MX2008011837A - Compuestos de union al dominio de repeticion de inhibidores de proteinas de apoptosis de baculovirus. - Google Patents

Compuestos de union al dominio de repeticion de inhibidores de proteinas de apoptosis de baculovirus.

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MX2008011837A
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Alain Boudreault
Patrick Bureau
James Jaquith
John W Gillard
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Abstract

Se expone un isómero, enantiómero, diasterioisómero o tautómero de un compuesto representado por la formula (I) o (II). (ver fórmula (I) o (II)) o una sal del mismo, en la cual R1, R2, R3, R100; R200, R300, A, A1, BG, Q Y Q1 son sustituyentes descritos en al presente; se expone también el uso de compuestos de la formula (I) y (II) para tratar trastornos proliferativos, tales como cáncer.

Description

COMPUESTOS DE UNION AL DOMINIO DE REPETICION DE INHIBIDORES DE PROTEINAS DE APOPTOSIS DE BACULOVIRUS CAMPO DE LA INVENCION La presente invención hace referencia a compuestos de puente que se unen a los dominios IAP BIR y que son útiles para el '¡tratamiento de I I trastornos proliferantes y de regulación de la apoptosis, tales como el cáncer.
ANTECEDENTES DE LA INVENCION La apoptosis o la muerte celular programada, usualmente ocurre en el desarrollo y mantenimiento normal de tejidos saludables 'en organismos multicelulares. Es un proceso complejo que da como resultado |la remoción de las células dañadas, enfermas o redundantes en el desarrollo, n ausencia de signos de inflamación o necrosis.
Se sabe que las vías apoptóticas intrínsecas se encuentran sin I regulación, particularmente en casos de cáncer y síndromes linfoproliferantes, i así como en los trastornos auto inmunes, tales como la esclerosis múltiple, i enfermedades neurodegenerativas y en la inflamación. Igualmente, las alteraciones de la respuesta apoptótica del huésped se han ¡ descrito en el desarrollo o mantenimiento de las infecciones virales y bacterianas. i Las caspasas son una familia de enzimas proteolíticas de la I clase de las proteasas de cisteína, las cuales se conoce que inician y ejecutan la apoptosis. En células normales, las caspasas están presentes como cimógenos inactivos, que se activan de forma catalítica después de las señales externas, por ejemplo, aquellas que resultan de la activación del receptor de muerte, orientado por un ligando, tal como las citoquinas o los agentes inmunológicos o por liberación de los factores mitocondriales, tales como el citocromo C posterior a la lesión celular inducida por agentes genotóxicos, quimiotóxicos o por radiación. Los inhibidores de proteínas de la i apoptosis (IAP) constituyen una familia de proteínas que tiene la capacidad de unirse a las caspasas e inhibirlas, de este modo suprimen la apoptosis celular. Debido a su función principal en la regulación de la actividad de las caspasas, las IAP tienen la capacidad de inhibir la muerte celular programada de una amplia gama de factores desencadenantes, que incluyen la pérdida de mecanismos de control del crecimiento celular homeostático o endógeno, así como los fármacos quimioterapéuticos y la radiación. Las IAP contienen de uno a tres dominios estructurales homólogos, denominados dominios (BIR) de repetición de IAP de baculovirus. Asimismo, pueden contener un dominio de dedo de ANILLO de zinc en el extremo C-terminal, con la capacidad de inducir la ubiquitihilación de las moléculas que se unen a la IAP por medio de su función de ligasa E3. Las IAP, XIAP, HIAP1 (también denominada clAP2) y HIAP2 (clAP1 ) humanas tienen cada una tres dominios BIR y un dedo de ANILLO de zinc terminal carboxi. Otra IAP, la NAIP, tiene tres dominios BIR (BIR1 , BIR2 y BIR3), pero no tiene dominio de ANILLO, mientras que Livin, TslAP y MLIAP tienen un dominio BIR único y un dominio de ANILLO. El inhibidor de la apoptosis ligado al cromosoma X (XIAP) es un ejemplo de una IAP que puede inhibir a la caspasa iniciadora, conocida como caspasa-9 y a las caspasas efectoras, la caspasa-3 y la caspasa-7, mediante unión directa. También puede inducir la eliminación de caspasas por medio de la vía de la proteasoma mediada por la ubiquitilación de la actividad de la ligasa E3 de un dominio de dedo de ANILLO de zinc. La XIAP se une a la vía del dominio BIR3 de la caspasa-9 y la inhibe. El dominio enlazador BIR2 de la XIAP inhibe la actividad de las caspasas -3 y -7. Los dominios BIR también se han asociado con las interacciones de las IAP con el factor de necrosis tumoral-factor receptor asociado (TRAF) -1 y -2, así como con TAB1 , como proteínas adaptadoras que dan señales de supervivencia por medio de la activación de NFkB. Entonces, las IAP funcionan como un freno directo a la cascada de la apoptosis, al evitar la acción de las caspazas o al inhibir a las caspasas activas y redirigir las señales celulares hacia un modo para promover la supervivencia. El progreso en el campo relacionado con el cáncer ha conducido a un nuevo paradigma de la biología del cáncer, donde la neoplasia se puede ver como la incapacidad de las células cancerosas de ejecutar las vías normales de apoptosis. Las células normales reciben retroalimentación continua de su ambiente, por medio de varios factores intracelulares y extracelulares, que si son removidas de este contexto "se suicidan". Esta inducción de la apoptosis se logra mediante la activación de la cascada de caspasas. Sin embargo, las células cancerosas adquieren la capacidad de sobreponerse o superar esta regulación de la apoptosis y continuar con la proliferación inadecuada. La mayoría de tratamientos contra el cáncer inducen al menos una respuesta apoptótica parcial en la célula cancerosa objetivo, causando la remisión o la iniciación de la regresión tumoral. En varios casos, sin embargo, las células residuales que son resistentes a la apoptosis tienen la capacidad de escapar a la terapia y de continuar el proceso de cambios oncogénicos/genéticos, enfermedad metastásica que supera nuestra capacidad de tratar eficazmente la enfermedad. Además, la mayoría de terapias contra el cáncer, incluso la terapia de radiación y la quimioterapia tradicional inducen la apoptosis en las células cancerosas, pero causan daño celular adicional, debido a su falta de especificidad para inducir la apoptosis únicamente en las células cancerosas. La necesidad de mejorar la especificidad / potencia de los agentes promotores de la apoptosis utilizados en el tratamiento del cáncer y de hecho, otros desórdenes proliferantes, es importante debido a los beneficios de la reducción de los efectos secundarios asociados con la administración de estos agentes. Por lo tanto, encontrar medios novedosos de inducir la apoptosis en las células cancerosas es una necesidad médica y su solución ofrece la posibilidad de obtener tratamientos totalmente nuevos contra el cáncer. Existe una cantidad creciente de datos que indican que las células cancerosas pueden evitar la apoptosis por la sobre-expresión sostenida de uno o más miembros de la familia de proteínas IAP, según se ha documentado en muchas muestras de biopsias de tumores primarios, así como en las líneas celulares cancerosas establecidas. Se ha demostrado en estudios epidemiológicos que la sobre-expresión de varias IAP se asocia con un pronóstico clínico y de supervivencia malo. En relación con XIAP esto se presenta en cánceres tan diferentes como la leucemia y el cáncer de ovario. La sobre-expresión de HIAP1 y HIAP2 resultante de la frecuente ampliación cromosómica de la región 11 q21 -q23, que engloba ambas, se ha observado en un variedad de neoplasias, que incluyen meduloblastomas, carcinomas de células renales, glioblastomas y carcinomas gástricos. Las moléculas reguladoras negativas (X)IAP tales como XAF, parece que son supresoras tumorales que con mucha frecuencia se pierden en los cánceres clínicos. Entonces, por su capacidad de suprimir la activación y ejecución de los mediadores intrínsecos de la apoptosis, las caspasas, las IAP pueden contribuir directamente con el progreso tumoral y la resistencia a la intervención farmacéutica. La inducción de la apoptosis en las células cancerosas por el uso de pequeñas moléculas potentes que se unen a los dominios específicos de la IAP es el tema central de esta invención. Nosotros y otras personas hemos demostrado la importancia crítica de los dominios BIR individuales para afectar la función anti-apoptótica de las IAP. Hemos propuesto que los antagonistas de las IAP, que se pueden unir a los dominios BIR individuales, alteran la función anti-apoptótica de las IAP. Efectivamente, los BIR individuales sirven como sitios críticos de enlace de los residuos N-terminal Ser-Gli-Val-Asp, Ser-Gli-Pro-lle y Ala-Tre-Pro-lle de las caspasas 3, 7 y 9, respectivamente y dicha unión es vital para la función inhibidora de caspasas de las ???. La unión de los residuos jde N-terminal AxPy tetra-péptidos a la XIAP provoca la liberación de las caspazas activas 3, 7 y 9. En el caso de las demás ???, tales como c-IAPI y C-IAP2, las funciones de los BIR, cuando están unidos al ligando, parecen dirigir la activación de la función de ANILLO de la ubiquitin ligasa de las ??? para unirse ;al objetivo o a las mismas ??? individuales, para causar la pérdida proteosomal. En cualquier caso, los antagonistas de moléculas pequeñas de las ??? deben ser excelentes agentes inductores de la apoptosis, con usos potenciales en casos de cáncer, trastornos proliferantes e inflamación. Una proteína de mitocondria de mamífero, es decir, un activador de caspasas de segunda derivación de mitocondria (SMAC) que actúan negativamente con la función de la ???, se une principalmente á los sitios BIR 3 ó 2 de las respectivas ??? por medio de un tetrapéptido AxPy amino-terminal. Cuatro proteínas inductoras de muerte de Drosophila, Reaper, HID, Grim y Sickle, que interactúan negativamente con la capacidad de las ??? de inhibir las caspasas, también se unen a los dominios BIR de las ??? de Drosophila análogas, por medio de un tetrapéptido AxPy amino-terminal, una secuencia que se adapta al sitio de unión de BIR y altera las interacciones IAP-caspasa. La topología general de los dominios BIR individuales se conserva bastante entre las ??? humanas y entre los dominios BIR individuales de las IAP humanas, siendo cada BIR un dominio polipeptídico de zinc, atrapado en un átomo coordinado de Zn por dos residuos de cisteína y uno de histidina. Las estructuras cristalográficas de rayos X de BIR2 y BIR3 de XIAP describen un espacio de unión crítico para el diseño AXPY de la superficie de cada dominio BIR. Existen alteraciones en la intervención de las secuencias de aminoácidos que forman el sitio de unión y hacen una ranura tanto en BIR2 como en BIR3. Igualmente, hemos descrito los dominios homólogos de los BIR de otras IAP clAP1 y clAP2. Esto abre la posibilidad de obtener varias clases de compuestos de unión naturales y sintéticos que tendrán diferente especificidad y afinidad de unión entre cada uno de los dominios BIR para cada una de las IAP. Discernir la manera en la cual dichos compuestos afectarán la función biológica de las IAP en las células cancerosas contra las células normales es un nuevo reto importante en el descubrimiento de agentes con mecanismos novedosos para tratar el cáncer y otros trastornos proliferantes donde se observa la función irregular de la IAP. Encontramos que ciertas clases de compuestos de unión a BIR se pueden unir a los BIR de IAP, con selectividad y potencia inesperadas, dando como resultado distintas ventajas terapéuticas para ciertas clases estructurales, potencialmente resultantes de la pérdida de la proteína celular IAP o de ambas. Se ha descrito una cantidad de compuestos peptídicos similares a AxPy y compuestos peptídicos AxPy modificados que activan la caspasa 3 de la célula al unirse a XIAP BIR3. Para obtener revisiones recientes, consulte Elmore y col., Annual Reports in Medicinal Chemistry, 40 (2006) 245-262; Sun y col., Bioorg. Med. Chem. Let. 15 (2005) 793-797; Oost y col., J. Med. Chem., 2004, 47(18), 4417-4426; Park y col., Bioorg. Med. Chem. Lett. 15 (2005) 771 -775; Franklin y col., Biochemistry, Vol. 42, N° 27, 2003, 8223-8231 ; Kip y col., Biochemistry 2002, 41 , 7344-7349; Wu y col., Chemistry and Biology, Vol. 0, 759-767 (2003); Glover y col., Analytical Biochemistry, 320 (2003) 157-169; Solicitud de patente publicada de E.U.A. N° 20020177557; y solicitudes de patente publicada de E.U.A. Nos. 20040180828; US2006/0025347A1 ; US2005/0197403A1 y US2006/0194741 A1 . Los compuestos antes mencionados han demostrado tener por objetivo un dominio BIR3 de XIAP aislado por medio del desplazamiento de una sonda marcada con fluorescencia y parecen inducir un evento apoptótico en un conjunto seleccionado de líneas celulares con potencia en el intervalo inferior micromolar-nanomolar. Estos compuestos mostraron poca actividad in vivo; probablemente debido a la biodisponibilidad limitada que puede por lo tanto, haber limitado la aplicación terapéutica. Entonces, los dominios IAP BIR representan un objetivo atractivo para el descubrimiento y desarrollo de agentes terapéuticos novedosos, especialmente para el tratamiento de desórdenes proliferantes, tales como el cáncer.
BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION Los inventores han descrito anteriormente una serie de compuestos que se unen a las unidades BIR de las IAP e inducen apoptosis en varias líneas celulares cancerosas (Publicación de solicitud de patente de E.U.A N° 20060264379). Una característica de estos compuestos es la unidad de pirrolidina central. En la presente describimos que la unión de dos unidades de unión BIR vía la pirrolidina sustituida, con preferencia por el sitio, orientación y naturaleza química de la unión, proporciona clases novedosas y evidentemente ventajosas de los compuestos con un aumento en la potencia de hasta 1000 veces, como resultado de la inducción de la apoptosis, contra varias líneas celulares cancerosas, sobre sus correspondientes compuestos de unión BIR no enlazados y que estos compuestos muestran la potencia y estabilidad requeridas, así como las propiedades farmacéuticas para el tratamiento de cánceres humanos. Ventajosamente, la naturaleza química del grupo de enlazadores se puede seleccionar para que cause la traslación de la alta potencia celular intrínseca (sub-nanomolar) a una potencia de microgramos / kg al inhibir o suprimir las IAP en varios modelos xenotrasplantados in vivo de cánceres humanos. Además, los compuestos descritos muestran estabilidad farmacéuticamente aceptable en una serie de tejidos y fluidos de mamíferos y tienen propiedades farmacéuticas que aseguran la solubilidad y biodisponibilidad adecuadas para varias vías de administración, adecuadas para el uso clínico. Dichos resultados de la I administración causan efectos sostenidos in vivo en mamíferos, según las Í determinaciones en tejidos normales y tumorales.
En una modalidad de la presente invención, se proporciona un isómero, enantiómero, diasteroisómero o tautómero de un compuesto representado por la fórmula I o II: donde m es 0, 1 ó 2; Y es NH, O o S; BG es 1)-X-L-X1-; X y X1 se seleccionan independientemente de 1) 0, 2) NR13, 3) S, 4) -CrC6 alquil-, 5) -CrC6 alquil-O-, 6) -Ci-C6 alquil-NR13-, 7) - Ci-C6 alquil-S-, O II O ) vH o ; L se selecciona entre: 1 ) -C1-C20 alquil-, 2) -C2-C6 alquenil-, 3) -C2-C4 alquinil-, 4) -C3-C7 cicloalquil-, 5) -aril-, 6) -bifenil-, 7) - heteroaril-, 8) - heterociclil-, 9) -Ci-C6 alquil-(C2-C6 alquenil)- C C6 alquil-, ) -Ci-C6 alquil-(C2-C4 alquenil)- C C6 alquil- 1 1 ) -Ci-C6 alquil-(C3-C7 cicloalquil)- Ci-C6 alquil- 12) -C C6 alquil- aril-Ci-C6 alquil-, 13) -C C6 alquil-bifenil— d-C6 alquil-, 14) -C1 -C6 alquil-heteroaril-Ci -C6 alquil-, ) -CrC6 alquil-heterociclil-Ci-C6 alquil-, 16) -CrC6 alquil-Y-d-Ce alquil-, 17) -aril-Y-aril- 18) -heteroaril-Y-heteroaril-, 19) -heterociclil-Y-heterociclil-, 21 ) O u N alquilo C C6 —i H donde el alquilo, alquenilo, alquinilo y cilcloalquilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R6 y el arilo, bitenilo, heteroarilo y heterociclilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R10; Q y Q1 se seleccionan independientemente entre 1 ) NR R5, 2) OR11 o 3) S(O)mR11 o Q y Q1 se seleccionan independientemente entre 1 ) arilo o 2) heteroarilo, el arilo y el heteroarilo que son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R10; A y A1 se seleccionan independientemente entre 1 ) -CH2-, 2) -CH2CH2- 3) -CH(d-C6 alquil)-, 4) -CH(C3-C7 cicloalquil)-, 5) -C3-C7 cicloalquil-, 6) -CHÍd-Ce alquil-C3-C7 cicloalquil)-, 7) -C(0) - o 8) -C(O)OR13; R1 y R100 se seleccionan independientemente entré 1 ) H o 2) C1-C6 alquilo sustituido opcionalmente por uno o más sustituyentes R6; R2 y R200 se seleccionan independientemente entre 1 ) H o 2) C1-C6 alquilo sustituido opcionalmente por uno o más sustituyentes R6; R3 y R300 son C-i-C6 alquilo independientes, sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R6; R4 y R5 se seleccionan independientemente entre 1 ) H, 2) haloalquilo, 3) <-Ci-C6 alquilo, 4) f-C2-C6 alquenilo, 5) <— C2-C4 alquinilo, 6) <-C3-C7 cicloalquilo, 7) <-C3-C7 cicloalquenilo, 8) <— arilo, 9) *— heteroarilo, 10) <— heterociclilo, 1 1 ) <— heterobiciclilo, 12) ^C(0)-R11 , 13) ^C(O)O-R11 , 14) ^C(=Y)NR8R9 o ) ^S(0)2-R11 , donde el alquilo, alqueniio, alquinilo, cilcloalquilo y cicloalquenilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R6;y en donde el arilo, heteroarilo, heterociciilo y heterobiciclilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R10¡ R6 es ' 1 ) halógeno, 2) NO2, 3) CN, 4) haloalquilo, ) Ci-C6 alquilo, 6) C2-C6 alqueniio, 7) C2-C4 alquinilo, 8) C3-C7 cicloalquilo, 9) C3-C7 cicloalquenilo, ) arilo, 1 1 ) heteroarilo, ¡ í 12) heterociciilo, 13) heterobiciclilo, 14) OR7, 15) S(0)mR7, 16) NR8R9, 17) NR8S(0)2R11 , 18) COR7, 19) C(O)OR7, 20) CONR8R9, 21 ) S(O)2NR8R9 22) OC(O)R7, 23) OC(O)Y-R11 , 24) SC(0)R7 o 25) NC(Y)NR8R9, donde el arilo, heteroarilo, heterociclilo y hetérobiciclilo sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R10; ! R7 es 1 ) H, 2) haloalquilo, 3) Ci-C6 alquilo, 4) C2-C6 alquenilo, 5) C2-C4 alquinilo, 6) C3-C7 cicloalquilo, 7) C3-C7 cicloalquenilo, 8) arilo, 9) heteroarilo, 10) heterociclilo, 11 ) heterobiciclilo, i 12) R8R9NC(=Y) o 13) C C6 alquil-C2-C4 alquenilo o 14) C C6 alquil-C2-C alquinilo, donde el alquilo, alquenilo, alquinilo, cilcloalquilo y cicloalquenilo i R son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R ;; y en donde el arilo, heteroarilo, heterociclilo y heterobiciclilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R10; R8 y R9 son cada uno independientemente 1) H, 2) haloalquilo, 3) -C C6 alquilo, 4) -C2-C6 alquenilo, 5) C2-C4 alquinilo, 6) -C3-C7 cicloalquilo, 7) C3-C7 cicloalquenilo, 8) arilo, 9) heteroarilo, 10) heterociclilo, 11 ) heterobiciclilo, 12) C(0)R11, 13) C(O)Y-R 1o 14) S(0)2-R1 1 , donde el alquilo, alquenilo, alquinilo, cilcloalquilo y cicloalquenilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R6; y en donde el arilo, heteroarilo, heterociclilo y heterobiciclilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R10; o R8 y R9 junto con el átomo de nitrógeno al cuál están unidos forman un anillo heterocíclico de cinco, seis . o siete miembros, opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes R6; R10 es 1 ) halógeno, 2) N02, 3) CN, 4) B(OR13)(OR14), 5) Ci-C6 alquilo, 6) C2-C6 alquenilo, 7) C2-C4 alquinilo, 8) C3-C7 cicloalquilo, 9) C3-C7 cicloalquenilo, 10) haloalquilo, 1 1 ) OR7, 12) NR8R9, 13) SR7, 14) COR7, 15) C(O)OR7, 16) S(O)mR7, j 17) CONR8R9, 18) S(O)2NR8R9, 19) arilo, 20) heteroarilo, 21 ) heterocicl'ilo o 22) heterobiciclilo, donde el alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo y cicloalquenilo opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes R6; R11 es 1 ) haloalquilo, 2) d-Ce alquilo, 3) C2-C6 alquenilo, 4) C2-C4 alquinilo, 5) C3-C7 cicloalquilo, ' 6) C3-C7 cicloalquenilo, 7) arilo, 8) heteroarilo, 9) heterociclilo o 10) heterobiciclilo, donde el alquilo, alquenilo, alquinilo, cilcloalquilo y cicloalquenilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R6; y en donde arilo, heteroarilo, heterociclilo y heterobiciclilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R10; R12 es 1 ) haloalquilo, 2) d-Ce alquilo, 3) C2-C6 alquenilo, 4) C2-C4 alquinilo, 5) C3-C7 cicloalquilo, 6) C3-C7 cicloalquenilo, 7) arilo, 8) heteroarilo, 9) heterociclilo, 10) heterobiciclilo, 11 ) C(O)-R11, 12) C(O)O-R1\ 13) C(O)NR8R9, 14) S(O)m-R11 o 15) C(=Y)NR8R9, donde el alquilo, alquenilo, alquinilo, cilcloalquilo y cicloalquenilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R6; y en donde el arilo, heteroarilo, heterociclilo y heterobiciclilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R10; R13 y R14 son cada uno independientemente 1 ) H o 2) Ci-C6 alquilo o R13 y R14 se combinan para formar un anillo heterocíclico anillo heterobicíclico; R20 es 1 ) H, 2) NH2 o 3) NHFmoc; o un profármaco; o el compuesto de la fórmula l ¡ o II se marca con un marcador detectable o un identificador de afinidad. En otro aspecto de la presente invención, se proporciona un compuesto intermedio representado por la fórmula 1 -iv: donde PG3, R1, R2, R3, R4 y R5 son tal como se; definen en la presente. En otro aspecto de la presente invención, se proporciona un compuesto intermedio representado por la fórmula 2-iv: R1 O R2 H 2-iv donde PG4, R1 , R2, R3, R4 y R5 son tal como se definen en la presente. En otro aspecto de la presente invención, se proporciona un compuesto intermedio representado por la fórmula 3-ii: ; R donde PG4. R1. R2. R3. A v Q son tal como se definen en la presente, y L es -(CH2)r-, -(CH2)r-Y-(CH2)r-, -alquil-aril-alquil-, -alquil-heteroaril-alquil-, cicloalquilo, arilo o heteroarilo. En otro aspecto de la presente invención, se proporciona un compuesto intermedio representado por la fórmula 4(i): 4-i donde PG4, PG400, L, R1 , R100, R2, R200, R3, R300, A, A1 , Q y Q1 son tal como se definen en la presente. En otro aspecto de la presente invención, se proporciona un compuesto intermedio representado por la fórmula 6-ii: 6-ii donde PG4, PG400, R , R100, R2, R200, R3, R300, A, A1, Q y Q1 son tal como se definen en la presente.
En otro aspecto de la presente invención, se proporciona un compuesto intermedio representado por la fórmula 7-v: 7-v donde PG4, PG400, L, R1, R100, R2, R200, R3, R300, A, A1, Q y Q1 son tal como se definen en la presente. En otro aspecto de la presente invención, se proporciona un compuesto intermedio representado por la fórmula 8-ii: 8- ¡i donde PG4, r, L, R 00, R200, A1 y Q son tal como se definen en la presente. En otro aspecto de la presente invención, se proporciona un compuesto intermedio representado por la fórmula 8-iii: R2 H O A - Q 8-iii donde PG4, r, L, R1 , R100, R2, R200, R3, A, A1 , Q y Q1 son tal como se definen en la presente. En otro aspecto de la presente invención, se proporciona un compuesto intermedio representado por la fórmula 17-i: donde PG4, L, R1, R100, R2, R200, R3, R300, A, A1 , Q y Q1 son tal como se definen en la presente. En otro aspecto de la presente invención, se proporciona un compuesto intermedio representado por la fórmula 18-i: donde PG4, L, F¡\ R100, R2, R200, R3, R300, A, A1, Q y Q1 son como se definen en la presente. En otro aspecto de la presente invención, se proporciona compuesto intermedio representado por la fórmula 19-2: 19-2 donde PG1 , PG2, L y X son tal como se definen en la presente. En otro aspecto de la presente invención, se proporciona un compuesto intermedio representado por la fórmula 19-3: donde PG2, L y X son tal como se definen en la présente. En otro aspecto de la presente invención, se proporciona un compuesto intermedio representado por la fórmula 19-8: 19-8 donde PG4, L, X, X1, R1 , R100, R2, R200, R3, R300, R4, R400, R5 y R500 son tal como se definen en la presente. En otro aspecto de la presente invención, se proporciona un compuesto intermedio representado por la fórmula 20-1 a: donde PG1 , definen en la presente.
En otro aspecto de la presente invención, se proporciona un compuesto intermedio representado por la fórmula 20-2: ! donde PG4, L, X y X1 son tal como se definen en la presente. i En otro aspecto de la presente invención, se proporciona un | compuesto intermedio representado por la fórmula 20-4: ! I donde PG4, L, X, X1, R1 , R100, R2, R200, R3, R300, R4, R400, R5 y R500 son tal como se definen en la presente. En otro aspecto de la presente invención, se proporciona un procedimiento para producir los compuestos representados por la fórmula I, descritos anteriormente en la presente y el procedimiento comprende: a) acoplar dos productos intermedios representados por la fórmula 1 -iv: 1 -iv donde PG3, R1 , R2, R3, A y Q son tal como se definen en la presente, en un solvente y b) eliminar los grupos protectores para formar los compuestos de la fórmula I. En otro aspecto de la presente invención, se proporciona un procedimiento para producir los compuestos representados por la fórmula I, descritos anteriormente en la presente y el procedimiento comprende: a) acoplar un producto intermedio representado por la fórmula 2-iv: donde PG4 es un grupo protector y R , R2, R3, A y Q son tal como se definen en la presente, y un diácido (0.5 equivalente) activado en un solvente y b) eliminar los grupos protectores para formar los compuestos de la fórmula I. En otro aspecto de la presente invención, se proporciona un método de preparación de una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de fórmula I y II, por el tratamiento de un compuesto de fórmula I o II con 1 a 2 equivalentes de ácido farmacéuticamente aceptable, según se define en la presente. En otro aspecto de la presente invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto, según se describió anteriormente, mezclado con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable. En otro aspecto de la presente invención, se proporciona una composición farmacéutica adaptada para la administración como agente de tratamiento de un trastorno proliferante en un sujeto, que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto, según se describió anteriormente. En otro aspecto de la presente invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula I en combinación con uno o más agonistas del receptor de muerte, por ejemplo, el agonista del receptor TRAIL. En otro aspecto de la presente invención se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula I en combinación con cualquier agente terapéutico que aumente la respuesta de uno o más agonistas del receptor de la muerte, por ejemplo, las citoquinas citotóxicas, tales como los interferones. En otro aspecto de la presente invención se proporciona un método de preparación de una composición farmacéutica y el método comprende: mezclar un compuesto, según se describió anteriormente, con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable. En otro aspecto de la presente invención se proporciona un método para el tratamiento de un padecimiento que se caracteriza por apoptosis insuficiente y el método comprende: administración a un sujeto que lo necesite, de una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición farmacéutica, según se describió anteriormente, como tratamiento del estado de enfermedad. En otro aspecto de la presente invención, se proporciona un método para modular la función de la IAP, que comprende: poner en contacto a una célula con el compuesto de la presente invención de manera que se evite la unión de la proteína de unión BIR con un dominio IAP BIR y por lo tanto, modular la función de la IAP. En otro aspecto de la presente invención se proporciona un método para el tratamiento de una enfermedad proliferante, que comprende: la administración a un sujeto que lo necesite, de una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición farmacéutica, según se describió anteriormente, como tratamiento de la enfermedad proliferante. En otro aspecto de la presente invención se proporciona un método para el tratamiento del cáncer, que comprende: la administración a un sujeto que lo necesite, de una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición farmacéutica, según se describió anteriormente, como tratamiento del cáncer. En otro aspecto de la presente invención se proporciona un método para el tratamiento del cáncer, que comprende: la administración a un sujeto que lo necesite, de una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición farmacéutica, según se describió anteriormente, en combinación o en secuencia con un agente seleccionado entre: a) un modulador de receptores de estrógenos, b) un modulador de receptores de andrógenos, c) un modulador de receptores de retinoides, d) un agente citotóxico, e) un agente anti-proliferante, f) un inhibidor de la prenil-proteína transíerasa, g) un inhibidor de la HMG-CoA reductasa, h) un inhibidor de la VIH proteasa, i) un inhibidor de la transcriptasa inversa, k) un inhibidor de la angiogénesis, I) un agonista de PPAR-?. m) un agonista de PPAR-d. n) un inhibidor de la resistencia inherente a los multifármacos, o) un agente antiemético, p) un agente útil para el tratamiento de la anemia, q) agentes útiles para el tratamiento de la neutropenia, r) un fármaco que mejora el sistema inmunológico, s) un inhibidor de proteasomas, t) un inhibidor de HDAC, u) un inhibidor de la actividad similar a la de la quimiotripsina que presenta la proteasoma o v) inhibidores de la ligasa E3, w) un modulador del sistema inmunológico tal como, pero que no se limite a, interferón alfa, Bacillus Calmette-Guerin (BCG) y radiación ionizante (UVB) que puede inducir la liberación de citoquinas, tales como las interleuquinas, TNF o inducir la liberación de los ligandos de los receptores de la muerte tales como TRAIL, x) un modulador de los receptores de la muerte, los agonistas TRAIL y TRAIL tales como los anticuerpos humanizados HGS-ETR1 y HGS-ETR2, o en combinación o de manera secuencial con la terapia de radiación, para el tratamiento del cáncer. En otro aspecto de la presente invención, se proporciona un método para el tratamiento o prevención de un trastorno proliferante en un sujeto, que comprende: la administración al sujeto de una cantidad terapéuticamente eficaz de la composición descrita anteriormente. En otro aspecto de la presente invención el método comprende además, la administración al sujeto, de una cantidad terapéuticamente eficaz de un agente quimioterapéutico antes, simultáneamente o después de la administración de la composición. En otro aspecto, el método comprende además, la administración al sujeto, de una cantidad terapéuticamente eficaz de un agonista del receptor de la muerte antes, simultáneamente o después de la administración de la composición. El agonista del receptor de la muerte es TRAIL o el agonista del receptor de la muerte es un anticuerpo TRAIL. El agonista del receptor de la muerte usualmente se administra en una cantidad que produce un efecto sinérgico.
En otro aspecto, se proporciona el uso del compuesto según se describió anteriormente para la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir un estado de enfermedad que se caracteriza por la apoptosis insuficiente. En otro aspecto, se proporciona el uso del compuesto según se describió anteriormente para la fabricación de un medicamentó para tratar o prevenir un trastorno proliferante. En otro aspecto, se proporciona el uso del compuesto según se describió anteriormente, en combinación con un agente para la: fabricación de un medicamento para tratar o prevenir un trastorno proliferante, donde el agente se selección entre: a) un modulador de receptores de estrógenos, b) un modulador de receptores de andrógenos, c) un modulador de receptores de retinoides, d) un agente citotóxico, e) un agente antiproliferante, f) un inhibidor de la prenil-proteína transferasa, g) un inhibidor de la HMG-CoA reductasa, h) un inhibidor de la VIH proteasa, i) un inhibidor de la transcriptasa inversa, k) un inhibidor de la angiogénesis, I) un agonista de PPAR-?, m) un agonista de PPAR-d, n) un inhibidor de la resistencia inherente a los multifármacos, o) un agente antiemético, p) un agente útil para el tratamiento de la anemia, ! q) agentes útiles para el tratamiento de la neutropenia, r) un fármaco que mejora el sistema inmunológico.; s) un inhibidor de proteasomas, t) un inhibidor de HDAC, u) un inhibidor de la actividad similar a la de la quimiotripsina que presenta la proteasoma o v) inhibidores de la ligasa E3, w) un modulador del sistema inmunológico tales como, pero que no se limita a, interferón alfa, Bacillus Calmette-Guerin (BCG) y radiación ionizante (UVB) que puede inducir la liberación de citoquinas, tales como las interleuquinas, TNF o inducir la liberación de los ligandos de los receptores de la muerte tales como TRAIL, x) un modulador de los receptores de la muerte, los agonistas TRAIL y TRAIL tales como los anticuerpos humanizados HGS^-ETRI y HGS- ETR2, o en combinación o de manera secuencial con la terapia de radiación.
En otro aspecto, se proporciona el uso del compuesto según se describió anteriormente, en combinación con un agonista del ¡receptor de la i muerte para la fabricación de un medicamento para tratar ,o prevenir un trastorno proliferante en un sujeto. En otro aspecto, se proporciona una composición farmacéutica que comprende el compuesto descrito anteriormente, mezclado con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable para tratar o prevenir un estado de enfermedad que se caracteriza por apoptosis insuficiente. En otro aspecto, se proporciona una composición farmacéutica que comprende el compuesto descrito anteriormente en combinación con cualquier compuesto que aumente el nivel circulante de uno o más agonistas del receptor de la muerte para prevenir o tratar un trastorno proliferante. En otro aspecto, se proporciona un método de preparación de una composición farmacéutica y el método comprende: mezclar el compuesto, según se describió anteriormente, con un vehículo, diluyenté o excipiente farmacéuticamente aceptable. En otro aspecto de la presente invención, se proporciona una sonda, que es un compuesto de fórmula I o II, que se describió anteriormente, marcado con un marcador detectable o un identificador de afinidad. En otro aspecto de la presente invención, se proporciona un método de identificación de compuestos que se unen a un dominio IAP BIR y el ensayo comprende: a) poner en contacto un dominio IAP BIR con una sonda para formar el complejo sonda-dominio BIR y la sonda es desplazable por un compuesto de prueba; b) medir una señal de la sonda para establecer el nivel de referencia; c) incubar el complejo sonda-dominio BIR con el compuesto de prueba; d) medir la señal de la sonda; e) comparar la señal del paso d) con el nivel de referencia, una modulación de la señal representa una indicación de que el compuesto de prueba se une al dominio BIR, donde la sonda es un compuesto de fórmula I o II marcado con un marcador detectable o un identificador de afinidad. En otro aspecto de la presente invención, se proporciona un método de detección de la pérdida de la función o de la supresión de IAP ¡n vivo, que comprende: a) administrar a un sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición farmacéutica, según se describió anteriormente; b) aislar una muestra de tejido del sujeto y c) detectar la pérdida de la función o supresión de las IAP de la muestra.
BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS Otros aspectos y ventajas de la presente invención se comprenderán mejor con referencia a la descripción asociada con las siguientes figuras, donde: La FIGURA 1 muestra el estudio con xenotrasplantes de la línea celular de cáncer de ovario humano SKOV-3 con el compuesto 3. A ratones desnudos CD-1 femeninos (aproximadamente 20-25 g) se inyectaron subcutáneamente 5 x 106 células SKOV-3 de tumor de ovario humano en matrigel al 50% en el flanco derecho. El día 55, cuando los tumores medían aproximadamente 100 mm3, se inició el tratamiento con el compuesto 3, dando tratamiento con el compuesto durante 5 días consecutivos, seguidos de dos días sin tratamiento de fármacos durante el resto del experimento. El tamaño del tumor se midió con calibradores digitales y se calculó con la fórmula V= (a x b2)/2, donde a es la dimensión del largo y b es la dimensión del ancho. Se observó la regresión tumoral a 1 mg/kg, mientras la estasis tumoral se observó a 0.3 mg/kg. La FIGURA 2 muestra el estudio con xenotrasplantes de la línea celular de cáncer de seno humano MDA-MB-231 con el compuesto 3. A ratones desnudos CD-1 femeninos (aproximadamente 20-25 g) se inyectaron subcutáneamente 1 x 106 células MDA-MB-231 de tumor de seno humano en el flanco derecho. El día 71 , cuando los tumores medían aproximadamente 90mm3, se inició el tratamiento con el compuesto 3, dando tratamiento con el compuesto durante 5 días consecutivos, seguidos de dos días sin tratamiento de fármacos durante el resto del experimento. El tamaño del tumor se midió con calibradores digitales y se calculó con la fórmula V= (a x b2)/2, donde a es la dimensión del largo y b es la dimensión del ancho. Se observó la regresión tumoral a 1 mg/kg. La FIGURA 3 demuestra que el compuesto 3 induce a una pérdida de células clAP-1 ¡n HCT-1 16 in vitro. Se trataron células PC3, SKOV3, MDA-MB-231 y HCT-1 16 con varias concentraciones del compuesto 3 y se incubaron a 37 °C durante 5 horas. Se extrajeron las células y se detectaron los niveles de clAP-1 y actina (el control de carga no se muestra) por el método de Western blot. Los resultados indicaron que el compuesto 3 indujo a la pérdida de clAP-1 en las células de cáncer humano en una forma dependiente del tiempo (no se muestra). Mediante un método similar al descrito en la Figura 3, el compuesto 3 indujo a una pérdida de c-IAP de las líneas celulares ES2 y 4T1 (no se muestra) y una pérdida de clAP2 de las células PC3 (no se muestra). La FIGURA 4 demuestra la modulación in vitro de las IAP en los glóbulos blancos de los ratones. La sangre completa de los ratones CD-1 se incubó in vitro con varias concentraciones del compuesto 3, durante 3 horas. Los glóbulos blancos se aislaron de la sangre completa tratada mediante el gradiente de Ficoll. Se aisló la proteína de los glóbulos blancos y se describió la cantidad relativa de clAP-1 y tubulina (control de carga) por el método de Western blot. Los resultados in vitro indican que el compuesto 3 induce a la pérdida de clAP-1 en la sangre de los ratones. La FIGURA 5 demuestra la modulación in vivo de la clAP-1 en los glóbulos blancos de los ratones. Se administró el compuesto 3 a ratones CD-1 por inyección de bolo intravenoso según la dosis indicada.1 Después de 1 a 48 horas se sacrificaron los animales, se extrajo la sangre, se aislaron los glóbulos blancos mediante gradiente de Ficoll y se extrajo la proteína. La cantidad relativa de clAP-1 y de tubulina (control de carga) se hizo evidente por medio del método de Western blot (se muestra a continuación en el punto de tiempo de 3 horas). Los resultados indican que el compuesto 3 induce a la regulación disminuida de clAP-1 en los glóbulos blancos de ratón, utilizando métodos de detección ex-vivo. La FIGURA 6 muestra el estudio con xenotrasplantes de la línea celular de cáncer de seno humano MDA- B-231 con el compuesto 24 (1 mg/kg). A ratones desnudos CD-1 femeninos (aproximadamente 20-25 g) se inyectaron subcutáneamente 1 x 106 células MDA-MB-231 de tumor de seno humano en matrigel al 50% el flanco derecho. El día 55, cuando los tumores medían aproximadamente 100 mm3, se inició el tratamiento con el compuesto 24, dando tratamiento con el compuesto durante 5 días consecutivos, seguidos de dos días sin tratamiento de fármacos durante el resto del experimento. El tamaño del tumor se midió con calibradores digitales y se calculó con la fórmula V= (a x b2)/2, donde a es la dimensión del largo y b es la dimensión del ancho. Círculos - control de HPCD al 20 %; rombos -compuesto 24. La FIGURA 7 demuestra la modulación in vivo de la clAP-1 en los glóbulos blancos de rata. Se administró el compuesto 24 a ratas por inyección de bolo intravenoso. Después de 1 a 48 horas, se extrajo la sangre, se aislaron los glóbulos blancos mediante gradiente de Ficoll y se extrajo la proteína. La cantidad relativa de clAP-1 y de tubulina (control de carga) se hizo evidente por medio del método de Western blot (se muestra a continuación en el punto de tiempo de 3 horas). Los resultados indican que el compuesto 24 induce a la pérdida de clAP-1 en los glóbulos blancos de ratón, utilizando métodos de detección ex-vivo.
DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION En varios tipos de cáncer y en otras enfermedades, la regulación al alza de las IAP inducida por defectos en los genes o por agentes quimioterapéuticos se ha correlacionado con un aumento en la resistencia a la apoptosis. En cambio, nuestros resultados muestran que las células que tienen niveles disminuidos de IAP son más sensibles a los agentes quimioterapéuticos y a los agonistas del receptor de muerte, tales como TRAIL. Se cree que una molécula pequeña, que antagoniza con la función de la IAP o una pérdida de IAP en las células enfermas puede ser útil como agente terapéutico. Informamos en la presente que los compuestos de la invención instantánea se pueden unir directamente a las IAP, causar una regulación a la baja de las proteínas IAP en las células e inducir la apoptosis en las células cancerosas. Además, los compuestos de la invención instantánea han demostrado efectos sinérgicos en combinación con los agentes clínicamente relevantes que se utilizan para el tratamiento del cáncer. Hemos descubierto una serie novedosa de compuestos puente que se unen a las IAP celulares intactas y causan una profunda reducción sostenida en la modulación en la proteína IAP y una apoptosis celular marcada de las células cancerosas por medio de la liberación aumentada de la caspasa activa 3. Esta respuesta biológica se ha observado en varias líneas celulares derivadas de cáncer de seno humano, pancreático, de colon, de pulmón, de ovario y en células de leucemia humana primaria y en células de linfoma. Se determinó que los compuestos son altamente sinérgicos con la muerte mediada por agonistas del receptor de muerte, tales como TRAIL, anticuerpos monoclonales del receptor TRAIL y TNF-a, en una amplia y completa gama de células cancerosas. Con base en estos hallazgos, los compuestos serán aplicables para el tratamiento de varios tipos de cáncer, como los tumores sólidos y los tumores que tienen su origen en el sistema hematopoyético. Adicionalmente, los compuestos de la presente invención también pueden ser útiles en la prevención de la invasión celular del cáncer metastático, inflamación y otras enfermedades que se caracterizan por las células que son resistentes a la apoptosis por vía del aumento de la regulación de cualquiera de las IAP. Según se muestra en la Figura 3, el compuesto 3 es capaz de inducir la pérdida total de las proteínas C-IAP1/2 de múltiples líneas celulares tumorales en concentraciones menores de 10 nM. Otros compuestos de la presente invención mostraron una capacidad similar de inducir en las células cancerosas la pérdida de IAP dependiente del tiempo. Esta pérdida de proteínas IAP se correlaciona fuertemente con el ED50 de las células SKOV3. La formación de un "puente" de dos unidades de unión BIR, M1 y M2, que se describe con más detalle más adelante, que utilizan la "unidad de puente" adecuada, unida a uno de los anillos de pirrolidina, proporciona compuestos de unión a los BIR de IAP, que muestran una actividad significativamente aumentada de la actividad anti-cancerígena (10-1000 veces), al compararlas con sus unidades monoméricas. Esta actividad mejorada resulta de una capacidad mejorada de unión a los dominios BIR de las IAP intactas y da como resultado, la inducción de la apoptosis en las líneas celulares de varios tipos de cáncer. Existen varios factores que ejercen influencia en el carácter pro-apoptótico in vitro de los compuestos de la presente invención. Específicamente, estos incluyen i) el punto de unión del enlace entre el enlazador y la pirrolidina, ii) la estereoquímica de enlace entre el enlazador y la unión de pirrolidina, iii) las propias fracciones del enlazador, incluso la estereoquímica, la regioquímica y la rigidez del sistema de enlace, iv) la sustitución de alquilo en R1 y R 00 y v) el patrón de sustitución en R4, R400, R5 y R500. Por facilidad, a lo largo de la descripción los compuestos de fórmula I y fórmula II también se puede incluir el uso de los términos P1 , P2, P3, P4 y P5. Estos términos se refieren a los aminoácidos o aminoácidos modificados, ya sea en la fórmula I o en la II. A continuación se ilustra el uso de los términos: donde la línea ondulada representa un enlace covalente a otra unidad de unión BIR. Los compuestos de la presente invención también se pueden representar por la fórmula 3 o la fórmula 4, en las cuales M1 y M2 representan dominios independientes que se unen a BIR. 4 donde R1 , R2, R100, R200, R3, R300, R20, A, A1 , Q, Q1 y BG tal como se definen en la presente y la línea punteada representa la línea divisoria hipotética para comparar los sustituyentes asociados con M1 y M2. En un subconjunto de la fórmula 3, M1 es igual a M2 y la línea punteada denota una línea de simetría. En otro subconjunto, M1 es diferente a M2. En un subconjunto, los compuestos de la fórmula 4 son asimétricos respecto a la línea punteada. En otro subconjunto los sustituyentes de M1 y M2 son los mismos. En otro subconjunto los sustituyentes de M1 y M2 son diferentes. Un experto en la técnica es capaz de reconocer que cuando M1 y M2 son iguales, los sustituyentes R , R2, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R1 1 , R13, R 4, r, m, Y, A, Q y X de M1 tienen el mismo significado que los sustituyentes R100, R200, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11 , R13, R14, r, m, Y, A1 , Q1 y X1 respectivos de M2. Cuando M1 y M2 son diferentes, al menos un sustituyente de R\ R2, R100, R200, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R 1, R13, R14, r, m, Y, A, A1, Q, Q1, X y X1 es diferente en M1 o en M2. Alternativamente, los sustituyentes de M1 se pueden definir como R1, R2, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R13, R 4, r, m, p, Y, A, Q y X, y los de M2 se pueden definir como R100, R200, R400, R500, R600, R700, R800, R900, R1000, R1100, R1300, R1400, r , m1, p , Y1 , A1 , Q1 y X1 respectivamente. En el caso en el que M1 y M2 son iguales, los sustituyentes R1 , R2, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R 3, R14, r, m, Y, A, Q y X de M1 tienen el mismo significado que los sustituyentes R100, R200, R400, R500, R600, R700, R800, R900, R1000, R1100, R1300, R1400, r1, m1, Y1 , A1, Q1 y X1 respectivos de M2. En el caso en que M1 y M2 son diferentes, al menos uno de los sustituyentes mencionados es diferente. Los compuestos de la presente invención son útiles como compuestos de unión del dominio BIR en IAP de mamíferos y son representados por la fórmula I o la fórmula II. Las siguientes son formas de modalidad, grupos y sustituyentes de los compuestos según la ¡fórmula I y la fórmula II, que se describen en detalle más adelante en la presente.
A y A1 En un subconjunto de compuestos de fórmula I o II, ambos A y A1 son CH2. En un subconjunto alternativo de compuestos de ¡fórmula I o II, ambos A y A1 son C=O. En otro subconjunto alternativo de compuestos d fórmula I o II, ambos A es CH2 y A1 es C=0. En otro subconjunto alternativo de compuestos dé fórmula I o II, ambos A y A1 son C(O)OCH3. j En otro subconjunto alternativo de compuestos de fórmula I o II, ambos A y A1 son C(O)OH. Cualquiera y cada definición individual de A y' A1 según se establece en la presente se puede combinar con cualquiera y cada una de las definiciones individuales de Core, R1, R2, R100, R200, R3, R30(?, Q, Q1 y BG según se establece en la presente.
Core Por lo tanto, para los compuestos de fórmula I, la presente invención comprende los compuestos de fórmula 1A a 1C: 1A 1B donde BG, A, A1, Q, Q1, R1, R100, R2, R200, R3 y R300 son tal como se definen a lo largo de la presente. En un ejemplo, la presente invención comprende lós compuestos de la fórmula 1A. En un ejemplo alternativo, la presente invención comprende los compuestos de la fórmula 1 B. En otro ejemplo alternativo, la presente invención comprende los compuestos de la fórmula 1 C. Alternativamente, los compuestos de fórmula II comprenden los compuestos de fórmula 2A y 2B: 2A donde BG, A, A1 , Q, Q1 , R1, R100, R2, R200 R3, R300 y R20 son tal como se definen a lo largo de la presente. En un ejemplo, la presente invención comprende los compuestos de la fórmula 2A. Cualquiera y cada definición individual de Core según se establece en la presente se puede combinar con cualquiera y cada una de las definiciones individuales de A, A1 , R1 , R2, R100, R200, R3, R300, R20, Q, Q1 y BG según se establece en la presente.
BG En un subconjunto de los compuestos mencionados, BG es -X- L-X1-. En un subconjunto, para los compuestos de fórmula I en los cuales BG es -X-L-X1-, la invención comprende los compuestos de fórmula 1 a a 1 c: Otro subconjunto de los compuestos mencionados comprende os de fórmula 1.1a a 1.1c: 1.1b R 100 1.1c donde L, X, X \ A, A1, R1, R100, R2, R200, R3, R300, R4, R400, R5 y R500 son tal como se definen a lo largo de la presente. En un subconjunto, para los compuestos de fórmula II en los cuales BG es -X-L-X1-, la invención comprende los compuestos de fórmula 2a: 2a donde L, X, X1, A, A1, Q, Q\ R1, R100, R2, R200, R3 y R20 son tal como se definen a lo largo de la presente. Cualquiera y cada definición individual de BG según se establece en la presente se puede combinar con cualquiera y cada una de las I definiciones individuales de Core, R1, R2, R100, R200, R3, R300 A, A1 Q y Q1 según se establece en la presente.
X y En un subconjunto de los compuestos mencionados, X y X1 se seleccionan independientemente de 1 ) 0, 2) NR13, 3) S, 4) C C6 alquil-O-, ) -Ci-C6 alquilo, O 6) H . ) \?? o " . En un ejemplo X y X1 se seleccionan independientemente de: 1 ) 0, Cualquiera y cada definición individual de X y X1 según se establece en la presente se puede combinar con cualquiera y cada una de las definiciones individuales de Core, L, A, A1 , R1 , R2, R100, R200, Ra, Rauu, R20, Q, Q1 y BG según se establece en la presente.
L En un subconjunto de los compuestos mencionados, L se selecciona de: 1 ) -C1-C20 alquil-, 2) -C3-C7 cicloalquil-, 3) -aril- 4) -bifenil-, 5) - heteroaril-, 6) -CrC6 alquil-(C2-C4 alquenil)- C C6 alquil- 7) -CrC6 alquil- aril-C C6 alquil-, 8) -aril-Y-aril-, O 10) ' ^ N " " alquilo C-,-C6 — i H donde el alquilo y cilcloalquilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R6 y el arilo, biíenilo y heteroarilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R 0; ¡ Ejemplos típicos de L incluyen Cualquiera y cada definición individual de L según se establece en la presente se puede combinar con cualquiera y cada una de las definiciones individuales de Core, A, A1 , r, R1, R2, R100, R200, R3, R300, R20, X, X1 , Q o Q1 según se establece en la presente, r En el aspecto mencionado anteriormente, r es Un íntegro que puede ser 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ó 10. Cualquiera y cada definición individual de r según se establece en la presente se puede combinar con cualquiera y cada una de las definiciones individuales de Core, A, L, A1, R1, R2, R100, R200, R3, R300, R20, Q, Q1, X y X1 según se establece en la presente. Más explícitamente, la invención comprende los compuestos de fórmula 1 .1 a 1 .18: 1.3 1.13 1.14 1.15 donde r, A, A1 , Q, Q1, R1, R100, R2, R200, R3 y R300 son tal como anteriormente en la presente. Alternativamente de forma más explícita, la invención comprende os de fórmula 2.1 a 2.2: 2.2 donde A, A1 , Q, Q1, R1 , R100, R2, R200, R3 y R20 son tal como se definieron anteriormente en la presente. i R1 y R100 En un subconjunto de los compuestos mencionados anteriormente, ambos R1 y R100 son H. En un subconjunto de los compuestos mencionados anteriormente, ambos R1 y R100 son CrC6 alquilo. En un ejemplo, ambos, R1 y R 00 son CH3. Cualquiera y cada definición individual de R1 y R100 según se establece en la presente se puede combinar con cualquiera y cada una de las definiciones individuales de Core, A, A1, R2, R200, R3, R300, Q, Q1, B, B1 y BG según se establece en la presente.
R2 y R200 En un subconjunto de los compuestos mencionados anteriormente, ambos R2 y R200 son CrC6 alquilo sustituido opcionalmente por OH. En un ejemplo, ambos, R2 y R200 son CH3. En otro ejemplo, R2 es CH2OH y R300 es CH3. En otro ejemplo, ambos, R2 y R200 son CH2OH. En otro ejemplo, ambos, R2 y R200 son CH2CH3. Cualquiera y cada definición individual de R2 y R200 según se establece en la presente se puede combinar con cualquiera y cada una de las definiciones individuales de Core, A, A1, R1, R100, R3, R300, Q, Q y BG según se establece en la presente.
R3 y R300 En un subconjunto de los compuestos de fórmula I, ambos R3 y R300 son C C6 alquilo. En un ejemplo, ambos, R3 y R300 son C(CH3)3. En un subconjunto de compuestos de fórmula II, R3 es C C6 alquilo. En un ejemplo, R3 es C(CH3)3. Cualquiera y cada definición individual de R3 y R300 según se establece en la presente se puede combinar con cualquiera y cada una de las definiciones individuales de Core, A, A1, R1 , R100, R2, R200, Q, Q1 y BG según se establece en la presente.
Q v Q1 En un subconjunto de los compuestos mencionados anteriormente, ambos Q y Q1 son NR R5 y R5 tal como se definen en la presente. Cualquiera y cada definición individual de Q y Q1 según se establece en la presente se puede combinar con cualquiera y cada una de las definiciones individuales de Core, A, A1, R1 , R100, R2, R200, R3, R300 y BG según se establece en la presente.
R4 y R5 En conjunto de los compuestos mencionados anteriormente en el que ambos A y A1 son C=O, R4 es H y R5 se selecciona entre: 1 ) *-C<i-C6 alquilo, 2) *-C2-C6 alquenilo, 3) <-C2-C4 alquinilo, 4) <-C3-C7 cicloalquilo, ) <-C3-C cicloalquenilo, i 6) <— arilo, 7) <— heteroarilo, 8) — heterociclilo o 9) <— heterobiciclilo, donde el alquilo, alquenilo, alquinilo, cilcloalquilo y cicloalquenilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R6; y en donde el arilo, heteroarilo, heterociclilo y heterobiciclilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R10; donde R6 y R10 son tal como se definen en la presente.
En otro subconjunto de los compuestos anteriores, R4 es H y R5 se selecciona entre: 1 ) <— C!-Ce alquilo o J 2) arilo, donde el grupo alquilo se sustituye opcionalmente por uno o dos sustituyentes R6 y donde el grupo arilo se sustituye opcionalmente por un sustituyente R10; donde R6 y R 0 son tal como se definen en la presente.
Por lo tanto, cuando ambos A y A1 son C=O, entonces ambos Q y Q1 son En otro ejemplo, Q es En otro ejemplo, ambos Q y Q son En otro ejemplo, ambos Q y Q1 son En otro ejemplo, ambos Q y Q son En otro ejemplo, ambos Q y Q1 son En otro ejemplo, ambos Q y Q1 son En otro ejemplo, ambos Q y Q1 son En otro ejemplo, ambos Q y Q son En otro ejemplo, ambos Q y Q1 son En otro ejemplo, ambos Q y Q1 son En otro ejemplo, ambos Q y Q1 son En otro ejemplo, ambos Q y Q1 son En otro ejemplo, ambos O y O1 son En otro ejemplo, ambos Q y Q1 son En otro ejemplo, ambos Q y Q1 son i En un subconjunto alternativo de los compuestos mencionados anteriormente en el que ambos A y A1 son CH2> entonces R4 y R5 son cada I uno independientemente 1 ) haloalquilo, 2) alquilo, 3) <— C2-C6 alquenilo, 4) <— C2-C4 alquinilo, ) <— C3-C7 cicloalquilo, 6) <— C3-C7 cicloalquenilo, : 7) <— arilo, 8) <— heteroarilo, 9) <— heterociclilo, ) «—heterobiciclilo, 1 1 ) <-C(O)R11 , 12) <-C(0)0-R1 1, 13) ^-C(=Y)NR8R9 o 14) ^S(O)2-R11 , donde el alquilo, alquenilo, alquinilo, cilcioalquilo y cicloalquenilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R6; y en donde el arilo, heteroarilo, heterociclilo y heterobiciclilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R10; donde Y, R6, R8, R9, R10 y R 1 son tal como se definen en la presente.
En otro subconjunto de los compuestos anteriores, R4 y R5 se seleccionan independientemente entre: 1 ) -CrC6 alquilo, 2) <-C(O)R11, 3) -C(0)0-R11 o 4) <-S(0)2-R11, donde el grupo alquilo se sustituye por un sustituyente R6; donde R6 y R son tal como se definen en la presente. En un subconjunto de los compuestos anteriores, R4 es S(O)2CH3 y R5 es En otro subconjunto de los compuestos anteriores, R4 es C(0)CH3 y R5 es En otro subconjunto de los compuestos anteriores, R4 es Cualquiera y cada definición individual de R4 y R5 según se establece en la presente se puede combinar con cualquiera y cada una de las definiciones individuales de Core, A, A1, R1, R100, R2, R200, R3, R300 y BG según se establece en la presente.
En un subconjunto de los compuestos antes mencionados, R11 es 1 ) Ci-C6 alquilo o 2) arilo, donde el grupo alquilo se sustituye opcionalmente por uno o más sustituyentes R6 y donde el grupo arilo se sustituye opcionalmente por uno o más sustituyentes R10¡ donde R6 y R10 son tal como se definen en la presente. En un subconjunto de los compuestos mencionados, R11 es 1 ) Ci-C6 alquilo sustituido opcionalmente por uno o dos sustituyentes R6 o 2) fenilo sustituido opcionalmente por un sustituyente R10; donde los sustituyentes R6 y R 0 son tal como se describen en la presente. Cualquiera y cada definición individual de R11 según se establece en la presente se puede combinar con cualquiera y cada una de las definiciones individuales de Core, A, A1, R1, R100, R2, R200, R4, R5, R3, R300 y BG según se establece en la presente.
En un subconjunto de los compuestos antes mencionados, R6 es 1 ) halógeno, 2) NO2) 3) CN, 4) arilo, ) heteroarilo, 6) heterociclilo, 7) heterobiciclilo, 8) OR7, 9) SR7 o ) NR8R9, donde el arilo, heteroarilo, heterociclilo y heterobiciclilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R10; donde R7, R8, R9 y R10 son tal como se definen en la presente.
En otro subconjunto de los compuestos antes mencionados, R6 es I 1 ) halógeno, 2) arilo o 3) NR8R9, i donde el grupo arilo se sustituye opcionalmente por un sustituyente R10; donde R8, R9 y R10 son tal como se definen en la presente.
En un subconjunto de los compuestos antes mencionados, R6 es 1 ) halógeno, ' 2) fenilo o i 3) NR8R9, donde el grupo fenilo se sustituye opcionalmente por un sustituyente R10; donde R8 y R9 son tal como se definen en la presente.
Cualquiera y cada definición individual de R6 según se establece en la presente se puede combinar con cualquiera y cada una de las definiciones individuales de Core, A, A1, R , R100, R2, R200, R4, R5, R3, R300 y BG según se establece en la presente.
R8 y R9 En un subconjunto de los compuestos antes mencionados, R8 y R9 son cada uno independientemente 1 ) H, 2) haloalquilo, 3) -C C6 alquilo, | 4) -C2-C6 alquenilo, ) C2-C4 alquinilo, 6) C3-C7 cicloalquilo o 7) C3-C7 cicloalquenilo, donde el alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo y cicloalquenilo son opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes R6; ¡ donde los sustituyentes R son tal como se definen en la presente. En otro subconjunto de los compuestos antes mencionados, R8 y R9 son cada uno independientemente 1 ) H o 2) -CrC6 alquilo, donde el grupo alquilo se sustituye opcionalmente por un grupo arilo. Cualquiera y cada definición individual de R8 y R9 según se establece en la presente se puede combinar con cualquiera y cada una de las definiciones individuales de Core, A, A1, R1, R100, R2, R200, R R5, R3, R300 BG según se establece en la presente. p l O En un aspecto de los compuestos antes mencionados, R10 es 1 ) halógeno, 2) NO2) 3) CN, 4) haloalquilo, 5) OR7, 6) NR8R9 o 7) SR7; donde R7, R8 y R9 son tal como se definen en la presente. En otro aspecto de los compuestos antes mencionados, R10 es 1) halógeno o 2) OCrC6 alquilo, Cualquiera y cada definición individual de R10 según se establece en la presente se puede combinar con cualquiera y cada una de las definiciones individuales de Core, A, A1, R1, R100, R2, R200, R4, R5, R3, R300 y BG según se establece en la presente. Alternativamente, la invención proporciona , un isómero, enantiómero, diasteroisómero o tautómero de un compuesto representado por la fórmula I o la fórmula 2: donde n es 0 ó 1 , m es 0, 1 ó 2; p es 1 ó 2; Y es NH, O o S; LG es 2) -X-L-X1-; X y X1 se seleccionan independientemente de 1 ) 0, 2) NR13, 3) S, 4) C C6 alquil-O-, 5) CrC6 alquil-NR13-, 6) Ci-C6 alquil-S-, 7) C C6 alquil-aril-O-, L se selecciona entre: 1) -CrC2o alquil-, 2) -C2-C6 alquenil-, 3) -C2-C4 alquinil-, 4) -C3-C7 cicloalquil-, 5) -fenil-, 6) — bifenil— , 7) - heteroaril-, 8) -heterocicil-, 9) -Ci-C6 alquil-(C2-C6 alquenil)- C C6 alquil-, ) -C C6 alquil-(C2-C4 alquinil)- CrC6 alquil— 11 ) -CrC6 alquil-(C3-C7 cicloalquil)- C C6 alquil- 12) -d-Ce alquil-fenil-Ci-C6 alquil, 13) -CrC6 alquil-bifenil-d-Ce alquil, 14) -C C6 alquil-heteroaril-CrC6 alquil, 15) -CrC6 alquil heterociclil— Ci-C6 alquil, 16) -CrC6 alquil-O-d-Ce alquil, 17) -C(O)-aril-C(0)-, 18) -C(O)-heteroaril-C(O)-, 19) -C(0)-(CrC6 alquil)-aril-(CrC6 alquil)-C(O)-, 20) -C(O)-(C C6 alquil)-heteroaril-(CrC6 alquil)-C(O)- o 21 ) -C(O)-(C C6 alquil)-(C3-C7 cicloalquil)-(CrC6 alquil)-C(O)-; Q y Q1 se seleccionan independientemente entre 1 ) NR4R5, 2) OR11 o 3) S(O)mR11 o Q y Q1 se seleccionan independientemente entre arilo o heteroanlo, siendo sustituidos opcionalmente por sustituyentes R12 o Q y Q1 son independientemente donde G es un anillo de 5, 6 ó 7 miembros que incorpora opcionalmente uno o más heteroátomos seleccionados entre S, N u O y que se sustituye opcionalmente por uno o más sustituyentes R 2; el anillo se i fusiona opcionalmente con un grupo arilo o heteroarilo, los cuales se sustituyen opcionalmente por uno o más sustituyentes R12; A y A1 se seleccionan independientemente entre ' 1 ) -CH2- 3) -CH(Ci-C6 alquil)-, 4) -CH(C3-C7 cicloalquil)-, 5) -C3-C7 cicloalquil-, 6) -CH(d-C6 alquil-C3-C7 cicloalquil)- o 7) -C(O) -; R1 y R100 se seleccionan independientemente entre 3) H o 4) alquilo sustituido opcionalmente por uno o más sustituyentes R6; R2 y R200 son independientemente H o C!-Ce alquilo sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R6; R4 y R5 se seleccionan independientemente entre:' 1 ) H, 2) Ci-C6 alquilo?, 3) C3-C7 cícloalquilo-?, 4) haloalquilo?, 5) arilo?, ) bifenilo?, ) heteroaril-arilo?, ) aril-heteroarilo-?, ) aril-hetrociclilo?, 0) heterociclilo?, 1 ) heteroarilo?, 2) heterociclilo?, 3) Ci-C6 alquil-OnC(0)?, 4) haloalquil-OnC(O)?, 5) C3-C7 cicloalquil-OnC(0)?, 6) aril-OnC(0)?, 7) heteroaril-OnC(O)?, 8) heterociclil-OnC(O)?, 9) R8R9NC(=Y)?, 0) Ci-C6 alquil-S(0)2?, 1 ) C3-C7 cicloalquil-S(O)2?, 2) aril-S(O)2?, 3) heteroaril-S(O)2?, 4) heterociclil-S(0)2?, 5) arilo-C3-C7 cicloalquilo fusionado?, 6) heteroarilo-C3-C7 cicloalquilo fusionado 7) aril-hetrociclilo fusionado?, 8) heteroaril-hetrociclilo fusionado—», 29) ar¡l-C3-C7 c¡cloalquil-OnC(O) fusionado?, 30) heteroar¡l-C3-C7 cicloalquil-OnC(O) fusionado?, 31 ) aril-heterociclil-OnC(O) fusionado? o 32) heteroaril-heterociclil-OnC(O) fusionado—», donde alquilo y cilcloalquilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R6 y el arilo, heteroarilo y heterociclilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R10; R6 se selecciona independientemente entre: 1 ) halógeno, 2) Ci-C6 alquilo, 3) C3-C7 cicloalquilo, 4) haloalquilo, 5) arilo, 6) heteroarilo, 7) heterociclilo, 8) OR7, 9) S(O)mR7, 10) NR8R9, 1 1 ) COR7, 12) C(O)OR7, 13) OC(O)R7, 14) SC(O)R7, 15) CONR8R9, 16) S(0)2NR8R9 o ¡ 17) N(=Y)NR8R9, ¡ donde el arilo, heteroarilo y heterociclilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R10; R7 se selecciona independientemente entre: 1 ) H, ; 2) Ci-C6 alquilo, 3) C3-C7 cicloalquilo, 4) haloalquilo, 5) arilo, 6) heteroarilo, 7) heterociclilo, 8) C(=Y)NR8R9 o 9) C1-C6 alquil-C2-C4 alquinilo, donde el arilo, heteroarilo y heterociclilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R10; R8 y R9 se seleccionan independientemente entre: 1 ) H, 2) d-C6 alquilo, 3) C3-C7 cicloalquilo, 4) haloalquilo, 5) arilo, 6) heteroarilo, 7) heterociclilo, 8) COC C6 alquilo, 9) COC3-C3 cicloalquilo, 10) CO-arilo, 11 ) CO-heteroarilo, 12) CO-heterociclilo, 13) C(O)Y-CrC6 alquilo, 14) C(O)Y-C3-C3 cicloalquilo, 15) C(0)Y-arilo, 16) C(O)Y-heteroarilo 0 17) C(0)Y heterociclilo, donde el arilo, heteroarilo y heterociclilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R10; o R8 y R9 junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos forman un anillo heterocíclico de cinco, seis o siete miembros, opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes R6; R10 se selecciona independientemente entre: 1) halógeno, 2) NO2, 3) CN, 4) C!-Ce alquilo, 5) haloalquilo, 6) C3-C7 cicloalquilo, 7) OR7, 8) NR8R9, 9) SR7, ; 10) COR7, 1 1 ) CO2R7, 12) S(O)mR7, 13) CONR8R9 o 14) S(O)2NR8R9, donde el grupo alquilo es sustituido opcionalmente por uno o más sustituyentes R6; R1 1 se selecciona independientemente entre: 1 ) Ci-C6 alquilo?, 2) C3-C7 cicloalquilo?, 3) arilo?, 4) heteroarilo? o 5) heterociclilo-*. donde alquilo y cilcloalquilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R6 y el arilo, heteroarilo y heterociclilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R10; R12 se selecciona independientemente entre: 1 ) Ci-C6 alquilo—», 2) C3-C7 cicloalquilo?, 3) haloalquilo?, 4) arilo?, 5) heteroarilo—», 6) heterociclilo?, 7) d-C6 alquil-OnC(O)?, 8) haloalquil-OnC(O)?, ' 9) C3-C7 cicloalquil-OnC(O)?, 10) aril-OnC(O)?, 11) heteroaril-OnC(0)?, 12) heterociclil-OnC(O)?, 13) R8R9NC(O)?, 14) d-C6 alquil-S(0)m- , 15) C3-C7 cicloalquil-S(0)m?, 16) aril-S(O)m?, 17) heteroaril-S(0)m?, 18) heterociclil-S(O)m?, 19) arilo-C3-C7 cicloalquilo fusionado, 20) heteroarilo-C3-C7 cicloalquilo fusionado o 21 ) C(=Y)-NR8R9, donde alquilo y cilcioalquilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R6 y el arilo, heteroarilo y heterociclilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R10; R13 es 1 ) H, 2) Ci-C6 alquilo-», 3) C3-C7 cicloalquilo?, i 4) haloalquilo?, ) arilo?, 6) heteroarilo—>, 7) heterociclilo?, 8) Ci-C6 alquil-OnC(O)?, 9) haloalquil-OnC(O)?, ) C3-C7 cicloalquil-OnC(O)?, 1 1 ) aril-OnC(O)?, 12) heteroaril-OnC(0)?, o 13) heterociclil-OnC(0)? o un profármaco o una sal farmacéuticamente aceptable o marcada con un marcador detectable o un identificador de afinidad.
Si alguna variable, tal como R6, R600, R10, R1000 y similares ocurre más de una vez en una estructura constituyente, la definición de la variable en cada caso es independiente de cada uno de los otros casos. Si un sustituyente es sustituido a su vez por uno o más sustituyentes, se debe comprender que esos uno o más sustituyentes se pueden unir al mismo átomo de carbono o a diferentes átomos de carbono. Las combinaciones de sustituyentes y variables definidas en la presente son posibles únicamente si producen compuestos químicamente estables.
