EA012433B1 - Многовалентные vla-4 антагонисты, содержащие полимерные фрагменты - Google Patents

Многовалентные vla-4 антагонисты, содержащие полимерные фрагменты Download PDF

Info

Publication number
EA012433B1
EA012433B1 EA200700212A EA200700212A EA012433B1 EA 012433 B1 EA012433 B1 EA 012433B1 EA 200700212 A EA200700212 A EA 200700212A EA 200700212 A EA200700212 A EA 200700212A EA 012433 B1 EA012433 B1 EA 012433B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
substituted
group
alkyl
alkylene
aryl
Prior art date
Application number
EA200700212A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200700212A1 (ru
Inventor
Андрей В. Конради
Майкл А. Плисс
Кристофер М. Семко
Теодор Йеднок
Дженифер Л. Смит
Original Assignee
Элан Фармасьютикалз, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Элан Фармасьютикалз, Инк. filed Critical Элан Фармасьютикалз, Инк.
Publication of EA200700212A1 publication Critical patent/EA200700212A1/ru
Publication of EA012433B1 publication Critical patent/EA012433B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/74—Synthetic polymeric materials
    • A61K31/785—Polymers containing nitrogen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/02—Drugs for disorders of the urinary system of urine or of the urinary tract, e.g. urine acidifiers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/10—Drugs for disorders of the urinary system of the bladder
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q5/00—Preparations for care of the hair

Abstract

Раскрыты конъюгаты формулы I, где А представляет собой соединение формулы II, которые связывают VLA-4. Некоторые из данных конъюгатов также ингибируют адгезию лейкоцитов и, в частности, адгезию лейкоцитов, опосредованную VLA-4. Такие конъюгаты полезны при лечении у пациентов-млекопитающих, например людей, воспалительных заболеваний, таких как астма, болезнь Альцгеймера, атеросклероз, СПИД-слабоумие, диабет, воспалительное заболевание кишечника, ревматоидный артрит, трансплантация тканей, метастазы опухолей и ишемия миокарда. Данные конъюгаты можно также вводить с целью лечения воспалительных заболеваний головного мозга, например рассеянного склероза.

Description

Данное изобретение касается конъюгатов, которые ингибируют адгезию лейкоцитов и, в частности, адгезию лейкоцитов, опосредованную, по меньшей мере, частично УЪА-4. Конъюгаты по данному изобретению характеризуются как содержащие более одного УЪА-4-ингибирующего соединения, ковалентно связанного с биологически совместимым полимером, например полиэтиленгликолем.
Современное положение дел
Физическое взаимодействие воспалительных лейкоцитов друг с другом и другими клетками организма играет важную роль в регуляции иммунных и воспалительных реакций [Бртшдет, Т. А. ЫаЮге, 346, 425, (1990); §ртшдет, Т. А. Се11 76, 301, (1994)]. Многие из данных взаимодействий опосредованы специфическими молекулами на клеточной поверхности, коллективно обозначаемыми как молекулы клеточной адгезии. Эти адгезионные молекулы подразделяют на различные группы на основании их структуры. Одно семейство адгезионных молекул, которые, как полагают, играют важную роль в регуляции иммунных и воспалительных реакций, представляет собой семейство интегринов. Гликопротеины клеточной поверхности данного семейства имеют типичную нековалентно связанную гетеродимерную структуру.
Интегрины отдельной подгруппы, представляющие здесь интерес, включают альфа 4 (α4) цепь, которая может образовывать пару с двумя другими бета цепями бета 1 (β1) и бета 7 (β7) [8оппеиЬегд, А. 1Ь1й]. Образование пар α4β1 происходит на многих циркулирующих лейкоцитах (например, лимфоцитах, моноцитах и эозинофилах), хотя отсутствует или происходит в низкой степени на нейтрофилах. УЪА-4 (очень поздний антиген-4, также обозначаемый как интегрин α4β! и СЭ49Й/СЭ29). впервые идентифицированный Нет1ег и Такайа является членом семейства интегринов β1, рецепторов клеточной поверхности. УЪА-4 состоит из цепи α4 и цепи β1. Существует по меньшей мере девять интегринов β1, все они имеют одинаковую цепь β1, и каждый имеет индивидуальную цепь. Эти девять рецепторов связывают различные комплементы разнообразных молекул клеточного матрикса, например фибронектин, ламинин и коллаген. УЪА-4, например, связывает фибронектин. УЪА-4 также связывает нематричные молекулы, которые экспрессируются эндотелиальными и другими клетками.
УЪА-4 (интегрин α4 β1) связывает адгезионные молекулы, называемые молекулами клеточной адгезии сосудистой стенки 1 (или УСАМ-1), которые часто подвергаются позитивной регуляции на эндотелиальных клетках в местах воспаления [ОкЬотие, Ъ. Се11, 62, 3 (1990)]. УСАМ-1 представляет собой нематричную молекулу, которая является экспрессированным рецептором, который, как полагают, отвечает за проходимость лейкоцитов в центральную нервную систему (ЦНС). Показано также, что α4βι связываются по меньшей мере с тремя сайтами на молекуле матрикса фибронектина [Нитрйпек, М. 1. и др. С1Ьа Еоипйайоп Бутрокшт, 189, 177, (1995)]. Определенные эпитопы УЪА-4 отвечают за активности связывания фибронектина и УСАМ-1, показано, что каждый из них ингибируется независимо. На основании данных, полученных с моноклональными антителами на животных моделях, полагают, что взаимодействие между α4βι и лигандами на других клетках и во внеклеточном матриксе играет важную роль в миграции и активации лейкоцитов [Уейпоек, Т. А. и др., Ыа!иге, 356, 63, (1992)].
Интегрин, генерированный при образовании пары α4 и β7, называется ЬРАМ-1 [Ноктапп, В. и ^е155тап, I. ЕМВО 1. 8, 1735, (1989)] и подобно α4β1 может связывать УСАМ-1 и фибронектин.
Кроме того, α4β7связывает адгезионную молекулу, которая, как считают, включена в хоминг лейкоцитов в слизистую ткань и обозначается МАйСАМ-1 [Ветйп, С. и др. Се11, 74, 185, (1993)]. Взаимодействие между α4β7 и МАйСАМ-1 также может быть важным на местах воспаления вне слизистой ткани [Уапд, Χ-Ό. и др., РЫА8, 91, 12604 (1994)].
Межклеточная адгезия, опосредованная УЕА-4 и другими рецепторами клеточной поверхности, связана с рядом воспалительных реакций. На месте поражения или другого воспалительного раздражения, активированные сосудистые эндотелиальные клетки экспрессируют молекулы, являющиеся адгезионными для лейкоцитов. Механика адгезии лейкоцитов к эндотелиальным клеткам включает отчасти распознавание и связывание рецепторов клеточной поверхности на лейкоцитах с соответствующими молекулами клеточной поверхности на эндотелиальных клетках. Будучи связанными, лейкоциты мигрируют по стенке кровеносного сосуда до пораженного места и высвобождают химические медиаторы, поражая инфекцию. Обзоры по адгезии рецепторов иммунной системы смотри, например, в работах Брппдет и ОкЬотп.
Воспалительные нарушения головного мозга, такие как рассеянный склероз (МБ), менингит, энцефалит и модельное заболевание, называемое экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит (ЕАЕ), представляют собой примеры нарушений центральной нервной системы, в которых механизм адгезии эндотелий/лейкоциты дает разрушение здоровой в других отношениях ткани головного мозга. Большое количество лейкоцитов мигрирует через гематоэнцефалический барьер (ГЭБ) у пациентов с данными воспалительными заболеваниями. Лейкоциты высвобождают токсические медиаторы, которые вызывают
- 1 012433 распространенное поражение и гибель клеток, в результате которого происходит нарушение нервной проводимости и паралич. Аналогичные случаи при энцефалите и менингите показывают, что данные заболевания можно лечить при помощи подходящих ингибиторов клеточной адгезии.
В других системах организма также происходит поражение ткани по механизму адгезии, результатом которого является миграция или активация лейкоцитов. Например, воспалительные заболевания кишечника (включая язвенный колит и болезнь Крона), по меньшей мере, частично вызваны проходимостью лейкоцитов по эндотелию кишечника через взаимодействие α4β7 с МайСАМ и также, возможно, через взаимодействие α4β1 с УСАМ-1, экспрессируемыми в данной ткани. Полагают, что астма, ревматоидный артрит и отторжение трансплантатов тканей имеют компоненты, основанные на взаимодействии α4β1 с УСАМ-1 и/или фибронектином, возможно, тем и другим, показано, что начальный инсульт после ишемии миокарда (сердечной ткани) может быть дополнительно осложнен поступлением лейкоцитов в поврежденную ткань, вызывающим дальнейшее поражение (Уеййег и др.). Другие воспалительные или медицинские состояния, опосредованные механизмом адгезии молекул, включают, например, болезнь Альцгеймера, атеросклероз, деменцию в результате СПИДа, диабет (включая острый ювенильный диабет), метастазы опухолей, инсульт и другие церебральные травмы, нефрит, ретинит, атопический дерматит, псориаз и острое лейкоцит-опосредованное поражение легких, например, респираторный дистресс синдром у взрослых.
Одна группа антагонистов УЪА-4, демонстрирующих перспективные качества противовоспалительных агентов, представляет собой класс сульфонилированных-Рго-РЬе соединений, как указано далее, например, в патенте США № 6489300. Данные соединения являются очень эффективными антагонистами связывания УЪА-4/УСАМ-1.
Обладая экстенсивным метаболизмом при первом прохождении через печень, данные соединения мало пригодны для перорального приема. Так как многие болезненные состояния, подлежащие лечению данными соединениями, являются хроническими состояниями, увеличенный период полураспада вводимого соединения в сыворотке повысил бы полезность соединений данного типа при лечении заболеваний у млекопитающих.
Период полураспада лекарства является мерой времени, которое необходимо для уменьшения количества лекарства в организме наполовину по нормальным путям метаболиза и выведения. Ингибиторы УЪА-4, включая ингибиторы, раскрытые в патенте США № 6489300, имеют недостаток - короткий период полураспада, от приблизительно 10 до приблизительно 20 мин, даже если фармацевтический препарат вводят внутривенно. Чтобы в организме пациента сохранялось эффективное количество лекарства в течение приемлемого периода времени следует вводить очень большие количества лекарства и/или лекарство надо вводить много раз в день.
Ингибиторы УЪА-4 с таким коротким периодом полураспада являются коммерчески нежизнеспособными терапевтическими кандидатами. Следовательно, существует потребность в ингибиторах УЪА-4 с существенно увеличенными периодами полураспада в сыворотке; предпочтительно в диапазоне от нескольких часов до нескольких дней.
Краткое содержание изобретения
Данное изобретение касается конъюгатов, демонстрирующих УЪА-4 антагонистические свойства. Конъюгаты по данному изобретению характеризуются как содержащие более одного антагониста УЪА-4, ковалентно связанных с полимером. Не ограничиваясь какой-либо теорией, полагают, что увеличенный период полураспада в сыворотке связан с конъюгацией активных соединений с полимером. Кроме того, присоединение множества копий таких соединений к полимеру снижает до минимума ухудшение биологической эффективности.
В одном аспекте данное изобретение касается конъюгатов приведенной ниже формулы I
В обозначает биологически совместимый полимерный фрагмент, необязательно ковалентно связанный с разветвленной центральной молекулой;
с.| равно от приблизительно 2 до приблизительно 20; А в каждом случае независимо представляет собой соединение формулы II или его фармацевтически приемлемую соль, где выбирают из
а) группы формулы (а):
- 2 012433
в которой В31 обозначает ковалентную связь с полимерным фрагментом, который необязательно содержит линкер, или В31 выбирают из группы, содержащей -Н, В31', -ΝΗ2, -NΗΒ31', -Ы(В31')2, -ΝΟ3-Ο6 циклил, -ОВ31 и -8В31, где каждый В31 независимо представляет собой необязательно замещенный линейный или разветвленный С1-С6алкил, необязательно замещенный С3-С6циклоалкил, необязательно замещенный арил или необязательно замещенный гетероарил, и В32 обозначает ковалентную связь с полимерным фрагментом, который необязательно содержит линкер, или В32 выбирают из группы, содержащей -Н, -Ν02, галогеналкил и -Ы(МВ41)В42, где М обозначает ковалентную связь, -С(О)- или -8О2-, и В41 обозначает В41', ^В41')2 или -ОВ41', где каждый В41' независимо представляет собой водород, необязательно замещенный линейный или разветвленный С,-С6 алкил, необязательно замещенный циклоалкил, необязательно замещенный арил, необязательно замещенный гетероциклил или необязательно замещенный гетероарил, где необязательными заместителями являются галоген, С1-С6 алкил или -0С1-С6алкил, и В42 обозначает водород, В41', алкинил или замещенный алкинил; и
Ь) группы формулы (Ь)
в которой В выбирают из группы, включающей ковалентную связь с полимерным фрагментом, водород, арил, замещенный арил, гетероарил, замещенный гетероарил, амино, гидроксил, замещенный амино, алкил, замещенный алкил, алкилокси, арилокси, гетероарилокси, гетероциклилокси, тиол, арилтио, гетероарилтио, гетероциклилтио и замещенный алкил, где каждый амино, замещенный амино, алкил, замещенный алкил, арил, замещенный арил, гетероарил и замещенный гетероарил необязательно ковалентно связан с полимерным фрагментом, где в каждом случае полимерный фрагмент необязательно содержит линкер, который ковалентно связывает полимерный фрагмент;
Аг1 выбирают из группы, включающей арил, замещенный арил, гетероарил и замещенный гетероарил, где каждый арил, замещенный арил, гетероарил и замещенный гетероарил необязательно ковалентно связан с полимерным фрагментом, где полимерный фрагмент необязательно содержит линкер, который ковалентно связывает полимерный фрагмент с Аг1;
Аг2 выбирают из группы, включающей арил, замещенный арил, гетероарил, замещенный гетероарил, алкил, замещенный алкил, алкиламино и замещенный алкиламино, где Аг2 необязательно ковалентно связан с полимерным фрагментом и где полимерный фрагмент необязательно содержит линкер, который ковалентно связывает полимерный фрагмент с Аг2;
X выбирают из группы, включающей -NΒ1-, -0-, -8-, -80-, -8О2 и необязательно замещенный -СН2-, который необязательно ковалентно связан с полимерным фрагментом, где в каждом случае, полимерный фрагмент необязательно содержит линкер, который ковалентно связывает полимерный фрагмент;
где В1 выбирают из группы, включающей водород и алкил;
Т выбирают из
а) группы формулы (с)
в которой Υ выбирают из группы, включающей -О- и -ΝΚ1 -, где В1 выбирают из группы, включающей водород и алкил;
к выбирают из группы, включающей ковалентную связь с полимерным фрагментом, который необязательно содержит линкер и -ΝΒ2Β3, где В2 и В3 независимо выбирают из группы, включающей водород, алкил, замещенный алкил, и где В2 и В3, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклическое кольцо или замещенное гетероциклическое кольцо, где каждый алкил, замещенный алкил, гетероциклил и замещенный гетероциклил необязательно ковалентно связан с полимерным фрагментом, который необязательно дополнительно содержит линкер;
т равно целому числу 0, 1 или 2;
η равно целому числу 0, 1 или 2; и
Ь) группы формулы (й)
- 3 012433
Ν-κβ (ΐ) в которой С представляет собой необязательно замещенное арильное или необязательно замещенное гетероарильное 5 или 6-членное кольцо, содержащее от 0 до 3 атомов азота, где указанный арил или гетероарил необязательно дополнительно содержит ковалентную связь с полимерным фрагментом, который необязательно содержит линкер;
Я6 представляет собой ковалентную связь с полимерным фрагментом, который необязательно содержит линкер, или Я6 обозначает -Н, алкил, замещенный алкил или -СН2С(О)Я17, где Я17 обозначает ОН, -ОЯ18 или -ПНЯ18, где Я18 представляет собой алкил, замещенный алкил, арил, замещенный арил, гетероарил или замещенный гетероарил;
Я55 обозначает -ОН или гидролизуемый сложный эфир, или Я55 образует гидролизуемый полимерный сложный эфир с полимерным фрагментом, необязательно через линкер; при условии, что:
A) по меньшей мере один из Аг1, 1, Аг2, Я55 и Т (более предпочтительно один из 1 и Т) содержит ковалентную связь с полимерным фрагментом;
B) если X обозначает -О-, то т равно двум; и
C) конъюгат формулы I имеет молекулярную массу не более приблизительно 80000.
Изобретение также касается фармацевтических композиций, которые содержат, например, фармацевтически приемлемый носитель и терапевтически эффективное количество конъюгата по данному изобретению или их смеси.
Изобретение также касается способов лечения у пациента заболевания, опосредованного, по меньшей мере частично, УЬА-4, включающий введение фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель и терапевтически эффективное количество конъюгата по данному изобретению или их смеси.
Изобретение также включает применение конъюгата по данному изобретению и его фармацевтически приемлемых солей для производства лекарственного средства для применения для лечении у пациента заболевания, опосредованного, по меньшей мере частично, УЬА-4.
Конъюгаты и фармацевтические композиции можно применять для лечения болезненных состояний, опосредованных, по меньшей мере частично, УЬА-4, или адгезией лейкоцитов. Такие болезненные состояния включают, например, астму, болезнь Альцгеймера, атеросклероз, деменцию вследствие СПИДа, диабет (включая острый ювенильный диабет), воспалительное заболевание кишечника (включая язвенный колит и болезнь Крона), рассеянный склероз, ревматоидный артрит, трансплантацию тканей, метастазы опухолей, менингит, энцефалит, инсульт и другие церебральные травмы, нефрит, ретинит, болезнь Шегрена, атопический дерматит, псориаз, ишемию миокарда и острое лейкоцит-опосредованное поражение легких, например, респираторный дистресс синдром у взрослых.
Другие болезненные состояния, которые можно лечить, применяя конъюгаты и композиции по настоящему изобретению, включают, но не ограничены этим, воспалительные состояния, такие как узловатая эритема, аллергический конъюнктивит, неврит зрительного нерва, увеит, аллергический ринит, анкилозирующий спондилит, псориатический артрит, васкулит, синдром Рейтера, системная красная волчанка, прогрессирующий системный склероз, полимиозит, дерматомиозит, грануломатоз Вегенера, аортит, саркоидоз, лимфоцитопению, темпоральный артериит, перикардит, миокардит, застойную сердечную недостаточность, нодозный полиартериит, синдромы гиперчувствительности, аллергию, синдромы гиперэозинофилии, синдром Чог-Страусса (гранулематозный аллергический ангиит), хроническое обструктивное заболевание легких, гиперчувствительный пневмонит, хронический активный гепатит, интерстициальный цистит, аутоиммунную эндокринную недостаточность, билиарный первичный цирроз печени, аутоиммунную апластическую анемию, хронический персистирующий гепатит и тиреоидит.
Предпочтительно использовать конъюгаты и фармацевтические композиции по данному изобретению в способах лечения астмы, ревматоидного артрита и рассеянного склероза. Что касается последнего заболевания, конъюгаты по данному изобретению не только обеспечивают противовоспалительный эффект при введении ίη νίνο, но дополнительно находят применение при лечении состояний и заболеваний, связанных с демиелинизацией.
Изобретение также касается способов получения конъюгатов по данному изобретению и промежуточных продуктов, используемых в данных способах.
Подробное описание изобретения
Как отмечается выше, данное изобретение касается конъюгатов, которые ингибируют адгезию лейкоцитов и, в частности, адгезию лейкоцитов, опосредованную, по меньшей мере частично, УЬА-4.
В одном предпочтительном варианте только один из Аг1, 1, Аг2 и Т содержит ковалентную связь с полимерным фрагментом.
В другом предпочтительном варианте полимерный фрагмент связан с группой -ПЯ2Я3.
В другом предпочтительном варианте, если X в конъюгатах по данному изобретению обозначает
- 4 012433
ΝΚ1, то т равно двум.
Еще в одном предпочтительном варианте с.| равно целому числу от 2 до приблизительно 20 и более предпочтительно от 2 до приблизительно 8.
Предпочтительные конъюгаты формулы I включают конъюгаты приведенной ниже формулы 1а
и их фармацевтически приемлемые соли, где
В представляет собой двухвалентный, трехвалентный, четырехвалентный (или более высокой валентности) биологически совместимый полимерный фрагмент или необязательно несколько биосовместимых полимеров, ковалентно соединенных связями через функциональные группы, или через разветвленную центральную молекулу, или посредством того и другого с образованием двухвалентного, трехвалентного, четырехвалентного (или более высокой валентности) полимерного фрагмента;
с.| равно от 2 до приблизительно 20;
А в каждом случае независимо представляет собой соединение формулы 11а
в которой
Κ выбирают из группы, включающей ковалентную связь с полимерным фрагментом, амино, замещенный амино, алкил и замещенный алкил, где каждый амино, замещенный амино, алкил и замещенный алкил необязательно ковалентно связан с полимерным фрагментом, где в каждом случае полимерный фрагмент необязательно содержит линкер, который ковалентно связывает полимерный фрагмент;
Аг1 выбирают из группы, включающей арил, замещенный арил, гетероарил и замещенный гетероарил;
Аг2 выбирают из группы, включающей арил, замещенный арил, гетероарил и замещенный гетероарил, где каждый арил, замещенный арил, гетероарил и замещенный гетероарил необязательно ковалентно связан с полимерным фрагментом, где полимерный фрагмент необязательно содержит линкер, который ковалентно связывает полимерный фрагмент с Аг2;
X выбирают из группы, включающей -ΝΚ1-, -0-, -8-, -80-, -8О2 и необязательно замещенный -СН2-, где Κ1 выбирают из группы, включающей водород и алкил;
Υ выбирают из группы, включающей -О- и -ΝΚ1-, где Κ1 выбирают из группы, включающей водород и алкил;
выбирают из группы, включающей ковалентную связь с полимерным фрагментом, который необязательно содержит линкер и -ΝΚ2Κ3, где Κ2 и Κ3 независимо выбирают из группы, включающей водород, алкил, замещенный алкил, и где Κ2 и Κ3 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклическое кольцо или замещенное гетероциклическое кольцо, где каджый алкил, замещенный алкил, гетероциклил и замещенный гетероциклил необязательно ковалентно связан с полимерным фрагментом необязательно через линкер;
т равно целому числу 0, 1 или 2;
η равно целому числу 0, 1 или 2; и его фармацевтически приемлемые соли; при условии, что:
A) по меньшей мере один из Κ, Аг2, и -ΝΚ2Κ3 содержит ковалентную связь с полимерным фраг- ментом;
B) если Κ ковалентно связан с полимерным фрагментом, то η равно единице, и X не является -0-, -8-, -80- или -8О2-;
C) если X обозначает -О- или -ΝΚ1-, то т равно двум; и
Ό) конъюгат формулы 1а имеет молекулярную массу не более 60000.
Предпочтительные конъюгаты формулы I включают конъюгаты приведенной ниже формулы 1Ь №
в которой каждый А независимо представляет собой соединение приведенной ниже формулы 11Ь:
- 5 012433
и где с| равно от 2 до приблизительно 20;
В является таким, как определено выше;
Аг1 выбирают из группы, включающей арил, замещенный арил, гетероарил и замещенный гетероарил;
Аг2 выбирают из группы, включающей арил, замещенный арил, гетероарил и замещенный гетероарил, где каждый арил, замещенный арил, гетероарил и замещенный гетероарил необязательно ковалентно связан с полимерным фрагментом, где полимерный фрагмент необязательно содержит линкер, который ковалентно связывает полимерный фрагмент с Аг2;
Υ выбирают из группы, включающей -О- и -ΝΚ1-, где Я1 выбирают из группы, включающей водород и алкил;
выбирают из группы, включающей ковалентную связь с полимерным фрагментом, который необязательно содержит линкер и ^Я2Я3, где Я2 и Я3 независимо выбирают из группы, включающей водород, алкил, замещенный алкил, и где Я2 и Я3 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклическое кольцо или замещенное гетероциклическое кольцо, где каждый алкил, замещенный алкил, гетероциклил и замещенный гетероциклил необязательно ковалентно связан с полимерным фрагментом, который необязательно дополнительно содержит линкер;
при условии, что по меньшей мере один из Аг2, и -NЯ2Я3 ковалентно связан с полимерным фрагментом, который необязательно содержит линкер;
и при дополнительном условии, что конъюгат формулы 1Ь имеет молекулярную массу не более 60000.
Предпочтительные конъюгаты формулы I включают конъюгаты приведенной ниже формулы 1с: (Знч
1е в которой каждый А независимо представляет собой соединение приведенной ниже формулы 11с
и где с| равно от 2 до приблизительно 20;
В является таким, как определено выше;
Я выбирают из группы, включающей ковалентную связь с полимерным фрагментом, амино, замещенный амино, алкил и замещенный алкил, где каждый амино, замещенный амино, алкил и замещенный алкил необязательно ковалентно связан с полимерным фрагментом, где в каждом случае, полимерный фрагмент необязательно содержит линкер, который ковалентно связывает полимерный фрагмент;
Аг1 выбирают из группы, включающей арил, замещенный арил, гетероарил и замещенный гетероарил;
Аг2 выбирают из группы, включающей арил, замещенный арил, гетероарил и замещенный гетероарил, где каждый арил, замещенный арил, гетероарил и замещенный гетероарил необязательно ковалентно связан с полимерным фрагментом, где полимерный фрагмент необязательно содержит линкер, который ковалентно связывает полимерный фрагмент с Аг2;
Υ выбирают из группы, включающей -О- и -NЯ1-, где Я1 выбирают из группы, включающей водород и алкил;
выбирают из группы, включающей ковалентную связь с полимерным фрагментом, который необязательно содержит линкер и ^Я2Я3, где Я2 и Я3 независимо выбраны из группы, включающей водород, алкил, замещенный алкил, и где Я2 и Я3 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклическое кольцо или замещенное гетероциклическое кольцо, где каждый алкил, замещенный алкил, гетероциклил и замещенный гетероциклил необязательно ковалентно связан с полимерным фрагментом, который необязательно дополнительно содержит линкер;
п равно целому числу 0, 1 или 2; и их фармацевтически приемлемые соли;
при условии, что по меньшей мере один из Я, Аг2, и -NЯ2Я3 ковалентно связан с полимерным фрагментом, который необязательно содержит линкер;
- 6 012433 и при дополнительном условии, что конъюгат формулы 1с имеет молекулярную массу не более 60000.
Предпочтительные конъюгаты формулы I включают конъюгаты приведенной ниже формулы И
в которой каждый А независимо представляет собой соединение приведенной ниже формулы !И
и где с.| равно от 2 до приблизительно 20;
В является таким, как определено выше;
В выбирают из группы, включающей ковалентную связь с полимерным фрагментом, амино, замещенный амино, алкил и замещенный алкил, где каждый амино, замещенный амино, алкил и замещенный алкил, необязательно ковалентно связан с полимерным фрагментом, где в каждом случае полимерный фрагмент необязательно содержит линкер, который ковалентно связывает полимерный фрагмент;
Аг1 выбирают из группы, включающей арил, замещенный арил, гетероарил и замещенный гетероарил;
Аг2 выбирают из группы, включающей арил, замещенный арил, гетероарил и замещенный гетероарил, где каждый арил, замещенный арил, гетероарил и замещенный гетероарил необязательно ковалентно связан с полимерным фрагментом, где полимерный фрагмент необязательно содержит линкер, который ковалентно связывает полимерный фрагмент с Аг2;
В2 и В3 независимо выбирают из группы, включающей водород, алкил, замещенный алкил, и где В2 и В3 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклическое кольцо или замещенное гетероциклическое кольцо, где каждый алкил, замещенный алкил, гетероциклил и замещенный гетероциклил необязательно ковалентно связан с полимерным фрагментом, который необязательно дополнительно содержит линкер;
п равно целому числу 0, 1 или 2; и их фармацевтически приемлемые соли;
при условии, что по меньшей мере один из В, Аг2 и -ЫВ2В3 ковалентно связан с полимером, который необязательно содержит линкер;
и при дополнительном условии, что конъюгат формулы И имеет молекулярную массу не более приблизительно 80000.
Предпочтительные конъюгаты формулы I включают конъюгаты приведенной ниже формулы 1е
в которой каждый А независимо представляет собой соединение приведенной ниже формулы 11е:
и где с.| равно от 2 до приблизительно 20;
В является таким, как определено выше;
Аг1 выбирают из группы, включающей арил, замещенный арил, гетероарил и замещенный гетероа рил;
Аг2 выбирают из группы, включающей арил, замещенный арил, гетероарил и замещенный гетероарил, где каждый арил, замещенный арил, гетероарил и замещенный гетероарил необязательно ковалентно связан с полимерным фрагментом, где полимерный фрагмент необязательно содержит линкер, который ковалентно связывает полимерный фрагмент с Аг2;
В2 и В3 независимо выбраны из группы, включающей водород, алкил, замещенный алкил, и где В2 и В3, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклическое кольцо или замещенное гетероциклическое кольцо, где каждый алкил, замещенный алкил, гетероциклил и замещенный гетероциклил необязательно ковалентно связан с полимерным фрагментом, который необязательно дополнительно содержит линкер; и их фармацевтически приемлемые соли;
- 7 012433 при условии, что по меньшей мере один из Аг2 и -ΝΚ2Κ3 ковалентно связан с полимерным фрагментом, который необязательно содержит линкер;
и при дополнительном условии, что конъюгат формулы 1е имеет молекулярную массу не более 60000.
Предпочтительные конъюгаты формулы I включают конъюгаты приведенной ниже формулы Ιί:
и где с.| равно от 2 до приблизительно 20;
В является таким, как определено выше;
Я4 ковалентно связан с полимерным фрагментом, который необязательно содержит линкер;
Я5 выбирают из группы, включающей алкил и замещенный алкил;
Аг3 выбирают из группы, включающей арил, замещенный арил, гетероарил и замещенный гетероарил;
X выбирают из группы, включающей -NЯ1-, -О-, -8-, -8Θ-, -8О2 и необязательно замещенный -СН2, где Я1 выбирают из группы, включающей водород и алкил;
т равно целому числу 0, 1 или 2;
η равно целому числу 0, 1 или 2; и их фармацевтически приемлемые соли;
при условии, что:
A) если Я ковалентно связан с полимерным фрагментом, то η равно единице и X не является -О-, -8-, -8О- или -8О2-;
B) если X обозначает -О- или -NЯ1-, то т равно двум; и
C) конъюгат формулы Ιί имеет молекулярную массу не более 60000.
Предпочтительные конъюгаты формулы I включают конъюгаты приведенной ниже формулы 1д о
в которой каждый А независимо представляет собой соединение приведенной ниже формулы 11д
И» и где с.| равно от 2 до приблизительно 20;
В является таким, как определено выше;
Я4 ковалентно связан с полимерным фрагментом, который необязательно содержит линкер;
Я5 выбирают из группы, включающей алкил и замещенный алкил;
Аг3 выбирают из группы, включающей арил, замещенный арил, гетероарил и замещенный гетероарил;
η равно целому числу 0, 1 или 2; и их фармацевтически приемлемые соли;
при условии, что конъюгат формулы 1д имеет молекулярную массу не более 60000.
Предпочтительные конъюгаты формулы I включают конъюгаты приведенной ниже формулы Ιίί:
1Ь в которой каждый А независимо представляет собой соединение приведенной ниже формулы ΙΙ11
- 8 012433
и где с.| равно от 2 до приблизительно 20;
Я4 ковалентно связан с полимерным фрагментом, который необязательно содержит линкер;
Аг3 выбирают из группы, включающей арил, замещенный арил, гетероарил и замещенный гетероа рил;
их фармацевтически приемлемые соли;
при условии, что конъюгат формулы Ι11 имеет молекулярную массу не более 60000.
Предпочтительные конъюгаты формулы I включают конъюгаты приведенной ниже формулы Ιί:
в которой каждый А независимо представляет собой соединение приведенной ниже формулы Ш
или их фармацевтически приемлемые соли, и где с.| равно от 2 до приблизительно 20;
и при условии, что конъюгат формулы Ιί имеет молекулярную массу не более 60000.
Предпочтительные конъюгаты формулы I включают конъюгаты приведенной ниже формулы Ц:
в которой каждый А независимо представляет собой соединение приведенной ниже формулы Щ
или их фармацевтически приемлемые соли, и где с.| равен от приблизительно 2 до приблизительно 20;
и при условии, что конъюгат формулы I) имеет молекулярную массу не более приблизительно 80000.
Предпочтительные конъюгаты формулы I включают конъюгаты приведенной ниже формулы 1к:
в которой каждый А независимо представляет собой соединение приведенной ниже формулы 11к
и их фармацевтически приемлемые соли.
Предпочтительные конъюгаты формулы I включают конъюгаты приведенной ниже формулы 1Ь: (2ЧА)ч
N.
в которой каждый А независимо представляет собой соединение приведенной ниже формулы ПЬ
- 9 012433
или их фармацевтически приемлемые соли, где
Я4 ковалентно связан с полимерным фрагментом, который необязательно содержит линкер.
Предпочтительно, если Аг1 в формулах 11а-11е и Аг3 в формулах ΙΙΓ-ΙΙ11 независимо выбраны из группы, включающей:
фенил,
4-метилфенил,
4-трет-бутилфенил,
2,4,6-триметилфенил,
2- фторфенил,
3- фторфенил,
4- фторфенил,
2.4- дифторфенил,
3.4- дифторфенил,
3.5- дифторфенил,
2- хлорфенил,
3- хлорфенил,
4- хлорфенил,
3.4- дихлорфенил,
3.5- дихлорфенил,
3- хлор-4-фторфенил,
4- бромфенил,
2- метоксифенил,
3- метоксифенил,
4- метоксифенил,
3.4- диметоксифенил,
4-трет-бутоксифенил,
4-(3'-диметиламино-н-пропокси)фенил,
2-карбоксифенил,
2-(метоксикарбонил)фенил,
4-(Н2ЫС(О)-)фенил,
4-(Н2ЫС(8)-)фенил,
4-цианофенил,
4-трифторметилфенил,
4-трифторметоксифенил,
3.5- ди(трифторметил)фенил, 4-нитрсфенил,
4-аминофенил,
4-(СН3С(О)ИН-)фенил,
4-(фенил-ИНС(О)ПН-)фенил,
4-амидинофенил,
4-метиламидинофенил,
4-[СНз8С(=ЫН)-]фенил,
4- хлор-3 -[Н2Ы8(О)2-] фенил,
1- нафтил,
2- нафтил, пиридин-2-ил, пиридин-3-ил, пиридин-4-ил, пиримидин-2-ил, хинолин-8-ил,
2-(трифторацетил)-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-7 -ил,
2-тиенил,
5- хлор-2-тиенил,
2.5- дихлор-4-тиенил,
1-Ы-метилимидазол-4-ил,
- 10 012433
Ι-Ν-метилпиразол-З -ил,
1-Ы-метилпиразол-4-ил,
1-№бутилпиразол-4-ил,
Ι-Ν-метил-З -метил-5 -хлорпиразол-4-ил,
1- №метил-5 -метил-3 -хлорпиразол-4-ил,
2- тиазолил и
5-метил-1,3,4-тиадиазол-2-ил.
Предпочтительно, если А представлен формулами 11а, 1ГЬ, 11с, ГИ и ГГе, и Аг1 связан с полимерным фрагментом, то Аг1 представлен формулой:
-Аг1 -Ζ-(ΟΗ2ΟΗΚ7Θ)ρΚ8, в которой Аг1 выбирают из группы, включающей арил, замещенный арил, гетероарил и замещенный гетероарил,
Ζ выбирают из группы, включающей ковалентную связь, линкерную группу, имеющую от 1 до 40 атомов, -О- и -ΝΚ9-, где Я9 выбирают из группы, включающей водород и алкил,
Я7 выбирают из группы, включающей водород и метил;
Я8 выбирают из группы, включающей -(Ь)ж-А, если р составляет более приблизительно 300, и (Ъ)В-(А)ч-1, где А представлен любой из приведенных выше формул с ГГа по ГГй, Ь обозначает линкерную группу, имеющую от 1 до 40 атомов, и \ν равно нулю или единице; и р равно целому числу от приблизительно 200 до 1360.
Если А представлен формулами ГГа или ГГГ, и Я не связан с полимерным фрагментом, заместитель следующей формулы:
(*8)п в которой Я5, X, т и η являются такими, как определено выше, предпочтительно выбирают из группы, включающей азетидинил, тиазолидинил, пиперидинил, пиперазинил, морфолино, тиоморфолинил, пирролидинил, 4-гидроксипирролидинил, 4-оксопирролидинил, 4-фторпирролидинил, 4,4-дифторпирролидинил, 4-(тиоморфолин-4-ил-С(О)О-)пирролидинил, 4-[СН38(О)2О-]пирролидинил, 3-фенилпирролидинил, 3-тиофенилпирролидинил, 4-аминопирролидинил, 3-метоксипирролидинил, 4,4-диметилпирролидинил, 4-№СЬ/-пиперазинил, 4-[СН38(О)2-]пиперазинил, 5,5-диметилтиазолидин-4-ил, 1,1-диоксотиазолидинил, 1,1-диоксо-5,5-диметилтиазолидин-2-ил и 1,1-диоксотиоморфолинил.
Предпочтительно, если А представлен формулой ГГа и заместитель, представленный формулой:
связан с полимерным фрагментом, то заместитель предпочтительно представлен формулой:
2-(СНгСНКтО)рН» в которой т равно целому числу 0, 1 или 2;
Ζ выбирают из группы, включающей ковалентную связь, линкерную группу, имеющую от 1 до 4 0 атомов, -О-, ^Я9-, где Я9 выбирают из группы, включающей водород и алкил,
Я7 выбирают из группы, включающей водород и метил;
р равно целому числу от 0 до приблизительно 1360;
Я5 выбирают из группы, включающей -В-(А)ч-1 и А, если р составляет более приблизительно 300, и А представлен приведенными выше формулами с ГГа по ΙΙ11.
Если А представлен формулами ГГа, ГГЬ, ГГс, ГИ, ГГе, и если Аг2 не связан с полимерным фрагментом, то Аг2 предпочтительно выбирают из группы, включающей фенил, замещенный фенил, 2-пиридинил, 3пиридинил, 4-пиридинил и 4-пиридин-2-онил.
Если А представлен формулами ГГа, ГГЬ, ГГе, ГИ, ГГе и если Аг2 связан с полимерным фрагментом, то Аг2 предпочтительно представлен формулой ΐ—Аг2—+ ’ I ' г-(сн2снв7о\Я’ в которой Аг2 выбирают из группы, включающей арил, замещенный арил, гетероарил и замещенный гетероарил;
Ζ выбирают из группы, включающей ковалентную связь, линкерную группу, имеющую от 1 до 40
- 11 012433 атомов, -Ο-, -ΝΒ9-, амид, карбамат и карбамид, где Я9 выбирают из группы, включающей водород и алкил,
Я7 выбирают из группы, включающей водород и метил;
р равно целому числу от 0 до приблизительно 1360;
Я8 выбирают из группы, включающей -В- (Л)ч-1 и А, если р составляет более приблизительно 300, и А представлен приведенными выше формулами 11а-1111.
В одном предпочтительном варианте -УС(О)^ представляет собой -ΟС(Ο)NЯ2Я3.
Если А представлен формулами 11а, 1ГЬ или 11с, -УС(О)^ представляет собой -ΟС(Ο)NЯ2Я3 и ни Я2, ни Я3 не связаны с полимерным фрагментом, то -ΟС(Ο)NЯ2Я3 предпочтительно выбирают из группы, включающей (СН3^С(О)О-, (пиперидин-1 -ил)-С(О)О-, (пиперидин-4-ил)-С(О)О-, (1 -метилпиперидин-4-ил)-С(О)О-, (4-гидроксипиперидин-1-ил)-С(О)О-, (4-формилоксипиперидин-1-ил)-С(О)О-, (4-этоксикарбонилпиперидин-1-ил)-С(О)О-, (4-карбоксилпиперидин-1-ил)-С(О)О-, (3 -гидроксиметилпиперидин-1-ил)-С(О)О-, (4-гидроксиметилпиперидин-1-ил)-С(О)О-, (4-фенил-1-Вос-пиперидин-4-ил)-С(О)О-, (4-пиперидон-1-илэтиленкеталь)-С(О)О-, (пиперазин-4-ил)-С(О)О-, (1-Вос-пиперазин-4-ил)-С(О)О-, (4-метилпиперазин-1-ил)-С(О)О-, (4-метилгомопиперазин-1-ил)-С(О)О-, (4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-ил)-С(О)О-, (4-фэнилпиперазин-1-ил)-С(О)О-, (4-(пиридин-2-ил)пиперазин-1-ил)-С(О)О-, (4-(4-трифторметилпиридин-2-ил)пиперазин-1-ил)-С(О)О-, (4-(пиримидин-2-ил)пиперазин-1-ил)-С(О)О-, (4-ацетилпиперазин-1-ил)-С(О)О-, (4-(фенил-С(О)-)пиперазин-1-ил)-С(О)О-, (4-(пиридин-4'-ил-С(О)-)пиперазин-1 -ил)-С(О)О-, (4-(фенил^НС(О)-)пиперазин-1-ил)-С(О)О-, (4-(фенил^НС(8)-)пиперазин-1-ил)-С(О)О-, (4-метансульфонилпиперазин-1-ил)-С(О)О-, (4-трифторметансульфонилпиперазин-1-ил)-С(О)О-, (морфолин-4-ил)-С(О)О-, (тиоморфолин-4-ил)-С(О)О-, (тиоморфолин-4'-илсульфон)-С(О)О-, (пирролидин-1-ил)-С(О)О-, (2-метилпирролидин-1-ил)-С(О)О-, (2-(метоксикарбонил)пирролидин-1-ил)-С(О)О-, (2-(гидроксиметил)пирролидин-1-ил)-С(О)О-, (2-Щ,№диметиламино)этил) (СН3)Ж.’(О)О-. (2-Щ-метил-№толуол-4-сульфониламино)этил)(СН3)Н-С(О)О-, (2-(морфолин-4-ил)этил) (СН3)№С(О)О-, (2- (гидрокси)этил)(СН3^С(О)О-, бис(2-(гидрокси)этил^С(О)О-, (2-(формилокси)этил)(СН3^С(О)О-, (СН3ОС(О)СЩ)Н^(О)О- и [2-(фенил-№С(О)О-)этил]Н^(О)О-.
Если А представлен формулами ГГа, ГГЬ или ГГс, -УС(О)^ представляет собой -ΟС(Ο)NЯ2Я3 и Я2 и/или Я3 связан с полимерным фрагментом, то полимерный фрагмент предпочтительно представлен формулой:
-2'-(СЩСНЯ7О)рЯ8,
Ζ выбирают из группы, включающей ковалентную связь, линкерную группу, имеющую от 1 до 40 атомов, -О-, -ΝΒ9-, амид, карбамат и карбамид, где Я9 выбирают из группы, включающей водород и алкил,
Я7 выбирают из группы, включающей водород и метил; р равно целому числу от 0 до приблизительно 1360; Я8 выбирают из группы, включающей -В-(А)ч-1 и А, если р составляет более приблизительно 300, и А представлен любой из приведенных выше формул с ГГа по ГШ.
- 12 012433
В соединениях формул Ш и Щ предпочтительно, чтобы группа формулы
была представлена формулами
в которых В66 обозначает ковалентную связь с полимерным фрагментом, который необязательно содержит линкер, или В66 представляет собой водород или линейный или разветвленный С1-С6 алкил; В77 обозначает ковалентную связь с полимерным фрагментом, который необязательно содержит линкер, или В77 представляет собой водород, галоген или линейный или разветвленный С1-С6 алкокси; и В88 обозначает ковалентную связь с полимерным фрагментом, который необязательно содержит линкер, или В88 обозначает водород или линейный или разветвленный С1-С6 алкил. Предпочтительно, чтобы один из В66, В77 и В88 обозначал ковалентную связь с полимерным фрагментом, который необязательно содержит линкер.
Предпочтительными соединениями формулы Ш также являются соединения формулы Ш-а:
и их фармацевтически приемлемые соли, где
Аг1 выбирают из группы, включающей алкил, замещенный алкил, арил, замещенный арил, циклоалкил, замещенный циклоалкил, гетероциклил, замещенный гетероциклил, гетероарил и замещенный гетероарил; и
В6 обозначает ковалентную связь с полимерным фрагментом, который необязательно содержит линкер.
Предпочтительные соединения формулы Ш-а включают соединения, где Аг1 представляет собой фенил или 5- или 6-членную гетероарильную группу, имеющую по меньшей мере один атом азота, каждая из которых необязательно является замещенной галогеном, гидрокси, С1-С6 алкокси, С1-С6 алкилом, нитро, трифторметилом, амино, моно- или ди(С1-С6)алкиламино, амино(С1-С6)алкилом, С2-С6 ацилом, С2-С6 ациламино или амино (С1-С6) ацилом. Аг1 представляет собой пиридил, необязательно замещенный галогеном, гидрокси, С1-С6 алкилом, С1-С6 алкокси, нитро, трифторметилом, амино, моно- или ди(С1С6)алкиламино, амино(С1-С6) алкилом, С2-С6 ацилом, С2-С6 ациламино или амино (С1-С6) ацилом. Особо предпочтительные соединения формулы Ш-а включают соединения, в которых Аг1 представляет собой пиридил, необязательно замещенный С,-С6 алкилом, гидрокси, галогеном, С1-С6 алкокси, нитро, трифторметилом, амино или моно- или ди(С1-С6) алкиламино.
Предпочтительными соединениями формулы II) являются также соединения формулы Щ-а:
- 13 012433 и их фармацевтически приемлемые соли, где
В6 обозначает ковалентную связь с полимерным фрагментом, который необязательно содержит линкер.
Предпочтительные соединения формулы Щ-а включают соединения, в которых В31 обозначает амино или моно- или ди(С1-С6) алкиламино; и В32 обозначает -Н, -ΝΟ2 или галогеналкил, более предпочтительно трифторметилметил.
Другими предпочтительными соединениями формулы Щ-а являются соединения, в которых
В31 обозначает амино или моно- или ди (С1-С6) диалкиламино; и
В представляет собой -Ν(ΜΚ )В ; где М обозначает -§О2-или -СО-;
В41 обозначает С1-С6 алкил, необязательно замещенный галогеном, гидрокси, С1-С6 алкокси, амино или моно- или ди(С1-С6)алкиламино; или фенил, или 5- или 6-членный гетероарил, содержащий по меньшей мере один атом азота, каждый из которых необязательно является замещенным галогеном, гидрокси, С1-С6 алкилом, С1-С6 алкокси, С3-С7 циклоалкилом, амино, нитро, трифторметилом или моно- или ди (С1-С6)алкиламино; и
В42 представляет собой водород, С1-С6 алкил или С3-С7 циклоалкил.
Другие предпочтительные соединения формулы Щ-а включают соединения, в которых группы В41 в формуле Щ-а представляет собой С1-С4 алкил, необязательно замещенный галогеном, гидрокси, С1-С6 алкокси, амино или моно- или ди (С1-С6) алкиламино; или пиридил или пиримидинил, каждый из которых необязательно является замещенным галогеном, гидрокси, С1-С3 алкилом, С1-С3 алкокси, амино или моно- или ди(С1-С4)алкиламино; и
В42 представляет собой водород, С1-С4 алкил или С3-С7 циклоалкил.
В одном примере конъюгаты по данному изобретению являются двухвалентными и представлены формулой III:
Ш в которой каждый А независимо является таким, как определено выше, и В' представляет собой -Ζ'(СН2СНВ7О)р-2'-, где каждый Ζ' независимо обозначает ковалентную связь или линкерную группу, В7 обозначает водород или метил, и р равно целому числу от приблизительно 100 до 1360.
В другом примере конъюгаты по данному изобретению являются соединениями от трехвалентных до декавалентных и предпочтительно представлены формулой IV:
IV в которой каждый А независимо является таким, как определено выше, и ΐ равно целому числу от 3 до 10.
Определения
Используемый здесь термин алкил обозначает моновалентные насыщенные алифатические углеводородные группы, имеющие от 1 до 5 атомов углерода и более предпочтительно от 1 до 3 атомов углерода. Данный термин проиллюстрирован такими группами, как метил, этил, н-пропил, изопропил, нбутил, трет-бутил, н-пентил и подобные.
Выражение замещенный алкил обозначает алкильную группу, имеющую от 1 до 3 и предпочтительно от 1 до 2 заместителей, выбранных из группы, включающей алкокси, замещенный алкокси, ацил, ациламино, ацилокси, амино, замещенный амино, аминоацил, арил, замещенный арил, арилокси, замещенный арилокси, циано, галоген, гидроксил, нитро, карбоксил, эфиры карбоксила, циклоалкил, замещенный циклоалкил, спироциклоалкил, гетероарил, замешенный гетероарил, гетероциклил и замещенный гетероциклил.
Термин необязательно замещенный алкил включает алкил и замещенный алкил, которые определены выше.
Термин необязательно замещенная -СН2- обозначает группу, которая является либо незамещенной, либо замещенной 1 или 2 заместителями, выбранными из группы, включающей алкокси, замещенный алкокси, тиоалкокси, замещенный тиоалкокси, ацил, ациламино, ацилокси, амино, замещенный амино, аминоацил, арил, замещенный арил, арилокси, замещенный арилокси, циано, галоген, гидроксил, сульфгидрил, нитро, карбоксил, эфиры карбоксила, циклоалкил, замещенный циклоалкил, спироциклоалкил, гетероарил, замещенный гетероарил, гетероциклил и замещенный гетероциклил. Предпочтительными заместителями на необязательно замещенной -СН2- являются гидрокси, алкокси, амино, моноалкиламино, диалкиламино, сульфгидрил, тиоалкокси и галоген (предпочтительно Е). Если необязательно замещенная -СН2- является замещенной, то предпочтительно, чтобы она была замещена одной группой.
Термин алкилен обозначает двухвалентные насыщенные алифатические углеводородные группы, предпочтительно имеющие от 1 до 5 и более предпочтительно от 1 до 3 атомов углерода, которые являются либо линейными, либо разветвленными. Данный термин иллюстрируют такие группы, как метилен
- 14 012433 (-СН2-), этилен (-СН2СН2-), н-пропилен (-СН2СН2СН2-), изопропилен (-СН2СН(СН3)-) и подобные.
Термин алкокси обозначает группу алкил-О-, которая включает, например, метокси, этокси, нпропокси, изопропокси, н-бутокси, трет-бутокси, втор-бутокси, н-пентокси и подобные.
Термин замещенный алкокси обозначает группу замещенный алкил-О-.
Термин ацил обозначает группы Н-С(О)-, алкил-С(О)-, замещенный алкил-С(О)-, алкенил-С(О)-, замещенный алкенил-С(О)-, алкинил-С(О)-, замещенный алкинил-С(О)-циклоалкил-С(О)-, замещенный циклоалкил-С(О)-, арил-С(О)-, замещенный арил-С(О)-, гетероарил-С(О)-, замещенный гетероарилС(О)-, гетероциклил-С(О)- и замещенный гетероциклил-С(О)-, где алкил, замещенный алкил, алкенил, замещенный алкенил, алкинил, замещенный алкинил, циклоалкил, замещенный циклоалкил, арил, замещенный арил, гетероарил, замещенный гетероарил, гетероциклил: и замешенный гетероциклил являются такими, как здесь определено.
Термин аминоацил обозначает группу -С(О)ЧК10К10, где каждый К10 независимо выбирают из группы, включающей водород, алкил, замещенный алкил, алкенил, замещенный алкенил, алкинил, замещенный алкинил, арил, замещенный арил, циклоалкил, замещенный циклоалкил, гетероарил, замещенный гетероарил, гетероциклил, замещенный гетероциклил, и где каждый К10 объединен с атомом азота с образованием гетероциклического или замещенного гетероциклического кольца, где алкил, замещенный алкил, алкенил, замещенный алкенил, алкинил, замещенный алкинил, циклоалкил, замещенный циклоалкил, арил, замещенный арил, гетероарил, замещенный гетероарил, гетероциклил и замещенный гетероциклил являются такими, как здесь определено.
Термин ацилокси обозначает группы алкил-С(О)О-, замещенный алкил-С(О)О-, алкенил-С(О)О-, замещенный алкенил-С(О)О-, алкинил-С(О)О-, замещенный алкинил-С(О)О-, арил-С(О)О-, замещенный арил-С(О)О-, циклоалкил-С(О)О-, замещенный циклоалкил-С(О)О-, гетероарил-С(О)О-, замещенный гетероарил-С(О)О-, гетероциклил-С(О)О- и замещенный гетероциклил-С(О)О-, в которых алкил, замещенный алкил, алкенил, замещенный алкенил, алкинил, замещенный алкинил, циклоалкил, замещенный циклоалкил, арил, замещенный арил, гетероарил, замещенный гетероарил, гетероциклил и замещенный гетероциклил являются такими, как здесь определено.
Термин алкенил обозначает алкенильные группы, имеющие от 2 до 6 атомов углерода и предпочтительно от 2 до 4 атомов углерода и имеющие по меньшей мере 1 и предпочтительно от 1 до 2: мест алкенильной ненасыщенности. Иллюстрациями таких групп являются винил, аллил, бут-3-ен-1-ил и подобные.
Термин замещенный алкенил обозначает алкенильные группы, имеющие от 1 до 3 заместителей и предпочтительно от 1 до 2 заместителей, выбранных из группы, включающей алкокси, замещенный алкокси, ацил, ациламино, ацилокси, амино, замещенный амино, аминоацил, арил, замещенный арил, арилокси, замещенный арилокси, циано, галоген, гидроксил, нитро, карбоксил, эфиры карбоксила, циклоалкил, замещенный циклоалкил, гетероарил, замещенный гетероарил, гетероциклил и замещенный гетероциклил при условии, что любое замещение гидроксила происходит не по винильному (ненасыщенному) атому углерода.
Термин алкинил обозначает алкинильные группы, имеющие от 2 до 6 атомов углерода и предпочтительно от 2 до 3 атомов углерода и имеющие по меньшей мере 1 и предпочтительно от 1 до 2 мест алкинильной ненасыщенности.
Термин замещенный алкинил обозначает алкинильные группы, имеющие от 1 до 3 заместителей и предпочтительно от 1 до 2 заместителей, выбранных из группы, включающей алкокси, замещенный алкокси, ацил, ациламино, ацилокси, амино, замещенный амино, аминоацил, арил, замещенный арил, арилокси, замещенный арилокси, циано, галоген, гидроксил, нитро, карбоксил, эфиры карбоксила, циклоалкил, замещенный циклоалкил, гетероарил, замещенный гетероарил, гетероциклил и замещенный гетероциклил.
Термин амино обозначает группу -ΝΗ2.
Термин циано обозначает группу -СК
Термин замещенный амино обозначает группу -ΝΚ'Κ, где К' и К независимо выбраны из группы, включающей водород, алкил, замещенный алкил, алкенил, замещенный алкенил, алкинил, замещенный алкинил, арил, замещенный арил, циклоалкил, замещенный циклоалкил, гетероарил, замещенный гетероарил, гетероциклил, замещенный гетероциклил, и где К' и К объединены с атомом азота, к которому они присоединены, с образованием гетероциклической или замещенной гетероциклической группы при условии, что К' и К оба не являются водородом. Если К' обозначает водород и К обозначает алкил, то замещенную аминогруппу иногда обозначают здесь как алкиламино. Если К' и К обозначают алкил, то замещенную аминогруппу иногда обозначают здесь как диалкиламино. Что касается монозамещенной аминогруппы, имеется в виду, что К' или К представляет собой водород, но не оба. Что касается дизамещенной аминогруппы, имеется в виду, что ни К', ни К не является водородом.
Термин нитро обозначает группу -КО2.
Термин арил или Аг обозначает моновалентную ароматическую карбоциклическую группу из 614 атомов углерода, имеющую одно кольцо (например, фенил) или несколько конденсированных колец (например, нафтил или антрил), причем конденсированные кольца могут быть или не быть ароматиче
- 15 012433 скими (например, 2-бензоксазолинон, 2Н-1,4-бензоксазин-3(4Н)-он-7-ил и подобные) при условии, что точка присоединения находится на ароматическом атоме углерода. Предпочтительные арилы включают фенил и нафтил.
Термин замещенный арил обозначает арильные группы, которые являются замещенными 1-3 заместителями и предпочтительно 1-2 заместителями, выбранными из группы, включающей гидрокси, ацил, ациламино, ацилокси, алкил, замещенный алкил, алкокси, замещенный алкокси, алкенил, замещенный алкенил, алкинил, замещенный алкинил, амино, замещенный амино, аминоацил, арил, замещенный арил, арилокси, замещенный арилокси, карбоксил, эфиры карбоксила, циано, тиол, тиоалкил, замещенный тиоалкил, тиоарил, замещенный тиоарил, тиогетероарил, замещенный тиогетероарил, тиоциклоалкил, замещенный тиоциклоалкил, тиогетероциклил, замещенный тиогетероциклил, циклоалкил, замещенный циклоалкил, галоген, нитро, гетероарил, замещенный гетероарил, гетероциклил, замещенный гетероциклил, гетероарилокси, замещенный гетероарилокси, гетероциклилокси, замещенный гетероциклилокси, аминосульфонил (ΝΗ2-802-) и замещенный аминосульфонил.
Термин арилокси обозначает группу арил-О-, которая включает, например, фенокси, нафтокси и подобные.
Термин замещенный арилокси обозначает группы (замещенный арил)-О-.
Термин карбоксил обозначает -СООН или его соли.
Термин эфиры карбоксила обозначает группы -С(О)О-алкил, -С(0)О-замещенный алкил, -С(О)арил и -С(О)О-замещенный арил, где алкил, замещенный алкил, арил и замещенный арил являются такими, как здесь определено.
Циклоалкил обозначает циклические алкильные группы, включающие от 3 до 10 атомов углерода, имеющие одно или несколько циклических колец, включая, например, адамантил, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклооктил и подобные.
Циклоалкенил обозначает циклические алкенильные группы, включающие от 4 до 10 атомов углерода, имеющие одно или несколько циклических колец и дополнительно имеющие по меньшей мере 1 и предпочтительно от 1 до 2 внутренних мест этиленовой или зинильной (>С=С<) ненасыщенности.
Выражения замещенный циклоалкил и замещенный циклоалкенил обозначают циклоалкильные или циклоалкенильные группы, имеющие от 1 до 5 заместителей, выбранных из группы, включающей оксо (=0), тиоксо (=8), алкокси, замещенный алкокси, ацил, ациламино, ацилокси, амино, замещенный амино, аминоацил, арил, замещенный арил, арилокси, замещенный арилокси, циано, галоген, гидроксил, нитро, карбоксил, эфиры карбоксила, циклоалкил, замещенный, циклоалкил, гетероарил, замещенный гетероарил, гетероциклил и замещенный гетероциклил.
Термин циклоалкокси обозначает -О-циклоалкильные группы.
Термин замещенный циклоалкокси обозначает группы -О-(замещенный циклоалкил).
Термины гало или галоген обозначают фтор, хлор, бром и йод и предпочтительно фтор или хлор.
Термин гидрокси обозначает группу -ОН.
Термин гетероарил обозначает ароматическую группу, имеющую в кольце от 1 до 10 атомов углерода и от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из группы, включающей кислород, азот и серу. Такие гетероарильные группы могут иметь одно кольцо (например, пиридинил или фурил) или несколько конденсированных колец (например, индолизинил или бензотиенил), где конденсированные кольца могут быть или не быть ароматическими и/или могут содержать гетероатом при условии, что точка присоединения находится на атоме ароматической гетероарильной группы. Предпочтительные гетерсарилы включают пиридинил, пирролил, индолил, тиофенил и фуранил.
Выражение замещенный гетероарил обозначает гетероарильные группы, которые являются замещенными 1-3 заместителями, выбранными из той же группы заместителей, которая определена для замещенного арила.
Термин гетероарилокси обозначает группу -О-гетероарил и термин замещенный гетероарилокси обозначает группу -0-замещенный гетероарил.
Термины гетероцикл, или гетероциклический, или гетэроциклоалкил, или гетероциклил обозначают насыщенную или ненасыщенную группу, имеющую одно кольцо или несколько конденсированных колец, от 1 до 10 атомов углерода и от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из группы, включающей азот, серу или кислород, в кольце, где в конденсированных системах колец одно или более колец могут представлять собой циклоалкил, арил или гетероарил при условии, что точка присоединения находится на гетероциклическом кольце.
Выражения замещенный гетероциклил, или замещенный гетероциклоалкил, или замещенный гетероциклил обозначает гетероциклильные группы, которые являются замещенными 1-3 заместителями, такими же, как определенные для замещенного циклоалкила.
Примеры гетероциклилов и гетероарилов включают, но не ограничены этим, азетидин, пиррол, имидазол, пиразол, пиридин, пиразин, пиримидин, пиридазин, индолизин, изоиндол, индол, дигидроиндол, индазол, пурин, хинолизин, изохинолин, хинолин, фталазин, нафтилпиридин, хиноксалин, хиназолин, циннолин, птеридин, карбазол, карболин, фенантридин, акридин, фенантролин, изотиазол, феназин,
- 16 012433 изоксазол, феноксазин, фенотиазин, имидазолидин, имидазолин, пиперидин, пиперазин, индолин, фталимид, 1,2,3,4-тетрагидроизохинолин, 4,5,6,7-тетрагидробензо [Ь]тиофен, тиазол, тиазолидин, тиофен, бензо [Ь]тиофен, морфолинил, тиоморфолинил (также обозначаемый как тиаморфолинил), пиперидинил, пирролидин, тетрагидрофуранил и подобные.
Термин тиол обозначает группу -8Н.
Термины тиоалкил, или алкилтиоэфир, или тиоалкокси обозначают группу -8-алкил.
Выражения замещенный тиоалкил, или замещенный алкилтиоэфир, или замещенный тиоалкокси обозначают группу -8-замещенный алкил.
Термин тиоарил обозначает группу -8-арил, где арил определен выше.
Термин замещенный тиоарил обозначает группу -8-замещенный арил, где замещенный арил определен выше.
Термин тиогетероарил обозначает группу -8-гетероарил, где гетероарил является таким, как определено выше.
Термин замещенный тиогетероарил обозначает группу -8-(замещенный гетероарил), где замещенный тиогетероарил определен выше.
Термин тиогетероциклил обозначает группу -8-гетероциклил, и термин замещенный тиогетероциклил обозначает группу -8-замещенный гетероциклил, где гетероциклил и замещенный гетероциклил.
Термин гетероциклилокси обозначает группу гетероциклил-О-, и термин замещенный гетероциклил-О- обозначает группу (замещенный гетероциклил)-О-, где гетероциклил и замещенный гетероциклил являются такими, как определено выше.
Термин тиоциклоалкил обозначает группу -8-циклоалкил, и термин замещенный тиоциклоалкил обозначает группу -8-(замещенный циклоалкил), где циклоалкил и замещенный циклоалкил являются такими, как определено выше.
Выражение гидролизуемый сложный эфир обозначает группу, которая гидролизуется ίη νίνο, продуцируя исходную кислоту. Примеры таких групп включают алкокси, замещенный алкокси, циклоалкокси, замещенный циклоалкокси, арилокси и замещенный арилокси. Предпочтительным гидролизуемым сложным эфиром является алкокси.
Выражение гидролизуемый полимерный сложный эфир обозначает биосовместимый полимер, который гидролизуется ίη νίνο, продуцируя исходную кислоту. Предпочтительным гидролизуемым полимерным сложным эфиром является РЕС.
Термины соединение и активное соединение используют для обозначения УЬА-4антагонистической части конъюгата по данному изобретению или антагониста УЬА-4, как он существует до конъюгации с полимером.
Термины линкер, линкерная группа или линкер, имеющий от 1 до 40 атомов обозначают группу или группы, которые (1) ковалентно связывают полимер с активным соединением и/или (2) ковалентно связывают друг с другом полимерные, олигомерные и/или мономерные части, содержащие полимерный фрагмент; неограничительные иллюстрации последнего включают полимер-линкер-полимер, олигомер-линкер-олигомер, мономер-линкер-мономер, олигомер-линкер-олигомер-линкер и подобные. В конкретном конъюгате линкер, соединяющий вместе полимерные, олигомерные и/или мономерные части полимерного фрагмента, и линкер, связывающий полимерный фрагмент с активным соединением, могут быть одинаковыми или разными (то есть, могут иметь одинаковые или разные химические структуры).
Линкер, который ковалентно связывает друг с другом полимерные, олигомерные и/или мономерные части, например пэлиалкиленоксидные части полимерного фрагмента, также обозначают как разветвленный центр или разветвленная центральная молекула. Разветвленные центры представляют собой молекулы, которые образуют козалентные связи с тремя или большим количеством полимерных, олигомерных и/или мономерных частей, обеспечивая трехвалентные (или более высокой валентности) полимерные фрагменты для конъюгации с активным соединением. Неограничительными примерами таких центральных молекул являются глицерин (1,2,3-пропантриол), пентаэритрит, лизин, 1,2,4-бензотриол, глюкоза (в своей пиранозной форме), этилендиаминтетрауксусная кислота, аминокислоты, 3- или 4аминосалициловая кислота, 1,3-диамино-2-гидроксипропан, глюкозамин и сиаловая кислота.
Типичными функциональными группами, посредством которых происходит связывание и которые (одна или более) могут находиться на линкерной группе, являются амиды (-С(О)ИК3-), простые эфиры (-О-), тиоэфиры (-8-), карбаматы (-ОС(О)ИК3-), тиокарбаматы (-ОС(8)ИК3-), карбамиды (-ΝΡΧΌΝΡ3-). тиокарбамиды (-ΝΚΉ(8)ΝΚ3-), аминогруппы (-ΝΚ3-), карбонильные группы (-С(О)-), алкоксигруппы (-О-алкилен) и др. Линкер может быть гомогенным или гетерогенным по своему атомному содержанию (например, линкеры, содержащие только атомы углерода, или линкеры, содержащие атомы углерода, а также один или более гетероатомов, присутствующих на линкере). Предпочтительно, линкер содержит от 1 до 25 атомов углерода и от 0 до 15 гетероатомов, выбранных из кислорода, NЯ3, серы, -8(О)- и -8 (О)2-, где Я3 обозначает водород, алкил или замещенный алкил. Линкер также может быть хиральным или ахиральным, линейным, разветвленным или циклическим.
В промежутках между находящимися на линкере функциональными группами, осуществляющими соединения или связи, линкер может дополнительно содержать спейсерные группы, включая, но не огра
- 17 012433 ничиваясь этим, спейсеры, выбранные из алкила, замещенного алкила, арила, замещенного арила, циклоалкила, замещенного циклоалкила, гетероарила, замещенного гетероарила, гетероциклила, замещенного гетероциклила и их комбинаций. Спейсер может быть гомогенным или гетерогенным по своему атомному содержанию (например, спейсеры, содержащие только атомы углерода, или спейсеры, содержащие атомы углерода, а также один или более гетероатомов, присутствующих на спейсере). Предпочтительно, чтобы спейсер содержал от 1 до 25 атомов углерода и от 0 до 15 гетероатомов, выбранных из кислорода, NЯ3, серы, -8(0)- и -8(О)2, где Я3 является таким, как определено выше. Спейсер также может быть хиральным или ахиральным, линейным, разветвленным или циклическим.
Неограничительными примерами спейсеров являются линейные или разветвленные алкиленовые цепи, фениленовые, бифениленовые и др. циклы, которые все способны нести одну или более функциональных групп, способных образовывать связь с активным соединением и одним или несколькими полиалкиленоксидными фрагментами. Одним конкретным примером полифункциональных групп линкерслейсер является лизин, который может связывать любое из активных соединений с двумя полимерными фрагментами через две аминогруппы, существующие в виде заместителей на С4 алкиленовой цепи. Другие неограничительные примеры включают парааминобензойную кислоту и 3,5-диаминобензойную кислоту, которые имеют, соответственно, 2 и 3 функциональные группы, доступные для образования связи. Специалист в данной области может легко представить другие такие полифункциональные группы линкер+спейсер.
Термины полимер и полимерный фрагмент обозначают биосовместимые, водорастворимые, по существу, неиммуногенные полимеры которые способны соединяться более чем с одним антагонистом УЪА-4 формулы II. Предпочтительно, чтобы полимер был неионным и биосовместимым, что определяют по отсутствию токсичности при используемых молекулярных массах и дозах. Данные термины также включают молекулы, в которых 3 или более полимеров соединены с разветвленной центральной молекулой, как обсуждается выше. Кроме того, данные термины включают молекулы, в которых их полимерные, олигомерные и/или мономерные части соединены при помощи одного или более линкеров.
Примеры подходящих полимеров включают, но не ограничены этим: полиоксиалкиленовые полимеры, такие как полиэтиленгликоль (РЕС), поливинилпирролидон (РУР), полиакриламид (РААт), полидиметилакриламид (РИААт), поливиниловый спирт (РУА), дексгран, поли(Ь-глутаминовая кислота) (РСА), стиролмалеиновый ангидрид (8МА), поли-№(2-гидроксипропил)метакриламид (НРМА), поли [дивиниловый эфир-малеиновый ангидрид] (П1УЕМА) (Катеба, Υ. и др., Вюта1епа18 25:3259-3266, 2004; ТБапои, М. и др., Сиггеп! Ορίηίοη ίη 1пуе811да1юпа1 Игидк 4(6): 701-709, 2003; Уегопеке, Р.М. и др., II Раттасо 54: 497-516, 1999).
Предпочтительными полимерами являются полиоксиалкилены. Полиоксиалкиленами считают макромолекулы, которые включают по меньшей мере одну полиалкиленоксидную часть, которая необязательно ковалентно связана с одним или несколькими дополнительными полиалкиленоксидами, где полиалкиленоксиды являются одинаковыми или разными. Неограничительные примеры включают полиэтиленгликоль (РЕС), полипропиленгликоль (РРС), полиизопропиленгликоль (РГРС), РЕС-РЕС, РЕСРРС, РРС-РГРС и подобные. В область определения полиоксиалкиленов также включены макромолекулы, в которых полиалкиленоксидные части необязательно соединены друг с другом через линкер. Иллюстративными примерами являются РЕС-линкер-РЕС, РЕС-линкер-РГРС и подобные. Более конкретные примеры включают коммерчески доступные поли[ди(этиленгликоль)адипаты], поли[ди(этиленгликоль) фталатдиолы] и подобные. Другими примерами являются блоксополимеры из оксиалкиленовых, полиэтиленгликольных, полипропиленгликольных и полиоксиэтилированных полиольных звеньев.
По меньшей мере одним из своих концов полимер ковалентно связан с неполимерным замещенным соединением формулы II, необязательно через линкер, с применением обычных химических методик, обеспечивающих ковалентную связь полимера с неполимерным замещенным соединением формулы II.
При использовании линкер ковалентно связан по меньшей мере с одним из полимерных концов, который, в свою очередь, ковалентно связан другим концом с неполимерным замещенным соединением формулы II. Химические реакции, дающие такие связи, хорошо известны в данной области. Такие химические реакции включают применение комплементарных функциональных групп на линкере, неполимерном замещенном соединении формулы II и полимере. Предпочтительно, если на линкере выбраны комплементарные функциональные группы, родственные функциональным группам, доступным для связывания на полимере, или которые можно ввести на полимер для связывания. К тому же, такие комплементарные функциональные группы хорошо известны в данной области. Например, взаимодействие между карбоновой кислотой линкера или полимера и первичным или вторичным амином полимера или линкера в присутствии хорошо известных подходящих агентов активации дает образование амидной связи, ковалентно соединяющей полимерный фрагмент с линкером; взаимодействие между аминогруппой линкера или полимера и сульфонилгалогенидом полимера или линкера дает образование сульфонамидной связи, ковалентно соединяющей полимерный фрагмент с линкером; и взаимодействие между спиртовой или фенольной группой линкера или полимера и алкил- или арилгалогеном полимера или линкера дает образование простой эфирной связи, ковалентно соединяющей полимерную группу с линкером.
Конечно, понятно, что, если на неполимерном замещенном соединении формулы II находятся под
- 18 012433 ходящие заместители, то нет необходимости в необязательном линкере, так как может существовать прямая связь полимера с неполимерным замещенным соединением формулы ΙΙ.
В приведенной ниже табл. I приведены примеры многочисленных реакционноспособных групп и связей, получаемых в результате взаимодействия между ними. Специалист в данной области может выбрать подходящие растворители и условия реакций для получения данных связей.
Таблица I. Типичные примеры комплементарных химических групп, образующих связи
Первая реакционноспособная группа Вторая реакционноспособная группа Связь
Гидроксил Изоцианат Уретан
Амин Эпоксид β-гидроксиамин
Сульфонил галоген Амин Сульфонамид
Карбоксил Амин Амид
Гидроксил Алкил/арил-галоген Простой эфир
Альдегид (в условиях восстановительного аминирования) Амин Амин
Предпочтительные линкеры включают, например, следующие группы: -О-, -ΝΚ3-, -ΝΚΉ(Ο)Ο-, -ОС(О)\Я;-. -ΝΚΉ(Ο)-, Ή(Ο)ΝΚ3-, -ΝΚΉ(Ο)ΝΚ3-, -алкилен-ИЯ3С(О)О-, -алкилен-МК3С(О)1МК3-, -алкилен-ОС(О^Я3-, -алкилен-ΝΚ3-, -алкилен-О-, -алкилен-МЯ3С(О)-, -алкилен-С(О^Я3-, -№3С(О)Оалкилен-, -МЯ3С(О)МЯ3-алкилен-, -ОС(О^Я3-алкилен, -МЯ3-алкилен-, -О-алкилен-, -МЯ3С(О)-алкилен-, -С(О)МЯ3-алкилен-, -алкилен-МЯ3С(О)О-алкилен-, -алкилен-М^ЩО^^-алкилен-, -алкилен-ОСТОЩЯ3алкилен-, -алкилен-ХЯ3-алкилен-, алкилен-О-алкилен-, -алкилен-ХЯ3С(О)-алкилен-, -С(О)ХЯ3-алкилен-, -КК.3С(О)О-алкиленокси-, -NЯ3С(Ο)NЯ3-алкиленокси-, -ОЩО^Я^алкиленокси, -КЯ3-алкиленокси-, -Оалкиленокси-, -НЯ3С(О)-алкиленокси-, -С(О)КЯ3-алкиленокси-, -алкиленокси-КК.3С(О)О-алкиленокси-, где Я3 является таким, как определено выше, и
где 4---х выбирают из группы, включающей арил, замещенный арил, циклоалкил, замещенный циклоалкил, гетероарил, замещенный гетероарил, гетероциклил и замещенный гетероциклил, и Ό и Е независимо выбраны из группы, включающей связь, -О-, СО, -ΝΚ3-, -ΝΚΉ(Ο)Ο-, -ОС(О)ЫЯ3-, -ΝΚΤ',’(Ο)-. -С(О)ЯЯ3-, -ΝΚΉ(Ο)ΝΚ3-, -алкилен-КЯ3С(О)О-, -алкилен-NЯ3С(Ο)NЯ3-, -алкилен-ОС(О)КЯ3-, алкиленΝΚ3-, -алкилен-О-, -алкилен-NЯ3С(Ο)-, алкилен-С(О)NЯ3-, -ЫЯ3С(О)О-алкилен-, -NЯ3С(О)NЯ3-алкилен-, -ОС(О)NЯ3-алкилен-, -ЫЯ3-алкилен-, -Ο-алкилен-, -ЫЯ3С(О)-алкилен-, -ЫЯ^ОЮ-алкиленокси-, о о о о о
-ΝΕ ί.’(Ό)ΝΒ -алкиленокси-, -ОЩО^Я -алкиленокси-, -ΝΕ -алкиленокси-, -О-алкиленокси-, -ΝΕ С(О)алкиленокси-, -С(О)NЯ3-алкиленокси-, -алкиленокси-NЯ3С(О)О-алкиленокси-, -С(О)NЯ3-алкилен-,
-алкилен-NЯ3С(О)Ο-алкилен-, -алкилен-NЯ3С(О)NЯ3-алкилен-, алкилен-ОС(О)NЯ3-алкилен-, -алкиленКЯ3-алкилен-, алкилен-О-алкилен-, -алкилен-NЯ3С(О)-алкилен- и -С (О)NЯ3-алкилен-, где Я3 является таким, как определено выше.
Предпочтительные алкиленовые группы в описанных выше линкерах включают С1-С15 алкиленовые группы, более предпочтительно С1-С6 алкиленовые группы и наиболее предпочтительно С1-С3 алкиленовые группы. Предпочтительные гетероциклические группы включают пиперазинил, пиперидинил, гомопиперазинил, гомопиперидинил, пирролидинил и имидазолидинил. Предпочтительными алкокси группами являются -(СН2-СН2-О)1-15.
Термин оксиалкилен обозначает -ОСН2СНЯ4-, где Я4 представляет собой алкил. Полимеризованные оксиалкилены обозначают как полиоксиалкилены, полиалкиленоксиды или полиалкиленгликоли, неограничительные примеры которых включают РЕС, полипропиленгликоль, полибутиленгликоль, полиизопропиленгликоль и подобные.
Такие полимеры необязательно имеют на конце моно-«заглушку» в виде заместителя, предпочтительно выбранного из алкила, арила, замещенного алкила, замещенного арила и разветвленной центральной молекулы, которая описана выше. В число таких полимеров входят полиоксиалкиленовые полимеры с диамино-«заглушками», которые известны в данной области как .ТеГГатшек®. Обычно, 1еГГатшек® (доступные от Ниикшап РегГогтапсе РгойисФ, ТНе Жой1апйк, Техак) содержат первичные аминогруппы, присоединенные к концу основной полиэфирной цепи. Таким образом, они являются полиэфираминами. Основой полиэфирной цепи является пропиленоксид (РО), этиленоксид (ЕО), или смесь
- 19 012433
ЕО/РО, или другие сегменты основной цепи. 1сГГатшс5® могут представлять собой моноамины, диамины и триамины и имеют различные молекулярные массы, приблизительно до 5000.
Кроме того, полимеризованные оксиалкилены могут необязательно содержать одну или более неоксиалкиленовых единиц, например, коммерчески доступные поли[ди(этиленгликоль)адипаты], поли[ди (этиленгликоль)фталатдиолы] и подобные. Также включены блоксополимеры оксиалкиленовых, полиэтиленгликольных, полипропиленгликольных и полиоксиэтилированных полиольных звеньев.
Полиоксиалкилены, такие как РЕС, обычно являются водорастворимыми воскообразными твердыми веществами. Обычно с увеличением молекулярной массы полимера возрастает его вязкость и точка замерзания. Коммерческие препараты обычно характеризуют средней молекулярной массой составляющих их полимеров.
Обычно средняя молекулярная масса всего полимера, являющаяся результатом от одной или множества полимерных частей, в конъюгатах по данному изобретению составляет от приблизительно 100 до приблизительно 100000; предпочтительно от приблизительно 20000 до приблизительно 60000; более предпочтительно от приблизительно 30000 до приблизительно 50000. Специалисту в данной области понятно, что полимеры данного типа являются полидисперсными. Полидисперсность означает, что полимерные молекулы, даже одного типа, имеют различные размеры (длины цепей для линейных или разветвленных полимеров). Таким образом, средняя молекулярная масса зависит от способа усреднения. Показатель полидисперсности, принятая мера вариабильности молекулярной массы, представляет собой соотношение средневесовой молекулярной массы к среднечисловой молекулярной массе. Он показывает распределение индивидуальных молекулярных масс в объеме полимеров. Среднечисловая молекулярная масса представляет способ определения молекулярной массы полимера. Среднечисловая молекулярная масса является принятым средним значением молекулярных масс индивидуальных полимеров. Ее определяют, измеряя молекулярную массу η полимерных молекул, суммируя данные массы и деля сумму на η. Среднечисловую молекулярную массу полимера можно определить методом осмометрии, титрованием конечных групп и обобщением характеристик.
Средневесовую молекулярную массу можно определить по рассеиванию света, рассеиванию нейтронов под малым углом (8ΆΝ8), рентгеновскому рассеиванию и скорости осаждения. Соотношение средневесовой величины к среднечисловой величине называется показателем полидисперсности. Теоретический образец полимера, не имеющий дисперсности, имел бы показатель полицисперсности 1. Предпочтительный диапазон показателей полидисперсности для настоящего изобретения составляет от приблизительно 1,10 до приблизительно 1,05. Более предпочтителен диапазон от приблизительно 1,05 до верхнего предела коммерчески осуществимого синтеза, что на сегодня составляет приблизительно 1,02.
Другие подходящие полимеры, такие как поливинилпирролидон (РУР), полиакриламид (РААт), полидиметилакриламид (РОААт), поливиниловый спирт (РУА), декстран, поли(Ь-глутаминовая кислота) (РСА), стиролмалеиновый ангидрид (8МА), поли-№(2-гидроксипропил)метакриламид (НРМА), поли [дивиниловый эфир-малеиновый ангидрид] (П1УЕМА), хорошо известны в данной области и имеют молекулярные массы от приблизительно 100 до приблизительно 100000; предпочтительно от приблизительно 10000 до приблизительно 80000; более предпочтительно от приблизительно 20000 до приблизительно 70000.
Неограничительные примеры РЕС, которые можно использовать в данном изобретении, включают следующие соединения:
НО (алкилен-О) РРКВЬ моно-гидрокси РЕС с моно-«заглушкой» (тРЕС)
Η2Ν (алкилен-О) ρρΚ№ моно-амино РЕС с моно-«заглушкой»
НО (алкилен-О) ррК-ОН дигидрокси РЕС без «заглушки»
Η2Ν (алкилен-О) РРК-ОН моно-амино РЕС без «заглушки»
НО (алкилен-О) РРКТО разветвленный моно-гидрокси РЕС
НО (алкилен-СО) РрКьс древовидный моно-гидрокси РЕС
где «рр» и алкилен являются такими, как здесь определено, и Вьь предпочтительно выбирают из группы, включающей алкил, замещенный алкил, арил и замещенный арил. Различные примеры РЕС показаны ниже.
- 20 012433
Разветвленные РЕС:
РЕС-реагенты, доступные от ΝΘΕ (20 кДа 4 ветви)
кДа РЕС-тетраамин с 4 ветвями Диглицериновое ядро Кат.№ 8ипЬпд111 0С-200РА
РЕС-реагенты, доступные от №к!аг (40 кДа 8-ветвей) йййййй кДа РЕС с 8 ветвями Гексаглицериновое ядро Кат.№ 01000Т08
Древовидные РЕС:
РЕС-реагенты, доступные от ΝΘΕ (40 кДа, 4 ветви)
кДа РЕС-спирт с 4 ветвями пентаэритритовое ядро кат.№ 8ипЬпд111 РТЕ-40000 кДа РЕС-тетраамин с 4 ветвями пентаэритритовое ядро кат.№ 8ипЬпд111 РТЕ-400РА
РЕС-реагенты, доступные от ΝΘΕ (40 кДа, 3 ветви)
кДа РЕС с 3 ветвями глицериновое ядро кат.№ 8ипЬпд111 СЬ-40000 кДа РЕС-триамин с 3 ветвями глицериновое ядро кат.№ 8ипЬпд111 СЬ-400РА
- 21 012433
РЕС-реагенты, доступные от 8ипВю (40 и 20 кДа)
Серия Υ-РЕС (ядро из аспарагиновой кислоты)
о
Υ-РЕС амин (40 кДа) кат.№ РΥАΜ- 40 Υ-РЕС нитрофенилкарбамат (40 кДа) глицериновое ядро кат.№ РΥNРС-40
н-жон/иад,/)--к
И--ОЧСЦаСНО)^
И--ОЧСНаСКЛ* 1 ιη,οιοηιΟΗ^τΗ
Серия 6 ветвей (ядро из сорбита)
Меньшая молекулярная масса, (сорбит, 6 ветвей) Производные, отличные ветвей.
Например, 10} можно ветвями (с эфиром) и 4 0 кДа РЕС с 6 ветвями, молекулой.
включают от кДа амин превратить доступная в серии
10, 15 и 20 кДа.
спирта включают амин 6 ветвями (кат.№ РбАМ4 0 кДа гексаамин с б с в
КекЬагз 5 кДа ΒοοΝΗ-ΡΕΟ-ΝΗ3 сложным затем провести конъюгацию с малой продукт по заказу
Данные РЕС-полимеры можно дополнительно модифицировать, удлиняя цепи РЕС-диаминами через подходящий линкер, например, карбамат (уретан) или карбамид.
Выражение фармацевтически приемлемая соль обозначает соли, которые сохраняют биологическую эффективность и свойства соединений данного изобретения и которые не являются нежелательными биологически или в другом смысле. Во многих случаях соединения данного изобретения способны образовывать кислые и/или основные соли в силу присутствия амино и/или карбоксильных групп или аналогичных им групп.
Фармацевтически приемлемые аддитивные соли оснований можно получить из неорганических и органических оснований. Соли, получаемые из неорганических оснований, включают (только для примера) соли натрия, калия, лития, аммония, кальция и магния. Соли, получаемые из органических оснований, включают, но не ограничены этим, соли первичных, вторичных и третичных аминов, таких как алкиламины, диалкиламины, триалкиламины, (замещенный алкил)амины, ди(замещенный алкил)амины, три(замещенный алкил)амины, алкениламины, диалкениламины, триалкениламины, (замещенный алкенил)амины, ди(замещенный алкенил)амины, три(замещенный алкенил)амины, циклоалкиламины, ди(циклоалкил)амины, три(циклоалкил)амины, (замещенный циклоалкил)амины, ди(замещенный циклоалкил)амины, три(замещенный циклоалкил)амины, циклоалкениламины, ди(циклоалкенил)амины, три(циклоалкенил)амины, (замещенный циклоалкенил)амины, ди(замещенный циклоалкенил)амин, три(замещенный циклоалкенил)амины, ариламины, диариламины, триариламины, гетероариламины, ди(гетероарил)амины, три(гетероарил)амины, гетероциклиламины, ди(гетероциклил)амины, три(гетероциклил)амины, смеси ди- и триаминов, где по меньшей мере два из заместителей на амине являются разными и выбраны из группы, включающей алкил, замещенный алкил, алкенил, замещенный алкенил, циклоалкил, замещенный циклоалкил, циклсалкенил, замещенный циклоалкенил, арил, гетероарил, гетероциклил и подобные. Также включены амины, в которых два или три заместителя вместе с атомом амино-азота образуют гетероциклическую или гетероарильную группу.
Примеры подходящих аминов включают (только для примера) изопропиламин, триметиламин, диэтиламин, три(изопропил)амин, три(н-пропил)амин, этаноламин, 2-диметиламиноэтанол, трометамин,
- 22 012433 лизин, аргинин, гистидин, кофеин, прокаин, гидрабамин, холин, бетаин, этилендиамин, глюкозамин, Νалкилглюкамины, теобромин, пурины, пиперазин, пиперидин, морфолин, Ν-этилпиперидин и подобные. Также следует понимать, что в практике данного изобретения были бы полезны другие производные карбоновых кислот, например амиды карбоновых кислот, включая карбоксамиды, (низший алкил)карбоксамиды, диалкилкарбоксамиды и подобные.
Фармацевтически приемлемые аддитивные соли кислот можно получить из неорганических и органических кислот. Соли, полученные из неорганических кислот, включают соли соляной кислоты, бромистоводородной кислоты, серной кислоты, азотной кислоты, фосфорной кислоты и подобные. Соли, полученные из органических кислот, включают соли уксусной кислоты, пропионовой кислоты, гликолевой кислоты, пировиноградной кислоты, щавелевой кислоты, яблочной кислоты, малоновой кислоты, янтарной кислоты, малеиновой кислоты, фумаровой кислоты, винной кислоты, лимонной кислоты, бензойной кислоты, коричной кислоты, миндальной кислоты, метансульфоновой кислоты, этансульфоновой кислоты, пара-толуолсульфоновой кислоты, салициловой кислоты и подобных.
Выражение фармацевтически приемлемый катион обозначает катион фармацевтически приемлемой соли.
Понятно, что во всех определенных здесь замещенных группах не предполагается включение полимеров, получаемых при определении заместителей с дополнительными заместителями на них самих (например, замещенный арил, имеющий замещенную арильную группу в качестве заместителя, которая сама замещена замещенной арильной группой, и др.). В таких случаях максимальным количеством таких заместителей является три. То есть, каждое из приведенных выше определений имеет ограничение, например, замешенные арильные группы ограничены группами -(замещенный арил)-(замещенный арил)(замещенный арил).
Аналогично, понятно, что в приведенных выше определениях не предполагается включение недопустимых моделей замещения (например, метила, замещенного 5 атомами фтора, или гидроксильной группы в альфа-положении относительно этенильной или ацетиленовой ненасыщенности). Такие недопустимые модели замещения хорошо известны специалистам в данной области.
Получение соединений
Конъюгаты по данному изобретению можно получить из легко доступных исходных материалов, используя следующие основные способы и методики. Принимаем во внимание, что если даны типичные или предпочтительные условия процесса (т.е., температуры, времена реакций, мольные соотношения реагентов, растворители, давления и др.), то можно также использовать другие условия процесса, если не указано иное. Оптимальные условия реакций можно варьировать при использовании конкретных реагентов или растворителей, но такие условия может определить специалист в данной области, применяя рутинные методики оптимизации.
Кроме того, как будет ясно специалисту в данной области, для предотвращения нежелательных взаимодействий некоторых функциональных групп могут понадобиться обычные защитные группы. Подходящие защитные группы для различных функциональных групп, а также подходящие условия для введения и снятия защиты конкретных функциональных групп хорошо известны в данной области. Например, многие защитные группы описаны в работе Т. к. Огеепе и О. М. кий. Рго1ес1шд Огоирк ίη Огдашс 8уп111ек1к, 8есопй Εάίΐίοη, кйеу, Νον ΥοιΈ 1991 и цитированных там ссылках.
Кроме того, соединения данного изобретения обычно содержат один или более хиральных центров. Таким образом, если требуется, такие соединения можно получить или выделить в виде чистых стереоизомеров, т.е., индивидуальных энантиомеров или диастереомеров, или в виде смесей, обогащенных стереоизомерами. Все такие стереоизомеры (и обогащенные смеси) включены в область данного изобретения, пока не указано по-другому. Чистые стереоизомеры (или обогащенные смеси) можно получить, используя, например, оптически активные исходные материалы или стереоселективные реагенты, хорошо известные в данной области. По-другому, рацемические смеси таких соединений можно разделить, применяя, например, хиральную колоночную хроматографию, хиральные агенты разделения и подобное.
Конъюгаты по данному изобретению предпочтительно включают полимерный фрагмент/необязательную разветвленную центральную молекулу, содержащую от 2 до 20 заместителей формулы II
о и
А именно, полимерный фрагмент может быть связан ковалентной связью с заместителем Аг1, заместителем 1, заместителем Аг2 и/или заместителем Т, причем полимерный фрагмент присоединен либо непосредственно, либо через линкер. В свою очередь, полимерный фрагмент может быть необязательно связан с разветвленной центральной молекулой.
В своем простейшем виде соединения данного изобретения представляют собой двухвалентные
- 23 012433 структуры, содержащие один полимерный фрагмент, имеющий два заместителя формулы II, присоединенные по обоим концам. В типичном случае при использовании в качестве полимерного фрагмента РЕС-производного, которое связано с соединением формулы II через карбонильную линкерную группу,
получаемый конъюгат можно представить следующей формулой:
где р предпочтительно равно целому числу от приблизительно 100 до 1360.
В одном примере четырехвалентной формы конъюгат содержит четыре полимерных фрагмента. В типичном случае один конец каждого полимерного фрагмента связан с общей разветвленной центральной молекулой, тогда как другие концы связаны с соединением формулы II, необязательно через линкер. Кроме того, и также для иллюстрации, каждый полимерный фрагмент является РЕС-производным, и общая разветвленная центральная молекула представляет собой пентаэритрит. В данной иллюстрации другие концы РЕС-фрагмента связаны с соединением формулы II через карбонильную линкерную группу, где соединение формулы II представлено формулой:
полученный конъюгат можно представить следующей формулой:
где сумма четырех «р» равна целому числу, предпочтительно от приблизительно 100 до 1360.
Протокол синтеза для получения конъюгатов формулы I вызывает взаимодействие функциональной группы на полимерном фрагменте с линкерной группой или непосредственно с соединением формулы II, ковалентно связывая тем самым полимерный фрагмент с соединением формулы II.
Исходные не замещенные РЕС-соединения формул ИЬ-ПЬ хорошо известны в данной области и проиллюстрированы в ряде патентов, включая (не ограничиваясь этим) патенты США №№ 6489300 и 6436904, которые оба включены здесь в виде ссылок во всей своей полноте. Неполимерные варианты соединений формулы II включают соединения, имеющие комплементарные функциональные группы или группы, из которых можно получить комплементарные функциональные группы, на одном: или нескольких из фрагментов Аг1, К, Аг2 и Т. Для иллюстрации, соединения, имеющие комплементарные функциональные группы (-ОН) на фрагменте Аг2 (например, тирозин), указаны ниже как подходящая исходная точка для добавления к молекуле полимерного фрагмента, непосредственно или через линкер.
Такие соединения можно получить, проводя сначала взаимодействие гетероциклической аминокислоты 1 с подходящим арилсульфонилхлоридом, как показано ниже на схеме 1:
Схема 1 (ф^соон + ЛИ8О,С| ---_ (В),
СООН
- 24 012433 где К, Аг1, X, т и η являются такими, как определено выше.
В частности, выше на схеме 1 объединяют гетероциклическую аминокислоту 1 со стехиометрически эквивалентным или избыточным количеством (предпочтительно от приблизительно 1,1 до приблизительно 2 эквивалентов) арилсульфонилгалогенида 2 в подходящем инертном разбавителе, например дихлорметане и подобном. Обычно взаимодействие проводят при температуре в диапазоне от приблизительно -70 до приблизительно 40°С, пока реакция в основном не завершится, что обычно происходит за 1-24 ч. Предпочтительно проводить взаимодействие в присутствии подходящего основания для удаления образующейся в течение реакции кислоты. Подходящие основания включают, например, третичные амины, такие как триэтиламин, диизопропилэтиламин, Ν-метилморфолин и подобные. По-другому, взаимодействие можно проводить в условиях типа 8сЬойеп-Ваитапп, используя водный щелочной раствор, такой как водный раствор гидроксида натрия, водный фосфатный буферный раствор, рН которого доведен до 7,4, и подобные. Получаемый продукт 3 можно выделить обычными способами, такими как хроматография, фильтрование, выпаривание, кристаллизация и подобные, или по-другому, использовать на следующей стадии без очистки и/или выделения.
Гетероциклические аминокислоты 1, используемые при описанном выше взаимодействии, либо являются известными соединениями, либо соединениями, которые можно получить из известных соединений по общеизвестным методикам синтеза. Примеры подходящих аминокислот для использования при данном взаимодействии включают, но не ограничены этим, Ь-пролин, транс-4-гидроксил-Ь-пролин, цис4-гидроксил-Ь-пролин, транс-3-фенил-Ь-пролин, цис-3-фенил-Ь-пролин, Ь-(2-метил)пролин, Ь-пипеколиновую кислоту, Ь-азетидин-2-карбоновую кислоту, Ь-тиазолидин-4-карбоновую кислоту, Ь-(5,5диметил)тиазолидин-4-карбоновую кислоту, Ь-тиаморфолин-3-карбоновую кислоту. Если требуется, можно использовать в описанной выше реакции с арилсульфонилхлоридом соответствующие эфиры карбоновых кислот и аминокислоты 1, такие как метиловые эфиры, этиловые эфиры, трет-бутиловые эфиры и подобные. Последующий гидролиз сложноэфирной группы до карбоновой кислоты с использованием общеизвестных реагентов и условий, т. е. обработка гидроксидом щелочного металла в инертном разбавителе, таком как смесь метанол/вода, дает Ν-сульфониламинокислоту 3.
Аналогично, арилсульфонилхлориды 2, используемые в описанной выше реакции, являются известными соединениями или соединениями, которые можно получить из известных соединений по общеизвестным методикам синтеза. Такие соединения обычно получают из соответствующих сульфоновых кислот, т.е., из соединений формулы Ат18О3Н, где Аг1 является таким, как определено выше, с использованием трихлорида фосфора и пентахлорида фосфора. Данное взаимодействие обычно проводят при контакте сульфоновой кислоты примерно с 2-5 мольными эквивалентами трихлорида фосфора и пентахлорида фосфора, без растворителя или в инертном растворителе, таком как дихлорметан, при температуре в диапазоне от приблизительно 0 до приблизительно 80°С в течение периода от приблизительно 1 до приблизительно 48 ч, получая сульфонилхлорид. По-другому, арилсульфонилхлориды 2 можно получить из соответствующих тиольных соединений, т.е., из соединений Ат1-8Н, где Аг1 такой, как здесь определено, посредством обработки тиола хлором (С12) и водой при обычных условиях реакции.
По-другому, арилсульфонилхлориды 2, используемые в описанной выше реакции, можно получить хлорсульфонилированием замещенного бензола или гетероциклоалкильной группы с использованием С18О3Н.
Примеры арилсульфонилхлоридов, подходящих для использования в данном изобретении, включают, но не ограничены этим, бензолсульфонилхлорид, 1-нафталинсульфонилхлорид, 2-нафталинсульфонилхлорид, пара-толуолсульфонилхлорид, ортотолуолсульфонилхлорид, 4-ацетамидобензолульфонилхлорид, 4-трет-бутилбензолсульфонилхлорид, 4-бромбензолсульфонилхлорид, 2-карбоксибензолсульфонилхлорид, 4-цианобензолсульфонилхлорид, 3,4-дихлорбензолсульфонилхлорид, 3,5дихлорбензолсульфонилхлорид, 3,4-диметоксибензолсульфонилхлорид, 3,5-дитрифторметилбензолсульфонилхлорид, 4-фторбзнзолсульфонилхлорид, 4-метоксибензолсульфонилхлорид, 2-метоксикарбонилбензолсульфонилхлорид, 4-метиламидобензолсульфонилхлорид, 4-нитробензолсульфонилхлорид, 4-трифторметилбензолсульфонилхлорид, 4-трифторметоксибензолсульфонилхлорид, 2,4,6-триметилбензолсульфонилхлорид, 2-тиофенсульфонилхлорид, 5-хлор-2-тиофенсульфонилхлорид, 2,5-дихлор-4-тиофенсульфонилхлорид, 2-тиазслсульфонилхлорид, 2-метил-4-тиазолсульфонилхлорид, 1метил-4-имидазолсульфонилхлорид, 1-метил-4-пиразолсульфонилхлорид, 5-хлор-1,3-диметил-4-пиразолсульфонилхлорид, 3-пиридинсульфонилхлорид, 2-пиримидинсульфонилхлорид и подобные. Если требуется, в описанной выше реакции можно использовать вместо сульфонилхлорида сульфонилфторид, сульфонилбромид или ангидрид сульфоновой кислоты для получения Ν-сульфониламинокислоты 3.
Затем проводят взаимодействие Ν-арилсульфониламинокислоты 3 с коммерчески доступными сложными эфирами тирозина, как показано ниже на схеме 2.
- 25 012433
Схема 2
4 « где Κ, Аг1, X, т и η являются такими, как определено выше, Ка обозначает водород или алкил, но предпочтительно алкильную группу, например трет-бутил, Ζ обозначает необязательное замещение на арильном кольце, и о равно нулю, единице или двум.
Данную реакцию сочетания обычно проводят, используя хорошо известные реагенты сочетания, такие как карбодиимиды, реагент ВОР (бензотриазол-1-илокси-трис(диметиламино)фосфоний гексафторфосфонат) и подобные. Подходящие карбодиимиды включают, например, дициклогексилкарбодиимид (ОСС), 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимид (БОС) и подобные. Если требуется, можно также использовать формы карбодиимидных реагентов сочетания на полимерном носителе, включающие, например, соединения, описанные в ТсБаНсйгоп Бейетк, 34(48), 7685 (1993). Кроме того, для содействия реакции сочетания можно использовать хорошо известные промоторы сочетания, такие как Νгидроксисукцинимид, 1-гидроксибензотриазол и подобные.
Данную реакцию сочетания обычно проводят посредством взаимодействия Ν-сульфониламинокислоты 3 приблизительно с 1-2 эквивалентами реагента сочетания и по меньшей мере одним эквивалентом (предпочтительно приблизительно 1-1,2 эквивалента) производного тирозина 4 в инертном разбавителе, таком как дихлорметан, хлороформ, ацетонитрил, тетрагидрофуран, Ν,Ν-диметилформамид и подобные. Обычно, проводят данное взаимодействие при температуре в диапазоне от приблизительно 0 до приблизительно 37°С в течение периода от приблизительно 12 до приблизительно 24 ч. По завершении взаимодействия соединение 5 выделяют обычными способами, включающими нейтрализацию, выпаривание, экстракцию, осаждение, хроматографию, фильтрование и подобные.
По-другому, Ν-сульфониламинокислоту 3, можно превратить в галогенангидрид кислоты, который затем используют в реакции сочетания с соединением 4, получая соединение 5. Галогенангидрид кислоты можно получить взаимодействием соединения 3 с галогенангидридом неорганической кислоты, таким как тионилхлорид, трихлорид фосфора, трибромид фосфора или пентахлорид фосфора, или предпочтительно с оксалилхлоридом в обычных условиях. Как правило, данное взаимодействие проводят, используя от приблизительно 1 до приблизительно 5 мольных эквивалентов галогенангидрида неорганической кислоты или оксалилхлорида, без растворителя или в инертном растворителе, таком как дихлорметан или четыреххлористый углерод, при температуре в диапазоне от приблизительно 0 до приблизительно 80°С в течение периода от приблизительно 1 до приблизительно 48 ч. При данном взаимодействии можно также использовать катализатор, например ДМФА.
Затем проводят взаимодействие галогенангидрида Ν-сульфониламинокислоты 3 по меньшей мере с одним эквивалентом (предпочтительно приблизительно 1,1-1,5 экв.) производного тирозина 4 в инертном разбавителе, таком как дихлорметан, при температуре в диапазоне от приблизительно -70 до приблизительно 40°С в течение периода от приблизительно 1 до приблизительно 24 ч. Предпочтительно проводить данное взаимодействие в присутствии подходящего основания для удаления генерируемой в течение взаимодействия кислоты. Подходящие основания включают, например, третичные амины, такие как триэтиламин, диизопропилэтиламин, Ν-метилморфолин и подобные. По-другому, взаимодействие можно проводить в условиях типа 8сйсйеп-Ваитапп, используя водную щелочь, например, гидроксид натрия и подобные. По завершении взаимодействия, соединение 5 выделяют обычными способами, включающими нейтрализацию, выпаривание, экстракцию, осаждение, хроматографию, фильтрование и подобные.
По-другому, соединение 5 можно получить, получая сначала производное диаминокислоты и затем проводя реакцию сочетания диаминокислоты с арилсульфонилгалогенидом 2, как показано ниже на схеме 3.
Схема 3
09»
Ζ где Κ, Ка, Аг1, X, Ζ, т, η и о являются такими, как определено выше.
Диаминокислоту 6, легко получить посредством взаимодействия аминокислоты 1 с аминокислотой 4, примененяя общеизвестные методики и реагенты сочетания аминокислот, такие как карбодиимиды, реагент ВОР и подобные, которые описаны выше.
- 26 012433
Диаминокислоту 6 можно затем сульфировать, используя сульфонилхлорид 2 и применяя описанные выше методики синтеза, получая соединение 7.
Производные тирозина 4, используемые в описанных выше взаимодействиях, являются известными соединениями или соединениями, которые можно получить из известных соединений по обычным методикам синтеза. Например, производные тирозина 4, подходящие для использования в описанных выше взаимодействиях, включают, но не ограничены этим, метиловый эфир Ь-тирозина, трет-бутиловый эфир Ь-тирозина, метиловый эфир Ь-3,5-дийодтирозина, метиловый эфир Ь-3-йодтирозина, метиловый эфир в-(4-гидроксинафт-1-ил) -Ь-аланина, метиловый эфир (5-(6-гидроксинафт-2-ил)-Ь-аланина и подобные. Если требуется, конечно можно также использовать другие сложные эфиры или амиды описанных выше соединений.
Производное Ν-арилсульфонил-гетероциклической аминокислоты и тирозина 7, можно использовать в качестве исходной точки для присоединения полимерного фрагмента по группе Аг2 посредством реакций сочетания, показанных ниже на схемах 4-14, которые являются только иллюстративными для демонстрации того, как можно ввести полимерные фрагменты. На данных схемах используют РЕС в качестве полимерного фрагмента только для иллюстрации. Понятно, что вместо РЕС можно использовать другие подходящие полимеры, и что специалист в данной области способен легко модифицировать приведенные ниже реакционные схемы для включения других полимеров. В некоторых случаях фрагмент РЕС можно вводить непосредственно в феноксигруппу, и в других случаях фрагмент РЕС можно вводить, получая связь через линкерный фрагмент.
В частности, схема 4 показывает следующее:
Схема 4
на которой Аг1, Я, Яа, т, η, о, X, и Ζ являются такими, как определено выше, Рд обозначает аминозащитную группу, например СΒΖ, Вос и др., которая предпочтительно удаляется ортогонально по сравнению с защитной группой для карбоксила Яа, и р равно целому числу предпочтительно от приблизительно 100 до приблизительно 1360.
В частности, на схеме 4 соединение 7, полученное, как описано выше, объединяют, по меньшей мере, с эквивалентным и предпочтительно с избыточным количеством 4-нитрофенилхлорформиата 8 в подходящем растворителе, таком как метиленхлорид, хлороформ и подобные, и предпочтительно в инертной атмосфере. Взаимодействие предпочтительно проводят при температуре от приблизительно -40 до приблизительно 0°С в присутствии подходящего основания для удаления генерируемой кислоты. Подходящие основания включают, например, триэтиламин, диизопропилэтиламин и подобные. После образования промежуточного смешанного карбоната (не показан) добавляют к реакционному раствору, по меньшей мере, приблизительно эквимолярное количество пиперазина Ν-Рд (8а). Данную реакцию продолжают при комнатной температуре в течение периода от приблизительно 1 до приблизительно 24 ч. По завершении взаимодействия соединение 9 выделяют обычными способами, включающими нейтрализацию, выпаривание, экстракцию, осаждение, хроматографию, фильтрование и подобные, или, подругому, используют в следующей реакции без очистки и/или выделения.
- 27 012433
Обычное удаление защитной группы дает свободное пиперазиновое производное 10. Удаление защиты выполняют в соответствии с используемой блокирующей группой. Например, трифторметилкарбонильную защитную группу легко удалить водным раствором карбоната калия. Кроме того, в данной области хорошо известны подходящие защитные группы для различных функциональных групп, а также подходящие условия для введения и удаления защиты конкретных функциональных групп. См., например, работу Т.^. Сгеепе и 6. М. \Уи15. Рго1есбпд Сгоирз ίη Огдашс Сйет181гу, 8есопб Εάίίίοη, \νίΚν Νονν Уогк, 1991, и цитированные в ней ссылки.
Затем свободное пиперазиновое производное 10 объединяют с α,ω-дихлорформиатполиоксиэтиленом, соединением 11, в подходящем инертном разбавителе, таком как метиленхлорид, хлороформ и подобные, и предпочтительно в инертной атмосфере. Обычно используют по меньшей мере 2 эквивалента (и предпочтительно от приблизительно 2,5 до приблизительно 10 эквивалентов) соединения 10 на имеющееся количество хлорформиата в комбинации с соединением 11. Взаимодействие необязательно проводят в присутствии каталитического количества ОМАР и основания для удаления генерируемой в течение реакции кислоты. Взаимодействие продолжают при окружающих условиях по существу до завершения, что обычно происходит за 4-24 ч. Если Ва обозначает алкил, то последующий гидролиз сложноэфирного производного дает свободную карбоксильную группу или ее соль. Получаемый димер 12 выделяют по обычным методикам, таким как нейтрализация, выпаривание, экстракция, осаждение, хроматография, фильтрование и подобные.
α,ω-Дихлорформиатполиоксиэтилен, соединение 11, легко получить из коммерчески доступного полиоксиэтилена посредством взаимодействия с избытком фосгена (обычно по меньшей мере от 2 до приблизительно 20 эквивалентов) в подходящем инертном растворителе, таком как метиленхлорид, хлороформ и подобные. Взаимодействие предпочтительно проводят в инертной атмосфере при окружающих условиях, по существу, до завершения, что обычно происходит приблизительно за 2-24 ч. Потом полученный α,ω-дихлорформиатполиоксиэтилен, соединение 11, выделяют по обычным методикам, таким как нейтрализация, выпаривание, экстракция, осаждение, хроматография, фильтрование и подобные.
Конкретный пример данной реакционной схемы, приводящей к образованию пиперазинового производного 28, показан ниже на схеме 5.
В частности, коммерчески доступную 3-пиридинсульфоновую кислоту 21 превращают в обычных условиях в соответствующий сульфонилхлорид 22 посредством взаимодействия с РОС13/РС15, применяя условия, хорошо известные в данной области. Взаимодействие сульфонилхлорида 22 с коммерчески доступной 8-5,5-диметилтиазолидин-4-карбоновой кислотой 23 выполняют в обычных условиях, предпочтительно в присутствии фосфатного буфера (рН 7,4), используя избыток сульфонилхлорида. Взаимодействие предпочтительно проводят при температуре от приблизительно -10 до приблизительно 20°С, по существу, до завершения взаимодействия, что обычно происходит за 0,5-5 ч. Полученный продукт 24 можно выделить общеизвестными способами, такими как хроматография, фильтрование, выпаривание, кристаллизация
- 28 012433 и подобные, или, по-другому, использовать на следующей стадии без очистки и/или выделения.
Затем проводят взаимодействие соединения 23 №пиридинилсульфонил-5,5-диметилтиазолидин-4карбоновой кислоты с трет-бутилтирозином, используя обычные условий для взаимодействия аминокислот. В частности, данную реакцию взаимодействия проводят, используя хорошо известные реагенты сочетания, например, 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимид (ЕОС), 1-гидроксибензотриазол (ΗΘΒΐ) и Ν-метилморфолин, для содействия реакции сочетания.
Данную реакцию сочетания обычно проводят посредством взаимодействия Ν-сульфониламинокислоты 23 приблизительно с 1-2 эквивалентами реагента сочетания и по меньшей мере одним эквивалентом, предпочтительно приблизительно 1-1,2 экв. трет-бутилового эфира тирозина в инертном разбавителе, таком как дихлорметан, хлороформ, ацетонитрил, тетрагидрофуран, Ν,Ν-диметилформамид и подобные. Обычно данное взаимодействие проводят при температуре в диапазоне от приблизительно 0 до приблизительно 22°С в течение периода от приблизительно 12 до приблизительно 24 ч. По завершении взаимодействия соединение 24 выделяют обычными способами, включающими нейтрализацию, выпаривание, экстракцию, осаждение, хроматографию, фильтрование и подобные, или, по-другому, используют на следующей стадии без очистки и/или выделения.
Отдельно, моно-Ы-Вос-пиперазин 25 превращают в соответствующий карбамилхлорид 26 посредством взаимодействия с фосгеном описанным выше способом. По завершении взаимодействия соединение 26 выделяют обычными способами, включающими нейтрализацию, выпаривание, экстракцию, осаждение, хроматографию, фильтрование и подобные, или, по-другому, используют на следующей стадии без очистки и/или выделения.
Взаимодействие соединения 24 с соединением 26 с получением соединения 27 протекает в обычных условиях в инертном разбавителе, таком как дихлорметан, с каталитическим количеством ОМАР и предпочтительно в присутствии основания для удаления генерируемой кислоты. Взаимодействие проводят при температуре от приблизительно -20 до приблизительно 22°С в течение периода от приблизительно 2 до приблизительно 24 ч. По завершении взаимодействия соединение 27 выделяют обычными способами, включающими нейтрализацию, выпаривание, экстракцию, осаждение, хроматографию, фильтрование и подобные, или, по-другому, используют на следующей стадии без очистки и/или выделения.
Удаление обеих групп, аминозащитной группы Вос и трет-бутилового эфира протекает в присутствии трифторуксусной кислоты, давая соединение 28, которое можно выделить обычными способами, включающими нейтрализацию, выпаривание, экстракцию, осаждение, хроматографию, фильтрование и подобные.
Приведенная ниже схема 6 иллюстрирует получение пилеразинового соединения, ортогонально защищеного по одной из аминогрупп относительно карбоксилзащитной группы, находящейся на фенилаланиновом соединении, таким образом, чтобы после взаимодействия пиперазинзащитную группу можно было удалить иначе, чем карбоксилзащитную группу. Такая ортогональная защита необходима, если последующие реакции на полученном соединении требуют защиты карбоксила, чтобы избежать нежелательных побочных реакций.
- 29 012433
В частности, на схеме 6 получают описанным выше способом соединение 24. Ν-трет-Воспиперазин 25 превращают обычным способом в N-трет-Вοс-N'-трифтсрметилкарбонилпиперазин 29 посредством взаимодействия с избытком трифторуксусного ангидрида в присутствии подходящего амина, такого как триэтиламин, для удаления генерируемой кислоты в течение взаимодействия в подходящем растворителе, таком как дихлорметан. Обычно данное взаимодействие проводят при температуре в диапазоне от приблизительно -20 до приблизительно 22°С в течение периода от приблизительно 1 до приблизительно 24 ч. По завершении взаимодействия соединение 29 можно выделить обычными способами, включающими нейтрализацию, выпаривание, экстракцию, осаждение, хроматографию, фильтрование и подобные, или, по-другому и предпочтительно, используют на следующей стадии без очистки и/или выделения.
В свою очередь, удаление защитной группы трет-Вос на N-трет-Вοс-N'-трифторметилкарбонилпиперазине 29 протекает в обычных условиях при использовании газообразного НС1, барботируемого через инертный растворитель, например метиленхлорид, ЕЮАс, ЕЮ2 и подобные, при окружающих условиях с получением соли гидрохлорида Ν'-трифторметилкарбонилпиперазина 30. Обычно данное взаимодействие проводят при температуре в диапазоне от приблизительно -20 до приблизительно 22°С в течение периода от приблизительно 0,5 до приблизительно 4 ч. По завершении взаимодействия, соединение 30 можно выделить обычными способами, включающими нейтрализацию, выпаривание, экстракцию, осаждение, хроматографию, фильтрование и подобные, или, по-другому и предпочтительно, использовать на следующей стадии без очистки и/или выделения.
Конверсия Ν'-трифторметилкарбонилпиперазина 30 в производный Ν-карбамилхлорид 31 обычно протекает при взаимодействии с фосгеном описанным выше способом. По завершении взаимодействия соединение 31 можно выделить обычными способами, включающими нейтрализацию, выпаривание, экстракцию, осаждение, хроматографию, фильтрование и подобные, или, по-другому и предпочтительно, использовать на следующей стадии без очистки и/или выделения.
Соединения 31 и 24 взаимодействуют в условиях, аналогичных описанным выше, с получением соединения 32, которое является ортогонально защищенным по амино-фрагменту пиперазиновой группы, а также по карбоксильному фрагменту фенилаланиновой группы. Селективное удаление трифторметилкарбонильной аминозащитной группы протекает в обычных условиях, с использованием водного раствора карбоната калия и получением соединения 33.
Приведенная ниже схема 7 иллюстрирует модификацию полимерного фрагмента до ковалентного связывания с соединением формулы II. Только для иллюстрации, полимерный фрагмент представляет собой четырехвалентный РЕС, связанный с пентаэритритом. На схеме 7 показано, что длину полимерного фрагмента можно легко отрегулировать общеизвестными химическими способами, получая оптимальную длину.
где сумма четырех «г» и «5» равна целому числу, предпочтительно от приблизительно 100 до 1360.
- 30 012433
В частности, проводят взаимодействие коммерчески доступного тетра(Ред)-пентаэритрита, соединения 34 (например, соединение, имеющее общую молекулярную массу примерно 20 кДа и доступное от 8ип Βίο, Оппйа, СА, И8А, кат. № Р40Н-20), с избытком фосгена, обычно по меньшей мере от 4 до приблизительно 40 экв. в подходящем инертном растворителе, таком как метилен хлорид, хлороформ и подобные. Взаимодействие предпочтительно проводят в инертной атмосфере при окружающих условиях, пока взаимодействие, по существу, не завершится, что обычно происходит приблизительно за 2-24 ч. Потом полученный тетрахлорформиатполиоксиэтилен, соединение 35, выделяют по обычным методикам, таким как нейтрализация, выпаривание, экстракция, осаждение, хроматография, фильтрование и подобные, или используют на следующей стадии реакции без очистки и/или выделения.
Затем тетрахлорформиат, соединение 35, объединяют с избытком (обычно от 2,5 до 10 экв. на имеющееся количество хлорформиата) α,ω-диаминополиоксиэтиленового соединения (например, соединения, имеющего молекулярную массу приблизительно 6 кДа и доступного от 8ип Βίο, кат. № Р2АМ-6) в обычных условиях в инертном разбавителе, таком как дихлорметан, необязательно в присутствии каталитического количества ОМАР и основания для удаления генерируемой кислоты. Взаимодействие обычно проводят при температуре от приблизительно -20 до приблизительно 22°С в течение периода от приблизительно 2 до приблизительно 24 ч или, по существу, до завершения взаимодействия. По завершении соединение 36 выделяют обычными способами, включающими нейтрализацию, выпаривание, экстракцию, осаждение, хроматографию, фильтрование и подобные, или, по-другому, используют на следующей стадии без очистки и/или выделения.
Если используют конкретный тетра(РЕС)-пентаэритрит от 8ип Βίο и диамин от 8ип Βίο, получаемый продукт, соединение 36, имеет молекулярную массу приблизительно 45 кДа. α,ω-Диаминополиоксиэтилены коммерчески доступны под торговой маркой ФГГатшек® и обычно имеют молекулярные массы от 10000 или выше.
Понятно, что моно-амино-защищенный α,ω-диаминополиоксиэтилен можно использовать в схеме 7, чтобы уменьшить до минимума сшивку, а также циклизацию. По завершении взаимодействия моноамино-защитные группы удаляют обычными способами, хорошо известными в данной области.
Схема 8 иллюстрирует второй способ превращения с введением полимерного заместителя. На данной схеме аминофрагмент пиперазиновой группы используют как комплементарную функциональную группу к получаемым на месте активированным карбоксильным группам α,ω-дикарбоксильного полимера. Также только для иллюстрации, α,ω-дикарбоксильный полимер представляет собой α,ωдикарбоксильный полиоксиэтилен. В данном варианте соединение дикарбоксил-РЕС представлен формулой НООССН2(ОСН2СН2)РОСН2СООН, где р является таким, как определено выше, и полученный линкер для группы РЕС представлен формулой -С(О)СН2-.
В частности, на схеме 8 избыток соединения 33 (например, от 2,5 до 10 эквивалентов соединения 33 на карбоксильную группу), полученного, как описано выше, добавляют к соединению дикарбоксил-РЕС, которое превращают на месте в активированный сложный эфир (не показан) посредством взаимодействия по меньшей мере с двумя эквивалентами (и предпочтительно с избытком) НАТИ [О-(7азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3,-тетраметилуронийгексафторфосфата] в присутствии подходящего амина, например триэтиламина. Взаимодействие соединения дикарбоксил-РЕС с соединением 33 предпочтительно протекает при температуре от приблизительно 0 до приблизительно 22°С в течение периода от приблизительно 2 до приблизительно 24 ч. По завершении взаимодействия соединение 39 выделяют обычными способами, включающими нейтрализацию, выпаривание, экстракцию, осаждение, хроматографию, фильтрование и подобные, или, по-другому, используют на следующей стадии без очистки и/или выделения.
- 31 012433
Обычное удаление трет-бутилкарбоксильной защитной группы избытком муравьиной кислоты дает соединение формулы ГА по данному изобретению.
Схема 9 иллюстрирует еще один способ преобразования, обеспечивая присоединение полимера к соединению А. На данной схеме амино-фрагмент пиперазиновой группы используют как комплементарную функциональную группу к полученному на месте хлорформиату полимера, содержащему α,ω-диол. Также для целей иллюстрации, полимер, содержащий α,ω-диол, представляет собой РЕО, который представлен формулой НОСН2СН2(ОСН2СН2)рОН, где р является таким, как определено выше, и полученный линкер представлен формулой -С(О)-.
Схема 9
В частности, на схеме 9 гидроксильную группу коммерчески доступного дигидрокси-РЕО 42 превращают в соответствующий хлорформиат 37 посредством взаимодействия с фосгеном в толуоле (Е1ика) в дихлорметане. Продукт выделяют выпариванием и используют на следующей стадии без дополнительной очистки.
Проводят взаимодействие избытка соединения 33 (например, от 2,5 до 10 экв. соединения 33 на имеющееся количество хлорформиата) с дихлорформиатом, соединением 43, полученным, как описано выше, в присутствии подходящего основания, такого как триэтиламин, для удаления генерируемой кислоты. Взаимодействие соединения дихлорформиат-РЕО с соединением 33 предпочтительно протекает при температуре от приблизительно 0 до приблизительно 22°С в течение периода от приблизительно 2 до приблизительно 4 ч. По завершении взаимодействия соединение 441 выделяют обычными способами, включающими нейтрализацию, выпаривание, экстракцию, осаждение, хроматографию, фильтрование и подобные, или, по-другому, используют на следующей стадии без очистки и/или выделения.
Обычное удаление трет-бутилкарбоксильной защитной группы избытком муравьиной кислоты дает соединение формулы Г по данному изобретению.
Взаимодействия, изображенные на схемах 8 и 9, проводят одновременно по любому концу дикарбоновой кислоты (схема 8) или дихлорформиата (схема 9), обеспечивая тем самым синтез в одном сосуде гомомономерного двухвалентного конъюгата или конъюгата более высокой валентности. Однако понятно, что данные взаимодействия можно проводить последовательно при использовании защитных групп.
В случае дикарбоновой кислоты одна из карбоксильных групп может быть защищенной, тогда как другая претерпевает взаимодействие с аминогруппой пиперазина. По завершении реакции защитную группу можно удалить и затем провести взаимодействие с таким же или предпочтительно другим соединением А с получением гетеродвухвалентной структуры. Кроме того, можно получить гетеротрехвалентные, гетерочетырехвалентные структуры и гетеромноговалентные структуры более высокой валентности, применяя ортогональные защитные группы на карбоксильной функциональности. В случае диола (схема 9) одна из гидроксильных групп может быть защищенной, тогда как другая претерпевает взаимодействие с фосгеном с образованием хлорформиата для последующего присоединения к аминогруппе пиперазина. По завершении реакции защитную группу можно удалить и затем провести взаимодействие с фосгеном и после с таким же или предпочтительно с другим соединением А с получением гетеродвухвалентной структуры. Еще, кроме того, можно получить гетеротрехвалентные, гетерочетырехвалентные структуры и гетеромноговалентные структуры с более высокой валентностью, применяя ортогональные защитные группы по спиртовой функциональности.
- 32 012433
Схема 10 иллюстрирует синтез промежуточных продуктов Ν-карбамилхлорида и изоцианата, пригодных для последующего присоединения полимера. На данной схеме амино-фрагмент пиперазиновой группы преобразуют для последующего присоединения полимера.
Схема 10
ш ₽4№,Н,
ςόντ1 Л
В частности, на схеме 10 конверсия аминофрагмента пиперазиновой группы соединения 33 в соответствующий Ν-карбамилхлорид, соединение 33а, протекает при взаимодействии с избытком фосгена в присутствии подходящего основания, такого как бикарбонат натрия, для удаления генерируемой в течение взаимодействия кислоты. По завершении взаимодействия соединение 33а можно выделить обычными способами, такими как нейтрализация, выпаривание, экстракция, осаждение, хроматография, фильтрование и подобные, или, по-другому и предпочтительно, использовать на следующей стадии (показано на схеме 11) без очистки и/или выделения.
По-другому, аминофрагмент пиперазиновой группы соединения 33 можно превратить в соответствующий амид, соединение 45, посредством взаимодействия, по меньшей мере, с эквивалентом и предпочтительно с избытком 4-нитробензоилхлорида в присутствии основания, такого как пиридин (которое также может действовать в качестве растворителя), для удаления генерируемой в течение взаимодействия кислоты. Взаимодействие предпочтительно протекает при температуре от приблизительно 0 до приблизительно 22°С в течение периода от приблизительно 1 до приблизительно 24 ч. По завершении взаимодействия соединение 45 выделяют обычными способами, включающими нейтрализацию, выпаривание, экстракцию, осаждение, хроматографию, фильтрование и подобные, или, по-другому, используют на следующей стадии без очистки и/или выделения.
Последующее восстановление пара-нитрозаместителя фенильной группы дает аминозаместитель в соединении 46. Восстановление обычно проводят, используя палладий/уголь в атмосфере водорода, обычно при повышенном давлении в подходящем разбавителе, таком как метанол. Взаимодействие протекает, по существу, до завершения, что обычно происходит приблизительно за 24-72 ч. Во время взаимодействия, дополнительно добавляют катализатор, который требуется для завершения взаимодействия. По завершении взаимодействия соединение 46 выделяют обычными способами, включающими нейтрализацию, выпаривание, экстракцию, осаждение, хроматографию, фильтрование и подобные, или, подругому, используют на следующей стадии без очистки и/или выделения.
Конверсия пара-аминозаместителя фенильной группы соединения 46 до соответствующего изоцианата 47 происходит при взаимодействии с избытком фосгена в присутствии подходящего основания, такого как бикарбонат натрия, который убирает генерируемую кислоту. Взаимодействие протекает, по существу, до завершения, что обычно происходит приблизительно за 0,5-5 ч при температуре от приблизительно 0 до приблизительно 22°С. По завершении взаимодействия соединение 47 выделяют обычными способами, включающими нейтрализацию, выпаривание, экстракцию, осаждение, хроматографию, фильтрование и подобные, или, по-другому, используют на следующей стадии без очистки и/или выде
- 33 012433 ления.
Схема 11 иллюстрирует еще один способ преобразования с получением замещения полимером. На данной схеме карбамилхлоридный фрагмент пиперазиновой группы соединения 33а используют как комплементарную функциональную группу для образования карбаматной или карбамидной связи. Только для иллюстрации, используемый полимер является α.ω-диол- или диамин-РЕС и представлен формулой НССН2СН2(ОСН2СН2)РСН. где С обозначает ΝΗ или О.
Схема 11
Ос
В частности. на схеме 11 показано взаимодействие избытка (например. от 2.5 до 10 экв. карбамилхлорида на каждый фрагмент НС) соединения 33а в инертном растворителе. таком как дихлорметан. с подходящим дигидрокси- или диамино-РЕС соединением. предпочтительно в присутствии подходящего основания. такого как триэтиламин и/или каталитических количеств 4-^№диметиламинопиридина (ОМАР). Взаимодействие протекает. по существу. до завершения. что обычно происходит приблизительно за 4-48 ч. По завершении взаимодействия соединение 48 выделяют обычными способами. включающими нейтрализацию. выпаривание. экстракцию. осаждение. хроматографию. фильтрование и подобные. или. по-другому. используют на следующей стадии без очистки и/или выделения.
Если С представляет собой гидроксильную группу. то продукт содержит карбаматную функциональность. ковалентно связывающую группу РЕС с антагонистом УЪА-4 через линкер. представленный формулой -С(О)-. Если С представляет собой аминогруппу. то продукт содержит карбамидную функциональность. ковалентно связывающую группу РЕС с антагонистом УЪА-4 через линкер. представленный формулой -С(О)-. Обычное удаление трет-бутильной карбоксилзащитной группы избытком муравьиной кислоты дает соединение данного изобретения.
Схема 12 иллюстрирует еще один способ преобразования с получением полимерного замещения. На данной схеме изоцианат соединения 47 используют как комплементарную функциональную группу для образования карбаматной или карбамидной связи. Только для иллюстрации. используемый полимер представляет собой α.ω-циол- или диамин-РЕС и представлен формулой НССН2СН2(ОСН2СН2)РСН. где С обозначает NΗ или О.
- 34 012433
В частности, на схеме 12 показано взаимодействие избытка изоцианата 47 (например, от 2,5 до 10 экв. изоцианата 47 на каждый фрагмент НО) с подходящим дигидрокси- или диамино-РЕО соединением в подходящем инертном разбавителе, таком как дихлорметан или толуол. Температуру реакции предпочтительно поддерживают при значении от приблизительно 0° до приблизительно 105°С, по существу, до завершения взаимодействия, что обычно происходит приблизительно за 1-24 ч. По завершении взаимодействия, соединение 49 выделяют обычными способами, включающими нейтрализацию, выпаривание, экстракцию, осаждение, хроматографию, фильтрование и подобные, или, по-другому, используют на следующей стадии без очистки и/или выделения.
Если О представляет собой гидроксил группу, то получаемый продукт содержит карбаматную функциональность, ковалентно связывающую группу РЕО с антагонистом УЪА-4 через линкерную группу -С(О)-. Если О представляет собой аминогруппу, то получаемый продукт содержит карбамидную функциональность, ксвалентно связывающую группу РЕО с антагонистом УЪА-4 через линкерную группу -С(О)-.
Обычное удаление трет-бутильной карбоксилзащитной группы избытком муравьиной кислоты дает моно-РЕО соединение 47 формулы I по данному изобретению.
Взаимодействия, показанные на схемах 11 и 12, проводят одновременно по обоим концам полимера (для получения димера), обеспечивая тем самым синтез в одном сосуде гомомономерного двухвалентного конъюгата или конъюгата более высокой валентности. Понятно, однако, что данные взаимодействия можно проводить последовательно, используя защитные группы.
В случае диамина одна из аминогрупп может быть защищена, в то время как другая претерпевает взаимодействие с карбамилхлоридом соединения 33а или изоцианатом соединения 47. По завершении взаимодействия защитную группу можно удалить и далее проводить взаимодействие с таким же или предпочтительно с другим соединением А с получением гетеродвухвалентной структуры. Кроме того, можно получить гетеротрехвалентные, гетерочетырехвалентные и гетеромультивалентные структуры более высокой валентности, используя ортогональные защитные группы на одной или нескольких из аминофункциональностей.
В случае диола одна из гидроксильных групп может быть защищена, в то время как другая претерпевает взаимодействие с карбамилхлоридом соединения 33а или изоцианатом соединения 47. По завершении взаимодействия защитную группу можно удалить и далее проводить взаимодействие с таким же или предпочтительно с другим соединением А с получением гетеродвухвалентной структуры. Кроме того, можно получить гетеротрехвалентный, гетерочетырехвалентный и гетеромультивалентные структуры более высокой валентности, используя ортогональные защитные группы по одной или нескольким из гидроксильных функциональностей.
На приведенных выше схемах аминофрагменты, расположенные на других частях молекулы, можно использовать описанным выше способом для ковалентного связывания полимерной группы с молекулой. Например, амины, находящиеся на Аг1, на гетероциклиламинокислоте или на Аг2, можно аналогичным образом преобразовать с получением РЕО замещения. Аминофрагменты можно включить в данные заместители во время синтеза и, если необходимо, ввести подходящую защиту. По-другому, можно использовать аминопредшественники. Например, как показано на схеме 10, восстановление нитрогруппы дает соответствующий амин. Аналогично, восстановление цианогруппы дает Н2ЫСН2- группу. В патенте США № 6489300 приведены нитро- и цианозамещенные группы Аг1, которые могут дать аминозамещенные группы Аг1.
Кроме того, аминозамещение можно включить в функциональность гетероциклических аминокислот и затем преобразовать, включая полимерный фрагмент. Например, функциональность гетероциклической аминокислоты может представлять собой 2-карбоксилпиперазин, описанный в патенте США № 6489300. По-другому, коммерчески доступный 3- или 4-гидроксипролин можно окислить до соответствующего кетона и затем провести восстановительное аминирование аммиаком в присутствии цианборгидрида натрия с получением соответствующего аминофрагмента. Кроме того, можно восстановить 4цианопролин с получением замещенной алкильной группы формулы -ΟΗ2ΝΗ2, которую можно преобразовать через амин.
Кроме того, аминофрагмент можно включить в функциональность Аг2. Предпочтительно, если аминофрагмент присутствует как предшественник амина, например, нитро- или цианогруппа, связанная с Аг2.
На приведенной выше схеме взаимодействия амина с комплементарной функциональной группой может быть обратным, таким образом, что карбоксильная или гидроксильная группа находится на антагонисте УЪА-4 формулы II (без каких-либо полимерных заместителей) и аминогруппа может представлять часть полимерного фрагмента. В таких случаях аминогруппу, предпочтительно являющуюся терминальной группой полимерного фрагмента, можно превратить в изсцианат, используя фосген и Е1^, и провести взаимодействие с гидроксильной группой с образованием карбамата, как показано ниже на схеме 13:
- 35 012433
Схема 13
В частности, проводят взаимодействие избытка соединения 50, описанного в патенте США № 6489300, описанным выше способом, получая соответствующий карбамат 51. Предпочтительно используют от приблизительно 2,5 до приблизительно 10 экв. соединения 50 на каждый изоцианатный фрагмент. Последующее удаление защиты, которое описано выше, дает соответствующую дикислоту (не показана).
По-другому, по схеме 13 можно проводить взаимодействие гидроксильной функциональности с фосгеном, получая хлоркарбонилокси производное, которое далее пускать во взаимодействие с аминогруппой диаминового соединения, получая карбамат.
Карбоксильную функциональность, например на фрагменте Аг1, можно преобразовать до соответствующего амида посредством взаимодействия с ди- или более длинным аминополимером способом, описанным выше на схеме 8. По-другому, приведенная ниже схема 14 иллюстрирует один способ получения аминофункциональности из соответствующей цианогруппы на фрагменте Аг1.
Схема 14
н, ню
а
В частности, на схеме 14 вводят трет-бутильную защиту на известное соединение 52, описанное в патенте США № 6489300, является в обычных условиях, получая цианосоединение 53, которое гидрируют в обычных условиях, получая аминометильное соединение 54. Аминометильная группа соединения 54 доступна для присоединения к ней полимерного фрагмента по одной или другой из приведенных выше схем.
Приведенная ниже схема 15 иллюстрирует альтернативный синтез 3-аминопирролидинильных производных, пригодных для присоединения к ним полимерного фрагмента по одной или другой из приведенных выше схем.
- 36 012433
Схема 15
Применяя общеизвестные способы, обрабатывают коммерчески доступный цис-4-гидрокси Ьпролин 57 метанольным раствором хлористого водорода в течение нескольких часов при кипении с обратным холодильником с последующим выпариванием, и полученный таким образом гидрохлорид метилового эфира обрабатывают избытком тозилхлорида в пиридине в течение двух дней при комнатной температуре, что дает продукт 58. Соединение 58 выделяют нейтрализацией пиридина с использованием слабой водной кислоты и экстракцией продукта органическим растворителем, таким как ЕЮАс. Продукт можно очистить кристаллизацией, флэш-хроматографией или более предпочтительно использовать на последующих стадиях без очистки.
Взаимодействие соединения 58 с насыщенным раствором избытка азида натрия в ДМФА при комнатной температуре в течение 15 дней дает соединение 59. Соединение 59 выделяют, разбавляя реакционную смесь водой с последующей экстракцией органическим растворителем, таким как ЕЮАс. Продукт можно очистить кристаллизацией, флэш-хроматографией или более предпочтительно использовать на последующих стадиях без очистки.
Соединение 59 обрабатывают гидроксидом натрия в смеси воды и метанола, таким образом, осуществляя гидролиз метилового эфира и получая карбоновую кислоту, которую выделяют посредством подкисления и экстракции органическим растворителем, таким как ЕЮАс. Карбоновую кислоту обрабатывают трет-бутиловым эфиром Ь-тирозина [Н-Туг(Н)-О!Ви] , ЕБАС, НОВ! и Ξ!3Ν в ДМФА, получая дипептид, который выделяют посредством разбавления водой и экстракции органическим растворителем, таким как Е!ОАс. Дипептид обрабатывают С1СОNΜе2, Е!^ и БМАР в ДХМ при кипении с обратным холодильником в течение 24 ч, получая карбамат 60, который выделяют посредством разбавления Е!ОАс, последующего промывания слабой водной кислотой и основанием и потом выпаривания. Соединение 60 тщательно очищают методом флэш-хроматографии.
В заключение, получают соединение 61, встряхивая раствор соединения 60 в метаноле с катализатором Рб/С в атмосфере водорода. Продукт 61 выделяют, удаляя катализатор фильтрованием и проводя выпаривание.
- 37 012433
В данной области хорошо известны другие способы взаимодействия соединения формулы II с полимером (необязательно связанным с разветвленной центральной молекулой).
Другие полимеры, подходящие для конъюгации с соединением формулы II, включают (без ограничения) поливинилпирролидон (РУР), полиакриламид (РААт), полидиметилакриламид (РИААт), поливиниловый спирт (РУА), декстран, поли(Ь-глутаминовую кислоту) (РСА), поли(стиролмалеиновый ангидрид) (8МА), поли-№-(2-гидроксипропил)метакриламид (НРМА), поли(дивиниловый эфир-малеиновый ангидрид) ^УЕМА). Например, РУР, РААт и РЭЛАт могут получить функциональность при введении сомономеров во время радикальной полимеризации. РУА и декстран, каждый содержит первичные гидроксильные (ОН) группы, подходящие для конъюгации. Способы синтеза данных биополимеров и образования их конъюгатов с биологическими материалами хорошо известны в данной области (см., например, опубликованную патентную заявку США 20040043030; патент США 5177059; патент США 6716821; патент США 5824701; патент США 6664331; патент США 5880131; работы Катейа, Υ. и др., В|ота1спа15 25: 3259-3266, 2004; Тйапои, М. и др, СштеШ Θρίηίοη ίη [пуе511да11опа1 Эгидх 4(6): 701-709, 2003; Устоме^е, Р.М., и др., II Рагтасо 54:497-516, 1999, которые все включены здесь во всей своей полноте).
Фармацевтические препараты
Используемые в качестве фармацевтических препаратов конъюгаты по данному изобретению обычно вводят в виде фармацевтических композиций. Данные конъюгаты можно вводить различными способами, включая пероральный, ректальный, трансдермальный, подкожный, внутривенный, внутримышечный, подъязычный, глазной способ или ингаляцию, включая введение через нос или пероральную ингаляцию. Предпочтительные способы введения включают подкожный, внутривенный и ингаляцию. Такие композиции получают способами, хорошо известными в области фармацевтики, и содержат по меньшей мере один конъюгат.
Изобретение также касается фармацевтических композиций, включающих конъюгат по данному изобретению, например, конъюгат формулы I, в комбинации с отдельным соединением, которое представляет собой ингибитор α4β7. Такие композиции содержат также фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель и их можно вводить так, как раскрыто выше или еще где-либо здесь.
Данное изобретение также включает фармацевтические композиции, которые содержат в качестве активного ингредиента один или более конъюгатов формулы I вместе с фармацевтически приемлемыми носителями. При получении композиций по данному изобретению активный ингредиент обычно смешивают с наполнителем, разбавляют наполнителем или заключают в такой носитель, который может иметь вид стерильных растворов для инъекций и стерильных упакованных порошков. Простой носитель для подкожного введения может содержать стерильный водный раствор №а2НРО4, NаΗ2РΟ4 и №101 в соотношении, которое обеспечивает изотонический и физиологически приемлемый рН, известный как РВ8 или физиологический раствор с фосфатным буфером. Другой вариант представляет введение соединений в стерильном изотоническом физиологическом растворе, рН которого доведен до физиологического значения, если необходимо. Другие варианты известны специалистам в данной области и включают системы смешанных растворителей, которые могут влиять на скорость абсорбции и общее время воздействия. Данные варианты включают системы смешанных растворителей, содержащие глицерин, полиэтиленгликоль 400 и льняное масло. Возможное применение находит также этанол, Ν,Ν'-диметилацетамид, пропиленгликоль и бензиловый спирт, которые все можно использовать для манипуляции с повышением проницаемости и гипертоничностью.
При получении препарата может быть необходимо размолоть активное соединение, чтобы получить подходящий размер частиц до объединения с другими ингредиентами. Если активное соединение является, по существу, нерастворимым, его обычно размалывают до размера частиц менее 200 меш. Если активное соединение существенно растворимо в воде, то размер частиц обычно регулируют перемалыванием, получая, по существу, однородное распределение в препарате, например, приблизительно 40 меш.
Некоторые примеры подходящих наполнителей включают лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, крахмалы, аравийскую камедь, фосфат кальция, альгинаты, трагакант, желатин, силикат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, целлюлозу, воду, сироп и метилцеллюлозу. Кроме того, препараты включают: лубриканты, такие как тальк, стеарат магния и минеральное масло; смачивающие агенты; эмульгирующие и суспендирующие агенты; консерванты, такие как метил- и пропилгидроксибензоаты; подслащающие агенты; и вкусовые агенты. Композиции по данному изобретению можно приготовить таким образом, чтобы обеспечить быстрое, длительное или замедленное высвобождение активного ингредиента после введения пациенту, применяя известные в данной области методики.
Введение терапевтических агентов с применением препарата для подкожного или внутривенного введения хорошо известно в фармацевтической индустрии. Препарат для подкожного или внутривенного введения должен обладать определенными качествами помимо того, что он представляет собой композицию, в которой терапевтический агент является растворимым. Например, препарат должен содействовать общей стабильности активного ингредиента(ингредиентов), также производство препарата должно быть рентабельным. Все эти факторы, в конечном счете, определяют общий благоприятный исход и по
- 38 012433 лезность внутривенного препарата.
Далее приведены другие вспомогательные добавки, которые можно включать в фармацевтические препараты соединений по настоящему изобретению: растворители: этанол, глицерин, проплленгликоль; стабилизаторы: БОТА (этилендиамин тетрауксусная кислота), лимонная кислота; антимикробные консерванты: бензиловый спирт, метилпарабен, пропилпарабен; буферные агенты: лимонная кислота/цитрат натрия, гидротартрат калия, гидротартрат натрия, уксусная кислота/ацетат натрия, малеиновая кислота/ малеат натрия, натрия гидрофталат, фосфорная кислота/дигидрофосфат калия, фосфорная кислота/динатрийгидрофосфат; и модификаторы тоничности: хлорид натрия, маннит, декстроза.
Присутствие буфера необходимо для поддержания водного рН в диапазоне от приблизительно 4 до приблизительно 8 и более предпочтительно в диапазоне от приблизительно 4 до приблизительно 6. Буферная система обычно представляет собой смесь слабой кислоты и ее растворимой соли, например цитрат натрия/лимонная кислота; или монокатионную или дикатионную соль двухосновной кислоты, например, гидротартрат калия, гидротартрат натрия, фосфорная кислота/дигидрофосфат калия и фосфорная кислота/динатрийгидрофосфат.
Количество используемых буферных систем зависит от (1) требуемого рН и (2) количества лекарства. Обычно количество используемого буфера соответствует молярному соотношению буфер:алендронат от 0,5:1 до 50:1 (где моли буфера представляют сумму молей буферных ингредиентов, например, цитрата натрия и лимонной кислоты) в препарате для поддержания рН в диапазоне от 4 до 8, и обычно используют молярное соотношение буфер (суммарный):присутствующее лекарство от 1:1 до 10:1.
Пригодный для данного изобретения буфер - смесь цитрат натрия/лимонная кислота содержит от 5 до 50 мг на мл цитрата натрия и от 1 до 15 мг на мл лимонной кислоты, что достаточно для поддержания водного рН 4-6 композиции.
Может также присутствовать буферный агент для предотвращения осаждения лекарства при образовании металлокомплекса с растворенными ионами металлов, например Са, Мд, Ее, А1, Ва, которые могут переходить в раствор из стеклянных контейнеров или резиновых пробок или могут присутствовать в обычной водопроводной воде. Агент может действовать как конкурентный агент, образующий комплекс с лекарством, и вызывать растворение металлокомплекса, приводящего к присутствию нежелательных частиц.
Кроме того, может потребоваться присутствие агента, например хлорида натрия, в количестве примерно 1-8 мг/мл для регулировки тоничности крови человека до единого значения, чтобы избежать разбухания или сморщивания эритроцитов после введения внутривенного препарата, приводящего к нежелательным побочным эффектам, таким как тошнота или диарея и, возможно, связанного с заболеваниями крови. Вообще, тоничность препарата соответствует тоничности крови человека, которая составляет величину в диапазоне от 282 до 288 мОсм/кг, и как правило, 285 мОсм/кг, что эквивалентно осмотическому давлению, соответствующему 0,9% раствору хлорида натрия.
Препарат для внутривенного применения можно вводить посредством прямой внутривенной инъекции, внутривенного болюса или вливания, добавляя к подходящему инфузионному раствору, такому как 0,9% раствор хлорида натрия для инъекций или другой совместимый инфузионный раствор.
Композиции можно приготовить в виде стандартной дозированной формы, каждая доза которой содержит от приблизительно 5 до приблизительно 100 мг, чаще от приблизительно 10 до приблизительно 30 мг активного ингредиента. Термин стандартная дозированная форма обозначает физически дискретные единицы, подходящие в качестве единых доз для пациентов, людей и других млекопитающих, причем каждая единица содержит предварительно определенное количество активного материала, рассчитанное для произведения требуемого терапевтического эффекта, в ассоциации с подходящим фармацевтическим наполнителем.
Конъюгат является эффективным в широком диапазоне дозировок, и обычно его вводят в фармацевтически эффективном количестве. Однако понятно, что фактически вводимое количество конъюгата определяет лечащий врач в свете существенных обстоятельств, включающих подлежащее лечению состояние, выбранный способ введения, фактически вводимое соединение, возраст, вес и реакцию индивидуального пациента, тяжесть симптомов у пациента и подобное.
Для получения твердых композиций, таких как таблетки, основной активный ингредиент смешивают с фармацевтическим наполнителем с образованием твердой предварительной композиции, содержащей гомогенную смесь соединения настоящего изобретения. При обозначении данной предварительной композиции как гомогенной, имеется в виду, что активный ингредиент диспергирован равномерно по композиции, таким образом, что композицию можно легко разделить на стандартные дозированные единицы равной эффективности, такие как таблетки, пилюли и капсулы. Затем данный твердый предварительный препарат делят на стандартные дозированные единицы описанных выше типов, содержащие, например, от приблизительно 0,1 до приблизительно 500 мг активного ингредиента по настоящему изобретению.
На таблетки или пилюли по настоящему изобретению можно нанести покрытие или скомпоновать их по-другому, получив дозированную форму, обеспечивающую преимущество продолжительного действия. Например, таблетка или пилюля может содержать внутренний дозированный компонент и внеш
- 39 012433 ний дозированный компонент, причем последний находится в виде оболочки поверх первого. Два компонента могут быть разделены энтеросолюбильным слоем, который служит для сопротивления разрушению в желудке и позволяет внутреннему компоненту пройти нетронутым в двенадцатиперстную кишку или обеспечивает замедленное высвобождение. Для таких энтеросолюбильных слоев или покрытий можно использовать разнообразные материалы, включающие ряд полимерных кислот и смеси полимерных кислот с такими материалами как шеллак, цетиловый спирт и ацетат целлюлозы.
Жидкие формы для перорального введения или введения посредством инъекции, в которые можно включить новые композиции по настоящему изобретению, включают водные растворы, сиропы с подходящими вкусовыми добавками, водные или масляные суспензии и эмульсии со вкусовыми добавками и пищевыми маслами, такими как хлопковое масло, кунжутное масло, кокосовое масло или арахисовое масло, а также эликсиры и аналогичные фармацевтические носители.
Композиции для ингаляций или инсуффляций включают растворы и суспензии в фармацевтически приемлемых водных или органических растворителях или их смесях и порошки. Жидкие или твердые композиции могут содержать подходящие фармацевтически приемлемые наполнители, которые описаны выше. Для локального или системного действия предпочтительно вводить композиции пероральным или носовым респираторным способом. Композиции в предпочтительных фармацевтически приемлемых растворителях можно распылять с использованием инертных газов. Распыляемые растворы можно вдыхать непосредственно из распылительного устройства, или распылительное устройство может быть соединено с маской или дыхательной машиной периодического действия, работающей под повышенным давлением. Раствор, суспензию или порошковые композиции можно вводить предпочтительно перорально или через нос из устройств, которые доставляют препарат подходящим образом. Для введения посредством ингаляции или инсуффляции предпочтительно, чтобы общая молекулярная масса конъюгата составляла от приблизительно 10000 до приблизительно 70000 Да, более предпочтительно от приблизительно 20000 до приблизительно 45000 Да.
Конъюгаты полимеров
Соединения по данному изобретению, которые готовят и вводят, представляют собой конъюгаты полимеров. Ожидается, что конъюгаты полимеров обеспечат преимущества над неконъюгированными полимерами, такие как повышенная растворимость и ш у|уо стабильность.
По существу, отдельную полимерную молекулу можно использовать для конъюгации с соединениями настоящего изобретения, хотя также предполагается, что можно присоединить более одной полимерной молекулы, обычно через носитель. Конъюгированные соединения по настоящему изобретению могут быть полезны в обоих применениях, ш у|уо и не ш у|уо. Кроме того, очевидно, что при конъюгации полимера можно использовать любые другие группы, фрагменты или другие конъюгированные типы, которые подходят для применения на концах. Например, в некоторых применениях может быть полезно функционализировать полимер, делая его реакционноспособным, и обеспечивая возможность его конъюгации с соединением формулы II и усиливая различные свойства или характеристики всего конъюгированного материала. Таким образом, полимер может содержать любую функциональность, повторяющиеся группы, связи или другие элементы структуры, которые не мешают эффективности конъюгированных соединений настоящего изобретения относительно предполагаемой цели.
Иллюстративные полимеры, которые с пользой используются для достижения требуемых характеристик, описаны выше, а также в РСТ \УО 01/54690 (®Непд и др.), включенной здесь в виде ссылки во всей своей полноте. Полимер можно соединить с соединениями настоящего изобретения (предпочтительно через линкерный фрагмент) с образованием стабильных связей, которые не расщепляются человеческими ферментами в значительной степени. Обычно, чтобы связь не расщеплялась «в значительной степени» требуется, чтобы не более приблизительно 20% связей, соединяющих полимер и соединения по настоящему изобретению, к которым полимер присоединен, расщеплялись за период 24 ч, что определяют в данной области по стандартным методикам, включающим (но не ограниченным), жидкостную хроматографию при высоком давлении (НРЬС).
Обычно соединения данного изобретения содержат по меньшей мере примерно 2 соединения формулы II, связанных с полимером. Конечное количество соответствует равновесию между максимизацией длительности взаимодействия при минимизации неспецифических модификаций продукта и, в то же время, определением химизма, который сохраняет оптимальную активность при одновременной оптимизации периода полураспада соединений настоящего изобретения. Предпочтительно, если сохраняется по меньшей мере приблизительно 50% биологической активности соединений настоящего изобретения и наиболее предпочтительно, если сохраняется 100%.
Как отмечается выше в предпочтительном практическом применении настоящего изобретения в рассматриваемые полимерные системы преимущественно включены полиалкиленгликольные остатки С2-С4 алкилполиалкиленгликолей, предпочтительно полиэтиленгликолевые (РЕС) или поли(окси)алкиленгликолевые остатки таких гликолей. Таким образом, полимер, с которым связаны соединения настоящего изобретения, может быть гомополимером полиэтиленгликолем (РЕС) или полиоксиэтилированным полиолом при условии во всех случаях, что полимер растворим в воде при комнатной температуре. Неограничительные примеры таких полимеров включают полиалкиленоксидные гомополимеры,
- 40 012433 например РЕС или полипропиленгликоли, полиоксиэтилен-производные гликолей, их сополимеры и блоксополимеры при условии, что сохраняется растворимость в воде блоксополимеров.
Примеры полиоксиэтилированных полиолов включают (но не ограничены этим) полиоксиэтилированный глицерин, полиоксиэтилированный сорбит, полиоксиэтилированную глюкозу или подобные. Глицериновая основная цепь полиоксиэтилированного глицерина является такой же, как основная цепь, например, в природных моно-, ди- и триглицеридах животных и людей. Таким образом, нет необходимости рассматривать данную цепь как инородный агент в организме.
Специалист в данной области поймет, что предыдущий перечень является только иллюстративным и что рассматриваются все полимерные материалы, имеющие описанные здесь качества. Полимер не должен иметь конкретную молекулярную массу, но предпочтительно, чтобы молекулярная масса составляла от приблизительно 100 до приблизительно 100000, предпочтительно от приблизительно 10000 до приблизительно 80000; более предпочтительно от приблизительно 20000 до приблизительно 70000. В частности, размеры 20000 или больше являются наиболее эффективными в предотвращении потери продукта в результате фильтрования в почках.
Под РЕС-производным понимают полимер полиэтиленгликоль, в котором одна или обе терминальных гидроксильных группы, находящихся на самом полиэтиленгликоле, модифицированы. Примеры подходящих модификаций включают замещение одной или обеих гидроксильных групп альтернативными функциональными группами, которые могут быть защищенными или незащищенными лигандами с низкой молекулярной массой, или другими макромолекулами или полимерами. Модификацию терминальных гидроксильных групп в полиэтиленгликоле можно осуществить посредством взаимодействия полиэтиленгликоля с соединениями, содержащими комплементарные реакционноспособные функциональные группы, включая функциональные группы, которые способны претерпевать взаимодействие с гидроксильными группами в полиэтиленгликоле. РЕС-производные соединений по данному изобретению могут содержать один или более полиэтиленгликольных (РЕС) заместителей, ковалентно с ними связанных через линкерные группы.
В следующих примерах препаратов показаны фармацевтические композиции настоящего изобретения.
Пример препарата 1.
Получают твердые желатиновые капсулы, содержащие следующие ингредиенты:
Ингредиент Количество (мг/капсула)
Активный ингредиент 30,0
Крахмал 305,0
Стеарат магния 5, 0
Указанные выше ингредиенты смешивают и заполняют ими твердые желатиновые капсулы в количестве 340 мг.
Пример препарата 2.
Получают препарат для таблеток, используя указанные ниже ингредиенты:
Ингредиент Количество (мг/таблетка)
Активный ингредиент 25,0
Целлюлоза микрокристаллическая 200, 0
Коллоидный диоксид кремния 10,0
Стеариновая кислота 5, 0
Компоненты смешивают и получают прессованием таблетки, каждая массой 240 мг.
Пример препарата 3.
Получают препарат в виде сухого порошка для ингалятора, содержащий следующие компоненты:
Ингредиент % масс.
Активный ингредиент 5
Лактоза 95
Активный ингредиент смешивают с лактозой и смесь добавляют в аппарат для ингаляции сухого порошка.
Пример препарата 4.
Таблетки, каждая из которых содержит 30 мг активного ингредиента, получают следующим образом:
- 41 012433
Ингредиент Количество (мг/таблетка)
Активный ингредиент 30,0 мг
Крахмал 45,0 мг
Микрокристаллическая целлюлоза 35,0 мг
Поливинилпирролидон (в виде 10% 4,0 мг
раствора в стерильной воде)
Натрийкарбоксиметилкрахмал 4,5 мг
Стеарат магния 0,5 мг
Тальк 1,0 мг
Всего 120 мг
Активный ингредиент, крахмал и целлюлозу пропускают через сито 20 меш (США) и тщательно перемешивают. Раствор поливинилпирролидона смешивают с полученным порошком, который затем пропускают через сито 16 меш (США). Полученные таким способом гранулы сушат при 50-60°С и пропускают через сито 16 меш (США). Затем добавляют натрийкарбоксиметилкрахмал, стеарат магния и тальк, предварительно пропущенные через сито 30 меш (США), к гранулам, которые после перемешивания прессуют на машине для прессования таблеток, получая таблетки, каждая массой 120 мг.
Пример препарата 5.
Капсулы, каждая из которых содержит 40 мг лекарственного средства, получают следующим обра зом:
Ингредиент Количество (мг/капсула)
Активный ингредиент 40,0 мг
Крахмал 109,0 мг
Стеарат магния 1,0 мг
Всего 150,0 мг
Активный ингредиент, крахмал и стеарат магния смешивают, пропускают через сито 20 меш (США) и заполняют смесью твердые желатиновые капсулы по 150 мг.
Пример препарата 6.
Суппозитории, каждый из которых содержит 25 мг активного ингредиента, получают следующим образом:
Ингредиент Количество
Активный ингредиент 25 мг
Глицериды насыщенных жирных кислот 2000 мг
Активный ингредиент пропускают через сито 60 меш (США) и суспендируют в предварительно расплавленных глицеридах насыщенных жирных кислот, применяя минимально необходимое нагревание. Затем смесь выливают в форму для получения суппозиториев с номинальной емкостью 2,0 г и дают охладиться.
Пример препарата 7.
Суспензии, каждая из которых содержит 50 мг лекарственного средства на дозу 5,0 мл, получают следующим образом:
Активный ингредиент, сахарозу и ксантановую смолу перемешивают, пропускают через сито 10 меш (США) и затем смешивают с предварительно приготовленным раствором микрокристаллической
- 42 012433 целлюлозы и натрийкарбоксиметилцеллюлозы в воде. Бензоат натрия, вкусовой агент и краситель разбавляют некоторым количеством воды и добавляют при перемешивании. Затем добавляют достаточное количество воды для получения необходимого объема.
Пример препарата 8.
Ингредиент Количество (мг/капсула)
Активней ингредиент 15,0 мг
Крахмал 407,0 мг
Стеарат магния 3,0 мг
Всего 425,0 мг
Активный ингредиент, крахмал и стеарат магния перемешивают, пропускают через сито 20 меш (США) и заполняют смесью твердые желатиновые капсулы по 425,0 мг.
Пример препарата 9.
Препарат для подкожного применения можно приготовить следующим образом:
Ингредиент Количество
Активный ингредиент 50 мг/мл
Физиологический раствор с фосфатным буфером 1,0 мл
Пример препарата 10.
Препарат для локального применения можно приготовить следующим образом:
Ингредиент Количество
Активный ингредиент 1-10 г
Эмульгирующий воск 30 г
Вазелиновое масло 20 г
Бесцветный мягкий парафин до 100 г
Бесцветный мягкий парафин нагревают до плавления. Вносят вазелиновое масло и эмульгирующий воск и перемешивают до растворения. Добавляют активный ингредиент и продолжают перемешивание до получения дисперсии. Затем смесь охлаждают до образования твердого материала.
Пример препарата 11.
Препарат для внутривенного введения можно получить следующим образом:
Ингредиент Количество
Активный ингредиент 250 мг
Изотонический физиологический раствор 100 мл
Другой предпочтительный препарат, применяемый в способах по настоящему изобретению, использует устройства для трансдермальной доставки (пластыри). Такие трансдермальные пластыри можно использовать для обеспечения непрерывного или периодического вливания соединений по настоящему изобретению в регулируемых количествах. Конструкция и применение трансдермальных пластырей для доставки фармацевтических агентов хорошо известны в данной области. Смотри, например, патент США 5023252 от 11 июня 1991, включенный здесь в виде ссылки. Можно сконструировать такие пластыри для непрерывной, импульсной доставки фармацевтических агентов или доставки по требованию.
Часто желательно или необходимо вводить фармацевтическую композицию в головной мозг непосредственно или опосредованно. Методики прямого введения обычно включают введение катетера для доставки лекарства в вентрикулярную систему пациента, чтобы обойти гематоэнцефалический барьер. Одна такая имплантируемая система, используемая для транспорта биологических факторов к конкретным анатомическим областям организма, описана в патенте США 5011472, который включен здесь в виде ссылки.
Методики опосредованного введения, которые обычно предпочтительны, обычно включают составление композиций для обеспечения модификации лекарства посредством конверсии гидрофильных лекарств в липидрастворимые лекарства. Модификацию обычно осуществляют посредством блокировки гидрокси, карбонильных, сульфатных и первичных аминогрупп, присутствующих на лекарстве, делая лекарство более липидрастворимым и склонным к транспортировке через гематоэнцефалический барьер. По-другому, доставку гидрофильных лекарств можно повысить посредством внутриартериального вли
- 43 012433 вания гипертонических растворов, которые могут кратковременно открывать гематоэнцефалический барьер.
Другие подходящие препараты для использования по настоящему изобретению можно найти в работе ВеттдЮп'к Рйагтасеи11са1 8с1епсек, Масе РиЬйкЫпд Сотрапу, РЫ1айе1рЫа, РА, 17111 ей. (1985).
Как отмечается выше, описанные здесь соединения подходят для использования в различных системах доставки лекарств, описанных выше. Кроме того, чтобы увеличить ш νίνο период полураспада вводимого соединения в сыворотке, можно заключать данные соединения в капсулы, вводить в просвет между липосомами, готовить в виде коллоида или можно применять другие общеизвестные методики, которые обеспечивают продолжительный период полураспада соединений в сыворотке. Для получения липосом доступны разнообразные способы, которые описаны, например, в патентах США №№ 4235871, 4501728 и 4837028 (8хока и др.), каждый из которых включен здесь в виде ссылки.
Применимость
Конъюгаты по данному изобретению являются α4β1 (УЬА-4)-антагонистами. Некоторые также обладают, по меньшей мере, частичным сродством к а4в7-интегринам, что делает их смешанными ингибиторами а4-интегрина. Конъюгаты обеспечивают увеличенное ш νί\Ό удерживание по сравнению с неконъюгированными соединениями. Улучшенное удерживание конъюгата в организме дает в результате меньшие необходимые дозы лекарства, что, в свою очередь, обеспечивает меньшие побочные эффекты и пониженную вероятность токсичности. Кроме того, лекарственный препарат можно вводить пациенту менее часто, достигая при этом аналогичного или улучшенного терапевтического эффекта.
Конъюгаты по данному изобретению обладают улучшенной способностью ингибирования ш νί\Ό адгезии лейкоцитов к эндотелиальным клеткам, опосредованной ингибированием α4β1- или α4β7связыванием с клеточными рецепторами, такими как УСАМ-1, фибронектин и МайСАМ. Предпочтительно можно применять конъюгаты по данному изобретению, например, посредством вливания, или подкожной инъекции, или перорального введения для лечения заболеваний, опосредованных α4β1и/или а4в7-адгезией или вообще адгезией лейкоцитов. Конъюгаты по настоящему изобретению можно использовать для лечения различных воспалительных нарушений головного мозга, в особенности, расстройств центральной нервной системы, при которых в результате механизма адгезии эндотелий/лейкоциты происходит разрушение здоровой в других отношениях ткани головного мозга. Таким образом, кснъюгаты по настоящему изобретению можно использовать, например, для лечения экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита (ЕАЕ), рассеянного склероза (М8), менингита и энцефалита.
Конъюгаты по настоящему изобретению можно также использовать для лечения расстройств и заболеваний, вызванных повреждением ткани в других системах организма, а именно там, где также происходит повреждение ткани через механизм адгезии, результатом которого является миграция или активация лейкоцитов. Примерами таких заболеваний у пациентов-млекопитающих являются воспалительные заболевания, такие как астма, болезнь Альцгеймера, атеросклероз, деменция вследствие СПИДа, диабет (включая острый ювенильный диабет), воспалительное заболевание кишечника (включая язвенный колит и болезнь Крона), ревматоидный артрит, отторжение трансплантатов ткани, метастазы опухолей, инсульт и другие церебральные травмы, нефрит, ретинит, атопический дерматит, псориаз, ишемия миокарда и острое лейкоцит-опосредованное поражение легких, такое как поражение, которое происходит при респираторном дистресс синдроме у взрослых.
Кроме того, другие болезненные состояния, которые можно лечить, используя конъюгаты по настоящему изобретению, включают узловатую эритему, аллергический конъюнктивит, неврит зрительного нерва, увеит, аллергический ринит, анкилозирующий спондилит, псориатический артрит, васкулит, синдром Рейтера, системную красную волчанку, прогрессирующий системный склероз, полимиозит, дерматомиозит, грануломатоз Вегенера, аортит, саркоидоз, лимфоцитопению, темпоральный артериит, перикардит, миокардит, застойную сердечную недостаточность, нодозный полиартериит, синдром гиперчувствительности, аллергию, синдром гиперэозинофилии, синдром Чог-Страусса, хроническое обструктивное заболевание легких, гиперчувствительный пневмонит, хронический активный гепатит, интерстициальный цистит, аутоиммунную эндокринную недостаточность, билиарный первичный цирроз печени, аутоиммунную апластическую анемию, хронический персистирующий гепатит и тиреоидит.
Изобретение также касается способов лечения болезненного состояния, вызванного или обостренного, по меньшей мере, частично (интегрин а4)-опосредованным связыванием лейкоцитов у пациента, причем указанные способы включают совместное введение эффективного количества конъюгата по данному изобретению, например, конъюгата формулы I, и эффективное количество отдельного соединения, которое представляет собой ингибитор α4β7. Совместное введение можно проводить одновременно или последовательно. Например, введение конъюгата по данному изобретению может предшествовать введению ингибитора α4β7 на несколько минут или часов. По-другому, ингибитор α4β7 можно вводить до конъюгата по данному изобретению.
Подходящие ш νί\Ό модели для демонстрации эффективности при лечении воспалительных реакций включают ЕАЕ (экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит) у мышей, крыс, морских сви
- 44 012433 нок или приматов, а также другие воспалительные модели, зависимые от интегринов α4.
Выражение «воспалительное заболевание кишечника» является коллективным обозначением для двух аналогичных заболеваний, называемых болезнь Крона и язвенный колит. Болезнь Крона представляет собой идиопатическое хроническое язвенно-констриктивное воспалительное заболевание, характеризующееся острым ограниченным и обычно трансмуральным вовлечением всех слоез стенки кишечника при гранулематозной воспалительной реакции. Может быть вовлечен любой сегмент желудочнокишечного тракта ото рта до ануса, хотя наиболее часто заболевание затрагивает терминальную подвздошную кишку и/или ободочную кишку. Язвенный колит представляет собой воспалительную реакцию сильно ограниченную слизистой и подслизистой оболочкой ободочной кишки. Лимфоциты и макрофаги появляются в большом количестве при повреждениях, вызванных воспалительным заболеванием кишечника, и могут вносить свой вклад в воспалительное поражение.
Астма является заболеванием, характеризующимся повышенной реактивностью трахеобронхиального дерева к различным раздражителям, потенциирующим пароксизмальное сужение бронхиальных воздушных путей. Раздражители вызывают высвобождение различных медиаторов воспаления из ЦЕпокрытых тучных клеток, включая гистамин, эозинофильные и нейтрофильные хемотактические факторы, лейкотриены, простагландин и тромбоцитактивирующий фактор. Высвобождение данных факторов увеличивает количество базофилов, эозинофилов и нейтрофилов, которые вызывают воспалительное поражение.
Атеросклероз является заболеванием артерий (например, коронарной, сонной, аорты и подвздошной). Основное поражение, атерома, состоит из выросшей фокальной (очаговой) бляшки во внутренней оболочке, имеющей ядро из липида и покрывающую фиброзную шляпку. Атеромы подвергают риску артериальный кровоток и ослабляют затронутые артерии. Главным последствием данного заболевания являются миокардиальные и церебральные инфаркты. Макрофаги и лейкоциты собираются к атеромам и вносят вклад в воспалительное поражение.
Ревматоидный артрит является хроническим, рецидивным воспалительным заболеванием, которое вызывает, в первую очередь, повреждение и разрушение суставов. Ревматоидный артрит обычно сначала затрагивает малые суставы рук и ног, а затем может вовлекать запястья, локти, щиколотки и колени. Артрит возникает из взаимодействия синовиальных клеток с лейкоцитами, которые проникают из кровеносной системы в синовиальную выстилку суставов. См., например, работу Раи1, !ттипо1оду (36 еб., Яауеп Ргезз, 1993).
Другим показанием для конъюгатов по данному изобретению является лечение отторжения органа или трансплантата, опосредованное УЪА-4. За последние годы произошло существенное улучшение эффективности хирургических методик трансплантации тканей и органов, таких как кожа, почка, печень, сердце, легкое, поджелудочная железа и костный мозг. Возможно, основной нерешенной проблемой является отсутствие удовлетворительных агентов, индуцирующих у реципиента иммунотолерантность к трансплантированному аллотрансплантату или органу. Если аллогенные клетки или органы трансплантируют носителю (т.е., донор и реципиент являются разными индивидуумами одного вида), то, вероятно, что иммунная система носителя повышает иммунную реакцию на инородные антигены в трансплантате (заболевание «хозяин-против-трансплантата»), ведущую к разрушению трансплантированной ткани. Клетки СЭ8', клетки СЭ4 и моноциты вовлечены в процесс отторжения тканей трансплантата. Между прочим, конъюгаты по данному изобретению, которые связываются с интегрином альфа-4, пригодны для блокировки аллоантиген-индуцированной иммунной реакции у реципиента, тем самым предупреждая такие клетки от участия в разрушении трансплантированной ткани или органа. См., например, работы Раи1 и др., Тгап§р1ап1 [п1егпа1юпа1 9, 420-425 (1996); Сеогс/уп8к| и др., Iттипо1оду 87, 573-580 (1996); Сеогсухп5к| и др., Тгап5р1ап1. Iттипо1. 3, 55-61 (1995); Уапд и др., Тгап8р1ап1абоп 60, 71-76 (1995); Апбег8оп и др., АРМЕ? 102, 23-27 (1994).
Родственным применением конъюгатов по данному изобретению, которые связываются с УЪА-4, является применение при модулировании иммунной реакции, включенной в заболевание трансплантат против хозяина» (СУНЪ). См., например, работу 8с111еде1 и др., 1. ^тииок 155, 3856-3865 (1995). СУНЪ представляет собой потенциально смертельное заболевание, которое случается, если иммунологически подходящие клетки переносят аллогенному реципиенту. В данной ситуации иммуноподходящие клетки донора могут атаковать ткани у реципиента. Ткани кожи, эпителия кишечника и печени часто являются мишенями и могут быть разрушены при СУНЪ. Данное заболевание представляет особенно тяжелую проблему, если трансплантируют иммунную ткань, например костный мозг; о менее тяжелом заболевании СУНЪ сообщают также в других случаях, включая трансплантацию сердца и печени. Терапевтические агенты по настоящему изобретению используют, среди прочего, для блокировки активации Тклеток донора, препятствуя тем самым их способности лизировать клетки-мишени носителя.
Препараты настоящего изобретения особенно полезны для лечения рассеянного склероза, ревматоидного артрита и астмы.
Дополнительным применением конъюгатов по данному изобретению является ингибирование метастазов опухолей. Сообщается, что некоторые опухолевые клетки экспрессируют УЪА-4 и соединения, которые закрепляют УЪА-4 блок-адгезию таких клеток к эндотелиальным клеткам. 81етЬаск и др., Иго1.
- 45 012433
Яек. 23, 175-83 (1995); Огокх и др., Гп1. 1. Сапсег 60, 867-71 (1995); Егеебтап и др., Ьеик. Ьутрйота 13, 47-52 (1994); Окайага и др., Сапсег Яек. 54, 3233-6 (1994).
Соединения, обладающие требуемой биологической активностью, можно модифицировать, когда необходимо, обеспечивая требуемые свойства, такие как улучшенные фармакологические свойства (например, ίη νίνο стабильность, биодоступность) или способность быть детектируемыми при диагностических применениях. Стабильность можно исследовать различными способами, такими как измерение периода полураспада белков во время инкубации с пептидазами или человеческой плазмой или сывороткой. Описан ряд таких исследований стабильности белков (см., например, работу УегЕоеГ и др., Еиг. ί. Эгид Ме1аЬ. РЕагтасоктек, 1990, 15(2): 83-93).
Дополнительным применением конъюгатов по данному изобретению является лечение рассеянного склероза. Рассеянный склероз представляет собой прогрессирующее неврологическое аутоиммунное заболевание, которое предположительно затрагивает от 250000 до 350000 человек в США. Считается, что рассеянный склероз является результатом специфической аутоиммунной реакции, при которой определенные лейкоциты атакуют и инициируют разрушение миелина, изолирующей оболочки, покрывающей нервные волокна. На животной модели рассеянного склероза показано, что крысиные моноклональные антитела, направленные против УЪА-4, блокируют адгезию лейкоцитов к эндотелию, и предотвращают, таким образом, воспаление центральной нервной системы и последующий паралич у животных.
Фармацевтические композиции данного изобретения подходят для использования в различных системах доставки. Подходящие для использования в настоящем изобретении препараты встречаются в ЯеттдФп'к Рйагтасеибса1 8с1епсек, Масе РиЬЕкЫпд Сотрапу, РЫ1абе1рЫа, РА, 17111 еб. (1985).
Количество, вводимое пациенту, зависит от того, что вводят, цели введения, например, для профилактики или терапии, от состояния пациента, способа введения и подобного. При терапевтических применениях, композиции вводят пациенту, уже страдающему от заболевания, в количестве, достаточном для исцеления или, по меньшей мере, частичного купирования симптомов заболевания и его осложнений. Количество, соответствующее выполнению этого, определяют как терапевтически эффективную дозу. Количества, эффективные для этого применения, зависят от подлежащего лечению болезненного состояния, а также от мнения лечащего врача, зависящего от таких факторов как тяжесть воспаления, возраст, вес и общее состояние пациента и подобные.
Композиции, вводимые пациенту, находятся в виде описанных выше фармацевтических композиций. Данные композиции можно стерилизовать общеизвестными способами стерилизации или стерильно фильтровать. Полученные водные растворы можно фасовать, чтобы использовать как таковые или лиофилизовать, объединяя лиофилизованный препарат со стерильным водным носителем перед введением.
Терапевтическая дозировка конъюгатов по настоящему изобретению будет меняться в зависимости, например, от конкретного применения, для которого готовят данный препарат, способа введения конъюгата, здоровья и состояния пациента и мнения лечащего врача. Например, доза для внутривенного введения обычно составляет от приблизительно 20 до приблизительно 2000 мкг на кг массы тела, предпочтительно от приблизительно 20 до приблизительно 500 мкг, более предпочтительно от приблизительно 100 до приблизительно 300 мкг на кг массы тела. Подходящий диапазон доз для внутриносового введения обычно составляет от приблизительно 0,1 пг до приблизительно 1 мг на кг массы тела. Эффективные дозы можно экстраполировать из графиков доза-реакция, полученных на ш νίΙΐΌ тестовых системах или животных моделях.
Конъюгаты по данному изобретению также способны связывать или противодействовать действию интегринов α6βι, α9β1,α4β7,α6β2, аев7 (хотя в данном изобретении предпочтительны α4βι и α9β1). Таким образом, конъюгаты по данному изобретению также пригодны для профилактики или уничтожения симптомов, расстройств или заболеваний, индуцированных связыванием данных интегринов с сответствующими лигандами.
Например, международная публикация № XVО 98/53817 от 3 декабря 1998 (раскрытие которой включено здесь в виде ссылки во всей своей полноте) и цитированные здесь ссылки описывают расстройства, опосредованные α4β7. Данная ссылка описывает также исследование для определения антагонизма α^-зависимого связывания со слитым белком УСАМ-Гд.
Кроме того, соединения, которые связывают интегрины α6β2 и αββ7, особо полезны для лечения астмы и родственных легочных заболеваний. См., например, М. Н. Огаукоп и др., ί. Ехр. Меб. 1998, 188 (11) 2187-2191. Соединения, которые связывают интегрин αββ7, также пригодны для лечения системной красной волчанки (см., например, М. Рапд и др., АгШпбк Яйеит. 1998, 41(3), 1456-1463); болезни Крона, язвенного колита и воспалительного заболевания кишечника (ГВЭ) (см., например, Ό. Е1е\\гш1 и др., 8сапб ί. СакГгоеп1его1 1998, 33(7) 743-748); синдрома Шегрена (см., например, и. Кгопе1б и др., 8сапб ί. Се81гоеп1его1 1998, 27(3), 215-218); и ревматоидного артрита (см., например, 8сапб. ί. СакГгоеп1его1 1996, 44(3), 293-298). И соединения, которые связывают α6βμ могут быть полезны для предотвращения оплодотворения (см., например, Н. СЕеп и др., СЕет. Вю1. 1999, 6, 1-10).
В другом аспекте данного изобретения можно использовать описанные здесь конъюгаты и композиции для ингибирования миграции иммунных клеток из системы кровообращения в центральную нерв
- 46 012433 ную систему, например, в случае рассеянного склероза, или в области, которые дают индуцированное воспалением разрушение миелина. Предпочтительно, если данные реагенты ингибируют миграцию иммунных клеток способом, который ингибирует демиелинизацию и который дополнительно может промотировать ремиелинизацию. Данные реагенты могут также предотвращать демиелинизацию центральной нервной системы вследствие врожденных метаболических расстройств, при которых просачивающиеся иммунные клетки влияют на рост миелиновой оболочки, главным образом, в ЦНС, и промотировать ремиелинизацию. Предпочтительно также, если данные реагенты уменьшают паралич при введении субъекту с параличом, вызванным демиелинизационным заболеванием или состоянием.
Воспалительные заболевания, которые включены для лечения с применением раскрытых здесь композиций, конъюгатов и способов, обычно включают состояния, относящиеся к демиелинизации. Гистологически, миелиновые аномалии представляют собой демиелинизацию или дисмиелинизацию. Демиелинизация подразумевает разрушение миелина. Дисмиелинизация обозначает недостаточное образование или содержание миелина в результате дисфункции олигодендроцитов. Предпочтительно предполагают, что раскрытые здесь композиции и способы лечат заболевания и состояния, относящиеся к демиелинизации, и способствуют ремиелинизации. Дополнительные заболевания или состояния, предполагаемые для лечения, включают менингит, энцефалит, повреждения спинного мозга и состояния, которые обычно вызывают демиелинизацию в результате воспалительной реакции. Раскрытые здесь конъюгаты, композиции и способы не направлены на заболевания и состояния, при которых существует, например, генетический дефект, ведущий к неправильному образованию миелина, например, дисмиелинизации.
Раскрытые здесь композиции, конъюгаты и коктейли предполагаются для использования при лечении состояний и заболеваний, связанных с демиелинизацией. Заболевания и состояния, затрагивающие демиелинизацию, включают (но не ограничены этим) рассеянный склероз, врожденные метаболические расстройства (например, фенилкетонурию, болезнь Тея-Сакса, болезнь Ниманна-Пика, болезнь Гоше, синдром Хурлера, болезнь Краббе и другие лейкодистрофии), невропатии с аномальной миелинизацией (например, синдром Гийена-Барре, хроническую иммунную демиелинизационную полиневропатию (СШР), многофокальную СШР, анти-МАС синдром, СЛЬОР синдром, синдром антисульфатидного антитела, синдром анти-СМ2 антитела, РОЕМ8 синдром, периневрит, синдром ГдМ анти-СБ1Ь антитела), демиелинизацию, связанную с приемом лекарств (например, вызванную введением хлорхина, ЕК506, перхексилина, прокаинамида и зимелдина), другие наследственные демиелинизационные состояния (например углевод-дефицитный гликопротеин, синдром Кокейна, врожденную гипомиелинизацию, врожденную мышечную дистрофию, болезнь Фарбера, синдром Маринеску-Шегрена, метахроматическую лейкодистрофию, болезнь Пелицеуса-Мерцбахера, болезнь Рефсума, родственные прионовые состояния и болезнь Салла) и другие демиелинизационные состояния (например, менингит, энцефалит или поражение спинного мозга) или заболевания.
Существуют различные модели заболеваний, которые можно использовать для изучения данных болезней ίη νίνο. Например, животные модели включают, но не ограничены этим:
Таблица ГГГ
Модель заболевания Вид
ЕАЕ Мыши, крысы, морские
свинки
Миелин-олигодендроцит гликопротеин
(МОЗ)-индуцированный ЕАЕ Крысы
ΤΝΓ-α трансгенная модель демиелинизации Мыши
Рассеянный склероз
Наиболее общим демиелинизирующим заболеванием является рассеянный склероз, но многие другие метаболические и воспалительные расстройства дают недостаточную или аномальную миелинизацию. М8 представляет собой хроническое неврологическое заболевание, которое появляется в раннем взрослом состоянии и в большинстве случаев прогрессирует, по существу, до инвалидности. Только в США имеется около 350000 случаев М8. Кроме травм, М8 является наиболее частой причиной неврологической нетрудоспособности в раннем и среднем взрослом возрасте.
Причина М8 еще подлежит определению. М8 характеризуется хроническим воспалением, демиелинизацией и глиозом (рубцеванием). Демиелинизация может оказывать негативное или позитивное влияние на аксональную проводимость. Позитивные аномалии проводимости включают замедленную аксональную проводимость, переменную блокаду проводимости, которая случается в присутствии высо
- 47 012433 кочастотных, но не низкочастотных серий импульсов, или полную блокаду проводимости. Позитивные аномалии проводимости включают генерацию эктопических импульсов, спонтанную или после механического напряжения, и аномальное перекрестное влияние (взаимное влияние)'' между демиелинированными экзонами.
Наблюдали, что Т-клетки, реакционноспособные по отношению к белкам миелина, или основному белку миелина (МВР), или протеолипидному белку миелина (РЬР), опосредуют ЦНС-воспаление при экспериментальном аллергическом энцефаломиелите. Также наблюдают пациентов, которые имеют повышенные уровни ЦНС-иммуноглобулина Цд). Кроме того, возможно, что некоторые из поражений тканей, наблюдаемых при МБ, опосредованы цитокиновыми продуктами активированных Т-клеток, макрофагов или астроцитов.
Сегодня 80% пациентов с диагнозом МБ живут 20 лет после появления заболевания. Терапии для лечения МБ включают: (1) лечение, предназначенное для модификации течения заболевания, включающее лечение острого приступа и направленное на длительное подавление заболевания; (2) лечение симптомов МБ; (3) профилактику и лечение медицинских осложнений и (4) решение вторичных персональных и социальных проблем.
Появление МБ может быть внезапным или таким мягким, что не дает оснований обращаться за медицинской помощью. Наиболее общие симптомы включают слабость в одной или нескольких конечностях, размытость зрения вследствие неврита зрительного нерва, сенсорные расстройства, диплопия и атаксия. Течение заболевания можно стратифицировать на три основных категории: (1) рецидивный МБ, (2) хронический прогрессирующий МБ и (3) неактивный МБ. Рецидивный МБ характеризуется возвратными атаками неврологической дисфункции. Приступы МБ обычно развиваются в течение периода от нескольких дней до недель и могут сопровождаться полным или частичным излечением или неизлечением. Восстановление от приступа обычно происходит за период от нескольких недель до нескольких месяцев после пика симптомов, хотя редко восстановление может продолжаться в течение 2 или более лет.
В результате хронического прогрессирующего МБ происходит постепенное прогрессирующее ухудшение без периодов стабилизации или ремиссии. Данная форма развивается у пациентов с предшествующим рецидивным МБ, хотя у 20% пациентов может не быть рецидивов. Острые рецидивы также могут происходить при прогрессирующем течении.
Третьей формой является неактивный МБ. Неактивный МБ характеризуется стойким неврологическим дефицитом разной степени. Большинство пациентов с неактивным МБ имеют предшествующую историю рецидивного МБ.
Течение заболевания зависит также от возраста пациента. Например, благоприятные прогностические факторы включают раннее появление симптомов (исключая детство), рецидивное течение и небольшую остаточную нетрудоспособность через 5 лет после появления. Напротив, плохой прогноз ассоциирован с поздним появлением симптомов (т.е., возраст 40 лет или более) и прогрессирующим течением. Эти переменные взаимозависимы, так как хронический прогрессирующий МБ имеет тенденцию начинаться в более позднем возрасте, чем рецидивный МБ. Нетрудоспособность от хронического прогрессирующего МБ обычно происходит в результате прогрессирующей параплегии или квадриплегии (паралича) у пациентов. В одном аспекте данного изобретения предпочтительнее лечить пациента, если данный пациент находится на ремиссионной стадии заболевания, чем на рецидивной.
Краткосрочное применение адренокортикотропного гормона или кортикостероидов для перорального приема (например, преднизона для перорального приема или внутривенного метилпреднизолона) является единственной конкретной терапевтической мерой для лечения пациентов с острым приступом МБ.
Более новые терапии МБ включают лечение пациента интерфероном бета-1Ь, интерфероном бета-1а и Сорахопе® (ранее известным как сополимер 1). Показано, что данные три лекарства значительно снижают частоту рецидивов заболевания. Данные лекарства предназначены для самостоятельного введения внутримышечно или подкожно.
Однако ни одна из современных модальностей лечения не ингибирует демиелинизацию, не говоря о промотировании или разрешении самопроизвольной ремиелинизации или уменьшении паралича. В одном аспекте данного изобретения рассматривают лечение МБ раскрытыми здесь агентами, как таковыми или в комбинации с другими стандартными модальностями лечения.
Врожденные метаболические расстройства
Врожденные метаболические расстройства включают фенилкетонурию (РКИ) и другие аминоацидурии, болезнь Тея-Сакса, болезнь Ниманна-Пика, болезнь Гоше, синдром Хурлера, болезнь Краббе и другие лейкодистрофии, которые сильно воздействуют на развитие оболочки, что более полно описано ниже.
РКИ является наследственной ошибкой метаболизма, вызванной дефицитом фермента фенилаланингидроксилазы. Недостаток данного фермента приводит к задержке умственного развития, поражению органов, необычной позе и в случаях материнской РКИ может нести серьезный риск беременности. Модель изучения РКИ раскрыта на мышах. Предпочтительно выдерживать новорожденных мышей, у которых идентифицирована РКИ, на диете без фенилаланина или с его низким содержанием. Аспектом дан
- 48 012433 ного изобретения является комбинация такой диеты с раскрытыми здесь конъюгатами и композициями для профилактики демиелинизации и для ремиелинизации клеток. пораженных в результате РКи.
Классическая болезнь Тея-Сакса проявляется у субъекта примерно в 6-месячном возрасте и в итоге приводит к смерти субъекта в возрасте около 5 лет. Данное заболевание происходит в результате недостатка фермента гексоаминидазы А (Нех А). который необходим для разрушения некоторых жировых веществ в головном мозге и нервных клетках. Данные вещества в отсутствие данного фермента накапливаются и приводят к разрушению нервных клеток. Другие формы дефицита фермента Нех А возникают позже в течение жизни и обозначаются как ювенильная. хроническая и взрослая формы проявления дефицита Нех А. Симптомы аналогичны симптомам. которые характеризуют классическую болезнь ТеяСакса. Существует также взрослая форма проявления дефицита данного фермента. В настоящее время не существует способов исцеления или лечения данного заболевания/дефицита. только превентивная мера утеро-исследования плода на данное заболевание. Таким образом. раскрытые здесь конъюгаты и композиции могут быть пригодны для облегчения или предотвращения разрушения нервных клеток у таких пациентов.
Болезнь Ниманна-Пика подразделяется на три категории: острую младенческую форму; тип В. который представляет собой менее общую хроническую неневрологическую форму; и тип С. который представляет собой биохимически и генетически отдельную форму заболевания. У нормальных индивидуумов. клеточный холестерин импортируется в лизосомы для обработки. после которой он высвобождается. Показано. что клетки. взятые у субъектов с болезнью Ниманна-Пика. недостаточно высвобождают холестерин из лизосом. Это ведет к избыточному накоплению холестерина внутри лизосом. вызывая ошибки обработки. Обнаружено. что №С1 имеет известные стеринраспознающие области. аналогичные областям в других белках. и. предполагается. что он играет некоторую роль в регуляции транспорта холестерина. Для форм типа А и С болезни Ниманна-Пика не установлены успешные способы лечения. Пациентам с заболеванием типа С рекомендуют следовать низкохолестериновой диете. Таким образом. раскрытые здесь конъюгаты и композиции могут быть пригодны для ослабления или предотвращения разрушения клеток.
Болезнь Гоше представляет собой наследственное заболевание. вызванное мутацией генов. Обычно данный ген отвечает за фермент. называемый глюкоцереброзидазой. который нужен организму для разложения жира глюкоцереброзида. У пациентов с болезнью Гоше организм не способен должным образом продуцировать данный фермент. и жир не может разлагаться. Подобно болезни Тея-Сакса. болезнь Гоше гораздо чаще встречается у потомков евреев из Восточной Европы (ашкенази). хотя болезнь может поражать индивидуумов из любой этнической группы. В популяции евреев ашкенази болезнь Гоше является наиболее общим генетическим нарушением с вероятностью приблизительно 1 из 450 человек. Вообще у населения болезнь Гоше затрагивает приблизительно 1 из 100000 человек.
В 1991 стала доступной ферментная заместительная терапия как первый эффективный способ лечения болезни Гоше. Данное лечение включает внутривенное введение модифицированной формы фермента глюкоцереброзидазы. Предполагают. что раскрытые здесь композиции и конъюгаты можно использовать сами по себе или. более предпочтительно. в комбинации с введением гликоцереброзидазы для лечения пораженного болезнью пациента.
Синдром Хурлера. известный также как мукополисахаридоз типа 1. представляет класс перекрывающихся заболеваний. Эти генетические заболевания участвуют в общем клеточном аккумулировании мукополисахаридов в фибробластах. Данные заболевания генетически различимы. Трансплантация фибробластов и костного мозга не представляется полезной. таким образом. необходимы конъюгаты и композиции. пригодные для снижения тяжести и прогрессирования заболевания. Раскрытые здесь конъюгаты и композиции можно вводить пациенту для снижения прогрессирования и/или тяжести заболевания.
Болезнь Краббе (известная также как глобоидно-клеточная лейкодистрофия) представляет собой аутосомно-рецессивное состояние. являющееся результатом дефицита галактозилкерамидазы (или галактоцереброзидазы). лизосомального фермента. который катаболизирует основной липидный компонент миелина. Во Франции частота заболеваний составляет предположительно 1 на 150000 рождений. Данное заболевание ведет к демиелинизации центральной и периферической нервной системы. Обычно заболевание начинается в течение первого года жизни. и состояние быстро прогрессирует. но также имеются сообщения о ювенильной. подростковой или взрослой формах с большими вариациями степени прогрессирования. Диагноз устанавливают на основании ферментного исследования (дефицит галактозилкерамидазы). Имеется несколько природных животных моделей (мыши. собаки. обезьяны). Болезнь Краббе. как все лейкодистрофии. не имеет случаев исцеления или эффективного лечения. Один вариант настоящего изобретения представляет собой применение раскрытых здесь композиций и конъюгатов для лечения или облегчения болезни Краббе и других лейкодистрофий.
Лейкодистрофии представляют собой группу генетически определенных прогрессирующих расстройств. которые затрагивают головной мозг. спинной мозг и периферические нервы. Они включают адренолейкодистрофию (АГИ). адреномиелоневропатию (ΆΜΝ). синдром Айкарди-Гутиера. болезнь Александра. САСН (т.е.. детскую атаксию с гипомиелинизацией центральной нервной системы или болезнь с исчезновением белого вещества). САОА81Ь (т.е.. церебральную аутосомно-доминантную арте
- 49 012433 риопатию с подкорковым инфарктом, и лейкоэнцефалопатией), болезнь Канавана (спонгиозную дегенерацию), сухожильно-мозговой ксантоматоз (СТХ), болезнь Краббе (обсуждается выше), метахроматическую лейкодистрофию (МЬП), неонатальную адренолейкодистрофию, синдром овариолейкодистрофии, болезнь Пелицеуса-Мерцбахера (спастическую параплегию по сцепленному с Х-хромосомой типу), болезнь Рефсума, синдром Ван дер Кнаапа (колеблющуюся лейкодистрофию с подкорковыми кистами) и синдром Зельвегера. Ни одно из данных заболеваний не имеет эффективных способов лечения, не говоря об исцелении. Следовательно, требуются способы лечения или облегчения симптомов заболевания, например, с использованием раскрытых здесь композиций и конъюгатов.
Невропатии с аномальной миелинизацией
Существуют различные хронические иммунные полиневропатии, в результате которых у пациента происходит демиелинизация. Возраст появления болезненного состояния различается в зависимости от состояния. Существуют стандартные способы лечения данных заболеваний, которые можно объединять с раскрытыми здесь композициями и конъюгатами. По-другому, раскрытые композиции и конъюгаты можно использовать сами по себе. Существующие стандартные терапии включают следующие:
Таблица ГУ
Невропатия Клинические признаки Лечение
Хроническая Появляется от 1 до Иммуносупрессия Т-
иммунная 80 лет. клеток преднизоном.
демиелинизационная Характеризуется циклоспорином А или
полиневропатия слабостью, потерей метотрексатом, ΗΙ6,
(СЮР) чувствительности и обменное переливание
гипертрофией нервов. плазмы
Многофокальная Появляется от 28 до Иммуносупрессия Т-
СЮР 58 лет, клеток преднизоном,
характеризуется человеческим
асимметрической слабостью, потерей чувствительности в течение заболевания, которое является медленно прогрессирующим или рецидивновозвратным) . иммуноглобулином (Н1С)
Многофокальная Появляется от 25 до НЮ-иммуносупрессия В-
двигательная 70 лет, у мужчин в клеток, обменное
невропатия (ΜΜΝ) два раза чаще, чем переливание плазмы
у женщин. Признаки циклофосфамид,
включают слабость, атрофию мышц, фасцикуляции и судороги, которые прогрессируют эа 130 лет. ритуксан
Невропатия С 1дМ- Появляется обычно Иммуносупрессия В-
связыванием с после 50 м клеток, обменное
- 50 012433
миелинассоциированными гликопротеинами (МАС) характеризуется потерей чувствительности (100¾), слабостью, нарушением походки, тремором, которые медленно прогрессируют. переливание плаз2-1ы, циклофосфамид, ритуксан, а-интерферон кладрибин или флударабин, преднизон
Синдром САЬОР (нарушение походки, аутоантитело, появление в позднем возрасте, полиневропатия) Нарушение походки с лолиневропатией Н1С, обменное переливание плазмы, циклофосфамид
Синдром РОЕМЗ (полиневропатия, органомегалия, эндоопатия, Мпротеин и изменения кожи) т=1Кже известен как синдром КроуФукасэ и болезнь Такацуки Появляется от 27 до 80 лет при слабости, потере чувствительности, пониженных сухожильных рефлексах или их отсутствии, кожных заболеваниях и других признаках. Остеосклеротические поражения лечат облучением. Распространенные поражения лечат химиотерапией (мелфалан и преднизон).
Демиелинизация, индуцированная лекарствами и облучением
Некоторые лекарства и облучение могут вызвать у субъектов демиелинизацию. Лекарства, которые отвечают за демиелинизацию, включают (но не ограничены этим) хлорхин, ЕК506, перхексиллин, прокаинамид и зимелдин.
Облучение также может вызвать демиелинизацию. Считают, что токсичность центральной нервной системы (ЦНС) вследствие облучения является результатом (1) повреждения структур сосудов, (2) уничтожения предшественников олигодендроцит-2 астроцитов и зрелых олигодендроцитов, (3) уничтожения популяций нервных стволовых клеток в гиппокампе, мозжечке и коре головного мозга и генерализованных изменений экспрессии цитокина. Наиболее радиационные повреждения происходят в результате радиотерапии, применяемой во время лечения некоторых раковых заболеваний. Смотри обзор Ве1ка и др., 2001, Вг. 1. Сапсег 85: 1233-9. Однако воздействие излучения может также являться проблемой для космонавтов (Норе^е11, 1994 Λάν. 8расе Яе5. 14: 433-42), а также в случае воздействия радиоактивных веществ.
Пациенты, которые принимают лекарства или подвергаются облучению, случайно или намеренно, могут испытывать преимущество при введении одного из раскрытых здесь конъюгатов или композиций с целью предотвращения демиелинизации или промотирования ремиелинизации.
Состояния, включающие демиелинизацию
Добавочные наследственные синдромы/заболевания, в результате которых происходит демиелинизация, включают синдром Кокейна, врожденную гипомиелинизацию, болезнь Фарбера, метахроматическую лейкодистрофию, болезнь Пелицеуса-Мерцбахера, болезнь Рефсума, прион-ассоциированные состояния и болезнь Салла.
Синдром Кокейна (С8) является редким наследственным расстройством, при котором люди чувствительны к солнечному свету, имеют малый рост и внешность преждевременно состарившихся людей. При классической форме синдрома Кокейна (тип I) симптомы прогрессируют и обычно становятся явными через один год. Ранняя или врожденная форма синдрома Кокейна (тип II) видна при рождении. Интересно, что в отличие от других ДНК-регенеративных заболеваний, синдром Кокейна не связан с
- 51 012433 раком. С8 представляет собой многосистемное расстройство, которое вызывает сильный недостаток роста тела и мозга и прогрессирующую кахексию, ретинальную, кохлеарную и неврологическую дегенерацию при лейкодистрофии и демиелинизационной невропатии без роста рака. После воздействия УФ (например, солнечного света), субъекты с синдромом Кокейна больше не могут производить сопряженную с транскрипцией регенерацию. Пока идентифицированы два дефектных гена при синдроме Кокейна, С8А и С8В. Ген С8А обнаружен на хромосоме 5. Оба гена отвечают за генетический код белков, которые взаимодействуют с компонентами транскрипционного механизма и с ДНК-регенерационными белками.
На сегодня не установлено случаев исцеления или эффективных способов лечения для пациентов с данным заболеванием. Таким образом, один аспект изобретения представляет способ лечения данного заболевания с использованием раскрытых здесь конъюгатов и композиций.
Врожденная гипомиелинизация имеет несколько названий, включая такие как врожденная дисмиелинизирующая невропатия, врожденная гипомиелинизирующая полиневропатия, врожденная гипомиелинизационная (Ошоп Ви1Ь) полиневропатия, врожденная гипомиелинизационная невропатия, врожденная невропатия в результате гипомиелинизации, гипомиелинизационная невропатия и ί'ΉΝ. Наследственные периферические невропатии, среди наиболее общих генетических расстройств у людей, представляют сложную, клинически и генетически гетерогенную группу заболеваний, которые вызывают прогрессирующее ухудшение периферических нервов. Врожденная гипомиелинизация представляет собой одну из групп заболеваний. Данная группа включает наследственную невропатию со склонностью к компрессионному параличу, болезнь Шарко-Мари-Туфа, синдром Дежерина-Сотта и врожденную гипомиелинизационную невропатию. Не известны случаи исцеления или эффективного лечения ни одного из данных заболеваний.
Болезнь Фарбера имеет несколько названий, включая: липогрануломатоз Фарбера, дефицит церамидазы, дефицит кислой церамидазы, АС дефицит, дефицит Ν-лаурилсфингозиндеацилазы и дефицит Νацилсфингозинамидогидролазы. Как показывают некоторые названия, данное заболевание происходит в результате дефицита кислотной (кислой) церамидазы (также известной как Ν-ацилсфингозинамидогидролаза, А8АН). В результате недостатка фермента происходит накопление несульфированного кислого мукополисахарида в нейронах и глиальных клетках. Пациенты с данным заболеванием обычно умирают до 2-летнего возраста.
Метахроматическая лейкодистрофия (МБЭ) представляет собой генетическое заболевание, вызванное дефицитом фермента арилсульфатазы А. Это одно из группы генетических расстройств, называемых лейкодистрофиями, которые влияют на рост миелиновой оболочки. Существует три формы МЬЭ: поздняя младенческая, ювенильная и взрослая. При поздней младенческой форме, которая является наиболее частой, появление симптомов происходит в возрасте от 6 месяцев до 2 лет. Обычно ребенок является нормальным при рождении, но в итоге теряет приобретенные ранее способности. Симптомы включают гипотонию (низкий тонус мышц), аномалии речи, недостаток умственных способностей, слепоту, ригидность (т.е., неконтролируемую скованность мышц), конвульсии, ухудшенное глотание, паралич и слабоумие. Симптомы ювенильной формы появляются в возрасте от 4 до 14 лет и включают пониженную успеваемость в школе, умственное ослабление, атаксию, припадки и слабоумие. При взрослой форме симптомы, которые появляются после 16 лет, могут включать ухудшенную концентрацию, депрессию, психиатрические расстройства, атаксию, тремор и слабоумие. Припадки могут происходить при взрослой форме, но менее часто, чем при других формах. Во всех трех формах первым сигналом является умственное ухудшение.
Болезнь Пелицеуса-Мерцбахера (известная также как перинатальная суданофильная лейкодистрофия) представляет собой генетическое заболевание Х-сцепленного типа, которое вызывает аномалию протеолипидного белка. В результате данной аномалии смерть ребенка происходит обычно в возрасте до одного года. Способы лечения или случаи исцеления данного заболевания не известны.
Болезнь Рефсума (также называемая дефицитом оксидазы фитановой кислоты, наследственным атактическим полиневритом или наследственной двигательной и сенсорной невропатией ГУ, НМ8К 1У) вызвана мутациями в гене, который кодирует фитаноил-СоА-гидроксилазу (РАНХ или ΡΗΥΗ). Основными клиническими признаками являются пигментная дегенерация сетчатки, хроническая полиневропатия и мозжечковые признаки. Фитановая кислота, жирная кислота с необычной разветвленной цепью (3,7,11,15-тетраметилгексадеканоевая кислота), аккумулируется в тканях и жидкостях организма пациента с данным заболеванием и не способна подвергаться метаболизу из-за недостатка РАНХ. Плазмаферез, проводимый один или два раза в месяц, эффективно удаляет данную кислоту из организма и позволяет ослабление ограничений диеты, лимитирующих потребление фитановой кислоты.
Прион-ассоциированные состояния включают болезнь Герстманна-Страусслера (Ο8Ό), болезнь Крейтцфельдта-Якоба (СЮ), смертельную семейную бессонницу и аберрантные изоформы прионового белка могут действовать как инфекционные агенты при данных заболеваниях, также как при куру и скрепи (заболевание, обнаруженное у овец). Термин «прион» происходит от выражения белковый инфекционный агент (Ргиктег, 8с1епсе 216: 136-44, 1982). Происходит протеолитическое расщепление прион-ассоциированного белка (РКР), результатом которого является амилоидогенный белок, который полимеризуется в нерастворимые фибриллы.
- 52 012433
Болезнь Салла и другие типы сиалурий представляют собой заболевания, включающие проблемы с накоплением сиаловой кислоты. Они являются аутосомно-рецессивными нейродегенеративными расстройствами, которые могут присутствовать в виде тяжелой инфантильной формы (т.е., Ι88Ό) или в виде медленно прогрессирующей взрослой формы, которая распространена в Финляндии (т.е., болезнь Салла). Основными симптомамм являются гипотония, мозжечковая атаксия и задержка умственного развития. Данные состояния и заболевания также рассматриваются на предмет паллиативного или облегчающего лечения.
Другие состояния, в результате которых происходит демиелинизация, включают постинфекционный энцефалит (также известен как острый рассеянный энцефаломиелит, ЛЭЕМ). менингит и повреждения спинного мозга. Раскрытые здесь композиции и конъюгаты также рассматриваются на предмет использования при лечении этих других демиелинизационных состояний.
Следующие синтетические и биологические примеры приведены для иллюстрации данного изобретения и ни коим образом не предназначены для ограничения области данного изобретения. Если не указано иное, все температуры даны в градусах Цельсия.
Примеры
В приведенных ниже примерах сокращения имеют следующие значения. Если сокращение не определено, то оно имеет общепринятое значение.__
АСЫ Ацетонитрил
ш. с широкий синглет
д Дублет
дд дублет дублетов
Триэтиламин
Г Грамм
час. Час
ВЭЖХ высокоэффективная жидкостная хроматография (или при высоком давлении)
кг Килограмм
кДа Килодальтон
л Литр
м Мультиплет
м Молярность
мг Миллиграмм
мин. Минута
мл Миллилитр
мм Миллиметр
мМ Миллимолярность
ммоль Миллимоль
с Синглет
насыщ. Насыщенный
т Триплет
ТГА трифторуксусная кислота
ТСХ тонкослойная хроматография
Г 5 Тозил
мкл Микролитр
МКГ Микрограмм |
мкм микрон или микрометр
Основные способы: протонные (Н) и углеродные (13С) спектры ядерного магнитного резонанса (ЯМР) получали, используя спектрометр Оетш 2000 или Вгикег Ауапсе 300. Присутствие протонов полиэтиленгликоля (РЕО) можно детектировать по большому широкому синглету при 3,6 м.д. Интегрирование данного сигнала сильно зависит от размера РЕО-фрагмента. Присутствие конъюгированного антагониста УЬА-4 также можно детектировать по 1Н ЯМР спектрам конъюгатов. Тонкослойную хроматографию выполняли на листах с предварительным покрытием из силикагеля 60 Р254 (ЕМЭ 15341-1) или предварительным покрытием из МКС18Б силикагеля 60 А (\У11а1шап 4803-110). Масс-спектры снимали
- 53 012433 на масс-спектрометре Адбеп! (ЬС/М8О УЪ) с регистрацией положительных ионов в одном квадруполе.
Способы ВЭЖХ для определения РЕС-продуктов и РЕС-конъюгатов:
Препаративную ВЭЖХ с обращенной фазой выполняли, используя модуль Уапап Ргер 81аг (модель 8Ό-1) с УФ-детектором Уапап, настроенным на 210 нм.
Способ А: образцы РЕС-продуктов и РЕС-конъюгатов очищали, применяя ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке Уубас С18 с размером пор 300 А (250 мм х 21,2 мм), обычно используя градиент 3550% АСN + 0,1% ТРА за 100 мин при 20 мл/мин.
Способ В: образцы РЕС-продуктов и конъюгатов очищали, применяя ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке Уубас С18 с размером пор 300 А (250 мм х 50 мм), обычно используя градиент 35-50% АСN + 0,1% ТРА за 100 мин при 60 мл/мин.
Способ С: чистоту РЕС-продуктов и конъюгатов подтверждали методом аналитической ВЭЖХ с обращенной фазой, используя систему Адбеп! 8епе5 1100 Оиа1егпагу. оснащенную колонкой 3,5 мкм С18 \Уа1ег5 8уттеЬу с размером пор 300 А (150 мм х 4,6 мм), использующей градиент 40-50 мас.% АСМ0,1% ТРА при скорости потока 1,5 мл/мин, и соединенной с детектором Ащ1еп1 1100 с переменной длиной волны, настроенным на 210 нм, и испарительным светорассеивающим детектором 8ебех 75 (40°С, усиление=5).
РЕС-реагенты: через компанию NОР Согрогабоп (УеЬщи Сагбеп Р1асе То\уег 20-3 ЕЫки 4-скоте, 8ЫЬиуа-ки, Токуо 150-6019) или №к!аг Ткегареибск (150 1пби8бга1 Яоаб, 8ап Саг1о§, СА 94070) приобретали следующие РЕС-исходные материалы: 30 кДа РЕС-диамин ^ОР Саб 8ипЬгщ1И Э8-300РА); 5 кДа сложный эфир Вос-NΗ-РЕС-NΗ8 (№к!аг Саб 4М530Н02); 20 кДа тетра-амин ^ОР Саб 8ипЬпдЫ РТЕ200РА);
кДа РЕС-спирт с 4 ветвями ^ОР Саб 8ипЬпдЫ РТЕ-40000); 40 кДа РЕС-спирт с 3 ветвями ^ОР Саб 8ипЬгщ1И СЬ-400).
Пример 1
Гидроксид натрия (10 г, 0,25 моль) растворяют в воде (300 мл). К данному раствору добавляют 4нитрофенилаланин (50,3 г, 0,22 моль) и перемешивают до полного растворения. К полученному раствору добавляют карбонат натрия (28,8 г, 0,26 моль) и перемешиваемую суспензию охлаждают на бане со льдом до +8°С, добавляют по капле бензилхлорформиат (44,7 г, 0,26 моль) при энергичном перемешивании, поддерживая внутреннюю температуру в диапазоне от +6 до +9°С. Смесь перемешивают при +6°С еще 1 ч, переносят в делительную воронку и промывают эфиром (2х150 мл). Водную фазу помещают в большую колбу Эрленмейера (2 л) и осторожно подкисляют разбавл. водн. НС1 до рН 2 и экстрагируют этилацетатом (4 х 500 мл). Объединенные экстракты промывают водой и сушат Мд8О4. Раствор фильтруют и фильтрат выпаривают, остаток растворяют в этилацетате (150 мл) и разбавляют гексаном (500 мл). Кристаллический материал отфильтровывают и ополаскивают холодным растворителем, сушат на воздухе, получая С^-4-нитрофенилаланин, 75 г (99,5% выход).
!Н-ЯМР, ДМСО-б6, δ: 12,85 (ш.с, 1Н), 8,12 (д, 2Н, 1=9 Гц), 7,52 (д, 2Н, 1=9 Гц), 7,30 (м, 5Н), 4,95 (с, 2Н), 4,28 (м, 1Н), 3,32 (ш.с, 1Н), 3,10 (м, 2Н) . 13С-ЯМР, 8: 173,1, 156,3, 146,6, 137,3, 130,8, 128,5, 128,0,
127,8, 123,5, 65,6, 55,1, 36,6. МС (т/ζ): 367,1 [М+23].
С'Ьх-4-нитрофенилаланин (75 г, 0,22 моль) растворяют в диоксане (300 мл). Полученный перемешиваемый раствор охлаждают на бане с сухим льдом до -20°С (внутри). Добавляют расплавленный изобутилен (примерно 290 мл), а затем добавляют конц. серную кислоту (35 мл) тремя равными частями через 30 мин. Добавление кислоты является сильно экзотермическим процессом, сопровождаемым значительной степенью полимеризации. На данной стадии существенным является эффективное механическое перемешивание. Полученную смесь перемешивают в течение 20 ч, позволяя нагреться до температуры окружающей среды, затем осторожно выливают в насыщенный водный раствор карбоната натрия (2 л) и разбавляют этилацетатом (600 мл). Органический слой отделяют и водный слой экстрагируют этилацетатом (2 х 200 мл). Объединенные экстракты промывают водой и сушат сульфатом натрия. Раствор фильтруют и выпаривают досуха. Остаток переносят в смесь этилацетат/гексан (500 мл; 1:1) и фильтруют через набивку из силикагеля (примерно 2х2 дюйма). Силикагель ополаскивают дополнительным количеством того же растворителя (всего 2 л) и фильтраты выпаривают, получая полностью защищенный 4нитрофенилаланин в виде вязкого масла, 73 г (83% после двух стадий). !Н-ЯМР, СЭС13, δ: 8,12 (д, 2Н, 1=8,4 Гц), 7,36 (м, 7Н), 5,35 (м, 1Н), 5,10 (м, 2Н), 4,57 (м, 1Н), 3,31 (м, 2Н), 1,43 (с, 9Н). 13С-ЯМР, СЭС13, δ: 169,7, 155,3, 146,9, 143,9, 136,0, 130,2, 128,4, 128,2, 128,0, 123,3, 82,9, 66,9, 54,7, 38,2, 31,4, 27,8, 13,9. МС (т/ζ): 423,1 [М+23].
Защищенный 4-нитрофенилаланин (73 г, 0,18 моль) растворяют в этаноле (500 мл) и добавляют катализатор оксид платины (1,5 г). Полученный раствор энергично перемешивают в атмосфере водорода (50-60 фунт/кв.дюйм) при температуре окружающей среды до прекращения адсорбции водорода (3 ч).
- 54 012433
Катализатор отфильтровывают и фильтрат выпаривают досуха, остаток переносят в этилацетат (200 мл) и фильтруют через набивку из силикагеля (2x2 дюйма), используя смесь этилацетат-гексан (3:2, 2 л) для ополаскивания силикагеля. Фильтрат концентрируют до приблизительно 200 мл и добавляют гексан (500 мл). Кристаллический продукт отфильтровывают, ополаскивают холодным растворителем и сушат на воздухе. Выход 56 г, 84%. Ή-ЯМР, СЛС13, δ: 7,30 (ш.с, 5Н), 6,92 (д, 2Н, 1=8,1 Гц), 6,58 (д, 2Н, 1=8,1 Гц), 5,21 (м, 1Н), 5,10 (д, 2Н, 1=2,1 Гц), 4,46 (м, 1Н), 3,59 (ш.с, 2Н), 2,97 (с, 2Н, 1=5,4 Гц), 1,42 (с, 9Н). 13СЯМР, СЛС13, δ: 170,6, 145,1, 136,3, 130,2, 128,3, 127,9, 125,6, 115,0, 81,9, 66,6, 55,2, 37,4, 27,8. МС (т/ζ): 393,1 [М+23].
Продукт примера 1 4-аминофенилаланин (20 г, 0,05 4 моль) растворяют в этаноле (200 мл) и обрабатывают основанием Хунига (21 г, 0,162 моль, 3 экв.) и 2-хлор-3-нитропиридином (10,3 г, 0,65 моль, 1,2 экв.). Полученный раствор перемешивают в атмосфере азота и нагревают при кипении с обратным холодильником в течение 24 ч. ЖХ-анализ показывает присутствие небольшого количества непрореагировавшего амина. Добавляют небольшое дополнительное количество хлорнитропиридина (1,1 г, 0,13 экв.) и продолжают кипячение с обратным холодильником еще 24 ч. Реакционную смесь охлаждают и выпаривают досуха. Остаток растворяют в этилацетате (600 мл) и полученный раствор промывают водой (1 х 200 мл), разбавл. водн. лимонной кислотой (0,2Ν, 2x200 мл), насыщенным раствором соли (1 х 200 мл) и сушат сульфатом натрия. Твердые вещества отфильтровывают и фильтрат выпаривают, получая 37 г насыщенно-красного масла, содержащего ожидаемый продукт, загрязненный избытком хлорнитропиридина. Неочищенный продукт очищают методом флэш-хроматографии (система Вю!аде, 75 л) элюируя смесью этилацетат:гексан (3:17). Фракции, содержащие чистый продукт, объединяют и выпаривают, получая насыщенно-красное вязкое масло, 26 г (99%). !Н-ЯМР, СЛС13, δ: 10,10 (с, 1Н), 8,49 (м, 2Н), 7,57 (д, 2Н, 1=9 Гц), 7,35 (ш.с, 5Н), 7,19 (д, 2Н, 1=9 Гц), 6,84 (м, 1Н), 5,30 (м, 1Н), 5,13 (д, 2Н, 1=3 Гц), 4,57 (м, 1Н), 3,11 (м, 2Н), 1,45 (с, 9Н). 13С-ЯМР, СЛС13, δ: 170,4, 155,5, 155,1, 150,0, 136,7, 136,3, 135,4, 132,4,
129.9, 128,5, 128,3, 128,0, 127,9, 122,2, 113,7, 82,2, 66,7, 55,1, 37,7, 27,8, 20,9. МС (т/ζ): 493,1 [М+1], 515,1 [М+23].
Красное нитросоединение (26 г, 0,054 моль) растворяют в ТГФ (350 мл) и добавляют катализатор оксид платины (1,35 г). Полученную смесь энергично перемешивают в атмосфере водорода (50-60 фунт/кв.дюйм) до прекращения адсорбции водорода (2 ч).
Катализатор отфильтровывают и фильтрат выпаривают досуха. Остаток растворяют в этилацетате (100 мл) и разбавляют гексаном (50 мл) до начала кристаллизации. Смесь еще разбавляют смесью этилацетат/гексан (1:1) (300 мл) и оставляют стоять в холодильнике на 3 ч. Кристаллические твердые вещества отфильтровывают, ополаскивают холодным растворителем и сушат на воздухе, получая продукт, 23 г, 94%. Ή-ЯМР, СЛС13, δ: 7,81 (дд, 1Н, Л = 1,5 Гц, 12=4,8 Гц), 7,33 (ш.с, 5Н), 7,17 (д, 2Н, 1=8,4 Гц), 7,03 (д, 2Н, 1=8,4 Гц), 6,96 (дд, 1Н, Л = 1,5 Гц, 12=7,5 Гц), 6,75 (дд, 1Н, Л = 5,0 Гц, 12 = 7,7 Гц), 6,22 (с, 1Н), 5,31 (м, 1Н), 5,09 (ш.с, 2Н), 4,50 (м, 1Н), 3,41 (ш.с, 2Н), 3,02 (м, 2Н), 1,43 (с, 9Н). 13С-ЯМР, СЛС13, δ: 170,6,
155,6, 145,5, 140,21, 138,8, 136,3, 130,8, 129,9, 128,5, 128,3, 127,9, 123,4, 118,2, 117,0, 82,0, 66,6, 55,2, 37,4,
27.9. МС (т/ζ): 407,1 [М-56], 463,1 [М+1], 485,1 [М+23].
