MX2010011209A

MX2010011209A - Uso de epotilona d en el tratamiento de enfermedades asociadas a tau incluyendo enfermedad de alzheimer.

Info

Publication number: MX2010011209A
Application number: MX2010011209A
Authority: MX
Inventors: Francis Y Lee; Charles F Albright; Donna Marie Barten
Original assignee: Squibb Bristol Myers Co
Priority date: 2008-04-24
Filing date: 2009-04-24
Publication date: 2010-11-12
Also published as: DK2276485T3; CN104666297A; CN102076339A; AU2009240538B2; US20110230528A1; HRP20140783T1; BRPI0911482A2; US20140135367A1; WO2009132253A1; PL2276485T3; TWI472329B; AU2009240538A1; TW200948360A; KR20100137576A; EP2276485B1; EA201001695A1; CN104116736A; CL2009000990A1; US8673949B2; EA021758B1

Abstract

En la presente se describen procedimientos de tratamiento de tauopatías usando epotilona D que presenta buena penetración cerebral, semivida larga, y retención altamente selectiva en cerebro, y proporciona terapias efectivas en el tratamiento de tauopatías que incluyen enfermedad de Alzheimer.

Description

USO DE EPOTILONA D EN EL TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES ASOCIADAS A TAU INCLUYENDO ENFERMEDAD DE ALZHEIMER Campo de la Invención Esta invención se refiere generalmente al tratamiento de enfermedades asociadas a TAU usando epotilona D, y más específicamente al tratamiento de la enfermedad de Alzheimer usando epotilona D.

Antecedentes de la Invención La enfermedad de Alzheimer (AD, por sus siglas en inglés) es la forma más común de demencia, afectando a un número estimado de 27 millones de personas por todo el mundo en 2006. La edad es el factor de riesgo conocido más grande para AD con una incidencia del 25-50% en personas de edad de 85 años o superior. Como se incrementa la edad promedio de la población, se espera que el número de pacientes con AD aumente exponencialmente . AD es la quinta causa principal de muerte en personas de 65 años de edad o más, y la mayoría de los pacientes necesitan eventualmente cuidados asistenciales en el hogar. Consecuentemente, AD tiene un impacto económico enorme, por ejemplo, los costes directos e indirectos estimados para 2005 solamente en los EE.UU. fueron de 148 mil millones de dólares. Además de los costes económicos, AD tiene un impacto devastador sobre los pacientes y los Ref.:214627 miembros de sus familias, causando angustia emocional severa y confusión.

Los pacientes se diagnostican con AD probable en base a la presencia de demencia con empeoramiento progresivo de la memoria y de otras funciones cognitivas y con la exclusión de otras causas de demencia. Un diagnóstico de AD solamente puede confirmarse post mortem ya que el diagnóstico clínico se basa en neuropatología del cerebro, específicamente, el diagnóstico requiere una evaluación del tejido cerebral, incluyendo la existencia y concentración de placas extracelulares en el cerebro, marañas intracelulares y neurodegeneracion cerebral. La demencia es también una parte requerida del diagnóstico, dado que las placas y las marañas se observan también en adultos normales cognitivamente , aunque usualmente en un menor grado.

Están actualmente aprobadas para AD dos clases de medicaciones, inhibidores de colinesterasa y un antagonista de ácido N-metil-D-aspártico (NMDA, por sus siglas en inglés) . Aunque estas dos clases de productos terapéuticos muestran algún beneficio clínico, muchos pacientes no responden, y estos fármacos sólo mejoran los síntomas de AD (por ejemplo, función cognitiva) con escasa o nula modificación de la progresión de la enfermedad. Por estas razones, la identificación de productos terapéuticos modificadores de esta enfermedad devastadora es un enfoque principal de la industria farmacéutica.

Los estabilizadores de microtúbulos se han sugerido como terapias para tratar tauopatías incluyendo AD. Véase, por ejemplo, Lee y col. (lista de referencias, infra) . En la Patente de los Estados Unidos 5.580.898, presentada en mayo de 1994 y concedida el 3 de diciembre de 1996, a Trojanowski y col. se sugiere el uso de paclitaxel (Taxol) para tratar pacientes que sufren de AD estabilizando microtúbulos. El paclitaxel ha probado ser altamente efectivo como un agente estabilizador de microtúbulos en tratar pacientes de cáncer; sin embargo, presenta penetración cerebral y establece neuropatía periférica cuando se considera para AD (descrito adicionalmente más adelante) y no ha surgido como una terapia viable para tratar AD.

En 1995, se mostró que epotilona B ejerce efectos estabilizadores de microtúbulos similares a paclitaxel (Bollag y col. 1995) . La epotilona A y la epotilona B son compuestos que se dan en la naturaleza que se aislaron por Hofle y col. a partir de productos de fermentación del microorganismo Sorangium cellulosum (por ejemplo, documento O 93/10121). Hofle y col. también descubrieron 37 variantes naturales de epotilona y compuestos relacionados producidos por S. cellulosum y cepas modificadas, incluyendo epotilonas C, D, E, F y otros isómeros y variantes (por ejemplo, Patente de los EE.UU. N.°: 6.624.310).

Las características únicas de las epotilonas naturales generaron mucho interés en su exploración como fármacos anticancerígenos potenciales. Ahora, han pasado cerca de veinte años desde el primer descubrimiento de las epotilonas naturales A y B. Se han descubierto cientos de análogos de epotilona y ¦ se han descrito en diversas solicitudes de patente, y se ha publicado bibliografía abundante bajo el título, "epotilonas" (Véase, por ejemplo, Altmann y col., lista de referencias, infra, en 396-423) .

El cesionario de la solicitud actual ha desarrollado ixabepilona, un análogo semisintético de epotilona B, para el tratamiento de cáncer. La ixabepilona tiene la fórmula estructural, El nombre químico para ixabepilona es (1S, 3S, 7S, 10R, 11S, 12S, 16R) - 7 , 11 -dihidroxi - 8 , 8 , 10 , 12 , 16 -pentametil-3 - [ (125) - l-metil-2- (2-metil-4-tiazolil) etenil] -17-oxa-4-azabiciclo [14.1.0] heptadecano-5 , 9-diona . Véase también el · documento US 6,605,599, cedido al cesionario actual, Bristol-Myers Squibb Company (BMS) . La ixabepilona es un agente estabilizador de microtúbulos que se ha aprobado por la FDA para el tratamiento de cáncer de mama metastásico y se vende por BMS bajo el nombre comercial IXEMPRA®. La ixabepilona se puede preparar como se describe en el documento US 6,605,599 o en el documento US 7,172,884, incorporados en el presente documento mediante referencia.

Se incluyen otras epotilonas naturales y análogos en ensayos clínicos avanzados para tratamiento de cáncer incluyendo epotilona B (papitulona de a/k/a, o EPO-906) , en ensayos de Fase III por Novartis Pharma AG, para tratamiento de cáncer ovárico; sagopilona (o ZK-EPO) , un análogo sintético de benzotiazolil-7-propenilo de epotilona B, en ensayos de Fase II mediante Bayer Schering AG para tratamiento de diversos cánceres incluyendo tumores del ovario, mama, pulmón, próstata y melanoma. En 2007, un ensayo de Fase II con sagopilona se inició en los Estados Unidos para tratamiento de metástasis cerebrales a partir de cáncer de mama. Adicionalmente, un análogo de epotilona D, KOS- 1584, ha avanzado a ensayos clínicos de Fase II para tratamiento de cáncer por Kosan en colaboración con Hoffmann-La Roche, Inc.; sin embargo, los ensayos clínicos con epotilona para tratar cáncer se interrumpieron en 2007. La estructura para epotilona D se puede representar por la siguiente fórmula: (Epotilona El cesionario de la aplicación actual también ha evaluado clínicamente BMS-310705 (Compuesto II en el presente documento) , para terapia del cáncer. BMS-310705 se continuó a través de ensayos clínicos de Fase I para tratamiento de cáncer ovárico; es un análogo de amino-epotilona F y tiene la estructura química: Se puede preparar el Compuesto II (BMS 310705) como se describe en el documento US 6,262,094, incorporado en el presente documento .

Mientras que ciertos de los compuestos de epotilona y análogos se han evaluado clínicamente para tratar cánceres, es altamente impredecible si un fármaco de cáncer se puede usar de forma efectiva para tratar enfermedades neurodegenerativas incluyendo AD. Hay diversos factores que afectan esto impredeciblemente . Un factor es la dificultad especial de lograr buena penetración cerebral debido a la barrera hematoencefálica (BHE) . Para que un compuesto sea útil en tratar enfermedades cerebrales neurodegenerativas, es necesario que el compuesto cruce la BHE; sin embargo, dado que una función de la BHE es proteger el cerebro de sustancias y toxinas externas, describir un fármaco útil que tiene buena penetración de la BHE es desafiante. Adicionalmente , la penetración de la BHE es una característica indeseable para un fármaco de cáncer (distinto de los fármacos de cáncer de cerebro) . Con un fármaco de cáncer, se busca usualmente que se permita la penetración de la BHE, mientras que para un fármaco diseñado para tratar AD u otras enfermedades cerebrales neurodegenerativas, es necesaria buena penetración de la BHE para que el compuesto sea efectivo. Así, por ejemplo, mientras que paclitaxel es un fármaco de cáncer altamente exitoso, no ha surgido como una terapia útil para tratar enfermedades cerebrales tales como AD, como hay una baja velocidad de penetración cerebral a través de la BHE.

Factores adicionales que afectan la impredecibilidad de evaluar la utilidad de fármacos de cáncer, particularmente fármacos estabilizadores de microtúbulos , en tratar AD y otras enfermedades cerebrales implican la capacidad de un fármaco para penetrar en el cerebro, para retenerse en el cerebro durante periodos largos, y para acumularse selectivamente en el cerebro en relación a los tejidos periféricos. Estos parámetros se pueden medir usando razones de cerebro a plasma, semivida cerebral, y la razón de la cantidad de fármaco retenido en el cerebro comparado con el plasma y los tejidos periféricos (más particularmente el hígado) . Adic ionalmente , medir la penetración cerebral, la retención cerebral y la acumulación cerebral selectiva con estabilizadores de microtúbulos es complejo porque estos compuestos se desalojan típicamente rápidamente del plasma pero se desalojan más lentamente de tejidos que contienen microtúbulos, haciendo importante ajustar ventanas temporales apropiadas para comparaciones de niveles de plasma y tejidos. La razón del cerebro a los tejidos periféricos es una medida particularmente importante dado que los agentes estabilizadores de microtúbulos a ciertas dosis son altamente citotóxicos para tejidos periféricos: cuando agentes estabilizadores de microtúbulos, tales como paclitaxel, se administran a dosis quimioterapéuticas, tiene lugar a menudo una neuropatía periférica y otros efectos secundarios (Postma y col. 1999) . Estos efectos secundarios pueden ser tolerables al tratar pacientes de cáncer pero existe una ventana terapéutica diferente y un perfil de efectos secundarios aceptable en tratar pacientes que sufren de AD y otras enfermedades cerebrales.

Cambios aún adicionales implicados con miras a fármacos de cáncer para aplicación potencial para enfermedades neurodegenerativas incluyen el modo de administración y la biodisponibilidad y citotoxicidad asociada con el mismo.

En el documento WO 2005/075023 Al, publicado el 30 de enero de 2004, cedido a Andrieux y col. de INSERM, se sugiere que ciertas epotilonas y análogos que incluyen epotilona A, B, C, D, E, y F, y análogos de epotilona de B y D de epotilona de benzot iazolilo y de epotilona de piridilo pueden ser útiles en tratar enfermedades que implican un defecto de- conectividad neuronal, tal como esquizofrenia o autismo. Sin embargo, Andrieux y col. niegan y por lo tanto enseñan en contra del uso de estos compuestos para tratar AD , estableciendo que las enfermedades asociadas con defectos de conectividad neuronal (es decir, aquellas reivindicadas en esta solicitud) "son diferentes de trastornos de demencia progresiva tales como Alzheimer, que implican degeneración neuronal".

En el documento WO 03/074053, (x053), cedido a Lichtner y col. de Schering AG (publicado el 12 de sept . de 2003) , hay una reivindicación amplia para usar un género amplio de compuestos de epotilona y análogos sintéticos para tratar cáncer de cerebro y otras enfermedades cerebrales, incluyendo tumor cerebral primario, tumor cerebral secundario, esclerosis múltiple, y AD . Lichtner y col. muestran ciertos datos en cuatro compuestos, a saber, paclitaxel comparado con los compuestos nombrados en la presente como compuesto 1: 4 , 8-dihidroxi-16- (l-metil-2- (2-metil-4-tiazolil) -etenil-1-oxa-7- (1-propil) -5,5,9, 13 -tetrametil-ciclohexadec- 13 -eno-2 , 6-diona) ; compuesto 2: dihidroxi-38 , 8 , 12 , 16 -tetrametil - 17-dioxabiciclo [14.1.0] heptadecano-5 , 9-diona; y compuesto 3: 7 , ll-dihidroxi-3- (2-metilbenzotiazol-5-il) -10- (proa-2-en-lil) -8, 8, 12, 16-tetrametil-4 , 17-diooxabiciclo [14.10] heptadecano-5 , 9-diona (véase publicación del documento WO '053 en la página 21) .

Notablemente, Lichtner y col. muestran datos de concentración cerebral y plasmática para los siguientes tres análogos de de epotildna, pero sólo durante periodos de hasta 40 minutos. Lichtner y col. no son capaces de mostrar datos comparativos contra paclitaxel a niveles cerebrales frente a plasmáticos debido a que sus niveles cerebrales de paclitaxel estuvieron por debajo del nivel de detección, y no mostrarán datos relativos a razones cerebro a hígado, semivida o retención cerebral para cualquiera de los compuestos (por ejemplo, concentración de fármaco en tejido cerebral durante periodos de tiempo prolongados) .

En vista de lo precedente, permanece aún la necesidad en la técnica de procedimientos de tratar tauopatías, en particular la enfermedad de Alzheimer.

Sumario de la Invención Los presentes inventores han descubierto en base a múltiples estudios in vivo que incluyen estudios de comportamiento y neuropatológicos , que la epotilona D logra un perfil sorprendentemente ventajoso en tratar tauopatías (y otras enfermedades neurodegenerativas), incluyendo AD. Los inventores han descubierto que la epotilona D presenta una combinación . remarcable de propiedades ventajosas, haciendo al compuesto particularmente adecuado para tratar tales enfermedades. Estas propiedades incluyen, no sólo un alto nivel de penetración cerebral penetración cerebral a través de la BHE, sino también una semivida sorprendentemente larga en el cerebro y una tasa de retención selectiva sorprendentemente alta en el cerebro comparada con niveles de fármaco encontrados en tejidos periféricos, más notablemente, el hígado, durante periodos prolongados de tiempo. Además, los inventores han descubierto adicionalmente que ventajas terapéuticas, sorprendentes en tratar enfermedades asociadas a Tau, particularmente, AD, se pueden lograr con dosificaciones bajas de epotilona D, por ejemplo, con dosificaciones que son aproximadamente 100 veces menos que aquellas administradas para lograr efectos quimiot-erapéuticos . Consecuentemente, los inventores han descubierto procedimientos que tienen en cuenta terapias en tratar enfermedades asociadas a Tau con epotilona D, particularmente tratamiento de AD, sin causar efectos secundarios inducidos por fármacos, y/o niveles de concentración de fármaco-plasma que requerirían uso de la epotilona D para interrumpirse para tratar al paciente en necesidad de tratamiento. Dando la dosis baja según se compara con tratamientos quimioterapéuticos , cualesquiera efectos secundarios están muy reducidos en comparación con efectos secundarios que se inducen tras administración de las epotilonas y análogos para el tratamiento de cáncer.

La presente invención proporciona procedimientos de tratar enfermedades asociadas a Tau incluyendo tauopatías, usando epotilona D que presentan un perfil sorprendentemente ventajoso para tratar AD. En particular, la invención proporciona un procedimiento de tratar la enfermedad de Alzheimer que comprende la etapa de administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de epotilona D a un paciente.

La presente invención proporciona adicionalmente una composición farmacéutica que comprende epotilona D para tratar enfermedades asociadas a Tau en un paciente, en el que la composición presenta un perfil de tratamiento que comprende buena penetración cerebral, vide media larga en el cerebro, y retención cerebral selectiva (por ejemplo, razón cerebro a hígado alta) , como se define en el presente documento. Las modalidades preferidas comprenden composiciones farmacéuticas para tratar tauopatías, particularmente, AD, comprendiendo una cantidad terapéuticamente efectiva de epotilona D y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Las modalidades y aspectos adicionales de la invención se exponen a continuación.

Breve Descripción de las Figuras La FIG. 1 muestra el diseño básico de un experimento en ratones Tg4510 usando epotilona D (Compuesto I) .

La FIG. 2 muestra los resultados de una prueba de laberinto de agua de Morris (MWM) de los ratones Tg4510 a los 2.5 meses, antes de administrar dosis con epotilona D (Compuesto I) .

La FIG. 3 muestra los resultados de una prueba de MWM de los ratones Tg4510 a los 4.5 meses, antes de administrar dosis con epotilona D (Compuesto I) .

Las FIGS. 4A-4B muestran los datos de la prueba 18 horas después de entrenamiento en los ratones Tg4510 de 4.5 meses de edad, después de 2 meses de administrar dosis con epotilona D (Compuesto I) . "TQ" representa cuadrante objetivo, "AR" representa adyacente a la derecha, "AL" representa adyacente a la izquierda, y "OP" representa el cuadrante opuesto. Se describen dos medidas del rendimiento, a saber % de longitud del camino (A) y número de cruces de la plataforma (B) .

La FIG. 5 muestra conteos neuronales en las regiones CAI y CA3 del hipocampo en ratones Tg4510 e 5.5 meses tras el tratamiento con vehículo, epotilona D 1 mpk (Compuesto I), y epotilona D 10 mpk (Compuesto I) .

La FIG. 6 muestra tinción de Tau fosforilada de los ratones Tg4510 tratados con vehículo, epotilona D 1 mpk (Compuesto I) , y epotilona D 10 mpk (Compuesto I) en el hipocampo. Se muestran las secciones representativas de 3 ratones por grupo. La tinción positiva con AT8 es gris oscura y negra.

