JPH0366701A

JPH0366701A - α―シクロデキストリンの吸着材およびその用途

Info

Publication number: JPH0366701A
Application number: JP20314789A
Authority: JP
Inventors: Yukio Tsuchiyama; 土山　幸夫; Hideo Nomura; 秀雄野村; Mitsuyasu Okabe; 満康岡部; Rokuro Okamoto; 岡本　六郎
Original assignee: Mercian Corp
Current assignee: Mercian Corp
Priority date: 1989-08-05
Filing date: 1989-08-05
Publication date: 1991-03-22
Anticipated expiration: 2013-04-28
Also published as: JP2745327B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野］本発明はα−シクロデキストリン吸着材およびその用途
に関し、さらに詳しくはα−シクロデキストリン含有水
性液、例えば未反応原料および各種の副産物を含有する
α−シクロデキストリンの生成反応混合物からα−シク
ロデキストリンを高効率かつ高選択性をもって吸着でき
る吸着材およびその用途に関する。

［従来の技術］ α−シクロデキストリンは、通常澱粉または澱粉分解物
にバチルス・マセランス（Ｂａａ　ｉ　１　］ｕｓ　　
ｍａｃｅｒａｎｓ）等の微生物が生産するシクロデキス
トリン生産酵素であるシクロデキストリングリコシルト
ランスフェラーゼ（以下ＣＧＴａｓｅという〉を作用さ
せることによって得られる。この生成反応混合物中には
目的生成物であるα−シクロデキストリンの他に未反応
の澱粉および澱粉の各種分解生成物、例えばβ−シクロ
デキストリン、γ−シクロデキストリン、オリゴデキス
トリン、グルコース、さらには使用酵素等が混在してい
るため高純度のα−シクロデキストリンを得るためには
繁雑な分Ｗ！操作を行う必要があつた９このような未反応原料および各種の副生物を含有するα
−シクロデキストリンの生成反応混合物からα−シクロ
デキストリンを回収する方法ヒして、各種の方法が提案
されてきた、例えば、特公昭第６０−２５１１８号公報はＣＧＴａｓ
ｅを用いてα−シクロデキストリンを製造する工程にお
いて、その工程中にエタノールを加え、α−シクロデキ
ストリンの生成量を増加させて結果的にα−シクロデキ
ストリンの回収を容易にする方法を開示している。特開
昭第６２−２９６６４０号公報はシクロデキストリンに
より包接されうる大きさのリガンドを結合した吸着材を
シクロデキストリンの生成反応混合物と接触させて該シ
クロデキストリンを吸着材に吸着せしめ、ついで該吸着
材をシフロブキスＩ・リンの脱着処理に付してシクロデ
キストリンを回収する方法を開示している。特開昭第６
３−１３７９０１号公報はシクロデキストリンの内部空
孔に侵入するのに適する共有結合したリガンドを含む所
望のシクロデキストリンと包接複合体を形成する吸着材
を開示している。この中でα−シクロデキストリン用の
好ましい吸着材としてドデシルアミン誘導セルロースを
挙げている。特開昭第６３−１．５４７０１号公報はシ
クロデキストリン相互の分離方法とし７て、シクロデキ
ストリン類を化学修飾したシリカ担体に吸着さぜついで
吸着されたシクロデキストリン類をエタノール水溶液に
より分別溶出させる方法を開示している。

［発明が解決しようとする課ＩＩＦ α−シクロデキストリンの製造工程中にエタノールを添
加する特公昭第６０−２５１１８号公報の方法は、α−
シクロデキストリンの収率は上がるが、反応液に未反応
の澱粉、澱粉の各種分解産物、使用酵素等が混在してい
る点に変わりはなく、高純度のα−シクロデキストリン
を容易に得るという問題を解決するものではない、シク
ロデキストリンにより包接されうる大きさのリガンドを
結合した吸着材によりシクロデキストリンを分離する特
開昭第６２−２９６６４０号公報の方法は、反応液中か
らのα−シクロデキストリンの選択的分離については未
だ十分なものとは言えない。α−シクロデキストリン用
の好ましい吸着材としてヘキシルアミン誘導セルロース
等を上げている特開昭第６３−１３７９０１号公報の方
法は、α−シクロデキストリンを高純度で回収分離する
方法としては、不十分である。化学修飾したシリカ担体
を吸着材として用いる特開閲第６３−１５４７０１月公
報の方法は、シクロデキストリン混合物中のα−シクロ
デキストリンを吸着材に選択的に吸着する４二とができ
ないので、α−シクロデキストリンの収率が低く、また
その吸着量も少ないので、工業的に満足できる方法では
ない。

