MX2013005238A - Antagonistas de mdm2 de espiro-oxindol. - Google Patents

Abstract

Se proporcionan en la presente compuestos, composiciones y métodos en el campo de la química farmacéutica. Los compuestos y composiciones proporcionados en la presente se relacionan con espiro-oxindoles que funcionan como antagonistas de la interacción entre p53 y MDM2 y su uso como agentes terapéuticos para el tratamiento de cáncer y otras enfermedades.

Description

ANTAGONISTAS DE MDM2 DE ESPIRO-OXINDOL DESCRIPCIÓN ANTECEDENTES El fenotipo de células cancerosas agresivas es el resultado de una variedad de alteraciones genéticas y epigenéticas que conducen a la desregulación de vías de señalización intracelulares (Ponder, Nature 411:336 (2001)). Generalmente, las células cancerosas no logran ejecutar un programa apoptótico y la falta de una apoptosis apropiada debido a defectos en la maquinaria de la apoptosis normal es considerada un característica del cáncer (Lowe et al., Carcinogenesis 27:485 (2000)). La incapacidad de las células cancerosas de ejecutar un programa apoptótico debido a defectos en la maquinaria apoptótica normal a menudo se asocia con un aumento de la resistencia a la apoptosis inducida por quimioterapia, radiación o inmunoterapia. La resistencia primaria o adquirida del cáncer humano de distintos orígenes a los actuales protocolos de tratamiento debido a defectos en la apoptosis constituye un gran problema en las actuales terapias contra el cáncer (Lowe et al., Carcinogenesis 21:485 (2000); Nicholson, Nature 407:810 (2000)). Por lo tanto, los esfuerzos actuales y futuros hacia el diseño y el desarrollo de nuevas terapias anticáncer específicas para objetivos moleculares para mejorar la supervivencia y la calidad de vida de los pacientes con cáncer deben incluir estrategias que se dirijan específicamente a la resistencia de las células cancerosas a la apoptosis.

El supresor tumoral p53 tiene un papel fundamental en el control del avance del ciclo celular, la senescencia y la apoptosis (Vogelstein ef al., Nature 408:307 (2000); Goberdhan, Cáncer Cell 7:505 (2005)). MDM2 y p53 son parte de un bucle de retroalimentación auto-regulador (Wu et al., Genes Dev. 7:1 26 (1993)). MDM2 es activada transcripcionalmente por p53 y MDM2, a su vez, inhibe la actividad de p53 mediante al menos tres mecanismos (Wu eí al., Genes Dev. 7:1126 (1993). En primer lugar, la proteína MDM2 se une directamente al dominio de transactivación de p53, inhibiendo así la transactivación mediada por p53. En segundo lugar, la proteína MDM2 contiene una secuencia de señales de exportación nuclear y, tras su unión a p53, induce la exportación nuclear de p53, evitando que p53 se una a los ADN objetivo. En tercer lugar, la proteína MDM2 es una ubiquitina ligasa E3 y, tras su unión a p53, es capaz de promover la degradación de p53.

Si bien en el pasado se han diseñado con éxito inhibidores de MDM2 en base a péptidos de alta afinidad (García-Echeverría et al., Med. Chem. 43:3205 (2000)), estos inhibidores no son adecuados para moléculas terapéuticas debido a su escasa permeabilidad celular y biodisponibilidad in vivo. A pesar de los grandes esfuerzos de la industria farmacéutica, las estrategias de detección sistemática de alto rendimiento han sido muy poco exitosas a la hora de identificar potentes inhibidores de moléculas pequeñas no peptídicos. Por lo tanto, existe una necesidad de inhibidores de moléculas pequeñas no peptídicos similares a fármacos de la interacción p53-MDM2.

La base estructural de la interacción entre p53 y MDM2 se ha establecido mediante cristalografía de rayos X (Kussie eí al., Science 274:948 (1996)).

En las Patentes de los Estados Unidos Nos. 7.759.383 B2 y 7.737.174 B2 se describen antagonistas de la interacción de p53-MDM2 en base a espiro-oxindol.

El cáncer de piel o melanoma es un tipo de cáncer común. Si bien representa solamente una pequeña fracción del total de los casos de cáncer, el melanoma es responsable de muchas muertes por cáncer. De acuerdo con estadísticas proporcionadas por la Sociedad Estadounidense del Cáncer, y a diferencia de muchos otros tipos de cáncer, la cantidad de nuevos casos de melanoma en los Estados Unidos aún sigue en aumento.

Al igual que con los demás tipos de cáncer, es imperioso realizar un diagnóstico temprano del melanoma. Aproximadamente 70% de los melanomas son de "diseminación superficial", lo que significa que pasan por una fase de crecimiento radial superficial antes de crecer verticalmente e invadir el tejido subyacente, lo que constituye una afección mucho más grave. Desafortunadamente, aproximadamente 20% de los melanomas cutáneos comienzan inmediatamente con una fase de crecimiento vertical, lo que explica por qué estos tumores son tan peligrosos. La tasa de supervivencia a 5 años para el melanoma en Etapa 1 es muy buena. Sin embargo, la misma disminuye rápidamente cuando se deja que el cáncer avance e invada, primero localmente y luego más distantemente. La tasa de supervivencia para la enfermedad en la Etapa 2 es de solamente 40-80%, en la Etapa 3 es de 10-70% y en la Etapa 4 es casi invariablemente letal dentro de los 5 años (<5-10% sobrevive más allá de los 5 años) debido a metástasis distante intratable especialmente en los pulmones y el cerebro.

El melanoma se origina en una transformación maligna de melanocitos, las células de la piel que producen el pigmento, mediante etapas intermedias pre-malignas atípicas y displásicas, en melanoma localmente invasivo y finalmente metastásico. Se ha indicado que un gran número de genes participa en estos procesos. El melanoma metastásico, la causa de muerte más común, es notoriamente resistente a la terapia convencional.

COMPENDIO DE LA INVENCIÓN La presente divulgación prevé que la exposición de humanos y animales a cantidades terapéuticamente efectivas de uno o más fármacos (por ejemplo, moléculas pequeñas) que aumentan la o las funciones de p53 y proteínas relacionadas con p53 (por ejemplo, p63, p73) inhibe el crecimiento de las células que expresan p53. En algunas realizaciones, los compuestos proporcionados en la presente invención inhiben la interacción entre p53 o proteínas relacionadas con p53 y DM2 o proteínas relacionadas con MDM2 (por ejemplo, MDMX). La inhibición de la interacción entre p53 o proteínas relacionadas con p53 y MDM2 o proteínas relacionadas con MDM2 inhibe el crecimiento de las células. Por ejemplo, la inhibición de la interacción entre p53 o proteínas relacionadas con p53 y MDM2 o proteínas relacionadas con MDM2 puede inhibir las células cancerosas o las células de soporte y/o hace que estas células se vuelvan una población más susceptible a la actividad inductora de la muerte celular de los fármacos terapéuticos o las terapias de radiación para tratar el cáncer. En algunas realizaciones, los inhibidores proporcionados en la presente invención prolongan la semivida de p53 al interferir con la interacción p53-MDM2 que normalmente promovería la degradación de p53. Los compuestos proporcionados en la presente invención satisfacen una necesidad insatisfecha para el tratamiento de múltiples tipos de cáncer, ya sea cuando se administran como monoterapia para inducir la senescencia, la inhibición del crecimiento celular, la apoptosis y/o la detención del ciclo celular en células cancerosas, o cuando se administran en una relación temporal con uno o más agentes adicionales, tales como otros fármacos terapéuticos o terapias de radiación para tratar el cáncer que inducen la muerte celular o que alteran el ciclo celular o (terapias de combinación), de forma de volver una mayor proporción de las células cancerosas y células de soporte susceptibles a la ejecución del programa de apoptosis en comparación con la correspondiente proporción de células en un animal tratado solamente con el fármaco terapéutico para el cáncer o la terapia de radiación.

En algunas realizaciones, el tratamiento de animales (incluidos humanos) con una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más compuestos proporcionados en la presente invención y un agente anticáncer produce una mayor actividad antitumoral y un mayor beneficio clínico en dichos animales en comparación con aquellos tratados con el compuesto o con fármacos/radiación anticáncer solamente. Dicho de otro modo, dado que los compuestos proporcionados en la presente invención pueden reducir el umbral apoptótico de células que expresan p53 o proteínas relacionadas con p53, la proporción de células que ejecutan exitosamente el programa de apoptosis en respuesta a la actividad inductora de apoptosis de fármacos/radiación anticáncer aumentará cuando se usen en combinación con uno o más de los compuestos proporcionados en la presente invención. Alternativamente, los compuestos proporcionados en la presente invención pueden usarse para permitir la administración de una dosis más baja, y por lo tanto menos tóxica y más tolerable, de un fármaco y/o radiación anticáncer para producir la misma respuesta tumoral/beneficio clínico que la dosis convencional con el fármaco/radiación anticáncer únicamente. Dado que las dosis para todos los tratamientos aprobados con fármacos y radiaciones anticáncer son conocidas, los presentes compuestos, composiciones y métodos proporcionados en la presente invención pueden usarse con uno o más tratamientos aprobados con fármacos y/o radiaciones anticáncer. Además, dado que los compuestos proporcionados en la presente invención pueden actuar al menos en parte mediante la estimulación de actividades pro-apoptóticas y/o inhibitorias del ciclo celular de p53 y proteínas relacionadas con p53, la exposición de células cancerosas y células de apoyo a cantidades terapéuticamente efectivas de los compuestos puede coordinarse temporalmente para que coincida con los intentos de las células de ejecutar el programa de apoptosis en respuesta a la terapia anticáncer con fármacos o radiación. De esta forma, en algunas realizaciones, la administración de los compuestos o las composiciones proporcionados en la presente invención en combinación con otros fármacos anticáncer conocidos proporciona prácticas terapéuticas especialmente eficaces.

En otras realizaciones, los inhibidores de la interacción entre p53 o proteínas relacionadas con p53 y MDM2 y proteínas relacionadas con MDM2 proporcionados en la presente invención pueden proteger a las células normales (por ejemplo, no hiperproliferativas) de los efectos tóxicos de ciertos agentes y radiación quimioterapéuticos, posiblemente a través de la capacidad de los inhibidores de inducir la detención del ciclo celular de las células normales. Por ejemplo, los inhibidores proporcionados en la presente invención pueden provocar la detención del ciclo celular en células que comprenden p53 de tipo silvestre o funcional (y/o proteínas relacionadas con p53 de tipo silvestre o funcional) y, a la vez, no tener ningún efecto o tener un efecto menor en las células cancerosas que comprenden p53 mutada, eliminada o de otra forma no funcional o menos funcional (y/o proteínas relacionadas con p53 mutada, eliminada o de otra forma no funcional o menos funcional). Este efecto protector diferencial puede permitir alcanzar un tratamiento más efectivo del cáncer, ya que permite el uso de dosis más altas y tratamientos más prolongados de agentes o tratamientos quimioterapéuticos sin aumentar los efectos secundarios tóxicos de dicho tratamiento cuando se administra en combinación con inhibidores proporcionados en la presente.

Los solicitantes han encontrado que ciertos espiro-oxindoles proporcionados en la presente invención exhiben una combinación inesperada de propiedades similares a las de los fármacos. Las combinaciones inesperadas incluyen, por ejemplo, dos o más de eficacia ¡n vitro, eficacia in vivo, estabilidad de microsomas hepáticos in vitro, propiedades deseables de absorción, distribución, metabolismo y excreción (ADME). Por ejemplo, ciertos espiro-oxindoles proporcionados en la presente son más resistentes a la degradación metabólica, por ejemplo, según se mide mediante la estabilidad microsomal hepática in vitro y/o la farmacocinética in vivo, y/o exhiben una eficacia in vivo mejorada en comparación con antagonistas de la interacción p53-MDM2 conocidos.

Los solicitantes también han encontrado que pueden usarse grupos metabólicamente escindibles para aumentar la solubilidad acuosa de la molécula base. De esta forma, en algunas realizaciones, los espiro-oxindoles proporcionados en la presente invención son profármacos útiles con solubilidad acuosa mejorada con relación a la molécula base.

En algunas realizaciones, los compuestos proporcionados en la presente invención son espiro-oxindoles que tienen las Fórmulas l-XXXV (ver más adelante bajo el título "Compuestos"), o sales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos.

En algunas realizaciones, los compuestos proporcionados en la presente invención inhiben la interacción entre p53 o proteínas relacionadas con p53 y MDM2 o proteínas relacionadas con MDM2.

En algunas realizaciones, los compuestos proporcionados en la presente invención contienen un grupo metabólicamente escindible. En particular, en algunas realizaciones, los compuestos proporcionados en la presente invención contienen un grupo hidroxi de una cadena lateral de hidroxicicloalquilo que puede usarse para unir un grupo metabólicamente escindible. Grupos metabólicamente escindibles adecuados incluyen, a modo no taxativo, ésteres de aminoácidos o ésteres de fosfato.

En algunas realizaciones, los compuestos proporcionados en la presente invención pueden usarse para inducir la senescencia, la detención del ciclo celular y/o la apoptosis en células que contienen p53 o proteínas relacionadas con p53 funcionales. También se proporcionan en la presente invención métodos de utilización de los compuestos proporcionados en la presente invención para sensibilizar células a uno o más agentes adicionales, tales como inductores de senescencia, apoptosis y/o detención del ciclo celular. Los compuestos proporcionados en la presente invención también pueden usarse para proporcionar quimioprotección de células normales a través de la inducción de la detención del ciclo celular antes del tratamiento con agentes quimioterapéuticos. En una realización, los métodos para hacer que una célula normal se vuelva resistente a agentes o tratamientos quimioterapéuticos comprenden poner en contacto la célula con uno o más compuestos proporcionados en la presente invención. En una realización, los métodos de protección de células normales en un animal que tiene una enfermedad hiperproliferativa de los efectos secundarios tóxicos de los agentes o tratamientos quimioterapéuticos comprenden administrar al animal un compuesto proporcionado en la presente invención. En la presente invención se proporcionan métodos para el tratamiento, la mejora o la prevención de trastornos, efectos secundarios o afecciones causados por la administración de agentes quimioterapéuticos a células normales que comprenden administrar a un animal que está recibiendo quimioterapia un compuesto proporcionado en la presente invención. Ejemplos de tales trastornos y afecciones provocados por la quimioterapia incluyen, a modo no taxativo, mucositis, estomatitis, xerostomía, trastornos gastrointestinales y alopecia.

Los compuestos proporcionados en la presente invención son útiles para el tratamiento, la mejora o la prevención de trastornos, tales como los que responden a la inducción de la muerte celular apoptótica, por ejemplo, trastornos caracterizados por la desregulación de la apoptosis, incluidas enfermedades hiperproliferativas tales como el cáncer. En ciertas realizaciones, los compuestos pueden usarse para tratar, mejorar o prevenir el cáncer que se caracteriza por una resistencia a terapias contra el cáncer (por ejemplo, aquellas células cancerosas que son resistentes a la quimioterapia, la radiación, las hormonas y similares). En otras realizaciones, los compuestos pueden usarse para tratar enfermedades hiperproliferativas caracterizadas por la expresión de p53 o proteínas relacionadas con p53 funcionales. En otras realizaciones, los compuestos proporcionados en la presente invención pueden usarse para proteger células normales (por ejemplo, no hiperproliferativas) de los efectos secundarios tóxicos de los agentes o tratamientos quimioterapéuticos mediante la inducción de la detención del ciclo celular en dichas células.

En una realización se proporcionan composiciones farmacéuticas. Las composiciones farmacéuticas pueden comprender uno o más compuestos proporcionados en la presente invención y un portador farmacéuticamente aceptable.

En una realización se proporcionan kits. Los kits pueden comprender uno o más de los compuestos proporcionados en la presente invención, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, e instrucción para administrar el compuesto a un animal. Los kits pueden contener opcionalmente agentes terapéuticos, por ejemplo, agentes anticáncer o agentes moduladores de la apoptosis.

En una realización se proporcionan métodos para tratar, prevenir o mejorar una enfermedad hiperproliferativa, por ejemplo, cáncer, en un paciente que comprenden la administración pulsátil al paciente de una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más de los compuestos proporcionados en la presente invención, o sales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos.

En una realización se proporcionan métodos para tratar, prevenir o mejorar una enfermedad hiperproliferativa, por ejemplo, cáncer, en un paciente que comprenden la administración pulsátil al paciente de una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más de los compuestos proporcionados en la presente invención, o sales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, en combinación con uno o más agentes terapéuticos, por ejemplo, anticáncer, adicionales.

En una realización, los kits comprenden uno o más de los compuestos proporcionados en la presente invención, o sales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, e instrucciones para administrar el o los compuestos a un paciente que tiene una enfermedad hiperproliferativa mediante dosificación pulsátil. Los kits pueden contener, opcionalmente, uno o más agentes terapéuticos, por ejemplo, anticáncer, adicionales.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Fig. 1 es un cromatograma de HPLC en fase inversa de MI-519-64 después del aislamiento mediante cromatografía sobre gel de sílice.

La Fig. 2 es un cromatograma de HPLC en fase inversa de MI-519-64 después del tratamiento con acetonitrilo/agua durante 12 h. Hay tres isómeros presentes. MI-519-64 y Ml-519-6401 corresponden a picos de RP-HPLC a los 30,578 minutos y 31 ,787 minutos, respectivamente. El isómero que eluyó a los 29,162 minutos se denomina I-519-6402.

La Fig. 3 es un cromatograma de HPLC en fase inversa de MI-519-64 después del tratamiento con acetonitrilo/agua durante 3 días.

La Fig. 4 es un gráfico de líneas que muestra las afinidades de unión de MI-519-64, MI-519-6401 y MI-519-6402 a la proteína MDM2 humana, según se determinó usando un ensayo de unión de polarización de la fluorescencia. La pureza de cada isómero utilizado en este experimento (según se determinó mediante RP-HPLC) es la siguiente: MI-519-6402: 90% (con 10% de MI-519-64); MI-519-64: 93% (con 3% de MI-519-64 y 4% de MI-519-6401); y MI-519-6401: >99%. Los valores logarítmicos de CI50 para MI-519-6402, MI-519-64 y MI-519-6401 son 2,030 nM, 1 ,598 n y 0,8354 nM, respectivamente.

La Fig. 5 es un gráfico de líneas que muestra las afinidades de unión de MI-773 (sal de TFA), MI-77301 (sal de TFA), MI-77301 (amina libre) y MI-77302 (sal de TFA) a la proteína MDM2 humana, según se determinó usando un ensayo de unión de polarización de la fluorescencia.

La Fig. 6 es un gráfico de líneas que muestra la estabilidad de MI-773 (sal de TFA) en distintos momentos en agua/metanol = 1 :1 con 0,1 % de TFA, pH 2,1. El compuesto correspondiente al pico 1 es MI-77302. El compuesto correspondiente al pico 3 es MI-773. El compuesto correspondiente al pico 4 es MI-77301.

La Fig. 7 es un gráfico de líneas que muestra la estabilidad de MI-77301 (sal de TFA) en distintos momentos en agua/metanol = 1 :1 con 0,1% de TFA, pH 2,1. El compuesto correspondiente al pico 1 es MI-77302. El compuesto correspondiente al pico 3 es MI-773. El compuesto correspondiente al pico 4 es MI-77301.

La Fig. 8 es una ilustración que muestra un análisis de western blot de la activación de p53 y la apoptosis inducida por MI-773 y MI-77301 en la línea celular de SJSA-1 (osteosarcoma).

La Fig. 9 es una ilustración que muestra un análisis de western blot de la activación de p53 y la apoptosis inducida por MI-519-6401 en la línea celular de SJSA-1.

La Fig. 10 es un gráfico de barras que muestra la apoptosis inducida por MI-773 y MI-77301 en la línea celular de SJSA-1.

La Fig. 11 es un gráfico de barras que muestra la muerte celular inducida por MI-519-64 y MI-519-6401 en la línea celular de SJSA-1.

La Fig. 12 es un gráfico de barras que muestra la muerte celular inducida por MI-519-64 y MI-519-6401 en la línea celular de RS4;11 (leucemia linfoblástica aguda (ALL)).

La Fig. 13 es una ilustración que muestra análisis de western blot de activación in vivo de p53 y escisión de PARP inducida por MI-519-64 y MI-519-6401 en tumores SJSA-1 en ratones.

La Fig. 14 es una ilustración que muestra análisis de western blot de activación in vivo de p53 y escisión de PARP inducida por MI-519-64 y MI-519-6401 en tumores RS4;11 en ratones.

La Fig. 15 es una ilustración que muestra análisis de western blot de activación in vivo de p53 y escisión de PARP inducida por MI-773 y MI-77301 en tumores SJSA-1 en ratones.

La Fig. 16 es una ilustración que muestra tres análisis de western blot de la activación de p53 y la apoptosis inducida por MI-773 y MI-77301 en la línea celular de RS4;11.

La Fig. 17 es un gráfico de líneas que muestra actividad antitumoral ¡n vivo de MI-519-64, MI-519-6401, MI-773 y MI-77301 en el modelo de xenoinjerto de osteosarcoma SJSA-1 en ratones.

La Fig. 18 es un gráfico de líneas que muestra el peso del animal luego de la administración de MI-519-64, MI-519-6401, MI-773 y MI-77301 en ratones.

La Fig. 19 es un gráfico de líneas que muestra la actividad antitumoral in vivo de MI-519-6401 y MI-77301 en el modelo de xenoinjerto de próstata humano 22Rv1.

La Fig. 20 es un gráfico de líneas que muestra la actividad antitumoral in vivo de MI-77301 en el modelo de xenoinjerto de osteosarcoma SJSA-1 en ratones (Cto -B = MI-77301 ; régimen de tratamiento = QD11 ).

La Fig. 21 es un gráfico de líneas que muestra el peso de los animales luego de la administración de MI-77301 en ratones (Cto-B = MI-77301).

La Fig. 22 es un gráfico de líneas que muestra la actividad antitumoral in vivo en el modelo de xenoinjerto de osteosarcoma SJSA-1 en ratones (Cto -B = MI-77301).

La Fig. 23 es un gráfico de líneas que muestra la actividad antitumoral in vivo de MI- 77301 en el modelo de xenoinjerto de osteosarcoma SJSA-1 en ratones (Cto -B = MI-77301).

La Fig. 24 es un gráfico de líneas que muestra la actividad inhibitoria del crecimiento de MI-77301 en líneas celulares de melanoma.

La Fig. 25 es una ilustración que muestra análisis de western blot de la activación de p53 inducida por MI-77301 en células SK-Mel-103 (melanoma humano).

La Fig. 26 es una ilustración que muestra análisis de western blot de la activación de p53 inducida por MI-77301 en células UACC-62 (melanoma de p53 tipo silvestre) y SK-Mel-19 (melanoma humano).

La Fig. 27 es un gráfico de barras que muestra la apoptosis inducida por MI-77301 en la línea celular de UACC-62.

La Fig. 28 es una ilustración que muestra análisis de western blot de la activación in vivo de p53 inducida por MI-773001 en xenoinjertos de melanoma SK-Mel-103 en ratones.

La Fig. 29 es un gráfico de líneas que muestra la actividad antitumoral in vivo de MI-77301 en el modelo de xenoinjerto de melanoma SK-Mel-103.

La Fig. 30 es un cromatograma de HPLC en fase inversa de CB061 -Isómero B sustancialmente puro.

La Fig. 31 es un gráfico de líneas que muestra la actividad antitumoral in vivo de MI-77301 en el modelo de xenoinjerto de tumor colorrectal humano HCT-116 en ratones.

La Fig. 32 es un gráfico de líneas que muestra la actividad antitumoral in vivo de MI-77301 en el modelo de xenoinjerto de tumor de próstata humano LNCAP en ratones.

La Fig. 33 es un gráfico de líneas que muestra la actividad antitumoral in vivo de MI-77301 en el modelo de xenoinjerto de tumor de leucemia linfoblástica aguda RS4;11 en ratones.

La Fig. 34 es una serie de tres espectrogramas de 13C CPMAS NMR que muestran MI-77301 (arriba), MI-773 (medio) y MI-77302 (abajo).

La Fig. 35 es un cromatograma de HPLC en fase inversa de MI-773 sustancialmente puro (eluyente: MeOH/agua con 0,1 % TFA).

La Fig. 36 es un cromatograma de HPLC en fase inversa de MI-77301 sustancialmente puro (eluyente: MeOH/agua con 0,1% TFA).

La Fig. 37 es un gráfico de líneas que muestra la estabilidad de MI-773 (sal de TFA) en distintos momentos en agua/metanol = 1 :1 con 0,1% de TEA, pH 10,8. El compuesto correspondiente al pico 3 es MI-773. El compuesto correspondiente al pico 4 es MI77301.

La Fig. 38 es un gráfico de líneas que muestra la estabilidad de MI-773 (sal de TFA) en distintos momentos en agua/metanol = 1 :1 pH 3,9. El compuesto correspondiente al pico 3 es MI-773. El compuesto correspondiente al pico 4 es MI-77301.

La Fig. 39 es un cromatograma de HPLC en fase inversa de C027 sustancialmente puro (eluyente: acetonitrilo/H20 con 0,1 % TFA).

La Fig. 40 es un cromatograma de HPLC en fase inversa de C02701 sustancialmente puro (eluyente: acetonitrilo/H20 con 0,1 % TFA).

La Fig. 41 es un cromatograma de HPLC en fase inversa de C029 sustancialmente libre de otros estereoisómeros (eluyente: acetonitrilo/H20 con 0,1% TFA).

La Fig. 42 es un cromatograma de HPLC en fase inversa de C02901 sustancialmente puro (eluyente: acetonitrilo/H20 con 0,1 % TFA).

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Se proporcionan en la presente invención compuestos que inhiben la interacción entre p53 o proteínas relacionadas con p53 y MDM2 o proteínas relacionadas con MDM2. Al inhibir los efectos negativos de MDM2 o proteínas relacionadas con MDM2 en p53 o proteínas relacionadas con p53, estos compuestos sensibilizan las células a inductores de la apoptosis y/o la detención del ciclo celular. En algunas realizaciones, los compuestos proporcionados en la presente invención inducen la apoptosis y/o la detención del ciclo celular. Por lo tanto, también se proporcionan en la presente invención métodos para sensibilizar células a inductores de la apoptosis y/o la detención del ciclo celular y a métodos para inducir la apoptosis y/o la detención del ciclo celular en células. En algunas realizaciones, los métodos comprenden poner en contacto las células con uno o más compuestos proporcionados en la presente invención solos o en combinación con uno o más agentes adicionales, por ejemplo, un inductor de la apoptosis y/o la interrupción del ciclo celular.

También se proporcionan en la presente invención métodos para tratar, mejorar o prevenir trastornos, por ejemplo, una enfermedad hiperproliferativa tal como cáncer, en un paciente que comprenden administrar al paciente uno o más compuestos proporcionados en la presente invención y uno o más agentes adicionales, por ejemplo un inductor de la apoptosis. Dichos trastornos incluyen los caracterizados por una desregulación de la apoptosis y los caracterizados por la proliferación de células que expresan p53 o proteínas relacionadas con p53 funcionales. En otras realizaciones se proporcionan métodos de protección de células normales (por ejemplo, no hiperproliferativas) en un animal de los efectos secundarios tóxicos de agentes y tratamientos quimioterapéuticos. Los métodos comprenden administrar al animal uno o más compuestos proporcionados en la presente invención. También se proporcionan en la presente invención métodos para tratar, prevenir o mejorar una enfermedad hiperproliferativa, por ejemplo, cáncer, en un paciente que comprenden administrar al paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más de los compuestos proporcionados en la presente invención, o sales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, de acuerdo con un régimen de dosificación pulsátil.

También se proporcionan en la presente invención métodos para tratar, prevenir o mejorar una enfermedad hiperproliferativa, por ejemplo, cáncer, en un paciente que comprenden administrar al paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más de los compuestos proporcionados en la presente invención, o sales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, de acuerdo con un régimen de dosificación pulsátil en combinación con uno o más agentes terapéuticos, por ejemplo, anticáncer, adicionales.

También se proporcionan en la presente invención kits que comprenden uno o más de los compuestos proporcionados en la presente invención e instrucciones para administrar el o los compuestos a un paciente que tiene una enfermedad hiperproliferativa mediante dosificación pulsátil. Los kits pueden contener, opcionalmente, uno o más agentes terapéuticos, por ejemplo, anticáncer, adicionales.

Definiciones Los términos "administración pulsátil", "administración de dosis pulsátiles" o "dosificación pulsátil", como se utilizan en la presente, se refieren a la administración intermitente (es decir, no continua) de uno o más de los compuestos que se proporcionan en la presente o sales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, a un paciente. Los regímenes de administración de dosis pulsátiles útiles en la presente invención comprenden cualquier régimen de administración discontinua que proporciona una cantidad terapéuticamente efectiva de los compuestos que se proporcionan en la presente o sales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, a un paciente que lo necesita. Los regímenes de dosificación pulsátil pueden utilizar dosis equivalentes, más bajas o más altas de los compuestos o sales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, que las que se utilizarían en regímenes de dosificación continua. Los compuestos que se proporcionan en la presente, o sales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, pueden administrarse como un único agente en un régimen de dosificación pulsátil o pueden administrarse en un régimen de dosificación pulsátil en combinación con uno o más agentes anticáncer adicionales (donde los agentes anticáncer adicionales se administran en un régimen continuo o pulsátil). El día previsto para la administración al paciente de los compuestos, o sales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, la administración puede realizarse en una dosis única o dividida, por ejemplo, una vez al día, dos veces al día, tres veces al día, cuatro veces al día o más. En una realización, los compuestos que se proporcionan en la presente, o sales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, se administran una vez (QD) o dos veces (BID) el día previsto para su administración. En una realización, los compuestos proporcionados, o sales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptable de los mismos, se administran oralmente al paciente de acuerdo con un régimen de dosificación pulsátil. En una realización, los compuestos que se proporcionan en la presente, o sales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptable de los mismos, se administran por vía intravenosa al paciente de acuerdo con un régimen de dosificación pulsátil.

La utilidad terapéutica de la administración del fármaco puede verse contrarrestada por el número y la gravedad de los acontecimientos adversos que experimenta un paciente. La dosificación pulsátil de los compuestos que se proporcionan en la presente, o sales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, puede resultar en una reducción del número y/o la gravedad de los acontecimientos adversos clínicos junto con un mantenimiento o mejora de la eficacia clínica en comparación con una dosificación diaria continua. Los beneficios clínicos de la administración de dosis pulsátiles de los compuestos que se proporcionan en la presente, o sales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, pueden ser más importantes cuando se combina con la administración de otros agentes terapéuticos al paciente.

En una realización, los compuestos que se proporcionan en la presente, o, sales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, se administran a un paciente con una frecuencia no mayor a un día por medio (por ejemplo, la administración se lleva a cabo el día 1 , el día 3, el día 5, el día 7, el día 9, etc.), uno cada tres días (por ejemplo, la administración se lleva a cabo el día 1 , el día 4, el día 7, él día 10, etc.), uno cada cuatro días, uno cada cinco días, uno cada seis días, uno cada siete días, uno cada ocho días, uno cada nueve días, uno cada diez días, uno cada dos semanas, uno cada tres semanas, uno cada cuatro semanas, uno cada cinco semanas o más. El régimen de dosificación pulsátil puede continuar durante una, dos, tres o cuatro semanas, uno, dos, tres o cuatro meses, uno, dos, tres o cuatro años o más.

En otra realización, los compuestos que se proporcionan en la presente, o sales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, se administran a un paciente un día por semana, por ejemplo, un compuesto de las Fórmulas l-XXXV, o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra a un paciente un día seguido de seis días consecutivos en los que el compuesto no se administra. En otra realización, los compuestos que tienen las Fórmulas l-XXXV, o sales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, se administran a un paciente un día cada dos semanas. En otra realización, los compuestos que tienen las Fórmulas l-XXXV, o sales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, se administran a un paciente un día cada tres semanas. En otra realización, los compuestos que tienen las Fórmulas l-XXXV, o sales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, se administran a un paciente un día cada cuatro semanas.

En otra realización, los compuestos que se proporcionan en la presente, o sales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, se administran a un paciente al menos dos días consecutivos, por ejemplo, al menos tres, cuatro, cinco, seis o siete días consecutivos, seguidos de al menos un día, al menos dos días consecutivos, al menos tres días consecutivos, al menos cuatro días consecutivos, al menos cinco días consecutivos, al menos seis días consecutivos, al menos siete días consecutivos, al menos ocho días consecutivos, al menos nueve días consecutivos, al menos diez días consecutivos, al menos once días consecutivos, al menos doce días consecutivos, al menos trece días consecutivos, al menos dos semanas consecutivas, al menos tres semanas consecutivas o al menos cuatro semanas consecutivas o más en los que el compuesto divulgado en la presente no se administra.

En una realización, los compuestos que se proporcionan en la presente, o sales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, y uno o más agentes anticáncer se administran a un paciente el día 1 de un ciclo de tratamiento anticáncer. Generalmente, la duración del ciclo de tratamiento se determina de acuerdo con los protocolos de dosificación aprobados de uno o más agentes anticáncer que deben administrarse al paciente en combinación con los compuestos que tienen las Fórmulas l-XXXV, o sales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos. En una realización el ciclo de tratamiento es de aproximadamente 14 días, aproximadamente 21 días o aproximadamente 28 días. En una realización particular, el ciclo de tratamiento es de 21 días. En una realización, el ciclo de tratamiento se repite una o más veces, por ejemplo, 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 , 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100 o más veces.

En otra realización, los compuestos que se proporcionan en la presente, o sales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, se administran a un paciente el día 1 , los días 1 y 2 o los días 1 , 2 y 3 de un ciclo de tratamiento, y uno o más agentes anticáncer se administran comenzando el día 1 del ciclo de tratamiento de acuerdo con el esquema de dosificación recomendado del agente anticáncer. En una realización, el agente anticáncer es un agente quimioterapéutico. En otra realización, el agente anticáncer es una terapia de radiación.

En otra realización, los compuestos que se proporcionan en la presente, o sales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, se administran por medio del uso secuencial de una combinación de dos o más esquemas de dosificación pulsátil. La combinación puede comprender los mismos esquemas de dosificación pulsátil o esquemas de dosificación pulsátil diferentes. El uso secuencial de una combinación de dos o más regímenes de dosificación pulsátil puede repetirse la cantidad de veces que sea necesario para lograr o mantener una respuesta terapéutica, por ejemplo, de una a aproximadamente cincuenta veces, por ejemplo, de una a aproximadamente veinte veces, por ejemplo, de aproximadamente una a aproximadamente diez veces. En cada repetición, cualquier agente terapéutico adicional puede ser el mismo utilizado en la repetición anterior u otro diferente.

En otra realización, los compuestos que se proporcionan en la presente, o sales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, se administran de acuerdo con un esquema de dosificación pulsátil y/o una combinación secuencial de dos o más esquemas de dosificación pulsátil seguido por un período de espera. La frase "período de espera", como se utiliza en la presente, se refiere a un período de tiempo entre los esquemas de dosificación cuando un compuesto divulgado en la presente no se administra al paciente. El período de espera puede ser de uno, dos, tres, cuatro, cinco o seis días, una, dos o tres semanas, uno, dos, tres o cuatro meses, uno, dos, tres o cuatro años o más. En ciertas realizaciones, el periodo de espera puede ser de uno a treinta días, por ejemplo, siete, catorce, veintiuno o treinta días, por ejemplo, 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 , 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 o 30 días. Después del período de espera, puede reiniciarse el mismo esquema de dosificación pulsátil u otro diferente y/o la combinación secuencial de uno o más esquemas de dosificación pulsátil de un compuesto divulgado en la presente. El régimen del período de dosificación pulsátil/espera puede repetirse la cantidad de veces que sea necesario para lograr o mantener una respuesta terapéutica, por ejemplo, de una a aproximadamente cincuenta veces, por ejemplo, de una a aproximadamente veinte veces, por ejemplo, de aproximadamente una a aproximadamente diez veces. Con cada repetición cualquier agente terapéutico adicional puede ser el mismo utilizado en la repetición anterior u otro diferente.

La expresión "agente anticáncer", como se utiliza en la presente, se refiere a cualquier agente terapéutico (por ejemplo, un compuesto quimioterapéutico y/o un compuesto terapéutico molecular), terapia antisentido, terapia de radiación o intervención quirúrgica, que se utilizan en el tratamiento de enfermedades hiperproliferativas tales como el cáncer (por ejemplo, en mamíferos, por ejemplo, en humanos).

El término "profármaco", como se utiliza en la presente, se refiere a un derivado farmacológicamente inactivo de una molécula de "fármaco" base que requiere la biotransformación (por ejemplo, espontánea o enzimática) dentro del sistema fisiológico objetivo para liberar o para convertir (por ejemplo, enzimáticamente, fisiológicamente, mecánicamente, electromagnéticamente) el profármaco en el fármaco activo. Los profármacos se diseñan para superar los problemas asociados con la estabilidad, solubilidad en agua, toxicidad, falta de especificidad o biodisponibilidad limitada. Profármacos ejemplares comprenden una molécula de fármaco activo en sí mismos y un grupo de enmascaramiento químico (por ejemplo, un grupo que suprime reversiblemente la actividad del fármaco). Algunos profármacos son variaciones o derivados de compuestos que tienen grupos escindibles en condiciones metabólicas. Los profármacos pueden prepararse fácilmente a partir de compuestos base utilizando métodos conocidos en la técnica, tales como los que se describen en A Textbook of Drug Design and Development, Krogsgaard-Larsen and H. Bundgaard (eds.), Gordon & Breach, 1991 , particularmente el Capítulo 5: "Design and Applications of Prodrugs"; Design of Prodrugs, H. Bundgaard (ed.), Elsevier, 1985; Prodrugs: Topical and Ocular Drug Delivery, K. B. Sloan (ed.), Marcel Dekker, 1998; Methods in Enzymology, K. Widder et al. (eds.), Vol. 42, Academic Press, 1985, particularmente las páginas 309-396; Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery, 5th Ed., M. Wolff (ed.), John Wiley & Sons, 1995, particularmente el Vol. 1 y las páginas 172-178 y las páginas 949-982; Pro-Drugs as Novel Delivery Systems, T. Higuchi and V. Stella (eds.), Am. Chem. Soc, 1975; y Bioreversible Carriers in Drug Design, E. B. Roche (ed.), Elsevier, 1987.

Los profármacos ejemplares se vuelven farmacéuticamente activos in vivo o in vitro cuando se someten a solvólisis en condiciones fisiológicas o se someten a degradación enzimática u otra transformación bioquímica (por ejemplo, fosforilación, hidrogenación, deshidrogenación, glicosilación). Los profármacos a menudo ofrecen ventajas de solubilidad en agua, compatibilidad tisular o liberación retrasada en el organismo de un mamífero. (Ver, por ejemplo, Bundgaard, Design of Prodrugs, páginas 7-9, 21-24, Elsevier, Amsterdam (1985); y Silverman, The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action, páginas 352-401 , Academic Press, San Diego, CA (1992)). Profármacos comunes incluyen derivados de ácido tales como ésteres preparados por la reacción de ácidos base con un alcohol adecuado (por ejemplo, un alcanol inferior) o ésteres preparados por la reacción del alcohol base con un ácido carboxílico adecuado (por ejemplo, un aminoácido), amidas preparadas por la reacción del compuesto ácido base con una amina, grupos básicos reaccionados para formar un derivado de base acilada (por ejemplo, una alquilamida inferior) o derivados que contienen fósforo, por ejemplo, ésteres de fosfato, fosfonato y fosforoamidato, incluido fosfato, fosfonato y fosforoamidato cíclicos, ver, por ejemplo, el documento US 2007/0249564 A1.

La frase "grupo metabólicamente escindible", como se utiliza en la presente, se refiere a grupos que pueden escindirse a partir de la molécula base por procesos metabólicos y que pueden sustituirse por hidrógeno. Ciertos compuestos que contienen grupos metabólicamente escindibles pueden se profármacos, es decir, son farmacológicamente inactivos. Ciertos otros compuestos que contienen grupos metabólicamente escindibles pueden ser antagonistas de la interacción entre p53 y MDM2. En dichos casos, estos compuestos pueden tener más, menos o equivalente actividad de la molécula base. Ejemplos de grupos metabólicamente escindibles incluyen aquellos que derivan de aminoácidos (ver, por ejemplo, los documentos US 2006/0241017 A1 ; US 2006/0287244 A1 ; y WO 2005/046575 A2) o compuestos que contienen fósforo (ver, por ejemplo, el documento U.S. 2007/0249564 A1 ), como se ilustra en el Esquema 1.

Esquema 1 escisión R-OH metabólica fármaco fármaco aminoácido éster de aminoácido base base escisión R-OH metabólica fármaco fármaco fosfito éster de fosfato base base La frase "sal farmacéuticamente aceptable", como se utiliza en la presente, se refiere a cualquier sal (por ejemplo, obtenida por la reacción con un ácido o una base) de un compuesto que se proporciona en la presente que es fisiológicamente tolerada en el animal objetivo (por ejemplo, un mamífero) o humano. Las sales de los compuestos proporcionados en la presente pueden derivar de ácidos y bases inorgánicos y orgánicos. Ejemplos de ácidos incluyen, a modo no taxativo, ácido clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, nítrico, perclórico, fumárico, maleico, fosfórico, glicólico, láctico, sallcílico, succínico, tolueno-p-sulfónico, tartárico, acético, cítrico, metanosulfónico, etanosulfónico, fórmico, benzoico, malónico, sulfónico, naftaleno-2-sulfónico, bencenosulfónico y similares. Otros ácidos, tales como ácido oxálico, aunque no son farmacéuticamente aceptables en sí mismos, pueden emplearse en la preparación de sales útiles como intermediarios en la obtención de los compuestos proporcionados en la presente y sus sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables.

Ejemplos de bases incluyen, a modo no taxativo, hidróxidos de metales alcalinos (por ejemplo, sodio), hidróxidos de metales alcalinotérreos (por ejemplo, magnesio), amoníaco y compuestos de fórmula NW4*, en donde W es alquilo C|.4, y similares.

Ejemplos de sales incluyen, a modo no taxativo: acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, bencenosulfonato, bisulfato, butirato, citrato, camforato, camforsulfonato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanosulfonato, fumarato, flucoheptanoato, glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, cloruro, bromuro, yoduro, 2-hidroxietanosulfonato, lactato, maleato, mesilato, metanosulfonato, 2-naftalenosulfonato, nicotinato, oxalato, palmoato, pectinato, persulfato, fenilpropionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartrato, tiocianato, tosilato, undecanoato y similares. Otros ejemplos de sales incluyen aniones de los compuestos que se proporcionan en la presente acompañados de un catión adecuado tal como Na\ NH4+y NW4+ (en donde W es un grupo alquilo C1-4), y similares. Para uso terapéutico, las sales de los compuestos que se proporcionan en la presente se contemplan como farmacéuticamente aceptables. Sin embargo, las sales de ácidos y bases que no son farmacéuticamente aceptables pueden también utilizarse, por ejemplo, en la preparación o purificación de un compuesto farmacéuticamente aceptable.

El término "solvato", como se utiliza en la presente, se refiere a la asociación física de un compuesto que se proporciona en la presente con una o más moléculas de disolvente, ya sean orgánicas o inorgánicas. Esta asociación física a menudo incluye la unión a hidrógeno. En ciertos casos, el solvato es capaz de aislarse, por ejemplo, cuando una o más moléculas de solvato se incorporan a la red cristalina del sólido cristalino. "Solvato" abarca tanto sólvatos en fase de solución como aislables. Solvatos ejemplares incluyen hidratos, etanolatos y metanolatos.

La frase "catión monovalente farmacéuticamente aceptable", como se utiliza en la presente, se refiere a cationes inorgánicos tales como, a modo no taxativo, iones de metales alcalinos, por ejemplo Na+ y K+, así como cationes orgánicos tales como, a modo no taxativo, amonio e iones de amonio sustituidos, por ejemplo, NH4+, NHMe3\ NH2Me2\ NHMe3+ y NMe \ La frase "catión divalente farmacéuticamente aceptable", como se utiliza en la presente, se refiere a cationes inorgánicos tales como, a modo no taxativo, cationes de metal alcalinotérreo, por ejemplo, Ca2+ and Mg2+.

Ejemplos de cationes monovalentes y divalentes farmacéuticamente aceptables se describen, por ejemplo, en Berge et al. J. Pharm. Sci., 66:1 -19 (1997).

La frase "cantidad terapéuticamente efectiva", como se utiliza en la presente, se refiere a la cantidad del agente terapéutico (incluidos los compuestos, composiciones farmacéuticas y composiciones proporcionados en la presente) suficiente como para resultar en una mejora de uno o más síntomas de un trastorno o para evitar el avance de un trastorno o provocar la remisión del trastorno. Por ejemplo, con respecto al tratamiento del cáncer, en una realización, una cantidad terapéuticamente efectiva puede referirse a la cantidad de un agente terapéutico que disminuye la tasa de crecimiento del tumor, disminuye la masa del tumor, disminuye el número de metástasis, aumenta el tiempo hasta el avance del tumor, aumenta la apoptosis de células tumorales o aumenta el tiempo de supervivencia al menos 5%, al menos 10%, al menos 15%, al menos 20%, al menos 25%, al menos 30%, al menos 35%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95% o al menos 100%.

Los términos "sensibilizar" y "sensibilización", como se utilizan en la presente, se refieren a hacer, a través de la administración de un primer agente terapéutico (por ejemplo, un compuesto que se proporciona en la presente), a un animal o una célula en un animal más susceptible o más sensible a los efectos biológicos (por ejemplo, promoción o retraso de un aspecto de función celular, incluidos, a modo no taxativo, división celular, crecimiento celular, proliferación, invasión, angiogénesis, necrosis o apoptosis) de un segundo agente terapéutico. El efecto de sensibilización de un primer agente en una célula objetivo puede medirse como la diferencia del efecto biológico pretendido (por ejemplo, la promoción o el retraso de un aspecto de función celular, incluidos, a modo no taxativo, crecimiento celular, proliferación, invasión, angiogénesis o apoptosis) observado tras la administración de un segundo agente con o sin administración del primer agente. La respuesta de la célula sensibilizada puede aumentarse al menos 10%, al menos 20%, al menos aproximadamente 30%, al menos aproximadamente 40%, al menos aproximadamente 50%, al menos aproximadamente 60%, al menos aproximadamente 70%, al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 90%, al menos aproximadamente 100%, al menos aproximadamente 150%, al menos aproximadamente 200%, al menos aproximadamente 250%, al menos 300%, al menos aproximadamente 350%, al menos aproximadamente 400%, al menos aproximadamente 450% o al menos aproximadamente 500% con respecto a la respuesta en ausencia del primer agente.

