KR930006994B1 - 우리딘의 제조방법 - Google Patents

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Abstract

내용 없음.

Description

우리딘의 제조방법
본 발명은 생화학 시약(참고. Methods in Enzymology. Vol. VI. 아카데믹 프레스, 뉴욕 및 런던, 1963, p 194) 또는 약제의 합성용 출발 물질(참고. Collection Czechosiov. Chem. Commun. Vol. 39, 3100∼3108, 1974 ; Bulletin of the Chemical Society of Japan. Vol. 48(7), 2084∼2090, 1975 ; Chem. Pharm. Bull., Vol. 19, 2466∼2471, 1971)로 유용한 우리딘의 발효 제조 방법에 관한 것이다.
지금까지, 미크로모노스포라(Micromonospora) 속의 박테리아 균주로부터 유도된 피리미딘 유사물-내성균주[일본국 특허 공개 제139786/1977호] 및 브레비박테리움(Brevi-bacterium) 속의 박테리아 균주로부터 유도된 퓨린 유사물-내성 균주[일본국 특허 공개 제38691/1983호]를 이용한 발효에 의한 우리딘의 제조 방법이 공지되어 있다. 이들 방법에서는, 우라실 및 우리딜 산이 동시에 배지에 축적된다.
본 발명은 상술한 미크로모노스포라 또는 브레비박테리움 속에 속하는 미생물을 사용하는 방법과는 달리 바실루스 속의 미생물을 이용하여 고수율 및 공업적으로 유리하게 우리딘을 제조하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명자들은 바실루스 속의 균주를 이용한 우리딘의 발효 제조방법을 광범위하게 연구하였다. 그 결과, 이들은 바실루스 속에 속하며, 우리딘 뉴클레오시드 포스포릴라제 활성이 결핍되고, 피리미딘 유사물에 내성인 미생물이 배지에 상당량의 우리딘을 생성 및 축적할 수 있다는 것을 발견하였다. 이러한 발견을 기초로 연구를 계속하여 본 발명이 완성되었다.
그러므로, 본 발명은 바실루스 속에 속하며, 우리딘 뉴클레오시드 포스포릴라제 활성이 결핍되고, 피리미딘 유사물에 내성인 우리딘-생성 미생물을 배지에 배양하여 배양액에 우리딘을 생성 및 축적하고, 축적된 우리딘을 회수함을 특징으로 하는 우리딘의 제조 방법을 제공하는 것이다.
여기서 사용된 "우리딘 뉴클레오시드 포스포릴라제 활성이 결핍된" 미생물은 제이. 제이. 스코카의 방법("Methods in Enzymology", Vol. LI, 피. 에이. 호페 및 엠. 이. 존스 발행, 아카데믹 프레스, 뉴욕, 1978, P 432)에 의해 측정할 때 단백질 1mg당 0.01단위(나노몰/분) 이하의 우리딘 뉴클레오시드 포스포릴라제 활성을 갖는 미생물을 의미하며, "피리미딘 유사물에 내성인" 미생물은 모 균주로서 바실루스 속에 속하는 균주로부터 유도되었으며, 유전적 특성이 모 균주가 성장할 수 없을 정도로 고농도, 예를들면 2배 이상, 바람직하게는 3배 이상 농도의 피리미딘 유사물을 함유한 배지에서 성장할 수 있도록 변형된 미생물을 의미한다. "피리미딘 유사물"은 우라실 및 시토신과 같은 피리미딘 염기와 그 구조가 유사한 물질, 예를들면 6-아자우라실, 2-티오우라실, 5-히드록시 우라실, 5-플루오로우라실, 그의 리보시드 또는 그의 리보티드를 의미한다. 피리미딘 유사물-내성 미생물은 적어도 1종의 피리미딘 유사물에 내성을 갖는 것으로 충분하다.
본 발명을 실시하는데 사용되는 미생물의 대표적인 예는 바실루스 서브틸리스 ST-58(IFO 14387, FERM BP-855, KFCC-10158), 바실루스 서브틸리스 STA-17(IFO 14388, FERM BP-856, KFCC-10159), 바실루스 서브틸리스 SA-85(IFO 14389, FERM BP-860, KFCC-10163), 바실루스 리케니포르미스 LA-2(IFO 14391, FERM BP-857, KFCC-10160) 및 바실루스 푸밀루스 PT-42(IFO 14390, FERM BP-858, KFCC-10161)이다.
이들 미생물 중에서, 균주 ST-58 및 STA-17은 모균주인 바실루스 서브틸리스 No. 122(IFO 14386, FERM BP-859, KFCC-10162)로부터 유도되었으며 ; 균주 SA-85는 모균주인 바실루스 서브틸리스(IFO 13719, ATCC 6051)로부터 유도되었으며 ; 균주 LA-2는 모균주인 바실루스 리케니포르미스(IFO 12199, ATCC 10716)로부터 유도되었으며 ; 균주 PT-42는 모균주인 바실루스 푸밀루스(IFO 12088, ATCC 6632)로부터 유도되었다.
