MX2013013048A - Compuesto de tiazol y metodo de preparacion y uso del mismo. - Google Patents
Compuesto de tiazol y metodo de preparacion y uso del mismo.Info
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Abstract
La presente invención describe una clase de compuestos de tiazol de la fórmula general (I) (ver Fórmula) el método de preparación y uso de los mismos. Más particularmente, la presente invención describe un derivado de largazol de producto natural, el método de preparación del mismo y el uso en el campo de tratamiento de antitumor y esclerosis múltiple como un inhibidor de histona desacetilasa.
Description
COMPUESTO DE TIAZOL Y MÉTODO DE PREPARACIÓN Y USO DEL MISMO
CAMPO DE LA INVENCIÓN
La presente invención se refiere a una clase de compuestos de tlazoles, el método para su preparación y uso de los mismos. Más específicamente, la presente invención se refiere a derivados novedosos de largazol de producto natural, el método para prepararlos y sus usos para tratamientos contra esclerosis múltiple y tumor como inhibidores de histona desacetilasa (HDAC, por sus siglas en inglés) .
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
El tumor es la segunda enfermedad más grande después de la enfermedad cardiovascular a nivel mundial y su tasa de incidencia todavía está en crecimiento en años recientes. El tratamiento de cáncer siempre ha sido un problema inquietante en los seres humanos. Debido a la carencia de selectividad de objetivos, los fármacos para quimioterapia tradicional tienden a producir efectos colaterales tóxicos más serios. Esta situación requiere personas para desarrollar fármacos antitumor de objetivos moleculares específicos con alta eficiencia y baja toxicidad. Se ha convertido en una dirección importante de búsqueda y desarrollo de fármacos
antitumorales actualmente para usar una enzima clave de trayectoria de transducción de señal celular relacionada con diferenciación, proliferación y metástasis de la célula de tumor como un objetivo de selección de fármaco, y encontrar una nueva medicina anticáncer que actúe selectivamente en este objetivo específico con alta eficiencia, baja toxicidad y alta especificidad. La histona desacetilasa (HDAC) es una enzima clave.
La esclerosis múltiple (MS, por sus siglas en inglés) es un tipo de enfermedades autoinmunitarias típicas. La patología de la enfermedad de MS incluye inflamación aguda del sistema nervioso central y desmielinación, que es uno de los incentivos más importantes que lleva a parálisis no invasiva del sistema nervioso y discapacidad entre los jóvenes. La manifestación clínica de MS es heterogénea. Más de 80% de los pacientes se manifiestan como fenotipo de recaída aliviado. Ya que la patogénesis de la enfermedad se desconoce y las señales de diagnóstico sensibles todavía están carentes en la actualidad, el diagnóstico de MS todavía sólo depende de la característica múltiple de la enfermedad en tiempo y espacio. Además, un lote de otras enfermedades tales como oftalmoneuromielitis tienen síntomas extremadamente similares a MS. Por lo tanto el tratamiento de MS, incluso el diagnóstico, permanece muy difícil en la
actualidad.
Los hallazgos actuales indican que las células CD4+ T juegan un papel importante en la patogénesis de MS, al menos iniciando MS en una etapa temprana. Los estudios previos sugieren que la célula TH1 (caracterizada en que produce IFN--?) juega un papel importante en la ocurrencia de las enfermedades. Con. el descubrimiento de TH17, más y más evidencia muestra que la función de este último en la patogénesis de MS no es inferior que aquella de TH1, por ejemplo, los ratones con menos cantidad de células TH17 no fueron susceptibles para EAE (Encefalomielitis
Autoinmunitaria Experimental) , las células TH17 se identificaron en el tejido del cerebro en los pacientes con MS y etc.
La acetilación y desacetilación de histona cromática es uno de los procesos críticos que regulan la expresión del gen, aunque la expresión del gen anormal es la base biológica molecular de la ocurrencia del tumor y algunas enfermedades genéticas y metabólicas. El grado de acetilación de histonas se controla coordinativamente por acetiltransferasa de histona (HAT) y desacetilasa de histona (HDAC) . Cuando HDAC se sobre-expresa y luego se recluta por el factor de transcripción, llevará a la inhibición anormal de genes específicos, de esta manera resultará en la ocurrencia de
tumores y otras enfermedades.
Los HDACs tienen dieciocho subtipos, los cuales pueden dividirse en cuatro clases, particularmente clase I (HDAC 1, 2, 3, 8), clase II (HDAC 4, 5, 6, 7, 9), clase III (SIRT l.~ 7) y clase IV (HDAC l'l) respectivamente. (Johnstone, R. W.
2002 Nature Rev. Drug Disc. 1:287). Se reporta que la actividad de HDAC es relevante para la ocurrencia de cáncer (Archer, S. Y. etc. 1998 Proc. Nat. Acad. Sci. EUA, 95: 6791-6796) . Cuando HDAC se sobre-expresa, inhibirá la expresión del gen in vivo de factores naturales que inhiben el tumor tal como p53 (Gu, W. etc.. 1997 Cell, 90: 595-606). Sin embargo, los inhibidores de HDAC (HDACi) aumentan el nivel de acetilación de cromatina · histona, de esta manera resultando en la activación de expresión de genes específicos, en consecuencia resultando en diferenciación de células o apoptosis de células de cáncer. Los estudios clínicos muestran que el nivel alto de acetilación de histonas puede lograrse al inhibir la actividad de HDAC.
Las HDACis que ya se han descubierto en la actualidad pueden dividirse en las siguientes categorías en la base de la estructura: ácidos grasos de cadena corta; ácido hidroxámicos ; grupo de epoxi-cetonas electrofílicas ; o-fenilendiaminas y péptidos macrocíclicos (Miller, T. A. etc.
2003 J. Med. Chem. 46:5097; Rosato, R. R. etc. 2004 Expert.
Opin. Invest. Drugs 13:21; Monneret, C, 2005 Eur. J. Med. 40:1; Yoo, C. B . etc. 2006 Nat. Rev. Drug Discovery 5:37). Los estudios de la relación estructura-actividad de HDACi han mostrado que la mayoría de HDACis pueden segmentarse en el dominio estructural del reconocimiento de superficie, región quelante de zinc . (ZBG)' y cadena alifática hidrofóbica que conecta las dos partes anteriores (Marks, P. 2007 Oncogene 26:1351).
La histona desacetilasa (HDAC) es una proteína importante para la regulación epigenética, que regula el remodelado de cromatina, expresión del gen y las funciones de varias proteínas incluyendo factores de transcripción, histonas, proteínas citoesqueletales y etc. Las HDACis son una clase de compuestos de molécula pequeña que pueden bloquear la actividad de HDAC y llevar a detención del ciclo celular, diferenciación celular y apoptosis, que es. la razón por la que se han aplicado en terapia de tumor. Los resultados experimentales recientes muestran que HDACis también pueden tener efectos inmunomoduladores y antiinflamatorios. Camelo et al encuentra que en el modelo de ratón de MS (encefalomielitis autoinmunitario experimental, EAE, por sus siglas en¦ inglés) HDACi TSA puede inhibir efectivamente la invasión de células T al sistema nervioso central de ratones, por ello reduce los síntomas clínicos de
la enfermedad. Chung et al encuentra que, el ácido HDACis fenil butitico y TSA pueden inhibir la expresión de TNF-alfa en modelos de artritis en animales y reducir la infiltración de células mononucleares , por ello reduce los síntomas de la enfermedad. Los estudios llevados a cabo por Bosisio et al prueban que HDACi puede inhibir la célula dendr.itica que presenta el antígeno de citocinas secretadas a favor de producir TH1 y TH17, . que incluye IL-12, IL-23 etc. Los estudios llevados a cabo, por Tao et al muestran que HDACi puede aumentar la diferenciación de la célula Treg supresora e inhibir la función 'en células TH1 y TH17. Los estudios mencionados arriba muestran que la inhibición de HDAC está estrechamente relacionada a la ocurrencia y desarrollo de enfermedades autoinmunitarias . La HDACi con toxicidad inferior, mejor selectividad contribuirá al tratamiento de enfermedades autoinmunitarias, especialmente al tratamiento de enfermedades MS.
Largazol es una lactona de péptido cíclico de diecisiete miembros altamente funcionalizada aislada de las cianobacterias marinas de Florida Symploa sp. (Taori, K. , etc. 2008 J. Am.. Chem. Soc. 130:1806-1807; Ying, Y. etc. 2008 J. Am. Chem. Soc. 130:8455-8459), y su estructura se muestra como sigue. El largazol tiene una estructura de esqueleto novedosa, que incluye: la porción tándem del
anillo dihidro-tiazol sustituido por 4 -metilo y anillo tiazol, L-valina y ácido (3S, 4E) -3-hidroxi-7-sulfidril-4-heptenoico. Los experimentos farmacológicos muestran que largazol es capaz de inhibir selectivamente el crecimiento de células de cáncer de mama (MDA-MB-231) y células de osteosarcoma de fibroblasto (U20S), mientras que muestra menos efecto en células epiteliales mamarias normales (NMuMG) y fibroblastos normales (NIH3T3). Los estudios posteriores muestran que larqazol es capaz de inhibir selectivamente HDAC de clase I. Basados en estos conocimientos de largazol, los inventores optimizan y modifican la estructura de largazol, y evalúan sus actividades, por ello obtienen una serie de compuestos con potencial para desarrollo adicional.
largazol
SUMARIO DE LA INVENCIÓN
Un objetivo de la presente invención es diseñar y sintetizar una clase novedosa de compuestos tiazol, que pueden usarse como inhibidores de histona desacetilasa,
proporcionando de esta manera nuevas formas para descubrir nuevos fármacos contra el tumor y esclerosis múltiple.
Otro objetivo de la presente invención es proporcionar métodos para preparación de los compuestos de tiazol.
Otro objetivo de la presente invención es proporcionar el uso de los compuestos de tiazol.