La frase "desregulación de la apoptosis", como se utiliza en la presente, se refiere a cualquier aberración en la capacidad (por ejemplo, predisposición) de una célula de sufrir muerte celular por medio de apoptosis. La desregulación de la apoptosis está asociada con una variedad de afecciones o es inducida por las mismas. Ejemplos no taxativos de ellas incluyen trastornos autoinmunes (por ejemplo, lupus eritematoso sistémico, artritis reumatoide, enfermedad de injerto contra huésped, miastenia grave o síndrome de Sjógren), afecciones inflamatorias crónicas (por ejemplo, psoriasis, asma o enfermedad de Crohn), trastornos hiperproliferativos (por ejemplo, tumores, linfomas de células B o linfomas de células T), infecciones virales (por ejemplo, herpes, papiloma o VIH) y otras afecciones tales como osteoartritis y aterosclerosis. Cabe destacar que cuando la desregulación es inducida por una enfermedad viral o está asociada con ésta, la infección viral puede ser detectable o no en el momento en el que ocurre la desregulación o que ésta se observa. Es decir, la desregulación inducida por virus puede ocurrir aun después de la desaparición de los síntomas de la infección viral.

La frase "p53 funcional", como se utiliza en la presente, se refiere a p53 tipo silvestre expresada en niveles normales, altos o bajos y variantes mutantes o alélicas de p53 que retienen al menos aproximadamente 5% de la actividad de p53 tipo silvestre, por ejemplo, al menos aproximadamente 10%, aproximadamente 20%, aproximadamente 30%, aproximadamente 40%, aproximadamente 50% o más de actividad tipo silvestre.

La frase "proteína relacionada con p53", como se utiliza en la presente, se refiere a proteínas que tienen al menos 25% de homología de secuencias con p53, tienen actividad supresora de tumor y son inhibidas por la interacción con MDM2 o proteínas relacionadas con MDM2. Ejemplos de proteínas relacionadas con p53 incluyen, a modo no taxativo, p63 y p73.

La frase "proteína relacionada con MD 2", como se utiliza en la presente, se refiere a proteínas que tienen al menos 25% de homología de secuencias con MDM2 e interactúan con p53 o proteínas relacionadas con p53 y las inhiben. Ejemplos de proteínas relacionadas con MDM2 incluyen, a modo no taxativo, MDMX y MDM4.

El término "senescencia", como se utiliza en la presente, se refiere al fenómeno por el cual las células diploides no cancerosas pierden la capacidad de dividirse y se caracteriza, en parte, por la disfunción o el acortamiento teloméricos.

La frase "enfermedad hiperproliferativa", como se utiliza en la presente, se refiere a cualquier afección en la cual una población localizada de células proliferativas en un animal no está regida por las limitaciones habituales de crecimiento normal. Ejemplos de trastornos hiperproliferativos incluyen tumores, neoplasmas, linfomas, leucemias y similares. Se dice que un neoplasma es benigno si no sufre invasión ni metástasis, y maligno si sufre cualquiera de éstas. Una célula "metastásica" significa que la célula puede invadir estructuras corporales cercanas. La hiperplasia es una forma de proliferación celular que implica un aumento del número de células en un tejido u órgano sin una alteración significativa de la estructura o función. La metaplasia es una forma de crecimiento celular controlado en el cual un tipo de célula completamente diferenciada sustituye a otro tipo de célula diferenciada.

El crecimiento patológico de las células linfoides activadas a menudo resulta en un trastorno autoinmune o una afección inflamatoria crónica. Como se utiliza en la presente, la frase "trastorno autoinmune" se refiere a cualquier afección en la cual un organismo produce anticuerpos o células inmunes que reconocen las moléculas, células o tejidos propios del organismo. Ejemplos no taxativos de trastornos autoinmunes incluyen anemia hemolítica autoinmune, hepatitis autoinmune, enfermedad de Berger o neuropatía por IgA, enfermedad celíaca, síndrome de fatiga crónica, enfermedad de Crohn, dermatomiositis, fibromialgia, enfermedad de injerto contra huésped, enfermedad de Grave, tiroiditis de Hashimoto, purpura trombocitopénica idiopática, liquen plano, esclerosis múltiple, miastenia grave, psoriasis, fiebre reumática, artritis reumática, esclerodermia, síndrome de Sjógren, lupus eritematoso sistémico, diabetes tipo 1 , colitis ulcerativa, vitíligo y similares.

La frase "enfermedad neoplásica", como se utiliza en la presente, se refiere a cualquier crecimiento anormal de células que sean benignas (no cancerosas) o malignas (cancerosas).

El término "melanoma", como se utiliza en la presente, se refiere a cualquier forma de cáncer que comienza en melanocitos. Melanoma incluye, a modo no taxativo, los siguientes subtipos: léntigo maligno, melanoma léntigo maligno, melanoma de extensión superficial, melanoma lentiginoso acral, melanoma mucoso, melanoma nodular, melanoma polipoide, melanoma desmoplásico, melanoma amelanótico, melanoma de tejido blando y melanoma metastásico. Melanoma, como se utiliza en la presente, también incluye melanoma metastásico.

La frase "célula normal", como se utiliza en la presente, se refiere a una célula que no sufre crecimiento anormal ni división. Las células normales son no cancerosas y no son parte de ninguna enfermedad o trastorno hiperproliferativo.

La frase "agente anti-neoplásico", como se utiliza en la presente, se refiere a cualquier compuesto que retrasa la proliferación, el crecimiento o la expansión de un neoplasma objetivo (por ejemplo, maligno).

Las frases "prevenir", "que previene" y "prevención", como se utilizan en la presente, se refieren a una disminución de la existencia de células patológicas (por ejemplo, células hiperproliferativas o neoplásicas) en un animal. La prevención puede ser completa, por ejemplo, la ausencia total de células patológicas en un sujeto. La prevención también puede ser parcial, de forma tal que la existencia de células patológicas en un sujeto sea menor que la que existiría sin tratamiento con uno o más compuestos proporcionados en la presente.

Los términos "un" y "una" se refieren a uno/a o más.

La frase "agentes moduladores de la apoptosis", como se utiliza en la presente, se refiere a agentes que participan en la modulación (por ejemplo, inhibición, disminución, aumento, promoción) de la apoptosis. Ejemplos de agentes moduladores de la apoptosis incluyen proteínas que comprenden un dominio de muerte celular tal como, a modo no taxativo, Fas/CD95, TRAMP, TNF Rl, DR1 , DR2, DR3, DR4, DR5, DR6, FADD y RIP. Otros ejemplos de agentes moduladores de la apoptosis incluyen, a modo no taxativo, TNFa, ligando Fas, anticuerpos contra Fas/CD95 y otros receptores de la familia TNF, TRAIL (también conocido como Ligando Apo2 o Apo2UTRAIL), anticuerpos contra TRAIL-R1 o TRAIL-R2, Bcl-2, p53, BAX, BAD, Akt, CAD, quinasa PI3, PP1 y proteínas caspasas. Agentes moduladores incluyen, en sentido amplio, agonistas y antagonistas de receptores de la familia TNF y ligandos de la familia TNF. Los agentes moduladores de la apoptosis pueden ser solubles o estar unidos a la membrana (por ejemplo, ligando o receptor). Los agentes moduladores de la apoptosis incluyen aquellos que son inductores de la apoptosis, tales como TNF o ligando relacionado con TNF, particularmente un ligando TRAMP, un ligando Fas/CD95, un ligando TNFR-1 o TRAIL.

La frase "portador farmacéuticamente aceptable" o "vehículo farmacéuticamente aceptable" comprende cualquier portador, disolvente, tensioactivo o vehículo farmacéutico estándar. Vehículos farmacéuticamente aceptables adecuados incluyen vehículos acuosos y vehículos no acuosos. Portadores farmacéuticos estándar y sus formulaciones se describen en Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA, 19th ed. 1995.

El término "alquilo", como se utiliza en la presente, solo o como parte de otro grupo, se refiere a un hidrocarburo alifático saturado de cadena recta o ramificada que tiene de uno a dieciocho carbonos o el número de carbonos designado (por ejemplo, C^Cis significa 1 a 18 carbonos). En una realización, el alquilo es un alquilo Ci-C10. En otra realización, el alquilo es un alquilo C4-C8. En otra realización, el alquilo es un alquilo Ci-C6. En otra realización, el alquilo es un alquilo Ci-C4. Grupos alquilo ejemplares incluyen metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, sec-butilo, isobutilo, tere-butilo, n-pentilo, n-hexilo, isohexilo, n-heptilo, 4,4-dimetilpentilo, n-octilo, 2,2,4-trimetilpentilo, nonilo, decilo y similares.

La frase "alquilo opcionalmente sustituido", como se utiliza en la presente, sola o como parte de otro grupo, significa que el alquilo, como se definió anteriormente, es insustituido o sustituido por uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente de hidroxi (es decir, -OH), nitro (es decir, -N02), ciano (es decir, -CN), cicloalquilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, heterociclo opcionalmente sustituido, alcoxi, ariloxi, aralquiloxi, alquiltio, carboxamido o sulfonamido. En una realización, el alquilo opcionalmente sustituido es sustituido por dos sustituyentes. En otra realización, el alquilo opcionalmente sustituido es sustituido por un sustituyente. En otra realización, los sustituyentes se seleccionan de hidroxilo (es decir, un hidroxialquilo), cicloalquilo opcionalmente sustituido (es decir, un (cicloalquil)alquilo) o amino (es decir, un aminoalquilo). Grupos alquilo opcionalmente sustituidos ejemplares incluyen -CH2OCH3, -CH2CH2NH2, -CH2CH2NH(CH3), -CH2CH2CN, -CH2S02CH3, hidroximetilo, hidroxietilo, hidroxipropilo y similares.

El término "alquenilo", como se utiliza en la presente, solo o como parte de otro grupo, se refiere a un radical alquilo divalente que contiene uno, dos, tres, cuatro o más grupos metileno unidos. Grupos alquenilo ejemplares incluyen -(CH2)-, -(CH2)2-, -(CH2)3-, -(CH2)4- y similares.

La frase "alquilenilo opcionalmente sustituido", como se utiliza en la presente, sola o como parte de otro grupo, significa que el alquilenilo como se definió anteriormente es insustituido o sustituido por uno, dos, tres o cuatro sustituyentes independientemente seleccionados del grupo que consiste en alquilo CTC6 opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido. En una realización, el alquilo C -C6 opcionalmente sustituido es metilo. En una realización, el arilo opcionalmente sustituido es un fenilo opcionalmente sustituido por uno o dos grupos halo. Grupos alquilenilo opcionalmente sustituidos ejemplares incluyen -CH(CH3)-, -C(CH3)2-, -CH2CH(CH3)-, -CH2CH(CH3)CH2-, -CH2CH(Ph)CH2-, -CH(CH3)CH(CH3)- y similares.

El término "haloalquilo", como se utiliza en la présente, solo o como parte de otro grupo, se refiere a un alquilo, como se definió anteriormente, que tiene uno a seis sustituyentes halo. En una realización, el haloalquilo tiene uno, dos o tres sustituyentes halo. Grupos haloalquilo ejemplares incluyen trifluorometilo, -CH2CH2F y similares.

El término "hidroxialquilo", como se utiliza en la presente, solo o como parte de otro grupo, se refiere a un alquilo, como se definió anteriormente, que tiene un sustituyente hidroxi. Grupos hidroxialquilo ejemplares incluyen hidroximetilo, hidroxietilo, hidroxipropilo y similares.

El término "dihidroxialquilo", como se utiliza en la presente, solo o como parte de otro grupo, se refiere a un alquilo, como se definió anteriormente, que tiene dos sustituyentes hidroxilo. Grupos dihidroxialquilo ejemplares incluyen -CH2CH2CCH3(OH)CH2OH, -CH2CH2CH(OH)CH(CH3)OH, -CH2CH(CH2OH)2, -CH2CH2CH(OH)C(CH3)2OH -CH2CH2CCH3-(OH)CH(CH3)OH y similares, incluidos estereoisómeros de los mismos.

El término "hidroxicicloálquilo", como se utiliza en la presente, solo o como parte de otro grupo, se refiere a un cicloalquilo opcionalmente sustituido, como se define más adelante, que tiene al menos uno, por ejemplo, uno o dos, sustituyentes hidroxi. Grupos hidroxicicloálquilo ejemplares incluyen: y similares, incluidos estereoisómeros de los mismos.

La frase "(cicloalquil)alquilo opcionalmente sustituido", como se utiliza en la presente, sola o como parte de otro grupo, se refiere a un alquilo opcionalmente sustituido, como se definió anteriormente, que tiene un sustituyente cicloalquilo opcionalmente sustituido (como se define más adelante). Grupos (cicloalquil)alquilo opcionalmente sustituidos ejemplares incluyen: y similares, incluidos estereoisómeros de los mismos.

El término "aralquilo", como se utiliza en la presente, solo o como parte de otro grupo, se refiere a un alquilo opcionalmente sustituido, como se definió anteriormente, que tiene uno, dos o tres sustituyentes arilo opcionalmente sustituidos. En una realización, el aralquilo tiene dos sustituyentes arilo opcionalmente sustituidos. En una realización, el aralquilo tiene un sustituyente arilo opcionalmente sustituido. En otra realización, el aralquilo es un aril(alquilo C,-C4). En otra realización, el aril(alquilo C1-C4) tiene dos sustituyentes arilo opcionalmente sustituidos. En otra realización, el aril(alquilo C1-C4) tiene un sustituyente arilo opcionalmente sustituido. Grupos aralquilo ejemplares incluyen, por ejemplo, bencilo, feniletilo, (4-fluorofenil)etilo, fenilpropilo, difenilmetilo (es decir, Ph2CH-), difeniletilo (Ph2CHCH2-) y similares.

El término "cicloalquilo", como se utiliza en la presente, solo o como parte de otro grupo, se refiere a grupos hidrocarburo cíclicos saturados o parcialmente insaturados (que contienen uno o dos enlaces dobles) que contienen uno a tres anillos que tienen de tres a doce átomos de carbono (es decir, cicloalquilo C3-Cn2) o el número carbonos designado. En una realización, el cicloalquilo tiene un anillo. En otra realización, el cicloalquilo es un cicloalquilo C3-C6. Grupos cicloalquilo ejemplares incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, ciclooctilo, norbornilo, decalina, adamantilo y similares.

La frase "cicloalquilo opcionalmente sustituido", como se utiliza en la presente, sola o como parte de otro grupo, significa que el cicloalquilo como se definió anteriormente es insustituido o sustituido por uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente de halo, nitro, ciano, hidroxi, amino, alquilo opcionalmente sustituido, haloalquilo, hidroxialquilo, aminoalquilo, aralquilo, cicloalquilo opcionalmente sustituido, alquenilo opcionalmente sustituido, alquinilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, heterociclo opcionalmente sustituido, alcoxi, ariloxi, aralquiloxi, alquiltio, carboxamido o sulfonamido. La frase "cicloalquilo opcionalmente sustituido" también significa que el cicloalquilo, como se definió anteriormente, puede estar fusionado con un arilo opcionalmente sustituido. Grupos cicloalquilo opcionalmente sustituidos ejemplares incluyen: y similares.

El término "alquenilo", como se utiliza en la presente, solo o como parte de otro grupo, se refiere a un grupo alquilo, como se definió anteriormente, que contiene uno, dos o tres enlaces dobles carbono-carbono. En una realización, el alquenilo tiene un enlace doble carbono-carbono. Grupos alquenilo ejemplares incluyen -CH=CH2, -CH2CH=CH2, -CH2CH2CH=CH2, -CH2CH2CH=CHCH3 y similares.

La frase "alquenilo opcionalmente sustituido", como se utiliza en la presente, sola o como parte de otro grupo, significa que el alquenilo, como se definió anteriormente, es insustituido o sustituido por uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente de halo, nitro, ciano, hidroxi, amino, alquilo opcionalmente sustituido, haloalquilo, hidroxialquilo, aralquilo, cicloalquilo opcionalmente sustituido, alquenilo opcionalmente sustituido, alquinilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, heterociclo opcionalmente sustituido, alcoxi, ariloxi, aralquiloxi, alquiltio, carboxamido o sulfonamido. Grupos alquenilo opcionalmente sustituidos ejemplares incluyen -CH=CHPh, -CH2CH=CHPh y similares.

El término "cicloalquenilo", como se utiliza en la presente, solo o como parte de otro grupo, se refiere a un grupo cicloalquilo, como se definió anteriormente, que contiene uno, dos o tres enlaces dobles carbono-carbono. En una realización, el cicloalquenilo tiene un enlace doble carbono-carbono. Grupos cicloalquenilo ejemplares incluyen ciclopenteno, ciclohexeno y similares.

La frase "cicloalquenilo opcionalmente sustituido", como se utiliza en la presente, sola o como parte de otro grupo, significa que el cicloalquenilo como se definió anteriormente es insustituido o sustituido por uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente de halo, nitro, ciano, hidroxi, amino, alquilo opcionalmente sustituido, haloalquilo, hidroxialquilo, aralquilo, cicloalquilo opcionalmente sustituido, alquenilo opcionalmente sustituido, alquinilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, heterociclo opcionalmente sustituido, alcoxi, ariloxi, aralquiloxi, alquiltio, carboxamido o sulfonamido.

El término "alquinilo", como se utiliza en la presente, solo o como parte de otro grupo, se refiere a un grupo alquilo, como se definió anteriormente, que contiene uno a tres enlaces triples carbono-carbono. En una realización, el alquinilo tiene un enlace triple carbono-carbono. Grupos alquinilo ejemplares incluyen -C=CH, -C=CCH3, -CH2C=CH, -CH2CH2C=CH y -CH2CH2C=CCH3.

La frase "alquinilo opcionalmente sustituido", como se utiliza en la presente, sola o como parte de otro grupo, significa que el alquinilo, como se definió anteriormente, es insustituido o sustituido por uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente de halo, nitro, ciano, hidroxi, amino, alquilo opcionalmente sustituido, haloalquilo, hidroxialquilo, aralquilo, cicloalquilo opcionalmente sustituido, alquenilo opcionalmente sustituido, alquinilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, heterociclo opcionalmente sustituido, alcoxi, ariloxi, aralquiloxi, alquiltio, carboxamido o sulfonamido. Grupos alquenilo opcionalmente sustituidos ejemplares incluyen -C=CPh, -CH2C=CPh y similares.

El término "arilo", como se utiliza en la presente, solo o como parte de otro grupo, se refiere a sistemas de anillos aromáticos monocíclicos o biciclicos que tienen de seis a catorce átomos de carbono (es decir, arilo C6-C14) tales como fenilo (abreviado como Ph), 1-naftilo y 2-naftilo y similares.

La frase "arilo opcionalmente sustituido", como se utiliza en la presente, sola o como parte de otro grupo, significa que el arilo, como se definió anteriormente, es insustituido o sustituido por uno a cinco sustituyentes seleccionados independientemente de halo, nitro, ciano, hidroxi, amino, alquilo opcionalmente sustituido, haloalquilo, hidroxialquilo, aralquilo, cicloalquilo opcionalmente sustituido, alquenilo opcionalmente sustituido, alquinilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, heterociclo opcionalmente sustituido, alcoxi, ariloxi, aralquiloxi, alquiltio, carboxamido o sulfonamido. En una realización, el arilo opcionalmente sustituido es un fenilo opcionalmente sustituido. En una realización, el fenilo opcionalmente sustituido tiene cuatro sustituyentes. En otra realización, el fenilo opcionalmente sustituido tiene tres sustituyentes. En otra realización, el fenilo opcionalmente sustituido tiene dos sustituyentes. En otra realización, el fenilo opcionalmente sustituido tiene un sustituyente. Grupos arilo sustituidos ejemplares incluyen 2-metilfenilo, 2-metoxifenilo, 2-fluorofenilo, 2-clorofenilo, 2-bromofenilo, 3-metilfenilo, 3-metoxifenilo, 3-fluorofenilo, 3-clorofenilo, 4-metilfenilo, 4-etilfenilo, 4-metoxifenilo, 4-fluorofenilo, 4-clorofenilo, 2,6-di-fluorofenilo, 2,6-di-clorofenilo, 2-metilo, 3-metoxifenilo, 2-et¡lo, 3-metoxifenilo, 3,4-di-metoxifenilo, 3,5-di-fluorofenilo 3,5-di-metilfenilo y 3,5-dimetoxi, 4-metilfenilo, 2-fluoro-3-clorofenilo, 3-cloro-4-fluorofenilo y similares. La frase arilo opcionalmente sustituido incluye grupos que tienen anillos cicloalquilo opcionalmente sustituido fusionados y heterociclo opcionalmente sustituidos fusionados. Ejemplos incluyen: y similares.

El término "heteroarilo", como se utiliza en la presente, solo o como parte de otro grupo, se refiere a sistemas de anillos aromáticos monocíclicos o biciclicos que tienen de cinco a catorce átomos de carbono (es decir, heteroarilo C5-Ci4) y uno, dos, tres o cuatro heteroátomos independientemente seleccionados del grupo que consiste en oxígeno, nitrógeno y azufre. En una realización, el heteroarilo tiene tres heteroátomos. En una realización, el heteroarilo tiene dos heteroátomos. En una realización, el heteroarilo tiene un heteroátomo. Grupos heteroarilo ejemplares incluyen 1-pirrolilo, 2-pirrolilo, 3-pirrolilo, 2-imidazolilo, 4-imidazolilo, pirazinilo, 2-oxazolilo, 4-oxazolilo, 5-oxazolilo, 3-isoxazolilo, 4-isoxazolilo, 5-isoxazolilo, 2-tiazolilo, 4-tiazolilo, 5-tiazolilo, 2-furilo, 3-furilo, 2-tienilo, 3-tienilo, 2-piridilo, 3-piridilo, 4-piridilo, 2-pirimidilo, 4-pirimidilo, purinilo, 2-bencimidazolilo, 4-bencimidazolilo, 5-bencimidazolilo, 2-benzotiazolilo, 4-benzotiazolilo, 5-benzotiazolilo, 5-indolilo, 3-indazolilo, 4-indazolilo, 5-indazolilo, 1-isoquinolilo, 5-isoquinolilo, 2-quinoxalinilo, 5-quinoxalinilo, 2-quinolilo, 3-quinolilo, 6-quinolilo y similares. El término heteroarilo incluye N-óxidos posibles. N-óxidos ejemplares incluyen N-óxido de piridilo y similares.

La frase "heteroarilo opcionalmente sustituido", como se utiliza en la presente, sola o como parte de otro grupo, significa que el heteroarilo como se definió anteriormente es insustituido o sustituido por uno a cuatro sustituyentes, generalmente uno o dos sustituyentes, seleccionados independientemente de halo, nitro, ciano, hidroxi, amino, alquilo opcionalmente sustituido, haloalquilo, hidroxialquilo, aralquilo, cicloalquilo opcionalmente sustituido, alquenilo opcionalmente sustituido, alquinilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, heterociclo opcionalmente sustituido, alcoxi, ariloxi, aralquiloxi, alquiltio, carboxamido o sulfonamido. En una realización, el heteroarilo opcionalmente sustituido tiene un sustituyente. En otra realización, el sustituyente es un arilo opcionalmente sustituido, aralquilo o alquilo opcionalmente sustituido. En otra realización, el sustituyente es un fenilo opcionalmente sustituido. Cualquier átomo de carbono o nitrógeno disponible puede ser sustituido. Grupos heteroarilo opcionalmente sustituidos ejemplares incluyen: y similares.

El término "heterociclo", como se utiliza en la presente, solo o como parte de otro grupo, se refiere a grupos cíclicos saturados o parcialmente insaturados (que contienen uno o dos enlaces dobles) que contienen uno a tres anillos que tienen de dos a doce átomos de carbono (es decir, heterociclo C2-Ci2) y uno o dos átomos de oxígeno, azufre o nitrógeno. El heterociclo puede estar unido opcionalmente al resto de la molécula a través de un átomo de carbono o nitrógeno. Grupos heterociclo ejemplares incluyen: y similares.

La frase "heterociclo opcionalmente sustituido", como se utiliza en la presente, sola o como parte de otro grupo, significa que el heterociclo, como se definió anteriormente, es insustituido o sustituido por uno a cuatro sustituyentes seleccionados independientemente de halo, nitro, ciano, hidroxi, amino, alquilo opcionalmente sustituido, haloalquilo, hidroxialquilo, aralquilo, cicloalquilo opcionalmente sustituido, alquenilo opcionalmente sustituido, alquinilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, heterociclo opcionalmente sustituido, alcoxi, ariloxi, aralquiloxi, alquiltio, carboxamido, sulfonamido, -CORc, -S02Rd, -N(Re)CORf, -N(Re)S02R9 o -N(Re)C=N(Rh)-amino, en donde Rc es hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido; Rd es alquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido; Re es hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido; R es hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido; R9 es alquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido; y Rh es hidrógeno, -CN, alquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido. La sustitución puede producirse en cualquier átomo de carbono o nitrógeno disponible. Grupos heterociclo sustituidos ejemplares incluyen: y similares. Un heterociclo opcionalmente sustituido puede estar fusionado con un grupo arilo para proporcionar un arilo opcionalmente sustituido, como se describió anteriormente.

El término "alcoxi", como se utiliza en la presente, solo o como parte de otro grupo, se refiere a un haloalquilo, alquilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, alquenilo opcionalmente sustituido o alquinilo opcionalmente sustituido unido a un átomo de oxígeno terminal. Grupos alcoxi ejemplares incluyen metoxi, terc-butoxi, -OCH2CH=CH2 y similares.

El término "ariloxi", como se utiliza en la presente, solo o como parte de otro grupo, se refiere a un arilo opcionalmente sustituido unido a un átomo de oxígeno terminal. Grupos ariloxi ejemplares incluyen fenoxi y similares.

El término "aralquiloxi", como se utiliza en la presente, solo o como parte de otro grupo, se refiere a un aralquilo unido a un átomo de oxígeno terminal. Grupos aralquiloxi ejemplares incluyen benciloxi y similares.

El término "alquiltio", como se utiliza en la presente, solo o como parte de otro grupo, se refiere a un haloalquilo, aralquilo, alquilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, alquenilo opcionalmente sustituido o alquinilo opcionalmente sustituido unido a un átomo de azufre terminal. Grupos alquilo ejemplares incluyen -SCH3 y similares.

El término "halo" o "halógeno", como se utiliza en la presente, solo o como parte de otro grupo, se refiere a fluoro, cloro, bromo o yodo. En una realización, el halo es fluoro o cloro.

El término "amino", como se utiliza en la presente, solo o como parte de otro grupo, se refiere a un radical de fórmula -NRaRb en donde Ra y Rb son independientemente hidrógeno, haloalquilo, aralquilo, alquilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, heterociclo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido; o Ra y Rb tomados junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos forman un heterociclo opcionalmente sustituido de cuatro a siete miembros. Grupos amino ejemplares incluyen -NH2, -N(H)CH3, -N(CH3)2, N(H)CH2CH3, N(CH2CH3), -N(H)CH2Ph y similares.

El término "carboxamido", como se utiliza en la presente, solo o como parte de otro grupo, se refiere a un radical de fórmula -CO-amino. Grupos carboxamido ejemplares incluyen -CONH2, -CON(H)CH3, -CON(H)Ph, -CON(H)CH2CH2Ph, -CON(CH3)2, CON(H)CHPh2 y similares.

El término "sulfonamido", como se utiliza en la presente, solo o como parte de otro grupo, se refiere a un radical de fórmula -S02-amino. Grupos sulfonamido ejemplares incluyen -S02NH2l -S02N(H)CH3, -S02N(H)Ph y similares.

El término "aproximadamente", como se utiliza en la presente, incluye el número mencionado ± 10%. De esa forma, "aproximadamente 10" significa 9 a 11.

Algunos de los compuestos de la presente invención pueden existir en forma de estereoisómeros, es decir, isómeros que difieren solamente en la disposición espacial de los átomos, incluidos isómeros ópticos e isómeros conformacionales (o confórmeros). La invención incluye todos los estereoisómeros, tanto preparaciones de estereoisómeros individuales puros como preparaciones enriquecidas de cada uno, y las mezclas racémicas de dichos estereoisómeros, así como diastereómeros y enantiómeros individuales que pueden separarse de acuerdo con métodos que son bien conocidos por los expertos en la técnica.

La frase "sustancialmente libre", como se utiliza en la presente, significa que el compuesto comprende menos de aproximadamente 25% de otros estereoisómeros, por ejemplo, diastereómeros y/o enantiómeros, según se establece utilizando métodos analíticos convencionales utilizados rutinariamente por los expertos en la técnica. En algunas realizaciones, la cantidad de otros estereoisómeros es de menos de aproximadamente 24%, menos de aproximadamente 23%, menos de aproximadamente 22%, menos de aproximadamente 21 %, menos de aproximadamente 20%, menos de aproximadamente 19%, menos de aproximadamente 18%, menos de aproximadamente 17%, menos de aproximadamente 16%, menos de aproximadamente 15%, menos de aproximadamente 14%, menos de aproximadamente 13%, menos de aproximadamente 12%, menos de aproximadamente 11%, menos de aproximadamente 10%, menos de aproximadamente 9%, menos de aproximadamente 8%, menos de aproximadamente 7%, menos de aproximadamente 6%, menos de aproximadamente 5%, menos de aproximadamente 4%, menos de aproximadamente 3%, menos de aproximadamente 2%, menos de aproximadamente 1% o menos de aproximadamente 0,5%.

Compuestos enriquecidos estereoisoméricamente que contienen aproximadamente 95% o más de un estereoisómero deseado, por ejemplo, aproximadamente 96% o más, aproximadamente 97% o más, aproximadamente 98% o más o aproximadamente 99% o más, se denominan en la presente "sustancialmente puros" o "estereoisómeros sustancialmente puros".

Compuestos estereoisoméricamente enriquecidos que contienen aproximadamente 99% o más de un estereoisómero deseado se denominan en la presente "puros" o "estereoisómeros puros". La pureza de cualquier compuesto enriquecido estereoisoméricamente puede determinarse utilizando métodos analíticos convencionales tales como, por ejemplo, HPLC en fase normal, HPLC en fase inversa, HPLC quiral y 1H y 13C NMR.

Compuestos En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de Fórmula I: en donde: R1a, R1b, R c y R1d se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, halógeno, hidroxi, amino, nitro, ciano, alcoxi, ariloxi, alquilo opcionalmente sustituido, haloalquilo, cicloalquilo opcionalmente sustituido, alquenilo opcionalmente sustituido, cicloalquenilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, carboxamido y sulfonamido; R2 se selecciona del grupo que consiste en arilo opcionalmente sustituido, aralquilo y heteroarilo opcionalmente sustituido; R3 se selecciona del grupo que consiste en alquilo opcionalmente sustituido, (cicloalquil)alquilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, alquenilo opcionalmente sustituido, cicloalquenilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido; R4 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo opcionalmente sustituido; R5 se selecciona del grupo que consiste en: R5-4 en donde: cada R6a y R6b se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo Ci-C6 opcionalmente sustituido; R7 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo d-C6 opcionalmente sustituido y cicloalquilo opcionalmente sustituido; R8a y R8b se seleccionan cada uno independientemente del -grupo que consiste en hidrógeno, alquilo Ci-C6 opcionalmente sustituido y cicloalquilo opcionalmente sustituido; o R8a y 8b tomados junto con el carbono al que están unidos forman un cicloalquilo de 3 a 8 miembros opcionalmente sustituido; W1 se selecciona del grupo que consiste en -OR9a y -NR9 R9c; R9a es hidrógeno; R9 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, -S02R9d, y -CONR R , R9c se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido; o R9b y R9c tomados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclo de 4 a 8 miembros opcionalmente sustituido; R9d se selecciona del grupo que consiste en alquilo opcionalmente sustituido y cicloalquilo opcionalmente sustituido; R9e y p9f se se|ecc¡onan cacja uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido y cicloalquilo opcionalmente sustituido; o R9e y R9f tomados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclo de 4 a 8 miembros opcionalmente sustituido; W2 se selecciona del grupo que consiste en -OR 0 y -NR11aR11b; con la condición de que cuando W1 es -OR9a y W2 es -OR10 entonces al menos uno de R7, R8a y R8b es distinto de hidrógeno; R10 es hidrógeno; o uno de R9a yR10 es hidrógeno y el otro es un grupo metabólicamente escindible; R11a se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, -S02R11c y -CONR 1dR1 e; R11b se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido; o 11a y R1 b tomados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclo de 4 a 8 miembros opcionalmente sustituido; R11c se selecciona del grupo que consiste en alquilo opcionalmente sustituido y cicloalquilo opcionalmente sustituido; R 1d y R1 e se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido y cicloalquilo opcionalmente sustituido; o R11d y R11e junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclo de 4 a 8 miembros opcionalmente sustituido; n es 1 , 2, 3, 4 o 5; cada R12a, R12b, R 2c y R12d se selecciona Independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo CrC6 opcionalmente sustituido; R13 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C^Ce opcionalmente sustituido; R14 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo Ci-C6 opcionalmente sustituido y cicloalquilo opcionalmente sustituido; Z se selecciona del grupo que consiste en -OR15 y -NR16aR16b; o Z y R14 tomados juntos forman un grupo carbonilo, es decir, C=0.

R15 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y un grupo metabólicamente escindible; R 6a se selecciona del grupo que consiste en -S02R16C y -CONR16dR16e; R16b se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo opcionalmente sustituido; R16c se selecciona del grupo que consiste en alquilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido; R16d R16e se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido; o R16d y R16e tomados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclo de 4 a 8 miembros; o es 1 , 2 o 3; p es O, 1 , 2 o 3; cada R17a, R 7b, R17c y R17d se selecciona independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo Ci-C6 opcionalmente sustituido; R18 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C -C6 opcionalmente sustituido; R19 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo Ci-C6 opcionalmente sustituido y cicloalquilo opcionalmente sustituido; R20 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo Ci-C6 opcionalmente sustituido y cicloalquilo opcionalmente sustituido; R21a y R21b son cada uno hidrógeno; o uno de R21a y R21b es hidrógeno y el otro es un grupo metabólicamente escindible; q es O, 1 , 2 o 3; r es 1 , 2 o 3; cada R22a, R2 b, R22c y R22d se selecciona independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo d-Ce opcionalmente sustituido; R23 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo Ci-C6 opcionalmente sustituido; R24 se selecciona del grupo que consiste en -S02R2i,a y -CONR24bR24c; R2 a se selecciona del grupo que consiste en alquilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido; R24b y R24c se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, cicloalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido; o R2 b y R2 c tomados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclo de 4 a 8 miembros; s y t son cada uno independientemente 1 , 2 o 3; X se selecciona del grupo que consiste en O, S y NR ; Y se selecciona del grupo que consiste en O, S y NR "; R se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido, aralquilo y cicloalquilo opcionalmente sustituido; R se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido, aralquilo, cicloalquilo opcionalmente sustituido y -COR ; R31 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo opcionalmente sustituido; y ~ representa un enlace simple o doble, o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En ciertas realizaciones, en los compuestos de Fórmula I, ~ representa un enlace simple.

En ciertas realizaciones, el compuesto de Fórmula I es una mezcla de estereoisómeros, por ejemplo, una mezcla de diastereómeros y/o enantiómeros, por ejemplo, una mezcla racémica. En otra de estas realizaciones, el compuesto es una mezcla de diastereómeros. En otra de estas realizaciones, el compuesto es una mezcla de enantiómeros. En realizaciones particulares, el compuesto es un enantiómero simple.

[0100] En ciertas realizaciones, R5 se selecciona del grupo que consiste en R5-1 y R5-2. En realizaciones particulares, R5 es R5-2- y Z es -OH. En realizaciones particulares, R5 es R5-2A yZ es OH.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de Fórmula la: en donde R1a, R1b, R1c, R d, R2, R3, R4, R5, X e Y tienen los significados descritos anteriormente para la Fórmula I, o una sal , solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de Fórmula Ib: en donde R1a, R1 , R1c, R1d, R2, R3, R4, R5, X e Y tienen los significados descritos anteriormente para la Fórmula I, o un tautómero de los mismos, o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de Fórmula ll-XVIl: XIV XV XVI XVII en donde R1a, R1 , R c, R1d, R2, R3, R4, R5, X e Y tienen los significados descritos anteriormente para la Fórmula I, o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En algunas realizaciones, se proporcionan compuestos de Fórmula II, en donde R a, R1b, R c, R d, R2, R3, R\ R5, X e Y tienen los significados descritos anteriormente con relación a la Fórmula I, o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula II están sustancialmente libres de otro u otros estereoisómeros, es decir, compuestos de las Fórmulas lll-XVIl. En algunas realizaciones, compuestos de Fórmula II son estereoisómeros sustancialmente puros. En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula II son estereoisómeros puros.

En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula XIII están sustancialmente libres de otro u otros estereoisomeros. En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula XIII son estereoisomeros sustancialmente puros. En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula XIII son estereoisómeros puros.

En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula XIV están sustancialmente libres de otro u otros estereoisómeros. En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula XIV son estereoisómeros sustancialmente puros. En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula XIV son estereoisómeros puros.

En algunas realizaciones, se proporcionan compuestos de Fórmula VI, en donde R a, R1b, R1c, R1d, R2, R3, R4, R5, X e Y tienen los significados descritos anteriormente con relación a la Fórmula I, o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula VI están sustancialmente libres de otro u otros estereoisómeros, es decir, compuestos de las Fórmulas ll-V y VII-XVII. En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula VI son estereoisómeros sustancialmente puros. En algunas realizaciones, los compuestos de la Fórmula VI son estereoisómeros puros.

En algunas realizaciones, se proporcionan compuestos de Fórmula X, en donde R1a, R1 b, R1c, R1d, R2, R3, R4, R5, X e Y tienen los significados descritos anteriormente con relación a la Fórmula I, o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula X están sustancialmente libres de otro u otros estereoisómeros, es decir, compuestos de las Fórmulas ll-IX y XI-XVII. En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula X son estereoisómeros sustancialmente puros. En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula X son estereoisómeros puros.

En algunas realizaciones, se proporcionan compuestos de Fórmula XII, en donde R1a, R1b, R1c, R1d, R2, R3, R4, R5, X e Y tienen los significados descritos anteriormente con relación a la Fórmula I, o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula XII están sustancialmente libres de otro u otros estereoisómeros, es decir, compuestos de las Fórmulas ll-XI y Xlll-XVIl. En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula XII son estereoisómeros sustancialmente puros. En algunas realizaciones, los compuestos de XII son estereoisómeros puros.

En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula XII son inesperadamente más potentes que los compuestos de las Fórmulas ll-XI y Xlll-XVIl. Por ejemplo, como se demuestra en la presente, los compuestos de Fórmula XII tienen valores de Cl50 más bajos que los compuestos de las Fórmulas ll-XI y Xlll-XVIl en comparación con MD 2. En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula XII son aproximadamente 2 o más veces, por ejemplo, aproximadamente 3 veces, aproximadamente 4 veces, aproximadamente 5 veces, aproximadamente 6 veces, aproximadamente 7 veces, aproximadamente 8 veces, aproximadamente 9 veces, aproximadamente 10 veces, aproximadamente 15 veces, aproximadamente 20 veces, aproximadamente 25 veces, aproximadamente 30 veces, aproximadamente 35 veces, aproximadamente 40 veces, aproximadamente 45 veces, aproximadamente 50 veces o más, más potentes que los compuestos de Fórmula II en ensayos de unión a MDM2 basados en la polarización de la fluorescencia. En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula XII son inesperadamente más eficaces que los compuestos de las Fórmulas ll-XI y Xlll-XVIl en modelos de tumor de xenoinjerto en ratones y/o en otros modelos de eficacia in vivo.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de las Fórmulas l-XVIl o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos. En algunas realizaciones, se proporcionan compuestos de las Fórmulas II, VI, X y XII, o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde: a) R1a, R1 , R1c y R d se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, fluoro y cloro; b) R1a y R1d son hidrógeno; R b se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y fluoro; y R c se selecciona del grupo que consiste en fluoro y cloro; c) R2 es fenilo opcionalmente sustituido; d) R3 se selecciona del grupo que consiste en alquilo opcionalmente sustituido, (cicloalquil)alquilo opcionalmente sustituido y cicloalquilo opcionalmente sustituido; e) R4 es hidrógeno; f) X es H; g) X es O; h) X es S; i) Y es O; j) Y es S; k) Y es NH; o l) X e Y son NH; o cualquier combinación de los mismos.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de las Fórmulas II, VI, X y XII o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde R5 es R5-1 ; R6a y R6b son hidrógeno; R7 es alquilo d-C4; R8a y R8 son hidrógeno; W es -OR10, R9 y R10 son hidrógeno; y n es 2.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de las Fórmulas II, VI, X y XII o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde R5 es R5-1 ; R6a y R6b son hidrógeno; R7 es alquilo d-C4; R8a y R8b son hidrógeno; W es -NR11aR11b, R9 es hidrógeno; y n es 2.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de las Fórmulas II, VI, X y XII o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde R5 es R5-1; R6a y R6b son hidrógeno; R7 es alquilo C C4; R8a y R8b son hidrógeno; W es -OR10, uno de R9 y R10 es hidrógeno y el otro es un grupo metabólicamente escindible; y n es 2.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de las Fórmulas II, VI, X y XII o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde R5 es R5-2; R12a, R12b, R12c y R12d son cada uno hidrógeno; R13 es hidrógeno; Z es -OR15 y R 5 es hidrógeno; o es 1 o 2; y p es 1 o 2.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de las Fórmulas II, VI, X y XII o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde R5 es R5-2; R 2a, R12b, R12c y R1 d son cada uno hidrógeno; R13 es hidrógeno; Z es -NR,eaR16b; o es 1 o 2; y p es 1 o 2.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de las Fórmulas II, VI, X y XII o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde R5 es R5-2; R12a, R12b, R 2c y R12 son cada uno hidrógeno; R13 es hidrógeno; Z es -OR15 y R15 un grupo metabólicamente escindible; o es 1 o 2; y p es 1 o 2.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de las Fórmulas II, VI, X y XII o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde R5 es R5-3; R17a, R17b, R17c y R17d son cada uno hidrógeno; R18, R19 y R20 son hidrógeno; R21a y R21b son hidrógeno; y q y r son 1.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de las Fórmulas II, VI, X y XII o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde R5 es R5-3; R17a, R17 , R17c y R17d son cada uno hidrógeno; R18, R19 y R20 son hidrógeno; uno de R21a y R21b es hidrógeno y el otro es un grupo metabólicamente escindible; y q y r son 1.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de las Fórmulas II, VI, X y XII o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde R5 es R5- 2A.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de las Fórmulas II, VI, X y XII o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde R2 se selecciona del grupo que consiste en aralquilo y arilo opcionalmente sustituido que tiene la Fórmula R2-1 : y R , R , R , R y R se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, halógeno, hidroxi, nitro, amino, ciano, alcoxi, alquilo opcionalmente sustituido, haloalquílo, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido. En realizaciones particulares, R25a se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y fluoro; R25b es cloro; R25c se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y fluoro; y R25d y R25e son hidrógeno.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de las Fórmulas II, VI, X y XII o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde R5 se selecciona del grupo que consiste en: - incluidos estereoisómeros, por ejemplo, enantiómeros, de los mismos, en donde: R7 es alquilo C1-C opcionalmente sustituido; R9a y R10 son cada uno hidrógeno; o uno de R9a y R10 es hidrógeno y el otro es un grupo metabólicamente escindible; R9b se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, -S02R9d, y -CONR9eR9f; R9c se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido; o R9b y R9c tomacjOS junt0 con e| ¿tomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclo de 4 a 8 miembros opcionalmente sustituido; R9d se selecciona del grupo que consiste en alquilo opcionalmente sustituido y cicloalquilo opcionalmente sustituido; R9e y R9f se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido y cicloalquilo opcionalmente sustituido; o R9e y R9f tomados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclo de 4 a 8 miembros opcionalmente sustituido; R11a se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, -S02R11c, y -CONR1 dR11e; R11 b se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido; o Rna y Rub tornac]OS junto con e| átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclo de 4 a 8 miembros opcionalmente sustituido; R11c se selecciona del grupo que consiste en alquilo opcionalmente sustituido y cicloalquilo opcionalmente sustituido; R11d y R11e se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido y cicloalquilo opcionalmente sustituido; o Riid y Rne tomac|os junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclo de 4 a 8 miembros opcionalmente sustituido; R14 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C^C o cicloalquilo C3-C6; R15 es hidrógeno o un grupo metabólicamente escindible; R16a se selecciona del grupo que consiste en -S02R 6c y -CONR16dR16e; R 6b se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo opcionalmente sustituido; R 6c se selecciona del grupo que consiste en alquilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido; Ri6d y ?ßß se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido; o Ri6d y Ri6e tomados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclo de 4 a 8 miembros; R19 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo Ci-C6 opcionalmente sustituido y cicloalquilo opcionalmente sustituido; R20 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C^-C6 opcionalmente sustituido y cicloalquilo opcionalmente sustituido; R21a y R21 son cada uno hidrógeno; o uno de R21a y R21b es hidrógeno y el otro es un grupo metabólicamente escindible; R24 se selecciona del grupo que consiste en -S02R24a y -CONR24bR24c; R2 a se selecciona del grupo que consiste en alquilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido; y R24b y R24c se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, cicloalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido, o R2 b y R24c tomados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclo de 4 a 8 miembros.

