BRPI0917719A2 - compostos que modulam cálcio intracelular - Google Patents

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Rogers Evan
Velicelebi Gonul
P Whitten Jeffrey
Cao Jianguo
Grey Jonathan
A Stauderman Kenneth
Pei Yazhong
Wang Zhijun
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Abstract

compostos que modulam o cálcio intracelular são aqui descritos compostos e composições farmacêuticas que contêm esses compostos, que modulam a atividade de canais de cálcio capacitivos (soc). também são aqui métodos de utilização desses moduladores do canal soc, isoladamente e em combinação com outros compostos, para o tratamento de doenças ou condições que se beneficiariam from inibição de atividade do canal soc.

Description

COMPOSTOS QUE MODULAM O CÁLCIO INTRACELULAR
REFERÊNCIA CRUZADA
Este pedido·' reivindica o beneficio dos Pedidos u.s.
Provisórios NCB de Série 81/158.710, depositado em 9 de 5 março de 2809; 61/158.702, depositado em 9 de março de
2009; 61/157.274, depositado em 4 de março de 2Ô0S: 61/143.739, depositado em 9 de janeiro de 2W9; 61/142»848, depositado em 6 de janeiro de 2009; e 51/092>364, depositado em 27 de agosto de 2008, todos aqui incorporados 10 por referência em sua totalidade.
CAMPO DA IWWÇÃÔ
Sâo aqui descxdtos compostos, composições farmacêuticas e. medicamentos que incluem esses compostos, e métodos de utilização desses compostos para modular 15 atividade de canal de cálcio capacitive· (store operated) (SOC) .
FUNDAMENTOS DA XWWÇÁO cálcio tem um papel vital na função e sobrevlda da célula. Por exemplo, o cálcio ê um elemento crucial na 20 transdução de sinais nas células e dentro delas. As respostas celulares aos fatores de crescimento, neurotransmissores, hormônios e várias outras moléculas sinalizadõras são iniciadas por meio de processos cálciodependentes.
Praticamente todos os tipos de célula dependem, de alguma forma,· da geração de sinais citoplasmaticos de Ca** para regular a função da célula, ou para desenoadear respostas específicas. Sinais çitosólicos de Ca4*' controlam uma ampla variedade de funções celulares que variam de .30 respostas de curto prazo como, por exemplo, contração e /3 5 δ séereção, até á regulação de longo praz© do crescimento e proliferação -CéluXar. Normalmente, esses sinais envolvem alguma combinação de liberação de Ca?* de estoques intracèlulares, por exemplo, o retículo endoplasmãtic© 5 (ER) , e influxo dé Ca.*2 através da membrana plasmática. Em um exemplo, a ativação da célula começa com a ligação de um agonista. a um receptor de superfície da membrana, que é acoplado ã fosfolipase C (PLC) por meio de um mecanismo de proteína G. a ativação de PLC leva à produção de inositol 10 1,4,5- trifosfato (3¾) que, por sua vez, ativa o receptor de IP.J, cansando a liberação de Ca4* do ER. A queda do Ca2* do EH então sinaliza para ativar canais de cálcio capacítivos (SOC) da membrana plasmática.
O influxo capacitivo de cálcio (SOC) é um processo na 15 fisiologia celular que controla funções tão diversas como, por exemplo, sem limitação, reabastecimento de estoques intracelulares de Ca2* (Putney e cols. Cell, 75, 199-201, 1993), ativação d® atividade enzimática (Fagan e cole. , <7. Biol. Chem, 275; 25.530-20.537, 2000), transcrição gêníca 20 (Lewis, Aniíu.. Rev. Xmmunol» 19: 497-521, 2001), proliferação celular (Nunez e cols,, Rhyaiol- 571, 1, 5775, 2006) e liberação de citoeínas (Winslow e cols., Curr. Opin. Xmmunoi. 15: 299-307, 2003). Em algumas células não excitáveis, por exemplo, células sanguíneas, células 25 imunes, células hematupoiáticas, linfõcito T e mastócitos, o influxo EÔC ©corre por meió de canais de cálcio ativados por liberação de cálcio (CRAC) , um tipo de canal SOC.
O mecanismo d© influxo de cálcio foi denominado entrada capacitiva de cálcio (SOCE). Proteínas da molécula 30 de interação estromal (STIM) são um componente essencial da
3/356 ftínção do .canal SOC, servindo como os- sensores para detecção da depleção de cálcio de estoques intracelulares e para ativação de canais SOC,
SUMÁRIO- DA XWENÇÃO
São aqui descritos compostos de Fórmula (I) , (II) , (III), (IV) ou (V) (doravante compostos de Formula (l)~ (Vj/f), composições que incluem esses compostos e métodos de uso destes, para modulação do cálcio intracelular.. Em um aspecto, compostos de Fórmula (I)~(V) modulam o cálcio 10 intracelular por inibição da atividade do canal de cálcio capacitive. Em um aspecto, compostos de Fórmula (X)-(V) modulam o cálcio intracelular por prevenção da atividade de complexos ativados de canal de cálcio capacitivo. Em um aspecto, compostos de Fórmula (I)-(V) inibem a ativação de 15 canais capacitivps. Em um aspecto, compostos de Fórmula (I)-(V) inibem a ativação de canais de cálcio ativados pela liberação de cálcio. Em um aspecto, compostos dé Fórmula (I)- (V) modulam uma atividade de, modulam uma interação de, ou modulam o nível de, ou distribuição de, ou se ligam a, ou interagem com pelo menos uma proteína do complexodo.
canal 8OC, Em um aspecto, compostos de Fórmula (I)-(V-) modulam uma atividade de, modulam uma interação de,ou modulam o nível de, ou distribuição de, ou se ligam a,ou interagem com pelo menos uma proteína do complexo do canax
CRAC.
Em um aspecto, os compostos aqui descritos são inibidores- seletivos da atividade do canal CRACL
Em outro aspecto, é aqui descrito um composto de
Fórmula (I)
4/356
Fórmula (I) em que:
A è fenil -eu benzofurano, em qúé fénil e benanfurano são> cada um, opcionalmente substituídos com pelo menos um R; ou A é fenxl substituído com dois grupos R em átomos de 10 carbono adjacentes, em que os dois grupos R e os átomos de carbono ao qual estão anexados formam um Cd-Cs cicloalquil ou Cj-Ca heterbcicloalquil;
R é selecionado de F, Cl, Br, X, -CN, -NOs, -CP3, -OH, -0¾, -OCF3, -C^CH, -0=¾, C3~Cg alquilenoalquino, Cx~C«
1.5 alqu.il, C3-Cs cíçlpalquil, Οχ-Ο^. heteroalguil, Οχ.-Ο§ haloalquil, tetrazolil, CS*C6 heterocicloalqui.1, fen.il, -
SbO)2N(Rd2, -C(=O}CF3, -CÍ^SHSMhRi,
S(=O)2NHC(=O}R4< «Wk:, -N(RjcUo)RSí -COgRu -C(.=O)R3, “ 0C(~O)R3,: -0(=0)^¾¾ -5¾, -5(=0}¾ e -S(*Q)3R3;
20- J e uma ligação, NHS(=Oh, S (=O)3MFU, -0(=0/, c (=0) SW («0) 2, - S (=0) 2KHC (»0 b ,N( Rd ; “ N ΐ R) C (~ O) , -C02:,. C(=0) , ~OC (=G) , -C ( =0)11(¾} , -S , -E(=0) e “S (=O)2í CX~C«. alquileno, Cs-Cd alquenileno, C2-C6 alquinileno, Cx-Ce.
heteroalquíleHG, C3-A cicloalquileno ou Cx-C§ heterocicloalquileno, em que Ci-Cg alquileno, C3-C,;
alqueniXeno, C3*C§ alguinilena, C3~C« heteroalquileno, C3-C<;. cícloalquilenc e C3*CS são opcionalments substituídos com pelo menos um R;
Ri é CO2R2 ou um bioisôstero de ácido carbdxílico, em que R2 é hidrogênio, Ci-C6 alquil, Cx-Cs cicloalquil,
5/356 haloalquil, fenil ou benzil;
-Z é 0, S, W, N-CN QU CRNCd
X é W-dfenil, W-L-B, Bf W-L-D ou D, em que fenil, B, e D são, cada um, opcionalmente substituídos com pelo menos 5 um R;
W é NR2í O ou uma ligação;
L é metíleno, et1leno substituído com pelo menos um R, Cj-Q alquileno, QrCs alquenileno., CdGs alquinilena, Ci-Cg heteroalquileno., CdCg cialcalquileno ou C3-Cg 10 heterotóieloalquiléno, em que metíleno, C:,-C3 alquileno, Cd e<; alquenileno, C2-Cg alquiniléno, Cdd heteroalquileno-, Cd Cç cicloalquiléno e Cs-C& são opcionalmente- substituídos com pelo manas um R;
B é selecionado dê furano,, tiofeno, pirrol., piridina, oxazole tiazol, imidazol, fiadiazol, isoxazol, isotiazol, pirazol, pirídazina, pirimidim, pirazina, oxadiazol, tiadiazol, triazol, indol, benzoxazol, benzotiazol, benzimidazol, benzoxad.iaz.oX f benzotiadiazol, benzotriazol, pirazolop.iridina, imidazopiridina, pirrolopiridina, 2G pirrolopirimidina, indoüzina, purina, furopiridina, tien.apiridi.na, furopirrol, furofurano, ti.enofuranp, 1,4di í drapirrolopirrol, tienopirrol ,· tienot iõf eno, quinolina, isoquinólina, furopirazol, tienopirazol e 1,5d.i idropirrulopirazol;
2.S D é Cv'Cj.s aicXoalquil ou C2~C9 heterocicloalquil;
cada R3 é selecionado independentemente de Cx-Cg alquil, Cx-Cg halaalquil, C3-Cs cicloalquiX-, feníl e benzil;·· cada R4 ê .selecionado independentemente de hidrogênio, Ci~C« alquil, Cs-C« halôalquil, CdCg eicloalquil, -feni.1 e 30 benzil; ou um sal, solvato, N-óxido ou pró-fârmaco
S/355 fãx^rnaceuticamente aceitável deste <
Para qualquer uma e todas as modalidades, os substituintes são selecionados entre um subconjunto das alternativas listadas. Por exemplo, em algumas modalidades,
S B.2 é hidrogênio ou Ci-Cs alquil . Em outras modalidades, Rj. ê H, metil, etil, n-propil, isopropil, n-butil, sec-butil, isobutil, n-péhtil òu hexil. Ainda em outras modalidades, Rj ê H, metil ou etil, Em algumas modalidades, fq é H. Em uma modalidade, a porção carboxxl do núcleo de tiofeno é 10 substituída com um bíoísósterç de ácido carboxílicó.
Uma modalidade consiste em um composto de Fórmula (I) em que H.x ê ,. Outra modalidade consiste em um composto de Fórmula (X) em que Rs é hidrogênio . Ainda outra modalidade consiste em um composto de Fórmula (X) em que íq 15 é hidrogênio. Uma modalidade adicional consista em um composto de Fórmula (X) em que E é Cu Uma modalidade consiste: em. um: composto de Fórmula (I) , em que: J é uma ligação. Outra modalidade consiste em um composto de Fórmula (X) , em que A é fenil. Uma modalidade consiste em 20 um composto de Fórmula (X) , em que fenil Ó substituído com pelo menos um R. Ainda -outra modalidade adicional consiste em um composto de Fórmula (I) , em que fenil é substituído com um R. Uma modalidade consiste em um composto de Fórmula (X), em que fenil. é substituído com dois R. Outra 25 modalidade consiste em um composto de Fórmula (X) , em que fenil ê substituído com três R. Ainda outra modalidade consiste em um composto de Fórmula (I), em que R é selecionado de F, õl. Br, I ou Cx-C« alquil. Uma modalidade adicional consiste em um composto de Fórmula (I) , em que 30 Cj-'Cs alquil é metil, etil, n-propíl, isoprop.il, n-butil,
7/35<
is’obutil ou tore-but11. Ainda outra modalidade adicional consiste eW um composto de Fórmula (I) , em que A é benzofurano, Uma modalidade consiste em um composto de Fórmula (I) , em que benzofurano é substituído com pelo .5 menos um R. Oütrá modalidada consiste em um composto de
Formula (I) , em que benzofuráho é substituído com um, R-<
Ainda outra modalidade consiste em um cbmposto de Fórmula (I) , em que R ê selecionado de F, Cl, Br, X, OH, CNf Gj-Cç alquil e ORj. Uma modalidade adicional consiste em um 1Õ composto de Fórmula (I) « em que R3 é C;-C§ alquil. Ainda outra modalidade adicional consiste em um composta de Fórmula (X), em que Ç1-C5 alquil é metil. Uma modalidade consiste em um composto de Fórmula (X) , em que X e B. Uma modalidade consiste em um composto de Fórmula (X), em que B 15 é selecionado de benzoxazol., benzotiazol, benzimidazol, pirazolopiridina, imídazopiridína, benzoxadiazol, benzotiadiazol e benzotriazol. Uma modalidade consiste em um composto de Formula (X), em que B é benzoxazol. Outra modalidade consiste em um composto de Fórmula (i), em que B .20 é benzotiazçl. Ainda outra modalidade consiste em um composto de Fórmula (X) , em que B ê pirazolopiridina - Uma modalidade adicional consiste em um composto de Formula (I), em que B é feensotladiazol. Ainda outra modalidade adicional consiste em um composto de Fórmula (l)> em que B
25 é substituído com um R. Uma i modalidade consiste em um
composto de Fórmüla (X), em q ae R é selecionado de F, Cl,
Br, X, -CF, ~-.NO2# ~0?3< -0H, -0R3, -OCRs, CX“Cfi
alquilenoalqu ino( Ci -Cs alqwi .1, Ca-Cs eicloalquil, .Ci-'C«
heteroalqu.il, Ct-Gç haloa Iquil, tetrásolil, Cs-Q
30 heterocicloalquil e fenil. W sa modalidade consiste em um
8/356 composto de Fórmula (I) eta que R é selecionado de F, Cl, Sr e I > Gutra modalidade consiste em um. composto de Formula (I) , em que X é D. Ainda outra modalidade consiste em um composto de Fórmula (I) , em que D ê Cj-C8 cicloalquil. Uma modalidade adicional consiste em um composto de Fórmula (X) ,· em que D é C2~CS heterócióloalquíl.
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ou um sal, solvato, N-óxido ou pró-fármaco farmaceuticamente aceitável deste.
Outro aspecto consiste em um composto selecionado de*
11/356
ou uj» sal,. solvato, s-oxid® ou prâ-fármaeo farlftaceutlcamente aceitável deste.
Ainda outxo aspecto adlMonal consiste ésa. um compost© seleciónado dex
12/356 ou um sal, solvato,. N-óxido ou pró-fãrmaco tarmaceuticamente aceitável deste.
Um aspecto consiste em urn composto selecionado de:
pró-fármacd
U~õxido solvato ou ou um sal í: farmaceuticamente aceitável deste.
Um aspecto consiste em um composto de Formula (II):
Formula (II) em que:
A é feii.il substituído com pelo menos três substítuintes ou benzofurano opcicnalmente substituído com pelo menos um R; ou dois R e os átomos de carbono do fenil 30 ao qual estão anexados formam um cicloalquil ou C^-Cs
13/355 het e roc i cl oal qui 1;
R é sélecionado de F, Cl, Br, ~CN, -NC® -cf3< ~0H,
-qí® -OCFa, -C®H, -OCRj, Cj-Cg álquilanoalquino, Cj-Cg alqu.il, Ci-Cs eicloalquil, heteraalqu.il, C3-Cç haloalquil, tetrazolil, C2-Cs heterociclqalquil, fsuil, WS(-GhR3, S{®)2»(ÍM2í “C(»O)CF3f -C'(«O»â («Ο)3&3, S(«O)2SHC(»O)R<, N(Rs)2, -N(Rg)G(®)R3, -CO2R*, -C(=O)Rs, GC(=O)R3, -£(=0)ΝΜ2, -Sas, -5(=0)¾ e -Sl^OhRa;
J ê uma- ligação, NHS (=0) 2, 5 (=0) 2N(R<) , ~Ç(«0),
C(=0)WS(=0)2, -SHSWMb NÕh), -N(R^)C®0), -CQa, c(=o)f -oc(=o), -c(=a)N0M, -s, -s(=o) e ~s(=a)2, Cr~® alquileno, C2~C« alquenileno, C3-C< alquinileno, Cx-® heteroalquilôno ou C3~C« cícloalquileno, em que Ci~CÊ alquileno, C2-Cs alquenilena, é2-Cg alquinileno, Οχ-Cg hetéroalquileno e C3-Cg cicloalquilenc é opcionaimente substituidçs com pelo menos um R;
R;l é CGjÁi ou. um bioisôstero de ãciào carbQKilico, em que Ha ê hidrogênio, Ci~Ce alguil, Cx-® cícloalquil, Qx-C§ háloalquil, fenil ou benz.il;
Z é O, S, NH, N-CN OU CHNO2;
W é NR3, 0 ou uma 'ligação?
Li é uma ligação, Ci-Cç; alquileno, Qs-Cg alqUén.íleno, c6 alquinileno, Ci-Cé heteroalquileno, C3-Cs cicloalquileno ou C2-Cg heterocácloalquileno, em que C:1-Cs 25 alquileno, CS-CÈ alqueniieno, C2-Cg alquinileno, Cx-Cg heteroalqui le.no, C3-C§ çicloalquileno, C2-Cs heterocicloalquileno é opcionaimente substituído oom pelo menos um R;
¥ é O ou S;
n é um número inteiro de 0-5;
14/356 cada R3. é selecionada independentemente de Cá-Cg alquil, A-Cg haloalqui1, C3-C8 ciçloalquil, fenil e benzil;
cada Rj é selecionado independentemente de hidrogênio, Ci-C« alquil, A~CS haloalquil, C3-Ca cicloalquil, fenil e 5 benzil; ou um sal, solvato, Ν-óxido ou prd-fdrroaco farmaceuticamente aceitável deste,
Outra modalidade consiste em um composto de Fórmula (II) em que Ri ê CGSR?. e R2 é hidrogênio. Uma modalidade adicional consiste em um composto de Fórmula (II), em que J 10 é uma ligação. Ainda outra modalidade adicional consiste em um composto de Fórmula (XI) :em que Rg ® hidrogênio. Ainda outra modalidade consiste era um composto de Fórmula (II) em que 2 ê O. Uma modalidade consiste em um composto de Fórmula (XX)., em que A é fenil. Outra modalidade consiste 15 em .um çorapcsto de Fõrmulá (II) , em que fenil ê substituídocom três R. Ainda outra modalidade adicional consiste em um composto de Fórmula (II) , em .que cada R é selecionado independentemente dè F, çl, Br, I, CsrCs alquil, OH e OR3. Uma modalidade adicional consiste em um composto de Fórmula 20 (II) em que R3 ê metil, Ainda outra modalidade consista em um composto de Fórmula (XI), em que Ci~C« alquil é metil. Uma modalidade consiste em um composto de Fórmula (IX), em que W é 1¾. são, cada um indepeadentemente, uma ligação. Outra modalidade consiste em um composto de Fórmula (II) , 25 em que Y é O. Uma modalidade consiste em um composto de
Formula (XI), èm qüe. n ê 0. ma modalidade adicional consiste era um composto de Fórmula (XX) , em que R é selecionado de F, Cl, Br, I, CN, OH, OR3 é N02, Ainda outra modalidade adicional -.consiste em um composto de Fórmula 30 (II), èm que n ê 1.
15/356
IM aspect© consiste em. um composto selecionado de:
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ou um sal, solvato ou pró-fármaco farmaoeuticamente aceitável deste.
Outro aspecto consiste em uma composição faxvaacêutica qué compreende um composto de Fórmula (I) ou (II) e um diluente, excipiente, veículo ou ligante farmiaceutxcamente aceitável deste.
Outro aspecto consiste em um método de modulação da
17/35δ
atividade de i canal de cálcio capacitivo (SOC)i que
compreende o contato do complexo do canal SOí 3, ©u .porção
deste, com um composto d« s Fórmula (I) ou (IX).
Outro as ipecto óonsi .ste em um método d® ; modula ção da
atividade de canal de cálcio ativado pela ( 1 ibera1 gão de
cálcio (CRA C) em U» v mamífero, que cc >mpreej ade a
admi ni stração ao mamífer o de um composto de F6 rmula (I) ou
{II) em que o composto de Fórmula (I) ou (2 ;x) mo dula a
atividade de CRAG no mamífera.
Outro aspecto consiste em um método de inibição da ativação da entrada capacitiva. de 'cálcio (SOCE) de fator nuclear de células T ativadas (WAT) em um mamífero., que compreende a administração ao mamífero de um composto, de Formula (I) ou (II) em que o composto de Fórmula (l) ou (XI) inibe ativação por SOCE de no mamífero.
Ainda outro aspecto consiste ém um método de. diminuição da liberação de citocina por inibição da ativação, por SOCE de >FAT em um mamífero,, que compreende a
administraçãí u ao mamífero de ; um composto de F ármúla (I) ou
20 (11) em qu e © Cí empasto de Formula (I) ou (3 ;i) diminui a
liberação de c.i tc scxna no mamxrero.
Um ásp ect© adicional consiste em un a método de
tratamento < le uma doença, distürbio ou çoi idição em um
mamífero que se benefioiari a da inibição da atividade do
25 canal de cálcio capacitivo que compreende a administração
ao mamífero < de un i composto d e Fórmula (I) ou ( XI) .
Um aspe cto < zonsiste- em um método para o tratamento de
uma doença i autoi .mune, doanç ;a ou condição he’ teroimune, ou
doença in.flamatõria em um mamífero, que compreende a administração ao mamífera de um composto de Formula (X) ou
18/354 (II) , ou sal farmaceuticamente aceitável ou pró-fãrmaco deste.
Em uma modal idade , a doença autoimune ê doença ínflamatória do intestino, artrite reumatôide-, mi-astenia grave, escleróse múltipla, síndrome de Sjõgren, diabetes tipo I-, lúpus eritematcs©,- psoríase, osteoartrite, esclerodermia e anemia hémolítica autoimune.
Em outra modalidade, a doença ou condição he.texpímune. é doença, enxerto versus hospedeiro, rejeição de enxerto, 10 dermatite acópica, uonjtíntivíte alérgica, rejeição a transplante de Õrgão, transplante alogênico ou xenogênico, e rinite. alérgica.
Em uma modalidade adicionai, a doença inflamatória é uveíte, -vaseulite, vagínite, asma, doença muscular 15 inflamatória, dermatit e, cistite inters tidal, oolite, doença de Crohn., dermatomios-ite,. hepatite e hepatite crônica recidivan.te.
Outro aspecto consiste em um método de tratamento de uma doença, distúrbio ou condição em um mamífero que se 20 beneficiaria da inibição da atividade do canal de cálcio capacitivo que compreende a administração ao mamífero de um composto de Fórmula (I) ou (XI) ou um sal farmaceüticamenté aceitável, N-óxido ou prô-fármaco desta.
Ém uma -modalidade, a doença, distúrbio ou condição- no mamífero é selecionada de glomerulçnefri-te, doenças ou distúrbios hepáticos, doenças ou distúrbios renais, doença pulmonar obstrutiva crônica, osteoporose, eczema, fibrose pulmonar, tirsoid-itte, fibrose cística, e- cirrose biliar primária.
uma modal idade > a doença, distúrbio ou condição é
19/358 artrite reumatóidé.
:Em uma modal ida a doença, distúrbio condição psorXase.
Em uma modalidade a doença.
distúrbio ou condição doença inflamatória do intestino.
modalidade, a doença, distúrbio ou condição rejeição a transplante de órgão
Em uma modalidade, a doença, distúrbio ou condição es^lexuse múltipla.
Um aspecto consiste no uso de um composto de Fórmula (X) ou (II). na fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença, distúrbio ou condição que se beneficiaria da inibição da atividade do canal de cálcio capacitivo.
Gs compostos aqui fornecidos são usados para modulação do cálcio intracelular < Em um aspecto, os compostos aqui fornecidos modulam a atividade do canal SOC. Em um aspecto, os compostos aqui fornecidos modulam a atividade do canal CRAC. Em outro aspecto, os compostos aqui fornecidos modulam a atividade de proteína ETIM. Em outro aspecto, os compostos aqui fornecidos modulam a atividade de proteína Orai. Em outro aspecto, os compostos aqui fornecidos modulam as interações funcionais de proteínas STIM com proteínas Orai. Em outro aspecto, os compostos aqui fornecidos reduzem o número de canais SOC funcionais. Em outro aspecto, os compostos aqui fornecidos reduzem o número de canais QRÁC funcionais. Em um aspecto, os compostos aqui descritos são bloqueadores do canal SOC. Em um aspecto, os compostos aqui descritos são bloqueadores do 30 canal CRAC ou moduladores do canal CRAC.
20/356
Em um aspecto, os compostos <âe Fórmulas (I) ou (II) são inibidores seletivós da atividade do canal CRÁC,.
Outros objetivos, características e vantagens dos compostos, composições, métodos e usos aqui descritos 5 ficarão evidentes a partir da descrição detalhada seguinte. Deve-se entender, no entanto, que a descrição detalhada ® os exemplos específicos, embora indiquem modalidades específicas, são apresentados apenas com fins ilustrativos, na medida em que várias alterações e modificações dentro do 10 espírito e do escopo da revelação ficarão evidentes a partir desta descrição detalhada.
BRWE WSCáXÇÃQ DAS FIGURAS
A Figura 1 esquematiza a via do canal 1«^.
A. Figura 2 mostra os traçbs de lew típicos em células 15 que superexpressam estãvelmente Grai-1 e STIM-1 humanas em. resposta ao estímulo de voltagem imediatamente apos interrupção > antes de Itw ser ativado e em 5 min após Xç®s® ser totãlmente ativado por depleção de estoques de cálcio intracelular.
CESCRIÇÃO DBTADHADA
A homeostasia do cálcio celular é um resultado da soma de sistemas reguladores envolvidos no controle dos níveis e movimentos do cálcio intx*acelular. A homeostasia do cálcio celular- é obtida, pelo menos em parte, por ligação de 25 cálcio e por movimento de cálcio para dentro e para fora da célula através da membrana plasmática e dentro da célula por movimento de cálcio através de membranas de organelas intracelulares que incluem, por exemplo, o retículo endoplasmátíco, retículo sarcoplasmático, mitocõndrias e 30 organelas endocíticas, incluindo endossamos e lisossomos.
21/35S movimento de cálcio através de membranas celulares é realizado por proteínas especializadas. Par exemplo, o cálcio do espaço extracelulax' pode entrar na célula através: de vários canais de cálcio e um permutador de sôdio/cálcio e e expulso ativamente da célula par bombas de cálcio e permutadores de sódio/cálcio. 0 cálcio também pode ser liberado de estoques internos por meie de receptores de inositol trisfosfato qu rianodina e pode ser recolhido por essas organelas por meio de bombas de cálcio.
O cálcio pode entrar nas células por qualquer uma entre diversas classes gerais de canais, incluindo, sem limitação, canais de cálcio, operados por voltagem (VOO), canais de cálcio capacitivoè (SOC) e permutadores de sódio/cãlcio operando em modo reverso. Os canais VOC são ativados pela despolarização da membrana e sao encontrados
em células ex citáveis como, por ex :emplõ, nervo e músculo,
e, em sua mai or parte, não são e.nc ’ontrados em. cé' Lulas não
exc itávexs. S ob algumas condições, o Ca2* pede ex Utt ar nas
céi alas por r neio de permutadores de Na*-Ca2* ops tratido em
2 0 mod o reverso.
A endocitose fornece outro processo pelo qual as
cél ulas podem captar cálcio do mei .© extracelular por meio
X de endossemos . Além disso, alguma s células, por exemplo,
cél ulas exõc ninas, podem liberar cálcio por meio de
Á.
’25 exocitose,
A concentração cítosdlica de cálcio é fortemente regulada, com níveis de repouso normalmente estimados em aproximadamente 0,1 pM em células mamíferas, enquanto a concentração de cálcio extracelular é tipicamente de cerca 30 de 2 mM. Essa forte, regulação facilita a transdução de sitiais nas células e dentro delas por meio do fluxo transitório de cálcio através da membrana plasmãtiaa e membranas de organelas intracelulares. Há diversos -sistemas de transporte de. cálcio intracelular e de tampão em células 5 que servem para modelar os sinais de cálcio intracelular- e manter uma concentração àitoplasmâtiea de cálcio de repouso baixa, Em células em repouso, os ccmiponent.es. principais envolvidos na manutenção dos níveis basais de cálcio, são as bombas de cálcio e as via®, de extravasarnento tanto no 10 retíoulo éúdoplasmático quanto na membrana .plasmáti-ca. tMa perturbação dos níveis citosólicos de cálcio em repouso pode afetar a transmissão de sinais cálcio-dependentes e dar origem a defeitos em diversos processos celulares. Por exemplo, a proliferação celular envolve -uma sequência de IS sinalização de cálcio prolongada. Outros processos celulares que envolvem a sinalização de cálcio incluem, sem limitação, secreção, sinalização de fator da transcrição -e fertilização.
Receptores da superfície- celular que ativam 2,0 fosfolipase ç (PLCj criam sinais de Ca'5* citcsólicô de fontes intra e extracelulares. XMa elevação inicial transitória de [Ca2T£ (concentração de cálcio intracelular) resulta da liberação de Ca'** do reticula endoplasmático (ER), que ê desencadeada pelo produto de PLC, inositol5 1,4,5-trisÊosfato (TEM, abertura de. receptores de IP3 no
ER (Streb e cols, Nature, 306, 67-69, 1983). Uma fase de subsequent® de entrada sustentada de Ca** através da membrana plasmatica então assegura, por meio de canais de cálcio capacitivos (SOC) especializados (no caso de células 30 imunes, os canais SOC são canais d® cálcio ativados por
23/356 liberação de cálcio (CRAC)) na membrana plasmática. A entrada capaçitiva de Ca”8* (SOCE) é o processe pelo qual o esvaziamento dos próprios estoques de Ca2* ativa canais de Ca2* na membrana plasmática para ajudar a reabastecer os estoques (Putney. Cell Calcium, 7, 1-12, 1386; Parekh. e cols., Physiol.: Rev. 757-810; 2Õ05) . SGCE faz mais do que simplesmente fornecer -Cá** para o. reabastecimento dos estoques, mas ele próprio pode gerar sinais de Ca** sustentados que controlam funções essenciais como, por 1Ô exemplo» expressão gênica, metabolismo celular e exocitose (Parekh e Putney, Physiol. Rév. B5, 757-810 (2005}}.
Em linfocitos e mastócitos, a ativação de antigen© ou receptores Fc, respectivamente, causa a liberação de Ca^* de estoques intracelulares, o que, por -sua vez, leva ao 15 influxo de Ça2* através de canais CRáC. na membrana plasmática. A .elevação subsequente do Ca** intracelular ativa ealcineurina, uma fosfatase que regula o fator da transcrição neat. Em células em repouso, wfat é fosforliado e reside no cítoplasma, mas quando dôsfosforílado -por 20 caleíneurina, NEAT se desloca para o núcleo e ativa programas genéticos diferentes, dependendo das condições de estimulação e tipo de célula. Em- resposta ãs infecções e durante rejeição de transplante, parceirós de. RFAT com o fator da transcrição AP-l (Fos-Jun) no núcleo de células T 25 ^éf&toràsA transativem genes -de citocina, genes que regulam a proliferação de células T e outros genes que orquestram uma resposta imune ativa (Rao e çols.» Armu. Ver. iSfflünoI,, 1597; 15: 707-47). Em contraste, em células T que reconhecem- auto-antígenos, WAT é ativado na axisância de 30 AF-1, e ativa um programa de transcrição conhecido cçmp
24/355 anergia”' f que suprime respostas autoimunes (Macian e cols., Transcriptional mechanisms underlying lymphocyte tolerance”. Cell. 14 de junho de 2002,- 109(6): 719-31} . Em uma subclasse dé células T conhecidas como células T 5 reguladoras que suprimem a autoimunidade mediada por células T efetoras autcrreativas, parceiros de NFAT com o fator da transcrição FOXP3 ativam genes responsáveis pela função supressora (W é cols., Cell, 28 de julho de 2006; 126(2): 375-87; Rudensky A. Y., Savin M.t Zheng Y. Cell. 28 lô de julho de 2006; 126(2): 253-2S6).
O retículo endoplasmático (ER) realiza diversos processos. O ER tem um papel tanto como um tanque de ca2* quanto como um estoque de Ca** sensível a agonie tá, e o enovelamento/prucessámento de proteína ocorre em seu lumen. 15 Nesse ultimo caso, várias proteínas chaperone Ca— dependent es assegux'am que proteínas recém-sintetizadas sejam dobradas corretamente e sejam enviadas para sua destinação apropriada, 0 ER também esta envolvido no tráfego de vesículas, liberação de sinais de estresse, 20 regulação do metabolismo de colesterol e apoptose. Muitos desses processos necessitam de Ca-’’ intraluminal, e o enovelamentó incorreto de proteínas, respostas ao estresse de ER e apoptose podem ser induzidos por depleção do ER de Ca2* por períodos de tempo prolongados. Como ele contêm uma 25 quantidade finita de Ca2*, é claro que o teor de Ca2* do ER deve cair apõs liberação daquele Ca’1* durante estimulação. No entanto, para prOsçrvar a integridade funcional do ÉR, é vital que o teor de Ca2* não caia muito ou que seja mantido pelo menos em um nível baixo. 0 reabastecimento do ER com
Ca2* ê, portanto, um processo central para todas as células
25/356 éucariôticas. Com© uma queda do teor do Ca1** do ER -ativa canais -capacitivos de Çaz* na membrana plasmatica, acredita-se que uma função importante dessa via de entrada de Ca2* seja a- manutenção dos níveis de Ca2* do ER que são
S necessários para síntese e enovelamento de proteína adeauadcs. No entanto, os ©anais capacitivos de -Ca** possuem outros papéis- importantes.
A compreensão -da -entrada capacitiva de cálcio foi fornecida por estudos el.etrofiaíológíoos que estabeleceram 10 que o processo de esvaziamento dos estoques ativava uma corrente de Cã2* em màstóaitos denominada corrente de Ca** ativada pela liberação de Ca2* ou é altamente seletivo para. Ca2*, nao é ativado por voltagem, e retifica a entrada de cálcio. Ele é encontrado em vários tipos de 15 células, principalmente de origem bematopóíética. 1^. nãO é. a. única corrente capacitive., e agora fica claro que oinfluxo capacitive engloba uma família de canais permeáveis ao ca2*, com propriedades diferentes em diferénte-s- tipos de células, Ickás fui a primeira corrente capacitiva de Ca2* a 2Q ser descrita e permanece um modelo popular para o estudo do. influxo capacítivo.
Os canais capacitivos de cálcio podem -ser ativados por qualquer procedimento que esvazie os estoques de Ca2* do ER; parece não fazer diferença como os estoques são 25 esvaziados, o efeito líquido é a ativação da e-n-tradá capacitiva de Ca**» Fisiologicamente, o esvaziamento do estoque é provocado por um aumento nos níveis de IP5 ou de outros sinais de liberação de Ca2, seguido por liberação de Ca3+ dos estoques, mas há vários outros métodos para o 3Q esvaziamento dos estoques. Esses métodos incluem os
26/356 seguintes:
1.) elevação de XFj no citosol (apôs estimulação do receptor ou díâlise do citoscl com o próprio IP3 ou congêneres relacionados como o Xns(2f4,5)1¾ análogo não metabolizável);
2} aplicação de um íonôforo de. Cã2* (per -exemplo, ionomicina) para permeabilizar a membrana do BS.;
3) díálise do citoplasma com- concentrações elevadas de quélantes de Ca2- (por exemplo» EGTA ou BAPTAJ , que fazem a quelação do Ca2* que extravasa dos estoques e, dessa fom, evitam o reabastecimento do estoque;
4) exposição aos inibidores da Ca2*-ATPase retículo sarcoplasmático/endoplasmático (SERCA) como.» por exemplo, tapsigargi.ua, ácido ciclopiazânico e di-terc- butilhidroquinona,'
5) sensibilização dos receptores de IPí aos níveis de repouso de InsPj. com agentes como timerosal; e
6) carga de quelantes metálicos de Ca2* permeáveis à membrana como, por exemplo, Ν/Ν,1ϊ?N' --tetrakis (22.0 piridilmetil) etileno diamina ÍTPEN), diretamente nos estoques,
Por meio de ação das massas, TPEN reduz a concentração intraluminal de Ca2* livre:, sem alterar o Ca2* total do estoque, de tal fôrma que seja gerado o dependente da depleção do estoque.
gsseg métodos de esvaziamento de estoques não são desprovidos dé problemas potenciais. A característica fundamental da entrada capacitiva de -Ca*'* é que é a queda do teor de Ca®* dexltrb dos estoques, e não a elevação subseqíienté da concentração de Caxl citoplasmátíeo, que
27/3Sá ativa os canais, No entanto, bloqueadores da bomba de ionojBÍcina e SERCA geralmente causam uma elevação na concentração de Ca**' citoplasmátíco em consequência da depleção do estoque, e essa elevação no Cae* podería abrir 5 os canais de cãtions ativados por Ca** permeáveis ao CaÃ+.
üma forma de evitar esses problemas e utilizar agentes sob condições nas quais o Ca2* citoplasmátiúo tenha sido fortemente tamponado com concentrações elevadas de quelante de Ca2* como., por exemplo, EGTA ou BAPTÀ»
Entrada cápaóitiva de cálcio
A concentração reduzida de cálcio em estoques de cálcio intracelular como, por exemplo, o retículo endop.lasmático, resultante da liberação de cálcio destes, fornece um sinal para o influxo de cálcio do meio 15 extracellular para dentro da célula. Esse influxo de cálcio, que produz uma elevação sustentada em Opiato da concentração de cálcio citosólico, geralmente não se baseia em canais da membrana plasmática controlados por voltagem e não envolve a ativação de canais de cálcio por cálcio. Esse 20 mecanismo do influxo de cálcio ê denominado entrada capacitivá de cálcio (ÇCE)# ativada pela liberação de cálcio, entrada capacitiva de cálcio ou operada por depleção. A entrada çapacitiva de cálcio pode ser registrada como uma corrente ioniza com propriedades distintas. Essa corrente é denominada Ι·χο (corrente capacitíva) ou ICrac· (corrente ativada por liberação de uá-rulXl) *
A análise eletrofisiolõgica de correntes capacitívas ou ativadas por liberação de cálcio revela propriedades 30 biofísicas distintas (veja# por exemplo, Parekh e Penner
28/356 (1597} Physiol. Rev. 77: 901-930) dessas correntes. Por exemplo, a corrente pode ser ativada por .depléção de
V estoques- de cálcio intracelular {por exemplo, por ativadores nlo fisiológicos como, por exemplo, tapsigai'gina, CPA, ionomicina e EAPTA, e ativadores fisiológicos como, por exemplo, IP3) .< ® pode ser seletiva para câtions divalentes, por exemplo·,· cálcio, em relação aos ions -monoval entes em soluções ou condições fisiológicas, pode ser Influenciada por alterações nos 10 níveis de cálcio citosólico, e pode exibir seletividade e condutividade alteradas na presença de concentrações, extracelulares baixas de cations divalentes, A corrente também pode ser bloqueada ou aumentada por 2-AFB (dependendo da concentração) e bloqueada por SKF96365 e 15 GdJ' ; e geralmente pode ser descrita corno uma corrente de cálcio que não é es-t-ritamente controlada por voltagem.
Estudos de patch-olas^· em mastÓC-itos e células T leucêmieas de Jurkat estabeleceram 0 mecanismo- de entrada de CRAC como um canal iônico com características biofísicas 2.0 -distintivas, incluindo uma seletividade elevada por Ca' pareada com. uma condutância extremamente baixa, Além - disso, foi demonstrado que o canal CRAC preenche os critérios rigorosos para ser considerado capacitivo, qüé. consiste na ativação unicamente pela redução de <MA* no ER> e não por 25 Ca** citosólíco ou outros mensageiros, gerados por PLC (Prakriya e cols», Em “Moleculax' and Cellular insights into ion Channel -Mo-logy (ed, Robert Maue) 121-140 (Elsevier Science, Amsterdam, 2004)).
Regulação da entrada capacitive de cálcio por estoques de cálcio intracelular
29/356
A entrada capacitiva de cálcio é regulada pelo nível de cálcio dentro de: um estaque de cálcio intracelular< Os estoques de cálcio intracelular pedem ser caracterizados pela sensibilidade aos agentes, que podem ser .fisiológicos 5 ou farmacológicas, que ativam a liberação de cálcio pelos estoques ou inibem a captação de cálcio nos estoques. Diferentes células foram estudadas na caracterização de estoques de cálcio intracelulare os estoques foram caracterizados como sensíveis a Vários agentes, incluindo, 10 sem limitação, Ife e compostos que têm impacto sobre o receptor de XPi, tapsigarginá, ionomicina e/ou ADP-ribose cíclica (cADPR) {veja, por exemplo, Berridge (1993) Mature ,3€1: 315-325; Churchill e bouis (199.9) Am. Physiol. 276; 0436-04347 Dargie e cais. (1990) Cell Regtil* 1: 279-290;
Gerasimenko e oolp. (1996) Cell S4; 473-486; Gromoda e sois. (1.995) FEBS tett. 360; 303-306/ Guse e COls. (1999) Ma t ure 3.9'8:·: 7 0 - 73) .
O acúmulo de cálcio dentro das organelas de armazenamento do retículo endoplasmãtiço e do retículo 30 sarcóplâsmãtico (SR; uma versão especializada da retículo éndoplásmãtico no músculo estriado) é obtido- por meio de cáleió-AWases do retículo sarcoplàsmâticG-endoplasmãtico (SERCAsj, comumente denominadas bombas de cálcio. Durante a sinalização (ou seja, quando os canais do retículo 35 endoplasmático são ativados para permitir a liberação de cálcio pelo retículo endoplasmático para dentro do cicoplazma)t o cálcio do retículo endoplasmáticoé reabastecido- pela bomba de .SERCA com cálcio citopiasmácicc que entrou na célula a partir do meio extracelular (Yue
3Õ Hinkle. (200Q) σ. Biol. ehem. 375; 23.848-23.653; Hofere
30/356 cols. (1998) a®0 J. 17: 1.986-1.995).
Os canais de liberação de cálcio associados aos receptoras de IP3 e rianpdina permitem a liberação controlada de cálcio pelo retíeul© endoplasmático e sarcoplasmático para o citoplasma, resultando em aumentos transitórios na concentração citoplasmática de cálcto. A liberação de cálcio mediada pelo receptor de IF3 é desencadeada por IPS formado pela degradação de Êosfoinositxdeos da membrana plasmátíca por meio da ação de 13 fosfolipase C, que ê ativada pela ligação de um agonista a um receptor acoplado ã proteína G ou tirosina qqinase da membrana plasmatica. A liberação de cálcio mediada por receptor de rianodina é desencadeada por um aumento no cálcio citoplasmãticõ e é denominada liberação de cálcio 15 induzida por cálcio (CICR}. A atividade de receptores de rianodina (que possuem afinidade por rianodina e cafeína) também pode ser regulada por ADD-ribose cíclica.
Dessa forma, os níveis de cálcio nos estoques, e no citoplasma, flutuam. Por exemplo, concentração de cálcio 20 livre do W pode diminuir de uma faixa de cerca de 60-400 μΜ até cerca de 1-50 μΜ guaido células Reba são tratadas com histamina, um agonista de receptores de histamina ligados à PbC (Miyawaki e cols. (1997) Kafure 388; 882~ 887) . A entrada capacitiva de cálcio é ativada à medida que 25 a concentração de cálcio livre dos estoques intracelulares ê reduzida. A depleção de cálcio do estoque, bem como um áumént© concomitante na cçnçentxaçãò de çãlcib ditosõlicb, pode, dessa forma, regular entrada capacitiva de cálcio nas células.
Tampônamento dó cálcio citcpl&sraãtico
31/355
A ativação por agonista d.e processos de sinalização em células pode envolver aumentos dramáticos na permeabilidade ao cálcio do retitulo endoplasmático, por exemplo, por meio da abertura de canais de receptor de ΪΕ:ϊ/ e da membrana 5 plasmática pór meio da entrada capacitiva de cálcio. Esses aumentos da permeabilidade ao cálcio estão associados a um aumento na oonoéhtraçãn de cálcio citosôlico que pode ser separado em dois componentest um wpico de liberação de cálcio pelo retículo endoplasmátíco durante a ativação do 10 receptor de llq, e uma fase de plátô, que é uma elevação sustentada dos níveis de cálcio resultante da entrada de cálcio no citoplasw do meio extracèlular. Mediante estimulação, a concentração de repouso de cálcio intracelular livre de cerca de 100 nM pode se elevar 15 globalmente a mais do que 1 pM é ainda mais em mlçrodomínios da célula. A célula modula esses sinais de cálcio com tampões endôgenos de cálcio, incluindo tamponamento fisiológico por organelas cómó, por exemplo/ mitocôndrías, retículo ondoplasmático e Golgi. A captação 20 mitocondríal de cálcio por meio de um uníporfcer na membrana interna é conduzida pelo grande potencial de membrana mítocondrial negativo, e o cálcio acumulado é liberado lentamente por meio de permutadores sódio-dependentes e sódio-independentes, e, sob algumas circunstancias, do poro 5 de transição da permeabilidade (FTP). Dessa forma, as mitocõndrias podem atuar como tampões de cálcio por recolhimento de cálcio durante períodos de ativação celular e podem liberá-lo lentamente mais tarde. A captação de cálcio no retíoulo endoplasmático é regulada pela cálcio30 ATPaée do retíeul© sarcoplasmático e endoplasmãtico
32/356 (SE.RCA) . A captação de cálcio no Golgi é mediada por uma ATPase de transporte de cálcio do tipo F (FMR1/ATF2C1) . Adicionalmente, há evidências de gue uma quantidade significativa do .cálcio liberado mediante ativação do 5 receptor de IPs ê expulsa da célula por meio da ação da cálcio-ATPase da membrana plasmática. For exemplo, cálcioATPases da membrana, plasmâtica fornecem o mecanismo dominante para depuração de cálcio em células T humanas e células de Juxkat, embora a troca sôdio/calcio também 10 contribua para a depuração de: cálcio em células T humanas.
Dentro de organelas de armazenamento de. cálcio, os íons cálcio podem estar ligados a proteínas de tamponamento de cálcio especializadas como, por exemplo, calseguestrinas, calreticulinas e calhaxinas. Adicionalmente, há proteínas 15 de tampqnamento de cálcio no eitosol que modulam os picos de cálcio e ajudam na redistribuíçáo dé íons cálcio. Dessa forma, proteínas e outras moléculas que participam em qualquer um desses e de outros mecanismos através dos quais os níveis de cálcio citosólico podem ser reduzidos são 20 proteínas que estão envolvidas, participam e/ou permitem o tamponamento do cálcio citoplasmátiço. Dessa forma, o tamponamento do cálcio citoplasmático ajuda a regular os níveis de Ca2* citoplasmãtico durante períodos de influxo sustentado de cálcio através de canais SOC ou picos de 2 5 liberação de Ca2·. Grandes aumentos nos níveis dé Ca2* citoplasmátíco ou o reabastecimento do estoque desativam
SOCE.
Eventos downstream mediados pela entrada de cálcio
Além das alterações intracelulares nos estoques de cálcio,· a entrada capacities de cálcio afeta diversos
33/356 evèntos que são consequentes ou adicionais às alterações capacitivas. For exemplo, o influxo de Ca2” resulta na ativação de um grande número de enzimas çalmodulinadependentes que incluem a serina fosfatase calcineurina. A 5 ativação de calcineurina por um aumento do cálcio intracelular resulta em processos seçretores agudos, como, por exemplo, degranulação de mastecitas. Mastõcitos ativados liberam grânulos pré-formados contendo histamina, heparina, TNFd e enzimas como, por exemplo, jS10 hexosaminidase. Alguns eventos celulares como, por exemplo, proliferação de células B e T, exxgem sinalização sustentada de calcineurina, o que exige um. aumento sustentado do cálcio intracelular. Diversos fatores da transcrição são regulados por calcineurina, incluindo NFAT 15 ífator nuclear de células T ativadas), MEF2 e NFk.B . Os fatores da transcrição NFAT desempenham papéis importantes em muitos tipos de célula, incluindo células imunes. Nas células imunes, NFAT medeia a transcrição de um grande número de moléculas, incluindo citocinas, quimiocinas e 20 receptores da superfície celular. Elementos de transcrição para NFAT foram encontrados dentro dos promotores de citocinas como, por exemplo, IL-2, 11,-3, XL~4, 11,-5, IL-8, XL-13, bem como em fator de necrose tumoral alf a (TNFd) , fator estimulante de colônias de granulõcitos (G-CSF) e 25 interferon gama (γ-XFN) .
A atividade de proteínas de NFAT ê regulada por seu nível de fosforilação, o qual, por sua vez, é regulado tanto por calcineurina quanto por NFAT quínases. A ativação de calcineurina por um aumento dos níveis do cálcio 30 intracelular resulta na desfosforilação de WAT e entrada
34/356 no núcleo. A refosforilação de -NEAT mascara a sequência de localização nuclear de WAT e evita sua entrada no núcleo. Pot causa de sua forte dependência da desfosforilação mediada por calcineuxina quanto à localização e atividade,
NEAT é um indicador sensível de níveis -de cálcio intracelular livre.
Doenças, distúrbios ou condições
Estudos clínicos demonstram que o canal CRAC é absclutamente necessário para a ativação de genes 10 subjacentes a resposta de célula T ao antígèno. A entrada sustentada -de cálcio é necessária para ativação de linfócitos e resposta imune adaptive. A entrada de cálcio nos linfócitos ocorre primariamente através dos canais CRAC. O cálcio liberado leva à ativação de NFAT e expressão
1.5 de citocinas necessárias à resposta imune. A inibição da entrada uapacitiva de cálcio é uma forma eficiente para evitar a ativação da célula T.
à inibição da atividade do canal CRAC com os compostos aqui descritos, tais como os compostos de Fórmulas (i)--(v), 20 fornece um meio para o fornecimento de terapia imunossupressora, como demonstrado pela eliminaçãõ da entrada capacitiva de cálcio observada em pacientes com imunodeficiência combinada grave (SCID). células- T, fibroblastos e, em alguns casos, células B, de pacientes 25 com imunodeficiência de célula T ou SCID que possuem um defeito principal na ativação da célula T mostram um forte defeito na entrada capacitiva de cálcio (Feske e cols. :(2001) Nature Jmmunol. 2í 316-324; Faratiseti. e cols. (1994) . d. Biol. Úhem. 269: 32.327-32.335; e Le Deist é 30 cols. (1995) Blood 85 s 1.053-1.062). Os. pacientes com SCID
35/354 nã® possuem resposta imune adapt iva, mas sem .nenhum, déficit ou toxicidade em órgãos principais. 0 fenótipo do paciente com SCID indica que a inibição de canais CRAC é uma estratégia eficas para a imunessupressão.
Doenças/distúrbios que envolvem inflamação e doenças/distúrbios relacionados ao sistema imunolõgico
Doenças ou distúrbios que podem ser tratados ou evitados com o uso dos compostos, composições e. métodos aqui fornecidos incluem doenças e distúrbios que envolvem 1Q inflamação e/bu que estão relacionados ao sistema imunológico. Essas doenças incluem, sem limitação., asma, doença pulmonar obstrutiva crônica, artrite reumatôide, doença, inflamatória do intestino, glomerulonefrite, doenças neuroinflamatõrias como, por exemplo, esclerose múltipla» e 15 distúrbios do sistema imunolôgico.
A ativação de neutrófiles (PMN) por mediadores inflamatórios é parcialmente obtida por aumento da concentração de cálcio- citosólico. Acredita-se que o influxo capacitive de cálcio, em particular, tenha um papel 20 importante na ativação de PMN. Foi demonstrado que o trauma aumenta o influxo capacitive de cálcio de PMN (Hauser e cols. (2000) . -J. Trauma Injury Infection and Critical Care 48 ¢4): 592-598) e que elevações prolongadas da concentração de cálcio citosólico em função do influxo '25 capacitivo de cálcio aumentado podem alterar o acoplamento estímulo-resposta às quimiotaxínas e -contribuem para a disfunção de PMN após lesão. A modulação da concentração de cálcio Citosólico em PMN através de canais capacitivos de cálcio pode, portanto, ser útil na regulação da inflamação medi ada por DMN e preserva a função cardiovascular após
36/356 lesão, choque ou sépsis (Hauser e αοίό. (2001) ® :LeuAocyte Biology 69 .(1). : 63-68) ..
Ó cálcio tem um papel crucial na ativação de linfdeitas. A ativação de linfóoitos, por exemplo, por S estimulação de antígeno, resulta em aumentos rápidos na concentração de cálcio intracelular livre e na ativação de. fatores da transcrição, incluindo fator nuclear de células T ativadas (WÃT), NF-kB, 3NK1, MEF2 e CRBB. WAT é um regulador da transcrição crucial dos genes de. IL-2 (e de 10 outra citocina) (veja, por exemplo, Lewis (2001) Annu. Rev.
iwiunol 19: 497“521). A elevação sustentada do nível de cálcio intracelular é necessária para manter NFAT em um estado transcricionalmente ativo, e é dependente da entrada canacitiva de cálcio. A redução ou bloqueio da entrada 15 capacítiva de cálcio em linfõcítos bloqueia a ativação de linfõcitos cálciodependente. Dessa forma, a modulação do cálcio intracelular e, partícularmente, da entrada capacitiva de cálcio (por exemplo, redução, eliminação de entrada capacitiva de cálcio) em linfócites pode ser um 20 método para o tratamento de distúrbios imunes e relacionados ao sistema ímuuolõgico, incluindo, por exemplo, doenças/distúrbios imunológicos crônicos, doenças/distúrbios imunológicos agudos., doenças/distúrbios autoimunes e de imunodeficiência, doenças/distúrbios que 25 envolvem inflamação, rejeições de enxerto de transplante de órgão e doença enxerto versus hospedeiro e respostas imunes alteradas' (por exempla, hiperativas) ,. M exemplo, o tratamento de uma doença/distürbio autoimune pode envolver a redução, bloqueio ou eliminação· da entrada capacitive de cálcio em linfõcitos.
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Exemplos de distúrbios imunes incluem psoríase, artrite reumatõide, vasculite, doença inflamatõria do intestino, dermatite, osteoartrite, asma, doença muscular inflamatõria, rinite alérgica, vaginite, cistite 5 intersticial, èscleíoderraia, osteoporose, ecnema, rej:eição de enxerto de transplante alogênicó ou xenogênico (órgão, medula óssea, células-tronco e outras células e tecidos)( doença enxerto versus hospedeiro, lúpus eritematoso, doença inflamatõria, diabetes tipo I, fibrose pulmonar, 10 dermatorniosite, síndrórné de Sjôgren, tireoidite (por exemplo, tireoidite de Hashimoto e autoimune), miastenia grave, anemia hemolítica autoimune, esclerose múltipla, fibrose cística, hepatite crônica recidivanté, cirrose biliar primária, conjuntivite alérgica e dermatits atõpiua.
Câncer e ©utraa doenças proliferativas
Compostos de Fórmula (X)-(V), composições destes e métodos aqui fornecidos podem ser usados em relação ao tratamento de maligní dados., incluindo, sem limitação, malignidades de origem linforreticular, câncer de bexiga, 20 câncer de mama, câncer de cólon, câncer endometrial, câncer da cabeça e pescoço, câncer de pulmão, melanoma, câncer ovariano, câncer de próstata e câncer retal- A entrada capacitiva de cálcio pode ter um papel importante na proliferação celular em células cancerosas (Weiss e cola. 25 (2001) International Journal of Cancer 92 (6) : 877-882).
A inibição de SOCE é suficiente para evitar a proliferação dé células tumorais. O derivado de pirazol STF-2, um bloqueador direto de Xcrací inibe SOCE e proliferação em células de «Jurkat (2itt e cols. , Cl Bíol.
Chem., 279, 12.427-12.07, 2004) é em células de câncer de
38/356 cólon. Foi sugerido que SÕCE sustentado necessita de captação de Ca2* mitocondrial (Nunez e cols., J. Physiol. 571, 1, 57’73, 2006) e que a prevenção da captação de Ca2* mítocondrial leva à inibição de SOÇE (Floth e cols. ,
P.N.A.N., 97, 19.607-10.612, 2000; Doth e cola. , J, Cell.
Biol. 137, 633-648, 1997; GlítSCh e cols. , ,WB0 J. , 21, 6.744-6.754, 2002). A estimulação de células de Jurkat Indus SOCE sustentado e ativação da fosfatase calcineurina Ca2*-dependente que desfosforilã NFÁT, promovendo- a ló expressão e proliferação de interleucina-2. compostos de
Fórmula (I)-(V) inibem SOCE e podem ser usados no tratamento de câncer ou de outras, doenças ou condições proliÊerativas,
Doenças e distúrbios hepãticos
Doenças ou distúrbios que podem ser tratados ou evitados com o uso doa compostos de Fórmula (I) - (V) , composições destes, e métodos aqui fornecidos incluem doenças e distúrbios hepáticos ou do fígado. Essas doenças e distúrbios incluem, sem limitação, lesão hépãtica, por exemplo, em função de transplante, hepatite e cirrose.
A entrada capacitiva de cálcio foi implicada em doença hepâtica crônica (Tao e cola. (1999) J. BXol. Chem., 274(34)í 23.761-23.769), bem como lesão de transplante apôs conservação a frio-reoxigenação aquecida (Elimadi e cols<
(2001) Azn. <7, Physiology, 281 (3 Parte 1) : G809- G815).
Doenças s distúrbios renais
Doenças ou distúrbios que podem ser tratados ou evitados com o uso dos métodos aqui fornecidos incluem doenças e distúrbios renais. A híperplasia da célula 30 mesangial é frfeqüebtémenté uma caracteristiça fundamental
39/356 dessas doenças e distúrbios > Essas doenças e distúrbios podem ser causados por mecanismos imunológicos ou outras mecanismos de lesão, incluindo IgAN, glomerulonefrite membranoproliferatívá ou -ne-frite do lúpus. Desequilíbrios 5 no controle da rêplicação da célula mesangial também parecem ter um papel na patogêness de insuficiência renal progressiva.
O turnover de células mesangiais no rim normal do adulto é muito baixo, com uma taxa de renovação de menos de 10 1%. ©ma característica proeminente das doenças gloftierulares/renais é a hiperplasia mesangial causada por taxa de proliferação elevada ou perda celular reduzida de células mesangiais,. Quando a proliferação de células mesangiais é induzida sem perda de células, por exempla, em. 15 função de estimulação mitogênicã, pode surgir glomerulonefrite mesangioprolíferativa.. ©adas indicaram que reguladores do crescimento da célula mesangial, particularmente fatores de crescimento, podem atuar por regulação de canais capacitivos- de cálcio (Ma e ocds.
(2001) J. Am. For. Of Nephrology, 12M1J 47-53).
Modeladores do influxo capacitivo de cálcio podem ajudar no tratamento de doenças glomerulares por inibição da proliferação de células mesangiais.
Canais capaditivós de cálcio
Estudos clínicos demonstram que o canal CRAC, um tipo de canal SOC, é absolutamente necessário para a ativação de genes subjacentes à resposta de célula T ao antigen© (Partiseti e cols. , <T. Biol. Chets., 269, 32.32/-32.355, 1S94 ; Eeské β çolsu, Cbsrr. Siol. 15, 1.235-1.241, 2005).
SÓCE pode contribuir dirétamente para a elevaçM© dos níveis
40/356 de* Ca2*' citosôlicQ ( [Ca2*] :ϊ) , como em linfdeltas T nas quais os canais CRAC geram os sinais de Ca** sustentados necessários para conduzir a expressão gênica subjacente à ativação da célula T por antlge.no. A entrada sustentada de 5 cálcio ê necessária para ativação de linfócitos e para a resposta imune adaptiva, A entrada de cálcio nos linfócitos ocorre primariamente através dos canais CRAC. Níveis aumentados de cálcio levam à ativação de NFAT e à. expressão de citocinas necessárias a resposta imune.
XÓ q canal CRAC possuí uma impressão digital biofísica distinta, dependência do estagne guantífiaával e função essencial em células T. Estudos demonstraram que os canais CRAÇ são formados a partir de duas proteínas componentes, que interagem para formar cabais CRAC. 0 canal CRAC é 15 montado por dois componentes funcionais, STIM-1 e Ôrai-1.
STIM-1 (molécula de interaçãa estremai 1} foi identificada como © sensor mamífero de -Ca“* do ER (Liou. J. e cols, Curr. Mol. 15, 1,235-1.241 (2005); Roos, J. e cols. Cell Β.ΪΟ1. 162, 435-445 (2005); WO 20041078295; US
2007/0031814) . Orai - 1/CRACM 1 foi identif ioado como um componente do canal CRAC mamífero (Feske, S, e cols. Nature 441, 179-185 (2006); Vig, M. e cola. Science 312, 1.2201.223 (2005); 2bang, S.L. e cols, Proc. Natl. Acad. Bci, USA 103, 9.357’9.362 (2006)).
STIM-1 é o sensor de Ca2* dentro dos estoques de. Ca**' do ER, movendo-se em resposta à depleçãa do estaque na ponta do ER perto da membrana plasmática. Orai-l é uma subunidade formadora de -paro do canal CRAC na membrana plasmática. Cada uma duas proteínas da membrana S.TIM-2. e 30 Qrai-1 demonstrou ser essencial para a ativação de canais
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CRAC.
A expressão de STlM-1 e Orai-1 em células renais embrionárias humanas 293 (células HEK2â3) reconstitui cãnãxs CRAC funcionais. A expressão de Orai-1 isoladamente 5 reduz fortemente a entrada capacitiva de Ca2* ern células HEK293 é ã liberação de corrente de Ca2* ativada por Ca2* (Xcíuc) ém leucemia de células basofílicas de rato, No entanto, expressa juntamente com a proteína sensível ao estoque STIM-1, Orai-1 causa um aumento maciço de SOCE, 10 aumentando a taxa de entrada de Ca** em até 103 vezes. Essa entrada de Ca2*' é inteiramente estoque-dependente, na medida em que a mesma cc-expressão não causa entrada de Ca2* estoqueindependente mensurável. A entrada é completamente bloqueada pelo bloqueador de canal 15 capacitivQ, 2-aminoetoxidifenilborato. As proteínas STIM são sensíveis ao estoque de Ca2* e mediam o acoplamento da membrana do reticule endoplasmátiGO-membrana plasiuátioa, sem propriedades intrínsecas de canal. Orai-1 contribui para o componente do canal dá membrana plasmática 20 responsável pela entrada de Ca^*. A supressão da função do canal CRAC por supewxpressã© de Orai-l reflete uma estequiometria necessária entre STÍM-1 e Oraí-l (Sobolóff é mis. , ·σ. Biol. Chem. Vol. 281, 30, 20.661-30.565,
2006).
Proteínas da molécula de interação estroiaal (SUM)
Em uma avaliação de RNAi em células de fJrosqphila S2 usando a entrada de Ca2* ativada por tapsigargina como um marcador para canais capàcitivos, um gene gerou uma entrada de Ca2* substanciálmente reduzida, e aquele gene codificava 30 a proteína da molécula de interação estromal (STIM) (Roos,
42/356
J, e. cols. <7. Gall. Mol'* 169, 435-445, 2005). Há dais homólagos de STXM em células mamíferas, STX.M-1 e STIM-2, atnbas parecendo sex' amplamente distribuídas (Williams e cola., Biochem. 1' de agosto de 2001; 357 (Pt. 3) : 673-85) .
STIW-1 é © sensor de Ca3* do W para a entrada oapacitiva de Cá2*.· -STIM-1 é uma proteína da membrana do tipo I de 77 kDa com múltiplos domíníóS previstos de interação protlica ou sinalização, e estâ localizada predominantemente no ER, mas também em certo grau na membrana plasmática.
O knockdown de STIM-1 por RWAi reduziu substancialmente Imm e® células de Jurkat Tea entrada capacitativa de Ca3* em células epiteliais ΉΕΚ293 e células de neuroblastoma SH-SY5Y. No entanto, o knockdown da STIM-2 intimamente relacionada não teve nenhum efeito. Esses resultados indicam um papel essencial de STXM Wroscphila) e STIM-1 (mamíferos) no mecanismo de ativação de canais capacitivos. â improvável que STIM-1 seja o próprio canal cap&Citivo. Ela não possui sequência canal-like, e a superexpressão da proteína aumentou apenas modestamehte a entrada de Ca24'. STTM-1 está localizada tanto na membrana plasmática quanto em membranas intracelulares corno © ER (Manji e cols., BíocMm. Mophys. Anta. 31 de agosto de 2030; 1.481(1)5 147-55, 2000). A séqúência de proteína sugere que ela transpõe a membrana uma vez; com seu terminal NHj orientado em direção ao lúmen do ER ou ao espaço extracelulãr. o terminal contém um domínio EFhand, e funciona como © sensor de Ca** no ER. A proteína também contém domínios de Interação proteína-proteína, notavelmente domínios coiled-coiled no citoplasma e urn motivo estéril (SAM) no ER (ou no espaço extracelular),
0/356 ambos próximos do domínio transmembrana previsto, STIM-l pode oligomerízar e, dessa forma, a proteína no ER e na membrana plasmática podería interagir unindo ós dois (Roos, j. e cole» J. Cell- Biol. 169, 435-445 (2005)).
A fluorescência por reflexão interna total (TIR.F) e a micrósoopía confocal revelam que STX.M-1 estã distribuída por todo o ER quando os estoques de Ca®* estão cheios, mas se redistribui em pontos distintos próximo à membrana plasmât ica com a depleção do estoque♦ Embora a 10 redistribuição de ST1M-1 nas regiões juncíonais do ER seja lenta (Liou, J. e cole- Curr. Mal. IS, 1,235-1.241 (2005),Zhang, S.L. e cols, Nat-urè 437, 902-9QS (2005), ela precede a abertura de canais CRAC por vários segundos (Wu e sois., J, Cell. Biol. 174, 803-813 (2006)) e ê, portanto, suficiéntemente rápida para ser uma etapa essencial na ativação de canais CRAC.
Foi sugerido que a depleção do estoque causa a inserção de ST1M-1 na membrana plasmãtica, onde pode controlar a entrada capacitiva de cálcio através dos canais 20 CRAC (Zhang, S.L. e cols. Nature 437, 902-905 (2005);
Spas sova, M.Ã., e cols. Proc, Naíí Acad. ,&ci. USA 10«>, 4.040-4.045 (.2006) ) .
A evidência crítica para STIM··! como o sensor de Ca3 para SOCE é que se espera que a mutação dos resíduos de ligação de Cas* previstos do motivo estrutural BF-hand reduza sua afinidade por Ca2* e, dessa forma, mimetize o estado com estoque depletado, fazendo com que STIM-l se redistribua espontaneamente nos pontos e desencadeie o influxo constitutivo de Ca/* através de SCCé, até mesmo quando os estoques estão cheios (Spassova, M.A. e cols.
44/356
Proc. Natl. Acad. Sol. UBA 1Õ3, 4.040-4..045 (20Ô6.) ; Liou, «J. e cols. Curr. Biol. 15, 1.235-1.241 (2005)) .
Proteínas Oral
Qrai-1 (também conhecido como GRACH 1) é uma proteína da. membrana plasmática amplamente expressa, de 33 Wa, com 4 domínios transmembrana e uma ausência de homologia de sequência significantè com outros canais de low (Vig, M, e mis. Science 312, 1.220-1.223 (2006); Ehang, B.L. e colo. Proc. Natl. Acad. Sei. USA 1.03, $.357-5.362 (2006)),
Estudos dé células T dè pacientes humanos com uma
s.índrome de imunodeficiência combinada grave (SCID), na qual © engajamento do receptor de. célula T ou a .depíeça© do estoque não ativou a entrada de CaAt; demonstararam que esta era causada por uma única mutação pontual em Orai-1 (Feske, 15 S- e. cols. Nature 441, 179-IBS (2005)).
Existem outros homõlogos mamíferos de Orai, por exemplo, Orai-2 e Orai-3; no entanto wa função não está claramente definida. Orai-2 e orai»3 podem exibir atividade do canal SGC quando superexpressas com STIM-1 em células 20 HEK (Mercer, J.C. e cols. j. Biol. Che®. 281, 24,575-24.990 (20B6) ) .
Evidências de que Orai-l contribuí para o poro do canal CRAG foram obtidas por estudos de mutagênese dê Orai1, A seletividade do canal ÇRAÇ por ions Ca* foi 25 demonstrada por mutações em Glu 106 ou Olu 190, que enfraquecem à habilidade de ligação de Ca1* a fim de bloquear á permeação de cations monovalent.es (similar aos mecanismos descritos para canais de Ca* controlados por voltagém) (Veromin.. e cols. Nature 4.43, 226-229 (200.6); Vig, M. e col.s. Carr» Blol. 16, 2.073-2.073 (2006).;
45/356
Pràkriya, M. a cols. Natur® 443, 230.-233 (2005,)).
A neutralização da carga em urn par de aspartatos na alça 1-XX (Asp 110 e Asp 112) reduz O bloqueio por Sd3*' e © bloqueio de corrente para fora pox Ca*’’ extracelular > 5 indicando que eases sítios negativamente carregados promovem o acíimulo de çátions ppiivalentes próximos à boca dó poro.
As correntes observadas por meio de superexpressão de Orai-l são muito parecidas oom Xcw.’, ® o fato de -que Órai-l 10 pode format multímeros (yeromin, A.V. e mis. Nature 443, 225-228 (2006); Vig. M. ecols. Curb. Biol. 16, 2,073-2.079 (2005); Prakriya# M-. e colá. .Nature 443, 230-233 (2006)) torna provável que o canal CRAC nativa seja um muitimero de Orai-1 isoladamente ou em combinação cam as subunidades 15 intimamente relacionadas õrai-2 e/ou Qrai-3.
^anai.« de eãlcio çapacitivos funcionais
A caracterizaç&a de canais SQC foi obtida, em grande parte, por um tipo de canal SQC? o canal CRAC. A atividade do canal CRA.C < desencadeada pela perda de Ca2* pèlo lúmen 20 do ER, que esta acoplada à abertura de canals CRAC na membrana plasmática por meio das ações de STXM X e Orai-x. A dfôpleçãa de Ca2* é percebida por STIM-1, fazendo com que ele se acumule na junção do ER adjacente ã membrana plasmãtica. Em um estudo de imagem de Ca** t base de TXRF 25 para mapear as localizações de canais ÇRAC abertos, foram observadas elevações de [Ca”1*) $ para co-localrzar com pontos dé STXM-l, mostrando díratamente que os canais CRAC se abrem somente ©® proximidade extrema a esses sítios (bulk, e cdá>, J. Cell. Biol. 174·., S15-825 (2006)).
células que ca-expressam tanto STXM-1 quanto Orai46/356
1, ' a depleçãò do estaque faz com que a própria Oral 1 se mova de uma distribuição dispersada para se acumular na. membrana plasmatica diretamente oposta à STXM-1, permitindo que STXM-1 ative o canal (Link, e cols., J. Cell. Biol.
S 174,. 815 825 (2006); Xu, P. e cols. Bi cabem. Biqphys. Rés. Commub. 350, .96 9-976 (200:6)). Dessa forma, os canais (MAC são formados por agrupamentos apostos de STIM-1 no ER e 0rai~l na membrana plasmâtica. A lacuna da junção entre o ER e a membrana plasmatics de onde Qrai-l/STXM-1 se agrupam 10 (cerca de 10-25 nm) pode ser suficientemente pequena para permitir interações proteína-proteína entre STXM-1 e Orai-
1. Isso é apoiado pelo fato de que STXM-1 e Oi*ai~l superexpres-sas podem ser co-imunoprecípifcadas (leromin, A,V. ã cols, Matute 443, 226-229 (2006) ; Vig, M, ô COÍS.
1.5 Curr. Siol. 16, 2.073-2.079 (2006)).
Dessa forma, STIM-1 e Órai-1 interagem diretemente ou como membros de um complexo multiproteinas. Isso foi corroborado observando-se que a expressão dá porção citosõiica de STXM-1 por si só era suficiente para ativar 20 os canais CRAC em um estudo (Huang, G. N. e cola. Sature Cell Biolx 8, 1003-1010 (2Q06)), e os efeitos da deleção do ERaM/cciled-coíl e de outros domínios do terminal C sugerem papéis no agrupamento de STXM-1 e ativação do canal SOC (Baba, Y. e cols. Proc. Xatl. Acad. 5αϊ. DBA 103, 167045 16709 (2006)). No lade luminal de STXM-1, a região EF-SAM isolada fox-ma. dimeros e multímeros de ordem superior com a remoção de Ca2i in vitro, indicando que a oligomerização de STXM-1 pode ser uma etapa precoce na ativação capacitiva de cálcio (stathopulos, e cols., J. Biol. Chem. 281, 35.85530 35.862 (2006)).
47/356
Em algumas mods ü. idades, os compostos de Fórmula (D *
(V) aqui descritos modulam O cálcio intracelular, por
exem pló, inibição oi x redução de SOCE e/ou Χς^,< Em outras
moda lidades, a modu) Lação por compostos de Formula (1)-(V)
resu ,lta de diverse >s efeitos como, por exemplo, sem
lí mi tação, ligação a uma proteína, interação com uma
proteína,, ou modulação de interações, atividades, níveis ou qualquer propriedade física, estrutural ou outra propriedade de uma proteína envolvida na modulação do 10 cálçio intracelular (por exemplo, uma proteína STIM e/ou uma proteína Orai).
Por exemplo, métodos para avaliação da ligação ou interação de um agente de teste com uma proteína envolvida na modulação do cálçio intracelular incluem WN, 15 espectroscopiá de massa, espectroscopia por fluorescência, ensaios de proximidade de cintilação, ensaios de ressonância de plasmônío de .superfície., e outros. Exemplos de métodos para avaliação da modulação de interações, atividades, níveis ou qualquer propriedade física, 20 estrutural ou outra propriedade de uma proteína envolvida na modulação do cálcio intracelular incluem, sem limitação, ensaios FRET para avaliar cs efeitos sobre interações de proteínas, RMN, cristalografia por raios-X e dicroísmo circular para avaliar os efeitos sobre interações de 5 proteínas e sobre propriedades físicas e estruturais de uma proteína, e ensaios de atividade adequados à avaliação de uma atividade em particular dé uma proteína <
Compostos
Qs compostos aqui descritos modulam o cálcio 30 intracelular e podem ser usados no tratamento de doenças ou
48/356 condi-ções. nas quais a modulação do cálcio intracelular possua um efeito benéfico. Em uma modalidade# ps compostos aqui descritos inibem a entrada capacitiva de cálcio. Em. uma modalidade# os .compostos de .Fórmula (1)-(V) interrompem 5 a montagem de unidades de SOCE. Em outra modalidade, os compostos de Fórmula (D-ív) alteram, as interações funcionais de proteínas que .formam complexos de canal de cálcio capacitivo. Em uma modalidade··, os compostos de Fórmula (X) - (V) alteram as interações funcionais- de STIM-I 1Q com Orai-i. -Em outras modalidades, os compostos de Fórmula (X) - (V) são bloqueadore-s. do poro do canal SOC . Em outras modalidades, ós compostos -de Fórmula. (l)-(v) são bloqueadorés do poro do canal CRAC,
Em um aspecto., os compostos aqui descritos inibem a 15 corrente, eletrofisiológica (Isçç) diretamente associada aos canais SOC ativados. Em outro aspectof os compostos aqux descritos inibem a corrente eletrof xsiolõgic.a· (Imcl diretamente associada aos canais crac ativados.
As doenças ou distúrbios que podem se beneficiar da 20 modulação do cálcio intracelular incluem, sem limitação, uma. doença relacionada ao sistema imunológico (por -exemplo# uma doença autoimune) , uma doença ou distúrbio que envolve inflamação (por exemplo, asma# doença pulmonar obstrútiva crônica, artrite; reumatóxde# doçpça xnflamatória do. '25 intestino, glómerulonefrit.e.# doenças neuroinf lámátÓrias.,esclerose múltipla, e distúrbios do sistema imunológico), dáncer ou outra doença proliferaiiva, doença renal e doença hepática. Em um aspecto, os compostos aqui descritos podem ser usados oómo imunossupressores para evitar rejeições de 30 enxerto transplante, rejeição de bransplant.e; alogênicb ou
49/35« xenoqênicn (órgão.,, modula óssea, células-tronco, outras células e tecidqs), doença enxerto versus hospedeiro* Rejeições de enxerto de transplante podem resultar de transplantes de tecidos ou órgãos* Doença enxerto versus hospedeiro pode resultar de transplante de medula óssea ou de célula-tronco.