Las FIGS . 7A-7B muestran tinción de plata de Gallyas para marañas neurofibrilares en ratones Tg4510 tratados con vehículo, epotilona D 1 mpk (Compuesto I) , o epotilona D 10 mpk (Compuesto I) . La FIG. 7A muestra micrografías representativas de tinción cortical, donde la tinción con plata negra es positiva. Se observan la tinción de fondo más clara y alguna tinción de vasos sanguíneos en ratones no transgénicos . La figura 7B muestra la cuantificación de la tinción de plata tanto en córtex como en hipocampo.

Las FIGS. 8A-8D muestran la concentración de Compuesto II (FIG. 8A) , ixabepilona (FIG. 8B) , paclitaxel (FIG. 8C) y epotilona D (Compuesto I) (FIG. 8D) en el plasma, cerebro, e hígado de ratones tras administración intravenosa a diversos intervalos de hasta 24 horas.

La FIG. 9 muestra la concentración de epotilona D (Compuesto 1) y Compuesto III (como se describe en el ejemplo 7 en el presente documento) en el cerebro después de administración oral (35 mpk) hasta 5 a 24 horas después de administrar la dosis.

La FIG. 10 muestra la concentración de epotilona D en el plasma, cerebro e hígado en ratones después de intervalos hasta una semana después de la dosificación.

Descripción Detallada de la Invención ABREVIATURAS Las siguientes son abreviaturas de diversos términos usados en esta descripción: 3R tres repeticiones 4R cuatro repeticiones AD enfermedad de Alzheimer APP = proteína precursora de ß-amiloide BHE = barrera hematoencef lica BMS = Bristol-Myers Squibb, Co .

CHC13 = cloroformo CH2C12 = cloruro de metileno DMAO = -dimetilaminopiridina EtOAc = acetato de etilo HPLC - cromatografía líquida de alta presión FDA = US Food and Drug Administration FTDP-17 = demencia frontotemporal con parkinsonismo asociada al cromosoma 17 h, hr = hora/horas IP = intraperitoneal IV = intravenoso LDA = diisopropilamida de litio LLQ = límite mínimo de cuantificación <LLQ = por debajo de LLQ, no detectable MAP = proteína asociada a microtúbulos MeOH = metaño1 min minutos MTs = microtúbulos mpk = miligramo por kilogramo MWM = laberinto de agua de Morris nM nanomolar NQ no cuantificable debido a que uno o más puntos de datos son < LLQ PEG polietilenoglicol PGP = glicoproteína P PO per os (administración oral) PVP = polivinilpirrolidona RT temperatura ambiente Si02 = gel de sílice TBAF = fluoruro de tetrabutilamonio TBS = solución salina amortiguada de Tris TEA = trietilamina TFA = ácido trifluoroacético THF = tetrahidrofurano TPGS = succinato de d-a-tocoferil polietilenoglicol 1000 Definiciones "Alrededor de" o "aproximadamente" tal como se usa en el presente documento quiere decir dentro de un intervalo aceptable de desviación estándar para el valor particular como se determina por alguien de habilidad ordinaria en la técnica, considerando la medida en cuestión y el instrumento usado para realizar la medida (es decir, las limitaciones en el sistema de medida) . Por ejemplo, "aproximadamente" puede significar dentro de una o más desviaciones estándar. Como se aplica a las formulaciones y dosificaciones, "aproximadamente" puede significar una desviación dentro del 10%, más preferiblemente dentro del 5%, e incluso más preferiblemente dentro del 2%, de las cantidades mostradas.

Los términos "al menos x" y "x o más" , en las que x denota un valor numérico, se usan intercambiablemente en el presente documento ya que se desea que tengan el mismo significado .

"Penetración cerebral" se refiere a la capacidad de un compuesto de cruzar la BHE . Debido a la rápida eliminación periférica para la mayoría de los agentes estabilizadores de microtúbulos , es importante medir las razones de cerebro a plasma a tiempos relativamente cortos tras la administración de la dosis, por ejemplo, en periodos de aproximadamente de 20 minutos a 1 hora tras la administración de la dosis, para evaluar la penetración cerebral por sí misma. Un compuesto que tiene buena penetración cerebral como se define en el presente documento quiere decir un compuesto que mostrará a . 20 minutos a 1 hora tras la administración de la dosis una razón de cerebro a plasma de 0.5 o mayor, más preferiblemente, 0.8 o mayor, y lo más preferiblemente, una razón de 1 o más (de nuevo, a un tiempo entre 20 minutos y 1 hora tras la administración de la dosis) . Al valorar si un compuesto de fármaco satisface este estándar de razón cerebro/plasma alta (por ejemplo, como, se enumera en las reivindicaciones en el presente documento) , hay que basarse en los estudios no humanos in vivo puesto que el tejido cerebral humano no puede analizarse para evaluar la concentración de fármaco.

"Beneficios cognitivos" quiere decir que se observa o muestra una mejora o disminución en el declive de la función cognitiva para al menos un paciente en necesidad de tratamiento, como se caracteriza por pruebas de cognición, medidas de función global, y actividades de la vida diaria, y comportamiento. Típicamente, los beneficios cognitivos se miden con pruebas de cognición diseñadas para medir declive cognitivo en un paciente o grupo de pacientes. Ejemplos de tales pruebas incluyen pruebas de cognición como ADAS-cog (Escala de Valoración de la enfermedad de Alzheimer, subescala cognitiva) y el M SE (mini-exámen de estado mental) ; pruebas de comportamiento como el NPI (Inventario Neuropsiquiátrico) ; pruebas de actividades de la vida diaria como la ADCS- ADL (Estudio Cooperativo de la Enfermedad de Alzheimer- Actividades de la Vida Diaria) ; y pruebas de función global tales como la CIBIC-plus (Impresión Basada en Entrevista Clínica de Cambio), y suma de CDR de cajas (índice de Demencia Clínica) .

"Periodos de tiempo prolongados" como se usan en el presente documento quieren decir periodo de 24 horas o más, típicamente 24 a 76 h.

"Tasa de retención - selectiva alta" o "retención selectiva alta" como se usan en el presente documento quiere decir que el fármaco o compuesto se retiene en un tejido u órgano, específicamente el cerebro, a un nivel más alto que el que se encuentra en otros tejidos y órganos, especialmente el hígado, como se mide a un periodo de tiempo prolongado tras administrar dosis. Más particularmente como se define en el presente documento, una tasa de retención selectiva alta quiere decir que la concentración de fármaco en el cerebro a es 4 o más veces la que se encuentra en el hígado a 24 o más horas tras administrar dosis) , más preferiblemente un factor de al menos 6 ó más, y lo más preferiblemente a un factor de 8 o más a 24 horas o más tras administrar dosis. En valorar si un compuesto o fármaco satisface este estándar o retención selectiva de cerebro/hígado alta (por ejemplo, como se enumera en las reivindicaciones en el presente documento) , los estudios que no se realizan en seres humanos deben ser tenidos en cuenta ya que el tejido del cerebro humano no se puede analizar para valorar la concentración de fármaco.

"Impacto o enfermedad subyacente" quiere decir un incremento en una medida de los biomarcadores y otros parámetros asociados con la progresión de la enfermedad, incluyendo marcadores bioquímicos en CSF o plasma, cambios en volumen cerebral, cambios en función cerebral como se miden mediante formación de imágenes funcionales, y cambios en histopatología o bioquímica que pueden observarse después de la autopsia. Biomarcadores típicos que se pueden usar para ensayos clínicos de AD incluyen analitos medidos en CSF tales como Tau, fosfo Tau, beta-amiliode , e isoprostanos , así como modalidades de formación de imágenes cerebrales tales como PET de fluorodesoxiglucosa y MRI volumétrica. Biomarcadores adicionales que pueden ser potencialmente útiles, particularmente aquellos que examinan la actividad sináptica, integridad/función de MT, y estrés oxidativo incluyen, pero no se limitan a: GABA, neuropéptido Y, alfa-sinucleína, neuregranina y péptido intestinal vasoactivo, tubulina, fragmentos de Tau, proteínas ubiquitinadas , formas solubles de proteína precursora amiloide, cromogranina B, 4-hidroxi-nonenal, nitrotirosina, y 8-hidroxi-desoxiguanidina .

"Intermitente" cuando se usa con referencia a un programa de administración de dosis quiere decir que hay interrupciones en el programa de administración de dosis que son irregulares. Por ejemplo, un programa de administración de dosis diario, semanal, bisemanal, o mensual no se considera intermitente bajo esta definición, debido a que la interrupción entre dosis es en cada caso regular y definida por el ciclo de dosis de administración del fármaco. Sin embargo, un programa de administración de dosis más elaborado con una o más interrupciones irregulares se consideraría intermitente, tal como 5 días sí, seguidos de 2 días no; o una dosis administrada en los días 1, 8 y 15, de un ciclo de 30 días, y así sucesivamente.

"Semivida larga", o "semivida cerebral larga" como se usa en el presente documento quiere decir que un fármaco que tiene una semivida de 20 o más horas tras administrar dosis (lo que se considera independiente de dosis) , y más preferiblemente, durante una periodo de 30 o más horas tras administrar dosis, y más preferiblemente, durante un periodo de 40 o más horas tras administrar dosis. Como con las velocidades de retención selectivas, hay que tener en cuenta estudios in vivo no humanos en valorar si el compuesto tiene una semivida cerebral larga.

"Dosis baja" como se usa en el presente documento quiere decir una dosis del compuesto de epotilona D que es significativamente menos que aquel administrado para lograr efectos quimioterapéuticos (por ejemplo, dado un modo particular de administración, ensayo clínico, y/o experimento) , preferiblemente una dosis que es 10 veces o menos que la dosis quimioterapéutica, más preferiblemente una dosis que es 50 veces o más menor, e incluso preferiblemente una dosis que es 100 veces o más de 100 veces menor que la dosis quimioterapéutica, es decir, aquella previamente valorada como terapéuticamente efectiva usando el mismo procedimiento de administración para el experimento, estudio o ensayo dado. Por ejemplo, en ensayos clínicos de Fase II de epotilona D, una dosis administrada fue administrada a 100 mg/m2 como una infusión de 90 minutos una vez a la semana durante tres semanas cada cuatro semanas (3 semanas sí, una semana no) , para un total acumulativo de 300 mg/m2 administrado cada 4 semanas. Una dosis baja en relación a esta dosis de ensayo clínico, como se define en el presente documento, querría decir una dosis de un mes acumulativa tras la administración IV de 30 mg/m2 o menos, más preferiblemente una dosis de 6 mg/m2 o menos, e incluso más preferiblemente una dosis de 3 mg/m2 o menos. Así, como un ejemplo alternativo, una dosis baja según se compara con la dosis de ensayo clínico anterior cuando se administra una vez cada 4 semanas sería una dosis de 30 mg/m2, más preferiblemente una dosis de 6 mg/m2, e incluso más preferiblemente una dosis de 3 mg/m2. Dado que la biodisponibilidad puede cambiar dependiendo del modo de administración (por ejemplo, administración oral frente a administración IV, con biodisponibilidad menor lograda en administración oral) , las dosificaciones relativas (es decir, valoración si una dosis dada es una "dosis baja" como se define en el presente documento) , se basaría en una comparación que implicaría el mismo modo o modos similares de administración.

"Paciente en necesidad de tratamiento" como se usa en el presente documento se desea que incluya uso de epotilona D para un paciente 1) ya diagnosticado con una enfermedad asociada a Tau (incluyendo una tauopatía, particularmente AD) en cualquier fase clínica incluyendo pacientes que tienen trastorno cognitivo suave a demencia avanzada; y/o 2) que tiene síntomas tempranos o prodrómicos y signos de una enfermedad asociada a Tau (incluyendo una tauopatía, particularmente AD) ; y/o 3) que se ha diagnosticado como susceptible a una enfermedad asociada a Tau (incluyendo una tauopatía, particularmente AD) , debido a edad, factores hereditarios, u otros factores para quien se recomienda médicamente un curso de tratamiento para retrasar la aparición o evolución o agravamiento o deterioro de los síntomas o signos de la enfermedad.

"Beneficios cognitivos estadísticamente significativos" quieren decir que hay beneficios cognitivos (por ejemplo, mejora o la disminución en declive de la función cognitiva) , tras un periodo de 6 meses a un año de tratamiento para al menos el 10% o más de . los pacientes evaluados, más preferiblemente al menos el 25% o más pacientes, e incluso más preferiblemente, 50% o más del grupo de pacientes. Preferiblemente, la mejora a una velocidad comparada con un grupo control se evalúa y refleja una mejora de al menos el 10% (por ejemplo, como se evalúa en base a registros de pruebas comparativas entre placebo y control, en la que "mejora" se desea para incluir reducción en declive en una afección de paciente) , más preferiblemente, se observa mejora a una velocidad de más del 25% o más, y lo más preferiblemente, a una velocidad del 35% o más.

"Enfermedad asociada a Tau" como se define en el presente documento quiere decir enfermedades asociadas con anormalidades en Tau así como enfermedades que son "tauopatías" . Las enfermedades asociadas a Tau incluyen, pero no se limitan a, demencia frontotemporal , incluyendo el subtipo de demencia frontotemporal conocido como Parkinsonismo ligado al cromosoma 17 (FTDP-17) , parálisis supranuclear progresiva, degeneración corticobasal , enfermedad de Pick, enfermedad argirofílica granulosa, así como enfermedad de Parkinson, síndrome de Down, Parkinsonismo post-encefálico, distrofia miotónica, enfermedad de Niemann- Pick C, demencia pugilística, enfermedad de Blint, una enfermedad priónica, esclerosis lateral amiotrófica, complejo de Parkinsonismo-demencia de Guam, esclerosis múltiple, glaucoma, retinopatía diabética, y daño cerebral traumático; así como enfermedad de Huntington, demencia de cuerpos de Lewy, enfermedad de Charcot-Marie-Tooth, paraplejia espástica hereditaria, y' atrofia de sistemas múltiples.

"Tauopatía" como se define en el presente documento quiere decir una enfermedad neurodegenarativa asociada con formas fibrilares de proteína Tau (marañas) en cerebro. Estas enfermedades incluyen AD sin embargo, otras tauopatías incluyen, pero no se limitan a, demencia frontotemporal , incluyendo el subtipo de demencia frontotemporal conocido como Parkinsonismo ligado al cromosoma 17 (FTDP-17) , parálisis supranuclear progresiva, degeneración corticobasal , enfermedad de Pick, y enfermedad argirofílica granulosa.

"Cantidad terapéuticamente efectiva de epotilona D" quiere decir una cantidad de epotilona D suficiente para (1) mitigar o aliviar al menos un síntoma de una enfermedad asociada a Tau (preferiblemente, una tauopatía, y más preferiblemente AD) , incluyendo funciones cognitivas tales como demencia, pérdida de memoria, comprensión reducida, destreza en llevar a cabo actividades de la vida diaria, y/o efectos mediados centralmente tales como, déficits motores y visión; y/o (2) revertir, reducir, evitar, inhibir, o retardar la aparición o agravamiento de la pérdida de función cognitiva asociada con una enfermedad asociada a Tau (preferiblemente, una tauopatía, y más preferiblemente AD) , y/o revertir, reducir, evitar, inhibir, o retardar la aparición o agravamiento de uno o más efectos mediados centralmente de la enfermedad, incluyendo déficits motores, visión, y así sucesivamente. En modalidades preferidas de la invención, el compuesto farmacéutico de la epotilona D es terapéuticamente efectivo no sólo en mitigar o aliviar los síntomas enfermedad asociada a Tau (preferiblemente, una tauopatía, y más preferiblemente AD) , sino que también es efectivo teniendo un impacto sobre la enfermedad subyacente (es decir, como se definió anteriormente) .

Modalidades Alternativas de la Invención Los presentes inventores han encontrado que la epotilona D, administrada para el tratamiento de una enfermedad asociada a Tau logra un nivel sorprendente de penetración cerebral, semivida cerebral larga, y retención selectiva, particularmente en comparación con otros estabilizadores de microtúbulos . Los inventores han descubierto adicionalmente que remarcablemente, efectos terapéuticos incrementados en tratar enfermedades asociadas a Tau, (particularmente tauopatías, y más particularmente AD) , se logran con dosis bajas de epotilona D. Como tal, se puede administrar una dosificación relativamente baja de epotilona D para tratamiento efectivo de una enfermedad asociada a Tau, preferiblemente AD . Los inventores han desarrollado así un procedimiento de tratar la enfermedad de Alzheimer empleando la administración de epotilona D a un paciente que tiene AD. El procedimiento se espera que sea terapéuticamente efectivo en tratar AD en pacientes humanos mientras que también plantea menos efectos secundarios o significativamente menos serios, comparados con los efectos secundarios que tienen lugar típicamente cuando los estabilizadores de microtúbulos se administran a pacientes humanos para quimioterapia. Tales efectos secundarios que se reducen o eliminan pueden incluir uno o más de aflicción gastrointestinal (incluyendo, sin limitación, náuseas, diarrea, estomatitis/mucositis , vómitos, anorexia, estreñimiento, y/o dolor abdominal), toxicidad hepática, neutropenia, leucopenia, mielosupresión, alopecia, mialgia/artralgia , fatiga, dolor musculoesquelético, trastornos de las uñas, pirexia, dolor de cabeza, exfoliación de la piel, y/o efectos neurosensores a diversos niveles de grado .

De acuerdo con una modalidad alternativa de la invención, se proporciona un procedimiento de tratar la enfermedad de Alzheimer que comprende la etapa de administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de epotilona D a un paciente, en la que el compuesto de epotilona D tiene dos o más propiedades seleccionadas de buena penetración cerebral, una semivida cerebral larga, y una tasa de retención altamente selectiva, como se define en el presente documento, más preferiblemente, donde la epotilona D demuestra todas las tres propiedades de buena penetración cerebral, semivida cerebral larga, y una tasa de retención altamente selectiva, como se definen estos términos en el presente documento.