Un experto en la técnica comprenderá que los patrones de sustitución y de los sustituyentes de los compuestos de la presente invención se pueden seleccionar para proporcionar compuestos que son químicamente estables y que se pueden sintetizar fácilmente utilizando los procedimientos químicos establecidos en los ejemplos, con técnicas químicas bien conocidas en el sector, utilizando materiales de inicio de fácil adquisición. Se debe entender que muchos de los sustituyentes o grupos descritos en la presente tienen grupos funcionales equivalentes, lo que significa que el grupo o sustituyeme se puede reemplazar por otro grupo o sustituyente que tenga similares propiedades electrónicas, de hibridación o de unión.
Definiciones A menos que se especifique lo contrario, se pueden aplicar las siguientes definiciones: Los términos singulares "un", "una" y "el o la" incluyen las referencias plurales correspondientes, a menos que el contexto indique claramente lo contrario. Según se usa en la presente, el término "comprende" significa que los elementos de la lista que sigue a la palabra "comprende" son necesarios u obligatorios, pero que otros elementos son opcionales y podrían o no estar presentes. Según se usan en la presente, los términos "consiste de" o "que consiste en" significan que se incluye y se limita a los elementos que siguen después de la frase "consiste de" o "que consiste en". Entonces, las frases "consiste de" y "que consiste en" indican que los elementos de la lista son necesarios y obligatorios y que no puede haber presente ningún otro elemento que no esté incluido en la lista. Según se usa en la presente, el término "alquilo" se refiere tanto a los grupos de hidrocarburos alifáticos saturados de cadena recta, como a los de cadena ramificada que tienen un número específico de átomos de carbono, por ejemplo, el CrC6 como en el CrC6- alquilo se define que incluye grupos de 1 , 2, 3, 4, 5 ó 6 átomos de carbono en una disposición lineal o ramificada y el CrC como en el C C4 alquilo se define que incluye grupos de 1 , 2, 3 ó 4 carbonos en una disposición lineal o ramificada, y por ejemplo, el C1-C20 como en el CrC20- alquilo se define que incluye grupos de 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 , 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ó 20 átomos de carbono en una disposición lineal o ramificada. Los ejemplos de CrC6-alquilo y d-C4 alquilo, según la descripción anterior, incluyen sin limitarse metilo, etilo, n-propilo, /-propilo, p-butilo, í-butilo, /-butilo, pentilo y hexilo. Según se usa en la presente, el término "alquenilo" se refiere a grupos de hidrocarburos no saturados de cadena recta o ramificada que tienen un número específico de átomos de carbono, de los cuales por lo menos dos de los átomos de carbono están unidos entre sí por un enlace doble y que tienen una ya sea regioquímica E o Z, o combinaciones de las mismas. Por ejemplo, el C2-C6 como en el C2-C6 alquenilo se define que incluye grupos de 2, 3, 4, 5 ó 6 átomos de carbono en una disposición lineal o ramificada y que al menos dos de los átomos de carbono están unidos por un enlace doble. Los ejemplos de C2-C6 alquenilo incluyen etenilo (vinilo), 1 -propenilo, 2-propenilo, 1 -butenilo y similares. Según se usa en la presente, el término "alquinilo" significa grupos de hidrocarburos no saturados de cadena recta que tienen un número específico de átomos de carbono y que al menos dos átomos de carbono están unidos por un enlace triple. Por ejemplo, el C2-C4 como el del C2-C4 alquinilo se define que incluye grupos de 2, 3 ó 4 átomos de carbono en cadena, con al menos dos de los átomos de carbono unidos por un enlace triple. Los ejemplos de dichos alquinilos incluyen etinilo, 1 -propinilo, 2-propinilo y similares. Según se usa en la presente, el término "cicloalquilo" significa un grupo de hidrocarburos monocíclico, saturado, alifático que tiene un número específico de átomos de carbono, por ejemplo, el C3-C7 como el del C3-C7 cicloalquilo se define que incluye 3, 4, 5, 6 ó 7 átomos de carbono en una disposición monocíclica. Los ejemplos del C3-C6 cicloalquilo, según se definió anteriormente, incluyen pero no se limitan a, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y cicloheptilo. Según se usa en la presente, el término "cicloalquenilo" significa un grupo de hidrocarburos monocíclico, saturado, alifático que tiene un número específico de átomos de carbono, por ejemplo, el C3-C7 como el del C3-C7 cicloalquenilo se define que incluye 3, 4, 5, 6 ó 7 átomos de carbono en una disposición monocíclica. Los ejemplos del C3-C7 cicloalquenilo, según se describió anteriormente, incluyen pero no se limitan a, ciclopentilo y ciclohexenilo. Según se usa en la presente, el término "halo" o "halógeno" se refiere a flúor, cloro, bromo y yodo. Según se usa en la presente, el término "haloalquilo" significa un alquilo, según la descripción anterior, en el cual cada átomo de hidrógeno se puede reemplazar sucesivamente por un átomo halógeno. Los ejemplos de los haloalquilos incluyen, pero no se limitan a, CH2F, CHF2 y CF3. Según se usa en la presente, el término "arilo", ya sea solo o en combinación con otro radical, significa un grupo carbocíclico aromático monocíclico que contiene 6 átomos de carbono, que se pueden fusionar a un segundo grupo carbocíclico de 5 ó 6 miembros, que pueden ser aromáticos, saturados o no saturados. El grupo arilo incluye, pero no se limita a, fenilo, indanilo, 1 -naftilo, 2-naftilo y tetrahidronaftilo. Los grupos arilo pueden estar unidos a otro grupo, ya sea en una posición adecuada del anillo cicloalquilo o del anillo aromático. Por ejemplo: Las líneas con flecha que salen del sistema de anillo indican que el enlace puede estar unido a cualquiera de los átomos adecuados del anillo. Según se usa en la presente, el término "biíenilo" significa dos grupos fenilo enlazados entre sí en uno de los sitios disponibles del anillo de fenilo. Por ejemplo: Según se utiliza en la presente, el término "heteroarilo" se refiere a un sistema de anillos monocíclicos o bicíclicos de hasta diez átomos, donde al menos un anillo es aromático y contiene de 1 a 4 heteroátomos seleccionados de un grupo que consiste de O, N y S. El sustituyeme heteroarilo puede unirse, ya sea por medio de un átomo de carbono o uno de los heteroátomos. Los ejemplos de los grupos heteroarilo incluyen, pero no se limitan a, tienilo, bencimidazolilo, benzo[b]tienilo, furilo, benzofuranilo, piranilo, isobenzofuranilo, cromenilo, xantenilo, 2H-pirrolilo, pirrolilo, imidazolilo, pirazolilo, piridilo, piracinilo, pirimidinilo, piridacinilo, indolicinilo, isoindolilo, 3H-¡ndolilo, indolilo, indazolilo, purinilo, 4H-quinolicinilo, isoquinólilo, quinolilo, ftalacinilo, naftiridinilo, quinoxalinilo, quinazolinilo, cinnolinilo, pteridinilo, isotiazolilo, isocromanilo, cromanilo, isoxazolilo, furazanilo, indolinilo, isoindolinilo, tiazolo[4,5-b]-piridina y derivados de fluoresceína, tales como: Según se usa en la presente, los términos "heterociclo", "heterocíclico" y "heterociclilo" se refieren a sistemas de anillo no aromáticos de 5, 6 ó 7 miembros que contienen de 1 a 4 heteroátomos seleccionados del grupo que consiste de O, N y S. Los ejemplos de los heterociclos, incluyen pero no se limitan a, pirrolidinilo, tetrahidrofuranilo, piperidilo, pirrolinilo, piperacinilo, imidazolinidinilo, morfolinilo, imidazolinilo, pirazolidinilo, pirazolinilo y Según se usa en la presente, el término "heterobiciclo", ya sea solo o en combinación con otro radical significa un heterociclo, según la descripción anterior, fusionado a otro ciclo, que puede ser un heterociclo, un arilo u otro ciclo de los que se definen en la presente. Los ejemplos de dichos heterobiciclos, incluyen pero no se limitan a, cumarina, benzo[d][1 ,3]dioxol, 2,3-dihidrobenzo[b][1 ,4]dioxina y 3,4-dihidro-2H-benzo[b][1 ,4]dioxepina. Según se utiliza en la presente, el término "heteroarilo" se refiere a un sistema de anillos monocíclicos o bicíclicos de hasta diez átomos, donde al menos un anillo es aromático y contiene de 1 a 4 heteroátomos seleccionados de un grupo que consiste de O, N y S. El sustituyente heteroarilo puede unirse, ya sea por medio de un átomo de carbono o uno de los heteroátomos. Los ejemplos de los grupos heteroarilo incluyen, pero no se limitan a, tienilo, bencimidazolilo, benzo[b]t¡enilo, furilo, benzofuranilo, piranilo, isobenzofuranilo, cromenilo, xantenilo, 2H-pirrolilo, pirrolilo, imidazolilo, pirazolilo, piridilo, piracinilo, pirimidinilo, piridacinilo, indolicinilo, isoindolilo, 3H-indolilo, indolilo, indazolilo, purinilo, 4H-quinolicinilo, isoquinolilo, quinolilo, ftalacinilo, naftiridinilo, quinoxalinilo, quinazolinilo, cinnolihilo, pteridinilo, isotiazolilo, isocromanilo, cromanilo, isoxazolilo, furazanilo, indolinilo e isoindolinilo. Según se usa en la presente, los términos "heterociclo", "heterocíclico" y "heterociclilo" se refieren a sistemas de anillo no aromáticos de 5, 6 ó 7 miembros que contienen de 1 a 4 heteroátomos seleccionados del grupo que consiste de O, N y S. Los ejemplos de los heterociclos, incluyen pero no se limitan a, pirrolidinilo, tetrahidrofuranilo, piperidilo, pirrolinilo, piperacinilo, imidazolinidinilo, morfolinilo, imidazolinilo, pirazolidinilo y pirazolinilo. Según se usa en la presente, el término "heteroátomo" se refiere a O, S ó N. Según se usa en la presente, el término "diácido activado" significa un diácido donde las fracciones de ácido carboxílico se han transformado, por ejemplo, pero sin limitarse a ello, en haluros ácidos, ásteres de succinato o ésteres HOBt, ya sea in situ o en un paso separado de síntesis. Por ejemplo, el cloruro de succinilo y el cloruro de tereftanoloilo son ejemplos de "cloruros diácidos". Los ésteres HOBt se pueden transformar in situ por el tratamiento del diácido con un agente deshidratante, tal como DCC, EDC, HBTU u otros, una base, tal como DIPEA y un HOBt en un solvente adecuado. La reacción de un diácido activado con una amina resultará en la conversión de la funcionalidad del ácido a la funcionalidad de una amida. Según se usa en la presente, el término "marcador detectable" significa un grupo que se puede unir a un compuesto de la presente invención para producir una sonda o a un dominio BIR de IAP, de tal forma que cuando la sonda se asocial con el dominio BIR, el marcador permite el reconocimiento directo o indirecto de la sonda, para ser detectada, medida y cuantificada. Según se usa en la presente, el término "identificador de afinidad" significa un grupo o ligando, que se une, ya sea a un compuesto de la presente invención o a un dominio BIR de IAP para permitir que otro compuesto se extraiga de una solución a la cual dicho ligando o grupo está unido Según se usa en la presente, el término "sonda" significa un compuesto de fórmula I que se marca con un marcador detectable o con un identificador de afinidad, que tiene la capacidad de unirse, covalentemente o no covalentemente, al dominio BIR de IAP. Cuando, por ejemplo, la sonda no se une covalentemente, puede ser desplazada por un compuesto de prueba.
Cuando, por ejemplo, la sonda se une covalentemente, se puede usar para formar aductos de enlaces cruzados, que se pueden cuantificar e inhibir por el compuesto de prueba. Según se usa en la presente, el término "opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes" o su término equivalente "opcionalmente sustituido por al menos un sustituyente" significa que las circunstancias descritas podrían ocurrir o no y que la descripción incluye los casos en los que el evento o circunstancia ocurre y en casos en los que el evento o circunstancia no ocurre. La definición significa de cero a cinco sustituyentes. Si los propios sustituyentes son incompatibles cón los métodos de síntesis de la presente invención, el sustituyente puede estar protegido por un grupo protector adecuado (PG) que es estable en las condiciones de reacción que se utilizan en estos métodos. Se puede remover al grupo protector en un punto adecuado de la secuencia de reacción del método para proporcionar un compuesto intermedio deseable o el compuesto objetivo. Los grupos protectores adecuados y los métodos de protección y dé desprotección de los diferentes sustituyentes mediante dichos grupos protectores adecuados son bien conocidos por los expertos en la técnica; los ejemplos se pueden encontrar en T. Greene y P. Wuts, Protecting Groups in Chemical Synthesis (3a ed.), John Wiley & Sons, NY (1999), que se incorpora a la presente en su totalidad a manera de referencia. Los ejemplos de grupos protectores utilizados incluyen, pero no se limitan a Fmoc, Bn, Boc, CBz y COCF3. En algunos casos, se puede seleccionar específicamente un sustituyente para ser reactivo en las condiciones de reacción que se utilizan en los métodos de esta invención. En estas circunstancias, las condiciones de reacción convierten al sustituyente seleccionado en otro sustituyente que es útil para^ un compuesto intermedio en los métodos de esta invención o es un sustituyente deseable para el compuesto objetivo. Las abreviaturas de los a-aminoácidos que se usan a lo largo de la presente son las siguientes: Según se usa en la presente, el término "residuo" al referirse a los a-aminoácidos significa un radical derivado de un a-aminoácido al eliminar el grupo hidroxilo del grupo carboxi y un hidrógeno del grupo a-amino. Por ejemplo, los términos GIn, Ala, Gli, lie, Arg, Asp, Fe, Ser, Leu, Cis, Asn y Tir representan los residuos de L-glutamina, L-alanina, glicina, L-isoleucina, L-arginina, L-ácido aspártico, L-íenilalanina, L-serina, L-leucina, L-cisteína, L-asparagina y L-tirosina, respectivamente. Según se usa en la presente, el término "sujeto" se refiere a los mamíferos humanos y no humanos, tales como primates, gatos, perros, cerdos, ganado vacuno, ovejas, cabras, caballos, conejos, ratas, ratones y similares. Según se usa en la presente, el término "profármaco" se reviere a un compuesto que se puede convertir en condiciones fisiológicas o por solvólisis en un compuesto biológicamente activo de la presente invención. Entonces, el término "profármaco" se refiere a un precursor de un compuesto de la invención, que es farmacéuticamente aceptable. Un profármaco puede ser inactivo o mostrar actividad limitada cuando se administra a un sujeto que lo necesita, pero se convierte in vivo en un compuesto activo de la presente invención. Usualmente, los profármacos se transforman in vivo para producir un compuesto de la invención, por ejemplo, por hidrólisis en la sangre u otros órganos por medio de procesos enzimáticos. El compuesto profármaco con frecuencia tiene ventajas de solubilidad, compatibilidad con los tejidos o de liberación controlada en el sujeto (véase Bundgard, H., Design of Prodrugs (1985), páginas 7-9, 21 -24 (Elsevier, Amsterdam). La definición de profármaco incluye vehículos enlazados covalentemente que liberan in vivo el compuesto activo de la invención cuando dicho profármaco se administra al sujeto. Los profármacos de un compuesto de la presente invención se pueden preparar al modificar los grupos funcionales presentes en el compuesto de la invención, de tal manera que las modificaciones se escinden, ya sea por una manipulación de rutina o in vivo, para producir un compuesto madre de la invención. Según se usa en la presente, el término "vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable" significa sin limitación, cualquier adyuvante, vehículo, excipiente, transportador, agente edulcorante, diluyente, preservante, tinte / colorante, intensificador del sabor, agente tensioactivo, agente humidificante, agente dispersante, agente de suspensión, estabilizador, agente isotónico, solvente, agente emulsificante o encapsulante, tales como liposomas, ciclodextrinas, sistemas de presentación de cápsulas de polímeros o matrices de polietilenglicol, que son aceptables para administrarse a los sujetos, de preferencia a los seres humanos. Según se usa en la presente, el término "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere tanto a las sales de adición ácida como a las sales de adición básica. Según se usa en la presente, el término "sales de adición ácida farmacéuticamente aceptables" se refiere a las sales que retienen la efectividad y propiedades biológicas de las bases libres, que no son biológicamente, o de otra manera indeseables y que se forman de ácidos inorgánicos, tales como el ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico y similares y los ácidos orgánicos, tales como el ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido maléico, ácido molónico, ácido succínico, ácido tumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido cinámico, ácido mandélico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido p-toluenosulfónico, ácido salicílico y similares. Según se usa en la presente, el término "sales de adición de base farmacéuticamente aceptables" se refiere a las sales que retienen la efectividad y propiedades biológicas de los ácidos libres, que no son biológicamente o de otra manera indeseables. Estas sales se preparan al agregar una base inorgánica o una base orgánica al ácido libre. Las sales derivadas de las bases inorgánicas incluyen, pero no se limitan a, las sales de sodio, potasio, litio, amonio, calcio, magnesio, hierro, zinc, cobre, manganeso, aluminio y similares. Las sales derivadas de las bases orgánicas incluyen, pero no se limitan a, las sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, aminas sustituidas que incluyen las aminas sustituidas que ocurren de manera natural, aminas cíclicas y resinas básicas de intercambio iónico, tales como isopropilamina, trimetilamina, dietilamina, trietilamina, tripropilamina, etanolamina, 2-dimetilaminoetanol, 2-dietilaminoetanol, diciclohexilamina, Usina, arginina, histidina, cafeína, procaína, hidrabamina, colina, betaína, etilendiamina, glucosamina, metilglucamina, teobromina, purinas, piperazina, piperidina, N-etilpiperidina, resinas de poliamina y similares. Según se usa en la presente, el término "unión al dominio BIR" se refiere a la acción de un compuesto de la presente invención sobre un dominio BIR de ???, que bloquea o disminuye a unión de las ??? a las proteínas que se unen a BIR o se involucra el desplazamiento de las proteínas que se unen a BIR de la ???. Los ejemplos de las proteínas de unión a BIR incluyen, pero no se limitan a, las caspasas y a las proteínas de unión a BIR derivadas de las mitocondrias, tales como Smac, Omi/WTR2A y similares. Según se usa en la presente, el término "apoptosis insuficiente" significa un estado en el cual se causa o continúa una enfermedad debido a que las células dañinas al sujeto no han sufrido apoptosis. Esto incluye, pero no se limita a, las células cancerosas que sobreviven en un sujeto que no recibe tratamiento, las células cancerosas que sobreviven en un sujeto durante o después del tratamiento anti-neoplásico o las células inmunológicas cuya acción es dañina al sujeto, incluso los neutrófilos, monocitos y células T auto-reactivas. Según se usa en la presente, el término "cantidad terapéuticamente eficaz" significa la cantidad de un compuesto; de formula I o II, que al administrarlo a un sujeto resulta suficiente para el tratamiento del estado de enfermedad asociado con la apoptosis insuficiente. La cantidad del compuesto de fórmula I varía dependiendo del compuesto, de la afección y de su gravedad, así como de la edad del sujeto que recibe el tratamiento, pero un experto en la técnica lo puede determinar de acuerdo con sus conocimientos y con la presente. Según se usa en la presente, el término "tratar" o "tratamiento" significa dar tratamiento al estado de enfermedad asociado con la apoptosis insuficiente en un sujeto, como se describe en la presente e incluye: (i) prevenir que una enfermedad o afección asociada con la apoptosis insuficiente ocurra en un sujeto, en particular, cuando dicho mamífero está predispuesto a la enfermedad o afección pero aún no se ha diagnosticado, (ii) inhibir la enfermedad o afección asociada con la apoptosis insuficiente, es decir, detener su desarrollo o (iii) aliviar una enfermedad o afección asociada con la apoptosis insuficiente, es decir, provocar la regresión de la afección. Según se usa en la presente, el término "tratar el cáncer" significa administrar una composición farmacéutica de la presente invención a un sujeto, preferiblemente a un ser humano que padece de cáncer para aliviar el cáncer al dar muerte, inhibir el crecimiento o inhibir la metástasis de las células cancerosas. Según se usa en la presente, el término "prevenir la enfermedad" se refiere, en el caso de cáncer, a la administración posterior a la cirugía, a la quimioterapia o a la radioterapia de un composición farmacéutica de la presente invención a un sujeto, preferiblemente un ser humano, que padeció de cáncer, con el fin de evitar el nuevo crecimiento del cáncer al dar muerte, inhibir el crecimiento o inhibir la metástasis de las células cancerosas que todavía hayan permanecido después del tratamiento. Esta definición también incluye la prevención de las condiciones que favorecen la supervivencia que conducen a enfermedades como asma, esclerosis múltiple (MS) y similares. Según se usa en la presente, el término "efecto sinérgico" significa el efecto que se alcanza con la combinación de los compuestos de la presente invención y cualquier agente quimioterapéutico o agonista del receptor de muerte de la presente invención, que es mayor que el efecto que se obtiene con sólo uno de los compuestos, agentes o agonistas o el efecto ventajoso que se obtiene con la combinación de los compuestos, agentes o agonistas mencionados, que es mayor que la suma de los efectos que se obtienen con cada uno de los compuestos, agentes o agonistas usados separadamente. Dicha sinergia permite administrar dosis más pequeñas. Según se usa en la presente, el término "apoptósis" o "muerte celular programada" significa el proceso regulado de muerte celular, donde una célula moribunda muestra un conjunto de señales bioquímicas bien marcadas, que incluyen formación de ampollas en la membrana celular, encogimiento del soma celular, condensación de la cromatina y fragmentación del ADN, así como la muerte celular mediada por caspasas. Según se usa en la presente, los términos "dominio BIR" o "BIR" se usan indistintamente a lo largo de la presente y se refieren a un dominio caracterizado por que tiene un número de residuos de aminoácidos invariables, que incluyen los residuos de cisteína conservados y un residuo conservado de histidina de la secuencia Cis-(Xaa1 )2Cis-(Xaa1 )i6His-(Xaa1 )6. 8Cis. Usualmente, la secuencia de aminoácidos de la secuencia de consenso es: Xaa1 -Xaa1 -Xaa1 -Arg-Leu-Xaa1 -Tre-Fen-Xaa1 -Xaa1 -Trp -Pro-Xaa2-Xaa1 -Xaa1 -Xaa2-Xaa2-Xaa1 -Xaa1 -Xaa1 -Xaa1 -Leu-Ala-Xaa1 -Ala-Gli-Fen-Tir-Tir-Xaa1 -Gli-Xaa1 -Xaa1 -Asp-Xaa1 -Val-Xaa1 -Cis-Fen-Xaa1 -Cis-Xaa1 -Xaa1 -Xaa1 -Xaa1 -Xaa1 -Xaa1 -Trp-Xaa1 -Xaa1 -Xaa1 -Asp-Xaa1 -Xaa1 -Xaa1 -Xaa1 - Xaa1 -H¡s-Xaa-1 -Xaa1 -Xaa1 -Xaa1 -Pro-Xaa1 -Cis-Xaa1 -Fen-Val, donde Xaa1 es cualquier aminoácido y Xaa2 es cualquier aminoácido o está ausente. Preferiblemente la secuencia es sustancialmente idéntica a una de las secuencias del dominio BIR proporcionadas para XIAP, HIAP1 o HIAP2 en la presente. Los residuos del dominio BIR se enumeran a continuación (véase Genome Biology (2001 ) 1 -10): Según se usa en la presente, el término "dedo de anillo de zinc" o "RZF" significa un dominio que tiene una secuencia de aminoácidos de la secuencia de consenso: Glu-Xaa1-Xaa1 -Xaa1 -Xaa1-Xaa1 -Xaa-1 -Xaa2-Xaa1 -Xaa1 -Xaa1 -Cis-Lis-Xaa3-Cis-Met-Xaa1 -Xaa1 -Xaa1 -Xaa1 -Xaa1 -Xaa3-X-aa1 -Phe-Xaa1 -Pro-Cis-Gli-His-Xaa1 -Xaa1 -Xaa1 -Cis-Xaa1 -Xaa1 -Cis-Ala-Xaa1 -Xaa-1 -Xaa1 -Xaa1 -Xaa1 -Cis-Pro-Xaa1 -Cis, donde Xaa1 es cualquier aminoácido, Xaa2 es Glu o Asp y Xaa3 es Val o lie. Según se usa en la presente, el término "IAP" se refiere a un polipéptido o proteína o a un fragmento de los mismos, codificado por un gen IAP. Los ejemplos de las IAP incluyen, pero no se limitan a la versión humana o de ratón de NAIP (Birc 1 ), HIAP-1 (clAP2, Birc 3), HIAP-2 (clAPI , Birc 2), XIAP (Birc 4), survivin (Birc 5), livin (ML-IAP, Birc 7), ILP-2 (Birc 8) y Apollon/BRUCE (Birc 6) (ver ejemplos en las patentes de E.U.A N° 6,107,041 ; 6,133,437; 6,156,535; 6,541 ,457; 6,656,704; 6,689,562; Devéraux y Reed, Genes Dev. 13, 239-252, 1999; Kasof y Gomes, J. Biol. Chem., 276, 3238-3246, 2001 ; Vucic y col., Curr. Biol. 10, 1359-1366, 2000; Ashab y col. FEBS Lett., 495, 56-60, 2001 , cuyo contenido se incorpora en la presente a manera de referencia). Según se usa en la presente, el término "gen IAP" se refiere a un gen que codifica un polipéptido que tiene al menos un dominio BIR y que es capaz de modular (inhibir o promover) la apoptosis de una célula o tejido. El gen IAP es un gen que tiene una secuencia de nucleótidos de aproximadamente 50% o mayor en similitudes con al menos una de NAIP (Birc 1 ), HIAP-1 (clAP2, Birc 3), HIAP-2 (clAP1 , Birc 2), XIAP (Birc 4), survivin (Birc 5), livin (ML-IAP, Birc 7), ILP-2 (Birc 8) y Apollon/BRUCE (Birc 6) humana o de ratón. La región de la secuencia sobre la cual se mide la identidad es una región que codifica al menos un dominio BIR y un dominio de dedo de anillo de zinc. Los genes IAP de mamífero incluyen las secuencias de nucleótidos aisladas de cualquier fuente de mamíferos. Según se usa en la presente, el término "IC50" sé refiere a una cantidad, concentración o dosis de algún compuesto en particular de la presente invención que logra un 50% de la inhibición en relación con la respuesta máxima, tal como el desplazamiento de la máxima unión de la sonda fluorescente en un ensayo que determina dicha respuesta. Según se usa en la presente, el término "EC50" se refiere a una cantidad, concentración o dosis de algún compuesto en particular de la presente invención que logra un 50% de la inhibición de la supervivencia celular. Según se usa en la presente, los términos "modular" o "que modula" se refieren al tratamiento, prevención, supresión, mejora o inducción de una función o condición al usar los compuestos de la presente invención. Por ejemplo, los compuestos de la presente invención pueden modular la función de IAP en un sujeto, y por lo tanto, mejorar la apoptosis al reducir significativamente o eliminar prácticamente la interacción de las proteínas apoptóticas activadas, tales como las caspasas 3, 7 y 9, con los dominios BIR de las IAP de mamífero o al inducir la pérdida de la proteína XIAP en una célula. Según se usa en la presente, el término "mejorar la apoptosis" significa aumentar el número de células que tienen apoptosis en determinada población celular in vitro o in vivo. Los ejemplos de las poblaciones celulares incluyen, pero no están limitadas a, las células de cáncer de ovario, células de cáncer de colon, células de cáncer de seno, células de cáncer de pulmón, células de cáncer pancreático o células T y similares. Se aprecia que el grado de mejora en la apoptosis proporcionada por un compuesto intensificador de la apoptosis de la presente invención en determinado ensayo variará, pero los expertos en la técnica pueden determinar el cambio estadísticamente significativo en el nivel de apoptosis que se identifica para un compuesto que mejora la apoptosis, que de otra manera está limitada por una IAP.
Preferiblemente, "mejorar la apoptosis" significa que el aumento en el número de células que sufren apoptosis es de al menos 25%, más preferiblemente el aumento es de 50% y aún más preferible es que el aumento sea de una dilución. Preferiblemente la muestra monitorizada es una muestra de células que normalmente sufren una apoptosis insuficiente (es decir, las células de cáncer). Los métodos para detectar los cambios en el nivel de apoptosis (es decir, intensificación o reducción) se describen en los ejemplos e incluyen los métodos de cuantificación de la fragmentación del ADN, los métodos de cuantificación de translocación de fosfatoilserina del citoplasma hacia el lado extracelular de la membrana, la determinación de la activación de las caspasas y los métodos de cuantificación de la liberación de citocromo C y del factor inhibidor de la apoptosis hacia el citoplasma por las mitocondrias. Según se usa en la presente, el término "enfermedad proliferante" o "trastorno proliferante" se refiere a la enfermedad causada por los niveles elevados poco apropiados de división celular, niveles bajos poco apropiados de apoptosis. o ambas causas, o que son el producto de los mismos. Los siguientes tipos de cáncer son ejemplos de las enfermedades proliferantes: linfoma, leucemia, melanoma, cáncer de ovario, cáncer de seno, cáncer pancreático, cáncer de pulmón y los trastornos auto inmunes. Según se usa en la presente, el término "agonista del receptor de muerte" se refiere a un agente capaz de estimular por contacto directo o indirecto la respuesta que promueve la apoptosis mediada por los receptores de muerte. Por ejemplo, el anticuerpo del agonista del receptor TRAIL se une al receptor (S) TRAIL y desencadena la respuesta apoptótica. Por otro lado, otro agente, tal como el interferón-a podría desencadenar la liberación del TRAIL endógeno y/o aumentar la regulación de los receptores TRAIL de tal manera que la respuesta pro-apoptótica de la célula se vea amplificada. Los compuestos de la presente invención o sus sales farmacéuticamente aceptables pueden contener uno o más centros asimétricos, ejes quirales y planos quirales y por lo tanto pueden formar enantiómeros, diasterómeros y otras formas estereoisoméricas y se pueden definir en términos absolutos de estereoquímica, como (R)- o (S)- o como (D)-o (L)- en el caso de los aminoácidos. La presente invención pretende incluir todos los isómeros posibles, así como sus formas racémicas y ópticamente puras. Los isómeros ópticamente activos (+) y (-), (R)- y (S)- o (D)- y (L) se pueden preparar utilizando sintones quirales o reactivos quirales o se pueden lograr por técnicas convencionales como HPLC de fase reversa. Las mezclas racémicas se pueden preparar y luego separarlas en isómeros ópticos individuales o se pueden preparar estos isómeros ópticos por síntesis quiral. Los enantiómeros se pueden obtener por métodos conocidos por los expertos en la técnica, por ejemplo, por la formación de sales diasteroisoméricas que luego se pueden separar por cristalización, cromatografía de gas-líquido o cromatografía líquida, reacción selectiva de un enantiomero con un reactivo específico para ese enantiomero. Los expertos en la técnica pueden también apreciar que el punto en el que el enantiomero se convierte en otra entidad química por una técnica de separación, se requiere un paso adicional para lograr la forma enantiomérica deseada. Alternativamente, los enantiómeros específicos se pueden sintetizar por la síntesis asimétrica, utilizando reactivos, sustratos, catalíticos o solventes ópticamente activos o convirtiendo un enantiómero en otro mediante la transformación asimétrica. Algunos compuestos de la presente invención pueden existir en la forma Zwitteriónica y la presente invención incluye las formas Zwitteriónicas de estos compuestos y de sus mezclas.
Utilidades Los compuestos de la presente invención son útiles como compuestos de unión del dominio BIR en IAP y dichos compuestos, tales como los compuestos, composiciones y el método de la presente invención incluyen la aplicación a células o sujetos que tienen la predisposición de desarrollar o ya han desarrollado un estado de enfermedad en particular, que se caracteriza por apoptosis insuficiente. De este modo, los compuestos, composiciones y métodos de la presente invención se utilizan para el tratamiento de enfermedades/trastornos de proliferación celular, que incluyen, pero no se limitan a, i) cáncer, ii) enfermedades auto inmunes, iii) trastornos inflamatorios y iv) procedimientos médicos posteriores debido a la proliferación, que incluyen, pero no se limitan a, cirugía, angioplastía y similares. Los compuestos de la presente invención también pueden ser útiles en el tratamiento de enfermedades en las que existe un defecto en la programación de la muerte celular o en la maquinaria apoptótica (TRAIL, FAS, apoptosoma), tal como la esclerosis múltiple, ateroesclerosis, inflamación, enfermedades autoinmunes y similares.
El tratamiento involucra la administración a un sujeto que necesita de un compuesto de la presente invención o su sal farmacéuticamente aceptable, o una composición farmacéutica que comprende un vehículo farmacéutico y una cantidad eficaz de un compuesto de la presente invención o su sal farmacéuticamente aceptable. En particular, los compuestos, composiciones y métodos de la presente invención son útiles para el tratamiento del cáncer, inclusive los tumores sólidos, como el carcinoma de piel, seno, cerebro, pulmón, testículo y similares. Los tipos de cáncer que se pueden tratar con los compuestos, composiciones y métodos de la invención incluyen, pero no se limitan a los siguientes: Tejido Ejemplo Glándulas neuroblastoma adrenales Hueso sarcoma osteogénico (osteosarcoma), fibrosarcoma, histiocitoma fibroso maligno, condrosarcoma, sarcoma de Ewing, linfoma maligno (sarcoma de células reticulares), mieloma múltiple, tumor cordoma maligno de células gigantes, osteocronfroma (exostosis osteocartilaginosa), condroma benigno, condroblastoma, condromixofibroma, osteoma ostoide y tumores de células gigantes Cardíaco sarcoma (angiosarcoma, fibrosarcoma, rabdomiosarcoma, liposarcoma), mixoma, rabdomioma, fibroma, lipoma y teratoma Gastrointestinal esófago (carcinoma de células escamosas, adenocarcinoma, leiomiosarcoma, linfoma), estómago (carcinoma, linfoma, leiomiosarcoma), páncreas (adenocarcinoma ductal, insulinoma, glucagonoma, gastrinoma, tumores carcinoides, vipoma), intestino delgado (adenocarcinoma, linfoma, tumores carcinoides, sarcoma de Kaposi, leiomioma, hemangioma, lipoma, neurofibroma, fibroma), intestino grueso (adenocarcinoma, adenoma tubular, adenoma velloso, hamartoma, leiomioma) Tracto hñón (adenocarcinoma, tumor de Wilm genitourinario [nefroblastoma], linfoma, leucemia), vejiga y uretra (carcinoma de células escamosas, carcinoma de células de transición, adenocarcinoma), próstata (adenocarcinoma, sarcoma), testículos (seminoma, teratoma, carcinoma embrional, teratocarcinoma, coriocarcinoma, sarcoma, carcinoma de células intersticiales, fibroma, fibroadenom , tumores adenomatoides, lipoma) Ginecológico Utero (carcinoma del endometrio), cérvix (carcinoma cervical, displasia cervical pre-tumor), ovarios (carcinoma ovárico [cistadenocarcinoma seroso, cistadenocarcinoma mucinoso, carcinoma no clasificado], tumores de células granulosa-tecales, tumores de células de Sertoli-Leydig, disgerminoma, teratoma maligno), vulva (carcinoma; de células escamosas, carcinoma intraepitelial, adenocarcinoma, fibrosarcoma, melanoma), vagina (carcinoma de células claras, carcinoma de células escamosas, sarcoma botrioide (rabdomiosarcoma embrionario), trompas de Falopio (carcinoma) Hematológico sangre (leucemia mieloide [aguda o crónica], leucemia linfoblástica aguda, leucemia linfocítica crónica, enfermedades mieloproliferativas, mieloma múltiple, síndrome mielodisplásico), enfermedad de Hodgkin, linfoma no Hodgkin [linfoma maligno] Hígado hepatoma (carcinoma hepatocelular), colangiocarcinoma, hepatoblastoma, angiosarcoma, adenoma hepatocelular, hemangioma Pulmón carcinoma broncogénico (de células escamosas, de células pequeñas indiferenciadas, de células grandes indiferenciadas, adenocarcinoma), carcinoma alveolar (bronquiolar), adenoma bronquial, sarcoma, linfoma, hamartoma condromatoso, mesotelioma Sistema cráneo (osteoma, hemangioma, granuloma, nervioso xantoma, osteítis deformante), meninges (meningioma, meningosarcoma, gliomatosis), cerebro (astrocitoma, meduloblastoma, glioma, ependimoma, germinoma [pinealoma], glioblastoma multiforme, oligodendroglioma, neurilemoma, retinoblastoma, tumores congénitos), neurofibroma de la espina dorsal, meningioma, glioma, sarcoma) Piel melanoma maligno, carcinoma de células básales, carcinoma de células escamosas, sarcoma de Kaposi sarcoma, nevi displásico de lunares, lipoma, angioma, dermatofibroma, queloides Los compuestos de la presente invención o sus sales farmacéuticamente aceptables o sus profármacos se pueden administrar en su forma pura o en una composición farmacéuticamente adecuada y se pueden llevar a cabo por métodos aceptados de la práctica farmacéutica galénica.