Los compuestos tiazol de la presente invención tienen la estructura de la fórmula general I:
en donde,
Ri es
en la cual,
R-ia y Rsa cada uno independientemente son grupo A o alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido por tert-butoxicarbonilamino;
R<!b y Rsb cada uno independientemente son grupo A; o,
R b y Rsb junto co el átomo de carbono al cual se unen
forman un hidrocarburo cíclico de 3 hasta 10 miembros o un heterociclo de 3 hasta 10 miembros que contiene 1 hasta 3 heteroátomos seleccionados de N, O y S;
Rícr Ríe y R6 cada uno independientemente son grupo A;
El grupo A es hidrógeno, halógeno, hidroxilo, nitro, cicloalquilo C3-C6, alcoxilo Ci-C6, alcoxilo Ci-C6 opcionalmente sustituido por arilo C6-Cio, amino, alquilamino Ci-C6, alquilamino Gi-C6 opcionalmente sustituido por arilo Cedo, alquilo C1-C6, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido por hidroxilo, alquilo Ci-C6 opcionalmente sustituido por alcoxilo C1-C4, alquilo opcionalmente sustituido por flúor, alquilo Ci- e opcionalmente sustituido por arilo Cg-Cio, alquenilo C2-C6, alquenilo C2-C6 opcionalmente sustituido por hidroxilo, alquenilo C2-C6 opcionalmente sustituido por alcoxilo C1-C4, alquenilo C2-C6 opcionalmente sustituido por flúor, grupo alquenilo C2-C6 opcionalmente sustituido por arilo Ce-C^o, alquinilo C2-C6, alquinilo C2- opcionalmente sustituido por hidroxilo, alquinilo C2-C6 opcionalmente sustituido por alcoxilo C1-C4, alquinilo z~ e opcionalmente sustituido por flúor, alquinilo C2-C6 opcionalmente sustituido por arilo C^-C10, arilo C6-C10, o heterociclo aromático de 5 hasta 7 miembros que contiene 1-3 heteroátomos seleccionados de N, O y S;
R2 es hidrógeno, halógeno, hidroxilo, alcoxilo C1-C6,
alcoxilo Ci-Cs opcionalmente sustituido por arilo C6-C10 , amino, alquilamino Ci -C6 , alquilamino Ci -C6 opcionalmente sustituido por arilo C6-Ci0, alquilo Ci-C6, cicloalquilo C3-C6, cicloalquilo C3~C6 opcionalmente sustituido por alquilo Ci-Cg, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido por uno o más grupos sustituyentes independientemente seleccionados de grupo hidroxilo, alcoxilo C1-C4, halógeno, benciloxilo y arilo C6~ C10 , alquenilo C2-Cs, alquenilo C2-C6 opcionalmente sustituido por uno o más grupos sustituyentes independientemente seleccionados de hidroxilo, alcoxilo C1 - C4 , halógeno y arilo C6-Cio, alquinilo C2-C6, alquinilo C2-C8 opcionalmente sustituido por uno o más grupos sustituyentes independientemente seleccionados de hidroxilo, alcoxilo C1-C4, halógeno y arilo C6-C10 , arilo C 6-Ci0 , arilo C6-C10 opcionalmente sustituido por halógeno o nitro, o heterociclo aromático de 5-7 miembros que contiene 1 hasta 3 heteroátomos seleccionados de N, O y S;
n es 0 , 1 o 2 ;
X es
donde R7 es hidrógeno o alquilo
Y puede no existir o existe como -(alquilo C1-C10 ) - , -(alquenilo C2-C9 ) - , -(arilo C6-Ci0 ) - , - (alquilo Ci-C6 ) - (arilo Cg-Cio)- -(arilo C6-Ci0) - (alquenilo C2-C6)-, -(cicloalquilo C3-
C6)-, -(alquilo C1-C5) -C (0) -NH- (alquilo C1-C5)-, -(alquilo Ci-C5) -C (0) -0- (alquilo 'C1-C5)- o -(alquilo C1-C5) -C (0) -0-(alquenilo C2-C9)-;
R3 es R3a, 3b/ R3c? R3d o R3e :
R8 es hidrógeno o alquilcarbonilo C1-C6; Preferiblemente, hidrógeno;
R9 es hidrógeno o alquilcarbonilo C1-C10.
En una modalidad adicional de la presente invención, en donde,
En la fórmula general I:
en donde :
Ri es Ria;
n=0;
R2, X, Y, y R3 se definen como arriba,
específicamente como la siguiente fórmula general
Ha
En la fórmula general' IIa:
R a y Rsa se definen como arriba; Preferiblemente, R4a y R5a cada uno independientemente son hidrógeno, alquilo Ci-C6 o alquilo Ci-C6 opcionalmente sustituido por tert-butoxicarbonilamino .
En otra modalidad adicional de la presente invención, en donde,
En la fórmula general I:
en donde :
Ri es Rib; _
n=0;
R2, X, Y, y R3 se definen como arriba,
específicamente como la siguiente fórmula general Ilt,:
Hb
En la fórmula IIb:
<ib y Rsb se definen como arriba; Preferiblemente, R4b y R5b cada uno independientemente son hidrógeno, alquilo Ci-C6, cicloalquilo C3-C6 o arilo C6-Ci0; o, R4b y Rsb junto con el átomo de carbono al cual se unen forman un hidrocarburo cíclico de 3 hasta 10 miembros.
En otra modalidad adicional de la presente invención, en donde,
En la fórmula general I:
en donde
Ri es Ric ;
n=0;
R2 , X, Y, y R3 se definen como arriba,
específicamente como la siguiente fórmula general
H e
En la fórmula IIc:
Río Rsc y R6 se definen como arriba;
Preferiblemente, R4 c , Rsc y R6 cada uno independientemente son hidrógeno o alquilo C i -C s .
En una modalidad más preferible de la presente invención, la X es -NH, n=0 y R2 , R3, R^br Rsb e Y se definen como arriba, el compuesto de la presente invención tiene la siguiente estructura de la fórmula general III:
III
En una modalidad particularmente preferible de la presente invención, la X es ' -NH, y n=0, mientras que R3 es
R3a? el compuesto de . la presente invención tiene la siguiente estructura de la fórmula general IV:
IV
En donde, R2, R3, R4b', Rsb e Y se definen como arriba. R2 preferiblemente es hidrógeno, alquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C6, alquilo Ci-C6 opcionalmente sustituido por hidroxilo, cicloalquilo C3-C6 opcionalmente sustituido por alquilo Ci-C6, · alquenilo C2-C8, alquenilo C2~C8 opcionalmente sustituido por hidroxilo, arilo C6-C10, alquilo Ci-C6 opcionalmente sustituido por arilo C6-C10 o benciloxilo, alquenilo C2-Ce opcionalmente sustituido por arilo C6-C10, alcoxilo C2-C8 opcionalmente sustituido por arilo C6-C10, arilo C -Cio opcionalmente sustituido por halógeno, o arilo C6-C10 opcionalmente sustituido por nitro;
Preferiblemente, R4b y sb cada uno independientemente son hidrógeno, flúor, alquilo Ci-C6, alquilo Ci-C6 opcionalmente sustituido por hidroxilo, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido por flúor, cicloalquilo C3-C6, alquenilo C2-C6, alquenilo C2-C6 opcionalmente sustituido
por hidroxilo, alquenilo C2-C6 opcionalmente sustituido por flúor, o arilo C6-Ci0; o, R4b y' Rsb junto con el átomo de carbono al cual se unen forman un hidrocarburo cíclico de 3 hasta 10 miembros o un heterociclo de 3 hasta 10 miembros que contiene 1 hasta 3 heteroátomos seleccionados de N, O y S;
Y preferiblemente es -(alquilo Ci-Cg)-, -(arilo C6-C10)-, -(alquilo Ci-C6) - (arilo C6-Ci0) -, .0 -(arilo C6-Ci0) - (alquenilo
Los compuestos tiazol de la fórmula general I de la presente invención, específicamente son como sigue:
Por lo tanto la presente invención proporciona métodos para preparar el compuesto tiazol de la fórmula general I, en donde, el método puede emplearse por una de las siguientes Rutas uno hasta cinco;
Ruta Uno
En la Ruta uno:
Ri ^2/ n, X e Y cada uno tiene el mismo significado como arriba;
Específicamente, el compuesto 1 reacciona con polvo de zinc activo en THF para formar el compuesto reactivo de zinc 2; la reacción de acoplamiento Negishi del compuesto 2 con compuesto de 2-bromo-tiazol catalizado por acetato de paladio y trifenilfosfina en tolúeno proporciona el compuesto 4. La hidrólisis del compuesto 4 en hidróxido de sodio/metanol-agua produce el compuesto 5 que es el ácido correspondiente del compuesto 4; reacción de condensación del compuesto 5 con varios reactivos nucleofílieos de la fórmula HX-Y-COOMe se conduce usando agentes de condensación tales como EDCI, HOBt
e i-Pr2 Et en D F para proporcionar el compuesto 6; el compuesto 6 reacciona' con la solución de metanol hecho frescamente de hidroxi amina para producir el compuesto Ia;
Ruta Dos
NHBoc
En la Ruta dos:
Ri, R2, Rs, n, X e Y cada uno tiene el mismo significado como arriba;
Específicamente, el compuesto 6 se hidroliza por álcali en metanol o THF/agua para proporcionar el compuesto Ie; reacción de condensación del compuesto Ie con o-fenilendiamina se conduce usando agentes de condensación tales como EDCI, HOBt e i-Pr2NEt en DMF para proporcionar el compuesto 7; el grupo protector Boc del compuesto 7 se remueve en solución de acetato de etilo del ácido clorhídrico para proporcionar los compuestos Ib, o el compuesto 7 reacciona con varios nucleófilos de la R8H para proporcionar el compuesto Ib;
Ruta tres
En la ruta tres:
Rir R2, nr X e Y cada uno tiene el mismo significado como arriba;
Específicamente, la reacción de condensación del compuesto 5 con varios · nucleófilos de la fórmula HX-Y-NHCOCH2STrt se conduce usando agentes de condensación tales como EDCI y DMAP como base en diclorometano para proporcionar el compuesto 8; el grupo protector Boc del compuesto 8 se remueve por el ácido trifluoroacético para proporcionar el compuesto Ic;
Ruta cuatro
En la ruta cuatro:
Ri, R2, R9, n, X e Y cada uno tiene el mismo significado
como arriba;
Específicamente, la reacción de condensación del compuesto 5 con varios nucleófilos de la fórmula HX-Y-SR9 se conduce usando agentes de condensación tales como EDCI, HOBt e i-Pr2NEt en DMF para proporcionar el compuesto Id;
Ruta Cinco
En la ruta cinco:
^2r 3r Rícr Rsc 6r , X e Y cada uno tiene el mismo significado como arriba;
Específicamente, la reacción del compuesto 9 con reactivo de Lawesson proporciona el compuesto 10; la reacción Hantzsch del compuesto 10 con bromopiruvato de etilo sustituido por R2 produce el compuesto bistiazol 11; el compuesto 11 se hidroliza por alcalino en metanol/agua para proporcionar el compuesto 12; la reacción de condensación del compuesto 12 con varios nucleófilos de la fórmula HX-Y-R3 se conduce usando agentes de condensación
tales como EDCI, HOBt e i-Pr2NEt en DMF para proporcionar el compuesto IIC- El compuesto tiazol de la fórmula general I de la presente invención puede usarse para preparar los farmacéuticos como inhibidores de histona desacetilasa , por lo tanto, puede usarse para preparar los farmacéuticos contra el tumor y esclerosis múltiple. Las líneas celulares del tumor incluyen HCT-116 de célula de cáncer de colon, Bx-PC3 de célula de cáncer pancreática, HL60 de célula de leucemia, A549 de célula de adenocarcinoma de pulmón humano, MDA- B-231 célula de cáncer de mama, y HMEC de célula epitelial mamaria. De esta manera, puede usarse para el tratamiento de cáncer de colon, cáncer pancreático, leucemia, cáncer pulmonar o cáncer de mama.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS
La Figura 1 es el registro clínico de EAE que se alivia efectivamente por HDACi CFH367-C.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA MODALIDAD PREFERIDA
La presente invención de aquí en adelante se ilustrará además por los siguientes ejemplos, pero no limitados a tales ejemplos.
