MX2010011918A - Derivados de 5-hidroximetil-oxazolidin-2-ona para el tratamiento de enfermedades intestinales bacteriales. - Google Patents

Abstract

La invención se relaciona con los compuestos de fórmula I (ver fórmula I) en los cuales A es N o CH; y n es 0 ó 1; o con las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, para la prevención o el tratamiento de enfermedades intestinales que son causadas por bacterias seleccionadas de entre Clostridium difficile, Clostridium perfringens o Staphylococcus aureus.

Description

DERIVADOS DE 5-HIDROXIMETIL-OXAZOLIDIN-2-ONA PARA EL TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES INTESTINALES BACTERIALES Descripción de la Invención La presente invención se relaciona con el uso de ciertos derivados 5-hidroximetil-oxazolidin-2-ona para la prevención o el tratamiento de enfermedades intestinales que son causadas por Clostridium difficile, Clostridium perf ingens o Staphylococcus aureus.

Ciertas cepas de Clostridium difficile, Clostridium perfringens o Staphylococcus aureus producen toxinas que causan diarrea. Frecuentemente, la incidencia de estas cepas productoras de toxinas está relacionada con el uso de antibióticos .

Entre estas cepas, Clostridium difficile, una bacteria anaeróbica Gram positiva formadora de esporas que produce dos entero-toxinas (A y B) , no sólo causa diarrea sino también afecciones intestinales más serias tal como colitis pseudomembranosa que es una amenaza letal . Actualmente es la fuente más común de diarrea infecciosa en hospitales y en las instalaciones de cuidados médicos de largo plazo en el mundo industrializado. Durante los últimos años, su incidencia a aumentado progresivamente y ahora es un problema clínico significativo en América del Norte y en Europa. Los factores de riesgo incluyen tratamiento previo con antibióticos, edad Ref.: 214949 y un sistema inmune comprometido que resulta por ejemplo de una quimioterapia citotóxica o del transplante de órganos.

El tratamiento actual para diarrea asociada con Clostridium difficile (CDAD) es ya sea vancomicina o metronidazol . Sin embargo, en ambos casos se observan altas tasas de recaída y no se evita la producción de toxinas y de esporas. Más aún, el tratamiento con vancomicina o metronidazol es un factor adicional de promoción de la aparición de cepas resistentes a la vancomicina de Enterococcus spp. [E. faecalis . y E. faecium) y de Staphylococcus aureus (VRE y V SA, respectivamente) en los intestinos (ver W.N. Al-Nassir et al., Antimicrojb . Agents Chemother. , publicado antes de impresión el 28 de abril de 2008). Los Enterococci son cocci Gram positivos que se encuentran de manera natural en el tracto gastrointestinal. Sin embargo, también pueden convertirse en patógenos significativos, causando endocarditis e infecciones del tracto urinario, sistema sanguíneo y de heridas. Una vez adquirida, la colonización intestinal por VRE puede durar varios años, sirviendo como una reserva para una infección potencial del paciente colonizado y para la propagación de VRE a otros pacientes. VRE puede aparecer como una coinfección en pacientes infectados con C. difficile, o de manera más común causa infección en ciertos pacientes de alto riesgo tales como los pacientes hematológicos y oncológicos, los pacientes en las unidades de cuidado intensivo, los pacientes de edad avanzada y en las instalaciones de cuidados médicos de largo plazo, y en pacientes que han recibido transplantes de órgano sólidos.

Por lo tanto existe una necesidad de un mejor tratamiento para los casos de CDAD y las infecciones relacionadas, en particular mediante la identificación de compuestos con una fuerte actividad en contra de C. difficile que reduzca de manera significativa la carga de toxina, la producción de esporas y que supere VRE y que a la vez tenga un impacto reducido en la flora intestinal comensal.

En WO 03/032962, WO 2004/096221 y O 2005/058888 se divulgan compuestos antibacteriales que contienen una fracción oxazolidina y un ácido 1 -c i c lopropi 1 - 6 -f luoro-4 -oxo- 1 , 4 -dihidro-quinol in- 3 -carboxí 1 i co o ác ido 1 -c i cloprop i 1 - 6 - f luoro-4 -oxo- 1 , 4-dihidro- [ 1 , 8 ] naf t i ri din- 3 -carboxí 1 ico .

Además, los compuestos de fórmula I tal como se los define anteriormente y su actividad antibacterial han sido previamente descritos en la publicación PCT N° PCT/IB2007/054557.

A continuación se encuentran diversas presentaciones de la invención: i) De acuerdo con su primera presentación principal, la presente invención se relaciona con los compuestos de fórmula I en la cual A es N o CH; y n es 0 ó 1 ; o con las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, para la prevención o el tratamiento de enfermedades intestinales que son causadas por bacterias seleccionadas de entre Clostridium difficile, Clostridium perfringens o Staphylococcus aureus.

Los siguientes párrafos proveen definiciones de diversos términos empleados en este texto y están destinadas a ser aplicadas de manera uniforme a través de la memoria descriptiva y reivindicaciones salvo que otra definición expresamente presentada provea un significados más amplio o más restrictivo.

El término "previniendo", "prevenir" o "prevención", empleado en referencia a una enfermedad significa, ya sea que dicha enfermedad no ocurre en el paciente o animal, o que, a pesar de que el animal o paciente están afectados por la enfermedad, parte o todos los síntomas de la enfermedad se ven, ya sea reducidos, o están ausentes.

El término "tratando", "tratar", o "tratamiento" empleado en referencia a una enfermedad significa ya sea que la enfermedad es curada en el paciente o animal, o que, a pesar de que el animal o paciente permanece afectado por la enfermedad, parte o todos los síntomas de la enfermedad se ven, ya sea disminuidos o son eliminados.

El término "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a sales de adición ácidas o básicas, no tóxicas, orgánicas o inorgánicas. Se puede hacer referencia a wSalt selection for basic drugs" , Int. J". Pharm. (1986), 33, 201-217.

El término "halógeno" se refiere a flúor, cloro, bromo o yodo, y preferentemente a flúor o cloro.