上記したように、α−シクロデキストリン含有反応混合
物から、α−シクロデキストリンを高純度にかつ高収量
で回収分離できる吸着材もしくは回収分離方法として上
記の従来技術はいずれも不十分であり、また工業的に満
足できるものではない本発明は上記の課題を解決し、α−シクロデキストリン
を選択的にかつその吸着能に優九、しがも溶離操作が容
易な吸着材の提供、およびα−シクロデキストリン含有
反応混合物から容易にα−シクロデキストリンを高純度
で回収分離できる方法の提供を目的とする。

［課題を解決するための手段および作用］本発明は、炭
素数１３〜２９の脂肪族炭化水素基が共有結合により結
合されている親水性の水不溶性樹脂基体からなるα−シ
クロデキストリンの吸着材を提供する。

さらに本発明は、該吸着材にα−シクロデキストリン含
有水性液を接触させて該吸着材に吸着せしめた後、該吸
着材を脱着処理に付してα−シクロデキストリンを回収
するα−シクロデキストリンの分離、Ｍ裏方法を提供す
る。

本発明はさらに、酵素法によるα−シクロデキストリン
の生成反応を上記吸着材の存在下に行わしめて、α−シ
クロデキストリンの収量を増加する方法を提供する。

リガンド：本発明においてリガンドとして使用できる脂肪族炭化水
素基は、直鎖状、分岐状のいずれでもよいが好ましくは
直鎖状であり、その炭素数は１３〜２９、好ましくは１
３〜２３である。炭素数が上記範囲の下限よりも少ない
とα−シクロデキストリンの選択的吸着能が劣るため好
ましくない。

また炭素数が上記範囲の上限を超えるとα−シクロデキ
ストリンの吸着量が減少するので好ましくない、脂肪族
炭化水素基は、分岐状であってもよいが、直鎖状部分が
末端の炭素から数えて少なくとも１３個以上あることが
必要である。

水不溶性樹脂基体：本発明において吸着材の基体として使用できる樹脂は、
実質的に水不溶性であり、かつ後述する方法でリガンド
を導入できるものであれば、とくに制限はなく任意に選
択使用できる。その中でとくに多糖類系化合物およびポ
リアクリルアミド系樹脂を基体樹脂として用いたものは
、単位体積当たりのα−シクロデキストリンの吸着量が
大きいので好適である。

なお、本明ＩｉＩ書において樹脂基体とは樹脂の主体を
なす骨格構造部分をいい、該樹脂がリガンドを導入する
ための官能基含有側鎖を有する場合にはその側鎖を除い
た部分である。

以下、本発明において好ましく用いられる多糖類系化合
物、ポリアクリルアミド系樹脂等の樹脂基体を例示する
が、樹脂基体にリガンドを導入するための官能基含有側
鎖が既に導入されているものをも含めて開示する。

（１）多糖類系化合物およびその誘導体多糖類系化合物
としてはセルロース、デキストラン、アガロース、キチ
ン、キトサン等を例示でき、その誘導体としては該多糖
類系化合物の架橋物または該多糖類系化合物に存在する
水酸基を利用してアミノ基、活性化カルボキシル基、ハ
ロアセチル基等の官能基を含む側鎖を導入したものを例
示できる。

このような多糖類系化合物およびその誘導体としては、
ＡＨ−セファロース４Ｂ、ＣＨ−セファロース４Ｂ、エ
ポキシ−活性化セファロース６Ｂ、ジエチルアミノエチ
ル−セファデックス、第４級アミノエチル−セファデッ
クス１．スルホプロピル−セファデックス等の商品名で
ファルマシア・ファインケミカル社から市販されている
もの、キトバール、キトビーズ等の商品名で富士紡績社
から市販されているもの等を例示できる。