En ciertas realizaciones, R5 se selecciona del grupo que consiste en R5-5, R5-6, R5-10, R5-11. R5-12, R5-13 y R5-14.

En ciertas realizaciones, R5 se selecciona del grupo que consiste en R5-10 y R5-12 y R14 es hidrógeno o metilo y R15 es hidrógeno.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de las Fórmulas II, VI, X y XII o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde R5 se selecciona del grupo que consiste en: en donde: R7 se selecciona del grupo que consiste en metilo, etilo, propilo, isopropilo y ciclopropilo; y R8a y R8b se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, metilo, etilo, propilo, isopropilo y ciclopropilo.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de las Fórmulas II, VI, X y XII o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde Rs se selecciona del grupo que consiste en: en donde: R7 se selecciona del grupo que consiste en metilo, etilo, propilo, isoprópilo y ciclopropilo; R8a y R80 se selecciona cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, metilo, etilo, propilo, isoprópilo y ciclopropilo; R9d se selecciona del grupo que consiste en metilo, trifluorometilo, etilo, propilo, isoprópilo y ciclopropilo; y R11c se selecciona del grupo que consiste en metilo, trifluorometilo, etilo, propilo, isoprópilo y ciclopropilo.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de las Fórmulas II, VI, X y XII o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde R5 se selecciona del grupo que consiste en: en donde: R7 se selecciona del grupo que consiste en metilo, etilo, propilo, isopropilo y ciclopropilo; R8a y R8b se se|ecc¡ona cacja uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, metilo, etilo, propilo, isopropilo y ciclopropilo; R9e se selecciona del grupo que consiste en metilo, trifluorometiío, etilo, propilo, isopropilo y ciclopropilo; y R11d se selecciona del grupo que consiste en metilo, trifluorometiío, etilo, propilo, isopropilo y ciclopropilo.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de las Fórmulas II, VI, X y XII, o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde R5 se selecciona del grupo que consiste en: en donde: R14 se selecciona del grupo que consiste en metilo, etilo, propilo, isopropilo y ciclopropilo; y R19 y R20se selecciona cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, metilo, etilo, propilo, isopropilo y ciclopropilo.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de las Fórmulas II, VI, X y XII, o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde R5 se selecciona del grupo que consiste en: ',' iec 16c ? NHSO,R1flc en donde: R14 se selecciona del grupo que consiste en metilo, etilo, propilo, isopropilo y ciclopropilo; y R16c se selecciona del grupo que consiste en metilo, trifluorometllo, etilo, propilo, isopropilo y ciclopropilo.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de las Fórmulas II, VI, X y XII, o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde R5 se selecciona del grupo que consiste en: en donde: R14 se selecciona del grupo que consiste en metilo, etilo, propilo, isopropilo y ciclopropilo; y R 6d se selecciona del grupo que consiste en metilo, trifluorometilo, etilo, propilo, isopropilo y ciclopropilo.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de las Fórmulas II, VI, X y XII, o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde R5 es: En otra realización, se proporcionan compuestos de Fórmula XVIIIa: en donde R1 y R1c se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, fluoro y cloro; R3 se selecciona del grupo que consiste en alquilo opcionalmente sustituido, (cicloalquil)alquilo opcionalmente sustituido y arilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido; R26a, R26b y R26c se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, fluoro y cloro; y R27 se selecciona del grupo que consiste en: R7 es alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido; W2 se selecciona del grupo que consiste en -OR10 y -NR11aR 1b; R9a y R10 son cada uno hidrógeno; o uno de R9a y R10 es hidrógeno y el otro es un grupo metabólicamente escindible; R11a se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, -S02R11c y -CONR11dR11e; R11b se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido; o Rna y Rnb domados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclo de 4 a 8 miembros opcionalmente sustituido; R11c se selecciona del grupo que consiste en alquilo opcionalmente sustituido y cicloalquilo opcionalmente sustituido; R 1d y Rl 1e se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido y cicloalquilo opcionalmente sustituido; o R11d y R11e tomados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclo de 4 a 8 miembros opcionalmente sustituido; R14 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C C4 opcionalmente sustituido y cicloalquilo opcionalmente sustituido; Z se selecciona del grupo que consiste en -OR15 y -NR16aR16b; R15 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y un grupo metabólicamente escindible; R16a se selecciona del grupo que consiste en -S02R16c y -CONR16dR16e; R16b se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo opcionalmente sustituido; R16c se selecciona del grupo que consiste en alquilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido; R16d y R16e se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido; o Ri6d y Ri6e tornac|os junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclo de 4 a 8 miembros; R19 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo ( Ce opcionalmente sustituido y cicloalquilo opcionalmente sustituido; R20 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo Ct-Ce opcionalmente sustituido y cicloalquilo opcionalmente sustituido; R21a y R2 b son cada uno hidrógeno; o uno de R21a y R21 b es hidrógeno y el otro es un grupo metabólicamente escindible; o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En otra realización, se proporcionan compuestos de Fórmula XVIIIb: en donde R1b, R b, R3, R26a, R26b, R26c y R27 tienen los significados descritos anteriormente para la Fórmula XVIIIa, o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En otra realización, se proporcionan compuestos de Fórmula XVIIIc: en donde R , R1b, R3, R26a, R26b, R26c y R27 tienen los significados descritos anteriormente para la Fórmula XVIIIa, o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En ciertas realizaciones, R27 se selecciona del grupo que consiste en R27-2, R27-3, R27-5, R27-6, R27-8, R27-9, R27-11 , R27-12, R27-14, R27-15, R27-16, R27-17, R27-19, R27-20, R27-21 , R27-22, R27-24, R27-25, R27-27, R27-29, R27-30, R27-31 y R27-32. En ciertas realizaciones, R27 se selecciona del grupo que consiste en R27-2, R27-3, R27-5 y R27-6, R27-8, R27-9, R27-14, R27-15, R27-16 y R27-17. En ciertas realizaciones, R27 es un grupo hidroxicicloalquilo.

En ciertas realizaciones, R9a es hidrógeno; W2 es OH; Z es OH; R7 es alquilo C^-C4, por ejemplo, metilo, etilo, propilo, o isopropilo o ciclopropilo; R14, R19 y R20 son cada uno independientemente hidrógeno, alquilo C1-C4, por ejemplo, metilo, etilo, propilo, o isopropilo o ciclopropilo; y R21a y R21b son cada uno hidrógeno.

En ciertas realizaciones, R9a es hidrógeno, R7 es hidrógeno, alquilo C rC4 o ciclopropilo; W2 es -NHR 1a; R11a es alquilo C C4, por ejemplo, metilo, trifluorometilo, etilo, propilo, o isopropilo o ciclopropilo; R14 es hidrógeno, alquilo C1-C4, por ejemplo, metilo, etilo, propilo, o isopropilo o ciclopropilo; Z es -NHS02R16c o -NHCONHR 6d; y R16c y R16d son cada uno independientemente alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido, por ejemplo, metilo, trifluorometilo, etilo, propilo, o isopropilo o ciclopropilo.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de las Fórmulas XIX-XXXIV: en donde R1b, R1c, R3, R26a, R26b, R25c y R27 tienen los significados descritos anteriormente con relación a la Fórmula XVIIIa, o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de Fórmula XIX, en donde R1b, R1c, R3, R26a, R26b, R26c y R27 tienen los significados descritos anteriormente con relación a la Fórmula XVIIIa, o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula XIX están sustancialmente libres de otro u otros estereoisómeros, es decir, compuestos de las Fórmulas XX-XXXIV. En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula XIX son estereoisómeros sustancialmente puros. En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula XIX son estereoisómeros puros.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de Fórmula XXIII, en donde R1b, R1c, R3, R26a, R26b, R26c y R27 tienen los significados descritos anteriormente con relación a la Fórmula XVIIIa, o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula XXIII están sustancialmente libres de otro u otros estereoisómeros, es decir, compuestos de las Fórmulas XIX-XXII y XXIV-XXXIV. En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula XXIII son estereolsómeros sustancialmente puros. En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula XXIII son estereoisómeros puros.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de Fórmula XXVII, en donde R1b, R1c, R3, R26a, R26b, R26c y R27 tienen los significados descritos anteriormente con relación a la Fórmula XVIIIa, o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula XXVII están sustancialmente libres de otro u otros estereoisómeros, es decir, compuestos de las Fórmulas XIX-XXVI y XXVIII-XXXIV. En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula XXVII son estereoisómeros sustancialmente puros. En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula XXVII son estereoisómeros puros.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de Fórmula XXIX, en donde R1b, R1c, R3, R26a, R26b, R26c y R27 tienen los significados descritos anteriormente con relación a la Fórmula XVIIIa, o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula XXIX están sustancialmente libres de otro u otros estereoisómeros, es decir, compuestos de las Fórmulas XIX-XXVI II y XXX-XXIV. En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula XXIX son estereoisómeros sustancialmente puros. En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula XXIX son estereoisómeros puros.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de las Fórmulas XIX, XXIII, XXVII y XXIX, en donde R27 se selecciona del grupo que consiste en: R27-57 R27-58 R27-60 R27-59 en donde: R7 es alquilo Ci-C ; R9a y R10 son hidrógeno; o uno de R9a y R10 es hidrógeno y el otro es un grupo metabólicamente escindible; R a y se se|ecCj0nan cacja uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido; o 11a R11 tomados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclo de 4 a 8 miembros opcionalmente sustituido; R14 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C C4; R15 es hidrógeno o un grupo metabólicamente escindible; y R16a se selecciona del grupo que consiste en -S02R 6c y -CONR16dR16e; R16c se selecciona del grupo que consiste en alquilo C†-C4 opcionalmente sustituido o ciclopropilo; R16d y R16e se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1 -C4 opcionalmente sustituido o ciclopropilo, o pi6d y Riee tomac|OS jUnto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclo de 4 a 8 miembros, o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de las Fórmulas XIX, XXIII, XXVII y XXIX, en donde R27 se selecciona del grupo que consiste en: R27-77 en donde: R7 es alquilo C!-C4 opcionalmente sustituido; W2 se selecciona del grupo que consiste en -OR 0 y -NR11aR11b; R9a y R10 son cada uno hidrógeno; o uno de R9a yR10 es hidrógeno y el otro es un grupo metabólicamente escindible; R11a se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, -S02R11c, y -CONR11dR11e; R1 b se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido; o Rna y Rnb toma(j0s junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclo de 4 a 8 miembros opcionalmente sustituido; R11c se selecciona del grupo que consiste en alquilo opcionalmente sustituido y cicloalquilo opcionalmente sustituido; piid y pne se se|ecc¡onan cac|a uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido y cicloalquilo opcionalmente sustituido; o Rnd y R e tomacjos jUnto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclo de 4 a 8 miembros opcionalmente sustituido; o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de las Fórmulas XIX, XXIH, XXVII y XXIX, en donde R27 se selecciona del grupo que consiste en: en donde R a y R1 b tomados junto con el nitrógeno al que están unidos forman un heterociclo opcionalmente sustituido de 5 o 6 miembros.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de las Fórmulas XIX, XXIII, XXVII y XXIX, en donde R27 se selecciona del grupo que consiste en: en donde: R14 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo Ci-C4; y R15 es un grupo metabólicamente escindible.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de las Fórmulas II, VI, X, XII, XIX, XXIII, XXVII y XXIX, en donde R15 es un grupo metabólicamente escindible que se selecciona del grupo que consiste en: en donde: cada R28a y R28b se selecciona independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido y aralquilo; R29a y R29 se seleccionan cada uno del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo opcionalmente sustituido; v es 1 , 2, 3, o 4; y R30a y R30b se seleccionan cada uno del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido, aralquilo, arilo opcionalmente sustituido y un catión monovalente farmacéuticamente aceptable; o tomados juntos R30a y R30 representan un catión divalente farmacéuticamente aceptable o un alquilenilo opcionalmente sustituido.

En ciertas realizaciones, R15 es el residuo de un aminoácido natural o no natural. En otras realizaciones, R15 es el residuo de glicina, isoleucina alanina, leucina, asparagina, lisina, ácido aspártico, metionina, cisteina, fenilalanina, ácido glutámico, treonina, glutamina, triptofán, valina, prolina, serina, tirosina, arginina e histidina.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de las Fórmulas II, VI, X, Xll, XIX, XXIII, XXVII y XXIX, en donde R3 es alquilo d-C10.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de las Fórmulas II, VI, X, XII, XIX, XXIII, XXVII y XXIX, en donde R se selecciona del grupo que consiste en -CH2C(CH3)3, -CH2C(CH3)2-CH2-CH3, -CH2C(CH3)2CH2CH2-CH3, -CH2C(CH3)2CH2CH2CH2CH3, -CH2C(CH2-CH3)2CH3, y -CH2C(CH3)2-CH2-CH(CH3)2. En ciertas realizaciones, R3 es -CH2C(CH3)3.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de las Fórmulas II, VI, X, XII, XIX, XXIII, XXVII y XXIX, en donde R3 es arilo opcionalmente sustituido.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos de las Fórmulas II, VI, X, XII, XIX, XXIII, XXVII y XXIX, en donde R3 es fenilo opcionalmente sustituido.

En algunas realizaciones, se proporcionan compuestos de las Fórmulas XIX, XXIII, XXVII y XXIX en donde R1b, R1c, R26a, R26b y R26c se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y halógeno, por ejemplo, cloro o fluoro, o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos que tienen las Fórmulas VI, X y XII, en donde: R1a, R1b, R1c y R d se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, fluoro y cloro; R2 se selecciona del grupo que consiste en aralquilo y: en donde: R25a, R25b, R25c, R25d y R 5e se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, fluoro y cloro; R3 se selecciona del grupo que consiste en alquilo C^-CB opcionalmente sustituido y arilo opcionalmente sustituido; R4 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo Ci-C6 opcionalmente sustituido; R5 se selecciona del grupo que consiste en: en donde: R 4 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo Ci-C4 opcionalmente sustituido; X se selecciona del grupo que consiste en O, S y NR ; Y se selecciona del grupo que consiste en O, S y NR"; R se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C!-C4 opcionalmente sustituido; y R se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo ( C4 opcionalmente sustituido y -COCH3, en donde el compuesto está sustancialmente libre de otro u otros estereoisómeros, o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En algunas realizaciones, R4 es hidrógeno. En algunas realizaciones, X es NH. En algunas realizaciones y es NH. En algunas realizaciones, R3 es -CH2C(CH3)3. En algunas realizaciones, R5 se selecciona del grupo que consiste en: En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos que tienen la Fórmula XII, en donde: R1a, R1b, R1c y R1d se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, fluoro y cloro; R2 se selecciona del grupo que consiste en bencilo y: en donde: R253 i R25b R25C i R25d y R25e se se|ecc¡onan cacja uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, fluoro y cloro; R3 se selecciona del grupo que consiste en alquilo Ci-C8 opcionalmente sustituido y fenilo; R4 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C C6 opcionalmente sustituido; R5 se selecciona del grupo que consiste en: en donde: R1 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido; X se selecciona del grupo que consiste en O, S y NR ; Y se selecciona del grupo que consiste en O, S y NR "; R se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C^-C4 opcionalmente sustituido; y R se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C C4 opcionalmente sustituido y -COCH3, en donde el compuesto está sustancialmente libre de otro u otros estereoisómeros, o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En algunas realizaciones, R4 es hidrógeno. En algunas realizaciones, X es NH. En algunas realizaciones y es NH. En algunas realizaciones, R3 es -CH2C(CH3)3. En algunas realizaciones, R5 se selecciona del grupo que consiste en: En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos que tienen la Fórmula XII, en donde: R1a es hidrógeno; R1 b, R1c y R1d se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, fluoro y cloro; R2 es: en donde: R25a R25b R25c R25d y R25e se se|ecc¡onan cac|a un0 independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, fluoro y cloro; R3 es alquilo C4-C8; R4 es hidrógeno; R5 se selecciona del grupo que consiste en: X e Y son NH, en donde el compuesto está sustancialmente libre de otro u otros estereoisómeros, o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En algunas realizaciones, R5 se selecciona del grupo que consiste en: En algunas realizaciones, se proporcionan compuestos que tienen la Fórmula XXXV: en donde: R1 y R1c se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, fluoro y cloro; R3 es alquilo C4-C8; y R25a, R25b y R2 c se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, fluoro y cloro, o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En algunas realizaciones, los compuestos que tienen la Fórmula XXXV están sustancialmente libres de otro u otros estereoisómeros. En algunas realizaciones, los compuestos que tienen la Fórmula XXXV son estereoisómeros sustancialmente puros. En algunas realizaciones, los compuestos que tienen la Fórmula XXXV son estereoisómeros puros. i En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos que tienen la siguiente estructura: o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En algunas realizaciones, se proporcionan compuestos que tienen la siguiente estructura: o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En algunas realizaciones, se proporcionan compuestos que tienen la siguiente estructura: o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos que tienen la siguiente estructura: o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos que tienen la siguiente estructura: o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos que tienen la siguiente estructura: o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos que tienen la siguiente estructura: o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos que tienen la siguiente estructura: o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde el compuesto está sustancialmente libre de otro u otros estereoisómeros.

En ciertas realizaciones se proporcionan compuestos que tienen la siguiente estructura: o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde el compuesto está sustancialmente libre de otro u otros estereoisómeros.

En ciertas realizaciones, se proporciona un compuesto que tiene la siguiente estructura: o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto es un estereoisómero sustancialmente puro.

En ciertas realizaciones, se proporciona un compuesto que tiene la siguiente estructura: o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto es un estereoisómero puro.

En ciertas realizaciones se proporcionan métodos para preparar un compuesto que tiene la Fórmula XXXVII: en donde: R32 se selecciona del grupo que consiste en -OR33 y -NR34aR34b; R33se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo y aralquilo; R34a se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, aralquilo, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido; R34b se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo; R1a, R1b, R1c y R1d se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, fluoro y cloro; R2 se selecciona del grupo que consiste en aralquilo y: 253^ R25b^ R25C j R25d y R25e se se|ecc¡onan cac|a un0 independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, fluoro y cloro; y R3 se selecciona del grupo que consiste en alquilo C^Ca opcionalmente sustituido y arilo opcionalmente sustituido.

En una realización, el método para preparar un compuesto que tiene la Fórmula XXXVII comprende permitir que un compuesto que tiene la Fórmula XXXVI: XXXVI se isomerice en un compuesto que tiene la Fórmula XXXVII: XXXVII en donde R1a, R1b, R c, R d, R2, R3 y R32 tienen los significados descritos anteriormente con relación a la Fórmula XXXVII.

En una realización, el método para preparar un compuesto que tiene la Fórmula XXXVII comprende disolver un compuesto que tiene la Fórmula XXXVI: en un disolvente o una mezcla de disolventes, en donde R1a, R1 , R1c, R1d, R2, R3 y R32 tienen los significados descritos anteriormente con relación a la Fórmula XXXVII.

En una realización, el método para preparar un compuesto que tiene la Fórmula XXXVII comprende: a) disolver un compuesto que tiene la Fórmula XXXVI: en un disolvente o una mezcla de disolventes; y b) permitir que el compuesto que tiene la Fórmula XXXVI se isomerice en un compuesto que tiene la Fórmula XXXVII, en donde R1a, R1b, R1c, R1d, R2, R3 y R32 tienen los significados descritos anteriormente con relación a la Fórmula XXXVII.

En una realización, el método para preparar un compuesto que tiene la Fórmula XXXVII: comprende: a) permitir que el compuesto que tiene la Fórmula XXXVI: se isomerice en un compuesto que tiene la Fórmula XXXVII; y b) aislar el compuesto que tiene la Fórmula XXXVII sustancialmente libre del compuesto que tiene la Fórmula XXXVI y uno o más estereoisómeros diferentes, en donde R1a, R1b, R1c, R1d, R2, R3 y R32 tienen los significados descritos anteriormente con relación a la Fórmula XXXVII.

En una realización, el método para preparar un compuesto que tiene la Fórmula XXXVII: comprende: a) disolver un compuesto que tiene la Fórmula XXXVI: en un disolvente o una mezcla de disolventes; b) permitir que el compuesto que tiene la Fórmula XXXVI se isomerice en un compuesto que tiene la Fórmula XXXVII; y c) aislar el compuesto que tiene la Fórmula XXXVII sustancialmente libre del compuesto que tiene la Fórmula XXXVI y uno o más estereoisómeros diferentes, en donde R1a, R1b, R c, R1d, R2, R3 y R32 tienen los significados descritos anteriormente con relación a la Fórmula XXXVII.

En una realización, el disolvente se selecciona del grupo que consiste en acetonitrilo, metanol, acetato de etilo y agua, o una mezcla de los mismos.

En una realización, la isomerización se lleva a cabo a un pH menor que 7, por ejemplo, a un pH de aproximadamente 6, aproximadamente 5, aproximadamente 4, aproximadamente 3, aproximadamente 2, o aproximadamente 1. En una realización, la isomerización se lleva a cabo a un pH de aproximadamente 7. En una realización, la isomerización se lleva a cabo a un pH mayor que 7, por ejemplo, a un pH de aproximadamente 8, aproximadamente 9, aproximadamente 10, aproximadamente 11 , aproximadamente 12, o aproximadamente 13.

En una realización, la isomerización se lleva a cabo en presencia de un ácido, por ejemplo, ácido trifluoroacético o ácido acético.

En una realización, la isomerización se lleva a cabo en presencia de una base, por ejemplo, NaHC03.

En una realización, la isomerización se lleva a cabo a una temperatura de aproximadamente 20°C a aproximadamente 100°C, por ejemplo, a una temperatura de aproximadamente 25°C a aproximadamente 70°C, por ejemplo, a una temperatura de aproximadamente 45°C a aproximadamente 65°C. En una realización, la isomerización se lleva a cabo a aproximadamente temperatura ambiente, por ejemplo, a aproximadamente 25°C. En una realización la isomerización se lleva a cabo a una temperatura superior a la temperatura ambiente, por ejemplo, a aproximadamente 30°C, aproximadamente 35°C, aproximadamente 40°C, aproximadamente 45°C, aproximadamente 50°C, aproximadamente 55°C, aproximadamente 60°C, aproximadamente 65°C, aproximadamente 70°C, aproximadamente 75°C, aproximadamente 80°C, aproximadamente 85°C, aproximadamente 90°C, aproximadamente 95°C, o aproximadamente 100°C.

En una realización, la isomerización se lleva a cabo aproximadamente durante un período de tiempo entre aproximadamente 0,5 horas y aproximadamente 2 semanas, por ejemplo, durante aproximadamente 1 hora, aproximadamente 3 horas, aproximadamente 6 horas, aproximadamente 12 horas, aproximadamente 1 día, aproximadamente 2 días, aproximadamente 3 días, aproximadamente 4 días, aproximadamente 5 días, aproximadamente 6 días, o aproximadamente 1 semana. El período de tiempo que se necesita para que se produzca la isomerización puede depender de una variedad de factores que incluyen la estructura química de la Fórmula XXXVI, el o los disolventes, la temperatura y/o el PH- En una realización, R32 es -OR33.

En una realización, R32 es -NR34aR34b.

En una realización, R34b es hidrógeno y R34a se selecciona del grupo que consiste en alquilo, hidroxialquilo, hidroxicicloalquilo, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido.

En una realización, R3 b es hidrógeno y R3 a se selecciona del grupo que consiste en.

En una realización, el compuesto que tiene la Fórmula XXXVII se aisla como un estereoisómero sustancialmente puro. En una realización, el compuesto que tiene la Fórmula XXXVII se aisla como un estereoisómero puro.

En una realización, R32 es -NR34aR3 b; 334a es: R es hidrógeno; R2 es: R3 es alquilo C C8.

En una realización, se proporciona un método para preparar MI-77301 que comprende permitir que MI-773 se isomerice en MI-77301.

En una realización, se proporciona un método para preparar MI-77301 que comprende: a) permitir que I-773 se isomerice en MI-77301 ; y b) aislar MI-77301 sustancialmente libre de otro u otros estereoisómeros.

En una realización, se proporciona un método para preparar MI-77301 que comprende: a) disolver MI-773 en un disolvente o una mezcla de disolventes; b) permitir que MI-773 se isomerice en MI-77301 ; y c) aislar MI-77301 sustancialmente libre de otro u otros estereoisómeros.

Los compuestos y procesos proporcionados en la presente se comprenderán mejor con relación a los siguientes esquemas sintéticos que ilustran los métodos mediante los cuales pueden prepararse los compuestos proporcionados en la presente. Los materiales de partida pueden obtenerse de fuentes comerciales o prepararse mediante métodos bien establecidos en la bibliografía conocidos para los expertos en la técnica. Será fácilmente evidente para el experto en la técnica que los compuestos definidos anteriormente pueden sintetizarse mediante sustitución de los reactivos y agentes apropiados en las síntesis que figuran a continuación.

Los compuestos de Fórmula la en donde Y es NH pueden sintetizarse como se describe en los Esquemas 2 y 3.

Esquema 2 Fórmula la (en donde Y es NH) Fórmula la (en donde Y es NH) Los compuestos de Fórmula la pueden separarse mediante métodos de resolución quiral bien conocidos en la técnica, por ejemplo, cromatografía en columna quiral, para proporcionar los compuestos de Fórmulas ll-XVIl. Columnas quirales adecuadas para su uso en resoluciones quirales incluyen, por ejemplo, las columnas quirales Daicel CHIRALCEL® OD-H, Daicel CHIRAKPAK® AD-H y Regís Technologies ULMO. Otros métodos de resolución quiral también son posibles. Los compuestos de las Fórmulas ll-XVIl también pueden prepararse mediante métodos sintéticos asimétricos. Por ejemplo, los compuestos de Fórmula II, en donde Y es NH, pueden sintetizarse mediante la utilización de una cicloadición 1 ,3-dipolar asimétrica como la etapa clave tal como se describió previamente (ver las Patentes de los Estados Unidos Nos. 7.759.383 B2 y 7.737.174 B2 y Ding et al., J. Am. Chem. Soc. Í27:10130-10131 (2005)) (Esquema 4).

Esquema 4 F Fórmula II (en donde Y = NH) Reactivos y condiciones: a) CH2CI2-CH3CN, KF-AI203, microondas o reflujo con metanol o piperidina; b) tamices moleculares de 4Á, tolueno, 70°C; c) HNR4R5, t.a.; d) Pb(OAc)4, CH2CI2-MeOH (1 :1 ), 0°C, o nitrato de amonio cérico (IV) (CAN), CH3CN, K2C03, t.a.

Brevemente, el compuesto A reacciona con el aldehido B para proporcionar C. El compuesto C reacciona con el aldehido E y el compuesto D para proporcionar F (un compuesto de Fórmula I en donde R" es aralquilo). El tratamiento de F con Pb(OAc)4 o CAN proporciona el compuesto de Fórmula II en donde Y es NH.

Los compuestos de Fórmula XII pueden prepararse mediante isomerización de los compuestos de Fórmula II. Sin pretender ceñirse a teoría alguna, la isomerización en un compuesto que tiene la Fórmula II a un compuesto que tiene la Fórmula XII (y otros isómeros, incluidos compuestos que tienen la Fórmula VI) pueden implicar la formación del intermediario imina que se muestra en el Esquema 5. Los compuestos de Fórmula XII tienen menos probabilidades de isomerizarse, es decir, pueden ser químicamente más estables que los compuestos de Fórmula II.

Esquema 5 + otros isómeros intermediario imina Métodos En algunas realizaciones, los compuestos proporcionados en la presente inducen la detención del ciclo celular y/o la apoptosis y también potencian la inducción de la detención del ciclo celular y/o la apoptosis, ya sea solo o en respuesta a señales de inducción de apoptosis adicionales. Por lo tanto, se prevé que estos compuestos sensibilicen las células a la inducción de la detención del ciclo celular y/o la apoptosis, incluidas células que son resistentes a dichos estímulos de inducción. Al inhibir la interacción entre p53 o proteínas relacionadas con p53 y MDM2 o proteínas relacionadas con MDM2, los compuestos proporcionados en la presente pueden utilizarse para inducir al apoptosis en cualquier trastorno que pueda tratarse, mejorarse 0 prevenirse mediante la inducción de la apoptosis. En una realización, los inhibidores pueden usarse para inducir la apoptosis en células que comprenden p53 o proteínas relacionadas con p53 funcionales.

En otra realización, la divulgación se refiere a modular la apoptosis con compuestos proporcionados en la presente en combinación con uno o más agentes moduladores de la apoptosis adicionales. Ejemplos de agentes moduladores de la apoptosis incluyen, a modo no taxativo, Fas/CD95, TRAMP, TNF Rl, DR1 , DR2, DR3, DR4, DR5, DR6, FADD, RIP, TNFa, ligando Fas, TRAIL, anticuerpos contra TRAIL-R1 o TRAIL-R2, Bcl-2, p53, BAX, BAD, Akt, CAD, quinasa PI3, PP1 y proteínas caspasas. También se incluyen otros agentes que participan en la etapa de inicio, decisión y degradación de la apoptosis. Ejemplos de agentes que modulan la apoptosis incluyen agentes cuya actividad, presencia o cambio en la concentración pueden modular la apoptosis en un sujeto. Los agentes moduladores de la apoptosis incluyen aquellos que son inductores de la apoptosis, tales como TNF o un ligando relacionado con TNF, en particular un ligando TRAMP, un ligando Fas/CD95, un ligando TNFR- 1 o TRAIL.

En algunas realizaciones, los compuestos, composiciones y métodos proporcionados en la presente, incluidos los métodos que comprenden la administración de dosis pulsátiles, se utilizan para tratar células, tejidos, órganos enfermos o afecciones patológicas y/o estados de enfermedad en un animal (por ejemplo, un paciente mamífero incluidos, a modo no taxativo, humanos y animales del área veterinaria). En este sentido, varias enfermedades y patologías pueden tratarse o prevenirse utilizando los métodos y composiciones de la presente. Una lista ejemplar no taxativa de estas enfermedades y afecciones incluye, a modo no taxativo, cáncer de mama, cáncer de próstata, linfoma, cáncer de piel, cáncer pancreático, cáncer de colon, melanoma, melanoma maligno, cáncer de ovario, cáncer de cerebro, carcinoma dé cerebro primario, cáncer de cabeza y cuello, glioma, glioblastoma, cáncer de hígado, cáncer de vejiga, cáncer de pulmón de célula no pequeña, carcinoma de cabeza y cuello, carcinoma de mama, carcinoma de ovario, pulmón carcinoma, carcinoma de pulmón de células pequeñas, tumor de Wilm, carcinoma cervical, carcinoma testicular, carcinoma de vejiga, carcinoma pancreático, carcinoma de estómago, carcinoma de colon, carcinoma prostético, carcinoma genitourinario, carcinoma de tiroides, carcinoma esofágico, mieloma, mieloma múltiple, carcinoma adrenal, carcinoma de células renales, carcinoma de endometrio, carcinoma de la corteza adrenal, insulinoma pancreático maligno, carcinoma carcinoide maligno, coriócarcinoma, micosis fungoide, hipercalcemia maligna, hiperplasia cervical, leucemia, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfocítica crónica (CLL) incluida CLL-B, leucemia mielógena aguda, leucemia mielógena crónica, leucemia granulocítica crónica, leucemia granulocítica aguda, leucemia de células pilosas, neuroblastoma, sarcoma tal como liposarcoma, histiocitoma fibroso maligno, osteosarcoma, sarcoma de Ewing, leiomiosarcoma y rabdomiosarcoma, sarcoma de Kaposi, policitemia vera, trombocitosis esencial, enfermedad de Hodgking, linfoma de no Hodgking, sarcomas de tejido blando tales como lipoma y schwannoma maligno, sarcoma osteogénico, macroglobulinemia primaria y retinoblastoma y similares, enfermedades autoinmunes mediadas por células T y B; enfermedades inflamatorias; infecciones; enfermedades hiperproliferativas; SIDA; afecciones degenerativas, enfermedades vasculares y similares. En algunas realizaciones, las células cancerosas que están siendo tratadas son metastásicas. En otras realizaciones, las células cancerosas que están siendo tratadas son resistentes a otros agentes anticáncer.

En algunas realizaciones, los compuestos, composiciones y métodos proporcionados en la presente, incluidos los métodos que comprenden la administración de dosis pulsátiles, se utilizan para tratar, mejorar o prevenir un cáncer que se selecciona del grupo que consiste en melanoma, cáncer de pulmón, un sarcoma, cáncer de colon, cáncer de próstata, coriócarcinoma, cáncer de mama, retinoblastoma, carcinoma de estómago, leucemia mieloide aguda, un linfoma, mieloma múltiple y una leucemia en un paciente.

En algunas realizaciones, los compuestos, composiciones y métodos proporcionados en la presente, incluidos los métodos que comprenden la administración de dosis pulsátiles, se utilizan para tratar, mejorar o prevenir melanoma en un paciente.

En algunas realizaciones, los compuestos, composiciones y métodos proporcionados en la presente, incluidos los métodos que comprenden la administración de dosis pulsátiles, se utilizan para tratar, mejorar o prevenir liposarcoma en un paciente.

En algunas realizaciones, los compuestos, composiciones y métodos proporcionados en la presente, incluidos los métodos que comprenden la administración de dosis pulsátiles, se utilizan para tratar cánceres que expresan p53 o proteínas relacionadas con 53 funcionales o de tipo silvestre. En algunas realizaciones, los compuestos, composiciones y métodos proporcionados en la presente se utilizan para tratar cánceres que expresan niveles elevados de MDM2 o proteínas relacionadas con MDM2.

En algunas realizaciones, los métodos, compuestos y composiciones proporcionados en la presente, incluidos los métodos que comprenden la administración de dosis pulsátiles, pueden utilizarse para tratar un paciente que tiene un sarcoma, incluidos, por ejemplo, liposarcoma, histiocitoma fibroso maligno, osteosarcoma y rabdomiosarcoma. En algunas realizaciones, los métodos, compuestos y composiciones proporcionados en la presente, incluidos los métodos que comprenden la administración de dosis pulsátiles, pueden utilizarse para tratar un paciente que tiene un tumor de tejido blando, incluidos, por ejemplo, sarcoma de Ewing, leiomiosarcoma, lipoma y schwannomas malignos. En algunas realizaciones, los métodos, compuestos y composiciones proporcionados en la presente, incluidos los métodos que comprenden la administración de dosis pulsátiles, pueden utilizarse para tratar un paciente que tiene cáncer de pulmón, mama, hígado o colon. En algunas realizaciones, los métodos, compuestos y composiciones proporcionados en la presente, incluidos los métodos que comprenden la administración de dosis pulsátiles, pueden utilizarse para tratar un paciente que tiene leucemia linfocítica crónica de células B y leucemia mieloide aguda.

En algunas realizaciones, infecciones adecuadas para el tratamiento con los compuestos, composiciones y métodos proporcionados en la presente incluyen, a modo no taxativo, infecciones causadas por virus, bacterias, hongos, micoplasma, priones y similares.

En algunas realizaciones, se proporcionan métodos, incluidos los métodos que comprenden la administración de dosis pulsátiles, para administrar una cantidad efectiva de un compuesto o composición proporcionados en la presente y al menos un agente terapéutico adicional (incluidos, a modo no taxativo, antineoplásicos quimioterapéuticos, agentes moduladores de la apoptosis, antimicrobianos, antivirales, antifunguicidas y agentes antiinflamatorios) y/o una técnica terapéutica (por ejemplo, intervención quirúrgica y/o radioterapias). En una realización particular, el o los agentes terapéuticos adicionales son un agente anticáncer.

Se contemplan un número de agentes terapéuticos o anticáncer para su uso en los métodos proporcionados en la presente, incluidos los métodos que comprenden la administración de dosis pulsátiles. Ciertamente, los métodos proporcionados en la presente pueden incluir a modo no taxativo, administración de numerosos agentes terapéuticos tales como: agentes que inducen apoptosis; polinucleótidos (por ejemplo, anti-sentido, ribózimas, ARNip); polipéptidos (por ejemplo, enzimas y anticuerpos); miméticos biológicos (por ejemplo, gosipol o miméticos de BH3); agentes que se unen (por ejemplo, oligomerizan o forman un complejo) con una proteina de la familia Bcl-2 tal como Bax; alcaloides; agentes alquilantes; antibióticos antitumorales; antimetabolitos; hormonas; compuestos de platino; anticuerpos monoclonales o policlonales (por ejemplo, anticuerpos conjugados con fármacos anticáncer, toxinas, defensinas), toxinas; radionucleidos; modificadores de la respuesta biológica (por ejemplo, interferones (por ejemplo, IFN-a) e interleuquinas (por ejemplo, IL-2)); agentes de inmunoterapia adoptiva; factores de crecimiento hematopoyéticos; agentes que inducen la diferenciación celular tumoral (por ejemplo, ácido todo-trans-retinoico); reactivos de terapia de genes (por ejemplo, reactivos de terapia y nucleótidos antisentido); vacunas tumórales; inhibidores de la angiogénesis; inhibidores de proteosoma: moduladores de NF-KB; compuestos anti-CDK; inhibidores de HDAC; y similares. Otros numerosos ejemplos de agentes terapéuticos tales como compuestos quimioterapéuticos y terapias anticáncer adecuados para la administración conjunta con los compuestos descritos son conocidos por los expertos en la técnica.

En ciertas realizaciones, los agentes anticáncer comprenden agentes que inducen o estimulan la apoptosis. Agentes que inducen o estimulan la apoptosis incluyen, por ejemplo, agentes que interactúan con el ADN o lo modifican, por ejemplo, intercalando, reticulando, alquilando o de otra forma dañando o modificando químicamente el ADN. Agentes que inducen la apoptosis incluyen, a modo no taxativo, radiación (por ejemplo, rayos X, rayos gamma, UV); factores relacionados con el factor de necrosis tumoral (TN F) (por ejemplo, proteínas receptoras de la familia del TNF, ligandos de la familia del TNF, TRAIL, anticuerpos para TRAIL-R1 o TRAIL-R2); inhibidores de quinasa (por ejemplo, el inhibidor de quinasa del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR)). Agentes anticáncer adicionales incluyen: inhibidor de quinasa del receptor del factor de crecimiento vascular (VGFR), inhibidor de quinasa del receptor del factor de crecimiento de fibroblastos (FGFR), inhibidor de quinasa del receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGFR) e inhibidores de quinasa de Bcr-Abl (tal como GLEEVEC)); moléculas antisentido; anticuerpos (por ejemplo, HERCEPTIN, RITUXAN, ZEVALIN y AVASTIN); anti-estrógenos (por ejemplo, raloxifeno y tamoxifeno); anti-andrógenos (por ejemplo, flutamida, bicalutamida, finasterida, aminoglutetamida, ketoconazol y corticosteroides); inhibidores de ciclooxigenasa 2 (COX-2) (por ejemplo, celecoxib, meloxicam, NS-398 y fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINEs)); fármacos antiinflamatorios (por ejemplo, butazolidina, DECADRON, DELTASONE, dexametasona, dexametasona ¡ntensol, DEXONE, HEXADROL, hidroxiclóroquina, METICORTEN, ORADEXON, ORASONE, oxifenobutazona, PEDIAPRED, fenilbutazona, PLAQUENIL, prednisolona, prednisona, PRELONA y TANDEARIL); y fármacos quimioterapéuticos anticáncer (por ejemplo, irinotecán (CAMPTOSAR), CPT-11 , fludarabina (FLUDARA), dacarbazina (DTIC), dexametasona, mitoxantrona, MILOTARG, VP-16, cisplatina, Carboplatina, oxaliplatina, 5-FU, doxorrubicina, gemcitabina, bortezomib, gefitinib, bevacizumab, TAXOTERE o TAXOL); moléculas de señalización celular; ceramidas y citoquinas; estaurosporina y similares.

Aun en otras realizaciones, las composiciones y métodos proporcionados en la presente, incluidos los métodos que comprenden la administración de dosis pulsátiles, incluyen uno o más compuestos proporcionados en la presente y al menos un agente anti-hiperproliferativo o antineoplásico que se selecciona de agentes alquilantes, antimetabolitos y productos naturales (por ejemplo, compuestos derivados de hierbas y otras plantas y/o animales).

Agentes alquilantes adecuados para su uso en las composiciones y métodos de la presente incluyen, a modo no taxativo: 1 ) mostazas de nitrógeno (por ejemplo, mecloretamina, ciclofosfamida, ifosfamida, melfalán (L-sarcolisina); y clorambucil); 2) etileniminas y metilmelaminas (por ejemplo, hexametilmelamina y tiotepa); 3) sulfonatos de alquilo (por ejemplo, busulfán); 4) nitrosoureas (por ejemplo, carmustina (BCNU); lomustina (CCNU); semustina (metil-CCNU); y estreptozocina (estreptozotocina)); y 5) triazenos (por ejemplo, dacarbazina (DTIC; dimetiltriazenoimid-azolcarboxamida).

En algunas realizaciones, antimetabolitos adecuados para su uso en las composiciones y métodos de la presente incluyen, a modo no taxativo: 1 ) análogos de ácido fólico (por ejemplo, metotrexato (ametopterina)); 2) análogos de pirimidina (por ejemplo, fluorouracilo (5-fluorouracilo; 5-FU), floxuridina (fluorode-oxiuridina; FudR) y citarabina (arabinósido de citosina)); y 3) análogos de purina (por ejemplo, mercaptopurina (6-mercaptopurina; 6-MP), tioguanina (6-tioguanina; TG) y pentostatina (2'-desoxicoformicina)).

En otras realizaciones adicionales, agentes quimioterapéuticos adecuados para su uso en las composiciones y métodos de la presente divulgación incluyen, a modo no taxativo: 1) alcaloides de la vinca (por ejemplo, vinblastina (VLB), vincristina); 2) epipodofillotoxinas (por ejemplo, etopósido y tenipósido); 3) antibióticos (por ejemplo, dactinomicina (actinomicina D), daunorrubicina (daunomicina; rubidomicina), doxorrubicina, bleomicina, plicamicina (mitramicina) y mitomicina (mitomicina C)); 4) enzimas (por ejemplo, L-asparaginasa); 5) modificadores de la respuesta biológica (por ejemplo, interferón-alfa); 6) complejos coordinadores de platino (por ejemplo, cisplatina (cis-DDP) y Carboplatina); 7) antracenodionas (por ejemplo, mitoxantrona); 8) ureas sustituidas (por ejemplo, hidroxiurea); 9) derivados de metilhidrazina (por ejemplo, procarbazina (N-metilhidrazina; MIH)); 10) supresores adrenocorticales (por ejemplo, mitotano (?,?'-DDD) y aminoglutetimida); 1 1) adrenocorticosteroides (por ejemplo, prednisona); 12) progestinas (por ejemplo, caproato de hidroxiprogesterona, acetato de medroxiprogesterona y acetato de megestrol); 13) estrógenos (por ejemplo, dietilstilbestrol y estradiol de etinilo); 14) antiestrógenos (por ejemplo, tamoxifeno); 15) andrógenos (por ejemplo, propionato de testosterona y fluoximesterona); 16) antiandrógenos (por ejemplo, flutamida): y 17) análogos de la hormona liberadora de gonadotrofina (por ejemplo, leuprolida).

Cualquier agente oncolítico que se utiliza rutinariamente en el contexto de una terapia contra el cáncer puede utilizarse en las composiciones y métodos de la presente divulgación. Por ejemplo, La Administración de Alimentos y Fármacos de los Estados Unidos (FDA) tiene un vademécum de agentes oncolíticos aprobados para su uso en los Estados Unidos. Otras agencias internacionales equivalentes a la FDA tienen vademécums similares. La Tabla 1 proporciona una lista de agentes antineoplásicos ejemplares aprobados para su uso en los Estados Unidos. Los expertos en la técnica apreciarán que las "etiquetas de los productos" exigidas en todos los productos quimioterapéuticos aprobados en los Estados Unidos deberán describir las indicaciones aprobadas, información acerca de la dosificación, datos sobre toxicidad y similares para los agentes ejemplares.

Tabla 1 Adicionalmente agentes anticáncer incluyen compuestos que han sido identificados como compuestos que tienen actividad anticáncer. Ejemplos incluyen, a modo no taxativo, 3- AP, 12-0-tetradecanoilforbol-13-acetato, 17AAG, 852A, ABI-007, ABR-217620, ABT-751 , ADI-PEG 20, AE-941 , AG-013736, AGRO100, alanosina, AMG 706, anticuerpo G250, antineoplastones, AP23573, apazicuona, APC8015, atiprimod, ATN-161 , atrasentén, azacitidina, BB-10901 , BCX-1777, bevacizumab, BG00001 , bicalutamida, BMS 247550, bortezomib, briostatina-1 , buserelina, calcitriol, CCI-779, CDB-2914, cefixima, cetuximab, CG0070, cilengitida, clofarabina, fosfato de combretastatina A4, CP-675,206, CP-724,714, CpG 7909, curcumina, decitabina, DENSPM, doxercalciferol, E7070, E7389, ecteinascidina 743, efaproxiral, eflornitina, EKB-569, enzastaurina, erlotinib, exisulind, fenretinida, flavopiridol, fludarabina, flutamida, fotemustina, FR901228, G17DT, galiximab, gefitinib, genisteina, glufosfamida, GTI-2040, histrelina, HQUI-272, homoharringtonina, HSPPC-96, proteína de fusión hu14.18-interleuquina-2, HuMax-CD4, iloprost, imiquimod, infliximab, interleuquina-12, IPI-504, irofulvén, ixabepilona, lapatinib, lenalidomida, lestaurtinib, leuprolida, LMB-9 inmunotoxina, lonafarnib, luniliximab, mafosfamida, MB07133, MDX-010, MLN2704, anticuerpo monoclonal 3F8, anticuerpo monoclonal J591 , motexafina, MS-275, MVA-MUC1-IL2, nilutamida, nitrocamptotecina, nolatrexed diclorhidrato, nolvadex, NS-9, 06-bencilguanina, oblimersen sódico, ONYX-015, oregovomab, OSI-774, panitumumab, paraplatina, PD-0325901 , pemetrexed, PHY906, pioglitazona, pirfenidona, pixantrona, PS-341 , PSC 833, PXD101 , pirazoloacridina, R115777, RAD001 , ranpirnasa, análogo de rebeccamicina, proteína rhuAngiostatina, rhuMab 2C4, rosiglitazona, rubitecán, S-1 , S-8184, satraplatina, SB-, 15992, SGN-0010, SGN-40, sorafenib, SR31747A, ST1571 , SU011248, ácido hidroxámico suberoilanilida, suramina, talabostat, talampanel, tariquidar, temsirolimus, inmunotoxina TGFa-PE38, talidomida, timalfasina, tipifarnib, tirapazamina, TLK286, trabectedina, glucuronato de trimetrexato, TroVax, UCN-1 , ácido valproico, vinflunina, VNP40101 M, volociximab, vorinostat, VX-680, ZD1839, ZD6474, zileutón y triclorhidrato de zosuquidar.

