MX2011002149A - Compuestos que modulan el calcio intracelular. - Google Patents

Compuestos que modulan el calcio intracelular.

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Zhijun Wang
Gonul Velicelebi
Jeffrey P Whitten
Yazhong Pei
Jianguo Cao
Evan Rogers
Brian Dyck
Jonathan Grey
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Abstract

La presente invención se refiere a compuestos y composiciones farmacéuticas que contienen tales compuestos, los cuales modulan la actividad de los canales de calcio operados en almacenamiento (SOC). También se describen en la presente métodos para utilizar tales moduladores de canal SOC, solos y en combinación con otros compuestos, para tratar padecimientos o condiciones que se beneficiarían de la inhibición de la actividad del canal SOC.

Description

COMPUESTOS QUE MODULAN EL CALCIO INTRACELULAR CAMPO DE LA INVENCIÓN En este documento se describen compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos que incluyen tales compuestos, y los métodos para usar tales compuestos para modular la actividad del canal de calcio operado por depósitos (SOC) .
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El calcio juega un papel vital en la función y en la supervivencia celular. Por ejemplo, el calcio es un elemento clave en la transducción de las señales hacia y dentro de las células. Las respuestas celulares a los factores de crecimiento, los neurotransmisores , las hormonas y una variedad de otras moléculas de señalización se inician a través de procesos dependientes del calcio.
Virtualmente todos los tipos de células dependen de alguna manera de la generación de señales del Ca2+ citoplasmático para regular las funciones celulares, o para activar las respuestas especificas. Las señales de Ca2+ citosólico controlan una amplia gama de funciones celulares que varían de las respuestas de corto plazo tales como las contracciones y la secreción, a la regulación a largo plazo del crecimiento y la proliferación celular. Usualmente, estas señales involucran alguna combinación de liberación del Ca2+ de los depósitos intracelulares , tales como el retículo endoplasmático (ER) , y el ingreso del Ca2+ a través de la membrana plasmática. En un ejemplo, la activación celular comienza con el enlazamiento de un agonista a un receptor superficial de la membrana, el cual se acopla con la fosfolipasa C (PLC) a través del mecanismo de la proteína G.
La activación de la PLC lleva a la producción de inositol 1,4, 5-trifosfato (IP3), el cual a su vez activa el receptor de IP3 provocando la liberación del Ca2+ del ER. La caída en el Ca2+ del ER entonces envía una señal a los canales de calcio operados por depósitos (SOC) de la membrana plasmática .
La entrada del calcio operada por depósitos (SOC) es un proceso de la fisiología celular que controla funciones tan diversas como, pero no limitadas a, la recarga de los depósitos del Ca2+ intracelulares (Putney et al., Cell, 75, 199-201, 1993) , la activación de la actividad enzimática (Fagan, et al., J. Biol . Chem. 275:26530-26537, 2000), la transcripción genética (Lewis, Annu. Rev. Immunol. 19:497-521, 2001) , la proliferación celular (Nunez et al., J. Physiol. 571:1, 57-73, 2006) , y la liberación de atocinas (Winslow et al., Curr. Opin. Immunol. 15:299-307, 2003) . En algunas células no excitables, por ejemplo, los glóbulos rojos, células inmunológicas , células hematopoyéticas , linfocitos T y mastocitos, la entrada del SOC ocurre a través de los canales de calcio activados por la liberación del calcio (CRAC) , un tipo de canal SOC.
El mecanismo de entrada del calcio ha sido conocido como entrada del calcio operada por depósitos (SOCE) . Las proteínas moleculares de interacción estromal son un componente esencial de la función de los canales SOC, que sirve como los sensores para detectar el vaciado del calcio de los depósitos internos y para activar los canales SOC.
SUMARIO DE LA INVENCIÓN En este documento se describen compuestos de las Fórmulas (I) , (II) y (III) , (IV) , o (V) (de aquí en delante los "compuestos de las Fórmulas (I)-(V)", composiciones que incluyen tales compuestos y métodos para usar los mismos para modular el calcio intracelular . En otro aspecto, los compuestos de las Fórmulas (I)-(V) modulan el calcio intracelular por la inhibición de la actividad de los canales de calcio operados por depósitos. En un aspecto, los compuestos de las Fórmulas (I)-(V) modulan el calcio intracelular previniendo la actividad de los complejos de los canales de calcio operados por depósito. En un aspecto, los compuestos de las Fórmulas (I) - (V) inhiben la activación de los canales operados por depósitos. En otro aspecto, los compuestos de las fórmulas (I) - (V) inhiben la activación de los canales de calcio activados por la liberación de calcio.
En un aspecto, los compuestos de las Fórmulas (I) - (V) modulan la actividad de, modulan una interacción de, o modulan el nivel de, o se enlazan a, o interactúan con al menos una proteína de los complejos de los canales SOC. En un aspecto, los compuestos de las fórmulas (I)-(V) modulan una actividad de, modulan una interacción de, o modulan el nivel de, o se enlazan con, o interactúan con, al menos una proteína de los complejos de los canales CRAC.
En otro aspecto, los compuestos descritos aquí son inhibidores selectivos de la actividad de los canales SOC.
En otro aspecto, en este documento se describen los compuestos de Fórmula (I) : Fórmula (I) en donde : A es fenilo o benzofurano, en donde el fenilo y el benzofuráno están cada uno sustituidos opcionalmente con al menos una R; o A es fenilo sustituido con dos grupos R en átomos de carbono adyacentes, en donde los dos grupos R y los átomos de carbono a los cuales están enlazados forman un cicloalquilo de C4-C8 o heterocicloalquilo de C3-C8; R se selecciona de F, Cl, Br, I, -CN, -N02, -CF3, -OH, -0R3, -OCF3, -C=CH, -C=CR3, alquilenoalquino de Ci-C6, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C6, heteroalquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, tetrazolilo, heterocicloalquilo de C2-C6, fenilo, -NHS(=0)2R3, S ( =0) 2N (R4) 2 , -C(=Q)CF3, C ( =0) NHS (=0) 2R3 , -S (=0) 2NHC (=0) R4 , N(R4)2, - (R4 ) C (=0) R3 , -C02R4, -C(=0)R3, -0C(=0)R3, -C (=0) (R4 ) 2 , -SR3, -S(=0)R3, y -S (=0) 2R3; J es un enlace, NHS (=0)2, S(=0)2N(R4), -C(=0), C(=0)NHS (=0) 2, -S (=0) 2NHC(=0) , N(R4), -N(R4)C(=0), -C02, -C(=0), -0C(=0), -C(=0)N(R4), -S, -S(=0), y -S(=0)2, alquileno de C1-C6, alquenileno de C2-C6, alquinileno de C2-C6, heteroalquileno de C1-C6, cicloalquileno de C2-C6, o heterocicloalquileno de C2-C6, en donde el alquileno de Cl-C6, alquenileno de C2-C6, alquinileno de C2-C6, heteroalquileno de C1-C6, cicloalquileno de C2-C6, y heterocicloalquileno de C2-C6, está substituido opcionalmente con al menos una R; Rl es C02R2 o un bioisóstero de ácido carboxílico, en donde R2 es hidrógeno, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de Cl-C6, haloalquilo de C1-C6, fenilo o bencilo; Z es O, S, NH, N-CN, o CHN02; X es W-L-fenilo, W-L-B, B, -L-D, o D en donde el fenilo, B y D están cada uno substituidos opcionalmente con al menos una R; es NR2 , 0 o un enlace; L es metileno, etileno substituido con al menos una R, alquileno de C3-C6, alquenileno de C2-C6, alquinileno de C2-C6, heteroalquileno de C1-C6, cicloalquileno de C2-C6, o heterocicloalquileno de C2-C6, en donde el metileno, alquileno de C2-C6, alquenileno de C2-C6, alquinileno de C2-C6 , heteroalquileno de C1-C6, cicloalquileno de C3-C6, y heterocicloalquileno de C2-C6 están substituidos opcionalmente con al menos una R; Rl es C02R2 o un bioisóstero de ácido carboxílico, en donde R2 es hidrógeno, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de Cl-C6, haloalquilo de C1-C6, fenilo o bencilo; Z es O, S, NH, N-CN, o CHN02 ; X es W-L-fenilo, W-L-B, W-L-D, o D en donde el fenilo, B y D están cada uno substituidos opcionalmente con al menos una R; W es NR2 , O o un enlace; L es metileno, etileno substituido con al menos una R, alquileno de C3-C6, alquenileno de C3-C6, alquinileno de C2-C6, heteroalquileno de C1-C6, cicloalquileno de C3-C6, o heterocicloalquileno de C2-C6, en donde el metileno, alquileno de C3-C6, alquenileno de C3-C6, alquinileno de C2-C6, heteroalquileno de C1-C6, cicloalquileno de C3-C6, o heterocicloalquileno de C2-C6, está substituido opcionalmente con al menos una R; B se selecciona de furano, tiofeno, pirrol, piridina, oxazol, tiazol, imidazol tiadiazol, isoxazol, isotiazol, pirazol, piridazina, pirimidina, pirazina, oxadiazol, tiadiazol, triazol, indol, benzoxazol, benzotiazol, bencimidazol , benzoxadiazol , benzotiadiazol , benzotriazol , pirazolopiridina, pirrolopirimidina, indolizina, purina, imidazopiridina, pirrolopiridina, fluoropiridina, tienopiridina, furopirrol, furofurano, ruenofurano, 1,4-dihidropirrolopirrol , tienopirrol, tienotiofeno, quinolina, isoquinolina, furopirazol, tienopirazol , y 1,6-dihidropirrolopirazol ; D es cicloalquilo de C2-C1Q o heterocicloalquilo de C2- C9; cada R3 se selecciona independientemente de alquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C8, fenilo, y bencilo ; cada R4 se selecciona independientemente de hidrógeno, alquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C8, fenilo, y bencilo; o las sales, solvatos, óxidos de N o profármacos de los mismos aceptables farmacéuticamente.
Para todas y cada una de las modalidades, los sustituyentes se selecciona de entre un subconjunto de las alternativas listadas. Por ejemplo, en algunas modalidades, R2 es hidrógeno o alquilo de C1-C6. En otras modalidades, R2 es H, metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, sec-butilo, iso-butilo, n-pentilo, o hexilo. En aún otras modalidades, R2 es H, metilo, o etilo. En algunas modalidades, R2 es H. En una modalidad, el radical carboxilo del núcleo de tiofeno se reemplaza con un bioisóstero de ácido carboxílico.
En una modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) en dond Rl es C02R2. En otra modalidad es un compuesto de la Fórmula (I) en donde R2 es hidrógeno. En aún otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde R4 es hidrógeno.
En otra modalidad es un compuesto de la Fórmula (I) en donde Z es O. En una modalidad es un compuesto de la Fórmula (I) en donde J es un enlace. En otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde A es fenilo. En una modalidad es un compuesto de la Fórmula (I) en donde el fenilo está sustituido con al menos una R. En aún otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde el fenilo está sustituido con una R. En una modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde el fenilo está sustituido con dos R. En una modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde el fenilo está sustituido con tres R. En aún otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde R se selecciona de F, Cl, Br, 0 ó alquilo de C1-C6. En una modalidad adicional, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde el alquilo de C1-C6 es metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, o ter-butilo. En aún otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde A es benzofurano. En una modalidad es un compuesto de la Fórmula (I) en donde el benzofurano está sustituido con al menos una R. En otra modalidad, es un compuesto de la es un compuesto de la Fórmula (I) en donde el benzofurano esta sustituido con una R. En aún otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde R se selecciona de F, Cl, Br, I, OH, CN, alquilo de C1-C6, y OR3. En una modalidad adicional, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde R3 es alquilo de C1-C6. En aún otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde el alquilo de C1-C6 es metilo. En una modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde X es B. En una modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde B se selecciona de benzoxazol, benzotiazol, bencimidazol , pirazolopiridina, imidazopiridina, benzoxadiazol , benzotiadiazol , y benzotriazol . En una modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde B es benzoxazol. En otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde B es benzotiazol . En aún otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde B es pirazolopiridina . En una modalidad adicional, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde B es benzotiadiazol . En aún otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde B está sustituido con una R. En una modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde R se selecciona de F, Cl, Br, I, -CN, -N02, -CF3, -OH, -OR3, -0CF3, -C=CH, -C=CR3, alqueniloalquino, de C1-C6, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C6, heteroalquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, tetrazolilo, heterocicloalquilo de C2-C6, y fenilo. En una modalidad, es un compuesto de la fórmula (I) en donde R se selecciona de F, Cl, Br e I. En otra modalidad es un compuesto de la Fórmula (I) en donde X es D. En aún otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde D es cicloalquilo de C3-C8. En una modalidad adicional es un compuesto de la Fórmula (I) en donde D es heterocicloalquilo de C2-C8.
En un aspecto, es un compuesto seleccionado de: y las sales, solvatos, óxidos de N o profármacos de los mismos aceptables farmacéuticamente.
En otro aspecto, es un compuesto seleccionado o una sal, solvato, óxido de N o profármacos de los mismos aceptables farmacéuticamente.
En aún otro aspecto, es un compuesto seleccionado de: o las sales, solvatos, óxidos de o profármacos los. mismos aceptables farmacéuticamente.
En un aspecto, es un compuesto de 1 Fórmula (II) : Fórmula (II) en donde : A es fenilo substituido con al menos tres sustituyentes o benzofurano substituido opcionalmente con al menos una R; o dos R y los átomos de carbono del fenilo a los cuales se unen, forman un cicloalquilo de C4-C8, o heterocicloalquilo de C3-C8; R se selecciona de F, Cl, Br, I, -CN, -N02, -CF3, -OH, -0R3, -OCF3, -C=CH, -C=CR3, alquilenoalquino de C1-C6, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C6, heteroalquilo de Cl-C6, haloalquilo de C1-C6, tetrazolilo, heterocicloalquilo de C2-C6,, fenilo, -NHS(=0)2R3, S ( =0) 2N (R4 ) 2 , -C(=0)CF3, -C(=0)NHS (=0) 2R3, -S ( =0) 2NHC ( =0) R4 , N(R4)2, - (R4 ) C (=0) R3 , -C02R4, -C(=0)R3, -0C(=0)R3, -C ( =0) N (R4 ) 2 , -SR3, -S(=0)R3, y -S (=0) 2R3 ; J es un enlace, , NHS(=0)2, S(=0)2N(R4), -C(=0), C(=0)NHS (=0) 2, -S(=0) 2NHC(=0) , N(R4), -N(R4)C(=0), -C02, -C(=0), -0C(=0), -C(=0)N(R4), -S, -S(=0), y -S(=0)2, alquileno de C1-C6, alquenileno de C2-C6, alquinileno de C2-C6 , heteroalquileno de C1-C6 o o cicloalquileno de C3-C6, en donde el alquileno de cl6, alquinileno de C2-C6, heteroalquileno de C1-C6, y cicloalquileno de C3-C6 está substituido opcionalmente con al menos una R; Rl es C02R2 o un bioisóstero de ácido carboxílico, en donde R2 es hidrógeno, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de Cl-C6, haloalquilo de C1-C6, fenilo o bencilo; Z es 0, S, NH, N-CN, o CHN02 ; W es NR2 , 0 ó un enlace; Ll es un enlace., alquileno de C1-C6, alquenileno de C2-C5 , alquinileno de C2-C6, heteroalquileno de C1-C6, cicloalquileno de C3-C6, o heterocicloalquileno de C2-C6 en donde el alquileno de C1-C6, alquenileno de C2-C6, alquinileno de C2-C6, heteroalquileno de C1-C6, cicloalquileno de C3-C6, heterocicloalquileno de C2-C6, está substituido opcionalmente con al menos una R; Y es O ó S; n es un entero de 0-5; cada R3 se selecciona independientemente de alquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C8, fenilo, y bencilo ; cada R4 se selecciona independientemente de hidrógeno, alquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C8 , fenilo, y bencilo; o las sales, solvatos, óxidos de N o profármacos de los mismos aceptables farmacéuticamente.
En otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (II) en donde Rl es C02R2 y R2 es hidrógeno. En una modalidad adicional, es un compuesto de la Fórmula (II) en donde J es un enlace. En aún otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (II) en donde R4 es hidrógeno. En aún orea modalidad, es un compuesto de la Fórmula (II) en donde Z es 0. En una modalidad, es un compuesto de la Fórmula (II) en donde A es fenilo. En otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (II) en donde el fenilo está sustituido con tres R. En aún otra modalidad, es un compuesto de la fórmula (II) en donde cada R se selecciona independientemente de F, Cl, Br, I, alquilo de C1-C6, OH, y 0R3. En una modalidad adicional, es un compuesto de la Fórmula (II) en donde R3 es metilo. En aún otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (II) en donde el alquilo de C1-C6 es metilo. En una modalidad, es un compuesto de la Fórmula (II) en donde W y Ll se seleccionan cada una independientemente de un enlace. En otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (II) en donde Y es O. En una modalidad, es un compuesto de la Fórmula (II) en donde n es =. En una modalidad adicional, es un compuesto de la Fórmula (II) en donde R se selecciona de F, Cl, Br, I, CN, OH, 0R3 , y N02. En aún otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (II) en donde n es 1.
En un aspecto, es un compuesto seleccionado de: o las sales, solvatos, o profármacos de los mismos aceptables farmacéuticamente.
En otro aspecto, es una composición farmacéutica que comprende compuestos de las Fórmulas (I) o (II) y un diluyente, excipiente, portador o aglutinante aceptables farmacéuticamente de los mismos.
En otro aspecto, es un método para modular la actividad de los canales de calcio operados por depósitos (SOC) que comprende poner en contacto los complejos de los canales SOC, o porciones de los mismos, con un compuesto de las Fórmulas (I) O (II) .
En otro aspecto, es un método para modular la actividad de los canales de calcio activados por la liberación de calcio (CRAC) en mamíferos, que comprende administrar a los mamíferos un compuesto de las Fórmulas (II) o (II) , en donde el compuesto de las Fórmulas (I) o (II) modula la actividad de los canales de calcio activados por la liberación del calcio en los mamíferos.
En otro aspecto, es un método para inhibir la activación de la entrada de calcio operada por depósitos (SOCE) del factor nuclear de célula sT activadas (NFAT) en mamíferos, que comprende administrar a los mamíferos un compuesto de las Fórmulas (I) o (II) en donde el compuesto de las Fórmulas (I) o (II) inhibe la activación de la SOCE de NFAT en los mamíferos.
En aún otro aspecto, es un método para reducir la liberación de citocinas al inhibir la activación de la SOCE por el NFAT en mamíferos, que comprende administrar a los mamíferos un compuesto de las Fórmulas (I) o (II) en donde el compuesto de las Fórmulas (I) o (II) reduce la liberación de citocinas en los mamíferos.
En un aspecto adicional, es un tetrodo para tratar una enfermedad, trastorno o condición en mamíferos, que se beneficiarían por la inhibición de la actividad de los canales de calcio operados por depósitos, que comprende administrar a los mamíferos un compuesto de las Fórmulas (I) o (II) .
En un aspecto, es un método para tratar una enfermedad autoinmune, una enfermedad o condición heteroinmune , o una enfermedad inflamatoria en los mamíferos, que comprende administrar a los mamíferos un compuesto de las Fórmulas (I) o (II) o las sales o profármacos aceptables farmacéuticamente del mismo.
En una modalidad, la enfermedad autoinmune es la enfermedad inflamatoria intestinal, artritis reumatoide, miastenia gravis, esclerosis múltiple, síndrome de Sjorgen, diabetes tipo I, lupus eritematoso, psoriasis, osteoartritis , esclerodermia, una anemia hemolítica autoinmune.
En otra modalidad, la enfermedad o condición heteroinmune es la enfermedad de injerto contra anfitrión, rechazo de injertos, dermatitis atópica, conjuntivitis alérgica, rechazo de transplante de órganos, transplantes alogenitos o xenogénicos, y rinitis alérgica.
En una modalidad adiciona, la enfermedad inflamatoria es uveitis, vasculitis, vaginitis, asma, la enfermedad muscular inflamatoria, dermatitis, cistitis intersticial, colitis, la enfermedad de Crohn, dermatomiositis, hepatitis, y hepatitis crónica recidivante.
En otro aspecto, es un método para tratar una enfermedad, trastorno o condición en los mamíferos, que se beneficiarían de la inhibición de la actividad de los canales de calcio operados por depósitos, que comprende administrar a los mamíferos un compuesto de las Fórmulas (I) o (II) o las sales, óxidos de N o profármacos aceptables farmacéuticamente del mismo.
En una modalidad, la enfermedad, trastorno o condición en los mamíferos se selecciona de glomerulonefritis , enfermedades o trastornos hepáticos, enfermedades o trastornos renales. Enfermedad pulmonar obstructiva crónica, osteoporosis , eczema, fibrosis pulmonar, tiroiditis, fibrosis cística, y cirrosis biliar primaria.
En una modalidad, la enfermedad trastorno o condición es artritis reumatoide .
En una modalidad, la enfermedad trastorno o condición es psoriasis.
En una modalidad, la enfermedad, trastorno o condición es la enfermedad inflamatoria intestinal.
En una modalidad, la enfermedad, trastorno o condición es el rechazo a transplantes de órganos.
En una modalidad, la enfermedad, trastorno o condición es esclerosis múltiple.
En un aspecto, es el uso de los compuestos de las Fórmulas (I) o (II) en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad, trastorno, o condición que se beneficiaría de la inhibición de la actividad de los canales de calcio operados por depósitos.
Los compuestos proporcionados aquí se usan para modular el calcio intracelular . En un aspecto, los compuestos proporcionados aquí modulan la actividad de los canales SOC . en un aspecto, los compuestos proporcionados aquí modulan la actividad de los canales CRAC. En otros aspectos, los compuestos proporcionados aquí modulan la actividad de la proteína STIM. En otro aspecto, los compuestos proporcionados aquí modulan la actividad de la proteína Orai . En otro aspecto, los compuestos proporcionados aquí, modulan las interacciones funcionales de las proteínas STIM con las proteínas Orai. En otro aspecto, los compuestos proporcionados aquí reducen el número de canales SOC funcionales. En tro aspecto, los compuestos proporcionados aquí, reducen el número de canales CRAC funcionales. En un aspecto, los compuestos descritos aquí son bloqueadores de los canales SOC. en un aspecto, los compuestos descritos aquí, son bloqueadores de los canales CRAC o moduladores de los canales CRAC.
En un aspecto, los compuestos de las Fórmulas (I) o (II) son inhibidores selectivos de la actividad de los canales CRAC.
Otros objetivos, características y ventajas de los compuestos, las composiciones, métodos y usos descritos aquí se volverán aparentes por la siguiente descripción detallada. Se debe entender, sin embargo, que la descripción detallada y los ejemplos específicos, aunque indican modalidades especificas, se dan a manera de ilustración solamente, ya que varios cambios y modificaciones dentro del espíritu y el ámbito de la descripción se volverán aparentes por esta descripción detallada.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1 bosqueja la vía de los canales ICRAC.
La Figura 2 muestra las trazas de ICRAC típicas en células que sobre-expresan de manera estable las proteínas Orail y STIM1 en respuesta al estimulo voltaico inmediatamente después de la irrupción, antes que se active la ICRAC, y a los 5 minutos después que la ICRAC está completamente activada por el vaciado de los depósitos de calcio intracelulares .
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La homeostasis del calcio celular es el resultado de la suma de los sistemas regulatorios involucrados en el control de los niveles y de los movimientos del calcio intracelular . La homeostasis del calcio celular se logra, al menos en parte, por el enlace del calcio y por el movimiento del calcio hacia dentro y hacia fuera de las células a través de la membrana plasmática y dentro de las células por el movimiento del calcio a través de las membranas de los organelos intracelulares incluyendo, por ejemplo, el retículo endoplasmático, el retículo sarcoplasmático, las mitocondrias y los organelos endocíticos que incluyen los endosomas y los lisosomas .
El movimiento del calcio a través de las membranas celulares se lleva a cabo por proteínas especializadas. Por ejemplo, el calcio del espacio extracelular puede entrar a las células a través de varios canales de calcio y un intercambiador de sodio/calcio y se extrude activamente desde las células por bombas de calcio e intercambiadores de sodio/calcio. El calcio también puede ser liberado de los depósitos internos a través de los receptores de inositol trifosfato o rianodina, y puede ser absorbido por estos organelos por medio de las bombas de calcio.
El calcio puede entrar a las células por alguno de las varias clases de canales, incluyendo pero no limitados a, los canales de calcio operados por voltaje (VOC) , los canales de calcio operados por depósitos (SOC) , y los intercambiadores de sodio/calcio que operan en modo invertido. Los canales VOC son activados por la despolarización de las membranas y se encuentran en células excitables como las nerviosas y musculares y en su mayor parte no se encuentran en las células no excitables. Bajo alunas condiciones, el Ca2+ puede entrar a las células por medio de los intercambiadores de Na+-Ca2+ que operan en modo invertido.
La endocitosis proporciona otro proceso mediante el cual las células absorben el calcio del medio extracelular a través de los endosomas . Además, algunas células, por ejemplo, las células exocrinas, pueden liberar el calcio por medio de la exocitosis.
La concentración del calcio citosólico es regulada estrechamente con los niveles restantes estimados usualmente en aproximadamente 0.1 µ? en las células de los mamíferos, en tanto que la concentración del calcio extracelular es típicamente de aproximadamente 2 mM. Esta regulación estrecha facilita la transducción de las señales hacia y dentro de las células a través del flujo de calcio transitorio a través de la membrana plasmática y las membranas de los organelos intracelulares . Existe una multiplicidad de sistemas intracelulares de transporte de calcio y amortiguadores que sirven para conformar las señales del calcio intracelular y mantener la concentración baja del calcio citoplasmático . En las células en reposo, los componentes principales involucrados en el mantenimiento de los niveles de referencia de calcio son las bombas de calcio y las vías de vaciado tanto en el retículo endoplasmático y la membrana plasmática.
La alteración del los niveles del calcio citosólico en reposo puede afectar la transmisión de tales señales dependientes de calcio y da lugar a defectos en varios procesos celulares. Por ejemplo, la proliferación celular involucra una secuencia de señalización de calcio prolongada. Otros procesos celulares que involucran la señalización del calcio incluyen, pero no se limitan a, la secreción, señalización del factor de transcripción y la fertilización.
Los receptores de la superficie celular que activan la fosfolipasa C (PLC) crean señales de Ca2+ citosólico de las fuentes extra e intracelulares. Una elevación transitoria inicial de la [Ca2+] i (concentración del calcio intracelular) resulta por la liberación del Ca2+ desde el retículo endoplasmático (ER) , la cual se activa por el producto de la PLC, el inositol-1, 4 , 5-trifosfato (IP3), que abre los receptores de IP3 en el ER (Streb et al., Nature, 306, 67-69, 1983) . Una fase posterior de la entrada sostenida del Ca2+ a través de la membrana plasmática asegura entonces, a través de los canales de calcio operados por depósitos (SOC) especializados (en el caso de las células inmunológicas los canales SOC son los canales de calcio activados por la liberación de calcio (CRAC)) en la membrana plasmática. La entrada de Ca2+ operada por depósitos (SOCE) es el proceso en el cual el vaciado de los depósitos de Ca2+ en si activa los canales de Ca2+ en la membrana plasmática para ayudar a recargar los depósitos (Putney, Cell Calcium, 7, 1-12, 1986; Parekh et al., Physiol. Rev. 757-810; 2005). El SOCE hace más que simplemente proporcionar Ca2+ para recargar los depósitos, sino que puede en si generar señales de Ca2+ sostenidas que controlan tales funciones esenciales como la expresión genética, el metabolismo celular y la exocitosis (Parekh y Putney, Physiol. Rev. 85, 757-810 (2005).
En los linfocitos y los mastocitos, la activación del antígeno de los receptores de Fe provoca respectivamente la liberación del Ca2+ de los depósitos intracelulares , lo cual a su vez lleva a la entrada del Ca2+ a través de los canales CRAC en la membrana plasmática. La elevación posterior en el Ca2+ intracelular activa la calcineurina, una fosfatasa que regula el factor de transcripción NFAT. En las células en reposo, el NFAT está fosforilado y reside en el citoplasma, pero cuando sufre desfosforilación por la calcineurina, el NFAT se desplaza al núcleo y activa diferentes programas genéticos dependiendo de las condiciones de estimulación y del tipo de las células. En respuesta a las infecciones y durante el rechazo de transplantes, el NFAT se asocia con el factor de transcripción AP-1 (Fos-Jun) en el núcleo de las células T "efectoras" , transactivando por ello los genes de citosina, los genes que regulan la proliferación de las células T y otros genes que organizan una respuesta inmunológica activa (Rao et al., Annu Rev Immunol., 1997; 15; 101-47) , En contraste, en las células T que reconocen los auto-antigenos, el NFAT es activado en ausencia del AP-1 y activa un programa de transcripción conocido como "anergia" que suprime las respuestas autoinmunes (Macian et al., Trancriptional mechanisms underlying lymphocyte tolerance . Cell 14 de junio de 2002; 109 (6) : 719-31) . En una subclase de células T conocida como células T regulatorias , las cuales suprimen la autoinmunidad mediada por las células T efectoras auto-reactivas, el NFAT se asocia con el factor de transcripción FOXP3 para activar los genes responsables de la función supresora (Wu et al . ( Cell 28 de jul. de 2006; 126(2); 375-87; Rudensky AY, Gavin M, Zheng Y. Cell. 28 de jul. de 2006; 126 (2) : 253-256) . ' El retículo endoplasmático (ER). lleva a cabo una variedad de procesos. El ER tiene una función tanto como un depósito y receptáculo de Ca2+ sensible a los agonistas, y el plegamiento/procesamiento de las proteínas tiene lugar dentro de su lumen. En el último caso, varias proteínas acompañantes aseguran que las proteínas recién sintetizadas sean plegadas correctamente y enviadas a sus destinos apropiados. El ER también está involucrado en el tráfico vesicular, la liberación de señales de tensión, la regulación del metabolismo del colesterol, y la apoptosis . Muchos de estos proceso requieren el Ca2+ intraluminal , y el plegamiento inadecuado de las proteínas, las respuestas a la tensión del ER, y la apoptosis pueden ser inducidas agotando el Ca2+ del ER por periodos de tiempo prolongados. Puesto que este contiene una cantidad finita de CA2+ es claro que el contenido de Ca2+ del ER debe caer después de la liberación de ese Ca2+ durante la estimulación. Sin embargo, para preservar la integridad funcional del ER, es vital que el contenido del Ca2+ no caiga demasiado bajo o que se mantenga al menos en un nivel bajo. La recarga del ER con Ca2+ es por lo tanto un proceso central para todas las células eucariotas . Puesto que una caída en el contenido de Ca2+ del ER activa los canales de Ca2+ operados por depósitos en la membrana plasmática, se cree que una función principal de esta vía de entrada del Ca2+ es el mantenimiento de los niveles de Ca2+ del ER que son necesarios para la síntesis y el plegamiento apropiados de las proteínas. Sin embargo, los canales de Ca2+ operados por depósitos tienen otras funciones importantes .
El entendimiento de esta entrada operada por depósitos fue proporcionado por los estudios electrofisiológicos los cuales, los cuales establecieron que el proceso para vaciar los depósitos activa una corriente de Ca2+ en los mastocitos, llamada corriente de Ca2+ activada por la liberación e Ca2+ o ICRAC. La ICRAC no es activada por el voltaje, rectificante hacia el interior, y notablemente selectiva para el Ca2+. Se descubrió en varios tipos de células, principalmente de origen hematopoyético . La ICRAC no es la única corriente operada por depósitos, y es aparente ahora que la entrada operada por depósitos abarca una familia de canales permeables para el Ca2+, con diferentes propiedades en los diferentes tipos de células. La ICRAC fue la primera corriente de Ca2+ operada por depósitos a ser descrita y sigue siendo un modelo popular paira estudiar la entrada operada por depósitos.
Los canales de calcio operados por depósitos pueden ser activados por cualquier procedimiento que vacíe los depósitos del ER; no parece importar cómo se vacían los depósitos, el efecto neto es la activación de la entrada del Ca2+ operada por depósitos. Fisiológicamente, el vaciado de los depósitos es invocado por un aumento en los niveles de IP3 o de otras señales de liberación del Ca2+ seguido por la liberación del Ca2+ de los¦ depósitos . Pero hay varios otros métodos para vaciar los depósitos. Estos métodos incluyen los siguientes: 1) elevación del IP3 en el citosol (enseguida de la estimulación de receptor o, dializar el citosol con IP3 en si o los congeneres relacionados, como los análogos no metabolizables Ins (2 , 4 , 5) P3) ; 2) aplicación de un ionóforo de Ca2+ (por ejemplo, (ionomicina) para permeabilizar la membrana del ER; 3) dializar el citoplasma con concentraciones altas de los quelantes de Ca2+ (EGTA o BAPTA) , los cuales forman quelatos con el Ca2+ que escapan de los depósitos y por lo tanto evitan la recarga de los depósitos; 4) exponer a los inhibidores de Ca2±ATPasa del retículo sarcoplasmático/endoplasmático (SERCA) como la tapsigargina, ácido ciclopiazónico, y di-ter-butilhidroquinona ; 5) sensibilizar los receptores de IP3 para restablecer los niveles de InsP3 con agentes como el timerosal; y 6) cargar quelantes de Ca2+ metálicos permeables a la mebrana, como la N, , N' , N' -tetraquis (2 -piridilmetil) etilendiamina (TPEN) directamente a los depósitos.
A través de la acción de masas, el TPEN reduce la concentración del Ca2+ intraluminal libre sin cambiar el Ca2+ total de los depósitos, de modo tal que se genera la señal dependiente del vaciado de los depósitos.
Estos métodos para vaciar los depósitos no están desprovistos de problemas potenciales. La característica clave de la entrada del Ca2+ operada por depósitos es que, es la caída en el contenido del Ca2+ dentro de los depósitos y no la elevación posterior en la concentración del Ca2+ citoplasmático lo que activa los canales. Sin embargo, la ionomicina y los bloqueadores de la bomba de SERCA por lo general provocan un aumento en la concentración del Ca2+ citoplasraático como consecuencia del vaciado de los depósitos, y tal aumento en el Ca2+ podría abrir los canales de cationes activados por el Ca2+ permeables al Ca2+. Un modo de evitar tales problemas es usar los agentes bajo las condiciones donde el Ca2+ citoplasmático ha sido amortiguado fuertemente con concentraciones altas de quelantes de Ca2+, tales como EGTA o BAPTA.
Entrada de Calcio Operada por Depósitos La concentración reducida del calcio en los depósitos de calcio intracelulares tales como el retículo endoplasmático, que resulta de la liberación del calcio del mismo, proporciona una señal para la entrada del calcio desde el medio extracelular hacia las células. Esta entrada de calcio, la cual produce una elevación de "meseta" sostenida de la concentración del calcio citosólico, por lo general no depende de los canales de la membrana plasmática abiertos por voltaje y no involucra la activación de los canales de calcio por el calcio. Este mecanismo de entrada del calcio se conoce como entrada capacitiva de calcio (CCE) , entrada activada por la liberación de calcio, entrada operada por depósitos o entrada de calcio operada por el vaciado. La entrada de calcio operada por depósitos puede ser registrada como una corriente iónica con propiedades distintivas. Esta corriente se conoce como ISOC (corriente operada por depósitos) o ICRAC (corriente activada por la liberación de calcio) .
Los análisis electrofisiológicos de las corrientes operada por depósitos y activada por la liberación de calcio revelan distintas propiedades biofísicas (véase, por ejemplo, Parekh y Penner 1997) Physiol. rev. 77:901-930) de estas corrientes. Por ejemplo, las corrientes pueden ser activadas por el vaciado de los depósitos intracelulares de calcio (por ejemplo, por los activadores no fisiológicos tales como la tapsigargina, CPA, ionomicina y BAPTA, y los activadores fisiológicos, tales como el IP3) y puede ser selectiva para los cationes divalentes, tales como el calcio, sobre los iones monovalentes en las soluciones o condiciones fisiológicas, puede ser influenciada por los cambios en los niveles de calcio citosólico, y puede mostrar selectividad y conductividad alteradas en presencia de concentraciones extracelulares bajas de cationes divalentes. La corriente también puede ser bloqueada o aumentada por el 2-APB (dependiendo de la concentración) y bloqueada por el SKF96365 y el Gd3+ y por lo general puede ser descrita como una corriente de calcio que no es estrictamente abierta por voltaje.
Los estudios de pinzamiento zonal en mastocitos y células T leucémicas de Jurkat han establecido el mecanismo de entrada CRAC como un canal de iones con características biofísicas distintivas, incluyendo una selectividad alta para el Ca2+ junto con una conductancia extremadamente baja. Además, se ha mostrado que los canales CRAC cumplen el criterio riguroso para ser operados por depósitos, el cual es la activación solamente por la reducción del Ca2+ en el ER más bien que por el Ca2+ citosólico u otros mensajeros generados por la PLC (Prakriya et al., En Molecular and Celular Insights into Ion Channel Biology (ed. Robert. Maue) 121-140 (Elsevier Science, Amsterdam, 2004) .
Regulación de la Entrada de Calcio Operada por Depósitos, por los Depósitos de Calcio Intracelulares La entrada de calcio operada por depósitos es regulada por el nivel del calcio dentro de los depósitos de calcio intracelulares. Los depósitos de calcio intracelulares pueden ser , caracterizados por su sensibilidad a los agentes, los cuales son fisiológicos o farmacológicos, los cuales activan la liberación del calcio desde los depósitos o que inhiben la absorción del calcio hacia los depósitos. Se han estudiado diferentes células durante la caracterización de los depósitos de calcio intracelulares, y los depósitos han sido caracterizados como sensibles a varios agentes, incluyendo, pero no limitados a, IP3 y los compuestos que afectan al receptor de IP3 , tapsigargina, ionomicina y/o ADP-ribosa cíclica (cADPR) (véase, por ejemplo, Berridge (1993) Nature 361:315-325; Churchill y Louis (1999) Am. J. Physiol. 276 :C426-C434; Dargie et al. (1990) Cell Regul . 1 :279-290 ; Gerasimenko et al. (1996) Cell 84 : 473-480; Gromoda et al. (1995) FEBS Lett . 360:303-306; Guse et al. (1999) Nature 398 : 70-73) .
La acumulación del calcio dentro de los organelos de almacenamiento del retículo endoplasmático y el retículo sarcoplasmático (SR; una versión especializada del retículo endoplasmático en los músculos estriados) se logra a través de las calcio ATPasas del retículo sarcoplasmático-endoplasmático (SERCAs) , conocidas comúnmente como bombas de calcio. Durante la señalización (es decir, cuando los canales del retículo endoplasmático son activados para proporcionar la liberación del calcio del retículo endoplasmático hacia el citoplasma) , el calcio del retículo endoplasmático es recargado por las bombas de SERCA con calcio citoplasmático que ha entrado a las células desde el medio extracelular (Yu y Hinkle (2000) J. Biol . Chem. 275:23648-23653; Hofer et al., (1998) E BO J. 17:1986-1995).
Los canales de liberación de calcio asociados con los receptores de IP3 y rianodina hacen posible la liberación controlada de calcio desde el retículo endoplasmático y sarcoplasmático hacia el citoplasma, resultando en aumentos transitorios en la concentración citoplasmática de calcio. La liberación de calcio mediada por el receptor de IP3 es activada por el IP3 formado durante la descomposición de los fosfoinositidos de la membrana plasmática a través de la acción de la fosfolipasa C ' la cual es activada por el enlazamiento de un agonista a un receptor acoplado a la proteína G de la membrana plasmática o la tirosina cinasa. La liberación de calcio mediada por el receptor de rianodina es activada por un aumento en el calcio citoplasmático y se conoce como liberación de calcio inducida por calcio (CICR) . La actividad de los receptores de rianodina (los cuales tienen afinidad por la rianodina y la cafeína)' también puede ser regulada por la ADP-ribosa cíclica.
Por lo tanto, los niveles de calcio en los depósitos, y en el citoplasma, fluctúan. Por ejemplo, el calcio libre del ER puede reducirse de un rango de aproximadamente 60-400 µ?, a aproximadamente 1-50 µ? cuando se tratan células HeLa con histamina, un agonista de ' los receptores de histamina enlazados a PLC (Miyawaki et al., (1997) Nature 388:882-887).
La entrada de calcio operada por depósitos es activada cuando se reduce la concentración del calcio libre de los depósitos intracelulares . El vaciado del calcio almacenado, así como un aumento concomitante en la concentración del calcio citosólico, puede regular así la entrada de calcio operada por depósitos hacia las células.
Amortiguamiento del Calcio Citoplasmático La activación por agonistas de los procesos de señalización en las células puede involucrar aumentos dramáticos en la permeabilidad al calcio del retículo endoplasmático, por ejemplo, a través de la apertura de los canales del receptor de IP3, y la membrana plasmática a través de la entrada de calcio operada por depósitos. Estos aumentos en la permeabilidad al calcio se asocian con un aumento en la concentración del calcio citosólico que puede ser separada en dos componentes: un "pico" de liberación de calcio desde el retículo endoplasmático durante la activación del receptor de IP3 y una fase de meseta la cual es una elevación sostenida de los niveles de calcio que resulta de la entrada de calcio hacia el citoplasma desde el medio extracelular . Tras la estimulación, la concentración del calcio libre intracelular restante de aproximadamente 100 nM puede elevarse globalmente a más de 1 µ? y más en los microdiomas de las células. Las células modulan estas señales de calcio con amortiguadores de calcio endógenos, incluyendo el amortiguamiento fisiológico por los organelos tales como las mitocondrias , el retículo endoplasmático y el aparato de Golgi. La absorción mitocondrial del calcio a través de un uniporter en la membrana interna es accionada por el gran potencial negativo de la membrana mitocondrial, y el calcio acumulado se libera lentamente a través de los intercambiadores dependientes e independientes de sodio, y, bajo algunas circunstancias, los poros de transición de la permeabilidad (PTP) . Así, las mitocondrias pueden actuar como amortiguadores de calcio al absorber el calcio durante los periodos de activación celular y pueden liberarlo lentamente después . La absorción del calcio hacia el retículo endoplasmático es regulada por la calcio ATPasa del retículo sarcoplasmático y endoplasmático (SERCA) . La absorción del calcio hacia el aparato de Golgi está mediada por una calcio ATPasa de transporte de calcio de tipo P (PMR1/ATP2C1) . Adicionalmente , existe evidencia de que una cantidad significativa del calcio liberado tras la activación de los receptores de IP3 es extrudido desde las células a través de la acción de la calcio ATPasa de la membrana plasmática. Por ejemplo, las calcio ATPasas de la membrana plasmática proporcionan el mecanismo dominante para la depuración del calcio e las células T humanas y las células de Jurkat, aunque el intercambio de sodio/calcio también contribuye a la depuración del calcio en las células T humanas. Dentro de los organelos de almacenamiento de calcio, los iones de calcio se enlazan a proteínas de amortiguamiento de calcio especializadas, tales como, por ejemplo, las calsecuestrinas , las calreticulinas y las calnexinas . Adicionalmente, hay proteínas de amortiguamiento de calcio en el citosol que modulan los picos de calcio y que ayudan en la redistribución de los iones de calcio. Por lo tanto, las proteínas y otras moléculas que participan en cualquiera de estos y otros mecanismo a través de los cuales se pueden reducir los niveles del calcio citosólico, son proteínas que están involucradas en, participan en y/o hacen posible el amortiguamiento del calcio citoplasmático . Por lo tanto, el amortiguamiento del calcio citoplasmático ayuda a regular los niveles del Ca2+ citoplasmático durante los periodos de entrada sostenida de calcio a través de los canales SOC o genera la liberación del Ca2+. Los aumentos grandes en el Ca2+ citoplasmático o la recarga de los depósitos desactivan la SOCE.
Eventos Mediados por la Entrada de Calcio Corriente Abaj o Además de los cambios intracelulares en los depósitos de calcio los efectos de la entrada de calcio operada por depósitos afectan varios de los eventos que son consiguientes a, o adicionales a los cambios operados por depósitos. Por ejemplo, la entrada de Ca2+ resulta en la activación de un gran número de enzimas dependientes de calmodulina, incluyendo la calcineurina de fosfatasa serina. La activación de la calcineurina por un aumento en el calcio intracelular resulta en procesos secretorios agudos, tales como la desgranulación de los mastocitos. Los mastocitos activados liberan gránulos preformados que contienen histamina, heparina, TNFa y enzimas tales como ß-hexosaminidasa .
Algunos eventos celulares, tales como la proliferación de las células B y T, requieren la señalización sostenida de calcineurina, la cual requiere un aumento sostenido en el calcio intracelular . Varios factores de transcripción están regulados por la calcineurtina incluyendo el NFAT, (factor nuclear de células T activadas) , MEF2, y NFKB. Los factores de transcripción de NFAT tienen funciones importantes en muchos tipos de células, incluyendo las células inmunes. En las células inmunes el NFAT tiene mediación sobre la transcripción de un gran número de moléculas, incluyendo las citocinas, las quimocinas y los receptores de la superficie celular. Los elementos de transcripción para el NFAT han sido encontrados dentro de los promotores de las citocinas, tales como IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-8, IL-13, así como el factor de necrosis de tumores (TNFa) , el factor estimulante de la colonia de granulocitos (G-CSF) y gamma- interferona (?-IFN) .
La actividad de las proteínas NFAT es regulada .por su nivel de fosforilación, el cual a su vez, es regulado tanto por la calcineurina y las NFAT cinasas. La activación de la calcineurina por un aumento en los niveles de calcio intracelulares resulta en la desfosforilación del NFAT y su entrada en el núcleo. La refosforilación del NFAT enmascara la secuencia de localización nuclear del NFAT y evita su entrada hacia el núcleo. Debido a su fuerte dependencia de la desfosforilación mediada por la calcineurina para su localización y su actividad, el NFAT es un indicador sensible de los niveles de calcio intracelulares .
Enfermedades, Trastornos o Condiciones Los estudios clínicos demuestran que los canales CRAC son requeridos absolutamente para la activación de los genes subyacentes a la respuesta de las células T a los antígenos . La entrada sostenida de calcio es necesaria para la activación de los linfocitos y la respuesta inmunológica adaptativa. La entrada de calcio hacia los linfocitos ocurre principalmente a través de los canales CRAC. El calcio aumentado lleva a la activación del NFAT y a la expresión de las citocinas requeridas para la respuesta inmune. Inhibir la entrada de calcio operada por depósitos es un modo eficiente de evitar la activación de las células T.
La inhibición de la actividad de los canales CRAC con los compuestos descritos aquí, tales como los compuestos de las Fórmulas (I) - (V) , proporciona los medios para suministrar terapias inmunosupresoras como se demuestra por la eliminación de la entrada de calcio operada por depósitos notada en los pacientes con inmunodeficiencia combinada severa (SCID) . Las células T, los fibroblastos, y en algunos casos las células B de los pacientes con inmunodeficiencia de células T o SCID, que tienen un defecto principal en la activación de las células T, muestran un fuerte defecto en la entrada de calcio operada por depósitos (Feske, et al., (2001) Nature Immunol . 2:316-324; Paratiseti et al., (1994) J. Biol. Chem. 269:32327-32335; y Le Detis et al., (1995) Blood 85:1053-1062). Los pacientes de SCID carecen de la respuesta inmune adaptativa, pero sin deterioro o toxicidad en los órganos principales. El fenotipo de los pacientes de SCID indica que la inhibición de los canales CRAC es una estrategia efectiva para la inmunosupresion.
Enfermedades/Trastornos que Involucran Inflamación y Enfermedades/Trastornos Relacionados con el Sistema Inmunológico Las enfermedades o trastornos pueden ser tratadas o prevenidas usando los compuestos, las composiciones, y los métodos proporcionados aquí, incluyen las enfermedades y trastornos que involucran inflamación y/o que están relacionados con el sistema inmunológico. Estas enfermedades incluyen, pero no se limitan a asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria intestinal, glomerulonefritis , enfermedades neuroinflamatorias , tales como esclerosis múltiple, y trastornos del sistema inmunológico .
La activación de los neutrófilos (PM ) por los mediadores inflamatorios se logra parcialmente aumentando la concentración de calcio citosólico. Se piensa en particular que la entrada de calcio operada por depósitos tiene una función importante en la activación de los PMN. Se ha demostrado que los traumas aumentan la entrada de calcio operada por depósitos a los PMN (Hauser et al., (2000) J. Trauma Injury Infection and Critical Care 48 (4):592-598) y que los aumentos prolongados en la concentración de calcio citosólico, debidos a la entrada aumentada de calcio operada por depósitos puede alterar el acoplamiento de respuesta al estimulo a las quimiotaxinas y contribuye a la disfunción de los PMN después de las lesiones. La modulación de la concentración de calcio citosólico de los PMN a través de los canales de calcio operados por depósitos podría ser útil por lo tanto para regular la inflamación mediada por PMN y dificulta la función cardiovascular después de lesiones, conmoción o septicemia (Hauser et al., (2001) J. Leukocyte Biology 69 (19) :63-68) .
El calcio tiene una función critica en la activación de los linfocitos. La activación de los linfocitos, por ejemplo, por estimulación de antígenos, resulta en un aumento rápido en las concentraciones de calcio libre intracelulares y la activación de los factores de transcripción, incluyendo el factor nuclear de células T activadas (NFAT) , NF-??, JNK1, MEF2 y CREB. El NFAT es un regulador clave de la transcripción de los genes de la IL-2 (y de otras citocinas) (véase, por ejemplo, Lewis (2001) Annu. Rev. Immunol 19:497-521). Una elevación sostenida del nivel de calcio intracelular se requiere para mantener el NFAT en un estado activo transcripcionalmente , y es dependiente de la entrada de calcio operada por depósitos. La reducción o el bloqueo de la entrada de calcio operada por depósitos en los linfocitos, bloquea la activación de los linfocitos dependiente de calcio. Por lo tanto, la modulación del calcio intracelular, y en particular la entrada de calcio operada por depósitos (por ejemplo, reducción en, eliminación de la entrada de calcio operada por depósitos) , en los linfocitos, es un método para tratar los trastornos inmunológicos y relacionados con la inmunología, que incluyen, por ejemplo, las enfermedades/trastornos inmunológicos crónicos, las enfermedades/trastornos inmunológicos agudos, enfermedades/trastornos autoinmunes y de inmunodeficiencia, las enfermedades/trastornos que involucran inflamación, rechazo de injertos de transplante de órganos y enfermedad injerto contra anfitrión y respuestas inmunológicas alteradas (por ejemplo, hiperactivas) . Por ejemplo, el tratamiento de las enfermedades/trastornos autoinmunes podría involucrar, bloquear o eliminar la entrada de calcio operada por depósitos en los linfocitos.
Lo ejemplos de los trastornos inmunológicos incluyen, psoriasis, artritis reumatoide, vasculitis, enfermedad inflamatoria intestinal, dermatitis, osteoartritis , asma, enfermedad inflamatoria muscular, rinitis alérgica, vaginitis, cistitis intersticial, esclerodermia, osteoporosis , eczema, rechazo de injertos de transplantes alogénicos o xenogénicos (órganos, medula ósea, células madre u otras células y tejidos), enfermedad injerto contra anfitrión, lupus eritematoso, enfermedades inflamatorias, diabetes tipo I, fibrosis pulmonar, dermatomiositis , síndrome de Sjorgren, tiroiditis (por ejemplo, tiroiditis de Hashimoto y autoinmune) , miastenia grave, anemia hemolítica autoinmune, esclerosis múltiple, fibrosis cística, hepatitis crónica recidivante, cirrosis biliar primaria, conjuntivitis alérgica y dermatitis atópica.' Cáncer y Otras Enfermedades Proliferativas Los compuestos de las Fórmulas (I)-(V), las composiciones de los mismos, y los métodos proporcionados aquí, se pueden usar en conexión con el tratamiento de neoplasias malignas, incluyendo, pero no limitadas a neoplasias malignas de origen linforreticular, cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer endometrial, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de pulmón, melanoma, cáncer ovárico, cáncer de próstata y cáncer rectal. Se piensa que la entrada de calcio operada por depósitos tiene una función importante en la proliferación celular en las células cancerígenas (Weiss et al., (2000) International Journal of Cáncer 92 (6) : 877-882) .
La inhibición de la SOCE es suficiente para evitar la proliferación de las células tumorales. El derivado de pirazol BTP-2, un bloqueador directo de la ICRAC, inhibe la SOCE y la proliferación en células de Jurkat (Zitt et al., J. Biol. Chem., 279, 12427-12437, 2004), y en células de cáncer de colon. Esto ha sugerido que la SOCE sostenida requiere la absorción del Ca2+ mitocondrial (Nunez et al., J. Physiol. 571.1, 57-73, 2006) y que la prevención de la absorción del Ca2+ mitocondrial lleva a la inhibición de la SOCE (Hoth et al., P.N.A.S., 97, 10607-10612, 2000; Hoth et al., J. Cell . Biol. 137, 633-649, 1997; Glitsch et al., EMBO J., 21, 6744-6754, 2002). La estimulación de las células de Jurkat induce la SOCE sostenida y la desactivación de la fosfatasa calcineurina dependiente de Ca2+ que somete al NFAT a desfosforilación, promoviendo la expresión de la interleucina 2 y la proliferación. Los compuestos de las Fórmulas (I) - (V) inhiben la SOCE y se pueden usar en el tratamiento del cáncer u otras enfermedades o condiciones proliferativas .
Enfermedades y Trastornos del Hígado Las enfermedades o trastornos que pueden ser tratados o prevenidos usando los compuestos de las Fórmulas (I)-(V), las composiciones de los mismos, y los métodos proporcionados aquí, incluyen enfermedades y trastornos hepáticos o del hígado. Estas enfermedades o trastornos incluyen, pero no se limitan a lesiones del hígado, por ejemplo, debidas a transplantes, hepatitis y cirrosis.
La entrada del calcio operada por depósitos ha sido implicada en las enfermedades crónicas del hígado (Tao et al., (1999) J. Biol. Chem . , 274 ( 34 ): 23761-23769 ) así como en las lesiones por transplantes después de la preservación en frío-reoxigenación en caliente (Elimadi et al., (2001) Am J. Prhysiology; 281 (3 Parte 1) : G809-G815) .
Enfermedades y Trastornos de los Ríñones Las enfermedades o trastornos que pueden ser tratados o prevenidos usando los métodos proporcionados aquí incluyen enfermedades y trastornos renales. La hiperplasia de células mesangiales es una característica clave frecuente de tales enfermedades y trastornos. Tales enfermedades y trastornos pueden ser provocados por mecanismos inmunológicos o otros mecanismos de lesiones, incluyendo IgA , la glomerulonefritis membranoproliferativa o la nefritis lupica. Los desbalances en el control de la replicación de las células mesangiales también parece tener una función en la patogénesis de la insuficiencia renal progresiva.
La regeneración de las células mesangiales en los ríñones normales de adultos es muy baja con una velocidad de renovación de menos de 1%. Una característica prominente de las enfermedades glomerulares/renales es la hiperplasia mesangial debida a la tasa de proliferación elevada o pérdida celular reducida de las células mesangiales. Cuando la proliferación de las células mesangiales es inducida sin pérdida de células, por ejemplo, debido a la estimulación mitogénica, se puede dar como resultado la glomerulonefritis mesangioproliferativa . Los datos han indicado que los reguladores del crecimiento de las células mesangiales, en particular se piensa que los factores de crecimiento, actúan regulando los canales de calcio operados por depósitos (Ma et al., (2001) J Am. Soc . Of Neprhology, 12©l)47-53) . Los moduladores de la entrada de calcio operada por depósitos pueden ayudar en el tratamiento de las enfermedades glomerulares al inhibir la proliferación de las células mesangiales .
Canales de Calcio Operados por Depósitos Los estudios clínicos demuestran que los canales CRAC, un tipo de canales SOC, se requieren absolutamente para la activación de los genes subyacentes a la respuesta de las células T a los antígenos (Partiseti et al . , J Biol . Chem. , 269, 32327-32335, 1994; Feske et al., Curr. Biol. 15, 1235-1241, 2005) . La SOCE contribuye directamente a la elevación de los niveles de Ca2+ citosólico ( [Ca2+] ) , ya que en los linfocitos T, donde los canales CRAC generan las señales de Ca2+ sostenidas necesitan conducir la expresión genética subyacente de la activación de células T por lo antígenos. La entrada sostenida de calcio es necesaria para la activación de los linfocitos y las respuestas inmunológicas adaptativas.
La entrada de calcio hacia los linfocitos ocurre principalmente a través de los canales CRAC. Los niveles de calcio aumentados llevan a la activación del NFAT y a la expresión de las citosinas requeridas para las respuestas inmunológicas.
Los canales CRAC tienen una huella digital biofísica distintiva, dependencia cuantificable a los depósitos, y una función esencial en las células T. Los estudios han demostrado que los canales CRAC se forman de dos proteínas componentes, las cuales interactúan para formar los canales CRAC. Los canales CRAC se ensamblan por dos componentes funcionales, STIM1 y Orail. La STIM1 (molécula de interacción estromal 1) fue identificada como el sensor de Ca2+ del ER de mamíferos (Liou, J. et al. Curr. Biol . 15, 1235-1241 (2005); Ross J. et al., J. Cell Biol. 169, 435-445 (2005); WO 20041078995; US 2007/0031814) . La Orail/CRACMl fue identificada como un componente de los canales CRAC de mamíferos (Feske, S. et al., Nature 441, 179-185 (2006); Vig, M. et al., Science 312, 1220-1223 (2006); Zhang, S. L. et al. Proc. Nati Acad. Sci. USA 103, 9357-9362 (2006)).
El STIM1 es el sensor de Ca2+ dentro de los depósitos de Ca2+ del ER, que se mueve en respuesta al vaciado de los depósitos hacia el ER punta cerca de la membrana plasmática. El Orail es una subunidad de formación de los canales CRAC en la membrana plasmática. Se ha demostrado que cada una de las dos proteínas de la membrana STIM1 y Orail son esenciales para la activación de los canales CRAC.
La expresión tanto de la STIM1 y la Orail en las células 293 de ríñones embrionarios humanos (células HEK293) reconstituye los canales CRAC funcionales. La expresión de la Orail solamente reduce fuertemente la entrada de Ca2+ operada por depósitos en las células HRK293 y la corriente de Ca2+ activada por la liberación de Ca2+ (ICRAC) en células de leucemia basofilica de ratas. Sin embargo, expresada junto con la proteína STIM1 de detección de depósitos, la Orail provoca un aumento masivo en la SOCE, aumentando la velocidad de entrada del Ca2+ hasta en 103 veces. Esta entrada de Ca2+ es completamente dependiente de los depósitos ya que la misma co-expresión provoca una entrada no mensurable de Ca2+ independiente de los depósitos. La entrada está bloqueada completamente por el bloqueador de los canales de calcio operados por depósitos, 2 -aminoetoxidifenilborato . Las proteínas STIM se conocen por tener mediación sobre la detección del Ca2+ de los depósitos y el acoplamiento de la membrana del retículo plasmático con propiedades de canal no intrínsecas. La Orail contribuye a los componentes de los canales de la membrana plasmática responsables de la entrada del Ca2+. La supresión de la función de los canales CRAC por la sobreexpresión de la Orail refleja una estequiometría requerida entre la STIM1 y la Orail (Soboloff et al., J. Biol. Chem. Vol . 281, no. 30, 20661-20665, 2006) .
Proteínas de Moléculas de Interacción Estromal (STIM) En la selección de ARNi y de células S2 de Drosophila usando la entrada de Ca2+ activada por tapsigargina como un marcador para los canales operados por depósitos, un gen dio una entrada de Ca2+ reducida substancialmente , ese gen codifica para la molécula de interacción estromal de proteínas (Stim) (Roos, J. et al. J. Cell Biol. 169, 435-445, 2005) . Hay dos homólogos de STIM en las células de mamíferos, STIMl y STIM2, ambos de los cuales parecen estar distribuidos de manera ubicua (Williams et al., Biochem J. 2001 Aug l; 357(Pt 3) : 673-85) . La STIMl es el detector de Ca2+ del ER para la entrada de Ca2+ operada por depósitos. La STIM2 es una proteína de membrana 77kDa tipo I con múltiples dominios de interacción o de señalización de proteínas pronosticados y se localiza predominantemente en el ER, pero también en una extensión limitada en la membrana plasmática.
La desactivación génica de la STIMl por el RNAi reduce substancialmente la ICRAC en células T de Jurkat, y la entrada de Ca2+ operada por depósitos en células epiteliales HEK293 y en células de neuroblastoma SH-SY5Y. Sin embargo, la desactivación génica de la STIM2 relacionada estrechamente no tuvo efectos. Estos resultados indican una función esencial de la STIM (Drosophila) y la STIMl (mamíferos) en el mecanismo de activación de los canales operados por depósitos. Es improbable que la STIMl constituya los canales operados por depósitos en si. Esta no tiene una secuencia similar a los canales, la sobreexpresión de la proteína solo aumenta de manera modesta la entrada del Ca2+. La STIMl se localiza en las membranas tanto plasmática como intercelular, tal como el ER (Manji et al., Biochim Biophys Acta. 2000 Aug 31; 1481 (1) : 147-55. 2000) . La secuencia de la proteína sugiere que esta abarca la membrana una vez, con su NH2 terminal orientada hacia el lumen del ER o el espacio extracelular . La NH2 terminal contiene un dominio EF-hand y funciona como el sensor de Ca2+ en el ER. La proteína también contiene dominios de interacción proteína-pr'oteína, dominios notablemente enrollados-enrollados en el citoplasma y un motif estéril (SA ) en el ER (o el espacio extracelular) , ambos cerca del dominio transmembrana pronosticado. La STIM1 puede formar oligómeros y por lo tanto la proteína en el ER y la membrana plasmática podrían interactuar formando puentes entre los dos (Roos, J. et al. J. Cell Biol. 169, 435-445 (2005) ) .
La fluorescencia por reflexión interna (TIRF) y la microscopía confocal revelan que la STIM1 se distribuye en todo el ER cuando los depósitos de Ca2+ están llenos, pero se redistribuye en puncta discreta cerca de la membrana plasmática por el vaciado de los depósitos. Aunque la redistribución de la STIM1 hacia las regiones de unión del ER es lenta (Liou, J. et al. Curr. Biol. 15, 1235-1241 (2005) ; Zhang, S. L. et al. Nature 437, 902-905 (2005), esta precede a la apertura de los canales CRAC por muchos segundos (Wu et al., J. Cell Biol. 174, 803-813 (2006)), y por lo tanto es lo suficientemente rápida para ser un paso esencial en la activación de los canales CRAC.
Se ha sugerido que el vaciado de los depósitos provoca la inserción de la STIMl en la membrana plasmática donde esta puede controlar la entrada de calcio operada por depósitos a través de los canales CRAC (Zhang, S. L. et al. Nature 437, 902-905 (2005); Spassova, M. A. et al. Proc . Nati Acad. Sci . USA 103, 4040-4045 (2006)).
La evidencia crítica para la STIMl como el sensor de Ca2+ para la SOCE es que se espera que la mutación pronosticada de los residuos de enlace al Ca2+ del motif estructural de la EF hand, reduzca su afinidad por el Ca2+ y por lo tanto que imite el estado de vaciado de los depósitos, haga que la STIMl se redistribuya espontáneamente hacia la puncta y active la entrada constitutiva de Ca2+ a través de los SOCs aún cuando los depósitos estén llenos (Spassova, M. A. et al. Proc. Nati Acad. Sci. USA 103, 4040-4045 (2006); Liou, J. et al. Curr. Biol . 15, 1235-1241 (2005)).
Proteínas Orai La proteína Orail (conocida también como CRACM1) es una proteína de la membrana plasmática de 33 kDa expresada ampliamente con 4 dominios transmembrana y una carencia de homología significativa de la secuencia con otros canales iónicos (Vig, M. et al. Science 312, 1220-1223 (2006) ; Zhang, S. L. et al . Proc. Nati Acad. Sci. USA 103, 9357-9362 (2006) ) .
Los estudios de células T de pacientes humanos con un síndrome severo de inmunodeficiencia combinada (SCID) , en los cuales el acoplamiento del receptor de células T o el vaciado de los depósitos no activan la entrada del Ca2+, se demostró que es debido a una mutación de punto único en la Orail (Feske, S. et al. Nature 441, 179-185 (2006)).
Existen otros homólogos de Orai de mamíferos, por ejemplo Orai2 y Orai3, sin embargo, su función no está definida claramente. La Orai2 y la Orai3 pueden exhibir actividad de canales SOC cuando se sobreexpresan con la STIMl en células HEK (Mercer, J. C. et al. J. Biol . Chem. 281, 24979-24990 (2006) ) .
La evidencia de que la proteína Orail contribuye con los poros de los canales CRAC se obtuvo mediante estudios de mutagénesis de la proteína Orail. La selectividad de los canales CRAC por los iones Ca2+ fue demostrada por mutaciones ya sea en la Glu 106 o la Glu 190, las cuales despiertan la habilidad del enlazamiento al Ca2+ para bloquear la permeación de los cationes monovalentes (igual que en los mecanismos descritos para los canales de Ca2+ abiertos por voltaje) (Yeromin, A. V. et al. Nature 443, 226-229 (2006); Vig, M. et al. Curr. Biol. 16, 2073-2079 (2006) ; Prakriya, M. et al. Nature 443, 230-233 (2006)).
Neutralizar la carga en un par de aspartatos en los lazos I-II (Asp 110 y Asp 112) reduce el bloqueo por el Gd3+ y el bloqueo de la corriente hacia fuera por el Ca2+ extracelula , lo que indica que estos sitios cargados negativamente pueden promover la acumulación de los cationes polivalentes cerca de la boca de los poros.
Las corrientes observadas a través de la sobreexpresión de la proteína Orail se parecen mucho a la ICRAC de la Orail, y el hecho de que la Orail pueda formar multímeros (Yeromin, A. V. et al. Nature 443, 226-229 (2006) ; Vig, M. et al. Curr. Biol. 16, 2073-2079 (2006) ; Prakriya, M. et al. Nature 443, 230-233 (2006)) , hace probable que los canales CRAC nativos sean ya sea un multímero de la Orail solamente o en combinación con las subunidades muy parecidas Orai2 y/u Orai3.
Canales de Calcio Operados por Depósitos Funcionales La caracterización de los canales SOC ha sido obtenida en gran medida por un tipo de canales SOC, los canales CRAC. La actividad de los canales CRAC es activad por la pérdida de Ca2+ del lumen del ER, el cual se acopla con la apertura de los canales CRAC en la membrana plasmática, a través de las acciones de la STIM1 y la Orail. El vaciado del Ca2+ es detectado por la STIM1 , provocando que esta se acumule en el ER adyacente a la membrana plasmática. En un estudio de imágenes de Ca2+ basadas en TIRF para mapear las ubicaciones de los canales CRAC abiertos, se observo que los aumentos de [Ca2+] i se co-localizan con la puncta de STIMl , demostrando directamente que los canales CRAC se abren solo en mucha proximidad a estos sitios (Luik, et al., J. Cell Biol . 174, 815-825 (2006) ) .
En las células que co-expresan tanto la STIMl y la Oráil, el vaciado de los depósitos provoca que la Orail en si se mueva de una distribución dispersa para acumularse en la membrana plasmática directamente opuesta a la STIMl, permitiendo que la STIMl active los canales (Luik, et al., J. Cell Biol. 174, 815-825 (2006); Xu, P. et al. Biochem. Biophys. Res. Commun. 350, 969-976 (2006)). Por lo tanto, los canales CRAC se forman por acumulaciones opuestas de STIMl en el ER y de Orail en la membrana plasmática. La brecha de unión entre el ER y la membrana plasmática donde se acumulan la irail/STIMl (de aproximadamente 10-25 nm) puede ser lo suficientemente pequeña para premitir las interacciones proteína-proteína entre la STIMl y la Orail. Esto es apoyado por el hecho de que la STIMl y la Orail sobreexpresadas pueden ser co- inmunoprecipitadas (Yeromin, A. V. et al. Nature 443, 226-229 (2006); Vig, M. et al. Curr . Biol. 16, 2073-2079 (2006) ) .