（２〉　ポリアクリルアミド系樹脂およびそれらの誘導
体ポリアクリルアミド系樹脂およびそれらの誘導体として
はアクリルアミド系樹脂またはアクリルアミドを主体と
する共重合体、あるいはこれら重合体のアミド塩を介し
てアミノアルキル基、第４級アミノフェニル基等を導入
したものを例示できる。

具体的には、例えばパイオーゲル（Ｂｉｏ−Ｇｅｌ）、
エンズアクリル（Ｅｎｚａｃｒｙｌ）等の商品名でバイ
オ−ラッド社から市販されているもの等を例示できる。

（３）　スチレン系樹脂およびそれらの誘導体スチレン
系樹脂およびそれらの誘導体としては、スチレンまたは
その核置換誘導体例えばハロアルキル置換スチレン、ア
ミノアルキル！換スチレン、第４級アミノアルキル置換
スチレン、カルボキシアルキル置換スチレン等を主たる
構成単位として含有する単独または共重合体を例示でき
、とくにクロルメチル化ポリスチレン、スチレン−ジビ
ニルベンゼン共重合体またはそのベンゼン環上にクロル
メチル基、アミノアルキル基、第４級アミノアルキル基
、カルボキシアルキル基等の官能基含有側鎖を導入した
ものが好適である。

具体的には、クロルメチル化ポリスチレンあるいはダイ
ヤイオンＷＡ系樹脂、ダイヤイオンＰＡ系樹脂、ダイヤ
イオンＷＫ樹脂等の商品名で三菱化成社から市販されて
いるもの等を例示できる。

（４）　ペプチド類ｐ−アミノ−ＤＬ−フェニルアラニン−Ｌ−ロイシン等
である。

（５）　その他後述する方法でリガンドを化学的に結合しうる官能基を
持つペンダント側鎖を有するかまたは導入された各種の
（共）重合体、例えば水不溶性樹脂を製造するのに用い
られる各種モノマーの単独重合体またはそれらの共重合
体が挙げられる。

具体的には、ブタジェン、イソプレン等のジエン類の重
合体；クロルメチルビニルエーテル、アリルグリシルエ
ーテル等のビニルエーテル類の重合体；アクリル酸アミ
ド、アクリル酸エステル、アクリロニトリル、Ｎ−メチ
ロールアクリルアミド等のアクリル酸類の重合体；メタ
クリル酸エステル、メタクリレートリル、グリシジルメ
タクリレート、２−ヒドロキシエチルメタクリレート、
２−スルホエチルメタクリレート、２−クロロ（ブロモ
）エチルメタクリレート等のメタクリル酸類の重合体：
イタコン酸、クロトン酸等の不飽和カルボン酸類の重合
体；フェノール、テトラエチレンペンタミン、およびフ
ェニレンジアミンとフォルマリンとの重合体；ならびに
これらの２種以上のモノマーからなる共重合体を例示で
°きる。

これらのモノマーに上記リガンドを共有結合により結合
せしめた誘導体をモノマーとした各種共重合体の場合に
は、リガンドを結合しなくとも本発明の担体とできる。

なおこれらの重合体は、それ自体公知の重合法、例えば
、ラジカル重合、重縮合法によって製造できる。

以上述べた樹脂中、好適なものとしては多糖類系化合物
およびその誘導体が挙げられ、中でもキトサンおよびそ
の架橋物がとくに好適である。

α−シクロデキストリン吸着材の製造：本発明の吸着材
は、上記水不溶性樹脂基体に前記リガンドを共有結合に
て導入することにより製造される。以下その製造方法を
述べる。

反応式％式％（）式中、Ｒは水不溶性基を、ＸおよびＹは相互に反応して
共有結合しうる官能基を、Ｌはリガンドを、ＺはＸとＹ
が反応して生成した共有結合部分を表す。

ＸおよびＹで表わされる官能基、その共有結合に使用さ
れる反応のタイプおよび共有結合部分Ｚを第１表に例示
する。

第１表に示すカルボキシル基（−Ｃｏｏ）（）の反応性
誘導体としては、カルボン酸ハライド（例ニーＣＯＣｌ
、−ＣＯＢｒ）　、カルボン酸無水物、活性カルボン酸
エステル基（例ニーＣ００Ｃ，Ｈ。