Para una descripción más detallada de agentes anticáncer y otros agentes terapéuticos se remite a los expertos en la técnica a cualquiera de los distintos manuales ilustrativos, entre los que se incluyen, a modo no taxativo, el Physician's Desk Reference y "Pharmaceutical Basis of Therapeutics" de Goodman y Gilman, décima edición, Eds. Hardman ef al., 2002.

En algunas realizaciones, los métodos proporcionados en la presente, incluidos los métodos que comprenden la administración de dosis pulsátiles, comprenden administrar uno o más compuestos proporcionados en la presente con terapia de radiación. Los métodos proporcionados en la presente no están limitados por los tipos, las cantidades ni los sistemas de administración usados para administrar la dosis terapéutica de radiación a un animal. Por ejemplo, el animal puede recibir radioterapia con fotones, terapia de radiación con haces de partículas, otros tipos de radioterapias y combinaciones de las mismas. En algunas realizaciones, la radiación se administra al animal utilizando un acelerador lineal. En otras realizaciones, la radiación se administra utilizando un bisturí de rayos gamma.

La fuente de radiación puede ser externa o interna con respecto al animal. La terapia de radiación externa es la más común e implica dirigir un haz de radiación de alta energía al sitio del tumor a través de la piel utilizando, por ejemplo, un acelerador lineal. Si bien el haz de la radiación se enfoca en el sitio del tumor, es casi imposible evitar la exposición de tejido normal saludable. Sin embargo, la radiación externa es comúnmente bien tolerada por los animales. La terapia de la radiación interna implica implantar una fuente emisora de radiación, tal como perlas, cables, gránulos, cápsulas, partículas y similares, dentro del cuerpo en o cerca del sitio del tumor e incluye el uso de sistemas de administración que apuntan específicamente a las células cancerosas (por ejemplo, utilizando partículas unidas a ligandos que se unen a las células cancerosas). Dichos implantes pueden retirarse después del tratamiento o pueden dejarse inactivos en el cuerpo. Los tipos de terapia de radiación interna incluyen, a modo no taxativo, braquiterapia, radiación intersticial, radiación intracavitaria, radioinmunoterapia y similares.

El animal opcionalmente puede recibir radiosensibilizadores (por ejemplo, metronidazol, misonidazol, Budr intraarterial, yododesoxiuridina intravenosa (ludR), nitroimidazol, 4-nitroimidazoles 5-sustituidos, 2H-isoindoldionas, [[(2-bromoetil)-amino]metil]-nitro-1 H-imidazol-1-etanol, derivados de nitroanilina, citotoxinas selectivas en hipoxia afines al ADN, ligando de ADN halogenado, óxidos de 1 ,2,4-benzotriazina, derivados de 2-nitroimidazol, derivados de nitroazol que contienen flúor, benzamida, nicotinamida, intercalador de acridina, derivado de 5-tiotretrazol, 3-nitro-1 ,2,4-triazol, derivado de 4,5-dinitroimidazol, texafrinas hidroxiladas, cisplatina, mitomicina, tiripazamina, nitrosourea, mercaptopurina, metotrexato, fluorouracilo, bleomicina, vincristina, Carboplatina, epirrubicina, doxorrubicina, ciclofosfamida, vindesina, etopósido, paclitaxel, calor (hipertermia) y similares), radioprotectores (por ejemplo, cistamina, fosforotioatos de dihidrógeno de aminoalquilo, amifostina (WR 2721), IL-1 , IL-6 y similares). Los radiosensibilizadores mejoran la muerte de las células tumorales. Los radioprotectores protegen el tejido sano de los efectos dañinos de la radiación.

Puede administrarse cualquier tipo de radiación a un animal, en la medida en que la dosis de la radiación sea tolerable para el animal sin efectos secundarios negativos inaceptables. Tipos adecuados de radioterapia incluyen, por ejemplo, radioterapia ionizante (electromagnética) (por ejemplo, rayos X o rayos gamma) o terapia de radiación con haces de partículas (por ejemplo, radiación de alta energía lineal). La radiación ionizante se define como la radiación que comprende partículas o fotones que tienen suficiente energía para ¡producir ionización, es decir, ganancia o pérdida de electrones (como se describe en, por ejemplo, el documento U.S. 5.770.581 que se incorpora a la presente a modo de referencia en su totalidad). Los efectos de la radiación pueden ser controlados al menos parcialmente por el médico. En una realización, la dosis de la radiación se fracciona para lograr una máxima exposición de las células objetivo y una toxicidad reducida.

En una realización, la dosis total de la radiación administrada a un animal es aproximadamente ,01 Gray (Gy) a aproximadamente 100 Gy. En otra realización, aproximadamente 10 Gy a aproximadamente 65 Gy (por ejemplo, aproximadamente 15 Gy, 20 Gy, 25 Gy, 30 Gy, 35 Gy, 40 Gy, 45 Gy, 50 Gy, 55 Gy o 60 Gy) se administran durante el curso del tratamiento. Mientras en algunas realizaciones una dosis completa de la radiación puede administrarse durante el curso de un día, la dosis total de forma ideal se fracciona y administra durante varios días. De forma deseable, la radioterapia se administra durante el curso de al menos aproximadamente 3 días, por ejemplo, al menos 5, 7, 10, 14, 17, 21 , 25, 28, 32, 35, 38, 42, 46, 52 o 56 días (aproximadamente 1-8 semanas). Por lo tanto, una dosis diaria de la radiación comprenderá aproximadamente 1-5 Gy (por ejemplo, aproximadamente 1 Gy, 1 ,5 Gy, 1 ,8 Gy, 2 Gy, 2,5 Gy, 2,8 Gy, 3 Gy, 3,2 Gy, 3,5 Gy, 3,8 Gy, 4 Gy, 4,2 Gy o 4,5 Gy), o 1-2 Gy (por ejemplo, 1 ,5-2 Gy). La dosis diaria de la radiación deberá ser suficiente para inducir la destrucción de las células objetivo. Si se prolonga en el tiempo, en una realización, la radiación no se administra todos los días, permitiendo de este modo que el animal descansé y se produzcan los efectos de la terapia. Por ejemplo, la radiación de forma deseable se administra 5 días consecutivos y no se administra durante 2 días, por cada semana de tratamiento, permitiendo de este modo 2 días de descanso por semana. Sin embargo, la radiación puede administrarse 1 día/semana, 2 días/semana, 3 días/semana, 4 días/semana, 5 días/semana, 6 días/semana o los 7 días/semana, dependiendo de la respuesta del animal y los efectos secundarios potenciales. La terapia de la radiación puede iniciarse en cualquier momento del período terapéutico. En una realización, la radiación se inicia en la semana 1 o la semana 2 y se administra durante lo que reste del período terapéutico. Por ejemplo, la radiación se administra en las semanas 1-6 o en las semanas 2-6 de un período terapéutico que comprende 6 semanas para el tratamiento de, por ejemplo, un tumor sólido. De forma alternativa, la radiación se administra en las semanas 1-5 o en las semanas 2-5 de un período terapéutico que comprende 5 semanas. Estos esquemas ejemplares de administración de radioterapia administración no pretenden, sin embargo, limitar los métodos proporcionados en la presente.

También pueden utilizarse agentes terapéuticos antimicrobianos como agentes terapéuticos en combinación con los compuestos proporcionados en la presente. Puede utilizarse cualquier agente que pueda matar, inhibir o, de otra forma, atenuar la función de los organismos microbianos, así como cualquier agente que se prevea que tenga dichas actividades. Los agentes antimicrobianos incluyen, a modo no taxativo, antibióticos naturales y sintéticos, anticuerpos, proteínas inhibidoras (por ejemplo, defensinas), ácidos nucleicos antisentido, agentes de alteración de las membranas y similares, utilizados solos o en combinación. Ciertamente, puede utilizarse cualquier tipo de antibiótico incluidos, a modo no taxativo, agentes antibacterianos, agentes antivirales, agentes antifúngicos y similares.

En algunas realizaciones de los métodos proporcionados en la presente, unb o más compuestos proporcionados en la presente y uno o más agentes terapéuticos o agentes anticáncer se administran a un animal en una o más de las siguientes condiciones: con diferente periodicidad, con diferentes duraciones, con diferentes concentraciones, mediante diferentes rutas de administración, etc. En algunas realizaciones, el compuesto se administra antes del agente terapéutico o anticáncer, por ejemplo, 0,5, 1 , 2, 3, 4, 5, 0, 12 o 18 horas, 1 , 2, 3, 4, 5, o 6 días, o 1 , 2, 3, o 4 semanas antes de la administración del agente terapéutico o anticáncer. En algunas realizaciones, el compuesto se administra después del agente terapéutico o anticáncer, por ejemplo, 0,5, 1 , 2, 3, 4, 5, 10, 12 o 18 horas, 1 , 2, 3, 4, 5, o 6 días, o 1 , 2, 3 o 4 semanas después de la administración del agente anticáncer. En algunas realizaciones, el compuesto y el agente terapéutico o anticáncer se administran conjuntamente pero con esquemas diferentes, por ejemplo, el compuesto se administra diariamente mientras que el agente terapéutico o anticáncer se administra una vez por semana, una vez cada dos semanas, una vez cada tres semanas o una vez cada cuatro semanas. En otras realizaciones, el compuesto se administra una vez por semana mientras que el agente terapéutico 0 anticáncer se administra diariamente, una vez por semana, una vez cada dos semanas, una vez cada tres semanas o una vez cada cuatro semanas.

En algunas realizaciones, las composiciones proporcionadas en la presente comprenden uno o más de los compuestos proporcionados en la presente en una cantidad que es efectiva para alcanzar el propósito buscado. Mientras las necesidades individuales varían, la determinación de los rangos óptimos de las cantidades efectivas de cada uno de los componentes se encuentra dentro del conocimiento de la técnica. Típicamente, los compuestos pueden administrarse a mamíferos, por ejemplo humanos, oralmente a una dosis de 0,0025 a 50 mg/kg, o una cantidad equivalente de la sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, por día del peso corporal del mamífero que está siendo tratado por trastornos sensibles a la inducción de la apoptosis. En una realización, aproximadamente 0,01 a aproximadamente 25 mg/kg se administra oralmente para tratar, mejorar o prevenir dichos trastornos. Para inyección intramuscular, la dosis es generalmente aproximadamente una mitad de la dosis oral. Por ejemplo, una dosis intramuscular adecuada sería aproximadamente 0,0025 a aproximadamente 25 mg/kg o de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 5 mg/kg.

La dosis oral unitaria puede comprender de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 1000 mg, por ejemplo, aproximadamente 0,1 a aproximadamente 100 mg del compuesto. La dosis oral unitaria puede administrarse uno o más veces diariamente como uno o más comprimidos o cápsulas que contienen cada uno de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 10 mg, convenientemente aproximadamente 0,25 a 50 mg del compuesto o sus solvatos.

En una formulación tópica, el compuesto puede presentarse en una concentración de aproximadamente 0,01 a 100 mg por gramo del portador. En una realización, el compuesto está presente en una concentración de aproximadamente 0,07-1 ,0 mg/ml, por ejemplo, aproximadamente 0,1-0,5 mg/ml y en una realización, aproximadamente 0,4 mg/ml.

Además de administrar el compuesto como un producto químico sin modificar, los compuestos proporcionados en la presente pueden administrarse como parte de una preparación o composición farmacéutica. En algunas realizaciones, la preparación o composición farmacéutica pueden incluir uno o más portadores, excipientes y/o auxiliares farmacéuticamente aceptables. En algunas realizaciones, el o los portadores, excipientes y/o auxiliares facilitan el procesamiento del compuesto para formar una preparación o composición que puede utilizarse farmacéuticamente. Las preparaciones, particularmente las preparaciones que pueden administrarse oralmente o tópicamente y que pueden utilizarse para un tipo de administración, tal como comprimidos, pastillas, grageas y cápsulas de liberación lenta, enjuagues bucales y lavados bucales, geles, suspensiones líquidas, enjuagues para el cabello, geles para el cabello, champúes y también preparaciones que pueden administrarse rectalmente, tales como supositorios, así como soluciones adecuadas para la administración mediante inyección, infusión intravenosa, tópicamente u oralmente, contienen de aproximadamente 0,01 a 99 por ciento, en una realización de aproximadamente 0,25 a 75 por ciento del o los compuestos activos, junto con el o los portadores, excipientes y/o auxiliares.

Las composiciones farmacéuticas proporcionadas en la presente pueden administrarse a cualquier paciente que pueda experimentar los efectos beneficiosos de los compuestos proporcionados en la presente. En primer lugar entre dichos pacientes se encuentran los mamíferos, por ejemplo, humanos, si bien los métodos y composiciones proporcionados en la presente no pretenden limitarse a ellos. Otros pacientes incluyen animales del área veterinaria (vacas, ovejas, cerdos, caballos, perros, gatos y similares).

Los compuestos y composiciones farmacéuticas de los mismos pueden administrarse a través de cualquier vía que logre el objetivo pretendido. Por ejemplo, la administración puede realizarse por vía parenteral, subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, transdérmica, bucal, intratecal, intracraneana, ¡ntranasal o tópica. De forma alternativa, o conjunta, la administración puede realizarse por vía oral. La dosificación administrada dependerá de la edad, salud y peso del paciente, el tipo de tratamiento conjunto, si lo hubiere, la frecuencia del tratamiento y la naturaleza del efecto deseado.

Las preparaciones farmacéuticas proporcionadas en la presente se fabrican mediante procesos convencionales de mezclado, granulación, fabricación de pastillas, disolución o liofilización. De esta forma, las preparaciones farmacéuticas para uso oral pueden obtenerse mediante combinación de los compuestos activos con excipientes sólidos, opcionalmente triturando la mezcla resultante y procesando una mezcla de gránulos, después de agregar agentes auxiliares adecuados, si se desea o es necesario, para obtener núcleos de comprimidos o pastillas.

Excipientes adecuados son, en particular, rellenos tales como sacáridos, por ejemplo lactosa o sacarosa, manitol o sorbitol, preparaciones de celulosa y/o fosfatos de calcio, por ejemplo trifosfato de calcio o hidrógeno fosfato de calcio, así como aglutinantes tales como pasta de almidón, utilizando, por ejemplo, almidón de maíz, almidón de trigo, almidón de arroz, almidón de papa, gelatina, tragacanto, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio y/o polivinilpirrolidona. Si se desea, pueden agregarse agentes desintegrantes tales como los almidones mencionados anteriormente y también carboximetilo-almidón, polivinilpirrolidona reticulada, agar o ácido algínico o una sal de los mismos tal como alginato de sodio. Los agentes auxiliares pueden ser agentes reguladores del flujo y lubricantes adecuados. Agentes auxiliares adecuados incluyen, por ejemplo, sílice, talco, ácido esteárico o sales de los mismos tales como estearato de magnesio o estearato de calcio y/o polietilenglicol. Se proporcionan núcleos de pastillas con recubrimientos adecuados que, si se desea, son resistentes a los jugos gástricos. Con este propósito pueden utilizarse soluciones de sacáridos concentradas que pueden contener, opcionalmente, goma arábiga, talco, polivinilpirrolidona, polietilenglicol y/o dióxido de titanio, soluciones de laca y disolventes o mezclas de disolventes orgánicos adecuados. Con el fin de proporcionar recubrimientos resistentes a los jugos gástricos se utilizan soluciones de preparaciones de celulosa adecuadas tales como ftalato de acetilcelulosa o ftalato de hidroxipropilmetilcelulosa. Pueden agregarse colorantes o pigmentos a los comprimidos o recubrimientos de las pastillas, por ejemplo, para una mejor identificación o con el fin de caracterizar combinaciones de dosis del compuesto activo.

Otras preparaciones farmacéuticas que pueden utilizarse oralmente incluyen cápsulas duras hechas de gelatina, así como cápsulas blandas selladas hechas de gelatina y un plastificante tal como glicerol o sorbitol. Las cápsulas duras pueden contener los compuestos activos en forma de gránulos que pueden mezclarse con rellenos tales como lactosa, aglutinantes tales como almidones y/o lubricantes tales como talco o estearato de magnesio y, opcionalmente, estabilizantes. En cápsulas blandas, los compuestos activos en una realización se disuelven o suspenden en líquidos adecuados tales como aceites grasos o parafina líquida. Adicionalmente, pueden agregarse estabilizantes.

Preparaciones farmacéuticas posibles que pueden utilizarse rectalmente incluyen, por ejemplo, supositorios, que consisten en una combinación de uno o más de los compuestos activos con una base de supositorio. Bases de supositorios adecuadas son, por ejemplo, triglicéridos naturales o sintéticos o hidrocarburos de parafina. Adicionalmente, también es posible utilizar cápsulas rectales de gelatina que consisten en una combinación de los compuestos activos con una base. Materiales de bases posibles incluyen, por ejemplo, triglicéridos líquidos, polietilenglicoles o hidrocarburos de parafina.

Formulaciones adecuadas para la administración parenteral incluyen soluciones acuosas del compuesto activo en forma soluble en agua, por ejemplo, sales solubles en agua y soluciones alcalinas. Adicionalmente, pueden administrarse suspensiones de los compuestos activos como suspensiones oleosas apropiadas para inyección. Vehículos o disolventes lipofílicos adecuados incluyen aceites grasos, por ejemplo, aceite de sésamo, o ésteres de ácidos grasos sintéticos, por ejemplo, oleato de etilo o triglicéridos o polietilenglicol-400. Suspensiones acuosas para inyección pueden contener sustancias que aumentan la viscosidad de la suspensión incluidos, por ejemplo, carboximetilcelulosa de sodio, sorbitol y/o dextrano. Opcionalmente, la suspensión también puede contener estabilizantes.

Las composiciones tópicas proporcionados en la presente se formulan en una realización como aceites, cremas, lociones, ungüentos y similares mediante la elección de portadores apropiados. Portadores apropiados incluyen aceites vegetales o minerales, vaselina blanca (parafina blanda blanca), grasas o aceites de cadena ramificada, grasas animales y alcohol de alto peso molecular (mayor que C 2). Los portadores pueden ser aquellos en los que el ingrediente activo es soluble. También pueden incluirse emulsificantes, estabilizantes, humectantes y antioxidantes así como agentes que imparten color o fragancia, si se desea. Adicionalmente, pueden utilizarse mejoradores de la penetración transdérmica en estas formulaciones tópicas. Ejemplos de dichos mejoradores pueden encontrarse en las Patentes de los Estados Unidos Nos. 3.989.816 y 4.444.762.

Los ungüentos pueden formularse mezclando una solución del ingrediente activo en un aceite vegetal, tal como aceite de almendras, con parafina blanda tibia y permitiendo que la mezcla se enfríe. Un ejemplo típico de dicho ungüento es uno que incluye aproximadamente 30% de aceite de almendras y aproximadamente 70% de parafina blanda blanca en peso. Las lociones pueden prepararse de forma conveniente disolviendo el ingrediente activo en un alcohol de alto peso molecular adecuado tal como propilenglicol o polietilenglicol.

En una realización, la presente divulgación se refiere a métodos de tratamiento de un paciente con una enfermedad hiperproliferativa, por ejemplo, cáncer, comprendiendo dichos métodos la administración pulsátil al paciente de uno o más compuestos o composiciones proporcionados en la presente, o sales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos.

Los siguientes Ejemplos ilustran, a modo no taxativo, los compuestos, composiciones y métodos proporcionados en la presente. Otras modificaciones y adaptaciones adecuadas de la variedad de condiciones y parámetros normalmente encontrados en la terapia clínica y que serán evidentes para los expertos en la técnica se encuentran dentro del espíritu y del alcance de los métodos, compuestos y composiciones proporcionados en la presente.

En ciertos aspectos, se proporcionan las siguientes realizaciones: Realización I: Un método para tratar, prevenir o mejorar un cáncer en un paciente, en donde el método comprende la administración pulsátil al paciente de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto que tiene la Fórmula XII: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: R1a, R1 , R1c y R1d se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, fluoro y cloro; R2 es: en donde: R6a, R6b, R6c, RM y R6e se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, fluoro y cloro; R3 es alquilo C Ce opcionalmente sustituido; R4 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo d-C6 opcionalmente sustituido; R5 se selecciona del grupo que consiste en: en donde: R7 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido; X se selecciona del grupo que consiste en O, S y NR ; Y se selecciona del grupo que consiste en O, S y NR "; R' se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido; y R se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido, en donde el compuesto está sustancialmente libre de otro u otros estereoisómeros.

Realización II: El método de la Realización I, en donde R4 es hidrógeno, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Realización III: El método de la Realización I, en donde X es NH, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Realización IV: El método de la Realización I, en donde Y es NH, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Realización V: El método de la Realización I, en donde R3 es -CH2C(CH3)3, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Realización VI: El método de la Realización I, en donde R5 se selecciona del grupo que consiste en: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Realización VII. El método de la Realización I, en donde: R1a es hidrógeno; R1b, R1° y R1d se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, fluoro y cloro; R3 es alquilo C4-C8; R4 es hidrógeno; Rs se selecciona del grupo que consiste en: X e Y son NH; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Realización VIII: El método de las Realizaciones VI o VII, en donde R5 se selecciona del grupo que consiste en: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Realización IX: El método de la Realización I, en donde el compuesto de Fórmula XII se selecciona del grupo que consiste en: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Realización X: El método de la Realización I, en donde el compuesto de Fórmula XII es: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Realización XI: El método de la Realización I, en donde el compuesto de Fórmula XII es: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Realización XII: El método de cualquiera de las Realizaciones IX-XI, en donde el compuesto está sustancialmente libre de otros estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Realización XIII: El método de la Realización XII, en donde el compuesto es un estereoisómero sustancialmente puro, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Realización XIV: El método de cualquiera de las Realizaciones l-XIII, en donde el compuesto se administra al paciente un día por semana, un día cada dos semanas, un día cada tres semanas o un día cada cuatro semanas.

Realización XV: El método de cualquiera de las Realizaciones l-XIV, en donde las células de la enfermedad hiperproliferativa expresan p53 funcional.

Realización XVI: El método de cualquiera de las Realizaciones l-XV, en donde la enfermedad hiperproliferativa es cáncer.

Realización XVII. El método de la Realización XVI, que adicionalmente comprende administrar al paciente uno o más agentes anticáncer Realización XVIII. El método de la Realización XVII, en donde el agente anticáncer es un agente quimioterapéutico.

Realización XIX: El método de la Realización XVIII, en donde el agente anticáncer es terapia de radiación.

Realización XX: Un kit que comprende un compuesto que tiene la Fórmula XII: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: R1a, R b, R c y R1d se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, fluoro y cloro; R2 es: en donde: R6a, R6b, R6c, R6d y R6e se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, fluoro y cloro; R3 es alquilo d-C8 opcionalmente sustituido; R4 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo d-C6 opcionalmente sustituido; R5 se selecciona del grupo que consiste en: en donde: R7 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1 opcionalmente sustituido; X se selecciona del grupo que consiste en O, S y NR'; Y se selecciona del grupo que consiste en O, S y NR "; R se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C C4 opcionalmente sustituido; y R" se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C C opcionalmente sustituido, en donde el compuesto está sustancialmente libre de otro u otros estereoisómeros, e instrucciones para la administración pulsátil del compuesto a un paciente que tiene a enfermedad hiperproliferativa.

Realización XXI: El kit de la Realización XX, en donde la enfermedad hiperproliferativa es cáncer.

Realización XXII: El kit de la Realización XXI, que adicionalmente comprende uno o más agentes anticáncer.

Realización XXIII: El kit de la Realización XXII, en donde las instrucciones indican la coadministración del compuesto junto con el o los agentes anticáncer.

En ciertos aspectos, en la presente se proporcionan las siguientes realizaciones particulares: Realización XXIV: Un método para tratar, mejorar o prevenir melanoma en un paciente que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto que tiene la Fórmula XII: en donde: R1a, R1b, R1c y R d se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, fluoro y cloro; R2 es: en donde: R6a, R6b, R6c, R6d y R6e se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, fluoro y cloro; R3 es alquilo C Ce opcionalmente sustituido; R4 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo d-Ce opcionalmente sustituido; R5 se selecciona del grupo que consiste en: R se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido; X se selecciona del grupo que consiste en O, S y NR'; Y se selecciona del grupo que consiste en O, S y NR "; R se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido; y R" se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C C opcionalmente sustituido, en donde el compuesto está sustancialmente libre de otro u otros estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Realización XXV: El método de la Realización XXIV, que adicionalmente comprende administrar al paciente uno o más agentes anticáncer adicionales.

Realización XXVI: El método de la Realización XXV, en donde el agente anticáncer es un agente quimioterapéutico.

Realización XXVII: El método de la Realización XXVI, en donde el agente anticáncer es terapia de radiación.

Realización XXVIII: El método de cualquiera de las Realizaciones XXIV-XXVII, en donde el melanoma se caracteriza por su resistencia a la terapia convencional contra el cáncer.

Realización XXIX: El método de cualquiera de las Realizaciones XXIV-XXVIll, en donde el melanoma expresa la proteína p53 tipo silvestre.

Realización XXX: El método de cualquiera de las Realizaciones XXIV-XXIX, en donde el compuesto de Fórmula XII es: en donde: R a, R b, R1c y R1d se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, fluoro y cloro; R2 es: en donde: R , R , R , R y R6e se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, fluoro y cloro; R3 es alquilo C Ce opcionalmente sustituido; R4 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo d-C6 opcionalmente sustituido; R5 se selecciona del grupo que consiste en: en donde: R se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C -C4 opcionalmente sustituido; X se selecciona del grupo que consiste en O, S y NR ; Y se selecciona del grupo que consiste en O, S y NR "; R se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C C opcionalmente sustituido; y R se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C C opcionalmente sustituido, en donde el compuesto está sustancialmente libre de otro u otros estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, e instrucciones para administrar el compuesto a un paciente que tiene melanoma.

Realización XXXII: El kit de la Realización XXXI, que adicionalmente comprende uno o más agentes anticáncer adicionales.

Realización XXXII I: El kit de la Realización XXXI, en donde las instrucciones indican la co-administración del compuesto junto con un agente anticáncer adicional.

En ciertos aspectos, en la presente se proporcionan las siguientes realizaciones particulares: Realización XXXIV: un compuesto que tiene las Fórmulas XII: XII en donde: R1a, R1 , R1c y R1d se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste hidrógeno, fluoro y cloro; R2 es: en donde: a^ p25b p25c^ p25d y p25e ge se|ecc¡onan cacja uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, fluoro y cloro; R3 es alquilo CrC8 opcionalmente sustituido; R4 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C C6 opcionalmente sustituido; R5 se selecciona del grupo que consiste en: en donde: R 4 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C^C4 opcionalmente sustituido; X se selecciona del grupo que consiste en O, S y NR ; Y se selecciona del grupo que consiste en O, S y NR"; R se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C,-C4 opcionalmente sustituido; y R se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C^-C* opcionalmente sustituido, en donde el compuesto está sustancialmente libre de otro u otros estereoisómeros, o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.

Realización XXXV: El compuesto de la Realización XXXIV, en donde R4 es hidrógeno, o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.

Realización XXXVI: El compuesto de la Realización XXXIV, en donde X es NH,: o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.

Realización XXXVII: El compuesto de la Realización XXXIV, en donde Y es NH, o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.

Realización XXXVIII: El compuesto de la Realización XXXIV, en donde R3 es -CH2C(CH3)3, o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.

Realización XXXIX: El compuesto de la Realización XXXIV, en donde R5 se selecciona del grupo que consiste en: o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.

Realización XL: El compuesto de la Realización XXXVIII, en donde: R1a es hidrógeno; R1b, R1c y R1d se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste hidrógeno, fluoro y cloro; R3 es alquilo C4-C8; R4 es hidrógeno; R5 se selecciona del grupo que consiste en: X e Y son NH; o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.

Realización XLI: El compuesto de las Realizaciones XXXIX o XL, en donde R5 se selecciona del grupo que consiste en: o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.

Realización XLII: El compuesto de la Realización XXXIV que se selecciona del grupo que consiste en: o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.

Realización XLIII: Un compuesto que tiene la estructura: o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.

Realización XLIV: Un compuesto que tiene la estructura: o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.

Realización XLV: El compuesto de cualquiera de las Realizaciones XLII-XLIV, en donde el compuesto está sustancialmente libre de otros estereoisómeros, o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.

Realización XLVI: El compuesto de la Realización XLV, en donde el compuesto es un estereoisómero sustancialmente puro, o una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.

Realización XLVII: Una composición farmacéutica que comprende el compuesto de cualquiera de las Realizaciones XXXIV-XLVI y un portador farmacéuticamente aceptable.

Realización XLVIII: Un método para tratar un paciente que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de cualquiera de las Realizaciones XXXIV-XLVI, en donde el paciente tiene una enfermedad hiperproliferativa.

Realización XLIX: Un método para tratar un paciente que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de la composición farmacéutica de la Realización XLVII, en donde el paciente tiene una enfermedad hiperproliferativa.

Realización L: El método de las Realizaciones XLVIII o XLIX, en donde la enfermedad hiperproliferativa es cáncer.

Realización Ll: El método de las reivindicaciones Realizaciones XLVIII o XLIX, en donde las células de la enfermedad hiperproliferativa expresan p53 funcional.

Realización Lll: El método de la Realización L, que adicionalmente comprende administrar al paciente uno o más agentes anticáncer.

Realización LUI: El método de la Realización Lll, en donde el agente anticáncer es un agente quimioterapéutico.

Realización LIV: El método de la Realización Lll, en donde el agente anticáncer es terapia de radiación.

Realización LV: Un método para tratar un paciente, en donde el paciente tiene un trastorno hiperproliferativo Y está siendo tratado con un agente anticáncer, que comprende administrar al paciente un compuesto o sal farmacéuticamente aceptable del mismo de cualquiera de las Realizaciones XXXIV-XLVI.

Realización LVI: El método de la Realización LV, en donde el paciente experimenta efectos secundarios del tratamiento con el agente anticáncer que se selecciona del grupo que consiste en mucositis, estomatitis, xerostomía, alopecia y trastorno gastrointestinal.

Realización LVII: El método de la Realización LVI, en donde las células del trastorno hiperproliferativo expresan p53 funcional.

Realización LVIII: Un kit que comprende un compuesto de cualquiera de las Realizaciones XXXIV-XLVI e instrucciones para administrar el compuesto a un paciente que tiene a enfermedad hiperproliferativa.

Realización LIX: El kit de la Realización LVIII, en donde la enfermedad hiperproliferativa es cáncer.

Realización LX: El kit de la Realización LIX, que adicionalmente comprende uno o más agentes anticáncer.

Realización LXI: El kit de la Realización LX, en donde las instrucciones indican la co-administración del compuesto junto con el o los agentes anticáncer.

EJEMPLO 1 Datos analíticos para compuestos Información general Los espectros de NMR se registraron en un BRUKER AVANCE 250, BRUKER AVANCE 300, BRUKER AVANCE DRX-400 o BRUKER AVANCE DPX-500 o un instrumento similar. A menos que se indique lo contrario, todos los desplazamientos químicos de las NMR indicados en la presente invención se denotan usando la escala delta (d).

Los análisis por cromatografía liquida-espectrometría de masas (indicada "LC-MS") se realizaron usando el método A, el método B o el método C: Método A: aparato WATERS UPLC-SQD; Ionización: electropulverización en modo positivo y/o modo negativo (ES+/-); Condiciones cromatográficas: Columna: ACQUITY BEH C18 1 ,7 pm - 2,1 x 50 mm; Disolventes: A: H20 (0,1 % ácido fórmico) B: CH3CN (0,1 % ácido fórmico); Temperatura de columna: 50°C; Flujo: 1 ml/min; Gradiente (2 min): de 5 a 50% de B en 0,8 min; 1 ,2 min: 100% de B; 1 ,85 min: 100% de B; 1 ,95 : 5% de B; Tiempo de retención = tR (min).

Método B: aparato WATERS ZQ; Ionización: electropulverización en modo positivo y/o modo negativo (ES+/-); Condiciones cromatográficas: Columna: XBridge C18 2,5 pm 4. 3 x 50 mm; Disolventes: A: H20 (0,1 % ácido fórmico) B: CH3CN (0,1 % ácido fórmico); Temperatura de columna: 70°C; Flujo: 0,9 ml/min; Gradiente (7 min): de 5 a 100% de B en 5,3 min; 5,5 min: 100% de B; 6,3 min: 5% de B; Tiempo de retención = tR (min).

Método C: aparato WATERS UPLC-SQD; Ionización: electropulverización en modo positivo y/o modo negativo (ES+/-); Condiciones cromatográficas: Columna: ACQUITY BEH C18 1 ,7 pm - 2,1 x 50 mm; Disolventes: A: H20 (0,1 % ácido fórmico) B: CH3CN (0,1 % ácido fórmico); Temperatura de columna: 50°C; Flujo: 0,8 ml/min; Gradiente (2,5 min): de 5 a 100% de B en 1 ,8 min; 2,4 min: 100% de B; 2,45 min: 100% de B; de 100 a 5% de B en 0.05 min; Tiempo de retención = tR (min).

El análisis de pureza se llevó a cabo usando HPLC en fase inversa usando una columna SunFire™ C18 5 pm 4,6 x150 mm con un caudal de 1 mL/min en las siguientes condiciones: Condición I: Gradiente de 90% de disolvente A (0,1 % de TFA en agua) y 10% de disolvente B (0,1 % of TFA en metanol) a 5% de disolvente A y 95% de disolvente B en 85 min; y Condición II: Gradiente de 80% de disolvente A (0,1 % de TFA en agua) y 20% de disolvente B (0,1 % de TFA en acetonitrilo) a 50% de disolvente A y 50% de disolvente B en 30 min.

El análisis de espectros de masa por ESI de baja resolución se llevó a cabo en un espectrómetro de masas Thermo-Scientific LCQ Fleet o instrumento similar.

Los nombres químicos de los compuestos proporcionados en este ejemplo se determinaron con ADCLABS, versión 12.0.

C027 - sal de TFA H NMR (300 MHz, MeOH-d,): 7,50-7,36 (m, 1H), 7,24-7,10 (m, 2H), 6,88-6,76 (m, 3H), 5,12 (d, J = 10,17 Hz, 1H), 4,49 (d, J = 10,17 Hz, 1H), 4,23 (dd, J = 6,83, 2,09 Hz, 1H), 3,98-3,83 (m, 1H), 2,49-2,36 (m, 1H), 2,36-2,22 (m, 1H), 2,10-1,96 (m, 2H), 1,94-1,82 (m, 1H), 1,35-1,28 (m, 1H), 1,29 (s, 3H), 0,80 (s, 9H); 13C NMR (75 MHz, MeOH-d4): 108,1, 166,0, 145,4, 136,9, 127,9, 126,1 (t, JC-F = 5,6 Hz), 125,4, 123,4118,8 (d, JC-F = 17,3 Hz), 112,0, 67,4, 64,5, 63,7, 61,6, 49,5, 45,6, 45,5, 42,4, 38,5, 30,9, 29,5, 27,6; ESI-MS calculado para C28H3335CIF2N303[M+H]+: 532,2179, Encontrado: 532,42.

C029 - sal de TFA 1H NMR (300 MHz, MeOH-d4): 8,84 (d, J =6,80 Hz, 1H), 7,58 (t, J = 6,80 Hz, 1H), 7,39 (t, J = 7,11 Hz, 1H), 7,22 (t, J = 7,80 Hz, 1H), 6,88 (dd, J = 9,81, 7,80 Hz, 1H), 6,78 (d, J = 10,13, 6,63 Hz, 1H), 5,11 (d, J = 10,37 Hz, 1H), 4,48 (d, J = 10,37 Hz, 1H), 4,21 (d, J = 10,37 Hz, 1H), 4,21 (dd, J = 7,32, 2,66 Hz, 1H), 3,95-3,75 (m, 1H), 2,46-2,22 (m, 2H), 2,12-1,96 (m, 2H), 1,94-1,80 (m, 1H), 1,34-1,28 (m, 1), 1,29 (s, 3H), 0,81 (s, 9H); 13C NMR (75 MHz, MeOH-d4): 180,2, 169,2, 132,2, 128,7 (d, JC-F = 2,2 Hz), 126,5 (d, JC-F = 4,6 Hz), 124,7 (dd, JC-F= 33,5, 19,2 Hz), 122,6 (d, JC-F = 18,1 Hz), 101,5 (d, JC-F = 23,0 Hz), 67,4, 64,4, 63,5, 61,9, 49,8, 45,6, 45,5, 42,4, 38,6, 30,9, 29,5, 27,6; ESI-MS calculado para C28H3235CIF3N303 [M+H]+: 550,2084, Encontrado: 550,33.

C031 - sal de TFA 1H NMR (300 MHz, MeOH-d4): 7,68-7,54 (m, 1H), 7,38-7,26 (m, 1H), 7,22-7,12 (m, 1H), 6,90-6,76 (m, 1H), 6,70-6,60 (m, 1H), 6,56-6,42 (m, 1H), 5,30-5,20 (m, 1H), 4,49 (d, J = 10,03 Hz, 1H), 4,25 (dd, J = 71,9, 2,39 Hz, 1H), 4,00-3,82 (m, 1H), 2,50-2,21 (m, 2H), 2,18-2,00 (m, 2H), 1,98-1,82 (m, 1H), 1,40-1,30 (m, 1H), 1,28 (s, 3H), 0,79 (s, 9H); 13C NMR (75 MHz, MeOH-d4): 180,6, 165,1 (d, JC-F= 246,7 Hz), 166,1, 157,7 (d, JC-F= 247,9 Hz), 145,6 (d, JC-F= 12,0 Hz), 132,0, 128,6, 128,2 (d, JC-F= 10,2 Hz), 126,3 (d, JC-F= 4,5 Hz), 125,0 (d, JC.F = 14,0 Hz), 122,4 (d, JC-F = 18,4Hz), 122,3, 109,8 (d, JC-F = 23,2 Hz), 99,9 (d, JC.F = 27,8 Hz), 67,4, 64,5, 63,5, 61,5, 49,2, 45,6, 45,5, 42,3, 38,4, 30,9, 29,5, 27,5; ESI-MS calculado para C28H3335CIF2 303 [M+H]+: 532,2179, Encontrado: 532,42.

C034 - sal de TFA 1H NMR (300 MHz, MeOH-d,): 7,28-7,10 (m, 5H), 6,92-6,84 (m, 1H), 6,80-6,76 (m, 1H), 5,40-5,20 (m, 1H), 5,08 (d, J = 10,96 Hz, 1H), 4,40-4,20 (m, 1H), 3,90-3,60 (m, 1H), 2,50-2,30 (m, 1H), 2,30-2,15 (m, 1H), 2,15-2,00 (m, 2H), 1,90-1,75 (m, 1H), 1,57 (dd, J = 15,3, 3,71 Hz, 1H), 1,25 (s, 3H), 0,79 (s, 9H); 13C NMR (75 MHz, MeOH-d4): 180,0, 165,9, 144,7, 136,7, 136,6, 135,8, 131,3, 130,1, 129,8, 128,1, 128,1, 126,8, 123,5, 112,0, 67,4, 64,3, 64,0, 62,2, 57,2, 45,7, 45,6, 42,7, 38,3, 31,0, 29,6, 27,5; ESI-MS calculado para C28H3435CI2N303 [M+H]+: 530,1977, Encontrado: 530,50.

C035 - sal de TFA H NMR (300 MHz, MeOH-d4): 7,40-7,00 (m, 5H), 6,80-6,40 (m, 1H), 5,60-5,00 (m, 2H), 4,60-4,20 (m, 1H), 4,00-3,80 (m, 1H), 2,60-2,40 (m, 1H), 2,40-2,20 (m, 1H), 2,20-2,00 (m, 2H), 2,00-1,80 (m, 1H), 1,70-1,50 (m, 1H), 1,28 (s, 3H), 0,83 (s, 9H); 3C NMR (75 MHz, MeOH-d4): 180,0, 165,8, 160,0-145,0 (m, 2 * Csp2-F), 136,5, 135,9, 131,4, 130,0, 129,9, 128,0, 124,1 (d, JC-F= 6,3 Hz), 119,1, 116,7 (d, JC-F = 20,4 Hz), 101,4 (d, JC-F = 23,0 Hz), 67,4, 64,2, 63,8, 62,5, 57,4, 45,6, 45,5, 42,7, 38,3, 31,0, 29,5, 27,5; ESI-MS calculado para C28H3335CIF2N303 [M+H]+: 532,2179, Encontrado: 532,42.

MI-519-73-sal de TFA 1H NMR (300 MHz, MeOH-d,): 7,50-7,30 (m, 2H), 7,20-7,10 (m, 1H), 6,90-6,70 (m, 3H), 5,00-4,70 (m, 1H), 4,36 (d, J = 9,76 Hz, 1H), 4,05-3,96 (m, 1H), 3,70-3,50 (m, 1H), 1,94 (dd, J = 14,98, 7,30 Hz, 1H), 1,80-1,00 (m, 8H), 1,16 (s, 3H), 0,90-0,70 (m, 1H), 0,80 (s, 9H); ESI-MS calculado para C3oH3735CI2FN303 [M+H]+: 576,2196, Encontrado: 576,58.

MI-519-74-sal de TFA 1H NMR (300 MHz, MeOH-d4): 7,50-7,30 (m, 2H), 7,25-7,10 (m, 1H), 6,85-6,70 (m, 3H), 5,00-4,70 (m, 1H), 4,32 (d, J = 9,69 Hz, 1H), 4,10-3,95 (m, 1H), 3,85-3,70 (m, 1H), 2,00-1,80 (m, 2HV 1,75-1,20 (m, 7H), 1,13 (s, 3H), 0,95-0,75 (m, 1H), 0,81 (s, 9H); ESl-MS calculado para C30H37 CI2FN303 [M+H]+: 576,2196, Encontrado: 576,58. ??-7102-saldeTFA 1H NMR (300 MHz, MeOH-d4): 7,36-7,25 (m, 1 H), 7,24-7,11 (m, 2H), 6,86 (d, J = 1 ,8 Hz, 1 H), 6,80 (dd, J = 1 ,8, 8,1 Hz, 1 H), 6,72 (d, J = 8,1 Hz, H), 4,82 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 4,36 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 4,04 (dd, J = 2,4, 7,4 Hz, 1 H), 3,74-3,56 (m, 1 H), 3,56-3,40 (m, 1 H), 2,05-1 ,78 (m, 5H), 1,75-1,59 (m, 1H), 1,43-1,04 (m, 5H), 0,81 (s, 9H); ESl-MS calculado para C29H35CIF2N303 (M + H)+ requiere 546,23, encontrado 546,58; HPLC (Condición I) tR = 50,45 min (Pureza 95,4%). ??-7103-saldeTFA 1H NMR (300 MHz, MeOH-d4): 8,38 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,54 (t, J = 6,7 Hz, 1H), 7,40 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 7,20 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 6,93 (d, J = 6,1 Hz, 1H), 6,86 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 4,45 (d, J = 10,3 Hz, 1H), 4,13 (dd, J = 2,8, 7,5 Hz, 1H), 3,77-3,55 (m, 1H), 3,55-3,42 (m, 1H), 2,09- 1,71 (m, 4H), 1,70-1,56 (m, 1H), 1,45.1,02 (m, 5H), 0,82 <s, 9H); ESl-MS calculado para C29H34CI2F2 3O3 (M + H)+ requiere 580,19, encontrado 580,67; HPLC (Condición I) tR = 55,01 min (Pureza 88,1%). ??-7104-sal de TFA 1H NMR (300 MHz, MeOH-d4): 7,49 (t, J = 7,2 Hz, 1?), 7,45-7,38 (m, 1H), 7,22 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 6,85-6,68 (m, 2H), 4,80 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 4,36 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 4,01 (dd, J = 2,4, 7,6 Hz, 1H), 3,74-3,57 (m, 1H), 3,55-3,39 (m, 1H), 2,04-1,77 (m, 4H), 1,74-1,59 (m, 1H), 1,44-1,04 (m, 5H), 0,90 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 0,82 (s, 9H); ESl-MS calculado para C29H34CIF3N3O3 (M + H)+ requiere 564,22, encontrado 564,58; HPLC (Condición I) tR = 51,76 mln (Pureza 86,9%). ??-7105-sal de TFA 1H NMR (300 MHz, MeOH-d4): 7,49 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,45-7,38 (m, 1H), 7,22 (t, J Hz, 1H), 6,85-6,68 (m, 2H), 4,80 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 4,36 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 4,01 (dd, J = 2,4, 7,6 Hz, 1H), 3,74-3,57 (m, 1H), 3,55-3,39 (m, 1H), 2,04-1,77 (m, 4H), 1,74-1,59 (m, 1H), 1,44-1,04 (m, 5H), 0,90 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 0,82 (s, 9H); ESl-MS calculado para CzgHasCIFzNaC (M + H)+ requiere 546,23, encontrado 546,58; HPLC (Condición I) tR = 49,20 min (Pureza 99,4%). ??-7106-saldeTFA 1H NMR (300 MHz, MeOH-d4): 8,36 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 7,59 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,41-7,11 m, 4H), 7,04 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 6,78 (d, J = 1 ,8 Hz, 1 H), 5,19 (d, J = 11 ,3 Hz, 1 H), 4,44 (J = 8,1 Hz, 1 H), 4,07 (d, J = 11,3 Hz, 1 H), 3,74-3,53 (m, 1 H), 3,53-3,37 (m, ÍH), 2,08-, 83 (m, 3H) 1,83-1,69 (m, 1H), 1,61-1,44 (m.1H), 1,44-1,08 (m, 4H), 1,07-0,72 (m, 1H), 0,88 (s, 9H); ESl-MS calculado para C29H36CI2N3O3 (M + H)+ requiere 544,21, encontrado 544,67; HPLC (Condición I) tR = 51 ,41 min (Pureza 93,0%). ??-7108-sal de TFA 1H NMR (300 MHz, MeOH-d4/DMSO-d6): 10,15 (s, 1H), 7,76 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,22 (s, 1H), 7,17-7,00 (m, 3H), 6,94 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 6,81 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 4,42 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 4,09 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 3,79 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 3,73-3,49 (m, 2H), 3,35 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 2,10-1,84 (m, 4H), 1,52-1,11 (m, 5H), 0,87 (s, 9H); 13C NMR (75 MHz, MeOH-d4/DMSO-de): 177,1, 172,4, 153,6 (d, JC.F = 242,7 Hz), 138,7, 138,5 (d, JC-F = 2,4 Hz), 133,2, 129,0, 127,544, 127,541 (d, JC-F = 6,7 Hz), 126,8, 126,5, 119,7 (d, JC-F= 19,2 Hz), 111,3, 110,4 (d, JC.F = 24,1 Hz), 68,4, 66,6, 65,7, 64,0, 58,6, 46,8, 42,2, 33,26, 33,20, 30,4, 30,2, 29,7, 29,5;. ESl-MS calculado para C29H35CI2FN3O3 (M + H)+ requiere 562,20, encontrado 562,67; HPLC (Condición I) tR = 55,08 min (Pureza 96,1 %); HPLC (Condición II) tR = 21 ,44 min (Pureza 92,7%). ??-7109-sal de TFA 1H NMR (300 MHz, MeOH-d4): 7,47 (t, J= 6,7 Hz, 1H), 7,42-7,33 (m, 1H), 7,Í8 (t, J = 7,7 Hz, 1H).6,87 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 6,78 (dd, J = 1,8, 8,1 Hz, 1H), 6,70 (d, J = 8,1 Hz, ÍH), 4,40 (d, J= 9,7 Hz, 1H), 4,11 (dd, J = 2,5, 7,6 Hz, H), 2,77-2,65 (m, 1H), 1,99 (dd, J = 7,6, 15,3 Hz, 1H), 124 (dd, J = 2,5, 15,3 Hz.1H), 0,92-0,62 (m, 2H), 0,81 (s, 9H), 0,56-0,30 (m, 2H); ESl-MS calculado para C26H29CI2FN3O2 (M + H)+ requiere 504, 16, encontrado 504,58; HPLC (Condición I) tR = 53,99 min (Pureza 94,4%).

