CN101443309B - Iap bir域结合化合物 - Google Patents
Iap bir域结合化合物 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101443309B CN101443309B CN200780017496.1A CN200780017496A CN101443309B CN 101443309 B CN101443309 B CN 101443309B CN 200780017496 A CN200780017496 A CN 200780017496A CN 101443309 B CN101443309 B CN 101443309B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- compound
- alkyl
- aryl
- formula
- randomly
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 0 C[C@](C1)CN(C([C@](*)NC(CN**)O)O)[C@@]1C=O Chemical compound C[C@](C1)CN(C([C@](*)NC(CN**)O)O)[C@@]1C=O 0.000 description 14
- GXHUUCMRPQSTDP-QMMMGPOBSA-N CC(C)(C)OC(N(CC(C1)=N)[C@@H]1C(OC)=O)=O Chemical compound CC(C)(C)OC(N(CC(C1)=N)[C@@H]1C(OC)=O)=O GXHUUCMRPQSTDP-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- FWSUCSZYLAGUIN-OBONEKDKSA-N CC([C@@H](C(N1[C@H](CN(CCc2ccccc2)C(c2ccccc2)=O)CCC1)=O)NC([C@H](C)N(C)C(OC(C)(C)C)=O)=O)OCC#C Chemical compound CC([C@@H](C(N1[C@H](CN(CCc2ccccc2)C(c2ccccc2)=O)CCC1)=O)NC([C@H](C)N(C)C(OC(C)(C)C)=O)=O)OCC#C FWSUCSZYLAGUIN-OBONEKDKSA-N 0.000 description 1
- ULIMZYAYESNNIP-SECBINFHSA-N CN[C@H](CO)c1ccccc1 Chemical compound CN[C@H](CO)c1ccccc1 ULIMZYAYESNNIP-SECBINFHSA-N 0.000 description 1
- VXKLNNSMYBTFNY-PBBYBOOSSA-N COC([C@H](C1)NC[C@H]1NC(c(cc1)ccc1C(NC(C1)CN[C@@H]1C(OC)=O)=O)=O)=O Chemical compound COC([C@H](C1)NC[C@H]1NC(c(cc1)ccc1C(NC(C1)CN[C@@H]1C(OC)=O)=O)=O)=O VXKLNNSMYBTFNY-PBBYBOOSSA-N 0.000 description 1
- IVSZLXZYQVIEFR-UHFFFAOYSA-N Cc1cc(C)ccc1 Chemical compound Cc1cc(C)ccc1 IVSZLXZYQVIEFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IIHYPCXSYGAYOC-UHFFFAOYSA-N NC1c2ccccc2C2C=CC=CC12 Chemical compound NC1c2ccccc2C2C=CC=CC12 IIHYPCXSYGAYOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JRZGPXSSNPTNMA-JTQLQIEISA-N N[C@@H](CCC1)c2c1cccc2 Chemical compound N[C@@H](CCC1)c2c1cccc2 JRZGPXSSNPTNMA-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- LXEJRKJRKIFVNY-UHFFFAOYSA-N O=C(c(cc1)ccc1C(Cl)=O)Cl Chemical compound O=C(c(cc1)ccc1C(Cl)=O)Cl LXEJRKJRKIFVNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XHLHPRDBBAGVEG-UHFFFAOYSA-N O=C1c2ccccc2CCC1 Chemical compound O=C1c2ccccc2CCC1 XHLHPRDBBAGVEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XRJBPNFIFCQUIF-GHNGSUTGSA-N OC[C@@H](c1ccccc1)/N=C(\CCC1)/c2c1cccc2 Chemical compound OC[C@@H](c1ccccc1)/N=C(\CCC1)/c2c1cccc2 XRJBPNFIFCQUIF-GHNGSUTGSA-N 0.000 description 1
- JNEDUSBNXZRKFL-ROUUACIJSA-N OC[C@@H](c1ccccc1)N[C@@H]1c2ccccc2CCC1 Chemical compound OC[C@@H](c1ccccc1)N[C@@H]1c2ccccc2CCC1 JNEDUSBNXZRKFL-ROUUACIJSA-N 0.000 description 1
- AFLKFBZAJYHMQN-UHFFFAOYSA-N SNC(c1ccccc1)c1ccccc1 Chemical compound SNC(c1ccccc1)c1ccccc1 AFLKFBZAJYHMQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了式I或II代表的化合物的异构体、对映异构体、非对映异构体或互变异构体或其盐,其中R1、R2、R3、R100、R200、R300、A、A1、BG、Q和Q1为文中所描述的取代基。本发明还公开了式I和II的化合物在治疗增殖性疾病如癌症中的应用。
Description
技术领域
本发明涉及可与IAP BIR域结合的桥连的化合物,其可用于治疗增殖性疾病和凋亡失调的疾病如癌症。
背景技术
凋亡(或者程序性细胞死亡)通常发生于多细胞器官中健康组织的正常发育和维持。其为复杂的过程,导致除去损坏的、患病的或者发育上多余的细胞,而不会出现炎症或者坏死的迹象。
已知特别是在癌症和淋巴增殖综合症(lymphoproliferative syndromes)以及自身免疫性疾病如多发性硬化中、在神经退化性疾病和在炎症中的内源性凋亡途径是失调的。同样,已经有关于病毒和细菌感染的发展或者维持中主体凋亡反应的变化的记载。
胱天蛋白酶为来自半胱氨酸蛋白酶的蛋白水解酶家族,已知其引发并执行凋亡。在正常细胞中,胱天蛋白酶作为无活性酶原存在,其被例如那些由配体驱动的死亡受体活化导致的外部信号如细胞因子或免疫活性剂(immunological agent)活化,或被线粒体因子如在基因毒性、化学毒性或放射诱导的细胞损伤后的细胞色素C的释放活化。凋亡蛋白抑制剂(Inhibitors of Apoptosis Proteins,IAPs)构成能够结合至并抑制胱天蛋白酶活性从而抑制细胞凋亡的蛋白家族。由于它们在调节胱天蛋白酶活性中的核心作用,IAP能够抑制源自各种诱因包括丧失内稳态(homeostatic)或者内源性细胞生长控制机制以及化疗药物和照射的程序性细胞死亡。
IAP包括一个至三个被称为杆状病毒重复(baculovirus IAP repeat,BIR)域的同源结构域。它们也可在C-端包含具有通过其E3连接酶功能诱导IAP-结合分子遍在蛋白化(ubiquitinylation)能力的RING锌指域。人类IAPs——XIAP、HIAP1(也称作cIAP2)以及HIAP2(cIAP1)分别具有三个BIR域,以及羧基端RING锌指。另一种IAP——NAIP具有三个BIR域(BIR1、BIR2和BIR3),但无RING域,而Livin、TsIAP和MLIAP具有一个BIR域和RING域。X染色体-连接的凋亡抑制剂(Xchromosome-linked inhibitor of apoptosis,XIAP)为可以通过直接结合抑制称作胱天蛋白酶-9的起始物胱天蛋白酶以及效应物胱天蛋白酶胱天蛋白酶-3和胱天蛋白酶-7的IAP的实例。其通过RING锌指域的E3连接酶活性还可诱导胱天蛋白酶通过遍在蛋白化-介导的蛋白酶体途径的除去。XIAP是通过BIR3域与胱天蛋白酶-9结合并抑制胱天蛋白 酶-9的。XIAP的接头-BIR2域抑制胱天蛋白酶-3和胱天蛋白酶-7的活性。BIR域还与IAP与肿瘤坏死因子-受体相关因子(tumor necrosis factor-receptor associated factor,TRAF)-1和-2的相互作用有关,并且对于TAB1作为通过NFkB活化实现生存信号传导的适配子蛋白。IAP通过阻止胱天蛋白酶的作用或者抑制活性胱天蛋白酶以及通过将细胞信号传导重定向至促生存模式(pro-survival mode)从而起凋亡级联的直接制动器的作用。
癌症领域的进展使得癌症生物学中出现了新的范例,其中瘤形成被看做癌症细胞不能执行正常的凋亡途径。正常的细胞通过各种细胞内和细胞外因子从其环境接受连续的反馈,并且如果从该背景移除则会“自杀”。该凋亡通过胱天蛋白酶级联的活化诱导。然而,癌细胞获得了克服或者绕开该凋亡调整的能力并继续不当地增殖。癌症的大多数治疗在癌症靶细胞中诱导至少部分的凋亡应答,使得癌症好转或者肿瘤开始消退。然而在许多情况下,残余的抗凋亡的细胞能够逃脱治疗并继续致癌/遗传改变的进程,导致出现我们无法有效治疗的高度耐药性、转移性疾病。此外,多数癌症疗法包括放疗和常规化疗在癌细胞中诱导凋亡,但由于其缺乏仅在癌细胞中诱导凋亡的特异性从而导致额外的细胞损伤。由于具有降低与给药这些药物相关的副作用的益处,因此非常需要改善用于治疗癌症以及甚至其他增殖性疾病的促凋亡剂(pro-apoptosis agents)的特异性/功效。因此,非常需要找到新的诱导癌细胞凋亡的医疗方法,并且该问题的解决会提供可能的治疗癌症的全新方法。
越来越多的数据表明,癌细胞可能通过持续地过表达IAP蛋白家族的一个或多个成员而避免凋亡,如在许多原发肿瘤活组织检查样品以及许多经确认的癌细胞系中所证实。流行病学研究证明,各种IAP的过表达与临床预后和存活不佳有关。对于XIAP,其存在于白血病和卵巢癌等各种癌症中。HIAP1和HIAP2过表达源于11q21-q23区域的频繁染色体扩增(其涵盖两者),已经在各种恶性肿瘤包括髓母细胞瘤、肾细胞癌、成胶质细胞瘤以及胃癌中观察到上述过表达。(X)IAP负调节分子如XAF似乎是肿瘤抑制剂,其通常在临床癌症中消失。因此,通过其抑制凋亡内在介体胱天蛋白酶的活化和执行,IAPs可直接地促进肿瘤进展和对药物介入的抗性。本发明的主题是通过使用能够与特定的IAP域结合的有效的小分子在癌细胞中诱导凋亡。
已经证明了单独的BIR域对于影响IAP的抗凋亡功能极为重要。我们提出,可与单独的BIR域结合的IAP拮抗剂将干扰IAP的抗凋亡功能。事实上,单独的BIR分别充当胱天蛋白酶3、7和9的N-端Ser-Gly-Val-Asp、Ser-Gly-Pro-Ile和Ala-Thre-Pro-Ile残基的关键结合位点,并且这些结合对于IAP的胱天蛋白酶抑制功能是绝对必要的。N-端AxPy四肽残基与XIAP的结合导致活性胱天蛋白酶3、7和9的释放。在其他IAP如c-IAP1和c-IAP2的情况下,当与配体结合时BIR的功能似乎将IAP的遍在蛋白连接 酶RING功能的活化指向结合的标靶、或单独的IAP本身,而导致蛋白体缺失(proteosomal loss)。在任一种情况下,IAP的小分子拮抗剂均应当为具有可用于癌症、各种增殖性疾病和炎症的前景的优异的促凋亡剂。
哺乳动物线粒体蛋白,即拮抗IAP功能的胱天蛋白酶的第二线粒体衍生的活化物(Second Mitochondria-derived Activator of Caspases,SMAC)主要通过AxPy氨基末端四肽与各IAP上的BIR3或2位点结合。四种能够拮抗果蝇IAP抑制胱天蛋白酶的能力的死亡诱导蛋白Reaper、HID、Grim和Sickle还能够通过短AxPy氨基末端四肽与类似的果蝇IAP的BIR域结合,所述四肽为适合BIR结合袋并且干扰IAP-胱天蛋白酶相互作用的序列。
单独的BIR域的整体拓扑结构在人IAP之间以及在人IAP的单独的BIR域之间是高度保守的,各BIR均为锌手指多肽域,并被锁入与两个半胱氨酸和一个组氨酸残基配位的锌原子。XIAP BIR2和BIR3的X-射线结晶结构揭示了各BIR域表面的AXPY基序的关键的结合袋。在形成BIR2和BIR3中的结合袋和沟的居间氨基酸序列中存在变化。同样,我们已经描述了其他IAP cIAP1以及cIAP2的BIR中的同源性域。这使得有可能获得各种天然以及合成的结合化合物,对于各IAP而言,这些化合物在各BIR域之间将具有不同的特异性和结合亲和力。分辨出这些化合物将以何种方式影响癌细胞以及正常细胞中IAP的生物学功能是发现用于治疗癌症和其中存在IAP功能失调的其他增殖性疾病的新机制药物的主要的新挑战。我们发现,某些BIR结合化合物可以出人意料的选择性和效力与IAP BIR结合,从而对某些结构种类具有明确的治疗价值,该治疗价值可能源于IAP丧失功能或者细胞IAP蛋白的丧失,或者两者的结合。
已经记载许多肽类AxPy样化合物和杂环修饰的AxPy肽类化合物,据报道这些化合物通过与XIAP BIR3结合而活化细胞胱天蛋白酶3。最近的一些综述可参见Elmore等,Annual Reports in Medicinal Chemistry,40(2006)245-262;Sun等,Bioorg.Med.Chem.Let.15(2005)793-797;Oost等,J.Med.Chem.,2004,47(18),4417-4426;Park等,Bioorg.Med.Chem.Lett.15(2005)771-775;Franklin等,Biochemistry,Vol.42,No.27,2003,8223-8231;Kip等,Biochemistry2002,41,7344-7349;Wu等,Chemistry and Biology,Vol.10,759-767(2003);Glover等,Analytical Biochemistry,320(2003)157-169;美国第20020177557号专利申请公开;以及美国第20040180828号专利申请公开;美国第US2006/0025347A1号专利申请公开;美国第US2005/0197403A1号专利申请公开;以及美国第US2006/0194741A1号专利申请公开。
已经通过置换荧光标记的探针证实前述化合物靶向于XIAP的孤立的BIR3域,并且它们似乎能在所选的一组癌细胞系中诱导凋亡事件,并且在低至微摩尔至纳摩尔的范 围内具有效力。这些化合物显示出可能源于有限的生物利用度的低体内活性,并可能从而具有有限的治疗应用。
因此,IAP BIR域代表了发现和开发特别是用于治疗增殖性疾病如癌症的新治疗药物的引人注目的标靶。
发明内容
本发明的发明人先前曾公开一系列与IAP的BIR单元结合并在各种癌细胞系中诱导凋亡的化合物(第20060264379号美国专利申请公开)。这些化合物的特征在于存在中心吡咯烷单元。我们现在于此公开,两个BIR构建单元通过取代的吡咯烷连接,其对于所述连接的位点、定向和化学性质具有偏好,提供了一类新颖且明显有利的化合物,这些化合物针对各种癌细胞系的源自诱导凋亡的功效相对于与它们对应的未桥连的BIR结合化合物最多提高1000倍,并且这些化合物显示用于治疗人类癌症所必需的功效、稳定性和制药学性质。有利地,所述桥连基团的化学性质可经选择以导致所述高度内在(亚纳摩尔)的细胞效力翻译为在若干人类癌症体内异种移植物模型中抑制和/或压制IAP的微克/kg效力。此外,所述化合物在一系列哺乳动物组织及体液具有药物学可接受的稳定性并且具有能够确保在使用各种适于临床应用的给药途径时具有足够的溶解度和生物利用度的药物学性质。这种给药在哺乳动物中产生在正常组织和肿瘤组织中检测到的持续的体内作用。
在本发明的一个实施方案中,提供了通式I或II所代表的化合物的异构体、对映异构体、非对映异构体或互变异构体,或者前药,或者用可检测的标记或者亲和标签标记的式I或II的化合物:
其中
m为0、1或2;
Y为NH、O或S;
BG为
1)-X-L-X1-;
X and X1独立地选自
1)O,
2)NR13,
3)S,
4)-C1-C6烷基-,
5)-C1-C6烷基-O-,
6)-C1-C6烷基-NR13-,
7)-C1-C6烷基-S-,
10)
L选自:
1)-C1-C20烷基-,
2)-C2-C6烯基-,
3)-C2-C4炔基-,
4)-C3-C7环烷基-,
5)-芳基-,
6)-联苯基-,
7)-杂芳基-,
8)-杂环基-,
9)-C1-C6烷基-(C2-C6烯基)-C1-C6烷基-,
10)-C1-C6烷基-(C2-C4炔基)-C1-C6烷基-
11)-C1-C6烷基-(C3-C7环烷基)-C1-C6烷基-,
12)-C1-C6烷基-芳基-C1-C6烷基-,
13)-C1-C6烷基-联苯基-C1-C6烷基-,
14)-C1-C6烷基-杂芳基-C1-C6烷基-,
15)-C1-C6烷基-杂环基-C1-C6烷基-,
16)-C1-C6烷基-Y-C1-C6烷基-,
17)-芳基-Y-芳基-,
18)-杂芳基-Y-杂芳基-,
19)-杂环基-Y-杂环基-,
其中所述烷基、烯基、炔基以及环烷基任选地被一个或多个R6取代基取代,以及所述芳基、联苯基、杂芳基以及杂环基任选地被一个或多个R10取代基取代;
Q以及Q1独立地选自
1)NR4R5,
2)OR11,或
3)S(O)mR11;或
Q以及Q1独立地选自
1)芳基,或
2)杂芳基,所述芳基以及所述杂芳基任选地被一个或多个R10取代基取代;
A以及A1独立地选自
1)-CH2-,
2)-CH2CH2-,
3)-CH(C1-C6烷基)-,
4)-CH(C3-C7环烷基)-,
5)-C3-C7环烷基-,
6)-CH(C1-C6烷基-C3-C7环烷基)-,
7)-C(O)-,或
8)-C(O)OR13;
R1以及R100独立地选自
1)H,或
2)C1-C6烷基任选地被一个或多个R6取代基取代;
R2以及R200独立地选自
1)H,或
2)C1-C6烷基任选地被一个或多个R6取代基取代;
R3以及R300独立地为任选地被一个或多个R6取代基取代的C1-C6烷基;
R4以及R5分别独立地选自
1)H,
2)卤代烷基,
3)←C1-C6烷基,
4)←C2-C6烯基,
5)←C2-C4炔基,
6)←C3-C7环烷基,
7)←C3-C7环烯基,
8)←芳基,
9)←杂芳基,
10)←杂环基,
11)←杂双环基,
12)←C(O)-R11,
13)←C(O)O-R11,
14)←C(=Y)NR8R9,或
15)←S(O)2-R11,
其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基任选地被一个或多个R6取代基取代;并且其中所述芳基、杂芳基、杂环基以及杂双环基任选地被一个或多个R10取代基取代;
R6为
1)卤素,
2)NO2,
3)CN,
4)卤代烷基,
5)C1-C6烷基,
6)C2-C6烯基,
7)C2-C4炔基,
8)C3-C7环烷基,
9)C3-C7环烯基,
10)芳基,
11)杂芳基,
12)杂环基,
13)杂双环基,
14)OR7,
15)S(O)mR7,
16)NR8R9,
17)NR8S(O)2R11,
18)COR7,
19)C(O)OR7,
20)CONR8R9,
21)S(O)2NR8R9
22)OC(O)R7,
23)OC(O)Y-R11,
24)SC(O)R7,或
25)NC(Y)NR8R9,
其中所述芳基、杂芳基、杂环基以及杂双环基任选地被一个或多个R10取代基取代;
R7为
1)H,
2)卤代烷基,
3)C1-C6烷基,
4)C2-C6烯基,
5)C2-C4炔基,
6)C3-C7环烷基,
7)C3-C7环烯基,
8)芳基,
9)杂芳基,
10)杂环基,
11)杂双环基,
12)R8R9NC(=Y),或
13)C1-C6烷基-C2-C4烯基,或
14)C1-C6烷基-C2-C4炔基,
其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基任选地被一个或多个R6取代基取代;并且其中所述芳基、杂芳基、杂环基、以及杂双环基任选地被一个或多个R10取代基取代;
R8以及R9分别独立地为
1)H,
2)卤代烷基,
3)C1-C6烷基,
4)C2-C6烯基,
5)C2-C4炔基,
6)C3-C7环烷基,
7)C3-C7环烯基,
8)芳基,
9)杂芳基,
10)杂环基,
11)杂双环基,
12)C(O)R11,
13)C(O)Y-R11,或
14)S(O)2-R11,
其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基任选地被一个或多个R6取代基取代;并且其中所述芳基、杂芳基、杂环基、以及杂双环基任选地被一个或多个R10取代基取代;
或者R8和R9与它们所连接的氮原子一同形成任选地被一个或多个R6取代基取代的五元、六元或七元杂环;
R10为
1)卤素,
2)NO2,
3)CN,
4)B(OR13)(OR14),
5)C1-C6烷基,
6)C2-C6烯基,
7)C2-C4炔基,
8)C3-C7环烷基,
9)C3-C7环烯基,
10)卤代烷基,
11)OR7,
12)NR8R9,
13)SR7,
14)COR7,
15)C(O)OR7,
16)S(O)mR7,
17)CONR8R9,
18)S(O)2NR8R9,
19)芳基,
20)杂芳基,
21)杂环基,或
22)杂双环基,
其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、以及环烯基任选地被一个或多个R6取代基取代;
R11为
1)卤代烷基,
2)C1-C6烷基,
3)C2-C6烯基,
4)C2-C4炔基,
5)C3-C7环烷基,
6)C3-C7环烯基,
7)芳基,
8)杂芳基,
9)杂环基,或
10)杂双环基,
其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基任选地被一个或多个R6取代基取代;并且其中所述芳基、杂芳基、杂环基、以及杂双环基任选地被一个或多个R10取代基取代;
R12为
1)卤代烷基,
2)C1-C6烷基,
3)C2-C6烯基,
4)C2-C4炔基,
5)C3-C7环烷基,
6)C3-C7环烯基,
7)芳基,
8)杂芳基,
9)杂环基,
10)杂双环基,
11)C(O)-R11,
12)C(O)O-R11,
13)C(O)NR8R9,
14)S(O)m-R11,或
15)C(=Y)NR8R9,
其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基任选地被一个或多个R6取代基取代;并且其中所述芳基、杂芳基、杂环基、以及杂双环基任选地被一个或多个R10取代基取代;
R13以及R14分别独立地为
1)H,或
2)C1-C6烷基;或
R13以及R14结合形成杂环或杂双环;
R20为
1)H,
2)NH2,或
3)NHFmoc。
在本发明的另一方面中提供了式1-iv代表的中间体化合物:
其中PG3、R1、R2、R3、R4、以及R5如此处所定义。
在本发明的另一方面中提供了式2-iv代表的中间体化合物:
其中PG4、R1、R2、R3、R4、以及R5如此处所定义。
在本发明的另一方面中提供了式3-ii代表的中间体化合物:
其中PG4、R1、R2、R3、A、以及Q如此处所定义,并且L为-(CH2)r-、-(CH2)r-Y-(CH2)r-、-烷基-芳基-烷基-、-烷基-杂芳基-烷基-、环烷基、芳基或杂芳基。
在本发明的另一方面中提供了式4(i)代表的中间体化合物:
其中PG4、PG400、L、R1、R100、R2、R200、R3、R300、A、A1、Q以及Q1如此处所定义。
在本发明的另一方面中提供了式6-ii代表的中间体化合物:
其中PG4、PG400、R1、R100、R2、R200、R3、R300、A、A1、Q以及Q1如此处所定义。
在本发明的另一方面中提供了式7-v代表的中间体化合物:
其中PG4、PG400、L、R1、R100、R2、R200、R3、R300、A、A1、Q以及Q1如此处所定义。
在本发明的另一方面中提供了式8-ii代表的中间体化合物:
其中PG4、r、L、R100、R200、A1、以及Q1如此处所定义。
在本发明的另一方面中提供了式8-iii代表的中间体化合物:
其中PG4、r、L、R1、R100、R2、R200、R3、A、A1、Q以及Q1如此处所定义。
在本发明的另一方面中提供了式17-i代表的中间体化合物:
其中PG4、L、R1、R100、R2、R200、R3、R300、A、A1、Q以及Q1如此处所定义。
