MX2014004765A - Metodo y aparato mejorados para el cultivo de brotes. - Google Patents

Abstract

Se proporcionan métodos para el cultivo y envío de brotes y microverdes en el mismo recipiente, que crecen mientras están en el envío utilizando la humedad proporcionada en una capa absorbente de agua, con organismos benéficos añadidos opcionales, e incluyendo métodos para producir brotes y microverdes para el consumo, y para uso farmacéutico/nutracéutico, que comprenden el crecimiento de brotes en recipientes listos para la venta al público, el recipiente comprende una capa de retención de humedad de medios de agar o similares que proporcionan agua para el crecimiento y evitan la necesidad de riego durante el crecimiento de los brotes. En ciertos aspectos, el medio se suplementa con organismos benéficos o aditivos tales como microbios probióticos, vitaminas (por ejemplo, B12), cofactores, nutrientes, y otros artículos (por ejemplo, fitoquímicos, colores naturales, y antioxidantes) que promueven el crecimiento de los microbios benéficos en el producto, y/o que se llegan a incorporar en el producto. En ciertos aspectos, los microorganismos benéficos añadidos se seleccionan para competir antagonizando patógenos humanos tales como Listeria, Salmonella, E. ccli enterohemorrágica, Yersinia, y/u organismos de descomposición (por ejemplo, Erwinia, Pseudomonas y Xanthomonas).

Description

MÉTODO Y APARATO MEJORADOS PARA EL CULTIVO DE BROTES REFERENCIA CRUZADA A LAS SOLICITUDES RELACIONADAS Esta solicitud reivindica el beneficio de prioridad a las Solicitudes de Patente Provisional de Estados Unidos Series Nos. 61/548,714 presentada el 18 de octubre de 2011, y 61/654,571 presentada el 01 de junio de 2012, ambas de las cuales se incorporan en la presente como referencia en su totalidad.

CAMPO DE LA INVENCIÓN Los aspectos particulares de la invención se refieren generalmente a métodos sanitarios para la producción de brotes y microverdes para el consumo (por ejemplo, consumo humano, de mascotas, y de animales), y en aspectos particulares, para uso farmacéutico y nutracéutico, los métodos que proporcionan crecimiento de los brotes en un recipiente (por ejemplo, recipientes listos para la venta al público/listos para usar) , y preferiblemente sin la necesidad de riego adicional durante el crecimiento.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Los brotes, microverdes, retoños o crestas (en la presente referidos como brotes) son un alimento producido exponiendo las semillas a condiciones que causan que germinen y crezcan en plantas pequeñas. Este previamente se ha hecho exponiendo las semillas a humedad mediante diversos métodos tales como inmersión o pulverización. Las semillas que germinan en formas de plantas pequeñas comestibles incluyen, pero no se limitan a, las de alfalfa, trébol, frijol mungo, rábano, mostaza, brócoli, lino, guisantes, girasol, maíz, trigo, soya, y otros.

Las semillas que se utilizan para propósitos de brotación se obtienen de fuentes tales como de campos de cultivo, y se almacenan en lugares tales como almacenes agrícolas que se pueden contaminar con bacterias, hongos u otros organismos que pueden ser nocivos para la salud. Por ejemplo, los campos de cultivo pueden llegar a ser afectados con la vida silvestre que portan patógenos microbianos tales como E. coli 0157 :H7, y Salmonella, que pueden propagarse a los cultivos y finalmente a las semillas. Las semillas cosechadas de tales campos, y los brotes germinados de tales semillas, se pueden contaminar (por ejemplo, contaminar por tales patógenos microbianos) .

Otros organismos (por ejemplo, organismos de la descomposición) con los cuales se pueden contaminar las semillas que brotan pueden interferir con la calidad de los brotes, por ejemplo, impartiéndoles un mal sabor o color, o reduciendo la vida en anaquel.

Los organismos nocivos para la salubridad y calidad de los brotes también pueden llegar a estar presentes con las semillas procedentes de fuentes distintas de la cosecha y transporte de semillas. Por ejemplo, el agua para remojar y rociar semillas y brotes durante el lavado y la germinación puede estar contaminada, como pueden ser las superficies de la maquinaria de procesamiento e incluso el aire del proceso utilizado para la aireación de las cámaras de brotación. Además, los trabajadores que trabajan en una planta de manufactura de brotes pueden portar patógenos y transferirlos a los productos directamente mediante el manejo de los productos, y/o indirectamente contaminando el ambiente de producción .

En la técnica anterior, los brotes y microverdes se cultivan por métodos que incluyen remojo, desinfección de las semillas, colocación de las semillas en bandejas, tambores o bolsas para permitir el crecimiento hasta el tamaño comercial. Alternativamente, las semillas se pueden colocar en recipientes para venta al público, con agujeros de riego en el fondo, sobre una espuma o un material absorbente tal como celulosa y brotar en el mismo recipiente en el cual finalmente se pueden suministrar a los consumidores, colocando los recipientes en bandejas y regando los brotes en crecimiento desde arriba o desde el fondo de la bandeja con las semillas regadas periódicamente via los agujeros en el recipiente. Al final del ciclo de crecimiento, los recipientes de la técnica anterior se tapan con una tapa, se etiquetan y envían al mercado con los agujeros de riego abiertos, lo que compromete la condición sanitaria del producto y su envase. Ambos métodos anteriores de la técnica anterior típicamente involucran el riego de los brotes durante todas las etapas de su crecimiento. Por ejemplo, en un método de tambor giratorio, las semillas desinfectadas se cultivan durante 4-6 días con rotación y riego constante de los tambores, seguido por lavado de los brotes y envasado manual o automatizado. Al final del ciclo de crecimiento, los brotes que salen de los tambores típicamente contienen aproximadamente 10,000,000 a 100,000,000 ufe (unidades formadoras de colonias) de bacterias por gramo. Un lavado y desinfección posterior puede reducir esta carga de bacterias por sólo un factor de 10 o 100, pero esta reducción se deshace rápidamente por el continuo/más crecimiento bacteriano durante el almacenamiento posterior.

Con respecto a los métodos de la técnica anterior en donde los brotes se cultivan en bandejas o recipientes (por ejemplo, en el recipiente de venta al público final), las bandejas y recipientes se colocan típicamente en bastidores y típicamente se riegan por la duración del ciclo de crecimiento por medio de riego por aspersión, o por-medio de puntos de entrada en el fondo de las bandejas o recipientes, a través de los cuales puede entrar el agua de riego. Los brotes y microverdes, por lo tanto, están expuestos a contaminantes que pueden entrar con el agua de riego o con el aire que entra vía la misma trayectoria que el agua de riego, o vía los agujeros de desagüe que se proporcionan para el agua de riego. Tales agujeros para la entrada y salida de agua de riego permiten que la contaminación microbiana sea introducida en todo el ciclo de crecimiento.

Hay una necesidad pronunciada en la técnica de métodos/medios para proteger la salubridad y la calidad de brotes de organismos patógenos y de descomposición, conteniendo el crecimiento de la mayoría del ciclo de crecimiento en un recipiente sanitario, cerrado, listo para la venta al público.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Los aspectos de la presente invención proporcionan métodos para el cultivo de brotes y microverdes que reduce la posibilidad del crecimiento de microorganismos nocivos en los brotes. En ciertos aspectos, los métodos permiten el crecimiento de los brotes durante la mayoría de su ciclo de crecimiento en un envase listo para la venta al público/consumidor, por primera vez permitiendo el crecimiento que sucede cuando los productos están envasados, empaquetados y paletizados, incluso durante la transportación. En ciertos aspectos, los métodos permiten la automatización completa de instalaciones de procesamiento de brotes, y/o permiten el envió a larga distancia de los brotes, mientras están creciendo. Los métodos también tienen la ventaja de proporcionar vida en anaquel incrementada debido a la condición sanitaria del ambiente de crecimiento y la ausencia de contaminación después del proceso.

