KR20230152032A - 결합제 및 이를 사용하는 방법 - Google Patents

결합제 및 이를 사용하는 방법 Download PDF

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KR20230152032A
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코트니 크레인
크리스틴 스위더렉
수잔 줄리엔
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모차르트 쎄라퓨틱스 인코포레이티드
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Abstract

본 발명은 CD8+KIR+ T 조절 세포에 특이적으로 결합하는 결합제, 및 염증성 질환, 자가면역 질환, 암 또는 감염성 질환과 같은 질환 또는 장애의 치료에서의 그의 용도를 제공한다.

Description

결합제 및 이를 사용하는 방법
서열 목록에 관한 진술
이 출원과 관련된 서열 목록은 종이 사본 대신 텍스트 형식으로 제공되며, 이로써 본 명세서에 참조로서 포함된다. 서열 목록을 포함하는 텍스트 파일의 명칭은 670151_403WO_Sequence_Listing.txt이다. 텍스트 파일은 85KB이며, 2022년 1월 20일에 생성되었고, EFS-Web을 통해 전자적으로 제출되었다.
면역계에는 선천성 면역과 후천성 면역이 포함된다. 후천성 면역에는 T 세포 하위집합과 B 세포 하위집합을 비롯한 여러 가지 세포 아형이 있다. T 세포 하위 집합은 세포독성 T 세포 및 헬퍼 T 세포, 조절 T 세포와 같은 나이브 T 림프구 및 이펙터 T 림프구를 포함하는 다양한 유형의 T 세포를 포함한다. 이러한 T 세포 유형의 활성은 이펙터 T 세포의 활동과 조절 T 세포에 의한 조절 사이의 균형에 의해 달성된다. 이펙터 T 세포는 염증을 촉진하지만, 조절 T 세포는 일반적으로 그것을 조절하는 것으로 생각된다. 따라서 트레그(Treg)는 자기 내성을 유지하고, 자가면역을 제한하며, 자가 반응성 CD4+ T 이펙터 세포의 연장 및 활성화를 제어함으로써 자가면역 병인에서 중요한 역할을 한다. 이펙터와 조절 T 세포 사이의 균형이 무너지면 면역 반응의 부적절한 활성화 또는 억제, 자기 내성 상실, 자가면역 장애 및 암이 발생할 수 있다. 면역 체계의 균형을 유지하기 위한 조절 T 세포의 메커니즘과 조절은 이제 막 이해되기 시작했다.
간단한 요약
CD8+KIR+ 조절 T 세포(트레그(Treg))의 활성을 조절하기 위한 결합제 및 그의 사용 방법이 제공된다. 결합제는 이중특이적 또는 다중특이적이며 CD8+KIR+ 트레그의 표면에 발현된 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그는 MHC 클래스 I 제한적이다. 일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그는 MHC Qa-1 제한적이지 않다. 또한 자가면역 질환, 감염성 질환 및 암의 치료를 위해 상기 결합제를 사용하는 방법이 제공된다.
일부 구현예에서, 제1 항원 (KIR 단백질 이외의 CD8+KIR+ T 조절 세포(트레그)에서 발현되는 항원으로부터 선택된 제1 항원)에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인; 및 CD8+KIR+ 트레그의 표면 상에 발현된 억제성 KIR 단백질에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하는 결합제를 제공하며, 여기서 결합제는 CD8+KIR+ 트레그에 결합한다.
일부 구현예에서, 제1 항원은 CD3, CD8, CD27, CD38, CD39, CD40L, CD45RA, CD45RB, CD45RO, CD73, CD103(ITGAE), CD122, CD166, CD177, CCR7, CXCR3, CXCR5, HLA-DR, ICOS, LAG-3/CD223, OX-40, PD-1, S1000A8/9, TIM-3, TLT-2, 2B4 및 41BB로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제1 항원은 CD3, CD5, CD8, CD27, CD38, CD39, CD40L, CD45RA, CD45RB, CD45RO, CD73, CD103 (ITGAE), CD122, CD166, CD177, CCR7, CXCR3, CXCR5, HLA-DR, ICOS, LAG-3/CD223, OX-40, PD-1, S1000A8/9, TIM-3, TLT-2, 2B4, 및 41BB로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제1 항원은 CD3, CD27, CD38, CD39, CD40L, CD45RA, CD45RB, CD45RO, CD73, CD122, ICOS, OX-40, 2B4, 41BB 및 HLA-DR로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제1 항원은 CD3, CD5, CD27, CD38, CD39, CD40L, CD45RA, CD45RB, CD45RO, CD73, CD122, ICOS, OX-40, 2B4, 41BB 및 HLA-DR로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제1 항원은 LAG-3/CD223, TIM-3, PD-1, S1000A8/9 및 TLT2로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제1 항원은 CD103(ITGAE), CD166, CD177, CXCR3 및 S1000A8/9로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제1 항원은 CCR7, CXCR3 및 CXCR5로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제1 항원은 PD-1, CXCR3 및 ICOS로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제1 항원은 CD3, CD5 및 CD8로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제1 항원은 CD3 및 CD8로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 결합제는 이중특이적 항체, 디아바디(diabody), 항체 Fc 융합체, scFv1-ScFv2, ScFv12-Fc-scFv22, IgG-scFv, DVD-Ig, 트리오맙/쿼드로마, 투-인-원 IgG, scFv2-Fc, TandAb, scFv-HSA-scFv, scFv-VHH, Fab-scFv-Fc, Fab-VHH-Fc, dAb-IgG, IgG- VHH, 탠덤 scFv-Fc, (scFv1)2-Fc-(VHH)2, BiTe, DART, 크로스맙, 안티칼린, 어피바디(affibody), 아비머(avimer), DARPin, 애드넥틴, scFv-Fc, 원-아암(one-armed) 탠덤 scFv-Fc 또는 DART-Fc이다. 일부 구현예에서, 결합제의 제1 또는 제2 결합 도메인은 그의 항체 또는 항원 결합 부분으로부터 선택되고, 다른 결합 도메인은 항체 단편이다. 일부 구현예에서, 항원 결합 부분은 Fab, Fab', F( ab')2, Fv, scFv 또는 단일 도메인 항체(VHH, VNAR, sdAb 또는 나노바디라고도 함)이다. 일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 CD3 또는 CD3의 서브유닛, 선택적으로 CD3엡실론에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, VH 및 VL은 하기로 이루어진 군에 명시된 한 쌍의 아미노산 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는다:
a. 각각, 서열번호:1 및 서열번호:2;
b. 각각, 서열번호:9 및 서열번호:10;
c. 각각, 서열번호:17 및 서열번호:18;
d. 각각, 서열번호:25 및 서열번호:26;
e. 각각, 서열번호:33 및 서열번호:34;
f. 각각, 서열번호:41 및 서열번호:34;
g. 각각, 서열번호:45 및 서열번호:34;
h. 각각, 서열번호:49 및 서열번호:50;
i. 각각, 서열번호:57 및 서열번호:58;
j. 각각, 서열번호:65 및 서열번호:66; 및
k. 각각, 서열번호:65 및 서열번호:166.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 hCDR1, hCDR1 및 hCDR3, 및 lCDR1, lCDR2 및 lCDR3을 포함하고, CDR은 하기로 이루어진 군에 명시된 아미노산 서열 세트로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는다:
a. 각각, 서열번호:3 내지 서열번호:8;
b. 각각, 서열번호:11 내지 서열번호:16;
c. 각각, 서열번호:19 내지 서열번호:24;
d. 각각, 서열번호:27 내지 서열번호:32;
e. 각각, 서열번호:35 내지 서열번호:40;
f. 각각, 서열번호:42 내지 서열번호:44 및 서열번호:38 내지 서열번호:40;
g. 각각, 서열번호:46 내지 서열번호:48 및 서열번호:38 내지 서열번호:40;
h. 각각, 서열번호:51 내지 서열번호:56;
i. 각각, 서열번호:59 내지 서열번호:64;
j. 각각, 서열번호:67 내지 서열번호:72; 및
k. 각각, 서열번호:67 내지 69 및 서열번호:167 내지 169.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 CD8 또는 CD8의 서브유닛, 선택적으로 CD8알파에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, VH 및 VL 영역은
a. 각각, 서열번호:73 및 서열번호:74; 및
b. 각각, 서열번호:81 및 서열번호:82로 이루어진 군에 제시된 한 쌍의 아미노산 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 갖거나,
또는 제1 결합 도메인은 VHH 쇄를 포함하고, VHH 쇄는
c. 서열번호:89;
d. 서열번호 93; 및
e. 서열번호 97로 이루어진 군에서 제시된 아미노산 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 hCDR1, hCDR1 및 hCDR3, 및 lCDR1, lCDR2 및 lCDR3을 포함하고, CDR의 아미노산 서열은
a. 각각, 서열번호:75 내지 서열번호:80; 또는
b. 각각, 서열번호:83 내지 서열번호:88로 이루어진 군에서 제시된 아미노산 서열로부터 선택되거나;
또는 제1 결합 도메인은 hCDR1, hCDR2 및 hCDR3을 갖는 VHH 쇄를 포함하며, VHH CDR의 아미노산 서열은
c. 각각, 서열번호:90 내지 서열번호:92;
d. 각각, 서열번호:94 내지 서열번호:96; 및
e. 각각, 서열번호:98 내지 서열번호:100로 이루어진 군에 제시된 아미노산 서열로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 ICOS 또는 ICOS의 서브유닛에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, VH 및 VL은 각각 서열번호:170 및 서열번호:171의 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호:172 내지 174의 아미노산 서열을 갖는 hCDR1, hCDR1 및 hCDR3, 및 각각 서열번호:175 내지 177의 아미노산 서열을 갖는 lCDR1, lCDR2 및 lCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 PD-1 또는 PD-1의 서브유닛에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, VH 및 VL은 각각 서열번호:178 및 서열번호:179의 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호:180 내지 182의 아미노산 서열을 갖는 hCDR1, hCDR1 및 hCDR3, 및 각각 서열번호:183 내지 185의 아미노산 서열을 갖는 lCDR1, lCDR2 및 lCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 CXCR3 또는 CXCR3의 서브유닛에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, VH 및 VL은 각각 서열번호:186 및 서열번호:187의 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호:188 내지 190의 아미노산 서열을 갖는 hCDR1, hCDR1 및 hCDR3, 및 각각 서열번호:191 내지 193의 아미노산 서열을 갖는 lCDR1, lCDR2 및 lCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 CD5 또는 CD5의 서브유닛에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, VH 및 VL은 각각 서열번호:194 및 서열번호:195의 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호:196 내지 198의 아미노산 서열을 갖는 hCDR1, hCDR1 및 hCDR3, 및 각각 서열번호:199 내지 201의 아미노산 서열을 갖는 lCDR1, lCDR2 및 lCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 KIR3DL1, KIR3DL2, KIR2DL1, KIR2DL2 및 KIR2DL3, 또는 이들의 조합으로부터 선택되는 억제성 KIR 단백질에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 KIR2DL1/2/3 또는 KIR2DL1/2에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, VH 및 VL은 하기로 이루어진 군에 제시된 아미노산 서열의 쌍들로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는다:
a. 각각, 서열번호:101 및 서열번호:102;
b. 각각, 서열번호:109 및 서열번호:110;
c. 각각, 서열번호:117 및 서열번호:118;
d. 각각, 서열번호:125 및 서열번호:126;
e. 각각, 서열번호:133 및 서열번호:134;
f. 각각, 서열번호:141 및 서열번호:142;
g. 각각, 서열번호:149 및 서열번호:150; 및
h. 각각, 서열번호:157 및 서열번호:158.
일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 hCDR1, hCDR1 및 hCDR3, 및 lCDR1, lCDR2 및 lCDR3을 포함하고, CDR은 하기로 이루어진 군으로부터 제시된 아미노산 서열의 세트로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는다:
a. 각각, 서열번호:103 내지 서열번호:108;
b. 각각, 서열번호:111 내지 서열번호:116;
c. 각각, 서열번호:119 내지 서열번호:124;
d. 각각, 서열번호:127 내지 서열번호:132;
e. 각각, 서열번호:135 내지 서열번호:140;
f. 각각, 서열번호:143 내지 서열번호:148;
g. 각각, 서열번호:151 내지 서열번호:156; 및
h. 각각, 서열번호:159 및 서열번호:164.
일부 구현예에서, 결합제는 Fc 도메인을 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 결합제는 Fc 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 도메인은 IgG1 및 IgG4 Fc 도메인로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없다. 일부 구현예에서, Fc 도메인은 IgG1 Fc 도메인이다. 일부 구현예에서, Fc 도메인은 IgG1 Fc 눌(null)이다.
일부 구현예에서, 결합제는 2가 또는 4가이다. 일부 구현예에서, 결합제는 이중특이적이다.
또한 본원에 기재된 임의의 구현예의 결합제 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
또한 본원에 기재된 임의의 구현예의 결합제를 암호화하는 핵산이 제공된다. 본원에 기재된 임의의 구현예의 핵산을 포함하는 벡터가 추가로 제공된다. 또한 본원에 기재된 임의의 구현예의 핵산 또는 벡터를 포함하는 세포주가 제공된다.
일부 구현예에서, 자가면역 질환을 치료하는 방법이 제공되며, 이는 본원에 기재된 임의의 구현예의 결합제 또는 약제학적 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에게 대상체의 병원성 면역 세포의 수 또는 활성을 감소시키고 이에 따라 자가면역 질환의 증상을 개선하는데 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 병원성 면역 세포에 의해 매개되는 면역 반응을 억제하는 방법이 제공되며, 이는 본원에 기재된 임의의 구현예의 결합제 또는 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그(활성화된 트레그)를 활성화 또는 자극하기에 효과적인 양으로 CD8+KIR+ T 조절 세포(트레그)와 접촉시키는 것을 포함하며, 이에 따라 병원성 면역 세포의 수 또는 활성이 감소된다.
일부 구현예에서, 자가항원에 대한 면역 반응을 억제하는 방법이 제공되며, 이는 본원에 기재된 임의의 구현예의 결합제 또는 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극하기에 효과적인 양으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 이에 따라 자가항원에 반응하는 병원성 면역 세포의 수 또는 활성이 감소된다.
일부 구현예에서, 항원에 대한 면역 반응을 억제하는 방법이 제공되며, 이는 본원에 기재된 임의의 구현예의 결합제 또는 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극하기에 효과적인 양으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 이에 따라 항원에 반응하는 병원성 면역 세포의 수 또는 활성이 감소된다.
자가면역 질환을 치료하거나 면역 반응을 억제하는 이러한 방법 중 일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그는 생체 내에서 결합제와 접촉된다. 일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그는 생체 외에서 결합제와 접촉된다. 일부 구현예에서, 활성화된 CD8+KIR+ 트레그는 이를 필요로 하는 대상체에게 유효량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 병원성 면역 세포는 자가반응성 CD4 T 세포, 자가항체 생성 B 세포 또는 자가 항원 제시 수지상 세포이다. 일부 구현예에서, 병원성 면역 세포는 자가 항원 제시 세포이다. 일부 구현예에서, 대상체에서 자가항체의 역가가 감소한다.
일부 구현예에서, 대상체는 자가면역 질환을 가지고 있다. 일부 구현예에서, 자가면역 질환은 셀리악병, 크론병, 소아 특발성 관절염, 염증성 장 질환(IBD), 인슐린 의존성 당뇨병(IDDM 또는 1형 당뇨병), 루푸스 신염, 중증 근무력증, 심근염, 다발성 경화증(MS), 천포창/유천포창, 류마티스 관절염(RA), 경피증/전신 경화증, 쇼그렌 증후군(SjS), 전신성 홍반성 루푸스(SLE) 및 궤양성 대장염으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
자가면역 질환을 치료하거나 면역 반응을 억제하는 방법의 일부 구현예에서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD8에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD3에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD5에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 PD-1에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 ICOS에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CXCR3에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그는 MHC 클래스 I 제한적이다. 일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그는 MHC HLA E(Qa-1b) 제한적이지 않다.
자가면역 질환을 치료하거나 면역 반응을 억제하는 방법에 대한 일부 구현예에서, 상기 방법은 대상체에게 면역억제제를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체에 대한 결합제의 투여는 대상체에서 개선된 치료 결과를 초래한다. 일부 구현예에서, 개선된 치료 결과는 질환 발적의 빈도 또는 중증도 감소, 전신 염증성 사이토카인 감소 또는 자가면역 질환과 관련된 증상의 자가 보고 감소이다.
자가면역 질환을 치료하거나 면역 반응을 억제하는 방법에 대한 일부 구현예에서, 결합제는 정맥 내로 투여된다. 일부 구현예에서, 결합제는 피하로 투여된다. 일부 구현예에서, 결합제는 약 0.01 mg/kg 내지 약 20 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없다.
일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극함으로써 대상체에서 자가면역 질환을 치료하기 위한 본원에 기재된 임의의 구현예의 결합제 또는 약제학적 조성물의 용도가 제공된다. 일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극함으로써 병원성 면역 세포에 의한 면역 반응의 감소를 위한 본원에 기재된 임의의 구현예의 결합제 또는 약제학적 조성물의 용도가 제공된다. 일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극함으로써 대상체에서 자가항체 역가를 감소시키기 위한 본원에 기재된 임의의 구현예의 결합제 또는 약제학적 조성물의 용도가 제공된다.
일부 구현예에서, 암을 치료하는 방법이 제공되며, 본원에 기재된 임의의 구현예의 결합제 또는 약제학적 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에게 D8+KIR+ T 조절 세포(트레그)를 활성화 또는 자극하여 암 증상을 완화시키는데 유효한 양으로 투여하는 것을 포함하며, 여기서 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성을 갖지 않는다.
일부 구현예에서, 암과 관련된 항원(암 항원)에 대한 면역 반응을 자극하는 방법이 제공되며, 이는 CD8+KIR+ T 조절 세포(트레그)를 CD8+KIR+ 트레그(활성화된 트레그)를 활성화 또는 자극하기에 효과적인 양의 본원에 기재된 임의의 구현예의 결합제 또는 약제학적 조성물과 접촉시키는 것을 포함하고, 이에 따라 암 항원에 대한 면역 반응이 증가하며, 여기서 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성을 갖지 않는다.
일부 구현예에서, 암을 치료하는 방법이 제공되며, 이는 본원에 기재된 임의의 구현예의 결합제 또는 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ T 조절 세포(트레그)를 고갈시켜 암 증상을 완화하는 데 효과적인 양으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 결합제는 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는다.
일부 구현예에서, 암과 관련된 항원(암 항원)에 대한 면역 반응을 자극하는 방법이 제공되며, 이는 본원에 기재된 임의의 구현예의 결합제 또는 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그를 고갈시키기에 효과적인 양으로 CD8+KIR+ T 조절 세포(트레그)와 접촉시키는 것을 포함하고, 이에 따라 암 항원에 대한 면역 반응이 증가되며, 여기서 결합제는 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는다.
암을 치료하거나 암과 관련된 항원에 대한 면역 반응을 자극하는 방법 중 일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그는 생체 내에서 결합제와 접촉된다. 일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그는 생체 외에서 결합제와 접촉한다. 일부 구현예에서, 활성화된 CD8+KIR+ 트레그는 이를 필요로 하는 대상체에게 유효량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 증가된 면역 반응은 암세포의 감소 또는 면역 억제성 면역 세포의 고갈을 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체의 암세포 수가 감소한다.
일부 구현예에서, 암은 암종, 림프종, 모세포종, 육종 및 백혈병으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 암은 유방암, 자궁경부암, 난소암, 폐암, 결장암(CRC)(및 장의 다른 암), 피부암, 식도암, 선암, 방광암 및 전립선암과 같은 고형 종양; 및 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD8에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD3에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD5에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 PD-1에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CXCR3에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 ICOS에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그는 MHC 클래스 I 제한적이다. 일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그는 MHC HLA E(Qa-1b) 제한적이지 않다.
일부 구현예에서, 방법은 대상체에게 화학요법제를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 대상체에게 면역요법을 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 체크포인트 억제제와 같은 면역요법을 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체에 대한 결합제의 투여는 대상체에서 개선된 치료 결과를 초래한다. 일부 구현예에서, 개선된 치료 결과는 부분 반응 또는 완전 반응이다. 일부 구현예에서, 개선된 치료 결과는 완화이다.
일부 구현예에서, 결합제가 정맥으로 투여된다. 일부 구현예에서, 결합제가 피하로 투여된다. 일부 구현예에서, 결합제는 약 0.01 mg/kg 내지 약 20 mg/kg의 용량으로 투여된다.
일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극함으로써 대상체에서 암을 치료하기 위한 본원에 기재된 임의의 구현예의 결합제 또는 약제학적 조성물의 용도가 제공되며, 여기서 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성을 갖지 않는다.
일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극함으로써 면역 억제성 면역 세포에 의한 면역 억제의 감소를 위한 본원에 기재된 임의의 구현예의 결합제 또는 약제학적 조성물의 용도가 제공되며, 여기서 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성을 갖지 않는다.
일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극함으로써 대상체에서 종양 부하의 감소를 위한 본원에 기재된 임의의 구현예의 결합제 또는 약제학적 조성물의 용도가 제공되며, 여기서 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성을 갖지 않는다.
일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그를 고갈시킴으로써 대상체에서 암을 치료하기 위한 본원에 기재된 임의의 구현예의 결합제 또는 약제학적 조성물의 용도가 제공되며, 여기서 결합제는 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는다.
일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그의 고갈을 위한 본원에 기재된 임의의 구현예의 결합제 또는 약제학적 조성물의 용도가 제공되며, 여기서 결합제는 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는다.
일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그를 고갈시킴으로써 대상체에서 종양 부담을 감소시키기 위한 본원에 기재된 임의의 구현예의 결합제 또는 약제학적 조성물의 용도가 제공되며, 여기서 결합제는 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는다.
일부 구현예에서, 감염을 치료하는 방법이 제공되며, 이는 본원에 기재된 임의의 구현예의 결합제 또는 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극하여 감염의 증상을 호전시키기에 효과적인 양으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 감염에 의해 유발된 감염된 세포에 대한 면역 반응을 자극하는 방법이 제공되며, 이는 본원에 기재된 임의의 구현예의 결합제 또는 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그(활성화된 트레그)를 활성화하거나 자극하여 감염된 세포에 대한 면역 반응을 증가시키기에 효과적인 양으로 CD8+KIR+ T 조절 세포(트레그)와 접촉시키는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그는 생체 내에서 결합제와 접촉한다. 일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그는 생체 외에서 결합제와 접촉한다. 일부 구현예에서, 활성화된 CD8+KIR+ 트레그는 이를 필요로 하는 대상체에게 유효량으로 투여된다.
감염을 치료하거나 감염된 세포에 대한 면역 반응을 자극하는 구현예들 중 일부에서, 면역 반응은 감염된 세포 또는 CD4 T 조절 세포 및 내성 DC로부터 선택되는 면역 억제성 면역 세포의 감소를 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체의 감염된 세포 수가 감소한다. 일부 구현예에서, 감염은 세균성 질환, 전신 진균성 질환, 리케차성(rickettsial) 질환, 기생충성 질환 및 바이러스성 질환으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 감염은 HIV 감염, C형 간염 바이러스(HCV) 감염, 인유두종 바이러스(HPV) 감염, 엡스타인 바 바이러스(EBV) 감염, SARS-COV2와 같은 코로나바이러스 감염(Covid-19), 거대 세포 바이러스(CMV) 감염 및 독감 바이러스 감염으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD8에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD3에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD5에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 PD-1에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CXCR3에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 ICOS에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그는 MHC 클래스 I 제한적이다. 일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그는 MHC HLA E(Qa-1b) 제한적이지 않다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 항미생물제 또는 항바이러스제를 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체에 대한 결합제의 투여는 대상체에서 개선된 치료 결과를 초래한다. 일부 구현예에서, 개선된 치료 결과는 감염 감소이다. 일부 구현예에서, 개선된 치료 결과는 감염된 세포의 감소이다. 일부 구현예에서, 결합제가 정맥으로 투여된다. 일부 구현예에서, 결합제가 피하로 투여된다. 일부 구현예에서, 결합제는 약 0.01 mg/kg 내지 약 20 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없다.
일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극함으로써 대상체에서 감염을 치료하기 위한 본원에 기재된 임의의 구현예의 결합제 또는 약제학적 조성물의 용도가 제공된다.
일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극함으로써 면역 억제성 면역 세포를 억제함으로써 면역 반응을 자극하기 위한 본원에 기재된 임의의 구현예의 결합제 또는 약제학적 조성물의 용도가 제공된다.
일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극함으로써 대상체에서 감염을 감소시키기 위한 본원에 기재된 임의의 구현예의 결합제 또는 약제학적 조성물의 용도가 제공된다.
일부 구현예에서, 이식 후 이식편 대 숙주 질환(GVHD)의 발병을 감소시키거나 예방하는 방법이 제공되며, 이는 본원에 기재된 임의의 구현예의 결합제 또는 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극하여 GVHD의 적어도 하나의 증상을 감소 또는 개선시키기에 효과적인 양으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없다.
일부 구현예에서, 이식을 받은 대상체를 치료하는 방법이 제공되며, 이는 본원에 기재된 임의의 결합제 또는 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그(활성화된 트레그)를 활성화 또는 자극하기에 효과적인 양으로 CD8+KIR+ T 조절 세포와 접촉시키는 것을 포함하며, 이에 따라 GVHD가 감소 또는 억제된다. 일부 구현예에서, 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없다.
일부 구현예에서, 이식을 받은 대상체를 치료하는 방법이 제공되며, 이는 본원에 기재된 임의의 결합제 또는 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그를 고갈시켜 GVHD의 증상을 완화시키기에 효과적인 양으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 결합제는 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는다.
일부 구현예에서, 이식에 대해 GVHD를 억제하는 방법이 제공되며, 이는 본원에 기재된 임의의 결합제 또는 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그를 고갈시키기에 효과적인 양으로 CD8+KIR+ T 조절 세포(트레그)와 접촉시키는 것을 포함하고, 이로써 GVHD 또는 그 증상이 감소된다. 일부 구현예에서, 결합제는 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는다.
일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그는 생체 내에서 결합제와 접촉한다. 일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그는 생체 외에서 결합제와 접촉한다. 일부 구현예에서, 활성화된 CD8+KIR+ 트레그는 이를 필요로 하는 대상체에게 유효량으로 투여된다.
일부 구현예에서, 감소된 GVHD는 GVHD에서 활성인 CD4+ T 세포의 감소를 포함한다. 일부 구현예에서, 이식은 장기 이식, 조혈 줄기세포 이식, 제대혈 줄기세포 이식, 유도 만능 줄기세포 유래 전구체 또는 분화 세포 이식 및 골수 이식으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 이식은 조혈 줄기세포 이식, 제대혈 줄기세포 이식, 유도 만능 줄기세포 유래 전구체 또는 분화 세포 이식 또는 골수 이식이다. 일부 구현예에서, 이식은 동종이식이다.
일부 구현예에서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD8에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD3에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD5에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 PD-1에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CXCR3에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 ICOS에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그는 MHC 클래스 I 제한적이다. 일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그는 MHC HLA E(Qa-1b) 제한적이지 않다.
일부 구현예에서, 면역억제제도 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 대상체에 대한 결합제의 투여는 대상체에서 개선된 치료 결과를 초래한다. 일부 구현예에서, 개선된 치료 결과는 GVHD와 관련된 증상의 감소, 전신 염증성 사이토카인 감소, GVHD에 의해 영향을 받는 조직의 병리학 감소, 숙주 조직에 대한 부작용과 관련된 면역 반응과 관련된 증상의 자가 보고 감소, 개선되거나 연장된 이식 생착, 하나 이상의 증상(들)의 완화, 및/또는 이식 거부반응의 발병 또는 진행의 예방, 지연 또는 둔화, 또는 코르티코스테로이드와 같은 광범위한 면역 억제제의 사용을 줄임으로써 연장된 이식 생착이다.
일부 구현예에서, 결합제가 정맥으로 투여된다. 일부 구현예에서, 결합제가 피하로 투여된다.
일부 구현예에서, 대상체의 이식과 관련된 GVHD의 치료를 위해 본원에 기재된 임의의 결합제 또는 약제학적 조성물의 용도가 제공된다. 일부 구현예에서, 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없다.
일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극함으로써 대상체에서 이식과 관련된 GVHD를 치료하기 위한 본원에 기재된 임의의 결합제 또는 약제학적 조성물의 용도가 제공된다. 일부 구현예에서, 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없다.
일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극함으로써 이식과 관련된 GVHD의 감소를 위한 본원에 기재된 임의의 결합제 또는 약제학적 조성물의 용도가 제공된다. 일부 구현예에서, 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없다.
일부 구현예에서, 이식에 대한 GVHD를 감소시키기 위한 본원에 기재된 임의의 결합제 또는 약제학적 조성물의 용도가 제공된다. 일부 구현예에서, 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없다.
일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그를 고갈시킴으로써 대상체에서 이식과 관련된 GVHD의 치료를 위한 본원에 기재된 임의의 결합제 또는 약제학적 조성물의 용도가 제공된다. 일부 구현예에서, 결합제는 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는다.
일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그의 고갈을 위한 본원에 기재된 임의의 결합제 또는 약제학적 조성물의 용도가 제공된다. 일부 구현예에서, 결합제는 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는다.
일부 구현예에서, GVHD를 감소시키기 위해 이식을 받은 대상체에서 CD8+KIR+ 트레그의 고갈을 위한 본원에 기재된 임의의 결합제 또는 약제학적 조성물의 용도가 제공된다. 일부 구현예에서, 결합제는 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는다.
본 발명의 이러한 측면 및 다른 측면은 다음의 상세한 설명, 구체적인 구현예의 비제한적인 예 및 첨부된 도면을 참조하여 보다 완전하게 이해될 수 있다.
도 1은 IgG-scFv 이중특이적 항체의 다양한 포맷을 나타낸다.
도 2는 특정 이중특이적 항체의 다양한 포맷을 나타낸다.
도 3은 추가적인 이중특이적 항체의 다양한 포맷을 나타낸다.
도 4a 내지 4d는 CD8+KIR+ T 조절 세포에 대한 Ly49 차단의 효과를 나타낸다.
도 5는 뮤린 실험적 자가면역 뇌척수염(EAE) 모델에서 Ly49 차단의 효과를 평가하기 위한 실험 설계를 나타낸다.
도 6은 MOG 단독, MOG + SP, MOG+ Ly49 차단으로 면역화한 후 7일 내지 27일차의 질병 중증도(임상 점수에 의해 측정됨)를 나타낸다.
도 7a 내지 도 7c는 셀리악 환자에게 만연한 T 세포의 특징을 나타낸다. 셀리악 환자는 CD8+KIR+ T 세포의 증가된 유병률을 가지며(도 7a), 세포 내 IFN감마 및 퍼포린을 가진 CD8+ T 세포의 비율의 증가를 가지며(도 7b), 세포 내 그랜자임 B를 가진 CD8+ T 세포의 비율의 증가를 갖는다(도 7c).
도 8a 및 도 8b는 셀리악 환자가 건강한 대조군에 비해 더 많은 CD8+KIR+ T 세포(도 8a) 및 CD8+KIR+ICOS+ T 세포(도 8b)를 갖는 것을 나타낸다.
도 9a 및 도 9b는 셀리악 환자로부터의 CD8+KIR+ T 세포의 글루텐 펩티드 재자극이, 자극되지 않은 세포 또는 대조군 독감 펩티드로 자극된 것과 비교하여, 탈과립화(도 9a, 좌측) 및 그랜자임 B 수준(도 9a, 우측)을 증가시키는 것을 보여준다. 글루텐 펩티드 재자극은 또한, 자극되지 않은 세포 또는 대조군 독감 펩티드로 재자극된 세포와 비교하여, 반응성 CD4+ T 세포의 감소로 이어진다(도 9b).
도 10a 및 도 10b는 CD8+ 트레그의 KIR 차단(blockade)("KIR 차단(block)")이 증가된 세포 내 그랜자임 B 수준(도 10a) 및 증가된 탈과립(CD107)(도 10b)을 야기함을 나타낸다.
도 11은 KIR 차단 및 글루텐 재자극으로 치료된 셀리악 환자로부터의 PBMC에서 CD8+ T 세포의 세포용해 활성 증가, CD4+ T 세포 활성화 감소 및 CD4+ T 세포 사멸 증가를 나타낸다.
도 12는 세(3) 셀리악 환자로부터의 샘플에서 CD8+CD16+ T 세포의 KIR 차단이 CD4 T 세포 활성화 및 증식(CD69)을 감소시킴을 나타낸다.
도 13은 셀리악병, 크론병, 다발성 경화증(MS), 전신 홍반성 루푸스(SLE), 궤양성 대장염(UC), 또는 1형 당뇨병(T1D)을 앓는 환자 또는 건강한 대상체로부터의 샘플에서 CD8+KIR+ 트레그 세포(상부 패널) 및 CD8+ CD39+ 트레그 세포(하부 패널)의 존재를 나타낸다.
도 14는 셀리악 환자 PBMC 샘플로부터 분리된 CD8+KIR+ 트레그 세포 상의 표면 마커 CD39, KLRG1, NKG2D, NKG2C, KLRB, CXCR3 및 CD122의 발현을 나타낸다.
도 15는 셀리악 환자 PBMC 샘플로부터 분리된 CD8+ 트레그 세포에 의한 그랜자임 B, 퍼포린 및 IL-10 생산을 나타낸다.
도 16은 항-CD3 항체로 자극한 후 셀리악 환자 PBMC 샘플로부터 분리된 CD8+KIR+ 트레그 세포에 의한 RANTES 및 TNFβ의 생산을 나타낸다.
도 17은 글리아딘 자극 후 CD8+KIR+ 트레그 세포와 공동 배양된 CD4+ T 세포에 의한 IL-17A 및 IL-23 생산의 감소를 나타낸다.
도 18은 CD8+KIR+ 트레그 세포와 공동 배양되고 글루텐으로 자극된 CD4+ T 세포에 의한 활성화 및 IFNγ의 변화를 나타낸다.
도 19는 CD8+KIR+ 트레그 세포와 공동 배양되고 글리아딘으로 자극된 CD4+ T 세포에서 항염증 사이토카인의 증가를 보여준다. CD4+ T 세포에 의해 생성된 IL-10은 세포내 사이토카인 염색을 사용하여 표시된다.
도 20은 반복된 항원 노출 시 증가된 CD8+ 트레그 세포 반응을 나타낸다.
도 21은 셀리악 환자 PBMC로부터의 CD8+ 트레그 세포에 의한 억제성 KIR 단백질 KIR2DL1/2/3 및 KIR3DL1의 선택적 발현을 나타낸다.
도 22는 셀리악 환자에서 CD8+KIR+ T 세포의 증가를 나타낸다.
도 23은 셀리악 환자의 장 조직에서 CD8+KIR+ T 세포의 존재를 나타낸다.
도 24는 셀리악 환자의 장 조직에서 그랜자임-양성 CD8+ T 세포와 CD4+ T 세포의 상호작용을 보여준다. 그랜자임 B는 흰색, CD8+ T 세포는 녹색, CD4+ T 세포는 황토색, CD8+ T 세포와 CD4+ T 세포 간의 상호작용은 노란색으로 표시된다.
도 25는 글루텐으로 공격접종시험 후 6일차(6D) 말초 혈액에서 CD8+ 트레그 세포의 증가를 나타낸다.
도 26은 글루텐 공격접종시험 후 14일차(14D) 조직 생검에서 CD8+ 트레그 세포의 증가를 나타낸다.
도 27은 글루텐 공격접종시험 후 14일차 셀리악 환자 조직 샘플의 CD4+ T 세포 수, 공동자극 분자 발현 및 증식, 및 KIR2DL 발현 T 세포를 나타낸다 (글루텐 공격접종시험 전 일치하는 환자 조직과 비교).
도 28은 이중특이적 KIR 바인더의 예와 활성화 신호 강도에 대한 그의 예상 영향을 나타낸다.
도 29a는 CD8 결합 도메인을 갖는 이중특이적 항체 및 KIR2DL1/2/3을 표적으로 하는 결합 도메인을 나타낸다. 도 29b는 탈과립을 나타내며, 도 29c는 항-CD8 scFv/KIR FAB-Fc(10㎍/mL, 1㎍/mL, 또는 0.1㎍/mL의 용량) 또는 단일클론 KIR 차단제(20㎍)의 투여 후 그랜자임 B 수준을 나타낸다.
도 30은 항-CD8 scFv/KIR FAB-Fc(10μg/mL 또는 1μg/mL의 용량)의 투여 후 전염증성 사이토카인의 용량 의존적 감소를 나타낸다.
도 31은 항-CD8 scFv/KIR FAB-Fc(10㎍/mL, 1㎍/mL, 또는 0.1㎍/mL 용량) 또는 단일클론 KIR 차단제(20㎍) 투여 후 CD4+ T 세포 사멸을 나타낸다.
도 32는 항-CD8 scFv/KIR FAB-Fc(10μg/mL, 1μg/mL, 또는 0.1μg/mL 용량)의 투여 후 CD4+ T 세포 사멸을 나타낸다.
도 33은 NK 세포에 비해 CD8+ T 세포에 대한 이중특이적 차단제(항-KIR2DL1/2/3 및 항-CD8)의 우선적 결합을 나타낸다.
도 34는 NK 세포 및 CD4+ T 세포에 비해 CD8+ T 세포에 대한 이중특이적 차단제(항-KIR2DL1/2/3 및 항-CD8)의 우선적 결합을 나타낸다.
정의
편의상, 명세서, 실시예 및 청구범위의 특정 용어를 여기에 정의한다. 달리 명시되지 않거나 문맥에서 암시하지 않는 한, 다음 용어 및 문구는 하기 제공된 의미를 갖는다. 정의는 특정 구현예를 설명하는 데 도움을 주기 위해 제공되며, 본 발명의 범위는 청구범위에 의해서만 제한되므로 청구된 발명을 제한하려는 의도가 아니다. 달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 기술자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다.
달리 표시되지 않는 한 본원에 사용된 단수 관사 ["a" 및 "an"]는 "하나", "적어도 하나" 또는 "하나 이상"을 의미하는 것으로 간주된다. 문맥상 달리 요구되지 않는 한, 본원에 사용된 단수형 용어는 복수형을 포함하고 복수형 용어는 단수형을 포함한다.
문맥상 달리 명확하게 요구되지 않는 한, 명세서 및 청구범위 전체에 걸쳐 "포함하다", "포함하는" 등의 용어는 배타적 또는 배타적 의미가 아닌 포괄적 의미, 즉 "포함하나, 이에 제한되지 않는"의 의미로 해석되어야 한다.
용어 "감소하다(decrease)", "감소하다(reduce)", "감소된", "감소", "감소하다" 및 "억제하다"는 일반적으로 기준에 비해 통계적으로 유의미한 양만큼의 감소를 의미하기 위해 사용된다.
용어 "증가된", "증가하다", "강화하다" 또는 "활성화하다"는 모두 일반적으로 기준에 비해 통계적으로 유의미한 양만큼의 증가를 의미하기 위해 사용된다.