;0s compostos aqui descritos modulam uma atividade de> modulam uma interação de# ou se ligam a, ou interagem com pelo menos uma porção de uma proteína no complexo do canal 10 de cálcio capacitivo. Em uma modalidade, os compostos aqui descritos modulam uma atividade: de, modulam uma interação de, ou se ligam a, ou interagem com pelo menos uma porção de uma proteína no complex© dó canal de cálcio ativado por liberação de cálcio. Em um aspecto, os compostos aqui 15 descritos reduzem o nível de complexos funcionais de canal de cálcio capacitivo. Em um aspecto, os compostos aqui descritos reduzem o nível de complexos ativados de canal de cálcio capacitivo. Em um aspecto, ós complexos de canal de cálcio capacitivo são complexos de canal de cálcio ativado 20 pela liberação de cálcio,
Ós compostos aqui descritos para tratamento de uma doença ou distúrbio, guando administrádos a um indivíduò que possui uma doença ou um distúrbio, reduzem, melhoram ou eliminam áficazmente um sintoma ou manifestação da doença 25 ou distúrbio* Os compostos aqui descritos também pedem Ser administrados a UW- indivíduo predisposto a uma doença óu distúrbio que ainda não manifesta w sintoma da doença ou distúrbio, evitando ou retardando o desenvolvimento dos sintomas. O agente podé ter esses efeitos isoladamente ou 3Q em combinação com outros agentes, ou pode tunuienar para
5Q/35S aumentar um efeito terapêutico de outro agente.
Os compostos aqçi descritos, sais farmaceuticamente aceitáveis, prd-fármacos farmaceuticamente aceitáveis ou solvátos farmaceuticamenté aceitáveis destes, modulam o cálcio intracelular, e podem ser usados para tratar pacientes nos quais a modulação do cálcio intracelular fornéce benè £ í c io.
Um aspecto consiste em m oompoetc de Fórmula (I);
Fórmula (X) em que:
A é fenil ou tenspfurano, em que fenil e benzofurano são, cada um, op.ciGnalm.ente substituídos com pelo menos um R; ou A é fenil substituído com dois grupos R em átomos de carbono adjacentes, em que os dois grupos R e os átomos de carbono ao qual estão anexados fcrmati úm C^-Cg cicloalquíl ou d ~C8 he t e ro c i c loal qui 1;
é selecionado da F, Cl, Br, X, ~CR, -NQS, -CPs, ~0H,
-ORSf ~OCF3, -C-Pç, d-Cg alquilenoa Iquinó, ,Ci-C« alquil, C3~CS cicloalquil, Cl-d heteroalquil, d-C§ haloalquil, tetxawlil, cs-cs heterocicloalquil, fenil, NHS.(«O):2.R3., -C{»O)CF}< -C(«O)NHS (=Q) 2R3,
N(R.fh, -N(R4.>C(«©)R3, -COsÍU, -C(=O)Ri, -OCt-Q)Rn ~SR3, S(«O)R3 é -Shohb;
j ê uma ligação, NHS :S («O') s.N(R<5) , -C(~0),
Ç(í=O}NHS (=0)2, ~'S (=s0) aMHC(~O) , S(R.-ü , -N (R.j) C (=0) , -CQ2,
C(”Qj , -00(==0} , -C(~0) N(R.;) , “8, -8 (-0) e -S{~Q)r>: CicCg 30 alquileno, Cs-Os alquenile.no, Cl-Q alquinileno, C3-Cg
51/356 heterbalquilenó, da-üs cicloalquileno ou Ch-Cí; heterbcicloalquileno, em que Ci-Ce alquileno, Οχ-Cg alqueníleno, 0?~£§ alquinileno, Ci-Cg heteroalquileno, C3-Ce. cicloalquileno e CS~C6 são opcionalmente substituídos com pél© menos um R;
Rx é O02R2 ou um bibisôstero de ácido carboxílico, em que R? é hidrogênio, Q-Cg alquil, Ci~Gg. cicloalquil, Ci-C§ haloalquil, fenil ou bénzll;
.2 é Õf S, NH, N-O óu X3W k ê W~L<£epil> W-L-B, B, W-L-D ou Π,· em que fenil, B-, e D são, cada um, opcionalmente substituídos com pelo menos um R ;
w é nr·:., 0 ou uma ligação;
L é metíleno, etileno substituído com pelo menos um R,
Cí-Cg alquileno, Cb-Cg alquçnileno, Cs-Cg alquinlleno, Cj.-Cg heteroalquileno, C3~C6 oiclaalquileno ou C2~€s heterociulaalquileno, em que metileno, C3-Cê alquileno, C2~ Cs alquenileno, C2~£s alquinileno, 0^-¾ heteroalquileno, C3C.$ cicloalquileno e C2-Çs Pão opoipnalmente substituídos com 20 pelo menos um R;
B é selecionado de furanq, tiofeno, pirrol, piridina, oxazol, tiazol, imadazol, tiadiazd, isoxasol,. isotiazol, piraz.01, piridasina, pirimidina, pirazina, oxadiazol, tiadlazol, triazol, indol, benzoxazol, benzotiazol, benzimidazol, benzoxadiazol, benzotiadiazol, benzotriazol, pirazolopiridina, imi dazopiridina, p irrolopiridina, pirrolbpirimidina, índolizina, purina, furopiridina, tienopiridina, furopirrol, furofurano, tíenofurano, 1,4diidrõpirrolopirrol, tíenopirrol, tienotiofeno, quinolina, 30 isoquinolína, furopirazol, txenopirazol e 1,552/356 di1dropirrolopirasol;
D é Cs-Cis cicloalquil ou Cs-C§ hetwocicloalquil;
oada Rs ê selecionado independenteaiente de Ci-C6 alquil, C2-C5 haloalquil, Ch-® cicloalquil, fenil e benzil;
.cada. R« é selecionado independentemente de hidrogênio,
Ci-Ci alquíl, haloalquil, C3~C.S cicXoalquil, fenil e benzil; ou um sal, solvato, N-dxido ou prõ-fármaco fàxúiaceútidáWénte. aceitável deste.
Umà modalidade consiste em um composto de Formula (X) , 10 em que X é B< Em. outra modalidade, B é selecionado de tiofeno, furano e pirrol. Em outra modalidade, tiofenp, furano e pix'rol são opcionalmènte substituídos oom pelo menos um R. Ainda em outra modalidade, B ê tiofeno e é substituído com pelo menos um R selecionado de F, Cl, Br, 15 I, -CM, alquino, Ci-CR alquilalquino, -NOS, -CIS, ~CR3,
-COS, Ci-Cs alquil, C3-Cs çicloalquil, .Cj-Cç fluoralguil, CiCg heteroalquil, Ci-Cg haloalquil, tetrazolil, Cs-Cg heterociclQalquil e fenal. .Axnda èm outra modalidade,. R é selecionado de F, Cl, Br e l. Em Outra modalidade, R é Α~ 20 C§ alouil. Fm uma modalidade adicional, Ui-Cg alqull ê met.il, etil, n~propil, .iscpropil, n*butil, isobutil e terçbutil. Ainda em outra modalidade, R é GR3. Bm uma modalidade adicional, R3. é Cj-Cs. alquil. Em outra modalidade, Ci-Cl alquxl é raetil, etil, n-propil, isopropix, 25 π-butil, isobutil e terc-butil. Em uma modalidade, R-, é metí1, Em uma modalidade, B ê tiofeno substituído com fenil. Em uma modalidadé, R é tiofeno. Em outra modaxidade, R é -S(«0)2R3 e Rj é .Cj-Cç alquil. Era outra modalidade, Cj-Ce alquil é met11, etil, n-propil, ísopropil, n-butil, isobutil e terc-butíl. Em outra modalidade B é tiofeno, R3
S3 /.355 é - funil substituída com -pelo menos um substituiate .-selecionado de F, Cl. Br, I, -GN, a 1quino.. C;-Cg alquiíalquino, -NOg, -CFj, -'CR?,, -OCFj, C3--C\; alquil, C3“C§ cidloalqui.l, Cj-'C§- fluoralquíl, Cj~C,; heteroalquil, Ci~C§ haló.alquil, tetra.zolil, Cs-Cs: heterocieloalquil-feni-l, Em outra, modalidade, Cs-Cg alquil é metil, et.il, n-propil., isopropil, n-butil, isbbufcil e teru-bútil,
Uma modalidade adicional consiste em um composto selecionado -de.;
54/3S6
OU urn sal, solvato ou pro-farmaco farmaceuticamente aceitável deste.
Ainda em outra modalidade, B é furano e é substituído com pelo menos um R selecionado dè F, Cl, Br, X> -CN, alquino, fe-fe alquílalquind, -Wfe -CF>.· ~C®, -ORj, ~OCFSf Cx-Cg alquil, fe-Cg cicloalquil, Ci-Cg fluoralquil, fe-fe heteroalqu.il, C5.-Cs haloaXquil, tetrazolil, C£-Ce heterôcicloalquíl e fenil. Ainda em outra modalidade, R é selecionado dá F, Cl, Br e I, Em outra modalidade, B é furano substituído com pelo menos um Ci-Çg alquil. Em uma modalidade adicional, Q-Cg alquil é metil, etil, n-propiX, iáopropil, n-butil, isobutil e terc-but.il. Ainda em outra modalidade, R é 0Ra. Em uma modalidade adicional, é CX-:C« alquil. Em outra modalidade, Ci-C«· alquil ê metii, etil, n·· propil, isopropil, n-butil, isobutil e terc-butil. Em uma modalidade, Rj é metil. Em uma modalidade, B é furano substituída com feni.1. Em uma modalidade, o fenil ê substituído com pelo menos um halogênio. Úma modalidade
55/356 adicional consiste w um composto selecionado ctet
X5 OU um sal, solvato ou prô-fárraaco farmaceuticamente aceitável deste♦
Wa modalidade consiste em um- composto de Fórmula (I) , em que hoteroaril é um heteroaril monocíalico, opcíonalmente substituído cora pelo menos um R. Bm outra 20 modalidade, heteroaril ê um hetéroaril monocíclico de 5 membros ou heteroaríl monocí.clíco dê 6 membros, em que hsteroaril inclui Θ ou 1 átomo de O , 0 W 1 átomo de S, Q-3 átomos de N e pelo menos 2 átomos de carbono, opcíonalmente substituído com pelo menos um R, Em outra modalidade, 25 héteroaril é um heteroaril de 5 ou 5 membros sélecionado entre furanoil, tienil, pirrolil, oxazolil, tiazolil, imidazólil, pi xa sol 11, ísoxazolil, rsotiazolil, 1.,3.,4tiadiarolil, piridiníl, piridatinil, pirimidinil, pirasinil e triazini.lt opcíonalmente substituído com pelo menos um R, üma modalidade consiste em um composto de Formula (X), em
56/356 què o heteroaril monocíclico é um heteroaril monocíclico de membros que possui pelo menos 1 átomo de H no anel. Em .outra modalidade, o heteroaril monocíclico de 5 membros possui 1 ou 2 átomos de N no anel. Em uma modalidade.
adicional, o heteroar.il monocíclico de 5 membros possui 1 átomo de S. Em uma modalidade adicional, o heteroaril monocíclico de 5 membros possui 1 átomo de Ô. Ainda em uma. modalidade adicional, o heteroaril monocíclico de 5 membros é substituído com pelo menos, um R« Ainda em uma modalidade adicional, © R é um. halógenio, Em outra modalidade, R é um Cs»C§ cicioalquil. Em outra modalidade, R ê cicloprcpil, cic.Xobutil, cislopentiX ou ciclohexil. Em outra modalidade, R é a heteroaril. Em uma modalidade adicional, R é um fenil opcionalmente substituído com um. halogênio. Ainda em outra modalidade, R ê um Cx-Cç alquil como, por exemplo., metil, etií, n-propil, isopropil, n-butil, isdbutil e terc-butil. Em uma modalidade adicional, é um composto selecionado de:
57/356
ou um. sal, solvato, N-óxido ou prô-fármacò farmaceuticamente aceitável deste.
Em outra modalidade, heteroaril é um heteroaril de 6 membros, em qu® heteroaril inclui o ou. 1 átomo de o, 0 ou 1 15 átomo de S, 1-3 átomos de N e pelo menos 2 átomos de carbono, opcionalmente substituído com pelo menos um R. Ainda em uma modalidade adicional, heteroaril é um heteroaril de 6 membro®· que contêm .1-3 átomos de N' no anel, opcionalmente substituído com pelo menos um R. Ainda em uma 20 modalidade adicional, o heteroaril de 6 membros é substituído com 1 átomo de N, Em outra modalidade, cbm 2 átomos de N« Ainda em uma modalidade adicional, 3 átomos dfe: K; Em outra modalidade, heteroaril é um heteroaril de 6 membros selecionado entre piridinil, piridazinil,
2.5 pirimidinil:, piraisinil e triazínil, opcionalmente substituído com pelb menos um R. Em uma modalidade, o heteroaril de S membros ê substituído com dois R. Em uma modalidade adicional, o heteroaril de 6 membros e substituído com R selecionado da halogênio, C5-C6 alquil,
Q-Cs haloalquil, fenil, hidróxi ou ORa. Em uma. modalidade,
58/356 halogênio é F. Em outra modalidade, halogênio é Cl, Ainda em uma modalidade adicional, halogênio é X. Ainda outra modalidade consiste en·. urn composto de Fórmula (I) , em que B é um heteroaril de 6 membros- substituído com pelo menos um 5 QR3 , em gue R3 é metil ou f enil.
Uma modalidade adicional consiste em um composto que possui a estrutura:
59/355 ou um sal, solvato,. N-óxido ou pró-fãrmaoo farmaceuticament® .aceitável deste.
Também são aqui apresentadas formas de N-õxido de compostos de Fórmula (X)-(V) como,, por exemplo, B é um N5 õxido de piridina. Wa modalidade consiste em um composto de Fórmulas (I)-(Vj, em que, quando o grupo heteroaril contém um átomo de nitrogênio, a forma de N-õxido também está presente. Ainda em outra modalidade, o átomo de nitrogênio é parte do anel heteroaril. Em outra modalidade, 10 o átomo de nitrogênio é um grupo amino que está substituído no anel heteroaril. Em outra modalidade, o N-Ôxido é um amina N-õxido. Ainda uma modalidade adicional consiste na forma de N-óxido de um anel heteroaril contendo pelo menos um átomo de nitrogênio·. Outra modalidade consiste na forma 15 de N~õxido de um anel heteroaril contendo dois átomos de nitrogênio >
Também são aqui descritas formas de metabólito de NÕxido de um composto de Fórmula (X) - Em uma modalidade, a forma de metabólito de N-õxido de um composto de Fórmula 20 (1) possui a estrutura:
em que X é selecionado de O, S ou NRi;
Rj é hidrogênio ou Q~CS alquil;
R é selecionado dé F, Cl, Br, I, -CT, -CF3í
-QÉJ, -QCFs, -C«eo, -OCR3, Cx-Cç alquilenoalquino, CV€s alquil, CVCs aicloalquil, Q-Cg heteroalquil, haloalqoil, tetrazolil, C;,-C1 heterocicloalquil, fenil, *60/356
NHS(“O}2R3f SUOHNÍR®, -C(=Q)CF3, -C (~O) NHS ®O) 2R3
S(«O) sNHC(«0}Ro MR/h., «W-CMRa, -CGsiU, -C(=O)R3
QC(=O)R3, -0(=0) MRM, - SR3/ ~S(~O)R3 e -S(“GHR3; R3 e R* são como descritos previamente; e .π é um número Inteiro de 0-5.
Uma modalidade consiste no metabôlíto descrito acima.
em. gue X é S.· Em outra modalidade, R é selecionado de F, Cl, Br e I e Ci-C,3 alquil. Em outra modal idade, Cx-Cs alquil ê mefcil, étil, n-propíl, isdpropil, n-butíl, isobutil e terc-butil. Ainda em outra modalidade, Cj-Cg alquil é metil Em uma modalidade adicional, n é 1. Ainda em uma modalidade adicional, n é 2. Em outra modalidade, n é 3. As formas de. metabôlito de N-óxido de um. composto de -Fórmula (I) possuem, em uma modalidade, a- estrutura
Em uma modalidade, as formas de metabõlito de N--6xido de um composto de Fórmula (I) são preparadas por métodos aqui -descritos, Em outra modalidade, as formas, de metabolite de N-óxido de um composto de Fórmula (I) não se limitam a benzotiázól, benzimídazol ou bensoxazol, mas também compostos de Fórmula (I) , em que X é um heteroaril que possui um átomo de nitrogênio como, por exemplo, pirrol, pirazol, oxazol, oxadíazol, tiazol, tiadiatol, imídazól, triazol, tiadiarol, isoxazol, ísotiazol, bentoxadiazol, heúzotri-azol, indol, piridina, pirimidina, piridazina, pi.ra.Kina, quinolina, iaoquinolína e io quinoxaline
Outra modalidade consiste em um composto de Fórmula (I), em que heteroaril é um. heteroaril bxoíçlicp., opcionalmente substituído com pelo menos um R. Em outra modalidade, heteroaril ê um hateroaril bicíclico de 8 5 membros, um heteroarxl bicíclico de 9 membros ou um heteroaril bicíclico de 10 membros, em que heteroaril inclui 0, 1 ou 2: átomos de Q, G, 1 dú 2: átomos de .£, 0-3 átomos de N e pelo menos 2 átomos de carbono, opcionalmente substituído com pelo: menos um R. Em Outra modalidade, 10 heteroaril é um héterdaril de 8 membros selecionado entre furofurano, íurppirrol, tienofurano, tienotiofeno, tienopirroi, dildropirralopirrol, furoimidazol, tienoimidazol, diidropirroloxmidazol, pirrolooxadiazol, di xdropirrolotriazol, pirrolotiadxazol, fuoroxadiazol, 15 tienacxadiazol, pirrolopxadiazal, furotriazol, tienotriazol, iurotiadiasol a tienotiadiazol, opcionalmente substituído com pelo mexxos um R.
Em uma modalidade, o heteroaril bicíclico de 8 membro® possui a -estrutura.
em que ü e :üx são independentemente 0, S ou NRS. Em uma modalidade, ü é O. Em outra modalidade, Ü ê S« Em na».
'25 modalidade adicxonal, U é NRS. Em outra modalidade, tanto ü quanto Ú:i são S. Ainda em outra modalidade, R2 & hidrogênio ou Ci-'Cs alguil. Ainda em outra modalidade, R é selecionado de F, 01, Br, I, -CN, alquino, Ci-Cs alquilalquino, NO2, CFj, -OH, -0R3-, -OCFj, ex-Cs alquil, C3-C§ cicloalquíl, Cx-Cg fluora.lqu.il, C.i-Cg hetexOalquil, Cj-Cg haloalquil,
62/356 tetrasolil, Cs-C^ hetaracicloalquil e fenil. Ainda em outra modal idade, R é selecionado de F, Cl, Sr e I. Em outra modalidade, R é CrC* alquil. Em uma modalidade adicional, Cx-Cç alquil é metil, etil, π-propil, isopropil, n-butil, 5 1sobutil é terc-butil. Ainda em outra modalidade, R é substituído com pelo menos um grupo CVCê alquil. Em uma modalidade adieional, Cx-C6 alquil é metil, etil, n-propil, isopropil, n-butil, isobutil e terd-but.il.
Uma modalidade consiste em um composto de Fórmula (I), 1Q em que B ê um grupo heterôaríl bieíclico de 8 membros, o composto selecionado de;
Outra modalidade consiste em um composto de Fórmula (X), em que o heteroaril biciclico de 8 membros possui a estrutura
em que C e Y são, cada um independentemente, O, S ou NR2 . Uma modalidade, consiste em um composto de Fórmula (I), em que U e ¥ são, ambos, S. 'Em outra modalidade, U e '¥ são, ambos, 0. Em uma modalidade adicional, U e Y são, ambos, NRa. Ainda em outra modalidade, U é O e Y é s.< Ainda em
63/356 outra modalidade, U é 0 e Ϊ é N. Ainda em uma modalidade adicional, U ê S e Y ê Mj.. Ba uma modalidade R2 é hidrogênio. Em uma modalidade adietonal, J é uma ligação e A é fenil opcionalmente substituído com pelo menos um S substituihte selecionado de Cl, F, Br e X. Em outra modalidade, o (pelo menos um): substituinte ê Cl. Ainda em uma modalidade adicional, o (pelo menos um) substituinte ê CN, OH ou NCV Uma modalidade consiste em um composto que possui a estrutura:
ou um sal, solvato, N-óxido ou pró-fármacò farmaceutícamente aceitável deste,
Em outra modalidade, heteroáril ê um heteroáril de ã membfos, em que heteroáril inclui 0, 1 ou 2 átomos de O, 0-, 1 ou 2 átomos de S, 1-3 átomos de N e pelo menos 2 átomos de carbono, òpçionalmente substituído com pelo menos um R.
Ainda em uma modalidade adicional, heteroáril é um 25 heteroáril de 9 membros contendo 1-3 átomos de N no anel, opcionalmente substituído com pelo menos um R. Em outra modalidade, heteroáril é um heteroáril de 9 membros selecionado entre benzoxazol, benzotiazol, bensoimídazol, benzoxadiazõl, benzotiadiazol, benzotriazol, indol, 30 imidazQpirldinã; triazolopiridina, pirazolopxrídína,
64/355 piírrolopirxmidina, indolizina, purina, oxazolopiridina, t.iazolopi ridina, imidazopiridina, imidazopir Idina, opcionalmente substituído com pelo menos um R.
Em uma modalidade, o heterçaril bicíclico de 9 membros possui a estrutura u -^' em que U ê CH ou N. Em outra modalidade, o heteroaril bicíclico de 9 membros que possui a estrutura mostrada 10 acima é substituído com pelo menos um R selecionado de halogêniO e/ou Cx-Cs alquil. Em outra modalidade, R é F, Cl, Br ou I. Etn uma modalidade adicional, R é metil, etil, n-propil, isopropíl, n-butil, isobutil ou terc-butil. Amda outra modalidade adicional consiste em um composto de
Formula (I? que possui a estrutura;
Ainda em outra modalidade, o hateroaril bicíclico de 9 membros possui á estrutura em que U ê O, s ou NRs. Em uma modalidade, U ê O. Ém * 65/356 utnà. modal idade adicional, U é S. Ainda em uma modalidade adicional, U é W3 e Rs ê hidrogênio.
Em outra modalidade, A é fenil e J é uma ligação. Em uma modalidade adicional, o fenil é substituído com pelo 5 menos um substi.tui.nte selecionado de F, Cl, Br .ou I. Uma. modalidade consiste em um composto de Fórmula (I), em que B é um heteroaril bicíclico de S membros selecionado de:
Ainda outra modalidade consiste em um composto de
Fórmula (I) , em que B é um heteroaril bicíclico de 9 membros que possui a estrutura selecionada de:
em que U é CH ou N, V é O, S ou KRg. Em uma modalidade, U é CH. Ainda em outra modalidade, Ü ê N. Em 20 uma modalidade adicional, V é O, Ainda em uma modalidade adicional, V é S. Em uma modalidade, V é em que Ri éhidrogênio ou Ci-Cs alquil. Em outra modalidade, o heteroaril bicíclico de 9 membros mostrado acima ê substituída com pelo menos um R sele ciai ado de F, Cl, Br,
2.5 I, -CN, alquino, CL-C& alquilalquino, -KO2, -CFj, -OH, ~0R3,
Cj-Cg alquil, C3-Cs cicloalquil, C3.-C€ fluoralquil, Cx-Ce heteroalquil, Cí-Cs haloalquil, tetrazolil, C2-C6 heterocicloalqui 1, f enil, -NHS (=0) 2R3, S í =O) ;;N í R<) 2, C{=0)CFi, -C(=O)N.HS (=O)sRs , -S (=0) 2WC (=0) R4 , $(RU.3,
N(RbC(=0ÍR3f -COA, -C(=Ô)R2, - 0C(=0)R3> -C(=O)R (¾) 2, 6 6 / 3 5 6
S©3, -SÍ-ORa. e -s{=:O)?,R3. Em outra modalidade, R é selecionado de F, Sr. Cl, I, OH, NO2, *
ON, 0R3, OÇF3 e CFj.
Uma modalidade adicional consiste em um composto de Fórmula (I) , em que B ê um beteroaril bicíclico de ã membros selecionado de t
Outra moda1idada cóns 1ste em um composto dé Formula (X) , em que B é um heteroaril bicíclico de 9 membros que
Ainda outra modalidade adicional consiste em um composto de Fórmula (1), ém que B é um heteraaril bicícxico de 9 membros que possui a estrutura ©pcionalmente substituído com pelo menos um R, Uma modalidade consiste em um composto de Fórmula (I), em que A é fenil opcic-nalmente substituído com pelo menos um substituinte selecionado indepandéntemente de F, Cl, Br, X, -CN, alquind, Çi-Cs alquilalqui.no, -ΝΌ·3, -CFj, -OH, -OR3, .30 QCFy, C;.~Cs alquil, Q-C§ cicloalquil, fluoralquil, Ci~
67/356
C&' heteroalqull, haloalqui.1, tetrasplil, Cs-Ç« heteracicloalquil, f anil., -KHS (2R.31 S (~0) 2N (R/J 2,
C(^O)CF:;, -C(«O}WS(«OhR3, -S UO) 2N»C (^0) R4, 15(^)2,
N{114)C(~0)Rà# -C02R4, -C(*Q)R3, -OC(».0jR3., -C («.©.) R (Rj :Si 5 SRx, -Sf»O)Rj e -S(®©)aR;5. Ainda em outra modalidade, R é selecionado de F, Cl, Br, I, -OR, alquino., Ci-Cs alquilalquino, -NOS. -CF3, -OH, -0R3, -QCFj, Ci-C*. alquil, C5“Cs cicloalquil, C<·<!: fluoralquil, Ci~C« hetexoaiqu.il, Cx€\: halaalquil, tetrazolil, . heterccicldalquil a fenil.
Ainda em outra mddalida.de', R é selecionada de F, cl, Br e X. Em outra modalidade, R ê Q-Cg alquil» Em uma modal idade adicional, A.-Cg alquil é met 11., e'til, n-propil, isapropil, n~butil, isobutil e tare-but11. Ainda em outra modalidade, A é fenil substituído com pelo menae um grupo C^-C« alquil.
.15 Em uma modalidade adicional, Cj-C,$ alquil é-'metil, e-til, xl~ propil, isopropil, n-butil, isobut.il e. terc-butil.
Em uma modalidade, o composto de Formula (X) é selécianado da:
Bu
Ainda em uma modalidade .adicional, heteroaril é um heteroaril de 10 membros contendo 1-3 átomos de no anel, opcionalmente -.substituído' com. pelo menos um: R. Em outra
3Q modalidade, betetoaril é um heteroaril de 10 membros
68/356 selecionado entre quinol .ina, cinolina, benzotriazina, quinoxalina, isoquinolina, naftiridina, quinazolina, ftalazina, opcionalmente substituído com pelo menos um R.
Também são- aqui revelados compostos nos· quais o heteroaril é um heteroaril de 10 membros contendo 3 heteroátomos no anel, Em. uma modalidade,, o heteroátomo -é selecionado de nitrogênio e enxofre. Em outra modalidade, O composto aqui descrito é selecionado de ácido 2-{benzo[c][1,2,51tiadiazol-5-carboxaraido)-4-(410 clorofenil)tiofeno-3-carboxílico, ácido 4-(4-clorofenil)-2(1-metil-iH-benzo[d] [1,2,3]triazol-5 -carboxamide)tiofeno-3 carbóxílico e- ácido 2- .(benzo [c] [1, 2,5] tiadiázol-4 carboxamido) -4-(4 “Clorofenil) tiofenç>-3-carboxílico>
Ainda outra modalidade adicional consiste em um composto de Fórmula (I), em que B é um heteroaril biçíclico de 10 membros que possui a estrutura em que U é CH ou N, em que o heteroaril é opcionalmente substituido com pelo menos um R.
Uma modalidade consiste em um composto de Fórmula (I) em que Ra é hidrogênio ou CVCe alquil- Outra modalidade, consiste em um composto de Fórmula (I) , em que J é uma 25 ligação e A. é fenil opcionalmente substituído com pelo menos um substituinte selecionado independentemente de F, Cl, Br, I, -CN, alquino·,. di-Cs alquilalquino, -W2, -0F3í OH, -0Rs, -OCF3, Ci-Cs alquil, Cá-Cs éicloalquil, Cq-Cg fluoralquil. Οχ-Cs heteroalquil,. Οχ-Οβ halóalquil, tetrazolil, C2-Q heterocicloalquil, fenil, - NHS(-012¾ ?
69/356
SWhMRM s, -cMJiCFj, -C (XU NHS:XOlsRs, -S («O)WC( =0)1^, N(^)3, -N(R4) C(«Ô)R3, -C02R4, -C(X5)R3, ~0C(»0)Rv
C(sO)MRJs, -SR3, -SMMR; e -S(=0j2R3. Ainda outra modalidade consiste am um. composto de Fórmula (XXI) em que:
R é selecionado de F, Cl, Br, I, -CN, alquino, Cr-Cg alquilalquino, -N0;Sf ~QH', ~0R3, ~OCF3f C2-C6 alquil,
Cj-Cá cicloalquil, Cj-Cç fluoralquil, Cy-Çg heteroalquil, Cj,.cá haloalguil, tetrazolil, C2“C§. heteroeicloalquil e f en.il... Ainda em outra modalidade, R e selecionado de F< Cl, Br e
I . Em outra modalidade, R é Ci-Cb alquil. Em uma modalidade aciicioúalf Cj~Cg: alquxl 1 metil,. evil, mprupil, isopxropxl, n-butil, isobutil e terc-butil. Ainda em outra modalidade, A é substituído eom pelo menos um grupo Ci~C§ alguil» Em uma moda.Xidade adicional, Ci“C§ alquil é metil, etxl, n15 pr?ppil, .IsopropiX# n-butil, isbbutil e terc-butil. Uma modalidade adicional consiste em um composto de Formula (I) selecionado de:
Dutra modalidade consiste em um. composto de Fórmula (X) , em que B é um heteroaril bicíclico? de 10 membros que
7&/35B possuí a estrutura
em que o heteroaril é opcionalmente substituído ccra pelo menos um. grupo R selecionado de F, -Cl, Br, I, -Cli,
S alquino, Ci-Cg alquilalquino, -Nth, -CEy, -GR, ~GR3·, -OCF31.
C,-Cg alquil,· Cs—Cg aidOálquil, C?. ~ Cg fluoialquil, Cj~C3 heterdalquil, Ci~Cs haloalquil, tétrazolil, C2-Cg heterociclealquil, fenil> -W (-O) 2¾ , S (-GHN (R.-j) 2:. Cí-QlÇFa? ~:C(d)NHSÍ^0)sR3í -S («O) 2HH€ («O) R« , Ν(Η4)2:, •10 U(R4) C (=O) Rs. ~CO3R4.,. ~CNQ)RSí -OC(^O)R3, ~·δ(»?Ο)1(Μν -SRs,
-S(“O)Rs e SíwOhRj, Em outra modalidade, A é um fenil oncionalmenta substituído cora pelo menos um substituinte selecionado independentementè de F, Cl, Br, X, -CN, alquino, Cx~Ce alquílalquino, “UO2f -CW, -OH, -OR3., -OCFj, 15 Ci-Cg alquil, 0:<-C6 càcloalquil, Cx-Gs fluoralguil, C3~CS heteroalquil, Ci-C§ haloalquil, tetrasoli.1, Cl-Cg heterocicloalquíl, fenil, 2Η3ί S 2í
C(~©)CFs, -CtíOlWÍ^OhRi, ~S(“0}aOC(-0)Rg, B (Rg) 2., mRdCÍ^OlRs, -COsRg;, ~C(“O):R3r -ÓC (d)R3, ~Ç(^O)N(Rd, 20 O3, -S (d): Rj- é ~B(=QhR3- Ainda em outra modalidade, R â selecionado de F, Cl, Br, X, -CN, alquino, C:3,-Cg alquílalquiuo, -MO-j, ~CFs, -OH, ~QRs> -OCFy, Ci~C« alquil,
C3-Cç cicloãlquil , Ci-C«. fluoralquil, Ci-Cg heteroalquil, Cjçs haloalquil, tetratolil, C2-C« heterocicloalquil e fenil,
Ainda em outra modalidade, R é selecionado de F, Cl, Br e
I. Ainda em outra modalidade, R é substituído com pelo menos um grupo Ci:~Cs alquil. Em uma modal idade adicional,
Cx-Cg alquil é metil, etil, n-propil, isopropil, n-butil, isobutil e terc-butil.
Vinculadoras
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Também são aqui revelados compostos de Fórmula ti), em qua X ê W-L-fénil, W~L~B, ou VJ-b-p. Em uma modalidade, R é Kfe. Em outra modalidade, W ê O. Ainda em outra modalidade, W é uma ligação. Em Uma modalidade adiuional, b é metileno 5 substituído com pelo menos um R ou etileno substituído com pelo menos um R, Em uma modalidade adioiona 1, W é Ci-Ct alquileho, fe-Cg alquenileno, fe-Cs alquinileno, C:!-fe heteroalquileno, Ch-Cg cicloalquileno ou Ci.~C« heterocicloalquileno, em que C3-Cs alquileno, Cs-Cg
1Q alquenílenc, Ck-Cs alquinileno, Ci-Cs heteroalqúileno, Ç3~Cg cicloalquileno e C3-C« heteroçicloalquileno são substituídos com pelo menos um R, Em uma modalidade adicional., b é
em que Ri, Ru, Rui e Riv são, cada um, selecionados independentemente de hidrogênio, F, Cl, Br, I, ~CN, alquíno, Ci-fe alquilaIguino, -Mh, -OH, - CF3, -OCRs, -ORj, Cj-Q alquil, C5-Cs cicloalquil, Cr-fe heteroalguil, fe-Ce fealoalquil, tetratolil, C2-C§ heterocicloalquil, genii, -
2.Ô WSÇfehRs, -S.(«Ó)sM(R4)-2·, -CfeGÍCFs,; -C.(»O)
W, -NÍRfeCfeOl fe, -COiW, -CfeOj fe, ~
OCfeCbRa, -COMRfe, -BRs, ~SfeG)R3 e -S (*Ó) fet; é®. que R;., Rn, Ruí ® R±v não podem, todos, ser hidrogênio; ou Ri e Rm ou Rh « feii ou Ri: e Efe du R-A e Ràv ou Ri é Ru ou Rm e Rfe 25 juntos com os átomos áò qual estão anexados, formam um grupo C3~CS cicloalquil ou um grupo Cfl-C§ hetsrocicloalquil. Em Outra modalidade, M é hidrogênio e Rh é selecionado de F, Cl, Sr Ou X.
Ainda outra modalidade Rx e. Rh. são, ambos, hidrogênio
Em uma modalidade adicional. Ri é hidrogênio e Rh é Ci-Cg
72/356 alquxl. Ainda em uma modalidade adicional Ci-Cs alquil é metil, etil, n-propil, isopropil, n-butil, ísobutil. e terc~ putil. Em uma modalidade Q-Ce alquil ê metil. Em outra modalidade, Riiá_. e RjV sã©f ambos, hidrogênio. Em ainda 5 outra modalidade, Rkí ê hidrogênio e $UV é selecionado de
F, Cl, Br ou I. Em uma modalidade adicional, Rh© u hidrogênio e Riv & <VC« alquil, Ainda em uma modalidade adicional, C.-C. alquil é metil, etil, n-propil, isopropil, n~but.il, isobutil e terc-butil, Sm uma modalidade, Cv'Cs l(j alquxl. é metil, Em outra modalidade, Ri e Rn são, cada um, selecionados independentemente de F, Cl, Br pu I. Ainda outra modalidade, Ríi± è R^ são, cada um, selecionados independentemente de F, Cl, Br ou I. Em uma modalidade adicional, e Rn são, cada um independentemente, Cx~C§ 15 alquil. Ainda em uma modalidade adicional, Ci-C§ alguil é metil, etil, n-propil, ísópropil, ú-but11, isobutil e tercbufcíl. Em uma modalidade Çi~C§ alquil é metil.
Em outra modalidade, I»· é Cg-Cg ciclóalquileuo selecionado de ciclopropil, ciclcbut.il, cxclppentxl e 20 çiclohexil opcionaImente substituído com pelo menos um R» Em umà modalidade, £ ê ciclopropil.
Uma modalidade consiste em um composto de Formula (1,) que possui a estrutura:
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74/356
75/356
76/356
Outra modalidade consists em um composto de Fõrmula (X) , em que I> é
selec ionados um
Br, I ae em que R;
i«dependentemente alquino, Ci-Çg alquilalquino, ~NQSí -CFs, -OCFj, -ORç, Cj-Cg alquil, C3-C6 cicloalquil, CVCs heteroalquilCi-C§ haloalquil, tetrasolil, C£-C§ heterocicloalquil, Mil., 15 NHS ¢-=0)2¾ ,· -S (~0) 2.N (R«) 2, ~C(^O)CFj, -C i =0) KHS {«O) 2R3 <
S(~O)2NHC(«Q)R3, -MRül, -N(R..1)C(~O)R3( -COsRg, -C(~0) R3, 0C(»O)R3, -COEWh' ~S(=O)R3 e ~S(~Q)í>Rj; ®m que R; e
Rn não podem ser, ambos, hidrogênio; ou R4 e R4, juntos com os átomos ao qual estão anexados, formam um grupo Cj-Cg 20 cicloalquenil ou um grupo C2~C§ heterocicloalquenil, desde qué Rg e Ra estejam na configuração cis. Em uma modalidade, Ri é hidrogênio e Rh ê selecionado de F, Cl, Br ou I. Ainda outra modalidade, R, é selecicnado de F, Cl, Br ou x e Rh. é * hidrogênio. Em uma modalidade adicional, R; ê hidrogênio e 25 Rn. é Ci-Cs5 alquil. Ainda em uma modalidade adicional, Ci.-C« alquil é metil, etil, n-propil, isopropil, n-butil, isobutil e terc-butíl. Em uma modalidade, Cx”C«. alquil é metil. Em outra modalidade, Ri é Cj.-C« alquil e Rh. é hidrogênio. Ainda em outra modalidade, Cr-Cs alquil é 30 metil, etil, n-propil, isopropil, n-butíl, isobutil e tercbutil. Em uma modalidade adicional, C3.-C5 alquil é met11. Ainda em uma modalidade adicional, jq e Ro. sao, cada, um, selecionados índependentemente. de F, Çl, Br ou X. Em uma modalidade, Rui e Rà„. são, cada um, seleçionados 5 independentemeute de F, Cl, Br ou. I. Em .outra modalidade,
Ri e Rti são, cada um independentemente, Cj.~Gs alquil. Aluda em outra modalidade, Ci-C§ alguil é metíl, etil, n-propil, ísoprópil, n-butil, ishbut.il @ terc-Butil, Em uma modalidade adicional, C:í-C.$ alqui.1 é metil .
.Ero outras modalidades, os compostos de Fórmula (I), nus quais L· é , possuem as seguintes estruturas:
Também sãó aqui descritos compostos de Formula (I), . ...
nos quais L> é - Apenas como exemplo, uma modalidade consiste em um composto de Formula (I) que possui a
78/356 estrutura j
Cl
Também são aqui revelados compostos de Fórmula (X) , em que L é um d-Cs heteroalquileno. Bn outra modalidade, o C$d hetéroalquileno é CH3S, (0¾¾1¾ (0¾) jS, (CddO,
IQ .(0¾¾¾ Ainda outra modalidade consiste em um composto de Fórmula (X) , em. que L é um d~d heteroalquileno, o composto selecionado de:
Algumas modalidades consistem em compostos de Fórmula (I), em que L ê
RI e V e uma ligação, d.~Cs alquil, C3C<j alquenxl, d
3Q alquinil, d-d heteroalquil; em que d~Cs alquil, d~d alquenil, C2-d alquinil, d~d heteroalquil é substituído com pelo menos um d; e 'W e V não podem ser, ambos, uma ligação. Rs e Rh são, cada um, selecionados indepêndentemente dé hidrogênio, F, Cl, Br, X, -CN, alquino, Q-CR alquilalquino, -N02, -0H, -CF3í -0CF3# -0R3, Cx-C§ alquil# C3“C§ cicloalquil, C3.~C§ heteroalquil, Ci-fe
S halcalqu.il/ tetrazolil, C2-Cs heterocicloalquil, fenil, WS Í-OHRl, -S (O) 2N(R4) 2, -C feCOCfe, -C(=sÔ) NHS(~0);;Fo, (-Q) 2NHC(»O) Rj, -N(R4j2#· -N ÍR*) C ( ~G) Rs , -0ΟΛ, -C{«0)R?# OC(™Õ)Rj, -CQ»(RU:a, ~SR3, -S(~O)Rj e -S(=0)2Rs; em que Η< e Ru não podem ser, ambos, hidrogênio; ou Ri e Ru# juntos 10 com os átomos ao qual estão anexados, formam um grupo Cs~C§ cicloaiquenil ou um grupo C2-C2 haterocicloalquenil, desde que Ri e Ru este jam na configuração eis,.
Também são aqui revelados compostos de Fórmula Cl) # nos quais L é selecionado de em que B é um heterçar11 opcionalmente substituído com pelo menos um R# e Ri, Ru, Riu# Kn? ® são como descritos previamente. Em algumas modalidades, L é
Em outras modalidades, Ri e Ri·., são selecionado de F# Cl, Br, X, -CN, alquino, alquílalquino, -NQ2f -OH, -CFS, *
QCFj, -0R:i Ou Ci-Ci: alquil.
Apenas oomo exemplo , os compos tos de Fórmula ( I), em que X é W-L-B, ém' que W ê uma ligação, L é selecionado de
80/356
Ri
e B ê um heteroaril, -são selecionados dec
Outra modalidade consiste em um composto selecionado de:
Também sã© aqui revelados compostos de Fórmula (!), em que X é W-L-.D·. Em outra modalidade, X é P< Ainda em uma modalídádé adicional, D é CvCi eicloalquíl. Bm uma modalidade.. D é selecionado de ciolopropil, ciclobutil, ciolópentil óu ciclohexil. Em outra modalidade,
0 ciolopxopil.. ciclobutil, ciclopentil ou ciclobexil é
81/356 substituído com pelo menos um R selecionado de F, Cl, Br, I, -CH, alquino, €^Cg. alquilalquino, -Md, -CF3, -OH, -ΘΜ, -OCFà, C;-C§ alquil, Cs-Cç cicloalquil, Ci~Cs Êluoralquil, CxCe heteroalquil, Cj*Cs halóalgüil, tetrasclil, C2'-C$ 5 heterocícloalquil e fenil. Em outra modalidade, 0 é selecionado de :
opeionalmente substituído com pelo menos um R. Em outra modalidade, R é selecionado de CH·, F, Cl, Br, I, CH, OCH3,
GN e NÓs- Ainda em outra modalidade, W é -NR2, em que R2 é hidrogênio, L é metileno e P ê selecionada de^
Ainda em uma modalidade adicional, w ê G, Pé matiléno e D é Ca:-Ce çicloalquil.
Outra modalidade consiste em um composto de Fórmula (I) , em qué D é Cg-C2 heteiroclcloalquil.. Ainda em outra modalidade, D é selecionade de tetrahidrofurano, tetrahidrotiofeno, pírrolidina, tetrahidropirano, petrahidrotiopiraho e piperidina. Ainda em outra modalidade, © é selecionado de:
Em outra modalidade, W é uma ligação, L é metileno e P ê selecionado de:
©pcionalments substituído com pelo menos um R.
Õma modalidade consiste em um composto de Fórmula (I),
S2/356
83/356
IQ Outra modalidade consiste em um composto de Fórmula (I) em gw Z é S. Em outra modalidade, Z é S é X ã fenil substituído com pelo menos um R selecionado de F, Cl, Br e X. Outra modalidade consiste em um composto em que Z é S e A é w feníl substituído com pelo menos um R selecionado de
F, Cl, Br e I, outra modalidade consiste êm um composto de Fórmula Π) em que R-, é um tioácido.
Üm aspecto consiste èm um composto de Fórmula (XX);
em que:
A ê fenil substituído com pelo menos três substituintes ou benzofurano opcionaImente substituído oom pelo menos Um R; ou A e fenil substituxdò Com doi.s grupos R em átomos- de carbono adjacentes, em que os dois grupos R e os átomos de carbono ao qual está© anexados formam um Cj-m cicloalquil ou C:<-Cs heterocicloalquil;
R é selecionacio de F, Cl, Br, I, -CN, ^CF?,, -OH,
34/356 *·
-0¾, -OCF3, -CsEH, -feCRjz Ci-Ο;. alquilsnoaiqufno, Ci.-C§ alquil, C3~€& cicloàlquil, Cr-0«. heteroalquil, Cx-C§ haloalquil, tetrazdlil, Cs-C$ heteiOciclQalqtíi.l, fenil, WSWhRh SMOfRih,· -CÍfO)CF3, -C(s0)8B:(«0)2Rv
S S HWMW Hfeh, -N(R*):C:(«Oyfc3, -CQA, -C(=O)Rr, 00/=0) R3f -8¾ , -0(=0)¾ é -0 (=0) 2R3;
J ê um ligação, NHS (=O)s, 5(=0)^(¾) , -0:(=0), C (»0) TO («0) s, -3(=0) s»HC () , N () > -N (RU C (-^0) > ~ CQj, 0(=0), -00(=0), , ~S, -S(=0) e -S(=O)s, 0χ-£® alquileno, C®-0« alqueUilend, Cg~Cs alquirdleno, C1-C&
het eroalgui leno ou C3-C€ ciclGalqUileno, em qua alquileno, C2-Cs alquenileno, ©z.-Cg: alquinilono, 0/.-0,:.
heteroalquileno e cxcloalquilenc são opaàonalments substituídos com pelo menos urn. R;
jq é 00:3¾ ou urn bíoisóstero de ácido cárboxílico, eeí que Rs é hidrogênio, Ci-Cs alquil, Ci-Cg çícloalquil, Ci~Cg haloalquil, fen.il ou benzil;
Z é 0, S, M-CN ou CHNÓs;
W ê W3f 0 ©u uma ligação;
Lj é uma ligação, Çj-C-s alguileno, Cq-Cg alquenileno,
C3-C«. alquiníleno, Cj.~Cís heterealqu.ileno, C3~CS cicloalquilãno ou C2-Cs heteroeicloalquileno, em que Cx~Cs alquileno, Cs-C€ alquenilano, Cj-Cí al.quinil.eno, CVC5 heteroalquiieno, C3-C€ cicloalquileno, Q-Cg heterocicloalquileno é opcionaltnente substituído com pelo menos um R;
Y é O ou S;
n é um número inteiro de 0-5;
cada R3 ê selecionado independent emente de Ci-Cs alquil, Cr-Cs haloalquil, C3-Ç8 ciclaalquil, fenil e benzil;
85/356 cada R.·} é selecionado independent emente de hidrogênio, Cx-Cs alquil, Ci~Cs haloalquil, C3-C8 eicloalguil, fenil e benzil; ou um sal, solvato, H~õxido ou prõ-fármaco farmaceutícamente aceitável deste.
Outra modalidade consiste em um composto de Fórmula (II) era que Ri é CO.2R2 e Rs ê hidrogênio. Uma modalidade adicional consiste em um composto de Fórmula (II)* em que J é uma ligação. Ainda outra modalidade adicional consiste em ura composto de Fórmula (II), em que R< ê hidrogênio. Ainda 10 outra modalidade consiste em um composto de Fórmula. (XX), em que Z ê 0, Uma modalidade consiste em um composto de Fórmula (II), era que A é fenil. Outra modalidade consiste era ura composto de Formula (II), em que fenil é substituído cora três R. Ainda outra modalidade adicional consiste em w 15 composto de Formula (XI) , em que cada R é selecionado independentemente de F, Cl, Br, X, Ci~Cg alquil, OH e OR3. üraa modalidade adicional consiste sm um composto de Fórmula (II), em qué r3 é metil. Ainda outra modalidade consiste em um composto de Fórmula (II), em que Ci-Cs alquil é metil.
Uma modalidade consiste em um composto de Fórmula (II), em que W © Li são, cada um independent emente, wa ligação. Outra modalidade consiste em um composto de Fórmula (II) , era que ¥ é Q. Uma modalidade consiste em um composto de Fórmula (II) f ém que n é 0. Uma modalidade adicional 25 consiste era um composto de Fórmula (II) , em que R ê seleeionado de F, Cl, Br, I, CN, OH, QRs e W- Ainda outra modalidade adicional consiste em um composto de Fórmula (XI), em que n é 1.
Outro aspecto consiste em um composto de Fórmula (III) :
5 / 3 5 6’
Fórmula (XXX) em quet
Á é fenil ou behzofurano, em que fènil e bewfuram são, cada um, opcionalmente substituídos com pelo menos um R; ou à é fenil substituído cora dois grupos R em Átomos de carbono adjacentes, etn que os dois grupos R e os átomos de 1Q carbono ao qual estão anexados formara um C4-® cicloalquíl ou ®-® heterociçlQalquíl;
R é selecionado de F, Cl, Br> I, -CM, -NGs, ~C®, -OH, -ÓR3, -OÇF3í -OéCH, -C-CR3f ®-® alquilenoalquino, ®-® alquil, ®-® cicloalquíl, ®.~Cs; heteroalquiX, ®-G« 15 haloalquil, tetrasoliX, Cs-® heterocicloalquil, feniX, NHS(«O)2H3, S(-0) sM ÍRj x, ~C(«O):CF3, -Ç ®O) MHS ®0) .•S(«0j:®NHC(«O)IUz N(RJ2, >8ÜM'CHW -CÔ^f -C(*0)R?, 00(-0) -C®0)M{R4®> ’ SR3, -S(»O)È'3 e -S®Q)r®;
J é uma ligação, NHS®®2, 5 ®O) ^.M (R«) , -C®0) ,
2G C®G) MHS (=O) 2 , -S (“GJsMBCÍ^Q) , N (Rd , M(®)C(=Q), -O® ,~
C(~0) ,· ~0C(~0) , “C(®)K(Rd , S, ~S(~0) è ~S(ssO)3í ®->® alquilèno, Cj-® alquenileno, Cs-Cg alquinAletio,Ci~® heteroalquilèno f Cr® cieloalquileno· ou®-® heteroticloalquileno, em que Ci~® alquileno,®~®
5 alqüenilend, ®~® alqtiinileno, ®~® heteroalguileno, Cs»® ciçlcalquiTeno e C2-® heterocicloalquileno são ©peiotialmente substituídos com pelo menos ura R;
® 4 C®® oà um bioisóstero de ácido carboxílico, em que ® é hidrogênio, Ci~® alquíl, ®-C« cicloalquíl, ®~® 30 haloalquil, fenil ou benzil;
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Z & Q, S, NH, N-CT OU »h·;
X ê heteroaril. ou w-h-heteroaril, em' que heteroaril é opcionalmehte substituído com pelo menos um r e heteroaril não ê bènsófurano ou béhzOtíofenO;
W. é BR3:, 0 ©U uma ligação;
L é Ci-Cè· alquilehd, e2-C§· alqueniléno, Cg-£*§ alquinileno, G3.-Ct; hetéroalquilènò, C3-Gs cicloalquilenó ou C2-Q heterocicloalquiléno, em que Ci-Cs alquileno, a*queMleno, -Cg-C^ alquiníleno, Ci-C« heteroalquileno, C3-€g 1Õ cicloalquileno e C2~CS são opcionalmente substituídos com pelo menos um R;
cada R3 é selecionado indépondentemente de C3~C« alquil, Cx-Cj haloalquil, C-s-Cs oiclcalquil, fenil e benzil?
cada R.s é selecionado independentemente de hidrogênio,
Ci~Çç alquil, Ç:-C€ haloalqu.il, C3-Cs cicloalquil, fenil e benzil; ou um. sal, solvato, N-oxido ou pró-fármaco farmaceuticamente aceitável deste.
Também é aqui rebelado um composto de Fórmula (XV) :
Fórmula (XV) em gue:
'25 A ê fenil OU beíizofurano, em que -fenil e benzofurano são, cada um, opciohalmeútè substituídos com pelo mérios um
R-j ou A é fenil substituído com dois grupos R em átomos de carbono adjacentes, em que os dois g-rupós R e os átomos de carbono ao qual estão anexados formám um C4-C2 cicloalquil ou Cl-Cs heterocicloalquil;
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R é selecionado de F, Cl, Br, I, -CN, “NO-, -C?Jt -OH,
-OR3, OCF·;, -CsCH, -CmCR3, ÇrC« alquilewalquino, C;-C.·;.
alquil, C3.-Q. cícloalquil, Ci~C«: heteroalqu.il, haloálquil, tetraZolíl, C3~Cg heterocicioalquil, fenil, 5 KHS(=C)2R3, SHhRtMai -C.(=Q)CF3, »C (=0) WS (=0¾¾,
S (=0) sNHCHOlRg, N(R®2, -NfR41C(«O)R3., -COsR4r -C(=0)R3, QC(M>).R3, -CMlKRíhj. - SRs, -8(=0)¾ e -S(=C)2R3;
J ê uma ligação, WS(«0)5> S(=0} (P4) , -0(=0) , c(=0) ws(®o.)2/ ~sl=ohrmc(=o) , n(rj , -n(r4)c(=o), -cq2;, ia 0(=0), -oc(o), -c(=o)n(r4) , -s, -s.(«o) e -s(=oh, cx-ce alquileno, 02-Çs alquenileno, C3~Cg alquinileno, 03~0§ heteroalquileno, C3-C4 ciuloalquileno ou Cs~Cs heterocicloalquileno, em que C:t-Cs alquileno, C3-C« alquenileno, C2-Ce alquinileno, Cx-C§ heteroalquileno, C3-Cg.
cicloalquileno e 0-¾ são opcionaimente substituídos com pelo menos um R;
Rx ê COsRs ou um bioisóstero de ácido carboxílico, em que Rs ê hidrogênio, Ci~Cs alquil, Cj.~Cg cicloalquíl, Ci~C§ haloalquil, fenil ou benzil;
Z é O, S, W, »-CN ou CRW;
X é aril,, henzotienil, benzofuranoil, ou -CHgCHjr fenil; em que aril, benzotien.il, benzofuranoil ou Senil de ~CM3CR2“fenil é substituído com pelo menos 3 substituintes selecionados independentemente de F, Cl, Br, X, -Ci-í, *25 alquiho, CX~C®: alquilalquino, -N0Sí -ΌΗ, ~CF3, -OCRs, -0R3,
Ci-Cs alquil, C3-C& cicloalquil, Cx~Cs heteroalquil, Cx~Cg haloãlquil, tetrazolil, C2~Cg heterocicloalquil, fenil, NHS (=0) 3R3, - 8 (=0) 21J {R$) a < c (-θ) CF3, -C. (=0) WS (=0) 2R3,
S :(=O) sMHC(=Q)Rj , -N M 3, -:R (R4..} C(®Q>R3., -CO2.R«·, -C ( «O) Ra , 3Q aC(=O)R3, -CON(R4)2, -SR.x, -S(=O)R3 e -S(=O)2R3;
89/356 cada Rj é selecionado independentemente da C5.-C1 alquil, d-Çg haloalquil, C3-Cs cicloalquil, fenil @ bemil;
cada Ri é selecionado independent emente de hidrogênio, dC§ alquil, d-C6 haloalquíl, C3-Ce cieloalquil, Êenil e 5 benzil; ou um sal, solvato, N-cxido ou pró-fármaco farmaceuticamente áceitãvçl deste.
Em algumas modalidades, X é fenil; em que x é substituído com. pelo menos 3 substítuintes selecionados independentemente de F, Cl., Br, I, -OI, alquinó, Ci-d IS alguilalquino, -W, -ÕH, -CF3, -OCF3, -OR3, Ci~d alquil, Cs -Q heteroalquil e Ci~A haloalquil. Em outras modalidades, X ê fenil; em que fenil e substituído com pelo menos 3 substituintes selecionados independentemente dé F, Cl, Br, X, -CN, alquino, Cj-Cs alquílalquino, -OH, ~CF3, 15 OCRs, -QMe, metil, etil, isopropil e t-butil. Em uma modalidade, X é substituído com 3, 4 ou 5 substituintés selecionados de F, Cl, Br, I, -CN, -Ws, -OH, -CF3, -OCF3f CRs, Ci“C$ alquil, C3.-Cs heteroalqu.il, Ci^C6 haloálquil e fenil. Em algumas modalidades, x ê selecionado de 2,3,420 triflUorÊenil; 3,4,5 -trifluorfenil; 2,4,S-trifluorfenxl;
2,3 ,.4-trielorofenil; 3,4,5-triolorofenil; 2,4,5triclorofenil; 2,3,4-tribromofení1; 3,4,5-tribromofenil;
2,4,5-tribromofenil; 2,,3,4-triiodofenil; 3,4,5t ,r i iodo f e n i 1; 2,4,5-1 r i lodo f eni 1; 2,3,4 trime t i 1 f eni 1;
5 3,4., 5 ~ t r ime 111 f eni 1; 2,4,5 -1 rime ti 1 f eni 1; 3,4,5- trimetoxifenil; 2,4., S-trimètoxxfénxl; e 2,4,5-trifluox'~5metoxifenil.
Em algumas modalidades, J é uma ligação e A é um fenil, opcionalmente substituído com pelo menos um 30 substituinte selecionado de F, Cl, Br, I, ~CN, alquino, c3~
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C§ alquilalquinç, -CFj, -ÔH, ~OR;, -OCF3, Ci-Cg alquil,
Ci“Cg flúoralquil, Ci~CS: heteroalquil e Çx-C§ haloalquil. Em outras modalidades, A é um fenil, opcionalmente substituído com pelo menos um substituinte selecionado de F, Cl, Br, i, 5 ~CN, CF3, -OH, «®e, -OCF3f metil e etil. Ainda em outras modalidades, A ê selecionado- de fenil; 2-fluorfenil; 3fluorfenil; 4-fluorfenil; 2-clòrofeniI; 3-clorofenil; 4~ clorofenil; .2,4-diclorofenil; a^a-diclorofenil; 3,.4diclorofenil; 3, 5-diclorof enil; 2-bromofenil; 3“bromofen.il;
4-bromofenil; 2-iòdóÊenil; 3-iodofenil; 4-iodofenil; 2metilfenil; 3-metilfenil; 4-metilfenil; 2,4-dimetilfenil;
'2,.3-dimntilferii.1; 3,4-dimetilfenil; 3,5-dimetilfenil; 2~ trifluormetilfenil; 3-trifluormetilfenil; e 4trirluormetilfen.il. Ainda em algumas outras modalidades, R:t é selecionado de fenil; 4-fluor*enil; 2Clorofenil; 3clorofenil? 4-ólorofenil; 2,4-diclorofenil; 3,4diclorofenil; 3,5-diclorofenil; 2-bromofenil; 4-bromofenil;
4-metilfenil; 3,4-dimetilfenil; e tetriflaormetilfenil.
Também são aqui descritos compostos que possuem a 20 estrutura de Formula (V.) ;
Fórmula (V) em qué:
A é fenil ou benzofurano, em que fenil e benzofurano são, cada um, opcionalmente substituí dos oom pelo menos um R; ou A é fenil substituído com dois grupos R em átomos carbono adjacentes, em que os dois grupos R e os átomos de 30' carbono ao qual estão anexados formam um tq-Cg cicloalquxl
91/35S ou Cs-Cs hetWooicloalquil;
R ê selecionado de F» Cl, Br:» I, -CN, ~Wa, -CF3, -OH, ~GR3, -0.CFS:f -C-CH, -C-CRj, Cj-Cs alquilenoalquino, Ci-C6 alquil, C3~Cg .cicloa-Xqail , Cx~C« heterdalquil, Οχ-Cg haloalquil, tetrazolil,· Cs~C§ heterocicloalquil, fenil,Λ» B(^a}sM(R4)a., -c(>o).c.ps, -c(«oíkhs(^A/
S(=0)aWC(=C)Ro N(R4)S, -M(R4 jC(“O)R3f -CO2R4, -Ç(=O)R3,CC(™Ô)R:5f -C(«O)N(RX.h., - SR3, -SÍ-ORj e ~S(==O)2R3;
J é uma ligação, lffiS(»C)3, B(®0) sNÍJU)» ~C(~0) ,
C^WWS^Oh, -S (-O)2MHC(-O} , N(Rd, ~M(R4)C(«Q) , -CDSíC(»0) ,· ~.OC Ç*0:) , ~C(^O)H(Rd , -S, -S(^O) eC alquílew, Cs-Cs alquenileno, Çg.-Cg alquínileno,Cr-Q heteroalquilenQ, C3~CS ciuloalquilano ou C2-C§ hetewciclualquileno, em que Ca-Cs alquílenq,C alquenileno, Cà-C® alquinileuo, Cx-C& heteroalquileno, C3~Ce cicloalúuileuo e Ca~Cg são opcionalmente substituídos corn.
pelo menos um R;
Ri é COsRs ou um bíoisostero de ácido carboxílico, em qué R2í í- hidrogênio, Ci-Cs alquil, CjóCs çiclpalquil» Ci-Cg 20 haloalquil, fenil ou benzil;
E é F, Cl ou deutério;
Z é O, St NH, N-CN ou CWQa;
X é W-L-feilil, W-L-Br B, W-L-D ou D, em que fenil, B,. ã D são, cada um, opcionalmente substituídos com pelo menos 25 um R;
W é NRS. , O oú uma. ligação;
I» é metileno, erileno substituído com pelo menos uffi R, Cy-Cç alquileno, C2~C§ alquenileno, C2-Cs alquíníleno, Ci-Cs heteroalquileno, C3-Cs cicloalquileno ou Cs-C* 30 heterocicloalquileno, em que metileno, C3-.ǧ· alquileno, Cs
92/356
Cs àlqueníleno, £1-¾ alquinileno, Ci-C® heteroalquilenpCi~ •Cs cicloalquilèn© e C2-Cs são opcíonalmenté substituí dos oom pelo menos um R;
δ ê séledionado de furano, tidfeno, pírrol, píridina, oxazol, txazol, xmidazol, tiadiazol, isõxasol, isotxázol, pirazql, pírxdázina, pirímidina, pirarina, oxadiazdl, tiadiasél, triazol, indol, bénzoxazól, beúzotiazol., benrimidasol, benzoxadíaiol, benzotiadiazol, benaotriazól, pirazolopiridina, xmí dazopix-idxna f pirrolopir idina, pixuiqlopirxmidiúa, indclizinà, purinã, furOpxxòdína, tienopiridina, furopirrol, furofurano, txenofUrano, 1,4diídropírrolapirrol,. tienopirrol, tieúotióf eno, quino 1ína, isoqxiixTOlina, f uropirazal, tienopirasol e .1,6-di idr©pir.r olop iraz o 1;
0 é. Cs-Ciá aioloalquil ou Ca.-Cs beteroclqlGalguil;
c ada Rr é. se l e c ionado independen t ement e de Cl -Cs al.qu.il, CVCg haloalquil, C3-Cs: eieloalquíl, feníl e benzil;
cada SU é selecionado xndependentemente de hidragênio,
Cj.-Cg alguil, Ci“Cs .haloalquxl, C3-C< cicloalquil, feriil e 20 benzil; ou um sal, solvato, N-dxido ou pró-fármaco farmaceuticametíte aceitável deste,
Orna modalidade consiste em um composto de Fórmula (V), em que E é F. Em outra, modalidade, E é Cl. Uma modalidade consiste em um composto de Fórmula (V)em que E é 25 deutèrio. Em outra modalidade, o composto de Fórmula (V) fornece um composto enriquecido em deutério. Ainda, outra moda1idade consiste em uma composição farmacêutica que compreende um composto de Fórmula (V) , em que -E é deutêrio e um veículo farmaceuticamente aceitável. Ainda outra 30 modalidade é um método de tratamento de uma doença,
93/356 distúrbio ©u condição aqui descrita, que compreende a administração a um indivíduo necessitado de uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos um composto enriquecido em deutério que possui uma estrutura de Fórmula 5 (V) ou um sal, solvato, N-óxido ou pró-fármaco farmaceutícamente aceitável deste. Ainda outra modalidade consiste no uso de um composto enriquecido em deutério que possui a estrutura de Fórmula (V) ou um sal, solvato, Noxido ou pro-fármacó farmaceutícamente aceitável deste para 10 a fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença, distúrbio ou condição aqui descrita» Ainda em uma modalidade adicionai, a incorporação do deutério na posição E permite um metabolismo mais lento de um composto de Fórmula (V) , comparado com um composto de Fórmula (V) com 15 um hidrogênio incorporado na posição E.
Deuterio (D ou 2H) © um isõtopO estável não radioativo de hidrogênio e possui um peso atômica de 2,0144. 0 hidrogênio ocorre naturalmente como uma mistura dos isotopes (hidrogênio ou prótio) , D (¾ ou deutério) e T 20 (3H ou trítio) . A abundância natural de deutério é de
0,015%. Geralmente, em compostos químicos com um átomo de Η, o átomo H na verdade representa uma mistura de H e D, com cerca de 0,015% sendo D. Em algumas modalidades, os compostos enriquecidos em deutério aqui descritos são 25 obtidos por troca de prótons çpm deutério ou por meio de materiais de partida e/ou intermediários enriquecidos com deutério.
Qualquer combinação dos grupos descritos acima para as diversas variáveis é aqui contemplada.
Em um aspecto, o composto de Fórmula (XV) ó
94/356 se 1 ec ionado dentre :
Ácido .4- (4-brptm&f-enil) -2- (2,3,5-triflüpr-4 metoxibenzamido) t-lof eno-3 - carbox í.1 ico ,Ácido '4-(4-bromoferdl)-2- (2,3,5-tri<31oro-45 metoxibenzamido)tíofenó-3-carboxilico;
Ácido 4-(4-bromofeni1)-2-(2,3,5-tribromo-4cse toxibenzamido) t xof eno - 3 - carboxí 1 i co;
Ácido 4- (4-bromofenil)-2-(2,3,5-triiodo-4met©xibenzamido)t io feno -3-carbox11ico;
Ácido 4: - (4 - Bromofeni 1)-2-(2,4, 5 -1 r 1 f lúor -3metoxibenzami do) t í of eno - 3 -carboxilico;
Ácido 4- (4-bromofenil} -2- (-2,4,5 - tricloro-3 metox ibenzami do)t iofeno *3 -carbox í1ico;
Ácido 4- .(4-bromofenil) -2 ~ (2,4, S-tribromd-315 me toxi benz am ido) t i of eno - 3 - carbox í lie©·;
Ácido 4- (4-bx'omofenil) -2- (2,4,5~triiodo-3 metbxibenzamido)tiofsuo-3-carboxilico;
Ácido 4 - (4 -bromo.fenil.) -2-0,3,6 -feriflüor - 4 metoxibentamido)t iofeno-3-carboxilie©;
Ácido 4-(4-bromofen.il)- 2-(2,3,6-tricloro-4metoxibenzamido) tiof eno-3 -carboxilico;
Ácido 4-(4-bromofenil)-2 -(2,3,6-tribromo-4metoxibenzamido)tiofeno-3-carboxilico;
Ácido 4-(4-bromofen11)-2-(2,3.6-tri i©do- 425 metoxiben®amido) tlofeno-3-cárboxilico;
Ácido 4-(4-bromofenil)-2-(2.4,6-triflúor~3me toxibe nxamido)t i ofeno-3 -caiboxí1ico;
Ácido 4- (4-bromofenil)-2-(2,4,6-trieloro-3~ metoxibenzamidb)t iofeno-3 -carboxilico;
Ácido 4-(4-broTOofenil)-2-(2,4,6-tribromp-395/356 me toxibenz-amido)tiofeno-3-carboxilico?
Ácido 4~(4-bromofenil)-2-(2,4,6-triiode-3metoxibenzamido)tiofeno-3-carboxilice;
Ácido 4 ~ (4 - cI orof eni 1)-2- (2,3,5 -1. r i f 1 úor - 4 5 metoxibenzamido)tiofeno- 3 -carboxi1ico;
Ácido 4- {á-cloroÊsnil) -2- (2,3, 5-'triclorc-4metçxibcnzamid©)t iofeno-3 -carboxilico;
Acido 4-(4-clorofeni1) -2 -(2,3,5-tribromo-4 metexibenzamido)tiofeno-3-carboxilico;
Ácido 4-(4-clorofenil)-2-(2,3,5~triiodo-4metoxibenzamido)tiofeno-3-carboxilico;
Ácido 4- (4-clòxofenil,; -2- (2,4,5-triflüor-3me t ox ibenz amido) t iof eno - 3 - carboxi 1 loo ,Ácido 4-(4-clorofenil)-2-(2,4, 5-triclor©-3“ metoxibenzamido)tiofeno-3-carboxilico;
Áçido 4- (4-clorofenil)-2-(2,4,5-tribromo-3metoxibenzamido)tiofeno-3-carhozilico;
Ácido 4-(4-clorofenil)-2- (2,4,5-triiodo-3metoxibenzamidojtiofeno-3 -carboxilico;
Ácido 4 -(4-clorofenil)-2-(2,3,6-triflüor-4metoxibenzamido)tiofeno-3-carboxilice;
Ácido 4- (4-clorofenil)-2-(2,3,6-tricloro-4metoxibenzamidd)tiofeno-3-carboxflico;
Ácido 4 - (4 - cloi’of enil) -2 - (2,3,6 ·· tribromo - 4 -
5 met ox ibenzam ido)t iofeno-3-carboxilie©;
Ácido 4 -(4-clorofenil) - 2-(2,3,6-triiodo-4 metoxibenzamido} tiof eno-3 -carbdxf lico ,
Ácido 4 -( 4-clcrofdnil)»2-(2,4,6- tri f lüor-3mefcoxibenzamido)tidf eno-3 -carboxflied;
Ácido 4-(4-clorofenil)-2-(2,4,6-tricloro-396/356 me t ox i benzami do) t 1 of eno - 3 - car box f 1 i c o;
Ácido 4 - (4-clorof.en.il) -2- (2,4,6-tribromo-3metoxibenzanido)tloteno-3 -carboxflico;
Ac i do 4-(4- cl or©feni 1) - 2 -.(2,4,6 -tri iodo - 3 5 metoxibenzamido)tiofeno-3-carboxxlico;
Ácido 4 -(4-fluorfenil)-2-(2, 3,5-triflUor-4rne t oxi bênz ami do) t io f eno - 3 - cai’box i 11 co;
Ácido 4 - (4-fluorfenil) -2-(2,3,5 - tricloro-4metoxib enzami do)tio£eno-3 -car boxflico;
Ácido 4-{4-fluorfenil)-2- (2,3,5-tribromo-4metoxibenzamido)tiofeno-3-çarboxílico;
Acido 4- {.4-f1uor f eni1)-2-(2,3,5-tr i iodo-4metoxibenzamido) tiof eno-3 -cax^boxílico;
Ácido 4»(4-fluorfenil)-2-(2,4,5-triflúor-315 met ox1benzamido)t io£eno-3 -carboxx1iοό;
Ácido 4 -(4-fluorfenil)-2-(2,4,5-trieloro-3metoxibenzamido) tiofeno-3-carboxilico
Ácido 4-(4-fluorfen.il): -2 - (2f 4, 5 - tribromo-3 metoxibenzamido)tiofeno-3-carboxilioo;
Ácido 4- (4-fluorfen.il) -2~ (2,4,5-triiodo-3metoxibenzamido) tiofeno-:3 -carboxi 1 io©;
Ácido 4-(4-fluorfenilj-2-(2,3,6-triflüor-4metoxibenzamido) tiof eno-3 -carboxilico;
Ácido 4~(4-fluorfenil)-2-(2,3,6-tricloro-425 metoxibenzamido)txcfeno-3-carboxí1ico;
Ácido 4- (4-f luorfenil) -2- (2,3., 6 ~tribromo-imetoxibenzamido)tiofeno-3-carboxflico;
Ácido 4- (4-fluorfen.il) -2- (2,3,6-triiodo-4metoxibenzami do)t iofeno- 3 -carbox flico;
q Ácido 4 - (4 - f luorfenil) - 2.- (2,4,6 - tri f lüor - 3 -
97'3 56 me toxibenz amido) t i o f e no - 3-carboxilico;
Ácido 4- (4-fluorfenil) -2- (2.,4f6tricloro-3metbxibenzamido)tiofeno-3 -carboxilino;
Ácido 4-(4-fluorfenil) -2- (2 , 4 ,S-tribromo-S5 metoxibenzamido)t io feno-3-carboxilicoj
Ácido 4 - (4 -fluorfeni 1) - 2 - (. 2,4 .< 6 - tri iodo- 3me toxibenz am i do)t iofeno-3-carborÍ1ioo;
Ácido 4 - .(4 - iodofenil) - 2- (2,3 # 5 - tri flúor - 4 metoxibsnzamidQ) t iof eno- 3 ·· carboxi lico ;
Ácido 4- (4 -iodofenil)-2-(2,3,5-triclorç-4 metoxibenaami do J t iof eno - 3 - carboxi 1 i co j
Ac i do 4-(4- iodo f enf 1) -2-(2,- 3.. f 5 -1 ribtomo - 4 metoxibenzamido)tiofeno-3 -carboxilice;
Ácido 4- (4 -iodofenil )-2-(2,3,S-tri iodo-4 15 met ox.ibe.nzamido) t iof eno - 3 -carboxilico ,Ác ido 4 - (4 - iodof enil) - 2 - (2,4.,5-t r i f XtiOr - 3 metoxibensamido)t iofeno- 3-carboxi1ico;
Ácido 4~ (4-iodof enil) - 2- (2,4., 5- tricloro-3metoxibenzamidojfiefeno-3-carboxilico;
Ácido 4 - (4 -iodof enil) - 2- (2,4,5 * tribrom- 3 metoxibenramido)tiofeno-3-carboxilico ?
Ácido 4 — (4 - rodof enil) —.2 — 12,4,5 - triiodo—3 — metoxibensamido)tiofeno-3 -carboxilico;
Ácido 4-(4-iodofenil)-2-(2,3,6-tri flúor-425 metoxibenzamido) tiofeno- 3-carboxilico ,Ácido 4--(4-iodofenil) -2- (2,3·, S-tricloro-4me tox i benx am ido)tiofeno-3-carboxi11co;
Ácido 4.- (4-iodof enil) -2-(2,3,6-tribromo-4metoxibenzamido)tiofeno-3-carboxilico;
Ácido 4- (..4--iodofenil.) -2 - (2,3,6-triiodo-498/356 metoxíbenzamido)tiofenc-3-carboxílico;
Ácido 4 - (4 -iodcfen.il) -2- (2,4,6- triflüor-3metoxibenzamido.) tiofeno- 3 -carboxílico;
Ácido 4-(4-iodofenil) -2.~ (2,4, «-tricloxó-S5 metoxibenzamido) tiofeno- 3 - carboxílico
Ácido 4 - (4 - iodof eni 1) - 2 - (2,4,6- tríbromo- 3 metoxibenzamidc·) tiofeno-3- carboxílico;
Ácido 4~ (4 -iodofenil)- 2 -(2,4,6-triiodo-3me t ox i bens am ido) ti ©feno -3- .carboxí 1 i c o
1Ô Ácido 4- (4-metiIfénil)~2~(2,3,5-tríflúor-4metoxibenzamido) tiofeno-3 - carboxíli co.;
Ácidc 4 -(4-metilfenil) -2- (2,3,5 -tricloro-4metoxibenzamidc)tiofeno-3-carboxílico;
Ácido. 4- (4-tnetilfenil) -2- {2,3,5-tribromo-415 metcxibenzamido)tiofeno-3-çarboxílico;
Ácido 4. - (4 - me t i 1 f e n 11.) -2-(2, 3,5“triiodo-4-
me t ox ibenzamido)ti of eno-3-carboxílico;
Ácido 4 -(4-mstilfenil)-2-(2,4 , 5 -1 r i f. 1 úor - 3 -
me toxibenz amido) t iof ene-3-carboxílico;
20 Ácido 4-(4-metilfenil)-2-(2,4 , S - tricloro- 3. -
metoxibenzamido)tiof eno-3-carboxílico;
Ácido 4-(4-met11fenil)-2-(2,4 5 - tribromo - 3 ~
me toxibenzamide)t iof eno- 3 -carboxí11co;
Ácido 4-(4-metilfenil)-2-(2, 4,5-trÍiod03-
25 metoxibenzamido)t iof eno-3-carboxílico;
Ácido 4-(4-metilfenil)-2-(2,3 ., 6 -1 r i f lúor - 4 -
metoxibenz ami do)tiof :eno-“ 3 - carboxí 1 ico;
Ácido 4-(4-metilfenil)- 2-(2,3 , 6 -t r ibroréo-4-
metoxibenzamide)t iof eno- 3 - carboxílico;
3Q Ácido 4-(4-metilfenil)-2-(2,3 • f 6-tricloro-4-
99/356 metoxibenzamido) tiof eno-3 -carboxi 1 loo;
ácido 4·-· (4~metllfeni.il -2- (2,3,6 “triiodo-4met oxibenzamido)t iofeno—3~ carboxi1ice;
Ácido 4~(4-metiIfenil)-2-(2,4,6-triflüar-35 metoxibénzamido) t iof eno.--3 - carboxi lie ο;
Ácido 4~ (4-metilfenil) -2- (2, 4,6-tricloro-3~ metoxibensamidc)t iofeno-3 ~ carboxf lico;
Ácido 4-(4“metilfenil)-2-(2,4,6-tribromo-3 metoxibenzamido} tiof éno- 3 -carboxi lico;
Ácido 4 -(4-metilfenil)~ 2-(2,4,6-triiedo-3 me t ox ibenzami do) t iof eno 3 ·· carboxi 1 i co;
Ac Ida 4-(4-metoxifeni1)- 2- (2,3,S-1r1fIder-4metoxibenzarnido) t iof eno- 3 -carbox.ilico;
Ácido 4-(i-metoxifenil)-2-(2,3,5-triclow-415 metoxibenzamido)tiofeno-3-carboxilico;
Ácido 4 - {4-metQxifeni1) -2- (2,.3,5-tribromo-éme toxibenzami do) t. iof eno - 3 - carboxi 1 ico ;
Ácido 4- {4-metoxifenil) -2- (2,. 3,5-triiodo-4metoxibenzamido)tiofeno- 3 -carboxilice;
Ácido 4-(4-metoxifenil)-2-(2,4f5-trif1üor-3 metoxibeneamida}tiofeno- 3-carboxilico;
Ácido 4- (4-metoxifenil) -2.- -(2,4,5»triclorO3me toxibenzasii do) tiofeno --3 - carboxi lico,
Ácido 4- (4-metoxifenil)-2-(2,4,5-tribromo-325 metoxíbençamido)tiofeno-3-carboxilico;
Ácido 4 - (4 -metoxif enil.) - 2 - -(.2,4 f 5 - tr iiodo- 3 me tox i benz am i do) t io f eno - 3 c arboxi 1 i co;
Ácido 4 - (4 -matoxifeni 1) -2.- (2, 3-,.g-trif lüor-4 ~ me toxi ben z am i do)t i o feno-3-ear boxi11co;
õ Ác ido 4 - (4 ~me box i f en i 1) - 2 - .-(2,3,6 -1 r ibromo - 4
100/356 metoxibenza.mido) tiçféno~3 .:-cãírboxílicO;
Ãcido 4»<4-metoxifeníl)-2-(2,3, 5-:triclora-4metoxibénzamida)tiofenç- 3 - carboxf1ica;
Ácido 4-(4-metoxlfenil)-2-(2,3,S-tríiadd-45 wto^íbenzatniáo.) tiofehb-S-cax'boxilico,'
Ác i do 4 - (4 - me t axí fen i 1) - 2 - (2,4 , 6 -1. r i f 1 úor ·· 3 ·· metoxibenzamido)t io feno-3 -carbox íIico;
Ãcido 4- (4-metGxifenil) -2- (2,4,6-triàlorò-3metoxibenzamido) tiof eno - 3 *carboxílico;
Ãcido 4- (4-metóxif énil)— 2 -(2,4,6 -tribràmo-3 metaxibenzamido)tiofeno-3 ~carboxíliço;
Ãcido 4 - (4 -metoxif anil) - 2- (2, 4 , 6 ~ trliada- 3 metaxibenzamido)ti ofèna-3 ~carboxilicç;
ou um sal, solvato ou prô-fármaco farmaceuticamente 15 aceitável destes.