ＮＨ２）等が挙げられる。

上記反応式において使用される式（Ｉ）および式（ＴＩ
）の出発原料および式（ＩＩＩ）のα−シクロデキスト
リン吸着材のタイプを次に例示する。

なお、ｘ、ＹおよびＬの各タイプは第２表に示す。

Ｒ＋　＝水素原子またはアセチル基、ｎ＝１００，０００−５００，０００ｎ＝１００．０００〜５００，０００ｎ＝１０６〜１０９１００．０００〜５００．　０００式中、セルロースはセルロースの基本骨格のうち部分的
に水酸基を省略した水不溶性樹脂基体を表す、この場合
、Ｘ、Ｙおよびし、は第２表のＮ。

１〜７に示すＸ、ＹおよびＬである。

の基本骨格のうち部分的に水酸基を省略した水不第１ＸＯＨ２ −ＣＯＯＨ又はその反応性誘導体０ＨＣＯＯＨ又はその反応性誘導体ＯＨ０ＨＣＨ−ハロゲンＣＨ−ハロゲンＯＨＯＨ −ＣＯＣＨ＝ＣＨ。

ＧＯＯＨ −ＮＨ！ −ＣＯＯＨ又はその反応性誘導体ＮＨ２ −ＣＯＯＨ又はその反応性誘導体ＯＨ０ＨＣＨ−ハロゲンＯＨＯＨＣＨ−ハロゲンＣＨ２−ＣＨＣ○ ＯＨＯＨＮＧＯＮＣ３の　イブアミド化アミド化エステル化エステル化エーテル化エーテル化エーテル化Ｎ−アルキル化Ｎ−アルキル化Ｎ−アルキル化Ｎ−アルキル化ウレタン化ウレタン化チオセミカルバジド化ＮＨＣＯ− Ｃ０ＮＨ− ０ＣＯ− ＣＯＯ− 〇− ＯＣＨＨＯ− ＯＨ−Ｎ −ＣＨＮ　　ＣＨ２ＣＨ２Ｃ０− −ＣＯＣＨＩＣＨ，−ＮＨＣＯ− −ＯＣＯＮＨ− ＮＨＣ−ＮＨ− ＯＨ２ＯＨ２ＯＨ２ＮＨ。

ＮＨ。

Ｃ０ＯＨ又はその反応性誘導体Ｃ０ＯＨ又はその反応性誘導体Ｃ０ＯＨ又はその反応性誘導体Ｃ０ＯＨ又はその反応性誘導体Ｃ０ＯＨ又はその反応性誘導体Ｃ０ＯＨ又はその反応性誘導体Ｃ０ＯＨ又はその反応性誘導体Ｃ０ＯＨ又はその反応性誘導体Ｃ０ＯＨ又はその反応性誘導体Ｃ０ＯＨ又はその反応性誘導体Ｃ０ＯＨ又はその反応性誘導体Ｃ０ＯＨ又はその反応性誘導体Ｃ０ＯＨ又はその反応性誘導体Ｃ０ＯＨ又はその反応性誘導体ＮＨ。

ＯＨ２ＮＨ。

　Ｈ２ＯＨ２ＮＨ。

　Ｈ２ＣＨｓ　（ＣＨ２）ＣＨ，（ＣＨ，）ＣＨ３（ＣＨ２）ＣＨ３（ＣＨ，）ＣＨ３（ＣＨ２）ＣＨｚ（ＣＨｚ）ＣＨ３（ＣＨ２）ＣＨ，（ＣＨ，）ＣＨ，（ＣＨ，）ＣＨ，（ＣＨ２）ＣＨ３（ＣＨ２）ＣＨ，（ＣＨ２）ＣＨ，（ＣＨ，）ＣＨ，（ＣＨ２）溶性樹脂基体を表す、この場合、Ｘ、ＹおよびＬは第２
表のＮｏ、１〜７に示すＸ、ＹおよびＬである６ａ　、　Ｒ＝′Ｌｉ−誌沙ＣＯＮ　ＨＮ　ＨＣＯＣＨ２
ＣＨ＝−式中、乙り反身は、−数式＋ＣＨＣＨ２）ゎ−
＝で示されるアクリル系樹脂基体を表す、この場合、Ｘ
、ＹおよびＬは第２表のＮｏ、８〜１４に示すＸ、Ｙお
よびＬ、である。

