BR112014014771B1

BR112014014771B1 - tira de clareamento de dente e método de clareamento dos dentes utilizando a referida tira

Info

Publication number: BR112014014771B1
Application number: BR112014014771-0A
Authority: BR
Inventors: Guofeng Xu; Steven Miller; Thomas J. Boyd; Richard Adams; Robert Pierce; David Viscio; Kari A. Fosser; Robert DiCosimo; Hong Wang
Original assignee: E.I. Du Pont De Nemours And Company; Colgate-Palmolive Company
Priority date: 2011-12-19
Filing date: 2012-12-18
Publication date: 2021-05-25
Also published as: CA2859569A1; ES2605158T3; PH12014501382A1; WO2013096321A3; TW201639542A; AU2012355355B2; TWI587872B; AU2012355355A1; HK1203403A1; MX349685B; ZA201404448B; CO6980625A2; CN104244918A; TW201330861A; RU2581906C2; US20140314829A1; MX2014007337A; JP6181666B2; TWI538692B; PL2793822T3

Abstract

COMPOSIÇÕES GERADORAS DE PERÁCIDO. Aqui descrito estão tiras de branqueamento de dentes, que compreendem uma película adesiva hidratável possuindo um ingrediente de branqueamento granular a ela ligado, em que após hidratação, o ingrediente de branqueamento granular libera peróxido de hidrogênio, que é utilizado por uma enzima catalisadora tendo atividade peridrolítica, para produzir enzimaticamente uma quantidade eficaz de agente de branqueamento de perecido, a partir de um substrato de doador de acilo. Os métodos para preparar e utilizar as tiras de branqueamento de dentes também são fornecidos.

Description

REFERÊNCIA CRUZADA AOS PEDIDOS RELACIONADOS

[001] Este pedido reivindica prioridade ao Pedido Provisório Norte-Americano No. 61/577.499, depositado em m 19 de dezembro de 2011, que é por meio deste documento incorporado por referência na sua totalidade.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[002] Existe uma necessidade por tiras de branqueamento adequadas para uso doméstico, com níveis totais reduzidos de peróxido, e que ainda assim forneçam atividade de branqueamento aumentada.

RESUMO

[003] A invenção fornece tiras de branqueamento que compreendem um ingrediente de branqueamento granular juntamente com uma enzima com atividade per-hidrolítica ("per-hidrolase"), que compreende a porção estrutural conservada da família carboidrato esterase 7 e doador de acila, de modo que, após o uso, o peróxido liberado pelo ingrediente de branqueamento granular reage com o doador de acila na presença da per-hidrolase para formar um perácido, em proximidade direta com os dentes, sem diluição substancial dos excipientes da formulação, permitindo desse modo um branqueamento aumentado dos dentes com quantidades muito menores de peróxido.

[004] As tiras compreendem um filme adesivo, de camada única ou em várias camadas (por exemplo, duas camadas) que, quando hidratado com água ou saliva, torna-se suficientemente adesivo para se fixar nos dentes. O ingrediente de branqueamento granular é fixado à lateral do filme para ser colocado em contato com os dentes. Após a aplicação, o ingrediente de branqueamento é colocado diretamente sobre os dentes (ou seja, entre os dentes e a camada adesiva). Os grânulos, em seguida, liberam peróxido por rápida dissolução em água. O ingrediente de branqueamento pode ser opcionalmente revestido por um material de rápida dissolução, como o sulfato de sódio, amido de milho ou goma arábica. Opcionalmente, as tiras fornecem uma segunda camada no filme, que está presente para prolongar o tempo de exposição. Essa segunda camada pode ser insolúvel em água, o que exigiria que o usuário removesse a tira após o tratamento, ou passível de erosão na água, o que faria com que a tira se dissolvesse após tratamento suficiente. A tira compreende ainda uma per- hidrolase (uma enzima capaz de catalisar a reação do éster do ácido carboxílico com peróxido de hidrogênio para formar um perácido), que pode também ser fornecida na forma granular sobre a superfície do filme, e um doador de acila, por exemplo, selecionados dentre ácidos carboxílicos e compostos acila, por exemplo, triacetina ou hexa-acetato de sorbitol, em que o doador de acila reage com a fonte de peróxido na tira na presença da per-hidrolase para formar um perácido, o que aumenta a ação de branqueamento da tira.

[005] Algumas modalidades da presente invenção fornecem uma tira de clareamento de dente que compreende um filme adesivo hidratável com um primeiro lado e um segundo lado, o primeiro lado possuindo um ingrediente de branqueamento granular ligado ao mesmo, sendo que a tira de clareamento de dente compreende ainda, em ou sobre o filme, ou sob a forma de grânulos ligados ao primeiro lado do filme; a) uma enzima com atividade per-hidrolítica, a dita enzima possuindo uma porção de assinatura da família da carboidrato esterase 7 (CE-7) que se alinha com uma sequência de referência SEQ ID NO: 1, a dita porção de assinatura compreendendo: i) uma porção motivo RGQ nas posições correspondentes às posições 118-120 da SEQ ID NO: 1; ii) uma porção GXSQG nas posições correspondentes às posições 186-190 da SEQ ID NO: 1; e iii) uma porção HE nas posições correspondentes às posições 303-304 da SEQ ID NO: 1; e (b) ao menos um substrato doador de acila, o dito substrato sendo selecionado do grupo consistindo em: I) ésteres com a estrutura [X]mR5 em que X = um grupo éster de fórmula R6C(O)O R6 = porção hidrocarbila C1 a C7 linear, ramificada ou cíclica, opcionalmente substituída com grupos hidroxila ou grupos alcóxi C1 a C4, em que, opcionalmente, compreende uma ou mais ligações éter para R6 = C2 a C7; R5 = uma porção hidrocarbila C1 a C6 linear, ramificada ou cíclica, ou uma porção cíclica heteroaromática com cinco membros opcionalmente substituída com grupos hidroxila; em que cada átomo de carbono em R5 compreende individualmente no máximo um grupo hidroxila ou no máximo um grupo éster ou grupo ácido carboxílico; em que R5 opcionalmente compreende uma ou mais ligações éter; M é um número inteiro que varia de 1 até o número de átomos de carbono em R5; e em que os ditos ésteres têm solubilidade em água de pelo menos 5 ppm a 25 °C; II) glicerídeos com a estrutura

em que R1 = alquila C1 a C7 de cadeia linear ou de cadeia ramificada opcionalmente substituída com uma hidroxila ou um grupo alcóxi C1 a C4, e R3 e R4 are individualmente H ou R1C(O); III) um ou mais ésteres de fórmula

em que R1 é uma alquila C1 a C7 de cadeia linear ou cadeia ramificada opcionalmente substituída com uma hidroxila ou um grupo alcóxi C1 a C4, e R2 é uma alquila, alquenila, alquinila, arila, alquilarila, alquil- heteroarila ou heteroarila C1 a C10 de cadeia linear ou de cadeia ramificada, (CH2CH2O)n ou (CH2CH(CH3)-O)nH, e n é de 1 a 10; e IV) sacarídeos acetilados selecionados do grupo consistindo em monossacarídeos acetilados, dissacarídeos acetilados e polissacarídeo acetilado; em que, após a hidratação do filme adesivo hidratável, peróxido de hidrogênio é liberado do ingrediente de branqueamento granular e a dita enzima catalisa a formação de uma quantidade efetiva de um perácido.

[006] Outras modalidades da presente invenção fornecem um método de clareamento dos dentes que compreende fornecer um sistema de embalagem compreendendo a tira de clareamento de dente, de acordo com qualquer reivindicaçã1 anterior; remover a tira de clareamento de dente do sistema de embalagem; e colocar em contato a tira de clareamento de dente diretamente com os dentes por um período de tempo suficiente para branquear os dentes; em que a tira de clareamento de dente é hidratada pela umidade presente na cavidade oral ou na superfície do dente ou é hidratada depois da etapa (b), porém antes da etapa (c).

[007] Outras áreas da aplicabilidade da presente invenção serão evidentes a partir da descrição detalhada fornecida a seguir. Deve ser compreendido que a descrição detalhada e os exemplos específicos, embora indiquem a modalidade preferencial da invenção, destinam-se apenas para fins de ilustração e não se destinam a limitar o escopo da invenção.

BREVE DESCRIÇÃO DAS SEQUÊNCIAS BIOLÓGICAS

[008] As sequências a seguir estão de acordo com o 37 C.F.R. §§ 1.821-1.825 ("Requirements for Patent Applications Containing Nucleotide Sequences and/or Amino Acid Sequence Disclosures - the Sequence Rules" - "Requisitos para Pedidos de Patente Contendo Sequências de Nucleotídeos e/ou Divulgações de Sequências de Aminoácidos - as Regras das Sequências" - equivalente em português) e são consistentes com a Norma ST.25 (2009) da Organização Mundial da Propriedade Intelectual (OMPI) e com os requisitos de listagem de sequências da Convenção sobre a Patente Europeia (EPC) e com os Regulamentos 5.2 e 49.5(a- bis) do Tratado de Cooperação em Matéria de Patentes (PCT), e com a Seção 208 e o Anexo C das Instruções Administrativas. Os símbolos e o formato usado para os dados de sequência de nucleotídeos e de aminoácidos estão de acordo com as regras definidas em 37 C.F.R. § 1.822.

[009] A SEQ ID NO: 1 é a sequência de aminoácidos da per-hidrolase variante C277S de Thermotoga maritima.

[010] A SEQ ID NO: 2 é a sequência de aminoácidos da proteína de fusão, compreendendo a per-hidrolase variante C277S de Thermotoga maritima acoplada a um domínio de ligação do dente (também conhecido como "EZ-7" na Publicação do Pedido de Patente Internacional No. WO2012/087970A2, de Butterick et al).

[011] A SEQ ID NO: 3 é a sequência de ácidos nucleicos que codifica uma cefalosporina C desacetilase de Bacillus subtilis ATCC® 31954™.

[012] A SEQ ID NO: 4 é a sequência de aminoácidos de uma cefalosporina C desacetilase de Bacillus subtilis ATCC® 31954™.

[013] A SEQ ID NO: 5 é a sequência de aminoácidos de uma cefalosporina C desacetilase de Bacillus subtilis subsp. subtilis, cepa 168.

[014] A SEQ ID NO: 6 é a sequência de aminoácidos de uma cefalosporina C deacetilase de B. subtilis ATCC® 6633™.

[015] A SEQ ID NO: 7 é a sequência de aminoácidos de uma cefalosporina C desacetilase de B. licheniformis ATCC® 14580™.

[016] A SEQ ID NO: 8 é a sequência de aminoácidos de uma acetilxilano esterase de B. pumilus PS213.

[017] A SEQ ID NO: 9 é a sequência de aminoácidos de uma acetilxilano esterase de Clostridium thermocellum ATCC® 27405™.

[018] A SEQ ID NO: 10 é a sequência de aminoácidos de uma acetilxilano esterase de Thermotoga neapolitana.

[019] A SEQ ID NO: 11 é a sequência de aminoácidos de uma acetilxilano esterase de Thermotoga maritima MSB8.

[020] A SEQ ID NO: 12 é a sequência de aminoácidos de uma acetilxilano esterase de Thermoanaerobacterium sp. JW/SL YS485.

[021] A SEQ ID NO: 13 é a sequência de aminoácidos de uma cefalosporina C desacetilase de Bacillus halodurans C125.

[022] A SEQ ID NO: 14 é a sequência de aminoácidos de uma cefalosporina C desacetilase de Bacillus clausii KSM- K16.

[023] A SEQ ID NO: 15 é a sequência de aminoácidos de uma variante da acetilxilano esterase de Thermotoga neapolitana da Publicação do Pedido de Patente Norte- Americano No. 2010-0087529 (incorporado na presente invenção por referência em sua totalidade), onde o resíduo Xaa na posição 277 é Ala, Val, Ser ou Thr.

[024] SEQ ID NO: 16 é a sequência de aminoácidos de uma variante da acetilxilano esterase MSB8 de Thermotoga maritima da SEQ ID NO: 16 é a sequência de aminoácidos de uma variante da acetilxilano esterase MSB8 de Thermotoga maritima da Publicação do Pedido de Patente Norte-Americano No. 2010-0087529, onde o resíduo Xaa na posição 277 é Ala, Val, Ser ou Thr.

[025] SEQ ID NO: 17 é a sequência de aminoácidos deduzido de uma variante da acetilxilano esterase de Thermotoga lettingae da Publicação do Pedido de Patente Norte-Americano No. 2010-0087529, onde o resíduo Xaa na posição 277 é Ala, Val, Ser ou Thr.

[026] A SEQ ID NO: 18 é a sequência de aminoácidos de uma variante da acetilxilano esterase de Thermotoga petrophila da Publicação do Pedido de Patente Norte- Americano No. 2010-0087529, onde o resíduo Xaa na posição 277 é Ala, Val, Ser ou Thr.

[027] A SEQ ID NO: 19 é a sequência de aminoácidos de uma variante da acetilxilano esterase de Thermotoga sp. RQ2 derivada de "RQ2(a)" da Publicação do Pedido de Patente Norte-Americano No. 2010-0087529, onde o resíduo Xaa na posição 277 é Ala, Val, Ser ou Thr.

[028] A SEQ ID NO: 20 é a sequência de aminoácidos de uma variante da acetilxilano esterase de Thermotoga sp. RQ2 derivada de "RQ2(b)" da Publicação do Pedido de Patente Norte-Americano No. 2010-0087529, onde o resíduo Xaa na posição 278 é Ala, Val, Ser ou Thr.

[029] A SEQ ID NO: 21 é a sequência de aminoácidos de uma acetilxilano esterase de Thermotoga lettingae.

[030] A SEQ ID NO: 22 é a sequência de aminoácidos de uma acetilxilano esterase de Thermotoga petrophila.

[031] A SEQ ID NO: 23 é a sequência de aminoácidos de uma primeira acetilxilano esterase de Thermotoga sp. RQ2 descrita como "RQ2(a)".

[032] A SEQ ID NO: 24 é a sequência de aminoácidos de uma segunda acetilxilano esterase de Thermotoga sp. RQ2 descrita como "RQ2(b)".

[033] A SEQ ID NO: 25 é a sequência de aminoácidos de uma cefalosporina C desacetilase de Thermoanearobacterium saccharolyticum.

[034] A SEQ ID NO: 26 é a sequência de aminoácidos da acetilxilano esterase de Lactococcus lactis (número de registro GENBANK® ABX75634.1).

[035] A SEQ ID NO: 27 é a sequência de aminoácidos da acetilxilano esterase de Mesorhizobium loti (número de registro GENBANK® BAB53179.1).

[036] A SEQ ID NO: 28 é a sequência de aminoácidos da acetilxilano esterase de Geobacillus stearothermophilus (número de registro GENBANK® AAF70202.1).

[037] As SEQ ID NOs: 29 a 163 são as sequências de aminoácidos dos peptídeos com afinidade com uma superfície da cavidade oral.

[038] As SEQ ID NOs: 164 a 177 são as sequências de aminoácidos dos ligantes/espaçadores peptídicos. As SEQ ID NOs: 178 a 197 são as sequências de aminoácidos de vários constructos de fusão da per-hidrolase direcionados que compreendem uma enzima per-hidrolítica acoplada com um ligante peptídico a um domínio de ligação com afinidade por uma superfície oral (consulte a Publicação do Pedido de Patente Internacional No. WO2012/087970A2, de Butterick et al).

DESCRIÇÃO DETALHADA

[039] A seguinte descrição da(s) modalidade(s) preferencial/preferenciais é de natureza meramente exemplar e de modo algum destina-se a limitar a invenção, sua aplicação ou usos.

[040] Conforme utilizado na presente invenção, os artigos "um", "uma" e "o/a" que precedem um elemento ou componente da invenção destinam-se a ser não restritivos em relação ao número de instâncias (ou seja, ocorrências) do elemento ou componente. Portanto, "um", "uma" e "o/a" devem ser lido para incluir um ou pelo menos um, e a forma singular da palavra do elemento ou componente também inclui o plural, a menos que o número seja obviamente mencionado como sendo singular.