본원에 사용된 용어 "분리된" 또는 "부분적으로 정제된"은, 핵산, 폴리펩티드 또는 단백질의 경우에, 적어도 하나의 다른 성분(예를 들어, 핵산 또는 폴리펩티드 또는 단백질)으로부터 분리된 핵산, 폴리펩티드 또는 단백질을 지칭하며, 이는 천연 공급원에서 발견되는 핵산, 폴리펩티드 또는 단백질과 함께 존재하고/하거나 세포에 의해 발현되거나, 분비된 폴리펩티드 및 단백질의 경우에서 분비될 때, 핵산, 폴리펩티드 또는 단백질과 함께 존재할 수 있다. 화학적으로 합성된 핵산, 폴리펩티드 또는 단백질, 또는 시험관 내 전사/번역을 사용하여 합성된 것은 "분리된" 것으로 간주된다. 용어 "정제된" 또는 "실질적으로 정제된"은 대상체 핵산, 폴리펩티드 또는 단백질의 중량의 적어도 95%인 분리된 핵산, 폴리펩티드 또는 단백질을 지칭하며, 예를 들어, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 그 이상을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "단백질" 및 "폴리펩티드"는 인접 잔기의 알파-아미노 및 카르복실기 사이의 펩티드 결합에 의해 각각 서로 연결된 일련의 아미노산 잔기를 지정하기 위해 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 용어 "단백질" 및 "폴리펩티드"는 크기나 기능에 관계없이 변형된 아미노산(예: 인산화, 당화, 글리코실화 등) 및 아미노산 유사체를 포함하는 단백질 아미노산의 중합체를 의미하기도 한다. "단백질" 및 "폴리펩티드"는 상대적으로 큰 폴리펩티드와 관련하여 종종 사용되는 반면, 용어 "펩티드"는 종종 작은 폴리펩티드와 관련하여 사용되지만, 당업계에서 이들 용어의 사용은 오버랩된다. 용어 "단백질" 및 "폴리펩티드"는 암호화된 유전자 생성물 및 그의 단편을 지칭할 때 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 따라서, 예시적인 폴리펩티드 또는 단백질은 유전자 생성물, 자연 발생 단백질, 상동체, 오르쏘로그(ortholog), 파라로그(paralog), 단편 및 기타 균등물, 전술한 것의 변이체, 단편 및 유사체를 포함한다.
CD3엡실론은 조절 T 세포를 포함하는 T 세포에서 발현되는 단백질이다. CD3엡실론 폴리펩티드는 NP000724.1에 제시된 아미노산 서열을 갖는 것을 포함하나, 이에 제한되지 않으며; 이 서열은 본원에 참조로서 포함된다.
CD5는 T 세포와 B 세포에서 발현되는 단백질이다. CD5 폴리펩티드는 NP_055022.2 및 NP_001333385.1에 제시된 아미노산 서열을 갖는 것을 포함하나, 이에 제한되지 않으며; 이들 서열은 본원에 참조로서 포함된다.
CD8알파는 조절 T 세포를 포함하는 T 세포에서 발현되는 단백질이다. CD8알파 폴리펩티드는 NP_001759.3, NP001139345.1, NP_741969.1, NP_001369627.1, NP_757362.1, NP_001171571.1, NP_742100.1, NP_742099.1, 및 NP_004922에 제시된 아미노산 서열을 갖는 것을 포함하나, 이에 제한되지 않으며; 이들 서열은 본원에 참조로서 포함된다.
KIR3DL1은 NK 세포와 일부 T 세포에서 발현되는 단백질이다. CD158E1, KIR, KIR2DL5B, KIR3DL1/S1, NKAT-3, NKAT3, NKB1 및 NKB1B로도 알려져 있다. KIR3DL1 폴리펩티드는 NP_037421.2 및 NP_001309097.1에 제시된 아미노산 서열을 갖는 것을포함하나, 이에 제한되지 않으며; 이들 서열은 본원에 참조로서 포함된다.
KIR3DL2는 NK 세포와 일부 T 세포에서 발현되는 단백질이다. 3DL2, CD158K, KIR-3DL2, NKAT-4, NKAT4, NKAT4B 및 p140로도 알려져 있다. KIR3DL2 폴리펩티드는 NP_006728.2 및 NP_001229796.1에 제시된 아미노산 서열을 갖는 것을 포함하나, 이에 제한되지 않으며; 이들 서열은 본원에 참조로서 포함된다.
KIR2DL1은 NK 세포와 일부 T 세포에서 발현되는 단백질이다. CD158A, KIR-K64, KIR221, KIR2DL3, NKAT, NKAT-1, NKAT1 및 p58.1로도 알려져 있다. KIR2DL1 폴리펩티드는 NP_055033.2에 제시된 아미노산 서열을 갖는 것을 포함하지만, 이에 제한되지 않으며; 이 서열은 본원에 참조로서 포함된다.
KIR2DL2는 NK 세포와 일부 T 세포에서 발현되는 단백질이다. CD158B1, CD158b, NKAT-6, NKAT6 및 p58.2로도 알려져 있다. KIR2DL2 폴리펩티드는 NP_055034.2에 제시된 아미노산 서열을 갖는 것을 포함하지만, 이에 제한되지 않으며; 이 서열은 본원에 참조로서 포함된다.
KIR2DL3은 NK 세포와 일부 T 세포에서 발현되는 단백질이다. CD158B2, CD158b, GL183, KIR-023GB, KIR-K7b, KIR-K7c, KIR2DL, KIR2DS5, KIRCL23, NKAT, NKAT2, NKAT2A, NKAT2B 및 p58로도 알려져 있다. KIR2DL3 폴리펩티드는 NP_056952.2에 제시된 아미노산 서열을 갖는 것을 포함하지만, 이에 제한되지 않으며; 이 서열은 본원에 참조로서 포함된다.
CD27은 TNF 수용체 슈퍼패밀리 구성원 7, S152, LPFS2, T14, TNFRSF7 및 Tp55로도 지칭된다. CD27 폴리펩티드는 NP_001233.2에 제시된 아미노산 서열을 갖는 것을 포함하지만, 이에 제한되지 않으며; 이 서열은 본원에 참조로서 포함된다.
CD38은 ADP-리보실 시클라제/환형 ADP-리보스 가수분해효소 1, ADPRC1 및 ADPRC 1로도 지칭된다. CD38 폴리펩티드는 NP_001766.2에 제시된 아미노산 서열을 갖는 것을 포함하지만, 이에 제한되지 않으며; 이 아미노산 서열은 본원에 참조로서 포함된다.
CD39는 엑토뉴클레오사이드 트리포스페이트 디포스포히드롤라제 1, SPG64 ATPDase 및 NTPDase-1로도 알려져 있다. 그것은 세포 외 ATP와 ADP를 AMP로 가수 분해하는 원형질막 단백질을 암호화한다. CD39 폴리펩티드는 NP_001307845.1, NP_001157651.1, NP_001157650.1, NP_001091645.1, NP_001767.3, NP_001299583.1, NP_001157655.1, NP_001157654.1, 및 NP_001157653.1에 개시된 아미노산 서열을 갖는 것을 포함하지만 이에 제한되지 않으며; 이들 아미노산 서열은 참조로서 본원에 포함된다.
CD40L 또는 CD40 리간드는 CD154, HIGM1, IGM, IMD3, T-BAM, TNFSF5, TRAP, gp39 및 hCD40L이라고도 한다. 그것은 T 세포의 표면에서 발현된다. CD40L 폴리펩티드는 NP_000065.1에 제시된 아미노산 서열을 갖는 것을 포함하지만 이에 제한되지 않으며; 이 서열은 참조로서 본원에 포함된다.
CD45는 단백질 티로신 포스파타제 수용체 유형 C, B220, CD45R, GP180, L-CA, LCA, LY5 및 T200으로 지칭된다. 그것은 CD45RA, CD45Rb 및 CD45RO를 포함하여 많은 이소형(isoform)을 갖는다. CD45 RA 및 CD45Rb는 나이브 T 세포에서 발현된다. CD45RO는 기억 T 세포에서 발현된다. CD45R0 폴리펩티드는 P08575-4에 개시된 아미노산 서열을 갖는 것을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. CD45RA 폴리펩티드는 P08575-8에 개시된 아미노산 서열을 갖는 것을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. CD45RB 폴리펩티드는 P08575-9에 개시된 아미노산 서열을 갖는 것을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. UniProtKB 데이터베이스를 참조. 이들 서열은 본원에 참조로 포함된다.
CD73은 5' 뉴클레오티다제 엑토, CALJA, CD73, E5NT, NT, NT5, NTE, eN 및 eNT 로도 지칭된다. CD73 폴리펩티드는 NP_001191742.1 및 NP_002517.1에 개시된 것을 포함하지만, 이에 제한되지 않으며; 이들 아미노산 서열은 본원에 참조로서 포함된다.
CD103, 또는 인테그린 서브유닛 알파 E(ITGAE)는 HUMINAE라고도 한다. CD103 폴리펩티드는 NP_002199.3에 개시된 아미노산 서열을 갖는 것을 포함하지만, 이에 제한되지 않으며; 이들 아미노산 서열은 본원에 참조로서 포함된다.
CD122, 또는 인터루킨 2 수용체 서브유닛 베타는 IL15RB, IMD63 및 P70-75라고도 한다. CD122 폴리펩티드는 NP_001333152.1, NP_001333151.1 및 NP_000869.1에 개시된 아미노산 서열을 갖는 것을 포함하지만, 이에 제한되지 않으며; 이들 아미노산 서열은 본원에 참조로서 포함된다.
CD166, 또는 활성화된 백혈구 세포 접착 분자(ALCAM)는 MEMD라고도 한다. CD166 폴리펩티드는 NP_001618.2, NP_001230209.1, NP_001230210.1 및 NP_001230212.1에 제시된 아미노산 서열을 갖는 것을 포함하지만, 이에 제한되지 않으며; 이들 아미노산 서열은 본원에 참조로서 포함된다.
CD177은 HNA-2a, HNA2A, NB1, NB1 GP, PRV-1 및 PRV1이라고도 한다. CD177 폴리펩티드는 NP_065139.2에 제시된 아미노산 서열을 갖는 것을 포함하지만, 이에 제한되지 않으며; 이 아미노산 서열은 본원에 참조로서 포함된다.
CCR7, 또는 C-C 모티프 케모카인 수용체 7은 BLR2, CC-CKR-7, CCR-7, CD197, CDw197, CMKBR7 및 EBI1이라고도 한다. CCR7 폴리펩티드는 NP_001829.1, NP_001288643.1, NP_001288645.1, NP_001288646.1, 및 NP_001288647.1에 제시된 아미노산 서열을 갖는 것을 포함하지만, 이에 제한되지 않으며; 이들 아미노산 서열은 본원에 참조로서 포함된다.
CXCR3, 또는 C-X-C 모티프 케모카인 수용체 3은 GPR9, MigR, CD182, CD183, Mig-R, CKR-L2, CMKAR3 및 IP10-R이라고도 한다. CXCR3 폴리펩티드는 NP_001495.1 및 NP_001136269.1에 제시된 아미노산 서열을 갖는 것을 포함하지만, 이에 제한되지 않으며; 이들 아미노산 서열은 본원에 참조로서 포함된다.
CXCR5, 또는 C-X-C 모티프 케모카인 5는 BLR1, CD185 및 MDR15라고도 한다. CXCR5 폴리펩티드는 NP_001707.1 및 NP_116743.1에 제시된 아미노산 서열을 갖는 것을 포함하지만, 이에 제한되지 않으며; 이들 아미노산 서열은 본원에 참조로서 포함된다.
HLA-DR은 두 개의 쇄로 구성된 클래스 II 조직 적합성 항원이다. HLA-DR 알파 쇄 폴리펩티드는 NP_061984.2에 제시된 아미노산 서열을 갖는 것을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. HLA-DR 베타 쇄 폴리펩티드는 NP_002116.2, NP_072049.2, NP_001346123.1 및 NP_001346122.1에 제시된 아미노산 서열을 갖는 것을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 이들 아미노산 서열은 본원에 참조로서 포함된다.
ICOS, 또는 유도성 T 세포 공동 자극제(inducible T cell costimulatory)는 AILIM, CD278 및 CVID1이라고도 한다. ICOS 폴리펩티드는 NP_036224.1에 제시된 아미노산 서열을 갖는 것을 포함하지만, 이에 제한되지 않으며; 이 아미노산 서열은 본원에 참조로서 포함된다.
LAG-3 또는 CD223은 림프구 활성화 3이라고도 한다. LAG-3 폴리펩티드는 NP_002277.4에 제시된 아미노산 서열을 갖는 것을 포함하지만, 이에 제한되지 않으며; 이 아미노산 서열은 본원에 참조로서 포함된다.
OX-40은 TNF 수용체 수퍼패밀리 구성원 4 또는 TNFRSF4, ACT35, CD134, IMD16 및 TXGP1L이라고도 한다. OX-40 폴리펩티드는 NP_003318.1에 제시된 아미노산 서열을 갖는 것을 포함하지만, 이에 제한되지 않으며; 이 아미노산 서열은 본원에 참조로서 포함된다.
PD-1은 프로그래밍된 세포 사멸 단백질 1이라고도 한다. PD-1 폴리펩티드는 NP_005009.2에 제시된 아미노산 서열을 갖는 것을 포함하지만, 이에 제한되지 않으며; 이 아미노산 서열은 본원에 참조로서 포함된다.
S1000A8/9 또는 S100A8 및 S100A9는 각각 S100 계열에 속하는 Ca2+ 결합 단백질이다. S100A8 또는 S100-A8은 60B8AG, CAGA, CFAG, CGLA, CP-10, L1Ag, MA387, MIF, MRP8, NIF 및 P8이라고도 한다. S100A8 폴리펩티드는 NP_001306125.1, NP_001306126.1, NP_001306127.1, NP_001306130.1 및 NP_002955.2에 제시된 아미노산 서열을 갖는 것을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. S100A9 또는 S100-A9는 60B8AG, CAGB, CFAG, CGLB, L1AG, LIAG, MAC387, MIF, MRP14, NIF 및 P14라고도 한다. S100A9 폴리펩티드는 NP_002956.1에 제시된 아미노산 서열을 갖는 것을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 이들 아미노산 서열은 본원에 참조로서 포함된다.
A형 간염 바이러스 세포 수용체 2(HAVCR2)라고도 하는 TIM-3은 CD366, HAVcr-2, KIM-3, SPTCL, TIM3, TIMD-3 및 TIMD3으로도 알려져 있다. TIM-3 폴리펩티드는 NP_116171.3에 제시된 아미노산 서열을 갖는 것을 포함하지만, 이에 제한되지 않으며; 이 아미노산 서열은 본원에 참조로서 포함된다.
TLT-2, 또는 골수 세포형 2 (myeloid cells like 2)에서 발현되는 트리거링 수용체(TREML2)는 C6orf76 또는 dJ238O23.1이라고도 한다. TLT-2 폴리펩티드는 NP_079083.2에 제시된 아미노산 서열을 갖는 것을 포함하지만, 이에 제한되지 않으며; 이 아미노산 서열은 본원에 참조로서 포함된다.
2B4 또는 CD244는 NAIL, NKR2B4, Nmrk 및 SLAMF4라고도 한다. 2B4 폴리펩티드는 NP_057466.1, NP_001160135.1 또는 NP_001160136.1에 제시된 아미노산 서열을 갖는 것을 포함하지만, 이에 제한되지 않으며; 이들 아미노산 서열은 본원에 참조로서 포함된다.
41BB, 또는 TNF 수용체 수퍼패밀리 구성원 9(TNFSF9)는 ILA, 4-1BB, CD137 및 CDw137이라고도 한다. 41BB 폴리펩티드는 NP_001552.2에 제시된 아미노산 서열을 갖는 것을 포함하지만, 이에 제한되지 않으며; 이 아미노산 서열은 본원에 참조로서 포함된다.
본원에 사용된 바와 같이, "에피토프"는 면역글로불린 VH/VL 쌍에 의해 통상적으로 결합된 아미노산, 예컨대 본원에 기재된 항체 및 다른 결합제를 지칭한다. 에피토프는 단백질의 3차 폴딩에 의해 병치된 연속 아미노산 또는 비연속 아미노산으로부터 폴리펩티드 상에 형성될 수 있다. 연속 아미노산으로부터 형성된 에피토프는 일반적으로 변성 용매에 노출되면 유지되는 반면, 3차 접힘에 의해 형성된 에피토프는 일반적으로 변성 용매로 처리하면 손실된다. 에피토프는 전형적으로 독특한 공간 형태로 적어도 3개, 보다 일반적으로는 적어도 5개, 약 9개 또는 약 8 내지 10개의 아미노산을 포함한다. 에피토프는 항체 또는 다른 결합제에 대한 최소 결합 부위를 정의하고, 따라서 항체, 그의 항원 결합 부분 또는 기타 면역글로불린 기반 결합제의 특이적 표적을 나타낸다. 단일 도메인 항체의 경우, 에피토프는 분리된 가변 도메인에 의해 결합된 구조 단위를 나타낸다.
본원에 사용된 바와 같이, "특이적으로 결합하다"는 본원에 기재된 결합제 (예컨대, 항체 또는 그의 항원 결합 부분)가 표적에 KD 10-5 M (10000 nM) 이하로, 예를 들어, 10-6 M, 10-7 M, 10-8 M, 10-9 M, 10-10 M, 10-11 M, 10-12 M, 또는 그 이하로 결합하는 능력을 치징한다. 특이적 결합은, 예를 들어, 항체 또는 다른 결합제의 친화도 및 결합력, 및 표적 폴리펩티드의 농도에 의해 영향을 받을 수 있다. 당업자는 적합한 세포 결합 분석에서 결합제의 적정과 같은 임의의 적합한 방법을 사용하여 본원에 기술된 항체 및 기타 결합제가 표적 항원에 선택적으로 결합하는 적절한 조건을 결정할 수 있다. 표적에 특이적으로 결합된 결합제는 유사하지 않은 경쟁자에 의해 대체되지 않는다. 특정 구현예에서, 항체 또는 그의 항원 결합 부분과 같은 결합제는 단백질 및/또는 거대분자의 복합 혼합물에서 표적 항원을 우선적으로 인식할 때 표적에 특이적으로 결합한다고 한다.
일부 구현예에서, 결합제, 예컨대 항체 또는 그의 항원-결합 부분 또는 본원에 기재된 바와 같은 다른 결합제는 10-5 M (10000 nM) 이하, 예컨대, 10-6 M, 10-7 M, 10-8 M, 10-9 M, 10-10 M, 10-11 M, 10-12 M, 또는 그 이하의 해리 상수(KD)로 표적 폴리펩티드에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 그의 항원 결합 부분 또는 본원에 기재된 바와 같은 다른 결합제는 약 10-5 M 내지 10-6 M의 해리 상수 (KD)로 표적 폴리펩티드에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 그의 항원 결합 부분 또는 본원에 기재된 바와 같은 다른 결합제는 약 10-6 M 내지 10-7 M의 해리 상수 (KD)로 표적 폴리펩티드에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 그의 항원 결합 부분 또는 본원에 기재된 바와 같은 다른 결합제는 약 10-7 M 내지 10-8 M의 해리 상수 (KD)로 표적 폴리펩티드에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 그의 항원 결합 부분 또는 본원에 기재된 바와 같은 다른 결합제는 약 10-8 M 내지 10-9 M의 해리 상수 (KD)로 표적 폴리펩티드에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 그의 항원 결합 부분 또는 본원에 기재된 바와 같은 다른 결합제는 약 10-9 M 내지 10-10 M의 해리 상수 (KD)로 표적 폴리펩티드에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 그의 항원 결합 부분 또는 본원에 기재된 바와 같은 다른 결합제는 약 10-10 M 내지 10-11 M의 해리 상수 (KD)로 표적 폴리펩티드에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 그의 항원 결합 부분 또는 본원에 기재된 바와 같은 다른 결합제는 약 10-11 M 내지 10-12 M의 해리 상수 (KD)로 표적 폴리펩티드에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 그의 항원 결합 부분 또는 본원에 기재된 바와 같은 다른 결합제는 10-12 M 미만의 해리 상수 (KD)로 표적 폴리펩티드에 특이적으로 결합한다.
본원에 사용된 바와 같이, "본질적으로 이루어진"이라는 용어는 주어진 구현예에 필요한 요소들을 지칭한다. 이 용어는 해당 구현예의 기본적이고 새로운 또는 기능적 특성(들)에 실질적으로 영향을 미치지 않는 요소의 존재를 허용한다.
용어 "이루어진"은 구현예의 설명에 언급되지 않은 임의의 요소를 배제하는 본원에 기재된 조성물, 방법 및 이들의 각각의 구성요소를 지칭한다.
예시에서 또는 달리 표시된 경우를 제외하고, 본원에서 사용된 성분 또는 반응 조건의 양을 나타내는 모든 숫자는 모든 경우에 "약"이라는 용어에 의해 수식되는 것으로 이해되어야 한다. 백분율과 관련하여 사용될 때 용어 "약"은 +/-1%를 의미할 수 있다.
"통계적으로 유의미한" 또는 "유의미하게"라는 용어는 통계적 유의성을 의미하며 일반적으로 기준 값 위 또는 아래의 2 표준 편차(2SD) 차이를 의미한다.
다른 용어는 본 발명의 다양한 측면의 설명 내에서 본원에 정의된다.
CD8+KIR+ 조절 T 세포의 조절(modulation)
CD8+KIR+ 조절 T 세포(트레그)에서 발현되는 항원에 특이적으로 결합하는 결합 도메인을 포함하는 결합제가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그는 MHC 클래스 I 제한적이다. 일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그는 MHC Qa-1(HLA-E) 제한적이지 않다. 또한 자가면역 질환, 감염성 질환 및 암의 치료를 위해 결합제를 사용하는 방법이 제공된다.
결합제는, KIR 단백질이 아닌 CD8+KIR+ 트레그에서 발현되는 T 세포 항원에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인; 및 CD8+KIR+ 트레그에서 발현되는 억제성 KIR 단백질에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 CD3, CD8, CD27, CD38, CD39, CD40L, CD45RA, CD45RB, CD45RO, CD73, CD103 (ITGAE), CD122, CD166, CD177, CCR7, CXCR3, CXCR5, HLA-DR, ICOS, LAG-3/CD223, OX-40, PD-1, S1000A8/9, TIM-3, TLT-2, 2B4, CD5 및 41BB 로부터 선택되는 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 CD3, CD5, CD8, CD27, CD38, CD39, CD40L, CD45RA, CD45RB, CD45RO, CD73, CD103(ITGAE), CD122, CD166, CD177, CCR7, CXCR3, CXCR5, HLA-DR, ICOS, LAG-3/CD223, OX-40, PD-1, S1000A8/9, TIM-3, TLT-2, 2B4 및 41BB 로부터 선택되는 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 CD3, CD8, CD40L, CD122, HLA-DR, OX-40, S1000A8/9 및 41BB/CD137 로부터 선택되는 항원의 서브유닛에 특이적으로 결합한다.
일부 구현예에서, 제1 항원은 CD8 KIR+ 트레그를 활성화할 수 있는 기능적 작용제로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 이러한 항원은, 예를 들어, CD3, CD27, CD38, CD39, CD40L, CD45RA, CD45RB, CD45RO, CD73, CD122, ICOS, OX-40, 2B4, 41BB 및 HLA-DR이다. 일부 구현예에서, 이러한 항원은, 예를 들어, CD3, CD5, CD27, CD38, CD39, CD40L, CD45RA, CD45RB, CD45RO, CD73, CD122, ICOS, OX-40, 2B4, 41BB 및 HLA-DR이다. 일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 이러한 항원에 결합될 때 작용제 활성을 갖는다.
일부 구현예에서, 제1 항원은 CD8 KIR+ 트레그의 기능적 억제를 줄이기 위해 기능적 길항제로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 이러한 항원은, 예를 들어, LAG-3/CD223, TIM-3, PD-1, S1000A8/9 및 TLT2이다. 일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 이러한 항원에 결합될 때 길항제 활성(예를 들어, 차단 활성)을 갖는다.
일부 구현예에서, 제1 항원은 CD8 KIR+ 트레그에 대한 결합제의 특이성을 향상시키는 테더링 부분이다. 일부 구현예에서, 이러한 항원은, 예를 들어, CD3, CD8, CD27, CD38, CD39, CD40L, CD45RA, CD45RB, CD45RO, CD73, CD103(ITGAE), CD122, CD166, CD177, CCR7, CXCR3, CXCR5, HLA-DR, ICOS, LAG-3/CD223, OX-40, PD-1, S1000A8/9, TIM-3, TLT-2, 2B4 및 41BB 이다. 일부 구현예에서, 이러한 항원은, 예를 들어, CD3, CD5, CD8, CD27, CD38, CD39, CD40L, CD45RA, CD45RB, CD45RO, CD73, CD103(ITGAE), CD122, CD166, CD177, CCR7, CXCR3, CXCR5, HLA-DR, ICOS, LAG-3/CD223, OX-40, PD-1, S1000A8/9, TIM-3, TLT-2, 2B4 및 41BB 이다. 일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 이러한 항원에 특이적으로 결합한다.
일부 구현예에서, 제1 항원은 조직 특이성을 향상시키기 위한 테더링 부분이다. 일부 구현예에서, 이러한 항원은, 예를 들어, CD103(ITGAE), CD166, CD177, CXCR3 및 S1000A8/9이다. 일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 이러한 항원에 특이적으로 결합한다.
일부 구현예에서, 제1 항원은 CD8 KIR+ 트레그 세포 이동을 향상시키는 작용제이다. 일부 구현예에서, 이러한 항원은, 예를 들어, CCR7, CXCR3 또는 CXCR5이다. 일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 이러한 항원에 특이적으로 결합한다.
일부 구현예에서, 제1 항원은 PD-1, ICOS 및 CXCR3로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 이러한 항원에 특이적으로 결합한다.
일부 구현예에서, 제1 항원은 CD3 또는 CD8로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제1 항원은 CD3, CD5 또는 CD8로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제1 항원은 CD3 또는 CD8의 서브유닛로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제1 항원은 CD3엡실론이다. 일부 구현예에서, 제1 항원은 CD8알파이다.
결합제의 제2 결합 도메인은 억제성 KIR 단백질(킬러 세포 면역글로불린형 수용체 단백질)에 특이적으로 결합한다. 억제성 KIR 단백질은, 예를 들어, KIR3DL1, KIR3DL2, KIR2DL1, KIR2DL2, 또는 KIR2DL3, 또는 이들의 조합일 수 있고, 예컨대 KIR2DL1/2/3 또는 KIR2DL1/2 단백질에 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, KIR 단백질은 KIR3DL1, KIR3DL2, KIR2DL1, KIR2DL2, 또는 KIR2DL3 또는 이들의 조합, 예컨대 KIR2DL1/2/3 또는 KIR2DL1/2 단백질로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 결합 파트너와의 KIR 단백질 상호 작용을 차단하는 KIR 단백질 길항제이다.
결합제는 두 항원 모두에 대한 결합 도메인을 포함하는 임의의 적합한 제제일 수 있다. 일부 구현예에서, 결합제는 이중특이적(즉, 2개의 상이한 항원에 대한 결합 도메인을 가짐)이다. 일부 구현예에서, 결합제는 2가(즉, 2개의 결합 도메인을 가짐)이다. 일부 구현예에서, 결합제는 4가(즉, 4개의 결합 도메인을 가짐)이다.
결합제의 결합 도메인은 항체 또는 비항체 형식에서 파생될 수 있다. 일부 구현예에서, 결합 도메인은 항체 또는 그의 항원 결합 부분(즉, 항체 단편)으로부터 파생된다. 일부 구현예에서, 항체 단편은 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv 또는 단일 도메인 항체(VHH, VNAR, sdAb 또는 나노바디라고도 함)이다. 일부 구현예에서, 결합 도메인은 안티칼린, 어피바디, 아비머, DARPin 또는 애드넥틴이거나, 이들로부터 파생된다.
일부 구현예에서, 결합제는 이중특이적 항체, 디아바디, 항체 Fc 융합체, scFv1-ScFv2, ScFv12-Fc-scFv22, IgG-scFv, DVD-Ig, 트리오맙/쿼드로마, 투-인-원 IgG, scFv2-Fc, TandAb, scFv-HSA-scFv, scFv-VHH, Fab-scFv-Fc, Fab-VHH-Fc, dAb-IgG, IgG-VHH, 텐덤 scFv-Fc, (scFv1)2 -Fc-(VHH)2, BiTe, DART, 크로스맙, 안티칼린, 어피바디, 아비머, DARPin, 애드넥틴, scFv-Fc, 원-아암 탠덤 scFv-Fc 또는 DART-Fc이다 (예컨대, 도 2 및 도 3 참조). 일부 구현예에서, IgG-scFv는 IgG(H)-scFv, scFv-(H)IgG, IgG(L)-scFv, scFv-(L)IgG, 2scFV-IgG 또는 IgG-2scFv이다 (도 1에 도시된 바와 같음).
일부 구현예에서, 결합제는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 제1 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 결합 도메인의 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 CD8+KIR+ 트레그에 발현된 항원, 예컨대 CD3, CD8, CD27, CD38, CD39, CD40L, CD45RA, CD45RB, CD45RO, CD73, CD103(ITGAE), CD122, CD166, CD177, CCR7, CXCR3, CXCR5, HLA-DR, ICOS, LAG-3/CD223, OX-40, PD-1, S1000A8/9, TIM-3, TLT-2, 2B4 및 41BB에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 제1 결합 도메인의 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 CD8+KIR+ 트레그에 발현된 항원, 예컨대 CD3, CD5, CD8, CD27, CD38, CD39, CD40L, CD45RA, CD45RB, CD45RO, CD73, CD103(ITGAE), CD122, CD166, CD177, CCR7, CXCR3, CXCR5, HLA-DR, ICOS, LAG-3/CD223, OX-40, PD-1, S1000A8/9, TIM-3, TLT- 2, 2B4 및 41BB에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 제1 결합 도메인의 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 CD8+KIR+ 트레그에 발현된 항원의 서브유닛, 예컨대 CD3, CD8, CD40L, CD122, HLA-DR, OX-40, S1000A8/9 및 41BB/CD137에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 제1 결합 도메인의 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 CD8+KIR+ 트레그에 발현된 항원의 서브유닛, 예컨대 CD3, CD5, CD8, CD40L, CD122, HLA-DR, OX-40, S1000A8/9 및 41BB/CD137에 특이적으로 결합한다.
일부 구현예에서, 제1 항원은 CD8 KIR+ 트레그를 활성화할 수 있는 기능적 작용제로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 이러한 항원은, 예를 들어, CD3, CD27, CD38, CD39, CD40L, CD45RA, CD45RB, CD45RO, CD73, CD122, ICOS, OX-40, 2B4, 41BB 및 HLA-DR이다. 일부 구현예에서, 이러한 항원은, 예를 들어, CD3, CD5, CD27, CD38, CD39, CD40L, CD45RA, CD45RB, CD45RO, CD73, CD122, ICOS, OX-40, 2B4, 41BB 및 HLA-DR이다. 일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 이러한 항원에 결합될 때 작용제 활성을 갖는다.
일부 구현예에서, 제1 항원은 CD8 KIR+ 트레그의 기능적 억제를 줄이기 위해 기능적 길항제로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 이러한 항원은, 예를 들어, LAG-3/CD223, TIM-3, PD-1, S1000A8/9 및 TLT2이다. 일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 이러한 항원에 결합될 때 길항제 활성(예를 들어, 차단 활성)을 갖는다.
일부 구현예에서, 제1 항원은 CD8 KIR+ 트레그에 대한 결합제의 특이성을 향상시키기 위한 테더링 부분이다. 일부 구현예에서, 이러한 항원은, 예를 들어, CD3, CD8, CD27, CD38, CD39, CD40L, CD45RA, CD45RB, CD45RO, CD73, CD103(ITGAE), CD122, CD166, CD177, CCR7, CXCR3, CXCR5, HLA-DR, ICOS, LAG-3/CD223, OX-40, PD-1, S1000A8/9, TIM-3, TLT-2, 2B4 및 41BB이다. 일부 구현예에서, 이러한 항원은, 예를 들어, CD3, CD5, CD8, CD27, CD38, CD39, CD40L, CD45RA, CD45RB, CD45RO, CD73, CD103(ITGAE), CD122, CD166, CD177, CCR7, CXCR3, CXCR5, HLA-DR, ICOS, LAG-3/CD223, OX-40, PD-1, S1000A8/9, TIM-3, TLT-2, 2B4 및 41BB이다. 일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 이러한 항원에 특이적으로 결합한다.
일부 구현예에서, 제1 항원은 조직 특이성을 강화하기 위한 테더링 부분이다. 일부 구현예에서, 이러한 항원은, 예를 들어, CD103(ITGAE), CD166, CD177, CXCR3 및 S1000A8/9이다. 일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 이러한 항원에 특이적으로 결합한다.
일부 구현예에서, 제1 항원은 CD8 KIR+ 트레그 세포 이동을 향상시키는 작용제이다. 일부 구현예에서, 이러한 항원은, 예를 들어, CCR7, CXCR3 또는 CXCR5이다. 일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 이러한 항원에 특이적으로 결합한다.
일부 구현예에서, 제1 항원은 PD-1, ICOS 및 CXCR3로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 이러한 항원에 특이적으로 결합한다.
일부 구현예에서, 제1 항원은 CD3 또는 CD8로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제1 항원은 CD3, CD5 또는 CD8로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제1 항원은 CD3 또는 CD8의 서브유닛로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제1 항원은 CD3엡실론이다. 일부 구현예에서, 제1 항원은 CD8알파이다.
본원에 기재된 결합 도메인에 사용하기 위한 항체는 당업계에 공지되어 있다.
CD3에 대한 항체는 예를 들어 미국 특허번호 5,929,212; 5,885,573; 및 8,551,478 및 국제 특허 공개 WO2018223004에 개시되어 있다.
CD8에 대한 항체는 예를 들어 공개된 미국 특허 출원번호 20190382488 및 20190071500 및 국제 특허 공개 WO2014164553 및 WO2017134306에 개시되어 있다.
CD5에 대한 항체는 예를 들어 공개된 미국 특허 출원번호 2018/0104308, 2011/0250203 및 2008/0254027에 개시되어 있다.
CD27에 대한 항체는 예를 들어 공개된 미국 특허 출원번호 20210009706, 20200247898 및 20200131272에 개시되어 있다.
CD38에 대한 항체는 예를 들어 공개된 미국 특허 출원번호 20200408765, 20200399391, 20090304710 및 20050158305에 개시되어 있다.
CD39에 대한 항체는 예를 들어 공개된 미국 특허 출원번호 20190062448, 20130273062 및 20100303828에 개시되어 있다.
CD40L에 대한 항체는 예를 들어 공개된 미국 특허 출원번호 20190092868, 20100092482, 20030031668 및 20010018041에 개시되어 있다.
CD45RA, CD45RB 및 CD45RO에 대한 항체는 예를 들어 공개된 미국 특허 출원번호 20030232009 및 20020168362에 개시되어 있으며 상업적 출처에서 구할 수 있다.
CD73에 대한 항체는 예를 들어 공개된 미국 특허 출원번호 20200148781, 20200071404, 20190256598 및 20160145350에 개시되어 있다.
CD103(ITGAE)에 대한 항체는 예를 들어 공개된 미국 특허 출원번호 20050266001에 개시되어 있다.
CD122에 대한 항체는 예를 들어 공개된 미국 특허 출원번호 20180362655 및 20110250213에 개시되어 있다.
CD166에 대한 항체는 예를 들어 공개된 미국 특허 출원번호 20160355587 및 20090269787에 개시되어 있다.
CD177에 대한 항체는 예를 들어 공개된 미국 특허 출원번호 20190125832에 개시되어 있다.
CCR7에 대한 항체는 예를 들어 공개된 미국 특허 출원번호 20200216548, 20180237529 및 20150344580에 개시되어 있다.
CXCR3에 대한 항체는 예를 들어 공개된 미국 특허 출원번호 20190119391, 20190008955 및 20130251733에 개시되어 있다.
CXCR5에 대한 항체는 예를 들어 공개된 미국 특허 출원번호 20190169283, 20160053014 및 20130236476에 개시되어 있다.
HLA-DR에 대한 항체는 예를 들어 공개된 미국 특허 출원번호 20180355043 및 20190071503에 개시되어 있다.
ICOS에 대한 항체는 예를 들어 공개된 미국 특허 출원번호 20160304610 및 20110243929에 개시되어 있다.
LAG-3/CD223에 대한 항체는 예를 들어 공개 된 미국 특허 출원번호 20210009687, 20200277372, 20200071403 및 20190276538에 개시되어 있다.
OX40에 대한 항체는 예를 들어 공개된 미국 특허 출원번호 20140377284, 20140308276 및 20100196359에 개시되어 있다.
PD-1에 대한 항체는 예를 들어 공개된 미국 특허 출원번호 20190322749, 20190309069, 20170313774 및 20110171215에 개시되어 있다.
S1000A8/9에 대한 항체는 예를 들어 공개된 미국 특허 출원번호 20180256710 및 20200023045에 개시되어 있다.
TIM-3에 대한 항체는 예를 들어 공개된 미국 특허 출원번호 20180072804, 20170306016 및 20150086574에 개시되어 있다.
TLT-2에 대한 항체는 예를 들어 공개된 미국 특허 출원번호 20130216540에 개시되어 있다.
2B4에 대한 항체는 예를 들어 상업적 공급업체에서 구할 수 있다.