Salvo respecto de las temperaturas, el término "alrededor de" ubicado antes de un valor numérico "X" se refiere en esta solicitud a un intervalo que se extiende desde X menos 10% de X hasta X más 10% de X, y preferentemente a un intervalo que se extiende desde X menos 5% de X hasta X más 5% de X. En el caso particular de las temperaturas, el término "alrededor de" ubicado antes de una temperatura "Y" se refiere en esta solicitud a un intervalo que se extiende desde la temperatura Y menos 10 °C hasta Y más 10 °C, y preferentemente a un intervalo que se extiende desde la temperatura Y menos 5 °C hasta Y más 5 °C; además, la temperatura ambiente significa en la presente solicitud 25 °C. ii) Preferentemente, el compuesto de fórmula I tal como se lo define en la presentación i) , o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, permitirá la prevención o el tratamiento efectivos de enfermedades de diarrea asociadas con cepas entero-tóxicas de Clostridium difficile, Clostridium perfringens o Staphylococcus aureus sin aumentar la concentración de enterococos resistentes a vancomicina (VRE) en los intestinos. iii) Más preferentemente, el compuesto de fórmula I tal como se lo define en la presentación i) , o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo permitirá la prevención o el tratamiento efectivos de enfermedades de diarrea asociadas con cepas entero-tóxicas de Clostridium difficile, Clostridium perfringens o Staphylococcus aureus y la reducción de la concentración de VRE en el intestino. iv) Preferentemente, los compuestos de fórmula I tal como se los define en. una de las presentaciones i) a iii), o la sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, serán tales que A es CH. v) También preferentemente, los compuestos de fórmula I tal como se los define en una de las presentaciones i) a iv) , o la sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, serán tales que n es 1. vi) De acuerdo con sub-presentaciones preferidas de las presentaciones i) a iii) , el compuesto de fórmula I o sus sales farmacéuticamente aceptables serán seleccionados de entre : ácido l-ciclopropil-6-fluoro-7-{4- [2-fluoro-4- ( (R) -5-hidroximetil-2-oxo-oxazolidin-3-il ) -fenoximetil] -4-hidroxi-piperidin-l-il}-4-oxo-l , 4-dihidro-quinolin-3-carboxílico ; ácido l-ciclopropil-6-fluoro-7- { 4- [2-fluoro-4- ( (R) -5-hidroximetil-2-oxo-oxazolidin-3-il ) -fenoximetil] -4-hidroxi-piperidin-l-il} -4-oxo-l , 4-dihidro- [1,8] naftiridin-3-carboxílico; - ácido l-ciclopropil-6-fluoro-7-{3- [2-fluoro-4- ( (R) - 5-hidroximetil-2-oxo-oxazolidin-3-il ) -fenoximetil] -3-hidroxi-pirrolidin-l-il } -4-oxo-l, 4-dihidro-quinolin-3-carboxílico; y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. vii) De acuerdo con sub-presentaciones más preferidas de las presentaciones i) a iii) , el compuesto de fórmula I o su sal farmacéuticamente aceptable será ácido l-ciclopropil-6-fluoro-7-{4- [2-fluoro-4- ( (R) -5-hidroximetil-2-oxo-oxazolidin-3-il) -fenoximetil] -4-hidroxi-piperidin-l-il } -4-oxo-l , 4-dihidro-quinolin-3-carboxílico o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. viii) De acuerdo con un aspecto de las presentaciones i) a vii) , la presente invención se relaciona con los compuestos de fórmula I tal como se los define en una de las presentaciones i) a vii) , o la sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, para el tratamiento de enfermedades intestinales que son causadas por bacterias seleccionadas de entre Clostridium difficile, Clostridium perfringens y Staphylococcus aureus. ix) De acuerdo con un aspecto preferido de la presentación viii) , la presente invención se relaciona con los compuestos de fórmula I tal como se los define en una de las presentaciones i) a vii) , o la sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, para el tratamiento de enfermedades intestinales que son causadas por Clostridium difficile (de manera destacable por una cepa de Clostridium difficile que produzca una toxina) . x) De acuerdo con otro aspecto principal de las presentaciones i) a vii) , la presente invención se relaciona con los compuestos" de fórmula I tal como se los define en una de las presentaciones i) a vii) , o la sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, para la prevención de enfermedades intestinales que son causadas por bacterias seleccionadas de entre Clostridium difficile, Clostridium perfringens y Staphylococcus aureus. xi) De acuerdo con un aspecto preferido de la presentación x) , la presente invención se relaciona con los compuestos de fórmula I tal como se los define en una de las presentaciones i) a vii) , o la sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, para la prevención de enfermedades intestinales que son causadas por Clostridium difficile (de manera destacable por una cepa de Clostridium difficile que produzca una toxina) . xii) Preferentemente, los pacientes en los cuales las enfermedades intestinales mencionadas en las presentaciones i) a xi) están destinadas a ser prevenidas, serán pacientes tratados con otros antibióticos o con terapias antivirales, pacientes con un sistema inmune comprometido tal como con quimioterapia citotóxica o pacientes de transplante de órganos, pacientes de edad avanzada (65 o más años), o pacientes de unidades de cuidado intensivo o de instalaciones de cuidados médicos de largo plazo. xiii) Aún otra presentación principal de esta invención se relaciona con un método para la prevención o el tratamiento de una enfermedad intestinal en un paciente, enfermedad que es causada por una bacteria seleccionada de entre Clostridium difficile, Clostridium perfringens y Staphylococcus aureus, comprendiendo dicho método la administración a dicho paciente de una cantidad efectiva de un compuesto de fórmula I tal como se los define en- una de las presentaciones i) a vii) , o de una sal farmacéuticamente aceptable de un tal compuesto, durante un período suficiente para la prevención o el tratamiento de la enfermedad intestinal . xiv) Preferentemente, el método de la presentación xiii) permitirá la prevención o el tratamiento efectivos de enfermedades de diarrea asociadas con cepas entero-génicas de Clostridium difficile, Clostridium perfringens o Staphylococcus aureus sin aumentar la concentración de enterococos resistentes a vancomicina (VRE) en el intestino. xv) Más preferentemente, el método de la presentación xiii) permitirá la prevención o el tratamiento efectivos de enfermedades de diarrea asociadas con cepas entero-tóxicas de Clostridium difficile, Clostridium perfringens o Staphylococcus aureus y la reducción de la concentración de VRE en el intestino. xvi) De acuerdo con un aspecto de las presentaciones xiii) a xv) , la presente invención se relaciona con un método para el tratamiento de una enfermedad intestinal en un paciente, enfermedad que es causada por una bacteria seleccionada de entre Clostridium difficile, Clostridium perfringens y Staphylococcus aureus, método que comprende la administración a dicho paciente de una cantidad efectiva de un compuesto de fórmula I tal como se los define en una de las presentaciones i) a vii) , o de una sal farmacéuticamente aceptable de un tal compuesto, durante un período suficiente para el tratamiento de la enfermedad intestinal. xvii) De acuerdo con un aspecto preferido de la presentación xvi) , la presente invención se relaciona con un método para el tratamiento de una enfermedad intestinal en un paciente, enfermedad que es causada por Clostridium difficile (de manera destacable por una cepa de Clostridium difficile que produce una toxina) . xviii) De acuerdo con otro aspecto de las presentaciones xiii) a xv) , la presente invención se relaciona con un método para la prevención de una enfermedad intestinal en un paciente, enfermedad que es causada por una bacteria seleccionada de entre Clostridium difficile, -Clostridium perfringens y Staphylococcus aureus, método que comprende la administración a dicho paciente de una cantidad efectiva de un compuesto de fórmula I tal como se los define en una de las presentaciones i) a vii) , o de una sal farmacéuticamente aceptable de un tal compuesto, durante un período suficiente para prevenir la enfermedad intestinal. xix) De acuerdo con un aspecto preferido de la presentación xviii) , la presente invención se relaciona con un método para prevenir una enfermedad intestinal en un paciente, enfermedad que es causada por Clostridium difficile (de manera destacable por una cepa que de Clostridium difficile que produce una toxina) . . ... xx) Preferentemente, los pacientes sometidos a dicho método de una de las presentaciones xiii) a xix) serán pacientes tratados con otros antibióticos o con terapias antivirales, pacientes con un sistema inmune comprometido tales como pacientes de terapia citotóxica o pacientes de transplante de órganos, pacientes de edad avanzada (65 o más años) , o pacientes de unidades de cuidado intensivo o de instalaciones de cuidados médicos de largo plazo. xxi) Aún un aspecto adicional de esta invención se relaciona con el uso de un compuesto de fórmula I tal como se lo define en una de las presentaciones i) a vii) , o de una sal farmacéuticamente aceptable de un tal compuesto, para la producción de un medicamento destinado a la prevención o al tratamiento de una enfermedad intestinal que es causada por una bacteria seleccionada de entre Clostridium difficile, Clostridium perfringens y Staphylococcus aureus. xxii) De acuerdo con un aspecto de la presentación xxi) , la presente invención se relaciona con el uso de un compuesto de fórmula I tal como se lo define en una de las presentaciones i) a vii) , o de una sal farmacéuticamente aceptable de un tal compuesto, para la producción de un medicamento destinado al tratamiento de una enfermedad intestinal que es causada por una bacteria seleccionada de entre Clostridium difficile, Clostridium perfringens y Staphylococcus aureus. xxiii) De acuerdo con un aspecto preferido de la presentación xxii) , la enfermedad intestinal destinada a ser tratada será causada por Clostridium difficile (de manera destacable por una cepa de Clostridium difficile qüe produzca una toxina) . xxiv) De acuerdo con otro aspecto de la presentación xxi) , la presente invención se relaciona con el uso de un compuesto de fórmula I tal como se lo define en una de las presentaciones i) a vii) , o de una sal farmacéuticamente aceptable de un tal compuesto, para la producción de un medicamento destinado a la prevención de una enfermedad intestinal que es causada por una bacteria seleccionada de entre Clostridium difficile, Clostridium perfringens y Staphylococcus aureus . xxv) De acuerdo con un aspecto preferido de la presentación xxiv) , la enfermedad intestinal destinada a ser prevenida es causada por Clostridium difficile (de manera destacable por una cepa de Clostridium difficile que produzca una toxina) . xxvi) Preferentemente, los pacientes para los cuales el medicamento producido de acuerdo con una de las presentaciones xxi) a xxv) está destinado, serán pacientes tratados con otros antibióticos o con terapias antivirales, pacientes con un sistema inmune comprometido tal como bajo terapia citotóxica o pacientes de transplante de órganos, pacientes de edad avanzada (65 o más años) , o pacientes de unidades de cuidado intensivo o de instalaciones de cuidados médicos de largo plazo. xxvii) Otro aspecto de esta invención se relaciona con un método para la prevención o el tratamiento de una enfermedad intestinal en un animal (por ejemplo, en un perro, gato, cerdo, vaca o caballo) , enfermedad causada por una bacteria seleccionada de entre Clostridium difficile, Clostridium perfringens y Staphylococcus aureus, método que comprende la administración a dicho animal de una cantidad efectiva de un compuesto de fórmula I tal como se lo define en una de las presentaciones i) a vii) , o de una sal farmacéuticamente aceptable de un tal compuesto, durante un período suficiente para el tratamiento de la enfermedad intestinal . xxviii) De acuerdo con un aspecto de la presentación xxvii) , la presente invención se relaciona con un método para el tratamiento de una enfermedad intestinal en un animal (por ejemplo, en un perro, gato, cerdo, vaca o caballo), enfermedad que es causada por una bacteria seleccionada de entre Clostridium difficile, Clostridium perfringens y Staphylococcus aureus, método que comprende la administración a dicho paciente de una cantidad efectiva de un compuesto de fórmula I tal como se lo define en una de las presentaciones i) a vii) , o de una sal farmacéuticamente aceptable de un tal compuesto, durante un período suficiente para el tratamiento de la enfermedad intestinal. xxix) De acuerdo con otro aspecto de la presentación xvii) , la presente invención se relaciona con un método para la prevención de una enfermedad intestinal en un animal (por ejemplo, en un perro, gato, cerdo, vaca o caballo) , enfermedad que es causada por una bacteria seleccionada de entre Clostridium difficile, Clostridium perfringens' y Staphylococcus aureus, método que comprende la administración a dicho paciente de una cantidad efectiva de un compuesto de fórmula I tal como se lo define en una de las presentaciones i) a vii) , o de una sal farmacéuticamente aceptable de un tal compuesto, durante un período suficiente para prevenir la enfermedad intestinal.

Las enfermedades intestinales destinadas a ser prevenidas o tratadas de acuerdo con las presentaciones i) a xxix) de esta invención comprenden, de manera destacable, diarrea, colitis y colitis pseudomembranosa . Preferentemente, dichas enfermedades intestinales serán causadas por Clostridium difficile (y de manera especial por una cepa de Clostridium difficile que produce una toxina) .

La ruta de administración más adecuada para los compuestos de fórmula I usados de acuerdo con las presentaciones i) a xxix) de la presente invención será la ruta oral. La administración puede ser diaria (por ejemplo, una a cuatro veces de manera diaria) o puede ser menos frecuente (por ejemplo, una vez cada dos días o dos veces por semana) .

A pesar de que las dosis de administración exactas de un compuesto de fórmula I tal como se los define en una de las presentaciones i) a vii) , o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, deberán ser determinadas por el médico o veterinario tratante, se espera que una cantidad entre 0,5 y 50 mg de un compuesto de fórmula I o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo por kg de peso corporal del paciente por día (por ejemplo una cantidad entre 1 y 5 mg del compuesto de fórmula I o de la sal farmacéuticamente aceptable del mismo por kg de peso corporal del paciente por día) administrada una o dos veces por día durante un período de 3 a 15 días (por ejemplo, por un período de 7 a 14 días) sea apropiada.

