KR870700095A - AraB 프로모터 및 미생물학적 방법에 의해 세크로핀을 포함한 폴리펩타이드를 제조하는 방법 - Google Patents

AraB 프로모터 및 미생물학적 방법에 의해 세크로핀을 포함한 폴리펩타이드를 제조하는 방법

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Abstract

내용 없음.

Description

AraB 프로모터 및 미생물학적 방법에 의해 세크로핀을 포함한 폴리펩타이드를 제조하는 방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 세크로핀 A의 아미노산 및 누클레오티드 서열, 및 이.콜라이에서 발현시키는데 사용된 합성 유전자를 나타낸다.

Claims (34)

  1. 숙주에 대해 이종이며, 생물학적으로 활성인 폴리펩티드를 코드화하는 유전자에 적합하게 연결된 ara B 프로모터의 서열을 함유하는, 숙주에서 발현가능한 폴리누클레오티드 분자.
  2. 제1항에 있어서, 언급된 유전자가 효소, 호르몬, 항체, 헤모글로빈 및 구조 유전자로 구성되는 군으로부터 선택된 폴리펩티드를 코드화하는 분자.
  3. 제1항에 있어서, 상기의 유전자가 세크로핀을 코드화하는 분자.
  4. 제1항에 있어서, DNA분자인 폴리누클레오티드 분자.
  5. 제1항에 있어서, 이본쇄 DNA분자인 폴리누클레오티드 분자.
  6. 제1항의 분자를 함유하는 복제가능한 발현 베히클.
  7. 제6항에 있어서, 플라스미드인 베히클.
  8. 제6항에 있어서, 박테리오파지인 베히클.
  9. 제7항에 있어서, 페노형 선택 마커도 함유하는 플라스미드.
  10. 제9항에 있어서, 언급된 마커가 항생물질 내성인 플라스미드.
  11. 제1항의 폴리누클레오티드 분자로 형질전환된 박테리아.
  12. 제6항의 베히클로 형질전환된 박테리아.
  13. (a) 생물학적으로 활성인 이종 펩티드를 코드화하는 이종 유전자에 적합하게 연결된 ara B프로모터를 함유하는 폴리누클레오티드 분자를 복제가능한 발현 베히클내로 삽입시키고, (b) 상기 펩티드를 발현 시킬 수 있는 박테리아를 상기 폴리누클레오티드 분자를 함유하는 발현베히클로 형질전환시키고; (c) 상기의 형질전환된 박테리아를 배양조건하에서 배양하고; (d) 상기 배양물로부터 상기의 펩티드를 회수함을 특징으로 하여, 생물학적으로 활성인 이종 펩티드로 발현시키도록 형질전환된 박테리아에서 생물학적으로 활성인 이종 펩티드를 제조하는 방법.
  14. (a) 후기 지수적 성장 상태에 도달될 때가지, 선택된 성장 조건하의 배양 배지에서, 형질전환시킬 박테리아에 대해 이종인 유전자에 적합하게 연결된 ara B프로모터를 함유하며 생물학적으로 활성인이 종펩티드를 코드화하는 폴리누클레오티드 분자로 형질전환시킨 박테리아를 배양하고; (b) 단계 (a)의 배양물을 신선한 배양배지로 옮겨 추가의 성장이 일어나기에 충분한 기간 동안 상기 배양물을 배양시키고; (c) 상기 단계 (b)의 배양물을 생성 배지로 접종하고, 최대의 박테리아 성장이 이루어지는 발효 조건에서 선택된 세포밀도를 성취하기에 충분한 시간동안 상기의 배양물을 배양시키고; (d) 상기 배지에, 상기 이종펩티드의 실질적인 수준을 생성시키기에 충분한 양의 L―아라비노스를 가하고; (e) 상기의 이종펩티드를 회수함을 특징으로 하여, 형질전환시킬 박테리아에 대해 이종인 유전자에 적합하게 연결된 ara B프로모터를 함유하며 상기의 펩티드를 코드화하는 폴리누클레오티드 분자로 형질전환된 박테리아를 배양함으로써 생물학적으로 활성인 이종펩티드를 제조하는 방법.