유사한 우리딘-생성 미생물들은 예를들면 자외선 조사[참고. J. gen. Microbiol. (1963), 33, p 367] 또는 N-메틸-N'-니트로-N-니트로소 구아니딘(이후 NTG로 약칭함)으로 처리[참고. Biochemical and Biophysical Research Commu
nications, Vol. 18, No. 5∼6, pp 788∼795, 1965]와 같은 공지의 변이 방법에 의해 처리하고, 리플리카 방법[참고. Journal of Bacteriology. Vol. 63, pp 399∼406, 1952]에 의해 상술한 특성을 갖는 변이주를 선택함으로써, 모균주인 바실루스 속의 기타 박테리아 균주로부터 쉽게 유도될 수 있다.
그러므로, 어떤 공지의 바실루스 균주를 취하여 상술한 변이 공정에 의해 변이주를 수득하고, 변이주가 우리딘 뉴클레오시드 포스포릴라제 활성 및 피리딘 유사물 내성과 관련된 본 발명의 요건을 만족시키는지를 결정한 후, 본 발명에 적당히 이용한다.
상술한 모균주 중에서, 바실루스 서브틸리스(IFO 13719, ATCC 6051), 바실루스 리케니포르미스(IFO 12199, ATCC 10716) 및 바실루스 푸밀루스(IFO 12088, ATCC 6632)는 일본국 오오사까 발효 연구소(IFO)에서 발행된 리스트 어브컬쳐스, 6판, 1978 및 미국 어메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(ATCC)에서 발행된 카탈로그 어브 균주 I, 15판, 1982에 기록된 공지의 균주이다. 균주 바실루스 서브틸리스 No. 122(IFO 14386, FERM BP-859, KFCC-10162)는 본 발명자들이 토양으로부터 분리한 균주이며, 하기의 박테리아 특성을 갖는다.
A. 형태
1) 형 및 크기 : 짧은 막대형(0.7∼0.8×2.5∼3.0μ)
2) 다형성 : 단독, 가끔 이중.
3) 운동성 : -
4) 포자 형성 : +
5) 포자의 형태 : 난형
6) 포자의 위치 : 중앙 근처
7) 그램 염색성 : 양성
8) 산 저항성 : -
B. 생육 상태
1) 부연 한천 평판 배양 : 무정형 및 확산형 ; 거칠고 평평한 표면 ; 불투명하며 밝은 갈색
2) 부연 액체 배양 : 표면에 얇은 막 형성 ; 혼탁성이 없음
3) 리트머스 밀크 : 펩톤화, 색소의 환원
C. 생리적 특성
1) 질산염의 환원 : +
2) V-P시험 : 양성
3) 녹말의 가수분해 : +
4) 시트르산의 이용 : +
5) 프로피온산의 이용 : -
6) 암모늄염의 이용 : +
7) 우레아제 : 약간
8) 카탈라제 : +
9) 산소의 이용 : 호기성
10) 염화나트륨에 대한 저항성 : 7%에서 성장 가능
11) 산 저항성 : pH 5.7에서 성장 가능
버기스 매뉴얼 어브 디터미네이티브 박테리올로지 8판, 알. 이. 부카난 및 엔. 이. 기본즈, 1984를 참고로 하면, 상기의 박테리아 특성을 갖는 균주는 바실루스 서브틸리스 종에 속하는 것으로 확인된다.
본 명세서에 기재된 IFO번호는 일본국 재단법인 발효 연구소(IFO : 일본국 오오사까후 오오사까시 요도가와꾸 주소 혼마찌 2쪼메 17-85)에 기탁된 각 미생물의 기탁 번호이며, FERM P-번호는 일본국 통상 산업성 공업 기술원 미생물 공업 기술 연구소(FRI ; 일본국 이바라끼껭 쯔꾸바꾼 야다베쪼 히가시 1쪼메 1-3)에 기탁된 미생물의 기탁 번호이다. FRI의 기탁은 1984년 10월 19일에 하기의 수탁 번호로 수행되었으며 하기와 같이 부다페스트 협약하의 기탁으로 전환되었다.
Figure kpo00001
KFCC번호는 한국 종균 협회에 기탁된 미생물의 기탁번호이며, 한국 종균 협회의 기탁은 1985년 10월 14일에 수행되었다.
본 발명에 따른 우리딘의 제조에 사용된 바실루스 균주는 우리딘 뉴클레오시드 포스포릴라제 활성의 결핍, 피리딘 유사물에 대한 내성 및 우리딘 생산능을 제외하고는 각 모균주와 같은 생물적 특성을 갖는다.
상기와 같은 방법으로 수득된 우리딘-생성 미생물을 공지의 미생물 배양 방법과 같은 방법으로 배양한다. 그러므로, 배지로는 탄소원, 질소원 및 금속 이온, 및 필요하다면 아미노산, 헥산 및 비타민과 같은 기타의 영양 물질을 함유한 액체 배양 배지를 사용할 수 있다. 탄소원으로는 예를들면 글루코오즈, 슈크로오즈, 말토오즈, 녹말, 당화 녹말, 몰라세 등을 사용할 수 있다. 질소원으로는 펩톤, 옥수수 침지액, 대두밀, 이스트 추출물 및 우레아와 같은 유기 질소원 및 황산, 질산, 염산, 탄산 및 기타 산의 암모늄염, 암모니아 기체 및 암모니아수와 같은 무기 질소원을 단독으로 또는 배합하여 사용할 수 있다. 기타 영양 물질로는 박테리아의 성장에 필요한 무기염, 아미노산, 비타민 등을 적당히 선택하여 단독으로 또는 배합하여 사용한다. 더우기, 필요하다면 실리콘유 또는 폴리알킬렌 글리콜 에테르와 같은 거품 방지제 또는 표면 활성제를 가할 수 있다. 배양은 일반적으로 통기 및 교반하의 진탕 배양 또는 침지 배양과 같은 호기성 조건하에 수행된다. 배지는 바람직하게는 4∼9범위의 pH를 갖는다. 배양 동안 pH가 변할 때, pH값을 바람직한 범위내로 조절하기 위해 황산, 탄산칼슘, 수산화나트륨, 암모니아 기체 또는 암모니아수를 적당히 가할 수 있다. 배양온도는 사용된 미생물의 성장 및 우리딘의 축적에 적당한 20∼45℃범위내에서 일반적으로 선택된다. 배양은 우리딘의 추적이 실제로 최대가 될때까지 수행하는 것이 바람직하다. 일반적으로 2∼6일 배양하면 종료된다.
생성된 배양액으로부터 우리딘을 분리 및 회수하기 위해, 예를들면 침전 및 이온 교환 수지 또는 활성탄을 사용한 크로마토그래피와 같은 공지의 분리 및 정제 기술을 사용할 수 있다[Agric. Biol. Chem., 29, 742(1965)].
본 발명에 따른 우리딘의 제조 방법은 우리딘을 대량으로 축적할 수 있고, 배양 배지 내의 우리딘 축적은 우라실 또는 우리딜산의 공동 생산이 거의 없으며, 따라서 우리딘의 분리 및 정제가 비교적 용이하기 때문에 공업적인 측면에서 매우 유리하다.
하기의 실시예에 의해 본 발명은 더욱 상세히 설명되나, 이들이 본 발명의 범위를 제한하는 것은 아니다.
[실시예 1]
하기에 기재된 조성을 갖는 기본 배지(A)를 100μg/ml의 우라실로 보충함으로써 제조된 배지를 바실루스 서브틸리스 No. 122(IFO 14386, FERM BP-859, KFCC-10162)으로 줄을 그어 접종하고, 50μg/ml의 NTG로 20분간 처리(이후, NTG처리는 이와 같은 조건하에 수행된다)한 후, 37℃에서 3일간 배양한다. 나타난 군락 중에서, 리플리카 평판법에 의해 우라실-요구성 변이주를 선택한다. 이 우라실-요구성 균주를 NTG처리한다. 100μg/ml의 우라실로 보충된 기본 배지(A)를 상기의 균주로 줄 그어 접종하고, 37℃에서 3일간 배양한다.
기본배지(A)
글로코오즈 2.0% 황산 암모늄 0.5%
소듐 글루타메이트 1.0% 황산 마그네슘 0.01%
인산 이칼륨 0.1% 비오틴 0.1mg/
Figure kpo00002
한천 2.0% (pH 7.0)
나타난 군락을 리플리카 평판법에 의해 기본 배지(A) 및 100μg/ml의 우리딘을 함유한 배지에 옮긴다. 이와 같은 방법으로 배지에서 성장할 수 없는 균주(우리딘 뉴클레오시드 포스포릴라제 활성-결핍 균주)를 선택한다. 이렇게 수득된 우리딘 뉴클레오시드 포스포릴라제 활성-결핍 균주를 기본배지(A)에 줄 그어 접종하고, 자발 변이의 결과 우라실 요구성 특성을 회복한 균주를 선택한다. 이 회복 균주를 NTG 처리하고, 기본 배지(A)에 100μg/ml의 2-티오우라실을 가함으로써 제조된 배지(A-T)에 줄 그어 접종한다. 배양을 37℃에서 4일간 수행한다. 배지(A-T)에 나타난 군락으로부터, 우리딘 생산 균주인 바실루스 서브틸리스 ST-58(IFO 14387, FERM BP-855, KFCC-10158)를 선택한다. 이 바실루스 서브틸리스 ST-58을 NTG로 처리하고, 기본 배지(A)에 200μg/ml의 6-아자우라실을 가함으로써 제조된 배지(A-A)에 줄그어 접종한 후, 37℃에서 4일간 배양한다. 나타난 군락으로부터, 높은 우리딘 생산능을 갖는 균주인 바실루스 서브틸리스 STA-17(IFO 14388, FERM BP-856, KFCC-10159)를 선택한다. 상술한 각 균주의 우리딘 뉴클레오시드 포스포릴라제 활성(제이.제이.스코카의 방법에 의해 결정) 및 각종 피리미딘 유사물에 대한 내성 정도는 각각 표 1 및 표 2에 나타낸다.
[표 1]
Figure kpo00003
*1) 단위/mg의 단백질
[표 2]
Figure kpo00004
*+ : 성장, - : 성장 안함
15% 글루코오즈, 3% 옥수수 침지액, 1% 우레아 및 2% 탄산칼슘을 함유한 20ml 발효 배지를 200ml 플라스크에 채우고, 상기의 각 미생물로 접종한 후, 37℃에서 3일간 진탕 배양 수행하여 표 3에 나타낸 결과를 얻는다.
[표 3]
Figure kpo00005
[실시예 2]
실시예 1의 방법에 따라, 바실루스 서브틸리스(IFO 13719, ATCC 651)로부터 우리딘 뉴클레오시드 포스포릴라제 활성-결핍 균주를 수득한다. 이 우리딘 뉴클레오시드 포스포릴라제 활성-결핍 균주를 NTG처리한후, 모 균주가 성장할 수 없는 농도(100μg/ml)의 6-아자우라실을 기본배지(A)에 가함으로써 제조된 배지에서 성장할 수 있는 균주로서 바실루스 서브틸리스 SA-85(IFO 14389, FERM BP-860, KFCC-10163)를 선택한다. 이 균주의 우리딘 뉴클레오시드 포스포릴라제 활성은 0.003 단위/mg 단백질로 측정된다(모균주의 활성은 0.033단위/mg 단백질이다). 바실루스 서브틸리스 SA-85를 실시예 1과 같은 조건하에 배양하면, 우리딘 축적량은 5.2mg/ml이다.
[실시예 3]
바실루스 리케니포르미스(IFO 12199, ATCC 10716)를 실시예 1과 같은 방법으로 NTG처리하고, 실시예 1에 기재된 기본 배지(A)에 50μg/ml의 5-플루오로 우리딘을 가함으로 제조된 배지에 줄 그어 접종한다. 배양을 37℃에서 4일간 수행하고, 생성된 군락에 대해 우리딘 뉴클레오시드 포스포릴라제 활성을 시험한다. 군락의 약 절반이 상기 효소 결핍인 것으로 발견된다. 이렇게 수득된 우리딘 뉴클레오시드 포스포릴라제 활성-결핍 균주 중의 하나를 공지 방법에 의해 자외선으로 조사시킨다. 기본 배지(A)에 모균주가 성장할 수 없는 농도(100μg/ml)의 6-아자우라실을 가함으로써 제조된 배지를 자외선 조사 균주로 줄그어 접종하고, 37℃에서 4일간 배양한다. 나타난 군락으로부터 우리딘 생산 균주인 바실루스 리케니포르미스 LA-2(IFO 14391, FERM BP-857, KFCC-10160)를 선택한다. 모균주 및 변이주(LA-2)를 우리딘 뉴클레오시드 포스포릴라제 활성 비교한다. 모균주는 0.030단위/mg 단백질의 활성을 나타내는 반면, 변이주의 활성은 0.009단위/mg단백질이다. 이렇게 수득된 균주 바실루스 리케니포르미스 LA-2를 실시예 1과 같은 조건하에 배양하여 3mg/ml의 우리딘을 축적한다. 한편, 모균주인 바실루스 서브틸리스(IFO 12199, ATCC 10716)를 상기와 같은 조건하에 배양하면 우리딘의 축적이 관찰되지 않는다.
[실시예 4]
바실루스 푸밀루스(IFO 12088, ATCC 6632)로부터 실시예 1과 같은 방법으로 우리딘 뉴클레오시드 포스포릴라제 할성-결핍 균주를 수득한다. 이 우리딘 뉴클레오시드 포스포릴라제 활성-결핍 균주를 NTG로 처리하고, 모균주가 성장할 수 없는 농도(600μg/ml)의 2-티오우라실을 실시예 1의 기본 배지(A)에 가함으로써 제조된 배지에서 성장할 수 있는 균주로서 바실루스 푸밀루스 PT-42(IFO 14390, FERM BP-858, KFCC-10161)를 선택한다. 이 균주의 우리딘 뉴클레오시드 포스포릴라제 활성은 0.007단위/mg단백질이다(모균주의 활성은 0.057단위/mg단백질이다). 바실루스 푸밀루스 PT-42를 실시예 1의 조건하에 배양하면 5mg/ml의 우리딘이 축적된다.
[실시예 5]
실시예 1에서 명시한 발효 배지 20ml를 함유한 50개의 200ml 플라스크를 사용하면, 실시예 1에 따라 바실루스 서브틸리스 STA-17을 배양한다. 수득된 배양액을 원심 분리하여 세포를 제거하고, 1N 염산에 의해 상층액의 pH를 2.0으로 조절하고, 생성된 침전물을 원심 분리하여 제거한다.
수득된 상층액을 우리딘 흡착용 활성탄 컬럼에 넣고, 1.4% 암모니아수를 함유한 50% 에탄올로 용출시킨다. 우리딘-함유 용출 분획을 합하여 감압하 농축하고, 농축물의 pH를 암모니아수에 의해 pH 8.0으로 조절한 후, 같은 부피의 0.01M 붕산 칼륨을 가한다. 생성 혼합물을 우리딘 흡착용 도웩스-1×2(Cl-형, 200∼400메시) 컬럼에 넣는다. 이 컬럼을 증류수로 세척하고, 1
Figure kpo00006
당 0.03M 염화칼륨 및 0.02M 붕산 칼륨을 함유한 수용액을 사용하여 우리딘의 용출을 수행한다. 우리딘-함유 용출 분획을 합하고, 같은 부피의 메탄올을 반복하여 가함으로써 붕산을 제거한 후, 농축 건조시킨다. 수득된 고체 물질을 소량의 물에 용해시키고, 냉각하면서 알콜을 용액에 가한다. 우리딘의 조결정(15g)을 수득한다. 이 결정을 소량의 뜨거운 물에 용해시키고, 용액을 다시 냉각시켜 결정상의 우리딘 11g을 수득한다.

Claims (9)

  1. 바실루스 속에 속하고, 우리딘 뉴클레오시드 포스포릴라제 활성이 결핍되었으며, 피리미딘 유사물에 내성을 갖는 우리딘-생성 미생물을 배양 배지에서 배양하여 배양액에 우리딘을 생성 및 축적하고, 이 배양액으로부터 우리딘을 회수함을 특징으로 하는 우리딘의 제조방법.
  2. 제1항에 있어서, 피리미딘 유사물이 6-아자우라실, 2-티오우라실, 5-히드록시우라실, 5-플루오로우라실, 그의 리보시드 또는 그의 리보티드인 방법.
  3. 제1항에 있어서, 피리미딘 유사물이 6-아자우라실인 방법.
  4. 제1항에 있어서, 미생물이 바실루스 서브틸리스, 바실루스 리케니포르미스 또는 바실루스 푸밀루스에 속하는 방법.
  5. 제1항에 있어서, 미생물이 바실루스 서브틸리스 ST-58(IFO 14387, FERM BP-855, KFCC-10158)인 방법.
  6. 제1항에 있어서, 미생물이 바실루스 서브틸리스 STA-17(IFO 14388, FERM BP-856, KFCC-10159)인 방법.
  7. 제1항에 있어서, 미생물이 바실루스 서브틸리스 STA-85(IFO 14389, FERM BP-860, KFCC-10163)인 방법.
  8. 제1항에 있어서, 미생물이 바실루스 리케니포르미스 LA-2(IFO 14391, FER
    M BP-857, KFCC-10160)인 방법.
  9. 제1항에 있어서, 미생물이 바실루스 푸밀루스 PT-42(IFO 14390, FERM BP-858, KFCC-10161)인 방법.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10244212B2 (en) 2016-11-22 2019-03-26 Samsung Electronics Co., Ltd. Electronic device and method for controlling thereof for reducing power consumption in a standby mode

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH022349A (ja) * 1988-02-17 1990-01-08 Takeda Chem Ind Ltd ピリミジンアナログ耐性化遺伝子ｄｎａおよびその用途
GB8906624D0 (en) * 1989-03-22 1989-05-04 Ici Plc Production of 2-deoxyuridine
JPH0695946B2 (ja) * 1991-01-23 1994-11-30 日本製紙株式会社 ウリジンの製造法
CN1057563C (zh) * 1997-09-26 2000-10-18 北京英特莱幸诺生物技术有限责任公司 一种枯草芽孢杆菌菌株及其应用
JP2001238700A (ja) * 2000-03-03 2001-09-04 Takara Shuzo Co Ltd 異種個体の存在割合の測定方法
DE10241116A1 (de) * 2002-09-03 2004-03-18 Amino Gmbh Verfahren zur Gewinnung von Uridin aus Melasse

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3139385A (en) * 1960-12-20 1964-06-30 Takeda Chemical Industries Ltd Method for the production of 5'-nucleotides
FR1316549A (fr) * 1961-12-14 1963-02-01 Meiji Seika Co Procédé de fabrication de nucléosides et nucléotides
FR1374725A (fr) * 1963-11-12 1964-10-09 Ajinomoto Kk Procédé de préparation de l'orotidine
JPS52139786A (en) * 1976-05-19 1977-11-21 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd Microbial production of uracil, uracilriboside, and uracilribotide

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10244212B2 (en) 2016-11-22 2019-03-26 Samsung Electronics Co., Ltd. Electronic device and method for controlling thereof for reducing power consumption in a standby mode

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CA1239605A (en) 1988-07-26

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