JPH05232098A - クロマトグラフィー用吸着担体およびその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 製造が容易、製造収率が高く、水に不溶性の
支持体に担持されている高速液体クロマトグラフィー用
吸着担体であって、光学活性化合物の不斉識別能の高い
吸着担体及びその製造法。 【構成】 シクロデキストリンが水に不溶性の支持体に
固定化されている吸着担体のシクロデキストリン部分
に、直接またはカルボニル基を介してアミノ酸またはア
ミノ酸誘導体が結合しているクロマトグラフィー用吸着
担体及びその製造法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、新規なクロマトグラフ
ィー用吸着担体及びその製造方法に関し、更に詳しくは
不斉識別能を有するクロマトグラフィー用吸着担体及び
その製造方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】シクロデキストリン（以下ＣＤとい
う。）はＤ−グルコピラノシドがα−１，４グルコシド
結合してなる円筒状の環状化合物であり、環状化合物の
円筒の外側は水酸基が多く親水性を有するが、円筒の内
側は疎水性を有する。このＣＤは円筒の内側が疎水性の
ため、フェニル基やナフチル基のような疎水性基を有す
る種々の有機化合物が包接されるホスト化合物として知
られている。また、ＣＤはＤ−グルコピラノシド１分子
当たり５個の光学活性な炭素を有することから、不斉識
別能を有する化合物としても知られている。

【０００３】近年、光学活性化合物の分離・精製の重要
性が増し、ＣＤが有する不斉識別能をこれに利用しよう
とする傾向が強まってきた。例えば、クロマトグラフィ
ーにおける移動相にＣＤを添加して光学活性化合物を分
離・精製する方法、クロマトグラフィー用吸着担体とし
てＣＤをシリカゲルや合成高分子等に固定化させたもの
を使用して、光学活性化合物を分離・精製する方法（米
国特許第４，５３９，３９９号公報参照）、ＣＤを膜に
含有させたＣＤ膜を使用する方法がある。また、ＣＤを
ポリマー化し、またポリマー化したものをビーズ状にし
てクロマトグラフィーの充填剤に利用する方法なども試
みられている。しかし、これらの方法は不斉識別能が不
十分であるという欠点がある。

【０００４】一方、ＣＤのもつ不斉識別能を更に向上す
ることを目的として、アミド結合を介してキラルなアミ
ノ酸が６位に結合することを特徴とする化学修飾β−シ
クロデキストリン（特開昭６４−５１４０２号公報参
照）が知られている。しかしこの方法により得られる化
合物は水に不溶性の支持体に化学修飾β−シクロデキス
トリンを固定化した状態での不斉識別能の評価は行われ
ておらず、クロマトグラフィー用吸着担体として使用で
きるかどうか不明な上、目的とする化合物を得るに際し
ては化学修飾法が煩雑であるばかりでなく、収率が低く
実用的ではない。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明は光学活性化合
物の分離、精製において従来方法による不斉識別不十分
な点を改善すると共に、高速液体クロマトグラフィー用
吸着担体として使用するため、水に不溶性の支持体に固
定化された高性能のクロマトグラフィー用吸着担体であ
り、かつ製造が容易であって、製造収率が高い吸着担体
及びその製造方法の開発を目的とする。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明によって、キラル
なアミノ酸をＣＤに導入することにより上記目的を達成
しうるクロマトグラフィー用吸着担体及びその製造方法
が提供される。即ち、本発明はＣＤが水に不溶性の支持
体に固定化されている担体の該ＣＤ部分に、直接または
カルボニル基を介してアミノ酸またはアミノ酸誘導体
（以下、これら両者をアミノ酸等という。）を結合して
いることを特徴とするクロマトグラフィー用吸着担体お
よび、（１） ＣＤが水に不溶性の支持体に固定化され
ている担体に縮合剤を反応させ、次いでこれにアミノ酸
等を反応させて結合させることによる前記クロマトグラ
フィー用吸着担体の製造方法、（２） アミノ酸等に縮
合剤を反応させ、次いでこれにＣＤが水に不溶性の支持
体に固定化されている担体を反応させ結合させることに
よる前記クロマトグラフィー用吸着担体の製造方法、
（３） 水に不溶性の支持体に縮合剤を反応させ、これ
にアミノ酸等が直接またはカルボニル基を介してＣＤに
結合しているＣＤ誘導体を反応させ結合させることによ
る前記クロマトグラフィー用吸着担体の製造方法、
（４） アミノ酸等が直接またはカルボニル基を介して
ＣＤに結合しているＣＤ誘導体に縮合剤を反応させ、こ
れに水に不溶性の支持体を反応させ、結合させることに
よる前記クロマトグラフィー用吸着担体の製造方法、
（５） ＣＤが水に不溶性の支持体に固定化されている
担体ＣＤに縮合剤を反応させ、これにアミノ酸等が直接
またはカルボニル基を介してＣＤに結合しているＣＤ誘
導体を反応させ、結合させることによる前記クロマトグ
ラフィー用吸着担体の製造方法、（６） アミノ酸等が
直接またはカルボニル基を介してＣＤに結合しているＣ
Ｄ誘導体に縮合剤を反応させこれにＣＤが水に不溶性の
支持体に固定化している担体を反応させ結合させること
による前記クロマトグラフィー用吸着担体の製造方法を
開発することにより上記の目的と達成した。

