KR890000825B1 - 폴리에틸렌이민 결합의 크로마토그라피 충전제 - Google Patents

폴리에틸렌이민 결합의 크로마토그라피 충전제 Download PDF

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Abstract

내용 없음.

Description

폴리에틸렌이민 결합의 크로마토그라피 충전제
본 발명에 따르면, 평균입경(粒經)이 약 3 내지 70미크론이고 평균기공 크기가 약 50 내지 약 1000Å 단위인 입상(粒狀)의 실리카켈을 평균분자량이 약 400 내지 1800인 폴리에틸렌이미노-푸로필 트리메톡시 실란(PEIPr-triMeO-silane)과 반응시킨다.
반응생성물인 비-가교(架橋)공유 결합된 폴리에틸렌이미노푸로필실릴-실릴카켈(PEI-PrSi-silica gel)은 이온교환 매체로서의 역할을 하기 때문에 음이온의 정제와 분리를 위한 액상 크로마토그라피에 있어서 컬럼 충전제로서 유용하다. 고성능 액상 크로마토그라피(high-performance liquid chromatographic〓HPLC) 용도로는 PEI -PrSi-실리카켈이 단백질 혼합물의 분리와 분석에 유용하다.
상기의 PEI-PrSi-실리카겔은 양이온성 단백질의 정제와 분리에 적당한 카르복실산염 형태로 전환시킬 수도 있다.
이와 유사하게 유용한 생성물은 평균입경이 약 37 내지 177 미크론이고 평균 기공크기가 약 40 내지 약 1000Å 단위인 조절된 기공의 입상유리와 PEIPr-triMeO-실란과의 최초 반응으로부터도 얻는다.
알퍼어트와 레그니어는 크로마토그라프지에서(Alpert and Regnier, J. Chrom atogr 185,375-392, 1979참조) 폴리에틸렌이민(PEI)이 실리카표면에 흡착될 수 있으며, 이에 따라 다관능성 옥시란에 의하여 고분자층내로 가교될 인접하는 흡착된 PEI 분자상에 1차 및 2차 이미노기를 충분히 공급하게 된다는 것을 발표하였다.
근래에는 가교된 폴리에틸렌이민으로 피복된 미세입상 실리카의 컬럼과 함께 고성능 액상 크로마토그라피(HPLC)를 사용한 합성 올리고 뉴클레오티드의 분리가 문헌에 보고된 바 있다(T.G.Lawson et al., Anal. Biochem. 133, 85-93, 1983참조).
이와 반대로 본 발명은 비-가교된 폴리에틸렌이미노프로필 실란이 흡착되는 것이 아니고 공유 결합된, 다공성 실리카나 유리 지지체를 제공하는 것이다.
본 발명의 상세한 설명하면 다음과 같다.
본 발명의 비-가교된 공유결합의 PEI 실리카겔과 유리 생성물은 다음과 같은 단계에 따라 용이하게 제조된다.
A. 평균 입경이 약 3 내지 70 미크론이고 평균 기공크기가 약 50 내지 1000Å 단위인 입상 실리카겔이나, 또는 평균 입경이 약 37 내지 177 미크론이고 평균 기공 크기가 약 40 내지 1000Å인 단위의 조절된 기공의 유리를 비활성 유기용제 슬러리내에서 평균분자량이 약 400 내지 약 1800인 폴리에틸렌이미노프로필 트리메톡시 실란의 저급 알칸올성 용액과 함께 반응시키되, 이 반응은 실온 환류온도에서 약 2 내지 50시간 동안 수행한다.
B. 반응 혼합물로부터 생성 고체분별물을 회수한다.
C. 실란을 건조시켜서 각개의 실리카겔이나 조절된 기공성 유리에 완전히 결합되기에 충분한 온도와 시간으로 상기 고형분별물을 가열한다.
본 명세서에서 사용된 ″공유결합된″이란 용어는 PEI기가 화학 상호작용에 의하여 실리카겔이나 조절된 기공성 유리에 공유 부착되어 푸로필-실린(Pr-Si)연결을 생성시킴을 의미하여 ; ″비-가교된″이란 용어는 인접된 공유결합 PEI 기상의 이미노 및 아미노기가 가교되지 않거나 가교제와 반응하지 않고 중합체 층을 형성하는 것을 의미한다.
