MX2007000228A - Antagonistas de vla-4 multivalentes que comprenden porsiones de polietilenglicol. - Google Patents

Antagonistas de vla-4 multivalentes que comprenden porsiones de polietilenglicol.

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Michael A Pleiss
Christopher M Semko
Theodore Yednock
Jenifer L Smith
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Abstract

Se describen conjugados que se unen al VLA-4. Ciertos de esos conjugados tambien inhiben la adhesion de leucocitos y, en particular, la adhesion de los leucocitos mediada por VLA-4. Esos conjugados son utiles en el tratamiento de enfermedades inflamatorias en un paciente mamifero, por ejemplo, en humano, como el asma, enfermedad de Alzheimer, ateroesclerosis, demencia por SIDA, diabetes, enfermedad de intestino inflamatorio, artritis reumatoide, trasplante de tejidos, metastasis tumoral e isquemia miocardica. Los conjugados tambien pueden ser administrados para el tratamiento de enfermedades inflamatorias del cerebro como la esclerosis multiple.

Description

ANTAGONISTAS DE VLA-4 MULTIVALENTES QUE COMPRENDEN PORCIONES DE POLIETILENGLICOL Campo de la Invención Esta invención se relaciona con conjugados los cuales inhiben la adhesión de los leucocitos y, en particular la adhesión de los leucocitos mediada al menos en parte por VLA-4. Los conjugados de esta invención se caracterizan porque contienen más de un compuesto que inhibe VLA-4 unido covalentemente a un polímero biocompatible, como el polietilen glicol.
Antecedentes de la Invención La interacción física de leucocitos inflamatorios entre sí y otras células del cuerpo juega un papel importante en la regulación de las respuestas inmune e inflamatoria [Springer, T. A. Nature, 346, 425, (1990); Springer, T. A. Cell 76, 301, (1994)]. Muchas de esas interacciones son mediadas por moléculas de la superficie celular específicas colectivamente conocidas como moléculas de adhesión celular. Esas moléculas de adhesión han sido subdivididas en diferentes grupos sobre la base de su estructura. Una familia de moléculas de adhesión gue se cree juega un papel importante en la regulación de las respuestas inmune e inflamatoria en la familia de la integrina. Ref.178812 Esta familia de las glicoproteínas de la superficie celular tiene una estructura heterodimérica ligada de manera no covalente, típica. El subgrupo de la integrina particular de interés aquí implica a la cadena alfa 4(a4), la cual puede aparearse con dos cadenas beta diferentes betal (ßl ) y beta 7 (ßl ) .
[Sonnenberg, A. ibid] . El apareamiento a4Jl ocurre en muchos leucocitos en circulación (por ejemplo los linfocitos, monocitos y eosinófilos) aunque está ausente o solo presente a bajos niveles en los neutrófilos en circulación. El VLA-4 (Antígeno Muy Tardío -4, también conocido como integrina a4ßl y como CD49d/CD29), identificado por primera vez por Hemler y Ta ada1 es un miembro de la familia de integrina ßl de receptores de la superficie celular. El VLA-4 consiste de una cadena «4 y ßl . Existen al menos nueve integrinas ßl , todos compartiendo la misma cadena ßl y teniendo cada una, una cadena distinta. Esos nueve receptores se unen todos a un complemento diferente de las diferentes moléculas de la matriz celular, como la fibronectina, laminina, y el colágeno. El VLA-4, por ejemplo, se une a la fibronectina . El VLA-4 también se une a moléculas no pertenecientes a la matriz que son expresadas por células endoteliales y otras células. El VLA-4 (integrina a4?l) se une a una molécula de adhesión llamada Molécula de Adhesión de las Células Vasculares 1 (o VCAM-1) la cual es con frecuencia sobrerregulada sobre las células endoteliales en sitios de inflamación [Osborne, L. Cell, 62, 3 (1990)]. La VCAM-1 es una molécula no perteneciente a la matriz la cual es un receptor expresado que se cree es responsable de la adherencia de los leucocitos al sistema nervioso central (CNS) . La aAßl también ha mostrado unirse a al menos tres sitios en la molécula de la matriz conocida como fibronectina [Humphries, M. J. et al. Ciba Foundation Symposium, 189, 177, (1995)]. Distintos epítopes del VLA-4 responden a las .actividades de unión de fibronectina y VCAM-1 y cada uno ha demostrado ser inhibido independientemente.2 Sobre la base de los datos obtenidos con anticuerpos monoclonales en modelos con animales se cree que la interacción entre aAßl y ligandos sobre otras células y la matriz extracelular juega un papel importante en la migración y activación de los leucocitos [Yednock, T. A. et al, Nature, 356, 63, (1992) . La integrina generada por el apareamiento de aA y ßl ha sido llamada LPAM-1 [Holzmann, B y Weissman, I. EMBO J. 8, 1735, (1989)] y al igual que la aAßl , puede unirse a VCAM-1 y fibronectina. Además, la alfa.4.beta.7 se une a una molécula de adhesión que se cree está implicada en la unión de los leucocitos al tejido mucoso llamado MAdCAM-1 [Berlin, C. et al. Cell, 74, 185, (1993)]. La interacción entre la aAßl y MAdCAM-1 también puede ser importante en sitios de inflamación fuera del tejido mucoso [Yang, X-D. et al. PNAS, 91, 12604 (1994)].
La adhesión intercelular mediada por VLA-4 y otros receptores de la superficie celular está asociada con un número de respuestas inflamatorias. En el sitio de un daño u otros estímulos inflamatorios, las células endoteliales vasculares activadas expresan moléculas que son adhesivas para los leucocitos. La mecánica de la adhesión de los leucocitos a las células endoteliales implica, en parte, el reconocimiento y unión de los receptores de la superficie celular sobre los leucocitos a las moléculas de la superficie celular correspondiente sobre las células endoteliales. Una vez unidos, los leucocitos migran a través de la pared de los vasos sanguíneos para entrar al sitio dañado y liberan mediadores químicos para combatir la infección. Para revisiones de los receptores de adhesión del sistema inmune véase, por ejemplo, Springer3 y Csborn4. Los trastornos inflamatorios del cerebro, como la esclerosis múltiple (MS) , meningitis, encefalitis, y un modelo de enfermedad llamado encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) , son ejemplos de trastornos del sistema nervioso central en los cuales el mecanismo de adhesión del endotelio/leucocito, da como resultado la destrucción del tejido cerebral en otras circunstancias sano. Grandes números de leucocitos migran a través de la barrera cerebral sanguínea (BCS) en sujetos con esas enfermedades inflamatorias. Los leucocitos liberan mediadores tóxicos que producen - un daño cerebral extenso y muerte dando como resultado una conducción nerviosa emparedada y parálisis. Ocurrencias similares en la encefalitis y meningitis indicadas pueden ser tratadas con inhibidores de la adhesión celular adecuados. En otros sistemas de órganos, el daño tisular también ocurre vía un mecanismo de adhesión resultante de la migración o activación de los leucocitos. Por ejemplo, la enfermedad del intestino inflamatorio15 (incluyendo la colitis ulcerativa y enfermedad de Crohn) , son causadas al menos parcialmente por la adherencia de los leucocitos a través del endotelio intestinal vía una interacción de aAßl con MadCAM y posiblemente la interacción de aAßl con VCAM-1 expresada en este tejido también. Se piensa que el asma6"8, artritis reumatoide18"21 y el rechazo de trasplante de tejido22 tienen componentes basados en la interacción de aAßl con VCAM-1 y/o fibronectina, probablemente ambos, se ha demostrado que un ataque inicial después de la isquemia miocárdica (tejido cardiaco) puede ser complicado aún más por la entrada de leucocitos al tejido dañado causando aún más daño (Vedder et al.5). Otras condiciones inflamatorias o médicas mediadas por un mecanismo molecular de adhesión incluyen, a manera de ejemplo, la enfermedad de Alzheimer, aterosclerosis9"10, demencia por SIDA11, diabetes12"14 (incluyendo la diabetes de aparición juvenil aguda, metástasis tumoral23"28, apoplejía, y otros traumas cerebrales, nefritis, retinitis, dermatitis atópica, psoriasis, y daño pulmonar agudo mediado por leucocitos como el que ocurre en el síndrome de distensión respiratoria adulta. Un grupo de antagonistas de VLA-4 que muestran ser prometedores como agentes antiinflamatorios es la clase de los compuestos de Pro-Fhe sulfonilados expuestos, por ejemplo en la Patente Estadounidense No. 6, 89, 300.31 Esos compuestos son antagonistas muy potentes de la unión de VLA-4/VCAM-1. Unido al metabolismo exhaustivo del primer paso por el hígado, esos compuestos tienen una disponibilidad oral pobre. Debido a que muchas de esas condiciones de enfermedad tratables por esos compuestos son condiciones crónicas, una vida media prolongada en suero incrementaría la utilidad de esos tipos de compuestos en el tratamiento de enfermedades en mamíferos . La vida media de un fármaco es una medida del tiempo que le toma a la cantidad de fármaco en el cuerpo disminuir a la mitad, a través de las vías metabólicas y de eliminación normales. Los inhibidores de VLA-4, incluyendo aquéllos descritos en la Patente Estadounidense No. 6,489,300, sufren de vidas medias cortas de aproximadamente 10 a 20 minutos, aún cuando se administren intravenosamente en una formulación farmacéutica. Para que el paciente retenga una cantidad efectiva del fármaco en su sistema durante un periodo de tiempo razonable, deben ser administradas cantidades muy grandes del fármaco y/o el fármaco debe ser administrado muchas veces al día. Los inhibidores de VLA-4 con esas vidas medias cortas no son candidatos terapéuticos comercialmente viables.
Por lo tanto, existe la necesidad de inhibidores de VLA-4 con vidas medias en suero significativamente mejores; preferiblemente en el intervalo de horas a días.
SUMARIO DE LA INVENCIÓN Esta invención proporciona conjugados que exhiben propiedades antagonistas de VLA-4. Los conjugados de esta invención se caracterizan porque contienen más de un antagonista de VLA-4 unido covalentemente a un polímero. Sin ser limitado por ninguna teoría, se cree que la mejor vida media en suero está asociada con la conjugación covalente de compuestos activos a un polímero. Además, la unión de copias múltiples de esos compuestos en polímeros minimiza la degradación de la eficacia biológica. En un aspecto, la invención proporciona conjugados de la fórmula I siguiente: I B es una porción polimérica biocompatible opcionalmente unida covalentemente a una molécula central con un brazo ramificado; q es de aproximadamente 2 hasta aproximadamente 20; A cada vez que ocurre es independientemente un compuesto de fórmula II o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde J se selecciona de: a) un grupo de fórmula (a) : donde R31 es un enlace covalente a la porción polimérica, la cual comprende opcionalmente un enlazante, o R31 es seleccionado del grupo que. consiste de -H, R31', -NH2, -NHR31', -N(R31')2, -NC3-C6 cíclico, -OR31', y -SR31', donde cada R31' es independientemente un alquilo de Ci-Cß lineal o ramificado opcionalmente sustituido, cicloalquilo de C3-C6, arilo opcionalmente sustituido, o heteroarilo opcionalmente sustituido, y R32 es un enlace covalente a la porción polimérica la cual opcionalmente comprende un enlazante, o R32 es seleccionado del grupo que consiste de -H, -N02, haloalquilo, y -N(MR1)R42 donde M es un enlace covalente, -C(0)- o -S02-, y R es R , N(R )2, o -OR , donde cada R41' es independientemente hidrógeno, un alquilo de Ci-Ce lineal o ramificado opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, heterocíclico opcionalmente sustituido o un heteroarilo opcionalmente sustituido, donde las sustituciones opcionales son haluro, alquilo de C?~C6, o -0 alquilo de Ci-Cß, y R42 es hidrógeno, R41', alquinilo, o alquinilo sustituido; y b) un grupo de fórmula (b) (R>* (t?) donde R es seleccionado del grupo que consiste de un enlace covalente a la porción polimérica, hidrógeno, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, amino, hidroxilo, amino sustituido, alquilo, alquilo sustituido, alquiloxi, ariloxi, heteroariloxi, hetero- cicliloxi, tiol, ariltio, heteroariltio, heterocicliltio y alquilo sustituido donde cada amino, amino sustituido, alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, y heteroarilo sustituido están opcionalmente unido covalentemente a la porción polimérica donde, en cada caso, la porción polimérica comprende opcionalmente un enlazante el cual une covalentemente la porción polimérica; Ar1 es seleccionado del grupo que consiste de arilo, arilo sustituido, heteroarilo y heteroarilo sustituido donde cada uno del arilo, arilo sustituido, heteroarilo y heteroarilo sustituido está opcionalmente unido covalentemente a la porción polimérica donde la porción polimérica opcionalmente comprende un enlazante que une covalentemente la porción polimérica a Ar1; Ar2 es seleccionado del grupo que consiste de arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, alquilo, alquilo sustituido, alquilamino, y alquilamino sustituido, donde Ar2 está opcionalmente unido covalentemente a la porción polimérica y donde la porción polimérica opcionalmente comprende un enlazante el cual enlaza covalentemente la porción polimérica a Ar2; X se selecciona del grupo que consiste de -NR1-, -O-, -S-, -SO-, -S02 y -CH2- opcionalmente sustituido el cual está opcionalmente unido covalentemente a la porción polimérica donde, en cada caso, la porción polimérica comprende opcionalmente un enlazante el cual enlaza covalentemente la porción polimérica; donde R1 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno y alquilo; T se selecciona de: a) un grupo de fórmula (c) donde Y se selecciona del grupo que consiste de -0-y -NR1- donde R1 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno y alquilo; se selecciona del grupo que consiste de un enlace covalente a una porción polimérica la cual opcionalmente comprende un enlazante y -NR2R3 donde R2 y R3 son seleccionados independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, y donde R2 y R3, junto con el átomo de nitrógeno unido a éstos, forman un anillo heterocíclico o un anillo heterocíclico sustituido donde cada uno del alquilo, alquilo sustituido, heterocíclico y heterocíclico sustituido está opcionalmente covalentemente unido a una porción polimérica la cual comprende opcionalmente además un enlazante, m es un número entero igual a 0, 1 ó 2; n es un número entero igual a 0, 1 ó 2; y b) un grupo de fórmula (d) donde G es un arilo opcionalmente sustituido o un anillo de 5 ó 6 miembros de heteroarilo opcionalmente sustituido que contiene de 0 a 3 nitrógenos, donde el arilo o heteroarilo comprende opcionalmente además un enlace covalente a una porción polimérica la cual comprende opcionalmente un enlazante; R6 es un enlace covalente a una porción polimérica la cual comprende opcionalmente un enlazante, o R6 es -H, alquilo, alquilo sustituido, o -CH2C(0)R17, donde R17 es -OH, -OR18, o - NHR18, donde R18 es alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, o heteroarilo sustituido; R55 es -OH o un éster hidrolizable, o R55 forma un éster polimérico hidrolizable con la porción polimérica, opcionalmente a través de un enlazante; siempre que: A. al menos uno de Ar1, J, Ar2, R55 y T (de manera más preferible uno de J y T) contiene un enlace covalente a la porción polimérica; B. cuando X es -O-, entonces m es dos; y C. el conjugado de fórmula I tiene un peso molecular no mayor de aproximadamente 80,000.
La invención también proporciona composiciones farmacéuticas, composiciones las cuales comprenden, por ejemplo, un soporte farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente efectiva de un conjugado de la invención o mezclas de los mismos. La invención también proporciona métodos para el tratamiento de una enfermedad mediada, al menos en parte, por VLA-4 en un paciente, método el cual comprende administrar una composición farmacéutica que comprende un soporte farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente efectiva de un conjugado de la invención o mezclas de los mismos. La invención también incluye el uso de un conjugado de la invención, y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, para la elaboración de un medicamento para usarse en el tratamiento de una enfermedad mediada, al menos en parte, por VLA-4 en un paciente. Los conjugados y composiciones farmacéuticas pueden ser usados para tratar condiciones de enfermedad mediadas, al menos en parte, por VLA-4 o la adhesión de los leucocitos. Esas condiciones de enfermedad, incluyen a manera de ejemplo el asma, enfermedad de Alzheimer, aterosclerosis, demencia por SIDA, diabetes (incluyendo la diabetes de aparición juvenil aguda) , enfermedad del intestino inflamatorio (incluyendo la colitis ulcerativa y enfermedad de Crohn) , esclerosis múltiple, artritis reumatoide, trasplante de tejidos, metástasis tumoral, meningitis, encefalitis, apoplejía y otros traumas cerebrales, nefritis, retinitis, enfermedad de Sjogren, dermatitis atópica, psoriasis, isquemia miocárdica y daño pulmonar agudo mediado por leucocitos, como el que ocurre en el síndrome de distensión respiratoria adulta. Otras condiciones de enfermedad que pueden ser tratadas usando los conjugados y composiciones de la presente invención incluyen, pero no se limitan a, condiciones inflamatorias como el eritema nodoso, conjuntivitis alérgica, neuritis óptica, uveítis, rinitis alérgica, espondilitis anquilosante, artritis psoriática, vasculitis, síndrome de Reiter, lupus eritematoso sistémico, esclerosis sistémica progresiva, polimiositis, dermatomiositis, granulomatosis de Wegner, aortitis, sarcoidosis, linfocitopenia, arteritis temporal, pericarditis, miocarditis, insuficiencia cardiaca congestiva, poliarteritis nodosa, síndrome de hipersensibilidad, alergia, síndromes hipereosinofílicos, síndrome de Churg-Strauss, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, pneumonitis por hipersensibilidad, hepatitis activa crónica, cistitis intersticial, insuficiencia endocrina autoimmune, cirrosis biliar primaria, anemia aplástica autoinmune, hepatitis persistente crónica y tiroiditis. Preferiblemente, los conjugados y composiciones farmacéuticas de esta invención son usados en métodos para tratar el asma, artritis reumatoide y esclerosis múltiple. También en esta enfermedad tardia, los conjugados de esta invención no únicamente proporcionan un efecto antiinflamatorio cuando son administrados in vivo sino que encuentran además uso en el tratamiento de condiciones y enfermedades asociadas con la desmielinización. La invención también proporciona métodos para preparar los conjugados de la invención y los intermediarios usados en esos métodos.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Como se hizo notar anteriormente, esta invención se relaciona con conjugados los cuales inhiben la adhesión de los leucocitos y, en particular, la adhesión de los leucocitos mediada, al menos en parte, por VLA-4. En una modalidad preferida, únicamente uno de Ar1, J, Ar2, y T contiene un enlace covalente a una porción polimérica . En otra modalidad preferida, la porción polimérica está unida al grupo -NR2R3. En una modalidad preferida adicional, cuando X en los conjugados de la invención es NR1, entonces m es dos. En otra modalidad preferida más, q es un número entero de 2 hasta aproximadamente 20 y de manera más preferible de 2 hasta aproximadamente 8. Los conjugados preferidos de fórmula I incluyen aquéllos de la fórmula la siguiente: y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, donde B es una porción polimérica biocompatible divalente, trivalente, tetravalente o de valencia superior u opcionalmente más de un polímero biocompatible unido covalentemente por un enlace de grupo funcional o por una molécula central con un brazo ramificado o ambas para formar una porción polimérica divalente, trivalente, tetravalente o de valencia superior; ?r es de 2 hasta aproximadamente 20; A cada vez que ocurre es independientemente un compuesto de fórmula lia U¡t donde R es seleccionado del grupo que consiste de un enlace covalente con la porción polimérica, amino, amino sustituido, alquilo y alquilo sustituido donde cada amino, amino sustituido, alquilo y alquilo sustituido está opcionalmente unido covalentemente a la porción polimérica donde, en cada caso, la porción polimérica comprende opcionalmente un enlazante el cual enlaza covalentemente la porción polimérica; Ar1 es seleccionado del grupo que consiste de arilo, arilo sustituido, heteroarilo y heteroarilo sustituido; Ar es seleccionado del grupo que consiste de arilo, arilo sustituido, heteroarilo y heteroarilo sustituido donde cada arilo, arilo sustituido, heteroarilo y heteroarilo sustituido está opcionalmente unido covalentemente a la porción polimérica, donde la porción polimérica comprende opcionalmente un enlazante el cual liga covalentemente la porción polimérica a Ar2; X se selecciona del grupo que consiste de -NR1-, -O-, -S-, -SO-, -S02 y opcionalmente -CH2- sustituido donde R1 es seleccionado del grupo que consiste de hidrógeno y alquilo; Y es seleccionado del grupo que consiste de -O- y -NR1- donde R1 es seleccionado del grupo que consiste de hidrógeno y alquilo; W es seleccionado del grupo que consiste de un enlace covalente con una porción polimérica la cual opcionalmente comprende un enlazante y -NR2R3 donde R2 y R3 son seleccionados independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, y donde R2 y R3, junto con el átomo de nitrógeno unido a éstos, forman un anillo heterocíclico o un anillo heterocíclico sustituido donde cada uno del alquilo, alquilo sustituido, heterocíclico y heterocíclico sustituido está opcionalmente unido covalentemente a la porción polimérica opcionalmente a través de un enlazante; m es un número entero igual a 0, 1 ó 2; n es un número entero igual a 0, 1 ó 2; y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos; siempre que: A. al menos uno de R, Ar2, W y -NR2R3 contengan un enlace covalente con la porción polimérica; B. cuando R esté unido covalentemente a la porción polimérica, n es uno y X no es -O-, -S-, -SO-, o -S02-; C. cuando X es -O- o -NR1-, entonces m es dos; y D. el conjugado de fórmula la tenga un peso molecular de no más de 60,000. Los conjugados preferidos de fórmula I incluyen aquellos de la fórmula Ib siguiente: F Ib donde cada A es independientemente un compuesto de la fórmula Ilb siguiente: y donde g es 2 hasta aproximadamente 20; B es como se definió anteriormente; Ar1 es seleccionado del grupo que consiste de arilo, arilo sustituido, heteroarilo, y heteroarilo sustituido; Ar2 es seleccionado del grupo que consiste de arilo, arilo sustituido, heteroarilo y heteroarilo sustituido donde cada uno del arilo, arilo sustituido, heteroarilo y heteroarilo sustituido está opcionalmente unido covalentemente a una porción polimérica donde la porción polimérica comprende opcionalmente un enlazante el cual enlaza covalentemente la porción polimérica a Ar2; Y se selecciona del grupo que consiste de -O- y -NR1-donde R1 es seleccionado del grupo que consiste de hidrógeno y alquilo; W es seleccionado del grupo que consiste de un enlace covalente a una porción polimérica el cual opcionalmente comprende un enlazante y -NR2R3 donde R2 y R3 son seleccionados independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, y donde R2 y R3, junto con el átomo de nitrógeno unido a éstos, forman un anillo heterocíclico o un anillo heterocíclico sustituido donde cada uno de alquilo, alquilo sustituido, heterocíclico y heterocíclico sustituido está opcionalmente unido covalentemente a la porción polimérica la cual comprende opcionalmente además un enlazante; siempre que al menos uno de Ar2, W y -NR2R3 esté unido covalentemente a una porción polimérica la cual comprende opcionalmente un enlazante; y siempre que el conjugado de fórmula Ib tenga un peso molecular no mayor de 60,000. Los conjugados preferidos de fórmula I incluyen aquéllos de la fórmula le siguiente: ic donde cada A es independientemente un compuesto de la fórmula lie siguiente: y donde q es de 2 hasta aproximadamente 20; B es como se definió anteriormente; R es seleccionado del grupo que consiste de un enlace covalente a una porción polimérica, amino, amino sustituido, alquilo y alquilo sustituido donde cada amino, amino sustituido, alquilo y alquilo sustituido está opcionalmente unido covalentemente a la porción polimérica donde, en cada caso, la porción polimérica comprende opcionalmente un enlazante el cual enlaza covalentemente la porción polimérica; Ar1 es seleccionado del grupo que consiste de arilo, arilo sustituido, heteroarilo y heteroarilo sustituido; Ar2 es seleccionado del grupo que consiste de arilo, arilo sustituido, heteroarilo y heteroarilo sustituido donde cada uno del arilo, arilo sustituido, heteroarilo y heteroarilo sustituido está opcionalmente unido covalentemente a una porción polimérica donde la porción polimérica comprende opcionalmente un enlazante el cual enlaza covalentemente la porción polimérica a Ar2; Y se selecciona del grupo que consiste de -0- y - NR1- donde R1 es seleccionado del grupo que consiste de hidrógeno y alquilo; W es seleccionado del grupo que consiste de un enlace covalente a una porción polimérica el cual opcionalmente comprende un enlazante y -NR2R3 donde R2 y R3 son seleccionados independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, y donde R2 y R3, junto con el átomo de nitrógeno unido a éstos, forman un anillo heterocíclico o un anillo heterocíclico sustituido donde cada uno de alquilo, alquilo sustituido, heterocíclico y heterocíclico sustituido está opcionalmente unido covalentemente a la porción polimérica la cual comprende opcionalmente además un enlazante; n es un número entero igual a 0, 1 ó 2; y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos; siempre que al menos uno de R, Ar2, y -NR2R3 esté unido covalentemente a una porción polimérica la cual comprende opcionalmente un enlazante; y además siempre que el conjugado de fórmula le tenga un peso molecular no mayor de 60,000. Los conjugados preferidos de fórmula I incluyen aquéllos de fórmula Id siguiente: Id donde cada A es independientemente un compuesto de fórmula lid siguiente: y donde g es de 2 hasta aproximadamente 20; B es como se definió anteriormente; R es seleccionado del grupo que consiste de un enlace covalente a una porción polimérica, amino, amino sustituido, alquilo y alquilo sustituido donde cada amino, amino sustituido, alquilo y alquilo sustituido está opcionalmente unido covalentemente a la porción polimérica donde, en cada caso, la porción polimérica comprende opcionalmente un enlazante el cual enlaza covalentemente la porción polimérica; Ar1 es seleccionado del grupo que consiste de arilo, arilo sustituido, heteroarilo y heteroarilo sustituido; Ar2 es seleccionado del grupo que consiste de arilo, arilo sustituido, heteroarilo y heteroarilo sustituido donde cada uno del arilo, arilo sustituido, heteroarilo y heteroarilo sustituido está opcionalmente unido covalentemente a una porción polimérica donde la porción polimérica comprende opcionalmente un enlazante el cual enlaza covalentemente la porción polimérica a Ar2; R2 y R3 son seleccionados independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, y donde R2 y R3 junto con el átomo de nitrógeno unido a éste, forman un anillo heterocíclico o un anillo heterocíclico sustituido, donde cada uno del alquilo, alquilo sustituido, heterocíclico y heterocíclico sustituido está opcionalmente unido covalentemente a una porción polimérica la cual comprende opcionalmente además un enlazante; n es un número entero igual a 0, 1 ó 2; y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos; siempre que al menos uno de R, Ar2 y -NR2R3 esté unido covalentemente a un polímero el cual comprende opcionalmente un enlazante; y además siempre que el conjugado de fórmula Id tenga un peso molecular no mayor de aproximadamente 80,000. Los conjugados preferidos de fórmula I incluyen aquéllos de fórmula le siguiente: ie donde cada A es independientemente un compuesto de fórmula lie siguiente : y donde g es de 2 hasta aproximadamente 20; B es como se definió anteriormente; Ar1 es seleccionado del grupo que consiste de arilo, arilo sustituido, heteroarilo y heteroarilo sustituido; Ar2 es seleccionado del grupo que consiste de arilo, arilo sustituido, heteroarilo y heteroarilo sustituido donde cada uno del arilo, arilo sustituido, heteroarilo y heteroarilo sustituido está opcionalmente unido covalentemente a una porción polimérica donde la porción polimérica comprende opcionalmente un enlazante el cual enlaza covalentemente la porción polimérica a Ar2; R2 y R3 son seleccionados independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, y donde R2 y R3 junto con el átomo de nitrógeno unido a éste, forman un anillo heterocíclico o un anillo heterocíclico sustituido, donde cada uno del alquilo, alquilo sustituido, heterocíclico y heterocíclico sustituido está opcionalmente unido covalentemente a una porción polimérica la cual comprende opcionalmente además un enlazante; y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos; siempre que al menos uno de Ar2 y -NR2R3 esté unido covalentemente a una porción polimérica la cual comprende opcionalmente un enlazante; y además siempre que el conjugado de fórmula le tenga un peso molecular no mayor de 60,000. Los conjugados preferidos de fórmula I incluyen aquéllos de fórmula If siguiente: (AL donde cada A es independientemente un compuesto de fórmula Ilf siguiente: y donde q es de 2 hasta aproximadamente 20; B es como se definió anteriormente; R4 está unido covalentemente a una porción polimérica la cual comprende opcionalmente un enlazante; R5 es seleccionado del grupo que consiste de alquilo y alquilo sustituido; Ar3 es seleccionado del grupo que consiste de arilo, arilo sustituido, heteroarilo y heteroarilo sustituido; X se selecciona del grupo que consiste de -NR1-, - 0-, -S-, -SO-, -S02 y -CH2- opcionalmente sustituido, donde R1 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno y alquilo; JI? es un número entero igual a 0, 1 ó 2; n es un número entero igual a 0, 1 ó 2; y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos; siempre que: A. cuando R esté unido covalentemente a la porción polimérica, n es uno y X no es -O-, -S-, -SO-, o -S02; B. cuando X sea -0- o -NR1-, entonces m es dos; y C. el conjugado de fórmula If tiene un peso molecular no mayor de 60,000. Los conjugados preferidos de fórmula I incluyen aquéllos de fórmula Ig siguiente: donde cada A es independientemente un compuesto de fórmula Ilg siguiente: y donde q es de 2 hasta aproximadamente 20; B es como se definió anteriormente; R4 está unido covalentemente a una porción polimérica la cual comprende opcionalmente un enlazante; R5 es seleccionado del grupo que consiste de alquilo y alquilo sustituido; Ar3 es seleccionado del grupo que consiste de arilo, arilo sustituido, heteroarilo y heteroarilo sustituido; n es un número entero igual a 0, 1 ó 2; y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos; siempre que el conjugado de fórmula Ig tenga un peso molecular no mayor de 60,000. Los conjugados preferidos de fórmula I incluyen aquéllos de fórmula Ih siguiente: lia donde cada A es independientemente un compuesto de fórmula Ilh siguiente: y donde q es de 2 hasta aproximadamente 20; R4 está unido covalentemente a una porción polimérica la cual comprende opcionalmente un enlazante; Ar3 es seleccionado del grupo que consiste de arilo, arilo sustituido, heteroarilo y heteroarilo sustituido; sales farmacéuticamente aceptables de los mismos; siempre que el conjugado de fórmula Ih tenga un peso molecular no mayor de 60,000. Los conjugados preferidos de fórmula I incluyen aquéllos de fórmula Ii siguiente: ff donde cada A es independientemente un compuesto de fórmula Ili siguiente: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y donde q es de 2 hasta aproximadamente 20; y siempre que el conjugado de fórmula Ii tenga un peso molecular no mayor de 60,000. Los conjugados preferidos de fórmula I incluyen aquéllos de fórmula Ij siguiente: B -(A), donde cada A es independientemente un compuesto de fórmula IIj siguiente: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y donde q es de 2 hasta aproximadamente 20; y siempre que el conjugado de fórmula Ij tenga un peso molecular no mayor de 80,000. Los conjugados preferidos de fórmula I incluyen aquéllos de fórmula Ik siguiente: I donde cada A es independientemente un compuesto de fórmula Ilk siguiente: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Los conjugados preferidos de fórmula I incluyen aquéllos de fórmula IL siguiente: H donde cada A es independientemente un compuesto de fórmula IIL siguiente: c una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde R4 está unido covalentemente a la porción polimérica la cual opcionalmente comprende un enlazante.