Em outro aspecto, o composta de Fórmula (XV) e sele c i onada dentre t
Ãcido 4“ (3-bromofenil) -2- (2, 3,- 5*trif lüor-4mntoxibenzamido)tiofeno-3-carboxíliou;
<20 Ácido 4- (3-brcmof enil) -2- (2,3,5-tricloro~4 metoxibenzamidb) t iof eno - 3- carhoxí Xico;
Ãcido 4~ (3~bromofenil) -2- (.2,3., 5-tribromo-4me t ox ibenzamido)t iófeno-3-carboxi1i co;
Ãcido 4- (3-bromafenil) -2~ (2,3, 5·-triiodo-4metcxibenzamido)t iofenp~ 3 -çarbcxí1ico;
Ãcido 4-(3-bromofenil)-2-(2,4,5-triflúor-3met.oxibenzamido) tiof eno-3 -carboxí 1 ico;
Ãcido- 4-(3-bramofenil)-2-(2,4,5-tricloro-3 metoxibenzamido)tiofeno-3-carboxilico;
o Ãcido 4-{3 -bromofeni1)-2-(2,4,5 - cribromo-3 -
101/358 metbkibenzwido). tlof e.no-3 - carbdXÍ licd;
Ácido 4 - (3-bromof en.il) - 2 - (2,4 f 5 ~tri iodo ~ 3 metoxibenzamido)tiofono-s-oarboxxlica;
Ácido 4- (3 -broraofèni 1) - 2 ~ (2, 3,6 -triflúor-4§ metoxibeuzamido) tiofé:no-3~carboxíliço7
Áci do 4-(3 - brbmofeni X)-2. -(2,3,6-tribromo-4 ~ metoxibenzamido) t.iofeno-3 -carboxllico;
Ácido 4 ~ (3-broraofenil)-2-(2.3,6-tricloro-4metoxibenzamido) tiofeno-3- earboxi 1 ico;.
Áe i do 4 - (3 * bromo Ê eni .1) - 2 - (2,3,6 - t r i i õdo - 4 w tox ibencamido)tio f ano- 3 -carboxí1ico;
Ácido 4- (i-hromof.eni.l) -2- (2,4, g-frifldor-Smetoxibenzamido) tiof.eno-3 -c&rboxí lie©..;
Ácido 4 *(3-broràafenil)-2-(2,4,S-tricloro-â.15 met oxiben cara ido) t iof enp - 3 ~ carboxí 1 ico ;
Ác ido 4 ~( 3 ~bromofeni1)- 2 -(2, 4> 6-1ribromo-3 wetoxibenzamido)tiofano-3-oarboxílico/
Ácido 4~(3~bromoÊenil)-2-(2,4,6-triiodo-3m® toxibenzamido)t i of eno-3 ~çarboxϊ1ico;
Ácido 4-(3-clorcfenil)-2 -(2,3,5-triflüor-4metoxibãnzamido)tiofeno- 3-carboxilico;
Ácido 4-(3~clorofenil)-2-(2, 3,5-tricloro-4~ metoxibenzamido)tiofono-3 ~ carboxílico;
Ácido 4 - {3“Cloi*ofenil) --2 - (2,3,5-t.ribrom.o-42 5 metoxibenzamido)tiofeno- 3-carboxílico;
Ácido 4- (3~clordfenil) -2~ .(2,3,5-triiodo-4metoxibenzamido·) tiofano-3-carboxílic.o,·
Ácido 4 -(3-clcrofenil)-2-(2,4,S-triflüor-3metoxibenzaraido)tiofeno-3-carboxílico;
Ácido 4-(3-clcrofenll)-2-(2,4,5-triclorõ-3102/356 métoxibensamido) Mofem- 3»carboxílicq;
Ácido 4 - (3 - clpx’qf eni 1 )-2-(2,4 , 5 - tribroma- 3 w twíbenzamída) t io.f mra - 3 - carboxílíeo ;
Ácido 4-(3-clorofenil)-2- (2 , 45*triiodo-35 Wtóxibenzwido) tíofeno- 3 -carboxílie©;
Ácido 4- (3-òloraffenil) -2-(2,3,6- trifí<or.-4met©xibênzamido) t iõfeno- 3 - carboxí1 ico;
Ácido 4- (3-clorcfenÍlj -2- (2,3,6-tríbróTOo-4metoxibenzamido)tiofeno-3 --carboxílicó?
o Ácido 4 - (3 - clorofen11) 2 {2,3,6 ·· t r í c lore- - 4- met ox ibenzamido)t iofeno- 3 - carbox í1ico;
Âc ido 4 -(3 -c1orofedi1)-2-(2,3,6 -trí1odo- 4 metoxibenzamido)t iofeno-3-carboxí1ico;
Áeido 4 - (3-clorofeni1)-2-{2,4,6 -trí flüor-3 15 metoxibenzamido)tiofeno~3-carboxílico;
Ácido 4 - (,3-çlorofenil) -2- (2,4,6-triCloro-3~ met oxibenzamido}tiofeno-3~ carboxí1i co;
ÁCidO (3-clorofànil)-2-(2,4,6-tribromo-3métoxibenzamíd©} tioíetio - 3 -carboxí lico ,·
0 Ác ido 4-(3-clorofeni1)~ 2-(2,4,6-tri iodo-3 - me toxibenzamido} t iof eno -· 3 - carboxilico;
Ácido 4~ (3-flúorfenilj-2-{2,3,S-triflúor-ámêtoxibenzamido)t ioféno-3-carbox11ico;
Ácido 4-(3- fluorfenil )-2- (2,35 -1ri çloro - 4 25 metoxibenzamidò) tiofeii©-3-carboxílico;
Ácido 4* (3.-flubrfenil) -2- (2,3, S-tribr©mo~4~ metoxíbsnzamido)tiofeno-3-carboxí1ico;
Ácido 4- (3-flubrfenil) -2 ·· (2,3,5- triiodo-4 metoxibenzamidb) tiofen.d-3-çarbòxílicc;
0 Ácido 4 ~(3-f1uorfeni1)-2-(2,4,5-1rif1üor- 3 -
103/356 metoxibenzamído) ticfeno- 3 -carboxi lie©;
Ácido. 4- (3-fluorfenil} -2- (.2.,4,5-tricloro-3me toxibenzamído). tiof eno- 3 -carboxi lico;
Ácido 4- (3-fluorfenil) -2~ (2,4 , 5-tribroma-35 metoxibenzamido). Kiofen.0-3 -carboxxlice.;
Ácido 4-(3-fludrfenil)-2-(2,4,s-triiod©-3metoxibenxamido) tiofeno-3 -carbaxilioo;
Ácido 4 - (3-fluorfenil)-2-(2 ,3 3-trifluor-4metoxibenzamido) txofeno-3 -carboxilica;
Ácido 4-(3-fluorfenil)-2-(2,3., 6-tricloro-4metoxibenzamido) t-io.feno-3 -carboxíliç©,Ácido. 4- (3--fluorfenil5 -2-.(2, 3,5-tribromo-4metoxibenzamido)ti.ofenp-l-cayboxílico;
Ácido 4-(3-fluorfenil)-2-(2,3,&-triiodo-415 met oxibenzamid©)tiofeno-3-carboxllico ;·
Ácido 4~(3-fluorfenil)-2-ί2,4,6-triflúor-3me t oxIbenzami do) t i of eno - 3 - carboxi1 ico;.
Ácido 4-(3-fluorfenil)-2-(2,4,6-tricloro-3me toxibenzamído)tiofeno-3-carboxilico;
Ácido 4“(3-fluorfenil)-2-(2,4,6-tribromo-3met oxiben z amido)t iofeno-3-çarboxl1ico;
Ácido' 4-(3 -fluorfend1j-2- (2.4 f 5-triiodo-3 metoxibenaamido}. t iof eno - 3 - carboxi 1 ico;
Ácido 4- (3-iòdofeníl) -2- (2,3.., 5-trif lüor-4'25 metoxibenzamido)tiofeno-3-carboxilico;
Ácido 4-(3-iodofeníl)-2-(2,3 r 5- triclcxo-4métoxfbenzamido)tiofeno-3-carboxílico;
Acido 4 -(3 -iodofenx1)-2-(2,3,5 -cribrorno- 4 rae tox ibenxam i do}tiofeno- 3-carboxi1x có;
q Ácido 4 -(3 -iodofeníl)-2-(2,3,5-1r1iodo-4 -
104/356 metoxibehzamido.)txof enô-3-carboxíXlco;
Ácido 4-(3-iGdofenil)-2 -(2,4,5-trifXúor-3metoxibenzamido)tiofeno-3-carboxíXico;
Ácidó 4 - (3 - iode/f enil.) - 2 ~ (2,4,5- tricloro - 3 ~
S met oxibenzam ido) t io f eno - 3 - carboxí1 W;
Mc ido 4- (3-iadofenil)-2-(2,4,5-tribrdmo-3 metoxibenzamido)tiofeno-3 -carboxí1ico;
Ácido 4- (3-iodófenil) -2- (2,4,5-triiodO-3met oxibenz amido) t i of eno - 3 - car box Hico;
IO Ácido 4-(3-iodcfenil) -2-(2,3., 6-trifXuor-4metaxibenzamido)tiofeno-3 -carboxíX ico;
Ácido 4- O-iodofenil)-2-¢2,3,6-tri bromo-4metoxibenzamido)tiofeno ~ 3-carboxilico;
Ácido 4-(3-iodofenxl)-2-(2,3,6-tricloro-415 met oxibenzamido)tiof eno -3-c arbox1X i co;
Ácido 4- (.3 -iodofenil) .-2- (2,3, 5-triiodo. -4metoxibenzamido) tiof en.o-3 -carboxílice;
Ácido 4-{3-iodofenil}-2-(2,4,6-trifldor-3metoxibenzamido)tiofeno- 3 -carboxÍlico;
Ácido 4-(3-iodofeniX) -2-(2,4,6-trieloro-3metoxibenz amido)tiofeno *3 -Carboxi1i co;
Ácido 4- (3“iodofenil) -.2- (2,4,6-tribromo-3metoxibenzamido) tiofeno-3 -carboxilico;
Ácido 4-í 3-iodofeni X) -2-¢2,4,S-1r i iodo-3 ~ metoxibenzamido)t iofeno-3-eaxboxilícó;
Ácido 4- (3-metilfenil) -2-· (2,3,5-trif lúer-4metoxibenzamido) tiof eno-3 -cái‘boxílico;
Ácido 4 - (3-metilfen.il} -2- (2,3,5-tricloro-4metoxibemamido) t iof eno - 3 -carboxf lico;
Ácido 4- (3-metilfen.il) -2- (2,3 ,.5-tribromo-4*»
105/356 metoxibanzamido)tiofeno-3-carbaxflico;
Ácido 4- (3-metxlfenxl) -2- (2/3 , 5-tx“iioda-4 metpx ibenz ami do) t i of eno - 3 - ca rboxf 1 1 co;
Ácido -4- (3-met ilfenii) --2-- (2,4,5-triflüar-35 metoxibenzamide)tiofeno-3 -carboxf1i co;
Ácido 4-(3-metilfenil)-2-(2,4,s- tricTora-3 raetoxibenzamldo)tiofeno-3 -carboxilico;
Ácido 4- {3-metilfenil) -2-- (2,4,5-tribromo-3metoxibenzam' do* tiofeno-3 -carbaxilico;
Ácido 4-(3-metilfenil)-2-(2,4,S-triiodo-3metoxibenzamidoj tiofeno-3-oarboxi1ico;
Ac i do 4 - (3 - me t i 1 f e n i 1) -2 - (2,3, Ú -t x* i f 1 üor - 4 metoxibenzamido)tiofeno-3 -carboxi1ico;
Ácido 4-(3-metilfenil)-2-(2,3,6-tribtomo-415 metoxibenzamido) tiofeno - 3 - carbojci 1 ico;
Ácido 4- (3-metilfenil,) -2- (2/3,6-txicloro-4metoxibenzamido)tiofeno-3-carboxflico;
Acid© 4- (3-met11feni1) -2- (2,3,6-1riiodo-4metoxibènzamido)tiofeno-3-carboxf11co,
Ácido 4- (3-metilf enil) -2- (2,4, S-tx^iflúor-lmetoxibenzamido)tiofèno-3 -carbaxilica;
Ácido 4-(3-metilfenil)-2-(2,4,6-tricloro~3metoxibenzamido)tiofeno-3-carboxflico;
Ácido 4 - (3 -met ilf eni 1) - 2,- (2,4, 6 - titibromo- 3 ~ metoxibenzamido)tiofano-3-carboxflico;
Ácido 4“ .(3-met ilf anil) -2- (2,4, 6 - triiodo-3metoxibenzamido)tiofeno-3 « carboxflica;
Ácido 4-(3-metoxifenil)-2-(2,3,s-triflüor-4metoxibenzamide)tiofeno-3-carboxflico;
Ácido 4- (3-metoxifenil) -2.- (S^S fS-tricloro-·/106/356 met oxibenzamido)t iof.eno- 3-carbox ί1 i c o;
Ác ido 4 - (3 -me toxif enil) - 2 - '(2,-3, 5 * t ribromo - 4 metoxibenzamido) t iof -eno.- 3 -carboxflioO;
Ácido 4-(3-metoxifenil) --2- (2,3/5-triiodo-4~ metoxibenzamidc·) tiofeno-3-carboxílico;
Ácido 4 -(3-metdxifenil)-2-(2,4,s-triflúor -3metoxibençamida)tiofeno- 3-carboxílico;
Ácido 4- (3-metoxitenil)-2 -(2,4,S~triçloro-3 me tçxxbanz amido) tiof enò- 3 - carboxí1ico;
o Án: ido 4 - (3 - met oxi f etil 1) - 2 - (.2t 4. - 5 -1 r 1 bròmo - 3 - metaxibenzamido) t iofeno- 3 -car-boxxlicô;
Ácido 4-(3-metoxi feni1) - 2-(2 r4,5 -1riiòdo-3~ metoxibenzamido)tiofeno-3 ~ carboxílie©;
Ácido 4-- (3uwtoxifenil) -2- (2, 3,6-trif lüor-415 metoxibenzamido)t iofeno-3-carboxílico;
Ácido 4- (3-metoxifeni1)-2-(2,3,8-triflúor-4metoxibenoamido)t iofeno- 3-carboxílico;
Ácido 4 - (3 -metoxi fenil) -.2- (.213,6 -1ribromo- 4 metoxibenzamido)tiofeno-3-carboxílico;
0 Ác ido 4 ~ (3 - me toxi f eni 1) 2 - (2,3S - trie lor ο - 4 - tne t oxibenzamido) t iof eno - 3 - carboxi 1 ico;
Ácido 4-(3-metoxifeni1)-2-(2,4,6 - triiodo- 3metoxibenzamido)t iofeno-3-carboxilico;
Ácido 4- (3-metoxifenil) -..2- (2,4, 6-tricloro25 metoxibenzamido)tiofeno-3-carboxilico;
Ácido 4.- (3-metoxifenil) -2- .(2,-4 r 6 - tribromo - 3 met oxibenzamido) t iof eno- 3 - carboxi 11 co-;
Ácido 4-(3-metoxifenil)-2-(2,4,6-triiodo-3metoxibenzamido) t iof eno- 3 -carboxi.1 ico;
qu urn sal, solvato ou pró-fãrmaco farmaceutícamente
107/356 aceitável destes
Também são aqui descritas modalidadea adicionais: de compostos que incluem, sem limitação, compostos na Tabela
Tabela i
Comp.
X benzo f uran~ 2 -i1
4-clorofenil benzofuran-2* 11
-meti.l-benzofuraxir':.
il ·· met ilf anil
-metilfenil
4-bromofeni1
2,4 -diclorqf enil
1orofenil
2-bromofenil
-bromofenil
-1ri f1uormeti1fenil
4-clorofenil il benzofuran-2-il
ben;
-met il-benzofuranH
-H
il me til-benzofuran- 2 11 benz o furan-2 -i1
3-metil-benzofuran-2 -H il
I 5 - c 1 oi'o - bens o f uran - 2 -h: ( il
I 5-fluor-benzofuran-2 -H !
il
Ο 8 / 3 5 6
j Comp.
4-bromofen11
4-bromofenx1
4-clorofenil
- clorof en.il.
4-bromofen11
4-clorofenil
4-bromo foul1
1£luormetΪ1feni1
-fluorfanil
4-cloròfenil
4-clorofenil
4-clorQfenil
-çlorofenil
4-clorofenil
5- fluor - benzofux'an-:
X.l
5-eloro-bènzo furan-2
- f l úor * 3 * met 11 benzofuran-3-x1 benzpfuran-2-11
-H
- H
3-flúor-benzofuran 11
2-metil- benzbf uran-5benzofuran-2 -11 bromo-benzofuran-2
4-clarofenil
4-olorofenil
4-clorofenil benzofuran-2- i1
bromo - 7 -met 6x1 benzofuran-2 -x1
5-Cloro-7-metóxibenzofuran-2-11
7-metóxi-5-nitroben z o fura n- 2-x1 benzofuran-5 -x
- Η I 5-me t oxi -benzofuran
- f luox* - benzo fur an benz ofur an-3-11
4-flúor-benzofuran-2-
109/356
ir -A -r2 •X
2-il
3 0 4-clorofenil 8 7-clorobenzofuràn-2- 11
31 4-clorofenil -H 4 - clorobenzof ur-sm -2 - 11
32 4-bromofenil -H benzofuran ~5-i1
33 4-clorofenil -H 7 -etoxi-benaofuran-2- 11
34 4-clorofenil -H -me tóx i-benzofuran- 2-.il
35 4 -- et 11 fenil -h ben zofuran-2 -i1
36 4-clQXOfenil -H 5,7~diflüor- benzof uran - 2 - i.l
37 4 - clorofenil -H 6-flúor-benzofuran-2- 11
38 4-clorofehil -H 5 -flüor- 7-metôxi- benzofuran-2-i1
39 3-etiIfenil -H benzofuran-2 -11
40 4-bromofenil -Ή 5-flúor-bèázafuran-2-
41 4-clanofenil -H benz© furan-2 -i1.
42 7-hidrôxi-benzófuran- 2-il -H benzofuran-2-i1
43 4~etinilfénil -H benzofuran-2 -i1
44 4-vinilfenil -H benzofuran-2-i1
45 4 - flüor- 2 -metilfenil -H benzof uran - 2 -- i 1
46 2-cloro-4-fluorfenil -H benzofuran-2-11
I Camp
S2 ?1
1I0/3S6
- me. t <§x i - 4 - me 111 f eni 1
2,4-dimetiIfenil aloro ~ 2-fluorfenil metoxifeni·
-cloro-3:-hidroxifenil
-cloro- 2-metox .4-azidofenil
2-metoxi-4 t r i fluormetoxifeni1
-bromo- 4 - fluorfenil hldrõxi-4 -metIlfeni X hi dr oxi fen.il
-c1oro- 3 -met oxifeni1
3.4~di
1fenil
4-1etrazo-1~ i1f en i1
4“pirrolofenil
H di ma t oxi f e n11
-flüor-2-metox1feniX
··'· H •H benzaf uran- 2-11 bensofuran benzofuran ·« 2-11 benzofuran bénn o f uran-2 - >
benzoluran-2- i 1 benzof hidroxifenil
benzofur an- 2 - .11 benxofuran-Me .n- 2 - 11
benzofuran-2-i1 an
2-il benzofuran-2 -11 be n.z o f uran.* 2 - i 1
H benzofuran·
4-aoetilfenil benzofuran-2
3-hidroxifer clorb-3-fluorfeni;
flúor-4 -metilfeni1
H
-H
-H benzo· furan - 2 - il ran·· benzofurar iran-2-11
- c 1 oi'o - 2 -me t .1 If e ni 1 benzo furan-2-x1
111/356
Comp. F -A ->s
72 2 - met 11-4 - met oxi. f e ni 1 -H Benzof uxan- 2 -1.1.
74 3 -* t e t raze 1 -11 f énil -K benzafuran-2-11
75 3 - clore-4- fluorfenil -H be nz ©fnran-2-11
7:6 3 ,. 4 --diclorofen.il 4-flúar-benzafuran-2- il
77 4 -cloro-3 -fluorfent1 -H 4-flúor-bensofuran-2- il
78 3-clorofenil -H bensofuran-2-il
7 9 3- trif luormetoxifem 1 -H benzoluran-2-il
80 4-cloro--3- t r i f 1 uormeti 1 f eni .1 -H bensofuran-2 -i1
81 4 - br orno - 2 - f 1 υ o r f e n i 1 -H benzofuran-2 -il
82 4-c1or©- 3 -ciano feni1 -H benzofuran-2-il
S3 3-br©trofenil -Ή benzofurap-2-il
84 4 - cianc - 3 - f 1 úor f eni 1 -H benzofuran-2-il
85 3-flúor-4-métilfenil -H benzofuran-2-i1
86 3.- flúor 4 -metilfenxl •k 7 -metoxi-henzofurab- 2-il
87 4 -me ti l.s ul f anil fen i 1 -H benzofuran-2-il
88 3-flúor-4-metiIfenil -H 7-hidrdxibenzofuran- 2-il
89 4 -ciano-3-fluorfen 1.1 -H benzófuran-2-il
90 3-fe:iazO2-ilfenil -H Bens© furan-2-i1
91 2-metil-4- tri f1uormetaxi f eni1 -H benz©furan-2-11
92 4-metiltio-2- tri f1uormetoxifeni1 -H benzofuran-2 -il
112/356
Comp. 8 s -A -X
93 4 -cloroferail -Η 7-hidroxibenzofuran- 2-.il
94 3,4 -d1f1uorf eni1 -H benzof wan-2 -11
95 3,4.-dime tiltenil -H .benzci uran- 2 -11
96 3-nitrofenil -H benzo f uran- 2-i1
97 4 - c 1 q ro - 3 ~ ni t r o f eni 1 -H benzofuran-2-il
98 2 - cloro- 4 - met Ilf enil. -H benzofuran-2-il
99 2-cloro~4-metilfeni1 -H benzofuran -2 -i1
100 4 - cianc- 2-metilfenil -H benzolcian 2 rl
101 2-flüor-4- metilsulfonilf enil -H benzofuran~2-11
102 2.. 4 di fluorfenil -H .benzbf uran- 2 -11
103 2,3 -dimet i if mil •H benzofuran- 2 ·· il
104 2-010X0-5“ trif luorme til fan i 1. -H benzofuran-2-11
105 4 -metóxi-2- tri f .luoxmet i 1 f eni 1 Ή berazpfuran- 2: -il
105 4-clorofenil -H benzofuran-2 -il
107 4-cloro-3-(2- (metilamino))-2- oxoetoxifenil -a benzofuran-2-il
108 4-cloro-3-(2- (met 11 ammo)) -2- oxoetoxifenil -CK:; benzofuran-2-il
109 3 -diidroxiamino-4 - met11fenil -H benzo furan~2-i1
110 4- r r i f luorroetoxif etiil •H benzof uran.- 2 - i 1
113/356
Comp a ir -A -X
11.1 4 - c 1 anomet11 f on 1.1 •H benzo furan-2-11
X12 3 - hi drox in-.e t i 1. - 4 - wtilfenil H benzofuran- 2-11
113 4-bromo-3,4~ difluorfenil -H hen z o furan-2-11
114 3 -flüur-5-metilfenll -H benzofuran-2-11
115 4 -metaximetillenx1 H benzoloran-2-11
116 4-wtiltiofen.il -H benzo f uran-2-11
117 4-formilfenxl .banzof uran - 2 ~ 11
113 4--clarofenil -H 7 -clano-benzofuran-2-
119 4-cloro-2- me t on icarbon 11f eni1 .H benzofuran-2 -i1
-....... 120 2 - carboxl - 4 -dlorbf eni 1 -H benzofuran-2-11
121 S-amíno-é-çianofenil -H BanzOfurano-2 ~11
122 4-©lorofanil -H 6 -brom© - 2 -0X0-2H·- cromeno
123 4-bromofanil ••K 4-flúor-benzo furan-2- 11
124 4-clorofenxl -H 5-metil-benzotien-2- 11
125 4 -bromofenil -H .bemotien-3-il
126 4-bromofenil -H benzctien-3-11
127 4-toll! -H benzotien-3-iI
128 4 -cloxof anil -H 3-hid.rÕAXi-benzotien- 2 -11
122 4-fluorfenil -H 3 -hidróxi-benzotien-
114/356
Comp. ΪΓ -A -R2 -X
ί': ' .: 2 -11
130 4 -bromofenil -H 5 -metil -. benzo tien- 2 - 11
131 2,4-diclorofenil -H benzotien-2 -11
13.2 2 -bromof mi 1 -H benzot1en-2-i1
133 2-bromofenil -H benzotten-3-11
134 2-bromofenil -H benzotien-5-11
135. 2 - bromof mil -H 5 -métil-benzot lm-2 - il
136 3-clorof mil -H benzot1en-2-11
137 3-olorofenil -H benzotten-5 ~11
138 3-çlòròfmil -H 5-metil-benzDtien-2- 11
139 3., 4 - dime t i If eni 1 -H benzotièn-2 -i1
140 3 ; 4-dimetilf mil ••H benzot ten-5-i1
141 3,4-dimetilfmil -H 5-metiI-benzo11en-2 - il
142 4- trif1uormet i1fenil -H benzot ien-5 ~il
143 4 -trifluormet i1£eni1 •H bmzot ien- 2 -11
144 4 -trifluormetilfen11 -H benzotim-3-il
145 4 - trif 1normat.11 feni 1 -H S-metil-benzotion-2- 11
146 4 -clorofenil -H 7 ~ f1ΰοr-benzotien- 2 - il
147 4-clorofenil -H 4 - cloro - benz ofc ien-- 2 - il
148 4-clorofenil -H 7-c1oro-benz ot i en-2-
115/356
Corap. r -A ~Rg -X
il
AWWAWA.A.A............ 149 4 -elorofenil -H 7-1ri f1uormet i1- bcnzot ien-2~il
150 4 c lorof enil -H 4 -trif luormat.il be nz ot i en~ 2-i1
151 4-bromofenil H 7-flúor-benzotien-2- il
Também são aqui descritas modalidades adicionais de compostos que incluem, sem limitação, compostos na Tabela ii que possuam a fórmula:
Tabela ii _____
Comp, r -A -¾ -X
1 4-aminofenil -H 4~fluorfeníl
2 4-bromofenil -H benzil
3 3 - aminofen.il -H 4 - fluorfenil
4 3 - ac e tamido f en i1 -H 4 - fluorfenil
5 4 -acetamidofeni1 -H 4-fluorfeníl
6 4 -bromof eni1 -H 3-carbamoi1feni1
7 4-tolil -H 2 - b i f en i 1 - 4 -1.1
a 4-to.lil -H 3,4,5 -1rimetoaifanil
$ 4 -etoxifenil -H 3-metilfenil _
10 4 -etorifenil -H 4-1-bu t i1feni1
11 4-tolíl -H 3 ~ni trofen.il
11.6/3 56
Comp * I N0 |
12
13 3-
14
4-bromofenil
-Rs
-brpmo t enx 1
-dimetilaminofeni1
4-caidsamoiIfenil
4-bifenil
4-fluorfenil fenil
4~ fluorfenil
3-etoxicarbonilamino -H I
-όarbamoi1feni1
4di me t i1carbamoi1feni l
4-bromofenil
-H
4-fluorfenil
4-.f luorfenil
4-etoxicarboni .0
d imetiluarbamoi1fenil
3~bifenil
4-oaxbamoilfeni1
4: bromo f enil •H aminofenil
4:-fluorfenil
4-fluorfenil
4-fluorfenil
-H i 3-imidazòl-2-ilfenil
4- bromo fenil ·· bromo f enil
4-bromofeni1
4-oxazo1-2-i1f eni1
Ή
-H dime t i 1 carbamo Ilf enil
-fluorfen ilureido fluorfenil
4“bromofenil fenil
H
fluorfenil
-Η I 3,4,5-trimetoxifenil rime t oxif eni1
I Comp.
117/356
CH2C
4-toll!
4-fluorfsnil
4-fluorfenil
H3 il
4~taiil
4-tolil
4-coin
-H
t.x.i f luarmet i 1 fenil
2,4,6-trimetilfenil
4~pirazol-i-ilfen.il
4-tolil anil
4-clorofenil
-flúor·· S ··
-metlie1orofenil
H
trimetilfen.il br omo - 2 , J, 4 4-metoxibenzi1
4.3
4G.
clorof enil ~ clorOfeni1
4-bifenil
4-n-butilfenil
-tolil
4“tolil
4-bromofeni1
4-tolil
bifenil
4-etilfenil
4“tOlll
4~bramof.enil
4-aoetamidofenil
4-n-butilfenil
t rifluorme ti11iofeni1
-fluorsulfonllfenil f1ubrmstoxifenil
2,4 - dielorofeni l
4-bromofeni1
-- n - prop i 1 f eni 1
H 3-trifluormetoxifenil
4-dielorofenil
4-bifenil
118/3SS
Comp, -A -X
50 2-bromofenil -H 3 -trifluôrmetoxifenil
51 3 -clorofenil -H 4 - txif Xuorraetoxxf eni .1
52 3-olprofenil -B 4 -n-prop!. If anil
53 3 ,4 -dimetilfenil -H 4~ trifluormetoxifenil
54 3 -, 4-dimetilfenil -H 4~H-propilfenil
55 4 - f. ϊ i f 1 uorme t i 1 f en 11 -H 2-- fluox fenil
56 4-trifluorraetilfenil -H 2-tolil
57 4 -1 r i f 1 u o rm e ü i 1 £ e n 11 -H 2-clcrofenil
58 4 -tri f luormet i 1 fenil -H 4-toliI
59 4 ~trifluormetilfenil -Me 4-bifenil
60 4 - tr if luoirme til fenil -Et 2,4 -di clorofeni1
81 i-trifluormetilfenil -H 3,4-di clcrofenil
62 4 - crifluormetilfeniI -H 2-feniltioetil
63 4 11 if luormet i 1 f eni 1 -H 4-dimet i1aminofeni1
64 4-trifluormetilfenil -H 4 · iodofenil
65 4-brumofeni1 -H 3-wetdxi~2 f 4 f 5- t r i f luc-r f eni 1
66 4 -hidroxifenil -H 3-freerfenil
67 3-hidroxi fenil -M 3-fluorfenil
68 7 -metóxi -benwfuran- 2 ~ il -H 3 - f luox'fenil
68 benzofuran-2 - il -H 3-fluorfenil
70 4-tetrazo”1-i1feni1 -M 3 -fluorfenil
71 4-pirrolofenil H 3-fluorfenil
72 4-clorufenil -H 2(3-(pirimidin~2- ilôxijfenil)
73 4 -bromofenil tBu 3,4 - di f luorfen.il
115/356
Comp. r -A -X
74 4-bromofenil 2.-naft.il.
75 7 - metoxifeen zo f ur axi - 2 - il -H 3 -fluorfenil
76 7 - hidroxibenóo.f ur&n - 2 - il -H 3-fluorfenil
77 2,3-diflüor-4- met11fenil -H 3-fluorfenil
7 8 4 -tolil -H 5-benzo [d] [1,3 ] dioxol.
79 2,4 -diclorofen.il -H 6-benzo [d] [1,3]dioxol
80 2-bromofenil -H 5-benzo[d] a,31dioxol
81 .4 -1 ri f luormet ll.fep.il -H S-benzo[d][1,3]dioxo1
82 4-bromofenil -H 3 f luorbeuz i lure ido
83 4~clorofenil -H naftalen-2 -ilóxi- acetamido
84 4-rLorofenil -H n a f t a 1 e n 2 - i .1
85 4-metoxifenil -H naftalen~2-íl
86 4-clorofenil -H S-benzo[d](1,SldioKpl
87 4-cXorofenil -H 5 - (2,2 - d:i f luorbenzo (dí [l,31dioxol
For toda a especificação, grupos e substituintes destes podem ser escolhidos para fornecer porções: é compostos estáveis <
Formas adicionais dé Compostos
Os compostos aqui descritos podem,· em alguns casos, existir coxo diastareômeros, enantiõmeros, oú outras formas estereoisoméricas. Os compostos aqui apresentados incluem todas as formas diastereoméricas, enantioméricas e epiméricas, além dás misturas apropriadas destes. .A
Ό/156 separação de esteiO&isômeros pôde ser realizada pot aromatógraf ia ou pela formação diaátexeòméxiça e separação por raaristãlizaçãa, ou cromatografia, ou qualquer combiiiação destes (Jean Jacques, André Collet,. Samuel H5 Wilén, ''Enantiomers, Racemates and Resolutions , John Wiley
And Sons, Inc., 1581, aqui incorporado por referência quanto a esta revelação). Estereoisômeros também podem ser obtidas por síntese estereosseletiva.
Ém algumas situações, as compostos podem existir como
10 tautômeros. Todos os tar itõmeros estão ii icluídos dentre > das
formulas aqui descritas.
Os métodos e campos lições aqui descí ritõs incluem < s uso
de formas amorfas, al/ ;m de formas c ristalinas (t; ambém
conhecidas como polimor fqs) . Qs compos tos aqui desc ritos
15 podem estar na forma de sais faxrniaceuti oamente acdit& veia.
Além disso, metabolites ativos desses co mpostos: que po ss.uem
0 mesmo tipo de ativiç [ade estão incli lidos na esooj so da
presente revelação, Além disso , O:S compc atos aqui desc ritos
podem existir em formas não s< alvatadas, bem como em f ormas
solvatãdas, com solventes farmaceuticamente aceitáveis como, por exemplo, água, etanol, e semelhantes. As formas solvatadas dos compostos aqui apresentados também são consideradas como aqui reveladas.
Em algumas modalidades, os compostos aqui descritos podem ser preparados como pré-fármacos. Um prô-fãrmaeo refere-se a um agente que é convertido no fármaco parente ín vivo, Prõ-fármacos são frequentemente úteis, pois, em algumas situações, eles podem ser mais fáceis de administrar do que o fármaco parente. Eles podem, por exemplo, ser biodisponíveís por adminis tração oral,
121/356 enquanto ο parénté não O é. 0 pró~fãrmaço também pode ter solubilidade aumentada em composições farmacêuticas em relação ao fármaco parente© Um exemplo, sem limitação, de um ptõfármaco seria um composto aqui descrito, que é 5 administrado como um éster (o prô-fármaco J para facilitar a transmissão através de uma membrana celular onde a hidrossoluhilidade é prejudicial à mobilidade, mas que então é metabolicamente hidrolisada no ácido carboxílico, a entidade ativa, uma vez dentro da célula onde a hidi’ossolubilidade é benéfica. Um exemplo adicional de um prô-fármaco pode ser um peptxdèo curto (poliaminoácido) ligado a um grupo ácido, em que o paptídeo é metabolizado para revelar a porção ativa. Em certas modalidades, mediante administração in vívq> um pro-fármaco é 15 químicamente convertido na forma biologicamente, farmaçeuticamente ou terapeuticamente ativa do composto. Em certas modalidades, um prõ-fármaçç ê metabolizado enzimatioamente por uma ou mais etapas ou processos na forma biologicamente, farmaceuticamente ou terapeuticamente ativa do composto.
Para produzir um pro-fármaco, um composto farmaceuticamente ativo é modificado de tal forma que o composto ativo será regenerado mediante administração in vá vo. O pro-fármaco pode ser projetado para alterar a estabilidade metabõlica ou as características de transporte de um fármaco, para mascarar efeitos colaterais ou toxicidade, para melhorar o sabor de um fármaco ou para alterar outras características ou propriedades de um fármaco. Em algumas modalidades, em virtude do conhecimento 30 dos processos farmacodinâmicos e do metabolismo do fármaco •Μ ·
122/356 in vivo, após wn. composta fax^maceuticamenfce ativo ter sido detérmihado, são projetados prõ-fáxmacos do composto (veja,· par exemplo., Nogrady (1985} «Medicinal chemistry: A Biochemical Approach, Oxford University Press, Nova York, páginas 388-332; Silverman (1992), The Organic Chemistry of Drug Design, and Drug Action, Academic Press, Inc., San Diego, páginas 352-401, Saulnier e cols. , (1994), «Bioorganic and Medicinal Chemistry betters, Vol·. 4 , p < 1985; Roosebopm é cols,, w:Pharmacoldgical Reviews, 56: S310 102, 2003; Miller e cols., X Med; Chem. Vol. 46, 3“ 24,
5.097-5.116, 2003; Aesop cho, «Recent. Advances in Oral
Prodrug Discovery, Annual Reports in Medicinal Chemistry, Vol. 41, 395-407, 2006).
Formas de prõ-fármaco dos compostos aqui descritos, em 15 que o prô-fármaco ê metabolizado in vívq para produzir um composta de Formula (I)-(V)f como aqui apresentado, estão incluídas dentro da escapo das reivindicações. Em alguns casos, alguns dos compostos aqui descritos podem ser um pró-fármacõ para outra derivado ou composto ativo,
Frô-fármacos são frequentemente úteis, porque, em algumas situações, eles podem sar mais fáceis de administrar do que o fârmaco parente, Eles poaem, par exemplo, ser bíodisponíveis por administração oral, enquanto o parente não o é. O pró-fãrmaco também pode ter solubilida.de aumentada em composições farmacêuticas em relação ao fármaco parente. Pró-fármacos podem .ser projetados cótfto derivados de fármacos reversíveis, para uso coto modificadores para aumentar o transporte de fármaco até locais específicos de tecidos. Em algumas modalidades, o design de um prõ-fármaço aumenta a hidróssolubilidade
123/356 efetiva. Veja, por exemplo, Fedorak, e cols. Am. JL physiol, i G210-218 (1995); Mcboed e cols., íSastroenterml.. , 196: 405-413 (1994) ; HoChhauS e cols., BÍOfíied. Ctrcm. , 6: 283“ 286 (19'92); J. Larsen e H, Bundgaard, Znt< V.
pharwseutíos, 37, 87 (1987); J. Larsen e cols., Xnt. *7, Pharmaceutics, 47, 123 (1988) ; Sinfcula e cols., J. Bharm. 5ci., 64; 1.81-210 (1975); -T, Mguchi é V. Stella, *9rodrugs ás Novel Delivery Systems”/, Vol. 14 da WA.C.S. Symposim Series”; « Edward B. Roche, B lore vers ible, carriers in Drug
Design, American Fharmaceutical Association e Perganion Press, 1987, todos aqui incorporados quanto a esta revelação).
Locais na porção do anel aromático de compostos aqui descritos podem ser suscetíveis a várias reações 15 metabôlícas e, portanto, ã incorporação de substituintes apropriados nas estrutwaá do ànel aromático, como, apenas como exemplo, halogenios, pode reduzir, minimizar ou eliminar essa via raetabõlica.
Os. compostos aqui descritos podem ser marcados 2Q isotopicamente (por exemplo., com um radioisõtopo) ou por outrds meios, incluindo, sem limitação, o uso dé cromoforos ou porções fluorescentes, marcadores bioluminescentes, marcadores fotoativãveis ou químioluminescentes.
Os compostos aqui descritos incluem compostos marcados 25 isotopic&mente, que são idênticos àqueles citados nas vãrias fórmulas e estruturas aqui apresentadas, exceto que um ou mais -átomos são substituídos por um átomo que possui uma massa atômica ou numero de massa diferente da massa atômica, ou do número de massa normalmente encontrado na 30 natureza. Exemplos de isdcopos que podem ser incorporados
124/356 nos presented compostos incluem isótopas de hidrogênio, carbono, nitrogânio, oxigênio, flúor e clpro: com, por exemple,· 2H, 5ϊί, UC, 14'C, JSN, 18O, ^'Q, 3aS, ÍSF, δζ?Χ, respectivamente. Certos compostos marcados isotopicamente 5 aqui descritos, por exemplo, aqueles nos quais isótapos radioativos como, por exemplo, 3H e i <“ são incorporados, são úteis em ensaios de distribuição de tecido de fârmaco e/ou substrato. Alám disso, a substituição com isôtopas como, por exemplo, deutêrio, ou seja, ’‘H, pode gerar 10 algumas vantagens terapêuticas resultantes da maior estabilidade metabólica como, por exemplo, meia-vida in vivo aumentada ou necessidades de dosagem reduzidas,
Bm modalidades adicionais, os compostos aqui descritos são metabólizados mediante administração a um organismo 15 necessitado para produzir um metabõlito que é então usado para produzir um efeito desejado, incluindo um efeito terapêutico desejado.
Os compostos aqui descritas podem ser formados como, e/ou usados como, sais farmaceuticamente aceitáveis. Os 20 tipos de saís farmacêuticos aceitáveis incluem, sem limitação: (1) sais de adição ácida, formadas por reação da forma de base livre do composto com um ácido inorgânica farmaceuticamente aceitável como, por exemplo, ácido clorídrico, ácido hidrobrôraiço, ácido sulfúrico, ácido 25 foafõríco, ácido metafasfórico, e semelhantes; ou com um ácido orgânico como, por exemplo, ácido acêtico, ácida propiônico, ãcido hex&nõico, ácido ciclopentánoprapiõnico, ácido glicólico, ácido pirüvico, ácido lãtico, ácido malanico, ácido succínico, ácido málico, ácido malêico, 30 ácida fumárico, ácido trifluoracético, ácida tartárico,
125/3S6 ácido cítrico, ácido benzóico, ácido 3-(4.hídroxibenzot1 íbenrôico, ácido wxxmlco, ácido mandálico, ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido 1,2étanodissülfônico, ácido 2~hidroxietanossulfônico, ácido benzenossulfônico, ácido toluenossulfônico, ácido 2naftalenossulfônico, ácido 4-metilbiciclo-[2,2.2] oct -2-enc~ 1-carboxílico, ácido glicoheptônico, 4,4'-metilenobis-{ ácido 3-h.idróx.i-2-ena-l-carboxílico) , ácido 3fenilpropíônico, ácido trimetilacêtico, ácido butilacético terciário, ácido lauri.1 sulfúrico, ácido glicônico. ácido glutâmico, ácido hidroxinaftôico, salicílico ácido, ácido esteárico, ácido mucônico, ácido butíríco, ácido fenilacêtico, ácido fenilbutírico, ácido valpróico, e semelhantes; (2) sais formados quando um próton acidic© presente no composto parente ® substituído 'por íon de metal, por exemplo, um íon de metal alcalino (por exemplo, lítio, sódio, potássio), um íon de metal alcalino terroso (por exemplo, magnésio ou cálcio), ou um íon de alumínio. Em alguns casos, os compostos aqui descritos podem se coordenar com uma base orgânica como, por exemplo, sem limitação, etanplamina, dietanolamina, trietanolamina, t remetam i na, N- meti1g1ucaraina, dic i c1ohex1lamina, tris {hidfoximetiDmétilamina. Em outros casos, os compostos aqui descritos podem formar sais com aminoácídos como, por exemplo, sem limitação, arginina, lisina, e semelhantes. Bases inórgãnicas aceitáveis usadas para formar sais cora compostos que incluem um próton acídico incluem, sem limitação, hidróxido de alumínio, hidróxido de cálcio, hidróxido de potássio, carbonato de sódio, hidróxido de
3Ò sódio, e semelhantes.
126/356
Deve-se entender que uma referência a um sal farmaceuticamente aceitável inclui as formas de adição de solvente ou formas cristais destas, partícularmeáté solvatos ou polimorfos.. Solvatos. contêm quantidades astequíométricas ou não estequiométricas de um solvente, e podem ser formados durante o processo de cristalização com solventes farmaeeuticamente aceitáveis como, por exemplo, água, etanol, e semelhantes. Hidrates são formados quando o solvente é água, ou alcoolatos são formados quando o 10 solvente é álcool. Solvatos de compostos aqui descritos podem ser convenientemente preparados ou formados durante os processos aqui descritos. Além disso, os compostos aqui fornecidos podem existir em forma não solvatada, bem como em formas solvetadas, Em geral, as formas solvatadas são 15 consideradas equivalentes às formas não solvatadas para os objetivos dos compostos e métodos aqui fornecidos.
Em algumas modalidades, os compostos aqui descritos como, por exemplo, os compostos de Fórmula (I) - (V) , estão em várias formas, incluindo, sem limitação, formas amorfas, 20 formas trituradas e formas nanoparticuladas. Além disso, os compostos aqui descritos incluem formas cristalinas, também Conhecidas como polimorfos. Polimorfos incluem os diferentes arranjos de compactação cristal da mesma composição de elementos, de um composto. Polimorfos 25 normalmente possuem diferentes padrões de difração dé raios-X, pontos de fusão, densidade, durezá, format-o cristal, propriedades Ópticas, estabilidade e solubilidade. Vários fatores como, por exemplo, p solvente de recristalização, a taxa de cristalização e a temperatura de 30 armazenamento, podem fazer com que uma única forma cristal
127/356 domine..
A avaliação e a caracterização dos saia, polimorfos e/ou solvatos farmaceuticamente .aceitáveis podem ser obtidas som o uso de diversas técnicas que incluem, sem 5 limitação, análise térmica, difração de raios-X, espectroscopia, absorção de vapor e microscopia♦ Métodos de análise térmica abordam a degradação termoqulmica ou processos termofísicos que incluem, sem limitação, transições polimõrficas, e esses métodos são usados para 10 analisar os relacianãniéntas entre formas polimõrficas, determinar perda de peso, para encontrar a temperatura de transição vítrea, ou para estudos de compatibilidade do excipiente. Esses métodos incluem, sem limitação, calorimetpia de varredura diferencial (DSC), calorimetria 15 de varredura diferencial modulada (.MDCS), análise termogravimétrica (TGA) e análise termogravimétrica e por infravermelho íTG/XR). Métodos de difração de raios-X incluem, sem limitação, difratomstros de cristal único e de energia e fontes de síncroton. As várias técnicas 20 éspectroscõpieas usadas incluem, sem limitação, Raman, FTXR, GV-VXS e IW (líquida e sólida) » As Várias técnicas de microscopia incluem, sem limitação, mícroscopia de luz polarizada, mícroscopia de varredura de elétrons (SEM) com análise de energia dispersiva de raios-x (EDX), micxoscopia 25 de varredura de elétrons ambiental com EDX í em atmosfera cie gás ou vapor de água), microscopia IR e microscopia Raman.
Por toda a especificação, grupos é substituintes destes podem ser escolhidos para fornecer porções e compostos estáveis,
Síntese de compostas
128./356.
*
Era algumas modalidades, a. síntese de compostos aqui descritos ê obtida usando meios descritos na literatura química, com ò uso dos métodos aqui descritos , ou por uma combinação destes. Além disso, solventes, temperaturas e 5 outras condições de reação aqui apresentadas podem variar.
Em. outras modalidades, os materiais de partida e reagentes usados para a síntese dos compostos aqui descritos são sintetizados ou obtidos de fontes comerciais comoj por exemplo, sem limitação, sigma“Aldrich, Fiçchex 10 Scientific (Fischer Chemicals) e Acros organics>
Em modalidades adiciçnãis, os compostos aqui descritos, e outros compostos relacionados, que possuem substituintes diferentes são sintetizados com o uso de técnicas e materiais aqui descritos, bem como aqueles que 15 são reconhecidos no campo, tais como descritos, pox exemplo, em Fieser e Fieser, Reagents for Organic Synthesis, Volumes 1-17 (John Wiley e Sons, 1991); Rodd Chemistry of Carbon Compounds, Volumes 1-5 e Suplementos (Elsevier Science Publishers, 1989)? Organic Reactions'', 20 Volumes 1-0 (John Wiley e Sons, 1991), Laroch Comprehensive Organic Transformations*' (VCR Publishers Inc., 1989), March, ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY 4« Ed., (Wiley 1992); Carey e Sundberg, ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY” 4·- Edição, Vols. A e 8 (Plenum 2000, 2001) , e 25 Green e Huts, PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SÉN1HESIS 5
Edição, (Wiley 1999) (todos aqui incorporados por referência quanto a esta revelação). Métodos gerai® para a preparação db composto, como aqui revelados, podem ser derivados de reações, e as reações podem ser modificadas 30 pelo uso de reagentes e condições apropriados, pela
129/356 intròdução daç várias porções encontradas nas fdrmulas aqui fornecidas. Como uma diretrizf ©s seguintes métodos sintéticos podem ser utilizados.
Formação dé ligações covalentes por reação de um.
életrÕfilo com um nueleõfilo
Os compostos aqui descritos podem, ser modificados' com o uso de vários eletrófilos e/ou nucleófilos para formar novos grupos funcionais ou substituintes. A Tabela g, intitulada Exemplos de ligações oovalentes e precursores 10 destas, lista exemplos não limitanteç selecionados de ligações covalentes e grupos funcionais precursores, que geram as ligações covalentes. A Tabela 2 pode ser usada como uma diretriz em direção a diversas combinações de eletrófilos. e nucleõfilos disponíveis que fornecem ligações 15 covalentés. Grupos funcionais precursores são mostrados como grupos eletrofílicos e grupos núcleofílicos.
Tabela 5: Exemplos de ligações eovalentes e precursores destas ...............
Produto da ligação ; covalente Eletrófilo Nueleofilo
Carboxami da s Esteres ativados Aminas/anilinás
Carboxamidas Acil azidas Aminas/ani1inas
Carboxamidas Acil baletos Am i na s / an i 1 i nas
Esteres Acil baletos AlcoÕis/fenâis
! Esteres Acil nitrilas Alcoôis/fenõis__
) Caiboxamidas Acil nítrilas Aminas/ani1inas
Iminas AideIdos Aminas /uni Unas ;—.........................: ..........—
Alquil aminaâ Alquil haletos 1 Aminas/anilinas
) Ésteres Alquil haletos Ácidos 1 carboxílicos
130/356
Tioèteres Alquil haletos Tiôis
Éteres Alquil haletos Alcoóxs/fenóis
Tioêteres Alquil sulfonates Tio’ r
êsterçs Anidridos Álcoôís/fendís
Carboxamidas Anídridos Aminas, aní1ina o
Tiafenôis Aril baletos Tiôis
Aril aminas Aril haletos Aminas
Tioéteres Az ind1nas Tiõis
Carboxamidas Ácidos carboxílions Aminas/anilínas
Esteres Ácidos carboxXlicos Alcòôís
Hidrazinas Hidrazidas Ácidos carboxílicos
N“ aciluréias ou ánidridos Carbodi im idas Ácidos carboxíliççs
Esteres Diazoalcanos Ácidos carboxílícos
Tioéteres Epóxidos Tióis
Txoêteres Haleaneram idas Tíôis
üréias Isocianatos Aminas/ani11nas
Uretanos Isocianatos Alcoõis/fend1â
Típurêias isotiocianatos Aminas / an.í linas
Ticéteres MaleímidaiS Tióis
Alquil aminas Sulfonate ésteres Aminas/anílinas
Tioéteres Sulfonato ésteres Tióis
Sulfonanddas Sulfunil haletos Aminas/anilinas
Sulfonato ésteres Sulfonil haletos Fenóis/alcoóis
Üso de grupos de proteção
131/356
Nas reações descritas, pede ser: necessário proteger grupos funcionais reativos, por exemplo, grupos hidroxi, amino, imino, tio ou carbóxi, quando esses forem desejados no produto final, á fim de evitar sua participação 5 ihdesejada em reações. Grupos de proteção são usados para bloquear algumas ou todas as porções reativas e evitar que esses grupos participem em reações químicas até que o grupo de proteção seja removido. Prefere-se que cada grupo de proteção seja removível por um meio diferente. Grupos de .10 proteção que são clivados sob condições de reação totálmente díspares preenchem o requisita de remoção diferencial.
Grupos de proteção podem ser removidas por ácido, base, condições redutoras (como, por exemplo, 15 hidrogenólise) e/ou condições oxidativas. Grupos como, por exemplo, tritil, dxmetoxitritil, acetal e t~ butildimetílsilil, são ácido-lábeis e podem ser usados para prótáqex' porções· reativas carbõxi e hidrõxi na presença de grupos amino protegidos com grupos Cbz, que são removíveis 20 por hidrogenôlise, e grupos Fmbc, que são base-lábeis.
Porções reativas de ácido çarbcxílioo e hidrõxi podem ser bloqueadas com grupos base-labels coma, por example, sém limitação, metil, etil e acetil, na presença de amima bloqueadas com grupas ácido-labeis como, por exemplo, t25 buti.1 carbamat© ou com ©arbamatos que são ácido e baseestáveis, mas removíveis por hidrõlise.
Porçoeâ reativas ce acxdo çarboxílica: e hi.dtõxi também podem ser bloqueadas com grupos de proteção removíveis por hidrólisê como, por exemplo, o grupo benzil, enquanto 30 grupos amina capazes de ligação de hidrogênio çom ácidos
132/356 podem ser bloqueados com grupos base-lábeis como», por exemplo, Fmoç,. Porções reativas dé âcldo çarboxílico podem ser protegidas por coxiversao em compostos éster simples, como aqui exemplificado, que incluem conversão em alquil 5 ésteres, ou podem ser bloqueadós com grupos de proteção removí vèiS: por oxidação como, por exemplo, 2,4dimetoxibenzil, enquanto grupos ãmino coexistentes podem ser bloqueados com silil carbamates flúor-lãbeis.
Grupos de bloqueio de alil sao úteis na presença dé IO grupos de proteção de ácido e base, já que os primeiros são estávais e podem ser subseqüen temente removidos por catalisadores de metal ou pi-ácido. For exemplo, um ácido carboxílico bloqueado por alil pode ser desprotegido com uma reação catalisada por Pd® na presença de grupos de 15 proteção de t-butil carbamate ácido-lábeis ou grupos de proteção de acetato amina base“lábeis. Ainda outra forma de grupo de proteção é uma resina à qual w compos tò ôu intermediário possa ser anexado. Desde que o resíduo esteja anexado à resina# aquele grupo funcional é bloqueado e não 20 pode reagir. Uma vez liberado da resina, o grupo funcional é disponível para reagir.
Tipicamente, grupos de bloqueio/proteção podem ser seiecionados 'des
3:0
'Outros grupos de proteção, mais uma descrição
133/356 detalhada de técnicas aplicáveis à criação de grupos de proteção e sua remoção, são descritos em Greene e Nuts, Protective Groups, in Organic Synthesis, 3* Edição, John Wiley & Sons, Nova York, NY, 1999, e Koaienski,. Protective
Groups*, Thieme Vèrlag, Nova York, NY, 1994, que são aqui incorporado® por referência quanto a esta revelação.
Síntese geral
A preparação de composto® de Fórmula (I)- {¥} aqui descritos pode ser obtida por métodos reconhecidos no 10 campo, como descrito em Koebel e cols. J. Med. Chem. 1975, volume 18, N« 2, 192-194; Gev/ald, K. ; Schinke, E.,; B.iíttcher, H. Çhem. Bar, 1955, 99, 94-100; Sabnis, R.W< Bu.lfur Rep. 1994, 10, 1-17; Sabnis, R.W. e cols., J. Heterocyclic Onam. 1999, 35, 333; Gernot A. Eller, Wolfgang IS Holzer Molecules 2W6, :11.., 371-376; Michael G, e cols., J.
Med. them.; 1999; 42(26) páginas 5,437-5.447.; todos aqui incorporados por referência.
Em uma modalidade, os compostós aqui descritos são preparados pela saqãência apresentada no Esquema A.
Esquema A. Exemplo não límitante da síntese dá compostos de Fórmula (1)-(V)
Hma condensação de Knoevenagel entre cetonas de estrutura A-l e cianoacetates de estrutura A-2 forma bases de Schiff de estrutura À-3. For exemplo, cetonas de estrutura A-l são reagidas com cianoacetatos de estrutura
Ά-2 na presença de uma amina como, por exemplo, morfolino.
134/256 em um .solvente como, por exemplo, tolueno, sob condições de desidratação, por exemplo, na presença de peneiras moleculares de 4 i, para formar base de Schiff de estrutura A~3. As. bases de Schiff de estrutura A-3 são reagidas sob condições de reação de Gewald (enxofre (S3) , morfolino em um solvente como, por exemplo, etanol e tolueno.) para formar tiofenos de estrutura A-4. Os tiofenos de estrutura A-4 são então reagidos com diversos, cloretos de ácido carboxílico para fornecer compostos de Fórmula Ém outra modalidade, tiofenos de estrutura A-4 são acoplados com ácidos carboxílicos na presença de um agente de acoplamento como, por exemplo, diciclohexilcarbodiimida (DCC), diisopropil carbodiimida (DXC) , i-etil-3 (3··· dimetilaminoprdpil.) carbodiimida (-EDCX), N15 hidroxibenzotxiazol (HOST), N-hidroxisuccinimide (HOSu), 4nitrofenol, pentafluorfenol, 2-(IH-benzotriazol-1-11)~
1.1.3.3- tetrametilurônio tetrafluorborato (TBTÜ), Obenzotriazol-N,N,Ν'N'-tetrametilurônio hexafluorfosfáto (HBTO), benzotriazol-1-il-oxi-tris-{dimetilamino)-fosfônio hexafluorfosfato (BOP), benzotriazol-1-il-oxi.-tris pirrolidino-fosfônio hexafluorfosfato, bromotrispirrolidino-fosfonio hexafluorfosfato, 2 - (5 -nórbótneno·-
2.3- dicarboximido)-1,1,3,3-tetrametilurdnio tetrafluorborato {TNTÜ), 0-(N-succinimidil)-1,1,3,325 totrametilurônio tetrafluorborato (TSTU), tetramet11tluoroformamidinium hexafluorfosfato, esemelhantes, para fornecex compostos de Fórmula (Xj-(V).
Em outra modalidade, os compostos de Fórmulas (X)-(V) são preparados de acordo com o procedimento apresentado no 3 0 Esquema B.
135/356
Esquema B. Exemplo não limítante da síntese de compostos de
Fórmulas (X)-(V)
Cetonas de estrutura A-l, cianoacetatos de estrutura
A-2, enxofre elementar,, morfolino e etanol são misturados juntos e agitados em temperatura ambiente para formar 10 tiofenos de estrutura A-4. Tiofenos de estrutura A-4 são então reagidos com ácidos carboxílicos ativados, por exemplo, cloretos ácidos, para formar arnidas de estrutura A-5« A hidrólise da funcionalidade éster de amida® de estrutura A-5 fornece os Ácidos carboxílicos s cor respondent e s.
Os esquemas aqui apresentados são meramente ilustrativos de alguns métodos pelos quais os compostos aqui descritos podem ser sintetizados, e várias modificações a esses esquemas podem ser feita®.
Por toda a especificação, grupos e substituintes destes podem ser escolhidos para fornecer porções e compos tos e stáve i s.
üm aspecto consiste em um método de produção de um composto de Formula (I) que compreende:
2S aj reação dè um derivado de trifluqrmetilsulfonilóxi tiofeno protegido por éster com um derivado de ácido berõniCó na presença de um catalisador;
b) remoção do grupo protegido por éster para resultar no composto de Fórmula (X) . Em uma modalidade, o derivado 3Q de tiofeno protegido por éster é um grupo t-butil éster. Em
136/356 outra modalidade, o derivado de: ácido boronico ê ácido t ri flubxmetcxifenil borônico, Em outra modalidade, o catalisador é w. catalisador de paládio. Ainda em outra modalidade, o catalisador da paládio é 5 tetrãkis(trifenilfosfina)paládio .(<» . Ainda em outra.
modalidade, a reação é realizada em uma mistura bifásica.
Ainda em uma modalidade adicional, a reação e realizada em uma temperatura elevada. Em outra modalidade, a temperatura está entre cerca de 50 até cerca de 80°C> Ainda em outra 10 modalidade, a temperatura é de cerca de 70 ®C. Ainda outra modalidade, após á reação do derivado· de ácido boronico com o derivado de tiofeno protegido por éster, o pz-oduto resultante e purificado por oromatografia. Ainda em outra modalidade, um ácido é usado para remover o grupo de
1.5 proteção de éster. Ainda ém outra modalidade, o ãçzdo é ácido tri fluoracético.
Üerta terminologia
A menos que definido de forma diferente, todos cs termos técnicos e científicós aqui usados possuem o mesma 20 significado comumente compreendido ao qual a matéria reivindicada pertence. Case haja várias definições paia os termos aqui apresentados, prevalecem aquelas dessa seção. Todas as patentes, pedidos de patente, publicações e sequências de nucleotídeos e aminoácidos publiçadas (por 25 exemplo, sequências disponíveis em GenBank ou em. outras bases de dados) aqui citados são incorporados por referência. Quando é feita referência a uma ÜRE ou a outro identificador ou endereço desse tipo, entende-se que esses identificadores podem mudar e informações específicas na 30 Internet podem mudar, mas informações equivalentes podem
137/356 ser encontradas por pesquisa na. Internet. Referências a essas evidenciam a disponibilidade e disseminação pública dessas ínfarmações <
©evè-se entendei* que a descrição geral mostrada aòterioimente e a descrição detalhada a seguir são apenae exemplares e explanatõrias, e não são restritivas de qualquer matéria reivindicada. Neste pedido, o uso do singular inclui d plural, a menos que especificamente estabelecida de forma diferente. Deve-se observar que, como usadas na especificação é nas reivindicações em anexo, as formas nc singular um, uma, b e «a* incluem referentes no plural, a menos que o contexto determine claramente de forma diferente. Neste pedido, o uso de 'çuíf significa e/ou, a menos que estabelecido de forma 15 diferente. Além disso, o uso do termo wque inclui, bem como de outras formas, por exemplo,, 'incluem, inclui e incluído, não é limitante.
Qs cabeçalhos das seções aqui usadas têm finalidade apenas organ! racional., e nãa devem ser consideradas coma 20 limitantes da matéria descrita em questão.
A definição de termos químicos-padrão pode ser encontrada em trabalhos de referência, incluindo, sem limitação, Carey e Sandberg ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY 41 ED. Vols. A ('20:00'}· é B (2001), Plenum Press, Nova York. A 25 menos qua indicado de forma diferente, são usados métodos convencionais de espectroscopia de massa, RMN., HPEC, química de proteínas, bioquímica, técnicas de DNA recombinante e farmacologia >
A menos que sejam apresentadas definições específicas, 30 a nomenclatura empregada em relação aos procedimentos e
138/356 técnicas laboratoriais de química analítica, química orgânica sintética e química medicinal e farmacêutica aqui descritos é aquela reconhecida no campo. Técnicas-padrão pòdem ser usadas para sínteses químicas, análises químicas, 5 preparação, formulação e liberação farmacêutica, e tratamento de pacientes. Técnicas-padrão podem ser usadas para DNA reçombinante, síntese de olígonucleotídeo e cultura e transformação de tecido (por exemplo, eletropcraçãõ, lipofecçãO)♦ As. reações e técnicas de 10 purificação podem ser realizadas, por exemple, «om P uso de kits de especificações do fabricante ou como comumente obtido na técnica ou como aqui descrito. As técnicas e cs procedimentos apresentados anteriormente podem ser geralmente realizados por métodos convencionais e como 15 descrito em várias referências gerais e mais específicas que são citadas e discutidas ao longo da presente especi ficação <
Deve-se entender que os métodos e composições aqui descritos não estão limitados à metodologia, protocolos, linhagens de células, construções e reagentes particulares aqui descritos e, dessa forma, podem variar. Deve-se entender também que a terminologia aqui usada tem a uníca finalidade de descrever modalidades particulares, e não visa limitar o escopo dos métodos, compostos, composições aqui descritas.
Como aqui usado, Ci-Cx inclui Ci-Cs, Ci-Cs ... Cx-Cx- CiCx refere-se ao número de átomos de carbono que .constituem a porção à qual ela designa (excluindo substítuintes opcionais).
Um grupo alquíl” refere-se a um grupo hidrocarboneto
139/356 al ifético. Os grupos alquil podem ou não incluir unidades de insaturação, A porção alquxl pode ser um grupo *alquil saturado, o que significa que ele não contêm nenhuma unidade de ínsaturação (ou seja, uma ligação dupla carbono5 carbono ou uma l igação tripla carbono-carbono):. 0 grupo alquil também pode ser uma porção de alquil insaturado*, o que significa que ele contêm pelo menos uma unidade de insaturaçio. A porção alquil, saturado ou insaturado, pode ser ramificada,, de cadeia linear ou cíclica.
o grupo *alquil* pode ter 1 a 6 átomos de carbono (sempre que aparecer aqui, uma faixa numérica corno, por exemplo, 1 a 6 refere-se a cada numero inteiro na faixa citada; por exempslo,, *1 a € átomos de carbono* significa que o grupo alquil pode consistir em 1 átomo de carbono, 2 15 átomos de carbono, 3 átomos de carbono etc», até e incluindo s átomos de carbono, embora a presente definição também englobe a ocorrência do termo “alquil* £1» que nenhuma faixa numérica é designada), O grupo alquil dos compostos aqui descritos poda ser designado como WCX-CS alquil ou designações similares. Apenas como exemplo, “Οχ4Cl alquil* indica, que há de um a seis átomos de carbono na cadeia alquil, ou seja, a cadeia alquil ê selecionada do grupo que consiste em metil, etil, n-propil, isopropil, n~ butil, i-sobutil, see-but.il, t-butil, n-pentil, Isopentil, neopentil, héxil, propen~3 il (alil) , ciclopropilmetx.x, ciclobutilmetil, ciulopentilmetil, ciclohexilmetil. Os grupos alquil também podem ser substituídos ou não substituídos. Dependendo da estrutura, um grupo alquil pode ser um 'monorradical -ou um dirradical (ou seja, um grupo alquileno)
1.4 0./355
Ura. BalcÓxi refere-se a w grupo -eO~a.lqp.il , em que alquil é como aqui definido.
O termo ^alquenil refere-se a um tipo de grupo alquil no qual os primeiros dois átomos do grupo .alqu.il formam uma 5 ligação dupla que não é parte de um grupo aromático, Ou seja, um grupo alquenil começa com os átomos -C(R)=CR2> em que R refere-se às porções restantes do grupo alquenil, que podem ser iguais ou diferentes. Exemplos não limitantes de ura grupo alquenil incluem -CH-CHz, -C (CU5)-CH-CHCUj, 10 CH“C(CH3)s e -C (CH3)«CHCH3 - A porção alquenil pode ser ramificada, de cadeia linear ou cíclica {quando então, ele também seria conhecido como grupo ’’'cicloalguenil) .· Grupos alquenil podem ter 2 a 6 carbonos. Grupos alquenil podem ser substituídos ou não substituídos. Dependendo da 15 est.t*utura, ura grupo alquenil pode ser um monorradical ou um dirradical (ou seja, um grupo alquenileno).
Ó termo «alquinil refere-se a um tipo de grupo alquil no qual os primeiros dois ãtomos do grupo alquil formam urna ligação tripla. Qu seja, um grupo alquinil começa com os 20 átomos -ChC-R, em que R refere-sé às porções restantes do grupo alquinil. Exemplos não limit antes de um grupo alquinil incluem -OOHa, -CACHCHy, ~C^CCHaCH3 e OCCH2CH3CH.j ... A porção R da porção alquinil pode ser ramificada, de .cadeia, linear ou cíclica. Um grupo alquinil 25 pode, ter 2 a. 6 carbonos. Grupos alquinil podem ser substituídos ou não substituídos. Dependendo da estrutura, um grupo alquinil pode ser um motiorradiqal ou ura dirradical (ou seja, um grupo alquinileno).
wAmine refere-se a um grupo -Wj.·
O termo «alguilamina? ou «alquilamino* refere-se ao
141/356 grupo “N(alquil)-xHy, em que alquil é como aqui definido e x e y são selecionados do grupo x « 1, y ~ 1. e x « 2 , y - 0. Quando x - 2, os grupos alquil, tomados em conjunto com o ♦ nitrogênio ao qual estão anexados, podem opcionalmente 5 formar um sistema em anel cíclico. Dialquilamino* refei^ese a um grupo ~N (alquil) 2, em que alquil é como aqui definido.
Õ termo ''aromático* refere-sé a um anel plano que üossui um sistema, des localizado de Π-elétrons contendo 4n e 10 2 H elétrons, em que n é um número inteiro. Anéis aromáticos podem ser formados por três, seis, sete, oito, nove ou mais do que nove Aromáticos podem ser opcionalmente substituídos. Ò termo aromático inclui tanto grupos aril (por exemplo, fenil, naftálenil) quanto 15 grupos heteroaril (por exemplo, pirid.inil, quinolin.il) .
Como aqui usado, o temo aril* refere-se a um anel aromático em gue cada um dos átomos que formam o anel é um átomo de carbono. Anéis aril podem ser formados por cinco, seis, sete, oito, nove ou mais do que nove átomos de 20 carbono. Grupos aril podem -ser opc lona.Imente substituídos.
Exemplos de grupos aril incluam, sem limitação, fenil e * naftalenil. Dependendo da estrutura, um grupo aril pode ser v um monorradical. ou um dirradical (ou seja, um. grupo arileno).
Carbóxi refere-se a -CQgH. Em algumas modalidades, porções carbõxi podem ser substituídas com w biois&stero de ácido earboxílico*, que se refere a um grupo ou porção funcional que exibe propriedades físicas e/ou químicas similares a uma porção de ácido carboxílíco. Um bioisõstero 3.0 de ácido carbox ílico possui propriedades biológicas a
142/356 similares àquelas de um grupo ácido carboxilico. üm composto com uma porção de ácido carboxilico pode ter a porção de ácido carboxilico trocada por um bioisÕsterc de ácido carboxilico e ter propriedades físicas e/ou 5 biológicas similares, quando comparado com o composto que contém ácido aarboxílíco. Por exempla, em uma modalidade, um bíoisõstero de ácido carboxilico ionizaria em pH fisiológico aproximadamente no mesmo grau que. um grupo ácido carboxilico. Exemplos de bioisósteros de um ácido 10 carboxilico incluem, sem limitação.
e semelhantes»
O termo ^cicloálquil* refere-se a um radical não 1§ aromático monçcíclico ou policie lí co, em que cada um dos átomos que formam o. anel (ou seja, átomos do esqueleto) é um átomo de carbono. Cícloalquis podem ser saturados, ou parcialmente insaturados. Cicloalquis podem ser fundidos com um anel aromático (quando então o cicloalquil é ligado 20 através de um átomo de carbono de anel não aromátiao) .
Grupos cicloalquil incluem grupos que possuem de 3 a 10 átomos no anel. Exemplos ilustrativos de grupos ciclaalquil incluem, sem limitação, as seguintes porções:
e semelhantes,
Os termos «heteroari1 ou, alternat ivamente, Rhe teroaromáticof/, referem-se a um grupo aril que inclui um
143/35:6 ou mais heteroátpmos no anel selecionados de nitrogênio, oxigênio e enxofre. Uma porção de Uieteroaromãtico ou ”heteroaril#' contendo N refere-se a um grupo aromático no qual pelo menos um dos átomos do esqueleto do anel é um S átomo de nitrogênio. Grupos beteroaril policieiicos podem ser fundidos ou não fundidos. Exemplos ilustrativos de. grupos heteroaril incluem as seguintes porções;
e semeIhantes.
Um grupo «heterodiclóalquil* ou um grupo heteroalicfclico refere-se a um grupo cicloalquil, em que pelo menos um átomo do esqueleto do anel é um heteroãtômo 20 selecionado de nitrogênio, oxigênio a enxofre. Os radicais podem estar fundidos com um aril ou heteroaril. Exemplos
- ilustrativos de grupos heterocicloalquil, também denominados heterocíclos não aromáticos, incluem:
e semelhantes.
O termo heteroalicíclico também inçlui todas
144/35 6 as formas de anel dos cax'boidratoe, incluindo, sem limitação, os monoss.acarxdeos, os dissaçarídeos e os olIgossacarfdecs. A menos que observado de forma diferente, , heterocioloalquis possuem de 2 a 10 carbunos no anel, 5 Entende-se que, quando se refere ao número de átomos de ^axhcno em urn heterocicloalguil, o número de átomos de carbono no heterocicloalquil não é igual ao número total de átomos (í-cluxado o heteroátomos) que constituem o heterocicloalquil (ou seja, átomos do esqueleto do anel 10 heterocicloalquil)O termo wháio ou, alternativamente, halogênio, significa flúor, cloro, bromo e iodo,
Ó termo '’haloalquil refere-se a um grupo alquil que é substituído com um ou mais halogênios. Qs halogênios podem 15 ser iguais ou podem ser diferentes. Exemplos não limitaut.es de haloalquis incluem -CHgCl, -CF.5, -CHF2, -C8aCF3, -CF3CF3, -CF(CBá) 3 > O semelhantes.
Os termos fluqralquil* e svfluoralcoxi incluem gupos alquil e alcóxi, respectivamente, que são substituídos çom 20 um ou mais átomos de flúor. Exemplos não limit antes de fluoralquis incluem “CF3, -CHF2í -CHsF, ~CK?CF3, -CF-CEu, CF2CF?CF3, “CF(CHa)3, e semelhantes. Exemplos não limitantas de grupos fluoralcoxi incluem -OCF3, ~OCHFa, ~OCH3F, OCHsCFj, -0CF2CF3, -0CF;CFamw -OCFCÇBjU, e semelhantes.
0 termo heteroalquil refere-se a um radical alquil em que um ou mais átomos do esqueleto da cadeia são selecionados de um átomo diferente de carbono, pór exemplo, oxigênio, nitrogêníò, enxofre, fósforo, silício, ou combinações destes. Os heteroatomos podem ser substituídos em qualquer posição interior do grupo heteroalquil.
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Exemplos incluem, SW limitação, -CHa-O-CHs, -CHs~CH2-0-CH3, -CH2-W’CHS, -ÇH2-CHs-NH-CH3;, -CW, -GH^CW-NHCHS , -CH^CH2-K(CH.j) -CHs, -ÇHa-S-CHr-CHj, -CHs~CH2,-S {O)-CHa, -CH2- C% - S (O) s-CHS:f “CHà-W»och3·, ~Oi2-Ô-M (W> 3 * «CS?-ΦΜ*
QCH3 e - CH=GH-N( ÇH;S ) ~ CH3 . Além disso, até dois he ter oá tomos podem ser consecutivos, por exemplo, -CH^-NH-OGH^ e ~CHa~O~ Sí(CHj)3. Excluindo o- número de heterod tomos, um héteroálquil pode ter de 1 a 6 átomos de carbono.
Ό termo ligação ou ligação simples refere-se a uma XO ligação química entre dois átomos, ou duas porções, quando os átomos unidos pela ligação são considerados corou sendo parte de uma suhèstrutura maior.
O termo porção refere-se á um segmento ou grupo funcional específico de uma molécula, Porções químicas são frequentemente entidades químicas reconhecidas embebidas ou anexadas a uma molécula.
Como aqui usado, o substitüinte ,VR que aparece isoladamente e. sem um número dé desiguação refere-se a um substituinte selecionado entre alquil, haloalquil, 20 heteroalquil > alquenil, ©icloalquil, aril, heteroáril (ligado por meio de um carbono do anel) e heterocicloalquil.
termo opcionalmente substituído ou substituído significa que o grupo citado pode ser substituído com um ou 25 mais grupos adicionais selecianados individual e independentemente de alquil, cicloalquil, aril, heteroáril, heterocicloalquil, -OH» alcóxi, aríloxi, alquiltío, ariltio, alquilsulfõxido, arilsulÊôxido, alquilsulfona, arilsulfona, -CN, alquino, Ci-C$ aiquilalqui.no, halo, acil, 30 aciloxí, -C0§H, -COs»alquil, nitro, haloalguil, fluoralquil e amino, incluindo grupos amino mono- e dissubstituidGS (por exemplo, -1¾, -NHR, ~Ν(Β)2), e os derivados protegidos destes. Apenas como exemplo, substituintes opcionais podem ser ιΛι\ em que cada I? ê selecionado § xndependentemente de uma ligação, -0-, -C{-0)-, -S-f
S(^Q)-, -S(~oh-, - NH-, -WC(O)-, SMOstWn, “
0C(Q)NH-. -WC(0)0~, ~ (Ci-C§ alquil) - OU - (Ç2-Cs alqueuil) - ; è cada Rs é selecionado independentemente entre H, (Q-Cg· alquil) , (c3-cs GÍcloalquil), aril, heteroaril, 10 hetêrocicloalquil e cx-c6 heteroalquil. Os grupos de proteção que podem formar derivados protegidos dos substituintes acima sãò encontrados em fontes como, por exemplo, Greene e Wts, acima.
Os métodos e formulações aqui descritas incluem o uso 15 de formas cristalinas (também conhecidás como polimorfos), ou sais; f armaceutteamente aceitáveis de compostos que possuem a estrutura das Formulas (I)-(V), além de metabõlitos ativos desses compostos que possuem o mesmo tipo de atividade. Em algumas situações, os compostos podem 20 existir^ coma tautõmeras. Todas as tautômeras são incluídos dentro do escopo dos compostos aqui apresentados. Além
- disso, os compostos aqui descritos podem existir em foixmas nãa solvatadas, bem como em formas solvatadas com solventes farmaceuticamente aceitáveis como, por exemplo, água, 25 etanol, e semelhantes. As formas solvatadas dos compostos aqui apresentados também são consideradas como aqui reveladas.
os termas kit e artigo -manufaturada* são usados como sinônimos,
3G O termo indivíduo ou paciente engloba mamíferas e
147/355 não mamíferos. Exemplos de mamíferos incluem.. sem limitação, qualquer membro dá ciasse Mamífero: humanos, primatãs não humanas como, por exemplo, chimpanzés e outros símios e espécies de macacos; animais d-e criação como, por 5 exemplo, gado, cavalos, carneiro, cabras, suínos; animais domésticos como, por exemplo, coelhos, cães e gates; animais de laboratório, incluindo roedores, por exemplo, ratos, camundongos e porquinhos-da-índia, e semelhantes. Exemplos de não mamíferos incluem, sem limitação, pássaros, 10 peixes e Semelhantes. Em uma modalidade dos métodos e composições aqui fornecidos, o mamífeiO é um ser humano.
Os termos tratar, que tratam ou tratamento, como aqui usados, incluem alívio, redução ou melhora de sintomas de uma doença ou condição, prevenção dfe sintomas 15 adicionais, melhora ou prevenção das causas subjacentes de sintomas, inibição da doença ou condição, por exemplo, interrupção do desenvolvimento da doença ou condição, alívio da doença w condição, causar a regressão da doença ou condição, alívio de uma condição causada pela doença ou 20 condição, ou interrupção dos sintomas da doença ou condição, profilatioamente e/çu terapeutioamente.
como aqui usado, o termo ^proteína-alvo refere-se a uma proteína ou uma porção de uma proteína capaz de ser ligada por, ou interagir com um composto aqui descrito, por exemplo, um composto de Formulas (I)-(V). Em certas modalidades, uma proteíná-alvo é uma proteína STIM. Em certas modalidades, uma proteína-alvo é uma proteína Orai.
Com© aqui usado, o termo proteína STIM inclui, sem limitação, STIM-1 de mamífero, por exemplo, STXM-1 humana e 30 de roedor (por exemplo, camundongo) . D-STIM de Drosophila.
148/356 melanogastsz:, Q-STXM de Cl slogans, STIM de Anophelea gambiae e STIM-2 de mamífero, por exemplo, STIM-2 humana e de roedor {por exemplo, camundongo) (veja os parágrafos [02113 a [Q27G] de ÜS 2007/Θ031814, além da Tabela 3 de US 5 2007/0031814, aqui incorporados por referência)- Como aqui descrito, essas proteínas foram identificadas cqmo envolvidas, participantes e/ou permitindo a entrada capacitiva de cálcio ou modulação deste, tampcnamento do cálcio citoplasmático e/ou modulação de níveis de cálcio 10 nos estoques de cálcio intracelular ou no movimento de cálcio no, dentro ou para fora dos estoques de cálcio intracelular (por exemplo, reticula endoplasmático).
Como aqui usado, o termo '’proteína Orai· incluí Orai-1 (ID, DE SE0. ; 1, como descrito em WO O7/O81804) , Orai-2 (ID, pE SEQ. 8’ ; 2 como aescnro em WO 07/081804) ou Orai-3 (XD. DÉ 'SEQ. '$*: 3 como descrito em WO 07/081804) , Ã sequência de ácidos nuclêicos de Orai-1 corresponde ao .Número de acesso w GenBank UM^32790, a sequência de ácidos nuclêicos Orai-2 corresponde ao Número de acesso no GenBank BC089270, e a seqüência de ácidos nuclêicos Orai-3 corresponde ao Número de ácesso no OenBahk NM_1S2288» Como aqui usada# o termo Oraí’f refere-se a qualquer um dós genes de Orai, por exemplo, Orai-i, Orai-2, Orai-3 (veja a Tabela I de WÓ 07/081804) , Como aqui descrita, essaç proteínas foram identificadas como estando envolvidas, participantes e/ou permitindo a entrada capacitiva de cálcio ©u modulação deste, tamponamento do cálcio citoplasmático e/ou modulação de níveis de cálcio nos estoques de cálcio intracelular ou no movimento de cálcio
3Ô no, dentro ou para fora dos estoques de cálcio intracelular
149/3 Sfi (por exemplo, retículo endoplasmátíço).
termo fragmento” pu ’'derived©”, quando se refere a uma proteína (por exemplo, STIM, Orai·) significa proteínas ou pôlípeptídéOxS que retêm basicamente a mesma função ou 5 atividade biológica em pelo menos um ensaie que a(sj proteína(s) nativa(s). Por exemplo, os fragmentos ou derivados da proteína citada mantêm pelo menos cerca de 50% da atividade das proteínas nativas, pelo menos 75%, pelo ménos cerca de 95% da atividade das proteínas nativas, como determinado., por exemplo, por um ensaio de influxo de Cálcio.
Como aqui usado, o tertóo melhora” dos sintomas de uma doença, distúrbio ou condição em particular por administração de um composto ou composição farmacêutica em 15 particular refere-se a qualquer redução da gravidade, retardo do surgimento, rèdução da progressão ou encurtamento da duração, permanente ou temporário, duradouro ou transitório, qué possa ser atribuído eu associado ã administração do composto ou composição.
2Q o termo modular”, como aqui usado, significa interagír com uma pzoteína-alvo, direta ou índiretamènte,
- de modo a alterar a atividade da proteína-alvo, incluindo, apenas como exemplo, inibir a atividade do alvo, ou limitar ou reduzir a atividade do alvo.
Com© aqui usado, o termo modulador refere-se a um composto que altera uma atividade de um alvo. Por exemplo, um modulador pode causar um aumento ou diminuição na magnitude de certa atividade de um alvo, comparada com a magnitude da atividade na ausência do modulador. Em certas modalidades, um moduladoi* ê um inibidor, que diminui a
150/356 magnitude de uma ou mais atividades de um alvo. Em certas modalidades, um inibidor evita completamente uma ou mais atividades de um alvo.
Cesso. aqui usado, o termo modulação, com referência ao cálcio intracelular, refere-se a qualquer alteração ou ajuste no cálcio intracelular, incluindo, sem limitação, alteração da concentração de cálcio, no citoplasmã e/ou organelas de armazenamento de cálcio intracelular, por exemplo, retículo endoplasmático, e alteração da cinética 10 dos fluxos de cálcio para dentro e para fora das células.
Em um aspecto, a modulação refere-se a uma redução.
Como aqui usado, o termo atividade-alvo refere-se a uma atividade biológica capaz de ser modulada põr um modulador. Algumas atividades-alvo exemplares incluem, sem 15 limitação, afinidade de ligação, transdução de sinal, atividade enzimática, crescimento tumoral, inflamação ou processos relacionados a inflamação, e melhora de um ou mais sintomas associados a uma doença ou condição.
Os termos inibe, que inibe ou inibidor da atividade do. canal SOC ou da atividade do canal CRAC, como aqui usados, referem-se à inibição da atividade do canal de cálcio -capacitivo. ou da atividade do canal de cálcio ativada pela liberação de cálcio.
termo aceitável com relação a uma formulação;, composição ou ingrediente, çomo aqui usado, significa que não possui nenhum efeito prejudicial persistente sobre a saúde geral do indivíduo que está sendo tratado.
termo fairniaceuticamenta aceitável, como aqui usado, refere-se a um material, por exemplo, um veiculo ou 30 diluente, que não anula a atividade biológica ou as
151 /3 propriedades do composto, e ê relativamente atóxico, ou seja, o material pode ser administrado a um indivíduo, sem causar efeitos biológicos indesejáveis ou interagir de forma. prejudicial com qualquer um dos componentes da
S composição na qual está contido.
O termo combinação farmacêutica, como aqui usado, significa um produto que resulta da mistura ou combinação de mais de um ingrediente ativo, e inclui combinações tanto fixas quanto não fixas dos ingredientes ativos. O termo 10 combinação fixa* significa que um ingrediente ativo, por exemplo, um composto de Fórmulas (I) - (V) , e um co-agente, são, ambos, administrados a um paciente simultaneamente na forma de uma única entidade ou dosagem. G termo combinação na© fixa significa que um ingrediente ativo, por exemplo, 15 um composto de Formulas (I)-(V), e um co-agente, são administrados a um paciente como entidades separadas, simultaneamente, concomitantemente ou seqúencíalmente sem limites de tempo intervenientes específicos, em que essa administração fornece níveis eficazes dos dois compostos no 20 corpo do paciente. Esse último também se aplica â terapia de coquetel, por exemplo, a administração de três ou mais
- ingredientes ativos.
Q termo composição farmacêutica* refere-se a uma mistura de um composto de Fórmulas: (i)-fvj aqui descrito,
S com outros component ;es quimiçí 38, por exemplo, veículos.
estabí1i zantes, di lue ntes agen tes dispersantes, agentes de
suspensão, agentes esj sessant :e.s. e / ou excipient es, A
compos ição farmacêu ti ca façi lira a administração do
compost© a um organi amo. Exist em diversas, metodolocias de
0 adminí st raç ã© de um composto na técnica, incluindo, ε ;em
152/356 limitação: administração intravenosa, oral, em açrossol, parenteral, oftãlmica, pulmonar e tópica.
Os termos quantidade eficaz*' ou ’‘quantidade terapeuticamente eficaz®, coroo aqui usados, referem-se a 5 uma quantidade suficiente de um agente ou um composto que está sendo administrado que aliviará etn algum grau um ou mais dos sintomas da doença ou condição sendo tratada. O resultado por ser a redução .e/ou alívio dos sinais, sintomas ou causas- de uma doença, ou qualquer outra 10 alteração desejada de um sistema biológico. Por exemplo, uma quantidade eficaz® para usos terapêuticos é a quantidade da composição que inclui um composto de Fórmulas ¢1)-(V) aqui descrito necessária para fornecer uma diminuição clinicamente significativa dos sintomas da 15 doença. Üda quantidade «eficaz* apropriada em qualquer caso individual pode ser determinada com o uso. de técnicas, por exemplo, um estudo de escalonamento de doses.
Os termos aumentar® ou que aumenta®, como aqui usados, significam aumentar ou prolongar, tanto era termos 20 de potência quanto de duração, um efeito desejado. Dessa forma, em relação ao aumento do efeito de agendes terapêuticos, o termo que aumenta® refere-se ã habilidade para aumentar ou prolongar, tanto em termos de potência quanto de duração, o efeito de outros agentes terapêuticos 25 em um sistema. O termo quantidade eficaz para aumentar®, como aqui usado, refere-se ã uma quantidade adequada para aumentar o efeito de outro agente terapêutico em uro sistema desejado.
0-s. termos co-administração” ou semelhantes, como aqui usados, visam englobar a administração dos agentes
153/356 terapêuticos selecionados a um único paciente, e visam incluir regimes de tratamento nos quais os agentes são administrados pela mesma via de administração ou -por vias de administração diferentes, ou ao mesmo tempo ou em tempos 5 diferentes.
termo * veículo·'·', como, aqui usado, refere-se aos compostos químicos ou agentes relativamente atóxicos que facilitam a incorporação de um composto em células ou tecidos,
O termo diluente* refere-.se aos compostas químicos aue são usados para diluir o composta de interesse antes da liberação. Diluentes também podem ser usados para estabilizar compostos, pois podem fornecer um ambiente mais estável. Sais dissolvidos em soluções tamponades (que também podem fornecer controle ou manutenção de pH) são utilizados como diluentes na técnica, incluindo, sem limitação, uma solução salina támponada com solução de fosfato.
üm metabôlito de um composto aqui revelado é um derivado daquele composta que ê formado quando o composto é metabolizado. Q termo «metabólito ativo'’ refere-se a um derivado biologicamente ativo de um composto que é formado quando o composto ê metabolisado, 0 termo metabolirado, como aqui usado, refere-se á soma dos processos incluindo, sem limitação, reações de hiàrõlise e reações catalisadas por enzimas) pelos quais uma substância em particular é alterada por Um organismo. Dessa forma, enzimas podem produzir alterações estruturais específicas a um composto. Por exemplo, citocromo P45Ó catalisa diversas reações oxidativas e redutivas, enquanto uridina dífosfato
154/356 glicurcniltransferases catalisam a transferência de uma molécula ativada de ácido glisurônico em alçoôis aromáticos,, alcoois alifáticos, ácidos caxboxílicos, amínas e grupas sulfidrila livres, informações adicionais sobre 5 metabolismo podem sér obtidas em The Pharmacological Basis of Therapeutics'*, 9 a Edição, McGraw-Hill (1996 ) Os métahõlitos dos compostos aqui revelados podem ser identificados por administração de compostos a um hospedeiro e análise de amostras de tecido do hospedeiro, XÔ ou por incubação de compostos com células hepâticas in vXfcro e análise dos compostos resultantes.
termo ’“'biadi^ponibi.lidadê* refere-se a percentagem do peso do composto aqui revelado (por exemplo, composto de Fórmulas (I)-(V)) que é liberada na circulação geral do 15 animal ou ser humano que está sendo estudado. A exposição total (ΑΠΟ(Ο™®)) de um fârmaco quando administrado intravenosamente ê normalmenté definida como ,100% Madisponível (F%). O termo «biodisponibilidade oral refere-se â extensão na qual um composto aqui revelado é 20 absorvido na circulação geral, quando a composição farmacêutica é ingerida oralmente comparada com injeção íntravenosa.
termo ''concentração plasmática'* refere-se a concentração de um composto de Fórmulas (l)-(V) aqui 25 revelado, no componente de plasma do sangue de um indivíduo« Entende-se que a concentração plasmãtica de compostos aqui descritos pode variar significativamente entre indivíduos, em função da variabilidade com relação ao metabolismo e/ou possíveis interações com outros agentes 30 terapêuticos, Pe acordo com uma modal idade aqui revelada, a
155/355 concentração plasmãtíca dos compostos aqui revelados pode variar de indivíduo para indivíduo. Da mesma forma, valores como, por exemplo, concentração plasmática máxima (CEi·^) ou tempo até alcançar a concentração plasmática máxima (TMJ , S ou área total sob a curva de tempo da concentração plasmática (AUC(O-so)) < podem variar de indivíduo para indivíduo. Em função dessa variabilidade, a quantidade necessária para constituir quantidade terapeuticamente eficazw de m composto pode variar de indivíduo para 10 indivíduo.
Çomo aqui usado, o termo ’'homeostasia de cálcio réfere-sé à manutenção de um equilíbrio global nos níveis e movimentos do cálcio intracelular, incluindo sinalização de cálcio, dentro de uma célula.
Como aqui usado, o termo «cálcio intrabelular' referese ao cálcio localizado em uma célula sem especificação de uma localização celular em particular. Em contraste, MitOSélico ou «çitoplasmátiço, com referência ao cálçio, refere-se ao cálcio localizado no citoplasma da célula,
Como aqui usado, «um efeito sobre o cálcio intracelular é qualquer alteração de qualquer aspecto do
- cálcio intracelular, incluindo, sem limitação, uma alteração nos níveis do cálcio intracelular e localização e movimento de cálcio para dentro, para fora ou em uma célula 25 ou estoque ou organela de cálcio intracelular. Por exemplo, um efeito sobre o cálcio intracelular pode sex uma alteração das propriedades como, por exemplo, da cinética, sensibilidades, taxa, amplitude e características elètrcfisiolôgicas, do fluxo ou movimento de cálçio que 3Q ocorre β® uma célula ou porção desta, Um efeito sbbre ό
15S/356 cálcio intracelular pode ser uma a.lt.epaç.ão em qualquer processo de modulação do cálcio intracelular, incluindo entrada capacitiva de cálcio, tamponamento do cálcio citosôlico e níveis de cálcio ou movimento de cálcio para 5 dentro ou para fora em um estoque de cálcio intracelular.
Qualquer um desses aspectos pode ser avaliado de diversas, formas, incluindo, sem limitação, avaliação dos níveis de cálcio ou de outro íon (particularmente um cátionj, movimento de cálcio ou de outro íon (particularmente de um 10 cation), flutuações nos níveis de cálcio ou de outro ion (particularmente um cátión), cinêtica dos fluxos de cálcio ou de outro íon (particularmente um cátion) e/ou transporte de cálcio ou de outro íon (particularmente um cátion) através de uma membrana. Orna alteração pode ser qualquer 15 alteração- que seja estatisticamente significante. Dessa forma, por exemplo, se cálcio intracelular em uma célula dé teste e em uma célula de controle difere, essa diferença pode ser uma diferença estatisticamente significante<
Como aqui usado, o termo envolvido e®* com relação ao 20 relacionamento entre uma proteína e um aspecto do -cálcio intracelular ou da regulação do cálcio intracelular significa que, quando a expressão ou atividade da proteína em uma célula é reduzida, alterada ou eliminada, há uma redução, alteração ou eliminação concomitante ou associada 25 de um ou mais aspectos do cálcio intracelular ou da regulação do cálcio intracelular. Essa alteração ou redução na expressão ou atividade pode ocorrer em virtude de uma alteração da. expressão de .um gene que codifica a proteína ou por alteração dos níveis d-a proteína. Uma proteína 3Q envolvida em um aspecto do cálcio intracelular como, por
157/356 exemplo, entrada capacitive de cálcio, dessa forma, pode ser aquela que permite ou participa em um aspecto do cálcio irtiace.ular ou da regulação do cálcio intracelular. Por exemplo, uma proteína que permite a entrada capacitiva de 5 cálcio pode ser uma proteína- 8TIM e/ou uma proteína Orai.
Como aqui usado, uma proteína que é um componente de um canal de cálcio ê uma proteína que participa em um complexo multiproteínas que forma o canal.
Como aqui usado, o termo basal ou «de repouso, com referência aos níveis de cálcio citosõlico, refere-se à concentração de cálcio no cítoplasma de uma célula como, por exemplo, uma c^büa não estimulada, que não foi submetida a uma condição que resulta em movimento de cálcio para dentro ou para fora da célula ou na célula. O nível 15 basal ou de repouso do cálcio citosolicc· pode ser a concentração de cálcio livre (ou seja, cálcio que não está ligado a. uma substância de ligação de cálcio celular) no citóplasma de uma célula como, por exemplo, uma célula não estimulada, que não foi submetida a uma condição que 2C resulta em movimento de cálcio para dentro ou para fora da célula >
Como aqui usada, o termo «movimento, com relação a ions, incluindo cátions, por exemplo, cálcio, refere-se ao movimento ou relocação como, por exemplo, fluxo, de ions 25 para dentro, parã fora ou em uma célula. Dessa forma, o movimento de íons pode ser, por exemplo, movimento de íons do meio extracelular em uma. célula, de dentro de uma célula para o meia extracelular, de dentro de uma crganela intracelular ou local de armazenamento para o citosol, do 30 citosol para dentro de uma organa la intracelular ou local
158/356 de armazenamento, de uma organela intracelular ou local de arms:.:enamer.to para outra organela intracelular qu outro local de armazenamento, do meio extracelular para dentr© de uma organela intracelular ou local de armazenamento, de uma 5 organela intracelular ou local de armazenamento para o me io extracelular, e de uma localização para outra dentro do citoplasma da célula.
Como aqui usado, o termo entrada de cation ou entrada de cálcio em uma célula refere-se à entrada de 10 cátions, por exemplo, cálcio, para urna, localização intracelular, por exemplo, para o citoplasma de uma célula ou no lümen de uma organela intracelular ou de um local de armazenamento. Dessa forma, a entrada de cátion pode ser, por exemplo, o movimento de cátions no cicoplasma da célula 15 do meio extracelular ou de uma organela intracelular ou local de armazenamento, ou o movimento de cãtions em uma organela intracelular ou local de armazenamento do citoplasma. ou meio extracelular. 0 movimento de cálcio para dentro do citoplasma a partir de uma organela intracelular 20 ou de um local de armazenamento também é denominado liberação de cálcio da organela ou local de armazenamento.
Como aqui usado, o termo proteína que modula cálcio intracelular refe.re-.se a qualquer proteína celular q«.e 25 está envolvida na regulação, controle e/ou alteração do cálcio intracelular. Por- exemplo, uma proteína desse, tipo pôde estar envolvida na alteração ou ajuste do cálcio intracelular de diversas formas, incluindo, sem limitação, por meio da manutenção dos níveis oitoplasmáticcs de 30 repouso ou basais de cálcio, ou por melo do envolvimento em
159/356 uma resposta celular a w sinal gue é transmitido em uma célula por meio da um mecanismo que inclui o desvio do cálcio intracelular dos estados de repouso ou basais. No contexto de uma proteína que modula cálcio intracelular, 5 uma proteína· celular é aquela que está associada a uma.
célula como, por exemplo, uma proteína citoplasmática, uma proteína associada ã membrana plasmática ou uma proteína intramembrana celular. Proteínas que modulam o cálcio intracelular incluem·., sem limitação, proteínas de transporte de íon, proteínas- de ligação de cálcio e proteínas reguladoras que regulam· as proteínas de transporte de íon.
Como aqui usado, o termo melhora refere-se a uma melhora ém uma doença ou condição- ou pelo menos um alívio 15 parcial, de sintomas associados a uma doença ou condição.
Como aqui usado, o termo resposta, celular refere-se a qualquer resposta celular que resulte de movimento de íon para dentro ou para fora de uma célula ou em ura célula, A resposta celular pode estai* associada a qualquer atividade 20 celular que s-eja dependente-, pelo menos em parte, de Ions' como, por exemplo, cálcio. Essas atividades podem incluir, . por .exemplo, ativação celular, expressão gênica,.
endocitose, exocitose, tráfego celular e. morte celular apoptática.
ComO aqui usado, o termo células imunes* inclui células do sistema imunoldgico e. células que realizam uma funçã© ou atividade em uma resposta imune como, por exemplo, .sem limitação, Células- T, Células B, línfdeitos, macrofagos, células dendríticas, neutrofilos, eosindfilos, 3Õ basõfilos, mastôcitçs, células plasmáticas, leucdçitqs,
18S/356 células de apresentação de antígeno e células natural killer.
Como aqui usado, o termo citocina refere-se às pequenas proteínas solúveis secretadas por células que podem alterar o comportamento, ou as propriedades da célula secretora ou de outra célula. As citocinas se ligam aos receptores de citoeina s desencadeiam um comportamento ou propriedade dentro da célula, por exemplo,, proliferação, morte óu diferenciação celular. citocinas exemplares incluem,· sem limitação, ínterleucinas (por exemplo, IL-2, IL-3, IL-4, XL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, XL-10, XL-11, XL.12, XL-13-, XL-IS, IL-16, IL-17, XL-18, XL-la, IL-10 e IL-1 PA) , fator de estimulação de colônias de granulôcitcs (GÇSF) , fator de estimulação de colônias de granulõcítos15 maerdfagos (gm-csf). , oncostatina. M, eritropoietina, fator inibidor de leucemia (LIF), interferons, >7.1 (também conhecido como 080). > B7.2 (também conhecido como B7õf W86), Membros da família W (TUF-u, iW-p, LT->, ligante de CD40, ligante de Fas, ligante de CD27, ligante de CB30,
4-1BBL.. Trail) e MIF.
termo. Entrada capacitiva de cálcio ou SOCBÍÍ
- refere-se ao mecanismo pelo qual a liberação cie ions cálcio de estoques intracelulares é coordenada com © influxo de ton através da membrana plasmâtica.
O termo inibidor seletivo da atividade do canal SOC significa que o inibidor' é seletivo para canais SOC e não afeta substaricialmente a atividade .de outros tipos de canais de ions, termo inibidor seletivo da atividade do canal CRAv
3Õ significa que o inibidor ê seletivo para canais CRAÇ e não
161/356 afeta -substaneialaiente a atividade de outros tipos d® canais de ions e/pu outras canais SOC,
Monitoramento ou avaliação dos efeitos sobre o cálcio intracelular
No monitoramento- ou avaliação do efeito, de um composto de Formulas (I)-(v) sobre o cálcio intracelular em qualquer um dos métodos de avaliação/identificação aqui descritos ou reconhecidos no campo, pode ser feita uma avaliação ou medida direta ou indireta de cálcio celular (incluindo 10 cálcio citosólico e cálcio de organ®las ou do compartimento intracelular) e/ou movimento de ions para dentro, para fora ou em uma célula, organela, estoque de cálcio ou porçõesdestes (por exemplo, uma membrana) . Diversos métodos são aqui descritos e/ou reconhecidos no campo para avaliação 15 dos níveis de cálcio e movimentos ou fluxo de ions. 0 método usado e as condições empregadas em particular podem depender de se um aspecto particular do cálcio intracelular está sendo monitorado ou avaliado. Por exemplo, como aqui descrito em algumas modalidades, reagentes e condições são 20 usados para, avaliar éspeçificamente a entrada capacitiva de cálcio, níveis de repouso de cálcio citosólico,
- tamponamento de cálcio e níveis de cálcio e captação ou liberação por organelas intracelulares e estaques de cálcio. O efeito de um composto de Fórmulas (1)-(7) sobre o 25 cálcio intracelular pode ser monitorado ou avaliado usando, por exemplo, uma célula, uma organ®1a intracelular ou um compartimento de armazenamento de cálcio, uma membrana .-.(incluindo, por exemplo, um pedaço destacado da membrana ou uma bícamada lipídíca) ou um sistema de ensaio sem células 30 (por exemplo, fora da vesícula da membrana) < Geralmente,
162/356 algum aspecto do cálcio intracelular é monitorado ou avaliado na presença de agente de teste e comparado com um controle, por exemplo, cálcio intracelular na ausência de agente de teste.
Métodos de Modulação do cálcio intracelular
A modulação do cálcio intracelular pode ser qualquer alteração ou ajuste no cálcio intracelular, incluindo, sem limitação, alteração da concentração de cálcio ou do nível no citoplasma e/ou organeias de armazenamento de cálcio 10 intracelular, por exemplo, retículo endoplasmãtieo, alteração no movimento de cálcio para dentro, para fora e em uma célula ou estoque ou organela de cálcio intracelular, alteração na localização de cálcio dentro de uma célula, e alteração da cínétiça, ou de outras 15 propriedades, dos fluxos de cálcio para dentro, para fora e nas células. Em modalidades particulares, a modulação do cálcio intracelular pód® envolver alteração ou ajuste, por exemplo, redução ou inibição, da entrada capacitive de cálcio# tamponamento do cálcio citosdlico, níveis de cálcio 20 para dentro ou para fora ou em um estoque ou organela de cálcio intracelular, e/ou níveis basais ou. de repouso de cálcio citosõlico. Em algumas modalidades,, a modulação do cálcio intracelular pode envolver uma alteração ou ajuste do movimento de íon mediado por receptor (por exemplo, 25 cálcio), movimento de íon operado por segundo mensageiro (por exemplo, cálcio), influxo de cálcio para dentro ou éfluxo para fora de uma célula, e/ou captação de íon (por exemplo, cálcio) dentro ou liberação por compartimentos intracelulares, incluindo, por exemplo, endossemos e lisossomos.
um aspecto, compostos aqui descritos modulam o :álcio intracelular, por exemplo, sem limitação, modulação (por exemplo, redução ou inibição) da atividade do canal soc, por exempla, inibição da atividade do canal
CRAC 'per exempla, inibição de inibição de SOCE) em uma célula do sistema imune (por exempla, linfdcito, leucócitò, célula um fibroblast© (ou uma célula derivada de um ou fibroblasto) uma célula epidérmica, dérmica ou ..cutânea
(por exemp. lo, um q rueratinócito) . A etapa d ê -modulação de
10 uma ou maí _s prote* ínas envolvidas na modul. ação do cálcio
intracelular (por exemplo, uma proteína STIM e/ ou uma
proteína C )rái) pode envolver, j jor exempl o, redu ção do
nível, exp ressão, uma atividade, função e /ou int? erações
moleculares s de uma proteína. Por exemplo, se uma célula
15 exibe um aumento nos níveis cà * cálcio ou náo possui
regulação de um aspecto da modulação do cálcio
intracelult u:·, por exemplo, entrada capaçit iva de cálcio,
então a m; rsdulação pode envolver a reduçãc > do níi rS.X.jp: dsi
expressão, de uma atividade ou função de uma in teração
proteína STIM molecular de uma proteína, por exemplo, uma e/ou uma proteína Orai,
Métodos de tratamento
Ê aqui apresentado um método de modulação da atividade íarial de cálcio capacitive (:SOC.) , que compreende contato do complexo do canal de cálcio capacitivo (SÒC), ou porção deste, com um composto de Fórmula (I) ?
&
Fórmula (I)
164/3 5δ em que :
A é fenil ou benzofurano, em que fenil e foenzof urano são, cada um, opcxonalmente substituídos· com pelo menos um. R; ou A é fenil substituído com dois grupos R em átomos de carbono adjacentes, em que os dois grupos R e o.s átomos de carbono ao qual estão anexados formam um C«~C« cicloalquil ou Ck-Cj heterociclóalquil;
R ê selecionado de F,· Cl, Br, I, -CN, -ΝΟχ, -CRs, -OH, -QRj, -O€F3>. -OCH, -OCRj, Ci-alquilenoalqúino, C3-Cs alqu.il, C.5-C§ cicloalquíl, Cr-C,. heteroalquil, Cx~Ce haloalguil, tetrasolil, Cs-Cs heteracicloalqu.il, fenil,· WS.(®0).3R3, (R4.}a, -C(«0)0F3, ’C(«O)lffiS(*0hRH
S(«0hmc(®0)R4, MRdc, ”N(RdC(^O)R3, “<Wh, -CfsÕFRj, 0C(W)R3., - SK-3, -E(«O)R3. e -S.(«O)âR3?
J ê uma ligação, WSMh, S(<2N{8<.), -C(-Õ), c ( «Q) WS («Ô) 2' S (—Ò) (*0) > N .(¾) ,· -w (R4) c (:=0) , - Ws,
C(-0), -pC(“O), -CWWÍRW “S> ”S(^p} a “S(Wh< 01-¾ alquileno, C^-Cg alquenileno, Cs-Cg alquinileno, C;.-C2 heteroalquílena, Cr-Cg cicloalguíleno ou Cs-Cg heterocicloalquileno, em que Cx-Cg alquileno, Cj-Cg alquenileno, Cj-Cf. alquinile.no,. Ci-Cg heteroalquileno, Q-Cl cicloalquileno e C2»ÇS slq opcionalmente substituídos com pelo menos um R;
R< é CO;,R:> ou um bioiadstero de ácido carboxílico, em que R2 ê hidrogênio, Gi-Cg alquil, Cx-Cs 'cicloalquil, Cx“Ce haloalquil, fenil oü benzil;
Z ê O , S , NH, N~CN ou CW021
X é W-L-fenil, W-L-B,, B, W-L-D cu P, em que fenil, B, e D são, cada um, opcionalmente substituídos com pelo menos um R ;
155/356
W é W2í 0 ou uma ligação;
I» ê metileno, etilano substituído com pelo menos um R, C3-C§ alquileno, C?~C« alquenileno, C2~C§ alquinilenor Ci~C§ heteroalquilen©, C3~C6 cicloalquileno ou Cs-Cs heterocícloalquileno, em que metileno, C3-Cç alquileno, C2~
C£ alquenileno, C?.~Cç alquinileno, Ci~Cs heteroalquileno, C3Ce cicloalquileno e cg-c§ são opcionalmente substituídos com pelo menos um R.
B é selecionado de furano, tiofeno, pirrol, piridiúa, oxazol, tiazol, imidazbl, tiadiazol, isoxazol; isotiazol, pirazol, piridazina, pirimidina, pirazina, oxadlazol, tiadiaaol, triazól, indol, benzoxazol, benzotiazol, benzimídazol, benzoxadiazol, benzotiadiasól, benzotríazol, pii-azolopiridina, iraidazdpiridins, pirrblopiridina, pirz©10pirimidina, indolizina, purina, furopiridína, tienopirídina, furopirrol,. furofwanc, tienof urano, 1,4diidropirrolopirrol, tiancpirrol, tienotiofeno, quiíiolina, isoquinolina, furopirazol, tienopirazpl e 1,6d i i drop i x* rol op i r a 2 o 1;
D é C3-C8 cicloalquil ou Ca~Cg heterocicloaiquil;
cada. Rs é selecionado independent emente de Ci-Cs alquil, C1-C5 haloalqu.il> Cs-Cs cicloalquil, fenil e benzil;
cada R4 é séleciònado independent emente de hidrogêniç, Cx-Cs alquil, Ci-Cg haloalquil, Cs“Cg cicloalquil, fenil e 25 benzil; ou um sal, solvato, H-óxido ou px^d-fármac© faimiaceuticamente aceitável deste.
Orna modalidade consiste em um método de modulação da atividade do canal de cálcio cap.aci.tivo· que compreende o contato d© complexo do canal de cálcio capacitivo (SQC), ou 30 porção deste, com um composto de F'drmula (X) ou um sal.
X66/356 ’ solvate/ N-óxidò ou pró-fármaco faarma.ceutí.camente aceitável deste, em que o contato ocorre in vitro.
Outra modalidade consiste em um método de modulação da atividade do canal de cálcio capacitivo que compreende o 5 contato do complexo do canal de cálcio capacitivo (SQC), ou porção deste, com um composto de -Fórmula (I) ou um sal, solvato, N~Õxidó ou pró-fárraaco farmaceuticamente aceitável deste, em que o contato ocorre in vivo.
Ainda outra modalidade consiste em um método de 10 modulação da atividade do canal de cálcio capacitivo que compreende o contato do complexo do canal de cálcio capacitivo (SOC), ou porção deste, com ura composto de Fórmula (X) ou um sal, solvato, N-éxido ou pró-fárraaco farmaceuticamente aceitável deste, em que o composto de 15 Fórmula (I) modula uma. atividade, modula uma interação ou modula o nível ou distribuições, ou se liga ou interage com pelo menos uma porção do complexo de canal de cálcio capacitivo selecionado de moléculas da família de proteínas de interação estroraal (STIM)>
Uma modalidade adicional consiste em um método de modulação da atividade do canal de cálcio capacitivo que compreende o contato do complexo do canal de cálcio capacitivo (SOC), ou porção deste, com um composto de Fórmula (I) ou .um sal, solvato, N-oxido ou pro-fármaco 2'5 farmaceutíoamente aceitável deste, em que o composto de Fórmula (I) modula uma atividade, modula uma interação ou modula o nível ou distribuições, -ou se liga ou interage com pelo menos uma porção de STÍM-l -ou STXM-2.
Outra modalidade consiste em um método -dé modulação da 30 atividade do canal de cálcio capacitivo que compreende o
167/356 contato do cwpjexo do canal de cálcio capacitivo (SOC) , ou porção deste, oom um composto de Fórmula (I) ou urn sal, solvato, N-ôxido ou pró-fãrmaco farmaceuticamente aceitável, deste, em que a modulação da atividade do canal de cálcio
5. capacitivo com um composto de Fórmula .(I) inibe a entrada capacitiva de calcic (SOCE).
Ainda outra modalidade consiste em um. método de modulação da atividade do canal de. cálcio capacitivo que compreende o contato do complexo do canal de cálcio 10 capacitivo (SOC), ou porção deste, com um composto de Fórmula (I) ou um sal, solvato, N~oxido ou pró-fármaco farmaceuticamente aceitável deste, em que o complexo de canal de cálcio capacitivo é complexo de canal cálcio ativado pela liberação de cálcio (CRAC) <
15. Uma modalidade adicional consiste em um método de modulação da atividade do canal de cálcio capacitivo que compreende o contato do complexo do canal de cálcio capacitivo (SPC), ou porção deste, com um composto de Fórmula (X). ou um sal, solvates, B-ôxido ou. pxó~ fármaco 20 farmaceuticamente aceitável deste, em que a modulação da atividade do canal de cálcio ativado pela liberação de cálcio ÍCRAC} com um composto de Fórmula (I) inibe a corrente eletxofisiolõgica (Içrac) diretamente associada aos canais CRAC ativados,
Ainda uma modalidade adicional consiste em um método de modulação da atividade do canal de cálcio capacitivo que compreende o contato do complexo do canal de cálcio capacitivo (SOC), ou porção deste, com. um composto de Fórmula .(XX) ou um sal, solvato, N-óxido ou pró-fármaco 30 farmaceuticamente aceitável deste, (XXX)·,. (XV) ou (V) ,
168/356 * Também é aqui apresentado um método de modulação da atividade de canal de cálcio ativado pela liberação de cálcio (CRAC) em um. mamífero que compreende a administração de um composto de Fórmulas (X)-(V), ou de um sal, solvato, 5 N-óxido ou prá-fármaco farmaceuticamente aceitável deste.
Uma modalidade consiste em um método de modulação da atividade de -canal de cálcio ativado pela liberaçáo de cálcio (C'RAC) em um mamífero que compreende a administração de um composto de Fórmulas (I-)-(V), ou de um sal, solvato,.
1-0 N-óxido ou pró-fármacó farmaceuticamente aceitável deste.,· em que α composto de Fórmulas (I) -(V) modula uma atividade., modula uma interação óu modula o nível ou distribuições, ou se liga ou interage com pelo menos um componente do complexo do canal de cálcio ativado pela liberação de cálcio (CRACj selecionado de moléculas da família de proteínas de interação estremai (STIM).
Outra modalidade consiste em um método de modulação da atividade de canal de cálcio ativado pela liberação de .cálcio (CRAC) em um mamífero que compreende a administração 20 de um composto de Fórmulas (X)~(V), ou de um sal, solvato, N-óxido ou prô-fãrmaco farmaceuticamente aceitável deste,
- em que o composto de Fórmulas {I)-(V) modula uma atividade, modula uma interação ou modula o nival ou distribuições, ou se liga, ou interage com STIM-1 ou STIM-2.
Ainda outra modalidade consiste em um método de modulação da atividade de canal de cálcio ativado pela liberação de cálcio (CRAG) em um mamífero que compreende. a administração de uni composto de Fórmulas (X)~(V), ou de um sal farmaceuticamente aceitável, solvato farmaceutiçamente 30 aceitável, N-óxido, ou prõ-fármaco farmaceuticamente
16.$/ 358 aceitável destes, em que a modulação da- atividade do canal de .cálcio ativado pela liberação de cálcio (CRAC) com um composto de Fórmulas (X)- (V) inibe a entrada çapacitiva de cálcio (SOCE).
S Umá modalidade adicional consiste em um método de modulação da atividade de canal de cálcio ativado pela liberação .dè cálcio (CRAC) em um mamífero que compreende a administração de um -.composto de Fórmulas ou de um sal.» solvato,· M-õxido ou prô-fármaco farmaceuticamente· 10 aceitável deste, em que a modulação da atividade do canal de cálcio ativado pela liberação de cálcio (CRAC) com um composto de Fórmulas (IJ- (V) inibe a corrente eletrofisiolõgica (1®^· diretamente associada aos canais
CRAC ativados<
Ainda uma modalidade adicional consiste em um método de modulação da atividade de canal de cálcio ativado pela liberação de cálcio (C.RÁC) em um' mamífero que compreende a administração de. um composto de Fórmulas (I) - (v) , ou de um sal, solvato, K~óxidõ ou pró-fármaco farmaceuticamente 20 aceitável deste, em que- o composto de Fórmulas (X) - (V} inibe SOCE com uma. ICw abaixo de 10 pM»
Outra modalidade consiste em um método de 'modulação da atividade de canal de cálcio ativado pela liberação de cálcio (CRAC) em um mamífero que compreenda a administração 25 de um composto de Fórmulas (I)-(V), ou sal, solvato, Nõxido ou pró-fármaco farmaceuticamente aceitável deste, em que o composto de Fórmulas (I)-(V) inibe a corrente eletrofisiológieá. (iCRAC) diretamente associada aos canais CRAC ativados em uma concentração, abaixo de lõ pM.
Um aspecto consiste em um método de tratamento, de -uma.
170/358 doença, distúrbio ou condição em um mamífero que se beneficiaria da inibição da atividade do canal de cálcio capacitivo que compreende a administração ao mamífero de um composto de Fórmulas. (I) (¥), ou sal, solvato, N-dxido ou 5 prô-fármaco farmaceuticamente aceitável deste.
Uma modalidade consiste em um método de tratamento de uma doença, distúrbio ou condição em um mamífero que se beneficiaria da inibição da atividade do canal de cálcio capacitivo que compreende a administração ao mamífexO de um 10 composto de Fórmulas (I) ~ (V) , õu sal, solvato, N~óxido ou prô-fármaco farmaceuticamente aceitável deste, em que o composto de Fórmulas (I)-(V) modula a atividade, modula umà interação ou se liga ou interage com uma proteína STIM-1 de mamífero, ou uma proteína STIM-2 de mamífero.
Um aspecto consiste em um. método para o tratamento de uma doença autóimune, uma doença ou condição heteroimune, ou doença inflamatória em um mamífero, que compreende a administração ao mamífero de um composto de Formula ÇI) ou (XI) ou sal, solvato, M-óxido ou prõ-fârmacò farmaceuticamente aceitável deste.
Em uma modalidade, a doença autoimune e doença inflamatõria do intestino, artrite reumatóide, miastenia grave, esclerose múltipla, síndrome de Sjôgren, diabetes tipó I, lúpus eritematoso, psoríase, osteoartrite,
2'5 esclerodermia e anemia bemol it íca autoimune.
Em óutra modalidade, a doença ou condição heteroimune ê doença enxerto versus hospedeiro, rejeição de enxerto, dermatite atôpica, conjuntivite alérgica, rejeição a transplante de órgãò, transplante alogêníço ou xenogênico e 30 rinite alérgica,
171/3S6 > Em uma modalidade adicional, a doença inflamatória é uveíte, vasculite, vaginite, asma, doença muscular inflamatôria, dermatite, cistite intersticiai, dermatomiosite, hepatite e hepatite crônica recidivante.
S Outro aspecto consiste em um método de tratamento de uma doença, distúrbio ou condição em um mamífero que se beneficiaria da inibição da atividade do canal de cálcio capacitivo que compreende a administração ao mamífero de um composto de Formulas (X)~(V} ou um sal, solvato, N-oxido ou 10 pró-fãrmaco farmaceuticamente aceitável deste.
Em uma modalidade, a doença, distúrbio ou condição no mamífero é selecionada, dè glomerulonefríte, doenças ou distúrbios hepátícos, doenças ou distúrbios renais, doença pulmonar obstrutíva crônica, osteoporose, eczema, fibrose 15 pulmonar, cireoidite, fibrose cística e cirrose biliar primária.
Ainda outra modalidade consiste em um método de tratamento de uma doença, distúrbio ou condição em um mamífero que se beneficiaria da inibição da atividade do 20 canal dé cálcio çapacitivo que compreende a administração ao mamífero d® um composto de Fórmula (I), ou sal, solvato, ·· N-ôxido ou pré-fármaco farmaceuticamente aceitável deste, em que a doença, distúrbio ou condição é artrite re..mato ide.
Ema modalidade adicional consiste em um método de tratamento de uma doença, distúrbio .ou condição em um mamífero que se beneficiaria da inibição da atividade do canal de cálcio capacitivo que compreende a administração ao mamífero de um composto de Fórmulas (I) - (V) , ou sal, ,3Q solvato, N-oxido ou prõ-fármaca farmaceuticamente aceitável
172/356 destÇ em que a doença, distúrbio ou condição é psaríase.
lima modalidade consiste em um método de trat^entq de uma doença, distúrbio ou condição em um mamífero que se beneficiaria da inibição da atividade do canal de cálcio 5 capacitive que compreende a administração ao mamífero de um composto de Fórmulas (X)~(V), ou sal solvato farmaceuticamente aceitável, N-Óxído ou pró-fármaco deste, em que a doença, distúrbio ou condição é uma doença inflamatóriá do intestino.
IO Em uma modalidade adicional, a doença inflamatória do intestino é oolite ulcerativa.
Uma modalidade adicional consiste em um método de tratamento de uma doença, distúrbio ou condição em um mamífero que se beneficiaria da inibição da atividade do 15 canal de cálcio çapaoitivq que compreende a administração ao mamífero de um composto de Fórmulas (X)-(V), óú sal, solvato, N-óxido ou prô-fármaco farmaceuticamente aceitável deste,, em que a doença, distúrbio ou condição é rejeição a transplante de órgão.
W modalidade adicional consiste W um método de tratamento de uma doença, distúrbio ou condição em um mamífero que se beneficiaria da inibição da atividade do canal de cálcio capacitive que compreende a administração ao mamífero de um composto de Fórmulas (X) - (V) , ou sal, solvato, N-ôxido ou pró-fármauo farmaceutícamente aceitável deste, em que a doença, distúrbio ou condição é esclerose múltipla,
Ainda uma modalidade adicional consiste em um método de tratamento de uma doença, distúrbio ou condição em um 30 mamífero que se beneficiaria da inibição da atividade do
173/356 k . canal de cálcio capacitivo que compreende a administração ao mamífero de um composto de Fórmulas (X) ~ ÍV) , ou sal, solvato, N-óxido ou pró-fãrmaco farmaceuticamente aceitável deste, que ainda compreende a administração ao mamífero de 5 um segundo agente terapêutico.
Outra modalidade consiste em um método de .tratamentode uma doença, distúrbio ou condição em um mamífero que se beneficiaria da inibição da atividade do canal de cálcio capacitivo que compreende a administração ao mamífero de um 10 composto de Fórmulas (l)-(V), ou sal, solvato, N-âxido ou prõ-fármaco farmaceuticamente aceitável deste, era que o segundo agente terapêutico é selecionado de imunossupressores, glicocoi*ticâides, fãrmacos antiinflamatórios não ssteróides, inibidores específicós da 15 Cox-2, leflunomide, tioglicose de ouro, tiomalato de ouro, aurof ina, sulfasalazina, hidroxícloroquinina, minocic1 ina, agentes anti-TW-a, abatacept, anakinra, interferon-p, intcrferon-γ, interleucina-2, vacinas para alergia, antihistamínicos, antileucotríenos, beta-agonistas, teofilina e 20 anticolinérgicos.
Ainda outra modalidade consiste em um método de . tratamento de uma doença, disturbs o ou condição em um mamífero que se beneficiaria da inibição da atividade do canal, de cálcio capacitivo que compreende a administração 25 ao mamífero de um composto de Fórmulas Çl) - (V) , ou sal, solvato, N-óxido ou prõ-fármaco farmaceuticamente aceitável deste, em que o segundo agente terapêutico ê selecionado de tacrolimus, ciclosporina, rapamicina, metotrexato, cíelofosfamida, azatioprina, mercaptopurína, micofenolato, 30 ou FTY72Q, prednisona, acetato de cortisona, prednisolona,
174/356 , metllprednisolona, dexametasona ., betametasona, trlamein©Iona, beciometasona, acetato de fludrocortisone, acetates de desaxicorticosterona, aldosterona, aspirina, ãcido salicílica, ácido gentisico, salícilato de -magnésio de colina, salicilato de colina, salicilatõ de magnésio de colina, saliçilato dfe colina, salicilato de magnésio, salicilato de sódio, diflunisal, carprofeno, fenoprofeno, fenoprofeno cálcico, fluorbiprofeno, ibuprofen©, cetoprofeno, nabutona, cetolorac, cetorolac tremetamina, 10 naproxeno, ©xãprozina, diclofenaco, etodolac, indometacina, sulindac, tolmetin, meclofenamato, meclofenamato sódico, ácido meíenâmico, piroxicam, meloxicam:, celecoxib, rofeçoxib, valdecoxib, parecoxib, etoricoxib, lumiracoxib, CS-S 02, 3TE-52 2, L-74 5,33 7 e NS398, 1eflunomida, tioglloose 15 de tiro tiomalato de ouro, aurofína, sulfasalazina, hidroxicloroguinina, minociclina, infliximab, etanercept, adalimumab, abataçept., anakinra, interferon-β. interferonγ, interleucina~2, vacinas para alergia, antí-histamínicos, antileucotz'ienos, beta-agonistas, teofilina e õ ant i colinêrgi cos,
Também é aqui descrito um método de inibição da ativação da entrada capaeitiva de cálcio (SOCE) de fator nuclear de células T ativadas (NFAT) em um mamífero que compreende a administração de um composto de Fórmulas. (X) ~ 25 (V) , ou de um sal, solvate, N~óxido ou pró-fármaco farmaceuticamente aceitável deste.
Uma modalidade consiste em um método de inibição da ativação da entrada capacitiva de cálcio (SOCE) de fator nuclear de células T ativadas (NFAT). em um mamífero que 3G compreende a administração dé um composto .de Fórmulas (I) 175/35« (V) , ou de um sal , solvato, N~õxidç ou pró-fãrmaao farmaceuticamente aceitável deste, em que © composto de Fórmulas. modula uma interação, ou modula o nível, t. ou distribuições, ou se liga, ou interage com uma proteína 5 STIM-1 de mamífero, ou uma proteína STXM-2 de mamífero.
Outro aspecto consiste em um método de diminuição da liberação de citocina por inibição da ativação da entrada capacitiva de cálcio de ΝΓΆΤ em um mamífero que compreende a administração de um composto de Formulas ou de um sal, solvato, N··· óxido ou prõ-fârm&co farmaceuticamente acei táve1 deste.
Outra mc sdalidade consiste em um método de diminuição
da liberação de citocína por j Ínibição da ativação da
entrada capac ’itiva de cálcio de NFAT em um mamífero que
15 compreende a administração de um. > composto de Fórmulas (X) ~
(V) , ou de um sal, solvato, N ÓX.ldO ou pró-fármaco
farmaceuticamente aceitável deste, em que o composto de Formulas (l)-(V) modula uma interação, ou modula o nível, ou distribuições, ou se liga, ou interage com uma proteína 20 STIM-1 de mamífero ou uma proteína STIM-2 de mamífero.
Ainda outra modalidade consiste em um método de diminuição da liberação de citocina por inibição da ativação da entrada çapacitiva de cálcio de I1FAT em um mamífero que compreende a administração: de um composto de 25 Fórmulas ou. de um sal, solvato, óxido ou prõfármaco farmaceuticamente aceitável deste, em que a citocina é selecionada de 11,-2, 1.1,-3. XL-4,, XL-5, IL-6, XL7, IL-8, IL-9, XL-10, IL-X1, XL-12, IL-13, XL-15, XL-16, XL-17, IL-18, XL-lu, IL-lp, IL-1 RA, fator de estimulação 3Θ de colônias de gx“anulôçitos (G-CSF) , fator de estimulação
176/356 de colônias de granulõcitos-macrõfagos (GM-CSF), oncostatina Mt o.rltropoletiha., fatpx* inibidor de leucemia (lxf) , interferons, interferon gama (y-TFN), bi . 1 (cdso), B7.2 (B70, cds.6) , tnf-u, lt-js, ligante de emo, ligante de Fas, ligante de CD27, l.igante de- W3.0, 4-1 bbl,
Trail e fator inibidor de migração (MW <
Em um aspeetd, ê aqui fornecida uma çompôsição farmacêutica, que inclui uma quantidade eficaz de um composto aqui fornecido, e um excipiente farmaceuticamente aceitável. Em um aspe.eto adicional, são fornecidas composições que ainda incluem um segundo ingrediente farmaceuti camente ativo.
Em certas modalidades, é aqui fornecida uma composição farmacêutica que contém: í) um veículo, díluénté e/ou excipiente fisiologicamente açeitãvel; e i.i) um ou mais compostos aqui descritos.
Em qualquer um dos aspectos mencionados anteriormente, estão modalidades adicionais que incluem administrações únicas da quantidade eficaz dos compostos aqui revelados, incluindo modalidades adicionais, nas quais; (1.) o composto de Fórmulas (T) -- (V) ê administrado uma vez; (11) o composto de Fórmulas (I)-(V) é administrado ao mamífero várias vezes ao longo de um dia; (iiij continuamente; ou (iv) c on t inua dárnentê.
Em qualquer um dos aspectos mencionados anteriormente, eètão modalidades adicionais que incluem administrações múltiplas da quantidade eficaz do composto de Fórmulas (X)~ (V), incluindo modalidades adicionais nas quais (i) o composto de Fórmulas- (X) - (V) é administrado ém uma única dose; (ii) o tempo entre administrações múltiplas é a cada
177/356 ♦ , 6 haras; (iii) o composto de Fórmulas Q) ~ (V) é administrado ao mamífero a cada 8 horas. Em modalidades adicionais ou alternativas, o método compreende uma féria v do fármaco, em que a administração do composto de Fórmulas 5 (X)-(V) é temporariamente suspensa ou a dose do composto de
Fórmulas (I.)-(V) que está sendo administrado é temporariamente reduzida; ao final da féria do fármaco, a dosagem do composto de Fórmulas (I)-(V; é reiniciada. A duração da féria do fármaco pode variar de 2 dias a 1 ano.
Em um aspecto, os compostos aqui descritos são administrados a um ser humano. Em algumas modalidades, os compostos aqui descritos são administrados oralmente.
Exemplos de composições farmacêuticas e métodos de admini stração
As composições farmacêuticas podem ser formuladas de forma convencional com o uso de um ou mais veículos fisiologicamente aceitáveis, incluindo excipientes e auxiliares que facilitam o processamento doa compostos ativos em. preparações que podem ser usadas farmaceutiçamente. A formulação adequada é dependente da via de administração escolhida. Detalhes adicionais sobre - excipientes adequados para composições farmacêutica© aqui descritas podem ser encontrados, por exemplo, em Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19a
Edição :(Easton, Pa. i Mack publishing Company, 1995).; Hoover, John E., Remington' s Pharmaceutical Sciences , Mack Publishing Co,, Easton, Pennsylvania 1.975,- Liberman, H.A. e Lachrnan, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, Nova York, N.Y., 198 G; e Pharmaceutical
Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7* Edição (Lippincott Williams & Wilkins] 999) , aqui incorporados pox referência quanto a esta revelação.
Üma composição farmacêutica, como aqui usada, referese a uma mistura de um composto de Fórmula® (I) - (V) aqui r descrito, com outros componentes químicos, por exemplo, veículos, estabiíizantes, diluentes, agentes dispersantes, agentes de suspensãoe agentes espess-antes e/ou excipientes.
A. composição farmacêutica facilita a administração do omposto a um organismo. Na prática dos métodos de 10 tratamento ou uso aqui fornecidos, quantidades terapeuticamente eficazes de compostos aqui descritos são administradas em -uma composição farmacêutica a um mamífero que possui uma doença, distúrbio ou condição a ser tratada. Em algumas modalidades, o mamífero é um ser humano. Uma 15 quant idade terapeuticamerice eficaz, pode variar amplamente, dependendo da gravidade da doença, da idade e da saúde relativa do indivíduo, a potência do composto usado e de outros fatores. Os compostos de Fórmulas- (I)- (V) podem ser usados isoladamente ou em combinação com um ou mais agentes 20 terapêuticos como componentes de misturas (como em terapia combinada).
As formulações farmacêuticas aqui descritas podem ser administradas a um indivíduo por diversas vias de administração, incluindo, sem- limitação, as vias de administração oral, parenteral (por exemplo, intravenosa, subcutânea, intramuscular), intranasal, hucal, tópica, retal ou transdéxmíea, Além disso, as composições farmacêuticas aqui descritas, que incluem um composto de Fórmulas (I)-(V) aqui descrito, podem ser formuladas em 30 qualquer forma de dosagem adequada, incluindo, sem
179/356 limitação, dispersões orais aquosas, líquidos, géis, xaropes, elixires, caidos, suspensões, aerossóis, formulações de liberação controlada, formulações de w dissólução rápida, formulações efervesoçntes, formulações 5 liofilizad&s, comprimidos, pós, pílulas, drágeas, cápsulas, formulações de liberação retardada, formulações de liberação estendida, formulações de liberação pulsatil, formulações multiparticuladas e formulações mistas de liberação imediata è de liberação controlada.
Pode-se administrai os compostos ç/ou composições de uma forma local em ver de sistêmica, por exemplo, por meio de injeção do composto díretaménte em um órgão ou tecido, frequentemente em uma preparação de depósito ou formulação de liberação sustentada. Essas formulações de longa ação 15 podem ser administradas por implantação (por exemplo, subcutaneamente ou por via intx'amuscular) ou por injeção intramuscular; Além disso, pode-se administrar o fármaco em um sistema de liberação direcionada de fárwcõs, por exemplo, em um liposspmo revestido com anticorpo Õrgão28 específico. Os lipcsspmos serão direcionados e recolhidos seletivamente pelo órgão< Além disso, o fármaco pode ser fornecido na forma de uma formulação de liberação rápida, na forma de uma formulação de liberação estendida, ou na forma de uma formulação de liberação intermediária.
Composições. farmacêuticas que incluem um composto aqui descrito podem ser fabricadas de forma convencional, como, apenas cotão exemplo, por meio de processos convencionais de mistura, dissolução, granulação, produção de drágeas, levigação, emulsificaçao, encapsulação, captura ou compressão.
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As composições farmacêuticas incluirão pelo menos um composto de Fórmulas (l)-(V) aqui descrito, como um ingrédieàte atiw em forma de ácido livre ou base livre, ou * em forma de um sal farmaceuticamente aceitável. Além disso, 5 os métodos e composições farmacêuticas aqui descritas incluem o üso de formas cristalinas (também conhecidas como polimorfos); bem como metabõlitõs ativos desses compostos que possuem o mesmo tipo de atividade. Em álgumas situações, os compostos podem existir como tãutõmèros.
Todos os taut©meros são incluídos dentro do escopo dos compostos aqui apresentados. Adicionalmehte, os compostos aqui descritos podem existir em faxinas hão solvatadas, bem com© em formas solvatadas com solventes farmacêuticamente aceitáveis como, por exemplo, água, etanol, e semelhantes.
As formas solvatadas dos compostos aqui apresentados também são consideradas com© aqui reveladas,
Em certas modalidades, as composições aqui fornecidas também podem incluir um ou mais conservantes para inibir atividade microbiana. conservantes adequados incluem 2.0 compastós de amôni© quaternário como, por exemplo, eloreto de benzaloônio, brometo de cetiltrimetílamôni© e cloreto de cetilpiridínio.
Preparações farmacêuticas para uso oral podem ser obtidas por mistura de um ou mais excipientes sólidos com 5 um ou mais dos compostos aqui descritos (por exemplo, compostos de Fórmulas (I) ·* (¥) ) ., opcionalmente trituração da mistura resultante, e processamento da mistura de grânulos, apôs adição de auxiliares adequados, se desejado, para a obtenção de comprimidos, pílulas ou cápsulas. Excipientes 30 adequados incluem, por exemplo, enchimentos como, por
181/356 exemplo, açúcares, incluindo lactose, sacarose, manitol ou sorbitol; preparações d© celulose como, por exemplo, amido de milho, amido de trigo, amido de arroz, amido de batata, r gelatina, goma tragácanto, tnetilcelulose, celulose 5 tnicrocris talina, hidroxipropiImetilcelulose, carboximetilcelulose sódica; ou outros, tais como: polivinilpirrolidonã (FVP ou povidona) ou fosfato de cálcio. Se desejado, podem ser adicionados agentes desintegrastes, por exemplo, a croscarmfelo.se sõdica 10 entrecruzada, polivinilpirrolidona, ãgar ou ácido algínico ou um sal deste como, por exemplo, alginate de sódio» 'Núcleos de drágeas são fornecidos com revestimentos adequados. Para essa finalidade, podem ser usadas soluções concentradas de açúcar, que podem, opcionalmente conter goma 15 arábica,. talco, polivinilpirrolidona, carbopol gel, polietileno glicol e/ou diõxido de titânio, soluções de laca e solventes orgânicos ou misturas solventes adequadas» Corantes ou pigmentos podem ser adicionados aos revestimentos de comprimidos ou drágeas para identificação 20 du para caracterizar diferentés combinações de doses de composto ativo.
Preparações farmacêuticas que podem ser usadas oralmente incluem cápsulas push-fit feitas de gelatina, bem como cápsulas macias, lacradas, feitas de gelatina e um 25 piastifleant e, por exemplo, glicerol ou sorbitol. As cápsulas push-fit podem conter os ingredientes ativos misturados com enchimento como, por exemplo, lactose, aglutinantes como, por exemplo, amidos, e/ou lubrificantes como, por exemplo.,, talco ou estearato de magnésio e, 30 opcionalmente, estabilizantes. Em cápsulas macias, os
182/356 cbmpostos ativos podem ser dissolvidos ou suspensos em líquidos adequados como, por exemplo, óleos graxos, parafina líquida ou polietileno glicóis líquidas. Além disso, podem ser adicionados estabilizantes,
Em algumas modalidades, as formas de dosagem sólida aqui reveladas podem estar na forma de um comprimido (incluindo um comprimido de suspensão, um comprimido de dissolução rápida, um comprimido mastigável, um comprimido de desintegração rápida, um comprimido efervescente ou uma 10 cápsula) , uma pílula, um pó (incluindo um pó compactado estéril, um pó dispensável ou um pó efervescente) , -uma cápsula (incluindo cápsulas macias ou rígidas, por exemplo, cápsulas feitas de gelatina derivada de animais ou HPMC derivada de planta, ou ’'cápsulas salpicadas) , dispersão '15 sólida, solução sólida, forma de dosagem bíoerosível, formulações de liberação controlada, formas de dosagem de liberação pulsátil, formas de dosagem multiparticuladas, pêletes, grânulos ou um aerossol. Em outras modalidades, a formulação farmacêutica está na forma de um pó. Ainda èm 20 outras modalidades, -a formulação farmacêutica está na forma de um comprimido, incluindo, sem limitação, um comprimido - de dissolução- rápida. Adícionalmente, as formulações farmacêuticas dos compostos aqui descritos pòdem ser administradas como uma cápsula -única ou em forma de dosagem 25 de múltiplas cápsulas. Em algumas modalidades, a formulação farmacêutica ê administrada em duas, ou três, ou quatro, cápsulas ou. comprimidos.
Em algumas modalidades, formas de dosagem sólida, por exemplo, comprimidos, comprimidos efervescentes e cápsulas, 3C< são preparadas por mistura de partículas de um composto de
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Fórmulas (I)-(V) aqui descrito, com um ou mais excipientee farmacêuticos para formar uma composição de mistura a granel. Quando se diz que essas composições de mistura- a granel- são homogêneas, isso significa que as partículas do 5 composto de Fórmulas (I)-(V) aqui descrito estão dispersas igualmente por toda a composição, de tal modo que a composição pode ser subdividida em formas de dosagem unitária igualmente eficazes, por exemplo, comprimidos, pílulas e cápsulas. As dosagens unitárias individuais 10 também podem incluir revestimentos de película, que se desintegram mediante ingestão oral ou mediante contato com diluente. Essas formulações podem ser fabricadas por técnicas farmacológicas convencionais>
As formas de dosagem sólida farmacêuticas aqui 15 descritas podem incluir um composto de Fórmulas (I) - (V)aqui descrito, e um ou mais aditivos farmacèuticamente aceitáveis como, por exemplo, um veículo compatível, aglutínante, agente de enchimento, agente de suspensão, agente flavorizante, agente adoçante, agente desintegrante, 20 agente dispsrsante, tensoatívo, lubrifícante, corante, diluente, solubilizante, agente umidífíoante,
- plastifícante, estabílizante, intensif.leader de penetração, agente umidíficante, agente antiespumante, antioxidante, çonservaiite, ou uma ou mais combinações destes, Ainda em 25 outros aspectos, com a utilização de procedimentos de revestimento padronizados, tais como aquelas descritos em Remington''s Pharmaceutical Sciences , 20* Edição (200'0) , um revestimento de película é fornecido em torno da formulação do composto aqui descrito. Em uma modalidade, 30 algumas ou todas as partículas do composto aqui descrito
184/356 são revestidas. Eis. outra modalidade, algumas ou todas as Λ* partículas- do composto aqui descrito são microencapsuladas< Ainda em outra modalidade, as partículas do composto aqui descrito não são microeneapsuladas e não são revestidas.
Veículos adequados para uso nas formas de dosagem sólida aqui descritas- incluem, sem limitação, acácia, gelatina, dióxido de silício coloidal, glicerofosfato de cálcio, lactatc de cálcio, maltodextrina, glicerina, magnésio silicate, caseinate de sódio., lecitina de soja, 1Q cloreto de sódio, fosfato tricálcicd, fosfato dípotássico, estearoil lactilato de sódio, carrágenana, mônoglícerídeo, diglicerídeo, amido pré-gelatinizãdo, hidroxipropilmetilcelulose, acetato e-stearato de hidroxipropilmetilcelulose, sacarose, celulose15 microcriStalina, lactose, manitol, e semelhantes.
Agentes de enchimento adequados para uso nas formas de dosagem cólida aqui descritas incluem, sem limitação, lactose, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio, fosfato de cálcio dibâsico, sulfato de cálcio, celulose 2.0 microcristalína, pó de celulose, dextrose, dext ratos, dextrana, amidos, amido pré-gelatinisado, » hidroxípropilmetilcelulose (HFMCj, ftalato de hidroxíprc^ilmetilcelulose, acetato estearato de hidroxípropilsietilcelulose (HPMCAâ) , sacarose, xilítól, 25 lactitol, manitol, sorbitol, cloreto de sódio, polietileno glicol, e semelhantes..
A fim de. liberar © composto de Fórmulas (1) -(9) a partir de uma matriz de forma de dosagem sólida tão eficientemente quanto possível, frequentemente são usados 30 desíntegrantes na formulação, especialmente quando as
185/356 formas de .dosagem são exprimidas com aglutinante.
Desintegrantes ajudam a romper a matriz da forma de dosagem por edema ou ação capilar quando a umidade é absorvida na forma de dosagem.. Désintegrantes adequados para uso nas formas de. dosagem sólida aqui descritas incluem, sem imitação, amido natural como, por exemplo,, amido, de milho ou amido de batata, um amido pré-gelatinizado como, por exemplo., National 1551 ou Amijel®, ou amidoglicolato de sódio como, por exemplo, Promogèl® ou Explotab®, uma 10 celulose como, por exemplo, um produto de madeira, metilcelulose cristalina, por exemplo, Avisei®, Avicel® P.H101, Avicel® PH102, Avicel® PH105, Elcema® P1OQ,
Emcocel·®, Vivacel®, Ming Tia^' e Solka-Floc®, metilcelulose.
croscarmelose, ou uma celulose entrecruzada, por exemplo, carboximetilceluiosa abdica entrecruzada (Ac-Di-Eól®), carboximetilcelulosé entrecruzada ou droscarmelose entrecruzada, um amido entrecruzado cotio, por exemplo./ amidoglicolato de sódio, um polímero entrecruzado como, por exemplo, crospovidona, uma poXívinilpirrolidona 20 entreçruzada, algínato como, por exemplo, ácido algínico ou um sal de ácido algínico como, por exemplo, alginato de < sódio, uma argila como, por exemplo, Veegum®' HV (sílicato de magnésio alumínio), uma goma como, por exemplo, ágar, guar, alfarroba, Karaya, pectina ou tragaoanto, amidoglicolatc de sódio, bentonita, uma esponja natural, um tensoativQ, uma resina como, por exemplo, uma resina de troca catiónica, polpa cítrica, lauril sulfato de sódio, laur.il sulfato de sódio em combinação amido, e semelhantes.
Aglutinances dão coesão às formulações de forma de 30 dosagem oral sólida: para a formulação de cápsulas
186/355 preenchidas com pô, eles ajudam na formação de plugu.es que podem ser preenchidos em cápsulas com casca macia ou rígida e, para formulação em comprimidos, eles asseguram que o comprimido permaneça intacto após compressão e ajudam a 5 assegurar uma uniformidade da mistura .antes de uma etapa de compressão ou preenchimento. Materials adequados para uso como aglutinantes nas formas de dosagem sólida aqui descritas incluem, sem limitação, carboximetilcelulose, metilcelulose (por exemplo, Methocel®), hidroxiprupilmetilcelulcse (por exemplo, Hipromelose WP
Pharmacoat-603acetato estearato de hidroxipropilmetilcelulose (Aqoate HS-LF e HS) > hidroxietilcelulose, hidroxipropilcelulose (por exemplo, KlucelR, etilcelulose (por exemplo, Ethocel®) e celulose 15 microcristalina (por exemplo, Avicel®), dextrose microer.istalina, amilose, silicato de magnésio alumínio, ácidos de polissacarídeo, bentonitas, gelatina, copolímero de polivinilpirrolidona/acetate de vinila, crospovídona, povidona, amido, amido pré-gelatinizado, tragacanto, 20 déxtrina, um açúcar, por exemplo, saçarose (por exemplo,
Dipac®), glicose, dextrose, melaços, manitol, sorbitol, xilitol (por exemplo, Xylitab®), lactose, uma goma natural ou sintética, por exemplo, acácia, tragacanto, goma ghatti, mucilagem de cascas de isapol, amido, polivinilpirrolidona 25 (por exemplo, Povidone® CL,· Kollidon® CL., Folyplasdone® XL-
10, e Povidone® K-12), arabinogalactana de lariço, Vçegum®, põlietileno glieol, cera®, aljmato de sódio, e semelhantes,
Em geral, são usados níveis de aglutinante de 20-70% 30 em formulações' de cápsula de gelatina preenchidas com pó. O
187/356 nível de utilização de aglutinante -em. formulações de comprimido varia dependendo de se é utilizada compressão direta, granulaçào úmida, compactação cq® -cilindra, ou o uso de outros excipientes como, por exemplo, enchimentos, 5 que por si próprios podem, atuar como aglútinante moderado.
Ém algumas modalidades, os formuladores determinam o nível de aglutinante para as formulações, mas- um nível de uso de aglutinante de até 70% em formulações de comprimido é comum.
1q Lubrificantes ou glídantes adequados para uso nas formas de dosagem sólida aqui descritas incluem, sem limitação, áeido esteárico, hidróxido de cálcio, talco, amido de milho, es tear il fumarato de sódio, sais de metal alcalino e alcalino terroso-, por exemplo, alumínio, cálcio,
1.5 magnésio, zinco, ácido esteárico, estearatos de sódio, e-stearato de magnésio, estearato de zinco, ceras,
Stearowet^, ácido bo,rico> benzoato de sódio, acetato de sódio, cloreto de .sódio, leucina, um polietileno glicol ou um metQxipolietileno glicol como, por exemplo, carbowaxrM,
PEG 40Õ0, PEG 50.00,. PEG 6000, propileno glicol, oleato de sódio, gliceril beenato, gliceril palmitoestearato,
- gliceril benzoato, magnésio ou lauril sulfato de sódio, é semelhantes.
D Puentes adequados para uso nas formas de dosagem sólida aqui descritas incluem, sem limitação, açúcares (incluindo lactose, sácarose, e dextrose), polissacarídeos (incluindo dextrátos- e maltodextrina), poliõis (incluindo manitol, xilitol e sorbitol), ciclodextrinas, e semelhantes.
-Agentes umidificantes adequados para uso nas- formas de
188/356 dosagem sólida aqui descritas incluem, por exemplo, ácido ciéico, mono@stea.rato de glicerila, monooleato de sorbitano, monol&urato de sorbitano, oleato de trietanolamina, monooleato de políoxietileno sorbitano, 5 monolaurato de polioxietileno sorbitano, compostos de amSnio quaternário (por exemplo, Polyquat 10*), oleato de sódio, lauríl sulfato de sódio, estearato de magnésio, docusato de sódio, triacetina, vitamina E TPGS, e semelhantes,
Ténsoàtivos adequados para uso nas forma® dé dosagem sólida aqui descritas incluem, por exemplo, lauríl sulfato de sódio, mdnooleato de sorbitano, monooleato de polioxietilenó sorbitano, polissórbatos, poloxâmeros, sais biliares, monoestearato de glicérila, cbpólfmerc.® de ôxido 15 de étileúo é óxictó de propileno, por exemplo, Pluronic* (BASE), e semelhantes.
Agentes de suspensão adequados para uso nas formas de dosagem sólida aqui descritas incluem, sèm límitaçãò, polivinilpirrolidona, por exemplo, polivinilpirrolidona 20 K12, polivinilpirrolidona K17, polivinilpirrolidona K25 ou polivinilpirrolidona K30, palletileno glícol, por exemplo, ' o polietíleno glícol pode ter um peso molecular de cerca de 30G até cerca de 6.000, ou cerca, de 3.3 50 até cerca de 4.000, ou çerca de 5.400 até cerca de 7.600, copclímero de 25 vinil pirrolidona/acetato de vinila (S630), carboximetíIceXulose sódica, met i1celulose, h idrox ípropiImeti1celulose, pelissorbato-8 0, hidroxíetílcelulose, alginate de sódio, gomas como, por exemplo, goma tragacanth e goma acácia, goma guar, 30 xantanas, incluindo goma xantana, açúcares, celulósicos
183/356 eomo, per exemplo,. aarboximetilcelulose sódica, metxlcelulase, carbcximetilcelulose sõdicá, hidroxipropilmet iIcelulase, hidroxíet ilcelulose, polissorbate*80, alginato de sódio, monolaurato de sorbitana polietaxilada,. manolaurato de serbítane po 1 i etox x lado, pov i dona ,< e semelhantes ♦
Antióxidantes adequados para uso nas formas de dosagem sólida aqui descritas incluem, por exemplo, por exemplo, hidroxitolueno butíladõ (BHT), aseorbato de- sódio e.
tocoferol.
Há uma superposição considerável entre aditivos usadas nas formas de- dosagem sólida aqui descritas. Dessa forma, os aditivos listados .acima' déVem' ser considerados coma meramente exemplares, ç nãó limitantes, das tipos de 15 aditivos que podem ser incluídos ém formas, de dosagem sólida das cmposlçóeá farmacêuticas aqui descritas.
Em outras modalidades, uma au mais camadas da formulação farmacêuticá sãe plastifiçadas. Ilustrativamente, um plastificante é géralmente um sólido 20 ou liquido com ponto de ebulição elevado. Flastifióántes adequados podem ser adicionados de cerca de 0,01% até cerca - de, 50% por peso (p/p) d» composição d© revés timento. Plastificantes incluem, sem limitação, ftalato de dietila, ésteres de citrato, polietileno gliçol, glicerol, 25 glicerídeos acetilados, triacetina, polipropíleno glicol, polietileno glíeal, trietil citrato, sebacato de dxbutila, âeide esteárico, estearói, estearato e oleo de·; rícino.
Comprimidos compactadas são formas de dosagem sólida preparadas por compactação da, mistura a granel das 30 formulações descritas acima. Em váx*ias modalidades, • 190/3SS >
ccmprímidos .compactados que são- pro jatadas para se dissolver na boca- incluirão wa ou mais agentes flavorizantes. Em outras modalidades, os comprimidos compactados incluirão uma película que circunda o 5 comprimido compactado final. Em algumas modalidades, o revestimento dè película pode permitir a liberação retardada dos compostos de Fórmulas (X)-(V) aqui descritos dá formulação. Em. outras modalidades, o revestimento de película ajuda na aceitação do paciente (por exemplo, 1Q revestimentos Gpadry® ou revestimento de açúcar).
Revestimentos de película que incluem Opadry® tipicamente variam de cerca de 1% até cerca de 3% do peso .do comprimido. Em outras modalidades, os comprimidos compactados incluem um ou mais excipíentes.
Uma cápsula pode ser preparada, por exemplo, por colocação da mistura a granel da formulação do composto ,descrita acima, dentro de uma cápsula. Em algumas modalidades, as formulações (suspensões e soluções não aquosas) são colocadas em um uma cápsula de gelatina macia.