Las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden preparar mediante la mezcla de un compuesto de la presente invención con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable adecuado y se puede formular en preparaciones en forma sólida, semisolida, líquida o gaseosa, tales como tabletas, cápsulas, polvos, gránulos, ungüentos, soluciones, inyecciones, inhaladores, geles, microesferas y aerosoles. Las vías usuales de administración de dichas composiciones farmacéuticas incluyen sin limitación, la vía oral, tópica, transdérmica, inhalada, parenteral (inyecciones subcutáneas, intravenosas, intramusculares, intraestemales o técnicas de infusión), sublingual, ocular, rectal, vaginal e intranasal. Las composiciones farmacéuticas de la presente invención se formulan para permitir que^ los ingredientes activos contenidos en las mismas sean biodisponibles mediante la administración de la composición a un sujeto. Las composiciones se administran a un sujeto o paciente en forma de una o más unidades de dosis, donde, por ejemplo, una tableta puede ser una unidad de dosificación y un envase que contiene el compuesto de la presente invención en forma de aerosol puede contener múltiples unidades de dosis. Los métodos actuales para la preparación de dichas formas de dosificación son conocidos o serán evidentes para los expertos en la técnica; por ejemplo, consulte Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a Ed., (Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1990). La composición que se administrará contiene en todo caso, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención o su sal farmacéuticamente aceptable, para el tratamiento de un estado de enfermedad, como se describió anteriormente. Una composición farmacéutica de la presente invención puede estar en forma sólida o líquida. En un aspecto, el o los vehículos son particulados, de manera que las composiciones estén, por ejemplo, en forma de tableta o de polvo. El o los vehículos pueden ser líquidos cuando las composiciones son, por ejemplo, jarabe oral, líquido inyectable o un aerosol, que es útil para la administración por inhalación. Para la administración oral, es preferible que la composición farmacéutica esté en su forma sólida o líquida, donde la forma semisólida, semilíquida, de suspensión y de gel se incluyen entre las formas que se consideran en la presente como formas sólidas o liquidas. Como una composición sólida para administración oral, la composición farmacéutica se puede formular como polvo, gránulo, tableta comprimida, pildora, cápsula, goma de mascar, pastilla y similares. Usualmente, dicha composición sólida contiene uno o más diluyentes inertes o vehículos comestibles. Además, puede estar presente uno o más de los siguientes ingredientes: agentes aglomerantes como carboximetilcelulosa, etil celulosa, celulosa microcristalina, goma tragacanto o gelatina; excipientes como almidón, lactosa o dextrinas, agentes desintegrantes como ácido algínico, alginato de sodio, Primogel, almidón de maíz y similares; lubricantes como estearato de magnesio o Sterotex; transportadores como dióxido de silicón coloidal; agentes edulcorantes como sucrosa o sacarina; agentes saborizantes, como menta, salicilato de metilo o sabor de naranja y agentes colorantes. Cuando la composición farmacéutica está en forma de cápsula, por ejemplo, una cápsula de gelatina, puede contener, además de los materiales mencionados anteriormente, un vehículo líquido, tal como polietileno glicol o aceite, como aceite de soya o aceite vegetal. La composición farmacéutica puede estar en forma de líquido, por ejemplo, como elixir, jarabe, solución, emulsión o suspensión. El líquido puede ser para administración oral o para inyección, por ejemplo. Cuando el propósito es la administración oral, la composición preferida contiene además de los compuestos presentes, uno o más agentes edulcorantes, preservantes, tintes o colorantes e intensiíicadores del sabor. Una composición con el propósito de ser inyectada, puede incluir uno o más agentes agente tensioactivos, agentes preservantes, agentes humidificadores, agentes dispersantes, agentes suspensores, tampones, estabilizadores e isotónicos. Las composiciones farmacéuticas líquidas de la presente invención, ya sean soluciones, suspensiones u otras formas similares, pueden incluir uno o más de los siguientes adyuvantes: diluyentes estériles como agua para inyección, solución salina, de preferencia solución fisiológica, solución de Ringer, cloruro de sodio isotónico, aceites como mono o diglicéridos sintéticos que pueden servir como medio solvente o de suspensión, polietilenglicoles, glicerina, propilenglicol u otros solventes; agentes antibacterianos como alcohol bencílico o metil paraben, agentes encapsulantes como ciclodextrinas o ciclodextrinas funcionalizadas, que incluyen, pero no se limitan a, las a,ß, o d-hidroxipropilciclodextrinas o Captisol; antioxidantes como el ácido ascórbico o bisulfito de sodio; agentes quelantes como el ácido etilendiamino tetraacético; tampones como acetatos, citratos o fosfatos y agentes para ajustar la tonicidad, como cloruro de sodio o dextrosa. La preparación parenteral puede tener una presentación en ampollas, jeringas desechables o viales de dosis múltiples de vidrio o plástico. Preferiblemente, la composición farmacéutica inyectable debe ser estéril. Una composición farmacéutica líquida de la presente invención para administración parenteral o por vía oral debe contener una cantidad de un compuesto de la presente invención de manera que se obtenga la dosis adecuada. Usualmente, esta cantidad es de al menos 0.01 % de un compuesto de la presente invención. Cuando es para administración oral, esta cantidad varía entre 0.1 y aproximadamente 70% del peso de la composición. Para uso parenteral, las composiciones y preparaciones según la presente invención se preparan de tal manera que la unidad de dosis parenteral contenga entre 0.01 y 10% en peso del compuesto de la presente invención. Las composiciones farmacéuticas se pueden diluir más al momento de administrarlas; por ejemplo, una formulación parenteral se puede diluir más con solución isotónica estéril para inyección, tal como solución salina al 0.9 %, dextrosa al 5% en peso (D5W), solución Ringer y otras. La composición farmacéutica de la presente invención se puede utilizar para administración tópica, en cuyo caso el vehículo puede comprender una base adecuada de solución, emulsión, ungüento o de gel. La base, por ejemplo, puede comprender uno o más de los siguientes ingredientes: petrolato, lanolina, polietilenglicoles, cera de abeja, aceite mineral, diluyentes como agua y alcohol, emulsificantes y estabilizadores. La composición farmacéutica para administración tópica puede contener agentes espesantes. Si la composición es para administración transdérmica, puede incluir un parche transdérmico o un dispositivo de iontoforesis. Las formulaciones tópicas pueden contener una concentración del compuesto de la presente invención de 0.1 a aproximadamente 10% p/v (peso por unidad de volumen).
La composición farmacéutica de la presente invención se puede utilizar para la administración rectal para el tratamiento, por ejemplo, del cáncer de colon, en forma de supositorio que se derretirá en el recto y así liberará el fármaco. La composición de administración rectal puede contener una base oleosa como excipiente adecuado no irritante. Dichas bases incluyen sin limitación lanolina, manteca de cacao y polietilenglicol. La composición farmacéutica de la presente invención puede incluir varios materiales que modifican la forma física de una unidad de dosis sólida o líquida. Por ejemplo, la composición puede incluir materiales para formar un revestimiento alrededor de los ingredientes activos. Los materiales del revestimiento generalmente son inertes y se pueden seleccionar, por ejemplo, entre azúcar, laca u otros agentes de revestimiento entérico. Alternativamente, los ingredientes activos se pueden encerrar en una cápsula de gelatina. La composición farmacéutica de la presente invención en forma sólida o líquida puede incluir un agente aglomerante que junta el compuesto de la presente invención y por lo tanto facilita la administración del compuesto. Los agentes adecuados para actuar con esta capacidad incluyen, pero no se limitan a, un anticuerpo monoclonal o policlonal, una proteína o un liposoma. La composición farmacéutica de la presente invención puede consistir de unidades de dosis que se pueden administrar en forma de aerosol. El término aerosol se usa para referirse a varios sistemas que van desde aquellos de naturaleza coloidal hasta los sistemas envasados a presión. La administración puede ser por medio de un gas líquido o comprimido o por medio de un sistema adecuado de bombeo que dispensa los ingredientes activos. Los aerosoles de los compuestos de la presente invención se pueden administrar en sistemas de fase única, bifásicos o trifásicos para la administración del o los ingredientes activos. La administración del aerosol incluye el envase necesario, activadores, válvulas, sub-contenedores y similares, que en conjunto forman un equipo. Los expertos en la técnica pueden fácilmente determinar cuáles soh los aerosoles preferibles. Las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden preparar por la metodología bien conocida en el campo farmacéutico. Por ejemplo, una composición farmacéutica para administración por inyección se puede preparar al mezclar un compuesto de la presente invención con agua destilada estéril para formar una solución. Se puede agregar un agente tensioactivo para facilitar la formación de una solución homogénea o una suspensión. Los agentes tensioactivos son compuestos que interactúan de manera no covalente con el compuesto de la presente invención y facilitan la disolución o la suspensión homogénea del compuesto en un sistema acuoso de administración. Los compuestos de la presente invención o sus sales farmacéuticamente aceptables se administran en una cantidad terapéuticamente eficaz, que varía dependiendo de varios factores, que incluyen la actividad del compuesto específico empleado; la estabilidad metabolica y la duración de la actividad del compuesto; la edad, el peso corporal, la salud general, el sexo y la dieta del paciente; la forma y hora de administración; la tasa de excreción, la combinación de fármacos; la gravedad de un trastorno o afección en particular y el sujeto que recibe terapia. Generalmente, una dosis diaria terapéuticamente efectiva puede ser de 0.1 mg a aproximadamente 40 mg/kg de peso corporal por día o dos veces al día de un compuesto de la presente invención o de su sal farmacéuticamente aceptable.
Terapia combinada Los compuestos de la presente invención o sus sales farmacéuticamente aceptables también se pueden administrar simultáneamente, antes o después de la administración de uno o más de los agentes que se describen más adelante. Dicha terapia combinada puede incluir la administración de una formulación de dosis farmacéutica única que contiene un compuesto de la presente invención y uno o más de los agentes adicionales que se indican a continuación, así como la administración de un compuesto de la presente invención y cada uno de los agentes adicionales en su propia formulación de dosis farmacéutica separada. Por ejemplo, un compuesto de la presente invención y un agente quimioterapéutico, tal como taxol (paclitaxel), taxotere, etoposido, cisplatina, vincristina, vinblastina y similares, que se pueden administrar a un paciente en una composición de dosis oral única, tal como una tableta o cápsula o se puede administrar cada agente en formulaciones de dosis orales separadas o por inyección intravenosa. Cuando se utilizan formulaciones de dosis separadas, los compuestos de la presente invención y uno o más agentes adicionales se pueden administrar esencialmente al mismo tiempo, es decir, simultáneamente o en momentos diferentes, es decir, de forma secuencial; por terapia combinada se entiende que se incluyen todos estos regímenes. Además, estos compuestos pueden tener sinergia con moléculas que pueden estimular la vía apoptótica del receptor de muerte de manera directa o indirecta, como por ejemplo, los compuestos de la presente invención se pueden usar en combinación con TRAIL soluble cualquier agente o procedimiento que puede causar un aumento en el nivel circulante de TRAIL, tal como el interferón-alfa o radiación. Así, la presente invención también abarca el uso de los compuestos de la presente invención en combinación con la terapia de radiación o con uno o más de los agentes adicionales descritos en el documento WO 03/09921 1 (PCT/US03/15861 ), que se incorpora a la presente a manera de referencia. Entre los ejemplos de los agentes adicionales se encuentran, pero no se limitan a, los siguientes: a) un modulador de receptores de estrógenos, b) un modulador de receptores de andrógenos, c) un modulador de receptores de retinoides, d) un agente citotóxico, e) un agente anti-proliferante, f) un inhibidor de la prenil-proteína transferasa; g) un inhibidor de la HMG-CoA reductasa, h) un inhibidor de la VIH proteasa, i) un inhibidor de la transcriptasa inversa, k) un inhibidor de la angiogénesis, I) un agonista de PPAR-?, m) un agonista de PPAR-d, n) un inhibidor de la resistencia inherente a los multifármacos, o) un agente antiemético, p) un agente útil para el tratamiento de la anemia, q) agentes útiles para el tratamiento de la neutropenia, r) un fármaco que mejora el sistema inmunológico. s) un inhibidor de proteasomas, tal como Velcade y MG1 32 (7-Leu-Leu-aldehído) (véase He y col. en Oncogene (2004) 23, 2554-2558); t) un inhibidor de HDAC, tal como el butirato de sodio, butirato de fenilo, ácidos hidroámicos, ciclin tetrapéptidos y similares (véase Rosato y col., Molecular Cáncer Therapeutics 2003, 1273-1284);' u) un inhibidor de la actividad similar a la de la quimiotripsina que presenta la proteasoma; v) inhibidores de la ligasa E3; w) un modulador del sistema inmunológico, tal como el interferón-alfa y radiación ionizante (UVB) que puede inducir la liberación de citoquinas, tales como las interleuquinas, TNF o inducir la liberación de ligandos de los receptores de muerte, tales como TRAIL; x) un modulador de los receptores de muerte TRAIL y los agonistas de TRAIL, tales como los anticuerpos humanizados HGS-ETR1 y HGS-ETR2; y o en combinación o de manera secuencial con la terapia de radiación, para el tratamiento del cáncer. Las combinaciones adicionales también pueden incluir agentes reductores de la toxicidad de los agentes antes mencionados, tal como la toxicidad hepática, la toxicidad neuronal, la nefrotoxicidad y similares. En un ejemplo, la co administración de uno de los compuestos de formula I de la presente invención con un agonista de los receptores de muerte, como TRAIL, tal como una molécula pequeña o un anticuerpo que mimetiza TRAIL puede causar un efecto sinérgico ventajoso. Además, los compuestos de la presente invención se pueden utilizar en combinación con cualquier compuesto que cause un aumento en los niveles de TRAIL circulante.
Alcaloides de la Vinca y compuestos relacionados Los alcaloides de la vinca que se pueden utilizar en combinación con los oligomeros de la invención para el tratamiento del cáncer y otros neoplasmas incluyen vincristina, vinblastina, vindesina, vinflunina, vinorelbina y anhidrovinblastina.
Las dolastatinas son oligopéptidos que interfieren principalmente con la tubulina en el dominio de unión del alcaloide de la vinca. Estos compuestos también se pueden usar en combinación con los compuestos de la invención para el tratamiento del cáncer y otros neoplasmas. Las dolastatinas incluyen dolastatina-10 (NCS 376128), dolastatina-15, ILX651 , TZT-1027, simplostatina 1 , simplostatina 3 y LU103793 (cemadotina). Las criptoíicinas (por ejemplo, criptoficina 1 y criptoficina 52 (LY355703)) se unen a la tubulina en el dominio de unión dél alcaloide de vinca e inducen la detención y apoptosis de la G2/M. Cualquiera de estos compuestos se puede usar en combinación con los compuestos de la invención para el tratamiento del cáncer y otros neoplasmas. Otros compuestos que alteran los microtúbulos que se pueden utilizar en conjunción con los compuestos de la invención para, el tratamiento del cáncer y otros neoplasmas se describen en las patentes de E.U.A N° 6,458,765; 6,433,187; 6,323,315; 6,258,841 ; 6,143,721 ; 6,127,377; 6,103,698; 6,023,626; 5,985,837; 5,965,537; 5,955,423; 5,952,298; 5,939,527; 5,886,025; ,831 ,002; 5,741 ,892; 5,665,860; 5,654,399; 5,635,483; 5,599,902; 5,530,097; ,521 ,284; 5,504,191 ; 4,879,278 y 4,816,444, y en la publicación de las solicitudes de patente de E.U.A. N° 2003/0153505 A1 ; 2003/0083263 A1 y 2003/0055002 A1 , cada una de las cuales se incorpora a la presente a manera de referencia.
Taxanos y otros compuestos estabilizadores de los microtúbulos Los taxanos, tales como paclitaxel, doxetaxel, RPR 109881 A, SB-T-1213, SB-T-1250, SB-T-101187, BMS-275183, BRT 216, DJ-927, MAC- 321 , IDN5109 e IDN5390 se pueden utilizar en combinación con los compuestos de la invención para el tratamiento del cáncer y otros neoplasmas. Los análogos de taxanos (por ejemplo, BMS-184476, BMS- 188797) y no taxanos funcionalmente relacionados (por ejemplo, las epotilonas (por ejemplo, epotilona A, epotilona B (EPO906), deoxiepotilona B y epotilona B lactam (BMS-247550)), eleuterobina discodermolida, 2-epi-discodermolida, 2-des-metidiscodermolida, 5-hidroximetildiscoder- molida, 19-des-aminocarbonildiscodermolida, 9(13)-ciclodiscodermolida y laulimolida) también se pueden utilizar en los métodos y composiciones de la invención. Otros compuestos estabilizadores de los microtúbulos que se puede usar en combinación con los compuestos de la invención para el tratamiento del cáncer y otros neoplasmas se describen en las patentes de E.U.A. N° 6,624,317; 6,610,736; 6,605,599; 6,589,968; 6,583,290; 6,576,658; 6,515,017; 6,531 ,497; 6,500,858; 6,498,257; 6,495,594; 6,489,314; 6,458,976; 6,441 ,186; 6,441 ,025; 6,414,015; 6,387,927; 6,380,395; 6,380,394; 6,362,217; 6,359,140; 6,306,893; 6,302,838; 6,300,355; 6,291 ,690; 6,291 ,684; 6,268,381 ; 6,262,107; 6,262,094; 6,147,234; 6,136,808; 6,127,406; 6,100,411 ; 6,096,909; 6,025,385; 6,01 1 ,056; 5,965,718; 5,955,489; 5,919,815; 5,912,263; 5,840,750; ,821 ,263; 5,767,297; 5,728,725; 5,721 ,268; 5,719,177; 5,714,513; 5,587,489; ,473,057; 5,407,674; 5,250,722; 5,010,099 y 4,939,168; y en la publicación de las solicitudes de patente de E.U.A. N° 2003/0186965 A1; 2003/0176710 A1 2003/0176473 A1; 2003/0144523 A1; 2003/0134883 A1; 2003/0087888 A1 2003/0060623 A1; 2003/0045711 A1; 2003/0023082 A1; 2002/0198256 A1 2002/0193361 A1; 2002/0188014 A1; 2002/0165257 A1; 2002/0156110 A1 2002/0128471 A1; 2002/0045609 A1; 2002/0022651 A1; 2002/0016356 ! A1 2002/0002292 A1 , cada una de las cuales se incorpora a la presente a manera de referencia.
Otros agentes quimioterapéuticos que se pueden administrar con un compuesto de la presente invención se enumeran en el siguiente cuadro: i i I Agentes de ciclofosfamida mecloretamina alquilación lomustina tiotepa busulfano estreptozocina procarbazina clorambucil ifosfamida temozolomida altretamina dacarbazina melíalan semustina fosfato de estramustina carmustina hexametilmelamina Agentes de cisplatina tetraplatino platino carboplatino BBR-3464 (Hoffmann-La oxaliplatino Roche) ZD-0473 (AnorMED) Ormiplatin espiroplatino SM-1 1355 (Sumitomo) lobaplatina (Aetema) iproplatino carboxiftalatoplatino AP-5280 (Access) satraplatino (Johnson Matthey) Antimetaboli azacitidina 6-mercaptopurina tos tomudex hidroxiurea gemcitabina 6-tioguanina trimetrexato decitabina (SuperGen) capecitabina citarabina deoxicoformicina clofarabina (Bioenvision) 5-fluorouracilo 2-fluorodeoxi fludarabina citidina floxuridina irofulven (MGI Pharma) pentostatina metotrexato 2-clorodeoxiadenosina DMDC (Hoffmann-La Roche) raltitrexed idatrexato etinilcitidina (Taiho) Inhibidores amsacrina TAS- 103 (Taiho) de la rubitecan (SuperGen) Topotecan topoisomera epirubicina elsamitrucina (Spectrum) sa mesilato de exatecan dexrazoxanet (TopoTarget) (Daiichi) J-107088 (Merck & Co) etoposido pixantrona (Novuspharma) quinamed (ChemGenex) BNP-1350 (BioNumerik) teniposido o mitoxantrona rebecamicina análogo gimatecan (Sigma-Tau) (Exelixis) irinotecan (CPT-1 1 ) CKD-602 (Chong Kun Dang) diflomotecan (Beaufour- BBR-3576 (Novuspharma) Ipsen) KW-2170 (Kyowa Hakko) 7-etil-10-hidroxi- camptotecina Antibióticos dactinomicina (actinomina ácido bleomicínico antitumorales D) amonafide idarubicina doxorubicina (adriamicina) bleomicina A azonaíida rubidazona deoxirubicina bleomicina B antrapirazol plicamicinp valrubicina mitomicina C oxantrazol portiromicina daunorubicina MEN-10755 (Menarini) (daunomicina) losoxantrona cianomorfolinpdoxorubicin epirubicina a sulfato de bleomicina GPX-100 (Gem (blenoxano) terarubicina Pharmaceuticals) mitoxantrona (novantrona) Agentes paclitaxel RPR 109881 A (Aventis) antimitóticos SB 408075 ZD 6126 (AstraZeneca) (GlaxoSmithKline) docetaxel TXD 258 (Aventis) E7010 (Abbott) PEG-paclitaxel (Enzon) Colchicinas epotilona B (Novartis) PG-TXL (Cell Therapeutics) AZ10992 (Asahi) vinblastina T 900607 (Tularik) IDN 5109 (Bayer) IDN-5109 (Indena) Vincristina T 138067 (Tularik) A 105972 (Abbott) AVLB (Prescient Vinorelbina NeuroPharma) A 204197 (Abbott) criptoficina 52 (Eli Lilly) Vindesina azaepotilona B (BMS) LU 223651 (BASF) vinflunina (Fabre) dolastatina 10 (NCI) BNP-7787 (BioNumerik) D 24851 (ASTAMedica) auristatina PE (Teikoku rizoxina (Fujisawa) Hormone) ER-86526 (Eisai) CA-4 pro-fármaco mivobulina (Warner- (OXiGENE) Lambert) combretastatina BMS 247550 (BMS) A4 (BMS) dolastatina- 10 (NIH) cemadotina (BASF) BMS 184476 (BMS) isohomohalicondrina-B CA-4 (OXiGENE) (PharmaMar) BMS 188797 (BMS) taxoprexina (Protarga) Inhibidores de Aminoglutetimida anastrazol la aromatasa Exemestano YM-51 1 (Yamanouchi) Letrozol formestano atamestano (BioMedicines) Inhibidores de pemetrexed (Eli Lilly) ZD-9331 (BTG) la timidilato nolatrexed (Eximias) CoFactor™ (BioKeys) sintetasa antagonistas Trabectedina (PharmaMar) albúmina + 32P (Isotope de ADN mafosfamida (Baxter Solutions) International) 06 bencil guanina glufosfamida (Baxter (Paligent) timectacina International) (NewBiotics) edotreotido apazicuona (Spectrum (Novartis) Pharmaceuticals) Inhibidores de arglabina (NuOncology perilil alcohol (DOR la Labs) tipifarnib (Johnson & BioPharma) 1 BAY-43-9006 farnesiltransfe Johnson) lonafarnib (Bayer) rasa (Schering-Plough) Inhibidores de CBT-1 (CBA Pharma) tariquidar (Xenova) la bomba trihidrocloruro de biricodar dicitrato (Vértex) zosuquidar (Eli Lilly) MS-209 (Schering AG) Inhibidores de tacedinalina (Pfizer) depsipéptido (Fujisawa) la histona pivaloiloximetil butirato MS-275 (Schering AG) acetiltransíera (Titán) sa SAHA (Aton Pharma) Inhibidores de Neovastat (Aeterna marimastat (British Biotech) la Laboratories) CMT-3 BMS-275291 (Celltech) metaloprotein (CollaGenex) asa Inhibidores de maltolato de galio (Titán) triapina (Vion) la tezacitabina (Aventis) didox (Molecules for Health) ribonucleótido reductasa Agonistas/ant virulizina (Lorus CDC-394 (Celgene) agonistas de Therapeutics) revimid TNF (Celgene) Antagonista atrasentan (Abbott) ZD -4054 (AstraZeneca) del receptor YM-598 (Yamanouchi) entodelina A Agonistas del fenretinida (Johnson & LGD-1550 (Ligand) receptor de Johnson) alitretinoina ácido (Ligand) retinoico Inmuno- Interferón norelin (Biostar) moduladores dexosoma terapia IRX-2 (Immuno-Rx) (Anosys) oncófago BLP-25 (Biomira) (Antigenics) PEP-005 (Peplin Biotech) pentrix (Australian Cáncer GMK (Progenies) Technology) vacunas synchrovax (CTL GMK (Progenies) Immuno) ISF-154 (Tragen) beta.-aletina (Dovetail) vacuna contra el vacuna contra el melanoma adenocarcinoma (Biomira) (CTL Immuno) terapia de vacuna contra el cáncer CLL (Vasogen) (Intercell) vacuna de p21 RAS CTP-37 (A VI BioPharma) (GemVax) Agentes estrógenos bicalutamida hormonales y Prednisona propionato de testosterona; antiestrógenos conjugados íluoximesterona hormonales metilprednisolona flutamida etinil estradiol metiltestosterona prednisolona octreotida clortrianisen dietilstilbestrol aminoglutetimida nilutamida idenestrol megestrol leuprolida mitotano tamoxifeno caproato de P-04 (Novogen) hidroxiprogesterona Toremofina goserelina 2-metoxiestradiol medroxiprogesterona (EntreMed) dexametasona leuporelina arzoxifeno (Eli Lilly) testosterona Agentes talaporfina (Light motexafina fotodinámicos Sciences) gadolinio (Pharmacyclics) Pd-bacteriofeoforbida hipeheina (Yeda) Theralux (Theratechnologies) texafirina de lutecio (Pharmacyclics) Inhibidores de imatinib (Novartis) C225 (ImClone) la tirosina kahalidaF (PharmaMar) ZD1839 (AstraZeneca) quinasa leflunomida rhu-Mab (Genentech) (Sugen/Pharmacia) ZD6474 (AstraZeneca) CEP-701 (Cephalon) MDX-H210 (Médarex) ZD 839 (AstraZeneca) vatalanib (Novartis) CEP-751 (Cephalon) 2C4 (Genentech) erlotinib (Oncogene PKI166 (Novartis) Science) MLN518 MDX-447 (Medarex) (Millenium) GW2016 (GlaxoSmithKI canertinib (Pfizer) ABX-EGF (Abgenix) PKC412 (Novartis) EKB-509 (Wyeth) escualamina (Genaera) IMC-1C1 1 (ImClone) fenoxodiol () EKB-569 (Wyeth) SU5416 (Pharmacia) trastuzumab (Genentech) SU6668 (Pharmacia) Agentes misceláneos SR-27897 (inhibidor de CCK A, Sanofi- gemtuzumab (anticuerpo CD33, Wyeth Synthelabo) Ayerst) BCX-1777 (inhibidor de PNP, BioCryst) CCI-779 (inhibidor de mTOR quinasa, tocladesina (agonista de AMP cíclico, Wyeth) Ribapharm) PG2 (intensificador de la hematopoyesis, ranpirnasa (estimulante de la Pharmagenesis) ribonucleasa, Alfacell) alvocidib (inhibidor exisulind (inhibidor de PDE V, vías de CDK, Aventis) celulares) Immunol™ (enjuague oral de galarubicina (inhibidor de la síntesis de triclosán, Endo) ARN, Dong-A) CP-461 (inhibidor de PDE, vías celulares) CV-247 (inhibidor de COX-2, Ivy Medical) triacetiluridina (pro-fármaco de uridina, tirapazamina (agente reductor, SRI Wellstat) International) AG-2037 (inhibidor de GART, Pfizer) P54 (inhibidor de COX-2, Phytopharm) SN-4071 (agente de sarcoma, Signature N-acetilcisteína (agente reductor, BioScience) WX-UK1 (inhibidor del activador Zambón) CapCellT (estimulante de de plasminógeno, Wilex) CYP450, Bavarian Nordic) TransMID-107.TM. (inmunotoxina, KS R-flurbiproten (inhibidor de NF-kappaB, Biomedix) Encoré) PBI-1402 (estimulante de PMN, ProMetic GCS-100 (antagonista de gal3, LifeSciences) GlycoGenesys) 3CPA (inhibidor de NF- PCK-31 5 (promotor de apoptosis, Procyon) kappaB, Active Biotech) bortezomib (inhibidor de 1 proteasomas, G17DT ¡nmunógeno (inhibidor de Millennium) gastrina, Aphton) doranidazol (promotor de apoptosis, Pola) seocalcitol (agonista del receptor de SRL-172 (estimulante de células T, SR vitamina D, Leo) Pharma) CHS-828 (agente citotóxico, Leo) efaproxiral (oxigenador, Allos TLK-286 (inhibidor de la glutatión S Therapeutics) transferasa, Telik) 131 -I-TM-601 (antagonista de ADN, ácido trans-retinoico (diferenciador, NIH) TransMolecular) PT-100 (agonista del factor de crecimiento, PI-88 (inhibidor de heparanasa, Progen) Point Therapeutics) eflornitina (inhibidor de ODC, ILEX MX6 (promotor de apoptosis, MAXIA) Oncology) midostaurina (inhibidor de PKC, Novartis) tesmilrfeno (antagonista de la histamina, apomina (promotor de apoptosis, ILEX YM BioSciences) Oncology) ácido minodrónico (inhibidor de briostatin-1 (estimulante de PKC, GPC osteoclastos, Yamanouchi) Biotech) urocidina (promotor de apoptosis, histamina (agonista del receptor de Bioniche) histamina H2, Maxim) CDA-II (promotor de apoptosis, Everlife) indisulam (estimulante de p53, Eisai) Ro-31 -7453 (promotor de ¦ apoptosis, La tiazofurina (inhibidor de IMPDH, Roche) Ribapharm) aplidina (inhibidor de PPT, SDX-101 (promotor de apoptosis, Salmedix) PharmaMar) brostalicina (promotor de apoptosis, cilengítida (antagonista de integrina, Pharmacia) Merck KGaA) ceflatonina (promotor de apoptosis, rituximab (anticuerpo CD20, Genentech) ChemGenex) SR-31747 (antagonista de IL-1 , Sanofi-Synthelabo) Las combinaciones adicionales también pueden incluir agentes reductores de la toxicidad de los agentes antes mencionados, tal como la toxicidad hepática, la toxicidad neuronal, la neurotoxicidad y similares.
Ensayos de exploración Los compuestos de la presente invención también se pueden utilizar en un método para detectar otros compuestos que se unen a un dominio BIR de IAP. En términos generales, para usar los compuestos de la invención en un método de identificación de compuestos que se unen a un dominio BIR de IAP, la IAP se une a un soporte y se agrega al ensayo un compuesto de la invención. Alternativamente, el compuesto de la invención se puede unir al soporte y se agrega la IAP. Existen varias formas para determinar la unión de un compuesto de la presente invención al dominio BIR. En una forma, el compuesto de la invención, por ejemplo, se puede marcar con fluorescencia o con radioactividad para determinar la unión de forma directa. Por ejemplo, se puede realizar al unir la IAP a un soporte sólido, agregar un compuesto de la invención marcado de forma detectable, lavar el exceso de reactivo y determinar si la cantidad de marcador detectable es el que se encuentra presente en el soporte sólido. Se pueden utilizar numerosos pasos de bloqueo y lavado, los que conocen los expertos en la técnica. En algunos casos, únicamente se marca uno de los componentes. Por ejemplo, se pueden marcar los residuos específicos del dominio BIR. Alternativamente, se puede marcar más de un componente con diferentes marcadores; por ejemplo, se puede usar I125 para marcar el dominio BIR y un marcador fluorescente para marcar la sonda. Los compuestos de la invención también se pueden usar como competidores para detectar candidatos a fármaco adicionales o compuestos de prueba. Según se usan en la presente, los términos "candidato a fármaco" o "compuestos de prueba" se usan indistintamente y describen cualquier molécula, por ejemplo, proteína, oligopéptido, molécula orgánica pequeña, polisacárido, polinucleótido y similares, que se prueban para determinar su bioactividad. Los compuestos pueden tener la capacidad de alterar directa o indirectamente la actividad biológica de la IAP. Los candidatos a fármaco incluyen varias clases químicas, aunque usualmente son moléculas orgánicas pequeñas que tienen un peso molecular de 100 o menos de aproximadamente 2,500 daltons. Los agentes candidatos generalmente incluyen los grupos funcionales necesarios para la interacción estructural con proteínas, por ejemplo, enlaces de hidrógeno y uniones lipofílicas, y usualmente incluyen al menos una grupo amino, carbonilo, hidroxilo, éter o un grupo carboxilo. Los candidatos a fármaco con frecuencia incluyen estructuras cíclicas o heterocíclicas de carbono y/o estructuras aromáticas o poliaromáticas sustituidas por uno o más grupos funcionales. Los candidatos a fármaco se pueden obtener de varias fuentes, que incluyen bibliotecas de compuestos sintéticos o naturales. Por ejemplo, varios medios están disponibles para la síntesis al azar y dirigida de una amplia variedad de compuestos orgánicos y biomoléculas, que incluyen la expresión al azar de los oligonucleótidos. Alternativamente, las bibliotecas de compuestos naturales en forma de extractos bacterianos, fúngicos, vegetales y animales están disponibles o son fáciles de producir. Adiciónalmente, las bibliotecas producidas natural o sintéticamente y los compuestos se pueden modificar fácilmente por medios químicos, físicos y bioquímicos convencionales. Los ensayos de detección competitiva se pueden realizar mediante la combinación de un dominio BIR de IAP y una sonda para formar el complejo sonda-dominio BIR en una primera muestra, seguido de la adición de un compuesto de prueba de una segunda muestra. Se determina la unión de prueba y un cambio o diferencia en la unión entre dos muestras indica la presencia de un compuesto de prueba con capacidad unirse al dominio BIR y potencialmente modular la actividad de las IAP. En un caso, la unión del compuesto de prueba se determina mediante el uso de ensayos de unión competitiva. En esta forma de modalidad, se marca la sonda con un marcador fluorescente. En algunas circunstancias, puede haber unión competitiva entre el compuesto de prueba y la sonda. Se considera que los compuestos de prueba que muestran la sonda y que producen un cambio en la fluorescencia al compararla con un control, se unen a la región BIR. En un caso, el compuesto de prueba se puede marcar. Se puede agregar primero el compuesto de prueba o un compuesto de la presente invención, o se pueden agregar ambos al dominio BIR de IAP por un tiempo suficiente para permitir la unión y la formación de un complejo. La formación del complejo sonda-dominio BIR usualmente requiere de incubaciones a temperaturas entre 4°C y 40°C durante 10 minutos a una hora para permitir una detección de alto rendimiento. Generalmente se elimina y se lava cualquier exceso de los reactivos. Luego se agrega el compuesto de prueba y la presencia o ausencia del componente marcado se observa para indicar si hay unión al dominio BIR. En un caso, se agrega primero la sonda y luego el compuesto de prueba. El desplazamiento de la sonda es una indicación de que el compuesto se está uniendo al dominio BIR y por lo tanto tiene capacidad de unirse a la IAP y potencialmente modular su actividad. Se puede marcar cualquiera de los componentes. Por ejemplo, la presencia de la sonda en la solución de lavado indica que hubo desplazamiento por el compuesto de prueba. Alternativamente, si se marca el compuesto de prueba, la presencia de la sonda en el soporte indica que hubo desplazamiento. En un caso, el compuesto de prueba se puede agregar primero y luego la sonda, después de incubar y lavar. La ausencia de unión por la sonda puede indicar que el compuesto de prueba se une al dominio BIR con mayor afinidad. Así, si la sonda se detecta en el soporte, acompañada de la falta de unión del compuesto de prueba, puede indicar que el compuesto de prueba tiene capacidad de unirse al dominio BIR.