Por lo tanto, la STIMl y la Orail interactúan directamente o como miembros de un complejo multiproteinico .
El sustento para esto se observó cuando la expresión de la porción citosólica en si fue suficiente para activar los canales' CRAC en un estudio (Huang, G. N. et al. Nature Cell Biol . 8, 1003-1010 (2006)) , y los efectos de la eliminación del ERM/bucle en espiral y otros dominios de C- terminal sugiere funciones en la acumulación de la STIM1 y la activación de los canales SOC (Baba, Y. et al. Proc . Nati Acad. Sci. USA 103, 16704-16709 (2006)) . Por el lado luminal de la STIM1, la región EF-SAM forma dimeros y multímeros de orden superior por la eliminación del Ca2+ in vitro, indicando que la oligomerización de la STIM1 puede ser un paso anterior en la activación del calcio operado por depósitos (Stathopulos , et al., J. Biol. Chem. 281, 35855-35862 (2006) ) .
En algunas modalidades, los compuestos de las Fórmulas (I) - (V) , descritos aquí, modulan el calcio intracelular , tal como, la inhibición o la reducción de la SOCE y/o la ICRAC.
En otras modalidades, la modulación por los compuestos de las Fórmulas (I)-(V) resulta de una variedad de efectos, tales como, pero no limitados a, enlazamiento a una proteína, interacciones con una proteína, o modulación de las interacción, las interacciones, actividades, los niveles o cualquiera de las propiedades físicas, estructurales u otras de una proteína involucrada en la modulación del calcio intracelular (por ejemplo, una proteína STIM y/o una proteína Orai) .
Por ejemplo, los métodos para evaluar el enlazamiento o la interacción e un agente de prueba con una proteína involucrada en la modulación del calcio intracelular incluyen, NMR, espectroscopia de masas, espectroscopia de fluorescencia, ensayos de proximidad de centelleo, ensayos de resonancia por plasmón superficial y otros. Los ejemplos de los métodos para evaluar la modulación de las interacciones, las actividades, los niveles o cualquiera de las propiedades físicas, estructurales u otras de una proteína involucrada en la modulación del calcio intracelular incluyen, pero no se limitan a, ensayos FRET para evaluar los efectos sobre las interacciones proteínicas, RMN, cristalografía de rayos X y dicroísmo circular para evaluar los efectos sobre las interacciones proteínicas y sobre las propiedades físicas y estructurales de una proteína, y los ensayos de actividad adecuados para evaluar una actividad particular de una proteína.
Compuestos Los compuestos descritos aquí, modulan el calcio intracelular, y pueden ser usadas en el tratamiento de enfermedades o condiciones donde la modulación del calcio intracelular tiene un efecto benéfico. En una modalidad, los compuestos descritos aquí inhiben la entrada de calcio operada por depósitos . En una modalidad, los compuestos de las Fórmulas (I) - (V) interrumpen el ensamblaje de las unidades SOCE . En otra modalidad, los compuestos de las Formulas (I) - (V) altera las interacciones funcionales de las proteínas que forman los complejos de los canales de calcio operados por depósitos. En una modalidad, los compuestos de las Fórmulas (I)-(V) alteran las interacciones funcionales de la STIM1 con la Orail. En otras modalidades, los compuestos de las Fórmulas (I) - (V) son bloqueadores de los poros SOC. En otras modalidades, los compuestos de las Fórmulas (I) - (V) son bloqueadores de los poros CRAC.
En un aspecto, los compuestos descritos aquí inhiben la corriente electrofisiológica (ISOC) asociada directamente con los canales SOC activados. En otro aspecto, los compuestos descritos aquí, inhiben la corriente electrofisiológica (ICRAC) asociada directamente con los canales CRAC activados.
Las enfermedades o condiciones que se benefician de la modulación del calcio intracelular incluyen, pero no se limitan a, una enfermedad relacionada con el sistema inmunológico (por ejemplo, una enfermedad autoinmune) , una enfermedad o trastorno que involucra inflamación (por ejemplo, asma, la enfermedad pulmonar obstructiva crónica, artritis reumatoide, la enfermedad intestinal inflamatoria, glomerulonefritis , enfermedades neuroinflamtorias, esclerosis múltiple, y trastornos del sistema inmunológico) , cáncer u otras enfermedades proliferativas , enfermedades renales y enfermedades del hígado. En un aspecto, los compuestos descritos aquí se pueden usar como inmunosupresores para evitar los rechazos de injertos transplantados, el rechazo de transplantes alogénicos o xenogénicos (órganos, medula ósea, células madre, otras células y tejidos), la enfermedad del injerto contra anfitrión. Los rechazos de injertos transplantados resultan de transplantes de tejidos u órganos. La enfermedad del injerto contra anfitrión puede resultar del transplante de medula ósea o de células madre .
Los compuestos descritos aquí modulan una actividad de, modulan una interacción de, o se enlazan a, o interactúan con al menos una porción de una proteína en el complejo de los canales de calcio operados por depósitos. En una modalidad, los compuestos descritos aquí modulan una actividad de, modulan una interacción de, o se enlazan a, o interactúan con al menos una porción de una proteína en el complejo de los canales de calcio activados por la liberación del calcio. En un aspecto, los compuestos descritos aquí, reducen el nivel de los complejos de los canales de calcio operados por depósitos funcionales. En una modalidad, los compuestos descritos aquí reducen el nivel de los complejos de los canales de calcio operados por depósitos activados. En un aspecto, los complejos de los canales de calcio operados por depósitos son los complejos de los canales de calcio activados por la liberación del calcio.
Los compuestos descritos aquí para el tratamiento de una enfermedad o trastorno, cuando se administran a los individuos que tienen una enfermedad o trastorno, reducen, alivian o eliminan de manera efectiva los síntomas o las manifestaciones de la enfermedad, o el trastorno. Los compuestos descritos aquí también pueden ser administrados a los individuos predispuestos a una enfermedad o trastorno, quienes no manifiestan aún un síntoma de la enfermedad o trastorno, evita o retarda el desarrollo de los síntomas. El agente puede tener efectos tales individualmente o en combinación con otros agentes, o sirve para aumentar el efecto terapéutico de otro agente.
Los compuestos descritos aquí, las sales aceptables farmacéuticamente, los profármacos aceptables farmacéuticamente, o los solvatos aceptables f rmacéuticamente de los mismos, modulan el calcio intracelular, y se pueden usar para tratar a los pacientes donde la modulación del calcio intracelular proporciona beneficios .
En un aspecto, es un compuesto de la Fórmula (I) : Fórmula (I) ; en donde ; A es fenilo o benzofurano, en donde el fenilo y el benzofurano están cada uno sustituidos opcionalmente con al menos una R; o A es fenilo sustituido con dos grupos R en átomos de carbono adyacentes, en donde los dos grupos R y los átomos de carbono a los cuales están enlazados forman un ci'cloalquilo de C4-C8 o heterocicloalquilo de C3-C8; R se selecciona de F, Cl, Br, I, -CN, -N02, -CF3, OH, -OR3, -OCF3, -C=CH, -C=CR3, alquilenoalquino de C1-C6, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C6, heteroalquilo de Cl-C6 , haloalquilo de C1-C6, tetrazolilo, heterocicloalquilo de C2-C6, fenilo, -NHS(=0)2R3, S ( =0) 2N (R4 ) 2 , -C(=0)CF3, -C (=0) HS (=0) 2R3 , -S (=0) 2NHC (=0) R4 , N(R4)2, - (R4 ) C ( =0) R3 , -C02R4, -C(=0)R3, -0C(=0)R3, -C ( =0) (R4 ) 2 , -SR3, -S(=0)R3, y -S(=0)2R3; J es un enlace, NHS (=0)2, S(=0)2N(R4), -C(=0), C(=0)NHS (=0) 2, -S (=0) 2NHC(=0) , N(R4), - (R4 ) C ( =0) , -C02, -C(=0), -0C(=0), -C(=0)N(R4), -S, -S(=0), y -S(=0)2, alquileno de C1-C6, alquenileno de C2-C6, alquinileno de C2-C6, heteroalquileno de C1-C6, cicloalquileno de C3-C6, o heterocicloalquileno de C2-C6, en donde el alquileno de Cl-C6, alquenileno de C2-C6, alquinileno de C2-C6, heteroalquileno de C1-C6, cicloalquileno de C3-C6, y heterocicloalquileno de C2-C6, está substituido opcionalmente con al menos una R; Rl es C02R2 o un bioisóstero de ácido carboxílico, en donde R2 es hidrógeno, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de Cl-C6, haloalquilo de C1-C6, fenilo o bencilo; Z es 0, S, NH, N-CN, o CHN02; X es W-L-fenilo, W-L-B, B, W-L-D, o D en donde el fenilo, B y D están cada uno substituidos opcionalmente con al menos una R; W es NR2, 0 ó un enlace; L es metileno, etileno substituido con al menos una R, alquileno de C3-C6, alquenileno de C2-C6, alquinileno de C2-C6, heteroalquileno de C1-C6, cicloalquileno de C3-C6, o heterocicloalquileno de C2-C6, en donde el metileno, alquileno de C3-C6, alquenileno de C2-C6, alquinileno de C2-C6, heteroalquileno de C1-C6, cicloalquileno de C3-C6, y heterocicloalquileno de C2-C6 están substituidos opcionalmente con al menos una R; B se selecciona de furano, tiofeno, pirrol, piridina, oxazol, tiazol, imidazol tiadiazol, isoxazol, isotiazol, pirazol, piridazina, pirimidina, pirazina, oxadiazol, tiadiazol, triazol, indol, benzoxazol, benzotiazol, bencimidazol , benzoxadiazol , benzotiadiazol , benzotriazol , pirazolopiridina, pirrolopirimidina, indolizina, purina, imidazopiridina, pirrolopiridina, fluoropiridina, tienopiridina, furopirrol, furofurano, ruenofurano, 1,4-dihidropirrolopirrol , tienopirrol, tienotiofeno, quinolina, isoquinolina, furopirazol, tienopirazol , y 1,6-dihidropirrolopirazol ; D es cicloalquilo de C2-C10 o heterocicloalquilo de C2-C9; cada R3 se selecciona independientemente de alquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C8, fenilo, y bencilo ; cada R4 se selecciona independientemente de hidrógeno, alquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C8 , fenilo, y bencilo; o las sales, solvatos, óxidos de N o profármacos de los mismos aceptables farmacéuticamente.
En una modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde X es B. En otra modalidad, B se selecciona de tiofeno, furano, y pirrol . En otra modalidad, el tiofeno, furano, y pirrol están substituidos opcionalmente con al menos una R.
En aún otra modalidad, B es tiofeno y está substituido con al menos una R seleccionada de F, Cl , Br, I, CN, alquino, alquilalquino de C1-C6, -N02, -CF3, -OH, -0R3, -0CF3, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C6, fluoroalquilo de C1-C6, heteroalquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, tetrazolilo, heterocicloalquilo de C2-C6, y fenilo. En aún otra modalidad, R se selecciona de F, Cl, Br e I. En otra modalidad, R es alquilo de C1-C6. En una modalidad adicional, el alquilo de C1-C6 es metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, y ter-butilo. En aún otra modalidad, R es 0R3. En una modalidad adicional. R3 es alquilo de C1-C6. En otra modalidad el alquilo de C1-C6 es metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, y ter-butilo. En una modalidad, R3 es metilo. En una modalidad B es tiofeno substituido con fenilp. En una modalidad, R es tiofeno. En otra modalidad, R es -S(=0)2R3, y R3 es alquilo de C1-C6. En otra modalidad, el alquilo de C1-C6 es metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, y ter-butilo. En otra modalidad B es tiofeno, R3 es fenilo sustituido con al menos un sustituyentes seleccionado de F, Cl, Br, I, -CN, alquino, alquilalquino de C1-C6, -N02, -CF3, -OH, -OR3, ocf3, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C6, fluoroalquilo de C1-C6, heteroalquilo de C1-C6, haloalquilo de cl-c6, tetrazolilo, heterocicloalquilo de C2-C6, fenilo. En otra modalidad, el alquilo de C1-C6 es metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo y ter-butilo. En una modalidad adicional es un compuesto seleccionado de: o una sal, solvato, o profármacos aceptable farmacéuticamente del mismo.
En aún otra modalidad, B es furano y está substituido con al menos una R seleccionada de F, Cl, Br, I, -CN, alquino, alquilalquino de C1-C6, -N02, -CF3, -OH, -0R3, -0CF3, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C6, fluoroalquilo de C1-C6, heteroalquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, tetrazolilo, heterocicloalquilo de C2-C6, y fenilo. En aún otra modalidad, R se selecciona de F, Cl, Br e I. En otra modalidad, B es furano sustituido con al menos un alquilo de C1-C6. En una modalidad adicional el alquilo de C1-C6 es metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, y ter-butilo. En aún otra modalidad, R es 0R3. En una modalidad adicional. R3 es alquilo de C1-C6. En otra modalidad el alquilo de C1-C6 es metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, y ter-butilo. En una modalidad, R3 es metilo. En una modalidad B es furano substituido con fenilo. En una modalidad, el fenilo está sustituido con al menos un halógeno. En una modalidad adicional es un compuesto seleccionado de: farmacéuticamente de los mismos.
En una modalidad es un compuesto de la Fórmula (I) en donde el heteroarilo es un heteroarilo monociclito, sustituido opcionalmente con al menos una R. En otra modalidad, el heteroarilo es un heteroarilo monociclito de 5 miembros o un heteroarilo monociclito de 6 miembros, en donde el heteroarilo incluye 0 ó 1 átomo de 0, 0 ó 1 átomo de S, 0-3 átomos de N, y al menos dos átomos de carbono, sustituidos opcionalmente con al menos una R. En otra modalidad, el heteroarilo es un heteroarilo con 5 o 6 miembros seleccionado de entre furanilo, tienilo, pirrolilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, pirazolilo, isoxazolilo, isotiazolilo, 1,3,4-tiadiazolilo, piridinilo, piridazinilo , pirimidinilo, pirazinilo, y triazinilo, sustituido opcionalmente con al menos una R. En una modalidad es un compuesto de la Fórmula (I) en donde el heteroarilo monociclico es un heteroarilo monociclico de 5 miembros que tiene al menos 1 átomo de N en el anillo. En otra modalidad, el heteroarilo monociclico de 5 miembros tiene 1 ó 2 átomos de N en el anillo. En una modalidad adicional, el heteroarilo monociclico de 5 miembros tiene 1 átomo de S. En una modalidad adicional, el heteroarilo monociclico de 5 miembros tiene 1 átomo de 0. en aún otra modalidad, el heteroarilo monociclico de 5 miembros está sustituido con al menos una R. En aún otra modalidad, el R es halógeno. En otra modalidad, R es cicloalquilo de C3-C6.
En otra modalidad, R es ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, o ciclohexilo. En otra modalidad, R es heteroarilo. En una modalidad adicional, R es fenilo substituido opcionalmente con un halógeno. En aún otra modalidad, R es un alquilo de C1-C6, tal como por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, y ter-butilo. En una modalidad adicional, es un compuesto seleccionado de: o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato, N-óxido o profármaco del mismo.
En otra modalidad, el heteroarilo es un heteroarilo de embros, en donde el heteroarilo incluye 0 o 1 átomo de 0, O o 1 átomos de S, 1-3 átomos de N, y por lo menos 2 átomos de carbono, opcionalmente sustituidos con por lo menos un R.
En aún otra modalidad, el heteroarilo es un heteroarilo de 6 miembros que contiene 1-3 átomos de N en el anillo, opcionalmente sustituido con por lo menos una R. En aún otra modalidad, el heteroarilo de 6 miembros se sustituye con 1 átomo de N. En otra modalidad, con 2 átomos de N. En aún otra modalidad, 3 átomos de N. En otra modalidad, el heteroarilo es un heteroarilo de 6 miembros seleccionado de entre piridinilo, pirididazinilo, pirimidinilo , pirazinilo, y triazinilo, opcionalmente sustituidos con por lo menos una R.
En una modalidad, el heteroarilo de 6 miembros se sustituye con dos R. En una modalidad adicional, el heteroarilo de 6 miembros se sustituye con R seleccionada del halógeno, alquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, fenilo, hidroxi, u 0R3. En una modalidad, el halógeno es F. En otra modalidad, el halógeno es Cl . En aún otra modalidad, el halógeno es I. En aún otra modalidad es un compuesto de la Fórmula (I) en donde B es un heteroarilo de 6 miembros sustituido con por lo menos un 0R3 en donde es R3 es metilo o fenilo .
En una modalidad adicional es un compuesto que tiene la estructura : o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato, N-óxido o profármaco del mismo.
También se encuentran presentes formas del N-óxido, de compuestos de la Fórmula (I)-(V), como por ejemplo, B es un N-óxido de piridina. En una modalidad, es un compuesto de las Fórmulas (I)-(V) en el qué, cuando el grupo heteroarilo contiene un átomo de nitrógeno, la forma del N-óxido también está presente. En aún otra modalidad, el átomo de nitrógeno es parte del anillo del heteroarilo. En otra modalidad, el átomo de nitrógeno es un grupo amino que se sustituye en el anillo heteroarilo. En otra modalidad, el N-óxido es un N-óxido amino. En aún otra modalidad, la forma N-óxido de un anillo heteroarilo contiene por lo menos un átomo de nitrógeno. En otra modalidad, es la forma del N-óxido de un anillo heteroarilo la que contiene dos átomos de nitrógeno.
En otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde el heteroarilo es un heteroarilo bicíclico, opcionalmente sustituido con por lo menos una R. En otra modalidad, el heteroarilo es un heteroarilo bicíclico de 8 miembros, un heteroarilo bicíclico de 9 miembros o un heteroarilo bicíclico de 10 miembros, en donde el heteroarilo incluye 0, 1 o 2 átomos de 0, 0, 1, o 2 átomos de S, 0-3 átomos de N, y por lo menos 2 átomos de carbono, opcionalmente sustituidos con por lo menos una R. En otra modalidad, el heteroarilo es un heteroarilo de 8 miembros seleccionado de entre furofurano, furopirrol, tienofurano, tienotiofeno, tienopirrol, dihidropirrolopirrol , furoimidazol , tienoimidazol , dihidropirroloimidazol , pirrolooxadiazol , dihidropirrolotriazol , pirrolotiadiazol , fuoroxadiazol , tienooxadiazol , pirrolooxadiazol, furotriazol, tienotriazol , f rotiadiazol , y tienotiadiazol opcionalmente sustituidos con por lo menos una R.
En una modalidad, el heteroarilo bicíclico de 8 miembros tiene la estructura en donde U y Ul son independientemente 0, S, o NR2. En una modalidad, U es 0. En otra modalidad, U es S. En una modalidad adicional, U es NR2. En otra modalidad, ambas U y Ul son S. En aún otra modalidad, R2 es hidrógeno o alquilo de C1-C6. En aún otra modalidad, R se selecciona de F, Cl , Br, I, - CN, alquino, alquilalquino de C1-C6, -N02 , -CF3, -OH, -0R3, -0CF3, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C6, fluoroalquilo de C1-C6, heteroalquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, tetrazolilo, heterocicloalquilo de C2-C6, y fenilo. En aún otra modalidad, R se selecciona de F, Cl, Br, e l. En otra modalidad, R es alquilo de C1-C6. En una modalidad adicional, alquilo de C1-C6 es metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, y tert-butilo. En aún otra modalidad, R se sustituye con por lo menos un grupo alquilo de C1-C6. En una modalidad adicional, alquilo de C1-C6 es metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, y tert-butilo.
En una modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde B es un grupo heteroarilo bicíclico de 8 miembros, el compuesto se selecciona de: En otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde el heteroarilo bicíclico de 8 miembros tiene la estructura en donde U e Y son independientemente cada uno 0, S, o NR2. En una modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde U e Y son ambas S. En otra modalidad, U e Y son ambas 0. En una modalidad adicional, U e Y son ambas NR2. En aún otra modalidad, U es O e Y es S. En aún otra modalidad, U es 0 e Y es N. En aún otra modalidad, U es S e Y es NR2. En una modalidad R2 es hidrógeno. En una modalidad adicional, J es un enlace y A es fenilo opcionalmente sustituido con por lo menos un substituyente seleccionado de Cl, F, Br, e I. En otra modalidad, por lo menos un substituyente es Cl . En aún otra modalidad, por lo menos un substituyente es CN, OH o N02. En una modalidad, es un compuesto que tiene la estructura: o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato, N- óxido o profármaco del mismo.
En otra modalidad, el heteroarilo es un heteroarilo de 9 miembros, en donde el heteroarilo incluye 0, 1, o 2 átomos de 0, 0, 1, o 2 átomos de S, 1-3 átomos de N, y por lo menos 2 átomos de carbono, opcionalmente sustituidos con por lo menos una R. En aún otra modalidad, el heteroarilo es un heteroarilo de 9 miembros que contiene 1-3 átomos de N en el anillo, opcionalmente sustituido con por lo menos una R. En otra modalidad, el heteroarilo es un heteroarilo de 9 miembros seleccionado de entre benzoxazol, benzotiazol, benzoimidazol , benzooxadiazol , benzotiadiazol , benzotriazol , indol, imidazopiridina, triazolopiridina, pirazolopiridina, pirrolopirimidina, indolizina, purina, oxazolopiridina, tiazolopiridina, imidazopiridina, imidazopiridina, opcionalmente sustituido con por lo menos una R.
En una modalidad, el heteroarilo de 9 miembros bicíclico tiene la estructura en donde U es CH o N. En otra modalidad, el heteroarilo bicíclico de 9 miembros que tiene la estructura mostrada arriba se sustituye con por lo menos una R seleccionada del halógeno y/o alquilo de C1-C6. En otra modalidad, R es F, Cl , Br, o I. En una modalidad adicional, R es metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo o tert-butilo. En aún otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) que tiene la estructura : En aún otra modalidad, el heteroarilo bicíclico de 9 miembros tiene la estructura en donde U es O, S, o NR2. En una modalidad, U es O. En una modalidad adicional, U es S. En aún otra modalidad, U es NR2 y R2 es hidrógeno .
En otra modalidad, A es fenilo y J es un enlace. En una modalidad adicional, el fenilo se sustituye con por lo menos un substituyente seleccionado de F, Cl, Br, o í. En una modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde B es un heteroarilo bicíclico de 9 miembros seleccionado de: En aún otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (i) en donde B es un heteroarilo bicíclico de 9 miembros que tiene la estructura seleccionada de: en donde U es CH o N, V es O, S, o NR2. En una modalidad, U es CH . En aún otra modalidad, U es N. En una modalidad adicional, V es O. En aún otra modalidad, V es S .
En una modalidad, V es NR2 en donde R2 es hidrógeno o alquilo de C1-C6. En otra modalidad, el heteroarilo bicíclico de 9 miembros mostrado arriba se sustituye con por lo menos una R seleccionada de F, Cl, Br, I, -CN, alquino, alquilalquino de C1-C6, -N02, -CF3, -OH, -OR3, -OCF3, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C6, fluoroalquilo de C1-C6, heteroalquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, tetrazolilo, heterocicloalquilo de C2-C6, fenilo, -NHS (=0) 2R3 , S (=0) 2N(R4) 2, -C(=0)CF3, - C ( =0) HS ( =0) 2R3 , - S ( =0) 2NHC ( =0) R4 , N(R4)2, - N(R4) C(=0)R3, - C02R4 , -C(=0)R3, - OC(=0)R3, -C(=0)N(R4)2, -SR3, -S(=0)R3, y-S(=0)2R3. En otra modalidad, R se selecciona de F, Br, Cl , I, OH, N02 , CN, 0R3 , 0CF3 , y CF3.
En una modalidad adicional, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde B es un heteroarilo bicíclico de 9 miembros seleccionado de: En otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde B un heteroarilo bicíclico de 9 miembros que tiene la estructura aún otra modalidad, un compuesto de la Fórmula (I) en donde B es un heteroarilo bicíclico de 9 miembros que tiene la estructura opcionalmente sustituida con por lo menos una R. En una modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde A es fenilo opcionalmente sustituido con por lo menos un substituyente seleccionado independientemente de F, Cl, Br, I, -CN, alquino, alquilalquino de C1-C6, -N02, - CF3 , -OH, -OR3, - 0CF3, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C6, fluoroalquilo de C1-C6, heteroalquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, tetrazolilo, heterocicloalquilo de C2-C6, fenilo, NHS(=0)2R3, S (=0) 2N(R4) 2, -C(=0)CF3, -C (=0) NHS (=0) 2R3 , -S (=0) 2NHC(=0)R4, N(R4)2, - N (R4 ) C ( =0) R3 , - C02R4, -C(=0)R3, - 0C(=0)R3, -C(=0)N(R4) 2, -SR3, -S(=0) 3, y-S(=0)2R3. En aún otra modalidad, R se selecciona de F, Cl, Br, I, -CN, alquino, alquilalquino de C1-C6, - N02 , -CF3, -OH, -0R3, -0CF3 , alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C6, fluoroalquilo de C1-C6, heteroalquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, tetrazolilo, heterocicloalquilo de C2-C6, y fenilo. En aún otra modalidad, R se selecciona de F, Cl , Br, e I. En otra modalidad, R es alquilo de C1-C6. En una modalidad adicional, alquilo de C1-C6 es metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, y tert-butilo. En aún otra modalidad, A es fenilo sustituido con por lo menos un grupo alquilo de Cl-C6. En una modalidad adicional, alquilo de C1-C6 es metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, y tert-butilo .
En una modalidad, el compuesto de la Fórmula (I) se selecciona de: En aún otra modalidad, el heteroarilo es un heteroarilo de 10 miembros que contiene 1-3 átomos de N en el anillo, opcionalmente sustituido con por lo menos una R. En otra modalidad, el heteroarilo es un heteroarilo de 10 miembros seleccionado de entre la quinolina, cinolina, benzotriazina, quinoxalina, isoquinolina, naftiridina, quinazolina, ftalazina, opcionalmente sustituida con por lo menos una R.
También se describen en la presente, compuestos en donde el heteroarilo es un heteroarilo de 10 miembros que contiene 3 heteroatomos en el anillo. En una modalidad, el heteroátomo se selecciona nitrógeno' y azufre. En otra modalidad, el compuesto descrito en la presente, se selecciona de ácido 2-(benzo[c] [1 , 2 , 5] tiadiazol-5 -carboxamido) -4- (4-4- (4-clorofenil) tiofeno-3 -carboxíl ico, ácido 4- (4-clorofenil) -2- (1-metil-lH-benzo [d] [1 , 2 , 3] triazol-5 -carboxamido) tiofeno-3-carboxílico, y el ácido 2-(benzo [c] [1,2,5] tiadiazol -4 -carboxamido) -4 - (4 -clorofenil) tiofeno-3 -carboxílico .
En aún otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde B es un heteroarilo bicíclico de 10 miembros que tiene la estructura donde U es CH o N, en donde el heteroarilo está substituido opcionalraente con por lo menos una R.
En una modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde R2 es hidrógeno o alquilo de C1-C6. En otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde J es un enlace y A es fenilo opcionalmente sustituido con al menos un sustituyente seleccionado independientemente de F, Cl, Br, I, -CN, alquino, alquilalquino de C1-C6, -N02, -CF3, -OH, -OR3, -OCF3, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C6, fluoroalquilo de C1-C6, heteroalquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, tetrazolilo, heterocicloalquilo de C2-C6, fenilo, NHS(=0)2R3, S (=0) 2N(R4) 2, -C(=0)CF3, -C (=0) NHS (=0) 2R3 , S ( =0) 2NHC ( =0) R4 , N(R4)2, - (R4 ) C ( =0) 3 , - C02R4 , -C(=0)R3, - 0C(=0)R3, -C(=0)N(R4) 2, -SR3, -S(=0)R3, y-S(=0)2R3.
En aún otra modalidad, un compuesto de la Fórmula (III) en donde R se selecciona de F, Cl, Br, I, -CN, alquino, alquilalquino de C1-C6, -N02 , -CF3, -OH, -0R3, -0CF3, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C6, fluoroalquilo de C1-C6, heteroalquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, tetrazolilo, heterocicloalquilo de C2-C6, y fenilo. En aún otra modalidad, R se selecciona de F, Cl, Br, e l. En otra modalidad, R es alquilo de C1-C6. En una modalidad adicional, alquilo de Cl-C6 es metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, y tert-butilo. En aún otra modalidad, A se sustituye con por lo menos un grupo alquilo de C1-C6. En una modalidad adicional, alquilo de C1-C6 es metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, y tert-butilo. En una modalidad adicional un compuesto de la Fórmula (I) se selecciona de: En otra modalidad un compuesto de la Fórmula (I) en donde B es un heteroarilo bicíclico de 10 miembros que tiene la estructura en donde el heteroarilo está substituido opcionalmente con por lo menos un grupo R seleccionado de F, Cl, Br, I, -CN, alquino, alquilalquino de C1-C6, -N02, -CF3, -OH, -0R3, - 0CF3 , alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C6, fluoroalquilo de C1-C6, heteroalquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, tetrazolilo, heterocicloalquilo de C2-C6, fenilo, -NHS(=0)2R3, S(=0) 2N(R4) 2, -C(=0)CF3, -C ( =0) HS ( =0) 2R3 , - S (=0) 2NHC (=0) R4 , N(R4)2, - (R4 ) C ( =0) R3 , -C02R4, - C(=0)R3, -0C(=0)R3, -C(=0)N(R4) 2, -SR3, -S(=0)R3, y S(=0)2R3. En otra modalidad, A es um fenilo opcionalmente sustituido con por lo menos un substituyente seleccionado independientemente de F, Cl, Br, I, -CN, alquino, alquilalquino de C1-C6, -N02, -CF3, -OH, -0R3, -0CF3, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C6, fluoroalquilo de, C1-C6, heteroalquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, tetrazolilo, heterocicloalquilo de C2-C6, fenilo, NHS(=0)2R3, S (=0) 2N(R4) 2, -C(=0)CF3, - C ( =0) HS ( =0) 2R3 , -S ( =0) 2NHC ( =0) R4 , N(R4)2, -N(R4)C(=0)R3, -C02R4, -C(=0)R3, -0C(=0)R3, - C(=0)N(R4)2, -SR3, -S(=0)R3, and -S(=0)2R3. En aún otra modalidad, R se selecciona de F, Cl, Br, I, -CN, alquino, alquilalquino de C1-C6, -N02 , -CF3, -OH, -0R3, -0CF3, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C6, fl.uoroalquilo de C1-C6, heteroalquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, tetrazolilo, heterocicloalquilo de C2-C6, y fenilo. En aún otra modalidad, R se selecciona de F, Cl, Br, e l. En aún otra modalidad, R se sustituye con por lo menos un grupo alquilo de C1-C6. En una modalidad adicional, alquilo de C1-C6 es metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, y tert-butilo.
Enlazadores También se describen en la presente compuestos de la Fórmula (I) en donde X es W-L-fenilo, -L-B, o W-L-D. En una modalidad, es NR2. En otra modalidad, es O. En aún otra modalidad, W es un enlace. En una modalidad adicional, L es metileno sustituido con por lo menos una R o etileno sustituido con por lo menos una R. En una modalidad adicional, W es alquileno de C3-C6, alquenileno de C2-C6, alquinileno de C2-C6, heteroalquileno de C1-C6, cicloalquileno de C3-C6, o heterocicloalquileno de C2-C6, en donde alquileno de C3-C6, alquenileno de C2-C6, alquinileno de C2-C6, heteroalquileno de C1-C6, cicloalquileno de C3-C6, y heterocicloalquileno de C2-C6'se sustituyen con por lo menos una R. En una modalidad adicional, L es , en donde Ri, Rii, Riii, y Riv se selecciona cada una independientemente del hidrógeno, F, Cl, Br, I, -CN, alquino, alquilalquino de C1-C6, -N02, -OH, -CF3, -0CF3, -OR3 , alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C6, heteroalquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, tetrazolilo, heterocicloalquilo de C2-C6, fenilo, -NHS(=0)2R3, -S (=0) 2 (R4 ) 2 , -C(=0)CF3, - C(=0)NHS(=0)2R3, -S ( =0) 2NHC ( =0) R3 , -N(R4)2, N(R4).C(=0)R3, -C02R4, -C(=0)R3, -0C(=0)R3, -CON(R4)2, -SR3 , -S(=0)R3, y -S(=0)2R3; en donde Ri, Rii, Riii, and Riv no todos son hidrógeno; o Ri y Riii, o Rii y Riii, o Ri y Riv, o Rii y Riv, o Ri y Rii, or Riii y Riv junto con los átomos a los que se enlazan forman un cicloalquilo de C3-C8 o un grupo heterocicloalquilo de C2-C8. En otra modalidad, Ri es hidrógeno, y Rii se selecciona de F, Cl, Br, o I.
En aún otra modalidad Ri y Rii son ambos hidrógeno. En una modalidad adicional Ri es hidrógeno y Rii es alquilo de C1-C6. En aún otra modalidad, alquilo de C1-C6 es metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, y tert-butilo. En una modalidad alquilo de C1-C6 es metilo. En otra modalidad, Riii y Riv son ambos hidrógeno. En aún otra modalidad, Riii es hidrógeno y Riv se selecciona de F, Cl, Br, o í. En una modalidad adicional, Riii es hidrógéno y Riv es alquilo de C1-C6. En aún otra modalidad, alquilo de C1-C6 es metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, y tert-butilo. En una modalidad alquilo de C1-C6 es metilo. En otra modalidad Ri y Rii se selecciona independientemente de F, Cl, Br, o í. En aún otra modalidad, Riii y Riv se selecciona cada uno independientemente de F, Cl, Br, o I. En una modalidad adicional Ri y Rii son independientemente cada uno alquilo de C1-C6. En aún otra modalidad alquilo de C1-C6 es metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, y tert-butilo. En una modalidad, alquilo de C1-C6 es metilo.
En otra modalidad, es cicloalquileno de C3-C6 seleccionado del ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, y ciclohexilo sustituidos con por lo menos una R. En una modalidad, L es el ciclopropilo.
En una modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) que tiene la estructura: en donde Ri y Rii son cada uno seleccionados independientemente del hidrógeno, F, Cl, Br, I, -CN, alquino, alquilalquino de C1-C6, -N02, -OH, -CF3, -0CF3, -0R3, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C6, heteroalquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, tetrazolilo, heterocicloalquilo de C2-C5, fenilo, -NHS(=0)2R3, -S ( =0) 2N (R4 ) 2 , -C(=0)CF3, C(=0)NHS (=0) 2R3, -S (=0) 2NHC (=0) R3 , -N(R4)2, - (R4 ) C ( =0) R3 , -C02R4, -C(=0)R3, -0C(=0)R3, -CON(R4)2, -SR3, -S(=0)R3, and -S(=0)2R3; en donde Ri y Rii ambos no pueden ser hidrógeno; o Ri y Rii junto con los átomos a los que se enlazan forman un grupo cicloalquenilo de C3-C6 o heterocicloalquenilo de C2-C8 , siempre que Ri y Rii estén en la configuración cis. En una modalidad Ri es hidrógeno y Rii se selecciona de F, Cl, Br, o í. En aún otra modalidad, Ri se selecciona de F, Cl, Br, o I y Rii es hidrógeno. En una modalidad adicional, Ri es el hidrógeno y Rii es alquilo de C1-C6. En aún otra modalidad, alquilo de C1-C6 es metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, y tert-butilo. En una modalidad, alquilo de C1-C6 es metilo. En otra modalidad, Ri es alquilo de C1-C6 y Rii es hidrógeno. En aún otra modalidad, alquilo de C1-C6 es metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, y tert-butilo. En una modalidad adicional, alquilo de C1-C6 es metilo. En aún otra modalidad, Ri y Rii se seleccionan cada uno independientemente de F, Cl, Br, o I . En una modalidad, Riii y Riv se seleccionan cada uno independientemente de F, Cl, Br, o í. En otra modalidad, Ri y Rii son independientemente cada uno alquilo de C1-C6. En aún otra modalidad, alquilo de C1-C6 es metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, y tert-butilo. En una modalidad adicional alquilo de C1-C6 es metilo.
En otras modalidades, los compuestos de la Fórmula También se describen en la presente, compuestos de la Fórmula (I) en donde L es . A modo de ejemplo solamente, en una modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) que tiene la estructura: También se describe en la presente, compuestos de la Fórmula (I) en donde L es un heteroalquileno de C3-C6. En otra modalidad, el heteroalquileno de C3-C6 es CH20, CH2S, (CH2)20, (CH2)2S, (CH2)30, (CH2)3S. En aún otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde L un heteroalquileno de C3-C6, el compuesto seleccionado de: En algunas modalidades, son compuestos de la R¡¡ Fórmula (I) en donde L es R y V es un enlace, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, alquinilo de C2-C6, heteroalquilo' de C1-C6; en donde alquilo de C1-C6, alquenilo de C1-C6, alquinilo de C2-C6, heteroalquilo de C1-C6 se sustituyen con por lo menos un R5 ; y y V no pueden ser ambos un enlace, Ri y Rii se seleccionan cada uno independientemente del hidrógeno, F, Cl, Br, I, -CN, alquino, alquilalquino de C1-C6, -N02, -OH, -CF3, -0CF3, -0R3, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C6, heteroalquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, tetrazolilo, heterocicloalquilo de C2-C6, fenilo, -NHS(=0)2R3, -S ( =0) 2 (R4 ) 2 , -C(=0)CF3, C(=0)NHS (=0) 2R3, -S (=0) 2NHC (=0) R3 , -N(R4)2, - (R ) C ( =0) R3 , -C02R4, -C(=0)R3, -0C (=0)R3, -CON(R4)2, -SR3, -S(=0)R3, and -S(=0)2R3; en donde Ri y Rii ambos no puede ser hidrógeno; o Ri y Rii junto con los átomos a los que se enlazan forman un cicloalquenilo de C3-C6 o un grupo heterocicloalquenilo de C2-C8, siempre que Ri y Rii estén en la configuración cis .
También se describe en la presente, compuestos de lo opcionalmente sustituido con por lo menos una R y Ri, Rii, Riii, Riv, y V es como se describió previamente. En algunas modalidades, L es En otras modalidades, Ri y Rii se seleccionan de F, Cl, Br, I, -CN, alquino, alquilalquino de C1-C6, -N02, -OH, -CF3, -OCF3 , -OR3, o alquilo de C1-C6.
A modo de ejemplo solamente, los compuestos de la Fórmula (I) donde X es W-L-B, dónde W es un enlace, L se selecciona de y R¡ y B es un heteroarilo que se selecciona de En otra modalidad, es un compuesto seleccionado También se. describe en la presente, compuestos de la Fórmula (I) donde X es W-L-D. En otra modalidad, X es D. En aún otra modalidad, D es cicloalquilo de C3-C8. En una modalidad, D se selecciona del ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo. En otra modalidad, el ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo se sustituyen con por lo menos una R seleccionada de F, Cl, Br, I, -CN, alquino, alquilalquino de C1-C6, -N02, -CF3, -OH, -OR3 , -OCF3, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C6, fluoroalquilo de C1-C6, heteroalquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, tetrazolilo, En otra modalidad, D se selecciona de opcionalmente sustituido con por lo menos una R. En otra modalidad, R se selecciona de CH3 , F, Cl, Br, I, OH, OCH3 , CN y N02. En aún otra modalidad, W es NR2 , en donde R2 es . En aún otra modalidad, W es 0, L es metileno y D es cicloalquilo de C3-C6.
En otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde D heterocicloalquilo de C2-C9. En aún otra modalidad, D se selecciona del tetrahidrofurano, tetrahidrotiofeno, tetrahidropirol , tetrahidropirano, tetrahidrotiopirano, y piperidina. En aún otra modalidad, D se ..lección. ,e CO O? 00,CO,CQO)..,yOQ En otra modalidad, W es un enlace, L es metileno y D se se ,lecci.ón.c00 Go co>C00 >C0¦' >00s , yyCQs , opcionalmente sustituido con por lo menos una R.
En una modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde X es -L-D está, seleccionada de: En otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde Z S. En otra modalidad, Z es S y X es fenilo sustituido con por lo menos una R seleccionada de F, Cl, Br, e l. En otra modalidad, es un compuesto, en donde Z es S y A es un fenilo sustituido con por lo menos una R seleccionada de F, Cl, Br, e l. En otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (I) en donde Rl es un tioácido.
En un aspecto, es un compuesto de la Fórmula (II) : Fórmula ( II ) ; en donde : A es un fenilo sustituido con por lo menos tres substituyentes o benzofuranos sustituidos opcionalmente con por lo menos una R; o A es fenilo sustituido con dos grupos R en los átomos de carbono adyacentes en donde los dos grupos R y los átomos de carbono a los que se enlazan forman un cicloalquilo de C4-C8 o heterocicloalquilo de C3-C8; R se selecciona de F, Cl , Br, I , -CN, -N02, -CF3, -OH, -0R3, -0CF3, -C=CH, -C=CR3, alquileno alquino de C1-C6, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C6, heteroalquilo de Cl-C6 , haloalquilo de C1-C6, tetrazolilo, heterocicloalquilo de C2-C6, fenilo, -NHS(=0)2R3, S ( =0) 2 (R4 ) 2 , -C(=0)CF3, C(=0)NHS (=0) 2R3, -S (=0) 2NHC (=0) R4 , N(R4)2, - (R4 ) C ( =0) R3 , -C02R4, -C(=0)R3, -0C(=0)R3, - C ( =0) (R4 ) 2 , -SR3, -S(=0)R3, and -S (=0) 2R3 ; J es un enlace, NHS(=0)2, S(=0)2N(R4) , -C(=0) , C ( =0) HS ( =0) 2 , - S ( =0) 2NHC ( =0) , N(R4) , -N(R4)C(=0) , -C02, -C(=0) , -0C(=O) , -C(=0)N(R4) , -S, -S(=0), y -S(=0)2, alquileno de C1-C6, alquinileno de C2-C6, alquinileno de C2-C6, heteroalquileno de C1-C6 o cicloalquileno de C3-C6, em donde alquileno de C1-C6, alquenileno de C2-C6, alquinileno de C2-C6, heteroalquileno de C1-C6, y cicloalquileno de C3-C6 está substituido opcionalmente con por lo menos una R; Rl es C02R2 o un bioisostero del ácido carboxílico, en donde R2 es hidrógeno, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de Cl-C6 , haloalquilo de C1-C6, fenilo o bencilo; Z es O, S, NH, N-CN, o CHN02 ; W es NR2, O o un enlace; Ll es un enlace, alquileno de C1-C6, alquenileno de C2-C6, alquinileno de C2-C6, heteroalquileno de C1-C6 cicloalquileno de C3-C6, o heterocvicloalquileno de C2-C6 em donde alquileno de C1-C6, alquenileno de C2-C6, alquinileno de C2-C6, heteroalquileno de C1-C6, y cicloalquileno de C3-se sustituyen opcionalmente con por lo menos una R; Y es O o S; n es un entero desde 0-5; cada R3 se selecciona independientemente de alquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C8, fenilo, y bencilo ; Cada R4 se selecciona independientemente de hidrógeno, alquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3 -C6 , fenilo, y bencilo; o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato, N-óxido o profármaco del mismo.
En otra modalidad, un compuesto de la Fórmula (II) en donde Rl es C02R2 y R2 es hidrógeno. En una modalidad adicional, es un compuesto de la Fórmula (II) en donde J es un enlace. En aún otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (II) en donde R4 es hidrógeno. En aún otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (II) en donde Z es O. En una modalidad, es un compuesto de la Fórmula (II) en donde A es fenilo. En otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (II) en donde el fenilo se sustituye con tres R. En aún otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (II) en donde cada R se selecciona independientemente de F, Cl, Br, I, alquilo de C1-C6, OH, y 0R3. En una modalidad adicional, es un compuesto de la Fórmula (II) en donde R3 es metilo. En aún otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (II) en donde alquilo de C1-C6 es metilo. En una modalidad, es un compuesto de la Fórmula (II) en donde y Ll son independientemente cada uno un enlace. En otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (II) en donde Y es O. En una modalidad,' es un compuesto de la Fórmula (II) en donde n es 0. En una modalidad adicional un compuesto de la Fórmula (II) en donde R se selecciona de F, Cl, Br, I, CN, OH, 0R3 , y N02. En aún otra modalidad, es un compuesto de la Fórmula (II) en donde n es 1.
En otro aspecto, es un compuesto de la Fórmula (III) : Fórmula (III) ; en donde : A es fenilo o benzofurano, en donde el fenilo y el benzofurano son cada uno opcionalmente sustituidos con por lo menos una R; o A es fenilo sustituido con dos grupos R en los átomos de carbono adyacentes, en donde los dos grupos R y los átomos de carbono al que se enlazan forman un cicloalquilo de C4-C8 o heterocicloalquilo de C3-C8; R se selecciona de F, Cl, Br, I, - CN, -N02, -CF3, -OH, -0R3, -0CF3, -C=CH, -C=CR3, alquilenoalquino de C1-C6, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C6, heteroalquilo de Cl-C6 , haloalquilo de C1-C6, tetrazolilo, heterocicloalquilo de C2-C6, fenilo, -NHS ( =0) 2R3 , S ( =0) 2 (R4 ) 2 , -C(=0)CF3, C(=0)NHS(=0)2R3, -S ( =0) 2NHC ( =0) R4 , N(R4)2, -N (R4 ) C ( =0) R3 , -C02R4, -C(=0)R3, -0C(=0)R3, -C (=0) N (R4 ) 2 , -SR3, -S(=0)R3, y -S (=0) 2R3 ; J es un enlace, NHS (=0)2, S(=0)2N(R4), -C(=0), C ( =0) HS ( =0) 2 , -S (=0) 2NHC (=0) , N(R4), -N(R4)C(=0), -C02, -C(=0), -0C(=0), -C(=0)N(R4), -S, -S(=0), y -S(=0)2f alquileno de C3-C6, alquenileno de C2-C6, alquinileno de C2-C6, heteroalquileno de C1-C6, cicloalquileno de C3-C6, o heterocicloalquileno de C2-C6, en donde alquileno de C1-C6, alquenileno de C2-C6, alquinileno de C2-C6, heteroalquileno de C1-C6, cicloalquileno de C3-C6, y heterocicloalquileno de C2-C6 está substituido opcionalmente con por lo menos una R; Rl es C02R2 o un bioisostero del ácido carboxílico, en donde R2 es hidrógeno, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de Cl- C6, haloalquilo de C1-C6, fenilo o bencilo; Z es O, S, NH, N-CN, O CHN02 ; X es heteroarilo o W-L-heteroarilo , en donde el heteroarilo está substituido opcionalmente con por lo menos una R y el heteroarilo no es benzofurano o benzotiofeno; W es NR2, 0 o un enlace; L es alquileno de C1-C6, alquenileno de C2-C6, alquinileno de C2-C6, heteroalquileno de C1-C6, cicloalquileno de C3-C6, o heterocicloalquileno de C2-C6, en donde alquileno de C1-C6, alquenileno de C2-C6, alquinileno de C2-C6, heteroalquileno de C1-C6, cicloalquileno de C3-C6, y heterocicloalquileno de C2-C6 está substituido opcionalmente con por lo menos una R; cada R3 se selecciona independientemente de alquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C8, fenilo, y bencilo ,· cada R4 se selecciona independientemente del hidrógeno, alquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C8 , fenilo, y bencilo; o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato, N-óxido o profármaco del mismo.
También se describe en la presente, un compuesto de la Fórmula (IV) : Fórmula (IV) ; en donde : A es fenilo o benzofurano, en donde el fenilo y el benzofuran se sustituyen cada uno opcionalmente con por lo menos una R; o A es fenilo sustituido con dos grupos R en los átomos de carbono adyacentes, en donde los dos grupos R y los átomos de carbono al cual se enlazan forman un cicloalquilo de C4-C8 o heterocicloalquilo de C3-C8; R se selecciona de F, Cl, Br, Iv -CN, -N02, -CF3, -OH, -OR3, -OCF3, -C=CH, -C=CR3, alquinilenoalquino de C1-C6, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C6, heteroalquilo de Cl-C6 , haloalquilo de C1-C6, tetrazolilo, heterocicloalquilo de C2-C6, fenilo, -NHS(=0)2R3, S ( =0) 2 (R4 ) 2 , -C(=0)CF3, C(=0)NHS (=0) 2R3, - S ( =0) 2NHC ( =0) R4 , N(R4)2, - (R4 ) C ( =0) R3 , -C02R4, -C(=0)R3, -0C(=0)R3, -C ( =0) (R4 ) 2 , -SR3, -S(=0)R3, y -S (=0) 2R3 ; J es un enlace, NHS(=0)2, S(=0)2N{R4) , -C(=0) , C(=0)NHS (=0) 2, -S (=0) 2NHC(=0) , N(R4) , -N(R4)C(=0) , -C02, -C(=0) , -0C(=0) , -C(=0)N(R4) , -S, -S(=0), y -S(=0)2, alquileno de C1-C6, alquenileno de C2-C6, alquinileno de C2-C6, heteroalquileno de C1-C6, cicloalquileno de C3-C6, o heterocicloalquileno de C2-C6, en donde alquileno de C1-C6, alquenileno de C2-C6, alquinileno de C2-C6, heteroalquileno de C1-C6, cicloalquileno de C3-C6, y heterocicloalquileno de C2-C6 está substituido opcionalmente con por lo menos una R Rl es C02R2 o un bioisostero del ácido carboxílico, en donde R2 es hidrógeno, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de Cl-C6, haloalquilo de C1-C6, fenilo o bencilo; Z es 0, S, NH, N-CN, o CHN02 ; X es arilo, benzotienilo, benzofuranilo, o -CH2CH2 -fenilo; en donde arilo, benzotienilo, benzofuranilo, o fenilo de -CH2CH2- fenilo es sustituido con al menos 3 sustituyentes seleccionados independientemente a partir de F, Cl , Br, I, -CN, alquino, alquilalquino de C1-C6, -N02, -OH, -CF3, -0CF3 , -OR3, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C6, heteroalquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, tetrazolilo, heterocicloalquilo de C2-C6, fenilo, -NHS(=0)2R3, S (=0) 2N(R4) 2, -C(=0)CF3, -C (=0) NHS ( -0) 2R3 , -S (-0) 2NHC (=0) R3 , -N(R4)2, -N(R4)C(=0)R3, -C02R4, -C(=0)R3, -0C(=0)R3, C0N(R4)2, -SR3, -S(=0)R3, y -S(=0)2R3; cada R3 es seleccionado independientemente a partir de alquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C8 , fenilo, y bencilo; cada R4 es seleccionado independientemente a partir de hidrógeno, alquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C8, fenilo, y bencilo; o una sal, solvato, N-óxido o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable.
En algunas modalidades, X es fenilo; en donde X es sustituido con al menos 3 sustituyentes seleccionados independientemente a partir de F, Cl, Br, I, -CN, alquino, alquilalquino de C1-C6, -N02, -OH, -CF3, -0CF3, -0R3, alquilo de C1-C6, heteroalquilo de C1-C6, y haloalquilo de C1-C6. En otras modalidades, X es fenilo; en donde fenilo es sustituido con al menos 3 sustituyentes seleccionados independientemente a partir de F, Cl , Br, I, -CN, alquino, alquilalquino de C1-C6, -OH, -CF3, -0CF3, -OMe, metilo, etilo, isopropilo, y t-butilo. En una modalidad, X es sustituido con 3, 4, o 5 sustituyentes seleccionados a partir de F, Cl, Br, I, -CN, -N02, -OH, -CF3, -OCF3, -OR3, alquilo de C1-C6, heteroalquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, y fenilo. En algunas modalidades, X se selecciona a partir de 2,3,4-trifluorofenilo ; 3 , 4 , 5-trifluorofenilo; 2,4,5-trifluorofenilo ; 2 , 3 , 4 - triclorofenilo ; 3 , 4 , 5-triclorofenilo; 2 , 4 , 5-triclorofenilo; 2 , 3 , 4 - tribromofenilo ; 3,4,5-tribromofenilo; 2 , 4 , 5- tribromofenilo; 2 , 3 , 4-triyodofenilo; 3 , 4 , 5-triyodofenilo; 2 , 4 , 5-triyodofenilo; 2,3,4-trimetilfenilo ; 3 , 4 , 5-trimetilfenilo; 2 , 4 , 5 - rimetilfenilo ; 3 , 4 , 5-trimetoxifenilo; 2 , 4 , 5 - trimetoxifenilo; y 2,4,5-trifluoro-3 -metoxifenilo .
En algunas modalidades, J es un enlace y A es un fenilo, opcionalmente sustituido con al menos un sustituyente seleccionado a partir de F, Cl , Br, I, -CN, alquino, alquilalquino de C1-C6, -N02, -CF3, -OH, -0R3, -0CF3, alquilo de C1-C6, fluoroalquilo de C1-C6, heteroalquilo de C1-C6, y haloalquilo de C1-C6. En otras modalidades, A es un fenilo, opcionalmente sustituido con al menos un sustituyente seleccionado a partir de F, Cl, Br, I, -CN, -CF3, -OH, -OMe, -0CF3, metilo, y etilo. En aún otras modalidades, A se selecciona a partir de fenilo; 2 - fluorofenilo ,- 3-fluorofenilo; 4 - fluorofenilo; 2-clorofenilo; 3 -clorofenilo; 4-clorofenilo; 2 , 4 -diclorofenilo; 2 , 3 -diclorofenilo; 3,4-diclorofenilo ; 3 , 5-diclorofenilo; 2 -bromofenilo; 3-bromofenilo; 4 -bromofenilo ,· 2-yodofenilo; 3 -yodofenilo; 4-yodofenilo; 2 -metilfenilo ; 3 -metilfenilo ; 4 -metilfenilo ; 2,4-dimetilfenilo ; 2 , 3 -dimetilfenilo ; 3 , 4 -dimetilfenilo; 3,5-dimetilfenilo; 2-trifluorometilfenilo; 3-trifluorometilfenilo ; y 4 - trifluorometilfenilo . En aún algunas otras modalidades, R4 se selecciona a partir de fenilo; 4 -fluorofenilo; 2 -clorofenilo ; 3 -clorofenilo ; 4-clorofenilo; 2 , 4 -diclorofenilo ; 3 , 4 -diclorofenilo; 3,5-diclorofenilo ; 2 -bromofenilo; 4 -bromofenilo ; 4 -metilfenilo ; 3 , 4 -dimetilfenilo; y 4 -trifluorometilfenilo .
También descritos en la presente, están compuestos que tienen la estructura de Fórmula (V) : Fórmula (V) ; en donde : A es fenilo o benzofurano, en donde fenilo y benzofurano son cada uno opcionalmente sustituido con al menos un R; o A es fenilo sustituido con dos grupos R en átomos de carbono adyacentes en donde los dos grupos R y los átomos de carbono a los cuales están unidos forman un cicloalquilo de C4-C8 o heterocicloalquilo de C3-C8; R se selecciona a partir de F, Cl, Br, I, -CN, -N02, -CF3, -OH, -0R3, -0CF3, -C=CH, -C=CR3, alquilenalquino de Cl-C6, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C6, heteroalquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, tetrazolilo, heterocicloalquilo de C2-C6, fenilo, -NHS(=0)2R3, S ( =0) 2N (R4 ) 2 , -C(=0)CF3, -C(=0)NHS (=0) 2R3, -S ( =0) 2NHC (=0) R4 , N(R4)2, - (R4 ) C ( =0) R3 , -C02R4, -C(=0)R3, -0C(=0)R3f -C ( =0) N (R4 ) 2 , -SR3, -S(=0)R3, y -S (=0) 2R3 ; J es un enlace, NHS(=0)2, S(=0)2N(R4), -C(=0), C(=0)NHS (=0) 2, -S(=0)2NHC(=0) , N(R4), -N(R4)C(=0), -C02, -C(=0), -0C(=0), -C(=0)N(R4), -S, -S(=0), y -S(=0)2, alquileno de C1-C6, alquenileno de C2-C6, alquinileno de C2-C6, heteroalquileno de C1-C6, cicloalquileno de C3-C6, o heterocicloalquileno de C2-C6, en donde alquileno de C1-C6, alquenileno de C2-C6, alquinileno de C2-C6, heteroalquileno de C1-C6, cicloalquileno de C3-C6, y heterocicloalquileno de C2-C6 es opcionalmente sustituido con al menos on R; Rl es C02R2 o un bioisóstero de ácido carboxílico, en donde R2 es hidrógeno, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de Cl-C6, haloalquilo de C1-C6, fenilo o bencilo; E es F, Cl, o deuterio; Z es 0, S, NH, N-CN, o CHN02; X es W-L-fenilo, W-L-B, B, W-L-D, o D en donde fenilo, B, y D son cada uno opcionalmente sustituido con al menos on R; es NR2, 0, o un enlace; L es metileno, etileno sustituido con al menos on R, alquileno de C3-C6, alquenileno de C2-C6, alquinileno de C2-C6 , heteroalquileno de C1-C6, cicloalquileno de C3-C6, o heterocicloalquileno de C2-C6, en donde metileno, alquileno de C3-C6, alquenileno de C2-C6, alquinileno de C2-C6, heteroalquileno de C1-C6, cicloalquileno de C3-C6, y heterocicloalquileno de C2-C6 es opcionalmente sustituido con al menos on R; B se selecciona a partir de furano, tiofeno, pirrol, piridina, oxazol, tiazol, imidazol, tiadiazol, isoxazol, isotiazol, pirazol, piridazina, pirimidina, pirazina, oxadiazol, tiadiazol, triazol, indol, benzoxazol, benzotiazol, bencimidazol , benzoxadiazol , benzotiadiazol , benzotriazol , pirazolopiridina, pirrolopirimidina, indolizina, purina, imidazopiridina, pirrolopiridina, furopiridina, tienopiridina, furopirrol, furofurano, tienofurano, 1, 4-dihidropirrolopirrol, tienopirrol, tienotiofeno , quinolina, isoquinolina, furopirazol, tienopirazol , y 1 , 6 -dihidropirrolopirazol ; D es cicloalquilo de C3-C10, heterocicloalquilo de C2- C9; cada R3 es seleccionado independientemente a partir de alquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C8 , fenilo, y bencilo? cada R4 es seleccionado independientemente a partir de hidrógeno, alquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C8, fenilo, y bencilo; o una sal, solvato, N-óxido o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable.
En una modalidad, es un compuesto de Fórmula (V) en donde E es F. En otra modalidad, E es Cl . En una modalidad, es un compuesto de Fórmula (V) en donde E es deuterio. En otra modalidad, el compuesto de Fórmula (V) proporciona un compuesto enriquecido con deuterio. En aún otra modalidad, es una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula (V) en donde E es deuterio y un portador farmacéuticamente aceptable. En aún otra modalidad es un métod para tratar una enfermedad, trastorno o condición descrita en la presente, que comprende administrar a un sujeto en tal necesidad, de una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos un compuesto enriquecido con deuterio que tiene una estructura de Fórmula (V) o una sal, solvato, N-óxido o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable. En aún otra modalidad es el uso de un compuesto enriquecido con deuterio que tiene la estructura de Fórmula (V) o una sal, solvato, N-óxido o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable, para la manufactura de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad, trastorno o condición descrita en la presente. En aún una modalidad adicional, la incorporación del deuterio en la posición E proporciona metabolismo reducido de un compuesto de Fórmula (V) , comparado con un compuesto de Fórmula (V) con un hidrógeno incorporado en la posición E.
El deuterio (D o 2H) es un isótopo de hidrógeno no radioactivo, estable, y tiene un peso atómico de 2.0144. El hidrógeno ocurre naturalmente como una mezcla de los isótopos 1H (hidrógeno o protio) , D (2H o deuterio) , y T (3H o tritio) . La abundancia natural de deuterio es 0.015%. En general, en compuestos químicos con un átomo de H, el átomo de H actualmente representa una mezcla de H y D, con aproximadamente 0.015% siendo D. En algunas modalidades, los compuestos enriquecidos con deuterio descritos en la presente, se logran ya sea intercambiando protones con deuterio o vía materiales de partida y/o intermediarios enriquecidos con deuterio.
Cualquier combinación de los grupos descritos anteriormente para las varias variables se contempla en la presente .
En un aspecto, el compuesto de Fórmula (IV) se selecciona a partir de entre: Ácido 4- (4 -bromofenil) -2- (2, 3, 5- trifluoro-4 -metoxibenzamido) tiofen-3-carboxílico; Ácido 4- (4-bromofenil) -2- (2 , 3 , 5 - tricloro-4 -metoxibenzamido) tiofen- 3- carboxí1ico; Ácido 4- (4 -bromofenil) -2- (2,3, 5-tribromo-4-metoxibenzamido) tiofen-3- carboxí1ico; Ácido 4- (4-bromofenil) -2- (2, 3 , 5-triyodo-4-metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico ; Ácido 4- (4 -bromofenil) -2- (2,4, 5 - trifluoro-3 -metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico ; Ácido 4- (4-bromofenil) -2- (2,4, 5-tricloro-3-metoxibenzamido) tiofen-3-carboxílico; Ácido 4- (4 -bromofenil) -2- (2,4, 5-tribromo-3-metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico ; Ácido 4- (4 -bromofenil) -2- (2,4, 5-triyodo-3-metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico; Ácido 4- (4-bromofenil) -2- (2,3, 6 -trifluoro-4 -metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico; Ácido 4- (4-bromofenil) -2- (2,3, 6-tricloro-4-metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico; Ácido 4 - (4 -bromofenil ) -2 - (2 , 3 , 6 -tribromo-4 -metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico; Ácido 4- (4-bromofenil) -2- (2,3, 6-triyodo-4-metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico; Ácido 4- (4-bromofenil) -2- (2,4, 6-trifluoro-3 -metoxibenzamido) tiofen-3-carboxílico; Ácido 4- (4-bromofenil) -2- (2,4, 6 - trieloro-3 -metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico ; Ácido 4 - (4-bromofenil) -2- (2,4, 6- tribromo-3 -metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico ; Ácido 4- (4-bromofenil) -2- (2, 4 , 6-triyodo-3-metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico; Ácido 4- (4-clorofenil) -2- (2, 3, 5 -trifluoro-4 -metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico; Ácido 4 - (4 -clorofenil) -2 - (2,3, 5- tricloro-4 -metoxibenzamido) tiofen-3-carboxílico; Ácido 4- (4 -clorofenil) -2- (2,3, 5-tribromo-4 -metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico; Ácido 4- (4-clorofenil) -2- (2,3, 5-triyodo-4-metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico ; Ácido 4- (4-clorofenil) -2- (2,4, 5-trifluoro-3 metoxibenzamido) tiofen-3-carboxílico; Ácido 4 - ( -clorofenil ) -2 - (2 , 4 , 5- ricloro-3 metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico; Ácido 4- (4-clorofenil) -2- (2, 4 , 5-tribromo-3 metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico; Ácido 4- (4-clorofenil) -2- (2,4, 5-triyodo-3 metoxibenzamido) tiofen- 3-carboxílico; Ácido 4- (4-clorofenil) -2- (2,3, 6-trifluoro-4 metoxibenzamido) tiofen-3-carboxílico; Ácido 4- (4-clorofenil) -2- (2,3, 6-tricloro-4 metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico; Ácido 4 - (4-clorofenil ) -2 - (2,3, 6 -tribromo-4 metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico; Ácido 4- (4-clorofenil) -2- (2, 3, 6-triyodo-4 metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico ; Ácido 4- (4-clorofenil) -2- (2,4, 6-trifluoro-3 metoxibenzamido) iofen-3 -carboxílico ; Ácido 4- (4-clorofenil) -2- (2,4, 6 -tricloro-3 metoxibenzamido) tiofen-3-carboxílico; Ácido 4- (4-clorofenil) -2- (2,4, 6-tribromo-3 metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico,· Ácido 4- (4-clorofenil) -2- (2, 4, 6-triyodo-3 metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico; Ácido 4- (4-fluorofenil) -2 - (2 , 3 , 5 -trifluoro-4 metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico; Ácido 4- (4-fluorofenil) -2- (2,3, 5-tricloro-4 metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico ; Ácido 4- (4 - fluorofenil ) -2- (2,3, 5-tribromo-4 metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico; Ácido 4- (4-fluorofenil) -2- (2, 3 , 5-triyodo-4 metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico; Ácido 4- (4-fluorofenil) -2- (2,4, 5 -trifluoro-3 metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico,· Ácido 4- (4-fluorofenil) -2- (2,4, 5-tricloro-3 metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico ; Ácido 4- (4-fluorofenil) -2- (2,4, 5-tribromo-3 metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico ; Ácido 4- (4-fluorofenil) -2- (2,4, 5-triyodo-3 metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico,· Ácido 4- (4-fluorofenil) -2- (2,3, 6 -trifluoro-4 metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico ; Ácido 4- (4-fluorofenil) -2- (2,3, 6-tricloro-4 metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico; Ácido 4- (4-fluorofenil) -2- (2 , 3 , 6-tribromo-4 metoxibenzamido) tiofen- 3-carboxílico ; Ácido 4- (4-fluorofenil) -2- (2 , 3 , 6-triyodo-4 metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico ; Ácido 4- (4-fluorofenil) -2- (2,4, 6-trifluoro-3-metoxibenzamido) tiofen-3-carboxílico; Ácido 4- (4-fluorofenil) -2- (2,4, 6-tricloro-3-metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico; Ácido 4 - (4 -fluorofenil) -2- (2 , 4 , 6-tribromo-3 -metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico; Ácido 4- (4-fluorofenil) -2- (2,4, 6-triyodo-3-metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico; Ácido 4- (4-yodofenil) -2- (2, 3, 5-trifluoro-4-metoxibenzamido) tiofen-3-carboxílico; Ácido 4 - (4-yodofenil) - 2 - (2,3, 5 -trieloro-4 -metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico; Ácido 4- (4-yodofenil) -2- (2,3, 5-tribromo-4-metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico ; Ácido 4- (4-yodofenil) -2- (2, 3, 5-triyodo-4-metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico ; Ácido 4- (4-yodofenil) -2- (2,4, 5 -trifluoro-3 -metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico ; Ácido 4- (4-yodofenil) -2- (2,4, 5-tricloro-3-metoxibenzamido) tiofen-3-carboxílico,- Ácido 4- (4-yodofenil) -2- (2,4, 5-tribromo-3-metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico; Ácido 4- (4-yodofenil) -2- (2 , 4 , 5- triyodo-3-metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico; Ácido 4- (4-yodofenil) -2- (2,3, 6-trifluoro-4 -metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico; Ácido 4- (4-yodofenil) -2- (2,3, 6-tricloro-4-metoxibenzamido) tiofen- 3-carboxílico; Ácido 4- (4-yodofenil) -2- (2, 3 , 6-tribromo-4-metoxibenzamido) iofen-3 -carboxílico; Ácido 4- (4-yodofenil) -2- (2,3, 6-triyodo-4-metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico; Ácido 4 - (4-yodofenil) -2- (2,4, 6-trifluoro-3 -metoxibenzamido) tiofen-3-carboxílico; Ácido 4- (4-yodofenil) -2- (2,4, 6-tricloro-3-metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico; Ácido 4- (4-yodofenil) -2- (2,4, 6 -tribromo-3 -metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico ; Ácido 4- (4-yodofenil) -2- (2, 4 , 6-triyodo-3-metoxibenzamido) iofen-3 -carboxílico ; Ácido 4- (4 -metilfenil) -2- (2,3, 5-trifluoro-4 -metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico ; Ácido 4- (4 -metilfenil) -2- (2,3, 5 -tricloro-4 -metoxibenzamido) tiofen-3-carboxílico; Ácido 4- (4 -metilfenil) -2- (2,3, 5-tribromo-4-metoxibenzamido) iofen- 3 -carboxílico; Ácido 4- (4 -metilfenil) -2- (2,3, 5-triyodo-4-metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico ; Ácido 4- (4-metilfenil) -2- (2, 4 , 5 -trifluoro-3 -metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico; Ácido 4- (4-metilfenil) -2- (2,4, 5-tricloro-3 -metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico; Ácido 4- (4-metilfenil) -2- (2 , 4 , 5-tribromo-3 -metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico; Ácido 4- (4-metilfenil) -2- (2,4, 5-triyodo-3-metoxibenzamido) tiofen-3-carboxílico; . Ácido 4- (4-metilfenil) -2- (2,3, 6 -trifluoro-4 -metoxibenzamido) tiofen-3-carboxílico; Ácido 4- (4-metilfenil) -2- (2,3, 6 -tribromo-4 -metoxibenzamido) tiofen-3-carboxílico; Ácido 4- (4-metilfenil) -2- (2,3, 6-tricloro-4-metoxibenzamido) tiofen-3-carboxílico ; Ácido 4- (4-metilfenil) -2- (2, 3 , 6-triyodo-4-metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico; Ácido 4- (4-metilfenil) -2- (2 , 4 , 6-trifluoro-3 -metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico ; Ácido 4- (4-metilfenil) -2- (2,4, 6 -tricloro-3 -metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico; Ácido 4- (4-metilfenil) -2- (2,4, 6-tribromo-3 -metoxibenzamido) iofen- 3 -carboxílico ; Ácido 4- (4-metilfenil) -2- (2,4, 6-triyodo-3-metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico; Ácido 4- (4-metoxifenil) -2- (2 , 3 , 5-trifluoro-4 metoxibenzamido) tiofen- 3 - carbox lico ; Ácido 4- (4-metoxifenil) -2- (2,3, 5-tricloro-4 metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxilico; Ácido 4- (4-metoxifenil) -2- (2 , 3 , 5-tribromo-4 metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxilico; Ácido 4- (4 -metoxifenil) -2- (2,3, 5-triyodo-4 metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxilico; Ácido 4- (4-metoxifenil) -2- (2,4, 5-trifluoro- 3 metoxibenzamido) tiofen-3-carboxilico; Ácido 4- (4 -metoxifenil ) -2- (2,4, 5-tricloro-3 metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxilico ; Ácido 4- (4 -metoxifenil ) -2- (2,4, 5-tribromo-3 metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxilico ; Ácido 4- (4-metoxifenil) -2- (2, 4 , 5-triyodo-3 metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxilico ; Ácido 4 - (4-metoxifenil ) -2- ( 2 , 3 , 6 - trifluoro-4 metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxilico,· Ácido 4- (4-metoxifenil) - 2- (2,3, 6-tribromo-4 metoxibenzamido) tiofen-3-carboxilico; Ácido 4 - (4-metoxifenil ) - 2 - (2,3,6- trieloro-4 metoxibenzamido) tiofen- 3 - carboxilico ; Ácido 4- (4-metoxifenil) -2- (2,3, 6-triyodo-4 metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxilico; Ácido 4 - (4-metoxifenil) -2 - (2,4, 6 -trifluoro-3 -metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxilico; Ácido 4- (4 -metoxifenil) -2- (2,4, 6-tricloro-3-metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxilico; Ácido 4- (4-metoxifenil) -2- (2, 4 , 6- tribromo-3 -metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxilico; Ácido 4- (4-metoxifenil) -2- (2,4, 6-triyodo-3-metoxibenzamido) tiofen- 3 - carboxilico ; o una sal, . solvato o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable.