B059 - sal de TFA 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,45-7,34 (m, 1H), 7,26-7,12 (m, 1H), 7,04-6,93 (m, 1H), 6,90 (d, J = 1 ,80 Hz, 1 H), 6,65 (dd, J = 8,08, 1 ,80 Hz, 1 H), 4,41 (d, J = 9,25 Hz, 1 H), 3,96 (quint, J = 8,13 Hz, 1H), 2,51-2,07 (m, 2H), 2,40-2,20 (m, 2H), 1,88 (dd, J = 14,20, 9,91 Hz, 1H), 1,32 (s, 3H), 1,20-0,80 (m, 1H), 0,88 (s, 9H); 13C NMR (75 MHz, CD3OD): 181,3, 172,9 (d, JC-F = 266,9 Hz), 168,6, 162,7, 145,3, 135,8, 131,7, 130,7 (d, JC-F = 38,6 Hz), 126,2 (d, JC-? = 4,5 Hz), . 126,1, 123,6, 122,9, 122,7, 111,4, 78,4, 67,7, 63,4, 46,0, 45,8, 44,3, 38,0, 31,4, 30,2, 27,6; ESI-MS calculado para C2eH3135Cl2FN303 [M+H]+: 546,1727, Encontrado: 546,50.

MI-519-77-sal de TFA 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,50-7,40 (m, 1H), 7,40 (m, 1H), 7,20-7,10 (m, 1H), 6,85 (d, J = 1,40 Hz, 1H), 6,84-6,72 (m, 2H), 5,00-4,80 (m, 1H), 4,45 (d, J = 10,10 Hz, 1H), 4,02 (t, J = 6,61 Hz, 1H), 3,90 (quinteto, J = 8,07 Hz, 1H), 2,50-2,25 (m, 2H), 2,10-1,82 (m, 3H), 1,81-1,31 (m, 8H), 1,30 (s, 3H), 1,10-0,91 (m, 1H), 0,91-0,81 (m 1H); ESI-MS calculado para C29H3335Cl2FN303 [M+H]+: 560,1883, Encontrado: 560,50.

MI-519-78-saldeTFA 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,45-7,31 (m, 2H), 7,20-7,11 (m, 1H), 6,86-6,82 (m, 1H), 6,81-6,78 (m, 2H), 4,90-4,80 (m, 1H), 4,45 (d, J = 10,33 Hz, 1H), 4,10-3,95 (m, 1H), 3,70-3,60 (m, 1H), 3,50-3,40 (m, 1H), 2,10-1,05 (m, 17 H), 1,05-0,95 (m, 1H), 0,95-0,80 (m, 1H); ESI-MS calculado para C3oH3535Cl2FN303 [M+H]+: 574,2040, Encontrado: 574,58.

MI-519-80-sal de TFA 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,80-7,72 (m, 1H), 7,50-7,38 (m, 2H), 6,87 (d, J = 1,81 Hz, 1H), 6,71 (dd, J = 8,16, 1,81 Hz, 1H), 6,52-6,40 (m, 1H), 4,96-4,80 (m, 1H),4,62 (d, J = 8,69 Hz, 1H), 4,10-3,95 (m, 1H), 3,70-3,55 (m, 1H), 3,50-3,45 (m, 1H), 2,00-1,80 (m, 3H), 1,80-1,60 (m, 1H), 1,40-1,00 (m, 5H), 0,95-0,85 (m, 1H), 0,80 (s, 9H); ESI-MS calculado para Cz^s^C NaOa [M+H]+: 578,1744, Encontrado: 578,75.

C02701 - sal de TFA (3-hidroxi-3-metil-ciclobutil)-amida de ácido (2,S,3'R,4'S,5'R)-6-Cloro-4,-(2,3-difluoro-fenil)-2'-(2,2-d¡met¡l-prop¡l)-2-oxo-1,2-dih¡dro-espiro[indol-3,3'-p¡rrolid¡na]-5'-carboxíl¡co, trifluoroacetato 1H NMR (300 MHz, MeOH-d4): 8,82 (d, J = 6,83Hz, 1H), 7,65-7,55 (m, 1H), 7,45-7,30 (m, 1H), 7,20-7,05 (m, 3H), 6,80-6,75 (m, 1H), 5,40-5,10 (m, 1H), 4,61 (d, J = 11,39 Hz, 1H), 4,50 (d, J = 7,66 Hz, 1H), 3,95-3,80 (m, 1H), 2,45-2,30 (m, 1H), 2,30-2,15 (m, 1H), 2,05-1,80 (m, 2H), 1,80-1,60 (m, 1H), 1,27 (s, 3H), 1,20-1,08 (m, 1H), 0,86 (s, 9H); 13C NMR (75 MHz, MeOH-d4): 177,8, 167,0, 160,0-148,0 (m, 2 Csp2-F), 145,2, 137,2, 126,8, 126,5-126,0 (m), 125,0, 124,1, 123,5, 122,1 (d, JC.F= 9,74 Hz), 119,1 (d, JC-F = 17,1 Hz), 112,1, 67,3, 64,5, 64,2, 62,6, 48,5, 45,6, 45,5, 43,3, 38,3, 31,0, 29,5, 27,5; ESI-MS calculado para C28H3335CIF2N303 [M+H]+: 532,2179, Encontrado: 532,50.

LC-MS: tR (min) = 0,86; [M+H]+: m/z 532; [M-H]": m/z 530 (método A). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6 + TFA): 0,80 (s, 9 H); 1,01 (d ancho, J=15,2 Hz, 1 H); 1 ,20 (s, 3 H); 1,60 (m, 1 H); 1,85 a 1,98 (m, 2 H); 2,08 (m, 1 H); 2,25 (m, 1 H); 3,72 (m, 1 H); 4,49 (m, 2 H); 5,30 (d, J=12,1 Hz, 1 H); 6,78 (d, J=2,0 Hz, 1 H); 7,16 (dd, J=2,0 y 8,3 Hz, 1 H); 7,23 (m, 1 H); 7,42 (m, 1 H); 7,48 (m, 1 H); 7,74 (d, J=8,3 Hz, 1 H).

C02901 - sal de TFA (3-hidroxi-3-metil-c¡clobutil)-amida de ácido (2'S,3'R,4'S,5'R)-4,-(3-Cloro-2-fluoro-fenil)-2'-(2,2-dimet¡l-propil)-5,6-d¡fluoro-2-oxo-1,2-di idro-esp^ trifluoroacetato 1H NMR (300 MHz, MeOH-d4): 7,80-7,65 (m, 1H), 7,60-7,50 (m, 1H), 7,40-7,30 (m, 1H), 7,20-7,10 (m, 1H), 6,80-6,65 (m, 1H), 5,50-5,10 (m, 1H), 4,60 (d, J= 11,39 Hz, 1H), 4,50 (d, J = 6,96 Hz, 1H), 3,95-3,80 (m, 1H), 2,50-2,30 (m, 1H), 2,30-2,20 (m, 1H), 2,10-1,80 (m, 2H), 1,80-1,65 (m, 1H), 1,27 (s, 3H), 1,20-1,05 (m, 1H), 0,87 (s, 9H); 13C NMR (75 MHz, MeOH-d4): 177,8, 167,0, 160,0-145,0 (m, 3? Csp2-F), 132,6, 128,6, 126,6, 122,5 (d, JC-F = 18,9 Hz), 121,3 (d, JC-F = 13,0 Hz), 118,8, 115,4 (d, JC-F= 21,7 Hz), 115,1, 101 ,8 (d, JC-F = 23,3 Hz), 67,3, 64,6, 64,3, 62,5, 48,7, 45,6, 45,5, 43,4, 38,3, 31,0, 29,5, 27,5; ESI-MS calculado para C28H3235CIF3N303 [M+Hf: 550,2084, Encontrado: 550,33.

LC-MS: tR (min) = 0,87; [M+H]+: m/z 550; [M-H]": m/z 548 (método A). 1H NMR (400 MHz; DMSO-d6 + TFA): 0,80 (s, 9 H); 1,01 (d, J=15,2 Hz, 1 H); 1,20 (s, 3 H); 1,62 (m, 1 H); 1,85 a 1,98 (m, 2 H); 2,08 (m, 1 H); 2,26 (m, 1 H); 3,73 (m, 1 H); 4,52 (m, 2 H); 5,28 (d, J= 2,1 Hz, 1 H); 6,79 (dd, J=6,7 y 10,1 Hz, 1 H); 7,25 (t, J=7,8 Hz, 1 H); 7,50 (m, 1 H); 7,60 (m, 1 H); 8,08 (m, 1 H).

C03001 - sal de TFA (3-hidrox¡-3-metil-ciclobutil)-amida de ácido (2'S,3'R,4'S,5'R)-6-Cloro-4,-(3-cloro-2-fluoro-fenil)- 2'-(2,2-d¡met¡l-propil)-5-fluoro-2-oxo-1 ,2-d¡hidro-esp¡ro[¡ndol-3,3,-p¡rrol¡dina]-5'-carboxílico, trifluoroacetato 1H N R (300 MHz, MeOH-d4): 7,70 (d, J = 7,30 Hz, 1 H), 7,60-7,50 (m, 1 H), 7,45-7,35 (m, 1 H), 7,25-7,15 (m, 1 H), 6,88 (d, J = 6,00 Hz, 1H), 5,21 (d, J = 11 ,35 Hz, 1 H), 4,61 (d, J = 1 ,37 Hz, 1 H), 4,53 (d, J = 8,19 Hz, 1 H), 3,95 -3,80 (m, 1 H), 2,50-2,35 (m, 1 H), 2,35-2,15 (m, 1 H), 2,00-1 ,80 (m, 2H), 1 ,80-1 ,60 (m, 1 H), 1 ,29 (s, 3H), 1 ,25-1 ,05 (m, 1 H), 0,89 (s, 9H); 13C NMR (75 MHz, MeOH-d4): 177,3, 166,7, 157,6 (d, JC-F = 249,5 Hz), 155,7 (d, JC-F = 243,5 Hz), 140,4 (d, JC.F = 2,8 Hz), 132,5, 128,4, 126,4 (d, JC-F = 4,9 Hz), 125,0 (d, JC-F = 7,4 Hz), 123,4 (d, JC-F = 19,5 Hz), 122,3 (d, JC-F = 18,9 Hz), 121 ,0 (d, JC-F = 13,0 Hz), 114,5 (d, JC-F = 25,1 Hz), 104,8, 67,1 , 64,6, 64,2, 62,4, 47,3, 45,4, 45,3, 43,2, 38,2, 30,8, 29,2, 27,3; ESI-MS calculado para C28H3235Cl2F2 303 [M+H]+: 566,1789, Encontrado: 566,50.

LC-MS: tR (min) = 0,93; [M+H]+: m/z 566 (método A).

H NMR (400 MHz, DMSO-d6 + TFA): 0,81 (s, 9 H); 1 ,02 (d ancho, J=15,2 Hz, 1 H); 1 ,20 (s, 3 H); 1 ,62 (m, 1 H); 1 ,87 a 1 ,99 (m, 2 H); 2,09 (m, 1 H); 2,27 (m, 1 H); 3,75 (m, 1 H); 4,55 (m, 2 H); 5,30 (d, J=12,1 Hz, 1 H); 6,89 (d, J=6,3 Hz, 1 H); 7,25 (t, J=7,8 Hz, 1 H); 7,50 (m, 1 H); 7,61 (m, 1 H); 8,04 (d, J=8,9 Hz, 1 H) C03101 - sal de TFA (3-h¡droxi-3-met¡l-ciclobutil)-amida de ácido (2'8,3?,4·5,5^)-4·-(3-???G?-2-???G?-?????)-2'-(2,2-d¡met¡l-propil)-6-fluoro-2-oxo-1 ,2-d¡hidro-espirot¡ndol-3,3'-pirrol¡dina]-5'-carboxíl¡co, trifluoroacetato LC-MS: tR (min) = 0,84; [M+H]+: m/z 532; [?-?G: m/z 530 (método A). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6 + TFA): 0,83 (s, 9 H); 1 ,11 (d ancho, J=15,2 Hz, 1 H); 1 ,22 (s, 3 H); 1 ,83 (m, 1 H); 2,00 a 2,36 (m, 4 H); 3,82 (m, 1 H); 4,20 (dd, J=2,9 y 7,7 Hz, 1 H); 4,36 (d, J=10,5 Hz, 1 H); 5,00 (d, J=10,5 Hz, 1 H); 6,53 a 6,74 (m, 2 H); 6,94 (dd, J=5,6 y 8,8 Hz, 1 H); 7,21 (t, J=8,0 Hz, 1 H); 7,41 (t, J=8,0 Hz, 1 H); 7,71 (t, J=8,0 Hz, 1 H).

C03401 - sal de TFA (3-hidroxi-3-metil-ciclobutil)-amida de ácido (2'S,3'R,4'R,5'R)-6-Cloro-4,-(3-cloro-fenil)-2,-(2,2- dimetil-prop¡l)-2-oxo-1,2-dih¡dro-espiro[indol-3,3'-p¡rrolid¡na]-5'-carboxíl¡co, trifluoroacetato 1H NMR (300 MHz, MeOH-d4): 7,58 (d, J = 8,07 Hz, 1H), 7,30-7,10 (m, 4H), 7,02 (d, J = 7,67 Hz, 1H), 6,77 (d, J= 1,54 Hz, 1H), 5,40-5,20 (m, 1H), 4,44 (d, J = 7,09 Hz, 1H), 4,10 (d, J = 11,25 Hz, 1H), 3,95-3,80 (m, 1H), 2,45-2,30 (m, 1H), 2,30-2,15 (m, 1H), 2,05-1,85 (m, 2H), 1,80-1,70 (m, 1H), 1,27 (s, 3H), 1,20-1,10 (m,1H), 0,86 (s, 9H); 13C NMR (75 MHz, MéOH-d4): 177,8, 167,3, 145,3, 137,1, 135,8, 134,4, 131,4, 130,4, 129,5, 128,3, 126,3, 124,2, 124,1, 112,2, 67,3, 64,9, 64,2, 62,8, 57,2, 45,7, 45,6, 43,4, 38,3, 31,0, 29,5, 27,5; ESI-MS calculado para C28H335Cl2N303[M+H]+: 530,1977, Encontrado: 530,58.

LC-MS: tR (min) = 0,84; [M+Hf : m/z 530; [M-Hf: m/z 528 (método A). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d5 + TFA): 0,80 (s, 9 H); 1,02 (d ancho, J=15,5 Hz, 1 H); 1,20 (s, 3 H); 1,68 (m, 1 H); 1,82 a 2,00 (m, 2 H); 2,09 (m, 1 H); 2,27 (m, 1 H); 3,73 (m, 1 H); 4,07 (d, J=11,9 Hz, 1 H); 4,32 (dd, J=2,2 y 8,4 Hz, 1 H); 5,29 (d, J=11,9 Hz, 1 H); 6,74 (d, J=2,0 Hz, 1 H); 6,98 (d, J=7,8 Hz, 1 H); 7,15 a 7,35 (m, 4 H); 7,78 (t, J=8,3 Hz, 1 H).

C03701 - sal de TFA (3-hidrox¡-3-metil-c¡clobutil)-amida de ácido (2,S,3,R,4,R,5'R)-6-Cloro-4'-(3-cloro-fenil)-2'-(2,2-d¡metil-prop¡l)-5-fluoro-2-oxo-1,2-dih¡dro-esp¡ro[¡ndol-3,3'-p¡rrolidina]-5'-carboxílico, trifluoroacetato 1H NMR (300 MHz, MeOH-d4): 9,00-8,80 (m, 1H), 7,73 (d, J = 8,42 Hz, 1H), 7,40-7,20 (m, 3H), 7,15-7,05 (m, 1H), 6,89 (d, J = 6,00 Hz, 1H), 5,32 (d, J = 11,34 Hz, 1H), 4,52 (d, J = 7,91 Hz, 1H), 4,20 (d, J = 11,28 Hz, 1H), 4,00-3,80 (m, 1H), 2,50-2,35 (m, 1H), 2,35-2,20 (m, 1H), 2,20-1,90 (m, 2H), 1.90-1.BQ (m, 1H), 1,31 (s, 3H), 1,30-1,15 (m, 1H), 0,91 (s, 9H); 13C NMR (75 MHz, MeOH-d4): 178,8, 168,2, 157,3 (d, JC-F = 255,8 Hz), 142,1 (d, JC-F = 2,6 Hz), 137,1, 135,5, 132,8, 131,7, 130,7, 129,6, 127,2 (d, JC-F = 7,2 Hz), 124,7 (d, JC.F = 19,3 Hz), 115,5 (d, JC-F = 24,9 Hz), 114,8, 68,6, 66,6, 65,3, 64,0, 58,2, 47,0, 46,8, 44,7, 39,5, 32,2, 30,8, 28,8; ESI-MS calculado para C28H3335Cl2FN303[M+H]+: 548,1883, Encontrado: 548,42.

LC-MS: tR (min) = 0,87; [M+H]+: m/z 548; [M-H]': m/z 546 (método A). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 0,70 a 2,23 (m, 18 H); 3,68 a 5,10 (m, 4 H); 6,78 a 8,03 (m, 6 H).

C04801 - sal de TFA (3-hidroxi-3-met¡l-ciclobutil)-amida de ácido (2,S,3'R,4'S,5,R)-6-Cloro-4'-(2,3-difluorp-fenil)-2'-(2,2-dimetil-propil)-5-fluoro-2-oxo-1,2-dihidro-espiro[indol-3,3'-p¡rrolidina]-5'-carboxí trifluoroacetato H NMR (300 MHz, MeOH-d4): 9,00-8,80 (m, 1H), 7,70 (d, J = 8,35 Hz, 1H), 7,50-7,35 (m, 1H), 7,30-7,10 (m, 2H), 6,88 (d, J = 6,88 Hz, 1H), 5,30 (d, J = 11,32 Hz, 1H), 4,66 (d, J = 11,33 Hz, 1H), 4,56 (d, J = 7,43 Hz, 1H), 4,00-3,80 (m, 1H), 2,50-2,35 (m, 1H), 2,35-2,20 (m, 1H), 2,10-1,90 (m, 2H), 1,80-1,70 (m, 1H), 1,30 (s, 3H), 1,16 (d, J = 15,34 Hz, 1H), 0,90 (s, 9H); 13C NMR (75 MHz, MeOH-d4): 177,5, 166,9, 160-145 (m, 2 Csp2-F), 155,9 (d, JC-F= 243,4 Hz), 140,7 (d, JC-F = 2,69 Hz, 1H), 126,5-126,1 (m), 125,6 (d, C-F = 7,6 Hz), 125,0 (d, JC-F= 3,4 Hz), 123,6 (d, JC-F= 19,5 Hz), 122,0 (d, JC-F= 9,8 Hz), 119,1 (d, JC_F =17,1 Hz), 114,7 (d, JC-F = 25,0 Hz), 113,4, 67,3, 64,7, 64,3, 62,5, 48,2, 45,6, 45,6, 43,4, 38,3, 31,0, 29,5, 27,5; ESl-MS calculado para C28H3235CIF3N303 [M+H]+: 550,2084, Encontrado: 550,42.

LC-MS: tR (min) = 0,89; [M+Hf: m/z 550; [M-H]": m/z 548 (método A) 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6 + TFA): 0,81 (s, 9 H); 1 ,02 (d ancho, J=15,5 Hz, 1 H); 1,20 (s, 3 H); 1,62 (m, 1 H); 1,87 a 1,98 (m, 2 H); 2,09 (m, 1 H); 2,26 (m, 1 H); 3,73 (m, 1 H); 4,56 (m, 2 H); 5,29 (d, J=12,4 Hz, 1 H); 6,89 (d, J=6,2 Hz, 1 H); 7,20 a 7,49 (m, 3 H); 8,06 (d, J=9,3 Hz, 1 H).

MI-710201 - sal de TFA (4-hidroxi-ciclohexil)-amida de ácido (2,S,3'R,4'S,5,R)-6-Cloro-4'-(2,3-difluoro-fenil)-2'-(2,2-dimetil-propil)-2-oxo-1,2-dihidro-espiro[indol-3,3'-pirrolidina]-5'-carboxílico, trifluoroacetato 1H NMR (300 MHz, MeOH-d4): 7,57 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,50-7,36 (m, 1H), 7,27-7,07 (m, 3H), 6,79 (s, 1H), 5,11 (d, J = 11,1 Hz, 1H), 4,55 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 4,39 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 3,71-3,52 (m, 1H), 3,52-3,37 (m, 1H), 3,21 (dd, J = 7,4, 14,5 Hz, 1H), 1,92 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 1,86-1,70 (m, 2H), 1,58 (d, J = 11,8 Hz, 1H), 1,43-1,18 (m, 4H), 1,12 (d, J = 15,5 Hz, 1H), 0,99 (d, J = 13,0 Hz, 1H), 0,88 (s, 9H); ESl-MS calculado para C29H35CIF2N303 (M + H)+ requiere 546,23, encontrado 546,58; HPLC (Condición I) tR = 52,15 min (Pureza 98,8%).

LC-MS: tR (min) = 0,84; [M+H]+: m/z 546; [M-H]": m/z 544 (método A). 1H NMR (400 MHz; DMSO-d6): mezcla de isómeros: 0,80 (s, 9 H); 0,84 a 1,30 (m, 5 H); 1,41 a 1,87 (m, 5 H); 3,43 a 3,54 (m, 2 H); 4,03 (m ancho, 1 H); 4,36 (d ancho, J=10,3 Hz, 2 H); 4,83 (m ancho, 1 H); 6,72 (d, J=2,0 Hz, 1 H); 7,10 (dd, J=2,0 y 8,3 Hz, 1 H); 7,14 (m, 1 H); 7,24 (m, 1 H); 7,40 (m, 1 H); 7,58 (d, J=8,3 Hz, 1 H); 7,97 (m ancho, 1 H); 10,56 (m ancho, 1 H).

MI-710401 - sal deTFA (4-hidroxi-c¡clohexil)-amida de ácido (2'S,3'R,4'S,5'R)-4'-(3-Cloro-2-fluoro-fenil)-2'-(2,2-dimetil-propil)-5,6-d¡fluoro-2-oxo-1,2-d¡hidro-espiro[¡ndol-3,3'-p¡rrol¡dina]-5'-carboxíl¡co, trifluoroacetato 1H NMR (300 MHz, MeOH-d4): 7,67 (t, J = 8,6 Hz, 1H), 7,57 (t, J = 6,8 Hz, 1H), 7,38 (t, J = 6,8 Hz, 1H), 7,15 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 6,71 (dd, J = 6,6, 10,1 Hz, 1H), 5,01 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 4,52 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 4,40-4,21 (m, 1H), 3,74-3,56 (m, 1H), 3,56-3,40 (m, 1H), 2,08-1,87 (m, 2H), 1,87-1,68 (m, 2H), 1,68-1,53 (m, 1H), 1,45-1,18 (m, 3H), 1,17-0,97 (m, 2H), 0,89 (s, 9H); ESI-MS calculado para C29H34CIF3N3O3 (M + Hf requiere 564,22, encontrado 564,58; HPLC (Condición I) tR = 52,15 min (Pureza 98,8%).

LC-MS: tR (min) = 0,84; [M+H]+: m/z 564; [M-H]": m/z 562 (método A) 1H NMR (400 MHz; DMSO-d6 + TFA): 0,81 (s, 9 H); 0,81 a 1,98 (m, 10 H); 3,35 (m, 1 H); 3,52 (m, 1 H); 4,53 (d, J=12,2 Hz, 1 H); 4,59 (dd, J=2,3 y 8,7 Hz, 1 H); 5,33 (d, J=12,2 Hz, 1 H); 6,78 (dd, J=6,8 y 10,3 Hz, 1 H); 7,21 (t, J=9,0 Hz, 1 H); 7,48 (m, 1 H); 7,66 (m, 1 H); 8,00 (m, 1 H).

MI-710501 - salde TFA (4-hidroxi-ciclohexil)-amida de ácido (2,S,3'R,4'S15'R)-4'-(3-Cloro-2-fluoro-fenil)-2'-(2,2-dimetil-propil)-6-fluoro-2-oxo-1,2-d¡hidro-espiro[indol-3,3'-p¡rrolid¡na]-5'-carboxílico, trifluoroacetato 1H NMR (300 MHz, MeOH-d4): 7,66-7,53 (m, 1H), 7,44-7,33 (m, 1H), 7,22-7,09 (m, 1H), 6,93-6,79 (m, 1H), 6,59-6,51 (m, 1H), 5,40-5,31 (m, 1H), 4,63-4,48 (m, 1H), 4,41-4,30 (m, 1H), 2,41-2,20 (m, 2H), 2,15-1,97 (m, 2H), 1,95-1,85 (m, 1H), 1,85-1,71 (m, 1H), 1.71-1,47 (m, 3H), 1,19-1,07 (m, 1H), 0,88 (s, 9H); ESI-MS calculado para C29H34CIF3N303 (M + H)+ requiere 546,23, encontrado 546,58; HPLC (Condición I) tR = 52,05 min (Pureza 98,8%); HPLC (Condición II) tR = 19,26 min (Pureza 100%).

LC-MS: tR (min) = 0,80; [M+H]+: m/z 546; [M-H]": m/z 544 (método A). 1H NMR (400 MHz; DMSO-d6 + TFA): 0,81 (s, 9 H); 0,81 a 1,99 (m, 10 H); 3,35 (m, 1 H); 3,52 (m, 1 H); 4,47 (d, J=12,0 Hz, 1 H); 4,53 (d ancho, J=8,3 Hz, 1 H); 5,37 (d, J=12,0 Hz, 1 H); 6,58 (dd, J=2,6 y 9,1 Hz, 1 H); 6,91 (m, 1 H); 7,21 (t, J=9,0 Hz, 1 H); 7,45 (m, 1 H); 7,62 a 7,72 (m, 2 H).

MI-710601 - sal de TFA (4-h¡droxi-c¡clohexil)-amida de ácido (2'S,3'R,4'R,5'R)-6-Cloro-4'-(3-cloro-fen¡l)-2,-(2,2-dimetil-prop¡l)-2-oxo-1 ,2-dihidro-espiro[¡ndol-3,3'-pirrolid¡na]-5'-carboxíl¡co, trifluoroacetato LC-MS: tR (min) = 0,82; [M+Hf: m/z 544; [M-H]": m/z 542 (método A). 1H NMR (400 MHz; DMSO-d6 + TFA): 0,80 (s, 9 H); 0,83 a 1 ,96 (m, 10 H); 3,34 (m, 1 H); 3,50 (m, 1 H); 4,02 (d, J=12,1 Hz, 1 H); 4,48 (d ancho, J=8,5 Hz, 1 H); 5,32 (d, J=12,1 Hz, 1 H); 6,75 (dd, J=1 ,9 y 8,3 Hz, 1 H); 6,98 (d, J=7,8 Hz, 1 H); 7,18 a 7,32 (m, 4 H); 7,74 (d, J=8,3 Hz, 1 H).

I-710801 (4- idroxi-ciclohex¡l)-amida de ácido (2'S,3'R,4'R,5'R)-6-Cloro-4'-(3-cloro-fenil)-2'-(2,2-dimetil-propil)-5-fluoro-2-oxo-1 ,2-dihidro-espiro[indol-3,3'-pirrolidina]-5'-carboxilico LC-MS: tR (min) = 0,85; [M+H]+: m/z 562; [M-H]": m/z 560 (método A). 1H NMR (400 MHz; DMSO-d6): 0,78 (m, 1 H); 0,81 (s, 9 H); 1 ,08 a 1 ,33 (m, 5 H); 1 ,70 a 1 ,90 (m, 4 H); 3,25 (m, 1 H); 3,35 a 3,58 (m, 3 H); 3,92 (d, J=9,2 Hz, 1 H); 4,43 (t, J=9,2 Hz, 1 H); 4,49 (d, J=4,8 Hz, 1 H); 6,79 (d, J=6,4 Hz, 1 H); 6,92 (d, J=7,8 Hz, 1 H); 7,09 a 7,21 (m, 3 H); 7,75 (d, J=8,5 Hz, 1 H); 7,83 (d, J=9,3 Hz, 1 H); 10,38 (s ancho, 1 H).

MI-710901 - sal de TFA ciclopropilamida de ácido (2'S,3,R,4,S,5,R)-6-Cloro-4,-(3-cloro-2-fluoro-fenil)-2'-(2,2-dimetil-propil)-2-oxo-1 ,2-dihidro-esp¡ro[indol-3,3'-pirrolidina]-5'-carboxílico, trifluoroacetato 1H NMR (300 MHz, MeOH-d4): 7,61 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 7,53 (t, J = 6,7 Hz, 1H), 7,40 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 7,21-7,08 (m, 2H), 6,79 (d, J= 1,6 Hz, 1H), 5,14 (d, J= 11,3 Hz, 1H), 4,60 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 4,48 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 2,78-2,58 (m, 1H), 1,86 (dd, J = 8,4, 15,4 Hz, 1H), 1,13 (d, J = 15,4 Hz, 1H), 0,88 (s, 9H), 0,78-0,60 (m, 2H), 0,47-0,16 (m, 2H); 13C NMR (75 MHz, MeOH-d4): 177,9, 169,5, 157,8 (d, JC-F = 249,4 Hz), 145,2, 137,2, 132,6, 128,7, 126,8 (d, JC.F = 1,6 Hz), 126,6 (d, JC-F = 4,9 Hz), 124,2, 123,6, 122,5 (d, JC.F = 18,8 Hz), 121,8 (d, JC-F = 13,1 Hz), 64,7, 64,4, 62,9, 43,5, 31,0, 29,6, 23,9, 6,7, 6,5; ESI-MS calculado para C26H2gCI2FN302 (M + H)+ requiere 504,16, encontrado 504,58; HPLC (Condición I) tR = 58,22 min (Pureza 99,6%).

LC-MS: tR (min) = 0,98; [M+H]+: m/z 504; [M-H]": m/z 502 (método A) 1H NMR (400 MHz; DMSO-d6 + TFA): 0,15 (m, 1 H); 0,35 (m, 1 H); 0,54 a 0,70 (m, 2 H); 0,81 (s, 9 H);1,01 (d, J=15,2 Hz, 1 H); 1,91 (dd, J=8,4 y 15,2 Hz, 1 H); 2,66 (m, 1 H); 4,52 (m, 2 H); 5,27 (d, J=12,0 Hz, 1 H); 6,79 (d, J=2,0 Hz, 1 H); 7,18 (dd, J=2,0 y 8,3 Hz, 1 H); 7,23 (d, J=8,1 Hz, 1 H); 7,48 (m, 1 H); 7,59 (m, 1 H); 7,74 (d, J=8,3 Hz, 1 H).

C08301 - sal de TFA 1H NMR (300 MHz, MeOH-d4): 7,64-7,54 (m, 1H), 7,20-7,46 (m, 1H), 7,46-7,38 (m, 1H), 7,28-7,14 (m, 2H), 5,26 (d, J = 11,34 Hz, 1H), 4,65 (d, J = 11,43 Hz, 1H), 4,55 (dd, J = 8,28, 1,59 Hz, 1H), 3,95-3,80 (m, 1H), 2,46-2,33 (m, 1H), 2,30-2,20 (m, 1H), 2,40-1,84 (m, 2H), 1,76-1,64 (m, 1H), 1,29 (s, 3H), 1,17 (dd, J = 15,40, 1,5 Hz, 1H), 0,88 (S, 9H); 13C NMR (75 MHz, MeOH-d4): 177,4, 166,9, 157,8 (d, JC-F = 249,9 Hz), 144,3 (d, JC-F = 248,0 Hz), 132,8, 132,5 (d, JC-F = 12,3 Hz), 128,6, 126,7 (d, JC-F = 4,87 Hz), 126,3 (d, JC.F = 3,32 Hz), 125,6, 123,9 (d, JC-F = 14,3 Hz), 122,6 (d, JC-F = 18,9 Hz), 122,1, 121,3 (d, JC.F = 13,1 Hz), 67,2, 64,7, 64,5, 62,6, 48,9, 45,6, 45,5, 43,4, 38,3, 31,0, 29,5, 27,5; ESI-MS calculado para C28H3.35CI2F2 303 [M+H]+: 566,18, Encontrado: 566,50.

C08601-sal de TFA 1H NMR (300 MHz, MeOH-d4): 8,83 (d, J = 6,98 Hz, 1H), 7,54-7,38 (m, 2H), 7,30-7,14 (m, 3H), 5,26 (d, J =11,37 Hz, 1H), 4,64 (d, J = 11,37 Hz, 1H), 4,56 (dd, J = 8,35, 1,27 Hz, 1H), 3,95-3,80 (m, 1H), 2,48-2,34 (m, 1H), 2,32-2,20 (m, 1H), 2,08-1,86 (m, 2H), 1,80-1,64 (m, 1H), 1,30 (s, 3H), 1,18 (d, J = 14,37 Hz, 1H), 0,90 (s, 9H); 13C NMR (75 MHz, MeOH-d4): 177,4, 166,9, 133,9, 132,4, 130,1, 126,35 (dd, JC-F = 9,43, 2,72 Hz), 125,5, 125,0 (d, JC-F = 3,72 Hz), 124,0 (d, JC-F = 14,4 Hz), 122,1 (d, JC.F = 3,13 Hz), 121,9 (d, JC-F = 9,77 Hz), 119,3 (d, JC.F = 17,1 Hz), 119,9, 115,1, 67,3, 64,8, 64,7, 64,5, 62,6, 45,6, 45,5, 43,4, 38,4, 31,0, 29,5, 27,5; ESI-MS calculado para C28H3235CIF3N303 [M+H]+: 550,20, Encontrado: 550,35.

C09101-sal de TFA 1H NMR (300 MHz, MeOH-d4): 8,43 (d, J = 7,73 Hz, 1H), 7,66-7,54 (m, 2H), 7,39 (t, J = 7,31 Hz, 1H), 7,24-7,10 (m, 2H), 6,82 (d, J = 1,43 Hz, 1H), 5,26 (d, J = 12,22 Hz, 1H), 4,61 (d, J = 11,38 Hz, 1H), 4,53 (d, J = 7,73 Hz, 1H), 3,57-3,54 (m, 1H), 1,93 (dd,J= 15,41, 8,26 Hz, 1H), 1,80-1,10 (m, 9H), 1,16 (s, 3H), 0,89 (s, 9H); 13C NMR (75 MHz, MeOH-d4): 177,6, 166,6, 157,7 (d, JC-F = 249,6 Hz), 144,9, 137,0, 132,4, 128,6, 126,5, 126,4 (d, JC-F = 4,9 Hz), 124,0, 123,3, 122,3 (d, JC-F = 19,2 Hz), 121,3 (d, JC-F= 13,0 Hz), 118,7, 114,9, 112,0, 68,7, 64,4, 64,0, 62,8, 50,2, 48,9, 43,2, 37,9, 37,8, 30,9, 30,8, 29,4, 28,5, 28,3; ESI-MS calculado para C3oH3735CI2F 303 [M+H]+: 576,21 , Encontrado: 576,58.

C09601-sal de TFA H NMR (300 MHz, MeOH-d4): 8,84 (d, J = 6,87 Hz, 1H), 7,62 (d, J = 8,10 Hz, 1H), 7,19 (dd, J = 8,10, 1,79 Hz, 1H), 7,15 (dt, J = 8,42, 1,87 Hz, 1H), 7,01 (s, 1H), 6,94 (d, J = 9,62, 1,30 Hz, 1 H), 6,83 (d, J = 1 ,69 Hz, 1 H), 5,21 (d, J = 11 ,25 Hz, 1 H), 4,45 (dd, J = 8,21 , 1 ,56 Hz, 1 H), 4,15 (d, J = 11,25 Hz, 1H), 4,00-3,82 (m, 1H), 2,50-2,36 (m,1H), 2,36-2,22 (m, 1H), 2,10-1,98 (m, 1H) 1,91 (dd, J = 15,44, 8,30 Hz, 1H), 1,84-1,72 (m, 1H), 1,31 (s, 3H), 1,16 (dd, J = 15,44, 1,47 Hz, 1H), 0,90 (s, 9H); 13C NMR (75 MHz, MeOH-d4): 177,7, 167,0, 164,0 (d, JC-F = 249,6 Hz), 145,3, 137,3, 136,6 (d, JC-F= 20,6 H), 136,6, 126,4, 126,1 (d, JC-F= 2,91 Hz), 124,3, 123,8, 117,9 (d, JC-F= 25,0 Hz), 115,4 (d, J = 23,0 Hz), 112,3, 67,3, 64,8, 64,3, 62,7, 56,7, 45,7, 45,6, 43,3, 38,4, 31,0, 29,6, 27,6; ESI-MS calculado para C28H3335CI2FN303 [M+H]+: 548,18, Encontrado: 548,67.

C09701-saldeTFA 1H NMR (300 MHz, MeOH-d4): 8,21 (d, J = 6,81 Hz, 1H), 7,68-7,54 (m, 2H), 7,39 (td, J = 7,60, 1,36 Hz, 1H), 7,18 (t, J = 8,09 Hz, 1H), 7,13 (dd, J = 7,97, 1,92 Hz, 1H), 6,79 (d, J= 1,66 Hz, 1 H), 5,30 (d, J = 11 ,51 Hz, 1 H), 4,56 (d, J = 11 ,84 Hz, 1 H), 4,52 (d, J = 8,26 Hz, ÍH), 3,86-3,70 (m, 1H), 2,00-1,80 (m, 2H), 1,65-1,05 (m, 8H), 1,04 (s, 3H), 0,87 (s, 9H); 13C NMR (75 MHz, MeOH-d4): 177,8, 167,2, 145,1, 137,2, 132,7, 128,8, 126,7 (d, JC-F = 3,6 Hz), 126,6, 124,2, 123,4, 122,6 (d, JC.F = 18,7 Hz), 121,7 (d, JC.F = 12,5 Hz), 112,1, 69,7, 64,6, 64,2, 62,9, 49,2, 43,4, 36,8, 36,4, 31,0, 29,5, 28,3, 28,3; ESI-MS calculado para CaoHa^CIzFNaOs [M+Hf: 576,21, Encontrado: 576,67.

C11701-sal de TFA 1H NMR (300 MHz, MeOH-d4): 8,83 (d, J = 6,61 Hz, 1H), 7,64 (dd, J = 6,06, 2,50 Hz, 1H), 7,59 (d, J = 8,11 Hz, 1H), 7,36-7,22 (m, 1H), 7,11 (dd, J = 8,09, 1,76 Hz, 1H), 7,00-6,82 (m, 1 H), 1 ,72 (d, J = 1 ,72 Hz, 1 H), 5,13 (d, J = 11 ,21 Hz, 1 H), 4,58 (d, J = 11 ,21 Hz, 1 H), 4,51 (dd, J = 8,23, 1,66 Hz, 1H), 3,98-3,80 (m, 1H), 2,44-2,32 (m, 1H), 2,32-2,20 (m, 1H), 2,10-1,94 (m, 1H), 1,88 (dd, J= 15,38, 8,24 Hz, 1H), 1,80-1,68 (m, 1H), 1,29 (s, 3H), 1,14 (dd, J= 15,38, 1,45 Hz, 1H), 0,89 (s, 9H); 13C NMR (75 MHz, MeOH-d4): 177,9, 167,1, 161,1 (d, JC-F = 2436 Hz), 145,2, 137,3, 136,9, 132,1 (d, JC-F = 9,0 Hz), 131,2 (d, JC-F = 3,60 Hz), 130,0 (d, JC-F = 2,22 Hz), 127,0, 123,8 (d, JC-F = 57,7 Hz), 121,6 (d, JC-F = 14,8 Hz), 118,5 (d, JC-F = 25,4 Hz), 112,1, 67,4, 64,5 , 64,4 , 62,7 , 48,4 , 45,7 , 45,5 , 43,3 , 38,4 , 31,0 , 29,6 , 27,6; ESI-MS calculado para C28H3335CI2FN303[M+H]+: 548,19, Encontrado: 548,67.

C29701-sal de TFA 1H NMR (MeOH-d4): 7,66 (d, J = 8,47 Hz, 1H), 7,56 (t, J = 6,87 Hz, 1H), 7,43 (td, J = 7,60, 1,47 Hz, 1H), 7,22 (d, J= 7,79 Hz, 1H), 7,16 (dd, J = 8,17, 1,89 Hz, 1H), 6,81 (d, J= 1,80 Hz, 1H), 5,17 (d, J = 11,92 Hz, 1H), 4,68-4,58 (m, 2H), 3,91-3,78 (m, 1H), 3,78-3,66 (m, 2H), 2,44-2,32 (m, 1H), 2,26-2,10 (m, 2H), 1,98-1,88 (m, 1H), 1,64-1,52 (m, 1H), 1,43 (t, J = 7,15 Hz, 1H), 1,33-1,25 (m, 1H), 1,29 (s, 3H), 0,81 (s, 3H); ESI-MS: Calculado para C3oH37CI2F 303 [M+H]+ = 576,22, Encontrado: 576,92.

C30201-sal de TFA 1H NMR (MeOH-d4): 7,68 (dd, J = 8,16, 1 ,47 Hz, 1 H), 7,48 (t, J = 7,09 Hz, 1 H), 7,39 (td, J = 7,30, 1 ,29 Hz, 1 H), 7,20-7,08 (m, 2H), 6,79 (d, J = 1 ,79 Hz, 1 H), 5,19 (d, J = 11 ,56 Hz, 1 H), 4,83 (d, J = 11 ,56 Hz, 1 H), 4,51 (t, J = 3,96 Hz, 1 H), 3,94-3,78 (m. 1 H), 3,12 (s, 3H), 2,50-2,36 (m, 1 H), 2,32-2,20 (m, 1 H), 2,10-1 ,92 (m, 2H), 1 ,73 (dd, J = 10,67, 9,23 Hz, 1 H), 1 ,40-1 ,25 ¡(m, 1 H), 1 ,29 (s, 3H), 0,75 (s, 9H); ESI-MS: Calculado para C29H35CI2FN3O3 [M+H]+ = 562,20, Encontrado: 562,58.

EJEMPLO 2 Ensayo de unión a MDM2 de polarización de la fluorescencia La afinidad de unión de los inhibidores de MDM2 se determinó utilizando un ensayo de unión basado en polarización de la fluorescencia (basado en FP) optimizado, sensible y cuantitativo usando una proteína MDM2 humana recombinante etiquetada con His (residuos 1-118) y un péptido en base a p53 etiquetado fluorescentemente.

El diseño de la sonda de fluorescencia se basó en un compuesto peptidomimético en base a p53 de alta afinidad previamente descrito (5-FAM- AIa- AIa-Phe-Met-Aib-pTyr-(6-CI-LTrp)-Glu-Ac3c-Leu-Asn-NH2 (SEQ ID NO: 1 )) (García-Echeverría ef al., J. Med. Chem. 43: 3205-3208 (2000)). Este péptido etiquetado se denomina PMDM6-F. El valor de Kd de PMDM6-F con la proteína MDM2 recombinante se determinó a partir de la curva de saturación. La proteína MDM2 se diluyó en series por duplicado en una placa de fondo redondo negra de 96 pocilios Dynex y el péptido PMDM6-F se agregó a una concentración de 1 nM. El ensayo se llevó a cabo en la solución amortiguadora: 100 mM fosfato de potasio, pH 7,5; 100 pg/mL de gamma globulina bovina; 0,02% azida de sodio, 0,01 % Tritón X-100) y los valores de polarización se midieron luego de 3 h de incubación usando un ULTRA READER (Tecan U.S. Inc., Research Triangle Park, NC). El valor de Cl50 se obtuvo ajustando los valores de mP en una curva sigmoidea de dosis-respuesta (pendiente variable) con una regresión no lineal y se determinó que era de 1 ,40 nM ± 0,25. El valor de Kd se calculó usando la ecuación: Valor Kd = Cl50 - L0/2. LO es la concentración total del ligando fluorescente; LO/2 es la concentración total del ligando fluorescente dividida entre 2. Dado que el PMDM6-F se utilizó con una concentración final de 1 nM, la LO/2 fue de 0,5 nM.

