KR960001124A - 유전자 발현의 조절방법 - Google Patents

유전자 발현의 조절방법 Download PDF

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KR960001124A
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세이코 미우라
가즈히로 오스예
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도리이 신이치로.
산토리 가부시키가이샤
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Abstract

본 발명은 야생형 락토스 억제자의 94, 241, 265 또는 300번 위치에서의 하나 이상의 아미노산이 야생형 락토스 억제자의 것 이외의 아미노산으로 치환된 락토스 억제자 단백질 및 이의 용도에 관한 것이다. 본 발명의 돌연변이체 락토스 억제자는 30℃이하의 온도에서는 목적 유전자의 발현을 억제하고, 37℃이상의 온도에서는 목적 유전자의 발현을 유도하며, 따라서 IPTG와 같은 값비싼 유도물질을 사용하지 않고도 배양 온도를 변화시킴으로써 발현을 조절할 수 있다.

Description

유전자 발현의 조절방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 β-갈락토시다제 생성에 미치는 배양 온도의 영향을 보여주는 그래프이다.
제2도는 플라스미드 pMC9-1 및 pMW119로부터의 플라스미드 pY01작제 공정도이다.
제3도는 단백질 생성에 미치는 배양 온도 및 유도 물질의 영향을 보여주는 나트륨 도데실 설페이트 겔 전기영동도이다.

Claims (22)

  1. 야생형 락토스 억제자의 94, 241, 265 또는 300번 위치에서의 하나 이상의 아미노산이 야생형 락토스 억제자의 것 이외의 아미노산으로 치환된 락토스 억제자 단백질.
  2. 제1항에 있어서, 94번 아미노산이 메티오닌인 락토스 억제자 단백질.
  3. 제1항에 있어서, 241번 아미노산이 트레오닌인 락토스 억제자 단백질.
  4. 제1항에 있어서, 265번 아미노산이 아스파르트산인 락토스 억제자 단백질.
  5. 제1항에 있어서, 300번 아미노산이 아스파라긴, 페닐알라닌 또는 프롤린인 락토스 억제자 단백질.
  6. 서열 확인 번호 20에 나타낸 아미노산 서열을 갖는데, 단 94번 Xaa가 Val이고, 241번 Xaa가 Ala이며, 265번 Xaa가 Gly이며 300번 Xaa가 Ser인 아미노산 서열은 제외되는 락토스 억제자 단백질.
  7. 야생형 락토스 억제자의 94, 241, 265 또는 300번 위치에서의 하나 이상의 아미노산이 야생형 락토스 억제자의 것 이외의 아미노산으로 치환된 락토스 억제자 단백질을 암호화하는 유전자.
  8. 제7항에 있어서, 94번 아미노산이 메치오닌인 유전자.
  9. 제7항에 있어서, 241번 아미노산이 트레오닌인 유전자.
  10. 제7항에 있어서, 265번 아미노산이 아스파르트산인 유전자.
  11. 제7항에 있어서, 300번 아미노산이 아스파라긴, 페닐알라닌 또는 프롤린인 유전자.
  12. 서열 확인 번호 20에 나타낸 아미노산 서열을 갖는데, 단 94번 Xaa가 Val이고, 241번 Xaa가 Ala이며, 265번 Xaa가 Gly이며 300번 Xaa가 Ser인 아미노산 서열은 제외되는 락토스 억제자 단백질을 암호화하는 유전자.
  13. 숙주세포의 배양온도를 변화시켜 락토스 억제자 단백질의 작용을 조절함으로써, 목적 단백질을 암호화하는 유전자(목적 유전자)의 발현을 조절함을 특징으로 하여, 락토스 억제자 단백질 유전자 및 상기 목적 유전자를 함유하는 숙주세포내에서 상기 목적 유전자의 발현을 조절하는 방법.
  14. 제13항에 있어서, 락토스 억제자 단백질 유전자가 목적 유전자를 함유하는 플라스미드 또는 숙주 염색체 내로 삽입되는 방법.
  15. 제13항에 있어서, 락토스 억제자 단백질 유전자가 목적 유전자를 함유하는 클로닝 벡터 또는 발현 벡터 내로 삽입되는 방법.
  16. 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 숙주세포가 포유류 세포, 원핵세포, 진균류, 효모 또는 곤충세포인 방법.
  17. 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 35℃이상의 온도에서 유전자를 발현시킬 수 있는 온도-민감성 돌연변이를 지닌 락토스 억제자 단백질을 암호화하는 유전자가 사용되는 방법.
  18. 제17항에 있어서, 37℃이상의 온도에서 유전자를 발현시킬 수 있는 온도-민감성 돌연변이를 지닌 락토스 억제자를 암호화하는 유전자가 사용되는 방법.
  19. 락토스 억제자가 단백질 유전자 및 목적 단백질을 암호화하는 유전자(목적유전자)를 함유하는 발현 벡터로 형질전환시킨 숙주 세포의 배양 온도를 변화시켜 락토스 억제자 단백질의 작용을 조절함으로써 상기 목적 유전자의 발현을 조절함을 특징으로 하여, 상기 목적 유전자를 발현시키는 방법.
  20. 제19항에 있어서, 숙주세포가 포유류 세포, 원핵세포, 진균류, 효모 또는 곤충세포인 방법.
  21. 제19항에 있어서, 35℃이상의 온도에서 유전자를 발현시킬 수 있는 온도-민감성 돌연변이를 지닌 락토스 억제자 단백질을 암호화하는 유전자가 사용되는 방법.
  22. 제12항에 있어서, 37℃이상의 온도에서 유전자를 발현시킬 수 있는 온도-민감성 돌연변이를 지닌 락토스 억제자를 암호화하는 유전자가 사용되는 방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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