【０００７】以下、本発明のクロマトグラフィー用吸着
担体及びその製造方法について説明する。

【０００８】本発明のクロマトグラフィー用吸着担体は
ＣＤが水に不溶性の支持体に固定化されている担体の該
ＣＤ部分に直接またはカルボニル基を介してアミノ酸等
が結合してなるものである。

【０００９】本発明における水に不溶性の支持体とは、
縮合剤と結合可能な官能基、例えば水酸基、カルボキシ
ル基、またはアミノ基のような官能基を有するもの、ま
たは導入可能なものであれば特に制限はなく、アガロー
ス、デキストラン、セルロースなどの多糖体またはポリ
アクリルアミドのようないわゆるソフトビーズ、ポリス
チレン、ポリメタクリレート、ポリビニルアルコール及
びこれらの共重合物などのような硬質の合成高分子ビー
ズ、またはシリカゲル、アルミナのような無機の硬質ビ
ーズなどが挙げられる。ビーズの粒径は１〜１０００μ
ｍ、好ましくは３〜１２０μｍが適当であり、ビーズの
形状は多孔性球状が好ましい。

【００１０】本発明において使用されるＣＤとしては、
α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ
−シイクロデキストリン、ヒドロキシアルキル化シクロ
デキストリンなどの他、メチル化シクロデキストリン、
アシル化シクロデキストリンであっても水酸基を２個以
上有しているＣＤであれば良く、またこれらの混合物で
あってもこれらの誘導体であっても良い。

【００１１】また、アミノ酸としては、アラニン、バリ
ン及びロイシンなどのような脂肪族系アミノ酸類、フェ
ニルアラニン及びチロシンなどのような芳香族系アミノ
酸類、ヒスチジンおよびトリプトファンなどのような複
素環式系アミノ酸類、リジン、アルギニン、アスパラギ
ン酸およびグルタミン酸のような塩基性、酸性系、アミ
ノ酸類及びセリン、スレオニン、システイン、プロリン
などが例示される。

【００１２】更に、アミノ酸誘導体としては、上記アミ
ノ酸のＮ端がベンジルオキシカルボニル基、ｔ−ブチル
オキシカルボニル基のような保護基で置換されたもの、
あるいはＣ端が炭素数１〜４で低級アルキル基、フェニ
ル基、ベンジル基のような保護基で置換されたものを用
いることができる。

【００１３】本発明のクロマトグラフィー用吸着担体
は、支持体に直接またはスペーサーを介してＣＤが固定
化され、さらにこのＣＤの水酸基に対して直接アミノ酸
のカルボニル基が結合するか、または水酸基に縮合剤が
作用し、それにアミノ酸等のアミノ基が結合するなどの
形でアミノ酸が固定化している。そして、ＣＤは一層で
あってもまた多層が直接またはスペーサーを介して積層
していても良い。

【００１４】そして不斉識別能を高く維持するには吸着
に関与する表面層のＣＤに対しアミノ酸等が結合してい
ることが必要である。この結合がないときは不斉識別能
が著しく低下する傾向がある。

【００１５】ここでスペーサーとは通常の結合において
の炭素数１〜数個のアルキレン基、エーテル酸素、ある
いは縮合剤として使用したＮ，Ｎ’−カルボニルジイミ
ダゾール、クロロ炭酸エステル類のカルボニル基などで
あって良い。

【００１６】本発明のクロマトグラフィー用吸着担体は
次に説明する方法で製造することができる。

【００１７】即ち、ＣＤが水に不溶性の支持体に固定化
されている担体の該ＣＤ部分に、縮合剤を反応させるこ
とにより縮合剤の一部（以下脱離基という。）を導入
し、これにアミノ酸等を反応させて脱離基と置換（場合
によってはその一部がカルボニル基として残ることもあ
る。）し、前記ＣＤとアミノ酸等とを結合させることに
よりクロマトグラフィー用吸着担体をを製造することが
できる。

【００１８】上記ＣＤ固定化担体を得るに際しては、例
えば特願平１−４９１６５号、米国特許４，５３９，３
９９号、特開昭６１−２３７０５７号公報などに記載さ
れているようにして行うことができる。