  15. 세크로핀을 코드화하는 제2의 유전적서열에 적합하게 연결된 다른 세크로핀―감성 박테리아를 위해 생성된 융합단백질의 살균 효과를 억제할 수 있는 폴리펩티드를 코드화하는 제1 유전서열을 함유하는 유전적 구조물.
  16. 유발가능한 프로모터에 적합하게 연결된 세크로핀을 코드화하는 유전적 서열을 함유하는 유전적 구조물.
  17. 제15항에 있어서, 작용성 연결에 유발가능한 프로모터도 함유하는 유전적 구조물.
  18. 제15, 16 또는 17항에 있어서, 세크로핀을 코드화하는 상기의 유전적 서열이 합성서열인 유전적 구조물.
  19. 제15항에 있어서, 상기의 폴리펩티드가 리딩 폴리펩티드인 유전적 구조물.
  20. 제15항에 있어서, 상기 폴리펩티드를 코드화하는 상기 유전적 서열이 약 300내지 5,000염기쌍을 함유하는 유전적 구조물.
  21. 제15,16 또는 17항에 있어서, 상기의 세크로핀이 세크로핀 A, B 또는 D인 유전적 구조물.
  22. 제15항에 있어서, 상기의 폴리펩티드를 코드화하는 상기의 유전적서열이 ara B유전자를 코드화하는 유전적 구조물.
  23. 제15 또는 16항의 유전적 구조물을 함유하는 주어진 숙주에서 복제가능한 베히클.
  24. 제23항에 있어서, 박테리아에서 발현가능한 베히클.
  25. 제23항에 있어서, 상기의 세크로핀이 A, B 또는 D인 베히클.
  26. 제15, 16 또는 17항중 어느 한 항의 유전적 구조물로 형질전환된 숙주.
  27. 제26항에 있어서, 세크로핀―감성 박테리아인 숙주.
  28. 제26항에 있어서, 상기의 세크로핀이 A, B 또는 D인 숙주.
  29. 생성되는 발현 융합 생성물내의 상기 숙주에 대해 상기 세크로핀의 살균효과를 억제할 수 있는 폴리펩티드를 코드화하는 유전적서열에 적합하게 연결된 세크로핀을 코드화하는 유전적 서열을 갖는 발현가능한 베히클로 형질전환된 세크로핀―감성 숙주.
  30. 세크로핀을 코드화하는 제1 단편 및 폴리펩티드를 코드화하는 제2 단편을 함유하며, 상기 세크로핀의 살균성질이거의 결실된 융합단백질.
  31. 제30항에 있어서, 상기의 세크로핀이 A, B 또는 D인 용융 단백질.
  32. 제30항에 있어서, 양 단편사이에 선택적 절단 가능부위를 함유하는 융합 단백질.
  33. 다른 폴리펩티드를 코드화하는 제2의 유전적 서열을 사용하여 세크로핀을 코드화하는 제1 유전적서열을 적합하게 연결하여 융합된 유전자를 형성하고; 세크로핀―감성 숙주내로 상기의 융합된 유전자를 형질전환시키고; 상기의 형질전환된 숙주를 배양하여, 상기 숙주에 대해 비―독성인 단백질 접합물을 생성시키고; 이어서, 상기의 단백질 접합물로부터 세크로핀을 회수함을 특징으로 하는 세균학적 방법에 의한 세크로핀의 제조방법.
  34. 제18항에 있어서, 단백질 접합물을 세크로핀과 상기의 다른 폴리펩티드로 절단하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
KR1019860700669A 1985-01-28 1986-01-24 AraB 프로모터 및 미생물학적 방법에 의해 세크로핀을 포함한 폴리펩타이드를 제조하는 방법 KR870700095A (ko)

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