在本发明的另一方面中提供了式18-i代表的中间体化合物:
其中PG4、L、R1、R100、R2、R200、R3、R300、A、A1、Q以及Q1如此处所定义。
在本发明的另一方面中提供了式19-2代表的中间体化合物:
其中PG1、PG2、L、X如此处所定义。
在本发明的另一方面中提供了式19-3代表的中间体化合物:
其中PG2、L、以及X、如此处所定义。
在本发明的另一方面中提供了式19-8代表的中间体化合物:
其中PG4、L、X、X1、R1、R100、R2、R200、R3、R300、R4、R400、R5以及R500如此处所定义。
在本发明的另一方面中提供了式20-1a代表的中间体化合物:
其中PG1、L、X、X1、R4以及R5如此处所定义。
在本发明的另一方面中提供了式20-2代表的中间体化合物:
其中PG4、L、X、以及X1、如此处所定义。
在本发明的另一方面中提供了式20-4代表的中间体化合物:
其中PG4、L、X、X1、R1、R100、R2、R200、R3、R300、R4、R400、R5、以及R500如此处所定义。
本发明的另一方面提供制备本文前述式I所代表的化合物的方法,所述方法包括:a)将由式1-iv所代表的两中间体在溶剂中偶联:
其中PG3、R1、R2、R3、A、以及Q如此处所定义;以及
b)除去保护基从而形成式1的化合物。
本发明的另一方面提供制备如本文前述的式I所代表的化合物的方法,所述方法包括:
a)将由式2-iv代表的中间体与活化的二酸(0.5当量)在溶剂中偶联:
其中PG4为保护基,并且R1、R2、R3、A、以及Q如此处所定义;以及
b)除去保护基从而形成式I的化合物。
本发明的另一方面提供通过用1至2当量如此处定义的药物学可接受的酸处理式I或II的化合物而制备式I和II化合物的药物学可接受的盐的方法。
本发明的另一方面提供药物组合物,其包含与药物学可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合的如前所述的化合物。
本发明的另一方面提供适于作为用于治疗对象中增殖性疾病的药物给药的药物组合物,其包含治疗有效量的如前所述的化合物。
本发明的另一方面提供药物组合物,其包含式I的化合物与一种或多种死亡受体激动剂例如TRAIL受体激动剂的组合。
本发明的另一方面提供药物组合物,其包含式I的化合物与能够增加一种或多种死亡受体激动剂的响应的任何治疗剂例如细胞因子(如各种干扰素)的组合。
本发明的另一方面提供制备药物组合物的方法,所述方法包括将如前所述的化合物与药物学可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合。
本发明另一方面提供用于治疗以凋亡不足为特征的疾病的方法,所述方法包括:向有此需要的对象给药治疗有效量的如前所述的药物组合物以治疗所述疾病。
本发明另一方面提供用于调节IAP功能的方法,所述方法包括:将细胞与本发明的化合物接触以防止BIR结合蛋白与IAPBIR域结合,从而调节IAP功能。
本发明另一方面提供用于治疗增殖性疾病的方法,所述方法包括:向有此需要的对象给药治疗有效量的如前所述的药物组合物以治疗所述增殖性疾病。
本发明另一方面提供用于治疗癌症的方法,所述方法包括:向有此需要的对象给药治疗有效量的如前所述的药物组合物以治疗癌症。
本发明另一个方面提供了用于治疗癌症的方法,所述方法包括:向有此需要的对象与选自下列的药物组合或者顺序地给药或者与放疗组合或者顺序地给予治疗有效量的如前所述的药物组合物从而治疗癌症:
a)雌激素受体调节剂,
b)雄激素受体调节剂,
c)类视黄醇受体调节剂,
d)细胞毒性剂,
e)抗增殖剂,
f)异戊二烯基-蛋白质转移酶抑制剂,
g)HMG-CoA还原酶抑制剂,
h)HIV蛋白酶抑制剂,
i)逆转录酶抑制剂,
k)血管发生抑制剂,
l)PPAR-γ激动剂,
m)PPAR-δ激动剂,
n)固有耐药性(inherent multidrug resistance)抑制剂,
o)止吐剂,
p)可用于治疗贫血的药物,
q)可用于治疗嗜中性白血球减少症(neutropenia)的药物,
r)免疫促进剂,
s)蛋白酶体抑制剂,
t)HDAC抑制剂,
u)蛋白酶体中化学胰蛋白酶样活性的抑制剂,或蛋白酶体中化学胰蛋白酶样活性的抑制剂,或
v)E3连接酶抑制剂,
w)免疫系统调节剂例如但不限于干扰素-α、卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin,BCG)、以及能够诱导细胞因子如各种干扰素、TNF释放或诱导死亡受体配体如TRAIL释放的电离辐射(UVB),
x)死亡受体TRAIL调节剂和和TRAIL激动剂如人源化抗体HGS-ETR1和HGS-ETR2。
本发明另一方面提供用于治疗或预防对象的增殖性疾病的方法,所述方法包括:向对象给药治疗有效量的如前所述的组合物。
在本发明的另一方面中,所述方法进一步包括在给药所述组合物之前、同时或者之后向所述对象给药治疗有效量的化疗剂。
在本发明的另一方面中,所述方法进一步包括在给药所述组合物之前、同时或者之后向所述对象给药治疗有效量的死亡受体激动剂。所述死亡受体激动剂为TRAIL或者所述死亡受体激动剂为TRAIL抗体。所述死亡受体激动剂通常以产生协同作用的量给药。
本发明另一方面提供如前所述的化合物在制备用于治疗或预防以凋亡不足为特征的疾病的药物中的应用。
本发明另一方面提供如前所述的化合物在制备用于治疗或预防增殖性疾病的药物中的应用。
本发明另一方面提供如前所述的化合物与选自以下的药物的组合在制备用于治疗或预防增殖性疾病的药物中的应用:
a)雌激素受体调节剂,
b)雄激素受体调节剂,
c)类视黄醇受体调节剂,
d)细胞毒性剂,
e)抗增殖剂,
f)异戊二烯基-蛋白质转移酶抑制剂,
g)HMG-CoA还原酶抑制剂,
h)HIV蛋白酶抑制剂,
i)逆转录酶抑制剂,
k)血管发生抑制剂,
l)PPAR-γ激动剂,
m)PPAR-δ激动剂,
n)固有的多抗药性的抑制剂,
o)止吐剂,
p)可用于治疗贫血的药物,
q)可用于治疗嗜中性白血球减少症的药物,
r)免疫促进剂,
s)蛋白酶体抑制剂,
t)HDAC抑制剂,
u)蛋白酶体中化学胰蛋白酶样活性的抑制剂,或
v)E3连接酶抑制剂,
w)免疫系统调节剂例如但不限于干扰素-α、卡介苗(BCG)、以及能够诱导细胞因子如各种干扰素、TNF释放或诱导死亡受体配体如TRAIL释放的电离辐射(UVB),x)死亡受体TRAIL调节剂和和TRAIL激动剂如人源化抗体HGS-ETR1和HGS-ETR2;
或者所述化合物与放疗组合或顺序地进行放疗。
本发明的另一方面提供如前所述的化合物与死亡受体激动剂的组合在制备用于治疗或预防对象中的增殖性疾病的药物中的应用。
本发明的另一方面提供用于治疗或预防以凋亡不足为特征的疾病的药物组合物,其包含与药物学可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合的如前所述的化合物。
本发明的另一方面提供用于预防或治疗增殖性疾病的药物组合物,其包含与能够增加一种或多种死亡受体激动剂的循环水平的任何化合物组合的如前所述的化合物。
本发明的另一方面提供用于制备药物组合物的方法,所述方法包括:将如前所述的化合物与药物学可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合。
本发明的另一方面提供探针,所述探针为前述式I或II的化合物,所述化合物用可检测的标记或亲和标签标记。
本发明的另一方面提供鉴定能够与IAP BIR域结合的化合物的方法,所述试验方法包括:
a)将IAP BIR域与探针接触形成探针:BIR域复合物,所述探针可被受试化合物代替;
b)测量探针的信号以建立参考水平;
c)将所述探针:BIR域复合物与受试化合物温育;
d)测量探针的信号;
e)将步骤d)的信号与参考水平相比,信号的调节提示所述受试化合物与BIR域结合,
其中所述探针是用可检测的标记或亲和标签标记的式I或II的化合物。
本发明的另一方面提供用于检测体内IAP功能损失或抑制(suppression)的方法,所述方法包括:a)向对象给药治疗有效量的如前所述的药物组合物;b)从所述对象分离组织样品;以及c)由所述样品接侧IAP的功能损失或抑制。
附图说明
结合以下附图参考说明书将对本发明的其他方面以及优点具有更深的理解:
图1所示为以化合物3进行的SKOV-3人卵巢癌细胞系异种移植试验(XenographStudy)。在右肋部皮下向雌性CD-1裸鼠(约20-25g)皮下注射5×106在50%matrigel中的SKOV-3人卵巢癌细胞。在第55天,当肿瘤约100mm3时,开始用化合物3治疗,在试验期间用化合物治疗连续5天,然后停止药物治疗2天。用数字测径器测量肿瘤大小并按照V=(a×b2)/2计算,其中a为最长尺寸,b为宽度。在1mg/kg观察到肿瘤消退,而在0.3mg/kg观察到肿瘤停滞。
图2所示为以化合物3进行的MDA-MB-231人乳癌细胞系异种移植试验。向雌性CD-1裸鼠(约20-25g)右肋皮下注射1×106MDA-MB-231人乳癌肿瘤细胞。在第71天,当肿瘤约90mm3时,开始用化合物3治疗,在试验期间用化合物治疗连续5天,然后停止药物治疗2天。用数字测径器测量肿瘤大小并按照V=(a×b2)/2计算,其中a为最长尺寸,b为宽度。在1mg/kg观察到肿瘤消退。
图3显示化合物3在体外诱导HCT-116细胞中的cIAP-1的损失。用各种浓度的化合物3处理PC3、SKOV3、MDA-MB-231、HCT-116细胞,在37℃温育5小时。收集细胞并且用蛋白质印迹法检测cIAP-1的水平以及作用(加样对照未显示)。结果显示,化合物3以时间依赖性方式(未显示)诱导人癌细胞中cIAP-1的损失。使用如图3中所述的相似的方法,化合物3诱导了ES2和4T1细胞系(未显示)中c-IAP1的损失以及PC3细胞(未显示)中cIAP2的损失。
图4显示小鼠白细胞中IAP的体外调节。用各种浓度的化合物3将CD-1小鼠全血在体外温育3小时。通过Ficoll梯度自经处理的全血中分离白血细胞。自白血细胞中分离蛋白质,并用蛋白质印迹法呈现cIAP-1和微管蛋白(加样对照)的相对量。体外结果显示化合物3诱导小鼠血液中cIAP-1的损失。
图5显示小鼠白细胞中cIAP-1的体外调节。以所示的剂量通过静脉内推注将化合物3向CD-1小鼠给药。在1至48小时后牺牲动物,收集血液,以Ficoll梯度分离白细胞并提取蛋白质。用蛋白质印迹法呈现cIAP-1和微管蛋白(加样对照)的相对量(下面显示在3小时时间点)。使用先体外再体内检测方法,检测结果显示化合物3诱导小鼠白细胞中cIAP-1的下调。
图6所示为以化合物24(1mg/kg)进行的MDA-MB-231人乳癌细胞系异种移植试验。向雌性CD-1裸鼠(约20-25g)右肋皮下注射1×106在50%matrigel中的MDA-MB-231人乳癌肿瘤细胞。在第55天,当肿瘤约100mm3时,开始用化合物24治疗,在试验期间用化合物治疗连续5天,然后停止药物治疗2天。用数字测径器测量肿瘤大小并按照V=(a×b2)/2计算,其中a为最长尺寸,b为宽度。圈表示20%HPCD对照;菱形表示化合物24。
图7显示大鼠白细胞中cIAP-1的体外调节。通过静脉内推注给药化合物24。在1至48小时后收集血液,以Ficoll梯度分离白细胞并提取蛋白质。用蛋白质印迹法呈现cIAP-1和微管蛋白(加样对照)的相对量(下面显示在3小时时间点)。使用先体外再体内检测方法,检测结果显示化合物24诱导小鼠白细胞中cIAP-1的下调。
具体实施方式
在许多癌症和其他疾病中,已经发现由基因缺陷或者化疗药物诱导的IAP上调与对凋亡的抗性提高有关。相反,我们的结果显示,IAP水平下降的细胞对化疗药物以及对死亡受体激动剂如TRAIL更为敏感。据信,可拮抗IAP功能或者导致患病细胞中IAP损失的小分子将可用作治疗剂。我们在此处披露,本发明的化合物可直接与IAP结合,导致细胞中IAP蛋白的下调,并在癌细胞中诱导凋亡。此外,本发明的化合物显示出与用于治疗癌症的临床相关药物的组合具有协同作用。
我们发现了一系列新颖的桥连的化合物,它们与完好的细胞IAP结合并导致IAP蛋白大幅、持续下调,并且通过活性胱天蛋白酶3的增强的释放导致癌细胞的细胞凋亡增强。已经在源自人乳腺癌、胰腺癌、结肠癌、肺癌、卵巢癌的各种细胞系以及原代人白血病细胞和淋巴细胞中观察到该生物学响应。已发现该化合物在许多各种各样的癌细胞中与死亡受体激动剂介导的杀死如TRAIL、TRAIL受体单克隆抗体以及TNF-α具有高的协同作用。基于这些发现,所述化合物将可用于治疗多种癌症类型,如实体瘤和源自造血系统的肿瘤。并且,本发明的化合物还可用于预防转移癌细胞入侵、炎症、以及特征为其中细胞通过上调任一IAP而抵抗凋亡的其他疾病。如图3中所示,化合物3在小于10nM的浓度下能够诱导c-IAP1/2蛋白自多种肿瘤细胞系中完全消失。本发明的其他化合物已经显示具有以使IAP以时间依赖性方式自癌细胞中消失的相似的能力。该IAP蛋白的消失与在SKOV3细胞中的ED50强烈地相关。
在下文中详述的两个IAP BIR构建单元M1和M2的“桥连”使用合适的“桥连单元”,该“桥连单元”连接至吡咯烷环之一,提供了桥连的IAP BIR结合化合物,与它们的单体单元相比,其显示出显著提高的抗癌活性(10-1000倍)。该提高的活性源于与完好的IAP的BIR域的结合能力提高,并且导致在各种癌细胞系中诱导凋亡。
各种因素影响本发明化合物的体内促凋亡特征。具体而言,这些因素包括:i)连接基/吡咯烷键的连接点,ii)连接基/吡咯烷键处的立体化学,iii)连接基部分本身,包括连接基系统的立体化学、区位化学、以及刚性,iv)在R1和R100处的烷基取代基,以及v)在R4、R400、R5和R500处的取代模式。
为了便于描述,在对式I和式II的化合物的描述之中也可包括术语P1、P2、P3、P4和P5的应用。这些术语是指式I或II中的氨基酸或者经修饰的氨基酸。下图说明了所述术语的应用:
其中波浪线代表连接至另一BIR结合单元的共价键。
本发明化合物也可由式3或式4代表,其中M1和M2代表独立的BIR结合域。
其中R1、R2、R100、R200、R3、R300、R20、A、A1、Q、Q1、以及BG如此处所定义,并且所述点线代表用于比较与M1和M2关联的取代基的假想的分界线。
在式3的一个子集中,M1与M2相同,并且所述点线表示对称线。在另一个子集中,M1不同于M2。
在一个子集中,式4的化合物关于所述点线是不对称的。在另一个子集中,M1和M2上的取代基是相同的。在另一个子集中,M1和M2上的取代基是不同的。
本领域技术人员将意识到,当M1和M2相同时,M1中的R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R13、R14、r、m、Y、A、Q、和X取代基分别与M2中的R100、R200、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R13、R14、r、m、Y、A1、Q1、和X1取代基具有相同的含义。当M1和M2不同时,至少一个R1、R2、R100、R200、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R13、R14、r、m、Y、A、A1、Q、Q1、X、和X1取代基在M1或M2中是不同的。
或者,M1中的取代基可以分别定义为R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R13、R14、r、m、p、Y、A、Q、和X,而M2中的取代基可以分别定义为R100、R200、R400、R500、R600、R700、R800、R900、R1000、R1100、R1300、R1400、r1、m1、p1、Y1、A1、Q1和X1。在M1和M2相同的情况下,M1中的R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R13、R14、r、m、Y、A、Q、和X取代基分别与M2中的R100、R200、R400、R500、R600、R700、R800、R900、R1000、R1100、R1300、R1400、r1、m1、Y1、A1、Q1和X1具有相同的含义。在M1和M2不同的情况下,前述取代基中的至少一个是不同的。
本发明的化合物可用作哺乳动物IAP的BIR域结合化合物,并且由式I或式II代表。以下详述了式I和式II化合物的具体实施方案、各基团和取代基。
A和A1:
在式I或II化合物的一个子集中,A和A1均为CH2。
在式I或II化合物的另一个子集中、A和A1均为C=O。
在式I或II化合物的另一个子集中、A为CH2而A1为C=O。
在式I或II化合物的另一个子集中、A和A1均为C(O)OCH3。
在式I或II化合物的另一个子集中、A和A1均为C(O)OH。
此处给出的A和A1的任何和各个单独的定义均可与此处给出的核(Core)、R1、R2、R100、R200、R3、R300、Q、Q1、和BG的任何和各个单独的定义结合。
核:
因此,对于式I的化合物,本发明包括式1A至1C的化合物:
其中BG、A、A1、Q、Q1、R1、R100、R2、R200、R3、和R300如上文和下文中所定义。
在一个实例中,本发明包括式1A的化合物。
在另一个实例中,本发明包括式1B的化合物。
在另一个实例中,本发明包括式1C的化合物。
或者,式II的化合物包括式2A和2B的化合物:
其中BG、A、A1、Q、Q1、R1、R100、R2、R200R3、R300和R20如上文和下文中所定义。
在一个实例中,本发明包括式2A的化合物。
此处给出的核的任何和各个单独的定义均可与此处给出的A、A1、R1、R2、R100、R200、R3、R300、R20、Q、Q1、和BG的任何和各个单独的定义结合。BG:
在前述化合物的一个子集中,BG为-X-L-X1-。
在一个子集中,对于其中BG为-X-L-X1-的式I化合物,本发明包括式1a至1c的化合物:
其中L、X、X1、A、A1、Q、Q1、R1、R100、R2、R200、R3、和R300如上文和下文中所定义。
前述化合物的另一个子集包括式1.1a至1.1c的化合物:
其中L、X、X1、A、A1、R1、R100、R2、R200、R3、R300、R4、R400、R5和R500如上文和下文中所定义。
在一个子集中,对于其中的BG为-X-L-X1-的式II化合物,本发明包括式2a的化合物:
其中L、X。X1、A、A1、Q、Q1、R1、R100、R2、R200、R3和R20如上文和下文中所定义。
此处给出的BG的任何和各个单独的定义均可与此处给出的核、R1、R2、R100、R200、R3、R300、A、A1Q、和Q1的任何和各个单独的定义结合。
X和X1:
在前述化合物的一个子集中,X和X1独立地选自
1)O,
2)NR13,
3)S,
4)C1-C6烷基-O-,
5)C1-C6烷基,
8)
9)或
在一个实例中X和X1独立地选自:
1)O,
此处给出的X和X1的任何和各个单独的定义均可与此处给出的核、L、A、A1、R1、R2、R100、R200、R3、R300、R20、Q、Q1、和BG的任何和各个单独的定义结合。
L:
在前述化合物的一个子集中,L选自:
1)-C1-C20烷基-,
2)-C3-C7环烷基-,
3)-芳基-,
4)-联苯基-,
5)-杂芳基-,
6)-C1-C6烷基-(C2-C4炔基)-C1-C6烷基-
7)-C1-C6烷基-芳基-C1-C6烷基-,
8)-芳基-Y-芳基-,
其中所述烷基和环烷基任选地被一个或多个R6取代基取代,并且所述芳基、联苯基和杂芳基任选地被一个或多个R10取代基取代。
L的典型的实例包括
此处给出的L的任何和各个单独的定义均可与此处给出的核、A、A1、r、R1、R2、R100、R200、R3、R300、R20、X、X1、Q、或Q1的任何和各个单独的定义结合。
r:
在前述方面中,r为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10的整数。
此处给出的r的任何和各个单独的定义均可与此处给出的核、A、L、A1、R1、R2、R100、R200、R3、R300、R20、Q、Q1、X和X1的任何和各个单独的定义结合。
更明确地,本发明包括式1.1至1.18的化合物:
其中r、A、A1、Q、Q1、R1、R100、R2、R200、R3和R300如上文中所定义。
或者更明确地,本发明包括式2.1和2.2的化合物:
其中A、A1、Q、Q1、R1、R100、R2、R200、R3和R20如上文中所定义。
R1和R100:
在前述化合物的一个子集中R1和R100均为H。
在前述化合物的一个子集中R1和R100均为C1-C6烷基。
在一个实例中,R1和R100均为CH3。
此处给出的R1和R100的任何和各个单独的定义均可与此处给出的核、A、A1、R2、R200、R3、R300、Q、Q1、B、B1、和BG的任何和各个单独的定义结合。
R2和R200:
在前述化合物的一个子集中R2和R200均为任选地被OH取代的C1-C6烷基。
在一个实例中,R2和R200均为CH3。
在另一个实施中,R2为CH2OH而R300为CH3。
在另一个实施中,R2和R200均为CH2OH。
在另一个实施中、R2和R200均为CH2CH3。
此处给出的R2和R200的任何和各个单独的定义均可与此处给出的核、A、A1、R1、R100、R3、R300、Q、Q1、和BG的任何和各个单独的定义结合。
R3和R300:
在式I化合物的一个子集中,R3和R300均为C1-C6烷基。
在一个实例中,R3和R300均为C(CH3)3。
在式II化合物的一个子集中,R3为C1-C6烷基。在一个实例中,R3为C(CH3)3。
此处给出的R3和R300的任何和各个单独的定义均可与此处给出的核、A、A1、R1、R100、R2、R200、Q、Q1、和BG的任何和各个单独的定义结合。
Q和Q1:
在前述化合物的一个子集中,Q和Q1均为NR4R5,其中R4和R5如此处所定义。
此处给出的Q和Q1的任何和各个单独的定义均可与此处给出的核、A、A1、R1、R100、R2、R200、R3、R300和BG的任何和各个单独的定义结合。
R4和R5:
在其中A和A1均为C=O的前述化合物的一个子集中,R4为H并且R5选自
1)←C1-C6烷基
2)←C2-C6烯基,
3)←C2-C4炔基,
4)←C3-C7环烷基,
5)←C3-C7环烯基,
6)←芳基,
7)←杂芳基,
8)←杂环基,或
9)←杂双环基,
其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基任选地被一个或多个R6取代基取代;并且其中所述芳基、杂芳基、杂环基、和杂双环基任选地被一个或多个R10取代基取代;
其中R6和R10如此处所定义。
在上述化合物的另一个子集中,R4为H而R5选自:
1)←C1-C6烷基,或
2)←芳基,
其中所述烷基任选地被一个或两个R6取代基取代;并且其中所述芳基任选地被一个R10取代基取代;
其中R6和R10如此处所定义。
前述子集的实例包括,R4为H而R5选自以下组中:
在另一个实施中,Q和Q1均为
在另一个实施中,Q和Q1均为
在另一个实施中,Q和Q1均为
在其中A和A1均为CH2的前述化合物的另一个子集中,R4和R5分别独立地为
1)卤代烷基,
2)←C1-C6烷基,
3)←C2-C6烯基,
4)←C2-C4炔基,
5)←C3-C7环烷基,
6)←C3-C7环烯基,
7)←芳基,
8)←杂芳基,
9)←杂环基,
10)←杂双环基,
11)←C(O)-R11,
12)←C(O)O-R11,
13)←C(=Y)NR8R9,或
14)←S(O)2-R11,
其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基任选地被一个或多个R6取代基取代;并且其中所述芳基、杂芳基、杂环基、和杂双环基任选地被一个或多个R10取代基取代;
其中Y、R6、R8、R9、R10和R11如此处所定义。
在上述化合物的另一个子集中,R4和R5独立地选自
1)C1-C6烷基,
2)←C(O)-R11,
3)←C(O)O-R11,或
4)←S(O)2-R11,
其中所述烷基被R6取代基取代;
其中R6和R11如此处所定义。
此处所述的R4和R5的任何和各个单独的定义均可与此处给出的核、A、A1、R1、R100、R2、R200、R3、R300、和BG的任何和各个单独的定义结合。
R11:
在前述化合物的一个子集中,
R11为
1)C1-C6烷基,或
2)芳基,
其中所述烷基任选地被一个或多个R6取代基取代;并且其中所述芳基任选地被一个或多个R10取代基取代;
其中R6和R10如此处所定义。
在前述化合物的一个子集中,R11为
1)C1-C6烷基任选地被一个或两个R6取代基取代,或
2)任选地被一个R10取代基取代的苯基;
其中所述R6和R10取代基如此处所定义。
此处给出的R11的任何和各个单独的定义均可与此处给出的核、A、A1、R1、R100、R2、R200、R4、R5、R3、R300和BG的任何和各个单独的定义结合。
R6:
在前述化合物的一个子集中,R6为
1)卤素,
2)NO2,
3)CN,
4)芳基,
5)杂芳基,
6)杂环基,
7)杂双环基,
8)OR7,
9)SR7,或
10)NR8R9,
其中所述芳基、杂芳基、杂环基、和杂双环基任选地被一个或多个R10取代基取代;
其中R7、R8、R9和R10如此处所定义。
在前述化合物的另一个子集中,R6为
1)卤素,
2)芳基,或
3)NR8R9,
其中所述芳基任选地被一个R10取代基取代;
其中R8、R9和R10如此处所定义。