【００１９】ＣＤ固定化担体に、アミノ酸等を反応させ
るに際しては、前記ＣＤ固定化担体を適当な溶媒、例え
ば１，４−ジオキサン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
などに分散させた後、Ｎ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾ
ール、ジスクシイミジルカーボネートまたはクロロ炭酸
エステル類のような縮合剤を、乾燥ＣＤ固定化担体１ｇ
当たり４〜６０ミリモル、好ましくは９〜３０ミリモル
加え脱離基を導入する。

【００２０】この反応に際しては無水塩化カルシウム、
塩化カリウムのような脱水剤を入れた乾燥管を付し、
０．５〜４時間、好ましくは１〜３時間反応させること
ができる。この時の反応温度は３０〜７０℃、好ましく
は４０〜６０℃に保つことが望ましい。

【００２１】次いで、反応液をろ過し、残渣を前記分散
溶媒で良く洗浄した後、乾燥担体１ｇ当たりアミノ酸等
を０．０１〜１０ミリモル、好ましくは０．１〜１０ミ
リモル加え、前記分散溶媒で良く分散し反応させる。こ
の時の反応温度は０〜９０℃、好ましくは３０〜８０℃
に保つことが望ましい。反応時間は１〜４８時間、好ま
しくは３時間〜２４時間が適当である。反応生成物を通
常の方法で後処理すると本発明のクロマトグラフィー用
吸着担体が得られる。

【００２２】なお、アミノ酸等を固定化したＣＤ固定化
担体を得るに際してはアミノ酸誘導体を固定化したＣＤ
固定化担体を、例えば、泉屋信夫ら．『ペプチド合成の
基礎と実験』１４３〜１７１ページ（丸善）に記載され
ているようにして行うこともできる。

【００２３】また、水に不溶性の支持体にＣＤが固定化
してなる担体に、縮合剤を反応させることにより脱離基
を導入されたアミノ酸等を反応させることにより製造す
ることができる。即ち、アミノ酸等を前記分散溶媒に分
散させた後、前記縮合剤をアミノ酸等１モル当たり１〜
２モル、好ましくは１〜１．１モル加え、０．５〜４時
間、好ましくは１〜２時間反応させる。この時の反応温
度は０〜５０℃、好ましくは０〜２０℃に保つことが望
ましい。

【００２４】次いでこの溶液にＣＤ固定化担体をアミノ
酸等１モルあたり２０〜４００ｇ、好ましくは１００〜
３００ｇ加え反応させる。この時の反応温度は０〜７０
℃、好ましくは０〜４０℃に保つことが望ましい。反応
時間は１〜３０時間、好ましくは５〜１５時間が適当で
ある。反応生成物をろ過、洗浄などの通常の方法で後処
理すると本発明のクロマトグラフィー用吸着担体が得ら
れる。なお、アミノ酸を固定化したＣＤ固定化担体を得
るに際しては前記と同様にして行うこともできる。

【００２５】また、例えば水に不溶性の支持体及び／ま
たは水に不溶性の支持体にＣＤを固定化してなる担体に
縮合剤を反応させることにより脱離基を導入し、次いで
アミノ酸等が直接またはカルボニル基を介して結合した
ＣＤ誘導体を反応させることにより製造することができ
る。

【００２６】アミノ酸等が直接またはカルボニル基を介
して結合したＣＤ誘導体を得るに際しては、アミノ酸等
を前記分散溶媒に分散させた後、前記縮合剤をアミノ酸
等１モル当たり１〜１０モル、好ましくは１〜１．２モ
ル加え、０．５〜４時間、好ましくは１〜３時間反応さ
せる。この時の反応温度は０〜６０℃、好ましくは０〜
３０℃に保つことが望ましい。

【００２７】次いで反応液にＣＤをアミノ酸等１モル当
たり０．０１〜１０モル、好ましくは０．１〜２モル加
え、１〜２０時間、好ましくは３〜１０時間反応させ
る。この時の反応温度は２０〜８０℃、好ましくは３０
〜６０℃に保つことが望ましい。

【００２８】さらに、反応液をアセトンなどの貧溶媒を
沈殿物が析出するまで加えた後、反応液をろ過し、残渣
をアセトンでよく洗浄し乾燥させるなどして得ることが
できる。

【００２９】なお、アミノ酸等を結合したＣＤ誘導体を
得るに際しては、例えばアミノ酸等のＮ末端を固定化し
た担体１ｇ当たり、メタノール、１，４−ジオキサンま
たはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを５〜１００ｍｌ、
好ましくは１０〜３０ｍｌ加え、担体を分散させる。更
にこの分散液の約１モルの水酸化ナトリウムなどのアル
カリ水溶液を０．０１〜１ｍｌ加え、０．１〜５時間、
好ましくは０．２〜０．５時間反応させて行うことがで
きる。この時の反応温度は０〜４０℃、好ましくは０〜
１０℃に保つことが望ましい。