La modulación se prueba mediante la detección de la capacidad de un compuesto de prueba para modular la actividad de IAP e incluye la combinación de un compuesto de prueba con un dominio BIR de IAP, según se describió anteriormente, y determinar la alteración en la actividad biológica de la IAP. Por lo tanto, en este caso, el compuesto de prueba se debe unir al dominio BIR (aunque esto podría no ser necesario) y alterar su actividad biológica, según se describe en la presente. En los ensayos se pueden usar controles positivos y negativos. Todas las muestras de control y de prueba se realizan varias veces para obtener resultados estadísticamente significativos. Después de incubar, se lavan todas las muestras para eliminar todo el material que no se unió específicamente y se determina la cantidad de sonda que se unió. Por ejemplo, cuando se emplea un radiomarcador, las muestras se pueden contar con un contador de centelleo para determinar la cantidad de compuesto que se unió. Usualmente, las señales que se detectan en el ensayo pueden incluir fluorescencia, transferencia de energía resonancia, fluorescencia resuelta en el tiempo, radioactividad, fluorescencia de polarización, resonancia plasmática o quimioluminiscencia y similares, dependiendo de la naturaleza del marcador. Los marcadores detectables útiles para realizar los ensayos de detección en esta invención incluyen un marcador fluorescente como la fluoresceína, verde de Oregon, dansil, rodamina, tetrametil rodamina, rojo de Texas, Eu3+; un marcador quimioluminiscente como la luciferasa; marcadores colorimétricos, marcadores enzimáticos o radioisótopos como tritio, I125 y similares. Los identificadores de afinidad, que pueden ser útiles para realizar los ensayos de detección de la presente invención incluyen biotina, polihistidina y similares.
Síntesis y metodología Los métodos generales para la síntesis de compuestos de la presente invención se muestran a continuación y se describen únicamente con fines de ilustración y no con la intención de que se interpreten como limitantes de los procedimientos para producir los compuestos por medio de otros métodos. Un experto en la técnica apreciará rápidamente que existen varios métodos disponibles para la preparación de los compuestos de la presente invención.
Procedimientos generales Se pueden prever varios métodos para la preparación de los compuestos de puente simétricos y no simétricos, representados por la fórmula I y II. Los métodos generales se ilustran en los esguemas 1 a 8 y en los esquemas 17 a 20, mientras los ejemplos específicos se ilustran en los esguemas 9 a 16 y en los esquemas 21 a 26. El esquema 1 ilustra un procedimiento general para la preparación de los compuestos enlazados bis-alquilo de la fórmula I. N-PG1-2- hidroxi prolina se desprotona con NaH y se trata con bromuro de propargilo para proporcionar el producto intermedio 1 -i. La activación del ácido carboxilico de 1 -i con agentes que acoplan los péptidos y un tratamiento con una amina primaria o secundaria y la desprotección de PG1 proporciona la amida intermedia 1 -ii. El acoplamiento peptídico de PG2(H)N(R3)CHCO2H con 1 -i¡ se realiza por activación del ácido carboxilico de PG2(H)N(R3)CHCO2H con agentes de acoplamiento peptídico, seguida de la adición de 1 -ii para proporcionar la amida completamente protegida, que puede además desprotegerse en PG2 para proporcionar la amida 1 -iii. La activación del ácido carboxilico de PG3(R1)N(R2)CHCO2H con los agentes de acoplamiento peptídico, seguida de la adición de 1 -iii para proporcionar la amida intermedial -iv. La fracción enlazadora bis-alquinilo se prepara por homo-acoplamiento de las fracciones de alquino de 1 -iv mediante el uso de un sistema catalítico adecuado y luego se procede a la desprotección de PG3, para proporcionar el compuesto 1 -v.
ESQUEMA 1 Según se ¡lustra en el esquema 2, el producto intermedio 2-i se prepara por medio del esquema de acoplamiento y desprotección típica de amidas. Como tal, la fracción de ácido carboxílico de PG1-cis-2-amino-Pro(PG2)-OH se activa con reactivos de acoplamiento de aminoácidos, se trata con una amina para proporcionar la correspondiente amida, se elimina la PG1, en condiciones de reacción adecuadas para proporcionar el producto intermedio 2-i. De manera similar, PG3(H)N(R3)HCC02H se acopla con 2-i, y luego por desprotección la PG3, para proporcionar 2-ii. PG4(R1)N(R2)HCCO2H se acopla a 2-ii para proporcionar 2-iii. La desprotección de PG2 proporciona 2-iv.
ESQUEMA 2 P 1* El esquema 3 ilustra que un compuesto enlazado a una amida de formula I se puede preparar mediante el tratamiento de 3-i con un diácido activado adecuadamente en presencia de una base para dar 3-ii. La desprotección de la PG4 proporciona compuestos de fórmula general 3-iii. La activación del diácido puede incluir el uso de ésteres, cloruros ácidos, bromuros ácidos, ésteres de succinamida, ésteres de HOBt y el uso de otros reactivos para la formación de los enlaces de amidas.
ESQUEMA 3 L = -(CH2)r-, -(CH2)r-Y-(CH2)r-, -alquil-aril-alquil-, -alquil-heteroaril-alquil-, cicloalquilo, arilo o heteroarilo, donde r es 1 -10 El esquema 4 ¡lustra los compuestos enlazados a alquilo, que se pueden preparar por los métodos descritos en la presente. El tratamiento de 3-i con 0.5 equivalentes de una cadena de alquilo que contiene dos grupos salientes, tales como 1 ,5-dibromopentano, 1 ,10-dibromodecano y similares, proporciona el producto intermedio 4-i. Alternativamente, la aminación reductora de 3-i con un dialdehído puede producir el producto intermedio 4-i. La desprotección de PG4 proporciona los compuestos de fórmula 4-ii.
ESQUEMA 4 El esquema 5 ilustra un método en el cual dos unidades de unión BIR se pueden enlazar por medio de la unidad de unión bis-acetilénica. El acoplamiento de 5-i con 5-ii proporciona una mezcla de productos intermedios enlazados simétricos 5-iii y 5-v, así como el producto intermedió asimétrico 5-iv. La separación de 5-ii, 5-iii y 5-v se puede realizar por métodos, tales como la cromatografía o recristalización. La desprotección de los productos intermedios 5-iii, 5-iv y 5-v, independientemente o como mezcla combinada proporcionan los compuestos 5-vi, 5-vii y 5-viii.
ESQUEMA 5 Acoplamiento de intermedios 5-i y 5-ii -v¡¡ 5-viü En el esquema 6 se ilustra un método adicional para la preparación de compuestos enlazados asimétricamente. El acoplamiento de -¡ con 6-i proporciona una mezcla de productos intermedios 6-ii, 5-iii y 6-iii. La separación de 6-ii, 5-iii y 6-iii se puede realizar por métodos tales como la cromatografía o recristalización. La desprotección de PG4 de: los productos I intermedios 6-iii proporciona el compuesto 6-iv. 1 ESQUEMA 6 Acopiamiento de los productos intermedios 5-i y 6-i Una estrategia alternativa incluye el enlace de dos unidades de unión BIR por medio de un grupo de enlace bis-amida, como se ilustra en los esquemas 7 y 8. El grupo formador de puente monoprotegido H02C-L-C02PG5 se activa con los agentes de acoplamiento peptídico y luego se tratan con el producto intermedio 3-i para proporcionar el producto intermedio 7-ii. La desprotección de PG5 proporciona el producto intermedio 7-iii. El tratamiento de 7-iii con agentes de acoplamiento peptídico, seguido de 7-iv, proporciona 7-v. La desprotección de PG4 y PG400 proporciona el compuesto 7-vi.
ESQUEMA 7 Compuestos formador de puente bis-amida P3-P3 d L = -< CH:),- , -(CH2).-Y-(CH;),- , arilo, heteroarilo Se puede utilizar un procedimiento similar para la preparación de las unidades de unión BIR formadoras de puente asimétricamente, que se han enlazado entre P2 y P3, según se ilustra en el esquema 8. El tratamiento de 8-i con un anhídrido cíclico, tal como el anhídrido succínico o glutámico, proporciona el producto intermedio 8-ii. El tratamiento de 8-ii con los agentes de acoplamiento de amidas seguido de 3-i proporciona el producto intermedio 8-iii. La desprotección de PG4 proporciona el compuesto 8-iv.
ESQUEMA 8 Compuestos de enlace bis-amida P2-P3 agentes de acoplamiento de amida 8H¡¡ „ . L = -cCHí)r , -(CHajrY-tCHjy- , arilo; heteroarilo El esquema 9 ilustra la síntesis del compuesto 1. Boc-cis-2-hidroxi-L-prolina se trató con NaH en DMF, seguido de bromuro de propargilo para proporcionar el compuesto intermedio 9-1. El acoplamiento de amidas con (R)-1 ,2,3,4-tetrahidro-1 -naftilamina y la desprotección de Boc con TFA proporciona el producto intermedio 9-2. El acoplamiento de amidas de Boc-tert-BuGly-OH con 9-2, seguido de la desprotección de Boc con TFA proporciona el producto intermedio 9-3. El acoplamiento de amidas de Boc-MeAla-OH con el producto intermedio 9-3 proporciona el producto intermedio 9-4. El homo-acoplamiento de los grupos acetileno de 9-4 usando un catalítico Cul/TMEDA bajo O2, proporciona el producto intermedio 9-5, que se desprotegió usando HCI 4N en 1 -4,dioxano para proporcionar el compuesto 1-2HCI.
ESQUEMA 9 9-2 El producto intermedio 10-6 se usó para preparar los compuestos 2 y 3 (véanse los esquemas 10 a 12). El producto intermedio 10-5, se preparó usando un procedimiento similar al descrito para el producto intermedio 9-4, usando Fmoc-AMPC(2S, 4S)-OH en el primer paso. La remoción del grupo de protección Fmoc con una base como morfolina al 20% en un solvente como THF, proporcionó el producto intermedio 10-6.
ESQUEMA 10 El tratamiento del producto intermedio 10-6 con 0.5 equivalentes de cloruro de sebacoilo en THF proporcionó 1 1 -1. La remoción de los grupos de protección Boc utilizando HCI 4N en 1 ,4-dioxano proporcionó el compuesto 2»2HCI (Esquema 11 ).
Similarmente, el tratamiento del producto intermedio 10-6 con 0.5 equivalentes de cloruro de teraftaloilo en THF proporcionó 12-1. La remoción de los grupos de protección Boc utilizando HCI 1 N en 1 ,4-dioxano proporcionó el compuesto 3»2HCI (Esquema 12).
ESQUEMA 12 El esquema 13 ilustra la preparación de los compuestos 4 y 5. Los productos intermedios 9-4 y 13-1 se acoplaron usando un sistema catalítico de CuCI y TMEDA en acetona, en atmósfera de oxígeno para proporcionar una mezcla de productos intermedios 9-5, 13-2, y 13-3. La separación mediante cromatografía de sílica gel proporcionó los productos intermedios individuales. Los productos intermedios 13-2 y 13-3 se desprotegieron por separado mediante el tratamiento con HCI 4N en 1 ,4-dioxano, para proporcionar los compuestos 4»2HCI y 5*2HCI, respectivamente.
ESQUEMA 13 Síntesis de los compuestos 4 y 5 13-3 Compuesto 5 El esquema 14 ¡lustra la preparación del compuesto 6. Los productos intermedios 9-4 y 14-1 se acoplaron mediante un sistema catalítico de CuCI y TMEDA en acetona en atmósfera de oxígeno. El producto intermedio 14-2 se aisló de la mezcla resultante por cromatografía de sílica gel. El producto intermedio 14-2 se desprotegió mediante el tratamiento con HCI 4N en 1 ,4-dioxano para proporcionar el compuesto 6»2HCI.
ESQUEMA 14 acetona El esquema15 ilustra la preparación de los compuestos de enlace P2-P3 7 y 8. El producto intermedio 15-1 se trató con anhídrido glutárico para proporcionar el producto intermedio 15-2. El tratamiento de 15-2 con HBTU, HOBt y DIPEA, seguido de la adición de 10-6 en DMF, proporcionó el producto intermedio 15-3. La remoción del grupo de protección Cbz utilizando H2 sobre Pd/C produjo el producto intermedio 15-4. La acilación de 15-4 con Boc-N-MeAla-OH proporcionó el producto intermedio 15-5, que se desprotegió el Boc usando HCI 4N en 1 ,4-dioxano y produjo el compuesto 7«2HCI.
La remoción del grupo de protección Fmoc del compuesto 7»2HCI, usando soporte de poliestireno de N-metilpiperazina en DMF se obtuvo el compuesto 8. La remoción del grupo de protección Boc del producto intermedio 15-3, con HCI 4N en 1 ,4-dioxano, proporcionó el compuesto 9»HCI (véase el Esquema 16).
ESQUEMA 16 El esquema 17 ilustra la síntesis de los compuestos enlazados e sulfonamidas. El tratamiento de 3-i con un reactivo de cloruro proporciona el producto intermedio 17-i. La desprotección de na el compuesto 7-ii.
ESQUEMA 17 Similarmente, el tratamiento de 3-i con un bis-isocianato proporciona el producto intermedio 18-i, el cual después de la desprotección de PG4 proporciona el compuesto 18-ii.
ESQUEMA 18 Los esquemas 19a y 19b describen una ruta alternativa para producir los compuestos 3-iii, 17-ii o 18-ii, donde A=CO y Q=NR4R5. El derivado protegido de amino-prolina 19-1 se trata con LG-L-LG para proporcionar el producto intermedio 19-2, que luego se desprotege en PG1 para producir el producto intermedio 19-3. El producto intermedio 19-3 se convierte en el producto intermedio 19-5 por las secuencias de acoplamiento de aminoácidos/desprotección que se describieron anteriormente. Un tercer paso de acoplamiento de aminoácidos convierte el producto intermedio 19-5 en el producto intermedio 19-6. La desprotección de 19-6 en PG2 produce el producto diácido intermedio 19-7. El tratamiento de 19-7 con agentes de acoplamiento de aminoácidos, seguido de R4R5NH, produce el producto intermedio 19-8, el cual después de la desprotección de PG4 proporcionó el compuesto 19-9.
ESQUEMA 19a ESQUEMA 19b desprotección 19-6 * PC' Este método se puede aplicar a la síntesis de amidas, sulfonamidas y ureas con puentes bis-prolina. Por ejemplo, en el caso en el que el grupo de unión incluye una fracción Ar, X-L-X = -NHS(O)2-Ar-S(O)2NH-, NHC(0)-Ar-C(O)NH- o -NHC(0)NH-Ar-NHC(O)NH-, -O-CH2ArCH2-O-. Alternativamente, el derivado de prolina 19-2 se puede desproteger en PG2 y se puede convertir en una amida intermedia 20-3. Mediante un procedimiento similar al descrito anteriormente, se puede convertir el compuesto 20-3 en el compuesto 19-9.
ESQUEMA 20 n 19-9 La síntesis del compuesto 20 se ilustra en el esquema 21 . N- Boc-cis-4-amino-L-prolina metil éster, 21 -1 , se trató con cloruro de tereftaloilo para proporcionar el producto intermedio 21 -2, el cual se desprotegió con TFA para proporcionar el producto intermedio 21 -3. El producto intermedio 21 -3 se acopló a Boc-tert-BuGly-OH, 21 -4, usando HBTU y HOBt, seguido de la desprotección con TFA para proporcionar el producto intermedio 21 -6. El producto intermedio 21 -6 se acopló a Boc-N-MeAla-OH, 21 -7, usando HBTU y HOBt para proporcionar el producto intermedio 21 -8. La saponificación del metil éster usando LiOH proporcionó el producto intermedio 21 -9. El acoplamiento del producto intermedio 21 -9 con fenetilamina usando HBTU y HOBt proporcionó el producto intermedio 21 -10, que se desprotegió usando HCI en 1 ,4-dioxano para proporcionar el compuesto 20«2HCI.
ESQUEMA 21 Este método se utilizó en la preparación de una serie de derivados de amidas de prolina, tales como los compuestos 19 a 24 y 46 a 51. Esto se muestra en el esquema 22, donde el producto intermedio 21 -9 se acopló a 2-propilamida, seguido de la desprotección con HCI para proporcionar el compuesto 22«2HCI, mientras el acoplamiento del producto intermedio 21 -9 a 1 ,1 -difenilmetilamina, seguido de la desprotección con HCI proporcionó el compuesto 24»2HCI.
ESQUEMA 22 La preparación de los derivados de pirrolidina se describe en el esquema 23. La fracción éster el producto intermedio 21 -8 se redujo al alcohol 23-1 que luego se oxidó a un aldehido 23-2. La aminación reductora con fenetilamina proporcionó el producto intermedio 23-4. La acilación de 23-4 con cloruro de acetilo o con cloruro de benzoilo proporcionó los productos 23-5 y 23-6, respectivamente. La desprotección con HCI 1 N en 1 ,4-dioxano proporcionó los compuestos 25»2HCI y 27»2HCI.
ESQUEMA 23a 22·-.·; R=M e Compuesto 25; = t.l e 23-6: R=Ph Compuesto 27: R=Ph ESQUEMA 23 b La sulfonilación de 23-4 con cloruro de metanosulfonilo, seguido de la desprotección con HCI 1 N en 1 ,4-dioxano proporcionó el producto 26-2HCI. El producto intermedio 24-1 proporcionó una plantilla útil para la preparación de cualquiera de los compuestos enlazados. El producto intermedio 24-1 se preparó a partir de N-Boc-cis-4-hidroxi-L-prolina y a,a'-dibromo-p-xileno, según se describe a continuación. El acoplamiento de amidas y la desprotección de los grupos protectores de Boc utilizando TFA proporcionaron los productos intermedios 24-3. Dos pasos consecutivos de acoplamiento de aminoácidos y desprotección, según se describió anteriormente, proporcionaron el compuesto 29»2HCI.
El producto intermedio 10-6 se enlazó utilizando cloruro 1 ,3-bencendisulfonilo para proporcionar el producto intermedio 25-1. La desprotección con HCI 4N en 1 ,4-dioxano proporcionó el compuesto 33 como su sal bis-HCI.
ESQUEMA 25 Similarmente, el producto intermedio 10-6 se enlazó usando diisocianato de ,4-tenileno para proporcionar el producto intermedio 26-1 , el cual con la desprotección con TFA proporcionó el compuesto 44 como su sal bis-TFA.
ESQUEMA 26 La preparación del compuesto 35 se ilustra en el esquema 27. El producto intermedio 10-1 se desprotegió mediante el tratamiento con piperida en THF para proporcionar el producto intermedio 27- . El acoplamiento de 27- 1 con Cbz-Gly-OH seguido de la desprotección de Boc proporcionó el producto intermedio 27-3 «TFA. El acoplamiento de 27-3 con Boc-t-BuGly-OH seguido de la desprotección de Boc proporcionó el producto intermedio 27- 5 'TFA. El acoplamiento de 27-5«2TFA con Boc-NMeAla-OH proporcionó el producto intermedio 27-6. La remoción del grupo Cbz usando H2 y Pd/C proporcionó 27-7, que se enlazó usando cloruro de tereftaloilo para proporcionar el producto intermedio 27-8. La desprotección del producto intermedio 27-8 usando HCI 4N en 1 ,4-dioxano proporcionó el compuesto -2HCI.
ESQUEMA 27a ESQUEMA 27b Se prepararon vahas aminas quirales a partir de (R)-2-hidroxi-1 - feniletilamina ópticamente activa, 28-1. El producto intermedio 28-1 se protegió con Boc para proporcionar el producto 28-2. La fracción de alcohol de 28-2 se alquiló con varios haluros de alquilo para proporcionar los productos intermedios 28-3, 28-4 y 28-5. La desprotección de los productos intermedios 8-3, 28-4 y 28-5 con HCI proporcionó las aminas quirales 28-6, 28-7 y 28-8.
ESQUEMA 28 28-2 28-3; R=CH, 28-6: R=CH, 28-1: R=CH^Pri 28-7: R=CH h 28-5: R=CH;CONH, Los productos intermedios 28-6, 28-7 y 28-8 se acoplaron con el producto intermedio 21 -9 de manera similar a la ilustrada para los compuestos 22 y 24 (véase el esquema 22) para proporcionar los compuestos 63, 64 y 65, respectivamente. Otras aminas quirales se pueden obtener comercialmente o se pueden preparar por varios métodos, que incluyen la , conversión o interconversión de cetonas, alcoholes o azidas a aminas, usando procedimientos químicos quirales y aquirales y la resolución quiral de los isómeros conocidos en el campo, tales como la cromatogratía o la cristalización.
Por ejemplo, el esquema 29 ¡lustra la síntesis enantioselectiva de 1 ,1 -difenilmetanoaminas enriquecidas ópticamente enriquecidas, asimétricas preparadas por adición de ácidos aril borónicos a sulfiniminas quirales, seguido de la hidrólisis de las sulíinaminas con ácido para producir los productos intermedios de aminas enriquecidas caracterizados por los productos intermedios 29-4 y 29-5 (Bolshan, Y.; Batey, R. A., Org. Letters 2005, 7, 1481 -1484).
ESQUEMA 29 29-1 29-2: R10=CH3l de=8l % 29-4; R 0=CH , 29-3; Ri*=OCH3, de=77% 29-5: R^OCH, Los productos intermedios 29-4 y 29-5 se acoplaron con el producto intermedio 21 -9 de manera similar a la ilustrada para los compuestos 22 y 24 (véase el esquema 22) para proporcionar los compuestos 66 y 67, respectivamente. Existen varios métodos para la conversión de tetralonas a 1 ,2,3,4-tetrahidronaftil-l -aminas quirales, por ejemplo, el método descrito por R. A. Stalker, y col., Tetrahedron 2002, 58, 4837, según se resume a continuación: Estas aminas quirales se pueden incorporar a los compuestos de la presente invención usando métodos similares a los ilustrados en los esquemas 21 y 22. Los esquemas anteriores se aplican tanto a los compuestos simétricos como a los asimétricos de la presente invención. Los sustituyentes A1, A, Q, Q1, R1 , R100, R2, R200, R3, R300 y similares son tal como se definieron anteriormente en la presente. LG es un grupo saliente, tal como, Cl, Br, I, OT, OSu u OM.
EJEMPLOS Las siguientes abreviaturas se usan a lo largo de la presente Boc: /-butoxicarbonilo; CBz: benciloxicarbonilo; DCM: diclometano, CH2CI2; DIPEA: diisopropilenetilamina; DMAP: 4-(dimetilamino)piridina; DMF: N.N-dimetilformamida; DTT: ditiotreitol; EDC: hidrocloruro de 3-dimetilaminopropil-3-etilcarbodiimida; EDTA: ácido etilendiaminotetracético; Fmoc: N-(9-fluorenilmetoxicarbonilo); HBTU: hexafluorofosfato de O-(benzotriazoM -il)- ?/,?/,?/',? '-tetrametiluronio; HCI: ácido clorhídrico; HOAc: ácido acético; HOBt: 1 -hidroxibenzotriazol; HPLC: cromatografía líquida de alta resolución; LCEM: cromatografía liquida-espectrómetro de masa; MeOH: metanol; MgS04: sulfato de magnesio; MS: espectro de masa; NaHCO3: bicarbonato de sodio; Pd/C: paladio en carbono; TEA: trietilamina; THF: tetrahidrofurano; y TMEDA: ?,?,?,?-tetrametiletilendiamina.
Métodos de síntesis Síntesis del compuesto 1 Paso 1 Intermedio 9-1 Se suspendió NaH (440 mg, 1 1.0 mmol) en DMF seco (5 mi) bajo N2 a 0°C. Se disolvió Boc-cis-2-hidroxil-L-prolina (1.00 g, 4.0 mmol) en DMF seco (15 mi) y se agregó por gotas a la suspensión de NaH. Se agitó la mezcla durante 10 minutos a 0 °C. Se agregó bromuro de propargilo (560 µ?, 5.0 mmol) por gotas a la solución. La mezcla se agitó durante 1 hora a 0°C y luego se inhibió con H2O. El contenido se agregó a un embudo de separación junto con EtOAc y ácido cítrico al 10% (hasta lograr un pH ~2). Se extrajo la capa orgánica, se secó y concentró bajo presión reducida. Por cromatografía instantánea (sílica, hexanos/THF) se produjo el producto intermedio 9-1 como un aceite claro. EM (m/z) M+Na =292.
Paso 2 Intermedio 9-2 El producto intermedio 9-1 (560 mg, 2.1 mmol), HOBt (444 mg, 2.9 mmol), EDC (563 mg, 2.9 mmol) y DIPEA (1.46 mi, 8.4 mmol) se disolvieron en diclorometano seco (10 mi) bajo N2 y se agitó la mezcla durante 10 minutos a temperatura ambiente. Luego se agregó 1 ,2,3,4-(R)-tetrahidronaftil-1 -amina (368 µ?, 2.5 mmol) y se agitó la solución durante 24 horas a temperatura ambiente. Luego se agregó el contenido a un embudo de separación, junto con EtOAc y se lavó con ácido cítrico al 10% (2 veces), NaHC03 saturado (2 veces) y salmuera. Se extrajo la capa orgánica, se secó y concentró bajo presión reducida. El producto se trató con 5 mi de CH2CI2/TFA al 50% durante 1 hora a temperatura ambiente. Los compuestos volátiles se eliminaron ¡n vacuo y el residuo se trituró con dietil éter para obtener el compuesto intermedio 9-2 FA. EM (m/z) M+1 = 299.
Paso 3 Intermedio 9-3 Boc-t-Bu-Gly-OH (484 mg, 2.1 mmol), HOBt (375 mg, 2.4 mmol), HBTU (910 mg, 2.4 mmol) y DIPEA (1 .20 mi, 7 mmol) se disolvieron en DMF seco (10 mi) bajo N2 y se agitó la mezcla durante 10 minutos a temperatura ambiente. Luego se agregó el producto intermedio 9-2 (720 mg, 1 .75 mmol) y la solución se agitó 24 horas a temperatura ambiente. Luego se agregó el contenido a un embudo de separación, junto con EtOAc y se lavó con ácido cítrico al 10% (2 veces), NaHCO3 saturado (2 veces) y salmuera. Se extrajo la capa orgánica, se secó y concentró bajo presión reducida. El producto resultante se trató con 10 mi de CH2CI2/TFA al 50% durante 1 hora a temperatura ambiente. Los compuestos volátiles se eliminaron in vacuo y el residuo se trituró con dietil éter para obtener el compuesto intermedio 9-3 FA. EM (m/z) M+1 = 412.
Paso 4 Intermedio 9-4 Se disolvió Boc-N-Me-Ala-OH (278 mg, 1.37 mmol), HOBt (227 mg, 1.49 mmol), EDC (293 mg, 1.49 mmol) y DIPEA (796 µ?, 4.6 mmol) en diclorometano seco (10 mi) bajo N2 y se agitó la solución durante 10 minutos a temperatura ambiente. Luego se agregó el producto intermedio 9-3 TFA (600 mg, 1.14 mmol) y la solución se agitó durante 24 horas a temperatura ambiente. Se agregó EtOAc y se lavó la capa orgánica con ácido cítrico al 10% (2 veces), NaHC03 saturado (2 veces) y salmuera, se secó con MgSO4 anhidro, se filtró y se eliminaron los compuestos volátiles bajo presión reducida. El producto se purificó con cromatografía de gel de sílice, eluyendo con hexanos/THF 10-100%, para proporcionar el producto intermedio 9-4. EM (m/z) M+Na=619.
Paso 5 Compuesto 1 Se suspendió el producto intermedio 9-4 (100 mg, 0.17 mmol), CuCI (25 mg, 0.25 mmol) y ?,?,?,?-tetrametilendiamina (38 µ? 0.25 mmol) en acetona seca (5 mi) y se agitó a temperatura ambiente en atmósfera de O2 durante 72 horas. Se agregó EtOAc y se lavó la capa orgánica con ácido cítrico al 10% (2 veces), NaHCO3 saturado (2 veces) y salmuera, se secó con MgS04, se filtró y se eliminaron los compuestos volátiles bajo presión reducida. El producto se purificó con cromatografía de gel de sílice, eluyendo con hexanos/THF 10-100% para proporcionar el producto intermedio 9-5. El tratamiento del producto 9-5 con HCI 4N en 1 ,4-dioxano a 0°C, durante 2 horas y la eliminación de compuestos volátiles bajo presión reducida proporcionaron el compuesto 1 como su sal bis-HCI. EM (m/z) M+1=991.7.
Síntesis del producto intermedio 10-6 Paso 1 Intermedio 10-1 Se disolvió Fmoc-AMPC(2S, 4S)-OH (900 mg, 2.0 mmol), HBTU (1.14 g, 3.0 mmol) y HOBt (415 mg, 3.0 mmol) en DMF seco (10 mi) y se trató con DIPEA (1050 ul, 6.0 mmol). La mezcla se agitó durante 10 minutos antes de agregar (R)-1 ,2,3,4-tetrahidronaftil-1 -amina (330 ul, 2.2 mmol). La mezcla se agitó durante la noche antes de diluirla con acetato de etilo (100 mi) y ácido cítrico al 10% (50 mi). La capa orgánica se separó y se lavó con ácido cítrico al 10% (2 x 50 mi), bicarbonato de sodio saturado (3 x 25 mi) y salmuera (1 x 20 mi), antes de secarla con sulfato de magnesio anhidro, filtrarla y concentrarla bajo presión reducida para producir el compuesto crudo 10-1 , como sólido blanco. Este material tenía 95% de pureza por LCEM y sin más purificación se procedió al siguiente paso.
Paso 2 Intermedio 10-2 El producto intermedio 10-1 se disolvió en cloruro de metileno (10 mi) y se trató con TFA (10 mi). La solución se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas antes de eliminar los compuestos volátiles bajo presión reducida. El aceite resultante se agitó con dietil éter (25 mi) para proporcionar un sólido color café claro, que se filtró y se lavó con dietil éter (2 x 5 mi), para proporcionar el compuesto 10-2 »TFA como sólido café claro (1.17 g).
Paso 3 Intermedio 10-3 Se disolvió Boc-t-BuGly-OH (460 mg, 2.0 mmol), HBTU (760 mg, 2.0 mmol) y HOBt (270 mg, 2.0 mmol) con DIPEA (765 ul, 7.5 mmol) en DMF seco (10 mi) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos ante de agregar el producto intermedio 10-2 (867 mg, 1.5 mmol). La mezcla se agitó durante la noche antes de diluirla con acetato de etilo (200 mi) y ácido cítrico al 10% (50 mi). La capa orgánica se separó y se lavó con ácido cítrico al 10% (2 x 50 mi), bicarbonato de sodio saturado (3 x 25 mi) y salmuera (1 x 20 mi), antes de secarla con sulfato de magnesio anhidro, filtrarla y concentrarla bajo presión reducida para producir el compuesto crudo 10-3, como sólido blanco (920 mg > 95% pureza por LCEM) y sin más purificación se procedió al siguiente paso.
Paso 4 Intermedio 10-4 El producto intermedio 10-3 se disolvió en cloruro de metileno (10 mi) y se trató con TFA (10 mi). La solución se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas antes de eliminar los compuestos volátiles bajo presión reducida. El aceite resultante se agitó con dietil éter (20 mi) para proporcionar un sólido color café claro, que se filtró y se lavó con dietil éter (2 x 5 mi), para proporcionar el compuesto 10-4 »TFA como sólido blanco.
Paso 5 Intermedio 10-5 Se disolvió Boc-MeAla-OH (308 mg, 1.52 mmol), HBTU (450 mg, 1.91 mmol) y HOBt (260 mg, 1.91 mmol) en DMF seco (10 mi). Se agregó DIPEA (886 ul, 5.0 mmol) y se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 10 minutos ante de agregar el producto intermedio 10-4 (900 mg, 1.27 mmol). La mezcla se agitó durante la noche antes de diluirla con acetato de etilo (200 mi) y ácido cítrico al 10% (50 mi). La capa orgánica se separó y se lavó con ácido cítrico al 10% (2 x 50 mi), bicarbonato de sodio saturado (3 x 25 mi) y salmuera (1 x 20 mi), antes de secarla con sulfato de magnesio anhidro, filtrarla y concentrarla bajo presión reducida para producir el compuesto crudo 10-5, como sólido blanco (0.87 mg > 95.5% pureza por LCEM) y sin más purificación se procedió al siguiente paso.
Paso 6 Intermedio 10-6 El producto intermedio 10-5 se disolvió en morfolina/THF al 20 % (10 mi) y la solución se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. Se eliminaron los compuestos volátiles bajo presión reducida para proporcionar el compuesto 10-6 como sólido blanco. Se purificó más por cromatografía de gel de sílice para proporcionar el producto 10-6, que tenía 95% de pureza por LCEM (EM (m/z) M+1 = 617.4.