[041] Conforme utilizado na presente invenção, o termo "compreendendo" significa a presença das características, números inteiros, etapas ou componentes definidos conforme referidos nas reivindicações, mas isso não impede a presença ou adição de uma ou mais outras características, números inteiros, etapas, componentes ou grupos dos mesmos. O termo "compreendendo" destina-se a incluir as modalidades englobadas pelos termos "consistindo essencialmente em” e “consistindo em”. De modo semelhante, o termo “consistindo essencialmente em” destina-se a incluir as modalidades englobadas pelo termo “consistindo em”.

[042] Conforme usado neste documento, o termo "cerca de" modificando a quantidade de um ingrediente ou reagente utilizado refere-se à variação na quantidade numérica que pode ocorrer, por exemplo, através de medição típica e procedimentos de manipulação de líquidos utilizados para fazer concentrados ou soluções de uso no mundo real; através de erro inadvertido nesses processos; por meio de diferenças na fabricação, fonte ou pureza dos ingredientes utilizados para fazer as composições ou realizar os métodos; e similares. O termo “cerca de” também engloba valores que diferem devido às condições de equilíbrio diferentes para uma composição resultantes de uma mistura inicial particular. As reivindicações, sejam modificadas ou não pelo termo “cerca de", incluem equivalentes às quantidades.

[043] Quando presentes, todas as faixas são inclusivas e combináveis. Por exemplo, quando uma faixa de "1 a 5" é citada, a faixa citada deve ser interpretada como incluindo as faixas "1 a 4", "1 a 3", "1 a 2", "1 a 2 e 4 a 5", "1 a 3 e 5" e similares.

[044] Conforme utilizado na presente invenção, os termos "substrato", "substrato adequado", "doador de acila" e "substrato de éster do ácido carboxílico" referem-se, de forma intercambiável, especificamente a: (a) um ou mais ésteres com a estrutura [X]mR5 em que: X é um grupo éster de fórmula R6C(O)O; R6 é uma porção hidrocarbila C1 a C7 linear, ramificada ou cíclica, opcionalmente substituída com um grupo hidroxila ou grupos alcóxi C1 a C4, em que, opcionalmente, R6 compreende uma ou mais ligações éter onde R6 é C2 a C7; R5 é uma porção hidrocarbila C1 a C6 linear, ramificada ou cíclica, ou uma porção cíclica heteroaromática com cinco membros ou uma porção cíclica aromática ou heteroaromática com seis membros opcionalmente substituída com um grupo hidroxila; em que cada átomo de carbono em R5 compreende individualmente no máximo um grupo hidroxila ou no máximo um grupo éster, e em que R5 opcionalmente compreende uma ou mais ligações éter; m é um número inteiro que varia de 1 até o número de átomos de carbono em R5, os ditos um ou mais ésteres apresentando solubilidade em água de pelo menos 5 ppm a 25 °C; ou (b) um ou mais glicerídeos com a estrutura

em que R1 é uma alquila C1 a C7 de cadeia linear ou de cadeia ramificada opcionalmente substituída com uma hidroxila ou um grupo alcóxi C1 a C4, e R3 e R4 são individualmente H ou R1C(O); ou (c) um ou mais ésteres de fórmula

em que R1 é uma alquila C1 a C7 de cadeia linear ou cadeia ramificada opcionalmente substituída com uma hidroxila ou um grupo alcóxi C1 a C4, e R2 é uma alquila, heteroarila ou heteroarila C1 a C10 de cadeia linear ou de cadeia ramificada, (CH2CH2O)n ou (CH2CH(CH3)-O)nH, e n é de 1 a 10; ou (d) um ou mais monossacarídeos acetilados, dissacarídeos acetilados ou polissacarídeos acetilados; ou (e) qualquer combinação de (a) a (d).

[045] Conforme utilizado na presente invenção, o termo "perácido" é sinônimo de peroxiácido, ácido peroxicarboxílico, ácido peróxi, ácido percarboxílico e ácido peroxoico.

[046] Conforme utilizado na presente invenção, o termo "ácido peracético" é abreviado como "PAA" e é sinônimo de ácido peroxiacético, ácido etanoperoxoico e todos os outros sinônimos do número de registro CAS 79-21-0.

[047] Conforme utilizado na presente invenção, o termo "monoacetina" é sinônimo de monoacetato de glicerol, monoacetato de glicerina e monoacetato de glicerila.

[048] Conforme utilizado na presente invenção, o termo "diacetina" é sinônimo de diacetato de glicerol; diacetato de glicerina, diacetato de glicerila e todos os outros sinônimos do número de registro CAS 25395-31-7.

[049] Conforme utilizado na presente invenção, o termo "triacetina" é sinônimo de triacetato de glicerina; triacetato de glicerol; triacetato de glicerila, 1,2,3- triacetoxipropano; triacetato de 1,2,3-propanotriol e todos os outros sinônimos do numero de registro CAS 102-76-1.

[050] Conforme utilizado na presente invenção, os termos "açúcar acetilado" e "sacarídeo acetilado" referem- se a mono, di e polissacarídeos, compreendendo pelo menos um grupo acetila. Os exemplos incluem, mas não se limitam, a penta-acetato de glicose; tetra-acetato de xilose; xilana acetilada; fragmentos de xilana acetilada; P-D- ribofuranose-1,2,3,5-tetra-acetato; tri-O-acetil-D- galactal; e tri-O-acetil-glical.

[051] Conforme utilizado na presente invenção, "hidrocarbila", "grupo hidrocarbila" e "porção hidrocarbila" destinam-se a significar uma disposição de cadeia linear, ramificada ou cíclica de átomos de carbono ligados por ligações entre carbonos simples, duplas ou triplas e/ou por ligações éter, e substituídos, por conseguinte, com átomos de hidrogênio. Tais grupos hidrocarbila podem ser alifáticos ou aromáticos. Exemplos de grupos hidrocarbila incluem metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila, t-butila, ciclopropila, ciclobutila, pentila, ciclopentila, metilciclopentila, hexila, ciclo-hexila, benzila e fenila. Em uma modalidade preferencial, a porção hidrocarbila é uma disposição de átomos de carbono linear, ramificada ou cíclica conectados por ligações carbono-carbono simples e/ou por ligações éter, e substituídos por conseguinte com átomos de hidrogênio.

[052] Conforme utilizado na presente invenção, os propanodiol; 1,3-propanodiol; 1,2-butanodiol; 1,3- butanodiol; 2,3-butanodiol; 1,4-butanodiol; 1,2- pentanodiol; 2,5-pentanodiol; 1,5-pentandiol; 1,6- pentanodiol; 1,2-hexanodiol; 2,5-hexanodiol; 1,6- hexanodiol; e misturas dos mesmos , referem-se aos ditos compostos compreendendo pelo menos um grupo éster de fórmula RC(O)O, onde R é uma porção hidrocarbila C1 a C7 linear. Em uma modalidade, o substrato de éster do ácido carboxílico é selecionado do grupo consistindo em diacetato de propilenoglicol (PGDA), diacetato de etilenoglicol (EDGA) e misturas dos mesmos.

[053] Conforme utilizado na presente invenção, o termo "diacetato de propilenoglicol" é sinônimo de 1,2- diacetoxipropano, diacetato de propileno; diacetato de 1,2- propanodiol e todos os outros sinônimos do número de registro CAS 623-84-7.

[054] Conforme utilizado na presente invenção, o termo "diacetato de etilenoglicol" é sinônimo de 1,2- diacetoxietano, diacetato de etileno, diacetato de glicol e todos os outros sinônimos do número de registro CAS 111-557.

[055] Conforme utilizado na presente invenção, os termos “mistura reacional enzimática adequada”, “componentes adequados para geração in situ de um perácido”, "componentes reacionais adequados", "mistura reacional aquosa adequada", "mistura reacional", e “componentes geradores de perácido” referem-se aos materiais e água (da saliva e/ou aplicada pelo usuário ao filme adesivo hidratável antes de usar) no qual os reagentes e o catalisador de enzima per-hidrolítica entram em contato. Os componentes geradores de perácido incluirão pelo menos enzima com atividade per-hidrolítica, preferencialmente em que a enzima per-hidrolítica é pelo menos uma per-hidrolase CE-7 (opcionalmente sob a forma de uma proteína de fusão direcionada para uma superfície do corpo), pelo menos um substrato de éster do ácido carboxílico adequado, uma fonte de peroxigênio e água (da saliva e/ou aplicada pelo usuário ao filme adesivo hidratável antes do uso).

[056] Conforme utilizado na presente invenção, o termo "per-hidrólise" é definido como a reação de um substrato selecionado com peróxido para formar um perácido. Tipicamente, peróxido inorgânico reage com o substrato selecionado na presença de um catalisador para produzir o ácido peroxicarboxílico. Conforme utilizado na presente invenção, o termo "per-hidrólise química" inclui reações de per-hidrólise nas quais um substrato (um precursor do ácido peroxicarboxílico) é combinado com uma fonte de peróxido de hidrogênio, em que o ácido peroxicarboxílico é formado na ausência de um catalisador de enzima. Conforme utilizado na presente invenção, o termo "per-hidrólise enzimática" inclui reações de per-hidrólise nas quais um substrato de éster do ácido carboxílico (um precursor de perácido; o doador de acila) é combinado com uma fonte de peróxido de hidrogênio e água, por meio do que o catalisador enzimático catalisa a formação de perácido.

[057] Conforme utilizado na presente invenção, o termo “atividade de per-hidrolase” refere-se à atividade do catalisador por unidade de massa (por exemplo, miligrama) de proteína, peso de célula seca ou peso de catalisador imobilizado.

[058] Conforme utilizado na presente invenção, “uma unidade de atividade enzimática” ou “uma unidade de atividade” ou "U" é definido como a quantidade de atividade per-hidrolase necessária para a produção de 1 μmol de produto ácido peroxicarboxílico por minuto, a uma temperatura especificada.

[059] Conforme utilizado na presente invenção, os termos “catalisador enzimático” e “catalisador per- hidrolase” referem-se a um catalisador que compreende uma enzima com atividade de per-hidrólise e pode estar sob a forma de uma célula microbiana inteira, célula(s) microbiana(s) permeabilizada(s), um ou mais componentes celulares de um extrato de células microbianas, enzima parcialmente purificada ou enzima purificada. O catalisador enzimático também pode ser quimicamente modificado (como por peguilação ou por reação com reagentes de reticulação). O catalisador per-hidrolase também pode ser imobilizado em um suporte solúvel ou insolúvel, usando métodos bem conhecidos pelas pessoas versadas na técnica; consulte, por exemplo, Immobilization of Enzymes and Cells; Gordon F. Bickerstaff, Editor; Humana Press, Totowa, NJ, EUA; 1997. Em uma modalidade, o catalisador per-hidrolase pode ser imobilizado de modo não covalente em ou sobre uma tira de cuidados bucais (por exemplo, uma tira de clareamento) ou bandeja dental. Em uma modalidade adicional, a imobilização não covalente para a tira ou bandeja dental pode ser através do uso de um domínio de ligação peptídica com forte afinidade por um material dentro ou sobre a tira ou bandeja (por exemplo, uma proteína de fusão que compreende uma enzima per-hidrolítica acoplada por meio de um espaçador de peptídeo opcional, a um domínio de ligação peptídica). Em outra modalidade, a bandeja dental é uma bandeja deformável. Em ainda outra modalidade, o catalisador per- hidrolase é imobilizado dentro ou sobre a bandeja deformável após a formação da impressão dental.

[060] Conforme utilizado na presente invenção, “acetilxilana esterases” refere-se a uma enzima (E.C. 3.1.1.72; AXEs) que catalisa a desacetilação das xilanas acetiladas e outros sacarídeos acetilados.

[061] Conforme utilizado na presente invenção, os termos “cefalosporina C desacetilase” e “cefalosporina C acetil-hidrolase” referem-se a uma enzima (E.C. 3.1.1.41) que catalisa a desacetilação de cefalosporinas, como a cefalosporina C e o ácido 7-aminocefalosporânico (Mitsushima et al. (1995) Appl. Env. Microbiol. 61(6):2224- 2229). As sequências de aminoácidos de várias cefalosporina C desacetilases com significativa atividade per-hidrolítica são fornecidas na presente invenção.

[062] Conforme utilizado na presente invenção, o termo "Bacillus subtilis ATCC® 31954™" refere-se a uma célula bacteriana depositada na Coleção Americana de Cultura de Células (ATCC) que tem o número de registro de depósito internacional ATCC® 31954™. Conforme descrito na presente invenção, uma enzima com significativa atividade per- hidrolase de B. subtilis ATCC® 31954™ é fornecida como SEQ ID NO: 4 (consulte a Publicação do Pedido de Patente Norte- Americano No. 2010-0041752).

[063] Conforme utilizado na presente invenção, o termo "Thermotoga maritima MSB8" refere-se a uma célula bacteriana relatada como possuindo atividade acetilxilano esterase (GENBANK® NP_227893.1; consulte a Publicação do Pedido de Patente Norte-Americano No. 2008-0176299). A sequência de aminoácidos da enzima com atividade per- hidrolase de Thermotoga maritima MSB8 é fornecida como a SEQ ID NO: 11. Variantes da per-hidrolase de Thermotoga maritima MSB8 são fornecidas como as SEQ ID NOs: 1 e 16.

[064] Conforme utilizado na presente invenção, uma “molécula de ácido nucleico isolada”, “polinucleotídeo isolado” e “fragmento de ácido nucleico isolado” serão usados de forma intercambiável e referem-se a um polímero de RNA ou DNA que é de fita simples ou dupla, contendo opcionalmente nucleotídeos sintéticos, artificiais ou alterados. Uma molécula de ácido nucleico isolada sob a forma de um polímero de DNA pode ser composta por um ou mais segmentos de cDNA, DNA genômico ou DNA sintético.

[065] O termo "aminoácido" refere-se à unidade estrutural química básica de uma proteína ou polipeptídeo. As abreviaturas a seguir são usadas na presente invenção para identificar aminoácidos específicos:

[066] Conforme utilizado na presente invenção, o termo "cerca de" modificando a quantidade de um ingrediente ou reagente utilizado refere-se à variação na quantidade numérica que pode ocorrer, por exemplo, através de medição típica e procedimentos de manipulação de líquidos utilizados para fazer concentrados ou, conforme utilizado na presente invenção, os termos “porção de assinatura” e “porção de diagnóstico” referem-se às estruturas conservadas compartilhadas entre uma família de enzimas com uma atividade definida. A porção de assinatura pode ser usada para definir e/ou identificar a família de enzimas estruturalmente relacionadas com atividade enzimática similar para uma família definida de substratos. A porção de assinatura pode ser uma única sequência de aminoácidos contígua ou uma coleção de porções conservadas não contíguas que, juntas, formam a porção de assinatura. Tipicamente, a(s) porção/porções conservada(s) é/são representada(s) por uma sequência de aminoácidos. Em uma modalidade, as enzimas per-hidrolíticas usadas nas presentes composições e métodos compreendem uma porção de assinatura da carboidrato esterase CE-7.

[067] Conforme utilizado na presente invenção, o termo “software de análise de sequência” refere-se a qualquer programa de software ou algoritmo computacional que é útil para a análise de sequências de nucleotídeos ou de aminoácidos. Um “software de análise de sequência” pode ser comercialmente disponível ou desenvolvido independentemente. Um software de análise de sequência típico incluirá, mas não estará limitado, ao pacote de programas GCG (Pacote Wisconsin Versão 9.0, Accelrys Software Corp., San Diego, CA), BLASTP, BLASTN, BLASTX (Altschul et al, J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990)), e DNASTAR (DNASTAR, Inc. 1228 S. Park St. Madison, WI 53715 USA), CLUSTALW (por exemplo, a versão 1.83; Thompson et al, Nucleic Acids Research, 22(22):4673-4680 (1994)), e o programa FASTA incorporando o algoritmo de Smith-Waterman (W. R. Pearson, Comput. Methods Genome Res., [Proc. Int. Symp.] (1994), Meeting Date 1992, 111-20. Editor(s): Suhai, Sandor. Editora: Plenum, Nova Iorque, NY), Vector NTI (Informax, Bethesda, MD) e Sequencher v. 4,05. Dentro do contexto desse pedido, será compreendido que onde o software de análise de sequência é usado para análise, os resultados da análise serão baseados em "valores padrão" do programa referenciado, a menos que seja especificado de outra forma. Conforme utilizado na presente invenção, "valores padrão" significa qualquer conjunto de valores ou parâmetros definidos pelo fabricante do software que são originalmente carregados com o software quando ele é inicializado pela primeira vez.