41BB에 대한 항체는 예를 들어 공개된 미국 특허 출원번호 20170198050 및 20200347144에 개시되어 있다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 CD3엡실론에 특이적으로 결합하고 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호:1 및 서열번호:2; 각각 서열번호:9 및 서열번호:10; 각각 서열번호:17 및 서열번호:18; 각각 서열번호:25 및 서열번호:26; 각각 서열번호:33 및 서열번호:34; 각각 서열번호:41 및 서열번호:34; 각각 서열번호:45 및 서열번호:34; 각각 서열번호:49 및 서열번호:50; 각각 서열번호:57 및 서열번호:58; 각각 서열번호:65 및 서열번호:66; 또는 각각 서열번호:65 및 서열번호:166에 제시된 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 CD3엡실론에 특이적으로 결합하고 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호:1 및 서열번호:2; 각각 서열번호:9 및 서열번호:10; 각각 서열번호:17 및 서열번호:18; 각각 서열번호:25 및 서열번호:26; 각각 서열번호:33 및 서열번호:34; 각각 서열번호:41 및 서열번호:34; 각각 서열번호:45 및 서열번호:34; 각각 서열번호:49 및 서열번호:50; 각각 서열번호:57 및 서열번호:58; 각각 서열번호:65 및 서열번호:66; 또는 각각 서열번호:65 및 서열번호:166에 제시된 아미노산 서열을 가지며; 여기서 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 프레임워크 영역은 선택적으로 1 내지 8, 1 내지 6, 1 내지 4, 또는 1 내지 2개의 아미노산 치환, 결실 또는 삽입으로 변형되고, 여기서 중쇄 또는 경쇄 가변 영역의 CDR은 변형되지 않는다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은, 서열번호:1 내지 72 및 166 내지 169 중 하나 이상에 따른 아미노산 서열(예를 들어, VH, VL, hCDR1, hCDR1, hCDR3, lCDR1, lCDR2, 및/또는 lCDR3)을 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 CD8알파에 특이적으로 결합하고, 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호:73 및 서열번호:74; 또는 서열번호:81 및 서열번호:82에 제시된 아미노산 서열을 갖거나, 또는 결합 도메인은 서열번호:89, 서열번호:93 또는 서열번호:97에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VHH 쇄를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 CD8알파에 특이적으로 결합하고 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호:73 및 서열번호:74; 또는 각각 서열번호:81 및 서열번호:82에 제시된 아미노산 서열을 갖거나; 또는 결합 도메인은 각각 서열번호:89, 서열번호:93 또는 서열번호:97에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VHH 쇄를 포함하고; 여기서 중쇄 및 경쇄 가변 영역 또는 VHH 쇄의 프레임워크 영역은 선택적으로 1 내지 8, 1 내지 6, 1 내지 4, 또는 1 내지 2개의 아미노산 치환, 결실 또는 삽입으로 변형되고, 여기서 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 또는 VHH 쇄의 CDR은 변형되지 않는다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 서열번호:73 내지 100 중 하나 이상에 따른 아미노산 서열(예를 들어, VH, VL, hCDR1, hCDR1, hCDR3, lCDR1, lCDR2, 및/또는 lCDR3)을 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 CD3엡실론에 특이적으로 결합하고 중쇄 가변 영역은 상보성 결정 영역 hCDR1, hCDR2 및 hCDR3, 경쇄 가변 영역 lCDR1, lCDR2 및 lCDR3을 가지며, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 CDR의 아미노산 서열은 각각 서열번호:3 내지 서열번호:8; 각각 서열번호:11 내지 서열번호:16; 각각 서열번호:19 내지 서열번호:24; 각각 서열번호:27 내지 서열번호:32; 각각 서열번호:35 내지 서열번호:40; 각각 서열번호:42 내지 서열번호:44 및 서열번호:38 내지 서열번호:40; 각각 서열번호:46 내지 서열번호:48 및 서열번호:38 내지 서열번호:40; 각각 서열번호:51 내지 서열번호:56; 각각 서열번호:59 내지 서열번호:64; 또는 각각 서열번호:67 내지 서열번호:72에 제시된다. 일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 CD3엡실론에 특이적으로 결합하고 각각 서열번호: 167, 168 및 169에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 lCDR1, lCDR2 및 lCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 CD8알파에 특이적으로 결합하고 상보성 결정 영역 hCDR1, hCDR2 및 hCDR3을 갖는 중쇄 가변 영역을 갖고 경쇄 가변 영역은 lCDR1, lCDR2 및 lCDR3을 갖고, 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 CDR의 아미노산 서열은 각각 서열번호:75 내지 서열번호:80; 또는 각각 서열번호:83 내지 서열번호:88에 제시되거나; 또는 제1 결합 도메인은 hCDR1, hCDR2 및 hCDR3을 갖는 VHH 쇄를 포함하고, VHH CDR의 아미노산 서열은 각각 서열번호:90 내지 서열번호:92; 각각 서열번호:94 내지 서열번호:96; 또는 각각 서열번호:98 내지 서열번호:100에 제시된다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 ICOS에 특이적으로 결합하고 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호:170 및 서열번호:171에 제시된 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 ICOS에 특이적으로 결합하고 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호:170 및 서열번호:171에 제시된 아미노산 서열을 갖는다; 여기서 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 프레임워크 영역은 선택적으로 1 내지 8, 1 내지 6, 1 내지 4, 또는 1 내지 2개의 아미노산 치환, 결실 또는 삽입으로 변형되고, 여기서 중쇄 또는 경쇄 가변 영역의 CDR은 변형되지 않는다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 서열번호:170 내지 177 중 하나 이상에 따른 아미노산 서열(예를 들어, VH, VL, hCDR1, hCDR1, hCDR3, lCDR1, lCDR2, 및/또는 lCDR3)을 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 PD-1에 특이적으로 결합하고 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호:178 및 서열번호:179에 제시된 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 PD-1에 특이적으로 결합하고 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호:178 및 서열번호:179에 제시된 아미노산 서열을 가지며; 여기서 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 프레임워크 영역은 선택적으로 1 내지 8, 1 내지 6, 1 내지 4, 또는 1 내지 2개의 아미노산 치환, 결실 또는 삽입으로 변형되고, 여기서 중쇄 또는 경쇄 가변 영역의 CDR은 변형되지 않는다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 서열번호:178 내지 185 중 하나 이상에 따른 아미노산 서열(예를 들어, VH, VL, hCDR1, hCDR1, hCDR3, lCDR1, lCDR2, 및/또는 lCDR3)을 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 CXCR3에 특이적으로 결합하고 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호:186 및 서열번호:187에 제시된 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 CXCR3에 특이적으로 결합하고 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호:186 및 서열번호:187에 제시된 아미노산 서열을 가지며; 여기서 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 프레임워크 영역은 선택적으로 1 내지 8, 1 내지 6, 1 내지 4, 또는 1 내지 2개의 아미노산 치환, 결실 또는 삽입으로 변형되고, 여기서 중쇄 또는 경쇄 가변 영역의 CDR은 변형되지 않는다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 서열번호:186 내지 193 중 하나 이상에 따른 아미노산 서열(예를 들어, VH, VL, hCDR1, hCDR1, hCDR3, lCDR1, lCDR2, 및/또는 lCDR3)을 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 CD5에 특이적으로 결합하고 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호:194 및 서열번호:195에 제시된 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 CD5에 특이적으로 결합하고 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호:194 및 서열번호:195에 제시된 아미노산 서열을 가지며; 여기서 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 프레임워크 영역은 선택적으로 1 내지 8, 1 내지 6, 1 내지 4, 또는 1 내지 2개의 아미노산 치환, 결실 또는 삽입으로 변형되고, 여기서 중쇄 또는 경쇄 가변 영역의 CDR은 변형되지 않는다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 서열번호:194 내지 201 중 하나 이상에 따른 아미노산 서열(예를 들어, VH, VL, hCDR1, hCDR1, hCDR3, lCDR1, lCDR2, 및/또는 lCDR3)을 포함한다.
일부 구현예에서, 결합제는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 결합제의 제2 결합 도메인은 억제성 KIR 단백질(킬러 세포 면역글로불린형 수용체 단백질)에 특이적으로 결합한다. 억제성 KIR 단백질은 KIR3DL1, KIR3DL2, KIR2DL1, KIR2DL2, 또는 KIR2DL3 또는 이들의 조합일 수 있고, 예컨대 KIR2DL1/2/3 또는 KIR2DL1/2 단백질에 특이적으로 결합할 수 있다.
억제성 KIR 단백질에 대한 항체는 당업계에 공지되어 있다.
KIR3DL1에 대한 항체는 예를 들어 미국 특허번호 5,770,387 및 국제 특허 공보 WO2018148223에 개시되어 있다.
KIR3DL2에 대한 항체는 예를 들어 공개된 미국 출원번호 20200199228 및 20150232556에 개시되어 있다.
KIR2DL1, KIR2DL2, KIR2DL3 및 이들의 조합에 대한 항체는 예를 들어 미국 특허번호 10,668,180 및 10,253,095, 국제 특허 공개 WO2006003179, 공개된 미국 출원번호 20150290316 및 20130251711 및 유럽 특허번호 3072522에 개시되어 있다.
일부 구현예에서, 제2 결합 도메인은 KIR3DL1에 특이적으로 결합하고 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호:133 및 서열번호:134; 각각 서열번호:141 및 서열번호:142; 또는 각각 서열번호:149 및 서열번호:150에 제시된 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 KIR3DL1에 특이적으로 결합하고 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호:133 및 서열번호:134; 각각 서열번호:141 및 서열번호:142; 또는 각각 서열번호:149 및 서열번호:150에 제시된 아미노산 서열을 가지며; 여기서 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 프레임워크 영역은 선택적으로 1 내지 8, 1 내지 6, 1 내지 4, 또는 1 내지 2개의 아미노산 치환, 결실 또는 삽입으로 변형되고, 여기서 중쇄 또는 경쇄 가변 영역의 CDR은 변형되지 않는다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 KIR3DL2에 특이적으로 결합하고 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호:157 및 서열번호:158에 제시된 아미노산 서열에 제시된 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 KIR3DL2에 특이적으로 결합하고 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호:157 및 서열번호:158에 제시된 아미노산 서열을 가지며; 여기서 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 프레임워크 영역은 선택적으로 1 내지 8, 1 내지 6, 1 내지 4, 또는 1 내지 2개의 아미노산 치환, 결실 또는 삽입으로 변형되고, 여기서 중쇄 또는 경쇄 가변 영역의 CDR은 변형되지 않는다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 KIR2DL1/2/3에 특이적으로 결합하고, 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호:101 및 서열번호:102; 각각 서열번호:109 및 서열번호:110; 각각 서열번호:117 및 서열번호:118; 또는 각각 서열번호:125 및 서열번호:126에 제시된 아미노산 서열을 가진다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 KIR2DL1/2/3에 특이적으로 결합하고, 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호:101 및 서열번호:102; 각각 서열번호:109 및 서열번호:110; 각각 서열번호:117 및 서열번호:118; 또는 각각 서열번호:125 및 서열번호:126에 제시된 아미노산 서열을 가지며; 여기서 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 프레임워크 영역은 선택적으로 1 내지 8, 1 내지 6, 1 내지 4, 또는 1 내지 2개의 아미노산 치환, 결실 또는 삽입으로 변형되고, 여기서 중쇄 또는 경쇄 가변 영역의 CDR은 변형되지 않는다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 KIR3DL1에 특이적으로 결합하고 중쇄 가변 영역은 상보성 결정 영역(CDR) hCDR1, hCDR2 및 hCDR3을 가지고, 경쇄 가변 영역은 lCDR1, lCDR2 및 lCDR3을 가지며, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 CDR의 아미노산 서열은 각각 서열번호:135 내지 서열번호:140; 각각 서열번호:143 내지 서열번호:148; 또는 각각 서열번호:151 내지 서열번호:156에 제시된 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 KIR3DL2에 특이적으로 결합하고 중쇄 가변 영역은 상보성 결정 영역 hCDR1, hCDR2 및 hCDR3을 갖고, 경쇄 가변 영역은 lCDR1, lCDR2 및 lCDR3을 가지며, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 CDR의 아미노산 서열은 각각 서열번호:159 내지 서열번호:164의 아미노산 서열에 제시된다.
일부 구현예에서, 제1 결합 도메인은 KIR2DL1/2/3에 특이적으로 결합하고 중쇄 가변 영역은 상보성 결정 영역 hCDR1, hCDR2 및 hCDR3을 갖고, 경쇄 가변 영역은 lCDR1, lCDR2 및 lCDR3을 가지며, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 CDR의 아미노산 서열은 각각 서열번호:103 내지 서열번호:108; 각각 서열번호:111 내지 서열번호:116; 각각 서열번호:119 내지 서열번호:124; 또는 각각 서열번호:127 내지 서열번호:132에 제시된다.
결합제
결합제는 적어도 제1 결합 도메인 및 제2 결합 도메인을 포함하는 임의의 적합한 제제일 수 있으며, 여기서 제1 결합 도메인은 KIR 단백질 이외에 CD8+KIR+ T 조절 세포(트레그)에서 발현되는 항원으로부터 선택되는 제1 항원에 특이적으로 결합하고; 및 제2 결합 도메인은 억제성 KIR 단백질에 특이적으로 결합하고, 여기서 결합제는 CD8+KIR+ 트레그에 결합한다.
일부 구현예에서, 결합제는 이중특이적(즉, 2개의 상이한 항원에 대한 결합 도메인을 가짐)이다. 일부 구현예에서, 결합제는 2가(즉, 2개의 결합 도메인을 가짐)이다. 일부 구현예에서, 결합제는 4가(즉, 4개의 결합 도메인을 가짐)이다. 일부 구현예에서, 결합제는 3가, 6가 또는 8가이다.
결합제의 결합 도메인은 항체 또는 비항체 형식에서 파생될 수 있다. 일부 구현예에서, 결합 도메인은 항체 또는 그의 항원 결합 부분(즉, 항원 결합 항체 단편)으로부터 파생된다. 일부 구현예에서, 항체 단편은 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv 또는 단일 도메인 항체(VHH, VNAR, sdAb 또는 나노바디라고도 함)이다. 일부 구현예에서, 결합 도메인은 안티칼린, 아피바디, 아비머, DARPin, 애드넥틴 또는 수용체 엑토도메인 Fc 융합 단백질로부터 파생된다.
일부 구현예에서, 결합제는 이중특이적 항체, 디아바디, 항체 Fc 융합체, scFv1-ScFv2, ScFv12-Fc-scFv22, IgG-scFv, DVD-Ig, 트리오맙/쿼드로마, 투-인-원 IgG, scFv2-Fc, TandAb, scFv-HSA-scFv, scFv-VHH, Fab-scFv-Fc, Fab-VHH-Fc, dAb-IgG, IgG-VHH, 텐덤 scFv-Fc, (scFv1)2-Fc-(VHH)2, BiTe, DART, 크로스맙, 안티칼린, 어피바디, 아비머, DARPin, 애드넥틴, scFv-Fc, 원-아암 탠덤 scFv-Fc 또는 DART-Fc이다. 일부 구현예에서, IgG-scFv는 IgG(H)-scFv, scFv-(H)IgG, IgG(L)-scFv, scFv-(L)IgG, 2scFV-IgG 또는 IgG-2scFv이다 (도 1에 도시된 바와 같음).
본원에 사용된 용어 "항체"는 면역글로불린 분자 및 면역글로불린 분자의 면역학적 활성 부분, 즉 표적 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위(항원 결합 부분)를 포함하는 분자를 의미한다. 이 용어는 일반적으로 전장 항체(중쇄 및 경쇄 불변 영역을 가짐) 및 그의 항원-결합 부분을 포함하는 2개의 면역글로불린 중쇄 가변 영역 및 2개의 면역글로불린 경쇄 가변 영역으로 구성된 항체를 지칭하며; 예를 들어, 온전한 단일클론 항체, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 이황화 연결된 Fv, scFv, 단일 도메인 항체(dAb), 디아바디, 다중-특이적 항체, 이중 특이적(dual specific) 항체, 이중특이적 항체 및 단일 쇄 항체(예를 들어, Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 85, 5879-5883 (1988) and Bird et al., Science 242, 423-426 (1988) 참조, 이들은 본원에 참조로서 포함됨)를 포함한다.
항체에서, 각 중쇄는 가변 영역(VH로 약칭)과 불변 영역으로 구성된다. 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인 CH1, CH2 및 CH3 및 선택적으로 네 번째 도메인인 CH4를 포함할 수 있다. 이들 각각의 도메인은 "Fc 도메인"으로 지칭된다. 본원에 사용된 바와 같이, 결합제가 Fc 도메인을 포함하는 경우, 이는 문맥에 의해 달리 명시되지 않는 한, 하나 이상의 Fc 도메인 또는 전체 Fc 영역을 포함할 수 있다. 각 경쇄는 가변 영역(VL로 약칭)과 불변 영역 또는 불변 도메인으로 구성된다. 경쇄 불변 영역은 CL 도메인이다. VH 및 VL 영역은 상보성 결정 영역(CDR)이라고 하는 초가변 영역으로 더 나눌 수 있고 프레임워크 영역(FR)이라고 하는 보존된 영역과 함께 산재되어 있다. 따라서 각 VH 및 VL 영역은 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4의 순서로 N 말단에서 C 말단까지 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성된다. 이 구조는 당업자에게 잘 알려져 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 항체의 "항원-결합 부분"은 VH 및 VL 서열 또는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 CDR을 갖는 본원에 기재된 항체의 부분을 지칭한다. 항체의 "항원-결합 부분"이라는 용어에 따르면, 항원-결합 부분의 예는 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 이황화 연결된 Fv, scFv, 단일 도메인 항체(dAb), 디아바디 및 단일 쇄 항체를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 Fab, F(ab')2, 및 Fv는 하기를 지칭한다: (i) Fab 단편, 즉 VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 구성된 1가 단편; (ii) F(ab')2 단편, 즉 이황화 가교를 통해 힌지 영역에서 서로 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편; 및 (iii) 항체의 VL 및 VH 도메인으로 구성된 Fv 단편. Fv 단편의 2개 도메인, 즉 VL 및 VH는 별도의 코딩 영역에 의해 암호화되지만, 합성 링커, 예를 들어 폴리-G4S 아미노산 서열(서열번호:165로 개시됨 '(G4S)n', 여기서 n = 1 내지 5)을 사용하여 다른 것에 더 연결될 수 있고, 이는 VL 및 VH 영역이 결합하여 1가 분자(단일 쇄 Fv(ScFv)로 알려짐)를 형성하는 단일 단백질 쇄로 제조할 수 있게 한다. 항체의 "항원-결합 부분"이라는 용어는 또한 이러한 단일 쇄 항체를 포함하는 것으로 의도된다.
"디아바디(diabody)"와 같은 다른 형태의 단일 쇄 항체도 여기에 포함된다. 디아바디는 2가, 이중특이적 항체이고, 여기서 VH 및 VL 도메인이 단일 폴리펩티드 쇄에서 발현되지만 두 도메인이 동일한 쇄에서 결합할 수 있기에는 너무 짧은 VH 및 VL 도메인을 연결하는 링커를 사용하고, 이에 따라 VH 및 VL 도메인은 서로 다른 쇄(각각 VL 및 VH)의 상보적 도메인과 쌍을 이루고 2개의 항원 결합 부위를 형성한다(예를 들어, Holliger, R, et al. (1993) Proc. Natl. Acad Sci USA 90:64446448, Poljak, R.J, et al (1994) Structure 2:1121-1123 참조).
면역글로불린 불변 영역 또는 Fc 영역은 중쇄 또는 경쇄 불변 영역을 의미한다. 인간 중쇄 및 경쇄 불변 영역 아미노산 서열은 당업계에 공지되어 있다. 불변 영역은 면역글로불린, IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM 부류로부터 선택될 수 있는 임의의 적합한 유형일 수 있다. 여러 면역글로불린 부류는 이소타입, 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 또는 IgA1, 및 IgA2로 추가로 나눌 수 있다. 상이한 부류의 면역글로불린에 해당하는 중쇄 불변 영역(Fc)은 각각 α, δ, ε, γ 및 μ일 수 있다. 경쇄는 카파(또는 κ) 및 람다(또는 λ) 중 하나일 수 있다.
일부 구현예에서, 결합제에는 Fc 영역 또는 그의 도메인이 없다. 일부 구현예에서, 결합제는 전체 Fc 영역 또는 그의 Fc 도메인을 갖는다. 일부 구현예에서, 결합제는 Fc 영역 또는 IgG1 이소타입의 Fc 도메인을 갖는다. 일부 구현예에서, 결합제는 Fc 영역 또는 IgG2 이소타입의 Fc 도메인을 갖는다. 일부 구현예에서, 결합제는 Fc 영역 또는 IgG3 이소타입의 Fc 도메인을 갖는다. 일부 구현예에서, 결합제는 Fc 영역 또는 IgG4 이소타입의 Fc 도메인을 갖는다. 일부 구현예에서, Fc 도메인은 2개 이상의 이소타입으로부터의 불변 영역을 포함하는 하이브리드 이소타입을 갖는다. 일부 구현예에서, Fc 영역 또는 Fc 도메인은 IgG1 또는 IgG4 불변 영역일 수 있다.
일부 구현예에서, Fc 도메인(예컨대, 중쇄)의 C-말단은 아미노산 잔기 PGK로 끝나는 완전한 C-말단일 수 있다. 일부 구현예에서, Fc 도메인의 C-말단은 또한 C 말단 아미노산 잔기 중 하나 또는 두 개가 제거된 단축된 C-말단일 수 있다. 일부 구현예에서, Fc 도메인의 C-말단은 PG로 끝나는 단축된 C-말단이다. 일부 구현예에서, C-말단 CH3 도메인을 포함하는 중쇄를 포함하는 결합제는 C-말단 글리신-리신 디펩티드(G446 및 K447, Kabat EU 인덱스에 따른 넘버링)를 포함한다. 일부 구현예에서, C-말단 CH3 도메인을 포함하는 중쇄를 포함하는 결합제는 C-말단 글리신 잔기(G446, Kabat EU 인덱스에 따른 넘버링)를 포함한다.
본원에 기재된 바와 같은 결합제는 다중특이적, 전형적으로 이중특이적 결합제이다. 일부 구현예에서, 결합제는, 이중특이적 항체와 같은, 다중특이적 항체 또는 항체 유사 분자이다. 다중특이적 항체는 적어도 2개의 상이한 부위 또는 항원에 대해 결합 특이성을 갖는 단일클론 항체이다. 본원에 기재된 결합제는 전형적으로 상이한 항원에 대한 결합 특이성을 갖는다. 이중특이적 항체는 전장 항체 또는 항체 단편으로 제조될 수 있다. 이중특이적 및 다중특이적 항체는 하기를 포함한다: scFv1-ScFv2, ScFv12-Fc-scFv22, IgG-scFv, DVD-Ig, 트리오맙/쿼드로마, 투-인-원 IgG, scFv2-Fc, TandAb, scFv-HSA-scFv, scFv-VHH, Fab-scFv-Fc, Fab-VHH-Fc, dAb-IgG, IgG-VHH, 탠덤 scFv-Fc, (scFv1)2-Fc-(VHH)2, scFv-Fc, 원-아암 탬덤(one-armed tandem) scFv-Fc 및 DART-Fc. 일부 구현예에서, IgG-scFv는 IgG(H)-scFv, scFv-(H)IgG, IgG(L)-scFv, svFc-(L)IgG, 2scFV-IgG 또는 IgG-2scFv이다 (도 1 참조).
다중 특이적 항체를 만드는 기술에는 서로 다른 특이성을 갖는 두 개의 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 재조합적 공동 발현이 포함되지만 이에 제한되지 않는다 (Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983), WO 93/08829, 및 Traunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991), 및 "knob-in-hole" engineering (예컨대, 미국 특허번호 5,731,168 참조) 참조)). 다중특이적 항체는 또한 항체 Fc-이종이량체 분자 제조 (WO 2009/089004A1); 2개 이상의 항체 또는 단편의 가교 (예를 들어, 미국 특허번호 4,676,980, 및 Brennan et al., Science, 229:81 (1985) 참조); 류신 지퍼를 사용하여 이중특이적 항체 생성 (예를 들어, Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992) 참조); 이중특이적 항체 단편을 제조하기 위한 "디아바디" 기술 사용 (예를 들어, Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993) 참조); 및 단일-쇄 Fv(scFv) 이합체를 사용(예를 들어, Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994) 참조); 및 예를 들어 문헌 [Tutt et al. J. Immunol. 147:60 (1991)]에 기재된 바와 같은 삼중 특이적 항체 제조를 위해 정전기 조향 효과(electrostatic steering effect)를 조작하여 제조될 수 있다.
"옥토퍼스(Octopus) 항체"를 포함하여 3개 이상의 기능적 항원 결합 부위를 갖는 조작된 항체가 또한 본원에 포함된다 (예를 들어, US 2006/0025576A1 참조).
결합제(예를 들어, 항체 또는 항원 결합 단편)는 또한 2개의 상이한 항원에 결합하는 항원 결합 부위를 포함하는 "이중 작용 FAb" 또는 "DAF"를 포함한다 (예를 들어, US 2008/0069820 및 Bostrom et al., 2009, Science 323:1610-14 참조). "크로스맙" 항체도 본원에 포함된다 (예를 들어, WO 2009/080251, WO 2009/080252, WO2009/080253, WO2009/080254 및 WO2013/026833 참조).
일부 구현예에서, 결합제는 Fc 도메인의 2개의 서브유닛 중 하나 또는 다른 하나에 융합된 상이한 항원-결합 부위를 포함하고; 따라서, Fc 도메인의 2개의 서브유닛은 2개의 동일하지 않은 폴리펩티드 쇄에 포함될 수 있다. 이들 폴리펩티드의 재조합 동시발현 및 후속 이량체화는 두 폴리펩티드의 여러 가능한 조합을 유도한다. 따라서 재조합 생산에서 이중특이적 분자의 수율 및 순도를 개선하기 위해 결합제의 Fc 도메인에 원하는 폴리펩티드의 결합을 촉진하는 변형을 도입하는 것이 유리할 것이다.
따라서, 특정 측면은 (a) 적어도 제1 결합 도메인, (b) 제2 결합 도메인, 및 (c) 안정한 결합이 가능한 제1 및 제2 서브유닛으로 구성된 Fc 도메인을 포함하는 결합제에 관한 것이며, 여기서 Fc 도메인은 Fc 도메인의 제1 및 제2 서브유닛의 결합을 촉진하는 변형을 포함한다. 인간 IgG Fc 도메인의 두 서브유닛 사이에서 가장 광범위한 단백질-단백질 상호작용 부위는 Fc 도메인의 CH3 도메인에 있다. 따라서, 한 측면에서 상기 변형은 Fc 도메인의 CH3 도메인에 있다.
특정 측면에서, Fc 변형은 소위 "놉-인투-홀(knob-into-hole)" 변형으로, Fc 도메인의 2개의 서브유닛 중 하나에서 "놉" 변형 및 Fc 도메인의 2개의 서브유닛 중 다른 하나에서 "홀" 변형을 포함한다. 특정 특면에서, Fc 도메인의 제1 서브유닛은 아미노산 치환 S354C 및 T366W(EU 넘버링)를 포함하고, Fc 도메인의 제2 서브유닛은 아미노산 치환 Y349C, T366S 및 Y407V (Kabat EU 인덱스에 따른 넘버링)를 포함한다.
놉-인투-홀 기술은 예를 들어 문헌 [미국 특허번호 5,731,168; 7,695,936; Ridgway et al., Prot Eng 9, 617-621 (1996) 및 Carter, J Immunol Meth 248, 7-15 (2001)]에 기재되어 있다. 일반적으로, 상기 방법은 제1 폴리펩티드의 계면에 돌출부("놉")를 도입하고 제2 폴리펩티드의 계면에 상응하는 공동("홀")을 도입하여 돌출부가 이종이량체 형성을 촉진하고 동종이량체 형성을 방해하도록 공동 내에 위치할 수 있도록 하는 것을 포함한다. 돌출부는 제1 폴리펩티드의 계면으로부터의 작은 아미노산 측쇄를 더 큰 측쇄 (예를 들어, 티로신 또는 트립토판)로 교체함으로써 구성된다. 큰 아미노산 측쇄를 더 작은 것(예를 들어, 알라닌 또는 트레오닌) 으로 교체함으로써 돌출부와 동일하거나 유사한 크기의 보상 공동이 제2 폴리펩티드의 계면에 생성된다.
따라서, 일부 구현예에서, Fc 도메인의 CH3 도메인에서 아미노산 잔기가 측쇄 부피가 더 큰 아미노산 잔기로 대체되어, 제2 Fc 도메인의 CH3 도메인 내 및 공동에 위치할 수 있는 CH3 도메인 내에 돌출부를 생성하고, 제2 Fc 도메인의 CH3 도메인에서 아미노산 잔기가 더 작은 측쇄 부피를 갖는 아미노산 잔기로 대체됨으로써, 제1 Fc 도메인의 CH3 도메인 내 돌출부가 내부에 위치할 수 있는 제2 Fc 도메인의 CH3 도메인 내에 공동을 생성한다. 돌출부 및 공동은, 예를 들어, 부위-특이적 돌연변이유발 또는 펩티드 합성에 의해, 폴리펩티드를 암호화하는 핵산을 변경함으로써 만들어질 수 있다. 특정 구현예에서, 제1 Fc 도메인의 CH3 도메인에서 위치 366의 트레오닌 잔기는 트립토판 잔기(T366W)로 대체되고, 제2 Fc 도메인의 CH3 도메인에서 위치 407의 티로신 잔기는 발린 잔기(Y407V)로 대체된다. 또 다른 구현예에서, 제2 Fc 도메인에서 추가로 위치 366의 트레오닌 잔기는 세린 잔기(T366S)로 대체되고 위치 368의 류신 잔기는 알라닌 잔기(L368A)로 대체된다.
또 다른 측면에서, 제1 Fc 도메인에서 추가로 위치 354의 세린 잔기가 시스테인 잔기로 대체되고(S354C), 제2 Fc 도메인에서 추가로 위치 349의 티로신 잔기가 시스테인 잔기(Y349C)로 대체된다. 이들 2개의 시스테인 잔기의 도입은 이합체를 추가로 안정화시키는 2개의 Fc 도메인 사이의 이황화 가교의 형성을 초래한다 (Carter (2001), J Immunol Methods 248, 7-15). 일부 구현예에서, 제1 Fc 도메인은 아미노산 치환체 S354C 및 T366W(EU 넘버링)를 포함하고 제2 Fc 도메인은 아미노산 치환체 Y349C, T366S 및 Y407V (Kabat EU 인덱스에 따른 넘버링)를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 Fc 도메인의 결합을 촉진하는 변형은 정전기 조정 효과를 매개하는 변형을 포함하며, 예를 들어 PCT 공보 WO 2009/089004에 기재된 바와 같다. 일반적으로, 이 방법은 2개의 Fc 도메인의 계면에서 하나 이상의 아미노산 잔기를 하전된 아미노산 잔기로 대체하여 동종이량체 형성이 정전기적으로 바람직하지 않게 되지만 이종이량체화는 정전기적으로 유리하도록 하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 결합제는 하나 이상의 scFv 또는 "단일 쇄 가변 단편"을 포함한다. scFv는 항체의 중쇄(VH) 및 경쇄(VL) 가변 영역의 가변 영역의 융합 단백질로, 10개 내지 약 25개 아미노산의 짧은 링커 펩티드와 연결되어 있다. 링커는 일반적으로 유연성을 위한 글리신뿐만 아니라 용해도를 위한 세린 또는 트레오닌이 풍부하며, VH의 N-말단을 VL의 C-말단과 연결하거나 또는 그 반대로 연결할 수 있다. 이 단백질은 불변 영역을 제거하고 링커를 도입했음에도 불구하고 원래 항체의 특이성을 유지한다. scFv 항체는, 예를 들어, 문헌 [Houston, JS, Methods in Enzymol. 203 (1991) 46-96]]에 기재되어 있다. scFv 분자를 제조하고 적합한 펩티드 링커를 설계하는 방법은, 예를 들어, 문헌 [미국 특허번호 4,704,692; 미국 특허번호 4,946,778; Raag and Whitlow, FASEB 9:73-80 (1995) 및 Bird and Walker, TIBTECH, 9:132-137 (1991)]에 기재되어 있다.
scFv-Fcs인 결합제는 문헌[Sokolowska-Wedzina et al., Mol. Cancer Res. 15(8):1040-1050, 2017]에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 결합제는 "이중특이적 T 세포 결합체(engager)" 또는 BiTE이다 (예를 들어, WO2004/106381, WO2005/061547, WO2007/042261 및 WO2008/119567 참조). 이 접근법은 단일 폴리펩티드 상에 배열된 2개의 항체 가변 도메인을 이용한다. 예를 들어, 단일 폴리펩티드 쇄는 2개의 단일 쇄 Fv(scFv) 단편을 포함할 수 있으며, 각각은 두 도메인 사이의 분자내 결합을 허용하기에 충분한 길이의 폴리펩티드 링커에 의해 분리된 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL) 도메인을 갖는다. 이 단일 폴리펩티드는 2개의 scFv 단편 사이에 폴리펩티드 스페이서 서열을 추가로 포함한다. 각 scFv는 서로 다른 에피토프를 인식하며, 이러한 에피토프는 서로 다른 단백질에 대해 특이적일 수 있으므로, 두 단백질 모두 BiTE에 의해 결합된다.
단일 폴리펩티드이기 때문에, 이중특이적 T 세포 결합체는 당업자에게 알려진 임의의 원핵세포 또는 진핵세포 발현 시스템(예컨대, CHO 세포주)을 사용하여 발현될 수 있다. 그러나 특정 정화 기술(예를 들어, EP1691833 참조)은 단량체의 의도된 활성 이외의 생물학적 활성을 가질 수 있는 다른 다량체 종으로부터 단량체 이중특이적 T 세포 결합체를 분리하는 데 필요할 수 있다. 하나의 예시적인 정제 도식에서, 분비된 폴리펩티드를 함유하는 용액은 먼저 금속 친화성 크로마토그래피에 적용되고, 폴리펩티드는 이미다졸 농도 구배로 용출된다. 이 용출액은 음이온 교환 크로마토그래피를 사용하여 추가로 정제되며, 염화나트륨 농도 구배를 사용하여 폴리펩티드가 용출된다. 마지막으로, 이 용출액은 크기 배제 크로마토그래피에 적용되어 다량체 종에서 단량체를 분리한다. 일부 구현예에서, 이중특이적 항체인 결합제는 펩티드 링커에 의해 서로 융합된 2개의 단일 쇄 FV 단편(scFV)을 포함하는 단일 폴리펩티드 쇄로 구성된다.
단일 도메인 항체는 단일 단량체 가변 항체 도메인으로 구성된 항체 단편이다. 단일 도메인 항체는 낙타과(예를 들어, 나노바디 또는 VHH 단편)로부터의 항체 중쇄의 가변 도메인으로부터 파생될 수 있다. 또한 단일 도메인 항체라는 용어는 자율적 인간 중쇄 가변 도메인(aVH) 또는 상어에서 파생된 VNAR 단편을 포함한다 (예를 들어, Hasler et al., Mol. Immunol. 75:28-37, 2016 참조).
단일 도메인 항체(DAB 또는 VHH)를 생산하는 기술은, 예를 들어, 문헌[ Cossins et al. 2006, Prot Express Purif 51:253-259 및 Li et al., Immunol. Lett. 188:89-95, 2017)에 개시된 바와 같이 공지되어 있다. 예를 들어, 표준 면역화 기술에 의해 낙타, 알파카 또는 라마로부터 단일 도메인 항체를 얻을 수 있다 (예를 들어, Muyldermans et al., TIBS 26:230-235, 2001; Yau et al., J Immunol Methods 281:161-75, 2003; 및 Maass et al., J Immunol Methods 324:13-25, 2007. 참조). VHH는 강력한 항원 결합 능력을 가질 수 있으며 기존의 VH-VL 쌍에 접근할 수 없는 새로운 에피토프와 상호작용할 수 있다 (예를 들어, Muyldermans et al., 2001 참조). 알파카 혈청 IgG에는 약 50%의 낙타과 중쇄 전용 IgG 항체(HCAb)가 포함되어 있다 (예를 들어, Maass et al., 2007 참조). 알파카는 항원으로 면역화될 수 있으며 VHH는 표적 항원에 결합하여 중화하여 분리될 수 있다 (예를 들어, Maass et al., 2007 참조). 알파카 VHH 코딩 서열을 증폭하는 PCR 프라이머가 확인되었고, 알파카 VHH 파지 디스플레이 라이브러리를 구축하는 데 사용될 수 있으며, 이는 당업계에 잘 알려진 표준 바이오패닝 기술에 의해 항체 단편 분리에 사용될 수 있다(예를 들어, Maass et al., 2007 참조).
일부 구현예에서, 결합제는 IgG-scFV이다. IgG-scFv 형식은 IgG(H)-scFv, scFv-(H)IgG, IgG(L)-scFv, svFc-(L)IgG, 2scFV-IgG 및 IgG-2scFv를 포함한다. 이들 및 기타 이중특이적 항체 포맷 및 이를 제조하는 방법은, 예를 들어, 문헌 [Brinkmann and Kontermann, MAbs 9(2):182-212 (2017); Wang et al., Antibodies, 2019, 8, 43; Dong et al., 2011, MAbs 3:273-88; Natsume et al., J. Biochem. 140(3):359-368, 2006; Cheal et al., Mol. Cancer Ther. 13(7):1803-1812, 2014; 및 Bates and Power, Antibodies, 2019, 8, 28]에 기재되어 있다.
Igg-유사 이중 가변 도메인 항체(DVD-Ig)는 문헌[Wu et al., 2007, Nat Biotechnol 25:1290-97; Hasler et al.,Mol.Immunol. 75:28-37, 2016 및 WO 08/024188 및 WO 07/024715]에 기재되어 있다. 트리오맙은 문헌[Chelius et al., MAbs 2(3):309-319, 2010]에 기재되어 있다. 2-in-1 IgG는 문헌 [Kontermann et al., Drug Discovery Today 20(7):838-847, 2015]에 기재되어 있다. Tanden 항체 또는 TandAb는 문헌 [Kontermann et al., id]에 기재되어 있다. ScFv-HSA-scFv 항체는 또한 문헌 [Kontermann et al. (id.)]에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 결합제는 스캐폴드 항원 결합 단백질, 예를 들어, 항원 결합 도메인에 대한 대체 스캐폴드로 사용된 피브로넥틴 및 설계된 안키린 반복 단백질(DARPins)이다 (예를 들어, 문헌[Gebauer and Skerra, Engineered protein scaffolds as next-generation antibody therapeutics. Curr Opin Chem Biol 13:245-255 (2009) 및 Stumpp et al., Darpins: A new generation of protein therapeutics. Drug Discovery Today 13: 695-701 (2008)] 참조). 일부 구현예에서, 스캐폴드 항원 결합 단백질은 리포칼린(안티칼린(Anticalin)), 단백질 A-유래 Z분자 예컨대 단백질 A의 Z-도메인(아피바디(Affibody)), A-도메인(아비머.맥시바디(Avimer/Maxibody)), 혈청 트랜스페린(트랜스바디); 설계된 안키린 반복 단백질(DARPin), 피브로넥틴(AdNectin), C형 렉틴 도메인(테라넥틴(Tetranectin)); 새로운 항원 수용체 베타-락타마제(VNAR 단편), 인간 감마-크리스탈린 또는 유비퀴틴(아필린(Affilin) 분자)의 가변 도메인; 인간 프로테아제 억제제의 쿠니츠(kunitz) 유형 도메인, 및 노틴(knottin) 패밀리, 펩티드 압타머 및 피브로넥틴(아드넥틴(adnectin))으로부터의 단백질과 같은 마이크로바디로 이루어진 군으로부터 선택된다.
리포칼린은, 스테로이드, 빌린, 레티노이드 및 지질과 같은 작은 소수성 분자를 운반하는 세포외 단백질 계열이다. 그들은 다른 표적 항원에 결합하도록 조작될 수 있는 원추형 구조의 개방형 말단(open end)에 많은 루프를 갖는 단단한 베타 시트 2차 구조를 가지고 있다. 안티칼린은 160 내지 180개의 아미노산 크기이며 리포칼린에서 파생된다. 더 자세한 내용은 문헌[Biochim Biophys Acta 1482: 337-350 (2000), 미국 특허번호 7,250,297B1, 및 US20070224633]을 참조한다.
설계된 안키린 반복 단백질(Designed Ankyrin Repeat Proteins, DARPins)은 통합 막 단백질이 세포골격에 부착되는 것을 매개하는 단백질 계열인 안키린(Ankyrin)에서 파생된다. 단일 안키린 반복은 2개의 알파 나선과 베타 회전으로 구성된 33개 잔기 모티프이다. 그들은 각 반복의 첫 번째 알파 나선과 베타 회전에 있는 잔기를 무작위화하여 다른 표적 항원에 결합하도록 조작될 수 있다. 그들의 결합 계면은 모듈의 수를 늘려서 증가시킬 수 있다(친화성 성숙 방법). 더 자세한 내용은 문헌 [J. Mol. Biol. 332, 489-503(2003), PNAS 100(4), 1700-1705(2003) 및 J. Mol. Biol. 369, 1015-1028(2007) 및 US20040132028A1]을 참조한다.
이펙터 기능을 변경하기 위한 Fc 도메인 변형
일부 구현예에서, Fc 영역 또는 Fc 도메인은 FcyRI(CD64), FcyRIIA(CD32a), FcyRIIB(CD32b), FcyRIIIA(CD16a) 및 FcyRIIIB(CD16b)로부터 선택된 적어도 하나의 Fc 수용체에 실질적으로 결합하지 않는다. 일부 구현예에서, Fc 영역 또는 도메인은 FcyRI(CD64), FcyRIIA(CD32a), FcyRIIB(CD32b), FcyRIIIA(CD16a) 및 FcyRIIIB(CD16b)로부터 선택되는 임의의 Fc 수용체에 실질적으로 결합하지 않는 것으로 나타난다. 본원에 사용된 바와 같이, "실질적으로 결합하지 않는(substantially no binding)"은 선택된 Fc감마 수용체 또는 수용체들에 대한 결합이 약하거나 전혀 없음을 의미한다. 일부 구현예에서, "실질적으로 결합하지 않는"은 적어도 1000배의 Fc 감마 수용체에 대한 결합 친화도의 감소(예를 들어, Kd 의 증가)를 의미한다. 일부 구현예에서, Fc 도메인 또는 영역은 Fc 눌(null)이다. 본원에 사용된 바와 같이, "Fc 눌"은 임의의 Fc감마 수용체에 대한 결합이 약하거나 전혀 없는 Fc 영역 또는 Fc 도메인을 의미한다. 일부 구현예에서, Fc 눌 도메인 또는 영역은 적어도 1000배의 Fc 감마 수용체에 대한 결합 친화도 감소(예를 들어, Kd 의 증가)를 나타낸다.