이에 따라 결합된이 없이 반응이 다음과 같은 2단계로 진행, 완료되는 것으로 생각된다.
단계 1 : 실란상의 실리카 히드록실과 메톡시기가 약간의 미반응된 잔류 메톡시기와 반응하여 Si-O-Si 결합과 유리 메탄올을 형성한다.
[반응식 1]
Figure kpo00001
단계 2 : 잔류메톡시기에 의한 반응의 완결은 a)와 b)에 의한 가열경화중에 수행한다.
[반응식 2]
Figure kpo00002
무정형실리카로 구성되는 실리카겔은 불규칙한 구형(바람직한 것)입상 형으로, 3 내지 325(ASTM)멧쉬 크기 범위의 여러 상용 등급으로 시판되고 있다. 그러나 멧쉬크기의 숫적 표시를 신뢰하기 보다는 본 발명 목적을 위한 정확한 표시는 실리카겔 입자의 평균 직경과 기공크기가 각각 약 3 내지 70 미크론 및 약 50 내지 1000, 바람직하게는 250 내지 500Å 단위인 것이다. HPLC 크로마토그라피 컬럼 충전에 있어서 최종생성물을 용도로는 약 3 내지 10미크론의 실리카겔 출발물이 바람직하고, 저압 크로마토그라피 컬럼 충전을 위하여는 약 40 내지 70미크론이 바람직하다.
조절된 기공성 유리(Controlled pore glass=CPG)는 액상 크로마토그라피 실리카와 유사한 규산염 함유 지지체물질로서, 예컨대 피어스 화학사(Pierce Chemical Co., Rockford, Illinois)로부터 시판되고 있으며 평균 입경이 37 내지 117미크론이고 평균 기공크기가 40 내지 1000Å, 바람직하게는 40 내지 500Å이다.
실리카겔이나 CPG 슬러리의 제조에 적당한 비활성 유기 용제중에는 예컨대 헥산, 헵탄등과 같은 지방족 탄화수소 ; 벤젠, 톨루엔, 크실렌등과 가타은 방향족 탄화수소 ; 에탄올, 이소푸로판올, 부탄올등과 같은 저급알칸올 ; 염화메틸렌, 클로로포름, 4염화탄소등과 같은 염화메탄(주의 : 이와같은 염소용제는 고온에서 반응할 수도 있다) ; 및 테트라히드로 푸란, 글라임(glyme), 디글라임과 같은 기타 비활성 용제 등이 있다. 일반적으로 gr으로 표시한 실리카겔이나 CPG 대(對)ml로 표시한 용제 비율 1 : 5는 적당한 슬러리를 부여할 수 있다. 실리카겔과 CPG의 미세성과 불용성때문에 진용액보다는 슬러리를 얻게 된다.
(N-트리메톡시실릴푸로필)-포리에틸렌이민으로서도 공지된 폴리에틸렌이미노푸로필 트리메톡시 실란은 폴리에틸렌이민과 아미노푸로필트리메톡시 실란과의 반응생성물이며, 다음과 같은 일반식으로 표시한다.
[화학식 1]
Figure kpo00003
상기식에서, n은 본 발명목적을 위하여는 약 4 내지 37이며, 또는 평균분자량에 따라 표시하면 약 400 내지 1800이다.
실란(I)은 실란을 용해하기 위한 충분한 알칸올을 사용하는 저급 C1-C6알칸올성 용액의 형태로 실리카겔이나 CPG와의 반응에 사용된다. 50% w/w이소푸로판올성 용액이 바람직하다.