[068] O termo "superfície corporal" refere-se a toda a superfície do corpo humano que pode servir como o alvo para um agente de benefício, como um agente de benefício de perácido. Os presentes métodos e composições são direcionados para aplicações e produtos de cuidados bucais. Como tal, a superfície corporal compreende um material/superfície da cavidade oral. Em uma modalidade, o material da cavidade oral compreende o esmalte do dente.

[069] Como usado aqui, os termos "clareamento dental" e "branqueamento dental" são usados de forma intercambiável, para referir-se à melhoria do brilho (por exemplo, clareamento) de um dente ou dentes. Tiras de branqueamento são descritas na presente invenção compreendendo ingredientes apropriados para gerar, enzimaticamente, uma quantidade eficaz de um perácido para branquear os dentes quando hidratado.

[070] Conforme usado na presente invenção, “manchas intrínsecas” nos dentes referem-se à cor resultante de cromógenos dentro do esmalte e dentina subjacente. A cor intrínseca dos dentes humanos tende a tornar-se mais amarela com o envelhecimento, devido ao afinamento do esmalte e escurecimento da dentina amarela subjacente. A remoção da mancha intrínseca geralmente requer o uso de peróxidos ou de outros produtos químicos oxidantes, que penetram no esmalte e descolorem os cromógenos internos.

[071] Ao contrário das manchas intrínsecas, as “manchas extrínsecas” se formam sobre a superfície dos dentes quando materiais cromógenos exógenos se ligam ao esmalte, geralmente dentro da película que naturalmente reveste os dentes. A maioria das pessoas acumula certo grau de manchas extrínsecas antiestéticas sobre os seus dentes ao longo do tempo. Esse processo de coloração é promovido por fatores como: (1) a ingestão de alimentos e bebidas que que contêm taninos como café, chá ou vinho tinto; (2) o uso dos produtos do tabaco; e/ou (3) exposição a determinadas substâncias catiônicas (por exemplo, estanho, ferro e clorexidina). Essas substâncias tendem a aderir à estrutura de hidroxiapatita do esmalte, que leva à descoloração do dente e a uma concomitante redução da brancura do dente. Ao longo de um período de anos, as manchas extrínsecas podem penetrar na camada de esmalte e resultar em manchas intrínsecas.

[072] Conforme utilizado na presente invenção, o termo “remoção da mancha” refere-se ao processo de remoção de uma mancha de uma superfície da cavidade oral. A(s) mancha(s) pode(m) ser manchas intrínsecas, manchas extrínsecas ou uma combinação das mesmas.

[073] Conforme utilizado na presente invenção, "quantidade efetiva de enzima per-hidrolase" refere-se à quantidade de enzima per-hidrolase necessária para alcançar a atividade enzimática necessária na aplicação específica. Tais quantidades eficazes são prontamente reconhecidas por uma pessoa versada na técnica e são baseadas em muitos fatores, tais como a variante da enzima particular usada.

[074] Conforme utilizado na presente invenção, o termo “fonte de peroxigênio” refere-se aos compostos capazes de fornecer o peróxido de hidrogênio a uma concentração de cerca de 1 mM ou mais quando em uma solução aquosa incluindo, mas sem se limitar, ao peróxido de hidrogênio, adutos de peróxido de hidrogênio (por exemplo, aduto de ureia-peróxido de hidrogênio (peróxido de carbamida)), perboratos e percarbonatos. Conforme descrito na presente invenção, a fonte de peroxigênio nas presentes tiras de branqueamento está sob a forma de partículas granulares, em que o usuário hidrata as partículas de peróxido granulares para liberar uma quantidade efetiva de peróxido de hidrogênio. Conforme descrito na presente invenção, a concentração de peróxido de hidrogênio fornecida pelo composto peróxido na formulação da reação aquosa é inicialmente igual a pelo menos 0,1 mM ou mais, após combinar os componentes da reação. Em uma modalidade, a concentração de peróxido de hidrogênio na formulação de reação aquosa é igual a pelo menos 0,5 mM. Em uma modalidade, a concentração de peróxido de hidrogênio na formulação de reação aquosa é igual a pelo menos 1 mM. Em uma modalidade, a concentração de peróxido de hidrogênio na formulação de reação aquosa é igual a pelo menos 10 mM. Em uma modalidade, a concentração de peróxido de hidrogênio na formulação de reação aquosa é igual a pelo menos 100 mM. Em uma modalidade, a concentração de peróxido de hidrogênio na formulação de reação aquosa é igual a pelo menos 200 mM. Em uma modalidade, a concentração de peróxido de hidrogênio na formulação de reação aquosa é igual a 500 mM ou mais. Em ainda outra modalidade, a concentração de peróxido de hidrogênio na formulação de reação aquosa é igual a 1000 mM ou mais. A razão molar do peróxido de hidrogênio para o substrato da enzima, por exemplo, triglicerídeo, (H2O2:substrato) na formulação pode ser de cerca de 0,002 a 20, preferencialmente de cerca de 0,1 a 10 e mais preferencialmente de cerca de 0,5 a 5.

[075] Conforme utilizado na presente invenção, o termo "oligossacarídeo" refere-se aos compostos contendo entre 2 e pelo menos 24 unidades monossacarídicas unidas por ligações glicosídicas. O termo "monossacarídeo" refere-se a um composto de fórmula empírica (CH2O)n, onde n > 3, o esqueleto de carbono é não ramificado, cada átomo de carbono exceto um contém um grupo hidroxila 1 e o átomo de carbono restante é um aldeído ou uma cetona no átomo de carbono 1. O termo "monossacarídeo" também refere-se a um hemiacetal cíclico intracelular ou formas de hemiacetal.

[076] Conforme utilizado na presente invenção, o termo "adesivo hidratável” refere-se a um material adesivo capaz de ser hidratado. O adesivo hidratável é substancialmente seco e não adesivo até ser hidratado. Após a hidratação, o adesivo hidratável torna-se suficientemente adesivo para ligar a tira/filme de clareamento de dente à superfície de um dente. O filme adesivo hidratável também compreende um ingrediente de branqueamento granular, por meio do qual, após a hidratação e uma quantidade efetiva de peróxido de hidrogênio ser liberada para ser usada na formação enzimática de um agente de branqueamento de perácido. A tira/filme de clareamento é geralmente fino (normalmente com menos de 2 mm), de forma e dimensionada para se ajustar dentro da cavidade oral, e suficientemente flexível de modo que o filme e pode ser aplicado e colocado em contato com uma pluralidade de dentes, por meio do que o adesivo hidratado ajuda a segurar a manter o filme/tira sobre a superfície do dente e proporciona uma quantidade suficiente de tempo para o agente de branqueamento de perácido branquear os dentes.

[077] Conforme utilizado na presente invenção, o termo “quantidade efetiva” fará referência à quantidade de material necessária para atingir o efeito desejado.

[078] Conforme utilizado na presente invenção, o termo “substancialmente não adesivo até ser hidratado" fará referência à falta de força de adesão suficiente para aderir o filme de clareamento dental à superfície de uma pluralidade de dentes antes da hidratação. Como tal, o filme adesivo hidratável será fácil de lidar e manipular antes da aplicação/hidratação pelo usuário.

[079] Por "identidade de sequência" se entende uma identidade de aminoácidos usando um programa de alinhamento de sequências, por exemplo, ClustalW ou BLAST, por exemplo, geralmente conforme descrito em Altschul SF, Gish W, Miller W, Myers EW, Lipman DJ, "Basic local alignment search tool", J Mol Biol (1990) 215 (3): 403-410 e Goujon M, Mc William H, Li W, Valentin F, Squizzato S, Paern J, Lopez R, Nucleic Acids Research (2010) 38 Suppl: W695-9.

[080] Os doadores de acila para uso na presente invenção, por exemplo, para formar perácidos após a reação com peróxido, são selecionados a partir de um ou mais dentre (i) ácidos carboxílicos C2-18, por exemplo, ácidos carboxílicos C2-6 (por exemplo, ácido acético), incluindo ácidos alquilcarboxílicos lineares ou ramificados inferiores, opcionalmente substituídos com hidróxi e/ou alcóxi C1-4; (ii) ésteres hidrolisáveis e aceitáveis dos mesmos (por exemplo, mono, di e triglicerídeos e sacarídeos acilados) e (iii) misturas dos mesmos. Por exemplo, os doadores acila incluem 1,2,3-triacetoxipropano (às vezes referido na presente invenção como triacetina ou triacetato de glicerina) e sacarídeos acilados, por exemplo, sacarídeos acetilados. Em uma modalidade particular, ésteres para esse uso podem, por exemplo, ser ésteres com solubilidade em água igual a pelo menos 5 ppm a 25 °C.

[081] Os doadores de acila e/ou enzimas podem ser opcionalmente encapsulados. Há uma variedade de opções de encapsulamento naturais e sintéticas bem conhecida na técnica. Amidos modificados e goma arábica são particularmente bem adequados, uma vez que eles são de grau alimentício, relativamente baratos, rápidos para dissolver e podem absorver níveis bastante elevados de óleos líquidos. Qualquer impacto sobre a viscosidade final precisa ser considerado.

[082] Em algumas modalidades, os grânulos compreendem um agente antissensibilidade capaz de dessensibilizar os nervos ou obstruir os túbulos da dentina. Em algumas modalidades, o agente antissensibilidade é selecionado de uma fonte de íons potássio, um silicato, uma fonte de íon estanoso, um aminoácido básico, uma argila e uma combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, a fonte de íons potássio é um sal de potássio oralmente aceitável e está presente em uma quantidade eficaz para reduzir a sensibilidade dentinária. Em algumas modalidades, a fonte de íons potássio é selecionada dentre cloreto de potássio, nitrato de potássio e uma combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, o aminoácido básico é arginina. Em algumas modalidades, o aminoácido básico é selecionado dentre fosfato de arginina, bicarbonato de arginina e cloridrato de arginina. Em algumas modalidades, o silicato é silicato de cálcio. Per-hidrolases CE-7

[083] As presentes composições e método compreendem enzimas com atividade per-hidrolítica que são estruturalmente classificadas como membros da família de carboidratos da família esterase 7 (família CE-7) de enzimas (consulte Coutinho, P.M., Henrissat, B. approach" in Recent Advances in Carbohydrate Bioengineering, H.J. Gilbert, G. Davies, B. Henrissat e B. Svensson eds., (1999) The Royal Society of Chemistry, Cambridge, pp. 3-12.). A família de enzimas CE-7 demonstrou ser particularmente eficaz para a produção de ácidos peroxicarboxílicos a partir de uma variedade de substratos de éster do ácido carboxílico em combinação com uma fonte de peroxigênio (Patentes Norte-Americanas Nos. 7.794.378; 7.951.566; 7.723.083; e 7.964.378 e as Publicações dos Pedidos de Patente Norte-Americanos Nos. 2008-0176299, 2010-0087529, 2011-0081693, e 2011-0236335, pertencentes a DiCosimo et al.; cada um incorporado na presente invenção por referência).

[084] Membros da família CE-7 incluem cefalosporina C deacetilases (CAHs; E.C. 3.1.1.41) e acetilxilana esterases (AXEs; E.C. 3.1.1.72). Membros da família CE-7 esterase compartilham uma porção de assinatura conservada (Vincent et al., J. Mol. Biol., 330:593-606 (2003)). Per-hidrolases que compreendem a porção de assinatura CE-7 (“per- hidrolases CE-7”) e/ou uma estrutura substancialmente semelhante, são adequadas para utilização nas composições e métodos descritos na presente invenção. Meios para identificar moléculas biológicas substancialmente semelhantes são bem conhecidos na técnica {por exemplo, protocolos de alinhamento de sequência, hibridizações de ácidos nucleicos e/ou a presença de uma porção de assinatura conservada). Em um aspecto, a per-hidrolase inclui uma enzima que compreende a porção de assinatura CE- 7 e pelo menos 20%, preferencialmente pelo menos 30%, mais preferencialmente pelo menos 33%, mais preferencialmente pelo menos 40%, mais preferencialmente pelo menos 42%, mais preferencialmente pelo menos 50%, mais preferencialmente pelo menos 60%, mais preferencialmente pelo menos 70%, mais preferencialmente pelo menos 80%, mais preferencialmente pelo menos 90% e mais preferencialmente pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de aminoácidos com uma das sequências aqui apresentadas.

[085] Conforme utilizado na presente invenção, a frase "enzima é estruturalmente classificada como uma enzima CE- 7", “per-hidrolase CE-7” ou "estruturalmente classificada como uma enzima da família carboidrato esterase 7” será usada para referir-se às enzimas com atividade per- hidrolítica, que são estruturalmente classificadas como carboidrato esterase CE-7. Essa família de enzimas pode ser definida pela presença de uma porção de assinatura (Vincent et al, supra). A porção de assinatura para as esterases CE- 7 compreende três porções conservadas (numeração da posição do resíduo em relação à sequência de referência SEQ ID NO: 1; uma variante C277S da per-hidrolase Thermotoga maritima). Arg1l8-Gly119-Gln120; Gly186-Xaa187-Ser188-Gln189-Gly190; e His303-Glu304.

[086] Normalmente, o Xaa na posição de resíduo de aminoácido 187 é glicina, alanina, prolina, triptofano ou treonina. Dois dos três resíduos de aminoácidos pertencentes à tríade catalítica estão em negrito. Em uma modalidade, o Xaa na posição de resíduo de aminoácido 187 é selecionado do grupo consistindo em glicina, alanina, prolina, triptofano e treonina.

[087] Outras análises das porções conservadas na família da carboidrato esterase CE-7 indicam a presença de uma porção conservada adicional (LXD nas posições de aminoácidos 272-274 da SEQ ID NO: 1) que podem ser usadas para definir adicionalmente uma per-hidrolase pertencente à família de carboidrato esterase CE-7. Em uma modalidade adicional, a porção de assinatura definida acima pode incluir uma (quarta) porção conservada adicional, definida como: Leu272-Xaa273-Asp274. O Xaa na posição de resíduo de aminoácido 273 é, tipicamente, metionina, isoleucina ou valina. A quarta porção inclui o resíduo de ácido aspártico (negrito) pertencente à tríade catalítica (Ser188-Asp274-His303).

[088] As per-hidrolases CE-7 podem estar sob a forma de proteínas da fusão com pelo menos um componente peptídico tendo afinidade por pelo menos uma superfície corporal. Em uma modalidade, todos os alinhamentos usados para determinar se uma per-hidrolase direcionada (proteína de fusão) compreende a porção de assinatura CE-7 serão baseados na sequência de aminoácidos da enzima per- hidrolítica sem o componente peptídico tendo a afinidade por uma superfície corporal.

[089] Uma variedade de algoritmos de alinhamento global bem conhecidos (ou seja, softwares de análise de sequência) pode ser usada para alinhar duas ou mais sequências de aminoácidos que representam enzimas com atividade per- hidrolase para determinar se a enzima compreende a presente porção de assinatura. A(s) sequência(s) alinhada(s) é/são comparada(s) com a sequência de referência (SEQ ID NO: 1) para determinar a existência de uma porção de assinatura. Em uma modalidade, um alinhamento CLUSTAL (como CLUSTALW) usando uma sequência de aminoácidos de referência ( conforme utilizado na presente invenção, a sequência da per-hidrolase (SEQ ID NO: 1)) é usada para identificar per- hidrolases pertencentes à família CE-7 esterase. A numeração relativa dos resíduos de aminoácidos conservados baseia-se na numeração da sequência de aminoácidos de referência para responder pelas pequenas inserções ou deleções (por exemplo, normalmente cinco aminoácidos ou menos) dentro da sequência alinhada.