在前述化合物的一个子集中,R6为
1)卤素,
2)苯基,或
3)NR8R9,
其中所述苯基任选地被一个R10取代基取代;
其中R8和R9如此处所定义。
此处给出的R6的任何和各个单独的定义均可与此处给出的核、A、A1、R1、R100、R2、R200、R4、R5、R3、R300和BG的任何和各个单独的定义结合。
R8和R9:
在前述化合物的一个子集中,R8和R9分别独立地为
1)H,
2)卤代烷基,
3)C1-C6烷基,
4)C2-C6烯基,
5)C2-C4炔基,
6)C3-C7环烷基,或
7)C3-C7环烯基,
其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基任选地被一个或多个R6取代基取代;
其中所述R6取代基如此处所定义。
在前述化合物的另一个子集中,R8和R9分别独立地为
1)H,或
2)C1-C6烷基,
其中所述烷基任选地被芳基取代。
此处给出的R8和R9的任何和各个单独的定义均可与此处给出的核、A、A1、R1、R100、R2、R200、R4、R5、R3、R300和BG的任何和各个单独的定义结合。
R10:
在前述化合物的一个方面中,R10为
1)卤素,
2)NO2,
3)CN,
4)卤代烷基,
5)OR7,
6)NR8R9,或
7)SR7;
其中R7、R8、和R9如此处所定义。
在前述化合物的另一个方面中,R10为
1)卤素,或
2)OC1-C6烷基。
此处给出的R10的任何和各个单独的定义均可与此处给出的核、A、A1、R1、R100、R2、R200、R4、R5、R3、R300和BG的任何和各个单独的定义结合。
或者,本发明提供式I或式2所代表化合物的异构体、对映异构体、非对映异构体或互变异构体,或其前药、或药物学可接受的盐、或用可检测的标记或亲和标签标记的所述化合物。
其中
n为0或1;
m为0、1或2;
p为1或2;
Y为NH、O或S;
LG为
2)-X-L-X1-;
X和X1独立地选自
1)O,
2)NR13,
3)S,
4)C1-C6烷基-O-,
5)C1-C6烷基-NR13-,
6)C1-C6烷基-S-,
7)C1-C6烷基-芳基-O-
10)
L选自:
1)-C1-C20烷基-,
2)-C2-C6烯基-,
3)-C2-C4炔基-,
4)-C3-C7环烷基-,
5)-苯基-,
6)-联苯基-,
7)-杂芳基-,
8)-杂环基-,
9)-C1-C6烷基-(C2-C6烯基)-C1-C6烷基-,
10)-C1-C6烷基-(C2-C4炔基)-C1-C6烷基,
11)-C1-C6烷基-(C3-C7环烷基)-C1-C6烷基,
12)-C1-C6烷基-苯基-C1-C6烷基,
13)-C1-C6烷基-联苯基-C1-C6烷基,
14)-C1-C6烷基-杂芳基-C1-C6烷基,
15)-C1-C6烷基杂环基-C1-C6烷基,
I6)-C1-C6烷基-O-C1-C6烷基,
17)-C(O)-芳基-C(O)-,
18)-C(O)-杂芳基-C(O)-,
19)-C(O)-(C1-C6烷基)-芳基-(C1-C6烷基)-C(O)-,
20)-C(O)-(C1-C6烷基)-杂芳基-(C1-C6烷基)-C(O)-,或
21)-C(O)-(C1-C6烷基)-(C3-C7环烷基)-(C1-C6烷基)-C(O)-;
Q和Q1独立地选自
1)NR4R5,
2)OR11,或
3)S(O)mR11;或
Q和Q1独立地选自任选地被R12取代基取代的芳基或杂芳基;或
Q和Q1独立地为
其中G为5、6或7元环,所述环任选地含有一个或多个选自S、N或O的杂原子,并且所述环任选地被一个或多个R12取代基取代,所述环任选地与芳基或杂芳基稠合,所述芳基和杂芳基任选地被一个或多个R12取代基取代。
A和A1独立地选自
1)-CH2-,
2)-CH2CH2-,
3)-CH(C1-C6烷基)-,
4)-CH(C3-C7环烷基)-,
5)-C3-C7环烷基-,
6)-CH(C1-C6烷基-C3-C7环烷基)-,或
7)-C(O)-;
R1和R100独立地选自
3)H,或
4)任选地被一个或多个R6取代基取代的C1-C6烷基;
R2和R200独立地为H或任选地被一个或多个R6取代基取代的C1-C6烷基;
R4和R5独立地选自:
1)H,
2)C1-C6烷基→,
3)C3-C7环烷基→,
4)卤代烷基→,
5)芳基→,
6)联苯基→,
7)杂芳基-芳基→,
8)芳基-杂芳基→,
9)芳基-杂环基→,
10)杂环基→,
11)杂芳基→,
12)杂环基→,
13)C1-C6烷基-OnC(O)→,
14)卤代烷基-OnC(O)→,
15)C3-C7环烷基-OnC(O)→,
16)芳基-OnC(O)→,
17)杂芳基-OnC(O)→,
18)杂环基-OnC(O)→,
19)R8R9NC(=Y)→,
20)C1-C6烷基-S(O)2→,
21)C3-C7环烷基-S(O)2→,
22)芳基-S(O)2→,
23)杂芳基-S(O)2→,
24)杂环基-S(O)2→,
25)稠合的芳基-C3-C7环烷基→,
26)稠合的杂芳基-C3-C7环烷基→,
27)稠合的芳基-杂环基→,
28)稠合的杂芳基-杂环基→,
29)稠合的芳基-C3-C7环烷基-OnC(O)→,
30)稠合的杂芳基-C3-C7环烷基-OnC(O)→,
31)稠合的芳基-杂环基-OnC(O)→,或
32)稠合的杂芳基-杂环基-OnC(O)→,
其中所述烷基和环烷基任选地被一个或多个R6取代基取代,并且所述芳基、所述杂芳基和所述杂环基任选地被一个或多个R10取代基;
R6独立地选自:
1)卤素,
2)C1-C6烷基,
3)C3-C7环烷基,
4)卤代烷基,
5)芳基,
6)杂芳基,
7)杂环基,
8)OR7,
9)S(O)mR7,
10)NR8R9,
11)COR7,
12)C(O)OR7,
13)OC(O)R7,
14)SC(O)R7,
15)CONR8R9,
16)S(O)2NR8R9,或
17)N(=Y)NR8R9,
其中所述芳基、所述杂芳基和所述杂环基(heterocylyl)任选地被一个或多个R10取代基取代;
R7独立地选自:
1)H,
2)C1-C6烷基,
3)C3-C7环烷基,
4)卤代烷基,
5)芳基,
6)杂芳基,
7)杂环基,
8)C(=Y)NR8R9,或
9)C1-C6烷基-C2-C4炔基,
其中所述芳基、杂芳基、和杂环基任选地被一个或多个R10取代;
R8和R9独立地选自:
1)H,
2)C1-C6烷基,
3)C3-C7环烷基,
4)卤代烷基,
5)芳基,
6)杂芳基,
7)杂环基,
8)COC1-C6烷基,
9)COC3-C3环烷基
10)CO-芳基,
11)CO-杂芳基,
12)CO-杂环基,
13)C(O)Y-C1-C6烷基,
14)C(O)Y-C3-C3环烷基
15)C(O)Y-芳基,
16)C(O)Y-杂芳基,或
17)C(O)Y杂环基,
其中所述芳基、杂芳基和杂环基任选地被一个或多个R10取代基取代;
或者R8和R9与它们所连接的氮原子一同形成任选地被一个或多个R6取代基取代的五元、六元或七元杂环;
R10独立地选自:
1)卤素,
2)NO2,
3)CN,
4)C1-C6烷基,
5)卤代烷基,
6)C3-C7环烷基,
7)OR7,
8)NR8R9,
9)SR7,
10)COR7,
11)CO2R7,
12)S(O)mR7,
13)CONR8R9,或
14)S(O)2NR8R9,
其中所述烷基任选地被一个或多个R6取代基取代;
R11独立地选自
1)C1-C6烷基→,
2)C3-C7环烷基→,
3)芳基→,
4)杂芳基→,或
5)杂环基→,
其中所述烷基和环烷基任选地被一个或多个R6取代基取代,并且所述芳基、杂芳基和杂环基任选地被一个或多个R10取代基取代;
R12独立地选自
1)C1-C6烷基→,
2)C3-C7环烷基→,
3)卤代烷基→,
4)芳基→,
5)杂芳基→,
6)杂环基→,
7)C1-C6烷基-OnC(O)→,
8)卤代烷基-OnC(O)→,
9)C3-C7环烷基-OnC(O)→,
10)芳基-OnC(O)→,
11)杂芳基-OnC(O)→,
12)杂环基-OnC(O)→,
13)R8R9NC(O)→,
14)C1-C6烷基-S(O)m→,
15)C3-C7环烷基-S(O)m→,
16)芳基-S(O)m→,
17)杂芳基-S(O)m→,
18)杂环基-S(O)m→,
19)稠合的芳基-C3-C7环烷基,
20)稠合的杂芳基-C3-C7环烷基,或
21)C(=Y)-NR8R9,
其中所述烷基和环烷基任选地被一个或多个R6取代基取代,并且所述芳基、杂芳基和杂环基任选地被一个或多个R10取代基取代;
R13为
1)H,
2)C1-C6烷基→,
3)C3-C7环烷基→,
4)卤代烷基→,
5)芳基→,
6)杂芳基→,
7)杂环基→,
8)C1-C6烷基-OnC(O)→,
9)卤代烷基-OnC(O)→,
10)C3-C7环烷基-OnC(O)→,
11)芳基-OnC(O)→,
12)杂芳基-OnC(O)→,或
13)杂环基-OnC(O)→。
如果在任何成分结构中有任何变量例如R6、R600、R10、R1000等出现了多于一次,则所述变量在每次出现时的定义彼此独立。如果某取代基本身被一个或多个取代基取代,则应当理解为所述一个或多个取代基可以连接至相同的碳原子或不同的碳原子。仅在它们能够形成化学稳定的化合物之时才允许此处定义的取代基以及变量的组合。
本领域技术人员将理解,本发明化合物上的取代模式以及取代基可经选择以提供化学稳定并、且易于使用实施例中给出的化学方法以及本领域公知的化学技术使用易于获得的起始物质合成的化合物。
应当理解,许多本文所述的取代基或者基团具有官能团等价物,这意味着所述基团或者取代基可以被具有相似的电学、杂化或成键性质的其他基团或者取代基代替。
定义
除非另有说明,否则适用以下定义:
单数形式“a”、“an”以及“the”包括相应的复数形式,除非上下文另有明确的规定。
如此处使用的,术语“包含”或“包括”是指在该词语后所列举的元素是需要的或者必须的,而其他元素是任选的并且可以存在或者不存在。
如此处使用的,术语“由……组成”是指包括并且仅限于该短语后的内容。因此,短语“由……组成”指所列举的元素是需要的或者必须的,并且不可存在其他的元素。
如此处使用的,术语“烷基”意欲包括具有所指定的碳原子数的所有的支链或者直链饱和脂肪烃基,例如在C1-C6-烷基中的C1-C6定义为包括具有直链或者支链排列的1、2、3、4、5或6个碳的基团,而C1-C4烷基中的C1-C4定义为包括具有直链或支链排列的1、2、3或4个碳的基团,并且例如C1-C20-烷基中的C1-C20定义为包括具有直链或支链排列的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个碳的基团。如上定义的C1-C6-烷基和C1-C4烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、戊基和己基。
如此处使用的,术语“烯基”是指具有其中所指定的碳原子数的不饱和直链或支链烃基,其中至少两个碳原子通过双键相互连接,并且具有E或Z区位化学(regeochemistry)或其组合。例如,C2-C6烯基中的C2-C6定义为包括具有直链或支链排列的2、3、4、5或6个碳的基团,至少两个碳原子通过双键相互连接。C2-C6烯基的实例包括乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基等。
如此处使用的,术语“炔基”是指具有其中所指定的碳原子数的不饱和直链烃基,并且其中至少两个碳原子通过三键结合在一起。例如C2-C4炔基中的C2-C4定义为包括在链中具有2、3或4个碳原子的基团,至少两个碳原子通过三键结合在一起。这种炔基的实例包括乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基等。
如此处使用的,术语“环烷基”是指具有其中所指定的碳原子数的单环饱和脂肪烃基,例如C3-C7环烷基中的C3-C7定义为包括具有单环排列的3、4、5、6或7个碳的基团。如上定义的C3-C7环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基以及环庚基。
如此处使用的,术语“环烯基”是指具有其中所指定的碳原子数的单环饱和脂肪烃基,例如C3-C7环烯基中的C3-C7定义为包括具有单环排列的3、4、5、6或7个碳的基团。如上定义的C3-C7环烯基的实例包括但不限于环戊烯基以及环己烯基。
如此处使用的,术语“卤代”或“卤素”是指氟、氯溴和碘。
如此处使用的,术语“卤代烷基”是指其中各氢原子可相继地被卤素原子代替的如上定义的烷基。卤代烷基的实例包括但不限于CH2F、CHF2和CF3。
如此处使用的,单独或与其他基团一同使用的术语“芳基”是指含有6个碳原子的碳环芳香单环基团,其可进一步与另一个可以是芳香的、饱和的或不饱和的5-或6- 元碳环基团稠合。芳基包括但不限于苯基、茚满基、1-萘基、2-萘基和四氢萘基。所述芳基可以在环烷基环或者芳香环上的合适位置与另一基团相连。例如:
从环系统上引出的标有箭头的线表示所述键可以连接至任何合适的环原子。
如此处使用的,术语“联苯基”是指在苯基环上的任一可用的位置连接在一起的两个苯基。例如:
如此处使用的,术语“杂芳基”是指最多十个原子的单环或双环系统,其中至少一个环是芳香性的,并且包含1至4个选自O、N和S的杂原子。杂芳基取代基可以通过环碳原子或者一个杂原子连接。杂芳基的实例包括但不限于噻吩基、苯并咪唑基、苯并[b]噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、吡喃基、异苯并呋喃基、色烯基、呫吨基、2H-吡咯基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、吲嗪基(indolizinyl)、异吲哚基、3H-吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、异喹啉基、喹啉基、酞嗪基、萘啶基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、蝶啶基、异噻唑基、异色烷基、色烷基、异噁唑基、呋咱基、吲哚啉基、异吲哚啉基、噻唑并[4,5-b]吡啶,以及
如此处使用的,术语“杂环”、“杂环的”或者“杂环基”是指含有1-4个选自O、N和S的杂原子的5、6或7元非芳香环系统。杂环的实例包括但不限于吡咯烷基、四氢呋喃基、哌啶基(piperidyl)、吡咯啉基、哌嗪基、咪唑烷基、吗啉基、咪唑啉基、吡唑烷基、吡唑啉基、以及
如此处使用的,单独或者与其他基团一起使用的术语“杂双环基”是指与杂环、芳基或者任何其他此处定义的环稠合的上述定义的杂环。这种杂双环基的实例包括但不限于香豆素、苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯、2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己二烯(dioxine)以及3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]二氧杂环庚烯。
如此处使用的,术语“杂芳基”是指最多十个原子的单环或双环系统,其中至少一个环是芳香性的,并且包含1至4个选自O、N和S的杂原子。杂芳基取代基可以通过环碳原子或者一个杂原子连接。杂芳基的实例包括但不限于噻吩基、苯并咪唑基、苯并[b]噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、吡喃基、异苯并呋喃基、色烯基、呫吨基、2H-吡咯基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、吲嗪基(indolizinyl)、异吲哚基、3H-吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、异喹啉基、喹啉基、酞嗪基、萘啶基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、蝶啶基、异噻唑基、异色烷基、色烷基、异噁唑基、呋咱基、吲哚啉基以及异吲哚啉基,
如此处使用的,术语“杂环”、“杂环的”或者“杂环基”是指含有1-4个选自O、N和S的杂原子的5、6或7元非芳香环系统。杂环的实例包括但不限于吡咯烷基、四氢呋喃基、哌啶基(piperidy1)、吡咯啉基、哌嗪基、咪唑烷基、吗啉基、咪唑啉基、吡唑烷基以及吡唑啉基,
如此处使用的,术语“杂原子”是指O、S或N。
如此处使用的,术语“活化的二酸”是指其中羧酸部分原位或者在单独的合成步骤中被转化为例如但不限于酰卤、琥珀酸酯、或者HOBt酯的二酸。例如琥珀酰氯和对苯二酰氯(terephthaloyl chloride)为“二酰氯”的实例。HOBt酯可通过用如DCC、EDC、HBTU等的脱水剂,如DIPEA的碱,以及HOBt在合适的溶剂中处理二酸生成。活化的二酸与胺的反应将导致酸官能团转化为酰胺官能团。
如此处使用的,术语“可检测的标记”是指一种基团,其可与本发明的化合物连接以生成探针,或者与IAP BIR域相连从而当探针与所述BIR域连接时,所述标记使得所述探针可被直接或者间接识别,从而可被检测、测定以及定量。
如此处使用的,术语“亲和标签”是指一种配体或者基团,其连接于本发明的化合物或者IAP BIR域,从而使另一化合物可被从溶液中提取至所述配体或者基团所连接的物质。
如此处使用的,术语“探针”是指被可检测的标记或者亲和标签标记、并且能够共价或者非共价结合至IAP BIR域的式I化合物。例如当所述探针非共价结合时,其可被受试化合物替代。例如当所述探针共价结合时,其可用于形成能够被定量和被受试化合物抑制的交联加成产物。
如此处使用的,术语“任选地被一个或多个取代基取代的”或者它的等价的术语“任选地被至少一个取代基取代的”是指随后记载的事件或情况可能存在或者可能不存在,而且该描述包括其中所述事件或环境存在的情况以及其中所述事件或环境不存在的情况。该定义是指零至五个取代基。
如果取代基本身与本发明的合成方法不相容,则可以用对用于这些方法的反应条件稳定的适当的保护基(PG)保护该取代基。该保护基可以在该方法反应序列中适当的点被除去以提供希望的中间体或目标化合物。适合的以及使用这种适合的保护基保护以及脱保护不同的取代基的方法为本领域技术人员所熟知;其实例可参见T.Greene和P.Wuts,Protecting Groups in Chemical Synthesis(3rded.),John Wiley & Sons,NY(1999),将其全文并入此处作为参考。自始至终使用的保护基的实例包括但不限于Fmoc、Bn、Boc、CBz和COCF3。在某些情况下,可以具体地选择取代基以在用于本发明方法中的反应条件之下是活泼的。在这种情况下,反应条件将选定的取代基转化为另一可用于本发明方法中的中间体化合物的取代基或目标化合物中需要的取代基。
全文中使用的α-氨基酸的缩写如下:
氨基酸 | 缩写 |
α-氨基丁酸 | Abu |
丙氨酸 | Ala |
精氨酸 | Arg |
天冬氨酸 | Asp |
天冬酰胺 | Asn |
半胱氨酸 | Cys |
谷氨酸 | Glu |
谷氨酰胺 | Gln |
甘氨酸 | Gly |
异亮氨酸 | Ile |
组氨酸 | His |
亮氨酸 | Leu |
赖氨酸 | Lys |
甲硫氨酸 | Met |
苯丙氨酸 | Phe |
脯氨酸 | Pro |
丝氨酸 | Ser |
[0862]
氨基酸 | 缩写 |
苏氨酸 | Thr |
色氨酸 | Trp |
酪氨酸 | Tyr |
缬氨酸 | Val |
如此处使用的,当有关α-氨基酸时术语“残基”是指源于相应的α-氨基酸的消除羧基的羟基以及α-氨基的氢的基团。例如,术语Gln、Ala、Gly、lle、Arg、Asp、Phe、Ser、Leu、Cys、Asn、和Tyr分别代表L-谷氨酰胺、L-丙氨酸、甘氨酸、L-异亮氨酸、L-精氨酸、L-天冬氨酸、L-苯丙氨酸、L-丝氨酸、L-亮氨酸、L-半胱氨酸、L-天冬酰胺、以及L-酪氨酸的残基。
如此处使用的,术语“对象”是指人以及非人哺乳动物如灵长类动物、猫、狗、猪、牛、绵羊、山羊、马、兔、大鼠、小鼠等。
如此处使用的,术语“前药”是指在生理条件之下或通过溶剂分解可以转化为本发明的生物学活性化合物的化合物。因此,术语“前药”是指本发明化合物的药物学可接受的前体。当向需要其的对象给药时,前药可以是非活性的或显示有限的活性,但在体内转化为本发明的活性化合物。通常,前药在体内例如通过经酶促的过程在血液或其它器官中水解而转化获得本发明的化合物。前药化合物在对象中常常提供溶解度、组织相容性或延迟释放的优点(参见Bundgard,H.,Design of Prodrugs(1985),pp.7-9,21-24(Elsevier,Amsterdam))。前药的定义包括共价地连接的载体,当这种前药向对象给药时在体内释放本发明的活性化合物。可以通过改变存在于本发明化合物中的官能团制备,所述改变或以常规操作或在体内分裂为本发明的母体化合物。
如此处使用的,术语“药物学可接受的载体、稀释剂或赋形剂”是指但不限于任何适用于所述对象优选人的辅料(adjuvant)、载体、赋形剂、助流剂、甜味剂、稀释剂防腐剂、染料/着色剂、增香剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、助悬剂、稳定剂、等渗剂(isotonic agent)溶剂、乳化剂,或包封剂(encapsulating agent)如脂质体、环糊精、包封聚合输送系统(encapsulating polymeric delivery systems)或聚乙二醇基质。
如此处使用的,术语“药物学可接受的盐”是指酸加成盐以及碱加成盐。
如此处使用的,术语“药物学可接受的酸加成盐”是指那些保持游离碱的生物有效性和性质的盐,它们不是生物学或其它方面不良的,并且是与无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等以及有机酸如乙酸、三氟乙酸、丙酸、羟基乙酸、丙酮酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、枸橼酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等形成的。
如此处使用的,术语“药物学可接受的碱加成盐”是指那些保持游离酸的生物有效性以及性质的盐,它们不是生物学或其他方面不良的。这些盐是由向游离酸加成无机碱或有机碱制备。源于无机碱的盐包括但不限于钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、钙盐、镁盐、铁盐、锌盐、铜盐、锰盐、铝盐等。源于有机碱的盐包括但不限于伯、仲和叔胺、被取代的胺包括天然存在的被取代的胺、环胺以及碱离子交换树脂,如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二甲基氨基乙醇、2-二乙基氨基乙醇、二环己胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、哈胺(hydrabamine)、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、聚胺树脂等的盐。
如此处使用的,术语“BIR域结合”是指本发明的化合物对IAP BIR域的作用,其阻滞或削弱IAPs至BIR结合蛋白的结合或参与顶替来自IAP的BIR结合蛋白。BIR结合蛋白的实例包括但不限于胱天蛋白酶以及线粒体衍生的BIR结合蛋白如Smac、Omi/WTR2A等。
如此处使用的,术语“凋亡不足”是指其中疾病是由对所述对象在害的细胞已不凋亡引起的或因此原因而持续的状态。这包括但不局限于未经治疗而存活在对象中的癌细胞、在抗癌治疗期间或之后存活在对象中的癌细胞、或其作用对所述对象在害的免疫细胞,并且包括嗜中性粒细胞、单核细胞以及自体反应的T细胞。
如此处使用的,术语“治疗有效量”是指式I或II化合物的量,当将其给药至对象时足以实现与凋亡不足有关的疾病状态的治疗。式I化合物的量将视所述化合物所述疾病及其严重程度、以及所要治疗的对象的年龄而定,但可以由具有其自身的知识以及了解本发明公开的本领域普通技术人员常规地确定。
如此处使用的,术语“治疗”是指对此处公开的对象中与凋亡不足有关的疾病状态的治疗,其包括:(i)防止与凋亡不足有关的疾病或病症在对象中发生,特别是当这种哺乳动物易患所述疾病或病症但还没有被诊断为患有其时;(ii)抑制与凋亡不足有关的疾病或病症,即阻滞其发展;或(iii)缓解与凋亡不足有关的疾病或病症,即导致所述病症的消退。
如此处使用的,术语“治疗癌症”是指向优选为人的患有癌症的对象给药本发明的药物组合物以通过杀死癌细胞、抑制癌细胞的生长、或抑制癌细胞的转移导致癌症的减轻。
如此处使用的,术语“预防疾病”在癌症的情况下是指外科手术后、化疗后或放疗后向优选为人的患有癌症的对象给药本发明的药物组合物以通过杀死剩余癌细胞、抑制其生长、或抑制其转移而阻止癌症的再生。该定义也包括导致疾病如哮喘MS等的促存活条件(prosurvival conditions)的预防。
如此处使用的,术语“协同效应”是指用本发明化合物与本发明的化疗药物或死亡受体激动剂的组合实现的效果高于仅由所述化合物、药物或激动剂之一得到的效果,或者有利地,由上述化合物、药物或者激动剂的组合得到的效果高于由单独地使用各化合物、药物或者激动剂得到的效果。这种协同作用使得能够给予较小的剂量。