Ejemplos para preparar compuestos
En las siguientes modalidades de preparación, RMN se determinará por instrumento Mercury-Vx 300M hechos por Varían, calibre RMN: d H 7..26 ppm (CDC13) , 2.50 ppm (DMSO-d6), 3.15 ppm (CD30D) ; ' Los reactivos se proporcionan principalmente por Shanghai Chemical Reagent Company; las placas en gel de sílice para la cromatografía de capa delgada CCD se producen . por Shandong Yantai Huiyou silica gel Development Co. Ltd., Tipo HSGF 254; el gel de sílice para cromatografía de columna en fase normal usado en purificación de los compuestos se producen por una rama de Shandong Tsingtao Marine Chemical Factory, Tipo zcx-11, mallas 200-300.
Ejemplo 1 de preparación (número del compuesto CFH367-C)
El polvo Zn activo (298mg, 4.58mmol) se disolvió en THF anhidro redestilado (20 mL) . El aire interior se reemplaza por N2. El compuesto 13 (875 mg,. 5.34mmol) se agregó gota a gota, mientras que la velocidad de goteo se controló para
prevenir de ebullición vigorosa. Después de tal adición, la mezcla de reacción se puso a reflujo durante 1.5 h, y entonces se enfrió naturalmente para proporcionar reactivo de zinc 14.
El compuesto 15 (lg, 3.82mmol) se disolvió en tolueno anhidro (20mL) . El aire interior se reemplaza por N2. El reactivo de zinc descrito arriba 14 se introduce dentro de la mezcla de reacción, entonces se agregaron el acetato de paladio del catalizador (43 mg, 0.19mmol) y trifenilfosfina (100 mg, 0.38mmol). La mezcla de reacción se calentó hasta 80-90 °C durante un tiempo hasta que el compuesto del material crudo 15 todo se consumió. Después de la eliminación de sustancia insoluble¦ por filtración, la fase orgánica se concentró y entonces se diluyó con CH2CI2 ( 50mL) . Después de agregar HC1 1N (30mL) con agitación durante 10 min, se separó la fase orgánica. La fase acuosa se extrajo por CH2CI2 (30mL) dos veces. La combinación de todas las fases orgánicas extraídas se concentró y entonces sometió a cromatografía instantánea de columna en gel de sílice (PE/EtOAc = 4: 1) para proporcionar el compuesto 16 (750 g, 73.5%, grasa amarilla), XH RMN (300 MHz , CDC13) d 7.85 (d, J=3.0 Hz, 1H) , 7.45 (d, J=3.0 Hz, 1H), 3.96 (s, 3H) , 3.10-3.14 (m, 1H) , 1.31-1.38 (m, 2H) , 0.84-0.89 ¦ (m, 2H) .
El compuesto 16 (700 mg, . 2.63mmol) se disolvió en
MeOH/H20 (30/6mL), y entonces NaOH sólido (210mg, 5.26mmol) se agregó dentro. La mezcla de reacción se calentó hasta reflujo durante 1 h. Después de la terminación de la reacción, la mezcla obtenida se concentró bajo presión reducida para remover la mayoría de MeOH y entonces se diluyó con H20. La fase acuosa luego se hizo ácida hasta pH = 2 por ácido clorhídrico 1N, se extrajo por EtOAc (20mL ? 3 veces) , y lavó con salmuera (30mL) . La fase orgánica se secó por Na2S04 anhidro y entonces se concentró para proporcionar el compuesto 17 sólido (660 mg, 99.5%, sólido amarillo pálido) que puede usarse directamente en la siguiente reacción.
El compuesto 17 (100 mg, 0.40mmol) se disolvió en DMF seco (5mL), luego se enfrió hasta 0°C en un baño de hielo. Se agregaron EDCI (76 mg, 0.40mmol) y HOBt (54 mg, 0.40mmol) y agitaron durante 10 min a 0°C. El compuesto 18 (73 mg, 0.44mmol) e i-Pr2NEt (120 mg, 1.20mmol) se agregaron y agitaron durante 12h a temperatura ambiente. La mezcla obtenida se diluyó con 20mL de agua, y luego se extrajo por EtOAc (15mL ? 3 veces) . Las fases orgánicas combinadas se lavaron por ácido clorhídrico 1N (15mL) , solución de bicarbonato de sodio sáturado (15ml) y salmuera (20mL) en la secuencia, y luego secaron por Na2S04 anhidro. Después de la eliminación del solvente al evaporar bajo una presión reducida, el residuo obtenido se purificó por cromatografía
de columna en gel de sílice ( PE/EtOAc=2 : 1 ) para proporcionar el compuesto del producto 19 (104 mg, 71.7%, grasa amarillo pálido). XH RMN (300 MHz, CDC13) 57.74 (d, J=3.0 Hz 1H) , 7.42 (t, J=5.4 Hz, 1H) , 7.36 (d, J=3.0 Hz 1H) , 3.58 (s, 3H) , 3.37 (q, J=6.3 Hz, 2H) , 2.30 (t, J=6.6 Hz, 2H) , 1.58-1.69 (m, 4H) , 1.19-1.25 (m, 2H) , 0.68-0.74 (m, 2H) .
Se suspendió clorhidrato de hidroxilamina (197 mg, 2.8 mmol) en MeOH (15mL), y luego KOH (235mg, 4.20mmol) se agregó dentro y agitó durante 5 min. La sustancia insoluole se removió por filtración y el filtrado se recolectó para uso. Después el compuesto 19 (104 mg, 0.28 mmol) se disolvió en MeOH anhidro (10 mi), solución MeOH mencionado arriba f escamente preparado de clorhidrato de hidroxilamina se agregó dentro y agitó durante 1 h a temperatura ambiente. La reacción se monitoreó por. CCD. La solución obtenida se diluyó con EtOAc, luego se neutralizó hasta pH = 5-6 por ácido clorhídrico 1N. Después de la eliminación del solvente al evaporar bajo presión reducida, la mezcla obtenida se extrajo secuencialmente por EtOAc (15mL ? 3 veces), y lavó por salmuera (10 mL) , secó por Na2S04 anhidro y concentró para proporcionar un producto crudo que se purificó por cromatografía de columna (CHCl3/MeOH=20 : 1-10 : 1 ) para proporcionar el producto CFH367-C (71 mg, 68.3%, sólido amarillo pálido). XH RMN (300 MHz, CD30D) d 8.36 (t, J=5.4
Hz, 1H) , 7.88 (d, J=3. O Hz 1H) , 7.74 (d, J=3.0 Hz 1H) , 3.41 (q, J=6.6 Hz, 2H), 3.31-3.36 (m, 1H) , 2.16 (t, J=6.6 Hz, 2H) , 1.64-1.69 (m, 4H) , 1.29-1..34 (m, 2H) , 0.82-0.86 (m, 2H) .
Los siguientes compuestos pueden sintetizarse usando el mismo método como arriba:
J=7.2 Hz, 2H) , 1.23-1.59 (m,
8H) , 1.22 (s, 9H)
Ejemplo 2 de preparación (número del compuesto CFH 94)
El compuesto 20 (90mg, 0.24mmol) se disolvió en THF /H20 (5mL, 4:1) . NaOH (12mg, 0.29mmol) se agregó y agitó durante 2h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se hizo ácida hasta pH = 2-3 con ácido clorhídrico 1N, se extrajo por EtOAc (10mLx3 veces), lavó .con salmuera (20mL) , secó por Na2SC>4 anhidro, y concentró para proporcionar el compuesto 21 (85 mg, 98%, sólido blanco). XH RMN (300 MHz, CD30D) d 7.86 (d, J=3.3 Hz, 1H), 7.70 (d, J=3.3 Hz, 1H) , 3.38 (t, J=6.3 Hz, 2H) , 3.20 (d, J=7.2 Hz, 2H) , 2.36 (t, J=6.9 Hz, 2H) , 1.89-2.00 (m, 1H) , 1.66-1.68 (m, 4H) , 0.96 (d, J=6.6 Hz, 6H) .