En otro aspecto, el compuesto de Fórmula (IV) se selecciona a partir de entre: Ácido 4- (3-bromofenil) -2- (2,3, 5 -trifluoro-4 -metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxilico; Ácido 4- (3-bromofenil) -2- (2 , 3 , 5-tricloro-4-metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxilico ; Ácido 4 - ( 3 -bromofenil ) - 2 - (2,3, 5 - tribromo-4 -metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxilico,· Ácido 4- (3-bromofenil) -2- (2,3, 5-triyodo-4-metoxibenzamido) tiofen-3-carboxílico; Ácido 4- (3-bromofenil) -2- (2,4, 5 -trifluoro-3 -metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxilico ; Ácido 4- (3-bromofenil) -2- (2,4, 5- tricloro-3 -metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxilico ; Ácido 4- (3 -bromofenil) -2- (2,4, 5-tribromo-3 -metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico; Ácido 4- (3 -bromofenil) -2- (2, 4 , 5-triyodo-3-metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico; Ácido 4- (3-bromofenil) -2- (2, 3, 6-trifluoro-4-metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico; Ácido 4- (3-bromofenil) -2- (2,3, 6-tribromo-4-metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico ; Ácido 4- (3-bromofenil) -2- (2 , 3 , 6-tricloro-4-metoxibenzamido) tiofen-3-carboxílico; Ácido 4- (3-bromofenil) -2- (2,3, 6-triyodo-4-metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico; Ácido 4 - (3-bromofenil) -2- (2,4, 6 -trifluoro-3 -metoxibenzamido) tiofen-3-carboxílico; Ácido 4- (3-bromofenil) -2- (2,4, 6 -tricloro-3 -metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico; Ácido 4- (3-bromofenil) -2- (2,4, 6-tribromo-3 -metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico; Ácido 4- (3-bromofenil) -2- (2,4, 6-triyodo-3-metoxibenzamido) tiofen-3-carboxílico; Ácido 4- (3-clorofenil) -2- (2,3, 5 -trifluoro-4 -metoxibenzamido) tiofen-3-carboxílico; Ácido 4- (3-clorofenil) -2- (2,3, 5-tricloro-4-metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico ; Ácido 4- (3-clorofenil) -2- (2 , 3 , 5- tribromo-4 -metoxibenzamido) tiofen-3-carboxílico; Ácido 4- (3-clorofenil) -2- (2,3, 5-triyodo-4-metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico; Ácido 4- (3-clorofenil) -2- (2,4, 5 -trifluoro-3 -metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico; Ácido 4- (3-clorofenil) -2- (2,4, 5-tricloro-3-metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico; Ácido 4- (3-clorofenil) -2- (2,4, 5- tribromo-3 -metoxibenzamido) tiofen-3-carboxílico; Ácido 4- (3-clorofenil) -2- (2,4, 5-triyodo-3-metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico; Ácido 4- (3-clorofenil) -2- (2,3, 6 -trifluoro-4-metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico; Ácido 4- (3-clorofenil) -2- (2, 3, 6-tribromo-4 -metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico ; Ácido 4- (3-clorofenil) -2- (2,3, 6-tricloro-4-metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico ; Ácido 4- (3-clorofenil) -2- (2,3, 6-triyodo-4-metoxibenzamido) tiofen-3-carboxílico; Ácido 4- (3-clorofenil) -2- (2,4, 6-trifluoro-3-metoxibenzamido) tiofen-3-carboxílico; Ácido 4- (3-clorofenil) -2- (2,4, 6-tricloro-3-metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico,- Ácido 4- (3-clorofenil) -2- (2,4, 6- tribromo-3 -metoxibenzamido) tiofen- 3 - carboxilico ; Ácido 4- (3-clorofenil) -2- (2 , 4 , 6-triyodo-3-metoxibenzamido) tiofen-3-carboxílico; ¦ Ácido 4- (3-fluorofenil) -2- (2 , 3 , 5-trifluoro-4-metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxilico ; Ácido 4- (3-fluorofenil) -2- (2,3, 5- tricloro-4 -metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxilico ; Ácido 4- (3-fluorofenil) -2- (2,3, 5-tribromo-4-metoxibenzamido) tiofen-3-carboxílico; Ácido 4- (3-f luorofenil) -2- (2,3, 5-triyodo-4-metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxilico,· Ácido 4- (3-fluorofenil) -2- (2,4, 5 - trifluoro-3 -metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxilico ; Ácido 4- (3-fluorofenil) -2- (2, 4, 5-tricloro-3-metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxilico ; Ácido 4- (3-fluorofenil) -2- (2,4, 5- tribromo-3 -metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxilico ; Ácido 4- (3-fluorofenil) -2- (2,4, 5-triyodo-3-metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxilico ; Ácido 4- (3-f luorofenil) -2- (2,3, 6-trifluoro-4 -metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxilico ; Ácido 4- (3 -f luorofenil) -2- (2 , 3 , 6- tricloro-4 -metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxilico ; Ácido 4- (3-fluorofenil) -2- (2,3, 6-tribromo-4-metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico; Ácido 4- (3-f luorofenil) -2- (2,3, 6-triyodo-4-metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico; Ácido 4- (3-f luorofenil) -2- (2, 4, 6 - trifluoro-3 -metoxibenzamido) tiofen-3 - carboxílico; Ácido 4- (3-fluorofenil) -2- (2,4, 6- tricloro-3 -metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico; Ácido 4- (3-fluorofenil) -2- (2,4, 6 - tribromo-3 -metoxibenzamido) tiofen-3-carboxílico; Ácido 4- (3-fluorofenil) -2- (2,4, 6-triyodo-3-metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico ; Ácido 4- (3-yodofenil) -2- (2,3, 5 - trifluoro-4 -metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico; Ácido 4- (3-yodofenil) -2- (2 , 3 , 5- tricloro-4 -metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico ; Ácido 4- (3-yodofenil) -2- (2,3, 5- tribromo-4 -metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico; Ácido 4- (3-yodofenil) -2- (2 , 3 , 5-triyodo-4-metoxibenzamido) tiofen-3-carboxílico; Ácido 4- (3-yodofenil) -2- (2,4, 5-trifluoro-3-metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico ; Ácido 4- (3-yodofenil) -2- (2 , 4 , 5- tricloro-3 -metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico ; Ácido 4- (3 -yodofenil) -2 - (2,4, 5-tribromo-3 -metoxibenzamido) tiofen-3-carboxílico; Ácido 4- (3 -yodofenil) -2- (2 , , 5-triyodo-3 -metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxilico; Ácido 4- (3-yodofenil) -2- (2, 3, 6-trifluoro-4-metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxilico ; Ácido 4- (3-yodofenil) -2- (2,3, 6-tribromo-4 -metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxilico ; Ácido 4- (3-yodofenil) -2- (2,3, 6 - tricloro-4 -metoxibenzamido) tiofen-3-carboxílico; Ácido 4- (3-yodofenil) -2- (2 , 3 , 6-triyodo-4-metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxilico ; Ácido 4- (3-yodofenil) -2- (2,4, 6 -trifluoro-3 -metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxilico ; Ácido 4- (3-yodofenil) -2- (2, 4 , 6-tricloro-3-metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxilico ; Ácido 4- (3-yodofenil) -2- (2,4, 6-tribromo-3 -metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxilico ; Ácido 4- (3-yodofenil) -2- (2,4, 6-triyodo-3-metoxibenzamido) tiofen-3-carboxilico; Ácido 4 - (3 -metilfenil) -2- (2 , 3 , 5-trifluoro-4 -metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxilico; Ácido 4- (3 -metilfenil) -2- (2,3, 5 -tricloro-4 -metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxilico ; Ácido 4- (3-metilfenil) -2- (2 , 3 , 5- tribromo-4 -metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico; Ácido 4- (3-metilfenil) -2- (2,3, 5-triyodo-4-metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico; Ácido 4- (3-metilfenil) -2- (2,4, 5 -trifluoro- 3 -metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico; Ácido 4- (3-metilfenil) -2- (2 , 4 , 5- tricloro-3 -metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico ; Ácido 4- (3-metilfenil) -2- (2,4, 5- tribromo-3 -metoxibenzamido) tiofen-3-carboxílico; Ácido 4- (3-metilfenil) -2- (2,4, 5-triyodo-3-metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico ; Ácido 4- (3-metilfenil) -2- (2,3, 6 -trifluoro-4 -metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico; Ácido 4- (3-metilfenil) -2- (2, 3, 6- tribromo-4 -metoxibenzamido) tiofen- 3 - carboxílico ; Ácido 4- (3-metilfenil) -2- (2 , 3 , 6-tricloro-4-metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico; Ácido 4- (3-metilfenil) -2- (2,3, 6-triyodo-4-metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxílico; Ácido 4- (3-metilfenil) -2- (2,4, 6-trifluoro-3-metoxibenzamido) iofen-3 -carboxílico; Ácido 4- (3-metilfenil) -2- (2,4, 6 - tricloro-3 -metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico; Ácido 4- (3-metilfenil) -2- (2 , 4 , 6-tribromo-3 metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxilico; Ácido 4- (3-metilfenil) -2- (2, 4 , 6-triyodo-3 metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxilico; Ácido 4- (3-metoxifenil) -2- (2, 3, 5 - trifluoro-4 metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxilico; Ácido 4- (3-metoxifenil) -2- (2,3, 5-tricloro-4 metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxilico ; Ácido 4 - (3-metoxifenil ) -2 - (2,3, 5 - tribromo-4 metoxibenzamido) tiofen-3-carboxílico; Ácido 4- (3-metoxifenil) -2- (2,3, 5-triyodo-4 metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxilico,· Ácido 4- (3-metoxifenil) -2- (2,4, 5 - trifluoro-3 metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxilico ; Ácido 4- (3-metoxifenil) -2- (2 , 4 , 5-tricloro-3 metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxilico ; Ácido 4 - ( 3 -metoxifenil ) - 2 - (2,4, 5- tribromo-3 metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxilico,· Ácido 4- (3-metoxifenil) -2- (2,4, 5-triyodo-3 metoxibenzamido) tiofen-3-carboxilico; Ácido 4- (3-metoxifenil) -2- (2,3, 6 -trifluoro-4 metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxilico,· Ácido 4- (3-metoxifenil) -2- (2,3, 6 -trif luoro-4 metoxibenzamido) tiofen- 3 -carboxilico; Ácido 4- (3-raetoxifenil) -2- (2,3, 6-tribromo-4 -metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico; Ácido 4- (3 -metoxifenil) -2- (2,3, 6-trieloro-4 -metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico ; Ácido 4 -( 3 -metoxifenil ) -2 -( 2 , 4 , 6 -triyodo-3 -metoxibenzamido) tiofen- 3-carboxílico; Ácido 4- (3 -metoxifenil) -2- (2,4, 6-tricloro-3-metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico; Ácido 4 - (3 -metoxifenil ) -2 - (2,4, 6 -tribromo-3 -metoxibenzamido) tiofen-3-carboxílico; Ácido 4 - ( 3 -metoxifenil ) -2 - (2,4, 6 -triyodo-3 -metoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico; O una sal, solvato o profármaco del mismo, farmacéuticamente aceptable.
También descrita en la presente, están modalidades adicionales de compuestos los cuales incluyen, pero no se limitan a, compuestos en la Tabla i: Tabla i Cmpto -A -R2 -X No. 13 4-bromofenilo -H 5 - fluoro-benzofuran-2 - ilo 14 4 -bromofenilo -H 5 -cloro-benzofuran-2- ilo 15 4-clorofenilo -H benzofuran-3 -ilo 16 4-clorofenilo -H 5-fluoro-3 -metil- benzofuran-2 - ilo 17 4 -bromofenilo -H benzofuran- 3 - ilo 18 4-clorofenilo -H 3 - fluoro-benzofuran-2 - ilo 19 4 -bromofenilo -H 2 -metil-benzofuran- 5- ilo 20 4- -H benzofuran-2 - ilo trifluorometilfenilo 21 4-fluorofenilo -H benzofuran-2 - ilo 22 4-clorofenilo -H 7 -bromo-benzofuran-2 - ilo 23 4-clorofenilo -H 7-fluoro-benzofuran-2 - ilo 24 4-clorofenilo -H 4 - fluoro-benzofuran-2 - ilo 25 4-clorofenilo -H benzofuran-5 - ilo 26 4-clorofenilo -H 5-bromo-7-metoxi- benzofuran-2 - ilo 27 4-clorofenilo -H 5-cloro-7-metoxi- benzofuran-2 -ilo 28 4-clorofenilo -H 7-metoxi-5-nitro- benzofuran- 2 - ilo 29 4-clorofenilo -H 5 -raetoxi -benzofuran-2 - ilo 30 4-clorofenilo -H 7 -clorobenzofuran- 2 - ilo 31 4-clorofenilo -H 4 -clorobenzofuran-2 - ilo 32 4 -bromofenilo -H benzofuran- 5 - ilo 33 4-clorofenilo -H 7 -etoxi -benzofuran-2 - ilo 34 4-clorofenilo -H 7 -metoxi -benzofuran-2 - ilo 35 4-etilfenilo -H benzofuran-2 -ilo Cm to -A -Ra -X No. 59 2-bromo-4- -Me benzofuran-2 - ilo fluorofenilo 60 2-hidroxi-4- -Et benzofuran-2 - ilo metilfenilo 61 4-fluoro-2- -H benzofuran-2 - ilo hidroxifenilo 62 4-acetilfenilo -H benzofuran-2 - ilo 63 4 - cloro- 3 - -H benzofuran-2 -ilo fluorofenilo 64 2-fluoro-4- -H benzofuran-2 -ilo metilfenilo 65 3 -metoxifenilo -H benzofuran-2 - ilo 66 4-cloro-3- -H benzofuran-2 -ilo metoxifenilo 67 3 , 4 -diclorofenilo -H benzofuran-2 -ilo 68 4-cloro-3-metilfenilo -H benzofuran-2 - ilo 69 3 -hidroxifenilo -H benzofuran-2 -ilo 70 4-tetrazo-l-ilfenilo -H benzofuran-2 -ilo 71 4 -pirrolofenilo -H benzofuran-2 - ilo 72 4-cloro-2-metilfenilo -H benzofuran-2 -ilo 73 2-metil-4- -H benzofuran-2 - ilo metoxifenilo 74 3 -tetrazo-l-ilfenilo -H benzofuran-2 - ilo 75 3 -cloro-4- -H benzofuran-2 - ilo fluorofenilo 76 3 , 4 -diclorofenilo -H 4 -fluoro-benzofuran-2 - ilo 77 4-cloro-3- -H 4 - fluoro-benzofuran-2 - fluorofenilo ilo 78 3 -clorofenilo -H benzofuran-2 - ilo 79 3- -H benzofuran-2 -ilo trifluorometoxifenilo 80 4-cloro-3- -H benzofuran-2 -ilo trifluorometilfenilo 81 4 -bromo-2- -H benzofuran-2 - ilo fluorofenilo 82 4-cloro-3-cianofenilo -H benzofuran-2 -ilo 83 3 -bromofenilo -H benzof ran-2 - ilo 84 4-ciano- 3 - fluoro- -H benzofuran-2 -ilo fenilo Cm to -A -R2 -X No. 85 3-f luoro-4- -H benzofuran- 2 - i lo metilfenilo 86 3 - f luoro-4 - ¦ -H 7 -metoxi -benzofuran-2 - metilfenilo ilo 87 4-metilsulfonilfenilo -H benzofuran-2 - i lo 88 3-f luoro-4- -H 7 -hidroxi -benzofuran- metilfenilo 2-ilo 89 4-ciano-3- -H benzofuran-2 - ilo fluorofenilo 90 3-tiazo-2-ilfenilo -H benzofuran-2-ilo 91 2-metil-4- -H benzofuran-2 -ilo trif luorometoxifenilo 92 4-metiltio-2- -H benzofuran- 2 - i lo trif luorometoxifenilo 93 4-clorofenilo -H 7-hidroxibenzofuran-2 - ilo 94 3 , 4-dif luorofenilo -H benzofuran-2 - ilo 95 3 , 4-dimetilfenilo -H benzofuran- 2 -ilo 96 3 -nitrofenilo -H benzofuran-2 - ilo 97 4 - cloro- 3 -nitrofenilo -H benzofuran-2 - ilo 98 2 -cloro- 4 -metilfenilo -H benzofuran- 2 - ilo 99 2 -cloro-4 -metilfenilo -H benzofuran-2 - ilo 100 4 -ciano- 2 -metilfenilo -H benzofuran-2 -ilo 101 2-fluoro-4- . -H benzofuran-2 - ilo metilsulfonilfenilo 102 2 , 4 -di f luorofenilo -H benzofuran-2 - ilo 103 2 , 3 -dimetilfenilo -H benzofuran-2 -ilo 104 2-cloro-5- -H benzofuran- 2 - ilo trif luorometilfenilo 105 4-metoxi - 2 - -H benzofuran- 2 - ilo trif luorometilfenilo 106 4-clorofenilo -H benzofuran-2 -ilo 107 4-cloro-3- (2- -H benzofuran-2 -ilo (metilamino) ) -2- oxoetoxifenilo 108 4-clc-ro-3- (2- -CH3 benzofuran-2 - ilo (metilamino) ) -2- oxoetoxifenilo 109 3 -dihidroxiamino-4 - -H benzofuran-2 -ilo metilfenilo Cm to -A -R2 -X No. 110 4- -H benzofuran-2 - ilo trifluorometoxifenilo 111 4-cianometilfenilo -H benzofuran-2 - ilo 112 3 -hidroximetil-4 - -H benzofuran-2 - ilo metilfenilo 113 4 -bromo-3 , 4- -H benzofuran-2 -ilo difluorofenilo 114 3 - fluoro- 5 - -H benzofuran-2 - ilo metilfenilo 115 4-metoximetilfenilo -H benzofuran-2 -ilo 116 4 -metiltiofenilo -H benzofuran-2 -ilo 117 4 - formilfenilo -H benzofuran-2 - ilo 118 4-clorofenilo -H 7 -ciano-benzofuran-2 - ilo 119 4 -cloro-2 - -H benzofuran-2 -ilo metoxicarbonilfenilo 120 2-carboxi-4- -H benzofuran- 2 - ilo clorofenilo 121 2 -amino-4 -cianofenilo -H benzofuran- 2 - ilo 122 4-clorofenilo -H 6 -bromo-2 -oxo-2H- chromene 123 4 -bromofenilo -H 4 - fluoro-benzofuran- 2 - ilo 124 4-clorofenilo -H 5 -meti1 -benzotien-2- ilo 125 4 -bromofenilo -H benzotien-3-ilo 126 4 -bromofenilo -H benzotien-3-ilo 127 4-tolilo -H benzotien-3-ilo 128 4-clorofenilo -H 3 -hidroxi -benzotien-2 - ilo 129 4 - fluorofenilo -H 3 -hidroxi-benzotien-2- ilo 130 4 -bromofenilo -H 5 -meti1 -benzotien-2- ilo 131 2 , 4-diclorofenilo -H benzotien-2 -ilo 132 2 -bromofenilo -H benzotien-2 -ilo 133 2 -bromofenilo -H benzotien-3-ilo 134 2 -bromofenilo -H benzotien- 5 - ilo 135 2 -bromofenilo -H 5-metil-benzotien-2- . ilo 136 3 -clorofenilo -H benzotien-2 -ilo Cmpto -A -R2 -X No. 137 3 -clorofenilo -H benzotien-5-ilo 138 3 - clorofenilo -H 5 -metil -benzotien- 2 - ilo 139 3 , 4 -dimetilfenilo -H benzotien-2 -ilo ,140 3 , 4 -dimetilfenilo -H benzotien- 5 -ilo 141 3 , -dimetilfenilo -H 5-metil -benzotien-2- ilo 142 4- -H benzotien- 5 - ilo trifluorometilfenilo 143 4- -H benzotien-2 -ilo trifluorometilfenilo 144 4- -H benzotien-3 -ilo trifluorometilfenilo 145 4- -H 5 -metil -benzotien-2 - trifluorometilfenilo ilo 146 4 -clorofenilo -H 7-fluoro-benzotien-2- ilo 147 4 -clorofenilo -H 4-cloro-benzotien-2 - ilo 148 4 - clorofenilo -H 7-cloro-benzotien-2- ilo 149 4 -clorofenilo -H 7-trifluorometil- benzotien-2-ilo 150 4 -clorofenilo -H 4-trifluorometil- benzotien-2-ilo 151 4 -bromofenilo -H 7 - fluoro-benzotien-2 - ilo También descritas en la presente, están modalidades adicionales de compuestos las cuales incluyen, pero no se limitan a, compuestos en la Tabla ii que tienen la Fórmula: Tabla ii Cm to -A -R2 -X No. 1 4-aminofenilo -H 4-fluorofenilo 2 4 -bromofenilo -H bencilo 3 3 -aminofenilo -H 4-fluorofenilo 4 3 -acetamidofenilo -H 4-fluorofenilo 5 4-acetamidofenilo -H 4-fluorofenilo 6 4 -bromofenilo -H 3 -carbamoilfenilo 7 4-tolilo -H 2 -bifenilo- 4- ilo 8 4-tolilo -H 3,4, 5-trimetoxifenilo 9 4 -etoxifenilo -H 3 - etilfenilo 10 4 -etoxifenilo -H 4-t-butilofenilo 11 4-tolilo -H 3 -nitrofenilo 12 4 -bromofenilo -H 4 -carbamoilfenilo 13 3 -dimetilaminofenilo -H 4-fluorofenilo 14 4 -bromofenilo -H 3 -etoxicarbonilamino- fenilo 15 4 -bifenilo -H 4-fluorofenilo 16 3 -carbamoilfenilo -H 4-fluorofenilo 17 4-dimetilcarbamoil- -H 4-fluorofenilo fenilo 18 4 -bromofenilo -H 4 -etoxicarbonilamino- fenilo 19 3 -dimetilcarbamoil- -H 4-fluorofenilo fenilo 20 3 -bifenilo -H 4-fluorofenilo 21 4 -carbamoilfenilo -H 4-fluorofenilo 22 4 -bromofeni lo -H 3-imidazol-2-ilofenilo 23 4 -bromofenilo -H 3- dimetilcarbamoilfenilo 24 4-oxazol-2-ilfenilo -H 4-fluorofenilo Cmpto -A -R2 -X No. 25 4-bromofenilo -H 3 -fluorofeniloureido 26 4-bromofenilo 2 - fluorofenilo CH2CH3 27 4-bromofenilo 3 - fluorofenilo CH2CH3 28 fenilo -H 3,4, 5-trimetoxifenilo 29 4-bifenilo -H 3,4, 5-trimetoxifenilo 30 4-fluorofenilo 4-tolilo CH2CH3 31 4 - fluorofenilo 4-clorofenilo CH2CH3 32 4-tolilo -H 3 -fluoro-5- trifluorometilfenilo 33 4-tolilo -H 3 -metilclorofenilo 34 4-tolilo -H 2,4, 6-trimetilfenilo 35 4-tolilo -H 4 -pirazol - 1- ilfenilo 36 4-tolilo -H 5-bromo-2 ,3,4- trimetilfenilo 37 3 , 4-diclorofenilo -H 4 -metoxibencilo 38 4-clorofenilo -H 4 -bifenilo 39 4-clorofenilo -H 4 -n-butilfenilo 40 4-tolilo -H 4 -acetamidofenilo 41 4-tolilo -H -n-butilfenilo 42 4-bromofenilo -H 4-bifenilo 43 4-tolilo -H 4 -trifluorometiltio- fenilo 44 4-tolilo -H 4 -etilfenilo 45 4-tolilo -H 4 - fluorosulfonilfenilo 46 4 -bromofenilo -H 4- trifluorometoxifenilo 47 4-bromofenilo -H 4-n-propilfenilo 48 2 , 4-diclorofenilo -H 3- trifluorometoxifenilo 49 2 , 4-diclorofenilo -H 4 -bifenilo 50 2 -bromofenilo -H 3- trifluorometoxifenilo Cmpto -A -R2 -X No. 51 3 -clorofenilo -H 4- trif luorometoxifenilo 52 3-clorofenilo -H 4-n-propilfenilo 53 3 , 4-dimetilfenilo -H 4- trif luorometoxifenilo 54 3 , 4-dimetilfenilo -H' 4-n-propilfenilo 55 4- -H 2-f luorofenilo trifluorometilfenilo 56 4- -H 2-tolilo trifluorometilfenilo 57 .4- -H 2 -clorofenilo trif luorometilfenilo 58 4- -H 4-tolilo trifluorometilfenilo 59 4- -Me 4 -bifenilo trifluorometilfenilo 60 4- -Et 2 , 4 -diclorofenilo trifluorometilfenilo 61 4- -H 3 , 4 -diclorofenilo trifluorometilfenilo 62 4- -H 2 - fenilotioetil trifluorometilfenilo 63 4- -H 4 -dimetilaminofenilo trifluorometilfenilo 64 4- -H 4-yodofenilo trifluorometilfenilo 65 4 -bromofenilo -H 3-metoxi-2 ,4,5- trif luorofenilo 66 4-hidroxifenilo -H 3 -fluorofenilo 67 3 -hidroxifenilo -H 3 -fluorofenilo 68 7 -metoxi -benzofuran- -H 3 -fluorofenilo 2-ilo 69 benzofuran- 2 - i lo -H 3 - f luorofenilo 70 4- tetrazo-l-ilofenilo -H 3 - f luorofenilo 71 4-pirrolofenilo -H 3 -f luorofenilo 72 4-clorofenilo -H 2- (3- (pirimidin-2- ilooxi) fenil ) Cmpto -A -R2 -X No. 73 4 -bromofenilo -tBu 3 , 4-difluorofenilo 74 4 -bromofenilo -H 2 -naftilo 75 7 -metoxibenzofuran-2 - -H 3 -fluorofenilo ilo 76 7 -hidroxibenzofuran- -H 3 -fluorofenilo 2-ilo 77 2 , 3 -difluoro-4- -H 3 -fluorofenilo metilfenilo 78 4-tolilo -H 5-benzo[d] [l,3]dioxol 79 2 , 4 -diclorofenilo -H 5-benzo[d] [l,3]dioxol 80 2 -bromofenilo -H 5-benzo[d] [l,3]dioxol 81 4- -H 5-benzo[d] [l,3]dioxol trifluorometilfenilo 82 4 -bromofenilo -H 3 -fluorobenciloureido 83 4-clorofenilo -H naftalen-2-ilooxi- acetamido 84 4 -clorofenilo -H naftalen-2 -ilo 85 4-metoxifenilo -H naftalen-2-ilo 86 4-clorofenilo -H 5-benzo[d] [l,3]dioxol 87 4 -clorofenilo -H 5- (2,2- difluorobenzo [d] [1,3] A través de la especificación, los grupos sustituyentes de los mismos pueden ser elegidos pa proporcionar compuestos y compuestos estables.
Otras Formas de los Compuestos Los compuestos descritos aquí pueden existir como diastereómeros , enantiómeros , u otras formas estereoisoméricas . Los compuestos presentados aquí incluyen todas las formas diastereoméricas , enantioméricas , y epiméricas, así como las mezclas de los mismos. La separación de los estereoisómeros se lleva a cabo por cromatografía o por formación diastereomérica y separación por recristalización, o cromatografía, o cualquier combinación de los mismos. (Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, "Enantiomers , Racemates and Resolutions" , John iley And Sons, Inc., 1981, la separación de los estereoisómeros como se discute en este referencia se incorpora aquí) . En otras modalidades, los estereoisómeros de obtienen por síntesis esteroselectiv .
En algunas situaciones los compuestos existen como tautómeros . Todos los tautómeros están incluidos dentro de las fórmulas descritas aquí .
Los métodos y las composiciones descritas aquí incluyen el uso de las formas amorfas así como de las formas cristalinas (conocidos también como polimorfos) . Los compuestos descritos aquí están en forma de sales aceptables farmacéuticamente. También, los metabolitos activos de estos compuestos que tienen el mismo tipo de actividad, están incluidos en el ámbito de la presente descripción. Adem s, en otras modalidades, los compuestos descritos aquí existen en formas no solvatadas y solvatadas con solventes aceptables farmacéuticamente, tales como agua, etanol, y los similares. Las formas solvatadas de los compuestos presentados aquí también se consideran como descritas en este documento.
En algunas modalidades, los compuestos descritos aquí se preparan como profármacos. Un "profármaco" se refiere a un agente que se convierte en el fármaco original in vivo. Los profármacos frecuentemente son útiles puesto que, en algunas situaciones, estos son más fáciles de administrar que el fármaco original. En alguitas modalidades, el profármaco es biodisponible por administración oral en tanto que el compuesto original no. En otras modalidades, el profármaco también tiene solubilidad mejorada en las composiciones farmacéuticas sobre el fármaco original. Un ejemplo, sin limitación, de un profármaco sería un compuesto descrito aquí, el cual se administra como un éster (el "profármaco") para facilitar la transmisión a través de la membrana celular en tanto que su solubilidad es perjudicial para la movilidad pero, el cual se hidroliza metabólicamente al ácidos carboxílico, la entidad activa, una vez dentro de las células donde su solubilidad en agua es benéfica. En otras modalidades, el profármaco es un péptidos corto (poliaminoácido) enlazado con un grupo ácido donde el péptidos es metabolizado para revelar la porción activa. En ciertas modalidades, tras la administración in vivo, un profármaco se convierte químicamente a la forma biológicamente, farmacéuticamente g terapéuticamente activa del compuesto. En ciertas modalidades, un profármaco se metaboliza enzimáticamente por uno o más pasos o proceso, hasta la forma biológicamente, farmacéuticamente o terapéuticamente activa del compuesto.
Para producir un profármaco, un compuesto activo farmacéuticamente se modifica de modo tal que el compuesto activo se regenerará tras la administración in vivo. El profármaco se puede diseñar para alterar la estabilidad metabólica o las características de transporte de un fármaco, para enmascarar ciertos efectos secundarios o su toxicidad, para mejorar el sabor de un fármaco o para alterar otras características o propiedades de un fármaco. En algunas modalidades, en virtud del conocimiento de los procesos farmacodinámicos y el metabolismo del fármaco in vivo, una vez que se determina un compuesto activo farmacéuticamente, se diseñan los profármacos. (Ver por ejemplo, Nogrady (1985) Medicinal Chemistry A biochemical Approach, Oxford University Press, Nueva York, páginas 388-392; Silverman (1992) , The Organic Chemistry of! Drug Design and Drug Action, Academic Press, Inc., San Diego, páginas 352-401, Saulnier et al., (1994), Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, Vol . 4, p, 1985; Rooseboom et al, Pharmacological Reviews , 56 : 53 - 102 , 2004; Miller et al., J. Med. Chem, Vol. 46, no. 24, 5097-5116, 2003; Aesop Cho, "Recent Advances in Oral Prodrug Discovery" , Annual Reports in Medicinal Chemistry, Vol. 41, 395-407, 2006) .
Las formas de profármaco de los compuestos descritos aquí, en donde el profármaco se metaboliza in vivo para producir un compuesto de las fórmulas (I) - (V) , como se establecen aquí, . se incluyen dentro del ámbito de las reivindicaciones. En algunos casos, algunos de los compuestos descritos aquí son profármacos para otro derivado o compuesto activo .
Los profármacos a menudo son útiles debido a que, en algunas situaciones, son fáciles de administrar que el fármaco parental . Por ejemplo, pueden estar biodisponibles por administración oral mientras que el compuesto parental no. El profármaco también puede tener solubilidad mejorada en las composiciones farmacéuticas sobre el fármaco parental. Los profármacos se pueden diseñar como derivados de fármacos reversibles, para usarse como modificadores para mejorar el transporte del fármaco a tejidos específicos del sitio. En algunas modalidades, el diseño de un profármaco aumenta su solubilidad efectiva en agua. Ver, por ejemplo, Fedorak et al., A. J. Physiol., 269:G210-218 (1005); McLoed et al., Gastroenterol, 106:405-413 (1994); Hochhaus et al., Biomed Chrom., 6:283-286 (1992); J. Larsen y H. Bundgaard, Int. J. Pharmaceutics, 37, 87 (1987); J. Larsen et al., Int. J. Pharmaceutics, 47, 103 (1988); Sinkula et al., J. Pharm. Sci., 64:181-210 (1975); T. Higuchi y V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol . 14 del A.C.S. Symposium Series; y Edward B. Roche, Bioreversible Carriers in Drugs Design, American Pharmaceutical Association and Pergamon Pres, 1987, todos incorporados aquí para tal descripción.
Los sitios de la porción del anillo aromático de los compuestos descritos aquí son susceptibles de varias reacciones metabólicas, y por lo tanto de incorporación de sustituyentes apropiados en las estructuras de anillos aromáticos, tales como, a manera de ejemplo solamente, los halógenos pueden reducir, minimizar, o eliminar esta vía metabólica .
Los compuestos descritos aquí se etiquetan isotópicamente (por ejemplo con un radioisótopo) o por otros medios, incluyendo, pero no limitados al uso de cromóforos o porciones fluorescentes, etiquetas bioluminiscentes , etiquetas fotoactivables o quimioluminiscentes .
Los compuestos descritos aquí incluyen los compuestos etiquetados isotópicamente, los cuales son idénticos a aquellos mencionados en las varias fórmulas y estructuras presentadas aquí, pero por el hecho de que uno o más átomos están reemplazados por átomos que tienen una masa atómica o un número de masa diferente de la masa atómica o del número de masa encontrado usualmente en la naturaleza. En otras modalidades, están los ejemplos de isótopos que se incorporan en los compuestos presentes incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxigeno, flúor y cloro, tales como, por ejemplo, 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 180, 170, 35S, 18F, 36C1, respectivamente. Ciertos compuestos etiquetados isotópicamente descritos aquí, por ejemplo aquellos en los cuales se incorporan los isótopos radioactivos tales como 3H y 14C, son útiles en los ensayos de distribución del fármaco y de tejido de substrato. Además, en algunas otras modalidades, la substitución con isótopos tales como el deuterio, es decir, 2H, da ciertas ventajas terapéuticas que resultan de una mayor estabilidad metabólica, tal como, por ejemplo, vida media in vivo aumentada o requerimientos de dosificación reducidos.
En otras modalidades, los compuestos descritos aquí se metabolizan tras la administración a un organismo en necesidad de producir un metabolito que se usa entonces para producir un efecto deseado, incluyendo un efecto terapéutico deseado .
Los compuestos descritos aquí se forman como, y/o se usan como, sales aceptables farmacéuticamente. El tipo de las sales aceptables farmacéuticamente, incluye, pero no se limita a: (1) sales de adición de ácidos, formadas al hacer reaccionar la forma de base libre del compuesto con un ácido orgánico aceptable farmacéuticamente, tales como, por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosforito, ácido metafosfórico, y los similares; o con un ácido orgánico, tales como, por ejemplo, ácido acético, ácido propiónico, ácido hexanoico, ácido ciclcopentanopropionico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido láctico, ácido malónico, ácido succínico, ácido málico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido trifluoroacetico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido 3- (4-hidroxibenzoil) benzoico, ácido cinámico, ácido mandélico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico ácido 1,2-etanodisulfonico, ácido 2 -hidroxietanosulfonico, ácido bencenosulfónico, ácido toluenosulfónico, ácido 2-naftalenosulfonico, ácido 4 -metilbiciclo- [2.2.2] oct-2-eno-l-carboxílico, ácido glucoheptónico, ácido 4,4'-metilenbis (ácido 3-hidroxi-2-en-l-carboxílico) , ácido 3-fenilpropiónico , ácido trimetilacético, ácido butilacetico , ácido lauril sulfúrico, ácido glucónico, ácido glutámico, ácido hidroxinaftoico, ácido salicílico, ácido esteárico, ácido mucónico, ácido butírico, ácido fenilacético, ácido fenilbutirico, ácido valproico, y los similares; (2) sales formadas cuando un protón ácido presente en el compuesto original es reemplazado por un ion metálico, por ejemplo, un ion de metal alcalino, (por ejemplo, litio, sodio, potasio) , un ion de metal alcalinotérreo (por ejemplo, magnesio o calcio, o un ion de aluminio. En algunos casos, los compuestos descritos aquí se coordinan con una base orgánica, tales como, pero no limitadas a, etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, trometamina, N-metilglucamina, diciclohexilamina, tris (hidroximetil ) metilamina . En otros casos, los compuestos escritos aquí forman sales con aminoácidos tales como, pero no limitados a, arginina, lisina, y los similares. Las bases inorgánicas aceptables usadas para formar sales con los compuestos que incluyen un protón ácido, incluyen, pero no se limitan a, hidróxido de aluminio, hidróxido de calcio, hidróxido de potasio, carbonato de sodio, hidróxido de sodio, y las similares.
Se debe entender que una referencia a una sal aceptable farmacéuticamente incluye las formas de adición de solvente o las formas cristalinas de las mismas, en particular los solvatos o polimorfos. Los solvatos contienen cantidades estequiométricas o no estequiométricas de un solvente, y en algunas modalidades se forman durante el proceso de cristalización con solventes aceptables farmacéuticamente tales como el agua, etanol y los similares. Los hidratos se forman cuando el solvente es agua, o los alcoholatos se forman cuando el solvente es alcohol. En algunas modalidades los solvatos de los compuestos descritos aquí se preparan o se forman de manera conveniente durante los procesos descritos aquí. En otras modalidades, los compuestos de proporcionados aquí existen en formas no solvatadas así como solvatadas. En general, las formas solvatadas se consideran equivalentes a las formas no solvatadas, para los propósitos de los compuestos y los métodos proporcionados aquí .
En otras modalidades/ los compuestos descritos aquí, tales como los compuestos de las Fórmulas (I)-(V), están en varias formas, incluyendo, pero no limitadas a, formas amorfas, formas pulverizadas, y formas nanoparticuladas . Además, los compuestos descritos aquí incluyen las formas cristalinas, conocidas también como polimorfos. Los polimorfos incluyen los diferentes arreglos de empaquetado cristalino de la misma composición elemental de un compuesto. Los polimorfos usualmente tienen diferentes patrones de difracción de rayos X, puntos de fusión, densidad, dureza, forma cristalina, propiedades ópticas, estabilidad, y solubilidad. Varios factores, tales como el solvente de recristalización, la velocidad de cristalización, y la temperatura de almacenamiento pueden provocar que domine una sola forma cristalina.
La selección y la caracterización de las sales, polimorfos, y/o solvatos aceptables farmacéuticamente, se logran usando una variedad de técnicas, incluyendo, pero no limitadas a, análisis térmico, difracción de rayos X, espectroscopia, sorción de vapor, y microscopía. Los métodos de análisis térmico tratan la degradación termoquímica o los procesos termofísicos incluyen, pero no se limitan a, transiciones polimórficas , y tales métodos se usan para analizar las relaciones entre las formas polimórficas , determinar la pérdida de peso, encontrar la temperatura de transición vitrea, o para los estudios de compatibilidad de excipientes. Tales métodos incluyen, pero no se limitan a, calorimetría diferencial de barrido (DSC) . Calorimetría Diferencial de Barrido Modulada (MDSC) , análisis de Termogravimetría (TGA) , y análisis Termogravimétricos e Infrarrojos (TG/IR) , los métodos de difracción de rayos X incluyen, pero no se limitan a, difractómetros de cristales individuales y de polvo y fuentes de sincrotrones. Las varias técnicas espectroscópicas usadas incluyen, pero no se limitan a Raman, FTIR, UV-VIS y RMN (en estado líquido y sólido) . Las varias técnicas microscópicas incluyen, pero no se limitan a microscopía de luz polarizada, Microscopía Electrónica de Barrido (SEM) con Análisis de Rayos X Dispersiva de Energía (EDX) , Microscopía Electrónica de Barrido Ambiental con EDX (en una atmosfera de gas o de vapor de agua) , microscopía de IR, y microscopía Raman.
Síntesis de los Compuestos En algunas modalidades, la síntesis de los compuestos descritos aquí se logra usando los medios descritos en la literatura química, usando los métodos descritos aquí, o por una combinación de los mismos.
En otras modalidades, los materiales y los reactivos iniciales usados para la síntesis de los compuestos descritos aquí, se sintetizan o se obtienen de fuentes comerciales, tales como, pero no limitadas a, Sigma-Aldrich, FischerScientific (Fischer Chemicals), y AcrosOrganics .
En modalidades adicionales, los compuestos descritos aquí, y otros compuestos relacionados que tienen diferentes sustituyentes se sintetizan usando las técnicas y los materiales descritos aquí, así como otras técnicas, tales como se describen, por ejemplo, en Fieser y Fieser's Reagents for Organic Synthesis, Volúmenes 1-17 (John Wiley and Sons, 1991); Rodd' s Chemistry of Carbón Compounds, Volúmenes 1-5 y los Suplementos (Elsevier Science Publishers, 1989) ; Organic Reactions, Volúmenes 1-40 (John Wiley and Sons, 1991) , Larock's Comprehensive Organic Transformations (VCH Publishers Inc., 1989), March ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY 4ta Ed., (Wiley, 1992); Carey y Sundberg, ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY 4ta Ed . , Vols . A y B (Plenum 2000, 2001), y Green y Wuts, PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SYBTHESIS 3ra Ed., (Wiley 1999) (todas las cuales se incorporan aquí como referencia) . Los métodos generales para la preparación de los compuestos como se describen aquí, se derivan de las reacciones conocidas, y en algunas modalidades, las reacciones se modifican mediante el uso de los reactivos y las condiciones apropiadas, para la introducción de las varias porciones encontradas en las fórmulas como se proporcionan aquí. Como una guía, se utilizan los siguientes métodos sintéticos.
Formación de Enlaces Covalentes por Reacción de un Electrófilo con un Nucleófilo Los compuestos descritos aquí se modifican usando varios electrófilos y/o nucleófilos para formar nuevos grupos funcionales o sustituyentes . La Tabla 2 titulada "Ejemplos de Enlaces Covalentes y Precursores de los Mismos" lista los ejemplos seleccionados, no limitantes de los enlaces covalentes y los grupos funcionales precursores los cuales proporcionan los enlaces covalentes. La Tabla 2 se usa como una guía hacia la variedad de combinaciones de electrófilos y nucleófilos disponibles, que proporcionan enlaces covalentes. Los grupos funcionales precursores se muestran como grupos electrofílicos y grupos nucleofílicos .
Tabla 6: Ejemplos de los Enlaces Covalentes y Precursores de los Mismos Uso de Grupos Protectores En algunas modalidades, en las reacciones descritas, es necesario proteger los grupos funcionales reactivos, por ejemplo, los grupos hidroxi, amino, imino, tio o carboxi, cundo estos se desean en el producto final, para evitar su participación indebida en reacciones. Los grupos protectores e usan para bloquear algunos o todos los radicales y evitar que tales grupos participen en reacciones químicas hasta que se eliminan los grupos protectores. En algunas modalidades, cada grupo protector se puede remover por diferentes medios.
Los grupos protectores que se separan bajo condiciones dispares de reacción total cumplen el requerimiento de la eliminación diferencial.
Los grupos protectores se eliminan por condiciones de reducción acidas, básicas (tales como, por ejemplo, hidrogenólisis) y/o condiciones oxidantes. En otras modalidades, los grupos tales como el tritilo, dimetoxitritilo, acetal y t-butildimetilsililo son lábiles a ácidos y se usan para proteger los radicales reactivos carboxi e hidroxi en presencia de grupos amino protegidos con grupos Cbz , los cuales se pueden eliminar por hidrogenólisis, y grupos Fmoc , los cuales son lábiles en bases. Los radicales reactivos ácido carboxílico e hidróxido se bloquean con grupos lábiles a bases, tales como, pero no limitados a, metilo, etilo, y acetilo en presencia de aminas bloqueadas con grupos lábiles a ácidos tales como carbamato de t-butilo o con carbamatos que son estables tanto en ácidos como bases, pero que se pueden eliminar hidrollticamente .
Los radicales reactivos ácido carboxílico e hidróxido se pueden bloquear con grupos protectores que se pueden eliminar hidrollticamente, tales como el grupo bencilo, en tanto que los grupos amina que son capaces de enlazamiento de hidrógeno con ácidos se bloquean con grupos lábiles a bases tales como Fmoc . En otras modalidades, los radicales reactivos ácidos carboxílicos son protegidos por conversión a compuestos simples de éster, como se ejemplifica aquí, los cuales incluyen la conversión a alquil ésteres, o estos se bloquean con grupos protectores que se pueden remover oxidativamente tales como 2 , 4-dimetoxibencilo, en tanto que los grupos amino coexistentes se bloquean con silil carbamatos lábiles a fluoruros.
Los grupos bloqueadores de alilo son útiles en presencia de los grupos protectores de ácidos y bases ya que los primeros son estables y subsecuentemente se eliminan por catálisis con metales o pi-ácidos. Por ejemplo, un ácido carboxílico bloqueado por alilo se desprotege con una reacción catalizada por PdO en presencia de grupos protectores de carbamato de t -butilo lábil a ácidos o amina acetato lábil a bases. Aun otra forma de grupo protector es una resina a la cual se enlaza un compuesto o intermediario.
A medida que el residuo se enlaza a la resina, ese grupo funcional se bloquea y no puede reaccionar. Una vez liberado de la resina, el grupo funcional está disponible para reaccionar.
Típicamente, en algunas modalidades, los grupos de bloqueo/protección se seleccionan de: Otros grupos protectores, más una descripción detallada de las técnicas aplicables a la creación de los grupos protectores y su eliminación, se describen en Greene y Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3ra Ed. , john Wiley & Sons, Nueva York, Y, 1999, y Kocienski, Protective Groups, Thieme Verlag, Nueva York, NY, 1994, la discusión de los grupos protectores en las publicaciones de arriba se incorporan aquí como referencia para tal descripción.
Síntesis General La preparación de los compuestos de fórmula (I) - (V) descritos aquí se puede realizar por métodos reconocidos en el campo, tales como se describen por Koebel et al . J. Med.
Chem, 1975, vol. 18, no. 2, 192-194; Gewald, K; Schinke, E . ; Bottcher, H. Chem. Ber. 1966, 99, 94-100; Sabnis, R. W, Sulfur Rep, 1994, 16, 1-17; Sabnis, R. W. et al . , J. Heterocyclic Chem. 1999, 36, 333; Gernot A. Eller, Wolfgang Holzer Molecules 2006, 11, 371-376; Michael G. et al . , J. Med. Chem. ; 1999; 42 (26) pp 5437 - 5447, todas las cuales están incorporadas aquí como referencia.
En una modalidad, los compuestos descritos aquí se preparan por la secuencia mostrada en el Esquema A.
Esquema A. Ejemplo no limitante de la Síntesis de Compuestos de la Fórmula (I) - (V) .
Una condensación Knoevenagel entre las cetonas de la estructura A-l y los cianoacetatos de la estructura A-2 forma las bases de Schiff de la estructura A-3. Por ejemplos las cetonas de la estructura A-l se hacen reaccionar con cianoacetatos de la estructura A-2 en la presencia de una amina, tales como por ejemplo, morfolina en un solvente tal como tolueno bajo condiciones de deshidratación, tales como en la presencia de tamices moleculares 4 A, para formar la base de Schiff de la estructura A-3. Las bases de Schiff de la estructura A-3 se hacen reaccionar bajo las condiciones de reacción de Gewald (azufre (S8) , morfolino en un solvente tal como etanol y tolueno) para formar tiofenos de la estructura A-4. Los tiofenos de la estructura A-4 se hacen reaccionar entonces con una variedad de cloruros de ácidos carboxílicos para proporcionar compuestos de Fórmulas (I)-(V) . En otra modalidad, los tiofenos de la estructura A-4 se acoplan con, ácidos carboxílicos en presencia de un agente de acoplamiento, tal como, por ejemplo, diciclohexilcarbodiimida (DCC) , diisopropil carbodiimida (DIC) , l-etil-3(3-dimetilaminopropil) carbodiimida (EDCI) , N-hidroxibenzotriazol (HOBT) , N-hidroxisuccinimida (HOSu) , 4 -nitrofenol , pentaf luorofenol , tetrafluoroborato de 2- (lH-benzotriazol-1-il) -1, 1, 3, 3-tetrametiluronio (TBTU) , hexafluorofosfato de 0-benzotriazol-?,?,?' ,?' - tetrametiluronio (HBTU) , hexafluorofosfato de benzotriazol-l-il-oxi-tris- (dimetilamino) -fosfonio (BOP) , hexaf luorofosfato de benzotriazol- 1- il-oxi- tris-pirrolidinofosfonio , hexaf luorofosfato de bromo-trispirrolidino-fosfonio, tetraf luoroborato de 2- (5-norborneno-2 , 3 -dicarboximido) -1, 1, 3 , 3-tetrametiluronio (TNTU) , tetraf luoroborato de 0- (N-succinimidil ) -1,1,3, 3-tetrametiluronio (TSTU) , hexafluorofosfato de tetrametilfluoroformamidinio y similares, para proporcionar compuestos de las fórmulas (I) - (V) .
En otra modalidad, los compuestos de fórmula (I) - (V) se preparan siguiendo los procedimientos bosquejados en el Esquema B.
Esquema B. Ejemplo no limitante de la Síntesis de los Compuestos de Fórmulas (I) - (V) Las cetonas de la estructura A-1, cianoacetatos de la estructura A- 2, azufre elemental, morfolina y etanol se mezclan y agitan a temperatura ambiente para formar tiofenos de la estructura A-4. Los tiofenos de la estructura A-4 se hacen reaccionar entonces con ácidos carboxílieos activados, tales como cloruros ácidos, para formar amidas de la estructura A- 5. La hidrólisis de la funcionalidad éster de las amidas de la estructura A- 5 proporciona los correspondientes ácidos carboxílieos .
Los esquemas presentados aquí son meramente ilustrativos de algunos métodos por los cuales los compuestos descritos aquí se pueden sintetizar, y se puedan hacer varias modificaciones a estos esquemas.
A través de toda la especificación, los grupos y los sustituyentes de los mismos se pueden elegir para proporcionar radicales estables y compuestos.
En un aspecto es un método de preparar un compuesto de fórmula (I) que comprende: a) hacer reaccionar un derivado de trifluorometilsulfoniloxi tiofeno protegido con éster; b) eliminar el grupo protegido de éster para dar como resultado el compuesto de fórmula (I) . En una modalidad, el derivado de tiofeno protegido con éster es un grupo t-butil éster. En otra modalidad, el derivado de ácido borónico es ácido trifluorometoxifenil borónico. En otra modalidad, el catalizador es un catalizador de paladio . En aún otra modalidad, el catalizador de paladio es tetrakis ( trifenilfosfina) paladio (0) . En aún otra modalidad, la reacción se realiza en una mezcla bifásica. En aún otra modalidad, la reacción se realiza a una temperatura elevada. En otra modalidad, la temperatura es entre aproximadamente 50 a aproximadamente 80°C. En aún otra modalidad, la temperatura es de aproximadamente 70°C. En aún otra modalidad, siguiendo la reacción del derivado de ácido borónico con el derivado de tiofeno protegido con éster, el producto resultante se purifica por cromatografía. En aún otra modalidad, un ácido se usa para eliminar el grupo protector de éster. En aún otra modalidad, el ácido se ácido trifluoroacético .
Cierta Terminología A menos que se especifique de otra manera, todos los términos técnicos y científicos usados aquí tienen el mismo significado como se entiende comúnmente en el campo al cual pertenece la materia objeto reivindicada. En le caso de que haya una pluralidad de definiciones para los términos de este documento, aquellos de esta sección prevalecen. Todas las patentes, solicitudes de patente, publicaciones y secuencias de nucleótidos y aminoácidos publicadas (por ejemplo, las secuencias disponibles en GenBank u otras bases de datos) mencionados aquí, se incorporan como referencia. Cuando se hace referencia un URL u otros de tales identificadores o direcciones, se entiende que tales identificadores pueden cambiar y la información particular en la red internacional puede ir y venir, pero la información equivalente se encuentra mediante búsquedas en la red internacional. La referencia a las mismas evidencia la disponibilidad y la diseminación publica de tal información.
Se debe entender que la descripción general anterior y la siguiente descripción detallada son ejemplares y explicativas solamente, y no son restrictivas de ninguna materia objeto reivindicada. En esta solicitud, el uso del singular incluye el plural a menos que se establezca de otra manera. Se debe notar que, como se usa en la especificación y las reivindicaciones anexas, las formas plurales "un", "uno", "una" y "el" , "la" incluye los referentes plurales a menos que el contexto lo dicte claramente de otra manera. En esta solicitud, el uso de "o" significa y/o" a menos que se establezca de otra manera. Además, el uso del término "que incluye" así como otras formas, tales como "incluye", "incluir" e "incluido" no es limitante.
Los encabezados de sección usados aquí son para propósitos de organización solamente y no se deben considerar como limitantes para la materia objeto reivindicada.
La definición de los términos químicos estándar se encuentra en los trabajos de referencia, incluyendo, pero no limitados a Carey y Sundberg "ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY 4ta ED." Vols. A (2000) y B(2001) , Plenum Press, Nueva York. Amenos que se indique de otra manera, se emplean los métodos convencionales de la espectroscopia de masas, NMR, PLC, química de proteínas, bioquímica, técnicas de ADN recombinante y farmacología, dentro de la habilidades de la técnica.
A menos que se proporcionen definiciones especificas, la nomenclatura específica en conexión con, y los procedimientos y las técnicas de laboratorio de, la química analítica, la química orgánica sintética, y la química medicinal y farmacéutica descritas aquí, son aquellas conocidas en la técnica. En algunas mods, se usan las técnicas estándar para las síntesis orgánicas, los análisis químicos, la preparación farmacéutica, la formulación, y la administración, y el tratamiento de los pacientes. En otras modalidades, se usan las técnicas estándar para el ADN recombinante , la síntesis de oligonucleótidos , y el cultivo y transformación de tejidos (por ejemplo, electroporación, lipofección) . En otras modalidades, se llevan a cabo las reacciones y las técnicas de purificación, por ejemplo, usando las especificaciones de los fabricantes de los equipos o como se lleva a cabo comúnmente en la técnica o como se describe aquí. Las técnicas y los procedimientos anteriores se llevan a cabo por lo general para los métodos convencionales y como se describe en las varias referencias generales y más específicas que se citan y se discuten a través de la presente especificación.
Se debe entender que los métodos y las composiciones descritas aquí, no se limitan a la metodología, los protocolos, las líneas celulares, los constructos, y los reactivos particulares descritos aquí, y en si pueden variar. También se debe entender que la terminología usada aquí tiene el propósito de describir las modalidades particulares solamente, y no se pretende limitar el ámbito de los métodos, los compuestos, y las composiciones descritos aquí.
Como se usa aquí, Cl-Cx incluye C1-C2, C1-C3...C1-CX . Cl-Cx se refiere al número de átomos de carbono que constituyen la porción a la cual designa (excluyendo los sustituyentes opcionales) .
Un grupo "alquilo" se refiere a un grupo hidrocarburo alifático. En algunas modalidades, los grupos alquilo incluyen o no incluyen unidades de instauración. En algunas modalidades, los radicales alquilo son gruidos "alquilo saturados" , lo cual significa que estos no contienen ninguna unidad de instauración (es decir, un enlace doble carbono-carbono o un enlace triple carbono-carbono) . En otras modalidades, los grupos alquilo también son radicales "alquilo insaturados" , lo cual significa que estos contienen al menos una unidad de instauración. En algunas modalidades, los radicales alquilo, ya sea saturados o insaturados, son ramificados, de cadena lineal o cíclicos.
En otras modalidades, los grupos "alquilo" tienen 1 a 6 átomos de carbono (siempre que aparezca aquí, un rango numérico, tal como "1 a 6" se refiere a cada entero en el rango dado, por ejemplo, "1 a 6 átomos de carbono" significa que el grupo consiste de 1 átomo de carbono, 2 átomos de carbono, 3 a tomos de carbono, etc., hasta e incluyendo 6 átomos de carbono, aunque la presente definición también cubre la aparición del término "alquilo" donde no se designa ningún rango numérico) . Los grupos alquilo de los compuestos descritos aquí se designan como "alquilo de C1-C6" o designaciones similares. A manera de ejemplo solamente "alquilo de C1-C6" indica que hay uno a ser átomos de carbono en la cadena alquídica, es decir, la cadena alquídica se selecciona del grupo que consiste de metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n=butilo, iso-butilo, sec-butilo, t-butilo, n-pentilo, iso-pentilo, neo-pentilo, hexilo, propen-3-ilo (alilo) , ciclopropilmetilo, ciclobutilmetilo, ciclopentilmetilo , ciclohexilmetilo . En algunas modalidades, los grupos alquilo están substituidos o no substituidos. En otras modalidades, dependiendo de la estructura, un grupo alquilo es un monorradical o un dirradical (es decir, u gripo alquileno) .
Un "alcoxi" se refiere a un grupo "-O-alquilo" donde, el alquilo es como se define aquí.
El término "alquenilo" se refiere a ün tipo de grupos alquilo en los cuales los primeros dos átomos de los grupos alquilo forman un enlace doble que no es parte de un agrupo aromático. Es decir, un grupo alquenilo comienza con los átomos -C(R)=CR2, en donde R se refiere a las porciones restantes del grupo alquenilo, las cuales son iguales o diferentes. Los ejemplos no limitantes de grupos alquenilo incluyen -CH=CH2, -C(CH3)=CH2, -CH=CHCH3, -CH=C(CH3)2 y -C (CH3 ) =CHCH3. Los radicales alquenilo son ramificados, de cadena lineal, o cíclicos (en cuyo caso, también serían conocidos como grupos "cicloalquenilo" ) . Los grupos alquenilo pueden tener 2 a 6 átomos de carbono. Los grupos alquenilo son substituidos o no substituidos. En algunas otras modalidades, dependiendo de la estructura, un grupo alquenilo es monorradical o dirradical (es decir, un grupo alquenileno) .
El término "alquinilo" se refiere a un tipo de grupos alquilo en los cuales los primeros dos átomos de los grupos alquilo forman un enlace triple. Es decir, un grupo alquinilo comienza con los átomos -C=C-R en donde R se refiere a las porciones restantes de los grupos alquinilo. Los ejemplos no limitantes de los grupos alquinilo incluyen -C=CH, -C=CCH3, -C=CCH3CH3 y -C=CCH2CH2CH3. En otras modalidades, la porción "R" de los radicales alquinilo es ramificada, de cadena lineal, o cíclica, un grupo alquinilo puede tener 2 a 6 átomos de carbono. Los grupos alquinilo están substituidos o no substituidos. En algunas modalidades, dependiendo de su estructura, un grupo alquinilo es un monorradical o un dirradical (es decir, un grupo alquinileno) .
"Amino" se refiere aun grupo -NH2.
El término "alquilamina" o "alquilamino" se refiere al grupo -N (alquil) xHy, donde el alquilo es como se define aquí y x e Y se seleccionan del grupo x=l, y=l y x=2, y=0. en algunas modalidades, cuando x=2, los grupos alquilo, tomados junto con el nitrógeno al cual se enlazan, forman opcionalmente un sistema de anillo cíclico. "Dialquilamino" se refiere a un grupo - (alquilo) 2 , donde el alquilo es como se define aquí.
El término "aromático" se refiere a un anillo plano que tiene un sistema de electrones p deslocalizado que contiene 4?+2p electrones," en donde n es un' entero. En otras modalidades, los anillos aromáticos se forman de cinco, seis, siete, ocho, nueve, o más de nueve átomos de carbono. En algunas otras modalidades, los aromáticos están substituidos opcionalmente. El término "aromático" incluye tanto grupos arilo (por ejemplo, fenilo, naftalenilo) y los grupos heteroarilo (por ejemplo, piridinilo, quinolinilo) .
Como se usa aquí, el término "arilo" se reifere a un anillo aromático en donde cada uno de los átomos que forman el anillo es un átomo de carbono. En otras modalidades, los grupos arilo están substituidos opcionalmente. Los ejemplos de grupos arilo incluyen, pero no se limitan a fenilo, y naftalenilo. En otras modalidades, dependiendo de su estructura, un grupo arilo es un monorradical o un dirradical (es decir, un grupo amileno) .
El término "arilalquilo" como se usa aquí, significa un grupo arilo, como se define aquí, unido a la porción molecular principal a través de un grupo alquilo, como se define aquí. Los ejemplos representativos de arilalquilos incluyen, pero no se limitan a, bencilo, 2-feniletilo, fenilpropilo, l-metil-3 -fenilpropilo, y 2-naft-2 -iletilo .
"Carboxi" se refiere a -C02H. En algunas modalidades, los radicales carboxi pueden ser reemplazados con un "bioisóstero de ácido carboxílico" , lo cual se refiere a un grupo funcional o radical que exhibe propiedades físicas y/o químicas similares que un radical ácido carboxílico. Un bioisóstero de ácido carboxílico tiene propiedades biológicas similares que las de un grupo ácido carboxílico. Un compuesto con un radical ácido carboxílico puede tener el radical ácido carboxílico intercambiado con un bioisóstero de ácido carboxílico y tiene propiedades físicas y/o biológicas similares, cuando se compara con los compuestos que contienen ácido carboxílico. Por ejemplo, en una modalidad, un bioisóstero de ácido carboxílico se ionizará a pH fisiológico casi en la misma extensión que un grupo ácido carboxílico. Los ejemplos de bioisósteros de un ácido carboxílico incluyen, pero no se limitan a, y los similares El término "cicloalquilo" se refiere a un radical monocíclico o policíclico, no aromático, en donde cada uno de los átomos que forman los anillos (es decir, los átomos del esqueleto) es un átomo de carbono. En algunas modalidades, los cicloalquilos están saturados, o parcialmente insaturados. En otras modalidades, los cicloalquilos están fusionados con un anillo aromático (en cuyo caso el cicloalquilo se enlaza a través de un átomo de carbono de anillo no aromático) . Los grupos cicloalquilo incluyen los grupos que tienen 3 a 10 átomos del anillo. Los ejemplos ilustrativos de los grupos cicloalquilo incluyen, pero no se limitan a, los siguientes radicales: Los términos "heteroarilo" o, alternativamente "heteroaromático" se refieren a un grupo arilo que incluye uno o más heteroátomos del anillo seleccionados de hidrógeno, oxigeno, y azufre. Un radical "heteroaromático" o "heteroarilo que contiene N se refiere a un grupo aromático en el cual al menos uno de los átomos de esqueleto del anillo es un átomo de nitrógeno. En algunas modalidades, los grupos heteroarilo policíclicos están fusionados o no fusionados. Los ejemplos ilustrativos de los grupos heteroarilo incluyen los siguientes radicales: O.tf.CO.CO.CO. 000 O.O coco caco y similares.
Un grupo "heterocicloalquilo" o "heteroaliciclico" se refiere a un grupo cicloalquilo, en donde al menos un átomo del anillo esquelético es un heteroátomo seleccionado de nitrógeno, oxígeno, y azufre. En algunas modalidades, los radicales están fusionados con un arilo o heteroarilo. Los ejemplos ilustrativos de grupos heterocicloalquilo, llamados también como heterociclos no aromáticos, incluyen: y similares. El término heteroaliciclico también incluye todas las formas de anillos de los carbohidratos, incluyendo, pero no limitadas a los monosacáridos , los disacáridos y los oligosacáridos . A menos que se señales de otra manera, los heterocicloalquilos tienen de 2 a 10 átomos de carbono en el anillo. Se entiende que cuando se hace referencia al número de átomos de carbono en un heterocicloalquilo, el número de átomos de carbono en el heterocicloalquilo no es el mismo que el número total de átomos incluyendo los heteroátomos que constituyen el heterocicloalquilo (es decir, los átomos del esqueleto del anillo heterocicloalquilo) .
El término "halo" o, alternativamente . "halógeno" significa flúor, cloro, bromo, e yodo.
El término "haloalquilo" se refiere a un grupo alquilo que está substituido con uno o más halógenos. En algunas modalidades, los halógenos son los mismos o estos son diferentes. Los ejemplos no limitantes de haloalquilos incluyen -CH2C1, -CF3, -CHF2, -CH2CF3, -CF2CF3, -CF(CH3)3, y los similares.
Los términos "f luoroalquilo" y fluoroalcoxi" incluyen los grupos alquilo y alcoxi, respectivamente, que están substituidos con uno o más átomos de flúor. Los ejemplos no limitantes de f luoroalquilos incluyen, -CF3, -CHF2, -CH2F, -CH2CF3, -CF2CF3 , -CF2CF2CF3, -CF(CH3)3, y los similares. Los ejemplos no limitantes de grupos f luoroalcoxi , incluyen -0CF3, -0CHF2, -0CH2F, -OCH2CF3, -OCF2CF3, -OCF2CF3, OCF2CF2CF3, -OCF(CH3)2, y los similares.
El término "heteroalquilo" se refiere a un radical alquilo donde uno o más átomos de la cadena esquelética se seleccionan de un átomo diferente al carbono, por ejemplo, oxígeno, nitrógeno, azufre, fósforo, silicio, o combinaciones de los mismos. En algunas modalidades, el o los heteroátomos se colocan en cualquier posición interior del grupo heteroalquilo. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a CH2-0-CH3, -CH2-CH2-0-CH3 , -CH2-NH-CH3, -CH2-CH2-NH-CH3 , CH2-N(CH3) -CH3, -CH2-CH2-NH-CH3 , -CH2 -CH2 - (CH3 ) -CH3, -CH2-S-CH2-CH3, -CH2-CH2 , -S (O) -CH3 , - CH2 - CH2 -S (O) 2 -CH3 , -CH2-NH-OCH3, -CH2-0-SÍ (CH3) 3, -CH2 -CH=N-OCH3 , y -CH=CH-N (CH3 ) -CH3. En algunas modalidades, hasta dos heteroátomos son consecutivos, tal como, a manera de ejemplo, -CH2-NH-OCH3 y -CH2 -O-Si (CH3 ) 3. Excluyendo el número de heteroátomos un "heteroalquilo" puede tener de 1 a 6 átomos de carbono.
El término "enlace" o "enlace simple" se refiere a un enlace químico entre dos átomos, o dos radicales cuando los átomos unidos por el enlace se consideran parte de una subestructura más grande.
El término "radical" se refiere a un segmento específico o un grupo funcional de una molécula. Los radicales químicos frecuentemente son entidades químicas reconocidas integradas en o unidas a una molécula.
Como se usa aquí, el sustituyente "R" que aparece por si solo y sin un número de designación se refiere a un sustituyente seleccionado de entre, alquilo, haloalquilo, heteroalquilo, alquenilo, cicloalquilo, arilo, heteroarilo (enlazado a través de un carbono del anillo) , y heterocicloalquilo .
El término "substituido opcionalmente" o "sustituido" significa que el grupo referenciado puede estar sustituido con uno o más grupos adicionales, seleccionados individualmente e independientemente de alquilo, cicloalquilo, arilo, heteroarilo, heterocicloalquilo, -OH, alcoxi, ariloxi, alquiltio, ariltio, alquilsulfoxido, arilsulfoxido , alquilsulfona, arilsulfona, -CN, halo, acilo, aciloxi, -C02H, -C02-alquilo, nitro haloalquilo, fluoroalquilo , y amino , incluyendo los grupos amino mono y disustituidos (por ejemplo, -NH2, -NHR, -N®2), y los derivados protegidos de los mismos. A manera de ejemplo, un sustituyente opcional es LsRs , en donde cada Ls se selecciona independientemente de un enlace, -O-, -C(=0)-, -S-, -S(=0)-, -S(=0)2-, -NH-, -NHC(O)-, -C(0)NH-, S(=0)2NH-, -NHS(=0)2, -OC(0)NH-, -NHC(0)0-, -(alquilo de CT-C6)-, o -(alquenilo de C2-C6)-; y cada Rs se selecciona independientemente de entre H, (alquilo de C1-C6) , (cicloalquilo de C3-C8) , arilo, heteroarilo, heterocicloalquilo, y heterocicloalquilo de Cl-C6. En algunas modalidades, los grupos protectores que forman los derivados protectores de los sustituyentes de arriba se encuentran en las fuentes tales como Greene y Wuts de arriba.
Los métodos y las formulaciones descritas aquí incluyen el uso de las formas cristalinas (conocidas también como polimorfos) , o las sales aceptables farmacéuticamente de los compuestos que tienen la estructura de la Fórmula (I) , así como los metabolitos activos de estos compuestos que tienen el mismo tipo de actividad. En algunas situaciones, los compuestos existen como tautómeros . Todos los tautómeros están incluidos dentro del ámbito de los compuestos presentados aquí. En algunas modalidades, los compuestos descritos aquí existen en las formas no solvatada así como solvatada con solventes aceptables farmacéuticamente tales como agua, etanol, y los similares. Las formas solvatadas de los compuestos presentados aquí también están consideradas para ser descritas aquí .
Los términos "equipo" y "articulo de fabricación" se usan como sinónimos.
El término "individuo" o "paciente" abarca mamíferos y no mamíferos. Los ejemplos de mamíferos incluyen, pero no se limitan a, cualquier miembro de la Clase Mammalian o mamíferos: humanos, primates no humanos tales como chimpancés, y otras especies de simios y monos; animales de granja tales como reses, caballos, ovejas, cabras, cerdos; animales domésticos tales como, conejos, perros, y gatos; animales de laboratorio, incluyendo roedores, tales como ratas, ratones, y cerdos de guinea, y los similares. Los ejemplos de no mamíferos incluyen, pero no se limitan a, pájaros, peces, y los similares. En una modalidad de los métodos y las composiciones proporcionadas aquí, el mamífero es un humano.
Los términos "tratar" , "tratado" o "tratamiento" como se usan aquí, incluyen aliviar, abatir o mejorar los síntomas de una enfermedad, trastorno o condición, evitar síntomas adicionales, aliviar o prevenir las causas subyacentes de los síntomas, inhibir l enfermedad, trastorno o condición, por ejemplo, detener el desarrollo de la enfermedad, trastorno o condición, aliviar la enfermedad, trastorno o condición, provocar la regresión de la enfermedad, trastorno o condición, aliviar una condición provocada por la enfermedad, trastorno o condición, o detener los síntomas de la enfermedad trastorno o condición ya sea profilácticamente o terapéuticamente.
Como se usa aquí el término "proteína objetivo" se refiere a una proteína o una porción de una proteína capaz de ser enlazada por, o que interactúa con un compuesto descrito aquí, tales como un compuesto de las Fórmulas (I), (II), o (III) . En ciertas modalidades, una proteína objetivo es una proteína STIM. En ciertas modalidades, una proteína objetivo es una proteína Orai .
Como se usa aquí, "proteína STIM" incluye, pero no se limita a, STIM-1 de mamífero, tal como STIM -1 de humano y de roedor (por ejemplo de ratón, D-stimk de Drosophila melanogaster, C-STIM de C. elegans, STIM de Anopheles gambiae y STIM-2 de mamífero, tal como STIM-2 de humano o de roedor (por ejemplo, de ratón) . Como se describe aq í, tales proteínas han sido identificadas por estar involucradas en, participar en y/o hacer posible la entrada de calcio operada por depósitos o la modulación de la misma, el amortiguamiento del calcio citoplasmático y/o la modulación de los niveles de calcio en o el movimiento del calcio hacia, dentro o fuera de los depósitos de calcio intracelulares (por ejemplo, del retículo endoplasmático) .
Como se usa aquí, una proteína "Orai" incluye Orail (SEC ID NO:l como se describe en WO 07/081804), Orai2 (SEC ID NO: 2 como se describe en WO 07/081804) u Orai3 (SEC ID NO: 3 como se describe en WO 07/081804) . La secuencia de ácido nucléico de Orail corresponde al número de acceso del GenBank NM 032790, la secuencia de ácidos nucléico de 0rai2 corresponde al número de acceso del GenBank BC069270 y la secuencia de ácido nucléico de la 0rai3 corresponde al número de acceso del GenBank NM_152288. Como se usa aquí, Orai se refiere a cualquiera de los genes Orai, por ejemplo Orail, Orai2, 0rai3 (véase la Tabla I de WO 07/081804) . Como se describe aquí, tales proteínas han sido identificadas por estar involucradas en, participar en y/o hacer posible la entrada del calcio operada por depósitos o la modulación de la misma, el amortiguamiento del calcio citoplasmático y/o la modulación de los niveles de calcio en o el movimiento del calcio hacia el interior, dentro o fuera de los depósitos de calcio intracelulares (por ejemplo, del retículo endoplasmático) .
El término "fragmento" o "derivado" cuando se refiere a una proteína (por ejemplo STIM, Orai) significa las proteínas o los polipéptidos los cuales retienen esencialmente la misma función biológica o la actividad en al menos un ensayo, que la(s) proteína(s) nativa(s) . Por ejemplo, los fragmentos o los derivados de la proteína referenciada mantiene al menos aproximadamente 50% de la actividad de las proteínas nativas, al menos aproximadamente 75%, al menos aproximadamente 95% de la actividad de las proteínas nativas, cuando se determina, por ejemplo, por un ensayo de entrada de calcio.
Como se usa aquí, el alivio de los síntomas de una enfermedad, trastorno o condición particular por la administración de un compuesto o composición farmacéutica particular se refiere a cualquier reducción de la severidad, retardo en el inicio, reducción de la progresión, o acortamiento de la duración, ya sea permanentes o temporales, duraderos o transitorios que se atribuyen a o que se asocian con la administración del compuesto o la composición.
El término "modular", como se usa aquí, significa interactuar con una proteína objetivo ya sea directamente o indirectamente, para alterar la actividad de la proteína objetivo, incluyendo, a manera de ejemplo, solo, inhibir la actividad del objetivo, o limitar o reducir la actividad del obj etivo .
Como se usa aquí, el término "modulador" se refiere a un compuesto que altera una actividad de un objetivo. Por ejemplo, en algunas modalidades, un modulador provoca un aumento o reducción en la magnitud de una cierta actividad de un objetivo en comparación con la magnitud de la actividad en ausencia del modulador. En ciertas modalidades, un modulador es un inhibidor, el cual reduce la magnitud de una o más actividades de un objetivo. En ciertas modalidades, un inhibidor evita completamente una o más actividades de un obj etivo .
Como se usa aquí, "modulación" con referencia al calcio intracelular se refiere a cualquier alteración o ajuste en el calcio intracelular, incluyendo, pero no limitadas a la alteración de la concentración del calcio en el citoplasma y/o de los organelos de almacenamiento de calcio intracelular, por ejemplo, el retículo endoplasmático, y la alteración de la cinética de los flujos de calcio hacia el interior, afuera, de dentro de las células. En un aspecto, modulación se refiere a la reducción.
Como se usa aquí, el término "actividad objetivo" se refiere a la actividad biológica capaz de ser modulada por un modulador. Ciertas actividades objetivo ejemplares incluyen pero no se limitan a, afinidad de enlace, transducción de la señal, actividad enzimática, crecimiento del tumor, inflamación o procesos relacionados con la inflamación, y mejoramiento o disminución de uno o más síntomas asociados con un padecimiento o condición.
El término "inhibe", "inhibir" o "inhibidor" se la actividad de los canales SOC, la actividad de los canales CRAC, como se usa aquí, se refiere a la inhibición de la actividad de los canales de calcio operados por depósitos o la actividad de los canales de calcio activados por liberación del calcio.
El término "aceptable" con respecto a una formulación, composición o ingrediente, como se usa aquí, significa que no tiene efectos perjudiciales sobre la salud general del sujeto que está siendo tratado.
Por "farmacéuticamente aceptable" como se usa aquí, se refiere a un material, tal como un portador o diluyente, el cual no anula la actividad biológica o las propiedades del compuesto, y es relativamente no toxico, es decir, el material se administra a un individuo sin provocar efectos biológicos indeseables o que interactúa en una manera perjudicial con ninguno de los componentes de la composición en la cual está contenido.
El término "combinación farmacéutica" como se usa aquí, significa un producto que resulta por el mezclado o la combinación de más de un ingrediente activo e incluye combinaciones tanto fijas y no fijas de los ingredientes activos. El término "combinación fija" significa que un ingrediente activo, por ejemplo, un compuesto de las Fórmulas (I), (II), o (III) y el co-agente, se administran ambos a un paciente simultáneamente en forma de una entidad o dosificación única. El término, "combinación no fija" significa que un ingrediente activo, por ejemplo, un compuesto de las Fórmulas (I), (II) o (III), y un co-agente, se administran a aun paciente como entidades separadas ya sea simultáneamente, concurrentemente o secuencialmente sin límites de tiempo intermedios no específicos en donde, tal administración proporciona niveles efectivos de los dos compuestos en le cuerpo del paciente. Lo ultimo también se aplica a la terapia de coctel, por ejemplo, la administración de tres o más ingredientes activos.
El término "composición farmacéutica" se refiere a una mezcla de un compuesto de las Fórmulas (I) , (II) o (III) , descrito aquí con otros componentes químicos, tales como portadores, estabilizadores, diluyentes, agentes de dispersión, agentes de suspensión, y/o excipientes. La composición farmacéutica facilita la administración del compuesto a aun organismo. Existen en varias técnicas para administrar un compuesto incluyendo, pero no limitados a; administración intravenosa, oral, aerosol, parenteral, oftálmica, pulmonar y tópica.
Los términos "cantidad efectiva" ? "cantidad efectiva terapéuticamente", como se usa aquí, se refiere a una cantidad suficiente de un agente o un compuesto que se administra, la cual aliviará en alguna extensión uno o más de los síntomas de la enfermedad o condición que es tratada. El resultado es la reducción y/o el alivio de los signos, síntomas o causas de una enfermedad, o cualquier otra alteración deseada de un sistema biológico. Por ejemplo, una "cantidad efectiva" para usos terapéuticos es la cantidad de la composición que incluye un compuesto de las Fórmulas (I) - (V) , descritas aquí, requerida para proporcionar una reducción clínicamente significativa en los síntomas de la enfermedad. En algunas modalidades, una cantidad "efectiva" apropiada en cualquier caso individual se determina usando técnicas tales como un estudio de escalamiento de la dosis.
Los términos "mejoran" o "mejorar", como se utiliza aquí, significan incrementar o prolongar ya sea en potencia o duración un efecto deseado. Así, con relación a mejorar el efecto de los agentes terapéuticos, el término "mejorar" se refiere a la habilidad para incrementar o prolongar, ya sea en potencia o duración, el efecto de otros agentes terapéuticos en un sistema. Una "cantidad efectiva que mejora", como se utiliza aquí, se refiere a una cantidad adecuada para mejorar el efecto de otro agente terapéutico en un sistema deseado.
Los términos "co-administración" o similares, como se utiliza aquí, deben de abarcar la administración de los agentes terapéuticos seleccionados a un solo paciente, y pretenden incluir regímenes de tratamiento en los cuales los agentes se administran por la misma o diferente ruta de administración o al mismo tiempo o en diferentes tiempos.
El término "portador", como se utiliza aquí, se refiere a agentes o compuestos químicos relativamente no tóxicos que facilitan la incorporación de un compuesto en las células o tej idos .
El término "diluente" se refiere a los compuestos químicos que se utilizan para diluir el compuesto de interés antes de la entrega. En algunas modalidades, los diluentes se utilizan para estabilizar los compuestos debido a que proporcionan un ambiente más estable. Las sales disueltas en soluciones amortiguadas (que también proporcionan control o mantenimiento del pH) se utilizan como diluentes, incluyendo, pero no limitado a una solución salina amortiguada con fosfato .
Un "metabolito" de un compuesto descrito aquí, es un derivado de ese compuesto que se forma cuando se metaboliza el compuesto. El término "metabolito activo" se refiere a un derivado biológicamente activo de un compuesto que se forma cuando se metaboliza el compuesto. El término "metabolizado" , como se utiliza aquí, se refiere a la suma de los procesos (incluyendo, pero no limitado a, reacciones de hidrólisis y reacciones catalizadas por enzimas) mediante los cuales una sustancia particular se cambia por un organismo. Así, en algunas modalidades, las enzimas producen alteraciones estructurales específicas a un compuesto. Por ejemplo, el citocromo P450 cataliza una variedad de reacciones oxidativas y reductivas mientras que las glucuroniltransferasas de difosfato de uridina catalizan la transferencia de una molécula activada de ácido glucurónico a alcoholes aromáticos, alcoholes alif ticos, ácidos carboxílieos , aminas y grupos sulfidrilo libres. Más información sobre el metabolismo se obtiene a partir de The Pharmacological Basis of Therapeutics , 9a Edición, McGraw-Hill (1996) . Los metabolitos de los compuestos descritos aquí se identifican ya sea por la administración de los compuestos a un huésped y el análisis de las muestras de tejido del huésped, o por la incubación de los compuestos con células hepáticas in vitro y el análisis de los compuestos resultantes.
La "biodisponibilidad" se refiere al porcentaje del peso del compuesto descrito aquí (por ejemplo el compuesto de Fórmula (I), (II) o (III)), que se entrega en la circulación general del animal o ser humano estudiado. La exposición total (AUC (0-°°)) de un fármaco cuando se administra por vía intravenosa se define usualmente como 100% biodísponible (F%) . La "biodisponibilidad oral" se refiere al grado al cual un compuesto descrito aquí, se absorbe en la circulación general cuando la composición farmacéutica se toma oralmente según se compara a la inyección intravenosa.
La "concentración de plasma en sangre" se refiere a la concentración de un compuesto de Fórmula (I) , (II) o (III) descrito aquí, en el componente de plasma de la sangre de un sujeto. Se entiende que la concentración de plasma de los compuestos descritos aquí puede variar significativamente entre los sujetos, debido a la variabilidad con respecto al metabolismo y/o posibles interacciones con otros agentes terapéuticos. De acuerdo con una modalidad descrita aquí, la concentración de plasma en sangre de los compuestos descritos aquí varía de sujeto a sujeto. Asimismo, en algunas modalidades, los valores tales como la concentración máxima de plasma (Cmax) o el tiempo para alcanzar la concentración máxima de plasma (Tmax) , o el área total bajo la curva de tiempo de concentración de plasma (AUC(0-°°)), varían de sujeto a sujeto. Debido a esta variabilidad, la cantidad necesaria para constituir "una cantidad terapéuticamente efectiva" de un compuesto variará de sujeto a sujeto.
Como se utiliza aquí, "homeostasis de calcio" se refiere al mantenimiento de un balance global en los niveles de calcio intracelular y los movimientos, incluyendo la señalización de calcio, dentro de una célula.
Como se utiliza aquí, "calcio intracelular" se refiere al calcio localizado en una célula sin especificación de una ubicación celular particular. En contraste, " citosólico" o "citoplásmico" con referencia al calcio, se refiere al calcio localizado en el citoplasma de la célula.
Como se utiliza aquí, un efecto sobre el calcio intracelular es cualquier alteración de cualquier aspecto del calcio intracelular, incluyendo pero no limitado a, una alteración en los niveles de calcio intracelular y ubicación y movimiento del calcio hacia, fuera de o dentro de una célula o depósito de calcio intracelular u organelo. Por ejemplo, en algunas modalidades, un efecto sobre el calcio intracelular es una alteración de las propiedades, tales como, por ejemplo, las características electrofisiológicas , de cinética, sensibilidad, velocidad, y amplitud, del flujo de calcio o el movimiento que ocurre en una célula o una porción de la misma. En algunas modalidades, un efecto sobre el calcio intracelular es una alteración en cualquier proceso que modula el calcio intracelular, incluyendo, la entrada de calcio accionada por el depósito, la amortiguación del calcio citosólico, y los niveles de calcio en o el movimiento de calcio hacia, fuera de o dentro de un depósito de calcio intracelular. Cualquiera de estos aspectos se evalúa en una variedad de formas incluyendo, pero no limitado a, evaluación de calcio u otros niveles del ion (particularmente el catión) , movimiento del calcio u otro ion (particularmente el catión) , fluctuaciones en el calcio u otros niveles del ion (particularmente el catión) , cinética del calcio u otros flujos del ion (particularmente el catión) y/o transporte de calcio u otro ion (particularmente el catión) a través de una membrana. Una alteración es cualquier cambio que sea estadísticamente significativo. Así, por ejemplo, en algunas modalidades, si el calcio intracelular en una célula de prueba y una célula de control, - se dice - difiere, tales diferencias son una diferencia estadísticamente significativa.
Como se utiliza aquí, "involucrado en" con respecto a la relación entre una proteína y un aspecto del calcio intracelular o de la regulación del calcio intracelular, significa que cuando la expresión o la actividad de la proteína en una célula se reduce, altera o elimina, hay una reducción, alteración o eliminación concomitante o asociada de uno o más aspectos del calcio intracelular o de la regulación del calcio intracelular. Tal una alteración o reducción en la expresión o actividad, puede ocurrir en virtud de una alteración de la expresión de un gen que codifica la proteína o alterando los niveles de la proteína.
Una proteína involucrada en un aspecto del calcio intracelular, tal como, por ejemplo, la entrada de calcio accionada por el depósito, de esta manera, es aquella que proporciona o participa en un aspecto del calcio intracelular o de la regulación del calcio intracelular. Por ejemplo, una proteína que proporciona la entrada de calcio accionada por el depósito es una proteína STIM y/o una proteína Orai.
Como se utiliza aquí, una proteína que es un componente de un canal de calcio es una proteína que participa en el complejo multi-proteínico que forma el canal.
Como se usa aquí, "basal" o "latente" con referencia a los niveles de calcio citosólico se refiere a la concentración de calcio en el citoplasma de una célula, tal como, por ejemplo, una célula no estimulada, que no se ha sometido a una condición que resulta en el movimiento del calcio dentro o fuera de la célula o en el interior de la célula. El nivel de calcio citosólico basal o restante puede ser la concentración de calcio libre (es decir, calcio que no se ha enlazado a una sustancia de enlace al calcio celular) en el citoplasma de una célula, tal como, por ejemplo, una célula estimulada, que no se ha sometido a una condición que resulta en el movimiento de calcio dentro o fuera de la célula.
Como se usa aquí, "movimiento" con respecto a los iones, incluye cationes, por ejemplo calcio, se refiere al movimiento o recolocación, tal como por ejemplo flujo, de iones dentro o fuera o dentro de una célula. Así, el movimiento de los iones puede ser, por ejemplo, el movimiento de los iones desde el medio extracelular hacia una célula, desde dentro de una célula al medio extracelular, desde dentro un organelo intracelular o sitio de almacenamiento al citosol, desde el citosol hacia un organelo intracelular o sitio de almacenamiento, desde un organelo intracelular o sitio de almacenamiento a otro organelo intracelular o sitio de almacenamiento, desde el medio extracelular hacia un organelo intracelular o sitio de almacenamiento, desde un organelo intracelular o sitio de almacenamiento al medio extracelular y desde una ubicación a otra dentro del citoplasma de la célula.
Como se utiliza aquí, la "entrada del catión" o la "entrada de calcio" en una célula, se refiere a la entrada de cationes, tales como calcio, en una ubicación intracelular, tal como el citoplasma de una célula o en el lumen de un organelo intracelular o sitio de almacenamiento. Así, en algunas modalidades, la entrada del catión es, por ejemplo, el movimiento de los cationes hacia el citoplasma de la célula desde el medio extracelular o desde un organelo intracelular o sitio de almacenamiento, o el movimiento de los cationes hacia un organelo intracelular o sitio de almacenamiento desde el citoplasma o medio extracelular. El movimiento del calcio hacia el citoplasma desde un organelo intracelular o sitio de almacenamiento también se refiere como "liberación de calcio" desde el organelo o sitio de almacenamiento .
Como se utiliza aquí, la "proteína que modula el calcio intracelular" se refiere a cualquier proteína celular que está involucrada en la regulación, control y/o alteración del calcio intracelular . Por ejemplo, en algunas modalidades, tal una proteína está involucrada en la alteración o ajuste del calcio intracelular en varias maneras, incluyendo, pero no limitado a, a través del mantenimiento de los niveles de calcio citoplásmico, básales o en reposo, o a través de la participación en una respuesta celular a una señal que se transmite en una célula a través de un mecanismo que incluye una desviación en el calcio intracelular de los estados básales o en reposo. En el contexto de una "proteína que modula el calcio intracelular", una proteína "celular" es aquella que se asocia con una célula, tal como, por ejemplo, una proteína citoplásmica, un proteína asociada a la membrana plasmática o una proteína de la membrana intracelular. Las proteínas que modulan el calcio intracelular incluyen, pero no se limitan a, proteínas de transporte del ion, proteínas que enlazan el calcio y proteínas reguladoras que regulan las proteínas de transporte del ion.
Como se utiliza aquí, "mejoría" se refiere a una mejora en un padecimiento o condición o al menos un alivio parcial de los síntomas asociados con un padecimiento o condición.
Como se utiliza aquí, la "respuesta de la célula" se refiere a cualquier respuesta celular que resulta del movimiento del ion hacia o fuera de una célula o dentro de una célula. En algunas modalidades, la respuesta de la célula se asocia con cualquier actividad celular que sea dependiente, al menos en parte, de los iones tales como, por ejemplo, el calcio. Tales actividades pueden incluir, por ejemplo, activación celular, expresión del gen, endocitosis, exocitosis, tráfico celular y muerte celular apoptótica.
Como se utiliza aquí, las "células inmunes" incluyen células del sistema inmunológico y células que realizan una función o actividad en una respuesta inmune, tales como, pero no limitado a, células T, células B, linfocitos, macrófagos, células dendríticas, neutrófilos, eosinófilos, basófilos, mastocitos, células plasmáticas, glóbulos blancos, células que presentan antígenos y células asesinas naturales.
Como se utiliza aquí, "citocina" se refiere a las proteínas solubles pequeñas secretadas por las células que en algunas modalidades, alteran el comportamiento o las propiedades de la célula secretora u otra célula. Las citocinas se enlazan a los receptores de citocinas y disparan un comportamiento o propiedad dentro de la célula, por ejemplo, la proliferación, muerte o diferenciación de la célula. Las citocinas ejemplares incluyen, pero no se limitan a, interleucinas (por ejemplo, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-la, IL-?ß, y IL-1 RA), factor de estimulación de la colonia de granulocitos (G-CSF) , factor de estimulación de la colonia de granulocitos-macrófagos (GM-CSF) , oncostatina M, eritropoyetina, factor inhibidor de leucemia (LIF) , interferones , B7.1 (también conocido como CD80) , B7.2 (también conocido como B70, CD86) , miembros de la familia TNF (TNF-a, TNF-ß, LT-ß, ligando CD40, ligando Fas, ligando CD27, ligando CD30, 4-1BBL, Trail) , y MIF.
La "entrada de calcio accionada por el depósito" o "SOCE" se refiere al mecanismo por el cual la liberación de iones de calcio de los depósitos intracelulares se coordina con influjo de iones a través de la membrana plasmática.
"Inhibidor selectivo de la actividad del canal SOC" significa que el inhibidor es selectivo para los canales SOC y que no afecta sustancialmente la actividad de otros tipos de canales del ion.
"Inhibidor selectivo de la actividad del canal CRAC" significa que el inhibidor es selectivo para los canales CRAC y que no afecta sustancialmente la actividad de otros tipos de canales del ion y/u otros canales SOC.
Monitoreo o Valoración de los Efectos en el Calcio Intracelular En el monitoreo o valoración del efecto de un compuesto de Fórmulas (I) - (V) en el calcio intracelular en cualquiera de los métodos de selección/identificación descritos aquí o reconocidos en el campo, se puede conducir una evaluación directa o indirecta o medición celular (incluyendo los organelos o compartimientos citosólicos e intracelulares) calcio y/o movimiento de iones en, dentro o fuera de una célula, organelo, depósito de calcio o porciones de los mismos (por ejemplo, una membrana) . Se describen y/o se reconocen aquí una variedad de métodos para evaluar los niveles de calcio y los movimientos o flujo de iones. El método particular usado y las condiciones empleadas pueden depender ya sea de un aspecto particular del calcio intracelular que se monitoreo o valora. Por ejemplo, como se describe aquí en algunas modalidades, se usan los reactivos y condiciones, para evaluar específicamente la entrada de calcio operada por el depósito, los niveles de calcio citosólico latentes, el amortiguamiento del calcio y los niveles y admisión de calcio o liberación de organelos intracelulares y depósitos de calcio. El efecto de un compuesto de Fórmulas (I) - (V) en el calcio intracelular se pueden monitorear o valorar usando, por ejemplo, una célula, un organelo intracelular o compartimiento de depósito de calcio, una membrana (que incluye, por ejemplo, un parche de membrana despegado o una bicapa de lípidos) o un sistema de ensayo libre de células (por ejemplo, vesícula de membrana externa) . En general, algunos aspectos del calcio intracelular se monitorea o valora en la presencia del agente de prueba y se compara a un control, por ejemplo, calcio intracelular en la ausencia de agente de prueba.
Métodos de modulación de Calcio Intracelular En un aspecto, los compuestos descritos aquí modulan el calcio intracelular, tal como pero no limitado a, modulación (por ejemplo, reducción o inhibición) de la actividad del canal SOC, tal como la inhibición de la actividad del canal de CRAC (por ejemplo, inhibición) de ICRAC, la inhibición de SOCE) en una célula del sistema inmune (por ejemplo, linfocito, células blancas de la sangre, célula T, célula B) , un fibroblasto (o un derivado celular de un fibroblasto) , o una célula epidérmica, dérmica o de la piel (por ejemplo, queratinocito) . La etapa de modular una o más proteínas involucradas en la modulación del calcio intracelular (por ejemplo, una proteína STIM y/o la proteína Orai) pueden involucrar, por ejemplo, reducir el nivel, expresión de, una actividad de, la función y/o las interacciones moleculares de una proteína. Por ejemplo, si una célula exhibe un incremento en los niveles de calcio o carencia de regulación de un aspecto de modulación de calcio intracelular, por ejemplo, entrada de calcio operada por depósito, entonces la modulación puede involucrar reducir el nivel de, la expresión de, una actividad o función de, o una interacción modular de una proteína, por ejemplo una proteína STIM y/o una proteína Orai .
Métodos de tratamiento Se presenta aquí un método de modulación de la actividad del canal de calcio operado por depósito (SOC) , que comprende poner en contacto el complejo del canal de calcio operado por depósito (SOC) , o porción del mismo, con un compuesto de Fórmula (I): Fórmula (I) en donde A es fenilo o benzofurano, en donde el fenilo y el benzofurano están cada uno sustituidos opcionalmente con al menos una R; o A es fenilo sustituido con dos grupos R en átomos de carbono adyacentes, en donde los dos grupos R y los átomos de carbono a los cuales están enlazados forman un cicloalquilo de C4-C8 o heterocicloalquilo de C3-C8; R se selecciona de F, Cl, Br, I, -CN, -N02, -CF3, OH, -OR3, -0CF3, -C=CH, -C=CR3, alquilenoalquino de C1-C6, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C6, heteroalquilo de Cl-C6, haloalquilo de C1-C6, tetrazolilo, heterocicloalquilo de C2-C6, fenilo, -NHS(=0)2R3, S ( =0) 2 (R4 ) 2 , -C(=0)CF3, -C (=0) HS (=0) 2R3, -S ( =0) 2NHC (=0) R4 , N(R4)2, - (R4 ) C ( =0) R3 , -C02R4, -C(=0)R3, -OC(=0)R3, -C ( =0) (R4 ) 2 , -SR3, -S(=0)R3, y -S (=0) 2R3 ; J es un enlace, NHS(=0)2, S(=0)2N(R4), -C(=0), C(=0)NHS (=0) 2, -S (=0) 2NHC(=0) , N(R4), -N(R4)C(=0), -C02, -C(=0), -0C(=0), -C(=0)N(R4), -S, -S(=0), y -S(=0)2, alquileno de C1-C6, alquenileno de C2-C6, alquinileno de C2-C6 , heteroalquileno de C1-C6, cicloalquileno de C2-C6, o heterocicloalquileno de C2-C6, en donde el alquileno de Cl-C6, alquenileno de C2-C6, alquinileno de C2-C6, heteroalquileno de C1-C6, cicloalquileno de C2-C6, y heterocicloalquileno de C2-C6, está substituido opcionalmente con al menos una R; Rl es C02R2 o un bioisóstero de ácido carboxílico, en donde R2 es hidrógeno, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de Cl-C6 , haloalquilo de C1-C6, fenilo o bencilo; Z es 0, S, NH, N-CN, O CHN02 ; X es W-L-fenilo, W-L-B, B, W-L-D, o D en donde el fenilo, B y D están cada uno substituidos opcionalmente con al menos una R; W es NR2 , 0 o un enlace; L es metileno, etileno substituido con al menos una R, alquileno de C3-C6, alquenileno de C2-C6, alquinileno de C2-C6, heteroalquileno de C1-C6, cicloalquileno de C2-C6, o heterocicloalquileno de C2-C6, en donde el metileno, alquileno de C2-C6, alquenileno de C2-C6, alquinileno de C2-C6, heteroalquileno de C1-C6, cicloalquileno de C3-C6, y heterocicloalquileno de C2-C6 están substituidos opcionalmente con al menos una R; B se selecciona de furano, tiofeno, pirrol, piridina, oxazol, tiazol, imidazol tiadiazol, isoxazol, isotiazol, pirazol, piridazina, pirimidina, pirazina, oxadiazol, tiadiazol, triazol, indol, benzoxazol, benzotiazol, bencimidazol , benzoxadiazol , benzotiadiazol , benzotriazol , pirazolopiridina, pirrolopirimidina, indolizina, purina, imidazopiridina, pirrolopiridina, fluoropiridina, tienopiridina, furopirroi, furofurano, ruenofurano, 1,4-dihidropirrolopirrol , tienopirrol, tienotiofeno , quinolina, isoquinolina, furopirazol, tienopirazol , y 1,6-dihidropirrolopirazol ; D es cicloalquilo de C2-C10 o heterocicloalquilo de C2- C9; cada R3 se selecciona independientemente de alquilo de C1-C6, haloalquilo de Cl-CS, cicloalquilo de C3-C8, fenilo, y bencilo; cada R4 se selecciona independientemente de hidrógeno, alquilo de C1-C6, haloalquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C8, fenilo, y bencilo; o una sal, solvato, óxidos de N o profármaco de los mismos aceptables farmacéuticamente.
En una modalidad, es un método para modular la actividad de los canales de calcio operados por depósitos (SOC) , que comprende poner en contacto los complejos de los canales de calcio operados por depósitos (SOC) , o porciones de los mismos, con un compuesto de la Fórmula (I) o una sal, solvato, óxido de N o profármaco del mismo aceptables farmacéuticamente, en donde el contacto se presenta in vitro.
En una modalidad, es un método para modular la actividad de los canales de calcio operados por depósitos (SOC) , que comprende poner en contacto los complejos de los canales de calcio operados por depósitos (SOC) , o porciones de los mismos, con un compuesto de la Fórmula (I) o una sal, solvato, óxido de N o profármaco del mismo aceptables f rmacéuticamente, en donde el contacto se presenta in vivo.
En aún otra modalidad, es un método para modular la actividad de los canales de calcio operados por depósitos, que comprende poner en contacto los complejos de los canales de calcio operados por depósitos (SOC) , o porciones de los mismos, con un compuesto de la Fórmula (I) o una sal, solvato, óxido de N o profármaco del mismo aceptables farmacéuticamente, en donde el compuesto de Fórmula (I) modula una actividad de, modula una interacción de, o modula el nivel de, o distribuciones de, o se enlaza a, o interactúa con al menos una porción del complejo del canal de calcio operado por depósitos, seleccionado de la familia de proteínas de las moléculas de interacción estromal (STIM) .
En otra modalidad, es un método para modular la actividad de los canales de calcio operados por depósitos, que comprende poner en contacto los complejos de los canales de calcio operados por depósitos (SOC) , o porciones de los mismos, con un compuesto de la Fórmula (I) o una sal, solvato, óxido de N o profármaco del mismo aceptables farmacéuticamente, en donde el compuesto de Fórmula (I) modula una actividad de, modula una interacción de, o modula el nivel de, o distribuciones de, o se enlaza a, o interactúa con al menos una porción del complejo del canal de calcio operado por depósitos, seleccionado de la familia de proteínas de las moléculas de interacción estromal (STIM) .
En otra modalidad, es un método para modular la actividad de los canales de calcio operados por depósitos, que comprende poner en contacto los complejos de los canales de calcio operados por depósitos (SOC) , o porciones de los mismos, con un compuesto de la Fórmula (I) o una sal, solvato, óxido de N o profármaco del mismo aceptables farmacéuticamente, en donde el compuesto de Fórmula (I) modula una actividad de, modula una interacción de, o modula el nivel de, o distribuciones de, o se enlaza a, o interactúa con al menos una porción STIM1 o STIM2.
En otra modalidad, es un método para modular la actividad de los canales de calcio operados por depósitos, que comprende poner en contacto los complejos de los canales de calcio operados por depósitos (SOC) , o porciones de los mismos, con un compuesto de la Fórmula (I) o una sal, solvato, óxido de N o profármaco del mismo aceptables farmacéuticamente, en donde la modulación de la actividad del canal de calcio operada por depósitos con un compuesto de Fórmula (I) inhibe la entrada del calcio operada por depósitos (SOCE) .
En aún otra modalidad, es un método para modular la actividad de los canales de calcio operados por depósitos, que comprende poner en contacto los complejos de los canales de calcio operados por depósitos (SOC) , o porciones de los mismos, con un compuesto de la Fórmula (I) o una sal, solvato, óxido de N o profármaco del mismo aceptables farmacéuticamente, en donde el complejo del canal de calcio operado por depósitos es el complejo del canal del calcio activado por liberación de calcio (CRAC) .
En aún otra modalidad, es un método para modular la actividad de los canales de calcio operados por depósitos, que comprende poner en contacto los complejos de los canales de calcio operados por depósitos (SOC) , o porciones de los mismos, con un compuesto de la Fórmula (I) o una sal, solvato, óxido de N o profármaco del mismo aceptables farmacéuticamente, en donde la modulación de la actividad del calcio activado por liberación de calcio (CRAC) , con un compuesto de Fórmula (I) inhibe la corriente electrofisológica (ICRAC) directamente asociada con los canales CRAC activados.
En aún una modalidad adcional es un método para modular la actividad del canal de calcio operado en almacenaje que comprende, contactar el complejo de canal de calcio operado en almacenaje (SOC) , o porción del mismo, con un compuesto de Fórmula (II) o una sal, solvato, N-óxido o profármaco del mismo f rmacéuticamente aceptable, (III), (IV) o (V).
También presentado aquí, está un método para modular la actividad del canal de calcio activado por liberación de calcio (CRAC) en un mamífero, que comprende administrar un compuesto de las Fórmulas (I) - (V) , o una sal, solvato, N-óxido o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable.
En una modalidad, es un método para modular la actividad del canal de calcio activado por liberación de calcio (CRAC) en un mamífero, que comprende administrar un compuesto de las Fórmulas (I)-(V), o una sal, solvato, N-óxido o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable en donde el compuesto de las Fórmulas (I)-(V) modula una actividad de, modula una interacción de, o modula el nivel de, o distribuciones de, o enlace a, o interactúa con al menos un componente del complejo de canal activado por liberación de calcio (CRAC) , seleccionado de la familia de proteínas de moléculas de interacción estromal (STIM) .
En otra modalidad, es un método para modular la actividad del canal de calcio activado por liberación de calcio (CRAC) en un mamífero, que comprende administrar un compuesto de las Fórmulas (I) - (V) , o una sal, solvato, N-óxido o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde el compuesto de las Fórmulas (I)-(V) modula una actividad de, modula una interacción de, o modula el nivel de, o distribuciones de, o enlace a, o interactúa con STIM1 o STIM2.
En aún otra modalidad, es un método para modular la actividad del canal de calcio activado por liberación de calcio (CRAC) en un mamífero, que comprende administrar un compuesto de las Fórmulas (I)-(V), o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato farmacéuticamente aceptable, N-óxido, o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde la modulación de la actividad del canal de calcio activado por liberación de calcio (CRAC) con un compuesto de Fórmulas (I) - (V) inhibe la entrada de calcio operado por almacenaje (SOCE) .
En una modalidad adicional, es un método para modular la actividad del canal de calcio activado por liberación de calcio (CRAC) en un mamífero, que comprende administrar un compuesto de las Fórmulas (I) - (V), o una sal, solvato, N-óxido o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde la modulación de la actividad del canal de calcio activado por liberación de calcio (CRAC) con un compuesto de Fórmulas (I) - (V) inhibe la corriente electrofisiológica (ICRAC) directamenta asociada con los canales CRAC activados.
En aún una modalidad adcional, es un método para modular la actividad del canal de calcio activado por liberación de calcio (CRAC) en un mamífero, que comprende administrar un compuesto de las Fórmulas (I) - (V) , o una sal, solvato, N-óxido o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde el compuesto de las Fórmulas (I) - (V) inhibe el SOCE con un IC50 por debajo de 10 µ?.
En otra modalidad, es un método para modular la actividad del canal de calcio activado por liberación de calcio (CRAC) en un mamífero, que comprende administrar un compuesto de las Fórmulas (I) - (V) , o una sal, solvato, bióxido o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde el compuesto de las Fórmulas (I) - (V) inhibe la corriente electrofisiológica (ICRAC) directamente asociada con los canales CRAC activados a una concentración por debajo de 10 µ?.
En un aspecto, es un método para tratar una enfermedad, trastorno o condicón en un mamífero que podría beneficiarse de la inhibición de la actividad del canal de calcio operado por almacenaje, que comprende administrar al mamífero, un compuesto de las Fórmulas (I) - (V), o una sal, solvato, N-óxido o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable.
En una modalidad, es un método para tratar una enfermedad, trastorno o condición en un mamífero, que podría beneficiarse de la inhibición de la actividad del canal de calcio operado por almacenaje, que comprende administrar al mamífero un compuesto de las Fórmulas (I) - (V), o una sal, solvato, N-óxido o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable en donde el compuesto de las Fórmulas (I) - (V) modula la actividad de, modula una interacción de, o enlace a, o interactúa con una proteína STIM1 de mamífero, o una proteína STIM2 de mamífero.
En un aspecto, es un método para tratar una enfermedad autoinmune, enfermedad o condición heteroinmune , o enfermedad inflamatoria en un mamífero, que comprende administrar al mamífero un compuesto de Fórmula (I) o (II) o una sal, solvato, N-óxido o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable .
En una modalidad, la enfermedad autoinmune es enfermedad del intestino inflamatorio, artritis reumatoide, miastenia gravis, esclerosis múltiple, síndrome Sjogren, diabetes tipo I, lupus eritematoso, psoriasis, osteoartritis , escleroderma, y anemia hemolítica autoinmune.
En otra modalidad, la enfermedad o condición heteroinmune es enfermedad de injerto contra hospedero, rechazo al injerto, dermatitis atópica, conjuntivitis alérgica, rechazo al transplante, transplante alogeneico o xenogénico y rinitis alérgica.
En una modalidad adcional, la enfermedad inflamatoria es uveítis, vasculitis, vaginitis, asma, enfermedad del músculo inflamatorio, dermatitis, cistitis intersticial, dermatomiositis , hepatitis y hepatitis reincidente crónica.
En otro aspecto, es un método para tratar una enfermedad, trastorno o condición en un mamífero que podría beneficiarse de la inhibición de la actividad del canal de calcio operado por almacenaje, que comprende administrar al mamífero un compuesto de las Fórmulas (I) - (V) o una sal, solvato, N-óxido o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable .
En una modalidad, la enfermedad, trastorno o condición en el mamífero se selecciona a partir de glomerulonefritis , enfermedad o trastornos hepáticos, enfermedades o trastornos renales, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, osteoporosis , eczema, fibrosis pulmonar, tiroiditis, fibrosis quística, y cirrosis biliar primaria.
En aún otra modalidad, es un método para tratar una enfermedad, trastorno o condición en un mamífero que podría beneficiarse de la inhibición de la actividad del canal de calcio operado por almacenaje, que comprende administrar al mamífero, un compuesto de Fórmula (I), o una sal, solvato, N-óxido o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable en donde la enfermedad, trastorno o condición es artritis reumatoide .
En una modalidad adicional, es un método para tratar una enfermedad, trastorno o condición en un mamífero que podría beneficiarse de la inhibición de la actividad del canal de calcio operado por almacenaje, que comprende administrar al mamífero un compuesto de las Fórmulas (I) -(V) , o una sal, solvato, N-óxido o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable en donde la enfermedad, trastorno o condición es psoriasis.
En una modalidad, es un método para tratar una enfermedad, trastorno o condición en un mamífero que podría beneficiarse de la inhibición de la actividad del canal de calcio operado por almacenaje, que comprende administrar al mamífero un compuesto de las Fórmulas (I) - (V) o sal farmacéuticamente aceptable, solvato, N-óxido o profármaco del mismo, en donde la enfermedad, trastorno o condición es una enfermedad del intestino inflamatorio.
En una modalidad adicional, la enfermedad del intestino inflamatorio es colitis ulcerativa.
En una modalidad adicional, es un método para tratar una enfermedad, trastorno o condición en un mamífero que podría beneficiarse de la inhibición de la actividad del canal de calcio operado por almacenaje, que comprende administrar al mamífero un compuesto de las Fórmulas (I) - (V) , o una sal, solvato, N-óxido o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable en donde la enfermedad, trastorno o condición es rechazo al transplante de órgano.
En una modalidad adicional, es un método para tratar una enfermedad, trastorno o condición en un mamífero que podría beneficiarse de la inhibición de la actividad del canal de calcio operado por almacenaje, que comprende administrar al mamífero un compuesto de las Fórmulas (I) - (V) , o una sal, solvato, N-óxido o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable en donde la enfermedad, trastorno o condición es esclerosis múltiple.
En aún una modalidad adcional es un método para tratar una enfermedad, trastorno o condición en un mamífero que podría beneficiarse de la inhibición de la actividad del canal de calcio operado por almacenaje, que comprende administrar al mamífero un compuesto de las Fórmulas (I) -(V) , o una sal, solvato, N-óxido o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable, que comprende además, administrar al mamífero un segundo agente terapéutico.
En otra modalidad, es un método para tratar una enfermedad, trastorno o condición en un mamífero que podría beneficiarse de la inhibición de la actividad del canal de calcio operado por almacenaje, que comprende administrar al mamífero un compuesto de las Fórmulas (I) - (V), o una sal, solvato, N-óxido o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde el segundo agente terapéutico se selecciona a partir de inmunosupresores , glucocorticoides , fármacos anti-inflamatorios no esteroidales , inhibidores específicos de Cox-2, leflunomido, tioglucosa de oro, tiomalato de oro, aurofina, sulfasalazina, hidroxicloroquinina, minociclina, agentes anti-TNF-ct, abatacept, anakinra, interferón-ß , interferón-?, interleucina-2 , vacunas de alergia, antihistaminas , antileucotrienos , beta-agonistas, teofilina y anticolinérgicos .
En aún otra modalidad, es un método para tratar una enfermedad, trastorno o condición en un mamífero que podría beneficiarse de la inhibición de la actividad del canal de calcio operado por almacenaje, que comprende administrar al mamífero un compuesto de las Fórmulas (I) - (V) , o una sal, solvato, N-óxido o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde el segundo agente terapéutico se selecciona a partir de tacrólimo, ciclosporina, rapamicina, metotrexato, ciclofosfamida, azatioprina, mercaptopurina, micofenolato, o FTY720, prednisona, acetato de cortisona, prednisolona, metilprednisolona, dexametasona, betametasona, triamcinolona, beclometasona, acetato de fludrocortisona, acetato de desoxicorticoesterona, aldosterona, aspirina, ácido salicílico, ácido gentísico, salicilato de colina magnesio, salicilato de colina, salicilato desodio, diflunisal, carprofeno, fenoprofeno, fenoprofen calcico, fluorobipro eno, ibuprofeno, cetoprofeno, nabutona, ketolorac, ketorolac trometamina, naproxeno, oxaprozina, diclofenac, etodolac, indometacina, sulindac, tolmetina, meclofenamato , meclofenamato sódico, ácido mefenámico, piroxicam, meloxicam, celecoxib, rofecoxib, valdecoxib, parecoxib, etoricoxib, lumiracoxib, CS-502, JTE-522, L-745,337 y NS398, leflunomido, tioglucosa de oro, tiomalato de oro, aurofin, sulfasalizina, hidroxicloroquinina, minociclina, infliximab, etanercept, adalimumab, abatacept, anakinra, interferón-ß , interferón-?, interleucina-2 , vacunas de alergia, antihist minas , antileucotrienos, beta-agonistas, teofilina, y anticolinérgicos .
También descrito en la presente está un método para inhibir la activación de entrada de calcio operada por almacenaje (SOCE) del factor nuclear de células T activadas (NFAT) en un mamífero que comprende administrar un compuesto de las Fórmulas (I) - (V) , o una sal, solvato, N-óxido o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable; En una modalidad, es un método para inhibir la activación de la entrada de calcio operada por almacenaje (SOCE) del factor nuclear de células T activadas (NFAT) en un mamífero que comprende administrar un compuesto de las Fórmulas (I) - (V), o una sal, solvato, N-óxido o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde el compuesto de las Fórmulas (I) - (V) modula una interacción de, o modula el nivel de, o distribuciones de, o enlace a, o interactúa con una proteína STIMl de mamífero, o una proteína STIM2 de mamífero .
En otro aspecto, es un método para reducir la liberación de citocina inhibiendo la activación de entrada de calcio operada por almacenaje de NFAT en un mamífero, que comprende administrar un compuesto de las Fórmulas (I) - (V) , o una sal, solvato, N-óxido o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable .
En otra modalidad, es un método para reducir la liberación de citocina inhibiendo la activación de entrada de calcio operada por almacenaje de NFAT en un mamífero, que comprende administrar un compuesto de las Fórmulas (I) - (V) , o una sal, solvato, N-óxido o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde el compuesto de las Fórmulas (I) - (V) modula una interacción de, o modula el nivel de, o distribuciones de, o enlace a, o interactúa con una proteína STIM1 de mamífero o una proteína STIM2 de mamífero.
En aún otra modalidad, es un método para reducir la liberación de citocina inhibiendo la activación de entrada de calcio operada por almacenaje de NFAT en un mamífero, que comprende administrar un compuesto de las Fórmulas (I) - (V) , o una sal, solvato, N-óxido o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde la citocina se selecciona a partir de IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-l , IL-?ß, IL-1 RA, factor de estimulación de la colonia del granulocito (G-CSF) , factor de estimulación de la colonia del granulocito-macrófago (GM-CSF) , oncostatina M, eritropoyetina, factor inhibidor de leucemia (LIF) , interferonas, gamma- interferón (?-IFN) , B7.1 (CD80) , B7.2 (B70, CD86) , TNF-OÍ , TNF-ß, LT-ß, ligando CD40, ligando Fas, ligando CD27, ligando CD30, 4-1BBL, Trail, y factor inhibidor de migración (MIF) .
En un aspecto, proporcionada aquí está una composición farmacéutica, la cual incluye una cantidad efectiva de un compuesto proporcionado en la presente, y un excipiente farmacéuticamente aceptable. En · un aspecto adiciona, proporcionadas en la presente están composiciones adicionales que incluyen un segundo ingrediente farmacéuticamente activos .
En ciertas modalidades, proporcionada en la presente está una composición farmacéutica que contiene: i) un portador, diluyente y/o excipiente fisiológicamente aceptable; y ii) uno o más compuestos descritos en la presente .
En cualquiera de los aspectos mencionados anteriormente están modalidades adicionales que incluyen administraciones únicas de la cantidad efectiva de los compuestos descritos en la presente, que incluyen modalidades adicionales en las cuales: (i) el compuesto de (I)-(IV) es administrado una vez; (ii) el compuesto de las Fórmula (I) - (V) es administrado al mamífero múltiples veces durante el transcurso de un día; (iii) consecutivamente; o (iv) con inuamente.
En cualquiera de los aspectos mencionados anteriormente, están modalidades adicionales que incluyen administraciones múltiples de la cantidad efectiva del compuesto de las Fórmulas (I) - (V) , que incluyen modalidades adicionales en las cuales (I) el compuesto de las Fórmulas (I)-(V) es administrado en una dosis única; (ii) el tiempo entre las administraciones múltiples es cada 6 horas; (iii) el compuesto de Fórmulas (I) - (V) se administra al mamífero cada 8 horas. En modalidades adicionales o alternativas, el método comprende un día libre de fármaco, en donde la administración del compuesto de Fórmulas (I)-(V) es temporalmente suspendida o la dosis del compuesto de Fórmulas (I)-(V) siendo administrado es temporalmente reducida; al final del día libre de fármaco, la dosificación del compuesto de las Fórmulas (I)-(V) se resume. La longitud del día libre de fármaco puede variar desde 2 días hasta 1 año.
En un aspecto, los compuestos descritos en la presente son administrados a un humano. En algunas modalidades, los compuestos descritos en la presente son oralmente administrados .
Ejemplos de Composiciones Farmacéuticas y Métodos de Administración Las composiciones farmacéuticas pueden formularse en una manera convencional utilizando uno o más portadores fisiológicamente aceptables incluyendo excipientes y auxiliares que facilitan el procesamiento de los compuestos activos en preparaciones que pueden utilizarse farmacéuticamente. La formulación apropiada es dependiente de la ruta de administración seleccionada. Detalles adicionales acerca de los excipientes adecuados para las composiciones farmacéuticas descritas aquí, pueden encontrarse, en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Decimonovena Edición (Easton, Pa . : Mack Publishing Company, 1995); Hoover, John E., Remington' s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co . , Easton, Pensilvania 1975; Liberman, H.A. and Lachman, L. , Eds . , Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, Nueva York, N.Y., 1980; y Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Séptima Edición (Lippincott Williams & Wilkins 1999) , incorporadas aquí por referencia para tal descripción.
Una composición farmacéutica, como se utiliza aquí, se refiere a una mezcla de un compuesto de Fórmulas (I) - (V) descrito aquí, con otros componentes químicos, tales como portadores, estabilizadores, diluentes, agentes de dispersión, agentes de suspensión, agentes de espesamiento, y/o excipientes. La composición farmacéutica facilita la administración del compuesto a un organismo. En la práctica de los métodos de tratamiento o uso provistos aquí, se administran cantidades terapéuticamente efectivas de los compuestos descritos aquí, en una composición farmacéutica a un mamífero que tiene un padecimiento, trastorno, o condición a ser tratada. En algunas modalidades, el mamífero es un humano. Una cantidad terapéuticamente efectiva puede variar ampliamente dependiendo de la severidad del padecimiento, la edad y la salud relativa del sujeto, la potencia del compuesto utilizado y otros factores. Los compuestos de Fórmulas (I) - (V) pueden utilizarse individualmente o en combinación con uno o más agentes terapéuticos como componentes de mezclas (como en la terapia de combinación) .
Las formulaciones farmacéuticas descritas aquí, pueden administrarse a un sujeto por múltiples rutas de administración, incluyendo pero no limitado a, rutas de administración oral, parenteral (por ejemplo, intravenosa, subcutánea, intramuscular), intranasal, bucal, tópica, rectal o transdérmica . Además, las composiciones farmacéuticas descritas aquí, las cuales incluyen un compuesto de Fórmulas (I) - (V) descrito aquí, pueden formularse en cualquier forma de dosificación adecuada, incluyendo pero no limitado a, dispersiones orales acuosas, líquidos, geles,' jarabes, elixires, lechadas, suspensiones, aerosoles, formulaciones de liberación controlada, formulaciones de rápida fundición, formulaciones efervescentes, formulaciones liofilizadas , tabletas, polvos, pildoras, grageas, cápsulas, formulaciones de liberación retardada, formulaciones de liberación extendida, formulaciones de liberación pulsátil, formulaciones multiparticuladas , y formulaciones mezcladas de liberación controlada y liberación inmediata.
Se pueden administrar los compuestos y/o composiciones en una manera local en vez de en una manera sistémica, por ejemplo, vía inyección del compuesto directamente en un órgano o tejido, a menudo en una preparación de depósito o formulación de liberación sostenida. Tales formulaciones de larga actuación pueden administrarse mediante implantación (por ejemplo subcutáneamente o intramuscularmente) o mediante inyección intramuscular. Además, se puede administrar el fármaco en un sistema de entrega del fármaco objetivo, por ejemplo, en un liposoma revestido con un anticuerpo específico al órgano. Los liposomas se tendrán como objetivo y se tomarán selectivamente por el órgano. Además, el fármaco puede proporcionarse en la forma de una formulación de liberación rápida, en la forma de una formulación de liberación extendida, o en la forma de una formulación de liberación intermedia.
Las composiciones farmacéuticas que incluyen un compuesto descrito aquí pueden fabricarse en una manera convencional, tal como, únicamente a manera de ejemplo, por medio de procesos convencionales de mezclado, disolución, granulación, fabricación de grageas, levigación, emulsificación, encapsulación, atrapado o compresión.
Las composiciones farmacéuticas incluirán al menos un compuesto de Fórmulas (I) - (V) descrito aquí, como un ingrediente activo en forma de base libre o de ácido libre, o en una forma de sal farmacéuticamente aceptable. Además, los métodos y las composiciones farmacéuticas descritas aquí, incluyen el uso de formas cristalinas (también conocidas como polimorfas) , así como también de metabolitos activos de estos compuestos que tienen el mismo tipo de actividad. En algunas situaciones, los compuestos pueden existir como tautómeros . Todos los tautómeros se incluyen dentro del alcance de los compuestos presentados aquí. Adicionalmente , los compuestos descritos aquí pueden existir en formas no solvatadas así como también en formas solvatadas con solventes farmacéuticamente aceptables tales como agua, etanol, y similares. Las formas solvatadas de los compuestos presentados aquí, también están consideradas a ser descritas aquí .
En ciertas modalidades, las composiciones provistas aquí también pueden incluir uno o más conservadores para inhibir la actividad microbiana. Los conservadores adecuados incluyen compuestos de amonio cuaternario tales como cloruro de benzalconio, bromuro de cetiltrimetilamonio y cloruro de cetilpiridinio .
Las preparaciones farmacéuticas para el uso oral pueden obtenerse mezclando uno o más excipientes sólidos con uno o más de los compuestos descritos aquí (por ejemplo los compuestos de Fórmulas (I) - (V) ) , opcionalmente moliendo la mezcla resultante, y procesando la mezcla de granulos, después de agregar los auxiliares adecuados, si se desea, para obtener tabletas, pildoras, o cápsulas. Los excipientes adecuados incluyen, por ejemplo, rellenadores tales como azúcares, incluyendo lactosa, sucrosa, manitol, o sorbitol; preparaciones de celulosa tales como, por ejemplo, almidón de maíz, almidón de trigo, almidón de arroz, almidón de papa, gelatina, goma tragacanto, metilcelulosa, celulosa microcristalina, hidroxipropilmetilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio; u otros tales como: polivinilpirrolidona (PVP o povidona) o fosfato de calcio. Si se desea, pueden agregarse agentes de desintegración, tales como la croscarmelosa de sodio reticulada, polivinilpirrolidona, agar, o ácido algínico o una sal de los mismos tal como el alginato de sodio.
Los núcleos de las grageas se proporcionan con revestimientos adecuados. Para este propósito, pueden utilizarse soluciones concentradas de azúcar, las cuales pueden opcionalmente contener goma arábiga, talco, polivinilpirrolidona, gel de carbopol, polietilenglicol , y/o dióxido de titanio, soluciones de laca, y solventes orgánicos adecuados o mezclas de solventes. Pueden agregarse colorantes o pigmentos a los revestimientos de las tabletas o grageas para la identificación o para caracterizar diferentes combinaciones de dosis del compuesto activo.
Las preparaciones farmacéuticas que pueden utilizarse oralmente incluyen cápsulas duras hechas de gelatina, así como también cápsulas suaves, selladas, hechas de gelatina y un plastificante , tal como glicerol o sorbitol . Las cápsulas duras pueden contener los ingredientes activos en mezcla con rellenador tal como la lactosa, aglutinantes tales como los almidones, y/o lubricantes tales como el talco o estearato de magnesio y, opcionalmente, estabilizadores. En las cápsulas suaves, los compuestos activos pueden disolverse o suspenderse en líquidos adecuados, tales como aceites grasos, parafina líquida, o polietilenglicoles líquidos. Además, pueden agregarse estabilizadores.
En algunas modalidades, las formas de dosificación sólidas descritas aquí pueden estar en la forma de una tableta, (incluyendo una tableta de suspensión, una tableta de rápida fundición, una tableta de desintegración por mordedura, una tableta de desintegración rápida, una tableta efervescente, o una capleta) , una pildora, un polvo (incluyendo un polvo empacado estéril, un polvo dispensable, o un polvo efervescente) , una cápsula (incluyendo tanto cápsulas suaves como duras, por ejemplo, cápsulas hechas de gelatina derivada de animales o HPMC derivado de plantas, o "cápsulas dispersables" ) , dispersiones sólidas, solución sólida, forma de dosificación bioerosionable , formulaciones de liberación controlada, formas de dosificación de liberación pulsátil, formas de dosificación multiparticuladas , pelets, gránulos, o un aerosol. En otras modalidades, la formulación farmacéutica está en la forma de un polvo. En aún otras modalidades, la formulación farmacéutica está en la forma de una tableta, incluyendo pero no limitado a, una tableta de rápida fundición.
Adicionalmente , las formulaciones farmacéuticas de los compuestos descritos aquí, pueden administrarse como una forma de dosificación de una sola cápsula o de múltiples cápsulas. En algunas modalidades, la formulación farmacéutica se administra en dos, o tres, o cuatro, cápsulas o tabletas.
En algunas modalidades, las formas de dosificación sólidas, por ejemplo, las tabletas, las tabletas efervescentes, y las cápsulas, se preparan mezclando partículas de un compuesto de Fórmulas (I) - (V) descrito aquí, con uno o más excipientes farmacéuticos para formar una composición de mezcla en volumen. Al referirse a estas composiciones de mezcla en volumen como homogéneas, se entiende que las partículas del compuesto de Fórmulas (I) -(V) descrito aquí, se dispersan uniformemente en la composición de modo que la composición puede subdividirse en formas de dosificación unitaria igualmente efectivas, tales como las tabletas, las pildoras, y las cápsulas. Las dosis unitarias individuales también pueden incluir revestimientos de película, que se desintegran sobre la ingestión oral o sobre el contacto con el diluente. Estas formulaciones se pueden fabricar mediante técnicas farmacológicas convencionales .
Las formas de dosificación sólidas, farmacéuticas, descritas aquí pueden incluir un compuesto de Fórmulas (I) -(V) descrito aquí, y uno o más aditivos f rmacéuticamente aceptables tales como un portador, aglutinante, agente de rellenado, agente de suspensión, agente saborizante, agente dulcificante, agente de desintegración, agente de dispersión, surfactante, lubricante, colorante, diluente, agente de solubilización, agente de humidificación, plastificante , estabilizador, mej orador de penetración, agente de humectación, agente anti-espumante , antioxidante, conservador, o una o más combinaciones de los mismos, compatibles. En aún otros aspectos, utilizando procedimientos de revestimiento estándar, tales como aquellos descritos en Remington's Pharmaceutical Sciences, 20a Edición (2000), se proporciona un revestimiento de película alrededor de la formulación del compuesto descrito aquí. En una modalidad, se revisten algunas o todas las partículas del compuesto descrito aquí. En otra modalidad, se microencapsulan algunas o todas las partículas del compuesto descrito aquí . En aún otra modalidad, las partículas del compuesto descrito aquí no se microencapsulan y no se revisten.
Los portadores adecuados para el uso en las formas de dosificación sólidas descritas aquí incluyen, pero no se limitan a, acacia, gelatina, dióxido de silicio coloidal, glicerofosf to de calcio, lactato de calcio, maltodextrina, glicerina, silicato de magnesio, caseinato de sodio, lecitina de soya, cloruro de sodio, fosfato de tricalcio, fosfato de dipotasio, estearoil lactilato de sodio, carragenano, monoglicérido, diglicérido, almidón pregelatinizado, hidroxipropilmetilcelulosa, estearato acetato de hidroxipropilmetilcelulosa, sucrosa, celulosa microcristalina, lactosa, manitol y similares.
Los agentes de rellenado adecuados para el uso en las formas de dosificación sólidas descritas aquí incluyen, pero no se limitan a, lactosa, carbonato de calcio-, fosfato de calcio, fosfato de calcio dibásico, sulfato de calcio, celulosa microcristalina, polvo de celulosa, dextrosa, dextratos, dextran, almidones, almidón pregelatinizado, hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) , ftalato de hidroxipropilmetilcelulosa, estearato acetato de hidroxipropilmetilcelulosa (HPMCAS) , sucrosa, xilitol, lactitol, manitol, sorbitol, cloruro de sodio, polietilenglicol , y similares.
Para liberar el compuesto de Fórmulas (I) - (V) de una matriz de la forma de dosificación sólida tan eficientemente como sea posible, a menudo se utilizan agentes de desintegración en la formulación, especialmente cuando las formas de dosificación se comprimen con el aglutinante. Los agentes de desintegración ayudan a romper la matriz de la forma de dosificación mediante el hinchamiento o la acción capilar cuando la humedad se absorbe en la forma de dosificación. Los agentes de desintegración adecuados para el uso en las formas de dosificación sólidas descritas aquí incluyen, pero no se limitan a, almidón natural tal como almidón de maíz o almidón de papa, un almidón pregelatinizado tal como Nacional 1551 o Amijel®, o almidón glicolato de sodio tal como Promogel® o Explotab®, una celulosa tal como un producto de madera, celulosa metilcristalina, por ejemplo, Avicel®, Avicel® PH101, Avicel® PH102, Avicel® PH105, Elcema® P100, Emcocel®, Vivacel®, Ming Tia®, y Solka-Floc®, metilcelulosa, croscarmelosa, o una celulosa reticulada, tal como la carboximetilcelulosa de sodio reticulada (Ac-Di-Sol®) , carboximetilcelulosa reticulada, o croscarmelosa reticulada, un almidón reticulado tal como el almidón glicolato de sodio, un polímero reticulado tal como crospovidona, una polivinilpirrolidona reticulada, un alginato tal como el ácido algínico o una sal de ácido algínico tal como alginato de sodio, una arcilla tal como Veegum® HV (silicato de aluminio-magnesio), una goma tal como agar, guar, goma garrofin, Karaya, pectina, o tragacanto, almidón glicolato de sodio, bentonita, una esponja natural, un surfactante, una resina tal como una resina de intercambio de cationes, pulpa cítrica, laurilsulfato de sodio, laurilsulfato de sodio en combinación con almidón, y similares .
Los aglutinantes imparten cohesión a las formulaciones sólidas de forma de dosificación oral: para la formulación de cápsula rellena de polvo, ayudan en la formación del tapón que pueden llenarse en cápsulas de coraza suave o dura y para las formulación de tableta, aseguran que la tableta permanezca intacta después de la compresión y ayudan a asegurar una uniformidad de la mezcla antes de una etapa de compresión o llenado. Los materiales adecuados para el uso como aglutinantes en las formas de dosificación sólidas descritas aquí incluyen, pero no se limitan a, carboximetilcelulosa, metilcelulosa (por ejemplo, Methocel®) , hidroxipropilmetilcelulosa (por ejemplo Hipromelosa USP Pharmacoat- 603 , estearato acetato de hidroxipropilmetilcelulosa (Aqoate HS-LF y HS) , hidroxietilcelulosa, hidroxipropilcelulosa (por ejemplo, lucel®) , etilcelulosa (por ejemplo, Ethocel®) , y celulosa microcristalina (por ejemplo, Avicel®) , dextrosa microcristalina, amilosa, silicato de aluminio-magnesio, ácidos polisacáridos , bentonitas, gelatina, copolímero polivinilpirrolidona/acetato de vinilo, crospovidona , povidona, almidón, almidón pregelatinizado , tragacanto, dextrina, una azúcar, tal como sucrosa (por ejemplo, Dipac®) , glucosa, dextrosa, melaza, manitol, sorbitol, xilitol (por ejemplo, Xylitab®) , lactosa, una goma natural o sintética tal como acacia, tragacanto, goma ghatti, mucílago de cascara de isapol, almidón, polivinilpirrolidona (por ejemplo, Povidona® CL, Kollidon® CL, Polyplasdona® XL-10, y Povidona® K-12) , arabogláctana del alerce, Veegum®, polietilenglicol , ceras, alginato de sodio, y similares.