La producción de composiciones farmacéuticas que contengan los compuestos de fórmula I tal como se los define en una de las presentaciones i) a vii) o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos puede llevarse a cabo en una manera que sea familiar para cualquier persona experimentada en la técnica (ver por ejemplo Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 21a edición (2005), Parte 5, " Pharmaceut ical Manufacturing" [publicado por Lippincott Williams & ilkins] ) llevando el compuesto de fórmula I descrito o sus sales farmacéuticamente aceptables, opcionalmente en combinación con otras substancias de valor terapéutico, a una forma de administración galénica con materiales portadores sólidos o líquidos no tóxicos, inertes adecuados, terapéuticamente compatibles, y, si se desea, con los adyuvantes farmacéuticos habituales.

Los compuestos de fórmula I pueden ser producidos de acuerdo con la presente invención empleando los procedimientos descritos a continuación.

Preparación de los compuestos de fórmula I Abreviaturas : Las siguientes abreviaturas son empleadas en esta memoria descriptiva y ejemplos: AcOH ácido acético AD-mix a 1 , 4-bis (dihidroquinin) ftalazina, K3Fe(CN)6, K2C03 y K20s04.2H20 AD-mix ß 1 , 4-bis (dihidroquinidin) ftalazina, K3Fe(CN)6, K2C03 y K20s04.2H20 Alloc aliloxicarbonilo aq. acuoso Boc tert-butoxicarbonilo t-BuOK tert-butilato de potasio Cbz benciloxicarbonilo CDAD diarrea asociada a Clostridium difficile CFU unidades formadoras de colonia CLSI Clinical Laboratory Standards Institute DBU 1, 8-diazabiciclo [5.4.0] undec-7-eno DCM diclorometano DIAD diisopropil azodicarboxilato DIPEA N,N-diisopropiletilamina DMF N,N-dimetilformamida DMSO dimetilsulfoxido EA acetato de etilo EDC clorhidrato de 1- (dimetilaminopropil) -3-etilcarbodiimida ESI Ionización de aerosol de electrones éter o Et20 éter de dietilo FC cromatografía flash h hora Hex n-hexano IC50 concentración que reduce el efecto en un 50% LZD-R resistente a linezolida MeCN acetonitrilo CPBA ácido meta-cloroperbenzóico MIC concentración inhibitoria mínima para inhibir el crecimiento bacterial MIC90 concentración inhibitoria mínima para inhibir el crecimiento de más que = 90% de las cepas MRSA Staphylococcus aureus resistente a meticilina MeOH metanol MS Espectroscopia de masa NaOMe metilato de sodio NMP N-metilpirrolidinona OD595 densidad óptica medida a 595 nM org. orgánico Pd/C o Pd(OH)2/C paladio o dihidroxipaladio en carbón PPh3 trifenilfosfina rt temperatura ambiente sat. saturado Si02 silica gel TBDMSCl cloruro de tert-butildimetilsililo TEA trietilamina TFA ácido trifluoroacético THF tetrahidrofurano TMSCl cloruro de trimetilsililo Métodos generales de preparación: Los compuestos de fórmula I pueden ser producidos de acuerdo con la presente invención mediante a) la reacción del compuesto de fórmula II P F II con un compuesto de fórmula III III en donde n y A son tal como se define en la fórmula I y R1 es (C1-C3) alquilsulfonilo (por ejemplo, metilsulfonilo) , trifluorometilsulfonilo o arilsulfonilo (por ejemplo fenil- o p-tolil-sulfonilo) preferentemente entre alrededor de 10 °C y 100 °C (más preferentemente entre alrededor de 40 °C y 80 °C) , en presencia de una base inorgánica tal como K2C03 o de una base orgánica tal como TEA en un solvente orgánico (por ejemplo DMF) ; o b) mediante la reacción de un compuesto de fórmula II con un compuesto de fórmula IV IV en el cual n y A son tal como se define en la fórmula tal como se describe en la sección a) . Dichos compuestos de fórmula IV pueden ser obtenidos mediante el tratamiento de compuestos de fórmula III en presencia de una base orgánica (por ejemplo TEA) o de una base inorgánica (por ejemplo K2C03 o un metilato alcalino tal como NaOMe o un hidruro alcalino tal como NaH) en un solvente orgánico (por ejemplo D F) ; o c) mediante la reacción de un compuesto de fórmula V en el cual n es tal como se define en la fórmula I, con un compuesto de fórmula VI en la cual A es tal como se define en la fórmula I, Y es halógeno y R2 es hidrógeno, BF2 o B(OC(=0) ( Cx-C4 ) alquil ) 2 , (Cx-C5) alquilo (por ejemplo metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo o tert-butilo) , alilo, aril- (Ci-C5) alquilo (por ejemplo bencilo, p-nitrobencilo o p-metoxibencilo) , tri-(Ci-C5) alquilsililo (por ejemplo trimet ilsililo o tert- butildimetilsililo) o diaril- (C1-C5) alquilsililo (por ejemplo tert-butildifenilsililo) , preferentemente entre alrededor de 10 °C y 100 °C, más preferentemente entre alrededor de 40 °C y 80 °C en presencia de una base orgánica, tal como TEA o DIPÉA, en un solvente orgánico, por ejemplo NMP; o d) mediante la conversión de un compuesto de fórmula VII VII en el cual R3 es (Ci-C5) alquilo (por ejemplo metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo o tert-butilo) , aril- (Cx- C5) alquilo (por ejemplo bencilo, p-nitrobencilo o p- metoxibencilo) , alilo, tri- (Ci-C5) alquilsililo (por ejemplo trimetilsililo o tert-butildimetilsililo) o diaril- (Ci- C5) alquilsililo (por ejemplo tert-butildifenilsililo) y n y A son tal como se define en la fórmula I en el compuesto de fórmula I correspondiente mediante hidrólisis, saponificación o hidrógenolisis (por ejemplo tal como se revisa en Protecting groups, Kocienski, P.J., Thieme (1994)).

Respecto del proceso anterior, se debe hacer notar lo siguiente: a propósito de la variante a) , el compuesto de fórmula III también podría ser reemplazado por un éster del mismo, i.e. un compuesto de fórmula II IE IIIE en el cual n, A y R1 son tal como se define en la fórmula III y R4 representa alquilo, alilo o arilalquilo, caso en el cual una etapa de desprotección de éster seguiría la reacción del compuesto de fórmula IIIE con el compuesto de fórmula II (los métodos generales para llevar a cabo la desprotección de ásteres han sido revisados en Protecting groups, Kocienski, P.J., Thieme (1994)) ; a propósito de la variante a) , el compuesto de fórmula II también podría ser reemplazado por un éter de sililo del mismo, i.e. un compuesto de fórmula IIPG IIPG en el cual PG2 representa un grupo protector sililo para una función alcohol tal como un tri- (C1-C5) alquilsililo (por ejemplo trimetilsililo o tert-butildimetilsililo) o diaril-(Ci-C5) alquilsililo (por ejemplo tert-butildifenilsililo) , caso en el cual una etapa de desprotección seguiría la reacción del compuesto de fórmula III o IIIE con el compuesto de fórmula IIPG (los métodos generales para llevar a cabo tales reacciones han sido revisados en Protecting groups, Kocienski, P.J., Thie e (1994)); a propósito de la variante c) , el compuesto de fórmula V también podría ser reemplazado por un compuesto de fórmula Vp VP en el cual n es tal como se define en la fórmula V y PG2 representa un grupo protector de una función alcohol (por ejemplo un grupo alquilsililo o diarilalquilsililo tal como trimetilsililo, tert-butildimetilsililo o tert-butildifenilsililo) , caso en el cual la etapa apropiada de desprotección seguiría la reacción del compuesto de fórmula VP con el compuesto de fórmula VI (los métodos generales para llevar a cabo tales reacciones han sido revisados en Protecting groups, Kocienski, P.J., T ierae (1994)); a propósito de la variante c) , cuando R2 no es H, se requiere una etapa adicional de desprotección de éster (los métodos generales general para llevar a cabo tales reacciones han sido revisados en Protecting groups, Kocienski, P.J., Thieme (1994)), salvo para los casos en los cuales R2 es BF2 o B (OC (=0) (C1-C4) alquil) 2 en los cuales la hidrólisis ya tiene lugar durante el trabajo acídico.

Los compuestos de fórmula I así obtenidos pueden, si se desea, ser convertidos en sus sales, y de manera destacable en sus sales farmacéuticamente aceptables.

De manera adicional, cuando los compuestos de fórmula I se obtengan en la forma de mezclas de enant iómeros , los enantiómeros pueden ser separados empleando métodos conocidos por las personas experimentadas en la técnica (por ejemplo mediante la formación y separación de sales diatereoméricas o mediante cromatografía empleando una fase estacionaria quiral) . Cuando los compuestos de fórmula I sean obtenidos en la forma de mezclas de dias tereómeros se los puede separar mediante una combinación adecuada de técnicas de cromatografía usando sílica gel, HPLC y cristalización.

Preparación de los diversos intermediarios de síntesis: Preparación del compuesto de fórmula II El compuesto de fórmula II puede ser obtenido mediant hidrogenación del compuesto de fórmula VIII VIII sobre un catalizador de metal noble tal como paladio en carbón en un solvente tal como THF, eOH o EA entre 0 °C y 40 °C o mediante hidrólisis en presencia de una solución de HBr en agua o AcOH entre 0 °C y 80 °C en un solvente tal como AcOH .

Preparación de los compuestos de fórmula III Los compuestos de fórmula III pueden ser preparados tal como se resumen en el Esquema de reacción 1 a continuación.

IX VI ???: R'= H ms: R1 = S02R5 Esquema de reacción 1 En el Esquema de reacción 1, R2 es H, alquilo, alilo o arilalquilo, y los demás símbolos son tal como se ha definido previamente .