【００３０】反応生成物を通常の方法で後処理すると前
記アミノ酸を固定化したＣＤ固定化担体を得ることがで
きる。また、アミノ酸誘導体のＣ端を固定化した担体
は、例えばアミノ酸誘導体のＣ端を固定化した担体１ｇ
当たり約２〜４モル塩酸の１，４−ジオキサン水溶液を
５〜５０ｍｌ、好ましくは１０〜２０ｍｌ加え、０．１
〜５時間、好ましくは０．３〜１時間反応させて行うこ
とができる。この時の反応温度は０〜４０℃、好ましく
は０〜１０℃が望ましい。反応生成物を通常の方法で後
処理すると前記アミノ酸を固定化したＣＤ固定化担体を
得ることができる。

【００３１】次いで、水に不溶性の支持体、またはＣＤ
固定化担体を前記分散溶媒に分散させた後、前記縮合剤
を乾燥担体１ｇ当たり４〜６０ミリモル、好ましくは９
〜３０ミリモル加え、０．５〜４時間、好ましくは１〜
３時間反応させる。この時の反応温度は３０〜７０℃、
好ましくは４０〜６０℃に保つことが望ましい。こうし
て得られた脱離基を導入させた担体を前記分散溶媒に分
散させた後、上記ＣＤ誘導体を乾燥担体１ｇ当たり０．
０１〜１００ミリモル、好ましくは０．１〜１０ミリモ
ル加え、１〜４８時間、好ましくは３〜２４時間反応さ
せる。この時の反応温度は０〜９０℃、好ましくは３０
〜８０℃に保つことが望ましい。

【００３２】反応生成物を、ろ過、洗浄などの通常の方
法で後処理すると、本発明のクロマトグラフィー用吸着
担体が得られる。なお、アミノ酸を固定化したＣＤ固定
化担体を得るに際しては、前記と同様にして行うことも
できる。

【００３３】また、例えば水に不溶性の支持体及び／ま
たは水に不溶性の支持体にＣＤが固定化してなる担体
に、縮合剤を反応させることにより脱離基が導入された
アミノ酸等が直接またはカルボニル基を介して結合した
ＣＤ誘導体を反応させることにより製造することができ
る。

【００３４】縮合剤を反応させることにより脱離基が導
入されたアミノ酸等が直接またはカルボニル基を介して
結合したＣＤ誘導体を得るに際しては、上記アミノ酸等
が直接またはカルボニル基を介して結合したＣＤ誘導体
を前記分散溶媒に分散させた後、前記縮合剤をＣＤ誘導
体１モル当たり１〜２モル、好ましくは１〜１．２モル
加え、０．５〜４時間、好ましくは１〜３時間反応させ
る。この時の反応温度は０〜９０℃、好ましくは２０〜
６０℃に保つことが望ましい。

【００３５】こうして得られたＣＤ誘導体に水に不溶性
の支持体、またはＣＤ固定化担体を２０〜４００ｇ、好
ましくは１００〜３００ｇ加え反応させる。この時の反
応温度は０〜９０℃、好ましくは０〜６０℃に保つこと
が望ましい。反応温度は１〜４８時間、好ましくは３〜
２４時間が適当である。

【００３６】反応生成物をろ過、洗浄などの通常の方法
で後処理すると、本発明のクロマトグラフィー用吸着担
体が得られる。なお、アミノ酸を固定化したＣＤ固定化
担体を得るに際しては、前記と同様にして行うこともで
きる。

【００３７】

【作用】本発明に従えば、非修飾ＣＤ固定化担体より高
い不斉識別能を有するクロマトグラフィー用吸着担体を
得ることができる。

【００３８】水に不溶性の支持体に担持されたクロマト
グラフィー用吸着担体は、単なる液体クロマトグラフィ
ー用吸着担体から高速液体クロマトグラフィー用吸着担
体としてまでの幅広いクロマトグラフィー用吸着担体と
して利用でき、カラムに充填するなどにより光学活性化
合物の分析、または有用光学活性化合物の精製などに使
用できる。

【００３９】分析、精製、分離などの対象となる光学活
性化合物としては、アミノ酸類やβ−遮断薬、バルビタ
ール誘導体、またはカテコールアミンなどの医薬品が良
く知られている。さらに、本発明クロマトグラフィー用
吸着担体を充填したカラムは光学活性化合物だけでな
く、二置換ベンゼンの構造異性をはじめ、疎水性基を有
する種々の異性体を分離することができる。

【００４０】

【実施例】以下、実施例を挙げて本発明を更に詳細に説
明する。但し、これらは本発明のクロマトグラフィー用
吸着担体及びその製造方法の一例であって、本発明はこ
れらになんら制限されないのは言うまでもない。