Preferiblemente, Ar1 en las fórmulas Ila-IIe y Ar3 en las fórmulas Ilf-IIh son seleccionadas independientemente del grupo que consiste de: fenilo, 4-metilfenilo, 4-t-butilfenilo, 2, 4, 6-trimetilfenilo, 2-fluorofenilo, 3-fluorofenilo, 4-fluorofenilo, 2, -difluorofenilo, 3, -difluorofenilo, 3, 5-difluorofenilo, 2-clorofenilo, 3-clorofenilo, 4-clorofenilo, 3, 4-diclorofenilo, 3, 5-diclorofenilo, 3-cloro-4-fluorofenilo, 4-bromofenilo, 2-metoxifenilo, 3-metoxifenilo, -metoxifenilo, 3, 4-dimetoxifenilo, 4-t-butoxifenilo, 4- ( 3 ' -dimetilamino-n-propoxi) -fenilo, 2-carboxifenilo, 2- (metoxicarbonil) fenilo, 4-(H2NC(0)-) fenilo, 4- (H2NC (S) -) fenilo, 4-cianofenilo, 4-trifluorometilfenilo, 4-trifluorometoxifenilo, 3, 5-di- (trifluorometil) fenilo, 4-nitrofenilo, 4-aminofenilo, 4-(CH3C(0)NH-) fenilo, 4- (fenilNHC(O)NH-) fenilo, 4-amidinofenilo, 4-metilamidinofenilo, 4- [CH3SC (=NH) -] fenilo, 4-cloro-3- [H2NS (0)2-] fenilo, 1-naftilo, 2-naftilo, piridin-2-ilo, piridin-3-ilo, piridin-4-ilo, pirimidin-2-ilo, quinolin-8-ilo, 2- (trifluoroacetil) -1,2, 3, 4-tetrahidroisoquinolin-7-ilo, 2-tienilo, 5-cloro-2-tienilo, 2, 5-dicloro-4-tienilo, 1 -N-metilimidazol-4-ilo, l-N-metilpirazol-3-ilo , l-N-metilpirazol-4 -ilo , l-N-butilpirazol-4 -ilo, l-N-metil-3-metil-5-cloropirazol-4 -ilo , 1-N—metil-5-metil-3-cloropirazol-4-ilo, 2-tiazolilo y 5-metil-l, 3, -tiadiazol-2-ilo . Preferiblemente, cuando A es de fórmula lia, Ilb, lie, lid y lie, y Ar1 está unido a una porción polimérica, entonces Ar1 es de la fórmula: -Ar1-Z-(CH2CHR70)PR8 donde Ar1 es seleccionado del grupo que consiste de arilo, arilo sustituido, heteroarilo, y heteroarilo sustituido, Z es seleccionado del grupo que consiste de un enlace covalente, un grupo enlazante de 1 a 40 átomos, -O-, y -?R9-, donde R9 es seleccionado del grupo que consiste de hidrógeno y alquilo, R7 es seleccionado del grupo que consiste de hidrógeno y metilo; R8 es seleccionado del grupo que consiste de -(L)w-A cuando p es mayor de aproximadamente 300 y (L) -B- (A) q_?, donde A es representado por cualquier fórmula lia hasta Ilh anteriores, L es un grupo enlazante de 1 a 40 átomos y w es cero o uno; y p es un número entero de aproximadamente 200 a 1360. Cuando A es de la Formula lia o Ilf, y R no es unido a una porción polimérica, el sustituyente de la siguiente fórmula: donde R5, X, m y n son < como se definieron anteriormente, es seleccionado preferiblemente del grupo que consiste de acetidinilo, tiazolidinilo, piperidinilo, piperacinilo, morfolino, tiomorfolinilo, pirrolidinilo, 4-hidroxipirrolidinilo, -oxopirrolidinilo, 4-fluoropirrolidinilo, 4, 4-difluoropirrolidinilo, 4- (tiomorfolin-4-ilC (O) O) pirrolidmilo, 4- [CH3S (O)20]pirrolidin?lo, 3-fenilpirrolidinilo, 3-tiofenil-pirrolidinilo, 4-amino-pirrolidinilo, 3-metoxipirrolidinilo, 4, 4-dimetilpirrolidinilo, 4 -N-Cbz-piperacinilo , 4-[CH3S(0)2] piperacinilo, 5, 5-dimetiltiazolindin-4-ilo, 1,1-dioxo-tiazolidinilo, 1, l-dioxo-5, 5-dimetiltiazolidin-2-ilo y 1,1-dioxotiomorfolinilo. Preferiblemente, cuando A es de la fórmula lia y el sustituyente de fórmula: está unida a la porción polimérica, entonces preferiblemente el sustituyente es de la fórmula ZríCHaCKR'O?pR» donde in es un número entero igual a cero, uno o dos; Z es seleccionado del grupo que consiste de un enlace covalente, un grupo enlazante de 1 a 40 átomos, -O-, -NR9-, donde R9 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno y alquilo, R7 es seleccionado del- grupo que consiste de hidrógeno y metilo; p es un número entero de 0 hasta aproximadamente 1360; R8 es seleccionado del grupo que consiste de -B- (A)q-!, y A cuando p es mayor de aproximadamente 300, y A es representado por cualquiera de las fórmulas lia hasta Ilh anteriores . Cuando A es de la fórmula lia, Ilb, lie, lid, lie y cuando Ar2 no está unido a una porción polimérica, entonces preferiblemente Ar2 es seleccionado del grupo que consiste de fenilo, fenilo sustituido, 2-piridinilo, 3-piridinilo, 4- piridinilo, y 4-piridin-2-onilo . Cuando A es de la fórmula lia, Ilb, lie, lid, lie y cuando Ar2 está unido a una porción polimérica, entonces Ar2 es representado preferiblemente por la fórmula: 4-Ar*- ' i ' Z-íCHaCH ^R» donde Ar2 es seleccionado del grupo que consiste de arilo, arilo sustituido, heteroarilo y heteroarilo sustituido; Z es seleccionado del grupo que consiste de un enlace covalente, un grupo enlazante de 1 a 40 átomos, -O-, -NR9-, amida, carbamato y urea, donde R9 es seleccionado del grupo que consiste de hidrógeno y alquilo. R7 es seleccionado del grupo que consiste de hidrógeno y metilo; p es un número entero de 0 hasta aproximadamente 1360. R8 es seleccionado del grupo que consiste de -B- (A)q-i, y A cuando p es mayor de aproximadamente 300, y A es representado por cualquiera de las fórmulas lia hasta Ilh anteriores . En una modalidad preferida, -YC(0) es -OC(0)NR2R3. Cuando A es de la fórmula Ha, Hb o He, -YC(0)W es -OC(0)NR2R3 y ni R2 ni R3 están unidas a una porción polimérica, entonces preferiblemente -OC(0)NR2R3 es seleccionada del grupo que consiste de: (CH3)2NC(0)0-, ¡piperidin-1-il) -C (0) 0-, (piperidin-4-il) -C (0) 0-, ;i-metilpiperidin-4-il) -C (0)0-, ;4-hidroxipiperidin-l-il) -C (0) 0-, '4-f ormiloxipiperidin- 1-il) -C (O) 0-, [4-etoxicarbonilpiperidin-l-il) -C (0) 0-, |4-carboxilpiperidin-l-il) -C (0) 0-, (3-hidroximetilpiperidin-l-il) -C (0) 0-, ,4-hidroximetilpiperidin-l-il) -C (0) 0-, ; 4 -fenil- 1-Boc-piperidin- -il) -C (0)0-, ;4-piperidon-l-il etilen cetal) -C (0) 0-, (piperacin-4-il) -C (0) 0-, (l-Boc-piperacin-4-il) -C (0)0-, ;4-metilpiperacin-l-il) -C (0) 0-, |4-metilhomopiperacin-l-il) -C (0) 0-, A- (2-hidroxietil)piperacin-l-il) -C (O) 0-, ;4-fenilpiperacin-l-il) -C (0)0-, (4- (piridin-2-il)piperacin-l] -il) -C(0)0-, [A- (4-trifluorometilpiridin-2-il)piperacin-l-il) C (0)0-, A- (pirimidin-2-il) piperacin-1-il) -C (0) 0-, [4-acetilpiperacin-l-il) -C (0) 0-, [A- (fenil-C(O) -) piperacin-1-il) -C(0)0-, (4- (piridin-4'-il-C(0) -) piperacin-1-il) -C (0) 0-, (4-(fenil-NHC(0) -) piperacin-1-il) -C(0)0-, (4-(fenil-NHC(S)-)piperacin-l-il) -C(0)0-, (4-metansulfonilpiperacin-l-il) -C (O) O-, (4-trifluorometansulfonilpiperacin-1-il) -C (0) 0-, (morfolin-4-il) -C(0)0-, (tiomorfolin-4-il)-C(0)0-, (tiomorfolin-4 ' -il sulfona) -C (0)0-, (pirrolidin-1-il) -C(0)0-, (2-metilpirrolidin-l-il) -C (0) 0-, (2- (metoxicarbonil)pirrolidin-l-il) -C (0) 0-, (2- (hidroximetil ) pirrolidin-1-il) -C(0) 0-, (2- (N, N-dimetilamino) etil) (CH3) NC (0) 0-, (2-(N-metil-N-toluen-4-sulfonilamino)etil) (CH3) N-C (0)0-, (2-(morfolin-4-il)etil) (CH3) NC (O) 0-, (2- (hidroxi) etil) (CH3) C (0) 0-, bis (2- (hidroxi) etil) NC (0)0-, (2-(formiloxi)etil) (CH3) NC (0) 0-, (CH3OC(0)CH2)HNC(0)0-, y 2- (fenilNHC (O) 0-) etil-] HNC (O) O- . Cuando A es de la fórmula Ha, Hb o He, -YC(0)W es -OC(0)NR2R3 y R2 y/o R3 están/está unido a la porción polimérica, la porción polimérica es representada preferiblemente por la fórmula: -Z'-(CH2CHR0)PR8 Z es seleccionado del grupo que consiste de un enlace covalente, un grupo enlazante, de 1 a 40 átomos, -O-, -NR9-, amida, carbamato y urea, donde R9 es seleccionado del grupo que consiste de hidrógeno y alquilo, R7 es seleccionado del grupo que consiste de hidrógeno y metilo; p es un número entero de 0 hasta aproximadamente 1360; R8 es seleccionado del grupo que consiste de -B-(A)q.JL, y A cuando p es mayor de aproximadamente 300, y A es representado por cualquiera de las fórmula Ha hasta Hh anteriores. En los compuestos de fórmula Ili y IIj, se prefiere que el grupo ? sea de la fórmula: donde R66 es un enlace covalente a la porción polimérica la cual opcionalmente comprende un enlazante, o R66 es hidrógeno o alquilo de Ci-Cß lineal o ramificado; R77 es un enlace covalente a la porción polimérica la cual opcionalmente comprende un enlazante, o R77 es hidrógeno, halógeno o alcoxi de Ci-Cd lineal o ramificado; y R88 es un enlace covalente a la porción polimérica la cual opcionalmente comprende un enlazante, o R88 es hidrógeno o alquilo de Ci-Ce lineal o ramificado. Preferiblemente, uno de R66, R77 y R88 es un enlace covalente a la porción polimérica la cual opcionalmente comprende un enlazante. Los compuestos preferidos de fórmula Ili son aquéllos de la fórmula Ili-a: IH-a y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, donde Ar1 es seleccionado del grupo que consi ste de un alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido , ciclo-alquilo, cicloalquilo sustituido, heterocíclico, heterocíclico sustituido, heteroarilo y heteroarilo sustituido; y R6 es un enlace covalente a una porción polimérica que comprende opcionalmente un enlazante. Los compuestos preferidos de Fórmula Ili-a incluyen aquéllos donde Ar1 es fenilo o un grupo heteroarilo de 5 o 6 miembros que tienen al menos un átomo de nitrógeno, cada uno de los cuales está sustituido opcionalmente con halógeno, hidroxi, alcoxi de Ci-Cg, alquilo de C?-C6, nitro, trifluorometilo, amino, mono- o di (Ci-Ce) alquilamino, amino (C?-C6) alquilo, acilo de C2-C6, acilamino de C2-C6 o amino (C?-C6) acilo. Ar1 es piridilo opcionalmente sustituido con halógeno, hidroxi, alquilo de C?-C6, alcoxi de C^-Cg, nitro, trifluorometilo, amino, mono- o di (Ci-Cg) alquilamino, amino (C?-C6) alquilo, acilo de C2-C6, acilamino de C2-C6 o amino (Ci-Cg) acilo. Particularmente los compuestos preferidos de Fórmula Ili-a incluyen aquéllos donde Ar1 es piridilo opcionalmente sustituido con alquilo de C?-Cfe, hidroxi, halógeno, alcoxi de C?-C6, nitro, trifluorometilo, amino, o mono- o di (C?-C6) alquilamino. Los compuestos preferidos de Fórmula IIj son también aquellos de fórmula Hj-a: y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, donde R6 es un enlace covalente a una porción polimérica que comprende opcionalmente un enlazante. Los compuestos preferidos de Fórmula IIj -a incluyen aquéllos donde R31 es amino o mono- o di (Ci-Cß) alquilamino; y R32 es -H, -N02 o haloalquilo, de manera más preferible trifluorometilmetilo . Todavía otros compuestos preferidos de Fórmula II -a son aquéllos donde R31 es amino o mono- o di (C?-C6) alquilamino; y R32 es -N(MR41)R42; donde M es -S02- o -CO-; R41 es alquilo de C?-C6 opcionalmente sustituido con halógeno, hidroxi, alcoxi de Ci-Cd, amino, o mono- o di(C?-C6) alquilamino; o fenilo o un heteroarilo de 5- o 6- miembros que contiene al menos un nitrógeno, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con halógeno, hidroxi, alquilo de Ci-Cß, alcoxi de Ci-Ce, cicloalquilo de C3-C , amino, nitro, trifluorometilo, o mono- o di (C?~C6) alquilamino; y R42 es hidrógeno, alquilo de Ci-C6, o cicloalquilo de C3-C7. Los compuestos preferidos adicionales de Fórmula II-j-a incluyen aquéllos donde Grupos R41 dentro de la Fórmula IIj -a son alquilo de C?-C opcionalmente sustituido con halógeno, hidroxi, alcoxi de Ci-Cg, amino, mono- o di (C?-Cg) alquilamino; o piridilo o pirimidinilo, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con halógeno, hidroxi, alquilo de C1-C3, alcoxi de C1-C3, amino, o mono- o di(C?-C4)-alquilamino; y R42 es hidrógeno, alquilo de C?-C4, o cicloalquilo de C3-C7. En un ejemplo, los conjugados de esta invención son divalentes y están representados por la fórmula III: lü donde cada A es independientemente como se definió anteriormente y B' es -V - (CH2CHR70) P- Z'- donde cada Z' es independientemente un enlace covalente o un grupo enlazante, R7 es hidrógeno o metilo y p es un número entero de aproximadamente 100 a 1360.
En un ejemplo, los conjugados de esta invención son trivalentes a decavalentes y están representados preferiblemente por la fórmula IV: IV donde cada A es independientemente como se definió anteriormente y t es un número entero de 3 a 10.
Definiciones Como se usa aquí, "alquilo" se refiere a grupos hidrocarbilo alifáticos saturados monovalentes que tienen de 1 a 5 átomos de carbono y, de manera más preferible de 1 a 3 átomos de carbono. Este término es ejemplificado por grupos como el metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, t-butilo, n-pentilo y similares. "Alquilo sustituido" se refiere a un grupo alquilo que tiene de 1 a 3, y preferiblemente de 1 a 2, sustituyentes seleccionados del grupo que consiste de alcoxi, alcoxi sustituido, acilo, acilamino, aciloxi, amino, amino sustituido, aminoacilo, arilo, arilo sustituido, ariloxi, ariloxi sustituido, ciano, halógeno, hidroxilo, nitro, carboxilo, esteres de carboxilo, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, espirocicloalquilo, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heterocíclico, y heterocíclico sustituido. "Alquilo opcionalmente sustituido" abarca "alquilo" y "alquilo sustituido" como se definió anteriormente. "-CH2- opcionalmente sustituido" se refiere al grupo que no está sustituido o está sustituido con 1 o 2 sustituyentes seleccionados del grupo que consiste de alcoxi, alcoxi sustituido, tioalcoxi, tioalcoxi sustituido, acilo, acilamino, aciloxi, amino, amino sustituido, aminoacilo, arilo, arilo sustituido, ariloxi, ariloxi sustituido, ciano, halógeno, hidroxilo, sulfhidrilo, nitro, carboxilo, esteres de carboxilo, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, espirocicloalquilo, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heterocíclico, y heterocíclico sustituido. Los sustituyentes preferidos sobre el "-CH2- opcionalmente sustituido" son hidroxi, alcoxi, amino, monoalquilamino, dialquilamino, sulfhidrilo, tioalcoxi, y halógeno (preferiblemente F) . Preferiblemente, cuando el "-CH2- opcionalmente sustituido" está sustituido, éste está sustituido con un grupo. "Alquileno" se refiere a grupos hidrocarbilo alifáticos saturados divalentes que tienen preferiblemente de 1 a 5 y de manera más preferible de 1 a 3 átomos de carbono, los cuales son de cadena lineal o ramificada. Este término es ejemplificado por grupos como el metileno (-CH2-) , etileno (-CH2CH2-) , n-propileno (-CH2CH2CH2-), isopropileno (-CH2CH (CH3) -) y similares. "Alcoxi" se refiere al grupo "alquilo-O-" el cual incluye, a manera de ejemplo al metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi, n-butoxi, t-butoxi, sec-butoxi, n-pentoxi y similares. "Alcoxi sustituido" se refiere al grupo "alquil-O- sustituido" . "Acilo" se refiere a los grupos H-C(O)-, alquil- C(0)-, alquil-C(O)- sustituido, alquenil-C (0) -, alquenil- C(0)- sustituido, alquinil-C (0) -,. alquinil-C (0) - sustituido, cicloalquil-C (0) -, cicloalquilo-C (0) - sustituido, aril-C(O)-, arilo-C(O)- sustituido, heteroaril-C (0) -, heteroarilo-C (0) - sustituido, heterocíclico-C (0) -, y heterocíclico-C (0) - sustituido, donde el alquilo, alquilo sustituido, alquenilo, alquenilo sustituido, alquinilo, alquinilo sustituido, ciclo-alquilo, cicloalquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heterocíclico y heterocíclico sustituido son como se definen aquí. "Aminoacilo" se refiere al grupo -C(O)NR10R10 donde cada R10 es seleccionado independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, alquenilo, alquenilo sustituido, alquinilo, alquinilo sustituido, arilo, arilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heterocíclico, heterocíclico sustituido y donde cada RIO está unido para formar junto con átomos de nitrógeno a un anillo heterocíclico o heterocíclico sustituido donde el alquilo, alquilo sustituido, alquenilo, alquenilo sustituido, alquinilo, alquinilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heterocíclico y heterocíclico sustituido son como se definen aquí. "Aciloxi" se refiere a los grupos alquilo-C (0) 0-, alquilo-C (0) 0- sustituido, alquenilo-C (0) 0-, alquenilo-C (0) 0- sustit?ido, alquinilo-C (O) 0-, alquinilo-C (0) 0- sustituido, arilo-C (0) 0-, arilo-C(0)0- sustituido, cicloalquilo-C (0) 0-, cicloalquilo-C (0) 0- sustituido, heteroarilo-C (0) 0-, hetero- arilo-C (0)0- sustituido, heterocíclico-C (0) 0-, y heterocíclico-C (0)0- sustituido donde el alquilo, alquilo sustituido, alquenilo, alquenilo sustituido, alquinilo, alquinilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heterocíclico y heterocíclico sustituido son como se definen aquí. "Alquenilo" se refiere a grupos alquenilo que tienen de 2 a 6 átomos de carbono y, de manera preferible de 2 a 4 átomos de carbono y que tienen al menos 1 y preferiblemente de 1 a 2 sitios de insaturación del alquenilo. Esos grupos son ejemplificados por el vinilo, arilo, but-3-en-l-ilo, y similares. "Alquenilo sustituido" se refiere - a grupos alquenilo que tienen de 1 a 3 sustituyentes, y preferiblemente 1 a 2 sustituyentes, seleccionados del grupo que consiste de alcoxi, alcoxi sustituido, acilo, acilamino, aciloxi, ammo, auno sustituido, ammoacilo, aplo, aplo sustituido, ariloxi, ariloxi sustituido, ciano, halógeno, hidroxilo, nitro, carboxilo, esteres de carboxilo, ciclo- alquilo, cicloalquilo sustituido, heteroarilo, heteroaplo sustituido, heterocíclico, y heterocíclico sustituido con la condición de cualquier sustitución del hidroxilo no esté unido a átomos de carbono vina lo (msaturado) . "Alqumilo" se refiere a grupos alqumilo que tienen de 2 a 6 átomos de carbono y, de manera preferible, de 2 a 3 átomos de carbono y que tiene al menos 1 y de manera preferible de 1 a 2 sitios de msaturación en el alqumilo. "Alqumilo sustituido" se refiere a grupos alqumilo que tienen de 1 a 3 sustituyentes, y de manera preferible 1 a 2 sustituyentes, seleccionados del grupo que consiste de alcoxi, alcoxi sustituido, acilo, acilammo, aciloxi, arrimo, amino sustituido, ammoacilo, arilo, arilo sustituido, ariloxi, ariloxi sustituido, ciano, halógeno, hidroxilo, nitro, carboxilo, esteres de carboxilo, ciclo-alquilo, cicloalquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heterocíclico, y heterocíclico sustituido. "Ammo" se refiere al grupo -NH2. "Ciano" se refiere al grupo -CN. "Mino sustituido" se refiere al grupo -NR'R" donde R' y R" son seleccionados independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, alquenilo, alquenilo sustituido, alquinilo, alquinilo sustituido, arilo, arilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heterocíclico, heterocíclico sustituido y donde R' y R" están unidos, junto con los enlaces de nitrógeno para formar un grupo heterocíclico o heterocíclico sustituido siempre que R' y R" no son ambos hidrógeno. Cuando R' es hidrógeno y R" es alquilo, el grupo amino sustituido es algunas veces referido como alquilamino. Cuando R' y R" son alquilo, el grupo amino sustituido es algunas veces referido aquí como dialquilamino. Cuando sea la referencia a un amino monosustituido, significa que R' o R" es hidrógeno pero no ambos. Cuando se hace referencia a un amino disustituido significa que R' o R" es hidrógeno. "Nitro" se refiere al grupo -N02. "Arilo" o "Ar" se refiere a grupos carbocíclicos aromáticos monovalentes de 6 a 14 átomos de carbono que tiene un solo anillo (por ejemplo fenilo) o anillos condensados múltiples (por ejemplo, naftilo o antrilo) anillos condensados, los cuales pueden o no ser aromáticos (por ejemplo 2-benzoxazolinona, 2H-1 , 4-benzoxazin-3 (4H) -ona-7-ilo, y similares) siempre que el punto de unión se encuentre en un átomo de carbono aromático. Los arilos preferidos incluyen al fenilo y naftilo. "Arilo sustituido" se refiere a grupos arilo, los cuales están sustituidos con 1 a 3 sustituyentes, y de manera preferible 1 a 2 sustituyentes, seleccionados del grupo que consiste de hidroxilo, acilo, acilamino, aciloxi, alquilo, alquilo sustituido, alcoxi, alcoxi sustituido, alquenilo, alquenilo sustituido, alquinilo, alquinilo sustituido, amino, amino sustituido, aminoacilo, arilo, arilo sustituido, ariloxi, ariloxi sustituido, carboxilo, esteres de carboxilo, ciano, tiol, tioalquilo, tioalquilo sustituido, tioarilo, tioarilo sustituido, tioheteroarilo, tioheteroarilo sustituido, tiocicloalquilo, tiocicloalquilo sustituido, tioheterocíclico, tioheterocíclico sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, halo, nitro, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heterocíclico, heterocíclico sustituido, heteroariloxi, heteroariloxi sustituido, heterocicliloxi, heterocicliloxi sustituido, amino sulfonilo (NH2-S02-) , y amino sulfonilo sustituido. "Ariloxi" se refiere al grupo aril-0- que incluye, a manera de ejemplo, fenoxi, naftoxi, y similares. "Ariloxi sustituido" se refiere a grupos aril-O-sustituidos. "Carboxilo" se refiere a -COOH o sales de los mismos. ' "Ester de carboxilo" se refiere a los grupos -C (O) O-alquilo, -C (O) O-alquilo sustituido, -C (O) -arilo, y -C(0) O-arilo sustituido donde el alquilo, alquilo sustituido, arilo y arilo sustituido son como se definen aquí.
"Cicloalquilo" se refiere a grupos alquilo cíclicos de 3 a 10 átomos de carbono que tienen uno solo o múltiples anillos cíclicos incluyendo, a manera de ejemplo el adamantilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclooctilo y similares. "Cicloalquenilo" se refiere a grupos alquenilo cíclicos de A a 10 átomos de carbono que tienen uno o múltiples anillos cíclicos y que tienen además al menos 1 y preferiblemente de 1 a 2 sitios internos de insaturación etilénica o vinílica (>C=C<) . "Cicloalquilo sustituido" y "Cicloalquenilo sustituido" se refieren a un grupo cicloalquilo o cicloalquenilo que tiene de 1 a 5 sustituyentes seleccionados del grupo que consiste de oxo (=0) , tioxo (=S) , alcoxi, alcoxi sustituido, acilo, acilamino, aciloxi, amino, amino sustituido, aminoacilo, arilo, arilo sustituido, ariloxi, ariloxi sustituido, ciano, halógeno, hidroxilo, nitro, carboxilo, esteres de carboxilo, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heterocíclico y heterocíclico sustituido. "Cicloalcoxi" se refiere a grupos -O-cicloalquilo. "Cicloalcoxi sustituido" se refiere a grupos -0-cicloalquilo sustituido. "Halo" o "halógeno" se refiere al flúor, cloro, bromo y yodo y preferiblemente es flúor o cloro.
"Hidroxi" se refiere al grupo -OH. "Heteroarilo" se refiere a un grupo aromático de 1 a 10 átomos de carbono y de 1 a 4 heteroátomos seleccionados del grupo que consiste de oxígeno, nitrógeno y azufre con el anillo. Esos grupos heteroarilo pueden tener un solo anillo (por ejemplo, piridinilo o furilo) o múltiples anillos condensados (por ejemplo, mdolicinilo o benzotienilo) donde los anillos condensados pueden o no ser aromáticos y/o contener un heteroátomo, siempre que el punto de unión sea a través de un átomo del grupo heteroarilo aromático. Los heteroarilos preferidos incluyen piridinilo, pirrolilo, indolilo, tiofenilo, y furanilo. "Heteroarilo sustituido" se refiere a grupos heteroarilo que están sustituidos con de 1 a 3 sustituyentes seleccionados del mismo grupo de sustituyentes definidos por arilo sustituido. "Heteroariloxi" se refiere al grupo -O-heteroarilo y "heteroariloxi sustituido" se refiere al grupo -0-heteroarilo sustituido. "Heterociclo" o "heterocíclico" o "heterocicloalquilo" o "heterociclilo" se refiere a un grupo saturado o insaturado que tiene un solo anillo o múltiples anillos condensados, de 1 a 10 átomos de carbono y de 1 a 4 heteroátomos seleccionados del grupo que consiste de nitrógeno, azufre y oxígeno dentro del anillo donde, en sistemas anulares fusionados, uno o más de los anillos pueden ser cicloalquilo, arilo o heteroarilo siempre que el punto de unión sea a través del anillo heterocíclico. "Heterocíclico sustituido" o "heterocicloalquilo sustituido" o "heterociclilo sustituido" se refiere a grupos heterociclilo que están sustituidos con de 1 a 3 de los mismos sustituyentes se definió para el cicloalquilo sustituido . Los ejemplos de heterociclilos y heteroarilos incluyen, pero no se limitan a acetidina, pirrol, imidazol, pirazol, piridina, piracina, pirimidina, piridacina, indolicina, isoindol, indol, dihidroindol, indazol, purina, quinolicina, isoquinolina, quinolina, ftalacina, naftilpiridina, quinoxalina, quinazolina, cinnolina, pteridiná, carbazol, carbolina, fenantridina, acridina, fenantrolina, isotiazol, fenacina, isoxazol, fenoxacina, fenotiacina, imidazolidina, imidazolina, piperidina, piperacina, indolina, ftalimida, 1, 2, 3, 4-tetrahidro-isoquinolina, 4, 5, 6, 7-tetrahidrobenzo [b] tiofeno, tiazol, tiazolidina, tiofeno, benzo [b] tiofeno, morfolinilo, tiomorfolinilo (también conocido como tiamorfolinilo) , piperidinilo, pirrolidina, tetrahidrofuranilo, y similares. "Tiol" se refiere al grupo -SH. "Tioalquilo" o " alquiltioéter" o "tioalcoxi" se refiere al grupo -S-alquilo.
"Tioalquilo sustituido" o " alquiltioéter sustituido" o "tioalcoxi sustituido" se refiere al grupo -S- alquilo sustituido. "Tioarilo" se refiere al grupo -S-arilo, donde el arilo es como se definió anteriormente. "Tioarilo sustituido" se refiere al grupo -S-arilo sustituido, donde el arilo sustituido es como se definió anteriormente . "Tioheteroarilo" se refiere al grupo -S- heteroarilo, donde el heteroarilo es como se definió anteriormente . "Tioheteroarilo sustituido" se refiere al grupo -S-heteroarilo sustituido, donde el tioheteroarilo sustituido es como se definió anteriormente. "Tioheterocíclico" se refiere al grupo -S-heterocíclico y "tioheterocíclico sustituido" se refiere al grupo -S-heterocíclico sustituido, donde el heterocíclico y heterocíclico sustituido son como se definieron anteriormente . "Heterocicliloxi" se refiere al grupo heterociclil- 0- y "heterociclil-O-sustituido" se refiere al grupo heterociclil-O- donde el heterociclilo y el heterociclilo sustituidos son como se definieron anteriormente. "Tiocicloalquilo" se refiere al grupo -S-cicloalquilo y " tiocicloalquil sustituido" se refiere al grupo -S-cicloalquilo sustituido, donde el cicloalquilo y el cicloalquilo sustituido son como se definieron anteriormente. "Ester hidrolizable" se refiere a un grupo que es hidrolizado in vivo para producir el ácido original. Los ejemplos de esos grupos incluyen al alcoxi, alcoxi sustituido, cicloalcoxi, cicloalcoxi sustituido, ariloxi y ariloxi sustituido. Un éster hidrolizable preferido es el alcoxi. "Ester polimérico hidrolizable" se refiere a un polímero biocompatible que es hidrolizado in vivo para producir el ácido original. Un éster polimérico hidrolizable preferido es el PEG. Los términos "compuesto" y "compuesto activo" son usados para referirse a la porción antagonista de VLA-4 de un conjugado de la invención o a un antagonista de VLA-4 como existe antes de la conjugación con un polímero. Los términos "Enlazante", "grupo enlazante" o "enlazante de 1 a 40 átomos" se refiere a un grupo o grupos que (1) enlazan covalentemente el polímero al compuesto activo y/o (2) enlazan covalentemente el polímero, oligómero y/o porciones monoméricas que comprenden la porción polimérica entre sí; las ilustraciones no limitantes de los últimos incluyen polímero-enlazante-polímero, oligómero-enlazante-oligómero, monómero-enlazante-monómero, oligómero-enlazante-oligómero-enlazante, y similares. Dentro de cualquier conjugado particular, el enlazante que conecta al polímero, oligómero y/o porciones monoméricas de una porción polimérica juntas, y el enlazante que une una porción polimérica a un compuesto activo puede ser el mismo o diferente (es decir, que puede tener la misma o estructuras químicas diferentes) . El enlazante que enlaza covalentemente el polímero, oligómero, y/o porciones monoméricas, como porciones de óxido de polialquileno, y una porción polimérica entre sí también es referido como "centro de brazo ramificado" o "molécula central de brazo ramificado" . Los centros del brazo ramificado son moléculas que se unen covalentemente a tres o más polímeros, oligómeros, y/o porciones monoméricas a ellas, proporcionando porciones poliméricas trivalentes o de valencia superior para la conjugación con el compuesto activo. Los ejemplos no limitantes de esas moléculas centrales son el glicerol (1, 2, 3-propantriol) , pentaerititol, lisina, 1,2,4- bencentriol, glucosa (en su forma de piranosa) , ácido etilendiamin tetraacético, aminoácidos, ácido 3- o 4-aminosalicílico, 1, 3-diamino-2-hidroxipropano, glucosamina, y ácido siálico. Los enlaces de grupos funcionales representativos, de los cuales un grupo enlazante puede tener uno o más, son amidas (-C(O)NR3-), éteres (-0-) , tioéteres (-S-) , carbamatos (-OC(O)NR3-) , tiocarbamatos (-OC (S) NR3-) , ureas (-NR3C (O) NR3) , tioureas (-NR3C (S) NR3-) , grupos amino (-NR3-) , grupos carbonilo (-C(O)-), grupos alcoxi (-O-alquilen-), etc. El enlazante puede ser homogéneo o heterogéneo en su contenido de átomos (por ejemplo, los enlazantes que contienen únicamente átomos de carbono o enlazantes que contienen átomos de carbono así como uno o más heteroátomos presentes sobre el enlazante. Preferiblemente, el enlazante contiene de 1 a 25 átomos de carbono y de 0 a 15 heteroátomos seleccionados de oxígeno, NR3, azufre, -S (0) - y -S(0)2-, donde R3 es hidrógeno, alquilo o alquilo sustituido. El enlazante también puede ser quiral o aquiral, lineal, ramificado o cíclico. Interviniendo entre los enlaces de grupo funcional o enlaces dentro del enlazante, el enlazante puede contener además grupos separadores incluyendo, pero sin limitarse a, separadores seleccionados de alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, heteroarilo, hereroarilo sustituido, heterocíclico, heterocíclico sustituido, y combinaciones de los mismos . El separador puede ser homogéneo o heterogéneo en su contenido de átomos (por ejemplo, separadores que contengan cualesquier átomos de carbono o separadores que contengan átomos de carbono, y uno o más heteroátomos presentes sobre el separador. Preferiblemente, el separador contiene 1 a 25 átomos de carbono y de 0 a 15 heteroátomos seleccionados de oxígeno, NR3, azufre, -S(0)- y -S(0)2-, donde R3 es como se definió anteriormente. El separador también puede ser quiral, o aquiral, lineal, ramificado o cíclico. Los ejemplos no limitantes de separadores son cadenas de alquileno lineales o ramificadas, fenileno, bifenileno, etc., anillos, todos los cuales son capaces de soportar uno o más de un grupo funcional capaz de formar un enlace con el compuesto activo y una o más porciones de óxido de polialquileno. Un ejemplo particular de un grupo separador de enlazante polifuncional es la lisina, el cual puede enlazar cualquiera de los compuestos activos de dos porciones poliméricas vía grupos amino sustituidos sobre una cadena de alquileno C . Otros ejemplos no limitantes incluyen al ácido p-aminobenzoico y ácido 3, 5-diaminobenzoico los cuales tienen 2 y 3 grupos funcionales respectivamente disponibles para la formación de enlaces. Otros de esos enlaces polifuncionales además de los grupos separadores pueden ser fácilmente contemplados por un experto en la técnica. Los términos "polímero" y "porción polimérica" se refieren a polímeros biocompatibles, solubles en agua, sustancialmente no inmunogénicos, los cuales son capaces de acoplarse a más de un antagonista de VLA-4 de fórmula II. Preferiblemente el polímero es no iónico y biocompatible de acuerdo a lo medido por la carencia de toxicidad a los pesos moleculares y dosis usadas. Los términos también abarcan moléculas en las cuales 3 o más polímeros están conectados a una molécula central de brazo ramificado, como se discutió anteriormente. Los términos abarcan además moléculas en las cuales el polímero, oligómero, y/o porciones monoméricas de las mismas están conectados por uno o más enlazantes. Los ejemplos de polímeros adecuados incluyen, pero no se limitan a: polímeros de polioxialquileno como el polietilen glicol (PEG) , polivinilpirrolidona (PVP) , poliacrilamida (PAAm), polidimetilacrilamida (PDAAm) , alcohol polivinílico (PVA) , dextrano, poli (ácido L-glutámico) (PGA) , anhídrido estiren maléico (SMA), poli-N- (2-hidroxipropil) metacrilamida (HPMA) , anhídrido polidiviniléter maleico (DIVEMA) (Kameda, Y. et al., Biomaterials 25: 3259-3266, 2004; Tanou, M. et al, Current Opinión in Investigational Drugs 4(6): 701-709, 2003; Veronese, F. M., et al., II Fármaco 54: 497-516, 1999). Los polímeros preferidos son polioxialquilenos .
" Polioxialquilenos" significa macromoléculas que incluyen al menos una porción de óxido de polialquileno que está opcionalmente unida covalentemente a uno o más óxidos de polialquileno adicionales, donde los óxidos de polialquileno son los mismos o diferentes. Los ejemplos no limitantes incluyen al polietilen glicol (PEG) , polipropilen glicol (PPG), poliisopropilen glicol (PIPG) , PEG-PEG, PEG-PPG, PPG- PIPG, y similares. También incluidas dentro de la definición de polioxialquilenos se encuentran macromoléculas donde las porciones de óxido de polialquileno están conectadas opcionalmente entre sí por un enlazante. Los ejemplos ilustrativos son PEG-enlazante-PEG, PEG-enlazante-PIPG, y similares. Los ejemplos más específicos incluyen los poli [di (etilen glicol) adipatos, poli [di (etilen glicol) ftalato dioles, y similares comercialmente disponibles. Otros ejemplos son copolímeros de bloques de oxialquileno, polietilen glicol, polipropilen glicol, y unidades de poliol polioxietilenadas . En al menos uno de esos' términos, el polímero está unido covalentemente a un compuesto sustituido no polimérico de fórmula II opcionalmente a través de un enlazante usando técnicas químicas convencionales que proporcionan un enlace covalente del polímero al compuesto no polimérico sustituido de Fórmula II. Cuando es empleado un enlazante, el enlazante se une covalentemente a al menos uno de los términos poliméricos los cuales, a su vez, están unidos covalentemente al compuesto no polimérico sustituido, de otro modo, la Fórmula II. Las químicas de reacción dan resultado a los enlaces bien conocidos en la técnica. Esas químicas de reacción implican el uso de grupos funcionales complementarios sobre el enlazante, el compuesto no polimérico sustituido de Fórmula II y el polímero. Preferiblemente, los grupos funcionales complementaricfs sobre el enlazante son seleccionados en relación a grupos funcionales disponibles sobre el polímero para la unión o que pueden ser introducidos sobre el polímero para la unión. Nuevamente, esos grupos funcionales complementarios son bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, la reacción entre un ácido carboxílico de cualquier enlazante o el polímero y una amina primaria o secundaria del polímero o el enlazante en presencia de agentes activadores bien conocidos, adecuados, da como resultado la formación de un enlace amida que enlaza covalentemente la porción polimérica al enlazante; la reacción entre el grupo amina de cualquier enlazante o el grupo polimérico y un haluro de sulfonilo del polímero o el enlazante da como resultado la formación de un enlace sulfonamida que enlaza covalentemente la porción polimérica al enlazante; y la reacción entre un grupo alcohol o fenol del enlazante o el polímero y un haluro de arilo o alquilo del polímero o enlazante da como resultado la formación de un enlace éter que enlaza covalentemente el grupo polimérico al enlazante. Debe comprenderse, por supuesto, que si se encuentran los sustituyentes apropiados sobre el compuesto no polímero sustituido de Fórmula II entonces no puede ser necesario el enlazante opcional puesto que puede existir un enlace directo del polímero al compuesto no polimérico sustituido de Fórmula II. La Tabla 1 ilustra a continuación numerosos grupos reactivos complementarios y los enlaces resultantes formados por la reacción entre ellos. Un experto en la técnica puede seleccionar los solventes y condiciones de reacción apropiadas para efectuar esos enlaces.