De acuerdo con otra modalidad de la invención, se proporciona un procedimiento de tratar la enfermedad de Alzheimer que comprende la etapa de administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de epotilona D a un paciente, en el que el compuesto de la epotilona D tras la administración tiene propiedades seleccionadas de dos o más de: · penetración cerebral de 0.5 o mayor, más preferiblemente, 0.8 o mayor, lo más preferiblemente, 1 o mayor, como se mide a 20 min. a 1 h tras administrar dosis; y/o • una semivida cerebral de al menos 24 horas, y más preferiblemente, de al menos 30 h, y lo más preferiblemente de hasta 40 h o más; y/o • una tasa de retención selectiva de cerebro a hígado de al menos 4 a 24 horas o más tras administrar dosis, más preferiblemente a una velocidad de 6 o más a 24 horas o más, y lo más preferiblemente a un factor de 8 o. más a 24 o más h tras la dosificación. De acuerdo con otra modalidad de la invención, se proporciona un procedimiento de tratar la enfermedad de Alzheimer que comprende la etapa de administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de epotilona D a un paciente, en la que el compuesto epotilona D tras la administración tiene propiedades seleccionadas de entre las tres siguientes: • penetración cerebral de 0.5 o mayor, más preferiblemente, 0.8 o mayor, lo más preferiblemente, 1 o mayor, como se mide a 20 min. a 1 h tras administrar dosis; y/o • una semivida cerebral de al menos 24 horas, y más preferiblemente, de al menos 30 h, y lo más preferiblemente de hasta 40 h o más; y/o • una tasa de retención selectiva de cerebro a hígado de al menos 4 a 24 horas o más tras administrar dosis, más preferiblemente, a una velocidad de 6 o más a 24 horas o más, y lo más preferiblemente a un factor de 8 o más a 24 o más h tras la dosificación.

De acuerdo con otra modalidad de la invención, se proporciona un procedimiento de tratar la enfermedad de Alzheimer que comprende la etapa de administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de epotilona D a un paciente, en la que el procedimiento es terapéuticamente efectivo en tratar AD en el paciente sin causar efectos secundarios inducidos por fármacos y/o niveles de concentración de fármaco en plasma que requerirían interrumpir el uso del procedimiento.

De acuerdo con otra modalidad de la invención, se proporciona un procedimiento de tratar la enfermedad de Alzheimer que comprende la etapa de administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de epotilona D a un paciente, en la que el procedimiento proporciona beneficios cognitivos, más preferiblemente, beneficios cognitivos estadísticamente significativos, al tratar AD, sin causar efectos secundarios inducidos por fármacos . y/o niveles de concentración de fármaco en plasma que requerirían interrumpir el uso del procedimiento .

De acuerdo con otra modalidad de la invención, se proporciona un procedimiento de tratar la enfermedad de Alzheimer que . comprende la etapa de administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de epotilona D a un paciente, en la que el procedimiento tiene un impacto en la enfermedad subyacente, más preferiblemente un impacto estadísticamente significativo en la enfermedad subyacente, sin causar efectos secundarios inducidos por fármaco y/o niveles de concentración de fármaco en plasma que requerirían interrumpir el uso del procedimiento.

De acuerdo con otra modalidad de la invención, se proporciona un procedimiento de tratar la enfermedad de. Alzheimer que comprende la etapa de administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de epotilona D a un paciente, en la que el procedimiento tiene un impacto en enfermedades subyacentes, proporciona beneficios cognitivos, y/o es terapéuticamente efectivo de otra manera, sin causar efectos secundarios tales como efectos secundarios gastrointestinales, leucopenia, y/o neurotoxicidad, que requeriría el uso del procedimiento a interrumpirse.

De acuerdo con otra modalidad de la invención, se proporciona un procedimiento de tratar la enfermedad de Alzheimer que comprende la etapa de administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de epotilona D a un paciente, en la que la dosis de epotilona D es una dosis baja, como se define en el presente documento.

De acuerdo con otra modalidad de la invención se proporciona un método de tratamiento de la enfermedad de Alzheimer que comprende la etapa de administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de epotilona D a un paciente, en donde la dosis de epotilona D está entre 0.001-10 mg/m2, alternativamente, a una dosis entre 0.00003-0.3mpk, administrada por día, por semana o por ciclos de dosificación intermitentes .

De acuerdo con otra modalidad de la invención, se proporciona un procedimiento de tratar la enfermedad de Alzheimer que comprende la etapa de administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de epotilona D a un paciente, en la que la epotilona D se administra por vía IV, y la dosis de epotilona D durante un ciclo de administración de dosis mensual acumulativa (es decir, dosis total de compuesto administrada durante un ciclo de un mes, independientemente del programa, por ejemplo, semanalmente , bisemanalmente , 3 semanas sí, una semana no, etc.) está en el intervalo entre 0.001 - 5 mg/m2, más preferiblemente entre 0.01 - 5 mg/m2, incluso más preferiblemente entre 0.01 - 3 mg/m2, todavía incluso más preferiblemente entre 0.1 - 3 mg/m2, y lo más preferiblemente entre 0.1 - 1 mg/m2.

De acuerdo con otra modalidad de la invención, se proporciona un procedimiento de tratar la enfermedad de Alzheimer que comprende la etapa de administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de epotilona D a un paciente, en la que la epotilona D se administra oralmente, y la dosis de epotilona D calculada sobre una base diaria está en el intervalo entre 0.001-2 mg/m2, más preferiblemente entre 0.01 - 2 mg/m2, incluso más preferiblemente entre 0.1 - 2 mg/m2, todavía incluso más preferiblemente entre 0.2 - 2 mg/m2.

De acuerdo con otra modalidad de la invención, se proporciona un procedimiento de tratar la enfermedad de Alzheimer que comprende la etapa de administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de epotilona D a un paciente, en la que la epotilona D se administra oralmente, y la dosis de epotilona D para una base mensual acumulativa (es decir, dosis total de compuesto administrada durante un ciclo de un mes, independientemente del programa, por ejemplo, diariamente, semanalmente , bisemanalmente , etc.) está en el intervalo entre 0.03 - 60 mg/m2, más preferiblemente entre 0.30 - 60 mg/m2, incluso más preferiblemente entre 3 - 60 mg/m2, aún más preferiblemente entre 6 - 60 mg/m2.

De acuerdo con otra modalidad de la invención, se proporciona un procedimiento de tratar la enfermedad de Alzheimer que comprende la etapa de administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de epotilona D a un paciente, en la que la epotilona D se administra oralmente en un programa de administración de dosis seleccionado de una vez diariamente, una vez semanalmente , una vez cada dos semanas, o una vez al mes .

De acuerdo con otra modalidad de la invención, se proporciona un procedimiento de tratar la enfermedad de Alzheimer que comprende la etapa de administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de epotilona D a un paciente, en la que la epotilona D se administra oralmente en un programa de administración de dosis seleccionado de una vez diariamente, y en el que la dosis diaria de epotilona D está entre 0.2 a 2 mg/m2.

De acuerdo con otro aspecto de la invención, se proporcionan procedimientos de tratar otras tauopatías, además de AD, de acuerdo con una cualquiera de las modalidades de la invención enumeradas anteriormente. Por ejemplo, tales otras tauopatías pueden incluir una o más de las enfermedades referidas en la definición de "enfermedad asociada a tauopatía" en el presente documento. Por ejemplo, una modalidad preferida de la invención comprende el uso de epotilona D, de acuerdo con cualquiera de . las modalidades anteriores, para tratar no sólo AD sino también una enfermedad seleccionada de demencia frontotemporal , incluyendo el subtipo de demencia frontotemporal y el Parkinsonismo ligado al cromosoma 17 (FTDP-17) , parálisis supranuclear progresiva, degeneración corticobasal , enfermedad de Pick, y enfermedad argirofílica granulosa, enfermedad de Parkinson, síndrome de Down, parkinsonismo post-encefálico, distrofia miotónica, enfermedad de Niemann-Pick C, demencia pugilística, enfermedad de Blint, enfermedades priónicas, esclerosis lateral amiotrófica, complejo de parkinsonismo-demencia de Guam, esclerosis múltiple, glaucoma, retinopatía diabética, y daño cerebral traumático. Una modalidad preferida comprende el uso de epotilona D, de acuerdo con cualesquiera de los procedimientos descritos en el presente documento, para tratar una tauopatía, incluyendo, sin limitación, una enfermedad seleccionada de AD, demencia frontotemporal , incluyendo el subtipo de demencia frontotemporal conocido como Parkinsonismo ligado al cromosoma 17 (FTDP-17) , parálisis supranuclear progresiva, degeneración corticobasal, enfermedad de Pick, y enfermedad argirofílica granulosa.

De acuerdo con otra modalidad de la invención, se proporciona epotilona D, para usar en tratar una enfermedad asociada a Tau, más preferiblemente, una tauopatía, lo más preferiblemente AD.

Se contempla que cada uno de los procedimientos inventivos anteriores también pueden combinarse con uno o más procedimientos inventivos diferentes, y todas las diversas combinaciones anteriores de los procedimientos inventivos anteriores se pueden combinar con uno o más de los otros procedimientos inventivos, y todas las diversas combinaciones de los procedimientos inventivos anteriores se contemplan también en el presente documento. Por ejemplo, una combinación de los procedimientos inventivos anteriores pueden comprender un procedimiento de tratar la enfermedad de Alzheimer que comprende la etapa de administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de epotilona D a un paciente, en el que el procedimiento es terapéuticamente efectivo en tratar AD en el paciente sin causar efectos secundarios inducidos por fármacos y/o niveles de concentración de fármacos en plasma que requerirían interrumpir el uso del procedimiento; y en donde la dosis de epotilona D es una dosis mensual acumulativa de entre 0.001 - 5 mg/m2, administrada por vía IV; y/o en el que la dosis de epotilona D está entre 0.001 y 2 mg/m2, administrada PO diariamente; y/o en el que la dosis de epotilona D se selecciona de una dosis dentro de uno cualquiera de los intervalos preferidos expresados anteriormente para administración oral o para administración IV.

También se contempla que cualquiera de los métodos descritos puedan combinarse con la modalidad, involucrando la epotilona D, para uso en tratamiento de una tauopatía, preferiblemente AD, en un paciente humano. Así por ejemplo, una modalidad de la invención que comprenda una combinación de las modalidades alternativas anteiores, comprendería epotilona D para tratar AD, en donde el uso es terapéuticamente efectivo al tratar AD, en donde la epotilona D se administra al paciente en una dosis entre 0.001-10 mg/m2, o alternativamente, a una dosis entre 0.00003-0.3 mpk, administrada por día, por semana o por ciclo de dosificación intermitente. Aún otra modalidad comprendería epitilona D, para tratar una -tauopatía, particularmente AD, en donde la epitilona D se administra a un paciente humano en una dosis baja y es terapéuticamente efectivo para suscitar un impacto en una enfermedad subyacente y/o para proporcionar beneficios cognitivos .

De acuerdo con otra modalidad de la invención, se proporciona una formulación farmacéutica que comprende epotilona D adecuada para administración a un paciente humano en necesidad de tratamiento para una enfermedad asociada a Tau, preferiblemente Tauopatía, más preferiblemente AD, en el que administración de la formulación es terapéuticamente efectiva en tratar AD en el paciente sin causar efectos secundarios inducidos por el fármaco y/o niveles de concentración de fármaco en plasma que requerirían interrumpir el uso de la formulación de epotilona.

De acuerdo con aún otra modalidad de la invención, se proporciona una formulación farmacéutica que comprende epotilona D adecuada para administración adecuada a un paciente humano para tratar una enfermedad asociada a Tau, preferiblemente Tauopatía, más preferiblemente AD, en la que la administración de la formulación proporciona beneficios cognitivos significativos estadísticamente en tratar AD, sin causar efectos secundarios inducidos por fármacos y/o niveles de concentración de fármacos en plasma que requerirían interrumpir el uso de la formulación de epotilona D.

De acuerdo con aún otra modalidad de la invención, se proporciona una formulación farmacéutica que comprende epotilona D adecuada para administración adecuada a un paciente humano para tratar una enfermedad asociada a Tau, preferiblemente taupatía, más preferiblemente AD, en la que la formulación es efectiva en proporcionar un impacto sobre la enfermedad subyacente, sin causar efectos secundarios inducidos por fármaco y/o niveles de concentración de fármaco en plasma que requerirían interrumpir el uso de la formulación de epotilona D.

De acuerdo con aún otra modalidad de la invención, se proporciona una formulación farmacéutica adecuada para administración a un paciente humano para tratar una enfermedad asociada a Tau, preferiblemente taupatía, más preferiblemente AD, en las que la formulación comprende una unidad de dosificación de epotilona D de entre 0.0001 - 10 mg/m2, más preferiblemente entre 0.001 - 5 mg/m2, más preferiblemente entre 0.001 - 3 mg/m2, incluso más preferiblemente entre 0.001 - 1 mg/m2, y los más preferiblemente entre 0.001 - 0.5 mg/m2.

De acuerdo con aún otra modalidad de la invención, se proporciona una formulación farmacéutica para administración IV a un paciente humano, en la que la formulación es adecuada para administrar una dosis mensual acumulativa de epotilona D en el intervalo entre 0.001-5 mg/m2, más preferiblemente entre 0.01-5 mg/m2, incluso más preferiblemente entre 0.01-3 mg/m2, aún incluso más preferiblemente entre 0.1-3 mg/m2, y lo más preferiblementre entre 0.1-1 mg/m2.

De acuerdo con aún otra modalidad de la invención, se proporciona una formulación farmacéutica para administración oral a un paciente humano, en la que la formulación es adecuada para administrar una dosis mensual acumulativa de epotilona D en el intervalo entre 0.03-60 mg/m2, más preferiblemente entre 0.30-60 mg/m2, incluso más preferiblemente entre 3-60 mg/m2, aún incluso más preferiblemente entre 6-60 mg/m2. .

De acuerdo con aún otra modalidad de la invención, se proporciona una formulación f rmacéutica para administración oral a un paciente humano, en la que la formulación comprende epotilona D en un sistema disolvente farmacéuticamente aceptable que comprende de aproximadamente 0 a 50% de propilenoglicol , aproximadamente 1 a 10% de TPGS, aproximadamente 0.5 a 10% de etanol, aproximadamente 0-90% de agua, y/o aproximadamente 5 al 85% de PEG tal como PEG-400.

Las combinaciones de cada una de las formulaciones farmacéuticas inventivas se contemplan también en el presente documento.

UTILIDAD Tauopatías Las tauopatías son enfermedades neurodegenerativas asociadas con formas anormales de la proteína Tau en el tejido cerebral. La enfermedad de Alzheimer (AD) fue la primera enfermedad neurodegenerativa en identificarse como que implica disfunción de Tau. En particular, se encontró que las marañas neurofibrilares - la presencia de las cuales es una de las patologías características de AD - contenían formas fibrilares, hiperfosforiladas , formas conformacionalmente alteradas de la proteína Tau. Subsiguientemente, se identificaron otras tauopatías incluyendo demencia frontotemporal y Parkinsonismo ligadas a cromosoma 17 (FTDP-17) , parálisis supranuclear progresiva, degeneración corticobasal , enfermedad de Pick, y enfermedad de granos argirófilos. Además, se ha asociado un enlace con las anormalidades de Tau (incluyendo Tau hiperfosforilado, agregados de Tau, y/o una asociación con el haplotipo Hl/HITau) con enfermedad de Parkinson, síndrome de Down, Parkinsonismo post-encefálico, distrofia miotónica, enfermedad de Niemann-Pick C, demencia pugilística, enfermedad de Blint, enfermedades priónicas, esclerosis lateral amiotrófica, complejo de Parkinsonismo-demencia de Guam, esclerosis múltiple, glaucoma, retinopatía diabética y daño cerebral traumático (Avila y col. 2004; Bartosik-Psuj ek y Stelmasiak 2006; Dickey y Petrucelli 2006; Wostyn, Audenaert y col. 2008).

Tau es una proteína de 50 a 75 kDa asociada a microtúbulos (MAP, por sus siglas en inglés) que une y estabiliza microtúbulos (MTs) . Hay seis variantes de secuencia primaria de Tau, y estas variantes están formadas mediante ayuste alternativo (Lace y col. 2007) . Las variantes de ayuste contienen cero, uno o dos (0N, 1N, o 2N) insertos N-terminales en combinación con bien tres repeticiones (3R) o bien cuatro repeticiones (4R) de un dominio de unión a microtúbulos. Los dominios repetidos son necesarios para estabilización de microtúbulos, mientras que las regiones ricas en prolina en cada lado de los dominios repetidos son necesarias para unir los microtúbulos (Preuss y col. 1997). Los dominios repetidos y las regiones ricas en prolina están fosforiladas con cinasas múltiples, conduciendo a disociación de Tau a partir de microtúbulos. El extremo N- terminal de Tau se extiende a partir de la superficie de microtúbulos , donde se cree que ayuda en determinar el espaciamiento entre microtúbulos y en la unión de la proteína motora dinactina a los microtúbulos (Magnani y col. 2007) . En células normales, hay niveles aproximadamente iguales de 3R Tau y 4R Tau presentes. 4R Tau se une más estrechamente a microtúbulos de lo que lo hace 3R Tau.

Tau es la más abundante en neuronas, y se localiza predominantemente en axones . Tau, es la proteína asociada a microtúbulos predominante en axones neuronales, mientras que la familia MAPI está ampliamente distribuida en neuronas, y la familia MAP2 es predominantemente somatodendrítica . Tau estabiliza microtúbulos axonales, facilitando por lo tanto el transporte de proteínas, orgánulós, lípidos, componentes celulares marcados para degradación, y moléculas de señalización celular bi-direccionalmente entre el cuerpo celular y los terminales sinápticos. La disfunción de Tau podría interferir con el tráfico axonal y por lo tanto afectar la función neuronal y la supervivencia neuronal . El gen de Tau puede desactivarse en ratones con consecuencias leves, pero si ambos genes Tau y MAP IB se retiran, el resultado es letalidad embrionaria. . Parece que alteraciones en la expresión de algunas MAP puede sustituirse unas a otras en muchos casos, incluyendo desarrollo (Avila y col. 2004) .

En algunos casos, las mutaciones en el gen que codifica Tau (algunas veces llamado MAPT) causan tauopatías, en particular en FTDP-17 y otras demencias frontotemporales . Muchas mutaciones de FTDP-17 disminuyen la unión a microtúbulos in vitro y/o incrementan su propensión a formar fibrillas (Lace y col. 2007). Otras mutaciones asociadas con tauopatía alteran el patrón de ayuste de Tau para generar predominantemente 3R o 4R Tau. Aún otra clase de mutaciones de Tau en el extremo N-terminal alteran la capacidad de unir a dinactina (Magnani y col. 2007) . Todas estas mutaciones tienen el potencial para interferir con funciones normales de Tau. En el caso de AD, se piensa que ß-amiloide (?ß) conduce a anormalidades en Tau.