En general, los niveles de aglutinante de aproximadamente 20 a aproximadamente 70%, se utilizan en las formulaciones de cápsulas de gelatina llenas de polvo. El nivel de uso del aglutinante en las formulaciones de tabletas, varía por la compresión directa, la granulación húmeda, la compactación del rodillo, o el uso de otros excipientes tales como los rellenadores que actúan como aglutinantes moderados. En algunas modalidades, los formuladores determinan el nivel de aglutinante para las formulaciones, pero es común el nivel de uso de aglutinante de hasta 70% en las formulaciones de tabletas.
Los deslizantes o lubricantes adecuados para el uso en las formas de dosificación sólidas descritas aquí incluyen, pero no se limitan a, ácido esteárico, hidróxido de calcio, talco, almidón de maíz, estearil fumarato de sodio, sales de metales alcalinos y metales alcalinotérreos , tales como aluminio, calcio, magnesio, cinc, ácido esteárico, estearatos de sodio, estearato de magnesio, estearato de cinc, ceras, Stearowet®, ácido bórico, benzoato de sodio, acetato de sodio, cloruro de sodio, leucina, un polietilenglicol o un metoxipolietilenglicol tal como Carbowax™, PEG 4000, PEG 5000, PEG 6000, propilenglicol , oleato de sodio, behenato de glicerilo, palmitostearato de glicerilo, benzoato de glicerilo, laurilsulfato de magnesio o sodio, y similares.
Los diluentes adecuados para el uso en las formas de dosificación sólidas descritas aquí incluyen, pero no se limitan a, azúcares (incluyendo lactosa, sucrosa, y dextrosa) , polisacáridos (incluyendo dextratos y maltodextrina) , polioles (incluyendo manitol, xilitol, y sorbitol) , ciclodextrinas y similares.
Los agentes de humectación adecuados para el uso en las formas de dosificación sólidas descritas aquí incluyen, por ejemplo, ácido oleico, monoestearato de glicerilo, monooleato de sorbitan, monolaurato de sorbitan, oleato de trietanolamina, monooleato de polioxietileno sorbitan, monolaurato de polioxietileno sorbitan, compuestos de amonio cuaternario (por ejemplo, Polyquat 10®), oleato de sodio, laurilsulfato de sodio, estearato de magnesio, docusato de sodio, triacetina, vitamina E TPGS y similares.
Los surfactantes adecuados para el uso en las formas de dosificación sólidas descritas aquí incluyen, por ejemplo, laurilsulfato de sodio, monooleato de sorbitan, monooleato de polioxietileno sorbitan, polisorbatos , polaxómeros, sales biliares, monoestearato de glicerilo, copolímeros de óxido de etileno y óxido de propileno, por ejemplo, Pluronic® (BASF) , y similares .
Los agentes de suspensión adecuados para el uso en las formas de dosificación sólidas descritas aquí incluyen, pero no se limitan a, polivinilpirrolidona, por ejemplo, polivinilpirrolidona K12, polivinilpirrolidona K17, polivinilpirrolidona K25, o polivinilpirrolidona K30, polietilenglicol, por ejemplo, el polietilenglicol puede tener un peso molecular de aproximadamente 300 a aproximadamente 6000, o aproximadamente 3350 a aproximadamente 4000, o aproximadamente 5400 a aproximadamente 7000, copolímero de vinil pirrolidona/acetato de vinilo (S630):, carboximetilcelulosa de sodio, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, polisorbato- 80 , hidroxietilcelulosa, alginato de sodio, gomas, tales como, por ejemplo, goma tragacanto y goma acacia, goma guar, xantanos , incluyendo goma xanthan, azúcares, celulósicos, tales como, por ejemplo, carboximetilcelulosa de sodio, metilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio, hidroxipropilmetilcelulosa, hidroxietilcelulosa, polisorbato-80, alginato de sodio, monolaurato de sorbitan polietoxilado, povidona y similares.
Los antioxidantes adecuados para el uso en las formas de dosificación sólidas descritas aquí incluyen, por ejemplo, hidroxitolueno butilado (BHT) , ascorbato de sodio, y tocoferol .
Existe traslape considerable entre los aditivos utilizados en las formas de dosificación sólidas descritas aquí. Así, los aditivos anteriormente listados deberían tomarse como meramente ejemplares, y no como limitativos, de los tipos de aditivos que pueden incluirse en las formas de dosificación sólidas de las composiciones farmacéuticas descritas aquí.
En otras modalidades, se plastifica una o más capas de la formulación f rmacéutica. Ilustrativamente, un plastificante es generalmente un sólido o un líquido con alto punto de ebullición. Los plastificantes adecuados pueden agregarse de aproximadamente 0.01% a aproximadamente 50% en peso (peso/peso) de la composición de revestimiento. Los plastificantes incluyen, pero no se limitan a, ftalato de dietilo, ésteres de citrato, polietilenglicol , glicerol, glicéridos acetilados, triacetina, polipropilenglicol , polietilenglicol, citrato de trietilo, sebacato de dibutilo, ácido esteárico, estearol, estearato, y aceite de ricino.
Las tabletas comprimidas son formas de dosificación sólidas preparadas compactando la mezcla en volumen de las formulaciones descritas anteriormente. En varias modalidades, las tabletas comprimidas que se diseñan para disolverse en la boca incluirán uno o más agentes saborizantes . En otras modalidades, las tabletas comprimidas incluirán una película que rodea la tableta comprimida final. En algunas modalidades, el revestimiento de película puede proporcionar una liberación retardada de los compuestos de Fórmulas (I) - (V) descritos aquí de la formulación. En otras modalidades, el revestimiento de película ayuda en la conformidad del paciente (por ejemplo, los revestimientos Opadry® o revestimientos de azúcar) . Los revestimientos de película incluyendo a Opadry® típicamente varían en el rango de aproximadamente 1% a aproximadamente 3% del peso de la tableta. En otras modalidades, las tabletas comprimidas incluyen uno o más excipientes.
Una cápsula puede prepararse, por ejemplo, colocando la mezcla en volumen de la formulación del compuesto descrito anteriormente, dentro de una cápsula. En algunas modalidades, las formulaciones (soluciones y suspensiones no acuosas) se colocan en una cápsula suave de gelatina. En otras modalidades, las formulaciones se colocan en cápsulas de gelatina estándar o cápsulas de no gelatina tales como las cápsulas que comprenden HPMC. En otras modalidades, la formulación se coloca en una cápsula dispersable, en donde la cápsula se traga completamente o la cápsula se puede abrir y el contenido se puede espolvorear en la comida antes de comer. En algunas modalidades, la dosis terapéutica se divide en múltiples cápsulas (por ejemplo, dos', tres, o cuatro). En algunas modalidades, la dosis completa de la formulación se entrega en una forma de cápsula.
En varias modalidades, las partículas del compuesto de Fórmulas (I) - (V) descrito aquí y uno o más excipientes, se mezclan en seco y se comprimen en una masa, tal como una tableta, que tiene una dureza suficiente para proporcionar una composición farmacéutica que sustancialmente se desintegra dentro de menos que aproximadamente 30 minutos, menos que aproximadamente 35 minutos, menos que aproximadamente 40 minutos, menos que aproximadamente 45 minutos, menos que aproximadamente 50 minutos, menos que aproximadamente 55 minutos, o menos que aproximadamente 60 minutos, después de la administración oral, liberando consecuentemente la formulación en el fluido gastrointestinal .
En otro aspecto, las formas de dosificación pueden incluir formulaciones microencapsuladas . En algunas modalidades, uno o más materiales compatibles adicionales están presentes en el material de microencapsulación . Los materiales ejemplares incluyen, pero no se limitan a, modificadores de pH, facilitadores de erosión, agentes anti-espumado, antioxidantes, agentes saborizantes, y materiales portadores tales como los aglutinantes, agentes de suspensión, agentes de desintegración, agentes de rellenado, surfactantes , agentes de solubilización, estabilizadores, lubricantes, agentes de humectación, y diluentes.
Los materiales útiles para la microencapsulación descrita aquí incluyen materiales compatibles con los compuestos descritos aquí, que aislan suficientemente el compuesto de otros excipientes no compatibles. Los materiales compatibles con los compuestos descritos aquí, son aquellos que retardan la liberación de los compuestos de Fórmulas (I) - (V) in vivo.
Los materiales de microencapsulación ejemplares útiles para retardar la liberación de las formulaciones que incluyen los compuestos descritos aquí, incluyen, pero no se limitan a, éteres de hidroxipropil celulosa (HPC) tales como Klucel® o Nisso HPC, éteres de hidroxipropil celulosa bajo sustituidos (L-HPC) , éteres de hidroxipropil metil celulosa (HP C) tales como Seppifilm-LC, Pharmacoat®, Metolosa SR, Methocel®-E, Opadry YS , PrimaFlo, Benecel MP824, y Benecel MP843, polímeros de metilcelulosa tales como Methocel®-A, estearato acetato de hidroxipropilmetilcelulosa Aqoat (HF-LS, HF-LG, HF-MS) y Metolosa®, Etilcelulosas (EC) y mezclas de los mismos tales como E461, Ethocel®, Aqualon®-EC, Sureleasa®, Alcohol polivinílico (PVA) tal como Opadry AMB, hidroxietilcelulosas tales como Natrosol®, carboximetilcelulosas y sales de carboximetilcelulosas (CMC) tales como Aqualon®-CMC, co-polímeros de polietilenglicol y alcohol polivinílico tales como Kollicoat IR®, monoglicéridos (Myverol) , triglicéridos (KLX) , polietilenglicoles , almidón modificado de comida, polímeros acrílicos y mezclas de polímeros acrílicos con éteres de celulosa tales como Eudragit® EPO, Eudragit® L30D-55, Eudragit® FS 30D Eudragit® L100-55, Eudragit® L100, Eudragit® S100, Eudragit® RD100, Eudragit® E100, Eudragit® L12.5, Eudragit® S12.5, Eudragit® NE30D, y Eudragit® NE 40D, ftalato acetato de celulosa, revestimientos sepifilm tales como mezclas de HPMC y ácido esteárico, ciclodextrinas , y mezclas de estos materiales.
En aún otras modalidades, los plastificantes tales como los polietilenglicoles, por ejemplo, PEG 300, PEG 400, PEG 600, PEG 1450, PEG 3350, y PEG 800, ácido esteárico, propilenglicol , ácido oleico, y triacetina se incorporan en el material de microencapsulacion. En otras modalidades, el material de microencapsulacion útil para retardar la liberación de las composiciones farmacéuticas es de la USP o del Formulario Nacional (NF) . En aún otras modalidades, el material de microencapsulacion es Klucel. En aún otras modalidades, el material de microencapsulacion es methocel.
Los compuestos microencapsulados descritos aquí pueden formularse por métodos que incluyen, por ejemplo, procesos de secado por rociado, procesos de solvente por discos giratorio, procesos de fundición en caliente, métodos de enfriamiento por pulverización, lecho fluidizado, deposición electrostática, extrusión centrífuga, separación por suspensión giratoria, polimerización en la interfaz líquido-gas o sólido-gas, extrusión por presión, o baño de extracción de solvente por rociado. Además de estos, también podrían utilizarse varias técnicas químicas, por ejemplo, coacervación de complejo, evaporación de solvente, incompatibilidad polímero-polímero, polimerización interfacial en el medio líquido, polimerización in situ, secado en líquido, y desolvación en el medio líquido. Además, también pueden utilizarse otros métodos tales como la compactación con rodillo, extrusión/esferonización, coacervación, o revestimiento con nanopartículas .
En aún otras modalidades, los polvos efervescentes también se preparan de acuerdo con la presente descripción. Las sales efervescentes se han utilizado para dispersar las medicinas en agua para la administración oral. Las sales efervescentes son gránulos o polvos gruesos que contienen un agente medicinal en una mezcla seca, usualmente compuesta de bicarbonato de sodio, ácido cítrico y/o ácido tártrico. Cuando tales sales se agregan al agua, los ácidos y la base reaccionan para liberar gas de dióxido de carbono, causando por consiguiente "efervescencia". Los ejemplos de sales efervescentes incluyen, por ejemplo, los siguientes ingredientes: bicarbonato de sodio o una mezcla de bicarbonato de sodio y carbonato de sodio, ácido cítrico y/o ácido tártrico. Cualquier combinación ácido-base que dé como resultado la liberación de dióxido de carbono, puede utilizarse en lugar de la combinación de bicarbonato de sodio y ácidos cítrico y tártrico, siempre y cuando los ingredientes sean adecuados para el uso farmacéutico y den como resultado un pH de aproximadamente 6.0 o más.
En otras modalidades, las formulaciones descritas aquí, las cuales incluyen un compuesto descrito aquí, son dispersiones sólidas. Los métodos para producir tales dispersiones sólidas incluyen, pero no se limitan a, por ejemplo, las Patentes Norteamericanas Números 4,343,789, 5,340,591, 5,456,923, 5,700,485, 5,723,269, y la Publicación de Patente Norteamericana Número 2004/0013734. En aún otras modalidades, las formulaciones descritas aquí son soluciones sólidas. Las soluciones sólidas incorporan una sustancia conjuntamente con el agente activo y otros excipientes tal que el calentamiento de la mezcla da como resultado la disolución del fármaco y la composición resultante se enfría posteriormente para proporcionar una mezcla sólida que puede adicionalmente formularse o agregarse directamente a una cápsula o comprimirse en una tableta. Los métodos para producir tales soluciones sólidas incluyen, pero no se limitan a, por ejemplo, las Patentes Norteamericanas Números 4,151,273, 5,281,420, y 6,083,518.
Las formas de dosificación oral sólidas, farmacéutica, que incluyen las formulaciones descritas aquí, que incluyen un compuesto descrito aquí, pueden formularse adicionalmente para proporcionar una liberación controlada del compuesto de Fórmulas (I) - (V) . La liberación controlada se refiere a la liberación de los compuestos descritos aquí, de una forma de dosificación en que se incorpora de acuerdo con un perfil deseado durante un periodo de tiempo extendido. Los perfiles de liberación controlada incluyen, por ejemplo, perfiles de liberación sostenida, liberación prolongada, liberación pulsátil, y liberación retardada. En contraste a las composiciones de liberación inmediata, las composiciones de liberación controlada permiten la entrega de un agente a un sujeto sobre un periodo de tiempo extendido de acuerdo con un perfil predeterminado. Tales velocidades de liberación pueden proporcionar niveles de agente terapéuticamente efectivos durante un periodo de tiempo extendido y por consiguiente pueden proporcionar un periodo más largo de respuesta farmacológica mientras que minimizan los efectos secundarios según se compara a las formas de dosificación de rápida liberación, convencionales. Tales periodos más largos de respuesta proporcionan muchos beneficios inherentes que no se logran con las preparaciones de liberación inmediata de corta actuación correspondientes.
En algunas modalidades, las formas de dosificación sólidas descritas aquí pueden formularse como formas de dosificación oral de liberación retardada con revestimiento entérico, es decir, como una forma de dosificación oral de una composición farmacéutica como se describe aquí, la cual utiliza un revestimiento entérico para afectar la liberación en el intestino delgado del tracto gastrointestinal. La forma de dosificación con revestimiento entérico puede ser un molde/tableta comprimida o moldeada o extrudida (revestida o no revestida) que contiene granulos, polvo, pelets, cuentas o partículas del ingrediente activo y/u otros componentes de la composición, los cuales están revestidos o no revestidos. La forma de dosificación oral con revestimiento entérico también puede ser una cápsula (revestida o no revestida) que contiene pelets, cuentas o granulos del portador sólido o de la composición, los cuales están revestidos o no revestidos.
El término "liberación retardada" como se utiliza aquí se refiere a la entrega de modo que la liberación se pueda lograr en alguna ubicación generalmente previsible en el tracto intestinal más distante a aquella que se habría logrado si no hubieran habido alteraciones de liberación retardada. En algunas modalidades el método para el retardo de la liberación es un revestimiento. Cualquier revestimiento debería aplicarse en un espesor suficiente tal que el revestimiento completo no se disuelva en los fluidos gastrointestinales en pH debajo de aproximadamente 5, pero que se disuelva en pH de aproximadamente 5 y más. Los revestimientos se hacen de: Polímeros acrílicos. El desempeño de los polímeros acrílicos (principalmente su solubilidad en los fluidos biológicos) puede variar con base en el grado y tipo de sustitución. Ejemplos de los polímeros acrílicos adecuados incluyen los copolímeros de ácido metacrílico y los copolímeros de metacrilato de amonio. Las series Eudragit E, L, S, RL, RS y NE (Rohm Pharma) , están disponibles como dispersiones acuosas o polvos secos, solubilizados en solventes orgánicos. Las series Eudragit RL, NE, y RS son insolubles en el tracto gastrointestinal pero son permeables y se utilizan primordialmente para la focalización colónica. Las series E Eudragit se disuelven en el estómago. Las series L, L-30D y S Eudragit son insolubles en el estómago y se disuelven en el intestino; Derivados de Celulosa. Ejemplos de derivados de celulosa adecuados son: etil celulosa; mezclas de reacción de ésteres . parciales de acetato de celulosa con anhídrido ftálico. El desempeño puede variar con base en el grado y tipo de sustitución. El ftalato acetato de celulosa (CAP) se disuelve en pH > 6. Aquateric (FMC) es un sistema con base acuosa y es un suedolatex CAP secado por rociado con partículas < 1 ym. Otros componentes en Aquateric pueden incluir pluronicos, Tweens, y monoglicéridos acetilados. Otros derivados de celulosa adecuados incluyen: trimelitato acetato de celulosa (Eastman) ; metilcelulosa (Pharmacoat, Methocel) ; ftalato de hidroxipropilmetilcelulosa (HPMCP) ; succinato de hidroxipropilmetilcelulosa (HP CS) ; y succinato acetato de hidroxipropilmetilcelulosa (por ejemplo, AQOAT (Shin Etsu) ) . El desempeño puede variar con base en el grado y tipo de sustitución. Por ejemplo, son adecuados los grados HPMCP tales como, HP-50, HP-55, HP-55S, HP-55F. El desempeño puede variar con base en el grado y tipo de sustitución. Por ejemplo, los grados adecuados de succinato acetato de hidroxipropilmetilcelulosa incluyen, pero no se limitan a, AS-LG (LF) , que se disuelve en pH 5, AS-MG (MF) , que disuelve en pH 5.5, y AS-HG (HF) , que disuelve en pH más alto. Estos polímeros se presentan como gránulos, o como polvos finos para las dispersiones acuosas.
Ftalato Acetato de Polivinilo (PVAP) . El PVAP se disuelve en pH > 5, y es mucho menos permeable al vapor de agua y a los fluidos gástricos.
En algunas modalidades, el revestimiento puede contener, y usualmente contiene, un plastificante y posiblemente otros excipientes de revestimiento tales como colorantes, talco, y/o estearato de magnesio. Los plastificantes adecuados incluyen citrato de trietilo (Citroflex 2) , triacetina (triacetato de glicerilo) , acetil trietil citrato (Citroflec A2) , Carbowax 400 (polietilenglicol 400) , ftalato de dietilo, citrato de tributilo, monoglicéridos acetilados, glicerol, ésteres de ácidos grasos, propilenglicol , y ftalato de dibutilo. En particular, los polímeros acrílicos carboxílicos aniónicos usualmente contendrán 10-25% en peso de un plastificante , especialmente el ftalato de dibutilo, polietilenglicol, citrato de trietilo y triacetina. Se emplean técnicas convencionales de revestimiento tales como el revestimiento por pulverización o mortero para aplicar los revestimientos. El espesor del revestimiento debe ser suficiente para asegurar que la forma de dosificación oral permanezca intacta hasta que se alcance el sitio de entrega tópica deseado en el tracto intestinal.
Pueden agregarse colorantes, desaglutinantes, surfactantes , agentes anti-espumado, lubricantes (por ejemplo, cera carnauba o PEG) a los revestimientos además de plastificantes para solubilizar o dispersar el material de revestimiento, y para mejorar el desempeño del revestimiento y el producto revestido.
En otras modalidades, las formulaciones descritas aquí, las cuales incluyen un compuesto de Fórmulas (I) - (V) descrito aquí, se entregan utilizando una forma de dosificación pulsátil. Una forma de dosificación pulsátil es capaz de proporcionar uno o más pulsos de liberación inmediata en puntos de tiempo predeterminados después de un tiempo de inactividad controlado o en sitios específicos. Las formas de dosificación pulsátil pueden administrarse utilizando una variedad de formulaciones incluyendo, pero no limitado a, aquellas descritas en las Patentes Norteamericanas Números 5,011,692; 5,017,381; 5,229,135; 5,840,329; 4,871,549; 5,260,068; 5,260,069; 5,508,040; 5,567,441 y 5,837,284.
Muchos otros tipos de sistemas de liberación controlada son adecuados para él uso con las formulaciones descritas aquí. Ejemplos de tales sistemas de entrega incluyen, por ejemplo, sistemas basados en polímeros, tales como ácido poliláctico y poliglicólico, polianhídridos y policaprolactona ; matrices porosas, sistemas basados en no polímeros que son lípidos, incluyendo esteróles, tales como colesterol, ásteres de colesterol y ácidos grasos, o grasas neutras, tales como mono-, di- y triglicéridos ; sistemas de liberación de hidrogel; sistemas silásticos; sistemas basados en péptidos; revestimientos de cera, formas de dosificación bioerosionables , tabletas comprimidas que utilizan aglutinantes convencionales y similares. Vea por ejemplo, Liberman et al., Pharmaceutical Dosage Forms, 2a Ed. , Vol . 1, pp. 209-214 (1990); Singh et al., Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, 2a Ed., pp. 751-753 (2002); Patentes Norteamericanas Números 4,327,725; 4,624,848; 4,968,509; 5,461,140; 5,456,923; 5,516,527; 5,622,721; 5,686,105; 5,700,410; 5,977,175; 6,465,014; y 6,932,983.
En algunas modalidades, las formulaciones farmacéuticas se proporcionan de modo que incluyen partículas de los compuestos descritos aquí, por ejemplo los compuestos de Fórmulas (I) - (V) , y al menos un agente de dispersión o agente de suspensión para la administración oral a un sujeto. Las formulaciones pueden ser un polvo y/o granulos para suspensión, y sobre la · mezcla con agua, se obtiene una suspensión sustancialmente uniforme.
Las formas de dosificación de formulación líquida para la administración oral, pueden ser suspensiones acuosas seleccionadas del grupo que incluye, pero no se limita a, dispersiones, emulsiones, soluciones, elixires, geles, y jarabes orales acuosos farmacéuticamente aceptables. Vea por ejemplo, Singh et al., Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, 2a Ed. , pp. 754-757 (2002) .
Las suspensiones y dispersiones acuosas descritas aquí pueden permanecer en un estado homogéneo, como se define en The USP Pharmacists' Pharmacopeia (edición 2005, capítulo 905), durante al menos 4 horas. La homogeneidad debería determinarse mediante un método de muestreo consistente con respecto a determinar la homogeneidad de la composición completa. En una modalidad, una suspensión acuosa puede re-suspenderse en una suspensión homogénea mediante una agitación física que dura menos que 1 minuto. En otra modalidad, una suspensión acuosa puede re- suspenderse en una suspensión homogénea mediante una agitación física que dura menos que 45 segundos. En aún otra modalidad, una suspensión acuosa puede re-suspenderse en una suspensión homogénea mediante una agitación física que dura menos que 30 segundos.
En aún otra modalidad, no es necesaria agitación alguna para mantener una dispersión acuosa homogénea.
Las composiciones farmacéuticas descritas aquí pueden incluir agentes dulcificantes tales como, pero no limitado a, jarabe acacia, acesulfama K, alitama, anís, manzana, aspartamo, plátano, crema bávara, mora, grosella negra, caramelo, citrato de calcio, alcanfor, caramelo, cereza, crema de cereza, chocolate, canela, goma de mascar, cítrico, ponche cítrico, crema cítrica, algodón de azúcar, cacao, cola, cereza fría, cítrico frío, ciclamato, cilamato, dextrosa, eucalipto, eugenol, fructosa, ponche de frutas, jengibre, glicirrhetinato, jarabe de glicirrhiza (regaliza), uva, toronja, miel, isomalta, limón, lima, crema de limón, glirrhizinato de monoamonio (MagnaSweet®) , maltol, manitol, maple, malvavisco, mentol, crema de menta, mora mixta, neohesperidina DC, neotama, naranja, pera, durazno, menta, crema de menta, Polvo Prosweet®, frambuesa, cerveza de raíz, ron, sacarina, safrol, sorbitol, yerbabuena, crema de yerbabuena, fresa, crema de fresa, stevia, sucralosa, sucrosa, sacarina de sodio, sacarina, aspartamo, acesulfame de potasio, manitol, talin, sucralosa, sorbitol, crema suiza, tagatosa, mandarina, taumatina, tuttifruitti , vainilla, nuez, sandía, cereza silvestre, gaulteria, xilitol, o cualquier combinación de estos ingredientes saborizantes , por ejemplo, anís-mentol, cereza-anís, canela-naranja, cereza-canela, chocolate-menta, miel-limón, lima-limón, limón-menta, mentol-eucalipto, naranj a-crema, vainilla-menta, y mezclas de los mismos .
Las formulaciones farmacéuticas descritas aquí pueden ser sistemas de entrega de fármaco auto-emulsificables (SEDDS) . Las emulsiones son dispersiones de una fase inmiscible en otra, usualmente en la forma de gotitas. Generalmente, las emulsiones se crean por la dispersión mecánica vigorosa. Los SEDDS, a distinción de las emulsiones o micro-emulsiones, forman espontáneamente emulsiones cuando se agrega a un exceso de agua sin dispersión o agitación mecánica externa alguna. Una ventaja de los SEDDS es que sólo se requiere un mezclado moderado para distribuir las gotitas en toda la solución. Adicionalmente , el agua o la fase acuosa puede agregarse justo antes de la administración, lo cual asegura la estabilidad de un ingrediente activo inestable o hidrofóbico. Así, los SEDDS proporcionan un sistema efectivo de entrega para la entrega oral y parenteral de los ingredientes activos hidrofóbicos . Los SEDDS pueden proporcionar mejoras en la biodisponibilidad de los ingredientes activos hidrofóbicos . Los métodos para producir formas de dosificación auto-emulsificables incluyen, pero no se limitan a, por ejemplo, las Patentes Norteamericanas Números 5,858,401, 6,667,048, y 6,960,563.
Existe traslape entre los aditivos anteriormente listados utilizados en las dispersiones o suspensiones acuosas descritas aquí, debido a que a menudo un aditivo dado se clasifica de manera diferente por diferentes practicantes en el campo, o a que se utiliza comúnmente para cualquiera de varias funciones diferentes. Así, los aditivos anteriormente listados se toman como meramente ejemplares, y no como limitativos, de los tipos de aditivos que pueden incluirse en las formulaciones descritas aquí.
Los excipientes potenciales para las formulaciones intranasales incluyen, por ejemplo las Patentes Norteamericanas Números 4,476,116, 5,116,817 y 6,391,452. Las formulaciones se preparan como soluciones en solución salina, empleando alcohol bencílico u otros conservadores, f luorocarburos , y/u otros agentes de solubilización o dispersión adecuados. Vea, por ejemplo, Ansel, H. C. et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Sexta Ed. (1995) . Preferiblemente estas composiciones y formulaciones se preparan con ingredientes f rmacéuticamente aceptables adecuados, no tóxicos. La elección de los portadores adecuados es altamente dependiente de la naturaleza exacta de la forma de dosificación nasal deseada, por ejemplo, soluciones, suspensiones, ungüentos, o geles.
Las formas de dosificación nasal generalmente contienen grandes cantidades de agua además del ingrediente activo. También pueden estar presentes cantidades menores de otros ingredientes tales como ajustadores de pH, emulsificadores o agentes de dispersión, conservadores, surfactantes , agentes de gelificación, o agentes de amortiguación y otros agentes de estabilización y solubilización. Preferiblemente, la forma de dosificación nasal debería ser isotónica con las secreciones nasales.
Para la administración por inhalación, los compuestos descritos aquí pueden estar en una forma como un aerosol, una niebla o un polvo. Las composiciones farmacéuticas descritas aquí se entregan convenientemente en la forma de una presentación de pulverizador de aerosol de paquetes presurizados o de un nebulizador, con el uso de un propelente adecuado, por ejemplo, diclorodifluorometano , triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado. En el caso de un aerosol presurizado, la unidad de la dosis puede determinarse proporcionando una válvula para entregar una cantidad medida. Las cápsulas y los cartuchos de, tal como, únicamente a manera de ejemplo, gelatina para el uso en un inhalador o insuflador, pueden formularse de modo que contengan una mezcla en polvo del compuesto descrito aquí y una base en polvo adecuada tal como lactosa o almidón.
Las formulaciones bucales que incluyen los compuestos descritos aquí, pueden administrarse utilizando una variedad de formulaciones que incluye, pero no se limitan a, las Patentes Norteamericanas Números 4,229,447, 4,596,795, 4,755,386, y 5,739,136. Además, las formas de dosificación bucal descritas aquí pueden incluir además un portador polimérico bioerosionable (hidrolizable) que también sirve para adherir la forma de dosificación a la mucosa bucal. La forma de dosificación bucal se fabrica a fin de erosionarse gradualmente sobre un periodo de tiempo predeterminado, en donde la entrega del compuesto se proporciona esencialmente completamente. La entrega del fármaco bucal, evita las desventajas encontradas con la administración del fármaco oral, por ejemplo, baja absorción, degradación del agente activo por los fluidos presentes en el tracto gastrointestinal y/o inactivación por primer paso en el hígado. Con relación al portador polimérico bioerosionable (hidrolizable) , virtualmente puede utilizarse cualquier tal portador, siempre y cuando el perfil deseado de liberación del fármaco no esté comprometido, y que el portador sea compatible con los compuestos descritos aquí, y con cualquiera de los otros componentes que puedan estar presentes en la unidad de dosificación bucal. Generalmente, el portador polimérico comprende polímeros hidrofílicos (solubles en agua e hinchables en agua) que se adhieren a la superficie húmeda de la mucosa bucal. Ejemplos de portadores poliméricos útiles aquí incluyen polímeros de ácido acrílico y co, por ejemplo, aquellos conocidos como "carbómeros" (Carbopol®, que se obtiene a partir de B.F. Goodrich, es un tal polímero) . Otros componentes también pueden incorporarse en las formas de dosificación bucal descritas aquí e incluyen, pero no se limitan a, agentes de desintegración, diluentes, aglutinantes, lubricantes, saborizantes , colorantes, conservadores, y similares. Para la administración bucal o sublingual, las composiciones pueden tomar la forma de tabletas, pastillas, o geles formulados en una manera convencional .
Las formulaciones transdérmicas descritas aquí pueden administrarse utilizando una variedad de dispositivos incluyendo, pero no limitado a, las Patentes Norteamericanas Números 3,598,122, 3,598,123, 3,710,795, 3,731,683, 3,742,951, 3,814,097, 3,921,636, 3,972,995, 3,993,072, 3,993,073, 3,996,934, 4,031,894, 4,060,084, 4,069,307, 4,077,407, 4,201,211, 4,230,105, 4,292,299, 4,292,303, 5,336,168, 5,665,378, 5,837,280, 5,869,090, 6,923,983, 6,929,801 y 6,946,144.
Las formas de dosificación transdérmica descritas aquí pueden incorporar ciertos excipientes farmacéuticamente aceptables que son convencionales en el arte. En una modalidad, las formulaciones transdérmicas descritas aquí incluyen al menos tres componentes: (1) una formulación de un compuesto de Fórmulas (I) - (V) ; (2) un mej orador de penetración; y (3) un adyuvante acuoso. Además, las formulaciones transdérmicas pueden incluir componentes adicionales tales como, pero no limitado a, agentes de gelif icación, cremas y bases de ungüento, y similares. En algunas modalidades, la formulación transdérmica puede incluir además un material de soporte tejido o no tejido para mejorar la absorción y prevenir la remoción de la formulación transdérmica de la piel. En otras modalidades, las formulaciones transdérmicas descritas aquí pueden mantener un estado saturado o supersaturado para promover la difusión en la piel.
Las formulaciones adecuadas para la administración transdérmica de los compuestos descritos aquí, pueden emplear dispositivos de entrega transdérmica y parches de entrega transdérmica y pueden ser emulsiones lipofílicas o soluciones acuosas amortiguadas, disueltas y/o dispersadas en un polímero o en un adhesivo. Tales parches pueden construirse para la entrega continua, pulsátil o sobre demanda, de los agentes f rmacéuticos. Aún más, la entrega transdérmica de los compuestos descritos aquí, puede lograrse por medio de parches iontoforéticos y similares. Adicionalmente , los parches transdérmicos pueden proporcionar una entrega controlada de los compuestos descritos aquí. La velocidad de absorción puede ¦ desacelerarse utilizando membranas que controlan la velocidad o atrapando el compuesto dentro de un gel o matriz polimérica. Inversamente, los mejoradores de absorción pueden utilizarse para incrementar la absorción. Un mej orador de absorción o un portador incluye solventes f rmacéuticamente aceptables, absorbibles, para ayudar al paso a través de la piel. Por ejemplo, los dispositivos transdérmicos están en la forma de un vendaje que comprende un miembro de soporte, un depósito que contiene el compuesto opcionalmente con portadores, opcionalmente una barrera que controla la velocidad para entregar el compuesto a la piel del huésped en una velocidad controlada y predeterminada durante un periodo de tiempo prolongado, y medios para asegurar el dispositivo a la piel.
Las formulaciones adecuadas para la inyección intramuscular, subcutánea, o intravenosa pueden incluir soluciones, dispersiones, suspensiones o emulsiones acuosas o no acuosas, estériles, fisiológicamente aceptables, y polvos estériles para la reconstitución en soluciones o dispersiones inyectables estériles. Ejemplos de portadores, diluentes, solventes, o vehículos acuosos y no acuosos, adecuados, incluyen agua, etanol, polioles (propilenglicol , polietilenglicol , glicerol, cremofor y similares), mezclas adecuadas de los mismos, aceites vegetales (tales como aceite de oliva) y ésteres orgánicos inyectables tales como oleato de etilo. La fluidez apropiada puede mantenerse, por ejemplo, por el uso de un revestimiento tal como la lecitina, por el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de las dispersiones, y por el uso de surfactantes . Las formulaciones adecuadas para la inyección subcutánea también pueden contener aditivos tales como los agentes de conservación, humectación, emulsificación, y dispersión. La prevención del crecimiento de microorganismos puede asegurarse mediante diversos agentes antibacteriales y antimicóticos , tales como parabenos , clorobutanol , fenol, ácido sórbico, y similares. También puede ser deseable incluir agentes isotónicos, tales como azúcares, cloruro de sodio, y similares. La absorción prolongada de la forma farmacéutica inyectable puede ser causada por el uso de agentes que retardan la absorción, tales como monoestearato de aluminio y gelatina.
Para las inyecciones intravenosas, los compuestos descritos aquí pueden formularse en soluciones acuosas; preferiblemente en amortiguadores fisiológicamente compatibles tales como la solución de Hank, la solución de Ringer, o el amortiguador salino fisiológico. Para la administración transmucosa, se utilizan en la formulación fluidos penetrantes apropiados para que la barrera sea permeada. Tales fluidos penetrantes son generalmente reconocidos en el campo. Para otras inyecciones parenterales, las formulaciones apropiadas pueden incluir soluciones acuosas o no acuosas; preferiblemente con amortiguadores o excipientes fisiológicamente compatibles. Tales excipientes son generalmente reconocidos en el c mpo.
Las inyecciones parenterales pueden involucrar la inyección en bolo o la infusión continua. Las formulaciones para inyección pueden presentarse en forma de dosificación unitaria, por ejemplo, en ampollas o en recipientes multidosis, con un conservador añadido. Las composiciones farmacéuticas descritas aquí pueden estar en una forma adecuada para la inyección parenteral como una suspensión, solución o emulsión estéril en vehículos aceitosos o acuosos, y pueden contener agentes de formulación tales como agentes de suspensión, estabilización y/o dispersión. Las formulaciones farmacéuticas para la administración parenteral incluyen soluciones acuosas de los compuestos activos en forma soluble en agua. Adicionalmente , las suspensiones de los compuestos activos pueden prepararse como suspensiones de inyección aceitosas, apropiadas. Los solventes o vehículos lipofílicos adecuados incluyen aceites grasos tales como aceite ' de sésamo, o ésteres de ácidos grasos sintéticos, tales como oleato de etilo o triglicéridos , o liposomas. Las suspensiones de inyección acuosas pueden contener sustancias que incrementan la viscosidad de la suspensión, tales como carboximetil celulosa de sodio, sorbitol, o dextran. Opcionalmente , la suspensión también puede contener estabilizadores adecuados o agentes que incrementan la solubilidad de los compuestos para permitir la preparación de soluciones altamente concentradas. Alternativamente, el ingrediente activo puede estar en forma de polvo para la constitución con un vehículo adecuado, por ejemplo, agua estéril libre de pirógenos, antes del uso.
En ciertas modalidades, pueden emplearse sistemas de entrega para los compuestos farmacéuticos, tales como, por ejemplo, liposomas y emulsiones. En ciertas modalidades, las composiciones provistas aquí también incluyen un polímero mucoadhesivo , seleccionado de entre, por ejemplo, carboximetilcelulosa, carbómero (polímero de ácido acrílico) , poli (metilmetacrilato) , poliacrilamida, policarbofilo, copolímero ácido acrílico/acrilato de butilo, alginato de sodio y dextran.
En algunas modalidades, los compuestos descritos aquí pueden administrarse tópicamente y se formulan en una variedad de composiciones tópicamente administrables , tales como soluciones, suspensiones, lociones, geles, pastas, barras medicadas, bálsamos, cremas o ungüentos. Tales compuestos farmacéuticos pueden contener agentes de solubilización, estabilizadores, agentes que mejoran la tonicidad, amortiguadores y conservadores.
Los compuestos descritos aquí también pueden formularse en composiciones rectales tales como enemas, geles rectales, espumas rectales, aerosoles rectales, supositorios, supositorios de jalea, o enemas de retención, que contienen bases convencionales del supositorio tales como manteca de cacao u otros glicéridos, así como también polímeros sintéticos tales como polivinilpirrolidona, PEG, y similares. En las formas de supositorio de las composiciones, se funde primero una cera de baja fusión tal como, pero no limitado a, una mezcla de glicéridos de ácidos grasos, opcionalmente en combinación con manteca de cacao.
Generalmente, un agente, tal como un compuesto de Fórmulas (I) - (V), se administra en una cantidad efectiva para la mejora de, o la prevención del desarrollo de los síntomas de, el padecimiento o trastorno (es decir, una cantidad terapéuticamente efectiva) . Así, una cantidad terapéuticamente efectiva puede ser una cantidad que es capaz de al menos parcialmente prevenir o revertir un padecimiento o trastorno. La dosis requerida para obtener una cantidad efectiva puede variar dependiendo del agente, formulación, padecimiento o trastorno, e individuo a quién se administra el agente.
La determinación de las cantidades efectivas también puede involucrar ensayos in vitro en los cuales diversas dosis de agente se administran a las células en cultivo y se determina la concentración de agente efectivo para mejorar algunos o todos los síntomas, para calcular la concentración requerida in vivo. Las cantidades efectivas también pueden basarse en estudios animales in vivo.
Un agente puede administrarse antes de, concurrentemente con y con posterioridad a la aparición de los síntomas de un padecimiento o trastorno. En algunas modalidades, un agente se administra a un sujeto con una historia familiar del padecimiento o trastorno, o que tiene un fenotipo que puede indicar una predisposición a un padecimiento o trastorno, o que tiene un genotipo que predispone al sujeto al padecimiento o trastorno.
El sistema de entrega particular utilizado puede depender de varios factores, que incluyen, por ejemplo, el objetivo pretendido y la ruta de administración, por ejemplo, local o sistémica. Los objetivos para la entrega pueden ser células específicas que dan lugar a o que contribuyen a un padecimiento o trastorno, incluyendo, por ejemplo, las células que tienen disregulación o dishomeostasis de calcio o calcio intracelular alterado, y células que no tienen calcio intracelular alterado pero que pueden tener alguna alteración, defecto o deficiencia que pueda ser, al menos en parte, compensada, contrarrestada, revertida o aliviada o eliminada, alterando el calcio intracelular de la célula. Las células particulares incluyen, por ejemplo, células inmunes (por ejemplo, linfocitos, células T, células B, glóbulos blancos) , fibroblastos (o células derivadas de un fibroblasto) , células epidérmicas, dérmicas o de la piel (por ejemplo, unos queratinocitos) , glóbulos rojos, células renales o del riñon (por ejemplo, células mesangiales) , células musculares (por ejemplo, una célula de músculo liso tal como una célula de músculo liso de las vías respiratorias (traqueal o bronquial)) y células exocrinas o secretoras (por ejemplo, salivales, incluyendo la glándula submaxilar y acinar parótida) . Por ejemplo, una célula objetivo puede ser una célula residente o de infiltración en los pulmones o en las vías respiratorias, que contribuye a un padecimiento o afección asmática, una célula residente o de infiltración en el sistema nervioso que contribuye a un padecimiento o trastorno neurológico, neurodegenerativo o desmielinizante , una célula residente o de infiltración involucrada en el rechazo de un injerto de riñon, células injertadas que cuando se activan conducen al padecimiento injerto contra huésped, una célula residente o de infiltración involucrada en el rechazo de un injerto de riñon, una célula residente o de infiltración, la activación de la cual contribuye a la inflamación, por ejemplo, en la "artritis, una célula residente o de infiltración en el riñon o sistema renal (por ejemplo, las células mesangiales) involucrada en la neuropatía y en la glomerulonefritis y una célula residente o de infiltración en las glándulas exocrinas (por ejemplo, las glándulas salivales y lacrimales) involucrada en desórdenes autoinmunes (por ejemplo, el padecimiento de Sjogren) . La administración de un agente puede dirigirse a uno o más tipos de células o subconjuntos de un tipo de células por métodos reconocidos en el campo. Por ejemplo, un agente puede acoplarse a un anticuerpo, el ligando a un receptor de la superficie celular o una toxina, o puede contenerse en una partícula que se internaliza selectivamente en células, por ejemplo, liposomas o un virus en el cual el receptor viral se enlaza específicamente a un cierto tipo de célula, o una partícula viral que carece del ácido nucleico viral, o puede administrarse localmente .
Ejemplos de Métodos de Dosificación y Regímenes de Tratamiento Los compuestos descritos aquí pueden utilizarse en la preparación de medicamentos para la modulación del calcio intracelular, o para el tratamiento de padecimientos o condiciones que se beneficiarían, al menos en parte, de la modulación del calcio intracelular. Además, un método para tratar cualquiera de los padecimientos o condiciones descritas aquí en un sujeto en necesidad de tal tratamiento, involucra la administración de composiciones farmacéuticas que contienen al menos un compuesto descrito aquí, o una sal farmacéuticamente aceptable, un profármaco farmacéuticamente aceptable, o un solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos, en cantidades terapéuticamente efectivas a dicho suj eto .
Las composiciones que contienen el (los) compuesto (s) descrito (s) aquí, pueden administrarse para tratamientos profilácticos y/o terapéuticos. En aplicaciones terapéuticas, las composiciones se administran a un paciente que ya sufre de un padecimiento o condición, en una cantidad suficiente para curar o al menos parcialmente detener los síntomas del padecimiento o condición. Las cantidades efectivas para este uso dependerán de la severidad y curso del padecimiento o condición, de la terapia previa, del estado de la salud del paciente, del peso, y de la respuesta a los fármacos, y del juicio del médico tratante.
En aplicaciones profilácticas, las composiciones que contienen los compuestos descritos aquí, se administran a un paciente susceptible a, o de otra manera, en riesgo de, un padecimiento, trastorno o condición particular. Tal una cantidad se define para ser una "cantidad o dosis profilácticamente efectiva" . En este uso, las cantidades precisas también dependen del estado de la salud del paciente, del peso, y similares. Cuando se utilizan en un paciente, las cantidades efectivas para este uso dependerán de la severidad y del curso del padecimiento, trastorno o condición, de la terapia previa, del estado de la salud del paciente y de la respuesta a los fármacos, y del juicio del médico tratante .
En el caso- donde la condición del paciente no mejora, sobre la discreción del médico, la administración de los compuestos puede administrarse crónicamente, es decir, durante un periodo de tiempo extendido, incluyendo durante toda la duración de la vida del paciente para mejorar, o de otra manera, controlar o limitar los síntomas del padecimiento o condición del paciente.
En el caso donde mejora el estado del paciente, sobre la discreción del médico, la administración de los compuestos puede darse continuamente; alternativamente, la dosis del fármaco que se administra puede reducirse temporalmente o suspenderse temporalmente durante una cierta longitud de tiempo (es decir, un "día libre de f rmaco") . La longitud del día libre de fármaco puede variar entre 2 días y 1 año, incluyendo únicamente a manera de ejemplo, 2 días, 3 días, 4 días, " 5 días, 6 días, 7 días, 10 días, 12 días, 15 días, 20 días, 28 días, 35 días, 50 días, 70 días, 100 días, 120 días, 150 días, 180 días, 200 días, 250 días, 280 días, 300 días, 320 días, 350 días, o 365 días. La reducción de la dosis durante un día libre de fármaco puede ser de aproximadamente 10% a aproximadamente 100%, incluyendo, únicamente a manera de ejemplo, aproximadamente 10%, aproximadamente 15%, aproximadamente 20%, aproximadamente 25%, aproximadamente 30%, aproximadamente 35%, aproximadamente 40%, aproximadamente 45%, aproximadamente 50%, aproximadamente 55%, aproximadamente 60%, aproximadamente 65%, aproximadamente 70%, aproximadamente 75%, aproximadamente 80%, aproximadamente 85%, aproximadamente 90%, aproximadamente 95%, o aproximadamente 100%.
Una vez que ha ocurrido la mejora de las condiciones del paciente, se administra una dosis de mantenimiento si es necesario. Subsiguientemente, la dosis o la frecuencia de administración, o ambas, pueden reducirse, como una función de los síntomas, a' un nivel en el cual se retiene el padecimiento, trastorno o condición mejorada. Los pacientes, sin embargo, pueden requerir de tratamiento intermitente sobre una base de largo término sobre cualquier recurrencia de los síntomas.
La cantidad de un agente dado que corresponderá a tal una cantidad, variará dependiendo de factores tales como el compuesto, padecimiento o condición particular y su severidad, de la identidad (por ejemplo, el peso) del sujeto o huésped en necesidad de tratamiento, pero no obstante puede determinarse en una manera reconocida en el campo de acuerdo con las circunstancias particulares que rodean el caso, incluyendo, por ejemplo, el agente específico que se administra, la ruta de administración, la condición que se trata, y el sujeto o huésped que se trata. En general, sin embargo, las dosis empleadas para el tratamiento de humanos adultos estará típicamente en el rango de aproximadamente 0.02 a aproximadamente 5000 mg al día, en otras modalidades, aproximadamente 1 a aproximadamente 1500 mg al día. La dosis deseada puede presentarse convenientemente en una dosis única o como dosis divididas administradas simultáneamente (o durante un periodo de tiempo corto) o en intervalos apropiados, por ejemplo como dos, tres, cuatro o más subdosis al día.
La composición farmacéutica descrita aquí puede estar en formas de dosificación unitaria adecuadas para la administración única de dosis precisas. En la forma de dosificación unitaria, la formulación se divide en dosis unitarias que contienen cantidades apropiadas de uno o más compuestos. La dosis unitaria puede estar en la forma de un paquete que contiene cantidades discretas de la formulación. Ejemplos no limitantes son cápsulas o tabletas empaquetadas, y polvos en viales o ampollas. Las composiciones de suspensión acuosa pueden empaquetarse en recipientes con una sola dosis, que no se pueden volver a cerrar.
Alternativamente, pueden utilizarse recipientes con múltiples dosis, que se pueden volver a cerrar, en cuyo caso es típico incluir un conservador en la composición. Únicamente a manera de ejemplo, las formulaciones para la inyección parenteral pueden presentarse en forma de dosificación unitaria, la cual incluye, pero no se limita a ampollas, o en recipientes con múltiples dosis, con un conservador añadido.
Las dosis diarias apropiadas para los compuestos descritos aquí son de aproximadamente 0.01 mg/kg a aproximadamente 20 mg/kg. En una modalidad, las dosis diarias son de; aproximadamente 0.1 mg/kg a aproximadamente 10 mg/kg. Una dosis diaria indicada en el mamífero mayor, incluyendo, pero no limitado a, los humanos, está en el rango de aproximadamente 0.5 mg a aproximadamente 1000' mg, convenientemente administrada en una dosis única o en dosis divididas, incluyendo, pero no limitado a, hasta cuatro veces al día o en forma de liberación extendida. Las formas de dosificación unitaria, adecuadas para la administración oral incluyen de aproximadamente 1 a aproximadamente 500 mg de ingrediente activo. En una modalidad, la dosis unitarias es aproximadamente 1 mg, aproximadamente 5 mg, aproximadamente, 10 mg, aproximadamente 20 mg, aproximadamente 50 mg, aproximadamente 100 mg, aproximadamente 200 mg, aproximadamente 250 mg, aproximadamente 400 mg, o aproximadamente 500 mg. Los rangos anteriores son meramente sugestivos, ya que el número de variables con respecto a un régimen de tratamiento individual es grande, y no son raras las variaciones considerables de estos valores recomendados.
Tales dosis pueden alterarse . dependiendo de diversas variables, no limitadas a la actividad del compuesto utilizado, el padecimiento o condición a ser tratada, el modo de administración, los requerimientos del sujeto individual, la severidad del padecimiento o condición que se trata, y el juicio1 del practicante.
La toxicidad y la eficacia terapéutica de tales regímenes terapéuticos, puede determinarse mediante procedimientos farmacéuticos estándar en los cultivos celulares o en los animales experimentales, incluyendo, pero no limitado a, la determinación de la LD50 (la dosis letal para él 50% de la población) y la ED50 (la dosis terapéuticamente efectiva en el 50% de la población) . La proporción de la dosis entre los efectos tóxicos y terapéuticos es el índice terapéutico y puede expresarse como la proporción entre LD50 y ED50. Se prefieren los compuestos que exhiben altos índices terapéuticos. Los datos obtenidos a partir de los ensayos del cultivo celular y de los estudios del animal, pueden utilizarse en la formulación de un rango de dosificación para el uso en el humano. La dosis de tales compuestos yace preferiblemente dentro de un rango de concentraciones circulantes que incluye la ED50 con mínima toxicidad. La dosis puede variar dentro de este rango dependiendo de la forma de dosificación empleada y de la ruta de administración utilizada.
Tratamientos de Combinación Los compuestos de Fórmulas (I) - (V) , y las composiciones de los mismos, también pueden utilizarse en combinación con otros agentes terapéuticos que se seleccionan por su valor terapéutico para la condición a ser tratada. En general, las composiciones descritas aquí y, en modalidades donde se emplea la terapia de combinación, otros agentes no tienen que administrarse en la misma composición farmacéutica, y, debido a las diferentes características físicas y químicas, pueden tener que administrarse por diferentes rutas. La determinación del modo de administración y la conveniencia de administración, donde sea posible, en la misma composición farmacéutica, está bien dentro del conocimiento del clínico. La administración inicial puede hacerse de acuerdo con protocolos establecidos, reconocidos en el campo, y luego, con base en los efectos observados, la dosis, los modos de administración y los tiempos de administración, pueden modificarse por el clínico.
En ciertas instancias, puede ser apropiado administrar al menos un compuesto descrito aquí en combinación con otro agente terapéutico. Únicamente a manera de ejemplo, si uno de los efectos secundarios experimentados por un paciente al recibir uno de los compuestos aquí, tal como un compuesto de Fórmulas (I) - (V) , es náusea, entonces puede ser apropiado administrar un agente anti-náuseas en combinación con el agente terapéutico inicial. O, únicamente a manera de ejemplo, la efectividad · terapéutica de uno de los compuestos descritos aquí puede mejorarse por la administración de un adyuvante (es decir, por sí mismo el adyuvante puede tener un beneficio terapéutico mínimo, pero en combinación con otro agente terapéutico, se mejora el beneficio terapéutico global para el paciente) . 0, únicamente a manera de ejemplo, el beneficio experimentado por un paciente puede incrementarse administrando uno de los compuestos descritos aquí con otro agente terapéutico (que también incluye un régimen terapéutico) que también tiene un beneficio terapéutico. En cualquier caso, independientemente del padecimiento, trastorno o condición que se trata, el beneficio global experimentado por el paciente puede ser simplemente la adición de los dos agentes terapéuticos o el paciente puede experimentar un beneficio sinérgico.
La elección particular de los compuestos utilizados dependerá del diagnóstico de los médicos asistentes y de su juicio de la condición del paciente y del protocolo de tratamiento apropiado. Los compuestos puede administrarse concurrentemente (por ejemplo, simultáneamente, esencialmente simultáneamente o dentro del mismo protocolo de tratamiento) o secuencialmente, dependiendo de la naturaleza del padecimiento, trastorno, o condición, la condición del paciente, y la elección efectiva de los compuestos utilizados. La determinación del orden de administración, y del número de repeticiones de administración de cada agente terapéutico durante un protocolo de tratamiento, está bien dentro del conocimiento del médico después de la evaluación del padecimiento que se trata y de la condición del paciente.
Las dosis terapéuticamente efectivas pueden variar cuando los fármacos se utilizan en combinaciones de tratamiento. Los métodos para determinar experimentalmente las dosis terapéuticamente efectivas de los fármacos y otros agentes para el uso en regímenes de tratamiento de combinación, se describen en la literatura. Por ejemplo, el uso de dosificación metronómica, es decir, proporcionar menores dosis más frecuente, para minimizar los efectos secundarios tóxicos, se ha descrito extensamente en la literatura. El tratamiento de combinación incluye además tratamientos periódicos que inician y se detienen en varias ocasiones para ayudar con el manejo clínico del paciente.
Para las terapias de combinación descritas aquí, las dosis de los compuestos co-administrados , variará por supuesto dependiendo del tipo de co- fármaco empleado, del fármaco específico empleado, del padecimiento o condición que se trata y así sucesivamente. Además, cuando se co-administra con uno o más agentes biológicamente activos, el compuesto provisto aquí puede administrarse ya sea simultáneamente con el (los) agente (s) biológicamente activo (s), o secuencialmente . Si se administra secuencialmente , el médico asistente decidirá sobre la secuencia apropiada de administrar la proteína en combinación con el(los) agente(s) biológicamente activo(s) .
En cualquier caso, los múltiples agentes terapéuticos (uno de los cuales es un compuesto de Fórmulas (I) - (V) descrito aquí) pueden administrarse en cualquier orden o incluso simultáneamente. Si se administran simultáneamente, los múltiples agentes terapéuticos pueden proporcionarse en una forma única unificada, o en múltiples formas (únicamente a manera de ejemplo, ya sea como una sola pildora o como dos pildoras separadas) . Uno de los agentes terapéuticos puede darse en dosis múltiples, o ambos pueden darse como dosis múltiples. Si no se administran de manera simultánea, el tiempo entre las dosis múltiples puede variar de más que cero semanas a menos que cuatro semanas. Además, los métodos de combinación, las composiciones y las formulaciones, no deben limitarse al uso de sólo dos agentes; también se visualiza el uso de múltiples combinaciones terapéuticas.
Se entiende que el régimen de la dosis para tratar, prevenir, o mejorar la(s) condición (es) para la(s) cual (es) se busca el alivio, puede modificarse de acuerdo con una variedad de factores. Estos factores incluyen el trastorno o condición de la cual sufre el sujeto, así como también la edad, peso, sexo, dieta, y condición médica del sujeto. Así, el régimen de la dosis realmente utilizado pude variar ampliamente y por consiguiente puede desviarse de los regímenes de dosificación establecidos aquí.
Los agentes farmacéuticos que constituyen la terapia de combinación descrita aquí, pueden estar en una forma de dosificación combinada o en formas de dosificación separadas pretendidas para una administración sustancialmente simultánea. Los agentes farmacéuticos que constituyen la terapia . de combinación también pueden administrarse secuencialmente con el compuesto terapéutico que se administra mediante un régimen que exige la administración en dos etapas. El régimen de administración en dos etapas exige una administración secuencial de los agentes activos o una administración separada de los agentes activos separados. El periodo de tiempo entre las múltiples etapas de administración puede variar dentro del rango de, algunos minutos a varias horas, dependiendo de las propiedades de cada agente farmacéutico, tales como la potencia, solubilidad, biodisponibilidad, vida media en plasma y el perfil cinético del agente farmacéutico. La variación circadiana de la concentración de la molécula objetivo también puede determinar el intervalo óptimo de la dosis.
Además, los compuestos descritos aquí también pueden utilizarse en combinación con procedimientos que pueden proporcionar un beneficio adicional o sinérgico al paciente. Únicamente a manera de ejemplo, se espera que los pacientes encuentren un beneficio terapéutico y/o profiláctico en los métodos descritos aquí, en donde la composición farmacéutica de un compuesto descrito aquí y/o las combinaciones con otros terapéuticos, se combinan con pruebas genéticas para determinar si ese individuo es un portador de un gen mutante que ' es conocido por estar correlacionado con ciertos padecimientos o condiciones.
Los compuestos descritos aquí y las terapias de combinación pueden administrarse antes, durante o después de la ocurrencia de un padecimiento o condición, y el momento para administrar la composición que contiene un compuesto, puede variar. Así, por ejemplo, los compuestos pueden utilizarse como un profiláctico y pueden administrarse continuamente a los sujetos con una propensión a desarrollar condiciones p padecimientos para prevenir la ocurrencia del padecimiento o condición. Los compuestos y las composiciones pueden administrarse a un sujeto durante o tan pronto como sea posible después del inicio de los síntomas. La administración de los compuestos puede iniciarse dentro de las primeras 48 horas del inicio de los síntomas, preferiblemente dentro de las primeras 48 horas del inicio de los síntomas, más preferiblemente dentro de las primeras 6 horas del inicio de los síntomas, y más preferiblemente dentro de 3 horas del inicio de los síntomas. La administración inicial puede ser vía cualquier ruta práctica, tal como, por ejemplo, una inyección intravenosa, una inyección en bolo, infusión durante aproximadamente 5 minutos a aproximadamente 5' horas, una pildora, una cápsula, un parche · transdérmico , entrega bucal, y similares, o una combinación de los mismos. Un compuesto se administra preferiblemente tan pronto como sea practicable después de que se detecta o sospecha el inicio de un padecimiento o condición, y durante una longitud de tiempo necesaria para el tratamiento del padecimiento, tal como, por ejemplo, de 1 día a aproximadamente 3 meses. La longitud del tratamiento puede variar para cada sujeto, y la longitud puede determinarse utilizando los criterios conocidos. Por ejemplo, el compuesto o una formulación que contiene el compuesto puede administrarse durante al menos 2 semanas, preferiblemente aproximadamente 1 mes a aproximadamente 5 años .
Inhibidores de la SOCE En un aspecto, los compuestos de Fórmulas (I) - (V) se administran o se utilizan en conjunción con otros inhibidores de la 'SOCE. Los inhibidores de la SOCE son inhibidores no selectivos.
Se ha descrito una variedad de inhibidores de la SOCE. Los inhibidores de la SOCE incluyen: a) Cationes, que incluyen cationes de lantánido, tales como por ejemplo, Gd3+, La3+ ; b) Inhibidores P-450, que incluyen econazol, miconazol, clotrimazpl, ketoconazol; c) Inhibidores de ciclooxigenasa, que incluyen ácido niflúmico, ácido flufenámico, tenidap,- d) Inhibidores de lipoxigenasa, · que incluyen ácido nordihidroguaiarético, ácido eicosatetrainoico; e) Compuestos que son bloqueadores de canal, que incluyen SK&F 96365, SC38249, LU52396, L-651,582, tetrandrina, 2-APB; f) Compuestos que inhiben la SOCE no por una acción sobre los canales SOC mismos, que incluyen U73122 (inhibidor de fosfolipasa C) , wortmannin (inhibidor de fosfatidilinositol cinasa) .
Algunos de estos inhibidores de la SOCE tienen acciones no específicas y/o múltiples modos de acción que contribuyen a la inhibición de la SOCE, que incluyen bloquear el poro del canal SOC (Bloqueadores de Canal) , la inhibición de la síntesis del ATP mitocondrial que parece soportar la SOCE (Gamberucci et al., J Biol. Chem. , 269, 23597-23602, 1994; Marriott et al., Am. J. Physiol . , 269, C766-C774, 1995), disturbios del pH citoplásmico (Muallem et al., Am. J. Physiol., 257, G917-G924, 1989), así como también inhibir la activación de los canales SOC.
Inmunosupresores En una modalidad, los compuestos descritos aquí, se administran como agentes únicos en la terapia inmunosupresora para reducir, inhibir, o prevenir la actividad del sistema inmunológico . La terapia inmunosupresora se utiliza clínicamente para: prevenir el rechazo de órganos y tejidos trasplantados (por ejemplo, médula ósea, corazón, riñon, hígado) ; tratamiento de padecimientos autoinmunes o padecimientos que son más probablemente de origen autoinmune (por ejemplo, artritis reumatoide, miastenia grave, lupus eritematoso sistémico, padecimiento de Crohn, y colitis ulcerativa) ; y tratamiento de algunos otros padecimientos inflamatorias no autoinmunes (por ejemplo, control de asma alérgico de largo plazo) .
En algunas modalidades, los compuestos descritos aquí se administra con otros inmunosupresores seleccionados de entre: inhibidores de calcineurina (tales como, pero no limitado a, ciclosporina, tacrolimus) ; inhibidores de mTOR (tales como, pero no limitado a, sirolimus, everolimus) ,· anti-proliferativos (tales como, pero no limitado a, azatioprina, ácido micofenólico) ; corticoesteroides (tales como, pero no limitado a, prednisona, acetato de cortisona, prednisolona, metilprednisolona, dexametasona, betametasona, triamcinolona, beclometasona, acetato de fludrocortisona , acetato de deoxicorticosterona, aldosterona, hidrocortisona) ; anticuerpos (tales como, pero no limitado a, anticuerpos monoclonales anti-receptor de IL-2Ra (basiliximab, daclizumab) , anticuerpos policlonales anti células T (antiglobulina del timocito (ATG) , anti-globulina del linfocito (ALG) ) ) .
Otros inmunosupresores incluyen, pero no se limitan a: glucocorticoides (alclometasona, aldosterona, amcinonida, beclometasona, betametasona, budesonida, ciclesonida, clobetasol, clobetasona, clocortolona, cloprednol, cortisona, cortivazol, deflazacort, deoxicorticosterona, desonida, desoximetasona, desoxicortona, dexametasona, diflorasona, diflucortolona, dif luprednato , f luclorolona , Fludrocortisona , fludroxicortida, flumetasona, flunisolida, fluocinolona acetonida, f luocinonida, fluocortina, fluocortolona, fluorometolona, fluperolona, fluprednideno, fluticasona, formocortal, halcinonida, halometasona, hidrocortisona/cortisol, aceponato de hidrocortisona, buteprato de hidrocortisona, butirato de hidrocortisona, loteprednol, medrisona, meprednisona, raetilprednisolona, aceponato de metilprednisolona, furoato de mometasona, parametasona , prednicarbato, prednisona, prednisolona, prednilideno , rimexolona, tixocortol, triamcinolon , ulobetasol) , ciclofosfamida, nitrosoureas , cisplatina, carboplatina, oxaliplatina, metotrexato, azatioprina, mercaptopurina, análogos de pirimidina, inhibidores de la síntesis de proteínas, metotrexato, azatioprina, mercaptopurina, dactinomicina, antraciclinas , mitomicina C, bleomicina, mitramicina, Atgam(R) , Timoglobulina® , OKT3®, basiliximab, daclizumab, ciclosporina, tacrolimus, sirolimus, Interferones (IFN-ß, IFN-?) , opioides, proteínas que enlazan TNF (infliximab, etanercept, adalimumab, golimumab) , ácido micofenólico, micofenolato de mofetilo, FTY720, así como también aquellos listados en US 7,060,697.
Agentes para Tratar Padecimientos Autoinmunes, Padecimientos Inflamatorios Donde el sujeto sufre de o está en riesgo de sufrir un padecimiento, trastorno o condición autoinmune, o un padecimiento, trastorno o condición inflamatoria, un compuesto descrito aquí, se administra en cualquier combinación con uno o más de los siguientes agentes terapéuticos: inmunosupresores (por ejemplo, tacrolimus, ciclosporina, rapamicina, metotrexato, ciclofosfamida, azatioprina, mercaptopurina, micofenolato, o FTY720) , glucocorticoides · (por ejemplo, prednisona, acetato de cortisona, prednisolona, metilprednisolona, dexametasona, betametasona, triamcinolona, beclometasona, acetato de fludrocortisona, acetato de deoxicorticosterona, aldosterona) , fármacos anti-inflamatorios no esteroidales (por ejemplo, salicilatos, ácidos arilalcanoicos , ácidos 2 arilpropionico , ácidos N-arilantranílico, oxicams, coxibs, o sulfonanilidas ) , inhibidores específicos a Cox-2 (por ejemplo, valdecoxib, etoricoxib, lumiracoxib, celecoxib, o rofecoxib) , leflunomida, tioglucosa de oro, tiomalato de oro, aurofina, sulfasalazina, hidroxicloroquinina, minociclina, proteínas que enlazan a TNF-OÍ (por ¦ ejemplo, infliximab, etanercept, o adalimumab) , abatacept, anakinra, interferón-ß, interferón-?, interleucina-2 , antileucotrienos , teofilina, o anticolinérgicos .
En una modalidad, los compuestos descritos aquí, se administran en combinación con inhibidores de la trayectoria NFAT-calcineurina . En una modalidad, los inhibidores de la trayectoria NFAT-calcineurina incluyen, pero no se limitan a, Ciclosporina A (CsA) y tacrolimus (FK506) .
En una modalidad, un compuesto descrito aquí, o las composiciones y los medicamentos que incluyen un compuesto de Fórmulas (I) - (V) , se administran a un paciente en combinación con un agente anti - inflamatorio incluyendo, pero no limitado a, fármacos anti-inflamatorios no esteroidales (NSAIDs) y corticoesteroides (glucocorticoides) .
Los NSAIDs incluyen, pero no se limitan a: aspirina, ácido salicílico, ácido gentísico, salícilato de magnesio colina, salícilato de colina, salicilato de magnesio colina, salicilato de colina, salicilato de magnesio, salicilato de sodio, diflunisal, carprofeno, fenoprofeno, fenoprofeno de calcio, flurobiprofeno, ibuprofeno, ketoprofeno, nabutona, ketoloraco, ketorolaco trometamina, naproxeno, oxaprozina, diclofenaco, etodolaco, indometacina, sulindaco, tolmetina, meclofenamato, meclofenamato de sodio, ácido mefenámico, piroxicam, meloxicam, inhibidores específicos a COX-2 (tales como, pero no limitado a, celecoxib, rofecoxib, valdecoxib, parecoxib, etoricoxib, lumiracoxib, CS-502, JTE-522, L-745 , 337 y NS398) .
Se contemplan aquí las combinaciones con los NSAIDs, que son inhibidores selectivos de COX-2. Tales compuestos incluyen, pero no se limitan a aquellos descritos en Patente Norteamericana Número 5,474,995; Patente Norteamericana Número 5,861,419; Patente Norteamericana Número 6,001,843; Patente Norteamericana Número 6,020,343, Patente Norteamericana Número 5,409,944; Patente Norteamericana Número 5,436,265; Patente Norteamericana Número 5,536,752; Patente Norteamericana Número 5,550,142; Patente Norteamericana Número 5,604,260; Patente Norteamericana Número 5,698,584; Patente Norteamericana Número 5,710,140; WO 94/15932; Patente Norteamericana Número 5,344,991; Patente Norteamericana Número 5,134,142; Patente Norteamericana Número 5,380,738; Patente Norteamericana Número 5,393,790; Patente Norteamericana Número 5,466,823; Patente Norteamericana Número 5,633,272; Patente Norteamericana Número 5,932,598 y 6,313,138; todas las cuales se incorporan aquí por referencia.
Los compuestos que se han descrito como inhibidores selectivos de COX-2 y que por consiguiente son útiles en los métodos o en las composiciones farmacéuticas descritas aquí incluyen, pero no se limitan a, celecoxib, rofecoxib, lumiracoxib, etoricoxib, valdecoxib, y parecoxib, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
Los corticoesteroides , incluyen, pero no se limitan a: betametasona, prednisona, alclometasona, aldosterona, amcinonida, beclometasona, betametasona, budesonida, ciclesonida, clobetasol, clobetasona, clocortolona, cloprednol, cortisona, cortivazol, deflazacort, deoxicorticosterona, desonida, desoximetasona, desoxicortona, dexametasona, diflorasona, diflucortolona, difluprednato, fluclorolona, fludrocortisona, fludroxicortida, flumetasona, flunisolida, fluocinolona acetonida, fluocinonida, fluocortina, fluocortolona, fluorometolona, fluperolona, fluprednideno, fluticasona, formocortal, halcinonida, halometasona, hidrocortisona/cortisol , aceponato de hidrocortisona, buteprato de hidrocortisona, butirato de hidrocortisona, loteprednol, medrisona, meprednisona, metilprednisolona, aceponato de metxlprednisolona, furoato de mometasona, parametasona, prednicarbato, prednisona/prednisolona, rimexolona, tixocortol, triamcinolona, y ulobetasol .
Otros agentes utilizados como anti-inflamatorios incluyen aquellos descritos en la Publicación de Patente Norteamericana 2005/0227929, incorporada aquí por referencia.
Algunos anti- inflamatorios comercialmente disponibles incluyen, pero no se limitan a: Arthrotec® (diclofenaco y misoprostol) , Asacol® (ácido 5-aminosalicíclico) , Salofalk® (ácido 5-aminosalicíclico) , Auralgan® (antipirina y benzocaína) , Azulfidina® (sulfasalazina) , Daypro® (oxaprozina) , Lodina® (etodolaco) , Ponstan® (ácido mefenámico) , Solumedrol® (metilprednisolona) , Bayer® (aspirina) , Bufferin® (aspirina), Indocina® ( indometacina) , Vioxx® (rofecoxib) , Celebrex® (celecoxib) , Bextra® (valdecoxib) , Arcoxia® (etoricoxib) , Prexige® (lumiracoxib) , Advil®, Motrin® (ibuprofeno) , Voltaren® (diclofenaco) , Orudis® (ketoprofeno) , Mobic® (meloxicam) , Relafen® (nabumetona) , Aleve®, Naprosyn® (naproxeno) , Feldene® (piroxicam) En una modalidad, los compuestos descritos aquí se administran en combinación con antagonistas del receptor de leucotrieno incluyendo, pero no limitado a, BAY u9773 (vea EP 00791576; publicada el 27 Agosto de 1997), DUO-LT (Tsuji et al, Org. Biomol , Chem. , 1, 3139-3141, 2003), zafirlukast (Accolate®) , montelukast (Singulair®) , prankulast (Onon®) , y derivados o análogos de los mismos.
Juegos o Equipos/Artículos de Fabricación Para el uso en las aplicaciones terapéuticas descritas aquí, también se describen aquí los juegos o equipos y los artículos de fabricación. Tales juegos pueden incluir un portador, paquete, o recipiente que está compartimentado para recibir uno o más recipientes tales como viales, tubos, y similares, cada uno de los recipientes incluye uno de los elementos separados a ser utilizado en un método descrito aquí. Los recipientes adecuados incluyen, por ejemplo, botellas, viales, jeringas, y tubos de ensayo. Los recipientes pueden formarse de una variedad de materiales tales como vidrio o plástico.
Los artículos de fabricación provistos aquí contienen materiales de empaquetamiento. Los materiales de empaquetamiento para el uso en productos farmacéuticos de empaquetamiento incluyen, por ejemplo las Patentes Norteamericanas Números 5,323,907, 5,052,558 y 5,033,252.
Ejemplos de materiales de empaquetamiento farmacéutico incluyen, pero no se limitan a, paquetes de ampollas, botellas, tubos, inhaladores, bombas, bolsas, viales, recipientes, jeringas, botellas, y cualquier material de empaquetamiento adecuado para una formulación seleccionada y un modo de administración y tratamiento pretendidos. Se contempla una amplia variedad de formulaciones de los compuestos y composiciones provistas aquí, como es una variedad de tratamientos para cualquier padecimiento, trastorno, o condición que se beneficiaría por la inhibición de la actividad del canal CRAC.
Por ejemplo, el (los) recipiente ( s) puede (n) incluir uno o más compuestos descritos aquí, opcionalmente en una composición o en combinación con otro agente como se describe aquí. El (los) recipiente ( s) opcionalmente tiene (n) un puerto de acceso estéril (por ejemplo, el recipiente puede ser una bolsa de solución intravenosa o un vial que tiene un tapón perforable por una aguja' de inyección hipodérmica) . Tales juegos opcionalmente comprenden un compuesto con una descripción o etiqueta o instrucciones de identificación, con relación a su uso en los métodos descritos aquí.
Un juego típicamente podrá incluir uno o más recipientes adicionales, cada uno con uno o más de varios materiales (tales como reactivos, opcionalmente en forma concentrada, y/o dispositivos) deseables desde un punto de vista comercial y del usuario para el uso de un compuesto descrito aquí. Ejemplos no limitativos de tales materiales incluyen, pero no se limitan a, amortiguadores, diluentes, filtros, agujas, jeringas; etiquetas de tubo, portador, paquete, recipiente y/o vial que listan el contenido y/o las instrucciones para el uso, e insertos del paquete con instrucciones para el uso. Típicamente también se incluirá un conjunto de instrucciones.
Una etiqueta puede ser sobre o puede estar asociada con el recipiente. Una etiqueta puede estar sobre un recipiente cuando las letras, los números u otros caracteres que forman la etiqueta están unidos, moldeados o grabados al aguafuerte en el recipiente mismo; una etiqueta puede asociarse con un recipiente cuando está presente dentro de un receptáculo o portador que también contiene el recipiente, por ejemplo, como un inserto del paquete. Una etiqueta puede utilizarse para indicar que el contenido debe utilizarse para una aplicación terapéutica específica. La etiqueta también puede indicar las instrucciones para el uso del contenido, tal como en los métodos descritos aquí.
En ciertas modalidades, las composiciones farmacéuticas pueden presentarse en un paquete o dispositivo dispensador que puede contener una o más formas de dosificación unitaria que contienen un compuesto provisto aquí. El paquete por ejemplo puede contener una hoja metálica o plástica, tal como un paquete de ampollas. El paquete o dispositivo dispensador puede · estar acompañado por instrucciones para la administración. El paquete o el dispensador también puede estar acompañado con un aviso asociado con el recipiente en forma prescrita por una agencia del gobierno que regula la fabricación, el uso, o la venta de los fármacos, cuyo aviso es reflector de la aprobación por la agencia de la forma del fármaco para la administración humana o veterinaria. Tal aviso, por ejemplo, puede ser el etiquetado aprobado por la Dirección Norteamericana de Alimentos y Medicinas para la prescripción de fármacos, o el inserto del producto aprobado. Las composiciones que contienen un compuesto provisto aquí formulado en un portador farmacéutico compatible, también pueden prepararse, colocarse en un recipiente apropiado, y etiquetarse para el tratamiento de una condición indicada.
Ensayos Pueden · utilizarse varias técnicas para evaluar la entrada de calcio accionada por el depósito y la señalización del calcio en las células. Tales técnicas incluyen, pero no se limitan a, electrofisiología de sujeción del parche (medición de los iones de calcio u otros iones a través de las membranas celulares, tales como las membranas plasmáticas) , mediciones de capacitancia (que permite a la exocitosis seguirse en el nivel de células únicas) , la formación de imágenes de calcio utilizando tintes fluorescentes permite patrones del movimiento del calcio dentro del citoplasma a ser rastreados, la transferencia de energía de resonancia de flüorescencia (FRET) permite interacciones proteína-proteína a ser evaluadas, y los métodos de biología molecular permiten la manipulación de los niveles de expresión de las proteínas de interés.
Puede utilizarse una amplia variedad de métodos de ensayo para examinar la modulación del calcio intracelular mediante los compuestos de Fórmulas (I) ' - (V) . Tales ensayos incluyen ensayos basados en células in yitro así como también modelos animales in vivo. Puede utilizarse cualquier ensayo que detecte, monitoree o mida un efecto sobre el calcio intracelular, incluyendo los eventos mediados por la entrada de calcio. Tales ensayos incluyen, pero no se limitan a, ensayos que monitorean, miden y/o detectan los niveles de calcio intracelular, la modulación de los niveles de calcio, y el movimiento del calcio hacia, fuera de o dentro de células y organelos intracelulares . Los ensayos también pueden incluir monitorear, medir y/o detectar los eventos mediados por la entrada de calcio y las moléculas involucradas en los eventos mediados por la entrada de calcio; tales como, pero no limitado a, moléculas de transducción de señal, factores de transcripción, moléculas secretadas y otras moléculas que son afectadas por los cambios en la homeostasis de calcio. Los ensayos incluyen, pero no se limitan a, aquellos descritos aquí y aquellos descritos en la Publicación de Patente Norteamericana Número 2007/0031814 y WO 07/081804, incorporadas aquí por referencia .
Células y Modelos Celulares Para la experimentación in vitro de la modulación del calcio intracelular mediante los compuestos de Fórmulas (I) -(V) , está disponible una amplia variedad de tipos de células para tales ensayos. En una modalidad particular, la célula es una en la cual ocurre la entrada de calcio accionada por el depósito o que puede manipularse tal que la entrada de calcio accionada por el depósito ocurra en la célula. En modalidades particulares, la célula contiene una o más proteínas involucradas en la modulación del calcio intracelular (y, en particular, se involucra en, participa en y/o proporciona la entrada de calcio accionada por el depósito, el movimiento del calcio hacia, fuera de o dentro de un organelo intracelular o depósito de calcio, la modulación de los niveles de calcio en un organelo intracelular o depósito de calcio (por ejemplo, el retículo endoplásmico) y/o la amortiguación del calcio) , tales como aquellas provistas aquí. En modalidades particulares, la(s) proteína (s) incluye (n) proteínas STIM (incluyendo la proteína STIM1, STI 2, DSTIM y CSTIM) y/o proteínas Orai (Orail, Orai2, Orai3). La célula puede expresar de manera endógena la(s) proteína (s) o puede expresar de manera recombinante la(s) proteína (s) .
Las células para el uso en los métodos pueden ser de cualquier especie. En una modalidad, las células pueden ser células eucarióticas . En una modalidad, las células pueden ser células de levadura, células de insectos (por ejemplo, Drosófila o Anofeles), o células mamíferas. Las células mamíferas incluyen, pero no se limitan a, células de roedor (por ejemplo, ratón, rata y hámster), primate, mono, perro, bovinas, conejo y humanas. Se puede utilizar una variedad de tipos de células en los métodos, incluyendo, por ejemplo, células neuronales, del sistema nervioso, cerebrales, del sistema inmunológico , por ejemplo, linfocitos T y células B, células primarias, células hematopoyéticas y de la sangre, células de estroma, células mieloides, células linfoides, y una variedad de células de tumor y de cáncer. Las células particulares incluyen células Drosófilas Schneider 2 o S2 , células de riñon embrionarias humanas (HEK293), células de leucemia basofílica de rata (RBL-2H3), células Jurkat, células epiteliales, células de rabdomiosarcoma, células rabdoides, células de retinoblastoma, células de neuroepitelioma, células de neuroblastoma, células de osteosarcoma , fibroblastos, células del estroma de la médula ósea, células de eritroleucemia y células de linfoblaste Otras líneas celulares incluyen HEK 293 y 293T, CHO (incluyendo CH0-K1) , LTK- , N2A, H6, y HGB . Muchas tales células y líneas celulares están disponibles a través de lugares de depósito de células tales como, por ejemplo, la Colección de Cultivo Tipo Americano (ATCC, Manassas, Va.) . Las células primarias pueden obtenerse por el aislamiento de fuentes.de tejido.
Pueden utilizarse las células de una línea celular conocida, tales como las células de neuroblastoma SH-SY5Y, células de feocromocitoma PC12, células de neuroblastoma SK-N-BE(2)C o SK-N-SH, células humanas de neuroepitelioma SK-N-MC, células SMS-K'CNR, células humanas de neuroblastoma LA -5, células humanas de neuroblastoma GI-CA-N, células humanas de neuroblastoma GOTO , células de ratón de neuroblastoma Neuro 2a (N2A) y/o células humanas de neuroblastoma IMR 32, células de leucemia mieloide crónica (por ejemplo, ' las células humanas K562) , células de leucemia promielocítica (por ejemplo, las células HL60) y células de linfoma histiocítico (por ejemplo, las células U937) , células de linfoma de Burkitt (por ejemplo, las células CA46) , células B (por ejemplo, NALM6) , células de leucemia linfoblástica aguda (por ejemplo, las células MOLT4), células T (por ejemplo, las células Jurkat) y células más tempranas T-ALL (por ejemplo, DU528) .
En una modalidad, la elección de una célula para el uso en un ensayo in vitro para probar la modulación del calcio intracelular mediante los compuestos descritos aquí, involucra varias consideraciones, incluyendo, por ejemplo, una proteína particular que se está utilizando en el método y una actividad o un aspecto particular de la modulación del calcio intracelular que está siendo monitoreado o evaluado en el método.
En una modalidad, la modulación del calcio intracelular mediante un compuesto descrito aquí, o (XIIIA) se examina monitoreando o evaluando el efecto sobre la entrada de calcio accionada por el depósito. Las células típicamente utilizadas en tales métodos exhiben la entrada de calcio accionada por el depósito ya se naturalmente o a través de la manipulación de las células. Las células que exhiben endógenamente la entrada de calcio accionada por el depósito, incluyen algunas células excitables y en sumo grado células no excitables y pueden identificarse utilizando los métodos descritos aquí y/o reconocidos en el campo.
En una modalidad, puede ser deseable utilizar una célula que contenga componentes de señalización y sistemas mensajeros que puedan efectuar la liberación del calcio de los depósitos intracelulares . Por ejemplo, las células que contienen componentes de sistemas de activación de fosfolipasa C (PLC) mediada por el receptor, pueden utilizarse para la activación fisiológica (vía la generación de IP3 ) del agotamiento del depósito para facilitar el monitoreo de la entrada de calcio accionada por el depósito. La activación de PLC mediada por el receptor ocurre a través de distintos mecanismos de acoplamiento: activación de PLC-ß mediante receptores acoplados a la proteína G (GPCRs) y activación de PLC-? mediante receptores de tirosina cinasa y tirosina cinasas no receptoras. Así, las células que contienen un sistema de activación de PLC mediada por el receptor, pueden monitorearse o evaluarse para la entrada de calcio accionada por el depósito sobre la activación agonista de uno o más receptores conocidos por participar en el sistema (vea por ejemplo Bouron (2000) FEBS Lett 470:269-272; Millar et al. (1995) J. Exp. Biol. 198:1843-1850; Yagodin et al. (1998) Cell Calcium 23:219-228; Yagodin et al. (1999) Cell Calcium 25:429-438; y Patterson et al. (2002) Cell 111:1-20) Puede realizarse una valoración del calcio intracelular después del tratamiento con un compuesto descrito aquí, bajo una variedad de condiciones. Las condiciones pueden seleccionarse para evaluar el efecto del agente de prueba sobre un aspecto específico del calcio intracelular. Por ejemplo, las condiciones y los reactivos se utilizan, para evaluar específicamente la entrada de calcio accionada por el depósito, los niveles de calcio citosólico en reposo, la amortiguación del calcio, y los niveles de calcio de y la admisión de calcio por o la liberación de, organelos intracelulares . Los niveles de calcio citosólico en reposo, los niveles de calcio intracelular del organelo y el movimiento del catión, pueden avaluarse utilizando cualquiera de los métodos descritos aquí o reconocidos en el campo.
Tales métodos para evaluar la modulación en el calcio intracelular incluyen, pero no se limitan a, mediciones basadas en indicadores sensitivos al calcio, tales como mediciones basadas en calcio etiquetado (tal como 45Ca2+) con aequorina que tiene como objetivo fluo-3, mag-fura 2 y ER- , y mediciones electrofisiológicas . Aspectos particulares del flujo de iones que pueden evaluarse incluyen, pero no se limitan a, una reducción (incluyendo la eliminación) en la cantidad del flujo de iones, propiedades biofísicas alteradas de la corriente de iones, y sensibilidades alteradas del flujo para los activadores o inhibidores de los procesos de flujo de calcio, tales como, por ejemplo, la entrada de calcio accionada por el depósito. También están disponibles los reactivos y las condiciones para el uso en evaluar específicamente el movimiento del calcio mediado por el receptor y el segundo movimiento del calcio accionado por el mensajero.
Evaluación de la Entrada de Calcio Operada por el Depósito En un aspecto, los compuestos descritos aquí se agregan a las células bajo condiciones que permiten que la entrada de calcio accionada por el depósito ocurra para evaluar los efectos de los compuestos de Fórmulas (I) - (XIV) sobre la entrada de calcio accionada por el depósito. Tales condiciones se describen aquí y se reconocen en el campo.
Por ejemplo, en un método las células pueden tratarse para reducir los niveles de calcio de los depósitos de calcio intracelular y luego analizarse para la evidencia del influjo del ion (por ejemplo, calcio) en respuesta a esto, en la presencia de un compuesto descrito aquí. Las técnicas para reducir los niveles de calcio de los depósitos intracelulares y para analizar las células para la evidencia del influjo del ion (por ejemplo, calcio) , se reconocen en el campo y se describen aquí .
En otros métodos, el análisis electrofisiológico de las corrientes a través de un parche de membrana de plasma despegado de las células o una vesícula de membrana externa, puede utilizarse para detectar o monitorear las corrientes de canal accionadas por el depósito (por ejemplo, ISOC, ICRAC) en la presencia de un compuesto descrito aquí.
Evaluación de los Eventos Mediados por la Entrada de Calcio Se conocen varias moléculas involucradas en las trayectorias reguladas por el calcio. La evaluación de las moléculas involucradas en los eventos mediados por la entrada de calcio, puede utilizarse para monitorear el calcio intracelular , y puede utilizarse, por ejemplo en los ensayos de selección descritos aquí para monitorear los efectos de los compuestos presentados aquí. Ejemplos de ensayos incluyen pero no se limitan a, ensayos que detectan, o determinan la presencia, los niveles, la alteración de los niveles, la producción, la modificación (tal como la fosforilación y la des - fosforilación) , el desplazamiento, la degradación y la actividad de las moléculas involucradas en los eventos mediados por la entrada de calcio (vea por ejemplo, Trevillyan et al. (2001) J. Biol . Chem. 276:48118-26) . Los ensayos descritos aquí pueden utilizarse con células que se han tratado con o que se han contactado -con un compuesto presentado aquí, o que expresan una cantidad alterada de una molécula de prueba (tal como una proteína involucrada en la regulación del calcio, incluyendo una proteína STIM, proteína Orai) , o con células control. Los ensayos también pueden dirigirse en células que se han estimulado con un activador fisiológico o no fisiológico, o en células no estimuladas.
Los siguientes son ensayos representativos para las moléculas involucradas en los eventos mediados por la entrada de calcio y pretenden ser solamente ejemplares. Otros ensayos para estas moléculas y ensayos para otras moléculas involucradas en los eventos mediados por la entrada de calcio, también pueden emplearse en cualquiera de los métodos de modulación y/o selección descritos aquí.
Liberación de ß-Hexosaminidasa En los mastocitos, el influjo de Ca2+ da como resultado la desgranulación y liberación de los mediadores inflamatorios tales como la heparina, histamina y enzimas tales como la ß-hexosaminidas . La detección y/o la medición de la liberación de tales moléculas, puede utilizarse así para monitorear el calcio intracelular . Por ejemplo, puede colectarse el medio de los mastocitos. Un sustrato adecuado para la ß-hexosaminidasa (por ejemplo, p-nitrofenil-acetil-glucosamida) puede agregarse posteriormente y la absorbancia de la mezcla resultante puede avaluarse para medir la cantidad relativa de la actividad de la ß -hexosaminidasa en las muestras (Fuñaba et al. (2003) Cell Biol . International 27 : 879-85) .
Actividad 'de la Fosfatasa CaN Dependiente del .
Calcio/Calmodulina La calcineürina fosfatasa (CaN) desfosforila varias proteínas, afectando su actividad y localización. La actividad de la CaN puede evaluarse mediante la incubación de la CaN purificada y un sustrato de CaN, por ejemplo un péptido radioetiquetado que corresponde a una secuencia en la subunidad RII de la cinasa dependiente de cAMP, ya sea con o sin un compuesto de Fórmulas (I) - (V) (vea, Trevillyan et al. (2001) J. Biol. Chem 276:48118-26). El nivel de péptido radioetiquetado y/o la cantidad de fosfato inorgánico libre, liberado, puede medirse para evaluar la actividad de des-fosforilación de la CaN.
Actividad de Transcripción de NFAT El factor de transcripción NFAT (factor nuclear de las células T activadas) regula varios genes en respuesta a los niveles de calcio intracelular . Por ejemplo, las proteínas NFAT regulan la transcripción de los genes de citocina involucrados en la respuesta inmune. Los promotores de los genes regulados por NFAT, y/o las regiones reguladoras y los elementos de estos genes, pueden utilizarse para monitorear la expresión regulada por NFAT y por consiguiente para monitorear el calcio intracelular . Las fusiones de genes reporteros pueden construirse con promotores regulados por NFAT o elementos regulados por NFAT unidos de manera operativa a un gen reportero tal como la luciferasa, ß-galactosidasa, proteína fluorescente verde (GFP) o cualquier otro reportero conocido en el arte (vea por ejemplo, la Solicitud Norteamericana Publicada Número 2002-0034728) . La cantidad de la proteína reportero o la actividad es una medida de la actividad de NFAT.
Fosforilación de NFAT La activación de NFAT se regula primordialmente a través de su fosforilación, lo que a su vez regula su localización subcelular. En las células no estimuladas, NFAT es una proteína citosólica hiperfosforilada . Una elevación en el Ca2+ intracelular, inducida por una variedad de mecanismos, incrementa la actividad de la fosfatasa dependiente de calmodulina-Ca2+ , la calcineurina . La calcineurina activada desfosforila múltiples residuos de serina dentro de la región reguladora de la molécula NFAT. NFAT se re-fosforila en respuesta a las disminuciones en los niveles de Ca2+ o a la inhibición de la CaN.
El estado de fosforilación de NFAT puede monitorearse por ejemplo, expresando una proteína NFAT etiquetada de manera detectable en las células, tal como una NFAT etiquetada con His6. La NFAT etiquetada puede purificarse de las células utilizando cromatografía Ni2+ y sometiéndola a electrofóresis en gel y manchado o manchado western. Las formas más altamente fosforiladas de la NFAT pueden distinguirse por su migración más lenta. El estado de la NFAT fosforilada puede utilizarse como una medida de la activación de NFAT (vea, Trevillyan et al. (2001) J. Biol . Chem 276 = 48118-26) .
Localización Nuclear de NFAT La localización de NFAT entre el citoplasma y el núcleo, se regula- por el estado de fosforilación de la NFAT. La fosforilación de la NFAT previene la localización nuclear enmascarando la secuencia de localización nuclear. La localización nuclear de NFAT puede monitorearse , por ejemplo, expresando NFAT etiquetada fluorescentemente, por ejemplo, GFP-NFAT, en las células. La microscopía confocal puede utilizarse para monitorear la localización nuclear de la NFAT etiquetada (vea, Trevillyan et al. (2001) J. Biol. Chem 276 =48118-26) .
Secreción de Citocina La secreción de citocina, tal como la secreción de IL-2, puede raonitorearse utilizando ensayos de detección de proteínas. Por ejemplo, el sobrenadante puede colectarse de las células inmunes . Un ensayo ELISA u otro formato adecuado con anticuerpos IL-2 puede utilizarse para detectar y/o medir la cantidad de IL-2 secretada según se compara a las células control. La secreción de otras citocinas, por ejemplo, TNF-a, también puede detectarse en ensayos similares.
Expresión de Citocina La expresión de citocinas, tales como, pero no limitado a, IL-2, puede evaluarse ya sea directamente o indirectamente en las células. Por ejemplo, en los métodos indirectos, un promotor de IL-2 puede unirse de manera operativa a un gen reportero tal como la luciferasa o la ß-galactosidasa, y el constructo reportero ' puede introducirse en las células. La expresión del gen reportero puede monitorearse y compararse a la expresión del gen en las células control (vea, Trevillyan et al. (2001) J. Biol . Chem 276:48118-26). Alternativamente, puede evaluarse la expresión de la proteína o ARNm de IL-2 recombinante o endógeno.
Proliferación de las Células T Las citocinas tales como la IL-2 son necesarias para la proliferación de las células T en respuesta a la estimulación del aloantígeno o mitógeno, y así, la proliferación de las células T se altera por los cambios en la secreción o en la expresión de la citocina. Las células T puede inducirse, tal como con concanavalina A o linfocitos aloreactivos y la proliferación de las células T puede medirse, por ejemplo, sometiendo las células a un pulso de 3H-timidina y midiendo la incorporación de la 3H-timidine (vea, Trevillyan et al. (2001) J. Biol. Chem 276:48118-26).
En algunas modalidades, la modulación (por ejemplo la inhibición o la reducción) de la SOCE mediante los compuestos presentados aquí, se determina por la evaluación de cualquiera de los siguientes criterios: a. existe inhibición directa del [Ca2+] i incrementado según se mide por un indicador de calcio; b. existe una inhibición directa de ISOC o ICRAC según se mide por la sujeción del parche; c. existe inhibición de las funciones de señalización corriente abajo, tales como la actividad de la calcineurina, localización subcelular de NFAT, fosforilación de NFAT, y/o citocina, por ejemplo, producción de IL-2; o d. existen modificaciones en la proliferación de las células inducida por la activación, trayectorias de señalización apoptótica y de diferenciación.
Modelos Animales Los modelos animales que pueden utilizarse en las modalidades de los métodos, incluyen además animales, tales como, pero no limitado a, animales no humanos, que tienen, en al menos algunas de sus células, una alteración o un defecto en, o un funcionamiento aberrante de, un proceso celular que depende de o que se regula por el calcio intracelular . Los procesos celulares que depende de o que se regulan por el calcio intracelular incluyen, por ejemplo, la activación celular, expresión del gen, tráfico celular, y apoptosis. Los padecimientos/trastornoes que involucran defectos que pueden ser al menos parcialmente compensados por la modulación del calcio intracelular incluyen, pero no se limitan a: desórdenes autoinmunes, que incluyen artritis reumatoide, padecimiento inflamatorio del intestino, síndrome de Sjogren (las citocinas asociadas con la invasión de linfocitos de las células epiteliales salivales, pueden reducir la movilización del calcio en las células de la parótida; también, la activación de las células T, incluyendo la activación de los factores de transcripción, la expresión del gen de citocina y la proliferación de las células, depende de la elevación sostenida del nivel de calcio intracelular provisto por el influjo de calcio accionado por el depósito) , asma (la entrada de calcio accionada por el depósito puede jugar un papel importante en la mediación de la constricción bronquial y en la proliferación de las células de músculo liso bronquial) , glomerulonefritis e inflamación glomerular (cambios en el calcio intracelular , tales como por la entrada de calcio accionada por el depósito, adhesión de monocito de señal en un modelo de co-cultivo de inflamación glomerular) .
Los tipos de modelos animales incluyen, pero no se limitan a, animales no humanos, tales como invertebrados y vertebrados no humanos y mamíferos no humanos, roedores (por ejemplo, ratones, rata y hámster) , vacas, pollos, cerdos, cabras, perros, ovejas, insectos, Drosófila, nemátodos, gusanos, C. elegans, monos, gorilas, y otros primates.
Los modelos animales incluyen animales transgénicos y no transgénicos. Un ejemplo de tal un modelo animal que puede utilizarse en las modalidades particulares de los métodos es un modelo de roedor de hiper- sensibilidad de las vías respiratorias (AHR) , una característica del asma. Este modelo puede generarse, por ejemplo, por sensibilización a través de la inmunización con ovalbúmina seguido por la exposición a ovalbúmina aerosolizada y reto por estimulación colinérgica (por ejemplo, vía la administración de metacolina o acetilcolina) (vea, por ejemplo, Xu et al. (2002) J. Appl . Physiol. 93:1833-1840; Humbles et al (2002) Proc . Nati. Acad.
Sci. 99:1479-1484) . La hiper- sensibilidad de las vías respiratorias (la cual pueden evaluarse utilizando métodos, tales como por ejemplo, utilizando pletismograf ía barométrica para registrar las curvas de presión respiratoria y a través de la medición de parámetros pulmonares tales como la conductancia pulmonar y la conformidad pulmonar) puede evaluarse y compararse en animales tratados y no tratados con un compuesto presentado aquí. Un ejemplo, adicional de un modelo animal que puede utilizarse en las modalidades particulares de los métodos, es un modelo de roedor de glomerulonéfritis' proliferativa mesangial, que puede generarse, por ejemplo, por la administración del anticuerpo anti-Thyl.1 (vea, por ejemplo, Jefferson and Johnson (1999) J. Nephrol. 12:297-307) . Cualquier número de parámetros indicativos de glomerulonéfritis o disfunción renal (por ejemplo, proliferación de células mesangiales, presión sanguínea, excreción de proteína urinaria, depuración de creatinina, índice de glomeruloesclerosis y otros parámetros) puede avaluarse y compararse en animales tratados con y no tratados con el agente de prueba. El ratón diabético no obeso (NOD) , una cepa innata del ratón que desarrolla espontáneamente una diabetes autoinmune que comparte muchas características inmunogenéticas con la diabetes mellitus Tipo 1, es otro ejemplo de un modelo animal que puede utilizarse en una modalidad particular de los métodos. Estos ratones también manifiestan muchas características de la exocrinopatía autoinmune (tal como el síndrome de Sjorgen) incluyendo la declinación de la función secretora del tejido exocrino (vea por ejemplo, Humphreys-Beher and Peck (1999) Arch. Oral Biol . 44 Suppl l:S21-25 y Brayer et al. (2000) J Rheumatol . 27:1896-1904) . Las características pertinentes para el síndrome de Sjorgen (por ejemplo, los infiltrados linfocíticos en las glándulas exocrinas (por ejemplo, las glándulas salivales y lacrimales) , la presencia de macrófagos y células dendríticas en las glándulas submaxilares , la integridad de la glándula lagrimal por la medición de la secreción basal y estimulada de lágrimas, las velocidades de flujo de saliva y la actividad de la amilasa) pueden evaluarse y compararse en animales tratados con y no tratados con un compuesto descrito aquí . Un modelo animal (por ejemplo, roedor) de padecimiento autoinmune también puede utilizarse en las modalidades particulares de los métodos.
Tales animales incluyen los modelos de rata disponibles a través de the National Institutes of Health (NIH) Autoimmune Rat odel Repository and Development Center (Bethesda, Md. ,· accesible en www.ors.od.nih.gov/dirs/vrp/ratcenter) . Un modelo de rata de artritis reumatoide (RA) y padecimientos autoinmunes crónicos/inflamatorios relacionados, es el modelo de artritis inducida con colágeno (vea, por ejemplo, Griffiths and Remmers (2001) Immunol . Rev. 184:172-183) . Los fenotipos característicos del padecimiento autoinmune (por ejemplo los niveles alterados de reactividad inmune a los auto-antígenos , inflamación crónica de los órganos ¦ objetivo que expresan autoantígenos , y la activación y participación de células mononucleares invasoras y fibroblastos del tejido en el daño del órgano) pueden avaluarse y compararse en animales tratados con y no tratados con un compuesto presentado aquí. Un modelo animal (por ejemplo, roedor) de dolor neuropático o inflamatorio, también puede utilizarse en una modalidad particular de los métodos. Por ejemplo, un modelo de rata de dolor neuropático involucra el desarrollo de alodinia táctil (respuesta exagerada a los estímulos innocuos) después de la ligación de los nervios espinales lumbares (vea por ejemplo, Chaplan et al. (1994) J. Neurosci. Methods 53:55-63 y Luo et al. (2001) J. Neurosci. 21:1868-1875) . La alodinia táctil, un rasgo característico del dolor neuropático, puede evaluarse (por ejemplo, evaluando el umbral de retiro de la pata en respuesta a la aplicación de presión) y puede compararse en animales tratados y no tratados con un compuesto descrito aquí .
EJEMPLOS Estos ejemplos se proporcionan solamente para propósitos ilustrativos y no para limitar el alcance de las reivindicaciones provistas aquí. Los materiales de inicio y los reactivos utilizados para la síntesis de los compuestos descritos aquí, pueden sintetizarse o pueden obtenerse a partir de fuentes comerciales, tales como, pero no limitado a, Sigma-Aldrich, Acros Organics, Fluka, y Fischer Scientific.
Ejemplo A: Síntesis de 2- (5-bromobenzo [d] oxazol-2-carboxamido) -4- (4-clorofenil) tiofen-3 -carboxilato (3A) de ter-butilo A una suspensión de ácido 5 -bromobenzo [d] oxazol carboxílico (2A, 60 mg, 0.25 mmol) en DCM (5 mi) temperatura ambiente, se agregó cloruro de oxalilo (0.2 mi una cantidad catalítica de DMF. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 17 horas. El solvente se removió bajo vacío a sequedad. El residuo se disolvió en DCM (5 mi) seguido por la adición de 2 -amino-4 - (4 -clorofenil) tiofen-3 -carboxilato de ter-butilo (1A, 62 mg, 0.2 mmol) y DIEA (0.3 mi) . La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 17 horas. La mezcla de reacción se diluyó con DCM (5 mi), se lavó con HCl acuoso 1N (3 x 5 mi) , agua (1 x 5 mi) , NaOH acuoso 1N (3 x 5 mi) y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. El agente se secado se removió mediante filtración. El filtrado se concentró bajo vacío para dar el 3A analíticamente puro que se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LC-MS: calculada para C23H18BrClN2Q4S: 532 (M +1); encontrada: 532.
Ejemplo B: Síntesis de ácido 2- (5-bromobenzo [d] oxazol -2-carboxamido) -4- (4-clorofenil) tiofen-3-carboxílico (4A) A una solución de 3A en DCM (2 mi) a temperatura ambiente se agregó TFA (2 mi) . La mezcla se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos. El solvente se removió bajo vacío. El residuo se suspendió en DCM (1 mi) . El sólido se colectó por filtración, se lavó con DCM (3 1 mi) y se secó para producir 4A. 1H NMR (DMSO-d6) d 7.12 (s, 1H) , 7.38(d, 2H) , 7.43(d, 2H) , 7.79(dd, 1H) , 7.96(d, 1H) , 8.29(d, 1H) , 12.80(bs, 1H) , 13.44(b, 1H) .
Usando procedimientos similares, se prepararon los siguientes compuestos. ácido 2- (7-bromobenzo [d] oxazol-2-carboxamido) -4- (4-clorofenil) tiofen-3 -carboxílico : 1H NMR (DMS0-d6) d 7.12 (s, 1H) , 7.38(d, 2H) , 7.43(d, 2H) , 7.51(dd, 1H) , 7.87(d, 1H) , 8.02(d, 1H) , 12.81(S, 1H) , 13.40(b, 1H) . ácido 2- (benzo [d] oxazol-6-carboxamido) -4- (4-clorofenil) tiofen- 3 -carboxílico : 1H NMR (DMS0-d6) 5.7.02(s, 1H) , 7.37(d, 2H) , 7.41(d, 2H) , 7.98(dd, 1H) , 8.07(d, 1H) , 8.34(d, 1H) , 9.00(s, 1H) , 12.45(s, 1H) , 13.35(bs, 1H) .
Ejemplo C: Síntesis de ácido 4- (4-clorofenil) -2- (8-hidropirazólo [1 , 5 -a] piridin-2- ilcarbonilamino) tiofen-3 -carboxílico (5) : A una solución de ácido 8 -hidropirazolo [1 , 5 -a] piridin-carboxílico (1) (41 mg, 0.25 mmol) en 2 mi de DC se agregó cloruro de oxalilo (210 µ?, 10 eq.) seguido por adición de DMF ca . La solución resultante se agitó 3 h a r.t. antes de evaporarse a sequedad. El cloruro ácido crudo 2 se disolvió en 2 mi de DCM. A la solución anterior se agregó aminotiofeno 3 (61 mg, 0.2 mmol), DMAP (2 mg) y DIEA (110 µ?) . Después que se agitó durante la noche a r.t., la reacción se elaboró con NaHC03 ac . La capa de DCM se separó, se concentró y luego se sometió a purificación de fase inversa de HPLC preparativa para producir 66.8 mg de intermediario t-Bu éster 4, el cual se agitó posteriormente en TFA/DCM (1:1, 3ml) a r.t. por 2h.
Después que se evaporó a sequedad, el residuo se disolvió en DMF y se sometió a purificación de HPLC preparativa de fase inversa. El compuesto del título 5 se aisló como sólido café claro (60.3 mg, rendimiento total: 75.8%). LC-MS: calculado M = 397.83; observado M = 397.82.
Ejemplo D: Síntesis de ácido 4 - (4 -bromofenil ) -2 - ( 8 -hidropirazolo [1 , 5-a] piridin- 2 - ilcarbonilamino) tiofen-3-carboxílico El compuesto del título se hizo de manera similar partiendo de ácido 8 -hidropirazolo [1 , 5 -a] piridin-carboxílico (1) (41 mg, 0.25 mmol) y 2-amino-4- (4-bromofenil) tiofen-3-carboxilato de t-butilo (71 mg, 0.2 mmol) . Rendimiento: 70.8 mg como sólido blanco (rendimiento total: 80%). LC-MS: calculado M = 442.29; observado M = 441.71.
Ejemplo E: Síntesis de ácido 4 - (4-clorofenil ) -2 -(indolizin-2-ilcarbonilamino) tiofen-3 -carboxílico El compuesto del título se hizo de manera similar partiendo de ácido indolizin-carboxílico (20 mg,' 0.12 mmol) y 2 -amino-4 - (4 -clorofenil ) tiofen- 3 -carboxilato de t-butilo (3) (37 mg, 0.12 mmol). Rendimiento: 13.9 mg como sólido amarillo (rendimiento total: 29.2%).
Ejemplo F: Síntesis de ácido 4- (4-clorofenil-2- { [6- metil-4- (trifluorometil) furano [2 , 3-b] piridin-2- i lcarbonilamino} tiofen- 3- carboxílico (13 ) A una solución de ácido 6-metil-4- ( trifluorometil) furano [2, 3-b] piridin-2-carboxílico (10) (61 mg, 0.25 mmol) en 2 mi de DCM se agregó cloruro de oxalilo (210 µ?, 10eq.) seguido por adición de DMF cat.. La solución resultante se agitó 3 h a r.t. antes de evaporarse a sequedad. El cloruro ácido crudo 11 se disolvió en 2 mi de DCM. A la solución anterior se agregaron aminotiofeno 3 (61 mg, 0.2 mmol) , DMAP (2 mg) y DIEA (110 µ?) . Después que se agitó durante la noche a r.t., la reacción se elaboró con NaHC03 ac .. La capa de DCM se separó, se concentró y luego se sometió a purificación de fase inversa de HPLC preparativa para producir 100 mg de intermediario t-Bu éster 12, el cual se agitó posteriormente en TFA/DCM (1:1, 3ml) a r.t. por 0.5 h. Después que se evaporó a sequedad, el residuo se disolvió en D F y se sometió a purificación de HPLC preparativa de fase inversa. El compuesto del título 13 se aisló como sólido amarillo (52.4 mg, rendimiento total: 54.5%). LC-MS: calculado M = 480.84; observado M = 521.22, 480.73.
Ejemplo G: Síntesis de ácido 4- (4-clorofenil-2- [ (7· fluorobenzoxaol-2-il) carbonilamino] tiofen-3 -carboxílico (20) Una solución de 2 -amino- 6 - fluorofenol (14) (254 mg, 2 mmol) y 2 , 2 , 2 -trimetoxiacetato de metilo (15) (328 mg, 2 mmol) en 3 mi de MeOH se calentó en reactor de microondas a 140°C por 1 h. Después del enfriamiento a r.t. se formaron cristales. La filtración seguida por lavado con MeOH proporcionó 208 mg de 7-fluorobenzoxazol-2-carboxilato de metilo (16) como agujas café. Rendimiento: 53.3%. LC-MS: calculado M = 195.15; observado M = 195.96.
A una solución de 7-fluorobenzoxazol-2 -carboxilato de metilo (16) (78 mg, 0.4 raraol) en 5 mi de THF/MeOH/H20 (5:4:1) se agregó 0.8 mi (2 eq. ) de solución ac . de NaOH 1 N. Después que se agitó a r.t. por 2 h, la mezcla de reacción se neutralizó con HC1 1N. La mezcla se concentró a sequedad para producir ácido crudo 17. El ácido crudo 17 se suspendió en 4 mi de DCM, 336 µ? de cloruro de oxalilo y DMF cat . se agregaron. Después que se agitó a r.t. por 3 h la mezcla de reacción se evaporó a sequedad. El cloruro ácido crudo resultante 18 se suspendió en 3 mi de DCM seguido por adición de DIEA (150 µ?) y DMAP (2 mg) . Después que se agitó durante la noche a r.t., la reacción se elaboró con NaHC03 ac .. La capa de DCM se separó, se concentró y luego se sometió a purificación de fase inversa de HPLC preparativa para producir 25 mg de intermediario t-Bu éster 19, el cual se agitó posteriormente en TFA/DCM (1:1, 3 mi) a r.t. por lh. Después que se evaporó a sequedad, el residuo se disolvió en DMF y se sometió a purificación de HPLC preparativa de fase inversa. El compuesto del título 20 se aisló como sólido amarillo (20.8 mg) . 1H NMR (DMSO-d6) d 13.48 (bs, 1H) , 12.94 (bs, 1H) , 7.86 (d, 1H) , 7.57 (m, 2H) , 7.40 (dd, 4H) , 7.12 (s 1H) .
Ejemplo H: Síntesis de ácido 4- (4-clorofenil-2- [ (4-fluorobenzoxaol-2-il) carbonilamino] tiofen-3 -carboxílico El compuesto del título se hizo de manera similar partiendo de 2 -amino-3-fluorofenol en lugar de 14. 1H NMR (DMSO-d6) d 13.5 (bs, 1H) , 12.9 (bs, 1H) , 7.83 (d, 1H) , 7.65 (m, 1H) , 7.42 (m, 5H) , 7.12 (s, 1H) .
Ejemplo I: Síntesis de ácido 4 - (4 -bromofenil-2 - [ (4 -fluorobenzoxaol-2-il) carbonilamino] tiofen- 3 -carboxílico El compuesto del título se hizo de manera similar partiendo de 2-amino-3-fluorofenol en lugar de 14 y más tarde usando 2-amino-4- (4 -bromofenil) tiofen-3-carboxilato de t-butilo en lugar de 3. 1H NMR (DMS0-d6) d 13.5 (bs, 1H) , 12.9 (bs, 1H) ,' 7.83 (d, 1H) , 7.64 (m, 1H) , 7.55 (d, 2H) , 7.44 (t, 1H) , 7.32 (d, 2H) , 7.12 (s, 1H) .
Ejemplo J: Síntesis de ácido 4- (4-Clorofenil) -2 (tiofeno [2 , 3 -d] tiofen- 2- ilcarboni lamino) tiofen-3 -carboxí lico A una solución de IB (184 mg, 1 mmol) en CH2C12 (2 mi) se agregó cloruro de oxalilo (254 mg, 2 mmol) y 4-dimetilaminopiridina (D AP, 24 mg, 0.2 mmol) . La mezcla de reacción se agitó por 2 h a temperatura ambiente. El solvente se removió in vacuo y se secó. El residuo se disolvió en CH2C12 (2 mi) y se agregó 3 (124 mg, 0.4 mmol) conjuntamente con N, -diisopropiletilamina . (DIEA, 520 mg, 4 mmol) . La mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se apagó con NaHC03 saturado (10 mi) y el terc-butil éster 5B se extrajo con EtOAc (10 mi x 2) . Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na2S04) y se concentraron in vacuo. El residuo se disolvió en CH2C12 (2 mi) y se agregó TFA (0.5 mi) . La mezcla se agitó por 2 h a temperatura ambiente. El producto final se purificó por HPLC. Las fracciones que contienen el producto deseado se combinaron y se concentraron. El compuesto 6B (6 mg, 1.5%) se obtuvo como sólido blanco.
Ejemplo K: Síntesis de ácido 4- (4 -Clorofenil) -2- [3- (2-clorofenil) -2 -fluoropropanoilamino] tiofen-3 -carboxílico (21) A una solución del compuesto 22 (200 mg, 1 mmol) en 5 mL de piridinio poli ( fluoruro de hidrógeno) se agregó lentamente, con buena agitación, nitrito de sodio (105 mg, 1.5 mmol) . Después que se agitó a temperatura ambiente por 18 h, se agregó agua (20 mi) . La solución resultante se extrajo con éter. La capa de éter se lavó con NaOH 1N. Lo acuoso se acetificó con HC1 y se extrajo con éter. La capa de éter se secó (Na2S04) . El solvente se removió in vacuo. El producto crudo 23 (151 mg, 74%) se utilizó para la siguiente etapa sin purificación adicional.
A una solución de 23 (151 mg, 0.74 mmol) en CH2C12 (2 mi) se agregó cloruro de oxalilo (190 mg, 1.5 mmol) y 4-dimetilaminopiridina (DMAP, 18 mg, 0.15 mmol) . La mezcla de reacción se agitó por 2 h a temperatura ambiente. El solvente se removió in vacuo y se secó. El residuo se disolvió en CH2C12 (2 mi) y se agregó 25 (93 mg, 0.3 mmol) conjuntamente con N, -diisopropiletilamina (DIEA, 390 mg, 3.0 mmol) . La mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se apagó con NaHC03 saturado (10 mi) y el terc-butil éster 26 se extrajo con EtOAc (10ml x 2) . Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na2S04) y se concentraron in vacuo. El residuo se disolvió en CH2C12 (2 mi) y se agregó TFA (0.5 mi) . La mezcla se agitó por 2 h a temperatura ambiente. El producto final se purificó por HPLC. Las fracciones que contienen el producto deseado se combinaron y se concentraron. El compuesto 21 (15 mg, 12%) se obtuvo como sólido blanco.
Ejemplo L: ácido Síntesis de 4- (4-Clorofenil) -2- (2-fluoro-3 -fenilopropanoilamino] tiofen-3 -carboxílico (31) A una solución del compuesto 27 (330 mg, 2 mmol) en 5 mL de piridinio poli ( fluoruro de hidrógeno) se agregó lentamente, con buena agitación, nitrito de sodio (210 mg, 3 mmol) . Después que se agitó a temperatura ambiente por 18 h, se agregó agua (20 mi) . La solución resultante se extrajo con éter. La capa de éter se lavó con NaOH 1N. Lo acuoso se acetificó con HC1 y se extrajo con éter. La capa de éter se secó (Na2S04) . El solvente se removió in vacuo. El producto crudo 28 (195 mg, 58%) se utilizó para la siguiente etapa sin purificación adicional.
A una solución de 28 (195 mg, 1.2 mmol) en CH2C12 (2 mi) se agregó cloruro de oxalilo (295 mg, 2.3 mmol) y 4-dimetilaminopiridina (DMAP, 24 mg, 0.2 mmol) . La mezcla de reacción se agitó por 2 h a temperatura ambiente. El solvente se removió in vacuo y se secó. El residuo se disolvió en CH2C12 (2 mi) y se agregó 4 (63 mg, 0.2 mmol) conjuntamente con N, -diisopropiletilamina (DIEA, 390 mg, 3.0 mmol) . La mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se apagó con NaHC03 saturado (10 mi) y el terc-butil éster 30 se extrajo con EtOAc (10ml x 2) . Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na2S04) y se concentraron in vacuo. El residuo se disolvió en CH2C12 (2 mi) y se agregó TFA (0.5 mi) . La mezcla se agitó por 2 h a temperatura ambiente. El producto final se purificó por HPLC. Las fracciones que contienen el producto deseado se combinaron y se concentraron. El compuesto 31 (15 mg, 18%) se obtuvo como sólido blanco.
Ejemplo M: Síntesis de ácido 4 - (4 -Clorofenil ) -2 - (2 -fluoro- 3 - fenilopropanoilamino] tiofen- 3 -carboxílico (35) A una solución enfriada del compuesto 27 (330 mg, 2 mmol) en 5 mL de 10% HC1 se agregó lentamente, con buena agitación, nitrito de sodio (210 mg, 3 mmol) . La mezcla de reacción se agitó primero por 3 h a OoC y luego temperatura ambiente durante la noche. Se agregó agua (20 mi) . La solución resultante se extrajo con éter. La capa de éter se lavó con NaOH 1N. Lo acuoso se acetificó con HC1 y se extrajo con éter. La capa de éter se secó (Na2S04) . El solvente se removió in vacuo. El producto crudo 32 se utilizó para la siguiente etapa sin purificación adicional.
A una solución de 32 (2 mmol) en CH2C12 (2 mi) se agregó cloruro de oxalilo (508 mg, 4 mmol) y 4-dimetilaminopiridina (DMAP, 24 mg, 0.2 mmol) . La mezcla de reacción se agitó por 2 h a temperatura ambiente. El solvente se removió in vacuo y se secó. El residuo se disolvió en CH2C12 (2 mi) y se agregó 25 (63 mg, 0.2 mmol) conjuntamente con N, N-diisopropiletilamina (DIEA, 1 g, 8 mmol) . La mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se apagó con NaHC03 saturado (10 mi) y el terc-butil éster 34 se extrajo con EtOAc (10ml x 2) . Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na2S04) y se concentraron in vacuo. El residuo se disolvió en CH2C12 (2 mi) y se agregó TFA (0.5 mi) . La mezcla se agitó por 2 h a temperatura ambiente. El producto final se purificó por HPLC. Las fracciones que contienen el producto deseado se combinaron y se concentraron. El compuesto 35 (10 mg, 3%) se obtuvo como sólido blanco.
Ejemplo N: Síntesis de ácido 4- (4-Clorofenil) -2- [3- (2-clorofenil) -2-cloropropanoilamino] tiofen-3-carboxílico (39) A una solución enfriada del compuesto 22 (100 mg, 0.5 mmol) en 2 mL de 10% HC1 se agregó lentamente, con buena agitación, nitrito de sodio (520 mg, 0.75 mmol). La mezcla de reacción se agitó primero por 3 h a 0°C y luego temperatura ambiente durante la noche. Se agregó agua (20 mi) . La solución resultante se extrajo con éter. La capa de éter se lavó con NaOH 1N. Lo acuoso se acetificó con HC1 y se extrajo con éter. La capa de éter se secó (Na2S04) . El solvente se removió in vacuo. El producto crudo 36 (77 mg, 77%) se utilizó para la siguiente etapa sin purificación adicional .
A una solución de 36 (77 mg, 0.35 mmol) en CH2C12 (2 mi) se agregó cloruro de oxalilo (89 mg, 0.7 mmol) y 4-dimetilaminopiridina (DMAP, 8 mg, 0.07 mmol). La mezcla de reacción se agitó por 2 h a temperatura ambiente. El solvente se removió in vacuo y se secó. El residuo se disolvió en CH2C12 (2 mi) y se agregó 25 (43 mg, 0.14 mmol) conjuntamente con N, -diisopropiletilamina (DIEA, 181 mg, 1.4 mmol) . La mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se apagó con NaHC03 saturado (10 mi) y el terc-butil éster 38 se extrajo con EtOAc (10 mi x 2) . Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na2S04) y se concentraron in vacuo. El residuo se disolvió en CH2C12 (2 mi) y se agregó TFA (0.5 mi) . La mezcla se agitó por 2 h a temperatura ambiente. El producto final se purificó por HPLC. Las fracciones que contienen el producto deseado se combinaron y se concentraron. El compuesto 39 (2 mg, 3%) se obtuvo como sólido blanco.
Ejemplo O: Síntesis de ácido 2- (2-Fluoro-3-fenilprop-2- A una solución de 40 (83 mg, 0.5 mmol) en CH2C12 (2 mi) se agregó cloruro de oxalilo (127 mg, 1 mmol) y 4-dimetilaminopiridina (DMAP, 12 mg, 0.1 mmol) . La mezcla de reacción se agitó por 2 h a temperatura ambiente. El solvente se removió in vacuo y se secó. El residuo se disolvió en CH2C12 (2 mi) y se agregó 25 (62 mg, 0.2 mmol) conjuntamente con N, N-diisopropiletilamina (DIEA, 258 mg, 2 mmol) . La mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se apagó con NaHC03 saturado (10 mi) y el terc-butil éster 42 se extrajo con EtOAc (10 mi x 2) . Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na2S04) y se concentraron in vacuo. El residuo se disolvió en CH2C12 (2 mi) y se agregó TFA (0.5 mi) . La mezcla se agitó por 2 h a temperatura ambiente. El producto final se purificó por HPLC. Las fracciones que contienen el producto deseado se combinaron y se concentraron. El compuesto 43 (66 mg, 82%) se obtuvo como sólido blanco.
Ejemplo P: Síntesis de ácido 4 - (4 -Clorofenil ) -2 - (2 -me A una solución de 44 (82 mg, 0.5 mmol) en CH2C12 (2 mi) se agregó cloruro de oxalilo (127 mg, 1 mmol) y 4-dimetilaminopiridina . (DMAP, 12 mg, 0.1 mmol). La mezcla de reacción se agitó por 2 h a temperatura ambiente. El solvente se removió in vacuo y se secó. El residuo se disolvió en CH2C12 (2 mi) y se agregó 25 (62 mg, 0.2 mmol) conjuntamente con N, -diisopropiletilamina (DIEA, 258 mg, 2 mmol) . La mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se apagó con NaHC03 saturado (10 mi) y el terc-butil éster 46 se extrajo con EtOAc (10 mi x 2) . Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na2S04) y se concentraron in vacuo. El residuo se disolvió en CH2C12 (2 mi) y se agregó TFA (0.5 mi) . La mezcla se agitó por 2 h a temperatura ambiente. El producto final se purificó por HPLC. Las fracciones que contienen el producto deseado se combinaron y se concentraron. El compuesto 47 (11 mg, 14%) se obtuvo como sólido blanco.
Ejemplo Q: Síntesis de ácido 4 - (4 -Clorofenil) -2 - (3 -fenilprop-2-inoilamino) tiofen-3 -carboxílico (50) A una solución de 48 (35 mg, 0.24 mmol) en CH2C12 (2 mi) se agregó 2 -cloro-4 , 6-dimetoxi-l , 3 , 5- triazina (CDMT, 42 mg, 0.24 mmol) y 4 -metilmorfolina (NMM, 103 mg, 0.8 mmol) . La mezcla de reacción se agitó por 0.5 h a temperatura ambiente antes se agregó 25 (62 mg, 0.2 mmol) . La mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se apagó con NaHC03 saturado (10 mi) y el terc-butil éster 46 se extrajo con EtOAc (10ml x 2) . Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na2S04) y se concentraron in vacuo. El residuo se disolvió en CH2C12 (2 mi) y se agregó TFA (0.5 mi) . La mezcla se agitó por 2 h a temperatura ambiente. El producto final se purificó por HPLC. Las fracciones que contienen el producto deseado se combinaron y se concentraron. El compuesto 50 (3.8 mg, 5%) se obtuvo como sólido blanco.
Ejemplo R: Síntesis de ácido 2- (3,3- Difenilpropanoilamino) -4- (4 -clorofenil) tiofen-3 -carboxílico A una solución de 51 (113 mg, 0.5 mmol) en CH2C12 (2 mi) se agregó cloruro de oxalilo (127 mg, 1 mmol) y 4-dimetilaminopiridina (DMAP, 12 mg, 0.1 mmol). La mezcla de reacción se agitó por 2 h a temperatura ambiente. El solvente se removió in vacuo y se secó. El residuo se disolvió en CH2C12 (2 mi) y 25 (62 mg, 0.2 mmol) se agregó conjuntamente con N, -diisopropiletilamina (DIEA, 258 mg, 2 mmol) . La mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se apagó con NaHC03 saturado (10 mi) y el terc-butil éster 53 se extrajo con EtOAc (10 mi x 2) . Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na2S04) y se concentraron in vacuo. El residuo se disolvió en CH2C12 (2 mi) y se agregó TFA (0.5 mi). La mezcla se agitó por 2 h a temperatura ambiente. El producto final se purificó por HPLC. Las fracciones que contienen el producto deseado se combinaron y se concentraron. El compuesto 54 (46 mg, 10%) se obtuvo como sólido blanco.
Ejemplo S : Síntesis de ácido 4 - (4 -bromofenil ) - 2 - (2 -metil-3 -fenilpropanamido) tipfen-3 -carboxílico (59) Una solución de aminotiofeno 57 (80 mg, 0.227 mmol) , cloruro ácido 56 (52 µ? , 1.5 eq.), DMAP (5 mg) y DIEA (197 µ?) en 2 mi de DCM se agitó durante la noche a r.t. Después que NaHCQ3 ac . se elaboró, la capa de DCM se separó, se concentró y luego se sometió a purificación de columna de gel de sílice (12 g) usando 0-50% gradiente B (A: hexano; B: 50% EA en hexano) para producir 114 mg de intermediario t-Bu éster 58. El éster anterior 58 se agitó en TFA/DCM (1:1, 3ml) a r.t. por 4h. Después que se evaporó a sequedad, el residuo se disolvió en DMF y se sometió a purificación de HPLC preparativa de fase inversa. El compuesto del título 59 se aisló como sólido blanco (52.9 mg, rendimiento total: Ejemplo T: Preparación de 2-amino-4- (4-bromofenil) tiofen-3-carboxilato de tere-butilo (62): S (12.06 g, 0.38 mol) y morfolina (39.5 mi, 0.38 mol) se agregaron a una solución de 60 (50g, 0.25mol) y 61 (54.78 mL, 0.38 mol) en t-BuOH (250 mL) . La mezcla se calentó a 60°C por 65 h. Después de la evaporación de t-BuOH, el residuo se purificó por cromatografía de columna ( PE/EA=100 : 1 ) para producir 57 (14 g, 15.7% de rendimiento). 1H NMR (CDC13 , 300MHz): d = 1.21 (s, 9H) , 6.01-6.10 (m, 3H) , 7.13-7.16 (m, 2H) , 7.42-7.45 (m, 2H) . LC-MS: 353.9 (M-l) - .
El compuesto 25 también se obtuvo usando métodos similares como se describieron anteriormente. El compuesto 25 (10.0 g, 11.3%). 1H NMR (CDC13 , 300MHz): d = 1.21 (s, 9H) , 6.00 (s, 1H) , 6.03 (s, 2H) , 7.18-7.22 (m, 2H) , 7.26-7.30 (m, 2H) . LC-MS : 309.9 (M-l) .
Ejemplo U: Preparación de ácido 4- (4 -clorofenil) -2- (2-oxo-2- (1,2,3, 4-tetrahidronaftalen-2 -il) etil) tiofen-3-carboxílico (65A) : A una solución de ácido 1 , 2 , 3 , 4 -tetrahidro-2 -naftalencarboxílico (176 mg, 1.0 mmol) en CH2C12 (2 mi) se agregó cloruro de oxalilo (254 mg, 2.0 mmol) y 4-dimetilaminopiridina (24 mg, 0.2 mmol). La mezcla de reacción se agitó por 2 h a temperatura ambiente. El solvente se removió in vacuo y se secó. El residuo se disolvió en CH2C12 (2 mi) y se agregó 25 (124 mg, 0.4 mmol) conjuntamente con N, -diisopropiletilamina (520 mg, 4.0 mmol) . La mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se apagó con NaHC03 saturado (10 mi) y el terc-butil áster 65 se extrajo con EtOAc (10 mi x 2) . Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na2S04) y se concentraron in vacuo. El residuo se disolvió en CH2C12 (2 mi) y se agregó. TFA (0.5 mi) . La mezcla se agitó por 2 h a temperatura ambiente. El producto final se purificó por HPLC. Las fracciones que contienen el producto deseado se combinaron y se concentraron. El compuesto 65A (24 mg, 14%) se obtuvo como sólido blanco.
Ejemplo V: Preparación de ácido 4- (4 -bromofenil) -2-{ [ (2-clorofenil) metoxi] carbonilamino} tiofen-3 -carboxílico (67A) :¦ Una solución de aminotiofeno 57 (80 mg, 0.227 mmol) , 2-clorobencil-cloroformiato (52 µ?, 1.5 eq.), DMAP (5 mg) y DIEA (197 µ?) en 2 mi de DCM se calentó a 45°C por 16h. Después que NaHC03 ac.se elaboró, la capa de DCM se separó, se concentró y luego se sometió a purificación de HPLC preparativa de fase inversa para producir 12 mg de intermediario t-butil éster 67. El éster 57 se -agitó en TFA/DCM (1:1, 3ml) a r.t. por 40 min. Después que se evaporó a sequedad, el residuo se disolvió en DMF y se sometió a purificación de HPLC preparativa de fase inversa. El compuesto del título 67A se aisló como sólido blanco (7.6 mg, rendimiento total: 7.2%).
Ejemplo W: Preparación de 4 - (4 -bromofenil ) -2 - (2 - 1,2,3,4 -tetrahidroisoquinolilcarbonilamino) tiofen- 3 -carboxilato de tere-butilo (70) : Una mezcla de tetrahidroisoquinolina (68) (63 µ?, 0.5 mmol) en 5 mi de DCM y 5 mi de NaHC03 ac . saturado se enfrió a 0°C. Una solución de fosgeno (990 µ? , 4 eq. 20% en tolueno) se agregó. Después de la agitación a 0°C por 30 min, la fase de DCM se separó, se secó sobre Na2S04 y se evaporó. El cloruro de tetrahidroisoquinolin-2-carbonilo crudo resultante (69) se acopló con aminotiofeno 57 durante la noche a r.t. en DCM (2 mi) en presencia de DMAP (5 mg) y DIEA (110 µ?) . Después que NaHC03 ac . se elaboró, la fase de DCM se separó, se concentró y luego se sometió a purificación de HPLC preparativa de fase inversa para proporcionar 46.3 mg de 4- (4 -bromofenil) -2- (2-1,2,3, 4 - tetrahidroisoquinolil-carbonilamino) tiofen-3 -carboxilato de tere-butilo (70) como una espuma amarilla en 45.1% de rendimiento.
Preparación de ácido 4- (4 -bromofenil) -2- (2-1, 2, 3 , 4-tetrahidroisoquinolilcarbonilamino) tiofen-3 -carboxílico (71A) y N- [4- (4 -bromofenil) (2-tienil) ] -2-1, 2,3,4-tetrahidroisoquinolilcarboxamida (71B) : Una solución de 4 - (4 -bromofenil) -2 - ( 2 - 1 , 2 , 3 , 4 -tetrahidroisoquinolilcarbonilamino) tiofen- 3 -carboxilato de tere-butilo (70) (46.3 mg) en TFA/DCM (1:1, 3 mi) se agitó a r.t. por 40 min. Después que se evaporó a sequedad, el residuo se disolvió en DMF y luego se sometió a purificación de HPLC preparativa de fase inversa. 22.9 mg de ácido 4- (4-bromofeni 1) -2- (2-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolilcarbonilamino) tiofen-3 -carboxílico (71A) (rendimiento: 55.5%) y 6.1 mg de N- [4- (4 -bromofenil ) (2-tienil) ] -2-1,2,3, 4 - tetrahidroisoquinolilcarboxamida (7 IB) (rendimiento: 16.3%) aislaron como sólidos blanco respectivamente .
Ejemplo X: Síntesis de ácido 4- (4-clorofenil) -2- (3- (3-fluorofenil) ureido) tiofen-3-carboxílico (74) Una mezcla de aminotiofeno 25, isocianato 72 DMAP y DIEA se agitó en 20 mi de DCM durante la noche a r.t. Después que NaHC03 ac . se elaboró, la capa de DCM se separó, se concentró y purificó por cromatografía de columna de gel de sílice. El grupo protector se removió agitando el éster 73 en TFA/DCM a temperatura ambiente. El solvente se removió in vacuo y se purificó por HPLC preparativa.
Ejemplo Y: Síntesis de ácido 4- (4-clorofenil) -2- (3- (furan-2-il) propanamido) tiofen-3 -carboxílico (77) Una mezcla de aminotiofeno 25, cloruro ácido 75 DMAP y DIEA se agitó en 20 mi de DCM durante la noche a r.t. Después que NaHC03 ac . se elaboró, la capa de DCM se separó, se concentró y purificó por cromatografía de columna de gel de sílice. El grupo protector se removió agitando el éster 76 en TFA/DCM a temperatura ambiente. El solvente se removió in vacuo y se purificó por HPLC preparativa.
Ejemplo Z: Síntesis de ácido 4-p-tolil-2- (3 , 4 , 5-trimetoxibenzamido) tiofen-3 -carboxílico Cianoacetato de etilo (5 mmol) , y 1- (3,4,5-trimetoxifenil) etanona (5 mmol) se disolvieron en tolueno' (5 mi) . Se agregó morfolina (5 mmol) seguido por tamices moleculares activados (4A) . La reacción se agitó a 80°C por 12 horas. La reacción se enfrió a temperatura ambiente, se filtró y se concentró. El residuo se recuperó en tolueno (5 mi), etanol (5 mi) y se agregó azufre (0.16 g; 5 mmol). La mezcla de reacción se calentó con mezclado a 70°C por 12 horas . La reacción se enfrió a temperatura ambiente y los solventes se evaporaron. El residuo se purificó por HPLC para proporcionar 2-amino-4- (3,4, 5-trimetoxifenil) tiofen-3-carboxilato de etilo. El 2-amino-4- (3 , 4 , 5-trimetoxifenil) tiofen-3 -carboxilato de etilo (5 mmol) se trató con cloruro de metilbenzoilo (5 mmol) en THF (10 mi) . La reacción se agitó a temperatura ambiente por 10 horas. La reacción se diluyó con NaOH 1N (10 mi) y acetato de etilo (15 mi) . Las capas se separaron, la capa orgánica se secó con sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía instantánea para proporcionar 4-p-tolil-2- (3,4, 5-trimetoxibenzamido) tiofen-3-carboxilato de etilo. El 4-p-tolil-2- (3, 4, 5-trimetoxibenzamido) tiofen-3 -carboxilato de etilo se hidrolizó bajo una variedad de condiciones (por ejemplo LiOH, agua; LiOH, H202, agua; o NaOH, agua) para proporcionar el compuesto del título.
Ejemplo AA: Síntesis de ácido 4- (4-Clorofenil) -2- [ (3-hidroxibenzo [b] tiofen-2-il) carbonilamino] tiofen-3-carboxílico (81) El ácido 3- (fenilmetoxi) enzo [b] tiofen-2-carboxílicoll (78, 55 mg, 0.19 mmol) se disolvió en DCM (1 mi) y se trató con DMF (1 gota) y cloruro de oxalilo (0.20 mi, 2.4 mmol). La mezcla se agitó por 3 h y se concentró bajo vacío. Se recuperó en DCM (2 mi) y se trató consecutivamente con 2-amino-4- (4 -clorofenil ) tiofen-3 -carboxilato de tere-butilo (59 mg, 0.19 mmol) y trietilamina (0.20 mi, 1.4 mmol) . La mezcla se agitó por 20 h a temperatura ambiente y luego se lavó con cloruro de sodio acuoso (3 mi) y se concentró bajo vacío. El residuo se purificó por HPLC para proporcionar 22 mg (21%) de 4- (4-clorofenil) -2- { [3- (fenilmetoxi) benzo [b] tiofen-2-il] carbonilamino} tiofen-3 -carboxilato de tere-butilo (79).