TABLA 1 Químicas de Unión Complementaria Representativas Los enlazantes preferidos incluyen, a manera de ejemplos, los siguientes -O-, -NR3-, -NR3C(0)0-, -OC(0)NR3-, -NR3C(0)-, -C(0)NR3-, -NR3C(0)NR3-, -alquilen-NR3C (O) 0-, -alquilen-NR3C(0)NR3-, -alquilen-OC (0) NR3-, -alquilen-NR3-, -alquilen-O-, -alquilen-NR3C (0) -, -alquilen-C (0) R3-, -NR3C-(0) -O-alquilen-, -NR3C (0) NR3-alquilen-, -0C (0) NR3-alquilen, - NR3-alquilen-, -O-alquilen-, -NR3C (O) -alquilen-, -C (0) NR3-alquilen -alquilen-NR3C (O) O-alquilen-, -alquilen-NR3C (0) NR3-alquílen-, alquilen-OC (O) R3-alquilen- , alquilen-NR3-alquilen- , alquilen- O-alquilen- , -alquilen-NR3C (O) -alquilen- , -C (O) NR3-alquilen- , -NR3C (O) O-alquilenoxi- , -NR3C (O) NR3-alquilenoxi- , -OC (0) NR3- alquilenoxi , -NR3-alquilenoxi- , -O-alquilenoxi- , -NR3C (0) - alquilenoxi- , - C (O) NR3-alquilenoxi- , -alquilenoxi-NR3C (O) 0- alquilenoxi- donde R3 es como se definió anteriormente y donde c -X 1*- se selecciona del grupo que consiste de arilo, arilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, y heterocíclico y heterocíclico sustituido, y D y E son seleccionados independientemente del grupo que consiste de un enlace -O-, CO, -NR3-, -NR3C(0)0-, -OC(0)NR3-, -NR3C(0)-, -C(0)NR3-, - NR3C(0)NR3-, -alquilen-NR3C (O) O-, -alquilen-N R3C(0)NR3-, -alquilen-OC (O) NR3-, -alquilen-NR3-, -alquilen-O-, -alquilen-NR3C(0)-, alquilen-C (O) NR3-, -NR3C(0)0- alquilen-, -NR3C(0)NR3-alquilen-, -0C(0) NR3-alquilen-, -NR3-alquilen-, -O-alquilen-, -NR3C (0) -alquilen-, -NR3C (O) O-alquilenoxi-, -NR3C-(0)NR3-alquilenoxí-, -OC (O) NR3-alquilenoxi, -NR3-alquilenoxi-, -O-alquilenoxi-, -NR3C (0) -alquilenoxi-, -C (O) NR3-alquilenoxi-, -alquilenoxi-NR3C (O) O-alquilenoxi-, -C (O) NR3-alquilen-, -alquilen- NR3C (O) O-alquilen-, -alquilen-NR3C (O) NR3-alquilen-, -alquilen- OC (O) NR3-alquilen-, -alquilen-NR3-alquilen-, alquilen-O- alquilen-, -alquilen-NR3C (O) - alquilen-, y -C (O) NR3-alquilen-, donde R3 es como se definió anteriormente. Los grupos alquileno preferidos en los enlazantes anteriores incluyen grupos alquileno de C1-C15, de manera más preferible grupos alquileno de Ci-Cß, de manera más preferible grupos alquileno de C1-C3. Los grupos heterocíclicos preferidos incluyen piperacinilo, piperidinilo, homo-piperacinilo, homopiperidinilo, pirrolidinilo, e imidazolidinilo. Los grupos alcoxi preferidos son - (CH2- CH2-0)?_i5. El término "oxialquileno" se refiere a -OCH2CHRd-donde Rd es alquilo. Los oxialquilenos polimerizados son referidos como polioxialquilenos, óxidos de polialquileno o polialquilen glicoles. Los ejemplos no limitantes de los cuales incluyen el PEG, polipropilen glicol, polibutilen glicol, poliisopropilen glicol, y similares. Esos polímeros están opcionalmente monocoronados con un sustituyente seleccionado preferiblemente de alquilo, arilo, alquilo sustituido, arilo sustituido y una molécula central de brazo ramificado como se describió anteriormente. Inclusive esos polímeros son aquellos polímeros de polioxialquileno coronados con amino los cuales son conocidos en la técnica como Jeffamines®. Generalmente, los Jeffamines® (disponibles de Huntsman Performance Products, The oodlands, Texas) contienen grupos amino primario unidos al término de un esqueleto de poliéster. Ellos son de este modo "poliéter aminas" . El esqueleto de poliéter se basa en óxido de propileno (PO) , óxido de etileno (EO) , o EO/PO mezclados, u otros segmentos estructurales. Las Jeffamines® pueden ser monoaminas, diaminas, y triaminas, y se encuentran disponibles en una variedad de pesos moleculares, que llegan hasta aproximadamente 5,000. Más aún, los oxialquilenos polimerizados pueden contener opcionalmente una o más unidades diferentes al oxialquileno como los poli [di (etilen) glicol) adipatos, poli [di (etilen glicol) ftalato dioles, y similares comercialmente disponibles. También se incluyen copolímeros de bloques de oxialquileno, polietilen glicol, polipropilen glicol, y unidades de poliol polioxietilenadas . Los polioxialquilenos, como el PEG, son proporcionados usualmente como un sólido ceroso, soluble en agua. Generalmente, a medida que se incrementa el peso molecular del polímero, su viscosidad y punto de congelamiento también se incrementa. Las preparaciones comerciales usualmente se caracterizan por el "peso molecular promedio" de los polímeros constituyentes. Típicamente, el peso molecular se mide de la cantidad total de polímero que surge de porciones poliméricas individuales y múltiples en los conjugados de la invención está entre aproximadamente 100 hasta 100,000; preferiblemente de 20,000 a 60,000; de manera más preferible de aproximadamente 30,000 hasta aproximadamente 50,000. Es evidente para aquel experto en la técnica que los polímeros de este tipo será polidispersos. La polidispersidad se refiere al hecho de que las moléculas poliméricas, aún las del mismo tipo, vienen en diferentes tamaños (longitudes de cadena para los polímeros lineales o multirramificados) . Por lo tanto el peso molecular promedio dependerá del método de promediación. El índice de polidispersidad como una medida común de la variabilidad de los pesos moleculares en la relación del peso molecular promedio en peso con el peso molecular promedio numérico. Esta indica la distribución de pesos moleculares individuales en lotes de polímeros. El peso molecular promedio numérico es una forma de determinar el peso molecular de un polímero. El peso molecular promedio numérico es el promedio común de los pesos moleculares de polímeros individuales. Esto se determina midiendo el peso molecular en n molecular poliméricas, sumando los pesos, y dividiendo por n. El peso molecular promedio numérico de un polímero puede ser determinado por osmometría, titulación el grupo final y propiedades coligativas. El peso molecular promedio en peso puede ser determinado por la difracción de luz, barrido de punto de ángulo pequeño (SANS) , difracción de rayos X, y velocidad de sedimentación. La relación del peso promedio al número promedio es conocida como el índice de dispersidad. Una muestra teórica de polímero que no tenga dispersidad tendría un índice de polidispersidad de 1. El intervalo preferido de un índice de polidispersidad para la presente invención es de aproximadamente 1.10 hasta aproximadamente 1.05. La más preferida es un intervalo de aproximadamente 1.05 hasta el límite superior de la síntesis comercialmente factible, el cual a la fecha es de aproximadamente 1.02. Otros polímeros adecuados como la polivinilpirrolidona (PVP), poliacrilamida (PAAm), polidimetilacrilamida (PDAAm) , alcohol polivinílico (PVA), dextran, poli (ácido L-glutámico) (PGA), anhídrido estiren maléico (SMA), poli-N- (2-hidroxipropil ) metacrilamida (HPMA) , anhídrido polidiviniléter maléico (DIVEMA) son bien conocidos en la técnica y tienen pesos moleculares de aproximadamente 100 hasta 100,000; de manera preferible de aproximadamente 10,000 hasta 80,000; de manera más preferible de aproximadamente 20,000 hasta aproximadamente 70,000. Los ejemplos no limitantes de PEG que pueden ser usados en la invención incluyen los siguientes: Donde el pp y alquileno son como se definen aquí y R es seleccionado preferiblemente del grupo que consiste de alquilo, alquilo sustituido, arilo y arilo sustituido. Varios ejemplos de PEG se muestran a continuación: mono-hidroxi PEG (mPEG) no coronado mono-amina PEG mono coronado di-hidroxi PEG no coronado PEG ramificado: Reactivos de PEG disponibles de NOF (4 brazos de 20 kDa) PEG tetra-amina de 4 brazos de 20 kDa Núcleo de diglicerina Cat # Sunbright DG-200PA Reactivos de PEG disponibles de Nektar (8 brazos de 40 kDa) PEG de 8 brazos de 4 kDa Núcleo de hexaglicerina Cat# 0J000T08 PEG Dendriméricos : Reactivos de PEG disponibles de NOF (4 brazos de 40 kDa) PEG alcohol de 4 PEG tetra-amina de 4 brazos de 40 kDa brazos de 40 kDa núcleo de pentaeritritol núcleo de pentaeritritol cat. # Sunbright PTE-40000 cat. # Sunbright PTE-400PA Reactivos PEG disponibles de NOF (3 brazos de 40 kDa) PEG de 3 brazos de 40 kDa PEG triamina de 3 brazos de 40 kDa Núcleo de glicerina núcleo de glicerina cat #. Sunbright GL-40000 cat # Sunbright GL-400PA Reactivos de PEG disponibles de SunBio (40 y 20 kDa) Serie Y-PEG (núcleo de ácido aspártico ) Y-PEG amina ( 40 kDa ] carbamato de Y-PEG nitrofenilo (40 kDa) Cat# PYAM-40 Cat# PYNPC-40 Series de 6 brazos (Núcleo de Sorbitol ) Los pesos moleculares más bajos disponibles en la serie de 6 brazos de sorbitol incluyen 10, 15 y 20 kDa. Los derivados diferentes de alcohol incluyen la amina de 6 PEG de 6 brazos de 40 brazos . kDa Por ejemplo, la amina de 6 brazos Producto acostumbrado de 10 kDa (cat# P6AM-10) podría ser convertida a una hexa-amina de 6 brazos de 40 kDa (con éster de BocNH-PEG-NHS de 5 kDa de Nektars) y entonces conjugada a una molécula pequeña. Esos polímeros de PEG pueden ser modificados además extendiendo las cadenas con PEG diaminas a través de un enlazante apropiado, por ejemplo un carbamato (uretano) o una urea .
PEG diamina PEG lineales modificados "Sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a sales las cuales retienen la efectividad biológica y propiedades de los compuestos de esta invención y que no son biológicamente o en otras circunstancias indeseables. En muchos casos, los compuestos de esta invención son capaces de formar sales de ácido y/o base en virtud de la presencia de grupos amino y/o carboxilo o grupos similares a estos. Las sales de adición de base farmacéuticamente aceptables pueden ser preparadas a partir de bases inorgánicas y orgánicas. Las sales derivadas de bases inorgánicas, incluyen a manera de ejemplo únicamente, sales de sodio, potasio, litio, amonio, calcio y magnesio. Las sales derivadas de bases orgánicas incluyen, pero no se limitan a, sales primarias, secundarias y terciarias, como las alquil aminas, dialquil aminas, trialquil aminas, alquilo aminas sustituidas, aminas di (sustituidas con alquilo), aminas tri (sustituidas con alquilo), alquenil aminas, dialquenil aminas, trialquenil aminas, alquenil aminas sustituidas, aminas di (sustituidas con alquenilo), aminas tri (sustituidas con alquenilo), cicloalquil aminas, di (cicloalquil) aminas, tri (cicloalquil) aminas, cicloalquil aminas sustituidas, cicloalquil aminas disustituidas, cicloalquil aminas trisustituidas, cicloalquenil aminas, di (cicloalquenil) aminas, tri (cicloalquenil) aminas, cicloalquenil aminas sustituidas, cicloalquenil aminas disustituidas, cicloalquenil aminas trisustituidas, aril aminas, diaril aminas, triaril aminas, heteroaril aminas, diheteroaril aminas, triheteroaril aminas, aminas heterocíclicas, aminas diheterocíclicas, aminas triheterocíclicas, di- y tri-aminas mezcladas donde al menos dos de los sustituyentes sobre la amina son diferentes y son seleccionados del grupo que consiste de alquilo, alquilo sustituido, alquenilo, alquenilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo, cicloalquenilo sustituido, arilo, heteroarilo, heterocíclico, y similares.
También se incluyen las aminas donde los dos o tres sustituyentes, junto con el nitrógeno del amino, forman un grupo heterocíclico o heteroarilo. Los ejemplos de aminas adecuadas incluyen, a manera de ejemplo únicamente, isopropilamina, trimetil amina, dietil amina, tri (iso-propil) amina, tri (n-propil) amina, etanolamina, 2-dimetilaminoetanol, trometamina, lisina, arginina, histidina, cafeína, procaína, hidrabamina, colina, betaina, etilendiamina, glucosamina, N-alquilglucaminas, teobromina, purinas, piperacina, piperidina, morfolina, N-etilpiperidina, y similares. También deberá entenderse que podrían ser útiles otros derivados de ácido carboxílico en la práctica de esta invención, por ejemplo, amidas de ácido carboxílico, incluyendo las carboxamidas, alquil carboxamidas inferiores, dialquil carboxamidas, y similares. Las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables pueden ser preparadas a partir de ácidos inorgánicos y orgánicos. Las sales derivadas de ácidos inorgánicos incluyen ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, y similares. Las sales derivadas de ácidos orgánicos incluyen al ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido quimérico, ácido oxálico, ácido málico, ácido malónico, ácido succínico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartártico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido cinámico, ácido mandélico, ácido metansulfónico, ácido etansulfónico, ácido p- toluensulfónico, ácido salicílico y similares. El término "catión farmacéuticamente aceptable" se refiere al catión de una sal farmacéuticamente aceptable. Debe entenderse que en todos los grupos sustituidos definidos aquí, los polímeros a los que se arribó definiendo los sustituyentes con sustituyentes adicionales a sí mismos (por ejemplo, arilo sustituido que tiene un grupo arilo sustituido como sustituyente el cual está en sí sustituido con un grupo arilo sustituido, etc) no pretenden ser incluidos aquí. En esos casos, el número máximo de esos sustituyentes es tres. Es decir, que cada una de las definiciones anteriores es restringida por una limitación de que, por ejemplo los grupos arilo sustituidos se limitan a -arilo sustituido- (árilo sustituido) - (arilo sustituido). De manera similar, debe comprenderse que las definiciones anteriores no pretenden incluir patrones de sustitución permitidos (por ejemplo metilo sustituido con 5 grupos flúor o' un grupo hidroxílo alfa a la instauración etilénica o acetilénica) . Esos patrones de sustitución no permitidos son bien conocidos por aquellos expertos en la técnica.
Preparación del Compuesto Los compuestos de esta invención pueden ser preparados a partir de materias primas fácilmente disponibles usando los siguientes métodos y procedimientos generales. Se apreciará que donde se den condiciones de proceso típicas o preferidas (es decir, temperaturas de reacción, tiempos, relaciones molares de los reactivos, solventes, presiones, etc) , también pueden ser utilizadas otras condiciones de proceso a menos que se establezca otra cosa. Las condiciones de reacción óptimas pueden variar como reactivos o solvente particular usado, pero esas condiciones pueden ser determinadas por un experto en la técnica por procedimientos de optimización de rutina. Adicionalmente, como será apreciado por aquellos expertos en la técnica, pueden ser necesarios grupos protectores convencionales para evitar que ciertos grupos funcionales experimenten reacciones indeseables. Los grupos protectores adecuados para varios grupos funcionales así como las condiciones adecuadas para proteger grupos funcionales particulares son bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, esos grupos protectores son descritos en T . W. Greene y G. M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, Segunda Edición, Wiley, New York, 1991, y referencias citadas ahí. Además, los compuestos de esta invención típicamente contendrán uno o más centros quirales. En consecuencia, si se desea, esos compuestos pueden ser preparados o aislados como estereoisómeros puros, es decir, como enantiómeros o diastereómeros individuales, o como mezclas enriquecidas en estereosiómeros . Todos esos estereoisómeros (y mezclas enriquecidas) se incluyen dentro del alcance de esta invención, a menos que se indique otra cosa. Los estereoisómeros puros (o mezclas enriquecidas) pueden ser preparados usando, por ejemplo, materiales iniciales ópticamente activos o reactivos estereoselectivos bien conocidos en la técnica. De manera alternativa, pueden ser preparadas mezclas racémicas de esos compuestos, usando, por ejemplo, cromatografía en columna quiral, agentes de resolución quiral y similares. Los conjugados de esta invención preferiblemente comprenden una porción polimérica/molécula central de brazos ramificados opcional que contengan de 2 hasta aproximadamente 20 sustituyentes de Fórmula II: II Específicamente, la porción polimérica puede ser unida a través de un enlace covalente al sustituyente Ar1, el sustituyente J, el sustituyente Ar2 y/o el sustituyente T donde la porción polimérica es unida directamente o es unida vía un enlazante. A su vez, la porción polimérica puede ser opcionalmente unida a una molécula central de brazos ramificados . En su forma más simple, los compuestos de esta invención son estructuras divalentes que comprenden una sola porción polimérica que tiene dos sustituyentes de fórmula II unidos a ambos términos. En un caso representativo se usa una porción polimérica derivada PEG la cual está ligada a un compuesto de fórmula II por un grupo enlazante de carbonilo, donde el compuesto de fórmula II es representado por: El conjugado resultante puede ser representado por la siguiente fórmula: Donde p es preferiblemente un número entero de aproximadamente 100 a 1360. En un ejemplo de una forma tetravalente, el conjugado comprende cuatro porciones poliméricas. En un caso representativo, un término de cada porción polimérica está unido a una molécula central de brazos ramificados común donde el otro término está unido a un compuesto de fórmula II opcionalmente a través de un enlazante. Más aún y nuevamente para propósitos ilustrativos, cada porción polimérica es derivada de PEG y la molécula central de brazos ramificados común es pentaeritritol. En esta ejemplificación, el otro término de la porción de PEG está ligada a un compuesto de fórmula II a través de un grupo enlazante de carbonilo, donde el compuesto de fórmula II es representado por: El conjugado resultante puede ser representado por la siguiente fórmula: Donde el agregado de las cuatro p' es un número entero preferiblemente de aproximadamente 100 hasta 1360. El protocolo sintético para formar los conjugados de fórmula I indican la reacción del grupo funcional de la porción polimérica ya sea con un grupo enlazante directamente con un compuesto de fórmula II, uniendo por lo tanto covalentemente la porción polimérica al compuesto de fórmula II. Inicialmente, los compuestos no sustituidos con PEG de fórmula Ilb-IIh son bien conocidos en la técnica y son ejemplificados en el número de patentes expedidas, incluyendo, sin limitación, las Patentes Estadounidenses Nos. 6,489,300 y 6,436,904 ambas de las cuales se incorporan aquí como referencia' en su totalidad. Las variantes no poliméricas de los compuestos de fórmula II incluyen aquellas que tienen grupos funcionales complementarios o grupos derivables a grupos funcionales complementarios sobre una o más de las porciones de Ar1, R, Ar2 y T. Para propósitos ilustrativos, los compuestos que tienen un grupo funcional complementario (-OH) sobre la porción Ar2 (por ejemplo, tirosina) son expuestos más adelante como un punto de partida adecuado para la adición de una porción polimérica a la molécula ya sea directamente o a través de un enlazante. Esos compuestos pueden ser preparados ' acoplando primero un aminoácido heterocíclico, 1 , con un cloruro, de aril sulfonilo apropiado como se ilustra en el Esquema de Reacción 1 a continuación: 1 2 3 Esquema de Reacción 1 Donde R, Ar1, X, m y n are son como se definieron anteriormente . Específicamente, en el Esquema de Reacción 1 anterior, el aminoácido heterocíclico, 1 , es combinado con una cantidad equivalente estequiométrica o en exceso (de manera preferible de aproximadamente 1.1 hasta aproximadamente 2 equivalentes) de haluro de ariisulfonilo, 2 , en un diluente inerte adecuado, en diclorometano y similares. Generalmente, la reacción es conducida a una temperatura que fluctúa de aproximadamente -70 °C hasta aproximadamente 40°C hasta que la reacción es sustancialmente completa, la cual típicamente ocurre de 1 a 24 horas. Preferiblemente, la reacción es conducida en presencia de una base adecuada para depurar el ácido generado durante la reacción. Las bases adecuadas incluyen, a manera de ejemplo, aminas terciarias, como la trietilamina, diisopropiletilamina, N-metil-morfolina y similares. Alternativamente, la reacción puede ser conducida bajo las condiciones pico de Schotten-Baumann usando una solución alcalina acuosa como una solución acuosa de hidróxido de sodio, una solución acuosa de fosfato amortiguada a pH 7.4, y similares. El producto resultante, _3, puede ser recuperado por métodos convencionales como la cromatografía, filtración, evaporación cristalización o similares, y de manera alternativa, usado en el siguiente paso sin purificación y/o aislamiento. Los aminoácidos heterocíclicos, 1 , empleados en la reacción anterior son compuestos conocidos o compuestos que pueden ser preparados a partir de compuestos conocidos por procedimientos sintéticos convencionales. Los ejemplos de aminoácidos adecuados para usarse en esta reacción incluyen, pero no se limitan a, L-prolina, trans-4-hidroxil-L-prolina, cis-4-hidroxil-L-prolina, trans-3-fenil-L-prolina, cis-3-fenil-L-prolina, L- (2-metil) prolina, ácido L-pipecolínico, ácido L-acetidin-2-carboxílico, ácido L-tiazolidin-4-carboxílico, ácido L- (5, 5-dimetil) tiazolidin-4-carboxílico, ácido L-tiamorfolin-3-carboxílico. Si se desea, los esteres de ácido carboxílico correspondientes de los aminoácidos 1 , como los esteres de metilo, esteres de etilo, esteres de t-butilo, y similares, pueden ser empleados en la reacción anterior con el cloruro de ariisulfonilo. La hidrólisis del grupo éster al ácido carboxílico usando reactivos y condiciones convencionales, es decir, tratamiento con un hidróxido de metal alcalino con un diluente inerte como el metanol/agua, proporciona entonces el ácido N-sulfonil amino, 3. De manera similar, los cloruros de ariisulfonilo, 2_, empleados en la reacción anteriormente son compuestos conocidos o compuestos que pueden ser preparados a partir de compuestos conocidos por procedimientos sintéticos convencionales. Esos compuestos son preparados típicamente a partir del ácido sulfónico correspondiente, es decir, a partir de compuestos de la fórmula Ar1S03H donde Ar1 es como se definió anteriormente, usando tricloruro de fósforo y pentacloruro de fósforo. Esta reacción es conducida generalmente poniendo en contacto el ácido sulfónico con aproximadamente 2 a 5 equivalentes molares de tricloruro de fósforo y pentacloruro de fósforo, ya sea puro o en un solvente inerte, como el diclorometano, a una temperatura en el intervalo de aproximadamente 0°C a aproximadamente 80 °C durante aproximadamente 1 hasta aproximadamente 48 horas para dar el cloruro de sulfonilo. De manera alternativa, los cloruros de arilsulfonil, 2 , pueden ser preparados a partir del compuesto de tiol correspondiente, es decir, de los compuestos de Ar1-SH donde Ar1 es como se define aquí, tratando el tiol con cloruro (C?2) y agua bajo condiciones de reacción convencionales. De manera alternativa, los cloruros de ariisulfonilo, 2, empleados en la reacción anterior pueden ser preparados por clorosulfonilación de benceno o un grupo heterocicloalquilo usando C1-S03H. Los ejemplos de cloruros de ariisulfonilo adecuados para usarse en esta invención incluyen, pero no se limitan a, cloruro bencensulfonilo, cloruro de 1-naftalensulfonilo, cloruro de 2-naftalensulfonilo, cloruro de p-toluensulfonilo, cloruro de o-toluensulfonilo, cloruro de 4-acetamidobencensulfonilo, cloruro de 4-ter-butilbencen-sulfonilo, cloruro de 4-bromobencensulfonilo, cloruro de 2-carboxibencensulfonilo, cloruro de 4-cianobencensulfonilo, cloruro de 3, -diclorobencensulfonilo, cloruro de 3,5-diclorobencensulfonilo, cloruro de 3, 4-dimetoxibencen-sulfonilo, cloruro de 3, 5-ditrifluorometilbencensulfonilo, cloruro de 4-fluorobencensulfonilo, cloruro de 4-metoxi-bencensulfonilo, cloruro de 2-metoxicarbonilbencensulfonilo, cloruro de 4-metilamido-bencensulfonilo, cloruro de 4-nitrobencensulfonilo, cloruro de 4-trifluorometilbencensulfonilo, cloruro de 4-trifluorometoxibencensulfonilo, cloruro de 2, , 6-trimetilbencensulfonilo, cloruro de 2-tiofensulfonilo, cloruro de 5-cloro-2-tiofensulfonilo, 2,5-dicloro-4-tiofensulfonilo, cloruro de 2-tiazolsulfonilo, cloruro de 2-metil-4-tiazolsulfonilo, cloruro de l-metil-4-imidazolsulfonilo, cloruro de l-metil-4-pirazolsulfonilo, cloruro de 5-cloro-l, 3-dimetil-4-pirazolsulfonilo, cloruro de 3-piridinsulfonilo, cloruro de 2-pirimidinsulfonilo y similares. Si se desea, puede ser usado un fluoruro de sulfonilo, bromuro de sulfonilo o anhídrido de ácido sulfónico en lugar del cloruro de sulfonilo en la reacción anterior para formar el N-sulfonil aminoácido, 3 . El N-arilsulfonil aminoácido, 3 , es entonces acoplado a esteres de tirosina comercialmente disponibles como se muestra en el Esquema de Reacción 2 siguiente: 3 Esquema de Reacción 2 donde R, Ar1, X, m y n son como se definieron anteriormente, Ra es hidrógeno o alquilo pero preferiblemente es un grupo alquilo como el t-butilo, Z representa la sustitución opcional sobre el anillo de arilo y o es cero, uno o dos. Esta reacción de acoplamiento es conducida típicamente usando reactivos de acoplamiento bien conocidos como las carbodiimidas, reactivos BOP (hexafluorofosfonato de benzotriazol-1-iloxi-tris (dimetilamino) -fosfonio) y similares. Las carbodiimidas incluyen, a manera de ejemplo, diciclohexilcarbodiimida (DCC), 1- (3-dimetilaminopropil) -3- etilcarbodiimida (EDC) y similares. Si se desea, también pueden ser usadas formas soportadas del polímero de reactivo de acoplamiento de carbodiimida incluyendo, por ejemplo, aquellas descritas en Tetrahedron Let ters, 34(48), 7685 (1993) . Adicionalmente, pueden ser usados promotores de acoplamiento bien conocidos como la N-hidroxisuccinimida, 1- hidroxibenzotriazol y similares, para facilitar la reacción 0 de acoplamiento. Esta reacción de acoplamiento es conducida típicamente poniendo en contacto el N-sulfonil aminoácido, _3, con de aproximadamente 1 hasta aproximadamente 2 equivalentes de acoplamiento y al menos un equivalente, de 5 manera preferible, de aproximadamente 1 hasta aproximadamente 1.2 equivalentes, de derivado de tirosina, 4, en un diluente inerte, como el diclorometano, cloroformo, acetonitrilo, tetrahidrofurano, N, N-dimetilformamida y similares.
Generalmente, esta reacción es conducida a una temperatura 0 que fluctúa de aproximadamente 0°C hasta aproximadamente 37 °C desde aproximadamente 12 hasta aproximadamente 24 horas. Tras completar la reacción, el compuesto 5_ es recubierto por métodos convencionales incluyendo la neutralización, *- evaporación, extracción, precipitación, cromatografía, filtración y similares.
De manera alternativa, el N-sulfonil aminoácido, _3, puede ser convertido en un haluro de ácido el cual entonces es acoplado con el compuesto, A_, para proporcionar el compuesto 5. El haluro de ácido puede ser preparado poniendo en contacto el compuesto _3 con un haluro de ácido inorgánico, como el cloruro de tienilo, tricloruro de fósforo, tribromuro de fósforo o pentacloruro de fósforo, o preferiblemente, con cloruro de oxalilo bajo condiciones convencionales. Generalmente, esta reacción es conducida usando de aproximadamente 1 a 5 equivalentes molares del haluro de ácido inorgánico o cloruro de oxalilo, ya sea puro o en un solvente inerte, como el diclorometano o tetracloruro de carbono, a una temperatura en el intervalo de aproximadamente 0°C hasta aproximadamente 80 °C durante aproximadamente 1 hasta aproximadamente 48 horas. También puede ser usado un catalizador, como la DMF, en esta reacción. El haluro de ácido del N-sulfonil aminoácido, _3, es entonces puesto en contacto con al menos un equivalente, de manera preferible de aproximadamente 1.1 hasta aproximadamente 1.5 equivalentes, del derivado de tirosina, 4, en un diluente inerte, como el diclorometano, a una temperatura en el intervalo de aproximadamente 70°C hasta aproximadamente 40 °C durante aproximadamente 1 hasta aproximadamente 24 horas. Preferiblemente, esta reacción es conducida en presencia de una base adecuada para retirar el ácido generado durante la reacción. Las bases adecuadas incluyen, a manera de ejemplo, aminas terciarias, como la trietilamina, disopropiletilamina, N-metilmorfolina y similares. De manera alternativa, la reacción puede ser conducida bajo condiciones del tipo de Schotten-Baumann usando álcali acuoso, como el hidróxido de sodio y similares. Tras completar la reacción, el compuesto 5 es recuperado por métodos convencionales incluyendo la neutralización, evaporación, extracción, precipitación, cromatografía, filtración y similares. De manera alternativa, el compuesto 5_ puede ser preparado formando primero un derivado de diamino ácido y entonces acoplando el diaminoácido al haluro de ariisulfonilo, 2 , como se muestra en el siguiente esquema de reacción 3 : Esquema de Reacción 3 donde R, Ra, Ar1, X, Z, m, n y o son como se definieron anteriormente. El diamino ácido, 6, puede ser preparado fácilmente acoplando el aminoácido, 1 , con el aminoácido, 4_, usando técnicas y reactivos de acoplamiento de aminoácidos convencionales, como carbodiimidas, reactivos de BOP y similares, como se describió anteriormente. El diaminoácido, 6 , puede entonces ser sulfonado usando cloruro de sulfonilo, 2 , usando los procedimientos sintéticos descritos anteriormente para proporcionar el compuesto 1_ . Los derivados de tirosina, A_, empleados en las reacciones anteriores son compuestos conocidos o compuestos que pueden ser preparados a partir de compuestos conocidos por procedimientos sintéticos convencionales. Por ejemplo, los derivados de tirosina, A_, adecuados para usarse en las reacciones anteriores incluyen, pero no se limitan a, metil éster de L-tirosina, t-butil éster de L-tirosina, metil éster de L-3, 5-diyodotirosina, metil éster de L-3-yodotirosina, metil éster de ß- (4-hidroxi-naft-l-il ) -L-alanina, metil éster de ß- ( 6-hidroxi-naft-2-il ) -L-alanina, y similares. Si se desea, por supuesto, también pueden ser empleados otros esteres o amidas de los compuestos descritos anteriormente. El derivado de aminoácido N-arilsulfonil-heterocíclico-tirosina, 7, puede ser usado como punto de partida para unir una porción polimérica en el grupo Ar2 por las reacciones de acoplamiento mostradas en los siguientes esquemas de Reacción 4-14, reacciones de acoplamiento las cuales son ilustrativas únicamente para demostrar como pueden ser introducidas porciones poliméricas. En esos Esquemas de Reacción, es usado PEG como la porción polimérica para propósitos ilustrativos únicamente. Debe comprenderse que podrían ser usados otros polímeros adecuados en lugar de PEG y que un experto en la técnica podría fácilmente verificar los esquemas de reacción siguientes incorporando otros polímeros. En algunos casos, la porción de PEG puede ser introducida directamente sobre el grupo fenoxi y, en otros casos, la porción de PEG puede ser introducida por enlace a través de una porción enlazante. Específicamente, el Esquema de Reacción 4 ilustra lo siguiente: donde Ar1, R, Ra, JT?, n, o, X, y Z son como se definieron anteriormente, Pg es un grupo protector de amina como CBZ, Boc, etc, el cual es, de manera preferible, removible ortogonalmente en comparación con el grupo protector de carboxilo de Ra y p es un número entero preferiblemente de aproximadamente 100 hasta 1360. Específicamente, en el Esquema de Reacción 4, el compuesto 1_, preparado como anteriormente, es combinado con al menos un equivalentes y preferiblemente un exceso de cloroformiato de 4-nitrofenilo, 8_, en un solvente adecuado como un cloruro de metileno, cloroformo y similares y preferiblemente bajo una atmósfera inerte. La reacción es conducida preferiblemente a una temperatura de aproximadamente -40° hasta aproximadamente 0°C en presencia de una base adecuada para depurar el ácido generado. Las bases adecuadas incluyen, a manera de ejemplo, trietilamina, diisopropiletilamina, y similares. Después de la formación del carbonato mezclado intermedio (no mostrado) , se agrega al menos una cantidad aproximadamente equimolar de N-Pg piperacina, 8a, a la solución de reacción. Esta reacción se dejó continuar a temperatura ambiente durante aproximadamente 1 a 24 horas. Tras completar la reacción, el compuesto 9 es recuperado por métodos convencionales incluyendo la neutralización, evaporación, extracción, precipitación, cromatografía, filtración y similares, o, de manera alternativa, se usa en el siguiente paso sin purificación y/o aislamiento. La remoción convencional del grupo protector proporciona un derivado de piperacina libre, 10. La remoción se efectúa de acuerdo con el grupo bloqueado empleado. Por ejemplo, un grupo protector trifluorometilcarbonilo es removido fácilmente vía una solución acuosa de carbonato de potasio. Además, los grupos protectores para varios grupos funcionales así como las condiciones adecuadas para proteger y desproteger grupos funcionales particulares son bien conocidas en la técnica. Véase, por ejemplo, T.W. Greene and G. M. Wuts, Protecting Groups in Organi c Chemistry, Segunda Edición, Wiley, New York, 1991, y las referencias citadas allí. Un derivado de piperacina libre, 1_0, es entonces combinada con un a,?-dicloroformiato de polioxietileno, compuesto Yl , en un diluente inerte adecuado como el cloruro de metileno, cloroformo, y similar y preferiblemente bajo una atmósfera inerte. Típicamente, se emplean al menos 2 equivalentes y preferiblemente 2.5 a 10 equivalentes de compuestos 1_0 por entidad de cloroformiato en combinación con el compuesto 1_1. La reacción es conducida opcionalmente en presencia de una cantidad catalítica de DMAP y una base para depurar el ácido generado durante la reacción. La reacción continúa bajo condiciones ambientales hasta completar sustancialmente, lo cual típicamente ocurre dentro de 4 a 24 horas. Cuando Ra es alquilo, la hidrólisis posterior del derivado éster proporciona el grupo carboxilo libre o una sal del mismo. El dímero resultante, 12, es recuperado por procedimientos convencionales como la neutralización, evaporación, extracción, precipitación, cromatografía, filtración y similares. El a,?-dicloroformiato de polioxietileno, compuesto 1_1, es preparado fácilmente a partir de polioxietileno comercialmente disponible con reacción con un exceso de fosgeno, típicamente de al menos 2 hasta aproximadamente 20 equivalentes, en un solvente inerte adecuado como el cloruro de metileno, cloroformo y similares. La reacción es conducida preferiblemente bajo una atmósfera inerte en condiciones ambientales hasta que la reacción es sustancialmente completa, lo cual típicamente ocurre en aproximadamente 2 a 24 horas. Posteriormente, el a,?-dicloroformiato de polioxietileno, compuesto 1_1, es recuperado por procedimientos convencionales como la neutralización, evaporación, extracción, precipitación, cromatografía, filtración y similares. Un ejemplo específico de este esquema de reacción hasta la formación del derivado de piperacina 28^ se ilustrado en el Esquema de Reacción 5 siguiente: 21 P0CI3, PCI5 Esquema de Reacción 5 Específicamente, el ácido 3-piridinsulfónico comercialmente disponible, 2_1, es convertido bajo condiciones convencionales al cloruro de sulfonilo correspondiente, 22, por contacto con POCl3/PCls usando condiciones bien conocidas en la técnica. El acoplamiento del cloruro de sulfonilo, 22, con el ácido S-5, 5-dimetiltiazolidin-4-carboxílico comercialmente disponible, 2_3, es efectuado bajo condiciones convencionales, preferiblemente en presencia de un amortiguador de fosfato (pH 7.4) usando un exceso de cloruro de sulfonilo. La reacción es conducida preferiblemente a una temperatura de aproximadamente -10 a 20°C hasta que la reacción es sustancialmente completa, lo cual típicamente ocurre dentro de 0.5 a 5 horas. El producto resultante, 2 , puede ser recuperado por métodos convencionales, como la cromatografía, filtración, evaporación, cristalización y similares, o de manera alternativa, ser usado en el siguiente paso sin purificación y/o aislamiento. El compuesto de ácido N-piridinil sulfonil-5, 5-dimetiltiazolidin-4-carboxílico, 2_3, es a continuación acoplado a t-butil tirosina usando condiciones de acoplamiento de aminoácidos convencionales. Específica, esta reacción de acoplamiento es conducida usando reactivos de acoplamiento bien conocidos como la 1- (3-dimetilaminopropil) -3-etilcarbodiimida (EDC) , 1-hidroxi-benzotriazol (HOBt) y N-metilmorfolina para facilitar la reacción de acoplamiento.
Esta reacción de acoplamiento es conducida típicamente poniendo en contacto el ácido sulfonilamino, 23, con aproximadamente 1 hasta aproximadamente 2 equivalentes del reactivo de acoplamiento y al menos un equivalente, de manera preferible de aproximadanente 1 hasta aproximadamente 1.2 equivalentes, del t-butil éster de tirosina, en un diluente inerte, como el diclbrometano, cloroformo, acetonitrilo, tetrahidrofurano, N, -dimetilformamida y similares. Generalmente, esta reacción es conducida a una temperatura que fluctúa de aproximadamente 0°C hasta aproximadamente 22 °C durante aproximadamente 12 hasta aproximadamente 24 horas. Tras completar la reacción, el compuesto 2_4 es recuperado por métodos convencionales incluyendo la neutralización, evaporación, extracción, precipitación, cromatografía, filtración y similares, o de manera alternativa, es empleado en el siguiente paso sin mayor purificación y/o aislamiento. Por separado, la mono-N-Boc-piperacina, 2_5, es convertida al cloruro de carbamilo correspondiente, 2_6, por reacción con fosgeno en la forma descrita anteriormente. Tras completar la reacción, el compuesto 2_6 es recuperado por métodos convencionales incluyendo la neutralización, evaporación, extracción, precipitación, cromatografía, filtración y similares o, de manera alternativa, es empleado en el siguiente paso sin purificación y/o aislamiento.
El acoplamiento del compuesto 2_4 con el compuesto 26 para proporcionar el compuesto 27 procede bajo condiciones convencionales en un diluente inerte como el diclorometano, con una cantidad catalítica de DMAP y preferiblemente en presencia de una base para depurar el ácido generado. La reacción es efectuada a una temperatura de aproximadamente -20 hasta aproximadamente 22 °C durante aproximadamente 2 hasta aproximadamente 24 horas. Tras completar la reacción, el compuesto 2J_ es recuperado por métodos convencionales incluyendo la neutralización, evaporación, extracción, precipitación, cromatografía, filtración y similares o, de manera alternativa, es empleado en el siguiente paso sin purificación y/o aislamiento. La remoción de ambos del grupo protector Boc de amino y el t-butil éster procede en presencia de ácido trifluoroacético para proporcionar el compuesto 2_8 el cual puede ser recuperado por métodos convencionales, incluyendo la neutralización, evaporación, extracción, precipitación, cromatografía, filtración y similares. El siguiente Esquema de Reacción 6 ilustra la preparación de un compuesto de piperacina protegido ortogonalmente sobre uno de los grupos amina en relación al grupo protector carboxilo encontrado sobre el compuesto de fenilalanina de modo que después del acoplamiento, el grupo protector- de piperacina pueda ser removido de manera diferenciada del grupo protector carboxilo.' Esa protección ortogonal es necesaria si las reacciones posteriores sobre el grupo resultante requieren un grupo protector carboxilo para evitar, reacciones laterales indeseables.