Aunque marañas y otros agregados de Tau son una característica patológica de tauopatías, varias líneas de evidencias sugieren que alguna otra forma de Tau anormal soluble, menos obvia es neurotóxica. Los datos que sugieren que el agregado de Tau en marañas neurofibrilares no es directamente patógeno incluyen observaciones de cerebros humanos y modelos de ratones. Por ejemplo, el examen de diferentes regiones y etapas de la enfermedad de cerebros afectados de la enfermedad de Alzheimer ha conducido a la conclusión de que las neuronas pueden sobrevivir y funcionar con marañas neurofibrilares durante décadas (Morsch y col. 1999) . Asimismo, los ratones transgénicos de Tau humana (hTau) tienen marañas y neurodegeneración grave, pero las neuronas con marañas no muestran signos selectivos de aflicción y son demasiado pocas en número para dar cuenta de la pérdida espectacular en neuronas observada en este modelo (Andorfer y col. 2005). Tg4510, una línea transgénica de Tau inducible, muestra formación de marañas espectacular y rápida, neurodegeneración, y déficits del comportamiento cuando se induce Tau-P301L (Santacruz y col. 2005). Cuando se reprime la expresión de Tau-P301L, se reducen grandemente la neurodegeneración y los déficits cognitivos, pero la formación de marañas continua. Estudios adicionales usando estos ratones muestran que los multímeros solubles de Tau correlacionan con déficits cognitivos. Se observaron también multímeros de Tau similares en FTDP-17 y en tejido cerebral de AD (Berger y col. 2007) . Finalmente, se obtuvo evidencia de Tau no fibrilar que estaba implicado en- déficits del comportamiento en AD usando ratones transgénicos que sobreexpresaban una forma mutante de proteína precursora de ß-amiloide (APP) (Roberson y col. 2007). Cuando estos ratones APP se cruzaron con ratones de Tau inactivado se formaron placas amiloides, pero se evitaron los déficits de comportamiento y las anormalidades sinápticas. En esta línea APP, no pudieron detectarse anormalidades de Tau en presencia de déficits sinápticos y déficits de comportamiento. Tomados conjuntamente, estos estudios muestran que una forma soluble, no identificada de Tau anormal es probablemente la especie neurotóxica.

Estabilización de Microtubulos para Tratamiento de Tauopatías Hay dos hipótesis principales para el papel de Tau en la enfermedad neurodegenerativa. Una hipótesis propone que las formas anormales de Tau trastornan la función celular, mientras que la otra hipótesis propone que la pérdida de Tau funcional conduce a la desestabilización de los microtúbulos . (Avila y col. 2004; Lace y col. 2007) . Es en base a la segunda hipótesis que se han sugerido los estabilizadores de microtúbulos como terapia para tratar tauopatías (Lee y col. 1994; Patente de los EE.UU. N.°: 5.580.898). Las disrupciones inapropiadas en tráfico axonal se han implicado en un número de enfermedades además de aquellas identificadas con anormalidades en Tau. Éstas incluyen enfermedad de Huntington, demencia de cuerpos de Lewy, enfermedad de Charcot-Marie-Tooth, paraplejia espástica hereditaria, y atrofia de múltiples sistemas (Roy y col. 2005).

Para poner a prueba si los estabilizadores de microtúbulos podrían beneficiar a los ratones que sobreexpresan Tau, los ratones transgénicos PrP T44 Tau se trataron con paclitaxel (Zhang y col. 2005) . Los ratones PrP T44 sobreexpresan 0N3R Tau humana normal en neuronas de la médula espinal y consecuentemente desarrollan déficits motores debidos a la sobreexpresión de Tau. El tratamiento de paclitaxel durante 3 meses redujo la disfunción motora e incrementó los números de microtúbulos y el transporte axonal en las raíces ventrales- fuera de la médula espinal . Aunque paclitaxel no es penetrante en el SNC, fue capaz de influir a los axones eferentes de neuronas en el cuerno ventral de la médula espinal. ' Interesantemente, la patología de Tau en este modelo (esferoides) no estaba afectada. Aunque este modelo no muestre pérdida neuronal, el efecto de los estabilizadores de microtúbulos en supervivencia neuronal podría no valorarse. Adicionalmente , no está claro si los beneficios motores observados en la tauopatía de la médula espinal podrían traducirse en beneficios cognitivos en una tauopatía cortical-hipocámpica . Por ejemplo, se observaron resultados opuestos con el cruce de dos líneas de ratones transgénicas de tauopatía diferentes para ratones transgénicos que sobreexpresan de glucógeno sintasa cinasa 3 (Gsk3) . En el modelo de tauopatía de médula espinal, los animales bigénicos Tau-Gsk3 tenían patología reducida, mientras que en el modelo de tauopatía del cerebro anterior, los animales bigénicos Tau-Gsk3 mostraron patología incrementada (Spittaels y col. 2000; Terwel y col. 2008).

La estabilización de microtúbulos se ha ofrecido como una explicación para los efectos de NAP, un péptido de secuencia NAPVSIPQ, en varios modelos animales. En particular, NAP - tiene actividades neurotróficas , antiinflamatorias, antiapoptósicas , y neuroprotectoras en muchos modelos celulares y en muchos modelos in vivo, incluyendo oclusión arterial cerebral medial (modelo de infarto) , trauma encefálico, lesiones colinotóxicas , envejecimiento, y defectos en el desarrollo en el síndrome alcohólico fetal y ratones deficientes en apolipoproteína E (Gozes y Spivak-Pohis 2006; Gozes 2007). Como para tauopatías, la administración de NAP durante 3 ó 6 meses se muestra que reduce niveles de ?ß, Tau hiperfosforilado, y Tau insoluble de sarcosilo mientras que incrementa Tau soluble en ratones 3xTg (Matsuoka y col. 2007; Matsuoka y col. 2008). Los ratones 3xTg sobreexpresan APP y Tau-P301L . (Oddo y col. 2003) . El mecanismo de actividad de NAP no está totalmente definido, pero hay evidencia, en base a unión a una columna de afinidad a NAP y a efectos en formación de microtúbulos y/o en estabilización de microtúbulos en neuronas cultivadas que unen NAP en los microtúbulos (Divinski y col. 2006) . NAP se conoce también por inhibir la agregación de ?ß, de tal forma que pueda actuar corriente arriba de Tau en el modelo de 3xTg. No es probable que NAP actúe como un agente estabilizador de microtúbulos típico, ya que es capaz de proteger contra neuropatía periférica inducida por paclitaxel en ratas (documento US 2006/0247168 Al) . Cuando los agentes estabilizadores de microtúbulos, tales como paclitaxel, se administran a dosis altas, quimioterapéuticas, tiene lugar a menudo una neuropatía periférica (Postma y col. 1999) que se cree que resulta de la sobreestabilización y empaquetamiento de microtúbulos en nervios periféricos. Dado que NAP evita la neuropatía periférica inducida por paclitaxel en ratas, es poco probable que paclitaxel y NAP actúen a través de mecanismos idénticos.

Hay también sugerencias de que los estabilizadores de microtúbulos podrían tener efectos neuroprotectores no relacionados con la disfunción de Tau obvia. Los compuestos estabilizadores de microtúbulos protegen neuronas cultivadas de múltiples agresiones tóxicas, incluyendo ?ß42, estrés oxidativo de ?ß40 soluble, disrupción lisosómica, toxicidad inducida por calcio, y toxicidad inducida por glutamato (Burke y col. 1994; Furukawa 1995; Sponne, Fifre y col. 2003; Michaelis y col. 2005; Butler y col. 2007). Se supone que los microtúbulos juegan un papel clave no sólo en mecanismos de transporte, sino también en la regulación de señalización celular, en particular señalización de calcio, posiblemente a través de unión de complejos de señalización macromolecular en la vecindad de la membrana plasmática (Michaelis y col. 2005) . Se ha demostrado también que los agentes estabilizadores de microtúbulos potencian la función mitocondrial reduciendo la generación de especies de oxígeno reactivas e incrementando la expresión de los genes de fosforilación oxidativa implicados en la producción de ATP (Wagner y col, 2008). Los agentes estabilizadores de microtúbulos se conocen también por influir ampliamente la señalización celular durante la disgregación del huso mitótico en las células cancerosas (Bergstralh y Ting 2006) . Estabilizadores de Microtúbulos que Penetran en el Cerebro La diana terapéutica de estabilizadores de microtúbulos para tauopatías y otras enfermedades neurodegenerativas es los microtúbulos en el cerebro. Sin embargo, los estabilizadores de microtúbulos pueden causar toxicidad para tejidos periféricos, tal como inhibición de proliferación celular, particularmente en el tracto gastrointestinal y en las células hematopoyéticas , y neuropatía periférica. Se desea así altamente identificar estabilizadores de microtúbulos con penetración cerebral excelente y retención selectiva, en el cerebro excelente comparada con tejidos periféricos, tal como para maximizar el índice terapéutico para tauopatías y otras enfermedades neurodegenerativas. La capacidad de los compuestos para unirse con una semivida más larga al tejido cerebral en relación a los tejidos periféricos es una propiedad altamente deseada.

Las series de taxano de estabilizadores de microtúbulos son sustratos de vehículos de resistencia a multifármacos múltiples, tales como P-glicoproteína (PGP) , cásete de unión a ATP, proteína de resistencia a multifármacos , y proteína de resistencia a cáncer de mama. Estos vehículos de resistencia a multifármacos evitan que se acumulen compuestos en tejido tumoral y tejido cerebral. Múltiples laboratorios han trabajado para sintetizar taxanos que no son sustratos para vehículos de resistencia a multi-fármacos , en particular PGP, con éxito limitado (Minderman y col. 2004; Rice y col. 2005; Ballatore y col. 2007). Se ha intentado también la coadministración de un inhibidor de PGP con paclitaxel (Fellner y col. 2002) . Estos esfuerzos han mostrado resultados de alguna entrada de taxano en el cerebro, logrando, por ejemplo, aproximadamente 1/30 de los niveles de paclitaxel en el cerebro como en el riñon con un inhibidor de PGP, o niveles cerebrales en el intervalo µ? con KU-237, pero sólo durante 4 horas después de administración (Michaelis 2006) . Así, el uso de los inhibidores de PGP no es un procedimiento atractivo para incrementar la penetración cerebral de taxanos.

Procedimientos de Preparación y Formulaciones La epotilona D es un compuesto conocido que se ha sintetizado químicamente de novo y se ha aislado a partir de fermentaciones de cepas de S. cellulosum como productos secundarios en la fermentación de S. cellulosum. La síntesis total de epotilona B se muestra en la Patente de los Estados Unidos N.°: 6.242.469 cedida a Danishefsky, y col., y procedimientos adicionales para preparar epotilona D y otros compuestos de epotilona pueden encontrarse en la Patente de los EE.UU. N.°: 6,204,388, Patente de los EE.UU. N.°: 6,288,237, Patente de los EE.UU. N.°: 6,303,342, documentos O 03/072730, US 6,410,301; US 2002/0137152A1 ; US6,867,333, Publicación de Solicitud de Pat . de los EE.UU. N. ° : 2006/004065, cada uno de los cuales está incorporado en el presente documento mediante referencia. Los procedimientos sintéticos para elaborar epotilona D se han caracterizado como no prácticos para desarrollo farmacéutico de escala total. Un procedimiento alternativo de preparación es comprometerse en fermentación a gran escala de epotilona B, por ejemplo, como se describe en la Patente de los Estados Unidos 7,172,884B2, con uso de cepas mejoradas diseñadas para proporcionar rendimientos relativamente grandes de epotilona B, y la epotilona B puede desoxidarse para proporcionar epotilona D. Los procedimientos de desepoxidación se conocen bien pero pueden encontrarse también en la Patente de los Estados Unidos 6.965.034 (documento WO 99/43653), cedida a Danishefsky y col., particularmente como se aplica a epotilona D.

Se exponen procedimientos adicionales para fabricar epotilona D en las Patentes de los Estados Unidos 6.998.256B2 y US 7,067,286, "Methods of Obtaining epotilona D using Crystallization and/or By the Culture of Cells in the Presence of Methyl Oléate", que describe la producción biosintética de epotilona D usando cepas de Myxococcus xanthus Klll-40-1 y Klll-72.4.4, y/o otras cepas recombinantes que se ha desarrollado por Kosan Biosciences Inc. (ahora BMS) , para mejorar la producción de epotilona D. Las condiciones de fermentación y purificación para fabricar epotilona D se exponen también en las Patentes de los Estados Unidos 6,998,256B2 y US 7,067,286, así como en las Patentes de los Estados Unidos 6,583,290, 6,858,411, 6,921,650, y 7,129,071, cada una de las cuales está cedida a Kosan (ahora BMS, el cesionario actual) , e incorporada en ,el presente documento mediante referencia. Véase también, Lau y Licari y col., Kosan Biosciences, "Optimizing the Heterologous Production of epotilona D in Myxococcus xanthus," Biotechnology & Bioengineering, vol. 78, n.°: 3, 05-mayo-02, en páginas 280-88.

Procedimientos aún adicionales que se pueden usar en fabricar epotilona D se ilustran en la Solicitud de Patente de los Estados Unidos de Números de Serie 12/118.432. Esta solicitud describe una combinación de etapas químicas y bioquímicas para preparar epotilonas tales como epotilona D. Por ejemplo, se proporcionan procedimientos en los que uno o más intermediarios que se pueden usar para síntesis de epotilona se obtienen a través de fermentación de células recombinantes, y después los intermediarios biosintetizados con uso de células recombinantes, descritos en el presente documento, se convierten en los compuestos de epotilona finales por medio de síntesis química.

La epotilona D usada en procedimientos de la presente invención se puede administrar a un paciente en diversas maneras conocidas en la técnica, típicamente mediante administración intravenosa, (IV) administración subcutánea, administración oral, y así sucesivamente. Por ejemplo, la epotilona D se puede formular con un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. Una composición farmacéutica que comprende epotilona D se puede¾ formular en una manera clásica usando vehículos sólidos o líquidos, diluyentes, y aditivos apropiados para el modo de administración deseado.

Las composiciones ejemplares para administración parenteral incluyen soluciones o suspensiones inyectables que pueden contener, por ejemplo, diluyentes o disolventes adecuados no tóxicos, parenteralmente aceptables, tales como manitol, 1 , 3 -butanodiol , agua, solución de Ringer, una solución de cloruro de sodio isotónica (Inyección de Cloruro de Sodio 0.9% [Solución Salina Normal] o Inyección de Dextrosa al 5%) , u otros agentes de dispersión adecuados o agentes humectantes y de suspensión adecuados, incluyendo mono o diglicéridos sintéticos, y ácidos grasos. Las composiciones farmacéuticamente aceptables y/o los procedimientos de administrar compuestos de la invención pueden incluir el uso de co-disolventes que incluyen, pero no se limitan a etanol, N, N-dimetilacetamida, propilenoglicol , glicerol y polietilenoglicoles , por ejemplo, polietilenoglicol 300 y/o polietilenoglicol 400. Se pueden usar tensioactivos (agentes de superficie farmacéuticamente aceptables) para incrementar las propiedades de extensión o humectantes de un compuesto reduciendo su tensión superficial, incluyendo sin limitación, succinato de d-a-tocoferil polietilenoglicol 1000 (TGPS) , CREMOPHOR®, SOLUTOL HS 15®, polisorbato 80, polisorbato 20, poloxámero, pirrolidonas tales como N-alquilpirrolidona (por ejemplo, N-metilpirrolidona) y/o polivinilpirrolidona; sin embargo, el uso de CREMAPHOR® tiene desventajas y no se prefiere. La formulación puede comprender también el uso de uno o más "amortiguadores" (por ejemplo, un ingrediente que confiere una capacidad para resistir cambios en la acidez o alcalinidad efectiva de un medio tras la adición de incrementos de un ácido o base) , incluyendo, sin limitación, fosfato de sodio, citrato de sodio, dietanolamina , trietanolamina, L-arginina, L-lisina, L-histidina, L-alanina, glicina, carbonato de sodio, trometamina (a/k/a tris [hidroximetil] aminometano o Tris), y/o mezclas de los mismos.

Las formulaciones para administrar compuestos de epotilona, incluyendo formulaciones que permiten el uso de tensioactivos no iónicos tales como CREMAPHOR®, se describen en la técnica previa. Por ejemplo, una formulación para usar en administración intravenosa que comprende una mezcla de propilenoglicol y etanol se describe en la Patente de los Estados Unidos 6.683.100. Las formulaciones adecuadas pueden comprender mezclas de polietilenoglicol/alcohol deshidratado, o propilenoglicol o glicerol/alcohol deshidratado. Por ejemplo, el documento WO 2006/105399 (PCT/US2006/011920) cedido a BMS, describe formulaciones que incluyen mezclas de aproximadamente 30 a 70 por ciento de volumen de alcohol deshidratado por cada 30 a 70 por ciento de volumen de PEG 300 y/o PEG 400, que se puede diluir con fluidos de infusión de solución salina o de dextrosa para administración IV, y puede aplicarse para usar en administrar epotilona D a pacientes por medio de administración IV. En tales formulaciones, se prefiere que la cantidad de etano se minimice para evitar efectos secundarios asociados con administración de etanol. Las razones óptimas de disolventes se pueden obtener fácilmente por alguien experto en el campo.

Las formulaciones adicionalmente preferidas diseñadas específicamente para administrar epotilona D y análogos se describen en la Patente de los Estados Unidos n. ° 7.091.193 (también publicada como documento US 2005/0148543) , cedida a Kosan (ahora BMS) . Esta patente describe una formulación en la que epotilona D y una hidroxipropil-beta-ciclodextrina se combinan en una solución de alcohol-agua que después se liofiliza. Las modalidades implican el uso de aproximadamente 10 mg de epotilona D y aproximadamente 0.4 g de hidroxipropil-beta-ciclodextrina combinada en una solución de terc-butanol-agua al 60% que se liofiliza después (los ingredientes se pueden reducir proporcionalmente para preparación de unidades de dosificación individuales, más bajas, de acuerdo con la invención actual). El ingrediente activo liofilizado "torta" puede reconstituirse después para administración IV, con usó de agua, etanol, y/o glicol, que pueden incluir propilenoglicol, polietilenoglicol 400, monooleato de polioxietilnosorbitán (vendido bajo el nombre comercial TWEEN 80), e hidrocarburos oxigenados relacionados. Se entiende que glicoles de diversas longitudes, de cadena y de diversos pesos moleculares (por ejemplo, polietilenoglicol 1000, otros compuestos de TWEEN) se pueden usar.