일반적으로 약 50% w/w 실란의 알칸올성 용액 약 50 내지 200ml가 각각 100gr의 실리카겔이나 CPG와의 반응에 이용된다. 반응속도를 증진시키기 위하여는 반응용제계의 환류온도까지의 고온이 이용될 수 있으나, 반응은 실온에서 수행될 수 있다. 반응은 용이하게 진행되어 실질적으로 2 내지 50시간내에 완결(단계 1)된다. 반응물의 혼합중 교반하는 것이 유리하나 그 후의 반응은 더 교반하지 않고 계속될 수 있다. 무수조건이 임계적인 것은 아니며, 소량의 수분의 존재, 예컨대 슬러리 용제 50ml당 약 0.1 내지 10.ml는 반응에 악영향을 주지 않는다.
종래의 물리적 방법, 예컨대 여과, 원심분리등에 의하여 반응혼합물로부터 생성 고형분별물을 회수한다.
일반적으로 5미크론의 입도를 보유하기에 충분한 여과방법이 적당하지만 3미크론의 입도에 대하여는 원심분리가 적당하다.
회수된 고형분별물을 다음에 실란을 건조하여 실리카겔이나 CPG에 완전 공유결합되기에 충분한 온도와 시간으로 가열 강화시킨다. 일반적으로 40 내지 120℃에서 약 1 내지 4시간이 충분한 것으로 발견되었다.
이와 같이 얻어진 공유결합된 비-가교의 최종생성물은 약 5.0 내지 약 3.8%의 질소를 함유한다.
이와 같이 얻어진 PEI-PrSi-실리카겔 또는 PEI-PrSi-CPG 생성물은 비활성용제내에서의 적당한 2염기성산무수물에 의하여 통상적인 처리를 함으로써(예컨대 S. Gupta et al., Anal. Biochem. 128, 196-201, 1983참조) 약산성 카르복실산염으로 전환될 수 있다. 이와 같은 전형적인 무수물에는 예컨대 무수숙신산, 무수글루타르산, 무수디글리콜산등이 포함된다. PEI 기상의 실질적인 모든 아미노와 아미노와의 반응에는 충분한 무수물을 사용한다. 생성되는 숙신오일화된 생성물의 카르복실기 수는 예컨대 적당한 알카리에 대한 표준 적정에 의하여 측정될 수 있다. 본 발명 목적을 위하여는 최종생성물 1gr당 카르복실 밀리당량은 약 0.3 내지 약 1.2가 바람직하다.
따라서 본 발명은 푸로필-실릴(Pr-Si)연결에 의하여 시리카겔이나 조절된 기공성 유리에 공유결합된 비-가교의 폴리에틸렌이민(PEI) 관능성을 제공한다. 상기의 PEI-PrSi-실리카겔 또는 PEI-PrSi-CPG 생성물은 음이온성물질의 정제와 분리에 신규하고 유용하며, 또한 카르복실산염형으로는 컬럼 크로마토그라피에 의하여 양이온성물질, 즉 단백질, 올리고뉴클레오티드 및 기타 전하를 갖는 분자의 정제와 분리에 신규하고 유용하게 결합된 상(相)을 구성하며, 특히 현대적 HPLC 장치에 적합하다. 충전은 여러가지 멧쉬 크기로, 예컨대 약 50 내지 600멧쉬로 될 수 있다.
본 발명에서 조작가능한 분리에 적당한 방법의 실시예는 정상상태의 흡수가교된 PEI-실리카 형에 대한 문헌, 예컨대 티.지.로우슨(T.G.Lawson)씨등이 발표한 합성 올리고뉴클레오티드의 분리에 대한 문헌에 이미 기록 된 것과 같다.