如此处使用的,术语“凋亡”或者“细胞程序死亡”是指其中正在死亡的细胞表现出一组包括细胞膜起泡、细胞体(cell soma)收缩、染色质凝聚以及DNA断裂成梯的特征明显的生物化学标志的细胞死亡调节过程以及任何胱天蛋白酶介导的细胞死亡。
如此处使用的,术语“BIR域”或者“BIR”在全文中可互换地使用,是指以在序列Cys-(Xaa1)2Cys-(Xaa1)16His-(Xaa1)6-8Cys内包括保守的半胱氨酸以及一个保守的组氨酸残基的若干不变的氨基酸残基为特征的域。通常,所述共有序列的氨基酸序列是:Xaa1-Xaa1-Xaa1-Arg-Leu-Xaa1-Thr-Phe-Xaa1-Xaa1-Trp-Pro-Xaa2-Xaa1-Xaa1-Xaa2-Xaa2-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Leu-Ala-Xaa]-Ala-Gly-Phe-Tyr-Tyr-Xaa1-Gly-Xaa1-Xaa1-Asp-Xaa1-Val-Xaa1-Cys-Phe-Xaa1-Cys-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Trp-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Asp-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-His-Xaa-1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Pro-Xaa1-Cys-Xaa1-Phe-Val,其中Xaa1是任意氨基酸,而Xaa2是任意氨基酸或者不存在。优选地,所述氨基酸与此处提供的XIAP、HIAP1或HIAP2的BIR域序列之一基本相同。
所述BIR域残基列举如下(参见Genome Biology(2001)1-10):
如此处使用的,术语“ring锌手指”或者“RZF”是指具有以下共有序列的氨基酸序列的域;Glu-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa-1-Xaa2-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Cys-Lys-Xaa3-Cys-Met-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa3-X-aa1-Phe-Xaa1-Pro-Cys-Gly-His-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Cys-Xaa1-Xaa1-Cys-Ala-Xaa1-Xaa-1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Cys-Pro-Xaa1-Cys,其中Xaa1是任意氨基酸,Xaa2是Glu或Asp,而Xaa3是Val或Ile。
如此处使用的,术语“IAP”是指由IAP基因编码的多肽或蛋白或其片段。IAP的实例包括但不限于人或小鼠NAIP(Birc1)、HIAP-1(cIAP2、Birc3)、HIAP-2(cIAP1、Birc2)、XIAP(Birc4)、survivin(Birc5)、livin(ML-IAP、Birc7)、ILP-2(Birc8)和Apollon/BRUCE(Birc6)(例如参见第6,107,041、6,133,437、6,156,535、6,541,457、 6,656,704、6,689,562号美国专利;Deveraux和Reed,Genes Dev.13,239-252,1999;Kasof和Gomes,J.Biol.Chem.,276,3238-3246,2001;Vucic等,Curr.Biol.10,1359-1366,2000;Ashab等;FEBS Lett.,495,56-60,2001,其内容并如此处作为参考)。
如此处使用的,术语“IAP基因”是指编码具有至少一个BIR域的多肽并且能够调节(抑制或增强)细胞或组织内的凋亡的基因。所述IAP基因为与人或小鼠NAIP(Birc1)、HIAP-1(cIAP2、Birc3)、HIAP-2(cIAP1、Birc2)、XIAP(Birc4)、survivin(Birc5)、livin(ML-IAP、Birc7)、ILP-2(Birc8)和Apollon/BRUCE(Birc6)中的至少一个具有约50%或更高的核苷酸序列同源性的基因。测定到序列同源性的区域为编码至少一个BIR域和ring锌手指域的区域。哺乳动物IAP基因包括分离自任何哺乳动物来源的核苷酸序列。
如此处使用的,术语“IC50”是指最大响应达到50%抑制率的特定本发明化合物的量、浓度或剂量,如在测量所述响应的试验中最大荧光探针结合置换。
如此处使用的,术语“EC50”是指达到细胞存活的50%抑制率的特定本发明化合物的量、浓度或剂量。
如此处使用的,术语“调节”是指使用本发明的化合物治疗、预防、压制、增强或诱导某功能或条件。例如本发明的化合物可调节对象中的IAP功能,从而通过显著地减少或基本消除活化的凋亡蛋白如胱天蛋白酶-3、7和9与哺乳动物IAP的BIR域之间的相互作用或者通过诱导细胞中XIAP蛋白的损失增强凋亡。
如此处使用的,术语“增强凋亡”是指在体外或体内增加给定的细胞群体中凋亡的细胞的数量。细胞群体的实例包括但不限于卵巢癌细胞、结肠癌细胞、乳腺癌细胞、肺癌细胞、胰腺癌细胞、或T细胞等。应当理解,在给定试验中由本发明的凋亡增强化合物提供的凋亡增强的程度将变化,但本领域技术人员能够确定凋亡水平的统计学显著的变化,从而确定能够增强否则被IAP限制的凋亡。优选地,“增强凋亡”是指经历凋亡的细胞数目的增加为至少25%,更优选增加50%,最优选增加至少一倍。优选地,所监控的样品为正常情况下凋亡不足的细胞样品(即癌细胞)。检测凋亡水平(即增强或降低)变化的方法记载于实施例中,包括定量DNA断裂的方法、定量磷脂酰丝氨酸(phosphatoylserine)自膜的胞质侧易位至细胞外侧、胱天蛋白酶活化的测定、以及细胞色素C和凋亡抑制因子通过线粒体释放入细胞质中的定量方法。
如此处使用的,术语“增殖性疾病”或者“增殖性病症”是指由过高的细胞分裂水平、过低的凋亡水平或者这两者导致的疾病。例如,癌症如淋巴瘤、白血病、黑素瘤、卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌、及肺癌,以及自身免疫性疾病都是增殖性疾病的实例。
如此处使用的,术语“死亡受体激动剂”是指能够通过直接或间接接触而刺激由死亡受体介导的促凋亡反应的物质。例如,激动剂TRAIL受体抗体将与TRAIL受体结合并诱发凋亡反应。另一方面,其他物质如干扰素-a会诱发内源性TRAIL的释放和/或以扩大细胞促凋亡反应的方式上调TRAIL受体。
本发明的化合物或其药物学可接受的盐可以含有一个或多个不对称中信,手性轴和手性平面,并且可因此产生对映异构体、非对映异构体以及其他立体异构形式,并且可根据绝对立体化学定义,例如定义为(R)-或(S)-或氨基酸定义为(D)-或(L)-。本发明意图包括所有的这种可能的异构体以及它们的外消旋体和光学纯的形式。光学活性(+)和(-)、(R)-和(S)-、或(D)-和(L)-异构体可使用手性合成子或手性试剂制备,或使用常规技术如反相HPLC拆分。可以制备外消旋体混合物并随后分离为单独的光学异构体,或者可以通过手性合成制备这些光学异构体。可以通过本领域技术人员公知的方法拆分对映异构体,例如通过形成非对映异构体盐并随后通过结晶、气相-液相或这液相色谱、一种对映异构体与对映异构体特异性试剂的选择性反应分离。本领域技术人员应当理解,在将所需的对映异构体通过分离技术转化为另一种化学物质的情况下,则需要额外的步骤以生成所需的对映异构体形式。或者,可以通过使用光学活性试剂、底物、催化剂、或者溶剂不对称合成或者通过不对称转换将一种对映异构体转化为另一种而合成特定的对映异构体。
本发明的某些化合物可以两性离子形式存在,并且本发明包括这些化合物的两性离子形式以及其混合物。
应用
本发明的化合物可用作IAP BIR域结合化合物,从而本发明的化合物、组合物以及方法包括用于患有或者易患以凋亡不足为特征的特定疾病的细胞或者对象的应用。因此,本发明的化合物、组合物和方法用于治疗细胞增殖性疾病/病症,包括但不限于i)癌症,ii)自身免疫性疾病,iii)炎性疾病,iv)医学过程包括但不限于外科手术、血管成形术等之后诱导的增殖。
本发明的化合物也可用于治疗其中细胞程序性死亡或凋亡机制(TRAIL、FAS、凋亡体)中存在缺陷的疾病,如多发性硬化症、动脉粥样硬化(artherosclerosis)、炎症、自身免疫等。
所述治疗包括向有此需要的对象给药本发明的化合物、或者其药物学可接受的盐、或者包含药物载体和治疗有效量的本发明化合物或其药物学可接受的盐的药物组合物。
特别地,本发明的化合物、组合物和方法可用于治疗包括实体瘤的癌症,例如皮肤、乳房、脑部、肺部、睾丸癌等。可通过本发明的化合物、组合物和方法治疗的癌症包括但不限于以下:
组织 | 实例 |
肾上腺 | 神经母细胞瘤 |
骨骼 | 骨原性肉瘤(骨肉瘤)、纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞 瘤、软骨肉瘤、尤因肉瘤、恶性淋巴瘤(网状细胞肉 瘤)、多发性骨髓瘤、恶性巨细胞瘤、脊索癌、 osteochronfroma(骨软骨性外生骨疣)、良性软骨瘤、成软骨细胞瘤、软骨黏液样纤维瘤(chondromyxofibroma)、骨 样骨瘤以及巨细胞瘤 |
心脏 | 肉瘤(血管肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肉瘤)、粘液瘤、横纹肌瘤、纤维瘤、脂肪瘤以及畸胎瘤 |
胃肠 | 食管(鳞状细胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤),胃 (癌、淋巴瘤、平滑肌肉瘤),胰腺(导管腺癌、胰岛细 胞癌、胰升血糖素瘤、促胃液素瘤、类癌瘤、舒血管肠肽瘤),小肠(腺癌、淋巴瘤、类癌瘤、卡波氏肉瘤、平滑 肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、神经纤维瘤、纤维瘤),大肠 (腺癌、肠管状腺瘤(tubular adenoma)、绒毛状腺瘤、错 构瘤、平滑肌瘤) |
泌尿生殖道 | 肾(腺癌、维耳姆斯瘤[肾母细胞瘤]、淋巴瘤、白血 病),膀胱以及尿道(鳞状细胞癌、转移细胞癌、腺 癌),前列腺(腺癌、肉瘤),睾丸(睾丸精原细胞瘤、 畸胎瘤、胚胎性癌、畸胎癌、绒毛膜癌、肉瘤、间质细胞癌、纤维瘤、纤维腺瘤、腺瘤样瘤、脂肪瘤) |
妇科 (Gynecological) | 子宫(子宫内膜癌),宫颈(宫颈癌、肿瘤前宫颈非典型 增生(pre-tumor cervical dysplasia)),卵巢(卵巢癌[浆液性囊腺癌、粘液性囊腺癌、未分类癌]、颗粒卵泡膜细胞瘤、支持-间质细胞瘤(Sertoli-Leydig cell tumors)、未分 化胚细胞瘤、卵巢未成熟畸胎瘤),外阴(鳞状细胞癌、 上皮内癌、腺癌、纤维肉瘤、黑素瘤),阴道(明细胞 癌、鳞状细胞癌、葡萄样肉瘤(胚胎性横纹肌肉瘤),输 卵管(癌) |
[0898]
组织 | 实例 |
血液 | 血液(骨髓性白血病[急性和慢性]、急性淋巴母细胞性白 血病、慢性淋巴细胞性白血病、骨髓增生殖性疾病、多发性骨髓瘤、脊髓发育不良综合征),霍奇金病、非霍奇金 氏淋巴瘤[恶性淋巴瘤] |
肝 | 肝细胞瘤(肝细胞癌)、肝小胆管癌、肝胚细胞瘤、血管肉瘤、肝细胞腺瘤、血管瘤 |
肺 | 支气管癌(鳞状上皮细胞、未分化小细胞、未分化大细胞、腺癌),肺泡(细支气管)癌、支气管腺瘤、肉瘤、淋巴瘤、软骨瘤型错构瘤、间皮瘤 |
神经系统 | 颅骨(骨瘤、血管瘤、肉芽肿瘤、黄瘤、佩吉特氏病), 脑脊膜(脑膜成纤维细胞瘤、meningiosarcoma、神经胶质瘤病),大脑(星形细胞瘤、成髓细胞瘤、神经胶质瘤、 室管膜瘤、胚组织瘤[松果体瘤]、多形性成胶质细胞瘤、少突神经胶质瘤、神经鞘瘤、眼癌、先天性肿瘤)、脊髓 神经纤维瘤、脑膜成纤维细胞瘤、神经胶质瘤、肉瘤) |
皮肤 | 恶性黑色素瘤、皮肤基底细胞癌、鳞状细胞癌、卡波氏肉瘤、痣结构不良痣(moles dysplastic nevi)、脂肪瘤、血管 瘤、皮肤纤维瘤、瘢痕瘤 |
本发明化合物或其药物学可接受的盐或它们的前药可以纯的形式或者在适宜的药物组合物中给药,并且可以通过任何被接受的盖伦药物实践(Galenic pharmaceuticalpractice)实施。
本发明的药物组合物可以通过将本发明的化合物与适宜的药物学可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合制备,并且可以配制为固体、半固体、液体或者气体制剂,如片剂、胶囊、粉末、颗粒、软膏、溶液剂、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶剂、微球以及气雾剂。这种药物组合物的典型的给药途径包括但不限于口服、非胃肠道(皮下注射、静脉内、肌肉内、胸骨内(intrasternal)注射或输注技术)、舌下、眼部、直肠、阴道以及鼻内。本发明的药物组合物被配制为允许其中所含的活性成分在将所述组合物给药至对象时为可生物利用的。将给药至对象或者患者的组合物采取一个或多个剂量单位的形式,其中例如片剂可以为单个剂量单位,而气雾剂形式的本发明化合物的容器可以容纳多个剂量单位。制备这种剂型的现行方法是己知的,或者对本领域技术人员而言将是明显的;例如参见Remington′s Pharmaceutical Sciences,18th Ed.,(Mack Publishing Company,Easton,Pa.,1990)。将要给药的组合物总是含有用于治疗如上所述的疾病的治疗有效量的本发明的化合物或其药物学可接受的盐。
本发明的药物组合物可以为固体或者液体的形式。在一个方面,载体为颗粒状的,从而所述组合物为例如片剂或者散剂形式。载体可以是液体,从而所述组合物为例如口服糖浆剂、可注射液体或者可用于例如吸入给药的气雾剂。
对于口服给药而言,所述药物组合物优选为固体或者液体形式,其中半固体、半液体、混悬剂以及凝胶形式均包括在此处被认为是固体或者液体的形式中。
作为用于口服给药的固体组合物,所述药物组合物可配制为散剂、颗粒剂、压制片剂、丸剂、胶囊剂、咀嚼剂、包药干糊片(wafer)等剂型。这种固体组合物通常将含有一种或多种惰性稀释剂或者可食用的载体。此外,可存在以下物质中的一种或多种:粘合剂如羧甲基纤维素、乙基纤维素、微晶纤维素、西黄蓍胶或者明胶;赋形剂如淀粉、乳糖或者糊精;崩解剂如海藻酸、海藻酸钠、Primogel、玉米淀粉等;润滑剂如硬脂酸镁或者Sterotex;助流剂如胶态二氧化硅;甜味剂如蔗糖或者糖精;调味剂如薄荷、水杨酸甲酯或橙味调味剂;以及着色剂。
当所述药物组合物为胶囊形式例如明胶胶囊时,其除上述类型的物质外可包含液体载体如聚乙二醇或者油如大豆油或者植物油。
所述药物组合物可以为液体的形式,例如为酏剂、糖浆剂、溶液剂、乳剂或者混悬剂。作为两个实例,所述液体可以用于口服给药或者用于通过注射给药。当意欲用于口服给药时,优选的组合物除本发明化合物外还包含一种或多种甜味剂、防腐剂、染料/着色剂以及增香剂。在意欲通过注射给药的组合物中,可以包含一种或多种表面活性剂、防腐剂、润湿剂、分散剂、助悬剂、缓冲剂、稳定剂和等渗剂。
本发明的液体药物组合物,无论它们为溶液剂、混悬剂或者其他类似的剂型,均可包含一种或多种以下辅料:灭菌稀释剂如注射用水、盐水溶液优选生理盐水、林格氏溶液、等渗氯化钠、可用作溶剂或者助悬介质的不挥发性油如合成单酸或二酸甘油酯、聚乙二醇、甘油、丙二醇或者其他溶剂;抗菌剂如苯甲醇或羟苯甲酸甲酯;包封剂如环糊精或者官能团化的环糊精,包括但不限于α、β或δ-羟基丙基环糊精或者Captisol;抗氧化剂如抗坏血酸或亚硫酸氢钠;螯合剂如乙二胺四乙酸;缓冲剂如乙酸盐、柠檬酸盐、或者磷酸盐以及用于调节渗透压的物质如氯化钠或葡萄糖。非胃肠道制剂可以被封闭于玻璃或者塑料安瓿、一次性注射器或者多剂量小瓶中。可注射药物组合物优选是无菌的。
用于非胃肠道给药或者口服给药的本发明的液体药物组合物应当含有能够得到合适的剂量的量的本发明化合物。通常,该量为组合物中含至少0.01%的本发明化合物。当欲用于口服给药时,该量可以在组合物重量的0.1至约70%之间变化。对于非胃 肠道应用,本发明的组合物和制剂制备为非胃肠道剂量单位包含0.01至10重量%的本发明化合物。药物组合物可以进一步在给药时稀释;例如非胃肠道剂型可以进一步用无菌、等渗注射溶液如0.9%盐水、5重量%葡萄糖(D5W)、林格氏溶液或其他物质稀释。
本发明的药物组合物可用于局部给药,在这种情况下,载体可合适地包括溶液剂、乳剂、软膏剂或者凝胶基质。所述基质例如可包含一种或者多种以下物质:软石蜡、羊毛脂、聚乙二醇、蜂蜡、矿物油,稀释剂如水和醇,以及乳化剂和稳定剂。增稠剂可存在于用于局部给药的药物组合物中。如果意欲用于透皮给药,则所述组合物可包括透皮贴剂或者离子电渗装置。局部剂型可以含有约0.1至约10%w/v(以每单位体积的重量计)浓度的本发明化合物。
本发明的药物组合物可以为例如将在直肠融化并释放药物的栓剂的形式用于直肠给药以治疗例如结肠癌。用于直肠给药的组合物可以含有油脂基质作为适宜的非刺激性赋形剂。这种基质包括但不限于羊毛脂、可可脂和聚乙二醇。
本发明的药物组合物可以包括调节固体或者液体剂量单位的物理形式的各种物质。例如,所述组合物可以包含在活性成分周围形成包覆壳的物质。所述形成包覆壳的物质通常是惰性的,并且可选自例如糖、虫胶、以及其他肠溶包衣剂。或者,所述活性成分可以被装在明胶胶囊中。
固体或者液体形式的本发明药物组合物可以包括与本发明化合物结合并从而有助于所述化合物的传递的物质。具有这种能力的合适的物质包括但不限于单克隆或多克隆抗体、蛋白质或者脂质体。
本发明的药物组合物可由能够作为气雾剂给药的剂量单位构成。术语“气雾剂”是指包括由那些胶体性质的系统至由加压的包装构成的系统的各种系统。传递可以通过液化的或者加压的气体或者通过能够分配活性成分的适宜的泵系统进行。本发明化合物的气雾剂可以单相、双相或三相系统中传递以传递所述活性成分。气雾剂的传递包括必须的容器、激活剂、阀、次容器等,它们可以一同形成药盒。本领域技术人员无需过度的试验即可确定优选的气雾剂。
本发明的药物组合物可以通过制药领域公知的方法制备。例如,意欲用于通过注射给药的药物组合物可以通过将本发明的化合物与无菌蒸馏水混合形成溶液而制备。可以加入表面活性剂以促进均质溶液或者悬浮液的形成。表面活性剂是非共价地与本发明的化合物相互作用以促进所述化合物在含水传递系统中的溶解或者均质悬浮的化合物。
本发明的化合物或其药物学可接受的盐以治疗有效的量给药,所述量将取决于各种因素,包括所采用的特定化合物的活性;所述化合物的代谢稳定性和作用长度;患 者的年龄、体重、整体健康状况、性别以及饮食;给药的模式和时间;排泄率;药物组合;特定疾病或病症的严重性;以及接受治疗的对象。通常,治疗有效的日剂量可为约0.1mg至约40mg/kg体重每日或者每日两次本发明的化合物或者其药物学可接受的盐。
联合治疗
本发明的化合物或其药物学可接受的盐也可在给药一种或多种下述治疗药物的同时、之前或者之后给药。这种联合治疗可包括给药包含本发明化合物以及一种或多种下述其他药物的单一药物剂量制剂,以及以其各自的药物剂量制剂给药本发明的化合物以及各种其他药物。例如本发明化合物和化疗药物如taxol(紫杉醇)、taxotere、依托泊苷、顺铂、长春新碱、长春碱等可一同在一个口服剂量组合物如片剂或胶囊剂中给药至患者,或者各药物在单独的口服剂量制剂中或者通过静脉内注射给药。但采用单独的剂量制剂时,本发明化合物与一种或多种其他药物可以在基本上相同的时间即同时给药,或者在分别交错的时间即顺序给药;应当理解联合治疗包括所有这些治疗方案。此外,这些化合物可以与能够以直接或间接的方式刺激死亡受体凋亡途径的分子协同,例如,本发明化合物可以与可溶性TRAIL任何能够导致TRAIL循环水平升高的物质或者方法如干扰素α或放射联合应用。
因此,本发明还包括本发明化合物与放疗或者一种或多种如WO03/099211(PCT/US03/15861)中所述的其他药物的联合应用,将该文献并入此处作为参考。
这种其他药物的实例包括但不限于以下:
a)雌激素受体调节剂,
b)雄激素受体调节剂,
c)类视黄醇受体调节剂,
d)细胞毒性剂,
e)抗增殖剂,
f)异戊二烯基-蛋白质转移酶抑制剂,
g)HMG-CoA还原酶抑制剂,
h)HIV蛋白酶抑制剂,
i)逆转录酶抑制剂,
k)血管发生抑制剂,
l)PPAR-γ激动剂,
m)PPAR-δ激动剂,
n)固有的多抗药性的抑制剂,
o)止吐剂,
p)可用于治疗贫血的药物,
q)可用于治疗嗜中性白血球减少症的药物,
r)免疫促进剂,
s)蛋白酶体抑制剂,如Velcade和MG132(7-Leu-Leu-醛)(参见He等,Oncogene(2004)23,2554-2558),
t)HDAC抑制剂,如丁酸钠、苯基丁酸盐/酯(phenyl butyrate)、异羟肟酸(hydroamicacids)、细胞周期蛋白四肽(cyclin tetrapeptide)等(参见Rosato等,Molecular CancerTherapeutics2003,1273-1284),
u)蛋白酶体中化学胰蛋白酶样活性的抑制剂,
v)E3连接酶抑制剂,
w)免疫系统调节剂例如干扰素-α、以及能够诱导细胞因子如各种干扰素、TNF释放或诱导死亡受体配体如TRAIL释放的电离辐射(UVB),
x)死亡受体TRAIL调节剂和和TRAIL激动剂如人源化抗体HGS-ETR1和HGS-ETR2;以及
或与放疗组合或者顺序地组合以治疗癌症。
其他的组合也可包括降低前述药物的毒性例如肝毒性、神经毒性、肾毒性等的药物。
在一个实例中,本发明式I化合物之一与死亡受体激动剂如TRAIL,如模拟TRAIL的小分子或者抗体的联合给药可带来协同效果的益处。此外,本发明化合物可与任何导致TRAIL循环水平提高的化合物联合应用。
长春花生物碱和相关的化合物
可与本发明的核碱基寡聚物联合应用以治疗癌症和其他瘤的长春花生物碱包括长春新碱、长春碱、长春地辛、长春氟宁、长春瑞滨和脱水长春碱。
海兔毒素(dolastatins)为主要在长春花生物碱结合域干扰微管蛋白的寡肽。这些化合物也可与本发明的化合物组合应用以治疗癌症及其他瘤。海兔毒素包括海兔毒素-10(NCS376128)、海兔毒素-15、ILX651、TZT-1027、symplostatin1、symplostatin3、和LU103793(西马多丁)。
Cryptophycins(例如cryptophycin1和cryptophycin52(LY355703))在长春花生物碱结合域内结合微管蛋白并诱导G2/M阻滞和凋亡。任何这些化合物均可与本发明化合物组合应用以治疗癌症和其他瘤。
可与本发明化合物组合应用以治疗癌症和其他瘤的其他微观干扰型化合物记载于U.S.专利6,458,765;6,433,187;6,323,315;6,258,841;6,143,721;6,127,377;6,103,698;6,023,626;5,985,837;5,965,537;5,955,423;5,952,298;5,939,527;5,886,025;5,831,002;5,741,892;5,665,860;5,654,399;5,635,483;5,599,902;5,530,097;5,521,284;5,504,191;4,879,278;及4,816,444,以及U.S.专利申请公开2003/0153505A1;2003/0083263A1;以及2003/0055002A1,将其分别引入此处作为参考。
紫杉烷类(Taxanes)以及其他微管稳定化合物
紫杉烷类如紫杉醇、doxetaxel、RPR109881A、SB-T-1213、SB-T-1250、SB-T-101187、BMS-275183、BRT216、DJ-927、MAC-321、IDN5109、和IDN5390可与本发明化合物组合应用以治疗癌症和其他瘤。紫杉烷类似物(例如BMS-184476、BMS-188797)以及功能相关的非紫杉烷类(例如埃博霉素(例如埃博霉素A、埃博霉素B(EPO906)、脱氧埃博霉素B以及埃博霉素B内酰胺(BMS-247550))、eleutherobin、discodermolide、2-epi-discodermolide、2-des-甲基discodermolide、5-羟基甲基discodermolide、19-des-氨基羰基discodermolide、9(13)-cyclodiscodermolide以及laulimalide)也可用于本发明方法和组合物中。
