KR900013078A - 아미드화 효소 발현계 - Google Patents
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Abstract
내용 없음
Description
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 알파-아미드화 효소용 포유류 발현벡터의 제조공정도.
제2도는 알파-아미드화 효소용 원핵생물 발현벡터의 제조 공정도.
제3도는 생육배지에 IPTG를 첨가시키거나 (+) 또는 첨가시키지 않았을 때(-) 표시된 플라스미드(실시예 1에 나타낸 특징을 가짐)을 지니는 에스케리치아 콜라이 (Escherichiacoil: 이하 이, 콜라이라 칭함) JM 105로부터의, 쿠마씨 블루로 염색된 불용성 단백질 분획의 SDS-PAGE전기영동사진임.
Claims (33)
- 알파-아미드화 효소의 플리펩티드 배열을 발현시킬수 있는 숙주로서, 이때 상기 숙주가, 상기 숙주에 대해 외래이며 상기 아미드화 효소를 암호화하는 DNA배열을 하류에 수반하는 전사 프로모터를 포함하는 발현벡터를 함유하고, 상기 벡터는 상기 숙주에서 폴리펩티드를 포함하는 발현벡터를 함유하고, 상기벡터는 상기 숙주에서 폴리펩티드를 발현시킬 수 있음을 특징으로하는, 알파-아미드화 효소의 폴리펩티드 배열을 발현시킬수 있는 숙주.
- 알파-아미드화 효소의 폴리펩티드 배열을 발현시킬수 있는 숙주로서, 이때 상기 숙주가, 상기 숙주에 대해 외래이며 엄격한 조건하에서 다음의 DNA배열과 하이브리다이즈할 수 있는 DNA배열을 하류에 수반하는 전사프로모터를 포함하는 발현벡터를 함유함을 특징으로하는 알파-아미드화 효소의 폴리펩티드 배열을 발현시킬수 있는 숙주.
- 알파-아미드화 효소의 폴리펩티드 배열을 발현시킬수 있는 숙주로서, 이때 상기 숙주가, 상가 숙주에 대해 외래이며 엄격한 조건하에서 다음의 DNA 배열과 하이브리다이즈 할수 있는 DNA배열을 하류에 수반하는 전사 프로모터를 포함하는 발현벡터를 함유함을 하류에 수반하는 전사 프로모터를 포함하는 발현벡터를 함유함을 특징으로하는 알파-아미드화 효소의폴리 펩티드 배열을 발현시킬수 있는 숙주.
- 제1항에, 제2항 또는 제3항에 있어서, 상기 DNA배열이 그렇지않으면 막 스패닝 영역을 암호화하였을 배열의 상류에 종결코돈을 포함함을 특징으로하는 알파-아미드화 효소의 폴리 펩티드 배열을 발현시킬 수 있는 숙주.
- 제4항에 있어서, 상기 종결코돈이 그렇지않으면 연속적인 라이신 잔기를 암호화하였을 때 배열의 상류에 위치함을 특징으로하는 알파-아미드화 효소의 폴리펩티드 배열을 발현시킬 수 있는 숙주.
- 윈핵세포에서 알파-아미드화 효소의 폴리펩티드 배열을 발현시킬수 있는 발현벡터로서, 상기 벡터는 아미드화 효소 암호화 영역을 갖는 제1DNA 배열을 그 하류에 수반하는 전사프로모터를 함유하고, 상기 제1배열을 자연적인 아미드화 효소를 발현시키는 자연적 DNA 배열과 충분히 상동적이어서 엄격한 조건하에서 상기 자연적 배열과 하이브리다이제이션을 행할수 있고, 또한 상기 제1배열이 상기 효소암호화 영역 개시부로부터 약50 뉴클레오티드 히내에 개시 메티오닌 코돈을 함유함을 특징으로하는, 원핵세포에서 알파-아미드화 효소의 폴리펩티드 배열을 발현시킬수 있는 발현벡터.