TFAA, Et3N J HCl gas J COCI2l NaHCO, Esquema de Reacción 6 Específicamente, en el Esquema de Reacción 6 el compuesto 2_4 es preparado en la forma descrita anteriormente. La N-t-Boc-piperacina, 2_5, es convertida convencionalmente a N-t-Boc-N' -trifluorometil-carbonilpiperacina, 2_9, por contacto con un exceso de anhídrido trifluoroacético en presencia de una amina adecuada como la trietilamina para depurar el ácido generado durante la reacción en un solvente adecuado, en diclorometano. Generalmente, esta reacción es conducida a una temperatura que fluctúa de aproximadamente -20 °C hasta aproximadamente 22 °C durante aproximadamente 1 hasta aproximadamente 24 horas. Tras completar la reacción, el compuesto 2_9 puede ser recuperado por métodos convencionales incluyendo la neutralización, evaporación, extracción, precipitación, cromatografía, filtración, y similares, o de manera alternativa, y preferible, se emplea en el siguiente paso sin purificación y/o aislamiento. A su vez, la remoción del grupo protector t-Boc sobre la N-t-Boc-N' -trifluorometil-carbonilpiperacina, 29, procede bajo condiciones convencionales usando HCl gaseoso burbujeado a través de un solvente inerte como el cloruro de metileno, EtOAc, Et02, y similares bajo condiciones ambientales para proporcionar la sal de clorhidrato de N'-trifluorometilcarbonilpiperacina, 3J3- Generalmente, esta reacción es conducida a una temperatura que fluctúa de aproximadamente -20 °C hasta aproximadamente 22 °C durante aproximadamente 0.5 hasta aproximadamente 4 horas. Tras completar la reacción, el compuesto 3_0 puede ser recuperado por métodos convencionales incluyendo la neutralización, evaporación, extracción, precipitación, cromatografía, filtración y similares, o de manera alternativa y preferida es empleado en el siguiente paso sin purificación y/o aislamiento. La conversión N' -trifluorometilcarbonilpipéracina, 30, al derivado de cloruro de N-carbamilo 3_1, procede convencionalmente en contacto con fosgeno en la forma descrita anteriormente. Tras completar la reacción, el compuesto 3_1 puede ser recuperado por métodos convencionales incluyendo la neutralización, evaporación, extracción, precipitación, cromatografía, filtración y similares, y de manera alternativa o preferible es empleado en el siguiente paso sin purificación y/o aislamiento. Los compuestos 3JL y 2_4 están acoplados bajo condiciones similares a aquellas descritas anteriormente para proporcionar compuesto 3_2 el cual es protegido ortogonalmente en la porción amino del grupo piperacina así como la porción carboxilo del grupo fenilalanina. La remoción selectiva del grupo protector de trifluorometilcarbonil amino procede bajo condiciones convencionales usando una solución acuosa de carbonato de potasio para proporcionar el compuesto 33. El siguiente Esquema de Reacción 7 ilustra la modificación de la porción polimérica antes de la unión covalente del compuesto II. Para propósitos ilustrativos únicamente, la porción polimérica es un PEG tetravalente unido a un pentaeritritol. El Esquema de Reacción 7 ilustra que la longitud de la porción polimérica puede ser ajustada fácilmente por química convencional para proporcionar los reactivos óptimos.
Esquema de Reacción 7 Donde el agregado de las cuatro r y s es un número entero, preferiblemente de aproximadamente 100 a 1360. Especí-ficamente, el pentaeritritol pegilado comercialmente disponible, el compuesto 3_4, (por ejemplo un compuesto que tiene un peso molecular total de aproximadamente 20 kD y disponible de Sun Bio, Orinda, CA, EUA, como catalogo no. P40H-20), se hace reaccionar con un exceso de fosgeno, típicamente de al menos 4 hasta aproximadamente 40 equivalentes, en un solvente inerte adecuado como el cloruro de metileno, cloroformo y similares.
La reacción es conducida preferiblemente bajo una atmósfera inerte a condiciones ambientales hasta que la reacción es sustancialmente completa, lo cual típicamente ocurre de aproximadamente 2 hasta 24 horas. Posteriormente, el tetracloroformiato de polioxietileno resultante, compuesto , es recuperado por procedimientos convencionales como la neutralización, evaporación, expresión, cromatografía, filtración y similares o se usa en el siguiente paso de reacción sin purificación y/o aislamiento. El tetracloroformiato, compuesto 3_5, es entonces combinado con un exceso (típicamente de 2.5 a 10 equivalentes de la entidad de cloroformiato) de un compuesto de ,?-diaminopolioxietileno (por ejemplo, un compuesto que tiene un peso molecular de aproximadamente 6 kD y disponible de Sun Bio, como catálogo no. P2AM-6) , bajo condiciones convencionales en un diluente inerte, como el diclorometano, en presencia de una cantidad catalítica de DMAP y una base para depurar el ácido generado. La reacción es conducida .típicamente a una temperatura de aproximadamente -20 hasta aproximadamente 22 °C durante aproximadamente 2 hasta aproximadamente 24 horas o hasta completar sustancialmente la reacción. Tras la conclusión, el compuesto 3_6 es recuperado por métodos convencionales incluyendo la neutralización, evaporación, precipitación, cromatografía, filtración y similares o, de manera alternativa, se emplean en el siguiente paso sin purificación y/o aislamiento. Cuando son empleados pentaeritritol tetrapegilado específico de Sun Bio y la diamina de Sun Bi, el producto resultante, compuesto 3_6, tiene un peso molecular de aproximadamente 45 kD. Los a,a>-diaminopolioxietilenos se encuentran comercialmente disponibles bajo el nombre comercial de Jeffamines® y típicamente tienen pesos moleculares de hasta 10,000 o mayores. Debe comprenderse que un a,?-diaminopolioxietileno protegido con monoamino puede ser usado en el Esquema de Reacción 7 para minimizar la reticulación así como la ciclización. Tras completar la reacción, el grupo protector monoamino removido por medios convencionales bien conocidos en la técnica. El Esquema de Reacción 8 ilustra una segunda ruta para la derivación para proporcionar la sustitución poliméricas. En este esquema, la porción amino del grupo piperacina es empleada como un grupo funcional complementario a grupos carboxilo activados formados in si tu de un polímero de ácido a, ?-dicarboxílico . Nuevamente para propósitos de ilustración únicamente, el polímero de a , ?-dicarboxílico es un polioxietileno de ácido a,?-dicarboxílico. En esta modalidad, el compuesto de dicarboxil-PEG es representado por la fórmula HOOCCH2 (OCH2CH2) POCH2COOH donde p es como se definió anteriormente y el enlazante resultante al grupo PEG es representado por -C(0)CH2-.
HO0CCH-{C?CH-ßH-).OCHjCílOH eí3WHATU Esquema de Reacción 8 Específicamente, en el Esquema de Reacción 8, se agrega un exceso de compuesto 3_3 (por ejemplo, de 2.5 a 10 equivalentes de compuesto 3_3 por grupo carboxilo) , preparado como anteriormente, al compuesto de dicarboxil-PEG el cual es convertido in si tu a un éster activado (no mostrado) por contacto con al menos dos equivalentes y de manera preferible, un exceso de HATU [O- (hexafluorofosfato de 7- azabenzotriazol-1-il) -1, 1, 3, 3, -tetrametiluronio] en presencia de una amina adecuada como la trietilamina. El acoplamiento del compuesto de dicarboxil-PEG al compuesto 3_3 procede preferiblemente a una temperatura de aproximadamente 0 hasta aproximadamente 22 °C durante aproximadamente 2 hasta aproximadamente 24 horas. Tras completar la reacción, el compuesto 3_9 es recuperado por métodos convencionales, incluyendo la neutralización, evaporación, extracción, precipitación, cromatografía, filtración y similares, o de manera alternativa, es empleado en el paso sin purificación y/o aislamiento. La remoción convencional del grupo protector carboxilo t-butilo con un exceso de ácido fórmico proporciona un compuesto de Fórmula IA de esta invención. El Esquema de Reacción 9 ilustra otra ruta más para la derivación para proporcionar la adición del polímero al compuesto A. En este Esquema de Reacción, la porción amina del grupo piperacina es empleada como un grupo funcional complementario a un cloroformiato de un polímero formado in si tu que comprende a,?-diol. Nuevamente para propósitos ilustrativos, el polímero que comprende un a:,?-diol es PEG el cual es representado por la fórmula HOCH2CH2 (OCH2CH2) POH donde p es como se definió anteriormente y el enlazante resultante es representado por -C(O)-.
Esquema de Reacción 9 Específicamente, en el Esquema de Reacción 9, el grupo hidroxilo de un dihidroxi PEG comercialmente disponible, A 2_, es convertido al cloroformiato correspondiente, 37_, por reacción con fosgeno en tolueno (Fluka), en diclorometano. El producto es aislado por evaporación y es empleado en el siguiente paso sin mayor purificación. Un exceso de compuesto _33 (por ejemplo, de 2.5 a 10 equivalentes del compuesto 3_3 por entidad de cloroformiato) se pone en contacto con dicloroformiato, compuesto 43, preparado como anteriormente, en presencia de una base adecuada como la trietilamina para depurar el ácido generado. El acoplamiento del compuesto de dicloroformiato-PEG al compuesto 3_3 procede preferiblemente a una temperatura de aproximadamente 0 hasta aproximadamente 22 °C durante aproximadamente 2 hasta aproximadamente 4 horas. Tras completar la reacción, el compuesto 44_ es recuperado por métodos convencionales incluyendo la neutralización, evaporación, extracción, precipitación, cromatografía, filtración o similares o, de manera alternativa, es empleado en el siguiente caso sin mayor purificación y/o aislamiento. La remoción convencional del grupo protector de carboxilo t-butilo con un exceso de ácido fórmico proporciona un compuesto de Fórmula I de esta invención. Las reacciones descritas en los Esquemas de Reacción 8 y 9 se conducen simultáneamente en cualquier extremo del ácido dicarboxílico (Esquema de Reacción 8) o el dicloroformiato (Esquema de Reacción 9) proporcionando por lo tanto una síntesis en un solo recipiente de un conjugado divalente homomérico o multivalente superior. Debe comprenderse, sin embargo, que esas reacciones pueden ser conducidas secuencialmente mediante el uso de grupos protectores. En el caso de un ácido dicarboxílico, uno de los grupos carboxilo puede ser protegido mientras el otro es sometido a acoplamiento al grupo amino de la piperacina. Tras la conclusión, el grupo protector puede ser removido y entonces se hace reaccionar con el mismo o preferiblemente un compuesto A diferente para proporcionar una estructura heterodivalente. Más aún, las estructuras heterotrivalentes, heterotetravalentes y heteromultivalentes superiores pueden ser preparadas mediante el uso de grupos protectores ortogonales sobre la funcionalidad carboxílica. En el caso de un diol (Esquema de Reacción 9) , uno de los grupos hidroxilo puede ser protegido mientras el otro es sometido a reacción con fosgeno para formar un cloroformiato para la adición posterior del grupo amino a la piperacina. Tras la conclusión, el grupo protector puede ser removido y entonces hacerse reaccionar con fosgeno y posteriormente con el mismo o preferiblemente un compuesto A diferente para proporcionar una estructura heterodivalente. Más aún, las estructuras heterotrivalentes, heterotetravalente y heteromultivalentes superiores pueden ser preparadas mediante el uso de grupos protectores ortogonales sobre la funcionalidad alcohol. El Esquema de Reacción 10 ilustra la síntesis de cloruro de N-carbamilo e intermediarios de isocianato útiles para la adición polimérica posterior. En este esquema, la porción amino del grupo piperacina es derivada para la adición posterior del polímero.
Esquema de Reacción 10 Específicamente, en el Esquema de Reacción 10, la conversión de la porción amino del grupo piperacina del compuesto 3_3, al cloruro de N-carbamilo correspondiente, compuesto 33a, procede por contacto con un exceso de fosgeno en presencia de una base adecuada como el bicarbonato de sodio para depurar el ácido generado durante la reacción. Tras la conclusión de la reacción, el compuesto 33a puede ser removido por métodos convencionales como la neutralización, evaporación, extracción, precipitación, cromatografía, filtración y similares o, de manera alternativa y preferible es empleado en lo siguiente (ilustrado en el Esquema de Reacción 11) sin purificación y/o aislamiento. De manera alternativa, la porción amino del grupo piperacina del compuesto _3_3 puede ser convertida a la amina correspondiente, compuesto 4_5, por la reacción con al menos un equivalente y preferiblemente un exceso de cloruro de 4-nitrobenzoilo en presencia de una base como la piridina (la cual también actúa como solvente) para depurar el ácido generado durante la reacción. La reacción preferiblemente procede a una temperatura de aproximadamente 0 hasta aproximadamente 22 °C durante aproximadamente 1 hasta aproximadamente 24 horas. Tras la conclusión de la reacción, el compuesto 4_5 es recuperado por métodos convencionales incluyendo la neutralización, evaporación, extracción, precipitación, cromatografía, filtración y similares o, de manera alternativa es empleado en el siguiente paso sin purificación y/o aislamiento. La reducción posterior del sustituyente para-nitro del grupo fenilo proporciona el sustituyente de amina en el compuesto 4_6. La reducción es conducida convencionalmente usando paladio/carbono bajo una atmósfera de hidrógeno típicamente a presiones elevadas en un diluente adecuado como el metanol. La reacción procede hasta la conclusión sustancial que típicamente ocurre dentro de aproximadamente 24 hasta aproximadamente 72 horas. Durante la reacción, se agrega catalizar adicional según se requiera para afectar la conclusión de la reacción. Tras la conclusión de la reacción, el compuesto 4_6 es recuperado por métodos convencionales incluyendo la neutralización, evaporación, extracción, precipitación, cromatografía, filtración y similares o, de manera alternativa y es empleado en el siguiente paso sin purificación y/o aislamiento. La conversión del sustituyente para-amino del grupo fenilo del compuesto 4_6 al isocianato correspondiente, 47, ocurre por reacción con un exceso de fosgeno en presencia de una base adecuada como el bicarbonato de sodio la cual depura el ácido generado. La reacción procede hasta la conclusión sustancial, la cual típicamente ocurre dentro de aproximadamente 0.5 hasta aproximadamente 5 horas a aproximadamente 0°C hasta aproximadamente 22 °C. Tras la conclusión de la reacción, el compuesto A l_ es recuperado por métodos convencionales incluyendo la neutralización, evaporación, extracción, precipitación, cromatografía, filtración y similares o, de manera alternativa es empleado en el siguiente paso sin purificación y/o aislamiento. El Esquema de Reacción 11 ilustra aún una ruta adicional para la derivación para proporcionar la sustitución polimérica. En este esquema, la porción de cloruro de carbamilo del grupo del compuesto 33a es empleada como un grupo funcional complementario para formar un enlace carbamato o urea. Para propósitos ilustrativos únicamente, el polímero empleado es un a,?-diol o diamina de un PEG y es representado por la fórmula HQCH2CH2 (OCH2CH2)pQH donde Q es NH u O.
Esquema de Reacción 11 Específicamente, en el Esquema de Reacción 11, se pone en contacto un exceso (por ejemplo 2.5 a 10 equivalentes de cloruro de carbamilo por cada porción de HQ) del compuesto 33a , En un solvente inerte como diclorometano con un compuesto de dihidroxi o diamin-PEG adecuado, preferiblemente en presencia de una base adecuada como la trietilamina y/o cantidades catalíticas de 4-N,N-dimetilaminopiridina (DMAP).
La reacción procede hasta la • conclusión sustancial, la cual típicamente ocurre dentro de aproximadamente 4 hasta aproximadamente 48 horas. Tras la conclusión de la reacción, el compuesto 4_8 es recuperado por métodos convencionales incluyendo la neutralización, evaporación, extracción, precipitación, cromatografía, filtración y similares o, de manera alternativa, es empleado en el siguiente paso sin purificación y/o aislamiento. Cuando Q es un grupo hidroxilo, el producto contiene una funcionalidad carbamato enlazando covalentemente el grupo PEG al antagonista de VLA-4 a través de un enlazante representado por la fórmula -C(O)-. Cuando Q es un grupo amina, el producto contiene una funcionalidad de urea enlazando covalentemente el grupo PEG al antagonista de VLA-4 a través de un enlazante representado por remoción convencional de -C (0) - del grupo protector de carboxilo t-butilo con un exceso de ácido fórmico que proporciona un compuesto de esta invención.
El Esquema de Reacción 12 ilustra otra ruta más para la derivación para proporcionar la sustitución del polímero. En este esquema, el isocianato del compuesto A l_ es empleado como un grupo funcional complementario para formar un enlace carbamato o urea. Para propósitos ilustrativos, únicamente, el polímero empleado es un a,?-diol o diamina de un PEG y es representado por la fórmula HQCH2CH2 (OCH2CH2) PQH donde Q es NH u 0.
Esquema de Reacción 12 Específicamente, en el Esquema de Reacción 12, se pone en contacto un exceso de isocianato 4_7 (por ejemplo, de 2.5 a 10 equivalentes de isocianato 47 por cada porción de HQ) con un compuesto de dihidroxi o diamino-PEG adecuado en un diluente inerte adecuado como el diclorometano o tolueno. La reacción es mantenida preferiblemente a una temperatura de aproximadamente 0o hasta aproximadamente 105°C hasta su conclusión sustancial, la cual típicamente ocurre dentro de aproximadamente 1 hasta aproximadamente 24 horas. Tras la conclusión de la reacción, el compuesto A 9 es recuperado por métodos convencionales incluyendo la neutralización, evaporación, extracción, precipitación, cromatografía, filtración y similares, o de manera alternativa, es empleado en un siguiente paso sin purificación y/o aislamiento. Cuando Q es un grupo hidroxilo, el producto resultante contiene una funcionalidad carbamato enlazando covalentemente el grupo PEG al antagonista de VLA-4 a través de un grupo enlazante -C(O)-. Cuando Q es un grupo amino, el producto resultante contiene una funcionalidad urea enlazando covalentemente el grupo PEG al antagonista de VLA-4 a través de un grupo enlazante -C(O)-. La remoción convencional del grupo protector de carboxilo t-butilo con un exceso de ácido fórmico proporciona compuesto de mono-PEG, compuesto A l_, de fórmula I de esta invención. Las reacciones descritas en los Esquemas de Reacción 11 y 12 son conducidas simultáneamente en ambos extremos del polímero (para la formación del dímero) proporcionando por lo tanto una síntesis con un recipiente de un conjugado divalente monómerico o multivalente superior. Debe comprenderse, sin embargo, que esas reacciones pueden ser conducidas secuencialmente mediante el uso de grupos protectores . En el caso de una diamina, uno de los grupos amina puede ser protegido mientras el otro es sometido a acoplamiento a cualquiera del cloruro de carbonilo del compuesto 33a o el isocianato del compuesto 4_7. Tras la conclusión, el grupo protector puede ser removido y entonces hacerse reaccionar ya sea con el mismo o preferiblemente un compuesto A diferente para proporcionar una estructura heterodivalente. Más aún, las estructuras heterodivalentes, heterotetravalentes y heteromultivalentes superiores pueden ser preparadas mediante el uso de grupos protectores ortogonales sobre una o más de las funcionalidades amino. En el caso de un diol, uno de los grupos hidroxilo puede ser protegido mientras el otro es sometido as acoplamiento a cualquiera del cloruro de carbamilo al compuesto 33a o el isocianato del compuesto 4_7. Tras la conclusión, el grupo protector puede ser removido y entonces hacerse reaccionar ya sea con el mismo o preferiblemente un compuesto diferente A para proporcionar una estructura heterodivalente. Más aún, las estructuras heterotrivalentes, heterotetravalentes, y heteromultivalentes superiores pueden ser preparados mediante el uso de grupos protectores ortogonales sobre una o más de las funcionalidades hidroxilo. En los esquemas de reacción anteriores, las porciones amino localizadas sobre otras porciones de la molécula pueden ser empleadas en la forma descrita anteriormente para enlazar covalentemente un grupo polimérico a la molécula. Por ejemplo, las aminas localizadas sobre Ar1, sobre el aminoácido heterocíclico o sobre Ar2 pueden ser derivadas de manera similar para proporcionar la sustitución del PEG. Las porciones amino pueden ser incluidas en ese sustituyente durante la síntesis y protegidas apropiadamente según sea necesario. De manera alternativa, pueden ser empleados precursores de amina. Por ejemplo, como se muestra en el Esquema de Reacción 10, la reducción de un grupo nitro proporciona la amina correspondiente. De manera similar, la reducción de un grupo ciano proporciona un grupo H2NCH2. Los grupos Ar1 sustituidos con nitro y ciano son proporcionados en la Patente Estadounidense No. 6,489,300 como lo es un grupo Ar1 sustituido con amino. Además, la sustitución del amino puede ser incorporada en la funcionalidad de aminoácido heterocíclico y entonces ser derivada para incluir una porción polimérica. Por ejemplo, la funcionalidad de aminoácido heterocíclico puede ser la 2-carboxilpiperacina descrita en la Patente Estadounidense No. 6,489,300. De manera alternativa, la 3- o 4-hidroxiprolina comercialmente disponible puede ser oxidada a la cetona correspondiente y entonces aminada reductivamente con amoniaco en presencia de cianoborohidruro de sodio para formar la porción amina correspondiente. Más aún, la 4- cianoprolina puede ser reducida para proporcionar un grupo alquilo sustituido de fórmula -CH2NH2 el cual puede estar derivado a través de la amina. Más aún, la porción amino puede ser incorporado en la funcionalidad Ar2. Preferiblemente, la porción amino está presente como un precursor de amina, como un grupo nitro o ciano unido a Ar2. En los esquemas de reacción anteriores, las reacciones de la amina con un grupo funcional complementario pueden ser revertidas, de modo que el grupo carboxilo o hidroxilo se encuentre sobre el antagonista de VLA-4 de Fórmula II (sin ningún sustituyente polimérico) y el grupo amina podría ser parte de la porción polimérica. En esos casos, el grupo amino, que termina preferiblemente la porción polimérica, puede ser convertido a un isocianato, usando fosgeno y Et3N, y se hace reaccionar con el grupo hidroxilo para formar un carbamato como se ilustra en el Esquema de Reacción 13 a continuación: Esquema de Reacción 13 Específicamente, se pone en contacto un exceso de compuesto 5_0 descrito en la Patente Estadounidense No. 6,489,300, en la forma descrita anteriormente para proporcionar el carbamato correspondiente, 5_1. Preferiblemente, se emplean de aproximadamente 2.5 hasta 10 equivalentes del compuesto 50_ por cada porción de isocianato. La desprotección, como se describió anteriormente, proporciona entonces el diácido correspondiente (no mostrado) . De manera alternativa, en el Esquema 13, la funcionalidad hidroxilo puede hacerse reaccionar con fosgeno para proporcionar el derivado de clorocarboniloxi el cual reacciona con un grupo amina de un compuesto diamina para proporcionar el carbamato.
La funcionalidad carboxilo, por ejemplo sobre la porción de Ar1, puede ser convertida a la amida correspondiente por la reacción con un di o un aminopolímero superior en la forma descrita anteriormente en el Esquema de Reacción 8. De manera alternativa, en el Esquema de Reacción 14 siguiente ilustra un método para la generación de una funcionalidad amina a partir del grupo ciano correspondiente sobre la porción de Ar1. ÍSuOH,H 2!SO4»?¿l^0 H4 PdC ü* Esquema de Reacción 14 Específicamente, en el Esquema de Reacción 14, el compuesto conocido 5_2_, descrito' en la Patente Estadounidense No. 6,489,300, es protegido con t-butilo bajo condiciones convenientes para proporcionar el compuesto ciano 5_3 el cual es hidrogenado bajo condiciones convencionales para proporcionar el compuesto de aminometilo 5_4_. El grupo aminometilo del compuesto 5_4_ está disponible para el acoplamiento de una porción polimérica a este en uno o cualquiera de los sistemas de reacción ilustrados anteriormente . El Esquema de Reacción 15 siguiente ilustra una síntesis alternativa de derivados de 3-aminopirrol idini lo útiles para el acoplamiento de una porción polimérica a estos en cualquiera de los Esquemas de Reacción ilustrados anteriormente.
Esquema de Reacción 15 Usando métodos convencionales, la cis-4-hidroxi L- prolina comercialmente disponible, 5_7, es tratada con cloruro de hidrógeno metanólico durante varias horas a reflujo, seguido por evaporación, y de este modo el clorhidrato de metil éster generado es tratado con un exceso de cloruro de tosilo en piridina durante 2 días a temperatura ambiente, dando el producto 58_. El compuesto 5_8_ es aislado neutralizando la piridina usando ácido acuoso y extrayendo el producto con un solvente orgánico como EtOAc. El producto 5_8 puede ser purificado por cristalización, cromatografía instantánea, o de manera más preferible ser usado en pasos posteriores sin purificación. La reacción de 5_8 con una solución saturada de un exceso de azida de sodio en DMF a temperatura ambiente durante 15 días da el compuesto 5_9. El compuesto 5_9 es aislado por dilución de la mezcla de reacción con agua, seguido por la extracción con un solvente orgánico como EtOAc. El producto 59 puede ser purificado por cristalización, cromatografía instantánea, o más preferiblemente ser usado en pasos posteriores sin purificación. El compuesto 5_9 es tratado con hidróxido de sodio, en una mezcla de agua y metanol, hidrolizando de este modo el metil éster y generando un ácido carboxílico, el cual es aislado por acidificación y extracción con un solvente orgánico como el EtOAc. El ácido carboxílico es tratado con t-butil éster de L-tirosina [H-Tyr (H) -OtBu] , EDAC, HOBt, y Et3N en DMF, generando un dipéptido, el cual es aislado por dilución con agua y extracción con un solvente orgánico como el EtOAc. El dipéptido es tratado con CICONMe2, Et3N, y DMAP en DCM a reflujo durante 24 horas, generando el carbamato, 60, el cual es aislado por dilución con EtOAc, lavado secuencial con ácido y base acuosos débiles, y entonces evaporación. El compuesto 6JD es purificado rigurosamente por cromatografía instantánea. Finalmente, el compuesto 61 es preparado agitando una solución de ^0 en metanol, con un catalizador de Pd/C bajo una atmósfera de hidrógeno. El producto, 6_1, es aislado de modo mediante la remoción del catalizador por filtración y evaporación. Otros métodos para el acoplamiento de un compuesto de fórmula II con un polímero (opcionalmente unido a una molécula central con brazos ramificados) son bien conocidos en la técnica. Otros polímeros adecuados para la conjugación de un compuesto de fórmula II incluye sin limitación, polivinilpirrolidona (PVP), poliacrilamida (PAAm), polidimetilacrilamida (PDAAm) , alcohol polivinílico (PVA) , dextrano, poli (ácido L-glutámico) (PGA), anhídrido estiren maléico (SMA), poli-N- (2-hidroxipropil) metacrilamida (HPMA) , anhídrido polidiviniléter maléico (DIVEMA) . A manera de ejemplo, el PVP, PAAm y PDAAm puede ser funcionalizado por medio de la introducción de comonómeros durante la polimerización por radicales. El PVA y el dextrano contienen cada uno grupos hidroxilo (OH) primarios adecuados para la conjugación. Los métodos para la síntesis de esos biopolímeros para conjugarlos a materiales biológicos son bien conocidos en la técnica (véase, por ejemplo, la solicitud de Patente Estadounidense publicada 20040043030; Patente Estadounidense No. 5,177,059; Patente Estadounidense No. 6,716,821; Patente Estadounidense No. 5,824,701; Patente Estadounidense No. 6,664,331; Patente Estadounidense No. 5,880,131; Kameda, Y. et al., Biomaterials 25:3259-3266, 2004; Thanou, M. et al, Current Opinión in Investigational Drugs 4(6): 701-709, 2003; Veronese, F.M., et al., II Fármaco 54: 497-516, 1999, todas las cuales se incorporan aquí como referencia en su totalidad) .
Formulaciones Farmacéuticas Cuando se emplean como fármacos, los conjugados de ésta invención usualmente son administrados en forma de composiciones farmacéuticas. Esos conjugados pueden ser administrados por una variedad de rutas incluyendo la oral, rectal, transdérmica, subcutánea, intravenosa, intramuscular, sublingual, oftálmica, o inhalación incluyendo la administración por inhalación nasal u oral. Las rutas de administración preferidas incluyen las subcutánea, intravenosa e inhalación. Esas composiciones son preparadas en la forma bien conocida en la técnica farmacéutica y comprenden al menos un conjugado. La invención también proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden un conjugado de acuerdo a la invención, por ejemplo, un conjugado de Fórmula I, en combinación con un compuesto separado el cual es un inhibidor de a4ß7. Esas composiciones también comprenden un soporte o excipiente farmacéuticamente aceptable y pueden ser administradas como se discute en otra parte aquí. Esta invención también incluye otras composiciones farmacéuticas las cuales contienen, como el ingrediente activo, uno o más del conjugado de fórmula I junto con soportes farmacéuticamente aceptables. En la elaboración de las composiciones de ésta invención, el ingrediente activo usualmente es mezclado con un excipiente, diluido por un excipiente o encerrado dentro de un soporte el cual puede estar, en soluciones inyectables estériles, y polvos empaquetados estériles. Para la administración subcutánea, un soporte simple puede comprender una solución estéril de agua, Na2HP04, NaH2P04, y NaCl, en proporciones que proporcionen un pH isotónico y fisiológicamente aceptable, conocida como PBS o solución salina amortiguada con fosfato. Otra opción es administrar los compuestos en solución salina isotónica estéril ajustada a pH fisiológico si es necesario. Otras opciones son conocidas por aquellos expertos en la técnica e incluyen sistemas de solventes mezclados que pueden afectar la velocidad de absorción y exposición total. Esas opciones incluyen sistemas de solventes mezclados que contienen glicerina, Polietilen glicol 400 y aceite de algodón. También de uso potencial son el etanol, N, N' -dimetilacetamida, propilen glicol y alcohol bencílico, todos los cuales pueden ser usados para manipular la permeabilidad y mejorar la hipertonicidad. En la preparación de una formulación, puede ser necesario moler el compuesto activo para proporcionar un tamaño de partícula apropiado antes de combinarlo con otros ingredientes. Si el compuesto activo es sustancialmente insoluble, este comúnmente es movido a un tamaño de partícula de menos de 200. Si el compuesto activo es sustancialmente soluble en agua, el tamaño de partícula normalmente se ajusta moliendo para proporcionar una distribución sustancialmente uniforme en la formulación, por ejemplo aproximadamente malla 40. Algunos ejemplos de excipientes adecuados incluyen a la lactosa, dextrosa, sucrosa, sorbitol, manitol, almidones de acacia, fosfato de calcio, alginatos, tragacanto, gelatina, silicato de calcio, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona, celulosa, agua, jarabe y metil celulosa. Las formulaciones pueden incluir adicionalmente: agentes lubricantes como el talco, estearato de magnesio, y agente mineral; agentes humectantes; agentes emulsificantes y suspensores; agentes preservativos como los hidroxibenzoatos de metilo y propilo, agentes edulcorantes; y agentes saborizantes. Las composiciones de la invención pueden ser formuladas de modo que proporcionen una liberación rápida, sostenida o retrasada del ingrediente activo después de la administración al paciente empleando procedimientos conocidos en la técnica. La administración de los agentes terapéuticos por formulación subcutánea o intravenosa es bien conocida en la industria farmacéutica. Una formulación subcutánea o intravenosa deberá poseer ciertas cualidades además de ser solo una composición en la cual sea soluble el agente terapéutico. Por ejemplo, la formulación deberá promover la estabilidad total de los ingredientes activos, también, la elaboración de la formulación deberá ser barata. Todos esos factores determinan finalmente el éxito y utilidad total de una formulación intravenosa. Otros aditivos accesorios pueden ser incluidos en las formulaciones farmacéuticas de compuestos de la presente invención como los siguientes: solventes: etanol, glicerol, propilen glicol; estabilizadores: EDTA (ácido etilen diamin tetraacético) , ácido cítrico; preservativos antimicrobianos: alcohol bencílico, metil parabeno, propil parabeno; agentes amortiguadores: ácido cítrico/citrato de sodio, tartrato ácido de potasio, tartrato ácido de sodio, ácido acético/ acetato de sodio, ácido maléico/maleato de sodio, ftalato ácido de sodio, ácido fosfórico/fosfato diácido de potasio, ácido fosfórico/fosfato ácido disódico; y modificadores de la tonicidad: cloruro de sodio, manitol, dextrosa. La presencia de un amortiguador es necesaria para mantener el pH acuoso en el intervalo de aproximadamente 4 hasta aproximadamente 8 y, de manera más preferible en el intervalo de aproximadamente 4 hasta aproximadamente 6. el sistema amortiguador es generalmente una mezcla de un ácido débil y una sal soluble del mismo, por ejemplo, citrato de sodio/ácido cítrico; o la sal monocatiónica o dicatiónica de un ácido dibásico, por ejemplo, tartrato ácido de potasio, tartrato ácido de sodio, ácido fosfórico/fosfato diácido de potasio, y ácido fosfórico/fosfato ácido disódico. La cantidad del sistema amortiguador depende (1) del pH deseado; y (2) la cantidad de fármaco. Generalmente, la cantidad de amortiguador usado está en una relación molar de 0 : 5 : 1 a 50: 1 de amortiguador: alendronato (donde las moles de amortiguador se toman como las moles combinadas de los ingredientes del amortiguador, por ejemplo, citrato de sodio y ácido cítrico) de la formulación para mantener el pH del intervalo de 4 a 8 y generalmente, se usa una relación molar de 1:1 a 10:1 de amortiguador (combinado) a fármaco presente.
Un amortiguador útil en la invención es el citrato de sodio/ácido cítrico en el intervalo de 5 a 50 mg por ml de citrato de sodio a 1 a 15 mg por ml de ácido cítrico, suficiente para mantener un pH acuoso de 4-6 de la composición. El agente amortiguador también puede estar presente para evitar la precipitación del fármaco a través de la formación de un complejo de metal soluble con iones metálicos disueltos, por ejemplo, Ca, Mg, Fe, Al, Ba, los cuales pueden exhibirse fuera de los recipientes de vidrio o tapones de caucho o estar presentes en agua de la llave común. El agente puede actuar como un agente completante con el fármaco y producir un complejo de metal soluble que conduzca a la presencia de partículas indeseables. Además, la presencia de un agente, por ejemplo, el cloruro de sodio en una cantidad de aproximadamente 1-8 mg/ml, para ajustar la tonicidad al mismo valor de la sangre humana puede ser requerido para evitar que el hinchamiento o contracción de los eritrocitos tras la administración de la formulación intravenosa conduciendo efectos laterales indeseables como nauseas o diarrea y posiblemente trastornos sanguíneos asociados. En general, la tonicidad de la formulación se iguala a la de la sangre humana la cual está en el intervalo de 282 a 288 mOsm/Kg, y en general es de 285 mOsm/Kg, la cual es equivalente a la presión osmótica correspondiente a una solución a 0.9% de cloruro de sodio. La formulación intravenosa puede ser administrada por inyección intravenosa directa, bolo i.v. o puede ser administrado por infusión por adición a una solución de infusión apropiada como una inyección de cloruro de sodio a 0.9% u otra solución de infusión compatible. Las composiciones pueden ser formuladas en una forma de dosificación unitaria, conteniendo cada dosis de aproximadamente 5 hasta aproximadamente 100 mg, de manera más usual de aproximadamente 10 hasta aproximadamente 30 mg, del ingrediente activo. El término "formas de dosificación unitaria" se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosis unitarias para sujetos humanos y otros mamíferos, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de material activo, calculado para producir el efecto terapéutico deseado, una asociación por un excipiente farmacéutico adecuado. El conjugado es efectivo sobre un intervalo de dosificación amplio y generalmente es administrado en una cantidad farmacéuticamente efectiva. Deberá comprenderse, sin embargo, que la cantidad del conjugado realmente administrado será determinado por el médico, a la luz de las circunstancias relevantes, incluyendo la condición a ser tratada, la ruta de administración elegida, el compuesto real administrado, la edad, peso y respuesta del paciente individual, la severidad de los síntomas del paciente, y similares. Para preparar composiciones sólidas como tabletas, los ingredientes activos principales son mezclados con un excipiente farmacéutico para formar una composición de preformulación sólida que contiene una mezcla homogénea de un compuesto de la presente invención. Cuando se hace referencia a esas composiciones de preformulación como homogéneas, significa que el ingrediente activo está uniformemente disperso a través de la composición, de modo que la composición puede ser subdividida fácilmente en formas de dosificación unitaria igualmente efectiva como tabletas, pildoras y cápsulas. Esta preformulación sólida, es entonces subdividida en formas de dosificación unitaria del tipo descrito anteriormente que contienen de, por ejemplo, 0.1 hasta aproximadamente 500 mg del ingrediente activo de la presente invención. Las tabletas o pildoras de la presente invención pueden ser recubiertas o compuestas de otro modo para proporcionar una forma de dosificación que proporcione la ventaja de una acción prolongada. Por ejemplo, las tabletas o pildoras pueden comprender un componente de dosis interna y dosis externa, estando el último en forma de una envoltura sobre el primero. Los dos componentes pueden ser separados por una capa entérica que sirva para resistir la desintegración en el estómago y permita que el componente interno pase intacto al duodeno o para retardar su liberación. Puede usarse una variedad de materiales como capas o recubrimientos entéricos, como materiales que incluyan un número de ácidos poliméricos y mezclas de ácidos poliméricos con materiales como goma selladora, alcohol cetílico y acetato de celulosa. Las formas líquidas en las cuales las composiciones novedosas de la presente invención pueden ser incorporadas para administrarse oralmente o por inyección incluyen soluciones acuosas, jarabes saborizados de manera adecuada, suspensiones acuosas u oleosas y emulsiones saborizadas con aceites comestibles, aceite de algodón, aceite de ajonjolí, aceite de coco o aceite de cacahuate, así como elíxires y vehículos farmacéuticos similares. Las composiciones para la inhalación o insuflación incluyen soluciones y suspensiones en solventes acuosos u orgánicos, farmacéuticamente aceptables, mezclas de los mismos y polvos. Las composiciones líquidas o sólidas pueden contener excipientes farmacéuticamente aceptables adecuados como se describió supra . Preferiblemente las composiciones son administradas por la vía respiratoria oral o nasal para un efecto local o sistémico. Las composiciones en solventes farmacéuticamente aceptables, preferiblemente pueden ser nebulizadas durante el uso de gases inertes. Las soluciones nebulizadas pueden ser respiradas directamente del dispositivo nebulizador o el dispositivo nebulizador puede ser unido a un soporte de máscara facial, o una máquina respiradora de presión positiva intermitente. Las composiciones en solución, suspensión o polvo pueden ser administradas, de manera preferible, oral o nasalmente, desde dispositivos que proporcionen la formulación en una forma apropiada. Para la administración por inhalación o insuflación, se prefiere que el peso molecular total del conjugado sea desde aproximadamente 10,000 Daltons y 70,000 Daltons, de manera más preferible entre aproximadamente 20,000 Daltons y 45,000 Daltons.
Conjugados poliméricos Los compuestos de esta invención como son formulados y administrados son conjugados poliméricos. Se anticipa que los conjugados polimericos proporcionen beneficios sobre los polímeros no conjugados, como una mejor solubilidad y estabilidad in vivo . Por lo tanto, puede ser empleada una sola molécula polimérica para conjugarse con los compuestos de la presente invención, aunque también se contempló que puede unirse más de una molécula polimérica también, típicamente a través de un soporte. Los soportes conjugados de la presente invención pueden encontrar utilidad en aplicaciones tanto in vivo así como no in vivo . Adicionalmente, deberá reconocerse que la conjugación del polímero puede utilizar cualesquier otros grupos, entidades, u otras especies conjugadas, según sea apropiado para la aplicación del ejemplo final. Como un ejemplo, puede ser ventajoso en algunas aplicaciones funcionales usar el polímero para volverlo activo y permitir que se conjugue a un compuesto de fórmula II y para mejorar las diferentes propiedades o características del material conjugado total. En consecuencia, el polímero puede contener cualquier funcionalidad, grupos repetidos, enlaces u otras estructuras constituyentes que no impliquen la eficacia de los compuestos conjugados en la presente invención para su propósito pretendido. Los polímeros ilustrativos que son empleados de manera útil para lograr esas características deseables son descritos supra, así como la PCT WO 01/54690 (de Zheng et al) incorporada por referencia aquí en su totalidad. El polímero puede ser acoplado a los compuestos de la presente invención (preferiblemente vía una porción enlazante) para formar enlaces estables que no sean significativamente escindibles por enzimas humanas. Generalmente, para que un enlace no sea "significativamente" escindible requiere que no más de aproximadamente 20% de los enlaces que conectan el polímero y los compuestos de la presente invención al cual esté ligado el polímero, sean escindidos dentro de un periodo de 24 horas, de acuerdo a lo medido por métodos estándar en la técnica, incluyendo, pero sin limitarse a la cromatografía de líquidos de alta presión (CLAP) . Generalmente, los compuestos de esta invención comprenden al menos aproximadamente 2 compuestos de fórmula II unidos a un polímero. La cantidad final es un equilibrio entre la maximización del grado de reacción mientras que la minimización de modificaciones no específicas del producto, y al mismo tiempo, que define la química que mantendrá la actividad óptima, mientras que al mismo tiempo la optimización de la vida media de los compuestos de la presente invención. Preferiblemente, al menos aproximadamente 50% de la actividad biológica de los compuestos de la presente invención se retiene, y más preferible se retiene el 100%. Como se hizo notar anteriormente en la práctica preferida de la presente invención, los residuos de polialquilen glicol de alquil de C2-C4 polialquilen glicoles, preferiblemente polietilen glicoles (PEG) , o residuos de poli (oxi) alquilen glicol de esos glicoles son incorporados de manera ventajosa en los sistemas poliméricos de interés. De este modo, el polímero al cual los compuestos de la presente invención son unidos pueden ser un homopolímero de polietilen glicol (PEG) o es un poliol polioxietilado, siempre que en todos los casos el polímero sea soluble en agua a temperatura ambiente. Los ejemplos no limitantes de esos polímeros incluyen a los homopolímeros de óxido de polialquileno como el PEG o polipropilen glicoles, glicoles polioxietilenados, copolímeros de los mismos y copolímeros de bloques de los mismos, siempre que la solubilidad en agua del copolímero de bloque se mantenga. Los ejemplos de polioles polioxietilados incluyen, pero no se limitan a, glicerol polioxietilado, sorbitol polioxietilado, glucosa polioxietilada o similares. La estructura de glicerol del glicerol polioxietilado es la misma estructura encontrada de manera natural en, por ejemplo, animales, y humanos en mono-, di- y triglicéridos. Por lo tanto, esta ramificación no necesariamente se observaría como un agente extraño en el cuerpo. Aquellos expertos en la técnica reconocerán que lo anterior es una lista meramente ilustrativa y que todos los materiales poliméricos que tienen las cualidades descritas aquí son contemplados. El polímero no necesita tener ningún peso molecular particular, pero se prefiere que el peso molecular esté entre aproximadamente 100 y 100,000, de manera preferible de aproximadamente 10,000 a 80,000; de manera más preferible de aproximadamente 20,000 a aproximadamente 70,000. En particular, tamaños de 20,000 o más son más efectivos para prevenir la pérdida del producto debido a la filtración en los riñones. El derivado de PEG significa un polímero de polietilen glicol en el cual uno o ambos de los grupos hidroxilo terminales encontrados en el polietilen glicol en sí han sido modificados. Los ejemplos de modificaciones adecuadas incluyen el reemplazo de uno o ambos grupos hidroxilo con grupos funcionales alternativos, los cuales pueden ser protegidos o desprotegidos, con ligandos de bajo peso molecular, o con otra macromolécula o polímero. La modificación de los grupos hidroxilo terminales en el polietilen glicol puede ser lograda haciendo reaccionar el polietilen glicol con compuestos que comprenden grupos funcionales reactivos complementarios, incluyendo grupos funcionales los cuales pueden experimentar una reacción con los grupos hidroxilo en polietilen glicol. Los derivados de PEG de los compuestos de esta invención pueden contener uno o más sustituyentes de polietilen glicol (PEG) unidos covalentemente a éstos por un grupo enlazante. Los ejemplos de formulación siguientes ilustran las composiciones farmacéuticas de la presente invención.
Ejemplo de Formulación 1 Se prepararon cápsulas de gelatina dura que contienen los siguientes ingredientes: Ingrediente Cantidad (mg/cápsula) Ingrediente activo 30.0 Almidón 305.0 Estearato de magnesio 5.0 Los ingredientes anteriores son mezclados y llenados en cápsulas de gelatina dura en cantidades de 340 mg.
Ejemplo de Formulación 2 Se preparó una fórmula de tableta usando los siguientes ingredientes: Ingrediente Cantidad ( g/tableta) Ingrediente activo 25.0 Celulosa, microcristalina 200.0 Dióxido de silicio coloidal 10.0 Acido esteárico 5.0 Los componentes son mezclados y comprimidos para formar tabletas, cada una con un peso de 240 mg.
Ejemplo de Formulación 3 Se preparó una formulación para inhalación en forma de polvo seco que contenía los siguientes componentes: Ingrediente % Peso Ingrediente activo 5 Lactosa 95 El ingrediente activo es mezclado con la lactosa y la mezcla es agregada a un aparato inhalador de polvo seco.
Ejemplo de Formulación 4 Se prepararon tabletas, cada una de las cuales contiene 30 mg de ingrediente activo, como sigue: Ingrediente Cantidad (mg/tableta) Ingrediente activo 30.0 mg Almidón 45.0 mg Celulosa microcristalina 35.0 mg Polivinilpirrolidona 4.0 mg (como una solución al 10% en agua estéril) Carboximetil almidón sódico 4.5 mg Estearato de magnesio 0.5 mg Talco 1.0 mg Total 120 mg El ingrediente activo, el almidón y la celulosa se hacen pasar a través de un tamiz US de malla No. 20 y se mezclan perfectamente. La solución de polivinilpirrolidona es mezclada con los polvos resultantes, los cuales se hacen pasar y entonces a través de un tamiz US de malla 16. Los granulos así producidos son secados de 50°C a 60°C y se hacen pasar a través de un tamiz US de malla 16. El carboximetil almidón sódico, estearato de magnesio y talco previamente pasados a través de un tamiz US de malla No. 30 se agregan entonces a los granulos los cuales, después de ser mezclados, son comprimidos en una máquina tableteadora para producir tabletas cada una con un peso de 120 mg.
Ejemplo de Formulación 5 Se produjeron cápsulas, cada una con un contenido de 40 mg de un medicamento como sigue Ingrediente Cantidad (mg/cápsula) Ingrediente activo 40.0 mg Almidón 109.0 mg Estearato de magnesio 1.0 mg Total 150.0 mg El ingrediente activo, almidón y estearato de * magnesio son mezclados, pasados a través de un tamiz US de malla No. 20, y llenados, en cápsulas de gelatina dura en cantidades de 150 mg.
Ejemplo de Formulación 6 Se prepararon supositorios, cada uno con un contenido de 25 mg de ingrediente activo como sigue: Ingrediente Cantidad Ingrediente activo 25 mg Glicéridos de ácido graso saturado para 2,000 mg El ingrediente activo se hace pasar a través de un tamiz US de malla No. 60 y se suspende en los glicéridos de ácido graso saturado previamente fundidos usando el calor mínimo necesario. La mezcla es entonces vertida en un molde para supositorios con una capacidad nominal de 2.0 g y se deja enfriar.
Ejemplo de Formulación 7 Se prepararon suspensiones, cada una con un contenido de 50 mg de medicamento por 5.0 ml como sigue: Ingrediente Cantidad Ingrediente activo 50.0 mg Goma de Xantana 4.0 mg Carboximetil celulosa sódica (11%) Celulosa microcristalina (89%) 50.0 mg Sucrosa 1.75 g Benzoato sódico 10.0 mg Sabor y color c.b. Agua purificada para 5.0 ml El ingrediente activo, sucrosa y goma de xantana son mezclados, se hacen pasar a través de un tamiz US No. 10, y entonces se mezclan con una solución previamente preparada de la celulosa microcristalina y la carboximetil celulosa sódica en agua. El benzoato de sodio, sabor y color se diluyen con algo de agua y se agregan con agitación. Entonces se agrega suficiente agua para producir el volumen requerido.
Ejemplo de Formulación 8 Ingrediente Cantidad (mg/cápsula) Ingrediente activo 15.0 mg Almidón 407.0 mg Estearato de magnesio 3.0 mg Total 425.0 mg El ingrediente activo, almidón y estearato de magnesio son mezclados, se hacen pasar a través de un tamiz US de malla No. 20, y se llenan en cápsulas de gelatina dura en cantidades de 425.0 mg.
Ejemplo de Formulación 9 Una formulación subcutánea puede ser preparada como sigue : Ingrediente Cantidad Ingrediente activo 50 mg.mL mg Solución salina amortiguada con fosfato 1.0 ml Ejemplo de Formulación 10 Una formulación tópica puede ser preparada como sigue : Ingrediente Cantidad Ingrediente activo 1-10 g Cera emulsificante 30 g Parafina líquida 20 g Parafina blanda blanca a 100 g La parafina blanda blanca es calentada hasta ser fundida. La parafina líquida y la cera emulsificante son incorporadas y agitadas hasta que se disuelven. El ingrediente activo es agregado y se continúa agitando hasta dispersar. La mezcla es entonces enfriada hasta solidificar.
Ejemplo de Formulación 11 Una formulación intravenosa puede ser preparada como sigue: Ingrediente Cantidad Ingrediente activo 250 mg Solución salina isotónica 100 ml Otra formulación preferida empleada en los métodos de la presente invención emplea dispositivos de liberación transdérmica ("parches") . Esos parches transdérmicos pueden ser usados para proporcionar una infusión continua o discontinua de los compuestos de la presente invención en cantidades controladas. La construcción y uso de los parches transdérmicos para proporcionar los agentes farmacéuticos es bien conocida en la técnica. Véase, por ejemplo, la Patente Estadounidense 5,023,252, expedida en Junio 11, 1991, incorporada aquí como referencia. Esos parches pueden ser construidos para la liberación continua, pulsátil o a demanda de los agentes farmacéuticos. Frecuentemente, será deseable o necesario introducir la composición farmacéutica al cerebro, ya sea directa o indirectamente. Las técnicas directas usualmente implican la colocación de un catéter para proporcionar el fármaco en el sistema ventricular del anfitrión desviando la barrera sanguínea-cerebral . Uno de esos sistemas de liberación implantables usado para el transporte de factores biológicos a regiones anatómicas específicas del cuerpo se describe en la Patente Estadounidense 5,011,472 la cual se incorpora aquí como referencia. Las técnicas indirectas, las cuales son generalmente preferidas, usualmente implican formular las composiciones para proporcionar la latencia del fármaco por conversión de fármacos hidrofílicos a fármacos solubles en lípidos. La latencia es generalmente lograda a través del bloqueo de los grupos hidroxi, carbonilo, sulfato y amina primaria presentes sobre el fármaco para volver el fármaco más soluble en lípidos y permitir su transporte a través de la barrera sanguínea-cerebral. De manera alternativa, la liberación de fármacos hidrofílicos puede ser mejorada por infusión intraarterial de soluciones hipertónicas las cuales pueden abrir transitoriamente la barrera sanguíneo-cerebral . Otras formulaciones adecuadas para usarse en la presente invención pueden encontrarse en Remington's Pharmaceutical Sciences, Mace Publishing Company, Philadelphia, PA, 17th ed. (1985) . Como se hizo notar anteriormente, los compuestos descritos aquí son adecuados para ser usados en una variedad de sistemas de liberación de fármacos descritos anteriormente. Adicionalmente, y para mejorar la vida media en suero in vivo del compuesto administrado, los compuestos pueden ser encapsulados, introducidos en el lumen de los liposomas, preparados como un coloide, o pueden ser empleadas otras técnicas convencionales que proporcionen una vida media en suero prolongada de los compuestos. Se encuentra disponible una variedad de métodos para preparar liposomas, como se describe, por ejemplo, en Szoka, et al., Patentes Estadounidenses Nos. 4,235,871, 4,501,728 y 4,837,028 cada una de las cuales se incorpora aquí como referencia.
Utilidad Los conjugados de esta invención son antagonistas de alfa4 betal (VLA-4 ) . Algunos también tienen al menos una afinidad parcial por las integrinas alfa4 beta7, haciendo los inhibidores mezclados de la integrina alfa4. Los conjugados proporcionan mejor retención in vivo en comparación con compuestos no conjugados. La mejor retención de un conjugado dentro del cuerpo da como resultado que se requieran dosis más bajas del fármaco, lo cual a su vez da como resultado algunos efectos laterales y reduce la probabilidad de toxicidad. Además, la formulación de fármaco puede ser administrada menos frecuentemente al paciente logrando a la vez un efecto terapéutico similar o mejor. Los conjugados de esta invención tienen mejor inhibición, in vivo, de la adhesión de los leucocitos a las células endoteliales mediada por la inhibición de la unión de alfa4 betal o alfa4 beta7 a los receptores celulares como el VCAM-1, fibronectina y MadCAM. Preferiblemente, los conjugados de esta invención pueden ser usados, por ejemplo, por infusión, o por inyección subcutánea o administración oral, para el tratamiento de enfermedades mediadas por alfa4 betal y/o alfa4 beta7 o, en términos generales, la adhesión de los leucocitos. Los conjugados de la invención pueden ser usados para tratar una variedad de trastornos cerebrales inflamatorios, especialmente trastornos del sistema nervioso central en los cuales el mecanismo de adhesión del endotelio/leucocitos de como resultado la destrucción o de otro modo del tejido cerebral sano. De este modo, los conjugados de la invención pueden ser usados, por ejemplo, por el tratamiento de la encefalomielitis autoinmune experimental (EAE), esclerosis múltiple (MS) , meningitis, y encefalitis. Los conjugados de la invención también pueden ser usados para tratar trastornos y enfermedades debidas a daño tisular en otros sistemas de órganos, es decir, donde el daño tisular también ocurra vía el mecanismo de adhesión que de cómo resultado la migración o activación de los leucocitos. Los ejemplos de esas enfermedades en pacientes mamíferos son enfermedades inflamatorias como el asma, enfermedad de Alzheimer, aterosclerosis, demencia asociada al SIDA, diabetes (incluyendo la diabetes de aparición juvenil aguda) , enfermedad del intestino inflamatorio incluyendo la colitis ulcerativa y enfermedad de Crohn) , artritis reumatoide, rechazo de transplante de tejidos, metástasis tumoral, apoplejía u otros traumas cerebrales, nefritis, retinitis, dermatitis atópica, psoriasis, isquemia miocárdica, daño pulmonar agudo mediado por leucocitos como el que ocurre en el síndrome de distensión repiratoria adulta. Otras condiciones de enfermedad adicionales que pueden ser tratadas usando los conjugados de la invención incluyen al eritema nodoso, conjuntivitis alérgica, neuritis óptica, uveitis, rinitis alérgica, espondilitis anquilosante, artritis psóriotica, vasculitis, síndrome de Reiter, lupus eritematoso sistémico, esclerosis sistémica progresiva, polimiositis, dermatomiositis, granulomatosis de Wegner, aortitis, sarcoidosis, linfocitopenia, arteritis temporal, pericarditis, miocarditis, insuficiencia cardiaca congestiva, poliarteritis nodosa, síndromes de hipersensibilidad, alergias, síndromes hipereosinofílicos, síndrome de Churg-Strauss, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, pneumonitis por hipersensibilidad, hepatitis activa crónica, cistitis intersticial, deficiencia endocrina autoinmune, cirrosis biliar primaria, anemia aplástica autoinmune, hepatitis persistente crónica y tiroiditis. La invención también proporciona métodos para tratar un estado de enfermedad causado o exacerbado al menos en parte por la unión de los leucocitos mediada por la integrina alfa 4 en un paciente, métodos los cuales comprenden la coadministración efectiva de un conjugado de la invención, por ejemplo un conjugado de fórmula I, y una cantidad efectiva de un compuesto separado el cual es inhibidor de af? . La coadministración puede ser llevada a cabo de manera simultánea o secuencial. Por ejemplo, la administración del conjugado de la invención puede preceder a la administración del inhibidor de af? por minutos u horas. De manera alternativa, el inhibidor de af? puede ser administrado antes del conjugado de la invención. Los modelos in vivo apropiados para demostrar la eficacia del tratamiento en respuestas inflamatorias incluyen la EAE (encefalomielitis autoinmune experimental) en ratones, ratas, cobayos, o primates, así como otros modelos inflamatorios que dependen de las integrinas OÍ4. La enfermedad del intestino inflamatorio es un término colectivo para dos enfermedades similares conocidos como enfermedad de Crohn o colitis ulcerativa. La enfermedad de Crohn es una enfermedad inflamatoria ulceroconstrutiva, idiopática caracterizada por implicación transneural delimitada y típica de manera aguda de todas las capas de la pared del intestino por una reacción inflamatoria granulomatosa. Cualquier segmento del tracto gastrointestinasl, desde la boca hasta el ano puede estar implicada, aunque la enfermedad más comúnmente afecta al ileo terminal y/o el colon. La colitis ulcerativa es una respuesta inflamatoria en gran medida limitada a la mucosa y submucosa colónica. Los linfocitos y macrófagos son numerosos en lesiones de la enfermedad del intestino inflamatorio y pueden contribuir a la lesión inflamatoria. El asma es una enfermedad caracterizada por un incremento en la respuesta del árbol traqueobronquial a varios estímulos que potencian la constricción paroxismal de las vías aéreas bronquiales. Los estímulos producen la liberación de varios mediadores de la inflamación de los mastocitos recubiertos con IgE incluyendo la histamina, factores quimiotácticos eosinofílicos y neutrofílicos, leucotrienos, prostaglandina y factor activador de las plaquetas. La liberación de esos factores recluta basófilos, eosinófilos y neutrofilos, los cuales producen lesiones inflamatorias . La aterosclerosis es una enfermedad de las arterias (por ejemplo, coronaria, carótida, aorta e iliaca) . La lesión básica, el ateroma, consiste de un aumento de placa focal dentro de la intima, que tiene un núcleo de lípidos y una capa fibrosa cubriéndolo. Los ateromas comprometen el flujo sanguíneo arterial y debilitan a las arterias afectadas. Los infartos miocárdicos y cerebrales son la consecuencia mayor de esta enfermedad. Los macrófagos y leucocitos son rejuntados en los arteromas y contribuyen al daño inflamatorio . La artritis reumatoide es una enfermedad inflamatoria recurrente, crónica, que causa principalmente daño y destrucción de las articulaciones. La artritis reumatoide usualmente afecta primero a articulaciones pequeñas de las manos y los pies, pero entonces puede implicar a las muñecas, codos, tobillos y rodillas. La artritis resulta de la interacción de las células sinoviales con los leucocitos que se infiltran desde la circulación hacia el revestimiento sinovial de las articulaciones. Véase, por ejemplo, Paul, Immu?ology (3ra edición, Raven Press, 1993) . Otra indicación para los conjugados de esta indicación es en el tratamiento del rechazo de órganos o injertos mediado por VLA-4. Durante años recientes ha habido una mejora considerable en la eficiencia de una técnica quirúrgica para transplantar tejidos y órganos como la piel, riñon, hígado, el corazón, pulmón, páncreas y médula ósea. Quizá el problema sobresaliente principal es la ausencia de agentes satisfactorios para inducir inmunotolerancia en el receptor al aloinjerto u órgano transplantado. Cuando son transplantadas células u órganos alogénicos a un anfitrión (es decir, el donador y el donante son individuos diferentes de la misma especie) , el sistema inmune del anfitrión probablemente monte una respuesta inmune a los antígenos ajenos en el transplante (enfermedad del anfitrión contra injerto) que conduce a la destrucción del tejido transplantado. Las células CD8+, células CD4 y monocitos están todos implicados en el rechazo de tejidos transplantados. Los conjugados de esta invención que se unen a la integrina alfa-4 son útiles, in ter alia , para bloquear las respuestas inmunes inducidas por aloantígenos en el donante previniendo por lo tanto que esas células participen en la destrucción de tejido u órgano transplantado. Véase, por ejemplo, Paul et al., Transplant International 9, 420-425 (1996); Georczynski et al., Immunology 87, 573-580 (1996); Georcyznski et al., Transplant. Im unol. 3, 55-61 (1995); Yang et al., Transplantation 60, 71-76 (1995); Anderson et al., APMIS 102, 23-27 (1994). Un uso relacionado para los conjugados de esta invención que se unen a VLA-4 es en la modulación de la respuesta inmune implicada en la enfermedad "injerto contra anfitrión" (GVHD). Véase, por ejemplo Schlegel et al., J. Immunol. 155, 3856-3865 (1995). La GVHD es una enfermedad potencialmente fatal que ocurre cuando son transferidas células inmunológicamente competentes a un receptor alogénico. En esta situación, las células inmunocompetentes del donador pueden atacar los tejidos del receptor. Los tejidos de piel, epitelio del intestino e hígado son con frecuencia blancos y pueden ser destruidos durante el curso de la GVHD. La enfermedad presenta un problema especialmente severo cuando está siendo transplantado tejido inmune, como en el transplante de médula ósea; pero ha sido reportada una GVHD menos severa en otros casos también, incluyendo los transplantes de corazón e hígado. Los agentes terapéuticos de la presente invención son usados, in ter alia para bloquear la activación de las células T al donador interfiriendo por lo tanto con su capacidad para lisar células blanco en el anfitrión. Las formulaciones de la presente invención son especialmente útiles en el tratamiento de la esclerosis múltiple, artritis reumatoide y asma. Un uso adicional de los conjugados de esta invención es la inhibición de la metástasis tumoral. Se ha reportado que varias células tumorales expresan VLA-4 y los compuestos que se unen a VLA-4 bloquean la adhesión de esas células a las células endoteliales. Steinback et al., Urol. Res. 23, 175-83 (1995); Orosz et al., Int. J. Cáncer 60, 867-71 (1995); Freedman et al., Leuk. Lymphoma 13, 47-52 (1994); Okahara et al., Cáncer Res. 54, 3233-6 (1994). Los compuestos que tienen actividad biológica deseada pueden ser modificados según sea necesario para proporcionar las propiedades deseadas como mejores propiedades farmacológicas (por ejemplo estabilidad in vivo, biodisponibilidad) , o la capacidad de ser detectados en aplicaciones de diagnóstico. La estabilidad puede ser ensayada en una variedad de formas como midiendo la vida media de las proteínas durante la incubación con peptidasas o plasma o suero humano. Han sido descritos numerosos de esos ensayos de la estabilidad de proteínas (véase, por ejemplo, Verhoef et al., Eur. J. Drug Metab. Pharmacokinet , 1990, 15(2) :83-93) . Un uso adicional de los conjugados de esta invención es en el tratamiento de la esclerosis múltiple. La 5 esclerosis múltiple es una enfermedad autoinmune neurológica progresiva que afecta a un estimado de 250,000 a 350,000 personas en los Estados Unidos. Se piensa que la esclerosis múltiple es el resultado de una reacción autoinmune específica en la cual ciertos leucocitos atacan e inician la destrucción de mielina, el revestimiento aislante que cubre las fibras nerviosas. En un modelo animal para la esclerosis múltiple, anticuerpos monoclonales murinos dirigidos contra VLA-4 han mostrado bloquear la adhesión de los leucocitos al endotelio, y de este modo prevenir la inflamación del sistema nervioso central y la parálisis en los animales16. Las composiciones farmacéuticas de la invención son adecuadas para usarse en una variedad del sistema de liberación de fármaco. Las formulaciones adecuadas para usarse en la presente invención se encuentran en Remington's Pharmaceutical Sciences, Mace Publishing Company, Philadelphia, PA, 17th ed. (1985) . La cantidad administrada al paciente variará dependiendo de lo que sea administrado, el propósito de la administración, como profilaxis o terapia, el estado del . paciente, la forma de administración, y similares. En aplicaciones terapéuticas, las composiciones son administradas a un paciente que ya padece una enfermedad en una cantidad suficiente para curar o al menos contrarrestar parcialmente los síntomas de la enfermedad y sus complicaciones. Una cantidad adecuada para lograr eso se define como una "dosis terapéuticamente efectiva". Las cantidades efectivas para este uso dependerán de la condición de la enfermedad que esté siendo tratada así como del juicio del clínico que preste la atención dependiendo de factores como la severidad de la inflamación, peso y condición general del paciente, y similares. Las composiciones administradas en pacientes están en la forma de las composiciones farmacéuticas descritas anteriormente. Esas composiciones pueden ser esterilizadas por técnicas de esterilización convencionales, o pueden ser filtradas de manera estéril. Las soluciones acuosas resultantes pueden ser empaquetadas para su uso, o liofilizadas, siendo la preparación liofilizada combinada con un soporte acuoso estéril antes de la administración. La dosis terapéutica de los conjugados de la presente invención variará de acuerdo a, por ejemplo, el uso particular para el cual se dio el tratamiento, la forma de administración del conjugado, la salud y condición del paciente, y el juicio del médico que haga la prescripción. Por ejemplo, para la administración intravenosa, la dosis típica estará en el intervalo de aproximadamente 20 µq hasta aproximadamente 2000 µq por kilogramo de peso corporal, preferiblemente de aproximadamente 20 µq hasta aproximadamente 500 µq, de manera más preferible de aproximadamente 100 µq hasta aproximadamente 300 µq por kilogramo de peso corporal. Los intervalos de dosis adecuados para la administración intranasal son, de manera general, de aproximadamente 0 . 1 µq a 1 mg por kilogramo de peso corporal. La dosis efectiva puede ser extrapolada de las curvas de dosis-respuesta derivadas de sistemas de prueba con modelos in vi tro o con animales. Los conjugados de esta invención también son capaces de unirse a o antagonizar las acciones de las integrinas a?ßi , oí ±, o f? , ot?ßz , af? , (aunque las afi , y OígY son preferidas en esta invención. En consecuencia, los conjugados de esta invención son también para prevenir y revertir los síntomas, trastornos o enfermedades inducidas por la unión de esas integrinas a sus ligandos respectivos. Por ejemplo, la Publicación Internacional No. WO 98/53817, publicada en Diciembre 3, 1998 (la descripción de la cual se incorpora aquí como referencia en su totalidad) y las referencias citadas ahí describen trastornos mediados por un af? . Esta referencia también describe un ensayo para determinar el antagonismo de la unión dependiente de af? a la proteína de fusión VCAM-Ig.
Adicionalmente, los compuestos que se unen a las integrinas oíd/?2 y af? son particularmente útiles para el tratamiento de asma y enfermedades pulmonares relacionadas.
Véase, por ejemplo M. H. Grayson et al., J. Exp . Med. 1998, 788(11) 2187-2191. Los compuestos que se unen a la integrina af? son útiles para el tratamiento de lupus eritematoso sistémico (véase, por ejemplo, M. Pang et al., Arthri tis Rheum . 1998, 41(8), 1456-1463); enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa y enfermedad del intestino inflamatorio (IBD) (véase, por ejemplo, D. Elewaut et al., Scand J.
Gastroenterol 1998, 33(7) 743-748); síndrome de Sjogren (véase, por ejemplo, U. Kroneld et al., Scand J.
Gastroen terol 1998, 27(3), 215-218); y artritis reumatoide (véase, por ejemplo, Scand J. Gastroen terol 1996, 44(3), 293-298) . Y los compuestos que se unen a pueden ser útiles para prevenir la fertilización (véase, por ejemplo, H. Chen et al., Chem . Biol . 1999, 6, 1-10). En otro aspecto de la invención, los conjugados y composiciones descritos aquí pueden ser usados para inhibir la migración de células inmunes del flujo sanguíneo al sistema nervioso central en el caso de, por ejemplo, la esclerosis múltiple, o a áreas lo cual da como resultado destrucción inducida por inflamación de la mielina. Preferiblemente, esos reactivos inhiben la migración de células inmunes en una forma que inhibe la desmielinización y que puede promover además la remielinización. Los reactivos pueden prevenir la desmielinización y promover la remielinización del sistema nervioso central para factores metabólicos congénitos en los cuales las células inmunes infiltrantes afecten el desarrollo del revestimiento de mielina, principalmente en el SNC. Los reactivos preferiblemente también reducen la parálisis cuando son administrados a un sujeto con parálisis inducida por una enfermedad o condición desmielinizante. Las enfermedades inflamatorias que están incluidas para el tratamiento de las composiciones, conjugados y métodos descritos aquí incluyen generalmente condiciones relacionadas con la desmielinización. Histológicamente, las anormalidades de la mielina son la desmielinización o desmielinizantes. La desminelinización implica la destrucción de la mielina. La desmielinización se refiere a la formación o mantenimiento defectuoso de la mielina resultante de la disfunción de los oligodendrocitos. Preferiblemente, las composiciones y métodos descritos aquí se contemplaron para tratar enfermedades y condiciones relacionadas con la desmielinización y ayudar con la remielinización. Las enfermedades o condiciones adicionales contempladas para el tratamiento incluyen la meningitis, encefalitis, y daños y condiciones de la médula espinal las cuales generalmente incluyen desmielinización como resultado de una respuesta inflamatoria. Los conjugados, composiciones y métodos descritos aquí no están dirigidos a métodos y condiciones donde exista, por ejemplo, un defecto genético que conduzca a una formación inapropiada de mielina, por ejemplo la desmielinización. Las composiciones, conjugados y cócteles descritos aquí se contemplaron para usarse en el tratamiento de condiciones y enfermedades asociadas con la desmielinización. Las enfermedades y condiciones que implican desmielinización incluyen, pero no se limitan a, la esclerosis múltiple, trastornos metabólicos congénitos (por ejemplo, fenilcetonuria, enfermedad de Tay-Sachs, enfermedad de Niemann-Pick, enfermedad de Gaucher, síndrome de Hurler, enfermedad de Krabbe y otras leucodistrofias) , neuropatías con mielinización anormal (por ejemplo, Guillain Barré, polineuropatía desmielinizante inmunocrónica (CIDP) , CIDP multifocal, síndrome anti-MAG, síndrome de GALOP, síndrome de anticuerpo anti-sulfátido, síndrome de anticuerpo anti-GM2, síndrome de POEMS, perineuritis, síndrome de anticuerpo IgM anti-GDlb) , desmielinización relacionada con fármacos (por ejemplo, causada por la administración de cloroquina, FK506, perhexilina, procainamida, y zimeldina) , otras condiciones desmielinizantes hereditarias (por ejemplo, glicoproteína deficiente en carbohidratos, síndrome de Cockayne, hipomielinización congénita, distrofia congénita muscular, enfermedad de Farber, síndrome de Marinesco-Sjogren, leucodistrofia metacromática, enfermedad de Pelizaeus- Merzbacher, enfermedad de Refsum, condiciones relacionadas con los priones y enfermedad de Salla) y otras condiciones desmielinizantes (por ejemplo, meningitis, encefalitis o daño de la médula espinal) o enfermedades desmielinizantes. Existen varios modelos de enfermedades que pueden ser usados para estudiar esas enfermedades in vivo . Por ejemplo, los modelos en animales incluyen pero no se limitan a: Tabla III Modelo de la Enfermedad Especies EAE Ratón, rata , cobayo EAE inducida por mielina-glicoproteína Rata oligodendrocítica (MOG) Modelo transgénico de desmielinización Ratón con TNF-a Esclerosis Múltiple La enfermedad desmielinizante más común es la esclerosis múltiple (MS por sus siglas en Inglés) , pero muchos otros trastornos metabólicos e inflamatorios pueden dar como resultado una mielinización deficiente o anormal. La MS es una enfermedad neurológica crónica, la cual aparece al inicio de la edad adulta y progresa hasta una discapacidad significativa en la mayoría de los casos. Existen aproximadamente 350,000 de MS en los Estados Unidos. Fuera del trauma, la MS es la causa más frecuente de discapacidad neurológica al principio o a la mitad de la edad adulta. La causa de la MS aún no es determinada. La MS se caracteriza por inflamación crónica, desmielinización y gliosis (cicatrización) . La desmielinización puede dar como resultado efectos negativos o positivos sobre la conducción axonal. Las anormalidades de conducción positiva incluyen aletargamiento de la conducción axonal, bloqueo de la condición variable que ocurre en presencia de trenes de impulsos de alta frecuencia pero no baja o un bloqueo completo de la conducción. Las anormalidades de conducción positiva incluyen generación de impulsos ectópicos, espontáneamente o después de tensión mecánica y "avance anormal" entre axones desmielinizados . Se ha observado que las células T reactivas contra las proteínas de la mielina, ya sea la proteína básica de la mielina (MBP) o la proteína proteolipídica (PLP) media la inflamación del CNS en la encefalomielitis alérgica experimental. También han sido observados pacientes que tienen niveles elevados de inmunoglobulina (Ig) en el SNC. Además es posible que sea observado algo de daño tisular en la MS mediada por productos de citocina de las células T activadas, macrófagos o astrocitos. Hoy en día, el 80% de los pacientes diagnosticados con MS viven 20 años después de la aparición de la enfermedad. Las terapias para manejar la MS incluyen: (1) tratamiento dirigido a la modificación del curso de la enfermedad, incluyendo el tratamiento de la exacerbación aguda y dirigida a supresión a largo plazo de la enfermedad; (2) tratamiento de los síntomas de la MS; (3) prevención y tratamiento de complicaciones médicas; y (4) administración de los problemas personales y sociales secundarios. La aparición de la MS puede ser dramática o moderada de modo que haga que un paciente no busque atención médica. Los síntomas más comunes incluyen debilidad en uno o más de los miembros, confusión visual debida a neuritis óptica, perturbaciones sensoriales, diplopia y ataxia. El curso de la enfermedad puede ser estratificado en tres categorías principales: (1) MS recurrente, (2) MS progresiva crónica, y (3) MS inactiva. La MS recurrente se caracteriza por ataques recurrentes de disfunción neurológica. Los ataques de la MS generalmente evolucionan durante dias hasta semanas y pueden ser seguidos por una recuperación completa, parcial o sin recuperación. La recuperación de los ataques generalmente ocurre dentro de semanas a varios meses del pico de los síntomas, aunque rara vez alguna recuperación puede continuar por 2 años o más.
La MS progresiva crónica da como resultado un empeoramiento gradualmente progresivo sin periodos de estabilización o recaída. De esta forma se desarrolla en pacientes con una historia anterior de MS recurrente, aunque en el 20% de los pacientes, no pueden recordarse recaídas. Las recaídas agudas también pueden ocurrir durante el curso progresivo. Una tercera forma es la MS inactiva. La MS inactiva se caracteriza por un déficit neurológico fijo de magnitud variable. La mayoría de los pacientes con MS inactiva tienen una historia temprana de MS recurrente. El curso de la enfermedad también depende de la edad del paciente. Por ejemplo, los factores de pronóstico favorable incluyen la aparición temprana (excluyendo la niñez) , un curso recurrente de poca incapacidad residual 5 años después de la aparición. En contraste, un diagnóstico pobre está asociado con una edad de aparición tardía (por ejemplo, 40 años o más) y un curso progresivo. Esas variables son independientes, puesto que la MS crónica progresiva tiende a comenzar a una edad posterior a la MS recurrente. La discapacidad 'de la MS progresiva crónica se debe usualmente a la paraplegia o cuadriplegia (parálisis) progresiva en pacientes) . En un aspecto de la invención, los pacientes preferiblemente serán tratados cuando el paciente esté en revisión más que en un estado de recaída de la enfermedad.