可与本发明化合物组合用于治疗癌症和其他瘤的其他微管稳定化合物记载于美国专利6,624,317;6,610,736;6,605,599;6,589,968;6,583,290;6,576,658;6,515,017;6,531,497;6,500,858;6,498,257;6,495,594;6,489,314;6,458,976;6,441,186;6,441,025;6,414,015;6,387,927;6,380,395;6,380,394;6,362,217;6,359,140;6,306,893;6,302,838;6,300,355;6,291,690;6,291,684;6,268,381;6,262,107;6,262,094;6,147,234;6,136,808;6,127,406;6,100,411;6,096,909;6,025,385;6,011,056;5,965,718;5,955,489;5,919,815;5,912,263;5,840,750;5,821,263;5,767,297;5,728,725;5,721,268;5,719,177;5,714,513;5,587,489;5,473,057;5,407,674;5,250,722;5,010,099;和4,939,168;以及U.S.专利申请公开2003/0186965A1;2003/0176710A1;2003/0176473A1;2003/0144523A1;2003/0134883A1;2003/0087888A1;2003/0060623A1;2003/0045711A1;2003/0023082A1;2002/0198256A1;2002/0193361A1;2002/0188014A1;2002/0165257A1;2002/0156110A1;2002/0128471A1;2002/0045609A1;2002/0022651A1;2002/0016356A1;2002/0002292A1,将其分别引入本文作为参考。
其他可与本发明的化合物一同给药的化疗药物列于下表:
烷基化剂 | 环磷酰胺洛莫司汀白消安丙卡巴肼异环磷酰胺六甲蜜胺(altretamine)美法仑磷酸雌莫司汀六甲蜜胺(hexamethylmelamine) | 氮芥塞替派链佐星苯丁酸氮芥替莫唑胺达卡巴嗪司莫司汀卡莫司汀 |
铂药物 | 顺铂卡铂奥沙利铂ZD-0473(AnorMED)螺铂洛铂(Aeterna)Carboxy phthalatoplatinum赛特铂(Johnson Matthey) | 四氯环己铂(tetraplatin)BBR-3464(Hoffmann-La Roche)奥马铂(Ormiplatin)SM-11355(Sumitomo)异丙铂AP-5280(Access) |
抗代谢物 | 氮杂胞苷雷替曲塞(tomudex)吉西他滨三甲曲沙卡培他滨脱氧助间型霉素(deoxycoformycin)5-氟尿嘧啶氟达拉滨氮尿苷喷司他丁2-氯脱氧腺苷雷替曲塞 | 6-巯嘌呤羟基脲6-硫代鸟嘌呤地西他滨(SuperGen)阿糖胞苷clofarabine(Bioenvision)2-氟脱氧胞苷伊洛福芬(irofulven)(MGIPharma)甲氨蝶呤DMDC(Hoffmann-La Roche)idatrexate乙炔基胞苷(Taiho) |
拓扑异构酶抑制剂 | 安吖啶鲁比特康(rubitecan)(SuperGen)表柔比星exatecan mesylate(Daiichi)依托泊苷quinamed(ChemGenex)替尼泊苷或米托蒽醌gimatecan(Sigma-Tau)伊立替康(CPT-11)diflomotecan(Beaufour-Ipsen)7-乙基-10-羟基-喜树碱 | TAS-103(Taiho)托泊替康依沙芦星(Spectrum)右雷佐生(TopoTarget)J-107088(Merck & Co)pixantrone(Novuspharma)BNP-1350(BioNumerik)蝴蝶霉素(rebeccamycin)类似物(Exelixis)CKD-602(Chong Kun Dang)BBR-3576(Novuspharma)KW-2170(Kyowa Hakko) |
[0955]
抗肿瘤抗生素 | 放线菌素(放线菌素D) 氨萘非特 多柔比星(阿霉素) azonafide deoxyrubicin 蒽吡唑(anthrapyrazole) 戊柔比星(valrubicin) 吡咯蒽醌(oxantrazole) 柔红霉素(道诺霉素) 洛索蒽醌 表柔比星 硫酸博来霉素(blenoxane)therarubicin | bleomycinic acid 伊达比星 博来霉素A 柔红霉素苯腙(rubidazone) 博来霉素B 普卡霉素 丝裂霉素C 泊非霉素 MEN-10755(Menarini) 氰基吗啉代多柔比星 GPX-100(Gem Pharmaceuticals)米托蒽醌(novantrone) |
抗有丝分裂剂 | 紫杉醇 SB408075(GlaxoSmithKline) 多西他赛 E7010(Abbott) 秋水仙碱 PG-TXL(Cell Therapeutics) 长春碱 IDN5109(Bayer) 长春新碱 A105972(Abbott) 长春瑞滨 A204]97(Abbott) 长春地辛 LU22365](BASF) dolastatin10(NCI) D24851(ASTAMedica) 力索新(rhizoxin)(Fujisawa)ER-86526(Eisai) mivobulin(Warner-Lambert) combretastatin A4(BMS) 西马多丁(BASF) isohomohalichondrin-B (PharmaMar) | RPR109881A(Aventis) ZD6126(AstraZeneca) TXD258(Aventis) PEG-紫杉醇(Enzon) 埃博霉素B(Novartis) AZ10992(Asahi) T900607(Tularik) IDN-5109(Indena) T138067(Tularik) AVLB(Prescient NeuroPharma) cryptophycin52(Eli Lilly) 氮杂埃博霉素(azaepothilone)B (BMS) 长春氟宁(Fabre) BNP-7787(BioNumerik) auristatin PE(Teikoku Hormone)CA-4prodrug(OXiGENE) BMS247550(BMS) 海兔毒素(dolastatin)-10(NIH) BMS184476(BMS) CA-4(OXiGENE) BMS188797(BMS) taxoprexin(Protarga) |
芳香酶抑制剂 | 氨鲁米特 依西美坦 来曲唑 阿他美坦(BioMedicines) | 阿那曲唑 YM-511(Yamanouchi)福美坦 |
胸苷酸合酶抑制剂 | 培美曲塞(pemetrexed)(Eli Lilly) 诺拉曲特(nolatrexed)(Eximias) | ZD-9331(BTG) CoFatorTM(BioKeys) |
[0956]
DNA拮抗剂 | trabectedin(PharmaMar) 马磷酰胺(Baxter International)glufosfamide(Baxter International) apaziquone(Spectrum Pharmaceuticals) | 白蛋白+32P(Isotope Solutions)O6苄基鸟嘌呤(Paligent) thymectacin(NewBiotics) edotreotide(Novartis) |
法尼基转移酶抑制剂 | arglabin(NuOncology Labs) tipifarnib(Johnson & Johnson)lonafarnib(Schering-Plough) | 紫苏醇(DOR BioPharma)BAY-43-9006(Bayer) |
泵抑制剂 | CBT-1(CBA Pharma) zosuquidar trihydrochloride(EliLilly) | tariquidar(Xenova) biricodar dicitrate(Vertex)MS-209(Schering AG) |
组蛋白乙酰转移酶抑制剂 | 泰克地那林(tacedinaline)(Pfizer)新戊酰基氧基甲基丁酸酯(Titan) SAHA(Aton Pharma) | 缩酚酸肽(Fujisawa)MS-275(Schering AG) |
金属蛋白酶抑制剂 | Neovastat(Aeterna Laboratories)CMT-3(CollaGenex) | 马立马司他(British Biotech)BMS-275291(Celltech) |
核糖核苷还原酶抑制剂 | gallium maltolate(Titan) tezacitabine(Aventis) | triapine(Vion) didox(Molecules for Health) |
TNFα激动剂/拮抗剂 | virulizin(Lorus Therapeutics)revimid(Celgene) | CDC-394(Celgene) |
内皮素A受体拮抗剂 | 阿曲生坦(atrasentan)(Abbott)YM-598(Yamanouchi) | ZD-4054(AstraZeneca) |
视黄酸受体激动剂 | 芬维A胺(Johnson & Johnson)alitretinoin(Ligand) | LGD-1550(Ligand) |
免疫调节剂 | 干扰素 dexosome治疗(Anosys) oncophage(Antigenics) pentrix(Australian CancerTechnology) GMK(Progenics) ISF-154(Tragen) 腺癌疫苗(Biomira) 癌症疫苗(Intercell) CTP-37(A VI BioPharma) | norelin(Biostar) IRX-2(Immuno-Rx) BLP-25(Biomira) PEP-005(Peplin Biotech) MGV(Progenics) synchrovax疫苗(CTL Immuno)β-alethine(Dovetail) 黑色素瘤疫苗(CTL Immuno) CLL治疗(Vasogen) p21RAS疫苗(Gem Vax) |
[0957]
激素和抗激素药物 | 雌激素泼尼松结合雌激素甲基泼尼松炔雌醇泼尼松龙chlortrianisen氨鲁米特己二烯雌酚(idenestrol)leuprolide己酸羟基孕酮戈舍瑞林甲羟孕酮leuporelin睾酮 | 比卡鲁胺丙酸睾酮氟甲睾酮氟他胺甲睾酮奥曲肽己烯雌酚尼鲁米特甲地孕酮米托坦他莫昔芬P-04(Novogen)Toremofine2-甲氧基雌二醇(EntreMed)地塞米松arzoxifene(Eli Lilly) |
光动力剂 | 他拉泊芬(talaporfin)(LightSciences)Pd-bacteriopheophorbide(Yeda)Theralux(Theratechnologies)得克萨菲啉镥(lutetiumtexaphyrin)(Pharmacyclics) | motexafin钆(Pharmacyclics)金丝桃素 |
酪氨酸激酶抑制剂 | 伊马替尼(imatinib)(Novartis)kahalide F(PharmaMar)来氟米特(Sugen/Pharmacia)CEP-701(Cephalon)ZD1839(AstraZeneca)CEP-751(Cephalon)埃罗替尼(erlotinib)(OncogeneScience)MLN518(Millenium)canertinib(Pfizer)PKC412(Novartis)squalamine(Genaera)phenoxodiol()SU5416(Pharmacia)曲妥珠单抗(trastuzumab)(Genentech)SU6668(Pharmacia) | C225(ImClone)ZD4190(AstraZeneca)rhu-Mab(Genentech)ZD6474(AstraZeneca)MDX-H210(Medarex)瓦他拉尼(vatalanib)(Novartis)2C4(Genentech)PKI166(Novartis)MDX-447(Medarex)GW20]6(GlaxoSmithKline)ABX-EGF(Abgenix)EKB-509(Wyeth)IMC-1C11(ImClone)EKB-569(Wyeth) |
其他的组合也可包括降低前述药物的毒性例如肝毒性、神经毒性、肾毒性等的药物。
筛选试验
本发明化合物也可用于筛选其他与IAP BIR域结合的化合物的方法中。大体而言,将IAP结合在载体(support)上并将本发明化合物加入试验中以将本发明化合物用于鉴别结合至IAP BIR域的化合物的方法中。或者,可以将本发明化合物结合至载体上并加入IAP。
有若干方法用于确定本发明化合物与BIR域的结合。在一种方法中,例如可将本发明化合物荧光或者放射性标记并直接测定结合。例如,可以通过将IAP连接至固体载体上、加入可检测地标记的本发明化合物、洗去过量的试剂、并且测定可检测标记的量是否是否在于固体载体上的量来实施上述方法。可使用多种封闭(blocking)和洗涤步骤,这些是本领域技术人员公知的。
在某些情况下,仅标记一种成分。例如,可以标记BIR域中的特定残基。或者可以用不同的标记标记多于一种的成分;例如使用I125标记BIR域,使用荧光标记标记探针。
本发明的化合物可用作筛选其他候选药物或者受试化合物的竞争剂。如此处使用的,术语“候选药物”或者“受试化合物”可互换地使用,表示要测试生物活性的任何分子例如蛋白质、寡肽、小的有机分子、多糖、多核苷酸等。所述化合物可能能够直接或者间接地改变IAP生物活性。
候选药物可包括各种化学种类,尽管通常它们都是分子量高于100并小于约2500道尔顿的小的有机分子。候选药物通常包括与蛋白质在结构上相互作用必须的官能团,例如氢键和亲脂性结合,并且通常包括至少胺、羰基、羟基、醚、或者羧基基团。所述候选药物通常包括被一个或多个官能团取代的环状碳结构或者杂环结构和/或芳香或多芳香结构。
候选药物可以得自任意数量的来源,包括合成或天然化合物库。例如许多手段可用于随机和定向合成广泛的有机化合物和生物分子,包括随机化的寡核苷酸的表达。或者,细菌、真菌、植物和动物提取物形式的天然化合物库是可用的或者易于制备的。此外,天然或者合成制备的库和化合物易于通过常规的化学、物理和生物化学手段修饰。
可以通过在第一样品中将IAP BIR域和探针结合以形成探针:BIR域复合物然后将来自第二样品的受试化合物加入来进行竞争性筛选试验。测定所述试验的结合,在两样品之间的结合的变化或者差异表示存在能够与BIR域结合并潜在地调节IAP活性的受试化合物。
在一种情况下,受试化合物的结合通过使用竞争性结合试验测定。在这种实施方案中,用荧光标记标记探针。在某些情况下,受试化合物和探针之间可能存在竞争性结合。导致与对照相比荧光的变化的显示出探针的受试化合物被认为与BIR域结合。
在一种情况下,受试化合物可以被标记。或者受试化合物、或者本发明化合物、或者两者均被首先加至IAP BIR域一段足以结合形成复合物的时间。
考虑到高通量筛选,探针:BIR域复合物的形成通常需要在4℃至40℃之间温育10分钟至约1小时。通常除去或者洗去任何过量的试剂。然后加入受试化合物,然后是存在或者不存在的标记的成分,以指示至BIR域的结合。
在一种情况下,首先加入所述探针,然后加入受试化合物。探针的置换是受试化合物与BIR域结合并因此能够结合至并潜在地调节IAP的活性的标志。可标记任一种成分。例如,在洗液中存在探针表明被受试化合物置换。或者,如果受试化合物被标记,在载体上存在的探针表明发生了置换。
在一种情况下,可以首先加入受试化合物,温育并洗涤,然后加入探针。没有被探针结合可能表明受试化合物以更高的亲和力与BIR域结合。因此,如果在载体上检测到探针,并且没有与受试化合物结合,则可能表明所述受试化合物能够与BIR域结合。
通过筛选受试化合物调节IAP活性的能力而进行调节试验,调节试验包括如上所述将受试化合物与IAP BIR域结合,并测定IAP生物活性的变化。因此在这种情况下,受试化合物应当既与BIR域结合(尽管这并非是必须的)又如上所述改变其生物活性。
在所述试验中可使用阳性对照以及阴性对照。所有的对照和受试样品均进行多次以获得统计学显著性结果。在温育后,洗涤样品除去非特异性结合的物质并测定结合的探针的量。例如,在使用放射性标记的情况下,可以在闪烁计数器中对所述样品计数以测定结合的化合物的量。
通常,取决于标记的性质,在试验中检测的信号可能包括荧光、能量共振转移、时间分辨荧光、放射活性、荧光偏振、等离子体共振、或者化学发光等。可用于进行本发明筛选试验的可检测的标记包括荧光标记如荧光素、俄勒冈绿(Oregon green)、丹磺酰、罗丹明、四甲基罗丹明、德州红、Eu3+;化学发光标记如荧光素酶;比色标记;酶标记物;或者放射性同位素如氘、I125等。
可用于进行本发明的筛选试验的亲和标签包括生物素、聚组氨酸等。
合成以及方法学
以下所示为用于合成本发明化合物的通用方法,公开这些方法仅用于举例说明的目的,并非意欲对通过任何其他方法制备所述化合物的工艺晶型限制。本领域技术人员将容易理解,有许多方法可用于制备本发明化合物。
通用步骤
可以预想用于制备由式I和式II代表的对称或者不对称地桥连的化合物的若干方法。在路线1至8以及路线17至20中图示了通用方法,而在路线9至16以及路线21至26中图示了具体的实例。
路线1图示了用于制备式I的双炔基桥连的化合物的通用程序。用NaH将N-PG1-2-羟基脯氨酸脱质子化,并用炔丙基溴处理以提供脯氨酸中间体1-i。用肽偶联剂活化1-i的羧酸并用伯胺或者仲胺处理,并将PG1脱保护以提供酰胺中间体1-ii。通过用肽偶联剂活化PG2(H)N(R3)CHCO2H的羧酸,然后加入1-ii以提供完全保护的酰胺,从而实现PG2(H)N(R3)CHCO2H与1-ii的肽偶联,其可以进一步在PG2脱保护以提供酰胺1-iii。用肽偶联剂活化PG3(R1)N(R2)CHCO2H的羧酸,然后加入1-iii以提供酰胺中间体1-iv。使用合适的催化剂系统通过1-iv的炔部分的自身偶联(homo-coupling)制备双炔基桥连部分,然后脱保护PG3以提供化合物1-v。
路线1
如路线2中所示,通过典型的酰胺偶联/脱保护路线制备中间体2-i。如此,用氨基酸偶联试剂活化pG1-顺-2-氨基-Pro(PG2)-OH的羧酸部分,用胺处理以提供相应的酰胺,然后在合适的反应条件下脱去pG1以提供中间体2-i。以类似的方式,pG3(H)N(R3)HCCO2H与2-i偶联,然后脱保护pG3以提供2-ii。pG4(R1)N(R2)HCCO2H与2-ii偶联以提供2-iii。脱保护pG2提供2-iv。
路线2
路线3图示了式I的酰胺桥连的化合物可以通过在碱的存在下用合适地活化的二酸处理3-i以提供3-ii制备。PG4脱保护提供通式3-iii的化合物。二酸的活化可以包括活性酯、酰氯、酰溴、琥珀酰胺酯、HOBt酯的使用,以及用于酰胺键形成中的其他试剂的使用。
L=-(CH2)r-、-(CH2)r-Y-(CH2)r-、-烷基-芳基-烷基-、-烷基-杂芳基-烷基-、
环烷基、芳基或杂芳基、其中r为1-10
路线3
路线4图示了烷基桥连的化合物,其可以使用如上所述的方法制备。用0.5当量的含有两个离去基团的烷基链如1,5-二溴戊烷、1,10-二溴癸烷等处理3-i提供中间体4-i。或者,用二醛还原氨基化3-i可以得到中间体4-i。脱保护PG4得到式4-ii的化合物。
路线4
路线5图示了一种其中两个BIR结合单元可以通过双乙炔桥连单元桥连的方法。5-i和5-ii的偶联提供对称地桥连的中间体5-iii和5-v以及不对称的中间体5-iv的混合物。可以通过如色谱法或者重结晶的方法分离5-ii、5-iii以及5-v。脱保护单独的中间体5-iii、5-iv和5-v或者其混合物提供化合物5-vi、5-vii和5-viii。
路线5:中间体5-i和5-ii的偶联
路线6中所示为用于制备不对称地桥连的化合物的另一种方法。偶联5-i和6-i将提供中间体6-ii、5-iii和6-iii的混合物。可以通过如色谱法或者重结晶的方法分离6-ii、5-iii和6-iii。中间体6-iii的pG4脱保护提供化合物6-iv。
路线6:中间体5-i和6-i的偶联
另一种策略包括如路线7和8中所示的通过双酰胺桥连基团桥连两个BIR结合单元。
用肽偶联剂活化单保护的桥连基团HO2C-L-CO2PG5,随后用中间体3-i处理以提供中间体7-ii。pG5脱保护提供中间体7-iii。用肽偶联剂然后用7-iv处理7-iii提供7-v。pG4和pG400脱保护提供化合物7-vi。
路线7:P3-P3双-酰胺桥连的化合物
如路线8中所示,类似的方法可用于制备在P2和P3之间被桥连的不对称地桥连的BIR结合单元。用环酸酐如琥珀酸酐或戊二酸酐处理8-i提供中间体8-ii。用酰胺偶联剂然后用3-i处理8-ii提供中间体8-iii。pG4脱保护提供化合物8-iv。
路线8:P2-P3双-酰胺桥连的化合物
路线9图示了化合物1的合成。用在DMF中的NaH然后用炔丙基溴处理Boc-顺-2-羟基-L-脯氨酸以提供中间体9-1。与(R)-1,2,3,4-四氢-1-萘胺进行酰胺偶联,并用TFA使Boc脱保护提供中间体9-2。Boc-叔-BuGly-OH与9-2酰胺偶联,然后用TFA使Boc脱保护提供中间体9-3。Boc-MeAla-OH与中间体9-3的酰胺偶联提供中间体9-4。使用CuI/TMEDA催化剂在O2下自身偶联9-4的乙炔基团得到中间体9-5,然后使用在1-4二噁烷中的4N HCl脱保护提供化合物1·2HCl。
路线9
中间体10-6用于化合物2和3的制备中(参见路线10至12)。使用与中间体9-4所述的类似的程序在第一步中使用Fmoc-AMPC(2S,4S)-OH制备中间体10-5。使用碱如20%吗啉在溶剂如THF中除去Fmoc保护基提供中间体10-6。
路线10
在THF中使用0.5当量的癸二酰氯处理中间体10-6提供11-1。使用4N在1,4-二噁烷中的HCl除去Boc保护基提供化合物2·2HCl(路线11)。
路线11
类似地,在THF中使用0.5当量对苯二酰氯处理中间体10-6提供12-1。使用1N在1,4-二噁烷中的HCl除去Boc保护基提供化合物3·2HCl(路线12)。
路线12
路线13图示了化合物4和5的制备。在丙酮中使用CuCl和TMEDA催化剂系统在氧气氛下偶联中间体9-4和13-1以提供中间体9-5、13-2以及13-3的混合物。硅胶色谱分离提供各单独的中间体。使用4N在1,4-二噁烷中的HCl处理单独地使中间体13-2和13-3脱保护,分别得到化合物4·2HCl和5·2HCl。
路线13:化合物4和5的合成
路线14图示了化合物6的制备。在丙酮中使用CuCl和TMEDA催化剂系统在氧气氛下偶联中间体9-4和14-1。通过硅胶色谱从所得的混合物中分离中间体14-2。使用4N在1,4-二噁烷中的HCl处理使中间体14-2脱保护以提供化合物6·2HCl。
路线14:
路线15图示了P2-P3桥连的化合物7和8的制备。用戊二酸酐处理中间体15-1以提供中间体15-2。用HBTU、HOBt和DIPEA处理15-2,然后加入DMF中的10-6,得到中间体15-3。使用H2在Pd/C上除去Cbz保护基得到中间体15-4。用Boc-N-MeAla-OH酰化15-4提供中间体15-5,使用4N在1,4-二噁烷中的HCl除去其Boc保护基提供化合物7·2HCl。
路线15
使用以聚苯乙烯作为载体的N-甲基哌嗪在DMF中除去化合物7·2HCl的Fmoc保护基提供化合物8。使用4N在1,4-二噁烷中的HCl除去中间体15-3的Boc保护基提供化合物9·HCl(参见路线16)。
路线16
路线17图示了由磺酰胺键桥连的化合物的合成。用二磺酰氯试剂处理3-i提供中间体17-i。PG4脱保护提供化合物17-ii。
路线17
类似地,用双-异氰酸酯处理3-i提供中间体18-i,其在脱保护PG4后得到化合物18-ii。
路线18
路线19a和19b描述了制备其中A=CO且Q=NR4R5的化合物3-iii、17-ii或18-ii的可供替换的路线。用LG-L-LG处理被保护的氨基-脯氨酸衍生物19-1以提供中间体19-2,然后在PG1脱保护得到中间体19-3。通过如前所述的氨基酸偶联/脱保护程序将中间体19-3转化为中间体19-5。第三个氨基酸偶联步骤将中间体19-5转化为中间体19-6。19-6在pG2脱保护得到二酸中间体19-7。用氨基酸偶联试剂、然后用R4R5NH处理19-7得到中间体19-8,脱保护pG4后得到化合物19-9。
路线19a
路线19b
该方法可用于合成桥连的双-脯氨酸酰胺、磺酰胺和脲。例如,在其中桥连基团包括Ar部分的情况下,X-L-X=-NHS(O)2-Ar-S(O)2NH-、NHC(O)-Ar-C(O)NH-、或-NHC(O)NH-Ar-NHC(O)NH-、-O-CH2ArCH2-O-。
或者,脯氨酸衍生物19-2可以在pG2脱保护并转化为酰胺中间体20-3。在如上所述的类似的程序后,20-3可被转化为化合物19-9。
路线20
路线21中图示了化合物20的合成。用对苯二酰氯处理N-Boc-顺-4-氨基-L-脯氨酸甲酯(21-1)以提供中间体21-2,将其用TFA进一步脱保护得到中间体21-3。用HBTU和HOBt使中间体21-3与Boc-叔-BuGyl-OH(21-4)偶联,然后用TFA脱保护以提供中间体21-6。使用HBTU和HOBt使中间体21-6与Boc-N-MeAla-OH(21-7)偶联以提供中间体21-8。使用LiOH皂化甲酯以提供中间体21-9。使用HBTU和HOBt使中间体21-9与苯乙胺偶联提供中间体21-10,将其用在1,4-二噁烷中的HCl脱保护以提供化合物20·2HCl。
路线21
该方法用于制备许多脯氨酸酰胺衍生物如化合物19至24以及46至51。该方法如路线22中所示,其中,中间体21-9与2-丙酰胺偶联,然后HCl脱保护得到化合物22·2HCl,而中间体21-9与1,1-二苯基甲胺偶联然后用HCl脱保护提供化合物24·2HCl。