[090] Exemplos de outros algoritmos adequados que podem ser usados para identificar as sequências compreendendo a presente porção de assinatura (quando comparado com a sequência de referência) incluem, mas não se limitam, ao de Needleman e Wunsch (J. Mol. Biol. 48, 443-453 (1970); a global alignment tool) e o de Smith-Waterman (J. Mol. Biol. 147: 195-197 (1981); a local alignment tool). Em uma modalidade, um alinhamento de Smith-Waterman é implementado usando os parâmetros predefinidos. Um exemplo de parâmetros predefinidos adequados incluem o uso de uma matriz de pontuação BLOSUM62 com penalidade de lacunas de abertura = 10 e uma penalidade de lacunas de extensão = 0,5.

[091] Em uma modalidade, as per-hidrolases adequadas incluem enzimas que compreendem a porção de assinatura CE-7 e pelo menos 20%, preferencialmente pelo menos 30%, 33%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de aminoácidos com a SEQ ID NO: 1.

[092] Exemplos de carboidrato esterases CE-7 com atividade per-hidrolítica incluem, mas não se limitam, às enzimas com uma sequência de aminoácidos como as SEQ ID NOs: 1 e 4 a 28. Em uma modalidade, a enzima compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em 1, 10, 11, 15 e 16.

[093] Conforme utilizado na presente invenção, o termo “variante CE-7”, "per-hidrolase variante" ou "variante" fará referência às per-hidrolases CE-7 tendo uma modificação genética que resulta em pelo menos uma adição, deleção e/ou substituição de aminoácido em comparação com a enzima correspondente (normalmente a enzima tipo selvagem), da qual a variante foi derivada; contanto que a porção de assinatura CE-7 e a atividade per-hidrolítica associada sejam mantidas. As per-hidrolases variantes CE-7 também podem ser utilizadas nas presentes composições e métodos. Exemplos de variantes CE-7 são fornecidas como SEQ ID NOs: 1, 15, 16, 17, 18, 19 e 20. Em uma modalidade, as variantes podem incluir as SEQ ID NOs: 1 e 16.

[094] O profissional versado na técnica reconhece que sequências de per-hidrolase CE-7 substancialmente similares (mantendo as porções de assinatura) também podem ser utilizadas nas presentes composições e métodos. Em uma modalidade, sequências substancialmente similares são definidas quanto à sua capacidade de hibridizar, sob condições altamente rigorosas, com as moléculas de ácidos nucleicos associadas com as sequências exemplificadas na presente invenção. Em outra modalidade, os algoritmos de alinhamento de sequência podem ser usados para definir enzimas substancialmente semelhantes com base na identidade porcentual com o DNA ou sequências de aminoácidos fornecidas na presente invenção.

[095] Conforme utilizado na presente invenção, uma molécula de ácido nucleico é "hibridizável" em outra molécula de ácido nucleico, como um cDNA, DNA genômico ou RNA, quando uma única fita da primeira molécula pode anelar com outra molécula sob condições adequadas de temperatura e força de solução iônica. As condições de hibridação e lavagem são bem conhecidas e exemplificadas em Sambrook, J. e Russell, D., T. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Terceira Edição, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor (2001). As condições de temperatura e força iônica determinam a “estringência” da hibridização. As condições de estringência podem ser ajustadas para buscar moléculas moderadamente semelhantes, tais como sequências homólogas de organismos distantemente relacionados até moléculas altamente semelhantes, tais como genes que duplicam as enzimas funcionais de organismos estreitamente relacionados. As lavagens de pós-hibridização tipicamente determinam as condições de estringência. Um conjunto de condições preferenciais utiliza uma série de lavagens iniciando com 6x SSC, SDS 0,5% em temperatura ambiente durante 15 min, em seguida repetido com 2x SSC, SDS 0,5% a 45 °C durante 30 min e, em seguida, repetido duas vezes com 0,2x SSC, 0,5% > SDS a 50 °C durante 30 min. Um conjunto de condições mais preferencial utiliza temperaturas mais elevadas, em que as lavagens são idênticas às descritas acima, exceto pelo fato de a temperatura das duas lavagens finais de 30 min em 0,2x SSC, 0,5% > SDS ter aumentado até 60 °C. Outro conjunto preferencial de condições de hibridização altamente estringentes é 0,1x SSC, 0,1% de SDS a 65 °C e lavado com 2x SSC, 0,1% de SDS, seguido por uma lavagem final de 0,1x SSC, 0,1% de SDS a 65 °C.

[096] A hibridização requer que os dois ácidos nucleicos contenham sequências complementares, embora dependendo da estringência da hibridização, incompatibilidades entre as bases podem ocorrer. A estringência adequada para hibridizar ácidos nucleicos depende do comprimento dos ácidos nucleicos e do grau de complementação, variáveis bem conhecidas na técnica. Quanto maior é o grau de semelhança ou homologia entre duas sequências de nucleotídeos, maior é o valor da Tm para híbridos de ácidos nucleicos com aquelas sequências. A estabilidade relativa (correspondente à maior Tm) das hibridizações de ácido nucleico diminui na seguinte ordem: RNA:RNA, DNA:RNA, DNA:DNA. Para os híbridos com mais de 100 nucleotídeos de comprimento, equações para calcular a Tm foram derivadas (Sambrook e Russell, supra). Para hibridizações com ácidos nucleicos mais curtos, ou seja, oligonucleotídeos, a posição das incompatibilidades torna- se mais importante, e o comprimento do oligonucleotídeo determina a sua especificidade (Sambrook e Russell, supra). Em um aspecto, o comprimento de um ácido nucleico hibridizável é de pelo menos cerca de 10 nucleotídeos. Preferencialmente, um comprimento mínimo para um ácido nucleico hibridizável é igual a pelo menos cerca de 15 nucleotídeos de comprimento, mais preferencialmente igual a pelo menos cerca de 20 nucleotídeos de comprimento, ainda mais preferencialmente igual a pelo menos 30 nucleotídeos de comprimento, ainda mais preferencialmente iguala pelo menos 300 nucleotídeos de comprimento e, com mais de preferência, igual a pelo menos 800 nucleotídeos de comprimento. Além disso, o profissional versado na técnica reconhecerá que a temperatura e a concentração salina da solução de lavagem pode ser ajustada conforme necessário, de acordo com fatores tais como o comprimento da sonda.

[097] Conforme utilizado na presente invenção, o termo “identidade porcentual” é uma relação entre duas ou mais sequências de polipeptídeos ou duas ou mais sequências de polinucleotídeo, conforme determinado por comparação das sequências. Na técnica, "identidade" também significa o grau de relação de sequências entre as sequências de polipeptídeo ou de polinucleotídeo, conforme for o caso, conforme determinado pela correspondência entre as fitas de tais sequências. "Identidade" e "similaridade" podem ser facilmente calculados por métodos conhecidos, incluindo, mas sem se limitar, a aqueles descritos em: Computational Molecular Biology, Lesk, A. M., ed.) Oxford University Press, NY (1988); Biocomputing: Informatics and Genome Projects (Smith, D. W., ed.) Academic Press, NY (1993); Computer Analysis of Sequence Data, Parte I (Griffin, A. M., e Griffin, H. G., eds.) Humana Press, NJ (1994); Sequence Analysis in Molecular Biology (von Heinje, G., ed.) Academic Press (1987); e Sequence Analysis Primer (Gribskov, M. e Devereux, J., eds.) Stockton Press, NY (1991). Métodos para determinar a identidade e a similaridade são codificados em programas de computador publicamente disponíveis. Cálculos de alinhamentos de sequência e identidade porcentual podem ser realizados usando o programa Megalign da solução de computação bioinformática LASERGENE (DNASTAR Inc., Madison, WI), o programa AlignX do Vector NTI v. 7.0 (Informax, Inc., Bethesda, MD), ou o Pacote de Software Aberto EMBOSS (EMBL- EBI; Rice et al, Treds in Genetics 16, (6): 276-277 (2000)). Vários alinhamentos das sequências podem ser realizados usando o método CLUSTAL (como CLUSTAL W; por exemplo, a versão 1.83) do alinhamento (Higgins e Sharp, CABIOS, 5: 151-153 (1989); Higgins et al., Nucleic Acids Res. 22: 4673-4680 (1994); e Chenna et al., Nucleic Acids Res 31 (13): 3497-500 (2003)), disponíveis junto ao Laboratório Europeu de Biologia Molecular através do Instituto Europeu de Bioinformática) com os parâmetros predefinidos. Parâmetros adequados para os alinhamentos de proteína CLUSTAL W incluem pena de existência de lacunas = 15, extensão de lacunas = 0,2, matriz = Gonnet (por exemplo, Gonnet250), proteína ENDGAP = -1, proteína GAPDIST = 4 e KTUPLE = 1. Em uma modalidade, um alinhamento rápido ou lento é usado com as configurações padrão onde um alinhamento lento é preferencial. Alternativamente, os parâmetros usando o método CLUSTALW (por exemplo, a versão 1.83) podem ser modificados para usar também o KTUPLE = 1, penalidade de lacunas = 10, extensão de lacunas = 1, matriz = BLOSUM (por exemplo, BLOSUM64), WINDOW = 5 e TOP DIGONALS SAVED = 5.

[098] Em um aspecto, moléculas de ácidos nucleicos isoladas codificam um polipeptídeo que tem uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 20%, preferencialmente pelo menos 30%, 33%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica às sequências de aminoácidos aqui indicadas. Em outro aspecto, moléculas de ácidos nucleicos isoladas codificam um polipeptídeo que tem uma sequência de aminoácidos que é pelo menos cerca de 20%>, preferencialmente pelo menos 30%, 33%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99%> idêntica às sequências de aminoácidos aqui indicadas. Moléculas de ácidos nucleicos adequadas não só têm as homologias acima, mas também normalmente codificam um polipeptídeo que tem cerca de 210 a 340 aminoácidos de comprimento, cerca de 300 a cerca de 340 aminoácidos, preferencialmente cerca de 310 a cerca de 330 aminoácidos e, mais preferencialmente, cerca de 318 a cerca de 325 aminoácidos de comprimento, em que cada polipeptídeo é caracterizado como possuindo atividade per- hidrolítica. Per-hidrolases direcionadas

[099] Conforme utilizado na presente invenção, o termo “per-hidrolase direcionada” e “enzima direcionada com atividade per-hidrolítica” fará referência às proteínas de fusão que compreendem pelo menos uma enzima per-hidrolítica (tipo selvagem ou variante da mesma) fundida/acoplada a pelo menos um componente peptídico com afinidade por uma superfície alvejada, preferencialmente uma superfície corporal alvejada. A enzima per-hidrolítica na per- hidrolase direcionada pode ser qualquer carboidrato esterase CE-7 com atividade per-hidrolítica. A per- hidrolase CE-7 pode ser identificada pela presença da porção de assinatura CE-7 que se alinha com uma sequência de referência SEQ ID NO: 1, a dita porção de assinatura compreendendo: i) uma porção motivo RGQ nas posições correspondentes às posições 118-120 da SEQ ID NO: 1; ii) uma porção GXSQG nas posições correspondentes às posições 186-190 da SEQ ID NO: 1; e iii) uma porção HE nas posições correspondentes às posições 303-304 da SEQ ID NO: 1; e

[100] Em uma modalidade, as enzimas per-hidrolíticas podem ser aquelas que têm uma sequência de aminoácidos que é igual a pelo menos cerca de 20%, preferencialmente pelo menos 30%, 33%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica a qualquer uma das sequências de aminoácidos aqui indicadas (ou seja, as SEQ ID NOs: 1 e 4 a 28).

[101] Em outra modalidade, a proteína de fusão compreende uma enzima per-hidrolítica que tem uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 1 e 4 a 28.

[102] Conforme utilizado na presente invenção, os termos “componente peptídico”, “componente peptídico tendo afinidade por uma superfície da cavidade oral”, "domínio de ligação da cavidade oral" e "OCBD" farão referência ao componente da proteína de fusão que não faz parte da enzima per-hidrolítica que compreende pelo menos um polímero de dois ou mais aminoácidos unidos por uma ligação peptídica; em que o componente tem afinidade pela superfície da cavidade oral alvo. Em um aspecto preferencial, o OCBD tem afinidade pelo esmalte do dente.

[103] Em uma modalidade, o componente peptídico com afinidade por uma superfície corporal pode ser um anticorpo de anticorpo Fab,, um fragmento variável de cadeia simples (scFv) um anticorpo Camelidae (Muyldermans, S., Rev. Mol. Biotechnol. (2001) 74:277-302), uma proteína de exibição de estrutura não anticorpo (Hosse et al., Prot. Sci. (2006) 15(1): 14-27 e Binz, H. et al. (2005) Nature Biotechnology 23, 1257-1268 para uma revisão de várias abordagens assistidas por estrutura) ou um polipeptídeo de cadeia simples sem uma dobra de imunoglobulina. Em outro aspecto, o componente peptídico tendo afinidade pelo tecido/superfície da cavidade oral (como o esmalte do dente) é um peptídeo de cadeia simples sem uma dobra de imunoglobulina.

[104] O componente peptídico tendo afinidade por uma superfície da cavidade oral pode ser separado da enzima per-hidrolítica por um ligante peptídico opcional. Certos ligantes/espaçadores peptídicos são de 1 a 100 ou de 1 a 50 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, os espaçadores de peptídeo possuem de cerca de 1 a cerca de 25, de 3 a cerca de 40 ou de 3 a cerca de 30 aminoácidos de comprimento. Em outras modalidades, são espaçadores que possuem de cerca de 5 a cerca de 20 aminoácidos de comprimento. Vários ligantes de peptídeo podem ser utilizados. Em uma modalidade, pelo menos um ligante peptídico está presente e pode ser repetido até 10 vezes.

[105] Em uma modalidade, o peptídeo de fusão compreende pelo menos um peptídeo de ligação à superfície da cavidade oral selecionado do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 178 a 197.

[106] Em outra modalidade, a superfície alvo é um material que faz parte da embalagem, tal como a tira de clareamento ou a camada de suporte polimérica (quando usando uma camada de suporte polimérica à qual o adesivo hidratável é aplicado) e/ou o método de liberação para a cavidade oral. O componente peptídico é selecionado por sua afinidade com um material ou materiais em uso, tais como filmes, plásticos e polímeros. O design da proteína de fusão de per-hidrolase direcionada permite a liberação controlada e a remoção da per-hidrolase do usuário mantendo-a em um dispositivo removível como, mas sem se limitar, a uma bandeja ou tira bucal.

[107] O componente peptídico tendo afinidade por uma superfície da cavidade oral pode ser separado da per- hidrolase CE-7 por um ligante peptídico opcional. Certos ligantes/espaçadores peptídicos são de 1 a 100 ou de 1 a 50 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, os espaçadores de peptídeo possuem de cerca de 1 a cerca de 25, de 3 a cerca de 40 ou de 3 a cerca de 30 aminoácidos de comprimento. Em outras modalidades, são espaçadores que possuem de cerca de 5 a cerca de 20 aminoácidos de comprimento. Vários ligantes de peptídeo podem ser utilizados. Exemplos de ligantes peptídicos são fornecidos como as SEQ ID NOs: 164 a 177.

[108] Como tais, exemplos de per-hidrolases CE-7 alvos podem incluir, mas não se limitam, a qualquer uma das per- hidrolases CE-7 com uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 1 e 4 a 28, acopladas a um componente peptídico tendo afinidade por uma superfície da cavidade oral. Em uma modalidade preferencial, exemplos de per-hidrolases alvo podem incluir, mas sem se limitar, a qualquer uma das per- hidrolases CE-7 com uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 1, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27 e 28 acopladas a um ou mais peptídeos de ligação à superfície corporal com afinidade por uma superfície da cavidade oral (opcionalmente através de um espaçador de peptídeo). Em uma modalidade preferencial, a per-hidrolase direcionada compreende uma per-hidrolase CE-7 que tem uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 1 e 16.