[실시예 1]
A. 평균입경이 40미크론이고 평균 기공크기가 60Å이고, 제이.티.베이커 화학사(J.T.Baker Chem. Co., Phillipsburg, NJ)에서 시판하고 있으며, ″실리카겔 #70 24″와 같이 불규칙한 형태의 실리카겔 10gr을 톨루엔 50ml내에서 슬러리화 시킨것에, 평균분자량이 400 내지 600(500으로 가정)이며 페트라아취시스팀(Petrarch Systems Inc., Bristol, PA.)으로부터 ″(N- 트리메톡시실릴-푸로필)폴리에틸렌이민 PS076″으로서 시판되고 있는 폴리에틸렌이미노푸로필 트리메톡시 실란의 50%w/w 이소푸로판올성 용액 19.71gr을 교반하면서 가한다.
이 혼합물을 실온(약 25℃)에서 약 1시간 10분간 교반한 다음, 교반하지 않고 하룻밤(약 17시간) 방치한다.
교반을 실온에서 5시간 40분 더 개시하고 혼합물을 하룻밤 더 방치한다. 다음에 혼합물을 중간정도의 프릿트 유리 여과기에서 여과한다. 여과액을 50ml를 톨루엔으로 2회, 50ml 메탄올로 2회 세척하여 과량의 실란 반응물의 제거를 확실히 한 다음 80 내지 85℃에서 약 3시간 30분 건조시켜 약 12gr의 공유결합된 PEI-실리카겔 생성물을 얻는다 : 약 3.9%N.
B. 실시예 1-A의 과정을 반복하되, 단 1ml의 물을 실리카겔/실란 혼합물에 가한다. 결합 실리카겔 생성물의 수율은 약 13.3g :약 5.5N%이다.
[실시예 2]
평균입경이 5.25미크론이고 평균기공 크기가 330Å이며, 세프 에이 라 티온 그룹(Sep A Ra Tion Group, Hesperia, CA)에서 구형실리카로서 ″Vydac A″ Catalog No. 101T9B5)라는 상표명으로 시판하고 있는 실리카겔 20gr을 100ml 톨루엔과 2ml의 물에서 슬러리화하여 실온에서 10분간 교반한다. 여기에 평균분자량이 500인 폴리에틸렌이미노푸로필 트리메톡시 실란의 50% w/w 이소푸로판올성 용액 39.4gr을 교반하면서 가하고, 혼합물을 5분간 더 교반한다. 다음에 반응혼합물을 실온에서 하룻밤 방치한다. 이 반응혼합물을 1.0미크론 여과 퍼넬을 사용하여 여과한다. 여과액을 50ml 톨루엔으로 2회, 50ml 메탄올로 2회 세척한 다음 퍼넬상에서 풍건하고, 마지막으로 80 내지 85℃에서 약 3시간 30분간 노에서 건조시켜 PET 결합 실리카겔 생성물을 얻는다 : 약 2.85%N.
[실시예 3]
평균입경이 40 내지 63미크론이고, 평균 기공크기가 420Å이며, 이 메르크 시약사(E.Merck Reagent, Germany)에서 ″Fractosil 500″이란 상표명으로 시판하고 있는 230 내지 400멧쉬(ASTM)의 실리카겔 20g을 50ml의 메탄올과 1ml의 물에서 슬러리화하여 5분간 실온에서 교반한다. 평균분자량이 1800인 폴리에틸렌이미노푸로필 트리메톡시 실란의 50% w/w 이소푸로판올성 용액 11.2gr을 100ml 메탄올에 녹인 분리용액을 역시 제조한다. 다음에 실란용액을 교반하여 5분간에 걸쳐서 실리카겔슬러리에 가한다. 첨가 완료후 교반을 중단하고, 혼합물을 실온에서 50시간 동안 방치한다.
여액을 진공하에서 3×50ml메탄올로 세척한 다음 80 내지 85℃에서 4시간동안 노내에서 건조하여 PEI 결합 실리카겔 생성물을 생성시킨다 : 약 1.1%N.
[실시예 4]
전술한 실시예의 내용에 따라 다음과 같은 반응혼합물을 제조한다.
Figure kpo00004
각개의 반응혼합물을 5분간 실온에서 교반한 다음, 실온에서 교반하지 않고 41시간 30분간 방치한다.
각 혼합물을 여과하여 50ml 이소푸로판올로 1회, 50ml 메탄올로 2회 세척한다. 각 여액을 노에서 80 내지 85℃로 3시간 12분간 건조하여 각각의 PEI 결합 실리카겔 생성물을 얻는다 : A : 1.2%N, B : 1.0%N, C : 0.9%N.
[실시예 5]
A. 평균입경이 40미크론이고 평균 기공크기가 50Å인 실리카겔 10gr을 50ml의 헥산에서 슬러리화시킨 것에 500의 평균분자량을 갖는 PEIPr-triMeO-실란의 50% w/w i-PrOH 용액 19.71gr을 가한다. 이 혼합물을 실온에서 5분간 교반한 다음-약 2시간동안 환류온도까지 가열한다. 이 혼합물을 실온까지 냉각시키고 여과후 50ml 헥산으로 2회, 50ml 메탄올로 2회 세척한다. 다음에 여액을 노에서 80 내지 85℃로 약 3시간 건조시켜 PEI 결합 실리카겔 생성물을 얻는다.
B. 실시예 5-A의 과정을 반복하되, 단 상기에서 사용된 실리카겔에 동량의 조절된 기공의 유리(125미크론, 240Å)를 대체시켜서 상응하는 공유결합된, 비-가교의 PEI-PrSi-CPG 생성물을 생성케 한다.
[실시예 6]
실시예 2의 과정을 반복하되, 단 125ml의 톨루엔과 2.5ml의 물내의 실리카 겔(5.25미크론 ; 330Å) 25gr을 PEIPr-triMeO-실란(분자량 500)의 50% w/w i-PrOH 용액 50gr과 반응시켜 약 29.4gr의 PEI 결합 실리카겔 생성물을 얻는다. 다음에 이 생성물을 125ml의 톨루엔과 10gr의 무수숙신산과 혼합시키고, 이 혼합물을 80℃의 수욕에서 2시간동안 회전시킨다. 이 기간 종말에 20ml의 메탄올을 가하고, 이 혼합물을 여과한다. 회수된 숙신 오일화된 PEI 결합 실리카겔 생성물을 연속하여 1×50ml 톨루엔, 2×50ml 메탄올 및 1×50ml 에틸에테르로 세척한다. 다음 이 생성물을 약 80℃에서 약 48분간 건조시킨다. 생성물을 1N 수산화나트륨으로 적정한 결과 생성물 1gr당 약 0.65의 카르복실 밀리당량이 나타났다.
[실시예 7]
실시예 2 생성물(3.6gr)의 메탄올성(25ml) 슬러리를 250×4.6mm의 스테인레스 강철 컬럼에 가압-충전하고, 충전된 컬럼을 pH 6.8에서 1ml/분의 유동속도로 0.025M 인산칼륨 완충액을 통하여 펌핑시킴으로써 평형되게 한다. 평형후 이들(단일)컬럼을, 상용등급의 씨토크롬 c, 알파1-산 글리코단백질, 오발부민 및 베타-락토글로불린을 함유하는 단백질용액의 크로마토그라피 분석에 사용한다. 각개 단백질 1mg을 함유하는 단백질용액 4mg 용액을 평형이 이루어진 컬럼에 가하고, 0.25M 인산칼륨, pH 6.8로부터 0.50M 인산칼륨, pH 6.8까지 1ml/분의 유동속도로 20분의 선상구배로 분리조작을 수행한다. 이들 단백질은 보유시간이 씨토크롬 c에 대하여는 2.8분, 알파 1-산 글리코단백질에 대하여는 9.0분, 오발부민에 대하여는 9.7이며 베타-락토글로불린에 대하여는 10.5 및 11.0분에서 2중선인 정확한 대칭 정점으로서 크로마토그라피된다. 개별적으로 분석된 각 단백질의 280nm 흡수물질 모두를 수집하고, 이로서 상기단백질의 공지된 표준에 대하여 그의 흡수를 비교함으로써 정량이 가능하다. 각 단백질에 대한 회수는 > 95%이다.
음이온성 단백질 용액은 본 명세서에서 설명한 약염기성 형의 컬럼에 의하여 보유될 수 있고, 이동상의 이온 강도나 pH를 변화시킴으로써 구배용리에 의하여 분리될 수 있음을 이해하여야 한다.
[실시예 8]
실시예 6의 숙신오일화된 생성물(3.6gr)의 메탄올성(25ml)슬러리를 250× 4.6mm의 스텐인레스강철 컬럼에 가압충전하고, pH 6.0으로 1ml/분의 유동속도로 0.0 10M 인산칼륨 완충액을 통하여 펌핑함으로써 충전된 컬럼을 평형시킨다. 평형화후에 이들(단일) 컬럼을, 상용등급의 오발부민, 씨토크롬 c, 헤모글로빈 및 리소자임을 함유하는 단백질용액의 크로마토그라피 분석에 사용한다. 각 단백질 1mg을 함유하는 단백질용액 4mg을 평형된 컬럼에 가하고, 0.010M 인산칼륨, pH 6.0으로부터 0.750M 인산칼륨, pH 6.0까지, 1ml/분의 유동속도로, 20분의 선상구배로 분리를 수행한다. 이들 단백질은 그 보유시간이 오발부민에 대하여는 약 3.0분, 헤모글로빈에 대하여는 11.4분, 씨토크롬 c에 대하여는 13.5분, 리소자임에 대하여는 18분인 정확한 대칭정점으로서 크로마토그라피된다.
개별적으로 분석된 각개 단백질의 280nm 흡수물질 모두를 수집하며, 이로써 상기 단백질의 공지된 표준에 대하여 그의 흡수를 비교함으로써 정량이 가능하게 된다.
양이온성 단백질 용액을 본 명세서에서 기술된 약 양이온성 형의 컬럼에 의하여 보유될 수 있고, 이동상의 이온강도가 pH를 변화시킴으로써 구배용리에 의하여 분리될 수 있다는 것을 이해하여야 한다.

Claims (7)

  1. 평균입경이 약 3 내지 약 70미크론이고 평균기공 크기가 약 50 내지 약 1000Å 단위인 입강의 실리카겔이나 또는 평균입경이 약 37 내지 약 177미크론이고 평균기공 크기가 약 40 내지 약 1000Å 단위인 입상의 조절된 기공성 유리와, 평균분자량이 약 400 내지 약 1800인 폴리에틸렌이미노프로필 트리메톡시 실란과의 공유결합된 비-가교의 폴리에틸렌이민 반응생성물에 있어서, 반응생성물의 폴리에틸렌이민기가 화학적 상호 작용에 의해 실시카겔이나 조절된 기공성 유리에 공유 부착되어 프로필-실릴 연결을 생성시키고 인접 공유 결합된 폴리에틸렌이민 기상의 이미노 및 아미노기기 가교되지 않거나 가교제와 반응하지 않고 중합체층을 형성하는 것을 특징으로 하는 반응 생성물.
  2. 제1항에 있어서, 입상의 실리카겔이 약 5 내지 약 40미크론의 평균입경과 약 50 내지 약 330Å단위의 평균기공 크기를 가지며, 폴리에틸렌이미노프로필 트리메톡시 실란은 약 400 내지 약 600의 평균분자량을 갖는 것을 특징으로 하는 반응 생성물.
  3. 제1항에 있어서, 입상의 실리카겔이 약 40 내지 62미크론의 평균입경과 약 420Å 단위인 평균 기공 크기를 갖고, 폴리에틸렌이미노프로필 트리메톡시 실란은 약 1000의 평균 분자량을 갖는 것을 특징으로 하는 반응 생성물.
  4. a. 평균입경이 약 3내지 약 70미크론이고 평균기공 크기가 약 50 내지 1000Å 단위인 입상의 실리카겔이나 또는 평균입경이 약 37 내지 약 177미크론이고 평균기공 크기가 약 40 내지 약 1000Å단위인 입상의 조절된 기공성 유리와, b. 평균분자량이 약 400 내지 약 1800인 폴리에틸렌이미노 프로필 트리메톡시 실란과의 반응생성물을 이어서, c. 비활성 유기용제내에서 2염기성 무수산과의 반응에 의하여 이루어지는 1gr당 약 0.3 내지 약 1.2의 카르복실 밀리당량을 함유하는 약산성의 카르복실화된 공유결합된 비가교의 폴리에틸렌이민 반응 생성물.
  5. 제4항에 있어서 비활성 유기용제내에서 무수숙신산과의 반응에 의하여 1gr당 약 0.8의 카르복실 밀리당량을 함유하는 약산성의 카르복실화 생성물로 전환된 것을 특징으로 하는 반응 생성물.
  6. a. 평균입경이 약 3 내지 약 70미크론이고, 평균기공 크기가 약 50 내지 1000Å단위인 입상의 실리카겔이나 또는 평균입경이 약 37 내지 약 177미크론이고 평균기공 크기가 약 40 내지 약 1000Å단위인 입상의 조절된 기공성 유리를 비활성 유기용제 슬러리내에서 평균분자량이 약 400 내지 1800인 폴리에틸렌 이미노프로필 트리메톡시 실란의 저급 알칼올성 용액과 함께 반응시키되, 이때의 반응은 실온 내지 환류온도에서 약 2 내지 약 50시간동안 수행하는 단계와 ; b. 반응혼합물들로부터 생성되는 고체 분별물을 회수하는 단계와 ; c. 실란을 건조시켜서 각각의 실리카겔이나 조절된 기공성 유리에 완전히 결합시키기 위해 약 40-120℃에서 약 1~4시간동안 상기 고체 분별물을 가열하는 단계 ; 로 구성되는 것을 특징으로 하는 반응생성믈의 폴리에틸렌이민기가 화학적 상호 작용에 의해 실리카겔이나 조절된 기공성 유리에 공유 부착되어 프로필-실릴 연결을 생성시키고 인접 공유 결합된 폴리에틸렌이민기상의 이미노 및 이미노기가 가교되지 않거나 가교제와 반응하지 않고 중합체층을 형성하는 것을 특징으로 하는 공유 결합된 비-가교의 폴리에틸이민 반응 생성물의 제조방법.
  7. a. 평균입경이 약 3 내지 약 70미크론이고 평균기공 크기가 약 50 내지 1000Å단위인 입상의 실리카겔이나 또는 평균입경이 약 37 내지 약 177미크론이고 평균기공 크기가 약 40 내지 약 1000Å단위인 입상의 조절된 기공성 유리를 비활성 유기용제 슬러리내에서, 평균 분자량이 약 400 내지 약 1800이 폴리에틸렌이미노프로필 트리메톡시 실란의 저급 알칸올용액과 함께 실온 내지 환류온도에서 약 2 내지 약 50시간동안 반응시키는 단게와 ; b. 반응혼합물로부터 생성되는 고체분별물을 회수하는 단계와 ; c. 실란을 건조시켜 각개 실리카겔이나 조절된 기공성 유리에 완전히 결합시키기 위해 약 40-120℃에서 약 1~4시간동안 상기 고체분별물을 가열하는 단계와 ; d. 생성되는 공유결합된 비-가교의 생성물을 비활성 유기용제내에서 2염기성 무수산과의 반응에 의하여 1gr당 약 0.3내지 약 1.2의 카르복실 밀리당량을 함유하는 카르복실화 생성물로 전환시키는 단계 ; 로 구성되는 것을 특징으로 하는 공유결합된 비-가교의 폴리에틸이민 반응 생성물의 제조방법.
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