路线22
吡咯烷衍生物的制备如路线23中所述。将中间体21-8的酯部分还原为醇23-1,然后将其氧化为醛23-2。使用苯乙胺还原氨化提供中间体23-4。用乙酰氯或苄酰氯酰化23-4分别提供23-3和23-6。使用1N在1,4-二噁烷中的HCl脱保护提供化合物25·2HCl和27·2HCl。
路线23a
路线23b
用甲磺酰氯磺酰化23-4,然后使用1N在1,4-二噁烷中的HCl脱保护提供化合物26·2HCl。
中间体24-1提供了可用于制备醚桥连的化合物的有用的模板。如下文所述,由N-Boc-顺-4-羟基-L-脯氨酸和α,α’-二溴-p-二甲苯制备中间体24-1。酰胺偶联并用TFA脱去Boc保护基得到中间体24-3。如上所述的两连续的氨基酸偶联和脱保护步骤提供化合物29·2HCl。
路线24
使用1,3-苯二磺酰氯桥连中间体10-6得到中间体25-1。使用4N在1,4-二噁烷中的HCl脱保护提供化合物33,为其二-HCl盐。
路线25
类似地,使用1,4-苯二异氰酸酯桥连中间体10-6得到中间体26-1,其在用TFA脱保护后得到化合物44,为二-TFA盐。
路线26
路线27中所示为化合物35的制备。用piperide在THF中处理使中间体10-1脱保护得到中间体27-1。27-1与Cbz-Gly-OH偶联,随后脱去Boc保护得到中间体27-3·TFA。27-3与Boc-t-BuGly-OH偶联,随后脱去Boc保护得到中间体27-5·TFA。27-5·2TFA与Boc-NMeAla-OH偶联提供中间体27-2。使用H2和Pd/C除去Cbz基团得到27-7,使用对苯二酰氯将其桥连得到中间体27-8。使用4N在1,4-二噁烷中的HCl脱保护提供化合物35·2HCl。
路线27a
路线27b
由光学活性的(R)-2-羟基-1-苯基乙胺(28-1)制备了各种手性胺。将中间体28-1以Boc保护得到28-2。用各种卤代烷基将28-2的醇部分烷基化得到中间体28-3、28-4和28-5。用HCl将中间体28-3、28-4和28-5脱保护得到手性胺28-6、28-7和28-8。
路线28
以化合物22和24中所述的类似的方式将中间体28-6、28-7和28-8与中间体21-9偶联(参见路线22)以分别提供化合物63、64和65。
其他手性胺可以商购获得或者可以通过许多方法制备,所述方法包括使用手性或非手性化学品的酮、醇或叠氮化物至胺的转化或者相互转化,以及通过本领域已知的方法如色谱法或结晶法的异构体手性拆分。
例如,路线29图示了光学富集的、非对称的1,1-二苯基甲胺的对映选择性合成,其通过将芳基硼酸加入手性sulfinimines中,然后用酸水解sulfinimines以提供光学富集的胺中间体例如中间体29-4和29-5而制备(Bolshan,Y.;Batey,R.A.,Org.Letters2005,7,1481-1484)。
路线29
以化合物22和24所图示的类似的方式使中间体29-4和29-5与中间体21-9偶联(参见路线22)以分别得到化合物66和67。
存在若干用于将四氢萘酮转化为手性1,2,3,4-四氢萘基-1-胺的方法,例如由R.A.Stalker等,Tetrahedron2002,58,4837中发表的方法,将其概述如下:
可以使用如路线21和22所图示的类似的方法将这些手性胺并入本发明的化合物中。
以上路线可用于合成本发明的对称化合物以及不对称化合物。取代基A1、A、Q、Q1、R1、R100、R2、R200、R3、R300等如此处所定义。LG为离去基团,如Cl、Br、I、OTs、OSu或OMs。
实施例
以下缩写用于全文之中:
Boc: t-丁氧基羰基;
CBz: 苄基氧基羰基;
DCM: 二氯甲烷,CH2Cl2;
DIPEA: 二异丙基乙胺;
DMAP: 4-(二甲基氨基)吡啶;
DMF: N,N-二甲基甲酰胺;
DTT: 二硫苏糖醇;
EDC: 3-二甲基氨基丙基-3-乙基碳二亚胺盐酸盐;
EDTA: 乙二胺四乙酸;
Fmoc: N-(9-芴基甲氧基羰基);
HBTU: O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐;
HCl: 盐酸;
HOAc: 乙酸;
HOBt: 1-羟基苯并三唑;
HPLC: 高效液相色谱;
LCMS: 液相色谱-质谱;
MeOH: 甲醇;
MgSO4: 硫酸镁;
MS: 质谱;
NaHCO3: 碳酸氢钠;
Pd/C: 钯碳;
TEA: 三乙胺;
THF: 四氢呋喃;以及
TMEDA: N,N,N,N-四甲基乙二胺。
合成方法
化合物1的合成
步骤1:中间体9-1
在N2下于0℃将NaH(440mg,11.0mmol)悬浮于无水DMF(5mL)中。将Boc-顺-2-羟基-L-脯氨酸(1.00g,4.0mmol)溶于无水DMF(15mL)中并逐滴加入NaH悬浮液中。在0℃将该混合物静置10min。将炔丙基溴(560μL,5.0mmol)逐滴加入溶液中。 将混合物在0℃下搅拌1h然后用H2O淬灭。将内容物与EtOAc和10%柠檬酸一起加入分液漏斗中(直到pH~2)。收集有机层、干燥并减压浓缩。快速色谱(Flashchromatography)(二氧化硅,己烷/THF)得到澄清油状中间体9-1。MS(m/z)M+Na=292。
步骤2:中间体9-2
在N2下将中间体9-1(560mg,2.1mmol)、HOBt(444mg,2.9mmol)、EDC(563mg,2.9mmol)和DIPEA(1.46mL,8.4mmol)溶于无水二氯甲烷(10mL)并在室温下搅拌10min。然后加入1,2,3,4-(R)-四氢萘基-1-胺(368μL,2.5mmol),并将溶液在室温下搅拌24h。然后将内容物与EtOAc一同加入分液漏斗中,并用10%柠檬酸(2×)、饱和NaHCO3(2×)和盐水洗涤。收集有机层、干燥并减压浓缩。在室温下用5ml的50%CH2Cl2/TFA处理产物1hr。真空除去挥发物并用二乙醚研磨残余物得到中间体9-2·TFA。MS(m/z)M+1=299。
步骤3:中间体9-3
在N2下将Boc-t-Bu-Gly-OH(484mg,2.1mmol)、HOBt(375mg,2.4mmol)、HBTU(910mg,2.4mmol)和DIPEA(1.20mL,7mmol)溶于无水DMF(10mL)并在室温下搅拌10min。然后加入中间体9-2(720mg,1.75mmol),并将溶液在室温下搅拌24h。然后将内容物与EtOAc一同加入分液漏斗中,并用10%柠檬酸(2×),饱和NaHCO3(2×)和盐水洗涤。收集有机层、干燥并减压浓缩。在室温下用10mL的50%CH2Cl2/TFA处理所得产物1hr。真空除去挥发物并用二乙醚研磨残余物得到中间体9-3·TFA。MS(m/z)M+1=412。
步骤4:中间体9-4
在N2下将Boc-N-Me-Ala-OH(278mg,1.37mmol)、HOBt(227mg,1.49mmol)、EDC(293mg,1.49mmol)和DIPEA(796μL,4.6mmol)溶于无水二氯甲烷(10mL)并在室温下搅拌10min。然后加入中间体9-3·TFA(600mg,1.14mmol)并将溶液在室温下搅拌24h。加入EtOAc并将有机层用10%柠檬酸(2x)、饱和NaHCO3(2x)和盐水洗涤,用无水MgSO4干燥、过滤、并减压除去挥发物。用硅胶色谱纯化产品,用10-100%己烷/THF洗脱得到中间体9-4。MS(m/z)M+Na=619。
步骤5:化合物1
将中间体9-4(100mg,0.17mmol)、CuCl(25mg,0.25mmol)和N,N,N,N-四甲基乙二胺(38μL,0.25mmol)悬浮于无水丙酮(5ml)中并在O2气氛下在室温下搅拌72h。加 入EtOAc并将有机层用10%柠檬酸(2x)、饱和NaHCO3(2x)和盐水洗涤,用无水MgSO4干燥、过滤并减压除去挥发物。用硅胶色谱纯化产物,用10-100%己烷/THF洗脱得到中间体9-5。在0℃用4N在1,4-二噁烷中的HCl处理9-52小时,然后减压除去挥发物得到化合物1,为其-HCl盐。MS(m/z)M+1=991.7。
中间体10-6的合成
步骤1:中间体10-1
将Fmoc-AMPC(2S,4S)-OH(900mg,2.0mmol)、HBTU(1.14g,3.0mmol)和HOBt(415mg,3.0mmol)溶于无水DMF(10mL)并用DIPEA(1050uL,6.0mmol)处理。将混合物搅拌10分钟然后加入(R)-1,2,3,4-四氢萘基-1-胺(330uL,2.2mmol)。将反应搅拌过夜,然后用乙酸乙酯(100mL)和10%柠檬酸(50mL)稀释。分离有机层并用10%柠檬酸(2x50mL)、饱和碳酸氢钠(3x25mL)和盐水(1x20mL)洗涤,然后用无水硫酸镁干燥,过滤并减压浓缩得到白色固体状粗10-1。以LCMS检测该物质纯度为95%,将其不经进一步纯化而用于下一步中。
步骤2:中间体10-2
将中间体10-1溶于二氯甲烷(10mL)并用TFA(10mL)处理。将溶液在室温下搅拌2小时,然后减压除去挥发物。用二乙醚(25mL)搅拌所得油状物得到浅褐色固体,经过滤并用二乙醚(2x5mL)洗涤得到浅褐色固体化合物10-2·TFA(1.17g)。
步骤3:中间体10-3
将Boc-t-BuGly-OH(460mg,2.0mmol)、HBTU(760mg,2.0mmol)和HOBt(270mg,2.0mmol)以及DIPEA(765uL,7.5mmol)溶于无水DMF(10mL)并将反应在室温下搅拌10min,然后加入中间体10-2(867mg,1.5mmol)。将混合物搅拌过夜,然后用乙酸乙酯(200mL)和10%柠檬酸(50mL)稀释。分离有机层并用10%柠檬酸(2x50mL)、饱和碳酸氢钠(3x25mL)和盐水(1x20mL)洗涤,然后用无水硫酸镁干燥、过滤并减压浓缩得到白色固体状粗10-3(920mg,LCMS纯度>95%),将其不经进一步纯化即用于下一步中。
步骤4:中间体10-4
将中间体10-3溶于二氯甲烷(10mL)并用TFA(10mL)。将溶液在室温下搅拌2小时然后减压除去挥发物。将所得油状物用二乙醚(20mL)搅拌得到浅褐色固体,将其过滤、用二乙醚(2x5mL)洗涤得到白色固体状化合物10-4·TFA。
步骤5:中间体10-5
将Boc-MeAla-OH(308mg,1.52mmol)、HBTU(450mg,1.91mmol)和HOBt(260mg,1.91mmol)溶于无水DMF(10mL)。加入DIPEA(886uL,5.0mmol)并将反应在室温下搅拌10min,然后加入中间体10-4(900mg,1.27mmol)。将混合物搅拌过夜,然后用乙酸乙酯(200mL)和10%柠檬酸(50mL)稀释。分离有机层并用10%柠檬酸(2x50mL)、饱和碳酸氢钠(3x25mL)和盐水(1x20mL)洗涤,然后用无水硫酸镁干燥、过滤并减压浓缩得到白色固体状粗10-5(0.87mg,LCMS纯度95.5%),将其不经进一步纯化即用于下一步中。
步骤6:中间体10-6
将中间体10-5溶于20%吗啉/THF(10mL)并将溶液在室温下搅拌16小时。减压除去挥发物得到白色固体状化合物10-6。进一步通过硅胶色谱纯化得到10-6,其LCMS纯度为95%(MS(m/z)M+1=617.4。
化合物2的合成
步骤1:中间体11-1
将粗10-6(200mg,0.251mmol)溶于THF(5mL)并在冰浴中冷却。加入DIPEA(50uL,0.275mmol)和癸二酰氯(26uL,0.125mmol)并将反应在室温下搅拌4小时,然后用乙酸乙酯(20mL)和饱和碳酸氢钠稀释。分离有机层,用盐水洗涤,用无水硫酸镁干燥、过滤并减压除去溶剂。将所得粗固体用硅胶色谱纯化,用10-100%己烷/THF梯度洗脱,得到白色固体状11-1(55mg)。
步骤2:化合物2
用4N在1,4-二噁烷(3mL)中的HCl处理中间体11-1(50mg)并搅拌3小时。减压除去挥发物并用二乙醚(3x5mL)研磨所得固体。减压干燥所得固体得到灰白色固体状化合物2·2HCl(30mg)。MS(m/z)(M+2)/2=541.4。
化合物3
步骤1:中间体12-1
将粗10-6(200mg,0.251mmol)溶于THF(5mL)并在冰浴上冷却至4℃。加入DIPEA(50uL,0.275mmol)。加入对苯二酰氯(26uL,0.125mmol)并将反应搅拌16小时,然后用乙酸乙酯(20mL)和饱和碳酸氢钠稀释。分离有机层,用盐水洗涤,用无水硫酸镁干燥,过滤并减压除去溶剂。将所得粗固体用硅胶色谱纯化,用25-100%己烷/THF梯度洗脱,得到白色固体状12-1(90mg)。
步骤2:化合物3
用4N在1,4-二噁烷(3mL)中的HCl处理中间体12-1(90mg)并搅拌3小时。减压除去挥发物,并用二乙醚研磨所得固体,过滤并用二乙醚(3x5mL)洗涤。减压干燥所得固体得到灰白色固体状化合物3·2HCI(40mg)。MS(m/z)(M+2)/2=523.4。
化合物4和5
将中间体9-4(130mg,0.2]mmol)和中间体13-1(130mg,0.22mmol)、CuCl(60mg,0.6mmol)和四甲基乙二胺(90μL,0.6mmol)悬浮于无水丙酮(15mL)并在室温下在O2气氛下搅拌120小时。加入EtOAc并用10%柠檬酸(2x)、饱和NaHCO3(2x)和盐水洗涤有机层,用无水Mg2SO4干燥,过滤并减压浓缩。用硅胶色谱纯化产物,用10-100%己烷/THF洗脱得到中间体9-5、13-2和13-3。将中间体13-2和13-3独立地用4N在1,4-二噁烷中的HCl处理。除去挥发物并将所得固体用二乙醚研磨,过滤并用二乙醚洗涤,分别得到化合物4和5,为它们的二-HCl盐。
化合物4·2HCl:MS(m/s)M+1=993.5。
化合物5·2HCl:MS(m/z)M+1=995.6。
化合物6
将中间体9-4(250mg,0.400mmol)、中间体14-1(560mg,0.900mmol)、CuCl(267mg,2.7mmol)和四甲基乙二胺(405μL,2.7mmol)悬浮于无水丙酮(10mL)并在室温下在O2气氛下搅拌72小时。加入Celite并通过celite垫过滤混合物。将EtOAc加入滤液并将所得有机层用10%柠檬酸(2x)、饱和NaHCO3(2x)和盐水洗涤,用无水Mg2SO4干燥,过滤并减压浓缩。用硅胶色谱纯化产物,用10-100%己烷/THF洗脱,得到中间体14-2。将中间体14-2用4N在1,4-二噁烷中的HCl处理。除去挥发物并将所得固体用二乙醚研磨,过滤并用二乙醚洗涤,得到化合物6,为其二-HCl盐。MS(m/s)(M+2)/2=514.4。
化合物7
步骤1:
在N2下在0℃将中间体15-1(1.0g,1.2mmol)、戊二酸酐(190mg,1.7mmol)和DIPEA(836μL,4.8mmol)溶于二氯甲烷(20mL)。加入催化量的DMAP并将溶液在冰上搅拌30min并在室温下搅拌24小时。向滤液中加入EtOAc并将所得有机层用10%柠檬酸(2x)、饱和NaHCO3(2x)和盐水洗涤,用无水Mg2SO4干燥,过滤并减压浓缩得到白色固体状中间体15-2。
步骤2:
在N2下将中间体15-2(420mg,0.5mmol)、HOBt(85mg,0.63mmol)、HBTU(222mg,0.60mmol)和DIPEA(313μL,1.8mmol)溶于无水DMF(5ml)并在室温下搅拌10min。加入中间体10-6(250mg,0.45mmol)并将溶液在室温下搅拌24小时。加入EtOAc并将所得有机层用10%柠檬酸(2x)、饱和NaHCO3(2x)和盐水洗涤,用无水Mg2SO4干燥,过滤并减压浓缩。用硅胶色谱纯化产物,用10-100%己烷/THF洗脱,得到中间体15-3。
步骤3:
将中间体15-3(240mg,0.17mmol)、10wt%Pd/C(50mg,50%H2O)悬浮于MeOH(10mL)中并在室温下在H2气氛下搅拌24h(1atm)。在celite上过滤内容物并用MeOH洗涤。减压下浓缩滤液得到白色固体状中间体15-4。
步骤4:
在N2下将BocNMe-Ala-OH(57mg,0.28mmol)、HOBt(44mg,0.33mmol)、HBTU(116mg,0.31mmol)和DIPEA(90μL,0.52mmol)溶于无水DMF(5mL),并用中间体15-4(160mg,0.13mmol)处理。在室温下搅拌24小时后加入EtOAc并将所得有机层用10%柠檬酸(2x)、饱和NaHCO3(2x)和盐水洗涤,用无水Mg2SO4干燥,过滤并减压浓缩。用硅胶色谱纯化产物,用10-100%己烷/THF洗脱,得到中间体15-5。将中间体15-5用4N在1,4-二噁烷中的HCl在室温下搅拌1小时。减压除去挥发物得到化合物7,为其HCl盐。MS(M+2)/2=618.0。
化合物8:
将化合物7·HCl(100mg,0.08mmol)溶于DMF(1mL)中并加入至哌嗪基甲基聚苯乙烯树脂(0.86mmol/g,356mg,0.3mmol)的CH2Cl2(5mL)混悬液中。在室温下震荡48小时后,加入另外200mg的树脂。将混合物在室温下震荡20天,然后过滤,用MeOH洗涤。减压除去挥发物得到白色固体状化合物8。MS(m/z)M+1=1012。
化合物9:
用4N在1,4-二噁烷中的HCl处理中间体15-3(10mg)1小时。减压除去挥发物得到化合物9,为其HCl盐。MS(m/s)(M+2)/2=642。
用与化合物2所述的类似的方式制备化合物10、11、12、13、14、15、16、39、40、41、42、43、52、55、56、57和58,其中用相应的磺酰氯或者活化的二酸代替步骤1中的癸二酰氯。这些化合物的MS表征总结于表1。
用与化合物29所述的类似的方式制备化合物17,使用1,2,3,4-(R)-四氢萘基-1-胺代替苯乙胺。MS(m/s)(M+2)/2=510.4。
化合物18:
将中间体21-8在4N在1,4-二噁烷中的HCl内搅拌2小时。真空除去挥发物并将残余物用二乙醚研磨得到白色固体状化合物18·2HCl。MS(m/z)M+1=815.4。
用与化合物20所述的类似的方式制备化合物19、21、22、23、24、31、32、46、47、48、49、50、51、54、59、60、61、63、64、65和67,其中在步骤6中用相应的胺代替苯乙胺。这些化合物的MS表征总结于表1。
化合物20
步骤1:中间体21-2
向冷却至0℃的N-Boc-顺-4-氨基-L-脯氨酸甲酯21-1(10.0g,35.61mmol)的CH2Cl2溶液内依次加入TEA(14.88mL,106.80mmol)、DMAP(10mg)和对苯二酰氯(3.61g,17.80mmol),并将反应在室温下搅拌过夜。加入水和乙酸乙酯,分离有机层,用10%柠檬酸、NaHCO3水溶液和盐水洗涤,用无水MgSO4干燥,过滤并真空浓缩。用硅胶色谱纯化得到白色固体状中间体21-2。
步骤2:中间体21-3·2TFA
在0℃将中间体21-2(4.80g,7.76mmol)溶于CH2Cl2(40mL)和TFA(40mL)的混合物。将溶液在室温下搅拌4小时。减压除去挥发物并将残余物用二乙醚研磨得到白色固体状中间体21-3·2TFA。MS(m/z)M+1=419.2。
步骤3:中间体21-5
向冷却至0℃的Boc-α-tBuGly-OH,21-4,(3.95g,17.07mmol)的DMF溶液中依次加入DIPEA(13.5mL,77.6mmol)、HOBt(2.62g,19.4mmol)和HBTU(7.36g,19.4mmol)。在搅拌10分钟后,加入中间体21-3·2TFA(5.02g,7.76mmol)并将反应混合物在室温下搅拌过夜。加入水和乙酸乙酯,分离有机层,用10%柠檬酸、NaHCO3水溶液和盐水洗涤,用无水MgSO4干燥,过滤并真空浓缩。用硅胶色谱纯化得到白色固体状中间体21-5。
步骤4:中间体21-6·2TFA
在0℃将中间体21-5(6.55g,7.76mmol)溶于CH2Cl2(40mL)和TFA(40mL)的混合物中。将溶液在室温下搅拌3小时。减压除去挥发物并将残余物用二乙醚研磨得到白色固体状中间体21-6·2TFA。MS(m/z)M+1=645.4
步骤4:中间体21-8
向冷却至0℃的Boc-NMe-Ala-OH,21-7,(3.15g,15.51mmol)的DMF溶液中依次加入DIPEA(12.3mL,70.5mmol)、HOBt(2.38g,17.63mmol)和HBTU(6.69g,17.63mmol)。搅拌10分钟后加入中间体21-6·2TFA(6.15g,7.05mmol)并将反应混合物在室温下搅拌过夜。加入水和乙酸乙酯,分离有机层,用]0%柠檬酸、NaHCO3水溶液和盐水洗涤,用无水MgSO4干燥,过滤并真空浓缩。用硅胶色谱纯化得到白色固体状中间体21-8。
步骤5:中间体21-9
向冷却至0℃的中间体21-8(6.20g,6.11mmol)的THF(80mL)和MeOH(8mL)溶液中加入1N LiOH水溶液(30.5mL)并将反应在室温下搅拌过夜。用10%柠檬酸将pH调至6并加入乙酸乙酯,分离有机层,用盐水洗涤,用无水MgSO4干燥,过滤并真空浓缩得到白色固体状中间体21-9。
步骤6:中间体21-10
向冷却至0℃的中间体21-9(150mg,0.15mmol)的DMF溶液中依次加入DIPEA(265uL,1.52mmol)、HOBt(51mg,0.38mmol)和HBTU(144mg,0.38mmol)。在搅拌10分钟后,加入苯乙胺(42uL,0.33mmol)并将反应混合物在室温下搅拌过夜。加入水和乙酸乙酯,分离有机层,用10%柠檬酸、NaHCO3水溶液和盐水洗涤,用无水MgSO4干燥,过滤并真空浓缩。用硅胶色谱纯化得到白色固体状中间体21-10。
步骤7:化合物20·2HCl
将4N在1,4-二噁烷中的HCl(3.0mL)加入中间体21-10(145mg,0.12mmol)中并将溶液在0℃下搅拌1小时。减压除去挥发物并将残余物用二乙醚研磨得到白色固体状化合物20·2HCl。MS(m/z)(M+2)/2=497.6。
化合物22·2HCl
步骤1:中间体22-1
向冷却至0℃的中间体21-9(75mg,0.08mmol)的DMF溶液中依次加入DIPEA(135uL,0.76mmol)、HOBt(26mg,0.19mmol)和HBTU(72mg,0.19mmol)。在搅拌10分钟后加入异丙胺(14uL,0.17mmol)并将反应混合物在室温下搅拌过夜。加入水和乙酸乙酯,分离有机层,用10%柠檬酸、NaHCO3水溶液和盐水洗涤,用无水MgSO4干燥,过滤并真空浓缩。用硅胶色谱纯化得到白色固体状中间体22-1。
步骤2:化合物22·2HCl
将4N在1,4-二噁烷(2.0mL)中的HCl加入中间体22-1(58mg,0.05mmol)中并将溶液在0℃搅拌2小时。减压除去挥发物并将残余物用二乙醚研磨得到白色固体状化合物22·2HCl。MS(m/z)(M+2)/2=435.4。
化合物24·2HCl
步骤1:中间体22-2
向冷却至0℃的中间体2]-9(600mg,0.61mmol)的DMF溶液中依次加入DIPEA(1.0mL,6.08mmol)、HOBt(205mg,1.52mmol)和HBTU(576mg,1.52mmol)。在搅拌10分钟后加入氨基二苯基甲烷(230uL,1.34mmol)并将反应混合物在室温下搅拌过夜。加入水和乙酸乙酯,分离有机层,用10%柠檬酸、NaHCO3水溶液和盐水洗涤,用无水MgSO4干燥,过滤并真空浓缩。用硅胶色谱纯化得到白色固体状中间体22-2。
步骤2:化合物24·2HCl
4N在1,4-二噁烷(1.9mL)中的HCl加入中间体22-2(660mg,0.50mmol)中并将溶液在0℃搅拌1小时。减压除去挥发物并将残余物用二乙醚研磨得到白色固体状化合物24·2HCl。MS(m/z)(M+2)/2=435.4。
化合物25
步骤1:中间体23-1
向冷却至0℃的中间体21-8(1.10g,1.08mmol)的THF溶液中加入硼氢化锂(118mg,4.86mmol),并将反应混合物在室温下搅拌3小时。加入乙酸乙酯和10%柠檬酸。分离有机层,用NaHCO3水溶液和盐水洗涤,用无水MgSO4干燥,过滤并真空浓缩。用硅胶色谱纯化得到白色固体状中间体23-1。MS(m/z)M+1=959.6
步骤2:中间体23-2
向中间体23-1(284mg,0.29mmol)的CH2Cl2溶液中加入Dess Martin periodinane(314mg,0.74mmol)并将反应在室温下搅拌5小时。加入NaHCO3水溶液,分离有机层,用盐水洗涤,用无水MgSO4干燥,过滤并真空浓缩。用硅胶色谱纯化得到白色固体状中间体23-2。
步骤3:中间体23-4
向中间体23-2(282mg,0.29mmol)的CH2Cl2溶液加入苯乙胺(82uL,0.65mmol)。在室温下搅拌30分钟后,加入三乙酰氧基硼氢化钠(280mg,1.32mmol)并将反应混合物搅拌2小时。加入饱和NaHCO3水溶液,分离有机层,用盐水洗涤,用无水MgSO4干燥,过滤并真空浓缩。用硅胶色谱纯化得到白色固体状中间体23-4。MS(m/z)M+1=1165.8
步骤4:中间体23-5
向冷却至0°C的中间体23-4(100mg,0.08mmol)的CH2Cl2溶液中依次加入三乙胺(60uL,0.43mmol)和乙酰氯(14uL,0.19mmol)。将反应在室温下搅拌2小时然后加入水和乙酸乙酯。分离有机层,用10%柠檬酸、NaHCO3水溶液和盐水洗涤,用无水MgSO4干燥,过滤并真空浓缩。用硅胶色谱纯化得到白色固体状中间体23-5。