【００４１】（実施例１） ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−イソロイシン修飾β
−シクロデキストリン固定化担体の製造 グリシジルメタクリレートとグリセリンジメタクリレー
トから得られたエポキシ基含有ゲル状共重合体中のエポ
キシ基を水により開環変性し、真空下で５時間乾燥し
た。この担体１０ｇに乾燥１，４−ジオキサン８５ｍｌ
を加え、更に窒素雰囲気下でＮ，Ｎ’−カルボジイミダ
ゾール１５ｇを加えて５０℃で３時間振盪後、担体を濾
取し、乾燥１，４−ジオキサンで洗浄した。このＮ−カ
ルボニルイミダゾール固定化担体（Ｎ−カルボニルイミ
ダゾール基：乾燥担体１ｇ当たり１．８ミリモル）約１
０ｇを、乾燥β−シクロデキストリン５２ｇを乾燥Ｎ，
Ｎ−ジメチルホルムアミド１５０ｍｌに溶解した溶液に
加え、窒素雰囲気下、６０℃で１５時間振盪後、担体を
濾取し、水及びアルコールで洗浄した。こうして得られ
たシクロデキストリン固定化担体１０ｇに、乾燥１，４
−ジオキサン８５ｍｌを加え、更に塩化カルシウムを入
れた乾燥管を付し、Ｎ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾー
ル１８ｇを加え、５０℃で３時間振盪後、担体を濾取
し、乾燥１，４−ジオキサンで洗浄した。このＮ−カル
ボニルイミダゾール担持シクロデキストリン固定化担体
（Ｎ−カルボニルイミダゾール基：乾燥担体１ｇ当たり
１．８ミリモル）約１０ｇに、乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホ
ルムアミド１００ｍｌを加え、更に塩化カルシウムを入
れた乾燥管を付し、ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−
イソロイシン１３ｇを加え、６０℃で１６時間振盪後、
担体を濾取し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド及び水で
洗浄した。こうして得られた吸着担体は、窒素の元素分
析によりｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−イソロイシ
ンを、乾燥担体１ｇ当たり０．０５ミリモル固定化して
いることが確かめられた。

【００４２】（実施例２） Ｌ−イソロイシン修飾β−シクロデキストリン固定化担
体の製造 実施例１により得られたｔ−ブチルオキシカルボニル−
Ｌ−イソロイシン修飾β−シクロデキストリン固定化担
体１０ｇに、４Ｎ塩酸の１，４−ジオキサン溶液３０ｍ
ｌを加え、氷冷下で３０分間振盪後、担体を濾取し水で
洗浄した。こうして得られた吸着担体は、窒素の元素分
析によりＬ−イソロイシンを乾燥担体１ｇ当たり０．０
５ミリモル固定化していることが確かめられた。

【００４３】（実施例３） Ｄ−イソロイシン修飾β−シクロデキストリン固定化担
体の製造 実施例１、実施例２においてｔ−ブチルオキシカルボニ
ル−Ｌ−イソロイシンの代りにｔ−ブチルオキシカルボ
ニル−Ｄ−イソロイシンを用いたほかは、実施例１、実
施例２と同様な操作を行った。こうして得られた吸着担
体は、窒素の元素分析によりＤ−イソロイシンを、乾燥
担体１ｇ当たり０．０４ミリモル固定化していることが
確かめられた。

【００４４】（実施例４） Ｌ−イソロイシンメチルエステル修飾β−シクロデキス
トリン固定化担体の製造 Ｌ−イソロイシンメチルエステル１２ｇに、Ｎ，Ｎ−ジ
メチルホルムアミド２０ｍｌを加え、更に塩化カルシウ
ムを入れた乾燥管を付し、Ｎ，Ｎ’−カルボニルジイミ
ダゾール１４ｇを加え、氷冷下で１時間撹拌した。次い
で、この反応液に実施例１で用いたβ−シクロデキスト
リン固定化担体１０ｇを加え、３０℃で１０時間振盪
後、担体を濾取し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドおよ
び水で洗浄した。こうして得られた吸着担体は、窒素の
元素分析によりＬ−イソロイシンメチルエステルを、乾
燥担体１ｇ当たり０．０４ミリモル固定化していること
が確かめられた。

【００４５】（実施例５） Ｌ−フェニルアラニン修飾β−シクロデキストリン固定
化担体の製造 実施例４において、Ｌ−イソロイシンメチルエステル１
２ｇの代りに、ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−フェ
ニルアラニン１９ｇを用いた他は、実施例４と同様な操
作を行った。更にこの担体に実施例２と同様の操作を行
った。こうして得られた吸着担体は窒素の元素分析によ
りＬ−フェニルアラニンを乾燥担体１ｇ当たり０．０７
ミリモル固定化していることが確かめられた。