- 제6항에 있어서, 상기 효소 암호화 영역의 최초의 3코돈이 아미노산 배열 ser-x-ser(이때 X는 phe 또는 leu 임)을 암호화 하는 것이 특징인 원핵세포에서 알파-아미드화 효소의 폴리펩티드 배열을 발현시킬수 있는 발현벡터.
- 제6항에 있어서, 상기 개시 메티오닌 코돈이 상기 효소 암호화 영역의 개시부로부터 상류 50뉴클레오티드이내에 위치함을 특징으로하는 원핵세포에서 알파-아미드화 효소의 폴리펩티드 배열을 발현시킬수 있는 발현벡터.
- 제6항에 있어서, 상기 효소발현 배열이 그렇지않으면 막스패닝 영역을 암호화하였을 배열의 상류에 종결 코돈을 포함하는 것이 특징인 원핵세포에서 알파-아미드화 효소의 폴리펩티드배열을 발현시킬수 있는 발현벡터.
- 제6항에 있어서, 상기 개시 메티오닌 코돈과 상기 종결 코돈 사이에 내재 개시부위가 일어나지 않는 것이 특징인 원핵세포에서 알파-아미드화 효소의 폴피펩디드 배열을 발현시킬수 있는 발현벡터.
- 제10항에 있어서, 개시 메티오닌 코돈과 상기 종결코돈사이에 위치하는 리보조옴 결합부위를 암호화하는 모든 DNA배열이, SDS폴리아크릴아미드 젤 상에서의 전기영동후 별개의 밴드로서 관찰될 수 있을 정도의 양으로 폴리펩티드가 번역 및 내재 개시되는 것을 방지할 수 있을만큼 개시코돈으로부터 충분히 멀리 위치함을 특징으로하는 원핵세포에서 알파-아미드화 효소의 폴리펩티드 배열을 발현시킬수 있는 발현벡터.
- 제6항에 상기 자연적인 DNA배열이 다음의 배열인 것이 특징인 원핵세포에서 알파-아미드화 효소의 폴리펩티드 배열을 발현시킬수 있는 발현벡터.
- 제6항에 있어서, 상기 자연적인 DNA배열이 다음의 배열인 것이 특징인 원핵세포에서 알파-아미드화 효소의 폴리펩티드 배열을 발현시킬수 있는 발현벡터.
- 제13항에 있어서, 상기 종결 코돈이 염기 1148과 1492사이에 위치하는 것이 특징인 원핵세포에서 알파-아미드화 효소의 폴리펩티드 배열을 발현시킬수 있는 발현벡터.
- 제13항에 있어서, 상기 종결코돈이 염기 1148과 1208사이에 위치하는 것이 특징인 원핵세포에서 알파-아미드화 효소의 폴리펩티드 배열을 발현시킬수 있는 발현벡터.
- 제12항에 있어서, 상기 종결코돈이 염기 2025과 2275사이에 위치하는 것이 특징인 원핵세포에서 알파-아미드화 효소의 폴리펩티드 배열을 발현시킬수 있는 발현벡터.
- 제6항에 있어서, 상기 종결코돈이 연속적인 염기 아미노산 배열을 암호화하는 DNA배열의 5개 코돈 이내에 위치하는 것이 특징인 원핵세포에서 알파-아미드화 효소의 폴리펩티드 배열을 발현시킬수 있는 발현벡터.
- 제7항에 있어서, 상기 개시 메티오닌 코돈이 ser-x-ser(X는 phe 또는 leu임)을 암호화하는 상기 DNA배열의 직전에 위치하는 것이 특징인 원핵세포에서 알파-아미드화 효소의 폴리펩티드 배열을 발현시킬수 있는 발현벡터.
- 진핵세포에서 알파-아미드화 효소의 폴리펩티드 배열을 발현시킬수 있는 발현벡터로서, 상기 백터는 아미드화 효소암호화 영역을 갖는 제1DNA 배열을 그 하류에 수반하는 전사 프로모터를 함유하고, 상기 제1배열은 자연적인 아미드화효소를 발현시키는 자연적 DNA 배열과 충분히 상동적이어서 엄격한 조건하에서 상기 자연적 배역과 하이브리다이제이션을 행할수 있고, 또한 상기 제1배열이 그렇지안흥면 막 스패닝영역을 암호화하였을 배열의 상류에 종결코돈을 함유함을 특징으로하는, 진핵세포에서 알파-아미드화 효소의 폴리펩티드배열을 발현 시킬수 있는 발현벡터.
- 제19항에 있어서, 상기 자연적 DNA배열이 다음의 배열인 것이 특징인 진핵세포에서 알파-아미드화 효소의 폴리펩티드 배열을 발현시킬수 있는 발현벡터.
- 제19항에 있어서, 상기 자연적 DNA배열이 다음의 배열인 것이 특징인 진핵세포에서 알파-아미드화 효소의 폴리펩티드배열을 발현시킬수 있는 발현벡터.
- 제21항에 있어서, 상기 종결코돈이 염기 1148과 1492 사이에 위치하는 것이 특징인 진핵세포에서 알파-아미드화 효소의 폴리펩티드 배열을 발현시킬수 있는 발현벡터.
- 제21항에 있어서, 상기 종결코돈이 염기 1148과 1208 사이에 위치하는 것이 특징인 진핵세포에서 알파-아미드화 효소의 폴리펩티드 배열을 발현시킬수 있는 발현벡터.
- 제19항에 있어서, 상기 종결코돈이 연속적인 염기성 잔기를 암호화하는 DNA배열의 5개의 코돈 이내에 위치하는 것이 특징인 진핵세포에서 알파-아미드화 효소의 폴리펩티드 배열을 발현시킬수 있는 발현벡터.
- 제20항에 있어서, 상기 종결코돈이 염기 2025과 2075 사이에 위치하는 것이 특징인 진핵세포에서 알파-아미드화 효소의 폴리펩티드 배열을 발현시킬수 있는 발현벡터.
- 제21항에 있어서, 상기 벡터가 상기 제1DNA배열을 pdBPVMTNeo, PSV2, pRSV pMAMNeo, peuk=C1, PCH 110 및 이들의 유도체중에서 선택된 발현계와 결합(ligating)시킴으로써 만들어짐을 특징으로하는 진핵세포에서 알파-아미드화효소의 폴리펩티드 배열을 발현시킬수 있는 발현벡터.
- 제6항의 발현벡터를 함유함을 특징으로하는 원핵세포숙주.
- 제19항의 벡터를 함유하는 진핵세포 숙주로서, 상기 숙주가 ⅣⅠ 기탁물 1039, Hela, CV1, C127,CHO(Chinese Hamster Ovary) 및 COS중에서 선택되는 것이 특징인 진핵세포숙주.
- 제19항의 발현벡터를 함유함을 특징으로하는 진핵세포숙주.
- 하류에 다음의 DNA 배열을 수반하는 전사 프로모터를 포함하는 발현 벡터를 함유함을 특징으로하는, 알파-아미드화 효소의 폴리펩티드 배열을 발현시킬수 있는 숙주.
- 하류에 다음의 DNA 배열을 수반하는 전사 프로모터를 포함하는 발현벡터를 함유함을 특징으로하는, 알파-아미드화 효소의 폴리펩티드 배열을 발현시킬수 있는 숙주.
- 제13항에 있어서, 상기 종결코돈이 염기 2340과 2690사이에 위치하는 것이 특징인 원핵세포에서 알파-아미드화 효소의 폴리펩티드 배열을 발현시킬수 있는 발현벡터.
- 제21항에 있어서, 상기 종결코돈이 염기 2340과 2690사이에 위치하는 것이 특징인 진핵세포에서 알파-아미드화 효소의 폴리펩티드 배열을 의하여 공개하는 것임.※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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