Los compuestos de fórmula III en los cuales R1 es S<¾R5, R5 siendo alquilo, trifluorometilo o arilo tal como fenilo o p-tolilo pueden ser obtenidos (Esquema de reacción 1) a partir de los compuestos de fórmula IIIA en los cuales R1 es H mediante la reacción con los cloruros de sulfonilo correspondientes en presencia de una base orgánica tal como TEA en un solvente tal como DCM o THF entre -10 °C y 50 °C. Los compuestos de fórmula IIIA pueden ser preparados mediante la reacción de los compuestos de fórmula VI con las piperidinas o pirrolidinas de formula IX en presencia de una base orgánica tal como TEA o DIPEA entre 40 °C y 100 °C en un solvente tal como THF, DMF o NMP. Si R2 es bencilo, el ácido carboxílico de fórmula IIIS puede ser liberado de acuerdo con procedimientos estándar tal como se describe en Protecting grovps, Kbcienski, P.J., Thieme (1994) (por ejemplo hidrogenación empleando Pd/C) .

Preparación de los compuestos de fórmula V Los compuestos de fórmula V pueden ser preparados tal como se resumen en el Esquema de reacción 2 a continuación.

Esquema de reacción 2 Los compuestos de fórmula V pueden ser obtenidos mediante la desprotección de los compuestos de fórmula XI en los cuales PG3 representa un grupo amino protector tal como alcoxicarbonilo . (por ejemplo Boc) , benciloxicarbonilo (por ejemplo Cbz) , Aloe o bencilo. Los métodos generales para llevar a cabo tales secuencias de protección/ desprotección de aminas secundarias han sido revisados en Protecting groups, Kocienski, P.J., Thieme (1994).

Los compuestos de fórmula XI pueden ser obtenidos mediante la reacción de un compuesto de fórmula II con los compuestos de fórmula X en los cuales R1 es S02R5, R5 siendo alquilo, trifluorometilo o arilo tal como fenilo o p-tolilo, o mediante la reacción de un compuesto de fórmula II con los epóxidos correspondientes derivados de los compuestos de fórmula X. Dichos epóxidos pueden ser obtenidos a partir de los compuestos de fórmula X, en los cuales R1 es S02R5 luego de tratamiento con ya sea una base orgánica tal como TEA, piridina o DBU o con una base inorgánica tal como K2C03 en un solvente tal como THF, éter o DCM entre -10 °C y 40 °C. Los compuestos de fórmula X en los cuales R1 es H están ya sea disponibles en el comercio (por ejemplo compuestos X en los cuales PG3 = Boc, n = l y R1 = H, o el epóxido derivado de los compuestos de fórmula X en los cuales PG3 = Boc, n = 0), o pueden ser preparados tal como se explica más adelante. De manera alternativa, los compuestos de fórmula XI pueden ser obtenidos mediante la reacción del compuesto de fórmula II con los compuestos de fórmula X en los cuales R1 es H bajo condiciones de Mitsunobu.

Preparación de los compuestos de fórmula VI Los compuestos de fórmula VI en los cuales R2 es hidrógeno, Me o Et están disponibles en el comercio (por ejemplo compuestos en los cuales A = CH, Y = Cl y R2 = H, Me o Et, o Y = F y R2= BF2, o compuestos en los cuales A = N, Y = Cl y R2 = H o Et) . Los compuestos de fórmula VI en los cuales R2 es B(OC(=0) (Ci~C4) alquil) 2 pueden ser obtenidos a partir de los compuestos de fórmula VI en los cuales R2 es H de acuerdo con WO 88/07998. Los demás compuestos de fórmula formula VI pueden ser obtenidos de acuerdo con métodos estándar a partir de los compuestos de fórmula VI en los cuales R2 es H.

Preparación de los compuestos de fórmula VII Los compuestos de fórmula VII pueden ser obtenidos mediante el acoplamiento de compuestos de fórmula V o, de manera alternativa, compuestos de fórmula VP tal como se ha definido previamente con compuestos de fórmula VI tal como se ha definido anteriormente salvo que R2 representa (Ci-C5) alquilo (por ejemplo metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo o tert-butilo) , aril- (Ci-C5) alquilo (por ejemplo bencilo, p-nitrobencilo o p-metoxibencilo) , alilo, tri- (Ci- C5) alquilsililo (por ejemplo trimetilsililo o tert-butildimetilsililo) o diaril- (C!-C5) alquilsililo (por ejemplo tert-butildifenilsililo) , bajo las mismas condiciones que aquellas descritas para la reacción de los compuestos de fórmula V con los compuestos de fórmula VI . Si se emplean los compuestos de fórmula VP, la etapa de desprotección se puede llevar a cabo después de la reacción de acoplamiento.

Preparación del compuesto de fórmula VIII El compuesto de fórmula VIII puede can ser obtenido de acuerdo con O 2004/096221.

Preparación de los compuestos de fórmula IX Los compuestos de fórmula IX pueden ser obtenidos mediante la desprotección de los compuestos de fórmula X (R1 = H) , por ejemplo mediante tratamiento de los compuestos correspondientes Boc protegidos con TFA o mediante hidrogenación de los compuestos correspondientes Cbz protegidos empleando Pd/C.

Preparación de los compuestos de fórmula X Los compuestos de fórmula X pueden ser preparados a partir de derivados metilideno de formula XII tal como se resumen en el Esquema de reacción 3 a continuación.

Xc XII Xa: R'=H Esquema de reacción Los compuestos de fórmula Xb, i.e. los compuestos de fórmula X en los cuales R1 es S02R5, son preparados a partir de los compuestos correspondientes de fórmula Xa en los cuales R1 es H empleando los mismos métodos empleados para la conversión de los compuestos de formula IIIA en compuestos de fórmula IIIS. Los compuestos de fórmula Xa son obtenidos ya sea a partir de los derivados metilideno conocidos de fórmula XII (por ejemplo aquellos en los cuales n = 0 y PG3 = bencilo, Boc o benciloxicarbonilo - ver EP 241206 y EP 550025; o aquellos en los cuales n = 1 y PG3 = bencilo, Boc, que están disponibles en el comercio) ya sea mediante cis-dihidroxilación catalizada con tetróxido de osmio o mediante su versión asimétrica (dihidroxilación de Sharpless empleando AD-mix a o ß) tal como se describe en J. A . Chem. Soc . (1988), 110, 1968. Los compuestos de fórmula Xc, i.e. el derivado epóxido de los compuestos de fórmula Xb son obtenidos ya sea mediante cierre intramolecular del anillo de los compuestos de fórmula Xb con una base inorgánica tal como K2C03 o NaH o con una base orgánica tal como TEA o DBU, o mediante epoxidación del doble enlace metilideno de los compuestos de fórmula XII con un perácido tal como MCPBA. De manera alternativa, los compuestos de fórmula Xc también pueden ser obtenidos mediante la reacción de los derivados oxo correspondientes (disponibles en el comercio cuando n = 0 ó 1 y PG3 = Cbz o Boc) con yoduro de trimetilsulfoxonio o yoduro de trimetilsulfonio en presencia de un hidróxido alcalino tal como hidróxido de potasio en un solvente polar tal como MeCN entre 20 y 100 °C (tal como se describe en J. Am. Chem. Soc. (1965), 87, 1353-1364 y Tetrahedron Lett . (1987) , 28, 1877-1878) .

En los siguientes Ejemplos se describen presentaciones particulares de la invención, los que sirven para ilustrar la invención con mayor detalle sin limitar su alcance de ninguna manera .

Ejemplos Todas las temperaturas se presentan en °C. Todas las investigaciones HPLC analíticas y preparativas en fases no quirales se llevan a cabo empleando columnas basadas en RP-C18. Las investigaciones HPLC analíticas se llevan a cabo en dos instrumentos diferentes con tiempos de ciclo de -2,5 min y -3,5 min respectivamente. Salvo que se indique de otra manera, los valores indicados para las MS corresponden a los picos principales ((M+H)+ con una variación de +/- 0,5 unidades) . En los espectros RMN, las constantes de acoplamiento J se presentan en Hz .

Procedimiento estándar de trabajo: Después de dilución en el solvente orgánico apropiado (ver el texto correspondiente en el Ejemplo) , la fase orgánica es separada y secuencialmente lavada con agua y con solución salina. En el caso en que la reacción se lleve a cabo en un solvente soluble en agua (por ejemplo, MeOH, THF o DMF) , las fases acuosas combinadas son retro-lavadas con el mismo solvente empleado para llevar a cabo el trabajo. Las fases orgánicas combinadas son secadas empleando MgS04 y filtradas. El filtrado es evaporado bajo presión reducida.

Procedimiento estándar de cromatografía: El material crudo es disuelto en el mínimo de eluyente (ver el texto correspondiente en el Ejemplo) y se somete a cromatografía empleando Si02. Las fracciones relevantes son retiradas y evaporadas bajo presión reducida.

Ejemplo 1: ácido l-ciclopropil-6-fluoro-7-{4- [2-fluoro-4- ( (R) -5-hidroximetil-2-oxo-oxazolidin-3-il) -fenoximetil] -4-hidroxi-piperidin-l-il}-4-oxo-l, 4-dihidro-quinolin-3-carboxílico : l.i. (R) -3- (3-fluoro-4-hidroxi-fenil) -5-hidroximetil-oxazolidin-2-ona : Una solución de (R) -3- (4-benciloxi-3-fluoro-fenil ) -5-hidroximetil-oxazolidin-2-ona (6.34 g, preparada de acuerdo con WO 2004/096221) en THF/MeOH (1:1; 200 mi) se hidrogena empleando Pd/C 10% (1 g) durante toda la noche. El catalizador es retirado mediante filtración, el filtrado es evaporado bajo presión reducida y el residuo es agitado en EA. Los cristales son recolectados mediante filtración, obteniéndose 3.16 g (70% de rendimiento) de un sólido incoloro.

H MN (DMSOd6; d ppm) : 3.5 (m, 1H) , 3.64 (m, 1H) , 3.74 (dd, J = 8.8, 6.4, 1H) , 3.99 (t, J = 8.8, 1H) , 4.64 (m, 1H) , 5.16 (t, J = 5.6, 1H) , 6.93 (dd, J = 9.7, 8.8, 1H) , 7.08 (ddd, J = 8.8, 2.6, 1.2, 1H) , 7.45 (dd, J = 13.5, 2.6, 1H) , 9.66 (s, 1H) .