【００４６】（実施例６） Ｄ−イソロイシン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−バリン修飾
シクロデキストリン固定化担体の製造 実施例５において、ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−
フェニルアラニン１９ｇの代りに、ｔ−ブチルオキシカ
ルボニル−Ｄ−イソロイシン１７ｇ、ｔ−ブチルオキシ
カルボニル−Ｌ−イソロイシン１７ｇまたはｔ−ブチル
オキシカルボニル−Ｌ−バリン１６ｇをそれぞれ用いた
ほかは、実施例５と同様な操作を行った。こうして得ら
れた吸着担体は窒素の元素分析により乾燥担体１ｇ当た
りＤ−イソロイシンを０．０４ミリモル、Ｌ−イソロイ
シンを０．０７ミリモル、Ｌ−バリンを０．０８ミリモ
ル固定化していることが確かめられた。

【００４７】（実施例７） Ｌ−アラニン修飾β−シクロデキストリン固定化担体の
製造 ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−アラニン１２ｇに、
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド２０ｍｌを加え、更に塩
化カルシウムを入れた乾燥管を付し、Ｎ，Ｎ’−カルボ
ニルジイミダゾール１１ｇを加え、氷冷下で１時間撹拌
した。次いでこの反応液にβ−シクロデキストリン１２
ｇを加え、３０℃で１０時間振盪した。さらにこの反応
液にアセトン２０ｍｌを加え、沈殿物を生じさせた後、
沈殿物を濾取し、アセトンで洗浄した。こうして得られ
た化合物２０ｇにＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド２０ｍ
ｌを加え、更に塩化カルシウムを入れた乾燥管を付し、
実施例１で用いたＮ−カルボニルイミダゾール固定化担
体１０ｇを加え、３０℃で１０時間振盪後、担体を濾取
し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドおよび水で洗浄し
た。更に、この担体に実施例２と同様の操作を行った。
こうして得られた吸着担体は窒素の元素分析によりＬ−
アラニンを乾燥担体１ｇ当たり０．０３ミリモル固定化
していることが確かめられた。

【００４８】（実施例８） ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−バリン修飾β−シクロ
デキストリン固定化担体の製造 ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−バリン１３ｇに、Ｎ，
Ｎ−ジメチルホルムアミド２０ｍｌを加え、更に塩化カ
ルシウムを入れた乾燥管を付し、Ｎ，Ｎ’−カルボニル
ジイミダゾール１１ｇを加え、氷冷下で１時間撹拌し
た。次いでこの反応液にβ−シクロデキストリン１２ｇ
を加え、３０℃で１０時間振盪した。さらにこの反応液
にアセトン２０ｍｌを加え、沈殿物を生じさせた後、沈
殿物を濾取し、アセトンで洗浄した。こうして得られた
化合物２０ｇにＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド２０ｍｌ
を加え、更に塩化カルシウムを入れた乾燥管を付し、
Ｎ，Ｎ’−カルボニルイミダゾール１１ｇを加え、氷冷
下で１時間撹拌した。次いで、この反応液に実施例１で
用いたエポキシ基含有ゲル状共重合体中のエポキシ基を
水により開環変性した担体１０ｇを加え、３０℃で１０
時間振盪後、担体を濾取し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムア
ミドおよび水で洗浄した。こうして得られた吸着担体は
窒素の元素分析によりベンジルオキシカルボニル−Ｌ−
バリンを乾燥担体１ｇ当たり０．０３ミリモル固定化し
ていることが確かめられた。

【００４９】（実施例９） Ｌ−アラニン修飾β−シクロデキストリン固定化担体の
製造 ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−アラニン１２ｇに、
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド２０ｍｌを加え、更に塩
化カルシウムを入れた乾燥管を付し、Ｎ，Ｎ’−カルボ
ニルジイミダゾール１１ｇを加え、氷冷下で１時間撹拌
した。次いでこの反応液にβ−シクロデキストリン１２
ｇを加え、３０℃で１０時間振盪した。さらにこの反応
液にアセトン２０ｍｌを加え、沈殿物を生じさせた後、
沈殿物を濾取し、アセトンで洗浄した。こうして得られ
た化合物２０ｇにＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド２０ｍ
ｌを加え、更に塩化カルシウムを入れた乾燥管を付し、
実施例１で用いたＮ−カルボニルイミダゾール担持シク
ロデキストリン固定化担体１０ｇを加え、３０℃で１０
時間振盪後、担体を濾取し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムア
ミドおよび水で洗浄した。更に、この担体に実施例２と
同様の操作を行った。こうして得られた吸着担体は窒素
の元素分析によりＬ−アラニンを乾燥担体１ｇ当たり
０．０４ミリモル固定化していることが確かめられた。

