KR920016468A - 항-트롬빈 폴리펩타이드 - Google Patents

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Abstract

내용 없음

Description

항-트롬빈 폴리펩타이드
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 본 발명의 항트롬빈 폴레펩타이드의 고성능 액체 크로마토그래피 분석결과를 나타내는 크로마토 그래피도이다. 제2도는 트립신-분해된 PE-P2(A) 및 PE-P2(B)의 용출 특성을 도시한 것이다. 제3도는 피크 2(P2)에 상응하는 단백질 대부분을 암호화하는 6개의 올리고뉴클레오타이드의 뉴클레오타이드 서열을 도시한 것이다.

Claims (33)

  1. 하기 아미노산 서열(i), (ⅱ)또는 (ⅲ)를 포함함을 특징으로 하는 폴리펩타이드 및 이의 약제학적으로 허용되는 염.
    (i)Pl
    Val Ser Tyr Thr Asp Cys Thr Glu Ser Gly Gln Asn Tyr Cys Leu
    1 5 10 15
    Cys Val Gly Gly Asn Leu Cys Gly Gly Gly Lys His Cys Glu Met
    20 25 30
    Asp Gly Ser Gly Asn Lys Cys Val Asp Gly Glu Gly Thr Pro Lys
    35 40 45
    Pro Lys Ser Gln Thr Glu Gly Asp Phe Glu Glu Ile Pro Asp Glu
    50 55 60
    Yaa Ile Leu Asn Zaa;
    65
    (ⅱ)P2
    Val Ser Tyr Thr Asp Cys Thr Glu Ser Gly Cln Asn Tyr Cys Leu
    1 5 10 15
    Cys Val Gly Ser Asn Val Cys Gly Glu Gly Lys Aan Cys Gln Leu
    20 25 30
    Ser Ser Ser Gly Asn Gln Cys Val His Gly Glu Gly Thr Pro Lys
    30 40 45
    Pro Lys Ser Gln Thr Gly Gly Asp Phe Glu Glu Ile Pro Asp Glu
    50 55 60
    Yaa Ile Leu Asn Zaa;
    (ⅲ)P3
    Val Sel Tyr Thr Asp Cys Thr Glu Ser Gly Gln Asn Tyr Cys Leu
    1 5 10 15
    Cys Val Gly Ser Asn Val Cys Gly Glu Gly Lys Asn Cys Gln Leu
    20 25 30
    Ser Ser Ser Gly Asn Gln Cys Val His Gly Glu Gly ;
    35 40
    상기 식에서 Yaa는 Asp 또는 Tyr이고, Zaa는 -OH, -NH2또는 Gly-OH이다.
  2. 제1항에 있어서, 아미노산 서열중 어느 하나 앞에 Met잔기가 선행되는 폴리펩타이드.
  3. 제1항에 있어서, 아미노산 서열중 어느 하나앞에 리더 서열 전체 또는 일부가 선행되는 플리펩타이드.
  4. 제3항에 있어서, 하기와 같은 리더 서열 전체 또는 일부가 존재하는 폴리펩타이드.
    Met Phe Ser Leu Lys Leu Phe Val Val Phe Ley Ala Val Cys Ile Cys Val Ser Gln Ala.
  5. 제1항에 있어서, 아미노산 서열중 어느 하나가 캐리어 서열에 융합된 상태로 존재하는 융합 단백질인 플리펩타이드.
  6. (a)제1항 내지 5항중 어느 한 항에서 정의한 폴리펩타이드가 발현되는 조건하에, 상기 폴리펩타이드를 암호화하는 DNA서열을 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주를 제공하고, (b)이와 같이 수득된 상기 폴리펩타이드 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 분리함을 특징으로 하여 상기 폴리펩타이드 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제조하는 방법.
  7. 제6항에 있어서, 숙주가 세균, 호모, 포유동물, 세포주, 곤충세포주 또는 동물인 방법.
  8. 제7항에 있어서, 숙주가이.콜라이타입 B(E. colitype B)균주 또는스로톱테라프러지피다(Spodopterafrugiperda)세포주인 방법.
  9. (a)가 1항 내지 5항중 어느 한 항에서 정의한 폴리펩타이드를 화학적으로 합성하고, (b)이와 같이 수득된 폴리펩타이드/또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 분리시킴을 특징으로 하여, 상기 폴리펩타이드 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제조하는 방법.
  10. 제9항에 있어서, 단계(a)가 고형-상 합성에 의해 수행되는 방법.
  11. 거머리히루디나리아마닐렌시스(Hiridinaria manillensis)종의 조직 또는 분비물로 부터 제1항에서 정의된 Yaa가 Asp이고, Zaa가 -OH인 아미노산 서열 (i),(ⅱ)또는 (ⅲ)을 갖는 폴리펩타이드 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 분리시킴을 특징으로 하여, 상기 폴리펩타이드 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제조하는 방법.