Síntesis del compuesto 2 Paso 1 : Intermedio 1 1 -1 El compuesto crudo 10-6 (200 mg, 0.251 mmol) se disolvió en THF (5 mi) y se enfrió en un baño de hielo. Se agregó DIPEA (50 ul, 0.275 mmol) y cloruro de sebacoilo (26 ul, 0.125 mmol) y la reacción se agitó durante 4 horas a temperatura ambiente antes de diluirla con etil acetato (20 mi) y bicarbonato de sodio saturado. Se separó la capa orgánica, que luego se lavó con salmuera, se secó con sulfato de magnesio anhidro, se filtró y se eliminó el solvente bajo presión reducida. El sólido crudo resultante se purificó por cromatografía de gel de sílice, eluyendo con gradiente de hexano/THF 10-100% para proporcionar el producto 1 1 -1 como sólido blanco (55 mg).
Paso 2 Compuesto 2 El compuesto intermedio 1 1 -1 (50 mg) se trató con HCI 4N en 1 ,4-dioxano (3 mi) y se agitó durante 3 horas. Se eliminaron los compuestos volátiles bajo presión reducida y el sólido resultante se trituró con dietil éter (3 x 5 mi). El sólido resultante se secó bajo presión reducida para obtener el compuesto 2»2HCI como sólido blanquecino (30 mg). EM (m/z) (M+2)/2=541.4.
Compuesto 3 Paso 1 Intermedio 12-1 El compuesto crudo 10-6 (200 mg, 0.251 mmol) se disolvió en THF (5 mi) y se enfrió a 4°C en un baño de hielo. Se agregó DIPEA (50 ul, 0.275 mmol). Se agregó cloruro de tereftaloilo (26 ul, 0.125 mmol) y se agitó la reacción durante 16 horas antes de diluirla con acetato de etilo (20 mi) y bicarbonato de sodio saturado. Se separó la capa orgánica, que luego se lavó con salmuera, se secó con sulfato de magnesio anhidro, se filtró y se eliminó el solvente bajo presión reducida. El sólido crudo resultante se purificó por cromatografía de gel de sílice, eluyendo con gradiente de hexanos/THF 25-100% para proporcionar el producto 12-1 como sólido blanco (90 mg).
Paso 2 Compuesto 3 El compuesto intermedio 12-1 (90 mg) se trató con HCI 4N en 1 ,4-dioxano (3 mi) y se agitó durante 3 horas. Se eliminaron los compuestos volátiles bajo presión reducida y el sólido resultante se trituró con dietil éter, se filtró y se lavó con dietil éter (3 x 5 mi). El sólido resultante se secó bajo presión reducida para obtener el compuesto 3«2HCI como sólido blanquecino (40 mg). EM (m/z) (M+2)/2=523.4.
Compuestos 4 y 5 El producto intermedio 9-4 (130 mg, 0.21 mmol) y el producto intermedio 13-1 (130 mg, 0.22 mmol), CuCI (60 mg, 0.6 mmol) y tetrametiletilendiamina (90 µ?, 0.6 mmol) se suspendieron en acetona seca (15 mi) y se agitaron a temperatura ambiente bajo una atmósfera de O2 durante 120 horas. Se añadió EtOAc y se lavó la capa orgánica con ácido cítrico al 10% (2 veces), NaHC03 saturado (2 veces) y salmuera, se secó sobre Mg2SO4 anhidro, filtrado y concentrado bajo presión reducida. Se purificó el producto por cromatografía de gel de sílice eluyendo con hexanos/THF 10-100%, para obtener los productos intermedios 9-5, 13-2 y 13-3. Se trataron los productos intermedios 13-2 y 13-3 de forma independiente con HCI 4N en 1 ,4-dioxano. Se eliminaron los compuestos volátiles y los sólidos resultantes se trituraron con dietil éter, se filtraron y lavaron con dietil éter para obtener los compuestos 4 y 5, respectivamente, como sus sales bis-HCI. Compuesto 4-2HCI: EM (m/s) M+1 =993.5. Compuesto 5-2HCI: EM (m/z) M+1 =995.6.
Compuesto 6 El producto intermedio 9-4 (250 mg, 0.400 mmol), el producto intermedio 14-1 (560 mg, 0.900 mmol), CuCI (267 mg, 2.7 mmol) y tetrametiletilendiamina (405 µ?, 2.7 mmol) se suspendieron en acetona seca (10 mi) y se agitaron a temperatura ambiente bajo una atmósfera de O2 durante 72 horas. Se agregó Celite y la mezcla se filtró a través de una almohadilla de Celite. Se agregó EtOAc al filtrado y la capa orgánica resultante se lavó con ácido cítrico al 10% (2 veces), NaHC03 saturado (2 veces) y salmuera, se secó sobre g2S04 anhidro, se filtró y se concentró bajo presión reducida. Se purificó el producto con cromatografía de gel de sílice eluyendo con hexanos/THF del 10 al 100%, para proporcionar el producto intermedio 14-2. Se trató el producto intermedio 14-2 con HCI 4N en 1 ,4-dioxano. Se eliminaron los compuestos volátiles y los sólidos resultantes se trituraron con dietil éter, se filtraron y lavaron con dietil éter para obtener el compuesto 6 como sus sales bis-HCI. EM (m/s) (M+2)/2=514.4.
Compuesto 7 Paso 1 Se disolvió el producto intermedio 15-1 (1.0 g, 1.2 mmol), anhídrido glutárico (190 mg, 1.7 mmol) y DIPEA (836 ul, 4.8 mmol) en diclorometano (20 mi) bajo N2 a 0 °C. Se añadió una cantidad catálitica de DMAP y luego se agitó la solución durante 30 minutos en hielo y 24 horas a temperatura ambiente. Se agregó EtOAc al filtrado y la capa orgánica resultante se lavó con ácido cítrico al 10% (2 veces), NaHCO3 saturado (2 veces) y salmuera, se secó sobre Mg2S04 anhidro, se filtró y se concentró bajo presión reducida para obtener el producto intermedio 15-2 como sólido blanco.
Paso 2 Se disolvió el producto intermedio 15-2 (420 mg, 0.5 mmol), HOBt (85 mg, 0.63 mmol), HBTU (222 mg, 0.60 mmol) y DIPEA (313 µ?, 1 .8 mmol) en (5 mi) DMF seco bajo N2 y la solución se agitó durante 10 minutos a temperatura ambiente. Se añadió el producto intermedio 10-6 (250 mg, 0.45 mmol) y se dejó que la solución se agitara durante 24 horas a temperatura ambiente. Se agregó EtOAc y la capa orgánica resultante se lavó con ácido cítrico al 10% (2 veces), NaHCO3 saturado (2 veces) y salmuera, se secó sobre Mg2S04 anhidro, se filtró y se concentró bajo presión reducida. Se purificó el producto por cromatografía de gel de sílice eluyendo con hexanos/THF del 10 al 100% para obtener el producto intermedio 15-3.
Paso 3 Se suspendió el producto intermedio 15-3 (240 mg, 0.17 mmol) y Pd/C al 10% en peso (50 mg, 50% H2O) en MeOH (10 mi) y se agitó la suspensión durante 24 horas a temperatura ambiente bajo atmósfera de H2 (1 atm). Se filtró el contenido sobre Celite y se lavó con MeOH. Se concentró el filtrado bajo presión reducida para obtener el compuesto intermedio 15-4 como sólido blanco.
Paso 4 Se disolvió BocNMe-Ala-OH (57 mg, 0.28 mmol), ; HOBt (44 mg, 0.33 mmol), HBTU (116 mg, 0.31 mmol) y DIPEA (90 µ?, 0.52 mmol) en (5 mi) DMF seco bajo N2 y la solución se trató con el producto intermedio 15-4 (160 mg, 0.13 mmol). Después de agitar durante 24 horas a temperatura ambiente, se agregó EtOAc y la capa orgánica resultante se lavó con ácido cítrico al 10% (2 veces), NaHC03 saturado (2 veces) y salmuera, se secó sobre Mg2SO4 anhidro, se filtró y se concentró bajo presión reducida, Se purificó el producto con cromatografía de gel de sílice eluyendo con hexahos/THF del 10 al 100%, para proporcionar el compuesto intermedio 15-5. Se trató el producto intermedio 15-5 con HCI 4N en 1 ,4-dioxano durante 1 hora a temperatura ambiente. Se eliminaron los compuestos volátiles bajo presión reducida para obtener el compuesto 7 como su sal de HCI. EM (M+2)/2 = 618.0.
Compuesto 8 Se disolvió el compuesto 7»HCI (100 mg, 0.08 mmol) en DMF (1 mi) y se añadió a CH2CI2 (5 mi) de suspensión de resina de poliestireno de piperazinometilo (0.86 mmol/g, 356 mg, 0.3 mmol). Despué de agitar a temperatura ambiente durante 48 horas, se añadieron 200 mg adicionales de resina. La mezcla se agitó durante 20 días a temperatura ambiente antes de ser filtrada, lavándola con MeOH. Se eliminaron los compuestos volátiles bajo presión reducida para obtener al compuesto 8, un sólido blanco.: EM (m/z) M+1 =1012.
Compuesto 9 Se trató al producto intermedio 15-3 (10 mg) con HCI 4N en 1 ,4-dioxano durante 1 hora. Se eliminaron los compuestos volátiles bajo presión reducida para obtener el compuesto 9 como su sal de HCI. EM (m/s) (M+2)/2 = 642. Se prepararon los compuestos 10, 1 1 , 12, 13, 14, 15, 16, 39, 40, 41 , 42, 43, 52, 55, 56, 57 y 58 de forma similar a la descrita para el compuesto 2, en donde el cloruro de sulfonilo o diácido activado se sustituyó por cloruro de sebacoilo en el paso 1 . La caracterización EM de estos compuestos se encuentra resumida en el cuadro 1. Se preparó el compuesto 17 de forma similar a la descrita para el compuesto 29 utilizando 1 ,2,3,4-(R)-tetrahidronaftil-1 -amino en lugar de fenetilamida. EM (m/s) (M+2)/2 = 510.4.
Compuesto 18 Se agitó el compuesto intermedio 21 -8 en HCI 4N en 1 ,4-dioxano durante 2 horas. Se eliminaron los compuestos volátiles in vacuo y se trituró el residuo con dietil éter para obtener el compuesto 18»2HCI como sólido blanco. EM (m/z) M+1 =815.4. Se prepararon los compuestos 19, 21 , 22, 23, 24, 31 , 32, 46, 47, 48, 49, 50, 51 , 54, 59, 60, 61 , 63, 64, 65 y 67 de forma similar a la descrita para el compuesto 20, en donde la fenetilamina se sustituyó por la amina correspondiente en el paso 6. La caracterización EM de estos compuestos se encuentra resumida en el cuadro 1.
Compuesto 20 Paso 1 Producto intermedio 21 -2 A una solución de éster de metilo N-Boc-cis-4-amino-L-prolina, 21 -1 , (10.0 g, 35.61 mmol) en CH2CI2 enfriada a 0 °C se agregaron secuencialmente TEA (14.88 mi, 106.80 mmol), DMAP (10 mg) y cloruro de tereftaloilo (3.61 g, 17.80 mmol) y la reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Se agregó agua y acetato de etilo, se separó la capa orgánica, se lavó con ácido cítrico al 10%, solución acuosa de NaHCO3 y salmuera, se secó en MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró in vacuo. Mediante la purificación con cromatografía de gel de sílice se obtuvo el producto intermedio 21 -2 como sólido blanco.
Paso 2 Producto intermedio 21 -3»2TFA El producto intermedio 21 -2 (4.80 g, 7.76 mmol) se disolvió en una mezcla de CH2CI2 (40 mi) y TFA (40 mi) a 0 °C. La solución se agitó durante 4 horas a temperatura ambiente. Los compuestos volátiles se eliminaron bajo presión reducida y el residuo se trituró con dietil éter para obtener el producto intermedio 21 -3»2TFA como sólido blanco. EM (m/z) M+1 =419.2 Paso 3 Producto intermedio 21 -5 A una solución de Boc-a-tBuGly-OH, 21 -4 (3.95 g, 17.07 mmol) en DMF enfriada a 0 °C se agregaron, en secuencia, DIPEA (13.5 mi, 77.6 mmol), HOBt (2.62 g, 19.4 mmol) y HBTU (7.36 g, 19.4 mmol). Después de agitar durante 10 minutos, se agregó el producto intermedio 21 -3»2TFA (5.02 g, 7.76 mmol) y se agitó la mezcla de reacción durante la noche a temperatura ambiente. Se agregó agua y acetato de etilo, se separó la capa orgánica, se lavó con ácido cítrico al 10%, solución acuosa de NaHC03 y salmuera, se secó en MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró in vacuo. Mediante la purificación con cromatografía de gel de sílice se obtuvo el producto intermedio 21 -5 como sólido blanco.
Paso 4 Producto intermedio 21-6«2TFA El producto intermedio 21 -5 (6.55 g, 7.76 mmol) se disolvió en una mezcla de CH2CI2 (40 mi) y TFA (40 mi) a 0 °C. La solución se agitó durante 3 horas a temperatura ambiente. Los compuestos volátiles se eliminaron bajo presión reducida y el residuo se trituró con dietil éter para obtener el producto intermedio 21 -6»2TFA como sólido blanco. EM (m/z) M+1 =645.4 Paso 4 Producto intermedio 21 -8 A una solución de Boc-NMe-Ala-OH, producto intermedio 21 -7 (3.15 g, 15.51 mmol) en DMF enfriada a 0 °C se agregaron, en secuencia, DIPEA (12.3 mi, 70.5 mmol), HOBt (2.38 g, 17.63 mmol) y HBTU (6.69 g, 17.63 mmol). Después de agitar durante 10 minutos, se agregó el producto intermedio 21 -62TFA (6.15 g, 7.05 mmol) y se agitó la mezcla de reacción durante la noche a temperatura ambiente. Se agregó agua y acetato de etilo, se separó la capa orgánica, se lavó con ácido cítrico al 10%, solución acuosa de NaHCO3 y salmuera, se secó en MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró in vacuo. Mediante la purificación con cromatografía de gel de sílice se obtuvo el producto intermedio 21 -8 como sólido blanco.
Paso 5 Producto intermedio 21 -9 A una solución de producto intermedio 21 -8 (6.20 g, 6.1 1 mmol) en THF (80 mi) y MeOH (8 mi) enfriada a 0 °C se agregó LiOH acuoso 1 N (30.5 mi) y la reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Se ajustó el pH a 6 con ácido cítrico al 10% y acetato de etilo, la capa orgánica se separó, se lavó con salmuera y se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y concentró in vacuo para obtener el producto intermedio 21 -9 como sólido blanco.
Paso 6 Producto intermedio 21 -10 A una solución de producto intermedio 21 -9 (150 mg, 0.15 mmol) en DMF enfriada a O °C se agregaron, en secuencia, DIPEA (265 µ?, 1 .52 mmol), HOBt (51 mg, 0.38 mmol) y HBTU (144 mg, 0.38 mmol). Después de agitar durante 10 minutos, se agregó fenetilamina (42 ul, 0.33 mmol) y se agitó la mezcla de reacción durante la noche a temperatura ambiente. Se agregó agua y acetato de etilo, se separó la capa orgánica, se lavó con ácido cítrico al 10%, solución acuosa de NaHC03 y salmuera, se secó en MgSO anhidro, se filtró y se concentró in vacuo. Mediante la purificación con cromatografía de gel de sílice se obtuvo el producto intermedio 21 -10 como sólido blanco.
Paso 7 Compuesto 20«2HCI Se agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (3.0 mi) al producto intermedio 21 -10 (145 mg, 0.12 mmol) y se agitó la solución durante 1 hora a 0 °C. Los compuestos volátiles se eliminaron bajo presión reducida y el residuo se trituró con dietil éter para obtener el compuesto 20»2HCI como sólido blanco. EM (m/z) (M+2)/2=497.6.
Compuesto 22«2HCI Paso 1 Producto intermedio 22-1 A una solución de producto intermedio 21 -9 (75 mg, 0.08 mmol) en DMF enfriada a 0 °C se agregaron, en secuencia, DIPEA (135 µ?, 0.76 mmol), HOBt (26 mg, 0.19 mmol) y HBTU (72 mg, 0.19 mmol). Después de agitar durante 10 minutos, se agregó isopropilamina (14 ul, 0.17 mmol) y se agitó la mezcla de reacción durante la noche a temperatura ambiente. Se agregó agua y acetato de etilo, se separó la capa orgánica, se lavó con ácido cítrico al 10%, solución acuosa de NaHCO3 y salmuera, se secó en MgS04 anhidro, se filtró y se concentró ¡n vacuo. Mediante la purificación con cromatografía de gel de sílice se obtuvo el producto intermedio 22-1 como sólido blanco.
Paso 2 Compuesto 22«2HCI Se agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (2.0 mi) al producto intermedio 22-1 (58 mg, 0.05 mmol) y se agitó la solución durante 2 horas a 0 °C. Los compuestos volátiles se eliminaron bajo presión reducida y el residuo se trituró con dietil éter para obtener el compuesto 22»2HCI como sólido blanco. EM (m/z) (M+2)/2=435.4.
Compuesto 24»2HCI Paso 1 Producto intermedio 22-2 A una solución de producto intermedio 21 -9 (600 mg, 0.61 mmol) en DMF enfriada a 0 °C se agregaron, en secuencia, DIPEA (1.0 mi, 6.08 mmol), HOBt (205 mg, 1.52 mmol) y HBTU (576 mg, 1.52 mmol). Después de agitar durante 0 minutos, se agregó aminodifenilmetano (230 ul, 1.34 mmol) y se agitó la mezcla de reacción durante la noche a temperatura ambiente. Se agregó agua y acetato de etilo, se separó la capa orgánica, se lavó con ácido cítrico al 10%, solución acuosa de NaHC03 y salmuera, se secó en MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró in vacuo. Mediante la purificación con cromatografía de gel de sílice se obtuvo el producto intermedio 22-2 como sólido blanco.
Paso 2 Compuesto 24»2HCI Se agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (1.9 mi) al producto intermedio 22-2 (660 mg, 0.50 mmol) y se agitó la solución durante 1 hora a 0 °C. Los compuestos volátiles se eliminaron bajo presión reducida y el residuo se trituró con dietil éter para obtener el compuesto 24»2HCI como sólido blanco. EM (m/z) (M+2)/2=435.4.
Compuesto 25 Paso 1 Producto intermedio 23-1 A una solución de producto intermedio 21 -8 (1.10 g, 1.08 mmol) en THF enfriada a 0 °C se agregó borohidruro de litio (118 mg, 4.86 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 3 horas a temperatura ambiente. Se agregó acetato de etilo y ácido cítrico al 10%. Se separó la capa orgánica, se lavó con NaHCO3 acuosa y salmuera, se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y concentró in vacuo. Mediante la purificación con cromatografía de gel de sílice se obtuvo el producto intermedio 23-1 como sólido blanco. EM (m/z) M+1 =959.6 Paso 2 Producto intermedio 23-2 A una solución de producto intermedio 23-1 (284 mg, 0.29 mmol) en CH2CI2 se agregó periodinano Dess Martin (314 mg, 0.74 mmol) y la reacción se agitó durante 5 horas a temperatura ambiente. Se agregó una solución acuosa de NaHC03, se separó la capa orgánica; se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y concentró in vacuo. Mediante la purificación con cromatografía de gel de sílice se obtuvo el producto intermedio 23-2 como sólido blanco.
Paso 3 Producto intermedio 23-4 A una solución de producto intermedio 23-2 (282 mg, 0.29 mmol) en CH2CI2 se agregó fenetilamina (82 ul, 0.65 mmol). Después de agitar durante 30 minutos a temperatura ambiente, se agregó triacetoxiborohidruro de sodio (280 mg, 1.32 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 2 horas. Se agregó NaHCO3 acuoso, se separó la capa orgánica, se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y concentró in vacuo. Mediante la purificación con cromatografía de gel de sílice se obtuvo el producto intermedio 23-4 como sólido blanco. EM (m/z) M+1 =1165.8 Paso 4 Producto intermedio 23-5 A una solución de producto intermedio 23-4 (100 mg, 0.08 mmol) en CH2CI2 enfriada a 0o C se agregó secuencialmente trietilamina (60 ul, 0.43 mmol) y cloruro de acetilo (14 ul, 0.19 mmol). La reacción se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente antes de agregar agua y acetato de etilo. Se separó la capa orgánica, se lavó con ácido cítrico al 10%, NaHC03 acuoso y salmuera, se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y concentró in vacuo. Mediante la purificación con cromatografía de gel de sílice se obtuvo el producto intermedio 23-5 como sólido blanco.
Paso 5 Compuesto 25»2HCI Se agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (3 mi) al producto intermedio 23-5 (80 mg, 0.06 mmol) y se agitó la solución durante 1 hora a temperatura ambiente. Los compuestos volátiles se eliminaron bajo presión reducida y el residuo se trituró con dietil éter para obtener el compuesto 25»2HCI como sólido blanco. EM (m/z) (M+2)/2=525.6.
Compuesto 26»2HCI Paso 1 Producto intermedio 23-5 A una solución de producto intermedio 23-4 (100 mg, 0.08 mmol) en CH2CI2 enfriada a 0o C se agregaron en secuencia TEA (60 ul, 0.43 mmol) y cloruro de metanesulfonilo (15 ul, 0.19 mmol) y la reacción se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente. Se agregó agua y acetato de etilo, se separó la capa orgánica, se lavó con ácido cítrico al 10%, solución acuosa de NaHC03 y salmuera, se secó en MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró in vacuo. Mediante la purificación con cromatografía de gel de sílice se obtuvo el producto intermedio 23-5 como sólido blanco.
Paso 2 Compuesto 26»2HCI Se agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (3 mi) al producto intermedio 23-5 (79 mg, 0.06 mmol) y se agitó la solución durante 1 hora a temperatura ambiente. Los compuestos volátiles se eliminaron bajo presión reducida y el residuo se trituró con dietil éter para obtener el compuesto 26«2HCI como sólido blanco. EM (m/z) (M+2)/2=561 .6. Se prepararon los compuestos 27, 28 y 30 de forma similar a la descrita para el compuesto 26, donde se usó cloruro de acetilo y cloruro de benzoilo para los compuestos 27 y 28, en lugar del cloruro de metanosulfonilo. Compuesto 27- EM (m/z) (M+2)/2=587.6. Compuesto 28- EM (m/z) (M+2)/2=543.6. Compuesto 30- EM (m/z) (M+2)/2=579.6.
Compuesto 29 Paso 1 Producto intermedio 24-1 A una solución de NaHMDS 1.0 M en THF (21 .6 mi, 21.6 mmol) enfriada a 0 °C se agregó lentamente una solución de N-Boc-cis-4-hidroxi-L- prolina (2.50 g, 10.8 mmol) en DMF. Después de agitar durante 20 minutos a 0 °C, se agregó a,a'-dibromo-p-xileno (1.37 g, 5.0 mmol) y se agitó la mezcla de reacción durante la noche a temperatura ambiente. Se agregó agua y acetato de etilo, se separó la capa orgánica, se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró in vacuo. Mediante la purificación con cromatografía de gel de sílice se obtuvo el producto intermedio 24-1 como sólido blanco.
Paso 2 Producto intermedio 24-2 A una solución de producto intermedio 24-1 (200 mg, 0.35 mmol) en DMF enfriada a 0 °C se agregaron, en secuencia, DIPEA (365 ul, 2.1 mmol), HOBt (132 mg, 0.98 mmol) y HBTU (345 mg, 0.91 mmol). Después de agitar durante 10 minutos, se agregó fenetilamina (107 ul, 0.85 mmol) y se agitó la mezcla de reacción durante la noche a temperatura ambiente. Se agregó agua y acetato de etilo, se separó la capa orgánica, se lavó con ácido cítrico al 10%, solución acuosa de NaHCOa y salmuera, se sécó en MgS04 anhidro, se filtró y se concentró in vacuo. Mediante la purificación con cromatografía de gel de sílice se obtuvo el producto intermedio 24-2 como sólido blanco.
Paso 3 Producto intermedio 24-3»2TFA El producto intermedio 24-2 (260 mg, 0.35 mmol) se disolvió en una mezcla de CH2CI2 (3 mi) y TFA (3 mi). La solución se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. Los compuestos volátiles se eliminaron bajo presión reducida y el residuo se trituró con dietil éter para obtener el producto intermedio 24-3»2TFA como sólido blanco. EM (m/z) M+ 1 =571 .4 Paso 4 Producto intermedio 24-4 A una solución de Boc-a-'BuGly-OH (256 mg, 1.10 mmol) en DMF enfriada a 0 °C se agregó en secuencia, DIPEA (361 ul, 2.10 mmol), HOBt (175 mg, 1 .3 mmol) y HBTU (455 mg, 1 .2 mmol). Después de agitar durante 10 minutos, se agregó el producto intermedio 24-32TFA (230 mg, 0.46 mmol) y se agitó la mezcla de reacción durante la noche a temperatura ambiente. Se agregó agua y acetato de etilo, se separó la capa orgánica, se lavó con ácido cítrico al 10%, solución acuosa de NaHCO3 y salmuera, se secó en MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró in vacuo. Mediante la purificación con cromatografía de gel de sílice se obtuvo el producto intermedio 24-4 como sólido blanco.
Paso 5 Producto intermedio 24-5«2TFA El producto intermedio 24-4 (458 mg, 0.46 mmol) se disolvió en una mezcla de CH2CI2 (3 mi) y TFA (3 mi). La solución se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente. Los compuestos volátiles se eliminaron bajo presión reducida y el residuo se trituró con dietil éter para obtener el producto intermedio 24-5-2TFA como sólido blanco. EM (m/z) M+1 =797.6 Paso 6 Producto intermedio 24-6 A una solución de Boc-NMe-Ala-OH (1 19 mg, 0.58 mmol) en DMF enfriada a 0 °C se agregó en secuencia, DIPEA (209 ul, 1 .2 mmol), HOBt (91 mg, 0.67 mmol) y HBTU (236 mg, 0.62 mmol). Después de agitar durante 10 minutos, se agregó el producto intermedio 24-52TFA (250 mg, 0.24 mmol) y se agitó la mezcla de reacción durante la noche a temperatura ambiente. Se agregó agua y acetato de etilo, se separó la capa orgánica, se lavó con ácido cítrico al 10%, solución acuosa de NaHCO3 y salmuera, se secó en MgS04 anhidro, se filtró y se concentró in vacuo. Mediante la purificación con cromatografía de gel de sílice se obtuvo el producto intermedio 24-6 como sólido blanco.
Paso 7 Compuesto 29*2HCI Se agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (1 .0 mi) al producto intermedio 24-6 (280 mg, 0.24 mmol) y se agitó la solución durante 1 hora a 0 °C. Los compuestos volátiles se eliminaron bajo presión reducida y el residuo se trituró con dietil éter para obtener el compuesto 29«2HCI como sólido blanco. EM (m/z) M+1 =967.6.
Compuesto 33 Paso 1 Producto intermedio 25-1 A una solución de producto intermedio 10-6 (258 mg, 0.50 mmol) en D F se agregó en secuencia, DIPEA (217 ul, 1.25 mmol) y cloruro de 1 ,3-bencenedisulíonil (69 mg, 0.25 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Se agregó agua y acetato de etilo, se separó la capa orgánica, se lavó con ácido cítrico al 10%, solución acuosa de NaHCO3 y salmuera, se secó en MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró in vacuo. Mediante la purificación con cromatografía de gel de sílice se obtuvo el producto intermedio 25-1 como sólido blanco.
Paso 2 Compuesto 33»2HCI Se agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (2 mi) al producto intermedio -1 (143 mg, 0.11 mmol) y se agitó la solución durante 1 hora a 0 °C. Los compuestos volátiles se eliminaron bajo presión reducida y el residuo se trituró con dietil éter para obtener el compuesto 33»2HCI como sólido blanco. EM (m/z) (M+2)/2=559.5.
Compuesto 34 Se preparó el compuesto 34 de forma similar a la del compuesto 20, en donde el metiléster de N-Boc-cis-4-amino-L-prolina se sustituyó por metiléster de N-Boc-trans-4-amino-L-prolina en el paso 1 y la fenetilamina se sustituyó por 1 ,2,3,4-(R)-tetrahidronaft¡l-1 -amina en el paso 6. EM (m/z) M+1 =1045.8.
Compuesto 35»2HCI Paso 1 Producto intermedio 27-1 Se disolvió el producto intermedio 10-1 (3.90 g, 6.68 mmol) en THF (100 mi) y se trató con piperidina (5.0 mi, 68.2 mmol). Se agitó la solución durante 16 horas a temperatura ambiente antes de eliminar los compuestos volátiles bajo presión reducida para obtener un producto semisólido que se suspendió en MeOH (5 mi) y se filtró. Se concentró el filtrado, se suspendió en MeOH (5 mi), se filtró y el filtrado se concentró para obtener el producto intermedio 27-1 como un producto semisólido (80 % de pureza).
Paso 2 Producto intermedio 27-2 A una solución de carbobenciloxiglicina (699 mg, 3.34 mmol) en DMF enfriada a 0 °C se agregó en secuencia, DIPEA (2.40 mi, 13.9 mmol), HOBt (488 mg, 3.61 mmol) y HBTU (1.37 g, 3.61 mmol). Después de agitar durante 10 minutos, se agregó el producto intermedio 27-1 (1.00 g, 2.78 mmol) y se agitó la mezcla de reacción durante la noche a temperatura ambiente. Se agregó agua y acetato de etilo, se separó la capa orgánica, se lavó con ácido cítrico al 10%, solución acuosa de NaHCO3 y salmuera, se secó en MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró in vacuo. Mediante la purificación con cromatografía de gel de sílice se obtuvo el producto intermedio 27-2 como sólido blanco.
Paso 3 Producto intermedio 27-3»TFA El producto intermedio 27-2 (1.42 g, 2.58 mmol) se disolvió en una mezcla de CH2CI2 (15 mi) y TFA (15 mi). La solución se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. Los compuestos volátiles se eliminaron bajo presión reducida y el residuo se trituró con dietil éter para obtener el producto intermedio 27-3«TFA como sólido blanco. EM (m/z) M+ 1 =451.4 Paso 4 Producto intermedio 27-4 A una solución de Boc-a-tBuGly-OH (668 mg, 2.89 mmol) en DMF enfriada a 0 °C se agregaron, en secuencia, DIPEA (2.1 mi, 12.0 mmol), HOBt (488 mg, 3.61 mmol) y HBTU (1.37 g, 3.61 mmol). Después de agitar durante 10 minutos, se agregó el producto intermedio 27-3«TFA (1.36 g, 2.41 mmol) y se agitó la mezcla de reacción durante la noche a temperatura ambiente. Se agregó agua y acetato de etilo, se separó la capa orgánica, se lavó con ácido cítrico al 10%, solución acuosa de NaHC03 y salmuera, se secó en MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró in vacuo. Mediante la purificación con cromatografía de gel de sílice se obtuvo el producto intermedio 27-4 como sólido blanco.
Paso 5 Producto intermedio 27-5*TFA El producto intermedio 27-4 (1.38 g, 2.08 mmol) se disolvió en una mezcla de DCM (10 mi) y TFA (10 mi). La solución se agitó durante 4 horas a temperatura ambiente. Los compuestos volátiles se eliminaron bajo presión reducida y el residuo se trituró con dietil éter para obtener el producto intermedio 27-5«TFA como sólido blanco. EM (m/z) M+1 =564.4 Paso 6 Producto intermedio 27-6 A una solución de Boc-NMe-Ala-OH (902 mg, 4.44 mmol) en DMF enfriada a 0 °C se agregaron, en secuencia, DIPEA (3.50 mi, 20.2 mmol), HOBt (682 mg, 5.05 mmol) y HBTU (1 .92 g, 5.05 mmol). Después de agitar durante 10 minutos, se agregó el producto intermedio 27-5«TFA (1 .14 g, 1 .68 mmol) y se agitó la mezcla de reacción durante la noche a temperatura ambiente. Se agregó agua y acetato de etilo, se separó la capa orgánica, se lavó con ácido cítrico al 10%, solución acuosa de NaHCO3 y salmuera, se secó en MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró in vacuo. Mediante la purificación con cromatografía de gel de sílice se obtuvo el producto intermedio 27-6 como sólido blanco.
Paso 7 Producto intermedio 27-7 A una solución de producto intermedio 27-6 (925 mg, 1 .24 mmol) en MeOH anhidro (25 mi) y agitado bajo N2, se agregó Pd/C al 10% (125 mg). Se purgó la mezcla de reacción con H2 y se agitó durante 1 hora. Luego, se filtró el producto de reacción a través de Celite y el filtrado se concentró in vacuo. Mediante la purificación con cromatografía de gel de sílice se obtuvo el producto intermedio 27-7 como sólido blanco. EM (m/z) M+1=615.4 Paso 8 Producto intermedio 27-8 A una solución de producto intermedio 27-7 (150 mg, 0.25 mmol) en DCM enfriada a 0o C se agregaron en secuencia TEA (100 ul, 0.73 mmol) y cloruro de tereftaloilo (25.0 mg, 0.12 mmol) y la reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Se agregó agua y acetato de etilo, se separó la capa orgánica, se lavó con ácido cítrico al 10%, solución acuosa de NaHC03 y salmuera, se secó en MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró in vacuo. Mediante la purificación con cromatografía de gel de sílice se obtuvo el producto intermedio 27-8 como sólido blanco.
Paso 9 Compuesto 35«2HCI Se agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (2 mi) al producto intermedio 27-8 (166 mg, 0.12 mmol) y se agitó la solución durante 1 hora a temperatura ambiente. Los compuestos volátiles se eliminaron bajo presión reducida y el residuo se trituró con dietil éter para obtener el compuesto 35»2HCI como sólido blanco. EM (m/z) (M+2)/2=580.6. Se prepararon los compuestos 36, 37 y 38 del producto intermedio 27-7, de forma similar a la descrita para el compuesto 35, utilizando cloruro de oxalilo, dicloruro de isoftaloilo y cloruro de 4,4'- bifenildicarbonilo, respectivamente, en lugar de cloruro de ftaloilo en el paso 8 Compuesto 36- EM (m/z) (M+2)/2=542.6. Compuesto 37- EM (m/z) (M+2)/2=580.6. Compuesto 38- EM (m/z) (M+2)/2=618.6.
Compuesto 44 Paso 1 Producto intermedio 26-1 A una solución de producto intermedio 10-6 (150 mg, 0.27 mmol) en THF se agregaron, en secuencia, TEA (1 12 ul, 0.81 mmol) y diisocianato 1 ,4-fenileno (43 mg, 0.27 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. Los compuestos volátiles se eliminaron bajo presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía de gel de sílice para obtener el producto intermedio 26-1 como sólido blanco.
Paso 2 Compuesto 44»2TFA El producto intermedio 26-1 (148 mg, 0.12 mmol) se disolvió en una mezcla de CH2CI2 (1 .5 mi) y TFA (0.4 mi). La solución se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. Los compuestos volátiles se eliminaron bajo presión reducida y el residuo se trituró con dietil éter para obtener el compuesto 44»2TFA como sólido blanco. EM (m/z) (M+2)/2=538.4.
Compuesto 62 Se trató el compuesto intermedio 21 -9 con HCI 4N en 1 ,4-dioxano durante 2 horas. Se eliminaron los compuestos volátiles bajo presión reducida y se trituró el residuo con dietil éter para obtener el compuesto 62»HCI como sólido blanquecino. EM (m/z) M+1 =787.6.