【００５０】（実施例１０） Ｌ−イソロイシン修飾α−シクロデキストリン固定化担
体の製造 実施例１、実施例２において、β−シクロデキストリン
５２ｇの代りにα−シクロデキストリン４５ｇを用いた
他は、実施例１、実施例２と同様の操作を行った。こう
して得られた吸着担体は、窒素の元素分析によりＬ−イ
ソロイシンを、乾燥担体１ｇ当たり０．１ミリモル固定
化していることが確かめられた。

【００５１】（実施例１１） ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−イソロイシン修飾β
−シクロデキストリン固定化担体の製造 グリシジルメタクリレートとグリセリンジメタクリレー
トから得られたエポキシ基含有ゲル状共重合体中にエポ
キシ基を水により開環変性し、真空下で５時間乾燥し
た。この担体１０ｇに１，４−ブタンジオールジグリシ
ジルエーテル２０ｇを加え、更に１Ｎ水酸化ナトリウム
水溶液２０ｍｌを加え、３０℃で５時間振盪後、担体を
濾取し、水及びアセトンで洗浄した。この１，４−ブタ
ンジオールジグリシジルエーテル固定化担体（エポキシ
基：乾燥担体１ｇ当たり０．２ミリモル）約１０ｇを、
０．０７Ｎ水酸化ナトリウム水溶液１６０ｍｌに分散さ
せ、更にβ−シクロデキストリン２９ｇを加え、４０℃
で４８時間振盪後、担体を濾取し、水およびアセトンで
洗浄した。こうして得られたβ−シクロデキストリン固
定化担体を用いて実施例１と同様な実験を行った。こう
して得られた吸着担体は、窒素の元素分析によりｔ−ブ
チルオキシカルボニル−Ｌ−イソロイシンを、乾燥担体
１ｇ当たり０．０５ミリモル固定化していることが確か
められた。

【００５２】（実施例１２） ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−バリン修飾β−シクロ
デキストリン固定化担体の製造 ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−バリン１３ｇに、Ｎ，
Ｎ−ジメチルホルムアミド２０ｍｌを加え、更に塩化カ
ルシウムを入れた乾燥管を付し、Ｎ，Ｎ’−カルボニル
イミダゾール１１ｇを加え、氷冷下で１時間撹拌した。
次いで、この反応液にβ−シクロデキストリン１２ｇを
加え、３０℃で１０時間振盪した。さらにこの反応液に
アセトン２０ｍｌを加え、沈殿物を生じさせた後、沈殿
物を濾取し、アセトンで洗浄した。こうして得られた化
合物２０ｇにＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド２０ｍｌを
加え、更に塩化カルシウムを入れた乾燥管を付し、Ｎ，
Ｎ’−カルボニルジイミダゾール１１ｇを加え、氷冷下
で１時間撹拌した。次いでこの反応液に、実施例１で用
いたβ−シクロデキストリン固定化担体１０ｇを加え、
３０℃で１０時間振盪後、担体を濾取し、Ｎ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミドおよび水で洗浄した。こうして得られ
た吸着担体は、窒素の元素分析によりベンジルオキシカ
ルボニル−Ｌ−バリンを、乾燥担体１ｇ当たり０．１１
ミリモル固定化していることが確かめられた。以下に、
本発明のクロマトグラフィー用吸着担体の不斉識別能に
ついて代表的な応用例を示す。

【００５３】（応用例）実施例５より得られたＬ−フェ
ニルアラニン修飾β−シクロデキストリン固定化担体及
び実施例６により同様にして得られる、Ｄ−イソロイシ
ン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−バリン修飾β−シクロデキ
ストリン固定化担体、更に実施例４よりえられたＬ−イ
ソロイシンメチルエステル修飾β−シクロデキストリン
固定化担体を、内径４．６ｍｍ、長さ１５０ｍｍのステ
ンレス製カラムにスラリー法で充填し、高速液体クロマ
トグラフ装置を用いてメチオニンβ−ナフチルアミドを
分析したところ、表１に示したような結果が得られた。
分析条件は次のとおりである。 溶離液 ：１％酢酸−トリエチルアミン緩衝液（ｐＨ
４）：アセトニトリル（８：２） 溶離速度：０．３ｍｌ／分 検出器 ：紫外分光光度計（２５４ｎｍ） 表中、αはＤ体のキャパシティー比をＬ体のキャパシテ
ィー比で除した分離係数を示す。また、比較例として本
発明の吸着担体の代りに実施例１で用いたシクロデキス
トリン固定化担体、及び実施例５において、シクロデキ
ストリン固定化担体の代りにグリシジルメタクリレート
とグリセリンジメタクリレートから得られたエポキシ基
含有ゲル状共重合体中のエポキシ基を水により開環変性
した担体を用いることにより得られるシクロデキストリ
ンを含まないＬ−イソロイシン固定化担体を充填したカ
ラムについても試験を行った。

【００５４】

【表１】

【００５５】表１から明らかなごとく、本発明により得
られた修飾β−シクロデキストリン固定化担体は、非修
飾β−シクロデキストリン固定化担体に比して高い分離
係数を有する。