[109] Em uma modalidade, a per-hidrolase é uma per- hidrolase CE-7 sob a forma de uma proteína de fusão que tem a seguinte estrutura geral: PAH- [L]y-OCBD ou OCBD- [L]y-PAH onde PAH é a enzima que tem atividade per-hidrolítica, por exemplo, com uma porção de assinatura CE-7, por exemplo, SEQ ID NO: 1, e OCBD é um componente peptídico tendo afinidade por uma superfície da cavidade oral; e L é um ligante opcional; e y é um número inteiro variando de 0 a 10. Em uma modalidade, o ligante (L) está presente e é um ligante peptídico que varia de 1 a 100 aminoácidos de comprimento.

[110] Por exemplo a SEQ ID NO: 2 é uma proteína de fusão que tem uma sequência da per-hidrolase da SEQ ID NO: 1 acoplada a um domínio de alvejamento C-terminal com uma afinidade para os tecidos orais.

[111] As per-hidrolases para uso nos produtos e métodos da invenção podem estar sob a forma livre, protegida (por exemplo, acetilada) ou de sal.

[112] Em outra modalidade, a superfície alvo é um material que faz parte da embalagem e/ou liberação para a cavidade oral. O componente peptídico é selecionado por sua afinidade com um material ou materiais em uso, tais como filmes, plásticos e polímeros. O design da proteína de fusão de per-hidrolase CE-7 direcionada permite a liberação controlada e a remoção da per-hidrolase do usuário mantendo-a em um dispositivo removível como, mas sem se limitar, a uma bandeja ou tira bucal. Afinidade de ligação

[113] O componente peptídico que tem afinidade pela superfície da cavidade oral compreende uma afinidade de ligação por uma superfície da cavidade oral de 10-5 molar (M) ou menos. Em certas modalidades, o componente peptídico é um ou mais peptídeos de ligação à superfície da cavidade oral e/ou domínio(s) de ligação tendo uma afinidade de ligação de 10-5 molar (M) ou menos pelo esmalte do dente. Em algumas modalidades, os peptídeos de ligação ou domínios terão um valor de afinidade de ligação de 10-5 M ou menos na presença de pelo menos cerca de 50 a 500 mM de sal. O termo "afinidade de ligação" refere-se à força da interação de um peptídeo de ligação com o seu respectivo substrato. Afinidade de ligação pode ser definida ou medida em termos da constante de dissociação do peptídeo de ligação ("KD"), ou "MB50."

[114] "KD" corresponde à concentração do peptídeo na qual o sítio de ligação no alvo é meio ocupado, ou seja, quando a concentração do alvo com o peptídeo ligado (material alvo ligado) é igual à concentração de alvo sem peptídeo ligado. Quanto menor é a constante de dissociação, mais firmemente o peptídeo está ligado. Por exemplo, um peptídeo com uma constante de dissociação nanomolar (nM) se liga mais firmemente do que um peptídeo com uma constante de dissociação micromolar (μM). Certas modalidades da invenção terão um valor KD de 10-5 ou menos.

[115] "MB50" refere-se à concentração do peptídeo de ligação que fornece um sinal que é igual a 50% do sinal máximo obtido em um ensaio de ligação baseado em ELISA. Consulte, por exemplo, o exemplo 3 da Publicação do Pedido de Patente Norte-Americano 2005/022683; por este meio incorporado por referência. A MB50 fornece uma indicação da intensidade da interação de ligação ou afinidade dos componentes do complexo. Quanto menor o valor de MB50, mais forte, ou seja, “melhor” é a interação do peptídeo com o seu substrato correspondente. Por exemplo, um peptídeo com uma MB50 nanomolar (nM) se liga mais firmemente do que um peptídeo com uma MB50 micromolar (μM) . Certas modalidades da invenção terão um valor MB50 de 10-5 ou menos.

[116] Em algumas modalidades, o componente peptídico tendo afinidade por uma superfície da cavidade oral pode ter uma afinidade de ligação, conforme medida pelos valores de KD ou MB50, menor ou igual a cerca de 10-5 M, menor ou igual a cerca de 10-6 M, menor ou igual a cerca de 10-7 M, menor ou igual a cerca de 10-8 M, menor ou igual a cerca de 10-9 M ou menor ou igual a cerca de 10-10 M.

[117] Em algumas modalidades, os peptídeos de ligação à superfície da cavidade oral e/ou os domínios de ligação à superfície da cavidade oral podem ter uma afinidade de ligação, conforme medido pelos valores de KD ou MB50, menor ou igual a cerca de 10-5 M, menor ou igual a cerca de 10-6 M, menor ou igual a cerca de 10-7 M, menor ou igual a cerca de 10-8 M, menor ou igual a cerca de 10-9 M ou menor ou igual a cerca de 10-10 M.

[118] Conforme utilizado na presente invenção, o termo “afinidade forte” fara referência a uma afinidade de ligação que tem um valor de KD ou MB50 menor ou igual a cerca de 10-5 M, preferencialmente menor ou igual a cerca de 10-6 M, mais preferencialmente menor ou igual a cerca de 10-7 M, mais preferencialmente menor que ou igual a cerca de 10-8 M, menor ou igual a cerca de 10-9 M, ou com mais preferência menor ou igual a cerca de 10-10 M. Pós de enzima

[119] Em algumas modalidades, as composições de cuidados pessoais podem usar um catalisador enzimático sob a forma de um pó de enzima estabilizado. Métodos para fazer e estabilizar formulações que compreendem um pó de enzima são descritos nas Publicações dos Pedidos de Patente Norte- Americanos Nos. 2010-0086534 e 2010-0086535.

[120] Em uma modalidade, a enzima pode estar sob a forma de pó de enzima em uma quantidade e em uma faixa de cerca de 0,5 por cento em peso (% em peso) a cerca de 75 por cento em peso, por exemplo, de 1 por cento em peso até cerca de 60 por cento em peso, com base no peso seco do pó de enzima. Uma faixa de porcentagem em peso preferencial da enzima no pó de enzima/mistura atomizada é de cerca de 10% em peso a 50% em peso, e uma faixa porcentual em peso mais preferencial da enzima no pó de enzima/mistura atomizada é de cerca de 20% em peso a 33% em peso.

[121] Em uma modalidade, o pó de enzima pode compreender ainda um excipiente. Em um aspecto, o excipiente é fornecido em uma quantidade em uma faixa de cerca de 95% em peso a cerca de 25% em peso com base no peso seco do pó de enzima. Uma faixa % em peso preferencial do excipiente no pó de enzima é de cerca de 90% em peso a preferencial no pó de enzima é de cerca de 80% em peso a 67% em peso.

[122] Em uma modalidade, o excipiente utilizado para preparar um pó de enzima pode ser um excipiente de oligossacarídeo. Em uma modalidade, o excipiente oligossacarídico tem um número de peso molecular médio de pelo menos cerca de 1250 e um peso molecular ponderal médio de pelo menos cerca de 9000. Em algumas modalidades, o excipiente oligossacarídico tem um número de peso molecular médio igual a pelo menos cerca de 1700 e um peso molecular ponderal médio igual a pelo menos cerca de 15000. Oligossacarídeos específicos podem incluir, mas não se limitam, a maltodextrina, xilana, manana, fucoidano, galactomanano, quitosana, rafinose, estaquiose, pectina, insulina, levana, graminano, amilopectina, sacarose, lactulose, lactose, maltose, trealose, celobiose, nigerotriose, maltotriose, melezitose, maltotriulose, rafinose, cestose e misturas dos mesmos. Em uma modalidade preferencial, o excipiente oligossacarídico é maltodextrina. Excipientes à base de oligossacarídeo também podem incluir, mas não se limitam, aos éteres de celulose não iônicos solúveis em água, como hidroximetilcelulose e hidroxipropilmetilcelulose, e misturas dos mesmos. Em ainda uma outra modalidade, o excipiente pode ser selecionado de, mas sem se limitar, a um ou mais dos seguintes compostos: trealose, lactose, sacarose, manitol, sorbitol, glicose, celobiose, a-ciclodextrina e carboximetilcelulose. Substratos de Éster/Doadores de Acila Adequados

[123] Substratos do éster do ácido carboxílico adequados podem incluir ésteres tendo a fórmula a seguir: (a) um ou mais ésteres com a estrutura [X]mR5 em que: X é um grupo éster de fórmula R6C(O)O; R6 é uma porção hidrocarbila C1 a C7 linear, ramificada ou cíclica, opcionalmente substituída com um grupo hidroxila ou grupos alcóxi C1 a C4, em que, opcionalmente, R6 compreende uma ou mais ligações éter onde R6 é C2 a C7; R5 é uma porção hidrocarbila C1 a C6 linear, ramificada ou cíclica, ou uma porção cíclica heteroaromática com cinco membros ou uma porção cíclica aromática ou heteroaromática com seis membros opcionalmente substituída com um grupo hidroxila; em que cada átomo de carbono em R5 compreende individualmente no máximo um grupo hidroxila ou no máximo um grupo éster ou grupo ácido carboxílico; e em que R5 opcionalmente compreende uma ou mais ligações éter; m é um número inteiro que varia de 1 até o número de átomos de carbono em R5, os ditos um ou mais ésteres apresentando solubilidade em água de pelo menos 5 ppm a 25 °C; ou (b) um ou mais glicerídeos com a estrutura

em que R1 é uma alquila C1 a C7 de cadeia linear ou cadeia ramificada opcionalmente substituída com uma hidroxila ou um grupo alcóxi C1 a C4, e R2 é uma alquila, alquenila, alquinila, arila, alquilarila, alquil- heteroarila ou heteroarila C1 a C10 de cadeia linear ou de cadeia ramificada, (CH2CH2O)n ou (CH2CH(CH3)-O)nH, e n é de 1 a 10; ou (d) um ou mais monossacarídeos acetilados, dissacarídeos acetilados ou polissacarídeos acetilados; ou (e) qualquer combinação de (a) a (d).

[124] Substratos adequados também podem incluir um ou mais sacarídeos acilados selecionados do grupo consistindo em mono, di e polissacarídeos acilados. Em outra modalidade, os sacarídeos acilados são selecionados do grupo consistindo em xilana acetilada; fragmentos de xilana acetilada; xilose acetilada (tal como tetra-acetato de xilose); glicose acetilada (tal como penta-acetato de a-D- glicose; penta-acetato de β-D-glicose; 1-tio-P-D-glicose- 2,3,4,6-tetra-acetato); penta-acetato de β-D-galactose; hexa-acetato de sorbitol; octoacetato de sacarose; β-D- ribofuranose-1,2,3,5-tetra-acetato; P-D-ribofuranose- 1,2,3,4-tetra-acetato; tri-O-acetil-D-galactal; tri-O- acetil-D-glucal; tetra-acetato de β-D-xilofuranose , penta- acetato de β-D-glicopiranose; β-D-glicopiranose-1,2,3,4- tetra-acetato; β-D-glicopiranose-2,3,4,6-tetra-acetato; 2- acetamido-2-desóxi-1,3,4,6-tetra-acetil-D-glicopiranose; 2- acetamido-2-desóxi-3,4,6-triacetil-1-cloreto-a-D- glicopiranose; penta-acetato de B-D-manopiranose e celulose acetilada. Em uma modalidade preferencial, o sacarídeo acetilado é selecionado do grupo consistindo em β-D- ribofuranose-1,2,3,5-tetra-acetato; tri-O-acetil-D- galactal; tri-O-acetil-D-glical; octoacetato de sacarose; e celulose acetilada.

[125] Em outra modalidade, substratos adequados adicionais também podem incluir 5-acetoximetil-2- furaldeído; 3,4-diacetóxi-1-buteno; ácido 4- acetoxibenezoico; acetato de vanilina; acetato do éter propilenoglicolmetílico; lactato de metila; lactato de etila; glicolato de metila; glicolato de etila; metoxiacetato de metila; metoxiacetato de etila; 3- hidroxibutirato de metila; 3-hidroxibutirato de etila; e citrato de trietil-2-acetila.

[126] Em outra modalidade, substratos adequados são selecionados do grupo consistindo em; monoacetina; diacetina; triacetina; monopropionina; dipropionina; tripropionina; monobutirina; dibutirina; tributirina; penta-acetato de glicose; tetra-acetato de xilose; xilana acetilada; fragmentos de xilana acetilada; β-D- ribofuranose-1,2,3,5-tetra-acetato; tri-O-acetil-D- galactal; tri-O-acetil-D-glical; monoésteres ou diésteres de 1,2-etanodiol; 1,2-propanodiol; 1,3-propanodiol; 1,2- butanodiol; 1,3-butanodiol; 2,3-butanodiol; 1,4-butanodiol; 1,2-pentanodiol; 2,5-pentanodiol; 1,5-pentanodiol; 1,6- pentanodiol; 1,2-hexanodiol; 2,5-hexanodiol; 1,6- hexanodiol; e misturas dos mesmos. Em outra modalidade, o substrato é um poliol C1 a C6 compreendendo um ou mais grupos éster. Em uma modalidade preferencial, um ou mais dos grupos hidroxila no poliol C1 a C6 são substituídos com um ou mais grupos acetóxi (como diacetato de 1,3- propanodiol; diacetato de 1,2-propanodiol; diacetato de 1,4-butanodiol; diacetato de 1,5-pentanodiol, etc.). Em uma outra modalidade, o substrato é o diacetato de propilenoglicol (PGDA), diacetato de etilenoglicol (EGDA) ou uma mistura dos mesmos.

[127] Em uma outra modalidade, substratos apropriados são selecionados do grupo consistindo em monoacetina, diacetina, triacetina, monopropionina, dipropionina, tripropionina, monobutirina, dibutirina e tributirina. Em ainda outro aspecto, o substrato é selecionado do grupo consistindo em diacetina e triacetina. Em uma modalidade mais preferencial, o substrato adequado compreende triacetina.

[128] O éster do ácido carboxílico está presente em uma concentração suficiente para produzir a concentração desejada do ácido peroxicarboxílico mediante per-hidrólise catalisada por enzima. O éster do ácido carboxílico não precisa ser completamente solúvel na formulação da reação, mas tem solubilidade suficiente para permitir a conversão do éster pelo catalisador per-hidrolase no correspondente ácido peroxicarboxílico. O éster do ácido carboxílico está presente na formulação da reação em uma concentração de 0,05% em peso a 40% em peso da formulação da reação, preferencialmente em uma concentração de 0,1% em peso a 20% em peso da formulação da reação, e mais preferencialmente em uma concentração de 0,5% em peso a 10% em peso da formulação da reação.

[129] A fonte de peroxigênio é fornecida como grânulos depositados em ou sobre o filme adesivo hidratável e pode incluir adutos de peróxido de hidrogênio (por exemplo, aduto de ureia-peróxido de hidrogênio (peróxido de carbamida)) sais de perborato, sais de percarbonato e sais de peróxido. A concentração do composto peroxigênio na formulação da reação pode variar de 0,0033% em peso até cerca de 50% em peso, preferencialmente de 0,033% em peso até cerca de 40% em peso, mais preferencialmente de 0,1% em peso até cerca de 30% em peso.

[130] Muitos catalisadores da per-hidrolase (células inteiras, células inteiras permeabilizadas e extratos de células inteiras parcialmente purificados) foram relatados como apresentando atividade catalase (EC 1.1 1.1.6). As catalases catalisam a conversão do peróxido de hidrogênio em oxigênio e água. Em um aspecto, o catalisador da per- hidrólise não tem atividade catalase. Em outro aspecto, um inibidor da catalase pode ser adicionado à formulação da reação. Uma pessoa versada na técnica pode ajustar a concentração do inibidor da catalase, conforme for necessário. A concentração do inibidor da catalase tipicamente varia de 0,1 mM até cerca de 1 M; preferencialmente, de cerca de 1 mM até cerca de 50 mM; mais preferencialmente de cerca de 1 mM até cerca de 20 mM.

[131] Em outra modalidade, o catalisador enzimático não possui atividade catalase significativa ou pode ser manipulado para diminuir ou eliminar a atividade catalase. A atividade catalase em uma célula hospedeira pode ser infrarregulada ou eliminada por interrupção da do(s) gene(s) responsável/responsáveis pela atividade catalase usando técnicas bem conhecidas, incluindo, mas sem se limitar, a mutagênese de transposon, expressão RNA antissentido, mutagênese direcionada e mutagênese aleatória.