El compuesto 21 (93mg, 0..25mmol) se disolvió en CH2C12 seco (5mL) . El compuesto 22 (74mg, 0.35mmol), HOBt (41mg, 0.30mmol), Et3N (36mg, 0.35mmol) se agregaron dentro respectivamente y agitaron durante 10 min a 0°C, luego se
agregó dentro EDCI (82 mg, 0.43mmol). La reacción se mantuvo a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción obtenida se lavó secuencialmente por ácido clorhidrico 1N (lOmL), solución de bicarbonato de sodio saturado (lOmL) y salmuera, secó por anhidro Na2S04, concentró y purificó por cromatografía instantánea (PE EtOAc = 2: 1-1:1) para proporcionar el compuesto 23 (74mg, 52.5%, aceite transparente incoloro). 1H RMN (300 MHz, CDC13) d 7.86 (d, J=3.3 Hz, 1H), 7.66 (t, J=5.4 Hz,. 1H) , 7.52 (d, J=7.8 Hz, 1H) , 7.45 (d, J=3.3 Hz, 1H) , 7.35 (d, J=7.8 Hz, 1H) , 7.06-7.14 (m, 2H), 3.40 (q, J=6.3 Hz, 2H) , 3.26 (d, J=6.9 Hz, 2H) , 2.38 (t, J=6.6 Hz, 2H) , 1.98-2.01 (m, 1H) , 1.66-1.76 (m, 4H) , 1.48 (s, 9H) , 0.98 (d, J=6.6 Hz, 6H) .
F,l compuesto 23 (73 mg, 0.13mmol) se disolvió en CH2C12 (2mL) , y luego la solución EtOAc de ácido clorhídrico 1N (2mL) se agregó y agitó durante lOmin a temperatura ambiente. Se obtuvo el producto CFH494 (60 mg, 93.8%, sólido blanco) después de la concentración. XH RMN (300 MHz, CD30D) d 7.93 (d, J=3.3 Hz, 1H) , 7.80 (d, J=3.3 Hz 1H) , 7.47-7.52 (m, 2H) , 7.35-7.42 (m, 3H) , 3.45 (q, J=6.6 Hz, 2H) , 3.31 (d, J=7.2 Hz, 2H) , 2.59 (t, J=6.6 Hz, 2H) , 1.81-2.00 (m, 1H) , 1.74-1.79 (m, 4H) , 0.98 (d, J=6.6 Hz, 6H) .
Los siguientes compuestos se sintetizaron usando el mismo método como arriba:
Ejemplo 3 de preparación (numero del compuesto CFH412)
El compuesto 24 (500mg, 1.87mmol) se disolvió en CH2CI2 seco (15mL) y luego el compuesto 25 (754mg, 1.87mmol), EDCI (488mg, 2.80mmol), D AP (23 mg, 0.19mmol) se agregaron secuencialmente dentro. La reacción se mantuvo a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se lavó secuencialmente con solución de bicarbonato de sodio saturado
(lOmL) y salmuera. La fase acuosa se extrajo con CHC13
(10mLx2 veces). La combinación de las fases orgánicas se secó con Na2S04 anhidro, concentró y purificó por cromatografía de columna (PE/EtOAc = 2: 1-1:1) para proporcionar el producto 26 (640 mg, 52.5%, grasa amarilla). XH RMN (300 MHz, CDC13) d 7.78 (d, J=3.0 Hz, 1H) , 7.51 (t, J=6.3 Hz, 1H) , 7.35 (d, J=8.1 Hz, 6H), 7.29 (d, J=3.0 Hz, 1H) , 7.11-7.23 (m, 9H) , 6.15 (t, J=6.0 Hz, 1H), 3.32 (q, J=6.0 Hz, 2H) , 3.22 (d, J=7.2 Hz, 2H), 3.05 (s, 2H) , 2.96 (q, J=6.0 Hz, 2H) , 1.94-1.96 (m, 1H) , 1.44-1.46 (m, 2H) , 1.35-1.40 (m, 2H) , 0.94 (d, J=6.6 Hz, 6H) .
El compuesto 26 (320 mg, 0.5mmol) se disolvió dentro CH2C12 (5mL). Se agregaron Et3SiH (188 mg, 1.65mmol) y ácido trifluoroacético (5.6 g, 0.05mol) dentro y agitaron durante 2h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida y purificó por cromatografía de columna en gel de sílice. (PE/EA = 1:1-1: 5) para proporcionar el producto CFH412 (150mg, 74.4%, grasa amarillo pálido). *H RMN (300 MHz, CDC13) d 7.78 (d, J=3.0 Hz, 1H) , 7.59 (t, J=5.7 Hz, 1H), 7.38 (d, J=3.0 Hz 1H) , 7.31 (t, J=5.7 Hz, 1H) , 3.36 (q, J=6.3 Hz, 2H) , 3.26 (q, J=5.7 Hz, 2?) , 3.19 (s, 2H) , 3.17 (d, J=7.2 Hz, 2H) , 1.86-1.97 (m, 1H) 1.47-1.58 (m, 4H) , 0.89 (d, J=6.6 Hz, 6H) .
Los siguientes compuestos se sintetizaron usando el mismo método como arriba:
Modalidad de la preparación 4 (número del compuesto CFH538)
El compuesto 27 (100 mg, 0.47mmol) se disolvió en DMF seco (5mL) y la mezcla se enfrió hasta 0°C en un baño de hielo. Se agregaron EDCI (108mg, 0.57mmol) y HGBt (76mg, 0.57mmol) dentro y agitaron durante 10 min a 0°C. Luego, el compuesto 28 (81mg, 0.52mmol) e i-Pr2NEt (91mg, 0.71mmol) se agregaron dentro y agitaron durante 12h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción obtenida se diluyó con 20mL de agua, se extrajo 'por EtOAc (15mL><3 veces) . Las fases orgánicas combinadas se lavaron por salmuera (20mL) y luego
secaron por Na2S0 anhidro. Después de la eliminación del solvente, el producto 29 (129 mg, 77.9%, grasa incolora) se obtuvo después de la purificación por cromatografía de columna en gel de sílice (PE/ EtOAc=3:l). aH RMN (300 MHz, CDC13) d 8.83 (s, 1H), 8.10 (s,lH), 8.05 (s,lH), 7.81 (d, J=9.0 Hz, 1H ), 5.87 (dddd, J=17.1, 10.5, 5.7, 5.1 Hz, 1H) , 5.31 (d, J=17.1 Hz, 1H) , 5.23 (d,. J=10.5 Hz, 1H), 4.73 (dd, J=9.3, 5.1 Hz, 1H), .4.65 (dd, J=17.1, 5.7 Hz, 2H) , 2.23-2.33 (m, 1H), 0.96 (t, J=6.9 Hz, 6H) .
El compuesto 29 (55mg, 0.16mmol) se disolvió en tolueno redestilado (5mL) . A está solución se agregó a solución de tolueno (1 mL) de catalizador Grubbs segunda generación (66 mg, 0.08 mmol) , y solución de tolueno (lmL) del compuesto 30 (100 mg, 0.48 mmol) . La mezcla de reacción se calentó hasta 110°C y se colocó a- reflujo durante 12h. La mezcla de reacción obtenida se concentró y luego purificó por cromatografía de columna en gel de sílice (PE/EtOAc=2: 1) para proporcionar el producto CFH538 (23mg, 50%, grasa amarillo pálido) . El material crudo 29 (25mg) se recicló. 1H RMN (300 MHz, CDCI3) d 8.86 (s,' lH), 8.13 (s, 1H) , 8.11 (s, 1H) , 7.83 (d, J=9.0 Hz, l'H) , 5.74 (dt, J=15.3, 6.6 Hz, 1H) , 5.63 (dt, J=13.2, 6.0 Hz, 1H) , 4.74(dd, J=9.0, 5.4 Hz, 1H) , 4.66 (dd, J=15.3, 5.4 Hz, 2H) , 2.91 (t, J=7.5 Hz, .2H) , 2.52 (t, J=7.5 Hz, 2H) , 2.35-2.43 (m, 2H) , 2.22-2.32 (m, 1H) ,
1.60-1.67 (m, 2H) , 1.19-1.26 . (m, 8H) , 1.04 (t, J=6.3 Hz, 6H) , 0.86 (t, J=6.9 Hz, 3H) .
Los siguientes compuestos se sintetizaron usando el mismo método como arriba:
2H) , 2.52 (t, J=7.5 Hz,
2H) , 2.35--2.43 (m, 2H) ,
2.22 -2.32 (m, 1H), 1 .60- 1.67 (m, 2H), 1.19-1.26 (m,
8H) , 1.04 (t, J=6.3 Hz,
6H) , 0.86 (t, J=6.9 Hz, 3H) d 8 .10 (s, 1H) , 7.89 (s,
1H) , 7.82 (d, J=9.0 Hz,
1H) , 5.75 (ddd, J=15.3,
6.6, 6.6 Hz, 1H) , 5.67
(ddd , J=14. 4 , 7.2, 7.2 Hz,
1H) , 4.74(dd, J=9.0, 5.1
Hz, 1H) , 4 .61 (dd, J=15.3, j?
CFH552 4.5 Hz, 2H) , 2.90 (t, J=l .2
Hz, 2H) , 2.77 (s, 3H) ,
2.51 (t, J=7.2 Hz, 2H) ,
2.31 -2.36(m , 2H) , 2.27-2.30
(m, 1H), 1. 61-1.66 (m, 2H) ,
1.19 -1.27 (m, 8H), 1.02 (t,
J=6. 6 Hz, 6H) , 0.86 (t,
J=l . 2 Hz, 3H)
Ejemplo 5 de preparación (numero del compuesto CFH325-B)
El compuesto 31 (1 g, 7.86mmol) se disolvió en DME seco
(30mL) . Se agregó reactivo de Lawesson (1.6 g, 3.9mmol)
dentro con la protección de N2. Después de 12h de reacción a temperatura ambiente, el compuesto 32 (l.Og, 88.8%, sólido blanco) , se obtuvo después de la filtración, eliminación de solvente, y purificación por cromatografía de columna en gel de sílice (PE /Et.OAc = 10: 1-2: 1). El compuesto 32 se usó para la siguiente reacción directamente.