Como un ejemplo más específico, una formulación que se puede usar para suministrar epotilona D a un paciente de acuerdo con la invención puede comprender aproximadamente 0 al 50% de propilenglicol , aproximadamente 1 al 10% de TGPS, aproximadamente 0.5 al 10% de etanol, aproximadamente 0-90% de agua, y/o aproximadamente 5 al 85% de PEG tal como PEG-400. Más específicamente, una formulación puede comprender: propilenoglicol al 50%, TPGS al 10%, etanol al 10%, agua al 30%; o propilenoglicol al 10%, PEG-400 al 40%, TPGS al 5%, etanol al 5%, agua al 40% PEG-400 al 85%, TPGS al 10%, etanol al 5%; o PEG-400 al .8.5%, TPGS al 1%, etanol al 0.5%, agua al 90%; Un procedimiento preferido de administrar epotilona D de acuerdo con la invención implica administración oral. La Patente de los Estados Unidos 6.576.651 describe procedimientos para administración oral de epotilonas con uso de uno o más amortiguadores ácido-neutralizantes farmacéuticamente aceptables. Sin embargo, un procedimiento de administración preferido implicará el uso de un comprimido o cápsula, incluyendo un comprimido o cápsula sólida o cápsula fluida o cargada de gelatina. Se puede . preparar un comprimido sólido o' una cápsula sólida de epotilona D con uno o más recubrimientos entéricos. Los recubrimientos entéricos se han usado durante muchos años para detener la liberación de fármaco desde formas de dosificación ingeribles oralmente. Dependiendo de la composición y/o grosor, los recubrimientos entéricos son resistentes al ácido estomacal para periodos de tiempo requeridos antes de que empiecen a disgregarse y permitan liberación lenta del fármaco en el estómago inferior o en la parte superior del intestino delgado. Ejemplos de recubrimientos entéricos se describen en las Patentes de los Estados Unidos N.°s: .6,224,910, US 5,225,202, US 2,809,918, US 3,835,221, US 4,728,512 y US 4,794,001, cada una de las cuales se incorpora en el presente documento mediante referencia.

Un comprimido recubierto entéricamente dirigido al uso de epotilona D se describe en la Patente de Solicitud de los Estados Unidos de Número de Serie 11/281,834, incorporada en el presente documento mediante referencia, que se puede usar para formular comprimidos de cápsulas de epotilona para practicar la invención. Esta formulación implica el uso de una partícula de base inactivada, tal como una perla de azúcar, a la que se aplica el agente activo (es decir, epotilona D) , que e encapsula después mediante un polímero de recubrimiento entérico, y/o una o más capas de sub-recubrimiento . Las perlas se incluyen después dentro de una cápsula. Los recubrimientos entéricos para usar en formular comprimidos o cápsulas de epotilona D pueden incluir polímeros de recubrimiento entérico, tales como, por ejemplo, ftalato de hidroxipropilmetilcelulosa, ftalato de polivinilacetato, ftalato acetato de celulosa, copolímeros de ácido acrílico, y copolímeros de ácido metacrílico. Un ejemplo de un copolímero del ácido metacrílico que se puede usar para formar un recubrimiento entérico es Eudragit.TM. La dispersión de copolímero acuoso L-30-D 55, que comprende un copolímero aniónico derivado de ácido metacrílico y de acrilato de etilo con una razón de grupos carboxilo libres para los grupos de éster etílico de aproximadamente 1:1, y un peso molecular promedio de aproximadamente 250.000, que se suministra como una dispersión acuosa que contiene sólidos al 30% en peso. Eudragit.TM. La dispersión de copolímero acuoso L-30-D 55 se suministra por Rohm-Pharma Co. , Alemania.

Al preparar perlas de recubrimiento entérico para formar cápsulas de epotilona D, puede ser deseable incluir una o más capas de sub-recubrimiento que se sitúan entre el núcleo de la epotilona D y el recubrimiento entérico para minimizar el contacto entre esas capas. Por ejemplo, materiales adecuados para formar la capa de sub-recubrimiento incluyen almidón; gelatina; azúcares tales como sacarosa, glucosa, dextrosa, melaza, y lactosa; las gomas naturales y sintéticas tales como goma arábiga, alginato de sodio, metilcelulosa , carboximetilcelulosa , y polímeros de y copolímeros de polivinilpirrblidona (PVP) tales como copolímeros de PVP-PVA; celulosas tales como etilcelulosa, hidroxiprop.ilcelulosa , e hidroxipropilmetilcelulosa ; polietilenoglicol ; y ceras. La capa de sub-recubrimiento puede comprender adicionalmente uno o más plastificantes , tales como polietilenoglicol, propilenoglicol , citrato de trietilo, triacitina, ftalato de dietilo, sebacato de tributilo, o combinaciones de los mismos.

El comprimido o cápsula de epotilona D puede comprender opcionalmente otros materiales tales como agentes aromatizantes, conservantes, o agentes colorantes según sea necesario o deseado.

Una dosificación apropiada de epotilona D la puede determinar alguien experto en la técnica, tomando en consideración los hallazgos descritos en el presente documento conjuntamente con factores típicos tales como la masa corporal del paciente, la condición física del paciente, y así sucesivamente. El agente de dosificación contendría epotilona D en una cantidad que es efectiva para tratar tauopatías tales como AD. Generalmente, un intervalo para la dosificación de epotilona D administrada para el tratamiento de tauopatías incluyendo AD se considera que está entre 0.0001 - 10 mg/m2, más preferiblemente entre 0.001 - 5 mg/m2. Otros intervalos de dosificación, más preferidos para administración PO e IV se expusieron anteriormente en la sección de modalidades alternativas. Las unidades mg/m2, se usan en el presente documento, para propósitos de comparación con las dosificaciones quimioterapéuticas previamente administradas con epotilonas y sus análogos. Sin embargo, las unidades mg/m2 se pueden convertir fácilmente a mpk, considerando la especie animal qué recibe (o que ha recibido) el fármaco y el peso corporal y/o altura. Por ejemplo, para un paciente humano que pese aproximadamente 70 kg, el intervalo de dosis de 0.0001 - 10 mg/m2 se convierte a aproximadamente 0.000003-0.3 mpk. La información adicional que concierne a las conversiones de dosis se puede encontrar en www. rphworld. com/viewlink-25045.html , y en el documento Cáncer Chemother Repts 50 (4) : 219 (1966) .

El fármaco se puede administrar diariamente, semanalmente, o sobre una base intermitente. Por ejemplo, el fármaco se puede administrar durante tres semanas sí, seguidas por una semana no, o durante dos semanas sí, seguidas por una semana no, o bajo otros programas de dosificación como puede determinarse por alguien experto en el campo. La dosis particular seleccionada dependerá del modo de administración y régimen de dosificación seleccionado. Un programa preferido es un programa de dosificación oral diaria una vez. Cuando se prescriben periodos de tiempo más largos entre cada aplicación (típicamente el cado para administración IV) , cada dosis unitaria puede ser mayor que cuando se proporcionan dosificaciones diarias.

Notablemente, la dosis de epotilona D que se administra a pacientes para tratamiento de cáncer en ciertos ensayos clínicos de Fase II fue de 100 mg/m2 administrada como una infusión de 90 minutos dada semanalmente durante 3 ó 4 semanas (es decir, en los días 1, 8, y 15, cada 4 semanas) , tras los ensayos de Fase I que implican escalas de dosis desde 9 hasta 150 mg/m2 para cada dosis. La dosis de fármaco contemplada para tratamiento de AD es aproximadamente 10 veces menor, y más probablemente, aproximadamente .100 veces menor, y quizás incluye más de 1000 veces menor que la dosis terapéutica de epotilona D que se administró para tratamiento de pacientes de cáncer en ensayos clínicos de Fase II, aunque el programa de dosificación y el modo de administración influirán la dosis.

La presente invención se explicará en mayor detalle por medio de ejemplos no limitantes más adelante, que hacen referencia a las figuras adjuntas. Los siguientes procedimientos se usaron en los experimentos descritos en los ejemplos que siguen a la descripción de los procedimientos. Procedimientos para Experimentales (ejemplos 1 a 5) Se describió recientemente la creación de Tg4510, una línea de ratón transgénico en Tau agresivo (Santacruz y col. 2005; Berger y col. 2007) . La línea Tg4510 expresó Tau-P301L, un mutante de Tau hallado en FTDP-17, usando el promotor de calmodulina cinasa II. La línea Tg4510 era única desde varios puntos de vista: 1. Alto nivel de expresión de Tau (13 veces en relación a Tau de ratón) ; 2. Restricción de expresión de Tau a los lóbulos frontotemporales (evitando de este modo los déficits motores que habían caracterizado las líneas Tau previas que expresaban Tau en la médula espinal) ; y 3. Neurodegeneración rápida y extensiva (el 60% de neuronas CAI se perdieron en 5.5 meses) precedida por déficits cognitivos medibles a 4.5 meses.

Preparación de Fármacos para Estudio de Tg4510 Epotilona D (Compuesto I) se administró intraperitonealmente con una aguja de calibre 26, en etanol al 10%, agua al 90%, 10 ml/kg a 0 (vehículo) , 1 mpk, y 10 mpk. Se hizo una solución de reserva lOx en etanol al 100%, y se diluyó justo antes de administrar dosis. Los ratones se administraron en 3 cohortes y se combinaron datos dando una N final de 12, 9, y 15 para los grupos de vehículo, 1 mpk, y 10 mpk, respectivamente. Los ratones se administraron en una campana de emisión de gases químicos.

Inyección y Programa de Realización de Pruebas de Comportamiento para Estudio de Tg4510 Se usaron ratones Tg4510 en este estudio. Estos ratones son un modelo bien caracterizado, agresivo de tauopatía que sobreexpresa Tau mutante P301L humana en el cerebro anterior (Santacruz y col. 2005; Berger y col. 2007). Los ratones se caracterizan por acumulaciones de formas anormales de Tau, incluyendo marañas similares a aquellas observadas en cerebro con AD, déficits del comportamiento, y eventualmente pérdida de neuronas. A las 9 semanas (+/- 15 días) de edad, los ratones se aclimataron al manejo con una única inyección falsa de medio salino amortiguado con fosfato, llevada a cabo dentro de una campana de emisión de gases químicos. Los ratones se albergaron después en jaulas mantenidas dentro de la campana de emisión de gases químicos durante 48 horas. Tras el periodo de 48 horas, los ratones se transfirieron a jaulas limpias y se llevaron a un alojamiento de examen de comportamiento para ponerlos a prueba.

Los ratones se pusieron a prueba en un laberinto de agua de Morris (MWM) durante seis días. Los ratones se distribuyeron en grupos de tratamiento en base a los resultados ' del análisis de comportamiento usando las puntuaciones de intervalo para investigar el índice de cruzado de los dos anillos de la investigación. Los ratones eran de 11 semanas (+/- 15 días) de edad al comienzo de la administración y se administraron una vez semanalmente . Se llevó a cabo un panel de pruebas de propensión física o química (SHIRPA Modificado) tras la primera semana de dosificación, incluyendo análisis de posición corporal, temblor, apariencia del pelo, manera de andar, escape del contacto físico, pasividad posicional, agarre del miembro, y reflejo correcto. Los ratones se examinaron adicionalmente 48 horas después de administrar cada semana con respecto a apariencia del pelo, agarre del miembro, reflejo correcto y para cualquier comportamiento estereotipado manifiesto. No se observó ningún signo de toxicidad, pérdida de peso o déficits motores manifiestos en el curso del estudio.

Los ratones se pusieron a prueba de - nuevo en el MWM después de la octava dosis (19 semanas de edad +/- 15 días) durante seis días. Después de la prueba de comportamiento, la dosificación se reanudó hasta que los animales fueron de 5.5 meses de edad en el tiempo de la recolección. Los animales se albergaron y se trataron de acuerdo con el Institutional Care and Animal Use Committee y de acuerdo con los estándares de los National Institutes of Health.

Protocolo del Laberinto de Agua de Morris Los ratones se pusieron a prueba en el laberinto de agua de Morris (M M) en dos ocasiones, una vez antes de la administración, y una vez dos meses después de haber comenzado la dosificación. La segunda ronda de la prueba del laberinto de agua se llevó a cabo en otra habitación de realización de pruebas. Los ratones se aclimataron a la habitación experimental durante 2-3 días antes de someterse a pruebas. Los ratones se situaron en un laberinto de agua de 1.5 m de diámetro, con una plataforma de 16 cm diámetro situada 0.5 - 1.0 cm bajo la superficie del agua. El agua se hizo opaca con pintura blanca no tóxica y la temperatura del agua se reguló entre 22-25 °C.

Se dio a los ratones 4 ensayos por día de hasta 90 segundos cada uno, con un periodo de descanso de 10 segundos en la plataforma después de cada ensayo. Si el ratón no encontró la plataforma en 90 segundos, el ratón se guió con cuidado a la plataforma y se dejó permanecer allí durante 10 segundos. Las habitaciones de prueba tenían cada una entradas externas grandes para orientar a los ratones a que aprendiesen la localización de la plataforma después de cada ensayo. Los ratones se situaron bajo una lámpara de calor para evitar la hipotermia después de cada ensayo. Los intervalos entre ensayos variaron de 25 a 45 minutos. Se - observaron los ratones usando software HVS Image Advanced Tracker VP200 .. (Buckingham, Reino Unido) y se determinó la distancia total recorrida hasta alcanzar la plataforma.

El análisis estadístico de la adquisición de longitud del camino de los cinco ensayos implicó un análisis de varianza de medidas repetidas. El modelo estadístico incluyó "tratamiento" (0. 1, o 10 mpk de epotilona D (Compuesto I) ) como un término entre animales, y los 5 ensayos como medidas repetidas sobre cada animal. Si el análisis indicó un efecto significativo de tratamiento, o una interacción de tratamiento mediante ensayo, las diferencias entre los grupos de 1 y 10 mpk se compararon con el grupo de vehículo usando prueba de Dunnett . Las longitudes de caminos de la investigación en cada cuadrante, y el número de cruces de plataforma en cada cuadrante, se analizaron usando prueba de Dunnett. En todos los casos, se compararon grupos de 1 y 10 mpk con el grupo de vehículo. Se hicieron todos los cálculos en SAS®, versión 9.1, bajo el sistema operativo Windows XP Professional .

El entrenamiento de adquisición se llevó a cabo durante 5 días consecutivos. Los ensayos de investigación se llevaron a cabo 18 horas después del último entrenamiento de adquisición en el día 6. Durante estos ensayos de 60 segundos, se retiró la plataforma, y se midieron la distancia que el ratón gastó en el cuadrante objetivo y el número de cruces de una región donde estaba situada previamente la plataforma. Se controló la velocidad de natación para todos los animales; el tratamiento de fármacos no causó ningún cambio en velocidad de natación consistente con que el fármaco no afectó al comportamiento motor. El tiempo de flote (velocidades de natación de < 5 cm/segundo) tampoco varió entre grupos de tratamiento.

Recolección de tejidos Los ratones se sometieron a eutanasia mediante dislocación cervical a los 5.5 meses seguida por decapitación. Los cerebros se retiraron inmediatamente y se dividieron a lo largo de la línea media en dos hemisferios. El hemisferio derecho se situó en 20 mi de paraformaldehído al 4% (preparado reciente en el día del sacrificio) y se almacenaron durante toda una noche a 4'C. El día siguiente, los cerebros se transfirieron a un tubo que contiene 20 mi de TBS (pH 7.4, TRIS 20 mM, NaCl 100 m ) y después se almacenaron a 4'C hasta procesamiento. Los hemisferios derechos se incrustaron en parafina, se seccionaron a 5 micrómetros, y se montaron en portaobjetos de vidrio cargados positivamente. Los portaobjetos se secaron durante toda una noche en un horno de 60 'C y se almacenaron a temperatura ambiente hasta que se tiñeron. Los hemisferios izquierdos se congelaron (en 2 minutos) en hielo seco.

El procedimiento de Gallyas El procedimiento de tinción de Gallyas se usó para detectar marañas neurofibrilares positivas en plata y neuritas distróficas positivas en plata. Las secciones finas incrustadas en parafina (5 micrómetros) montadas sobre portaobjetos de vidrio se desparafinaron y se rehidrataron por medio de incubación en serie en xileno (dos veces durante 10 minutos cada una) , etanol al 100% (dos veces durante 10 minutos cada una) , MeOH al 95% / H202 al 5% (30 minutos) , etanol al 95% (dos veces durante 5 minutos cada una), etanol al 80% (dos veces durante 5 minutos cada una) , etanol al 50% (dos veces durante 5 minutos cada una) , y agua (dos veces durante 5 minutos cada una) . Las secciones se situaron después en ácido peryódico al 5% durante 5 minutos, se lavaron en dH20 dos veces durante 5 minutos cada vez, y se situaron en solución de yoduro de plata alcalina (que contiene nitrato de plata al 1%) durante 1 minuto.

Las secciones se lavaron en ácido acético al 0.5% durante 10 minutos, se situaron en solución reveladora recién preparada durante 15 minutos, y se lavaron de nuevo en ácido acético al 0.5% durante 5 minutos. Tras un aclarado en agua desionizada, las secciones se situaron en cloruro de oro al 0.1% durante 5 minutos y se aclararon de nuevo en agua desionizada. Las secciones se incubaron en tiosulfato de sodio al 1% (hipo) durante 5 minutos y después se aclararon en agua del grifo. Se llevó a cabo contratinción en rojo rápido nuclear al 0.1% durante 2 minutos. Las secciones se aclararon en agua del grifo, se deshidrataron en series graduadas de alcohol (95%, 100%, 100%) durante 2 minutos, y se aclararon en 3 cambios de xileno, 10 inmersiones cada uno. Finalmente, se añadieron el medio de montaje Cytoseal 60 y los cubreobjetos a los portaobjetos (Richard-Alian Scientific of Kalamazoo, MI) . Se llevaron a cabo estadísticas usando la prueba de Kruskal-Wallis no paramétrica, seguida por la prueba de comparación múltiple de Dunn usando Graphpad Prism 4. Se obtuvieron los mismos resultados con el ANOVA paramétrico seguido por la prueba post-hoc de Dunnett.

