KR950703642A - 만누로난 씨(c)-5-에피머라제를 암호화하는 서열을 포함하는 디 엔 에이(dna) 화합물(dna compounds comprising sequences encoding mannuronan c-5-epimerase) - Google Patents

만누로난 씨(c)-5-에피머라제를 암호화하는 서열을 포함하는 디 엔 에이(dna) 화합물(dna compounds comprising sequences encoding mannuronan c-5-epimerase) Download PDF

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Abstract

본 발명은 만누로난 C-5-에피머라제 활성을 갖는 효소를 암호화하는 서열을 포함하는 DNA 화합물을 개시한다. 제조된 유전자 서열 및 효소는 명확한 G/M 비 및 블록 구조를 갖는 알기네이트의 생산에 사용할 수 있다. 명확한 G/M 비를 갖는 알기네이트는 또한 유전자 서열의 선택적 불활성화에 의해 생산될 수 있다.

Description

만누로난 씨(C)-5-에피머라제를 암호화하는 서열을 포함하는 디 엔 에이(DNA) 화합물(DNA COMPOUNDS COMPRISING SEQUENCES ENCODING MANNURONAN C-5-EPIMERASE
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 122kd 단백질의 N-말단 단부의 아미노산 서열 및 상응하는 올리고뉴클레오티드의 뉴클레오티드 서열을 도시한 것이다.
제2도는 플라스미드 pHE14, pHE16, pBD1, pHE18 및 pML1내에 결합된 삽입체의 제한 엔도뉴클레아제 지도이다.
제3도는 E1 암호화된 단백질의 일부분의 만누로난 C-5-에피머라제(1) 활성을 세포 성장의 함수로서 도시한 것이다.

Claims (18)

  1. 만누로난 C-5-에피머라제를 암호화하는 서열을 포함하며, 이때 이 서열은 천연의 출처에서 분리하거나 또는 합성에 의해 유도한 서열인 DNA 화합물.
  2. DNA 블록 A 및/또는 블록 S 및/또는 DNA 블록 R을 포함하는 만누로난 C-5-에피머라제를 암호화하는 분리된 DNA 화합물.
  3. 제2항에 있어서, 하나 이상의 DNA 블록 A, 하나의 DNA 블록 S 및 0 내지 5개 이상의 DNA 블록 R을 포함하는 만누로난 C-5-에피머라제를 암호화하는 분리된 DNA 화합물.
  4. 제1항에 있어서, 제6도에 제시한 DNA서열의 적어도 일부를 포함하는 분리된 DNA 화합물.
  5. 제1항에 있어서, 제6도에 제시한 단백질 아미노산 서열의 적어도 일부를 암호화하는 분리된 DNA 화합물.
  6. 제1항의 DNA 서열을 포함하는 재조합 DNA 벡터.
  7. 만누로난 C-5-에피머라제 활성을 갖는 효소의 생산 및/또는 알기네이트의 미생물에 의한 생산용 재조합 숙주 세포를 제조하는데에 제1항 내지 제6항중 어느 한 항의 DNA 서열을 사용하는 방법.
  8. 제7항에 있어서, 75 내지 98%의 고함량의 G 블록을 갖는 알기네이트의 미생물에 의한 생산에 DNA 서열을 사용하는 방법.
  9. 제7항에 있어서, 목적하는 M/G 블록 함량을 갖는 알기네이트를 생산하도록 선택된 DNA서열을 알기네이트의 미생물에 의한 생산에 사용하는 방법.
  10. 에피머라제 활성을 발현시킬 수 있는 재조합 숙주 세포를 제조하므로써 만누로난 C-5-에피머라제를 갖는 효소를 생산하는 방법으로서, 상기 숙주 세포에서 기능하는 프로모터 및 해독 활성화 서열 (a); 및 상기 프로모터 및 해독 활성화 서열로부터 발현되도록 위치하며, DNA 블록 A 및/또는 DNA 블록 S및/또는 블록 R을 포함하는 만누로난 C-5-에피머라제를 암호화하는 DNA 서열(b)을 포함하는 재조합 DNA 발현 벡터로 상기 숙주 세포를 형질전환시키는 것을 특징으로 하는 방법.
  11. 천연의 숙주 세포에서 만난 만누로난 C-5-에피머라제를 암호화하는 하나, 몇개 또는 모든 DNA 서열을 선택적으로 불활성화시키는 것을 특징으로 하는 알기네이트의 박테리아에 의한 생산 방법.
  12. 제11항에 있어서, 0 내지 25%의 G블록 함량을 갖는 알기네이트 또는 순수한 폴리-M알기네이트를 생산하는 방법.
  13. 제11항에 있어서, 상기 DNA 서열을 선택적으로 불활성화하여 목적하는 M/G 블록 함량 및 G블록 분포를 갖는 알기네이트를 생산하는 방법.
  14. 제6도에 개시한 서열의 적어도 일부를 포함하며 만누로난 C-5-에피머라제 활성을 갖는 효소의 아미노산 서열.
  15. 제1항에 있어서, 상기 화합물이 알기네이트 생산 숙주에서 자연 발생한 것이 아니며, 천연의 출처에서 분리하거나 또는 합성에 의해 유도한, 하나 이상의 A 블록 및 하나 이상의 R블록을 포함하는 DNA화합물.
  16. 제15항에 있어서, 상기 화합물이 추가로 하나 이상의 S블록을 포함하는 DNA 화합물.
  17. 알기네이트 생산 숙주에서 자연 발생한 것이 아니며, 천연의 출처에서 분리하거나 또는 합성에 의해 유도한, 하나 이상의 A 블록 및 하나 이상의 R블록을 포함하는, 만누로난 C-5-에피머라제 활성을 갖는 폴리펩티드.
  18. 제17항에 있어서, 상기 폴리펩티드가 추가로 하나 이상의 S블록을 포함하는 폴리펩티드.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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