El compuesto 32 (500 mg, 3.49mmol) se disolvió en DME seco (30mL) . Se agregó KHC03 (2.1 g, 21mmol) y agitó durante lOmin a temperatura ambiente. El compuesto 33 (1.5 g, 7.68mmol) se agregó gota a gota. Después de lh de reacción, la mezcla de reacción se enfrió en' un baño de hielo y luego se agregó gota a gota anhídrido trifluoroacético (2.2g, 10.48 mmol) y solución DME (lOmL) de 2,6-lutidina (1.87g, 17.46 mmol) . La reacción se mantuvo a 0°C durante lh, y se mantuvo durante la noche después de elevación hasta temperatura ambiente. Después de que la reacción del compuesto 32 se completó lo cual se detectó por CCD, el solvente se removió al evaporar bajo presión reducida y entonces se diluyó con EtOAc (50mL) . La fase orgánica se lavó secuencialmente con ácido clorhídrico 1N (20mL) , bicarbonato de sodio saturado (20 mL) y salmuera (20 mL) , y secó con Na2S04 anhidro. El compuesto 34 (647 mg de 77.4%, sólido amarillo pálido) se obtuvo después de purificación por cromatografía en gel de sílice (PE/EtOAc = 4:1-2:1). 1H RMN (300 MHz, CDC13) d 8.00
(s, 1H) , 7.50 (d, J=3.9 Hz, 1H) , 7.36 (d, J=5.1 Hz, 1H) , 7.00 (dd, J=4.8, 3.9 Hz, 1H) , 4.34 (q, J=7.2 Hz, 2H) , 1.33 (t, J=7.2 Hz, 3H)
El compuesto 34 (447 mg, 1.87mmol) se disolvió en EtOH/H20 (20/5mL) . Se agregó sólido aOH (149mg, 3.74mol) dentro a 0°C y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Después de la terminación de la reacción, se removió EtOH bajo presión reducida, diluyó con H20 e hizo ácida hasta pH=2 por ácido clorhídrico 1N y extracción por EtOAc (20mLx3 veces) . La fase orgánica recolectada se lavó por salmuera (20mL) y luego se secó con Na2S04 anhidro. El compuesto 35 se obtuvo por concentración, que se usó directamente para la siguiente reacción.
El compuesto 35 (110· mg, 0.52mmol) se disolvió en DMF seco (5mL), luego se enfrió hasta 0°C en un baño de hielo. Se agregó EDCI (150 mg, 0.78mmol) y HOBt (106 mg, 0.78mmol ) dentro y se agitó durante 10 min a 0°C. El compuesto 18 (96 mg, 0.57mmol) e i-Pr2-NEt (134 mg, 1.04mmol) se agregaron dentro y agitaron durante 12 h a temperatura ambiente. La mezcla obtenida se diluyó con 20mL de agua, luego se extrajo por EtOAc (15mL ? 3 veces) . Las fases orgánicas combinadas se lavaron por ácido clorhídrico 1N (15ml), solución de bicarbonato de sodio saturado (15ml) y salmuera (20mL) en la secuencia, y luego se secaron con Na2S04 anhidro. Después de
la eliminación de solvente al evaporar bajo presión reducida, el residuo obtenido se purificó por cromatografía de columna en gel de sílice ( PE/EtOAc=2: 1 ) para proporcionar el producto de compuesto 36 (146 mg, 86.4%, grasa amarillo pálido). 1H RMN (300 MHz, CDC13) d 7.95 (s, 1H) , 7.47 (d, J=3.9 Hz, 1H) , 7.39 (d, J=5.1 Hz, 1H) , 7.03 (dd, J=5.1, 3.9 Hz, 1H) , 3.62 (s, 3H) , 3.42 (q, Hz, 2H) , 2.31 (t, J=6.6 Hz, 2H), 1.65-
1.71 (m, 4H) .
Se suspendió clorhidrato de hidroxilamina (215mg, 3.1mmol) en MeOH ( 15mL) , y luego se agregó KOH (260mg, 4.65mmol) y agitó durante 5 min. La sustancia insoluble se removió por filtración y el filtrado se recolectó para el siguiente uso. Después el compuesto 36 (lOOmg, 0.31mmol) se disolvió en MeOH anhidro (10ml) , la solución MeOH mencionada arriba frescamente preparada de clorhidrato de hidroxilamina se agregó dentro y agitó durante 1 h a temperatura ambiente. El punto final de reacción se determinó por CCD. La solución obtenida se diluyó con ' EtOAc , luego neutralizó hasta pH = 5-6 por ácido clorhídrico 1N. Después de la eliminación de solvente al evaporar bajo presión reducida, la mezcla obtenida se extrajo secuencialmente por EtOAc (15mL ? 3 veces), y lavó por salmuera (lOmL), secó por Na2S04 anhidro y concentró para proporcionar el producto crudo que se purificó por cromatografía de columna (CHCl3/MeOH=20 : 1-10 : 1) para
obtener el producto CFH325-B (86 mg, 86%, sólido blanco) . XH RMN (300 MHz, CD30D) d 8.09 (s, 1H) , 7.87 (s, 1H) , 7.66 (d, J=3.9 Hz, 1H) , 7.60 (d, J=5.1 Hz, 1H) , 7.14 (dd, J=3.9, 5.1 Hz, 1H) , 3.42 (q, J=6.3 Hz, .2H) , 2.16 (t, J=6.6 Hz, 2H) , 1.68-1.71 (m, 4H) .
Ejemplo de prueba de Bio-experimento:
Ejemplo de prueba 1: . experimento para detectar la actividad inhibidora para histona desacetilasa 1, 3, 6 (HDAC1, 3, 6)
1. Objetivo Experimental:
El objetivo es detectar la actividad inhibidora de los compuestos contra histona desacetilasa humana recombinante 1, 3, 6.
2. Fuente del Material:
Se obtienen HDAC1, HDAC3 y HDAC6 humanos del sistema de expresión baculovirus.
3. Principio :
La actividad de enzima de HDAC1,3 se determina usando el sustrato Ac-Lys-Tyr-Lys (Ac) -AMC mientras que la actividad de la enzima de HDAC6 se, coloca en ensayo usando el sustrato Boc-lys (Ac) -AMC . La reacción se lleva a cabo en las microplacas de 96 o 384 pozos de fondo plano. Después de que el sustrato se desacetiló por HDACs, el producto AMC que se
obtuvo de hidrólisis por tripsina puede generar señal de fluorescencia. La medición se toma al usar un lector de placa de etiquetas múltiples en filtro de excitación 355nm y un filtro de emisión 460nm. La tasa inicial de fluorescencia debe reflejar exactamente la tasa de formación del producto y actividad de la enzima.
4. Proceso Experimental
Procesamiento de muestra: La muestra se disolvió en DMSO y se mantuvo a temperatura baja. DMSO en el sistema final se limita bajo una concentración baja que no afectará la actividad de enzima.
Procesamiento de datos y resultados: La concentración sencilla de los compuestos, por ejemplo, 20µ?/??1, se usó en la selección preliminar y la actividad de la muestra se probó. Como para las muestras que exhiben una cierta actividad, por ejemplo la. relación de inhibición es mayor que 50%, la relación de dependencia de dosis de actividad, valor IC5o/EC50, se determinaron, que pueden obtenerse por el ajuste no lineal de la actividad contra la concentración de las muestras. El software para cálculo para el ajuste no lineal es Graphpad Prism 4, y el modelo para el ajuste es respuesta de dosis sigmoidal (inclinación variable) . Para la mayoría de los modelos de selección del inhibidor, la parte inferior y superior de la curva fija se ajusta como 0 y 100.
Generalmente, todas las mediciones se duplicaron (n=2), y los resultados se indican como mediolSD (Desviación Estándar) o SE (Error estándar) . Un tazón-inhibidor HDAC bien reportado, SAHA (Vorinostat) se usó como un control positivo en cada medición.
5. Resultados Experimentales:
HDACl HDAC3 HDAC6 No. de HDAC1 HDAC3 HDAC6
?05?(µ?) IC50(nM) ?s50(µ?) muestra ??50(µ?) IC50(nM) - 5?(µ?)