MS (ESI) : 228.1. l.ii. bencil éster de ácido 4- [2-fluoro-4- ( (R) -5-hidroximetil-2-oxo-oxazolidin-3-il) -fenoximetil] -4-hidroxi-piperidin-1-carboxílico : Una solución del intermediario l.i (1.27 g) y bencil éster de ácido l-oxa-6-aza-spiro [2.5] octan-6-carboxílico (1.60 g; preparado de acuerdo con US 4.244.961) se disuelve en DMF (15 mi) y se trata con Na2C03 (1.16 g) . La mezcla se calienta a 100 °C durante toda la noche. El residuo obtenido después del trabajo (DCM) se agita en EA, y el sólido es recolectado mediante filtración y secuencialmente lavado con EA y con Hex, obteniéndose 2.52 g (94.5% de rendimiento) de un sólido beige.

XH RMN (DMSOd6; d ppm): 1.57 (m, 4H) , 3.14 (m, 2H) , 3.54 (m, 1H) , 3.64 (m, 1H) , 3.79 (m, 5 H) , 4.03 (t, J = 9.1, 1 H) , 4.66 (m, 1 H) , 4.78 (s, 1 H) , 5.05 (s, 2 H) , 5.16 (t, J = 5.6, 1 H) , 7.18 (m, 2 H) , 7.32 (m, 5 H) , 7.55 (d, J = 12, 1 H) .

MS (ESI) : 475.0. l.iii. (R) -3- [3-fluoro-4- (4-hidroxi-piperidin-4- ilmetoxi ) -fenil] -5-hidroximetil-oxazolidin-2-ona : Una suspensión del intermediario l.ii (2.5 g) en EA/MeOH (1:1; 100 mi) es hidrogenada empleando Pd/C durante 48 h. La suspensión es calentada a 40 °C y el catalizador es retirado mediante filtración. El filtrado es evaporado empleando presión reducida para obtener 1.61 g (89% de rendimiento) de un polvo amarillo.

XH RM (DMSOd6; d ppm) : 1.4-1.63 (m, 4H) , 2.67 (m, 2H) , 2.83 (m, 2H) , 3.53 (dd, J = 4.0, 12.0, 1H) ; 3.66 (dd, J = 3.3, 12.0, 1H) , 3.71 (s, 2H) ; 3.80 (m, 1H) , 4.05 (t, J = 9.0, 1H) , 4.48 (s, 1H) , 4.68 (m, 1H) , 5.20 (s, 1H) , 7.20 (m, 2H) , 7.57 (d, 1H) .

MS (ESI) : 341.5. l.iv. ácido l-ciclopropil-6-fluoro-7- { 4- [2-fluoro-4- ( (R) -5-hidroximetil-2-oxo-oxazolidin-3-il) -fenoximetil] -4-hidroxi-piperidin-l-il } -4-oxo-l , 4-dihidro-quinolin-3-carboxílico : Una solución del intermediario l.iii (200 mg) , complejo diacetato de boro ácido 7-cloro-l-ciclopropil-6-fluoro-1 , 4-dihidro-4-oxo-3-quinolincarboxílico (241 mg; preparado de acuerdo con WO 88/07998) y DIPEA (100 µ?) en NMP (2 mi) se agita a 85 °C durante 5 h. La mezcla de reacción es evaporada bajo presión reducida y el residuo es dispuesto en HC1 5 M en MeOH (3 mi) y es agitado. El sólido resultante es recolectado mediante filtración y lavado con MeOH para obtener 230 mg (67% de rendimiento) de un sólido amarillo.

¾ RM (DMSOd6; d ppm) : 1.66-1.35 (m, 4H) , 1.75 (d, J = 12,8, 2H) , 1.95 (m, 2H) , 3.33 (t amplio, J = 11.0, 2H) , 3.57 (m, 3H) , 3.67 (dd, J = 12.3, 3.3, 1H) , 3.83 (m, 2H) , 3.92 (s, 2H) , 4.06 (t, J = 9.0, 1H) , 4.69 (m, 1H) , 7.24 (m, 2H) , 7.60 (m, 2H) , 7.90 (d, J = 13.3, 1H) , 8.66 (s, 1H) .

MS (ESI) : 585.9.

Ejemplo 2: ácido l-ciclopropil-6-fluoro-7-{4- [2-fluoro-4- ( (R) -5-hidroximetil-2-oxo-oxazolidin-3-il) -fenoximetil] -4-hidroxi-piperidin-l-il}-4-oxo-l, 4-dihidro- [1, 8] naftiridin-3-carboxílico : Una solución de ácido 7-cloro-l-ciclopropil-6-fluoro-1 , 4-dihidro-4-oxo-l , 8-naftiridin-3-carboxílico (166 mg; producto comercial) y del intermediario l.iii (200 mg) en NMP (5 mi) se trata con TEA (0.32 mi) y TMSCl y se calienta a 85 °C durante 5 h. La mezcla de reacción es evaporada bajo presión reducida y el residuo es dispuesto en HCl 5 M en MeOH (3 mi), y es agitado durante 30 min. La solución es evaporada bajo presión reducida y el residuo es dispuesto en EA. El sólido resultante es recolectado mediante filtración y es lavado con EA, obteniéndose 271 mg (78% de rendimiento) de un sólido amarillo.

XH RMN (DMSOd6; d ppm): 0.89-1.27 (m, 4H) ; 1.78 (d, J = 12,8, 2H) ; 1,90-2.04 (m, 2H) ; 3.53-3.88 (m, 6H) ; 3.88 (s, 2H) , 4.06 (t, J = 9.0, 1H) , 4.42 (d amplio, J = 13.2, 2H) , 4.44 (m, 1H) ; 7.11 (m, 2H) ; 7.55 (d, J = 14.5, 1H) ; 8.05 (d, J = 13.5, 1H) ; 8.60 (s, 1H) .

MS (ESI) : 586.8.

Ejemplo 3: ácido l-ciclopropil-6-fluoro-7-{ (RS) -3-[2-fluoro-4- ( (R) -5-hidroximetil-2-oxo-oxazolidin-3-il) -fenoximetil] -3-hidroxi-pirrolidin-l-il}-4-oxo-l, -dihidro-quinolin-3-carboxílico : 3.i. bencil éster de ácido dialil-carbámico : Se agrega cloruro de benzoilo (15.5 mi) gota a gota durante 30 min a una solución de dialilamina (12.3 mi) y TEA (21 mi) en DCM (100 mi) a 0 °C. La mezcla de reacción es agitada a temperatura ambiente durante 16 h. El residuo obtenido después del trabajo (DCM) es purificado mediante cromatografía (Hex/EA 95:5) para proveer 20.71 g (88% de rendimiento) de un líquido incoloro.

XH RMN (DMSOd6; d ppm) : 3.83 (dt, J = 1 y J = 6, 4H) ; 5.05-5.18 (m, 6H) ; 5.70-5.86 (m, 2H) ; 7.27-7.48 (m, 5H) . 3.ii. bencil éster de ácido 2 , 5-dihidro-pirrole-l-carboxílico : Se agrega benciliden-bis (triciclohexilfosfin) diclororutenio (5 g) a una solución del intermediario 3. i (17.56 g) en DCM (1.5 1) a temperatura ambiente bajo nitrógeno. La mezcla de reacción se agita a 40 °C durante 2 h y se concentra in vacuo. El residuo es purificado mediante FC (Hex/EA 90:10) para proveer 14.08 g (91% de rendimiento) de un líquido amarillo.

JH RMN (DMSOd6; d ppm) : 4.05-4.16 (m, 4H) ; 5.08 (s, 2H) ; 5.81-5.92 (m, 2H) ; 7.27-7.41 (m, 5H) . 3.iii. bencil éster de ácido (RS) -3-hidroxi-pirrolidin-1-carboxílico : Se agrega una solución 1 M de borano en THF (9 mi) a una solución del intermediario 3.ii (1.81 g) en THF (25 mi) a 0 °C bajo nitrógeno. La mezcla de reacción es agitada a temperatura ambiente durante 16 h y es enfriada a 0 °C. Se agrega cuidadosamente NaOH 20% (1.8 mi) gota a gota seguido de peróxido de hidrógeno acuoso al 35% (1.2 mi) . La mezcla es agitada a 0 °C durante 30 min y a temperatura ambiente durante 2 h. Se agregan Et20 y una solución acuosa al 40% de bisulfito de sodio y la mezcla de reacción es agitada vigorosamente durante 15 min. El residuo obtenido después del trabajo (Et2Ü) es purificado mediante FC (Hex/EA 5:5 hasta 3:7) para proveer 1.01 g (51% de rendimiento) de un aceite incoloro .

XH RMN (DMSOd6; d ppm): 1.67-1.82 (m, 1H) ; 1.82-1.96 (m, 1H) ; 3.16-3.25 (m, 1H) ; 3.28-3.44 (m, 3H) ; 4.20-4.29 (amplio, 1H) ; 4.92 (d, J = 3, 1H) ; 5.06 (s, 2H) ; 7.27-7.41 (m, 5H) . 3.iv. bencil éster de ácido 3-oxo-pirrolidin-l-carboxílico : Una solución del intermediario 3.iii (1,10 g) en DCM (8 mi) se enfría a 0 °C y se agrega DIPEA (2.5 mi) gota a gota, seguido de una solución de complejo piridina trióxido de azufre (1.79 g) en DMSO (6.5 mi) . La mezcla de reacción se agita a 0 °C durante 1 h y se apaga mediante la adición de agua (6 mi) . La fase acuosa se extracta con Et20/Hex (1:1, 3 x 5 mi) y las fases orgánicas combinadas se concentran in vacuo. El residuo obtenido después del trabajo (Et20/Hex 1:1) se purifica mediante FC (Hex/EA 5:5) para proveer 1.05 g (96% de rendimiento) de un aceite amarillento.