ｅ　、　Ｒ＝　乙１Ｊ１−ＣＯＮ　）（（ＣＨ２）　ｓ
−式中、工１１升は、−数式千ＣＨ・−ＣＨ，）。

まで示されるアクリル系樹脂基体を表す、この場合、ｘ、
ｙおよびＬは第２表のＮｏ、１〜７に示すＸ、。

ＹおよびＬである。

共有結合による本発明の吸着材の製造におい′Ｃ２式（
Ｉ）の水不溶性樹脂基体と式（ＩＩ）のリガンド導入成
分との反応は、公知の方法で進めることができる０例え
ば千畑一部編「固定化酵素」（９〜８５頁、昭和５０年
３月２０日（株＞ｉ談社発行等に記載の方法である。そ
れ数本明細書（こおいては本文献をもって詳細な記述に
代える。

本発明により提供される吸着材は、用途に応じて任意の
形態に成形することができる１例えばビーズ状、繊維状
、中空ｍ雄状、円柱状、角柱状、フィルム状等である。

一般に好まＬ７い形状はビーズ状である。

吸着材の特性： α−シクロデキストリン吸着特性を、水不溶性樹脂・基
体としてキトサンを用いた場合を第３表に示す、第３表
中、α−シクロデキストリンの吸着量および選択率は次
のようにして測定した。

α−シクロデキストリンの吸着量；第３表に示す吸着材各１０ｎｎｌをＬＷ／Ｖ％のα−シ
クロデキストリン水溶液１５０ｍ１中で振とうし、上澄
液がＩＷ／Ｖ％濃度を維持するまでＩＷ／Ｖ％のα−シ
クロデキストリン水溶液を取り替える。ＩＷ／Ｖ％のα
−シクロデキストリン水溶液ε平衡吸着に達した樹脂を
ガラスカラム（１，５Ｃｍｘ２０ｃｍ）に充填し、１０
０ｍ１の水を流して洗浄した後、７０′Ｃの温水２’　
ＯＯｉｆ　１により吸着したα−シク０デキス）・リン
を溶出１２、溶出液中のα−シクロデキストリン含有量
を測定し、その値から吸着材１１当たりのα−シクロデ
キストリン吸着量を換算した。

α−シクロデキストリンの選択率；吸着材１０ｍ１をシクロデキストリン含有液（α−シク
ロデキストリン０．５Ｗ／Ｖ％５β−シクロデキストリ
ン０．５Ｗ／Ｖ％、γ−シクロデキストリン０．５Ｗ、
／Ｖ％を含有）５００ｍｌ中で振とう［＝、、吸着材添
加前後の上澄液中の各シクロデキストリン含有量を測定
した。シクロデキストリン含有量は、高速液体クロマト
グラフィー　（Ｓｈｏｄｅｘ、Ｒ３−ｐａｋ　　ＤＣ−
６１３カラム；　ＣＨｒＣＮ／Ｈ２０＜６５／３５）１
５ｍｍ／ｍ１ｎ）を用いて測定した８第３表一−−−吸萱材−−−−−−−吸艷え−−Ｊ！釈翌−＜
ｇ／１−Ｒ）　　　　　（％〉ＣＨ：ｌ　（ＣＨ２）４　　　　　４３−６　　　　７
６．８ＣＨ２（ＣＨ２）＊　　　　　　８７．８　　　
　６４．７ＣＨｓ　（ＣＨｚ）　ｖ　　　　　２９９．
０　　　　５５．５ＣＩ（３（０８２）　　＋。−３０
０，０８１，６ＣＨ３（ＣＨ２）　　＋２　　　　　　
　　２６６．０　　　　　　　　　　９２．ｌＣＨ３（
ＣＨ２）１４　　　　２２９．１　　　　９５．ｌＣＨ
３（ＣＨ２）ｌａ　　　　　１９０．９　　　　９７．
３ＣＨ３（ＣＨｚ）　ｌａ　　　　　１８２．７　　　
　９７．８ＣＨｙ　（ＣＨｚ）２゜−１６９，８９８゜
５ＣＨ：ｌ　　（ＣＨ２）２２　　　　　　１７２．１
　　　　　　　９７．６注二％は重量％を示す。