【００５６】

【発明の効果】本発明のクロマトグラフィー用吸着担体
は、応用例から明らかなように、ＣＤ固定化担体をアミ
ノ酸等により修飾することにより、非修飾シクロデキス
トリン固定化担体よりも高い不斉識別能を示すものであ
る。従って、本発明に係るクロマトグラフィー用吸着担
体は、従来のシクロデキストリン固定化担体で分離が不
可能な化合物の分離の可能性を有するほか、単なる分析
や分取手段にとどまらず幅広い工業用分離精製設備への
応用をはかるための有力な手段となることは明らかであ
る。

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【手続補正書】

【提出日】平成４年８月１８日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００２９

【補正方法】変更

【補正内容】

【００２９】なお、アミノ酸を結合したＣＤ誘導体を得
るに際しては、例えばアミノ酸等のＮ末端を結合したＣ
Ｄ誘導体１ｇ当たり、メタノール、１，４−ジオキサン
またはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを５〜１００ｍ
ｌ、好ましくは１０〜３０ｍｌ加え、ＣＤ誘導体を分散
させる。更にこの分散液の約１モルの水酸化ナトリウム
などのアルカリ水溶液を０．０１〜１ｍｌ加え、０．１
〜５時間、好ましくは０．２〜０．５時間反応させて行
うことができる。この時の反応温度は０〜４０℃、好ま
しくは０〜１０℃に保つことが望ましい。反応生成物を
通常の方法で後処理すると前記アミノ酸を結合したＣＤ
誘導体を得ることができる。

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００３０

【補正方法】変更

【補正内容】

【００３０】また、アミノ酸誘導体のＣ端を結合したＣ
Ｄ誘導体は、例えばアミノ酸誘導体のＣ端を結合したＣ
Ｄ誘導体１ｇ当たり約２〜４モル塩酸の１，４−ジオキ
サン水溶液を５〜５０ｍｌ、好ましくは１０〜２０ｍｌ
加え、０．１〜５時間、好ましくは０．３〜１時間反応
させて行うことができる。この時の反応温度は０〜４０
℃、好ましくは０〜１０℃が望ましい。反応生成物を通
常の方法で後処理すると前記アミノ酸を結合したＣＤ誘
導体を得ることができる。

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 シクロデキストリンが水に不溶性の支持
   体に固定化されている担体の該シクロデキストリン部分
   に、直接またはカルボニル基を介してアミノ酸またはア
   ミノ酸誘導体が結合していることを特徴とするクロマト
   グラフィー用吸着担体。
2. 【請求項２】 シクロデキストリンが水に不溶性の支持
   体に固定化されている担体に縮合剤を反応させ、次いで
   これにアミノ酸またはアミノ酸誘導体を反応させて結合
   させることを特徴とする請求項１記載のクロマトグラフ
   ィー用吸着担体の製造方法。
3. 【請求項３】 アミノ酸またはアミノ酸誘導体に縮合剤
   を反応させ、次いでこれにシクロデキストリンが水に不
   溶性の支持体に固定化されている担体を反応させ結合さ
   せることを特徴とする請求項１記載のクロマトグラフィ
   ー用吸着担体の製造方法。
4. 【請求項４】 水に不溶性の支持体に縮合剤を反応さ
   せ、これにアミノ酸またはアミノ酸誘導体が直接または
   カルボニル基を介してシクロデキストリンに結合してい
   るシクロデキストリン誘導体を反応させ結合させること
   を特徴とする請求項１記載のクロマトグラフィー用吸着
   担体の製造方法。
5. 【請求項５】 アミノ酸またはアミノ酸誘導体が直接ま
   たはカルボニル基を介してシクロデキストリンに結合し
   ているシクロデキストリン誘導体に縮合剤を反応させ、
   これに水に不溶性の支持体を反応させ、結合させること
   を特徴とする請求項１記載のクロマトグラフィー用吸着
   担体の製造方法。
6. 【請求項６】 シクロデキストリンが水に不溶性の支持
   体に固定化されている担体に縮合剤を反応させ、これに
   アミノ酸またはアミノ酸誘導体が直接またはカルボニル
   基を介してシクロデキストリンに結合しているシクロデ
   キストリン誘導体を反応させ、結合させることを特徴と
   する請求項１記載のクロマトグラフィー用吸着担体の製
   造方法。
7. 【請求項７】 アミノ酸またはアミノ酸誘導体が直接ま
   たはカルボニル基を介してシクロデキストリンに結合し
   ているシクロデキストリン誘導体に縮合剤を反応させこ
   れにシクロデキストリンが水に不溶性に支持体に固定化
   している担体を反応させ結合させることを特徴とする請
   求項１記載のクロマトグラフィー用吸着担体の製造方
   法。