KR870700095A - AraB 프로모터 및 미생물학적 방법에 의해 세크로핀을 포함한 폴리펩타이드를 제조하는 방법 - Google Patents
AraB 프로모터 및 미생물학적 방법에 의해 세크로핀을 포함한 폴리펩타이드를 제조하는 방법Info
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Abstract
내용 없음.
Description
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 세크로핀 A의 아미노산 및 누클레오티드 서열, 및 이.콜라이에서 발현시키는데 사용된 합성 유전자를 나타낸다.
Claims (34)
- 숙주에 대해 이종이며, 생물학적으로 활성인 폴리펩티드를 코드화하는 유전자에 적합하게 연결된 ara B 프로모터의 서열을 함유하는, 숙주에서 발현가능한 폴리누클레오티드 분자.
- 제1항에 있어서, 언급된 유전자가 효소, 호르몬, 항체, 헤모글로빈 및 구조 유전자로 구성되는 군으로부터 선택된 폴리펩티드를 코드화하는 분자.
- 제1항에 있어서, 상기의 유전자가 세크로핀을 코드화하는 분자.
- 제1항에 있어서, DNA분자인 폴리누클레오티드 분자.
- 제1항에 있어서, 이본쇄 DNA분자인 폴리누클레오티드 분자.
- 제1항의 분자를 함유하는 복제가능한 발현 베히클.
- 제6항에 있어서, 플라스미드인 베히클.
- 제6항에 있어서, 박테리오파지인 베히클.
- 제7항에 있어서, 페노형 선택 마커도 함유하는 플라스미드.
- 제9항에 있어서, 언급된 마커가 항생물질 내성인 플라스미드.
- 제1항의 폴리누클레오티드 분자로 형질전환된 박테리아.
- 제6항의 베히클로 형질전환된 박테리아.
- (a) 생물학적으로 활성인 이종 펩티드를 코드화하는 이종 유전자에 적합하게 연결된 ara B프로모터를 함유하는 폴리누클레오티드 분자를 복제가능한 발현 베히클내로 삽입시키고, (b) 상기 펩티드를 발현 시킬 수 있는 박테리아를 상기 폴리누클레오티드 분자를 함유하는 발현베히클로 형질전환시키고; (c) 상기의 형질전환된 박테리아를 배양조건하에서 배양하고; (d) 상기 배양물로부터 상기의 펩티드를 회수함을 특징으로 하여, 생물학적으로 활성인 이종 펩티드로 발현시키도록 형질전환된 박테리아에서 생물학적으로 활성인 이종 펩티드를 제조하는 방법.
- (a) 후기 지수적 성장 상태에 도달될 때가지, 선택된 성장 조건하의 배양 배지에서, 형질전환시킬 박테리아에 대해 이종인 유전자에 적합하게 연결된 ara B프로모터를 함유하며 생물학적으로 활성인이 종펩티드를 코드화하는 폴리누클레오티드 분자로 형질전환시킨 박테리아를 배양하고; (b) 단계 (a)의 배양물을 신선한 배양배지로 옮겨 추가의 성장이 일어나기에 충분한 기간 동안 상기 배양물을 배양시키고; (c) 상기 단계 (b)의 배양물을 생성 배지로 접종하고, 최대의 박테리아 성장이 이루어지는 발효 조건에서 선택된 세포밀도를 성취하기에 충분한 시간동안 상기의 배양물을 배양시키고; (d) 상기 배지에, 상기 이종펩티드의 실질적인 수준을 생성시키기에 충분한 양의 L―아라비노스를 가하고; (e) 상기의 이종펩티드를 회수함을 특징으로 하여, 형질전환시킬 박테리아에 대해 이종인 유전자에 적합하게 연결된 ara B프로모터를 함유하며 상기의 펩티드를 코드화하는 폴리누클레오티드 분자로 형질전환된 박테리아를 배양함으로써 생물학적으로 활성인 이종펩티드를 제조하는 방법.
- 세크로핀을 코드화하는 제2의 유전적서열에 적합하게 연결된 다른 세크로핀―감성 박테리아를 위해 생성된 융합단백질의 살균 효과를 억제할 수 있는 폴리펩티드를 코드화하는 제1 유전서열을 함유하는 유전적 구조물.
- 유발가능한 프로모터에 적합하게 연결된 세크로핀을 코드화하는 유전적 서열을 함유하는 유전적 구조물.
- 제15항에 있어서, 작용성 연결에 유발가능한 프로모터도 함유하는 유전적 구조물.
- 제15, 16 또는 17항에 있어서, 세크로핀을 코드화하는 상기의 유전적 서열이 합성서열인 유전적 구조물.
- 제15항에 있어서, 상기의 폴리펩티드가 리딩 폴리펩티드인 유전적 구조물.
- 제15항에 있어서, 상기 폴리펩티드를 코드화하는 상기 유전적 서열이 약 300내지 5,000염기쌍을 함유하는 유전적 구조물.
- 제15,16 또는 17항에 있어서, 상기의 세크로핀이 세크로핀 A, B 또는 D인 유전적 구조물.
- 제15항에 있어서, 상기의 폴리펩티드를 코드화하는 상기의 유전적서열이 ara B유전자를 코드화하는 유전적 구조물.
- 제15 또는 16항의 유전적 구조물을 함유하는 주어진 숙주에서 복제가능한 베히클.
- 제23항에 있어서, 박테리아에서 발현가능한 베히클.
- 제23항에 있어서, 상기의 세크로핀이 A, B 또는 D인 베히클.
- 제15, 16 또는 17항중 어느 한 항의 유전적 구조물로 형질전환된 숙주.
- 제26항에 있어서, 세크로핀―감성 박테리아인 숙주.
- 제26항에 있어서, 상기의 세크로핀이 A, B 또는 D인 숙주.
- 생성되는 발현 융합 생성물내의 상기 숙주에 대해 상기 세크로핀의 살균효과를 억제할 수 있는 폴리펩티드를 코드화하는 유전적서열에 적합하게 연결된 세크로핀을 코드화하는 유전적 서열을 갖는 발현가능한 베히클로 형질전환된 세크로핀―감성 숙주.
- 세크로핀을 코드화하는 제1 단편 및 폴리펩티드를 코드화하는 제2 단편을 함유하며, 상기 세크로핀의 살균성질이거의 결실된 융합단백질.
- 제30항에 있어서, 상기의 세크로핀이 A, B 또는 D인 용융 단백질.
- 제30항에 있어서, 양 단편사이에 선택적 절단 가능부위를 함유하는 융합 단백질.
- 다른 폴리펩티드를 코드화하는 제2의 유전적 서열을 사용하여 세크로핀을 코드화하는 제1 유전적서열을 적합하게 연결하여 융합된 유전자를 형성하고; 세크로핀―감성 숙주내로 상기의 융합된 유전자를 형질전환시키고; 상기의 형질전환된 숙주를 배양하여, 상기 숙주에 대해 비―독성인 단백질 접합물을 생성시키고; 이어서, 상기의 단백질 접합물로부터 세크로핀을 회수함을 특징으로 하는 세균학적 방법에 의한 세크로핀의 제조방법.
- 제18항에 있어서, 단백질 접합물을 세크로핀과 상기의 다른 폴리펩티드로 절단하는 단계를 추가로 포함하는 방법.※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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