吸着材の用途：本発明の吸着材は、α−シクロデキストリン製造反応液
からα−シクＵデＡストリンを選択的に分Ｍ精製できる
。α−シクｔつデキストリンは澱粉類の水性懸濁液また
は水溶液４ｒ、各種のＣＧ　’Ｔ　：１．　ｓＣを作用
させ、生成するα−シクロデキストリン、未反応の澱粉
および副生ずる各種の澱粉分解産物、例えばβ−シクロ
デキストリン、γ−シクロデキストリン、オリゴデキス
トリン、グルコース等を含む反応液からα−シクロデキ
ストリンを分離精製して製造される。

本発明の吸着材は、α−シクロデキストリンを選択的に
吸着しうるから、カラムクロマトグラフィーの担体とし
て、また回分式によりα−シクロデキストリン含有水性
液に接触させてα−シクロデキストリンを該吸着材に吸
着させ、それによって未反応の澱粉、副生物等と分離し
た後、該吸着材からα−シクロデキストリンを熱水また
はアルカノール／水混合溶媒等を用いて脱着することに
より、高収率でα−シクロデキストリンを分ＭＷＩＩＩ
Ｊできる。

吸着材とα−シクロデキストリン含有水性液との接触時
の温度は、一般には室温でよいが場合によっては約り０
℃〜約７０℃の加温下でもよい。

接触時間は通常１〜４時間の範囲で十分である。

吸着材からのα−シクロデキストリンの脱着に用いる熱
水の温度は約り０℃〜約９０℃の範囲であればよく、ま
たアルカノール／水混合溶媒を用いる場合には、アルカ
ノールとしてメタノール、エタノール、プロパノール等
の低級アルカノール等が好ましい、アルカノール／水の
混合比は一般に１１５〜３１５　（Ｖ／Ｖ）の範囲が好
ましい。

脱着用溶媒としては、上記の他、アセトン、アセトニト
リル、テトラヒドロフラン、ジオキサン等をも使用でき
る。

α−シクロデキストリン含有水性液としては、α−シク
ロデキストリン生成反応液の他に、α−シクロデキスト
リンを触媒として用いた化学反応液、α−シクロデキス
トリンを生成物の保護剤として用いた酵素反応液または
微生物醗酵液等を例示できる。

本発明の吸着材はα−シクロデキストリンの生成反応に
おいて、α−シクロデキストリンの増収に有用である。

α−シクロデキストリンも含めたシクロデキストリンの
生成反応は、ＣＧＴａｓｅによる酵素反応であり、可逆
的に進行する。従ってシフロブキス）・リンの増収を図
るには、反応系にシクロデキストリンに包接されうる有
機溶媒を共存させるとよい、これにより生成したシクロ
デキストリンは沈澱物として反応系外に除去され、原料
澱粉等からシクロデキストリンへの変換率を向上できる
（例えば、特開昭第６０−１５６３９８号公報〉。

本発明の吸着材は、リガンドとしてα−シクロデキスト
リンに包接されうる有機残基を有するため、該吸着材を
反応系に共存させることによりα−シクロデキストリン
の変換率を向上させることができる。さらに本発明の吸
着材は、α−シクロデキストリンを選択的に吸着すると
いう特性を有しているため、該吸着材からの脱着により
高純度のα−シクロデキストリンが得られる。

本発明の吸着材を用いるα−シクロデキストリンの生成
反応は、該生成反応を該吸着材の存在下に実施する点を
除いてはそれ自体公知の出発原料を用いてそれ自体公知
の反応条件下に実施できる。