? RM (DMSOd6; d ppm) : 2.48-2.61 (m, 2H) ; 3.61-3.80 (m, 4H) ; 5.09 (s, 2H) ; 7.27-7.41 (m, 5H) . 3.v. bencil éster de ácido 3-metilen-pirrolidin-l-carboxílico : Se agrega t-BuOK (617 mg) en una porción a una suspensión blanca de bromuro de metil trifenilfosfonio (1,98 g) en THF (10 mi) a temperatura ambiente bajo nitrógeno. La suspensión amarilla es agitada a temperatura ambiente durante 1 h y luego es enfriada a -10 °C. Se agrega gota a gota una solución del intermediario 3. iv (1,05 g) en THF (2 mi) durante 10 min y la mezcla de reacción se deja entibiar hasta temperatura ambiente durante 2 h. La reacción es apagada mediante la adición de NH4C1 acuoso saturado (1 mi) y es diluida con EA. El residuo obtenido después del trabajo (EA) es purificado mediante cromatografía (Hex/EA 90:10) para proveer 633 mg (64% de rendimiento) de un líquido amarillento.

H RMN (DMSOd6; d ppm) : 2.48-2.61 (m, 2H) ; 3.36-3.53 (m, 2H) ; 3.84-4.01 (m, 2H) ; 4.97-5.03 (m, 2H) ; 5.08 (s, 2H) ; 7.27-7.41 (m, 5H) . 3.vi. bencil éster" de ácido l-oxa-5-aza-spiro [2.4] heptan-5-carboxílico : Una solución del intermediario 3.v (7.21 g) en DCM (400 mi) es tratada con MCPBA (20.1 g) y NaHC03 (22.3 g) a temperatura ambiente. La reacción es agitada a temperatura ambiente durante 2 h, diluida con DCM (200 mi) y vertida en una solución de Na2S03 (45 g) en agua (400 mi) . La mezcla es agitada durante 10 min y la fase orgánica es separada. El residuo obtenido después del trabajo (DCM) es purificado mediante FC (Hex/EA 6:4) para proveer 4.37 g (56% de rendimiento) de un aceite amarillo.

XH RMN (DMS0d6; d ppm): 1.70-1.83 (m, 1H) ; 2.22-2.37 (m, 1H) ; 2.90-2.94 (m, 1H) ; 2.95-2.99 (m, 1H) ; 3.15 (t, J = 11, 1H) ; 3.39-3.77 (m, 3H) ; 5.09 (s, 2H) ; 7.27-7.41 (m, 5H) . 3.vii. bencil éster de ácido (RS) -3- [2-fluoro-4- ( (R) -5-hidroximetil-2-oxo-oxazolidin-3-il ) -fenoximetil] -3-hidroxi-pirrolidin-l-carboxílico : Se agrega K2C03 (274 mg) a una suspensión del intermediario l.i (300 mg) y del intermediario 3. vi (338 mg) en DMF (3 mi) . La mezcla de reacción es agitada a 80 °C durante 3 h y el solvente es retirado in vacuo. El residuo obtenido después del trabajo (DCM) es purificado mediante FC (DCM/MeOH 95:5) para proveer 531 mg (87% de rendimiento) de una espuma beige.

H RMN (DMSOd6; d ppm) : 1.80-1.92 (m, 1H) ; 1.96-2.08 (m, 1H) ; 3.32-3.59 (m, 5H) ; 3.66 (ddd, J = 3, J = 6 y J = 13, 1H) ; 3.80 (dd, J = 6 y J = 9. 1H) ; 3.97-4.09 (m, 3H) ; 4.64-4.72 (m, 1H) ; 5.07 (s, 2H) ; 5.19 (t, J = 6, 1H) ; 5.23 (s, 1H) ; 7.18-7.23 (m, 2H) ; 7.27-7.38 (m, 5H) ; 7.57 (dd, J = 2 y J = 14, 1H) .

MS (ESI) : 460.9. 3.viii. (R) -3- [3-fluoro-4- ( (RS) -3-hidroxi-pirrolidin- 3-ilmetoxi) -fenil] -5-hidroximetil-oxazolidin-2-ona : Una solución del intermediario 3.vii (259 mg) en THF/MeOH (1:1; 20 mi) es hidrogenada empleando Pd/C 10% (60 mg) durante 20 h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción es concentrada in vacuo, dispuesta en DCM/MeOH 90:10 (20 mi) y agitada a temperatura ambiente durante 30 min. El catalizador es retirado mediante filtración y el filtrado es concentrado in vacuo para proveer 184 mg (100% de rendimiento) como una espuma naranja.

MS (ESI) : 327.3. 3.ix. ácido l-ciclopropil-6-fluoro-7-{ (RS) -3- [2-fluoro-4- ( (R) -5-hidroximetil-2-oxo-oxazolidin-3-il ) -fenoximetil] -3-hidroxi-pirrolidin-l-il } -4-oxo-l , 4 dihidro-quinolin-3-carboxílico : Una solución del intermediario 3.viii (226 mg) y complejo diacetato de boro ácido 7-cloro-l-ciclopropil-6-fluoro-1 , 4-dihidro-4-oxo-3-quinolincarboxílico (270 mg; preparada de acuerdo con WO 88/07998) en NMP (5 mi) es tratada con DIPEA (120 µ?) y agitada a 60 °C durante 2 h. La mezcla de reacción es concentrada in vacuo y el residuo es dispuesto en HCl 5 M en MeOH (2 mi) . La solución es agitada a temperatura ambiente durante 1 h, concentrada in vacuo y el residuo es purificado mediante FC (DCM/MeOH/AcOH 95:4:1 hasta 90:9:1). El residuo espumoso es dispuesto en MeOH (2 mi), agitado durante 1 h y filtrado. Los cristales son recolectados y secados in vacuo para obtener 23 mg (6% de rendimiento) de un sólido beige.

XH RMN (DMS0d6; d ppm) : 1.10-1.34 (m, 4H) ; 1.98-2.10 (m, 1H) ; 2.14-2.26 (m, 1H) ; 3.48-3.70 (m, 3H) ; 3.71-3.89 (m, 5H) ; 4.05 (t, J = 9, 1H) ; 4-09-4.18 (m, 2H) ; 4.66-4.74 (m, 1H) ; 5,19 (t, J = 6, 1H) ; 5.40 (s, 1H) ; 7.09 (d, J = 8, 1H) ; 7.18-7.31 (m, 2H) ; 7.59 (dd, J = 2 y J = 14 , 1H) ; 7.82 (d, J = 14, 1H) ; 8.59 (s, 1H) ; 15.52 (s, 1H) .

MS (ESI) : 572.3.

Ejemplo 4: Actividad antibacterial in vi ro de los compuestos de la invención respecto de cepas de referencia de Clostridium difficile o Clostridium perfringens: 4. i . Método experimental : Se determinan las concentraciones inhibidoras mínimas (MICs) mediante un ensayo de dilución de medio de cultivo.

Como medio de ensayo se emplea medio Brucella suplementado con una concentración final de 0.5 mg/L de vitamina Kl y 5 mg/L hemina. Brevemente, se preparan soluciones stock: de los compuestos en DMSO (5.12 mg/ml), y 5 µ? de un rango de diluciones seriales de dos-veces en 50% DMSO/50% H20 se disponen en placas de microtitulación de 96 pocilios que contienen 45 µ? de medio Brucella suplementado y se agitan durante 5 min. Para preparar el inoculo se suspenden colonias de 24 horas de edad de C. difficile cultivadas en agar Brucella suplementado con 5% de sangre de ovejas laked, 5 g de hemina/ml, y 1 µg de vitamina Kl/ml en medio de cultivo Brucella suplementado y se ajustan a una densidad que coincida con 0.5 del estándar de McFarland. 50 µ? de una dilución de 50-veces de esta suspensión es empleada para inocular los pocilios en la placa de 96 pocilios, lo que resulta en aproximadamente 104 unidades formadoras de colonias (CFU) por pocilio. La concentración final en DMSO es de 2.5%. El rango de concentración final es desde 0.03 - 16 g /mL. Las placas son incubadas bajo condiciones anaeróbicas durante 48 h a 37 °C. Después de la incubación las placas son leídas en un lector de placas a OD595 (Ultramark, Biorad Laboratories) . Los MICs son inicialmente leídos a la concentración más baja que presenta >90% de inhibición del crecimiento en comparación con los pocilios de control. Las placas también son revisadas de manera visual con la ayuda de un espejo de lectura, y los MICs son confirmados por la ausencia de crecimiento visible. 4.ii. Resultados: Los compuestos de los Ejemplos 1-3 son ensayados in vi ro por su actividad en la inhibición del crecimiento de tres cepas de referencia de C. difficile o Clostridium perfringens . Los resultados obtenidos son resumidos en la Tabla 1 a continuación.

Tabla 1 Los compuestos de los Ejemplos 1-3 presentan una potente actividad in vitro en contra de las cepas de C. difficile y de C. perfringens ensayadas. También se observa una fuerte actividad en contra de la cepa hiper-virulenta NC13366 resistente a quinolona. Los compuestos de los Ejemplos 1 y 2 son levemente más activos que el compuesto del Ejemplo 3 y todos los compuestos Ejemplo son claramente más activos que ciprofloxacina y linezolida.