Este material se recuperó en ácido trifluoroacético y se agitó por 5 h. El solvente se removió bajo vacío y el residuo se disolvió en DCM (3 mi) y se trató con tribromuro de boro 1.0 M en DCM (0.12 mi, 0.12 mmol) . Después de 1 h, se agregó tribromuro de boro adicional en DCM (0.40 mi, 0.40 mmol) y la agitación se continuó por 2 h. La mezcla se lavó con bicarbonato de sodio acuoso (3 mi) y se concentró bajo vacío. El residuo se purificó por HPLC preparativa para proporcionar 5.8 mg (35%) de 81 como un polvo blancuzco.
Ejemplo AB : Síntesis de ácido 2- (benzofuran-2- carbonilamino) -4- ( -metil-3 -nitro-fenil) tiofen- 3 -carboxílico (84) 2- (benzofuran-2-carbonilamino) -4- ( trifluorometil- sulfoniloxi) tiofen-3 -carboxilato de tere-butilo (82, 50 mg, 0.102 mmol), ácido 4 -metil- 3 -nitrofenilborónico (28 mg, 0.153 mmol) , Tetraquis ( trifenilfosfina)paladio (0) (1.0 mg, 0.001 mmol) , y carbonato de sodio (42 mg, 0.407 mmol), se combinaron en etanol 2:1:1, tolueno y agua, la mezcla bifásica se agitó vigorosamente en un vial sellado a 70°C. Después de 2 horas, la mezcla se filtró a través de Celita y la Celita se enjuagó con cloruro de metileno. La fracción orgánica del filtrado se lavó con agua, se secó con sulfato de sodio, se filtró, se concentró, se trituró en metanol, se centrifugó, se decantó y el sólido resultante se secó bajo vacío y se trató con una mezcla 1:1 de cloruro de metileno y ácido trifluoroacético . Después de 4 horas la mezcla se concentró in vacuo, y el residuo se trituró en cloruro de metileno, se centrifugó, se decantó y se secó bajo alto vacío para producir 84 como un polvo blanco (35.2 mg, 43 %) . 1H NMR (500 MHz, DMSO d6. ) d 13.48 (br, 1 H) , 12.57 (br, 1 H) , 7.96 (S, 1 H) , 7.86 (m, 2 H) , 7.76 (d, 1 H) , 7.64 (d, 1 H) , 7.57 (t, 1 H) , 7.49 (d, 1 H) , 7.42 (t, 1 H) , 2.55 (s, 3 H) ppm.
Ejemplo AC: Síntesis de ácido 2- (benzofuran-2-carbonilamino) -4- [4- ( trifluorometoxi) fenil] tiofen-3-carboxílico (87) 2- (benzofuran-2-carbonilamino) -4-(trifluorometilsulfoniloxi ) tiofen-3 -carboxilato de tere-butilo (85, 50 mg, 0.102 mmol) , ácido 4-( trifluorometoxi ) fenilborónico (32 mg, 0.153 mmol), Tetraquis (trifenilfosfina) paladio (0) (1.0 mg, 0.001 mmol), y carbonato de sodio (42 mg, 0.407 mmol), se combinaron en etanol 2:1:1, tolueno y agua, la mezcla bifásica se agitó vigorosamente en un vial sellado a 70 °C. Después de 2 horas, la mezcla se filtró a través de Celita y la Celita se enjuagó con cloruro de metileno. La fracción orgánica del filtrado se lavó con agua, se secó con sulfato de sodio, se filtró, se concentró, se purificó por cromatografía de capa preparativa (10 % acetato de etilo/Hexano) luego se trató con una mezcla 1:1 de cloruro de metileno y ácido trifluoroacético . Después de 4 horas la mezcla se concentró in vacuo, y el residuo se trituró en cloruro de metileno, se centrifugó, se decantó y se secó bajo alto vacío para producir 87 como un polvo blanco (11.1 mg, 25 %) . 1H NMR (500 MHz , DMSO d6. ) d 13.35 (br, 1 H) , 12.55 (br, 1 H) , 7.87 (d, 1 H) , 7.86 (s, 1 H) , 7.76 (d, 1 H) , 7.57 (t, 1 H) , 7.49' (d, 2 H) , 7.42 (t, 1 H) , 7.36 (d 2 H) , 7.08 (s, 1 H) ppm. ESI MS [M + H] 448.26.
Ejemplo AD : Síntesis de ácido 4- (4-clorofenil) -2- (7-nitro- 3 -oxobenzotiazol-2- ilcarbonilamino) tiofen- 3 -carboxílico A una solución de 2-cloro-l , 3-dinitrobenceno 88 (2.02 g, 10 mmol) en 1, 2 -dimetoxietano (DME , 20 mi) se agregó mercaptoacetato de metilo 89 (1.6 g, 15 mmol) y trietilamina (TEA, 6 mi, 40 mmol) . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se apagó con NaOH 1 (100 mi) . La capa orgánica se separó y la acuosa se extrajo con EtOAc (100 mL x 2) . Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na2SQ4) y se concentraron in vacuo. El residuo se disolvió en MeOH (100 mi) y se agregaron 10 mi de TEA. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente por 4 h. La solución de reacción se concentró in vacuo. El sólido se colectó por filtración y se secó y proporcionó 91 (2g, 80%) como sólido amarillo.
A una solución de 91 en THF (20 mi) se agregó MeOH (20 mi) y LiOH 2M (20 mi) . La mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente . El solvente orgánico se removió in vacuo. El residuo se suspendió en H20 (100 mi) y se enfrió en un baño de agua con hielo. A lo acuoso enfriado se agregó HCl 1M hasta pH < 2. El sólido se colectó por filtración y se secó y proporcionó el ácido 92 como sólido amarillo.
Una mezcla de aminotiofeno (25, 63 mg, 0.2 mmol), cloruro de benzotiazol-2-carbonilo 92 (i) (36 mg, 0.3 mmol), 140 pL de DIEA y 2 mg de DMAP en 2 mi de DCM se agitó durante la noche a r.t. Después que se elaboró con NaHC03 ac . , la capa de DCM (ca. 3 mi) se sacudió con 2 mi de NaOH 1N por 5 min. La fase orgánica se separó, se concentró y luego se sometió a purificación de HPLC preparativa para proporcionar el producto N óxido, el cual posteriormente se agitó en TFA/DCM (1:1, 3 mi) a r.t. por 1 h. Después de la evaporación a sequedad, el residuo sólido se trituró con DCM para producir el producto.
Ejemplo AE: Síntesis de ácido 7-nitro-3-oxobenzotiazol- 2 -carbóxílico (95) 93 95 Bajo una atmósfera de argón, se agregó Tf20 (7.22 mi, 12.1 g, 42.9 mmol) por goteo a una solución agitada de 93 (12.0 g, 34.3 mmol) y trietilamina (9.57 mi, 6.95 g, 68.7 mmol) en DCM (160 mi) a -78°C. La mezcla se calentó a 10°C durante 4 horas. La solución se apagó con agua (150 mi) . La mezcla se extrajo con diclorometano (3 x 200 mi), se secó sobre NaS04 y se concentró bajo presión reducida. La purificación de la mezcla por cromatografía (Sistema ISCO, sílice, 0-50% EtOAc-hexano durante 30 minutos) proporcionó 95 (15.12 g, 91%) como un sólido cristalino.
Ejemplo AF: Síntesis de ácido 4- (4-Clorofenil) - 2(4,5,6, 7-tetrahidrobenzo [b] tiofen-2-il) carbonilamino] tiofen-3-carboxílico (99) A una solución de 96 (91 mg, 0.5 mmol) en CH2C12 (2 mi) se agregó cloruro de oxalilo (127 mg, 1 mmol) y 4- dimetilaminopiridina (DMAP, 36 mg, 0.3 mmol). La mezcla de reacción se agitó por 2 h a temperatura ambiente. El solvente se removió in vacuo y se secó. El residuo se disolvió en CH2C12 (2 mi) y se agregó 25 (62 mg, 0.2 mmol) conjuntamente con N, N-diisopropiletilamina (DIEA, 260 mg, 2 mmol) . La mezcla se agitó por 2 h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se apagó con NaHC03 saturado (10 mi) y el terc-butil éster 98 se extrajo con EtOAc (10 mi x 2) . Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na2S04) y se concentraron in vacuo. El residuo se disolvió en CH2C12 (2 mi) y se agregó TFA (0.5 mi) . La mezcla se agitó por 2 h a temperatura ambiente. El producto final se purificó por HPLC. Las fracciones que contienen el producto deseado se combinaron y se concentraron. El compuesto 99 (62.8 mg, 75%) se obtuvo como sólido blanco. LC-MS: calculado para C20H16C1NO3S2 : 418 (M +1) .
Ejemplo AG: Síntesis de ácido 4- (4-Cloro-3-fluorofenil) -2 (quinoxalin-2-ilcarbonilamino) tiofen-3-carboxílico (104) A una solución de 100 (43.5 mg, 0.25 mmol) en CH2C12 (2 mi) se agregó cloruro de oxalilo (64 mg, 0.5 mmol) y 4-dimetilaminopiridina (DMAP, 12 mg, 0.1 mmol) . La mezcla de reacción se agitó por 2 h a temperatura ambiente. El solvente se removió in vacuo y se secó. El residuo se disolvió en CH2C12 (2 mi) y se agregó 8 (66 mg, 0.2 mmol) conjuntamente con N, -diisopropiletilamina (DIEA, 260 mg, 2 mmol) . La mezcla se agitó por 2 h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se apagó con NaHC03 saturado (10 mi) y el terc-butil éster 103 se extrajo con EtOAc (10 mi x 2) .
Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na2S04) y se concentraron in vacuo. El residuo se disolvió en CH2C12 (2 mi) y se agregó TFA (0.5 mi) . La mezcla se agitó por 2 h a temperatura ambiente. El producto final se purificó por HPLC. Las fracciones que contienen el producto deseado se combinaron y se concentraron. El compuesto 104 (52.7 mg, 61%) se obtuvo como sólido amarillo. LC-MS: calculado para C20H11C1FN3O3S: 428 (M +1). 1H N R (DMSO-d6) d 7.17 (s, 1H) , 7.25 (dd, 1H, J = 2.0, 8.3), 7.47 (dd, 1H, J = 2.0, 10.5), 7.58 (t, 1H, J = 8.1), 8.04-8.09 (m, 2H) , 8.16-8.18 (m, 1H) , 8.26-8.28 (m, 1H) , 9.64 (s, 1H) , 13.29 (s, 1H) , 13.48 (bs, 1H) .
Ejemplo AH : Síntesis de ácido 2 - (benzo [3 , 4 -d] 1 , 2 , 3 -tiadiazol-5-ilcarbonilamino-4- (2 , 3 -difluoro-4 -metilfenil) tiofen- 3 -carboxílico (109) A una solución de ácido benzo-1 , 2 , 3 -tiadiazol-5-carboxílico (105) (360 mg, 2 mmol) en 10 mi de DCM se agregó cloruro de oxalilo (1.68 mi, 10 eq.) seguido por adición de DMF cat.. La solución resultante se agitó 3 h a r.t. antes de evaporarse a sequedad. El cloruro ácido crudo 106 se disolvió en 10 mi de DCM. A la solución anterior se agregó aminotiofeno 107 (542 mg, 1.67 mmol) , DMAP (5 mg) y DIEA (1.05 mi) . Después que se agitó durante la noche a r.t., la reacción se elaboró con NaHC03 ac .. La capa de DCM se separó y se concentró. El residuo resultante se agitó con 3 mi de NaOH 1N en 40 mi de THF/MeOH/H20 (5:4:1) a r.t por 2h y luego se neutralizó con HC1 1N a pH ca. 7. Después de la remoción de MeOH y THF la suspensión restante se diluyó con agua. El precipitado se filtró, se lavó con agua y se secó para producir 567 mg 108 como sólido blanco lechoso, el cual se agitó posteriormente en TFA/DCM (1:1, 10 mi) a r.t. por 3 h. Después que se evaporó a sequedad, el residuo sólido se trituró con MeOH, se filtró, se lavó con MeOH y se liofilizó a partir de dioxano para producir 373 mg 109 como sólido blancuzco (rendimiento total: 51.8%) . 1H NMR (DMSO-d6) d 13.4 (bs, 1H) , 12.50 (s, 1H) , 9.21 (s, 1H) , 8.65 (dd, 1H) , 8.29 (dd, 1H) , 7.15 (S, 1H) , 7.10 (m, 2H) . 51 Ejemplo AI: Síntesis de ácido 2- (benoxazol-2- ilcarbonilaminp) -4- (7-hidroxibenzofuran-2-il) tiofen-3- Una mezcla de 2-acetil-7-hidroxi-benzofurano (1.06 g, 6 mmol) ( cianoacetato de t-butilo (110, 840 µ?, 6 mmol, 1 eq.) , azufre (192 mg, 6 mmol) y morfolina (630 µ? , 1.2 eq) en t- BuOH (6 mi) se calentó a 60°C por 72 h. La mezcla de reacción roja se evaporó para remover la morfolina y t-BuOH. El residuo se disolvió en DCM y se sometió a una purificación de fase normal. Las fracciones que contienen el producto deseado se colectaron. La concentración proporcionó 756 mg 112 como espuma amarilla (rendimiento: 38%) .
Una mezcla de aminotiofeno 112 (66 mg, 0.2 mmol) , cloruro de benzoxazol-2-carbonilo 113 (91 mg, 0.5 mmol) , 261 L de DIEA y 2 mg de DMAP en 2 mi de DCM se agitó durante la noche a r.t. Después que se elaboró con NaHC03 ac . , la capa de DCM se separó y se concentró. El residuo resultante se agitó con 0.5 mi de NaOH 1N en 3 mi de THF/ eOH/H20 (5:4:1) a r.t por lh y luego se neutralizó con HC1 1N a pH ca. 7. Después que se concentró a sequedad, el residuo se disolvió en D F y se sometió a purificación de HPLC preparativa para producir 58 mg de 114 como sólido amarillo, el cual se agitó posteriormente en TFA/DCM (1:1, 3 mi) a r.t. por 40 min. Después que se evaporó a r.t. a sequedad, el residuo sólido se disolvió en DMF y se sometió a purificación de HPLC preparativa para producir 26.7 mg de 115 como sólido amarillo. 1H NMR (DMSO-d6) d 12.8 (bs, 1H) , 9.98 (s, 1H) , 8.01 (d, 1H)', 7.96 (d, 1H) , 7.66 (t, 1H) , 7.56 (m, 2H) , 7.06 (m, 3H) , 6.74 (d, 1H) .
Ejemplo AJ: Síntesis de ácido 4- (4-bromofenil) -2- [ (1-metilimidazol-4-il) carbonilamino] tiofen-3 -carboxílico (119) A una solución de ácido l-metil-imidazol- -carboxílico (114 mg, 0.9 mmol) en 3 mi de DCM se agregó cloruro de oxalilo (382 µ?) seguido por adición de DMF cat.. La solución resultante se agitó 3 h a r.t. antes de evaporarse a sequedad. El cloruro ácido crudo se disolvió en 2 mi de DCM. A la solución anterior se agregaron aminotioferio 57 (39 mg, 0.11 mmol) , DMAP (5 mg) y DIEA (238 µ?) . Después que se agitó durante la noche a 30 °C, la reacción se elaboró con NaHC03 ac .. La capa de DCM se separó y se concentró. El residuo resultante (crudo 118) se agitó con 3 mi de NaQH 1N en 3 mi de TFA/DCM/H20 (6:3:1) a 45°C por lh. Después que se concentró a sequedad, el residuo se disolvió en DMF y se sometió a purificación de HPLC preparativa para producir 26.8 mg de 119 como sólido blancuzco (rendimiento total: 60%) . LC-MS : calculado M = 406.25; observado M = 407.87.
Ejemplo AK: Síntesis de ácido -benzo [d] furan-2 - (benzoxazol-2-ilcarbonilamino) tiofen-3 -carboxí lico (123) Una mezcla de 2-acetil-benzofurano (120, 640 mg, 4 mmol) , cianoacetato de t-butilo (111, 629 µ? , 4.4 mmol, 1.1 eq.), azufre (141 mg, 4.4 mmol) y morfolina (420 µ?, 1.2 eq) en t-BuOH (4 mi) se calentó a 60°C por 72 h. La mezcla de reacción roja se evaporó para remover la morfolina y t-BuOH. El residuo se disolvió en DCM y se sometió a una purificación de f se normal . Las fracciones que contienen el producto deseado se colectaron. La concentración proporcionó 563 mg d 121 como sólido café (rendimiento: 44.6%) .
Una mezcla de aminotiofeno 121 (63 mg, 0.2 mmol), cloruro de benzofuran-2-carbonilo 113 (54 mg, 0.3 mmol), 140 L de DIEA y 2 mg de DMAP en 2 mi de DCM se agitó durante la noche a r.t. Después que se elaboró con NaHC03 ac . , la capa de DCM (ca. 3 mi) se sacudió con 2 mi de NaOH 1N por 5 min. La fase orgánica se separó, se concentró y luego se sometió a purificación de HPLC preparativa para proporcionar 54.4 mg de 122 como sólido amarillo, el cual se agitó posteriormente en TFA/DCM (1:1, 3 mi) a r.t. por lh. Después que se evaporó a sequedad, el residuo sólido se trituró con DCM para producir 41 mg de 123 como sólido amarillo. 1H NMR (DMSO-d6) d 13.72 (bs, 1H) , 12.42 (s, 1H) , 7.88 (s, 1H) , 7.87 (d, 1H) , 7.76 (d, 1H) , 7.67 (d, 1H) , 7.56 (t, 2H) , 7.54 (s, 1H) , 7.42 (t, 1H) , 7.31 (t, 1H) , 7.25 (t, 1H) , 7.14 (s, 1H) .
Ejemplo AL: Síntesis del anillo de Benzotiazol (cuando X es un anillo de benzotiazol de un compuesto de la formula (I) ) Se describe en la presente un método para preparar urna porción de anillo de benzotiazol de um compuesto de La Formula (I) tal como a continuación se describe.
En algunas modalidades, la porción del anillo de benzotiazol de un compuesto de Formula (I) se sustituye con al menos urna R. En otra modalidad, El anillo de benzotiazol se sustituye con al menos urna R seleccionada de F, Cl , Br y I .
Ejemplos Biológicos Ejemplos In Vitro Ejemplo 1: Selección In Vitro para Agentes que Modulan los Niveles de Calcio Intracelular Se utilizaron ensayos basados en fluorescencia para seleccionar los compuestos descritos en la presente, tales como compuestos de las Fórmulas (I)-(V) los cuales modulan el calcio intracelular.
A. Ensayo basado en Fluorescencia de Entrada de Calcio Operada por Almacén en Células Estables Orail/STIMl.
Células : Las células que expresan establemente STIM1 y Orail recombinante humana fueron generadas transfectando un plásmido de expresión de Orail humana (pcDNA3.1 -Orail -cmyc) en células HEK-293 que sobreexpresan establemente STIM1 humana (Roos et al. 2005 JCB 169(3) : 435-445) . Las colonias de células que expresan establemente tanto proteínas STIM1 como Orail se seleccionaron y luego se subclonaron por dilución limitada. Las células se cultivaron a 37°C/6% C02 en medio completo con 10% FBS y marcadores de selección apropiados .
Ensayo El día previo a la realización del ensayo las células estables Orail/STIMl se colocaron en placas en 50 pL de medio completo a 90-95% de confluencia en una placa de 384 cavidades. Las células crecieron a 37°C/6% C02 durante la noche. En el día del ensayo, fluo-4-?? 1.5 µ? (Invitrogen) en medio completo se agregó a las células, las cuales luego se incubaron por 1 hora a RT. Las células se lavaron una vez en HBSS libre de Ca2+ (solución salina amortiguada de Hank) y 35 µ? de HBSS libre de Ca2+ se agregó a cada cavidad. Los compuestos de prueba se agregaron a cavidades en 10 pL de solución de HBSS libre de Ca2+ , preparada a 4.5X la concentración final deseada, y se incubó por 30 minutos a RT . La señal de fluorescencia de línea de base inicial luego se midió con un lector de placa FLIPR384 (Molecular Devices) . La entrada de calcio se inició agregando 5 µ? de 10X CaC12 (10 mM) en HBSS, y los cambios de fluorescencia celular se midieron con el lector de placa FLIPR384. En cada cavidad, la magnitud de la señal de fluorescencia como un resultado de la entrada de calcio en la célula se determinó calculando la diferencia entre la señal de fluorescencia pico medida después de la adición de calcio y la señal de fluoresencia de línea de base inicial (designada Pico Basal) . Los valores de IC50 fueron típicamente calculados como la concentración que inhibiió el 50% de la señal de Pico Basal (Tabla A) .
B. Ensayo basado en Fluorescencia de Entrada de Calcio Operada por Almacén en Células RBL-2H3.
Células : Las células RBL-2H3 se obtuvieron de ATCC y se mantuvieron en medio completo con 10% FBS a 37°C/6% C02.
Ensayo : El día previo a la realización del ensayo, las células RBL-2H3 se colocaron en placas en 50 pL de medio completo en una placa de 384 cavidades. Las células crecieron a 37°C/6% C02 durante la noche y crecieron a 50-60 % de confluencia por el siguiente día. En el día del ensayo, tinte Fluo-4-?? 1.5 µ? (Invitrogen) en medio completo se agregó y se incubó por 1 hora a RT. Las células se lavaron dos veces en amortiguador HBSS libre de Ca2+ y 35 µ? de amortiguador HBSS libre de Ca2+ se agregaron a cada cavidad. 10 µ?, de un compuesto de prueba preparado en una solución de HBSS libre de Ca2+ a 4.5X de la concentración deseada se agregaron a una cavidad y se incubó por 5 minutos a RT . 10 de tapsigargina preparada en una solución de HBSS libre de Ca2+ a 5.5X de la concentración deseada (5.5 uM) se agregaron a cada cavidad y se incubó por unos 25 minutos adicionales. La señal de fluorescencia de línea de base inicial se midió con un lector de placa FLIPR384 (Molecular Devices) . 5 L de 12X calcio en HBSS (12 mM) se agregaron y los cambos de fluorescencia celular se midieron con el lector de placa FLIPR384. En cada cavidad, el cambio de la señal fluorescente como una función de un tiempo debido a la entrada de calcio en la célula se determina calculando la diferencia entre la señal fluoresente medida 7 segundos después de la adición de calcio y la señal de fluorescencia de línea de base inicial en tiempo cero (t = 0) . Este parámetro se designa cuesta arriba. El valor de IC50 es calculado como la concentración a la cual 50% de la cuesta arriba es inhibido.
Los compuestos de la Fórmula (I)-(V) son inhibidores en este ensayo.
C. Ensayo basado en Fluorescencia de Entrada de Calcio Operada por Almacén en Células Jurkat .
Células : Las células Jurkat E6-1 se obtuvieron de ATCC y se mantuvieron en medio completo con 10% FBS a 37°C/6% C02.
Ensayo : El día previo a la realización del ensayo, las células Jurkat E6-1 se sembaron a una densidad de 2 millones de células/ml en medio completo en un matraz T-175. Las células crecieron a 37°C/6% C02 durante la noche. Al siguiente día, tinte Fluo-4-? 1.5 µ? (Invitrogen) en medio completo se agregó y se incubó por 1 hora a RT. Las células se recolectaron, se lavaron dos veces en amortiguador HBSS libre de Ca2+ y se colocaron en placas en 35 pL de amortiguador HBSS libre de Ca2+ en una placa de 384 cavidades. 10 pL de un compuesto de prueba preparado en una solución de HBSS libre de Ca2+ a 4.5X de la concentración deseada se agregaron a una cavidad y se incubó por 5 minutos a RT. 10 pL de tapsigargina preparada en una solución de HBSS libre de Ca2+ a 5.5X de la concentración deseada (5.5 uM) se agregaron a cada cavidad y se incubó por unos 25 minutos adicionales. La señal de fluorescencia de línea de base inicial se midió con un lector de placa FLIPR384 (Molecular Devices) píate reader. 5 il> de 12X calcio en HBSS (12 mM) se agregaron y los cambios de fluorescencia celular se midieron con el lector de placa FLIPR384. En cada cavidad, el cambio de la señal fluorescente como una función de tiempo debido a la entrada de calcio en la célula se determina calculando la diferencia entre la señal fluorescente medida 7 segundos después de la adición de calcio y la señal de fluoresencia de línea de base inicial en tiempo cero (t = 0) . Este parámetro se designa cuesta arriba. El valor de IC50 es calculado como la concentración a la cual 50% de la cuesta arriba es inhibido.
Los compuestos de la Fórmula (I) - (V) son inhibi'dores en este ensayo.
Tabla A. Datos in vitro para compuestos representativos - = no determinado; IC50 (DM) : 0 < A < 0.5; 0.5 < B < 1.0; 1.0 < C < 10 En la presente también se describen compuestos los cuales tienen una IC50 (µ?) menor que 10 µ? ya sea en células JR251 o RBL o ambas, tal como por vía de ejemplo solamente: ácido 4- (4-metoxifenil) -2- ( 3 - fenilpropanamido) tiofen-3-carboxílico ácido 4- (2 , 4-diclorofenil) -2- (3-fenilpropanamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (2-fenilacetamido) tiofen-3-carboxilico ácido 4- (4-cianofenil) -2- (3-fenilpropanamido) tiofen-3 carboxilico ácido 2- (2- (4 -clorofenil) -3-metilbutanamido) -4- (3,4 diclorofenil) tiofen-3 -carbpxilico ácido 2- (3-bencilureido) -4- (4 -bromofenil) tiofen-3 carboxilico ácido 4- (3, 4-diclorofenil) -2- (2- (3 metoxifenil) acetamido) tiofen-3 -carboxilico ácido 4- (3 , 4-diclorofenil) -2- (3 fenilpropanamido) tiofen-3 -carboxilico ácido 4- (4-broraofenil) -2- (3 , 3 difenilpropanamido) tiofen-3 -carboxilico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (3- (2 , 4 difluorofenil ) propanamido) tiofen-3-carboxilico ácido 4 - (4 -bromofenil) -2- (3 - (3 , 4 difluorofenil ) propanamido) tiofen-3-carboxilico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (3- (3 fluorofenil) propanamido) tiofen-3 -carboxilico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (3- (4 fluorofenil) propanamido) tiofen-3 -carboxilico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (3-fenilpropanamido) tiofen-3 carboxilico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (3, 3 difenilpropanamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (3- (2,4 difluorofenil ) propanamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (3- (3 , 4 difluorofenil) propanamido) tiofen-3-carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (3- (3 clorofenil) ropanamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (3- (3 fluorofenil) propanamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (3- (4 clorofenil) propanamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (3- (4 fluorofenil) propanamido) tiofen-3-carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- ( 3 - fenilpropanamido) tiofen-3 carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (4 -fenilbutanamido) tiofen-3 carboxílico ácido 2- (1, 5-dimetil-lH-pirazol-3-carboxamido) -4-p toliltiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4 -bromofenil) -2- (l-metil-lH-imidazol-4 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4 -bromofenil) -2- (3-fenil-l, 2, 4-oxadiazol-5 ilamino) tiofen-3-carboxílico ácido 4- ( -bromofenil) -2- (4-metil-l, 2, 3-tiadiazol-5 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (5-cloro-l-metil-lH-pirazol-4 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (l-metil-lH-imidazol-4 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (l-metil-5-fenil-lH-pirazol-3 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (1-fenil-lH-pirazol-4 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (l-fenil-5- ( trifluorometil) lH-pirazol-4 -carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (3 , 5-dimetilisoxazol-4 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (3-fenil-lH-pirazol-4 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (4 -ciclopropiltiazol -2 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (4-metil-l, 2 , 3 -tiadiazol-5 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4 -clprofenil) -2- (5- (furan-2-il) -1-metil-lH pirazol-3 -carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (5-fenilisoxazol-3 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (isoxazol-5 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (tiazol-4-carboxaraido) tiofen 3 -carboxílico ácido terc-butil 4- (4-bromofenil) -2- (4-metil-l, 2 , 3 tiadiazol - 5 -carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido terc-butil 4- (4 -bromofenil) -2- (5-cloro-l-metil lH-pirazol-4 -carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (2-hidroxi-6 metilisonicotinamido) tiofen- 3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (6 (trif lüorometil ) ñicotinamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (6- fluoropicolinamido) tiofen 3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- ( 6 -metoxipicolinamido) tiofen 3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (6-metilnicotinamido) tiofen-3 carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (pirazin- 2 -carboxamido) tiofen 3-carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (piridazin-4 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (2 , 6 dicloronicotinamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (2, 6 dimetoxinicotinamido) tiofen-3-carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (2- (trifluorometil) pirimidin 5-carbcxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (4-fenilpirimidin-2 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4 -clorofenil) -2- (5- ( trifluorometil ) irimidin 2 -carboxamido) tiofen- 3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- ( 5 -metilpirazin-2 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (5-fenilpirimidin-2 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (6 ( trifluorometil) nicotinamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (6-cloropiridazin-3 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- ( 6 -metoxipicolinamido) tiofen 3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (6-metilnicotinamido) tiofen-3 carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (isonicotinamido) tiofen-3 carboxílico 4- (4 -bromofenil) -2- (nicotinamido) tiofen-3-carboxílico ácido ácido 4- (4 -bromofenil) -2- (isonicotinamido) tiofen-3 carboxílico ácido 2- (1, 3-dimetil-lH-tieno [2, 3-c] pirazol-5 carboxamido) -4-p-toliltiofen-3 -carboxílico ácido 4- (2, 3-difluoro-4-metilfenil) -2- (imidazo [2,1 b] tiazol-6 -carboxamido) tiofen- 3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (1, 3-dimetil-lH-tieno [2, 3 c] pirazol-5 -carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4 -clorofenil) -2- (1, 3-dimetil-lH-tieno [2,3 c] pirazol-5-carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (imidazo [2, 1-b] tiazol-6 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (tieno [2, 3-d] [1 , 2 , 3 ] tiadiazol 6 -carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4 - (2 , 3 -difluoro-4 -metilfenil) -2- (tieno [3 , 2 b] tiofen-2-carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (4H-furo [3 , 2-b] pirrol-5 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (4H-tieno [3 , 2-b] pirrol-5 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (4H-furo [3 , 2-b] irrol-5 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico- ácido 4- (4-clorofenil) -2- (4H-tieno [3 , 2-b] pirrol-5 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (tieno [3 , 2-b] tiofen-2 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-cianofenil) -2- (tieno [3 , 2-b] tiofen-2-carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (imidazo [1, 2-a] piridin-2-carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (3-fluoro-5-metilimidazo [1,2-a] iridin-2 -carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (imidazo [1, 2-a] piridin-6-carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido N- (4- (4-bromofenil) -3-carbamoiltiofen-2-il) -1H-benzo [d] imidazol-2 -carboxílico ácido 2- (IH-benzo [d] imidazol-2 -carboxamido) -4- (4-clorofenil) tiofen- 3 -carboxílico ácido 2- (4 , 6-dicloro-lH-indol-2-carboxamido) -4-p-toliltiofen- 3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (4 , 6-dicloro-lH-indol-2-carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (pirazolo [1, 5 -a] pirimidin-2-carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (tieno [2, 3-b] pirazin-6-carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [e] [1, 2 , 4] triazin-3 -carboxamido) -4- (4-clorofenil) tiofen- 3 -carboxílico ácido 2- (quinolin-2 -carboxamido) -4-p-toliltiofen-3- carboxí lico ácido 4- (2 , 3-dif luoro-4 -metilfenil) -2- (quinoxalin-2 -carboxámido) tiofen- 3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (quinolin-2-carboxámido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (quinoxalin-2 -carboxámido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4 -clorofenil) -2- (5-metilquinoxalin-2-carboxamido) tiofen- 3 -carboxílico ácido 4- (4 -clorofenil) -2- (8-metilquinoxalin-2-carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4 -clorofenil) -2- (cinolin- 3 -carboxámido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4 -clorofenil) -2- (quinazolin-2-carbox mido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (quinolin-2-carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (quinoxalin-2 -carboxámido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (1, 2-dihidrociclobutabencen-l-carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (2 , 3-dihidrobenzo [b] tiofen- 2-carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (2- (2 , 3-dihidro-lH-inden-l-il) acetamido) tiofen-3-carboxílico ácido 4- (4 -clorofenil) -2- (3- (ciclohexilmetil) ureido) tiofen- 3 -carboxilico ácido 4- (4 -clorofenil) -2- (4-fluoro-2 , 3-dihidrobenzo [b] tiofen-2-carboxamido) tiofen-3-carboxílico ácido 4- (4 -clorofenil) -2- (4-oxo-l, 2,3,4-tetrahidronaftalen- 2 -carboxamido) tiofen- 3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (5-fluoro-2, 3 -dihidro- 1H-inden-2 -carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (indolin-2-carboxamido) tiofen- 3 - carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (3-adamanti1carboxamido) tiofen- 3 -carboxílico ácido (R) -4- (4 -clorofenil) -2- (1,2,3,4-tetrahidronaftalen-2-carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido (S) -4- (4-clorófenil) -2- (1,2,3,4-tetrahidronaftalen-2 - carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (5-cloro-2, 3 -dihidrobenzofuran-2 -carboxamido) - 4- (4 -clorofenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (ciclopropancarboxamido) -4- (2 , 4-diclorofenil ) tiofen- 3 -carboxílico ácido 2- (ciclopropancarboxamido) -4- (3,4-diclorofenil ) tiofen- 3 -carboxílico ácido 4- (2-bromofenil) -2- (ciclopropancarboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- ( 1 , 2 , 3 , - tetrahidronaftalen-2 -carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (2, 3-dihidro-lH-inden-2-carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (2 , 3 -dihidrobenzofuran-2 -carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (3-metoxiciclohexancarboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (5-cloro-2 , 3-dihidrobenzofuran-2 -carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (8-metoxi-l, 2,3,4-tetrahidronaftalen-2 -carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (croman- 3 -carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- ( isoindolin-2 -carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (1 , 2 , 3 , 4 -tetrahidronaftalen-2-carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (1, 2-dihidrociclobutabencen-l-carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (2, 3-dihidro-lH-inden-2-carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (2 , 3-dihidrobenzo [b] [1, 4] dioxin-2 -carboxamido) tiofen-3-carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (5 -nitro- 2, 3 -dihidro- 1H- inden-2 -carboxamido) tiofen- 3 -carboxílico ácido 4- (4 -clorofenil) -2- ( isoindolin-2 -carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido (E) -4- (4 -clorofenil) -2- (2-ciano-3-fenilacrilamido) tiofen-3 -carboxílico ácido (Z) -4- (4-bromofenil) -2- (2-fluoro-3-fenilacri lamido) tiofen- 3 -carboxílico ácido (Z) -4- (4-clorofenil) -2- (2-f luoro-3 -fenilacrilamido) tiofen-3 -carboxílico ácido (Z) -4- (4-clorofenil) -2- (3- (2-clorofenil) -2-fluoroacrilamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (3-fenilpropiolamido) tiofen-3-carboxílico ácido 2- (benzofuran-2-carboxamido) -4- (2 , 3 -difluoro-4 -metoxifenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzofuran-2 -carboxamido) -4- (2 , 3 -difluoro-4 -metilfénil) tiofen^-carboxílico ácido 2- (benzofuran-2 -carboxamido) -4- (2, 3-dihidro-lH-inden-5-il) tiofen-3-carboxílico ácido 2- (benzofuran-2 -carboxamido) -4- (2,4,6-trifluorofenil) tiofen- 3 -carboxílico ácido 2- (benzofuran-2 -carboxamido) -4- (2 , 4-dicloro-3-cianofenil) tiofen-3-carboxílico ácido 2- (benzofuran-2 -carboxamido) -4- (2 , 4 -dicloro-3 metoxifenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzofuran-2-carboxamido) -4- (2, 4-difluoro-3 hidroxifenil ) tiofen- 3 -carboxílico ácido 2- (benzofuran-2 -carboxamido) -4- (2 , 4-difluoro-3 metoxifenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzofuran-2 -carboxamido) -4- (2 , 5-difluoro-4 metoxifenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzofuran-2 -carboxamido) -4- (2 ,6-difluoro-4 metoxifenil ) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzofuran-2 -carboxamido) -4- (3 , 4 , 5 trifluorofenil ) tiofen- 3 -carboxílico ácido 2- (benzofuran-2 -carboxamido) -4- (3 , 4-dicloro-2 metilfenil) tiofen-3-carboxílico ácido 2- (benzofuran-2-carboxamido) -4- (4-bromo-2, 3 difluorofenil ) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzofuran-2-carboxamido) -4- (4-bromo-2,5 dimetilfenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzofuran-2 -carboxamido) -4- (4-cloro-2,3 difluorofenil ) tiofen- 3 -carboxílico ácido 2- (benzofuran-2-carboxamido) -4- (4-cloro-2, 5 difluorofenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzofuran-2-carboxamido) -4- (4-cloro-2-fluoro 5-metilfenil) tiofen-3 -carboxilico ácido 2- (benzofuran-2-carboxamido) -4- (4-cloro-3 , 5-difluorofenil) tiofen-3 -carboxilico ácido 2- (benzofuran-2 -carboxamido) -4- (4 -ciclopropil-2, 3-difluorofenil) tiofen-3 -carboxilico ácido 2- (benzofuran-2-carboxamido) -4- (4-fluoro-2, 3-dimetilfenil ) tiofen-3 -carboxilico ácido 2- (benzofuran-2-carboxamido) -4- (4-fluoro-2, 5-dimetilfenil) tiofen- 3 -carboxilico ácido 2- (benzofuran-2-carboxamido) -4- (4-metoxi-2 , 5-dimetilfenil) tiofen- 3 -carboxilico ácido 2- (benzofuran- 2-carboxamido) -4- (4-metoxi-2 , 6-dimetilfenil ) tiofen- 3 -carboxilico ácido 2- (benzofuran-2-carboxamido) -4- (5-cloro-2-fluoro-4 -metilfenil ) tiof n- 3 -carboxilico ácido 2- (benzofuran-2-carboxamido) -4- (benzofuran- 5-il) tiofen- 3 -carboxilico ácido 4- (2 , 3-difluoro-4 -metilfenil ) -2- (4-fluorobenzofuran-2 -carboxamido) tiofen-3 carbox lico ácido 4- (2 , 3-difluoro-4 -metilfenil) -2- (7-hidroxibenzofuran-2 -carboxamido) tiofen-3 -carbox lico ácido (E) -2- (benzofuran-2 -carboxamido) -4- (4-cloroestiril ) tiofen-3 -carboxilico ácido (E) -2 - (benzofuran-2 -carboxamido) -4 - (4 -fluoroestiril) tiofen- 3 -carboxílico ácido 2- (4 - fluorobenzofuran-2 -carboxamido) -4- (7-hidroxibenzofuran- 2 - il ) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (7-hidroxibenzofuran-2-carboxamido) -4- (7-hidroxibenzofuran-2-il) tiofen-3 -carboxilico ácido 2- (benzofuran- 2 -carboxamido) -4- (4-fluoro-2 , 3-dimetilfenil) tiofen-3 -carboxilico ácido 2- (benzofuran-2-carboxamido) -4- (5-bromo-7-metoxibenzofuran-2 - il ) tiofen- 3 -carboxílico ácido 2- (benzofuran-2-carboxamido) -4- (5-bromobenzofuran- 2 - il ) tiofen- 3 -carboxílico ácido 2- (benzofuran-2 -carboxamido) -4- (5-clorobenzofuran- 2 - il ) tiofen-3 -carboxí lico ácido 2- (benzofuran-2-carboxamido) -4- (5-hidroxibenzofuran-2-il) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzofuran- 2 -carboxamido) -4- (5-metoxibenzofuran-2 -il ) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzofuran- 2 -carboxamido) -4- (6-bromobenzofuran- 2 - il ) tiofen- 3 -carboxílico ácido 2- (benzofuran- 2 -carboxamido) -4- (7- (benciloxi ) benzofuran-2 -il) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzofuran-2-carboxamido) -4- (7-cianobenzof ran-2 -il) tiofen-3-carboxílico ácido 2- (benzofuran-2-carboxamido) -4- (7-hidroxibenzofuran-2- il) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzofuran-2 -carboxamido) -4- (7 metoxibenzofuran-2 -il) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzofuran- 2-carboxamido) -4- (benzofuran-2 il) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzofuran-2-carboxamido) -4- (benzofuran-5 il) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzofuran- 5 -carboxamido) -4- (2 , 3-difluoro-4 metilfenil) tiofen-3-carboxílico ácido 2- (benzofuran-5-carboxamido) -4- (4-bromo-2,3 difluorofenil ) tiofen-3 -carboxílico ácido 4 - (7- (lH-pirazol-3-il) benzofuran-2-il) -2 (benzofuran-2 -carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (7- (lH-pirazol-4-il) benzofuran-2-il) -2 (benzofuran-2 -carboxamido) tiofen- 3 -carboxílico ácido 4- (7-acetoxibenzofuran-2-il) -2- (benzofuran-2 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (benzofuran- 2 -carboniloxi) -2- (benzofuran-2 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] [1, 2 , 3] tiadiazol-5 -carboxamido) -4 (2 , 3-difluoro-4 -metilfenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] [1, 2 , 3] tiadiazol -5 -carboxamido) -4 (3 , 4-diclorofenil) tiofen- 3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] [1, 2 , 3] tiadiazol-5-carboxamido) -4- (4 bromofenil) tiofen-3-carboxílico ácido 2- (benzo [d] [1, 2 , 3] tiadiazol-5-carboxamido) -4- (4-cloro-3 -fluorofenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] [1, 2 , 3] tiadiazol-5-carboxamido) -4- (4· cloro-3 -metoxifenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] [1, 2 , 3] tiadiazol-5-carboxamido) -4- (4-clorofenil) tiofen-3-carboxílico ácido 2-(benzo[d] [1, 2 , 3] tiadiazol-5-carboxamido) -4- (4-cianofenil) tiofen-3-carboxílico ácido 2- (benzo [d] [1, 2 , 3] tiadiazol-5-carboxamido) -4- (7-hidroxibenzofuran- 2 - il) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] [1, 2, 3] iadiazol-5-carboxamido) -4- (7-metoxibenzofuran-2 -il )' tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] [1, 2 , 3] tiadiazol - 6 -carboxamido) -4- (4-bromofenil) tiofen-3-carboxílico ácido 2- (benzo [d] [1, 2 , 3] tiadiazol-6-carboxamido) -4- (4-clorofenil) tiofen- 3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] [1, 2 , 3] iadiazol- 6 -carboxamido) -4- (7-hidroxibenzofuran-2-il) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] tiazol-2-carboxamido) -4- (2, 3-difluoro- 4 -metilfenil ) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] tiazol-2 -carboxamido) -4- (2-fluoro-4-metilfenil) tiofen-3-carboxílico ácido 2- (benzo [d] tiazol-2 -carboxamido) -4- (3-fluoro-4-metilfenil) tiofen-3-carboxílico ácido 2- (benzo [d] tiazol-2-carboxamido) -4- (4 bromofenil) tiofen-3-carboxílico ácido 2- (benzo [d] tiazol-2-carboxamido) -4- (4-cloro-2, 3 difluorofenil) tiofen-3-carboxílico ácido 2- (benzo [d] tiazol-2 -carboxamido) -4- (4-cloro-2 fluorofenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] tiazol-2-carboxamido) -4- (4-cloro-3 , 5 difluorofenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] tiazol-2 -carboxamido) -4- (4-cloro-3 fluorofenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 2 - (benzo [d] tiazol- 2 -carboxamido) -4 - (4 clorofenil) tiofen- 3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] tiazol-2 -carboxamido) -4- (7 hidroxibenzofuran- 2 -il) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] tiazol-2-carboxamido) -4-p-toliltiofen 3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] tiazol- 5 -carboxamido) -4- (4 clorofenil) tiofen-3-carboxílico ácido 2- (benzo [d] tiazol- 6 -carboxamido) -4- (4 clorofenil ) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (2 , 3 -difluoro-4 -metilfenil) -2- (4 fluorobenzo [d] tiazol-2-carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-cloro-2-fluorofenil) -2- (7 fluorobenzo [d] tiazol-2-carboxamido) tiofen-3-carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (4-fluorobenzo [d] tiazol-2 carboxamido) tiofen-3 -carboxilico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (4 -nitrobenzo [d] tiazol-2 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- ( 6 -nitrobenzo [d] tiazol-2 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- ( 7 - fluorobenzo [d] tiazol-2 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (5-bromobenzo [d] oxazol-2-carboxamido) -4- (2 , 3 difluoro-4 -metilfenil ) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (5-bromobenzo [d] oxazol-2-carboxamido) -4- (4 clorofenil) tiofen- 3 -carboxílico ácido 2- (7-fluorobenzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4- (7 hidroxibenzofuran-2- il ) tiofen-3 -carboxílico ácido 2 - (benzo [d] oxazol-2-carboxamido) -4 - (2 , 3 -difluoro 4 -metilfenil ) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4- (3 , 4 , 5 trifluorofenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 2 - (benzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4 -( 3 , 4 diclorofenil ) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4- (3-ciano-4 fluorofenil ) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4- (4 -bromo-2 fluorofenil) tiofen-3 -carboxilico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4- (4-cloro-2, 5 difluorofenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4- (4-cloro-2 fluoro-5-metilfenil) tiofen-3-carboxílico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4- (4-cloro-2 metilfenil) iofen-3-carboxílico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4- (4-cloro-3 (trifluorometil) fenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] oxazol-6 -carboxamido) -4- (4 clorofenil) iofen-3 -carboxílico ácido 4 - (2 , 3 -difluoro-4 -metilfenil) -2- (4 fluorobenzo [d] oxazol-2 -carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (5-clorobenzo [d] oxazol-2 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4 -bromofenil) -2- (7 -fluorobenzo [d] oxazol-2 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-cloro-3-fluorofenil) -2- (4 fluorobenzo [d] oxazol-2 -carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (4 , 6 -difluorobenzo [d] oxazol-2 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4 -clorofenil) -2- (4 - fluorobenzo [d] oxazol-2 carboxamido) tiofén-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (4-hidroxibenzo [d] oxazol-2 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- ( 7 -cianobenzo [d] oxazol-2 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (5-clorobenzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4- (2, 3 difluoro-4 -metilfenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- ( 6 -bromobenzo [d] oxazol-2-carboxamido) -4- (2,3 difluoro-4 -metilfenil ) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (7-bromobenzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4- (2, 3 difluoro-4 -metilfenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (7-cianobenzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4- (2,3 difluoro-4 -metilfenil ) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4- (2 , 3-dihidro lH-inden-5-il) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4- (2, 3 dihidrobenzofuran- 5- il ) tiofen- 3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4- (2 , 4 difluorofenil ) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4- (2-cloro-4 (trifluorometil) fenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4- (2-cloro-4 metoxifenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4- (2 -cloro-4 metilfenil) tiofen- 3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4- (2-fluoro-4 (trifluorometil) fenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2-carboxamido) -4- (2-metoxi-4-(trifluorometil) fenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2-carboxamido) -4- (2-metil-4-(trifluorometil) fenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2-carboxamido) -4- (3- (hidroximetil) -4-metilfenil) tiofen-3-carboxílico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4- (4- (trifluorometoxi) fenil) tiofen-3-carboxílico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2-carboxamido) -4- (4- ( trifluorometil ) fenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4- (4-bromo-2 , 3-difluorofenil ) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4- (4-ciano-2-metilfenil) tiofen- 3 -carboxílico ácido 4- (2, 3 -difluoro-4 -metilfenil) -2- (5,6-difluorobenzo [d] oxazol-2-carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (2, 3-difluoro-4 -metilfenil) -2- (5-metoxibenzo [d] oxazol-2-carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (2 , 3-difluoro-4 -metilfenil) -2- (6-fluorobenzo [d] oxazol - 2 -carboxamido) tiofen- 3 -carboxílico ácido 4- (2 , 3-difluoro-4-metilfenil) -2- (7-fluorobenzo [d] oxazol-2 -carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (7-cianobenzo [d] oxazol-2-carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (7-fluorobenzo [d] oxazol-2 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (5-clorobenzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4- (4 clorofenil) tiofen- 3 -carboxílico ácido 2- (7-bromobenzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4- (4 clorofenil) tiofen- 3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4- (2 , 3 , 4 trifluorofenil ) iofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2-carboxamido) -4- (2, 4-difluoro 3 -hidroxifenil ) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2-carboxamido) -4- (2, 4-difluoro 3 -metoxifenil ) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4- ( 2 -fluoro-4 metilfenil ) tiofen- 3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2-carboxamido) -4- (3,4 dimetilfenil ) tiofen- 3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4- (3-fluoro-4 metilfenil) tiofen-3-carboxílico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4- (4 bromofenil) tiofen-3-carboxílico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4- (4-cloro-2,3 difluorofenil ) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4- (4 -cloro-2 fluorofenil) iofen- 3 -carboxilico ácido 2- (benzo [d] oxazql-2 -carboxamido) -4- (4-cloro-3 , 5 difluorofenil) tiofen-3 -carboxilico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4- (4-cloro-3 cianofenil) tiofen-3 -carboxilico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4- (4-cloro-3 fluorofenil) tiofen-3 -carboxilico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4- (4-cloro-3 metoxifenil) tiofen-3 -carboxilico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2-carboxamido) -4- (4 clorofenil) iofen-3 -carboxilico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4- (4-ciano-2 fluorofenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] oxazol-2 -carboxamido) -4- (4 fenoxifenil) tiofen- 3 -carboxílico ácido 4- (4 -bromofenil) -2- (4 -fluorobenzo [d] oxazol-2 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (4 -metilbenzo [d] oxazol-2 carboxamido) tiofen- -carboxílico ácido 4- (4 -clorofenil) -2- (5-fluorobenzo [d] oxazol-2 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- ( -clorofenil) -2- (6- fluorobenzo [d] oxazol-2 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- ( 7 -metilbenzo [d] oxazol-2 carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] oxazol- 2 -carboxamido) -4- (4-formilfenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] oxazol -2 -carboxamido) -4- (7-hidroxibenzofuran- 2 - il ) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benzo [d] oxazol -2 -carboxamido) -4- (7-metoxibenzofuran- 2 -il) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (2, 3-difluoro-4-metilfenil) -2- (5-fluorobenzo [d] oxazol-2 -carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-cloro-3-fluorofenil) -2- (7-fluorobenzo [d] oxazol -2 -carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (2, 5 -dimetilfuran- 3 -carboxamido) -4-p-toliltiofen- 3 -carboxílico ácido 2- (2-metil-5-fenilfuran-3-carboxamido) -4-p-toliltiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- ( furan-2 -carboxamido) tiofen-3-carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (2 , 5-dimetilfuran-3 -carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (2-metil-5-fenilfuran-3-carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (5- (4-clorofenil) furan-2-carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- ( 5 -nitrofuran-2 -carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (furan-2 -carboxamido) tiofen-3-carboxílico ácido 2- (2- (feniltio) acetamido) -4- (4-(trifluorometil) fenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (2 , 4-diclorofenil) -2- (2- (feniltio) acetamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (2-bromofenil) -2- (2- (feniltio) acetamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (2- (feniltio) acetamido) tiofen- 3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- ( 2 -fenoxiacetamido) tiofen- 3-carboxílico ácido (E) -2- (3- (furan-2-il) acrilamido) -4-p-toliltiofen-3 -carboxílico ácido (E) -4- (4-bromofenil) -2- (3- (furan-2-il) acrilamido) tiofen-3 -carboxílico ácido (E) -4- (4-clorofenil) -2- (2-ciano-3- (furan-2-il) acrilamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (2- (benzofuran-2-il) acetamido) -4- (4-bromofenil ) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (2- (benzofuran-3-il) acetamido) -4- (4-bromofenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (3- (furan-2-il) ropanamido) tiofen- 3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (3- (tiofen-2-il) propanamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (2- ( 2 - formiltiofen-3 -iloxi) acetamido) tiofen-3-carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (3- (furan-2-il) propanamido) tiofen- 3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (3- (tiofen-2-il) propanamido) tiofen-3 -carboxílico ácido terc-butil 4- (4-clorofenil) -2- (3- (3-fluorofenil) propanamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 2-. ( (2-clorobenciloxi) carbonilamino) -4- (4-clorofenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (3-bencilureido) -4- (4-clorofenil) tiofen-3-carboxílico ácido 2- (benciloxicarbonilamino) -4- (4-bromofenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (benciloxicarbonilamino) -4- (4-clorofenil) tioferi-3-carboxílico ácido 4- (2 , 4-dicloro-5-fluorofenil) -2- (3-fenilpropanamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (2, 4-diclorofenil) -2- (3-fenilpropanamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- ( (2-clorobenciloxi) carbonilamino) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- ( -bromofenil) -2 - (3- (2,6-diclorofenil) propanamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (3- (2-clorofenil) propanamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (3- (2-fluorofenil) propanamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4 -bromofenil) -2- (3- (3-metoxifenil) propanamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (3- (4-metoxifenil) propanamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4 -clorofenil) -2-(3-(2,6-diclorofenil ) propanamido) tiofen- 3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (3- (2-clorofenil) propanamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (3- (2-fluorobencil ) ureido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (3- (2-fluorofenil) propanamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (3-fenetilureido) tiofen-3-carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- ( 5 - fenilpentanamido) tiofen-3-carboxílico ácido 4- (4-hidroxifenil) -2- (3-fenilpropanamido) tiofen- . 3-carbpxílico ácido 4- (4-metoxifenil) -2- (3 -fenilpropanamido) tiofen-3-carboxilico ácido 2- (2-bencil-3 , 3 -dimetilbutanamido) -4- (4-clorofenil) iofen- 3 - carboxilico ácido 2 - (3- (2 -cloro- 4, 5-difluorofenil) -2-fluoropropanamido) -4- (4-clorofenil) tiofen-3 -carboxilico ácido 2- (3- (2-cloro-6-fluorofenil) -2-fluoropropanamido) -4- (4 -clorofenil) tiofen-3 -carboxilico ácido 4- (4 -bromofenil) -2- (2-metil-3-fenilbutanamido) tiofen- 3 -carbox lico ácido 4- (4 -bromofenil) -2- (2-metil-3-fenilpropanamido) tiofen-3 -carboxilico ácido 4- (4 -bromofenil) -2- (3- (2,6-dimetilfenil ) propanamido) tiofen-3 -carboxilico ácido 4- (4 -bromofenil) -2- (3- (3-fluorofenil) ureido) tiofen-3 -carboxilico ácido 4- (4-cloro-2-fluorofenil) -2- (3-fenilpropanamido) tiofen-3 - carboxilico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (2-fluoro-3 -fenilpropanamido) tiofen-3 -carboxilico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (2-metil-3-fenilbutanamido) tiofen- 3 -carboxilico ácido 4- (4 -clorofenil) -2- (2-metil-3-fenilpropanamido) iofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) G2- (3- (2, 6 dimetilfenil) propanamido) tiofen-3 -carboxílico ácido terc-butil 4- (4-clorofenil) -2- (3 fenilpropanamido) tiofen-3 -carboxílico ácido terc-butil 4- (benzofuran-2-il) -2- (3 fenilpropanamido) tiofen-3 -carboxílico ácido (R) -4- (4-clorofenil) -2- (3- (2-clorofenil) -2 fluoropropanamido) tiofen-3 -carboxílico ácido (S) -4- (4-clorofenil) -2- (3- (2-clorofenil) -2 fluoropropanamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (2-cloro-3- (2-clorofenil) ropanamido) -4- (4 clorofenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (2-cloro-3-fenilpropanamido) -4- (4 clorofenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (3- (2-cloro-4-fluorofenil) -2 fluoropropanamido) -4- (4-clorofenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (3- (2-cloro-5-fluorofenil) -2 fluoropropanamido) -4- (4-clorofenil) tiofen- 3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (3- (2, 6-diclorofenil) -2 fluoropropanamido) tiofen- 3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (3- (2-cloro-4, 5 difluorofenil) - 2 - fluoropropanamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (3- (2-cloro-4-fluorofenil) -2 fluoropropanamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4 -bromofenil) -2- (3- (2-cloro-5-fluorofenil) -2 fluoropropanamido) tiofen- 3 -carboxílico ácido 4- (4 -bromofenil) -2- (3- (2-cloro-6-fluorofenil) -2 fluoropropanamido) iofen-3 -carboxílico ácido 4- (4 -bromofenil) -2- (3- (2-clorofenil) -2 fluoropropanamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (3- (3-etilfenil) ureido) tiofen 3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (1- (4 clorofenil) ciclopropancarboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (3- (2 , 6 -diclorofenil ) -2 fluoropropanamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (3- ( 2 -clorofenil ) -2 cianopropanamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (3- ( 2 -clorofenil ) -2 fluoropropanamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (3- (2 cianofenil) propanamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (3-metil-3 fenilbutanamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (3-fenil-2- (lH-tetrazol-1 il ) ropanamido) tiofen- 3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (3 -fenilbutanamido) tiofen-3 carboxílico ácido 4- (5-clorobenzofuran-2-il) -2- (3-fenilpropanamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (benzofuran-2-carboniloxi) -2-(benc loxicarbonilamino) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (2 , 3-difluoro-4-metilfenil) -2- (4-fluoropirazolo [1, 5-a] piridin-2-carboxamido) tiofen-3-carboxílico ácido 4- (2 , 3 -difluoro-4 -metilfenil) -2- (pirazolo [1,5-a] piridin-2-carboxamido) tiofen-3-carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (4 - fluoropirazolo [1,5-a] piridin-2-carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (pirazolo [1, 5-a] piridin-2-carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (4 -cloropirazolo [1, 5-a] piridin-2-carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4 -clorofenil) -2- (4-fluoropirazolo [1,5-a] piridin-2-carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4 -clorofenil) -2- (pirazolo [1, 5-a] piridin-2-carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (7-hidroxibenzofuran-2-il) -2- (pirazolo [1, 5-a] piridin- 2 -carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (2 , 2 ' -bitiofen-5 -carboxamido) -4- (4-clorofenil) tiofen-3-carboxílico ácido 2- (2 , 21 -bitiofen-5-carboxamido) -4-p-toliltiofen-3-carboxílico ácido 2- (3-cloro-4- ( isopropilsulfonil) tiofen-2-carboxamido) -4- (4 -clorofenil) tiofen-3-carboxílico ácido 2- (3-cloro-4- ( isopropilsulfonil) tiofen-2-carboxamido) -4 -p-toliltiofen-3 -carboxílico ácido 2- (3-cloro-4- (metilsulfonil) tiofen-2-carboxamido) -4 -p- toliltiofen-3 -carboxílico ácido 2- ( 3 -metiltiofen-2 -carboxamido) -4- (4-(trifluorometil) fenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (3-metiltiofen-2-carboxamido) -4 -p-toliltiofen-3 -carboxílico ácido 2- (4- (4 -clorofenilsulfonil) -3-metiltiofen-2-carboxamido) -4 -p-toliltiofen-3 -carboxílico ácido 2- (5-cloro-4-metoxitiofen-3-carboxamido) -4- (4-clorofenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (5-feniltiofen-2-carboxamido) -4 -p- toliltiofen-3 -carboxílico ácido 2- (tiofen-2-carboxamido) -4- (4-(trifluorometil) fenil) tiofen-3 -carboxílico ácido 2- (tiofen-3 -carboxamido) -4 -p-toliltiofen- 3 -carboxílico ácido 4- (3 , 4 -diclorofenil ) -2- (tiofen-3-carboxamido) tiofen- 3 -carboxílico ácido 4- (3 , -dimetilfenil) -2- ( 3 -metiltiofen-2 -carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (3 , 4-dimetilfenil) -2- (tiofen-3-carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (3-clorofenil) -2- ( 3 -metiltiofen-2 -carboxamido) tiofen- 3 -carboxílico ácido 4- (3-clorofenil) -2- ( tiofen-3 -carboxamido) tiofen-3-carboxílico ácido 4- (4 -bromofenil) -2- ( 3 -metiltiofen-2 -carboxamido) tiofen- 3 -carboxílico ácido 4- (4-bromofenil) -2- (5-feniltiofen-2-carboxamido) tiofen- 3 -carboxílico ácido 4- (4 -clorofenil) -2- (2, 5 -diclorotiofen-3 -carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (3-metiltiofen-2-carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4-clorofenil) -2- (tiofen-3-carboxamido) tiofen-3-carboxílico ácido N- (4- (4-bromofenil) -3-carbamoiltiofen-2-il) -3-metiltiofen-2 -carboxílico ácido 2 - ( 2 , 5 -diclorotiofen- 3 -carboxamido) -4 -p-toliltiofen-3 -carboxílico ácido 2- (3-cloro-4- (metilsulfonil) tiofen-2-carboxamido) -4- (4-clorofenil) tiofen- 3 -carboxílico ácido 2- (tiofen-2-carboxamido) -4 -p-toliltiofen-3 -carboxílico ácido 4- (2-bromofenil) -2- ( 3 -metiltiofen-2 -carboxamido) tiofen-3 -carbpxílico ácido 4- (2-bromofenil) -2- ( tiofen- 2-carboxamido) tiofen-3 -carboxílico ácido 4- (4 -bromofenil) -2- (4- (4-clorofenilsulfonil) -3-metiltiofen-2 -carboxamido) tiofen-3-carboxílico; y ácido 4- (4 -clorofenil) -2- ( 5- feniltiofen- 2 -carboxamido) tiofen-3 -carboxílico .
Ejemplo 2: Ensayo de sujeción del parche ICRAC In Vitro Obj etivo El objetivo de este ensayo es examinar los efectos in vitro de los compuestos de prueba en canales CRAC clonados (genes Orail y STIM1 expresados establemente en células HEK293) , responsables del ICRAC, el canal de calcio activado con liberación de calcio, actual.
Artículos de Prueba y Control Formulación: Se preparan soluciones base del artículo de prueba en sulfóxido de dimetilo (DMSO) y almacenadas en congelamiento. Las concentraciones del artículo de prueba se preparan nuevas diariamente diluyendo las soluciones base en un amortiguador de registro externo, apropiado. Si es necesario, las formulaciones del artículo de prueba se someten a sonicación (Modelo 2510, Branson Ultrasonics, Danbury, CT) , a temperatura ambiente para facilitar su disolución. En ciertos casos, las soluciones de prueba contienen hasta 0.1% de DMSO y la presencia de 0.1% de DMSO no afecta al canal actual.
Concentraciones y Cantidad del Artículo de Prueba Típicamente, los efectos de tres (3) concentraciones de cada artículo de prueba se evalúan (0.1, 1, y 10 µ?) . Los artículos de prueba se pesan y preparan como soluciones stock de 30 mM ó 10 mM en DMSO. El stock de DMSO se diluye en amortiguador de registro externo para preparar una solución de prueba de 10 µ? (DMSO final 0.03% ó 0.1%) . La solución de prueba de 10 µ? se diluye en amortiguador de registro externo para preparar soluciones de prueba de 1 µ? y 0.1 µ?. Las soluciones contienen hasta 0.1% de DMSO a la concentración más alta la cual se diluye en las soluciones de prueba a concentraciones más bajas.
Artículo de Control Positivo Se preparan soluciones stock del artículo de control positivo en lotes, en partes alícuotas para uso individual, se congelan en almacenamiento y se utilizan dentro de seis meses. La concentración de control positivo se prepara nueva cada día diluyendo las soluciones stock en amortiguador de> registro externo. La concentración de DMSO final en el artículo de control positivo es de hasta 0.1% de la solución.
Artículo de Control Negativo El artículo de ¦ control negativo es de 0.1% de DMSO en amortiguador de registro externo.
Sistemas de Prueba de Canal de Iones Clonados Las células se mantienen en incubadores de cultivo de tejido según los protocolos estándar CalciMedica. Los stocks se mantienen en almacenamiento criogénico. Las células utilizadas para electrofisiología se colocan en placas o platos de plástico para cultivo de tejido.
Células HEK293 Las células HEK293 se transfectan establemente con los ADNcs de canal de iones, apropiados (Orail/STIMl) . Se cultivan células en DMEM (Gibco 11960) suplementado con 10% de suero de bovino fetal (Gibco 10082) , 100 U/mL de penicilina G de sodio, 1 mM de piruvato de Na (Gibco 11360) , 100 g/mL de sulfato de estreptomicina (Gibco 10378) , 0.5 mg/mL de geneticina (Gibco 10131-035) y 50 g/mL de zeocina (Invitrogen 45-0430) . Las células se deberán mantener a = 80% de confluencia. Él día antes del análisis, las células en platos de cultivo se lavan una vez con D-PBS libre de calcio/magnesio, se tratan con tripsina/EDTA y se re-suspenden en el medio de cultivo y se cuantifican. Las células se diluyen entonces en el medio de cultivo con 1% de suero de bovino fetal y se colocan en placas a baja densidad (5-10K) en cubiertas de vidrio revestidas con poli-D-lisina en platos de cultivo de tejido de 24 pozos y se colocan en un incubador de cultivo de tejido ajustado a 37°C en una atmósfera humidificada de 6% de C02 y 95% de aire.
Métodos de Prueba Cámara de Registro y Perfusión de Artículos de Prueba Las cubiertas de vidrio que contienen células se transfieren a una cámara de registro (Warner Instruments) con perfusión continua de amortiguador de registro externo. Durante los registros del ICRAC, todos los tratamientos se administran mediante perfusión con baño alimentado por gravedad desde depósitos de jeringas desechables a través de una tubería de polietileno desechable que desemboca en un múltiple de teflón. La relación de flujo se ajusta entre 1.2-1.5 mL/min. , asegurando el intercambio de la solución completa en ~1 min. Todos los experimentos se realizan a temperatura ambiente.
Grupos de Tratamiento del Artículo de Prueba Para los experimentos donde el artículo de prueba se aplica durante 10 minutos el paradigma del tratamiento se resume en la Tabla 1. El amortiguador de registro de control se inunda o bombea durante cinco (5) minutos mientras que el ICRAC se desarrolla y se estable una línea base estable; cada célula se utiliza como su propio control. Cada artículo de prueba se aplica a células sin experimentar (n = 2, donde n = el número de células/concentración; a 1 concentración/célula) durante una duración de diez (10) minutos (Tabla 1) . El artículo de prueba se lava durante diez (10) minutos para examinar la reversibilidad del efecto. La solución salina de registro externo sin calcio se inunda o bombea durante dos (2) minutos para determinar la corriente de fondo en la ausencia de ICRAC. La solución salina de control que contiene calcio se re-aplica durante tres (3) minutos.
Para experimentos donde el artículo de prueba se aplica durante 30 minutos antes del registro de ICRAC, el paradigma de tratamiento se resume en la Tabla 2. Antes del comienzo de cada experimento-, las célula se incuban con el compuesto durante 30 minutos a temperatura ambiente, y el compuesto permanece presente en todos los registros de ICRAC. Las células de control se exponen al vehículo solamente. Después de la entrada forzada y establecimiento de la configuración del control en parche de células enteras, al amortiguador de registro ± se inunda o bombea durante diez (10) minutos. Al final del período de 10 min. , se mide la amplitud del ICRAC.
Los efectos de los compuestos se determinan comparando la señal de ICRAC en las células pretratadas con el compuesto, con la señal en las células pretratadas con el vehículo. Los compuestos en la Tabla A inhiben la señal ICRAC en este ensayo .
Tabla 1. Programa del Artículo de Prueba para Estudios Aplicación de 10 minutos Tabla 2. Programa del Artículo de Prueba para Estudios de Aplicación de 40 minutos Época Solución Tiempo de exposición Artículo de prueba 30 minutos 1 Artículo de prueba 10 minutos 2 Lavado 10 minutos 3 0 calcio 2 minutos 4 control 3 minutos Grupos de Tratamiento de Control Como control negativo, se aplica 0.1% de DMSO a células sin tratar (n = 2 , donde n = el número de células). Esto se utiliza para monitorear la magnitud de la parada o salida del ICRAC. Como un control positivo, 1 µ? de ácido 4-(4-bromofenil) -2- ( 3 - fluorobenzamido) tiofen-3 -carboxílico se aplica rutinariamente a células sin tratar (n = 2 , donde n = el número de células) .
Procedimientos de Control o Sujeción de Parche de Células Enteras Se utilizan procedimientos de control en parche estándar de células enteras. Las composiciones de las soluciones extracelulares e intracelulares se muestran en las Tablas 3 y 4. Las células se visualizan en un microscopio invertido (Olympus 1X71) y voltaje sujetado utilizando un amplificador Multiclamp 700B y el programa informático PClamp (Axon Instruments) . En breve, las pipetas de parche de borosilicato se llenan con solución intracelular (Apéndice 1) se posicionan en la membrana celular. Una vez que se forma un sello GQ, se aplica succión hasta que el parche se rompe y se establece la configuración de las células enteras. La calidad de la configuración se evaluará con la "prueba de membrana" en Clampex para determinar la capacitancia celular (Cm) , resistencia de entrada (Rm) , resistencia de acceso (Ra) , y corriente de carga o agarre a -50 mV (Ih) . Los datos se almacenan en la red informática CalciMedica (y se respaldan por las noches) para un análisis fuera de línea.
Tabla 3 Composición de la Solución Extracelular (concentración en mM) NaCl 120 TEA-C1 10 HEPES 10 CaC12 10 (y 0) MgC12 2 (y 12) glucosa 10 El pH se ajusta a 7.2 con NaOH y la osmolaridad final se ajusta a 325 con sacarosa. Las soluciones se preparan diariamente. Las sustancias químicas utilizadas en la preparación de la solución se adquieren de Sigma-Aldrich (St. Louis, MO) , a menos que se indique de otra manera, y son de pureza de calidad reactivo ACS o superior.
Tabla 4 Composición de la Solución Intracelular [concentración en mM) Cs-glutamato 120 HEPES 10 BAPTA 20 MgC12 3 El pH se ajusta a 7.2 con CsOH. Las soluciones se preparan en lotes, en porciones de alícuota, y se refrigeran hasta usarse. Se utiliza una alícuota nueva cada día y se almacena en hielo durante todo el día. Las sustancias químicas utilizadas en la preparación de la solución se adquieren de Sigma-Aldrich (St. Louis, MO) , a menos que se indique de otra manera, y son de pureza de calidad reactivo ACS o superior.
Procedimientos de Prueba ICRAC El ICRAC del complejo de canal Orail/STIMl se activa mediante la depleción pasiva de almacenamientos de calcio intracelular utilizando BAPTA 20 mM en la solución intracelular . Los datos de sujeción de voltaje se adquieren utilizando el programa informático Clampex para suscitar un protocolo de voltaje de estímulo (mostrado en la Tabla 5) aplicado cada seis (6) segundos. Las corrientes se digitalizan en 10 kHz y se filtran en 2 kHz. Se emplea compensación capacitiva de células enteras. Las trazas de ICRAC representativas se muestran en la Figura 2.
Tabla 5 Protocolo de Sujeción de Voltaje Voltaje Descripción Vh +30 raV para minimizar la entrada de calcio entre barridas Vstep a 0 mV durante 10 ms para evaluar la corriente "cero" Vstep a -100 mV durante 10 ms para medir el ICRAC en alta fuerza de conducción Vramp a +100 mV por más de 50 ms para monitorear el perfil de rectificación interna de ICRAC Vstep a +50 mV durante 10 ms para estimar la corriente de fuga Análisis de Datos El análisis de datos se realiza utilizando el programa informático Clampfit. El ICRAC se mide a -100 mV y la corriente medida después de 5 min se utiliza como el control de línea base. Para estudios de aplicación de 10 minutos, la corriente medida después de la aplicación de 10 min de 1 artículo de prueba, se normaliza a la corriente de línea base y se expresa como el % de control. Para estudios de aplicación de 40 min, la corriente medida al final de los 10 minutos del tiempo de registro de ICRAC se utiliza como el comparador. La corriente medida en el amortiguador "0 calcio" se utiliza para substraer la corriente de fuga de fondo. Los puntos de datos para cada concentración del artículo de prueba (n = 2) se ajustan a una función sigmoidea (SigmaPlot) para determinar el IC50 y la pendiente Hill.
Los compuestos de la Fórmula (I)-(V) inhiben el ICRAC utilizando el protocolo de aplicación tanto de 10 minutos como de 40 minutos.
Ejemplos In Vivo Ejemplo 3. Ensayo in vitro de desgranulación de mastocitos Células : Se obtienen células RBL-2H3 de ATCC y se mantienen en medio completo con 10% de FBS a 37°C/C02 al 6%.
Ensayo : a) Estimulación con tapsigargina 1 µ?/??? 20 nM El día anterior a la realización del ensayo, las células RBL-2H3 se colocan en placas de 96 pozos. Las células se hacen crecer a 37°C/6% de C02 durante toda la noche. Al siguiente día, las células se lavan dos veces en amortiguador HBSS con CaC12 1.8 mM y 1.75% de suero de bovino fetal (FBS) . Se agregan 70 L de un compuesto de prueba preparado en Amortiguador HBSS con CaC12 1.8 mM + 1.75% de FBS y se incuban durante 10 minutos a 37°C/6% de C02. Las células se estimulan mediante la adición de 7 L de tapsigargina 11X/TPA (tapsigargina 11 µ?/??? 220 nM) y se incuban a 37°C/6% de C02 durante 120 minutos. El medio se recolectan y los lisados celulares se preparan mediante la adición de 70 L de 0.05% de Tritón X-100 en HBSS con CaC12 1.8 mM. Los niveles de ß-hexosaminidasa se miden tanto en el medio como en los lisados celulares. El ensayo con ß -hexosaminidasa se realiza agregando 40 µL· de substrato de p-nitrofenil-acetil-glucosamida 1 mM en citrato de sodio 0.05M (pH 4.5) a 10 L de la muestra (medio acondicionado o lisado celular) , incubando 60 minutos a 37 °C, luego agregando 100 L de carbonato de sodio 0.05M/bicarbonato de sodio 0.05M (pH 10.5), mezclando a fondo y leyendo la absorbancia a 405 nm. El porcentaje de ß -hexosaminidasa liberada se calcula como sigue: A405 (medio) / [A405 (medio) + A405 (lisado] . El valor IC50 se calcula como la concentración a la cual se inhibe 50% de la hexosaminidasa liberada en las células tratadas con vehículo .
Los compuestos de la Fórmula (I) - (V) son inhibidores en este ensayo. b) Estimulación con IgE-DNP El día anterior a la realización del ensayo, las células RBL-2H3 se colocan en placas en 200 pL del medio completo en una placa de 96 pozos durante 1 hora. Se agregan 20 pL de DNP-IgE 11X y las células se hacen crecer a 37°C/6% de C02 durante toda la noche. Al siguiente día, las células se lavan dos veces en amortiguador HBSS con CaCl2 1.8 mM y 1.75% de suero de bovino fetal (FBS) . Se agregan 70 pL de un compuesto de prueba preparado en Amortiguador HBSS con CaC12 1.8 mM y 1.75% y se incuban durante 10 minutos a 37°C/6% de C02. Las células se estimulan mediante la adición de 7 pL de DNP-BSA 11X y se incuban a 37°C/6% de C02 durante 30 minutos . El medio se recolecta y los Usados celulares se preparan mediante la adición de 70 ul de 0.05% de Tritón X-100 en HBSS con CaC12 1.8 mM. Los niveles de ß-hexosaminidasa se miden tanto en el medio como en los lisados celulares. El ensayo con ß -hexosaminidasa se realiza agregando 40 pL de substrato de p-nitrofenil-acetil-glucosamida 1 mM en citrato de sodio 0.05M (pH 4.5) a 10 pL de la muestra (medio acondicionado o lisado celular) , incubando 60 minutos a 37°C, luego agregando 100 pL de carbonato de sodio 0.05M/bicarbonato de sodio 0.05M (pH 10.5), mezclando a fondo y leyendo la absorbancia a 405 nm. El porcentaje de ß-hexosaminidasa liberada se calcula como sigue: A405 (medio) / [A405 (medio) + A405 (lisado] . El valor IC50 se calcula como la concentración a la cual se inhibe 50% de la hexosaminidasa liberada en las células tratadas con vehículo.
Los compuestos de la Fórmula (I)-(V) son inhibidores en este ensayo.
Ejemplo 4. Ensayo in vitro de liberación de citoquina de células T Células : Se obtienen células Jurkat E6-1 de ATCC y se mantienen en medio completo con 10% de FBS a 37°C/6% de C02.
Ensayo : El día anterior a la realización del ensayo, las células T Jurkat se colocan en placas en 90 L de Amortiguado HBSS con CaC12 1.8 m y 1.75% de suero bovino fetal (FBS) en una placa de 96 pozos a una densidad de 1.5 x 105 células/pozo durante tres horas. Se agregan 10 L del compuesto de prueba 10X en HBSS y se incuban durante 10 minutos a 37°C/6% de C02. Las células se estimulan mediante la adición de 10 xL de PHA/TPA 11X (27.5 g/mL de PHA/TPA 880 nM) y se incuban a 37°C/6% de C02 durante 20 horas. Al siguiente día, los sobrenadantes se recolectan y ensayan para los niveles IL-2 mediante ELISA de acuerdo con los protocolos del fabricante. El valor IC50 se calcula como la concentración a la cual se inhibe 50% de IL-2 secretado en las células tratadas con vehículo.
Los compuestos de la Fórmula (I) - (V) son inhibidores en este ensayo.
Ejemplo 5. Efectos de Dosis-Respuesta de un compuesto de la Fórmula (I)-(V), CSA o Rapamicina en el DTH de las Almohadillas de las Patas de los Ratones Propósito: Determinar los efectos de la dosis-respuesta del Compuesto de Prueba en respuesta al DTH inducido con mBSA en las almohadillas de las patas en el momento de la dosificación que se hace durante la sensibilización así como en la fase de inducción.
Animales: Ratones Macho Swiss Webster de aprox. 20-25 gramos al comienzo del estudio.
Materiales: BSA metilado (Sigma) , adyuvante completo de Freund (Difco) más H37 RA de M. tuberculosis suplementario (Difco) .
Diseño de Estudio General: Los ratones se anestesian con Isoflurano e inyecciones intradérmicas de antígeno dadas de 0.1 mi en la base .la cola (DO, D07) . El antígeno se prepara haciendo una solución de 4 mg/mL en agua estéril. Se agregan volúmenes iguales de antígeno y adyuvante completo de Freund al cual se agregan 4 mg/ml de MTB (sonicar durante 5 minutos después de agregar MTB al aceite) , se emulsionan mezclando manualmente hasta que una perla de este material mantenga su forma al momento de colocarse en agua. El tratamiento con este compuesto de prueba se inicia el día O, qd (intervalos de 24 hr) y se continúa hasta el día 10 cuando se hace una estimulación.
En el día 10 los animales se inyectan en almohadilla de la pata trasera, derecha, con 20 µ? de mBSA 10 mg/mL. Cinco machos sin sensibilizar se inyectan con mBSA en la almohadilla de la pata. Veinticuatro horas después (día 11) se cortan transversalmente las patas traseras izquierda y derecha en los maléolos medios y laterales y se pesan y se determina la diferencia de peso inducida por la inyección de antígeno .
Análisis Estadístico. Se analizan las diferencias de los pesos de las patas (media ± SE) de cada grupo utilizando un análisis t de Student o A OVA con análisis posterior de Dunnett. Se establece una significancia estadística a p = 0.05.
Tabla 5. Machos de los Grupos de Tratamiento Grupo N Tratamiento de 10 mL/kg qd, po 1 5 Controles normales (sin sensibilización) Inyectar mBSA a la derecha solamente 2 8 DTH+Vehículo (70% de PEG400/30% de Agua) 3 8 DTH + Compuesto de Prueba (50 mg/kg, po, qd) 4 8 DTH + Compuesto de Prueba ( 100 mg/kg, po, qd) 5 8 DTH + Compuesto de Prueba (200 mg/kg, po, qd) 6 8 DTH + Compuesto de Prueba (300 mg/kg, po, qd) 7 8 DTH + CS A ( 100 mg/kg, qd, ip) 8 8 DTH + Rapamicina (5 mg/kg, qd, ip) Se espera que los compuestos de la Fórmula (I)-(V) sean efectivos en este modelo.
Ejemplo 5A: Datos Farmacocinéticos de un Compuesto de las Fórmulas (I) - (V) en Ratas La biodisponibilídad y las propiedades farmacocinéticas del plasma en ratas del Compuesto de las Fórmulas (I) - (V) administrado oralmente en el vehículo de 25% de PEG400/20% de etanol/55% de H20. Dos grupos de tratamiento, 1) un grupo de dosis i.v. a 2 mg/kg y 2) un grupo de dosis oral a 10 mg/kg se administran a ratas machos Sprague-Dawley (3 ratas por grupo), que pesan aproximadamente 250-300 gm. Se recolectan hasta 10 puntos de tiempo por cada grupo. Los puntos de tiempo típicos son: predosis, 15, 30 minutos, 1, 2, 4, 6, 8 y 24 horas. Se recolectaron hasta 300 L de sangre entera a través de una cánula en la vena yugular en cada punto de tiempo. Se recolecto sangre entera en tubos de microcentrifuga que contiene anticoagulante y se centrifuga a 5000 rpm en una microcentrifuga durante 5 minutos antes de que se transfiera el plasma a un tubo de microcentrifuga limpio. Las muestras de plasma se sometieron a análisis bioanalítico .
Ejemplo 6: Efecto del Compuesto de Prueba en un modelo de Artritis Inducida con Colágeno (CIA) en Ratas Propósito: Determinar la eficacia del Compuesto de Prueba administrado mediante dosificación oral cantidad dosificada (cd) , para inhibir la inflamación, destrucción del cartílago y resorción ósea para desarrollar artritis por colágeno tipo II en ratas.
Animales: Ratas hembra Lewis (Charles River # 7246950), que pesan 125-150 g al comienzo del estudio. 40 ratas se inyectan con colágeno para obtener 40 respondedores sólidos en los días 10 y 11. Cuatro animales no inmunizados sirven como controles normales .
Materiales: Compuesto de Prueba, colágeno Tipo II, adyuvante incompleto de Freund, ácido acético. El Compuesto de Prueba se prepara a una concentración de 10 mg/ml en 50% de PEG400/50% de agua. El colágeno se prepara haciendo una solución de 4 mg/ml en Ácido acético 0.01N. Se emulsionan volúmenes iguales de colágeno y adyuvante incompleto de Freund, mezclándolos a mano hasta que una perla de este material mantenga su forma al momento de colocarse en agua.
Diseño de Estudio General: Animales (10 ratas/grupo para artritis, 4 ratas/grupo para control normal) .
Los animales en los grupos de artritis se anestesian con isoflurano e inyecciones de colágeno dadas (DO) ; cada animal obtiene 300 µ? de la mezcla distribuida sobre 3 sitios subcutáneos en la espalda. El Día 6 .(D6) los animales se anestesian de nuevo y se dio una segunda inyección de colágeno, como antes.
La dosificación oral del Compuesto de Prueba en intervalos de 24 horas (qd) se inicia el Día 0 utilizando un volumen de dosis de 5 ml/kg para soluciones orales. Las ratas se pesan los Días 0, 3, 6 y 9-17 de artritis, y se tomaron mediciones con calibrador de los tobillos cada día empezando el Día 9. Se toman pesos finales del cuerpo el Día 17 de artritis. El Día 17, todos los animales se anestesian para extraer sangre terminal y luego se les practica la eutanasia. Subsecuentemente, se removieran las patas traseras y rodillas, las patas traseras se pesan y luego (con las rodillas) se colocan en formalina para procesarse por microscopía. También se removieron hígados, bazo y timo y ríñones, se recortaron de tejido extraño y se pesaron. Los ríñones se mantuvieron en formalina para histopatología .
El muestreo ocurrirá cada día 1 e involucra los grupos 2-5 con muestras retenidas de todos los grupos. Esto da como resultado que todos los animales se traten de manera similar y es importante para los parámetros clínicos y pesos finales del hígado.
Los compuestos de las Fórmulas (I) - (V) producen una reducción significativa de artritis en este modelo.
Ejemplo 7: Efecto de los compuestos de las Fórmulas (I) - (V) en Colitis Inducida con DNBS en Ratas Procedimiento: Ratas macho Wistar que pesan 200 + 20 g se sometieron a ayuno durante 24 horas antes de utilizarse. La colitis distal se induce por instilación intra-colónica de DNBS (ácido 2 , 4 -dinotrobencen-sulfónico, 20 mg en 0.5 mL de etanol al 30%) con un catéter de 12 cm de longitud, seguido por inyección moderada de aire (2 mi) a través del catéter para asegurar que la solución permanezca en el colon. Los animales se dividen en grupos de 5 cada uno. La sustancia y vehículo de prueba se administran ya sea diariamente o dos ves al día mediante una ruta apropiada de administración de 24 horas y 1 hora antes de la instilación con DNBS y luego durante 6 días consecutivos a partir de entonces. Un grupo de control normal se trata con 0.9% de NaCl solo sin estimulación con DNBS. Los animales se sacrifican 12 horas después de la dosis tentativa final y 24 horas después de la dosis diaria final y el colon se remueve y pesa. Durante el experimento, se monitorea diariamente el peso corporal, sangre oculta fecal y consistencia de excremento. Además, cuando la cavidad abdominal se abre antes de la remoción del colon, se observan adhesiones entre el colon y otros órganos que es la presencia de ulceración del colon después de la remoción y pesaje de cada colon (se registra una puntuación de daño macroscópico de acuerdo con algunos criterios de puntuación establecidos) . La relación de peso de colon a cuerpo se calcula de acuerdo con la fórmula: Colon (g) /BW x 100. El incremento "Neto" en la relación de grupo de Control con vehículo + DNBS en relación al grupo de Control con vehículo, se utiliza como una base para su comparación con los grupos tratados individuales y se expresa como "Dec. (%)" (disminución porcentual) . Se considera significativa una reducción del 30% o más (=30%) en una relación de peso de colon a cuerpo, en relación al grupo de control tratado con vehículo .
Se utiliza sulfasalazina como el agente de análisis estándar. (Hogaboam CM, et al., An orally active non-selective endothelin receptor antagonist, bosentan, markedly reduces injury in a rat model of colitis. Eur J Pharmacol . 309: 261-269, 1996; Yue G, et al. En algunas modalidades, el tirilazid-mesilato de 21-aminoesteroide mejora la inflamación del colon en ratas. J Pharmacol Exp Ther . 276: 265-270, 1996. ) .
Se espera que el compuesto de la Fórmula (I) - (V) reduzca la colitis en este modelo.
Ejemplo 8. Efecto de los compuestos de las Fórmulas (I) - (V) en el Rechazo de Trasplante de Piel en Ratas Procedimiento. Se adquieren ratas Brown Norway y Lewis libres de patógenos específicos de 10 semanas de edad, de Charles River y se alojan bajo condiciones convencionales de limpieza. Los animales se manejan y dejan aclimatar durante un período de dos semanas. Donadores de piel: ratas hembra Brown Norway, de 10 semanas de edad. Receptores de Piel: ratas hembra Lewis, de 10 semanas de edad.
Se mataron las ratas donadoras Brown Norway para servir como donadores de 5 a 8 trasplantes de piel. Directamente después de matar las ratas Brown Norway, la piel abdominal de las ratas se rasura y se toman trasplantes de piel de 20 mm de diámetro. Después de la remoción de tejido conectivo, estos injertos se trasplantan en las ratas Lewis. Esto se realiza rasurando la piel dorsal superior de la rata Lewis bajo anestesia con isoflurano, removiendo un pedazo de piel de 15 mm de diámetro perforando y reemplazando con un trasplante de piel derivado de la rata Brown Norway.
Durante el estudio cada injerto se fija mediante 4-6 puntos de sutura utilizando violeta Safil 6/0 (B Braun, Aesculap) y se cubre con Paraffin Gauze Dressing BP (3 3 cm, Smith & Nephew) , un pedazo de gaza y cinta quirúrgica. Esta adaptación minimiza la probabilidad de perder un trasplante por razones diferentes al rechazo.
En todos los casos, los trasplantes se protegen con un vendaje; estos se remueven después de seis días para permitir la inspección diaria del trasplante.
El rechazo se monitorea evaluando primero signos de inflamación (coloración roja) y necrosis (endurecimiento y ennegrecimiento del injerto) .
Ensayo Clínico de Fase II de la Seguridad y Eficacia de los Compuestos de las Fórmulas (I)-(V) en Pacientes con Artritis Reumatoide Activa.
El propósito de este ensayo de fase II es investigar la seguridad, tolerabilidad, PK, PD, y eficacia de infusiones intravenosas individuales y repetidas de un compuesto de las Fórmulas (I) - (V) en pacientes con artritis reumatoide activa.
Pacientes : Los sujetos elegibles serán hombres y mujeres entre las edades de 18 y 75 Criterios : Criterios de Inclusión: •Todos los sujetos deberán utilizar una contracepción aceptable para asegurar que no ocurran embarazos durante el transcurso del estudio y durante al menos 12 semanas después de la dosificación para hombres y durante 32 semanas después de la dosificación para mujeres; •El índice de masa corporal dentro del rango 18.5 - 35 kg/m2 global, además de un rango de peso de 55 - 95 kg; •El sujeto deberá ser capaz de dar un consentimiento informado y poder cumplir con los requerimientos e itinerario del estudio; · El sujeto deberá tener un diagnóstico de AR de acuerdo con los criterios de 1987 revisados del Colegio Norteamericano de Reumatología (ACR) ; •El sujeto debe tener una puntuación de actividad de padecimiento DAS28 mayor de 4.2 en la selección y pre-dosis; · El sujeto debe tener un nivel de suero CRP de >/0.5 mg/dl o un nivel ESR de 28 mm/hora en la selección y pre-dosis ; •El sujeto NO tiene que haber recibido ninguna terapia biológica en el pasado, incluyendo productos biológicos para el tratamiento de artritis reumatoide; •El sujeto debe tener análisis de la función hepática que incluyan alanina transaminasa (ALT) y aspartato transaminasa (AST) de 1.5 veces el límite superior de lo normal (ULN) y fosfatasa alcalina (ALP) de 3 veces el ULN en la selección. El paciente también debe tener bilirrubina total dentro del ULN en la selección; •El sujeto debe haber recibido al menos 3 meses de metotrexato y debe estar en una dosis estable de metotrexato (hasta 25 mg/semana) durante al menos 8 semanas antes de la selección y estar dispuesto a permanecer en esta dosis durante todo el estudio; •Si se toma sulfasalazina además del metotrexato, el sujeto debe estar en una dosis estable durante al menos 4 semanas antes de la selección y estar dispuesto a permanecer en esta dosis durante todo el estudio; •Si se toma hidroxicloroquina o cloroquina además de metotrexato, el sujeto deberá estar en una dosis estable durante al menos 3 meses antes de la selección y estar dispuesto a permanecer en esta dosis durante todo el estudio; •Aquellos sujetos en otras terapias orales antireumáticas, las cuales pueden incluir Fármacos Antiinflamatorios No Esteroideos (NSAIDs) , inhibidores COX-2, glucocorticoides orales por ejemplo prednisolona (-10 mg/día) , deben estar en regímenes de dosificación estables durante al menos 4 semanas antes de la selección y estar dispuestos a permanecer en este régimen durante todo el estudio. Los sujetos que reciben glucocorticoides intramusculares por ejemplo metilprednisolona (-120 mg/mes) deben estar en un régimen de dosificación estable durante al menos 3 meses antes de la selección y estar dispuestos a permanecer en este régimen durante todo el estudio; •El sujeto deberá estar en una dosis estable de suplementos de folato (5 mg/semana) durante al menos 4 semanas antes .
Criterios de Exclusión: •Cualquier anormalidad clínicamente relevante, identificada en la valoración médica de selección, examen de' laboratorio (por ejemplo parámetro de hematología fuera de los límites normales) , o ECG (12 Lead o Holter) ; •El sujeto tiene un resultado positivo de antígeno superficial de Hepatitis B positiva o anticuerpo de Hepatitis C en la selección; «El sujeto 'tiene un historial de pruebas de función hepática elevada en más de una ocasión (ALT, AST y ALP > 3 x Límite Superior de lo Normal (ULN) ; bilirrubina total > 1.5 x ULN) en los pasados 6 meses; •Previa exposición o pasada infección causada por Mycobacterium tubuerculosis ; •El sujeto tiene una infección aguda; •El sujeto tiene una historial de infecciones repetidas, crónicas u oportunistas que, en la opinión del investigador y/o monitor médico GSK, ponga al sujeto en un riesgo inaceptable como un participante en esta evaluación; •El sujeto tiene un historial de malignidad o afección, excepto por carcinoma de células básales curado quirúrgicamente o mujeres con carcinoma cervical curado (> 2 años antes) ; •El sujeto tiene un historial de virus de inmunodef iciencia humana (VIH) u otro padecimiento de inmunodeficiencia; •El sujeto cuya depuración calculada de creatinina es menor de 50 ml/min; •El sujeto tiene condiciones cardiacas, pulmonares, metabólicas, renales, hepáticas o gastrointestinales significativas que, en la opinión del investigador y/o monitor médico GSK, pone al sujeto en un riesgo inaceptable como un participante en esta evaluación; •El sujeto ha tomado ciclosporina, leflonomida, ciclofofamida o azatioprina 1 mes de la selección. Los sujetos que han tomado ciclosporina, leflonomida, ciclofofamida o azatioprina en el pasado tienen deben de haberse recuperado de todos los eventos adversos relacionados con el fármaco; •El sujeto ha tomado sales de oro o d-penicilamina 1 mes antes de la selección. Los sujetos que han tomado sales de oro o d-penicilamina en el pasado deben haberse recuperado de todos los eventos adversos relacionados con el fármaco; •El sujeto ha recibido glucocorticoides intra-articulares dentro de 1 mes de la selección; •Historial reciente de alteraciones hemorrágicas , anemia, padecimiento de ulcera péptica, hematemesis o sangrado gastrointestinal.
•Sujetos con un historial de padecimiento hematológico o padecimientos de plaquetas adquiridos, incluyendo trombocitopenia inducida por fármacos, trombocitopenia idiopática aguda o padecimiento de von Willebrand; •Sujetos con un riesgo conocido de hemorragia intracraneal que incluye cirugía del Sistema Nervioso Central (SNC) dentro de los últimos 12 meses, malformaciones vasculares arteriales, aneurismas, trauma de cabeza cerrado significativo dentro de 6 meses o cualquier otro incidente que el investigador y/o monitor médico considere relevante; • El sujeto tiene Hb < 10 g/decilitros (dL) y conteo de plaquetas < 150 x 109/Litros (L) ; • Donación de sangre en exceso de 500 mi dentro de un período de 56 días antes de la dosificación; •Una indisposición de sujetos masculinos a abstenerse de relaciones sexuales con mujeres embarazadas o lactando,- o una indisposición del sujeto masculino a utilizar un condón con espermicida además de que su pareja femenina tenga que utilizar otra forma de contracepción tal como un dispositivo intrauterino (DIU) , diafragma con espermicida, anticonceptivos orales, progesterona inyectable, implantes subdérmicos de levonorgestrol o una ligadura de trompas si la mujer pudiera quedar embarazada durante al menos 12 semanas después de la dosificación; •Una indisposición del sujeto femenino con maternidad potencial a utilizar anticoncepción adecuada, como se define en la sección de restricciones del estudio. Si es necesario, serán confirmadas mujeres sin maternidad potencial (es decir post-menopáusicas o quirúrgicamente estériles por ejemplo ligadura de trompas o histerectomía o amputación de ovarios bilateral) . El estatus de post-menopausia se confirmará mediante hormona de estimulación de folículos en suero (FSH) y concentraciones de estradiol en la selección. La esterilidad quirúrgica se definirá como mujeres que hayan tenido una histerectomía documentada, ligadura de trompas o amputación de ovarios bilateral; • El sujeto tiene un historial de uso de fármacos de abuso dentro de los 12 meses previos a la selección •Historial de consumo regular de alcohol que exceda la ingesta semanal promedio mayor de 21 unidades o una ingesta diaria promedio mayor de 3 unidades (hombres) o una ingesta semanal promedio mayor de 14 unidades o una ingesta diaria promedio mayor de 2 unidades (mujeres) . Los sujetos que regularmente consumen más de 12 unidades de alcohol en un período de 24 h también serán excluidos . 1 unidad es equivalente a una medida de media pinta o jarra (220 mi) de cerveza/cerveza rubia ó 1 (25 mi) de licor o 1 vaso (125 mi) de vino; •Prueba positiva de embarazo o lactancia en la selección; •Participación en un ensayo con cualquier fármaco de investigación dentro de 3 meses o 5 vidas medias o duraciones (cualquiera que sea más prolongado) antes.
Diseño de Estudio: Este es un estudio de hallazgo de dosis, adaptativo controlado con placebo, doble ciego, aleatorio, para investigar la seguridad, tolerabilidad, PK, PD y eficacia de infusiones intravenosas, individuales y repetitivas, de un compuesto de las Fórmulas (I) - (V) en pacientes con artritis reumatoide activa. El estudio se divide en 2 partes: La parte A es una fase de hallazgo de dosis, adaptativa, la cual proporcionará seguridad, tolerabilidad, PK y PD en infusiones intravenosas individuales. La parte B es una fase de dosis repetidas la cual proporcionará seguridad, tolerabilidad, PK, PD y eficacia después de las infusiones intravenosas repetidas de un nivel de dosis seleccionado.
Medidas de Resultados Primarios : •Seguridad y Tolerabilidad después de las dosis ascendentes individuales de un compuesto de la Fórmula (I) , (II) o (III) en 1 mes y después de 3 dosis repetidas de un compuesto de las Fórmulas (I)-(V) en 3 meses. Eficacia Clínica (puntuación DAS28) de un compuesto de las Fórmulas (I) - (V) en 1 mes.
Medidas de Resultados Secundarios: •Media pesada DAS28 después de dosis intravenosas individuales y repetidas • Parámetros PK en plasma de un compuesto de la Fórmula (I) - (V) después de las dosis intravenosas individuales y repetidas que incluyen liberar, y comprometer un compuesto de concentraciones (suero) de las Fórmula (I)-(V), AUC(0-8), Cmax, depuración, volumen de distribución y relación de acumulación •Criterios de respuesta de DAS28 y EULAR después de las dosis intravenosas individuales y repetidas • Respuesta de ACR20/ACR50/ACR70 después de las dosis intravenosas individuales y repetidas •Número de articulaciones hinchadas evaluadas utilizando conteos de 28 articulaciones •Número de articulaciones blandas/dolorosas evaluadas utilizando conteos de 28 articulaciones •Evaluación de dolor del sujeto •Evaluación global del médico de la condición de artritis •Evaluación global del paciente de condición de artritis •índice de discapacidad funcional (Cuestionario de Evaluación de Salud) •Proteina C-reactiva (CRP) • ESR • índice de Fatiga Global • índice de Discapacidad HAQ • Biomarcadores farmacodinámicos después de las dosis intravenosas individuales y repetidas •AUC50 y EC50 característicos de cambios de puntos finales clínicos con modelo de exposición al plasma, cuando se evalúa mediante modelos PK/PD de respuesta indirecta y Emax sigmoideo.
• Inmunogenicidad (Anticuerpos humanos anti-compuesto de la Fórmula (I) - (V) ) Ensayo Clínico de Fase II de la Seguridad y Eficacia de los Compuestos de las Fórmulas (I)-(V) en Pacientes con Psoriasis de tipo Placa, Recalcitrante, Severo El propósito de este ensayo de fase II es investigar la seguridad, eficacia, y tolerabilidad de un compuesto de las Fórmulas (I)-(V) en pacientes con psoriasis de tipo placa, recalcitrante, severa.
Pacientes : Los sujetos elegibles serán hombres y mujeres entre las edades de 18 y 75.
Criterios : Criterios de Inclusión: •El paciente tiene psoriasis de tipo placa, recalcitrante, severa, y ha fallado en al menos 1 terapia sistémica (con el fin de que este psoraleno de estudio con luz ultravioleta A se considere una terapia sistémica) ; •El paciente tienen una implicación psoriática de al menos 10% de BSA; •El paciente tiene una puntuación PSGA de 4 ó mayor; •El paciente, si es una mujer, es quirúrgicamente estéril o tiene 2 años de post-menopausia, o si tiene potencial de maternidad y actualmente está utilizando un método médicamente aceptado de contracepción, y está de acuerdo en continuar con el uso de este método durante la duración del estudio (y durante 30 días después de su participación en el estudio) . Los métodos aceptables de contracepción incluyen: abstinencia, anticonceptivo de esteroides (oral, transdérmico, implantado, o inyectado) en conjunción con un método de barrera, o dispositivo intrauterino (DIU) ; •El paciente, si es un hombre, es quirúrgicamente estéril, o si es capaz de producir progenie, actualmente está utilizando un método aprobado de control de natalidad, y está de acuerdo en continuar el uso de este método durante la duración del estudio (y durante 60 días después de tomar la última dosis de un compuesto de las Fórmulas (I)-(V) debido a los posibles efectos en la espermatogénesis) ; «El paciente debe estar dispuesto y ser capaz de cumplir con los procedimientos del estudio y restricciones y estar dispuesto a regresar a la clínica para la evaluación de seguimiento como se específica en este protocolo.
Criterios de Exclusión: · El paciente ha recibido tratamiento con tratamientos de psoriasis sistémica (específicamente, retinoides, metotrexato, ciclosporina A, etanercept, efalizumab, otros agentes biológicos u otros inmunomoduladores) dentro de 4 semanas, o terapia a base de UV dentro de 2 semanas, o alefacept dentro de 6 semanas del 1er día de planeación del estudio de tratamiento; •El paciente ha recibido tratamiento con potentes inhibidores CYP3A4 que incluyen ciclosporina, clotrimazol, fluconazol, itraconazol, ketoconazol, voriconazol, eritromicina, claritromicina, y troleandomicina, inhibidores de la proteasa del virus de inmunodeficiencia humana (VIH) , o nefozodona dentro de 1 semana (7 días) del 1er día de planeación del tratamiento del estudio; •El paciente actualmente está recibiendo warfarina; •El paciente tiene hipersensibilidad a un compuesto de las Fórmulas (I)-(V) o cualquier componente de un compuesto de la Fórmula (I), (II) ó (III); • El paciente tiene uno o más de los siguientes valores de química en suero que se determinan en la visita de selección (visita 1) : •niveles de bilirrubina mayores 2 veces el límite superior de lo que es normal (ULN) ; •niveles ALT o AST mayores 2 veces el ULN; «niveles de creatinina en suero o más de de 2 mg/dL; •El paciente requiere actualmente tratamiento para VIH con inhibidores de proteasa; •El paciente está tomando medicación para un diagnóstico clínico de ulceración gastrointestinal o ha experimentado melena (excremento negro) o hematemesis en las 3 semanas previas ; •El paciente es una mujer que está embarazada o lactando; •El paciente ha recibido tratamiento con un fármaco de investigación dentro de las 4 semanas del 1er día de planeación del tratamiento de estudio.
Diseño de Estudio: Este estudio es exploratorio, no aleatorio, de etiqueta abierta, de aumento de dosis, de la eficacia, seguridad, y tolerabilidad de un compuesto de las Fórmulas (I)-(V) en pacientes con psoriasis de tipo placa, recalcitrante, severa.
Ensayo Clínico de Fase II de la Seguridad y Eficacia de los Compuestos de las Fórmulas (I)-(V) para la Profilaxis de Rechazo Agudo después de Trasplante Renal El tratamiento inmunosupresor estándar después de un trasplante renal es una combinación de tacrolimús, micofenolato-mofetilo, y prednisolona . Con este régimen la incidencia de rechazo aguado dentro de los primeros seis meses después del trasplante pueden descender aproximadamente al 20%. El reto principal en la actualidad continúa siendo mejorar resultados a largo plazo previniendo la nefropatía de aloinjerto crónica (CAN) . Puesto que el rechazo agudo es un fuerte indicador de CAN, una disminución adicional en la incidencia de rechazo agudo puede mejorar la supervivencia del injerto a largo plazo. El propósito de este ensayo clínico de fase II es investigar la efectividad y seguridad de un compuesto de las Fórmulas (I) - (V) para la profilaxis de rechazo agudo después de un trasplante renal.
Pacientes : Los sujetos elegibles serán hombres y mujeres con edades de 18 y mayores Criterios : Criterios de Inclusión: •Receptores de trasplante renal; •Consentimiento informado aprobado IRB en presencia de testigos, firmado y fechado; Criterios de Exclusión: • Embarazo ; •Donante viviente, que es de HLA idénticos; •Síndrome urémico hemolítico como padecimiento original de los ríñones; • Glomeruloesclerosis segmentaria focal que ha sido recurrente en un injerto previo; •Más de dos injertos fallidos previamente y/o PRA > 85%; •Diabetes melitosa que actualmente no se trata con insulina ; • Conteo total de glóbulos blancos < 3,000/mm3 ó conteo de plaquetas < 75,00/mm3; •Infección activa con hepatitis B, hepatitis C, o HIV; •Historial de tuberculosis.
Diseño del Estudio: Este es un estudio de intervención controlada con placebo, doble ciego, aleatorio, sobre la eficacia y seguridad del uso profiláctico de un compuesto de las Fórmulas (I) - (V) . Un grupo recibirá una dosis individual de un compuesto de las Fórmulas (I) - (V) intravenosamente en el momento del trasplante, y otro grupo recibe una infusión placebo .
Resultados Primarios: •Determinar la incidencia y severidad de rechazo agudo confirmado con biopsia dentro de los primeros seis meses después del trasplante Resultados Secundarios: • Función renal que se estima por la depuración de creatinina endógena en 6 meses •Aparición de nefropatía crónica por aloinjerto en 6 meses • Incidencia acumulativa de infecciones y malignidades en 6 meses • Costos médicos durante los primeros 6 meses después del trasplante •Supervivencia del paciente e injerto Ensayo Clínico de Fase II de la Seguridad y Tolerabilidad de un compuesto de las Fórmulas (I) - (V) en Pacientes con Colitis Ulcerativa Activa (UC) El propósito de este ensayo de fase II es investigar la seguridad, tolerabilidad de un régimen del compuesto de la Fórmula (I) - (V) en pacientes con colitis ulcerativa activa.
Pacientes : Los sujetos, elegibles serán hombres y mujeres con edad de 18 y mayores Criterios : Criterios de Inclusión: · UC activa en terapia con 5-ASA y también tratados con 6-MP y/o corticosteroides o que ha sido tratados previamente con AZA, 6-MP o corticosteroides y que podrían no tolerar los mismos ; • Puntuación Mayo de 6 a 10 puntos con padecimiento moderado a severo en endoscopia (puntuación Mayo de al menos 2) realizada = 14 días de la administración del fármaco de estudio ; •Los sujetos en las siguientes medicaciones deben enlistarse en el estudio si las medicaciones están de acuerdo con los siguientes programas previos a la administración del fármaco de estudio y si no se anticipan cambios durante el estudio ; oprednisolona = 20 mg diariamente (o equivalente) (la dosis debe ser estable durante al menos 2. semanas antes de la administración del fármaco de estudio) ; o 5 -ASA (la dosis debe ser estable durante al menos 4 semanas antes de la administración del fármaco de estudio) ; oAZA o 6-MP (la dosis debe ser estable durante al menos 3 meses antes de la administración del fármaco de estudio) ; oEsteroides rectales o 5-ASA (debe ser estable durante al menos 4 semanas antes del fármaco de estudio) ; •Los sujetos que utilizan medicaciones rectales deben tener un padecimiento visible en la sigmoidoscopia en 20 era; •Los valores de laboratorio para la selección deben cumplir ciertos criterios; oLas mujeres deben ser post-menopáusicas (> 12 meses sin menstruo) o quirúrgicamente estériles (por ejemplo por histerectomía y/o amputación de ovarios bilateral) o deben estar utilizando anticoncepción efectiva (por ejemplo anticonceptivos orales, dispositivo intrauterino (DIU) , método de doble barrera de condón y espermicida) durante al menos 4 semanas antes de la administración del fármaco de estudio y estar de acuerdo en continuar la anticoncepción durante la duración de su participación en el estudio; y oLos sujetos masculinos sexualmente activos deben o utilizar un método de barrera de anticoncepción durante la duración del estudio.
Criterios de Exclusión: •Terapia anti-TNF dentro de las 8 semanas antes de la administración del fármaco de estudio; • Cualquier terapia experimental más terapia de = 4 semanas antes de la administración del fármaco de estudio; •Tratamiento previo con cualquier anticuerpo monoclonal o proteínas de fusión a base de inmunoglobulina = 8 semanas antes del tratamiento de estudio; •Presencia de síndrome de Cushing; «Megacolon tóxico o padecimiento fulminante susceptible a requerir colectomía o extirpación del intestino grueso; •Contraindicación a colonoscopia o sigmoidoscopia; • Inmunodeficienci'a primaria o secundaria; •Padecimiento autoinmune además de UC, con las excepciones de síndrome de Sjogren o hipotiroidismo; •Historial de malignidad, excluyendo células básales o escamosas adecuadamente tratadas y curadas de la piel, o carcinoma cervical in situ; •Padecimiento psiquiátrico mayor (loa sujetos con depresión estable que reciban manejo apropiado serán aprobados en el estudio) ; •Evidencia de infección aguda o crónica que se evidencia por: •cultivo de heces positivo a patógenos y/o toxina Clostridium difficile; •hallazgos en una Radiografía de pecho en pantalla tales como infiltrado ( s ) pulmonar (es) o adenopatía; •tratamiento actual para infección por tuberculosis, evidencia clínica o radiológica de TB activa, o para sujetos en Norteamérica, un PPD positivo sin profilaxis previa; •Herpes zoster = 3 meses antes de la administración del fármaco de estudio; •padecimiento infeccioso activo que requiere antibióticos i.v. dentro de las 4 semanas previas al tratamiento de estudio o antibióticos orales en el momento del alistamiento; •VIH o SIDA; •pruebas positivas de VHB, o VHC que indiquen infección activa o crónica; • Padecimiento cardiaco clínicamente significativo que requiere mediación, angina inestable, del miocardio dentro de 6 meses, o insuficiencia cardiaca congestiva; •Arritmia que requiere terapia activa, con la excepción de anormalidades de conducción clínicamente insignificantes o menores ; •Historial de padecimientos cerebro-vasculares que requieren medicación/tratamiento; •Terapia de anti-coagulación o una alteración hemorrágica conocida; • Padecimiento de ataques epilépticos que requieren terapia activa; •Abuso conocido de drogas o alcohol; •Embarazo o lactancia; • Cualquier condición médica subyacente que en la opinión del Investigador Principal vuelvan al fármaco de estudio peligroso para el sujeto o que pudiera opacar la interpretación de eficacia o seguridad del tratamiento; o · Incapacidad o indisposición de regresar a las visitas de Seguimiento y cumplir con el protocolo de estudio.
Medidas de Resultados Primarios: •Cambio en la puntuación Mayo el Día 57 en comparación con la Selección Medidas de Resultados Secundarios: • índice de remisión Diseño del Estudio: Este es un estudio de dosis múltiple, aleatorio, controlado con placebo, doble ciego, de fase II, de un compuesto de las Fórmulas (I) - (V) en sujetos con UC (CU) que experimentan erupciones. Todos los sujetos tendrán un padecimiento activo al mismo tiempo que estarán en un medicación que contenga 5 -ASA y están ya sea en dosis estables de corticosteroides y/o azatioprina o 6-mercaptopurina, o que previamente han estado en estas medicaciones aunque podrían no tolerar las mismas. La erupción se define como una puntuación Mayo de 6 a 10 con actividad de padecimiento moderada a severa en endoscopia (sub-puntuación endoscópica Mayo de al menos 2) dentro de las 2 semanas que reciben la administración del fármaco de estudio. Las dosis de medicaciones concomitantes permitidas (compuestos que contengan corticosteroides , azatioprina (AZA) , 6 -mercaptopurina (6-MP) , y 5-aminosalicilatos (5 -ASA) ) deberán permanecer constantes durante el transcurso del estudio. Los sujetos se escogerán al azar para recibir el placebo o un compuesto de las Fórmulas (I) - (V) intravenosamente en los Días 1, 15, 29, y 43. Todos los sujetos se observarán en la clínica a intervalos regulares hasta el Día 85 por seguridad, eficacia, evaluaciones farmacocinéticas y/o farmacodinámicas. Todos los sujetos se contactarán 70 días después de la última dosis del fármaco de estudio. La evaluación de seguridad se determinará mediante mediciones de los signos vitales, pruebas de laboratorio clínico, exámenes físicos, evaluaciones de inmunogenicidad, rayos x del pecho, electrocardiogramas, y la incidencia y severidad de eventos adversos emergentes en el tratamiento. La evaluación clínica primaria de actividad se determinará con el cambio en la puntuación Mayo en el Día 57 en comparación con la Selección. Los puntos finales secundarios incluyen la determinación del índice de remisión mediante la puntuación mayo en el Día 57, la evaluación de cicatrización mucosa y cambio de la línea base en la puntuación IBDQ.
Ensayo Clínico de Fase II de la Seguridad y Eficacia de los Compuestos de las Fórmulas (I)-(V) en Pacientes con Esclerosis Múltiple El propósito de este ensayo de fase II es investigar la seguridad, eficacia y tolerabilidad de un compuesto de las Fórmulas (I) - (V) en pacientes con Esclerosis Múltiple Reincidente-Remitente .
Pacientes : Los sujetos elegibles serán hombres y mujeres entre las edades de 18 y 65.
Criterios : Criterios de Inclusión: •Tener un diagnóstico definitivo de Esclerosis Múltiple Reincidente-Remitente •Tener un historial de al menos 1 de los siguientes: a. Un mínimo de 2 recaídas de MS dentro de los 2 años previos pero no estar dentro del período de 1 mes previo a la selección, b. Una recaída de MS dentro de los 6 meses previos pero no estar dentro del período de 1 mes previo a la selección Criterios de Exclusión: •Tener un padecimiento del SNC (por ejemplo, linfoma del SNC, lupus eritematoso sistémico) •Tener implicación bulbar significativa de MS u otros déficits neurológicos •Tener una ulcera por decúbito o escaras •Haber recibido terapias inmunomoduladoras dentro de los 3 meses de la selección Medidas de Resultados Primarios: •El número acumulativo de lesiones recientes con peso TI que mejoran con Gd en MRIs (Exploraciones de Resonancia Magnética) craneales dentro de la semana 23.
Medidas de Resultados Secundarios: •El número total de recaídas de MS hasta la semana 23; cambio de la línea base en la puntuación de la Escala de Estatus de Discapacidad Expandida (EDSS) en la semana 23 Diseño del Estudio: Este es un estudio de dosis variable, aleatorio, controlado con placebo, doble-ciego, de fase II, de inyecciones subcutáneas múltiples de un compuesto de las Fórmulas (I)-(V) en pacientes con esclerosis múltiple reincidente-remitente. Los pacientes recibirán inyecciones subcutáneas de un compuesto de las Fórmulas (I) - (V) o placebo en las semanas 0, 1, 2, 3, 7, 11, 15, y 19 ó 100.
Composiciones Farmacéuticas Composición Parenteral Para preparar una composición farmacéutica parenteral adecuada para su administración por inyección, 100 mg de un compuesto de las Fórmulas (I) - (V) se disuelve en DMSO y luego se mezcla con 10 mL de solución salina estéril al 0.9%. La mezcla se incorpora en una forma de dosificación unitaria adecuada para su administración mediante inyección.
En otra modalidad, los siguientes ingredientes se mezclan para formar una formulación inyectable: Ingrediente Cantidad Compuesto de las Fórmulas (I)-(V) 1.2 g solución amortiguadora de acetato de sodio (0.4 M) 2.0 mL HC1 (1 N) ó NaOH (l M) q.s. a pH adecuado agua (destilada, estéril) q.s. a 20 mL Todos los ingredientes anteriores, excepto el agua, se combinan y agitan y si es necesario, con ligero calentamiento si es necesario. Luego se agrega una cantidad suficiente de agua .
Composición Oral Para preparar una composición farmacéutica para administración oral, se mezclan 100 mg de un compuesto de las Fórmulas (I) - (V) con 750 mg de almidón. La mezcla se incorpora en una dosis unitaria oral, tal como una cápsula de gelatina dura, la cual es adecuada para administración oral.
En otra modalidad, los siguientes ingredientes se mezclan a fondo y se comprimen en tabletas con una sola marca .
Ingrediente Cantidad por tableta, mg compuesto de las Fórmulas (I)-(V) 200 Almidón de maíz 50 Croscarmelosa de sodio 25 Lactosa 120 estearato de magnesio 5 En aún otra modalidad, los siguientes ingredientes se mezclan a fondo y se cargan en una cápsula de gelatina de cubierta dura.
Ingrediente Cantidad por tableta, mg compuesto de las Fórmulas (l)-(V) 200 lactosa, desecada con atomización 148 estearato de magnesio 2 En aún otra modalidad, los siguientes ingredientes se mezclan para formar una solución/ suspensión para administración oral : Ingrediente Cantidad Compuesto de las Fórmulas (I)-(V) i g Carbonato de Sodio Anhidro o. i g Etanol (contenido alcohólico 200), USP 10 mL Agua Purificada, USP 90 mL Aspartame 0.003 g Composición Sublingual (Gragea Dura) Para preparar una composición farmacéutica para administración bucal, tal como gragea dura, mezclar 100 mg de un compuesto de las Fórmulas (I) - (V) con 420 mg de azúcar en polvo mezclada con 1.6 mL de jarabe de maíz claro, 2.4 mL de agua destilada, y 0.42 mL de extracto de menta. La mezcla se mezcla suavemente y se vierte en un molde para formar una gragea adecuada para administración bucal.
Composición para Inhalación Para preparar una composición farmacéutica para administración por inhalación, 20 mg de un compuesto de las Fórmulas (I)-(V) se mezclan con 50 mg de ácido cítrico anhidro y 100 mL de solución de cloruro de sodio al 0.9%. La mezcla se incorpora en una unidad de administración para inhalación, tal como un nebulizador, el cual es adecuado para administración por inhalación.
Composición para Gel Rectal Para preparar una composición farmacéutica para administración rectal, 100 mg de un compuesto de las Fórmulas (I) - (V) se mezclan con 2.5 g de metilcelulosa (1500 mPa) , 100 mg de metilparabeno, 5 g de glicerina y 100 mL de agua purificada. La mezcla de gel resultante se incorpora entonces en unidades de suministro rectal, tal como jeringas, las cuales son adecuadas par administración rectal.
Un supositorio de peso total de 2.5 g se prepara mezclando un compuesto de las Fórmulas (I) - (V) con Witepsol™ H-15 ( triglicéridos de ácido graso vegetal, saturado; Riches-Nelson, Inc., Nueva York), y tiene la siguiente composición: Ingrediente Cantidad por supositorio, mg compuesto de las Fórmulas (l)-(V) 500 Witepsol® H- 15 resto Composición para Gel Tópico Para preparar una composición farmacéutica para gel tópico, se mezclan 100 mg de un compuesto de las Fórmulas (I) - (V) con 1.75 g de hidroxipropil-celulosa, 10 mL de propilenglicol , 10 mL de isopropil-miristato y 100 mL de alcohol purificado USP. La mezcla de gel resultante se incorpora entonces en contenedores, tales como tubos, los cuales son adecuados para administración tópica.
Composición para Solución Oftálmica Para preparar una composición de solución oftálmica, f rmacéutica, 100 mg de un compuesto de las Fórmulas (I) - (V) se mezclan con 0.9 g de NaCl en 100 mL de agua purificada y se filtra utilizando un filtro de 0.2 mieras. La solución isotónica resultante se incorpora entonces en unidades de administración oftálmica, tal como recipientes para colirio, los cuales son adecuados para administración oftálmica.
Los ejemplos y modalidades descritas en la presente son para propósitos ilustrativos solamente y en algunas modalidades, varias modificaciones o cambios se incluirán dentro del campo de acción de la descripción y alcance de las reivindicaciones anexadas.

Claims (68)

    NOVEDAD DE LA INVENCIÓN Habiendo descrito la presente invención, se considera como una novedad y, por lo tanto, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes: REIVINDICACIONES compuesto de la Fórmula Fórmula (I) ; caracterizado porque:
  1. A es fenilo o benzofurano, en donde fenilo y benzofurano se sustituyen cada uno opcionalmente con al menos un R; o A es fenilo sustituido con dos grupos R en átomos de carbono adyacentes en donde los dos grupos R y los átomos de carbono a los cuales los mismos están unidos forman un cicloalquilo C4-C8 ó heterocicloalquilo C3-C8; R se selecciona de F, Cl, Br, I, -CN, -N02, -CF3, -OH, -OR3, -OCF3, -C=CH, -C=CR3, alquilenalquino C1-C6, alquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C6, heteroalquilo C1-C6, haloalquilo C1-C6, tetrazolilo, heterocicloalquilo C2-C6, fenilo, NHS(=0)2R3, S (=0) 2N(R4) 2, -C(=0)CF3, -C (=0) NHS (=0) 2R3 , S ( =0) 2NHC ( =0) R4 , N(R4)2, - (R4 ) C ( =0) R3 , -C02R4, -C(=0)R3, - 0C (=0) R3 , -C(=0)N(R4)2, -SR3, -S(=0)R3, y -S(=0)2R3; J es un enlace, NHS (=0)2, S(=0)2N(R4) , -C(=0) , -C(=0)NHS (=0) 2, -S (=0) 2NHC(=0) , N(R4), -N(R4)C(=0) , -C02, -C(=0), -0C(=0), -C(=0)N(R4), -S, -S(=0), y -S(=0)2, alquileno C1-C6, alquenileno C2-C6, alquinileno C2-C6, heteroalquileno C1-C6, cicloalquileno C3-C6, heterocicloalquileno C2-C6, en donde alquileno C1-C6, alquenileno C2-C6, alquinileno C2-C6, heteroalquileno C1-C6, cicloalquileno C3-C6, y heterocicloalquileno C2-C6 es opcionalmente sustituido con al menos un R; Rl es C02R2, un bioisóstero de ácido carboxílico, en donde R2 es hidrógeno, alquilo C1-C6, cicloalquilo C1-C6, haloalquilo C1-C6, fenilo o bencilo; Z es 0, S, NH, N-CN, ó CHN02; X es W-L-fenilo, W-L-B, B, W-L-D, ó D en donde fenilo, B, y D se sustituyen cada uno opcionalmente con al menos un R; es NR2 , O ó un enlace; L es metileno, etileno sustituido con al menos un R, alquileno C3-C6, alquenileno C2-C6, alquinileno C2-C6, heteroalquileno C1-C6, cicloalquileno C3-C6, o heterocicloalquileno C2-C6, en donde el metileno, alquileno C3-C6, alquenileno C2-C6, alquinileno C2-C6, heteroalquileno C1-C6, cicloalquileno C3-C6, y heterocicloalquileno C2-C6 se sustituye opcionalmente con al menos un R; B se selecciona de furan, tiofeno, pirrol, piridina, oxazo.l, tiazol, imidazol, tiadiazol, isoxazol, isotiazol, pirazol, piridazina, pirimidina, pirazina, oxadiazol, tiadiazol, triazol, indol, benzoxazol, benzotiazol, bencimidazol , benzoxadiazol , benzotiadiazol , benzotriazol , pirazolopiridina, pirrolopirimidina, indolizina, purina, imidazopiridina, pirrolopiridina, furopiridina, tienopiridina, furopirrol, furofurano, tienofurano, 1,4-dihidropirrolopirrol , 1 tienopirrol, tienotiofeno, quinolina, isoquinolina, furopirazol, tienopirazol , y 1,6-dihidropirrolopirazol ; D es cicloalquilo C3-C10 ó heteroalquilo C2-C9; cada R3 se selecciona independientemente de alquilo Cl-C6, haloalquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C8, fenilo, y bencilo; cada R4 se selecciona independientemente de hidrógeno, alquilo C1-C6, haloalquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C8, fenilo, y bencilo; o una sal, solvato, N-óxido o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.
  2. 2. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque Rl es C02R2.
  3. 3. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque R2 es hidrógeno.
  4. 4. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque R4 es hidrógeno.
  5. 5. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque Z es O.
  6. 6. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque J es un enlace.
  7. 7. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque A es fenilo.
  8. 8. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque el fenilo se sustituye con al menos un R.
  9. 9. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque el fenilo se sustituye con al menos un R.
  10. 10. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque el fenilo se sustituye con dos R.
  11. 11. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones .1 a 8 , caracterizado porque el fenilo se sustituye con tres R.
  12. 12. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, caracterizado porque R se selecciona de F, Cl, Br, I, o alquilo de C1-C6.
  13. 13. El compuesto de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque el alquilo de C1-C6 es metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, O tere-butilo .
  14. 14. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque A es benzofurano.
  15. 15. El compuesto de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque el benzofurano se sustituye con al menos un R.
  16. 16. El compuesto de conformidad con la reivindicación 14 ó 15, caracterizado porque el benzofurano se sustituye con un R.
  17. 17. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 14 a 16, caracterizado porque R se selecciona de F, Cl, Br, I, OH, CN, alquilo de C1-C6, y OR3.
  18. 18. El compuesto de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque R3 es alquilo de C1-C6.
  19. 19. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 14 a 18, caracterizado porque el alquilo de C1-C6 es metilo.
  20. 20. El compuesto de conformidad con cualquiera, de las reivindicaciones 1 a 19, caracterizado porque X es B.
  21. 21. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 20, caracterizado porque B se selecciona de benzoxazol, benzotiazol, bencimidazol , pirazolopiridina, imidazopiridina, benzoxadiazol , benzotiadiazol , y benzotriazol . .
  22. 22. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21, caracterizado porque B es benzoxazol .
  23. 23. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21, caracterizado porque B es benzotiazol .
  24. 24. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21, caracterizado porque B es pirazolopiridina.
  25. 25. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21, caracterizado porque B es benzotiadiazol .
  26. 26. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20 a 25, caracterizado porque B se sustituye con una R .
  27. 27. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20 a 26, caracterizado porque R se selecciona de F, Cl, Br, I, -CN, -N02, -CF3, -OH, -OR3, -0CF3, -C=CH, -C=CR3, alquilenalquino C1-C6, alquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C6, heteroalquilo C1-C6, haloalquilo Cl- C6, tetrazolilo, heterocicloalquilo C2-C6, y fenilo.
  28. 28. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20 a 27, caracterizado porque R se selecciona de F, Cl , Br, e I.
  29. 29. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, caracterizado porque X es D.
  30. 30. El compuesto de conformidad con la reivindicación 29, caracterizado porque D es cicloalquilo de C3-C8.
  31. 31. El compuesto de conformidad con la reivindicación 29, caracterizado porque D es heterocicloalquilo de C2-C8.
  32. 32. Un compuesto, caracterizado porque es seleccionado de: 20 ??? ??? o una sal, solvato, N-óxido o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.
  33. 33. Un compuesto, caracterizado porque es seleccionado d<=> : o una sal, solvato, N-óxido o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.
  34. 34. Un compuesto, caracterizado porque es seleccionado de: o una sal, solvato, N-óxido o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.
  35. 35. Un compuesto, caracterizado porque es seleccionado de: o una sal, solvato, N-óxido o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.
  36. 36. Un compuesto de la Fórmula (II) : Fórmula (II) ; caracterizado porque: A es fenilo sustituido con al menos tres sustituyentes o benzofurano opcionalmente sustituido con al menos un R, o A es fenilo sustituido con dos grupos R en átomos de carbono adyacentes en donde los dos grupos R y los átomos de carbono a los cuales los mismos están unidos forman un cicloalquilo C4-C8 ó heterocicloalquilo C3-C8; R se selecciona de F, Cl, Br, I, -CN, -N02, -CF3, -OH, -0R3, -0CF3, -C=CH, -C=CR3, alquilenalquino C1-C6, alquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C6, heteroalquilo C1-C6, haloalquilo C1-C6, tetrazolilo, heterocicloalquilo C2-C6, fenilo, -NHS(=0)2R3, S (=0) 2N(R4) 2, -C(=0)CF3, -C ( =0) HS ( =0) 2R3 , -S (=0) 2NHC(=0)R4, N(R4)2, -N (R4 ) C ( =0) R3 , -C02R4, -C(=0)R3, -0C(=0)R3, -C(=0)N(R4) 2, -SR3, -S(=0)R3, y -S(=0)2R3; J es un enlace, NHS (=0)2, S(=0)2N(R4), -C(=0), -C(-=0)NHS (=0) 2, -S ( =0) 2NHC (=0) , N(R4), -N(R4)C(=0), -C02, -C(=0), -0C(=0), -C(=0)N(R4), -S, -S(=0), y -S(=0)2, alquileno C1-C6, alquenileno C2-C6, alquinileno C2-C6, heteroalquileno C1-C6 o cicloalquileno C3-C6, en donde alquileno C1-C6, alquenileno C2-C6, alquinileno C2-C6, heteroalquileno C1-C6, y cicloalquileno C3-C6, es opcionalmente sustituido con al menos un R; Rl es C02R2, un bioisóstero de ácido carboxílico, en donde R2 es hidrógeno, alquilo C1-C6, cicloalquilo C1-C6, haloalquilo C1-C6, fenilo o bencilo; Z es O, S, NH, N-CN, ó CHN02; W es NR2, O ó un enlace; L es un enlace, alquileno C3-C6, alquenileno C2-C6, alquinileno C2-C6, heteroalquileno C1-C6, cicloalquileno C3-C6 , o heterocicloalquileno C2-C6, en donde el alquileno Cl-C6 , alquenileno C2-C6, alquinileno C2-C6, heteroalquileno Cl-C6 , cicloalquileno C3-C6, heterocicloalquileno C2-C6 se sustituye opcionalmente con al menos un R; Y es 0 ó S; n es un número entero de 0-5; cada R3 se selecciona independientemente de alquilo Cl-C6, haloalquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C8, fenilo, y bencilo; cada R4 se selecciona independientemente de hidrógeno, alquilo C1-C6, haloalquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C8, fenilo, y bencilo; o una sal, solvato, N-óxido o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.
  37. 37. El compuesto de conformidad con la reivindicación 36, caracterizado porque Rl es C02R2 y R2 es hidrógeno.
  38. 38. El compuesto de conformidad con las reivindicaciones 36 ó 37, caracterizado porque J es un enlace .
  39. 39. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 36-38, caracterizado porque R4 es hidrógeno.
  40. 40. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 36 a 39, caracterizado Z es O.
  41. 41. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 36 a 40, caracterizado porque A es fenilo. 5
  42. 42. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 36 a 41, caracterizado porque fenilo se sustituye con al menos tres R.
  43. 43. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 36 a 42, caracterizado porque cada R se 10 selecciona de F, Cl , Br, I alquilo C1-C6, OH, y OR3.
  44. 44. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 36 a 43, caracterizado porque R3 es metilo.
  45. 45. El compuesto de conformidad con cualquiera de las J reivindicaciones 36 a 44, caracterizado porque alquilo C1-C6 15 es metilo.
  46. 46. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 36 a 45, caracterizado porque W y Ll son cada uno independientemente un enlace .
  47. 47. El compuesto de conformidad con cualquiera de las 20 reivindicaciones 36 a 46, caracterizado porque Y es O.
  48. 48. El compuesto de conformidad con la reivindicación 47, caracterizado porque n es 0.
  49. 49. El compuesto de conformidad con la reivindicación 47, caracterizado porque R se selecciona de F, Cl , Br, I, CN, OH, OR3 , y N02.
  50. 50. El compuesto de conformidad con la reivindicación 49, caracterizado porque n es 1.
  51. 51. Un compuesto, caracterizado porque es seleccionado de : J65 o una sal, solvato, N-óxido o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.
  52. 52. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 51, y un diluyente farmacéuticamente aceptable, excipiente, portador o aglutinante.
  53. 53. Un método para modular la actividad del canal de calcio operado en almacenamiento (SOC) , caracterizado porque comprende poner en contacto el complejo de canal SOC, una porción del mismo, con un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 52, o una sal farmacéuticamente aceptable, o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.
  54. 54. Un método para modular la actividad del canal de calcio activado con liberación de calcio (CRAC) en un mamífero, caracterizado porque comprende administrar al mamífero un compuesto de cualquiera de los reivindicaciones 1 a 52, o una sal o profármaco farmacéuticamente aceptable, en donde el compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 52, modula la actividad CRAC en el mamífero .
  55. 55. Un método para inhibir la actividad de la entrada de calcio operado en almacenamiento (SOCE) de factor nuclear de células T activadas (NFAT) en un mamífero, caracterizado porque comprende administrar al mamífero un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 52, o una sal o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 52, inhibe la activación SOCE de NFAT en el mamífero.
  56. 56. Un método para disminuir la liberación de citoquina inhibiendo la activación SOCE de NFAT en un mamífero, caracterizado porque comprende administrar al mamífero un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 52 ó una sal o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 52, disminuye la liberación de citoquina en el mamífero.
  57. 57. Un método para tratar un padecimiento autoinmune, padecimiento o condición heteroinmune , o padecimiento inflamatorio en un mamífero, caracterizado porque comprende administrar al mamífero un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-52 ó sal o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.
  58. 58. El método de conformidad con la reivindicación 57, caracterizado porque comprende el padecimiento autoinmune es inflamación del colon, artritis reumatoide, miastenia gravis, esclerosis múltiple, síndrome de Sjogren, diabetes tipo I, lupus eritematoso, psoriasis, osteoartritis , escleroderma, y anemia hemolítica autoinmune .
  59. 59. El método de conformidad con la reivindicación 57, caracterizado porque el padecimiento o condición heteroinmune es padecimiento de inj erto-versus-huésped, rechazo de injerto, dermatitis atópica, conjuntivitis alérgica, rechazo de trasplante de órganos, trasplante alogénico o xenogénico, rinitis alérgica.
  60. 60. El método de conformidad con la reivindicación 57, caracterizado porque el padecimiento inflamatorio es uveítis, vasculitis, vaginitis, asma, padecimiento muscular inflamatorio, dermatitis, cistitis intersticial, dermatomiositis , colitis, padecimiento de Crohn, hepatitis, y hepatitis reincidente crónica.
  61. 61. Un método para tratar un padecimiento, trastorno o condición en un mamífero que podría beneficiarse de la inhibición de la actividad del canal de calcio operado en almacenamiento, caracterizado porque comprende administrar al mamífero un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 52, o una sal o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.
  62. 62. El método de conformidad con la reivindicación 61, caracterizado porque el padecimiento, trastorno o condición en el mamífero se selecciona de glomerulonefritis , padecimientos o trastornoes hepáticos, padecimientos o trastornoes renales, padecimiento pulmonar obstructivo, crónico, osteoporosis , eczema, fibrosis pulmonar, tiroiditis, fibrosis cística, y cirrosis biliar primaria.
  63. 63. El método de conformidad con la reivindicación 58, caracter zado porque el padecimiento, trastorno o condición es artritis reumatoide .
  64. 64. El método de conformidad con la reivindicación 58, caracterizado porque el padecimiento, trastorno, o condición es psoriasis.
  65. 65. El método de conformidad con la reivindicación 58, caracterizado porque el padecimiento, trastorno, o condición es inflamación del colon.
  66. 66. El método de conformidad con la reivindicación 59, caracterizado porque el padecimiento, trastorno o condición es rechazo de trasplante de órganos .
  67. 67. El método de conformidad con la reivindicación 58, caracterizado porque el padecimiento, trastorno o condición es esclerosis múltiple.
  68. 68. El uso de un compuesto en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 52, o una sal o profármaco farmacéuticamente aceptable, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un padecimiento, trastorno, o condición que podría beneficiarse de la inhibición de actividad de canal de calcio operado en almacenamiento .
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