酵素法によるα−シクロデキストリンの生成反応を本発
明の吸着材の存在下に実施すると、α−シクロデキスト
リンの収量は従来法に比して約８５〜１１０％増加する
。

α−シクロデキストリンの生成反応を本発明の吸着材の
存在下に実施する方法としては、α−シクロデキストリ
ンの反応容器中に吸着材をビーズ状の形態で仕込み、撹
拌懸濁させながら回分式または連続的に酵素反応を進め
る方法、ビーズ状等適当な形態に成形した吸着材を反応
カラムに充填し、出発原料およびＣＧＴａｓｅを含む水
性液を１回または数回繰り返して通液する方法等を例示
できる。

以下実施例に基づき本発明をより詳細に説明する。

実施例１　α−シ　ロー　スト１ン　　　の　４３０ｍ
１の懸濁した活性化ＣＨセファロース４Ｂと１００ｍ１
の０．１Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ８，０）を混合した後、１
９ｍｇ　（０，０７ｍｍｏ　ｌ　）の１−ステアリルア
ミンを加え、室温で１時間反応させた、樹脂を戸別し、
それぞれ１００ｍ１の０゜０５Ｍトリス緩衝液＜ｐＨｓ
、ｏ＞、０．０５Ｍギ酸榎街液（ｐＨ４，０）で交互に
洗浄し、過剰のアミンを除去した。その後水洗し、乾燥
してＣＨセファロース４Ｂのカルボキシル基に１−ステ
アリルアミンがアミド結合した吸着材を得た。

実施例２　α−シクローキストリン　　　の　１３０ｍ
１の懸濁した活性化ＣＨセファロース４Ｂと１００　ｍ
　ｌの０．１Ｍ炭ＩＩ街液（ｐＨ８，０）を混合した７
１１５ｉ、３ｍｇ　（０，０７ｍｍｏ　ｌ）の１−テト
ラデシルアミンを加え、室温で１時間反応させた。樹脂
を戸別し、それぞれ１００ｍ１の０．０５Ｍトリス緩衝
液（ｐＨ３，０）、０．０５Ｍギ酸緩衡液（ｐＨ４，０
）で交互に洗浄し、過剰のアミンを除去した。その後水
洗し、乾燥してＣＨセファロース４Ｂのカルボキシル基
に１＝テトラデシルアミンがアミド結合した吸着材を得
た。

実施例３　α−シ　ロー　ス　１ン　１レー製４８６．
５ｍｌのジメチルフォルムアミドＦ）で膨潤させたキト
サン樹脂（商品名キトバール、富士紡績社製）に７０ｍ
ｌのＤＭＦを加え、ついで５。９４ｍｍｏ　Ｉのステア
リン酸とピバリン酸の混合酸無水物を１６．５ｍ．ｌの
ＤＭＦに溶解した液を加え、室温で８４時時間上う撹拌
した。

樹脂をＰ別し、１００ｍｌの１Ｍ水酸化ナトリウム水溶
液で洗浄した後、３００ｒｎｌのメタノールで洗浄した
。さらに３００ｍｌの水で洗浄して、キトサン樹脂のア
ミノ基にステアリン酸が酸アミド結合を介して導入され
た置換キトサン樹脂を得た。

実施例４　α−シクロ−　ストリン　　　の　過１０ｍ
ｌのジメチルフォルムアミド（ＤＭＦ）で膨潤させたキ
トサン樹脂（商品名キトバール、富士紡績社製）に１０
０＋ｎｌのＤＭＦを加えた後、２、５ｍｍｏ　１のりグ
ノセリン酸とピバリン酸の混合酸無水物を２０ｍｌのＤ
ＭＦに溶解した液を加え、室温で４８時時間上う撹拌し
た６樹脂を沢別し、１００ｍｌのＤＭＦで洗浄した．さ
らに１００ｍｌの１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液で洗浄し
た後、１００ｍｌの水で洗浄して、キトサン樹脂　　通
し、吸着したα−シクロデキストリンを溶出しのアミノ
基にリグノセリン酸が酸アミド結合を介　　た、溶出液
を：ａ縮乾固して純度９５．２％のα−して導入された
吸着材を得た．　　　　　　　　　　　シクロデキスト
リン１１．２ｇを得た。