El uso a corto plazo de hormona adrenocorticotrópica o corticosteroides orales (por ejemplo, prednisona oral o metilprednisolona intravenosa) es la única medida terapéutica específica para tratar a pacientes con exacerbación aguda de la MS . Las terapias más novedosas para la MS incluyen tratar el paciente con interferón beta-Ib, interferón beta- la, y Copaxone® (anteriormente conocido como copolímero 1). Esos tres fármacos han mostrado reducir significativamente la tasa de recaída de la enfermedad. Esos fármacos son autoadministrados intramuscularmente o subcutáneamente. Sin embargo, ninguna de las modalidades de tratamiento actuales inhiben la desmielinización, pero promueven o permiten una remielinización espontánea o reducen la parálisis. Un aspecto de la invención comprende tratar la MS con agentes descritos aquí solos o en combinación con otras modalidades del tratamiento estándar.
Trastornos Metabólicos Congénitos Los trastornos metabólicos congénitos incluyen a la fenilcetonuria (PKU) y otras aminoacidurias, enfermedad de Tay-Sachs, enfermedad de Niemann-Pick, enfermedad de Gaucher, síndrome de Hurler, enfermedad de Krabbe y otras leucodistrofias que tienen impacto sobre el desarrollo del revestimiento como se describe de manera más completa más adelante.
La PKU es un error heredado del metabolismo causado por una deficiencia en la enzima fenilalanin hidroxilasa. La pérdida de esta enzima da como resultado retardo mental, daño a órganos, postura inusual y puede, en casos de PKU materna, compromete de manera severa el embarazo. Un modelo de estudio de la PKU ha sido descubierto en ratones. Preferiblemente los infartos identificados con PKU son mantenidos con una dieta sin o baja en fenilalanina. Un aspecto de la invención sería combinar esas dietas con los conjugados y composiciones descritas aquí para evitar la desmielinización y remielinizar las células dañadas debido a la PKU. La enfermedad de Tay-Sachs clásica aparece en el sujeto a la edad aproximada de 6 meses y eventualmente dará como resultado la muerte del sujeto a la edad de 5 años. La enfermedad se debe a la carencia de la enzima, hexoaminidasa A (hex A) , la cual es necesaria para degradar ciertas sustancias grasas en las células del cerebro y nerviosas. Las sustancias con ausencia de la enzima se acumulan y conducen a la destrucción de las células nerviosas. Otra forma de deficiencia de la enzima hex A ocurre más tarde en la vida y es conocida como formas de deficiencia de hex A de aparición juvenil crónica y adulta. Los síntomas son similares a aquéllos que caracterizan a la enfermedad de Tay-Sachs clásica. También existe una forma de la deficiencia de la enzima que aparece en la edad adulta. Actualmente existe una cura o tratamiento para la enfermedad/deficiencia, únicamente la medida preventiva de probar ín vi tro el feto para determinar la enfermedad. De este modo, los conjugados y composiciones descritos aquí pueden ser útiles para aliviar o prevenir la destrucción de células nerviosas en esos pacientes. La enfermedad de Niemann-Pick cae en esas tres categorías: la forma infantil aguda, la tipo B es una forma menos común, no neurológica, y la tipo C es una forma bioquímica y genéticamente es distinta de la enfermedad. En un individuo normal, el colesterol celular es importado a los lisosomas para su procesamiento, después de lo cual es liberado. Las células retiradas de sujetos con Niemann-Pick han mostrado estar defectuosas de la liberación de colesterol de los lisosomas. Esto conduce a una acumulación excesiva de colesterol dentro de los lisosomas, produciendo errores de procesamiento. Se ha encontrado que la NPC1 tiene regiones sensibles al esterol conocidas similares a aquéllas en otras proteínas, lo cual sugiere que juega un papel en la regulación del tráfico de colesterol. No han sido identificadas terapias exitosas para las formas del tipo A y C de Neumann-Pick. Para el tipo C, se recomienda a los pacientes seguir una dieta baja en colesterol. De este modo, los conjugados y composiciones descritas aquí pueden ser útiles para aliviar o prevenir la destrucción de las células. La enfermedad de Gaucher es una enfermedad hereditaria causada por una mutación genética. Normalmente, este gen es responsable de una enzima llamada glucocerebrosidasa que necesita el cuerpo para degradar grasa, glucocerebrósido. En pacientes con enfermedad de Gaucher, el cuerpo no es capaz de producir apropiadamente esta enzima y la grasa no puede ser degradada. Al igual que la enfermedad de Tay-Sachs, la enfermedad de Gaucher es considerablemente más común en descendientes de Judíos de Europa del Este (Ashkenazi) , aunque los individuos de cualquier grupo étnico pueden ser afectados. Entre la población Judía Ashkenazi la enfermedad de Gaucher es el trastorno genético más común, con una incidencia de aproximadamente 1 en 450 personas. En el público en general, la enfermedad de Gaucher afecta 1 en 100,000 personas. En 1991, la terapia de reemplazo de enzimas estuvo disponible como el primer tratamiento efectivo para la enfermedad de Gaucher. El tratamiento consiste de una forma modificada de la enzima glucocerebrosidasa dada intravenosamente. Se contempló que las composiciones y conjugados descritos aquí pueden ser usados solo o de manera más preferible en combinación con la administración de glicocerebrosidasa para tratar la enfermedad en un sujeto afectado. El síndrome de Hurler, también conocido como mucopolisacaridosis tipo I, es una clase de enfermedades superpuestas. Esas enfermedades genéticas comparten en común la acumulación celular de mucopolisacáridos en fibroblastos. Las enfermedades son genéticamente distinguibles. El transplante de fibroblastos y médula ósea no parecen ser útiles, de este modo son necesarios conjugados y composiciones útiles para aliviar la severidad y progreso de la enfermedad. Los conjugados y composiciones descritos aquí pueden ser administrados al sujeto para hacer disminuir el progreso y/o severidad de la enfermedad. La enfermedad de Krabbe (también conocida como leucodistrofia celular globoide) es una condición recesiva autosómica resultante de la deficiencia de galactosilceramidasa (o galactocerebrosidasa) , una enzima lisosomal que cataboliza un componente lipídico principal de la mielina. La incidencia en Francia se estima en 1:150,000 nacimientos. La enfermedad conduce a la desmielinización del sistema nervioso central y periférico. La aparición generalmente ocurre durante el primer año de vida y la condición progresa rápidamente, pero también han sido reportadas formas de aparición juvenil, adolescente y adulta, con una tasa de progreso más variable. El diagnóstico se establece a partir de ensayos de enzima (deficiencia de galactosilceramidasa) . Existen varios modelos ' en animales naturales (ratón, perro, mono) . La enfermedad de Krabbe, al igual que todas las leucodistrofias, no tiene cura o tratamientos efectivos conocidos. Una modalidad de la presente invención es usar las composiciones y conjugados descritos aquí para tratar o aliviar la enfermedad de Krabbe y otras leucodistrofias . Las leucodistrofias son un grupo de trastornos progresivos determinados genéticamente que afectan al cerebro, la médula espinal. Ellas incluyen a la adrenoleucodistrofia (ALD) , adrenomieloneuropatía (AMN) , síndrome de Aicardi-Goutiers, enfermedad de Alexander, CACH (es decir, ataxia infantil con hipomielinización del sistema nervioso central o enfermedad de materia blanca vanizante) , CADASIL (es decir, arteriopatía dominante autosomal cerebral con infartos subcorticales y leucoencefalopatía) , enfermedad de Canavan (degeneración esponjosa) , Xantomatosis Cerebrotendinosa (CTX) , enfermedad de Krabbe (discutida anteriormente) , leucodistrofía metacromática (MLD) , adrenoleucodistrofía neonatal, síndrome de ovarioleucodistrofia, enfermedad de Pelizaeus-Merzbacher (paraplegia espática ligada al cromosoma X) , enfermedad de Refsum, síndrome de van der Knaap (leucodistrofía vascular con quistes subcorticales) y síndrome de Zellweger. Ninguna de las enfermedades tiene tratamientos efectivos que las curen. En consecuencia, se necesitan medios para tratar o aliviar los síntomas de la enfermedad, usando las composiciones y conjugados descritos aquí.
Neuropatías con Mielinización Anormal. Existe una variedad de polineuropatías inmunes crónicas las cuales dan como resultado la desmielinización en el paciente. La edad de aparición de las condiciones varía por la condición. Existen tratamientos estándar para esas enfermedades y podrían ser combinados con las composiciones descritas aquí. De manera alternativa, las composiciones y conjugados descritos pueden ser usados solos. Las terapias estándar existentes incluyen las siguientes: Tabla IV asimétrica, pérdida Inmunoglobulina sensorial, con un humana (HIG) curso que progresa lentamente o que evita recaídas Neuropatía Motora Parece en HIG Multifocal (MMN) intervalos de 25 a Inmunosupresión de 70 años, con dos células B con veces más hombres intercambio de que mujeres. Las plasma características ciclofosfamida, incluyen debilidad, Rituxan atrofia muscular, fasciculaciones y calambres los cuales son progresivos durante 1-30 años Neuropatía con Su aparición es Inmunosupresión de Unión de IgM a inusual a más de 50 células B Glicoproteína años y se Intercambio de Asociada con la caracteriza por plasma Mielina (MAG) pérdida sensorial Ciclofosfamida (100%), debilidad, Rituxam Desmielinización Inducida por Fármacos y Radiación Ciertos fármacos y la radiación pueden inducir desmielinización en sujetos. Los fármacos que son responsables de la desmielinización incluyen pero no se limitan a la cloroquina, FK506, perhexilina, procainamida, y zimeldina. La radiación también puede inducir desmielinización. Se cree que la toxicididad del sistema nervioso central (SNC) debida a la radiación es causada por (1) daño a las estructuras de los vasos, (2) supresión de progenitores de astrocitos oligodendrocíticos-2 y oligodendrocitos maduros, (3) supresión de la población de mastocitos neurales en el hipocampo, cerebelo y corteza y alteraciones generalizadas de la expresión de citocina. El mayor daño por la lesión resulta de radioterapias administradas por el tratamiento de los cánceres. Para una revisión véase Belka et al., 2001 Br. J. Cáncer 85: 1233-9. Sin embargo, la exposición a la radiación también puede ser un problema de los astronautas (Hopewell, 1994 Adv. Space Res. 14: 433-42) así como la exposición a sustancias radioactivas . Los pacientes que han recibido fármacos o se han expuesto accidental o intencionalmente a radiación pueden experimentar beneficio por la administración de uno de los conjugados o composiciones descritas aquí para prevenir la desmielinización o promover la remielinización.
Condiciones que implican Desmielinización Los síndromes/enfermedades hereditarias adicionales que dan como resultado desmielinización incluyen al síndrome de Cockayne, hipomielinización congénita, enfermedad de Farber, leucodistrofia metacromática, enfermedad de Peliszaeus-Merzbacher, Refsum, condiciones relacionadas con los priones y enfermedad de Salla. El síndrome de Cockayne (CS) es un trastorno hereditario rato en el cual las personas son sensibles a la luz del sol, tienen estatura corta y tienen la apariencia de envejecimiento prematuro. En la forma clásica del síndrome de Cockayne (Tipo I) los síntomas son progresivos y se vuelven típicamente evidentes después de la edad de un año. Una aparición temprana o forma congénita del síndrome de Cockayne (Tipo II) es evidente desde el nacimiento. De manera interesante, a diferencia de otras enfermedades de reparación del ADN, el síndrome de Cockayne no está ligado al cáncer. El CS es un trastorno multisistema que causa una deficiencia profunda del crecimiento tanto somática como cerebral y caquexia progresiva, retinal, coclear, y degeneración neurológica, con una leucodistrofia y neuropatía desmielinizante sin un incremento en el cáncer. Después de la exposición a la UV (por ejemplo, la luz del sol), los sujetos con síndrome de Cockayne ya no pueden efectuar la reparación acoplada a la trascripción. Hasta ahora han sido identificados dos gentes defectuosos en el síndrome de Cockayne, el CSA y el CSB. El gen CSA se encuentra en el cromosoma 5. Ambos genes codifican para proteínas que interactúan para proteínas que interactúan con componentes de la maquinaria transcripcional y con proteínas que reparan el ADN. A la fecha, no han sido identificadas curas o tratamientos efectivos para pacientes con esta enfermedad. De este modo, un aspecto de la invención es el tratamiento de ésta enfermedad con los conjugados y composiciones descritas aquí. La hipomielinización congénita tiene varios nombres incluyendo el de neuropatía desmielinizante congénita, polineuropatía hipomielinizante congénita, polineuropatía hipomielinizante congénita (Bulbo de Cebolla) , neuropatía de hipomielinización congénita, neuropatía congénita causada por hipomielinización, neuropatía de hipomielinización y CH . Las neuropatías periféricas hereditarias entran en los trastornos genéticas más comunes en humanos, son un grupo complejo, clínica y genéticamente heterogéneo de trastornos que producen deterioro progresivo de los nervios periféricos. La hipomielinización congénita es uno de un grupo de trastornos.
Este grupo incluye a la neuropatía hereditaria con susceptibilidad o parálisis por presión. Enfermedad de Charcot-Marie-Tooth, síndrome de Dejerine-Sottas y neuropatía hipomielinizante congénita. No existen curas conocidas o tratamientos efectivos para ninguno de esos trastornos. La enfermedad de Farber tiene varios nombres incluyendo: lipogranulomatosis de Farber, deficiencia de ceramidasa, deficiencia de ceramidasa acida, deficiencia de AC, deficiencia de N-laurilfingosin desacilasa, y N- acilfingosin amidohidrolasa . Como lo revelan ciertos nombres, la enfermedad ocurre debido a una deficiencia de ceramidasa (también conocida como N-acilfingosin amidohidrolasa, ASAH) . La carencia de la enzima da como resultado una acumulación de mucopolisacáridos ácidos no sulfonados en las neuronas y células gliales. Los pacientes con la enfermedad usualmente mueren antes de la edad de 2 años. La leucodistrofia metacrómica (MLD) es un trastorno genético causado por una deficiencia de la enzima arilsulfatasa A. Es uno de un grupo de trastornos genéticos llamados leucodistrofias que afectan el crecimiento del revestimiento de mielina. Existen tres formas de la MLD: infantil tardía, juvenil y adulta. En la forma infantil tardía, la cual es la más común, la aparición de los síntomas comienza entre los seis meses de edad y los 2 años. El infante usualmente es normal al nacimiento, pero eventualmente pierde las capacidades previamente ganadas. Los síntomas incluyen hipotonía (bajo tono muscular) , anormalidades del habla, pérdida de capacidades mentales severa, rigidez (es decir, tensión muscular no controlada), convulsiones, hinchamiento, parálisis y demencia. Los síntomas de la forma juvenil empiezan entre las edades de 4 y 14 años, e incluyen bajo rendimiento escolar, deterioro mental, ataxia, ataques y demencia. En la forma adulta, los síntomas, los cuales comienzan después de una edad de 16 años, puede incluir mala concentración, depresión, trastornos psiquiátricos, ataxia, temblores y demencia. Los ataques pueden ocurrir en la forma adulta, pero son menos comunes que en las otras formas. En las tres formas el deterioro mental es usualmente el primer signo. La enfermedad de Peliszaeus-Merzbacher (también conocida como leucodistrofia sudanofílica perinatal) es un trastorno genético ligado al cromosoma X que produce una anormalidad a una proteína proteolipídica. La anormalidad da como resultado la muerte de los infantes típicamente antes de la edad de un año. No existen tratamientos o curas conocidas para la enfermedad. La enfermedad de Refsum (es también conocida como deficiencia de ácido fitánico oxidasa, heredopatía atáctica polineuritiforme o neuropatía motora o sensorial hereditaria IV, HMSN IV) es causada por mutaciones en el gen, que codifica para ia fitanoil-CoA hidroxilasa (PAHX o PHYH) . Las características clínicas principales son retinitis pigmentosa, polineuropatía crónica y signos cerebelares. El ácido fitánico, un ácido graso de cadena ramificada inusual (el ácido 3, 7 , 11 , 15-tetrametil-hexadecanoíco) se acumula en los tejidos y fluidos corporales de los pacientes con la enfermedad y es incapaz de ser metabolizado debido a la ausencia de PAHX. La plasmaféresis efectuada una o dos veces mensualmente remueve efectivamente el ácido del cuerpo y permite la liberación de las restricciones dietéticas que limitan el consumo de ácido fi tánico. Las condiciones relacionadas con los priones incluyen la enfermedad de Gerstmann-Straussier (GSD) , síndrome de Creutzfeldt-Jakob (CJD) , insomnio fatal familiar e isoformos aberrantes de la proteína priónica, que pueden actuar como agentes infecciosos en esos trastornos así como en el kuru y legra (una enfermedad encontrada en las ovejas) . El término prion se deriva de "agentes infecciosos proteicos) (Prusiner, Science 216:136-44, 1982). Existe una escisión proteolítica de la proteína relacionada con el prion (PRP) que da como resultado que un péptido amiloidogénico polimerice en fibrillas insolubles. La enfermedad de Salla y otros tipos de sialurías son enfermedades que implican problemas con el almacenamiento de ácido siálico. Ellos son trastornos neurodegenerativos recesivos autónomos que pueden estar presentes como una forma infantil severa (es decir, ISSD) o una forma adulta progresiva lenta que prevalece en Finlandia (es decir, enfermedad de Salla) . Los síntomas principales son la hipotonía, ataxia cerebral o retardo mental. Esas condiciones y enfermedades también se contemplaron para los tratamientos paliativos y de alivio. Otras condiciones que dan como resultado desmielinización incluyen a la encefalitis postinfecciosa (también conocida como encefalomielitis diseminada aguda, ADEM) , meningitis o lesiones a la médula espinal. Las composiciones y conjugados descritas aquí también se contemplaron para usarse en el tratamiento de esas otras condiciones desmielinizantes. Los siguientes ejemplos sintéticos y biológicos se ofrecen para ilustrar esta invención y no deben constituirse, de ninguna manera, en limitantes del alcance de ésta invención. A menos que se establezca otra cosa, todas las temperaturas están en grados Celsius.
EJEMPLOS En los siguientes ejemplos, las siguientes abreviaciones tienen los siguientes significados. Si una abreviación no es definida, esta tiene su significado aceptado de manera general . ACN = acetonitrilo s amplio = singulete amplio d = Doblete dd = doblete de dobletes Et3N = trietilamina G = Gramos h y hr = Horas CLAP = Cromatografía de líquidos de alto rendimiento (o presión) Kg = kilogramo kDa = kilodaltons L = Litro M multiplete M = Molar Mg = miligramo Min = Minuto Ml = mililitro Mm = milímetro mM = milimolar mmol = milimol S = Singulete sat. = saturado t Triplete TFA = ácido trifluoroacético TLC o tic = cromatografía en capa fina Ts = Tosilo µL = micro] itro µq = microgramo µm = micrón o micrómetro Métodos Generales: Los espectros de resonancia magnética nuclear del protón (^-í) y le carbono (13C) (RMN) se obtuvieron usando un espectrofotómetro Gemini 2000 o Bruker Avance 300. La presencia de los protones del polietilen glicol (PEG) puede ser detectada por un si plete grande, amplio a 3.6 ppm. La integración de esta señal puede variar dependiendo del tamaño de la porción de PEG. La presencia del antagonista de VLA-4 conjugado también puede ser detectada en los espectros de XH RMN de conjugados. La cromatografía en capa fina fue efectuada sobre láminas precubiertas de sílice 60 F254 (EMD 15341-1) o sílice MKC18F precubierta 60 A (Whatman 4803-110) . La espectrometría de masas fue efectuada en un espectrómetro de masas como Agilent (LC/MSD VL) en el modo cuad de un solo ion positivo.
Métodos de CLAP para producto de PEG y conjugados de PEG: La CLAP preparativa en fase inversa de efectuó usando un módulo Varian Prep Star (Modelo SD-1) con un detector de UV Varian UV calibrado a 210 nm. Método A: Se purificaron muestras de productos de PEG y conjugados de PEG usando CLAP en fase inversa sobre una columna Vydac C18 (250 mm x 21.2 mm) , con un tamaño de poro de 300 Á usando típicamente un gradiente de 35-50% de ACN + 0.1 % de TFA en 100 min a 20 mL/min. Método B: Se purificaron muestras de productos y conjugados de PEG usando CLAP en fase inversa sobre una columna Vydac C18 (250 mm x 50 mm) , con un tamaño de poro de 300 Á, usando típicamente un gradiente de 35-50% de ACN + 0.1% de TFA en 100 min a 60 mL/min. Método C: La pureza de los productos y conjugado de PEG fue confirmada vía CLAP analítica en fase inversa usando un sistema Agilent Series 1100 Quaternary equipado con una columna C18 (150 mm x 4.6 mm) Waters Symmetry con un tamaño de poro de 300 Á, de 3.5 , usando un gradiente de 40-50% ele ACN con/0.1 % de TFA a una velocidad de flujo de 1.5 mL/min. Y acoplada a un detector de longitud de onda variable Agilent 1100 calibrado a 210 nm y un detector de difracción de luz con evaporación Sedex 75 (40°C, ganancia=5) Reactivos de PEG: Las materias prima de PEG fueron adquiridas a través de NOF Corporation (Yebisu Garden Place Tower, 20-3 Ebisu 4-chome, Shibuya-ku, Tokyo 150-6019) o Nektar Therapeutics (150 Industrial Road, San Carlos, CA 94070) como sigue: PEG diamina de 30 kDa (NOF Cat. Sunbright DE-300PA) ; éster de Boc-NH-PEG-NHS 5 kDa (Nektar Cat. 4M530H02); tetraamina de 20 kDa (NOF Cat. Sunbright. PTE-200PA) ; PEG alcohol de 4 brazos de 40 kDa (NOF Cat. Sunbright PTE-40000); PEG alcohol de 3 brazos de 40 kDa (NOF Cat. Sunbright GL-400) .
Ejemplo 1 Se disolvió hidróxido de sodio (10 g, 0.25 m) en agua (300 ml). A ésta solución se agregó 4-nitrofenilalanina (50.3 g, 0.22 m) y se agitó hasta completar la disolución. A la solución resultante se agregó carbonato de sodio (28.8 g, 0.26 m) y se agitó y la suspensión se enfrió en un baño de hielo a +8°C. Se agregó por goteo cloroformiato de bencilo (44.7 g, 0.26 m) con agitación vigorosa, manteniendo la temperatura interna en un intervalo de +6° a +9°C. La mezcla se agitó a +6°C durante 1 hr adicional, se transfirió al embudo de separación y se lavó con éter (2 x 150 ml) . La fase acusa se colocó sobre un matraz Erlenmeyer grande (2L) y se acidificó cuidadosamente con HCL ac. dil. hasta p.H=2 y se extrajo con acetato de etilo (4 x 500 ml) . Los extractos combinados fueron lavados con agua y secado con MgS04. La solución se filtró y el filtrado se evaporó, el residuo se disolvió en acetato de etilo (150 ml) y se diluyó con hexano (500 ml ) . El material cristalino se filtró y enjuagó con solvente frío, se secó al aire para dar Cbz-4-nitrofenilalanina, 75 g (rendimiento de 99.5%). 1H-RMN, DMSO-d6, (d) : 12.85 (s amplio, 1H) , 8.12 (d, 2H, J=9Hz) , 7.52 (cl, 2H, J=9Hz), 7.30 (m, 511), 4.95 (s, 2H) , 4.28 (m, 1H) , 3.32 (s amplio, 1H) , 3.10 (m, 2H) . 13C-RMN (d): 173.1, 156.3, 146.6, 137.3, 130.8, 128.5, 128.0, 127.8, 123.5, 65.6, 55.1, 36.6. EM (m/z) : 367.1 [M+23] . La Cbz-4-nitrofenilalanina (75 g, 0.22 m) se disolvió en dioxano (300 ml) . La solución resultante de la agitación se enfrió en un baño de hielo seco a -20°C (interna). Se agregó isobutileno licuado (aprox. 290 ml) seguido por ácido sulfúrico conc. (35 ml) agregado en tres porciones iguales, con 30 min de separación. La adición de ácido es un proceso muy exotérmico, acompañado por un grado sustancial de polimerización. Es esencial una agitación mecánica eficiente en esta etapa. La mezcla resultante se agitó durante 20 hr, dejando calentar a temperatura ambiente, entonces se vertió cuidadosamente en solución ac. sat. De carbonato de sodio (2L) y se diluyó con acetato de etilo (600 ml). Se separó la capa orgánica y se extrajo la capa acuosa con acetato de etilo (2 x 200 ml ) . Los extractos combinados se lavaron con agua y se secaron sobre sulfato de sodio. Se filtró la solución y se evaporó hasta sequedad. El residuo se retiró en una mezcla de acetato de etilo/hexano (500 ml; 1:1) y se filtró a través de un tapón de gel sílice (ca. 2x2 en). La sílice se enjuagó con una cantidad adicional del mismo solvente (2 L en total) y los filtrados se evaporaron para dar la -ni trofenilalanina completamente protegida como un aceite viscoso, 73 g (83% después de dos pasos) . 1H-RMN, CDCI3, (d) : 8.12 (d, 2H, J=8.4Hz), 7.36 (m, 7H) , 5.35 (rn, 1H) , 5.10 (m, 2H), 4.57 (m, 1H) , 3.31 (m, 2H) , 1.43 (s, 9H) . 1C-RMN, CDCI3, (d) : 169.7, 155.3, 146.9, 143.9, 136.0, 130.2, 128.4, 128.2, 128.0, 123.3, 82.9, 66.9, 54.7, 38.2, 31.4, 27.8, 13.9. EM (m/z): 423.1 [M+23]. La 4-nitrofenilalanina protegida (73 g, 0.18 m) se disolvió en etanol (500 ml) y se le agregó catalizador de óxido de platino (1.5 g) . La solución resultante se agitó vigorosamente en una atmósfera de hidrógeno (50-60 psi) a temperatura ambiente hasta que cesó la adsorción de hidrógeno adicional (3 hr) . Se filtró el catalizador y el filtrado se evaporó hasta sequedad, el residuo se retiró en acetato de (200 ml) y se filtró a través de un tapón de sílice (2x2 pulgadas) usando una mezcla de acetato de etilo-hexano (3:2, 2L) para enjuagar la sílice. El filtrado se concentró a aprox. 200 ml y se le agregó hexano (500 ml) . El producto cristalino se filtró, se enjuagó con solvente frío y se secó al aire. Rendimiento - 56 g, 84%. :H-RMN, CDC13, (d): 7.30 (s amplio, 5H) , 6.92 (d, 2H, J=8.1Hz), 6.58 (d, 2H, J=8.1Hz), 5.21 (m, 1H) , 5.10 (d, 2H, J=2.1Hz), 4.46 (m, 1H) , 3.59 (s amplio, 2H), 2.97 (s, 2H, J=5.4Hz), 1.42 (s, 9H) . 1:C-RMM, CDCI3, (d) : 170.6, 145.1, 136.3, 130.2, 128.3, 127.9, 125.6, 115.0, 81.9, 66.6, 55.2, 37.4, 27.8 EM (m/z): 393.1 [M+23] .
Ejemplo 2 El producto del ejemplo 1, 4-aminofenilalanina, (20 g, 0.054 m) fue disuelto en etanol (200 ml) y tratado con base de Hunig (21 g, 0.162 m, 3 eq) y 2-cloro-3-nitropiridina (10.3 g, 0.65 m, 1.2 eq) . La solución resultante fue agitada bajo una atmósfera de nitrógeno y calentada a reflujo durante 24 hr. El análisis de LC indicó la presencia de una pequeña cantidad de amina sin reaccionar. Se agregó una pequeña cantidad adicional de cloronitropiridina (1.1 g, 0.13 eq) y se continuó el reflujo durante otras 24 hr. La mezcla de reacción fue enfriada y evaporada hasta sequedad. El residuo fue disuelto en acetato de etilo (600 mi) y la solución obtenida fue lavada con agua (1 x 200 ml) , ácido cítrico ac. dil. (0.2 N, 2 x 200 ml), salmuera (1 x 200 ml) y secado con sulfato de sodio. Los sólidos fueron filtrados y el filtrado evaporado para dar 37 g de aceite rojo oscuro, que contenía el producto esperado contaminado con un exceso de cloronitropiridina. El producto impuro fue purificado por cromatografía instantánea (Biotage 75L system) eluyendo con una mezcla acetato de etilo:hexano (3:17). Las fracciones que contenían el producto puro fueron combinadas y evaporadas para dar un aceite rojo oscuro, viscoso, 26 g (99%). ]H-RMN, CDC13, (d) : 10.10 (s, 1H) , 8.49 (m, 2H) , 7.57 (d, 2H, J=9Hz), 7.35 (s amplio, 5H) , 7.19 (d, 2H, J=9Hz), 6.84 (m, 1H), 5.30 (m, 1H) , 5.13 (d, 2H, J=3Hz), 4.57 (m, 1H) , 3.11 (m, 2H) , 1.45 (s, 9H) . 13C-RMN, CDC13, (d): 170.4, 155.5, 155.1, 150.0, 136.7, 136.3, 135.4, 132.4, 129.9, 128.5, 128.3, 128.0, 127.9, 122.2, 113.7, 82.2, 66.7, 55.1, 37.7, 27.8, 20.9. EM (m/z): 493.1 [M+l], 515.1 [M+23] . El compuesto nitro rojo (26 g, 0.054 m) fue disuelto en THF (350 ml) y se le agregó catalizador de óxido de platino (1.35 g) . La mezcla resultante fue agitada vigorosamente bajo una atmósfera de nitrógeno (50-60 psi) hasta que cesó la adsorción de hidrógeno (2 hr) . El catalizador fue filtrado y el filtrado evaporado hasta sequedad. El residuo fue disuelto en acetato de etilo (100 ml) y se diluyó con hexano (50 ml) hasta comenzar la cristaiización. La mezcla fue diluida adicionalmente con una mezcla de acetato de etilo/hexano (1:1) (300 ml) y se dejó reposar en un refrigerador durante 3 hr. Los sólidos cristalinos fueron filtrados, enjuagaclo-s con solvente frío y secados al aire para dar el producto, 23 g, 94%. ]H-RMN, CDCI3, (d) : 7.81 (dd, 1H, Jl =1.5Hz, J2=4.8Hz), 7.33 (s amplio, 5H) , 7.17 (d, 2H, J=8.4Hz), 7.03 (d, 2H, J=8.4Hz), 6.96 (dd, 1H, Jl =1.5Hz, J2=7.5Hz), 6.75 (dd, 1H, Jl=5.0Hz, J2=7.7Hz), 6.22 (s, 1H) , 5.31 (m, 1H) , 5.09 (s amplio, 2H) , 4.50 (m, 1H), 3.41 (s amplio, 2H) , 3.02 (m, 2H) , 1.43 (s, 9H) . 13C-RMN, CDC13, (d) : 170.6, 155.6, 145.5, 140.21, 138.8, 136.3, 130.8, 129.9, 128.5, 128.3, 127.9, 123.4, 118.2, 1 17.0, 82.0, 66.6, 55.2, 37.4, 27.9. EM (m/z): 407.1 [M- 56], 463.1 [M+l], 485.1 [M+23] . La aminopiridina (19 g, 0.041 m) fue suspendida en diclorometano (200 ml) y se le agregó CDI (12 g, 0.074 m, 1.8 eq) . La mezcla resultante fue agitada a temperatura ambiente durante 20 hr. La mezcla de reacción fue lavada con bicarbonato ac. sat. (2 x 100 ml), salmuera (1 x 100 ml) y secada con sulfato de sodio. Los sólidos fueron filtrados y el filtrado evaporado hasta sequedad. El residuo fue disuelto en acetato de etilo (caliente, 300 ml) y se dejó cristalizar. El producto cristalino fue filtrado, enjuagado con acetato de etilo frío y secado al aire para dar 19.9 g, 81 % de la imiclazolona. XH-RMN, CDC13, (d) : 10.63 (s, 1H) , 8.06 (d, 1H, J=3Hz), 7.66 (d, 2H, J=9Hz), 7.32 (m, 8H) , 7.05 (m, 1H) , 5.36 (m, 1H), 5.13 (s, 2H) , 4.59 (m, 1H) , 3.17 (m, 2H) , 1.45 (s, 9H) . 13C-RMN, CDCI3, (d) : 170.4, 155.6, 154.3, 143.8, 141.0, 136.2, 135.8, 131.8, 130.2, 128.3, 128.0, 125.9, 122.2, 118.3, 116.0, 82.4, 66.8, 55.0, 37.7, 27.8. EM (m/z) : 433.1 [M-56] , 489.2 [M+l] , 511.2 [M+23] .
Ejemplo 3 A una solución del producto del ejemplo 2 (4.0 g, 8.19 mmol) en DMF (40 ml) se agregó carbonato de potasio triturado (1.58 g, 11.47 mmol) seguido por la adición de bromoacetato de etilo (1.0 ml, 11.47 mmol) . La mezcla de reacción fue agitada bajo nitrógeno a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo fue retirado en acetato de etilo (100 ml) . La fase orgánica fue lavada con H20, salmuera, secada sobre Na2S04, filtrada, y concentrada al vacío. El material crudo fue purificado por cromatografía en columna (100% acetato de etilo) para dar 4.5 g (100%) del compuesto del título como una espuma blanca. Rf - 0.42 (5% MeOH/CH2Cl2) . EM m/z=561, (M+H)+. ]H RMN (CDC13) d 8.10-8.08 (d, 1H) , d 7.67-7.65 (d, 2H), d 7.37-7.30 (m, 7H) , d 7.20-7.17 (m, 1H) , d 7.10-7.05 (m, 1H), d 5.30-5.27 (d, 1H) , d 5.11 (s, 2H) , d 4.58-4.55 (c, 1H), d 3.81 (s, 3H), d 3.16- 3.14 (d, 2H) 1 d 1.42 (s, 9H) .
Ejemplo 4 Una solución del producto del Ejemplo 3 (2.25 g, 4.01 mmol) en MeOH (20 ml) con catalizador de Pd/C de Degussa (113 mgs) fue colocada bajo H (55 psi) durante la noche. La mezcla de reacción fue filtrada a través de Celite y concentrada al vacío para dar 1.65 g (97%) del compuesto del título como un aceite marrón. Rf = 0.32 (5% MeOH/CH2Cl2) . EM m/z=449, (M+Na)+. ]H RMN (CDC1,) d 8.11-8.09 (d, 1H), d 7.68-7.65 (d, 2H), d 7.41- 7.38 (el, 2H) , d 7.20-7.17 (m, 1H) , d 7.10-7.06 (m, 1H) , d 4.73 (s, 2H) , d 3.81 (s, 3H) , d 3.67-3.62 ( , 1H), d 3.16-3.09 (m, 1H) , d 2.91-2.84 (m, 1H) , d 1.46 (s, 9H) .
Ejemplo 5 Se colocó ácido pi ?d?n-3-sulfónico (125 g, 0.78 m) en un matraz de 3 bocas de 1 L, equipado con agitador mecánico, condensador de reflujo, termómetro y entrada de nitrógeno. A continuación, se agregó pentacloruro de fósforo (250 g, 1.19 m, 1.5 eq) , seguido inmediatamente por oxicloruro de fósforo (330 ml, 3.8 m, 4.5 eq) . El contenido del matraz fue agitado inicialmente a temperatura ambiente durante 30 min, entonces se llevó lentamente un reflujo suave (temp. interna, aprox. 110°C) durante la siguiente hora, mantenido a esta temperatura durante aprox. 3.5 hr entonces se dejó enfriar nuevamente durante las siguiente 12 hr a temperatura ambiente. Se observó desprendimiento de gas durante este tiempo. Los compuestos volátiles fueron separados bajo presión reducida (a 12 mmHg/40°C) y el residuo semisólido amarillo fue diluido con DCM (1 L) . La suspensión fue vertida lentamente en bicarbonato ac. sat., enfriado con hielo, con agitación, manteniendo el pH=7. Se observó desprendimiento de gas. La capa orgánica fue separada y la capa acuosa fue extraída nuevamente con DCM. Los extractos combinados fueron lavados con bicarbonato ac. sat. frío, salmuera y secados con sulfato de magnesio. Los sólidos fueron filtrados y el filtrado evaporado, dejando cloruro de piridin-3-sulfonilo como un líquido oleoso amarillo pálido, 123 g (93% puro; 88% del teórico). H.-RMN, CDC13 (d) : 9.26 (d, 1H) , 8.98 (dd, 1H) , 8.34 ( , 1H) , 7.62 (m, 1H) . 1JC-RMN, CDC13, (d) : 155.3, 147.4, 140.9, 134.6, 124.2. EM (m/z): 178.0 [M+l] . Se disolvió L-penicilamina (150 g, 1.0 m) con agitación en agua DI (1500 ml), enfriada en un baño de hielo a +80C y tratado con formalina (150 ml, 37% ac). La mezcla de reacción fue agitada a +8°C durante 2 hr, entonces el baño de enfriamiento fue removido y se 'continuó agitando durante 12 hr. La solución clara fue concentrada bajo presión reducida (14 mmHg/50°) dejando un residuo blanco. Los sólidos fueron resuspendidos, y entonces disueltos en MeOH caliente (2500 ml) y se dejaron reposar a temperatura ambiente durante 12 hr. El precipitado blanco esponjado fue filtrado y enjuagado con metanol frío. El filtrado fue concentrado y puesto a cristalizar nuevamente. El precipitado recolectado fue combinado con el primer cultivo y secado en un horno al vacío durante 24 hr a 55°C a 45 mmHg. El rendimiento del ácido (R) -5, 5-dimetiltiazolidin-4-carboxílico fue de 138 g (>99% puro; 86% del teórico). ^l-RMN, DMSO-d6, (d) : 4.25 (d, 1H), 4.05 (d, 1H), 3.33 (s, 1H) , 1.57 (s, 3H) , 1.19 (s, 3H) . 13C-RMN, DMSO-d6, (d): 170.8, 74.4, 57.6, 51.8, 28.9, 27.9. EM (m/z) : 162.3 [M+l] . En un reactor 4L equipado con agitador mecánico y termómetro, fue preparada una solución amortiguadora de fosfato monobásico de potasio (43 g, 0.31 m) y fosfato dibásico de potasio (188.7 g, 1.08 m) en agua DI (2L). Se agregó el ácido (R) -5, 5-dimetí ltiazolidin-4-c_arboxílico (107 g, 0.675 m) y se agitó hasta completar la disolución. La solución fue enfriada en un baño de hielo a +8°C. Se agregó por goteo una solución de de cloruro de piridin-3-sulfonilo (124 g, 0.695 m) en DCM (125 ml ) , preparada por separado, al reactor, con agitación vigorosa, durante 1 hr. El pH de la mezcla de reacción fue verificado y después de 4 hr, se encontró que era un pH=5 y se ajustó a pH=6 mediante la adición de bicarbonato sólido. La mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente durante 18 hr. El pH fue ajustado a 2 con ácido sulfúrico ac. dil., se agitó durante 1 hr y los sólidos amarillos precipitados fueron filtrados, enjuagados con agua hasta neutralizarlos. La torta sólida fue transferida a un matraz Erlenmeyer de 2L, suspendida en DCM (500 ml) con agitación ocasional durante 5 min y filtrada nuevamente. La torta de filtración fue lavada con DCM y secada al aire. El rendimiento del compuesto del título, ácido (R) -5, 5-dimetil-3- (piridin-3-ilsulfonil) tiazolidin-4-carboxílico fue de 148.9 g (98% puro; 73% del teórico). 2H-RMN, DMSO-dd, (d): 9.05 (d, 1H) , 8.89 (m, 1H) , 8.32 (m, 1H) , 7.69 (m, 1H) , 4.68 (c, 2H) , 4.14 (s, 1H) , 1.35 (s, 3H) , 1.29 (s, 3H) . 13C-RMN, DMSO-d6, (d): 170.0, 154.3, 147.9, 135.8, 134.1 , 124.8, 72.6, 54.3, 50.2, 29.4, 25.0. EM (m/z): 303.2 [M+l] . - • Ejemplo 6 A una solución del producto del ejemplo 4 (1.65 g, 3.88 mmol) en acetonitrilo (35 ml) se agregó el producto del ejemplo 5 (1.06 g, 3.53 mmol), HATU (1.75 g, 3.88 mmol), y trietilamina (5.3 ml) . La solución marrón homogénea fue agitada bajo nitrógeno durante 72 horas. La mezcla de reacción orgánica fue concentrada al vacío, retirada en acetato de etilo (40 ml ) , filtrada con HCl 1 N, NaHCOj sat., y salmuera. La capa orgánica fue secada sobre Na?SQ,?, filtrada, y concentrada al vacío para dar 2.67 g (97%) 3 corno una espuma anaranjada. Rf =0.36 (5% MeOH/CH2Cl2) . EM m/z=711 , (M+H)+. XH RMN (CDC13) d 9.09-9.08 (d, 1H) , d 8.86-8.84 (m, 1H), d 8.18- 8.15 (m, 1H) , d 8.07-8.05 ( , 1H) , d 7.66-7.63 (d, 2H), d 7.52-7.48 (m, 1H) , d 7.41- 7.38 (d, 2H) , d 7.19-7.16 (m, 1H) , d 7.08-7.04 (m, 1H) , d 6.93-6.90 (d, 1H) , d 4.83- 4.76 (c, 1H), d 4.71 (s, 2H) , d 4.62-4.59 (d, 1H) , d 4.49-4^.46 (d, 1H) , d 3.91 (s, 1H) , d 3.80 (s, 3H) , d 3.22-3.08 (m, 2H), d 1.46 (s, 9H) , d 1.20-1.17 (d, 6H).
Ejemplo 7 A una solución del producto del ejemplo 6 (2.67 g, 3.75 mmol) en THF (12 ml) se agregó a solución de LiOH-H?0 (245 mgs, 5.97 mmol) en H¿0 (3 ml). La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente durante la noche bajo nitrógeno. Tras concluir la mezcla de reacción fue concentrada al vacío, disuelta en H20 (100 ml), y acidificada a pH 4 con una solución de HCl 1 M. El producto deseado precipitó como un sólido blanco y fue filtrado y enjuagado con H20 para dar 1.87 g (72%) del compuesto del título. EM m/z=697, (M+H) + . LH RMN (CD3OD) d 9.02 (s, 1H) , d 9.80 (s, 1H), d 8.47-8.44 (d, 1H) , d 8.21-8.19 (d, 1H), d 7.98-7.96 (d, 1H), d 7.63-7.59 (m, 3H) , d 7.52-7.48 (m, 3H), d 7.17-7.13 (m, 1H) , d 4.75 (s, 2H) , d 4.72-4.61 (m, 3H) , d 4.14 (s, 1H), d 3.22-3.16 ( , 2H) , d 1.45 (s, 9H) , d 1.25-1.19 (d, 6H) . 13C RMN (CD30D) d 169.9, 169.5, 168.9, 153.1 , 152.8, 147.5, 142.8, 140.2, 136.6, 135.8, 134.0, 131.7, 129.9, 126.0, 124.2, 123.9, 117.8, 114.9, 81.8, 72.6, 54.1 , 49.9, 41.3, 36.4, 28.5, 26.6, 23.4.
Ejemplo 8 El producto- del ejemplo 2 (52 g, 0.106 m) fue suspendido en MeOH (450 ml) , se le agregó catalizador de hidrogenación (8.7 g, 5% Pd/C, Degussa) y la mezcla fue agitada bajo la atmósfera de hidrógeno (60 psi) hasta que cesó la absorción adicional (ca. 2 hrs). Se agregó THF (150 ml) para disolver los sólidos precipitados y la solución fue filtrada a través de un tapón de Celite, usando DCM para enjuagar el filtro. El filtrado fue evaporado hasta sequedad, redisuelto en DCM (300 ml) y separado nuevamente. Esta operación se repitió dos veces. Los sólidos espumosos fueron mantenidos bajo alto vacío durante 3 hrs. El rendimiento del compuesto del título fue de 38.3 g (101 % del teórico) lH-RMN, CDC13, (d) : 8.08 (m, 1H) , 7.56 (AB c, 4H) , 7.37 (m, 1H) , 7.06 (m, 1H) , 3.68 (m, 1H) , 2.03 (m, 2H) , 1.49 (s, 9H) . 1 C-RMN, CDCI3, (d) : 173.8, 154.6, 143.9, 141.0, 137.4, 131.5, 130.2, 126.1, 122.3, 118.0, 116.1, 81.4, 56.0, 40.6, 27.9. EM (m/z) : 299.3 [M-56] , 355.4 [M+l], 377.4 [M+23] .
Ejemplo 9 El producto del ejemplo 8 (38.3 g, asúmanse 0.106 m) fue disuelto en DCM (500 ml) y tratado sucesivamente con: N-metilmorfolina (27 g, 30 ml , 0.266 m; 2.5 eq) , HOBt (17.3 g, 0.128 m; 1.2 eq) , y el producto del ejemplo 5 (33.8 g, 0.112 m; 1.06 eq) . La solución no homogénea resultante f e enfriada en un baño de hielo a +4°C y tratada con EDC (22.5 g, 0.117 m; 1.1 eq) en una porción. La mezcla de reacción fue agitada, dejándola calentar a temperatura ambiente durante las siguientes 4 hr y entonces durante 18 hr más. El solvente fue separado y el residuo disuelto en acetato de etilo (1.2L), lavado con bicarbonato ac . sat. (2 x 250 ml ) , agua (250 ml), salmuera (300 ml) y secado con sulfato de magnesio. La solución fue filtrada y evaporada hasta sequedad, dejando aceite anaranjado claro, viscoso, 76 g (»100%). El producto crudo fue purificado por cromatografía instantánea sobre gel de sílice (Biotage 75L, en una mezcla de acetato de etilo/metanol (3%). Las fracciones, que contenían el producto puro, fueron combinadas y evaporadas para dar 54 g del compuesto del título (rendimiento del 83%). 1H-RMN, CDCl-j, (d) : 10.37 (s, 1H) , 9.1 1 (s, 1H) , 8.87 (m, 1H) , 8.19 (rn, 1H), 8.05 (m, 1H) , 7.56 (AB c, 4H) , 7.52 (m, 1H) , 7.36 (m, 1H), 7.06 (m, 21-1 ) , A . 83 ( , 1H) , 4.58 (AB a, 2H) , 3.96 (s, 1H), 3.19 (m, 2H), 1.49 (s, 9H) , 1.22 (s, 3H) , 1.18 (s, 3H). 13C-RMN, CDCl,, (d) : 169.7, 167.6, 153.9, 148.4, 143.8, 140.9, 135.8, 135.6, 132.9, 131.9, 130.2, 125.9, 123.8, 122.1 , 118.0, U5.9, 82.8, 73.6, 60.3, 54.8, 53.7, 50.6, 37.8, 29.1, 27.8, 23.9, 14.1. EM (m/z): 583.3 [M-56] , 639.4 [M+1J, 661.3 [M+23] .
Ejemplo 10 A una solución de trifluorobutirato de etilo (15 g, 89 mmol) y formiato etilo (36 rnL, 444 mmol) en THF (200 mL) enfriada en hielo, bajo N;. se agregó una solución de KOtBu 1 M en THF (107 mmol, 107 mL) durante un periodo de 25 minutos. Después de 15 minutos el baño de hielo fue removido y la mezcla de reacción fue agitada una hora a temperatura ambiente. Entonces se agregó formiato etilo adicional (18 mL, 222 mmol) y la mezcla de reacción fue agitada durante la noche. La mezcla de reacción fue concentrada y el residuo repartido entre éter frío (100 mL) y agua fría (300 mL) . El pH de la' fase acuosa fue ajustado a 2 con HCl concentrado. El producto fue extraído con diclorometano (1 x 100 rnL, 45 x 75 mL) y los extractos orgánicos combinados fueron lavados con salmuera (1 x 100 mL) , secados (MgS04) , filtrados, y concentrados para dar el compuesto del título como un aceite espeso, el cual solidificó tras reposar, 10.2 g (58.5%). EM (m/z) = 198 (M + H)+.
Ejemplo 11 i F>e A una solución del producto del ejemplo 10 (10 g, 51 mmol) y sulfato de dietilguanidma (8.3g, 25.2 mmol) en EtOH (60 mL) bajo N2, se agregó NaOEt, solución al 21 % en EtOH (20.7 rnL, 55.5 mmol) durante un periodo de 10 minutos. La mezcla de reacción fue entonces calentada a reflujo durante 5 horas. La solución heterogénea fue enfriada y vertida agua fría (100 mL) para dar una solución homogénea. El pH de la solución fue ajustado a aproximadamente 3.5 con HCl conc. y HCl 1 N. Se recolectó un precipitado sólido de la solución, la cual fue recolectada por filtración. El sólido color canela claro fue lavado con agua y secado al aire, rendimiento de 2.9 g, (23%) del compuesto del título. EM (m/z) = 250 (M + H) + . X RMN (300 MHz, CD3OD) d 7.65 (s amplio, 1H) , 3.55 (c, 4H) , 3.30 (c, 2H) , 1.25 (t, 6H) .
Ejemplo 12 Fue cargado un matraz con el producto del Ejemplo 11 (2.0 g, 8.02 mmol), DIEA (1.5 mL, 8.83 mmol), DMAP (.98 g, 0.8 mmol), y diclorometano (30 mL) . La mezcla fue enfriada a 0°C y se le' agregó anhídrido trifluoroacetico (1.5 mL, 8.83 mmol) . La reacción se volvió ..homogénea y fue agitada a 0°C durante 3 horas. La mezcla fue extinguida con MaHCOs sat. y extraída con diclorometano. La fase orgánica fue lavada con cítrico ácido 0.2 N, secada sobre Na2S04, filtrada, y •concentrada al vacío para dar 2.87 g (94%) del compuesto del título como un sólido marrón. *H RMN (300 MHz, CDCI3) d 8.28 (s, 1H), 3.65-3.52 (m, 4H) , 3.29-3.19 (c, 2H) , 1.22- 1.17 (t, 6H) .
Ejemplo 13 Una solución del producto del ejemplo 12 (1.3g, 3.5 mmol), H-Fe (p-N02) OtBu (1.1 g, 4.2 mmol), y DIEA (0.9 mL, 5.3 mmol) en CH3CN (14 mL) bajo N2 fue calentada a reflujo durante la noche. Al siguiente día se agregó H-Fe (p-N02) OtBu (0.8 g, 3 mmol) adicional y se continuo el reflujo durante 3 día. La mezcla de reacción fue entonces enfriada y concentrada. El. residuo retirado en EtOAc (50 mL) y la porción orgánica filtrada con KHSO40.5 N (3 x 50 mL) , agua (1 x 50 mL) , salmuera (1 x 10 rnL) , secada (MgS04) , filtrada y concentrada hasta una goma marrón. El material crudo fue p>urificado por cromatografía instantánea (5:1 hexano/EtOAc) para dar 640 mg (38%) del. compuesto del título como una goma dorada. CCF: 3:1 hexano/EtOAc, Rf = 0.30, EM (m/z) = 498 (M+H)+, ñ RMN, (300 MHz, CDC13) d 8.19 (d, 2H) , 7.80 (s, 1H) , 7.25 (d, 2H) , 5.19 (d amplio, 1H) , 4.95 (c, 1H) , 3.70 -3.50 (m, 4 H) , 3.45 -3.25 (m, 2H) , 3.10 (c, 2H) , 1.40 (SI 9 H) , 1.05 (t, 6 H).
Ejemplo 14 El producto del ejemplo 13 (635 mg, 1.27 mmol) fue disuelto en EtOH absoluto (5 mL) al cual se agregaron 35 mg de Pd/C, 10 %P. La reacción fue sometida a hidrogenación (45 psi de H ) durante 2.5 horas, momento en el cual se agregaron 50 mgs de Pd/C, 10 %P y la mezcla de reacción fue nuevamente sometida a hidrogenación (45 psi de H2) durante la noche. La mezcla de reacción fue filtrada a través de una almohadilla de Celite y el filtrado fue concentrado para dar 452 mg (76%) del compuesto del título. EM (m/z) = 468 (M+H)+, *H RMN (300 MHz, CDC13) d 7.75 (s, 1H) , 6.90 (d, 2H) , 6.60 (d, 2H) , 5.05 (d amplio, 1H) , 4.80 (c, 1H) , 3.70 - 3.45 (m, 6 H), 3.10 -2.90 (m, 4 H) , 1.40 (s, 9 H) , 1.15 (t, 6H) .
Ejemplo 15 Una solución del producto del ejemplo 14 (598mg, 1.28mmol), 2-cloro-3-nitropiridina (243 mg, 1.53 mmol), y DIEA (0.67 mL, 3.83 mmol) en EtOH (5 ml) bajo N2 fue calentada a reflujo. Al siguiente día la reacción fue enfriada y se agregó 2-cloro-3-n?tropiridina adicional (40 mg, 0.25 mmol) y DIEA (0.11 mL, 0.60 mmol) y la reacción fue calentada a reflujo durante un día. La mezcla de reacción fue entonces concentrada y el residuo retirado en EtOAc (20 mL) . La fase orgánica fue lavada con agua (2 x 20 mL) . Las fases acuosas combinadas fueron extraídas nuevamente con EtOAc (2 x 10 mL) . Los extractos orgánicos combinados fueron lavados con ácido cítrico 0.2 N (3 x 20 L) , agua (1 x 10 mL) , NaHCO, sat. (3 x 20 mL) , salmuera (1 x 10 mL) , secados (MgS04) , filtrados y separados hasta una goma anaranjada. El producto crudo fue purificado por cromatografía instantánea eluyendo con 4:1 hexano/EtOAc (Rf = 0.14) para dar 610 mg (81 ?•) del compuesto del título como un aceite rojo. EM (m/z) = 590 (M+H)+, X RMN (300 MHz , CDC13) d 10.10 (s, 1H) , 8.55 (d, 1H) , 8.50 (m, 1H), 7.79 (s, lll), 7.75 (d, 2H) , 7.15 (d, 2H) , 6.80 (c, 1H), 5.10 (d amplio, 1H) , 4.90 (m, 1H) , 3.70 - 3.45 (m, 4 H) , 3.25 (m, 2H) , 3.10 (c, 2H) , 1.40 (s, 9H) , 1.10 (t, 6 H) .
Ejemplo 16 A una solución del producto del ejemplo 15 (610 mg, 1.03 mmol) en EtOH absoluto (5 mL) se agregaron 60 mg de Pd/C, 10 %P. La mezcla fue sometida a hidrogenación (45 psi H ) durante la noche. Al siguiente día la mezcla de reacción fue filtrada a través de Celite y El filtrado concentrado para dar 500 mg (87%) del compuesto del título. EM (m/z) = 560 (M+H)+, XH RMN (300 MHz , CDC13) d 7.85 (d, 2H) , 7.80 (s, 1H), 7.20 (d, 2H) , 7.05 (d, 2H) , 7.00 (d, 1H) , 7.75 (rn, 1H) , 6.20 (s amplio 1H) , 5.15 (s amplio, 1H) , 4.85 (m, 1H) , 3.75 -3.45 (m, 4 H), 3.40 (s amplio, 2H) , 3.15 (m, 2H) , 3.05 (c, 2H) , 1.40 (s, 9H) , 1.15 (t, 6 H) .
Ejemplo 17 Una solución del producto del ejemplo 16 (141 mg, 0.250 mmol) y CDI (62 mg, 0.378 mmol) en CH¿C12 (3 mL) fue agitada durante la noche. Al siguiente día se agregó CDI adicional (30 rng, 0.185 mmol) y la reacción fue agitada otro día. La mezcla de reacción fue entonces concentrada y retirada en EtOAc (10 mL) y la porción orgánica lavada con ácido cítrico 0.2 N (3 5 mL) , agua (1 x 5 mL) , NaHC03 sat. (3 x 5 mL) , salmuera (1 x 5 mL) , secada (MgS04), filtrada y concentrada para dar 69 mg (47%) del compuesto del título como una espuma la cual fue usada sin mayor purificación. EM (m/z) = 586 (M+H)+, X RMN (300 MHz , CDC13) d 8.20 (s amplio, 1H), 8.05 (d, 1H), 7.80 (s, 1H) , 7.65 (d, 2H) , 7.90 (m, 3H) , 7.05 (m, iH) , 5.15 (d amplio, iH) , 4.95 (m, 1H) , 3.70 - 3.45 (m, 4H), 3.25 (app d, 2H) , 3.10 (c, 2H) , 1.40 (s, 9H) , 1.15 (t, 6H) .
Ejemplo 18 A una solución de , 6-dicloro-5-aminopirimidina (5.0g, 30.7 mmol) en DMSO (30 mL) se agregó Na2S-9H:0 (7.4 g, .8 mmol). La mezcla fue agitada a temperatura ambiente durante la noche. Entonces de agregó agua (40 mL) a la mezcla y la solución fue evaporada bajo presión reducida hasta aproximadamente 6 mL . A esta solución se agregó HCl conc. (0.5 mL) y agua para precipitar el producto. La solución fue filtrada y el sólido anaranjado fue lavado con agua y secado para dar 4.3 g (86%) del compuesto del título. XH RMN (300 MHz, DMSO-d6) d 5.84 (2H, s), 7.79 (1H, s), 14.37 (1H, s amplio); EM(m/z): MH+ = 162.
Ejemplo 19 Al producto del ejemplo 18 (4.3 g, 26 mmol) disuelto en NH.-.OH conc. (4 mL) se agregó EtOH (40 mL) . A ésta solución, se agregó Raney Nickel (exceso) en porciones. La reacción fue agitada a temperatura ambiente durante la noche y entonces calentada a 80 °C durante 2 horas. La mezcla fue filtrada a través de Celite y el filtrado concentrado. El producto crudo fue purificado por cromatografía instantánea sobre sílice usando EtOAc/hcxano para dar 1.6 g ( A l 'i ) del compuesto del título como un sólido amarillo. X RMN (300 MHz, DMSO-de) d 5.90 (2H, s) , 8.20 (2H, s) ; EM(m/z) MH+ = 130.
Ejemplo 20 rNH Al producto del ejemplo 19 (0.51 g, 3.9 mmol) en MeOH (20 mL) y HOAc (0.5 mL) se agregó CH3CHO (0.52 mL, 9.2 mmol). Entonces se agregó NaBHCN (590 mg, 9.2 mmol) en una porción. La reacción fue agitada a temperatura ambiente durante la noche y se agregaron HOAc, CH3CHO, y NaBH3CN adicionales. La reacción fue agitada durante la noche, concentrada, y el residuo fue. retirado en EtOAc y NaHC03 sat. La capa acuosa separada fue extraída nuevamente con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas fueron secadas y concentradas hasta un residuo. El residuo fue disuelto en MeOH y tratado con HOAc, CH3CHO y NaBH3CN como se describió anteriormente. Siguiendo el procedimiento de trabajo descrito anteriormente. El producto crudo fue purificado por cromatografía instantánea sobre sílice usando EtOAc/hexano, para dar 0.35g (57%) del compuesto del título como un aceite amarillo. H RMN (300 MHz, CDClj) d 1.35 (3 H, c, J = 12Hz), 3.29 (2H, j , 4.21 (1H, s amplio), 8.04 (1H, 3), 8.36 (1H, s); EM (m/z): MH+ = 158.
Ejemplo 21 Al producto del ejemplo 20 (70 mg, 0.45 mmol) disuelto en DMF (1 mL) se agregó TEA (93 uL) y cloruro de isonicotinoilo (0.12 g, 0.67 mmol) . La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 2 días y entonces repartida entre EtOAc y aHC03 sat. La capa acuosa separada fue extraída nuevamente con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas fueron secadas y concentradas para dar 67 mg (57%) del compuesto del título el cual fue usado sin mayor purificación. X RMN (300 MHz, CDCI3) d 1.26 (3 H), 3.65-3.69 (1H), 4.21 (1H), 7.17 (2H), 8.43 (1H), 8.54 (2H), 8.86 (1H) Nota: el ;H RMN muestra evidencia de rotámeros como lo demuestra la amplitud de todos los picosas; EM(m/z) : MH+ -- 263.
Ejemplo 22 A una solució del producto del ejemplo 21 (0.11 q, 0.42 mmol) y el producto del ejemplo 8 (0.135 g, 0.38 mmol) en IPA (2.5 ml) se agregó DIEA (0.35 ml, 1.9 mmol). La mezcla de reacción fue agitada en un tubo sellado a 130°C durante 2 días. La mezcla cruda fue concentrada y el aceite fue purificado por cromatografía instantánea en columna con un gradiente de solvente de 0-10? de MeOH en CH2C12 para dar el compuesto del título como un aceite. 1H RMN (300 MHz, CDC13) d 1.16 (1.2H, m) , 1.26-1.31 (1.8H, m) , 1.50-1.53 (9H, d, J = 9 Hz), 3.0 (1H, m) , 3.2 (0.8H, m) , 3.36 (1.2H, m) , 4.12- 4.18 (1.2H, m) , 4.96-5.10 (.8H, rn) , 5.80-5.95 (1H, m) , 6.93-6.96 (1H, m) , 7.07 (1H, m) , 7.31-7.45 (5H, m) , 7.66-7.75 (3H, m) , 8.06 (1H, m) , 8.44-8.51 (2H, m) ; CLAP/EM: un solo pico a 1.29 min, MH' = 581.
Ejemplo 23 1 OMe Ñ02 A 2, 4-dicloro-5-nitropirimidina (2.0 g, 10.3 mmol) en MeOH (7 mL) a 0°C bajo N2 se agregó por goteo NaOMe (0.5 M en MeOH, 25 mL) . Después de completar la adición, la mezcla de reacción fue agitada a 0°C durante 15 min. Entonces se agregó dietilamina (5 mL) y la mezcla fue agitada a ta durante la noche. La mezcla de reacción fue concentrada y eí residuo fue repartido entre EtOAc y H20. La capa orgánica fue secada y concentrada hasta un residuo el cual fue purificado por c omatografía instantánea sobre sílice usando EtOAc/Hexano, para dar el compuesto del título como un sólido blanco mate (1.1 g, 4.9 mmol, rendimiento del 47%). XH RMN (300 MHz, CDC13) d 1.26 (6H, t, J = 6.6 Hz), 3.70 (4H, m) , 4.08 (3H, s) , 9.01 (1H, s); CLAP/EM: MH' = 227.
Ejemplo 24 Al producto del Ejemplo 23 (1.1 g, 4.9 minol) en MeOH/EtOAc (1:1, 20 mL) fue reducido con Pd/C (5% degussa, 0.5 g) y H2 (50 psi) en a agitador de Parr durante la noche. La mezcla de reacción fue filtrada y el filtrado fue concentrado bajo presión reducida para dar el compuesto del título como un sólido (0.85 g, 4.3 mmol, rendimiento del 88.5%). XH RMN (300 MHz, CDC13) d 1.18 (6H, t, J - 6.9 Hz) , 3.03 (2H, amplio), 3.57 ,(6H, t, J = 6.9 Hz), 3.96 (3H, s), 7.71 (1H, s) ; CLAP/EM: MH+ = 197.
Ejemplo 25 Al producto del Ejemplo 24 (0.85 g, 4.3 mmol) en CH2C12 (15 mL) y TEA (1.4 mL, 10 mmol) se agregó sal de HCL de cloruro de isonicotinilo (1.13 g, 6.3 mmol). Después de 15 min, la CCF no mostró material inicial. La mezcla fue extraída entre EtOAc y NaHC03 sat. La capa acuosa fue lavada con EtOAc dos veces. Las capas orgánicas combinadas fueron lavadas con NaHCOs sat. y salmuera. Se secó sobre MgSO,? y se filtró. El filtrado fue concentrada para dar el compuesto del título como un sólido marrón (1.3 g, 4.3 mmol, rendimiento del 100%). :H RMN (300 MHz, CDC13) d 1.20 (6H, t, J = 6.9 Hz), 3.60 (4 H, c, J = 6.9 Hz) , 3.96 (3H, s), 7.72 (2H, d, J = 6.0 Hz) , 7.75 (1H, s amplio), 8.80 (2H, d, J = 6.0 Hz) , 8.89 (1H, s); CL?P/EM: MH+ - 302.
Ejemplo 26 Al producto del Ejemplo 25 (100 mg, 0.33 mmol) en THF (1 ml.) se agregó KOtBu ( 1 M en THF, 0.5 mL) y lentamente seguido por EtI (40 µL, 0.5 mmol) . La mezcla de reacción fue agitada a ta durante la noche. La CCF mostró la desaparición del material inicial. La mezcla fue repartida entre EtOAc y H:0. La capa acuosa fue lavada con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas fueron lavadas con NaHC0 sat. y salmuera. Se secó y concentró para dar el compuesto del título (90 mg, 0.27 mmol, 83%) que se usó sin mayor purificación. ' H RMN (300 MHz, CDC13) d 1.10 (9H, m) , 3.47 (5H, m) , 3.92 (1H, m) , 7.14 (2H, d, J = 6.0 Hz), 7.78 (1H, s amplio), 8.44 (2H, d, J = 6.0 Hz); CLAP/EM: MH"1 = 330.
Ejemplo 27 Al producto del Ejemplo 26 (200 mg, 0.61 mmol) en DMF (4 mL) se agregó EtSNa (66 rng, 0.79 mmol) y la mezcla de reacción fue calentada a 100°C durante 1 hr . La LC/EM mostró el material inicial aún presente. Se agregó otra porción de NaSEt (66 mg, 0.79 mmol) y la reacción se calentó otra vez a 2 hr. La LC/EM mostró únicamente el producto. La DMF fue removida bajo presión reducida y se agregó H20 (10 mL) seguida por HCL conc. (0.132 mL) . La evaporación del solvente deja un residuo. Este fue disuelto en EtOH y filtrado. El filtrado fue concentrad para dar el compuesto del título (190 mg, 100%) que fue usado sin mayor purificación. ? RMN (300 MHz, CD30D) d 1.24 (9H, m) , 3.60 (4H, m) , 3.60-4.00 (2H, amplio), 8.12 (3H, d, J - 5.7 Hz), 8.92 (2H, d, J - 5.7 Hz); CLAP/EM: MH1 = 316.
Ejemplo 28 Al producto del Ejemplo 27 (70 mg, 0.22 mmol) en POCÍ} (3 rnL) a ta se agregó dietilanilina (30 µL) . La mezcla de reacción fue calentada a 100°C durante 30 rain. Entonces ésta fue concentrada. El residuo fue repartido entre EtOAc y H20. La capa orgánica fue lavada con H20 dos veces. Entonces se secó y concentró para dar el compuesto del título (50 mg, 0.15 mmol, 68%) y se usó para la siguiente reacción sin mayor purificación. CLAP/EM: MH* = 334 Ejemplo 29 A una solución del producto del Ejemplo 28 (50 mg, 0.15 mrnol) y el producto del Ejemplo 8 (60 mg, 0.17 mmol) en IPA (0.75 mL) se agregó DIE? (0.15 mL, 0.8 mmol). La mezcla de reacción fue agitada en un tubo sellado a 130 grados durante 7 días. La mezcla cruda fue concentrada y el residuo fue purificado por CLAP preparativa y cromatografía instantánea sobre gel de sílice para dar un sólido blanco mate (10 mg). X RMN (300 MHz, CDC13) d 1.10-1.30 (9H, m) , 1.48 (4.5H, s), 1.51 (4.5H, s), 2.80-3.38 (3H, m) , 3.53 (4H, m) , 4.05-4.30 (1H, m) , 4.83 (0.5H, m) , 4.96 (0.5H, m) , 5.15- 5.50 (1H, m) , 6.95-7.10 (2H, m) , 7.25-7.50 (5H, m) , 7.69 (0.5H, d, J = 8.4 Hz), 7.76 (0.5H, d, J = 8.4 Hz) , 8.08 (1H, d, J = 5.1Hz), 8.51 (2H, m) , 8.83 (0.5H, amplio), 8.95 (0.5II, amplio); CLAP/EM: MH" = 652.
Ejemplo 30 El Compuesto 25 (20 g, 0.11 mol) fue disuelto en CHCI: (500 mL) bajo N . La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C. Se le agregó trietilamina (18.12 mL, 0.13 mol) seguido por anhídrido trifluoroacético (18.14 mL, 0.13 mol) en porciones. La reacción se dejó calentar a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo fue retirado en acetato de etilo (200 mL) . La fase orgánica fue lavada con H20, NaHC03 sat., salmuera, secado sobre Na?S04, filtrado, y concentrado al vacío para dar 29.7 g (96%) 29 como un sólido amarillo. 1H RMN (CDCI3) d 3.64-3.60 (m, 2H) , 3.55-3.53 (m, 2H) , 3.49-3.45 (m, 4H) , 1.44 (s, 9H) . C RMN (CDC13) d 155.7 (JC.F=36 Hz), 154.3, 116.4 (JC.F=288 HZ), 80.8, 45.7, 43.3, 28.3. Se agregó el compuesto 29 (29.26 g, 0.10 mol) en porciones a un matraz de 500 mL que contenía una solución de HCl 4N en dioxano (200 mL) a 0°C. La reacción fue agitada en un baño de hielo durante 4 horas cuando la CCF (hexano: acetato de etilo 3:1) mostró 100% de conversión al producto. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y tratada con etil éter (500 mL) . El producto fue filtrado y secado para dar 22.5 g (99%) 30 como un sal de monoclorohidrato blanca. 1ti RMN (DMSO-d6) d 3.82-3.79 (m, 4H) , 3.53 (s, 1H) , 3.18-3.16 (m, 4H) . 13C RMN (DMSOdd) d 154.3 (JC-F=35 Hz), 115.9 (JC- F=289 HZ), 66.1 , 42.0, 41.9, 41.5. Un matraz de 250 mL fue cargado con 30 (1.0 g, 4.6 mmol), CH2C12 (40 mL) , y NaHC03 sat. (40 mL) . La mezcla de reacción fue agitada vigorosamente a 0°C durante 15 minutos.
Se dejó de agitar y las capas se dejaron separar. Se agregó una solución 2.0 M de fosgeno en tolueno (9 mL, 18 mmol) a la mezcla de reacción el cual fue agitada vigorosamente durante minutos, manteniendo temperatura a 0°C. Las capas fueron separadas y la fase acuosa fue lavada con CH2C12 (15 mL) . Las capas orgánicas combinadas fueron filtradas con salmuera, secadas sobre Na2S04, filtradas, y concentradas al vacío. El residuo fue retirado en CH2C12 y concentrado al vacío nuevamente para dar 1.0 g (92%) 31 como un sólido blanco. EM (m/z) 245, (M+H)+. :H RMN (CDC13) d 3.80-3.68 (m, 8H) . 13C RMN (CDC13) d 155.9 (JC-F=37 HZ), 148.7 (JC-F=12HZ), 116.3 (JC- F=289 Hz), 48.3, 47.8, 45.7, 45.3, 45.1 , 42.9, 42.7. Un matraz de 25 fue cargado con 24 (5.97 g, 0.011 mol), DMAP (1.34 g, 0.011 mol), y CH2C12 (22 mL) . Se agrego trietilamina (2.4 mL, 0.017 mol) seguida por 31 (4.2 g, 0.017 mol) . La mezcla de reacción fue calentada a reflujo durante 20 horas. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo fue retirado en acetato de etilo. La fase orgánica fue lavada con NaHC03 sat., H20, salmuera, secada sobre Na2S04, filtrada, y concentrada al vacío para dar 9.3 g de una espuma rosa. El material crudo fue purificado por cromatografía instantánea (gradiente de 50% de acetato de etilo/hexano hasta 75% acetato de etilo/hexanos) para dar 6.1 g (76%) 32 como una espuma rosa pálido. Rf = 0.14 (hexano: acetato de etilo 1:1). EM (m/z) 730, (M+H) + . XH RMN (CDC13) d 9.08-9.07 (m, 1H) , 8.87-8.85 (m, 1H) , 8.16-8.14 (m, 1H) , 7.52-7.48 (m, 1H) , 7.25-7.22 (d, 2H) , 7.03-7.00 (d, 2H) , 6.91-6.88 (d, 1H) , 4.78-4.70 (c, 1H) , 4.60-4.44 (dd, 2H) , 3.88 (s, 1H) , 3.75-3.60 (m, 8H) , 3.09-3.06 (m, 2H) , 1.42 (s, 9H) , 1.18 (s, 3H) , 1.16 (s, 3H) . A una solución de 32 (6.11 g, 8.4 mmol) disuelto en MeOH (90 mL) se agregó una solution de carbonato de potasio (5.79 g, 42 mmol) en H20 (10 mL) . La reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 15 minutos y entonces concentrada al vacío. El residuo fue filtrado con cantidades copiosas de H20 para dar 4.65 g (88%) 33 como un sólido blanco. Rf = 0.08 (5% MeOH/CH2Cl2) . EM (m/z) 634, (M+H) + . 1H RMN (CDC13) d 9.09-9.08 (m, 1H) , 8.87-8.85 (m, 1H) , 8.16-8.14 (m, 1H), 7.52-7.48 (m, 1H) , 7.23-7.20 (d, 2H) , 7.03-7.00 (d, 2H) , 6.91-6.88 (d, 1H) , 4.78-4.70 (c, 1H) , 4.59-4.46 (dd, 2H) , 3.89 (s, 1H), 3.65-3.50 (m, 4H) , 3.09-3.06 (m, 2H) , 2.92-2.88 (m, 4H) , 1.43 (s, 9H) , 1.19 (s, 3H) , 1.17 (s, 3H) . 13C RMN (CDCI3) d 170.1, 167.9, 154.5, 153.9, 150.7, 148.8, 136.0, 133.4, 133.2, 130.6, 124.1, 121.9, 83.0, 73.9, 55.0, 53.7, 50.7, 46.0, 45.7, 45.0, 37.9, 29.3, 28.0, 24.0. Un matraz de 250 mL fue cargado con 33 (2.5 g, 3.9 mmol), CH2C12 (40 mL) , y NaHC03 sat. (40 mL) . La mezcla de reacción fue agitada vigorosamente a 0°C durante 15 minutos.
Se dejó de agitar y las capas se dejaron separar. Se agregó rápidamente una solución de 2.0 M de fosgeno en tolueno (7.9 mL, 16 mmol) a la mezcla de reacción, el cual fue agitada vigorosamente durante 60 minutos manteniendo la temperatura a 0°C. Las capas fueron separadas y la fase acuosa fue lavada con CH2C12 (30 mL) . Las capas orgánicas combinadas fueron lavadas con ácido cítrico 0.2 N, salmuera, secadas sobre Na2S04, filtradas, y concentradas al vacío para dar 2.8 g (100%) espuma blanca. El material crudo fue purificado a través de un tapón de sílice, eluyendo con 100% acetato de etilo,- para dar 2.2 g (78%) 40 como una espuma blanca. Rf = 0.43 (acetato de etilo:hexano 3:1). XH RMN (CDC13) d 9.09-9.08 (m, 1H) , 8.87-8.85 (m, 1H) , 8.16-8.14 (d, 1H) , 7.52-7.48 (m, 1H), 7.25-7.22 (d, 2H) , 7.03-7.01 (d, 2H) , 6.90-6.88 (d, 1H) , 4.78-4.70 (c, 1H) , 4.60-4.45 (dd, 2H) , 3.88 (s, 1H) , 3.79-3.65 (m, 8H) , 3.10-3.07 (m, 2H) , 1.43 (s, 9H) , 1.18 (s, 3H) , 1.17 (s, 3H) . 13C RMN (CDC13) d 169.9, 167.9, 154.1, 153.6, 150.2, 148.5, 136.1 , 133.8, 130.6, 124.2, 121.7, 82.9, 73.7, 54.8, 53.8, 50.6, 48.3, 45.8, 37.7, 29.2, 27.9, 23.9.