Ejemplo 5: actividad antibacterial in vitro del compuesto del Ejemplo 1 en contra de una colección de Clostridium difficile aislada clínicamente: 5. i . Método experimental : Se emplea en método de referencia recomendado por el CLSI de dilución de agar para aneróbicos (M11-A6) para el ensayo de susceptibilidad. El medio de ensayo es agar Brucella suplementado con 5% de sangre de oveja laked, 5 pg de hemin/ml , y 1 g de vitamina Ki/ml. Los compuestos de ensayo son diluidos en serie y agregados al agar suplementado fundido. Se preparan controles de crecimiento en placas libres de fármacos. Antes de los ensayos, todos los aislados son sub-cultivados dos veces en placas de agar brucella enriquecido. Las colonias bacteriales son suspendidas en medio de cultivo brucella. Se emplea estandarización con un colorímetro Vitek para preparar cada inoculo al equivalente de 0.5 del estándar de McFarland, aproximadamente 104-105 CFU por punto después de la aplicación con un replicador Steers. Las placas son incubadas bajo condiciones anaeróbicas durante 48 h a 37 °C. La concentración mínima inhibidora (MIC) es la concentración que inhibe completamente el crecimiento visible en comparación con el control libre de fármacos. Todos los antibióticos son preparados y ensayados en conjunto con vancomicina y metronidazol como controles. 5.ii. Resultados: El compuesto del Ejemplo _1. es ensayado por su actividad para inhibir el crecimiento de una colección de 209 diversos C. difficile aislados de manera clínica in vitro. El compuesto del Ejemplo 1 presenta un MIC90 (concentración mínima inhibidora para inhibir el crecimiento de 90% de las cepas o más) de 0.25 yg/ml, los MICs obtenidos se encuentran en el rango desde 0.06 hasta 0.5 yg/ml. En promedio es más activo que vancomicina, metronidazol y linezolida, que tiene MIC90s of 2, 1 y 8 µg/ml, respectivamente.

Ejemplo 6: actividad antibacterial in vitro de los compuestos de la invención en contra de bacterias aeróbicas Gram-positivas : 6. i . Método experimental : Se determinan las concentraciones mínimas inhibitorias (MICs) mediante un ensayo de microdilución de medio de cultivo de acuerdo con las pautas del Clinical Laboratory Standards Institute [CLSI, antiguamente NCCLS, 1997] . Brevemente, se preparan soluciones stock de los compuestos en EMSO (5,12 mg/ml) , diluidas de manera serial en medio de cultivo II de Mueller-Hinton (CaMHB) ajustado en cationes, y dispuesto en placas de microtitulación con la ayuda de un robot de pipeteo Biomek 2000 (Beckman Coulter) . La concentración final de DMSO es de 2.5% o menor. Las placas son inoculadas para obtener una concentración generalmente de 3-6xl05 CFU/ml. Después de incubación a 37 °C durante 18-24 h, las placas son leídas en un lector de placas a OD595 (Ultramark, Biorad Laboratories) . Los MICs son inicialmente leídos a la concentración más baja, presentando un >90% de inhibición de crecimiento en comparación con los pocilios de control. Las placas también son revisadas de manera visual con la ayuda de un espejo de lectura, y los MICs son confirmados mediante la ausencia de un crecimiento visible. 6.ii. Resultados: El compuesto del Ejemplo 1 es ensayado en contra de bacterias aeróbicas Gram-positivas . Los resultados obtenidos se resumen en la Tabla 2 a continuación.

Tabla 2 MIC medido MIC · medido MIC medido MIC medido para para para line- para el vanco- ciproflo- zolida compuesto Cepa micina xacina ( g/ml) del (pg/ml) (pg/ml) Ejemplo 1 (yg/ml) S. aureus ATCC 29213 1 0.25 2 0.25 S. aureus A-798 (MRSA) 1 > 16 2 0.25 S. aureus ATCC 43300 1 0.25 2 0.25 (MRSA) S. aureus SI (LZD-R) 1 0.25 > 32 1 E. faecalis ATCC 29212 1 2 2 0.25 E. faecalis H 4060 > 32 > 16 2 0.25 E. faecalis H 6279 > 32 > 16 2 0.25 E. faecalis H 6897 > 32 > 16 4 1 E. faecalis H 7094 > 32 > 16 4 0.5 E. faecalis H 7460 > 32 > 16 16 1 E. faecium ATCC 19434 1 8 2 0.25 E. faecium H 9070 > 32 > 16 2 1 E. faecium H 7969 > 32 > 16 4 1 E. faecium H 7966 > 32 > 16 1 0.5 E. faecium H 7965 > 32 > 16 2 0.5 E. faecium H 7937 > 32 > 16 1 0.25 E. faecium A 962 > 32 > 16 4 0.5 E. faecium A 949 > 32 > 16 2 1 E. faecium Ll (LZD-R) 0,5 > 16 > 32 2 En resumen, el compuesto del Ejemplo 1 presenta una potente actividad in vitro en contra de cepas de Staphylococcus aureus, S. aureus MRSA, Enterococcus faecalis, y Enterococcus faecium. Es activo en contra de cepas que resisten a la vancomicina, ciprofloxacina o linezolida.

Ejemplo 7: actividad antibacterial in vitro del compuesto del Ejemplo 1 en contra de cepas bacteriales anaeróbicas particulares: Empleando el método experimental descrito en el Ejemplo 5 (ver 5. i), el compuesto del Ejemplo 1 (Ej . 1) es probado in vitro por la capacidad de inhibir el crecimiento de ciertas bacterias anaeróbicas que son conocidas o de las cuales se sospecha que juegan un ron en la flora normal del intestino y en la mantención de su rol en la protección en contra de un sobre crecimiento de C. difficile (de aquí en adelante llamada las "bacterias comensales del intestino") . Como referencias, el compuesto del Ejemplo 5 de WO 2005/058888 (Rl) y ciprofloxacina (CP) son ensayadas al mismo tiempo. Los MICs así obtenidos son presentados a continuación en la Tabla 3.

Tabla 3 resumen, el compuesto del Ejemplo 1 presenta una actividad reducida respecto de las bacterias comensales en comparación con C. difficile. Para Bacteroides spp., que son miembros importantes de la flora protectora humana del intestino, la actividad es 30 a 200 veces menor. Esta actividad selectiva ofrece el potencial de un control selectivo de C. difficile en el intestino mientras se evitan importantes bacterias de la flora intestinal.

Además, cuando se lo compara con el compuesto del Ejemplo 5 de WO 2005/058888, el compuesto del Ejemplo 1 presenta en la mayor parte de los casos 2 a 4 veces menos de actividad en contra de la Bacteroides spp. ensayada, 4 veces menos actividad en contra de las cepas Bubacterium limosum A-1259 o Finegoldia magna A-1254, 4 a 8 veces menos activa en contra del Bifidobacterium spp. ensayado y 8 veces menos activa en contra de las cepas Lactobacillus acidophilus A-1255 y Lactococcus lactis A-1256.

Por lo tanto, cuando se compara con el compuesto del Ejemplo 5 de WO 2005/058888 (Rl) , el compuesto del Ejemplo 1 es significativamente menos activo en contra de las bacterias comensales del intestino, lo que indica una ventaja en cuanto a la destrucción selectiva de C. difficile en el intestino.

Ejemplo 8: Efecto del compuesto del Ejemplo 1 en la producción de toxinas de C. difficile: 8. i . Método experimental : La cepa hiper-toxigénica C. difficile NC13366 se cultiva de manera anaeróbica en medio Brucella suplementado durante 24 horas a 37 °C hasta una densidad celular de aproximadamente lxlO8 CFU/ml . Las bacterias son lavadas mediante centrifugación y resuspendidas en el mismo volumen de medio Brucella suplementado que contiene antibióticos a 1 y 8 g/ml, respectivamente. El control no contiene antibiótico. Los cultivos son incubados adicionalmente de manera anaeróbica a 37 °C. En el día 5 se recolectan los sobrenadantes de los cultivos y se los ensaya por toxina A y por toxina B tal como se describe más adelante.

Se detecta la toxina A mediante Western Blotting usando un sistema de ensayo para análisis de proteínas grandes NuPage (Large Protein Analysis System) (Invitrogen LP0001, de acuerdo con las instrucciones del kit) . Se emplea el juego de inmunodetección Western Breeze anti ratón (Invitrogen WB7103) con anticuerpos monoclonales anti CdTA de ratón (PCG4.1, Biodesign C70517M) .

Se detecta la toxina citotóxica de C. difficile (toxina B) de manera semi-cuantitativa mediante el ensayo de los sobrenadantes de los cultivos de C. difficile por la actividad de rounding de células {cell-rounding, células que se hacen redondas) en células CHO. Las células CHO son sembradas en placas de 96 pocilios de fondo plano (lxlO5 células/ pocilio) y se permite que se adhieran durante 3 h. Se agregan las diluciones apropiadas de los sobrenadantes esterilizados mediante filtración a las células y se las incuba adicionalmente a 37 °C, en 5% de C02. Después de 20 h de incubación se determina el rounding celular empleando un microscopio invertido. El título de las toxinas es definido como la más alta dilución serial de 10 veces de sobrenadante que produce más que un 90% de rounding celular.

Las unidades formadoras de colonias (CFU) se determinan mediante el plaqueado de las diluciones apropiadas de las muestras de ensayo en agar Brucella suplementado y conteo de colonias después de 48 horas de incubación a 37 °C bajo condiciones anaeróbicas. 8.ii. Resultados: La vista , general de una placa Western Blot para analizar la producción de toxina A en el sobrenadante de cultivos celulares estáticos de alta densidad de C. difficile NC 13366 (una cepa hiper-productora de toxina de tipo NAPI/027 que causa violentos episodios en hospitales con alta mortalidad) es presentada en la Figura 1.

El método experimental mencionado en el párrafo 8. i es empleado para obtener el resultado presentado en la Figura 1. En el día 1 (DI) , los cultivos son tratados con ya sea el compuesto del Ejemplo 1 (Ex. 1), vancomicina (V) , metronidazol (M) a 1 y 8 g/ml o se dejan sin tratamiento (U) ; en el día 5 (D5), se analizan los contenidos de la toxina A en los sobrenadantes y se los compara con aquellos observados en DI (ver Figura 1) . En los cultivos en fase estacionaria de alta densidad de cinco días de edad de C. difficile toxigénica, el compuesto del Ejemplo 1 inhibe de novo la producción de toxina A empleando concentraciones de 1 y 8 yg/ml, i.e a 2 y 16x el MIC (ver la Figura 1) . En contraste, metronidazol y vancomicina no inhiben la producción de toxina A bajo estas condiciones o sólo lo hacen de manera débil.