Producto intermedio 28-6 Paso 1 Producto intermedio 28-2 Se disolvió (S)-(+)-2-fenilglicinol, 28-1 (1.64 g, 12.0 mmol) en CH2CI2 (90 mi). Se agregó Boc20 (2.84 g, 13.0 mmol) y DMAP (34 mg, 0.02 mmol), y se agitó la mezcla durante 1 hora a temperatura ambiente. Se diluyó la mezcla de reacción con dietil éter (200 mi) y HCI 1 N (100 mi). Se lavó la capa orgánica con HCI 1 M (2 x 100 mi), se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se eliminaron los compuestos volátiles bajo presión reducida. Mediante cromatografía de gel de sílice se purificó el residuo resultante para obtener un aceite para obtener el producto intermedio 28-2 como sólido blanco (2.7 g, 95% de rendimiento). EM (m/z) M+1 =238.2.
Paso 2 Producto intermedio 28-6 Se disolvió el producto intermedio 28-2 (420 mg, 1.77 mmol) y yodometano (330 µ?, 5.29 mmol) en DMF anhidro (25 mi). Se enfrió la mezcla a 0 °C y luego se agregó NaH (60% de dispersión en aceite, 103 mg, 2.58 mmol). Después de 2 horas, se diluyó la mezcla de reacción con acetato de etilo (200 mi) y HCI 1 M (100 mi). Se lavó la capa orgánica con HCI 1 (2 x 100 mi), se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se eliminaron los compuestos volátiles bajo presión reducida. Mediante cromatografía de gel de sílice se purificó el residuo para obtener el producto intermedio 28-3 como un aceite. Se enfrió el producto intermedio 28-3 a 0 °C y se trató con HCI 4M en 1 ,4-dioxano (5 mi). Después de agitar durante 90 minutos, se eliminaron los compuestos volátiles bajo presión reducida y se lavó el sólido resultante con dietil éter para obtener el producto intermedio 28-6 HCI como sólido blanco (237 mg, 69% de rendimiento). EM (m/z) M+1 =152.2. Se utilizó un procedimiento similar para la preparación de los compuestos intermedios 28-7 y 28-8, en donde el yoduro de metilo se reemplazó con bromuro de bencilo para el producto intermedio 28-7 y yodoacetamida para el producto intermedio 28-8.
Compuesto 66 66-1 Compuesto 66 Paso 1 Producto intermedio 29-1 A una solución de benzaldehído (840 µ?, 8.25 mmol) en CH2CI2 (150 mi) se agregó (S)-2-metilpropano-2-sultinamida (1.0 g, 8.25 mmol) y etóxido de titanio (3.5 mi, 16.50 mmol). Se aplicó reflujo a la mezcla de reacción durante 5 horas y se enfrió a temperatura ambiente. Se agregó agua y se agitó la mezcla vigorosamente, luego se filtró a través de Celite. Se extrajo la capa acuosa con CH2CI2 (3 veces) y se lavaron los extractos orgánicos combinados con salmuera, se secaron sobre MgS04 anhidro, se filtraron y se concentraron in vacuo. Mediante la purificación con cromatografía de gel de sílice se obtuvo el producto intermedio 29-1 como un aceite amarillo.
Paso 2 Producto intermedio 29-2 A una suspensión de (S,E)-N-bencilideno-2-metilpropano-2-sulfinamida, 29-1 1 , (1 10 mg, 0.526 mmol), [Rh(cod)(CH3CN)2]BF4 (20.1 mg, 0.053 mmol), ácido para-tolilborónico (143 mg, 1 .052 mmol) y Et3N (1 47 µ?, 1 .052 mmol) en dioxano (1 .2 mi) se agregó H20 (2.4 mi). Se agitó la suspensión marrón resultante durante 2 días a temperatura ambiente. Se extrajo la capa acuosa con EtOAc (3 veces) y se lavaron los extractos orgánicos combinados con salmuera, se secaron sobre MgS04 anhidro, se filtraron y concentraron in vacuo. Mediante la purificación con cromatografía de gel de sílice se obtuvo el producto intermedio 29-2 como sólido blanco (d.e =81 %).
Paso 3 Producto intermedio 29-4 A una solución de (S)-2-metil-N-((fí)-fenil(p-tol¡l)met¡l)propano-2-sulfinamida (82 mg, 0.27 mmol), 29-2, en MeOH (270 µ?) se agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano 4 (140 µ?, 0.54 mmol). Se agitó la solución durante 1 hora a temperatura ambiente, luego se agregó Et2O y se formó un precipitado blanco. Se filtró el precipitado y se lavó con Et20 para obtener el producto intermedio 29-4»HCI como sólido blanco.
Paso 4 Producto intermedio 29-5 A una solución de producto intermedio 21 -9 (122 mg, 0.123 mmol) en DMF enfriada a 0°C se agregó en secuencia, DIPEA (193 µ?, 1 .107 mmol), HOBt (42 mg, 0.308 mmol) y HBTU (1 17 mg, 0.308 mmol). Después de agitar durante 10 minutos, se agregó el producto intermedio 29-4«HCI (59 mg, 0.253 mmol) y se agitó la mezcla de reacción durante la noche a temperatura ambiente. Se agregó agua y acetato de etilo, se separó la capa orgánica, se lavó con ácido cítrico al 10%, solución acuosa de NaHC03 y salmuera, se secó en MgS04 anhidro, se filtró y se concentró in vacuo. Mediante la purificación con cromatografía de gel de sílice se obtuvo el producto intermedio 66-1 como un sólido rosado.
Paso 5 Compuesto 66»2HCI Se agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (1 mi) al producto intermedio 66-1 (135 mg, 0.12 mmol). La solución se agitó durante 1 hora a 0 °C. Los compuestos volátiles se eliminaron bajo presión reducida y el residuo se trituró con dietil éter para obtener el compuesto 6«2HCI como sólido blanco. EM (m/z) (M+2)/2=573.6. Se prepararon los compuestos representativos de la presente invención de acuerdo con los procedimientos descritos anteriormente, que se ilustran en el cuadro 1 : CUADRO 1 Se ¡lustran los compuestos representativos dé la presente invención que se pueden preparar por modificación simple de los procedimientos anteriormente descritos en los cuadros 2 a 6: en donde A y A1 son ambos CH2 o ambos C(O) y CUADRO 3 M1-BG-M2 CUADRO 4 M1-BG-M2 Fórmula 1B BG es r= 1 a 10 \ CUADRO 5 R1, R2, R3, R100, R200 y R300 son tal como se definen anteriormente en la presente, -X-L-X - se selecciona de: R400sonH; se seleccionan entre C 10 donde las fracciones de arilo se pueden sustituir por R10 y donde R10 y R10 se definen anteriormente en la presente, independientemente, como R10, y donde el alquilo puede sustituirse además por R6, según se define anteriormente en la presente.
CUADRO 6 R1, R2, R3, R100, R200 y R300 son tal como se definen anteriormente en la presenta, -X-L-X - se selecciona de: R4yR400sonH; R5 y R500 se seleccionan entre: donde las fracciones de arilo se pueden sustituir pór R10 y donde R10 y R10 se definen anteriormente en la presente, independientemente, como R10, y donde el alquilo puede sustituirse además por R6, según se define anteriormente en la presente.
Ensayos Construcción molecular para la expresión GST-XIAP BIR3RING: Secuencia de codificación XIAP de los aminoácidos 246-497 clonados en PGEX2T1 vía BamH1 y AVA I. Se transformó el plásmido en E. coli DH5a para utilizarlo en la expresión proteica y la purificación. GST-HIAP2 (clAP-1 ) BIR 3: Secuencia de codificación HIAP2 de los aminoácidos 251 -363 clonados en PGex4T3 vía BamH1 y Xhol. El plásmido se transformó en E. coli DH5a para utilizarlo en la expresión proteica y la purificación. GST-HIAP2 (clAP-2) BIR 3: Secuencia de codificación HIAP1 de los aminoácidos 236-349 clonados en PGex4T3 vía BamHI y Xhol. El plásmido se transformó en E. coli DH5a para utilizarlo en la expresión proteica y la purificación. GST- enlazador BIR 2 BIR3Ring: Secuencia de codificación XIAP de los aminoácidos 93-497 clonados en PGex4T3 vía BamHI y Xhol. Se amplificaron los aminoácidos 93-497 de longitud completa XIAP en pGex4t3, utilizando los iniciadores: TTAATAGGATCCATCAACGGCTTTTATC y GCTGCATGTGTGTCAGAGG, utilizando condiciones estándar de PCR. Se clonó el fragmento TA de PCR en pCR-2.1 (invitrogen). Se subclonó el enlazador BIR 2 BIR 3Ring en pGex4T1 mediante digestión BamHI/Xhol. El plásmido se transformó en E. coli DH5a para utilizarlo en la expresión proteica y la purificación. XIAP humano de longitud completa, plásmido AEG número 23. Los aminoácidos 1 -497 de secuencia de codificación XIAP se clonaron en el vector de fusión GST, PGEX4T1 vía los sitios de restricción BamHI y Xho I. El plásmido se transformó en E. coli DH5a para utilizarlo en la purificación proteica. GST-XIAP enlazador BIR 2: Secuencia de codificación XIAP enlazador BIR 2 de los aminoácidos 93-497 clonados en pGex4T3 vía BamHI y Xhol. El plásmido se transformó en E. coli DH5a para utilizarlo en la expresión proteica y la purificación.
Expresión y purificación de las proteínas recombinantes A. Expresión de las proteínas recombinantes Se expresaron las proteínas marcadas con glutationa S-transferasa (GST) en cepas de Escherichia coli DH5-alpha. Para la expresión de XIAP de longitud completa, los dominios individuales o combinaciones de XIAP-BIR, clAP-1 , clAP-2 y las bacterias transformadas por Livin se cultivaron durante la noche a 37°C en caldo Luria (LB), medio de cultivo suplementado con 50 µg/ml de ampicilina. El cultivo de la noche anterior se diluyó 25 veces en medio LB fresco suplementado con ampicilina y se permitió que las bacterias crecieran hasta A60o = 0.6, luego se indujeron con isopropil-D-1 -tiogalactopiranosida 1 mM durante 3 horas. Después de la inducción, las células se centrifugaron a 5000 RPM durante 10 minutos y se descartó el medio. Cada pella obtenido a partir de un cultivo de 1 litro recibió 10 mi de regulador de pH de lisis (50 mM Tris-HCI, 200 mM NaCI, 1 mM DTT, 1 mM PEMF, 2 mg/ml de lisozima, 100 g/ml)) y se incubó a 4°C con agitación lenta. Después de 20 minutos de incubación, se colocó la suspensión celular a -80 °C durante la noche o hasta que se requirió su uso.
B. Purificación de proteínas recombinantes Para la purificación de proteínas recombinantes, el lisado celular inducido por IPTG se descongeló, se mezcló con vortex y se interrumpió por congelamiento súbito en nitrógeno líquido dos veces utilizando vortex después de cada deshielo. Se lisaron las células un poco más al pasar el extracto cuatro veces a través de un dispositivo de disrupción de células Bio-Neb Cell (Glas-col) ajustado a 100 psi con gas nitrógeno. El extracto se aclaró mediante centrifugación a 4°C a 15000 RPM en un rotor SS-34 Beckman durante 30 minutos. Se mezcló el sobrenadante resultante con 2 mi de perlas de glutatión-seíarosa (Pharmacia) por 500 mi de cultivo celular (por 1000 mi de cultivo para XIAP de longitud completa) durante 1 hora a 4°C. Después, se lavaron las perlas 3 veces con solución salina regulada tris 1 X (TBS) para eliminar las proteínas no ligadas. Se eluyeron las proteínas retenidas con 2 lavados de 2 mi de 50 mM TRIS pH 8.0 que contenían 10 mM glutationa reducido. Se reunieron (pool) las proteínas eluidas y se precipitaron con sulfato de amonio 604 g/litro y la pella resultante se resuspendió en una solución regulador de pH apropiada. Al analizarlas con SDS-PAGE, las proteínas mostraron una pureza >90%. La concentración proteica de las proteínas purificadas se determinó a partir del método de Bradford. Se expresaron las proteínas His-marcador en la cepa de E. coli en las células de E. coli AD494 al utilizar una construcción pet28ACPP32. Se preparó la fracción de proteína soluble como se describe arriba. Para la purificación proteica, el sobrenadante se purificó por cromatografía de afinidad utilizando la sefarosa de quelación (Pharmacia) cargada con NiSO4) conforme a las instrucciones del fabricante. La pureza de la proteína eluida fue >90%, según se determinó mediante SDS-PAGE. La concentración proteica de las proteínas purificadas se determinó a partir del ensayo de Bradford.
Síntesis de la sonda fluorescente P1 Se preparó una sonda peptídica fluorescente, Fmoc-Ala-Val-Pro- Phe-Tyr(t-Bu)-Leu-Pro-Gly(t-Bu)-Gly-OH utilizando un estándar de química Fmoc en resina cloruro 2-clorotritilo (Int. J. Pept. Prot. Res. 38:555-561 , 1991 ). Se efectuó una escisión de la resina utilizando 20% de ácido acético en diclorometano (DCM), lo que todavía dejó bloqueada la cadena lateral. Se enlazó la cadena de ácido carboxílico C-terminal protegida al 4'-(aminometi)fluoresceína (Molecular Probes, A-1351 ; Eugene, Oreg.) utilizando un exceso de diisopropilcarbodiimida (DIC) en dimetilformamida (DMF) a temperatura ambiente y se purificó por cromatografía de gel de sílice (10% de metanol en DCM). Se eliminó el grupo protector Fmoc N-terminal utilizando piperidina (20%) en DMF y se purificó mediante cromatografía de gel de sílice (20% metanol en DCM, 0.5% HOAc). Finalmente, se eliminaron los grupos protectores de cadena lateral de t-butilo utilizando 95% de ácido trifluoroacético que contenían 2.5% agua y 2.5% triisopropilo silano para obtener una sonda P1 (>95% pureza, HPLC).
Sonda P2 Ensayo de unión Ensayo basado en la competencia de polarización de fluorescencia Se evaluó la fluorescencia y fluorescencia-polarización en todos los ensayos, utilizando un instrumento Tecan Polarion con un filtro de excitación ajustado a 485 nm y el filtro de emisión ajustado á 535 nm. Para cada ensayo, primero se estableció la concentración de la proteína objetivo por titulación de la proteína seleccionada para producir una señal lineal de dosis-respuesta al incubarla por sí sola en presencia de la sonda fluorescente P1 o P2. Al establecer estas condiciones, se evaluó la potencia de los compuestos (IC5o) y la selectividad en presencia de una cantidad fija definida de proteína objetivo y sonda fluorescente y una dilución seriada de los compuestos seleccionados de 10 puntos. Para cada curva de IC50, se corrieron los ensayos como se indica a continuación: Se agregaron 25 µ?/???? del compuesto diluido en 50 mM de regulador de pH MES pH 6.5 en una placa negra de 96 pozos, luego 25 ul/pozo de albúmina de suero bovino (BSA) a 0.5 mg/ml en 50 mM MES pH 6.5. Primero se evaluó la auto-fluorescencia de cada compuesto al realizar una lectura únicamente de la solución compuesto/BSA. Luego, se agregaron 25 ul de la sonda de fluoresceína diluida en 50 mM MES que contenían 0.05 mg/ml BSA y se efectuó una lectura para detectar la disminución de la señal de fluoresceína. Finalmente, se agregaron 25 ul/pozo de la proteína objetivo o de control (GST- BIR) diluida a la concentración apropiada en 50 mM MES que contenía 0.05 mg/ml BSA y se evaluó la polarización de la fluorescencia.
Determinación de ICso y las constantes de inhibición Para cada ensayo, las unidades relativas de polarización-fluorescencia se graficaron contra las concentraciones finales de compuesto y el IC5o calculado utilizando el software Grad pad prism o el Cambridge soft. El valor ki se derivó del valor IC50 calculado como se describe anteriormente y conforme a la ecuación descrita en Nikolovska-Coleska, Z. (2004) Anal Biochem 332, 261-273.
Ensayo de la competencia de polarización de fluorescencia Se determinó el k¡ de varios compuestos en el ensayo de BIR2-BIR3-ring FP, que utilizó la sonda P2, como se describe anteriormente. Por ejemplo, el compuesto 3 presentó un valor de k¡ menor de 100 nM.
Ensayo de de-represión de caspasa-3 XIAP de longitud completa, enlazador BIR2 o enlazador- BIR2- BIR3-RING Para determinar la actividad relativa de un compuesto seleccionado contra XIAP-Bir2, establecimos un ensayo in vitro en el que la caspasa-3 se inhibió por las proteínas de fusión de GST de XIAP enlazador-Bir2, XIAP enlazador Bir2-Bir3-RING o XIAP de longitud completa. Se incubaron en forma conjunta caspasa 3 (0.125 ul) y 12.25-34.25 nM (concentración final) de la proteína de fusión GST-XIAP (GST-Bir2, GST-Bir2Bir3RING o XIAP de longitud completa) con diluciones seriadas del compuesto (200 uM-5 pM). Se midió la actividad de la caspasa 3 al sobreponer una capa de 25 µ? de una solución de 0.4 mM DEVD-AMC. El volumen de reacción final fue de 100 ul. Todas las diluciones se hicieron con regulador de pH de caspasa (50 mM Hepes pH 7.4, 100 mM NaCI, sucrosa al 10%, 1 mM EDTA, 10 mM DTT, CHAPS al 0.1 % (Stennicke, H.R. y Salvesen, G.S. (1997). Biochemical characteristics of caspase-3, -6, -7, and -8. J. Biol. Chem. 272, 25719-25723). Se midió la AMC fluorescente liberada de la hidrólisis de caspasa-3 del sustrato en un espectrofotometro TECAN a 360 nm de excitación y 444 nm emisión, después de 15 minutos de incubación a temperatura ambiente. Se calcularon los valores IC50 sobre ün modelo de competencia de uno o dos sitios con GraphPad v4.0, se utilizaron los valores de fluorescencia después de 15 minutos de incubación graficados contra la concentración Iog10 del compuesto. Los valores IC50 de los compuestos preferidos mostraron estar correlacionados con los valores EC50 contra los de SKOV3 y en general fueron menores de 1 µ?.
Ensayo sin células Ensayo de de-represión de caspasa utilizando extractos celulares (apoptosoma) Se incubaron en forma conjunta 100 ug de células 293 extracto de S100 y 0.25 uM-2 uM de la proteína de fusión GST-XIAP XIAP-Bir3RING, !AP-Bir2Bir3RING o XIAP de longitud completa) con diluciones seriadas de compuesto (40 uM-5 pM). Se activaron las caspasas presentes en los extractos al agregar 1 mM dATP, 0.1 mM ALLN, 133 ug Citocromo C (concentraciones finales) e incubarlos a 37°C durante 25 minutos. Todas las reacciones y diluciones utilizaron regulador de pH S100 (50 mM Pipes pH 7.0, 50 mM KCI, 0.5 mM EGTA pH 8.0, 2 mM MgCI2 suplementado con diluciones 1/1000 de 2 mg/ml Citocalisina B, 2 mg/ml Quimostatina, Leupeptina, Pepstatina, Antipaina, 0.1 M PEMF, 1 M DTT). El volumen final de reacción fue de 30 ul. Se midió la actividad de caspasa-3 al sobreponer una capa de 30 ul de una solución de 0.4 mM DEVD-AMC. Se midió la escisión liberada de AMC en un espectroíotómetro TECAN a 360 nm excitación y 444 nm de emisión, en un ciclo cinético de 1 hora con lecturas tomadas cada 5 minutos. Se calculó la actividad de la caspasa como V0 de la fluorescencia/seg de AMC. Se comparó la de-represión de la caspasa por nuestros compuestos a un extracto completamente activado y un extracto activado reprimido por la presencia de la proteína de fusión XIAP. Los valores IC50 de los compuestos preferidos mostraron estar correlacionados con los valores EC50 contra los de SKOV3 y en general fueron menores de 1 uM.
Ensayos de cultivo celular y de muerte celular A. Cultivo celular Se cultivaron las células cancerosas MDA-MD-231 (seno) y H460 (pulmón) en medio RPMI1640 suplementado con FBS al 10% y 100 unidades/ml de penicilina y estreptomicina.
B. Ensayos Se efectuaron ensayos de supervivencia en varias líneas celulares que incluyeron células MDA-MB-231 , SKOV3, H460, PC3, HCT-116 y SW480. Se sembraron células en placas de 96 pozos a una densidad respectiva de 5000 y 2000 células por pozo y se incubaron a 37°C en presencia de CO2 al 5% durante 24 horas. Se diluyeron compuestos seleccionados en el medio a varias concentraciones desde 0.01 uM hasta 100 uM. Se agregaron los compuestos diluidos a las células MDA-MB-231. A las células MDA-MB-231 SKOV3, H460, PC3, HCT-116 y SW480, se agregaron los compuestos, solos o en presencia de 1 -3 ng/ml de TRAIL. Después de 72 horas se evaluó la viabilidad celular mediante ensayos basados en MTS. Se agregó una solución de [3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-5-(3- carboximetoxifenil)-2-(4-sulfofenil)-2H-tetrazolio, sal interna; MTS] a las células durante un período de 1 a 4 horas. Durante la incubación se evaluó la cantidad de MTS convertida utilizando un espectrofotómetro ajustado a 570 nm. Se trataron las células MDA-MB-231 , SKOV3 y PC3 con compuestos seleccionados de la presente invención y se determinó que tenían valores de EC50 de 100 nM o menores. Cuando todas las líneas celulares mencionadas se trataron con los compuestos de la presente invención en presencia de TRAIL, se determinó que tenían valores de EC50 de 50 nM o menores.
Ensayo de supervivencia MTT Un día antes del tratamiento con el compuesto, se colocaron de 2000 a 4000 células por pozo en un cultivo de tejido tratado en una placa de formato de 96 pozos con 100 ul de medio y se incubó a 37°C, con CO2 al 5%. El día del tratamiento del compuesto, se diluyeron los compuestos con el medio de cultivo celular a una solución madre (stock) de trabajo de concentración 2X. Luego, se agregaron 100 ul de compuesto diluido a cada pozo. Se incubó la placa tratada durante 72h a 37°C, con CO2 al 5%. Durante la incubación, se evaluó la viabilidad celular como se indica, se agregaron 20 ul de reactivo MTT a 5 mg/ml por cada pozo de la placa celular. Se incubó la placa durante 2 horas a 37°C en presencia de C02 al 5%. Se descartó el sobrenadante de la placa y se agregaron 100 ul de isopropanol. Se midió la absorbancia con un espectrofotómetro TECAN a 570 nm. Se expresó el porcentaje de viabilidad como el porcentaje de la señal obtenida con las células no tratadas. Como se observa en el cuadro 7, los compuestos representados en el cuadro 1 en la presente generalmente presentan valores de EC50 contra las células MDA-MB-231 y SKOV-3 de <1 µ?. Los compuestos seleccionados mostraron un valor de EC50 <50 nM.
CUADRO 7 41 A 42 A 43 B 44 A 45 D 46 B 47 A 48 B 49 A 50 B 51 B 52 A 53 D 54 D 55 A 56 A 57 A 58 B 59 B 60 A 61 A 64 A A - EC50 menor de 50 nM B - EC50 menor de 250 nM C - EC50 mayor de 1000 nM D - EC50 mayor de 1000 nM Ensayo de apoptosis: Medición de la actividad de caspasa-3 de las células cultivadas Un día antes del tratamiento, se colocaron en placas 10,000 células por pozo en una placa de 96 pozos tratada con cultivo blanco de tejido con 100 ul de medio de cultivo. El día del tratamiento de compuesto, se diluyeron los compuestos con medios de cultivo celulares a una concentración madre (stock) de trabajo de 2X y se agregaron 100 ul de compuesto diluido a cada pozo y se incubó la placa durante 5 horas a 37°C en presencia de CO2 ai 5%. Durante la incubación, se lavó la placa dos veces con 200 ul de regulador de pH de solución salina amortiguada TRIS (TBS). Se lisaron las células con 50 ul de regulador de pH de ensayo de caspasa (20 mM Tris-HCI pH 7.4, NP-40 al 0.1 %, Chaps al 0.1 %, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.1 mM PEMF, 2 mg/ml Quimostatina, Leupeptina, Pepstatina, Antipapina) luego se incubaron a 4°C con agitación durante 30 minutos. Se agregaron 45 ul de regulador de pH de ensayo de caspasa y 5 ul de Ac-DEVD-AMC a 1 mg/ml a cada pozo, se agitó la placa y se incubó durante 16 horas a 37°C. La cantidad de AMC liberada se midió en un espectrofotómetro con el filtro de excitación y emisión ajustado a 360 nm y 444 nm. Se expresó el porcentaje de actividad de caspasa-3 en comparación de la señal obtenida con las células no tratadas. Los valores IC50 de los compuestos preferidos mostraron estar correlacionados con los valores EC5o contra los de SKOV3 y en general fueron menores de 1 µ?.
Bioquímica celular A. Detección de XIAP y PARP/Caspasa-3/Caspasa-9 Se efectuó la detección de las células expresadas XIAP y PARP mediante ensayos de Western blot. Se colocaron en placas las células a 300000 células/pozo en pozos de 60 mm (6 pozos por placa). Al día siguiente se trataron las células con el compuesto seleccionado a la concentración indicada. Después de 24 horas, las células tripsinizadas se aglutinaron mediante centrifugación a 1800 rpm a 4°C. La pella resultante se lavó dos veces con TBS frío. Se lisó la pella de células del último lavado con 250 ul de regulador de pH de lisis (NP-40, glicerol, 1 % de cóctel de inhibidor de proteasa (Sigma)), colocado a 4°C durante 25 minutos con agitación lenta. Se centrifugó el extracto de células a 4°C durante 10 minutos a 10,000 rpm. Tanto el sobrenadante como la pella se guardaron para el análisis de Western blot, como se describe a continuación. A partir del sobrenadante, se evaluó el contenido de proteína y alrededor de 50 ug de proteína fueron fraccionados en SDS-PAGE al 10%. Se lavaron las pellas con regulador de pH de lisis y se resuspendieron en 50 ul de regulador de pH Lamelli 1 X, se hirvieron y fraccionaron en SDS-PAGE. Durante la electroforesis se electro-transfirió cada gel en una membrana de nitrocelulosa a 0.6 A durante 2 horas. Se bloquearon los sitios no específicos de la membrana durante 1 hora con 5% de leche descremada en TBST (TBS que contenía 0.1 % (v/v) de Tween-20) a temperatura ambiente. Para la inmunodeteccion de proteínas, se incubaron las membranas durante la noche con anticuerpos primarios cultivados contra el clon XIAP 48 obtenido de Becton-Dickison) o PARP: obtenido de Cell signal o anticuerpos primarios caspasa-3 o caspase-9, que se incubaron agitándolos a 4°C en las diluciones que se indican a continuación: Clon XIAP 80 (Becton-Dickinson) 1/2500 PARP (Cell Signal) 1/2500 Caspasa 3 (Sigma) 1/1500 Caspasa 9 (Upstate) 1 /1000 Después de la incubación durante la noche, las membranas recibieron tres lavados de 15 minutos en TBST, luego se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente en presencia de un anticuerpo secundario unido con enzima HRP (Chemicon) y diluida a 1/5 000. Durante la incubación cada membrana se lavó tres veces con TBST y se detectaron las bandas inmuno-reactivas al agregar de un sustrato luminiscente (ECL kit Amersham) y se capturó la señal en película de rayos X de varios tiempos de exposición. Ciertos compuestos ejemplificados mostraron inducción de la escisión de concentraciones cercanas a PARP que se correlacionan con los valores EC50 contra SKOV3 y resultaron típicamente menores a 1 u .
Modelo de fibra hueca Se utilizó el modelo in vivo de fibra hueca para demostrar la eficacia in vivo de los compuestos seleccionados contra las líneas celulares seleccionadas como terapia de agente único o en combinación con los agentes citotóxicos seleccionados. El día 1 , se cultivaron las líneas celulares seleccionadas y la fibra se llenó a una densidad celular de alrededor de 40,000 células/fibra. Al día de la operación (día 4), se implantaron subcutáneamente tres fibras en un ratón macho 28-35 Nu/Nu CD-1. El día 5, los ratones empezaron a recibir una inyección diaria por vía subcutánea del vehículo de control o del vehículo que contenía el compuesto seleccionado en la concentración adecuada y/o inyección de agente citotóxico vía intraperitoneal. Después de 3-7 días de tratamientos consecutivos de fármacos, se sacrificaron los animales, se removió cada fibra y se evaluó la viabilidad metabólica de las células restantes mediante el ensayo MTT. Se definió la eficacia del compuesto como la diferencia entre el animal tratado con el vehículo y el animal tratado únicamente con el compuesto o con el compuesto proporcionado en combinación del agente citotóxico. Se implantaron células MDA-MB-231 el día 1. Se administró el compuesto 3 durante 4 días consecutivos vía bolos de inyecciones IV (vena de la cola) a concentraciones de 1 , 3 y 10 mg/kg (2 mg/ml en 20 % HPCD acuosa). Se observó la supresión completa del crecimiento celular en comparación con el control de HPCD al 20% para el compuesto 3 a concentraciones de 3 mg/kg del fármaco.
Estudio de xenotrasplante de línea celular de cáncer ovárico humano SKOV-3 con el compuesto 3 Se les inyectaron 5 x 106 células de tumor ovárico humano SKOV-3 de forma subcutánea a ratones desnudos CD-1 femeninos (aproximadamente 20-25 g) en matrigel al 50% de forma subcutánea en el flanco derecho. El día 55, cuando los tumores median aproximadamente 100 mm3, se inició el tratamiento con el compuesto 3 en un calendario de 5 días de tratamiento y 2 sin tratamiento durante la duración del experimento. El tamaño del tumor se midió con calibradores digitales y se calculó con la fórmula V= (a x b2)/2, donde a corresponde a la dimensión del largo y b corresponde al ancho. Se observó regresión tumoral mientras se dosificó el compuesto 3 a 1 mg/kg mientras que se observó estasis del tumor al dosificar el compuesto 3 a 0.3 mg/kg (véase la Figura 1 ).
Estudio de xenotrasplante de la linea celular de cáncer de seno humano MDA-MB-231 con Compuesto 3 Se inyectaron subcutáneamente 1 x 106 células de tumor de seno humano MDA-MB-231 a ratones desnudos CD-1 femeninos (aproximadamente 20-25g) en el flanco derecho. El día 71 , cuando los tumores medían aproximadamente 90 mm3, se inició el tratamiento con el compuesto 3 en un calendario de 5 días con tratamiento y 2 sin tratamiento durante la duración del experimento. El tamaño del tumor se midió con calibradores digitales y se calculó con la fórmula V= (a x b2)/2, donde a corresponde a la dimensión del largo y b corresponde al ancho. Se observó regresión tumoral al dosificar el compuesto 3 a 1 mg/kg (véase la Figura 2).
Estudios farmacocinéticos Se disolvieron los compuestos seleccionados en solución salina normal y se proporcionaron a varias dosis utilizando diferentes vías de administración, que incluyen bolos intravenosos, infusión intravenosa, inyección oral y subcutánea. El compuesto de la presente invención demostró tener una farmacocinética aceptable con las diferentes vías de administración.
Potencia in vitro Se demostró que los compuestos de la presente invención dieron muerte a las líneas celulares in vitro SKOV3 (ovárica), MDA-MB-231 (seno), BT549 (seno), HL-60 (leucemia promielocítica aguda) y PANC-1 (pancreática), demostrando valores de EC50 desde 0.1 nM hasta 1000 nM (véase el cuadro 7). Se mapeó el SAR de estos compuestos utilizando SKOV3 y emergieron varias tendencias interesantes. El cambio de la estereoquímica en el sitio de enlace de pirrolidina afectó la potencia de los compuestos como se observa en los valores EC5o de los derivados de cis- y trans-prolina 3 y 29 (EC5o=1 nM, 88 nM, respectivamente. Las unidades de enlace de amida proporcionaron compuestos activos, sin embargo, se observó un rango significativo de potencia contra las células SKOV3 al variar los componentes de las unidades de enlace. Proporcionan compuestos altamente activos las unidades pequeñas, confinadas al enlace, pero no limitadas a, 1 ,4-fenil dicarboxamidas (tereftaloilamidas), 1 ,3-fenil dicarboxamidas, 2,6-naftil dicarboxamidas, 1 ,4-ciclohexil dicarboxamidas, 3,5-piridil dicarboxamidas, o C2-C10 dicarboxamidas aliíáticas. Las unidades de enlace amidas bis-glicina tales como los compuestos 30 proporcionan compuestos menos activos (EC50=188 nM). Las unidades de enlaces éter, urea y sulfonamida proporcionan compuestos que mostraron actividad contra las células SKOV3, aunque los compuestos enlazados con sulfonamida generalmente mostraron menor actividad. Se observaron cambios significativos en la potencia contra las células SKOV3 al variar la sustitución P4, donde (R)-estereoquímica en amida R /R400 proporciona compuestos que son 5-10 veces más potentes que el isómero (S) correspondiente. La introducción de las fracciones hidrofílicas cercanas a la amida proporciona compuestos menos activos tales como el compuesto 49. Adicionalmente, la alquilación de la fracción de alanina N-terminal proporciona compuestos que son hasta 100 veces más potentes que los derivados correspondientes no sustituidos de alanina N-terminal. Sin embargo, un subconjunto de líneas celulares cancerosas no es sensible por naturaleza a los compuestos de la presente invención, con valores de EC5o mayores de 1000 nM. Hemos demostrado que los compuestos de enlace IAP BIR muestran la muerte sinérgica de varias líneas celulares cancerosas con agonistas de los receptores de muerte tales como TRAIL, anticuerpos agonistas de los receptores TRAIL, TNF-a y otros. En la presente revelamos que el compuesto de las fórmulas I y II también muestra muerte sinérgica de varias líneas celulares de cáncer con los agonistas de los receptores de muerte tales como TRAIL. Cuando estas células se trataron con compuesto y TRAIL o anticuerpo antagonista TRAIL, estas líneas celulares fueron altamente sensibles al compuesto con valores de EC50) generalmente menores de 100 nM. Estas líneas celulares de cáncer incluyen HELA (cervical), HCT1 16 (colon), PC3 (próstata), OVCAR-3 (ovario), HEY (ovario) y H460 (pulmón). En presencia de TRAIL (1 -3 ng/ml) y concentraciones variables del compuesto 3 los valores de EC50 para las líneas celulares mencionadas fueron menores de 1000 nM.
Potencia in vivo Se ensayó el compuesto 3 en los modelos tumorales de xenotrasplante de SKOV3 y MDA-MB-231 (véanse las Figuras 1 y 2). Se observó en ambos casos la regresión tumoral en 1 mg/kg cuando se administraba por 5 días y no se administraba por 2 días. Se observó estasis tumoral en el xenotrasplante SKOV3 en 0.1 mg/kg.