Inmunohistoquímica Se desparafinaron secciones finas incrustadas en parafina (5 micrómetros) y rehidrataron con agua en 3 cambios de xileno, dos cambios de etanol al 100%, y un cambio de etanol al 95%, seguido por aclarado en agua. La recuperación del antígeno se llevó a cabo empañando los portaobjetos en amortiguador de citrato de sodio 10 mM, pH 6.0 durante 30 minutos en un Vaporizador Black and Decker (Modelo n.°: HS900) y después enfriando durante 30 minutos. La actividad peroxidasa endógena se elimina mediante incubación en peróxido de hidrógeno al 0.6% en MeOH al 90% durante 15 minutos. Después de lavar en TBS, los cubreobjetos se bloquearon en suero de cabra normal al 10% en TBS durante una hora. Esto fue seguido de incubación del anticuerpo de fosfoTau AT8 (Pierce Biotechnology Inc., Rockford, IL, Goedert y col., 1995) diluido en la solución bloqueante durante toda una noche a 4°C. - Después de 3 lavados en TBS, los cubreobjetos se incuban con un anticuerpo de IgG antirratón durante 1 hora a temperatura ambiente. Después de lavar en TBS, la señal se detectó usando un Kit de Vectastáína de ABC Elite (Vector Labs Burlingame, CA) durante una hora seguido de detección usando el reactivo diaminobenzadina de Vector labs . Los núcleos se contratiñeron en azul con hematoxilina , seguido por sumergir los portaobjetos 2 veces en sustituto de agua del grifo de Scott (Surgipath N° 02900, Richmond, IL) y se enjuagaron después en agua del grifo Las secciones se deshidrataron después en serie graduada de alcohol (95%, 100%, 100%) después se eliminó en tres cambios de xileno. Se añadieron después los portaobjetos y el medio de montaje de Cytoseal 60.

Estereología Los portaobjetos teñidos de Nissl se escanearon y digitalizaron usando el Aperio ScanScope (Aperio Technologies, Inc., Vista, CA) . Las imágenes de la sección de cerebro entera se tomaron a alta resolución y se almacenaron como ficheros en Spectrum (Software de Aperio) . Para procesar imágenes, se tomó una región de 4.000 X 4.000 pixeles incluyendo el hipocampo entero usando la herramienta de extracción y se guardó como un fichero JPEG para importar en Metamorph (Molecular Devices, Sunnyvale, CA) para cuantificación de pérdida de células en las regiones CAI y CA3 del hipocampo. Se utilizó una versión modificada del procedimiento disector de sección única (Moller y col. 1990) para cuantificar la pérdida de células debido a su adecuabilidad para secciones de tejido finas, incrustadas en parafina. Para obtener números relativos de células, se recogió cada quinta sección según los cerebros incrustados en parafina se cortaron sagitalmente entre la Bregma y aproximadamente 0.75 mm lateralmente. Se dibujaron tres regiones y se contaron por sección usando software Metamorph. Las mismas regiones se usaron para cada imagen y se contaron 5 secciones por animal, 5 cubreobjetos separados. Las estadísticas se llevaron a cabo usando ANOVA seguido por prueba post-hoc de Dunnett.

EJEMPLO 1 El diseño del experimento de Tg4510 con epotilona D (Compuesto I) como se describe anteriormente se representa en la FIG. 1. En este experimento, los ratones se probaron a los 2.5 meses en el M M y se asignaron a uno de los tres grupos (N = 12, 13, 16) de tal forma que se determinó que la realización del pretratamiento de cada grupo era similar. Empezando a 2.5 meses, se administró a los ratones una inyección intraperitoneal (IP) semanalmente bien de vehículo sólo o bien de vehículo con 1 mpk o 10 mpk de epotilona D (Compuesto I) . A 4.5 meses, los ratones se probaron de nuevo en el WM determinando en efecto del tratamiento en el comportamiento cognitivo. Después de 5.5 meses, los ratones se sometieron a eutanasia y los cerebros se recogieron para análisis subsiguientes.

En experimentos se xenotransplantes tumorales, los investigadores típicamente administran epotilona D (Compuesto I) intraperitonealmente a 30 mpk cada dos días durante 5 días, proporcionando una dosis acumulativa de 150 mpk. (Chou y col., 1998). Así, el tratamiento con epotilona D (Compuesto I) 1 mpk durante 12 semanas, como se describe en el presente documento, se considera que está aproximadamente 100 veces por debajo de la dosis de oncología, con el tratamiento a 10 mpk estando aproximadamente 10 veces por debajo de la dosis de oncología típica administrada en este tipo de experimento. Cuando los ratones se administraron una vez semanalmente con 1 mpk y 10 mpk de epotilona D (Compuesto I) durante 2 ó 6 meses, no se observaron anormalidades histbpatológicas en tejidos múltiples, incluyendo hígado, riñon, corazón, testículos, glándula adrenal, médula ósea, nervios periféricos, estómago, e intestinos grueso y delgado.

La FIG. 2 muestra los resultados de una prueba de M M de los ratones Tg4510 a 2.5 meses, antes de administrar dosis con epotilona D (Compuesto I) o con vehículo. No hubo diferencias estadísticas significativas entre los grupos antes de administrar en adquisición de ensayos de sonda, que fue la base para separar animales en grupos. En otras palabras, la FIG. 2 opera como un control en mostrar que la realización del pre-tratamiento de cada grupo fue similar.

A los ratones Tg4510 se les administró después epotilona D (Compuesto I) una vez semanalmente intraperitonealmente a 1 mpk,, 10 mpk, y con vehículo, y la prueba del MWM se llevó a cabo a los 4.5 meses, tras esta dosificación semanalmente durante 12 semanas. Los resultados que se ' muestran en la FIG. 3, revelaron que los ratones tratados con epotilona D (Compuesto I) 1 mpk fueron capaces de localizar la plataforma escondida en el MWM más rápidamente (es decir, en una manera significativa estadísticamente (p < 0.01)), de lo que pudieron los ratones que se trataron con vehículo. El grupo de tratamiento de 10 mpk mostró una tendencia a mejora comparado con el grupo vehículo. Estos hallazgos muestran que el tratamiento de ratones Tg4510 con epotilona D (Compuesto I) conduce a una función cognitiva mejorada significativa estadísticamente en relación al tratamiento con vehículo, y adicionalmente , que la dosis más baja de 1 mpk generó resultados mejorados comparada con la dosis más alta (10 rapk) . Notablemente, los inventores en el presente documento confirmaron que la exposición usando este paradigma era dependiente de la dosis, basado en experimentos separados comparando dosis de 1 mpk y de 10 mpk en ratones. Por esta razón, la reducción en la mejora del comportamiento en el grupo de 10 mpk, en relación al grupo de 1 mpk, no se debió a niveles de fármaco no anticipados, reducidos en los animales tratados con 10 mpk.

EJEMPLO 2 Las FIGS. 4A-4B muestran datos de sonda 18 horas después de 5 días de entrenamiento en los ratones Tg4510 de 4.5 meses de edad administrados con dosis durante 2 meses con epotilona D (Compuesto I) a l mpk, 10 mpk, y con vehículo. En las FIGS. 4A-4B, "TQ" significa cuadrante objetivo, "AR" significa contiguo a la derecha, "AL" significa contiguo a la izquierda, y "OP" significa cuadrante opuesto. Dos medidas de comportamiento, a saber, longitud del camino en % (FIG. 4A) y número de cruces de plataforma (FIG. 4B) en cada cuadrante, se indican en las FIGS. 4A-4B. Una preferencia por el cuadrante diana indica que el ratón recordó la localización donde se situaba la plataforma durante la fase de adquisición del estudio. Como se puede ver a partir de los datos, los ratones tratados con vehículo actuaron a discreción con resultados similares para cada uno de TQ, AR, AL, y OP, tanto para las medidas de longitud del camino (FIG. 4A) como para las medidas de cruce de plataforma (FIG. 4B) , y no mostraron una preferencia de cuadrante. Sin embargo, tanto los ratones tratados con 1 mpk (Compuesto I) mostraron diferencias estadísticamente significativas en ambas medidas comparados con el grupo de vehículo en memoria, por ejemplo, en recordar- que la plataforma se había situado en el TQ. Adicionalmente , el grupo de 10 mpk mostró actuación significativamente mayor comparado con el grupo de vehículo en la medida de longitud del camino en porcentaje (FIG. 4A) pero no usando la medida del número de cruces de plataforma (FIG. 4B) .

EJEMPLO 3 Para determinar el efecto de epotilona D (Compuesto I) sobre patología cerebral, se examinó el tejido cerebral a partir de un subgrupo (N=5) de los ratones Tg4510 a partir del experimento precedente. Los estudios previos han mostrado que los ratones Tg4510 pierden aproximadamente el 60% de sus neuronas en la región CAI del hipocampo a 5.5 meses (Santacruz y col. 2005) . Así, los presentes inventores examinaron primero el número de neuronas en la región de CAI del hipocampo, seguido por el exámen de la región CA3. La FIG. 5 representa conteos neuronales en las regiones CAI y CA3 del hipocampo en los ratones a 5.5 meses tras el tratamiento con vehículo, 1 mpk de epotilona D (Compuesto I) , y 10 mpk de epotilona D (Compuesto I) .

Sorprendentemente, como se puede ver en la FIG. 5, los ratones Tg4510 tratados con epotilona D 1 mpk (Compuesto I) tienen sustancialmente más neuronas CAI que animales tratados con vehículo. De hecho, la diferencia entre los ratones tratados con vehículo y los ratones tratados con 1 mpk de epotilona (Compuesto I) muestra que el 1 mpk de epotilona D (Compuesto I) evitó la pérdida neuronal, con una diferencia estadísticamente significativa con el vehículo (p < 0.01). Los ratones tratados con 10 mpk de epotilona D (Compuesto I) tuvieron niveles neuronales de CAI que eran intermediarios entre los ratones tratados con vehículo y los ratones tratados con 1 mpk de epotilona D (Compuesto I) . Estos resultados son consistentes con y refuerzan los hallazgos de los estudios de comportamiento de Ejemplos 1 y 2, es decir, mostrando que la dosis 10 veces menor produjo resultados consistentemente significativos en tratar tauopatía.

Se observó una tendencia similar para los conteos celulares totales de regiones CA3 del hipocampo, -con diferencias significativas entre el 1 mpk y los ratones no transgénicos comparados con los ratones tratados con vehículo. La elevación en conteos celulares en la región CA3 en el grupo tratadO-.-f.ue ..menos pronunciada que en la región CAI donde hay más neurodegeneracion esta edad; sin embargo, estos resultados muestran un impacto sobre la enfermedad subyacente en múltiples regiones del cerebro.

EJEMPLO 4 El efecto de tratamiento en tinción de Tau fosforilada que tiñe CAI se examinó también. El anticuerpo AT8 reconoce Tau que está fosforilada en los residuos 202 y 205. Esta forma de Tau hiperfosforilada está muy enriquecida en cerebros de pacientes de AD y de otras tauopatías (Goedert y col . , 1995) .

La FIG. 6 muestra tinción de AT8 fosfoTau de los ratones Tg4510 tratados con vehículo, epotilona D 1 mpk (Compuesto I) , y epotilona D 10 mpk (Compuesto I) , como se describe anteriormente. La tinción de fosfoTau se indicó en negro intenso. Sorprendentemente, los ratones tratados con 1 mpk de epotilona D (Compuesto I) , mostraron mucha menos tinción de fosfoTau, en particular en comparación con los ratones tratados con vehículo. Los ratones tratados con 10 mpk de epotilona D (Compuesto I) mostraron niveles intermediarios de tinción con fosfoTau.

EJEMPLO 5 El efecto de tratamiento con epotilona D (Compuesto I) en formación de maraña neurofibrilar en el córtex se examinó por tinción de plata de Gallyas. Las FIGS . 7A-7B muestran tinción de plata de Gallyas para marañas neurofibrilares en el córtex frontal de ratones Tg4510 tratados con vehículo, epotilona D 1 mpk (Compuesto I) , y epotilona D 10 mpk (Compuesto I), como se describe anteriormente. En la FIG. 7A, la tinción de plata está en negro, y "NT" significa no transgénicos , manifestando alguna tinción no específica asociada con los vasos sanguíneos. Como se puede ver en la FIG. 7A, los ratones tratados con 1 mpk de epotilona D (Compuesto I) tuvieron niveles mucho más bajos de marañas neurofibrilares que los ratones tratados con vehículo; esto se cuantificó para todos los animales en el estudio en la FIG. 7B. Se observó un impacto significativo en la enfermedad subyacente tanto en el córtex como en el hipocampo en la dosis de 1 mpk, con la dosis de 10 mpk que muestra de nuevo una tendencia pequeña hacia la mejora.

Como se describe en los ejemplos precedentes, el tratamiento de ratones Tg4510 con epotilona D (Compuesto I) evitó el declive cognitivo y mejoró la función cognitiva a lo largo del tiempo comparada con los ratones no tratados con Tg4510. Además, las pruebas neuropatológicas , como medidas de impacto sobre enfermedad subyacente (es decir, conteos celulares, tinción fosfo Tau y las pruebas de tinción con plata) , demuestran que el tratamiento con epotilona D evita pérdida neuronal, reducen la acumulación de Tau anormal, y evita la formación de marañas neurofibrilares a niveles estadísticamente significativos comparados con ratones Tg4510 no tratados. Así, los inventores en el presente documento creen se los primeros en descubrir y demostrar la prevención de pérdida cognitiva, patología de Tau, y neurodegeneración tras tratamiento con un compuesto estabilizador de microtúbulos , a saber, epotilona D.

Adicionalmente , los inventores en el presente documento han descubierto que los efectos terapéuticos logrables tras tratamiento con epotilona D son probablemente no dependientes linealmente de dosis. Específicamente, resultados dosodependientes consistentes se obtuvieron repetidamente en cada uno de los estudios de comportamiento y neuropatológicos , en los que a una dosis diez veces menor (1 mpk) , se obtuvo efecto beneficioso significativamente potenciado en todas las medidas comparadas con el vehículo, mientras que la dosis más alta (10 mpk), mostró una tendencia hacia un efecto con la mayoría de las medidas y una diferencia estadísticamente significativa sobre el vehículo en al menos una medida de la prueba de sonda del M M.

EJEMPLO 6 El comportamiento de epotilona D comparado con otros estabilizadores de microtúbulos en diversos experimentos de bolo intravenoso En un grupo de experimentos, ixabepilona (análogo de aza-epotilona B) , Compuesto II (BMS 310705, 21-amino epotilona F) , y epotilona D (Compuesto I) se evaluaron y compararon con paclitaxel tras la administración de bolo IV en las venas de la cola de ratones desnudos a dosificaciones de 1 a 12 mpk con 3 ratones/grupo. Cada uno de los cuatro compuestos se administró a 5 ml/kg usando CRE APHOR® al 10%, etanol al 10%, y agua al 80% conteniendo dextrosa al 5%. Para determinar la penetración cerebral relativa de cada compuesto, se midieron los niveles de plasma, cerebro, y niveles hepáticos de los compuestos se midieron en diversas veces después de una dosis única usando cromatografía líquida con espectrometría de masas en tándem (LC/MS/MS) después de una extracción de fase orgánica, como se muestra en las figuras 8A-8D y en la Tabla 1. Los niveles hepáticos no se midieron en los ratones tratados con paclitaxel.

La FIG. 8A muestra la concentración del Compuesto I en el plasma, cerebro, e hígado de ratones tras administración IV a 1 miligramo por kilogramo (mpk) en diversas veces.

La FIG. 8B muestra la concentración de ixabepilona en el plasma, cerebro, e hígado de ratones tras administración IV a 12 mpk en diversas veces.

La FIG. 8C muestra la concentración de paclitaxel en el plasma y cerebro de ratones tras administración IV a 4 mpk en diversas veces .

La FIG. 8D muestra la concentración de epotilona D (Compuesto I) en el plasma, cerebro, e hígado de ratones tras administración IV a 5 mpk en diversas veces.

Los datos mostraron que el Compuesto II y la ixabepilona tuvieron niveles relativos al tejido periférico medidos por la razón de los niveles de compuesto en el cerebro a hígado, particularmente en los últimos tiempos después de la distribución inicial y de la eliminación . del fármaco del plasma. Como se esperaba, los niveles cerebrales de paclitaxel son bajos. En particular, los niveles cerebrales de paclitaxel no excedieron niveles de fármacos en plasma durante al menos 24 horas después de administrar dosis. Inesperadamente, la epotilona D (Compuesto I) tuvo las propiedades combinadas de penetración notablemente mejor y retención selectiva como se evidenció mediante los altos niveles cerebrales que excedían los niveles hepáticos a 6 y 24 horas después de administrar dosis. Esto demostró retención inesperada de epotilona D (Compuesto I) en el órgano objetivo (cerebro) en relación a la periferia, incluyendo el plasma y tejidos, lo más notablemente el hígado, que es un sitio potencial de toxicidad.

Más específicamente, la tabla 1 muestra datos de penetración cerebral para cuatro .. estabilizadores de microtúbulos - paclitaxel, Compuesto II (BMS 310705), ixabepilona, y epotilona D -- después de administrar dosis bolo IV (mpk varió, como se muestra en la tabla) usando ratones desnudos, datos que se reflejan también en las figuras 8A-8D. La razón cerebro a plasma se incrementa generalmente con el tiempo después de administrar dosis cada compuesto debido a la rápida pérdida desde el plasma y la retención del fármaco mediante unión a microtúbulos. La razón cerebro a plasma puede caer después para compuestos donde hay menos retención en el cerebro, tal como se observa para el Compuesto II que muestra un decrecimiento entre 6 y 24 horas. A pesar del cambio en la razón cerebro a plasma con el tiempo, esta razón proporciona una medida de penetración cerebral intrínseca para un compuesto cuando se comparan los datos de tiempos cortos después de administrar dosis (por ejemplo, entre 20-60 minutos administrar dosis). En las tablas en el presente documento, se calcularon las razones cerebro a plasma y cerebro a hígado calculando primero las razones para animales individuales, y determinando después el promedio de las razones; las tablas en el presente documento comunicaron los valores promedio así obtenidos.

TABLA 1 Compuesto Dosis TiemConc . en Conc . Razón Razón (mpk) po plasma cerebral cerebro a cerebro a (hr) (nM) (nM) plasma hígado Paclitaxel 4 1 447 47 0.10 NQ 6 43 16 0.37 NQ 24 12 15 1.25 NQ Compues- 1 6 3 6.8 2.1 0.01 to II 24 1 1.3 · 1.2 0.02 Ixabepi- 12 0.12 11.236 579 0.05 0.05 lona 0.33 3057 495 0.16 0.09 1 390 284 0.73 0.07 2 171 360 2.1 0.11 Compuesto Dosis TiemConc . en Conc . Razón Razón (mpk) po plasma cerebral cerebro a cerebro a (hr) (nM) (nM) plasma hígado 6 53 371 7.0 0.30 24 8 236 30 1.2 Epotilona 5 6 6 2794 470 149 D 24 1 2046 2046 1204 Mirando en la tabla 1, paclitaxel es pobremente penetrante en el cerebro como se evidencia por una razón cerebro a plasma de 0.1 en una hora después de administrar dosis; ixabepilona es más penetrante en el cerebro que paclitaxel con una razón cerebro' a plasma de 0.73 a 1 hora después de administrar dosis (tabla 1) ; A tiempos de 6—24 horas después de la administración de dosis, la razón de cerebro a plasma es una reflexión tanto de la penetración cerebral intrínseca como de la retención cerebral intrínseca (semivida) en el cerebro. Los datos a 6 y 24 horas después de la administración de dosis de epotilona D muestran al menos un incremento de 60 veces en la razón cerebro a plasma por encima de ixabepilona, el compuesto con la siguiente razón cerebro a plasma más alta en este grupo.