Se llevaron a cabo experimentos de unión competitiva dependiente de la dosjs con diluciones en serie de un compuesto evaluado en DMSO. Una muestra de 5 pL del compuesto evaluado y la proteína MDM2 (10 nM) y el péptido PMDM6-F (1 nM) pre-incubados en la solución amortiguadora de ensayo (100 mM fosfato de potasio, pH 7,5; 100 pg/mL gamma globulina bovina; 0,02% azida de sodio, 0,01 % Tritón X-100) se agregaron en una placa de fondo redondo negra de 96 pocilios Dynex para producir un volumen final de 125 pL. Para cada ensayo los testigos incluyeron la proteína MDM2 y PMDM6-F (equivalente a 0% de inhibición), péptido PMDM6-F solo (equivalente a 100% de inhibición). Los valores de polarización se midieron después de 3 h de incubación. Los valores de CI50, es decir, la concentración de inhibidor en la cual se desplaza el 50% del péptido unido, se determinaron a partir de una representación gráfica usando análisis de mínimos cuadrados no lineales. El ajuste a la curva se llevó a cabo usando el software GRAPHPAD PRISM (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA).

En la alternativa, los valores de polarización de la fluorescencia se midieron usando el lector de placas Infinite M-1000 (Tecan U.S., Research Triangle Park, NC) en placas de fondo redondo negras de 96 pocilios Microfluor 2 (Thermo Scientific). En los experimentos de saturación se agregaron 1 nM de PMDM6-F y concentraciones crecientes de proteínas a cada pocilio hasta un volumen final de 125 µ? en la solución amortiguadora de ensayo (100 mM fosfato de potasio, pH 7,5, 100 g/ml de ?-globulina bovina, 0,02%. azida de sodio (Invitrogen), con 0,01 % Tritón X-100 y 4% DMSO). Las placas se mezclaron e incubaron a temperatura ambiente durante 30 minutos con agitación suave para asegurar el equilibrio. Los valores de polarización en unidades de milipolarización (mP) se midieron a una longitud de onda de excitación de 485 nm y una longitud de onda de emisión de 530 nm. Luego se calcularon las constantes de disociación en equilibrio (Kd) ajustando los incrementos de FP dependientes de la dosis sigmoideos en función de las concentraciones de proteína usando el software Graphpad Prism 5.0 (Graphpad Software, San Diego, CA).

Se determinaron los valores de K¡ de los compuestos evaluados en un experimento de unión competitiva dependiente de la dosis. Se agregaron mezclas de 5 µ? del compuesto evaluado en diferentes concentraciones en DMSO y 120 µ? de complejo de proteína pre-incubada/sonda fluorescente con concentraciones fijas en la solución amortiguadora de ensayo (100 mM fosfato de potasio, pH 7,5, 100 g/ml ?-globulina bovina, 0,02% azida de sodio, con 0,01 % Tritón X-100) a placas de ensayo y se incubó a temperatura ambiente durante 30 minutos con agitación suave. Las concentraciones finales de la proteína y la sonda fluorescente en los ensayos competitivos fueron de 10nM y 1 nM, respectivamente, y la concentración final de DMSO fue de 4%. En cada placa de ensayo se incluyeron testigos negativos que contenían complejo de proteína/sonda fluorescente solamente (equivalente a 0% de inhibición) y testigos positivos que contenían sonda fluorescente libre solamente (equivalente a 100% de inhibición). Los valores de FP se midieron como se describió anteriormente. Se determinaron los valores de Cl50 mediante ajuste de regresión no lineal de las reducciones de FP dependientes de la dosis sigmoideas en función de las concentraciones de compuesto totales usando el software Graphpad Prism 5.0 (Graphpad Software, San Diego, CA). Se calcularon los valores dé K¡ de los compuestos evaluados con respecto a la proteína MDM2 usando los valores de Cl50 medidos, el valor de Kd de la sonda fluorescente con respecto a la proteína y las concentraciones de la proteína y la sonda fluorescente en los ensayos competitivos (Nikolovska-Coleska et al. , Anal. Biochem. 332:261 -73 (2004)).

Los compuestos que se muestran en la Tabla 2A como la base libre se evaluaron como la base libre o como la sal de CF3C02H (TFA) o HCI. En general se esperan respuestas comparables de los ensayos entre la base libre y la forma de sal de un compuesto (ver, por ejemplo, MI-77301 (base libre) y MI-77301 (sal de TFA)).

Cinética de unión de diferentes isómeros en medios de unión Se diluyeron alícuotas de soluciones concentradas de DMSO recientemente preparadas de compuestos en solución amortiguadora de ensayo de unión de FP para preparar las soluciones de incubación del compuesto acuoso en el que se llevaría a cabo la isomerización del compuesto. La concentración final de compuesto en la solución de incubación fue de 25µ? y 5% de DMSO estuvo presente para mejorar la solubilidad. Estas soluciones se almacenaron a temperatura ambiente durante todo el transcurso del experimento. Se mezclaron 80 µ? de alícuotas de soluciones de compuesto con 20 de mezcla de MDM2/PMDM6-F recientemente preparada en las placas de ensayo en diferentes momentos. Las concentraciones finales de la proteína, sonda fluorescente y DMSO son las mismas que las de los ensayos competitivos descritos anteriormente. También se incluyeron testigos negativos y positivos en cada placa de ensayo. Luego de 15 minutos de incubación a temperatura ambiente con agitación suave se midieron los valores de mP y se determinaron los valores de Cl50 como se describió anteriormente (Tabla 2B). Cabe destacar que, debido al tiempo de preparación e incubación de las placas necesario antes de la medición, todos los valores de Cl50 presentados más adelante son valores obtenidos, de hecho, 20 minutos después del tiempo de incubación indicado.

EJEMPLO 3 Ensayó de unión a MDM2 de polarización de la fluorescencia La afinidad de unión de los inhibidores de MDM2 se determinó opcionalmente usando un ensayo de unión basado en la polarización de la fluorescencia (basado en la FP) usando una proteína MDM2 recombinante humana (residuos 5-109) y PMDM6-F de la siguiente manera: la proteína MDM2 se diluyó en serie con un paso de 1 ,8 en una placa Costar 3686 de 96 pocilios negra con superficie anti-unión y el péptido PMDM6-F se agregó a una concentración de 5 nM. El ensayo se llevó a cabo en la solución amortiguadora: 100 mM fosfato de potasio, pH 7,5; 100 pg/mL gamma globulina bovina, 0,01 % Tritón X-100) y los valores de anisotropía se midieron en equilibrio usando una lectora Fusión (Packard). La fracción de ligando unido, FSB, se calculó usando la siguiente ecuación: FSB = (Aobs - AF)/[(Ab-Aobs)Q + Aobs - AF] (ref), en donde Aobs = anisotropía observada, Ab = anisotropía cuando la totalidad de p53 está unido, AF = anisotropía cuando p53 está libre, Q = relación entre Intensidad de fluorescencia unida/intensidad de fluorescencia libre (Biochemistry 43:16056-16066 (2004)). Se determinó que la Kd, usando la ecuación de Langmuir aplicada a la polarización de la fluorescencia, era de 1 ,8 nM.

Se llevaron a cabo experimentos de unión competitiva dependiente de la dosis con diluciones en serie de un compuesto ensayado en DMSO. Una muestra de 5 pL del compuesto evaluado y péptido PMDM6-F (5 nM) y proteína MDM2 (6 u 8 nM) en la solución amortiguadora de ensayo (100 mM fosfato de potasio, pH 7,5; 100 g/mL gamma globulina bovina; 0,01 % Tritón X-100) se agregaron en una placa Costar 3686 de 96 pocilios negra con superficie anti-unión para producir un volumen final de 125 pL. Para cada ensayo los testigos incluyeron la proteína MDM2 y PMDM6-F (equivalente a 0% de inhibición), péptido PMDM6-F solo (equivalente a 100% de inhibición). Los valores de polarización se midieron en equilibrio. Los valores de Cl50, es decir, concentración de inhibidor en la que se desplaza el 50% del péptido unido, se determinaron a partir de una representación gráfica usando el modelo logístico de 4 parámetros (Ratkowsky and Reedy, Biometrics 42(3): 575-82 (1986). El ajuste se obtuvo mediante regresión no lineal usando el algoritmo de Marquardt en el software Xlfit (Tabla 3).

Tabla 3 EJEMPLO 4 Ensayo de crecimiento celular Las líneas celulares isogénicas de cáncer de colon HCT-116 fueron amablemente donadas por el Prof. Bert Vogelstein (Johns Hopkins, Baltimore, MD) y se mantuvieron en medio 5A de McCoy que contenía 10% FBS. El resto de las líneas celulares se obtuvieron del ATCC (Manassas, VA) y se mantuvieron en medio RPMI-1640 que contenía 10% FBS, Las células se sembraron en placas de cultivo celular de fondo plano de 96 pocilios a una densidad de 2-3x 103 células/pocilio con compuestos y se incubaron durante 4 días. La tasa de inhibición del crecimiento celular luego del tratamiento con concentraciones crecientes de compuestos de prueba se determinó mediante WST-8 (sal monosódica de 2-(2-metox¡-4-nitrofenil)-3-(4-nitrofenil)-5-(2,4-disulfofenil)-2H-tetrazolio) (Dojindo Molecular Technologies Inc., Gaithersburg, Maryland). Se agregó WST-8 a una concentración final de 10% a cada pocilio y luego las placas se incubaron a 37°C durante 2-3 hrs. La absorbancia de las muestras se midió a 450 nm usando una lectora TECAN ULTRA. La concentración de los compuestos que inhibieron el 50% del crecimiento celular (Cl50) se calculó comparando la absorbancia de las células sin tratar y las células tratadas con los compuestos usando el software GraphPad Prism (GraphPad Software, La Jolla, CA 92037, USA). Los resultados de este ensayo se presentan en las Tablas 2A y 2C. En las condiciones usadas en este ensayo es posible que un compuesto que tiene la Fórmula II se isomerice y convierta en un compuesto que tiene la Fórmula XII y otros isómeros (por ejemplo, MI-773 se isomeriza y convierte en MI-77301 ; MI-519-64 se isomeriza y convierte en MI-519-6401 ). Los resultados de este ensayo para MI-77301 en una variedad de líneas celulares de melanoma (Fernandez, Y., er a/., Cáncer Res. 65:6294-6304 y referencias allí citadas) se presentan en la Fig. 24.

EJEMPLO 5 Ensayo de muerte celular Se realizaron ensayos de muerte celular usando tinción con azul de tripano. Las células se trataron en presencia y ausencia de los compuestos indicados. Se tiñeron las células flotantes y adherentes con azul de tripano. Las células que se tiñeron de azul o las que eran morfológicamente no saludables se puntuaron como células muertas. Se contaron al menos 100 células en cada una de las tres áreas separadas bajo el microscopio. Tal como se muestra en las Figs. 1 1 y 12, los inhibidores de MDM2 proporcionados en la presente inducen la muerte celular en células cancerosas de SJSA-1 y RS4;11 con p53 tipo silvestre.

Tabla 2A Tratamiento de cuatro días.

Tabla 2B Tabla 2C 1 Tratamiento de cuatro días.

EJEMPLO 6 Análisis por Western blot Para los análisis por Western blot se lisaron las células en solución amortiguadora RIPA helada: 20 mM Tris-HCI (pH 7,5), 150 mM NaCI, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 1 % desoxicolato de sodio, 2,5 mM pirofosfato de sodio, 1 mM b-glicerofosfató, 1mM ortovanadato de sodio y 1 pg/ml leupeptina. Las proteínas en los lisados de células completas se detectaron mediante análisis por Western blot usando los siguientes anticuerpos: anti-p53 (clon DO-1 ), anti-MDM2 (clon SMP-14), anti-p2l (clon SX118), anti-p-actina (clon AC-40) y deshidrogenasa de gliceraldehído-3-fosfato (GAPDH; conjugado HRP). Como se muestra en las Figs. 8, 9 y 13-16, los inhibidores de MDM2 proporcionados en la presente son activos en este ensayo.

La escisión de PARP se usó como marcador bioquímico de la apoptosis. Durante la apoptosis, caspasas escinden Poli (ADP-ribosa) polimerasa (PARP). Anti-PARP de conejo (Cell Signaling Cat No. 9542), utilizado en el experimento, detecta la escisión de la Poli (ADP-ribosa) polimerasa (PARP) de longitud completa (1 16kD) y fragmento más grande (89kD) escindido de PARP. Se trataron un total de 2 ? 106 células adherentes en presencia o ausencia de MI-77301 y se incubaron a 37°C durante 19 hr. Las células se cosecharon usando 0,05% tripsina-EDTA (Invitrogen), se lacaron en PBS y se lisaron sobre hielo durante 15 min usando solución amortiguadora RIPA (Sigma) complementada con cóctel inhibidor de proteasa (Roche). Se obtuvo un lisado celular aclarado mediante centrifugación de las células lisadas a 13000 x g a 4°C durante 15 min. Se estimó la proteína en el lisado celular usando tinte de ensayo para proteínas Bio-Rad comercialmente disponible. Se cargó un total de 25 g de proteína en un gel SDS-PAGE 4-20%, se sometió a electroforesis y se transfirió a una membrana de PVDF durante 3 horas a 40 V. La membrana se bloqueó en TBST (20 mM Tris, 0,5 M NaCI, 0,1 % Tween-20, pH 7,5) que contenía 5% de leche en polvo (Bio-Rad) durante 1 hr a temperatura ambiente. Se aplicó anticuerpo primario diluido en TBST, que contenía 5% de leche en polvo, a la membrana durante toda la noche en una habitación fría a 4°C en un agitador orbital. La membrana se lavó en TBST, se incubó durante 1 hr a temperatura ambiente con un anticuerpo secundario anti-conejo (anticuerpo anti-conejo de cabra Immunopure, Thermo Scientific) o un anticuerpo anti-ratón (anticuerpo anti-ratón de cabra Pierce, Thermo Scientific), diluido 1 :2000 en TBST. La membrana se lavó en TBST y se desarrolló usando reactivo SuperSignal West Pico (Thermo Scientific). Se usó anticuerpo de gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH) conjugado con HRP (Santa Cruz) como testigo de carga para proteínas. Los análisis por Western blot para MI-77301 se proporcionan en las Figs. 25, 26 y 28.

EJEMPLO 7 Estudios de eficacia in vivo usando modelos de xenoinjerto SJSA-1 y 22Rv1 Se cosecharon células tumorales de SJSA-1 (osteosarcoma) con Tripsina (0,05%)-EDTA (0,53 mM) (GIBCO™, Invitrogen Corp.), se agregó medio de crecimiento y las células se colocaron sobre hielo. Se mezcló una muestra celular 1 :1 con azul de tripano (GIBCO™, Invitrogen Corp.) y se contó en un hemocitómetro para determinar la cantidad de células vivas/muertas. Las células se lavaron una vez con 1X PBS (GIBCO™, Invitrogen Corp.) y se resuspendieron en PBS. Para inyecciones de Matrigel, luego de lavar en PBS, las células se resuspendieron en una mezcla helada 1 :1 de PBS y Matrigel (BD Biosciences, Invitrogen Corp.) para una concentración proteica en Matrigel final de 5 mg/ml. Se inocularon tumores SJSA-1 en ratones C.B-17 SCID a razón de 5 x 10 células en 0,1 mi con Matrigel. Se inyectaron las células subcutáneamente en la región de la ijada de cada ratón usando una aguja calibre 27.

El tamaño de los tumores que crecían en los ratones se midió en dos dimensiones usando calibres. Volumen del tumor (mm3) = (AxB2)/2, donde A y B son la longitud y el ancho del tumor (en mm), respectivamente. Durante el tratamiento se midieron el volumen del tumor y el peso corporal tres veces por semana. Después de terminado el tratamiento, el volumen del tumor (Figs. 17, 20, 22 y 23) y el peso corporal (Figs. 18 y 21 ) se midieron al menos una vez por semana. Los ratones se mantuvieron otros 60 días para observar adicionalmente el crecimiento del tumor y la toxicidad. Como se ilustra en la Fig. 22, una sola dosis de 200 mg/kg de MI-77301 (tratamiento QD1) muestra una eficacia comparable a un régimen de dosificación continuo (tratamiento QD7).

Antes de comenzar el tratamiento, se permitió que los tumores crecieran hasta un volumen de 60-140 mm3, punto en el cual deberían haberse establecido los suministros de vasos sanguíneos al tumor. Se aleatorizaron los ratones con tumores dentro del rango de tamaño aceptable en grupos de tratamiento de 8 ratones para compuestos experimentales y 10 ratones para el grupo testigo. Los compuestos experimentales se administraron oralmente una vez por día durante 2-3 semanas. El grupo testigo recibió vehículo solo (10% PEG 400:3% Cremophor:87% PBS). Otros vehículos adecuados para la administración in vivo de los compuestos proporcionados en la presente incluyen, a modo no taxativo, 98% PEG 200:2% polisorbato 80; 98% PEG 200:2% TPGS; y 0,5% polisorbato 80:0,6% metilcelulosa:98,9% agua.

Usando protocolos similares se evaluó la actividad antitumoral de MI-519-6401 y MI-77301 en el modelo de cáncer de próstata 22Rv1 en ratones (Fig. 19), y la actividad antitumoral de MI-77301 se evaluó en el modelo de tumor colorrectal humano HCT-116 (Fig. 31), el modelo de tumor de próstata humano LNCAP (Fig. 32) y el modelo de ALL humana RS4;11 (Fig. 33).

EJEMPLO 8 Síntesis de MI-519-64 y MI-519-65 Etapa 1 : 3-oxociclobutanocarboxilato de bencilo (2) Con referencia al Esquema 6A, se agregó BnBr a una mezcla de compuesto 1 y K2C03 en 150 mL de acetonitrilo. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 24 h y el sólido se filtró. El disolvente se retiró y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna para proporcionar el compuesto 2.

Etapa 2: 3-hidroxi-3-met¡lciclobutanocarboxilatos de bencilo (3 y 4) Se agregó MeMgCI en THF por goteo a la solución del compuesto 2 en éter dietílico a - 78°C y la mezcla se agitó a la misma temperatura durante media hora. Después de que el monitoreo mediante TLC mostró la desaparición del material de partida, la reacción se aplacó mediante la adición de solución acuosa de NH4CI. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo tres veces y la fase orgánica combinada se lavó con salmuera y se secó ( a2S04). El sólido se filtró y el disolvente se retiró. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna para proporcionar los compuestos 3 y 4 (5:1 en base al análisis mediante TLC).

Etapa 3: 3-(terc-butildimetilsililoxi)-3-metilciclobutanocarboxilatos de bencilo (5 y 6) A una mezcla de los compuestos 3 y 4 en DMF (10 mL) se agregó imidazol y TBSCI y la mezcla resultante se agitó a 80°C durante 30 h. Después de enfriar hasta alcanzar temperatura ambiente, se agregó agua y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo tres veces. La fase orgánica combinada se lavó con salmuera y se secó (Na2S0 ). El sólido se filtró y el disolvente se retiró. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna para obtener los compuestos 5 y 6.

Etapa 4: ácidos 3-(terc-butildimetilsililoxi)-3-metilciclobutanocarboxílicos (7 y 8) A una mezcla de los compuestos 5 y 6 en isopropanol se agregó Pd/C. La mezcla resultante se agitó bajo 1 atm de hidrógeno durante 1 h. La TLC mostró la desaparición del material de partida y el sólido se filtró. El disolvente se retiró para proporcionar los compuestos 7 y 8.

Etapa 5: bencil-3-(terc-butildimetilsililoxi)-3-metilciclobutilcarbamatos 9 y 10 A una solución agitada a 0°C de los compuestos 7 y 8 y Et3N en acetona se agregó CICOOEt por goteo. La mezcla resultante se agitó a 0°C durante 30 min. Se agregó una solución de NaN3 en agua y la mezcla resultante se agitó a 0°C durante 20 min adicionales. Se agregó agua y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo tres veces. La fase orgánica combinada se lavó con salmuera y se secó (Na2S04). El disolvente se retiró y el residuo se disolvió en tolueno. Se agregaron alcohol bencílico y NaHC03. La mezcla resultante se agitó a 80°C durante 2 h. Se retiró la totalidad del disolvente y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna para obtener dos isómeros 9 y 10 en una relación 5:1.

Etapa 6: 3-(terc-butildimetilsililoxi)-3-metilciclobutanamina (11 ) A una mezcla del isómero mayor 9 y NaHC03 en isopropanol se agregó Pd/C y la mezcla resultante se agitó bajo 1 atm de hidrógeno durante 1 h. El sólido se filtró y el disolvente se retiró para proporcionar el compuesto 11.

Etapa 7: 3-(terc-butildimetilsililoxi)-3-metilciclobutanamina (12) A una mezcla del isómero menor 10 y NaHC03 en isopropanol se agregó Pd/C y la mezcla resultante se agitó bajo 1 atm de hidrógeno durante 1 h. El sólido se filtró y el disolvente se retiró para proporcionar el compuesto 12.

Esquema 6A 11 (isómero mayor, 5: 1 ) 12 (isómero menor) isómeros separados Esquema 6B Etapa 8: MI-519-64 Con referencia al Esquema 6B, a una solución de compuesto 11 en THF se agregó el compuesto 13 y la solución resultante se agitó durante toda la noche. El disolvente se retiró y el residuo obtenido de esta forma se disolvió en CH3CN/H20 (1 :1 ). Se agregó CAN y la mezcla de reacción se agitó durante 30 min. Se agregó agua y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo tres veces. Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na2S0 ), se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice para proporcionar el compuesto 14. El compuesto 14 se disolvió en metanol, se agregó 1 HCI 2M en agua y la mezcla de reacción se agitó durante 1 h a temperatura ambiente. El disolvente se retiró y el residuo se purificó mediante HPLC para proporcionar MI-519-64 como la sal de TFA. 1H NMR (300 MHz, CD3OD) d 7,54-7,52 (m, 1 H), 7,42-7,38 (m, 1 H), 7,23-7,18 (m, 1 H), 6,88-6,75 (m, 3H), 5,04 (d, J = 9,9 Hz, 1 H), 4,45 (d, J = 9,9 Hz, 1 H), 4,19-4, 16 (m, 1 H), 3,92-3,89 (m, 1 H), 2,42-2,1 1 (m, 2H), 2,10-1 ,87 (m, 3H), 1 ,32-1 ,24 (m, 4H), 0,82 (s, 9H); MS (ESI) m/z 548 [M+H]+.

Etapa 9: MI-519-65 A una solución de compuesto 12 en THF se agregó el compuesto 13 y la solución resultante se agitó durante toda la noche. El disolvente se retiró y el residuo se disolvió en CH3CN/H20 (1 : 1 ). Se agregó CAN y la mezcla de reacción se agitó durante 30 min. Se agregó agua y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo tres veces. Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na2S04), se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice para proporcionar el compuesto 15. El compuesto 15 se disolvió en metanol, se agregó 1 HCI 2M en agua y la mezcla de reacción se agitó durante 1 h a temperatura ambiente. El disolvente se retiró y el residuo se purificó mediante HPLC para proporcionar MI-519-65 como la sal de TFA. 1 H NMR (300 MHz, CD3OD) d 7,50 (m, 1 H), 7,44-7,38 (m, 1 H), 7,24-7,20 (m, 1 H), 6,89-6,88 (m, 1 H), 6,80 (m, 1 H), 6,71 (m, 1 H), 4,91-4,88 (m, 1 H), 4,40-4,36 (m, 2H), 4,10-4,06 (m, 1 H), 2,41-2,33 (m, 2H), 2,07-1 ,87 (m, 3H), 1 ,25-1 ,21 (m, 4H), 0,82 (s, 9H); MS (ESI) m/z 548 [M+H]+.

EJEMPLO 9 Síntesis de MI-519-6401 Esquema 7 MI-519-64 MI-519-6401 Se colocó MI-519-64 (100 mg) purificado mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice en un matraz de fondo redondo de 50 mL equipado con una barra de agitación magnética. Se agregó acetonitrilo (20 mL) para disolver totalmente el compuesto y se agregó agua desionizada (7 a 10 mL). Luego se agregó solución acuosa saturada de NaHC03 (áprox. 0,5 mL) para ajusfar el valor de pH entre 7 y 8. Esta solución se dejó agitar a temperatura ambiente durante al menos 12 h. A la solución se agregaron TFA (0, 1 mL) y otros 10 mL de agua desionizada y la solución se purificó mediante RP-HPLC semi-preparativa inmediatamente utilizando acetonitrilo y agua como el eluyentes para proporcionar MI-519-6401 como la sal de TFA. 1H NMR (300 MHz, MeOH-d4): 7,62-7,53 (m, 2H), 7,45-7,35 (m, 1 H), 7,20- 7,10 (m, 2H), 6,80-6,85 (m, 1 H), 5,11 (d, J = 11 ,07 Hz, 1 H), 4,57 (d, J = 11 ,11 Hz, 1 H), 4,40 (d, J = 7,39 Hz, 1H), 4,00-3,80 (m, 1 H), 2,50-2,35 (m, 1 H), 2,35-2,20 (m, 1 H), 2,10-1 ,90 (m, 1 H), 1 ,90-1 ,60 (m, 2H), 1 ,30 (s, 3H), 1 ,20-1 ,05 (m, 1 H), 0,88 (s, 9H); 13C NMR (75 MHz, MeOH-d4): 177,8, 168,0, 157,6 (d, JC-F = 249 Hz), 144,9, 136,8, 132,2, 128,5, 126,5, 126,3 (d, JC-F = 4,76), 123,9, 123,7, 122,3 (d, JC.F = 18,97 Hz), 122,0 (d, JC.F = 13,1 Hz), 111 ,8, 67,1 , 64,6, 64,5, 62,9, 49,0, 45,5, 45,4, 43,3, 38,0, 30,8, 29,5, 27,3; ESI-MS calculado para CzeH ^CbFNsOa [M+H]+: 548,1883, Encontrado: 548,25.

Los espectros de la RP-HPLC analítica se presentan en las Figs. 1-3. En referencia a la Fig. 3, MI-519-6401 corresponde al pico de RP-HPLC a los 31 ,787 minutos.

En un procedimiento alternativo, se colocó MI-519-64 (100 mg) purificado mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice en un matraz de fondo redondo de 50 mL con una barra de agitación magnética. Se agregó metanol (20 mL) para disolver totalmente el compuesto y se agregó agua desionizada (10 a 20 mL). Luego se agregó solución acuosa saturada de NaHC03 (aprox. 0,5 mL) para ajusfar el valor de pH entre 7 y 8. Esta solución se dejó agitar a temperatura ambiente durante al menos 12 h. A la solución se agregaron TFA (0,1 mil) y otros 10 mL de agua desionizada y la solución se purificó mediante RP-HPLC semi-preparativa inmediatamente utilizando acetonitrilo y agua como el eluyentes para proporcionar MI-519-6401 como la sal de TFA.

Se prepararon C02701 , C02901 , C03001 , C03101 , C03401 , C03701 , C03801 , C04801, C08301 , C08601 y C11701 del Ejemplo 1 utilizando procedimientos similares a los utilizados para preparar MI-519-6401.

EJEMPLO 10 Síntesis de MI-773 Esquema 8 Etapa 1 A una solución agitada de oxindol 1 (4,19 g, 25 mmol) en metanol (50 mL) se agregó aldehido 2 (3,96 g, 25 mmol) y piperidina (2,45 mL, 25 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h y el precipitado amarillo se recogió, se lavó sucesivamente con metanol, hexanos y éter etílico y se secó para proporcionar el compuesto 3 (6,25 g, 81 % de rendimiento).

Etapa 2 A una solución de compuesto 3 (6,25 g, 21 mmol) en tolueno (75 mi) se agregó el compuesto 4 (5,43 g, 21 mmol), el compuesto 5 (2,15 g, 21 mmol) y tamices moleculares de 4Á (4 g). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante toda la noche y se filtró. El filtrado se evaporó y el residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice instantánea en columna (n-hexano/acetato de etilo = 9:1 a 5:1 ) para proporcionar el compuesto 6 (8,78 g, 65% de rendimiento).

Etapa 3 La solución del compuesto 6 (965 mg, 1 ,5 mmol) y la amina 7 (346 mg, 3 mmol) en 5 mL de THF se agitó a temperatura ambiente durante 2 días y el disolvente se retiró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice instantánea en columna (n-hexano/acetato de etilo = 1 :1 a 1 :4) para proporcionar el compuesto 8 (819 mg, 72% de rendimiento).

Etapa 4 A una solución enfriada con un baño de hielo del compuesto 8 (800 mg, 1 ,05 mmol) en CH3CN (8 mi), H20 (4 mi) y acetona (4 mi) se agregó CAN (amonio cérico) (1 ,15 g, 2,1 mmol). La evolución de la reacción se monitoreó mediante TLC. Cuando todo el material de partida había desaparecido (cerca de 5 min), se agregaron 100 mg de NaHC03 en polvo y la mezcla de reacción se diluyó con 50 mL de acetato de etilo. La fase orgánica se secó sobre Na2S04 anhidro, se filtró y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice instantánea en columna (cloruro de metileno/metanol/trietilamina = 200:1 :1 a 200:10:1 ) para proporcionar (2'f?,3S,4'S,5'R)-6-cloro- '-(3-cloro-2-fluorofenil)-?/-((fra s-4-hidroxic¡clohexil)-2,-neopentil-2-oxospiro[indolina-3,3'-pirrolidina]-5'-carboxamida (MI-773) (402 mg, 68% de rendimiento, Pureza (HPLC): > 95% (Fig. 35)). La configuración estereoquímica absoluta de MI-773 se determinó mediante análisis por rayos X.

Se disolvió MI-773 en DCM, se agregó TFA y el disolvente se eliminó mediante evaporación. El residuo se purificó adicionalmente mediante cromatografía sobre una columna C18 de HPLC semi-preparativa en fase inversa con el disolvente A (0,1% de TFA en agua) y el disolvente B (0,1% de TFA en metanol) como eluyentes (gradiente: 45% de disolvente A y 55% del disolvente B hasta 30% del disolvente A y 70% del disolvente B en 30 min) para proporcionar MI-773 como la sal de TFA. NMR para MI-773 (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD) d 7,47 (t, J = 7,0 Hz, 1 H), 7,34 (t, J = 7,4 Hz. 1 H), 7,14 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 6,83 (s, 1 H), 6,80 (s, 2H), 4,39 (d, J = 10,0 Hz, 1 H), 4,15-4,05 (m, 1 H), 3,72-3,53 (m, 1 H), 3,53-3,85 (m, 2H), 2,10-1 ,75 (m, 4H), 1 ,62 (d, J = 12,2 Hz, 1 H), 1 ,45-1 ,05 (m, 5H), 0,78 (s, 9H).

Estabilidad de MI-773 (sal de TFA): se disolvió MI-773 (sal de TFA) en una mezcla de agua/metanol: 1) agua/metanol = 1 :1 con 0,1 % de TFA, pH 2,1 ; 2) agua/metanol = 1 :1 con 0,1 % de TEA, pH 10,8; o 3) agua/metanol = 1 :1 , pH 3,9. La solución se dejó reposar a temperatura ambiente. La pureza se evaluó utilizando una columna C18 de HPLC analítica en fase inversa a las 0, 12 h, 24 h, 48 h y 72 h. Los resultados mostraron la transformación de MI-773 (correspondiente al pico 3) en MI-77302 (correspondiente al pico 1 ), MI-77301 (correspondiente al pico 4) y otro compuesto (correspondiente al pico 2) que tiene el mismo peso molecular (Figs. 6, 37 y 38). La pureza de una solución de muestra idéntica almacenada a 4°C también se evaluó a 0 y 36 h. Los resultados mostraron una transformación comparativamente lenta de MI-773 a 4°C.

EJEMPLO 1 1 Síntesis de MI-77301 Esquema 9 otros isómeros Se disolvió MI-773 (como la sal de TFA) en MeOH/H20 (relación v/v 1 :1 ) y sé dejó reposar a temperatura ambiente durante 1-4 días. La solución se purificó mediante cromatografía sobre una columna C18 de HPLC semi-preparativa en fase inversa con disolvente A (0,1% de TFA en agua) y disolvente B (0,1% de TFA en metanol) como eluyentes (gradiente: 45% de disolvente A y 55% de disolvente B to 30% de disolvente A y 70% de disolvente B en 30 min). MI-77301 se aisló como la sal de TFA. 1H NMR (300 MHz, MeOH-d ): 8,35 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 7,54-7,62 (m, 2H), 7,37-7,43 (m, 1 H), 7,12-7,20 (m, 2H), 6,80 (d, J = 1 ,5 Hz, 1 H), 5,20 (d, J = 11 ,4 Hz, 1 H), 4,58 (d, J = 1 1 ,4 Hz, 1 H), 4,51 (d, J = 7,2 Hz, 1 H), 3,50-3,75 (m, 1 H), 3,30-3,50 (m, 1 H), 1 ,82-2,00 (m, 3H), 1 ,76 (d, J = 10,5 Hz, 1 H), 1 ,52 (d, J = 12,3 Hz, 1 H), 1 ,05-1 ,42 (m, 4H), 0,88-1 ,00 (m, 1 H), 0,88 (s, 9H); 3C NMR (75 MHz, MeOH-d4): 177,7, 166,9, 157,6 (d, JC.F = 248,0 Hz), 145,0, 137,0, 132,4, 128,6, 126,6, 126,4 (d, JC.F = 4,9), 124,0, 123,4, 122,3 (d, JC.F = 18,8 Hz), 121 ,5 (d, JC.F = 12,8 Hz), 111 ,9, 69,9, 64,4, 64,0, 62,8, 49,7, 34,3, 34,2, 30,9, 30,82, 30,77, 29,4; ESI-MS calculado para C29H35CI2FN303 (M + H)+ requiere 562,20, encontrado 562,33; [a]D25 = -27,2° (c = 0,005 g/mL en MeOH); Pureza (HPLC): > 95% (ver Fig. 36).

En un procedimiento alternativo, se disolvió MI-773 (77 mg) en 15 mL de MeOH/H20 (v/v = 1 :1 ). Después de 3 días, los cristales de agujas que se habían formado se recogieron, se lavaron con MeOH frío/H20 (v/v = 1 :1 ) y se secaron al vacío para proporcionar MI-773Ó1 como la amina libre (20 mg; >95% de pureza como se determinó mediante HPLC). H NMR (300 MHz, MeOH-d4): 7,49-7,55 (m, 1 H), 7,25-7,31 (m, 1 H), 7,10-7,16 (m, 1 H), 6,82 (d, J = 1 ,8 Hz, 1 H), 6,50-6,71 (m, 1 H), 6,49 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 4,32 (d, J = 9,0 Hz, 1 H), 4,09 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 3,57-3,69 (m, 1 H), 3,49 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 3,46-3,57 (m, 1H), 1 ,83-2,07 (m, 3H), 1 ,68-1 ,80 (m, 1 H), 1 ,54 (dd, J = 9,0, 14,3 Hz, 1 H), 1 ,12-1 ,45 (m, 5H), 0,80 (s, 9H). La configuración estereoquímica absoluta de MI-77301 se determinó mediante análisis por rayos X.

Estabilidad de Wll-77301 (sal de TFA): MI-77301 (sal de TFA) se disolvió en una mezcla de agua/metanol (agua/metanol = 1 :1 con 0,1 % de TFA). La solución se dejó reposar a temperatura ambiente. La pureza se evaluó utilizando una columna C18 de HPLC analítica en fase inversa a las 0, 12 h, 48 h y 72 h. Los resultados mostraron una lenta transformación de MI-77301 (correspondiente al pico 4) en MI-77302 (correspondiente al pico 1) y dos compuestos más (correspondiente a los picos 2 y 3) que tienen el mismo peso molecular (Fig. 7). La estereoquímica absoluta de MI-77302 se determinó mediante análisis por rayos X.

Se prepararon MI-710201 , MI-710401 , MI-710501 , MI-710601 , MI-710801 y MI-710901 del Ejemplo 1 utilizando procedimientos similares a los utilizados para preparar MI-77301.

En la Fig. 34 se presenta la espectroscopia por 13C CPMAS NMR (400 MHz) de MI-77301 (arriba), MI-773 (medio) y MI-77302 (abajo). Se observan desplazamientos químicos en la región carbonilo (170-185 ppm).

En un procedimiento alternativo, MI-77301 se preparó como se describe en el Esquema 9A.

Esquema 9A pureza qu Inii ca *¦ 97¾> EJEMPLO 12 Síntesis de: (2,S,3R,4· ,5·S)-6-cloro-4,-(3-cloro-2-fluoGofenil)-N-((.rans)-4-hidroxiciclohexil)-2,-neopentil-2-oxospiro[indolina-3,3'-pirrolidina]-5'-carboxamida; y (2,R,3S,4'R,5,S)-6-cloro-4,-(3-clOGO-2-fluorofenil)-N-((frans)-4-hidroxiciclohex¡l)-2,-neopentil-2-oxosp¡ro[indolina-3,3'-pirrolidina]-5'-carboxamida Se preparó (5S,6R)-5,6-d¡fenilmorfolin-2-ona de acuerdo con J. Org. Chem. 2005, 70, 6653. pf: 139°C (Kofler); LC-MS: tR (min) = 0,96; [M+H]+: m/z 254 (método C).

OR.S'R^'S.e'S.S'R.Sa'SVe-cloro-S'-O-cloro^-fluorofenin-e'-neopentil-S'^'-difenil 3'.4',8',8a'-tetrahidroesp¡ro[indolina-3.7'-pirrolof2,1-cin .4loxazinal -1'.2(6'H -diona A una suspensión de 496 mg (1 ,61 mmol) de (E)-6-cloro-3-(3-cloro-2-fluorobencilideno)indolin-2-ona en tolueno bajo argón, se agregaron 408 mg (1 ,61 mmol) de (5S,6R)-5,6-difenilmorfolin-2-ona y 213 µ?_ (1 ,61 mmol) de 3,3-dimetil-butiraldehído. La mezcla de reacción se calentó a temperatura de reflujo durante 6 horas, tras lo cual se enfrió hasta alcanzar temperatura ambiente y se concentró hasta secarse a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea en un cartucho de sílice de 70 g (15-40 pm gel de sílice; disolvente eluyente: ciclohexano/ acetato de etilo 90/10 v/v; flujo: 50 mUmin). Se obtuvieron 0,58 g de (3R,3'R,4'S,6'S,8'R,8a'S)-6-cloro-8'-(3-cloro-2-fluorofenil)-6'-neopentil-3',4'-difenil 3\4\8\8a'-tetrahidroespiro[indolina-3,7'-pirrolot2,1 -c][1 ,4]oxazina]-1 \2(6'l-|)-diona como un sólido amarillo amorfo. LC-MS: tR (min) = 1 ,81 ; [M+H]+: m/z 643;[M-H]": m/z 641 (aparato WATERS UPLC-SQD; Ionización: electropulverización en modo positivo y/o modo negativo (ES+/-); Condiciones cromatográficas: Columna: ACQUITY BEH C18 1 ,7 pm - 2,1 x 50 mm; Disolventes: A: H20 (0,1 % ácido fórmico) B: CH3CN (0, 1 % ácido fórmico); Temperatura de la columna: 50 °C; Flujo: 0,8 ml/min; Gradiente (2,5 min): de 5 a 100 % de B en 1 ,8 min; 2,4 min: 100 % de B; 2,45 min: 100 % de B; de 100 a 5 % de B en 0,05 min; Tiempo de retención = tR (min); que en la presente se denomina "Método C"); 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 0,39 (s, 9 H); 1 ,30 (dd, J=4,0 y 15,2 Hz, 1 H); 1 ,93 (dd, J=6,3 y 15,2 Hz, 1 H); 3,49 (dd, J=4,0 y 6,3 Hz, 1 H); 4,47 (d, J=1 1 ,2 Hz, 1 H); 5,04 (d, J=4,2 Hz, 1 H); 5,08 (d, J=11 ,2 Hz, 1 H); 6,53 (d, J=8, 1 Hz, 1 H); 6,66 a 6,76 (m, 3 H); 6,96 (m, 2 H); 7,10 a 7,26 (m, 9 H); 7,34 (t ancho, J=7,9 Hz, 1 H); 7,62 (t ancho, J=7,9 Hz, 1 H); 10,71 (s ancho, 1 H). (2'S.3R.4'R.5'S)-6-cloro-4'-(3-cloro-2-fluorofen¡l^ 4-h¡drox¡ciclohexil)-2'-neopentil-2-oxospirorindolina-3.3' pirrolidina1-5'-carboxamida A una mezcla de 112 mg (0,97 mmol) de frans-4-aminociclohexanol en 2 mL de tetrahidrofurano bajo argón, se agregaron 0,57 g (0,89 mmol) de ^,3?,4'3,6'3,8?,83'5)-6-cloro-8'-(3-cloro-2-fluorofenil)-6'-neopentil-3',4'-difenil S'^'.e'.ea'-tetrahidroespirofindolina-SJ'-pirrolo[2,1-c][1 ,4]oxazina]-1 ',2(6'H)-diona en 8 mL de tetrahidrofurano. La mezcla resultante se calentó a 60°C durante 17 horas, tras lo cual se agregaron 136 pL (0,97 mmol) de trietilamina y se continuó con el calentamiento.

Después de 24 horas, se agregaron 13,6 mg (0,12 mmol) de íraí7s-4-aminociclohexanol y 2,5 mL de tetrahidrofurano. Después de 41 horas, la mezcla de reacción se enfrió hasta alcanzar temperatura ambiente y se concentró hasta secarse a presión reducida. El residuo se diluyó con una mezcla de 20 mL de acetato de etilo y 6 mL de agua y decantó. La fase acuosa se extrajo con 6 mL de acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio y se concentraron hasta secarse a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea en un cartucho de sílice de 70 g (15-40 pm gel de sílice; disolvente eluyente: ciclohexano/ acetato de etilo 50/50 v/v con posterior 40/60 v/v; flujo: 50 mL/min). Se obtuvieron 0,55 g de (2,S,3R,4,R,5,S)-6-cloro-4,-(3-cloro-2-fluorofenil)-1 '-((1 S,2R)- 2-hidroxi-1 ,2-d¡fen¡let¡l)-N-((frans)-4-h¡droxic¡clohexil)-2'-neopentil-2-oxospiro[¡nd pirrolid¡na]-5'-carboxamida como un merengue blanco, pf: 190°C (Kofler); LC-MS: tR (min) = 1 ,56; [M+H]+: m/z 758; [M-H]-: m/z 756 (método C); 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 0,51 (s, 9 H); 0,62 (d, J=15,2 Hz, 1 H); 0,81 (m, 1 H); 1 ,02 a 1 ,35 (m, 4 H); 1 ,60 (m, 1 H); 1 ,79 (m, 2 H); 2,36 (dd, J=9,3 y 15,2 Hz, 1 H); 3,24 a 3,34 (m parcialmente oculto, 2 H); 3,48 (m, 1 H); 3,69 (d, J=10,9 Hz, 1 H); 3,94 (d, J=7,9 Hz, 1 H); 4, 13 (d, J=10,9 Hz, 1 H); 4,45 (d, J=4,4 Hz, 1 H); 5,05 (dd, J=4,4 y 7,9 Hz, 1 H); 5,14 (d, J=4,4 Hz, 1 H); 6,18 (d, J=8,2 Hz, 1 H); 6,50 (d, J=2,0 Hz, 1 H); 6,59 (t ancho, J=7,9 Hz, 1 H); 6,67 (dd, J=2,0 y 8,2 Hz, 1 H); 6,73 (t ancho, J=7,9 Hz, 1 H); 7,20 (t, J=7,8 Hz, 1 H); 7,24 (t ancho, J=7,9 Hz, 1 H); 7,28 (t, J=7,8 Hz, 2 H); 7,35 (m, 2 H); 7,39 a 7,45 (m, 3 H); 7,49 (d, J=8,2 Hz, 1 H); 7,57 (d, J=7,8 Hz, 2 H); 10,32 (s ancho, 1 H). (2'S,3R,4'R,5'S)-6-cloro^'-(3-cloro-2-fluorofeni oxospiro[indolina-3,3'-pirrolidina1-5'-carboxamida Una mezcla de 542 mg (0,71 mmol) de (2'S,3R,4,R,5'S)-6-cloro-4'-(3-cloro-2-fluorofen¡l)-1 '-((1 S,2R)-2-h¡drox¡-1 ,2-d¡feniletil)-N-((frans)-4-hidroxiciclohex¡l)-2'-neopentil-2-oxospiro[indolina-3,3'-pirrolid¡na]-5'-carboxamida en 10 mL de etanol se enfrió hasta alcanzar 0°C y se agregaron 989 mg (1 ,79 mmol) de nitrato de amonio cérico lentamente mediante una espátula en 15 min. La mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 1 hora, tras lo cual se trató con 4 mL de tolueno, 2 mL de etanol, 5 mL de salmuera saturada y 3 mL de acetato de etilo y decantó. La fase orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo con 2x5 mL de acetato de etilo. Las fases orgánicas se combinaron y se lavaron con 3 mL de carbonato de sodio al 5%. Después de la decantación, la fase acuosa se diluyó con agua y se extrajo nuevamente con 10 mL de acetato de etilo. Las fases orgánicas se combinaron y sucesivamente se lavaron con 2 mL de disulfito de sodio al 11 % y 2 mL de salmuera saturada. Esto luego se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró hasta secarse a presión reducida. Se purificaron 222 mg del residuo mediante cromatografía instantánea en un cartucho de sílice de 40 g (15 pm gel de sílice; disolvente eluyente: diclorometano/ acetona 75/25 v/v con posterior 65/35 v/v; flujo: 30 mUmin). Se obtuvieron 0, 83 g de un merengue blancuzco, se recogieron dos veces en óxido de diisopropilo y se secaron a 25°C a presión reducida. Se obtuvieron 157 mg de (2'S,3R,4,R,5'S)-6-cloro-4,-(3-cloro-2-fluorofenil)-N-((frans)-4-hidrox¡-ciclohexil)-2'-neopentil-2-oxospiro[indolina-3,3'-pirrolidina]-5'-carboxamida como un sólido amorfo blanco, pf: 176°C (Kofler); LC-MS: tR (min) = 1 ,13 (91 %) y 1 ,03 (9%); [M+H]+: m/z 562; [M-Hf: m/z 560 (método C); 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 0,76 (s, 9 H); 0,85 (dd, J=1 ,8 y 14,3 Hz, 1 H); 0,97 a 1 ,28 (m, 4 H); 1 ,38 a 1 ,50 (m, 2 H); 1 ,67 (m, 1 H); 1 ,80 (m, 2 H); 2,56 (t, J=12,1 Hz, 1 H); 3,23 a 3,38 (m parcialmente oculto, 2 H); 3,45 (m, 1 H); 3,93 (d, J=9,6 Hz, 1 H); 4,22 (dd, J=9,6 y 12, 1 Hz, 1 H); 4,46 (d, J=4,4 Hz, 1 H); 6,62 (d, J=8,1 Hz, 1 H); 6,70 a 6,75 (m, 2 H); 7, 13 (t ancho, J=7,9 Hz, 1 H); 7,31 (t ancho, J=7,9 Hz, 1 H); 7,64 (t ancho, J=7,9 Hz, 1 H); 7,92 (d, J=7,7 Hz, 1 H); 10,51 (s ancho, 1 H). (2'R,3S,4'R,5'S)-6-cloro^'-(3-cloro-2-fluorofenil)-^ oxospirorindolina-3,3'-pirrolidinal-5'-carboxam¡da El resto del compuesto bruto (206 mg) se disolvió y se agitó en 10 mL de acetato de etilo, se trató con 41 pL (0,07 mmol) de ácido acético glacial y la mezcla de reacción se calentó a 60°C durante 3 horas, tras lo cual se enfrió hasta alcanzar temperatura ambiente y se agitó durante 16 horas. Luego se lavó con 5 mL de hidrogenocarbonato de sodio saturado y 3 mL de agua. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró hasta secarse a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea en un cartucho de sílice de 30 g (15-40 pm gel de sílice; disolvente eluyente: diclorometano/ acetona 75/25 v/v; flujo: 20 mL/min). El producto aislado se recogió dos veces en óxido de diisopropilo. El sólido se filtró y se secó a 25°C a presión reducida. Se obtuvieron 106 mg de (2'R,3S,4'R,5'S)-6-c|oro-4'-(3-cloro-2-fluorofenil)-N-((írans)-4-hidroxiciclohexil)-2'-neopentil-2-oxospiro[indolina-3,3' pirrolidina]-5'-carboxamida como un sólido amorfo de tono rosado, pf: 193°C (Kofler); LC-MS: t,R (min) = 1 ,03; [M+H]+: m/z 562; [M-H]": m/z 560 (método C); 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 0,72 (dd, J=1 ,5 y 14,2 Hz, 1 H); 0,80 (s, 9 H); 1 ,08 a 1 ,30 (m, 5 H); 1 ,68 a 1 ,91 (m, 4 H); 3,28 a 3,49 (m, 3 H); 3,58 (m, 1 H); 4,29 (d, J=9,0 Hz, 1 H); 4,39 (t, J=9,0 Hz, 1 H); 4,50 (d, J=4,4 Hz, 1 H); 6,68 (d, J=2,0 Hz, 1 H); 7,05 (dd, J=2,0 y 8, 1 Hz, 1 H); 7,12 (t ancho, J=7,9 Hz, 1 H); 7,34 (t ancho, J=7,9 Hz, 1 H); 7,48 a 7,57 (m, 2 H); 7,72 (d, J=8,1 Hz, 1 H); 10,40 (s ancho, 1 H); aD = +18,4° +/- 0,9 (c = 1 ,525 mg/ 0,5 mL MeOH).