步骤5:化合物25·2HCl
将4N在1,4-二噁烷(3mL)中的HCl加入中间体23-5(80mg,0.06mmol)中并将溶液在室温下搅拌1小时。减压除去挥发物并将残余物用二乙醚研磨得到白色固体状化合物25·2HCl。MS(m/z)(M+2)/2=525.6。
化合物26·2HCl
步骤1:中间体23-5
向冷却至0℃的中间体23-4(100mg,0.08mmol)的CH2Cl2溶液中依次加入TEA(60uL,0.43mmol)和甲磺酰氯(15uL,0.19mmol),并将反应在室温下搅拌2小时。加入水和乙酸乙酯,分离有机层,用10%柠檬酸、NaHCO3水溶液和盐水洗涤,用无水MgSO4干燥,过滤并真空浓缩。用硅胶色谱纯化得到白色固体状中间体23-5。
步骤2:化合物26·2HCl
将4N在1,4-二噁烷(3mL)中的HCl加入中间体23-5(79mg,0.06mmol)中并将溶液在室温下搅拌1小时。减压除去挥发物并将残余物用二乙醚研磨得到白色固体状化合物26·2HCl。MS(m/z)(M+2)/2=561.6。
用与化合物26所述的类似的方式制备化合物27、28和30,其中对于化合物27和28分别使用乙酰氯和苄酰氯代替甲磺酰氯。
化合物27-MS(m/z)(M+2)/2=587.6。
化合物28-MS(m/z)(M+2)/2=543.6。
化合物30-MS(m/z)(M+2)/2=579.6。
化合物29
步骤1:中间体24-1
向冷却至0℃的1.0M NaHMDS的THF溶液(21.6mL,21.6mmol)中缓缓加入N-Boc-顺-4-羟基-L-脯氨酸(2.50g,10.8mmol)的DMF溶液。在0℃搅拌20分钟后,加入α,α’-二溴-p-二甲苯(1.37g,5.0mmol)并将反应混合物在室温下搅拌过夜。加入水和乙酸乙酯,分离有机层,用MgSO4干燥,过滤并真空浓缩。用硅胶色谱纯化得到白色固体状中间体24-1。
步骤2:中间体24-2
向冷却至0℃的中间体24-1(200mg,0.35mmol)的DMF溶液中依次加入DIPEA(365uL,2.1mmol)、HOBt(132mg,0.98mmol)和HBTU(345mg,0.91mmol)。在搅拌10分钟后加入苯乙胺(107uL,0.85mmol)并将反应混合物在室温下搅拌过夜。加入水和乙酸乙酯,分离有机层,用10%柠檬酸、NaHCO3水溶液和盐水洗涤,用无水MgSO4干燥,过滤并真空浓缩。用硅胶色谱纯化得到白色固体状中间体24-2。
步骤3:中间体24-3·2TFA
将中间体24-2(260mg,0.35mmol)溶于CH2Cl2(3mL)和TFA(3mL)的混合物中。将溶液在室温下搅拌1小时。减压除去挥发物并将残余物用二乙醚研磨得到白色固体状中间体24-3·2TFA。MS(m/z)M+1=571.4
步骤4:中间体24-4
向冷却至0℃的Boc-α-tBuGly-OH(256mg,1.10mmol)DMF溶液中依次加入DIPEA(361uL,2.10mmol)、HOBt(175mg,1.3mmol)和HBTU(455mg,1.2mmol)。在搅拌10分钟后加入中间体24-32TFA(230mg,0.46mmol),并将反应混合物在室温下 搅拌过夜。加入水和乙酸乙酯,分离有机层,用10%柠檬酸、NaHCO3水溶液和盐水洗涤,用无水MgSO4干燥,过滤并真空浓缩。用硅胶色谱纯化得到白色固体状中间体24-4。
步骤5:中间体24-5·2TFA
将中间体24-4(458mg,0.46mmol)溶于CH2Cl2(3mL)和TFA(3mL)的混合物中。在室温下搅拌溶液30分钟。减压除去挥发物并将残余物用二乙醚研磨得到白色固体状中间体24-5·2TFA。MS(m/z)M+1=797.6
步骤6:中间体24-6
向冷却至0℃的Boc-NMe-Ala-OH(119mg,0.58mmol)的DMF溶液中依次加入DIPEA(209uL,1.2mmol)、HOBt(91mg,0.67mmol)和HBTU(236mg,0.62mmol)。在搅拌10分钟后加入中间体24-5·2TFA(250mg,0.24mmol),并将反应混合物在室温下搅拌过夜。加入水和乙酸乙酯,分离有机层,用10%柠檬酸、NaHCO3水溶液和盐水洗涤,用无水MgSO4干燥,过滤并真空浓缩。用硅胶色谱纯化得到白色固体状中间体24-6。
步骤7:化合物29·2HCl
将4N在1,4-二噁烷(1.0mL)中的HCl加入中间体24-6(280mg,0.24mmol),将溶液在0℃下搅拌1小时。减压除去挥发物并将残余物用二乙醚研磨得到白色固体状化合物29·2HCl。MS(m/z)M+1=967.6。
化合物33
步骤1:中间体25-1
向中间体10-6(258mg,0.50mmol)的DMF溶液中依次加入DIPEA(217uL,1.25mmol)和1,3-苯二磺酰氯(69mg,0.25mmol),并将反应在室温下搅拌过夜。加入水和乙酸乙酯,分离有机层,用10%柠檬酸、NaHCO3水溶液和盐水洗涤,用无水MgSO4干燥,过滤并真空浓缩。用硅胶色谱纯化得到白色固体状中间体25-1。
步骤2:化合物33·2HCl
将4N在1,4-二噁烷(2mL)中的HCl加入中间体25-1(143mg,0.11mmol)中并将溶液在0℃搅拌1小时。减压除去挥发物并将残余物用二乙醚研磨得到白色固体状化合物33·2HCl。MS(m/z)(M+2)/2=559.5。
化合物34:
用与化合物20类似的方式制备化合物34,其中在步骤1中将N-Boc-顺-4-氨基-L-脯氨酸甲酯以N-Boc-反-4-氨基-L-脯氨酸甲酯代替,并且在步骤6中将苯乙胺以1,2,3,4-(R)-四氢萘基-1-胺代替。MS(m/z)M+1=1045.8。
化合物35·2HCl
步骤1:中间体27-1
将中间体10-1(3.90g,6.68mmol)溶于THF(100mL)中,并用哌啶(5.0mL,68.2mmol)处理。将溶液在室温下搅拌16小时,然后减压除去挥发物得到半固体物,将其悬浮于MeOH(5mL)中并过滤。浓缩滤液,将其悬浮于MeOH(5mL)中,过滤并将滤液浓缩得到半固体状物中间体27-1(纯度80%)。
步骤2:中间体27-2
向冷却至0℃的苄氧羰基甘氨酸(carbobenzyloxyglycine)(699mg,3.34mmol)的DMF溶液依次加入DIPEA(2.40mL,13.9mmol)、HOBt(488mg,3.61mmol)和HBTU(1.37g,3.61mmol)。在搅拌10分钟后加入中间体27-1(1.00g,2.78mmol),并将反应混合物在室温下搅拌过夜。加入水和乙酸乙酯,分离有机层,用10%柠檬酸、NaHCO3水溶液和盐水洗涤,用无水MgSO4干燥,过滤并真空浓缩。用硅胶色谱纯化得到白色固体状中间体27-2。
步骤3:中间体27-3·TFA
将中间体27-2(1.42g,2.58mmol)溶于CH2Cl2(15mL)和TFA(15mL)的混合物中。将溶液在室温下搅拌1小时。减压除去挥发物并将残余物用二乙醚研磨得到白色固体状中间体27-3·TFA。MS(m/z)M+1=451.4
步骤4:中间体27-4
向冷却至0℃的Boc-α-tBuGly-OH(668mg,2.89mmol)的DMF溶液中依次加入DIPEA(2.1mL,12.0mmol)、HOBt(488mg,3.61mmol)和HBTU(1.37g,3.61mmol)。在搅拌10分钟后加入中间体27-3·TFA(1.36g,2.41mmol),并将反应混合物在室温下搅拌过夜。加入水和乙酸乙酯,分离有机层,用10%柠檬酸、NaHCO3水溶液和盐水洗涤,用无水MgSO4干燥,过滤并真空浓缩。用硅胶色谱纯化得到白色固体状中间体27-4。
步骤5:中间体27-5·TFA
将中间体27-4(1.38g,2.08mmol)溶于DCM(10mL)和TFA(10mL)的混合物中。将溶液在室温下搅拌4小时。减压除去挥发物并将残余物用二乙醚研磨得到白色固体状中间体27-5·TFA。MS(m/z)M+1=564.4
步骤6:中间体27-6
向冷却至0℃的Boc-NMe-Ala-OH(902mg,4.44mmol)的DMF溶液中依次加入DIPEA(3.50mL,20.2mmol)、HOBt(682mg,5.05mmol)和HBTU(1.92g,5.05mmol)。在搅拌10分钟后加入中间体27-5·TFA(1.14g,1.68mmol),并将反应混合物在室温下搅拌过夜。加入水和乙酸乙酯,分离有机层,用10%柠檬酸、NaHCO3水溶液和盐水洗涤,用无水MgSO4干燥,过滤并真空浓缩。用硅胶色谱纯化得到白色固体状中间体27-6。
步骤7:中间体27-7
向在N2下搅拌的中间体27-6(925mg,1.24mmol)的无水MeOH(25mL)溶液中加入10%Pd/C(125mg)。将反应混合物用H2吹涤并搅拌1小时。然后通过celite过滤反应,并真空浓缩滤液。用硅胶色谱纯化得到白色固体状中间体27-7。MS(m/z)M+1=615.4
步骤8:中间体27-8
向冷却至0℃的中间体27-7(150mg,0.25mmol)的DCM溶液中依次加入TEA(100uL,0.73mmol)和对苯二酰氯(25.0mg,0.12mmol),并将反应在室温下搅拌过夜。加入水和乙酸乙酯,分离有机层,用10%柠檬酸、NaHCO3水溶液和盐水洗涤,用无水MgSO4干燥,过滤并真空浓缩。用硅胶色谱纯化得到白色固体状中间体27-8。
步骤9:化合物35·2HCl
将4N在1,4-二噁烷(2mL)中的HCl加入中间体27-8(166mg,0.12mmol)中,并将溶液在室温下搅拌1小时。减压除去挥发物并将残余物用二乙醚研磨得到白色固体状化合物35·2HCl。MS(m/z)(M+2)/2=580.6。
用与化合物35所述的类似的方式从中间体27-7制备化合物36、37和38,分别使用草酰氯、间苯二酰氯(isophthaloyl dichloride)和4,4’-联苯二甲酰氯(4,4’-biphenyldicarbonyl chloride)代替步骤8中的苯二酰氯(phthaloyl chloride)。
化合物36-MS(m/z)(M+2)/2=542.6。
化合物37-MS(m/z)(M+2)/2=580.6。
化合物38-MS(m/z)(M+2)/2=618.6。
化合物44
步骤1:中间体26-1
向中间体10-6(150mg,0.27mmol)的THF溶液中依次加入TEA(112uL,0.81mmol)和1,4-苯二异氰酸酯(43mg,0.27mmol),并将反应在室温下搅拌4小时。减压除去挥发物,并用硅胶色谱纯化残余物得到白色固体状中间体26-1。
步骤2:化合物44·2TFA
将中间体26-1(148mg,0.12mmol)溶于CH2Cl2(1.5mL)和TFA(0.4mL)的混合物中。将溶液在室温下搅拌1小时。减压除去挥发物并将残余物用二乙醚研磨得到白色固体状化合物44·2TFA。MS(m/z)(M+2)/2=538.4。
化合物62:
用4N在1,4-二噁烷中的HCl处理中间体21-9两小时。减压除去挥发物并将残余物用二乙醚研磨得到灰白色固体化合物62·HCl。MS(m/z)M+1=787.6。
中间体28-6
步骤1:中间体28-2
将(S)-(+)-2-苯基氨基乙醇(glycinol),28-1(1.64g,12.0mmol)溶于CH2Cl2(90mL)。加入Boc2O(2.84g,13.0mmol)和DMAP(34mg,0.02mmol)并在室温下搅拌1小时。将反应混合物用二乙醚(200mL)和1N HCl(100mL)稀释。将有机层用1M HCl(2x100mL)洗涤,用无水MgSO4干燥,过滤并减压除去挥发物。用硅胶色谱纯化所得残余物得到油状物以得到白色固体状中间体28-2(2.7g,收率95%)。MS(m/z)M+1=238.2。
步骤2:中间体28-6
将中间体28-2(420mg,1.77mmol)和碘甲烷(330μL,5.29mmol)溶于无水DMF(25mL)。将混合物冷却至0℃,然后加入NaH(以60%分散于油中,103mg,2.58mmol)。在2小时后,将反应混合物用乙酸乙酯(200mL)和1M HCl(100mL)稀释。将有机层用1M HCL(2x100mL)洗涤,用无水MgSO4干燥,过滤并减压除去挥发物。用硅胶色谱纯化残余物得到油状中间体28-3。然后将中间体28-3冷却至0℃,并用4M在1,4-二噁烷(5mL)中的HCl处理。在搅拌90分钟后,减压除去挥发物,并将所得固体 用二乙醚洗涤,得到白色固体状中间体28-6·HCl(237mg,收率69%)。MS(m/z)M+1=152.2。
采用类似的程序制备中间体28-7和28-8,其中对于中间体28-7用苄基溴代替碘甲烷,对于中间体28-8用碘乙酰胺代替碘甲烷。
化合物66
步骤1:中间体29-1
向苯甲醛(840μL,8.25mmol)的CH2Cl2(150mL)溶液中加入(S)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.0g,8.25mmol)和乙醇钛(3.5ml,16.50mmol)。将反应混合物回流5小时,冷却至室温。加入水并将混合物剧烈搅拌,然后通过celite搅拌。将水层用CH2Cl2(3x)萃取,并将合并的有机萃取物用盐水洗涤,用无水MgSO4干燥,过滤并真空浓缩。用硅胶色谱纯化得到黄色油状中间体29-1。
步骤2:中间体29-2
向(S,E)-N-亚苄基-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺,29-11,(110mg,0.526mmol)、[Rh(cod)(CH3CN)2]BF4(20.1mg,0.053mmol)、对-甲苯基硼酸(143mg,1.052mmol)和Et3N(147μl,1.052mmol)的二噁烷(1.2mL)混悬液中加入H2O(2.4mL)。将所得褐色混悬液在室温下搅拌2天。将水层用EtOAc(3x)萃取,并将合并的有机萃取物用盐水洗涤,用无水MgSO4干燥,过滤并真空浓缩。用硅胶色谱纯化得到白色固体状中间体29-2(d.e.=81%)。
步骤3:中间体29-4
向(S)-2-甲基-N-((R)-苯基(p-甲苯基)甲基)丙烷-2-亚磺酰胺(82mg,0.27mmol),29-2,的MeOH(270μL)溶液中加入4N在1,4-二噁烷中的HCl4(140μL,0.54mmol)。将溶液在室温下搅拌1小时,然后加入Et2O并形成白色沉淀。过滤并用Et2O洗涤沉淀得到白色固体状中间体29-4·HCl。
步骤4:中间体29-5
向冷却至0℃的中间体21-9(122mg,0.123mmol)的DMF溶液中依次加入DIPEA(193μL,1.107mmol)、HOBt(42mg,0.308mmol)和HBTU(117mg,0.308mmol)。在搅拌10分钟后加入中间体29-4·HCl(59mg,0.253mmol),并将反应混合物在室温下搅拌过夜。加入水和乙酸乙酯,分离有机层,用10%柠檬酸、NaHCO3水溶液和盐水洗涤,用无水MgSO4干燥,过滤并真空浓缩。用硅胶色谱纯化得到粉红色固体状中间体66-1。
步骤5:化合物66·2HCl
将4N在1,4-二噁烷(1ml)中的HCl加入中间体66-1(135mg,0.12mmol)。将溶液在0℃搅拌1小时。减压除去挥发物,并将残余物用二乙醚研磨得到白色固体状化合物6·2HCl。MS(m/z)(M+2)/2=573.6。
根据上述程序制备本发明的代表性化合物并在表1中示出:
表1
表2至6中所示为可通过上述程序的简单变化而制备的本发明的代表性的化合物:
表2
其中A和A1均为CH2或均为C(O),并且
表3
M1-BG-M2
式1A
BG为
表4
M1-BG-M2
式1B
BG为
表5
R1、R2、R3、R100、R200和R300如上述所定义,
-X-L-X`-选自:
R4和R400为H;
R5和R500选自:
其中所述芳基部分可以被R10取代,并且其中R10和R10’独立地定义为如上文所述的R10,并且其中所述烷基可以进一步被如上所定义的R6取代。
表6
R1、R2、R3、R100、R200和R300如上述所定义,
-X-L-X`-选自:
R4和R400为H;
R5和R500选自:
其中芳基部分可以被R10取代,并且其中R10和R10’独立地如上述R10所定义,并且其中烷基可以被如上述定义的R6进一步取代。
试验
用于表达的分子构建体
GST-XIAP BIR3RING:通过BamH1和AVA I将氨基酸246-497的XIAP编码序列克隆入PGEX2T1。将质粒转化入大肠杆菌DH5α用于蛋白表达和纯化。
GST-HIAP2(cIAP-1)BIR3:通过BamH1和XhoI将氨基酸251-363的HIAP2编码序列克隆入PGex4T3。将质粒转化入大肠杆菌DH5α用于蛋白表达和纯化。
GST-HIAP1(cIAP-2)BIR3:通过BamH1和XhoI将氨基酸236-349的HIAP1编码序列克隆入PGex4T3。将质粒转化入大肠杆菌DH5α用于蛋白表达和纯化。
GST-接头BIR2BIR3Ring:通过BamH1和XhoI将氨基酸93-497的XIAP编码序列克隆入PGex4T1。使用引物TTAATAGGATCCATCAACGGCTTTTATC和GCTGCATGTGTGTCAGAGG采用标准PCR条件从pGex4t3中的全长XIAP扩增氨基酸93-497。将PCR片段TA克隆入pCR-2.1(invitrogen)。通过BamHI/XhoI消化将接头BIR2BIR3Ring亚克隆入pGex4T1。将质粒转化入大肠杆菌DH5α用于蛋白表达和纯化。
全长人XIAP,AEG质粒数23(AEG plasmid number23)。通过BamH1和Xho I限制位点将氨基酸1-497的XIAP编码序列克隆入GST融合载体PGEX4T1。将质粒转化入大肠杆菌DH5α用于蛋白纯化。
GST-XIAP接头BIR2:通过BamHI和XhoI将氨基酸93-497的XIAP接头BIR2编码序列克隆入pGex4T3。将质粒转化入大肠杆菌DH5α用于蛋白表达和纯化。
重组蛋白质的表达和纯化
A.重组蛋白质的表达
将谷胱甘肽S-转移酶(GST)标签蛋白在大肠杆菌菌株DH5-α中表达。为了表达全长XIAP,将转化XIAP-BIR域、cIAP-1、cIAP-2和Livin各自或其组合的细菌在37℃于加有50μg/ml氨苄青霉素的Luria肉汤(LB)培养基中培养整夜。然后将整夜培养的培养物用新鲜的加有氨苄青霉素的LB培养基稀释25倍,并使细菌生长至A600=0.6然后用1mM异丙基-D-1-硫代半乳糖吡喃糖苷诱导3小时。在诱导时,将细胞在5000RPM离心10分钟并除去培养基。从1升培养物中获得的各沉淀物接受10ml裂解缓冲液(50mM Tris-HCl,200mM NaCl,1mM DTT,1mM PMSF,2mg/ml溶酶体(lysosyme),100μg/ml)),在轻微震荡下于4℃温育。温育20分钟后,将细胞悬浮液在-80℃放置整夜或者直到需要时。
B.重组蛋白的纯化
为了纯化重组蛋白,将IPTG诱导的溶胞产物解冻、涡旋,然后在每次解冻后涡旋条件下在液氮中闪冻二次破坏。通过将提取物通过氮气设置于100psi的Bio-Neb细胞破坏装置(Glas-col)四次进一步破坏所述细胞。将提取物在SS-34Beckman转子中在4℃下以15000RPM离心30分钟澄清。然后将所得上清液与每500ml细胞培养物(每1000ml全长XIAP培养物)2ml谷胱甘肽-琼脂糖凝胶珠(Pharmacia)在4℃混合1小时。然后,用1×Tris-Buffered Saline(TBS)洗涤3次以除去未结合的蛋白。将保留的蛋白质每次用2ml的含有10mM还原的谷胱甘肽的50mM的TRIS pH8.0洗脱2次。将洗脱的蛋白质合并并用604g/升硫酸铵沉淀,将所得沉淀物再悬浮于适宜的缓冲液中。通过SDS-PAGE判断,纯化的蛋白质的纯度>90%。纯化的蛋白质的蛋白浓度通过Bradford法测定。
在大肠杆菌AD494细胞中,使用pet28ACPP32构建体将His-标签蛋白表达于大肠杆菌菌株中。如上所述制备可溶性蛋白部分。根据厂商操作指南使用装有NiSO4的螯合-琼脂糖凝胶(Pharmacia)通过亲和色谱法纯化上清液用于蛋白纯化。以SDS-PAGE测定,洗脱的蛋白质的纯度>90%。以Bradford试验测定纯化的蛋白的蛋白质浓度。
荧光探针P1的合成
在2-氯三苯甲基氯树脂上使用标准Fmoc化学制备荧光肽探针Fmoc-Ala-Val-Pro-Phe-Tyr(t-Bu)-Leu-Pro-Gly(t-Bu)-Gly-OH(Int.J.Pept.Prot.Res.38:555-561,1991)。从树脂上的切割使用在二氯甲烷(DCM)中的20%乙酸进行,该切割使得侧链仍旧封闭。在室温下使用在二甲基甲酰胺(DMF)中的过量的二异丙基碳二亚胺(DIC)将 C-端保护的羧酸与4’-(氨基甲基)荧光素偶联(Molecular Probes,A-1351;Eugene,Oreg.),然后用硅胶色谱纯化(DCM中的10%甲醇)。使用DMF中的20%哌啶除去N-端Fmoc保护基,然后以硅胶色谱纯化(DCM中的20%甲醇,0.5%HOAc)。最后,使用含有2.5%水和2.5%三异丙基硅烷的95%三氟乙酸除去叔丁基侧链保护基,以提供探针P1(HPLC测定纯度>95%)。
探针P2
结合试验
基于荧光偏振的竞争性试验
在所有试验中,使用激发滤光片设置在485nm、发射滤光片设置在535nm的Tecan Polarion仪器衡量荧光和荧光-偏振。在每个试验中,通过滴定选定的蛋白质得到目标蛋白质的浓度,以生成仅在荧光探针P1或P2存在下的线性剂量-响应信号。在建立这些条件后,在固定的所确定量的目标蛋白质和荧光探针以及选定化合物的10个点的连续稀释存在下评价化合物的效力(IC50)和选择性。对于每个IC50曲线而言,如下进行试验:将50mM MES缓冲液pH6.5中的稀释的化合物以25μL/孔加入空白96孔板中,然后以25μL/孔加入50mM的MES pH6.5中的0.5mg/ml牛血清白蛋白(BSA)。首先仅以化合物/BSA溶液进行试验以测定各种化合物的自体荧光。然后加入25μL在含有0.05mg/ml BSA的50mM MES中稀释的荧光素探针,并检测荧光素信号的熄灭。最后加入25μL/孔在含有0.05mg/ml BSA的50mM MES中稀释至适宜浓度的目标或者对照蛋白质(GST-BIRs)并测定荧光偏振。
IC50和抑制常数的测定
在每个试验中,将相对偏振-荧光单位对化合物的最终浓度作图,使用Grad padprism和/或Cambridge软件计算IC50。如上所述并根据Nikolovska-Coleska,Z.(2004)Anal Biochem332,261-273中所述的方程由算得的IC50获得ki值。
荧光偏振竞争性试验
使用探针P2如上所述测定BIR2-BIR3-ring FP试验中各种化合物的ki值。例如,化合物3显示小于100nM的ki。
胱天蛋白酶-3全长XIAP、接头BIR2或者接头-BIR2-BIR3-RING脱抑制(derepression)试验
为了测定所选化合物对XIAP-Bir2的相对活性,我们建立了体外试验,其中通过XIAP接头-Bir2、XIAP接头Bir2-Bir3-RING或全长XIAP的GST融合蛋白抑制胱天蛋白酶-3。将胱天蛋白酶-3(0.125μl)和12.25-34.25nM(最终浓度)的GST-XIAP融合蛋白(GST-Bir2、GST-Bir2Bir3RING或全长XIAP)与连续稀释的化合物(200μM-5pM)共温育。通过叠加25μL的0.4mM DEVD-AMC溶液测定胱天蛋白酶3活性。最终反应体积为100μL。所有的稀释均在胱天蛋白酶缓冲液中(50mM Hepes pH7.4,100mM NaCl,10%蔗糖,1mM EDTA,10mM DTT,0.1%CHAPS(Stennicke,H.R.,和Salvesen,G.S.(1997).Biochemical characteristics of caspase-3,-6,-7,and-8.J.Biol.Chem.272,25719-25723)进行。
在于室温下温育15分钟后,在激发波长为360nm、发射波长为444nm的TECAN分光光度计中测量由底物的胱天蛋白酶-3水解释放的荧光AMC。使用GraphPadv4.0,以温育15分钟后的荧光值对log10化合物浓度作图,基于单位点或者双位点竞争模型计算IC50值。
结果显示,优选的化合物的IC50值与对SKOV3s的EC50值相关,并且通常小于1μM。
无细胞试验
使用细胞提取物的胱天蛋白酶脱抑制试验(凋亡体)
将100μg的293细胞S100提取物和0.25μM-2μM的GST-XIAP融合蛋白(XIAP-Bir3RING、XIAP-Bir2Bir3RING、或全长XIAP)与连续稀释的化合物(40μM-5pM)共温育。通过添加1mM dATP、0.1mM ALLN、133μg细胞色素C(最终浓度)并在37℃下温育25分钟活化提取物中存在的胱天蛋白酶。所有的反应和稀释均使用S100 缓冲液(50mM Pipes pH7.0,50mM KCl,0.5mM EGTA pH8.0,2mM MgCl2加有1/1000稀释的2mg/ml松胞菌素B,2mg/ml胰凝乳蛋白酶抑制剂,抑酶醛肽,胃酶抑素,抗蛋白酶,0.1M PMSF,1M DTT)。最终反应体积为30μL。通过叠加30μL的0.4mM DEVD-AMC溶液测定胱天蛋白酶3活性。在激发波长为360nm、发射波长为444nm的TECAN分光光度计中,以每5分钟进行读数的1小时动态周期测量释放的AMC断裂。胱天蛋白酶活性作为AMC荧光/sec的Vo计算。将我们的化合物对胱天蛋白酶的脱抑制与完全活化的提取物和被XIAP融合蛋白的存在所抑制的活化的提取物进行比较。