Las razones cerebro a hígado no sólo proporcionan una medida más singular de retención cerebral y semivida, sino que también la retención selectiva comparada con tejidos periféricos. Esto es valioso porque el hígado, elegido en gran parte porque está bien perfundido y tiende a tener niveles más altos que muchos otros tejidos periféricos, contiene microtúbulos donde el compuesto puede retenerse, a diferencia del plasma no celular. A diferencia de la razón cerebro a plasma donde el tiempo de medida óptimo está en el intervalo de 20-60 minutos, es preferible comparar las razones cerebro a plasma a tiempos más tardíos después de la administración de la dosis (por ejemplo, 24 horas o más) , cuando los niveles de plasma han disminuido significativamente, permitiendo por lo tanto una medida' más segura del fármaco que está específicamente retenido dentro de las células cerebrales y hepáticas . Una comparación de las razones cerebro a hígado muestra que la epotilona D está retenida alta y selectivamente en el cerebro en relación al hígado. Por ejemplo, la razón de cerebro a hígado a las 24 horas de epotilona D es 1204, una razón remarcablemente, mucho más alta comparada con las razones mucho menores para ixabepilona (1.2) y Compuesto II (0.02) en el mismo grupo de experimentos.

En un experimento separado, se evaluaron las concentraciones en plasma y en cerebro para periodos de tiempo más largos, es decir, hasta 168 horas, tras administración de bolo IV, usando un protocolo similar al descrito anteriormente, pero con ratones transgénicos triples de mediana edad (Oddo y col., 2003), en las manos de científicos diferentes. Los resultados de este experimento se muestran a continuación- en la tabla 2 y en la figura 10.

TABLA 2 (SÓLO EPOTILONA D) Estos datos demuestran la retención extendida de epotilona D en tejido cerebral durante al menos 168 horas (7 días) después de una dosis individual. Los niveles cerebrales absolutos y las razones en la tabla 1 y en la tabla 2 para epotilona D varían; es importante destacar que los experimentos descritos en las tablas 1 y 2 se llevaron a cabo separadamente a tiempos diferentes por científicos diferentes con cepas de ratones diferentes. Los inventores han observado que pequeñas diferencias en el tiempo de inyección de IV pueden alterar el perfil de exposición exacta dentro de un grupo de estudios, particularmente la concentración en plasma máxima, que influirá en la concentración en el cerebro, y adicionalraente, que el tiempo de inyección IV puede diferir entre científicos. Por esta razón, es mejor comparar compuestos dentro de un experimento único. A pesar de este asunto, las tendencias generales y las características relacionadas de los estabilizadores de microtúbulos según se comparan unos con otros típicamente son consistentes, y estos resultados muestran que la epotilona D es altamente penetrante en el cerebro con penetración y retención cerebral incrementadas sustancialmente comparadas con el Compuesto II, ixabepilona, y paclitaxel. Por ejemplo, incluso cuando nos involucramos en una comparación de datos obtenidos de dos experimentos aparte, la razón de cerebro a plasma de epotilona D a 6 horas después de administración de la dosis fue 2046 en la tabla y 89 en la tabla 2 aún marcadamente mayor que las razones a los mismos tiempos para paclitaxel (0.37), y Compuesto II (2.1) en la tabla 1. Debido a que los niveles en hígado en el estudio descrito en la tabla 2 caen por debajo del nivel más bajo de cuantificación (LLQ de 49 nM en este estudio) a las 24 horas, una razón cerebro a hígado no fue cuantificable (NQ) a este tiempo.

El documento WO 03/074053 Al muestra en líneas generales el uso de ciertas epótilonas para el tratamiento de enfermedades del cerebro. De acuerdo con esa publicación, niveles plasmáticos y cerebrales para tres epótilonas (no incluyendo epotilona D) se midieron durante los primeros 40 minutos tras la administración intravenosa a 5 mpk. Los datos de concentración plasmática y cerebral mostrados en el documento WO 03/074053 Al para lo que se identifica en éste como compuesto 1: 4,8-dihidroxi-16- (l-metil-2- (2-metil-4-tiazolil) -etenil-l-oxa-7- (1- . propil) -5 , 5, 9, 13-tetrametil-ciclohexadec-13-eno-2 , 6-diona, ¦ y para paclitaxel se reproducen en la tabla 1 más adelante. Los datos se mostraron en el documento WO 03/074053 de acuerdo con las unidades, g/ml y en minutos; estos datos se convirtieron a nM y se mostraron en la tabla 3 en nM y horas, para propósitos de comparación. Estos datos (por la tabla 3) no se confirmaron independientemente por los inventores en el presente documento, más bien, se reproducen en base a los valores presentados en esa publicación (como se convirtieron en horas y nM) . Adicionalmente, se observa que no se reporta estereoisomerismo y/o un método de preparación para el compuesto 1 dentro de Wo/03/074053, y se hace referencia a una mezcla 13 E/Z (ver página 13, línea 15).

TABLA 3 Compuesto TiemConc . en Concentrac Razón po Plasma ion en cerebro a (ho(nM) Cerebro plasma ras) (nM) Compuesto 0.17 1540 580 0.4 III 0.33 1150 1540 1.3 0.67 580 1150 2 Paclitaxel 0.17 940 <LLQ NQ 0.33 700 <LLQ NQ 0.67 230 <LLQ NQ Debido a que los datos se registraron a sólo 40 minutos, sólo se puede valorar -la penetración cerebral a partir de este estudio examinando la razón cerebro a plasma. Se presume que paclitaxel tiene penetrancia cerebral pobre (consistente con los datos en la tabla 1) debido a que los niveles cerebrales están por debajo de LQ, aunque no se da a conocer el nivel de detección. Las medidas de retención cerebral que necesitan medirse al menos 24 horas tras administración de la dosis, y la penetración cerebral selectiva que necesita medirse mediante comparación con tejidos periféricos no se discutieron en el documento WO 03/074053 Al.

EJEMPLO 7 El comportamiento de la epotilona D tras administración oral Para analizar adicionalmente la actuación de epotilona D en tratamiento de tauopatías, el compuesto se evaluó en dos experimentos que implican administración a ratones C57BL/6 a 10 mpk y a 35 mpk mediante sonda oral, respectivamente. Adicionalmente, en estos experimentos el compuesto que es 4 , 8 -dihidroxi - 16 - ( 1-metil -2 - ( 2 -metil-4 -triazolil) -etenil-l-oxa-7- (1-propil) -5,9, 13-tetrametil-ciclohexadec-13-ene-2 , 6-diona (compuesto III, en el presente documento) , se evaluó después y se hace comparación lado a lado entre epotilona D y compuesto III. A continuación, los inventores comunican primero el detalle experimental para preparación y aislamiento del compuesto III, y después se describen los datos biológicos, in vivo.

Información Experimental General : En los siguientes procedimientos, todas las temperaturas se dan en grados Celsius. Los espectros de RMN ""? se hacen funcionar en un instrumento Bruker 500, 400, o 300 MHz y los cambios químicos se comunican en ppm (d) con referencia a tetrametilsilano (5=0.0). Todas las evaporaciones se llevaron a cabo bajo presión reducida. A menos que se señale lo contrario, los análisis de CL/EM se llevaron a cabo en un instrumento de Waters usando una columna en fase reversa Phenomenex-Luna 3.0 x 50 mm S 10 que emplea una velocidad de flujo de 4 ml/min usando un gradiente de TFA al 0.1% en MeOH/agua [0-100% en 3 min, con tiempo de funcionamiento de 4 min] , y un aparato detector de UV a 220 nm o una columna en fase reversa Phenomenex-Luna 3.0 x 50 mm lOu que emplea una velocidad de flujo de 5 ml/min usando un gradiente de acetato de amonio 10 mM en acetonitrilo/agua [5-95% en 3 min, con 4 minutos de tiempo de funcionamiento] y un aparato detector de UV a 220 nm. A menos que se establezca otra cosa, se hicieron purificaciones en columnas de gel de sílice de malla 40-63, o usando un sistema de Biotage® Horizon, o usando equipamiento de HPLC especificado y condiciones de HPLC especificadas.

Etapa 1 : OTBS Sal de Fosfonio A A una solución de sal de fosfonio A (preparada de acuerdo con Nicolaou et al., J. Am. Chem. Soc. 1997.119, 7974-7991; 40.5 g, 57.9 mmol) en 300 mi de THF a 0o se añadió bis (trimetilsilil) amida de sodio (63.7 mi, 63.7mmol), y la solución se agitó durante 5 min. Se añadió una solución de (6S) -6-metil-7- (tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)heptan-2-ona (preparada de acuerdo con el documento US 7,326,798; 14.54 g, 63.7 mmol) en 50 mi de THF rápidamente, y la mezcla se agitó calentando a RT durante toda una noche. La mezcla de reacción se vertió en NH4CI saturado, y se extrajo con EtOAc (300 mi) . La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, y se evaporó a vacío. El producto en bruto se purificó en una columna de gel de sílice (EtOAc/hexano 0-10%) proporcionando 16 g (30.7 mmol, 53%) de Intermediario de Síntesis-1. RMN ¾ (500 MHz, CDCI3) d ppm 6.90 (s, 1H) , 6.43 (s, 1H) , 5.20-5.05 (m, 1H) , 4.6-4.5 (m, 1H) , 4.15-4.00 (m, 1H) , 3.9-3.8 (m, 1H) , 3.6-3.3 (m, 2H) , 3.25-3.05 (m, 1H) , 2.70 (s, 3H) , 2.35-2.15 (m, 2H) , 2.05 -1.90 (m, 5H) , 1.90-1.75 (m, 1H) , 1.75 -1.65 (m, 3H) , 1.65 -1.45 (m, 6H) , 1.45 -1.25 (m, 3H) , 1.15 -1.00 (m, 1H) , 1.00-0.80 (m, 12H) , 0.05 - -0.05 (dd, 6H) , EM (CLEM) [M+H] = 522.44, [M+Na] = 544.42.

Etapa 2: A una solución de Intermediario de Síntesis-1 (16 g, 30.7 mmol) en 300 mi de etanol a RT se añadió monohidrato del ácido p-toluenosulfónico (5.83 g, 30.7 mmol) . La mezcla se agitó durante 7 horas, se vertió en NaHC03 saturado y se extrajo con cloruro de metileno (300 mi) . Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera y se secaron sobre sulfato de magnesio. Después de filtración y eliminación del disolvente, el material en bruto se purificó usando un sistema de Biotage (EtOAc/hexano, 10-45%) proporcionando 9.8 g (22.4 mmol, 73%) de Intermediario de Síntesis-2. RMN XH (500 MHz, CDC13) d ppm 6.92-6.90 (m, 1H) , 6.45-6.40 (m, 1H) , 5.15-5.00 (m, 1H) , 4.10-4.00 (m, 1H) , 3.50-3.30 (m, 2H) , 2.69 (s, 3H) , 2.35-2.15 (m, 2H) , 2.1-1.9 (m, 5H) , 1.75 -1.50 (m, 5H), 1.50-1.25 (m, 3H) , 1.10-0.75 (m, 13H) , 0.05 - -0.05 (dd, 6H) , EM (CLEM) [M+H] = 438.29, [M+Na] = 460.24.

Etapa 3 : Intermediario de Síntesis-3 A una solución de cloruro de oxalilo (2.94 mi, 33.6 mmol) en 100 mi de cloruro de metileno se añadió DMSO (4.88 mi, 68.8 mmol) lentamente a -78°. Después, de agitar 10 minutos, se añadió el Intermediario de Síntesis-2 (7 g, 15.99 mmol) en 100 mi de cloruro de metileno y se continuó la agitación durante 30 min. ' Se añadió TEA (11.14 mi, 80 mmol), y la mezcla se dejó calentar a -10°. Después de que se añadiera NaHC03 saturado, la mezcla de reacción se extrajo dos veces con cloruro de metileno (100 mi) Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2S04, se filtraron y se evaporaron dando el producto en bruto como un aceite amarillo. La filtración a través de una columna de Si02 corta, eluyendo con disolvente EtOAc al 15%/hexano, y concentración a vacío proporcionó 7 g (16 mmol, 100%) de Intermediario de Síntesis-3 como un aceite incoloro. RMN ? (500 MHz, CDC13) d ppm 9.6-9.5 (d, 1H) , 6.9 (m, 1H) , 6.4 (m, 1H) , 5.2-5.1(m, 1H) , 4.1-4.0 (m, 1H) , 2.7 (s, 3H) , 2.3-2.2 (m, 3H) , 2.2-1.8 (m, 5H) , 1.7-1.5 (m, 4H) , 1.4 -1.2 (m, 3H) , l.l-1.0(m, 3H) , 0.87 (s, 9H) , 0.03 (s, 3H) , 0.01 (s, 3H) , Etapa 4 : Intermediario de Síntesis-4 Sé siguió el procedimiento de Klar y col. (Angew. Chem. Int. Ed. 2006, 45, 7942-7948) . A 200 mi de THF a -78°C se añadieron 70 mi de LDA 0.5 M recién preparado (35 mmol), seguido por 8.48 g (35 mmol) de (S)-2-(2,2-dimet i 1 - 1 , 3 - dioxan- 4 - i 1 ) - 2 -met i lheptan- 3 - ona (Klar y col., Synthesis 2005, 2, 301-305) . La agitación se contiunuó durante 30 min a -30°. Después de enfriar a -78°, se añadió una solución de ZnCl2 1.0 M (35.0 mi, 35 mmol) , y la solución resultante se agitó durante 20 min. Se añadió una solución de Intermediario de Síntesis-3 (7 g, 16.06 mmol) en 50 mi de THF durante 20 min. La mezcla se agitó durante 8 horas adicionales a -78°C. La mezcla se vertió en NH4C1 saturado y se extrajo con EtOAc (300 mi) . Las fases orgánicas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2S04 y se concentraron a vacío. El residuo se purificó usando una columna de Si02 ( EtOAc/hexano , 0- 10%) proporcionando 7.5 g (11 mmol, 69%) de Intermediario de Síntesis-4 como el isómero que eluye primero y como el isómero de aldol principal. RMN 1H (500 MHz , CDCI3) d ppm 6.90 (m, 1H), 6.43 (m, 1H) , 5.15 -5.05 (m, 1H), 4.15 - 4.00 (m, 2H) , 4.00-3.80 (m, 2H) , 3.50-3.40 (m, 1H) , 3.30-3.20 (m, 1H) , 2.85 -2.75 (m 1H) , 2.69 (s, 3H) , 2.35 -2.15 (m, 2H) , 2.10-1.90 (m, 5H) , 1.75 - 0.75 (m, 41H ), 0.05 - -0.05 (d, 6H), EM (CLEM) [M+H] = 678.47, [M+Na] = 700.44.

Etapa 5 : Intermediario de Síntesis-5 A una solución de Intermediario de Síntesis-4 (8 g, 11.8 mmol) en 200 mi de cloruro de metileno a 0o se añadió 2,6-lutidina (6.87 mi, 59 mmol), seguido por trifluorometanosulfonato de terc-butildimetilsililo (8.13 mi, 35.4 mmol) . La mezcla se dejó calentar a RT durante toda una noche, se vertió en NaHC03 saturado y se extrajo con cloruro de metileno. Las fases orgánicas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2S04 y los disolventes se eliminaron a vacío. El residuo se purificó en una columna de Si02 (EtOAc/hexano, 5-10%) proporcionando Intermediario de Síntesis-5 (7.8 g, 9.84 mmol, 83%). RMN XH (500 MHz, CDC13) d ppm 6.90 (s, 1H) , 6.44 (s, 1H) , 5.15 - 5.05 (m, 1H) , 4.25 -4.20 (m, 1H) , 4.10 -4.00 (m, 1H) , 4.00-3.90 (m, 1H) , 3.90 - 3.75 (m, 1H) , 3.75 - 3.70 (m, 1H) , 3.10 -3.00 (, 1H) , 2.70 (s, 3H) , 2.35 -2.15 (m, 2H) , 2.00-1.85 (m, 5H) , 1.70 - 0.75 (m, 50H), 0.10 - -0.05 (m, 12H) . EM (CLEM) [M+H] = 792.48, [M+Na] = 814.44.

Etapa 6 : Me Intermediario de Síntesis-6 A una solución de Intermediario de Síntesis-5 (6.8 g, 8.58 mmol) en 100 mi de etanol a RT se añadió monohidrato de ácido p -toluenosul fónico (1.8 g, 9.44 mmol) . Después de agitar durante. 6 horas, se añadió NaHC03 y la mezcla se extrajo con EtOAc . Las fases orgánicas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2S04 y se concentraron a vacío. La reacción se repitió usando 1 g de Intermediario de Síntesis-5. Los productos en bruto combinados se purificaron usando un sistema de Biotage ( E t OAc / hexano , 10-40%) proporcionando Intermediario de Síntesis-6 (5 g, 6.65 mmol, 68%) . RMN 1K (5.00 MHz , CDC13) d ppm 6.9 (s, 1H) , 6.44 (s, 1H) , 5.15 -5.05 (m, 1H) , 4.15-4.00 (m, 1H) , 4.00-3.90 (m, 1H) , 3.90-3.80 (m, 1H) , 3.75-3.65 (m, 1H) , 3.65-3.55 (m, 1H) , 3.10-2.90 (m, 2H) , 2.69 (s, 3H) , 2.25-2.15 (m, 2H) , 2.00-0.75 (m, 50H) , 0.10- - 0.05 (m, 12H) . EM (CLEM) [M+H] = 752.42.

Etapa 7 : Intermediario de Síntesis-7 A una solución de Intermediario de Síntesis-6 (5 g, 6.65 mmol) en 200 mi de cloruro de metileno a 0o se añadió 2,6- lutidina (7.7 mi, 66.5 mmol) , seguida por trif luorometanosulf onato de terc-butildimetilsililo (9.16 mi, 39.9 mmol) . La mezcla se dejó calentar a RT durante toda una noche, después se vertió en NaHC03 saturado y se extrajo con cloruro de metileno. El disolvente orgánico se evaporó y la mezcla en bruto se filtró a través de una fase de Si02 con EtOAc/hexano (10-20%) proporcionando Intermediario de Síntesis-7 como un aceite (6.9 g, 100%) . RMN ¾ (500 MHz, CDC13) d ppm 6.9 (s, 1H) , 6.44 (s, 1H) , 5.20-5.05 (m, 1H) , 4.10 - 4.00 (m, 1H) 3.95 - 3.85 (m, 1H) , 3.80 - 3.75 (m, 1H) , 3.70 -3.60 (m, 1H) 3.60 - 3.50 (m, 1H) , 3.10 -3.00 (m, 1H) , 2.69 (s, 3H) , 2.25 2.15 (m, 2H) , 2.00 - 0.75 (m, 67H) , 0.10 - -0.05 (m, 24H) . Etapa 8 : Intermediario de Síntesis-8 A una solución de Intermediario de Síntesis-7 (5 g, 5.1 mmol) en 80 mi de cloruro de metileno y 40 mi de MeOH a 0o se añadió ácido (+/- ) -canfor-10-sulfónico (1.18 g, 5.1 mmol).

La mezcla se agitó durante 6 h a 0o, se vertió en NaHC03 ' saturado y se extrajo con cloruro de metileno. Las fases orgánicas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2S04 y se concentraron proporcionando Intermediario de Síntesis-8 como un aceite (3.6 g, 4.15 mmol, 81%). RMN H (500 MHz, CDC13) d ppm 6.90 (s, 1H) , 6.44 (s, 1H) , 5.2-5.1 (m, 1H) , 4.1-4.0 (m, 2H) , 3.85-3.75 (m, 1H) , 3.7-3.6 (m, 2H) , 3.1-3.0 (m, 1H) , 2.7 (s, 3H) , 2.3 -2.2 (m, 2H) , 2.0-1.9 (m, 6H) , 1.7-1.5 (m, 5H) , 1.5 -1.3 (m, 3H) , 1.3-1.1 (m, 6H) , 1.1-1.0 (m, 4H) , 1.0-0.8 (m, 35H) , 0.1- -0.1 (m, 18H) . EM (CLEM) [M+H] = 866.49.

Etapa 9 : Intermediario de Síntesis-9 A una solución de cloruro de oxalilo (0.8 mi, 9.14 mmol) en 40 mi de cloruro de metileno a -78° se añadió DMSO (1.24 mi, 17.5 mmol). Después de agitar durante 10 min, se añadió una solución de Intermediario de Síntesis-8 (3.6 g, 4.15 mmol) en 40 mi de cloruro de metileno. Después de 30 min, se añadió TEA (3.76 mi, 27.0 mmol) y la mezcla de reacción se dejó calentar a 0o durante 2 h. Se añadió NaHC03 saturado y la mezcla se extrajo con cloruro de metileno. Las fases orgánicas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2S04 y se concentraron a vacío proporcionando Intermediario de Síntesis-9 como una aceite (3.6 g, 4.16 mmol, 100%) . RMN 1H (500 MHz, CDC13) d ppm 9.77 (m, 1H) , 6.9 (s, 1H) , 6.44 (s, 1H) , 5.3 (s, 1H) , 5.2-5.1 (m, 1H) , 4.5-4.4 (m, 1H) , 4.1-4.0 (m, 1H) , 3.8-3.7 (m, 1H) , 3.1-3.0 (m, 1H) , 2.7 (s, 3H) , 2.6-2.1 (m, 4H) , 2.0-1.9 (m, 4H) , 1.7-1.5 (m, 4H) , 1.5 -1.3 (m, 5H) , 1.3-1.1 (m, 5H) , 1.1-1.0 (m, 3H) , 1.0-0.8 (m, 35H) , 0.1- -0.1 (m, 18H) .

Etapa 10: Intermediario de Síntesis-10 A una solución de Intermediario de Síntesis-9 (3.6 g, 4.16 mmol) en 120 mi de t-BuOH y 85 mi de THF a 0o se añadieron 30 mi de agua, 2-metibut-l-eno (18.5 g, 264 mmol), dihidrógenofosfato de sodio (1.6 g, 13.2 mmol) y clorito de sodio (2.98 g, 26.4 mmol) . Después de agitar a 2 h a 0o, la mezcla se vertió en solución de Na2S203 saturada (100 mi) y se extrajo tres veces con EtOAc (300 mi) . Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2S04, y se concentraron a vacío. El residuo se purificó usando un sistema Biotage (EtOAc/hexano, 10-50%) dando Intermediario de Síntesis-10 como un aceite incoloro (2.8 g, 3.18 mmol, 72%) . R N (500 MHz, CDC13) d ppm 6.93 (s, 1H) , 6.66 (s, 0.5H) , 6.46 (s, 0.5H), 5.25-5.0 (m, 1H) , 4.4 -4.3 (m, 1H) , 4.2-4.0 (m, 1H) , 3.9-3.7 (m, 1H) , 3.2-3.0 (m, 1H) , 2.7 (d, 3H) , 2.6 -2.4 (m, 1H) , 2.4-2.0 (m, 3H) , 2.0-1.0 (m, 23H), 1.0-0.8 (m, 35H) , 0.1- -0.1 (m, 18H) . EM (CLEM) [M+H] = 881.53.

Etapa 11: Intermediario de Síntesis-11 A una solución de Intermediario de Síntesis-10 (2.8 g, 3.18 mmol) en 5 mi de THF a RT se añadió TBAF (42 mi, 1.0 M) . La mezcla se agitó durante 6 horas, después se vertió en NH4C1 saturado, y se extrajo dos veces con EtOAc (300 mi) . Las fases orgánicas combinadas se lavaron con HCl (1.0 N, 200 mi), NaHC03 saturada y salmuera, y se secaron sobre Na2S04 dando Intermediario de Síntesis-11 como un aceite viscoso (2.6 g, 3.3 mmol, 100%). RMN ?? (500 MHz, CDC13) d ppm 6.9 (s, 1H) , 6.6-6.5 (m, 1H) , 5.2-5.1 (m,lH), 4.4-4.3 (m, 1H) , 4.15-4.05 (m, 1H) , 3.8-3.7 (m, 1H) , 3.4-3.2 (m, 1H) , 3.1-3.0 (m, 1H) , 2.8-2.7 (m, 2H) , 2.66 (d, 3H) , 2.5-2.4 (m, 1H) , 2.4-2.3 (m, 2H) , 2.3-2.2 (m, 1H) , 2.0-0.8 (m, 46H) , 0.1-0.0 (m, 12H) . EM (CLEM) [M+H] = 766.3. [M-H20] = 748.3. Etapa 12 : Me Mezcla 13 E/Z de Compuesto III A una solución de Intermediario de Síntesis-11 (2.6 g, 3.3 mmol) en 27 mi de THF a RT se añadió TEA (2.36 mi, 17 mmol) , seguido por cloruro de 2 , 4 , 6 -triclorobenzoílo (3.31 g, 13.57 mmol) . La mezcla de reacción se agitó durante 20 min, después se diluyó con 260 mi de tolueno. La solución de tolueno se añadió lentamente a una mezcla agitada de DMAP (3.86 g, 31.6 mmol) en 1400 mi de tolueno durante 4 h, después de lo que TLC indicó completacion. Se añadió HCl (4.0 N, 12.5 mi), y el disolvente se eliminó a vacío. El residuo se purificó parcialmente usando un sistema de Biotage (EtOAc/hexano, 0-10%) , proporcionando una mezcla que contenía un producto de monosililo y la mezcla anterior (isómeros 13 E/Z) incluyendo Compuesto III (1.1 g) . EM (CLEM) (520.2, 634.2) . Este material se sometió a desprotección sin purificación adicional.

Etapa 13: Compuesto III A una solución de la mezcla de reacción anterior (102 mg) a -20° se añadió 1 mi de TFA/CH2C12 (20% v/v) . La mezcla de reacción se transfirió a un baño de hielo y se agitó durante 1 h. El disolvente se retiró a vacío, añadiéndose pequeñas porciones de tolueno re-evaporando después, lo que proporcionó un sólido blanco. La misma reacción se repitió con 125 mg de la mezcla parcialmente purificada. Los dos residuos de la reacción se combinaron y purificaron en una columna de Si02 (EtOAc/hexano, 20-35%) que proporcionó un sólido blanco (180 mg) . El sólido blanco se llevó en 5 mi de MeOH, y se purificó mediante HPLC (Varían, detector Dynamax PDA-2; columna Waters C18; A: agua con TFA al 0.05%; B: acetonitrilo con TFA al 0.05%, isocrático) . Se recogieron dos picos principales (Pico 1. 73.4 mg, 38%; y Pico 2, 41.8 mg, 22%) .

El Pico 1 se determinó que es el isómero 13-Z (numeración 1-oxa) mediante observación de NOE entre el protón olefínico de C-14 y el metilo C-13. RMN K (500 MHz , CDC13) d ppm 7.14 (s, 1H) , 6.75 (s, 1H) , 5.15-5.05 (m, 1H) , 5.05-5.00 (m, 1H) , 4.45-4.35 (m, 1H) , 3.65 -3.55 (m, 1H) , 3.35-3.25 (m,lH), 2.92 (s, 3H) , 2.55-2.45 (m, 2H) , 2.35-2.25 (m, 2H) , 2.25-2.15 (m, 1H) , 2.00 (s, 3H) , 1.90-1.80 (m, 1H) , 1.80-1.65 (m, 5H) , 1.60-1.45 (m, 2H) , 1.45-1.30 (m, 5H) , 1.25-1.15 (m, 3H) , 1.05-0.95 (m, 6H) , 0.90-0.85 (t, 3H) . EM (CLEM) [M+H] = 520.3.

El Pico 2 se determinó que es el isómero 13 -E (Compuesto III para experimento del Ejemplo 7, a continuación) por ausencia de NOE entre el protón olefínico C-14 y el metilo C- 13. RMN XH (500 MHz, CDC13) d ppm 7.03 (s, 1H) , 6.65 (s, 1H) , 5.3-5.2 (m, 1H) , 5.05-5.00 (m, 1H) , 4.45-4.40 (m, 1H) , 3.65 - 3.60 (m, 1H) , 3.4-3.3 (m, 1H) , 2.77 (s, 3H) , 2.6-2.3 (m, 4H) , 2.15-2.05 (m, 1H) , 1.99 (s, 3H) , 1.95-1.85 (m, 1H) , 1.8-1.7 (m, 2H) , 1.57 (s, 3H) , 1.50-1.35 (m, 4H) , 1.29 (s, 3H) , 1.25- 1.10(m, 3H) , 1.0-0.9 (m, 6H) , 0.9-0.8 (t, 3H) . EM (CLEM) [M+H] = 520.3.

Estudios In-Vivo Orales con Epotilona D y Compuesto III Para cada compuesto (epotilona D y Compuesto III, preparado y descrito como por el experimento descrito de forma inmediatamente anterior) , se administraron dosis a tres ratones por grupo (10 mpk y 35 mpk) a 10 ml/kg usando PEG-400 al 85%, TPGS al 10%, y etanol al 5.0%. A diversos intervalos después de la dosificación, los niveles de compuesto de plasma, cerebro, e hígado se midieron tras homogeneización tisular, extracción con cromatografía líquida de acetonitrilo con espectrometría de masas en tándem (LC/MS/MS) . Los resultados de los estudios se resumen en las tablas 4 y 5 y además, los resultados del estudio a 35 mpk se muestran en la figura 9. Específicamente, la tabla 4 muestra la concentración de la epotilona D (Compuesto 1) y del Compuesto III en el cerebro después de administración oral (10 mpk) hasta 24 horas después de administrar dosis (para Compuesto III, a la extensión aún detectable dando LLQ) , y la tabla 5 muestra y la FIG. 9 traza, la concentración de epotilona D (Compuesto 1) y de Compuesto III en el cerebro después de administración oral (35 mpk) hasta 5 a 24 horas después de administrar dosis (de nuevo, para el Compuesto III, a la extensión detectable para compuesto III) . (No se preparó un trazado para los datos de la tabla 4 ya que sólo fue detectable un valor de concentración cerebral.) En las tablas 4 y 5, debajo de donde los valores eran <LLQ, se anota el valor LLQ entre paréntesis.

TABLA 4 TABLA 5 Como se puede ver, para el Compuesto III, los niveles de tejidos de las últimas veces (es decir, después de 1 hora o más) muestran que los niveles de Compuesto III disminuyen rápidamente en el tejido cerebral. Así, el Compuesto III tiene pobre retención cerebral tanto para lo observado en la carencia de niveles cerebrales medibles a 24 horas en ambos experimentos. La dosificación oral con epotilona D reveló razones de cerebro a plasma de 0.7 y 1.1 a 1 hora, reflejando buena penetración cerebral. A diferencia del compuesto Compuesto III, los niveles cerebrales de epotilona D se mantuvieron durante más de 24 horas (tablas 2, 4 y 5, figura 9-10) . La razón cerebro a hígado para administración de dosis oral de epotilona D indica que la epotilona D está retenida selectivamente en el cerebro, de forma consistente con los datos en las tablas 1 y 2 después de la administración de dosis IV. En particular, la razón cerebro a hígado para epotilona D fue de 8 y 19 a 24 horas después de administrar dosis a 10 mpk y a 35 mpk, respectivamente (tablas 4 y 5) . Estos valores reflejan velocidades de retención de cerebro a hígado altamente selectivas para epotilona D.

EJEMPLO 8 Datos de semivida de epotilona D tras administración IV, oral, e IP Para evaluar adicionalmente las propiedades de epotilona D para tratar tauopatías, la semivida cerebral de epotilona D se calculó a partir de múltiples estudios, y los resultados se mostraron en la tabla 6. Para calcular una semivida cerebral segura para un compuesto de semivida larga, necesitan tomarse medidas para varias semividas después de una dosis individual . A partir del estudio descrito en la tabla 2, donde se midieron las concentraciones cerebrales por 7 días después de una dosis única, la semivida cerebral de epotilona D (Compuesto I) después de dosificación IV es 61 horas (tabla 6) . La semivida cerebral en ratones después de múltiples vías de administración y dosificaciones promedió 46.0 +/- 7 horas (tabla 6) . De forma similar, la semivida cerebral después de dosificación IV en ratas fue de 31 horas (tabla 6) . En contraste, la semivida cerebral del Compuesto III fue claramente significativamente más corta que la epotilona D, como se refleja en la figura 9. Como una ilustración adicional de la semivida cerebral de la epotilona D, se proporciona la FIG. 10 que traza los resultados de un estudio (datos comunicados en la tabla 2, anteriormente) que muestra los niveles de concentración cerebral a periodos de tiempo de hasta 175 horas tras administrar dosis, tras una administración de bolo IV de 5 mpk.

TABLA 6 Lista de citas Altmann y col., "The Chemistry and Biology of epotilonas - The Wheel Keeps Turning, " Chem. Med. Chem Vol . 2 (2007) .

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Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims

REIVINDICACIONES Habiendo descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :

1. Uso de epotilona D en la preparación de un medicamento, en donde el medicamento es terapéuticamente efectivo en el tratamiento de enfermedad de Alzheimer en un paciente humano en necesidad de tratamiento de la misma.

2. Uso de epotilona D en la preparación de un medicamento, en donde el medicamento es terapéuticamente efectivo en el tratamiento de enfermedad asociada a Tau en un paciente en necesidad de tratamiento de la misma, en donde la enfermedad asociada a Tau se selecciona de demencia frontotemporal con Parkinsonismo enlazado a cromosoma 17 (FTDP-17) , parálisis supranuclear progresiva, degeneración corticobasal , enfermedad de Pick, enfermedad de los granos agirófilos, síndrome de Down, distrofia miotónica, enfermedad de Niemann-Pick C, demencia pugilística, enfermedad de Blint, y lesión cerebral traumática.

3. Uso de epotilona D de conformidad con la reivindicación 1 o 2, en donde la epotilona D se administra de manera intravenosa.

4. Uso de epotilona D de conformidad con la reivindicación 3, en donde la dosis mensual acumulativa de epotilona D administrada al paciente humano es de 30 mg/m2 o menos .

5. Uso de epotilona D de conformidad con la reivindicación 4, en donde la dosis mensual acumulativa de epotilona D administrada al paciente humano es de 6 mg/m2 o menos.

6. Uso de conformidad con la reivindicación 3 , en donde la dosis de epotilona D administrada intravenosamente durante un ciclo de un mes, independientemente del programa, está en el intervalo entre 0.01-5 mg/m2.

7. Uso de epotilona D de conformidad con la reivindicación 6, en donde la dosis de epotilona D administrada de manera intravenosa durante un ciclo de un mes, independientemente del programa, está en el intervalo entre 0.1-3 mg/m2.

8. Uso de epotilona D de conformidad con la reivindicación 1, en donde la dosis mensual acumulativa de epotilona D administrada al paciente humano es de 30 mg/m2 o menos.

9. Uso de conformidad con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde la epotilona D se administra de manera oral .

10. Uso de epotilona D de conformidad con la reivindicación 9, en donde la dosis de epotilona D administrada oralmente durante un ciclo de un mes, independientemente del programa, está en el intervalo de entre 0.03 a 60 mg/m2.

11. Formulación farmacéutica para la administración a un paciente humano, caracterizada porque, comprende una unidad de dosis de epotilona D de 0.0001-10 mg/m2.

12. Formulación farmacéutica para administración intravenosa a un paciente humano, caracterizada porque es adecuada para la administración de una dosis mensual acumulativa de epotilona D de 0.001-5 mg/m2.

13. Formulación farmacéutica para la administración oral a un paciente humano, caracterizada porque es adecuada para la administración de una dosis mensual acumulativa de epotilona D de 0.03-60 mg/m2.

14. Epotilona D, caracterizada porque es para el uso en el tratamiento de enfermedad de Alzheimer.

15. Epotilona D, caracterizada porque es para el 'uso en el tratamiento de una enfermedad asociada a Tau seleccionada de demencia frontotemporal con Parkinsonismo enlazado a cromosoma 17 (FTDP-17) , parálisis supranuclear progresiva, degeneración corticobasal , enfermedad de Pick, enfermedad de los granos agirófilos, síndrome de Down, distrofia miotónica, enfermedad de Niemann-Pick C, demencia pugilística, enfermedad de Blint, y lesión cerebral traumática.