EJEMPLO 13 Síntesis de (frans-4-hidroxi-ciclohexil)-amida de ácido (2'S,3'R,4'S,5'R)-1'-acetil-6-cloro- 4'^3-cloro-2-fluoro-fenil)-2'-(2,2-dimetil-propil)-2-oxo-1,2-dihidro-espiro[indol-3,3'-pirrolidina]-5'-carboxílico Éster 4- 2'S.3'R.4'S.5'R)-l .1 '-diacetil-6-cloro-4'-(3-cloro-2-fluoro-fenil)-2'-(2,2-dimetil-propil)-2-oxo-1 ,2-dihidro-espiroíindol-3,3'-pirrolidina1-5'-carbonil1-aminoVciclohexílico de ácido acético A una solución de 281 mg (0,50 mmol) de (írans-4-hidroxi-ciclohexil)-amida de ácido (2'S,3'R,4'S,5'R)-6-cloro-4,-(3-cloro-2-fluoro-fenil)-2,-(2,2-dimetil-propil)-2-oxo-1 ,2-dihidro-espiro[indol-3,3'-pirrolidina]-5'-carboxílico en 5,0 mL de piridina bajo argón, se agregó 178 pL (2,50 mmol) de cloruro de acetilo. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 4 días, tras lo cual se vertió en una mezcla de agua y acetato de etilo. La fase orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo dos veces con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron con sulfato de magnesio y luego se concentraron hasta secarse a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea en un cartucho de sílice de 50 g (15-40 pm gel de sílice; disolvente eluyente: diclorometano/ metanol 98/2 v/v; flujo: 40 mL/min) y luego se purificó por segunda vez mediante cromatografía instantánea en un cartucho de sílice de 30 g (15-40 pm gel de sílice; disolvente eluyente: diclorometano/ metanol 98/2 v/v; flujo: 20 mL/min). Se obtuvieron 123 mg de éster 4-{[(2,S,3'R,4'S,5,R)-1 ,1 ,-diacetil-6-cloro-4'-(3-cloro-2-fluoro-fenil)-2'-(2,2-dimetil-propil)-2-OXO-1 ,2-dihidro-espiro[indol-3,3'-pirrolidin]e-5'-carbonil]-amino}-ciclohexílico de ácido acético como un polvo blanco. LC-MS: tR (min) = 1 ,19; [M+H]+: m/z 688; [M-H]": m/z 686 (método A). (frans-4-hidroxi-ciclohex¡l)-amida de ácido (2'S,3'R,4'S,5'R)-1 '-Acetil-6-cloro-4'-(3-cloro-2-fluoro-fenil)-2'-(2,2-dimetil-prop¡l)-2-oxo-1 ,2-dihidro-espirofindol-3,3'-pirrolidinal-5'-carboxílico A una solución de 1 17 mg (0, 17 mmol) de éster 4-{[(2'5,3 ,4'5,5?)-1 ,1 '-diacetil-6-cloro- 4'-(3-cloro-2-fluoro-fenil)-2'-(2,2-dimetil-propil)-2-oxo-1 ,2-dihidro-espiro[indol-3,3'-pirrolidina]-5'^ carbonil]-amino}-ciclohexílico de ácido acético en 10,0 mL de metanol bajo argón, se agregó 10 mL (81 mmol) de una solución de carbonato de potasio saturado. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, tras lo cual el metanol se evaporó a presión reducida. La fase acuosa remanente se extrajo 3 veces con 20 mL de diclorometano. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con 20 mL de salmuera, se secaron con sulfato de magnesio y luego se concentraron hasta secarse a presión reducida. Se obtuvieron 92 mg de [trans-4-hidroxi-ciclohexil)-amida de ácido (2'S,3'R,4,S,5'R)-1'-acetil-6-cloro-4'-(3-cloro-2-fluoro-fenil)-2'-(2,2-dimetil-propil)-2-oxo-1 ,2-dihidro-espiro[indol-3,3'-pirrolidina]-5'-carboxílico como un polvo blanco, pf: 220°C (Kofler); LC-MS: tR (min) = 0,97; [M+H]+: m/z 604; [M-H]": m/z 602 (método A); 1H NMR (60°C, CLOROFORMO-d, 400 MHz): 0,68 (s, 9 H); 0,75 a 2,62 (m parcialmente oculto, 14 H); 3,51 (m, 1 H); 3,65 (m, 1 H); 4,28 (m ancho, 1 H); 4,48 (dd, J=3,4 y 5,9 Hz, 1 H); 4,98 (d, J=10,3 Hz, 1 H); 6,65 (d, J=1 ,5 Hz, 1 H); 6,99 (t, J=7,8 Hz, 1 H); 7,05 a 7,48 (m, 5 H).

EJEMPL0 14 Síntesis de (írans-4-hidroxi-ciclohexilmetil)-amida de ácido (2'8,3'?,4'5,5?)-6-???G?-4'-(3-cloro-2-fluoro-fenil)-2'-(2,2-dimetil-propil)-2-oxo-1 ,2-dihidro-espiro[indol-3,3'-pirrolidina]- 5'-carboxílico (frans-4-hidroxi-ciclohexilmetil)-amida de ácido (2'R,3'S,4'S,5'R)-6-Cloro-4'-(3-cloro-2-fluoro-fenin-2l-(2,2-dimetil-propil)-1'-((1 R,2S)-2-h¡droxi-1.2-difenil-et¡IV2-oxo-1.2-dihidro-esp¡r^^ 3,3'-pirrolidinal-5'-carboxílico A una solución de 0,28 g (1 ,71 mmol) de clorhidrato de 4-aminometil-ciclohexanol en 12,0 mL de tetrahidrofurano, se agregaron 0,46 mL (3,26 mmol) de trietilamina. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos y se agregó 1 g (1 ,55 mmol) de: progresivamente mediante una espátula y luego 2 mL de tetrahidrofurano. La mezcla de reacción se calentó a temperatura de reflujo durante 7 horas y luego se agitó a temperatura ambiente durante 2,5 días, tras lo cual se diluyó con 10 mL de agua y 15 mL de acetato de etilo. La fase orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se secaron con sulfato de magnesio y luego se concentraron hasta secarse a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea en un cartucho de sílice de 70 g (15-40 µ?t? gel de sílice; disolvente eluyente: diclorometano, luego diclorometano/ metanol 98/2 v/v; flujo: 50 mL/min). Se obtuvieron 0,40 g de (frans-4-hidroxi-ciclohexilmet¡l)-amida de ácido (2'R,3'S,4'S,5'R)-6-cloro-4'-(3-cloro-2-fluoro-fenil)-2'-(2,2-dimetil-propil)-1 '-((1 R,2S)-2-hidroxi-1 ,2-difenil-etil)-2-oxo-1 ,2-dihidro-espiro[indol-3,3'-pirrolidina]-5'-carboxílico como un sólido blanco. LC-MS: tR (min) = 1 ,16; [M+H]+: m/z 772; [M-H]": m/z 770 (método A); 1H NMR (CLOROFORMO-d, 400 MHz): 0,74 (s amplio, 9 H); 0,83 (m, 2 H); 1 ,13 (m, 2 H); 1 ,20 (m, 1 H); 1 ,25 (d, J=15,6 Hz, 1 H);1 ,35 (d, J=4,9 Hz, 1 H); 1 ,42 (m, 1 H); 1 ,55 (m parcialmente oculto, 1 H); 1 ,84 a 2,00 (m, 2 H); 2,29 (d, J=2,9 Hz, 1 H); 2,67 (dd, J=9,3 y 15,6 Hz, 1 H); 2,86 (m, 1 H); 3,38 (m, 1 H); 3,48 (m, 2 H); 4,11 (m, 2 H); 4,36 (d, J=8,3 Hz, 1 H); 5,20 (dd, J=2,9 y 8,3 Hz, 1 H); 5,64 (d, J=8,1 Hz, 1 H); 6,28 (m, 1 H); 6,44 (t, J=7,8 Hz, 1 H); 6,53 (d, J=2,2 Hz, 1 H); 6,62 (dd, J=2,2 y 8,1 Hz, 1 H); 6,67 (t, J=7,8 Hz, 1 H); 7,09 (t, J=7,8 Hz, 1 H); 7,25 (s, 1 H); 7,30 a 7,45 (m, 5 H); 7,54 a 7,67 (m, 5 H). (frans-4-hidroxi-ciclohexilmetil)-amida de ácido (2'S,3'R,4'S,5'R)-6-Cloro-4'-(3-cloró-2-fluoro-fenil)-2'-(2,2-dimetil-propil) -2-oxo-1 ,2-dihidro-espirolindol-3,3'-pirrolidinaV5'-carboxilico En un matraz de tres cuellos de 50 ml_ se introdujeron sucesivamente 0,70 g (0,91 mmol) de (frans-4-hidroxi-ciclohexilmetil)-amida de ácido (2'R,3'S,4'S,5'R)-6-cloro-4'-(3-cloro-2-fluoro-fenil)-2'-(2,2-dimetil-propil)-1 '-((1 R,2S)-2-hidroxi-1 ,2-difenil-etil)-2-oxo-1 ,2-dihidro-espiro[indol-3,3 -pirrolidina]-5'-carboxílico, 7,0 mL de acetonitrilo, 3,5 mL de agua destilada y 3,5 mi de acetona. La mezcla resultante se agitó y se enfrió hasta alcanzar 0°C y se agregó en pequeñas porciones 0,99 g (1 ,81 mmol) de nitrato de amonio cérico. La mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 20 minutos, tras lo cual se agregaron 89 mg (1 ,06 mmol) de hidrogenocarbonato de sodio y la agitación se mantuvo durante 5 minutos. La mezcla se diluyó con 60 mL de acetato de etilo y decantó. La fase orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo dos veces con 10 mL de acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con 20 mL de agua, se secaron con sulfato de magnesio y luego se concentraron hasta secarse a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea en un cartucho de sílice de 30 g (15-40 pm gel de sílice; disolvente eluyente: diclorometano; flujo: 30 mL/min) y luego se purificó por segunda vez mediante cromatografía instantánea en un cartucho de sílice de 15 g (15-40 pm gel de sílice; disolvente eluyente: diclorometano/ metanol/ 28% amoníaco 97/2/1 v/v/v; flujo: 30 mL/min). Se obtuvieron 87 mg de (fra/is-4-hidroxi-ciclohexilmetil)-amida de ácido (2'S,3'R,4'S,5'R)-6-cloro-4'-(3-cloro-2-fluoro-fenil)-2'-(2,2-dimetil-propil)-2-oxo-1 ,2-dihidro-espiro[indol-3,3'-pirrolidina]-5'-carboxílico como un sólido blanco, pf: 192°C (Kofler); LC-MS: tR (min) = 0,84; [M+Hf: m/z 576; [M-H]-: m/z 574 (método A); 1H NMR (CLOROFORMO-d, 400 MHz): mezcla de isómeros: 0,90 (s, 9 H); 0,99 a 2,09 (m parcialmente oculto, 11 H); 3,05 a 3,27 (m, 2 H); 3,59 (m, 2 H); 4,39 (d, J=8,8 Hz, 1 H); 4,59 (m, 1 H); 6,76 (S amplio, 1 H); 6,99 (t, J=7,8 Hz, 1 H); 7,06 a 7,56 (m, 6 H); 7,82 (t ancho, J=6,1 Hz, 1 H).

EJEMPLO 15 Síntesis de (frans-4-hidroxi-ciclohexil)-amida de ácido (2'S,3'R,4'S,5'R)-6-Cloro-4'-(3-cloro-2-fluoro-fenil)-2'-(2,2-dimetil-propil)-1'-metil-2-oxo-1,2-dihidro-espiro[indol-3,3'-pirrolidina]-5'-carboxílico A una suspensión de 0,50 g (0,89 mmol) de (frans-4-hidroxi-ciclohexil)-amidá de ácido (2'S,3'R,4'S,5'R)-6-cloro^ 3-cloro-2-fluoro-fenil)-2,-(2,2-dimetil-propil)-2-oxo-1 ,2-dihid [indol-3,3'-pirrolidina]-5'-carboxílico en 18,0 mL de acetonitrilo bajo argón, se agregaron 0,89 mL (0,97 mmol) de una solución de formaldehído al 36,5% en agua y luego 65 mg (0,98 mmol) de cianoborohidruro de sodio. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, tras lo cual se vertió en 50 mL de acetato de etilo. La fase acuosa se separó y la fase orgánica se lavó con una solución saturada de hidrogenocarbonato de sodio. La última fase acuosa se extrajo nuevamente con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron con sulfato de magnesio y luego se concentraron hasta secarse a presión reducida. El residuo (0,52 g) se purificó mediante cromatografía HPLC quiral en una columna Kromasil C18 (1100 g lote 4680, 10 pm, 7,65 x 35 cm), disolvente eluyente: acetonitrilo/ agua 40/60 v/v + 0,1 % ácido trifluoroacético; flujo: 250 mL/min. La solución recogida se trató con hidrogenocarbonato de sodio hasta pH 8 y luego se extrajo 3 veces con 200 mL de acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron dos veces con 100 mL de agua, se secaron con sulfato de magnesio y luego se concentraron hasta secarse a presión reducida. El residuo luego se secó en una secadora a presión reducida durante 16 horas. Se obtuvieron 0,17 g de (4-hidroxi-ciclohexil)-amida de ácido (2'S,3'R,4'S,5'R)-6-cloro-4'-(3-cloro-2-fluoro-fenil)-2 2,2-dimetil^ropil)-1 '-metil-2-oxo-1 ,2-dihidro-espiro[indol-3,3'-pirrolidina]-5'-carboxílico como un sólido blanco, pf: 188°C (Kofler); LC-MS: tR (min) = 0,85-0,97 (mezcla de isómeros); [M+H]+: m/z 576; [M-H]': m/z 574 (método A); 1H NMR (400 MHz, CLOROFORMO-d): 0,73 (d, J=15,6 Hz, 1 H); 0,79 (s, 9 H); 1 ,15 a 1 ,48 (m, 4 H); 1 ,85 a 2,12 (m, 5 H); 2,75 (s, 3 H); 3,60 a 3,77 (m, 3 H); 4, 17 (d, J=9,8 Hz, 1 H); 4,33 (d ancho, J=9,8 Hz, 1 H); 6,69 (d, J=1 ,5 Hz, 1 H); 6,99 (t, J=7,8 Hz, 1 H); 7,05 (dd, J=1 ,5 y 8,3 Hz, 1 H); 7,10 a 7,25 (m, 3 H); 7,37 (m ancho, 1 H); 7,56 (t, J=7,8 Hz, 1 H).

Se utilizó una metodología similar para preparar C29701 y C30201 .

EJEMPL0 16 Estudios de isomerización Información general Los experimentos que implicaban componentes sensibles a la humedad y/o el aire se llevaron a cabo en material de vidrio secado al horno bajo una atmósfera de nitrógeno. Los disolventes y reactivos comerciales se utilizaron sin purificación adicional con la siguiente excepción: se destiló THF en el momento a partir de alambre de sodio.

Se llevó a cabo cromatografía instantánea usando gel de sílice (tipo H) de TM Chemicals, Inc. Las columnas típicamente se envasaron como una suspensión y se equilibraron con hexano antes de su uso. La cromatografía en capa fina (TLC) analítica se llevó a cabo usando una placa de gel de sílice pre-recubierta Merck 60 F254 (0,2 mm de espesor). Sometidas a elusión, las placas se visualizaron usando radiación UV. Fue posible una visualización adicional mediante tinción con solución básica de permanganato de potasio o solución ácida de ácido fosfomolíbdico con posterior calentamiento con una pistola de calentamiento.

Los compuestos se purificaron mediante HPLC usando una columna para HPLC semi-preparativa de fase inversa Waters Sunfire C18 (19 mm * 150 mm) usando el disolvente A (agua, 0,1 % de TFA) y el disolvente B (CH3CN, 0,1 % de TFA o MeOH, 0,1 % de TFA) como eluyentes con un caudal de 10 mL/min en un instrumento Waters Delta 600. La HPLC en fase inversa analítica se llevó a cabo usando un módulo de separación Waters 2795.

Las espectroscopias por resonancia magnética nuclear de protones (1H NMR) y resonancia magnética nuclear de carbono (13C NMR) se llevaron a cabo en un espectrómetro de NMR Bruker Advance 300. Los desplazamientos químicos de los espectros de 1H NMR se indicaron como 8 en unidades de partes por millón (ppm) campo abajo de SiMe (d 0,0) o con relación a la señal de cloroformo-d (d = 7,26, singulete), metanol-d4 {d = 3,31 , quintuplete) y DMSO-d6 (d = 2,50, quintuplete). Las multiplicidades se proporcionaron como: s (singulete); d (doblete); t (triplete); q (cuartete); dd (doblete de dobletes); ddd (doblete de dobletes de dobletes); dt (doblete de tripletes); m (multipletes), etc. El número de protones para una resonancia dada se indica mediante nH. Las constantes de acoplamiento se indican como valores J en Hz. Los espectros de resonancia magnética nuclear de carbono (13C NMR) se indican como d en unidades de partes por millón (ppm) campo abajo de SiMe (d 0,0) o con relación a la señal de cloroformo-d (<5 = 77,23, triplete), MeOH-d4 (d = 49,20, septuplete) y DMSO-d6 (¿ = 39,52, septuplete).

El análisis de espectros de masa por ESI de baja resolución se llevó a cabo en un espectrómetro de masas Thermo-Scientific LCQ Fleet.

Los compuestos 1 -10 se prepararon de acuerdo con el Esquema 10 y la Tabla 4 usando métodos previamente descritos (ver, por ejemplo, Ding, K. et al., J. Am. Chem. Soc. 727:10130-10131 (2005); Ding, K. ef al., J. Med. Chem. 49:3432-3435 (2006); Yu, S. ef al., J. Med. Chem. 52:7970-7973 (2009); Shangary, S., Proc. Nati. Acad. Sci. 705:3933-3938 (2008); el documento US 7.759.383) como una mezcla de isómeros. El isómero A se identificó como el isómero predominante luego de la oxidación de CAN en la mayoría de los casos. Los solicitantes han encontrado que disolver la mezcla de isómeros obtenida a partir de la oxidación de CAN en un disolvente o una mezcla de disolventes y permitir que la mezcla de reacción madure durante un período de tiempo en distintas condiciones proporciona una mezcla de isómeros que tiene el Isómero B como el isómero predominante. En algunos casos, los Isómeros C y D se aislaron en forma pura o sustancialmente pura. Del mismo modo, los compuestos 11 y 12 se prepararon de acuerdo con el Esquema 1 1 y la Tabla 5.

El procedimiento de isomerización utilizado en este estudio fue el siguiente: se colocaron aproximadamente 30 mg del producto obtenido a partir de la oxidación de CAN (previamente purificado mediante cromatografía en columna instantánea) en un matraz de fondo redondo equipado con una barra de agitación magnética. Se agregó acetonitrilo (2,4 mL) para disolver el producto. A la solución de acetonitrilo se agregó agua (2,0 mL) y 0,5 mL de solución de NaHC03 (saturada) para obtener un pH de aproximadamente 8. La mezcla de reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante aproximadamente 3 días. El porcentaje de isómeros se determinó usando HPLC analítica. Se llevó a cabo purificación adicional en una HPLC en fase inversa semi-preparativa o preparativa usando MeOH (0,1 % TFA) y agua (0,1 % TFA) como fase móvil.

La isomerización del Isómero A en Isómero B también puede llevarse a cabo en condiciones acidas, por ejemplo, MeCN-H20, CF3C02H (pH <1 ), temperatura ambiente, 3 días; acetato de etilo, ácido acético, 60°C, 3 h, o condiciones neutras, por ejemplo, MeOH o MeOH-H20.

Esquema 10 Isomerización Isómeros A-0 ssí MaHCOj MeCNHiOC1.:1> ta, 3 días Tabla 4 a Rendimiento después de la oxidación; La relación se determinó mediante análisis por HPLC; 0 Rendimiento después de separación por HPLC; d La relación se determinó mediante análisis por HPLC después de dejar que el producto de la oxidación reposara en MeOH durante dos horas; 6 El Isómero A del Compuesto 10 y el Isómero B del Compuesto 10 se denominan Ml-219 y MI-21901 , respectivamente, en la tabla 2A.

Esquema 11 Compuesto 11 Compuesto 11 Compuesto 11 Isómero A Isómero B Isómeros C y D 25% Compuesto 12 Compuesto 12 Compuesto 12 Isómeros C y D Isómero A Isómero B Iwmerizacron isómero sat NaHCOs MeCN:H,0 (ti) ta. 3 días Tabla 5 a Rendimiento después de la oxidación; La relación se determinó mediante análisis por HPLC; c Rendimiento de la hidrólisis; " inicio con Compuesto 12-lsómero A puro.

Datos analíticos Compuesto 1 - Isómero A (sal de TFA): ESI: Calculado para C25H3o35CI2N302 [M+H]+= 474,17, Encontrado: 474,50.

Compuesto 1 - Isómero B (sal de TFA): ESI: Calculado para C25H3035Cl2N3O2 [M+H]+= 474,17, Encontrado: 474,68.

Compuesto 1 - Isómero D (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,72 (d, J = 8,08 Hz, 1H), 7,28-7,22 (m, 1H), 7,20-7,12 (m, 2H), 7,12-7,08 (m, 1H), 7,04 (d, J = 7,65 Hz, 1H), 6,81 (d, J = 1,79 Hz, 1H), 5,54 (d, J= 10,87 Hz, 1H), 4,37 (dd, J = 6,54, 4,52 Hz, 1H), 4,15 (d, J = 10,85 Hz, 1H), 2,98 (s, 3H), 2,81 (s, 3H), 1,70 (dd, J = 15,24, 6,67 Hz, 1H), 1,20 (dd, J = 15,26, 4,43 Hz, 1H), 0,91 (s, 9H); ESI: Calculado para C25H3o35CI2N302 [M+H]+= 474,17, Encontrado: 474,50.

Compuesto 2 - Isómero A (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,28-7,16 (m, 3H), 7,16-7,06 (m, 1H), 6,92-6,82 (m, 2H), 6,80-6,76 (m, 1H), 4,92 (d, J =10,23, 4,20-4,10 (m, 2H), 2,73 (s, 3H), 1,99 (s, J = 15,32, 6,75 Hz, 1H), 1,47 (dd, J = 15,54, 3,49 Hz, 1H), 0,80 (s, 9H); ESI: Calculado para C24H2835CI2 302 [M+H]+= 460,16, Encontrado: 460,52.

Compuesto 2 - Isómero B (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,63 (d, J - 8,06 Hz, 1H), 7,30-7,14 (m, 4H), 7,12-7,00 (m, 1H), 6,82-6,76 (m, 1H), 5,29 (d, J = 11,24 Hz, 1H), 4,47 (d, = 6,68 Hz, 1H), 4,16 (d, J = 11,22 Hz, 1H), 2,73 (s, 3H), 1,92 (dd, J= 15,40.8,39 Hz, 1H), 1,17 (d, J = 16,85 Hz, 1H), 0,90 (s, 9H); 13C (75 MHz, CD3OD): 177,78, 168,54, 145,38, 137,07, 135,77, 134,60, 131,40, 130,29, 129,48, 128,29, 126,32, 124,24, 124,16, 112,18, 65,11, 64,18, 62,85, 56,95, 43,42, 30,97, 29,66, 26,98; ESI: Calculado para C24H2835CI2 302 [M+H]+= 460,16, Encontrado: 460,48.

Compuesto 2 - Isómero D (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,57 (d, J = 8,12 Hz, H), 7,24-7,08 (m, 3H), 7,04-6,98 (m, 1H), 6,92 (d, J = 7,62 Hz, 1H), 6,76 (d, J = 1,78 Hz, 1H), 5,02 (d, J = 12,47 Hz, 1H), 4,42 (dd, J = 7,06, 4,40 Hz, 1H), 4,13 (d, J = 12,47 Hz, 1H), 2,70 (s, 3H), 1,74 (dd, J = 15,35, 7,14 Hz, 1H), 1,17 (dd, J = 15,37, 4,38 Hz, 1H), 0,88 (s, 9H); 13C (75 MHz, CD3OD): 176,72, 167,32, 144,88, 137,13, 135,62, 133,98, 131,17, 130,24, 129,73, 128,41, 127,88, 123,91, 123,53, 112,57, 65,42, 64,33, 62,97, 59,03, 44,86, 31,01, 29,57, 27,03; ESI: Calculado para ?24?28¾ 302 [M+H]+= 460,16, Encontrado: 460,50.

Compuesto 3 - Isómero A (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,80-7,70 (m, 1H), 7,50-7,40 (m, 1H), 7,32-7,22 (m, 1H), 6,92-6,88 (m, 1H), 6,74 (dd, J = 8,15, 1,75 Hz, 1H), 6,48 (d, J = 8,11 Hz, 1H), 5,58 (d, J = 7,94 Hz, 1H), 4,38 (d, J = 7,94 Hz, 1H), 4,26 (d, J = 7,55 Hz, 1H), 2,99 (s, 3H), 2,84 (s, 3H), 2,06 (dd, J = 15,42, 7,72 Hz, 1H), 1,13 (d, J = 15,37 Hz, 1H), 0,89 (s, 9H); 13C (75 MHz, CD3OD): 180,07, 166,93, 157,51 (d, C-F = 243,98 Hz), 145,59, 137,11, 132,54, 128,77, 127,66, 126,74 (d, JC-F = 4,55 Hz), 125,89 (d, JC.F =13,40 Hz), 123,68, 122,85 (d, JC-F = 10,19 Hz), 123,10 (d, JC-F = 18,37 Hz), 112,07, 63,03, 62,05, 61,76, 42,09, 37,70, 36,89, 30,77, 29,34; ESI: Calculado para C2sH2935CI2FN302 [M+H]+= 492,16, Encontrado: 492,44.

Compuesto 3 - Isómero B (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,68-7,57 (m, 2H), 7,45-7,35 (m, 1H), 7,22-7,10 (m, 2H), 6,84-6,77 (m 1H), 5,68 (d, J = 10,24 Hz, 1H), 4,64 (d, J = 10,24 Hz, 1H), 4,48 (dd, J = 8,20, 1,70 Hz, 1H), 2,98 (s, 3H), 2,80 (s, 3H), 1,89 (dd, J = 15,48, 8,26 Hz, 1H), 1,14 (dd, J = 15,48, 1,67 Hz, 1H), 0,89 (s, 9H); 13C (75 MHz, CD3OD): 177,96, 168,37, 152,99 (d, JC.F = 253,32 Hz), 145,26, 137,39, 132,82, 128,82, 126,95, 126,70 (d, JC-F = 4,79 Hz), 124,28, 122,09 (d, JC-F = 13,13 Hz), 118,90, 115,11, 112,24, 64,69, 59,97, 42,64, 37,96, 37,03, 31,03, 29,62; ESI: Calculado para C25H2935CI2FN302 [M+H]+= 492,16, Encontrado: 492,46.

Compuesto 3 - Isómero C (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD) (sal de TFA): 7,63 (d, J= 8,13 Hz, 1H), 7,52-7,38 (m, 2H), 7,24-7,12(m, 2H), 6,83 (d, J= 1,80 Hz, 1H), 5,47 (d, J = 11,16 Hz, 1H), 4,42 (d, J = 11,31 Hz, 1H), 4,35 (t, J = 5,66 Hz, 1H), 2,95 (s, 3H), 2,93 (s, 3H), 1,91 (dd, J = 15,39, 5,80 Hz, 1H), 1,71 (dd, J = 15,24, 5,43 Hz, 1H), 0,84 (s, 9H); ESI: Calculado para C25H2935CI2FN302 [M+H]+= 492,16, Encontrado: 494,20.

Compuesto 3 - Isómero D (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD) (sal de TFA): 7,60 (d, J = 8,07 Hz, 1H), 7,40-7,30 (m, 1H), 7,22-7,12 (m, 1H), 7,07 (dd, J = 8,16, 1,87 Hz, 1H), 7,04-6,95 (m, 1H), 6,80 (d, J = 1,87 Hz, 1H), 5,58 (d, J = 9,80 Hz, 1H), 4,51 (d, J = 9,84 Hz, 1H), 4,43 (dd, J = 6,69, 4,15 Hz, 1H), 2,99 (s, 3H), 2,80 (s, 3H), 1,68 (dd, J = 15,41, 6,81 Hz, 1H), 1,42 (dd, J = 15,41, 4,26 Hz, 1H), 0,90 (s, 9H); ESI: Calculado para C25H2936CI2FN302 [ +H]+= 492,16, Encontrado: 492,28.

Compuesto 4 - Isómero A (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,66-7,54 (m, 1 H), 7,38-7,28 (m, 1H), 7,22-7,10 (m, 1H), 6,87 (s, 1H), 6,82-6,72 (m.2H), 5,21 (d, J = 10,00 Hz, 1H), 4,50 (d, J = 9,93 Hz, 1H), 4,30-4,24 (m, 1H), 2,75 (s, 3H), 2,07 (dd, J = 15,35, 7,35 Hz, 1H), 1,8 (d, J = 14,57 Hz, 1H), 0,80 (s, 9H); 13C (75 MHz, CD3OD): 180,31, 167,24, 157,81 (d, JC-F = 247,78 Hz), 145,44, 136,94, 132,11, 128,66, 127,94, 126,47 (d, JC-F = 4,45 Hz), 125,29, 125,01 (d, JC-F = 13,96 Hz), 123,37, 122,64 (d, C-F = 18,03 Hz), 122,04, 64,35, 63,69, 61,74, 49,51, 42,34, 30,92, 29,55, 27,10; ESI: Calculado para C24H2735CI2FN302 [M+Hf= 478,15, Encontrado: 478,92.

Compuesto 4 - Isómero B (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,65-7,55 (m, 2H), 7,40-7,34 (m, 1H), 7,20-7,10 (m, 2H), 6,84-6,80 (m, 1H), 5,26 (d, J = 11,15 Hz, 1H), 4,64 ' (d, J = 11,19 Hz, 1H), 4,45 (d, J = 7,86 Hz, 1H), 2,74 (s, 3H), 1,87 (dd, J= 15,19, 8,58 Hz, 1H), 1,11 (d, J = 15,21 Hz, 1H), 0,90 (s, 9H); 13C (75 MHz, CD3OD): 177,75, 168,20, 159,53 (d, JC.F = 248,25 Hz), 145,22, 137,24, 132,59, 128,58, 126,63 (d, JC-F = 5,25 Hz), 124,16, 123,43, 126,66, 122,59 (d, JC-F = 4,05 Hz), 121,54 (d, JC-F = 12,75 Hz), 112,13, 64,49, 64,40, 62,73, 55,34, 43,33, 31,01, 29,58, 27,06; ESI: Calculado para C24H2735CI2FN302 [M+H]+= 478,15, Encontrado: 478,25.

Compuesto 4 - Isómero C (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,62 (d, J = 8,17 Hz, 1H), 7,46-7,36 (m, 2H), 7,22 (dd, J = 8,13, 1,89 Hz, 1H), 7,15 (t, J = 8,08 Hz, 1H), 6,80 (d, J = 1,85 Hz, 1H), 4,84 (d, J = 12,32, 1H), 4,35 (d, J = 12,32 Hz, 1H), 4,24 (t, J = 5,62 Hz, 1H), 2,67 (s, 3H), 1,87 (dd, J = 5,44, 2,53 Hz, 2H), 0,77 (s, 9H); ESI: Calculado para C24H2735CI2FN302 [M+H]+= 478,15, Encontrado: 478,52.

Compuesto 4 - Isómero D (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,53 (d, J = 8,11 Hz, 1H), 7,36-7,26 (m, 1H), 7,11 (dd, J = 8,08, 1,88 Hz, 1H), 6,98-6,90 (m, 2H), 6,77 (d, J= 1,85 Hz, 1 H), 5,03 (d, J = 11 ,95 Hz, 1 H), 4,51 (d, J = 11 ,87 Hz, 1 H), 4,50-4,42 (m, 1 H), 2,72 (s, 3H), 1,72 (d, J = 15,36, 7,30 Hz, 1H), 1,16 (dd, J= 15,37, 4,09 Hz, 1H), 0,89 (s, 9H); ESI: Calculado para C24H2735CI2FN302 [M+H]+= 478,15, Encontrado: 478.38.

Compuesto 5 - Isómero A (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,63-7,53 (m, 1H), 7,40-7,30 (m, 1H), 7,23-7,13 (m, 1H), 6,87 (d, J = 1,36 Hz, 1H), 6,86-6,74 (m, 2H), 5,19 (d, J = 10,22 Hz, 1H), 4,49 (d, J = 10,22 Hz,1H), 4,25 (dd, J = 7,35, 2,71 Hz, 1H), 3,56-3,43 (m, 1H), 3,42-3,30 (m, 4H), 2,07 (dd, J = 15,43, 7,44 Hz,1 H), 1,72-1,58 (m, 1H), 1,56-1,40 (m, 1H), 1,30 (dd, J = 15,43, 2,62 Hz, 1H), 0,80 (s, 9H); 13C (75 MHz, CD3OD): 180,26, 166,78, 157,81 (d, JC-F = 247,93 Hz), 145,43, 136,90, 132,16, 128,82, 127,96, 126,48 (d, JC-F = 4,49 Hz), 125,43, 124,94 (d, JC-F = 14,00 Hz), 123,37, 122,63 (d, JC.F = 18,23 Hz), 112,00, 71,01, 67,25, 64,38, 63,80, 61,69, 50,06, 42,36, 38,30, 33,80, 30,94, 29,55; ESI: Calculado para C27H3335CI2FN304 [M+H]+= 552,18, Encontrado: 552,92.

Compuesto 5 - Isómero B (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,60 (d, J = 8,15 Hz, 1H), 7,55 (t, J = 7,12 Hz, 1H), 7,38 (t, J = 7,57 Hz, 1H), 7,20-7,10 (m, 2H), 6,78 (d, J =1,70 Hz, 1H), 5,27 (d, J = 11,40 Hz, 1H), 4,62 (d, J= 11,40 Hz, 1H), 4,52 (dd, J = 8,33, 1,29 Hz, 1H), 3,45-3,25 (m, 5H), 1,90 (dd, J = 15,46, 8,38 Hz, 1H), 1,64-1,48 (m, 1H), 1,46-1,32 (m, 1H), 1,14 (dd, J= 15,46, 1,34 Hz, 1H), 0,87 (s, 9H); 13C (75 MHz, CD3OD): 177,77, 167,67, 157,90 (d, JC-F = 251,2 Hz), 145,21, 137,26, 132,67, 128,64, 126,89 (d, JC.F = 1,88 Hz), 126,65 (d, JC.F = 4,89 Hz), 124,17, 123,43, 122,60 (d, JC-F = 19,0 Hz), 121,52 (d, JC.F = 13,0 Hz), 112,14, 79,99, 67,25, 64,45, 62,873, 48,8, 43,39, 38,26, 33,78, 31,02, 29,57; ESI: Calculado para C27H3335CI2FN304 [M+H]+= 552,18, Encontrado: 552,42; Compuesto 5 - Isómero C (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 8,37 (s, ancho, NH), 7,62 (d, J = 8,11 Hz, 1H), 7,50-7,34 (m, 2H), 7,36-7,10 (m, 2H), 6,83 (d, J= 1,83 Hz, 1H), 4,32 (d, J = 12,09 Hz, 1H), 4,24-4,14 (m, 1H), 3,50-3,10 (m, 5H), 1,86-1,72 (m, 2H), 1,58-1,44 (m, 1H), 1,44-1,26 (m, 1H), 0,80 (s, 9H); ESI: Calculado para C27H3335CI2FN304 [M+H]+= 552,18, Encontrado: 552,42.

Compuesto 5 - Isómero D (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,49 (d, J = 8,02 Hz, 1H), 7,36-7,24 (m, 1H), 7,11 (dd, J = 8,09, 1,89 Hz, 1H), 7,06-6,96 (m, 1H), 6,96-6,88 (m, 1 H), 6,80 (d, J = 1 ,88 Hz, 1 H), 4,89 (d, J = 11,57 Hz, 1 H), 4,46 (d, J = 11 ,57 Hz, 1 H), 4,35-4,25 (m, 1H), 3,56-3,40 (m, 1H), 3,40-3,20 (m, 4H), 1,70-1,40 (m, 3H), 1,10 (dd, J = 14,59, 3,06 Hz, 1H), 0,91 (s, 9H); ESI: Calculado para C27H3335CI2FN30¿ [M+H]+= 552,18, Encontrado: 552,40.

Compuesto 6 - Isómero A (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,59 (t, J = 6,93 Hz, 1H), 7,41 (td, J = 7,55, 0,97 Hz, 1H), 7,22 (t, J = 7,90 Hz, 1H), 6,90 (d, J = 1,79 Hz, 1H), 6,77 (dd, J = 8,14, 1 ,79 Hz, 1 H), 6,48 (d, J = 8,15 Hz, 1 H), 5,21 (d, J = 8,22 Hz, 1 H), 4,50 (d, J = 8.19 Hz, 1H), 4,17 (dd, J = 7,63, 2,23 Hz, 1H), 4,10-3,80 (m, 4H), 3,75-3,45 (m, 4H), 3,40-3,00 (m, 4H), 2,08-1,96 (m, 1H), 1,19 (dd, J = 15,32, 2,23 Hz, 1H), 0,81 (s, 9H); 13C (75 MHz, CD3OD): 180,28, 168,91, 157,75 (d, JC-F = 248,38 Hz), 145,50, 137,13, 132,29, 128,63, 127,67, 126,63 (d, Jc-F = 4,50 Hz), 125,74 (d, JC-F = 13,69 Hz), 124,72, 123,44, 122,83 (d, JC-F = 18,25 Hz), 112,20, 65,16, 64,25, 63,84, 62,22, 58,01, 53,84, 50,05, 42,39, 35,72, 30,95, 29,52; ESI: Calculado para C29H3635CI2FN403 [M+H]+= 577,21, Encontrado: 577,48.

Compuesto 6 - Isómero B (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,66-7,48 (m, 2H), 7,42-7,32 (m, 1H), 7,20-7,10 (m, 2H), 6,78 (d, J= 1,68 Hz, 1 H), 5,38 (d, J = 11 ,48 Hz, 1H), 4,65 (d, J= 11,48 Hz, 1H), 4,52 (d, J= 7,59 Hz, 1H), 4,00-3,70 (m, 4H), 3,70-3,60 (m, 2H), 3,50-3,40 (m, 2H), 3,40-3,10 (m, 4H), 1,97 (dd, J = 15,40, 8,62 Hz, 1H), 1,12 (d, J = 15,40 Hz, 1H), 0,88 (s, 9H); 13C (75 MHz, CD3OD): 177,73, 169,20, 145,19, 137,15, 132,54, 128,69, 126,84, 126,64 (d, Jc-F = 4,80 Hz), 124,11, 123,72, 122,57 (d, JC-F = 13,19 Hz), 121,77 (d, JC-F = 13,19 Hz), 112,06 , 65,08, 64,59, 64,32 , 62,69, 57,41, 53,70, 48,47 , 43,55, 35,61, 31,06, 29,56; ESI: Calculado para C29H3635CI2FN403 [M+H]+= 577,21 , Encontrado: 577,48.

Compuesto 7 - Isómero B (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,54-7,44 (m, 2H), 7,36-7,26 (m, 1H), 7,14-7,00 (m, 2H), 6,70 (d, J= 1,76 Hz, 1H), 5,22 (d, J= 11,36 Hz, 1H), 4,50 (d, J= 11,36 Hz, 1H), 4,41 (d, J = 8,23, 1,85 Hz, 1H), 1,81 (dd, J= 15,46, 8,31 Hz, 1H), 1,06 (dd, J = 15,46, 1,90 Hz, 1H), 0,78 (s, 9H); ESI: Calculado para C23H2535CI2FN302 [M+H]+= 464, 13, Encontrado: 464,60.

Compuesto 7 - Isómero D (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,64 (d, J = 8,01 Hz, 1H), 7,54-7,40 (m, 2H), 7,28-7,12 (m, 2H), 6,83 (d, J = 1,68 Hz, 1H), 4,96 (d, J= 12,33 Hz, 1H), 4,36 (d, J = 12,33 Hz, 1H), 4,28 (t, J = 5,60 Hz, 1H), 1,93-1,86 (m, 2H), 0,80 (s, 9H); ESI: Calculado para C23H2535CI2FN302 [M+H]+= 464,13, Encontrado: 464,42.

Compuesto 8 - Isómero B (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,66 (d, J = 8,49 HZ, 1H), 7,35-7,12 (m, 4H), 6,86 (d, J = 6,02 Hz, 1H), 5,67 (d, J = 10,03 Hz, 1H), 4,41 (dd, J = 8,20, 1,79 Hz, 1H), 4,13 (d, J = 10,03 Hz, 1H), 2,97 (s, 3H), 2,74 (s, 3H), 1,91 (dd, J = 15,46, 8.20 Hz, 1H) 1,17 (dd, J = 15,46, 1,82 Hz, 1H), 0,91 (s, 9H); 13C (75 MHz, CD3OD):177,80, 168,54, 156,04 (d, JC.F = 243,74 Hz), 141,04, 136,12, 135,16, 131,81, 130,66, 129,73, 128,52, 125,50 (d, Jc-F =7,37 Hz), 123,70 (d, JC F = 19,58 Hz), 114,43 (d, JC.F =25,50 Hz), 113,62, 65,81, 64,45, 60,58, 57,31, 42,59, 38,04, 37,00, 31,04, 29,63; ESI: Calculado para C25H2935CI2FN302 [M+H]+= 492,16, Encontrado: 492,50.

Compuesto 8 - Isómero D (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,73 (d, J = 8,75 Hz, 1H), 7,30-7,18 (m, 1H), 7,18-7,12 (m, 1H), 7,12-7,06 (m, 1H), 6,89 (d, J = 6,12 Hz, 1H), 5,52 (d, J = 10,56 Hz, 1H), 4,37 (dd, J = 6,56, 4,48 Hz, 1H), 4,18 (d, J = 10,62 Hz, 1H), 2,99 (s, 3H), 2,80 (s, 3H), 1,69 (dd, J= 15,35, 6,58 Hz, 1H), 1,21 (dd, J= 15,35, 4,37 Hz, 1H), 0,93 (s, 9H); ESI: Calculado para C25H2935CI2FN302 [M+H]+= 492,16, Encontrado: 492,62.

Compuesto 9 - Isómero A (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,25-7,20 (m, 3H), 7,10-7,00 (m, 1H), 6,85 (d, J = 6,00 Hz, 1H), 5,13 (d, J = 11.10 Hz, 1H), 4,30-4,10 (m, 2H), 2,72 (s, 3H), 2,02 (dd, J = 15,30, 7,20 Hz, 1H), 1,52 (dd, J = 15,30, 3,90 Hz, 1H), 0,79 (s, 9H); ESI: Calculado para C24H2735CI2FN302 [M+H]+= 478,15, Encontrado: 478,46.

Compuesto 9 - Isómero B (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,68 (d, J = 8,47 Hz, 1H), 7,32-7,16 (m, 3H), 7,04 (d, J = 7,63 Hz, 1 H), 6,85 (d, J = 6,01 Hz, 1 H), 5,23 (d, J = 11 ,21 Hz, 1 H), 4,46 (dd, J = 8,23, 1 ,76 Hz, 1H), 4,13 (d, J = 11,21 Hz, 1H), 2,71 (S, 3H), 1,90 (dd, J = 15,46, 8,23 Hz, 1H), 1,17 (dd, J = 15,48, 1,75 Hz, 1H), 0,89 (s, 9H) 13C (75 MHz, CD3OD): 177,57, 168,31, 159,98 (d, JC-F = 244,73 Hz), 140,90, 135,98, 134,31, 131,59, 130,56, 129,45, 128,47, 125,84 (d, JC-F = 7,48 Hz), 123,61 (d, JC.F = 19,45 Hz), 114,33 (d, Jc-F = 25,29 Hz), 113,57, 65,62, 64,15, 62,93, 57,04, 63,42, 31,01, 29,60, 27,02; ESI: Calculado para C24H2735CI2FN302 [M+H]+= 478,15, Encontrado: 478,46.

Compuesto 9 - Isómero C (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,66 (d, J = 8,70 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 8,20 Hz, 1H), 7,23 (t, J = 7,89 Hz, 1H), 7,09 (t, J = 1,70 Hz, 1H), 6,93 (d, J = 7,66 Hz, 1H), 6,89 (,J = 6,13 Hz, 1H), 4,22 (t, J = 5,73 Hz, 1H), 3,91 (d, J = 12,36 Hz,1H), 2,70 (s, 3H), 1,90-1,84 (m, 2H), 0,83 (S, 9H); ESI: Calculado para C24H2735CI2FN302 [M+H]+= 478,15, Encontrado: 478,58.

Compuesto 9 - Isómero D (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,51 (d, J = 8,79 Hz, 1H), 7,24-7,12 (m, 2H), 7,08 (s, 1H), 7,25 (d, J = 7,13 Hz, 1H), 6,85 (d, J = 6,13 Hz, 1H), 4,80 (d, J= 11,25 Hz, 1H), 4,25-4,15 (m, 1H), 4,09 (d, J= 11,25 Hz, 1H), 2,76 (s, 3H), 1,44 (dd, J = 15,26, 7,62 Hz, 1H), 1,08 (dd, J = 15,26, 3,19 Hz, 1H), 0,92 (s, 9H); ESI: Calculado para C24H2735CI2FN302 [M+H]+= 478,15, Encontrado: 478,56.

Compuesto 10 - Isómero A (sal de TFA) (??-219-sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,32-7,22 (m, 3H), 7,18-7,10 (m, 1H), 7,06 (d, J = 8,74 Hz, 1H), 6,88 (d, J = 6,08 Hz, 1H), 4,97 (d, J = 10,79 Hz, 1H), 4,22 (d, J = 10,79 Hz, 1H), 4,26-4,18 (m, 1H), 3,50-3,20 (m, 5H), 2,03 (dd, J = 15,35, 6,56 Hz, 1H), 1,68-1,52 (m, 2H), 1,50-1,40 (m, 1H), 0,84 (s, 9H); 3C (75 MHz, CD3OD): 179,64, 166,47, 140,40 (d, JP-C = 2,94 Hz), 136,54, 136,06, 131,64, 130,16, 130,02, 128,14, 127,27 (d, JP-C = 40,14 Hz), 123,05 (d, JP-C = 19,44 Hz), 115,94 (d, JP-C = 25,54 Hz), 113,09, 70,91, 67,24, 64,19, 64,10, 62,73, 57,52, 42,66, 38,14, 33,85, 30,99, 29,57; ESI: Calculado para C27H3335CI2FN304 [M+H]+= 552,18, Encontrado: 552,75; HPLC Pureza = 82%.

Compuesto 10 - Isómero B, (sal de TFA) (MI-21901 - sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,68 (d, J = 8,47 Hz, 1H), 7,32-7,17 (m, 3H), 7,12-7,02 (m, 1H), 6,85 (d, J = 6,00 Hz, 1H), 5,23 (d, J = 11,28 Hz, 1H), 4,46 (dd, J = 8,41, 1,91 Hz, 1H), 4,10 (d, J = 11,28 Hz, 1H), 3,50-3,20 (m, 5H), 1,90 (dd, J= 15,18, 8,62 Hz, 1H), 1,65-1,47 (m, 1H), 1,47-1,33 (m,1H), 1,18 (d, J = 15,18 Hz,1 H), 0,89 (s, 9H); 13C (75 MHz, CD3OD): 177,56, 167,81, 155,99 (d, JP-C = 243,27 Hz), 140,87, 135,98, 134,28, 131,63, 130,60, 129,51, 128,60, 125,82 (d, JP-C = 7,39 Hz), 123,58 (d, JP-C = 19,68 Hz), 114,30 (d, JP-C = 25,32 Hz), 113,55, 70,86, 67,23, 65,53, 64,16, 63,07, 57,35, 43,43, 38,15, 33,78, 31,01, 29,57; ESI: Calculado para C27H3335Cl2RN304 [M+H]+= 552,18, Encontrado: 552,38; HPLC Pureza = 95%.

Compuesto 10 - Isómero D (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,60-7,53 (m, 1H), 7,30-7,10 (m, 2H), 7,08-7,02 (m, 1H), 7,00-6,92 (m, 1H), 6,84 (d, J= 6,13 Hz, 1H), 4,96 (d, J = 12,25 Hz, 1H), 4,39 (dd, J = 7,22, 4,31 Hz, 1H), 4,10 (d, J = 12,27 Hz, 1H), 3,50-3,20 (m, 5H), 1,68 (dd, J = 15,29, 7,23 Hz, 1H), 1,62-1,48 (m, 1H), 1,48-1,32 (m, 1H), 1,17 (dd, J = 15,29, 4,16 Hz, 1H), 0,90 (s, 9H); ESI: Calculado para C27H3335CI2FN304 [M+H]+= 552,18, Encontrado: 552,40.

Compuesto 11 - Isómero A (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,50-7,40 (m, 2H), 7,28-7,18 (m, 1H), 6,91 (d, J = 1,81 Hz, 1H), 6,78(dd, J = 8,13, 1,87 Hz, 1H), 6,46 (d, J = 8,14 Hz, 1H), 5,30 (d, J = 8,52 Hz, 1H), 4,43 (d, J = 8,52 Hz, 1H), 4,40-4,20 (m, 2H), 4,08 (dd, J = 7,47, 2,43 Hz, 1H), 2,00 (dd, J = 15,32, 7,53 Hz, 1H), 1,22 (t, J = 7,12 Hz, 3H), 1,19 (dd, J = 15,32, 2,55 Hz, 1H), 0,81 (s, 9H); 13C (75 MHz, CD3CI, note amina libre): 181,33, 171,91, 156,54 (d, JC-F = 248,02 Hz), 142,85, 134,15, 129,91, 128,37 (d, JC-F = 14,61 Hz), 127,19 (d, JC-F = 3,19 Hz), 125,94, 124,94, 124,63 (d, JC-F = 4,50 Hz), 122,10, 121,69 (d, JC.F = 18,50 Hz), 110,72, 67,16, 65,70, 63,19, 61,74, 51,17, 43,45, 30,33, 29,97, 14,32; ESI: Calculado para C25H2835CI2FN203 [M+H]+= 493,15, Encontrado: 493,44.

Compuesto 11 - Isómero B (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,59 (d, J = 7,41 Hz, 1H), 7,50-7,42 (m, 1H), 7,40-7,32 (m, 1H), 7,17-7,07 (m, 2H), 6,78 (d, J = 1,65 Hz, 1H), 5,61 (d, J = 12,25 Hz, 1H), 4,56 (d, J = 12,25 Hz, 1H), 4,47 (dd, J = 8,50, 1,50 Hz, 1H), 4,25 (dq, J = 10,77, 7,12 Hz, 1H), 4,13 (dq, J = 10,77, 7,12 Hz, 1H), 1,93 (dd, J = 15,39, 8,67 Hz, 1H), 1,34 (dd, J = 15,39, 1,57 Hz, 1H), 1,10 (t, J =7,12 Hz, 3H), 0,87 (s, 9H); ESI: Calculado para C25H2835CI2FN203 [M+H]+= 493,15, Encontrado: 493,44.

Compuesto 12 - Isómero A (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,56-7,46 (m, 1H), 7,46-7,36 (m, 1H), 7,26-7,18 (m, 1H), 6,91 (d, J = 1,61 Hz, 1H), 6,76 (dd, J= 8,10, 1,50 Hz, 1H), 6,47 (d, J = 8,14 Hz, 1H), 5,29 (d, J = 8,67 Hz, 1H), 4,43 (d, J= 8,67 Hz, 1H), 4,11 (d, J = 7,47, 2,13 Hz, 1H), 2,02 (dd, J = 15,36, 7,50 Hz, 1H), ,16 (dd, J = 15,36, 2,24 Hz, 1H), 0,81 (s, 9H); ESI: Calculado para C23H2435CI2FN203 [M+H]+= 465,11 , Encontrado: 465,42.

Compuesto 12 - Isómero B (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,58-7,42 (m, 2H), 7,36-7,26 (m, 1H), 7,14-7,02 (m, 1H), 6,75 (s, 1H), 5,43 (d, J = 12,00 Hz, 1H), 4,58 (d, J = 11,97 Hz, 1H), 4,35 (d, J = 8,53 Hz, 1H), 1,87 (dd, J = 15,08, 9,31 Hz, 1H), 1,09 (d, J = 15,31 Hz, 1H), 0,85 (s, 9H); ESI: Calculado para C23H2435CI2FN203 [M+H]+= 465,11, Encontrado: 465,38.

Compuesto 12 - Isómero D (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,49 (d, j = 8,10 Hz, 1H), 7,36-7,26 (m, 1H), 7,13 (dd, J = 8,10, 1,85 Hz, 1H), 7,08-7,00 (m, 1H), 6,96-6,86 (m, 1 H), 6,78 (d, J = 1 ,80 Hz, 1 H), 5,32 (d, J = 12,69 Hz, 1 H), 4,56 (d, J = 12,69 Hz, 1 H), 4,42 (dd, J = 7,27, 3,88 Hz, 1H), 1,69 (dd, J = 15,44, 7,64 Hz, 1H), 1,13 (dd, J= 15,44, 3,76 Hz, 1H), 0,90 (s, 9H); ESI: Calculado para C23H2435CI2FN203 [M+H]+= 465,11 , Encontrado: 465,54.

EJEMPLO 17 Síntesis de CB061 -Isómero B (sal de TFA) Esquema 12 Isomerización CB061 eat hteH Oj Isómeros A-D MeCN H_0 (1 1} ta, 3 días Se preparó CB061 de acuerdo con el Esquema 12 utilizando la metodología descrita en el EJEMPLO 16 para proporcionar una relación de isómeros A:B:(C+D) después de la oxidación de 15:67:18, una relación de isómeros A:B:(C+D) después de la isomerización de 2:74:24 y CB061 -Isómero B (como la sal de TFA) sustancialmente puro después de la cromatografía (Fig. 30).

Datos analíticos para CB061 -Isómero B (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,66 (d, J = 8,45 Hz, 1 H), 7,30-7,16 (m, 3H), 7,10-7,03 (m, 1 H), 6,85 (d, J = 5,98 Hz, 1 H), 5,22 (d, J = 11 ,37 Hz, 1 H), 4,46 (dd, J = 8,31 , ,68 Hz, H), 4,09 (d, J = 11 ,37 Hz, H), 3,70-3,50 (m, 1 H), 3,50-3,39 (m, 1 H), 2,00-1 ,84 (m, 3H), 1 ,82-1 ,70 (m, 1 H), 1 ,58-1 ,46 (m, 1 H), 1 ,40-1 ,12 (m, 4H), 1 ,08-0,90 (m, 1 H), 0,88 (s, 9H); 13C NMR (75 MHz, CD3OD): 177,42, 166,80, 155,82 (d, JC.F = 243,61 Hz), 140,67 (d, JC-F = 2,77 Hz), 135,73, 134,18, 131 ,36, 130,33, 129,44, 128,37, 125,77 (d, JC-F = 7,38 Hz), 123,38 (d, JC.F = 19,54 Hz), 114,06 (d, JC.F = 25,18 Hz), 113,39, 69,97, 65,12, 64,06, 62,94, 57,41 , 49,88, 43,37, 34,38, 34,29, 30,98, 30,82, 29,39; ESI: Calculado para C29H35CI2FN3O3 [M+H]+= 562,20, Encontrado: 562,36. La estereoquímica absoluta de CB061 -Isómero B se determinó mediante cristalografía de rayos X en monocristal.

EJEMPLO 18 Síntesis de CB087 - Isómero B (sal de TFA) Esquema 13 compuesto A mezcla 85:15 de isómeros CB087 Isómeros A-D 03067 C8087 Isómero B Isómeros A, C y D Se preparó CB087 de acuerdo con el Esquema 13 utilizando la metodología descrita en el EJEMPLO 16 para proporcionar una relación de isómeros (A+C+D):B después de la oxidación de 65:35, una relación de isómeros (A+C+D):B después de la isomerización de 18:82 (en acetonitrilo-agua en presencia de TFA) y CB087-lsómero B (como la sal de TFA) sustancialmente puro después de la cromatografía. En este estudio, el intermediario A se aisló como una mezcla de isómeros 85:15 en base al análisis por 1H NMR. Esta mezcla se utilizó en la etapa de oxidación. El isómero mayor se caracterizó mediante ? NMR y ESI. También se observó una pequeña isomerización en MeOH o en MeOH-agua a un pH de 8 después de 3 días a temperatura ambiente.

Datos analíticos para el isómero mayor del compuesto A: 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 7,40 (s, 6H), 7,10 (s, 9H), 7,20 (t, J = 7,12 Hz, 1H), 6,74 (t, J = 7,86 Hz, 1H), 6,48 (s, 1H), 6,44 (d, J = 8,20 Hz, 1H), 6,08 (t, J = 7,02 Hz, 1H), 5,51 (d, J = 8,22 Hz, 1H), 5,35 (d, J = 4,67 Hz, 1H), 4,55 (d, J = A,45 Hz, 1H), 4,18 (s, 1H), 4,15-3,90 (m, 3H), 3,70-3,55 (m, 1H), 2,30-2,00 (m, 4H), 1,60-1,30 (m, 4H); 13C (75 MHz, CD3OD): 179,68, 175,39, 155,86 (d, JC.P =247,63 Hz), 142,81, 134,49, 134,21, 132,34, 132,09, 129,46, 129,28 (d, JC.P = 12,91 Hz), 128,45, 128,09, 127,78, 127,16, 126,90, 126,67, 125,20, 124,90, 124,08 (d, JC.P = 3,27 Hz), 121,32 (d, JC.P = 8,18 Hz), 121,17, 110,01, 76,10, 75,35, 69,39, 67,82, 66,89, 61,60, 49,60, 48,14, 33,60, 33,48, 30,12, 29,82; ESI: Calculado para C44H41CI2FN3O4 [M+H]+= 764,25, Encontrado: 764,26.

Datos analíticos para CB087-lsómero B (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 8,34 (d, J = 7,70 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 8,11 Hz, 1H), 7,70 (t, J = 7,02 Hz, 1H), 7,42 (t, J = 7,61 Hz, 1H), 7,40-7,30 (m, 5H), 7,22 (d, J = 7,90 Hz, 1H), 7,16 (dd, J = 8,17, 1,85 Hz, 1H), 6,61 (d, J = 1,74 Hz, 1H), 5,58 (s, 1H), 5,34 (d, J = 10,97 Hz, 1H), 4,83 (d, J = 11,04 Hz, 1H), 3,78-3,60 (m, 1H), 3,50-3,40 (m, 1H), 2,00-1,86 (m, 2H), 1,86-1,78 (m, 1H), 1,70-1,60 (m, 1H), 1,42-1,20 (m, 3H), 1,02 (qd, J= 12,68, 3,30 Hz, 1H); 13C (75 MHz, CD3OD): 177,29, 167,33, 154,20 (d, JC.F = 284,04 Hz), 144,70, 136,97, 132,50, 131,26, 130,24, 130,03, 128,83, 128,70, 126,61, 126,54, 123,98, 122,91, 122,35 (d, JC-F = 18,95 Hz), 121,70 (d, JC-F = 12,66 Hz), 111,78, 70,44, 69,95, 64,89, 62,47, 49,98, 49,87, 34,33, 34,28, 30,91, 30,80; ESI: Calculado para C30H29CI2FN3O3 [M+H]+= 568,16, Encontrado: 568,54.

EJEMPLO 19 Síntesis de CB083 - Isómero B (sal de TFA) Esquema 14 1,1 equtv mezcla de isómeros Relación compuesto A isómera 84:16 CB083 Isómeros A-D C80S5 C8033 Isómeros A, C y D Isóniero B Se preparó CB083 de acuerdo con el Esquema 14 utilizando la metodología descrita en el EJEMPLO 16 para proporcionar una relación de isómeros (A+C+D):B después de la oxidación de 41 :59, una relación de isómeros (A+C+D):B después de la isomerización de 10:90 (en acetonitrilo-agua en presencia de TFA) y CB083-lsómero B (como la sal de TFA) sustancialmente puro después de la cromatografía. En este estudio, el intermediario A se aisló como una mezcla de isómeros 84:16 y el isómero mayor se utilizó en la etapa de oxidación. También, se observó una pequeña isomerización en MeOH o en MeOH-agua a un pH de 8 después de 3 días a temperatura ambiente.

Datos analíticos para el isómero mayor del compuesto A: 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 8,42 (d, J = 7,49 Hz, H, 1 H), 7,40-7,25 (m, 5H), 7,25-7,10 (m, 9H), 7,20-6,98 (m, 3H), 6,94 (dd, J = 8,06, 1 ,88 Hz, 1 H), 6,82 (d, J = 8,07 Hz, H), 6,63-6,55 (m, 2H), 6,53 (d, J = 1 ,84 Hz, 1 H), 5,18 (d, J = 5,70 Hz, 1 H), 4,32 (s, 1 H), 3,97 (d, J = 5,70 Hz, 1 H), 3,70 (d, J = 7,57 Hz, 1 H), 3,70-3,55 (m, 2H), 3,25-3,10 (m, 1 H), 2,64 (dd, J = 14,03, 6,91 Hz, 1 H), 2,45 (dd, J = 13,97, 9,24 Hz, 1 H), 2,15-1 ,90 (m, 4H), 1 ,55-1 ,30 (m, 4H); 13C (75 MHz, CD3OD): 181 ,03, 176,38, 144,79, 144,55, 139,09, 138,54, 135,17, 134,94, 133,16, 130,13, 130,07, 129,77, 129,26, 129,11 , 129,03, 128,95, 128,80, 128,18, 127,66, 127,35, 122,68, 111 ,27, 79,40, 76,05, 72,19, 70,6, 70,56, 62,05, 53,09, 49,63, 37,84, 34,88, 34,77, 31 ,34, 31 ,07; ESI: Calculado para C45H45CIN3O4 [M+Hf = 726,31 , Encontrado: 726,44.

Datos analíticos para CB083-lsómero B (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): 10,28 (s, NH, 1 H), 8,51 (d, J = 6,67 Hz, NH, 1 H), 7,59 (d, J = 8,03 Hz, 1 H), 7,25-7,00 (m, 9H), 6,60-6,50 (m, 3H), 4,82 (s, 1 H), 4,42 (d, J = 9,65 Hz, 1 H), 3,64-3,50 (m, 1 H), 3,46-3,32 (m, 1 H), 3,30-3,16 (m, 1 H), 2,85 (dd, J = 13,83, 4,77 Hz, 1 H), 2,28 (dd, J = 13,83, 10,20 Hz, 1 H), 1 ,90-1 ,66 (m, 4H), 1 ,38-1 ,10 (m, 4H); 13C (75 Hz, DMSO-d6): 178,36, 166,47, 143,95, 136,55, 133,32, 131 ,90, 128,69, 128,46, 128,09, 127,88, 127,18, 126,83, 126,52, 123,21 , 120,72, 109,97, 70,38, 67,78, 63,18, 62,17, 52,83, 47,76, 34,54, 33,57, 29,82, 29,78; ESI: Calculado para C31 H33CIN303 [M+H]+= 530,22, Encontrado: 530,40.

EJEMPLO 20 Síntesis de Síntesis de CB084 - Isómero B (sal de TFA) Se preparó CB084 de acuerdo con el Esquema 15 utilizando la metodología descrita en el EJEMPLO 16 para proporcionar una relación de isómeros A:B:(C+D) después de la oxidación de 97:1 :2, una relación de isómeros A:B:(C+D) después de la isomerización de 46:52:2 en acetonitrilo-agua en presencia de TFA después de 3 días, una relación de isómeros A:B:(C+D) después de la isomerización de 9:49:42 en acetonitrilo-agua a pH 8 después de 3 días y CB084-lsómero B (como la sal de TFA) sustancialmente puro después de la cromatografía.

Datos analíticos para CB084-lsómero A (amina libre): 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): 10,02 (s, NH, 1 H), 7,86 (d, J = 7,60 Hz, NH, 1 H), 7,31 (d, J = 7,91 Hz, 1H), 7,05 (d, J = 7,91 Hz, 1 H), 6,97 (s, 3H), 6,54 (s, 1 H), 6,46 (d, J = 3,65 Hz, 2H), 4,50 (d, J = 4,08 Hz, NH, 1 H), 3,60-3,40 (m, 2H), 3,40-3,30 (m, 1 H), 3,25-3,10 (m, 1 H), 2,80-2,70 (m, 2H), 2,60-2,40 (m, 1 H), 1 ,90-1 ,60 (m, 4H), 1 ,34 (dd, J = 13,86, 10,33 Hz, 1 H), 1 ,30-1 ,05 (m, 4H), 0,90-0,70 (m, 1 H), 0,71 (s, 9H); 13C (75 MHz, DMSO-d6): 180,50, 169,86, 143,83, 138,61 , 131 ,88, 129,53, 127,91 , 127,64, 125,83, 125,55, 120,61 , 108,90, 68,15, 68,08, 68,03, 61 ,27, 55,94, 47,20, 43,56, 34,36, 33,83, 33,77, 30,30, 30,02, 29,80, 29,67; ESI: Calculado para C30H3935CIN3O3 [M+H]+= 524,27, Encontrado: 524,55.

Esquema 15 mezcla de 2 isómeros 1,0 equiv 1,1 equiv 1,1 equiv CB08 ceoftt CB084 Isómero A Isómero B Isómeros C y D Isomercadón Datos analíticos para CB084-lsómero B (sal de TFA): 1H NMR (300 MHz, CD3OD): 8,54 (d, J = 7,42 Hz, NH, 1 H), 7,48 (d, J = 8,06 Hz, 1 H), 7,23 (d, J = 8,06 Hz, 1 H), 7,20-7,08 (m, 3H), 6,90 (s, 1H), 6,67 (d, J = 6,94 Hz, 1H), 4,49 (d, J = 11,08 Hz, 1H), 4,17 (dd, J = 7,91, 1,68 Hz, 1H), 3,75-3,60 (m, 1H), 3,60-3,45 (m, 1H), 3,40-3,30 (m, 1H), 2,79 (dd, J = 14,10, 6,05 Hz, 1H), 2,36 (dd, J = 14,10, 10,21 Hz, 1H), 2,10-1,80 (m, 4H), 1,49 (dd, J = 15,58, 8,30 Hz, 1H), 1,45-1,20 (m, 4H), 1,00-0,80 (m, 1H), 0,87 (s, 9H); 13C (75 MHz, DMSO-d6): 175,40, 144,42, 136,34, 133,82, 128,42, 127,93, 127,02, 126,60, 123,34, 121,24, 110,53, 67,72, 63,74, 63,35, 61,30, 51,75, 47,89, 42,56, 33,47, 33,44, 32,92, 29,78, 29,66, 29,52, 28,85; ESI: Calculado para C3oH3935CIN303 [M+H]+= 524,27, Encontrado: 524,44.

EJEMPLO 21 Síntesis de C144 Esquema 16 C144- Se preparó C144 utilizando la metodología descrita anteriormente. La estereoquímica absoluta de C144 se determinó mediante cristalografía de rayos X en monocristal.

Datos analíticos para C144: 1H NMR (300 MHz, CD3CI): 7,70-7,40 (m, 5H), 7,50-7,00 (m, 9H), 7,00-6,80 (m, 5H), 6,80-6,60 (m, 2H), 6,43 (d, J = 7,68 Hz, 1 H), 6,11 (t, J = 5,79 Hz, 1H), 5,99 (d, J = 7,56 Hz, 1 H), 5,27 (d, J = 6,91 Hz, 1 H), 4,48 (dd, J = 14,79, 6,31 Hz, 1 H), 4,34 (d, J = 6,91 Hz, 1 H), 4,21 (dd, J = 14,79, 5,41 Hz, 1 H), 4,13 (d, J = 11 ,24 Hz, 1 H), 3,80 (d, J = 11 ,24 Hz, 1 H), 3,51 (d, J = 9,46 Hz, 1 H), 2,83 (dd, J = 15,40, 9,46 Hz, 1 H), 1 ,32 (d, J = 15,40 Hz, 1 H), 0,76 (s, 9H); 13C (75 MHz, CD3CI): 178,42, 173,63, 142,12, 139,27, 137,97, 134,54, 133,23, 132,49, 131 ,78, 129,21 , 128,88, 128,74, 128,48, 128,21 , 127,92, 127,86, 127,77, 127,52, 127,29, 124,63, 122,27, 109,35, 75,06, 72,14, 70,40, 66,08, 60,65, 60,51 , 43,62, 43,56, 30,11 , 29,91 ; ESI: Calculado para C44H46N3O3 [M+H]+= 664,35, Encontrado: 664,36.

EJEMPLO 22 Actividad celular de MI-77301 La actividad de ?-77300 en distintas líneas celulares tumorales se presenta en la Tabla 6. La concentración citotóxica es la primera concentración en la que se observa la muerte celular correspondiente al índice citotóxico. La citotoxicidad se cuantificó mediante exclusión del azul de tripano a las 96 h, excepto para CCF-STTG1 a las 192 horas (media 20-50% de muerte celular y alta >50% de muerte celular). La Cl50 anti-proliferativa se determinó mediante ensayo de ATP.

Tabla 6 EJEMPLO 23 Inhibición del crecimiento celular y efectos citotóxicos en líneas celulares de 22Rv1 Se evaluaron la inhibición del crecimiento celular y los efectos citotóxicos de MI-519-6401 y MI-77301 en una línea celular de cáncer de próstata 22Rv1 (de DSMZ - Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, referencia DSMZ ACC438). Para los ensayos de inhibición del crecimiento se incubaron células en presencia de MI-519-6401 o MI-77301 durante 96 h en formato de 96 pocilios. Las condiciones de siembra de células se adaptaron para obtener un crecimiento celular significativo en este formato de ensayo. Los ensayos de inhibición del crecimiento se llevaron a cabo usando el kit luminiscente Celltiter-Glo (Promega). Los valores de Cl50 (concentración en la que el porcentaje de inhibición del crecimiento es igual a la mitad del efecto inhibitorio máximo del compuesto evaluado) se calcularon y ubicaron en el rango entre 100 nM y 500 nM en esta línea celular de cáncer de próstata para ambos compuestos.

Para los ensayos de citotoxicidad, las células se incubaron con MI-519-6401 o MI-77301 durante 96 h en formato de 6 pocilios. Las condiciones de siembra de células se adaptaron para obtener un crecimiento celular significativo en este formato de ensayo. Los éfectos citotóxicos se midieron usando tinción con azul de tripano. Se tiñeron las células flotantes y adherentes con azul de tripano. La cuantificación se llevó a cabo mediante el analizador de viabilidad celular Vi-CELL® (Beckmann-Coulter) que determina tanto la concentración celular como el porcentaje de células viables. Para ambos compuestos en concentraciones cercanas a las concentraciones de Cl90 (concentración en la que el porcentaje de inhibición del crecimiento es igual al 90% del efecto inhibitorio máximo del compuesto evaluado), los porcentajes de células viables se redujeron significativamente en comparación con las células sin tratar y, en el mejor de los casos, fueron entre 50 y 70% en la línea celular de 22Rv1.

EJEMPLO 24 Ensayo de apoptosis La apoptosis se determinó usando el kit de tinción Anexina-V-FLUOS/yoduro de propidio (Roche Applied Science) con modificaciones de las instrucciones del fabricante. Las células apoptóticas en etapa temprana exhiben una translocación de fosfatidilserina desde la superficie interna a la externa de la membrana plasmática que puede detectarse mediante tinción con Anexina V unida a fluoresceína. La tinción con yoduro de propidio (Pl) determina las células apoptóticas en etapa tardía o las células necróticas. Se colocó un total de 0,25 ? 106 células en placas durante toda la noche en un cultivo tisular de 6 pocilios. Al día siguiente se trataron las células adherentes en presencia o ausencia de MI-77301 y se incubaron a 37°C durante 2,5 días. Las células se cosecharon usando 0,05% tripsina-EDTA (Invitrogen) agrupando las poblaciones de células flotantes y adherentes, que se lavaron con PBS. Posteriormente, las células se tiñeron con Anexina-V-FLUOS y Pl en la solución amortiguadora de incubación a temperatura ambiente durante 10 minutos en la oscuridad. Se realizaron modificaciones usando 0,5 µ? de cada uno de Anexina-V-FLUOS y Pl (en lugar de los 2 µ? de cada uno mencionados en el manual de instrucciones) para la tinción. Se encontró que estas modificaciones reducen el ruido de fondo, en particular de la fluoresceína, en el ensayo. Las células se adquirieron y analizaron en un citómetro de flujo. Las células Anexina V+/PI- se puntuaron como células apoptóticas tempranas y las células Anexina V+/PI+ como células apoptóticas tardías. Los resultados de este ensayo se presentan en la Fig. 27.

EJEMPLO 25 Eficacia in vivo del modelo de xenoinjerto de SK-Mel-103 en ratones Preparación del fármaco Se disolvió MI-77301 en 10% PEG400 (polietilenglicol, peso mol 400, Sigma No. P3265), 3% Cremophor EL (Sigma No. C5135) y 87% 1X PBS (GIBCO™, Invitrogen Corp.) en la concentración deseada (preparado nuevamente cada día y dosificado oralmente antes de transcurrida 1 hora). Se verificó el pH de las soluciones de fármaco antes de su uso, el cual debía situarse entre pH 3,0 y 9,0 para administración oral (sonda oral) y entre pH 4,5 y 9,0 para administración IV (intravenosa). El pH de una solución se ajustó con NaOH 0,5N cuando fue necesario.

Cultivo celular Se mantuvieron células de melanoma humano SK-MEL-103 a 37°C, 95% de aire, 5% de dióxido de carbono en medio RPMI-1640 HyQ® (con 2,05 mM L-glutaminá, 0,1 µ? filtrado estéril, Hyclone®, QB Perbio) complementado con 10% FBS y penicilina/estreptomicina y se pasaron dos veces por semana.

Invección de células tumorales de xenoinjerto Se cosecharon células tumorales para xenoinjertos con Tripsina (0,05%)-EDTA (0,53mM) (GIBCO™, Invitrogen Corp.), se agregó medio de crecimiento y las células se colocaron sobre hielo. Se mezcló una muestra celular 1 :1 con azul de tripano (GIBCO™, Invitrogen Corp.) y se contó en un hemocitómetro para determinar la cantidad de células vivas/muertas. Las células se lavaron una vez con 1X PBS (GIBCO™, Invitrogen Corp.) y se resuspendieron en PBS. Se inyectaron las células en 0,1 mi subcutáneamente (s.c.) en la región de la ijada de cada ratón usando una aguja calibre 27. Para inyecciones de Matrigel, luego de lavar en PBS, las células se resuspendieron en una mezcla helada 1 :1 de PBS y Matrigel (BD Biosciences, Invitrogen Corp.) para una concentración proteica en Matrigel final de 5 mg/ml. Se inocularon tumores SK-MEL-103 en ratones SCID (cepa de reproducción UM:236 C.B-17 SCID, Charles River) a razón de 5 x 106 células en 0,1 mi con Matrigel. El tratamiento se inició en el día 4-5 luego de la inyección del tumor.

Monitoreo de crecimiento tumoral de xenoinjerto y peso El tamaño de los tumores que crecían en los ratones se midió en dos dimensiones usando calibres. Volumen del tumor (mm3) = (AxB2)/2, donde A y B son la longitud y el ancho del tumor (en mm), respectivamente. Durante el tratamiento se midieron el volumen del tumor y el peso corporal tres veces por semana. Una vez terminado el tratamiento se midieron el volumen del tumor y el peso corporal al menos una vez por semana y los ratones se mantuvieron otros 60 días para observar adicionalmente el crecimiento del tumor y la toxicidad.

Evaluación de la toxicidad y criterio de valoración No se permitió que los tumores excedieran el 10% del peso corporal total del animal. Si un animal tenia dos o más tumores, no se permitió que el peso total de todos los tumores excediera el 10% del peso corporal total del animal. Al cabo del período experimental, o cuando el tamaño del tumor se aproximó al 10% del peso corporal total, se sacrificó el animal. Los animales mostraron una profunda morbilidad o una pérdida de peso superior al 20% del peso corporal cuando se sacrificaron.

La eficacia de MI-77301 a 100 mg/kg por vía oral en este ensayo se presenta en la Fig. 29.

Habiéndose descrito detalladamente los métodos, compuestos y composiciones proporcionados en la presente, los expertos en la técnica comprenderán que los mismos podrán llevarse a cabo dentro de un amplio rango de condiciones, formulaciones y otros parámetros equivalentes sin afectar el alcance de los métodos, compuestos y composiciones proporcionados en la presente ni de cualquier realización de los mismos. Todas las patentes, solicitudes de patente y publicaciones citadas en la presente se incorporan a modo de referencia en su totalidad.

Claims (67)

1. REIVINDICACIONES 1. Un compuesto que tiene la Fórmula XII: en donde: R1a, R1b, R1c y R1d se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, fluoro y cloro; R2 se selecciona del grupo que consiste en aralquilo y: en donde: R25a R25b R25c R25d y R25e se se|ecc¡onan cacja uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, fluoro y cloro; R3 se selecciona del grupo que consiste en alquilo Ci-C3 opcionalmente sustituido y arilo opcionalmente sustituido; R4 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo Ci-C6 opcionalmente sustituido; R5 se selecciona del grupo que consiste en: en donde: R14 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido; X se selecciona del grupo que consiste en O, S y NR ; Y se selecciona del grupo que consiste en O, S y NR"; R se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido; y R" se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido y -COCH3, en donde el compuesto está sustancialmente libre de otro u otros estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 2. El compuesto de la reivindicación 1 , en donde: R2 es: R3 es alquilo d-C8 opcionalmente sustituido; R5 se selecciona del grupo que consiste en: R se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 3. El compuesto de la reivindicación 2, en donde R4 es hidrógeno, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 4. El compuesto de la reivindicación 2, en donde X es NH, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 5. El compuesto de la reivindicación 2, en donde Y es NH, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 6 El compuesto de la reivindicación 2, en donde R3 es -CH2C(CH3)3, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 7. El compuesto de la reivindicación 2, en donde R5 se selecciona del grupo que consiste en: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 8. El compuesto de la reivindicación 2, en donde: R1a es hidrógeno; R1b, R1c y R1d se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, fluoro y cloro; R3 es alquilo C4-C8; R4 es hidrógeno; R5 se selecciona del grupo que consiste en: X e Y son NH; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 9. El compuesto de las reivindicaciones 7 u 8, en donde R5 se selecciona del grupo que consiste en: sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Un compuesto que tiene la Fórmula XXXV: en donde: R1 y R1c se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, fluoro y cloro; R3 es alquilo C4-C8; y R25a, R25b y R25c se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, fluoro y cloro, en donde el compuesto está sustancialmente libre de otro u otros estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 11. El compuesto de la reivindicación 2 que se selecciona del grupo que consiste en: i82 en donde el compuesto está sustancialmente libre de otro u otros estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 12. El compuesto de la reivindicación 1 que se selecciona del grupo que consiste en: en donde el compuesto está sustancialmente libre de otro u otros estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 13. Un compuesto que se selecciona del grupo que consiste en: en donde el compuesto está sustancialmente libre de otro u otros estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 14. Un compuesto que tiene la estructura: en donde el compuesto está sustancialmente libre de otro u otros estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 15. Un compuesto que tiene la estructura: en donde el compuesto está sustancialmente libre de otro u otros estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 16. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-15, en donde el compuesto es un estereoisómero sustancialmente puro, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 17. El compuesto de la reivindicación 16, en donde el compuesto es un estereoisómero puro, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 18. Una composición farmacéutica que comprende el compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-17, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un portador farmacéuticamente aceptable. 19. Una composición farmacéutica que comprende el compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-17, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento de una enfermedad hiperproliferativa. 20. Un método para tratar un paciente que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-17, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el paciente tiene una enfermedad hiperproliferativa. 21. Un método para tratar un paciente que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de la composición farmacéutica de la reivindicación 18, en donde el paciente tiene una enfermedad hiperproliferativa. 22. Un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-17, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en tratamiento de una enfermedad hiperproliferativa. 23. El uso de un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-17, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para tratamiento de una enfermedad hiperproliferativa. 24. La composición farmacéutica de la reivindicación 19, en donde la enfermedad hiperproliferativa es cáncer. 25. El método de las reivindicaciones 20 o 21 , en donde la enfermedad hiperproliferativa es cáncer. 26. El compuesto de la reivindicación 22, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde la enfermedad hiperproliferativa es cáncer. 27. El uso de la reivindicación 23, en donde la enfermedad hiperproliferativa es cáncer. 28. La composición farmacéutica de la reivindicación 24, en donde el cáncer se selecciona del grupo que consiste en melanoma, cáncer de pulmón, sarcoma, cáncer de colon, cáncer de próstata, corlocarcinoma, cáncer de mama, retinoblastoma, carcinoma de estómago, leucemia mieloide aguda, linfoma, mieloma múltiple y leucemia. 29. El método de la reivindicación 25, en donde el cáncer se selecciona del grupo que consiste en melanoma, cáncer de pulmón, sarcoma, cáncer de colon, cáncer de próstata, coriocarcinoma, cáncer de mama, retinoblastoma, carcinoma de estómago, leucemia mieloide aguda, linfoma, mieloma múltiple y leucemia. 30. El compuesto de la reivindicación 26, en donde el cáncer se selecciona del grupo que consiste en melanoma, cáncer de pulmón, sarcoma, cáncer de colon, cáncer de próstata, coriocarcinoma, cáncer de mama, retinoblastoma, carcinoma de estómago, leucemia mieloide aguda, linfoma, mieloma múltiple y leucemia. 31. El uso de la reivindicación 27, en donde el cáncer se selecciona del grupo que consiste en melanoma, cáncer de pulmón, sarcoma, cáncer de colon, . cáncer de próstata, coriocarcinoma, cáncer de mama, retinoblastoma, carcinoma de estómago, leucemia mieloide aguda, linfoma, mieloma múltiple y leucemia. 32. La composición farmacéutica de la reivindicación 28, en donde el cáncer se selecciona del grupo que consiste en liposarcoma y melanoma. 33. El método de la reivindicación 29, en donde el cáncer se selecciona del grupo que consiste en liposarcoma y melanoma. 34. El compuesto de la reivindicación 30, en donde el cáncer se selecciona del grupo que consiste en liposarcoma y melanoma. 35. El uso de la reivindicación 31 , en donde el cáncer se selecciona del grupo que Consiste en liposarcoma y melanoma. 36. El método de la reivindicación 25, en donde las células del cáncer expresan p53 funcional. 37. El método de la reivindicación 25, que adicionalmente comprende administrar al paciente uno o más agentes anticáncer. 38. El método de la reivindicación 37, en donde el agente anticáncer es un agente quimioterapéutico. 39. El método de la reivindicación 37, en donde el agente anticáncer es terapia de radiación. 40. El método de la reivindicación 25, en donde el método comprende la administración de dosis pulsátiles del compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o la composición farmacéutica al paciente. 41. El método de la reivindicación 40, en donde el compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o la composición farmacéutica se administra al paciente un día por semana, un día cada dos semanas, un día cada tres semanas o un día cada cuatro semanas. 42. Un método para tratar un paciente, en donde el paciente tiene un cáncer y está siendo tratado con un agente anticáncer, que comprende administrar al paciente el compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-17, o sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 43. Un método para tratar un paciente, en donde el paciente tiene un cáncer y está siendo tratado con un agente anticáncer, que comprende administrar al paciente la composición farmacéutica de la reivindicación 18. 44. El método de las reivindicaciones 42 o 43, en donde el paciente experimenta efectos secundarios del tratamiento con el agente anticáncer que se selecciona del grupo que consiste en mucositis, estomatitis, xerostomía, alopecia y trastorno gastrointestinal. 45. El método de las reivindicaciones 42 o 43, en donde las células del cáncer expresan p53 funcional. 46. Un kit que comprende el compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-17, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo e instrucciones para administrar el compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, a un paciente que tiene cáncer. 47. Un kit que comprende la composición farmacéutica de la reivindicación 18 e instrucciones para administrar la composición farmacéutica a un paciente que tiene cáncer. 48. ¦ El kit de las reivindicaciones 46 o 47, en donde el cáncer se selecciona del grupo que consiste en melanoma, cáncer de pulmón, sarcoma, cáncer de colon, cáncer de próstata, coriocarcinoma, cáncer de mama, retinoblastoma, carcinoma de estómago, leucemia mieloide aguda, linfoma, mieloma múltiple y leucemia. 49. El kit de las reivindicaciones 46 o 47, que adicionalmente comprende uno o más agentes anticáncer. 50. El kit de las reivindicaciones 46 o 47, en donde las instrucciones indican la coadministración del compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o composición farmacéutica junto con el o los agentes anticáncer. 51. El kit de las reivindicaciones 46 o 47, en donde las instrucciones indican la administración de dosis pulsátiles del compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o composición farmacéutica al paciente. 52. Un método para preparar un compuesto que tiene la Fórmula XXXVII: comprendiendo dicho método permitir que un compuesto que tiene la Fórmula XXXVI se isomerice en un compuesto que tiene la Fórmula XXXVII, en donde: R32 se selecciona del grupo que consiste en -OR33y-NR34aR34b; R33 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo y aralquilo; R3 a se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, aralquilo, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido; R34b se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo; R1a, R1 , R1c y R1d se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, fluoro y cloro; R2 se selecciona del grupo que consiste en aralquilo y: R , R , R , R y R se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, fluoro y cloro; y R3 se selecciona del grupo que consiste en alquilo C^-Ca opcionalmente sustituido y arilo opcionalmente sustituido. 53. El método dé la reivindicación 52, en donde el disolvente se selecciona del grupo que consiste en acetonitrilo, metanol, acetato de etilo y agua, o una mezcla del mismo. 54. El método de las reivindicaciones 52 o 53, en donde la isomerización se lleva a cabo a un pH menor que 7. 55. El método de las reivindicaciones 52 o 53, en donde la isomerización se lleva a cabo a un pH de 7. 56. El método de las reivindicaciones 52 o 53, en donde la isomerización se lleva a cabo a un pH mayor que 7. 57. El método de cualquiera de las reivindicaciones 52-54, en donde la isomerización se lleva a cabo en presencia de un ácido que se selecciona del grupo que consiste en ácido trifluoroacético y ácido acético. 58. El método de cualquiera de las reivindicaciones 52, 53, o 56, en donde la isomerización se lleva a cabo en presencia de NaHC03. 59. El método de cualquiera de las reivindicaciones 52-58, en donde la isomerización se lleva a cabo a una temperatura de aproximadamente 20°C a aproximadamente 100°C. 60. El método de cualquiera de las reivindicaciones 52-59, en donde R32 es -OR33. 61. El método de cualquiera de las reivindicaciones 52-59, en donde R32 es -NR34aR34b. 62. El método de la reivindicación 61 , en donde R34b es hidrógeno y R34a se selecciona del grupo que consiste en alquilo, hidroxialquilo, hidroxicicloalquilo, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido. 63. El método de la reivindicación 62, en donde R34a se selecciona del grupo que consiste en: 64. El método de cualquiera de las reivindicaciones 52-63, en donde el compuesto de Fórmula XXXVM se aisla como un estereoisómero sustancialmente puro. 65. El método de la reivindicación 64, en donde el compuesto que tiene la Fórmula XXXVII se aisla como un estereoisómero puro. 66. El método de cualquiera de las reivindicaciones 52-65, en donde: R32 es -NR34aR34b; R34a es: R >3J3JbD es hidrógeno; R2 es: R es alquilo C C8. 67. El método de la reivindicación 52 que adicionalmente comprende aislar el compuesto que tiene la Fórmula XXXVM sustancialmente libre del compuesto que tiene la Fórmula XXXVI. RESUMEN Se proporcionan en la presente compuestos, composiciones y métodos en el campo de la química farmacéutica. Los compuestos y composiciones proporcionados en la presente se relacionan con espiro-oxindoles que funcionan como antagonistas de la interacción entre p53 y MDM2 y su uso como agentes terapéuticos para el tratamiento de cáncer y otras enfermedades.