Аминопиридин (19 г, 0,041 моль) суспендируют в дихлсрметане (200 мл) и добавляют СЛ1 (12 г, 0,074 моль, 1,8 экв.). Полученную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 20 час. Реакционную смесь промывают насыщ. водн. бикарбонатом (2 х 100 мл), насыщенным раствором соли (1 х 100 мл) и сушат сульфатом натрия. Твердые вещества отфильтровывают и фильтрат выпаривают досуха. Остаток растворяют в этилацетате (горячий, 300 мл) и кристаллизуют. Кристаллический продукт отфильтровывают, ополаскивают холодным этилацетатом и сушат на воздухе, получая 19,9 г, 81% имидазолона. Ή-ЯМР, СЛС13, δ: 10,63 (с, 1Н), 8,06 (д, 1Н, 1=3 Гц), 7,66 (д, 2Н, 1=9 Гц), 7,32 (м, 8Н), 7,05 (м, 1Н), 5,36 (м, 1Н), 5,13 (с, 2Н), 4,59 (м, 1Н), 3,17 (м, 2Н), 1,45 (с, 9Н). 13С-ЯМР, СЛС13, δ: 170,4, 155,6, 154,3, 143,8, 141,0, 136,2, 135,8, 131,8, 130,2, 128,3, 128,0, 125,9, 122,2, 118,3, 116,0, 82,4, 66,8, 55,0, 37,7, 27,8. МС (т/ζ): 433,1 [М-56], 489,2 [М+1], 511,2 [М+23].
- 55 012433
К раствору продукта примера 2 (4,0 г, 8,19 ммоль) в ДМФА (40 мл) добавляют измельченный карбонат калия (1,58 г, 11,47 ммоль), затем добавляют метилбромацетат (1,0 мл, 11,47 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в атмосфере азота при комнатной температуре в течение ночи. Концентрируют реакционную смесь в вакууме и остаток переносят в этилацетат (100 мл). Органическую фазу промывают Н2О, насыщенным раствором соли, сушат над №28О4, фильтруют и концентрируют в вакууме. Сырое вещество очищают методом колоночной хроматографии (100% этилацетат), получая 4,5 г (100%) указанного в заголовке соединения в виде белой пены. В(=0,42 (5% МеОН/СН2С12). МС т/ζ = 561, (М+Н)+. 1НЯМР, СПС13, δ: 8,10-8,08 (д, 1Н), 7,67-7,65 (д, 2Н), 7,37-7,30 (м, 7Н), 7,20-7,17 (м, 1Н), 7,10-7,05 (м, 1Н), 5,30-5,27 (д, 1Н), 5,11 (с, 2Н), 4,58-4,55 (кв., 1Н), 3,81 (с, 3Н), 3,16-3,14 (д, 2Н), 1,42 (с, 9Н) .
Раствор продукта примера 3 (2,25 г, 4,01 ммоль) в МеОН (20 мл) помещают вместе с катализатором Эеди^а Рб/С (113 мг) в атмосферу Н2 (55 фунт/кв.дюйм) на ночь. Реакционную смесь фильтруют через целит и концентрируют в вакууме, получая 1,65 г (97%) указанного в заголовке соединения в виде коричневого масла. Вг = 0,32 (5% МеОН/СН2С12). МС т^=449, (М+№)+. !Н-ЯМР, СПС13, δ: 8,11-8,09 (д, 1Н), 7,68-7,65 (д, 2Н), 7,41-7,38 (д, 2Н), 7,20-7,17 (м, 1Н), 7,10-7,06 (м, 1Н), 4,73 (с, 2Н), 3,81 (с, 3Н), 3,673,62 (м, 1Н), 3,16-3,09 (м, 1Н), 2,91-2,84 (м, 1Н), 1,46 (с, 9Н).
Пример 5
Пиридин-3-сульфоновую кислоту (125 г, 0,78 моль) помещают в 3-горлую колбу на 1 л, снабженную механической мешалкой, обратным холодильником, термометром и впускным отверстием для азота. Затем добавляют пентахлорид фосфора (250 г, 1,19 моль, 1,5 экв.) и сразу после этого оксихлорид фосфора (330 мл, 3,8 моль, 4,5 экв.). Содержимое колбы сначала перемешивают при температуре окружающей среды в течение 30 мин, затем медленно в течение следующего часа доводят до слабого кипения с обратным холодильником (внутренняя температура приблизительно 110°С), поддерживают при данной температуре приблизительно 3,5 ч, затем в течение следующих 12 ч дают охладиться обратно до температуры окружающей среды. В это время наблюдают выделение газа. Летучие вещества удаляют при пониженном давлении (при 12 мм рт.ст./40°С) и желтый полутвердый остаток разбавляют ДХМ (1 л). Суспензию медленно выливают в перемешиваемый, охлаждаемый льдом насыщ. водн. бикарбонат, поддерживая рН 7. Наблюдают выделение газа. Органический слой отделяют и водный слой обратно экстрагируют ДХМ. Объединенные экстракты промывают холодным насыщ. водн. бикарбонатом, насыщенным раствором соли и сушат сульфатом магния. Твердые вещества отфильтровывают и фильтрат выпаривают, оставляя пиридин-3-сульфонилхлорид в виде светло-желтой маслянистой жидкости, 123 г (93% чистоты; 88% от теории). !Н-ЯМР, СПС13, δ: 9,26 (д, 1Н), 8,98 (дд, 1Н), 8,34 (м, 1Н), 7,62 (м, 1Н). 13С-ЯМР, СПС13, δ: 155,3, 147,4, 140,9, 134,6, 124,2. МС (т/ζ): 178,0 [М+1].
Ь-пеницилламин (150 г, 1,0 моль) растворяют при перемешивании в деионизированной воде (1500 мл), охлаждают на бане со льдом до +8°С и обрабатывают формалином (150 мл, 37% водн.). Реакционную смесь перемешивают при +8°С в течение 2 ч, затем убирают охлаждающую баню и продолжают перемешивание в течение 12 ч. Прозрачный раствор концентрируют при пониженном давлении (14 мм рт.ст./50°), оставляя белый остаток. Твердые вещества ресуспендируют, затем растворяют в горячем МеОН (2500 мл) и оставляют стоять при температуре окружающей среды на 12 ч. Белый пушистый осадок отфильтровывают и ополаскивают холодным метанолом. Фильтрат концентрируют и снова кристаллизуют. Собранный осадок объединяют с первым сбором и сушат в вакуумной печи в течение 24 ч при 55°С и 45 мм рт.ст. Выход (К)-5,5-диметилтиазолидин-4-карбоновой кислоты составляет 138 г (>99% чистоты; 86% от теории). !Н-ЯМР, ДМСО-б6, δ: 4,25 (д, 1Н), 4,05 (д, 1Н), 3,33 (с, 1Н), 1,57 (с, 3Н), 1,19 (с, 3Н). 13С-ЯМР, ДМСО-б6, δ: 170,8, 74,4, 57,6, 51,8, 28,9, 27,9. МС (т/ζ): 162,3 [М+1].
В реакторе на 4 л, снабженном механической мешалкой и термометром, готовят буферный раствор из моноосновного фосфата калия (43 г, 0,31 моль) и двухосновного фосфата калия (188,7 г, 1,08 моль) в деионизированной воде (2 л). Добавляют (В)-5,5-диметилтиазолидин-4-карбоновую кислоту (107 г, 0,675
- 56 012433 моль) и перемешивают до полного растворения. Раствор охлаждают на бане со льдом до +8°С. Добавляют в реактор по капле отдельно приготовленный раствор пиридин-3-сульфонилхлорида (124 г, 0,695 моль) в ДХМ (125 мл) при энергичном перемешивании в течение 1 ч. Контролируют рН реакционной смеси и через 4 ч обнаруживают рН 5 и доводят его до рН 6, добавляя твердый бикарбонат. Смеси дают нагреться до температуры окружающей среды в течение 18 ч. Доводят рН до 2 разбавл. водн. серной кислотой, перемешивают в течение 1 ч и осадившиеся желтые твердые вещества отфильтровывают, ополаскивают водой до нейтральной реакции. Твердый осадок с фильтра переносят в колбу Эрленмейера на 2 л, суспендируют в ДХМ (500 мл), произвольно вращая в течение 5 мин, и снова отфильтровывают. Осадок на фильтре промывают ДХМ и сушат на воздухе. Выход указанного в заголовке соединения (Κ)5,5-диметил-3-(пиридин-3-илсульфонил)тиазолидин-4-карбоновой кислоты составляет 148,9 г (98% чистоты; 73% от теории). !Н-ЯМР, ДМСО-й6, δ: 9,05 (д, 1Н), 8,89 (м, 1Н), 8,32 (м, 1Н), 7,69 (м, 1Н), 4,68 (кв., 2Η), 4,14 (с, 1Н), 1,35 (с, 3Н), 1,29 (с, 3Н). 13С-ЯМР, ДМСО-й6, δ: 170,0, 154,3, 147,9, 135,8, 134,1, 124,8,
72,6, 54,3, 50,2, 29,4, 25,0. МС (т/ζ): 303,2 [М+1].
Пример 6
К раствору продукта примера 4 (1,65 г, 3,88 ммоль) в ацетонитриле (35 мл) добавляют продукт примера 5 (1,06 г, 3,53 ммоль), НАТи (1,75 г, 3,88 ммоль) и триэтиламин (5,3 мл). Гомогенный коричневый раствор перемешивают в атмосфере азота в течение 72 ч. Органическую реакционную смесь концентрируют в вакууме, переносят в этилацетат (40 мл), промывают 1Ν НС1, насыщ. NаΗСОз и насыщенным раствором соли. Органический слой сушат над №2804, фильтруют и концентрируют в вакууме, получая 2,67 г (97%) в виде оранжевой пены. Кг =0,36 (5% Ме0Н/СН2С12). МС т^=711, (М+Н)+. Ή-ЯМР, СОСк δ: 9,09-9,08 (д, 1Н), 8,86-8,84 (м, 1Н), 8,18-8,15 (м, 1Н), 8,07-8,05 (м, 1Н), 7,66-7,63 (д, 2Н), 7,52-7,48 (м, 1Н), 7,41-7,38 (д, 2Н), 7,19-7,16 (м, 1Н), 7,08-7,04 (м, 1Н), 6,93-6,90 (д, 1Н), 4,83-4,76 (кв., 1Н), 4,71 (с, 2Н), 4,62-4,59 (д, 1Н), 4,49-4,46 (д, 1Н), 3,91 (с, 1Н), 3,80 (с, 3Н), 3,22-3,08 (м, 2Н), 1,46 (с, 9Н), 1,20-1,17 (Д, 6Н).
К раствору продукта примера 6 (2,67 г, 3,75 ммоль) в ТГФ (12 мл) добавляют раствор Ь10Н-Н20 (245 мг, 5,97 ммоль) в Н2О (3 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи в атмосфере азота. По завершении реакционную смесь концентрируют в вакууме, растворяют в Н2О (100 мл) и подкисляют до рН 4 1М раствором НС1. Требуемый продукт высаживают в виде белого твердого вещества, фильтруют и ополаскивают Н2О, получая 1,87 г (72%) указанного в заголовке соединения. МС т^=697 (М+Н)+. Ή-ЯМР (С1);01)) δ: 9,02 (с, 1Н), 9,80 (с, 1Н), 8,47-8,44 (д, 1Н), 8,21-8,19 (д, 1Н), 7,98-7,96 (д, 1Н), 7,63-7,59 (м, 3Н), 7,52-7,48 (м, 3Н), 7,17-7,13 (м, 1Н), 4,75 (с, 2Н), 4,72-4,61 (м, 3Н), 4,14 (с, 1Н), 3,22-3,16 (м, 2Н), 1,45 (с, 9Н), 1,25-1,19 (д, 6Н). 13С-ЯМР (С1);01)) δ: 169,9, 169,5, 168,9, 153,1, 152,8, 147,5, 142,8, 140,2, 136,6, 135,8, 134,0, 131,7, 129,9, 126,0, 124,2, 123,9, 117,8, 114,9, 81,8,
72,6, 54,1, 49,9, 41,3, 36,4, 28,5, 26,6, 23,4.
Пример 8
Η,Ν-'γ'θ'Κ о 1
Продукт примера 2 (52 г, 0,106 моль) суспендируют в МеОН (450 мл), добавляют катализатор гидрирования (8,7 г, 5% Ρά/С, Эеди^а) и перемешивают смесь в атмосфере водорода (60 фунт/кв.дюйм) до прекращения абсорбции (примерно 2 ч). Добавляют ТГФ (150 мл) для растворения осадившихся твердых веществ и раствор фильтруют через набивку из целита, используя ДХМ для ополаскивания фильтра. Фильтрат выпаривают досуха, повторно растворяют в ДХМ (300 мл) и снова удаляют. Данную операцию повторяют дважды. Пенистые твердые вещества хранят в высоком вакууме в течение 3 ч. Выход указан
- 57 012433 ного в заголовке соединения составляет 38,3 г (101% от теории). 'Н-ЯМР, 0Ό013, δ: 8,08 (м, 1Н), 7,56 (АВ кв., 4Н), 7,37 (м, 1Н), 7,06 (м, 1Н), 3,68 (м, 1Н), 2,03 (м, 2Н), 1,49 (с, 9Н). 13С-ЯМР, 0Ό013, δ: 173,3, 154,6,
143,9, 141,0, 137,4, 131,5, 130,2, 126,1, 122,3, 118,0, 116,1, 81,4, 56,0, 40,6, 27,9. МС (т/ζ): 299,3 [М-56], 355, 4 [М+1], 377,4 [М+23].
Пример 9
Продукт примера 8 (38,3 г, получ. 0,106 моль) растворяют в ДХМ (500 мл) и обрабатывают последовательно: Ν-метилморфолином (27 г, 30 мл, 0,266 моль, 2,5 экв.), НОВ! (17,3 г, 0,128 моль; 1,2 экв.) и продуктом примера 5 (33,8 г, 0,112 моль, 1,06 экв.). Полученный негомогенный раствор охлаждают на баке со льдом до +4°С и обрабатывают ЕЭС (22,5 г, 0,117 моль, 1,1 экв.) одной порцией. Реакционную смесь перемешивают, позволяя нагреться до температуры окружающей среды в течение следующих 4 ч и затем еще 18 ч. Растворитель удаляют и остаток растворяют в этилацетате (1,2 л), промывают насыщ. водн. бикарбонатом (2 х 250 мл), водой (250 мл), насыщенным раствором соли (300 мл) и сушат сульфатом магния. Раствор фильтруют и выпаривают досуха, оставляя светло-оранжевое вязкое масло, 76 г (>>100%). Сырой продукт очищают методом флэш-хроматографии на силикагеле Вю!аде 75Ь, в смеси этилацетат/метанол (3%). Фракции, содержащие чистые продукты, объединяют и выпаривают, получая 54 г указанного в заголовке соединения (выход 83%). 'Н-ЯМР, 0Ό013, δ: 10,37 (с, 1Н), 9,11 (с, 1Н), 8,87 (м, 1Н), 8,19 (м, 1Н), 8,05 (м, 1Н), 7,56 (АВ кв., 4Н), 7,52 (м, 1Н), 7,36 (м, 1Н), 7,06 (м, 2Н), 4,83 (м, 1Н), 4,58 (АВ а, 2Н), 3,96 (с, 1Н), 3,19 (м, 2Н), 1,49 (с, 9Н), 1,22 (с, 3Н), 1,18 (с, 3Н). 13С-ЯМР, 0Ό013, δ: 169,7,
167.6, 153,9, 148,4, 143,8, 140,9, 135,3, 135,6, 132,9, 131,9, 130,2, 125,9, 123,8, 122,1, 118,0, 115,9, 82,8,
73.6, 60,3, 54,8, 53,7, 50,6, 37,8, 29,1, 27,8, 23,9, 14,1. МС (т/ζ) : 583,3 [М-56] , 639,4 [М+1], 661,3 [М+23].
Пример 10
К охлаждаемому льдом раствору этилтрифторбутирата (15 г, 8 9 ммоль) и этилформиата (36 мл, 444 ммоль) в ТГФ (200 мл) в атмосфере Ν2 добавляют раствор 1М КО!Ви в ТГФ (107 ммоль, 107 мл) за период 25 мин. Через 15 мин баню со льдом убирают и реакционную смесь перемешивают в течение одного часа при комнатной температуре. Затем добавляют еще этилформиат (18 мл, 222 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение ночи.
Реакционную смесь концентрируют и остаток распределяют между холодным эфиром (100 мл) и холодной водой (300 мл). рН водной фазы доводят до 2 концентрированной НС1. Продукт экстрагируют дихлорметаном (1 х 100 мл, 45 х 75 мл) и объединенные органические экстракты промывают насыщенным раствором соли (1 х 100 мл), сушат (Мд§О4), фильтруют и концентрируют, получая указанное в заголовке соединение в виде густого масла, которое затвердевает при стоянии, 10,2 г (58,5%). МС (Μ/ζ)=198 (М+Н)+.
Пример 11
К раствору продукта примера 10 (10 г, 51 ммоль) и диэтилгуанидинсульфата (8,3 г, 25,2 ммоль) в ЕЮН (60 мл) в атмосфере Ν2 добавляют МЮЕк 21% раствор в ЕЮН (20,7 мл, 55,5 ммоль), за период 10 мин. Затем реакционную смесь нагревают при кипении с обратным холодильником в течение 5 ч. Гетерогенный раствор охлаждают и выливают в холодную воду (100 мл), получая гомогенный раствор. рН раствора доводят до приблизительно 3,5 концентрированной НС1 и 1Ν НС1. Из раствора осаждается твердое вещество, которое собирают фильтрованием. Светлое желтовато-коричневое твердое вещество промывают водой и сушат на воздухе, получая 2,9 г (23%) указанного в заголовке соединения. МС (т/ζ) = 250 (М + Н)+. !Н-ЯМР (300 МГц, С1);О1)) δ: 7,65 (ш.с, 1Н), 3,55 (кв., 4Н), 3,30 (кв., 2Н), 1,25 (т,6Н).
- 58 012433
В колбу загружают продукт примера 11 (2,0 г, 8,02 ммоль), ОША (1,5 мл, 8,83 ммоль), ОМАР (0,98 г, 0,8 ммоль) и дихлорметан (30 мл). Смесь охлаждают до 0°С и добавляют трифторуксусный ангидрид (1,5 мл, 8,83 ммоль). Реакционная смесь становится гомогенной, ее перемешивают при 0°С в течение 3 ч. Смесь гасят насыщ. NаНСО3 и экстрагируют дихлорметаном. Органическую фазу промывают 0,2Ν лимонной кислотой, сушат над №2БО4, фильтруют и концентрируют в вакууме, получая 2,87 г (94%) указанного в заголовке соединения в виде коричневого твердого вещества. Ή-ЯМР (300 мГц, СЭС13) δ: 8,28 (с, 1Н), 3,65-3,52 (м, 4Н), 3,29-3,19 (кв., 2Н), 1,22-1,17 (т, 6Н).
Пример 13
Раствор продукта примера 12 (1,3 г, 3,5 ммоль), Н-Рйе(пара-НО2)О!Ви (1,1 г, 4,2 ммоль) и ЭША (0,9 мл, 5,3 ммоль) в СН3С№ (14 мл) нагревают в атмосфере Ν2 при кипении с обратным холодильником в течение ночи. На следующий день добавляют еще Н-Рйе(пара-НО2)О!Ви (0,8 г, 3 ммоль) и продолжают кипячение с обратным холодильником в течение 3 дней. Затем реакционную смесь охлаждают и концентрируют. Остаток переносят в ЕЮАс (50 мл) и органическую часть промывают 0,5Ν КНБО4 (3 ж 50 мл), водой (1x50 мл), насыщенным раствором соли (1x10 мл), сушат (МдБО4), фильтруют и концентрируют до коричневатой смолы. Сырой материал очищают методом флэш-хроматографии (5:1 гексан/ЕЮАс), получая 640 мг (38%) указанного в заголовке соединения в виде золотой смолы. ТСХ: 3:1 гексан/ЕЮАс, Кг = 0,30, МС (т/ζ) = 498 (М+Н)+, Ή-ЯМР, (300 МГц, СОСЕ) δ: 8,19 (д, 2Н), 7,80 (с, 1Н), 7,25 (д, 2Н), 5,19 (ш.д, 1Н), 4,95 (кв., 1Н), 3,70-3,50 (м, 4Н), 3,45-3,25 (м, 2Н), 3,10 (кв., 2Н), 1,40 (с, 9Н), 1,05 (т, 6Н).
Пример 14
Продукт примера 13 (635 мг, 1,27 ммоль) растворяют в абсолютном ЕЮН (5 мл), к которому добавляют 35 мг Рй/С, 10 мас.%. Реакционную смесь гидрируют (45 фунт.кв.дюйм, 3,2 кг/кв.см Н2) в течение 2,5 ч, в это время добавляют 50 мг Рй/С, 10 мас.%, и реакционную смесь снова гидрируют (45 фунт.кв.дюйм, 3,2 кг/кв.см Н2) в течение ночи. Реакционную смесь фильтруют через набивку из целита и фильтрат концентрируют, получая 452 мг (76%) указанного в заголовке соединения. МС (т/ζ) = 468 (М+Н)+, !Н-ЯМР (300 МГц, СЭСЕ,) δ: 7,75 (с, 1Н), 6,90 (д, 2Н), 6,60 (д, 2Н), 5,05 (ш.д, 1Н), 4,80 (кв., 1Н), 3,70-3,45 (м, 6Н), 3,10-2,90 (м, 4Н), 1,40 (с, 9Н), 1,15 (т, 6Н).
Раствор продукта примера 14 (598 мг, 1,28 ммоль), 2-хлор-3-нитропиридин (243 мг, 1,53 ммоль) и ЭША (0,67 мл, 3,83 ммоль) в ЕЮН (5 мл) в атмосфере Ν2 нагревают при кипении с обратным холодильником. На следующий день реакционную смесь охлаждают и добавляют еще 2-хлор-3-нитропиридин (40 мг, 0,25 ммоль) и ЭША (0,11 мл, 0,60 ммоль) и нагревают реакционную смесь при кипении с обратным холодильником в течение одного дня. Затем реакционную смесь концентрируют и остаток переносят в ЕЮАс (20 мл). Органическую фазу промывают водой (2x20 мл). Объединенные водные смывы обратно экстрагируют ЕЮАс (2x10 мл). Объединенные органические экстракты промывают 0,2Ν лимонной кислотой (3x20 мл), водой (1x10 мл), насыщ. NаНСО3 (3x20 мл), насыщенным раствором соли (1x10 мл), сушат (МдБО4), фильтруют и получают оранжевую смолу. Сырой продукт очищают методом флэшхроматографии, элюируя смесью 4:1 гексан/ЕЮАс (К£ = 0,14), получая 610 мг (81%) указанного в заголовке соединения в виде красного масла. МС (т/ζ) = 590 (М+Н)+, 1 Н-ЯМР (300 МГц, СЭС13) δ: 10,10 (с, 1Н), 8,55 (д, 1Н), 8,50 (м, 1Н), 7,79 (с, 1Н), 7,75 (д, 2Н), 7,15 (д, 2Н), 6,80 (кв., 1Н), 5,10 (ш.д, 1Н), 4,90 (м, 1Н), 3,70-3,45 (м, 4Н), 3,25 (м, 2Н), 3,10 (кв., 2Н), 1,40 (с, 9Н), 1,10 (т, 6Н).
Пример 16
- 59 012433
К раствору продукта примера 15 (610 мг, 1,03 ммоль) в абсолютном Е1ОН (5 мл) добавляют 60 мг Рб/С, 10 мас.%. Смесь гидрируют (45 фунт.кв.дюйм, 3,2 кг/кв.см Н2) в течение ночи. На следующий день реакционную смесь фильтруют через целит и фильтрат концентрируют, получая 500 мг (87%) указанного в заголовке соединения. МС (т/ζ) = 560 (М+Н)+, !Н-ЯМР (300 МГц, СОС1;) δ: 7,85 (д, 2Н), 7,80 (с, 1Н), 7,20 (д, 2Н), 7,05 (д, 2Н), 7,00 (д, 1Н), 7,75 (м, 1Н), 6,20 (ш.с, 1Н), 5,15 (ш.с, 1Н), 4,85 (м, 1Н), 3,75-3,45 (м, 4Н), 3,40 (ш.с, 2Н), 3,15 (м, 2Н), 3,05 (кв., 2Н), 1,40 (с, 9Н), 1,15 (т, 6Н).
Пример 17
Раствор продукта примера 16 (141 мг, 0,250 ммоль) и СТО (62 мг, 0,378 ммоль) в СН2С12 (3 мл) перемешивают в течение ночи. На следующий день добавляют еще С^I (30 мг, 0,185 ммоль) и реакционную смесь перемешивают еще один день. Затем реакционную смесь концентрируют и переносят в ЕЮАс (10 мл) и органическую часть промывают 0,2Ν лимонной кислотой (3x5 мл), водой (1x5 мл), насыщ. NаНСОз (3x5 мл), насыщенным раствором соли (1x5 мл), сушат (Мд8О4), фильтруют и концентрируют, получая 69 мг (47%) указанного в заголовке соединения в виде пены, которую используют без дополнительной очистки. МС (т/ζ) = 586 (М+Н)+, 1 Н-ЯМР (300 МГц, СНС1;) δ: 8,20 (ш.с, 1Н), 8,05 (д, 1Н), 7,80 (с, 1Н), 7,65 (д, 2Н), 7,90 (м, 3Н), 7,05 (м, 1Н), 5,15 (ш.д, 1Н), 4,95 (м, 1Н), 3,70-3,45 (м, 4Н), 3,25 (кажущийся д, 2Н), 3,10 (кв., 2Н), 1,40 (с, 9Н), 1,15 (т, 6Н).
Пример 18
К раствору 4,6-дихлор-5-аминопиримидина (5,0 г, 30,7 ммоль) в ДМСО (30 мл) добавляют №128-9Н2О (7,4 г, 30,8 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Затем добавляют к смеси воду (40 мл) и раствор выпаривают при пониженном давлении до приблизительно 6 мл. К данному раствору добавляют конц. НС1 (0,5 мл) и воду для осаждения продукта. Раствор фильтруют и оранжевое твердое вещество промывают водой и сушат, получая 4,3 г (86%) указанного в заголовке соединения. !Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-б6) δ: 5,84 (2Н, с), 7,79 (1Н, с), 14,37 (1Н, ш.с); МС (т/ζ): МН+ = 162.
Пример 19
ΝΗΖ
К продукту примера 18 (4,3 г, 26 ммоль), растворенному в конц. ^МН4ОН (4 мл), добавляют ЕЮН (40 мл). К данному раствору добавляют частями никель Ренея (избыток). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи и затем нагревают при 80°С в течение 2 ч. Смесь фильтруют через целит и фильтрат концентрируют. Сырой продукт очищают методом флэш-хроматографии на силикагеле, используя смесь ЕЮАс/гексан и получая 1,6 г (47%) указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества. 1 Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-б6) δ: 5,90 (2Н, с), 8,20 (2Н, с); МС (т/ζ) МН+ = 130.
Пример 20
К продукту примера 19 (0,51 г, 3,9 ммоль) в МеОН (20 мл) и НОАс (0,5 мл) добавляют СН3СНО (0,52 мл, 9,2 ммоль). Затем добавляют NаΒН3СN (590 мг, 9,2 ммоль) одной порцией. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи и добавляют еще НОАс, СН3СНО и NаΒН3СN. Реакционную смесь перемешивают в течение ночи, концентрируют и остаток переносят в ЕЮАс и насыщ. NаНСО3. Отделенный водный слой обратно экстрагируют ЕЮАс. Объединенный органический слой сушат и концентрируют до остатка. Остаток растворяют в МеОН и обрабатывают НОАс, СН3СНО и NаΒН3СN, как описано выше. Следуя описанной процедуре обработки, очищают сырой продукт методом флэш-хроматографии на силикагеле, используя смесь ЕЮАс/гексан и получая 0,35 г (57%) указанного в заголовке соединения в виде желтого масла. 1 Н-ЯМР (300 МГц, СЭСЕ) δ: 1,35 (3Н, кв, 1=12
- 60 012433
Гц), 3,29 (2Н, м), 4,21 (1Н, ш.с), 8,04 (1Н, с), 8,36 (1Н, с); МС (т/ζ): МН+ = 158.
Пример 21
К продукту примера 20 (70 мг, 0,45 ммоль), растворенному в ДМФА (1 мл), добавляют ТЕА (93 мкл) и изоникотиноилхлорид (0,12 г, 0,67 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 дней и затем распределяют между ЕЮАс и насыщ. NаΗСОз. Отделенный водный слой обратно экстрагируют ЕЮАс. Объединенный органический слой сушат и концентрируют, получая 67 мг (57%) указанного в заголовке соединения, которое используют без дополнительной очистки. 1Н-ЯМР (300 МГц, СЭС13) δ: 1,26 (3Н), 3,65-3,69 (1Н), 4,21 (1Н), 7,17 (2Н), 8,43 (1Н), 8,54 (2Н), 8,86 (1Н) Отметим: 1Н ЯМР показывает очевидное присутствие ротамеров, доказательством чего являются ширины всех пиков; МС (т/ζ): МН+ = 263.
Пример 22
К раствору продукта примера 21 (0,11 г, 0,42 ммоль) и продукта примера 8 (0,135 г, 0,38 ммоль) в ГРА (2,5 мл) добавляют ПГЕА (0,35 мл, 1,9 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в закупоренной пробирке при 130°С в течение 2 дней. Сырую смесь концентрируют и масло очищают методом колоночной флэш-хроматографии с градиентом растворителя 0-10% МеОН в СН2С12, получая указанное в заголовке соединение в виде масла. 1Н-ЯМР (300 МГц, СЭС13) δ: 1,16 (1,2Н, м), 1,26-1,31 (1,8Н, м), 1,50-1,53 (9Н, д, 1=9 Гц), 3,0 (1Н, м), 3,2 (0,8Н, м), 3,36 (1,2Н, м), 4,12-4,18 (1,2Н, м), 4,96-5,10 (0,8Н, м), 5,80-5,95 (1Н, м), 6,93-6,96 (1Н, м), 7,07 (1Н, м), 7,31-7,45 (5Н, м), 7,66-7,75 (3Н, м), 8,06 (1 Н, моль), 8,44-8,51 (2Н, м); ВЭЖХ/МС: отдельный пик при 1,29 мин, МН+ = 581.
Пример 23
К 2,4-дихлор-5-нитропиримидину (2,0 г, 10,3 ммоль) в МеОН (7 мл) при 0°С в атмосфере Ν2 добавляют по капле №ЮМе (0,5 М в МеОН, 25 мл). По завершении добавления реакционную смесь перемешивают при 0°С в течение 15 мин. Затем добавляют диэтиламин (5 мл) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь концентрируют и остаток распределяют между ЕЮАс и Н2О. Органический слой сушат и концентрируют до остатка, который очищают методом флэшхроматографии на силикагеле, используя смесь ЕЮАс/гексан и получая указанные в заголовке соединения в виде грязно-белого твердого вещества (1,1 г, 4,9 ммоль, 47% выход). 1 Н-ЯМР (300 МГц, СЭС13) δ: 1,26 (6Н, т, 1=6, 6 Гц), 3,70 (4Н, м), 4,08 (3Н, с), 9,01 (1Н, с); ВЭЖХ/МС: МН+ = 227.
Пример 24
Продукт примера 23 (1,1 г, 4,9 ммоль) в МеОН/ЕЮАс (1:1, 20 мл) восстанавливают, используя Рй/С (5% Оедикка, 0,5 г) и Н2 (50 фунт.кв.дюйм, 3,5 кг/кв.см) в аппарате Парра в течение ночи. Реакционную смесь фильтруют и фильтрат концентрируют при пониженном давлении, получая указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества (0,85 г, 4,3 ммоль, 88, 5% выход). !Н-ЯМР (300 МГц, СИСЬ) δ: 1,18 (6Н, т, 1=6,9 Гц), 3,03 (2Н, ш), 3,57 (6Н, т, 1=6,9 Гц), 3,96 (3Н, с), 7,71 (1Н, с); ВЭЖХ/МС: МН+= 197.
Пример 25
- 61 012433
К продукту примера 24 (0,85 г, 4,3 ммоль) в СН2С12 (15 мл) и ТЕА (1,4 мл, 10 ммоль) добавляют соль изоникотинилхлорид-НС1 (1,13 г, 6,3 ммоль). Через 15 мин ТСХ показывает отсутствие исходного вещества. Смесь распределяют между Е!ОАс и насыщ. NаНСО3. Водный слой дважды промывают Е!ОАс. Объединенные органические слои промывают насыщ. NаНСО3 и насыщенным раствором соли, сушат над Мд§О4 и фильтруют. Фильтрат концентрируют, получая указанное в заголовке соединение в виде коричневого твердого вещества (1,3 г, 4,3 ммоль, 100% выход). 1 Н-ЯМР (300 МГц, СБС13) δ: 1,20 (6Н, т, 1=6, 9 Гц), 3,60 (4Н, кв., 1=6,9 Гц), 3,96 (3Н, с), 7,72 (2Н, д, 1=6,0 Гц), 7,75 (1Н, ш.с), 8,80 (2Н, д, 1=6,0 Гц), 8,89 (1Н, с); ВЭЖХ/МС: МН+ = 302.
Пример 26
К продукту примера 25 (100 мг, 0,33 ммоль) в ТГФ (1 мл) медленно добавляют КО!Ви (1М в ТГФ, 0,5 мл), а затем ЕЯ (40 мкл, 0,5 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. ТСХ показывает исчезновение исходного вещества. Смесь распределяют между Е!ОАс и Н2О. Водный слой промывают Е!ОАс. Объединенные органические слои промывают насыщ. NаНСО3 и насыщенным раствором соли, сушат и концентрируют, получая указанное в заголовке соединение (90 мг, 0,27 ммоль, 83%), которое используют без дополнительной очистки. 1Н-ЯМР (300 МГц, СБС13) δ: 1,10 (9Н, м), 3,47 (5Н, м), 3,92 (1Н, м), 7,14 (2Н, д, 1=6,0 Гц), 7,78 (1Н, ш.с), 8,44 (2Н, д, 1=6,0 Гц); ВЭЖХ/МС: МН+ = 330.
Пример 27
К продукту примера 26 (200 мг, 0,61 ммоль) в ДМФА (4 мл) добавляют Е(8№1 (66 мг, 0,79 ммоль) и реакционную смесь нагревают 100°С в течение 1 ч. ЖХ/МС показывает присутствие исходного вещества. Добавляют еще порцию №18Е1 (66 мг, 0,79 ммоль) и реакционную смесь нагревают еще 2 ч. ЖХ/МС показывает присутствие только продукта. ДМФА убирают при пониженном давлении и добавляют Н2О (10 мл), а затем конц. НС1 (0,132 мл). Выпаривание растворителя дает остаток. Его растворяют в Е!ОН и фильтруют. Фильтрат концентрируют, получая указанное в заголовке соединение (190 мг, 100%), которое используют без дополнительной очистки. 1Н-ЯМР (300 МГц, СБ3ОБ) δ: 1,24 (9Н, м), 3,60 (4Н, м), 3,60-4,00 (2Н, ш.), 8,12 (3Н, д, 1=5,7 Гц), 8,92 (2Н, Д, 1=5,7); ВЭЖХ/МС: МН+ =316.
Пример 28
К продукту примера 27 (70 мг, 0,22 ммоль) в РОС13 (3 мл) при комнатной температуре добавляют диэтиланилин (30 мкл). Реакционную смесь нагревают до 100°С в течение 30 мин, затем концентрируют. Остаток распределяют между Е!ОАс и Н2О. Органический слой дважды промывают Н2О. Затем его сушат и концентрируют, получая указанное в заголовке соединение (50 мг, 0,15 ммоль, 68%) и используют для следующего взаимодействия без дополнительной очистки. ВЭЖХ/МС: МН+ = 334.
Пример 29
К раствору продукта примера 28 (50 мг, 0,15 ммоль) и продукта примера 8 (60 мг, 0,17 ммоль) в ГРА (0,75 мл) добавляют БГЕА (0,15 мл, 0,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в закупоренной пробирке при 130°С в течение 7 дней. Сырую смесь концентрируют и остаток очищают методами препаративной ВЭЖХ и флэш-хроматографии на силикагеле, получая грязно-белое твердое вещество (10 мг). 1Н
- 62 012433
ЯМР (300 МГц. СБС1з) δ: 1.10-1.30 (9Н. м). 1.48 (4.5Н. с). 1.51 (4.5Н. с). 2.80-3.38 (3Н. м). 3.53 (4Н. м). 4.05-4.30 (1Н. м). 4.83 (0.5Н. м). 4.96 (0.5Н. м). 5.15-5.50 (1Н. м). 6.95-7.10 (2Н. м). 7.25-7.50 (5Н. м). 7.69 (0.5Н. д. 1 = 8.4 Гц). 7.76 (0.5Н. д. 1 = 8.4 Гц). 8.08 (1Н. д. 1=5.1 Гц). 8.51 (2Н. м). 8.83 (0.5Н. ш.). 8.95 (0.5Н. ш.); ВЭЖХ/МС: МН+ = 652.
Пример 30
Соединение 25 (20 г. 0.11 моль) растворяют в СН2С12 (500 мл) в атмосфере Ν2. Реакционную смесь охлаждают до 0°С. Добавляют триэтиламин (18.12 мл. 0.13 моль). а затем частями трифторуксусный ангидрид (18.14 мл. 0.13 моль). Реакционной смеси дают нагреться до комнатной температуры в течение ночи. Реакционную смесь концентрируют в вакууме и остаток переносят в этилацетат (200 мл). Органическую фазу промывают Н2О. насыщ. NаΗСО3. насыщенным раствором соли. сушат над №ь8О4. фильтруют и концентрируют в вакууме. получая 29.7 г (96%) соединения 29 в виде желтого твердого вещества. !Н-ЯМР. СБС13. δ: 3.64-3.60 (м. 2Н). 3.55-3.53 (м. 2Н). 3.49-3.45 (м. 4Н). 1.44 (с. 9Н). 13С-ЯМР. СБС13. δ: 155.7 (1С-Р=36 Гц). 154.3. 116.4 (1С-Р=288 Гц). 80.8. 45.7. 43.3. 28.3.
Соединение 29 (29.26 г. 0.10 моль) добавляют частями в колбу на 500 мл. содержащую раствор 4Ν НС1 в диоксане (200 мл) при 0°С. Реакционную смесь перемешивают на бане со льдом в течение 4 ч. когда ТСХ (3:1 гексан:этилацетат) показывает 100% конверсию в продукт. Реакционную смесь концентрируют в вакууме и обрабатывают этиловым эфиром (500 мл). Продукт отфильтровывают и сушат. получая 22.5 г (99%) соединения 30 в виде белой соли моногидрохлорида. 'Н-ЯМР (ДМСО-б6) δ: 3.82-3.79 (м. 4Н). 3.53 (с. 1Н). 3.18-3.16 (м. 4Н). 13С-ЯМР (ДМСО-б6) δ: 154.3 (1С-Р=35 Гц). 115.9 (1С-Р=289 Гц). 66.1. 42.0. 41.9. 41.5.
В колбу на 250 мл загружают соединение 30 (1.0 г. 4.6 ммоль). СН2С12 (40 мл) и насыщ. NаΗСО3 (40 мл). Реакционную смесь энергично перемешивают при 0°С в течение 15 мин. Перемешивание прекращают и дают слоям разделиться. 2.0 М раствор фосгена в толуоле (9 мл. 18 ммоль) добавляют к реакционной смеси. которую энергично перемешивают в течение 30 мин. поддерживая температуру при 0°С. Слои разделяют и водную фазу промывают СН2С12 (15 мл). Объединенные органические слои промывают насыщенным раствором соли. сушат над №ь8О4. фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток переносят в СН2С12 и снова концентрируют в вакууме. получая 1.0 г (92%) соединения 31 в виде белого твердого вещества. МС (т/ζ) 245. (М+Н)+. !Н-ЯМР (СБС13) δ: 3.80-3.68 (м. 8Н). 13С-ЯМР (СБС13) δ: 155.9 (1С-Р=37 Гц). 148.7 (1С-Р=12 Гц). 116.3 (1С-Р=289 Гц). 48.3. 47.8. 45.7. 45.3. 45.1. 42.9. 42.7.
В колбу на 25 мл загружают соединение 24 (5.97 г. 0.011 моль). ЭМАР (1.34 г. 0.011 моль) и СН2С12 (22 мл). Добавляют триэтиламин (2.4 мл. 0.017 моль). а затем соединение 31 (4.2 г. 0.017 моль). Реакционную смесь нагревают при кипении с обратным холодильником в течение 20 ч. Реакционную смесь концентрируют в вакууме и остаток переносят в этилацетат. Органическую фазу промывают насыщ. NаΗСО3. Н2О. насыщенным раствором соли. сушат над №ь8О4. фильтруют и концентрируют в вакууме. получая 9.3 г розовой пены. Сырой материал очищают методом флэш-хроматографии (градиент от 50% этилацетат/гексан до 75% этилацетат/гексан). получая 6.1 г (76%) соединения 32 в виде светло-розовой пены. Кг = 0.14 (1:1 гексан:этилацетат). МС (т/ζ) 730. (М+Н)+. 'ίί-ЯМР (СБС13) δ: 9.08-9.07 (м. 1Н). 8.878.85 (м. 1Н). 8.16-8.14 (м. 1Н). 7.52-7.48 (м. 1Н). 7.25-7.22 (д. 2Н). 7.03-7.00 (д. 2Н). 6.91-6.88 (д. 1Н). 4.78
- 63 012433
4,70 (кв., 1Н), 4,60-4,44 (дд, 2Н), 3,88 (с, 1Н), 3,75-3,60 (м, 8Н), 3,09-3,06 (м, 2Н), 1,42 (с, 9Н), 1,18 (с, 3Н), 1,16 (с, 3Н).
К раствору соединения 32 (6,11 г, 8,4 ммоль) растворенному в МеОН (90 мл) добавляют раствор карбоната калия (5,79 г, 42 ммоль) в Н2О (10 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 мин и затем концентрируют в вакууме. Остаток фильтруют и промывают большим количеством Н2О, получая 4,65 г (88%) соединения 33 в виде белого твердого вещества. Яг = 0,08 (5% МеОН/СН2С12). МС (т/ζ) 634, (М+Н)+. Ή-ЯМР, СПС13, δ: 9,09-9,08 (м, 1Н), 8,87-8,85 (м, 1Н), 8,16-8,14 (м, 1Н), 7,52-7,48 (м, 1Н), 7,23-7,20 (д, 2Н), 7,03-7,00 (д, 2Н), 6,91-6,88 (д, 1Н), 4,78-4,70 (кв., 1Н), 4,59-4,46 (дд, 2Н), 3,89 (с, 1Н), 3,65-3,50 (м, 4Н), 3,09-3,06 (м, 2Н), 2,92-2,88 (м, 4Н), 1,43 (с, 9Н), 1,19 (с, 3Н), 1,17 (с, 3Н). 13С-ЯМР (СПС13) δ: 170,1, 167,9, 154,5, 153,9, 150,7, 148,8, 136,0, 133,4, 133,2, 130,6, 124,1, 121,9, 83,0, 73,9, 55,0, 53,7, 50,7, 46,0, 45,7, 45,0, 37,9, 29,3, 28,0, 24,0.
В колбу на 250 мл загружают соединение 33 (2,5 г, 3,9 ммоль), СН2С12 (40 мл) и насыщ. NаΗСО3 (40 мл). Реакционную смесь энергично перемешивают при 0°С в течение 15 мин. Перемешивание прекращают и дают слоям разделиться. Быстро добавляют 2,0М раствор фосгена в толуоле (7,9 мл, 16 ммоль) к реакционной смеси, которую энергично перемешивают в течение 60 мин, поддерживая температуру 0°С. Слои разделяют и водную фазу промывают СН2С12 (30 мл). Объединенные органические слои промывают 0,2Ν лимонной кислотой, насыщенным раствором соли, сушат над №28О4, фильтруют и концентрируют в вакууме, получая 2,8 г (100%) белой пены. Сырое вещество очищают через набивку из силикагеля, элюируя 100% этилацетатом и получая 2,2 г (78%) соединения 40 в виде белой пены. Яг=0,43 (3:1 этилацетат:гексан). Ή-ЯМР, СПС13, δ: 9,09-9,08 (м, 1Н), 8,87-8,85 (м, 1Н), 8,16-8,14 (д, 1Н), 7,52-7,48 (м, 1Н), 7,25-7,22 (д, 2Н), 7,03-7,01 (д, 2Н), 6,90-6,88 (д, 1Н), 4,78-4,70 (кв., 1Н), 4,60-4,45 (дд, 2Н), 3,88 (с, 1Н), 3,79-3,65 (м, 8Н), 3,10-3,07 (м, 2Н), 1,43 (с, 9Н), 1,18 (с, 3Н), 1,17 (с, 3Н). 13С-ЯМР, СПС13, δ: 169,9, 167,9, 154,1, 153,6, 150,2, 148,5, 136,1, 133,8, 130,6, 124,2, 121,7, 82,9, 73,7, 54,8, 53,8, 50,6, 48,3, 45,8, 37,7, 29,2, 27,9, 23,9.
Пример 31. А. Синтез трет-бутилового эфира карбаматсвязанного бис-конъюгата РЕС.
Карбаматсвязанные конъюгаты получают на основе модифицированного способа из АО 92/16555, который при этом включен в виде ссылки. Таким образом, 6 кДа РЕС-диол (500 мг, 0,083 ммоль) растворяют в минимальном количестве СН2С12 (0,1 мл). К данному раствору добавляют 2,0 М раствор фосгена в толуоле (0,6 мл, 1,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 ч и затем концентрируют в вакууме, получая 500 мг (100%) 6 кДа бис-хлорформиата РЕС в виде белого твердого вещества.
Добавляют раствор соединения 33 (211 мг, 0,33 ммоль) в СН2С12 (3 мл) (см. пример 30) к 6 кДа бисхлорформиату РЕС (500 мг, 0,08 ммоль), растворенному в СН2С12 (2 мл). Добавляют триэтиламин (11 мкл, 0,08 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь концентрируют в вакууме и остаток растворяют в МеОН (10 мл). Добавляют 2% сшитую полистиролсульфокислотную смолу (410 мг) и реакционный сосуд вращают в течение 2 ч. Смесь фильт
- 64 012433 руют и фильтрат концентрируют в вакууме, получая 500 мг (87%) белого твердого вещества. Часть материала (246 мг) очищают методом ВЭЖХ, получая 156 мг 6 кДа трет-бутилового эфира бис-конъюгата РЕО в виде белого твердого вещества. ВЭЖХ определяет конъюгат, как имеющий чистоту >99% (время удерживания = 9,655 мин).
Ή-ЯМР (СПС13) δ: 9,07 (ш.с, 2Н), 8,86-8,84 (м, 2Н), 8,18-8,15 (д, 2Н), 7,53-7,48 (м, 2Н), 7,22-7,19 (д, 4Н), 7,03-6,99 (д, 4Н), 6,86-6,83 (д, 2Н), 4,73-4,70 (м, 2Н) 4,58-4,44 (дд, 4Н), 4,27-4,24 (м, 4Н), 3,62 (ш.с, 621Н), 3,40-3,37 (м, 6Н), 3,07-3,05 (м, 4Н), 1,41 (с, 18Н), 1,20-1,16 (д, 12Н). В. Синтез карбаматсвязанного бис-конъюгата РЕО Очищенный 6 кДа трет-бутиловый эфир карбамат-связанного бисконъюгата РЕО (100 мг, 0,01 ммоль) растворяют в муравьиной кислоте (5 мл) и нагревают при 40°С в течение 24 ч. Реакционную смесь концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в воде, концентрируют в вакууме, снова растворяют в воде и лиофилизуют, получая 100 мг (100%) 6 кДа карбоновую кислоту карбаматсвязанного бис-конъюгата РЕО в виде белого порошка. ВЭЖХ определяет конъюгат, как имеющий чистоту >99% (время удерживания = 7,63 мин).
!Н-ЯМР (СБС1з) δ: 9,06 (ш.с, 2Н), 8,84-8,83 (м, 2Н), 8,17-8,14 (д, 2Н), 7,53-7,49 (м, 2Н), 7,24-7,21 (д, 4Н), 7,02-6,99 (д, 4Н), 6,94-6,92 (д, 2Н), 4,81-4,79 (м, 2Н), 4,57-4,48 (дд, 4Н), 4,28-4,25 (м, 4Н) 3,64 (ш.с, 621Н), 3,41-3,38 (м, 6Н), 3,23-3,08 (м, 4Н), 1,23-1,18 (д, 12Н).
Пример 32.
А. Синтез трет-бутилового эфира карбаматсвязанного окта-конъюгата РЕО.
Схема 17
Указанное в заголовке соединение получают, следуя методике, применяемой выше в примере 31, и используя в качестве центральной молекулы ОКТа-РЕО-производное.
- 65 012433
Пример 33
ΝΟΡΟοροτΛαη
Раствор соединения 100 (100 мг, 0,14 ммоль) и 4-нитрофенола (24 мг, 0,17 ммоль) в ТГФ (0,7 мл) охлаждают на бане со льдом. Добавляют суспензию ЕЭС (33 мг, 0,17 ммоль) в СН2С12 (0,7 мл) и перемешивают реакционную смесь при 0°С в течение 4 ч. Реакционную смесь разбавляют этилацетатом (100 мл) и промывают 0,2Ν лимонной кислотой. Органический слой промывают 10% К2СО3, насыщенным раствором соли, сушат над №28О4, фильтруют и концентрируют в вакууме, получая 90 мг (96%) соединения 101, которое сразу используют. !Н-ЯМР, СОС13, δ: 9,07 (ш.с, 1Н), 8,84-8,83 (д, 1Н), 8,28-8,25 (д, 2Н), 8,16-8,14 (д, 1Н), 8,09-8,07 (д, 1Н), 7,65-7,63 (д, 2Н), 7,51-7,47 (дд, 1Н), 7,41-7,39 (д, 2Н), 7,36-7,35 (д, 2Н), 7,12-7,07 (м, 1Н), 6,95-6,92 (д, 1Н), 5,00 (с, 2Н), 4,82-4,76 (м, 1Н), 4,62-4,45 (дд, 2Н), 3,91 (с, 1Н), 3,18-3,12 (м, 2Н), 1,44 (с, 9Н), 1,18-1,16 (д, 6Н).
- 66 012433 кДа РЕС-диамин (1 г, 0,033 ммоль) и 5 кДа Вос-ЛН-РЕС-МН8 эфир (0,67 г, 0,13 ммоль) растворяют в СН2С12 (10 мл). Добавляют диизопропилэтиламин (0,116 мл, 0,67 ммоль) и перемешивают реакционную смесь при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь концентрируют в вакууме, получая сырой продукт. Остаток очищают согласно ВЭЖХ-способу В, получая 0,46 г 40 кДа Восзащищенного РЕС-диамина в виде белого твердого вещества. ВЭЖХ-способ С определяет продукт, как имеющий чистоту >96% (время удерживания = 7,6 мин). Ή-ЯМР (СОС13) δ: 6,75 (ш.с, 2Н), 5,15 (ш.с, 2Н), 3,64 (с, 2940Н, РЕС), 3,33-3,31 (м, 10Н), 2,47-2,43 (м, 4Н), 1,44 (с, 18Н).
Ον-γ И η О Н
ΝΗϊ
Η2Ν
0 кДа РЕС-диамин кДа Вос-защищенный РЕС-диамин (0,2 г, 0,005 ммоль) растворяют в ТРА (4 мл) и перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрируют в вакууме, получая 200 мг (100%) сырого 40 кДа РЕС-диамина в виде бежевого остатка. ВЭЖХ-способ С определяет продукт, как имеющий чистоту >96% (время удерживания = 6,5 мин). 1 Н-ЯМР (СЭСТ) δ: 7,85 (ш.с, 1Н), 6,75 (ш.с, 1Н), 3,64 (с, 2432Н, РЕС), 3,34-3,32 (м, 10Н), 2, 47-2,45 (м, 4Н) .
Трет-бутиловый эфир (102) 40 кДа РЕС-диамин (0,2 г, 0,005 ммоль) растворяют в СН2С12 (4 мл). Добавляют диизопропилэтиламин (17 мкл, 0,1 ммоль), а затем соединение 101 (0,082 г, 0,1 ммоль). Добавляют еще порцию диизопропилэтиламина (17 мкл) и перемешивают реакционную смесь при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь концентрируют в вакууме, получая 300 мг (150%) сырого соединения 102 в виде белого твердого вещества. ВЭЖХ-способ С определяет продукт, как имеющий чистоту >70% (время удерживания = 8,9 мин). Сырой продукт используют как таковой.
Конъюгат 103.
Соединение 102 (0,3 г, 0,007 ммоль) растворяют в муравьиной кислоте (5 мл) и нагревают при 40°С в течение 24 ч. Реакционную смесь концентрируют в вакууме и очищают согласно ВЭЖХ-способу А, получая 0,14 г (68%) соединения 103 в виде белого твердого вещества. ВЭЖХ-способ С определяет конъюгат, как имеющий чистоту >99% (время удерживания = 7,3 мин). Ή-ЯМР (СЭСТ) δ: 9,05 (ш.с, 2Н), 8,82-8,81 (м, 2Н), 8,17-8,14 (д, 2Н), 8,05-8,04 (д, 2Н), 7,65-7,58 (м, 4Н), 7,54-7,48 (м, 2Н), 7,41-7,34 (д, 4Н), 7,10-7,05 (м, 2Н) 6,95-6,93 (д, 2Н), 4,90 (м, 2Н), 4,63-4,49 (м, 6Н), 3,64 (ш.с, 3042Н, РЕС), 3,35-3,29 (м, 6Н), 3,22 (м, 5Н), 2,45-2,41 (т, 4Н), 1,79-1,74 (м, 4Н), 1,29-1,27 (д, 12Н).
Пример 34
1*1.
1М.
- 67 012433
Синтез полимера:
4 о кДа Βοβ-ΝΗ-ΡΕΟ-ΝΗδ эфир,
Искиг
кДа Вос-защищенный РЕС-тетраамин кДа РЕС-тетраамин (0,5 г, 0,025 ммоль) и 5 кДа Вос-ΝΗ-ΡΕΟ-ΝΗδ эфир (1 г, 0,2 ммоль) растворяют в СИ2С12 (5 мл). Добавляют диизопропилэтиламин (0,087 мл, 0,5 ммоль) и перемешивают реакционную смесь при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь концентрируют в вакууме и переносят в МеОН (10 мл). Добавляют 2% сшитую полистиролсульфокислотную смолу (1,17 г) и реакционный сосуд вращают в течение 2 ч. Смесь фильтруют и концентрируют в вакууме, получая 1,4 г сырого продукта в виде бежевого твердого вещества. Остаток очищают согласно ВЭЖХ-способу В, получая 0,44 г (44%) 40 кДа Вос-защищенного РЕС-тетраамина в виде белого твердого вещества. ВЭЖХспособ С определяет продукт, как имеющий чистоту >96% (время удерживания = 8,4 мин). 'Н-ЯМР, СССС δ: 6,75 (ш.с, 1Н), 5,15 (ш.с, 1Н), 3,64 (с, 2970Н, РЕС), 3,33-3,29 (м, 15Н), 2,46-2,42 (т, 8Н), 1,79
- 68 012433
1,75 (м, 8Н), 1,44 (с, 36Н).
кДа РЕС-тетраамин.
кДа Вос-защищенный РЕС-тетраамин (0,1 г, 0,0025 ммоль) растворяют в ТРА (4 мл) и перемешивают при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Реакционную смесь концентрируют в вакууме, получая 120 мг 40 кДа РЕС-тетраамина в виде прозрачного остатка. ВЭЖХ-способ С определяет продукт, как имеющий чистоту >96% (время удерживания = 6,2 мин). Ή-ЯМР (СБС13) δ: 7,39 (ш.с, 1Н), 6,75 (ш.с, 1Н), 4,49-4,48 (м, 4Н), 3,64 (с, 3253Н, РЕС), 3,35-3,33 (м, 15Н), 2,49-2,46 (м, 8Н), 1,80-1,75 (м, 8Н).
Трет-бутиловый эфир (104).
кДа РЕС-тетраамин (0,1 г, 0,0025 ммоль) растворяют в СН2С12 (2 мл). Добавляют диизопропилэтиламин (9 мкл, 0,05 ммоль), а затем соединение 101 (82 мг, 0,1 ммоль). Добавляют еще порцию диизопропилэтиламина (9 мкл) и перемешивают реакционную смесь при комнатной температуре в течение 48 ч. Реакционную смесь концентрируют в вакууме, получая 110 мг сырого соединения 104 в виде белого твердого вещества. ВЭЖХ-способ С определяет продукт, как имеющий чистоту >80% (время удерживания = 10,9 мин).
Конъюгат 105.
Соединение 104 (0,1 г, 0,0024 ммоль) растворяют в муравьиной кислоте (5 мл) и нагревают при 40°С в течение 24 ч. Реакционную смесь концентрируют в вакууме и очищают согласно ВЭЖХ-способу А, получая 0,05 г (48%) соединения 105 в виде белого твердого вещества. ВЭЖХ-способ С определяет конъюгат, как имеющий чистоту >99% (время удерживания = 7,6 мин). Ή-ЯМР (СБС13) δ: 9,06 (ш.с, 4Н), 8,83-8,82 (м, 4Н), 8,20-8,17 (д, 4Н), 8,05-8,03 (д, 4Н), 7,63-7,61 (м, 8Н), 7,53-7,49 (м, 4Н), 7,42-7,33 (м, 8Н), 7,09-7,05 (м, 4Н), 6,70 (м, 4Н), 4,84 (м, 4Н), 4,62-4,50 (м, 12Н), 3,64 (ш.с, 2357Н, РЕС), 3,36-3,29 (м, 12Н), 2,46-2,42 (т, 8Н), 1,79-1,74 (м, 8Н), 1,30-1,25 (м, 24Н).
Пример 35
кДа РЕО-тетравммн
- 69 012433
Трет-бутиловый эфир (106) кДа РЕС-тетраамин (37 мг, 0,000925 ммоль) и ОМАР (0,5 мг, 0,0037 ммоль) растворяют в СН2С12 (0,5 мл). Добавляют триэтиламин (3 мкл, 0,019 ммоль), а затем соединение 40 (26 мг, 0,037 ммоль). Добавляют еще порцию триэтиламина (3 мкл) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь концентрируют в вакууме, получая 34 мг сырого соединения 106 в виде белого твердого вещества. ВЭЖХ-способ С определяет продукт, как имеющий чистоту >80% (время удерживания = 10,9 мин).
Конъюгат 107.
Соединение 106 (34 мг, 0,0008 ммоль) растворяют в муравьиной кислоте (4 мл) и нагревают при 40°С в течение 24 ч. Реакционную смесь концентрируют в вакууме и очищают согласно ВЭЖХ-способу А, получая 17 мг (50%) соединения 107 в виде белого твердого вещества. ВЭЖХ-способ С определяет конъюгат, как имеющий чистоту >99% (время удерживания = 7,6 мин). 1Н-НМР (СЭСЕ) δ: 9,06 (ш.с, 4Н), 8,86 (ш.с, 4Н), 8,17-8,15 (д, 4Н), 7,52 (д, 4Н), 7,26-7,23 (д, 8Н), 7,02-6,99 (д, 8Н), 6,72 (м, 4Н), 5,69 (м, 4Н), 4,80 (м, 4Н), 4,60-4,47 (дд, 8Н), 3,64 (ш.с, 1602Н, РЕС), 3,36-3,30 (дд, 8Н), 3,16 (м, 8Н), 2,46-2,42 (т, 8Н), 1,24 (ш.с, 24Н).
Пример 36.
- 70 012433
кДа РЕС-спирт с 4 ветвями (0,2 г, 0,005 ммоль) растворяют в СН2С12 (1 мл). К данному раствору добавляют 2,0М раствор фосгена в толуоле (0,15 мл, 0,3 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь концентрируют в вакууме, получая 200 мг 40 кДа РЕС-тетрахлорформиата в виде белого твердого вещества.
Трет-бутиловый эфир (108).
кДа РЕС-тетрахлорформиат (0,2 г, 0,005 ммоль) растворяют в СН2С12 (2 мл). К данному раствору добавляют соединение 33 (63 мг, 0,1 ммоль), а затем триэтиламин (3,5 мкл, 0,025 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 72 ч. Реакционную смесь концентрируют в вакууме, получая 270 мг соединения 108 в виде белого твердого вещества.
Конъюгат 109.
Соединение 108 (0,26 г, 0,006 ммоль) растворяют в муравьиной кислоте (5 мл) и нагревают при 40°С в течение 24 ч. Реакционную смесь концентрируют в вакууме и очищают согласно ВЭЖХ-способу А, получая 0,105 г (42%) соединения 109 в виде белого твердого вещества. ВЭЖХ-способ С определяет конъюгат, как имеющий чистоту >99% (время удерживания = 8,3 мин). 1Н-ЯМР (СОС13) δ: 9,06 (ш.с, 4Н), 8,85-8,84 (м, 4Н), 8,17-8,14 (д, 4Н), 7,53-7,49 (м, 4Н), 7,26-7,22 (д, 8Н), 7,01-6,98 (д, 8Н), 4,81-4,78 (м, 4Н), 4,59-4,46 (дд, 8Н), 4,28-4,35 (м, 8Н), 3,64 (ш.с, 3872Н, РЕС), 3,15-3,13 (м, 8Н), 1,24-1,19 (м, 24Н).
Пример 37
кДа РЕС-слирт с 3 ветвями,
ΝΟΡ СогрогаВоп
- 71 012433
Трет-бутиловый эфир (111).
кДа РЕО-спирт с 3 ветвями (0,25 г, 0,00625 ммоль), соединение 110 (0,04 г, 0,056 ммоль), и трифенилфосфин (0,025 г, 0,094 ммоль) сушат азеотропной перегонкой с толуолом (5 мл). Половину объема отгоняют (2,5 мл) и смесь охлаждают до комнатной температуры. Добавляют СН2С12 (0,5 мл) для получения гомогенной реакционной смеси. Добавляют по капле диэтилазодикарбоксилат (0,015 мл, 0,094 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение 48 ч. ВЭЖХ-способ С показывает полное исчезновение исходного РЕО-спирта. Реакционную смесь концентрируют в вакууме, получая трет-бутиловый эфир 111 в виде белого твердого вещества.
Конъюгат 112.
Соединение 111 (0,2 г, 0,005 ммоль) растворяют в муравьиной кислоте (3 мл) и нагревают при 40°С в течение 24 ч. Реакционную смесь концентрируют в вакууме и очищают согласно ВЭЖХ-способу А, получая 0,1 г (48%) соединения 112 в виде белого твердого вещества. ВЭЖХ-способ С определяет конъюгат, как имеющий чистоту >99% (время удерживания = 8,1 мин). 1 Н-ЯМР, СОС13, δ: 9,08 (ш.с, 3Н), 8,84 (ш.с, 3Н), 8,18-8,16 (д, 3Н), 8,02-8,00 (д, 3Н), 7,67-7,61 (м, 6Н), 7,47-7,38 (м, 9Н), 7,08-7,04 (м, 3Н), 6,91 (м, 3Н), 4,88 (м, 3Н), 4,62-4,49 (дд, 6Н), 4,13 (м, 6Н), 3,64 (ш.с, 5919Н РЕО), 3,23 (м, 6Н), 1,25-1,24 (д, 18Н).
Аналогичные способы используют для синтеза следующих конъюгатов:
Пример 38
Проводят взаимодействие 40 кДа РЕО-спирта с 4 ветвями с соединением 110 и удаляют защиту, используя способы, аналогичные способам синтеза 112, и получая конечный продукт.
Данный продукт очищают согласно ВЭЖХ-способу А. ВЭЖХ-способ С определяет конъюгат, как имеющий чистоту >95% (время удерживания = 7,5-8,1 мин). !Н-ЯМР, СОС13, δ: 9,08 (ш.с,4Н), 8,84 (ш.с, 4Н), 8,18-8,16 (д, 4Н), 8,02-8,00 (д, 4Н), 7,67-7,61 (м, 8Н), 7,47-7,38 (м, 12Н), 7,08-7,04 (м, 4Н), 6,91 (м, 4Н), 4,88 (м, 4Н), 4,62-4,49 (дд, 8Н), 4,13 (м, 8Н), 3,64 (ш.с, 10101Н РЕО), 3,23 (м, 8Н), 1,25-1,24 (д, 24Н).
Пример 39
Проводят взаимодействие 40 кДа РЕО-спирта с 3 ветвями с трет-бутиловым эфиром 114 (показан ниже) и удаляют защиту, используя способы, аналогичные синтезу 112, и получая конечный продукт. Продукт очищают согласно ВЭЖХ-способу А. ВЭЖХ-способ С определяет конъюгат, как имеющий чистоту >95% (время удерживания =7,3 мин). 1 Н-ЯМР, СОС13, δ: 8,66 (ш.с, 3Н), 8,44 (ш.с, 3Н), 8,04-8,02 (д, 3Н), 7,75-7,30 (м, 24Н), 7,10-7,06 (м, 3Н), 6,93 (с, 3Н), 5,60-5,50 (м, 3Н), 4,15 (м, 6Н), 3,66 (ш.с, 4270Н РЕО), 3,00 (м, 3Н), 3,40-3,20 (м, 6Н), 1,27 (д, 9Н).
- 72 012433
114.
«Да РЕС-спирт с 3 ветвями,
МОГ СотрогаЙоп
Трет-бутиловый эфир (117).
кДа РЕС-спирт с 3 ветвями (0,00625 ммоль), соединение 116 (0,056 ммоль) и трифенилфосфин (0,094 ммоль) сушат азеотропной перегонкой с толуолом (5 мл). Половину объема отгоняют (2,5 мл) и охлаждают смесь до комнатной температуры. Добавляют СН2С12 (0,5 мл) для гомогенности реакционной смеси. Добавляют по капле диэтилазодикарбоксилат (0,094 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение 48 ч. Реакционную смесь концентрируют в вакууме, получая трет-бутиловый эфир 111.
Конгьюгат 118.
Соединение 118 (0,005 ммоль) растворяют в муравьиной кислоте (3 мл) и нагревают при 40°С в течение 24 ч. Реакционную смесь концентрируют в вакууме и очищают согласно ВЭЖХ-способу А, получая соединение 112.
Пример 41.
Используя продукт примера 29 и РЕС-полимеры, используемые в примерах 38 и 39, получают следующие конъюгаты:
- 73 012433
Конъюгаты, представленные далее в табл. У и ΥΕ, получают согласно описанным здесь примерам и схемам.
Таблица У (в Э---(А),
Соед Νο. ί Фрагменты В Фрагменты А
1 2 гомодимер -0(0)0(014201120),,-0(0)-
2 3 гомотример рС-ТС^СН/^С(О)-4 т<о>с<о»1йн*‘Н
3 4 ГОМОтетрамер (-(ЧцосярА “''рцада.одН
4 δ гомооктамер ζ
5 2 гомодимер -ο(θ)θ(σΗ2θΗ₽θ)ρ-θ(ο)- оА
В гомотример А(а)С(оау>м,-О“| η,γ-ν
7 гомотетрамер {-(перейду, '<О¥ВДДС;-+
8 гомоокгамер Ζ
9 гомодимер -С(0)0(СНгСНг0)р-С(О)- χγ7'!
- 74 012433
где в каждой из структур сумма всех «р» составляет от 200 до 1360.
Таблица УГ
СФ—(А)(
Фрагменты В Фрагменты А
ΖΖ (общая ММ конъюгата составляет около 42000) о-ь/гЬ Ср! >
ΖΖ (общая ММ конъюгата составляет около 42000) •р φΥ
ΖΖΖ (общая мм конъюгата составляет около 41000) о+. /Υ φΥ
% (общая ММ около -42ООС η конъюгата ) кГ х-4 : оставляет
Чу кН. ' (общая ММ конъюгата с около 41500) ч ютавпяет ф¥
(общг около г я ММ к 42000) р_/ф η онъюгата о оставл; η > п ет Олт
- 75 012433
Биологические примеры
Пример А. Ш νίίτο исследования по определению эффективности испытываемых соединений: индукция эпитопа 15/7 на 1игка! ТМ (15/7 ЫВ8).
Клетки Фд-фазы 1игка! ТМ инкубируют в 96-ячеечном планшете Р1ех1р1а!е в следующих условиях: 105 клеток/100 мкл/ячейка в буфере для анализа (20 мМ Нерек, 140 мМ №С1, 1 мМ СаС12, 1 мМ МдС12 и 0,3% В8А), 10 мкг/мл 15/7 (Е1ап) и соединение при разных концентрациях. Инкубацию проводят в течение 30 мин при комнатной температуре. Затем клетки дважды промывают буфером для анализа и инкубируют с козьими РаЬ'2 к антимышиному ^ЩРс^РЕ (Iттиηο!есй са!# № РN ^0551) при 1:200 в буфере для анализа в течение 30 мин на льду в темноте. Затем клетки один раз промывают и ресуспендируют в 300 мкл холодного буфера для анализа с целью проведения РАС8-исследования (Βес!οη-^^ск^η8οη).
Конкурентное исследование многовалентных лигандов (МУСОМР)
Способы
Интегриновые рецепторы опосредуют клеточную адгезию через многовалентное взаимодействие со специфическими лигандами, причем многие интегриновые рецепторы одновременно соединяются со многими молекулами лигандов в адгезионном субстрате. Для моделирования данного физиологического взаимодействия в высокочувствительном количественном исследовании разработан образец многовалентного лиганда, который связывается, в частности, с интегрином α4 на поверхности лимфоцитов. Данный образец состоит из малой молекулы-лиганда для интегрина α4 (соединение 200, структура которого показана ниже), конъюгированной с молекулой-носителем мышиного ^С при 6-10-кратном молярном избытке (6-10 малых молекул : 1 ^С). Данное связывание ингибируется посредством 21/6 и антителом к α4. Связанный с клеточной поверхностью конъюгат можно определить при помощи флюоресцентномеченного вторичного антитела относительно мышиного ^С в РАС8-исследовании. В данном исследовании используют две разных молекулы-носителя мышиного моноклонального ^С, ТМ2а и 27/1, ни одна из которых не связывается с человеческими лимфоцитами, если не конъюгирована с лигандом α4.
200.
- 76 012433
Конъюгация малая молекула-реагент антитела
Примерно 1 мг антитела ТМ2а или 27/1 (Е1ап) инкубируют с молярным избытком соединения 200 (1:6 или 1:10) в присутствии бис(сульфосукцинимидил)суберата (Р1егсе) при 50-кратном молярном избытке в общем объеме 1,0 мл в течение 60 мин при комнатной температуре и перемешивании. Затем реакционную смесь гасят аминсодержащим буфером ТЯ18-С1 при рН 7,5 в течение 20 мин. Дважды проводят диализ продукта в течение 24 ч против 4000 объемов РВ8 при 4°С в мембранных кассетах с порогом ММ 10 кДа для удаления несвязанных малых молекул и линкерного реагента.
Исследование конкурентного связывания
Клетки 1игка! (сублиния ТМ, субклон #15, Е1ап) инкубируют при титровании различных тестовых соединений в присутствии ТМ2а- или 27/1-конъюгата, разведенного 1:100 в буфере для анализа в течение 30 мин при комнатной температуре. Затем убирают несвязанный реагент посредством нескольких стадий промывания, при этом клетки осаждают в центрифуге Весктап настольного типа при 300д в течение 5 мин, затем регсуспендируют в свежем буфере. Оставшийся связанный с антителом конъюгат детектируют, инкубируя клетки с козьими Р(аЬ)'2 к антимышиному 1дС(Рс)-фикоэритрину (Весктап Сои1!ег) в течение 30-мин при 4°С с последующим промыванием и РАС8-исследованием.
Индукция эпитопа 2С3 на клетках 8866 (2С3 лиганд-индуцированный сайт связывания)
Клетки 8866 1од-фазы инкубируют в 96-ячеечном планшете Р1ех1р1а!е в следующих условиях: 105 клеток/100 мкл/ячейка в буфере для анализа (РВ8, 1 мМ СаС12, 1 мМ МдС12, 5% РВ8), 10 мкг/мл 2С3 (Е1ап) и соединение при разных концентрациях. Инкубацию проводят в течение 30 мин при комнатной температуре. Затем клетки дважды промывают буфером для анализа и инкубируют с козьими РаЬ'2 к антимышиному 1дС(Рс)-РЕ (1ттипо1ес11 са!# № РN ΙΜ0551) при соотношении 1:200 в буфере для анализа в течение 30 мин на льду в темноте. Затем клетки один раз промывают и ресуспендируют в 300 мкл холодного буфера для анализа для проведения РАС8-исследования (ВесФп-Оюкшкоп).

Claims (41)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Конъюгат формулы I ζ£>ΗΛ>.
    I в которой В обозначает биологически совместимый полимерный фрагмент, необязательно ковалентно связанный с разветвленной центральной молекулой;
    с.| равно от приблизительно 2 до приблизительно 100;
    А в каждом случае независимо представляет собой соединение формулы II или его фармацевтически приемлемую соль, где 1 обозначает группу формулы (Ь) в которой Я выбирают из группы, включающей водород, С1-С6алкил, замещенный С1-С6алкил, арил, замещенный арил, гетероарил и замещенный гетероарил;
    Аг1 выбирают из группы, включающей арил, замещенный арил, гетероарил и замещенный гетероарил, где каждый арил, замещенный арил, гетероарил и замещенный гетероарил необязательно ковалентно связан с полимерным фрагментом, где полимерный фрагмент необязательно содержит линкер, который ковалентно связывает полимерный фрагмент с Аг1;
    X обозначает -8- или необязательно замещенный -СН2-, который необязательно ковалентно связан с полимерным фрагментом, где в каждом случае полимерный фрагмент необязательно содержит линкер, который ковалентно связывает полимерный фрагмент;
    Аг2 обозначает фенил или замещенный фенил, где Аг2 необязательно ковалентно связан с полимерным фрагментом и где полимерный фрагмент необязательно содержит линкер, который ковалентно связывает полимерный фрагмент с Аг2;
    где Я1 выбирают из группы, включающей водород и С1-С6алкил;
    т равно целому числу 0, 1 или 2;
    - 77 012433 п равно целому числу 0, 1 или 2; и Т обозначает группу формулы (б) в которой С представляет собой необязательно замещенное арильное или необязательно замещенное гетероарильное 5- или 6-членное кольцо, содержащее от 0 до 3 атомов азота, где указанный арил или гетероарил необязательно дополнительно содержит ковалентную связь с полимерным фрагментом, который необязательно содержит линкер, который ковалентно связывает полимерный фрагмент с С;
    В6 представляет собой ковалентную связь с полимерным фрагментом, который необязательно содержит линкер, который ковалентно связывает полимерный фрагмент с В6, или В6 обозначает -Н, С1-С6 алкил или замещенный С1-С6алкил;
    В55 обозначает -ОН;
    где каждый арил обозначает фенил и нафтил;
    где каждый гетероарил обозначает ароматическую группу, имеющую в кольце от 1 до 10 атомов углерода и от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из группы, включающей кислород, азот и серу;
    где каждый линкер независимо означает -С(О)-, -О-, -ΝΚ3-, -NΚ3С(О)О-, -ОС(О)NΚ3-, -ИЩЩО))-, -Ο(Θ)ΝΚ.3-, -ΝΚ.30(ΟΝΚ.3-, -С1-С6алкилен-№3С(О)О-, -С1-С6алкилен-NΚ3С(О)NΚ3-, -С1-С6алкиленОС(О)NΚ3-, -С1-С6алкилен-ИК3-, -С1-С6алкилен-О-, -С1-С6алкилен-ИК3С(О)-, -С1-С6алкилен-С(О)ЫВ3-, -ИК3С(О)О-С1-С6алкилен-, -ИК3С(О)МВ3-С1-С6алкилен-, -ОС(О)ИК3-С1-С6алкилен, -ЫВ3-С1-С6алкилен-, -О-С1-С6алкилен-, -ИК3С(О)-С1-С6алкилен-, -С(О)ИК3-С1-С6алкилен-, -С1-С6алкилен-ИК3С(О)О-С1-С6 алкилен-, -С1-С6алкилен-ИК3С(О)ИК3-С1-С6алкилен-, -С1-С6алкилен-ОС(О)ИК3-С1-С6алкилен-, -С1-С6 алкилен-ИК3-С1 -С6алкилен-, -С1 -С6алкилен-О-С1 -С6алкилен-, -С1 -С6алкилен-ИК3С(О)-С1 -С6алкилен-,
    -С(О)ИК3-С1-С6алкилен-, -ИК3С(О)О-С1-С6алкиленокси-, -ИК3С(О)ИК3-С1-С6алкиленокси-, -ОС(О)ИК3С1-С6алкиленокси, -ИК3-С1-С6алкиленокси-, -О-С1-С6алкиленокси-, -ИК3С(О)-С1-С6алкиленокси-, -С(О)ИК3-С1-С6алкиленокси- или -С1-С6алкиленокси-ИК3С(О)О-С1-С6алкиленокси-, где каждый В3 независимо выбирают из группы, состоящей из водорода, С1-С6алкила и замещенного С1-С6алкила;
    где необязательные заместители перечисленных выше групп обозначают (ί) С1-С6алкокси, ацил, ациламино, ацилокси, амино, моно- или ди(С1-С5)алкиламино, аминоацил, арилокси, циано, галоген, гидроксил, нитро, карбоксил, -С(О)О-(С1-С6)алкил, -С(О)О-арил;
    (ίί) арил, необязательно замещенный от 1 до 3 группами, которые независимо обозначают С1-С6алкокси, ацил, ациламино, ацилокси, амино, моно- или ди(С1-С5)алкламино, аминоацил, арилокси, циано, галоген, гидроксил, нитро, карбоксил, -С(О)О-(С1-С6)алкил, С3-С10циклоалкил, гетероарил, гетероциклоалкил, -С(О)О-арил или С1-С5 алкил, необязательно замещенный С1-С6алкокси, ацилом, ациламино, ацилокси, амино, моно- или ди(С1-С5)алкиламино, аминоацилом, арилокси, циано, галогеном, гидроксилом, нитро, карбоксилом, -С(О)О-(С1-С6)алкилом или -С(О)О-арилом;
    (ίίί) С3-С10циклоалкил, необязательно замещенный от 1 до 3 группами, которые независимо обозначают оксо, тиоксо, С1-С6алкокси, ацил, ациламино, ацилокси, амино, моно- или ди(С1-С5)алкиламино, аминоацил, арилокси, циано, галоген, гидроксил, нитро, карбоксил, -С(О)О-(С1-С6)алкил, С3-С10циклоалкил, гетероарил, гетероциклоалкил или -С(О)О-арил;
    (ίν) гетероарил, независимо замещенный от 1 до 3 группами, которые независимо обозначают С1 -С6 алкокси, ацил, ациламино, ацилокси, амино, моно- или ди(С1-С5)алкиламино, аминоацил, арилокси, циано, галоген, гидроксил, нитро, карбоксил, -С(О)О-(С1-С6)алкил, С3-С10 циклоалкил, гетероарил, гетероциклоалкил, -С(О)О-арил или С1-С5алкил, необязательно замещенный алкокси, ацилом, ациламино, ацилокси, амино, моно- или ди(С1-С5)алкиламино, аминоацилом, арилокси, циано, галогеном, гидроксилом, нитро, карбоксилом, -С(О)О-(С1-С6)алкилом или -С(О)О-арилом; или (ν) гетероциклоалкил, который обозначает насыщенную или ненасыщенную группу, имеющую одно кольцо или несколько конденсированных колец, от 1 до 10 атомов углерода и от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из группы, включающей азот, серу или кислород, и необязательно замещенную от 1 до 3 группами, которые независимо обозначают оксо, тиоксо, С1-С6алкокси, ацил, ациламино, ацилокси, амино, моно- или ди(С1-С5)алкиламино, аминоацил, арилокси, циано, галоген, гидроксил, нитро, карбоксил, С(О)О-(С1-С6)алкил, С3-С10 циклоалкил, гетероарил, гетероциклоалкил или -С(О)О-арил;
    при условии, что:
    А) по меньшей мере один из 1, Аг2 и Т содержит ковалентную связь с полимерным фрагментом и
    С) конъюгат формулы I имеет молекулярную массу не более приблизительно 80000.
  2. 2. Конъюгат по п.1, где только один из 1, Аг2 и Т содержит ковалентную связь с полимерным фрагментом.
  3. 3. Конъюгат по п.1, где п равно 2, В в каждом случае обозначает С1-С3 алкил и обе группы В находятся на одном атоме углерода.
  4. 4. Конъюгат по п.1, где с.| равно целому числу от 2 до 20.
    - 78 012433
  5. 5. Конъюгат по п.1, где с.| равно целому числу от 2 до 8.
  6. 6. Конъюгат по п.1, где разветвленная центральная молекула обозначает сорбит, глицерин, диглицерин, гексаглицерин, пентаэритрит, лизин, 1,2,4-бензотриол, глюкозу, этилендиаминтетрауксусную кислоту, 4-аминосалициловую кислоту, 1,3-диамино-2-гидроксипропан, глюкозамин и сиаловую кислоту.
  7. 7. Конъюгат по п.1, где В выбирают из группы где Ζ обозначает
    - 79 012433 где сумма всех р или всех п составляет от 100 до 1360.
  8. 8. Конъюгат по п.1, где А в каждом случае независимо представляет собой соединение формулы Ш или его фармацевтически приемлемую соль.
  9. 9. Конъюгат по п.8, где т равно 1, X равно Б и К в каждом случае независимо выбирают из гидроксила, С1-С6алкилокси, С1-С6алкила или ковалентной связи с полимерным фрагментом.
  10. 10. Конъюгат по п.9, где п равно 2 и К в обоих случаях представляет собой метил.
  11. 11. Конъюгат по п.8, где С обозначает пиридинил.
  12. 12. Конъюгат по п.1, где А и В такие, как показано ниже
    - 80 012433 где ΖΖ обозначает и ΖΖΖ обозначает где сумма всех η составляет от 100 до 1360.
  13. 13. Конъюгат по п.1, выбранный из группы, включающей
    - 81 012433 и их фармацевтически приемлемые соли.
  14. 14. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и терапевтически эффективное количество конъюгата по п.1 или их смеси.
  15. 15. Фармацевтическая композиция по п.14, где фармацевтически приемлемый носитель подходит для парентерального введения.
  16. 16. Фармацевтическая композиция по п.14, где фармацевтически приемлемый носитель подходит для подкожного введения.
  17. 17. Фармацевтическая композиция по п.14, где фармацевтически приемлемый носитель подходит для введения посредством вливания.
    - 82 012433
  18. 18. Фармацевтическая композиция по п.14, где фармацевтически приемлемый носитель подходит для введения посредством инъекции.
  19. 19. Фармацевтическая композиция по п.14, где фармацевтически приемлемый носитель подходит для перорального введения.
  20. 20. Фармацевтическая композиция по п.14, где фармацевтически приемлемый носитель подходит для ректального введения.
  21. 21. Фармацевтическая композиция по п.14, где фармацевтически приемлемый носитель подходит для введения с использованием пластыря.
  22. 22. Фармацевтическая композиция по п.14, где фармацевтически приемлемый носитель подходит для введения посредством ингаляции.
  23. 23. Способ лечения болезненного состояния, вызванного или обострившегося в результате, по меньшей мере частично, а4-интегрин-опосредованного связывания лейкоцитов у пациента, включающий введение эффективного количества конъюгата по п.1.
  24. 24. Способ по п.23, в котором а4-связывающее взаимодействие, которое ингибируют, осуществляется с УСАМ-1.
  25. 25. Способ по п.23, в котором а4-связывающее взаимодействие, которое ингибируют, осуществляется с фибронектином.
  26. 26. Способ по п.23, в котором а4-связывающее взаимодействие, которое ингибируют, осуществляется с МабСАМ.
  27. 27. Способ по п.23, в котором указанное болезненное состояние является аутоиммунным болезнен ным состоянием.
  28. 28. Способ по п.23, в котором лечение при помощи конъюгата по п.1 облегчает воспаление и последующее поражение ткани в результате аутоиммунной реакции.
  29. 29. Способ по п.23, в котором болезненное состояние представляет собой рассеянный склероз, менингит, энцефалит, инсульт или другие церебральные травмы.
  30. 30. Способ по п.23, в котором болезненное состояние представляет собой рассеянный склероз.
  31. 31. Способ по п.23, в котором указанное болезненное состояние выбрано из группы, включающей астму, респираторный дистресс синдром у взрослых и острое лейкоцит-опосредованное поражение легких.
  32. 32. Способ по п.31, в котором болезненное состояние представляет собой астму.
  33. 33. Способ по п.23, в котором болезненное состояние представляет собой ревматоидный артрит.
  34. 34. Способ по п.23, в котором болезненное состояние представляет собой воспалительное болезненное состояние, выбранное из группы, включающей узловую эритему, аллергический конъюнктивит, неврит зрительного нерва, увеит, аллергический ринит, анкилозирующий спондилит, псориатический артрит, васкулит, синдром Рейтера, системную красную волчанку, прогрессирующий системный склероз, полимиозит, дерматомиозит, грануломатоз Вагнера, аортит, саркоидоз, лимфоцитопению, темпоральный артериит, перикардит, миокардит, застойную сердечную недостаточность, нодозный полиартериит, синдромы гиперчувствительности, аллергию, синдром гиперэозинофилии, синдром Чог-Страусса, хроническое обструктивное легочное заболевание, гиперчувствительный пневмонит, хронический активный гепатит, интерстициальный цистит, аутоиммунную эндокринную недостаточность, билиарный первичный цирроз печени, аутоиммунную алластическую анемию, хронический персистирующий гепатит и тиреоидит, СПИД-слабоумие, диабет, болезнь Альцгеймера, слабоумие, атеросклероз, метастазы опухолей и отторжение трансплантатов.
  35. 35. Способ по п.23, в котором болезненное состояние представляет собой болезнь Шегрена.
  36. 36. Способ по п.23, в котором болезненное состояние представляет собой болезнь Крона.
  37. 37. Способ по п.23, в котором болезненное состояние представляет собой воспалительное заболева ние кишечника.
  38. 38. Способ по п.23, в котором болезненное состояние представляет собой язвенный колит.
  39. 39. Способ по п.23, в котором конъюгат включает ингибитор α4βι и α4β7.
  40. 40. Фармацевтическая композиция, содержащая конъюгат по п.1 в комбинации с ингибитором α4β7.
  41. 41. Способ лечения болезненного состояния, вызванного или обостренного, по меньшей мере частично, а4-интегрин-опосредованным связыванием лейкоцитов у пациента, причем указанный способ включает совместное введение эффективного количества конъюгата по п.1 и эффективного количества ингибитора α4β7.
EA200700212A 2004-07-08 2005-07-08 Многовалентные vla-4 антагонисты, содержащие полимерные фрагменты EA012433B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US58697504P 2004-07-08 2004-07-08
PCT/US2005/024369 WO2006010054A2 (en) 2004-07-08 2005-07-08 Multivalent vla-4 antagonists comprising polyethylene glycol moieties

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200700212A1 EA200700212A1 (ru) 2007-08-31
EA012433B1 true EA012433B1 (ru) 2009-10-30

Family

ID=35501261

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200700212A EA012433B1 (ru) 2004-07-08 2005-07-08 Многовалентные vla-4 антагонисты, содержащие полимерные фрагменты

Country Status (20)

Country Link
US (4) US7794700B2 (ru)
EP (4) EP2298356A3 (ru)
JP (1) JP2008505927A (ru)
KR (1) KR101273614B1 (ru)
CN (1) CN101035563B (ru)
AR (1) AR050425A1 (ru)
AU (1) AU2005265316B2 (ru)
BR (1) BRPI0513143A (ru)
CA (1) CA2573245C (ru)
EA (1) EA012433B1 (ru)
EC (1) ECSP077231A (ru)
HK (1) HK1111674A1 (ru)
IL (1) IL180558A0 (ru)
MA (1) MA28786B1 (ru)
MX (1) MX2007000228A (ru)
NO (1) NO20070216L (ru)
NZ (1) NZ588839A (ru)
TW (1) TWI418346B (ru)
WO (1) WO2006010054A2 (ru)
ZA (1) ZA200700238B (ru)

Families Citing this family (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL143929A0 (en) * 1999-01-22 2002-04-21 Elan Pharm Inc Acyl derivatives which treat vla-4 related disorders
US7595318B2 (en) * 2004-01-23 2009-09-29 Elan Pharmaceuticals, Inc. Polyethylene glycol conjugates of heterocycloalkyl carboxamido propanoic acids
CN101035563B (zh) * 2004-07-08 2012-03-28 艾伦药物公司 包括聚合物部分的多价vla-4拮抗剂
CN101300255A (zh) * 2005-05-20 2008-11-05 艾伦药物公司 咪唑啉酮苯丙氨酸衍生物vla-4拮抗剂
EP1901778A2 (en) * 2005-07-08 2008-03-26 Elan Pharmaceuticals Inc. Preparation of polymer conjugates of therapeutic, agricultural, and food additive compounds
CA2851103A1 (en) 2005-09-29 2007-04-12 Elan Pharmaceuticals, Inc. Carbamate compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by vla-4
WO2007041270A1 (en) * 2005-09-29 2007-04-12 Elan Pharmaceuticals, Inc. Pyrimidinyl amide compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by vla-4
WO2007060409A1 (en) * 2005-11-23 2007-05-31 Astrazeneca Ab L-alanine derivatives
CA2643838A1 (en) * 2006-02-27 2007-09-07 Elan Pharmaceuticals, Inc. Pyrimidinyl sulfonamide compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by vla-4
WO2007100763A2 (en) 2006-02-28 2007-09-07 Elan Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating inflammatory and autoimmune diseases with alpha-4 inhibitory compounds
JP2009528359A (ja) * 2006-02-28 2009-08-06 エラン ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド ナタリズマブを用いて炎症性疾患および自己免疫性疾患を治療する方法
KR20080104343A (ko) * 2006-03-03 2008-12-02 엘란 파마슈티칼스, 인크. 나탈리주마브로 염증 및 자가면역 질환을 치료하는 방법
JP2009538338A (ja) * 2006-05-22 2009-11-05 イーラン ファーマスーティカルズ、インコーポレイテッド 治療用、農業用及び食品添加用化合物のポリマー複合体の調製
JP2009539815A (ja) * 2006-06-09 2009-11-19 アストラゼネカ アクチボラグ 固形腫瘍の治療用のａ５ｂ１アンタゴニストとしてのＮ−（ベンゾイル）−Ｏ−［２−（ピリジン−２−イルアミノ）エチル］−Ｌ−チロシン誘導体と関連化合物
WO2008093065A1 (en) * 2007-01-29 2008-08-07 Astrazeneca Ab L-ALANINE DERIVATIVES AS α5βL ANTAGONISTS
US20100150915A1 (en) 2007-02-20 2010-06-17 Stewart Edward J Methods of treating multiple sclerosis by administration of alpha-fetoprotein in combination with an integrin antagonist
WO2008125811A1 (en) * 2007-04-11 2008-10-23 Astrazeneca Ab N-[HETEROARYLCARBONYL]-S-THIENYL-L-ALANINE DERIVATIVES AS α5β1 ANTAGONISTS
WO2008153967A1 (en) * 2007-06-08 2008-12-18 Contec Therapeutics, Inc. Bk1 antagonist conjugates
JP2011506322A (ja) * 2007-12-07 2011-03-03 エラン ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド 液性腫瘍を治療するための方法および組成物
EP2085407A1 (en) 2008-02-04 2009-08-05 Sahltech I Göteborg AB Treatment of idiopathic thrombocytopenic purpura
CN102459179A (zh) * 2009-04-27 2012-05-16 艾伦药物公司 α-4整联蛋白的吡啶酮拮抗剂
EP2467159A1 (en) * 2009-08-20 2012-06-27 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Vla-4 as a biomarker for prognosis and target for therapy in duchenne muscular dystrophy
US11287423B2 (en) 2010-01-11 2022-03-29 Biogen Ma Inc. Assay for JC virus antibodies
HUE060312T2 (hu) 2010-01-11 2023-02-28 Biogen Ma Inc A JC vírus antitestek vizsgálata
EP2525831B1 (en) * 2010-01-22 2019-05-15 Ascendis Pharma A/S Carrier-linked carbamate prodrug linkers
CA2797974A1 (en) 2010-04-30 2011-11-03 Elan Pharmaceuticals, Inc. Selective integrin inhibitors
EP2739690B1 (en) 2011-08-03 2016-08-10 Henkel IP & Holding GmbH Electrically conductive structural adhesive
CA2902624C (en) 2013-02-28 2021-05-18 Takeda Pharmaceutical Company Limited Method for producing sulfonyl chloride compound
EP3004334A4 (en) 2013-05-28 2016-12-21 Biogen Ma Inc METHODS OF EVALUATION RISK OF DEVELOPMENT OF PML
WO2015003156A1 (en) * 2013-07-05 2015-01-08 Biogen Idec Ma Inc. Compositions and methods for treatment of stroke
US20150250883A1 (en) * 2014-02-12 2015-09-10 7 Hills Pharma, Llc Compositions and methods to improve the homing and grafting of hematopoetic stem cells
US20200255530A1 (en) * 2015-07-23 2020-08-13 Biogen Ma Inc. Compositions and methods for treatment of stroke and other cns disorders
US11174256B2 (en) 2018-10-30 2021-11-16 Gilead Sciences, Inc. Imidazopyridine derivatives
CR20210213A (es) 2018-10-30 2021-06-24 Gilead Sciences Inc Derivados de quinolina como inhibidores de la integrina alfa4beta7
AU2019373245C1 (en) 2018-10-30 2022-10-27 Gilead Sciences, Inc. Compounds for inhibition of alpha 4β7 integrin
JP7189368B2 (ja) 2018-10-30 2022-12-13 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド アルファ４ベータ７インテグリンの阻害のための化合物
AU2020329207B2 (en) 2019-08-14 2024-02-29 Gilead Sciences, Inc. Compounds for inhibition of alpha 4 beta 7 integrin

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001054690A1 (en) * 2000-01-28 2001-08-02 Biogen, Inc. Pharmaceutical compositions containing anti-beta 1 integrin compounds and uses
WO2003084984A1 (en) * 2002-04-08 2003-10-16 J. Uriach Y Compania S.A. Heterocyclic amides with alpha-4 integrin antagonist activity
WO2004066931A2 (en) * 2003-01-24 2004-08-12 Elan Pharmaceuticals Inc. Composition for and treatment of demyelinating diseases and paralysis by administration of remyelinating agents
WO2005000246A2 (en) * 2003-06-25 2005-01-06 Elan Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating rheumatoid arthritis
WO2005070921A1 (en) * 2004-01-23 2005-08-04 Elan Pharmaceuticals, Inc. Polyethylene glycol conjugates of heterocycloalkyl carboxamido propanoic acids
WO2005111020A2 (en) * 2004-04-30 2005-11-24 Elan Pharmaceuticals, Inc. Pyrimidine hydantoin analogues which inhibit leukocyte adhesion mediated by vla-4

Family Cites Families (31)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4235871A (en) 1978-02-24 1980-11-25 Papahadjopoulos Demetrios P Method of encapsulating biologically active materials in lipid vesicles
US4501728A (en) 1983-01-06 1985-02-26 Technology Unlimited, Inc. Masking of liposomes from RES recognition
US5023252A (en) 1985-12-04 1991-06-11 Conrex Pharmaceutical Corporation Transdermal and trans-membrane delivery of drugs
US4837028A (en) 1986-12-24 1989-06-06 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
US5011472A (en) 1988-09-06 1991-04-30 Brown University Research Foundation Implantable delivery system for biological factors
US5177059A (en) 1989-11-15 1993-01-05 Sandoz Ltd. Polymyxin B conjugates
DE4107857A1 (de) 1991-03-12 1992-09-17 Thomae Gmbh Dr K Cyclische harnstoffderivate, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und verfahren zu ihrer herstellung
EP0576589A4 (en) 1991-03-18 1994-07-27 Enzon Inc Hydrazine containing conjugates of polypeptides and glycopolypeptides with polymers
US5880131A (en) 1993-10-20 1999-03-09 Enzon, Inc. High molecular weight polymer-based prodrugs
US5824701A (en) 1993-10-20 1998-10-20 Enzon, Inc. Taxane-based prodrugs
EP1001764A4 (en) * 1997-05-29 2005-08-24 Merck & Co Inc Heterocyclic amides as cell adhesion inhibitors
AU726585B2 (en) 1997-05-29 2000-11-09 Merck & Co., Inc. Biarylalkanoic acids as cell adhesion inhibitors
AR016133A1 (es) 1997-07-31 2001-06-20 Wyeth Corp Compuesto de carbamiloxi que inhiben la adhesion de leucocitos mediada por vla-4, compuestos que son prodrogas de dichos compuestos, composicionfarmaceutica, metodo para fijar vla-4 a una muestra biologica, metodo para el tratamiento de una condicion inflamatoria
US6489300B1 (en) * 1997-07-31 2002-12-03 Eugene D. Thorsett Carbamyloxy compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4
US6939855B2 (en) * 1997-07-31 2005-09-06 Elan Pharmaceuticals, Inc. Anti-inflammatory compositions and method
CA2323048C (en) 1998-03-12 2006-10-10 Shearwater Polymers, Inc. Poly(ethylene glycol) derivatives with proximal reactive groups
GB9821061D0 (en) * 1998-09-28 1998-11-18 Celltech Therapeutics Ltd Chemical compounds
IL143929A0 (en) * 1999-01-22 2002-04-21 Elan Pharm Inc Acyl derivatives which treat vla-4 related disorders
AU2623900A (en) 1999-01-22 2000-08-07 American Home Products Corporation Compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by vla-4
US6436904B1 (en) 1999-01-25 2002-08-20 Elan Pharmaceuticals, Inc. Compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4
JP2003506491A (ja) * 1999-08-13 2003-02-18 バイオジェン インコーポレイテッド 細胞接着インヒビター
WO2002008202A2 (en) 2000-07-21 2002-01-31 Elan Pharmaceuticals, Inc. Alpha amino acid derivatives--inhibitors of leukocyte adhesion mediated by vla-4
US20040043030A1 (en) 2001-07-31 2004-03-04 Immunomedics, Inc. Polymeric delivery systems
US6716821B2 (en) 2001-12-21 2004-04-06 Immunogen Inc. Cytotoxic agents bearing a reactive polyethylene glycol moiety, cytotoxic conjugates comprising polyethylene glycol linking groups, and methods of making and using the same
TWI281470B (en) * 2002-05-24 2007-05-21 Elan Pharm Inc Heterocyclic compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by alpha4 integrins
TW200307671A (en) * 2002-05-24 2003-12-16 Elan Pharm Inc Heteroaryl compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by α 4 integrins
JP2007531735A (ja) 2004-04-01 2007-11-08 エラン ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド ステロイド節約剤および該節約剤を使用する方法
CN101035563B (zh) 2004-07-08 2012-03-28 艾伦药物公司 包括聚合物部分的多价vla-4拮抗剂
CN101300255A (zh) * 2005-05-20 2008-11-05 艾伦药物公司 咪唑啉酮苯丙氨酸衍生物vla-4拮抗剂
EP1901778A2 (en) * 2005-07-08 2008-03-26 Elan Pharmaceuticals Inc. Preparation of polymer conjugates of therapeutic, agricultural, and food additive compounds
JP2011506322A (ja) 2007-12-07 2011-03-03 エラン ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド 液性腫瘍を治療するための方法および組成物

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001054690A1 (en) * 2000-01-28 2001-08-02 Biogen, Inc. Pharmaceutical compositions containing anti-beta 1 integrin compounds and uses
WO2003084984A1 (en) * 2002-04-08 2003-10-16 J. Uriach Y Compania S.A. Heterocyclic amides with alpha-4 integrin antagonist activity
WO2004066931A2 (en) * 2003-01-24 2004-08-12 Elan Pharmaceuticals Inc. Composition for and treatment of demyelinating diseases and paralysis by administration of remyelinating agents
WO2005000246A2 (en) * 2003-06-25 2005-01-06 Elan Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating rheumatoid arthritis
WO2005070921A1 (en) * 2004-01-23 2005-08-04 Elan Pharmaceuticals, Inc. Polyethylene glycol conjugates of heterocycloalkyl carboxamido propanoic acids
WO2005111020A2 (en) * 2004-04-30 2005-11-24 Elan Pharmaceuticals, Inc. Pyrimidine hydantoin analogues which inhibit leukocyte adhesion mediated by vla-4

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHEN L.L. ET AL.: "Evidence that ligand and metal ion binding to integrin a4b1 are regulated through a coupled equilibrium" JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, vol. 276, 2001, pages 36520-36529, XP008067974 page 36527, column 2 - page 36528; figure 1 *
HAAG R. ET AL.: "POLYMER THERAPEUTICS: CONCEPTS AND APPLICATIONS" ANGEWANDTE CHEMIE. INTERNATIONAL EDITION, VCH VERLAG, WEINHEIM, DE, vol. 45, no. 8, 13 February 2006 (2006-02-13), pages 1198-1215, XP009066269 ISSN: 0570-0833 the whole document figures 5,6 *
HURYN D.M. ET AL.: "Synthesis, characterization and evaluation of pro-drugs of VLA-4 antagonists" April 2004 (2004-04), BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS, OXFORD, GB, PAGE(S) 1651-1654, XP002327663 ISSN: 0960-894X abstract page 1653, column 1, paragraph 2; figure 1 *
JONES D.S. ET AL.: "Multivalent poly(ethylene glycol)-containing conjugates for in vivo antibody suppression" BIOCONJUGATE CHEMISTRY, ACS, WASHINGTON, DC, US, vol. 14, no. 6, November 2003 (2003-11), pages 1067-1076, XP002302390 ISSN: 1043-1802 abstract; figure 1 *
PEPINSKY R.B. ET AL.: "Design, synthesis and analysis of a polyethylene glycol-modified (PEGylated) small molecule inhibitor of integrin a4bl with improved pharmaceutical properties" JOURNAL OF PHARMOCOLOGY AND EXPERIMENTAL THERAPEUTICS, vol. 312, no. 2, 2005, pages 742-750, XP008067961 see discussion page 744, column 1; figures 1,2; tables 1,2 *

Also Published As

Publication number Publication date
EP2258399A2 (en) 2010-12-08
EP2258400A3 (en) 2011-08-10
WO2006010054A3 (en) 2006-12-28
ECSP077231A (es) 2007-03-29
NZ588839A (en) 2012-09-28
MX2007000228A (es) 2007-03-30
JP2008505927A (ja) 2008-02-28
TWI418346B (zh) 2013-12-11
ZA200700238B (en) 2008-07-30
EP2258399A3 (en) 2011-08-10
WO2006010054A2 (en) 2006-01-26
CN101035563A (zh) 2007-09-12
EP2298356A2 (en) 2011-03-23
EP1765412A2 (en) 2007-03-28
US20130338164A1 (en) 2013-12-19
KR20070051267A (ko) 2007-05-17
EP2298356A3 (en) 2011-08-10
MA28786B1 (fr) 2007-08-01
US20060013799A1 (en) 2006-01-19
TW200603788A (en) 2006-02-01
US20120329807A1 (en) 2012-12-27
AU2005265316A1 (en) 2006-01-26
CA2573245A1 (en) 2006-01-26
US7794700B2 (en) 2010-09-14
EA200700212A1 (ru) 2007-08-31
BRPI0513143A (pt) 2008-04-29
HK1111674A1 (en) 2008-08-15
AR050425A1 (es) 2006-10-25
KR101273614B1 (ko) 2013-06-12
CN101035563B (zh) 2012-03-28
EP2258400A2 (en) 2010-12-08
NO20070216L (no) 2007-04-04
US20110002876A1 (en) 2011-01-06
CA2573245C (en) 2013-10-01
AU2005265316B2 (en) 2012-02-02
US8263063B2 (en) 2012-09-11
IL180558A0 (en) 2007-06-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA012433B1 (ru) Многовалентные vla-4 антагонисты, содержащие полимерные фрагменты
US7595318B2 (en) Polyethylene glycol conjugates of heterocycloalkyl carboxamido propanoic acids
US8269009B2 (en) Methods and compositions for treating liquid tumors
EA015528B1 (ru) Получение полимерных конъюгатов соединений, применяемых в терапии, сельском хозяйстве и в качестве пищевых добавок
US8569426B2 (en) Preparation of polymer conjugates of therapeutic, agricultural, and food additive compounds

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU