KR890000540B1 - 미생물에 의한 5'-크산틸산의 제조방법 - Google Patents

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Abstract

내용 없음.

Description

미생물에 의한 5'-크산틸산의 제조방법
제1도는 본 발명의 변이주와 MW-4768-8과의 복귀 변이주 발생 비교도.
본 발명은 브레비 박테이움 암모니아 게네스의 특수한 변이주에 의해서 탄소원 및 질소원, 기타 미생물에 유용한 유기 및 무기영양원을 함유하는 배지에서 호기적인 배양을 하므로 5'-크산틸산을 공업적으로 제조하는 방법에 관한 것이다.
5'-크산틸산을 핵산 생합성 대사과정의 중간물질로 정미성을 가지고 있으며, 특히 핵산조미료로 많이 사용되는 5'-구아닐산의 제조에 전구물질로 사용된다. 종래 5'-크산틸산의 미생물에 의한 제조 방법으로는 미국특허3211629, 일본특허소49-39839등이 알려져 있다. 그러나 이들 종래 방법에서는 대부분의 미생물 변이주들이 5'-크산틸산이외의 핵산물질 5'-이노신산, 히포크산틴, 구아노신, 크산틴, 크산토신등을 다량 부생시키거나 생산능이 낮았다. 본 발명자들은 이러한 점이 개선된 5'-크산틸산의 생산능이 우수한 균주를 발명하기 위해 연구하여 오던 중 브레비 박테리움 암모니아 게네스의 특수한 변이주 MW-4768-8(KAIST 850214-15712)을 발명한바 있다(공고번호 86-248).
본 연구자들은 MW-4768-8주에 대해서 자세히 연구한 결과 발효진행중 복귀변이주가 발생한다는 것을 발견하였다. 따라서 본 연구자들은 복귀변이주가 발생하지 않는 유전적으로 안정된 균주의 개발에 의해서 생산성을 더욱 향상시킬수 있다는 점에 착안하여 균주개량을 계속하여 오던중 본원 발명의 새로운 변이주 MW-4768-2471(KCIC 8200P)이 친주에 비하여 생산성이 더욱 향산된 우수한 균주임을 발견하였다. 본원 발명의 특수한 변이주 MW-4768-2471을 효과적으로 분리한 변이처리 및 선별방법은 다음과 같다. MW-4768-871주를 주 1배지에서 30℃, 12시간 배양한 균체를 0.05M인산 완충액(pH 7.0)5 ml에 잘 현탁시킨 후 15W 자외선등으로 30cm거리에서 15분간 조사한 후 주 2배지에 0.2ml씩 평판하여 30℃에서 7일간 배양한다. 생육한 균집락을 취하여 각각 주 3의 배지에 식균한 후 30℃에서 5일간 진탕 배양후 610μM에서 흡광도 조사에 의해서 생육도를 조사한다. 이중 생육이 가장 적은 균주만을 선발하여 다시 슬파구아니딘 내성 및 변이복귀 발생여부를 조사한후 생산능 시험에 의해서 생산능이 가장 우수한 본원 발명의 변이주 MW-4768-2471이 최종 분리되었다.
주1) 포도당 20g, 황산마그네슘 7수화물 1g, 염화칼슘 2수화물 50mg, 황산망간 1수화물 10mg, 황산아연 7수화물 1mg, 황산 제1철 7수화물 10mg, 인산제 1카리 1g, 황산암모늄 2g, 요소 3g, 치아민 염산염 5mg, 판토 텐산칼슘 10mg, 비오틴 30μg, 아데닌 20mg, 구아닌 20mg, 한천 20g, 증류수 1l.
주2) 주1의 배지에 슬파구아니딘 500μg/ml 농도로 첨가.
주3) 주1의 배지에서 한천 20g제외, 구아닌 5mg,
본 발명의 변이주 MW-4768-2471주가 모주로부터 분리된 과정을 요약하면 다음과 같다.
Figure kpo00001
본 발명의 변이주 MW-4768-2471이 찬주와 유전학적 변이를 확인할수 있는 배양 및 생리학적 특성의 차이점은 다음과 같다.
[표 1]
라이소자임에 대한 감수성 비교
Figure kpo00002
주) + + : 생육좋음, ± : 거의 생육 않음, - : 생육않음. 주1의 배지에 라이소자임을 각 농도에 따라 첨가한 후 30℃에서 48시간 배양하였다.
[표 2]
데옥시 콜린산에 대한 감수성 비교
Figure kpo00003
주) 주1의 액체배지에 데옥시콜린산 첨가 30℃에서 48시간 배양후 610μm에서의 흡광도 비교에 의한 상대생육도.
[표 3]
슬파구아니딘에 대한 내성 비교
Figure kpo00004
주) 주1의 배지에 meat ex. 5g 슬파구아니딘 각 농도로 첨가 30℃에서 4일 배양후 생육도 비교.
[표 4]
5'-크산틸산 생산성 비교
Figure kpo00005
주) 참고 : 실시예 1
주 3의 배지에서 30℃에서 진탕 배양후 610μm에서 흡광도에 의해 생육도를 조사(100배 희석 oD값)하여 MW-4768-8 각 본 발명 변이주 MW-4768-2471의 복귀 변이주 발생을 비교한바 제1도와 같다.
그외 본 발명의 변이주 4768-2471주의 균학적 성질은 다음과 같았다.
영양요구성 : 구아닌요구성, 아데닌 생육촉진
당자화성 : 포도당, 과당, 만노스
이상과 같이 본 발명의 변이주 브레비 박테리움 암모니아 게네스 MW-4768-2471주가 친주 및 종래의 여러 변이주와 특별히 다른 생리학적 특성은.
1. 아데닌 생육촉진, 구아닌 요구성, 라이소자임 감수성, 슬파구아니딘 내성을 가지고 있다는 점.
2. 장시간의 액체배양에 의해서도 복귀 변이주가 전혀 발생하지 않는 유전적으로 안정된 균주로서 5'-크산틸산의 생산성이 대단히 높다는 점. 으로 요약될수 있다.
본 발명에 사용하는 배지로서는 탄소원으로 포도당, 과당, 만노스 혹은 이들을 포함하는 물질, 황산암모늄, 암모니아, 요소, 펩톤등 유기 혹은 무기질소원, 황산마그네슘, 인산카리등 각종 다당물 배지에 첨가할 수 있는 유·무기 영양원을 포함하는 배지로 호기적 조건하에서 배양온도 30-40℃ pH6.5-8.0에서 배양한다.
배양 종로후 이미 알려진 이온교환 수지처리 혹은 활성 탄소에 흡착, 용리하므로 배약액에서 5'-크산틸산을 회수할 수 있다. 본 발명의 자세한 방법을 실시예에서 기재하고 있으나 본원이 실시예에 한정되는 것은 아니다.
[실시예1]
생산균주 : 본원 발명의 변이주 MW-4768-2471
종균배지 : 포도당 40g, 폴리펩톤 5g, 효모 엑키스 10g, 비프 엑키스 5g, 식염 3g, 아데닌, 구아닌 각 50mg, 증류수 1l의 종균배지에 식균하여 배양하여 종배양액을 제조하였다.
발효배지 : 포도당 150g, 인산 1카리 및 2카리 각 10g, 황산마그네슘 7수화물 10g, 황산철 7수화물 10g, 염화칼슘 2수화물 10mg, 황산아연 4수화물 1mg, 황산망간 5mg, 비오틴 50μg, 치아민염산염 1mg, 판토텐산칼슘 5mg, 황산암모늄 3g, 요소 2g, C.S.L. 25g, 아데닌 70mg, 구아닌 120mg, 증류수 1l.
발효방법 : 5l소형발효조에 발효배지 2l사입한 후 120℃에서 20분 멸균하여 암모니아수로 pH7.0조절한후 30℃에서 24시간 진탕 배양한 종배양액을 5% 식균하여 교반기 회전수 800rpm, 배양온도 32℃, 통기량 1VVM pH7.0으로 조절하면서 50시간 배양하였다. 발효중 잔당이 2-3%되면 70%포도당 수용액을 추가하여 발효 완료시까지 잔당을 1-2%로 유지하였다. 배양완료후 5'-크산틸산 축적량은 78.6mg/ml였으며 5'-크산틸산이외 핵산계물질은 거의 검출되지 않았다. 반면 변이전 친주인 MW-4768-8을 동일 방법에 의해서 실시했을 경우 59.3mg/ml이었다.
[실시예2]
발효배지 조성중 포도당대신 전분가수분해물을 포도당량으로 20%되게하여 28l소형 발효조에 사입하여 32℃에서 60시간 발효하였다. 포도당은 배양중 2-3% 유지되게 주입하였으며, 교반기 회전수 500rpm에서 통기량 1VVM조건으로 하였으며 기타 조건은 실시예 1에 준하였다. 발효완료후 5'-크산틸산의 축적량은 75mg/ml였다.

Claims (1)

  1. 5'-크산틸산 생산능을 갖는 브레비 박태리움 암모니아 게네스의 특수한 변이주 MW-4768-2471(KCTC 8200P)를 당류를 주원료로 한 배지에서 호기적 발효에 의해 배양액중 5'-크산틸산을 고농도를 축적시키는 것을 특징으로 하는 미생물에 의한 5'-크산틸산의 제조방법.
KR1019860005306A 1986-07-01 1986-07-01 미생물에 의한 5'-크산틸산의 제조방법 KR890000540B1 (ko)

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