CFH326 0. ,212 0. ,107 l. .110 CFH401 0. 042 0. 030 0.020
CFH340--M 0. ,606 0. ,691 1. .106 CFH403--1 1. 020 0. 687 0.295
CFH355 0. ,031 0. ,256 . 0. .938 CFH429 0. 657 0. 410 0.305
CFH369 0. ,341 0. ,358 1. .206 CFH394 NA NA NA
CFH383 0. ,031 0. ,188 0. .621 CFH412--4 2. 587 1. 638 29.451
CFH382 0. ,047 0. 102 1. .217 CFH384 NA NA NA
CFH340 NAa NA NA CFH398--4 9. 593 3. 136 NA
CFH354 NA NA NA CFH398--M NA NA NA
CFH368 NA NA ¦ 1! 3.511 CFH412--M 2. 655 2. 218 NA
CFH396 0. 035 0. 086 0. ,497 CFH426--M 2. 453 1. 577 ' NA
CFH410 0. 178 0. 249 1. .246 CFH383--4 1. 102 0. 352 3.159
CFH424 0. 021 0. 073 0. ,575 CFH397 0. 438 0. 224 2.045
CFH381 0. 173 0. 194 0. ,176 CFH326--4 816 0. 193 1.331
CFH395 0. 013 0. 142 0. ,167 CFH340--4 0. 535 0. 615 1.194
GFH367 0. 022 0. 106 0. ,376 CFH456 0. 897 0. 895 1.156
CFH352 0. 116 0. 384 2. ,295 CFH470 0. 121 0. 174 0.566
CFH399 1. 574 2. 203 9. ,536 CFH484 1. 684 1. 178 1.424
CFH367--C 0. 065 0. 262 0. ,785 CFH494 5. 911 3. 814 NA
CFH409 0. 347 0. 325 0. ,748 CFH508 0. 984 4. 307 NA
CFH409--A 0. ,628 0. 276 0. .188 CFH522 15.343 NA NA
CFH403 0,.114 0.377 0.467 CFH500 NA NA NA
CFH421 0, .204 0 .314 0 .501 CFH514 NA NA NA
CFH 55 0. .488 0 .587 4 .991 CFH325 NA NA NA
CFH437 0. .165 0 .453 5, .178 CFH339-A NA NA NA
CFH447 0. .270 0 .364 0, .473 CFH353 NA NA NA
CFH448-P 0. .105 0 .201 ' 1, .067 CFH367-A NTb NT NT
CFH417 0. .058 0 .079 1. .746 CFH381-A NT NT NT
CFH430 0. ,047 ?. .253 0, .777 CFH396-A NT NT NT
CFH461 0. ,050 0, .158 0, .957 CFH410-A NA NA NA
CFH324-C NA NA ' NA CFH379 NA NA NA
CFH338 NA NA NA CFH398-S 0. 181 0. 327 0.088
CFH352-C 14.523 3. ,818 3. .571 CFH412 4. 507 2. 063 0.869
CFH381-C 0. 052 0. .037 0. ,105 CFH426 0. 263 0. 495 0.190
CFH395-C 0. 020 0. .010 0. ,010 CFH 40 1. 052 0. 534 1.664
CFH409-C 0. 086 0. .064 0. ,134 CFH367-S 1. 828 2. 245 0.692
CFH397-2 0. 917 0. .262 1. ,662 CFH397-S 1. 222 0. 315 0.181
CFH381-B 0. 050 0. ,060 0. ,092 CFH383-S 0. 937 0. 728 0.470
CFH381-M 0. 064 0. ,075 1. ,761 CFH411 0. 956 0. 384 0.212
CFH395-M 0. 050 0. ,097 . o. 565 CFH550 NA NA NA
CFH421-C 0. 025 0. ,063 1. 857 CFH384-S 20 1.638 13 ;.654 NA
CFH407 0. 086 0. .130 1. 290 CFH412-S 0. 087 0. 058 3.716
CFH435 0. 218 0. ,161 1. 823 CFH426-S 0. 117 0. 106 4.324
CFH449 0. 147 0. ,176 1. 784 CFH538 1. 89B 2. 031 NA
CFH412-C 6. 274 2. ,913 3. 068 ' CFH552 2. 600 3. 558 NA
CFH407-C 0. 106 0. 052. 0. 332 CFH325-B 0. 134 0. 188 0.608
CFH449-H 0. 011 0. 016 0. 049 CFH443-5 0. 032 0. 011 ' 0.488
CFH455-C 0. 079 0. 075 0. 075 CFH443-4 0. 056 0. 106 0.185 a : el compuesto probado de 20pg/mL no tiene actividad inhibidora; b : no probado.
Puede apreciarse de los resultados experimentales de la tabla de arriba:, los resultados biológicos de transformación
de la parte R2 muestran que, los grupos alquilo, la sustitución por grupos alqueno y grupos arilo presentan buena actividad inhibidora HDAC. La diversificación del grupo sustituyente es propicia para la actividad biológica de los compuestos. El compuesto sustituido por isobutileno CFH395 tiene la mejor actividad inhibidora en HDAC1. Los compuestos CFH355, CPH437 y CFH417 inhiben selectivamente HDAC1 (HDAC1/HDAC6=~ 30 veces). Mientras que el compuesto CFH355 tiene una selectividad de 8 veces para HDAC1 y HDAC3.
Al mismo tiempo, la actividad biológica muestra que si las partes R2 permanecen iguales e Y es -(grupo alquilo Ci-Cio)-, la longitud de la cadena tiene un impacto grande en la actividad. Similarmente , si las cadenas laterales tienen la misma longitud, diferentes compuestos sustituidos .R2 ambos tienen diferente actividad, tal como una serie de compuestos sustituidos por isobutilo, la cadena con 7 metilenos tienen la mejor actividad inhibidora en HDAC1 mientras que para los compuestos sustituidos de ciclopropilo, la cadena con 6 metilenos tiene la mejor actividad inhibidora.
Con el grupo R2 fue isobutilo, el inventor ha investigado el fragmento Y de la cadena lateral y tipo diferente de grupos quelantes Zn (ZBG) . Como para la inhibición de HDAC1, ácido hidroxámico ZBG tiene la mejor actividad. Mientras que ZBG es a-mercapto cetona, HDAC6 se
inhibe selectivamente, tal como CFH398-S.
Con el grupo í½ fue ciclopropilo, se investigaron la sustitución Rb y R5b. Puede encontrarse de la actividad inhibidora de HDAC que cuando R4B y R5b y C al cual se conectan forman un anillo de seis miembros, esto es el compuesto CFH421-C, la actividad inhibidora en HDAC1 es la mejor y HDAC1 se inhibe, selectivamente (HDAC1/HDAC6 = 75 veces ) .
Ejemplo de Prueba 2: Experimento para probar la actividad antitumor de nivel, celular.
1. Objetivo Experimental:
El objetivo es evaluar la actividad antitumor de los compuestos al probar la actividad inhibidora de los compuestos en el crecimiento de las lineas celulares HCT-116 de cáncer de colón humano.
2. Principio de la Prueba:
El ensayo colorimétrico, ensayo MTT es para evaluar la viabilidad celular, la cual está basada en la reducción metabólica de tetrazolio bromuro de 3- (4, 5-dimetil-2-tiazol) -2,5-difenilo (MTT). Las enzimas de oxidoreductasa celular dependiente de NAD ( P ) H en la mitocondria puede, bajo condiciones definidas, refleja el número de células viables
presentes. Estas enzimas son capaces de reducir el pigmento de tetrazolio de bromuro de MTT (3- (4, 5-dimetiltiazol-2-il) - 2, 5-difeniltetrazolio para su formazan insoluble, el cual tiene un color púrpura. Después de usar DMSO para disolver Formazan, el lector de microplaca puede usarse para medir la densidad óptica en una longitud de onda de 550/690nm.
3. Procesamiento Experimental:
Procesamiento de muestra: La muestra se disolvió en DMSO y mantuvo a temperatura baja. DMSO en el sistema final se limita bajo una concentración baja la cual no afecta la actividad de enzima.
La viabilidad celular se detectó al usar el ensayo MTT. Las células se mantuvieron . en la fase del crecimiento logarítmico se digirieron por tripsina al 0.05% y sembraron durante la noche en placas de 96 pozos a 2.0*103 por pozo en medio de crecimiento. Después del sembrado, las células se incubaron con C02 al 5% a 37 °C durante la noche. Seis gradientes de concentración de los compuestos de prueba se agregan y las placas se incuban a 37 durante 72 hr y cada concentración de cada compuesto se triplican. Luego 20 yL de 5 mg/mL MTT se agregan a cada pozo durante 3 horas a 37 °C, los medios se remueven y reemplazan con lOOyL de DMSO a 37 °C hasta que los cristales se disolvieron. La absorbancia se
mide usando un lector de microplaca SpectraMAX 340 en 550nm (Ll), con una longitud de onda de referencia en 690nm (L2) , se trazó contra diferentes concentraciones de los inhibidores. Se obtienen IC50 por el ajuste no lineal del valor (L1-L2), que es directamente proporcional al número de células viables, contra la concentración de las muestras.
Procesamiento de datos y resultados: La concentración sencilla de los compuestos, por ejemplo, 20µ?/??1, se usó en la selección preliminar y la actividad de la muestra se probó. Como para las muestras que exhiben una cierta actividad, por ejemplo la tasa de inhibición es mayor que 50%, la relación dependiente de la actividad de dosis, valor IC50/EC50, se determinaron, que pueden obtenerse por el ajuste no lineal de la actividad contra la concentración de las muestras. El software de cálculo para el ajuste no lineal es Graphpad Prism 4, y el' modelo para el ajuste es respuesta de dosis sigmoidal (inclinación variable) . Para la mayoría de los modelos de selección de inhibidor, la parte inferior y la superior de la curva fija es ajusta como 0 y 100. Generalmente, todas las mediciones se duplicaron (n=2), y los resultados se indican como mediaiSD (Desviación Estándar) o SE (error estándar) . Se usó un compuesto reportado de doxorubicina (doxorubicina) como referencia positiva encada medición.
4. Resultados Experimentales:
4.1 : Resultados de los compuestos en la linea celular
cáncer de colón humano HCT-116:
Viabilidad Viabilidad Viabilidad
No. De No. De No. De
celular celular celular muestra muestra muestra
??50(µ?) ?s50(µ?) IC50 (µ?)
CFH326 11.143+1 .167 CFH381 -C 0. 438±0. 018 CFH403 7 , .596+0. .817
CFH369 8.714±1. 227 CFH395 -c 0. 408±0. 023 CFH421-C 0, ,233±0. .029
CFH383 7.406+1. 473 CFH40 -C 2. 976+0. 188 CFH407 0. .310+0. .032
CFH382 10.304+1 .130 CFH381 -B 0. 562±0. 071 CFH435 0, .768+0. .099
CFH410 6.696+0. 652 CFH38'1 -M 0. 472+0. 055 CFH449 0. .392+0. .031
CFH367-C 0.452+0. 022 CFH395 -M 0. 538+0. 051 CFH401 0. .267+0. .007
CFH461 7.647+1. 499 CFH407 -C 1. 117+0. 484
CFH396 8.266±0. 858 CFH409 -A 15 .125±2 .919
CFH508 9.322+0. 433 CFH421 10 .023±0 .748
4.2 : Resultados de los compuestos en la linea celular de
cáncer de colon humano BxPC-3:
Viabilidad Viabilidad Viabilidad
No. De No. De No. De
celular celular celular muestra muestra muestra
ICgo ínM) ICso OnM) ICSO (MM)
CFH382 2.6 CFH355 3.3 CFH461 0.9
CFH396 4.3 CFH410 4.7 CFH383 2.6
CFH395 1.9 CFH424 17. £ CFH403 3.9
CFH367- CFH367 6.2 CFH326 6.8 1.3
C
0 CFH417 1.9
CFH397 6.4 CFH421 4.8
Resultados de los compuestos en otras líneas celulares
tumor
No . De HL60 A549 MDA-MB-231 HMEC
muestra IC50 (µ?) IC50 (µ?) IC50 (µ?) ?s50 ?)
CFH395 0.3 1.6 0.5 1.2
CFH382 NTa 3.6 2.7 NT
CFH417 NT 3.2 2.1 NT
a: no probado.
5. Conclusiones: los compuestos que tienen actividad
inhibidora en HDAC1 sin excepción exhiben buena actividad al inhibir la proliferación celular del tumor, en particular tiene un buen impacto en el cáncer de colon, cáncer pancreático, adenocarcinoma del pulmón, cáncer de mama. Desde el punto de la actividad de crecimiento inhibidora de las líneas celulares de cáncer, la actividad del compuesto en la célula es sustancialmente consistente con aquella de las enzimas .
Ejemplo de prueba 3: Inhibidor. HDAC como el fármaco para tratar esclerosis múltiple (MS)
1. Método Experimental .y resultados:
El registro clinico de EAE puede aliviarse efectivamente por
H ACi CPH367-C. El inventor lleva a cabo una inyección hipodérmica de lOO L de MOG35-55 emulsificado por adyuvante completo de freund (15C^g/ratón) y toxina MT (5mg/mL) por inactivación térmica, en los ratones C57 hembras de 8 semanas de edad. Y, en el mismo dia y en el tercer día de inyección intraperitoneal de PTX (200ng/ratones/veces, disueltos por PBS) se lleva a cabo dos veces. En el tercer dia después de la inmunización, a los ratones se administran por medio de alimentación por sonda gástrica, dos veces al dia, y cada dosis es 10mg/kg del peso corporal. El desempeño de los ratones se observaron diariamente y la relación basada en el siguiente criterio: 0: sin señales de incidencia; cola con debilidad (0.5 puntos) o parálisis (1 punto); las cuatro patas con debilidad (0.5 puntos) o parálisis (1 punto). Los registros de arriba se cuentan para lograr un registro final. Los resultados muestran que (Fig. 1) CFH367-C tiene un buen efecto terapéutico en los síntomas clínicos de EAE, y la severidad de la enfermedad en los ratones tratados fue significativamente inferior que el grupo de control del solvente (P <0.01) .
HDACi CFH367-C significativamente reduce el fenómeno de desmielinación de médulas espinales de animales EAE. Las muestras de médulas espinales de control normal, los ratones
EAE y el grupo de tratamiento de ratones EAE se tomaron respectivamente. Después de fijarse, las muestras se envolvieron por incrustación de parafina convencional, sección en 5 micrometros, hidratación con desparafinado para alcohol al 95%, tinción con LFB (Luxol Fast Blue) durante la noche a 56 grados; lavado por etanol al 95% y luego por agua, separación de color usando una solución de carbonato de litio al 0.05%, lavado por etanol al 70% dos veces, lavado por agua destilada, tinción con eosina durante 2 minutos, deshidratación de etanol de gradiente, tratamiento de transparencia por xileno, y montaje por goma neutra. Las partes colorantes principales de LFB es la materia blanca de la médula espinal, principalmente compuesta de fibras de nervio y su mielina. Los resultados experimentales muestran que la materia blanca de los ratones normales pueden estar pigmentada de azul . con una estructura relativamente densa; mientras que las regiones de materia blanca de la médula espinal en ratones EAE aparece en gran número de vacuolas, y el grado de coloración se redujo significativamente, mostrando un fenómeno de desmielinación severa. Los ratones administrados con CFH367-C tienen una estructura densa de la materia blanca de la médula espinal con un colorante aún. Esto se cerró para los ratones de control normal, mostrando su efecto terapéutico importante.
HDACi CFH367-C reduce significativamente la infiltración de las células inmunitarias periféricas en la médula espinal de animales ???. Las muestras de las médulas espinales de control normal, ratones EAE y el grupo de tratamiento de ratones EAE se tomaron respectivamente. Después de fijarse, las muestras se trataron por las siguientes etapas en secuencias, las cuales fueron incrustación de parafina convencional y sección en 5 micrometros. Las secciones se desparafinaron por xileno, rehidrataron por todos los niveles de etanol, y tiñeron con hematoxilina durante cinco minutos; después de lo cual las rebanadas se lavaron por agua corriente, y el color se separó por ácido clorhídrico. Luego, después de lavado con agua, las rebanadas se tiñeron con eosina durante 2 minutos; después de la deshidratación por deshidratación de etanol de gradiente, las rebanadas se hicieron transparentes por xileno, y montaron con goma neutra. Los resultados experimentales muestran que casi se infiltraron las células inmunitarias periféricas en la médula espinal de los ratones normales; aunque las regiones de materia blanca en médula espinal de ratón EAE aparecen en gran número de células inmunitarias periféricas con infiltración, y esto provoca el daño de tejido anexo con la apariencia de las vacuolas. La estructura de materia blanca de la médula espinal en los ratones administrados con CFH367-
C es densa sin infiltración obvia en las células inmunitarias periféricas, mostrando un efecto terapéutico importante.
HDACi CFH367-C reduce significativamente la infiltración de leucocito positivo CD54 en la médula espinal de animales EAE .
El HDACi CFH367-C significativamente reduce la infiltración de leucocito positivo CD45 de la médula espinal en animales EAD reducidos significativamente. Las médulas espinales se toman se toman de los ratones. Después de fijarse, las médulas espinales se tratan con OCT y se hacen que sean secciones congeladas de 10 µp?. Las secciones se lavaron con PBS tres veces, y cada vez durante 5min, luego se incubaron durante la noche a 4°C con anticuerpo contra CD45 (anticuerpo primario) ; después de lavarse con PBS tres veces, las secciones se tiñen con anticuerpo secundario etiquetado fluorescencia a 37°C durante lh. Después de lavarse con PBS tres veces, las secciones se montaron con glycerinum. CD45 es el antigeno común de leucocito. Los resultados experimentales muestran que la tinción nuclear muestra que existen un número grande de células agregadas en la médula espinal de ratones EAE, y la mayoría de ellos fueron los leucocitos positivos CD45. Este fenómeno no existe en ratones normales, mientras que la agregación de leucocito positivo tampoco se ha observado en los ratones que se administraron con CFH367C,
mostrando que la infiltración del leucocito a la médula espinal de ratones EAE puede inhibirse por CFH367-C.
HDACi CFH367-C reduce significativamente la infiltración de células T positivas CD4 en la médula espinal de animales EAE. Los estudios preliminares han indicado que las células T positivas CD4 juegan un papel importante en la patopoyesis de EAE. El inventor también ha observado la función de los fármacos, en la filtración de células T positivas CD4. Las médulas espinales se tomaron de los ratones. Después de fijarse, las médulas espinales se incrustaron en OCT para hacerlas en secciones congeladas de 10 ym. Las secciones se lavaron con PBS tres veces, y cada vez durante 5 min, luego se incubaron durante la noche a 4°C con anticuerpo (anticuerpo primario) contra CD4; después de lavarse con PBS tres veces, las secciones se tiñen con anticuerpo secundario etiquetado fluorescencia a 37°C durante lh. Después de lavarse con PBS tres veces, las secciones se montan por glycerinum. Los resultados experimentales muestran que la tinción nuclear muestra que existen un gran número de células agregadas en la médula espinal de ratones EAE, y la mayoría de ellas fueron las células T positivas CD4. Este fenómeno no existe en ratones normales. La filtración y agregación de las células T
positivas CD4 puede aliviarse obviamente al administrar CFH367-C.
2. Conclusiones:
El inhibidor de histona desacetilasa CFH367-C puede aliviar efectivamente los síntomas clínicos del modelo de ratón experimental EAE de MS . Se encuentra al teñir la médula espinal de ratones EAE que CFH367-C puede inhibir las células inmunitarias periféricas, especialmente la infiltración de célula T positiva CD4 para el sistema nervioso central de los ratones, y aliviar el fenómeno de desmielinación de las neuronas de animal EAE y aliviar además las manifestaciones clínicas de EAE. Los resultados de búsqueda actuales indican que el inhibidor de histona desacetilasa CFH367-C puede usarse en el tratamiento' de enfermedad MS y puede aplicarse en tratamientos de otras enfermedades autoinmunitarias , incluyendo artritis reumatoide, psoriasis, lupus eritematoso sistémico etc.
Claims (11)
1. Un compuesto tiazol de la fórmula general I, caracterizado porque, Ri es Rla , Rib o Ric : en el cual, ¾a y Rsa cada uno independientemente son grupo A o alquilo Ci-C 6 opcionalmente sustituido por tert-butoxicarbonilamino; . R ib y Rs cada uno independientemente son grupo A; o, í4b y Rs junto con el átomo de carbono al cual se unen forman un hidrocarburo cíclico de 3 hasta 10 miembros o un heterociclo de 3 hasta 10 miembros que contiene 1 hasta 3 heteroátomos seleccionados de N, O y S; R c/ Rsc y RÉ cada uno independientemente son grupo A; el grupo A es grupo hidrógeno, halógeno, hidroxilo, nitro, cicloalquilo C3-C6, alcoxilo Ci-C6, alcoxilo Ci~C6 opcionalmente sustituido por arilo C6-Ci0 , amino, alquilamino ??-?d, alquilamino Ci-C6 opcionalmente sustituido por arilo C6~ Cio , alquilo C1-C6, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido por hidroxilo, alquilo Ci-C6 opcionalmente sustituido por alcoxilo C1-C , alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido por flúor, alquilo Ci-C6 opcionalmente sustituido por arilo C6-Ci0, alquenilo C2-C6, alquenilo C2-C6 opcionalmente sustituido por hidroxilo, alquenilo C2 -C6 opcionalmente sustituido por alcoxilo C1-C4, alquenilo ¿- ^ opcionalmente sustituido por flúor, alquenilo C2-C6 opcionalmente sustituido por arilo C6-C10 , alquinilo C2-C6, alquinilo C2-Ce opcionalmente sustituido por hidroxilo, alquinilo C2-C6 opcionalmente sustituido por alcoxilo Ci-C4, alquinilo C2-C6 opcionalmente sustituido por flúor, alquinilo C2-C6 opcionalmente sustituido por arilo Ce~ Cío, arilo C6-C10, o heterociclo aromático de 5 hasta 7 miembros que contiene 1-3 heteroátomos seleccionados de N, O y S; R2 es hidrógeno, halógeno, hidroxilo, alcoxilo Ci'-C¾, alcoxilo Ci-C8 opcionalmente sustituido por arilo C6-Cio, amino, alquilamíno Ci-C6, alquilamino Ci-C6 opcionalmente sustituido por arilo C6-Ci0, alquilo Ci-C6, cicloalquilo C3-G6, cicloalquilo C3-C6 opcionalmente sustituido por alquilo C1-C6, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido por uno o más grupos sustituyentes independientemente seleccionados de grupo hidroxilo, alcoxilo C1-C4, halógeno, benciloxilo y arilo Ce-Cío, alquenilo C2-C8, alquenilo C2-C6 opcionalmente sustituido por uno o más grupos sustituyentes independientemente seleccionados de hidroxilo, alcoxilo C1-C4, halógeno y arilo C6-C10 , alquinilo C2-C6, alquinilo C2-C3 opcionalmente sustituido por uno o más grupos sustituyentes independientemente seleccionados de hidroxilo, alcoxilo C1-C4, halógeno y arilo C6-C10 , arilo C6-Ci0, arilo C6-Ci0 opcionalmente sustituido por halógeno o nitro, o heterociclo aromático de 5-7 miembros que contiene 1 hasta 3 heteroátomos seleccionados de N, O y S; n es 0, 1 o 2; X es en donde R7 es hidrógeno o alquilo Y puede no existir o existe como -(alquilo C1 -C10 ) - , (alquenilo C2-C9)-, -(arilo C6-Ci0)'-, -(alquilo Ci-C6) - (arilo Ce-Cio)-, -(arilo C6-Ci0) - (alquenilo C2-C6) -, -(cicloalquilo C3-C6)-, -(alquilo C1-C5) -C (0) -NH- (alquilo C1-C5)-, -(alquilo Ci- C5) -C (0) -O- (alquilo C1-C5)- o -(alquilo C1-G5) -C (0) -0- (alquenilo C2-C9)- ; R3 es R3a, R3b, R3c, 3d o R3e: Rs es hidrógeno o alquilcarbonilo C1-C6; R9 es hidrógeno o alquilcarbonilo C1-C10.
2. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque, en la fórmula general I: R2 es hidrógeno, alquilo Ci-C6, cicloalquilo C3-C6, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido por hidroxilo, benciloxilo o arilo C6-Ci0, alquenilo C2-C8, a-rilo Ce-C10r o arilo C6-Cio opcionalmente sustituido por halógeno o nitro; n es 0; X es -NH-; Y es -(alquilo d- io) - , -(arilo C6-Ci0)-, -(alquilo Ci-C6)- (arilo C6-Cio)- o -(arilo C6-Ci0) - (alquenilo C2-C6)-; R8 es hidrógeno .
3. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el compuesto tiene la estructura de la fórmula general IIa, Ilb o IIC: nc en la fórmula general IIa: R2, X, Y, y R3 se definen de conformidad con la reivindicación 1; R a y Rsa cada uno independientemente son hidrógeno, alquilo Ci-C6 o alquilo Ci-C6 opcionalmente sustituido por tert-butoxicarbónilamino; en la fórmula Ilb: R2, X, Y, y R? se definen de conformidad con la reivindicación 1; <jb y Rsb cada uno independientemente son hidrógeno, alquilo Ci-C6, cicloalquilo C3-C6 o arilo C6-Ci0; o, R<ib y Rsb junto con el átomo de carbono al cual se unen forman un hidrocarburo cíclico de. 3 hasta 10 miembros; en la fórmula IIc: R2, X, Y, y R3 se definen de conformidad con la reivindicación 1; R c R5c y R6 cada uno independientemente son hidrógeno o alquilo Ci-C6.
4. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el compuesto tiene la estructura de la fórmula general IV: IV en la fórmula IV, R2, Rib, Rsb Y r Y cada se definen de conformidad con la reivindicación 1.
5. El compuesto de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque en la fórmula general IV: R2 es hidrógeno, alquilo C]_-C6, cicloalquilo C3-C6, alquilo Ci-C6 opcionalmente sustituido por hidroxilo, cicloalquilo C3-C6 opcionalmente sustituido por alquilo Ci-C6, alquenilo C2-C8, alquenilo C2-C8 opcionalmente sustituido por hidroxilo, arilo C6-Ci0, alquilo Ci-C6 opcionalmente sustituido por arilo C6-Ci0 o benciloxilo, alquenilo C2-C8 opcionalmente sustituido por arilo C6-Ci0, alcoxilo C2-C8 opcionalmente sustituido por arilo C6-C10, arilo C6-Ci0 opcionalmente sustituido por halógeno, o arilo Cg-Cio opcionalmente sustituido por nitro; R-jb y Rs cada, uno independientemente son hidrógeno, flúor, alquilo Ci-C6, alquilo Ci-C6 opcionalmente sustituido por hidroxilo, alquilo Ci-C6 opcionalmente sustituido por flúor, cicloalquilo C3-C6, alquenilo C2-C6, alquenilo C2-C6 opcionalmente sustituido por hidroxilo, alquenilo C2-C6 opcionalmente sustituido por flúor, o arilo C6-C10; o, R b y Rsb junto con el átomo de carbono al cual se unen forman un hidrocarburo cíclico de 3 hasta 10 miembros o un heterociclo de 3 hasta 10 miembros que contiene 1 hasta 3 heteroátomos seleccionados de N, O y S; Y es -(alquilo d-C8) -, -(arilo C6-Ci0) -, -(alquilo Ci-C6) - (arilo C6-Cio) -, o -(arilo C6-Ci0) - (alquenilo C2-C6) -.
6. El compuesto de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque, el compuesto es seleccionado del grupo que consiste de:
7. El método para preparar el compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el método puede emplearse por cualquiera de una de las siguientes Ruta uno hasta Ruta cinco; en la Ruta uno: Ri/ ^2r n, X e Y cada uno tiene el mismo significado como se establece con la reivindicación 1; el compuesto 1 reacciona con polvo de zinc activo en THF para formar el compuesto reactivo de zinc 2; la reacción de acoplamiento Negishi del compuesto 2 con compuesto catalizado con 2-bromo-tiazol por acetato de paladio y trifenilfosfina en tolueno proporciona el compuesto 4. La hidrólisis del compuesto 4 en hidróxido de sodio/metanol-agua produce el compuesto 5 que es el ácido correspondiente del compuesto 4; la reacción de condensación del compuesto 5 con varios reactivos nucleofilicos de la fórmula HX-Y-COOMe se conduce usando agentes de condensación tales como EDCI, HOBt y i- Pr2NEt en DMF para proporcionar el compuesto 6; el compuesto 6 reacciona con la solución de metanol hecho frescamente de hidroxi amina para producir el compuesto la; Ruta Dos en la Ruta dos: Rir R8 nc X e Y cada uno tiene el mismo significado como se establece en la Reivindicación 1; el compuesto 6 se hidroliza por álcali en metanol o THF/agua para proporcionar el compuesto Ie; Reacción de condensación del compuesto Ie con o-fenilendiamina protegida por mono-Boc se conduce usando agentes de condensación tales como EDCI, HOBt y i-Pr2NEt en DMF para proporcionar el compuesto 7; el grupo protector Boc del compuesto 7 se remueve en solución de acetato de etilo del ácido clorhídrico para proporcionar los compuestos Ib, o el compuesto 7 reacciona con varios . nucleófilos de la fórmula RgH para proporcionar el compuesto Ib/ Ruta Tres en la Ruta Tres: Rif R2Í n, X e Y cada uno tiene el mismo significado como se establece en la reivindicació 1; la reacción de condensación del compuesto 5 con varios nucleófilos de la fórmula HX-Y-NHC0CH2STrt se conduce usando agentes de condensación tales como EDCI y DMAP como alcalino en diclorometano para proporcionar el compuesto 8; el grupo protector Boc del compuesto 8 se remueve por el ácido trifluoroacético para proporcionar el compuesto Ic; Ruta Cuatro en la Ruta Cuatro: Ri, R2, R9, n, X e Y cada uno tiene el mismo significado como se estable en la Reivindicación 1; la reacción dé condensación del compuesto 5 con varios nucleófilos de la fórmula HX-Y-SRg se conduce usando agentes de condensación tales como EDCI, HORt e i-Pr2NEt en DMF para proporcionar el compuesto Id; Ruta Cinco en la Ruta cinco: 2/ 3/ R4CÍ R50 R6- n, X e Y cada uno tiene el mismo significado como se establece en la Reivindicación 1; la reacción del compuesto 9 con reactivo de Lawesson proporciona el compuesto 10; la reacción Hantzsch del compuesto 10 con bromopiruvato de etilo sustituido por R2 produce compuesto bistiazol 11; El compuesto 11 se hidroliza por alcalina en metanol/agua para proporcionar el compuesto 12; Reacción de condensación del compuesto 12 con varios nucleófilos de la fórmula HX-Y-R3 se conduce usando agentes de condensación tales como EDCI, HOBt e i-Pr2NEt en DMF para proporcionar el compuesto IIC.
8. El uso del compuesto de conformidad con la reivindicación 1 para preparar farmacéuticos como inhibidores de histona desacetilasa .
9. El uso del compuesto de conformidad con la reivindicación 1 para preparar farmacéuticos contra tumor.
10. El uso de conformidad con la reivindicación 9, en donde, el tumor es seleccionado dé cáncer de colon, tumor pancreático, leucemia, tumor pulmonar o tumor de mama .
11. El uso del compuesto de conformidad con la reivindicación 1 para preparar farmacéuticos para el tratamiento de esclerosis múltiple.
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