Discusión Los resultados anteriores sugieren que los compuestos de unión IAP BIR de la invención instantánea son agentes altamente potentes, tanto in vitro como in vivo, donde se puede correlacionar el enlace mecánico entre la unión y las modulaciones de IAP a la eficacia anti-cancerosa. Se ha demostrado que los compuestos de la presente invención se unen a los dominios BIR de las IAP con una elevada afinidad, resultando en la liberación de las caspasas activas 3 y 9. Además, estos compuestos resultan en la inducción de apoptosis en las células cancerosas mientras que sensibilizan sinérgicamente a las líneas celulares cancerosas a los agonistas de los receptores de muerte, tales como TRAIL. Adicionalmente, cuando los animales que padecían de un tumor se trataron con los compuestos de la presente invención, demostraron estasis tumoral y/o regresión tumoral a dosis farmacéuticamente apropiadas. Los compuestos de la presente invención demostraron una farmacocinética aceptable por las diferentes vías de administración.
Otras modalidades A partir de la descripción anterior, será evidente para alguien con habilidades ordinarias en la técnica que se puede hacer variaciones y modificaciones a la invención descrita en la presente para adaptarla a los diversos usos y condiciones. Dichas modalidades también se encuentran dentro del alcance de la presente invención.
Todas las publicaciones mencionadas en esta especificación están incorporadas en esta especificación a manera de referencia.

Claims (20)

  1. NOVEDAD DE LA INVENCION
  2. REIVINDICACIONES 1.- Un isómero, enantiomero, diastereoisomero o tautómero de compuesto representado por la Fórmula I ó II
  3. II donde m es 0, 1 ó 2; Y es NH, O o S; BG es 1) -X-L-X1-; X y X1 se seleccionan independientemente de 1) 0, 2) NR13, 3) S, 4) -C C6 alquil-, 5) -Ci-C6 alquil-O, 6) -C C6 alquil-NR13-, 7) - CrC6 alquil-S-,
  4. L se selecciona entre: 1 ) -CrC2o alquil-, 2) -C2-C6 alquenil-, 3) -C2-C4 alquinil-, 4) -C3-C7 cicloalquil-, 5) -aril-, 6) -biíenil-, 7) -heteroaril-, 8) - heterociclil-, 9) -Ci-C6 alquil-(C2-C6 alquenil)-C C6 alquil-, 10) -C C6 alquil- (C2-C4 alquenil)-C C6 alquil-, 11 ) -C C6 alquil-(C3-C7 cicloalquil)-C C6 alquil-, 12) -C C6 alquil-aril-CrC6 alquil-, 13) -CrC6 alquil-bifenil-C C6 alquil-, 14) -CrC6 alquil-heteroaril-C C6 alquil-, 15) -CrC6 alquil- heterociclil-d-Ce alquil-, 16) -C C6 alquil-Y-Ci-C6 alquil-, 17) -aril-Y-aril-, 18) -heteroaril-Y-heteroaril-, 19) -heterociclil-Y-heterociclil-, donde el alquilo, alquenilo, alquinilo y cilcloalquilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R6 y los grupos arilo, bifenilo, heteroarilo y heterociclilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R10; Q y Q1 se seleccionan independientemente entre 1 ) NR4R5, 2) OR1 1 o 3) S(0)mR1 1 o Q y Q1 se seleccionan independientemente entre 1) arilo o 2) heteroarilo, el arilo y el heteroarilo que son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R10; A y A1 se seleccionan independientemente entre 1 ) -CH2-, 2) -CH2CH2-, 3) -CH(d-C6 alquilo)-, 4) -CH(C3-C7 cicloalquilo)-, 5) -C3-C7 cicloalquil-, 6) -CH(C-|-C6 alquil-C3-C7 cicloalquil)-, 7) -C(O)- o 8) -C(0)OR13; R1 y R 00 se seleccionan independientemente entre 1 ) H o 2) Ci-C6 alquilo sustituido opcionaimente por uno o más sustituyentes R6; R2 y R200 se seleccionan independientemente entre 1 ) H o 2) C1-C6 alquilo sustituido opcionaimente por uno o más sustituyentes R6; R3 y R300 son independientemente C^Ce alquilo sustituido opcionaimente por uno o más sustituyentes R6; R4 y R5 se seleccionan independientemente entre 1 ) H, 2) haloalquilo, 3) <— d-C6 alquilo, 4) <— C2-C6 alquenilo,
  5. 5) <-C2-C4 alquinilo,
  6. 6) <— C3-C7 cicloalquilo, 7) <-C3-C7 cicloalquenilo, 8) <— arilo, 9) <— heteroarilo, 10) ^heterociclilo, 1 1 ) ^heterobiciclilo, 12) ^C(O)R11 , 13) ^C(O)O-R1 1 , 14) <-C(=Y)NR8R9 o 15) <-S(O)2-R11 , donde el alquilo, alquenilo, alquinilo, cilcloalquilo y cicloalquenilo son sustituidos opcionaimente por uno o más sustituyentes R6; y en donde arilo, heteroarilo, heterociclilo y heterobiciclilo son sustituidos opcionaimente por uno o más sustituyentes R10; R6 es 1 ) halógeno, 2) NO2, 3) CN, 4) haloalquilo, 5) -CrC6 alquilo, 6) -C2-C6 alquenilo,
  7. 7) C2-C4 alquinilo,
  8. 8) -C3-C7 cicloalquilo,
  9. 9) C3-C7 cicloalquenilo,
  10. 10) arilo, 1 1 ) heteroarilo, 12) heterociclilo, 13) heterobiciclilo, 14) OR7, 15) S(O)mR7, 16) NR8R9, 17) NR8S(0)2R1 1 , 18) COR7, 19) C(O)OR7, 20) CONR8R9, 21 ) S(O)2NR8R9, 22) OC(O)R7, 23) OC(O)Y-R1 1 , 24) SC(O)R7 o 25) NC(Y)NR8R9, donde el arilo, heteroarilo, heterociclilo y heterobiciclilo son sustituidos opcionaimente por uno o más sustituyentes R 0; R7 es 1 ) H, 2) haloalquilo, 3) C C6 alquilo, 4) C2-C6 alquenilo, 5) C2-C4 alquinilo, 6) C3-C7 cicloalquilo, 7) C3-C7 cicloalquenilo, 8) arilo, 9) heteroarilo, 10) heterociclilo, 11 ) heterobiciclilo, 12) R8R9NC(=Y) o 13) C C6 alquil-C2-C4 alquenilo o 14) CrC6 alquil-C2-C4 alquinilo, donde el alquilo, alquenilo, alquinilo, cilcloalquilo y cicloalquenilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R6;y en donde el arilo, heteroarilo, heterociclilo y heterobiciclilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R10; R8 y R9 son cada uno independientemente 1 ) H, 2) haloalquilo, 3) CrC6 alquilo, 4) C2-C6 alquenilo, 5) C2-C4 alquinilo, 6) C3-C7 cicloalquilo, 7) C3-C7 cicloalquenilo, 8) arilo, 9) heteroarilo, 10) heterociclilo, 11 ) heterobiciclilo, 12) C(O)R11, 13) C(O)Y-R11 o 14) S(O)2-R11, donde el alquilo, alquenilo, alquinilo, cilcloalquilo, cicloalquenilo es sustituido opcionalmente por uno o más sustituyentes R6; y en donde el arilo, heteroarilo, heterociclilo y heterobiciclilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R10; o R8 y R9 junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos forman un anillo heterocíclico de cinco, seis o siete miembros, opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes R6; R10 es 1 ) halógeno, 2) NO2, 3) CN, 4) B(OR13)(OR14), 5) C C6 alquilo, 6) C2-C6 alquenilo, 7) C2-C4 alquinilo, 8) C3-C7 cicloalquilo, 9) C3-C7 cicloalquenilo, 10) haloalquilo, 11 ) OR7, 12) NR8R9, 13) SR7, 14) COR7, 15) C(0)0 R7, 16) S(O)mR7, 17) CONR8R9, 18) S(O)2NR8R9, 19) arilo, 20) heteroarilo, 21 ) heterociclilo o 22) heterobiciclilo, donde el alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo y cicloalquenilo son opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes R6; R11 es 1) haloalquilo, 2) C C6 alquilo, 3) C2-C6 alquenilo, 4) C2-C4 alquinilo, 5) C3-C7 cicloalquilo, 6) C3-C7 cicloalquenilo, 7) arilo, 8) heteroarilo, 9) heterociclilo o 10) heterobiciclilo, donde el alquilo, alquenilo, alquinilo, cilcloalquilo y cicloalquenilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R6; y en donde el arilo, heteroarilo, heterociclilo y heterobiciclilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R10; R12 es 1 ) haloalquilo, 2) C C6 alquilo, 3) C2-C6 alquenilo, 4) C2-C4 alquinilo, 5) C3-C7 cicloalquilo, 6) C3-C7 cicloalquenilo, 7) arilo, 8) heteroarilo, 9) heterociclilo, 10) heterobiciclilo, 1 1 ) C(0)-R11, 12) C(0)0-R11, 13) C(0)NR8R9, 14) S(O)m-R11 o 15) C(=Y)NR8R9, donde el alquilo, alquenilo, alquinilo, cilcloalquilo y cicloalquenilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R6; y en donde el arilo, heteroarilo, heterociclilo y heterobiciclilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R10; R13 y R 4 son cada uno independientemente 1 ) H o 2) d-C6 alquilo o R13 y R14 se combinan para formar un anillo heterocíclico o un anillo heterobicíclico; R20 es 1 ) H, 2) NH2 o 3)NHFmoc; o un profármaco; o el compuesto de la fórmula I o II se marca con un marcador detectable o un identificador de afinidad. 2. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque ambos A y A1 son CH2. 3. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque ambos A y A1 son C=O. 4. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque A es CH2 y A1 es C=O. 5. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 caracterizado además porque ambos A y A1 son C(0)OCH3. 6. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque ambos A y A1 son C(O)OH. 7. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque comprende los compuestos de la fórmula 1A a 1 C: 1A 1 B 1C donde BG, A, A1, Q, Q1, R1, R 00, R2, R200, R3 y R300 son tal como se definen en la reivindicación 1. 8.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque comprende los compuestos de la fórmula 2A y 2B: 2A 2B donde BG, A, A1, Q, Q1 , R , R100, R2, R200, R3 y R20 son tal como se definen en la reivindicación 1 . 9. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 caracterizado además porque BG es -X-L-X1-. 10. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 caracterizado además porque comprende los compuestos de la fórmula 1 a < 1 c: 1 a 1c donde L, X, X \ A, A1, Q, Q1, R1, R100, R2, R200, R3 y R300 son tal como se definen en la reivindicación 1. 11.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado además porque comprende los compuestos de la fórmula 1.1a a 1.1c: R5 1.1a 1.1b 3500 1.1C donde L, X, X 1, A, A1, Q, Q1, R1, R100, R2, R200, R3, R300, R4, R400, R5 y R500 son tal como se definen en la reivindicación 1. 12.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado además porque comprende los compuestos de la fórmula 2a: 2a donde L, X. X1, A, A1, B, Q, Q1, R1, R 00, R2, R200, R3 y R20 son tal como se definen en la reivindicación 1. 13.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado además porque ambos X y X1 se seleccionan independientemente entre 1 ) O, 2) NR , 3) S, 4) -CrC6 alquil-O-, 5) -Ci-C6 alquilo, 14. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado además porque X y X1 se seleccionan independientemente entre: 1 ) O, 15. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque L se selecciona entre: 1 ) -C C2o alquil-, 2) -C3-C7 cicloalquil— , 3) -aril-, 4) — bifenil— , 5) - heteroaril-, 6) -C C6 alquil-(C2-C4 alquenil)- C C6 alquil-; 7) -CrC6 alquil- aril— Ci-C6 alquil-, 8) -aril-Y-aril-, 91 AJ N Y O 10) r . alquilo C C6H 0 H donde el alquilo y cilcloalquilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R6 y el arilo, bifenilo y heteroarilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R 0. 16.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado además porque L se selecciona entre el grupo que consiste de: ? 17. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado además porque r es un número que puede ser 1,i2, 3, 4, 5, 6, 7, 8,9010. 18. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, i caracterizado además porque comprende los compuestos de la fórmula 1.1 a 1.18: 290 Q1- H R200 1.4 1.6 1.9 1.10 1.13 1.14 1.17 donde r es un número que puede ser 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ó 10, y A, A1, Q, Q1, R1, R100, R2, R200, R3 y R300 son como se definen en la reivindicación 1. 19.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque comprende los compuestos de la fórmula 2.1 y 2.2: 2.2 donde A, A1 , Q, Q1 , R1 , R100, R2, R200, R3, R300 y R20 son tal como se definen en la reivindicación 1. 20.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque ambos, R1 y R100 son H. 21.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque ambos, R1 y R100 son CrC6 alquilo. 22. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 21 , caracterizado además porque ambos R1 y R100 son CH3. 23. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque ambos, R2 and R200 son C C6 alquilo opcionalmente sustituidos con OH. 24. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado además porque ambos, R2 y R200 son CH3. 25. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado además porque R2 es CH2OH y R300 es CH3. 26. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado además porque ambos, R2 y R200 son CH2OH. 27. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado además porque ambos, R2 y R200 son CH2CH3. 28.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque ambos, R3 y R300 son C C6 alquilo. 29.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado además porque ambos, R3 and R300 son C(CH3)3. 30. - El compuesto de conformidad con la réivindicación 1 , caracterizado además porque ambos, Q y Q son NR4R5. 31. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque ambos, A y A1 son C=0 y ambos Q y Q1 son NR4R5, R4 es H y R5 se selecciona entre: 1) <-C -C6 alquilo, 2) ^-C2-C6 alquenilo, 3) <-C2-C4 alquinilo, 4) <-C3-C7 cicloalquilo, 5) <— C3-C cicloalquenilo, 6) <— arilo, 7) ·<— heteroarilo, 8) <— heterociclilo o 9) <— heterobiciclilo, donde el alquilo, alquenilo, alquinilo, cilcloalquilo y cicloalquenilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R6; y en donde el arilo, heteroarilo, heterociclilo y heterobiciclilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R10; donde R6 y R10 son tal como se definen en la presente. 32. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 31 , caracterizado además porque R4 es H y R5 se selecciona entre: 1) <— Ci-C6 alquilo o 2) arilo, donde el alquilo se sustituye opcionalmente por uno o dos sustituyentes R6; y donde el arilo se sustituye opcionalmente por un sustituyente R 0; donde R6 y R10 son tal como se definen en la presente. 33. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado además porque R4 es H y R5 se selecciona entre el grupo que consiste de 35.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque ambos A y A1 son C=O y ambos Q y Q son 36.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 caracterizado además porque ambos A y A1 son C=O, Q es 37.- El compuesto de conformidad con la reivindicación caracterizado además porque ambos A y A1 son C=O y ambos Q y Q1 son H 38.- El compuesto de conformidad con la reivindicación caracterizado además porque ambos A y A1 son C=O y ambos Q y Q1 son 39.- El compuesto de conformidad con la reivindicación caracterizado además porque ambos A y A1 son C=O y ambos Q y Q1 son compuesto de conformidad con la reivindicación caracterizado además porque ambos A y A1 son C=O y ambos Q y Q1 son 41.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque ambos A y A1 son C=O y ambos Q y Q1 son 42.- El compuesto de conformidad con la reivindicación caracterizado además porque ambos A y A1 son C=0 y ambos Q y Q1 son 43.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 caracterizado además porque ambos A y A1 son C=O y ambos Q y Q1 son 44.- El compuesto de conformidad con la reivindicación caracterizado además porque ambos A y A1 son C=O y ambos Q y Q1 son 45.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque ambos A y A1 son C=O y ambos Q y Q1 son 46.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque ambos A y A1 son C=O y ambos Q y Q1 son 47.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque ambos A y A1 son C=O y ambos Q y Q1 son 48.- El compuesto de conformidad con la reivindicación caracterizado además porque ambos A y A1 son C=O y ambos Q y Q1 son 49.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque ambos A y A1 son C=O y ambos Q y Q1 son 50.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque ambos A y A1 son C=O y ambos Q y Q1 son OH 51.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque ambos A y A1 son C=O y ambos Q y Q1 son 52.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque ambos A y A1 son C=O y ambos Q y Q1 son 53.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque ambos A y A1 son C=O y ambos Q y Q son 54.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque ambos A y A1 son C=O y ambos Q y Q1 son 55.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque ambos A y A1 son C=O y ambos Q y Q1 son 56.- El compuesto de conformidad con la reivindicación caracterizado además porque ambos A y A1 son C=O y ambos Q y Q1 son 57.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque ambos A y A1 son C=O y ambos Q y Q1 son 58.- El compuesto de conformidad con la reivindicación caracterizado además porque ambos A y A1 son C=O y ambos Q y Q1 son 59. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque ambos, A y A1 son CH2 y ambos, Q y Q1 son NR4R5, luego R4 y R5 son cada uno independientemente 1 ) haloalquilo, 2) -C-i-Ce alquilo, 3) <— C2-C6 alquenilo, 4) <-C2-C4 alquinilo, 5) <— C3-C7 cicloalquilo, 6) <— C3-C7 cicloalquenilo, 7) <— arilo, 8) <— heteroarilo, 9) ^heterociclilo, 10) ^heterobiciclilo, 1 1 ) ÷-C(O)R1 1 , 12) <-C(0)O-R1 1, 13) ^C(=Y)NR8R9 o 14) -S(O)2-R1 1 , donde el alquilo, alquenilo, alquinilo, cilcloalquilo y cicloalquenilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R6; y en donde el arilo, heteroarilo, heterociclilo y heterobiciclilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R10; donde Y, R6, R8, R9, R10 y R1 1 son tal como se definen en la presente. 60. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 59, caracterizado además porque ambos R4 y R5 se seleccionan independientemente entre 1 ) -CrC6 alquilo, 2) <-C(O)R1 1 , 3) ^C(0)0-R11 o 4) <— S(0)2-R11 , donde el alquilo se sustituye por un sustituyente R6; donde R6 y R11 son tal como se definen en la presente. 61 . - El compuesto de conformidad con la reivindicación 60, caracterizado además porque R4 es S(O)2CH3 y R5 es 62.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 60, caracterizado además porque R4 es C(0)-CH3 y R5 es 63.- El compuesto de conformidad con la reivindicación caracterizado además porque R4 es 64. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R11 es 1 ) Ci-C6 alquilo o 2) arilo, donde el alquilo se sustituye opcionalmente por uno o más sustituyentes R6; y donde el arilo se sustituye opcionalmente por uno o más sustituyentes R10; donde R6 y R10 son tal como se definen en la presente. 65. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 64, caracterizado además porque R11 es 1 ) Ci-C6 alquilo sustituido opcionalmente por uno o dos sustituyentes R6 o 2) fenilo sustituido opcionalmente por un sustituyente R10; donde los sustituyentes R6 y R10 son tal como se describen en la presente. 66. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R6 es 1 ) halógeno, 2) NO2) 3) CN, 4) arilo, 5) heteroarilo, 6) heterociclilo, 7) heterobiciclilo, 8) OR7, 9) SR7 o 10) NR8R9, donde el arilo, heteroarilo, heterociclilo y heterobiciclilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R 0; donde R7, R8, R9 y R10 son tal como se definen en la presente. 67.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 66, caracterizado además porque R6 es 1 ) halógeno, 2) arilo o 3) ÑR8R9, donde el arilo se sustituye opcionalmente por un sustituyente R10; donde R8, R9 y R10 son tal como se definen en la presente. 68.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque ambos R8 y R9 son cada uno independientemente 1 ) H, 2) haloalquilo, 3) -C C-6 alquilo, 4) C2-C6 alquenilo, 5) C2-C4 alquinilo, 6) C3-C7 cicloalquilo o 7) C3-C7 cicloalquenilo, donde el alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo y cicloalquenilo son opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes R6; donde los sustituyentes R6 son tal como se definen en la presente. 69. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R10 es 1) halógeno, 2) N02, 3) CN, 4) haloalquilo, 5) OR7, 6) NR8R9 o 7) SR7; donde R7, R8 y R9 son tal como se definen en la presente. 70. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque se selecciona de un grupo que consiste de: 307 308 309 310 20 312 20 314 315 20 317 318 319 320 321 322 323 324 325 71 .- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque se selecciona de un grupo que consiste de: Compuesto Estructura 6 328 ? Un compuesto intermedio representado por la fórmula 1 donde PG , R1 , R , R , A y Q son tal como se definen en la reivindicación 1. 73. - Un compuesto intermedio representado por la fórmula 2-iv: donde PG4, R1, R2, R3, A y Q son tal como se definen en la reivindicación 1. 74. - Un compuesto intermedio representado por lalfórmula 3-ii: donde PG4, PG400, R1, R2, R3, A y Q son tal como se definen en la reivindicación 1 y L es -(CH2)r -, -(CH2)r-Y-(CH2)r-, -alquil-arilfalquil-, -alquil- heteroaril-alquil-, cicloalquilo, arilo o heteroarilo. 75.- Un compuesto intermedio representado por la fórmula 4-i: 4-i donde PG4, PG400, L, R1, R100, R2, R200, R3, R300, A, A1, X, X1, Q y Q1 son tal como se definen en la reivindicación 1. 76.- Un compuesto intermedio representado por la fórmula 6-ii: 6-ii donde PG4, PG400, R1, R100, R2, R200, R3, R300, A, A1, Q y Q1 son tal como se definen en la reivindicación 1. 77.- Un compuesto intermedio representado por la fórmula 7-v: 7-v donde PG4, PG400, L, R , R100, R2, R200, R3, R300, A, A1, Q y Q1 s n tal como se definen en reivindicación 1. 78.- Un compuesto intermedio representado por la fórmula 8-ii: CO2H 8-ii donde PG4, r, L, R , R , A y Q son tal como se ^definen en la reivindicación 1. ¡ 79.- Un compuesto intermedio representado por la fórmula 8-iii: 8-iü donde PG4, PG400, r, L, R1 , R100, R2, R200, R3, R300, A, A1 , Q y Q1 son tal como se definen en la reivindicación 1. 80.- Un compuesto intermedio representado por la fórmula 17-i: donde PG4, PG400, L, R1, R100, R2, R200, R3, R300, A, A1, Q y Q1 son tal como se definen en la reivindicación 1 . 81 .- Un compuesto intermedio representado por lá fórmula 18-i: donde PG4, PG400, L, R1, R100, R2, R200, R3, R300, A,A1,QyQ1 son tal como se definen en la reivindicación 1. 82. - Un compuesto intermedio representado por la fórmula 19-8: 19-8 donde PG4, PG400, L, X, X1, R1, R100, R2, R200, R3, R300, R4, R400, R5 y R500 son tal como se definen en la reivindicación 1. 83. - Un compuesto intermedio representado por la fórmula 19-3: donde PG2, L y X son tal como se definen en la reivindicación 1<. 84.- Un compuesto intermedio representado por la fórmula 20-2 donde L, X, X1 , R4 y R5 son tal como se definen en la reivindicación 1 . 85.- Un compuesto intermedio representado por la fórmula 20-4 donde L, X, X1 , R3, R4 y R5 son tal como se definen en la reivindicación 1 . 86.- Un procedimiento para producir los compuestos representados por la fórmula I, descritos anteriormente en la presente, el procedimiento consiste en: a) acoplar dos productos intermedios representados por la fórmula 1 (iv): 1 (¡v) donde PG3, R , R2, R3, A y Q son tal como se definen en la presente, en un solvente; y b) eliminar los grupos protectores para formar los compuestos de la fórmula I. 87.- Un procedimiento para producir los compuestos representados por la fórmula I, descritos anteriormente en la presente, el procedimiento consiste en: a) acoplar un producto intermedio representado por la fórmula 2(iv): 2(iv) donde PG4 es un grupo protector y R1, R2, R3, A y Q son tal cómo se definen i en la presente y un diácido (0.5 equivalentes) activado en un solvente y b) eliminar los grupos protectores para formar los compuestos de la fórmula I. 88.- El uso de un compuesto representado por la fórmula I o II: o una sal de los mismos, para la fabricación de un medicamento útil para el tratamiento o prevención de un estado de enfermedad caracterizado por apoptosis insuficiente, donde: m es 0, 1 ó 2; Y es NH, O o S; BG es 1 ) -X-L-X1-; X y X1 se seleccionan independientemente de 1 ) O, 2) NR^3, 3) S, 4) -C C6 alquil-, 5) -C C6 alquil-O, 6) -C C6 alquil-NR13-, 7)- C C6 alquil-S-, 8), H 15) ^ ^ ;L se selecciona entre: 1 ) -CrC2o alquil-, 2) -C2-C6 alquenil-, 3) -C2-C4 alquinil-, 4) -C3-C7 cicloalquil-, 5) -aril-, 6) -bifenil-, 7) -heteroaril-, 8) - heterociclil-, 9) -C C6 alquil-(C2-C6 alquenil)- d-C6 alquil-, 10) -Ci-C6 alquil-(C2-C4 alquenil)- C C6 alquil-;
  11. 11) -C C6 alquil-(C3-C7 cicloalquil)- d-C6 alquil-,
  12. 12) -C C6 alquil-aril-Ci-C6 alquil-,
  13. 13) -C C6 alquil— bifenil— Ci-C6 alquil-,
  14. 14) -C-i-Ce alquil-heteroaril-Ci-Ce alquil-,
  15. 15) -C C6 alquil-heterociclil-CrC6 alquil-, 6) -C C6 alquil-Y-CrC6 alquil-, 17) -aril-Y-aril-, 18) -heteroaril-Y-heteroaril-, 19) -heterociclil-Y-heterociclil-, 20) X JL H^ ?? > ü alciuil0 c cf ¿ o 21 ) donde el alquilo, alquenilo, alquinilo y cilcloalquilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R6 y el arilo, bifenilo, heteroarilo y heterociclilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R 0; Q y Q1 se seleccionan independientemente entre 1 ) NR R5, 2) OR11o 3) S(0)mR11 o Q y Q1 se seleccionan independientemente entre 1 ) arilo o 2) heteroarilo, el arilo y el heteroarilo que son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R10; A y A1 se seleccionan independientemente entre 1 ) -CH2-, 2) -CH2CH2-, 3) -CH(Ci-C6 alquilo)-, 4) -CH(C3-C7 cicloalquilo)-, 5) -C3-C7 cicloalquil-, 6) -CHÍd-Ce alquil-C3-C7 cicloalquil)-, 7) -C(O)- o 8) -C(O)OR13; R1 y R100 se seleccionan independientemente entre 1 ) H o 2) d-C6 alquilo sustituido opcionalmente por uno o más sustituyentes R6; R2 y R200 se seleccionan independientemente entre 1 ) H o 2) C1-C6 alquilo sustituido opcionalmente por uno o más sustituyentes R6; R3 y R300 son C^C& alquilo independientes, sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R6; R4 y R5 se seleccionan independientemente entre 1 ) H, 2) haloalquilo, 3) *— Ci-C6 alquilo, 4) <— C2-C6 alquenilo, 5) -<— C2-C4 alquinilo, 6) <— C3-C7 cicloalquilo, 7) <— C3-C7 cicloalquenilo, 8) <— arilo, 9) <— heteroarilo, 10) <— heterociclilo, 1 1 ) — heterobiciclilo, 12) ^C(O)R11, 13) ^C(O)O-R11 , 14) <-C(=Y)NR8R9 o 15) <— S(O)2-R11 , donde el alquilo, alquenilo, alquinilo, cilcloalquilo y cicloalquenilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R6; y en donde el arilo. heteroarilo. heterociclilo y heterobiciclilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R10; R6 es 1 ) halógeno, 2) NO2) 3) CN, 4) haloalquilo, 5) CrC6 alquilo, 6) C2-C6 alquenilo, 7) C2-C4 alquinilo, 8) C3-C7 cicloalquilo, 9) C3-C7 cicloalquenilo, 10) arilo, 1 1 ) heteroarilo, 12) heterociclilo, 3) heterobiciclilo, 14) OR7, 15) S(O)mR7,
  16. 16) NR8R9,
  17. 17) NR8S(O)2R1 1 ,
  18. 18) COR7,
  19. 19) C(O)OR7,
  20. 20) CONR8R9, 21 ) S(O)2NR8R9, 22) OC(O)R7, 23) OC(O)Y-R11 , 24) SC(O)R7 o 25) NC(Y)NR8R9, donde el arilo, heteroarilo, heterociclilo y heterobiciclilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R10; R7 es 1 ) H, 2) haloalquilo, 3) C C6 alquilo, 4) C2-C6 alquenilo, 5) C2-C4 alquinilo, 6) C3-C7 cicloalquilo, 7) C3-C7 cicloalquenilo, 8) arilo, 9) heteroarilo, 10) heterociclilo, 1 1 ) heterobiciclilo, 12) R8R9NC(=Y) o 13) CrC6 alquil-C2-C4 alquenilo o 14) C C6 alquil-C2-C4 alquinilo, donde el alquilo, alquenilo, alquinilo, cilcloalquilo y cicloalquenilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R6; y en donde el arilo, heteroarilo, heterociclilo y heterobiciclilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R 0; R8 y R9 son cada uno independientemente 1 ) H, 2) haloalquilo, 3) C C6 alquilo, 4) C2-C6 alquenilo, 5) C2-C4 alquinilo, 6) C3-C7 cicloalquilo, 7) C3-C7 cicloalquenilo, 8) arilo, 9) heteroarilo, 10) heterociclilo, 1 1 ) heterobiciclilo, 12) C(0)R11 , 13) C(0)Y-R11o 14) S(0)2-R11, donde el alquilo, alquenilo, alquinilo, cilcloalquilo y cicloalquenilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R6; y en donde el arilo, heteroarilo, heterociclilo y heterobiciclilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R10; o R8 y R9 junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos forman un anillo heterocíclico de cinco, seis o siete miembros, opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes R6; R 0 es 1 ) halógeno, 2) NO2, 3) CN, 4) B(OR13)(OR14), 5) C C6 alquilo, 6) C2-C6 alquenilo, 7) C2-C alquinilo, 8) C3-C7 cicloalquilo, 9) C3-C7 cicloalquenilo, 10) haloalquilo, 1 1 ) OR7, 12) NR8R9, 13) SR7, 14) COR7, 15) C(0)0 R7, 16) S(O)mR7, 17) CONR8R9, 18) S(O)2NR8R9, 19) arilo, 20) heteroarilo, 21 ) heterociclilo o 22) heterobiciclilo, donde el alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo y cicloalquenilo son opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes R6; R11 es 1 ) haloalquilo, 2) C^Ce alquilo, 3) C2- C6 alquenilo, 4) C2-C alquinilo, 5) C3-C7 cicloalquilo, 6) C3-C7 cicloalquenilo, 7) arilo, 8) heteroarilo, 9) heterociclilo o 10) heterobiciclilo, donde el alquilo, alquenilo, alquinilo, cilcloalquilo y cicloalquenilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R6; y en donde el arilo, heteroarilo, heterociclilo y heterobiciclilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R10; R12 es 1 ) haloalquilo, 2) C C6 alquilo, 3) C2-C6 alquenilo, 4) C2-C4 alquinilo, 5) C3-C7 cicloalquilo, 6) C3-C7 cicloalquenilo, 7) arilo, 8) heteroarilo, 9) heterociclilo, 10) heterobiciclilo, 11 ) C(O)-R11, 12) C(O)0-R11, 13) C(O)NR8R9, 14) S(O)m-R11 o 15) C(=Y)NR8R9, donde el alquilo, alquenilo, alquinilo, cilcloalquilo y cicloalquenilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R6; y en donde el arilo, heteroarilo, heterociclilo y heterobiciclilo son sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes R10; R13 y R14 son cada uno independientemente 1) H o 2) C C6 alquilo o R 3 y R 4 se combinan para formar un anillo heterocíclico o un anillo heterobicíclico y R20 es 1 ) H, 2) NH2 o 3) NHFmoc. 89. - El uso del compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 71 para la fabricación de un medicamento útil para el tratamiento o prevención del estado de enfermedad caracterizado por apoptosis insuficiente. 90. - El uso que se reclama en las reivindicaciones 88 u 89, en donde la enfermedad es cáncer. 91. - El uso del compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 71 para la fabricación de un medicamento útil para el tratamiento o prevención de un trastorno proliferativo. 92. - El uso del compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 71 en combinación con un agente para la fabricación de un medicamento útil para el tratamiento o prevención de un trastorno proliferativo, donde el agente es seleccionado entre: a) un modulador de receptores de estrógenos, b) un modulador de receptores de andrógenos, c) un modulador de receptores de retinoides, d) un agente citotóxico, e) un agente antiproliíerativo, f) un inhibidor de la prenil-proteín transferasa, g) un inhibidor de la HMG-CoA reductasa, h) un inhibidor de la VIH proteasa, i) un inhibidor de la transcriptasa inversa, k) un inhibidor de la angiogénesis, I) un ?-agonista de PPAR m) un d-agonista de PPAR, n) un inhibidor de la resistencia inherente a los multifármacos, o) un agente antiemético, p) un agente útil para el tratamiento de la anemia, q) agentes útiles para el tratamiento de la neutropenia, r) un fármaco que mejore el sistema inmunológico, s) un inhibidor de proteasomas; t) un inhibidor de HDAC; u) un inhibidor de la actividad similar a la de la quimiotripsina que presenta la proteasoma o v) inhibidores de la ligasa E3; w) un modulador del sistema inmunológico, que incluya, pero sin limitarse a, interferón alfa, Bacilo Calmette-Guerin (BCG) y radiación ionizante (UVB) que puede inducir la liberación de citoquinas, tales como las interleuquinas, TNF o inducir la liberación de los ligandos de los receptores de muerte, tales como TRAIL; x) un modulador de los receptores de muerte TRAIL y los agonistas de TRAIL, tales como los anticuerpos humanizados HGS-ETR1 y HGS-ETR2; o en combinación o de manera secuencial con la terapia de radiación. 93. - El uso del compuesto de cualquiera de las reivindicaciones de 1 a 71 en combinación con un agonista del receptor de muerte para la fabricación de un medicamento útil para el tratamiento o prevención de un trastorno proliferativo en un sujeto. 94. - El uso que se reclama en la reivindicación 93, donde el agonista del receptor de muerte es TRAIL. 95. - El uso que se reclama en la reivindicación 93, donde el agonista del receptor de muerte es el anticuerpo TRAIL. 96. - El uso que se reclama en reivindicación 93, donde el agonista del receptor de muerte se encuentra en una cantidad que produce un efecto sinérgico. 97. - El uso que se reclama en las reivindicaciones 92 ó 93, en donde el estado del trastorno proliferativo es cáncer. 98. - Una composición farmacéutica útil para el tratamiento de un estado de enfermedad caracterizado por apoptosis insuficiente que comprende el compuesto de cualquiera las reivindicaciones 1 a 71 , mezclado con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable. 99. - Una composición farmacéutica útil para la prevención o tratamiento de un trastorno proliferativo que comprende el compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 71 en combinación con cualquier compuesto que aumente el nivel circulante de uno o más agonistas de los receptores de muerte. 100. - Un método para la preparación de una composición farmacéutica, el método comprende: mezclar el compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 71 , con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable. 101.- Un compuesto intermedio representado por la fórmula 19- donde PG1, PG2, L y X son tal como se definen en la presente. 102.- Un compuesto intermedio representado por la fórmula 20- donde PG1, L, X, X1, R4 y R5 son tal como se definen en la presente. 103.- Un método para la preparación de una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de la fórmula I y II, por el tratamiento de un compuesto de fórmula I o II con 1 a 2 equivalentes de un ácido farmacéuticamente aceptable, como se define en la presente.
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