  12. 활성분으로서, 제1항 내지 제5항중 어느 한 항에서 정의한 폴리펩타이드 또는 이의 약제학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함함을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
  13. 제1항 내지 제5항중 어느 한 항에서 정의한 폴리펩타이드를 암호화 하는 DNA서열을 포함하는 발현 벡터.
  14. 제13항에 있어서, 플라스미드인 벡터.
  15. 제13항에 있어서, 바이러스인 벡터.
  16. 제15항에 있어서, 바이러스가, 폴리헤드린 프로모터가 DNA서열에 작동적으로 연결되어 있는 재조합 바큘로바이러스(baculovirus)인 벡터.
  17. 제13항 내지 16항중 어느 한 항에 있어서 DNA서열이, 폴리펩타이드가 발현되는 세포로 부터 폴리펩타이드를 분비시킬 수 있는 리더 펩타이드를 추가로 암호화 하는 벡터.
  18. 제13항 내지 17항중 어느 한 항에 있어서, DNA서열이, 절단되어 폴리펩타이드를 유리할 수 있는 융합 단백질을 암호화 하는 벡터.
  19. 제13항 내지18항중 어느 한 항에 따른 혼화성 발현 벡터로 형성전환된 숙주.
  20. 제19항에 있어서 세균,효모, 포유동물 세포주, 곤충 세포주 또는 동물인 숙주.
  21. 제20항에 있어서, 균주 이 콜라이 타입 B또는 스포돕테라 프러지피다 세포주인 숙주.
  22. 제1항내지 5항중 어느 한 항에서 정의한 폴리펩타이드를 암호화하는 DNA 서열.
  23. 제22항에 있어서, 합성 DNA서열인 DNA서열.
  24. 제22항에 있어서, cDNA인 DNA서열.
  25. 제22항 내지 24항중 어느 한 항에 있어서, 폴리펩타이드가 발현되는 세포로부터 폴리펩타이드를 분비시킬 수 있는 리더 펩타이드를 추가로 암호화 하는 DNA서열.
  26. 제22항 내지 25항중 어느 한 항에 있어서, 절단되어 폴리펩타이드를 유리할 수 있는 융합 단백질을 암호화하는 DNA 서열.
  27. 제13항 내지 18항중 어느 한 항에 따른 혼화성 발형 벡터로 숙주를 형질전환시킴을 특징으로 하여 제1항 내지 5항중 어느 한 항에서 정의한 폴리펩타이드가 발현될 수 있는 숙주를 제조하는 방법
  28. 제27항에 있어서, 발현 벡터가 (a)폴리펩타이드를 암호화 하는 DNA서열을 화학적으로 합성하고, (b)상기 DNA 서열을 발현 벡터내로 삽입시킴으로써 제조되는 방법.
  29. 제27항에 있어서, 발현 벡터가, (a)거머리 하루디나리아 마닐렌시스 종으루 부터의 mRNA로부터 폴리펩타이드를 암호화 하는 cDNA를 발현 벡터내로 삽입시킴으로써 제조되는 방법.
  30. 제22항에 있어서, 하기 서열로 필수적으로 이루어진 DNA서열.
    GTTTCTTACACCGACTGCACCGAATCTGGCCAGAACTACTGCCTGTGCGTTGGTTCTAAC
    GTTTGCGGTGAAGGTAAAAACTGCCAGCTGTCTTCTTCTGGTAACCAGTGCGTTCACGGGT
    GAAGGTACCCCGAAACCGAAATCTCAGACTGAAGGTGACTTCGAAGAAATTCCGGACGAAGACATCCTGAACTAG
  31. 제22항에 있어서, 하기 서열로 필수적으로 이루어진 DNA서열.
    GTG AGC TAC ACT GAT TGT ACG GAA TCA GGC CAG AAT TAT TGT CTA
    TGC GTG GGA GGT AAT CTC TGC GGT GGA GGC AAA CAT TGT GAA ATG
    GAC GGT TCT GGA AAT AAA TGC GTC GAT GGG GAA GGT ACT CCG AAG
    CCT AAG AGC CAG ACT GAA GGC GAT TTC GAA GAA ATC CCA GAT GAA
    GAT ATA TTG AAT TAA
  32. 제22항에 있어서, 하기 서열로 필수적으로 이루어진 DNA서열.
    ATG TTC TCT CTC AAG TTG TTC GTT GTC TTC CTG GCT GTT TGC ATC
    TGC GTG TCT CAA GCA GTG AGC TAC ACT GAT TGT ACG GAA TCA GGT
    CAG AAT TAT TGT CTA TGC GTG GGA AGT AAT GCT TGC GGT GGA GGC
    AAA AAT TGT CAA CTG AGC AGT TCT GGA AAT CAG TGC GTC CAT GGG
    GAA GGT ACT CCG AAG CCT AAG AGC CAG ACT GAA GGC GAT TTC GAA
    GAA ATC CCA GAT GAA GAT ATA TTG AAT TAA
  33. 제31항 또는 32항에 있어서 하기 서열이 바로 직전에 선행하는 DNA 서열.
    ATG TTC TCT CTC AAG TTG TTC GTT GTC TTC CTG GCT GTT TGC ATC
    TGC GTG TCT CAA GCA.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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