结果显示,优选的化合物的IC50值与对SKOV3s的EC50值相关,并且通常小于1μM。
细胞培养和细胞死亡试验
A.细胞培养
将MDA-MD-231(乳腺癌)和H460(肺癌)癌细胞在加有10%FBS和100单位/mL青霉素和链霉素的RPMI1640培养基中培养。
B.试验
在包括MDA-MB-231、SKOV3、H460、PC3、HCT-116和SW480细胞的各种细胞系上进行存活试验。将各细胞以各自每孔5000和2000的密度种于96孔板上并在5%CO2存在下于37℃温育24小时。将选定的化合物以0.01μM至最高100μM的各种浓度在培养基中稀释。将稀释的化合物加在MDA-MB-231细胞上。对于MDA-MB-231SKOV3、H460、PC3、HCT-116和SW480细胞,单独或者在1-3ng/ml的TRAIL存在下加入所述化合物。72小时后,通过基于MTS的试验评价细胞生存力。将[3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺基苯基)-2H-四唑内盐;MTS]的溶液加在细胞上1至4小时。温育后,使用设置于570nm的Tecan分光光度计衡量转化的MTS的量。
用所选定的本发明化合物处理MDA-MB-231、SKOV3和PC3细胞,发现EC50均为100nM或更小。当用本发明化合物在TRAIL的存在下处理上述细胞系时,它们显示50nM或更小的EC50。
MTT存活试验
在用化合物处理一天前,将每孔2000至4000细胞种于用组织培养处理的含有100μl培养基的96孔板并在37℃、5%CO2条件下温育。在用化合物处理的那天,用细胞培养基将化合物稀释至2×工作储备液浓度。然后将100μL稀释的化合物加入各孔 中。将处理的板在37℃、5%CO2温育72小时。温育后,在将每孔20μL的5mg/ml的MTT试剂加至板上后衡量细胞生存力。将板在37℃在5%CO2的存在下温育2小时。然后将上清液移除并加入100μL异丙醇。在TECAN分光光度计于570nm下测定吸光度。存活百分比表达为以未处理的细胞获得的信号的百分比。
从表7中可见,上文表1中所示的化合物对MDA-MB-231和SKOV-3细胞通常显示<1μM的EC50值。特定化合物具有<50nM的EC50。
表7
化合物 | MDA-MB231EC50(nM) | SKOV-3EC50 (nM) |
1 | A | A |
2 | A | A |
3 | A | A |
5 | C | |
10 | A | A |
11 | A | |
12 | A | |
13 | A | |
14 | A | |
15 | A | |
16 | A | |
17 | A | |
18 | D | |
19 | A | |
20 | A | |
21 | A | |
22 | B | |
23 | A | |
24 | A | |
25 | A | |
26 | B | |
27 | B | |
28 | A | |
29 | B | |
30 | C | |
31 | B | |
32 | B | |
33 | A | |
34 | B | |
35 | B | |
36 | C | |
37 | C | |
38 | B | |
39 | A |
[1404]
化合物 | MDA-MB231EC50(nM) | SKOV-3EC50 (nM) |
40 | A | |
41 | A | |
42 | A | |
43 | B | |
44 | A | |
45 | D | |
46 | B | |
47 | A | |
48 | B | |
49 | A | |
50 | B | |
51 | B | |
52 | A | |
53 | D | |
54 | D | |
55 | A | |
56 | A | |
57 | A | |
58 | B | |
59 | B | |
60 | A | |
61 | A | |
64 | A |
A-EC50小于50nM
B-EC50小于250nM
C-EC50大于1000nM
D-EC50大于1000nM
凋亡试验:培养细胞胱天蛋白酶-3活性的测定
在处理前1天前,将细胞以每孔10000个种于含有100μL培养基的白色组织培养(white tissue culture)处理的96孔板中。在用化合物处理的那天,用细胞培养基将化合物稀释至2×工作储备液浓度,将100μL稀释的化合物加入各孔中,并将处理的板在37℃、5%CO2温育5小时。温育后,用200μL冷TRIS缓冲盐水(TBS)缓冲液洗板两次。用50μL胱天蛋白酶试验缓冲液(20mM Tris-HCl pH7.4,0.1%NP-40,0.1%Chaps,1mM DTT,0.1mM EDTA,0.1mM PMSF,2mg/ml胰凝乳蛋白酶抑制剂,抑酶醛肽,胃酶抑素,抗蛋白酶)裂解细胞,并在震荡下于4℃温育30分钟。将45μL胱天蛋白酶试验缓冲液和5μL1mg/ml的Ac-DEVD-AMC加入各孔中,震荡板并在37℃温育 16小时。在TECAN分光光度计中测定释放AMC的量,激发滤光片和发射滤光片分别设置在360nm和444nm。以与未处理细胞获得的信号相比表达胱天蛋白酶活性百分比。
结果显示,优选的化合物的IC50值与对SKOV3s的EC50值相关,并且通常小于1μM。
细胞生物化学:
A.XIAP和PARP/胱天蛋白酶-3/胱天蛋白酶-9的检测
通过蛋白质印迹法检测细胞表达的XIAP和PARP。将细胞以300000细胞/孔铺于60mm孔(6孔板)。第二天将细胞用所示浓度的选定化合物处理。24小时后将细胞胰蛋白酶化,通过在1800RPM于4℃离心沉淀。将所得沉淀物用冷TBS漂洗2次。将最终洗涤过的细胞沉淀用250μL溶胞缓冲液(NP-40,甘油,1%蛋白酶抑制剂混合物(Sigma))溶解,在轻微震荡下置于4℃下25分钟。将细胞提取物在4℃下10,000rpm离心10分钟。保留上清液以及沉淀用于如下所述的蛋白质印迹法分析。由上清液中测定蛋白质含量,并将约50μg蛋白质在10%SDS-PAGE分离。将沉淀用溶解缓冲液洗涤,并再悬浮于50μL Lamelli缓冲液1X中,使之沸腾并在SDS-PAGE上分离。在电泳后,将各凝胶在0.6A电转移至硝基纤维素膜上2小时。用在TBST(含0.1%(v/v)吐温-20的TBS)中的5%脱脂乳在室温下封闭膜非特异性位点1小时。
对于蛋白质免疫检测,将膜与XIAP(克隆48,得自Becton-Dickison)或者PARP(Cell signal)的第一抗体(primary antibody)温育过夜,或者将胱天蛋白酶-3或者胱天蛋白酶-9第一抗体在震荡下于4℃以以下稀释液温育:
XIAP克隆80(Becton-Dickinson).....1/2500
PARP(Cell Signal)......................1/2500
胱天蛋白酶3(Sigma).........................1/1500
胱天蛋白酶9(Upstate)........................1/1000
在整夜温育后,膜接受三次在TBST中的15分钟的洗涤,然后在室温下在与HRP-酶(Chemicon)偶联的第二抗体的存在下温育1小时,并以1/5000稀释。在温育后,将各膜用TBST洗涤三次,并通过加入荧光底物(ECL试剂盒Amersham)并捕获不同曝光时间的X-RAY膜上的信号来检测免疫反应带。
某些示例性化合物显示在接近一定浓度时诱导PARP的断裂,所述浓度与对SKOW3s的EC50值有关并且通常小于1μM。
中空纤维模型(Hollow fiber model)
采用中空纤维体内模型来证实选定化合物对选定细胞系的单一药物治疗或者与选定的细胞毒性剂组合的体内效力。在第一天,培养所选的细胞系并以约40,000细胞/纤维的细胞密度填充纤维。在手术日(第四天),将三条纤维皮下植入28-35Nu/Nu CD-1雄性小鼠中。在第五天,小鼠开始每日接受通过皮下途径注射的对照载体或者含有适宜浓度的所选化合物的载体和/或通过腹膜内途径注射的细胞毒性剂。在连续以药物处理3-7天后,牺牲动物,移除所有纤维并用MTT试验测定剩余细胞的代谢活性(metabolic viability)。化合物的效力定义为载体处理的动物以及用单独的化合物或者与细胞毒性剂组合的所述化合物处理的动物之间的差异。
在第一天植入MDA-MB-231细胞。以1、3和10mg/kg(2mg/mL在20%的HPCD水溶液中)通过IV推注(尾静脉)注射给药化合物3连续4天。与20%HPCD对照相比,以化合物3在3mg/kg的药物浓度下观察到完全的细胞生长抑制。
使用化合物3进行的SKOV-3人卵巢癌细胞系异种移植研究
在右肋部皮下,向雌性CD-1裸鼠(约20-25g)皮下注射在50%matrigel中的5×106SKOV-3人卵巢肿瘤细胞。在第55天,当肿瘤约100mm3时,开始用化合物3以5天给药/2天停药的治疗方案在试验期间进行治疗。用数字测径器测量肿瘤大小并按照V=(a×b2)/2计算,其中a为最长尺寸,b为宽度。
在以1mg/kg剂量给药化合物3时观察到肿瘤消退,而在以0.3mg/kg剂量给药化合物3时观察到肿瘤停滞(见图1)。
用化合物3进行的MDA-MB-231人乳腺癌细胞系异种移植试验
向雌性CD-1裸鼠(约20-25g)右肋部皮下注射1×106MDA-MB-231人乳腺肿瘤细胞。在第71天,当肿瘤约90mm3时,开始用化合物3以5天给药/2天停药的治疗方案在试验期间进行治疗。用数字测径器测量肿瘤大小并按照V=(a×b2)/2计算,其中a为最长尺寸,b为宽度。
在以1mg/kg剂量给药化合物3时观察到肿瘤消退(见图2)。
药动学试验
将选定的化合物溶于生理盐水并以包括静脉内推注、静脉内输注、口服以及皮下注射的不同给药途径以各种剂量给药。
通过若干给药途径,本发明化合物均表现出可接受的药动学性质。
体外功效
试验证明本发明化合物在体外以0.1nM至1000nM之间的EC50杀死SKOV3(卵巢癌)、MDA-MB-231(乳腺癌)、BT549(乳腺癌),HL-60(急性早幼粒细胞白血病)以及PANC-1(胰腺癌)(参见表7)。
使用各种SKOV3对这些化合物的SAR作图,显示出若干有趣的趋势。由顺式和反式脯氨酸衍生物3和29的EC50(EC50分别为1nM和88nM)可以看出,吡咯烷桥连位点处立体化学的变化影响了化合物的效力。酰胺桥连单元提供了活性化合物,但是通过改变桥连单元的成分观察到很大范围的对SKOV3细胞的效力。小的、构型受限制的桥连单元包括但不限于1,4-苯基二羧酰胺(对苯二酰胺)、1,3-苯基二羧酰胺、2,6-萘基二羧酰胺、1,4-环己基二羧酰胺、3,5-吡啶基二羧酰胺或者C2-C10脂肪族二羧酰胺提供了高度活性的化合物。包含双-甘氨酸酰胺的桥连单元如化合物30提供了较低活性的化合物(EC50=188nM)。
醚、脲和磺酰胺桥连单元提供了对SKOV3细胞有活性的化合物,但磺酰胺桥连单元通常活性较小。
通过改变P4取代基观察到对SKOV3细胞效力的显著的变化,其中在R4/R400酰胺处的(R)-立体化学提供比相应的(S)-异构体效力高5-10倍的化合物。在所述酰胺附近引入亲水性部分提供了较低活性的化合物如化合物49。
此外,N-端丙氨酸部分的烷基化提供了比相应的未取代的N-端丙氨酸衍生物效力最多高100倍的化合物。
癌细胞系的一个子集并非固有地对本发明的化合物敏感,它们的EC50高于1000nM。我们已经证明,IAP BIR结合化合物显示出与死亡受体激动剂如TRAIL、激动剂TRAIL受体抗体、TNF-α等的协同杀各种癌细胞系的活性。我们于此公开,式I和II的化合物还表现出与死亡受体激动剂如TRAIL的协同杀各种癌细胞系的活性。当用化合物和TRAIL或拮抗剂TRAIL抗体处理这些细胞时,这些细胞系对化合物高度敏感,EC50通常小于100nM。
这些癌细胞系包括HELA(宫颈癌)、HCT116(结肠癌)、PC3(前列腺癌)、OVCAR-3(卵巢癌)、HEY(卵巢癌)、和H460(肺癌)。在TRAIL(1-3ng/mL)和各种浓度的化合物3的存在下,对上述细胞系的EC50小于1000nM。
体内效力
在SKOV3和MDA-MB-231异种移植肿瘤模型中检测化合物3(参见图1和2)。在两种情况下,当给药5天停药2天时,在1mg/kg均观察到肿瘤消退。在SKOV3异种移植中在0.1mg/kg观察到肿瘤停滞。
讨论
上述结果表明,本发明的IAP BIR结合化合物在体外和体内均为非常有效的药物,其中在IAP结合和IAP调节间的机制关联可被认为与抗癌功效有关。我们证明了本发明的化合物以高的亲和力与IAP的BIR域结合,导致活性胱天蛋白酶3和9的释放。并且,这些化合物导致在癌细胞中诱导凋亡,同时协同地使癌细胞系对死亡受体激动剂如TRAIL更敏感。此外,当用本发明的化合物处理患有肿瘤的动物时,在药物学相关的剂量本发明化合物使得肿瘤表现出停滞和/或消退。
通过若干给药途径,本发明化合物均表现出可接受的药动学性质。
其他实施方案
由前述说明本领域技术人员将了解,可对此处记载的发明作出变更和修改以适应各种用途和条件。这些实施方案也包括在本发明的范围内。
本说明书中所提到的所有出版物均并入此处作为参考。
Claims (81)
1.式I或II代表的化合物或其盐
其中
m为0、1或2;
Y为O;
BG为
-X-L-X1-;
X和X1独立地为
1)O,
2)NR13,
3)S,
4)-C1-C6烷基-,
5)-C1-C6烷基-O-,
6)-C1-C6烷基-NR13-,
7)-C1-C6烷基-S-,
L为:
1)-C1-C20烷基-,
2)-C2-C4炔基-,
3)-C3-C6环烷基-,
4)-芳基-,
5)-联苯基-,
6)-杂芳基-,
7)-C1-C6烷基-(C2-C4炔基)-C1-C6烷基-,
8)-C1-C6烷基-(C3-C6环烷基)-C1-C6烷基-,
9)-C1-C6烷基-芳基-C1-C6烷基-,
10)-C1-C6烷基-联苯基-C1-C6烷基-,
11)-C1-C6烷基-杂芳基-C1-C6烷基-,
12)-C1-C6烷基-杂环基-C1-C6烷基-,
13)-C1-C6烷基-Y-C1-C6烷基-,
14)-芳基-Y-芳基-,
Q和Q1独立地为
1)NR4R5,
2)OR11,或
3)S(O)mR11;
A和A1独立地为
1)-CH2-,或
2)-C(O)-;
R1和R100独立地为
1)H,或
2)C1-C6烷基;
R2和R200独立地为
1)H,或
2)任选地被一个R6取代基取代的C1-C6烷基;
R3和R300独立地为C1-C6烷基;
R4和R5分别独立地为
1)H,
2)-C1-C6烷基,
3)-芳基,
4)-杂双环基,
5)-C(O)-R11,或
6)-S(O)2-R11,
其中所述烷基任选地被一个或多个R6取代基取代;并且其中所述芳基任选地被一个R10取代基取代;
R6为
1)芳基,
2)COR7,
3)C(O)OR7,或
4)CONR8R9,
其中所述芳基任选地被一个R10取代基取代;
R7为
1)C1-C6烷基,或
2)芳基,
其中所述烷基任选地被一个R6取代基取代;并且其中所述芳基任选地被一个R10取代基取代;
R8和R9为H;
R10为
1)卤素,
2)C1-C6烷基,
3)OR7,
4)芳基,或
5)杂环基;
R11为
1)C1-C6烷基,或
2)芳基;
R13为
1)H,或
2)C1-C6烷基;
并且R20为
1)H,
2)NH2,或
3)NHFmoc;
其中:
杂环基为含有1-4个选自O、N和S的杂原子的5、6或7元非芳香环系统;
杂双环基为与另一环稠合的杂环;
杂芳基为最多十个原子的单环或双环系统,其中至少一个环是芳香性的,并且包含1至4个选自O、N和S的杂原子;以及
芳基为含有6个碳原子的碳环芳香单环基团,其任选地与另一个可以是芳香的、饱和的或不饱和的5-或6-元碳环基团稠合。
2.权利要求1的化合物,其中A和A1均为CH2。
3.权利要求1的化合物,其中A和A1均为C=O。
4.权利要求1的化合物,其中A为CH2而A1为C=O。
16.权利要求1的化合物,其中R1和R100均为C1-C6烷基。
17.权利要求16的化合物,其中R1和R100均为CH3。
18.权利要求1的化合物,其中R2和R200均为任选地被OH取代的C1-C6烷基。
19.权利要求18的化合物,其中R2和R200均为CH3。
20.权利要求18的化合物,其中R2为CH2OH而R300为CH3。
21.权利要求18的化合物,其中R2和R200均为CH2OH。
22.权利要求18的化合物,其中R2和R200均为CH2CH3。
23.权利要求1的化合物,其中R3和R300均为C(CH3)3。
24.权利要求1的化合物,其中Q和Q1均为NR4R5。
25.权利要求1的化合物,其中A和A1均为C=O,Q和Q1均为NR4R5,R4为H并且
R5为
1)-C1-C6烷基,
2)-芳基,或
3)-杂双环基,
其中所述烷基任选地被一个或多个R6取代基取代;并且其中所述芳基任选地被一个R10取代基取代。
26.权利要求25的化合物,其中R4为H而R5为:
1)-C1-C6烷基,或
2)-芳基,
其中所述烷基任选地被一个或两个R6取代基取代;并且其中所述芳基任选地被一个R10取代基取代。
37.权利要求1的化合物,其中A和A1均为C=O,而Q和Q1均为
38.权利要求1的化合物,其中A和A1均为C=O,而Q和Q1均为
39.权利要求1的化合物,其中A和A1均为C=O,而Q和Q1均为
53.权利要求1的化合物,其中A和A1均为CH2、Q和Q1均为NR4R5。
54.权利要求53的化合物,其中R4和R5独立地为
1)C1-C6烷基,
2)-C(O)-R11,或
3)-S(O)2-R11,
其中所述烷基被R6取代基取代。
58.权利要求1的化合物,其中R11为苯基。
59.权利要求1的化合物,其中R6为芳基,其中所述芳基任选地被一个R10取代基取代。
64.权利要求1的化合物,其为下式的化合物:
或其药物学可接受的盐。
65.权利要求1的化合物,其为如下式的化合物:
或其药物学可接受的盐。
68.制备如权利要求1所述的式I所代表的化合物的方法,所述方法包括:
a) 将式3-i所代表的中间体与活化的二酸在溶剂中偶联以提供式3-ii的化合物:
其中PG4为保护基,而R1、R2、R3、A、和Q以及R100、R200、R300、A1、和Q1如权利要求1中所定义;以及
b) 将式3-ii的化合物除去保护基,从而形成式I的化合物。
69.权利要求1至66之一的化合物在制备用于治疗或预防以凋亡不足为特征的疾病的药物中的应用。
70.权利要求69的应用,其中所述疾病为增殖性疾病。
71.权利要求69的应用,其中所述疾病为癌症。
72.权利要求69-71之一的应用,其中所述药物与死亡受体激动剂联合应用。
73.权利要求72的应用,其中所述死亡受体激动剂为TRAIL。
74.权利要求72的应用,其中所述死亡受体激动剂为TRAIL受体抗体。
75.权利要求74的应用,其中所述TRAIL受体抗体为人源化抗体HGS-ETR1或HGS-ETR2。
76.权利要求72-75之一的应用,其中所述死亡受体激动剂以产生协同作用的量存在。
77.用于治疗或预防以凋亡不足为特征的疾病的药物组合物,其包含权利要求1至66之一所述的化合物以及药物学可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
78.用于预防或治疗增殖性疾病的药物组合物,其包含与增加一种或多种死亡受体激动剂的循环水平的任何化合物组合的权利要求1至66之一所述的化合物。
79.用于制备药物组合物的方法,所述方法包括:将权利要求1至66之一的化合物与药物学可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合。
80.制备权利要求1的非盐的化合物的药物学可接受的盐的方法,所述方法包括将权利要求1的化合物用1至2当量的药物学可接受的酸处理。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US78252306P | 2006-03-16 | 2006-03-16 | |
US60/782,523 | 2006-03-16 | ||
US87699406P | 2006-12-26 | 2006-12-26 | |
US60/876,994 | 2006-12-26 | ||
PCT/CA2007/000428 WO2007104162A1 (en) | 2006-03-16 | 2007-03-16 | Iap bir domain binding compounds |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN101443309A CN101443309A (zh) | 2009-05-27 |
CN101443309B true CN101443309B (zh) | 2013-04-24 |
Family
ID=40727130
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN200780017496.1A Expired - Fee Related CN101443309B (zh) | 2006-03-16 | 2007-03-16 | Iap bir域结合化合物 |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN101443309B (zh) |
ZA (1) | ZA200807882B (zh) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2567544C2 (ru) * | 2010-02-12 | 2015-11-10 | Фармасайенс Инк. | Bir домен iap связывающие соединения |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6992063B2 (en) * | 2000-09-29 | 2006-01-31 | The Trustees Of Princeton University | Compositions and method for regulating apoptosis |
-
2007
- 2007-03-16 CN CN200780017496.1A patent/CN101443309B/zh not_active Expired - Fee Related
-
2008
- 2008-09-12 ZA ZA200807882A patent/ZA200807882B/xx unknown
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6992063B2 (en) * | 2000-09-29 | 2006-01-31 | The Trustees Of Princeton University | Compositions and method for regulating apoptosis |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
ZA200807882B (en) | 2010-05-26 |
CN101443309A (zh) | 2009-05-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101535300B (zh) | Iap bir域结合化合物 | |
US9365614B2 (en) | IAP BIR domain binding compounds | |
EP1883627B1 (en) | Bir domain binding compounds | |
US7795298B2 (en) | IAP BIR domain binding compounds | |
US20100203012A1 (en) | Iap bir domain binding compounds | |
CN101443309B (zh) | Iap bir域结合化合物 | |
CN101360728A (zh) | Iap bir结构域结合化合物 | |
US20120141496A1 (en) | Iap bir domain binding compounds | |
RU2472780C2 (ru) | Соединения, связывающие домен bir белков iap | |
MX2008014502A (es) | Compuestos de union a dominio de repeticion de proteinas inhibidoras de apoptosis baculovirales de las proteinas inhibidoras de apoptosis. |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20130424 Termination date: 20180316 |
|
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |