KR960016339B1 - 응고매개변수 측정을 위한 시험담체 및 방법 - Google Patents

응고매개변수 측정을 위한 시험담체 및 방법 Download PDF

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Abstract

요약없음.

Description

응고매개변수 측정을 위한 시험담체 및 방법
제1도는 본 발명에 따른 시험담체의 개략도.
제2도는 제1도에 따라 시험담체를 사용하여 제조되어진 곡선.
* 도면의 주요부분에 대한 부호의 설명
1 : 시험담체,2 : 담체층,
3 : 용융접착 스트립,4 : 유리섬유층,
3a : 나일론 메쉬(covering mesh),5 : 산화제층,
6 : 반응층,7 : 다른 용융접착 스트립.
본 발명은 소위 응고매개변수의 측정을 위한 시험담체, 즉 응고과정에 영향을 주는 성분에 대하여 혈액분석을 하기 위한 시험담체에 관한 것이다.
체액성분, 특히 혈액성분의 정량분석 및 정성분석을 하기 위하여, 최근에는 소위 담체가 결합된 시험기구의 사용이 증가되고 있다. 이 시험기구에서, 샘플과 접촉되는 고체 시험담체의 적절한 막에 시약을 끼워넣는다. 샘플과 시약의 반응은 육안으로 볼 수 있거나 또는 대부분 반사굴절계 같은 장치를 사용하여 볼 수 있는 검출신호, 특히 색변화로 알 수 있다.
일반적으로 시험담체는 합성수지물질로 만들어진 세로의 담체층으로 구성되는 시험 스트립으로서 제조되며, 그 위에 시험부분이 놓이게 된다. 그러나, 시험담체는 또한 정사각형 혈소판 또는 구형 혈소판의 형태로 공지되어 있다.
유럽 특허공보 제0 045 476호는 혈액으로부터 혈장 또는 혈청을 분리하기 위한 방법 및 시약을 설명하였으며, 특히 간단한 방법으로 혈액성분 물질을 측정할 수 있도록 체액성분(소위 매개변수)의 진단적 측정을 위한 시험담체를 설명하였다. 본 발명의 명세서에 따르면, 적혈구가 들어가지 않는 2.5μm 이하의 섬유 직경을 갖는 유리섬유막을 통하여 흐르는 혈액에서, 혈장을 적혈구로부터 분리할 수 있다. 혈액은 모세관 힘에 의해서 전달되는 혈장으로부터 다른 영역의 장치까지 구형 유리섬유털의 한쪽 끝에 적용시키는 것이 바람직하다. 혈장을 얻은 후 혈장이 채워진 털부분은 매트릭스가 레미션 측정에 의해 검출될 매개변수를 위하여 실시되는 필요한 시약을 함유한 매개변수(종이, 흡착필름 등)에 대해서 압착된다.
이같이 간단한 혈장획득 및 혈장전달계는, 지혈적인 문제의 검사범위내에서 측정하고자 하는 매개변수를 제외하고는, 임상화학적으로 중요한 모든 매개변수에 대해 사용될 수 있다. 원래, 응고분석은 합성수지 용기 또는 비처리된 유리가 혈액 및 혈장응고에 영향을 주기 때문에 실리콘 수지를 피복시켜 불활성화시킨 유리용기에서 수행되어야 한다는 것은 공지된 사실이다. 따라서, 유리는 활성화에 의해서 혈장의 퀴크 원페이즈(Quick one-phase) 응고 시간을 단축시키고, 혈장의 응고인자는 정상범위내에 있다. 낮은 퍼센트의 혈장의 경우, 퀴크 원페이즈 응고시간은 응고인자의 불활성화로 인해서 연장된다. 특히, 유리는 제V인자 및 제Ⅱa인자를 불활성화시킨다. 이러한 불활성화에 의하여 연장된 응고시간으로 인해서, 개개의 응고인자의 비율이 바뀌기 때문에 진단의 효용성이 상실된다. 퍼센트로 나타낸 퀴크값(Quick value)은 피브리노오겐 농도 및 제Ⅱ,Ⅴ,Ⅶ 및 Ⅹ인자의 활성을 포함한다. 건강한 사람의 혈장을 100% 혈장이라고 가정하고 생리 식염수로 희석하여 적절한 낮은 퍼센트의 혈장을 제조하였다. 연속된 희석으로, 환자의 혈장의 퀴크치를 결정하는 것을 기초로 하여 참조곡선을 도시하였다.
그러나, 부분적인 트롬보플라스틴시간(PTT)는 또한 제XII인자와 XI인자의 불활성화에 영향을 주지 않는다. 안티트롬빈 Ⅲ과 헤파린의 검출은 유리에 의한 트롬빈의 불활성화로 인해서 상당히 방해를 받는다.
그러므로, 본 발명의 목적은 응고에 중립이어서 지혈검사에 사용될 수 있고 시험담체에서 분리 및 전달계로서 특히 유용한 유리섬유층을 제공하는 것이다. 이러한 유리섬유층은 분리능 및 전달 특성을 유지하는 것이 바람직하다. 본 발명에 따른면, 응고매개변수 측정을 위한 시험담체가 제공되며, 이러한 시험담체는 폴리비닐 알코올 또는 폴리비닐 알코올/비닐 아세테이트로 피복된 유리섬유가 포함된 시험층을 포함하고 있다.
또한, 본 발명은 유리섬유층의 제조방법은, 특히 폴리비닐 알코올이 첨가된 과량의 물에 유리섬유가 슬러리화 되어 종이생산에 통상적으로 사용되는 방법으로 층을 형성시켜 증가된 온도에서 건조시킨 시험담체를 위한 유리섬유층의 제조방법을 제공한다.
더욱이, 본 발명은 또한 혈액의 응고매개변수 측정을 위한 방법을 제공하며, 이러한 방법에는 폴리비닐 알코올 또는 폴리비닐 알코올/비닐 아세테이트로 피복된 유리섬유가 함유된 유리섬유층을 통하여 혈액이 빠져나가는 단계가 포함된다.
폴리비닐 알코올을 첨가하여 유리표면을 변형시켜서, 예를 들면 이러한 유리표면은 유리섬유털의 흡착성을 위해서 필요한 친수성을 가지지만 응고인자에 영향을 주지 않았다. 즉, 응고에 중립이 되게 하였다. 유리는 실리콘 수지유상액으로 실리콘화시켜서 표면을 피복시킬 수 있으며, 그로 인하여 응고인자에는 영향을 주지 않으나 특별한 유리섬유의 경우 실리콘화는 적셔짐이 생기지 않게 하는 표면의 높은 정도의 소수성을 생기게 하여, 섬유가 완전하게 혈장전달능 및 적혈구 분리능을 상실한다는 것은 특히 놀랄만하다.
폴리비닐 알코올은 폴리비닐 아세테이트를 가수분해시켜 제조하며, 이 경우에, 원하는 성질의 생성물에 따라서 완전한 가수분해 또는 부분적인 가수분해가 수행된다. 본 발명에 따른 사용의 경우, 완전한 가수분해 생성물 뿐만 아니라 부분적으로 가수분해된 생성물을 사용할 수 있다. 공업적으로 사용되는 많은 양의 폴리비닐 알코올은 보통 약 10,000 내지 100,000의 평균 분자량을 가지며, 일부 특별한 경우에는 이보다 더 높은 분자량을 가질 수도 있고, 아세틸기의 잔류함량이 특히 다르다. 약 5 내지 15%의 아세틸기를 포함하며, 특히 약 10%의 아세틸기를 함유한 적은 분자량 화합물은 물에 가장 쉽게 용해되는 반면, 고분자량의 화합물 또는 높은 함량의 아세틸기를 갖는 생성물은 이보다 물에 덜 용해된다. 또한 폴리비닐 알코올 사슬들간의 상호반응은 용해도에 영향을 준다. 중합체 사슬의 부분적인 평행배향 때문에, 어떤 영역에서 “결정 영역”이 생긴다. 배향이 되는 경향이 커지면 커질수록 규칙적인 사슬이 구성되며, 가장 강하게 배향되어지는 아세틸기의 비율이 낮아진다. 그러므로, 97% 내지 100%의 가수분해가 이루어지는 경우, 즉 0% 내지 3%의 아세틸화가 이루어지는 경우에, “결정성”은 특히 강하게 증가되는 반면 찬물에 대한 용해도는 극히 감소된다.