[132] A concentração do ácido peroxicarboxílico gerado (por exemplo, ácido peracético) pela per-hidrólise de pelo menos um éster do ácido carboxílico é igual a pelo menos 0,1 ppm, preferencialmente pelo menos 0,5 ppm, 1 ppm, 5 ppm, 10 ppm, 20 ppm, 100 ppm, 200 ppm, 300 ppm, 500 ppm, 700 ppm, 1000 ppm, 2000 ppm, 5000 ppm ou 10.000 ppm de perácido em até 10 minutos, preferencialmente em até 5 minutos após o início da reação de per-hidrólise. Obviamente, uma pessoa versada na técnica pode ajustar os componentes reacionais para alcançar a concentração desejada de perácido.

[133] Em um aspecto, o tempo reacional necessário para produzir a concentração desejada de perácido não é maior que cerca de duas horas, preferencialmente não é maior que cerca de 30 minutos, mais preferencialmente não é maior que cerca de 10 minutos e, mais preferencialmente, é de aproximadamente 5 minutos ou menos. Em outros aspectos, uma superfície da cavidade oral entra em contato com o ácido peroxicarboxílico formado de acordo com os processos descritos na presente invenção em até 5 minutos de hidratação e combinando os componentes da reação. Em uma modalidade, o esmalte do dente entra em contato com o ácido peroxicarboxílico produzido com os processos e as composições aqui descritas dentro de cerca de 5 minutos até cerca de 24 horas ou dentro de cerca de 5 minutos até 2 horas de combinação (via hidratação pelo usuário) dos ditos componentes reacionais presentes em ou sobre a tira/filme de clareamento. Método de Ensaio por HPLC para Determinação da Concentração do Ácido Peroxicarboxílico e de Peróxido de Hidrogênio

[134] Uma variedade de métodos analíticos pode ser usada para analisar os reagentes e produtos incluindo, mas sem se limitar, a cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC), cromatografia a gás (CG), espectroscopia de massa (MS), eletroforese capilar (EC), o procedimento analítico descrito por U. Pinkernell et al., (Anal. Chem., 69(17):3623-3627 (1997)), e o ensaio com 2,2'-azino-bis-(3- etilbenzotazolina)-6-sulfonato (ABTS) (U. Pinkernell et. al. Analyst, 122: 567-571 (1997) e Dinu et. al. Adv. Funct. Mater., 20: 392-398 (2010)), conforme descrito nos presentes exemplos. Modalidades Exemplares:

[135] Modalidade 1. Uma tira de clareamento de dente (tira 1) compreendendo um filme adesivo hidratável com um primeiro lado e um segundo lado, o primeiro lado possuindo um ingrediente de branqueamento granular ligado ao mesmo, em que a tira compreende, em ou sobre o filme, ou em grânulos ligados ao primeiro lado do filme, (i) uma proteína com atividade per-hidrolítica que contém a porção de assinatura de um membro da família da carboidrato esterase 7; (ii) um doador de acila, por exemplo, selecionado a partir de ésteres do ácido carboxílico e compostos de acila,

[136] Modalidade 2. Tira 1, em que a proteína com atividade per-hidrolase compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir de: a) MAFFDLPLEELKKYRPERYEEKDFDEFWEETLAESEKFPLDPVFERMESHLKTVEAYDV TFSGYRGQRIKGWLLVPKLEEEKLPCVVQYIGYNGGRGFPHDWLFWPSMGYICFVMDTR GQGSGWLKGDTPDYPEGPVDPQYPGFMTRGILDPRTYYYRRVFTDAVRAVEAAASFPQV DQERIVIAGGSQGGGIALAVSALSKKAKALLCDVPFLCHFRRAVQLVDTHPYAEITNFL KTHRDKEEIVFRTLSYFDGVNFAARAKIPALFSVGLMDNISPPSTVFAAYNYYAGPKEI RIYPYNNHEGGGSFQAVEQVKFLKKLFEKG (SEQ ID NO: 1), b) uma sequência de aminoácidos com i) uma porção RGQ nas posições que correspondem às posições 118-120 da SEQ ID NO: 1; ii) uma porção GXSQG nas posições que correspondem às posições 186-190 da SEQ ID NO: 1; e iii) uma porção HE nas posições que correspondem às posições 303-304 da SEQ ID NO: 1; e c) uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 80% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1.

[137] Modalidade 3. Modalidade 1 ou 2, em que a proteína com atividade per-hidrolítica compreende uma sequência de aminoácidos que tem afinidade por, por exemplo, se liga a ou complexa com as superfícies orais ou, alternativamente, tem afinidade, por exemplo, se liga ou complexa com um ou mais componentes da tira de clareamento.

[138] Modalidade 4. Qualquer uma das tiras anteriores, compreendendo uma proteína com atividade per-hidrolase que se liga a ou complexa com as superfícies orais (por exemplo, película do dente ou esmalte) compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir de a) MAFFDLPLEELKKYRPERYEEKDFDEFWEETLAESEKFPLDPVFERMESHLKTVEAYDV TFSGYRGQRIKGWLLVPKLEEEKLPCVVQYIGYNGGRGFPHDWLFWPSMGYICFVMDTR GQGSGWLKGDTPDYPEGPVDPQYPGFMTRGILDPRTYYRRVFTDAVRAVEAAASFPQVD QERIVIAGGSQGGGIALAVSALSKKAKALLCDVPFLCHFRRAVQLVDTHPYAEITNFLK THRDKEEIVFRTLSYFDGVNFAARAKIPALFSVGLMDNISPPSTVFAAYNYYAGPKEIR IYPYNHEGGGSFQAVEQVKFLKKLFEKGGPGSGGAGSPGSAGGPGSTKPPRTPTANTSR PHHNFGSGGGGSPHHHHHH (SEQ ID NO: 2), e b) uma sequência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 2.

[139] Modalidade 5. Qualquer uma das tiras anteriores, em que a proteína com atividade per-hidrolítica é fornecida sob a forma granular sobre a primeira superfície do filme.

[140] Modalidade 6. Qualquer uma das tiras anteriores, sendo que o segundo lado do filme adesivo hidratável é ligado a uma camada que inibe a dissolução do filme adesivo hidratável.

[141] Modalidade 7. Qualquer uma das tiras anteriores, sendo que o ingrediente de branqueamento granular é revestido com um material de rápida dissolução, como amido de milho, sulfato de sódio, goma arábica e combinações dos mesmos.

[142] Modalidade 8. Qualquer uma das tiras anteriores, sendo que o ingrediente de branqueamento granular é selecionado dentre os grânulos que compreendem oxidantes orgânicos e/ou inorgânicos, por exemplo, selecionados a partir de peróxido de hidrogênio, peróxido de ureia, percarbonatos, perboratos, peroximonofosfatos, peroxidissulfatos, peroxiácidos e ácido peracético.

[143] Modalidade 9. Qualquer uma das tiras anteriores, sendo que o ingrediente de branqueamento granular é selecionado de peróxidos sólidos e doadores de peróxidos sólidos, por exemplo, selecionados a partir de sais de peróxido ou complexos (por exemplo, tais como como sais de peroxifosfato, peroxicarbonato, perborato, peroxissilicato ou persulfato; por exemplo, peroxifosfato de cálcio, perborato de sódio, peróxido de carbonato de sódio, peroxifosfato de sódio e persulfato de potássio); hipocloritos; peróxido de ureia; complexos do polímero de peróxido de hidrogênio como complexos do polímero de peróxido de hidrogênio-polivinilpirrolidona; peróxidos metálicos, por exemplo, peróxido de zinco e peróxido de cálcio; perácidos e combinações dos mesmos.

[144] Modalidade 10. Qualquer uma das tiras anteriores, sendo que o ingrediente de branqueamento granular compreende peróxido de ureia, um complexo polimérico de peróxido de hidrogênio-polivinilpirrolidona, percarbonato de sódio ou uma combinação de dois ou mais dos mesmos.

[145] Modalidade 11. Qualquer uma das tiras anteriores, em que o tamanho de partícula (D50) dos grânulos na primeira superfície do filme, por exemplo, o ingrediente de branqueamento granular, ou per-hidrolase ou doador de acila na forma granular é de 0,1 a 300 mícrons, por exemplo, de 10 a 275 mícrons, por exemplo, de 100 a 250 mícrons.

[146] Modalidade 12. Qualquer uma das tiras anteriores, sendo que o ingrediente de branqueamento granular compreende mais de 0,01%, por exemplo, de 0,01 a 0,1%, por exemplo, de 0,02 a 0,08% do peso total do filme adesivo hidratável e um ingrediente de branqueamento granular ligado a isso.

[147] Modalidade 13. Qualquer uma das tiras anteriores, sendo que a quantidade de agente de branqueamento granular sobre o primeiro lado do filme adesivo hidratável é de 0,001 a 10 mg/cm2, por exemplo, de 0,001 a 1 mg/cm2, por exemplo, de 0,005 a 0,015 mg/cm2.

[148] Modalidade 14. Qualquer uma das tiras anteriores, sendo que o doador de acila é selecionado de (i) um ou mais ésteres de ácido carboxílico C2-18, por exemplo, ésteres de ácido carboxílico C2-6 (por exemplo, ésteres de acetila), incluindo ésteres de ácido alquilcarboxílico lineares ou ramificados, opcionalmente substituídos com hidróxi e/ou alcóxi C1-4; (ii) um ou mais glicerídeos acilados (por exemplo, mono, di e triglicerídeos), (iii) sacarídeos acilados e (iv) misturas dos mesmos.

[149] Modalidade 15. Qualquer uma das tiras anteriores, o doador de acila sendo selecionado de 1,2,3- triacetoxipropano (às vezes referido na presente invenção como triacetina ou triacetato de glicerina) e sacarídeos acilados, por exemplo, sacarídeos acilados.

[150] Modalidade 16. Qualquer uma das tiras anteriores, compreendendo um doador de acila que compreende um composto éster com solubilidade em água de pelo menos 5 ppm a 25 °C.

[151] Modalidade 17. Qualquer uma das tiras anteriores, que compreende um perácido ou que gera um perácido após o uso.

[152] Modalidade 18. Qualquer uma das tiras anteriores, sendo que os ingredientes estão presentes em quantidades suficientes para fornecer, mediante mistura, um agente branqueador em uma quantidade e concentração eficazes para branquear os dentes.

[153] Modalidade 19. Qualquer uma das tiras anteriores, sendo que o filme adesivo hidratável compreende um ou mais polímeros hidrossolúveis selecionados a partir de éteres de celulose hidrofílicos (por exemplo, carboximetilcelulose, hidroxipropilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose), acetatos de polivinila, carbômeros (por exemplo, CARBOPOL® 97 IP), gomas polissacarídicas (por exemplo, goma xantana), amidos alimentícios modificados, gelatina modificados (por exemplo, gelatina à base de peixe ou animal), copolímeros de carboxivinila reticulados, polivinilpirrolidonas reticuladas, óxido de polietileno (por exemplo, POLYOX™), ácidos poliacrílicos e poliacrilatos, álcoois polivinílicos, alginato, caseína, pululano e combinações dos mesmos.

[154] Modalidade 20. Qualquer uma das tiras anteriores, sendo que o filme adesivo hidratável compreende um ou mais polímeros hidrossolúveis selecionados a partir de éteres de celulose hidrofílicos (por exemplo, hidroxipropilmetilcelulose ou hidroxipropilcelulose), óxido de polietileno, acetatos de polivinila e carbômeros (por exemplo, CARBOPOL® 971 P); e combinações dos mesmos.

[155] Modalidade 21. Qualquer uma das tiras anteriores, sendo que o filme adesivo hidratável compreende hidroxipropilmetilcelulose, acetatos de polivinila e um carbômero, por exemplo, em uma razão em peso seco de 10-20 HPMC:2-10 PVAc:1 carbômero.

[156] Modalidade 22. Qualquer uma das tiras anteriores, sendo que o filme adesivo hidratável compreende adicionalmente um plastificante, por exemplo, propilenoglicol, polietilenoglicol ou triacetina.

[157] Modalidade 23. Qualquer uma das tiras anteriores, sendo que o primeiro lado do filme adesivo hidratável é revestido por uma cobertura protetora antes do uso.

[158] Modalidade 24. Qualquer uma das tiras anteriores, sendo que o filme adesivo hidratável tem uma viscosidade igual a pelo menos 100.000 cps após a ativação, por exemplo, uma viscosidade de 100.000 a 200.000 cps.

[159] Modalidade 25. Qualquer uma das tiras anteriores, sendo que o filme adesivo hidratável é substancialmente seco antes da aplicação.

[160] Modalidade 26. Qualquer uma das tiras anteriores, sendo que a espessura do filme adesivo hidratável é de 0,1 a 5 mm, por exemplo, de 0,5 a 5 mm.

[161] Modalidade 27. Qualquer uma das tiras anteriores, sendo que as dimensões totais aproximadas são de 2 a 10 cm de comprimento x 0,5 a 2 cm de largura x 0,1 a 10 mm de espessura, por exemplo, de 1 a 10 mm de espessura, por exemplo, uma tira em que a área superficial de um lado é igual a 5 a 20 cm2, por exemplo, de cerca de 5 a 15 cm2, por exemplo, de cerca de 10 cm2.

[162] Modalidade 28. Qualquer uma das tiras anteriores, compreendendo grânulos revestidos de um complexo de polímero de peróxido de hidrogênio-polivinilpirrolidona peróxido de ureia e/ou percarbonato de sódio, e grânulos de per-hidrolase sobre a primeira a superfície do filme, com triacetina dispersa no filme.

[163] Modalidade 29. Qualquer uma das tiras anteriores, compreendendo ainda grânulos de um agente antissensibilidade, por exemplo, nitrato de potássio ou arginina.

[164] Modalidade 30. Um método (método 2) de clareamento dos dentes que compreende aplicar o primeiro lado de uma tira como descrito mais acima, por exemplo, a tira 1 et seq. diretamente aos dentes e deixando-a por um tempo suficiente, por exemplo, pelo menos 5 minutos, por exemplo 10 a 60 minutos, por exemplo, 10 a 30 minutos, para branquear os dentes.

[165] Modalidade 31. Um método (método 3) para fazer uma tira para clareamento dental, por exemplo, uma tira conforme descrito mais acima, de acordo com a tira 1 et seq., compreendendo fornecer um filme adesivo hidratável, por exemplo, como descrito acima, cujo filme foi retirado da água e não totalmente seco, ou cujo filme foi umedecido, adicionando à uma superfície do filme grânulos de um ingrediente de branqueamento granular, por exemplo, conforme descrito acima, e secando o filme com os grânulos adicionados a uma superfície.

[166] Por exemplo, as tiras podem ser feitas primeiramente fazendo o filme adesivo hidratável, usando meios convencionais e, em seguida, adicionando o ingrediente clareador granulado à uma superfície. As tiras de filme adesivo hidratável podem ser retiradas da água de uma variedade de maneiras conhecidas na técnica, como por extrusão ou remoção de uma suspensão aquosa (por exemplo, em um nível de sólidos de 10 a 30%) sobre uma esteira aquecida, da qual a água é evaporada. Alternativamente, o filme é seco e, em seguida, reumedecido. Os grânulos podem ser adicionados à superfície desse filme enquanto o filme é semisseco, ou seja, apenas úmido o suficiente para ser pegajoso, de modo que os grânulos aderem à superfície do filme. Após o filme ser totalmente seco e refrigerado até a temperatura ambiente, os grânulos continuam a aderir à superfície do filme. Antes do uso, portanto, o filme adesivo hidratável e a tira como um todo são substancialmente secos. Devido ao fato de o peróxido estar superfície do filme, uma quantidade relativamente pequena de grânulos é necessária para fornecer uma concentração efetiva na superfície. Modalidades preferenciais:

[167] Quando expostos à saliva ou outras fontes de água (como água da torneira), os grânulos se dissolvem e liberam os componentes reacionais para produzir enzimaticamente o perácido desejado. A hidratação da camada adesiva hidratável aumenta a aderência do filme, permitindo que o filme/tira clareador se ligue à superfície o alvo (ou seja, o esmalte do dente).