En ciertos aspectos, la presente invención proporciona medios para proteger la salubridad y la calidad de los brotes de organismos patógenos y de descomposición, conteniendo el crecimiento durante la mayoría del ciclo de crecimiento en un recipiente sanitario, cerrado, listo para la venta al público, eliminando la necesidad de regar las semillas y brotes en crecimiento. En ciertos aspectos, los recipientes utilizados en el método de la invención están cerrados al ambiente exterior con la excepción de permitir el intercambio de aire y gases. Además, en ciertos aspectos, el método de la invención facilita la adición de una flora microbiológica benéfica o protectora que competirá con y resistirá a cualquiera de los organismos nocivos (por ejemplo, organismos patógenos o de descomposición) que de otro modo podrían estar en, o ser introducidos en los brotes, con tal microflora benéfica actuando efectivamente como un sistema inmune protector para los brotes y microverdes en crecimiento. En ciertas modalidades, la adición de microorganismos benéficos a los brotes puede ser por aplicación directa a las semillas y los brotes, y/o añadiendo tales microorganismos a, por ejemplo, agar y/u otro medio de crecimiento en el recipiente. En aspectos todavía adicionales, se pueden seleccionar microbios benéficos aplicados o añadidos los cuales ayudan en la fijación de nitrógeno y/o promueven el crecimiento de las plantas. En aspectos todavía adicionales, además de los organismos probióticos benéficos, también se proporcionan y facilitan vitaminas, nutrientes, cofactores, y similares (por ejemplo, en cada caso, para beneficiar a los consumidores humanos y animales de los brotes), debido a que los métodos de la invención evitan el uso del agua de riego en los brotes, el agua de riego necesariamente actúa quitando tales aditivos y organismos benéficos.

De acuerdo con aspectos particulares, las semillas o brotes en crecimiento se desinfectan para reducir o eliminar cualquier patógeno. La flora mala a ser remplazada incluye, pero no se limita a, Salmonella, Listeria, Escherichia coli enterohemorrágica (EHEC) , y organismos de descomposición tales como Psuedomonas. Luego, las semillas o brotes se colocan en un recipiente desinfectado con al menos una composición seleccionada del grupo que consiste de agar pasteurizado/esterilizado, agar-agar, algas marinas, algas, extractos de algas, poliésteres derivados de plantas tales como celulosa, quitina, pectina, fibras naturales absorbentes de agua, espumas, esponjas y polímeros absorbentes de agua, u otras composiciones absorbentes de agua que pueden retener el agua y poner tal agua a disposición de los brotes. Puesto que los brotes son por lo tanto proporcionados con un suministro de agua en el recipiente que es suficiente para completar su crecimiento a granel comercializable, no hay necesidad de introducir agua adicional al recipiente por medio del riego -de este modo se elimina una trayectoria de contaminación, y también se permite que los brotes crezcan en recipientes mientras están en camino desde la instalación de procesamiento al consumidor final. En ciertos aspectos, los medios también se pueden proporcionar con microorganismos benéficos que pueden, por ejemplo, producir sustancias antimicrobianas naturales que ayudarán en la supresión de organismos contaminantes. Además, o alternativamente, los medios también se pueden proporcionar con otros microorganismos que producen vitaminas (por ejemplo, B12) , que añaden valor nutricional al producto de brote. En ciertos aspectos, los organismos benéficos añadidos también pueden competir y de este modo controlar el crecimiento de organismos nocivos. La semilla o brotes en el recipiente con la capa de medio se pueden enviar sin demora desde las instalaciones de envasado, y luego dejar crecer mientras están en tránsito y mientras están en los anaqueles de la tienda a la espera de ser comprados. Los vehículos utilizados para el envío se proporcionan preferiblemente con control de temperatura para mantener las temperaturas apropiadas para el crecimiento y/o, más tarde, el almacenamiento de los brotes. Los recipientes para brotes, que no requieren la entrada adicional de agua, se pueden sellar, excepto, preferentemente, por medios tales como una capa de plástico o celulosa permeable, que permite el intercambio de gases, mientras que al mismo tiempo bloquea la entrada de microorganismos y otros contaminantes.

En aspectos particulares, la presente invención se refiere a un método sanitario para la producción de brotes y microverdes para consumo humano, de mascotas, y animales, y para uso farmacéutico y nutracéutico . Las modalidades preferidas de la invención proporcionan el crecimiento de los brotes en un recipiente sanitario listo para la venta al público o listo para usar sin necesidad adicional de riego. En una forma de modalidad, el recipiente comprende una capa de retención de humedad inferior de agar o similar que proporciona agua para el crecimiento, evitando asi la necesidad de riego de los brotes durante el proceso de crecimiento. En ciertos aspectos, el medio se puede suplementar con aditivos benéficos tales como microbios probióticos, vitaminas, cofactores, nutrientes, y otros artículos que promueven el crecimiento de los microbios benéficos en el producto o que llegan a incorporarse en el producto. Preferiblemente, los aditivos benéficos pueden incluir la vitamina B12, fitoquímicos , colores naturales y antioxidantes. Preferiblemente, se seleccionarán microorganismos benéficos aditivos para proporcionar efectos antagonistas sobre los patógenos humanos, tales como Listeria, Salmonella, E. coli enterohemorrágica, Yersinia, y/u organismos de descomposición (por ejemplo, Erwinia, Pseudomonas y Xanthomonas).

Una modalidad particular de la invención comprende las etapas de: a) colocar un medio absorbente de agua desinfectado, no tóxico, preferiblemente comestible que contiene suficiente agua para que los brotes crezcan a su tamaño total pretendido, en recipientes, los cuales pueden ser un recipiente listo para la venta al público o listo para usar, con el contenido de agua del medio siendo adecuado para apoyar el crecimiento de los brotes sin la necesidad de riego; b) colocar las semillas o brotes sobre el medio; c) opcionalmente proporcionar organismos benéficos o probióticos o factores nutricionales ; d) proporcionar condiciones de temperatura a los recipientes adecuadas para promover el crecimiento de los brotes en el recipiente; e) colocar opcionalmente los recipientes en tránsito en un recipiente de envió a temperatura controlada o similar, mientras que el crecimiento de la etapa d) está tomando lugar; y f) opcionalmente, una vez que el crecimiento de los brotes se ha completado en una medida adecuada, cambiar la temperatura de los recipientes a una temperatura menor adecuada para el almacenamiento y extender la vida en anaquel. La temperatura proporcionada en la etapa d) de crecimiento puede estar preferiblemente en el rango de 15-27°C (60-80°F), y la temperatura proporcionada en la etapa f) de almacenamiento puede estar preferiblemente en el rango de aproximadamente 0-7°C (32 a 45°F) .

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Fig. 1 es un diagrama de un recipiente ejemplar utilizado en la producción de brotes de acuerdo con ciertos aspectos de la presente invención.

La Fig. 2 es un diagrama de flujo de la producción del método de producción de brotes de acuerdo con ciertos aspectos de la presente invención.