더욱이, 물에 대한 용해도는 알데히드로 처리한 후(아세틸화)나 또는 알코올기의 다른 화학적 변화에 의해 감소시킬 수 있다. 본 발명에 따르면 찬물에 대하여는 낮은 용해도를 가지나 따뜻한 물에 대하여는 좋은 용해도를 갖는 폴리비닐 알코올이 특히 유용하다. 생성물은 20℃에서는 천천히 용해되거나 또는 전혀 용해되지 않으며 50℃ 내지 100℃의 온도, 특히 60℃ 이상의 온도에서는 물에 쉽게 용해되어진다.
본 발명에 따른 유리섬유털은 적절한 유리섬유털을 물중의 폴리비닐 알코올 용액으로 처리하거나 또는 적절한 유기용매로 처리한 다음, 바람직하게는 60℃ 이상의 온도에서 건조시키고, 보다 바람직하게는 90℃ 내지 140℃의 온도에서 건조시켜 제조할 수 있거나, 또는 유리섬유털의 제조과정에서 폴리비닐 알코올을 첨가하여 제조할 수 있다. 공지된 바와 같이, 유리섬유털은 과량의 중에서 0.1 내지 20μm의 평균직경 및 0.1mm 내지 5mm의 길이를 갖는 건조 및 펠트처리된 유리섬유를 현탁시켜서 제조되고 분할되며, 종래의 제지기계를 이용하여 제지과정에서 통상적으로 사용되는 방법과 유사하게 이 “펄프”가 얇은 판으로 형성되어 건조된다. 펄프에 첨가된 폴리비닐 알코올분말 또는 섬유는 유리섬유의 슬러리화 중에 전체적으로 균일하게 분포되며, 유리섬유털의 연속 생산에서 어느 정도까지 용해되거나 용융되고, 털을 건조시킨 후에 균일한 피복이 유리섬유 위에 형성된다. 이같은 피복은 응고에 중립성을 가지는 유리섬유가 되지만, 이러한 유리섬유는 다른 한편으로는 털에 의해서 물 또는 수용액의 전달과 흡착성이 부여되지 않는 정도까지 친수성을 가진다.
실란화한 유리섬유를 펄프에 첨가하는 것은 특히 바람직하다. 이같은 류의 적절한 섬유는 독일연방공화국 특허공보 제3523969호에서 제시하였으며, 본 특허 명세서의 완전한 내용은 이것을 참조로 하여 만들었다. 이러한 것을은 본 발명에 따라서 폴리비닐 알코올이나 폴리비닐 알코올/비닐 아세테이트로 추가로 피복되었다. 그로 인하여 유리섬유는 특별한 정도까지 응고에 중립성이 있으며, 특히 우수한 강도를 가지는 특징을 보인다.
본 발명에 따라 적용시킬때 폴리비닐 알코올은 유리섬유를 비교적 균일하게 피복시키기 때문에, 특히 약 0.5% 내지 20%, 바람직하게는 1% 내지 5%의 폴리비닐 알코올이 응고에 중립성을 갖는 섬유를 만들기에 충분하다. 20% 이상의 비율은 바람직한 효과를 얻기에 해롭지 않으나 경제적인 이유로 사용되지 않는다.
유럽 특허공보 제 0 045 476호에 따르면, 혈청 및 혈장전달 뿐만 아니라 혈장으로부터 적혈구를 분리하기 위한 유리섬유털이 사용되는 경우에 한하여서, 유리섬유는 평균직경이 0.2μm 내지 5μm이며, 바람직하게는 0.5μm 내지 2.5μm이고, 털은 0.1g/cm3내지 0.5g/cm3의 밀도를 가져야 한다. 그러나, 응고에 중립성 및 전달능에 관한 문제에 한하여서는, 그보다 큰 두께의 유리섬유 및 다른 밀도의 털이 또한 사용될 수 있다. 그같은 털의 경우, 털의 폴리비닐 알코올 함량을 또한 20% 이상의 함량일 것이다.
본 발명에 따른 유리섬유는 종래의 방법에 의해서 제시한 바와 같은 털로 전환되며, 그중에서도 다음 실시예가 응고매개변수 측정을 위한 시약으로서 사용될 수 있다. 그러나, 유럽 특허공보 제0 045 476호에 따라 얻은 혈장의 경우 짧은 칼럼이 사용될 수 있다. 그 다음에 혈장은 응고시험에서 종래의 방법으로 사용될 수 있다.