[168] O filme adesivo hidratável compreende um ou mais polímeros hidrossolúveis oralmente aceitáveis selecionados a partir de éteres de celulose hidrofílicos (por exemplo, carboximetilcelulose, hidroxipropilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose), acetatos de polivinila, carbômeros (por exemplo, CARBOPOL® 97 IP), gomas polissacarídicas (por exemplo, goma xantana), amidos alimentícios modificados, gelatina (por exemplo, gelatina à base de peixe ou animal), copolímeros de carboxivinila reticulados, polivinilpirrolidonas reticuladas, óxido de polietileno (por exemplo, POLYOX™), ácidos poliacrílicos e poliacrilatos, álcoois polivinílicos, alginato, caseína, pululano e combinações dos mesmos. Formulações de gel adesivas para uso com agentes de clareamento dental são conhecidas na técnica, por exemplo, conforme descrito nas Patentes Norte-Americanas Nos. 7.862.801; 5.746.598; 6.730.316; e 7.128.899; cada uma incorporada por referência em sua totalidade. O filme adesivo permite que o agente de branqueamento perácido o fique em contato com os dentes por períodos de tempo prolongados e proteja os tecidos moles e, dessa forma, ele deve fornecer uma alta viscosidade, por exemplo, uma viscosidade após a aplicação de pelo menos 100.000 centipoise (cps) (cerca de 100 Pascal-segundo (Pas)), preferencialmente de 100.000 a 200.000 cps (100 a 200 Pa-s).

[169] Onde uma segunda camada de filme é usada para proteger o filme adesivo hidratável de rápida degradação ou dissolução, o veículo ou material de suporte pode ser feito de tecidos, pano, composto de madeira, resina, elastômero, papel, derivados de celulose insolúveis ou menos solúveis como etilcelulose e acetato de celulose, cloreto de polivinila, cera, PARAFILM™, polietileno, álcool polivinílico, TEFLON™, cloreto de polivinila, acetato de polivinila e seus derivados.

[170] O ingrediente de branqueamento granular pode ser um peróxido sólido ou doador de peróxido sólido selecionado a partir de sais de peróxido ou complexos (tais como sais de peroxifosfato, peroxicarbonato, perborato, peroxissilicato ou persulfatos; por exemplo, peroxifosfato de cálcio, perborato de sódio, peróxido de carbonato de sódio, peroxifofato de sódio e persulfato de potássio), hipocloritos; peróxido de ureia; complexos do polímero de peróxido de hidrogênio coo complexos do polímero de peróxido de hidrogênio-polivinilpirrolidona e peróxidos de metal, por exemplo, peróxido de zinco e peróxido de cálcio; um perácido sólido; e combinações dos mesmos. Em modalidades particulares, o ingrediente de branqueamento granular é peróxido de ureia ou um complexo do polímero de peróxido de hidrogênio- polivinilpirrolidona. O ingrediente de branqueamento granular pode ser opcionalmente revestido para fornecer estabilidade de armazenamento melhorada (por exemplo, revestido com sulfato de sódio, amido de milho ou goma arábica). Listagem das modalidades preferenciais:

[171] Modalidade preferencial 1. Uma tira de clareamento de dente que compreende um filme adesivo hidratável com um primeiro lado e um segundo lado, o primeiro lado possuindo um ingrediente de branqueamento granular ligado ao mesmo, sendo que a tira de clareamento de dente compreende ainda, em ou sobre o filme, ou sob a forma de grânulos ligados ao primeiro lado do filme; a) uma enzima com atividade per-hidrolítica, a dita enzima possuindo uma porção de assinatura da família da carboidrato esterase 7 (CE-7) que se alinha com uma sequência de referência SEQ ID NO: 1, a dita porção de assinatura compreendendo: i) uma porção motivo RGQ nas posições correspondentes às posições 118-120 da SEQ ID NO: 1; ii) uma porção GXSQG nas posições correspondentes às posições 186-190 da SEQ ID NO: 1; e iii) uma porção HE nas posições correspondentes às posições 303-304 da SEQ ID NO: 1; e (b) ao menos um substrato doador de acila, o dito substrato sendo selecionado do grupo consistindo em: i) ésteres com a estrutura [X]mR5 em que X = um grupo éster de fórmula R6C(O)O R6 = porção hidrocarbila C1 a C7 linear, ramificada ou cíclica, opcionalmente substituída com grupos hidroxila ou grupos alcóxi C1 a C4, em que, opcionalmente, compreende uma ou mais ligações éter para R6 = C2 a C7; R5 = uma porção hidrocarbila C1 a C6 linear, ramificada ou cíclica, ou uma porção cíclica heteroaromática com cinco membros opcionalmente substituída com grupos hidroxila; em que cada átomo de carbono em R5 compreende individualmente no máximo um grupo hidroxila ou no máximo um grupo éster ou grupo ácido carboxílico; em que R5 opcionalmente compreende uma ou mais ligações éter; M é um número inteiro que varia de 1 até o número de átomos de carbono em R5; e em que os ditos ésteres têm solubilidade em água de pelo menos 5 ppm a 25 °C; ii) glicerídeos com a estrutura

VKs. em que R1 é uma alquila C1 a C7 de cadeia linear ou de cadeia ramificada opcionalmente substituída com uma hidroxila ou um grupo alcóxi C1 a C4, e R3 e R4 são individualmente H ou R1C(O); iii) um ou mais ésteres de fórmula

[172] Modalidade preferencial 2. A tira de clareamento de dente, de acordo com a modalidade preferencial 1, sendo que a enzima com atividade per-hidrolítica compreende uma sequência de aminoácidos selecionada dentre: a) SEQ ID NO: 1; e b) uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 80% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1.

[173] Modalidade preferencial 3. A tira de clareamento de dente, de acordo com a modalidade preferencial 1, em que a enzima que tem atividade per-hidrolítica compreende ainda um domínio de ligação fundido ao N ou C-terminal da enzima, o dito domínio de ligação tendo afinidade por um tecido oral ou pela tira de clareamento de dente.

[174] Modalidade preferencial 4. A tira de clareamento de dente, de acordo com a modalidade preferencial 3, sendo que o domínio de ligação com afinidade por um tecido oral compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 178 a 197.

[175] Modalidade preferencial 5. A tira de clareamento de dente, de acordo com qualquer uma das modalidades preferenciais, sendo que a enzima com atividade per- hidrolítica tem afinidade por um tecido oral e compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir da a) SEQ ID NO: 2, e b) uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 80% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 2.

[176] Modalidade preferencial 6. A tira de clareamento de dente, de acordo com qualquer uma das modalidades preferenciais, compreendendo ainda uma camada de suporte fixada ao dito segundo lado do filme adesivo hidratável, a dita camada de suporte sendo capaz de inibir a dissolução do filme adesivo hidratável.

[177] Modalidade preferencial 7. A tira de clareamento de dente, de acordo com qualquer uma das modalidades preferenciais, sendo que o ingrediente de branqueamento granular é revestido com um revestimento hidrossolúvel capaz de dissolver após a hidratação.

[178] Modalidade preferencial 8. A tira de clareamento de dente, de acordo com qualquer uma das modalidades preferenciais acima, sendo que o ingrediente de branqueamento granular é selecionado de peróxidos sólidos e de doadores de peróxido sólido.

[179] Modalidade preferencial 9. A tira de clareamento de dente, de acordo com qualquer uma das modalidades preferenciais, sendo que o ingrediente de branqueamento granular é selecionado dentre sais de peróxido, complexos de peróxido, peroxifosfato, peroxicarbonato, perborato, peroxissilicato, sais de persulfato, peroxifosfato de cálcio, perborato de sódio, peróxido de carbonato de sódio, peroxifosfato de sódio, persulfato de potássio, hipocloritos, peróxido de ureia, complexos do polímero de peróxido de hidrogênio, complexos do polímero de peróxido de hidrogênio-polivinilpirrolidona, peróxidos de metal, peróxido de zinco, peróxido de cálcio e combinações dos mesmos.

[180] Modalidade preferencial 10. A tira de clareamento de dente, de acordo com qualquer uma das modalidades preferenciais acima, sendo que o ingrediente de branqueamento granular compreende peróxido de ureia. Em algumas modalidades, o ingrediente de branqueamento granular compreende um complexo de polímero de peróxido de hidrogênio-polivinilpirrolidona. Em algumas modalidades, o complexo de polímero de peróxido de hidrogênio- polivinilpirrolidona é um complexo de polímero de polivinilpirrolidona reticulado com peróxido de hidrogênio.

[181] Modalidade preferencial 11. A tira de clareamento de dente, de acordo com qualquer uma das modalidades preferenciais, sendo que o diâmetro médio de partícula (D50) do ingrediente de branqueamento granular variou de 10 mícrons até 300 mícrons, por exemplo, de 10 mícrons a 200 mícrons.

[182] Modalidade preferencial 12. A tira de clareamento de dente, de acordo com qualquer uma das modalidades preferenciais, sendo que a tira de clareamento de dente compreende de cerca de 0,01% em peso até cerca de 0,1% em peso de um perácido. Em algumas modalidades, o ingrediente de branqueamento granular compreende de cerca de 0,1% em peso até cerca de 30% em peso de uma fonte de peroxigênio.

[183] Modalidade preferencial 13. A tira de clareamento de dente, de acordo com qualquer uma das modalidades preferenciais acima, sendo que a quantidade do agente branqueador granular sobre o primeiro lado do filme adesivo hidratável varia de 0,001 mg/cm2 até 10 mg/cm2, por exemplo, de 0,001 mg/cm2 até 1 mg/cm2.

[184] Modalidade preferencial 14. A tira de clareamento de dente, de acordo com qualquer uma das modalidades preferenciais acima, sendo que o substrato doador de acila é 1,2,3-triacetoxipropano.

[185] Modalidade preferencial 15. A tira de clareamento de dente, de acordo com qualquer uma das modalidades preferenciais, sendo que o filme adesivo hidratável compreende um ou mais polímeros hidrossolúveis selecionados a partir de um éter de celulose hidrofílico, carboximetilcelulose, hidroxipropilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, um acetato de polivinila, um carbômero, uma goma polissacarídica, goma xantana, um amido alimentício modificado, gelatina, gelatina à base de peixe ou animal, um copolímero de carboxivinila reticulado, uma polivinilpirrolidona reticulada, óxido de polietileno, um ácido poliacrílico, um poliacrilato, um álcool polivinílico, alginato, caseína, pululano e uma combinação de dois ou mais dos mesmos.

[186] Modalidade preferencial 16. A tira de clareamento de dente, de acordo com qualquer uma das modalidades preferenciais acima, sendo que o filme adesivo hidratável compreende um ou mais polímeros hidrossolúveis selecionados a partir de um éter de celulose hidrofílico, um acetato de polivinila, um carbômero e uma combinação de dois ou mais dos mesmos.

[187] Modalidade preferencial 17. A tira de clareamento de dente, de acordo com qualquer uma das modalidades preferenciais acima, sendo que o filme adesivo hidratável compreende hidroxipropilmetilcelulose (HPMC), acetato de polivinila (PVAc) e um carbômero em uma razão em peso seco para HMPC:PVAc:carbômero de 10 a 20:2 a 10:1.

[188] Modalidade preferencial 18. A tira de clareamento de dente, de acordo com qualquer uma das modalidades preferenciais acima, sendo que o filme adesivo hidratável compreende ainda um plastificante.

[189] Modalidade preferencial 19. A tira de clareamento de dente, de acordo com qualquer uma das modalidades preferenciais acima, sendo que compreende ainda propilenoglicol.

[190] Modalidade preferencial 20. Método de clareamento dos dentes compreendendo a) fornecer um sistema de embalagem que compreende a tira de clareamento de dente, de acordo com qualquer uma das modalidades preferenciais acima; b) remover a tira de clareamento de dente do sistema de embalagem; e colocar em contato a tira de clareamento de dente diretamente com os dentes por um período de tempo suficiente para branquear os dentes; em que a tira de clareamento de dente é hidratada pela umidade presente na cavidade oral ou na superfície do dente ou é hidratada depois da etapa (b), porém antes da etapa (c).

[191] Modalidade preferencial 21. Método da modalidade preferencial 20, sendo que a tira de clareamento compreende ainda uma camada de suporte fixada ao dito segundo lado do filme adesivo hidratável, a dita camada de suporte sendo capaz de inibir a dissolução do filme adesivo hidratável.

[192] Modalidade preferencial 22. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades preferenciais acima, sendo que o diâmetro médio de partícula (D50) do ingrediente de branqueamento granular variou de 10 mícrons até 200 mícrons.

[193] Modalidade preferencial 23. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades preferenciais acima, sendo que o ingrediente de branqueamento granular compreende mais de 0,01% em peso do peso total do filme adesivo hidratável, e um ingrediente de branqueamento granular ligado ao mesmo. Em algumas modalidades, o ingrediente de branqueamento granular compreende mais de 0,05% em peso do peso total do filme adesivo hidratável e um ingrediente de branqueamento granular ligado ao mesmo. Em algumas modalidades, o ingrediente de branqueamento granular compreende de cerca de 0,01% em peso até cerca de 0,1% em peso do peso total do filme adesivo hidratável e um ingrediente de branqueamento granular ligado ao mesmo.

[194] Modalidade preferencial 24. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades preferenciais acima, sendo que a quantidade do agente branqueador granular sobre o primeiro lado do filme adesivo hidratável varia de 0,001 mg/cm2 até 1 mg/cm2.

[195] Modalidade preferencial 25. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades preferenciais acima, sendo que o substrato doador de acila é 1,2,3-triacetoxipropano.

[196] Modalidade preferencial 26. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades preferenciais acima, sendo que o filme adesivo hidratável compreende um ou mais polímeros hidrossolúveis selecionados a partir de um éter de celulose hidrofílico, carboximetilcelulose, hidroxipropilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, um acetato de polivinila, um carbômero, uma goma polissacarídica, goma xantana, um amido alimentício modificado, gelatina, gelatina à base de peixe ou animal, um copolímero de carboxivinila reticulado, uma polivinilpirrolidona reticulada, óxido de polietileno, um ácido poliacrílico, um poliacrilato, um álcool polivinílico, alginato, caseína, pululano e uma combinação de dois ou mais dos mesmos.

[197] Modalidade preferencial 27. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades preferenciais acima, sendo que o filme adesivo hidratável compreende um ou mais polímeros hidrossolúveis selecionados a partir de um éter de celulose hidrofílico, um acetato de polivinila, um carbômero e uma combinação de dois ou mais dos mesmos.

[198] Modalidade preferencial 28. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades preferenciais acima, sendo que o filme adesivo hidratável compreende hidroxipropilmetilcelulose (HPMC), acetato de polivinila (PVAc) e um carbômero em uma razão em peso seco para HMPC:PVAc:carbômero de 10 a 20 : 2 a 10 : 1.

[199] Modalidade preferencial 29. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades preferenciais acima, sendo que o filme adesivo hidratável compreende ainda um plastificante.

[200] Modalidade preferencial 30. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades preferenciais acima, sendo que o filme adesivo hidratável compreende ainda propilenoglicol.

[201] Modalidade preferencial 31. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades preferenciais, sendo que o ingrediente de branqueamento granular é revestido com um revestimento hidrossolúvel capaz de dissolver após a hidratação.

[202] Modalidade preferencial 32. Método para fazer uma tira de clareamento de dente, que compreende: a) fornecer um filme adesivo hidratável semisseco, b) aplicar em uma superfície do filme, grânulos de um ingrediente de branqueamento granular, por meio do que os grânulos aderem à superfície, e c) secar o filme.

[203] Em algumas modalidades, o diâmetro médio de partícula (D50) do ingrediente de branqueamento granular varia de 10 mícrons até 300 mícrons. Em algumas modalidades, o diâmetro médio de partícula (D50) do ingrediente de branqueamento granular varia de 25 mícrons até 200 mícrons. Em algumas modalidades, o diâmetro médio de partícula (D50) do ingrediente de branqueamento granular varia de 35 mícrons até 150 mícrons. Em algumas modalidades, o diâmetro médio de partícula (D50) do ingrediente de branqueamento granular varia de 50 mícrons até 125 mícrons. Em algumas modalidades, o diâmetro médio de partícula (D50) do ingrediente de branqueamento granular varia de 60 mícrons até 100 mícrons. Em algumas modalidades, o diâmetro médio de partícula (D64) do ingrediente de branqueamento granular é igual a cerca de 64 mícrons. Em algumas modalidades, o diâmetro médio de partícula (D94) do ingrediente de branqueamento granular é igual a cerca de 64 mícrons.

[204] Em algumas modalidades, o diâmetro médio de partícula (D50) da enzima que tem atividade per-hidrolítica é de 100 mícrons até 300 mícrons. Em algumas modalidades, o diâmetro médio de partícula (D50) da enzima que tem atividade per-hidrolítica é de 150 mícrons até 275 mícrons. Em algumas modalidades, o diâmetro médio de partícula (D50) da enzima que tem atividade per-hidrolítica é de 175 mícrons até 250 mícrons.

[205] Todos os ingredientes para uso nas tiras descritas na presente invenção devem ser oralmente aceitáveis. Por "oralmente aceitável", tal como o termo é usado na presente invenção, se entende um ingrediente que está presente em uma tira, conforme descrito em uma quantidade e de forma que não torne a tira insegura para o uso na cavidade oral.

[206] Como usado em todo o documento, as faixas são usadas como abreviação para descrever cada valor que está dentro do intervalo. Qualquer valor dentro do intervalo pode ser selecionado como o término do mesmo. Além disso, todas as referências citadas neste documento são, por meio deste, incorporadas por referência em suas totalidades. No caso de conflito de uma definição da presente divulgação e de uma referência citada, a presente divulgação prevalece.

[207] A menos que seja especificado de outra forma, todas as porcentagens e quantidades expressas neste documento e em outras partes do relatório descritivo devem ser entendidas como se referindo às porcentagens em peso. As quantidades dadas baseiam-se no peso ativo do material. EXEMPLOS

[208] Os exemplos a seguir são fornecidos para demonstrar aspectos preferenciais da invenção. Deve ser compreendido pelas pessoas versadas na técnica que as técnicas divulgadas nos exemplos a seguir são técnicas para funcionar bem na prática da invenção e, dessa forma, podem ser consideradas como constituindo modos preferenciais para a sua prática. No entanto, as pessoas versadas na técnica devem, à luz da presente divulgação, notar que muitas mudanças podem ser feitas nas modalidades específicas que são divulgadas e ainda assim obter um resultado igual ou semelhante sem se afastar do espírito e do escopo dos métodos e exemplos presentemente divulgados.

[209] Todos os reagentes e materiais foram obtidos junto à DIFCO Laboratories (Detroit, MI), GIBCO/BRL (Gaithersburg, MD), TCI America (Portland, OR), Roche Diagnostics Corporation (Indianapolis, IN), Thermo Scientific (Pierce Protein Research Products) (Rockford, IL) ou Sigma/Aldrich Chemical Company (St. Louis, MO), a menos que seja especificado de outra forma.

[210] As abreviaturas a seguir no relatório descritivo correspondem a unidades de medida, técnicas, propriedades ou compostos da seguinte maneira: "seg" ou "s" significa segundo(s), "min" significa minuto(s), "h" ou "hr" significa hora(s), "μL" significa microlitro(s), "mL" significa mililitro(s), "L" significa litro(s), "mM" significa milimolar, "M" significa molar, "mmol" significa milimol(s), "ppm" significa parte(s) por milhão, "wt" significa peso, "wt %" significa porcentagem em peso, "g" significa grama(s), "mg" significa miligrama(s), "g" significa micrograma(s) e "ng" significa nanograma(s). Exemplo 1

[211] Uma tira é preparada como descrito acima, formando o filme adesivo hidratável e, em seguida, enquanto o filme é está pegajoso, adicionando o agente clareador granulado e a enzima granulada à superfície de um lado, usando os ingredientes na tabela 1. A tira irá sofrer erosão lentamente na boca após a aplicação e, dessa forma, não precisa ser removida.

[212] A tira no exemplo 1 é retirada da água por extrusão ou por fundição de uma suspensão aquosa (por exemplo, com 10 a 30% de teor de sólidos) sobre uma esteira aquecida, da qual a água é evaporada. Os grânulos são adicionados à superfície desse filme quando o mesmo é semisseco ou seco, mas ainda está pegajoso. Uma vez arrefecido até a temperatura ambiente, os grânulos aderem à superfície do filme. Para uma tira com uma área de 10 cm2 e um peso de 10 mg/cm2, essa fórmula fornece 5 mg de triacetina. Supondo-se que 1,4 mg dos grânulos de branqueador são distribuídos sobre a tira, juntamente com 0,3 mg de grânulos de enzima, essa dose é suficiente para ácido peracético suficiente diretamente na superfície do dente para fazer uma tira de clareamento apenas com peróxido funcionar significativamente melhor. (Tiras com apenas peróxido têm tipicamente uma dose total de cerca de 3 a 10 mg de peróxido).

[213] Quando expostos à saliva ou outras fontes de água (como água da torneira), os grânulos se dissolvem imediatamente e tornaram-se ativos. A camada adesiva também é ativada e adere aos dentes eficazmente. O exemplo 1 é projetado para sofrer erosão lentamente na boca ao longo do tempo, de modo que o usuário não precisa removê-lo. Exemplo 2

[214] Uma tira é preparada como descrito acima, formando o filme adesivo hidratável e, em seguida, enquanto o filme ainda está pegajoso, adicionando os agentes granulados a um lado e a camada de suporte protetora do outro lado, usando os ingredientes na tabela 2. Uma vez que a camada de suporte não se dissolverá, o usuário deve removê-la após passar um período suficiente de tempo para permitir que o clareamento ocorra, normalmente de cerca de 10 a 30 minutos. As duas camadas também podem ser produzidas simultaneamente por extrusão ou fundição em base de solvente, em seguida, o agente clareador granulado pode ser adicionado à superfície do filme adesivo hidratável. Tabela 2

Exemplo 3

[215] Vários tamanhos de partículas do complexo de peróxido de hidrogênio-polivinilpirrolidona e uma enzima com atividade per-hidrolítica ("enzima") foram avaliados por suas capacidades de gerar ácido peracético uniformemente em toda a superfície de uma tira adesiva hidratável contendo triacetina.

[216] Para avaliar a geração do ácido peracético a partir desse produto, discos de 0,3175 cm (3/8") foram cortados do filme. Cada disco foi hidratado com 20 de tampão fosfato de sódio 50 mM, pH 7,2 e incubado a 37 °C durante 15 min. 380 de ácido fosfórico 0,1 M foi adicionado ao filme para suprimir a reação enzimática e diluir a amostra para detecção. A solução foi analisada para o ácido peracético com análises de HPLC para o ácido peracético usando o método descrito anteriormente na Patente Norte- Americana No. 7.829.315, para DiCosimo et al. Para cada avaliação, um mínimo de três amostras foram cortadas do produto da tira em um comprimento de 60,96 cm (24 polegadas) de filme.

[217] Amostras de tira com a enzima e um revestimento de peróxido de hidrogênio-polivinilpirrolidona foram feitas primeiramente incorporando a enzima em um filme polimérico de pululano. O filme seco contendo a enzima foi triturado e peneirado até um tamanho de partícula de 60 a 80 mesh (177 μm a 250 μm) . A forma particulada da enzima foi, em seguida, misturada com peróxido de hidrogênio- polivinilpirrolidona (PEROXYDONE™ XL-10, Ashland Inc., Wilmington, DE). Essa mistura foi depositada sobre uma estrutura de filme com duas camadas com uma camada adesiva hidratável contento principalmente óxido de polietileno e triacetina, e uma camada de suporte de álcool polivinílico para fornecer uma camada de suporte não dissolvível. Os resultados da avaliação da geração de ácido peracético para duas análises consecutivas estão listados na tabela 3. As amostras foram avaliadas no início e no fim da produção e demonstram uma consistência insatisfatória para o ácido peracético. Tabela 3: Produção de ácido peracético a partir de tiras adesivas hidratáveis produzidas com um revestimento de enzima per-hidrolase em pululano e PEROXYDONE™ XL-10.

[218] O PEROXYDONE XL-10 foi subsequentemente processado para formar partículas maiores por granulação com etanol de alto cisalhamento. Após a granulação, a amostra foi peneirada até um tamanho de partícula de 60 a 200 mesh (75 μm a 250 μm) . A distribuição de tamanho de partícula de PEROXYDONE™ XL-10, conforme utilizada para produzir amostras descrita na tabela 3, e o PEROXYDONE™ XL- 10 após a granulação de alto cisalhamento e peneiramento, são descritos na tabela 4. As amostras foram medidas em um Beckman Coulter LSI 3320 equipado com um alimentador seco Tornado. Os pós foram analisados diretamente sem serem dispersos em um líquido. Tabela 4: Distribuição de tamanho de partícula para PEROXYDONE XL-10 usada na deposição antes e após a granulação.

[219] Outra análise de produção de tira foi realizada primeiramente preparando uma amostra de enzima carregada na matriz de pululano em duas vezes a concentração das amostras da tabela 3. O filme de pululano foi triturado e peneirado até 60 a 80 mesh (177 μm a 250 μm) e, em seguida, combinado com o PEROXYDONE XL-10 granulado. A mistura foi, em seguida, revestida sobre uma estrutura de filme de duas camadas tal como descrito acima. A avaliação dessa amostra para a geração do de ácido peracético é fornecida na tabela 4 e demonstrou uma produção maior e mais consistente em toda a análise de produção. Tabela 5: Produção de ácido peracético a partir de tiras adesivas hidratáveis com um revestimento da enzima per-hidrolase em pululano e PEROXYDONE™ XL-10 granulado sob alto cisalhamento.

Claims

1. Tira de clareamento de dente CARACTERIZADA por compreender um filme adesivo hidratável com um primeiro lado e um segundo lado, o primeiro lado possuindo um ingrediente de branqueamento granular ligado ao mesmo, em que a tira compreende, em ou sobre o filme, ou na forma de grânulos ligados ao primeiro lado do filme, (i) uma proteína granulada tendo atividade per- hidrolase que contém o domínio catalítico de um membro da família da carboidrato esterase 7; e (ii) um doador carboxi, em que após o uso, o peróxido liberado pelo ingrediente de branqueamento granular reage com o doador de carboxi na presença da per-hidrolase para formar um perácido; em que a proteína granulada com atividade de per- hidrolase compreende uma sequência de aminoácidos selecionada de SEQ ID NO: 1; em que a tira de clareamento de dente compreende uma camada de suporte; em que o doador de carboxi é 1,2,3-triacetoxipropano; em que o filme adesivo hidratável compreende hidroxipropilmetilcelulose (HPMC); e em que os grânulos se dissolvem imediatamente e se tornam ativos quando expostos à saliva ou outras fontes de água.

2. Tira de clareamento de dente, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que a proteína com atividade de per-hidrolase tem afinidade para o tecido oral e compreende ainda uma sequência de aminoácidos selecionada a partir de a) ) SEQ ID NO: 2 MAFFDLPLEELKKYRPERYEEKDFDEFWEETLAESEKFPLDPVFERMESHLKTVE AYDVTFSGYRGQRIKGWLLVPKLEEEKLPCVVQYIGYNGGRGFPHDWLFWPSMGYICFV MDTRGQGSGWLKGDTPDYPEGPVDPQYPGFMTRGILDPRTYYRRVFTDAVRAVEAAASF PQVDQERIVIAGGSQGGGIALAVSALSKKAKALLCDVPFLCHFRRAVQLVDTHPYAEIT NFLKTHRDKEEIVFRTLSYFDGVNFAARAKIPALFSVGLMDNISPPSTVFAAYNYYAGP KEIRIYPYNHEGGGSFQAVEQVKFLKKLFEKGGPGSGGAGSPGSAGGPGSTKPPRTPTA NTSRPHHNFGSGGGGSPHHHHHH, e b) uma sequência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 2.

3. Tira de branqueamento dentário, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o ingrediente de branqueamento granular é revestido com um material de dissolução rápida.

4. Tira de clareamento de dente, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que o ingrediente de branqueamento granular é selecionado dentre peróxidos sólidos e doadores de peróxido sólido.

5. Tira de clareamento de dente, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que o ingrediente de branqueamento granular é selecionado dentre sais ou complexos de peróxido, peroxifosfato, peroxicarbonato, perborato, peroxissilicato, sais de persulfato, peroxifosfato de cálcio, perborato de sódio, peróxido de carbonato de sódio, peroxifosfato de sódio, persulfato de potássio, hipocloritos, peróxido de ureia, complexos do polímero de peróxido de hidrogênio, complexos do polímero de peróxido de hidrogênio-polivinilpirrolidona, peróxidos de metal, peróxido de zinco, peróxido de cálcio e combinações dos mesmos.

6. Tira de clareamento de dente, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o ingrediente de branqueamento granular compreende peróxido de ureia.

7. Tira de clareamento de dente, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o tamanho da partícula (D50) do ingrediente de branqueamento granular é 10-200 mícrons.

8. Tira de clareamento de dente, de acordo com a reivindicação 7, CARACTERIZADA pelo fato de que o ingrediente de branqueamento granular compreende 0,1% ou menos do peso total do filme adesivo hidratável e um ingrediente de branqueamento granular ligado ao mesmo.

9. Tira de clareamento de dente, de acordo com a reivindicação 8, CARACTERIZADA pelo fato de que a quantidade de agente branqueador granular no primeiro lado do filme adesivo hidratável é 0,001-1 mg/cm2.

10. Tira de clareamento de dente, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA por compreender um perácido ou que gera um perácido ao ser usada.

11. Tira de clareamento de dente, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que os ingredientes estão presentes em quantidades suficientes para fornecer, após mistura, um agente de branqueamento em uma quantidade e concentração eficazes para branquear os dentes.

12. Tira de clareamento de dente, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o filme adesivo hidratável compreende ainda um ou mais polímeros hidrossolúveis selecionados a partir de um éter de celulose hidrofílico, carboximetilcelulose, hidroxipropilcelulose, um acetato de polivinila, um carbômero, uma goma polissacarídica, goma xantana, um amido alimentício modificado, gelatina, gelatina à base de peixe ou animal, um copolímero de carboxivinila reticulado, uma polivinilpirrolidona reticulada, óxido de polietileno, um ácido poliacrílico, um poliacrilato, um álcool polivinílico, alginato, caseína, pululano e uma combinação de dois ou mais dos mesmos.

13. Tira de clareamento de dente, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o filme adesivo hidratável compreende um ou mais polímeros hidrossolúveis selecionados a partir de um éter de celulose hidrofílico, um álcool polivinílico, um carbômero e uma combinação de dois ou mais dos mesmos.

14. Tira de clareamento de dente, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o filme adesivo hidratável compreende ainda um plastificante.

15. Tira de clareamento de dente, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o filme adesivo hidratável compreende ainda um propilenoglicol.

16. Tira de clareamento de dente, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o ingrediente de branqueamento granular é revestido com um revestimento hidrossolúvel capaz de dissolver após a hidratação.

17. Tira de clareamento de dente, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que uma quantidade efetiva de um perácido é gerada em uma concentração substancialmente uniforme em toda a superfície da tira de clareamento de dente.

18. Método de clareamento dos dentes CARACTERIZADO por compreender a) fornecer um sistema de embalagem que compreende a tira de clareamento de dente conforme definida na reivindicação 1; b) remover a tira de clareamento de dente do sistema de embalagem; e c) colocar a tira de clareamento de dente diretamente em contato com os dentes por um período de tempo suficiente para branquear os dentes; em que a tira de clareamento de dente é hidratada pela umidade presente na cavidade oral ou na superfície do dente ou é hidratada depois da etapa (b), porém antes da etapa (c).