La Fig. 3 es un diagrama de flujo detallado de la producción del método de producción de brotes de la Fig. 2, de acuerdo con ciertos aspectos de la presente invención.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LOS ASPECTOS EJEMPLARES DE LA INVENCIÓN De acuerdo con aspectos ejemplares particulares, los brotes se cultivan sobre una capa de medios en un recipiente tal como una "concha de almeja" de plástico u otra forma de envases a base de plástico o polímero. Otros recipientes utilizables son, por ejemplo, frascos de vidrio, frascos de cerámica, bañeras de plástico con tapas, y bandejas de cultivo con tapas. Los medios pueden ser o comprender cualquiera de un número de tipos, que tienen la característica común de ser absorbentes de agua y estructuralmente de apoyo para las semillas o brotes los cuales se pueden colocar en la proximidad. El agar y otros tipos de gel son adecuados, pero la invención puede ser practicada con otros materiales absorbentes de agua tales como fibras de celulosa (por ejemplo, al menos una composición seleccionada del grupo que consiste de agar pasteurizado/esterilizado, agar-agar, alga marina, algas, extractos de algas, poliésteres derivados de plantas tales como celulosa, quitina, pectina, fibras naturales absorbentes de agua, espumas, esponjas y polímeros absorbentes de agua, u otras composiciones absorbentes de agua que pueden retener el agua y poner tal agua a disposición de los brotes) .

Con referencia a la Fig. 1, una modalidad del método de la invención para cultivar brotes es la siguiente: el recipiente 101 el cual mantendrá los brotes primero preferiblemente se desinfecta por la aplicación de un peróxido de hidrógeno, alcohol, luz ultravioleta, vapor u otro agente desinfectante apropiado.

Luego la capa 102, un medio estéril/pasteurizado que contiene cantidades apropiadas de agua para completar el ciclo de crecimiento, se coloca en el recipiente 101. Si el medio elegido es el agar, esta colocación se puede realizar vertiendo solución de agar líquida caliente en el recipiente y permitiendo que se enfríe. La capa 102 se puede inocular opcionalmente con microorganismos benéficos, como se describe en la presente, y adicionalmente se pueden añadir nutrientes para promover el crecimiento de organismos benéficos. Otros aditivos para la capa 102 pueden incluir antioxidantes, vitaminas, pigmentos naturales, materiales orgánicos tales como algas y algas marinas, y nutrientes de plantas, para promover el crecimiento de la germinación y crecimiento de las semillas y brotes.

Las semillas o brotes se ponen en contacto con el agua y se deja que absorban agua, y también se desinfectan. Esta etapa es importante cuando se aplica una alta densidad de semillas a la parte superior de la capa de gel, por dos razones: En primer lugar, si se aplican suficientes semillas de modo que más de una capa de semillas llega a estar presente, entonces las semillas en la capa superior no estarán en contacto directo con el gel, y no tendrán fuente inmediata de agua para promover la germinación. En este caso, las semillas pre-remojadas que han absorbido el agua pueden depender de la humedad interna para apoyar la germinación y el crecimiento de una raiz inicial hacia abajo en el gel que contiene agua. En segundo lugar, si se coloca una alta densidad de semillas en la capa de gel, entonces el gel próximo a estas semillas tiende a agotarse de agua ya que la humedad se absorbe en las muchas semillas próximas. El gel agotado es incapaz de suministrar suficiente agua para permitir la germinación adecuada de las semillas. Este problema se denomina en la presente como "capa superior de gel seca".

Preferiblemente, las semillas pueden absorber al menos aproximadamente 40% de su peso seco en agua durante el proceso de remojo, e incluso más preferiblemente, 80% o más de su peso seco.

Las semillas o brotes desinfectados 103 se colocan en contacto con la capa 102 de modo que puedan crecer con el beneficio del agua contenida en la capa 102. El recipiente 101 se cierra preferiblemente contra la contaminación microbiana, por ejemplo, colocando una tapa 104 en la parte superior del recipiente. Preferiblemente, la tapa 104 puede comprender una porción o parche de plástico u otro material de membrana que permita el intercambio de gases, tales como gases residuales de la respiración de las plantas. Más preferiblemente, los materiales de tapa pueden permitir además el paso de vapor de agua, de modo que se puede evitar el exceso de condensación en el recipiente. Opcionalmente, se puede proporcionar una membrana de intercambio de gases en algún otro lugar en el recipiente (diferente de la tapa) , o se puede proporcionar la provisión de intercambio de gases por medios distintos de una membrana, tal como permitiendo que la tapa esté ligeramente entreabierta, aún todavía colocada para evitar la entrada de microbios, de la misma manera de operación como una tapa de placa de petri común. El punto es que se proporcionen medios para el intercambio de gases y vapor de agua que no proporcionen un punto de entrada para los microorganismos. Un concepto clave de esta invención es mantener la capa 102 y las semillas 103 en un estado de aislamiento del aire exterior y el agua, excepto tal como podría pasar a través de una membrana u otros medios para excluir los microorganismos contaminantes que pueden existir fuera del recipiente 101.

Una modalidad preferida para la práctica de esta invención es como sigue, y es con referencia a la Fig. 2. Las semillas, por ejemplo semillas de alfalfa, se obtienen 200 de un distribuidor. Estas semillas se desinfectan 201, con o sin pre-remojo, remojándolas en una solución que comprende, por ejemplo, al menos un agente seleccionado del grupo que consiste de lejía, peróxido de hidrógeno, ácidos orgánicos, y/u otros desinfectantes apropiados con o sin tensioactivos no espumantes. Alternativamente, las semillas, por ejemplo, se pueden pasteurizar instantáneamente por breve exposición a agua caliente. Las semillas luego se enjuagan con agua que puede contener niveles de desinfectante residual apropiados. Aunque las semillas se pueden colocar inmediatamente en la capa de medios y sellar en un recipiente, es mejor remojar las semillas para que absorban el agua. Preferiblemente, las semillas pueden absorber al menos aproximadamente 40% de su peso seco en agua durante el proceso de remojo, e incluso más preferiblemente, 80% o más de su peso seco. Las semillas que han absorbido agua tienden a brotar y arraigarse mejor en el medio. Por consiguiente las semillas se remojan y drenan 202. Las semillas humedecidas también pueden ser, opcionalmente, almacenadas en un refrigerador durante un periodo de tiempo para su uso posterior.

Después del periodo de refrigeración opcional, si lo hay, las semillas son una vez más desinfectadas durante un tiempo apropiado y con la concentración apropiada de los agentes desinfectantes para reducir la carga biológica de los microbios unidos a las semillas sin afectar a la germinación. Opcionalmente, las semillas luego pueden ser pre-germinadas poniéndolas en una cámara de germinación para germinar durante 1-2 dias, o se pueden colocar directamente en contacto con una capa de agar 203 en el mismo recipiente en el cual serán enviados. En el caso que las semillas sean pre-germinadas, se pueden someter a un tercer protocolo de lavado y desinfección después del cual se pueden colocar en recipientes en la etapa 203. Las semillas germinan y proceden a crecer 204 en el recipiente. Este crecimiento puede ocurrir mientras el recipiente está en un área de espera de una instalación de manufactura y/o mientras está en tránsito al consumidor y/o mientras el producto está en espera de su compra por los consumidores en los anaqueles de la tienda.

La capa de medios en el fondo del recipiente puede ser de cualquier espesor adecuado, con la intención de la invención que sea mejor ejercida por una capa que proporcione suficiente volumen de agua para apoyar el suficiente crecimiento de brotes de modo que los brotes lleguen a llenar el recipiente. Una cantidad óptima de agar seria tal que la capa de agar llega a ser más o menos completamente absorbida después de varios dias de crecimiento de los brotes, y el recipiente parece contener solamente brotes.

Es importante enfatizar que cualquier medio de gel en el cual se colocan las semillas debe ser adecuado para el consumo humano (es decir, comestible y preferiblemente apetecible) , puesto que las partículas de gel pueden estar presentes en el producto. Preferiblemente, esto significa que no se puede añadir al medio germicida no comestible u otro producto químico.

Los productos alimenticios producidos por los métodos de esta invención se pueden mejorar adicionalmente por diversos medios. Como se describe anteriormente en relación con la Fig. 2, las semillas preferiblemente primero se desinfectan 201 por lavado en una solución desinfectante tal como la lejía, por ejemplo, en una concentración de no más de 20,000 ppm de hipoclorito de sodio o calcio. Este remojo puede ser durante un período de tiempo de, por ejemplo, de 5 a 15 minutos más o menos, de tal manera que las bacterias se reducen en número, pero las semillas se mantienen fértiles. La desinfección posterior de las semillas hidratadas se realiza en diluciones mucho menores de agentes desinfectantes para asegurar que están reduciendo la carga microbiana sin afectar la germinación. Por lo tanto, el lavado posterior se puede hacer, por ejemplo, en 50-2000 ppm de hipoclorito de calcio o sodio. En ciertos aspectos, se ha encontrado que las semillas se deben hidratar antes de ser colocadas encima del agar u otro medio de gel si la tasa de germinación adecuada y penetración de las raices en el agar se obtendrán con las altas densidades de semillas requeridas para la producción adecuada de brotes.

Después del tratamiento de desinfección primaria, y un lavado para remover el residuo, las semillas preferiblemente se pueden drenar y refrigerar, y se pueden añadir cultivos de microorganismos benéficos. Estos pueden incluir levaduras u otros microbios, que proporcionarán vitamina B12, y microbios comensales que son antagónicos a los patógenos humanos, fitopatógenos , y organismos de descomposición. Los microorganismos benéficos añadidos pueden consistir de un organismo o comprender un cóctel de microbios mezclados para múltiples tareas, tal como la producción de metabolitos antimicrobianos; producción de vitaminas, cofactores, enzimas; y competición por nutrientes con patógenos y/u organismos de descomposición. La flora microbiana benéfica añadida proporciona una flora de reemplazo, dado que la flora natural de las semillas se destruye a través de la desinfección agresiva, y luego se remplaza por organismos benéficos (por ejemplo, una mezcla adecuada de organismos benéficos mesófilos y psicrotróficos/psicrófilos) . Los organismos benéficos, por ejemplo, se pueden inocular por roció sobre la semilla, de tal manera que tenderán a formar uniones a las semillas y se les adherirán cuando las semillas se colocan en el agar en la etapa 203. Además de añadir beneficios en esta etapa (por ejemplo, a la semilla esterilizada) , el agar por si mismo se puede inocular cuando se prepara o después de que se coloca en el recipiente.

Los organismos "benéficos" incluyen y en ciertos aspectos se definen como microorganismos inofensivos comestibles que pueden producir vitaminas, enzimas o cofactores que son saludables para los seres humanos, o que aumentan el valor nutricional de los brotes y microverdes. Los organismos benéficos en ciertos aspectos también pueden inhibir el crecimiento de organismos de descomposición y patógenos por medio de la competición por espacio y nutrientes y a veces también por la producción de metabolitos inhibidores del crecimiento. Tales organismos benéficos se pueden seleccionar para crecer competitivamente en el rango de temperatura de crecimiento mesófilo, que también tiende a ser el mejor rango para la germinación y crecimiento de los brotes. Alternativamente, tales organismos se pueden seleccionar para crecer en el rango psicrófilo más frío, proporcionando así mejor crecimiento durante las fases de envío y almacenamiento posteriores después de que el crecimiento de los brotes se ha logrado y las temperaturas más frías se emplean para mejorar el almacenamiento y la vida en anaquel.

Los "microbios benéficos" u "organismos benéficos" comprenden organismos vivos tales como bacterias, fagos, levaduras, virus, hongos y similares, que tienen el efecto de inhibir el crecimiento de organismos patógenos o de otro modo nocivos. El término organismos benéficos utilizado en esta descripción también incluye sustancias antibióticas naturales creadas y secretadas por organismos probióticos, las sustancias tienden a inhibir el crecimiento de organismos nocivos, por ejemplo, bacteriocinas benignas; y también incluye fagos y virus benignos que atacan las células patógenas.

Se entenderá que el término microbios benéficos u organismos benéficos en la presente también puede referirse a mezclas de diversas especies probióticas y diversas sustancias, además de una especie única o sustancia única. Los "organismos benéficos" utilizados en la presente también pueden tener la capacidad de suministrar propiedades antagonistas contra los patógenos indeseables que de otra manera podrían llegar a estar presentes en los líquidos utilizados para la germinación y el crecimiento de los brotes .

Un grupo preferido de microorganismos de acuerdo con la presente invención comprende microorganismos productores de ácido láctico que inhiben patógenos compitiendo por el sustrato y generando un ambiente ácido no favorable. Las propiedades antagonistas de los microorganismos productores de ácido láctico, además, pueden surgir de otros metabolitos, como enzimas (por ejemplo, lactoperoxidasas ) , toxinas de patógenos específicos, dióxido de carbono, peróxidos o antibióticos, tales como bacteriocinas .

Los organismos benéficos también pueden incluir organismos formadores de esporas, tales como B. coagulans, Bacillus clausii, Bacillus pumilus, y otras cepas de Bacillus no toxigénicas, no patógenos. Pueden tener efectos antimicrobianos contra los organismos objetivos y tienen efectos benéficos potenciales en los seres humanos, por ejemplo, como inmunoestimulantes . Estos microorganismos tienen la capacidad de crear muy rápidamente un ambiente que no es adecuado para el crecimiento de patógenos. Esto se debe al rápido crecimiento, alto rendimiento y reproducibilidad de tales microorganismos en comparación con otras bacterias productoras de ácido láctico como Lactobacillus acidophilus.

Los microorganismos formadores de esporas son capaces de sobrevivir más tiempo y reproducirse ellas mismas en comparación con microorganismos no formadores de esporas.

Los agentes/organismos benéficos adecuados ejemplares para uso en la presente son microorganismos productores de ácido láctico. Los microorganismos productores de ácido láctico adecuados ejemplares para uso en la presente son microorganismos gue exhiben propiedades antagonistas contra cepas indeseables de microorganismos liberando entre otros metabolitos, el ácido láctico.

Las bacterias productoras de ácido láctico adecuadas ejemplares para uso en la presente incluyen al menos una seleccionada del grupo de géneros gue consiste de Lactobacillus (miembros homofermentadores del grupo) , Lactococcus, Pedioccocus y/o Leuconostoc, y preferiblemente la especie Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus curvatus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus jenseni, Lactobacillus casei, Lactobacillus fermentum, Lactococcus lactis, Pedioccocus acidilacti, Pedioccocus pentosaceus, Pedioccocus urinae y/o Leuconostoc mesenteroides.

Los aspectos de la invención actual permiten el remplazo de microorganismos originales encontrados en la superficie de una semilla con un grupo de organismos mesófilos de crecimiento rápido que pueden triunfar en la competencia y potencialmente matar a los patógenos y organismos de descomposición objetivos residuales que han sobrevivido al proceso de desinfección, y también permitir la introducción de un cóctel mezclado de organismos benéficos mesófilos y psicrotróficos ya sea juntos o en secuencia, para permitir que los psicrótrofos crezcan y protejan al producto durante el almacenamiento refrigerado, con los organismos mesófilos habiendo protegido previamente el producto durante las fases de germinación y crecimiento.

En una modalidad preferida, cada cepa benéfica utilizada será caracterizada para asegurarse de que está vacia de factores de virulencia para los seres humanos, y no es antagónica a otros miembros del cóctel u organismos que se ponen en contacto con las semillas o agar.

Cuando las semillas y los brotes están en contacto con la humedad, se proporciona una oportunidad para que los organismos patógenos u otros nocivos tomen ventaja de esta humedad para propósitos de supervivencia y crecimiento. De acuerdo con esta invención, se añaden organismos benéficos para reemplazar y triunfar en la competencia de la flora nociva y prevenir que suceda el crecimiento nocivo.