응고매개변수의 측정을 위한 본 발명에 따른 또다른 임의의 시험담체는 앞서 만들어진 유럽 특허공보 제0 045 476호에서 제시한 시약과 유사하게 제조할 수 있다. 본 발명에 따른 유리섬유층 뿐만 아니라 혈장과 접촉하는 모든 부분은 응고에 중립인 물질로 이루어져야 하며, 그같은 경우, 특히 공지된 적절한 합성수지가 사용되어진다.
본 발명은 첨부된 도면 및 몇몇 실시예를 참조로 하여 다음과 같이 보다 자세하게 설명된다.
제1도에 도시된 시험담체(1)는 종래의 담체 스트립의 주형태를 가진다. 용융접착 스트립(3), 유리섬유층(4) 및, 유리섬유층(4)과 부분적으로 겹치는 피복용 메쉬(3a)가 합성수지막, 예를 들면 폴리스티렌의 담체층(2)상에 고정되어 있다.
한편, 유리섬유층(4)은 산화제층(5) 및 반응층(6)과 중첩되며, 산화제층(5) 및 반응층(6)은 담체층(2)에 부착된 또 하나의 용융접착 스트립(7)에 플랩모양으로(flap-like) 고정된다.
분석을 수행하기 위해서, 혈액 한방울이 피복용 메쉬(3a)에 가해지고, 유리섬유층(4)을 통해서 산화제층(5) 및 반응층(6)의 구역으로 이동된다. 이로 인해서 유럽 특허출원 제0 045 476호에 설명된 방법으로 혈장의 분리가 일어난다. 층(5) 및 (6)에 함유된 시약과 반응을 개시하기 위해서, 샘플(액체)이 층(5) 및 (6)층으로 침투하여 상응하는 반응이 일어나도록 층(5) 및 (6)을 아래방향으로 누른다.
이러한 종류의 응고시험의 경우에 일어나는 화학반응에 대한 보다 상세한 설명은 유럽 특허출원 제0 182 373호와 다음의 실시예에서 찾을 수 있을 것이다.
실시예 1
본 발명에 따른 유리섬유털의 제법
1kg의 유리섬유를 회전날에서 섬유를 분리하기 위하여 약산성인 pH3으로 조절된 물 420리터에 슬러리화한다. 제지기계(tilting sieve machine Void, Heidenheim, Germany)의 저장 콘테이너에서, 0.3%까지 희석을 실시하여 이 희석액에 50g의 폴리비닐 알코올 섬유(Kuralon VPB 105-2, 쿠라레이 제품)를 넣고 혼합한다. 제지기계의 원료상자에서, 현탁액을 순환시켜 물로 0.05%까지 희석하고, 이것을 제지기계의 체에 적용시키면 판형성이 나타난다. 그리고나서 판을 110℃ 내지 120℃에서 건조 실린더상에서 건조시킨다. 기계의 조절에 따라서, 20 내지 100g/m3의 단위 표면적당 중량을 가지며 0.2 내지 1mm의 두께를 지닌 털을 얻는다.
실시예 2
응고 중립성을 위한 유리섬유털의 시험
실시예 1에 따라 제조된 유리섬유털로부터 각각 40mg의 샘플을 건강한 사람 및 항응고제를 처리한 환자로부터 유래된 300μl의 혈장과 섞은 다음, 37℃에서 1분 동안 반응시킨다. 그 다음, 원심분리하여 혈장을 분리시킨다. 혈장은 퀴크 원페이즈 응고시간을 위하여 유리섬유털로 처리전후 검사한다. 응고시험은 다음과 같이 사용되었다. 염화칼슘과 트롬보플라스틴으로부터의 응고기작을 출발로 하여 샘플을 넣어 피브린실이 형성될 때까지의 시간을 측정하였다. 또한, 퀴크 시간의 결정을 위하여 광도측정 시험법을 사용할 수도 있다(참고 : U. Becker et al., Neue Aspekte der Gerinnungsdiagnostik, pub. F.K. Schattauer Verlag, Stuttgart and New York, 1984, pp. 17-30).
실시예 3
퀴크 원-페이즈 응고시간의 결정
a) 시험담체의 제조
첨부한 도면 제1도에 따라서 시험담체가 제조되었다. 유리섬유층(4)는 50 내지 60g/m2의 단위 표면적당 중량을 가지며 0.5mm의 두께를 가진 털이다. 시험담체의 종방향 길이는 15mm이다. 카바 메쉬(3a)는 140μm의 실두께 및 250μm의 메쉬 크기를 가진다.
반응층(6)은 시약필름이 110μm 두께의 젖은 필름상에 격자를 이룬 200μm 두께의 폴리카아본네이트 필름으로 이루어져 있으며, 45℃에서 이 반응층(6)을 건조시켰다. 필름형성은 다음과 같이 제조된다.
물 1l에 10g의 선형 교차결합 폴리아크릴아미드(Rohagit 700, 룀사 제품, 담스타트, 독일연방공화국), 100mmole의 4-(2-히드록시에틸)-1-피퍼라진-에탄술폰산, 1mmole의 Tos-Gly-Pro-Arg-p-페닐렌디아민, 15밀리몰의 N-(4-플루오로페닐)-N-메틸아미노메탄-포스폰산 및 4.9g의 토끼뇌의 트롬보플라스틴을 용해시킨다. 이 용액을 수산화나트륨 용액으로 pH 7.5로 조절한다.
산화제층(5)은 적절하게 포화시킨 나이론 메쉬(필라멘트 두께 약 40μm, 메쉬 크기 약 60μm, 주리허르 보이털투흐파브릭사 제품, 스위스)로 구성되어 있다. 그 메쉬는 50밀리몰/리터의 헥사시아노 훼레이트(Ⅲ)칼륨과 50밀리몰/리터의 염화칼슘 용액에 포화시켰다.
b) 본 발명에 따른 시험담체와 보통의 유리털을 사용한 시험담체의 비교
나일론 메쉬(3a)상에 유리섬유층(4)을 고정시키고, 각 경우에 생리 식염수로, 100%, 50%, 33%, 25% 및 12.5%로 연속 희석시킨 시트레이트 혈장 35μl를 피펫하였다. 시험담체를 37℃로 데우고 레미션 광도계를 사용하여 시간에 따른 색형성을 기록하였다. 비처리된 유리섬유털에 의해서 얻은 것보다 본 발명에 따른 유리섬유털에 의해서 실제로 높은 신호를 얻었다(참고 : 동봉 도면 제2도). 퀴크시간은 10% 감소되는 시간을 채택하였다. 그 차이는 다음 표에 수치로 나타내었다.
[표]
Figure kpo00001

Claims (9)

  1. 폴리비닐 알코올 또는 폴리비닐 알코올/비닐 아세테이트로 피복된 유리섬유를 구비한 유리섬유층(4)을 포함하는 것을 특징으로 하는 혈액의 응고매개변수 측정을 위한 시험담체.
  2. 제1항에 있어서, 상기 유리섬유층(4)에 0.5% 내지 20%의 폴리비닐 알코올이 함유되어 있는 것을 특징으로 하는 시험담체.
  3. 제2항에 있어서, 상기 유리섬유층(4)에 1% 내지 5%의 폴리비닐 알코올이 함유되어 있는 것을 특징으로 하는 시험담체.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 유리섬유는 0.2μm 내지 2.5μm의 평균직경을 가지고 있고, 상기 유리섬유층(4)은 0.1g/cm3내지 0.5g/cm3의 밀도를 가지는 것을 특징으로 하는 시험담체.
  5. 제4항에 있어서, 상기 유리섬유는 0.2μm 내지 2.5μm의 평균직경을 가지는 것을 특징으로 하는 시험담체.
  6. 제1항 내지 제3항중 어느 한항에 있어서, 상기 유리섬유는 실란화되어 있는 것을 특징으로 하는 시험담체.
  7. 제1항 내지 제3항중 어느 한항에 있어서, 상기 유리섬유층(4)은 털로서 형성되어 있는 것을 특징으로 하는 시험담체.
  8. 폴리비닐 알코올 또는 폴리비닐 알코올/비닐 아세테이트로 피복된 평균직경이 0.2 내지 5μm인 유리섬유를 포함하고 있고, 0.1 내지 0.5g/cm3의 밀도를 가진 유리섬유층을 통하여 혈액이 통과되는 단계와, 적혈구가 혈장으로부터 분리되는 단계와, 그리고 분리된 상기 혈장에 의해서 혈액의 응고매개변수를 측정하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 혈액의 응고매개변수의 측정방법.
  9. 제8항에 있어서, 0.5% 내지 20%의 폴리비닐 알코올을 함유한 유리섬유층(4)을 포함하는 시험담체에 의해서 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.
KR1019870002832A 1986-03-27 1987-03-27 응고매개변수 측정을 위한 시험담체 및 방법 KR960016339B1 (ko)

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