１５０ｇのじゃがいも澱粉に０．１５ｇのネオスビター
ゼ（長瀬産業社製）を添加接水を加え、全容積を１００
０ｒｎｌとし、８０℃で２０分間加熱して液化した．つ
いで１２０℃で１０分間オートクレーブ処理して液化澱
粉液を製造した．これに水を加えて１５００ｍｌに調整
した後、５０℃まで冷却してから６５００Ｕのバチルス
・マセランスＣＧＴａｓｅ（商品名コンチザイム、天野
製薬社製）を添加し、ｐ　Ｈ　６、５０℃で反応させた
。

２０時間後に反応を停止させ、反応生成液を得た。

実施例３で得られたシクロデキストリン吸着材２００ｍ
ｌを充填したカラムに、上記反応生成液を下降法で通液
した後、６００ｍｌの水でカラムを洗浄した。

このカラムに１０００ｍｌの温水（７０℃）を実施例５
と同様の方法で反応生成液を製造し、この反応生成液を
実施例４で得られたシクロデキストリン吸着材２００ｍ
ｌを充填したカラムに下降法で通液した後、８００ｒｎ
ｌの水で洗浄した。

このカラムに１０００ｍｌの温水（７０℃）を通して吸
着したα−シクロデキストリンを溶出した．溶出液を濃
縮乾固して、純度９７，０％のαシクロデキストリン９
．０ｇを得た。

２２５ｇのじゃがいも澱粉に０．２２５ｇのネオスビタ
ーゼ（長瀬産業社製）を添加接水を加え、全容積を１５
００ｒｎｌとした．ついで８０℃で２０分間加熱液化し
た後、１２０°Ｃで１０分間オート・クレープ処理をし
て液化澱粉を製造した。この操作を繰り返し、２組の液
化澱粉を製造した。

これらを５０℃まで冷却し、９７００Ｕのバチルス・マ
セランスＣＧＴａｓｅ（コンチザイム、天野製薬社製）
をそれぞれに添加し、ｐＨ６，５０℃で反応させた。

一方の反応液は、反応開始１時間後、実施例３で得られ
たシクロデキストリン吸着材５００ｍ１を充填したカラ
ム内を５００ｍ　ｌ／ｈ　ｒ　（ＳＶ＝ｌ〉の流速で循
環させた。

反応開始２０時間後、各反応液中のα−シクロデキスト
リン生成量を高速液体クロマトグラフィーで測定した。

カラム内を循環させた反応液については、樹脂をＰ別し
、ｒ液中のα−シクロデキストリン量、および樹脂を十
分水洗した後、７０℃の温水で吸着したα−シクロデキ
ストリンを溶出した溶出液中のα−シクロデキストリン
量とを別々に高速液体クロマトグラフィーで測定して求
めた。

結果を第４表に示す。

第４表シクロデキストリン生成量（対基質当たりの転換率）立
之左王曳月　　立之斐使月 α−シクロデキストリン　　　９．６％　　　２０．０
％β−シクロデキストリン　　１２．９％　　　　１０
．４％γ−シクロデキストリン　　　３．２％　　　　
２．１％注二％は重量％を示す。

［発明の効果コ本発明によれば、α−シクロデキストリン含有水性液か
らのα−シクロデキストリンの選択的分離、精製能力に
優れた吸着材およびα−シクロデキストリンの精製方法
が提供される。

さらに本発明によれば、酵素反応によりα−シクロデキ
ストリンを生産するとき、該反応系に本発明の吸着材を
存在させることによりα−シクロデキストリンの収量を
増加できるα−シクロデキストリンの増収方法が提供さ
れる。

Claims

【特許請求の範囲】１、Ｃ＿１＿３〜Ｃ＿２＿９の脂肪族炭化水素基が共有
結合により結合されている水不溶性樹脂基体からなるα
−シクロデキストリンの吸着材。２、α−シクロデキストリン含有水性液を請求項１記載
の吸着材と接触せしめ、ついで該吸着材をα−シクロデ
キストリンの脱着処理に付してα−シクロデキストリン
を回収するａ−シクロデキストリンの分離、精製方法。３、酵素法によるα−シクロデキストリンの生成反応を
、請求項１記載の吸着材の存在下に行うα−シクロデキ
ストリンの収量増加方法。