Ejemplo 31 A. Síntesis de t-butil éster conjugado con bis-PEG ligado a carbamato HO-FEG-OH 3St Esquema de Reacción 16 Los conjugados ligados a carbamato fueron preparados sobre la base de un método modificado sobre la base de la WO 92/16555, la cual se incorpora aquí como referencia. De este modo, el PEG-diol de 6 kDa (500 mg, 0.083 mmol) fue disuelto en una cantidad mínima de CH2C12 (0.1 ml) .
A este se agregó una solución 2.0 M de fosgeno en tolueno (0.6 ml, 1.2 mmol). La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 18 horas y entonces concentrada al vacío para dar 500 mg (100%) del bis-cloroformiato de PEG de 6 kDa como un sólido blanco. Se agregó una solución de 3^3 (211 mg, 0.33 mmol) en CH2C12 (3 mL) (véase el ejemplo 30) al bis-cloroformiato de PEG de 6 kDa (500 mg, 0.08 mmol) disuelto en CH2C12 (2 mL) . Se agregó trietilamina (11 µL, 0.08 mmol), y la mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 18 horas. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío, y el residuo fue disuelto en MeOH (10 ml) . Se agregó resina de ácido poliestiren sulfónico reticulada al 2% (410 mg) y el recipiente de reacción fue agitado durante 2 horas. La mezcla fue filtrada, y el filtrado fue concentrado al vacío para dar 500 mg (87%) de un sólido blanco. Se purificó una porción del material (246 mg) por CLAP, produciendo 156 mg del t-butil éster conjugado con PEG de 6 kDa como un sólido blanco. La CLAP determinó que el conjugado era >99% puro (tiempo de retención = 9.655 min). XH RMN (CDC13) d 9.07 (s amplio, 2H) , 8.86-8.84 (m, 2H) , 8.18-8.15 (d, 2H) , 7.53- 7.48 (m, 2H) , 7.22-7.19 (d, 4H), 7.03-6.99 (d, 4H) , 6.86-6.83 (d, 2H) , 4.73-4.70 (m, 2H) 4.58-4.44 (dd, 4H) , 4.27-4.24 (m, 4H) , 3.62 (s amplio, 621H) , 3.40-3.37 (m, 6H) , 3.07- 3.05 (m, 4H) , 1.41 (s, 18H) , 1.20-1.16 (d, 12H) .
B. Síntesis de conjugado de bis-PEG ligado a carbamato El t-butil éster conjugado con bis-PEG ligado a carbamato de PEG de 6 kDa (100 mg, 0.01 mmol) fue disuelto en ácido fórmico (5 mL) y calentado a 40°C durante 24 horas. La reacción fue concentrada al vacío. El residuo fue disuelto en agua, concentrado al vacío, disuelto nuevamente en agua, y liofilizada para dar 100 mg (100%) de ácido carboxílico conjugado con bis-PEG de 6 kDa como un sólido blanco. La CLAP determinó que el conjugado era >99% puro (tiempo de retención = 7.63 min). 1ti RMN (CDCI3) d 9.06 (s amplio, 2H) , 8.84-8.83 (m, 2H) , 8.17-8.14 (d, 2H) , 7.53- 7.49 (m, 2H) , 7.24-7.21 (d, 4H), 7.02-6.99 (d, 4H) , 6.94-6.92 (d, 2H) , 4.81-4.79 (m, 2H) , 4.57-4.48 (dd, 4H) , 4.28-4.25 (m, 4H) 3.64 (s amplio, 621H) , 3.41-3.38 (m, 6H) , 3.23- 3.08 (m, 4H) , 1.23-1.18 (d, 12H) .
Ejemplo 32 A. Síntesis de t-butil éster conjugado con octa-PEG ligado a carbamato Néctar cat. No. 0J00T08 PEG de 8 brazos: MW 40 KDa (1) exceso de C0C12, (2) evaporar Exceso de R2NH y ET3N Esquema de Reacción 17 Siguiendo los procedimientos dados en el Ejemplo 31 anterior y empleando una molécula central octapegilada, se preparó un compuesto del título. Ejemplo 33 de 5 Da PEG-diamina Protegida con Boc de 40KDa Nitro-fenil éster (101 ) Una solución de 100 (100 mg, 0.14 mmol) y 4-nitrofenol (24 mg, 0.17 mmol) en THF (0.7 ml . ) fue enfriada en un baño de hielo. Se agregó una suspensión de EDC (33 mg, 0.17 mmol) en CH2C12 (0.7 mL) y la reacción fue agitada a 0CC durante 4 horas. La reacción fue diluida con acetato de etilo (100 mL) y lavada con ácido cítrico 0.2 N. La capa orgánica fue lavada con K2C03 al 10%, salmuera, secada sobre Na2S0 , filtrada, y concentrada al vacío para dar 90 mg (96%) de 101, el cual fue usado inmediatamente. 1H RMN (CDC13) d 9.07 (s amplio, 1H), 8.84-8.83 (d, 1H) , 8.28-8.25 (d, 2H) , 8.16-8.14 (d, 1H), 8.09-8.07 (d, 1H) , 7.65-7.63 (d, 2H) , 7.51 -7.47 (dd, 1H) , 7.41-7.39 (d, 2H) , 7.36-7.35 (d, 2H) , 7.12-7.07 (m, 1H), 6.95-6.92 (d, 1H) , 5.00 (s, 2H) , 4.82-4.76 (m, 1H) , 4.62-4.45 (dd, 2H) , 3.91 (s, 1H) , 3.18-3.12 (m, 2H) , 1.44 (s, 9H) 1 1.18-1.16 (d, 6H) .
La PEG diamina de 30 kDa (1 g, 0.033 mmol) y el Boc-NH-PEG-NHS éster de 5 kDa (0.67 g, 0.13 mmol) fueron disueltos en CH2C12 (10 mL) . Se agregó diisopropiletilamina (0.116 mL, 0.67 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. La reacción fue concentrada al vacío para dar el producto crudo. El residuo fue purificado de acuerdo al método de CLAP B para dar 0.46 g de la PEG diamina protegida con Boc de 40 kDa como un sólido blanco. El método de CLAP C determinó que el producto era >96% puro (tiempo de retención = 7.6 minutos). ?H RMN (CDC13) d 6.75 (s amplio, 2H), 5.15 (s amplio, 2H)3.64 (s, 2940H, PEG), 3.33-3.31 (m, 10H), 2.47-2.43 (m, 4H) , 1.44 (s, 18H) .
PEG diamina de 40 kDa La PEG diamina protegida con Boc de 40 kDa (0.2 g, 0.005 mmol) fue disuelta en TFA (4 mL) y agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La reacción fue concentrada al vacío para dar 200 mg (100%) de PEG diamina de 40 kDa cruda como un residuo caqui. El método CLAP C determinó que el producto era >96% puro (tiempo de retención = 6.5 minutos). X RMN (CDC13) d 7.85 (s amplio, 1H) , 6.75 (s amplio, 1H) , 3.64 (s, 2432H, PEG), 3.34-3.32 (m, 10H) , 2.47-2.45 (m, 4H) . t-butil éster (102) La PEG diamina de 40 kDa (0.2 g, 0.005 mmol) fue disuelta en CH2C12 (4 mL) . Se agregó diisopropiletilamina (17 µL , 0.1 mmol), seguido por el compuesto 101 (0.082 g, 0.1 mmol). Se agregó otra porción de diisopropiletilamina (17 µL) y la reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 18 horas. La reacción fue concentrada al vacío para dar 300 mg (150%) crudo 102 como un sólido blanco. El método de CLAP C determinó que el producto era >70% puro (tiempo de retención = 8.9 minutos). El producto crudo se usó como tal.
Conjugado 103 102 (0.3 g, 0.007 mmol) fue disuelto en ácido fórmico (5 mL) y se calentó a 40°C durante 24 horas. La reacción fue concentrada al vacío y se purificó de acuerdo al método de CLAP A para dar 0.14 g (68%) de 103 como un sólido blanco. El método de CLAP C determinó que el conjugado era >99% puro (tiempo de retención = 7.3 minutos). XH RMN (CDC13) d 9.05 (s amplio, 2H) , 8.82-8.81 (m, 2H) , 8.17-8.14 (d, 2H) , 8.05-8.04 (d, 2H) , 7.65-7.58 (m, 4H) , 7.54-7.48 (m, 2H) , 7.41-7.34 (d, 4H) , 7.10-7.05 (m, 2H) 6.95-6.93 (d, 2H) , 4.90 (m, 2H), 4.63-4.49 (m, 6H) , 3.64 (s amplio, 3042H, PEG), 3.35-3.29 (m, 6H) , 3.22 (m, 5H) , 2.45-2.41 (t, 4H) , 1.79-1.74 (m, 4H)1 1.29-1.27 (d, 12H) .
Ejemplo 34 40 KDa 104.
Síntesis del polímero KDa Boc-NH-PEG-NHS éster de 5KDa NOF Corporation Nektar PEG tetra amina protegida con Boc de 40 kDa Se disolvieron la PEG tetra-amina de 20 kDa (0.5 g, 0.025 mmol) y el 5 kDa Boc-NH-PEG-NHS éster (1 g, 0.2 mmol) en CH2C12 (5 ml). Se agregó diisopropiletilamina (0.087 ml, 0.5 mmol) y la reacción agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. La reacción fue concentrada al vacío y se retiró en MeOH (10 ml) . Se agregó ácido poliestiren sulfónico reticulado (1.17 g) y el recipiente de reacción fue agitado durante 2 horas. La mezcla fue agitada y concentrada al vacío para dar 1.4 g del producto como un sólido caqui. El residuo fue purificado de acuerdo al método de CLAP B para dar 0.44 g (44%) de la PEG tetra-amina protegida con Boc de 40 kDa como un sólido blanco. El método de CLAP C determinó que el producto era >96% puro (tiempo de retención = 8.4 minutos). 1H RMN (CDC13) d 6.75 (s amplio, 1H) , 5.15 (s amplio, 1H) , 3.64 (s, 2970H, PEG), 3.33-3.29 (m, 15H) , 2.46-2.42 (t, 8H) , 1.79-1.75 (m, 8H) , 1.44 (s, 36 H) .
PEG tetra-amina de 40 kDa La PEG tetra-amina protegida con Boc de 40 kDa (0.1 g, 0.0025 mmol) fue disuelta en TFA (4 mL) y agitada a temperatura ambiente durante 1.5 horas . La reacción fue concentrada al vacío para dar 120 mg de PEG tetra-amina de 40 kDa como un residuo transparente. El método de CLAP C determinó que el producto era >96% puro (tiempo de retención = 6.2 minutos). 1H RMN (CDC13) d 7.39 (s amplio, 1H) , 6.75 (s amplio, 1H) , 4.49-4.48 (m, 4H) , 3.64 (s, 3253H, PEG), 3.35- 3.33 (m, 15H), 2.49-2.46 (m, 8H) , 1.80-1.75 (m, 8H) . t-butil éster (104) La PEG tetra-amina de 40 kDa (0.1 g, 0.0025 mmol) fue disuelta en CH2C12 (2 mL) . Se agregó diisopropiletilamina (9 µL , 0.05 mmol) seguida por el compuesto 101 (82 mg, 0.1 mmol) . Se agregó otra porción de diisopropiletilamina (9 µL) y la reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 48 horas. La reacción fue concentrada al vacío para dar 110 mg de 104 crudo como un sólido blanco. El método de CLAP C determinó que el producto era >80% puro (tiempo de retención = 10.9 minutos) .
Conjugado 105 Se disolvió 104 (0.1 g, 0.0024 mmol) en ácido fórmico (5 mL) y se calentó a 40°C durante 24 horas. La reacción fue concentrada al vacío y fue purificada de acuerdo al método de CLAP A para dar 0.05 g (48%) de 105 como un sólido blanco. El método CLAP C determinó que el conjugado era >99% puro (tiempo de retención = 7.6 minutos). 1H RMN (CDCI3) d 9.06 (s amplio, 4H) , 8.83-8.82 (m, 4H) , 8.20-8.17 (d, 4H), 8.05-8.03 (d, 4H) , 7.63- 7.61 (m, 8H) , 7.53-7.49 (m, 4H), 7.42-7.33 (m, 8H) , 7.09-7.05 (m, 4H) 6.70 (m, 4H) , 4.84 2'35 (m, 4H) , 4.62-4.50 (m, 12H) , 3.64 (s amplio, 2357H, PEG), 3.36-3.29 (m, 12H) , 2.46-2.42 (t, 8H) , 1.79-1.74 (m, 8H) , 1.30-1.25 (m, 24H) .
Ejemplo 35 -M KDa t-butil éster (106) La PEG tetra-amina de 40 kDa (37 mg, 0.000925 mmol) y DMAP (0.5 mg, 0.0037 mmol) fueron disueltas en CH2C12 (0.5 mL) . Se agregó trietilamina (3 µL, 0.019 mmol) , seguida por 40 (26 mg, 0.037 mmol). Se agregó otra porción de trietilamina (3 µL) y la reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 18 horas. La reacción fue concentrada al vacío para dar 34 mg 106 crudo como un sólido blanco. El método de CLAP C determinó que el producto era >80% puro (tiempo de retención = 10.9 minutos).
Conjugado 107 Se disolvió 106 (34 mg, 0.0008 mmol) en ácido fórmico (4 mL) y se calentó a 40 °C durante 24 horas. La reacción fue concentrada al vacío y purificada de conformidad con al Método de CLAP A para dar 17 mg (50%) de 107 como un sólido blanco. El Método de CLAP C determinó que el conjugado era >99% puro (tiempo de retención = 7.6 minutos) . 1H RMN (CDC13) d 9.06 (s amplio, 4H) , 8.86 (s amplio, 4H) , 8.17-8.15 (d, 4H) , 7.52 (d, 4H) , 7.26-7.23 (d, 8H) , 7.02-6.99 (d, 8H) , 6.72 (m, 4H) , 5.69 (m, 4H)14.80 (m, 4H) , 4.60-4.47 (dd, 8H) , 3.64 (s amplio, 1602H, PEG), 3.36-3.30 (dd, 8H) , 3.16 (m, 8H) , 2.46-2.42 (t, 8H) , 1.24 (s amplio 24H) .
Ejemplo 36 PEG alcohol de 4 brazos de 40 kDa NOF Corporation Tetracloroformiato de PEG de 40 kDa El PEG alcohol de 4 brazos de 40 kDa (0.2 g, 0.005 mmol) fue disuelto en CH2C12 (1 mL) . A este se agregó una solución de 2.0 M de fosgeno en tolueno (0.15 mL, 0.3 mmol). La reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 18 horas. La reacción fue concentrada al vacío para dar 200 mg de tetracloroformiato de PEG de 40 kDa como un sólido blanco. t-butil éster (108) El tetracloroformiato de PEG de 40 kDa (0.2 g, 0.005 mmol) fue disuelto en CH2C12 (2 mL) . A este se agregó A 33 (63 mg, 0.1 mmol), seguido por trietilamina (3.5 µL , 0.025 mmol) . La reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 72 horas. La reacción fue concentrada al vacío para dar 270 mg de 108 como un sólido blanco.
Conjugado 109 Se disolvió 108 (0.26 g, 0.006 mmol) en ácido fórmico (5 mL) y se calentó a 40°C durante 24 horas. La reacción fue concentrada al vacío y purificada de acuerdo al Método de CLAP A para dar 0.105 g (42%) de 109 como un sólido blanco. El Método de CLAP C se determinó que el conjugado era >99% puro (tiempo de retención= 8.3 minutos). 1H RMN (CDC13) d 9.06 (s amplio, 4H) , 8.85-8.84 (m, 4H) , 8.17-8.14 (d, 4H) , 7.53-7.49 (m, 4H) , 7.26- 7.22 (d, 8H) , 7.01-6.98 (d, 8H) , 4.81-4.78 (m, 4H) , 4.59-4.46 (dd, 8H) , 4.28-4.35 (m, 8H) , 3.64 (s amplio, 3872H, PEG), 3.15-3.13 (m, 8H) , 1.24-1.19 ( , 24H) .
Ejemplo 37 PEG alcohol de 3 brazos de 40 kDa NOF Corporation t-butil éster (111) El PEG alcohol de 3 brazos de 40 kDa (0.25 g, 0.00625 mmol), 110 (0.04 g, 0.056 mmol), y trifenilfosfina (0.025 g, 0.094 mmol) fueron secados por destilación azeotrópica de tolueno (5 mL) . La mitad del volumen fue destilada (2.5 mL) , y la mezcla fue enfriada a temperatura ambiente. CH2C12 (0.5 mL) fue agregada para hacer la reacción homogénea. Se agregó por goteo azodiacarboxilato de dietilo (0.015 mL, 0.094 mmol) y la reacción se agitó durante 48 horas. El método de CLAP C mostró la desaparición completa del PEG alcohol inicial. La reacción fue concentrada al vacío para dar el t-butil éster 111 como un sólido blanco.
Conjugado 112 Se disolvió 111 (0.2 g, 0.005 mmol) en ácido fórmico (3 mL) y se calentó 40°C durante 24 horas. La reacción fue concentrada al vacío y fue purificada al vacío y fue purificada de acuerdo al Método CLAP A para dar 0.1 g (48%) de 112 como un sólido blanco. El Método de CLAP C determinó que el conjugado era >99% (tiempo de retención = 8.1 minutos). XH RMN (CDC13) d 9.08 (s amplio, 3H) , 8.84 (s amplio, 3H), 8.18-8.16 (d, 3H) , 8.02-8.00 (d, 3H) , 7.67-7.61 (m, 6H), 7.47-7.38 (m, 9H) , 7.08-7.04 (m, 3H) , 6.91 (m, 3H) , 4.88 (m, 3H) , 4.62-4.49 (dd, 6H) , 4.13 (m, 6H) , 3.64 (s amplio, 5919H PEG), 3.23 (m, 6H) , 1.25-1.24 (d, 18H) . Se usaron métodos similares para sintetizar los siguientes conjugados: Ejemplo 38 113.
PEG alcohol de 4 brazos de 40 kDa fue acoplado a 110 y desprotegido hasta el producto final usando métodos similares como con 112. El producto fue purificado de acuerdo de acuerdo al Método de CLAP A. El Método de CLAP C determinó que el conjugado era >95% puro (tiempo de retención= 7.5-8.1 minutos). 1R RMN (CDCI3) d 9.08 (s amplio, 4H) , 8.84 (s amplio, 4H), 8.18-8.16 (d, 4H) , 8.02-8.00 (d, 4H) , 7.67-7.61 (m, 8H) , 7.47-7.38 (m, 12H) , 7.08-7.04 (m, 4H) , 6.91 (m, 4H) , 4.88 (m, 4H) , 4.62-4.49 (dd, 8H) , 4.13 (m, 8H) , 3.64 (s amplio, 10101 H PEG), 3.23 (m, 8H) , 1.25-1.24 (d, 24H).
Ejemplo 39 115.
El PEG alcohol de 3 brazos de 40 kDa fue acoplado al t-butil éster 114 (mostrado más abajo) y desprotegido hasta el producto final usando métodos similares al 112. El producto fue purificado de acuerdo al Método de CLAP A. El método de CLAP C determinó que el conjugado era >95% puro (tiempo de retención = 7.3 minutos). X RMN (CDC13) d 8.66 (s amplio, 3H), 8.44 (s amplio, 3H) , 8.04- 8.02 (d, 3H) , 7.75-7.30 (m, 24H) , 7.10-7.06 (m, 3H) , 6.93 (s, 3H) , 5.60-5.50 (m, 3H) , 4.15 (m, 6H) , 3.66 (s amplio, 4270H PEG), 3.00 (m, 3H) , 3.40-3.20 (m, 6H) , 1.27 (d, 9H) . 114.
Ejemplo 40 PEG alcohol de 3 brazos de 40 kDa NOF Corporation t-butil éster (117) El PEG alcohol de 3 brazos de 40 kDa (0.00625 mmol), 116 (0.056 mmol), y trifenilfosfina (0.094 mmol) se secaron por destilación azeotrópica de tolueno (5 mL) . La mitad del volumen se destiló (2.5 mL) , y la mezcla se enfrió a temperatura ambiente. Se agregó CH2C12 (0.5 mL) para hacer la reacción homogénea. Se agregó por goteo azodicarboxilato de dietilo (0.094 mmol) y la reacción se agitó durante 48 horas. La reacción se concentró al vacío para dar el t-butil éster.
Conjugado 118 Se disolvió 118 (0.005 mmol) en ácido fórmico (3 mL) y se calentó a 40°C durante 24 horas. La reacción se concentró al vacío y se purificó de acuerdo al Método CLAP A para dar 112.
Ejemplo 41 Usando el producto del Ejemplo 29 y los polímeros de PEG usados en los Ejemplos 38 y 39, se prepararon los siguientes conjugados: Los siguientes conjugados en las Tablas V y VI son preparados de acuerdo a los ejemplos y esquemas de reacción descritos aquí .
TABLA V donde en cada una de las estructuras la suma de todas las p es de 200 a 1360.
TABLA IV ZZ = Z Z Z= EJEMPLOS BIOLÓGICOS Ejemplo A Ensayos in vitro para determinar la potencia de los compuestos candidatos: Inducción del epítope 15/7 en Jur at TM (15/7 LIBS) Se incubaron células TM de Jurkat en fase Log- en una Flexiplaca de 96 pozos bajo las siguientes condiciones: 105 células/100 µl/pozo en amortiguador de ensayo (Hepes 20 mM, NaCl 140 mM, CaCl? 1 mM, MgCl2 1 mM y BAS al 0.3%), 10 /g/ml de 15/7 (Elan) , y compuesto a un intervalo de concentraciones. La incubación se efectuó durante 30 minutos a TA. Las células se lavaron entonces dos veces con amortiguador del ensayo y se incubaron con Goat Fab ' 2 anti Ms IgG (Fc)-PE (Immunotech cat# PN IM0551) a 1:200 en amortiguador de ensayo durante 30 minutos sobre hielo en la oscuridad. Las células se lavaron entonces una vez y se resuspendieron en 300 µl de amortiguador de ensayo frío para análisis por FACS (Becton-Dickinson) .
Ensayo de Competencia de Ligando Multivalente (MVCOMP) : Métodos : Los receptores de integrina median la adhesión celular a través de una interacción multivalente con sus ligandos específicos - receptores de integrina múltiples que se acoplan simultáneamente a moléculas de ligando múltiple dentro de un sustrato adhesivo. Para simular esta interacción fisiológica en un ensayo cuantitativo, altamente sensible, se desarrolló una prueba de ligando multivalente que se une específicamente a una integrina a4 sobre la superficie de linfocitos. La sonda consiste de un ligando de molécula pequeña para la integrina a4, compuesto 200 (estructura mostrada más adelante) , conjugado a una molécula de soporte de IgG en un exceso molar de 6-10 (6-10 moléculas pequeñas: 1 IgG) . Esta unión es inhibida por 21/6, y anticuerpo para a . Una vez unido a la superficie celular, el conjugado puede ser medido con un anticuerpo secundario marcado de manera fluorescente contra IgG de ratón por análisis FACS. En este ensayo han sido usadas dos moléculas diferentes de soporte de IgG monoclonal, TM2a y 27/1, ninguna de las cuales se une a los linfocitos humanos a menos que se conjuguen con el ligando a4. 200, Conjugación de Reactivo en la Molécula Pe ueña-Anticuerpo Se incubó aproximadamente 1 mg de TM2a o 27/1 (Elan) con un exceso molar de 1:6 o 1:10 del compuesto 200 en presencia de [Bis (sulfosuccinimidil) suberato] (Pierce) en un exceso molar de 50 veces en un volumen total de 1.0 ml durante 60 minutos a temperatura ambiente, con agitación. La reacción fue entonces extinguida con el amortiguador que contiene amina TRIS-C1 a pH 7.5 durante 20 minutos. El producto fue dializado dos veces durante 24 horas contra 4,000 volúmenes PBS a 4 grados C en casetes de membrana con un corte de 10 MW KD para remover la molécula pequeña no unida y el reactivo enlazante.
Ensayo de Unión Competitiva Las células de Jurkat (subline TM, subclona #15, Elan) fueron incubadas con una titulación de varios compuestos de prueba en presencia de conjugado de TM2a o 27/1 diluido a 1:100 en amortiguador de ensayo durante 30 minutos a temperatura ambiente. El reactivo no unido es entonces removido por varios pasos de lavado en los cuales las células fueron sedimentadas en una centrífuga de mesa Beckman a 300 x g durante 5 minutos, entonces se resuspendieron en amortiguador fresco. El conjugado de anticuerpo unido restante fue detectado incubando las células con anti-IgG de ratón (Fc) Ficoeritrina F(ab)'2 de Cabra (BeckmanCoulter) durante 30 minutos a 4 grados C, seguido por lavado y análisis FACS.
Inducción del Epitope 2G3 sobre células 8866 (Sitio de Unión Inducido por el Ligando 2G3) Las células 8866 en fase Log son incubadas en una Flexiplaca de 96 pozos bajo las siguientes condiciones: 105 células/100 //1/pozo en amortiguador de ensayo (PBS, CaCl2 1 mM, MgCl2 1 mM, FBS al 5%), 10 ,ag/ml de 2G3 (Elan), y el compuesto a un intervalo de concentraciones. La incubación se efectuó durante 30 minutos a TA. Las células fueron entonces lavadas dos veces con amortiguador de ensayo e incubadas con Fab '2 anti Ms IgG (Fc)-PE de Cabra (Immunotech cat# PN 1M0551) a 1:200 en amortiguador de ensayo durante 30 minutos sobre hielo en la oscuridad. Las células fueron entonces lavadas una vez y resuspendidas en 300 µl de amortiguador de ensayo frío para el análisis por FACS (Becton-Dickinson) . Se hace constar, que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (50)

  1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones . 1. Un conjugado de la fórmula I:
  2. I caracterizado porque B es una porción polimérica biocompatible opcionalmente unida covalentemente a una molécula central con un brazo ramificado; q es de aproximadamente 2 hasta aproximadamente 100; A cada vez que ocurre es independientemente un compuesto de fórmula II
  3. II o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde J se selecciona de: a) un grupo de fórmula (a) donde R31 es un enlace covalente a la porción polimérica, la cual comprende opcionalmente un enlazante, o R31 es seleccionado del grupo que consiste de -H, R31', -NH2, -NHR31', -N(R31')2, -NC3-C6 cíclico, -OR31', y -SR31', donde cada R31' es independientemente un alquilo de C?-C6 lineal o ramificado opcionalmente sustituido, cicloalquilo de C3-C6, arilo opcionalmente sustituido, o heteroarilo opcionalmente sustituido, y R32 es un enlace covalente a la porción polimérica la cual opcionalmente comprende un enlazante, o R es seleccionado del grupo que consiste de -H, -N02, haloalquilo, y -N(MR1)R42 donde M es un enlace covalente, -C(O)- o -S02-, y R41 es R41', N(R41')2, u -OR41', donde cada R41' es independientemente hidrógeno, un alquilo de C?-C6 lineal o ramificado opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, heterocíclico opcionalmente sustituido o un heteroarilo opcionalmente sustituido, donde las sustituciones opcionales son haluro, alquilo de C?-C6, o -O alquilo de Ci-Ce, y R42 es hidrógeno, R41', alquinilo, o alquinilo sustituido; y b) un grupo de fórmula (b )
  4. (R)p {b) donde R es seleccionado del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, y heteroarilo sustituido; Ar1 es seleccionado del grupo que consiste de arilo, arilo sustituido, heteroarilo y heteroarilo sustituido donde cada uno del arilo, arilo sustituido, heteroarilo y heteroarilo sustituido está opcionalmente unido covalentemente a la porción polimérica donde la porción polimérica opcionalmente comprende un enlazante que une covalentemente la porción polimérica a Ar1; Ar2 es seleccionado del grupo que consiste de arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, alquilo, alquilo sustituido, alquilamino, y alquilamino sustituido, donde Ar2 está opcionalmente unido covalentemente a la porción polimérica y donde la porción polimérica opcionalmente comprende un enlazante el cual enlaza covalentemente la porción polimérica a Ar2; X se selecciona del grupo que consiste de -NR1-, -O-, -S-, -SO-, -SG2 y -CH2- opcionalmente sustituido el cual está opcionalmente unido covalentemente a la porción polimérica donde, en cada caso, la porción polimérica comprende opcionalmente un enlazante el cual enlaza covalentemente la porción polimérica; donde R1 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno y alquilo; T se selecciona de: a) un grupo de fórmula (c) donde Y se selecciona del grupo que consiste de -0-y -NR1- donde R1 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno y alquilo; W se selecciona del grupo que consiste de un enlace covalente a una porción polimérica la cual opcionalmente comprende un enlazante y -NR2R3 donde R2 y R3 son seleccionados independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, y donde R2 y R3, junto con el átomo de nitrógeno unido a éstos, forman un anillo heterocíclico o un anillo heterocíclico sustituido donde cada uno del alquilo, alquilo sustituido, heterocíclico y heterocíclico sustituido está opcionalmente covalentemente unido a una porción polimérica la cual comprende opcionalmente además un enlazante; 27i es un número entero igual a 0, 1 ó 2; n es un número entero igual a 0, 1 ó 2 ; y b) un grupo de fórmula (d) donde G es un arilo opcionalmente sustituido o un anillo de 5 ó 6 miembros de heteroarilo opcionalmente sustituido que contiene de 0 a 3 nitrógenos, donde el arilo o heteroarilo comprende opcionalmente además un enlace covalente a una porción polimérica la cual comprende opcionalmente un enlazante; R6 es un enlace covalente a una porción polimérica la cual comprende opcionalmente un enlazante, o R6 es -H, alquilo, alquilo sustituido, o -CH2C(0)R17, donde R17 es -OH, -OR18, o
  5. -NHR18, donde R18 es alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, o heteroarilo sustituido; R55 es -OH o un éster hidrolizable, o R55 forma un éster polimérico hidrolizable con la porción polimérica, opcionalmente a través de un enlazante; siempre que: A. al menos uno de J, R55 y T contengan un enlace covalente a la porción polimérica; B. cuando X es -O-, entonces m es dos; y C. el conjugado de fórmula I tiene un peso molecular no mayor de aproximadamente 80,000. 2. El conjugado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque únicamente uno de J, R55 y T contienen un enlace covalente a la porción polimérica. 3. El conjugado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque n es 2, R en cada caso es alquilo de C1-C3, y ambos grupos R son el mismo carbono. 4. El conjugado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque q es un número entero de 2 hasta aproximadamente 20. 5. El conjugado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque q es un número entero de 2 hasta aproximadamente 8.
  6. 6. El conjugado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque A en cada caso es independientemente un compuesto de fórmula lia lia o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
  7. 7. El conjugado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque A en cada caso es independientemente un compuesto de fórmula Ilb: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
  8. 8. El conjugado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque A en cada caso es independientemente un compuesto de fórmula lie: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
  9. 9. El conjugado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque A en cada caso es independientemente un compuesto de fórmula lid: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
  10. 10. El conjugado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque A en cada caso es independientemente un compuesto de fórmula lie: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
  11. 11. El conjugado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque A en cada caso es independientemente un compuesto de fórmula Ilf: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde R está unido covalentemente a una porción polimérica la cual comprende opcionalmente un enlazante; R5 es seleccionado del grupo que consiste de alquilo y alquilo sustituido; Ar3 es seleccionado del grupo que consiste de arilo, arilo sustituido, heteroarilo y heteroarilo sustituido.
  12. 12. El conjugado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque A en cada caso1 es independientemente un compuesto de o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde R4 está unido covalentemente a una porción polimérica la cual comprende opcionalmente un enlazante; R5 es seleccionado del grupo que consiste de alquilo y alquilo sustituido; Ar3 es seleccionado del grupo que consiste de arilo, arilo sustituido, heteroarilo y heteroarilo sustituido; y n es un número entero igual a 0, 1 ó 2.
  13. 13. El conjugado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque A en cada caso es independientemente un compuesto de fórmula Ilh siguiente: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde R4 está unido covalentemente a una porción polimérica la cual comprende opcionalmente un enlazante; y Ar3 es seleccionado del grupo que consiste de arilo, arilo sustituido, heteroarilo y heteroarilo sustituido.
  14. 14. El conjugado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque A en cada caso es independientemente un compuesto de fórmula Ili: (R)n o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
  15. 15. El conjugado de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque m es 1, X es S, y R en cada caso es seleccionado independientemente de hidroxilo, alquiloxi, alquilo o una unión covalente a la porción polimérica.
  16. 16. El conjugado de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque n es 2 , y R en ambos casos es metilo.
  17. 17. El conjugado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque A en cada caso es independientemente un compuesto de fórmula IIj siguiente: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
  18. 18. El conjugado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque A en cada caso es independientemente un compuesto de fórmula Ilk siguiente: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
  19. 19. El conjugado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque A en cada caso es independientemente un compuesto de fórmula IIL siguiente: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde R4 está unido covalentemente a una porción polimérica la cual comprende opcionalmente un enlazante.
  20. 20. El conjugado de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque G es piridinilo, R31 es hidrógeno o dialquilamino y R32 es sulfonamida, amida o urea.
  21. 21. El conjugado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque A y B son como se muestra a continuación: donde Z es ZZ es ZZZ es y donde la suma de todas las p es de aproximadamente 100 a 1360.
  22. 22. El conjugado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque se selecciona del grupo que consiste de: y una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
  23. 23. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende un soporte farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente efectiva de un conjugado de conformidad con la reivindicación 1 o mezclas del mismo.
  24. 24. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 23, caracterizada porque el soporte farmacéuticamente aceptable es adecuado para la administración parenteral.
  25. 25. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 23, caracterizada porque el soporte farmacéuticamente aceptable es adecuado para la administración subcutánea.
  26. 26. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 23, caracterizada porque el soporte farmacéuticamente aceptable es adecuado para la administración por infusión.
  27. 27. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 23, caracterizada porque el soporte farmacéuticamente aceptable es adecuado para la administración por inyección.
  28. 28. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 23, caracterizada porque el soporte farmacéuticamente aceptable es adecuado para la administración oral.
  29. 29. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 23, caracterizada porque el soporte farmacéuticamente aceptable es adecuado para la administración rectal.
  30. 30. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 23, caracterizada porque el soporte farmacéuticamente aceptable es adecuado para la administración usando un parche.
  31. 31. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 23, caracterizada porque el soporte farmacéuticamente aceptable es adecuado para la administración por inhalación.
  32. 32. Un método para tratar un estado de enfermedad causado exacerbado al menos en parte por la unión de los leucocitos medida por la integrina alfa 4 en un paciente, caracterizado porque comprende administrar una cantidad efectiva de un conjugado de conformidad con la reivindicación 1.
  33. 33. El método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque la interacción de unión de a4 que es inhibida es con VCAM-1.
  34. 34. El método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque la interacción de unión de a4 que es inhibida es con fibronectina.
  35. 35. El método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque la interacción de unión de a4 que es inhibida es con adCAM.
  36. 36. El método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque el estado de enfermedad es un estado de enfermedad autoinmune.
  37. 37. El método de conformidad con la reivindicación 36, caracterizado porque el tratamiento por el conjugado de conformidad con la reivindicación 1 alivia la inflamación y el daño tisular posterior causado por una reacción autoinmune.
  38. 38. El método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque el estado de enfermedad es la esclerosis múltiple, meningitis, encefalitis, apoplejía y otros traumas cerebrales.
  39. 39. El método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque el estado de enfermedad es la esclerosis múltiple.
  40. 40. El método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque el estado de enfermedad es seleccionado del grupo que consiste de asma, síndrome de distención respiratoria adulta y daño pulmonar agudo mediado por los leucocitos.
  41. 41. El método de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque el estado de enfermedad es el asma.
  42. 42. El método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque la condición de la enfermedad es la artritis reumatoide.
  43. 43. El método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque el estado de enfermedad es una condición de enfermedad inflamatoria seleccionada del grupo neuritis óptica, uveítis, rinitis alérgica, espondilitis anquilosante, artritis psoriática, vasculitis, síndrome de Reiter, lupus eritematoso sistémico, esclerosis sistémica progresiva, polimiositis, dermatomiositis, granulomatosis de egner, aortits, sarcoidosis, linfocitopenia, arteritis temporal, pericarditis, miocarditis, insuficiencia cardiaca congestiva, poliarteritis nodosa, síndrome de hipersensibilidad, alergia, síndromes hipereosinofílicos, síndrome de Churg-Strauss, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, pneumonitis por hipersensibilidad, hepatitis activa crónica, cistitis intersticial, insuficiencia endocrina autoimmune, cirrosis biliar primaria, anemia aplástica autoinmune, hepatitis persistente crónica, tiroiditis, demencia por SIDA, diabetes, enfermedad de Alzheimer, demencia, ateroesclerosis, tumor metastático y rechazo de transplante.
  44. 44. El método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque el estado de la enfermedad es la enfermedad de Sjogren.
  45. 45. El método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque el estado de la enfermedad es la enfermedad de Crohn.
  46. 46. El método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque el estado de la enfermedad es la inflamatoria del intestino.
  47. 47. El método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque el estado de la enfermedad es la colitis ulcerativa.
  48. 48. El método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque el conjugado es un inhibidor de a4ß? y aß?.
  49. 49. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende un conjugado de conformidad con la reivindicación 1 en combinación con un inhibidor de a4ß7.
  50. 50. Un método para tratar un estado de enfermedad causado o exacerbado al menos en parte por la unión de los leucocitos mediada por la integrina alfa 4 en un paciente, caracterizado porque comprende la coadministración de una cantidad efectiva de un conjugado de conformidad con la reivindicación 1 y una cantidad efectiva de un inhibidor de a4ß7.
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