Em outras modalidades, as formulações são colocadas em cápsulas de gelatina padronizadas ou em cápsulas não * gelatina, por exemplo, cápsulas -que compreendem HPMC. Em outras modalidades, a formulação é colocada em uma cápsula salpicada,, em que a cápsula pode ser deglutida inteira ou 25 pode ser aberta e o seu conteúdo salpicado nos alimentos, antes da ingestão. Em algumas modalidades, a dose terapêutica é dividida em múltiplas {por exemplo, duas, três oú quatro) cápsulas. Em algumas modalidades, toda a dose da formulàçãG é liberada em forma de uma cápsula.
0 Em várias modalidades, as partículas do composto de
Xtl/356
Formulas (I)-(v) aqui descrito e um ou mais excipientes sao ·>
misturadas secas e compactadas em uma massa, por exemplo, um comprimido, que possui uma dureza suficiente para fornecei' uma composição farmacêutica que substancialmente 5 se desintegra em menos que cerca de 30 minutos, menos que cerca de 35 minutos, menos que cerca de 40 minutos, menos que cerca dè 45. minutos, menos que cerca de 50 minutos, menos :qúé certa de 55 minutos, ou menos que cerca de 50 minutos, após administração oral, liberando, dessa forma, a 10 formulação ho fluido gastrintestínal.
Em outro aspecto, as formas de dosagem podem incluir formulações microencapsuladãsEm algumas modalidades, um ou mais outros materiais compatíveis estão presentes no material de microencapsulação, Materiais exemplares 15 incluem, sem limitação, modificadóres do pH, facilitàdores da erosão, agentes antiéspumantes, antioxidantes, agentes flavorisantes e materiais de transporte como, por exemplo, aglutinantes, agentes de suspensão, agentes de desintegração, agentes de enchimento, tensoativos, solubilizantes, estabillzantes, luhrificantes, agentes umidificantes e diluentes.
Materiais úteis para a microencapsulação aqui descrita incluem materiais compatíveis com os compostos aqui descritos, que isolam suficientemente o composto de outros 5 excipientes não compatíveis. Materiais compatíveis com os compostos aqui descritos são aqueles que retardam a liberação dos compostos de Fórmulas (I)-(V) fn vivo.
Materiais de microencapsulação exemplares úteis para retardo da liberação das formulações que incluem compostos 30 aqui descritos incluem, sem limitação, éteres de ΐ-i
192/356 , hidroxipropil celulose (WO como, por exemplo, IClucel^ ou Nisso HPC, éteres inferiores de hidroxipropil celulose substituída (L-HPC), éteres de hidrpxipropilmetilcelulose (HPMO como, por exemplo Seppifilm~LC, Pharmaooat®,
Metolose SR, Methocel®-E, Opadry YS, PrimaFlo, Benecel MP824 e Benecel MP8-43, polímeros de metilcélulcse como, por exempla, Methocel®~A, acetato estearato de hidroxipropilmetilcelulose Agoat (HF-LS, HF-LG, HF-W) e Metolose®, etilceluloses -(EC) e misturas destas, por 10 exemplo, E4E1, Ethocel®, Aqualong-EC, Swelèase, álcool polivinílico (WA), por exemplo, Qpadry AMB, hidroxietílceluloses, por exemplo, Natrosei®, cárboximetilcelúloses e sais de carboximetilcelulcses (CMC), por exemplo, Aqualong-CMC, álcool polivinílico e 15 copolxmeros de polietileno glico.l·, por exemplo, Kolliccat IR®, monoglicerídeos (Myverol) , triglicei'ideos (KLX) , polietileno glicóis, amido modificado de alimentos, polímeros acrílicos e misturas de polímeros acrílicos com. éteres d® celulose como, por exemplo, Eudragit® EPO,.
Büdragit® L30D-S5, Sudragit® FS 301), Eudragit 1100-55,
Eudrag.it® LIGO, Eudragit® S100, Eudrag.it® RD1QQ, Eudragit® ’ E1Ó0, Eudragit® 112,5, Eudragit® S12.5, .Eudragit® KE30D e Eudragít® NÉ 40D, ftalato acetato de celulose, Sepifilms como, por exemplo, misturas de HPMC e ácido esteárico, 25 ciclodextrinas, e misturas desses materiais,
Ainda em outras modalidades, plastífícantes como, por exemplo, polietileno glícôis, por exemplo, PEG 300, PSG 400, PEG 500, PEG 1450, PEG 3350 e PEG 800, ãcído esteárico, prapileno glícol, ácido olêico e triacetina são 30 incorporados no material .de microencapsulação. Em outras
193/355 modalidadeso material de microencapaulação ütíl para *
retardar a liberação das composições farmacêuticas é da USF ou da «National Formulary* (NF) , Ainda em outras modalidades , o material de mícroencapsulação é Klucel.
Ainda em outras modalidades, o material de microencapaulação é methocel
Os compostos mícroencapsuladõs aqui descritos podem sei* formulados por métodos que incluem, por exemplo, processos de atomização, processos de solvente spinning 10 disk, p;rocessos de fusão a quente, métodos de resfriamento por váporização, leito flnidificado, deposição eletrostática, extrusâo por centrifugação, separação dé suspensão rotacionai, polimerização em interface líquidogás óu sõlidó-gãs, extrusâo por pressão ou banho de 15 extração de solvénfe por pulverização. Além destas> várias técnicas químicas, por exemplo, coacervação complexa, evaporação de solvente, incompatibilidade polímeropolímero, polimerização interfacial em meios líquidos, polimerização in situ, secagem em líquidos e dessolvatação 20 em meios líquidos, também poderiam ser usadas. Além disso, outros métodos, tais como compactação com cilindro,
- extrusâo/esferonização, coacervação ou revestimento de nanopártícula, também podem ser usados.
Ainda em outras modalidades, pos efervescentes também 25 são preparados de acordo com a presente revelação. sais efervescentes foram usados para dispersar remédios em água para administração oral. Sais .efervescentes são grânulos ou pós não refinados que contêm um agente medicinal em uma mistura seca, normalmente compostos por bicarbonate de 30 sódiò, ácido cítrica e/ou ácido tartárico. Quando esses
194/3§6 sais slo adicionadas a água, os ácidos e a base reagem para liberar gás de dióxido de carbono, causando, dessa forma, efervescência. Exemplos de sais efervescentes incluem, por exemplo, os seguintes ingredientes; bicarbonate. de sódio ou uma mistura de bicarbonate· de sódio e carbonato de sódio, ácido cítrico e/ou ácido tartãrico. Qualquer combinação ácido-base que resulte na liberação de dióxido de carbono pode ser usada no lugar da combinação de bicarbonate de sódio e ácidos Cítrico e tartãrico, desde que os ingredientes sejam adequados ao uso farmacêutica e resultem em u® pH de cerca de 6,0 ou mais.
Em outras modalidades, as formulações aqui descritas, que incluem um composto aqui descrito, são dispefsuee sólidas. Métodos de produção dessas dispersões sólidas incluem, sem limitação, por exemplo, as Patentes U.S. NÔSi
4.343.789, 5.340.591, 5.456.923, 5.700,485, 5.723/269 é
Publicação de Patente U.S. N* 2004/0013734. Ainda em outras mqdalidades, as formulações aqui descritas são soluções sólidas. As soluções sólidas incorporam uma substância junto com o agente ativo e outros excipientes, de tál forma que o aquecimento da mistura resulte em dissolução do
- fármaco,: e a composição resultante é então resfriada para fornecer uma mistura sólida que pode ser posteríormente formulada ou adicionada diretamente a uma cápsula ou 25 compactada ea um 'comprimido. Métodos de produção dessas soluções sólidas incluem, sem limitação, por exempla, as Patentes U.S. Nass 4.151.273, 5.281.420 e 6.083.518.
As formas farmacêuticas de dosagem oral sólida que incluam formulações aqui descritas, que incluem compostos aqui descritos, podem ainda ser formuladas para fornecer
195/356 uma liberação controlada do composto de Fórmulas (l)-(vj . Liberação controlada refere-se à liberação dos .compostos aqui descritos a partir de uma forma de dosagem na qual estão incorpárados de acordo com um perfil desejado ao 5 longo de um período de tempo prolongado. Perfis de liberação controlada incluem, por exemplo, perfis de liberação sustentada, liberação prolongada, liberação pulsátil e liberação retardada. Em contraste. com composições de liberação imediata, composições de liberação controlada permitem a liberação de um agente a ura indivíduo ao longo de um. período de tempo estendido de acordo com um perfil predeterminado. Essas taxas de liberação podem fornecer níveis terapeuticamente eficazes de agente por um período de tempo prolongado et dessa forma, fornecer um período mais longo de resposta farmacolõgica, minimizando, ao mesmo tempo, os efeitos colaterais, quando comparadas com formas de dosagem de liberação rápida convencionais. Esses períodos mais longos de resposta fornecem muitos benefícios inerentes que não são obtidos com as preparações
2C de liberação imediata, de curta ação, correspondentes.
Em algumas modalidades, as formas de dosagem sólida aqui descritas podem ser formuladas como formas de dosagem oral de liberação retardada com revestimento entérico, ou seja, uma forma, de dosagem oral de uma composição farmacêutica, como aqui descrito, que utiliza um revestimento entérico para afetar a liberação no intestino delgado do trato gastrintéstínal, a forma de dosagem- com revestimento entérico pode ser um comprimido/molde compactado ou moldado ou extruído {revestido ou não revestido) contendo grânulos, pó, péletes, glóbulos ou
196/356 partídulas d© ingrediente ativo e/ou de outros componentes da composição, os quais eles próprios são revestidos ou não revestidos. A forma de dosagem oral com rwestí mento entêrico também pode ser urna cápsula (revestida ou não 5 revestida) contendo pêlstes, glóbulos ou grânulos d© veidul© ou da composição sólida, os quais eles próprios são revestidos ou não revestidos.
O termo liberação retardada( como aqui usado, refere -se à liberação de modo que a liberação possa ser 10 obtida ém alguma localização geralmente previsível nó trato gastrintestinal mais distai aquela que tería sido obtida caso na© houvesse alterações de liberação retardada. Em algumas modalidades, o método para retardo da liberação consiste em um revestimento. Quaisquer revestimentos devem ser apliçados em: uma espessura suficiente, de tal forma que tod© o revestimento não se dissolva nos fluidos gastrintestinais am pH abaixo de cerca de s, mas que não se
dissolva em pH en s torno de 5 ou mais. Revest; Lmentos podem
sex' feitos de;
20 Foiímeros « iorxli coe. 0 desempenho d te polímeros
acrílicos (prims ir lamente sua sclubilidade em fluidos
- biológ icos) pode variar < zom. base no grau e tipo de
s ubs t it u i ç ao. Ex* amplos de polímeros acrílíc os adequados
incluem eopolímex •os de ãcií io metacrílicQ e c< spolímeros de
25 amônio metacrilat o. A série ! Eudragít E, R-, S, RL, RS e MB
(Rohm Pharma) est á disponív! el como solubilizad a em solvente
orgânico, diapers íão aquosa ou pós secos. A ãrie Eudragít
RL, NE e RS são j Insolúveis no trato gastrintej stínaX, mas é
permeável e é usada primarlamente para direcionamento ao cólon. A série E de Eudragít se dissolve no estômago. A
197/35« *
P >.
r série Eudragit L-, L-30D. e S são insolúveis no estômago e se dissolvem no intestino;
Derivados de celulose. Exemplos de derivados de celulose adequados são: etil celulose; misturas de reação dé acetato ésteres parciais de celulose com anidrido ftãlxco. Q desempenho pode variar com base tio grau e tipo de substituiçãò. Acetato ftalato de celulose (CAP) se dissolve em pH > 6. Aquateric (FMC) é um. sistema com base aquosa e é um. pseudolátex de CAP atomizado com partículas <
1 pm. Outros componentes em Aquatexuc podem incluir pluxonicos, Tweens e monoglicerídeos acetilados. Outros derivados de celulose adequados incluem: acetato trimelitato de celulose (Eastman) ; raetilcelulose (Pharmacoat, Methocel); ftalato de hidroxipropilmetilcelulpse {HPMCP); succinato de híâroxipropilmetxlcelulose (HFMCS); e acetato succinato de hídrcxxpropilmetilcelulose (por exemplo, AQOAT (Shin Etsu)). Q desempenho pode variar com base no grau e tipo de * substituição. Por exemplo, HPMÇP, por exemplo, graus de HP'S 0 50, HP-55, HP-55S, HP-SSF, são adequados. 0 desempenho pode, variar com toas© no grau e tipo de substituição. >or
- exemplo,. graus adequados de acetato succinato de hidxOxipropilmetilcelulose incluem., sem limitação, AS-U3 (LF), que sê dissolve em pH 5 . AS-ífô (MF), que se dissolve em pH 5,5, e AS-HG (HF) , que se dissolve em pH maior. Esses polímeros são oferecidos como grânulos, Ou como pós finos para dispersões aguosas;
Acetato £ tala to de polivínlla (PVAP)... WAF se dissolve em pH > 5, e é bem manos permeável ab vapor de água e - 30 fluidos gástricos.
198/356 * Em algumas modalidades., o revestimento pode conter, e normalmente contém, um piastifleante e possivelmente .outros excipientes de revestimento como, por exemplo, corantes., talco e/ou estearato de magnésio, Plastificantes adequados incluém citrato de trietila (Citroflex 2), triacetína (triacetate de glicerila), acetil citrato de trietila (Citroflec A2j , Carbowax 400 (polietileno glicol 400}, ftalato de dietila, citrato de tributila, monoglicerídeos acet.ilados, glicerol, ésteres de ácido graxo, propileno glicol e ftalato de díbutila. Em particular, polímeros acrílicos carboxílicos aniônícos normalmente conterão 1025% por peso de um plastificante, especialmente ftalato de dibutíla, políétileno glicol, citrato de trietila e triacetina. Técnicas convencionais de revestimento como, 15 por exemplo, revestimente por pulverização ou coletivo, são empregadas para aplicação de revestimentos. Ά espessura do revestimentó deve ser suficiente para assegurar que a forma de dosagem, oral peimianeça intacta até que o local desejado de liberação tópica no trato gastríntesfinal seja alcançado.
Corantes, detackifzera, tensoativô®, agentes anti espuma, lubrificantes (por exemplo, cera de carnaúba ou PEG) podem ser adicionados aos revestimentos, além de plastificantes, para solubilazai ou dispersar o material de 25 revestimento, e para aumentar o desempenho do revestimento e do produto revestido.
Em outras modalidades, as formulações aqui descritas, que incluem um composto de Fórmulas (X)-(V) aqui descrito, são liberadas usando uma forma de dosagem pulsátíl. Uma 30 forma de dosagem pulsãtil é capaz de fornecer um ou mais
199/358 * pulsos de liberação imediata em pontos do tempo, predeterminados após um intervalo de tempo controlado ou em locais específicos. Formas de dosagem pulsáúil podem s-er administradas usando diversas formulações pulsãteis que incluem, sem limitação, aquelas descritas nas Patentes U.S, lh;s 5.011,692, 5.017,381, 5.229.135, 5,840.329, 4.871.549, 5.260.068, '5.260.069, 5.508.040, 5.567.441 e 5,8-37.284.
Muitos outros tipos de sistemas de liberação controlada são adequados para uso com as formulações aqui descritas, Exemplos desses sistemas de liberação incluem, por exemplo, sistemas à base dé polímero, por exemplo, ãçido polilático e poliglicõlico, polianídridos e pólicaprolactona; matrizes porosas, sistemas que não se baseiam em polímero que são lipídeos, incluindo ésterôis, por exemplo, colesterol, êsterés e ácidos graxos dé colesterol, ou gorduras neutras, por exemplo, mono-·, d.i~ e triglicer.ideps; sistemas de liberação de hidrogel; sistemas de silastic; sistemas ã base de psptídeos; revestimentos de cera, formas de dosagem bioerosíveis, comprimidos compactados com o uso de aglutinantes convencionais, e semelhantes. Veja, por exemplo, Inberman e eols., • Pharmaceutical Dosage Forms'1', 2* Edição, Vol. 1, pp. 209214 (19901 ; Singh e çols.; “Enciclopédia of Pharmaceutical Technology*, 2s Edição, pp. 751-753 (2002); Patentes Ü.S.
4,327.725, 4.624.848, 4.968.509, 5.461.-140, 5.456.823,
5.516.527, 5.622.-72-1, 5.686.105, 5.700.-410, S. 977.175,
6.465.014 è 6-.932.983.
Bm algumas modalidades, são fornecidas formulações fairmacêuticas que incluem partículas dos compostos aqui descritos, por exemplo, compostos de Fórmulas (I):-(v), e
200/356 *
» pelo menos um agente dispers-ante ou agente de suspensão para administração oral a um indivíduo. As -formulações podem ser um pó e/ou grânulos para suspensão e, mediante.mistura com âgua, é. obtida uma suspensão substancialmente uniforme.
Formas de dosagem de formulação líquida para administração oral .podem ser suspensões aquosas selecionadas- do grupo que incluí., sem limitação, dispersões .aquósas orais-,, emulsões, soluções, elixires,, géis e xaropes farmaceuticamente aceitáveis. Veja, por .exemplo, Singh e cole. ttEnciclopedia of Pharmaceutical Teahhology , 2*
Edição, pp, 734-757 (2902).
As suspensões -e dispersões aquosas aqui descritas podem permanecer em um estado homogêneo, como definido em 15 The USP Pharmacists' Pharmacopeia {edição de 2005, capitulo 90S) , por pelo menos 4 horas. A homogeneidade déve ser determinada por um método de coleta de amostras consistente com relação à determinação da homogeneidade da composição inteira. Em uma modalidade, uma su-spensão aquosa pode ser ressuspensa em- uma suspensão homogênea por agitação física que dure menos de 1 minuto. Em outra
- modalidade, uma suspensão aquosa pode ser ressuspensa em uma suspensão homogênea por agitação física que dure menos de 45 segundos. Ainda em outra modalidade, uma suspensão aquosa pode ser ressuspensa .em uma. suspensão homogênea por agitação física que dure menos de 30 segundos. Ainda em outra- modalidade, nenhuma agitação é necessária para, manter uma dispersão aquosa homogênea.
as composições farmacêuticas aqui, -descritas podem , 3 0 incluir agentes adoçantes como, por exemplo, sem limitação,
201/356 *ί· * ’ . xarope de acacia, acessulfame K, alltame, anis, maçã, aspartame, banana, creme da Bavária, baga, groselha negra, doce de manteiga, citrato de cálcio, cânfora, caramelo, cereja, creme de cereja, chocolate, canela, chiclete, cítricos, ponche de cítricos, creme de cítricos, algodão doce, cacau, cola, cereja refrescante, cítrico refrescante, ciclamato, cilamato, dextrose, eucalipto, eugenol, frutose, ponche de frutas, gengibre, glioirritinato, xarope de áleaçus (licoricej , uva, toranja, mel, isomalte, limão·, lô lima, creme de limão, glioirrizinato monoamônio (MagnaSweeet®) , maltol, manitol, bordo, marshmallow, mentol, creme de menta, bagos mistos, neohesperidina DC, neotame, laranja., pêra, pêssego, hortelã, creme de hortelã, pô de Prosweet<& f framboesa, cerveja preta, rum, sacarina,
IS safrole, sorbitol, menta verde, creme de menta verde, morango, creme de morango, estêvia, sucralose, sacarose, sacaiina sódica, sacarina, aspartame, acessulfame potássico, manitol> talina, sucralose, sorbitol, creme suíço, tagatose, tangerina, taumatína, tutti-frutti, 20 baunilha, nozes, melão, cereja silvestre, Wintergreen, xilitol, ou qualquer combinação desses ingredientes
- flavorizantes, por exemplo, anis: mentol, cereja-anis canela-laranj a, cere ja~canela, chocolate-menta, mel-1imão, limão-lima, limão-menta, mentol-euca'ipto, laranja-creme.
baunilha-menta, e misturas destes.
Em algumas modalidades, as formulações farmacêuticas aqui descritas podem ser sistemas de liberação de fármacos aúto-emulsif icantes (SEDDS) < Emulsões são dispersões de uma fase imiscível em outra, normalmente na forma de goticulas .
Geralmente, emulsões são criadas por dispersão mecânica
202/356 vigorosa, SEDDS, ao contrário de emulsões ou microemulsoes, formam espontaneamente emulsões quando adicionados a um excesso de água será nenhuma dispersão mecânica ou agitação externa. Uma vantagem de SEDDE é qu® só á necessária uma 5 agitação suave para distribuir as gotículas por toda a solução, Adíçíonalmente, água ou a fase aquosa pode ser adicionada imedíatamente antes da administração, o que assegura estabilidade de um ingrediente ativo instável ou hidrofõbico. Dessa forma, os SEBDS fornecem um sistema de 10 liberação eficaz para liberação oral e parenteral de ingredientes ativos Mdrófobíeos, SEDDS podem fornecer aumentos da bíodisponibilidade de ingredientes ativos Mdrofõbiços. Métodos de produção de formas de dosagera auto-emulsifleantes incluem, sem limitação, por exemplo, 15 Patentes U.S·, IT8 5.S58.401, 6.657.048 e 6.560.563.
Rã uma superposição entre os aditivos listados ádiráa usados nas dispersões ou suspensões aquosas aqui descritas, já que certo aditivo é frequentemente çlassificadò diferentomente por diferentes profissionais no campo, ou é 20 uomumente usado para qualquer uma entre várias funções.
Dessa forma, os aditivos listados acima devem ser
- considerados camo meramente exemplares, e não limitantes, dos tipos de aditivos que podem ser incluídos em formulações aqui descritas.
Bxcipientes potenciais para formulações xntranasai-s incluem, por exemplo, as Patentes U.S. 4,476.116,
5,116.817 e 5.391.452. Soluções de formulações em solução salina, que empregam álcool benzíllco ou outras conservantes adequados, fiuorcarbonos, e/ou outros agentes 30 solúbilizantes ou díspersantes« Veja, por exemplo, Ansel,
H.C. é cols., *Pharmaceutical Dosage Forms and Drug
Delivery Systems, 6s Edição (1995). De preferência, essas composições e formulações, são preparadas com ingredientes farmaceuticamente aceitáveis atõxicos adequados. A escolha 5 de veículos adequados é altamente dependente da natureza exata da forma de dosagem nasal desejada, por exemplo, soluções, suspensões, pomadas ou géis. As formas de dosagem nasal geralmente contêm grandes quantidades de água, além do ingrediente ativo. Quantidades menores de outros 10 ingredientes, por exemplo, a justadores do pH, emulsificantes ou agentes diapersantes, conservantes, tensoativos, agent e s de gelificação ou de tamponamento e outros agentes estabilizãntes e solubilizantes, também podem estar presentee. Dé preferência, a forma de dosagem 15 nasal deve ser isotônica com as secreções nasais.
Para administração por inalação, os compostos aqui descritos podem estar em uma forma como um aerossol, Uma névoa ou um pó. As composições farmacêuticas aqui descritas são conveníentemente liberadas na forma de uma apresentação 20 em spray de aerossol por embalagens pressurizadas ou por um nebulizador, com o uso de um propelente adequado, por • exemplo, diclorodifluorRietano, triclorofluormetano, díclorotetrafluoretanc, dióxido de carbono ou outro gás adequado. No caso de um aerossol pressurizado, a unidade de 25 dosagem pode ser determinada .pôr fornecimento de uma válvula para liberar uma quantidade metrificada. Podem ser formuladas cápsulas e cartuchos, por exemplo, de. gelatina para uso em um inalador ou insuflador contendo uma mistura em pu do composto aqui descrito e uma base de pó adequada 30 como, por exemplo, lactose ou amido.
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Fca-mulações bucais que incluem compostos aqui descritos podem ser administradas usando diversas formulações que incluem, sem limitação, as Patentcs Ç.S. N*® 4.229.447, 4.596.795, 4.755,3 86 e 5.739.136. Além disso., as formas de dosagem bucal aqui descritas podem ainda incluir um veiculo polimérico bioerosível (hidrolisável) que também serve para aderir a forma de dosagem à bucal mucosa. A forma de dosagem bucal é fabricada de modo a erodir gradualmente ao longo de um 10 período de tempo predeterminado, em que a liberação do composto é fornecida basicamente por todo o tempo. A liberação bucal de fármacos evita as desvantagens encontradas com a administração oral de fârmacos, por exemplo, absorção lenta, degradação dO agente ativo por 15 fluidos presentes no trato gastrintestinal e/ou rnativação na primeira passagem no fígado. Com relação ao veículo polimérico bioerosível (hidrolisavel), praticamente. qualquer veículo desse tipo pode ser usado, desde que o perfil de liberação· de fáxmiaco desejado não seja comprometido, e o veiculo seja compatível com os compostos aqui descritos, e quaisquer outros componentes que possam estar presentes na unidade de dosagem bucal. Geralmente, o veículo polimérico compreende polímeros hidrofíliços (hidrossolúveis e que incham na água) que aderem à superfície -úmida da mucosa bucal. .Exemplos de veículos póliméricos úteis nesta especificação incluem polímeros e copolíméros de ácido acrílico, por exemplo, aqueles conhecidos como ’carbôrnérOs* (Carbopol®, que pode -ser obtido por B.F. Goodrith,·· é um polímero desse tipo) . Outros componentes que também podem .ser incorporados nas formas de
205/358 » . dosagem bucal aqui descritas incluam, sem limitação, desí ntegr ante s, diluent.es, aglutinantes, lubrificantes,, flavorisantes, corantes, conservantes, e semelhantes. Para administração butal ou sublingual, as composições podem assumir a fôrma de comprimidos, losangos ou géis formulados de forma convencional.
As formulações trausdérmicas aqui descritas podem ser administradas com o uso de diversos dispositivos que incluem, sem limitação, as Patentes U.S. 3.598.122, 10 .3 „5.9:8.123, 3,710.795, 3.731.683, 3.742.951, 3,814.097,
3.921.638, 3.972,995, 3.993.072, 3.993.073, 3.996.934,
4.031.894, 4.08'0.084, 4.069.307, 4.077.407, 4,201.211,
4.230.105, 4.292.299, 4#292.303, 5.336.168, 5.565.378,
5.837.280, 5.869.090, 8.923.983, 6.929,801 e 6.946.144,
As formas de dosagem transdérmíca aqui descritas podemincorporar alguns excipientes farmaceuticamente aceitáveis que são convencionais na técnica. Em uma modalidade, as formulações transdêrmicas aqui descritas incluem pelo menos três componentes: (1) uma formulação de um composto de
Fórmulas (2) um intensifícador de penetração; e (3) um adjuvant© aquoso. Além disso, farmulações transdérmicas podem incluir componentes adicionais como, por exemplo, sem limitação, agentes de gelificação, bases de cremes e pomada, e semelhantes» Em algumas modalidades, 25 a foxmiulação transdérmica pode ainda incluir um material de revestimento trançado ©u não trançado para aumentar a absorção e evitar a remoção da formulação transdérmica da pele. Em outras modalidades, as formulações transdêrmicas aqui descritas podem manter um estado saturado ou 30 super saturado para promover a difusão tia pele.
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Fomul aç õ e s ade quada s à admini s tração transdérmica de compostos aqui desç podem empregar dispositivos de
1iberação transdérmica emplastros de liberação transdérmíca, e podem ser emulsões lippfilicas ou tamponadas, soluções aqwsasp dissolvidas e/ou dispersas em um polímero ou um adesivo, construídos para liberação emplastros podem ser contínua, pulsátil cu sob demanda de agentes farmacêuticos. Além disso, a liberação srmica dos compostos aqui descritos pode ser obtida por meio de emplastros iontoforéticos seme1 han t es.
Adicionalmente, os emplastros transdérmicos podem fornecer liberação controlada dós compostos aqui descritos, A taxa de absorção pode ser reduzida pela utilização de membranas de controle da taxa de liberação ©u por' captura do composto is dentro de uma matriz de polímero
Ou gel, Invèrsãmènte podem ser usados intensifioadores da absorção para aumentar a absorção . Um intensif loader da absorção ou veí culo pode incluir solventes, absorvívels farmaceuticamente ácéitâvsiç para ajudar na passagem através da /pele. Por exemplo, 20 dispositivos transdéxmicos estão na forma de uma bandagèm que compreende um membro de revestimento, um reservatório que contém o composto opcionalmente com veículos, Qpcionalmente uma barreira de controle da taxa dé liberação para liberar o composto à pele do hospedeiro em uma caza 2S controlada e predeterminada ao longo de um período de tempo prolongado, e meios para fixai* o dispositivo à pele. Formulações adequadas para injeção intramuscular, subcutânea ou íntravenosa podem incluir soluções, dispersões, suspensões ou emulsões aguosas ou não aquosas 30 estéreis físiologicamente aceitáveis, e pós estéreis para
207/356 * reconstituição em soluções ou dispersões injetaveie estareis. Exemplos de transportadores, diluentes, scXwntep· ou veículos aquosos ou não aquosos adequados- incluem âgua, étánól, pòlióis (propilenoglicol, polietilen©glicol, glicérol, cromoforo, e semelhantes), misturas adequadas destes, óleos vegetais (por exemplo, azeite de oliva) e êsteres orgânicos injetãvais, por exemplo, oleato de etila. A fluidez adequada pode ser mantida, por exemplo, pelo uso de um re ws t í mento edrno, por exemplo, lecitina, pela manutenção do tamanho de partícula necessário, no caso de dispèrsdes, e pelo uso de tensoativos. Formulações adequadas à injeção subeutânea também podem conter aditivos corno, por exemplo, agentes Conservantes, umidificantes, emulsificantes e de dispensa. .-A prevenção do crescimento de microorganismos pode ser assegurada por vários agentes antíbacterianos e antífúngicos, por exemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido òõrbico, e semelhantes. Também pode ser desejável incluir agentes isotônicos, por exemplo, açúcares, cloreto de sódio, e semelhantes. A absorção ,2Q prolongada da forma farmacêutica injetável pode ser obtida pelo uso de agentes de retardo da absorção, por exemplo, monoestearato de alumínio s gelatina.
Para inj eções intrawnosas, os compostos aqui descritos podem ser formulados em soluções aquosas, '25 preferivelmente em tampões fisiologicamente compatíveis como, por exemplo, solução de Bank, solução de Ringer ou tampão de solução salina fxsiolõgica. Para administração transmucosa, penetrantes apropriados para a barreira a ser permeada são usados na formulação. Esses penetranteç são 30 geralmente reconhecidos no campo. Para outras injeções
208/356 parenteraís, foxmulações apropriadas podam incluir soluções aquosas ou não aquosas, preferivelmente com tampões ou êxcípientes fisioiogioamente compatíveis. Esses excípientes sao geralmenté. reconliecidos no campo.
Injeções parenterais podem envolver injeção em bolo ou infusão contínua. Formulações para injeção podem ser apresentadas em forma de dosagem unitária, por exemplo, em ampolas ou em recipientes multidoses, com um. conservante adicionado. A composição farmacêutica aqui descrita pode estar em uma forma adequada à injeção parenteral como suspensões, soluções ou emulsões estéreis em veículos oleosos ou aquosos, e pode conter agentes de formulação como, por exemplo, agentes de suspensão, estabilicantes e/ou dispersant.es. Formulações farmacêuticas para administração parenteral incluem soluções aquosas dos compostos ativos em forma hidrossolúvel, Adicionalmente, suspensões dos compostos ativos podem ser preparadas como suspensões oleosas para injeção apropriadas. Solventes ou veículos lipofxlicos adequados incluem óleos graxos como, por exemplo, óleo de gergelim, ou ésteres sintéticos de ácido graxo, por exemplo, uleato de atila ou triglicerídeos, ou lipossomos. Suspensões aquosas para injeção podem conter substâncias que aumentam a viscosidade da suspensão, por exemplo, carboximetll.celulo.se sódica, sorbitol ou dextrana. Opcionalmente, a suspensão também pode contér estabilizantes adequados ou agentes que aumentam a solubilidade dos compostos para permitir a preparação de soluções altamente concentradas. Alteiniativamente, o ingrediente ativo pode estar em forma de pó para reconstituição com um veiculo adequado, por
209/356 * exempla, agua est-êril sem pirogênio, .antes do uso.
Em certas modalidades, podem ser empregados sistemas de liberação para compostos farmacêuticos como, por exemplo, lipossomos e emulsões. Em certas modalidades, as
Cômpasições aqui fornecidas também incluem um polímero mucoadesiv© selecionado entre, por exemplo, carboximetileelulose, carbômero (polímero de ácido acrílico), poli(mètilmetacrilato), paliacrilamida, policarbof11, copolímero. de ãoido acrílíco/butil acrilato, alginate de sõdio e déxtranà.
Em algumas modalidades, OS compastòs aqui descritos podem ser administrados topicamenté & são formulados: em diversas composições topicamente administráreis, por exemplo, soluções, suspensões, loções, géis, pastas, tiras 15 ©om medicação, bálsamos, cremes ou pomadas. Esses compostos farmacêuticos podem conter solubilizantes, estahilizantes, agentes de aumento da toniçidade, tampões e eonservantes..
Os compostos aqui descritos também pedem ser formulados em composições retais como, por exemplo, enemas, 2t gêiS: retais, espumas retais, aerossóis retais, supositdrios, supositôrios em geléia ou enemas de retenção,
- que contêm bases de supositõrio convencionais como, por exemplo, manteiga de cacau ou outros glicerídeos, além de polímeros sintéticos como, par exemplo, palivinilpirralidona, PEG, e semelhantes. Em formas de supositõrio das composições, primeiro é derretida uma cera com baixo ponto de fusão como, por exemplo, sem limitação, uma mistura de glicerideos de ácido graxo, opcionalmente em combinação com manteiga de cacau.
, 30 Geralmente, um agente, por exemplo, um composto de
210/355
Formulas (I).* (vj , é administrado em uma quantidade eficaz para melhora ou prevenção do desenvolvimento de sintomas da doença ou distúrbio (ou seja, uma quantidade terapeuticamente eficaz). Dessa forma, uma quantidade 5 teràpéuticamente eficaz pode ser uma quantidade que é capas de evitar ou reverter pelo menos parcialmsnte uma doença ou distúrbio. A dose necessária para obter uma quantidade eficaz pode variar, dependendo do agente, da formulação, da doença ou distúrbio, e do indivíduo que recebe a administração do agente.
A determinação de quantidades eficazes também pode envolver ensaios ín vítiK> nos quais doses variáveis de agente são administradas às células em cultura e a concentração de agente eficaz para melhorar alguns ou todos 15 os sintomas é determinada a fim de calcular a concentração necessária in vivo. Quantidades eficazes t^mbé^ podem ser baseadas em estudos animais in vivo.
Um agente pode ser administrado antes, concomitantamente e subsequente ao aparecimento de sintomas 20 de uma doença ou distúrbio. Em algumas modalidades, um agente é administrado a um indivíduo com uma história • familiar da doença ou distúrbio, ou que possui um fenótípo que pode indicar uma predisposição a uma doença ou distúrbio, ou que possuí um genõtipo que predispõe q 25 indivíduo a doença ou distúrbio, .0 sistema de libesração particular usado pode depender' de diversos fatores, incluindo, por exemplo, o alvo visado ç a via de administração, por exemplo, local ou sistêmica. Alvos pata liberação podem ser células específicas que 30 estão causando ou contribuindo pai'a uma doença ou
211/355 distúrbio, incluindo, por exemplo, células que possuem cálcio intracelular alterado ou desregulaçlo do cálcio ou homeostasia do cálcio alterada., e células que não possuem cálcio intracelular alterado, mas que podem ter alguma 5 alteração, defeito ou deficiência que pode ser, pelo menos em parte, compensada, .contraposta,· revertida ou aliviada ou eliminada por alteração do cálcio intracelular da célula. Células particulares incluem, por exemplo, células- imunes (por exemplo, linfócitos, células T, células B, 10 leucõcitos), fibroblastos (ou células derivadas de uta fibroblasto), células epidérmicas, dérmicas ou da pele (por exemplo, queratinõcitos), células sangüíneas, células renais (por exemplo, células mesangiais), células musculares (por exemplo, uma célula de músculo liso como, 15 por exemplo, uma célula de músculo liso da via aérea (da traquéia ou brônquio)} e células exõcrinas ou secretoras (por exemplo, salivares, incluindo· células acinares da parótida e da glândula submandibular}< Por exemplo, uma célula-alvo pode ser células residentes ou infiltrantes nos 20 pulmões ou vias aéreas que contribuem para uma enfermidade ou doença asmática, células residentes ou ínfiltrantes no sistema nervoso que contribuem para uma doença ou distúrbio neurológico, neurodegenerativo ou desmiélinizants, células residentes ou infiltrantes envolvidas na rejeição de um
25. enxerto de rim, células enxertadas que, quando ativadas, levam à doença enxerto versus hospedeiro, células residentes ou infiltrantes envolvidas èm rejeição de um enxerto de rim, células residentes ou infiltrantes, cuja ativação contribui para inflamação, por exemplo, em 30 artrite, células residentes ou infiltrantes iio rim' ou
212/356 sistema renal (por exemplo, células mesangiais) envolvidas em neuropatia e glomerulônefrite, e células residentes ou infiltrantes em glândulas exocrinas (por exemplo, glândulas salivares e lacrimais) envolvidas em distúrbios autoimunes (por exemplo, doença de Sjogren). A administração de um agente pode ser direcionada a um ou mais tipos de célula ou subconjuntos de um tipo de célula por métodos reconhecidos no campo. Por exemplo, um agente pode ser acoplado a um anticorpo, ligante para um receptor da superfície celular 1δ ou uma toxina, ou pode estar contido em uma partícula que ê seletivamente internalizada nas células, por exemplo, lipossomos ou um vírus no qual o receptor viral se liga especificamente a certo tipo de célula, ou uma partícula viral desprovida do ácido nucléico viral, ou pode ser 15 administrado localmente.
Exemplos de métodos de dosagem e regimes de tratamento
Os compostos aqui descritos podem ser usados na preparação de medicamentos para a modulação do cálcio intracelular, ou para o tratamento de doenças ou condições 20 que se beneficiariam, pelo menus em parte, da modulação do cálcio intracelular. .Além· disso, um método para o ' tratamento de qualquer uma das doenças ou condições aqui descritas em um indivíduo que necessita desse tratamento envolve a administração de composições farmacêuticas que 25 contêm pelo menos um composto aqui descrito, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco farmaceuticamente aceitável ou solvato farmaceuticamente aceitável deste, em quantidades terapeuticamente eficazes ao referida indivíduo,
As composições que contêm o(s) composto(s) aqui
213/356 descrito(sj podem ser administradas para tratamentos profilátiços e/ou terapêuticos, Em aplicações terapêuticas, as composições são administradas a um paciente que já sofre de uma doença ou condição, em uma quantidade suficiente 5 para curar ou pelo menos interromper' parçialmente -os sintomas da doença ou condição. Quantidades eficazes para isso dependerão da gravidade e da evolução da doença ou çdndíção, de terapia prévia, do estado de saúde do paciente, do peso e da resposta aos fármacos e da avaliação 10 do medico assistente.
Em aplicações profilãfcicas, as composições que contêm os compostos aqui descritos são administradas a um paciente suscetível ou de algum modo em risco de uma doença, distúrbio ou condição em particular, üma quantidade desse 15 tipo é definida como sendo uma quantldáde ôu dose profilaticamente eficaz*♦ Nesse uso, as quantidades precisas também dependem do estado de saúde e peso do paciente, e semelhantes . Quando usadas em um paciente, quantidades eficazes para esse uso dependerão da gràvidade 20 e da evolução da doença, distúrbio ou condição, de terapia prévia, do estado de saúde do paciente e da resposta aos , fármacos. e da avaliação do médico assistente.
Nos casos nos quais a condição do paciente não melhora, a critério do médico, a administração dos 25 compostos pode ser feita cronicamente, ou seja, por um periodo de tempo prolongado, incluindo por toda a duração da vida do paciente, a fim de melhorar ou de algum outro modo controlar ou limitar os sintomas da doença ou condição do paciente.
Nos casos nos quais o estado do paciente não melhora,
214/356
Ik
a critério do médico, a administra ação dos c compostos pode
ser feita continuamente; a 1terna .t 1 vamente, a dose de
fármaco que está sendo adí tinistrada pode ser
t empora r i ament e reduzida ou temporariamente suspensa por
5 certo per iodo de tempo (ou se; a, um< a féria d o fármaco) . A
duração da fés ria do fármaco pode 7 'ariar erz re 2 dias e 1.
ano, incluindo, apenas como exemp lo, 2 dia .s, 3 dias
dias, 5 dias, 5 dias, 7 dias, 1.0 di« as, 12 dia s, 15 dias, 20
dias, 28 dias , 35 dias, 50 dias, 70 dias, 100 dias, .12 0
IO dias, 150 dias , 180 dias, 200 dias, 250 dias, '280' dias, 3 00
dias, 320 dias, 350 dias ou 365 c lias . A redução de d .o se
durante a féria do fármaco p ode ser de cer c a de 10% até
cerca de 100% , incluindo, aj >enas como exem pio, cerca de
10%, cerca de 15%, cerca de 20%, cerca de 25%, cerca de
15 3 0%, cerca de 35%, cerca de 40%, cerca de 45%, cerca de
50%, cerca de 55%, cerca de 60%, cerca de 65%, cerca de
70%, cerca de 75%, cerca de 8 0%, cerca de 85%, cerca de
9Q%, cerca de 95% ou cerca de 100%.
Apôs ter ocorrido melhora das condições do paciente,
20 uma dose de manutenção é admini strada, s e necessário.
Subsequenteme n te, a dosag em c >u a frequência de
administração. ou ambas, pode ser reduzida. em função dos
sintomas, até um. nível no qual a melhora da doença, distúrbio ou condição é retida. Os pacientes, no entanto, podem necessitar dè tratamento intermitente de longo prazo mediante qualquer recorrência dos sintomas.
À quantidade de certo agente que corresponderá a uma quantidadè desse tipo irá variar, dependendo de fatores como um composto, doença óu condição em particular e sua - 30 gravidade, a identidade (por exemplo, peso) do indivíduo ou
215/356 hospedeiro que necessita do tratamento, mas, no entanto, pode ser determinada de uma forma reconhecida no campo de .acordo com as circunstâncias especificas que circundam o caso, incluindo, por exemplo, o agente específico que está 5 sendo administrado, a via- de administração, a condição sendo tratada, e o indivíduo ou hospedeiro que está sendo tratado. Em geral, no entanto, as doses empregadas para tratamento de um humano adulto estarão tipicamente na faixa de cerca de Ò, 02 a cerca de 5.000 mg por dia, em algumas 10 modalidades, cerca de 1 a cerca de 1.500 mg por dia. A- dose desejada pode ser apresentada convenientemente em uma única dose ou como doses divididas administradas símultaneamenté (ou ao longo de um 'período de tempo curto) ou em intervalos adequados, por exemplo, co® duas, três, quatro ou mais 15 subdoses por dia.
A composição farmacêutica àqul descrità pode estar em formas de dosagem unitária adequadas â administração única de dosagens precisas, W forma de dosagem unitária, a formulação é dividida em doses unitárias contendo 20 quantidades apropriadas' de um ou mais compostos, A dosagem unitária pode estar na forma de uma embalagem contendo .. quantidades distintas da f omul ação. Exemplos não limitantes são comprimidos ou cápsulas embaladas, e pós em frascos ou ampolas. Composições de suspensão aquosa podem 25 ser embaladas em recipientes de dose única não reutilizável. Alternativamente> recipientes reutilizáveís de doses múltiplas podem ser usados, quando então é típico incluir um conservante- na composição. Apenas como exemplo, as formulações para injeção parenteral podem ser 30 apresentadas em forma de dosagem unitária, que incluem, sem
216/356 limitação, ampolas, ou em recipientes multidoses, com um c ones rvant e adi c i onado.
As dosagens diárias apropriadas para os compostos aqui descritos são de cerca de 0,01 mg/kg até cerca de 20 mg/kg<
Em uma modalidade, as dosagens diárias são de cerca de 0,1 mg/kg até cerca de 10- mg/kg. Uma dosagem diária indicada nó mamífero maior, incluindo, sem limitação, humanos, está na faixa de cerca de 0,5 mg até cerca de 1.000 mg, convenientemente administrados em uma única dose ou era 10 doses divididas, incluindo, sem limitação, até quatro vezes ao dia, ou em forma de liberação, estendida. Formas de dosagem unitária adequadas para administração oral incluem de cerca de 1 até cerca de 500 mg de ingrediente ativo, Em uma modalidade, a dosagem unitária é de cerca de 1 mg,
15 cerca de 5 mç j, cerca de 10 mg, cerca de 20 mg , cerca de 50
mg, cerca de IGO mg, cercí ά d e 200 mg, caro a de 250 mg,
cerca de 40C > mg ou cerca de 500 mg. As f« s.ixas cita das
anteriormente í são meramente sugestivas, já que o número de
variáveis es a relação ao re gimé de tratamento de um
20 indivíduo é grande, e v 'ari ações consider áveis des £3 C* Sa· Xi· fc?
valores recon lendados não são ir icomuns. Essas d psagens po dem
- ser alteradí is, dependendo d e diversas va riãveas, não
limitadas à atividade do CO reposto usado, ã doença oú
condição a ser tratada, ao modo de admit li atração, às
25 necessidades do paciente individual, à gravid ade da doença
ou condição responsável. sendo tratada. e à avaliação do profissio nal
A toxic: idade e a efic< ácií ã terapêutica d esses regimes
terapêut ic os podem ser d te te rminadas por procedimen .tos
30 far mac êuti c os > padronizados e: m culturas de células ou
217/356 animais experimentais, incluindo, sem limitação, a determinação da {a. dose letal para 50% da população) e da EDS0 (a dose terapéuticamente eficaz em 50% da população). A proporção de dose entre os efeitos tóxicos e terapêuticos é o índice terapêutico, e ela pode ser expressa como a proporção entre íDso o ΕΟ5ΐ!. Compostos que exibem índices terapêuticos elevados são preferidos. Os dados obtidos de ensaios de cultura de células e estudos em animais podem ser usados na formulação de uma faixa de dosagem para uso em seres .humanos. A dosagem desses compostos se situa preferivelmente dentro de uma faixa de concentrações circulantes que incluem a ED<:<? com toxicidade mínima. A dosagem pode variar dentro dessa faixa, dependendo da forma de dosagem empregada e da via de administração utilizada.
Tratamentos combinados
Os compostos da Fórmulas (1)-(7), e composições destes, também podem ser usados em combinação com outros agentes terapêuticos que são selecionados quanto ao seu valor terapêutico para a condição a ser tratada. Em geral, as composições aqui descritas e, em modalidades nas quais a
- terapia combinada é empregada, outros agentes não precisam ser administrados na mesma composição farmacêutica, e podem, por causa das características físicas e químicas diferentes, ter que ser administrados por vias diferentes.
A determinação do modo de administração e da conveniência da administração, quando possível, na mesma composição farmacêutica, faz parte dos conhecimentos médicos. A administração inicial pode ser feita de acordo com > 30 protocolos estabelecidos reconhecidos no campo, e então,
218/355 com base nos efeitos observados, a dosagem, os modos de administração e ps, momentos de adm.inistx'ação podem ser medificados pelo médico.
Em certos casos, pode ser adequado administrar pelo menos um composto aqui descrito em combinação com outro agente terapêutico. Apenas como exemplo, se um dos efeitos colaterais apresentados por um paciente apôs receber um dos compostas aqui apresentados, por exemplo, um composto de Fórmulas {I) -(V), ê náusea, então pode ser adequado 10 administrar um agente antismétic© em combinação com. o agente terapêutico inicial. Ou, apenas como exemplo, a eficácia terapêutica de um dos compostos aqui descritos pode ser aumentada pela administração dê um adjuvants (ou seja, por si próprio o adjuvant© pode ter benefício 15 terapêutico mínimo, mas, em çosbinação com outro agente terapêutico, o benefício terapêutico global para o paciente é aumentado). Ou, apenas como exemplo, o beneficio apresentado por um paciente pode ser' aumentado por administração de um dos compostos aqui descritos com outro 20 agente terapêutico (o que também inclui um regime terapêutico) que também possui benefício terapêutico,. Em
- qualquer caso, independentemente da doença, distúrbio ou condição sendo tratado, o benefício global apresentado pelo paciente pode simplesmente ser aditivo dos dois agentes 25 terapêuticos ou © paciente pode apresentar um benefício sinérgico.
A escolha específica dos compostos usados dependerá do diagnostica dos médicos assistentes e de sua avaliação da condição do paciente e d© protocolo de tratamento 30 apropriado. Os compostos podem ser administradas
2X9/356 concernitantemente (por exemplo, simultaneamente, basicamente simultaneamente ou dentro do mesmo protocolo de tratamento) ou seqüencialmentef dependendo da natureza da doença, distúrbio ou condição, da condição do paciente e da 5 -escolha dos compostas usadas. Ã determinação da ordem de administração e do número de repetições da administração de cada agente terapêutico durante um protocolo de tratamento está dentro das conhecimentos dd médica apôs avaliação- da doença que está sendo tratada e da condição do paciente.
Dasagens terapeuticamente eficazes podem variar quando
OS' fármacos são usados em combinações de tratamentos < Métodos para determinar’ experimentalmente dcsagens terapeuticamente eficazes de fãrmacos e outros agentes para uso em regimes combinados de tratamento são descritos na 15 literatura. Fax exemplo, a uso de dosagem metronômica, ou seja, o fornecimento de dosés menores, mais frequentes, a fim de minimizar os efeitos colaterais tóxicos, foi descrito intensamente na literatura, O tratamento combinado ainda inclui tratamentos periódicas que começam e terminam 20 em vários momentos para .ajudar com o manejo clínico do paciente.
Para as terapias combinadas aqui descritas, as dosagens dos compostos co-administrados irão evidentemente variar, dependendo do tipo de co~fármaco empregado, do 25 fármaco específica empregado, da doença ou condição que está sendo tratada., e assim por diante. Além disso, quando co-administrado com um ou mais agentes biologicamente ativos, o composto aqui fornecido pode ser administrado simultanèãment® com o(s) agente(s) biologicamente ativo(s), 30 ou sequencíalmente, Se administrado sequencialmente, o
220/356 médico assistente decidix-á sobre a sequência apropriada de administração da proteína em combinação çom ©(s.) agente(s) biologicamente ativo(s) .
Em qualquer caso, os múltiplos agentes terapêuticos
5' (um dos quais é um compostó de Fórmulas aqui descritas} podem ser administrados em qualquer ordem ou até mesmo- simultaneamente. Sé simultaneamente, os múltiplos agentes terapêuticos podem ser fornecidos em uma forma unificada, única, ou em múltiplas formas (apenas como 10 exemplo, como uma única pílula ou como duas pílulas separadas) . Um dos agentes terapêuticos pode ser dado em múltiplas doses, ou ambos podem ser dados como múltiplas doses. Se não simultaneamente, o momento entre as múltiplas doses pode variar de mais de zero semana a menos que quatro 15 semanas. Além disso, os metodvs composições e formulações da combinação não são limitados ao uso de apenas dois agentes, o uso de múltiplas combinações terapêutiças também está previsto.
Entendé“se que o regime de dosagem para tratar, evitar 2.0 ou melhorar a(s) condiçãç (condições) para a qual se busca um alívio pode ser modificado de acordo com diversos . fatores. Esses fatores incluem o distúrbio ou condição da qual o indivíduo sofre, bem como a idade, õ peso, ç sexo, a dieta e a condiçãa médica do indivíduo. Dessa forma, O 2S regime de dosagem 'realmenté, empregado pode variar amplamente e, dessa forma, pode se desviar dos regimes de dosagem aqui apresentados<
Os agentes farmacêuticos que constituem a terapia combinada aqui revelada podem estar em uma forma de dosagem 30 combinada ou em formas de dosagem separadas destinadas à
221/35¾ administração substanc-íalmente simultânea. Os agentes farmacêuticos guè constituem a terapia combinada tawbém podem ser administrados sequenuialmente, com o composto terapêutico sendo administrado por um regime que demanda a 5 administração em duas etapas. O regime de administração em duas etapas pode necessitar de administração sequencial dos agentes ativos ou da administração intervalada dos agentes ativos separados. 0 período de tempo entre ãs múltiplas etapas de administfaçãò podè vàriár de poucos minutes a 10 vãrlas horas, dependendo das propriedades de cadã agente farmacêutico., por exemplo, da potência, solubilidade, bíodisponibi1idade, meia-vida plasmâtica e perfil cinético do agente farmacêutico. A variação circadiana da concentração da molécula-alvo também pode determinar o 15 intervalo ótimo entre as doses,
Alêm disso, os compostos aqui descritos também podem ser usados em combinação com procedimentos qu® fornecem benefício adicional ou sinêrgico ao paciente. Apenas como exemplo, espera-se que os pacientes encontrem benefício 20 terapêutico e/ou profilático nos métodos aqui descritos, em que a composição farmacêutica de um composto aqui revelado . e para combinações com outra® substâncias terapêuticas sejam combinadas com testes genéticos para determinar se aquele indivíduo ê portador de um gene mutante que 25 sabidam<-nce está relacionado a certas doenças ou condições.
Os compostos aqui descritos e as terapias combinadas podem ser administrados antes, durante ou depois da ocorrência de uma doença ou condição, e o momento da administração da composição que contém um composto pode 30 variar. Dessa forma, por exemplo, os compostos podem ser usados como ura profilático e podem ser administrados continuamente aos indivíduos com uma propensão ao desenvolvimento de condições ou doenças a fim de evitar a ocorrência da doença ou condição. Os compostos e 5 composições podem ser administrados a um indivíduo durante ou logo quê passível apõe o surgimento dos sintomas, A admínístráçãò dos compostos pode ser iniciada dentro das primeiras 48 horas àpõs o surgimento dos sintomas, preferivelmente dentro das primeiras 48 horas após o 10 surgimento das sintomas, mais praferivelmente dentro das primeIras 6 horas após o surgimento dos sintomas é, principalmente, dentro de 3 horas apõs o surgiméntò dos sintomas. A administração inicial por ser por meio de qualquer via prática como, por exempla, uma injeção 15 intravenosa, uma injeção era bolo, infusão ao longo de 5 minutos a cerca de 5 horas, uma pílula, uma cápsula, um emplastro transdê.mico, liberação bucal, e semelhantes, ou combinação destes. W composto ê preferivelmente administrado logo que seja praticável apôs o surgimento de 20 uma doença ou condição ser detectado ou suspeito, e pela duração de tempo necessária para o tratamento da doença . coma, por exemplo, de 1 dia até cerca de 3 meses. A duração do tratamento. pode variar para cada indivíduo, e a duração *
pode ser determinada usando os critérios conhecidas. Par 25 exemplo, o composto ou uma. formulação· contendo o composto pode ser administrado por pelo menos 2 semanas, preferivelmente cerca de 1 mês até cerca de 5 anos.
Inibidores de SOCE
Em um aspecto, os compostos de Formulas (I )-(¥) são 30 administrados ou usados em conjunta com outras inibidores
223/356 de SQCE. Em um aspecto, os inibidores de SQCE são inibidores não seletivos.
Mversos inibidores de SOCE foram descritos.
Inibidares dé SQCE incluem:
a) üãtions, que incluem eátions de. lantanxdeo como, por exemplo, Cd1·*, ba**?
b) inibidores de P.-450, que incluem econasol, miconazol;, clotrimazol, cetaconazol;
c) Inibidorès da ciclooxígénãse, que incluem ácido .niflúmico, ácido flufenâmico, tenidáp;
d) Inibidores da lipoxigenase, que inçluèm ácido norâlidroguaiarético, ácido eicosatetlainõico;
e) cpmpostos que são blcqueadores de canalque incluem S^F 96365, SC38249, 13352396, L-6S1.582,
15: tetrandxúna, 2-APB?
f) Compostos que inibem SGCE não por uma ação sobre os próprios canais SOC, que incluem U73122 (inibidor de fosfolípase C) .. wortmanina (inibidor da fosfatidilinositol quinase).
Alguns desses inibidores de SOCE possuem ações não específicas e/ou múltiplos modos de ação que contribuem > para a inibição de SOCÉ, que incluem o bloqueio do poro do canal SOC (bloqueadores de canal), inibição da síntese mitocondrial de ATP que parece apoiar SOC.E (Gamberucei .e cols., Üt Biol. Chess., 269, 23.597-23.602, 1994? Marriott e cole., Am. J. Phyeiol., 269. C766-C774, 1995), perturbações do pH citoplasmático (Muallem e cols. , Am» Physiol.,. 257, 0'917-0924, 1969), além da inibição da ativação de canais
SOC.
Imunos supressores
224/356
Em uma modalidade, ós compostos aqui descritos são administrados; como agentes únicos em terapia imuhossupressora para reduzir, inibir ou evitar a atividade do sistema ímunalógicO- A terapia imunossupressóra é usada 5 clinicamente para; evitar a rejeição de órgãos e tecidos transplantadas .(po-t exempla, medula Óssea, coração, rim, fígado); tratamenta de doenças aUtoimunes ou dòenças' que muito provavelmente têm origem autoiname (por exemplo, artrite reumãtóide, miastenia grave, lupus eritematoso 10 sistêmico, doença de Crohn e colite ulcerative) ,· e tratamento cte algumas outras doenças inflamatóraas não autoimunes (por exemplo, controle de longo prazo da asma alérgica).
Em algumas modalidades, os compostos aqui descritos 15 são administrados com outras imunossupressores selecionados entre; inibidores de calcineurina (por exemplo, sem limitação, ciclosporina, tacrolimus); inibidores de mlOR (por exemplo, sem limitação, sirolimus, everolímus); antiproliferativos (por exemplo, sem limitação, 20 azatioprina, ácido micafsnóiico); oorticocteróides (por exemplo, sem limitação, prednisona, acetato de cortísona, , prednisolonà, me tilpredni solaria, dexametasona, betametasona, triamcinalona, beclametasòna, acetato de fludrocortisóna, acetato de desoxicorticosterona, aide ater ona, hidrocortisoná) anticorpos (por exemplo, sem limitação, anticorpos monoclonais anti-receptor de IL-2Rd (basiliximab, daclizumab), anticorpos policlonais anticélula T (globulins antitimócíto (ATG) , globuliiia antilinfócito (AbS.)) )
Outros imunossupressores incluem, sem limitação;
25/356 glxcocórtxcõidés (aleloffietasona, aldosterone, aneinonida, beólômetásóna, betametasona, budesonida, oíclesqnida, çlobetasol, clobetasona, clocortolona, cloprednol, cortisona, córtivazol, deflazacort, desôxioorticosterona, 5 desunida, desóximetasona, desoxicortona, dexametasona, diflorásona, diflucortoldna, difluprednátd, flüclõrolGna, fludrocortisona, fludroxieortída, flümetasona, flunisolida, fluocinolõna ácetonida, fluouinonida, tluouortin, fluoçortoloha, fluormetolona, £luperçlbna, fluprednideno, 10 flutícasóba, f©rmUcórtal, halcinonida, halometasuna, hidroeortisona/cGrtisol, aceponãto de hidrocortisona, buteprato de hidx'ocortisona, butirata de bidracortisóna, loteprednol, medx*ispnaf meprednispna, matilprednisolona, aceponato de mefcíiprednisolona, furoato de mometasona, 15 parametasona, preduicarbato f preânisona, pi-edndsolqna, predniliden©, rimexolona, tixocortcl, tri amei no lona., ulobetasol), cielofosfamida, nitrosouréias, cisplatina, carboplatina, oxaliplatina, metotrexato, azatioprina, mercaptopurina, pxrimidxna análogos, pxvxteína síntese 20 inibidores, metptrexato, azatiopxina, meroaptopurina dactinomícina, antracíclinas, mítpwicina C, bXeomicina, * mitramicina, Atgam^, Timoglobulina, OKT3,S>, basiliximab, daclizumab, cxclosporina, tacrolimus, sirolimus, «
Interferons (iFN-p, lFN-γ) , opiôides, proteínas de ligação 25 de TNF (infliximab, etanercept, adalimumab, golimumab), ácido micofenôlico, micofenolato mofetil, FTY720, além daqueles listados em US 7.060.657.
Agentes para o tratamento de doenças aútoimunes, doenças inflamatôrias
Quando o indivíduo sofre ou está em risco de sofrer de
228/355 uma doença, distúrbio ou condição autoimune, ou de uma doença, distúrbio ou condição inflamatória, um composto aqui descrito é administrado em qualquer combinação com um ou mais dos seguintes agentes terapêuticos;
imunossupressores (por exemplo, tacrolimus, ciclosporina, rapamicina, metotrexato, ciclofosfamida, azatioprina, mercaptópurina, micofenolat.o ou FTY720), glicócorticdides (pOb exemplo, prêdnisdná, acetato de cortisona, prednisolona, metilprednisõlona, dexametasona, betametasona, triamcinolona, beclometasona, acetato de fludrocortisone, acetato de desoxicortfcosterona, aidestarena), fãrmacos antiinflamatórios não esteróides (por exemplo, salicilatos, ácidos arilalcanóicos, ácidos 2arilpropiônicos, ácidos N-arilantxanílicos, oxicams, coxibs ou sulfonanilidas) , inibidorés específicos -da C©x-2 (pox' exemplo, valdecoxib, etoricoxib, lumiracoxib, celecoxib ou rofecoxib), leflunomida, tioglicose de ouro, tiomalato de ouro, auro f ina, sulfasalazína, hidroxi cloroquinína, minociclina, proteínas de ligação de TNF-α (por exemplo, infliximab, etanercept ou adalimumab), abatacept, anakinra, interferon-^, interferon^y, íntsrleueina-2, « antileucotrienos, teofilina ou anticolinérgicos,
Em uma modalidade, os compostos aqui descritos são administrados em combinação com inibidores da via NPAT25 calcineurina. Em uma modalidade, os inibidores da via NFATcalcineurina incluem, sem limitação, ciclosporína Λ (CsA) e tacrolimus (FK5Õ6).
Em uma modalidade, um composto aqui descrito.,·· ou composições e medicamentos que incluem um composto de 30 Formulas (I) ~ (V) , são administradas a um paciente ern
227/356 combinação cora um agente antiinflamatorlo que inclui, s.era limitação, fármacos antíinflamatórios não esteroides (NSÃI.W) e curticesteróides (glicoçorticôides) <
NSAlDs incluem, sem limitação:: aspirina, ácido salicílico, ácido gentisico, salicilato de magnésio de colina, salicilato de colina, salicilato de magnésio de. colina, salicilato de colina, salicilato de magnésio, salicilat© de sódio, diflunisal, carprofeno, fenoprofeno, fenoprofeno cálcico, fluorbiprofeno, ibuprofeno, cetoprofe.no, nabutona, cetolorac, cetorolac ttometamina, naproxeno, oxaprosina, diclofenaco, etodolac, indometacina, sulindac, tolmetin, meclofenamato, meclofenasato sõdíco, ácido mefenâmico, piroxicam, meluxicam, inibidores específicos para COX-2: (por exemplo, sem limitação, 15 celecoxib, rofecoxib, valdecoxib, parecoxib, etoricoxib, lumiracoxib, CS-502, JTE-S22, L-745.337 e NS398) .
Combinações com NSAIDs, que são inibidores seletivas
de CC >X-2, s ao aqui contemp ladas. Esses compostos mcli iam.
sem limitação, aqueles s revelados na Patente U.S. 8’
0 5.4 74 . 995, Patente U.S. I 5.961.419, Patente U.S. N
6,001 .843, Patente U.S. 1 Γ· 6.0 20,343. Patente U.S. ΪΤ
5.409 .944,. Patente U.S. S F 5.436.265, Patente ü, s < N
5 <536 . 752,. Patente u.s. t Γ 5.850.142, Patente U.S . ir
5 , 60 4 .260, Patente U.S. 1 r 5,698.584, Patente U.S . N
5 5.710 .140, ' i4£) 94/15932; Pat rente U.S. 5.344.991 ; Pa tf. mte
U.S. N 5.1 34.142; Pat ente U.S. N* 5.380 .735; Pat ente I J. 5.
Nc 5. 393.79 0; Patente U.S. N* 5.466,823 >; Patente 5: U.S.
5.633.272; Patente U.S. 8» 5.932.598 e 6.313.138; todas aqui incorporadas pór referência.
Compostos que foram descritos como inibidores
228/356 seletivos de COX-2 e são, portanto, úteis nos métodos ou composições farmacêuticas aqui descritas, incluem, sem limitação, celecoxib, rofecoxib, lumiracoxib, etoricoxíb, valdecoxib e parecoxib, ou um sal farmaceuticamente aceitável destes.
Cortiçosteróides incluem, sem limitação: betametasona, prednisona, alclòmetasona, aldosterone, ancinonida, beclometasona, betametasona, budesonida, ciclssonida, clobetasol, clobetasona, clocortolona, cloprednol, cortisonà, cortivaaol, detlásacort, desoxicai^ticosterona, desonida, desoximatasona, desaxicortona, dexametasona, diflorasona, difludortolona, difluprednato, fluclorolona, fludrocortisone, flúdroxieort.ida, flumetasona, flunisolida, fluocinolona acetonida, fluoçinpnida, fluocortin, 15 fluocortolona, fluormetolona, fluperolona, fluprednideno, flutiçasona, formocortal, halcinonida, halometasona, hidroco.rtisoua/çortisolf açeponato de hidrocortisona, buteprato de hidrocortisona, butirato de hidrocortisona, loteprednol, medrisona, meprednisona, metilprednisolona, 20 aceponato de metilprednisolona, furoato de mometasona, paramtasona, prednicarbato, prednisona/pa ednisolona, rimexolona, tixocortol, triamcinclona e ulobetasol.
Outros agentes- usados como antiinÊlamatÓrios incluem aqueles revelados na Publicação de Patente Ü«S> .25 2005/0227925, aqui incorporada por referência.
Alguns antiinflamatórios comercialmente disponíveis incluem, sem limitação: Arthrotec'^ (diclafenaco e misoprostol) , Asacol’® (ácido 5-aminossalicilico} , Salófalk®’ (ácido 5-aminòssalicílico), Auralgan® (antipirina e benzocaína} , Azulf idiíie·® (sulfasalazina), Daypro'^
229/356 (oxaprozina), Lodine® (etodolac), Ponstan® (ácido mefenâmico) , solumedi*ol* (metilprednlsolona) , Bayer® (aspirina) , Bufferin.® (aspirina) , Indocin® (indometacina) , Vioxx® (rofecoxib) , Celebrex* (celecoxib)t Bextra®
5' (valdecoxib) , Arcoxia® (etorlcaxib) , Prexige* (lumiracGxib), Motrin® {ibuprofeno), Voltaren® (diclofenaco), Orudis* (catoprofeno), Mobic® (meloxicam), Relafen® (nabumetona)t Aleve®( Naprosyn® (naproxeno)t
FeIdene® (piroxi cam).
1G Em uma modalidade, os compostos aqui descritos sãó administrados em combinação com antagonistas do receptor de leucotrieno que incluem, sem limitação, BÁ¥ U9773 (vaja EP
Q0791576; publicado em 27 de agosto de 1997), DüÓ-LT (Tsují é cols., Qrg. Biomol. Chesi,, 1, 3.139-3,141, 2003) , zafxrlukast (Aooolatfô®), montelukast (Singulair*), prankulast (Onon*), e derivados ou análogos destes.
Kit s/artigós manufaturados
Para uso nas aplicações terapêuticas aqui descritas, kits e artigos manufaturados também, são aqui descritos.
Esses kits podem incluir um veículo, uma embalagem ou recipiente que é compartimentalizado para receber um ou mais recipientes, tais como frascos,, tubos, e semelhantes, cada um dos recipientes iucluindo um dos elementos separados a serem usados em um métodõ aqui descrito.
Recipientes adequados incluem, por exemplo, garrafas, francos, seringas e tubos de ensaia. Os recipientes podem ser formados por diversos materiais como, por exemplo, vidro ou plástico.
Os artigos manufaturados aqui fornecidos contêm materiais de embalagem. Materiais de embalagem para uso na
230/35« embalagem de produtos farmacêuticos incluem# por exemplo, as Patentes U.S. lles 5.323.907, 5.052.558 e 5.033.252.
Exemplos de materiais de embalagens farmacêuticas incluem, sem limitação, embalagens em blister, garrafas, tubos, 5 inaladores, bombas, bolsas, frascos, recipientes, seringas, garrafas, e qualquer material de embalagem adequado para uma formulação selecionada e modo de administração e tratamento desejados, üm amplo conjunto de formulações dos compostos e de formulações aqui fornecidas é contemplado, 10 bem como diversos tratamentos para qualquer doença, distúrbio ou condição que se beneficiaria da inibição da atividade do canal CRAC.
Por exemplo, os recipientes podem incluir um ou mais compostos aqui descritos, opcionalmente em uma composição 15 ou em combinação com outro agente, como aqui revelado. Os recipientes opcionalmente possuem a entrada de acesso estéril {-por exemplo, o recipiente pode ser uma bolsa de solução intravenosa ou um frasco que possui uma tampa penetrável por uma agulha de injeção hipodérmica). Esses 20 kits opcionalmente compreendem um composto com uma descrição ou rótulo de identificação ou instruções relacionadas ao seu uso nos métodos aqui descritos.
Um kit poderá tipicamente incluir um ou mais recipientes adicionais, cada um com um ou mais dos vários materiais (por exemplo, reagentes, opcionalmente em forma concentrada, e/ou dispositivos) desejáveis do ponto de vista comercial e do usuário para uso de um composto aqui descrito. Exemplos não Ximitantes desses materiais incluem, sem limitação, tampões, diluentes, filtros, agulhas, seringas, rótulos de veículo, embalagem, recipiente, -frasco
231/356 e/ou tubo que listam o conteúdo e/ou instruções para uso, e bulas com instruções para uso. Um conjunto de instruções também será tipicamente incluído.
Um rótulo pode estar no recipiente ou. assobiado a ele.
s Um rotulo pode estar em um recipiente quando letras,| números ou outros caracteres que formam o rótulo estiverem| anexados, moldados ou incrustados no próprio recipiente; um rótulo pode estar associado a um recipient© quando estiver presente dentro de um receptáculo ou veículo que também| contém o recipiente, por exemplo, como uma bula. W rótulo pode ser usado para indicar que o conteúdo deve ser usados para uma aplicação terapêutica específica. O rótulo tambémj pode indicar instruções para uso do conteúdo, por exemplo, nos métodos aqui descritos.|
Em certas modalidades, as composições farmacêuticas podem ser apresentadas em uma embalagem ou dispositivo dispensador que pode contei* uma ou mais formas de dosagem unitária contendo um composto aqui fornecido. A embalagem pode, por exemplo, conter uma folha de metal ou plástica, por exemplo, uma embalagem em blister. A embalagem ou o dispositivo dispensador pode ser acompanhado por instruções para administração. A embalagem ou o dispensador também pode ser acompanhado por um aviso associado ao recipiente na forma prescrita por um órgão governamental que regula a fabricação, o uso ou a venda de substâncias farmacêuticas, o qual reflete a aprovação pelo órgão da forma do fármaco para administração humana ou veterinária. Esse aviso, por exemplo, pode ser a. rotulagem aprovada pelo FDA (U.S, Food| and Drug Administration - agência governamental americana| * 30 que regula e fiscaliza a fabricação de comestíveis, drogasJ
232/356 . :.è cosméticos) para fármacos de prescrição, ou a bula * aprovada do produto. As composições que contêm um composto aqui fornecido formulado em um veículo farmacêutico compatível também podem ser preparadas, colocadas em um 5 recipiente apropriado e rotuladas para o tratamento de uma condição indicada.
Ensaios
Várias técnicas podem ser usadas para avaliar a entrada capacitívá de cálcio e a sinalização de cálcio nas 10 células. Essas técnicas incluem, sem limitação, eietrofisiologia patch damp (medida de ions cálcio ou outros íons através de membranas celulares, por exemplo, membranas plasmáticas), medidas da capacitância (permitem que a exocitose seja acompanhada no nível de células 15 únicas), imagens de cálcio usando corantes fluorescentes, que permitem que os padrões de movimento de cálcio dentro do cítoplasma sejam rastreados, transferencia de energia de ressonância de fluorescência. .(FRET) permite que interações proteína-proteína sejam avaliadas, e métodos de biologia 20 moleculax' que permite» a manipulação dos níveis de expressão de proteínas de interesse.
Uma ampla variedade de métodos de ensaio pode ser usada para examinar a modulação do cãlcia intracelular por compostos de Fórmulas (I)-(V). Esses ensaios incluem 23 ensaios in vitro baseados em células, além de modelas animais ín vivo. Quaisquéx* ensaids que detectem, monitorem ou meçam um efeito sobre © ©ãlcio intracelular, incluindo eventos mediadas pela entrada de cálcio, podem ser usados. Esses ensaios incluem, sem limitãção, ensaios que 30 monitoram, medem e/ou detectam: níveis do cálcio
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X intracelular > modulação de níveis de cálcio e movimento de cálcio para dentre, para fora ou dentro de células e drganelas intracelulares. Os ensaios também podem incluir o monitoramento, medição e/ou detecção dos eventos mediados 5 pela entrada de cálcio e de moléculas .envolvidas em eventos mediados pela entrada de cálcio como, por exemplo, sem limitação, moléculas dé transdução de sinal, fatores da transcrição, .moléculas secretadas e outras moléculas que são áfétadas por alterações na homeostasia dé cálcio. Os 10 ensaios incluem, sem limitação, aqueles aqui descritos e aqueles descritos nas Publicações de Patente U.S. N° 2007/0031814 e WO 07/081804, aqui incorpôradas por referência,
Célula® © modelos de células
Para testes in vitro da modulação do cálcio intracelular por compostos do Formulas (ÍJ~W), está disponível uma ampla variedade de tipos de célula para esses ensaios. Em uma modâlidade em particular, a célula é aquela na qual qçorre a entrada capacitiva de cálcio ou que 20 pode ser manipulada de tal modo que a entrada capacitiva de cálcio ocorra na célula. Em. modal idades particulares, a célula contém uma ou mais proteínas envolvidas na modulação do çálcío intracelular' (e, em particular, está envolvida, participa e/ou permite a entrada capacitiva de cálcio, movimento de cálcio para dentro, para fora ou dent xo de uma organ©1a intracelular ou estoque de cálcio, modulação de níveis de cálcio em uma organela intracelular ou estoque de cálcio (por exemplo, retículo endoplasmático) e/ou tamponamento de cálcio), tais como aquelas aqui fornecidas.
Em modalidades particulares, as proteínas incluem proteínas
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STIM (incluindo S-TXM--1, STIM-2, DSTIM e proteína CSTIM) e/ou proteínas Orai (Oral-I, Oral--2, Oral.-3) . A célula pode expressar endogenamente a(s) proteína. (s) ou expressar reoombinantemente a(s) proteína(s).
As células para uso nos métodos podem ser de qualquer espécie. Em uma modalidade, as células podem ser células eucariôticas. Em uma modalidade, as células pedem ser células de leveduras, de insetos (por exemplo, Drosophila ou Anopheles) ou células mamíferas. Células mamíferas incluem, sem limitação, células de roedores (por exemplo, camündongo, rato e hamster) , de primatas, de macacos, de cães, bovinas, de coelho e humanas. Vários tipos de células podem ser usados nos métodos, incluindo, por exemplo, células- neuronals, células do sistema nervoso.,· do cérebro, células do sistema imunológico, por exemplo, linfõaito T e células B, células primarias, células sangüíneas e hematopoiéticas, células estromais, células mielõides, células linfóides, e várias células tumorais e cancerosas. Células específicas, incluem células de PzOsóphíla Schneider
2 ou S3, células de rim embrionário humano (HEE293), células de leucemia basofílica de rato .FBL-2H3), células de Jurkat, células epiteliais, células de rabdomiossarcoma, células rabdóides, retinoblastoma células, células de neuroepitelioma, células de neuroblastoma, células de osteessarcoma, fibrebiastos, células do estruma da medula óssea, células de eritroleucemia e células linfoblásticas. Outras linhagens de células incluem HEK293 e 293T, CHO (incluindo CHQ-KT) , LW-N2A, Ή6 e HGB» Muitas dessas células e linhagens de células estão disponíveis por meio de depo-sitórios de células como, por exemplo, a ^American
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Type Culture Cal lection (ATCC, Manassas, Va>). Células primárias podem ser obtidas por isolamento dé fontes de tecido
Podem ser usadas células dé uma linhagem, de células conhecida, por exemplo, células dé neuroblastoma SH-SYST, células de féocromoçitoma PC12, células de neuroblastoma SK~N~BE(2)C au SK-K-SH, células de neuroépitelioma humana SK-N~MC, células SMS-KChR, células de neuroblastoma humana LAK--S, células de neuroblastoma humano GX-CA-N, células de.
neuroblastoma humana GOTO, células de neuroblastoma de camundongo Neuro 2a (N2A) e/ou células de neuroblastoma humano IMR 3.2, células de leucemia mielóide crônica (por exempla, células humanas K552), células de leucemia promielacitica (par exemplo, células HL60) e células de :ͧ linfomá. histiocítico (por exemplo, células U937) , células de 1infama de. Burkitt (por exemplo, células CA46), células B (por exemplo, NALM6), células de leucemia linfoblástica aguda (por exemplo, células MPLT4) , células T (por exemplo, células de Jurkat) e .células.· precoces T-Abl, (por exemplo,
DU528).
Em uma modalidade, a escolha de uma célula para uso em um ensaio in vitro para testar a modulação do cálcio intracelular por compostos aqui descritos envolve várias considerações, incluindo, por exemplo., uma proteína 25 particular que esta senda usada no método a um aspecto ou atividade dè mòdulaçao particular do cálcio intracelular que está sendo monitorado ou avaliado no método.