Los organismos benéficos se pueden poner en contacto con los brotes de varias maneras, de acuerdo con el aparato y los métodos que se están empleando para germinar y cultivar los brotes. Para esta invención, se pueden añadir organismos benéficos después de que las semillas se han desinfectado y su flora normal se destruye. Los organismos benéficos también se pueden añadir a la solución de agar.

En aspectos particulares de la presente invención, se pueden añadir organismos benéficos en cualquier punto en un proceso de brotación, desde la aplicación directa a las semillas seas a la posterior aplicación a las semillas cuando descansan en la capa de agar, o por mezcla con la capa de agar cuando se vierte en el recipiente.

En una modalidad preferida de la invención, se añaden dos grupos de organismos benéficos a los medios, con un grupo seleccionado para el crecimiento óptimo a temperaturas moderadas (por ejemplo, 15-27°C (60-80°F)), y el otro seleccionado del crecimiento a temperaturas más frías (por ejemplo, 0-7°C (32 a 45°F) ) . El primer grupo, conocido en la técnica como "mesófilos" crecerá mejor a las temperaturas cálidas moderadas (por ejemplo, 15-27°C (60-80°F) las cuales las semillas necesitan para germinar y crecer. El segundo grupo, conocido como "psicrófilos" o "psicrótrofos" crece mejor a temperaturas más frías (por ejemplo, 0-7 °C (32 a 45°F) , tales como aquellas en las cuales el recipiente de brotes será almacenado después de que se han completado las fases de germinación y crecimiento.

Por ejemplo, si la mejor temperatura para la germinación de semillas es 29-30°C (85°F), entonces los organismos benéficos seleccionados serán aquellos que prefieren crecer a o cerca de esta temperatura. Aún más preferiblemente, si se planea que los brotes se dejarán, digamos, tres días para el crecimiento, y luego se colocarán en el almacenamiento refrigerado a, digamos, 7°C (45°F), entonces los organismos benéficos adicionales, seleccionados para esta temperatura, también se pueden añadir a los medios. El concepto es que el primer grupo de organismos benéficos protegerá a los brotes mientras están germinando, mientras que el segundo grupo se multiplicará y asumirá esta función cuando el recipiente se enfria a 7°C (45°F), que se ha mantenido más o menos latente a las temperaturas mayores.

Una característica distintiva de esta invención es que promueve el envió rápido de producto de brote desde la instalación de manufactura, como lo opuesto a los sistemas de la técnica anterior en donde los brotes permanecen en la instalación durante su fase de crecimiento completa, típicamente en un tambor giratorio que es regado continuamente con agua. En contraste, con la presente invención, los brotes se pueden enviar inmediatamente después de que se colocan en una capa de medios dentro del recipiente .

Se pueden colocar múltiples recipientes, por ejemplo, en una tarima, y luego la tarima se coloca, por ejemplo, sobre un camión o un vagón de ferrocarril para el envío. El camión o vagón de ferrocarril se establece para proporcionar a los recipientes entarimados calor o refrigeración para mantener las condiciones óptimas de crecimiento de los brotes durante el envío. Por ejemplo, si los recipientes de brotes se colocan en un vagón de ferrocarril, una unidad de bomba de calor en el vagón de ferrocarril se puede programar para proporcionar la mejor temperatura para el crecimiento de los brotes. Por ejemplo, si el mejor perfil de temperatura para un tipo particular de brote es 21°C (70°F) durante tres días, con los brotes luego siendo colocados en almacenamiento frío a 7-8°C (45°F), el sistema de bomba de calor del vagón de ferrocarril sería programado para proporcionar este perfil. Los brotes, por ejemplo, podrían ser destinados para el suministro a los consumidores en Boston, MA, un viaje de cinco días por ferrocarril desde donde se envasan, por ejemplo, en Spokane, WA. En este caso, las semillas serían colocadas en recipientes con medios y organismos benéficos en el día 1. Los recipientes serían sellados, colocados en tarimas, y cargados en un vagón de ferrocarril, donde serían mantenidos a 21 °C (70 °F) para la germinación y crecimiento en los días 1, 2, y 3. En el día 4, los brotes habrán completado su crecimiento requerido, de este modo, la temperatura del vagón de ferrocarril se reduciría a la temperatura de modo de almacenamiento, la cual sería 7-8°C (45°F) . En los días 4 y 5, los recipientes de brotes procederían a Boston en el vagón de ferrocarril a la temperatura de almacenamiento frío.

Lo anterior contrasta con la técnica actual para el suministro de brotes via ferrocarril o camión, en la cual los brotes deben alcanzar el tamaño deseado en la instalación de manufactura antes de ser cargados para su transporte. En tal sistema, los brotes no estarían creciendo durante el tránsito, sino solamente estarían en almacenamiento, con el tiempo de transporte siendo sustractivo directamente de la vida en anaquel del producto. El resultado final en la técnica anterior es que los brotes son varios días menos frescos que los que se suministran en Boston.

Una característica distintiva de los métodos particulares de la presente invención es que permiten el envío de brotes con un perfil de temperatura variable en el vehículo de transporte, en el cual una temperatura de fase inicial de crecimiento es seguida por una temperatura de fase de almacenamiento. El vehículo de transporte, el cual también puede ser un contenedor de envío, o un vagón de ferrocarril o camión de temperatura controlada se proporciona con un perfil de tiempo-temperatura de múltiples fases, que tiene una primera fase con temperaturas adecuadas para el crecimiento de brotes, y una segunda fase con la temperatura adecuada para el almacenamiento de los brotes. El perfil de temperatura, por ejemplo, se puede implementar por un sistema de control automático que implica un reloj de tiempo real y un controlador de temperatura, o se puede implementar por ajuste manual de los controles de temperatura del vehículo de acuerdo con las instrucciones para el conductor que se proporcionan junto con el envío de los brotes.

Esta invención tiene varios aspectos y/o ventajas preferidas incluyendo las siguientes: A. Crecimiento en un envase listo para la venta al público sin riego y sin agujeros de desagüe. Los aspectos particulares permiten la entrada inicial de las semillas y medios en el envase para la venta al público final que será suministrado al consumidor, sin la necesidad de la entrada más tarde de agua o nutrientes por medio de riego. Esto significa que el recipiente no necesita tener agujeros para la entrada del agua de riego, o agujeros para la salida de tal agua. La ausencia de estas entradas y los agujeros que necesitan significa que el recipiente puede permanecer sellado contra la contaminación, proporcionando así un producto más sanitario y saludable, seguro contra la contaminación por patógenos.

B. Crecimiento en un medio que contiene agua, tal como agar, celulosa, algas marinas, algas, alginina, otros polisacáridos o proteínas complejas, o polímeros. El agar es un medio adecuado para la capa de retención de agua en la cual se colocan las semillas. Sin embargo, otros materiales de matriz de retención de agua seguros para alimentos son adecuados para uso con esta invención, y estos materiales pueden incluir, por ejemplo, diversas formas de agar, celulosa, algas marinas, algas, alginina, otros polisacáridos o proteínas hidrófilas complejas, o polímeros, esponjas, fibras textiles, y otros materiales adecuados que serán evidentes, en vista de la presente descripción, para un experto normal en la técnica.

C. Recipiente de cultivo con micro-perforaciones o agujeros pequeños que permiten el intercambio de gases y vapor de agua sin permitir que entren contaminantes. El recipiente en el cual se colocan las semillas y los medios debe resistir la entrada de contaminantes microbianos del exterior. Esto se puede hacer de una manera mecánica con una tapa retenida, por ejemplo, por medio de la fuerza de gravedad contra la boca del recipiente, en la manera de una cubierta de placa de Petri. Otros arreglos pueden involucrar recipientes con pequeños agujeros y deflectores que tienden a bloquear la entrada de partículas más grandes tales como las bacterias transportadas por el aire, mientras permiten el intercambio de vapor de agua, aire y gases respiratorios con el exterior. Algunos plásticos, materiales textiles, y otros materiales permiten el intercambio de gases y vapor de agua mientras también bloquean los contaminantes microbianos. La gasa médica es un ejemplo de tal material que se puede utilizar para proporcionar un orificio de intercambio de vapor resistente a la contaminación en un recipiente de otro modo hecho de material impermeable. Varios materiales de lámina sintética son adecuados para proporcionar el intercambio de gases mientras previenen la contaminación microbiana. Un ejemplo de tal material es la película de polietileno natural de 10 milésimas de pulgada (0.03 cm) , como se describe en Kordan, Applied Microbiology, Vol. 13, No. 5 (1965) . Otras películas adecuadas pueden ser los plásticos utilizados en las operaciones de bancos de sangre que permiten el intercambio de gases celulares, mientras que impiden el paso de líquidos y, por supuesto, de microorganismos. Una discusión de materiales plásticos adecuados se da en Christopher, Blood Banking and Transfusión Medicine, ppl83-187, (Elsevier Health Sciences, 2007) . La Fig. 3 muestra un parche de material de intercambio de gas 310 incorporado en una tapa de recipiente.

D. Siembra y cultivo con crecimiento parcial o completo en tránsito. Una ventaja importante de los aspectos particulares de la invención es la provisión de la oportunidad para que los brotes crezcan en tránsito (por ejemplo, sin el crecimiento de patógenos) . Después de que los medios y las semillas se colocan en el recipiente, el recipiente se sella y no necesita entradas adicionales de agua u otros materiales. Esto significa que las semillas pueden salir de la instalación de manufactura inmediatamente y comenzar a crecer mientras están en tránsito, a bordo de un camión, vagón de ferrocarril, o en un contenedor de envió. Preferiblemente, estos modos de transporte ofrecen control de temperatura a la medida de las necesidades de los brotes en crecimiento (es decir, temperaturas cálidas (por ejemplo, 15-27°C (60-80°F)) para los primeros dias en los cuales se inicia el crecimiento y luego se completa, y temperaturas más frias después (por ejemplo, 0-7°C (32 a 45°F)), para prolongar la vida en anaquel) . Este es un avance significativo para resolver un problema importante en la técnica del cultivo de brotes debido a que elimina la necesidad de espacio extenso del piso de la planta para el cultivo de brotes, cubos giratorios u otras máquinas; y, también permite que los brotes estén varios dias más cerca de sus destinos finales en el momento cuando el crecimiento se completa y el reloj inicia a correr en la vida en anaquel, y permite además un nivel mucho mayor de seguridad con respecto a los potenciales patógenos y organismos de descomposición. Con la tecnología actual, los brotes comienzan a envejecer y a gastar la vida en anaquel inmediatamente después del envasado en la fábrica. Sin embargo, con la invención actual, los brotes pueden pasar la mayoría o todo su tiempo de tránsito en la fase de crecimiento, y por lo tanto no entran en la fase de pudrición y uso de vida en anaquel hasta días después, proporcionando mayor seguridad y ventajas financieras/comerciales .

E. Envío en recipientes que retienen la temperatura de crecimiento y cambian a enfriamiento después de que se logra el crecimiento deseado. Un elemento importante de los aspectos particulares de la invención es el uso que se hace de los medios de envío con control de temperatura, tales como contenedores de envío, vagones de ferrocarril, camiones con refrigeración/calefacción, etc. Para sacar el mayor provecho de esta invención, los recipientes para brotes llenos se deben proporcionar con transporte o estantes de exhibición a temperaturas que mejor promueven el crecimiento inicial de los brotes, y luego temperaturas menores que mejor promueven el almacenamiento, después de que se ha logrado el crecimiento óptimo. Por lo tanto, los aspectos particulares de la invención proporcionan y/o comprenden el uso de modos de transporte que proporcionan el control de temperatura adecuado para el crecimiento de brotes en las horas y días iniciales hasta que los brotes alcanzan la madurez, y luego, preferiblemente, proporcionan un interruptor para controlar la temperatura que es más adecuada para el alargamiento de la vida en anaquel, como en el almacenamiento frío. Un termostato controlado por computadora unido a una unidad de refrigeración/calefacción en un contenedor de envió es un ejemplo de tal modo, particularmente si el control por ordenador también incorpora un reloj de tiempo real que puede cambiar la temperatura cuando los brotes han tenido tiempo suficiente para crecer, y por lo tanto necesitan ser mantenidos a una temperatura diferente, usualmente menor, para propósitos de almacenamiento. En los casos donde la distancia de transporte no es grande, puede ser que los brotes no hayan terminado de crecer antes del momento en que llegan a la tienda donde serán vendidos. En este caso, la propia tienda puede ser proporcionada con una vitrina de exhibición de temperatura controlada, preferiblemente programada para cambiar de temperatura de fase de crecimiento a temperaturas de fase de almacenamiento en el momento apropiado. También es preferible que cada envió de brotes que deja la fábrica sea proporcionado con medios de registro de datos leíbles remotamente que se pueden leer recibiendo las vitrinas de exhibición de la tienda por medio de un enlace de datos inalámbrico, o similares, de modo que la vitrina de la tienda de recepción puede calcular el tiempo correcto para cambiar la temperatura desde la temperatura de fase de crecimiento óptima a la temperatura de fase de almacenamiento .

F. Un método de suministro de microbios benéficos, donde la microflora de las semillas se destruye a través de la desinfección y se remplaza por los organismos benéficos. Un elemento importante de los aspectos particulares de la invención es la oportunidad que proporciona el uso de organismos probióticos para proteger a los brotes de la contaminación durante sus fases de crecimiento y envió. Los métodos de la técnica anterior que implican riego previenen que se haga un contacto duradero entre los organismos probióticos y los brotes, debido a que el agua de riego por aspersión inherentemente quita cualquier organismo benéfico que pudiera haber sido aplicado previamente. Con esta invención, sin embargo, los organismos benéficos se pueden incorporar en la capa de medios desde el principio o mezclar con las semillas que se aplican a la capa de medios. Puesto que el recipiente luego se sella, no hay agua de roció o riego entrante para quitar los organismos benéficos. Además, los medios se pueden proporcionar con nutrientes adecuados para el crecimiento de los organismos probióticos. Es preferible que las semillas, recipiente, y medios sean sometidos a desinfección antes del uso de modo que se eliminan o reducen los microorganismos nocivos. Luego, se añade al recipiente una dosis fuerte (por ejemplo, una dosis suficiente para los propósitos efectivos de competición/antagonismo con respecto a los posibles patógenos) de organismos benéficos, de modo que a estos se les da un buen comienzo en el crecimiento sin la necesidad de competir con los organismos malos.

G. Un método para el suministro de microbios benéficos. Como se discute en la presente, los microbios benéficos pueden ser o incluir microbios que son antagónicos a los patógenos y organismos de descomposición; microbios que se consideran benéficos para los seres humanos; y microbios que producen vitaminas y cofactores tales como la vitamina B12, antioxidantes, anti-carcinógenos , anti-teratógenos , inmunoestimulantes y aceites benéficos. Estos microbios pueden incluir microbios mesófilos añadidos en una etapa temprana en el método a las semillas y brotes de etapas tempranas desinfectados para permitir la competición contra los patógenos y organismos de descomposición. Un segundo grupo de microbios benéficos psicrotróficos o psicrofilicos se puede añadir simultáneamente, o se añade al final del ciclo de crecimiento. Los miembros de este segundo grupo crecen a temperaturas menores y por lo tanto ofrecen protección al producto a temperaturas bajas que se utilizan para extender la vida en anaquel del producto, después de que los brotes alcanzan el tamaño comercial. Un aspecto importante de los aspectos particulares de la invención es el concepto de crecimiento de dos fases del producto: Una primera fase para la germinación y el desarrollo de los brotes a tamaño comercial, que se realiza, generalmente a temperaturas cálidas propicias para el crecimiento de la planta, y, una segunda fase, en la cual los brotes son sometidos a diferente temperatura, usualmente más fría, de modo que se puede mejorar la vida en anaquel del producto maduro. Este aspecto de fase de dos temperaturas es importante no sólo para los arreglos de transporte, como se describió anteriormente, sino también es importante desde el punto de vista de la selección de los mejores organismos probióticos. Varios organismos probióticos pueden tener diferentes preferencias de temperatura para su propia multiplicación y crecimiento. Algunos organismos son "mesófilos" los cuales gustan de temperaturas más cálidas, tal como temperatura ambiente, o quizás mayor, tal como 4-5°C a 7-8°C (40 a 45°F) . Estos organismos son mejor adecuados para proteger el producto de brote durante las fases de germinación y crecimiento y, cuando los brotes también se desarrollan mejor con temperaturas cálidas. Sin embargo, cuando los brotes alcanzan el tamaño comercial, y necesitan entrar en el almacenamiento, el ambiente más frió para conservar la vida en anaquel, entonces los organismos benéficos mesófilos pueden no seguir siendo efectivos. En este punto, se necesitan organismos probióticos psicrofilicos amantes del frió. Estos organismos se pueden proporcionar incluyéndolos en la entrada inicial de organismos benéficos en los medios de esta invención. Estos organismos permanecerán latentes durante la fase de calentamiento inicial del producto, pero cuando se imponen las temperaturas de fase de almacenamiento, cobrarán vida y se multiplicarán, para proporcionar protección y beneficios probióticos durante el almacenamiento también. Los aspectos preferidos proporcionan una mezcla de organismos probióticos, que contiene tanto organismos mesófilos/amantes del calor como organismos psicrofilicos/amantes del frió en la entrada inicial de los organismos benéficos.

H. Otro aspecto benéfico de esta invención es la capacidad para imponer pruebas de seguridad y calidad en diversas etapas del método. En ciertos aspectos, la invención comprende la producción de brotes y microverdes en la cual la seguridad del producto se evalúa con una o más de las siguientes etapas: a. Cada lote de semillas se somete a muestreo y pruebas estadísticamente significativas para múltiples patógenos incluyendo Salmonella, Listeria, y EHEC; b. Después de 1-2 dias de germinación, los brotes germinados se someten a prueba secundaria para los mismos organismos ; c. Un programa de pruebas de producto terminado, que emplea un plan de muestreo estadísticamente significativo se emplea para analizar el producto terminado antes de su liberación en el mercado; y d. Un método para realizar el muestreo del producto terminado donde los recipientes listos para la venta al público se siembran, se toman muestras y se colocan en un recipiente más grande con los medios que serán sometidos al crecimiento a la misma o, preferiblemente, temperatura mayor para acelerar el crecimiento y luego se analizan antes de la liberación del lote.

I. Adición de Nutrientes Promotores del Crecimiento de Microbios al Agar para promover el crecimiento de los organismos probióticos. Para fomentar el crecimiento de los organismos probióticos en la capa de medios de las modalidades de la invención, se pueden añadir nutrientes que mejoran el crecimiento de organismos probióticos, tales como los que se encuentran en el medio DIFCOTM MRS, la fórmula del cual es como sigue: Agar de Lactobacilo DIFCO™ AOAC Fórmula aproximada* por litro Leche peptonizada 15.0 g Extracto de levadura 5.0 g Dextrosa 10.0 g Jugo de tomate (de 100 mi) 5.0 g Fosfato monopotásico 2.0 g Polisorbato 80 1.0 g Agar 10.0 g El solicitante también ha encontrado que la adición de una fuente de nitrógeno y minerales puede promover el crecimiento. Por ejemplo, se observó crecimiento mejorado cuando se añadió una hoja de algas marinas secas por debajo de la capa de agar.

Para proporcionar un número adecuado de brotes en un envase de venta al público, es preferible colocar suficientes brotes en la capa de agar en el recipiente de manera que al menos una porción de esa capa se cubre con una doble capa de brotes. Es más preferible que la capa sea totalmente cubierta con dos capas de brotes, y, en algunos casos tres capas de brotes. Para proporcionar una fuente de oxigeno para el desarrollo de los brotes, se ha encontrado que es benéfico añadir a la capa absorbente de agua un microorganismo que produce peróxido de hidrógeno.

En las siguientes reivindicaciones, el término "brotes" incluye brotes, retoños, y microverdes. Los microverdes se definen en el comercio de alimentos como verduras, lechugas y hierbas que se cosechan cuando son muy jóvenes, generalmente cuando son de aproximadamente una pulgada (2.54 cm) de alto. El término brote también incluye semillas recién germinadas y también pequeñas plantas que se crean a partir de los métodos de cultivo de tejidos o producción asexual que no implican semilla. En modalidades particulares de la invención, los brotes también comprenden semillas remojadas utilizadas para la generación de brotes, las semillas remojadas se colocan en la capa absorbente de agua en los métodos de la invención.

EJEMPLO 1 (Un recipiente de vidrio PIREX de 100 mL No. 1305 se preparó con aproximadamente 10 mi de solución de agar al 0.5%) Un recipiente de vidrio PIREX de 100 mL No. 1305 se preparó con aproximadamente 10 mi de solución de agar al 0.5% (% en peso) . Esta concentración se eligió como óptima después de algunos experimentos, ya que se encontró que una solución al 0.7% (% en peso), normal para uso bacteriológico, fue demasiado rígida para la fácil penetración de las raíces e incrustación en el brote, mientras que una solución al 0.4% (% en peso) proporcionó un gel que fue demasiado suave, de tal manera que algunas de las semillas o brotes más grandes se hundieron hasta el fondo de la capa de agar. La consistencia preferible de la capa será tan suave como sea posible, todavía aún suficientemente rígida para soportar las semillas en la parte superior de la capa (por ejemplo, entre 0.4% (% en peso) y 0.7% (% en peso), preferiblemente entre 0.45% (% en peso) y 0.6% (% en peso), o 0.45% (% en peso) y 0.55% (% en peso)). Una solución madre de agar al 0.5% (% en peso) se preparó con 0.5 g de polvo de agar en 100 mi de agua. En lugar de agar, se pueden sustituir otros materiales de retención de agua, por ejemplo, alginato, polisacáridos naturales complejos, fibra de algodón, fibra de madera, papel, geles de proteínas, y similares. Cualquier sustancia que puede contener agua adecuada para el crecimiento de las semillas es un candidato, siempre que no sea fácilmente biodegradable o metabolizada por la flora microbiana de las semillas o la flora microbiana benéfica introducida. El agar es una sustancia preferida porque es de grado alimentario y es un producto natural de las algas marinas. El agar también es preferible debido a que llega a ser esencialmente invisible cuando el agua contenida se absorbe en los brotes, de tal manera que después de unos pocos dias de crecimiento, la capa 102 (ver Fig. 1) prácticamente desaparece y sólo se ve una masa de raices en su lugar.

EJEMPLO 2 (Las semillas germinadas se esterilizan, se enjuagan, se remojan, se colocan en la capa de medios en el recipiente cerrado con tapa que permite el intercambio de gases, y proporciona el crecimiento en el recipiente, incluso durante el envío y durante la exhibición en los anaqueles de las tiendas) La Fig. 3 solamente ilustra una modalidad de la invención, que se podría implementar con diversas semillas, métodos de lavado, recipientes, y adiciones probióticas. La Fig. 3 representa otra modalidad de los métodos de la invención para el cultivo de los brotes. Las semillas germinadas 300 se colocan en la bolsa 301 y se sumergen en el recipiente 303 que contiene una solución de lejía 304. El residuo de solución de lejía se remueve de las semillas enjuagando la bolsa con agua. Luego las semillas se colocan en una solución de remojo 306, que contiene opcionalmente organismos benéficos. Después de un período adecuado de remojo, que típicamente puede ser desde seis a cuarenta y ocho horas, las semillas están ya sea cerca de la germinación o ya han germinado. En este punto, las semillas 300 se colocan en el recipiente estéril 307 en la capa de medios 308 en el fondo del recipiente, y el recipiente se sella con la tapa 309. La tapa se puede mantener en su lugar por gravedad, proporcionando una barrera física contra la infiltración microbiana, mientras que también permite el intercambio de gases, de la misma manera que una cubierta de placa de Petri. Opcionalmente, la tapa de recipiente se podría sellar herméticamente, pero se proporciona con el parche o porción de membrana permeable 310, que es un parche de plástico permeable al gas u otro material adecuado, que permite que ocurra el intercambio de gases mientras no proporciona el paso a objetos del tamaño de células bacterianas (por ejemplo, 1 a 2 mieras) . De acuerdo con aspectos particulares, se puede utilizar un material tipo gortex (politetrafluoroetileno, el constituyente químico del TeflónTM, con una micro-estructura caracterizada por nodos interconectados por fibrillas) .

Una gran ventaja de este procedimiento es que los brotes se dejan crecer en el recipiente 307, incluso durante el envío y durante la exhibición en los anaqueles de las tiendas. Esto significa que el envío desde la instalación de manufactura puede tener lugar tan pronto como los brotes se colocan en el recipiente, sin la necesidad de varios dias de crecimiento adicional, que en la técnica anterior, ocurriría en tambores o aparato similar en la instalación de manufactura. Esto reduce en gran medida los requisitos para el espacio de piso' de la instalación, y también significa que los brotes estarán disponibles para el consumo inmediatamente después de completar el crecimiento durante la fase de envío. Esto resulta en una vida en anaquel del producto añadida y brotes más frescos y más seguros disponibles para el consumidor.

Se debe señalar que las semillas y brotes de esta invención forman preferiblemente un crecimiento denso de plantas en la superficie de los medios, las raíces de las cuales finalmente absorben el agua de la capa de medios 308, causando que la capa se encoja o desaparezca. En este punto, el volumen de recipiente 307 consiste casi completamente de brotes .

Los materiales similares al agar u otros materiales que contengan agua se podrían sustituir por agar en la práctica de los métodos de la invención. El papel del agar (o el otro material adecuado) es mantener la humedad en un formato confinado y proporcionar un soporte estructural en el cual los brotes pueden descansar. También se podrían utilizar sustancias tales como gelatina de proteína animal, la cual también retiene el agua en una matriz estructural. También se podría utilizar una capa de esponja o textil u otro material absorbente de agua para proporcionar apoyo y agua a las semillas. Esto es menos preferible puesto que el consumidor necesitaría remover la capa de fondo y desecharla en la abertura del producto para su uso.

Claims (19)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN Habiendo descrito la presente invención, se considera como novedad y por lo tanto se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes: REIVINDICACIONES Recibidas por la Oficina Internacional el 16 de Mayo de 2013 (16.05.2013)

1. Un método para el cultivo de brotes, caracterizado porque comprende las etapas de: obtener brotes, semillas o semillas germinadas; y colocar los brotes, semillas o semillas germinadas en contacto con una capa de material que contiene agua en un recipiente, en donde el recipiente opcionalmente se configura para proporcionar el intercambio de gases y vapor de agua mientras que impide la entrada de contaminantes, y en donde la capa de material que contiene agua contiene agua suficiente para proporcionar el crecimiento de los brotes a volumen o tamaño comercial sin la necesidad de entrada de agua adicional, en donde se proporciona un método para el cultivo de brotes.

2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la capa de material que contiene agua comprende uno o más de agar, agar-agar, algas marinas, algas, extractos de algas, alginato, celulosa, quitina, pectina, polisacáridos naturales complejos, esponjas, fibra de polímeros absorbentes de agua, papel, geles de proteína, preferiblemente agar o agar-agar, y agua.

3. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el material que contiene agua se divide en piezas para proporcionar mejor contacto con los brotes, semillas o semillas germinadas.

4. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la capa de material que contiene agua contiene agua suficiente para hacer crecer los brotes hasta el tamaño comercial, sin la necesidad de entrada de agua adicional para proporcionar evitar la contaminación microbiana .

5. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la capa de material que contiene agua contiene agua suficiente para proporcionar el crecimiento de los brotes sin la necesidad de entrada de agua adicional durante el envío o antes de la venta.

6. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque los brotes, semillas o semillas germinadas, antes de la colocación, se derivan de semillas hidratadas con suficiente humedad interna para apoyar la germinación, preferiblemente derivadas de semillas suficientemente remojadas para absorber al menos aproximadamente 40% de su peso seco en agua durante el proceso de remojo.

7. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque los brotes, semillas o semillas germinadas, antes de la colocación, se derivan de semillas remojadas en la presencia de un organismo microbiano benéfico .

8. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el recipiente se sella contra la introducción de agua liquida.

9. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el recipiente es un recipiente listo para la venta al público sellado contra la introducción de agua liquida y contaminantes microbianos.

10. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende la etapa adicional, después de lograr el crecimiento adecuado, de disminuir la temperatura del recipiente a una temperatura apropiada para el almacenamiento del brote, en donde la temperatura menor es menor que la temperatura de crecimiento del brote.

11. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizado porque la capa absorbente de agua comprende al menos un aditivo seleccionado del grupo que consiste de: microorganismos benéficos, microorganismos probióticos, vitaminas, vitamina B12, cofactores, nutrientes, fitoquimicos, colores naturales, antioxidantes, nutrientes para plantas, y nutrientes para humanos .

12. El método de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque el aditivo seleccionado comprende un microorganismo capaz de producir peróxido de hidrógeno.

13. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque el organismo benéfico es al menos uno seleccionado del grupo que consiste de microbios mesófilos, y microbios psicrotroficos o psicrófilos.

14. El método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque los microorganismos benéficos añadidos comprenden tanto microbios mesófilos como microbios psicrotroficos o psicrófilos.

15. El método de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque los brotes, semillas o semillas germinadas se desinfectan, en donde el microbio mesófilo se añade en una etapa temprana en el método a los brotes, semillas o semillas germinadas desinfectadas, y en donde el microbio psicrotrofico o psicrófilo se añade en una etapa tardía, en cada caso en cantidades suficientes para permitir la competición contra los patógenos y organismos de descomposición en las respectivas etapas.

16. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque además comprende cultivar los brotes a un volumen o tamaño comercial.

17. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende enviar el recipiente bajo condiciones de temperatura de modo que los brotes continúan creciendo durante el envió.

18. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque las semillas se hidratan e inoculan con probióticos y/u organismos benéficos, y se refrigeran hasta que se ponen en contacto con el material que contiene agua.

19. El método de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque después de poner los brotes, semillas o semillas germinadas en contacto con la capa de material que contiene agua en el recipiente, el recipiente se envasa y envía, y el crecimiento a un volumen o tamaño comercial se logra en tránsito.