Los sobrenadantes también son analizados por la toxina B citotóxica mediante el uso del ensayo de rounding de células basado en células mencionado en el párrafo 8. i. las actividades de los sobrenadantes de los cultivos tratados con el compuesto del Ejemplo 1 se ven reducidas en más que un 90% en comparación con el control sin tratamiento. En contraste, las actividades de los sobrenadantes de los cultivos tratados con vancomicina no se ven reducidas (a 1 yg/ml) o- sólo se reducen en un 30% En resumen, el compuesto del Ejemplo 1 tiene la capacidad de detener de manera eficiente la síntesis de las toxinas A y B de C. difficile incluso en cultivos estáticos de alta densidad y en ausencia de muerte celular, lo que no es el caso para vancomicina y metronidazol , los fármacos de preferencia actualmente empleados para el tratamiento de infecciones de C. difficile .

Ejemplo 9: Efecto del compuesto del Ejemplo 1 en la formación de esporas en C. difficile: 9. i. Método experimental: Se cultiva C. difficile A-1050 (ATCC 43596) hasta crecimiento logarítmico en medio de cultivo Brucella suplementado , lo que resulta en que la turbidez alcance 0,5 del estándar de McFarland (6-7 h a 37 °C bajo condiciones anaeróbicas) . Los cultivos son diluidos 1:50 en tubos que contienen 1 mL de medio de cultivo Brucella suplementado que contiene los antibióticos a diversas concentraciones en pasos de dilución de 2 veces. Los tubos son incubados adicionalmente durante 4 días a 37 °C bajo condiciones anaeróbicas. El MIC se define como la concentración que inhibe completamente el crecimiento visible (turbidez) . 0,5x MIC es la concentración más alta del fármaco que permite el crecimiento visible.

La evaluación de las unidades formadoras de colonias (CFUs) de las células totales se lleva a cabo mediante el plaqueo de diluciones de 10 veces apropiadas de los cultivos en agar de Brazier que contiene 4% de suspensión de yema de huevo y 1% de sangre de caballo lisada (Lab M) . Las colonias son contadas después de incubación a 37 °C durante 48 h bajo condiciones anaeróbicas. Los conteos de esporas se llevan a cabo mediante la muerte selectiva de células vegetativas mediante tratamiento con 50% de etanol durante 1 h a temperatura ambiente y el conteo posterior de CFU en agar de Braziers tal como se indica anteriormente . 9.ii. Resultados: C. difficile es un organismo formador de esporas y las esporas pueden persistir por largo tiempo en el ambiente hospitalario. Las esporas son muy resistentes a los procedimientos de desinfección habituales. Por lo tanto, las esporas juegan un papel importante en la transmisión y en la persistencia de las infecciones con C. difficile . Se tratan cultivos de C. difficile in vitro con diversas concentraciones inferiores a MIC del compuesto del Ejemplo 1, vancomicina o metronidazol y se investiga el efecto sobre la producción de .esporas después de 4 días de incubación anaeróbica a 37 °C (ver párrafo 9. i) . A una concentración que representa 0,5x de MIC, el tratamiento con el compuesto del Ejemplo 1 produce bajos conteos de esporas (<1% de esporas del conteo de células totales) . En contraste, los cultivos no tratados y los cultivos tratados con metronidazol o vancomicina a concentraciones de 0 , 5x de MIC presentan altas tasas de esporulación (>90% de esporas del conteo de células totales) . Esto indica que el compuesto del Ejemplo 1 tiene el potencial de reducir la producción de esporas durante el tratamiento de una infección con C. difficile de manera más eficiente que vancomicina o metronidazol .

Ejemplo 10: Actividad in vivo de un compuesto de la invención en el modelo de C. difficile en hámster: 10. i. Método experimental: Se aplica una única inyección de fosfato de clindamicina (10 mg/kg s.c.), en hámster Golden Syrian, y un día después los animales son infectados mediante cebadura con 105 CFU de cepa C. difficile toxigénica 10465. Se produce una colitis fulminante en la mayoría de de los animales (-95%) y se desarrolla 1 a 2 días después de la administración de C. difficile . Sin tratamiento, la colitis progresa rápidamente y se convierte en colitis severa, necrosis hemorrágica del intestino ciego y muerte. El compuesto del Ejemplo 1 es administrado de manera oral como una suspensión a tres niveles de dosificación (10 mg/kg, 30 mg/kg y 100 mg/kg; n = 10 por grupo) . Se emplea vancomicina (50 mg/kg) como un control. Los animales son tratados una vez diariamente durante 5 días y a continuación se mantienen en observación durante 21 días adicionales.

Los animales son observados tres veces de manera diaria por morbidez y por presencia o ausencia de diarrea. El punto final del estudio es la supervivencia. Los animales para los cuales se juzga que están en un estado moribundo [período extendido de pérdida de peso que progresa a un estado escuálido, anorexia durante 24-48 h, letargo prolongado (más que 3 días) , signos de parálisis, erosiones cutáneas o trauma, postura encorvada, abdomen distendido] son sacrificados mediante una única inyección de pentobarbital sódico. 10. ii. Resultados: La utilidad terapéutica del compuesto del Ejemplo 1 es ensayada empleando el protocolo del párrafo 10. i . Todos los animales infectados no tratados mueren entre 2 y 5 días después de la infección, mientras que todos los animales tratados con 10, 30 ó 100 mg/kg del compuesto del Ejemplo 1 sobreviven durante el período de tratamiento de 5 días. Al nivel de dosis más bajo, 40% de los animales sobrevive la fase de recaída 21 días después del tratamiento, mientras que en los grupos de 30 y 100 mg/kg 80 y 100% de los animales sobrevive sin una recaída. Como control se emplea vancomicina con una dosis de 50 mg . Estos resultados demuestran que el compuesto del Ejemplo 1 tiene la capacidad de tratar animales infectados con C. difficile de manera comparable con vancomicina .

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (14)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede se -reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :

1. Compuesto de fórmula I Caracterizado porque A es N o CH; y n es 0 ó 1 ; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la prevención o el tratamiento de enfermedades intestinales que son causadas por bacterias seleccionadas de entre Clostridium difficile, Clostridium perfringens o Staphylococcus aureus.

2. Compuesto de fórmula I de conformidad con la reivindicación 1 para el uso mencionado en la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque A es CH.

3. Compuesto de fórmula I de conformidad con la reivindicación 1 ó 2 para el uso mencionado en la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque n es 1.

4. Compuesto de fórmula I de conformidad con la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque es seleccionado de entre: ácido l-ciclopropil-6-fluoro-7-{4- [2-fluoro-4- ( (R) -5- hidroximetil-2-oxo-oxazolidin-3-il) -fenoximetil] -4-hidroxi- piperidin-l-il }-4-oxo-l, 4-dihidro-quinolin-3-carboxílico; - ácido l-ciclopropil-6-fluoro-7-{4- [2-fluoro-4- ( (R) -5- hidroximetil-2-oxo-oxazolidin-3-il) -fenoximetil] -4-hidroxi- piperidin-l-il}-4-oxo-l, 4-dihidro- [1, 8] naftiridin-3-carboxílico; y ácido l-ciclopropil-6-fluoro-7-{3- [2-fluoro-4- ( (R) -5- hidroximetil-2-oxo-oxazolidin-3-il) -fenoximetil] -3-hidroxi- pirrolidin-l-il}-4-oxo-l, 4-dihidro-quinolin-3-carboxílico; o una sal farmacéuticamente aceptable de un tal compuesto, para la prevención o el tratamiento de enfermedades intestinales que son causadas por bacterias seleccionadas de entre Clostridium difficile, Clostridium perfringens o Staphylococcus aureus.

5. Compuesto de fórmula I de conformidad con la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque es ácido l-ciclopropil-6-fluoro-7-{4- [2- • fluoro-4- ( (R) -5-hidroximetil-2-oxo-oxazolidin-3-il) -fenoximetil] - 4-hidroxi-piperidin-l-il}-4-oxo-l,4-dihidro-quinolin-3- carboxílico o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la prevención o el tratamiento de enfermedades intestinales que son causadas por bacterias seleccionadas de entre Clostridium difficile, Clostridium perfringens o Staphylococcus aureus.

6. Compuesto de fórmula I de conformidad con las reivindicaciones 1 a 5, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque se usa para la prevención o el tratamiento de enfermedades intestinales que son causadas por Clostridium difficile.

7. Compuesto de fórmula I de conformidad con las reivindicaciones 1 a 5, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque para la prevención o el tratamiento de enfermedades intestinales que son causadas por una · cepa de Clostridium difficile que produce una toxina.

8. Compuesto de fórmula I de conformidad con las reivindicaciones 1 a 5, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque para la prevención o el tratamiento de enfermedades de diarrea asociadas con cepas entero-toxigénicas de Clostridium difficile, Clostridium perfringens o Staphylococcus aureus sin el aumento de la concentración de enterococos resistentes a vancomicina en el intestino.

9. Compuesto de fórmula I de conformidad con las reivindicaciones 1 a 5, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque para la prevención o el tratamiento de enfermedades de diarrea asociadas con cepas entero-toxigénicas de Clostridium difficile, Clostridium perfringens o Staphylococcus aureus y la . reducción . de la concentración de enterococos resistentes a vancomicina en el intestino.

10. Uso de un compuesto de fórmula I de conformidad con una de las reivindicaciones 1 a 5, o de una sal farmacéuticamente aceptable de un tal compuesto, para la manufactura de un medicamento destinado a la prevención o al tratamiento de una enfermedad intestinal que es causada por una bacteria seleccionada de entre Clostridium difficile, Clostridium perfringens y Staphylococcus aureus.

11. Uso de conformidad con la reivindicación 8, en donde el medicamento está destinado al tratamiento de una enfermedad intestinal .

12. Uso de conformidad con la reivindicación 8 , en donde el medicamento producido está destinado a la prevención de la enfermedad intestinal.

13. Uso de conformidad con las reivindicaciones 8 a 10, en donde el medicamento producido también está destinado a no aumentar la concentración de enterococos resistentes a vancomicina en el intestino.

14. Uso de conformidad con las reivindicaciones 8 a 10, en donde el medicamento producido también está destinado a reducir la concentración de enterococos resistentes a la vancomicina en el intestino.