Em uma modalidade, a modulação do cálcio intracelular por um composto aqui descrito, ou (XIIIA) , é examinada por 30 monitoramento ou avaliação do efeito sobre a entrada
235/355 capacitiva de cálcio. As células tipicamente usadas nesses métodas exibem entrada capacitiva de cálcio naturalmente ou por meio da manipulação das células. As células que endogenamente exibem entrada capacitiva de cálcio incluem 5 algumas células excitáveis e a maioria das células não excitáveis, e podem ser identificadas usando métodos aqui descritos e/ou reconhecidos no campo.
Em uma modalidade, pode ser desejável utilizar uma célula que contém componentes de sinalização e sistemas 10 mensageiros que podem efetuar a liberação de cálciò dos estoques intracelulares. For exemplo, células que contêm componentes de sistemas de ativação fosfolipase C (PLC) mediada por receptor podem ser usadas para ativação fisiológica (por meio de geração de de depleção de 15 estoques para facilitar o manicuramento da entrada capac.it.iva de cálcio. A ativação de FLC mediada por receptor ocorre por meio de mecanismos de acoplamento distintos; ativação de FLC-β por receptores acoplados à proteína G (GPCRs) e ativação de PLC-γ por receptores de tirosina quinase e tirosina guinases não receptoras. Dessa forma, células que contêm um sistema de ativação de PLC mediada por receptor podem ser monitoradas ou avaliadas quanto ã entrada capacitiva de cálcio mediante ativação par aganista de um ou mais receptores que sabidamente participam na sistema (veja, por exemplo, Bouron (2000) FEDS Lett. 470: 269-272; Millar e cols. (1995) JI Exp. Biol. 1.98 s 1.843-1.85-0;- Yagodin e cols. (1998) Cell Calcium 23: 219-22-8.-Í Yagadin e cols. (1999) Cell Calcium 25: 429438; e Patterson e cols. (2002} Cell 111* 1-20).
Uma avaliação do. cálcio intracelular apôs tratamento
S37/356 com um composto- aqui descrito pode ser feita sob diversas condições. As condições podem ser selecionadas para avaliar o efeito do agente de teste sobre um aspecto específico do •cálcio intracelular. Por exemplo, -reagentes e condições são s usados para avaliar especificamente a entrada capacitiva de cálcio, os níveis de repouso de cálcio, citosólico, o tamponamento dá cálcio e os níveis de cálcio e captação ou liberação de cálcio por organelas intracelulares, ós níveis de repouso de cálcio citosólico, os níveis de cálcio de 10 organelas intracelulares è d movimento de cãtions podem ser avaliados usando qualquer um dos métodos aqui descritos ou reconhecidos no campo. Esses métodos de avaliação da modulação do cálcio intracelular incluem, sem limitação, medições baseadas em indicador sensível ao- cálcio, por 15 exemplo, fluo-3, mag-fura 2 e aequorina direcionada ao ER, medições baseadas em cálcio marcado (por exemplo, '*òCai:+} e medições eletrõfisíológicas. Aspectos particulares do fluxo de ions que podem ser avaliados incluem, sem limitação, uma redução (incluindo eliminação} na quantidade de fluxo de 20 íons, propriedades biofísicas alteradas da corrente de íons e sensibilidades alteradas do fluxo aos ativadores ou inibidores de processos de fluxo de cálcio como, por exemplo, entrada capacitiva de cálcio. Reagentes e condições para uso para avaliar especificamente o -movimento 25 de cálcio mediado por receptor e ó movimento de cálcio operado por segundo mensageiro também estão disponíveis.
Avaliação de entrada capacitiva de cálcio
Em um aspecto, os compostos aqui descritos são adicionados às células sob condições que permitem que 30 ocorra a entrada capacitiva de -cálcio- a fim de avaliar os
238/356 efeitos -das Fórmulas (I) ~ (XIV) sabre a entrada capacitiva de- cálcio. Essas condições são aqui descritas e são reconhecidas no campo.
Por exemplo, em um método, as células podem ser tratadas para reduzir os níveis de cálcio de estoques de cálcio intracelular e depois analisadas quanto a evidências de influxo de ions (por exemplo, cálcio) em resposta, a ele na presença de um composto aqui descrito. Técnicas pára redução dos níveis de cálcio de estoques intracelulares e 10 para a análise de células quanto a evidências de influxo de ions (por exemplo, cálcio) são reconhecidas no campo e aqui descritas,
Era outran métodos, a análise eletrofisiolôgica de correntes através de um pedaço de membrana plasmática 15 destacado da célula ou uma vesícula da membrana fora da célula pode ser usada para detectar ou monitorar correntes capacitivas do canal (por exemplo, Iseç, Tcrãc) na presença de um composto aqui descrito.
Avaliação de eventos mediados pela entrada de cálcio
São conhecidas várias moléculas envolvidas nas vias reguladas por cálcio, A avaliação de moléculas envolvidas em eventos mediados pela entrada de cálcio pode ser usada para monitorar o cálcio intracelular, e pode ser usada, por exemplo, em ensaios de avaliação aqui descritos para 25 monitorar os efeitos dos compostos aqui apresentadas..
Exemplos de ensaias incluem, sem limitação, ensaios que detectam ou determinam a presença, os níveis, alteração dos níveis, produção, modificação (por exemplo, fosforilação e desfosforilação), translocação, degradação e atividade de 30 moléculas envolvidas em eventos mediados pela entrada de
239/355 câlciò· (vaja,: por exemplo, Trevillyan e cole. (2001) , <ÚT<. Bíol. cham, 276: 48.118-26) . Os ensaios aqui descritos podem ser usados cot células que foram tratadas, ou. colocadas em contate com um composto aqui apresentado, ou 5 que expressam uma quantidade alterada de uma molécula de teste (por exemplo, uma proteína envolvida na regulação de cálcio, incluindo uma proteína STXM, uma proteína Orai), ou com células de controle. Os ensaios também podem ser realizados em células que foram estimuladas com. um ativador XÓ fisiológico ou não fisiológico, ou em células não estimuladas. A seguir, serão apresentados ensaios representativos- pára moléculas envolvidas ea eventos mediados pela entrada de cálcio, os quais são apenas exemplares. Outros ensaios para essas moléculas e ensaios 15 para outras moléculas envolvidas em eventos mediados pela entrada de cálcio também podem ser empregados em qualquer dos métodos de avaliação e/ou modulação aqui descritos.
Liberação de p-hexosaminidase
Em mastócitos, o influxo de Ca8* resulta em 20 degranulaçãõ e liberação de mediadores inflamatórios como, per exemplo, heparina, histamina e enzimas como phexosaminidase. Ã detecção e/ou medição da liberação dessas moléculas pode, dessa forma, ser usada para monitorar o cálcio- intracelular. p©r; exemplo, meios de mastócitos podem 25 ser coletados. Um substrato adequado para hexosaminidase (por exemplo, p-nitrofenil-acetil-glicósamída) pode então ser adicionado e. a absorbância da mistura resultante avaliada paira medir a quantidade relativà de atividade dé Ρ-hexosaminidase nas amostras (Funafoa -e cola. (20Ô3) Cell 30 Siol. international 27: 879-85),
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Atividade de CaN fosfatas® dependente de cálcio/calmodulina
A fosfatas© calcineurina (CaN) desfçsforila várias proteínas, afetando sua atividade e localização. A atividade de Cá» pode ser avaliada por incubação de CaN purificada e de um substrato de Cau, por exemplo, um peptídeo radiornarcado que corresponde a uma sequência na subunidade RII de quinase cAMP-dependente, com ou sem um composto de Fórmulas (I·-)·-(V) (veja Trevillyan e cols.
(2001), U. Bíol. Chem. 276: 48.118-26). 0 nível dé peptídeo.
radiomarcado e/ou a quantidade de fosfato inorgânico livre liberada podem ser medidos para avaliar a atividade de desfosf or ilação de CaN.
Atividade transcricional de NFAT
O fator da transcrição NFAT (fator nuclear de células
T ativadas) .regula diversos· genes em resposta aos níveis de cálcio intracelular. >ar exemplo, as proteínas de NFAT regulam a transcrição de genes de citocina envolvidos na resposta imune. Promotores de genes regulados por NFAT, e/ou regiões e elementos reguladores desses genes, podem ser usados para monitorar a expressão regulada por NFAT e, desse modo, monitorar o cálcio intracelular. Podem ser construídas fusões de gene repórter com promotores regulados por NFAT ou elementos regulados por NFAT ligados operaslonaImente a um gene repórter como, por exemplo, luciferase, p-galactosidase, proteína verde fluorescente (GFP) ou qualquer outro repórter conhecido na técnica (veja, por exemplo, Pedido- U.S. Publicado N° 2802-0034728). A quantidade de proteína repórter ou atividade é uma medida da atividade de NFAT.
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Fosforilação de WAT
Ά ativação de NFAT s regulada primariamente por meio de sua f os for ilação, o que, por sua w, regula sua localização súbcelular. Era células não estimuladas, WAT é uma proteína çitosôliea híperfosforilada. Uma elevação no Ca^’ intracelular, induzida por diversos mecanismos, aumenta a atividade dã fosfatase Ca^-calmodulinadependente, calcineurina. A calcineuriná ativada desfosforila múltiplos resíduos de serina dentro da região 10 reguladora da molécula de NFAT. NFAT é fosforilado novamente em resposta a diminuições nos níveis de Cas+ ou inibição de CaN.
estado de fósforilação de WAT pode ser monitorado, por* exemplo, por expressão de uma proteína de WAT marcada 15 de forma detectãve1 em células, por exemplo, NFAT marcado com His6. NFAT marcado pode ser purificadQ das células usando cxomatografia com Νί“* e submetido a eletrofors.se em gel e coloração ou wtem blotting. As formas mais altamente fosforiladas de MFAT podem ser distinguidas pqr 20 Sua migração mais lenta. Q estado de NFAT fosforilado pode sér usado como uma medida da ativação de WAT (veja Trevillyan e cols. (2001)., J. Biol. Chem, 276; 4.811 8-26).
Localização nuclear de WAT
A local: L cação de MFI VT entre o cit :©plasma e o núole< 3 é
25 regulada ps >lo estado de fosfori' lação de NFAT. A
fosforilação de NFAT « ívita a loca ligação nuclear ] por
ma s caramento da séquên cia de loca tl i cação nuclear. A
localização nuclear de NFAT pôde ser monitorada, j por
exemplo, pc >r expressa^ o de NFAT marcado de foi ema
30 fluorescente, < por exem pio, GFP-NFA T, nas células. A
242/356 microscopia confocal pode ser usada para monitorar a localização nuclear do NFAT marcado (veja, Trevillyan e COlSx (2601), J. Biol. Chwjn 276: 48.118-26).
Secreção de citoeina
A secreção de citocína, por exemplo, a secreção de XL-
2, pode ser monitorada usando ensaios de detecção de proteína. Por exemplo, o sobrenadante pode ser coletado de células imunes. Um ensaio ELISA ou outro formato adequado com anticorpos para IL-2 pode ser usado para detectar e/ou 10 medir a quantidade de IL-2 secretada, comparada com células de controle. A secreção de outras citocinas, por exemplo, TNF-o., também pode ser detectada em ensaios similares.
ExpréssMó de citocina
A expressão de citocinas, por exemplo, sem limitação, 15 XL” 2, pode ser avaliada direta ou indiretamente nas células. Por exemplo, em métodos indiretos, um promotor de IL-2 pode ser ligado operacionalmente a um gene repórter, ppr exemplo, luciferase ou p-galactosidase> -e a construção repórter introduzida nas células. A expressão do gene 20 repórter pode ser monitorada e comparada com a expressão gênica em células de controle (veja, Trevillyan e cols. (2001), Biol. Chew. 276: 48.118-26). Alternativamente, a expressão de aOTA ou proteína de IL-2 endógena ou recombinante pode ser avaliada.
Proliferação de células T
Citocinas, por exemplo, IL-2, são necessárias para proliferação de células T em resposta a um mitõgeno ou à aloestimulação de antígeno e, dessa forma, a proliferação de células T está alterada por mudanças na expressão óu 30 secreção de citocina. As células T podem ser induzidas, por .243/356 exempla, com cancanavalina A ou linfdeitas alorreativas, e a proliferação de células T medida, por exemplo, por submissão das células a u® pulso de 5H~timidina e medição da incorporação de 3H~timidina (veja Trevillyan e cols.
(2001), <7. JBlol. Cfeem. 276 ; 48.118-26) .
Em algumas modalidades, a modulação (por exemplo, inibição ou redução) de SOCE por compostos aqui apresentados é determinada por avaliação de qualquer um dos seguintes critérios:
a , hã inibição direta de [-Ca**] h aumentadè, como medido por um indicador de cálcio;
b , há uma inibição direta de ISOC ou como medido pbr patch clamp;
c. há inibição de funções de sinalização downstream 15 como, por exemplo, atividade de calcineurina, localização subcelular de WAT, fosf or ilação de WAT, e/ou produção de citocina, por exemplo, IL-2; ou
d. h.á modificações na proliferação celular, diferenciação celular e/ou de vias de sinalização apoptéticas induzidas por ativação.
Modelos animais
Modelos animais que podem ser usados, em modal idades dos métodos ainda incluem animais, por exemplo, sem limitação, animais não humanos, que possuem, em pela menos 25 algumas de suas células, uma alteração ou defeito ou funcionamento aberranté de um processo celular que se baseia ou é regulado pelo cálcio intracelular. Processos celulares que se baseiam ou são regulados pelo cálcio intracelular incluem, por exemplo, ativaçáo celular, 30 expressão gêníca, tráfego celular e apoptose.
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Doenças/distúrbios que envolvem defeitos que podem ser pelo menos parcialmente compensados pela modulação do cálcio intracelular incluem, sem limitação: distúrbios autoimunes, incluindo artrite reumatôide, doença inflamatõria do 5 intestino, sindrome de Sjogren (citocinas associadas à invasão de iinfócitos de células epíteliaxs salivares podem reduzir a mobilização de cálcio em células da pardtida;
além disso., ativação de células T, incluindo ativação de fatores da transcrição, expressão de genes de citocxna e 10 proliferação celular, depende dá elevação sustentada do nível de cálcio intracelular fornecida pelo influxo capacitivo dê cálcio), asma (a entrada capacitiva de cálcio pode ter um papel importante na mediação da constrição brônquica e proliferação de células de músculo liso 5 brônquico), glcmerulonefrite e inflamação glomerular (alterações no cálcio intracelular, por exemplo, por entrada capacitiva de cálcio, sinal de adesão de mondeitos em um modelo de cocultura de inflamação glomerular) ,
Os tipos de modelos animais incluem, sem limitação,.
2õ animais não humanos, por exemplo, invertebrados e vertebrados não humanos e mamíferos não humanos, roedores (por exemplo,· camundongos, rato e hamster) , vacas, galinhas, porcos, cabras, cães, carneiros, insetos. Drosophila, nematõdeos, vermes., C. elegans, macacos, gorilas e outros primatas.
Modelos animais incluem animais transgenicos e não transgênicós. Um exemplo de um modelo animal desse tipo que pode ser usado em modalidades particulares dos métodos é um modelo em roedor de hipex^reativídade das vias aéreas (AHR), IO uma característica da asma, Esse modelo pode ser gerado, por exemplo, por sensibilização por meio de imunização com ovalbumina, seguida por exposição à ovalbumína em. aerossol e ataque por estimulação colinérgica (por exemplo, por meio da administração de raetacõlina ou acetilcolina) (veja, por 5 exemplo, Xu e oolsn (2002) J, App.1, Physiol. 93; 1.833-
1.,840,: Humbles e cole. (2002) Proc. Natl. Acad. Sei. 99;
1.479-1.484). A hiperreativídade das vias aéreas (que pode ser avaliada com o uso de métodos como, por exemplo, usando pletismografia barométrica pára registrar curvas de pressão 10 respiratória e por' meio da medida de parâmetros pulmonares como, por exemplo, condútância pulmonar e complacência pulmonar) pode ser avaliada e comparada em animais tratados é não tratadas com um conipasto aqui apresentado. Um exemplo adicional de um modelo animal que pode ser usado em 15 modalidades particulares dos métodos ê um modelo em roedor de glomerOlonéfrite mesangial prolíferativa, que pode ser gerado, por exemplo, por administração de anticorpo antiTh.il, 1 (veja, por exemplo, Jefferson e Johnson (1999) J.
A’ephrol. 12: 297-307). Diversas parâmetros indicativos de 20 glomerulonefrite ou dis.função renal (por exemplo, prol if ereção de células mesangiais, pressão sanguínea., excreção urinária de proteína, depuração de creatinina, índice de glomeruloesclerose a outros parâmetros) podem ser avaliados e comparados em animais tratados e não tratados 25 com agente de teste. Q camundongo diabético não obeso (NOD), uma cepa endogâmica de camundongo que desenvolve espontaneamente um diabetes autoimune que compartilha muitas características imunogenéticas com diabetes melito tipo I, é outro exemplo de um modelo animal que pode ser 30 usado era uma modalidade particular dos métodos.
Esses
246/356 oamundongos também manifestam muitas caracteristicas de èxocrinopatia autoimune (por exemplo, síndrome de -Sj.ógren), incluindo declínio da função: wore tora do tecido exocri.no (veja, por exemplo, Humphreys-Beber e Peck (1999) Arch.
S Oral Biol. 44 Supl > .1? $21-25 e Brayer :e cols. (2GQU), tr. Rheumatol. 27? 1.896-1.904), características relevantes para a síndrome de Sjogren (por exemplo, infiltrados linfôcítiços em glândulas exôcrinas (por exemplo, glândulas salivares e lacrimais), presença de células dendríticas e 10 macrofagos em glândulas submandibulares, integridade da glândula lacrimal pela medida de secreção lacrimal basal e estimulada, taxas de fluxes de saliva e atividade de amilase) podem ser avaliadas e comparadas em animais tratados e não tratados com um composto aqui descrito. Üm 15 modelo animal (pqr exemplo, roedor) de doença autoimune também pode ser usado em modalidades particulares dos métodos. Esses animais incluem modelos em ratos disponíveis pelo Autoimmune Rat Model Repository and Development Center do National institutes of Health (RIH) (Bethesda, 20 Md.,- acessível em ww. ors. od.nih.gov/dirs/vrp/ra teen ter) .
Um modelo w rato de artrite reumatoide (RA) e doenças autoimunes crônicas/inflamatorias relacionadas ê o modelo de artrite induzida por colâgeno (CIA) (veja, por exemplo. Griffiths e Remmex's (2001) Immunol. Ver., 184· 172-183).
Fenótipos característicos de doença autoimune (por exemplo, níveis alterados de .reatívidade imune acs áuto-antígenos, inflamação crônica de ôrgãos-alvo que expressam autoantigen© e ativação e participação de células mcnonueleares invasoras e. fibroblastos teciduais em dano de órgão) podem 30 ser avaliados e comparados em animais tratados e não
247/356 tratados com um composto aqui apresentado. Um modelo animal (por exemplo., roedor) de dor neuropãtica ou inflamatôria também pode ser usado em uma modalidade particular dos métodos. Por exemplo, um modelo em rato de dor neurcpátíca 5 envolve o desenvolvimento de alodinia tãtil {resposta exagerada a estímulos normalmente inócuos) apôs ligação de nervos espinhais lombares (veja, por exemplo, Chaplan e Còls. (1994) d. Meurosci. Methods 53: 55-63 e Luo e cole.
(2ÓÔ1) J. Neürosói. 21: 1.868-1.875). A alodinia tátil, um traço característico de dor neuròpáticã; pode sér avaliada (por exemplo, por avaliação do limiar de retirada da pata em resposta à aplicação de pressão) e comparada em animais tratados e não tratados com úm composto aqui descrito.
KÒMPtOS
Estes exemplos são fornecidos apenas pára fins ilustrativos e não limitam o escopo das reivindicações aqui fornecidas. Os materiais de partida e reageutes usados pára a síntese dos compostos aqui descritos podem ser sintetizados ou podem ser obtidos de fontes comerciais como por exemplo, sem limitação, Sigma-Aldrich, Acros
Organics, Fluka e Fischer Scientific.
Exemplo A: Síntese de têrc-butil 2-(5-brome>benzo íd] oxazol2-carbóxámidò)-4-«-clorofenil)tiofeno-3-carboxilatç (3A) w Ci
L—s
O^Cf8y .J ό
M
2A
Cf
Br
4A
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A uma suspeasão de ãcid© 5-bromobenzo [d] oxazol~2carboxilico (2A, 50 mg, 0,25 mmol) em DCM (5 ml) em temperatura ambiente, foi adicionado cloreto' de oxalila (0,2 ml) e quantidade uatalítica de W. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 17 horas. O solvente fui removido sob vácuo até seco. O resíduo foi dissolvido em DCM (5 ml) , seguido por adição de terc-butil 2~aminó-4(4-clorofen.il) t iof eno-3-carboxilato (IA, 62 mg, 0,2 mmu.1} e
DIEA (0,3 ml). A mistura foi agitada em temperatura
IO ambiente, por 1.7 horas. A mistura de reação foi diluída com DCM (5 ml), lavada com HC1 aquoso 1 N (3 x 5 ml), água (1 x 5 ml), NaOH aguoso 1 N (3 x 5 ml) e seca sobre sulfato de sódio anidro. 0 agente seçante foi removido por filtração.
O filtrado foi concentrado sob vácuo para gerar 3A analiticamente puro que foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. LC-MS: calculado para CaxHisBrClNsO^S; 532 (M+l); encontrado: 532.
Exemplo Bi Síntese de ácido 2-(S-brômòbenzoIdloxazol-2carboxamide)-4 -(4-clorofeni1)tiofeno-3-carboxxlicô (4Á)
A uma solução de 3A em DCM (2 ml) em temperatura ambiente, foi adicxanada: TFA (2 ml) . A mistura foi agitada *
em temperatura ambiente por 3o minutos. 0 solventefoi ír removido sob vácuo. 0 resíduo foi suspensa em: DCM Cl. ml) . 0 sólido foi coletado por filtração, lavado com DCM (3 x 1 25 ml) e seco, para gerar 4A. λΗ RMN (DMSO-dá) § 7,12 (s,1H) ,
7,3:8 (d, 2H) , 7,43 (d, 2H) , 7,7:9' fdd, IH) , 7,36 (d,1H) ,
8,25 (d, 1H), 12,80 (bs, 1H), 13,44 (b, 1H).
Usando procedimentos similares, os seguintes compostos foram preparados,
Ácido
- (7-bromobenzo[d3 õxazol~2-<3arboxamido) -4» (4 clorofenil) tiofeno-3-aarboxiliooi JH RW (BMSO-d§)
IH)
2H), 7,43
SB) ,.
(dd, IH) (d
IH) , 8 is, IH) , 13,.40 (b, IH)
IH) ,
Cl
0H
Ácido 2“(benzo[d]oxazo-6-carboxamide)-4-(4-clorofenil) tiofeno’3~earboxilic0: !h RMN (DMSO-dê) 8
IH) (d.
7,41 (d (dd, IH)
IH)
IH) f >,.00 (S, IH) f 12,45 (ç, IH), 13,35 (bs,
IH) .
Exemplo
C: Sintea© de ácido 4~(4-Glorofenil)-2-(8hidrapirazolo [1, S-alplridina-S-ilcarbonilaiaino) tiofeno-B o&rboxilico (5)?
y.-d >«
u kJ
>--w 'S
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A uma solução de ácido S-hidropirazolo [1,5-a] piridina^· carboXílico (1) (41 mg, 0,25 mmol) em 2 ml de DOf, foi adicionado cloreto de oxalila (210 pl, 10 eq), seguido por adição de cat. DMF. A solução resultante foi agitada por 3 h em temperatura ambiente, antes de ser evaporada até seca.
O cloreto ãcido bruto 2. foi dissolvido em 2 ml de DCM. Â solução acima, foram adicionados aminotiofeno 3 (61 mg, 0,2 mmol), DMÁP (2 mg) e DIE A (110 pl) . Após ser agitada de um dia para o outro em temperatura ambiente, a reação foi 10 desenvolvida com NaHCO3 aqúoso. A camada de DCM foi separada, concentrada e depois submetida à purificação por HPLC preparativa de fase reversa para gerar 66,8 mg do intermediário t-Bu éster 4, que foi subsequentemente agitado em TFA/DCM (1:1, 3 ml) em temperatura ambiente por 15 2 h. Após evaporado até seco, o resíduo foi dissolvido em
PMF e submetido ã purificação por HPLC preparativa de fase reversa. O composto do título S foi isolado como um sólido marrom claro (60,3 mg, rendimento global : 75f>S%) . LC-MS : calculado 397,83; observado 397,82.
Exemplo ΣΗ Síntese de ácido 4-(4~bromofenxl)-2-(8hidropirasolo [1, S«a] piridina-2-ilcarbonilamino) tiofeno-3carboxxlico
O composto do título foi feito partindo similarmente de ácido 8-hidropirazolo[1,5~a]piridina-carboxílicb (i) (41 25 mg, 0,25mmol) e t~butil 2~amina~4~(4-bromofenil)tiofeno~3~ carboxilato (71 mg, 0,2 mmol) . Rendimentot 70,-..8 mg como um sólido branco (rendimento global: 80%). LC-MS: calculado M ~ 442,29; observado M « 441,71.
Exemplo Et Síntese de ácido 4-(4-elorofenil)-2-(indolisin-
0 2-iicafbonilamino)tiofeno-3-çarboxxliçõ
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O composto do título foi feito partindo similarmente de ácido indolizina-carboxilicQ .{2'0 mg, 0,1.2 wl) e t~ butil 2~amíno~4-(4-clarofenil)tiofeno-S-carboxilato (3) (37 mg, 0,12 mmol), Rendimento; 13,9 mg como um sólido amarelo S {.rendimento global; 29,2%).
Exemplo F: Síntese de ácido 4-(4-alorafenil-2-{6-metil-4» (trifluormetil)furano[2,3~b]piridina-2-ilcarbonilamino} tiofeno -3-carboxxlico (13)
A uma solução de ácido S-metil-á(trifluorwtetil) furano[2,3-b]pirídina-2-carboxíli.eo {10) (61 mg, 0,25 mmol) em 2 ml de DCM, foi adicionado cloreto de oxalila (210 pl, 10 eq) seguido por adição de cat. W. A solução resultante foi agitada por 3 h em temperatura 25 ambiente, antes de ser evaporada até seca. 0 cloreto ácido bruto 11 foi dissolvido em 2 ml de DCM. Ã solução acima, foram adicionados aminotiofeno 3 (61 mg, 0,2 mmol), DMAP (2 mg) e Dl EA (110 pl) . Após ser agitada de um dia para o outro em temperatura ambiente, a reação foi desenvolvida 3 0 com NaHCOs aquoso. A camada de DCM foi separada, condentrada è depois submetida â purificarão por HPLC preparativa de fase reversa para gerar 10.0 mg do intermediário t-w éster 12, que foi subsequentemente agitado em TFA/.EOÍ (1;1, 3 ml) ém temperatura ambiente por 5 0,5 h. Apôs evaporado até seco, d resíduo foi dissolvido ém
DMF e submetido á purificação por HFLC preparative, de fase reversa. 0 composto do título 13 foi isolado cômo um sólido amarelo (52,4 mg, reiidimento global: 54,5%). LC-MS: calculado M = 480, 84 ; observado M ~ .521,2.2, 480,73.
Exemplo G: Síntese de ácido 4~(4~ulorofenil-2-[(7~ fluorbensoxasol- 2 -i 1)carbonilamino ] t içfeno-3 -carhcxí1ico (20)
Uma solução de 2 --am i no -6- fluor feno1 (14) (254 mg, 2 mmol) e metil 2,2,2 - trimetoxiacetato (15) (328 mg, 2 mmol) em 3 ml de MeOH foi aquecida em um reator de micro-ondas a
140 °C por 1 h< Apôs resfriamento até a temperatura ambiente, formaram-se cristais. Fíltração, seguida por
253/355 lavagem com MeOH, gerou- 2GS tug de metil 7-fluorbenxoxasol-
2-carboxílato (16) ców agulhas marrons, Rendimento: 53r3%LC-MS: calculado M » 195,15; observado M « 195,96-
A uma solução dé .metil. Ç-flucrbenxoxatol-l-carboxilatò (16) (.7.8 mg, 0,4 mmol) em 5 ml de THF/MeQH/HgO (5:4:1), foi adicionado 0,8 ml (2 eqj de solução- aquosa HaOH 1 M. Apôs agitada em temperatura ambiente por 2 h, a mistura de reação foi neutralizada- com HC1 1 A mistura foi concentrada até seca para gerar ácido bruto 17, O ácido 10 bruto 17 foi suspenso em 4 ml de DCM, e 336 μΐ de cloreto de oxalila e cat, DMF foram adicionados. Apôs agitada em temperatura ambiente per .3 h, a mistura de reação foi evaporada até seca. O cloreto ácido bruto resultante 18 foi suspenso em 3 ml de DCM, seguido por adição de DIEA. (150 15 μΐ.) e DMAP (2 mg) . Após agitada cie um dia para o outro em temperatura ambiente, a reação foi desenvolvida com NaHCQj aque-so. A camada dê DCM foi separada, concentrada e depois submetida à purificação por HPLC preparativa de fase
reversa para gerar- 25 mg do int es rmedi ário t-Bu éster 19,
20 que foi subsequentemen (te agitado em. WJ VDCM (1:1, 3 ml) -em
temperatura ambiente ] □or 1 h < Apd •s ev aporado até seco, o
resíduo foi disso!vido em DMF e sut jmeti do à purificação por
HPLC preparativa de f< áse reversa. 0 cc imposto do título 20
foi isolado como um sô •lido amarelo (20, 8 mg) . XH RMN (DMSO-
25 d6) β 13,48 (bs, 1H) , 12,94 (bs, 1H) , 7,8 6 (d, 1H) , 7,57
(m, 2H) , 7-,-40 (dd, 4Ή) , 7,12 (S, lí 0 .
Exemplo H? Síntese de ácido 4. (4-clorofenil-2 - [ (4-
f luorbenzbxazol -2 -11) carbon! lamine] tiofeno-3 -carboxílico
O composto do título foi feito similarmente, partindo de 2-amino-3-fluorfenol ao invés de 14. RMN (DNSD-dU S
254/356
13,5 (bs, 1H) , 12,9 (bs, :1H) , 7,83 (d, 1H) , 7,65 (m, 1H) , 7,42 (m, S»} , 7,12 (s, 1H) .
Exemplo I: síntese de ácido 4~C4~brom0fenÍl-2~[(4~ fluorbenzóxascl-2-11)earbonilamino j tiofeno· ~3-carboxí11 co
O composto do título foi feito simílarmente, partindo de 2.-amino-'3~fluorfenol ao invés da 14, e posteriormente usando t-butil 2'-aminò-4-(4’bromofenil)tiofeno-3carboxilato ao invés de 3. XH RMN (DMSQ-d§) 6 13,5 (bs.
1H) , 12,9 (bs., 1H), 7,83 (d, IHj , 7/64 (m, 1H) , 7,55 (d,
IQ 2H), 7,44 (t, 1H) , 7,32 (d, 2H), 7,12 (ô, 1H) .
Exemplo J: Síntese de ácido 4-(4-clorofenil)-2-(tiofeno [2,3-d] tiofen-2-ilcãrbonilamino) tiofeno- 3-earboxílico (6B)
A uma solução de 1B (184 mg, mmol) em CHa.Cls (2 ml) foram adicionados cloreto de oxalila (254 mg, 2 mmol) e 4dimetâlamindpiridina (-DMAF, 24 mg, 0,2 mmol) . A mistura dè 25' reação foi agitada por 2 h em temperatura ambiente. Q solvente foi removido in vacw e seco. O resíduo foi di&sõlvidó em CH2.Gl.-x (2 ml) e 3 (124 mg, 0,4 mmol) foi adicionado, juntamente com íí,Jí-diisopropilètilàmina (.DIEA,
520 mg, 4 mmol) < A mistura foi agitada de um dia para o '3'0 outro em temperatura ambiente. A mistura de reação foi
255/356 extinta com NâHCG3. saturado (1Q ml} e ©: terç-butil és ter 5S foi extraídó com EtOAc (10 ml x 2} . As camadas orgânicas cúmbinadas foram seca® (Na2SQ4l. e concentradas in vacuo. 0 resíduo foi dissolvido em C.H2Cla (2 ml),. e TEA (0,5 ml) foi adicionado, A mistura foi agitada por 2 h em temperatura ambiente. 0 produto final foi purificado por HPLC. As frações contendo ò produto desejado foram combinadas e concentradas. .0 Composto 6B (6 mg, 1,5%) f oi obtido com© um sólido branco.
Exemplo Kí Síntese de ácido 4- (4-ulorofenÍ.l) -2- [3--(2c.loraf eni 1) ~ 2 - f luorpropaxioilamino] tio feno *3 - carboxí li ao (21)
A uma solução do composto 22 (200 mg, 1 tamol) em 5 ml de piridíni© poli(fluoreto de hidrogênio), foi lentamente adicionado, com boa agitação, nitrito de sódio (105 mg, 1,5 2G mmol) < Apôs ser agitada em temperatura ambiente por 18 h, água (20 ml) foi adicionada. A solução resultante foi extraída ccm éter; A camada de éter foi lavada com Nãpd 1 h, A camada aquosa foi aoidificada com HC1 e extraída com éter, A camada de éter foi seca (NasSO4) > O solvente foi 25 removido ín vácuo. O produto bruto 23 (151 mg, 74%) foi usado-na etapa seguinte, sem purificação adicional.
256/356
A uma solução de 23 (151 mg.
0,74 mmol) em CH2C12 (2 ml) , .foram adicionados cloreto de oxalila (190 mg, 1,5 mrnol) e 4-dimetilamínopiridina (DMA.F, 18 mg, 0,15 mmol) . A mistura de reação foi agitada por 2 h em temperatura ambiente. O solvente foi removido in vacuo e seco. O resíduo foi dissolvido em Cfí2Cl2 (2 ml) , e. 25 (93 mg, 0,3 mrnol) foi adicionado, juntamente com N, Ills diisopropiletilamina (DlEA., 390 mg, 3,9 mrnol). A mistura foi agitada de um dia para o outro em temperatura ambiente.
À mistura de reação foi extinta com NaHOCh saturado (10 ml) e o terc-butil éster 26 foi extraído çom EtGAc (10 ml x 2).
As camadas orgânicas çombiuadw foram secas (WrSCU) e 2D concentradas in vacuo. Q resíduo foi dissolvida em CH^Cls (.2 ml), e TFA (0,5 ml) foi adicionado, A mistura foi agitada por 2 h em temperatura ambiente, ô produto final foi purificado por HFLC. As frações contendo o produto desejado foram combinadas e concentradas. O Composto 21 (15 25 mg, 12%) foi obtido como um solido branco.
Exemple lit Síntese de ácido 4~ (4-cloxòfenil) -2- (2-flúor-3f ®niipropânoilamino)tiofend-3-carboxí1ico (31)
257/356
IS A uma soluçãp dp compusto 27 (330 mg, 2 mmol) em 5 ml de piridfilio· poll (f luoreto de hidrogênio), foi lentamente adicionado, com boa agitação, nitrito de· sódio .(210: nig, 3 mmol)v Após ser agitada em temperatura ambiente por 18 h,
água (2 o t ml) foi adicionada. A sol ução r es ul ta.n t e foi
15 extraída com éter. J 4 camada de. éte sx foi lavada com NaC a i
N. A oam ada aquosa foi acidificads ( com HCÍ e extraída com
éter. A camada de « §:ter foi seca (NaâSÓ. d · o solvente foi
removido in vacuo. 0 produto brut o 28 (195 mg, 58%) foi
usado na etapa seguinte, sem puri.fi .cação adiei onal.
20 A u; na solução de 28 (195 mg, 1,2 mmol) em CHsCl^ (2
ml) , for am adicioná idos cloreto d< a oxa Lila (295 mg, 2,3
mmol} e 4-dimetílam· inopiridina .(DM AP, 23 mg f 0,2 mmol) A
mistura de reação fôi agitada por 2 h eiT i temperatura
ambiente, 0 solvent te foi remavíc so in va cm c e seco. . 0
25 resíduo foi dissolv ido em CH3çla ( 2 ml) e 4 (63 mg, 0,2
mmol) foi adi .c tonado, ju n tamer ite com 1 AN-
diisoprar >ile ti lamina (D TEA, 390 mc J, 3,0 i mmol}. A mist :ura
foi agita ida de um d i a para o outro em ter ipcrat ura ambiet tte.
A misture i de reação foi extinta com NaHCí sar urado (10 ml)
3 0 e o isrc- but.il éster 30 foi extraíd to c om EtOAC {10 ml x 2) .
258/356
As camadas orgânicas combiriadas foram sacas ) e concentradas .in vacuo. Q resíduo foi dissolvido m CHxCla .(.2 ml) r e TEA (0,5 ml) foi adicionada. A mistura foi agitada por 2 h em temperatura ambiente. o produto final 5 foi purificado por HFLC. As frações contendo o produto desejado foram combinadas e concentradas. o composto 31 (15 mg, 18%) fói obtido como um sólido branco.
Exemplo M: Síntese de ácido 4- (4-cloròfenil)-2-(2-fluor-3f eni Xprópanoilamino)tiofeno ~3-carboxílice (35)
1.0
(COCík.
w% HO fiaNCjüC t«MR:; awsfo,. It $
A uma solução resfriada do composto 27 (330 mg, 2 20 mmol) em 5 ml de HC1 10%, foi lentamente adicionado, com boa agitação, nitrito de sodio (210 mg, 3 mmol) . A. mistura de reação primeiro foi agitada por 3 h a 0°C e depois em temperatura ambiente- de um dia para o outro. Ãgua (26 ml) foi adicionada.. A solução resultante foi extraída com éter.
A camada de éter foi lavada com NaOH 1 N. A camada aquosa foi acidifiçada com HC1 e extraída com éter. A camada de éter foi seca '('Na^SCL) . O solvente foi removido in vacuo. O produto bruto 32 fõí usado na etapa seguinte, sem purificação adicional.
A uma solução de 32 mmol) em CH2C12 (2 ml) , foram
259/356 adicionados cloreto de- çxalila (508 mg, 4 mrnol) -e 4dimetllaminopiridina (dmaf, 24 mg, -0,-2 mmol). A mistura de: reação .foi agitada por 2 b. em. temperatura ambiente·» O solvente foi- removido in vacuo e saco, o residue foi dissolvido em CH2.C12· (2 ml) è 25 (63 mg, 0,-2 mrnol) foi adicionado, juntamente com iV, N-dxisôprópílètilamina (Dl EA,
g. 8 mrnol) .. A mistura foi agitada dé .um diá para © outro em temperatura. ambiente.. A mistura d® reação' foi extinta com NaHCOs saturado (10 ml) è o terc-butíl. éster 34 foi 10 extraído com EtOAc (10 ml x 2) . As camadas orgânicas combinadas foram secas {ha2SO4) e concentradas in. vacuo, ό resíduo fed: dissolvido em CH2.CI2. (2 ml)., e tfa (q,5 ml) foi adicionado» A mistura foi agitada por 2 h em temperatura ambiente. 0 produto final foi purificado por HPLC. As 15 frações contendo o produto desejado foram combinadas e concentradas-. O Composto 35 (10 mg, 3%) foi obtido com© um sólido branco.
Exemplo N: Síntese de ácido 4-(4~clorofenil>-2-[3-(2çlorgfenil) -2-cloropropanoilajaíno] tíofeno-3-carboxílie© (35)
250/356
A uma soluça© resfriada do composto 22 (180 mg, 0,5 mol) em. 2 ml de HC1 1G%, foi lentamante adicionado, com boa agitação, nitrito de sódio (520 mgf 0,75 mmol). A mistura de reação primeiro foi agitada pox' 3 h a 0°C e 5 depois em temperatura. ambiente de um dia para o outro. Água (20 ml) foi adicionada. A solução resultante foi extraída com éter. A camada de éter foi lavada com NaOH IN. A camada aquosa foi acidificada com HC1 é extraída, com éter, A camada de éter foi seca (Na2SQç) . o solvente foi removido
10 in vacuo. 0 produto bruto 36 (77 mg , 77%·} foi usado na
etapa seguinte, sem purificação adicional,
A uma solução de 36 (77 i vg, 0,35 mmol) em CHsCi2 (2
ml) , foram: adicionados cloreto < âe oxalila (89 mg, 0,7 mmol)
e 4-dimetilaminopitidina (DMAÍb 8 mg, Ó, 07 mmol) . A mistura
de reação foi agitada por 2 h em temperature ambiente. O solvente foi removido in vacuo e seco, ó resíduo foi dissolvido em CHxC12 (2: ml) e 25 (43 mg,, 0,14 mmol) foi adicionado, juntamente com W,N~diisopropiletilamina (dzea, 181 mg, 1.,.4 mmol) . A -mistura foi agitada de um dia para o 20 outro em temperatura ambiente. A mistura de reação foi extinta com NaHCOj saturado (10 ml) e o térc-butil éster 38 foi extraído com EtQAc (10 ml x 2) . As camadas orgânicas combinadas foram secas (NasSOs) e concentradas in vacuo, ο resíduo foi dissolvido em CHSC12 (2 ml), e TFA (0,5 ml) foi 25 adicionado. A mistura foi agitada por 2 h em temperatura ambiente. 0 produto final foi purificado por HPLC. As frações contendo o produto desejado foram combinadas e concentradas. 0 Composto 39 (2 mg, 3%) foi obtido como um. sólido branco.
Exemplo 0: Síntese de ácido 2-(S-flúor-S-fenilprop261/356 enoilamino)-4~(4-clorofenil)tiofena-3-caxboxMlioo (43)
A uma solução de 40 (83 mg, Q f 5 mmol) em CH2C13 (2 ml) , foram adicionados cloreto dá oxálila (127 mg, 1 mmol) e 4’dímetilaminopiridina (WAP, 12 mg, 0;1 mmol) . A mistura de reação foi agitada por 2 h em témperatura ambiente. Gsolvente foi removido in vacuo e seco. O resíduo foi dissolvido em CH3Ç12 (2 ml) e 25 (62 mg, 0,2 mmol) foi adicionado., juntamente çom <fp~diisopx'opilet.ilamina (ÍXIEA,
258 mg, 2 mmol) . A mistura foi agitada de um dia para o outro em temperatura ambiente, A mistura de reação foi extinta com WHÇQa saturado (10 ml) e o tero-butil ester 42 foi extraído com EtOAc (10. ml x 2) . As camadas orgânicas combinadas foram secas (NasE0,í) e concentradas in vacuo. Ο resíduo foi dissolvido em ÇHSC12 (2 ml), e TEA (0,5 ml) foi adicionado. A mistura foi agitada por 2 h em temperatura ambiente. O produto final foi purificado por HPLC. As frações contendo o produto desejado foram combinadas e concentradas. O Composta 43 (66 mg, 82%) foi obtido como um sólido branca.
Exemplo Pí Síntese de ácido 4 - (4-clorofenil) -2 - (2-sietil-3~ fenilpropanoilamino)tiafeno-3-carboxíliço (473
262/356
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A uma solução dé- 44 (82 mg, 0,5 mmol) em CH.3CI3 (2 ml), foram adicionados cloreto dè oxàlila (127 mg, 1 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (DMAF, 12 tòg, 0,1 mmol) . A mistura de reação foi agitada por 2 h em temperatura ambiente, O 10 solvente foi removido .i.n vaçUP ©: seco. 0 resíduo foi dissolvidó em. CH2CI2: (2 ml) e 2.5' (62 mg, 0,2 mmol) foi adicionado, juntamente corn iV<N~diisopropiletilamina (DIEA,
258 mg, 2 mmol) , A mistura foi agitada de um dia para o outro em temperatura ambiente, A mistura de reação foi 15 extinta com MaHCPs saturado (10. ml) e o terc-butil éster: 46 foi extraído com EtOAo (10 ml x 2 ) . As camadas orgânicas combinadas foram seças {BasS©.d e concentradas in vacuo, ο resíduo foi dissolvido em CH2GI2 (2 ml) , e TFA (0,5 ml.) foi adicionado, A mistura foi agitada por 2 h em temperatura 20 ambiente. Q produto final foi purificado por HPLC. As frãçSéS contendo o produto desejado foram combinadas e concentradas.. O Composto 4'7 (11 mg, 14%) foi obtido como um sólido branco.
Exemplo Qt Síntese de ácido 4-(4-aloroÊenil)-2-(3fenilprop-2-inoilamino)ti ©feno-3’Carboxilico (50)
263/356
A uma solução de 48 (35 rag, 0,24 mmol) ent CH2C12 (2 ml), .foram adicionadas E-cloro-í,6-dimetoxí-l,3,5-triazina (CDMT, 42 mg, 0,24 mmol) e 4-metilmorfolino (EMM, 103 reg, 0,8 mmol). A mistura de reação foi agitada por 0,5 h era temperatura ambiente antes da adição .de 25 (62 mg, 0,2 mmol) . A mistura .fox agitada de um dia para o outro em temperatura ambienta. Ã mistura de reação fol extinta com NaHCO-j- saturado (10 ml) e o terc-butil ester 46 fol extraído com EtOAc (10 ml x 2) . As camadas orgânicas combinadas foram secas (Na^SOj e concentradas in vacuo. Ο resíduo foi dissolvido em Cd2cls (2 ml), e TFA (0,5 ml) foi adicionado. A mistura foi agitada por 2 n em temperatura ambiente. O produto final foi purificado por HPLC. As frações contendo o produto desejado foram combinadas e concentradas. O Composto 50 (3,8 mg, 5%) foi obtido como um sõlído 'branco.
Exemplo R: Síntese de ácido 2M3,3-difenilprapanoilamino) 4-(4-clõzòfenil)tiofeno»3-carboxiliòo (54)
íCQCOí, sb* t £ &
A uma solução de 51 (113 mg, 0,5 mmol) em CH2C1« (2
264/356 ml), foram adicionados cloreto de oxalila (127 mg, 1 mmal) e 4-dimetilaminopíridína (DMAP, 12 mg, 0,1 mmol). A mistura de reação foi agitada por 2 h em temperatura ambiente. O solvente foi removido in vacuo e seco. 0 resíduo foi .5 dissolvido em CH2C12 (2 ml) e 25 (62 mg, 0,2 mmol) foi adicionado, juntamente com E, A’-diisopx'opiletilamina (DIEA,
258 mg, 2 mmol) . A mistura foi agitada de um dia para o outro em temperatura ambiente, A mistura de reação foi extinta oom .NaHCGj saturado (ló ml) , e o terc-butil éstçr 12 53 foi extraída com Stôàc (10 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram secas (W-sSQU e concent radas in vacuo. 0 resíduo foi dissolvido em CH2C1Í: (2 ml), e TFA (0,5 ml) foi adicionada. A mistura foi agitada por 2 h em temperatura ambiente. ô produto final foi purificado pôr HPLC. As 15 frações cbnteçdò o produto désájado foram combinadas e concentradas. O Composto 54 (46 mg, 10%) foi obtido coma um sóiida branco,
Exemplo §.« síntese de. ácido 4-«-bromofenil) -2 - (2-metil-3fenilpropanamido)tícfeno-3-carboxílico (59)
Ürna solução de amínotiofeno 57 (80 mg, 0,227 mmol), cloreto ácido 56 (52 pl , 1,5 eq) , DMàP- (5 mg), e DXEA (197 pl) em 2 ml da DCM foí agitada dé um dia para .0 outra em 30 temperatui'a ambiente. Após desenvolvimento com NaJHiCÇN
265/356 aquoso, a camada de DCM foi separada, concentrada e depois submetida â purificação com coluna silica gel (12 g) usando gradiente 8-50% B (A: hexano; B: EA 50% em bexano) para gerar 114 mg do intermediário t-Bu éster 58, o éster acima .58 foi agitado em TFA/DCM (Itl, 3 ml) em temperatura ambiente por 4 h. Após evaporado até seco, o residue foi dissolvido em DMF e submetido à purificação por HFLC preparatória de fase reversa, o composto do título 58 foi isolado como um sólido branco > 52,9 mg.., rendimento global; 47,96) .
Exemplo T: Preparação de terc-butil 2-amino-4-(4hromofenil)tiofeno-3-carboxilato (62)
S (12,06 g, 0,38 mol) e morfolino (39,5 ml,. 0,38 mol) foram adicionados a uma solução de 60 (50 g, 0,25 mol) e 61 (54,78 ml, 0,38 mol) em t-BuOH (250 ml). A mistura foi aquecida até 6CPC por 65 h. Após evaporação do t-BuOH, o resíduo foi purificado por cromatogxafia em coluna (PE./ÊA » 100’1) para gerar 57 (14 g, 15,7%. de rendimento). XH RMN (CPCI3, 300: AHs) ; d - 1,21 (s, 9H) , 6,01-6,10 (m, 3H) , 7,13-7,16 (m, 2H), 7,42-7,45 (m, 2H) . IC-MS: 353,9 (m-lp.
TÍÍqh ~*
O composto 25 também foí obtido usando métodos
266/356 similares aos descritos acima. Composto 25 (10,0 g, 11,3%). XH RMN (CDClj, 300 MHz) : Õ « 1,21 (s, 9H) , 6,00 (s, 1H) , 6,03 (s, 2Ή), 7,18-7,22 (m, 2H) , 7,26-7,30 (m, 2H) . LC-MS: 309,9 (M-1).
Exemplo Us Preparação de ácido 4-(4-clorofenil)-2-(2-mo-2(1 r 213,4-tetraMdròçaftalen-2 - il) etil) tiofeno-3-carboxííico (65A)
A uma solução de ácido 1,2,3,4-tetrahidro-2-naftaleno20 carboxííico {176 mg, 1,0 mmol) em CH2C12 (.2 ml), foram adicionados- cloreto de oxalila (254 mg, 2,0 mmol) e 4dímetilaminopiridina (24 mg, 0,2 mmol), A mistura de reação foi agitada por 2 h em temperatura ambiente.. 0 solvente foi removido in vacuo e seco. O resíduo foi dissolvido em
CHsClg (2 ml) e 25 (124 mg, 0,4 mmol) foi adicionado, juntamente com AT, fí-diisopropiletilamina (520 mg, 4,0 mmol) .
A mxstura fói agitada de um dia para o outro em temperatura ambiente. A mistura de reação foi extinta com NaHCÔ3 saturado (3.0 ml) e c terc-butil éster 65 foi extraído com
EtOAc (10 ml x 2) . As camadas orgânicas combinadas foram se-cas (Na.sSCM e concent radas in vacuo. 0 resíduo foi dissolvido em CH2.Ç12 (2 ml), e TFA (0,5 ml) foi adicionado, A mistura foi agitada por 2 h em temperatura ambiente, o produto final foi purificado por HPLC. As frações contendo o- produto desejado foram combinadas e concentradas. 0 Composto 65A (24 mg# 14%) foi obtido, como um sólido branco.
Exemplo V? Preparação de ácido 4-(4-bromofenil)-2-{U2clorofen.il) metoxi) earbunilamiuo}tiofeno- 3 -carboxílico (67A)
Uma solução de aminotíofenô 57 (80 mg, O,227 mmol), 220 dloróbenzil-cloroformato (52 μί, 1,5 eq)> ΠΜΑΡ (5 mg) é diea (197 μί) em 2 ml de DCM foi aquecida a 45°C por 16 h. Após um desenvolvimento com NaHCOj aquosa, a camada de DCM foi separada, concentrada e depois submetida ã purificação por HPLC preparativa de fase reversa, para gerar 12 mg do 25 intermediário de t-butil éster 67. o éster 57 foi agitado em TFA/DCM (1:1, 3 ml) em temperatura ambiente por 40 min. Após evaporado até seco, o resíduo foi dissolvido em DMF é submetido a purificação por HPLC preparativa de fase reversa. O composto- do título 67A foi isolado como um 30 sólido branco (7,6 mg, rendimento global: 7,2%).
268/356
Exemplo Ws Preparação de terc-butil 4-(4-brmofenil)-2-(2-
1, 2,3 ,-4 -t.»tr ahidro £ soquínol i 1 oarboni 1 amino) t i o f eno * 3 - c arbox i1at© (70)
Uma mistura de tetrahidrOissquinolina (68) (63 μΐ, 0,. 5 15 mmol) em 5 ml de DCM e 5 ml de NaHCO3 aquoso saturado fox resfriada até 0»C. Uma solução de fosgênio (980 ,μΐ, 4 eq 2ϋ% em toluene) foi adicionada. Após agitação a 0ôÇ por 30 mint a. fase de DCM foi separada, seca sobre. NasSG4 e evaporada, O tetrahidroiscquinolina-“2~carboníl cloreto (69) bruto resultante foi acoplado com aminotiofeno 57 de um dia para o outro em temperatura ambiente em dcm (2 ml) em presença de DMAP (5 mg) e DIEA (no μΐ) , Após um desenvolvimento com NaHCQi aquoso, a fase de DCM foi separada, concentrada e depois submetida à purificação por
HPDC preparativa de fase reversa para gerar 46,3 mg de terç-butil 4- (4~Womofenil) -2- (2-1,.2,3,4t e trahidro isoquinolí1carbonilamino)tiofene-3 -carboxilato (70) como uma espuma amarela em 45,1% de rendimento. Preparação de ácido 4-(4-bromofenil)-2-(2-1,2,3,4-
0 tetrahidrdisoquino1iIcarboni1amino)tiofeno-3-cãrboxilico
269/356 (71A) e N~[4-(4-bromofenil)(2-tienil)1-2-1,2,3,4tetrahidrci soquinolilearboxami da (7IB)
Uma solução de terc-butil 4-(4-bromofenil)-2-(2-
1.. 2,3,4 tetrahidroisoquinolilcarbonilamino) tiofeno-3- carboxilato (70) (46,3 mg) em TFA/DCM (1:1-, 3 ml) foi agitada em temperatura ambiente por 40 min. Após evaporado ate seco, o resíduo foi dissolvido em DMF e depois submetido â purificação pôr HFLC preparativa de fase reversa. 22,9 mg de ácido 4-(4-bromofenil) -2-(2-1,2, 3,410 tetrahidroisoquinoliIcarbonilaminò)tioféno-3 -carboxí1ieo (71A) (rendimento: 55,.5%) e 6,1 mg de N-[4-(4bromofsnil)(2-tienil)]-2-1,2,3,4tetrahidroisoquiuolílcarboxamida (71B) (rendimento- 16,3%) foram isolados como sólidos brancos, respectivamente.
Exemplo x$ Síntese de Soldo 4-(4-alôrofenil)’2-(3-(3fluorfenil)ureido)tiofeno-3«çarboxilicõ (74)
Uma mistura de aminotiofenó 25, isoci.anato 72 DMÃP e 2S ΒΙΕΆ é agitada em 20 ml de DCM de um dia para o outro em temperatura ambiente. Após desenvolvimento com NaHCò3 aquoso, a camada de DCM -é separada, concentrada e purificada por cromatografia. em coluna de síliça gel. O grupe de proteção é removido por agitação do éster 73 em 30 TFA/ DCM em temperatura ambiente, 0 solvente ê removido in
270/356 vacuo e purificado por HPLC preparativa»
Exemplo Y: Síntese de ácido 4-(4-clorofenil)-2-(3-(furan-2illpropanamidu)tiofenc-3-carboxílico (77)
Uma mistura de aminotiofeno 25, cloreto ácido 75 DMAP é DIEA ê agitada é® 20 ml de DCM de u® dia para o outro « temperatura ambiente. Após desenvolvimento com HaHCCh 15 aquoso, a camada de DCM é separada,· concentrada e purificada por crornatografia em coluna de silica gel. 0 grupo de proteção é removido por agitação do éster 76 em TFA/DCM em temperatura ambiente, 0 solvente é removido ín vácuo e purificado por HPLC preparativa.
Exemplo S: Síntese de ácido 4-p-tolil-2-(3,4,5trimetaxibens amido)tiofano-3 -çarboxílico
Etil cianoacetato (5 mmol) e 1-(3,4,5trimetoxifeniljetanona (5 mrnol) são dissolvidos em tolueno {5 ml) . Morfolino (5 mrnol) é adicionado, seguido por 2S peneiras moleculares ativadas (4 Ã) . A reação ê agitada a 80°U por 12 horas. A reaçao & resfriada até a temperatura ambiente, filtrada e concentrada, ó resíduo é recolhido em tolueno (5 ml), etanol (5 ml), e enxofre é adicionado (0,16 g, 5 mmol.) , A mistura de reação é aquecida com mistura, a 3 0 7õ®ç por 12 horas. A reação é resfriada até a temperatura
271/356 ambiente e os solventes são evaporados. G resíduo ê purificado por HPLC para fornecer etil l-amino-i- (3,4,5“ trimetoxífenil) tiofeno-3-carboxílato. Etil 2-amino-4(3,4,5-trimetoxifenil)tiofeno-3-carboxílato (5 mmol} é s tratado com 4-metiÍbensoil cloreto (S mmol) em THF (10 ml).
A. reação e agitada em temperatura ambiente por 10 horas. A reação é diluída com WQH 1 N (16 ml) e acetato de étila (15 ml) . As camadas são separadas, a camada orgânica é seca com sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada. O 10 resíduo é purificado por cromatografia instantânea para fornecer etil 4-p-tolil-2-(3,4,5trimetoxibensamido)tiofenc-3-carboxilato. Etil 4-p~tolil-2(3,4, 5-trims toxibenaamído) tiofeno-3 ~çarboxilato é hidrolisado sob diversas condições (por exemplo, LiOH, 15 agua; LiGH, HSO^·., água; ou WOM, água) para fornecer o composto do título·.
Exemplo AÀ: Síntese de ácido 4-(4-sÍórofenil)-2-[(3hidroxibenzo [b] tiofen-2-il} carbonil amino] tíofeno-3'carboxí1ico (S1)
ft >4
Ácido 3 ~(feniImetoxi) benxo(b] tiof eno-2«carboxí1ico
IG.P. Moloney, j.a. Angus, A.D. Robertson, M.J., Stoemer,
272/356
Μ» Robinson, L., Lay, C.E. Wright, K. McRae, A. Christopoulos, Aust. JI Uhsrn 20Q8, 51(7), 484-499) (78., 55 mg, 0., 19 mmol) foi dissolvido em DCM .(.1 ml) e tratado com ©MF (1 gotà) e cloreto de oxalila (0.,-2-0 ml, 2,4 mmol) » A mistura fed agitada pot 3 h e concentrada sob vácuo. Ela foi recolhida em DCM (2 ml) e tratada seqüènbialmente bom tern-but11 2 -amino-4 - (4-cloroferd 1). tiofend-3-carboxilatõ (39 mg, 0,19 mmol) e triétilamina (0,20 ml, 1,4 mmol) . A mistura foi agitada por 20 h ém temperatura ambiente e foi então lavada com cloreto de sódio agues© (3 ml) e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por HPLC para gerar 22 mg (21%) de terc- but11 4-(4~clarofenil)-2{13- (fenilmetoxi)benzo [b] tiofen’ 2-illcarbonilamírioltiof οποί -carboxilàtô: (79) , Esse material foi recolhido em doido trifluoraoético e agitado por 5 h, o solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi dissolvido em DCM (3 ml) e tratado com 1,5: M de tribromet© de boro em ÇCM: (0,1:2 ml, 0,12 mmol) ♦ Após 1 h, mais tribi*ometp de boro em PCM (0.,40 ml, 0,4õ mmol) foi adicionado, e a agitação foi continuada por 2 h. A. mistura foi lavada com bicarbonate? de sódio aquoso (3 ml) e concentrada sob vacua. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa para gerar 5,8 mg (35%) de 81 como um pó esbranquiçado,
Exemplo ABs Síntese de ácido 2-(benzofuran-225 carbon!lamino)-4-(i-metil-S-nitrc-fenil)tiofenó-Scarboxílico (84)
Os®
HÇ W
0«H
Terç-butil (benzofuran- 2 - carbonxlamino} -4 {trifluormetilsulfcnxloxí}'tioféno-3-carboxilato (82, 5Ô mg, 10 0,102 mmol), ácido 4~metil- 3~nitrofenilborôhieo (.28. mq,
0.,15=3. mmol), Tetrakis (trífenilfoáf ina)paládio(fí) (.1,0. mg,
0,001 mmol) e carbonato de sódio (42: mg, 0,407 mmol) foram ccmbinados em etanol, toluáho e água. 2:1:1, e a mistura bifãsíca foi agitada vigorcsamente em um frasco lacrado a 15 70«C. Após 2 horas, a mistura foi filtrada através de
Célite é o Celite enxaguado oom cloreto de metileno, A fração orgânica do filtrado foi levada com água, seca com sulfato de sódio, filtrada, coxicentrada, triturada em metanol, centrifugada, decantada, e o sólido ‘resultante foi 20· seco sob vácuo e tratado com uma mistura 1:1 de cloreto de metiléno e ácido trifluoracético. Após: 4 horas, a mistura foi concentrada in vacuo, e o resíduo triturado em cloreto de metíleno, centrifugado, decantado e seco sob alto vácuo para gerar 84 como um pó branco (35,2 mg, 43%}. XH RMN (500
MHZ, DMSO ds) S = 13,48 (br, 1 H) , 12,57 (br, 1 H) , 7,96 (S, 1. H) , 7,86 (m, 2 H) , 7,78 (d, 1 K) , 7,64 (d, 1 H) , 7,-57 (t, 1 H) , 7,4.9 (d, 1 H) , 7,42 (t , 1 H) , 2, 55· (s, 3 H) ppmExmplo ACt Síntese de ácido 2- (benzofurau-2carbonilamino)~4-[4-(trifluormetoxi)fenill tiofeno-3« carboxílicô (87)
274/356
FF
F .O
F '3
F çH ΐ
H0S W
O OK
H . ;h
Terc-buri 1
2- (benxafuran-2-earbón.ilamino) -4- (trifluormetilsulfonilçxi)tiofeno-C-eárboxilato (85, 50 mg, 10 0,102 ramal), .ácido 4- (trif Iwrmetoxi) fsnilbordnico (32 mg-,
0.,15-3 mrnol), Tetrakis (trifenilfosfíha) paládio (0) (1,-.0 mg,
0,001 mrnol) e carbonato de sódio (4.2 mg, 0,407 mrnol) foram combinados em. etanol, toluene e água 2;l;i, é à mistura bifâsica foi agitada vigorosarnenta em um frasco lacrado a 1S 70 Ci Após 2 horas, a mistura foi filtrada através de delito e o Celíte enxaguado óom cloreto de matilencu A fração orgânica do filtrado foi lavada com água, seca com sulfato de sódio, filtrada, concentrada, purificada por cromatografia de camada preparativa (acetato de etila 20 10%/Hexano), e depois tratada com uma mistura 1:1 de cloreto de metilen© e ácido trif.luoracético. Após 4 horas, a mistura foi concentrada in vaeuc·, e o resíduo triturado em cloreto de metliens, centrifugado, decantado e seco sob alto vácuo para gerar 87 como um pó branco (11,1 mg, 25%), 3H RMK (500 MHz, DMSQ dç) § - 13,35 (br, 1H) , 12,55 (br, 1 H) , 7,87 (d, 1 H), 7,86 (s, 1 H) , 7,75 (d, 1 H) , 7,57 (t, 1H) , 7,43 (d, 2 H) , 7,4.2 (t, 1 H) , 7,36 id 2 H) , 7,08 (s, 1 H) ppm. ESI MS (M*H) 44.8,26»
Exemplo AD? Síntese de ácido 4~(4-clorofenil)-2-(7-nitro*3*
0 oxobenzotiazol -2 - ilcarbonilasnine) tiof eno -3 - carboxilico
275/355 (92Β)
A uma solução de 2-cloro-l,3~dinitrabenseno 88 (2,02 g, 1:0 mmol; am 1,.2-dimetoxietano (DME, 20 ml) , foram adicionados metil meroapfcoacetato 89 (1,6 g, 15 mmol) e 20 trietilamina (TEA, 5 ml, 40 mmol), A mistura de reação fol agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura de reação foi -extinta com '1 M de NaOH (100 ml) . A camada orgânica foi separada e a aquosa foi extraída com EtOAc (ISO ml x 2} . As camadas orgânicas combinadas foram 25 secas (NagSOí·) e concentradas in wcuo. O resíduo foi dissolvido em MeOH (100 ml), e 10 rol de TEA foram adíçionádos. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiènte por 4 h. A -solução da reação foi concentrada in vacuo. C* sólido foi coletado por f 11 tração e seco e gerou 30 91 (2 g, 80%) como um .sólido amarelo.
276/3S6
A uma solução de 91 em THF (20 ml), foram adicionados MeOH (20 ml) e 2 M de LiOH (20 ml) . A mistura de reação foi agitada de um dia para o outro em temperatura ambiente, O solvente orgânico foi removido in vacuo. Q resíduo foi suspenso em H::O (100 ml) e resfriado em um banho-maria gelado, Â camada aquosa resfriada, foi adicionado 1 M de HC1 até pK < 2. O sólido foi coletado por filtração e seco, e gerou o ácido 32 como um sólido amarelo.
Uma mistura de aminótiofend (25, 63 mg, 0,2 mmol) , bensotiazol-S-carbonilcloreto 92 (i) (36 mg, 0,3 mmol), 140 μΐ de DIEA e 2 mg de DMAP em 2 ml de DCM é agitada de um dia para p outro em temperatura ambiente. Apôs desenvolvimento com NaHCOj aquoso, a camada de DCM (aproximadamente 3 ml) é agitada com 2 ml .de 'NaOH 1 JJ por S min. A fase orgânica é separada, concentrada, e depois submetida ã purificação por HPLC preparativa para gerar o produto de N ôxidc, que é subsequentemente agitado em TFA/DCM (1:1, 3 ml) em temperatura ambiente por 1 h. Apôs evaporação até seco, o resíduo solido é triturada com DCM para gerar o produto.
Exemplo AE; Síntese de ãçido 7»nitro»3“oxobenzotiaral~2“ carboxílico (95)
td bs
Sob uma atmosfera de argônio, Tf2o (7,22 ml, 12,1 g,
42,9 mmol) foi adicionado gata a gota, a uma solução agitada de 93 (12, e g, 34,3 mmol) e trietilamina- (9,57 ml, 6,95 g,
68,7 mmol) em DCM (160 ml) a -780C. A mistura foi aquecida
277/356 até 10°C: ao longo de 4 horas. A solução foi. extinta com âgua (150 ml) » A mistura, foi extraída co® diclorometanu (3 x 200 ml) seca sobre NaSO.t e concentrada sob pressão reduzida. A purificação da mistura por cromatografia 5 (sistema ISCO, silica, EtOAc-hexan© 0-50% ao longo de 30 minutos) forneceu 95 (16,12 g, 91%) Como um sólido cristalino <
Exemplo AF: Síntese de ácido 4-(4-clorofenil)-2 (4,5,6#7~ tetrabidrobenzc[d]tiofen-2-il)carbonilamlno]tiofeno-S10 carboxílico (99)
A uma solução de 96 (91 mg, 0,5 mmol) em CH5CI2 (2 ml) , foram adicionados cloreto de oxalila (127 mg, .1 mmol)
20: e 4“dimetilaminopiridina (ΏΜΑΡ, 36 mg, 0,3 mmol) . A mistura de. reação foi agitada, por 2 h em temperatura ambiente - p solvente foi removido in vacuo e seco. O resíduo foi dissolvido em ÒH2C1X (2: ml) e 25 (82- mg, 0,2 mmol) foi adicionada, juntamente com ^,K~diisopropiletiiamina (DIEA,
26ô mg, 2 mmol) . A mistura foi agitada por 2 h em temperatura .ambiente. A mistura dé reação foi extinta com NaHCOs saturado (10 ml) e< o térç-butil éster 98 foi extraído com EtOAc (10 ml x 2) . As camadas orgânicas combinadas foram secas (Na3S0í) e concentradas in vacuo. 0 resíduo foi dissolvido em CH2CI2 (2 ml), e TEA (0,5 ml) foi
278/356 adicionado. A mistura foi agitada por 2 h em temperatura ♦
ambiente. 0 produto final foi purificado por HPLÇ. As frações contendo o produto desejado foram combinadas e concentradas. O Compost© 99 (62, S mg, 75%) foi obtido como um solido biancò. LC-MS: calculado para C2ôH15C1NOsSsi 418 (M +1) <
Exemplo Wi Síntese de ácido 4-(4“Cloro-3-flu<srfenil) 2(quinoxalin-2-ilçarbõnilamincitiofeno ~ 3 ~carboxílico (104)
A uma solução de 100 (43,5 mg, 0,25 mmol) ém CH2C12 (2 ml), foram adicionados cloreto de óxalila (64 mg, 0,5 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (DMAP, 12 mg, 0,1 mmol), A mistura 20 dé reação foi agitada por 2 h em temperatura ambiente. Q solvente foi removido in vacuo e seco, o resíduo foi dissolvido em CH2C12 (2 ml) e 8 (66 mg, 0,2 mmol) foi adicionado, juntamente com .íA^-diisçprcpiletilamina (MEA, 260 mg, 2 mmol) . A mistura foi agitada por 2 h. em .25 temperatura ambiente. A mistura de reação foi extinta com
BaHCOj saturado (10 ml) e o terc-butil éster 103 foi extraído com EtOAc (10 ml X 2) . As camadas orgânicas combinadas foram secas (NasSÚ^) e concentradas in vacuo,. O resíduo foi dissolvido em CHgGlj (2 ml) , e TFA (0,5 ml) foi
0 adicionado. A mistura foi agitada por 2 h em temperatura
279/356 ambient®. 0 produto final foi. purificado por HPIjC. As *
frações contendo o produto desejado foram combinadas e concentradas-. O Composto 104 (52,7 mg, 61%) foi obtido como um sólido amarelo. LC-MS: calculado para C^duClFMjGjS: 428 S (M +1) .
XH SMN iDMSO-dg) 8 7,17 (s., 1H) , 7,25 (dd, 1H, *1 « 2,0, 8,3) , 7,47 (dd, 1H, J - 2,0, 10,5), 7,5« (t, 1H, <T 8,1), 8,04-3,09 (m, 2H) , 8,16-8.18 (m, 1H) , 8,26-8,28 (®, 1H) , 9,64 (s, 1H) , 13,29 (s, 1H) , 13,48 (bs, 1H) .
Exemplo AH: Síntese de ácido 2-0^^0(3,4-011,2,3t i adi aXol- 5 ~i1carboni1amino-4-(2,3 -di f1úor-4metilfenil)tiofeno-3-carboxílico {109)
À uma solução de ácido benzo-1,2,3~tiadia«ol-5carbaxílíço (105) (360 mg, 2 mmol) em 10 ml de DCM, foi adicionado cloreto de oxalila (1,68 ml, 10 eq), seguido por adição de cat- DMF. A solução resultante foi agitada por 3 h em temperatura ambiente, antes de ser evaporada até seca.
C cloreto ácido bruto 106 foi dissolvido em 10 ml de DCM. A solução acima, foram adicionados aminotiofeno 107 (542 mg, 1,67 mmol), DMAP' (5 mg) e DXBA (1,05 ml). Apõa agitada de um dia para © outro em temperatura ambiente, a reação foi desenvolvida- com MaHCOs aquas©. A camada de DOM foi separada e concentrada, o resídua resultante foi agitado
280/358 com 3 ml de NaOH 1 N em 4 0 ml de THF/MeQH/H3G (5 :4:1.) em ♦
temperatura, .ambiente por 2. b e depois neutral irado com .HC1 1 N atd pH de aproximadamente 7. .Após remoção do MeGH e THE, a suspensão restante foi diluída com água. Ο pxecipitadd foi filtrado, lavado com água e seco, para gerar 587 mg de 108 como um sólido branco leitoso, que foi subsequentemente agitado em ΤΒΆ/DCM (1:1, 10 ml) em temperatura ambiente por 3 h. Após evaporado até seco, o resíduo sólido foi triturado com. MeQH, filtrado, lavada com 10 MeOH e liofilizado por dióxano para gerar 373 mg de 109como um sólido esbranquiçado (rendimento global: 51,8%). ~H RMN (DMSO-dd δ 13,4 (bs, 1H) , 12,50 (s, 1H) , 9,21 (s, 1H) ,
8,6.5 (dd, 1H) , 8,29 (dd, 1H) , 7,15 (s, 1H)., 7,10 (m, 2H) .
Exemplo AI: Síntese de ácido 2~(benoxazol-215 iloarbpnílaminç)-4-(7-hÍdroxibenxofurán“2Íl)tiofeno-3caxboxíliao (115)
Uma mistura de 2-acetil-7-hidróxi-benzofurano (1,06 g ramol) , t-buf.il cianoacetato (110, 840 pl, 6 mmol, 1 eq), enxofre (192 mg, 5 mmol) e morfOlino (630 pi, 1,2 eq) em t~
BuÕH (5 ml) foi aquecida a 60.®C por 72 h. Á mistura de reação vermelha foi evaporada para- remover morfolino e tBuOH. O resíduo foi dissolvido em DÇM ® submetido à purificação de fase normal. As frações contando o produto desejado foram coletadas. A concentração gerou 756 mg de
281/356 . - 112 como uma espuma amarela (rendimento: 38%) .
#
Uma mistura de aminotiafeno 112 (66 mg, 0,2 mmol), benzoxazol-2~cax*bonilcioreto 113 (91 mg, 6,5 mmol), 261 μΐ de diea e 2 mg de DMM? em 2 ml de DCM foi agitada de um dia para o outro em temperatura ambiente. Após desenvolvimento com SaHCOj aquosó, a camada de DCM foi separada a concentrada. 0 resídua resultante foi agitado com 0,5 ml de NaOH 1 N em 3 ml de THF./MèOH/H2O (5:4-1) em temperatura ambiente por 1 h, e depois neutralizado com HC1 1 N até pH de aproximadamente 7. Após concentrado até seco, o resídua foi dissolvida em DMF e submetido à purificação por HPLC preparativa para gerar 58 mg de 1.14 como um sólido amarelo, que foi subsegüentemente agitado em TFA/DCM (1;1, 3 ml) em temperatura ambiente pç.r 40 min. Após evaporado em temperatura ambiente até seco, o resíduo sólido foi dissolvido em DMF e submetido a pur if í cação por HPLC preparativa para gerar 26,7 mg de 115 o orna um sólido amarelo. XH' W (DMSO-dd δ 12,8 (bs, 1H) , 9,98 (s, 1H) , 8,01 (d, 1H) f 7,96 (d, 10), 7,66 (t, IH) , 7,56 (m, 2H) ,
7,06 Cm, 3H) , 6,74 (d, 1H) .
Exemple Aút Síntese de ácido 4*íÁ-bramafenil)-2-[(1~ metilimidazol-4-11)carbonilamino] tio feno ~ 3 ~ carboxi1ico (119)
282/356 •Λ*..
.. A uma solução de ácido l-metil-imidasol-ã-carboxílico (116) (114 mg, 0,9 mmol) em 3 ml de DCM, foi adicionado cloreto de oxalila (382 pl ) , seguido por adição de cat. DMF. A solução resultante foi agitada -por 3 h em temperatura ambiente, antes de ser evaporada até seca. 0 cloreto ácido bruto foi dissolvido em 2 ml de DCM. Ã solução acima, foram adicionados aminotiofeno 57 (39 mg, 0,11 mmol), DMAS? (5 mg) e DIEA (238 pl) . Após agitada de um dia para o out.ro a 30 °C, a reação foi desenvolvida com
NaHCCg aqudso. A camada de DCM foi separada e concent rada.
O resíduo resultante .(118 bruto) foi agitado com 3 ml de WQH 1 N em 3 ml TFA/DCM/HXQ (6:3:1) a 456C por 1 h. Apõs concentrado até seed, o resíduo foi dissolvido am DMF e submetido à purificação por HPLC preparativa pára gerar 15 26,8 mg de 119 como um solido esbranquiçado (rendimento global: 60%) > LC-MS: calculado M = 406,25; observado M « 407,87.
Exemplo AKs síntese de ácido 4-benzoid]furan-2-il-2(benzoxazol-2-11carbon!lamino)tiofeno-3-carboxílico (123)
Uma mistura de .2-acetil-benzofurano (120, 640 mg, 4 mmol), t-butil cianoacetato (111, 629 pl, 4,4 mmol, 1,1. eq) , enxofre (141 mg, 4,4 mmol) e morfoli.no (420 pl, 1,2 eq) èm fc-BuGH (4 ml) foi aquecida a 6WC por 72 h. A mistura de reação vermelha foi evaporada para remover morfolino e t-BuQH. 0 resíduo foi .dissolvido, em bCM e submetido à purificação de fase normal. As frações contendo ó produto desejado foram coletadas, A concentração gerou
583 mg de 121 como um sólido marrom (rendimento: 44,6%).
üma: mistura de aminotiofeno 121 {63 mg, o., 2 mmol) , benzofuran-2-carbonilsloreto 113 (54 mg, 0,3 mmol), 140 μΐ de DIEA e 2. mg de MAP em 2 ml de BCM foi agitada de um dia para o outro em temperatura ambiente. Após desenvolvimento 10 com MaHCO^ aquoso, a camada de D CM {aproximadamente 3 ml) foi agitada com 2 ml de NaOH 1 N por 5 min. A fase orgânica foí separada, concentrada e depois submetida a purificação por HPLC preparativa para gerar 54,4 mg de 122 como um sólido amarelo, que foi subsequentemente agitado em TFA/DCM 15 (1:1, 3 ml) em temperatura ambiente por 1 h. Após evaporado até seco, o resíduo sólido foi triturado com PCM para gerai' 41 mg de 123 como um sólido amarelo. BMM (DMSO-dç) 8 13,72 (ba, IH) , 12,42 (s, IH) , 7, S3 (s:, 1H) , 7,87 (d, IH). , 7,78 (d, IH) , 7,67 (d, IH) , 7,56 (t, 2H) , 7,S4 (s, IH) ,
7,42 (t, IH) , 7,31 (t, IH) ,. 7,25. {t., IH) ., 7,14 (s, IH) ,
Exemplo AL: Síntese de anel benzotiazol (quando X é um anel benzofelazol de um composto de Fórmula (I)) , E aqui descrito um método para preparação de uma porção de anel bentotiatol de um composto de 'Fórmula. (I) , como mostrado abaixo,
2S4/356
Em algumas modalidades ,· a porção de anel benzofeiazol Mí de um composto de Fórmula. (I) é substituida com pelo menos um R. Em outra modalidade, o anel benzotiazol ê substituído com peld menos um R selecionado de P, Cl, Er e X.
Exemplas biológicos
Exemplos in vibro
Exemplo 1; Avaliação in vitro para agentes que modulam os níveis de cálcio intracelular
Ensaios baseados em fluorescência foram usados para 10 avaliação dos compostos aqui descritos como, por exemplo, os compostos de Fórmulas (I.)-(V) que modulam cálcio i ntrace1υ1ar.
A, Ensaio baseado em fluorescência da entrada capacitiva de cálcio em células estáveis para Orai-1/STIM-1»
Célulasi
Células que expressam estavelmente STXM-1 e 0rai-i humanas recorabinantes foram geradas por transfecção de um plasmídeo de expressão de Qrai-1 humana (pc©NA3.l~Òrai-l~ cmyc) em células HEK-293 que superexpressam estavelmente 20 BTIM-1 huinana (Roos e eçls. 2005 JCB 169(3) t 435-445) ,
Colônias de células que expressam estavelmente proteínas STXR-l e Òraí-1 foram selecionadas e depois subclonadas por diluição limítante. As células foram cultivadas a 3?°C/CO> 0 em meio completo com FBS 10% e marcadores de seleção 2 5. apropr lados,
Ensaio
No dia anterior ã realização do ensaio, células estáveis para Õrai-l/STIM-l foram plaqueadas em SÔ pl de meio completo a 90-95% de confluência em uma placa de 3 84 30 poços. As células foram desenvolvidas a 37°C/C08 6% de um
285/356 >
* dia para o outro. No dia do ensaio, 1,5 pM de fluo·» 4-AM (T.nvitrogén) èm meio completo foi adicionado âs células, qúé foram então incubadas por 1 hora em temperatura ambiente. As células forma lavadas uma vez era HBSS sem Cb3'* .5 (solução salina tãmponada de Hank) e 35 μί dè HBSS se» Cá2'* foram adicionados a cada poço» Qs: compostos de teste fdrain adicionados aos poços em 10 ul de solução de BBSS sem Ua~v preparada a 4.5X da concentração final desejada, e incubados por 30 minutos em temperatura ambiente.. 0 sinal 10 de fluorescência de base inicial foi então medido com uma leitora de placas FDIFíÇ'4^ (Molecular Devices) . A entrada de cálcio foi iniciada por adição de 5 μί de 10X GaCl2 (10 mM) em HBSS, e as alterações na fluorescência celular foram medidas com a leitora de placas FI>IFR5H. Bm cada poço, a 15 magnitude do sinal de fluorescência em consequência da entrada de calcic na célula foi determinada Por cálculo da diferença entre, o sinal de fluorescência de pico medido apôs adição de cálcio e o sinal de fluorescência de base inicial (designado Pico-Basal), Os valores da IC^o foram 20 tipicamente calculadas como a concentração que. inibiu 50% do sinal de Pico-Basal (Tabela A).
B. Ensaios baseado em fluorescência da entrada capacitiva de cálcio em células RBD-2H3*
Células:
2§ As células RBL-2H3. foram obtidas de ATCC e mantidas em saeió completo com FBS 10% a 37®C/CO8· $*·
Ensáiò:
No dia anterior à realização do ensaio, células
2H3 são plaque adas em 5-0 μί de meio completo em uma placa 30 de 384 poços, AS células são desenvolvidas a 37°Ç/ÇQS 6% de
286/356 um dia para o -outro- e: crescem até 5p60% de confluência par * volta da dia seguinte, No: dia do ensaio, 1,5 pM de corante Fluo-4/AM (znvitrogen) em meio completo é adicionado e incubado por 1 hora em temperatura ambiente. As células são 5 lavadas duas vezes em tampão de HBSS sem .Ca*? e 35 μΐ de tampão de HBSS sem Cá**' são adicionados a cada placa,. Dez μΐ de um composto de teste preparado em uma solução de HSSE sem. Ca2 a 4,5.x da concentração desejada são adicionados a ura poço e incubados por 5 minutos em temperatura ambiente.
Dez μΐ de tapsígargina preparada em uma solução de HBSS sem Ca* a 5.SX da concentração desejada (5,5 p.M) são adicionadas a cada placa e incubados par mais -25 minutos. 0 sinal de fluorescência de base inicial é medido com uma leitora de placas FLIPR·584 (Molecular Devices) < Cinco μΐ de 15 12X cálcio em HBSS (12 raM) são adicionados, e as alterações na fluorescência celular são medidas cam a. leitora de placas FLIP?/8'5, Em cada poço, a alteração no sinal fluorescente em função do tempo devida à entrada de cãlcio na célula é determinada por cálculo da diferença entre o sinal fluorescente medido 7 segundos apõs â adição de .cálcio e o sinal de fluorescência de base inicial no momento zero (t. - 0) . Esse parâmetro é designada «bpslope,^ .
O valor da ICS0 é calculado coma a concentração na qual 50% do wDpslope,f são inibidos.
2.5 Gs CompostoS: de Fórmula (X)-(v) são inibidores nesse ensaio.
Ü. Ensaias baseada em fluorescência da entrada capacitiva de cãlcio em células de JUrkat.
Células:
30' As células de Jurkat E6-1 foram obtidas de ATCC e
287/356 mantidas .em meio, completo com FBS 10% a 37®C/CG2 6%.
Ensaio:
No dia anterior à realização do ensaio, as células de durkat E5-1 são semeadas em uma densidade de 2 milhões de células/ml, em meio completo em um. frasco T-175. As células são. desenvolvidas a 37®C/CO2 O de um dia para o outro. Nó dia seguinte,. 1,5 μΜ de corante Fluo-4-AM (Xnvitrogen) em meio completo é adicionado e incubado por 1 hora em temperatura ambiente. As células são coletadas, lavadas 10 duas vetes em tampão de BBSS sem CaÍT e plaqueadas em 35 μ.Ι de tampão de HBSS sem Cá2*' em uma placa de 384 poços. Dez pl de um composto de teste preparado em uma solução de HBSS sem Ca2* a 4,5X da concentração desejada são adicionados a um poço e incubados por 5 minutos em temperatura ambiente.
Des μΐ de tapslgargina preparada em uma. solução de HSSS sem
Caa* a 5,5X da concentração desejada (5,5 μΜ) são adicionados a cada placa e incubados por mais 25 minutos, O sinal de fluorescência de base inicial é medido com uma leitora de placas FLIPR4** (Molecular Devices) . Cinco pl de 20 12X cálcio em HBSS (12 mM) são adicionados, e as alterações na fluorescência celular são medidas com a leitora de placas FLIPR3**. Em cada poço, a alteração' no sinal fluorescente em função do tempo devido à entrada, de cálcio., na célula é determinada por cálculo da diferença entre o 25 sinal fluorescente medido 7 segundos apôs a adição de cálcio e o sinal de fluorescência de base inicial no .momento zero (t - Q) ·. Esse parâmetro é designado wüpslcpe·* .
O valor da TCs$ ê calculado como a concentração na qual S0% do Upslope são inibidos.
Os Compostos de Fórmula (I)-(v) sãc inibídores nesse
288/356 ensaio.
Tabela A. Dados in vitro para compostos representativos
2S9/356
29Ô/3S6
291/356
1,0 ; 1,0 5 Cá 10
Também são aqui .revelados compostos que possuem uma (μΜ) de menos de 10 μΜ em células JR251 ou BBU, ou em.
ambas, apenas como exemplo:
ácido 4 -(4-metoxifenil)-2- O-fenilpxopanamido)tiofeno-
3-carboxilico
Ácido 4 - (2,4 -diclorofenil)- 2 -(3-feniIpropanamido) tíofeno-3-carboxílico
Ácido 4- (4-clorofenil) -2- (2-fenilaaetamido}tiofeno-3carboxílicô:
Ácido 4 ~ (4-ciauofenil)- 2 ~ (3 -fenilpropanamido}tioieno3 -çarboxílied
Ácido 2 - (2 - (4. - clorofenil) - 3 -metilbutanamido) -4- (34 15 dialord.feti.il} t ioieno- 3-carbcxí licc·
Ácido 2 ~ {3 -benzilureido) -4 ~ (4 -brornòf enil) tiof ano-3 earboxílicp
Ácido 4“ (3,4-diclorofenil)-2-(2-(3-metoxifenil) : acetamido)tiofeno-3-carboxí1i co
Ácido 4-(3,4diolorofeuil)-2-(3-feuilpropanamidoj tiofeno-3-carboxí1ico
Ácido 4 - (4~bromof enil) -2 - (3,3 -dif enilpt^opanamido) tiofeno-3~carboxi1ico
292/356
Ácido 4 - (4 -bromof enil) -2- (3 - (2,. 4- dif luorf enil) própanamidb) tí of enc - 3 - cárboxí '1 i co
Ácido 4 - <4-brbmof enil.) -2 - (3 - (3,4-dif luorfenil) propànamido)tiofano ~ 3-carboxflido
-Ácido 4-(4-bromofenil)-2- (3-(3-fluorfenil) pzOpanãmido) t. iof eno ~ 3 - caxboxí 11 co ácido 4 - (4-bromofenil) - 2 - (3 - (4 - f lúór f eiii 1) piopanam.idb) t i of e no- 3 -carbox í1icο
Ácido 4-(4-bromof eni 1) -2-:( 3 -f anilpropanamido) 11 of οποί 0 3-carbox11ico
Áçidç 4-(4-çlorófeníl)-2-(3,3-difenilpropanamido) t i o feno-3-carboxi1i co
Ácido: 4- (4-clorofenil) -2- (3- (2,4-difluorÊeníl) propammido) t iof eno- 3 -carboxilico
Ácido 4 - {4 -olorof enil) - 2 - (3 - (. 3,4 -dif luorf enil) propanamidoj tiof eno-S -çarboxílicç.
Ácido 4- (4-olorofenil) -2- (3- {3-clcrofeml)pxopanamido:} t i of eno- 3-carboxx1ico
Kcido 4*(4-cXorofenil)-2-(3-(3-fluorfenil)propanamido)
2S t i of eno - 3 ~ carbox í 1 i coÁcIdo 4 - (,:.4 - clcrof enil) - 2 - (3 - (4 -clorof enil '> propanamido) t iof eno - 3 - car-boxi li co
Ácido 4- (4-clorofenil)-2-(3- (4-fluorfenil)prõpanamíido) t iofeno-3-carboxi1Icq
Ácido 4-(4-clorofenil)-2-{3-fenilpropanamidõ)tiofenò3 -carboxÍ1i co
Ácido 4- (4-eloroffônil) -2~ (4-feni.l.butananiido? tiofeno-3carboxilieo
Ácido 2 (1, 5-dimetil-lH~pirazol”3~cax“boxamido} -4-p3 0 tollitiofeno- 3 -carboxili co x 293/356
Acid© 4- H-bromofenil)-d- (1 ~metil-lH-ímídazol-4carboxamídb)tiof.feno- 3-carboxílico
Ácido 4- (4 -bromofenil} -2 - ( 3 -f enil -1,2 f 4 -oxadiazol - 5ilamino) :tiof énò:~ 3 - carbòxí lico s Ácido 4·- (4“bromofenil} --2- (4 -m-stil·· 1 z 2,3-tiadiaz©l~5carboxamido)tiofeno-3- carboxí1ico
Ácido 4- (4-bromofenil) ~2~ (5-clorb-l-metil-lH-pirazol4~ carboxamido)t íofeno-3-carboxílico
Ácido 4~(4-clorofenil)~2~(l-metii~lH-xmidatol-4- o carboxamido)tiofeno-3-carboxí1ico
Ácido 4 -(4-clorofenil)-2~(1-metil-5 -fenil-lll-pirazol3 -carboxamido)tiofeno-3-carbexí1i c©
Ácido 4- (4-clorofen.il) -2- (l-fenil.-lH-pirazol-4carboxamido) tiof eno-3-carboxíli.co
Ácido 4- (4-clorofenil) -2- {l-fenil-5- (trifl.uormet.il) 1H.-pirazol-4-carboxamido)tiofeno- 3 ~oarboxí1ico
Âcid© 4” (4- clorofeníl) -2- (3,5-dimetil.isoxazo.l -4earboxamido)tiofeno-3-earboxilie©
Ácido. 4 - C4 -c 1 orofeni 1) -2- (3 - feni 1 ~ 1H-pira®oi~4 -
0 ©a rboxamí do:) t i of eno - 3 - carboxí 1 ico
Ácido 4- (4-clorofenil) -2- (4 -©iclopropilt.iasol>-2~ carboxamido)tiõfeno-3 ~oarboxílico
Ácido 4(4-clorofeníl)-2-(4-métíl-12,3-tíadiasdl-5~ carboxamido)tiofeno-3-carbcxí1ico
Ácido 4- (4-clorofenil) -2- (5- (furan-S-il) -1-tnetÍl-lHpirazol-3 -carboxamide )t i ofeno- 3-carboxílico
Ácido 4-(4-clorofeni1)~ 2 -(S-fenilisoxãzcl-3 carboxamido)t iofeno-3-carboxílico
Ácido 4-(4-clorofénil)-2-(isoxazol-S-
S carboxamido)tiofeno-3 -carboxílico
294/356
Ãcidb- 4- (4-clorofeníl). -2- (tiazol-4* carboxamidojtiofeno- 3-carboxílico
Ãcido terc-butií 4 » {4“bromofeni.l) -2- (.l-metíl-l, 2, Ιο 1 adiarol- 5 - carboxamide)t iofeno-3-earboxí.1ico
Ãcido tçrd-butil 4- (4-bromafenil) -2-(5-çloro-l-metillH-pi.razol- 4 -carboxamide) tiofeno-3 -cax'bdxf lieo
Ãcide 4- Í4 -bre-mof enil) ~2~ (2-hidróxi-6~ me til is on i c o t iuami do). t i of one - 3 - carbox 11 led .Ãcido 4 ·· (l-bromofenil) -2-(6- (trifluormetil)
IQ nicotinamide) tiof eno- 3 carbcxf11 co
Ãcido 4- (4-bramofen.il) -2- (6-fluorpicolinamido) tiafena-
3-carboxi1ico
Ãcido 4- (4-bromofenil)-2-(6-metoxipicolinamido) t iofeno-3 -carboxilico
Ãcido 4-{4~bromofenil)-2-(6-metiInicotinamido)tiofeno3 -carbox£lico
Ãcido 4 - (4 -bromofenil)-2-(pirazIna-2 -carboxamido) t io f eno-3 -carboxi1ico
Ãcido 4 - (4 -Prompteni1)-2- (piridazIna-4-carboxamide)
Q t iof eno ·· 3 ·· carboxi lico
Ãc ido 4 - (4 - c loro f en i 1 j - 2 - (2.., 6 - di cl or on £ co t inamido) t iofeno- 3 -aarboxilico
Ãcidc 4- (4-clorofe,nil) -2- (2,6-dimetoxinicotinamido) tiofeno-3-carbox!lico
Ãcido 4 - (4 -clorofanil) - 2-C2-(trif luormet11)pirimidina-
5-carboxamido)t iofeno-3-carbdxflico
Ãcido 4-(4-elôrofenil) -2~(4-fenilpirimidina-2carboxam ido)t io f eno-3-c arbox11i co
Ãcido 4- (4-clorofenil) -2- (5- (trifluormet.il)pirimidina30 2-caz'boxamido) tiofeno-3-carboxilico
295/356
Ácido 4- (4-elorofenil) -2- (S-metilpii^azina-?darboxamido)tiofèno-3-carboxi11 co
Ác 1 do 4-(4 - c 1 or of eni 1) --2 ~ (5 - f eni Ip 1 r im íd i na - 2 carboxamid©)tiofenò-3-carboxilico
Adido 4- U-olOrof énil) -2 - (S- (trif Iwrmetil) nicotinãmido)tiofeno-3-carbdxílico
Ácido 4-(4-çlçrofenil)-2-(S-cloropiridazína-lcai'boxamido) tiofeâo-3 -carboxilico.
Ácido 4 - (4-oldrOfedil) -2- (E-metoxipicdlinamidd) tiofeno-3-carboxilico
Ácido 4 - (4-clcroÊenil) -2- (6-metilnico.tinamído) t i.of eno~
-carboxi1icó
Áe ido 4 *(4 -c1or©fenil)-2-(1so.nl cotinámid©)tíqfenò-3carboxxlieo
Ácido 4 - (4 -bromof .enil} - 2 - (nlcotinamido) tiofenp- 3 carboxilie©
Ácido 4 - í4-bromofenil) -2 - .(isonicotinamido) tiof eno- 3 c arboxí1í©o
Ácido 2- (..!.,.3-dimetil - 1M-tien© [2,3 -ç] pirazol -520 carboxamide) - 4 -p- toll 1 tiofeno- 3 - carboxi..1 ico
Ácido 4-(2,3-diflüor-4-metilfenil)-2-(imidazo[2,1-
b] t iaxol-6-earboxamido}tiof eno- 3-carboxi1ico
Ác i do 4 - (4 - br orno f .eni 1) -2 ~ (1,3- dime t i 1 -1H -1 i ono (2,3-
c) pirazol-5carboxamido)tiofeno-3-carboxílico
Ácido 4-(4-clorofénil)-2-(1,3~dimetil~lH-tieno[2f3cj pirazcl-5 ~carboxamide)tiofeno-3-carboxi1ico
Ácido 4- (4-clorofénil)-2-(imidazo[2,1-b]tÍazol-6carboxamido)tiofeno-3-carboxilico
Ácido 4- (4-clorofénil) -2- (tiebo [2,3-d] [1,2\. 3] t iadia zd 1 - δ - c arboxami do) t iof eno - 3 - .çarbokí 1 ico
296/356
Ácido 4- (2., 3 díf.lâ.Dr-4-mfâtilfenil) -2- (tieno [3,2-b] tiofènó-2 - carbóxamido) tiof eno-3 -carboxílion
Ácido; 4-.(4 -bròmofení1) -2· (4H-furo [3,2 -b| pirrol-5 carboxamido)r iof end.-3 -carboxíli co
Ácido 4 - (4 -bramofanil) -2 - (4H-tienô [3 ,..2- b] pirrol-S earboxamida)tiofenò-3-carboxílica
Ácido 4(4-clorbfenil) -2- (4H-fura [3 ,· 2-b] piriOl-Scazboxãmidò) tiofeho-s -çàrbçxí lieo
Ácido- 4 - (4 -ciorof anil) -2 - (4H-tienb (3,2-bjpirrôl- 510 càrboxamido)tiofeno-3-carboxílieo
Ácido 4-(4 -clorofenil)-2-(tienò[3,·2 -b]tiofeno-2carboxamido)tiofeno-3 carboxílico
Ácido 4 “ (4-ciaoofénil)-2-(tienp(3,2-b]tiofeno-2carboxamido) tiof eno - 3 - carboxí 1 ico
Ácido 4-(4-bromofenil)-2 -(imidazo[1f 2-a]pixidina-2çarboxamido)tiof ano-3-carboxí1ico
Ácido 4- (4~clorofenil)-2-(3-flüor-S-metílimidazo[1,2a] piridina - 2 “Carboxamido) tiof eno-3 -çarboxí 1 icc?
Ácido 4 - (4-çloro£enil) -2- (imidazo Cl, 2-a]pirídirxa-620 çarboxamído)tiofçno-3-Garboxílico
Ác a do N- (4 ~ (4 -bromof eni 1) - 3 - carbamoi 11 iof eri- 2- i.1} - 1Hbenzo[d]imidazol-2-carboxi1ico
Ácido 2-(lH-benzo[d]imidazol-2~carboxamido)-4»(4clorofenil)tiofeno-3-carboxílico
Ácido 2-(4,. S-diclòro-lH-indol-2-Gai*bQxamido) -4 -ptoli1tiofeno-3-carboxí1ico
Ácido 4-Í4-clorofçnil)-2-(4,6-diclorOlH-iádol-2carboxamido)tiofeno-3-carboxílico
Ácido 4- (4-clorofenil)-2-(pirazolo[lf 5~a]pirímidina-230 carboxamide) t.iofeno-3 -carboxílico
297/356
Ácido 4- {4-clo-rofenil) --.2- (tiwo [2, 3-bl pirazina-Scarboxamide) tiòfèúo~ 3 -carboxilico
Ácido 2 -. (benzo [e] [1 ,:2, 4] triazina-3 - carboxamide) -4 - (4 clorofeni1)tiofeno-3 -carboxilico
Ácido 2- (quinolina-2-carboxamide)-4-p~tollItiofeno-3carboxilico
Ácido 4-(2,3-diflüçr-4-metilfenil)--2-(quinoxalina-2carboxamido) tiofeno - 3 carboxi 1 ico
Ácido 4- (4-bromofenil)-2-(guinolina-2-carboxamido) is tiof eno - 3 --carboxilico
Ácido 4- (4-bromof enil)-2-(quinoxalina~2~carboxamide) tiofeno-3-carboxilico
Ácido 4 — (4-clorofen.il) -2- (5-metilquinoxalina-2aarboxamido)tiofeno-3-carboxi1ico
Ácido 4- (4~clorGfenil) -2- (8-metilquinoxa.lina~2carboxamido)t iofeno-3-carboxilico
Ácido 4- (4~-clorofen.il) -2- (cinolina-3-carboxamido) t iofeno-3- carboxi1ico
Me ido 4 - -(4 ~ ç lorofeni 1) - 2 - (qpinaool ina - 2 - carboxamido)
0 t iof eno- 3-earboxilice
Ácido 4-{4-clorofenil)-2-(quinolina-a-carboxamido) fc iof eno- 3-carboxi1ico
Ácido 4-(4-clorofenil)-2-(quiuoxalina-2-çarboxamido} tiofeno-3 -carboxilico
2-5. Ácido 4- (4-clorofenil) - 2-(1,-2-diidrociclobutabènzenb-
- carbòxamí do) t i o f eno - 3 - carbox Í 1,1 co
Ácido 4- (4-clorofenil) -2- (2,3-diidrobetizo [bl tiofeno-2carboxamido)tiofeno-3-carboxilioo
Ácido 4.- (4-clorofenil) -2- (2- (2,3-diidro-lH-inden-l30 il)acetamido)tiofeno-3-carboxilico .298 / 356 íc ido 4 - (4 “ c loro feni 1) - 2 - (3- - (c i c lohexiImet11) ure i do) t io.f ono - 3 -oarboxilico
Ácido 4-(4-clorofenil)-2-(4~flüor-2,3-diidrobenzo[bj t iof eno-2-carboxamido)tiof©no-3 - oarboxí1i co
Ãc ido 4 - (.4 - ç lorof çn.i 1) - 2 - (4 - oxo-1,2,3,4 ~ tetrahidrona ftaleno - 2 -carbexamido) tiofeno ~ 3 - carboxí1 ico
Ácido 4- (4-clorof’.ebil) -2- (s-fluor-2,3-diidro-l.Hindeno-2 - carboxamide) t. iofene-3 - carboxí 1 ico
Ácido 4-(4-clorofeni1)- 2 - (indoline-2-cai*boxamido) tio feno- 3 - -carboxí1i co
Ácido 4- (4-bromoféniI)-2-(3-adamanti1carboxamide) tiofeno~3-carboxí1ico
Ácido (R)-4-«-clprofenii)-2-(1,2,3,4tetrahidxonaftaleno-2-carboxam ido)t iofono- 3- carboxí1i-co
1.5 Ácido (S) -4-.(4-clorofen.i l) -2 - (1,2,3 f 4 - te trãhidrona f ta 1 eno - 2 - carboxamido) t xof ono -3— carbóxí 1 x-co
Ácido 2* (5-cloro-2,3-díidi%>benzofux'an-2“Carbõxamido} 4 - .(-4 - clorof ®ni 1) t i o feno -3 - earbox í Ixco
Ácido 2- (ciclopi^opanocarboxamddo) -4- (2,4 -diclorqfenil)
Q t. io f e.no - 3 - carboxi 1 ico
Ácido 2 ~(siclopropanocarboxamid©j-4-(3,4-díclorofenil) tiofeno-3 -earboxí1ico
Ác i do 4 - (2 - br orno £ an i 1) - 2 - (c i c l.opr opanoc arboxam i do) tiofeno-3-carboxilico
Ácido 4- (4-biOmofení1)- 2-(1,2.3,4 -tetrahidronaf talenb2 -carboXámido -) t iof eno - 3 -carboxí lico
Ácido 4- (4-bromofenil} -2- (2,3-diidro-lH- indeno-'2carboxamido)tiofene-3 -earboxílico
Ác 1 do 4 - (4 - br orno f en í 1) - 2 - (2,3 - d i id x'obonz of ür an - 2 30 carboxamido)tiofono-3-carboxílico
299/358
Ácido 4-(4-bromofenil}-2-{3 metoxÍciclohexanGcaxboxam.ido) tiofeno-3 -carboxílico
Ácido 4 -(4-bromofenil)-2 -(5-cloro-2,3 di i drobenzo furan-2-oarboxamxdo}t i ofeno- 3 -carboxí1íco
Ácido 4-(4-bromofenil)-2-(8-raetoxi-l,2,3,4t etrahi drenaita1 eno-2-carbóxamído)tiofeno- 3 -carboxí 1 ico
Ácido 4 - (4 -bromof eni 1) - 2 - (cróman- 3 - aai-bòxamido) tiofeno-3-carboxí1ico
Ácido 4-.(4-bromofeni1) - 2 - (í soindol ino - 2 10 carboxamido)tiofeno-3 -carboxí1ico
Ácido 4 -(4-elorofenil)-2-(1,2,3,4 ~tetrahidronaftaleno2 -ca .rb oxam i do) t i. o f e no - 3 ·· c a r box í 1 i c o
Ácido 4 - (4 - c 1 orofeni .1) - 2 - (1,2 - di i droc í c 1 obutabanzeno j,-carbóxamí do)txofeno- 3-carboxí1i co
Ácido 4- (4-elorofenil)-2-(2,3-diidro-1H-xndeno-2carhoxandd©}tiofeno-3-carboxílico
Ácido 4 - (4-elorof enil) -2 -(2,3-diidrobemo [b] [1, 4] dioxina-2cai boxamidcb 11ofeno-3“carboxílico
Ácido 4-(4-clorcfenil;-2-(S-nitro-2,3-diidro-lH20 indeno-2-carboxamido)tiofeno-3-carboxílico
Ácido 4-(4-elorofenil)-2-(ÍsoindoÍina-2carboxamidcí) tiofeno- 3- carboxílico . Ácido (E)-4-(4-clorofenil)-2-(2-cianõ-3feni1acri1amido)tiofeno-3 -carbox í1ico
5 Ác ido (2)-4 -(4 -brOrnofenil)- 2-(2-flúor-3fenilacrilamido)tiofeno-3-carboxílico
Ácido (2)-4-(4-elorofenil)-2-(2-flúor-3fenilacrilamido)tiofeno-3-carboxí1ico
Ácido (Z) -4- (4-elorofenil) - 2- (3- (2-cloròfe.níl) - 230 fluoracrilamido)tiofeno-3-carboxílico
300/336
Ãcxdo 4- (4 -clorofenil )-2-(3 -fenilpropiolamido) tiofeno3-carbdxilico
Ácido 2- {benzofuran-l-cax'baxamido) -4- (2, 3-dif lüer~4metoxifeníl) tiofeno-3-carboxílico
Ácido: 2-(benzófuran-a-aarbGxamído)-4-(2,3-dxxflüor-4me t i 1 f eni 1) t io f eno - 3 -ca rbox í 11 co
Ácidò 2- (benzof uran-S-carboxam.xdo) -4- {2, 3-diidro-lHiiiden- 5 -11) tióf éno-3 -carboxílico
Ácido 2-(benzofuran-2 -carboxamido)-4 -(2,4,διό tfifluorfènil)tiofeno-3-cárboxílíco
Ácido 2-(benzofuran-2-çarboxamido)-4-(2,4-dieloro-3cianofeni1)tiofeno-3-carboxílico
Ácido 2 -(benzofuran-2-carboxamido)-4-(2,4-dicloro-3metoxlfení1)tiofeno-3 -oaxboxílico
1B Ácido 2-(benzofuran~2“Carboxamiâo} -4·· (2,4-díflúox-3hidroxi fenil)tiofeno-3 -carboxí1ico
Ácido 2.-» (benzof uran-2- carboxamide) - 4 - (2,4 - dif lúor- 3 metóxi f en.il) tiof eno-3 - carboxílico
Ácido: 2 - (benzofuran-2-carboxamido) -4 - (2,5-dif lüor-4 ~
Ô metóxi fenil)tiofeno-3-oarboxilíco
Ábldo. 2- (benzofuran-2-aarboxamído)-4-(2,6-diflúor-4raetoxí fenil)tiofeno-3-carboxílíco
Ácido 2-(benzofuran- 2 ~ carboxamide)-4 -(3,4,5trifluorfeni1)tiofeno-3 -carboxílíco
5 Ácido 2 - (benzo furan - 2 - carboxamide) - 4- (3,4 - die loro 2 metilfenil)tiofeno-3-carboxílíco
Ácido 2- (benzofuran-S-oarboxamido)-4 -(4-bromo-2,3difluorf©nil)tiofeno- 3 -darboxílico
Ácido 2- (benzofuran.’2-carboxamido) -4- (4-bromo-2,5-
0 dime t i 1 fenil) t i of eno 3 - carboxf 1 i co
301/356
Ácido 2- (benzofuran-2-carboxamide) -4-(4-clqr©-2,3di fluorfenil) t iof eno.·- -3 -carboxilico
Ácido 2 · (benzofuran-2-carboxamide} -4- (4 - cloro -2,5~ di fluorfenil)tiofeno-3 - carboxflico
Ácido 2 - (benzofuran-2-carboxamide) -4- (.4:-cloro - 2-.flúor 5 - met i 1 f .eni lit 1 ©f enb: - 3 - c arboxi 1 i c o
Áçidb 2-(benzofuran-S-carboxamido)-4 -(4-clôro-3,5di fluorfenil)tiofeno-3-carboxi1iço
Acid© .2-- (benzof«ran -2-carboxamide) -4 - (.4 -cicloprbpil10 2 ( 3-difluorfénil} tiofeno-3-carboxflie©
Ácido: 2 - (benzofuran-2-carboxamide) -4 - (4-f luor-2,3dime t ilfanil)tiofend-3-carboxi1ico
Ácido 2- (benzofufan-2“carhoxàmido)-4- (4 -flúor-2,5 dimet11feni1)tiof eno»3-carboxi1i co
Ácido 2- (benzofuran-2-oarfooxamid©) -4- (4-wtóxi-2,5dime t i 1 f en i 1) t i c f eno - 3 - car box 1'1 icq
Ácido 2 - (bçnzofuran~2 ~carboxamide} -4 - (4-metdxi-2.., 6 dimet 1 If en. i 1) t io f eno - 3 - carbox Í1 i co
Ácido 2“(benzofuran-2-carbcxattiidQ)-4- (S-cloro~2-fluor~ 2Õ 4-metilfenil)tiofeno-3-carboxilico
Ácido 2·· i.benzofuran-2-carbo.xami.do} -4- (benzofuran-5i1)fc i ofeno-3 -carboxi1i co
Ácido 4-(2,3-:difluar-4-metilfenil) -2-(4fluerbemef uran- 2 - carboxamide) tiofeno - 3 - carboxi lie©
Ácido 4~(2f3-difluor~4-metilfenil}~2~(7hidroxibenzofuran-2-uarbòxamido)tiofeno-3 -carboxilico
Ácido (E) -2- (benzofuran-2--carboxamide) -4- (4 cloroes tiri1)tiofeno-3 -carboxilico
Ácido (E)-2-(benzofuran-2-carboxamide)-4 - (430 fluorestiril)tiofeno-3-carboxilico
302/356
Ácido 2-(4-fluorbenzofuran-2-carboxamide) -4- (7bidroxibenzofuran- 2 - i I) t iof ene- 3 · çarboxf li ca
Kcid© 2- (7-hidxGxibençofuran-:2-çarb©xamido) -4- (7hàdroxibenzofuran-2- il)tiofeno-3 -caxboxilico
Ácido 2- (benzo.furan-2 -oarboxamid©) -4 - (4 - f lü.or-2,3 dimatilf èni 1) tiofeno-3 -cárbaxf lico
Ácidè 2- (benzofuran-2-çarboxamido) -4»(g-brí»tó-7metoxibçnzofuran-2~i1)ti ©feno-3 ~ çarboxí1ico
Ácido 2~ (benzofwan-2-carboxamido)-4-(510 bromebenzofuran-2- il} tiof e.no- 3-carboxílie©
Ácido 2 -(benzofuran-2-oarboxamido)-4-(5clorobenzófúràn-2- il) tiof eno- 3 -carhoxflie©
Ácido 2 - (benzof uran-2-oarboxamido)· - 4 - ( 5Mdmxibsnzof uran-2 -11) tiof ene-3 ~çarboxílico
Ácido 2-{benzofuran-2-caxboxamido) -4-(5~ me r. ox ibenz ©furan - 2 - i 1) t iof eno - 3 ~ carboxi 1 i co
Acido 2“(benzçfuran-2-carboxamido)-4-(6bromobenzofuran-2 -i1)cx ofeno-3-carboMlico
Ácido 2- (bensofuran-2-carboxamido)-4-(7-
0 (benziloxi) benzof uran - 2 - il) t iof eno - 3 - cai'boxi 1 io©
Ãci do 2- (benzofuran-2 - carboxamide)-4 - (7cianobenzofnran-2 - i.l.,) tiofeno-3 -carboxilico
Ácido 2-(benzofuran-2-carboxamido)-4~(7bidroxibensofuran-2-il)tiofeno- 3-carboxilie©
Ácido 2- (ben.zofux'an-2-cax'boxamido) -4- (7metoxibenzofuran- 2-i1)tiofeno-3-carboxi1ico
Ácido 2- (benzofuran-2-carboxamide)-4- (benzofuran-2il}tiofeno-3-carboxílie©
Ácido 2- íbenzafuran-2-carboxamido) -4.- (benzofuran-5-
0 i1)t iofeno-3 -carboxflica
303/356
Ac ido 2- {benzo furado - 5 - carboxamide) - 4 - (2,3 - d i.f lücr - 4 métilfeni1)tiofeno-3-carboxílico ácido 2- (benzofurano-S-carboxamidc) -4- (4-bromo-:2,3difluoxfànil)tiofeno-3-carbbxílico
5' Ácido' 4-(7-(iH-pirazol-3 -il) benzofuran-2 -iX) -2(bensofúrán-2-Oaiboxamido)tiofeno- 3 -carhoxílico
Acido 4- (7 - (lH-pirazdI-4-il)benzofuran-2 -1.1) ·· 2 ·· (benzofuran- 2-carboxamido) tiof eno-3 -carboxílico ácido 4 - (7-acetòxibé:nzcf uran-2~il,)-2-(benzofuran-210 carboxamide) tiofeno- 3 -carboxíline ácido 4-(benzofuran-2-carboniloxí)-2-(beni zofuran- 2çarboxam i do)t iofeno- 3 -carboxí1icc
Ácido 2-(benzo[d][1,2,3]tiadiazol-S-carboxamido)-4(.2,3 -diflüor-4 -metilfenil) tiofeno-.3-carboxilicG
Ácido 2-(benzo[d] [1,2f 3]tiadiazol-5-carboxamide)-4(3,4-diclorofenil)tiofeno-3-carboxilico
Ácido 2-(benzo[d] (1,, 2,3] tiadiazol-5-carboxamido) -4-(4bromo f enl1)t iofeno-3 -carboxí1ico
Ácido 2-(benzo[d] (1,2,3]tiadlazol-S-carboxamldo)-4-(4~ 20 cloro-3-.fluorfenil) tiofeno-S-carboxílico
Ácido 2-(benzo[d] [1,2,311iadiazol-5-carboxamido)-4-(4 Cloro-3-metoxifenil)tiofeno-3-carboxílico
Ácido' 2-(benzo[d][1,2,3]tiadiazol-5-carboxamido)-4~(4clorofeni1)ticfeno~3-carboxí1ico ácido 2-(benzo[d][1,2,3]tiadiazol-5-carboxamide)-4-(4cianofenil)tiofeno-S-carboxílico
Âc-ido 2 - (benzo [d] [1,2,3} tiadiazolc- 5-carboxamide) -4(7-hidroxibenxofuran-2-11)tiofeno-3-carboxílico
Ácido 2~(benzo[d] [1,2,3]tiadiazol-5-carboxamido)-4-(730 metoxibenzofuran-2-il)tiofeno-3~carboxílico
304 ./3 56
Ácido 2-(benzo[d][1,2<31tiadiasole-6-carboxamide} - 4 (4-bromofénil)tíofeno-3-carbõxílien
Ácido 2- (benzo [dl (1,2,3] tiadiazol-S-carboxamide} -4 ·· (4qlorof en i1)tibfeno-3 -cárbòxí1ico
Ácido 2 -(benzo[dl [1,2,3]tiadiazol-S-carboxamide)-4-(7hidroxibenzofuran-2»11)tiofeno- 3-carboxílico
Ácido 2- (benzOld] tiazOl-2-cafboxamidb) -4- (2,3-diflúor~
4-metilfenil)tiofano-3-carboxílico
Ácido 2- (benzo [d] tÍázql-2-cax'boxamido) -4- (2-flúox-410 metil.fe.nl 1) tiofeno- 3 -carboxí lico
Ácido 2 - (benzo [d] tiazòl-2-carboxamide)-4- (3-flüor~4metilfeníl)tiofeno-3-carboxílico
Ácido 2-(benzo[dj tiazol-2-çarboxamido)-4 -(4 bremofeni1)tiofeno-3 -carboxí1ico
Ácido 2 - (benzo [ditiazol~2~cax’baxamido) -4 - (4-cloro-2, 3difluorfenil)tiofeno-3-carboxílico
Ácido 2-(benaold]tiazol-2-carboxamido)-4-(4-cloro-2f1uorÊeni1)t igf eno-3-carboxí1ico
Ácido 2-(benzo[d] tiazol-2~carboxamido)»4~(4-cloro-3,s20 difluorfeni1)tiofene-3 -carboxílioo
Ácido 2~ (benzo[d]tiasol-2-carboxamído)-4-(4-cloro-3fluorfenil)tipfeno-3-carbpxílicp
Ácido 2 -(benzo[d]t iazol- 2 -carboxamido)-4 -(4 clorofenil)tiofeno-3-carboxílico
Ácido 2 - (benzo [d] t iazol - 2 - carboxamide) - 4 - (7 - hidroxibenzofuran-2-il)tiofeno-3-carboxílico
Ácido 2-(benzo(d]tiazol-R-carboxamido)-4-ptollIt iofeno-3-carboxílico
Ácido 2 -(benzo[d]tiazol-5-carboxamide)-4-(43.0 clorofenil) tiofeno-3-carboxílico
3Õ5/3S6
Ácido 2-(benzoidltiazol-s-carboxamido)-4-(4cloroféní1)tiofeno-3-catbdxí lico.
Ácido 4~ (2, 3-di.fl-aor-á-metilf©nil) -2- {4.fluorbônzoklitiacdl-2-càrbcxamidd)tiofene-3-carboxflico
Ácido 4~(4-clòro~2-fluorfenil)-2-(7fluorbenzorditiazol-2 -carboxamido)tíofeno-3.-carboxí1ico
Ácido 4 - {.4 - clórofeni 1) -2 - (4-fluorbehzo [d] tiazol - 2 « carboxamidb)tiof éno-3-carbóxxlicb
Adido 4-<4-clorof en.il) -2- (4-nitx'obenzo (dl txazol-210 carboxamido)tipfeno-3-cárboxílico
Ácido 4- (4-clorofen.il} -2- (6-nitrobenzo[dl tiazol-2carboxamido) tiofeno-3: -carboxi 1 ícoic)
Ácido 4- (4~clcrofen.il) ~2- (7-fluorbenzo [d] t.iazol-2aarboxami do)tiofeno-3 -carboxi 1 ico
Ácido 2-(5-bromobçnzo[dl oxazol-2-carboxamido) -4- (.2 , 3.di f lüor - 4. -iaet i 1 fen i 1) t i o feno - 3 - carboxí 1 i co
Ácido 2 - (5-bromobenco[dl oxaool-2*carboxamide)-4 -(4clorofenx1)t iofene-3“carboxxlico
Ácido 2~ (7-fluorbenzo[d]©xazol-2~carboxamide)-4-(7 20 hidroxibenzofuran-2 ~ il)tiofeno-3 ~ carboxilico
Ácido 2-(benzo[d]oxazol-2-carboxamido)-4-(2,3-difluor-
- -met ilf ení 1) tiofe.no - 3 - carboxí 1 ico
Ácido 2 - (benzo[dloxazol-2~carbcxamido)-4-(3,4,5 tri f 1 uorf en i 1) tiof eno - 3 - c ax*box í 1 i co
Ácido 2-(benzo[d]oxaEol-2-carboxamido)~4«(3 f 4diclorofenil)tíofend-3-carboxxlico
Ácido 2-(benzo[d]oxaaol-2-carboxamido)-4-(3-ciano-4f luorf exiil) tiof eno- 3 - carboxílico
Ácido 2 ~(benzo[d]oxazol-2-earboxamido)~ 4-(4-bromo30 24 luorof eni 1) t iof eno 3 -carboxí 1 ico
306/356
Ácido 2- (.benzo [d]oxasol-2-carboxamido) -4-(4-cloro-2,5dífluorfenil) tiofeno-3 - carboxilico
Ácido 2- [benzo [d] oxaEO.l-2-carboxamido) -4- (4-clo.ro-2f Iwr-5:*metilfenil) tíofanc-3 -caxboxíliço
Ácido 2-(benzo[d]oxazol~2-carboxamido)-4-(4-cloro·-2- metiifenil)tiofeno-3-carboxilico
Ãcidb 2-(benzo[d]oxazol~ 2-carboxamide)-4-(4-cloro-3(triflucrmetil)fenil)tiofeno-3-carboxilico
Ác ido 2 - (beilz o [ d ] oxazol - 6 - carboxamx do )-4-(410 çlorofenx1)t iofeno- 3 -carboxí1icó
Ácido 4 -(2,3 -difluar-4-metiIfenil)-2-(4 -fluorbenzo[d] oxazol- 2; - carboxamido) t iof enó - 3 - carboxí1 i co
Ácido 4- (4 -bromofenil) -2- (5-clorobenzo [d] oxazol-2cax*boxamido) tiofeno- 3 -carboxí1 ico
Ácido 4-(4-bromofenil)-2-(V-fluoxbenzor[d]oxaxol-2carboxami do)tiofeno-3 -carboxiIico
Áoido 4- (4-cloro-3-fluoxfenil)-2-(4-fluorbenzo(d) oxazol-2 -carboxamide)t iofeno- 3-carboxíli co
Ácido 4 - (4 -cloxofen.il) -2 - {4 í::6-dif luorbenzo [dxoxaçol-2 20 carboxamide)tiofeno-3-carboxilico
Ácido 4 ~ (4 -clorof ení 1) ~2 - (4-f luorbenzo [d] oxazol- 2 earboxamido)ti ofeno- 3-carboxí1ico
Ácido 4- (4-clorofenil)-2-(4-hxdroxibenso[d]oxazol-2carboxamido) tiofeno 3-carboxilico
Ácido 4- (4-clcrofenil) -2~ (7-cianobenzo [d] cxazo.1-2c a rboxamido) t i o f eno - 3 - cax*box í li co
Ácido 2 - ( 5-clorobenzo[dl oxazol-2 -carboxamido}-4 -(2,3diflúòr-4-metilfenil)tiofeno-3-carboxilico
Ácido 2 -(6-bromobenzo[d]oxazol-2-carboxamido)-4 -(2,330 diflúor-4-metilfenil)tiofeno-3-carboxílico
307/356
Ácido 2 - (7-bromobanno [d] oxazol- 2 -carboxamide) -4-(2,3 diflüor-4-mètilf enil)'tiofene-3-carboxXlico .Ácido 2- (7-cianobenze [d] oxacol-S-carboxamido) - 4- (2 f 3 diflüor-4-metilfenil)tioféno-3-carboxílico
Ácido 2-(benzo[d]oxagôl-2-carboXamido}-4-(2 f 3~diidro1H-inden- 5 -11} tiofenb-3-carboxilico
Ácido: 2 - (benzo [d] oxazol- 2 - carboxamide )-4- (2,3 diidrebenzofuran-S- i'l) tiof end-3 -carboxilico
Ácido 2-(benzo[d]oxazol-2-carboxamide/-4:-(2,4 10 difluorfénil)tiofeno-3-carbcxílicc
Ácido 2-(benzo [d]oxazol- 2 -carboxamide)-4-(2-cloro-4(tri fluormet i1)f eni l)tiofeno-3-carbóxíli co
Ácido 2- (benzo [d]exazol-2-carboxamide)-4 -(2-cloxo-4metoxifenil)tiofeno-3-carboxilico
Ácido 2 -(benzo[d]çxazpl-2-carboxamide)-4 -(2-clero-4metilfenil)tiofeno-3-carboxilice
Ácido: 2- {benzo [d] oxazol-2-carboxamide)-4 - (2~flüQr-4~ (trifluormeti.1)fenil)tiofeno-3 -carboxi1íco
Ácido 2 -(benzo[d]pxazol-2 -earboxamido)-4 -(2-me tóxí-420 (tri f luormet í 1) f ení .1) ti of eno - 3 - ca rboxí 1 ico
Ácido 2-{benzo[d]oxazol-2-carboxamido)-4 ~(2-metil-4(trifluormet11)fenil)tíofeno-3-carboxílico
Ácido 2-(benzo[dloxazol-2-carboxamido)-4-(3(hid roxi met: i X J - 4 - me ti 1 £ en i 1} t i of eno - 3 - carbox í 1 i co
Ácido 2-(benzo[d]oxazdl-2-carboxamide)-4-(4(trifluormetoxi)fenil)tiafeno-3-carboxílico
Ácido 2-(benzo[d]oxazol-2-carboxamido)-4-(4(tri fluorraeti1)feni1)tiofeno-3 -carboxi1ico
Ácido 2 -(benzo [d]oxazol-2-carboxamide)-4 -(4 -bromo-2f330 difluorfeni1}t iofeno-3 -carboxi1i co
308/356
Ácido 2 -(benzo[d]oxazol-2-carboxamido)-4 -(4 -çiane- 2metilfenil)tiofeno-3-carboxííico áçido 4 -(2,3-difluor- 4 -metilf eni1)-2-(5, s ~ difluorbenzo [dloxã adl-2 -c arhoxamido)tio£eno-3-carboxí1ico
Ácido 4-(2,3-diflúor~4-metilfenil)-2-(5-mètoxibe.nzu[d] dxaz ol-2-carboxam ido)tiofeno-3 -carboxí1i co
Ácido 4 -(2,3-diflÚor-4-metxlfônil)-2-(6-fluorbenzo[d] oxazol-2-carboxamide) tiofeno-3-cWboxillco
Ácido 4- (2,3-difluor-4-métilfenil)-2-(7-fluórbenza [d]
10. çxazol-2-carboxamide)tiofeno-3-carboxííico
Ácido 4 -(4-brómofanil)- 2 - (7-cíancbenzo[d)oxazol-2 carbcxami cio)t iofeno-3» carboxííico
Ácido 4 -(4-clorofenil)-2-(7-fluorbanz©[d]oxazòl-2carboxamide)tiofene-3 -carboxí1ico
Ácido 2- (5-clorobenzo Ml oxazcl-2-carboxamide) -4 - (4clorofenyOt iofeno-3 -carboxííico
Ácido 2 -(7-bromobenso[dl oxazol~ 2-carboxamído)-4 -( 4clorofenil)tiefeno- 3 -carboxííico
Ácido 2-(benso[dlcxazoX-2-carboxamido)-4-(2,3,420 tri fluorf eni1)t iofena-3 -carboxí1ico
Ácido 2 - (benzo [d]axazol-2-carboxamide) -4 -(2,4 -diflüor3-hidxaxifenil)tiofeno-3-carboxííico
Ácido 2-(banzo [d]oxazol-2-carboxamido)-4-(2,4-dlflüar3-metóxi fenil)tiofeno-3-carboxííico
Ácida 2-(benzo[d]axazol-2-carboxamida)-4 -(2-fláor-4metilfeni1)tiofeno-3-carboxííico
Ácido 2-(benzo[d]oxazol-2-carboxamído )-4-(3,4dimetílfenil)tiofeno-3-carboxííico
Ácida 2-(benzo[d]oxazol-2-carboxamide)-4 -(3-flüor-430 metilfeníl)tiofeno-3-carboxííico
309/356 ác i do 2 - (bs ns α [d J oxazoi ~ 2 -carboxamida) ~ 4 ~ ( .4 ~ bromofeni 1} t iofer.o - 3- carboxí 1 icc
Ácido 2 - (benzo[d] oxazol-S-carboxamido} -4 - (4-cloro-2,3 difluorfenil)tiofewo-3~carboxílico
Ácido 2 - (benzo [d] oxaz ol ~ 2 - carbdxami do ) - 4 ~ (4 - o loro -2flúorfenil) tÍoÊeno-3 -carboxí lico
Ácido 2 -(benzo[d]çxazol-2-carboxamido)~4~(4-cloro-3.,5difluorfeni1)tiofenó-3 -carboxílico
Ácido 2~ (benzo [d) oxazol-2-carboxamido) -4 - (4 - cloro··310 c í anòf eni 1) t io feno - 3 ~ carbox í li cb
Ácido 2 ~(benzo[d]orazol-S-oarbOxaraido)-4-(4-clcro-3flúorfenilltiofeho-3 -carboxílico
Ácido 2 - (benzo [dj oxazol - 2 -carboxamido) - 4 - (4 -c loro- 3 me toxif en11)tioíen©-3 -carboxí1iόo
IS Ácido 2 ~ (benzo [dldxazol'- 2 - carboxaraid®}-4- ( 4 clorofenil)tiofeno-3 -carboxilico
Ácido 2 - (benzo [d] oxazol~2 ~carboxamido) -4 - (4 -dano-2 flúorfenil)tiofeno-3-carboxílico
Ácido 2- (benzo [dloxazol-2 -cax'boxamid©) -4- (420 fenoxifenil)tiofeno-3-carboxílico
Ácido 4-(4-bromoÊenil)- 2-(4-fluorbenzo[d]oxanol-2carboxamide)tiofeno-3-carboxílico
Ácido 4-(4-cloroÊenil)-2-(4-metilbenzo[d]oxazol-2carboxami do)tiofeno-3 - carboxí1ico
Ácido 4-(4-clorofsnil)-2-(S-fluorbenso[d]oxazol-2carboxamide)tiofeno-3-carboxílico
Ácido 4- (4-clorofenil)-2-(S-fluorbenzotd]oxazol-2carboxamido)tiofeno-3-carboxílico
Ácido 4 -(4-clorcfenil)-2-(7-metilbenzo[d]oxazdle-230 carboxamide)tiofebo-3-carboxílico
310/356
Ácido ?2- (benzeldloxazol-2-carboxamidoj *4~ (4formilfenil)tíofeno-3-carboxílic©
Ácido 2 -(benzo[dloxazol-2-carboxamído)-4-(7hidraxibenzofuran-2-11) t iofene - 3 -carboxí lies
Ácido 2-(benzo[d]ôxaxol-2-carboxamido)-4 - (7me toxibenz o f ur an - 2 - i 1) t i of ano - 3 - carboxí lico
Ácida 4- (2-, 3-diflúor-4-metilfenil) -2- (S-fluorbenso [d] oxazal - 2 - carboxamide) t i of. ano - 3 - oarboxí lico
Ácido 4-(4-clora-3-fluorfenil)-2-(ΥΙΟ fluorbenzo[d]oxazol- 2 -carboxamide)tiofeno-3-carboxílico
Ácido 2- (2., S-dimetilfuran-3- carboxamide) -4-ptoli 1t1oféno- 3 -carboxílico
Ácido 2- {2-metil-5-feni.lfuran-3-carbox.amido) -4-ptolí1tiofeno- 3 -carbox11ico
Ácido 4-(4~brompfenil)-2-(furan-2-carboxamido)tiofeno3 -carboxí1ico
Ácido 4-(4“Clorofenil}-2-(2 f5-dimetilfuran-3çarboxa^ido) t.iofeno-3 -carboxí 1 ico
Ácido 4(i-oloroÊenil)-2-(2-metil-5-fenilfuran-32 0 carboxamido)fciofeno-3 -carboxilico
Ácido 4-.(4 -clorofenil) -2 - (5- (4 -clorofenil) furano-2carbexamido)tiofeno-3-carboxílico
Ácidc 4-(4 -clorofenil}- 2-(5-nitrofurano-2carboxamide)tiofeno-3-carboxí1ico
Ácido 4 - (4-clorofenil)-2-(furan-2-carboxamida)tiof ena3 -carboxílieo
Ácido 2-(2-(feniltío)acetamido) -4-(4 -(tríflucrmetil) feni1)t io f eno -3-carboxí1ico
Ácido 4-(2(4-diclorofenil)-2-(2-(feniltiõ)acetamido) tiofena-3-carboxílico
311/356
Ác ido 4-(2-bromofeni 1)-2-(2(feniltto)acetamido)tiofeno-3-carboxílico
Ácido 4-(4-bromofenil)- 2 -{2(f etii iria) ace t ami do)t1of eno - 3 - ca rbox í 1 i co
Ácido 4- (4-clorofénil) -2- {2-ffônõxiacetamidQ)ticfeno~3carboxílico
Áe ido (E} - 2 - (3 - {furan - 2 - i 1) ac r i 1 and do) - 4 -p -t olí11 iofe no - 3 - c a r box í 1 i co
Ácido (E)-4-(4~brómoffenil)-2-(3-(fúran-210 il)acrilamido)tiofeno-3-carboxilíco
Ácido (É)-4-(4-cloròfenil)-2-(2-ciand-3-(furan-2il)acrilamido)tiofano-3-carboxí1ico
Ácido 2- (2 ~ (benzofuran- 2 -1.1) acetamido) -4 - (4bromofeni1)txofeno-3-carboxilíco
Ácido 2-(2-(benzofuran-â-il)acetamido)-4-(4bromofenil)tiafeno-3-carboxílico
Ácido 4 - (‘ 4 -bromofenil) - 2 - (3 - (furan- 2 -11) propanamído) t iofono-3-carboxilico
Ácido 4- (4-.bromofenil) -2- (3- (tíofén.-2-il)propanamido) t io feno-3-carboxílico
Ácido 4 - (4 -olorofen.il) - 2 - (2 - (2 - formi 11iofen- 3 - ilõxí) acetamido)t i ofeno-3 -carboxílico
Ácido 4-(4-clorofeníl)-2-(3- (furan-2-11} propaiiamido) tiofeno-3-çarboxilico
Ácido 4-{4-clorofenil)-2-(3-(tiofen-2-il)propanamido) tiofeuo-3-carboxí1ico
Ácido terc-butil 4 - (4-clox'ofenil) -2 - (3- (3-fluorfenil) propanamido)tiofenc-3-carboxílico
Ácido 2- ((2-clorobenziloxi)carbon1lamino)-4-(430 clorofenil)tiofeno-3-carboxílico
312/356
Ãcido. 2-(3-benzilureido)-4~(4~clorofanil)tiofeno-3carboxílico
Ãcido 2 -(benzílexicarbonilamino)-4-(4 -bromofeni1) t io£eno- 3 -carboxí1ico
S Ãcido- 2-(benziloxicarbonílamino)-4-(4-cloroienil) tioféno-3-oarboxílíco
Ãcido 4-(2,4-dicloro-5-fluorfenil)-2-(3fenilpropanamido) tiof eno 3 -carboxílico
Ãcido 4 -(2.,4-diclorofenil) -2- (3-fenilpropanamido) tiofeno-3-carboxílico
Ãcido 4 - (4 -brOmof eni 1) - 2 - .[ (2 -clorobenziloxi) carbonilamino}tiof eno- 3-oarboxí1iob
Ãcido 4 - (4-bromofenil) -2- (3- (.2,6-diclórofénil).
propanamido) tiof eno- 3-c-arboxí lico
Ãcido 4-(4-bromofenil)-2-(3-(2-çlorofenil) propanamidõ)fc.iòfeno-3-darboxílico
Ãcido 4“(4-bromofenil)-2-(3-(2 -fluorfenxl)propanamido) t iofeno-3 -oarboxí1ico
Ãcido 4 -(4-bromofeni1)-2-(3 -(3-me toxi fenil) propanamidò)tiofeno-3 -carboxí1ioo
Ãcido 4-(4-bromofenil)-2-(3-(4-metoxífenil) propanamido)tiofeno-3 -carboxi1íoo
Ãc i do 4 - (4 - c loro ten 11) - 2 - (3 - (.2,6 - d io 1 oro f an i 1) propanamido)t iofeno- 3-oarboxílico
Ãcido 4-(4-clorofenil)-2-(3-(2-clorofenil)propanamido) t iof eno - 3 - c arbox í 1. i c o
Ãcido 4-(4-clorofeni1)-2-(3-(2-fluorbenz il) ure ido)tiofeno -3-oarboxílico
Ãcido 4- (4-clorofenil} -2- (3- (2-fluorfenil.)
0 propanamido) t-iof eno- 3 - oarboxí lico
3.13/356
Ácido 4- (4~clorofenil.) -2- (3-fenetilureído) tiofeno~3carboxílicc
Ácido 4 - (4 - clorof enil) -2- (5 - f eni.lpentana.mido) tiofeno3 - ca rbox í.1 i c o
Ácido 4-(4-hidroxifeníl)-2-(3-Êenilpropanamid©) ti o f eno- 3 - c a r box.£ 1 i co
Ácido 4- (4-raecoxií.:enil) -2- (3 f enilpropanamidô) tiofeno3 - ca rbox í 1 i co
Ácido 2~{2-Benzil-3,3-dimetilbutanamidd)-4 -(410 ç1or o feni1) t iof eno-3 · carboxi1i co
Ácido 2-(3~(a-clôro-ã,S-difluorfénil)-2fluorpropanamido) -4- (4 -clorofenil) tiofétio-3-carboxílico
Ácido 2-(3-(2-cloro6-flúorfenil)-2-fluorpropanamido)-
4-(4-clorofenil)tiofeno-3-caxboxílico
Ácido 4-(4-bromofenil)-2-(2-metil-3fenilbutanamído)tiofeno-3-carboxílico
Ácido 4 - (4-bromofenil) -2- (2-mstil-3-fenilpropanamido) tiof eno- -3 - carboxílico
Ácido 4- (4-bromofenil) -2- (3 - (2/3,6-dimetilfenil)
0 propanam i do)tio f eno- 3 -carboxí1i co
Ácido 4- (4“bx'omofenil) -2- (3~ (3-fluorfenil) ureido) t i o f eno-3 -carboxí1ico
Ác ido 4- (4 -c1cro-2 -f1corfeni1)~2 ~(3-feni1propanamido) t iofeno-3 -carboxí1ico
Ácido 4-(4-clorofenil)-2-(S-flúor-S-feriIpropanamido) t iofeno-3-carboxilico
Ácido 4 -(4-clorofenil)-2-(2-metil-3-fenilbutanamido) t iof eno-3-carbox£lico
Ácido 4- (4-clorofenil)-2-(2-metil-3-fenilpropanamido)
0 t io f eno ~ 3 - c a rbox .11. i co
314/356
Ácido 4-(4· -elorofenil) - 2 -(3-(2,6-dimetilf enil) propanamido) t iofeno~ 3-carboxílico
Ácido tèrc-butil 4~:(4-clorofenil)-2:-(3fenilpropanamido) tiof ano-3 -carboxí 1 icò
Ácido taré-bútil 4-(bçnzofuran-l-il.)-2-{3f eniIpropanamidó)tiofem-3-carboxíIico
Ácido (R) -4- (4-clorofenil) -2- í 3 - (2-elorofenil): -2fluorpropanamidd)tiofene-3-carboxí1ico
Ácido (S) -4 - (4-elorofenil) -2- :(3~ (2-clorófeni1) - 210 fluorpropanamído)t i o f eno-3 -carboxí1ico
Ácido 2-(2-c1pro-3 -(2-e1orof enil)propanamido)-4 ~(4 çlorofenil)tiofeno-3-carboxílico
Ácido 2~ (2-cloro-3-feniXpropanamido)-4 -(4-elorofenil) tiofeno-3-carboxílico i 5 Ácido 2-(.3 - (2 - cloro- 4 - f luorfeni 1) - 2 - f luorprçpanamido) -
-(4-elorofenil)tiofeno-3-carboxílico
Ác ido 2 - (3 - (2 - cloro- 5 - £ 1 ucr f en i 1) - 2 - f lucipropa.namidp) -
- (4 - elorof anil) t.iof eno-3 -carboxí 1 ico
Ácido 4- (4-bromofenil)-2-/3-(2,6-diclorofenil)~2~ 20 fluorpropanamido)tiofeno-3-carboxílico
Ácido 4-(4-bromofenil)-2 -(3 -(2-cloro-4,5dif luorf eni 1) - 2 - f luorpropanamido) tiofeno-3 - carbox.il ico x Ácido 4~ (4-broiWfenil)-2-(3-(2~cloro-4~fluorfènil)-2fluorpropanamido)tiofeno-3-carboxílico
Ácido 4-(4-bromofenil)-2-(3-(2-cloro-5-fluorfenil)-2fluorpropanamidd) tiofeno - 3-'carboxílico
Ác ido 4 - (4 - bromof en i l) - 2 - {. 3 - (2 - c loro - δ - f luor f e n i 1) - 2f luorpropanamido) tiofeno-3 - caroox.í 1 ico
Ác ido 4 -(4-bromofeni1)-2-(3 -(2-elorofenil}-2 ~ fluorpropanamido)tiofeno-3 -carboxí1ico
315/356
Áo.ido 4— (4“bromofenil)-2-(3- (S-etilfenil)ureido) t i of eno · 3 - carboxilico
Ácido 4- (4 “Olorofen.il) - 2- (1- H-clprofenil) c i c 1 opr opano carbdxam i do) fc i o f eno - 3 - ca r box í 1 i co
S Ácido 4- (4-clorufenil)-2-(3-(2,5-diclorofenil)-2f lubrpropanamido) ti of. ene - 3 - carboxilico
Ácido 4- (4-clorofenil) -2 - (3- (2-oiorofenil.} -2oianbprdpanámidd) tioféno- 3 - carboxilico
Ác i do 4 - (4 - c lordf eni 1)-2-(3-(2 - c1 o r o f e ni 1} - 2 10 fluarpropanamido}tiofeno-3-carboxi1ico
Ác ido 4 - (4 - clordf eni 1). - 2 ~ ( 3 - (2 - Oíanofení 1.) prôpanamido) tiofeno- 3 -carboxilico
Ácido 4- (4 - clorof enil}: -2 - (3 - metil- 3 - fenilbutanamido) ti ofeno- 3 ~carboxilico
Ácido 4 (4-clorofeníl) -2 - (3-fenil-2~ (lH-tétrazol-111)propanamidp}t iofeno-3-carboxil í up
Ácido 4 - (4 - clorof enil). - 2- (3 - fenilbutanamido) t iof eno - 3 carboxilico
Ácido 4 - (5-clorobenzafuran-2-il)-2-(320 fenilpropanamiâa)tiofeno-3-carboxilico
Ácido 4» (benzofuran-2-cax?bonilfâxi) -2(benziloxicarboni 1 air i no) tiof eno- 3 -carboxi 1 ico
Ácido 4 - (2,3-dif lúor-4 -metilfenil) -2· (4-f luorpirazolo [1,5-a] piz'idina-2-carboxamido) tiofeno-3 -carboxí lieo
Ácido 4- (2,3-diflüar-4-nietilfenil}-2-(pirazolo [1 f 5a]pinidina-2 -carboxamide)tiofeno-3~ carboxi1ico
Ãc i do 4 -(4-brornofeai1)-2-(4 -fluorp irazolo[1,5a] piridina-2-carboxamido)tiofeno-3-carboxilico
Ácido 4 - (4-bromof.enil) -2- (pirazolo [1, 5-«alpiridinã“230 carboxamide)tiofeno-3-carboxilico ' 316/355
Ácido 4-(4-clorofenil)-2-(4-çloropirazalo[1# 5a] piridina-l-carboxamido) tiofeno-3 'carboxi lie©
Ácido 4- (4-clorofenil) -2- (4-fluorpirazolo [1, 5a] piridina-2-carboxamido)tiofeno-S-carboxíl ico
Ácido 4-(4-clorofenil)-2- (pirazolo[1, 5~a] piridina-2- carboxamida)tiofeno··.>··carboxilico
Ácido 4~ (7-hidr©x:ibenxofuran-2-il} -2- (píraxclo[1, 5aj piridina-2-carboxamido)tiofeno~3-carboxilico
Ácido 2- (21 21 -bitiofeno-5 -carboxamide) -.4- (41Q clorofenil)tiofene-3-carbOXilico
Ácido 2 -(2/2f ~bitio f eno- 5 - carboxamido) - 4 - p toliltiofeno-3-carboxilico
Ácido 2“(3-cloro-4-(isopropilsulfonil)tiofeno-2 carboxamido) -4- (4-clorofenil) tiofeno-3-carboxílíco
Ácido 2 -(3-çloro ~ 4 -(isoprppi1su1foni1)tiofeno-2carboxamido)-4-p-toli11 iofeno-3-carboxi1ico
Ácido 2-(3-clarO“4-(metilsulfoníl)tiofeno-2carboxamido)-4-p-tõliltiofeno-3-©arboxilico
Ácido 2-(3-metiltiofeno-2-carboxamido)-4-(4-
0 (tri fluormetil)fenil)tiofeno-3 -carboxilico
Ácido. 2~(3-metiltiQfeno-2-carboxamido)-4-ptol 11. ti o feno - 3 - c ar box í 1 i co
Ácido 2 - (4--(4 - elorof enilsul f oni 1) - 3 -metiItiofeno- 2 carboxamide)-4-p-toliltiofeno-3“Carboxílico
Ácido 2-(5-clorO~4-metoxitiofeno-3-carboxamido)-4-(4c 1 or o f an i 1) t. iof eno - 3 - c a rbox í lico
Ácido 2-(5-faniltiofeno-2-carboxamido)-4~p.toliltiofeno-3-carboxilie©
Ácido 2-(tiofeno-2-carboxamido)-4-(4-(trífluormetílj fenil)tiofeno-S-Cãrboxílico
317/3S6
Ácido 2- (tiofeno-3-carboxamido) “4-p~toliltiofeno-3carboxílico
Ácido 4- (3,4-diclorofenil) -2- (tiofe.no-3- · carboxamido) t i©feno-3 -carboxí1ico
Ác ido 4-(3,4-dime ti1feni 1)- 2-(3-meti11 iofen©- 2carboxamido)tiofeno-3-carboxílico
Ác ido 4-(3,4- dime t ilf. enil) - 2 - (t i o f e no - 3 - carboxamido) tiof eno-3-carboxílico
Ãc ido 4 - (3 -clorof eni 1. - 2 - (3 -metí11 iof eno- 2 10 carboxamido)tiofene-3-carboxílico
Ácido 4- (3-elorofen.il) -2- (tiofeno-3-carboxamido) tiofeno-3-carboxí1ico
Ácido 4-(4-bromofeníl}-2-(3-meti1tiofeno-2carboxamido)tiofeno-3-carboxí1ico
IS Ácido 4“ (4-bromofenil)-2-(S-feni1tiofeno-2carboxam ido)tiofeno- 3 -carbox11ico
Ácido 4 -(4 -clorofenil)-2-(2,5-dielorot iofeno- 3carboxamido) tiof eno-3-carboxí.1 ico
Ácido 4- (4-clorofeni.1) -2- (3-metiltiofeno-220 carboxamido)tiofeno-3-carboxílico
4-(4-clorofenil)-2-(tiofeno-3-carboxamido)tiofeno-3carboxílico
Ácido ,N- (4- (4-bromofenil) -S-carbamoiltiofen-l-il} -3~ #.
metiltiofeno-2-carboxí1ico
Ácido 2-(2fS-diclorotiofeno-3 -carboxamido j-4-p~ toliltiofeno-3-carboxílico
Ácido 2-(3-clero-4- (metiXsulfoni1)tiofeno-2 carboxamido)-4-(4-clorofenil)tioffôno~3-carboxílico
Ácido 2-(tiofeno-l-aazOoxamido)-4-p~tOliltiofeno-330 carboxílico
318/356
Ácido
4- (2-bromofenil) - 2- (3-metiltiofenO’ carboxamide)tiofeno-3-carboxí1ico
Ácido
-(2-bromofenil)-2 -(tiofeno- 2- carboxamide)tiofeno-3-carboxílice
Ácido 4-(4-bromofenil)-2-(4-(4-clorofenilsulfanil}-3metiltiofeno-2 -carboxamide)tiofeno-3-carboxílico; e
Ácido
4-(4-clorofenil)-2-(5 -feniltiofeno-2earboxamido) t íofeilo- 3 - carboxí lico.
Exemplo 2: Ensaio patch clamp de I^ç in vitro
Objetivo ó objetiva deste ensaia é examinar os efeitos in vitro de compostos de teste sobre canais CRAC clonados (genes de Çrai-1 é STIM-1 expressos estavelmente em células HEK293) responsáveis por lesse? a carrente do canal de cálcio 15 ativado pela liberação de cálcio.
Artigos de teste e de controle
Fonmulaçãot Soluções de estoque de artigo de teste são preparadas em dime 111 sulfõxido (DMSO) e armazenadas congeladas» As concentrações de artigo de teste são 20 preparadas frescas diariamente por diluição de soluções de estoque em um tampão de registro externo apropriado. Se necessário, as formulações de artigo de teste são sonifiçadas (Modela 1510, Bransan Ultrasonics, Danbury, CT) , em temperatura ambiente, para facilitar a dissolução.
Em certos casos, as soluções de teste contêm até 0,1% de DMSO, e a presença de DMSO 0,1% não afeta a corrente do canal.
Concentrações e quantidade de artigo de teste
Tipicamente, cs efeitos de três (3) concentrações de cada artigo de· teste são avaliados (0,1, 1 e XG μΜ) > Os
319/356
artigos de teste são nesados e prepara idos com· o -soluções de
estoque de 30 0® 1 GU 10 mM em DMSO. 0 estog ue de DMSQ é
diluído em tampa o de r egistro ex-tarr ip para preparar uma
solução de teste de 10 (DMSO finai de 0, 03' % GU 0,1%). A
solução de teste de 10 pM é di.' luída s :m tampa: o de registro
externo par a prej sarar s< iluções de te s te de 1 pM e Q.,-1 pM.
As sol uçõe s de teste contêm até : DMSO 0, 1% na maior
concent raçã o que SciO f liluídas em sí iluçoas de teste em
At X». 4·^. V·!1 ti go de co ήçrole posi tive
Sc luçõ es de estoque do arti .go de controle positivo sãa
prepara das em bateiadas ( divíd: idas βϊ a alíquc st as para usô
individual. arma; sènadas congeladas e usadas em. até seis
meses. A < àoncéní :ração de cont role | JGSitiVO: ê preparada
fresca diàr 'lament ;e por dlluiçãC < de sc sluções < ie estoqúé em
tampão de r egistr Ό exter no. A concentração final de XMSO no
artigo de teste de cor itrole j >osit:iv o é άθ ,3.tíê 0 j X% QH
SOlUÇãO.
Artígc de controle negativo
O artigo de controle negativo é DMSO 0,1% em tampão de registro externo.
Sistemas de teste do canal de fon ciosado
As células são mantidas em incubadoras de cultura de tecido por protocolos padronizados CalciMedica. Os estoques 25 são mantidos em armazenamento criogênico. As células usadas para eletrofisiologia são plaqueadas em placas plásticas de cultura de tecido.
Células HEE2F3
Células HEK293 são transfectadas estaveImente .com o cDNAs apropriados do canal iônico (Orai-l/STTM-l). As
320/356 células são cultivadas em DMEM (Gibco 11960) suplementado com soro bovino fetal 10% (Gíbco 10082) , 100 Ú/ml de penicilina G sódica, 1 mM de piruvato de Ba (Gibco 11360;, 100 pg/ml de sulfato de estreptomicina (Gibco 10.378), 0,5 mg/ml dé geneticiha (Gibco 1.0.1.31.-.935) e 50 pg/ml. de xeocina (Invitrogèn 45-0430) . As células devem ser mantidas a 80% de confluência. No dia anterior ao teste, as células em placas de cultura são lavadas uma vez com P-PBS sem cá1cxo/magnésio, tratadas com tripsina/EDTA e ressuspensas 10 no meio de cultura e contadas. As células são então diluídas ém meio de cultura com soro bovino fetal 1% e plaquea.das em densidade baixa (5-10 K) sobre lamínulas de vidro revestidas com poli-D-lisina em placas de cultura de tecido de 24 poços e colocadas em uma incubadora de cultura 15 de tecido ajustada em 37°C em uma atmosfera dé ar 95% umidificado, C% 6%.
Métodos de teste
Câmara de registro e pextfusãp de artigos de teste haminulas :de vidro contendo células são transferidas 20 para uma câmara de registro (Warner Instruments) com perfusão contínua de tampão de registro externo. Durante os registro.® de lease / todos os tratamentos são liberados por „ perfusão por banho alimentado por gravidade de reservatórios de seringas descartáveis por meio de uma 25 tubulação de políetileno descartável que drena para um coletor de Teflon. A taxa de fluxo é ajustada entre 1,2-1,5 ml/min, assegurando a troca completa da solução em aproximadamente 1 min. Todos os experimentos são realizados em temperatura ambiente,
Grupos de tratamento com artigo de teste
321/3:56
Para experimentos nos quais o artigo de teste ê aplicado por 10 minutos, o paradigma: do tratamento está resumido na Tabela 1. Tampão de registro de controle ê pexf undid© por cinco (5) minutos enquanto los^c se 5 desenvolvè e um valor basal estável ê estabelecido; cada célula é usada como seu próprio controle. cada artigo de testè ê aplicada às células virgens (n à 2, em que n « o número de Células/cOncéntraçãd; a 1 concentração/célula) por uma duração de dez (XG) minutos (Tabela. 1). G artigo de
10. teste é rétirado por lavagem por dez (10) minutos para
observar a reversibilidada do e: feito. Soluça© salina de
registro externo sem cálc ‘io é perfund ida pós ·.· dois (2)
minutos para detérmínar a c íórrent e de fui ado na i ausência de
Xc&rc· Solução salina de conta rale cc >ntendo cálcio é
reapliçada por três (3) minutas.
Pars l experimentos nas qt laís c > artiga de teste é
aplicado por 30 minutos ante ;s da r eg i s t ra dé Icsac / o
paradigms i da tratamento está re sumido na Tabela 2. Antes do
inicia d· a cada experimento, as r célu) Las são incubadas < ,:οπ'ί
20 composto por 30 minutos em temper atura ambiente, e 0
compost© permanece presente ao lango de todos os regista ΓΟΟ
Células de control* B expostas apenas 3.0
„ veículo. Após interrupção e est abeis c. imento da configura< ;Mo
de patci i clamp de célula ir iteira, composto tampãõ de
25 registro é perfundido por dez (10) minutos. Ao final do
período de 10 min, a amplitude de Xamc é medida» Os efeitos dos compostos são determinados por comparação do sinal de Xceac ám células pré-tratadas com composto com o sinal era células pré-tratadas com veículo. Os compostos na Tabela A 30 inibem o sinal de ,ICrãc nesse ensaio.
/ 35 δ
Tabela 1. Esquema de artigo de teste para estudos de aplicação por 10 minutos
| Período Solução Tempo de exposição |
1 Controle basal/ estabilização 5 minutos
2 Artigo de teste 10 minutos
3 Lavagem 10 minutes
1 4 0 CálclG 2 minutos
| 5 Controle 3 minutos
Tabela 2. Esquema de artigo de teste para estudos de aplicação por 40 minutos ______________
Período Solução Tempo de exposição
Artigo de teste 30 minutos
X Artigo de teste 10 minutos
2 Lavagem 10 minutos
3 Q cálcio 2 minutos
Controle 3 minutos
Grupos d® controle de tratamento
Como controle negativo, DMSQ 0,1% ê aplicado às células virgens (n = 2, em que n ® o nxlmero de células) . Este é usado para monitorar a magnitude do resumo de ΤεΚΑ<> Como controle positivo, 1 pM de ácido 4-(4~bramofenil)-2~ 10 (3-fluorbenzamide) tiofeno~3-carboxílico ê rotlneiramente aplicado às células virgens (n ~ 2, em que n ». o número de células).
Procedimentos de patch clamp ãe célula inteira
São usados procedimentos padronizados de patch clamp 15 de célula inteira. As composições das soluções extracelulares e intracelulares são mostradas nas Tabelas 3 e 4. As células são visualizadas em um microscópio
323/356 invertido {Olympus 1X71) e a voltagem fixada (clamped) usando, um amplificador Multiclamp 700B e o software PClamp. (Axon Instruments). Resumidamente, pipetas com patch de borossilicato preenchidas com solução intracelular 5 (Apêndice 1) são posicionadas sobre a membrana celular.
Apôs ser formado o lacre de GQ, ê aplicada sucção até que o patch sé rompa :e a configuração de célula inteira seja estabelecida. A qualidade da configuração será avaliada com o t teste de membrana' em Clamper para determinar a XO capacitância da célula (Cm), resistência de entrada (Rm) , resistência de acesso (Ra), e mantendo a corrente a -50 mV (1 h) , Os dados são armazenados na rede de computador CalciMedica (e com backup feito a cada noite) para análise off-line,
Tabela 3. Composição da solução extraç.elular (concentração em bM
................ .,.1.1.,.,.,.,.1.,.,.,.1.1.1.1.,.,..................... Na Cl 12 0
TEA-CX 10
HEPES xo
CaClz 10 (e 0)
Mgcl;.: 2 {e 32)
Glicose 10
O pH é ajustado até 7,2 com NaOH e. a osmolar idade final é ajustada até 325 com. sacarose. As soluções são preparadas diariamente. As substâncias químicas usadas na preparação da solução são adquiridas de Sigma-Aldrich (St.
Louis, MO), a menos que observado de fôrma diferente, e são de pureza de grau de reagente ACS ou superior.
Tabela 4 Composição da solução intracelular (concentração em mM)
cs~glutamato 128
HBPES 10
BAPTA 20
McCI ___ 3
pH é ajustado até 7,2 com CsòH. As soluções são preparadas em bateladas, divididas em all quotas e refrigeradas até o uso. Uma alíquota fresca é usada a cada dia e armazenada n© gelo ao longo do dia. As substâncias químicas usadas na preparação da solução são adquiridas de Sigma-Aldrich (St. Louis, MG), a menos que observado de forma diferente,, e sãc de grau de reagente ACS.
Prccedímento de teste de
Xcam do complexo do canal Orai-l/STIM-1 é ativado por depleçâo passiva de estoques de cálcio intracelular usando mN de BAPTA na solução intracelular. Os dados do damp de voltagem são adquiridos com o uso do software Clamper para despertar* um protocolo de voltagem de estímulo (mostrado na Tabela 5} aplicado a cada seis (8) segundos.
As correntes sao digitalizadás a 10 kHz e filtradas a 2 kHz. É empregada compensação capacitiva de célula inteira. Traços de ICRAC representativos são mostrados na Figura 2.
Tabela 5- Protocolo do damp de voltagem
Voltages» Descrição
Vh 4-30 mV para minimizar a entrada de cálcio entre varreduras
até 0 mV por 10 ms para avaliar corrente ’'zero*
aié -100 mV por 10 ms para medir Iomc ern força de condução e.l ovada
VESW até +10.0 mV ao longo de 50 ms para monitorar o perfil de retificação interno de
325/356
I até +50 W por 10 ms | para estimar corrente | extravasada s
Análise doá dados
A análise dos dados foi realizada usando o software Clampfit.: lew é medido a -100 mV, e ã córténté medida após 5 min é usada cômo o controle de base. Para estudos de aplicação por 10 minutos, a corrente medida apôs aplicação por 10 min do artigo de. teste é normalizada para a corrente de base e expressa como % do controle. Fará estudos de' aplicação ppr 40 min, a corrente medida ao final dos 10 minutos do tempo de registra de XCRÀC é usada eomó 10 comparador. A corrente medida etn tampão de 0 cálcio é usada para subtrair a cor rente extravasada de fundo. Qs pontos de dados para çada concentração de artigo d® teste (n > 2) são ajustados a uma função sigmaide (SigmaPlot) para determinar a XC§« e M'Hill. slope .
Qs Compostos de Fórmula (I)-(V) inibem Imc usando tanto o protocolo de aplicação de 10 minutos quanto o de 40 minutos >
Exemplos in vivo
Exemplo 3* Ensaio in vitro de degranulação de mastoeitos
Células;
As células RBL-2H3 foram obtidas de ATCC e mantidas em meio completo com FBS 10% a 37eC/C0a 6% .
Ensaio:
a) Estimulação com I pM de tapsígargína/20 nif de TFA
2S No dia anterior à realização do ensaie·, as células
RBL-2H3 são plagueadas em uma placa de 96 poças. As células são desenvolvidas a 3 7”C/CC; 6% de um dia para o outro. No dia seguinte, as células são lavadas duas vezes em tampão
326/35 5 dé BBSS com 1,8 mM de CaÇl2 e soro bovino fetal 1,75% (FBS) . Setenta μΐ de um composto de teste preparado em tampão de HBSS com 1,8 m» de ÇaCXs + FBS 1,75% são adicionados e incubados por 10 minutos a 37^0/0¾ 6%. As células são estimuladas pela adição de 7 pl de 11X tapsigargina/TRA (11 μΜ de tapsigargina/220 nM de TPA) e incubadas a 37^-C/CO^ 6% por 120 minutos. O meio é coletado e ligados de células são preparados pela adição de 70 ul de Triton á-100 0,05% era BBSS com 1,8 mM de CaGl3. .Os:, níveis lò de ^-bexosarainidase são medidos tanto no meio quanto nos lisados de células. Ô ensaio de β-hexosaminidase é realizado por adição de 40 μΐ de 1 mM .substrato de p~ nítrafenil-acetil-glicosamida em 0,05 M de citrato de sódio (pM 4,5) a 10 jil de amostra (meio condicionado Ou lisado de 15 células) , incubação por 68 minutos a 37*C>· e depois adição de 100 μ.1 de Q,.O5 M: de carbonato de sódio/0,05 M de bicarbonato de sódio (pH 10,5), misturando-se cuidadosamente e lendo a absorbância a 405 mu A percentagem de úhexosaminidase liberada é calculada da 2ô seguinte forma: Ά405 (meio)/(A405 (meio) + A4Õ5 (lisado)J .
O valor da IC5S é calculado como a concentração na qual 50% da β-hexosaminidase liberada em células tratadas com veículo são inibidos.
Os Compostos de Fórmula (I)-(V) são inibidores, nesse 25 ensaio.
b) Estimulação com JgE-WP
No dia anterior à realização do ensaio, as células RBL.-2H3 são plaqueadas em 200 μΐ de meio completo em uma placa, de 96 poços for 1 hora, vinte μΐ de 11X DMP-XgE são 30 adicionados f e- ás células são de senvol vidas a 3-70:C/eo^ 6%
327/356 de um dia para o outro. No dia seguinte, as células slo lavadas duas vezes em tampão de .HBS-S com 1,8 mM de ÇaCls e
1,75% dé soro bovino fetal (FBS). Setenta pl de um composto: dé teste preparado em tampão de BBSS tom 1,8 mM de CaCl2 e
S FBS 1,75% são adicionados e incubados por 1Q minutos a
37°Ç/CO2 5%. As células são estimuladas pela adição de 7 pl de XIX DNF-BSA e incubadas a 37*C/COS 8% por 30 minutos. O meio é còletadõ è lisadoá de células são preparados pela adição de 7ò pl de Triton X~ 100 <3,05% ém BBSS com 1,8 mM de 10 CãCljj, os níveis de β~hexosaminidase sãò medidos tanto no meio quanto nos lisadòs de células. O ensaio de p» hexosaminidase ê realizado pôr adição de 4 0 pl de 1 W de substrato de p~nitrofenil -acet.il -glicosamida em 0,05 M de citrato de sódio (pH 4,5) a 1:0 pl de amostra (meio 15 condicionado ou lisadp de células)f incubação por 60 minutes a 37°C, e depois adição de 100 pl de 0,G5 M de carbonato de sódio/0,05 M de bicarbonato de sódio (pB
10,5) f mistuiando~se cuidadosamente e lendo a absorbância a
4QS nm. A percentagem de p-hexosaminidase liberada é. 20 calculada da seguinte .forma: A4Ô5 ímsio} / ÍA405 (meio) +
A405 (lisado)]. O valor* da ICS0 é calculado como a concentração na qual 50% da p~hexosaminidase liberada em células tratadas com veículo são inibidos»
Os Compostos de Formula (I)-(V) são inibidores nesse 25 ensaio.
Exemplo 4s Ensaio in vitro da liberação dé oitocina por células T
Cã lulsíè:
Células de Jurkat B6-1 foram obtidas de ATCC e mantidas em meio completo com FBS 10% a 37®C/CQj· 6%.
328/356
Snaai©:
No dia anterior à realização do ensaio, as células áe durkafc T são pláqueadãs em 90 pl de tampão de BBSS com 1,8 itsM de: CaCls e soro bovino fetal 1/75% (FBS) em uma placa de 5 96 poços em uma densidade de 1,5 k 10;> células/poço por 3 horas. Dez μί de 10X compòsto de teste preparádò ém BBSS são adíciónàdós e incubados por 10 minutos a 37®C/Q3S 6%.
As células são estimuladas pela adição de 10 pl de 11X PHA/TFA (27/5 pg/ml de PHA/SSO nM de TPA) e incubadas a
IO 37eC/ÇQs 5% por 20 horas. No dia seguinte, os sobrenadantes são coletados e testados quanto aos níveis de IL-2 por ELISA de acordo com os protocolos do fabricante. O valqr da XCSs é calculado como a concentração na qual 50% da XL-2 wcretada em células tratadas com veículo são inibidos.
Os Compostos de Fórmula (I)-(V) são inibidores nesse ensaio.
Exemplo 5. Efeitos dose-resposta de um composta de Formulas (I) ~ (V), Ç8A ou rapamicina em DTH do coxim da pata de camundongos
Objetivo: Determinar os efeitos de doseresposta do composto de teste na resposta de DTH induzida por mBSA em coxins da pata quando a dosagem é feita durante a fase de sensibilização, bem como na fase de indução.
Animais: Machos de camundongos Swiss Webster com 25 aproximadamente 20-25 gramas no início do estudo.
Matériais: BSA metílado (sigma) adjuvante completo de
Freund (Difco) mais H37 RA de tuberculosis suplementar (Difco;,
Design geral do estudo:
Os camundongos são anestesiados com isofluorano e
329/356 receberam injeções intradéimiicas de antígenç de 0,1 ml na base da cauda (DO, DG7) . Ç antigena é preparada por produção de uma solução de 4 mg/ml em agua estéril< Volumes iguais de antígenó é adjuvante completo de Freund, ao qual 5 4 mg/ml MTB são adicionados (oonificar por 5 minutos após adição dé MTB ao Óleo) , são emulsif içados por mistura manual até- que um glóbulo desse material mantenha sua forma quando colocado nã água'. 0 tratamento com: composto de teste, é iniciado no dia 0, á cada 24 horas (intervalos da 24 horas) é continuou até o 10 a dia, quando é feito o ataque.
No 106 dia, os animais são injetados no coxim da pata traseira direita com 20 μΐ de 10 mg/ml de mBSA, Cinco machos não sensibilizados são injetados com mBSA no coxim da pata. Vinte e quatro horas máiá tarde (IIs dia), as
1.5 patas traseiras direita e esquerda são seccionadas no. maléolo mediai e lateral e pesadas, e a diferença de peso indueidas pela Injeção de antígeno é determinada.
Análise estatística.. Os pesos das- patas (média ± SE) para cada grupo são analisados quanto ãs diferenças usando um teste t de Student ou AN0VA com pôs-teste de Dunnett. A signifícãncia estatística é ajustada a p<0,05.
Tabela 5. Machos des grupes de tratamenta
Tratamento 1δ ml/kg a cada 24 horas
Grupo via oral (sem
Controles normais
1 5 sens ib i1í zação)
Injetar mBSA apenas na direita |
2 0 DTH + Veículo (PEG Í00 7Ôt /Água 30%)
ΠΤΗ + Composto de teste (Só mg/kg, :
3 8 via oral, a cada 24 horas)
330/355
8 DTH via + Composto oral .· a cada de teste (100 mg/kg, 24 horas)
O DTH ψ Composto de t e ste {2 0 0 mg / k g,
via oral, a cada 24 horas)
DTH +· Composto de te st e (300 mg / kg,
8 via oral, a cada 24 horas)
·*—*................. ............ .......... ................................................................
8 DTH 4· CSA (100 ffl g/k g a cada 24 horas,
intraperitoneal)
DTH-t-Rapamicina (5 mg/kg a cada horas, intraperitoneal)
Espera-se que os Compostos de Formula (l)-(V) sejam eficazes nesse modelo.
Exemplo
SA-í Pados farmacocinétieas de um composto de
Fórmulas (I) - (V) em ratos
A biodisponibilidade e propriedades farmacocínêticas no plasma em ratos de composto de
Fórmulas (I)- (V) administrado oralmente em
PEG 400 25%/etanol 20%/veíC'ulo de
HíO 551. Dois grupos de tratamento, (1) um grupo de dose intravenosa a 2 mg/kg; e (2) um grupo de dose oral a 10 10 mg/kg, são administradas a machos de rato Sprague-Dawley (3 ratos por grupo), pesando aproximadamente 250-300 g. Até 3.0 pontos do tempo são coletados para cada grupo. Pontos do tempo típicos sãò: pré-dose, 15, 30 minutos, 1, 2, 4, 6, 8, 12 e 24 horas. Até 300 pl de sangue total são coletados 15 através de uma cânula na veia jugp.lar em cada ponto do tempo. O sangue total ê coletado em tubos de microcentrí.fuga contendo anticoagulante e centrifugado a 5,000 rpm em um microcentrífuga por 5 minutos, antes do plasma ser transferido para um tubo de microcentrífuga 2ó limpo. Axs amostras de plasma são submetidas â anã l,i se
331/356 bioánalítica.
Exemplo 6: Efeito de composto da teste no modelo de artrite induzida por colãgeno em ratos (CIA) ühjetívoi Determinar a eficácia de Compostos de teste administrados por dosagem oral a cada 24 horas, na inibição da inflamação, destruição de cartilagem e reabsorçao: óssea dó desenvolvimento dé artrite por colágeno do tipo II em ratos.
Animais: Fêmeas de ratos Lewis (Charles River # 10 7246950) , pesando 125-150 g no inicio do estudo.. Quarenta ratos são injetados com colãgeno para obter responsivos sólidos nos dias 10 e 11. Quatro animais não imunizados servem como controles normais.
Materiais: Composto de teste,· colãgeno do tipo IX, adjuvants incompleto de Freund, ácido acético. O composto de teste é preparado em uma concentração de 10 mg/ml em PEG 400 50%/água 50%. O colágeno é preparado por produção de Uma solução de 4 mg/ml em -ácido acétioo 0,01 N\ volumes iguais de colãgeno e adjavante incompleto de Freund são emulsifiçados por mistura manual até que um glóbulo desse material mantenha sua forma guando colocado na água.
Pesigh geral d© estudo: .Animais (10 ratos/grupo for artrite, 4 ratos/grupo para controle normal).
Os animais nos grupos de artrite são anestesiados com 25 isofluorãno e receberam injeções de colãgeno (D0) ; cada animal recebe 300 μΐ da mistUrà espalhados sobre 3 lo subeutâneos nas costas , No V- Dia (DS) , os animais são anestesiadas novamente e recebem uma segunda injeção de colãgeno, como antes.
A dosagem oral de Composto de teste em intervalos de
332/356
24. heras (a cada 24 haras) ê iniciada no Bia 0. usando urn volume de doss de 5 ml/kg para soluções orais., Qs ratos são pesados no Dia 0 e nos 3 0 6* e 9ζ:-17’:· dias de artrite, e medições oom compasso nos tornozelos são feitas todos os dias, começando no 9* Dia. os pesos corporais finais são Obtidos no 17a Dia de artrite. No 17° Dia, todos os animais são anéstssiadós para coleta de sangue final e depois são sacrificados. Subsequentemente, as patas traseiras e os joelhos são removidos, as patas traseiras são pesadas e 10 depois (com os joelhos) colocadas em formalins. para processamento para microscopia. Os fígados, baço e timo e rins também são removidos, são retirados tecido estranhos e são pesados. Os rins são mantidos ém formalina para hi s topatolog ia,
A coleta de amostras acorrerá no 1° dia e envolve os grupos 2~5 com amostras obtidas de todos os grupos. Isso faz com que todos os animais sejam tratados similarmente e é importante para os parâmetros clínicos e pesos hepáticos finais.
Os Compostos de Fórmulas (I)-(V) produzem uma redução significativa de artrite nesse modele.
Exemplo 7 s Efeito de compast©® d® Fórmulas (I)- (V) sobre oolite induzida por DNSS em ratas
Procedimento; Machos de ratos Wistar pesando 200 a 20 25 g são deixadas em jejum por 24 horas antes do uso. Çolite distàl é induzida por instilação intracolônica de BNBS (ácido 2,4-dinotrobenzena sulfonic©:, 20 mg em 0,5 ml de etanól 30%) com um cateter de 12 cm de comprimento, seguido por injeção suave de ar (2 ml) através do cate ter para 30 assegurar que a solução permaneça no cólon. Os animais são
333/356 divididos em grupos de 5 cada. A substância de teste e veículo são administrados diariamente ou duas vezes ao dia pela via de administração apropriada 24 horas e 1 hora antes da instilação de DNBS e depois por 6 dias 5 consecutivos posteriorments, üm grupo de controle normal é tratado com NaCl õ,9% isoladamente, sem ataque com DNBS. Os animais são sacrificados 12. horas após a dose de duas vezes ao dia final e 24 horas apõe a dose diária final, e o cólon ê removido e pesado. Durante o experimento, o peso 10 corporal, a pesquisa de sangue oculto nas fezes e a consistência das fezes são monitorados, diariamente. Além disso, quando a cavidade abdominal é aberta antes da remoção do cólon, são observadas adesões entre o cólon e outros órgãos, bem como a presença de ulderaçto colônica 15 após remoção e pesagem de cada cólon (uma pontuação de dano macroscópico é registrada de acordo com critérios de pontuação estabelecidos). A proporção de cólon/peso corporal é calculada de acordo com a fórmula: Cólon (g)/PC X 100, Q aumento '* líquido ha proporção de grupo de 20 controle de veículo + MBS em relação ao grupo dé controle de veículo é usado como uma base para comparação com grupos individuais tratados, e expresso como À'Dec. (%) (diminuição percentual) ... üma redução de 30% ou mais (> 30%) na proporçãa de cólon/pes© corporal, em relação ao grupo de 25 controle tratada com veículo, é considerada significance.
Sülfasalazina â Usada como o agente de teste-padrão. (Hógáboam. C.M., e cols. *An orally açtive non-selective endothelíii receptor antagonist, bos ent an, markedly reduces lesion in a rat model of colitis . Eur. J. Phazmiacoi. 309;
261-269, 1996; Yue Q, e cods. , *I;n some embodiments, the
334/366
21-aminosteroid tirilasid mesylate ameliorates inflammatory bowel disease in ruts*. J.. Phawacol. Exp. Ther. 276.: 26527 0, 1996.)
Espèra-se que os Compostos de Fórmula (!) *(v) reduzam oolite hèsse modelo,
Exemplo 8. Efeito de compostos de Fórmulas (I) - (V) sobre rejeição de transplantas de pele em ratos
Procedimento. Ratos Lewis e Brown Norway livres de patôgenos específicos com 1Q semanas de idade são
XÓ adquiridos de Charles Mver e abrigados ább condições limpas convencionais. Os animais são texiipulados e é permitido que eles se aclimatizem por um período de duas semanas. Doadores de pele: fêmeas de ratos Brown NoWay, com 10 semanas de idade. Receptores de pele; fêmeas de 15 ratos. (Lewis, com 10 semanas de idade.
Os ratos Brown Norway doadores sâo mortos para servir como doadores de 5a 8 transplantes de pele, imediatamente após a morte dos ratos Brown Norway, a pele, abdominal dos ratos é raspada e são retirados transplantes de pele de 20 20 mm de diâmetro de tamanho. Apõs remoção de tecido conjuntivo, esses enxertos são transplantados em ratos Lends. Isso .é realizado por raspagem a pele dorsal superior do rato Lewis sob anestesia com isofluora.no, removendo um pedaço de pele de 15 mm de diâmetro por punção e 25 substituição com um transplante de pele derivado do rato Brown Norway.
Durante o estudo cada, enxerto 4 fixado por 4-6 pontos usando Safil 6/0 violeta (B Braun, Aesculap) e coberto por Curativo de Gaze de Parafina BP (3 x 3 cm, Smith & Nephew), 30 um pedaço de gaze e fita cirúrgica. Essa adaptação minimiza
335/356 a possibilidade de afrouxamento de um transplante por razoes diferentes de rejeição.
Em todos os casos, os transplantes são protegidos com bandagens; estas são removidas apôs seis dias, para permitir 5 a inspeção diária do transplante.
A rejeição é monitorada por avaliação dos primeiros sinais de inflamação (vermelhidão) e necrose (endurecimento e escurecímento do enxerto).
Experimento clínico de fase II da segurança e eficácia de 10 compostos de Fórmulas (I)~(V) em pacientes com artrite reúmatÓide ativa.
objetivo desse experimento de fase II é investigar a segurança, tolerábilidade, PK, W e eficácia de infusões intravenosas únicas e repetidas dé um composto de Formulas 15 (!). -(V) em pacientes com artrite réumatõide ativa.
Pacientes: ©s individual «legíveis serão Homens e mulheres entre as idades de 18 e 75 anos.
Critérios;
Critérios de inclwâo:
- Todos os indivíduos devem usar contracepção aceitável para assegurar que não ocorram gravidezes durante a evolução do estudo e por pelo menos 12 semanas após a dosagem para homens e por 32 semanas após dosagem para mulheres;
- índice de massa corporal dentro da faixa de 18,5 35 kg/m2, inclusive, além de uma faixa de peso de 55 - 95 hg;
- 0 indivíduo deve ser capas de conceder autorização informada e pode atender às exigências e cronograma do 30 estudo:
336/356
- Q indivíduo deve ter ura diagnóstico de RA de acordo com os critérios, revisados de 1987 do American College of
Rheumatology (ACR.) ;
- O indivíduo deve ter uma pontuação de atividade da doença DAS28 de mais do que 4,2 na seleção e pré“dcse;
- O indivíduo deve ter um nível séricó de CRP >/ 0,5 mg/dl ou um nível de ESR. de 28 mm/hora na seleção e pré-
- O indivíduo NÃO recebeu nenhuma terapia biológica no passado, incluindo substâncias biológicas para o tratamento de artrite reuraatóide;
- O indivíduo deve ter testes de função hepática, incluindo alanina transaminase (ALT) e aspartate transaminase (AST), em até 1,5 vezes o limite superior do 15 normal {OLN) e fosfatase alcalina (ALL) em até 3 vezes ÜLN na seleção. O paciente também deve ter bilirrubina. total dentro do ULN na seleção;
- O indivíduo deve ter recebido· pelo menos 3 meses de metotrexato e deve estar em uma dose estável de metotrexato (até 25 mg/semana) por pelo menos 8 semanas antes da seleção e desejar permanecer nessa dose por todo o estudo;
Se, além do metotrexabo-, estivei- sendo usada sulfasalasina, o indivíduo deve estar em uma dose estável por pelo menos 4 semanas antes da seleção e desejar 25 permanecer nessa dose por todo o estudo;
Sem além do metotrexato, hidroxicloroquína ou cloroquina estiver sendo usada, o indivíduo deve estar em uma dose estável por pelo menos 3 meses antes da seleção e desejar permanecer nessa dose por todo o estudo.;
3.0 - Aqueles indivíduos em uso de outras terapias anti
337/356 reumáticas orals, que podem incluir fármacos ãhtiinflamatórios não; esteróides (KSAIDsj , inibidores da COX ·· 2, glicOcarticóides orais, por exemplo, pxednisolona (aproximadamente 1,0 mg/dia), devem estar em regimes de 5 dosagem estáveis pôr pelo menos 4 semanas antas da seleção e desejar per^ianecèr nesse regime por todo o estudo. Qs indivíduos qüé recebem glicocorticóides intramusculares, por exemplo, metilpz^ednisolona (aproximadamente 120 mg/mês), devem estar em um regime de dosagem estável por 10 pelo menos 3 meses antes da seleção è desejar permanecer nesse regime por todo o estudo;
- O indivíduo deve estar em uma dose estável de suplementas do folato (5 mg/semana) por pelo menos 4 semanas antes.
Critérios de exclusão:
Qualquer anormalidade clinicamente relevante identificada na avaliação médica de seleção, exames labora torrais (por exemplo, .pafãüsetros de hematologia fora dos limites normais), ou ÉCG (12 eletrodos ou Holter);
- o indivíduo possui um resultado positivo para antígeno de superfície de hepatite B ou anticorpo para hepatite C na seleção;
- ô indivíduo possuí uma história de testes de função hapãtica elevados èm mais de uma ocasião (ALT, AST e alf >
3xò limite superior da normal (ULN); bilirrubina total >
1,5 X tOH hos últimos è meses;
- Exposição prévia ou infecção passada causada por Mycobacterium ttfbèrduldsí.s;
- O indivíduo póssui uma infecção aguda;
« 0 indivíduo possui uma história de infecções
338/356 repetidas, crônicas ou oportunístiuas que, na opinião do investigador e/ou.. monitor médico de GSK,. coloca o indivíduo em um risco inaceitável como participante nesse expe riménto;
- 0 indivíduo possui uma história de malignidade, exceto carcinoma de célula basal cirurgicamente curado ou mulheres com carcinoma cervical curado (> 2 anos antes);
O indivíduo, possuí uma história de vírus da imunodeficiência humana (HIV) ou outra doença de 10 imunodeficiência;
- O indivíduo cuja depuração de creatinina calculada ê de menos de SO ml/min; ó indivíduo possui condições cardíacas, pulmonares, metabólicas, renais, hepáticas ou gastrintestinais significastes que, na opinião do investigador e/ou monitor médico de GSK, coloca o indivíduo em um risco inaceitável como participante nesse experimento;
- 0 indivíduo fez uso de ciclosporina, leflunomida, ciclofosfamida ou azatioprina em até 1 mês antes da
2Q seleção. Indivíduos que fizeram uso de eiclospori.na , leflunçmida, ciclofosfamida ou azatioprina no passado devem ter se recuperado de todos os eventos adversos relacionados ao fármaco;
Q indivíduo fez uso de sais de ouro ou d25 penial lamina: em até 1 mês antes da seleção. Indivíduos que fizeram uso de saís de ouro ou d-panicilamina no passado dévèm ter se recuperado de todos os eventos adversos relacionados ao fármaco;
- O indivíduo recebeu glicocorticoides intra- articulares em até 1 mês antes da seleção,339/356
História recente de distúrbios de sangramento, anemia, doença péptíca ulcerosa, hematõmese ou sangramento gast, rintes tinal;
- Indivíduos com. uma história de doença hematologica
S ou distúrbios plaquetários adquiridos, incluindo tromboc itòpenia induzida por fármaeos, trombocitopenia idippãtica aguda ©u doença de von Willebrand?
Indivíduos com um risco conhecido de hemorragia intracraniana, incluindo cirurgia dó sistema nervoso xo central (SKC) nos últimos 12 meses, malformações vasculares arteriais, aneurismas, trauma craniano fechado significant® em até 6 meses ou qualquer outro incidente que o investigador e/ou monitor médico considere relevante;
- O indivíduo possui Hb <10 g/deçilitro (dl) e 15 contagem de plaquetas < 150 x 109/litro (1) ;
- Doação do sangüe de mais de 500 ml dentro de um período de 56 dias antes da dosagem;
- Orna relutância de indivíduos do sexo masculino em se abster de relação sexual com mulheres grávidas ou lactantes,' ou uma relutância do indivíduo do sexo masculino em usar preservativos com espermicidas, além de sua parceira usar outra forma de contracepção como, por exemplo, dispositive intra-uterine (DIÜ) , diafragma com eçpermicida, contraceptivos orais, progesterona injetável, implantes subdérmicos de levonorgestrel ou uma ligação tubária, caso as mulheres possam engravidar por pelo menos 12 semanas após dosagem;
- Uma relutância de mulheres em idade, fértil em usar contracepção adequada, como definido na seção de restrição do estudo» Se necessário, mulheres fora da idade fértil (ou
340/356 seja, pós-menopausa ou cirurgicamente estéreis, por exemplo, ligação tubária ou histerectomia ou ooforectpmia bilateral) serão confirmadas * O estado de pds-menopausa será confirmado por -Concentrações séricas de hormônio folículo-estimulante (FSH) e de estradiol na seleção. A esterilidade cirúrgica será definida como mulheres que tiveram uma hist&rectomia, ligação tubária cu ooforeutomia bilateral documentadas;
- O indivíduo possui uma história de uso de fármacos 10 que criam dependência em até 12 meses antes da seleção;
- História de consumo regular de álcool que excede uma ingestão semanal média de mais do que 21 unidades ou uma ingestão diária média de mais do que 3 unidades (homens) ou uma ingestão- semanal média de mais do que 14 unidades ou uma ingestão diária Têua de mais do que 2 unidades (mulheres). Indivíduos que consomem regularmente mais de 12 unidades de álcool em um período de 24 horas também -serão excluídos. Uma unidade é equivalente a 220 ml de cerveja ou 1 medida (25 ml) dé destilado ou 1 taça (125 ml) de vinho;
- Teste de gravidez positivo ou lactação na seleção;
- Participação em. um experimento oom qualquer fármaco em investigação em até 3 meses ou 5 meias-vidas (o que for mais longo) antes, .Design.- do estudo; Esse ê um estudo de. ajuste da dose, randomisado, duplo-cego, controlado por placebo, adaptive, para investigar a segurança, tolerabilidade, PK, PD e eficácia de infusões intravenesas únicas e repetidas de um composto de Fórmulas (I)-(V) em pacientes com artrite reumatóidé ativa. Ô estudo é dividido em 2 partes: Parte A é uma fase de ajuste de dose, adaptive, que fornecerá
341/356 segurança, toleraMl idade f PK e PD em infusões intravenosas únicas. A Parte B é uma fase de doses repetidas que fornecerá segurança,, tolerabilidade, PK, PD. e eficácia apôs infusões intravénosas repetidas de um nível de dose 5 selécionado.
Medidas do result-adõ priori o t
Segurança e télerabilldade após doses únicas crescentes de um composto de Formula (I), (XX) ou (XXX) em 1 mês e após 3 doses repetidas de- um composto de Fórmulas IQ (I)-(V) em 3 meséS. Eficácia clínica (pontuação DAS28) de um composto de Formulas (X) - (V) ém :1 mês.
Medidas do resultado secundário:
- DAS28 médio ponderado após doses intravenosas únicas e repetidas.·
- Parâmetros plasmâticos da RK de um composto de
Fórmulas (í)-(V) após doses iptravenusas Únicas e repetidas,. incluindo concentrações (séricasj livres e. ligadas de W composto de Formulas (X) ~ (V) , AUC.^^.), CWX, depuração, volume de distribuição e proporção d® acúmulo.
- Critérios de resposta DAS 2 8 é EUDAB após doses intravenosas únicas e repetidas.
- Resposta ACR20/ACR5Q/ACR70 apôs doses intravenosas únicas e repetidas.
- Número de articulações edemaciadas avaliadas usando 25 contagens de 28 articulações.
- Número de articulações sensíveis/dolorosas avaliadas usando contagens de 28 articulações.
- Avaliação da dor do indivíduo.
- Avaliação- global do médico da condição da artrite.
- Avaliação global do pacientes da condição da
342/3 56 artrite.
~ índice de incapacidade funcional (Health Assessment Questionnaire*).
- Proteína c-reativà (CRP).
~ BSR-
- índice de fadiga global.
- índice de incapacidade HAQ<
Biomãrcádores fánuacodinâmicos após doses intravenosas únicas e repetidas.
- AüCSç e EC5í; características pára alterações do ponto final clíníço com modelo de exposição plasmática, como avaliadas por modelos FK/RB sigmóides de n de resposta indireta.
- Imunogenicidade (anticorpos humanos anti-composto de 15 Fórmulas (I) ~ (V))
Experimento clínico de fase XI da segurança e eficácia de compostos de Fórmulas (X)~(V) em pacientes com psoriasé grave, recalcxtzante, do tipo placa.
O objetivo desse experimento de fase IX é investigar a segurança, eficácia e tolerabilidade de um composto de Fórmulas (X) (V) em pacientes com psoríase grave, recalcitrants, do tipo placa.
Pacientes: Os indivíduos elegíveis serão homens e mulheres entre as idades de 18 e 75.
Critérios?
Critérios de inclusão:
- o paciente possui psòx~íase grave, recalcitrante, do tipo placa e não obteve sucesso com pelo menos 1 terapia sistêmica (para es objetivos desse estudo, psoraleno com luz ultravioleta A é considerado como sendo uma terapia ϊ 343/356 ' sistêmica);
- Ο. paciente possui envolvimento psoriátíco de pelo menos 10% de BSAj
- O paciente possui uma pontuação da PSGA de 4 ou mais?
~ Q paciente, sé mulher, é cirurgicamente estéril ou 2 anos pós-menopause ou, se, em idade fértil, está usando atualmente a método de contracepção medicamente aceito, e concorda ém continuar com uso desse método pela duração do 10 estudo (e pór 30 diàs apõe participação no estudo) , Métodos de contracepção aceitáveis incluem: abstinência, contraceptivo esteroidal (oral, transdérmico, implantado ou injetado) ém conjunto còm um método de barreira, ou dispositivo intra-uterine (DID') ;
IS - 0 paciente, se homem, é cirurgicamente.· estéril ou, se em idade fértil, está atualmente usando um método aprovado de controle da natalidade, e çoncorda em continuar com © us© desse método pela duração do estudo (é por 60 dias apõs receber a última dose de um composto de Fórmulas (I) -(V) por causa dos possíveis efeitos sobre a espantatogênese);
- 0 paciente deve concordar e ser capaz de seguir aos procedimentos e restrições do estudo e desejar retornar para a clínica para a avaliação de acompanhamento, como especificado nesse protocolo.
Critérios de exclusão:
- 0 paciente possui recebeu tratamento com tratamentos sistêmicos para psoi'xase (especif ícamente, retinõídes, metotrexato, ciclosporina A, etanercept, efalisumab, outros
3Q agentes biológicos ou outros imunomoduladores} em até 4
344/356 semanas, ou terapia a base de UV em até 2 semanas, ou alefacept em até 5 semanas da 1:> dia planejado do tratamento do estudo;
paciente recebeu tratamento com inibidores potentes de CYP3A4, incluindo ciclosporína, clotrimazol, fluconacol, ítraconazol, cetoconaxol, voriçonazol, eritromicina, claritromiçina e troleandomicina,. inibidores de protease do vírus da imunodeficiência humana (HIV) , ou nefaoodoua êm até 1 semana (7 dias) do 1<! dia planejada da 10 tratamento do estudo.;
- O paciente está recebendo atualmente warfarin;
- O paciente possui hipèrsensibilidade a um composta de Fórmulas (Ij-(v) ou qualquer componente da um composto dê Fórmula (I), (II) ou (IIX);
X5 - Ç: pacient e póssul um ou mais das seguintes vaiares de bioquímica sérica, como determinado nà visita de seleção (visita 1):
- níveis de bilirrubína de mais do que 2 ve.sés ά limite, superior do normal (0Ό) ;
- níveis de ALT ou AST de mais do que 2 vezes o ULN;
- níveis séricas de creatínina de mais do que 2 mg/dl;
- O paciente necessita de tratamento atual para HIV com inibidores de protease;
- Q paciente está em usa de medicação para um
2.5 diagnóstico clínico de ulceração gastrintestinal ou apresentou melena ou hematêmese nas 3 semanas anteriores,· ~ o paciente é uma mulher grávida ou lactante;
- O paciente recebeu tratamento com um fármaco em investigação em até 4 semanas em relação ao V dia planejado do tratamento dp estudei
345/356
Design do. estudo; Esse é um estudo de escalonamento de dose, exploratório, aberto, não randomizado, da eficácia., segurança e tolerabilidada de um composto de Fórmulas (X) (V) sai pacientes com psorfase grave, recalcitrants, do tipo 5 placa.
Experiment© clínico de faae IX da segurança e eficácia de compostos de Formulas (I)-(V) para a profilaxia de rejeição aguda apse transplante renal* tratamento imunossupressor padronizado- apôs.
transplante renal é uma combinação de tacrolimus, micofenolãto mofetil, e prednisGlona. Com esse regime, a incidência de rejeição aguda nos primeiros seis meses apôs transplante pode cair até cerca de 20%. O principal desafio no presente consiste em melhorar o resultado de longo prazo 15 por prevenção de nefropatia crônica por aloenxerta (CAN).
Como a rejeição aguda ê um forte indicador de CAN, uma diminuição adicional na incidência de rejeição aguda pode melhorar a sobrevida de longo prazo do enxerto. Õ objetivo desse experimento clinic© de fase II é investigar a 28 eficácia e segurança de um composto de Fórmulas (X)~(V) para a profilaxia de rejeição aguda após transplante renal.
Pacientes: Os Individeos elegíveis serão homens e mulheres com mais de 18 de idade, ou mais.
Cri t ériós::
Critérios de inclusão:
- Receptores de transplante renal;
- Autorização informada aprovada pelo T.RB assinada, datadá e com testemunhas;
Critérios de exclusão:
- Gravidez;
346/356 <
- Doador vivo, que seja HLA. idêntico;
Sfndx'cme. hemolítica urêmxça com© doença renal original;
- Glomerulóèsclerose focal segmentar que ocorreu e® um 5 enxerto prévio;
- Mais de dois enxertos previamente mal sucedidos e/ou
PRA > 85%;
- Diabetes melit© atualmente não tratado -cm insulina ;
Contagem de leucocitos totais < 3.Õúô/mm3 ou contagem de pIaquetas < 75.000/mm3;
• Infecção ativa com hepatite s, hepatite C ou HIV;
- Historia de tuberculosis.
Design do estudo: Esse é um estudo interveneionista, randomzadcq duplo-cego, controlado por placebo, sobre a 15 eficácia e segurança do uso profilático de ura composto de Fórmulas {X)-{v). Mm grupo receberá uma dose única de um composto de Fórmulas (I)»(V) intravenosamente no momento do transplante, e o outro grupo recebe uma infusão de placebo.
Resultado primário:
- Determinar a incidência e gravidade de rejeição aguda confirmada por biopsia nós primeiros seis meses após o transplante.
Resultados secundários:
- Função renal estimada pela depuração de creatinina 25 endógéna em 6 meses.
- Ocorrência de nefropatia crônica por aloenxerto em 6 meses,
- Incidência .cumulat-iVá de infecções e maíignidades em meses <
- Custos médicos durante os primeiros 6 meses após o
347/356 transplante,
- Sobrévida do paciente e do enxerto.
Experimento clínica de fase II da segurança e tolerabilidade de w campos tá de Formulas (I) - (V) em pacientes com oolite ulcerativa ativa (ÜC)0 objetivo desse experimento de fase II ê investigar a segurança, tolérabilidade de um regime com composto de Fórmulas (I)- (V) em pacientes com oolite uleerativa ativa,
Pacientes í Os indivíduos elegíveis serão homens e 10 mulheres com 18 anos dé idade ou mais,
Crí ÊéxÚOS::
Critérios de inclusão:
- Pacientes com UC ativa em terapia com 5-ASA e também tratada com 6-MP e/ou corticosterõides ou que também foram tratados previamente com AZA, 6-MP ou eorticosterdides e não pode tolerá-los;
- Pontuação de Mayo de 6 a 10 pontos com doença moderada a, grave por endoscopia (pontuação de Mayo de pelo menos 2) realizada < 14 dias da administração do fármaco do estudo;
- Indivíduos com as seguintes medicações podem ser incluídos no estudo, se as medicações estiverem de acordo com as seguintes posologias antes da administração do fárráaco do estudo e se não foram previstas alterações 25 durante o estudo; prednisolona < 2ú mg por dia (ou equivalente) (a dose deve ser estável por pelo menos 2 semanas antes da adminiâtraçMõ do fâxmaco do estudo} ; 5-ASA (a dose deve ser estável por pelo menos 4 semanas antes da administraçãõ do fãrmaco do estudo) ; AZA ou δ-MP (a dose 36 deve ser estável por pelo menos 3 meses antes da
348/356 administração do fármaco d© estudo); esterôides ou 5-ASA retais (devem estar estáveis por pelo menos 4 semanas antes da administração do fármaco do estudo);
- ládivídúós que utilizam medicações retain devem ter s doença visível na sigmoidoscopía a > 20 cm;
~ Os valores laboratoriais na seleção devem obedecer a certos critérios:
- Mulheres devem estar na pós-mferiopáusa (> 12 meses sem menstruar) ou cirurgicamente estéreis (por exemplo, por 1:0. histerectomia é/óu ooforectomia bilateral) õu devem estar usando contracepção eficaz (poi* exemplò, contraceptives orais, dispositivo intra-uterine (Dip), método de barreira dupla de pi*eservativo e espermicída) por pelo menos 4 semanas antes da administração do fãrmaco do estudo e 15 concordar em continuar a contracepção pela duração de sua participação no estudo; e
Indivíduos do sexo masculina sexualmente ativos devem usar um método de contracepção de barreira durante a duração do estudo.
Critérios de exclusão:
Terapia anti-IW em até 8 semanas antes da administração do fármaco do estudo;
Qualquer terapia experimental mais terapia S 4 semanas antes da administração do fármaco do estudo;
- Tratamento prévio com qualquer anticorpo monoclonal ou proteínas de fusão a base de imunoglobulina 8 semanas antes do tratamento do estudo;
- Presença de síndrome de Cushing;
Megacólon tóxico ou doença fulminante que provavelmente necessite de colectomia;
9/356
- Contra-indicação, a colonoscopia ou sigmoidoscopia;
- Imunodeficiência primária qu secundária;
- Doença autoimune além, da ÜC-, com as exçações de síndrome de S jogren: ou hipotixeoídismo;
» História d® malignidade, excluindo da célula basal ou escámosa da pele adequadamente tratada e curada, ou. cervical carcinoma ϊη situ;
Doença psiquiátrica importante (indivíduos com
depressão e stáve1 que: recebem tratamento adequada serão
10 permitidos no estudo);
- Evidências de infecção aguda ou crônica, como
evidenciado por:
- cultura de feres positiva para patógenos e/ou toxina
de. Clostridiu® difficile;
- achados na radiografia de tórax da seleção, por exemplo,, infiltrados pulmonares ou adenopatia;
- tratamento atual, para infecção por tuberculose, evidências clínicas ou raâialõgiça: de. TB ativa ou, para indivíduos na America do Norte, um PPD positivo, sem profilaxia prévia;
~ Herpes zoster < 3 meses, antes da administração do fármaco do estudo;
doença infecciosa ativa que necessita de antibióticos intravenosos em até 4 semanas antes do 25 tratamento do estudo ou antibióticos orais no momento da inclusão;
- HIV ou AIDS;
- testes posicivos para HBV ou HCV, indicando infecção ativa ou crônica;
- doença cardíaca clinicamente significativa,
Ο/35 5 ' necessitando dá medicação, angina instável, miocãrdíca, em até 6 meses, ou insuficiência cardíaca congestiva;
- Arritmia que necessita de terapia ativa, com a exceção de anormalidades da condução clinicamente insignífiçantes ou pequenas;
- História de doença cerebrovascular que necessita de medi cação / tiat amenta;
Terapia anticoageXante ou um distúrbio de s ang rament O c onhe c i dó;
- distúrbio de convulsão que necessita de terapia ativa;
- Úso abusivo de fármacós ou álcool;
- Gravidez ou amamentação;
- Qualquer condição médica subj acente què, na Qpinxão IS do Investigador Principal, tornará o fârmaco do estudo perigosa par a ao indivíduo ou possa obscureaer a interpretação da eficácia ou segurança d© tratamento,- ou
- Incapacidade ou relutância em retornar para visitas de acompanhamento e concordância com © protocolo do estudo.
Medidas do resultado primário:
- Alteração na por^uaçâo de Mayo no 57* dia, comparada cam a da seleção.
Medidas da resultado secundário:
- Taxa de remissão.
Desion do estudo: Esse ê um estudo multidoses de fase
II, duplo-cego, .controlado por placebo, random!zado, de um composto de Fórmulas CD - (V) e®' indivíduos cam UC ativa que apresentam flare. Todos os indivíduos terão doença ativa enquanto em uso de uma medicação contenda 5-ASA e estão em 30 doses estáveis de cortiçosterôides e/ou azatioprina ou 6
351/356 mérbaptopútina, o.u que jâ fizeram uso prévio dessas medicações, mas não puderam tolerá-las. Flare é definido como uma pontuação de Mayo de § a 10 com atividade da doença de moderada a grave na endoscopia (subpcntuação 5 endoscôpica de Mayo de pelo menos 2) em até 2 semanas antes de receber a administração do fármaco do estuda. Doses de medicaçõès concomitantes permitidas (compostos contend© ccrticosterõides, azatioprína (AZA), 6-mercaptopurina (€MP) e 5- aminossalicilatos (5-ASA)) devem permanecer 10 constantés durante a evolução do estudo. Os indivíduos serão random!zados para, receber placebo ou um composto de Fórmulas (I.)-(V) intravenosamente nos 1*, 15ô f 290 e 43a
Dias. Todos os indivíduos serão obáervados na clínica em intervalos regulares até o 85* Dia para avaliações da 15 segurança, eficácia, farmacccinétícas e/ou farmacodinãmicas. Todos os indivíduos serão contatados 70 dias após a última dose de fármacp do estudo. A avaliação da segurança será determinada por medições dos sinais vitais, testes laboratoriais clínicos., exames físicos, 20 avaliações de imunogeniçídade, raios-X do tórax, eletrocardiogramas e a incidência e. gravidade de eventos adversos decorrentes do tratamento. A avaliação clínica primária, da atividade será determinada pela alteração na pontuação de Mayo no 57* Dia, comparada com a seleção. Os 25 pontos finais secundãrios incluem a determinação da taxa de remissão pela pontuação dé Mayo no 57c Dia, avaliação da ciçatríração mucosa e alteração em relação aos valores de base na pontuação IBDQ.
Experimento clxnxcò de Fase IX da segurança e eficácia de 30 compostos de Fórmulas (l)-(V) em pacientes com esclerose múltipla
0. objetiva desse experimento de fase II ê investigar a segurança, eficácia e tolexabjlidadé de um composto de Fórmulas (X) ~ (v) em pacientes com esclerose múltipla S remi tente/recorrente.
Pacientes: Qs indivíduos elegíveis serão homens e mulheres entre 18 e 65 de idade»
Critérios:
Critéx-ias de inclusão:
- Possuir um diagnóstico definitivo de esclerose múltipla remi tente/recorrente.
- Possu:; uma historia de pelo menos 1 dos seguintes: a» Um mínimo de 2 recidivas de MS nos 2 anos anteriores, mas não no período de 1 mês antes da seleção.
b, Uma recidiva de MS nos 6 meses anteriores, mas não no período de 1 mês antes da seleção.
Critérios de exclusão:
- Possuir uma doença do S'NC (por exemplo, linfoma do SMC, lúpus eritemãtóso sistêmico).
- Possuir envolvimento bulbar significants de MS ou outros deficits neurológicos.
- Possuir uma úlcera de. decúbito.
Ter recebido terapias imunomoduladoras em até 3 meses da seleção.
Medidas do resultado primário;
- 0 número cumulativo de novas -lesões TI-weighted realçadas por Gd em RNMs cranianas até a 23 * semana.
Medidas do resultado secundário:
- Ó total número de recidivas de MS até a 23* semana;
alteração em relação ao nível de base na pontuação da
353/356
Expanded Disability Status Scale (EDSS) na 23* semana.
do estudo: Esse é um estudo de fase II de
Design variação de dose., duplo-cego, controIadQ por placebo, random!zado, de múltiplas injeções subcutâneas de um composto de
Fórmulas (1)-(V) múltipla remitente-recorrente.
em pacientes com esclerose
Pacientes receberão injeções subcutâneas de um- composto de
Fórmulas (I) - (V) ou placebo
11,. 15, e 19 ou 100 semanas .
Compos íçõés farmacêut1 cas
Composição parenteral
Para preparar uma Composição faimiacêuticã parenteral adequada à administração por injeção, 1.00 mg de üm composto de Fórmulas são dissolvidos era BMSO e depois misturados com XO ml de
SO1ução salina estéril 0, 9% . A mistura incorporada em uma forma de dosagem unitária adequada administração por injeção outra modalidade, seguintes ingredientes são misturados para formar uma formulação injetável
| Ingrediente Quantidade
.Composto de Fórmulas (.1) - (V) 1,2 g
| .'Solução-tampão dé acetato de sódio (0,4 M) ___ HC1 {1 ou Na0H (1 H)______ § Água (destilada, estéril) 2, Q ml g.s. até pH adequada q,â. até 2O ml
Todos os ingredientes acima, exceto água, são 20 combinados e agitados e, se necessário, com ligeiro
aquecimento. Uma quantidade suficiente de água é então adicionada.
Composição oral
Para preparar uma ípmposição famacêutica para liberação oral, 100 mg de um composto de Fórmulas são misturados cóm 750 mg de amido. A mistura é incorporada em uma unidade de dosagem oral, por exemplo,, uma cápsula de gelatina dura, que é adequada à administração oral.
Em outra modalidade, ss seguintes ingredientes são misturados intimàmente e compactados em comprimidos com f enda única >
.............. ---—V- ............^V..»V.S,S>^XSSSSSSSSW.SV.SSW.SSS-~V^W.H-^V^^^~~~~~·.»»»»»—« ( Quantidade por comprimido, ( ingrediente( ( (mg | Composto de Fórmulas (X) - (V) | 2(0.0. · > · · .'IT·,·,·,·,·,·,·,···,·,,·,·,·,·,·,·,·,·,· ,,, ,·.·.·,· ί ί.ί - - - - - - - - - - - - - -. - .... ...
I Amido de milho___j SO _______________________________
I Croscarmelose sddica25 i Lactose120
--------------.-.............E.-’.’.vvvvvasssssssv^ss^wsss^w^s™^™™-™I Estearate de magnésio ]____ S __
Ainda em outra, modalidade, os seguintes ingredientes são misturados intimamente e carregados em uma cápsula de
1.0 gelatina çom invólucro rígido. __ ( ( Quantidade por comprimido, ( Ingrediente |_________ ___________W..............................
Composto de Fórmulas (I)-(V) | 200
................··· ——...............................|......................................................
Lactose, atomizada ! 148 _ _____
Estearate de magnésio | 2 ___
Ainda era. outra modal ida* ie, os seguintes ingredientes
são misturados para formar uma solução/suspensão para.
administração oral,
ingrediente Quantidade
( Composto de Fórmulas (I) - íV) 1 3
| Çarbonato de sõdío anidro 0,1 g
| Etanol {2G0 proof), USP 10 ml
V-------- ....... j Água purificada, ÜSF 90 ml
355/356
Aspartame I Ó,003g
Lssssshhhhssshs^^^-.-.-.-.-.------——— - - .....— ..........................................................................................?
Composição siiblingual (losango rígido)
Para preparar uma composição farmacêutica para liberação bucal:, por exemplo, um losango rígido, misturar IQô mg de um composto de Formulas (X) - (V) com 420 mg de 5 açúcar em põ misturada com 1,5 ml de xarope de milho leve, 2,4 ml de água destilada, e 0,42 ml de extrato de menta. A mistura, é misturada gentilmente e derramada em um molde para formai* um losango adequado à administração bucal.
Composição para inalação
Para preparar uma composição farmacêutica para liberação por inalação, 20 mg de um composta de Fórmulas (X)-(V) são misturados com 50 mg de ácido cítrico anidro e 100 ml de solução de cloreto de sódio 0,9%. A mistura é incorporada em uma unidade de liberação por inalação, por exemplo, um nebulíradar, que ê adequada à administração por inalação.
Composição retal em gel
Para preparar uma composição farmacêutica para liberação ratal, 100 mg de um composto de Fórmulas (I)-(V) 20 são miàtuxados com 2,5 g de metilcelulose (1.500 mPa) , 1ÔÓmg de métilparabeno, 5 g de glioerina e 100 ml de água purificada. A mistura em gel resultante ê então incorporada em unidades de liberação retal, por exemplo, seringas, que sao adequadas à administração retal.
Formulação da supositõrio
Um supositõrio de peso total 2,5 g é preparado, por místu.ra de um composto de Fórmulas (I · - (VJ com Witepsol**5 H-15 {triglicerídeos de ácido graxa vegetal saturado,Riches-Nelson, Xnc., Nova York), e possui a -seguinte
356/356 ______
Ingrediente
Composto de Fórmulas
Composição tópica em gel
Para preparar a composição farmacêutica tópica em gel,
100 mg- de um composto de Fózwlas (T) - (V) são misturados 5 com 1,75 g de hidroxipropil celulose, 10 ml de propileno gliool, 10 ml de miristato de isopropíla e XÔQ ml de álcool purificado USP. A mistura em gel resultante -é então incorporada em recipientes, por exemplo, tubos, que são adequados à administração tópica.
IO Composição de solução oítálmica
Paia preparar uma composição farmacêutica de solução oftálmica, iQô mg de um composto de Fórmulas (I) - (V) são misturados com 0,9 g de NaCl em 100 ml de água purificada e filtrada usando um filtro de 0,2 micron. A solução 15 isotônioà resultante é então incorporada em unidades de liberação oftãlmica, por exemplo, recipientes de colírio, que sãc adequados à administração oftálmica.
Qs exemplos e modalidades aqui descritos têm finalidade apenas ilustrativa e, em algumas modalidades, 20 várias modificações ou alterações podem ser incluídas na abrangência da revelação e do escopo das reivindicações em anexo.

Claims (5)

REIVINDICAÇÕES i.. Composto caracterizado por ter a Fórmula (IH Z Fórmula (X) em que: A ê fenil ou benzdfurano, em que Senil e benzofurano 10 são, cada um, opcionaimente substituídos com pelo menus um R; ou à ê fenil substituído com dois grupos R em átomos de carbono adjacentes, em que os dois grupas R e os átomos de carbono ao qual estão anexado® formam um Á-Cg cidloalqull ou C3-Cs heterauicloalquil; 15 R é selecionado de F, Cl, Br, X, -CN, -NO3, ~CF3, “DH, -0R5, -OCF3, -OCH, -CasCRj, Ci-Cs alquilenoalquino, C:;-Cg alquil, Cs-Cé çicloalguil, Ci~Cfí heteroalquil, Cj-C$ haloalquil, tetrazolil, Cj-Cg 'heterocicloalquil,·. fenil, NHS(~O)2R3, S (-O) 2N (R4) ã, -C(«O)CF3.,· -c(~o)nhf(=o) 2r3, 20 S ( =O) SNHC (~O}R4 , N(R4);;, -NÍRj C (=Q)R3, -CQzRs, -C(=O)R:i, OCi>O)R3( -C(“O)N(R.U u “ SR;., -Sí=O)Ri e -Si-Ô)2R5; J é uma ligação, nhs (~o) £f S («O)SN(R4) , -ç(-O) , C ( =0) NHS í-O) ,, -S{-QhNHC(-Òh N(R4), -N (R,) C (-O) , -CO2í Cí-Cj, -OC(«O), -Ct-om&h S, -8(=0} e -S(=0)2, Ci-Cs 25 alquileno, C2-Cç alquenileno., C2-Cg alquinileno, C;.-C8 heteroalquileno, Cj-Cg cicloalquileno ou Cg-C5 heterocicloalquileno, em que Ci-Cg alquileno, Cs-Cg alquenileno-, Cs-Cs alquinileno, Ci-Cg heteroalquileno, Q-Cg cicloalquileno e C2-Cs são opcionaimente substituídos eom 30 pelo menos um R; R2 é C0aR2 ou um bioisostero de ácido carboxilico, em qua R2 é hidrogênio, Cx-Cs. alqu.il, -Ci~Cg cicioalquil, Ci-'Cg haloalquil, fenil ou benzil? z- é Ό> S, NH, N-CH OU CHW?,; .5 X é W-L-fenil, w-L-B, B, W-b-D ou D, etn que fenil, B, e D sao, cada urn, opcionalmente substituídos com pelo menosum R; W e W2, 0 ou uma ligação; L ê metileno, etileno substituído com pelo menos urn R,. 10 C;-Cç alquileno, C2-Cs alquenileno, C2-C6 alquinileno, Ci-Cs heteroalquileno., C3-C§.· cicloalgu-ileno ou C-s-Cc: heteroçiç.loalquileno,. em que metile.no, C3-Cs alquileno, Chalquenileno, C2-Ce alquinileno, Ci-Cg heteroalquileno, c3cicloalquileno e Ca-Cs são opciònalmente substituídos com. IS pelo menos um R_; B é selecionado de furano,· ti.ofe.no, pirrol, pirídina, oxazol, tiaçõl, imidazol, tiadiazol, isoxazol, isotiazol, pirazol, piridazina, pirimidina, pirazina, oxadiasol, tiadiasol, triazal, indol, benzoxazol, benxotiazol, 2ô benz imidazo.1, benzoxadiazol, benzotiadiazol., benzotriazol, pirazolopi ridina, ímidazopir idina, pirrolopiridina.. pirrolopirim; dina, indolizina, purina, furopiridina, tienopiridina, furopirrol, fuxof urano, tienof urano, l.,4~ diidropirrolopirrol, tienopirrol, tienotiof. eno, quinolina, 25 isoguínolina, furopirazol,. tienopirazol e 1,6·diidrop ir rolopirazo.l; D ê C3-Cig cicioalquil ou Cs-C^ heterocíeloalquil; cada Rj ê selecionado independent emente de Ci-Ce alquíl, 03,-Cg haloalquil.:·, Cj-C3 cicioalquil, feni.1 e benzil; 30 cada é selecionado- independent emente de hidrogênio, Cx-Cs alquil, Cx-Cg haloalquil, C3-C3 cicloalquil, fenil e benzil.; ou um sal, solvato, N-õxido ou prd-farmaco farmaceuticamente aceitável deste, 5 2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que .¾ ê CO2R-.
1, 2, 3, 4, S, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ,< .14, 1 Xí: , 1 , 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47,
48, 49, 5G, 51 ou 52 ou de um sal farmaceuticamenté aceitável ou prô-fármaco deste, em que o ^emposto, de qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, u, 7, 8, 9,
10,
11,
12,
13, 14, 15, 15, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24,
30 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 3-7, 38, 39,
17/.2 Ο t 40, 41, 42., 4.3, 44, 4S, 46, 47, 48, 49. SO, 51 ©U 52 modula atividade de CRAG no mamífero.
55. Método de inibição da ativação da entrada capacitiva de cálcio (SQCE) de fator nuclear de células T s ativadas (NEAT) em um mamífero, caracterizado, por éompreender ã administração ao mamífero de um Composto, de
qualquer uma dás reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 2i,. 22, 23, 24, 25. 26, 27, 28, 29, 36, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 10 40, 41, 42, 43, 44', 45, 46:, 47, 48, 49, 50, 51 ou 52 ou de um sal farmaceutiçamonte aceitável ou pro-fârmaco deste, em que o Composto, de qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 1Q, .11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20. 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 15 35, 36, 37, 38, 3 9, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49.
50, 51 ou 52 inibe a ativação por SOCE de WAT no mamífero.
56. Método de diminuição da liberação de citocina por inibição da ativação por SGCE de WAT em um mamífero, taraoterigad© pelo fato de que compreende a administração
20 ao mamífero de um Composto, de qualquer· uma das reivíndicaçoes 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 , 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33 , 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43 , 44, 45, 46, 47, 48 , 4.9, 50, 51 ou 52 ou um. sal 25 f arma c eu t i carne nt e .aceitável ou pró-fármaco deste, que compreende o Composto, de acordo com q>- ialguer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 , 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, .28, 29, 30, 31, 32, 33 , 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 4.2, 43, 3G 44, 45, 46, 47, 48 , 45, 50, 51 ou 52 diminu i a liberação de
18/20 citoeina no mamífero.
57, Métádà para o tratamento de uma doença autoimune doença ou condição hétéraimune, eu doença, inflamatõria era um. mamífero, cãracterizado por compreender a administração:
S ao mamífero de um Composto, de qualquer umadas reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,. 8, 5, 10, 11, 12,13,
14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24. 25, 26, 27,28,
29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 3.7, 38, 39, 40, 41, 42,43.
44, 48, 45, 47, 48, 49., 50, 51 Ou 52 ou sal
10 fax'maceutioamente aceitãvel ou prç-fármaco daste.
58., Método, de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pelo fato dé quê a doença autoimune é doença inflamatoria da intestino, artrite réumãtôide, mias·tecia grave, esclerose múltipla, sindrome de Sjõgren, diabetes 15 tipo X, lúpus eritematoso, psoríaáe, osteoartrite, esclerodaxmia e anemia hemolítica autoimune.
59. Método, de acordo com a reivindicação^ 57, caracterizado pelo fato de que a. dçença óu condição hçteroimune é doença enxerto versus hospedeiro, rejeição de
20 enxerto, détmatite atõpiça, conjuntivíte alérgica, rejeição a transplante de órgão, transplante alogênioo ou xenogênico. e finite alérgica.
60. Método, de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pelo fato de que a doença inflamatória e
25 uveíte, vasculite, vaginite, asma, doença muscular inflamatória, dermatite, cistite intersticial, dermatomiosite , oolite, doença de Crohn, hepatite e hepatite crônica recídivante.
61. Método de tratamento de uma doença, distúrbio ou 30 condição em um mamífera que sé beneficiaria da inibição da
19/20 atividade do canal :de calcic capacitiyo, caracterizado por compreender a administração ao mamífero de um Composto, de qualquer uma das reivindicações 1, 2. 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,
10, 11, 12, 13, 14, 15, 16:, 17:, 18, 19, 20, 2:1 , 22, 23, 24, .5 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 3 3 , 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 4 3,, 4 4, 4 5, 46, 4 7.. 48, 49, 50, 51 ou 52. ou de
Um sal farmaceuticamente aceitável ou pro-fármaco deste.
82, Método, de acordo com a reivindicação 61, caracterizado pelo fato de que a doença, distúrbio ou 10 condição no mamífero ê selecionada de glomerulonefrite, doenças ou distúrbios bepáticos, doenças ou distúrbios renais., doença pulmonar obstrutiva crônica, osteoporose, eczema, fibrose pulmonar, tireoidite, fibrose cística e cirrose biliar primária.
15 63, Método, de acorde com a reivindicação 58, caracterizado pelo fato de que a doença, distúrbio ou condição ê artrite reumatôide.
64. Método, de acordo com a reivindicação 58, caracterizado pelp fato de que a doença, distúrbio oú
20 condição é psoríase-
65. Método, de acordo com a reivindicação 88, caracterizado pelo fato de que a doénçá., distúrbio ou condição ê doença ínflamatória do intestino.
66. Método, de acordo com a reivindicação 59, 25 caracterizadc· paio fato de que á doença, distúrbio ou condição ê rejeição a transplante de órgão.
67. Método, de acordo com a reivindicação 58, caracterizado pelo fato de que a doença, distúrbio óu condição é esclerose múltipla.
30 68, xjgo de um composto de qualquer uma das
20/20
reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25·, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 3:4, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51 ou 52 ou de um sal
1.5 com pelo menos um R:.
16. Composto, de acordo com a reiviiidicaçâô 14 òu 15, caracterizado pelo fato de que benzofurano é substituído com um R,
17» Composto, de acordo com qualquer uma das 20 reivindicações 14, 15 ou 16, caracterizado pelo fato de que
R é selecionado de F, Cl , Br, I, OH, CN, Ci-Cs alquil e or3. 17, das 18 . caracter! 19. Composto, de gado pelo fato acordo com a de que Rg é Ct-C,. acordo com reivindicaç ão alquil. qualquer uma Composto, de reivindie ações 14, 15, 16, 17 OU ia.. .carac ter i zado pelo fato de q ue C:“Cé alquil é metil. 20. Composto, de acordo coro qualquer uma das reivindie ações 1, ) 4, 5, 6, 7, 8.. 3, 10, 11, 12, 13, 14, 1.5, 1 .6, 17, 18 ou :1!' 5, caracteri zado pelo fato de ς [ue X
30 é B.
5/20
21. Composto, de acordo som qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, >·, 10, 1.1, 1.2, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20, car ac ter i zado pelo fato de que fô ê selecionado de benzoxazol. benzotiazol
5 benaimidazol, pirazolopiridina, imidazqpiridina, benzqxadiaaol, bénzotiadiazol e benzotriazol.
22. Composto, de reivindicações 1, 2, 3,
14, 15, 16·,. '17, 18, 19,
10 de que 8 é benzcxazol.
23. Composto, de reivindicações 1, 2, 3, 14, 15, IS, 17, 18, 19, de que B ê benzofeiazol,
15 24. Composto, de reivindicações 1, 2, 3.
14, 15, 16, 17, 13. 19, acordo com qualquer uma das
2 ê O , S, mí, M~CN OU CHN02 ;
W è.NRj, 0 ou uma ligação;
2o Lx é uma ligação, Ci~C« alquileno, Cj-Q alqueniieno,
C2-C,. alquinílenu, C2-C6 heteroalquileno, C3-Cs cicloalquile.no ou C2C<, heteTOcicloalquileno, em que C.x-C« alquileno, C2~CS alquenileno, C;>-C,. alquinileno, Cx-Cl.
heteroalquí leno, Cj-Cg cicloalquileno, €^.-¾
25 heterocicloalquilen© é opcionalmente substituído com pelo menos um R;
Y é G ou 3;
n é um número inteiro de Q-5;
cada Rs é selecionado independentemente de Cj-Cs
30 alquil, Cx-Cg haloalquil, C3-Cs çieloalquil, fenil e benzil;
13/20 cada R,; e selecionado independen temente de hidrogênio, Cj~C’í alquil, Çj.~Cs haloalquil, Q5-C§ cicloalquil, fenil e benzil; ou um sal, solvato, N-õxido ou pró-fãrmaco
5 fairtaceuticamente aceitável deste.
37. Composto, de acordo cc-m a reivindicação 3.6, caragteritadó pelo fato de que Rj. é CÕjRí e Rs é hidrogênio.
38. Composto, de acordo com a reivindicação 36 ou 37, caracterizado pelo fato de que J ê uma ligação.
10 39. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 36, 3 ou 38, c aracterizado pelo fato de que R4 é hidrogênio.
40. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 36, 37, 38 ou 3 9, caracteri za do peto fato de
15 que 2 ê O.
41. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 36, 37, 38, 39 ou 40, caracterizado pelo fato de que A é fenil .
42. Composto, de acordo com qualquer uma das 20 reivindicações 36.. 37, 38, 39, 4 0 ou 41,. caracterizado pelo fato de que fenil ê substituído com três R.
43. Compôs to , de acordo com qualquer uma das reivindicações 36, 37, 38, 39, 40., 41 ou 42, caracterizado pelo fato de que cada R ê selecionado independenteméhte de
25 F, Cl, Br, I, alquil, OH,· e CRj.
44. Composto, de acordo com qualquer umadas reivindicações 36, 37, 38, 39, 40:, 41, 42 ou43, o a r a c terizado pelo fato de qua R3 é- metil.
45. Composto, de acordo com qualquer umadas
30 reivindicações 36, 37, 38, 39, 4'0., 41, 42, 43 ou 44,
14/20 « caracterizado pel© fat© de que Ci-Cg alquil ê metil.
46. Composta, de acordo com qualquer uma das reivindicações 16, 37, 38, 39, 40, 41, 44 OU 45, caracterizado pelo fato de que W e In são, cada um 8 independàntèmente, uma ligaçâó. 47. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 4 5 ou
46, caradterizadô pel© fat© dé que Y é 0.
48, Composto, de acordo çom a re iv1ndicaçío 47, 10 caracterizado pe1o fato de que π é 0. 41 Composto, de acordo com a reivindicação 47, caracterizada pelo fato de qua R é selecionado de F, Cl, Br, I, CN, OH, Ôfe e N0s 50. Composto, de acordo com a reivindicarão 49, 15 car ac terigado pelo fato de que π á 1. 51. Composto caracterizado ] por ser selecionado de:
au um sal..,, SQ.l-vatu ou prõ-fármaco farmaçeutícamente ace i tá ve 1 deste.
S2.. Comí sasição far macêutrc u. :t.errzads 1 por ÇomprçerK ler um Composto, de qualqua: r uma das reivind icaçôes 5 1, 2, 3, 4, 5. 6, 7, 8,.· 9, 1Ώ, 11, 12, 1.3, 3 ..4, 15, .: 16, 17, 18, 19, 30, 21, 22, 23, 24, 25, 2.6, 27, 28, : 19, 30, 31, 32, 3 ·£', 14. f . 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, < U, 45, 46, 47, 4 8, 49, 5 0 ou 51 e um di luente, exoipieni te, veie ;ulo ou
aglutinauta farmaceuticamènte aceitável deste.
10 53. Método dé modulação dá atividade de canal de cálcio aapacitivd (SOC), caracterizadP por compreender o contato do complexo db canal SOC, ou porção deste, com um Composto, de qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5,
6,
7,
8,
9, 10, .11, 12, 13, 14, 15, 16., 17, 15, 19, 2G, 21,
15 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36,
37, 38, 39, 4G, 41, 42, 43, 44, 45, 45, 47, 48, 49, 50, 51 ou 52 ou. urn sal farmacexiticuameúte aceitável ou pró-fármacodeste.
54... Método de modulação da atividade de canal de
20 cálcio ativado pela liberação de cálcio (-CRAC) em um mamífero, caracterizado por compreender a administração ao mamífero de um Composto, de qualquer uma das reivindicações
3 0 alquilenoalquino, Cl-Cg alquil, C.-C.. cicloalquil, Cj-Cs heteroalquil, haloalquil, tetrazolil,
heteroci cloalquil c f eni .1 , 28 . Composto, de acordo com qualquer uma das reivindi cações 20, 21, 22, 2 .3:, 24, 25, 26 .ou. 2 '7 5 ©aracter oí T izado pelo fato de que R é seles danado de F, Cl, Br k* -1 - 29 v Composto, de acordo com qualquer uma das réivindi cações 1, í 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 , 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 OU 1« 1, caract erizado pelo fato de qu e X 10 é D. 30. Composto, de acordo com a reivindic ação 29, caracter is ado pelo fato de que D é C5-C8 o icloal çjui .1. 31. Composto, de acordo com a reivíndic ação 29, cara ever izado pelo fato da que D ê Cs-Cs heterocicloalqui .1, 15 32. Composto ç exact erizado por ser selecianad o de:
8/20·
9/20
ou um sal, solvato, N-õxido ou prõ~ fármaco farmaceuticamente aceitável deste.
33. Composto caracterizado por ser selecionado de:
ou urn sal, solvate,- N-õkidó ou prõ-fáxwco farmaceut.icanente aceitável deste.
34. Composto çgractericado por ser selècíónado det
ou um sal, solvato, N~óxido ou prô-fármac© farmaceutiaamente aceitável deste.·
35. Composto caracterizado por ser selecionado det .0
HO « í yso
0’
À
J* '~a
õ ο
Ci >-N
farmaceuticamente aceitável deste.
3S. Composto caracterizado por ter a Fórmula (TI):
(¾
Formula (XX) em que;
A & fenil substituído com pelo menos substituintes ou benzofurano opcionalmente substituído c® pelo menos um Fu ou A ê fénil substituído com dois, grupos R em átomos de carbono adjacentes, em que qs dois grupos R e cs átomos de earbobo- ao qual estão anexados formam um CVC$ cicloalquil ou C^-Cg heterocicloalquil;
R ê selecionado do Ff Cl, Br, If -OG ~NÓa·, -CFS/ -OH,
12/20
-OR·., -OCFj, -C-CH, -CssCR3í €χ-0§. alquilenoslquino, Çx~C« alquil, C3-Cg cicloalquil, Cl-Cg heteroalquil, Çf-Cg haloalquil, tetrazolil, C2-Cs heterocielealquil, fenil, s-HJíMRi):, -c(-o)cf3, -c(».©)s$h$W) Λ,
5 S (®O/:3NHC (.M)Rí:í: N(R«)2, -MRd CÍ-QJW, -CW ~C(M) R®, pç:, ~C.(^O)NfR-M, ~ SR.3, -0(:=0)¾ e -S(=O)2R,;
J é uma ligação, NHS(®0)2, S (=0)(¾) , -C(»p) ,
C (=G)NHS ( =0)â , ’SMIiHHCM} ' NfRj, -N(R4.) C { =O.) , -C0S, 01=0), -00(=0) , -C(«O)N(R0 , -S, -3(=0) é -S(=0)s, Cj-Cs
10 alquileno, CrCe alquenileno, C2-Cs alquinile.no, €1-¾ heteroalquileno ou C3-Cg cicloalquilenõ, em. que €1-¾ alquileno, C2-C^ alquèníleno, Cs-Cg alquínileno, Pi-Cg heteroalquílano, e Cl-Q; eicloalquileno é opcionalmente substituído com pelo menos um R;
15 é CQ2R;í ou um bioisóster© dé ácido carboxílico, em que Rs é hidrogênio , Ci.~Cs a.lquil, Cv~Cs cicloalquil, .Cj-Cg haloalquil, fenil ou benzil;
3,
8,
10, 1.1
13,
14, 15, 16, 17, 18,
20 ou 21, carac ter izado pe lo fato de que B é benzatiadiazol.
26. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20, 21, 22, 23, 24 ou 25, caracterizado pelo
25 fato de que B é substituído com um R.
27. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20, 21, 22, 23, 24, 25 ou 26, cntacterizado pelo fato de que R é selecionado de F, Cl, Br, I, -CN. N05, CF·,, -OH, -OR3, -QCF3, -OCH. -í>CR3f C\-C;:
3 0 11. Composto, de acordo com qualquer·· uma das ' reivindicações 1, .2,. 3, 4, 5, 6, 7 ou 8, caracterizado pelo fato de que fenil é substituído com três R-
12. Composto, de acordo oom qualquer uma das reivindica ções 1-, 2, 3, 4# 5, 6, 7# I, 9, 10 ou1.1,
S Wracteriaado pelo fato de que R é selecionado de F,Cl,
Br, I ou Cj·-Cs alquil.
13. Composto, de acordo com a reivindicação12, caracterizado pelo fato de que Ci~Cg alquil é raetil, etil, n-propil, isoprcpíl, n-butíl, isóbutil ou terc-butil.
1Q 14., composto, de àçórdo com qualquer «ma. das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5 ou €>: caracterizado pelo fato de que A é benzofurano.
15. Composto, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que benzofurano é substituído
3. Composto, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de qué R2 ê hidrogênio.
4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13,
20 ou 2.1, caracterizado pelo fato de que B ê pirazolopiridina,
25, Composto de acordo com qualquer umà das reivindicações 1, 2,
4, 5, 6, 7, 8, 3, 10, 11, 12, 13,
20 ou 21, çarae terizado pelo fato acordo com qualquer uma das
4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13,
20 ou 21, caraçterizadò pelo fato acordo com qualquer uma das
4. Composto, de acordo com qualquer uma das
10 reivindicações 1, 2 ou 3, caracterizado pelo fato de que R< é hidrogênio.
5. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3 ou 4, caracterizado pelo fato de que z é α.
15 6, Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4 ou 5, caracterizado pelo fato de que j á uma ligação.
7. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5 ou 6, caracterizado pelo fato
20 de que A 'é fenil..
8. Composto, de acordo com qualquer Uifta das reivindicações 1,- 2, 3, 4, 5, 6 ou 7, caracterizado pelo fato de que fenil é substituído com pelo menos um R.
9. Composto, de acordo com qualquer uma das 25 reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6> 7 ou 8, caracterizado pelo fato de que fenil é substituído com um R.
10. Compos to > de acor do com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8, car ac ter i z ado, pelo fato de que fenil é substituído com dois R.
5 farmaceuticamente aceitável ou pró-fármaco deste caracterizado pelo fato de que é na fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença, distúrbio ou condição que se beneficiaria da inibição da. atividade do canal de cãlcio capacitivo.
Figura ί Inibidores dó c an íi X CRAC
FIGURA 2
Içtí&r fiKdóç&ríG ripicí< ea células T é <SÍ pA ea Sú atí de
!»!»!tÍn»»>»Í>Í»»tÍ>Í»tlÍ»»tWWWJÍtW.ltUUlAU\ ^uuwwwmwwwmuuwwwmtwwu Media * $ΓΜ Cdp (pH I8d t 3>4 Aapiitude de içpAf.' HUt43 Pensidade >ie i^Λ/ρΐ'Γ'Ξβ
Traços txpici »er ativada s ·** í-t’RAí! m re«p«»ta an e«tixaal» de voltearem isnediatamente após entrada, antes de tç^Aí; e si« .5 min ages *<:&&<' «*ír tot.«latente ativada per deRleção estotpws de eàclie intracelular.
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