일부 구현예에서, Fc 도메인은 이펙터 기능 활성이 감소했거나 실질적으로 없다. 본원에 사용딘 "이펙터 기능 활성"은 항체 의존성 세포 독성(ADCC), 항체 의존성 세포 식균 작용(ADCP) 및/또는 보체 의존성 세포 독성(CDC)을 의미한다. 일부 구현예에서, Fc 도메인은 야생형 Fc 도메인과 비교하여 감소된 ADCC, ADCP 또는 CDC 활성을 나타낸다. 일부 구현예에서, Fc 도메인은 야생형 Fc 도메인과 비교하여 ADCC, ADCP 및 CDC의 감소를 나타낸다. 일부 구현예에서, Fc 도메인은 이펙터 기능(즉, ADCC, ADCP 또는 CDC를 자극하는 능력)이 실질적으로 없다. "이펙터 기능이 실질적으로 없는"은 야생형 Fc 도메인과 비교하여 적어도 1000배의 이펙터 기능 활성 감소를 의미한다.
일부 구현예에서, Fc 도메인은 ADCC 활성이 감소했거나 전혀 없다. 본원에 사용된 바와 같이 감소되거나 전혀 없는 ADCC 활성은 Fc 도메인의 ADCC 활성이 적어도 10배, 적어도 20배, 적어도 30배, 적어도 50배, 적어도 100배 또는 적어도 500배 감소하는 것을 의미한다.
일부 구현예에서, Fc 도메인은 CDC 활성이 감소했거나 전혀 없다. 본원에 사용된 바와 같이 감소되거나 전혀 없는 CDC 활성은 Fc 도메인의 CDC 활성이 적어도 10배, 적어도 20배, 적어도 30배, 적어도 50배, 적어도 100배 또는 적어도 500배만큼 감소된 것을 의미한다.
ADCC 및/또는 CDC 활성의 감소/고갈을 확인하기 위해 시험관내 및/또는 생체내 세포독성 분석을 수행할 수 있다. 예를 들어, Fc 수용체(FcR) 결합 분석은 항체에 Fc감마 수용체가 결여되어 있음을 확인하기 위해 수행될 수 있다(따라서 ADCC 활성이 결여될 가능성이 있음). ADCC를 매개하는 일차 세포인 NK 세포는 Fc감마RIII만을 발현하는 반면, 단핵구는 Fc감마RI, Fc감마RII 및 Fc감마RIII를 발현한다. 조혈 세포에서의 FcR 발현은 문헌 [Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)]의 464페이지의 표 3]에 요약되어 있다. 관심 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위한 시험관내 분석의 비제한적인 예는 미국 특허번호 5,500,362 (예를 들어, Hellstrom, I. et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986) 및 and Hellstrom, I et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985) 참조); 미국 특허번호 5,821,337 (Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987) 참조)에 기재되어 있다. 대안적으로, 비방사성 분석 방법이 사용될 수 있다 (예를 들어, 유세포 분석을 위한 ACTITM 비방사성 세포독성 검정(CellTechnology, Inc. Mountain View, CA); 및 CytoTox 96TM 비방사성 세포독성 분석(Promega, Madison, Wis.)). 이러한 분석에 유용한 이펙터 세포는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 및 자연 킬러(NK) 세포를 포함한다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 관심 분자의 ADCC 활성은 생체 내에서, 예를 들어, 문헌 [Clynes et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998)]에 개시된 것과 같은 동물 모델에서 평가될 수 있다.
C1q 결합 분석은 또한 항체 또는 Fc 도메인 또는 영역이 C1q에 결합할 수 없고 따라서 CDC 활성이 없거나 감소된 CDC 활성을 갖는지 확인하기 위해 수행될 수 있다. 예를 들어, WO 2006/029879 및 WO 2005/100402의 C1q 및 C3c 결합 ELISA 참조. 보체 활성화를 평가하기 위해, CDC 분석이 수행될 수 있다 (예를 들어, 문헌[Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M.S. et al., Blood 101:1045-1052(2003); 및 Cragg, M. S. and M. J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)] 참조).
일부 구현예에서, Fc 도메인은 ADCP 활성이 감소했거나 전혀 없다. 본원에 사용된 바와 같이 감소되거나 전혀 없는 ADCP 활성은 Fc 도메인의 ADCP 활성이 적어도 10배, 적어도 20배, 적어도 30배, 적어도 50배, 적어도 100배 또는 적어도 500배만큼 감소된 것을 의미한다.
ADCP 결합 분석은 또한 항체 또는 Fc 도메인 또는 영역이 ADCP 활성이 없거나 감소된 ADCP 활성을 갖는지 확인하기 위해 수행될 수 있다. 예를 들어, US20190079077 및 US20190048078 및 본원에 개시된 참고문헌을 참조.
감소된 이펙터 기능 활성을 갖는 항체는 Fc 영역 잔기 238, 265, 269, 270, 297, 327 및 329 중 하나 이상의 치환을 갖는 것들을 포함한다 (미국 특허번호 6,737,056 참조). 이러한 Fc 돌연변이체는, 잔기 265 및 297이 알라닌으로 치환된 소위 "DANA" Fc 돌연변이체를 포함하는, 아미노산 위치 265, 269, 270, 297 및 327 중 2개 이상에서 치환을 갖는 Fc 돌연변이체를 포함한다 (미국 특허번호 7,332,581 참조). FcR에 대한 결합이 감소된 특정 항체 변이체도 알려져 있다 (예를 들어, 미국 특허번호 6,737,056; WO 2004/056312, 및 Shields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001) 참조).
특정 구현예에서, 결합제는 Fc감마R 결합을 감소시키는 하나 이상의 아미노산 치환, 예를 들어, Fc 영역의 위치 234 및 235에서의 치환 (잔기의 EU 넘버링)을 갖는 Fc 도메인 또는 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 치환은 L234A 및 L235A(LALA)이다. 일부 구현예에서, Fc 도메인은 인간 IgG1 Fc 영역에서 파생된 Fc 영역에 D265A 및/또는 P329G를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 치환은 인간 IgG1 Fc 영역에서 파생된 Fc 영역의 L234A, L235A 및 P329G(LALA-PG)이다. (예를 들어, WO 2012/130831 참조). 일부 구현예에서, 인간 IgG1 Fc 영역에서 파생된 Fc 영역의 치환은 L234A, L235A 및 D265A(LALA-DA)이다.
일부 구현예에서, Fc 영역에 변경이 발생하여 C1q 결합 및/또는 보체 의존성 세포 독성(CDC)이 변경(즉, 감소)되며, 예를 들어 문헌[미국 특허번호 6,194,551, WO 99/51642 및 Idusogie 외. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)]에 기재된 바와 같다.
결합 도메인의 변형
일부 구현예에서, 결합 도메인은 보존적 치환 또는 치환에 의해 변형될 수 있다. 보존적 아미노산 치환의 경우, 주어진 아미노산이 유사한 물리화학적 특성을 갖는 잔기로 대체될 수 있으며, 예를 들어, 한 지방족 잔기를 다른 지방족 잔기로 치환 (예: Ile, Val, Leu 또는 Ala를 서로 치환), 또는 한 극성 잔기를 다른 극성 잔기로 치환 (예: Lys와 Arg; Glu와 Asp; 또는 Gln과 Asn 사이)하는 것이다. 이러한 다른 보존적 아미노산 치환, 예를 들어 유사한 소수성 특성을 갖는 전체 영역의 치환은 잘 알려져 있다. 보존적 아미노산 치환을 포함하는 폴리펩티드는 원하는 활성(예: 항원 결합 활성 및 네이티브 또는 레퍼런스 폴리펩티드의 특이성)이 유지되는지 확인하기 위해 본원에 기재된 분석법 중 어느 하나에서 테스트될 수 있다.
보존적 치환의 경우, 아미노산은 그의 측쇄 특성의 유사성에 따라 분류될 수 있다 (AL Lehninger, in Biochemistry, second ed., pp. 73-75, Worth Publishers, New York (1975)): (1) 비극성: Ala(A), Val(V), Leu(L), Ile(I), Pro(P), Phe(F), Trp(W), Met(M); (2) 하전되지 않은 극성: Gly(G), Ser(S), Thr(T), Cys(C), Tyr(Y), Asn(N), Gln(Q); (3) 산성: Asp(D), Glu(E); 및 (4) 염기성: Lys(K), Arg(R), His(H).
대안적으로, 보존적 치환의 경우 자연 발생 잔기는 공통 측쇄 특성에 기초하여 그룹으로 나눌 수 있다: (1) 소수성: 노르류신(Norleucine), Met, Ala, Val, Leu, Ile; (2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; (3) 산성: Asp, Glu; (4) 염기성: His, Lys, Arg; (5) 쇄 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro; 및 (6) 방향족: Trp, Tyr, Phe. 비보존적 치환은 이러한 클래스 또는 다른 클래스 중 하나의 구성원을 교환하는 것을 수반한다.
특정한 보존적 치환은 예를 들어; Ala에서 Gly 또는 Ser로; Arg에서 Lys로; Asn에서 Gln 또는 His로; Asp에서 Glu로; Cys에서 Ser로; Gln에서 Asn으로; Glu에서 Asp로; Gly에서 Ala 또는 Pro로; His에서 Asn 또는 Gln으로; Ile에서 Leu 또는 Val로; Leu에서 Ile 또는 Val로; Lys에서 Arg, Gln 또는 Glu로; Met에서 Leu, Tyr 또는 Ile로; Phe에서 Met, Leu 또는 Tyr으로; Ser에서 Thr로; Thr에서 Ser로; Trp에서 Tyr로; Tyr에서 Trp로; 및/또는 Phe에서 Val, Ile 또는 Leu로의 치환을 포함한다.
일부 구현예에서, 결합 도메인의 보존적으로 변형된 변이체는 바람직하게는 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 그 이상이 기준 VH 또는 VL 서열과 동일하며, 여기서 VH 및 VL CDR은 변형되지 않는다. 레퍼런스와 변형된 서열 사이의 상동성 정도(퍼센트 동일성)는, 예를 들어, 월드 와이드 웹에서 이러한 목적을 위해 일반적으로 사용되는 무료로 이용 가능한 컴퓨터 프로그램 (예를 들어, 기본 설정이 있는 BLASTp 또는 BLASTn)을 사용하여 두 서열을 비교함으로써 결정될 수 있다.
천연(또는 레퍼런스) 아미노산 서열의 변형은 당업자에게 공지된 다수의 기술 중 임의의 기술에 의해 달성될 수 있다. 예를 들어, 원하는 돌연변이 서열을 함유하는 올리고뉴클레오티드를 합성함으로써 특정 부위에 돌연변이를 도입할 수 있으며, 천연 서열의 단편에 대한 결찰(ligation)을 가능하게 하는 제한 부위가 측면에 위치한다(flank). 결찰 후, 생성된 재구성된 서열은 원하는 아미노산 삽입, 치환 또는 결실을 갖는 변이체를 암호화한다. 대안적으로, 원하는 치환, 결실 또는 삽입에 따라 변경된 특정 코돈을 갖는 변경된 뉴클레오티드 서열을 제공하기 위해 올리고뉴클레오티드 지정 부위 특이적 돌연변이유발 절차를 사용할 수 있다. 이러한 변경을 만드는 기술은 매우 잘 확립되어 있으며, 예를 들어, 본원에 그 전문이 참조로서 포함된 문헌 [Walder et al. (Gene 42:133, 1986); Bauer et al. (Gene 37:73, 1985); Craik (BioTechniques, January 1985, 12-19); Smith et al. (Genetic Engineering: Principles and Methods, Plenum Press, 1981); 및 미국 특허번호 4,518,584 및 4,737,462]에 개시된 것들을 포함한다.
CD8+KIR+ 조절 T 세포
조절 T 세포는 CD8+ KIR+인 표현형을 특징으로 하며 일반적으로 MHC 클래스 I 제한적이다. 인간에서 CD8+Kir+ 조절 T 세포는 억제성 KIR 단백질을 발현한다. 일부 구현예에서, 세포에 의해 발현되는 KIR 단백질은 하나 이상의 억제성 KIR 단백질, 예를 들어 KIR2DL1, KIR2DL2, KIR2DL3, KIR2DL5, KIR3DL1 및 KIR3DL2를 포함하고; 구체적으로 KIR2DL2, KIR2DL3 및 KIR3DL1 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, CD8+KIR+ 조절 T 세포는 HLA E(Qa-1b) 제한적이지 않다. (예를 들어, 뮤린 Qa-1b 및 인간 HLA E 제한에 대한 일반적인 설명에 대한 문헌[Lohwasser et al., International Immunology 13:321-327 (2001) 및 Sarantopoulos et al., J. Clin. Invest. 114(9):1218-1221 (2004)] 참조). 일부 구현예에서, CD8+KIR+ 조절 T 세포는 CD44+, CD122+인 것으로 특성화될 수 있으며, HLA E(Qa-1b) 제한적이지 않다. 일부 구현예에서, CD8+KIR+ 조절 T 세포는 또한 CD28-인 것으로 특징지어질 수 있다. 일부 구현예에서, CD8+KIR+ 조절 T 세포는 CD28-, CD44+ 및 CD122+인 것으로 특징지어질 수도 있다. 일부 구현예에서, CD8+KIR+ 조절 T 세포는 CD28-, CD44+ 및 CD122+인 것으로 특징지어질 수 있으며, HLA E(Qa-1b) 제한적이지 않다.
일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그는 CD3, CD8, PD-1, CD16, CD122, CD39, CXCR3, ICOS, CD103 및 억제성 KIR 단백질과 같은 항원을 발현한다.
일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그는 다음 항원 중 하나 이상을 발현한다: CD3, CD27, CD38, CD39, CD40L, CD45RA, CD45RB, CD45RO, CD73, CD103 (ITGAE), CD122, CD166, CD177, CCR7, CXCR3, CXCR5, HLA-DR, ICOS, LAG-3/CD223, OX-40, PD-1, S1000A8/9, TIM-3, TLT-2, 2B4, 및 41BB. 일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그는 다음 항원 중 하나 이상을 발현한다: CD3, CD5, CD16, CD27, CD38, CD39, CD40L, CD45RA, CD45RB, CD45RO, CD73, CD103 (ITGAE), CD122, CD166, CD177, CCR7, CXCR3, CXCR5, HLA-DR, ICOS, KLRB1, KLRG1, LAG-3/CD223, NKG2C, NKG2D, OX-40, PD-1, S1000A8/9, TIM-3, TLT-2, 2B4, 및 41BB. 일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그는 다음 항원 중 하나 이상을 발현한다: CD39, KLRB1, KLRG1, NKG2C, NKG2D, CXCR3 및 CD122.
결합제의 제조
다양한 구현예에서, 결합제는 인간, 뮤린 또는 기타 동물 유래 세포주에서 제조될 수 있다. 결합제를 생성하기 위해 재조합 DNA 발현이 사용될 수 있다. 이를 통해 선택한 숙주 종에서 다양한 항원 결합 부분 및 기타 결합제(융합 단백질 포함)와 항체의 제조가 가능하다. 박테리아, 효모, 트랜스제닉 동물 및 계란에서의 항체, 그의 항원 결합 부분 및 기타 결합제의 제조는 또한 세포 기반 생산 시스템의 대안이다. 트랜스제닉 동물의 주요 이점은 재생 가능한 소스에서 잠재적으로 높은 수확량을 얻을 수 있다는 것이다.
본원에 사용된 용어 "핵산" 또는 "핵산 서열" 또는 "폴리뉴클레오티드 서열" 또는 "뉴클레오티드"는 리보핵산, 데옥시리보핵산 또는 그의 유사체의 단위를 포함하는 중합체 분자를 지칭한다. 핵산은 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있다. 단일 가닥 핵산은 변성 이중 가닥 DNA의 한 가닥 핵산일 수 있다. 일부 구현예에서, 핵산은 cDNA, 예를 들어 인트론이 결여된 핵산일 수 있다.
항체의 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 분자, 또는 그의 항원 결합 부분, 및 기타 결합제는 당업계에 공지된 다양한 방법에 의해 제조될 수 있다. 이러한 방법에는 항체, 항원 결합 부분 또는 다른 결합제(들)를 암호화하는 합성 뉴클레오티드 서열의 제조가 포함되지만 이에 제한되지 않는다. 또한, 올리고뉴클레오티드 매개(또는 부위 지정) 돌연변이유발, PCR 매개 돌연변이유발 및 카세트 돌연변이유발을 사용하여 항체 또는 항원 결합 부분뿐만 아니라 다른 결합제를 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 제조할 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은, 적어도 항체, 그의 항원 결합 부분, 결합제 또는 그의 폴리펩티드를 암호화하는 핵산 서열은, 예를 들어, 결찰을 위한 무딘 끝 또는 엇갈린 끝 말단, 적절한 말단을 제공하기 위한 제한 효소 분해, 적절하게 응집력있는 끝 부분 채우기, 바람직하지 않은 결합을 피하기 위한 알칼리성 포스파타제 처리, 및 적절한 리가아제로 결찰하는 것과 같은 종래 기술에 따라 벡터 DNA로 재조합될 수 있다. 이러한 조작을 위한 기술은 예를 들어 문헌 [niatis et al., Molecular Cloning, Lab. Manual (Cold Spring Harbor Lab. Press, NY, 1982 and 1989), 및 Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology (John Wiley & Sons), 1987-1993]에 개시되어 있으며, 항체 또는 그의 항원 결합 부분 또는 그의 VH 및/또는 VL 폴리펩티드를 암호화하는 핵산 서열 및 벡터를 구축하는 데 사용할 수 있다. 결합제가 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 포함하는 경우, 일부 구현예에서, VH 폴리펩티드는 제1 핵산에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, VL 폴리펩티드는 제2 핵산에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, VH 및 VL 폴리펩티드가 하나의 핵산에 의해 암호화된다.
DNA와 같은 핵산 분자는 전사 및 번역 조절 정보를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고 그러한 서열이 폴리펩티드를 암호화하는 뉴클레오티드 서열에 "작동 가능하게 연결"되어 있는 경우 폴리펩티드를 "발현할 수 있다"고 한다. 작동 가능한 연결은 조절 DNA 서열 및 발현하고자 하는 DNA 서열(예를 들어, 항체 또는 그의 항원 결합 부분)이 회수 가능한 양으로 폴리펩티드 또는 항원 결합 부분의 유전자 발현을 허용하는 방식으로 연결되는 연결이다. 유전자 발현에 필요한 조절 영역의 정확한 특성은 유사한 기술 분야에서 잘 알려진 바와 같이 유기체마다 다를 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Sambrook et al., 1989; Ausubel et al., 1987-1993] 참조.
따라서, 본원에 기재된 항체 또는 그의 항원 결합 부분 또는 다른 결합제의 발현은 원핵 세포 또는 진핵 세포에서 일어날 수 있다. 적합한 숙주는 효모, 곤충, 균류, 조류, 및 생체내 또는 원위치(in situ)의 포유동물 세포를 포함하는 박테리아 또는 진핵 숙주, 또는 포유동물, 곤충, 조류 또는 효모 기원의 숙주 세포를 포함한다. 포유동물 세포 또는 조직은 인간, 영장류, 햄스터, 토끼, 설치류, 소, 돼지, 양, 말, 염소, 개 또는 고양이 기원일 수 있지만, 임의의 다른 포유동물 세포가 사용될 수 있다. 또한, 예를 들어, 효모 유비퀴틴 가수분해효소 시스템을 사용하여, 유비퀴틴-트랜스멤브레인 폴리펩티드 융합 단백질의 생체내 합성을 달성할 수 있다. 이렇게 생성된 융합 단백질은 생체 내에서 처리되거나 시험관 내에서 정제 및 처리되어, 본원에 기재된 바와 같이 항체 또는 항원 결합 부분을 특정 아미노 말단 서열로 합성할 수 있게 한다. 또한, 직접적인 효모(또는 박테리아) 발현에서 개시 코돈 유래 메티오닌 잔기의 보유와 관련된 문제를 피할 수 있다. (예를 들어, 문헌 [Sabin et al., 7 Bio/Technol. 705(1989); Miller et al., 7 Bio/Technol. 698 (1989)] 참조). 효모가 포도당이 풍부한 배지에서 성장할 때 대량으로 생산되는 당분해 효소를 코딩하는 능동적으로 발현된 유전자의 프로모터 및 종결 요소를 포함하는 일련의 효모 유전자 발현 시스템은 재조합 항체 또는 그의 항원 결합 부분 또는 기타 결합제를 얻기 위해 사용될 수 있다. 알려진 당분해 유전자는 또한 매우 효율적인 전사 제어 신호를 제공할 수 있다. 예를 들어, 포스포글리세르산 키나아제 유전자의 프로모터 및 터미네이터 신호를 사용할 수 있다.
곤충에서 항체 또는 그의 항원-결합 부분 및 기타 결합제의 제조는, 예를 들어, 당업자에게 공지된 방법에 의해 폴리펩티드를 발현하도록 조작된 배큘로바이러스로 곤충 숙주를 감염시킴으로써 달성될 수 있다. 문헌[Ausubel et al., 1987-1993] 참조.
일부 구현예에서, 도입된 핵산 서열(항체 또는 그의 항원 결합 부분 또는 그의 폴리펩티드 또는 기타 결합제를 암호화함)은 수용 숙주 세포에서 자가 복제가 가능한 플라스미드 또는 바이러스 벡터에 통합된다. 임의의 매우 다양한 벡터가 이러한 목적을 위해 사용될 수 있고 당업자에게 알려져 있고 이용가능하다. 예를 들어, 문헌 [Ausubel et al., 1987-1993] 참조. 특정 플라스미드 또는 바이러스 벡터를 선택하는 데 중요한 요소는 하기를 포함한다: 벡터를 포함하는 수용 세포가 벡터를 포함하지 않는 수용 세포로부터 인식되고 선택될 수 있는지에 대한 용이성; 특정 숙주에서 원하는 벡터 복제물의 수; 및 다른 종의 숙주 세포 간에 벡터를 "셔틀(shuttle)"할 수 있는 것이 바람직한지 여부.
당업계에 공지된 예시적인 원핵 벡터는 대장균(E. coli)에서 복제할 수 있는 것과 같은 플라스미드를 포함한다. DNA 암호화 항체 또는 그의 항원 결합 부분 및 기타 결합제의 발현에 유용한 다른 유전자 발현 요소는 (a) SV40 초기 프로모터(Okayama et al. al., 3 Mol Cell Biol 280 (1983)), Rous 육종 바이러스 LTR(Gorman et al., 79 PNAS 6777 (1982)) 및 Moloney 쥐 백혈병 바이러스 LTR(Grosschedl et al., 41 Cell 885 (1985))과 같은 바이러스 전사 프로모터 및 이들의 인핸서 요소; (b) SV40 후기 영역(Okayarea et al., 1983)에서 파생된 것과 같은 스플라이스 영역 및 폴리아데닐화 부위, 및 (c) SV40(Okayama et al., 1983)에서와 같은 폴리아데닐화 부위를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 면역글로불린-암호화 DNA 유전자는 발현 요소로서 SV40 초기 프로모터 및 그의 인핸서, 마우스 면역글로불린 H 쇄 프로모터 인핸서, V40 후기 영역 mRNA 스플라이싱, 토끼 S-글로빈 개재 서열, 면역글로불린 및 토끼 S-글로빈 폴리아데닐화 부위, 및 SV40 폴리아데닐화 요소를 사용하여 문헌[Liu et al., infra, and Weidle et al., 51 Gene 21 (1987)]에 기재된 바와 같이 발현될 수 있다.
뉴클레오티드 서열을 암호화하는 면역글로불린의 경우, 전사 프로모터는 예를 들어 인간 사이토메갈로바이러스일 수 있고, 프로모터 인핸서는 사이토메갈로바이러스 및 마우스/인간 면역글로불린일 수 있다.
일부 구현예에서, 설치류 세포에서 DNA 코딩 영역의 발현을 위해, 전사 프로모터는 바이러스 LTR 서열일 수 있고, 전사 프로모터 인핸서는 마우스 면역글로불린 중쇄 인핸서 및 바이러스 LTR 인핸서 중 하나 또는 둘 모두, 및 폴리아데닐화 및 전사 종료 영역일 수 있다. 다른 구현예에서, 기타 단백질을 암호화하는 DNA 서열은 포유동물 세포에서 단백질의 발현을 달성하기 위해 상기 언급된 발현 요소와 조합된다.
각 코딩 영역 또는 유전자 융합은 발현 벡터에 조립되거나 발현 벡터로 삽입된다. 가변 영역(들) 또는 그의 항원 결합 부분을 발현할 수 있는 수용 세포는 항체 또는 항체 폴리펩티드 또는 그의 항원 결합 부분을 암호화하는 뉴클레오티드로 단독으로 형질감염되거나, 또는 VH 및 VL 쇄 코딩 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오티드(들)로 공동 형질감염된다. 형질감염된 수용 세포는, 혼입된 코딩 영역의 발현을 허용하는 조건 하에서 배양되고 발현된 항체 쇄 또는 온전한 항체 또는 항원 결합 부분은 배양물로부터 회수된다.
일부 구현예에서, 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 암호화하는 코딩 영역을 포함하는 핵산은 수용 숙주 세포를 공동 형질감염시키는 데 사용되는 별도의 발현 벡터로 회합(assemble)된다. 각 벡터는 하나 이상의 선택 가능한 유전자를 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 2개의 선택 가능한 유전자, 즉 박테리아 시스템에서의 선택을 위해 설계된 첫 번째 선택 가능한 유전자 및 진핵 시스템에서의 선택을 위해 설계된 두 번째 선택 가능한 유전자가 사용되며, 여기서 각 벡터는 코딩 영역 세트를 가지고 있다. 이 전략은 먼저 박테리아 시스템에서 뉴클레오티드 서열의 생산을 먼저 지시하고 증폭을 허용하는 벡터를 생성한다. 이렇게 박테리아 숙주에서 생산되고 증폭된 DNA 벡터는 후속적으로 진핵 세포를 공동 형질감염시키는 데 사용되며, 원하는 형질감염된 핵산을 운반하는 공동-형질감염된 세포의 선택을 허용한다 (예를 들어, 항체 중쇄 및 경쇄를 코딩함). 박테리아 시스템에서 사용하기 위한 선택가능한 유전자의 비제한적 예는 암피실린에 대한 내성을 부여하는 유전자 및 클로람페니콜에 대한 내성을 부여하는 유전자이다. 진핵 형질감염체에서 사용하기 위한 선택가능한 유전자는 크산틴 구아닌 포스포리보실 트랜스퍼라제 유전자(gpt로 지정됨) 및 Tn5로부터의 포스포트랜스퍼라제 유전자(neo로 지정됨)를 포함한다. 대안적으로 VH 및 VL 쇄를 암호화하는 융합된 뉴클레오티드 서열은 동일한 발현 벡터에서 회합될 수 있다.
발현 벡터의 형질감염 및 항체 또는 그의 항원 결합 부분 또는 기타 결합제의 제조를 위해 수용 세포주는 차이니즈 햄스터 난소 세포주(예를 들어, DG44) 또는 골수종 세포일 수 있다. 골수종 세포는 형질감염된 면역글로불린 유전자에 의해 암호화된 면역글로불린을 합성, 회합 및 분비할 수 있으며 면역글로불린의 글리코실화 메커니즘을 보유한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 수용 세포는 재조합 Ig 생성 골수종 세포 SP2/0이다. SP2/0 세포는 형질감염된 유전자에 의해 암호화된 면역글로불린만을 생성한다. 골수종 세포는 배양액이나 마우스의 복강에서 성장할 수 있으며, 분비된 면역글로불린은 복수액에서 얻을 수 있다.
항체 또는 그의 항원 결합 부분 또는 기타 결합제를 암호화하는 발현 벡터는 형질전환, 형질감염, 원형질체 융합, 인산칼슘-침전, 및 디에틸아미노에틸(DEAE) 덱스트란과 같은 폴리양이온 적용과 같은 수단, 및 전기천공법, 직접 마이크로주입 및 마이크로발사체 충격과 같은 기계적 수단을 포함하는 임의의 다양한 적합한 수단에 의해 적절한 숙주 세포로 도입될 수 있다. 당업자에게 공지된 문헌[Johnston et al., 240 Science 1538 (1988)] 참조.
효모는 면역글로불린 중쇄 및 경쇄 제조에 있어 박테리아에 비해 특정 이점을 제공한다. 효모는 글리코실화를 포함하는 번역 후 펩티드 변형을 수행한다. 효모에서 원하는 단백질을 생산하는 데 사용할 수 있는 강력한 프로모터 서열과 높은 사본 수의 플라스미드를 활용하는 많은 재조합 DNA 전략이 존재한다. 효모는 복제된 포유동물 유전자 생성물의 리더 서열을 인식하고 리더 서열을 지닌 폴리펩티드( 즉, 프리폴리펩티드)를 분비한다. 예를 들어, 문헌[Hitzman et al., 11th Intl. Conf. Yeast, Genetics & Molec. Biol. (Montpelier, France, 1982)] 참조.
효모 유전자 발현 시스템은 생산 수준, 분비 및 항체의 안정성, 회합된 항체 및 그의 항원 결합 부분에 대해 일상적으로 평가될 수 있다. 효모가 글루코스가 농축된 배지에서 성장할 때 대량으로 생산되는 당분해 효소를 코딩하는 능동적으로 발현되는 유전자로부터의 프로모터 및 종결 요소를 포함하는 다양한 효모 유전자 발현 시스템이 이용될 수 있다. 알려진 당분해 유전자는 또한 매우 효율적인 전사 제어 신호를 제공할 수 있다. 예를 들어, 포스포글리세르산 키나아제(PGK) 유전자의 프로모터 및 종결 신호가 이용될 수 있다. 또 다른 예는 번역 신장 요소 1알파 프로모터이다. 효모에서 면역글로불린의 발현을 위한 최적의 발현 플라스미드를 평가하기 위해 다양한 접근법을 취할 수 있다. 문헌[II DNA Cloning 45, (Glover, ed., IRL Press, 1985) 및, 예컨대 미국 특허 공보 US 2006/0270045 A1] 참조.
박테리아 균주는 또한 본원에 기재된 항체 분자 또는 그의 항원 결합 부분 또는 기타 결합제의 제조를 위한 숙주로서 이용될 수 있다. 대장균(E. coli) W3110과 같은 대장균 K12 균주, 바실러스(Bacillus) 종, 살모넬라 티피뮤리움(Salmonella typhimurium) 또는 세라티아 마르세센스(Serratia marcescens)와 같은 장내세균 및 다양한 슈도모나스(Pseudomonas) 종이 사용될 수 있다. 레플리콘(replicon)을 함유하는 플라스미드 벡터 및 숙주 세포와 호환되는 종으로부터 파생된 제어 서열이 이들 박테리아 숙주와 관련하여 사용된다. 벡터는 복제 부위뿐만 아니라 형질전환된 세포에서 표현형 선택을 제공할 수 있는 특정 유전자를 운반한다. 박테리아에서 항체 및 그의 항원 결합 부분의 생성을 위한 발현 플라스미드를 평가하기 위해 많은 접근법이 취해질 수 있다 (Glover, 1985; Ausubel, 1987, 1993; Sambrook, 1989; Colligan, 1992-1996 참조).
숙주 포유동물 세포는 시험관 내 또는 생체 내에서 성장될 수 있다. 포유동물 세포는 리더 펩티드 제거, VH 및 VL 쇄의 접힘 및 조립, 항체 분자의 글리코실화 및 기능적 항체 및/또는 그의 항원 결합 부분의 분비를 포함하는, 번역 후 변형(post-translational modification)을 면역글로불린 분자에 제공한다.
항체 단백질의 생산을 위한 숙주로서 유용할 수 있는 포유동물 세포는 상기 기재된 림프계 유래의 세포에 더하여 베로(Vero) 또는 CHO-K1 세포와 같은 섬유아세포 유래의 세포를 포함한다. 면역글로불린 폴리펩티드를 발현하기 위해 사용될 수 있는 예시적인 진핵 세포는 COS 7 세포를 포함하는 COS 세포; 293-6E 세포를 포함하는 293 세포; CHO-S, CHO-K1 및 DG44 세포를 포함하는 CHO 세포; PERC6™ 세포(크루셀(Crucell)); 및 NSO 세포를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 특정 진핵 숙주 세포는 중쇄 및/또는 경쇄에 대해 원하는 번역 후 변형을 만드는 능력에 기초하여 선택된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, CHO 세포는 293 세포에서 생산된 동일한 폴리펩티드보다 시알화(sialylation) 수준이 더 높은 폴리펩티드를 생산한다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 항체 또는 그의 항원-결합 부분 또는 기타 결합제는 임의의 적합한 방법에 따라 폴리펩티드를 암호화하는 하나 이상의 핵산 분자로 조작되거나 형질감염된 동물의 생체 내에서 제조될 수 있다.
일부 구현예에서, 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 무세포(cell-free) 시스템에서 제조된다. 비제한적인 예시의 무세포 시스템은 예를 들어 문헌[Sitaraman et al., Methods Mol. Biol. 498: 229-44 (2009); Spirin, Trends Biotechnol. 22: 538-45 (2004); 및 Endo et al., Biotechnol. Adv. 21: 695-713 (2003)]에 기재되어 있다.
포유동물 세포에서 VH 및 VL 쇄의 발현을 위해 많은 벡터 시스템이 이용가능하다(Glover, 1985 참조). 손상되지 않은 항체를 얻기 위해 다양한 접근법을 따를 수 있다. 상기 논의된 바와 같이, 동일한 세포에서 VH 및 VL 쇄 및 선택적으로 관련된 불변 영역을 공동 발현하여 VH 및 VL 쇄의 완전한 사면체 H2L2 항체 또는 그의 항원 결합 부분으로의 세포 내 연결 및 결합을 달성할 수 있다. 공동 발현은 동일한 숙주에서 동일하거나 상이한 플라스미드를 사용하여 발생할 수 있다. VH 및 VL 쇄 또는 그의 항원 결합 부분을 암호화하는 핵산은 동일한 플라스미드에 배치될 수 있으며, 이후 세포로 형질감염되어 두 쇄를 모두 발현하는 세포를 직접 선택할 수 있다. 대안적으로, 세포는 하나의 쇄, 예를 들어 VL 쇄를 암호화하는 플라스미드로 먼저 형질감염된 후, 생성된 세포주를 제2의 선택가능한 마커를 함유하는 VH 쇄 플라스미드로 형질감염될 수 있다. 어느 한 경로를 통해 항체, 그의 항원 결합 부분 또는 기타 결합제를 생산하는 세포주는 강화된 특성, 예컨대 회합된 항체 또는 그의 항원 결합 부분의 더 높은 생산 또는 형질감염된 세포주의 향상된 안정성을 갖는 세포주를 생성하기 위해 추가 선택 가능한 마커와 함께 펩티드, VH, VL 또는 VH + VL 쇄의 추가 사본을 암호화하는 플라스미드로 형질감염될 수 있다.
또한, 식물은 미생물 또는 동물 세포의 대규모 배양을 기반으로 하는 재조합 항체 생산을 위한 편리하고 안전하며 경제적인 대체 발현 시스템으로서 부상했다. 항체 또는 항원 결합 부분은 식물 세포 배양물 또는 통상적으로 재배된 식물에서 발현될 수 있다. 식물에서의 발현은 전신적이거나 서브-세포 플라스티드(plastid)로 제한되거나 종자(배젖)로 제한될 수 있다. 예를 들어, 문헌[미국 특허 공보 2003/0167531; 미국 특허번호 6,080,560; 미국 특허번호 6,512,162; 및 WO 0129242] 참조. 여러 식물 유래 항체가 임상 시험을 포함하여 발전된 개발 단계에 도달했다 (예를 들어, Biolex, NC 참조).
손상되지 않은 항체의 경우, 항체의 가변 영역(VH 및 VL)은 일반적으로 면역글로불린 불변 영역(Fc)의 적어도 일부, 일반적으로 인간 면역글로불린의 일부에 연결된다. 인간 불변 영역 DNA 서열은 불멸화 B-세포와 같은 다양한 인간 세포로부터 잘 알려진 절차에 따라 분리될 수 있다 (예를 들어, 전체 내용이 본원에 참조로 포함된 WO 87/02671 참조). 항체는 경쇄 및 중쇄 불변 영역을 모두 포함할 수 있다. 중쇄 불변 영역은 CH1, 힌지, CH2, CH3 및 때때로 CH4 영역을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, CH2 도메인을 삭제하거나 생략할 수 있다.
대안적으로, 단일 쇄 항체의 제조를 위해 기재된 기술(예를 들어, 미국 특허번호 4,946,778; Bird, Science 242:423-42 (1988); Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883 (1988); and Ward et al., Nature 334:544-54 (1989)참조; 이들 전체 내용을 본원에 참조로서 포함됨)은 원하는 항원에 특이적으로 결합하는 단일 쇄 항체를 제조하도록 조정할 수 있다. 단일 쇄 항체는 아미노산 브릿지를 통해 Fv 영역의 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 연결하여 단일 쇄 폴리펩티드를 생성함으로써 형성된다. 대장균에서 기능성 Fv 단편을 회합하는 기술도 사용될 수 있다 (예를 들어, Skerra et al., Science 242:1038-1041 (1988) 참조; 그 전체 내용은 본원에 참조로 포함됨). 다른 결합제의 제조 방법은 위에 설명되어 있다.
손상되지 않은(예를 들어, 전체) 항체, 그의 이량체, 개별 경쇄 및 중쇄, 또는 그의 항원 결합 부분은 공지된 기술, 예를 들어, 면역흡착 또는 면역친화성 크로마토그래피, HPLC(고성능 액체 크로마토그래피)와 같은 크로마토그래피 방법, 황산암모늄 침전, 겔 전기영동 또는 이들의 조합에 의해 회수되고 정제될 수 있다. 일반적으로, 스콥스(Scopes), 단백질 정제(Springer-Verlag, NY, 1982)를 참조한다. 적어도 약 90% 내지 95% 이상의 균질성을 갖는 실질적으로 순수한 항체 또는 그의 항원 결합 부분이 유리하며, 98% 내지 99% 또는 그 이상의 균질성을 갖는 항체가 특히 약제학적 용도에 유리하다. 부분적으로 또는 원하는 대로 균질하게 정제되면 손상되지 않은 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 치료적으로 사용하거나 또는 분석 절차, 면역형광 염색 등을 개발하고 수행하는 데 사용할 수 있다. 일반적으로 문헌 [Vols. I & II Immunol. Meth. (Lefkovits & Pernis, eds., Acad. Press, NY, 1979 and 1981)]을 참조한다.
약제학적 제형화
일부 측면에서 결합제는 활성 성분을 포함하는 조성물에 관한 것이다(즉, 본원에 기재된 바와 같은 결합제, 또는 본원에 기재된 항체 또는 그의 항원-결합 부분 또는 기타 결합제를 암호화하는 핵산을 포함함). 일부 구현예에서, 조성물은 약제학적 조성물이다. 본원에 사용된 바와 같이, "약제학적 조성물"이라는 용어는 제약 산업에서 사용하기 위해 허용되는 약제학적으로 허용되는 담체와 조합된 활성제를 의미한다. "약제학적으로 허용되는"이라는 문구는 건전한 의학적 판단의 범위 내에서 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 또는 기타 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한하고, 합리적인 이익/위험 비율에 상응하는 화합물, 재료, 조성물 및/또는 투여 형태를 지칭하기 위해 사용된다.
그 안에서 용해되거나 분산된 활성 성분을 함유하는 약리학적 조성물의 제조는 당업계에서 잘 이해되고 임의의 특정 제형에 기초하여 제한될 필요는 없다. 전형적으로 이러한 조성물은 액체 용액 또는 현탁액으로서 주사가능한 것으로 제조된다; 그러나 사용 전에 액체에서 재수화에 적합한 고체 형태 또는 현탁액이 제조될 수도 있다. 제제는 또한 유화되거나 리포좀 조성물로서 제공될 수 있다. 항체 또는 그의 항원 결합 부분 또는 기타 결합제는 약제학적으로 허용되고 활성 성분과 호환되는 부형제와 함께 본원에 기재된 치료법에 사용하기에 적합한 양으로 혼합될 수 있다. 적합한 부형제는 예를 들어 물, 염수, 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올 등 및 이들의 조합이다. 또한, 원하는 경우, 약제학적 조성물은 활성 성분(예를 들어, 항체 또는 그의 항원 결합 부분 또는 기타 결합제)의 효과를 향상시키거나 유지하는 습윤제 또는 유화제, pH 완충제 등과 같은 소량의 보조 물질을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 약제학적 조성물은 그 안에 있는 성분의 약제학적으로 허용되는 염을 포함할 수 있다. 약제학적으로 허용되는 염은 예를 들어 염산 또는 인산과 같은 무기산, 또는 아세트산, 타르타르산, 만델산 등과 같은 유기산으로 형성되는 산부가염(폴리펩티드의 유리 아미노기로 형성됨)을 포함한다. 유리 카르복실기로 형성된 염은 또한 예를 들어 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘 또는 수산화철과 같은 무기 염기, 및 이소프로필아민, 트리메틸아민, 2-에틸아미노 에탄올, 히스티딘, 프로카인 등과 같은 유기 염기로부터 유래될 수 있다. 생리학적으로 허용되는 담체는 당업계에 잘 알려져 있다. 예시적인 액체 담체는 활성 성분(예를 들어, 항체 및/또는 그의 항원 결합 부분 또는 기타 결합제) 및 물을 함유하는 멸균 수용액이며, 생리학적 pH 값, 생리식염수 또는 둘 모두에서 인산나트륨, 인산염 완충 염수와 같은 완충액을 함유할 수 있다. 또한, 수성 담체는 하나 이상의 완충염뿐만 아니라 염화나트륨 및 염화칼륨, 덱스트로스, 폴리에틸렌 글리콜 및 기타 용질과 같은 염을 함유할 수 있다. 액체 조성물은 또한 물에 더하여 물을 제외하고 액체상을 함유할 수 있다. 그러한 추가적인 액상의 예시는 글리세린, 면실유와 같은 식물성 오일, 및 물-오일 에멀젼이다. 특정 장애 또는 병태의 치료에 효과적인 활성제의 양은 장애 또는 병태의 특성에 따라 달라지며, 표준 임상 기술에 의해 결정될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 항체 또는 그의 항원 결합 부분 또는 기타 결합제, 또는 항체 또는 그의 항원 결합 부분 또는 기타 결합제를 암호화하는 핵산을 포함하는 약제학적 조성물은 동결건조물일 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 치료적 유효량의 결합제 또는 약제학적 조성물을 포함하는 주사기가 제공된다.
염증성 및 자가면역 질환의 치료
일부 측면에서, 본원에 기재된 바와 같은 결합제는 염증성 질환을 갖는 대상체에게 본원에 기재된 바와 같은 결합제 또는 약제학적 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법(들)에 사용될 수 있다. 일부 측면에서, 본원에 기술된 바와 같은 결합제는 자가면역 질환을 앓거나 자가항원에 대한 면역 반응을 갖거나 자가면역 장애(본원에서 자가면역 질환으로 집합적으로 지칭될 수 있음)를 유발하거나 발병시키는 항원에 대한 면역 반응을 갖는 대상체에게 본원에 기재된 바와 같은 결합제 또는 약제학적 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법(들)에 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 자가면역 질환에 대한 치료가 필요하다. 일부 구현예에서, 자가면역 질환을 치료하는 방법이 제공되며, 이는 대상체의 병원성 면역 세포의 수 또는 활성을 감소시키기에 효과적인 양으로 이를 필요로 하는 대상체에게 본원에 기재된 임의의 결합제 또는 본원에 기재된 약제학적 조성물을 투여하는 것을 포함하고 이에 따라 자가면역 질환의 증상이 개선된다. 일부 구현예에서, 병원성 면역 세포에 의해 매개되는 면역 반응을 억제하는 방법이 제공되며, 이는 본원에 기재된 임의의 결합제 또는 본원에 기재된 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그(활성화 트레그)를 활성화 또는 자극하기에 효과적인 양으로 CD8+KIR+ T 조절 세포(트레그)와 접촉시키는 것을 포함하고, 이에 따라 병원성 면역 세포의 수 또는 활성이 감소된다. 일부 구현예에서, 자가항원에 대한 면역 반응을 억제하는 방법이 제공되며, 이는 임의의 본원에 기재된 결합제 또는 본원에 기재된 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극하기에 효과적인 양으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 이에 따라 자가항원에 반응하는 병원성 면역 세포의 수 또는 활성이 감소된다. 일부 구현예에서, 자가면역 장애를 유발하거나 발병을 초래하는 자가항원에 대한 면역 반응을 예방하는 방법이 제공되며, 이는 임의의 본원에 기재된 결합제 또는 본원에 기재된 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극하기에 효과적인 양으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 이에 따라 대상체에서 자가항원에 반응하는 병원성 면역 세포의 수 또는 활성이 감소하거나 또는 자가항체의 역가가 감소한다. 일부 구현예에서, 자가면역 장애를 유발하거나 발병을 초래하는 자가항원에 대한 면역 반응을 억제하는 방법이 제공되며, 이는 임의의 본원에 기재된 결합제 또는 본원에 기재된 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극하기에 효과적인 양으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 이에 따라 대상체에서 자가항원에 반응하는 병원성 면역 세포의 수 또는 활성이 감소하거나 또는 자가항체의 역가가 감소한다. 일부 구현예에서, 자가면역 장애를 유발하거나 발병을 초래하는 항원 또는 자가항원에 대한 면역 반응을 억제하는 방법이 제공되며, 이는 임의의 본원에 기재된 결합제 또는 본원에 기재된 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극하기에 효과적인 양으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 이에 따라, 대상체에서 항원 또는 자가항원에 대한 면역 반응이 감소되거나 억제된다.
본원에 사용된 용어 "자가항원"은 일반적으로 면역계(예를 들어, 건강한 인간 면역계)에 의해 자기로서 인식되는 항원(예를 들어, 세포 표면 단백질 또는 다른 항원)을 의미한다. 항원 또는 자가항원은 자가면역 질환 또는 병태에서 체액성 또는 세포 매개 면역 반응의 표적이 되거나 또는 과도한 면역 반응(총칭하여 "자가면역 질환")을 유발한다. 본원에 사용된 바와 같이, CD8+KIR+ 트레그 또는 활성화된 CD8+KIR+ 트레그의 "활성화 또는 자극"은 면역 반응, 특히 자가항원에 대한 면역 반응을 억제하거나 또는 자가면역 장애를 유발하거나 발병을 초래하는 자가항원에 대한 면역 반응을 억제하는 능력과 같은 이러한 세포의 조절 T 세포 기능의 증가를 의미한다. CD8+KIR+ 트레그의 활성화 또는 자극은 이러한 세포에 대한 억제 효과를 제거하여, CD8+KIR+ 트레그를 복원시키는 것(예를 들어, 대상체 또는 질병의 발병 전에 치료를 필요로 하는 대상체에서 면역 체계에 대한 균형을 복원시키거나 또는 균형 잡힌 면역 활성을 복원시키는 것)을 포함한다. CD8+KIR+ 트레그의 활성화 또는 자극에는 CD4+ 세포, B 세포, 또는 면역 반응을 매개하는 다른 세포의 제거, 예를 들어 그러한 세포의 세포용해와 같은 제거도 포함될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 병원성 면역세포는 자가항원에 반응하거나 자가 항원에 대한 반응을 유도하는 면역세포를 말한다. 이러한 병원성 면역 세포의 예는 당업계에 공지된 바와 같이 자가반응성 CD4+ T 세포, 자가항체 생성 B 세포, 자가 항원 제시 수지상 세포 및 기타 자가 항원 제시 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그는 생체 내에서 결합제와 접촉한다. 일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그는 생체 외에서 결합제와 접촉한다. 활성화된 CD8+KIR+ 트레그는 이후 이를 필요로 하는 대상체에게 유효량으로 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 활성화된 CD8+KIR+ 트레그는 자가반응성 CD4+ T 세포, 자가항체 생성 B 세포, 자가 항원 제시 수지상 세포 또는 자가 항원 제시 세포와 같은 병원성 면역 세포에 억제 효과를 발휘한다. 일부 구현예에서, 활성화된 CD8+KIR+ 트레그는 자가반응성 CD4+ T 세포, 자가항체 생산 B 세포 및 자가 항원 제시 수지상 세포와 같은 병원성 면역 세포에 억제 효과를 발휘한다. 일부 구현예에서, 활성화된 CD8+KIR+ 트레그는 자가반응성 CD4+ T 세포, 자가항체 생성 B 세포 및 자가 항원 제시 수지상 세포와 같은 병원성 면역 세포를 고갈시킨다. 일부 구현예에서, 활성화된 CD8+KIR+ 트레그는 대상체에서 병원성 면역 세포의 병원성 효과를 조절하고 자가항체의 역가를 감소시킨다. 일부 구현예에서, 활성화된 CD8+KIR+ 트레그는 대상의 자가항체 역가를 감소시킨다.
일부 구현예에서, 결합제는 본원에 기재된 임의의 결합제로부터 선택되며, 각 경우에 이펙터 기능 활성이 감소했거나 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없다. 일부 구현예에서, 감소된 이펙터 기능 활성이 감소되거나 ADCC, ADCP 또는 CDC 이펙터 기능 활성이 없다. 일부 구현예에서, 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없다는 것은 실질적으로 ADCC, ADCP 및 CDC 이펙터 기능 활성이 없다는 것을 의미한다. 일부 구현예에서, 결합제는 Fc 도메인 또는 영역이 결여되어 있고 감소된 이펙터 기능을 갖거나 실질적으로 이펙터 기능이 없다. 일부 구현예에서, 결합제는 Fc 도메인 또는 영역의 아미노산 치환으로 인해 이펙터 기능이 감소되거나 실질적으로 이펙터 기능이 없는 Fc 도메인 또는 영역을 갖는다. 일부 구현예에서, 결합제는 Fc 도메인 또는 영역의 아미노산 치환, 예컨대 Fc 눌 치환으로 인해 이펙터 기능이 감소되거나 실질적으로 이펙터 기능이 없는 Fc 도메인 또는 영역을 갖는다. 일부 구현예에서, 결합제는 Fc 도메인 또는 영역이 결여되어 있거나 또는 하나 이상의 Fc감마 수용체에 대한 결합이 감소된 Fc 도메인 또는 영역을 갖거나 또는 Fc 눌 도메인이다. 일부 구현예에서, 결합제는 Fc 도메인 또는 영역이 결여되어 있다. 일부 구현예에서, 결합제는 하나 이상의 Fc감마 수용체에 대한 결합이 감소된 Fc 도메인 또는 영역을 갖거나 또는 Fc 눌 도메인이다. 일부 구현예에서, 결합제는 Fc 도메인 또는 영역 내의 아미노산 치환으로 인해 하나 이상의 Fc감마 수용체에 대한 결합이 감소된 Fc 도메인 또는 영역을 갖는다.
임의의 특정 이론에 구속되고자 하는 것은 아니며, 결합제에 의한 이펙터 기능 활성의 감소 또는 부재는 결합제와 다른 세포 유형(즉, 비-CD8+KIR+ 트레그)의 상호작용을 제한하고/하거나 결합제에 의해 결합된 CD8+KIR+ 트레그의 고갈을 제한할 수 있다.
일부 구현예에서, 치료를 필요로 하는 대상체는 자가면역 질환을 가지고 있다. 일부 구현예에서, 치료를 필요로 하는 대상체는 예컨대 하기와 같은 자가면역 질환을 갖는다: 자가면역 유도 간염, 에디슨병(Addison's Disease), 원형 탈모증, 알포트 증후군(Alport's Syndrome), 강직성 척추염, 항인지질 증후군, 관절염, 회충증, 아스페르길루스증 아토피성 알레르기, 아토피성 피부염, 아토피성 비염, 자가면역성 용혈성 빈혈, 자가면역성 간염, 자가면역성 근염, 베체트병(Behcet's Disease), 조류애호가폐, 기관지천식, 카플란증후군(Caplan's Syndrome), 심근병증, 복강병, 샤가스병(Chagas' Disease), 만성 사구체신염, 만성 이식편 대 숙주 질환, 코간증후군(Cogan's Syndrome), 한랭응집소병, CREST 증후군, 크론병, 한랭글로불린혈증, 쿠싱 증후군, 피부근염, 원판상 루푸스, 드레셔 증후군(Dressier's Syndrome), 이튼-람베르트 증후군(Eaton-Lambert Syndrome), 뇌척수염, 내분비성 눈병증, 홍반, 에반 증후군(Evan's Syndrome), 펠티 증후군(Felty's Syndrome), 섬유근육통, 푸크 순환염(Fuch's Cyclitis), 위 위축, 위장관 알레르기, 거대 세포 동맥염, 사구체 신염, 굿패스쳐 증후군(Goodpasture's Syndrome), 이식편 대 숙주 질환, 그레이브스병(Graves' Disease), 길랭-바레병(증후군), 하시모토 갑상선염(Hashimoto's Thyroiditis), 용혈성 빈혈, 헤노흐-쇤라인 자반증(Henoch-Schonlein Purpura), 과점성 증후군, 특발성 부신 위축, 특발성 폐섬유증, 특발성 혈소판감소성 자반증, IgA 신장병증, 염증성 장질환(증후군), 인슐린 의존성 당뇨병(IDDM 또는 1형), 소아 관절염, 소아 특발성 관절염, 소아 당뇨병(1형), 램버트-이튼 증후군 후천성 척추염(Lambert-Eaton Syndrome Laminitis), 편평 태선, 루포이드 간염, 루푸스, 루푸스 신염, 림프구 감소증, 마크로글로불린혈증, 메니에르병 질병(Meniere's Disease), 혼합 결합 조직 질환, 기원이 불분명한 단일 클론 감마병증, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 심근염, 천포창/유천포창(Pemphigus/Pemphigoid), 악성 빈혈, POEMS 증후군, 다선 증후군, 결절 다발 동맥염, 다발성 근염, 조기 치매, 원발성 무감마글로불린 혈증, 원발성 담즙성 간경화/담관염, 건선, 건선성 관절염, 레이노 현상, 라이터 증후군(Reiter's Syndrome), 류마티스 열, 류마티스 관절염, 샘프터 증후군(Sampter's Syndrome), 슈미트 증후군(Schmidt's Syndrome), 경피증/전신 경화증, 슐만 증후군(Shulman's Syndrome), 쇼르겐 증후군, 강직 증후군, 교감성 안염, 전신성 홍반성 루푸스, 타까야수동맥염(Takayasu's Arteritis), 측두 동맥염, 갑상선염, 혈소판 감소증, 갑상선 중독증, 독성 표피 괴사 용해증, B형 인슐린 저항성, I형 당뇨병, 궤양성 결장염, 포도막염, 백반증, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증(Waldenstrom's Macroglobulinemia) 및/또는 베게너 육아종증(Wegener's Granulomatosis).
일부 구현예에서, 자가면역 질환은 자가면역 간염, 셀리악병, 크론병, 소아 특발성 관절염, 염증성 장질환(IBD), 인슐린 의존성 당뇨병(IDDM 또는 1형 당뇨병), 루푸스 신염, 중증 근무력증, 심근염, 다발성 경화증(MS), 천포창/유천포창, 원발성 담즙성 간경변/담관염, 류마티스 관절염(RA), 경피증/전신 경화증, 쇼그렌 증후군(SjS), 전신성 홍반성 루푸스(SLE) 또는 궤양성 대장염이다.
일부 구현예에서, 자가면역 질환은 자가면역 간염, 셀리악병, 크론병, 염증성 장질환(IBD), 인슐린 의존성 당뇨병(IDDM 또는 1형 당뇨병), 다발성 경화증(MS), 류마티스 관절염(RA), 전신성 홍반성 루푸스(SLE) 또는 궤양성 대장염이다.
본원에 기재된 방법은 자가면역 질환을 갖는 대상체에게 결합제의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함한다. 본원에 기재된 바와 같은, "치료적 유효량", "효과적인 양", "유효량" 및 "유효 용량"이라는 어구는 자가면역 질환의 치료, 관리, 재발 방지, 지연 또는 발병의 예방에서 치료적 이점을 제공하는 본원에 기재된 결합제의 양, 예를 들어, 자가면역 질환의 적어도 하나의 증상, 징후 또는 마커의 통계적으로 유의한 감소를 제공하는 양을 지칭한다. 치료적 유효량의 결정은 당업자의 능력 범위 내에 있다. 일반적으로, 치료적 유효량은 대상체의 병력, 연령, 병태 및 성별뿐만 아니라 대상체의 의학적 병태의 중증도 및 유형, 및 다른 약제학적 활성 제제의 투여에 따라 달라질 수 있다.
대상체에서 증상, 병리학, 질병 진행 또는 질병 발적을 감소시키는 방법이 고려된다. 본원에 사용된 "대상체"는 인간 또는 동물을 의미한다. 일반적으로 동물은 영장류, 설치류, 가축 또는 사냥 동물 같은 척추동물이다. 영장류는 침팬지, 시노몰구스 원숭이, 거미원숭이, 마카크(macaque), 예를 들어 레셔스(Rhesus)를 포함한다. 설치류에는 생쥐, 래트, 우드척, 흰족제비, 토끼 및 햄스터가 포함된다. 가축 및 사냥 동물은 소, 말, 돼지, 사슴, 들소, 버팔로, 고양이과 종, 예를 들어 집고양이; 개과 종, 예를 들어 개, 여우, 늑대; 조류 종, 예를 들어 닭, 에뮤, 타조; 및 물고기, 예를 들어 송어, 메기 및 연어를 포함한다. 특정 구현예에서, 대상체는 포유동물, 예를 들어 영장류, 예를 들어 인간이다. "환자", "개체" 및 "대상체"라는 용어는 같은 의미로 사용된다.
바람직하게는 대상체는 포유동물이다. 포유동물은 인간, 비인간 영장류, 마우스, 래트, 개, 고양이, 말 또는 소일 수 있지만, 이들 예시에 제한되지 않는다. 예를 들어, 각종 자가면역 질환의 동물 모델을 대표하는 대상체로서, 인간 이외의 포유동물이 유리하게 이용될 수 있다. 또한, 본원에 기재된 방법을 사용하여 가축 및/또는 애완동물을 치료할 수 있다. 대상체는 수컷 또는 암컷일 수 있다. 특정 구현예에서, 대상체는 인간이다.
대상체는 이전에 자가면역 질환으로 진단받거나 이를 앓는 것으로 확인되었고 치료가 필요한 자일 수 있지만, 자가면역 질환에 대한 치료를 이미 받았을 필요는 없다. 대안적으로, 대상체는 치료가 필요한 자가면역 질환을 가진 자로 이전에 진단되지 않은 자일 수도 있다. 대상체는 위험 인자를 나타내지 않는 자가면역 질환과 관련된 병태 또는 하나 이상의 합병증에 대해 하나 이상의 위험 인자를 나타내는 자일 수 있다. 자가면역 질환에 대한 치료가 "필요한 대상체"는 그 질병을 갖고 있거나 그 질병을 갖는 것으로 진단된 대상체일 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체가 자가면역 장애를 유발하거나 발병을 초래할 수 있는 항원 또는 자가항원에 대한 면역 반응을 발달시킬 위험이 있는 경우 대상체이면 치료가 필요하다. 다른 구현예에서, 자가면역 질환이 "발달할 위험이 있는" 대상체는 질병 또는 병태가 발달할 위험이 있는 것으로 진단된 대상체를 의미한다.
본원에 기재된 바와 같이, 질환, 장애 또는 의학적 병태(예: 자가면역 질환)와 관련하여 사용되는 용어 "치료하다", "치료", "치료하는" 또는 "개선(amelioration)"이라는 용어는 증상 또는 병태의 진행 또는 심각성을 역전, 완화, 개선, 억제, 둔화 또는 중지시키는 것을 목적으로 하는 병태에 대한 치료적 처치를 의미한다. 용어 "치료하는"은 병태 또는 질환의 적어도 하나의 역효과 또는 증상을 감소시키거나 경감시키는 것을 포함한다. 치료는 일반적으로, 하나 이상의 증상이나 임상 지표가 감소할 때 "효과적"이다. 또는 병태의 진행이 감소하거나 중단되면 치료가 "효과적"이다. 즉, "치료"는 증상 또는 지표의 개선뿐만 아니라 치료가 없을 때 예상되는 증상의 중단 또는 적어도 진행 또는 악화의 둔화를 포함할 수 있다. 유익하거나 원하는 임상 결과에는 하나 이상의 증상 감소, 대상체의 질환 발적 감소, 하나 이상의 증상(들)의 완화, 결핍 정도의 감소, 자가면역 질환의 안정화(즉, 악화되지 않음), 또는 자가면역 질환의 발병 또는 진행의 예방, 지연 또는 둔화가 포함되지만, 이에 제한되지 않는다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "투여하는"은 본원에 기재된 바와 같은 결합제 또는 본원에 기재된 바와 같은 결합제를 암호화하는 핵산을 (예컨대, 대상체에 투여에 의해) CD8+KIR+ 트레그에 대한 결합제의 결합을 초래하는 방법 또는 경로에 의해 접촉시키는 것을 지칭한다. 유사하게, 본원에 기재된 바와 같은 결합제 또는 상기 결합제를 암호화하는 본원에 기재된 핵산을 포함하는 약제학적 조성물은 대상체에서 효과적인 치료를 초래하는 임의의 적절한 경로에 의해 투여될 수 있다.
결합제의 투여량 범위는 효능에 따라 달라지며 원하는 효과, 예를 들어, 하나 이상의 증상 감소, 대상체의 질병 발작 감소, 하나 이상의 증상 완화, 결핍 정도 감소, 자가면역 질환의 안정된(즉, 악화되지 않은) 상태, 또는 자가면역 질환의 발병 또는 진행의 예방, 지연 또는 둔화를 생성하기에 충분히 많은 양을 포함한다. 투여량은 용납할 수 없는 부작용을 일으킬 정도로 많아서는 안 된다. 일반적으로, 투여량은 대상체의 연령, 병태 및 성별에 따라 달라질 것이며 당업자에 의해 결정될 수 있다. 임의의 합병증이 발생할 경우 개별 의사가 투여량을 조정할 수도 있다. 일부 구현예에서, 투여량은 약 0.01 mg/kg 체중 내지 약 20 mg/kg 체중 범위이다. 일부 구현예에서, 투여량은 약 0.5 mg/kg 체중 내지 약 15 mg/kg 체중 범위이다. 일부 구현예에서, 용량 범위는 약 0.5 mg/kg 체중 내지 약 5 mg/kg 체중이다. 대안적으로, 용량 범위는 1 ug/mL에서 1000 ug/mL 사이의 혈청 수준을 유지하도록 적정될 수 있다.
일부 구현예에서, 대상체는 예를 들어 급성 자가면역 질환 또는 병태의 치료를 위해 본원에 기재된 임의의 결합제의 단일 용량을 투여받는다. 일부 구현예에서, 대상체는 예를 들어 자가면역 질환 또는 병태로 이어질 수 있는 면역 반응의 예방을 위해 본원에 기재된 임의의 결합제의 단일 용량을 투여받는다. 일부 구현예에서, 대상체는 예를 들어 만성 자가면역 질환 또는 병태의 치료와 같이 본원에 기재된 임의의 결합제의 반복된 용량을 투여받는다. 일부 구현예에서, 대상체는 예를 들어 자가면역 질환 또는 병태로 이어질 수 있는 면역 반응의 예방을 위해 본원에 기재된 임의의 결합제의 반복된 용량을 투여받는다. 일부 구현예에서, 용량은 몇 주, 몇 달 또는 몇 년 동안, 매주, 격주로, 3주마다, 매월, 격월로, 또는 6개월마다 투여된다. 치료 기간은 대상체의 임상 경과 및 치료에 대한 반응성에 따라 다르다.
일부 구현예에서, 용량을 정맥 내로 투여할 수 있다. 일부 구현예에서, 정맥내 투여는 약 10분 내지 약 4시간의 기간에 걸쳐 발생하는 주입일 수 있다. 일부 구현예에서, 정맥내 투여는 약 30분 내지 약 90분의 시간에 걸쳐 발생하는 주입일 수 있다. 일부 구현예에서, 용량을 피하로 투여할 수 있다.
본원에 기재된 임의의 결합제를 함유하는 약제학적 조성물은 단위 용량으로 투여될 수 있다. 약제학적 조성물과 관련하여 사용될 때 용어 "단위 용량"은 대상체에 대한 단일 투여량으로서 적합한 물리적으로 분리된 단위를 지칭하며, 각각의 단위는 생리적으로 허용되는 필요한 희석제(예: 담체 또는 비히클)와 관련하여 원하는 치료 효과를 내도록 계산된 소정량의 활성 물질(예를 들어, 결합제)을 함유한다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 임의의 결합제의 투여는 감소된 전신 염증성 사이토카인, 질병에 의해 영향을 받는 조직에서 감소된 병리학, 감소된 발적 빈도 및/또는 중증도, 질병과 관련 감소된 증상의 자가 보고, 하나 이상의 증상(들)의 완화, 및/또는 자가면역 질환의 발병 또는 진행의 예방, 지연 또는 둔화와 같은 개선된 치료 결과를 초래할 수 있다.
일부 구현예에서, 결합제 또는 본원에 기재된 임의의 결합제의 약제학적 조성물은 면역요법과 함께 투여된다. 본원에 사용된 바와 같이, "면역요법"은 대상체 자신의 면역 체계를 조절하도록 고안된 치료 전략을 의미한다. 면역요법의 예에는 체크 포인트 억제제 및 조절제와 같은 항체, 및 시클로스포린, 시클로스포린 A, 마이코페닐레이트 모페틸, 시롤리무스, 타크로리무스, 에타너셉트, 프레드니손, 아자티오프린, 메토트렉세이트 시클로포스파미드, 프레드니손, 아미노카프로산, 클로로퀸, 히드록시클로로퀸, 히드로코르티손, 덱사메타손, 클로람부실, DHEA, 다나졸, 브로모크립틴, 멜록시캄, 인플릭시맙, 아바타셉트, 벨라타셉트, 및 아달리무맙과 같은 면역억제제가 포함되나, 이에 제한되지 않는다.
이식 합병증의 치료
일부 구현예에서, 이식편 대 숙주 질환 또는 GVHD와 관련된 이식의 합병증을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 이식에 대한 숙주 면역 반응을 억제하기 위해 이식을 받은 대상체에게 본원에 기재된 결합제 또는 약제학적 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 GVHD의 합병증을 감소시키는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 이식과 관련된 면역 반응을 억제하기 위해 이식을 받은 대상체에게 본원에 기재된 결합제 또는 약제학적 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 GVHD의 합병증을 감소시키는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 이식을 받았고 GVHD를 겪고 있는 대상체에게 본원에 기재된 결합제 또는 약제학적 조성물을 투여하는 것을 포함하는, GVHD를 감소시키는 방법이 제공되며, 이에 의해 GVHD의 증상이 감소된다. 일부 구현예에서, 이식을 받았고 GVHD를 겪고 있는 대상체에게 본원에 기재된 결합제 또는 약제학적 조성물을 투여하는 것을 포함하는, GVHD 억제 방법이 제공되며, 이에 의해 GVHD가 억제되거나 감소된다. 일부 구현예에서, 이식을 받은 대상체로부터의 CD8+KIR+ T 조절 세포(트레그)와 본원에 기재된 결합제 또는 약제학적 조성물을 접촉시키는 것을 포함하는, GVHD를 억제 또는 감소시키는 방법이 제공되며, 이에 의해 CD8+KIR+ T 조절 세포(트레그)가 활성화된다. 일부 구현예에서, 이식을 받은 대상체로부터의 CD8+KIR+ T 조절 세포(트레그)와 본원에 기재된 결합제 또는 약제학적 조성물을 접촉시키는 것을 포함하는, GVHD를 억제 또는 감소시키는 방법이 제공되며, 이에 의해 이식의 CD8+KIR+ T 조절 세포(트레그)가 고갈된다. 일부 구현예에서, 이식을 받은 대상체로부터의 CD8+KIR+ T 조절 세포(트레그)와 본원에 기재된 결합제 또는 약제학적 조성물을 접촉시키는 것을 포함하는, GVHD를 억제 또는 감소시키는 방법이 제공되며, 이에 의해 CD8+KIR+ T 조절 세포(트레그)가 고갈된다.
일부 구현예에서, 대상체는 조혈 줄기세포 이식, 제대혈 줄기세포 이식, 유도 만능 줄기세포 유래 전구세포 또는 분화세포 이식, 골수 이식 또는 고형 장기 이식을 받았다. 이식은 전형적으로 동종 이식이다. 일부 구현예에서, 대상체는 조혈 줄기세포 이식, 제대혈 줄기세포 이식, 유도 만능 줄기세포 유래 전구세포 또는 분화세포 이식, 골수 이식 또는 고형 장기 이식을 받았으며, GVHD를 겪고 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 조혈 줄기세포 이식, 제대혈 줄기세포 이식, 유도 만능 줄기세포 유래 전구세포 또는 분화세포 이식, 골수이식 또는 고형 장기 이식을 받았고 GVHD를 겪을 위험이 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 조혈 줄기세포 이식을 받았고 GVHD를 겪고 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 조혈 줄기세포 이식을 받았고 GVHD를 겪을 위험이 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 제대혈 줄기세포 이식을 받았고 GVHD를 겪고 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 제대혈 줄기세포 이식을 받았으며 GVHD를 겪을 위험이 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 유도 만능 줄기세포 유래 전구세포 또는 분화세포 이식을 받았고 GVHD를 겪고 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 유도 만능 줄기세포 유래 전구세포 또는 분화세포 이식을 받았고 GVHD를 겪을 위험이 있다. 일부 구현예에서, 대상체가 골수 이식을 받았고 GVHD를 겪고 있다. 일부 구현예에서, 대상체가 골수 이식을 받았고 GVHD를 겪을 위험이 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 고형 장기 이식을 받았고 GVHD를 겪고 있다. 일부 구현예에서, 대상체가 고형 장기 이식을 받았고 GVHD를 겪을 위험이 있다.
일부 구현예에서, GVHD는 CD4 T 세포와 같은 병원성 면역 세포의 고갈에 의해 억제되거나 감소한다. 일부 구현예에서, GVHD는 이식으로부터의 CD8+KIR+ 트레그와 같은 병원성 면역 세포의 고갈에 의해 억제되거나 감소한다. 일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그는 생체 내에서 결합제와 접촉한다. 일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그는 생체 외에서 결합제와 접촉한다. 활성화된 CD8+KIR+ 트레그는 이후 이를 필요로 하는 대상체에게 유효량으로 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 결합제는 본원에 기재된 임의의 결합제로부터 선택되며, 각 경우에 이펙터 기능 활성이 감소되거나 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없다. 일부 구현예에서, 감소된 이펙터 기능 활성이 감소되거나 또는 ADCC, ADCP 또는 CDC 이펙터 기능 활성이 없다. 일부 구현예에서, 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없다는 것은 실질적으로 ADCC, ADCP 및 CDC 이펙터 기능 활성이 없다는 것을 의미한다. 일부 구현예에서, 결합제는 Fc 도메인 또는 영역이 결여되어 있고 감소된 이펙터 기능을 갖거나 실질적으로 이펙터 기능이 없다. 일부 구현예에서, 결합제는 감소된 이펙터 기능을 갖는 Fc 도메인 또는 영역을 갖거나 또는 아미노산 치환으로 인해 실질적으로 이펙터 기능이 없는 Fc 도메인 또는 영역을 갖는다. 일부 구현예에서, 결합제는 감소된 이펙터 기능을 갖는 Fc 도메인 또는 영역을 갖거나 또는 아미노산 치환, 예컨대 Fc 눌 치환으로 인해 실질적으로 이펙터 기능이 없는 Fc 도메인 또는 영역을 갖는다. 일부 구현예에서, 결합제는 Fc 도메인 또는 영역이 결여되어 있거나 또는 하나 이상의 Fc감마 수용체에 대한 결합이 감소된 Fc 도메인 또는 영역을 갖거나 또는 Fc 눌 도메인이다. 일부 구현예에서, 결합제는 Fc 도메인 또는 영역이 없다. 일부 구현예에서, 결합제는 하나 이상의 Fc감마 수용체에 대한 결합이 감소된 Fc 도메인 또는 영역을 갖거나 또는 Fc 눌 도메인이다. 일부 구현예에서, 결합제는 Fc 도메인 또는 영역 내의 아미노산 치환으로 인해 하나 이상의 Fc감마 수용체에 대한 결합이 감소된 Fc 도메인 또는 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, 결합제는 본원에 기재된 임의의 결합제로부터 선택되며, 각 경우에 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는다. 일부 구현예에서, 이펙터 기능 활성은 ADCP 및/또는 CDC 이펙터 기능 활성과 조합된 ADCC이다. 일부 구현예에서, 이펙터 기능 활성을 갖는다는 것은 ADCC, ADCP 및 CDC 이펙터 기능 활성을 갖는다는 것을 의미한다. 다양한 구현예에서, 이러한 결합제는 Fc 도메인을 갖거나 또는 하나 이상의 Fc감마 수용체에 결합하는 Fc 도메인을 갖는다.
임의의 특정 이론에 구속되고자 하는 것은 아니며, 결합제에 의한 이펙터 기능 활성의 감소 또는 부재는 결합제와 다른 세포 유형(즉, 비 CD8+KIR+ 트레그)의 상호작용을 제한하고/하거나 CD8+KIR+ 트레그의 고갈을 제한할 수 있다. 대조적으로, 결합제에 의한 이펙터 기능 활성의 존재는 CD8+KIR+ 트레그가 고갈되도록 면역 반응을 편향시키는 것으로 여겨진다.
일부 구현예에서, 이식은 줄기세포 이식, 골수 이식 또는 고형 장기 이식이다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "이식"은 한 대상체로부터 다른 대상체에게 이식되거나, 동일한 대상체 내에서(예를 들어, 대상체 내의 다른 영역으로) 이식된 장기, 조직 또는 세포를 의미한다. 간, 신장, 심장 또는 폐와 같은 장기, 또는 기타 신체 부위(예컨대 뼈, 또는 골수와 같은 골격 기질, 피부와 같은 조직, 각막, 창자, 내분비선, 또는 줄기세포, 또는 다양한 유형들, 또는 조혈 줄기세포를 포함하는 조혈 세포 및 전구 세포, 제대혈 줄기세포 및 유도 만능 줄기세포 유래 전구세포 또는 분화세포)는 모두 이식의 예이다. 일부 구현예에서, 고형 장기 이식은 간, 신장, 폐, 췌장 및/또는 심장 이식이다. 이식이라는 용어에는 이식편(graft)이 포함된다. 이식은 동종이식(allograft)(또는 동종이식(allogeneic graft)) 또는 이종이식일 수 있다. 용어 "동종이식"은 한 종의 유전적으로 동일하지 않은 두 구성원 간의 이식을 의미한다. "이종이식"이라는 용어는 다른 종의 구성원 간의 이식을 의미한다.
일부 구현예에서, 이식은 골수 이식이다. 일부 구현예에서, 이식은 조혈 줄기세포 이식이다. 일부 구현예에서, 이식은 제대혈 줄기세포 이식이다. 일부 구현예에서, 이식은 유도 만능 줄기세포 유래 전구세포 또는 분화세포 이식이다.
일부 구현예에서, 대상체는 이식편 대 숙주 질환 또는 GVHD를 앓고 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 GVHD에 걸릴 위험이 있다.
본원에 기재된 방법은 결합제의 치료적 유효량을 이식을 받는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 본원에 기재된 바와 같이 "치료적 유효량", "효과적인 양", "유효량" 및 "유효 용량"이라는 어구는 이식과 관련된 GVHD의 관리에 치료적 이점을 제공하는 본원에 기재된 결합제의 양을 지칭할 수 있다. 일부 구현예에서, 치료적 이점은 GVHD 발병의 지연 또는 예방이다. 일부 구현예에서, 치료적 이점은 GVHD의 적어도 하나의 증상, 징후 또는 마커의 통계적으로 유의미한 감소이다. 치료적 유효량의 결정은 당업자의 능력 범위 내에 있다. 일반적으로, 치료적 유효량은 대상체의 병력, 연령, 병태 및 성별 뿐만 아니라 대상체의 의학적 상태의 중증도 및 유형, 및 다른 약제학적 활성 제제의 투여에 따라 달라질 수 있다.
이식을 받은 대상체에서 GVHD의 증상을 감소시키거나, GVHD를 감소시키거나, 예방하는 방법이 고려된다. 본원에 사용된 "대상체"는 인간 또는 동물을 의미한다. 일반적으로 동물은 영장류, 설치류, 가축 또는 사냥 동물 같은 척추동물이다. 영장류는 침팬지, 시노몰구스 원숭이, 거미원숭이, 마카크, 예를 들어 레셔스를 포함한다. 설치류에는 생쥐, 래트, 우드척, 흰족제비, 토끼 및 햄스터가 포함된다. 가축 및 사냥 동물은 소, 말, 돼지, 사슴, 들소, 버팔로, 고양이과 종, 예를 들어 집고양이; 개과 종, 예를 들어 개, 여우, 늑대; 조류 종, 예를 들어 닭, 에뮤, 타조; 및 물고기, 예를 들어 송어, 메기 및 연어를 포함한다. 특정 구현예에서, 대상체는 포유동물, 예를 들어 영장류, 예를 들어 인간이다. "환자", "개체" 및 "대상체"라는 용어는 같은 의미로 사용된다.
바람직하게는, 대상체는 포유동물이다. 포유동물은 인간, 비인간 영장류, 마우스, 래트, 개, 고양이, 말 또는 소일 수 있지만, 이들 예시에 제한되지 않는다. 예를 들어, 각종 자가면역 질환의 동물 모델을 대표하는 대상체로서, 인간 이외의 포유동물이 유리하게 이용될 수 있다. 또한, 본원에 기재된 방법을 사용하여 가축 및/또는 애완동물을 치료할 수 있다. 대상체는 수컷 또는 암컷일 수 있다. 특정 구현예에서, 대상체는 인간이다.
대상체는 이식을 받을 개체가 될 수 있다. 또는, 대상체는 이미 이식을 받은 개체일 수 있다. 대상체는 이식을 받을 예정이고 GVHD의 위험이 있는 개체일 수 있다. 대상체는 이식을 받았고 GVHD에 걸릴 위험이 있는 개체일 수 있다. 대상체는 이식을 받았고 GVHD가 있는 개체일 수 있다.
본원에 기재된 바와 같이, 질환, 장애 또는 의학적 병태(예: GVHD)와 관련하여 사용되는 용어 "치료하다", "치료", "치료하는" 또는 "개선"이라는 용어는 GVHD의 증상 또는 병태의 진행 또는 심각성을 역전, 완화, 개선, 억제, 둔화 또는 중지시키는 것을 목적으로 하는 병태에 대한 치료적 처치를 의미한다. 용어 "치료하는"은 병태 또는 질환의 적어도 하나의 역효과 또는 증상을 감소시키거나 경감시키는 것을 포함한다. 치료는 일반적으로, 하나 이상의 증상이나 임상 지표가 감소할 때 "효과적"이다. 또는 병태의 진행이 감소하거나 중단되면 치료가 "효과적"이다. 즉, "치료"는 증상 또는 지표의 개선뿐만 아니라 치료가 없을 때 예상되는 증상의 중단 또는 적어도 진행 또는 악화의 둔화를 포함할 수 있다. 유익하거나 원하는 임상 결과에는 GVHD와 관련된 하나 이상의 증상 감소가 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "투여하는"은 본원에 기재된 바와 같은 결합제 또는 본원에 기재된 바와 같은 결합제를 암호화하는 핵산을 (예컨대, 대상체에 투여에 의해) CD8+KIR+ 트레그에 대한 결합제의 결합을 초래하는 방법 또는 경로에 의해 접촉시키는 것을 지칭한다. 유사하게, 본원에 기재된 바와 같은 결합제 또는 상기 결합제를 암호화하는 본원에 기재된 핵산을 포함하는 약제학적 조성물은 대상체에서 효과적인 치료를 초래하는 임의의 적절한 경로에 의해 투여될 수 있다.
결합제의 투여량 범위는 효능에 따라 달라지며 원하는 효과, 예를 들어, GVHD의 하나 이상의 증상 감소 또는 GVHD의 감소 또는 예방을 생성하기에 충분히 많은 양을 포함한다. 투여량은 용납할 수 없는 부작용을 일으킬 정도로 많아서는 안 된다. 일반적으로, 투여량은 대상체의 연령, 병태 및 성별에 따라 달라질 것이며 당업자에 의해 결정될 수 있다. 임의의 합병증이 발생할 경우 개별 의사가 투여량을 조정할 수도 있다. 일부 구현예에서, 투여량은 약 0.01 mg/kg 체중 내지 약 20 mg/kg 체중 범위이다. 일부 구현예에서, 투여량은 약 0.5 mg/kg 체중 내지 약 15 mg/kg 체중 범위이다. 일부 구현예에서, 용량 범위는 약 0.5 mg/kg 체중 내지 약 5 mg/kg 체중이다. 대안적으로, 용량 범위는 1 ug/mL에서 1000 ug/mL 사이의 혈청 수준을 유지하도록 적정될 수 있다.
일부 구현예에서, 대상체는 예를 들어 이식에 따른 급성 GVHD의 치료를 위해 본원에 기재된 임의의 결합제의 단일 용량을 투여받는다. 일부 구현예에서, 대상체는 예를 들어 만성 GVHD의 치료를 위해 본원에 기재된 임의의 결합제의 반복된 용량을 투여받는다. 일부 구현예에서, 용량은 몇 주, 몇 달 또는 몇 년 동안, 매주, 격주로, 3주마다, 매월, 격월로, 또는 6개월마다 투여된다. 치료 기간은 대상체의 임상 경과 및 치료에 대한 반응성에 따라 다르다.
일부 구현예에서, 용량을 정맥 내로 투여할 수 있다. 일부 구현예에서, 정맥내 투여는 약 10분 내지 약 4시간의 기간에 걸쳐 발생하는 주입일 수 있다. 일부 구현예에서, 정맥내 투여는 약 30분 내지 약 90분의 시간에 걸쳐 발생하는 주입일 수 있다. 일부 구현예에서, 용량을 피하로 투여할 수 있다.
본원에 기재된 임의의 결합제를 함유하는 약제학적 조성물은 단위 용량으로 투여될 수 있다. 약제학적 조성물과 관련하여 사용될 때 용어 "단위 용량"은 대상체에 대한 단일 투여량으로서 적합한, 물리적으로 분리된 단위를 지칭하며, 각각의 단위는 생리적으로 허용되는 필요한 희석제(예: 담체 또는 비히클)와 관련하여 원하는 치료 효과를 내도록 계산된 소정량의 활성 물질(예를 들어, 결합제)을 함유한다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 임의의 결합제의 투여는 감소된 전신 염증성 사이토카인, 질병에 의해 영향을 받는 조직에서 감소된 병리학, 숙주 조직에 대한 부작용과 관련된 면역 반응과 관련된 증상의 자가 보고 감소, 이식 생착의 개선 또는 연장, 하나 이상의 증상 완화, 및/또는 이식 거부 반응의 발병 또는 진행의 예방, 지연 또는 둔화, 또는 코르티코스테로이드와 같은 광범위한 면역억제제 사용 감소를 통한 이식 생착 연장과 같은 개선된 치료 결과를 초래할 수 있다.
일부 구현예에서, 결합제 또는 본원에 기재된 임의의 결합제의 약제학적 조성물은 코르티코스테로이드(들)와 같은 면역억제제와 함께 투여된다.
감염성 질환 치료
일부 측면에서, 본원에 기재된 바와 같은 결합제는 본원에 기재된 바와 같은 결합제 또는 약제학적 조성물을 감염을 갖는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 방법(들)에서 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 감염 치료가 필요하다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 임의의 결합제 또는 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극하기에 효과적인 양으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함으로써 감염 증상이 완화되는 감염을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 본원에 기재된 임의의 결합제 또는 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그(활성화된 트레그)를 활성화 또는 자극하기에 효과적인 양으로 CD8+KIR+ T 조절 세포(트레그)와 접촉시킴으로써 감염원에 대한 면역 반응을 자극하는 것을 포함하고, 이로써 감염원에 대한 면역 반응이 자극된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 본원에 기재된 임의의 결합제 또는 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그(활성화된 트레그)를 활성화 또는 자극하기에 효과적인 양으로 CD8+KIR+ T 조절 세포(트레그)와 접촉시킴으로써 감염원으로 감염된 세포에 대한 면역 반응을 자극하는 것을 포함하고, 이로써 감염된 세포를 고갈시킨다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 본원에 기재된 임의의 결합제 또는 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그(활성화된 트레그)를 활성화 또는 자극하기에 효과적인 양으로 CD8+KIR+ T 조절 세포(트레그)와 접촉시킴으로써 감염원으로 감염된 세포에 대한 면역 반응을 자극하는 것을 포함하고, 이로써 감염된 세포에 대한 면역 반응을 자극한다.
감염을 치료하는 방법의 일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그는 생체내에서 본원에 기재된 임의의 결합제와 접촉된다. 일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그가 생체 외에서 본원에 기재된 임의의 결합제와 접촉된다. 활성화된 CD8+KIR+ 트레그는 이후 이를 필요로 하는 대상체에게 유효량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 면역 반응은 면역 억제성 면역 세포의 감소를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, 면역 억제성 면역 세포에는 CD4 트레그 및 내성 DC가 포함된다. 일부 구현예에서, 대상체의 감염된 세포 수가 감소한다.
일부 구현예에서, 결합제는 본원에 기재된 임의의 결합제로부터 선택되며, 각 경우에 이펙터 기능 활성이 감소되거나 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없다. 일부 구현예에서, 감소된 이펙터 기능 활성이 감소되거나 또는 ADCC, ADCP 또는 CDC 이펙터 기능 활성이 없다. 일부 구현예에서, 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없다는 것은 실질적으로 ADCC, ADCP 및 CDC 이펙터 기능 활성이 없다는 것을 의미한다. 일부 구현예에서, 결합제는 Fc 도메인 또는 영역이 결여되어 있고 감소된 이펙터 기능을 갖거나 실질적으로 이펙터 기능이 없다. 일부 구현예에서, 결합제는 감소된 이펙터 기능을 갖는 Fc 도메인 또는 영역을 갖거나 또는 아미노산 치환으로 인해 실질적으로 이펙터 기능이 없는 Fc 도메인 또는 영역을 갖는다. 일부 구현예에서, 결합제는 감소된 이펙터 기능을 갖는 Fc 도메인 또는 영역을 갖거나 또는 아미노산 치환, 예컨대 Fc 눌 치환으로 인해 실질적으로 이펙터 기능이 없는 Fc 도메인 또는 영역을 갖는다. 일부 구현예에서, 결합제는 Fc 도메인 또는 영역이 결여되어 있거나 또는 하나 이상의 Fc감마 수용체에 대한 결합이 감소된 Fc 도메인 또는 영역을 갖거나 또는 Fc 눌 도메인이다. 일부 구현예에서, 결합제는 Fc 도메인 또는 영역이 없다. 일부 구현예에서, 결합제는 하나 이상의 Fc감마 수용체에 대한 결합이 감소된 Fc 도메인 또는 영역을 갖거나 또는 Fc 눌 도메인이다. 일부 구현예에서, 결합제는 Fc 도메인 또는 영역 내의 아미노산 치환으로 인해 하나 이상의 Fc감마 수용체에 대한 결합이 감소된 Fc 도메인 또는 영역을 갖는다.
임의의 특정 이론에 구속되고자 하는 것은 아니며, 결합제에 의한 이펙터 기능 활성의 감소 또는 부재는 결합제와 다른 세포 유형(즉, 비-CD8+KIR+ 트레그)의 상호작용을 제한하고/하거나 결합제에 의해 결합된 CD8+KIR+ 트레그의 고갈을 제한할 수 있다.
일부 구현예에서, 대상체는 감염성 질환에 대한 치료가 필요하거나, 예를 들어, 세균성 질환, 전신성 진균성 질환, 리케차성 질환, 기생충 질환 또는 바이러스성 질환과 같은 감염원에 감염되었다. 일부 구현예에서, 감염은 디프테리아, 백일해, 잠복성 세균혈증, 요로 감염, 위장염, 연조직염, 후두덮개염, 기관염, 아데노이드 비대, 후인두 농양, 농가진, 습진, 폐렴, 심내막염, 패혈성 관절염, 폐렴구균 폐렴, 복막염, 균혈증, 수막염, 급성 화농성 수막염, 요도염, 자궁경부염, 직장염, 인두염, 난관염, 부고환염, 임질, 매독, 리스테리아증, 탄저병, 노카르디아증, 살모넬라, 장티푸스, 이질, 결막염, 부비동염, 브루셀라증 야토병, 콜레라, 선페스트, 파상풍, 괴사성 장염, 방선균증, 혼합 혐기성 감염, 매독, 재발열, 렙토스피라증, 라임병, 쥐 물림열, 결핵균(미코박테리움 결핵 포함), 림프절염, 나병, 클라미디아, 클라미디아 폐렴, 트라코마 또는 봉입체 결막염과 같은 세균성 질환; 히스토플라스마증, 콕시시도이드진균증, 분아균증, 스포로트리쿰증, 크립토코쿠스증, 전신 칸디다증, 아스페르길루스증, 모균증, 진균종 또는 색소진균증과 같은 전신성 진균 질환; 발진티푸스, 로키산 홍반열 에를리히증, 동부 진드기 매개 리케차증, 리케차두, Q열 또는 바르토넬라증과 같은 리케차병; 말라리아, 바베시아증, 아프리카 수면병, 샤가스병, 리슈만편모충증, 덤덤열, 톡소플라스마증 수막뇌염, 각막염, 지충충증, 편모충증, 크립토스포리디움증, 동포자충증, 원포자충증, 미소포자충증, 회충증, 편충 감염, 십이지장충 감염, 실충 감염, 안구 유충 유충증, 선모충증, 기니 벌레병, 림프 사상충증, 로이아증, 강변 실명증, 개 심장사상충 감염, 주혈흡충증, 수영 가려움증, 오리엔탈 폐흡충, 오리엔탈 간 흡충, 간질증, 비대흡충증, 후편충증, 촌충 감염, 포충병 및 폐포포충병과 같은 기생충 질환; 홍역, 아급성 경화성 범뇌염, 감기, 볼거리, 풍진, 장미진, 제5병, 수두, 코로나바이러스 감염, 코비드19 질환, 호흡기 세포융합 바이러스 감염, 크룹, 세기관지염, 전염성 단핵구증, 소아마비, 헤르판기나, 수족구 구강질환, 보른홀름병, 생식기 헤르페스, 생식기 사마귀, 무균성 뇌수막염, 에코바이러스 감염, 엡스타인-바 바이러스 심낭염, 위장염, A형 간염 감염, B형 간염 감염, C형 간염 감염, HIV 감염, 인유두종 바이러스(HPV) 감염, 라이 증후군, 가와사키 증후군, 인플루엔자, 기관지염, 바이러스성 "보행" 폐렴, 급성 열성 호흡기 질환, 급성 인두결막열, 유행성 각결막염, 단순 포진 바이러스 1(HSV-1) 감염, 단순 포진 바이러스 2(HSV-2) 감염, 대상포진, 거대세포 봉입병, 광견병, 진행성 다초점 백질뇌증, 쿠루, 치명적인 가족성 불면증, 크로이츠펠트-야콥병, 게르스트만-스프라우슬러-샤인커병, 열대성 강직성 하반신 마비, 서부 말 뇌염, 캘리포니아 뇌염, 세인트루이스 뇌염, 황열병, 뎅기열, 림프구성 맥락수막염, 라사 열, 출혈열, 한타바이러스 폐증후군, 마르부르크 바이러스 감염, 에볼라 바이러스 감염 및 천연두와 같은 바이러스성 질환에 감염되었다.
일부 구현예에서, 감염이 바이러스 감염이다. 일부 구현예에서, 감염은 HIV 감염, A형 간염 감염, B형 간염 감염, C형 간염 감염, 엡스타인 바 바이러스 감염, SARS-COV2 감염(Covid-19)과 같은 코로나바이러스 감염 및 독감 바이러스 감염(인플루엔자)과 같은 바이러스 감염이다. 일부 구현예에서, 감염은 코로나바이러스, 디프테리아, 에볼라, 독감(인플루엔자), HIV, 인간 유두종 바이러스(HPV), A형 간염, B형 간염, C형 간염, 홍역 바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스, 로타 바이러스 및 헤르페스 바이러스와 같은 감염원에 의해 발생한다.
본원에 기재된 방법은 결합제의 치료적 유효량을 감염이 있거나 감염원에 의해 감염된 세포가 있는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 본원에 기재된 바와 같이 "치료적 유효량", "효과적인 양", "유효량" 및 "유효 용량"이라는 어구는 감염성 질환의 치료, 관리 또는 재발 방지에 치료적 이점을 제공하는 본원에 기재된 결합제 또는 약학적 조성물의 양(예: 감염의 증상, 징후 또는 마커를 적어도 하나 이상 통계적으로 유의하게 감소시키는 양)을 지칭할 수 있다. 치료적 유효량의 결정은 당업자의 능력 범위 내에 있다. 일반적으로, 치료적 유효량은 대상체의 병력, 연령, 병태 및 성별 뿐만 아니라 대상체의 의학적 상태의 중증도 및 유형, 및 다른 약제학적 활성 제제의 투여에 따라 달라질 수 있다.
본원에 사용된 "대상체"는 인간 또는 동물을 의미한다. 일반적으로 동물은 영장류, 설치류, 가축 또는 사냥 동물 같은 척추동물이다. 영장류는 침팬지, 시노몰구스 원숭이, 거미원숭이, 마카크, 예를 들어 레셔스를 포함한다. 설치류에는 생쥐, 래트, 우드척, 흰족제비, 토끼 및 햄스터가 포함된다. 가축 및 사냥 동물은 소, 말, 돼지, 사슴, 들소, 버팔로, 고양이과 종, 예를 들어 집고양이, 개과 종, 예를 들어 개, 여우, 늑대, 조류 종, 예를 들어 닭, 에뮤, 타조, 및 물고기, 예를 들어 송어, 메기 및 연어를 포함한다. 특정 구현예에서, 대상체는 포유동물, 예를 들어 영장류, 예를 들어 인간이다. "환자", "개체" 및 "대상체"라는 용어는 같은 의미로 사용된다.
바람직하게는, 대상체는 포유동물이다. 포유동물은 인간, 비인간 영장류, 마우스, 래트, 개, 고양이, 말 또는 소일 수 있지만, 이들 예시에 제한되지 않는다. 예를 들어, 각종 감염의 동물 모델을 대표하는 대상체로서, 인간 이외의 포유동물이 유리하게 이용될 수 있다. 또한, 본원에 기재된 방법을 사용하여 가축 및/또는 애완동물을 치료할 수 있다. 대상체는 수컷 또는 암컷일 수 있다. 특정 구현예에서, 대상체는 인간이다.
대상체는 이전에 감염 진단을 받았거나 감염을 앓고 있는 것으로 확인되어 치료가 필요한 개체일 수 있지만, 이미 감염에 대한 치료를 받은 개체일 필요는 없습니다. 또는, 대상체는 이전에 감염이 있는 것으로 진단되지 않았지만, 치료가 필요한 개체일 수도 있다. 대상체는 감염과 관련된 병태 또는 하나 이상의 합병증에 대해 하나 이상의 위험 요인을 나타내는 대상체 또는 그러한 위험 요인을 나타내지 않는 대상체일 수 있다. 감염에 대한 치료가 "필요한 대상체"는 해당 감염이 있거나 해당 감염이 있는 것으로 진단된 대상체일 수 있다. 다른 구현예에서, 감염 "발병 위험에 있는" 대상체는 감염 발병 위험에 있는 것으로 진단된 대상체를 지칭한다.
본원에 기재된 바와 같이, 질환, 장애 또는 의학적 병태(예: 감염)와 관련하여 사용되는 용어 "치료하다", "치료", "치료하는" 또는 "개선"이라는 용어는 증상 또는 병태의 진행 또는 심각성을 역전, 완화, 개선, 억제, 둔화 또는 중지시키는 것을 목적으로 하는 병태에 대한 치료적 처치를 의미한다. 용어 "치료하는"은 병태의 적어도 하나의 역효과 또는 증상을 감소시키거나 경감시키는 것을 포함한다. 치료는 일반적으로, 하나 이상의 증상이나 임상 지표가 감소할 때 "효과적"이다. 또는 병태의 진행이 감소하거나 중단되면 치료는 "효과적"이다. 즉, "치료"는 증상 또는 지표의 개선뿐만 아니라 치료가 없을 때 예상되는 증상의 중단 또는 적어도 진행 또는 악화의 둔화를 포함할 수 있다. 유익하거나 원하는 임상 결과에는 대상체에서 감염된 세포의 감소, 하나 이상의 증상(들) 완화, 결손 정도 감소, 감염 상태의 안정화(즉, 악화되지 않음), 또는 치료가 없을 때 예상되는 것과 비교하여 감염 또는 감염 진행의 지연 또는 둔화가 포함되지만, 이에 제한되지 않는다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "투여하는"은 본원에 기재된 바와 같은 결합제 또는 본원에 기재된 바와 같은 결합제를 암호화하는 핵산을 (예컨대, 대상체에 투여에 의해) CD8+KIR+ 트레그에 대한 결합제의 결합을 초래하는 방법 또는 경로에 의해 접촉시키는 것을 지칭한다. 유사하게, 본원에 기재된 바와 같은 결합제 또는 상기 결합제를 암호화하는 본원에 기재된 핵산을 포함하는 약제학적 조성물은 대상체에서 효과적인 치료를 초래하는 임의의 적절한 경로에 의해 투여될 수 있다.
결합제의 투여량 범위는 효능에 따라 달라지며 원하는 효과, 예를 들어, 감염된 세포에 대한 면역 반응을 자극, 감염된 세포의 수 감소, 감염의 진행 둔화 또는 예방을 생성하기에 충분히 많은 양을 포함한다. 투여량은 용납할 수 없는 부작용을 일으킬 정도로 많아서는 안 된다. 일반적으로, 투여량은 대상체의 연령, 병태 및 성별에 따라 달라질 것이며 당업자에 의해 결정될 수 있다. 임의의 합병증이 발생할 경우 개별 의사가 투여량을 조정할 수도 있다. 일부 구현예에서, 투여량은 약 0.01 mg/kg 체중 내지 약 20 mg/kg 체중 범위이다. 일부 구현예에서, 투여량은 약 0.01 mg/kg 체중 내지 약 10 mg/kg 체중 범위이다. 일부 구현예에서, 투여량은 약 0.1 mg/kg 체중 내지 약 10 mg/kg 체중 범위이다. 일부 구현예에서, 투여량은 약 0.5 mg/kg 체중 내지 약 10 mg/kg 체중 범위이다. 일부 구현예에서, 용량 범위는 약 0.5 mg/kg 체중 내지 약 5 mg/kg 체중이다. 대안적으로, 용량 범위는 1 ug/mL에서 1000 ug/mL 사이의 혈청 수준을 유지하도록 적정될 수 있다.
일부 구현예에서, 대상체는 예를 들어 급성 감염의 치료를 위해 본원에 기재된 임의의 결합제 또는 약제학적 조성물의 단일 용량을 투여받는다. 일부 구현예에서, 대상체는 예를 들어 자가면역 질환이나 병태를 유발할 수 있는 감염에 대한 면역 반응 예방을 위해 본원에 기재된 임의의 결합제 또는 약제학적 조성물의 단일 용량을 투여받는다. 일부 구현예에서, 대상체는 예를 들어 만성 감염의 치료를 위해 본원에 기재된 임의의 결합제 또는 약제학적 조성물의 반복된 용량을 투여받는다. 일부 구현예에서, 용량은 몇 주, 몇 달 또는 몇 년 동안, 매주, 격주로, 3주마다, 매월, 격월로, 또는 6개월마다 투여된다. 치료 기간은 대상체의 임상 경과 및 치료에 대한 반응성에 따라 다르다.
일부 구현예에서, 용량을 정맥 내로 투여할 수 있다. 일부 구현예에서, 정맥내 투여는 약 10분 내지 약 4시간의 기간에 걸쳐 발생하는 주입일 수 있다. 일부 구현예에서, 정맥내 투여는 약 30분 내지 약 90분의 시간에 걸쳐 발생하는 주입일 수 있다. 일부 구현예에서, 용량을 피하로 투여할 수 있다.
일부 구현예에서, 총 약 2 내지 약 10 회 용량이 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 총 4회 용량이 투여된다. 일부 구현예에서, 총 5회 용량이 투여된다. 일부 구현예에서, 총 6회 용량이 투여된다. 일부 구현예에서, 총 7회 용량이 투여된다. 일부 구현예에서, 총 8회 용량이 투여된다. 일부 구현예에서, 총 9회 용량이 투여된다. 일부 구현예에서, 총 10회 용량이 투여된다. 일부 구현예에서, 총 10회 이상의 용량이 투여된다.
결합제를 함유하는 약제학적 조성물은 단위 용량으로 투여될 수 있다. 약제학적 조성물과 관련하여 사용될 때 용어 "단위 용량"은 대상체에 대한 단일 투여량으로서 적합한, 물리적으로 분리된 단위를 지칭하며, 각각의 단위는 생리적으로 허용되는 필요한 희석제(예: 담체 또는 비히클)와 관련하여 원하는 치료 효과를 내도록 계산된 소정량의 활성 물질(예를 들어, 결합제)을 함유한다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 임의의 결합제의 투여는 임상 증상 개선, 바이러스 부하 감소, 병원체 제거 또는 감소 또는 감염 된세포 감소과 같은 개선된 치료 결과를 초래할 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 임의의 구현예의 결합제 또는 약제학적 조성물은 항세균제, 항진균제 또는 항바이러스제와 같은 감염성 질환 제어제와 병용 투여된다. 항균제는, 예를 들어, 페니실린 G, 페니실린 V, 클록사실린, 디클록사실린, 메티실린, 나프실린, 옥사실린, 암피실린, 아목시실린, 바캄피실린, 아즈로실린, 카르베니실린, 메즐로실린, 피페라실린 또는 티카르실린과 같은 락탐 항생제; 아미카신, 겐타마이신, 카나마이신, 네오마이신, 네틸마이신, 스트렙토마이신 또는 토브라마이신과 같은 아미노글리코시드; 아지트로마이신, 클라리트로마이신, 에리스로마이신, 린코마이신 또는 클린다마이신과 같은 마크롤라이드; 데메클로사이클린, 독시사이클린, 미노사이클린, 옥시테트라사이클린 또는 테트라사이클린과 같은 테트라사이클린; 시녹사신 또는 날리딕산과 같은 퀴놀론계; 시프로플록사신, 에녹사신, 그레파플록사신, 레보플록사신, 로메플록사신, 노르플록사신, 오플록사신, 스파플록사신 또는 트로바플록사신과 같은 플루오로퀴놀론계; 바시트라신, 콜리스틴 또는 폴리믹신 B와 같은 폴리펩티드; 술피속사졸, 술파메톡사졸, 술파디아진, 술파메티졸 또는 술파세트아미드와 같은 술폰아미드; 및 트리메토프림, 설파메타졸, 클로람페니콜, 반코마이신, 메트로니다졸, 퀴누프리스틴, 달포프리스틴, 리팜핀, 스펙티노마이신 또는 니트로푸란토인과 같은 기타 항균제; 이독수리딘, 비다라빈, 트리플루리딘, 아시클로비르, 팜시클로비르, 펜시클로비르, 발라시클로비르, 간시클로비르, 포스카넷, 리바비린, 아만타딘, 리만타딘 또는 시도포비르와 같은 일반 항바이러스제와 같은 항바이러스제; 안티센스 올리고뉴클레오티드, 면역글로불린, 인터페론, 및 지도부딘, 디다노신, 잘시타빈, 스타부딘, 라미부딘, 네비라핀, 델라비딘, 사퀴나비르, 오셀타미비르 및 페라미비르, 리토나비르, 인디나비르, 또는 넬피나비르와 같은 기타 약물일 수 있다.
암 치료
일부 측면에서, 본원에 기재된 결합제 또는 약제학적 조성물은 암의 치료 방법(들)에 사용될 수 있으며 이는 본원에 기재된 바와 같은 결합제 또는 약제학적 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 임의의 결합제 또는 본원에 기재된 임의의 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극하기에 효과적인 양으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 암 치료 방법을 제공하며, 이에 따라 암 증상이 개선되며, 여기서 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없다. 일부 구현예에서, 암과 관련된 항원(암 항원; 예를 절어, 암세포 상에서 발현되는 항원)에 대한 면역 반응을 자극하는 방법이 제공되며, 이는 본원에 기재된 임의의 결합제 또는 본원에 기재된 임의의 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극하기에 효과적인 양으로 CD8+KIR+ T 조절 세포 (트레그)와 접촉시키는 것을 포함하며, 이에 따라 암 항원에 대한 면역 반응이 증가하며, 여기서 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없다.
일부 구현예에서, 결합제는 본원에 기재된 임의의 결합제로부터 선택되며, 각 경우에 이펙터 기능 활성이 감소되거나 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없다. 일부 구현예에서, 감소된 이펙터 기능 활성이 감소되거나 또는 ADCC, ADCP 또는 CDC 이펙터 기능 활성이 없다. 일부 구현예에서, 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없다는 것은 실질적으로 ADCC, ADCP 및 CDC 이펙터 기능 활성이 없다는 것을 의미한다. 일부 구현예에서, 결합제는 Fc 도메인 또는 영역이 결여되어 있고 감소된 이펙터 기능을 갖거나 실질적으로 이펙터 기능이 없다. 일부 구현예에서, 결합제는 감소된 이펙터 기능을 갖는 Fc 도메인 또는 영역을 갖거나 또는 아미노산 치환으로 인해 실질적으로 이펙터 기능이 없는 Fc 도메인 또는 영역을 갖는다. 일부 구현예에서, 결합제는 감소된 이펙터 기능을 갖는 Fc 도메인 또는 영역을 갖거나 또는 아미노산 치환, 예컨대 Fc 눌 치환으로 인해 실질적으로 이펙터 기능이 없는 Fc 도메인 또는 영역을 갖는다. 일부 구현예에서, 결합제는 Fc 도메인 또는 영역이 결여되어 있거나 또는 하나 이상의 Fc감마 수용체에 대한 결합이 감소된 Fc 도메인 또는 영역을 갖거나 또는 Fc 눌 도메인이다. 일부 구현예에서, 결합제는 Fc 도메인 또는 영역이 없다. 일부 구현예에서, 결합제는 하나 이상의 Fc감마 수용체에 대한 결합이 감소된 Fc 도메인 또는 영역을 갖거나 또는 Fc 눌 도메인이다. 일부 구현예에서, 결합제는 Fc 도메인 또는 영역 내의 아미노산 치환으로 인해 하나 이상의 Fc감마 수용체에 대한 결합이 감소된 Fc 도메인 또는 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, 암 치료 방법이 제공되며, 이는 본원에 기재된 임의의 결합제 또는 본원에 기재된 임의의 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그를 고갈시켜 암 증상을 개선하기에 효과적인 양으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 결합제는 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는다. 일부 구현예에서, 암에 대한 면역 반응을 자극하는 방법이 제공되며, 이는 본원에 기재된 임의의 결합제 또는 본원에 기재된 임의의 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그를 고갈시키기에 효과적인 양으로 CD8+KIR+ T 조절 세포(트레그)와 접촉시키는 것을 포함하고, 이로써 암에 대한 면역 반응이 증가되며, 여기서 결합제는 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는다. 일부 구현예에서, 암과 관련된 항원(암 항원)에 대한 면역 반응을 자극하는 방법이 제공되며, 이는 본원에 기재된 임의의 결합제 또는 본원에 기재된 임의의 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그를 고갈시키기에 효과적인 양으로 CD8+KIR+ T 조절 세포(트레그)와 접촉시키는 것을 포함하고, 이로써 암 항원에 대한 면역 반응이 증가되며, 여기서 결합제는 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는다.
일부 구현예에서, 결합제는 본원에 기재된 임의의 결합제로부터 선택되며, 각 경우에 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는다. 일부 구현예에서, 이펙터 기능 활성은 ADCP 및/또는 CDC 이펙터 기능 활성과 조합된 ADCC이다. 일부 구현예에서, 이펙터 기능 활성을 갖는다는 것은 ADCC, ADCP 및 CDC 이펙터 기능 활성을 갖는다는 것을 의미한다. 다양한 구현예에서, 이러한 결합제는 Fc 도메인을 갖거나 또는 하나 이상의 Fc감마 수용체에 결합하는 Fc 도메인을 갖는다.
일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그는 생체 내에서 결합제와 접촉한다. 일부 구현예에서, CD8+KIR+ 트레그는 생체 외에서 결합제와 접촉한다. 일부 구현예에서, 활성화된 CD8+KIR+ 트레그는 이를 필요로 하는 대상체에게 유효량으로 투여된다.
임의의 특정 이론에 구속되고자 하는 것은 아니며, 결합제에 의한 이펙터 기능 활성의 감소 또는 부재는 결합제와 다른 세포 유형(즉, 비 CD8+KIR+ 트레그)의 상호작용을 제한하고/하거나 CD8+KIR+ 트레그의 고갈을 제한할 수 있다. 대조적으로, 결합제에 의한 이펙터 기능 활성의 존재는 CD8+KIR+ 트레그가 고갈되도록 면역 반응을 편향시키는 것으로 여겨진다.
일부 구현예에서, 증가된 면역 반응은 암세포의 감소 또는 면역 억제성 면역 세포의 고갈을 포함한다. 이러한 맥락에서, 면역 억제성 면역 세포는 예를 들어 종양 관련 대식세포, CD4+ 트레그 및/또는 내성 수지상 세포(DC)를 의미한다. 일부 구현예에서, 대상체의 암세포 수가 감소한다. 일부 구현예에서, 대상체의 면역 억제성 면역 세포 수가 감소한다.
"암" 및 "악성 종양"이라는 용어는 신체 기관 및 시스템의 정상적인 기능을 방해하는 세포의 통제되지 않은 성장을 지칭한다. 암 또는 악성 종양은 원발성 또는 전이성일 수 있다. 즉, 원래 종양 부위에서 멀리 떨어진 조직에 종양 성장을 심는 침습성이 될 수 있다. "종양"은 신체 기관 및 시스템의 정상적인 기능을 방해하는 세포의 통제되지 않은 성장을 의미한다. 본원에 사용된 용어 암은 문맥상 달리 나타내지 않는 한 악성 종양 및 종양을 포함한다. 암에 걸린 대상체는 대상체의 몸에 존재하는 객관적으로 측정 가능한 암세포를 가진 대상체이다. 이 정의에는 양성 종양 및 악성 암뿐만 아니라 잠재적으로 휴면 상태인 종양 및 미세 전이가 포함된다. 원래 위치에서 이동하여 다른 중요한 장기에 씨딩하는 암은 결국 영향을 받은 장기의 기능 저하를 통해 대상체의 사망을 초래한다. 백혈병 및 림프종과 같은 혈액 악성 종양(조혈 암)은 예를 들어 대상체의 정상적인 조혈 구획을 능가하여 조혈 부전(빈혈, 혈소판 감소증 및 호중구 감소증의 형태)을 유발하여 궁극적으로 사망에 이르게 할 수 있다.
암의 예는 암종, 림프종, 모세포종, 육종, 골수종 및 백혈병을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 그러한 암의 보다 특정한 예는 기저 세포 암종, 담도암, 방광암, 골암, 뇌 및 CNS 암, 유방암(예를 들어, 삼중 음성 유방암), 복막암, 자궁경부암; 담관암종, 융모막암종, 연골육종, 결장직장암(결장직장암), 결합조직암, 소화기계암, 자궁내막암, 식도암, 눈암, 두경부암, 위암(위장암 및 위암 포함), 교모세포종(GBM), 간 암종, 간암, 상피내 신생물, 신장 또는 신장암(예: 투명 세포 신장암 또는 비-투명 세포 신장암), 후두암, 백혈병, 간암, 폐암(예: 소세포 폐암, 비소세포 폐암, 폐의 선암종, 및 폐의 편평 암종), 호지킨 및 비호지킨 림프종을 포함하는 림프종, 흑색종, 중피종, 골수종, 신경모세포종, 구강암(예: 입술, 혀, 입, 인두), 난소암, 췌장암, 전립선암, 망막모세포종, 횡문근육종, 호흡기암, 침샘암종, 육종, 피부암, 편평세포암, 고환암, 갑상선암, 자궁암 또는 자궁내막암, 자궁 중증 암종, 비뇨기암, 외음부암; 다른 암종 및 육종뿐만 아니라 B 세포 림프종(저등급/여포성 비호지킨 림프종(NHL), 소림프구성(SL) NHL, 중간 등급/여포성 NHL, 중간 등급 미만성 NHL, 고등급 면역 모세포성 NHL, 고등급 림프 모세포성 NHL, 고등급 비소세포성 비호지킨 림프종, 비대성 질환 NHL, 맨틀 세포 림프종, 에이즈 관련 림프종, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 털 세포 백혈병, 만성 골수성 백혈병 및 이식 후 림프증식성 장애(PTLD), 뿐만 아니라 유피종, 부종(예: 뇌종양과 관련된 부종) 및 마이그 증후군과 관련된 비정상적인 혈관 증식, 다발성 골수종과 같은 골수종을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, 암은 간세포 암종, 소세포 폐암 및 대세포 폐암과 같은 폐 암종, 결장직장 암종, 식도 암종, 자궁경부 암종, 난소 암종, 신장 세포 암종, 전립선 암종 및 방광 암종을 포함하나 이에 제한되지 않는 고형 종양으로부터 선택된다.
본원에 기재된 방법은 암 또는 악성 종양을 갖는 대상체에게 본원에 기재된 결합제 또는 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함한다. 본원에 기재된 바와 같은, "치료적 유효량", "효과적인 양", "유효량" 및 "유효 용량"이라는 어구는 암 또는 악성 종양의 치료, 관리, 재발 방지에서 치료적 이점을 제공하는 본원에 기재된 결합제 또는 약제학적 조성물의 양, 예를 들어, 암, 종양, 악성 종양의 적어도 하나의 증상, 징후 또는 마커의 통계적으로 유의한 감소를 제공하는 양을 지칭한다. 치료적 유효량의 결정은 당업자의 능력 범위 내에 있다. 일반적으로, 치료적 유효량은 대상체의 병력, 연령, 병태 및 성별 뿐만 아니라 대상체의 의학적 병태의 중증도 및 유형, 및 다른 약제학적 활성 제제의 투여에 따라 달라질 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법은 대상체에서 종양 크기 또는 종양 부담을 감소시키고/시키거나 대상체에서 전이를 감소시킨다. 다양한 구현예에서, 대상체의 종양 크기는 약 25 내지 50%, 약 40 내지 70%, 또는 약 50 내지 90% 또는 그 이상 감소한다. 다양한 구현예에서, 상기 방법은 종양 크기를 10%, 20%, 30% 또는 그 이상으로 줄인다. 다양한 구현예에서, 상기 방법은 종양 크기를 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 줄인다.
본원에 사용된 "대상체"는 인간 또는 동물을 의미한다. 일반적으로 동물은 영장류, 설치류, 가축 또는 사냥 동물 같은 척추동물이다. 영장류는 침팬지, 시노몰구스 원숭이, 거미원숭이, 마카크, 예를 들어 레셔스를 포함한다. 설치류에는 생쥐, 래트, 우드척, 흰족제비, 토끼 및 햄스터가 포함된다. 가축 및 사냥 동물은 소, 말, 돼지, 사슴, 들소, 버팔로, 고양이과 종, 예를 들어 집고양이; 개과 종, 예를 들어 개, 여우, 늑대; 조류 종, 예를 들어 닭, 에뮤, 타조; 및 물고기, 예를 들어 송어, 메기 및 연어를 포함한다. 특정 구현예에서, 대상체는 포유동물, 예를 들어 영장류, 예를 들어 인간이다. "환자", "개체" 및 "대상체"라는 용어는 같은 의미로 사용된다.
바람직하게는 대상체는 포유동물이다. 포유동물은 인간, 비인간 영장류, 마우스, 래트, 개, 고양이, 말 또는 소일 수 있지만, 이들 예시에 제한되지 않는다. 예를 들어, 각종 암의 동물 모델을 대표하는 대상체로서, 인간 이외의 포유동물이 유리하게 이용될 수 있다. 또한, 본원에 기재된 방법을 사용하여 가축 및/또는 애완동물을 치료할 수 있다. 대상체는 수컷 또는 암컷일 수 있다. 특정 구현예에서, 대상체는 인간이다.
대상체는 이전에 암으로 진단받거나 이를 앓는 것으로 확인되었고 치료가 필요한 개체일 수 있지만, 암에 대한 치료를 이미 받았을 필요는 없다. 또는, 대상체는 치료가 필요한 암을 가진 것으로 이전에 진단받지 않은 개체일 수도 있다. 대상체는 암과 관련된 병태 또는 하나 이상의 합병증에 대해 하나 이상의 위험 인자를 나타내는 개체 또는 위험 인자를 나타내지 않는 대상체일 수 있다. 특정 암에 대한 치료가 "필요한 대상체"는 그 병태를 갖고 있거나 그 질환을 갖는 것으로 진단받은 대상체일 수 있다. 다른 구현예에서, 병태를 "발병시킬 위험이 있는" 대상체는 병태가 발병될 위험이 있는 것으로 진단받은 대상체를 의미한다.
본원에 기재된 바와 같이, 질환, 장애 또는 의학적 병태(예: 암)와 관련하여 사용되는 용어 "치료하다", "치료", "치료하는" 또는 "개선"이라는 용어는 증상 또는 병태의 진행 또는 심각성을 역전, 완화, 개선, 억제, 둔화 또는 중지시키는 것을 목적으로 하는 병태에 대한 치료적 처치를 의미한다. 용어 "치료하는"은 병태의 적어도 하나의 역효과 또는 증상을 감소시키거나 경감시키는 것을 포함한다. 치료는 일반적으로 하나 이상의 증상이나 임상 지표가 감소할 때 "효과적"이다. 또는 병태의 진행이 감소하거나 중단되면 치료는 "효과적"이다. 즉, "치료"는 증상 또는 지표의 개선뿐만 아니라 치료가 없을 때 예상되는 증상의 중단 또는 적어도 진행 또는 악화의 둔화를 포함할 수 있다. 유익하거나 원하는 임상 결과에는 대상체의 암세포 감소, 하나 이상의 증상(들)의 완화, 결핍 정도의 감소, 암 또는 악성 종량의 안정화(즉, 악화되지 않음), 종양 성장 및/또는 전이의 지연 또는 둔화, 치료를 받지 않았을 때 예상되는 수명에 비해 연장된 수명이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "투여하는"은 본원에 기재된 바와 같은 결합제 또는 약제학적 조성물 또는 본원에 기재된 바와 같은 결합제를 암호화하는 핵산(예컨대, 대상체에 투여에 의해)을 CD8+KIR+ 트레그에 대한 결합제의 결합을 초래하는 방법 또는 경로에 의해 접촉시키는 것을 지칭한다. 유사하게, 본원에 기재된 바와 같은 결합제 또는 상기 결합제를 암호화하는 본원에 기재된 핵산을 포함하는 약제학적 조성물은 대상체에서 효과적인 치료를 초래하는 임의의 적절한 경로에 의해 투여될 수 있다.
결합제의 투여량 범위는 효능에 따라 달라지며, 원하는 효과, 예를 들어 종양 성장의 둔화 또는 종양 크기 감소를 생성하기에 충분히 많은 양을 포함한다. 투여량은 용납할 수 없는 부작용을 일으킬 정도로 많아서는 안 된다. 일반적으로, 투여량은 대상체의 연령, 병태 및 성별에 따라 달라질 것이며 당업자에 의해 결정될 수 있다. 임의의 합병증이 발생할 경우 개별 의사가 투여량을 조정할 수도 있다. 일부 구현예에서, 투여량은 약 0.01 mg/kg 체중 내지 약 20 mg/kg 체중 범위이다. 일부 구현예에서, 투여량은 약 0.01 mg/kg 체중 내지 약 10 mg/kg 체중 범위이다. 일부 구현예에서, 투여량은 약 0.1 mg/kg 체중 내지 약 10 mg/kg 체중 범위이다. 일부 구현예에서, 투여량은 약 0.5 mg/kg 체중 내지 약 10 mg/kg 체중 범위이다. 일부 구현예에서, 용량 범위는 약 0.5 mg/kg 체중 내지 약 5 mg/kg 체중이다. 대안적으로, 용량 범위는 1 ug/mL에서 1000 ug/mL 사이의 혈청 수준을 유지하도록 적정될 수 있다.
상술한 용량의 투여는 반복될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 상술한 용량은 몇 주 또는 몇 달 동안 매주, 격주로, 3주마다 또는 매달 투여된다. 치료 기간은 대상체의 임상 경과 및 치료에 대한 반응성에 따라 다르다.
일부 구현예에서, 용량을 정맥 내로 투여할 수 있다. 일부 구현예에서, 정맥내 투여는 약 10분 내지 약 4시간의 시간에 걸쳐 발생하는 주입일 수 있다. 일부 구현예에서, 정맥내 투여는 약 30분 내지 약 90분의 시간에 걸쳐 발생하는 주입일 수 있다. 일부 구현예에서, 용량을 피하로 투여할 수 있다.
결합제를 함유하는 약제학적 조성물은 단위 용량으로 투여될 수 있다. 약제학적 조성물과 관련하여 사용될 때 용어 "단위 용량"은 대상체에 대한 단일 투여량으로서 적합한 물리적으로 분리된 단위를 의미하며, 각각의 단위는 소정량의 활성 물질(예를 들어, 결합제)을 함유하며, 요구되는 생리학적으로 허용되는 희석제, 즉 담체 또는 비히클과 관련하여 원하는 치료 효과를 생성하도록 계산된다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 임의의 결합제의 투여는 치료되는 암에 대한 표준 의학적 기준에 의해 결정된 바와 같은 안정적인 질환, 부분 반응 또는 완전 반응으로부터 선택되는 객관적 반응으로서 개선된 치료 결과를 초래할 수 있다. 일부 구현예에서, 치료 결과가 개선되면 종양 부담이 감소한다. 일부 구현예에서, 개선된 치료 결과는 무진행 생존 또는 무질환 생존이다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 임의의 구현예의 결합제 또는 약제학적 조성물은 면역요법 또는 화학요법과 병용하여 투여된다. 본원에 기재된 "면역요법"은 암 또는 악성 종양과 싸우기 위해 대상체 자신의 면역 체계를 유도하거나 증대시키도록 고안된 치료 전략을 의미한다. 면역요법의 예는 체크 포인트 억제제와 같은 항체를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 화학요법은 예를 들어 알킬화제, 예를 들어 시클로포스파미드, 이포스파미드, 트로포스파미드 또는 클로람부실과 같은 질소 머스타드; 카르무스틴(BCNU) 및 로무스틴(CCNU)과 같은 니트로소우레아; 부술판 및 트레오술판과 같은 알킬술포네이트; 다카르바진과 같은 트리아젠; 시스플라틴 및 카르보플라틴과 같은 백금 함유 화합물; 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신 및 비노렐빈과 같은 빈카 알칼로이드와 같은 식물 알칼로이드; 파클리탁셀 및 도세탁솔과 같은 탁소이드; DNA 토포이소머라제 억제제; 에토포사이드, 테니포사이드, 토포테칸, 9-아미노캄토테신, 캄프토테신, 엑사테칸, 및 크리스나톨과 같은 에피포도필린류; 미토마이신 C와 같은 미토마이신; 메토트렉세이트 및 트리메트렉세이트와 같은 DHFR 억제제와 같은 항엽산제와 같은 항대사물질; 미코페놀산, 티아조푸린, 리바비린 및 EICAR와 같은 IMP 탈수소효소 억제제; 히드록시우레아 및 데페록사민과 같은 리보뉴클레오시드 환원효소 억제제; 및 5-플루오로우라실, 플록수리딘, 독시플루리딘 및 라티트렉세드와 같은 우라실 유사체와 같은 피리미딘 유사체; 시타라빈(ara C), 시토신 아라비노시드 및 플루다라빈과 같은 시토신 유사체; 메르캅토퓨린 및 티오구아닌과 같은 퓨린 유사체; 타목시펜, 랄록시펜 및 메게스트롤과 같은 항에스트로겐과 같은 수용체 길항제와 같은 호르몬 요법; 고스크린 및 루프롤라이드 아세테이트와 같은 LHRH 작용제; 플루타미드 및 비칼루타미드와 같은 항안드로겐; 레티노이드/델토이드; EB 1089, CB 1093 및 KH 1060과 같은 비타민 D3 유사체; 베르토포름(BPD-MA), 프탈로시아닌, 감광제 Pc4, 데메톡시-하이포크렐린 A 및 (2BA-2-DMHA)와 같은 광역학 요법; 인터페론-알파 및 인터페론-감마와 같은 사이토카인; 종양괴사인자; 및 로바스타틴과 같은 이소프레닐화 억제제와 같은 기타물질; 1-메틸-4-페닐피리디늄 이온과 같은 도파민성 신경독소; 스타우로스포린과 같은 세포 주기 억제제; 악티노마이신 D 및 닥티노마이신과 같은 악티노마이신; 블레오마이신 A2, 블레오마이신 B2 및 페플로마이신과 같은 블레오마이신; 다우노라비신, 독소루비신(아드리아마이신), 이다루비신, 에피라비신, 피라라비신, 조라비신 및 미톡산트론과 같은 안트라사이클린; 베라파밀과 같은 MDR 억제제 및 탑시가르긴과 같은 Ca2+ATPase 억제제이다.
예시적인 구현예
본 발명은 다음의 구현예에 의해 더욱 상세히 설명되며, 이는 제한적인 것으로 해석되어서는 안 된다.
1. 결합제로서,
KIR 단백질 이외의 CD8+KIR+ T 조절 세포(트레그) 상에서 발현되는 항원으로부터 선택된 제1 항원에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인; 및
억제성 KIR 단백질에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하고,
여기서 결합제는 CD8+KIR+ 트레그에 결합하는, 결합제.
2. 앞선 구현예에 있어서, 제1 항원이 CD3, CD5, CD8, CD27, CD38, CD39, CD40L, CD45RA, CD45RB, CD45RO, CD73, CD103 (ITGAE), CD122, CD166, CD177, CCR7, CXCR3, CXCR5, HLA-DR, ICOS, LAG-3/CD223, OX-40, PD-1, S1000A8/9, TIM-3, TLT-2, 2B4, 및 41BB로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 결합제.
3. 앞선 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 항원이 CD3, CD8, CD27, CD38, CD39, CD40L, CD45RA, CD45RB, CD45RO, CD73, CD103 (ITGAE), CD122, CD166, CD177, CCR7, CXCR3, CXCR5, HLA-DR, ICOS, LAG-3/CD223, OX-40, PD-1, S1000A8/9, TIM-3, TLT-2, 2B4, 및 41BB로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 결합제.
4. 앞선 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 항원이 하기 항원 군으로부터 선택되는 것인, 결합 도메인:
a. CD3, CD5, CD27, CD38, CD39, CD40L, CD45RA, CD45RB, CD45RO, CD73, CD122, ICOS, OX-40, 2B4, 41BB 및 HLA-DR;
b. LAG-3/CD223, TIM-3, PD-1, S1000A8/9 및 TLT2;
c. CD3, CD5, CD8, CD27, CD38, CD39, CD40L, CD45RA, CD45RB, CD45RO, CD73, CD103(ITGAE), CD122, CD166, CD177, CCR7, CXCR3, CXCR5, HLA-DR, ICOS, LAG-3/CD223, OX-40, PD-1, S1000A8/9, TIM-3, TLT-2, 2B4 및 41BB;
d. CD103(ITGAE), CD166, CD177, CXCR3 및 S1000A8/9;
e. CCR7, CXCR3 및 CXCR5;
f. PD-1, ICOS 및 CXCR3;
G. CD3, CD5 및 CD8; 및
h. CD3 및 CD8.
5. 앞선 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 항원이 하기 항원 군으로부터 선택되는 것인, 결합 도메인:
a. CD3, CD27, CD38, CD39, CD40L, CD45RA, CD45RB, CD45RO, CD73, CD122, ICOS, OX-40, 2B4, 41BB 및 HLA-DR;
b. LAG-3/CD223, TIM-3, PD-1, S1000A8/9 및 TLT2;
c. CD3, CD8, CD27, CD38, CD39, CD40L, CD45RA, CD45RB, CD45RO, CD73, CD103(ITGAE), CD122, CD166, CD177, CCR7, CXCR3, CXCR5, HLA-DR, ICOS, LAG-3/CD223, OX -40, PD-1, S1000A8/9, TIM-3, TLT-2, 2B4 및 41BB;
d. CD103(ITGAE), CD166, CD177, CXCR3 및 S1000A8/9;
e. CCR7, CXCR3 및 CXCR5; 및
f. CD3 및 CD8.
6. 앞선 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 상기 결합제가 이중특이적 항체, 디아바디, 항체 Fc 융합체, scFv1-ScFv2, ScFv12-Fc-scFv22, IgG-scFv, DVD-Ig, 트리오맙/쿼드로마, 투-인-원 IgG, scFv2-Fc, TandAb, scFv-HSA-scFv, scFv-VHH, Fab-scFv-Fc, Fab-VHH-Fc, dAb-IgG, IgG-VHH, 탠덤 scFv-Fc, (scFv1)2-Fc-(VHH)2, BiTe, DART, 크로스맙, scFv-Fc, 원-아암 탠덤 scFv-Fc, DART-Fc, 안티칼린, 어피바디, 아비머, DARPin 또는 애드넥틴인, 결합제.
7. 앞선 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 결합 도메인 또는 제2 결합 도메인이 항체 또는 그의 항원 결합 부분으로부터 선택되고, 다른 결합 도메인은 항체 단편인, 결합제.
8. 구현예 7에 있어서, 상기 항원 결합 부분이 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv, 또는 VHH, VNAR, sdAb 또는 나노바디와 같은 단일 도메인 항체인, 결합제.
9. 앞선 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 결합제.
10. 앞선 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제2 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 결합제.
11. 앞선 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 결합 도메인은 CD3 또는 CD3의 서브유닛, 선택적으로 CD3엡실론에 특이적으로 결합하는, 결합제.
12. 구현예 11에 있어서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, VH 및 VL 아미노산 서열은 하기로 이루어진 군으로부터 제시된 아미노산 서열의 쌍으로부터 선택되는, 결합제:
a. 각각, 서열번호:1 및 서열번호:2;
b. 각각, 서열번호:9 및 서열번호:10;
c. 각각, 서열번호:17 및 서열번호:18;
d. 각각, 서열번호:25 및 서열번호:26;
e. 각각, 서열번호:33 및 서열번호:34;
f. 각각, 서열번호:41 및 서열번호:34;
g. 각각, 서열번호:45 및 서열번호:34;
h. 각각, 서열번호:49 및 서열번호:50;
i. 각각, 서열번호:57 및 서열번호:58;
j. 각각, 서열번호:65 및 서열번호:66; 및
k. 각각, 서열번호:65 및 서열번호:166.
13. 구현예 11에 있어서, 제1 결합 도메인은 서열번호:1에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호:2에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 결합제.
14. 구현예 11에 있어서, 제1 결합 도메인은 서열번호:9에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호:10에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 결합제.
15. 구현예 11에 있어서, 제1 결합 도메인은 서열번호:17에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호:18에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 결합제.
16. 구현예 11에 있어서, 제1 결합 도메인은 서열번호:25에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호:26에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 결합제.
17. 구현예 11에 있어서, 제1 결합 도메인은 서열번호:33에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호:34에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 결합제.
18. 구현예 11에 있어서, 제1 결합 도메인은 서열번호:41에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호:34에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 결합제.
19. 구현예 11에 있어서, 제1 결합 도메인은 서열번호:45에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호:34에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 결합제.
20. 구현예 11에 있어서, 제1 결합 도메인은 서열번호:49에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호:50에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 결합제.
21. 구현예 11에 있어서, 제1 결합 도메인은 서열번호:57에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호:58에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 결합제.
22. 구현예 11에 있어서, 제1 결합 도메인은 서열번호:65에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호:66에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 결합제.
23. 구현예 11에 있어서, 제1 결합 도메인은 서열번호:65에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호:166에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 결합제.
24. 구현예 11에 있어서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 hCDR1, hCDR1 및 hCDR3, 및 lCDR1, lCDR2 및 lCDR3을 포함하고, CDR은 하기로 이루어진 군에 제시된 아미노산 서열 세트로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 것인, 결합제:
a. 각각, 서열번호:3 내지 서열번호:8;
b. 각각, 서열번호:11 내지 서열번호:16;
c. 각각, 서열번호:19 내지 서열번호:24;
d. 각각, 서열번호:27 내지 서열번호:32;
e. 각각, 서열번호:35 내지 서열번호:40;
f. 각각, 서열번호:42 내지 서열번호:44 및 서열번호:38 내지 서열번호:40;
g. 각각, 서열번호:46 내지 서열번호:48 및 서열번호:38 내지 서열번호:40;
h. 각각, 서열번호:51 내지 서열번호:56;
i. 각각, 서열번호:59 내지 서열번호:64;
j. 각각, 서열번호:67 내지 서열번호:72; 및
k. 각각, 서열번호: 67 내지 69 및 167 내지 169.
25. 구현예 1 내지 10 중 어느 하나에 있어서, 제1 결합 도메인은 CD8 또는 CD8의 서브유닛, 선택적으로 CD8알파에 특이적으로 결합하는, 결합제.
26. 구현예 25에 있어서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, VH 및 VL 영역이
a. 각각, 서열번호:73 및 서열번호:74; 및
b. 각각, 서열번호:81 및 서열번호:82로 이루어진 군에서 제시된 아미노산 서열 쌍으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖거나,
또는 제1 결합 도메인은 VHH 쇄를 포함하고, VHH 쇄는
c. 서열번호:89;
d. 서열번호 93; 및
e. 서열번호 97로 이루어진 군에서 제시된 아미노산 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 것인, 결합제.
27. 구현예 25에 있어서, 제1 결합 도메인은 서열번호:73에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호:74에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 결합제.
28. 구현예 25에 있어서, 제1 결합 도메인은 서열번호:81에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호:82에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 결합제.
29. 구현예 25에 있어서, 제1 결합 도메인은 서열목록:89에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VHH 쇄를 포함하는, 결합제.
30. 구현예 25에 있어서, 제1 결합 도메인은 서열목록:93에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VHH 쇄를 포함하는, 결합제.
31. 구현예 25에 있어서, 제1 결합 도메인은 서열목록:97에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VHH 쇄를 포함하는, 결합제.
32. 구현예 25에 있어서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 hCDR1, hCDR1 및 hCDR3, 및 lCDR1, lCDR2 및 lCDR3을 포함하고, CDR은
a. 각각, 서열번호:75 내지 서열번호:80; 및
b. 각각, 서열번호:83 내지 서열번호:88로 이루어진 군에 제시된 아미노산 서열 세트로부터 선택된 아미노산 서열을 갖거나,
또는 제1 결합 도메인은 hCDR1, hCDR2 및 hCDR3을 갖는 VHH 쇄를 포함하며, VHH CDR은
c. 각각, 서열번호:90 내지 서열번호:92;
d. 각각, 서열번호:94 내지 서열번호:96; 및
e. 각각, 서열번호:98 내지 서열번호:100로 이루어진 군에 제시된 아미노산 서열 세트로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는, 결합제.
33. 구현예 1 내지 10 중 어느 하나에 있어서, 제1 결합 도메인이 ICOS에 특이적으로 결합하는, 결합제.
34. 구현예 33에 있어서, 제1 결합 도메인은 서열번호:170의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호:171의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 결합제.
35. 구현예 33에 있어서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호:172, 173 및 174에 따른 hCDR1, hCDR1, 및 hCDR3 아미노산 서열, 및 각각 서열번호: 175, 176 및 177에 따른 lCDR1, lCDR2 및 lCDR3 아미노산 서열을 포함하는 것인, 결합제.
36. 구현예 1 내지 10 중 어느 하나에 있어서, 제1 결합 도메인은 PD-1에 특이적으로 결합하는, 결합제.
37. 구현예 36에 있어서, 제1 결합 도메인은 서열번호:178의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호:179의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 결합제.
38. 구현예 36에 있어서, 제1 결합 도메인이 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호:180, 181 및 182에 따른 hCDR1, hCDR1 및 hCDR3 아미노산 서열, 및 각각 서열번호:183, 184 및 185에 따른 lCDR1, lCDR2 및 lCDR3 아미노산 서열을 포함하는 것인, 결합제.
39. 구현예 1 내지 10 중 어느 하나에 있어서, 제1 결합 도메인은 CXCR3에 특이적으로 결합하는, 결합제.
40. 구현예 39에 있어서, 제1 결합 도메인은 서열번호:186의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호:187의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 결합제.
41. 구현예 39에 있어서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호:188, 189 및 190에 따른 hCDR1, hCDR1 및 hCDR3 아미노산 서열, 및 각각 서열번호: 191, 192 및 193에 따른 lCDR1, lCDR2 및 lCDR3 아미노산 서열을 포함하는 것인, 결합제.
42. 구현예 1 내지 10 중 어느 하나에 있어서, 제1 결합 도메인은 CD5에 특이적으로 결합하는, 결합제.
43. 구현예 42에 있어서, 제1 결합 도메인은 서열번호:194의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호:195의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 결합제.
44. 구현예 42에 있어서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호:196, 197 및 198에 따른 hCDR1, hCDR1 및 hCDR3 아미노산 서열, 및 각각 서열번호:199, 200 및 201에 따른 lCDR1, lCDR2 및 lCDR3 아미노산 서열을 포함하는 것인, 결합제.
45. 앞선 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 억제성 KIR 단백질은 KIR3DL1, KIR3DL2, KIR2DL1, KIR2DL2 및 KIR2DL3, 또는 이들의 조합으로부터 선택되는, 결합제.
46. 구현예 45에 있어서, 제2 결합 도메인은 KIR2DL1/2/3 또는 KIR2DL1/2에 특이적으로 결합하는, 결합제.
47. 앞선 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제2 결합 도메인이 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, VH 및 VL 영역은 하기로 이루어진 군에 제시된 아미노산 서열의 쌍으로부터 선택된 아미노산을 갖는 것인, 결합제:
a. 각각, 서열번호:101 및 서열번호:102;
b. 각각, 서열번호:109 및 서열번호:110;
c. 각각, 서열번호:117 및 서열번호:118;
d. 각각, 서열번호:125 및 서열번호:126;
e. 각각, 서열번호:133 및 서열번호:134;
f. 각각, 서열번호:141 및 서열번호:142;
g. 각각, 서열번호:149 및 서열번호:150; 및
h. 각각, 서열번호:157 및 서열번호:158.
48. 앞선 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제2 결합 도메인은 서열번호:101에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호:102에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 결합제.
49. 구현예 1 내지 47 중 어느 하나에 있어서, 제2 결합 도메인은 서열번호:109에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호:110에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 결합제.
50. 구현예 1 내지 47 중 어느 하나에 있어서, 제2 결합 도메인은 서열번호:117에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호:118에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 결합제.
51. 구현예 1 내지 47 중 어느 하나에 있어서, 제2 결합 도메인은 서열번호:125에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호:126에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 결합제.
52. 구현예 1 내지 47 중 어느 하나에 있어서, 제2 결합 도메인은 서열번호:133에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호:134에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 결합제.
53. 구현예 1 내지 47 중 어느 하나에 있어서, 제2 결합 도메인은 서열번호:141에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호:142에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 결합제.
54. 구현예 1 내지 47 중 어느 하나에 있어서, 제2 결합 도메인은 서열번호:149에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호:150에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 결합제.
55. 구현예 1 내지 47 중 어느 하나에 있어서, 제2 결합 도메인은 서열번호:157에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호:158에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 결합제.
56. 구현예 1 내지 47 중 어느 하나에 있어서, 제2 결합 도메인이 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 hCDR1, hCDR1, 및 hCDR3, 및 lCDR1, lCDR2 및 lCDR3를 포함하고, CDR은 하기로 이루어진 군에 제시된 아미노산 서열의 세트로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 CDR로 이루어진 군에 제시된 아미노산 서열의 세트로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 것인, 결합제:
a. 각각, 서열번호:103 내지 서열번호:108;
b. 각각, 서열번호:111 내지 서열번호:116;
c. 각각, 서열번호:119 내지 서열번호:124;
d. 각각, 서열번호:127 내지 서열번호:132;
e. 각각, 서열번호:135 내지 서열번호:140;
f. 각각, 서열번호:143 내지 서열번호:148;
g. 각각, 서열번호:151 내지 서열번호:156; 및
h. 각각, 서열번호:159 및 서열번호:164.
57. 앞선 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 결합제가 Fc 도메인을 함유하지 않는, 결합제.
58. 구현예1 내지 56 중 어느 하나에 있어서, Fc 도메인을 추가로 포함하는, 결합제.
59. 구현예 58에 있어서, Fc 도메인은 IgG1 및 IgG4 Fc 도메인으로부터 선택되는, 결합제.
60. 구현예 59에 있어서, 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성을 갖지 않는, 결합제.
61. 구현예 58 내지 60 중 어느 하나에 있어서, Fc 도메인이 IgG1 Fc 도메인인, 결합제.
62. 구현예 58 내지 61 중 임의의 것에 있어서, Fc 도메인이 IgG1 Fc 눌(null)인, 결합제.
63. 앞선 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 결합제는 2가 또는 4가인, 결합제.
64. 앞선 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 결합제는 이중특이적인, 결합제.
65. 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
66. 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제를 암호화하는 핵산.
67. 구현예 66의 핵산을 포함하는 벡터.
68. 구현예 67의 벡터를 포함하는 세포주.
69. 자가면역 질환을 치료하는 방법으로서, 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 65의 약제학적 조성물을 대상체의 병원성 면역 세포의 수 또는 활성을 감소시키기에 효과적인 양으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 이에 따라 자가면역 질환의 증상을 개선되는, 방법.
70. 병원성 면역 세포에 의해 매개되는 면역 반응을 억제하는 방법으로서, 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 65의 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그(활성화 트레그)를 활성화 또는 자극하기에 효과적인 양으로 CD8+KIR+ T 조절 세포(트레그)와 접촉시키는 것을 포함하고, 이에 따라 병원성 면역 세포의 수 또는 활성이 감소되는, 방법.
71. 자가 항원과 같은 항원에 대한 면역 반응을 억제하는 방법으로서, 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 65의 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극하기에 효과적인 양으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 이에 따라 항원 또는 자가항원에 반응하는 병원성 면역 세포의 수 또는 활성이 감소되는, 방법.
72. 구현예 70에 있어서, CD8+KIR+ 트레그가 생체 내에서 결합제와 접촉되는 것인, 방법.
73. 구현예 70에 있어서, CD8+KIR+ 트레그가 생체 외에서 결합제와 접촉되는 것인, 방법.
74. 구현예 73에 있어서, 활성화된 CD8+KIR+ 트레그가 이를 필요로 하는 대상체에게 유효량으로 투여되는 것인, 방법.
75. 구현예 69 내지 74 중 어느 하나에 있어서, 병원성 면역 세포는 자가반응성 CD4 T 세포, 자가항체 생성 B 세포, 또는 자가 항원 제시 수지상 세포인, 방법.
76. 구현예 69 내지 74 중 어느 하나에 있어서, 병원성 면역 세포가 자기 항원 제시 세포인, 방법.
77. 구현예 71에 있어서, 자가항체의 역가는 대상체에서 감소되는 것인, 방법.
78. 구현예 69 및 74 내지 77 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 셀리악병, 크론병, 소아 특발성 관절염, 염증성 장 질환(IBD), 인슐린 의존성 당뇨병(IDDM 또는 1형 당뇨병), 루푸스 신염, 중증 근무력증, 심근염, 다발성 경화증(MS), 천포창/유천포창, 류마티스 관절염(RA), 경피증/전신 경화증, 쇼그렌 증후군(SjS), 전신성 홍반성 루푸스(SLE), 및 궤양성 대장염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 자가면역 질환을 갖는, 방법.
79. 구현예 78에 있어서, 자가면역 질환은 셀리악병, 크론병, 염증성 장 질환(IBD), 인슐린 의존성 당뇨병(IDDM 또는 1형 당뇨병), 루푸스 신염, 다발성 경화증(MS), 류마티스 관절염(RA), 경피증/전신 경화증, 쇼그렌 증후군(SjS), 전신성 홍반성 루푸스(SLE) 및 궤양성 대장염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
80. 구현예 69 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 결합제가 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD8에 특이적으로 결합하는, 방법.
81. 구현예 69 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 결합제가 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD3에 특이적으로 결합하는, 방법.
82. 구현예 69 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 결합제가 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD5에 특이적으로 결합하는, 방법.
83. 구현예 69 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 결합제가 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 PD-1에 특이적으로 결합하는, 방법.
84. 구현예 69 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 결합제가 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 ICOS에 특이적으로 결합하는, 방법.
85. 구현예 69 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 결합제가 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CXCR3에 특이적으로 결합하는, 방법.
86. 구현예 69 내지 85 중 어느 하나에 있어서, CD8+KIR+ 트레그는 MHC 클래스 I 제한적인, 방법.
87. 구현예 69 내지 86 중 어느 하나에 있어서, CD8+KIR+ 트레그는 MHC HLA E(Qa-1b) 제한적이지 않은, 방법.
88. 구현예 69 내지 87 중 어느 하나에 있어서, 대상체에게 면역억제제를 투여하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
89. 구현예 69 내지 88 중 어느 하나에 있어서, 결합제의 대상체에 대한 투여가 대상체에서 개선된 치료 결과를 초래하는, 방법.
90. 구현예 89에 있어서, 개선된 치료 결과는 질환 발적의 감소된 빈도 또는 중증도, 감소된 전신 염증성 사이토카인, 또는 자가면역 질환과 관련된 증상의 감소된 자가 보고인, 방법.
91. 구현예 69 내지 90 중 어느 하나에 있어서, 결합제가 정맥내로 투여되는, 방법.
92. 구현예 69 내지 91 중 어느 하나에 있어서, 결합제가 피하로 투여되는, 방법.
93. 구현예 69 내지 92 중 어느 하나에 있어서, 결합제가 약 0.01 mg/kg 내지 약 20 mg/kg의 용량으로 투여되는, 방법.
94. 구현예 69 내지 93 중 어느 하나에 있어서, 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없는 것인, 방법.
95. CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극함으로써 대상체에서 자가면역 질환을 치료하기 위한 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 65의 약제학적 조성물의 용도.
96. CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극함으로써 병원성 면역 세포에 의한 면역 반응의 감소를 위한 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 65의 약제학적 조성물의 용도.
97. CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극함으로써 대상체에서 자가항체 역가의 감소를 위한 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 65의 약제학적 조성물의 용도.
98. 암을 치료하는 방법으로서, 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 65의 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극하여 암 증상을 완화하기에 효과적인 양으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 상기 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없는 것인, 방법.
99. 암과 관련된 항원(암 항원)에 대한 면역 반응을 자극하는 방법으로서, 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 65의 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그(활성화된 트레그)를 활성화 또는 자극하기에 효과적인 양으로 CD8+KIR+ T 조절 세포(트레그)와 접촉시키는 것을 포함하고, 이에 의해 암 항원에 대한 면역 반응이 증가하고, 상기 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없는 것인, 방법.
100. 암의 치료 방법으로서, 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 65의 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그를 고갈시킴으로써 암 증상을 완화하기에 효과적인 양으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 상기 결합제는 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는 것인, 방법.
101. 암과 관련된 항원(암 항원)에 대한 면역 반응을 자극하는 방법으로서, 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 65의 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그(활성화된 트레그)를 고갈시키기에 효과적인 양으로 CD8+KIR+ T 조절 세포(트레그)와 접촉시키는 것을 포함하고, 이에 의해 암 항원에 대한 면역 반응이 증가하고, 상기 결합제는 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는 것인, 방법.
102. 구현예 99 또는 101에 있어서, CD8+KIR+ 트레그가 생체 내에서 결합제와 접촉되는 것인, 방법.
103. 구현예 99에 있어서, CD8+KIR+ 트레그가 생체 외에서 결합제와 접촉되는 것인, 방법.
104. 구현예 103에 있어서, 활성화된 CD8+KIR+ 트레그가 이를 필요로 하는 대상체에게 유효량으로 투여되는 것인, 방법.
105. 구현예 99 및 101 내지 104 중 어느 하나에 있어서, 증가된 면역 반응은 암세포의 감소 또는 면역 억제성 면역 세포의 고갈을 포함하는, 방법.
106. 구현예 98 내지 105 중 어느 하나에 있어서, 이에 의해 대상체의 암세포가 감소되는, 방법.
107. 구현예 98 내지 106 중 어느 하나에 있어서, 암은 암종, 림프종, 모세포종, 육종, 골수종 및 백혈병으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
108. 구현예 98 내지 106 중 어느 하나에 있어서, 암은 유방암, 자궁경부암, 난소암, 폐암, 결장암(CRC)(및 장의 다른 암), 피부암, 식도암, 선암, 방광암 및 전립선암과 같은 고형 종양; 및 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
109. 구현예 98 내지 108 중 어느 하나에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD8에 특이적으로 결합하는 방법.
110. 구현예 98 내지 108 중 어느 하나에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD3에 특이적으로 결합하는 방법.
111. 구현예 98 내지 108 중 어느 하나에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD5에 특이적으로 결합하는 방법.
112. 구현예 98 내지 108 중 어느 하나에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 PD-1에 특이적으로 결합하는 방법.
113. 구현예 98 내지 108 중 어느 하나에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 ICOS에 특이적으로 결합하는 방법.
114. 구현예 98 내지 108 중 어느 하나에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CXCR3에 특이적으로 결합하는 방법.
115. 구현예 98 내지 114 중 어느 하나에 있어서, CD8+KIR+ 트레그가 MHC 클래스 I 제한적인, 방법.
116. 구현예 98 내지 115 중 어느 하나에 있어서, CD8+KIR+ 트레그가 MHC HLA E(Qa-1b) 제한적이지 않은, 방법.
117. 구현예 98 내지 116 중 어느 하나에 있어서, 대상체에게 화학요법제 또는 면역요법제, 예컨대 체크 포인트 억제제를 투여하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
118. 구현예 98 내지 117 중 어느 하나에 있어서, 대상체에 대한 결합제의 투여가 대상체에서 개선된 치료 결과를 초래하는, 방법.
119. 구현예 118에 있어서, 개선된 치료 결과는 부분 반응 또는 완전 반응인, 방법.
120. 구현예 118에 있어서, 개선된 치료 결과는 완화(remission)인, 방법.
121. 구현예 98 내지 120 중 어느 하나에 있어서, 결합제가 정맥내로 투여되는, 방법.
122. 구현예 98 내지 120 중 어느 하나에 있어서, 결합제가 피하로 투여되는, 방법.
123. 구현예 98 내지 122 중 어느 하나에 있어서, 결합제는 약 0.01 mg/kg 내지 약 20 mg/kg의 용량으로 투여되는, 방법.
124. CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극함으로써 대상체에서 암을 치료하기 위한 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 65의 약제학적 조성물의 용도로서, 상기 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없는 것인, 용도.
125. CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극함으로써 면역 억제성 면역 세포에 의한 면역 억제의 감소를 위한 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 65의 약제학적 조성물의 용도로서, 상기 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없는 것인, 용도.
126. CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극함으로써 대상체에서 종양 부하의 감소를 위한 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 65의 약제학적 조성물의 용도로서, 상기 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없는 것인, 용도.
127. CD8+KIR+ 트레그를 고갈시킴으로써 대상체에서 암을 치료하기 위한 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 65의 약제학적 조성물의 용도로서, 상기 결합제는 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는 것인, 용도.
128. CD8+KIR+ 트레그를 고갈을 위한 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 65의 약제학적 조성물의 용도로서, 상기 결합제는 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는 것인, 용도.
129. 대상체에서 종양 부하의 감소를 위한 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 65의 약제학적 조성물의 용도로서, 상기 결합제는 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는 것인, 용도.
130. 감염을 치료하는 방법으로서, 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 65의 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극하여 감염의 증상을 개선하기에 효과적인 양으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법.
131. 감염에 의해 유발된 감염된 세포에 대한 면역 반응을 자극하는 방법으로서, 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 65의 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그(활성화된 트레그)를 활성화하거나 자극하기에 효과적인 양으로 CD8+KIR+ T 조절 세포(트레그)와 접촉시키는 것을 포함하고, 이에 의해 감염된 세포에 대한 면역 반응이 증가되는, 방법.
132. 구현예 131에 있어서, CD8+KIR+ 트레그는 생체 내에서 결합제와 접촉되는 것인, 방법.
133. 구현예 131에 있어서, CD8+KIR+ 트레그는 생체 외에서 결합제와 접촉되는 것인, 방법.
134. 구현예 133에 있어서, 활성화된 CD8+KIR+ 트레그를 이를 필요로 하는 대상체에게 유효량으로 투여하는, 방법.
135. 구현예 131 내지 134 중 어느 하나에 있어서, 면역 반응은 감염된 세포의 감소 또는 CD4+ T 조절 세포 및 관용 DC로부터 선택된 면역 억제성 면역 세포의 감소를 포함하는, 방법.
136. 구현예 135에 있어서, 이에 따라 대상체에서 감염된 세포의 수가 감소되는, 방법.
137. 구현예 130 내지 136 중 어느 한 항에 있어서, 감염이 세균성 질환, 전신성 진균성 질환, 리케차성 질환, 기생충성 질환 및 바이러스성 질환으로부터 선택되는, 방법.
138. 구현예 137에 있어서, 감염이 HIV 감염, C형 간염 바이러스(HCV) 감염, 인유두종 바이러스(HPV) 감염, 엡스타인 바 바이러스(EBV) 감염, SARS-COV2 감염(Covid-19)과 같은 코로나바이러스 감염, 거대세포바이러스(CMV) 감염 및 독감 바이러스 감염으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
139. 구현예 130 내지 138 중 어느 하나에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD8에 특이적으로 결합하는 것인, 방법.
140. 구현예 130 내지 138 중 어느 하나에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD3에 특이적으로 결합하는 것인, 방법.
141. 구현예 130 내지 138 중 어느 하나에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD5에 특이적으로 결합하는 것인, 방법.
142. 구현예 130 내지 138 중 어느 하나에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 PD-1에 특이적으로 결합하는 것인, 방법.
143. 구현예 130 내지 138 중 어느 하나에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 ICOS에 특이적으로 결합하는 것인, 방법.
144. 구현예 130 내지 138 중 어느 하나에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CXCR3에 특이적으로 결합하는 것인, 방법.
145. 구현예 130 내지 144 중 어느 하나에 있어서, CD8+KIR+ 트레그가 MHC 클래스 I 제한적인, 방법.
146. 구현예 130 내지 145 중 어느 하나에 있어서, CD8+KIR+ 트레그가 MHC HLA E(Qa-1b) 제한적이지 않은, 방법.
147. 구현예 130 내지 146 중 어느 하나에 있어서, 항균제 또는 항바이러스제를 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
148. 구현예 130 내지 147 중 어느 하나에 있어서, 대상체에 대한 결합제의 투여가 대상체에서 개선된 치료 결과를 초래하는, 방법.
149. 구현예 148에 있어서, 개선된 치료 결과는 감염 또는 감염된 세포의 감소인, 방법.
150. 구현예 130 내지 149 중 어느 하나에 있어서, 결합제가 정맥 내로 투여되는, 방법.
151. 구현예 130 내지 149 중 어느 하나에 있어서, 결합제가 피하로 투여되는, 방법.
152. 구현예 130 내지 151 중 어느 하나에 있어서, 결합제가 약 0.01 mg/kg 내지 약 20 mg/kg의 용량으로 투여되는, 방법.
153. 구현예 130 내지 149 중 어느 하나에 있어서, 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없는 것인, 방법.
154. CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극함으로써 대상체에서 감염을 치료하기 위한 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 65의 약제학적 조성물의 용도.
155. CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극하여 면역 억제성 면역 세포를 억제함으로써 면역 반응을 자극하기 위한 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 65의 약제학적 조성물의 용도.
156. CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극함으로써 대상체에서 감염 또는 감염된 세포의 감소를 위한 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 65의 약제학적 조성물의 용도.
157. 이식 후 이식편 대 숙주 질환(GVHD)의 발병을 감소시키거나 예방하는 방법으로서, 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 65의 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극하여 GVHD의 적어도 하나의 증상을 감소 또는 개선하기에 효과적인 양으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 상기 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없는 것인, 방법.
158. 이식을 받은 대상체를 치료하는 방법으로서, 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 65의 약제학적 조성물을 D8+KIR+ 트레그(활성화된 트레그)를 활성화 또는 자극하기에 효과적인 양으로 CD8+KIR+ T 조절 세포(트레그)와 접촉시키는 것을 포함하고, 이에 의해 GVHD가 감소 또는 억제되며, 상기 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없는 것인, 방법.
159. 이식을 받은 대상체를 치료하는 방법으로서, 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 65의 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그를 고갈시켜 GVHD의 증상을 완화시키기에 효과적인 양으로 이를 필요로 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 상기 결합제는 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는 것인, 방법.
160. 이식에 대한 GVHD를 억제하는 방법으로서, 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 65의 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그를 고갈시키기에 효과적인 양으로 CD8+KIR+ T 조절 세포(트레그)와 접촉시키는 것을 포함하고, 이에 의해 GVHD 또는 그의 증상이 감소되고, 상기 결합제는 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는 것인, 방법.
161. 구현예 158 또는 160에 있어서, CD8+KIR+ 트레그가 생체 내에서 결합제와 접촉되는 것인, 방법.
162. 구현예 158에 있어서, CD8+KIR+ 트레그가 생체 외에서 결합제와 접촉되는 것인, 방법.
163. 구현예 162에 있어서, 활성화된 CD8+KIR+ 트레그를 이를 필요로 하는 대상체에게 유효량으로 투여하는, 방법.
164. 구현예 157 및 160 내지 163 중 어느 하나에 있어서, 감소된 GVHD는 GVHD에서 활성인 CD4+ T 세포의 감소를 포함하는, 방법.
165. 구현예 157 내지 164 중 어느 하나에 있어서, 이식은 장기 이식, 조혈 줄기세포 이식, 제대혈 줄기세포 이식, 유도 만능 줄기세포 유래 전구세포 또는 분화세포 이식, 및 골수 이식으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
166. 구현예 165에 있어서, 이식은 조혈 줄기세포 이식, 제대혈 줄기세포 이식, 유도 만능 줄기세포 유래 전구세포 또는 분화세포 이식, 또는 골수 이식인, 방법.
167. 구현예 157 내지 166 중 어느 하나에 있어서, 이식이 동종이식인, 방법.
168. 구현예 157 내지 167 중 어느 하나에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD8에 특이적으로 결합하는, 방법.
169. 구현예 157 내지 167 중 어느 하나에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD3에 특이적으로 결합하는, 방법.
170. 구현예 157 내지 167 중 어느 하나에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD5에 특이적으로 결합하는, 방법.
171. 구현예 157 내지 167 중 어느 하나에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 PD-1에 특이적으로 결합하는, 방법.
172. 구현예 157 내지 167 중 어느 하나에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 ICOS에 특이적으로 결합하는, 방법.
173. 구현예 157 내지 167 중 어느 하나에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CXCR3에 특이적으로 결합하는, 방법.
174. 구현예 157 내지 173 중 어느 하나에 있어서, CD8+KIR+ 트레그가 MHC 클래스 I 제한적인, 방법.
175. 구현예 157 내지 174 중 어느 하나에 있어서, CD8+KIR+ 트레그가 MHC HLA E (Qa-1b)에 제한적이지 않은, 방법.
176. 구현예 157 내지 175 중 어느 하나에 있어서, 대상체에게 면역억제제를 투여하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
177. 구현예 157 내지 176 중 어느 하나에 있어서, 대상체에 대한 결합제의 투여는 대상체에서 개선된 치료 결과를 초래하는, 방법.
178. 구현예 177에 있어서, 개선된 치료 결과는 GVHD와 관련된 증상의 감소, 감소된 전신 염증성 사이토카인, GVHD에 의해 영향을 받는 조직에서 감소된 병리, 숙주 조직에서 부작용과 관련된 면역 반응과 관련된 증상의 자가 보고 감소, 개선되거나 연장된 이식 생착, 하나 이상의 증상(들)의 완화, 및/또는 이식 거부의 발병 또는 진행의 예방, 지연 또는 둔화, 또는 광범위한 스펙트럼의 면역 억제제, 예컨대 코르티코스테로이드의 사용 감소에 의한 이식 생착 연장인, 방법.
179. 구현예 157 내지 178 중 어느 하나에 있어서, 결합제가 정맥 내로 투여되는, 방법.
180. 구현예 157 내지 178 중 어느 하나에 있어서, 결합제가 피하로 투여되는, 방법.
181. 대상체에서 이식과 관련된 GVHD의 치료를 위한 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 65의 약제학적 조성물의 용도로서, 상기 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성을 갖지 않는 것인, 용도.
182. CD8+ KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극함으로써 대상체에서 이식과 관련된 GVHD의 치료를 위한 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 65의 약제학적 조성물의 용도로서, 상기 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없는 것인, 용도.
183. CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극함으로써 이식과 관련된 GVHD의 감소를 위한 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 65의 약제학적 조성물의 용도로서, 상기 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없는 것인, 용도.
184. 이식에 대한 GVHD의 감소를 위한 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 65의 약제학적 조성물의 용도로서, 상기 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없는 것인, 용도.
185. CD8+KIR+ 트레그의 고갈에 의한 대상체의 이식과 관련된 GVHD의 치료를 위한 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 65의 약제학적 조성물의 용도로서, 상기 결합제는 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는, 용도.
186. CD8+KIR+ 트레그의 고갈을 위한 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 65의 약제학적 조성물의 용도로서, 상기 결합제는 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는, 용도.
187. 이식을 받은 대상체에서 CD8+KIR+ 트레그를 고갈시켜 GVHD를 감소시키기 위한 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 65의 약제학적 조성물의 용도로서, 상기 결합제는 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는, 용도.
188. 구현예 69 내지 94, 98 내지 123, 130 내지 153, 및 157 내지 180의 임의의 방법에서, 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 65의 약제학적 조성물의 용도.
189. 구현예 69 내지 94, 98 내지 123, 130 내지 153, 및 157 내지 180의 임의의 방법에서의 사용을 위한 의약품의 제조에서 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 65의 약제학적 조성물의 용도.
본 개시내용에 대한 구현예의 설명은 개시된 정확한 형태로 완전하거나 그 개시내용을 제한하기 위한 것이 아니다. 본 개시내용의 특정 구현예 및 실시예는 설명의 목적으로 기재되어 있지만, 관련 기술 분야의 통상의 기술자가 인식하는 바와 같이 개시내용의 범위 내에서 다양한 균등 변형이 가능하다. 본원에 제공된 개시내용의 교시는 적절하게 다른 절차 또는 방법에 적용될 수 있다. 본원에 기재된 다양한 구현예를 결합하여 추가 구현예를 제공할 수 있다. 본 개시의 측면은, 필요 시, 본 개시의 또 다른 추가 구현예를 제공하기 위해 상기 참조 및 출원의 구성요소, 기능 및 개념을 사용하도록 변형될 수 있다. 이러한 변형 및 기타 변경은 상세한 설명에 비추어 본 개시내용에 대해 만들어질 수 있다.
전술한 구현예의 임의의 특정 요소는 다른 구현예의 요소와 결합되거나 대체될 수 있다. 더욱이, 본 발명의 그러한 구현예와 관련된 이점들이 이러한 구현예의 맥락에서 설명되었지만, 다른 구현예들도 또한 그러한 이점들을 나타낼 수 있고, 모든 구현예가 본 개시의 범위 내에 속하기 위해 반드시 그러한 이점들을 나타낼 필요는 없다.
확인된 모든 특허 및 기타 공개물은 예를 들어 본 발명과 관련하여 사용될 수 있는 이러한 공개물에 설명된 방법론을 설명하고 개시할 목적으로 인용에 의해 명시적으로 본원에 포함된다. 이들 공개물은 본 출원의 출원일 이전의 공개를 위해서만 제공된다. 이와 관련하여 어떠한 내용도 발명자들이 선행 발명 또는 기타 이유로 그러한 공개에 대항할 권리가 없다는 것을 인정하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 서류의 날짜 또는 표시에 관한 모든 진술은 출원인이 이용할 수 있는 정보를 기반으로 하며, 이 문서의 날짜 또는 내용의 정확성을 인정하는 것으로 간주되지 않는다.
실시예
실시예 1: 자가면역 장애에서 CD8+KIR+ 트레그 세포 활성화 및 병원성 면역 세포에 대한 세포독성에 대한 단일 및 이중특이적 분자의 시험
CD8 KIR+ 트레그 세포 활성화 및 자가반응성 CD4 T 세포와 같은 병원성 면역 세포의 세포독성 매개 제거의 기능적 회복을 위한 단일특이적 및 이중특이적 분자(억제성 KIR 차단제 포함) 패널을 시험하기 위해, 1차 CD8+ KIR+ T 세포를 증가하는 농도의 CD3 작용제 항체와 함께 배양하며, 이는 증가하는 농도의 억제성 KIR 차단 분자의 존재 하에 CD8 KIR+ T 세포 수용체의 펩티드/MHC 결합을 모방한다. 억제성 KIR 신호의 차단은 CD8 KIR+ 트레그 세포 활성화에 필요한 TCR 결합의 활성화 임계값을 감소시켜 CD8 KIR+ T 세포의 특이적이고 증가된 활성화 상태를 야기할 것으로 예상할 수 있다. CD8+KIR+ 트레그 세포의 증가된 활성화는 특정 사이토카인(예를 들어, IFN감마, IL-10, TNF알파, IL-35 또는 그의 서브유닛 등)의 분비 증가, 활성화와 관련된 발현 마커(예를 들어, CD69, CD25, CD62L, CD44, CD45)의 증가 및 증식 증가에 의해 확인된다.
단일 및 이중 특이적 분자 패널은 CD8 KIR+ 트레그 세포 매개된 기능적 결과를 유도하여 그 효능을 기반으로 검사되며, 이어서 글루텐 재자극된 CD4 T 세포에 대한 반응으로 셀리악 환자 말초 혈액 단핵 세포 유래 CD8 KIR+ 트레그 세포를 사용하여 시험된다. CD8 KIR+ 트레그 세포에 의한 병원성 면역 세포에 대한 증가된 활성화 및 강화된 활성은 특정 사이토카인(예를 들어, IFN감마, IL-10, TNF알파 및/또는 IL-35 또는 그의 서브유닛 등)의 분비 증가, 발현 마커(예를 들어, CD69, CD25, CD62L, CD44 및/또는 CD45)의 증가, 억제성 분자(LAG-3, TIM-3 및/또는 PD-1)의 감소, 증식 증가, 자가반응성 CD4+ T 세포 및 자가항체 생성 B 세포, 자가항원 제시 수지상 세포 및 자가 APC와 같은 기타 병원성 면역 세포의 증가된 억제에 의해 확인된다.
실시예 2: 감염 모델에서 CD8+KIR+ 트레그 세포 활성화 및 세포독성에 대한 단일 및 이중특이적 분자의 시험
단일특이적 및 이중특이적 분자 패널(억제성 KIR 차단제 포함)은 CD8 KIR+ 트레그 세포 활성화의 기능적 회복과 병원체 감염 세포의 세포독성 매개 직접 및 간접적 제거에 대해 시험된다. 인간 CMV 특이적 T 세포(셀레로(Cellero))는 MHC 클래스 I 분자 HLA-A2에 결합하는 바이러스 유래 우성 에피토프(pp65)의 용량을 증가시키면서 배양된다. 펩티드는 HLA-A2 발현 림프종 세포주 T2에 로딩된다. 특정 억제성 KIR 분자 기능의 시험을 위해, MHC I 결핍 림프종 T1 세포주 또는 K562 세포주가 관련된 동족 MHC 클래스 I 분자(예를 들어, KIR2DL1을 차단할 때 HLA-C2)로 형질감염된다. KIR 차단이 병원체 감염 세포의 제거를 구체적이고 효과적으로 재구축하는지 확인하기 위해, CD8 트레그 세포 활성화, 세포독성, 사이토카인 생성 및 증식을 조사한다. 아넥신 V(Annexin V) 염색 및 증식을 사용하여 표적 세포 제거 및 세포 사멸의 정도도 결정된다. 대조군으로서 우리는 예를 들어 무관한 인플루엔자 헤마글루티닌 펩티드(음성 대조군), CD3 항체 비드 활성화(양성 대조군) 또는 MHC 결핍 림프종 T1 세포주 또는 부모 K562 세포(음성 대조군)를 사용한다. 더 큰 감도로 활성화를 감지하기 위해 우리는 억제성 KIR 차단제 및/또는 작용제 결합 시 향상된 활성화를 나타내기 위해 예를 들어 Jurkat 세포를 SHP1/2 또는 NFAT 리포터로 형질감염시켜 사용을 위한 분자의 우선순위를 정한다.
실시예 3: 암 모델에서 CD8+KIR+ 트레그 세포 활성화 및 세포독성에 대한 단일 및 이중특이적 분자의 시험
CD8 KIR+ 트레그 세포는 KIR 차단이 CD8 KIR 트레그 세포 활성화 및 표적 세포 사멸을 향상시키는지 확인하기 위해 KIR 이중특이적 분자 패널의 존재 하에 높은 항원 부하를 갖는 종양 세포주 패널에 대해 시험된다. KIR 이중특이적 분자는 단독으로 또는 다른 KIR 이중특이적 분자와 함께 그리고 다른 면역 체크포인트 억제제와 병용하여 시험된다. 예를 들어, 연구는 예컨대 A549(NSCLC), H1229(NSCLC), A375(흑색종), SK-Mel 3(흑색종), Caki-1(RCC) 및/또는 786-O(RCC)를 포함하기 위해 종양 세포주와의 공배양에서 KIR 분자 용량 증량과 함께 항-CD3 작용제 항체 용량 증량을 시험한다. 반응에 대한 일배체형의 의존성은 예를 들어 1차 NY-ESO-1 특이적 T 세포(셀레로(Cellero)) 대 NY-ESO1 펩티드 펄스 T2(HLA-A2 제한 세포주) 및/또는 HLA-A2 K562를 사용하여 결정된다. 종양 세포 표적에 의한 HLA 발현의 서브유닛이 최적의 반응(예를 들어, KIR3DL1에 결합하는 HLA-B 또는 HLA-C에 결합하는 KIR2DL1/2/3)에 필요한지 여부를 평가하기 위해, 관련 HLA 분자가 K562 또는 T1 세포에서 과발현되며 관련 우성 에피토프(https://antibodies.cancer.gov/detail/MajorHistocompatibilityComplexClassICPeptide1)로 펄싱된다.
실시예 4: GVHD 이식 모델에서 CD8+KIR+ 트레그 세포 활성화 및 세포독성에 대한 단일- 및 이중특이적 분자의 시험
조혈 줄기세포 이식 및 기타 이식 절차 후, 공여자 유래 세포가 동종 숙주 조직을 이물질로 인식하고 활성화되어 이식편 대 숙주 질환(GVHD)으로 알려진 수용자의 건강한 세포를 파괴하는 심각하고 생명을 위협하는 합병증이 발생할 수 있다. 동종반응성 GVHD는 이식 수용자의 최대 50%에서 이식 관련 이환율을 초래하고 이식 후 약 20%의 사망을 차지한다. CD8+KIR+ 트레그에 대한 KIR 차단은 이식된 세포가 건강한 조직을 파괴하고 이를 이물질로 인식하는 경우 이식편 대 숙주 질환의 심각성을 줄일 수 있다. KIR 차단이 GVHD 중증도에 미치는 영향을 시험하기 위해, 인간 면역 세포를 NOD/SCID/감마 쇄(NSG) 결핍 마우스에 주입한 후 인간 세포 활성화 및 마우스 조직 파괴의 결과로서 다기관 급성 병리가 관찰하는 잘 특성화된 GVHD 모델을 사용한다. KIR 차단 단일 및 이중특이적 분자는 30일 내지 45일 연구 기간 동안 72시간마다 주입되며. 종점 분석에는 혈청 전염증성 사이토카인, 인간 T 세포의 활성화 마커 발현, 질병 점수(생존 및 체중 포함), 염증 및 상피 세포 사멸에 대한 장 조직의 조직병리학적 분석이 포함된다. 이 연구는 이식 생착을 유지하면서 GVHD의 중증도를 줄이는 방법으로서 KIR 차단의 유용성을 지원할 뿐만 아니라 여러 장기 및 조직에 영향을 미칠 수 있는 전신 질환에 대한 KIR 차단의 효과를 결정한다.
실시예 5: Ly49 차단은 CD8+Ly49+ T 조절 세포의 활성을 증가시킨다
CD8+Ly49+ 트레그에 대한 Ly49 차단의 효과는 시험관 내에서 확인되었다. 간략하게, 표준 MOG 펩티드 프로토콜을 사용하여 EAE 유도 10일 후 10일차에 C57BL/6 마우스의 비장 및 림프절로부터 세포를 분리하였다(Saligrama et al., Nature 572:481-487 (2019) 참조). CD4+ T 세포, CD8+ CD28-조절 T 세포 및 CD8+CD28+를 자기적(magnetic) 분리를 사용하여 분리하고 차단 항체(대조군) 또는 차단 항체 LY49 C/l(클론 5e6; 항체의 Fc 부분 결여)(항-Ly49)의 F(ab')2 단편의 부재 하에서 CD3/CD28을 자극하였고 및 CD4 T 세포와 1:1 배양했다.
도 4a 내지 4d를 참조하면, Ly49 차단의 존재 하에 CD8+ 트레그 활성화(도 4a), 면역억제성 사이토카인의 생성(도 4b), 세포용해 활성(그랜자임 B)(도 4c) 및 항염증성 IL-10 사이토카인의 CD4 T 세포 생산 증가(도 4d)에서 통계적으로 유의미한 증가가 있었다. 전장 Ly49 C/I 차단 항체(클론 5E6)의 존재 하에 CD3/CD28로 자극된 세포에서 유사한 결과가 관찰되었다(데이터는 나타내지 않음). 이러한 결과는 CD8+Ly49+ T 세포가 Ly49/KIR 차단에 의해 활성화의 증가를 나타냄을 확인시켜준다.
세포(상기)의 상청액을 공동 배양 개시 후 48시간에 수집하고 바이오플렉스(Bioplex) 분석을 사용하여 다양한 분석물(사이토카인)에 대해 분석했다.
이 분석의 결과는 Ly49 차단이 MOG 펩티드 단독으로 처리된 마우스와 비교하여 MOG 및 억제제 펩티드로 처리된 마우스의 샘플에서 다음과 같은 전염증성 사이토카인을 억제함을 나타내었다: RANTES, IL-6, IL-18, GM-CSF, TNF알파 및 IFN감마(데이터는 표시되지 않음). 또한, IL-2 및 IL-15 수준은 MOG 펩티드로 처리된 마우스와 비교하여 MOG 및 억제제 펩티드로 처리된 마우스의 샘플에서 감소했다(데이터는 표시되지 않음). 항염증 사이토카인 IL-22 및 MCP-3의 수준은 MOG 펩티드로 처리된 마우스와 비교하여 MOG 및 억제제 펩티드로 처리된 마우스의 샘플에서 감소했다(데이터는 표시되지 않음).
Ly49 차단의 효과는 뮤린 EAE 모델의 생체 내에서 평가되었다. 간략하게, 표준 MOG 주사 프로토콜을 사용하여 C57BL/6 마우스에서 EAE를 유도하였다( Saligrama et al., Nature 572:481-487 (2019) 참조). 마우스에 MOG 단독 또는 "대리(surrogate) 펩티드" 칵테일("SP") 또는 차단 항체 LY49 C/1의 F(ab')2 단편(클론 5E6; 항체의 Fc 부분 결여)(항-Ly49 또는 "Ly49 차단")(도 5)과 함께 투여되었다. Ly49 차단은 질환의 발병을 지연시키고 질환의 중증도를 감소시켰으며(도 6), 이는 자가면역 발동 시 CD8+ 트레그 동원이 질환 조절에 기여했음을 시사한다.
실시예 6: CD8 KIR+ T 세포는 셀리악 환자에서 KIR 발현에 대해 음성인 CD8 T 세포보다 더 큰 세포용해 잠재력을 갖는다
셀리악 환자와 건강한 공여자로부터 말초혈액 단핵세포(PBMC)를 얻었다. PBMC는 CD8+ T 세포에 대해 강화되었고, 이후 범억제성 KIR 반응성 펩티드의 혼합 및 CD8을 포함하는 여러 표면 마커에 대해 염색되었고, 분류되어 CD8+ KIR+ T 세포 및 CD8+ KIR- 세포를 얻었다. 분류 후, PBMC를 글루텐 펩티드로 자극하였다. 자극 6일 후, CD8 트레그 세포가 세포 내 그랜자임, 퍼포린 및 IFN감마 수준에 대해 평가되었다.
셀리악 환자의 PBMC는 CD8+KIR+ 트레그 세포의 비율이 더 컸다(도 7a). KIR+ CD8+ T 세포는 CD8+ KIR- T 세포와 비교하여 퍼포린, 세포 내 IFN감마 및 그랜자임 B를 갖는 세포의 비율이 더 컸다(도 7b 및 7c). 이러한 결과는 셀리악 환자가 KIR에 대해 음성인 CD8+ T 세포보다 더 큰 세포용해 잠재력을 가진 CD8+KIR+ T 세포를 보유하고 있음을 나타낸다.
실시예 7: 셀리악 환자는 건강한 대조군 보다 더 많은 KIR+ CD8+ T 세포 및 KIR+ CD8+ T 세포 상의 더 많은 ICOS 발현을 갖는다
셀리악 환자(6명) 또는 건강한 공여자의 PBMC를 유세포 분석법으로 분석하고 CD8+ T 세포에 게이팅했다. 셀리악 환자의 PBMC는 건강한 공여자의 PBMC보다 CD3+/PanKIR+ T 세포가 더 많았다(도 8a). 셀리악 환자의 PBMC는 건강한 공여자의 PBMC보다 CD3+/PanKIR+/ICOS+ 세포가 더 많았다(도 8b). 이러한 결과는 셀리악 환자가 KIR+ CD8+ T 세포에서 ICOS 발현이 더 많다는 것을 나타낸다.
실시예 8: 글루텐 재자극은 그랜자임 B 수준 및 CD8+KIR+ 트레그의 탈과립화 및 CD4+ T 세포의 손실을 증가시킨다
CD8+KIR+ T 세포에 대한 글루텐 재자극의 효과를 확인하기 위해, 셀리악 환자의 PMBC를 12일 동안 글루텐 펩티드로 자극하여 IL-7 및 15의 존재 하에 CD4 반응성 세포와 CD8+ 트레그 세포를 강화했다. 그런 다음 CD8 트레그 및 CD4 T 세포를 선택하여 펩티드, 독감 펩티드 또는 글루텐 펩티드 없이 펄스된 자가 APC와 1:1로 조합했다. 48시간 후, 유세포 분석기로 세포를 분석했다.
글루텐 펩티드를 사용한 재자극은, 대조군 독감 펩티드 또는 자극받지 않은 세포를 사용한 재자극과 비교하여, CD107(도 9a, 왼쪽) 및 그랜자임 B 수준(도 9a, 오른쪽)에 의해 측정된 바와 같이 탈과립을 증가시켰다. (598은 환자 598의 PBMC를 나타낸다.) 글루텐 펩티드를 사용한 재자극은 또한 생존 가능한 CD4+ 세포의 백분율 감소를 야기한 반면, 독감 펩티드를 사용한 재자극은 그렇지 않았다(도 9b). 이러한 결과는 CD8+KIR+ 트레그에 의한 항원 반응이 특이적이고, 셀리악 환자의 트레그 소스와 일치하며, 빠르고 지속됨을 나타낸다. 이러한 결과는 CD8+ 트레그 세포가 상향 조절되고 CD4+ T 세포 활성화가 하향 조절되며, 병원성 CD4+ T 세포가 제거됨을 보여준다.
실시예 9: KIR 차단은 그랜자임 B 함량 및 CD8+ T 세포의 탈과립을 증가시킨다
CD8+CD16+ T 세포는 셀리악병으로 진단된 3명의 환자로부터 선택되었고 100ug/ml KIR2DL1/2/3 및 KIR3DL1 길항제 항체(각각 50ug)의 존재 또는 부재 하에 CD4+ T 세포 및 1ug/ml 항-CD3 작용제 항체(클론 OKT3)와 1:1로 배양되었다. 48시간 후, CD8+ 트레그 세포를 유세포측정법을 사용하여 분석했다. KIR 차단("KIR 블록")은 세포내 그랜자임 B 수준(도 10a) 및 탈과립화(CD107)(도 10b)를 증가시켰다.
KIR 차단의 효과는 셀리악 환자의 PBMC를 사용하는 또 다른 실험에서 시험관 내에서 평가되었다. 간략하게, CD8+ 트레그는 셀리악 환자 PBM으로부터 강화되었고 자가 CD4 T 세포 및 글리아딘 펩티드 칵테일로 펄싱된 항원 제시 세포와 함께 배양되었고, 유세포측정법을 사용하여 분석되었다. 재자극 시, 항 억제성 KIR 항체(항-KIR2DL1/2/3, 항-KIR3DL1 또는 항-KIR2DL1/2/3 및 KIR3DL1의 칵테일)를 투여받은 세포는 CD8+ T 세포의 세포용해 활성 유도, CD4+ T 세포 활성화의 감소, 및 CD4+ T 세포 사멸 증가(도 11)를 나타냈다. 이러한 결과는 단일 및 이중특이적 KIR 차단 시 여러 환자 샘플에서 일관되게 관찰되었다.
실시예 10: KIR 차단은 CD4+ T 세포 활성화를 감소시킨다
CD8+ CD16+ T 세포는 셀리악병으로 진단된 3명의 환자로부터 선택되었고 100ug/ml KIR2DL1/2/3 및 KIR3DL1 길항제 항체(각각 50ug)의 존재 또는 부재 하에 CD4+ T 세포 및 1ug/ml 항-CD3 작용제 항체(클론 OKT3)와 1:1로 배양되었다. 48시간 후, CD8+ 트레그 세포를 유세포측정법을 사용하여 분석했다. KIR 차단은 세 환자 모두의 샘플에서 CD4+ T 세포 활성화 및 증식(CD69)을 감소시켰다(도 12).
실시예 11: 셀리악병의 CD8+ 트레그 세포에서 선택 KIR 단백질과 HLA 리간드 발현 간의 결합
셀리악 환자 PBMC를 KIR2DL1/2/3 및 KIR3DL1을 표적으로 하는 항체로 염색했다. CD8 T 세포에 대한 게이팅 후, KIR 리간드 및 HLA 일배체형에 대한 세포의 양성 백분율을 결정했다. (HLA 및 KIR 타이핑은 Scisco Genetics와 협력하여 수행되었다.)
환자의 CD8 T 세포는 다음과 같이 KIR을 발현했다: 3개 중 3개는 KIR2DL을 발현했고 3개 중 2개는 말초 혈액에서 KIR3DL을 발현했다. 선택 KIR에 대한 HLA 리간드는 셀리악 환자 샘플에서 과도하게 나타났다. 환자 10명 중 9명은 HLA-C 07:01:01 복제물이 1개 이상, 환자 10명 중 10명은 HLA-B 08:01:01 복제물이 1개 이상이었다.
실시예 12: CD8 및 KIR2DL에 공동 결합하는 이중특이적 분자의 특성화
크로스맙(CrossMab)은 KIR2L1/2/3에 결합하는 Fab(IPH2102 IgG1r mAb(모 항체 VH 및 VL 서열, 각각 서열번호: 101 및 102)로부터 제조됨) 및 CD8알파에 결합하는 scFv (Mb1b IgG1r mAb(모 항체 VH 및 VL 서열, 서열번호:81 및 82)로부터 제조됨)를 사용하여 제조되었다. Fab 및 scFv를 IgG1 힌지-CH2-CH3에 부착시켰고, 여기서 CH3 도메인은 2개의 이형이량체 중쇄를 올바르게 연결하기 위해 "놉-인투-홀(knobs-into-holes)" 돌연변이를 포함하도록 조작되었다. "놉" 중쇄는 돌연변이 S354C 및 T366W를 포함하였다. "홀" 중쇄는 돌연변이 Y349C, T366S, L368A 및 Y407V를 포함하였다.
KIR2L1/2/3 - CD8알파 크로스맙은 옥테트(Octet) 기기를 사용하여 생물층 간섭계에 의해 KIR2DL1 또는 KIR2DL3 및 CD8알파에 대한 공동 결합에 대해 테스트되었다. 공동 결합 연구를 위해 크로스맙은 0.3125ug/ml 내지 20ug/ml 범위의 2배 희석액을 사용하여 AHC(항-인간 Fc) 바이오센서에 포획되었다. 분석물(KIR2DL1, KIR2DL3 및 CD8알파)은 100nM에서 일정하게 유지되었다. 캡처 후 분석물 공동 결합은 두 가지 방식으로 분석되었다: 먼저 KIR2DL1 또는 KIR2DL3의 연결에 바로 이어 CD8알파의 연결, 또는 CD8알파의 연결에 이어 KIRDL1 또는 KIR2DL3의 직접 연결. KIR2DL1, KIR2DL3 및 CD8알파는 헥사히스티딘 펩티드로 태그되었다. 크로스맙은 표적 KIR2DL1 또는 KIR2DL3 및 CD8알파를 공동 결합할 수 있었다.
KIR2DL1, KIR2DL3 및 CD8알파 리간드에 대한 크로스맙 친화도를 측정하고 옥테트 기기를 사용하여 항-CD8알파 및 항-KIR2DL1/L2/L3 모 항체와 비교했다. 동역학 분석을 위해 크로스맙을 1.25ug/ml의 로드 농도를 사용하여 AHC(항인간 Fc) 바이오센서에 포획했다. 각 분석물(KIR2DL1, KIR2DL3 및 CD8알파) 농도 범위는 6.25nM 내지 200nM 였다. 포획 후 분석물 결합은 먼저 KIR2DL1, KIR2DL3 또는 CD8알파의 결합에 이어 각 분석물의 독립적 해리에 대해 분석되었다. 이를 통해 ka(on rate), kd (off rate) 및 KD 값을 얻을 수 있었고 모 항체와 직접 비교할 수 있었다. 동역학 분석은 크로스맙이 표적 KIR2DL1, KIR2DL3 및 CD8알파에 대한 친화성을 유지함을 나타냈다.
모 항체 항-KIR2DL1/L2/L3 IPH2102 IgG1r mAb 및 항-CD8알파 Mb1b IgG1r mAb의 친화도도 분석했다. 동역학 분석을 위해 모 항체를 1.25ug/ml의 로드 농도를 사용하여 AHC(항-인간 Fc) 바이오센서에 개별적으로 포획했다. IPH2102 IgG1r mAb의 경우, KIR2DL1 또는 KIR2DL3 분석물의 범위는 6.25nM 내지 200nM 였다. 포획 후 분석물 결합은 먼저 KIR2DL1 또는 KIR2DL3의 결합에 대해 분석되었고 이후 각 분석물의 독립적 해리에 대해 분석되었다. 마찬가지로, Mb1b IgG1r mAb의 경우, CD8알파 분석물의 범위는 6.25nM 내지 200nM 였다. 포획 후 분석물 결합은 먼저 CD8알파의 결합에 대해 분석되었고 이후 해리에 대해 분석되었다.
실시예 13: 다른 자가면역 질환으로 진단된 환자로부터의 PBMC 샘플 분석
루푸스, 궤양성 대장염, 크론병, 다발성 경화증 및 1형 당뇨병을 앓고 있는 환자의 PBMC를 유세포측정법 및 바이오플렉스 분석을 사용하여 분석했다. CD8+KIR+ 트레그 세포는 억제성 KIR 표면 수용체, KIR2DL1/2/3 및 KIR3DL1의 하위 집합을 표적으로 하는 항체 칵테일을 사용하여 이러한 환자 샘플에서 확인되었다(도 13). 트레그는 셀리악병 환자의 CD8+ 트레그와 일치하는 CXCR3, CD39 및 기타 세포 표면 마커를 발현하는 것으로 밝혀졌다 (데이터는 표시되지 않음). CD8+ 트레그는 IFN감마 및 IL-22를 포함하여 CD8+ 트레그 세포 기능과 관련된 가용성 분석물을 생산하는 것으로 밝혀졌다 (데이터는 표시되지 않음).
실시예 14: CD8+KIR+ 트레그 세포의 표현형 및 기능적 특성화
셀리악병 및 HLA DQ2.5 일배체형을 가진 개체의 PBMC를 유세포측정법 및 바이오플렉스 분석법을 사용하여 분석하여 상청액에서 가용성 분석물을 검출했다. CD8+KIR+ 트레그 세포는 이들 환자 샘플에서 확인되었고, 표면 마커 CD39, KLRG1, NKG2D, NKG2C, KLRB, CXCR3 및 CD122를 발현하는 것으로 밝혀졌다(도 14).
자가 CD4 T 세포 및 글리아딘 펩티드로 펄싱된 항원 제시 세포와 함께 최적화된 조건에서 배양되었을 때, CD8+KIR+ 트레그는 세포용해 마커 그랜자임 B, 퍼포린 및 CD107a, 세포내 항-염증성 사이토카인 IL-10, IFNγ 및 TNFα 및 분비된 사이토카인을 포함하여 CD8+ 트레그 세포 기능과 관련된 가용성 분석물질을 생성했다 (예를 들어, 도 15 참조). 증가하는 용량의 항-CD3 항체로 분리된 CD8+KIR+ 트레그 세포의 자극은 전달된 TCR 신호의 강도로 적정되는 RANTES 및 TNFβ를 포함하여 용량 의존 방식으로 다수의 사이토카인 및 케모카인을 생성했다(도 16). 글리아딘으로 재자극된 CD4+ T 세포와 공동 배양했을 때, CD8+KIR+ 트레그 세포는 CD4+ T 세포 활성화를 제어하고 CD4+ 세포에 의해 생성된 전염증성 사이토카인을 감소시켰다 (도 17 내지 도 19). 활성화의 CD4+ T 세포 마커는 글리아딘 재자극 동안 CD8+KIR+ 트레그 세포의 추가가 글리아딘-반응성 CD4+ T 세포 활성화를 특이적으로 감소시킨다는 것을 보여준다 (도 18). CD4 T 세포에 의해 생성된 항염증 사이토카인도 증가하였고(도 19) 공동 배양 상청액에서 검출된 특정 염증 사이토카인 및 케모카인은 하향 조절되었다. 이들 데이터는 셀리악 환자로부터 유래된 PBMC로부터 분리된 CD8+KIR+ 트레그가 최적화된 조건 하에서 배양될 때 생존하고, 연장되고 기능할 수 있고, 따라서 셀리악 환자의 기능적 결함이 가역적인 것으로 나타남을 보여준다.
추가로, 반복된 항원 노출 시 CD8+ 트레그 세포 반응 및 유병률의 풍부한 리콜이 관찰되었으며, 이는 잠재적으로 긴 지속성과 질환 변형 효과를 시사한다(도 20). 환자 간 가변성이 관찰되었지만 반복적인 항원 노출에 대한 CD8+ 트레그 세포의 기능적 반응에 대한 일관된 효과가 여러 데이터 판독에서 관찰되었다. 이러한 결과는 CD8+ 트레그 세포의 가능한 유도 기억 기능을 시사한다.
실시예 15: 셀리악병의 CD8+ 트레그 세포에서 선택 KIR 단백질과 HLA 리간드 발현 간의 결합
셀리악 환자 PBMC를 KIR2DL1/2/3 및 KIR3DL1에 대한 항체로 염색하고 유세포측정법을 사용하여 분석했다. KIR2DL1/2/3, KIR3DL1 또는 KIR2DL1/2/3과 KIR3DL1 둘 다를 선택적으로 발현하는 환자와 함께 CD8+ 트레그 세포에서 특정 억제성 KIR 단백질의 좁은 발현이 관찰되었으며(도 21), 관찰은 전신성 홍반성 루푸스, 궤양성 대장염, 크론병, 다발성 경화증 및 1형 당뇨병을 포함하여, 다른 AI 징후가 있는 환자까지 확장되었다 (도 13). 이 발현 패턴은 억제성 KIR 단백질의 거의 유비쿼터스 게놈 발현과 관련이 있으며, 건강한 대조군 집단에 비해 셀리악 환자에 걸쳐 각각의 HLA 리간드의 일배체형 발현을 과장되게 나타낸다 (표 2).
실시예 16: 글루텐을 사용한 공격접종시험 전후 셀리악 환자의 PBMC 및 장 조직에서 T 세포 발현 및 상호작용 패턴
포르말린 고정, 파라핀 내장형 셀리악 환자 십이지장 생검은 고정 조직에서 동시에 8개의 세포 마커를 검출하는 독점 플랫폼 및 맞춤형 항체 칵테일(Utivue, Inc.와 협력하여 개발)을 사용하여 절단 및 염색되었다. 항체 칵테일에는 CD3, CD4, CD8, CD28, PD-1, Ki-67, 그랜자임 B 및 KIR2DL1/2/3을 표적으로 하는 항체가 포함되었다.
CD8+ KIR+ 트레그 세포는 셀리악병에서 증가한다(도 22). 억제성 KIR의 발현은 셀리악 환자 말초 혈액 및 조직에서 확인되었고 CD8+ 트레그 세포의 마커이다(도 23). CD8+ T 세포의 하위 집합만이 KIR 발현과 함께 공동 국소화되므로 KIR 및 CD8 공동 발현은 장 조직에서 CD8+ 트레그 세포를 나타낸다.
무글루텐 식이요법 중인 셀리악 환자의, 글루텐을 공격접종시험 전, 십이지장 조직 샘플을 T 세포 마커에 대해 분석했다. 그랜자임-양성 CD8+ T 세포는 CD4+ T 세포와 직접 상호작용하는 것으로 관찰되었다(도 24 참조, 여기서 그랜자임 B는 흰색으로 표시되고, CD8+ T 세포는 녹색으로 표시되며, CD4+ T 세포는 황토색으로 표시되며, CD8+ T 세포와 CD4+ T 세포 사이의 상호작용은 노란색으로 표시됨).
글루텐으로의 공격접종시험 시, CD8+ 트레그 세포는 셀리악 환자의 말초 혈액(도 25) 및 조직(도 26)에서 증가하였다. 글루텐 공격접종시험 14일 후, (글루텐 공격접종시험 이전 매칭된 환자 조직에 비해) CD4+ T 세포 수, 공동자극 분자 발현 및 조직에서의 증식은 감소한 반면, 억제성 KIR2DL 발현 T 세포는 증가했다 (도 27).
실시예 17: 이중특이적 KIR 결합제
KIR 및 다른 분자를 표적으로 하는 결합 도메인을 갖는 이중특이적 항체 또는 그의 단편과 같은 이중특이적 KIR 결합제는 활성화의 기능적 임계값에 도달하고 독성 없이 기능을 달성하기 위해 신호 강도를 조작하는 데 사용될 수 있다(도 28).
간략하게, CD8 트레그는 셀리악 환자 PBMC로부터 농축되었고 자가 CD4 T 세포 및 글리아딘 펩티드 칵테일로 펄싱된 항원 제시 세포와 함께 배양되었고 유세포측정법(도 29a, 29b 및 29c), 34개의 분석물을 검출하는 바이오플렉스 분석(ProCarta Plex; 도 30), 및 인큐사이트(incucyte)를 사용한 세로 이미징 및, 이후 유세포측정법(도 31)을 사용하여 분석되었다. 이중특이적 및 단일특이적 KIR 차단이 있는 셀리악 환자 유래 PBMC의 글루텐 재자극은 이중특이적 차단(항-KIR2DL1/2/3 및 항-CD8)이 KIR 단독 차단보다 CD8+ 트레그 세포 활성에 더 큰 영향을 미쳤음을 나타낸다 (도 29a, 29b 및 29c). 이들 효과는 또한 용량 의존적이었다(도 29b 및 29c). 전염증성 사이토카인(도 30) 및 케모카인의 광범위한 패널에 대해서도 용량 의존적 감소가 관찰되었다. 이중특이적 KIR-CD8 차단은 또한 CD4+ T 세포 생존에 대한 더 크고 용량 의존적인 효과와 관련이 있다(도 31 및 32). 이중특이적 결합 KIR3DL1 및 CD8은 유사하게 효과적이었다 (데이터는 나타내지 않음). CD8+ T 세포에 대한 이중특이적 차단제(항-KIR2DL1/2/3 및 항-CD8)의 우선적인 결합은 NK 세포에 비해 KIR을 발현하는 CD8+ T 세포가 10배 더 적음에도 불구하고 입증되었다(도 33 및 34). KIR2DL1/2/3보다는 KIR3DL1을 표적으로 하는 이중특이성에 대한 유사한 우선적 결합이 관찰되었다 (데이터는 표시되지 않음).
특정 구현예를 예시하고 설명했지만, 위에서 설명한 다양한 구현예를 결합하여 더 많은 구현예를 제공할 수 있으며 본 발명의 정신과 범위를 벗어나지 않고 다양한 변경이 이루어질 수 있음이 쉽게 이해될 수 있다.
2021년 2월 3일에 출원된 미국 임시 특허 출원번호 63/145,394, 2021년 2월 10일에 출원된 미국 특허 가출원번호 63/148,016, 2021년 3월 15일에 출원된 미국 특허 가출원번호 63/161,325, 2021년 6월 11일에 출원된 미국 특허 가출원번호 63/209,949, 2022년 1월 10일에 출원된 미국 특허 가출원번호 63/298,028을 포함하여, 본 명세서에 언급되거나 출원 데이터 시트에 기재된 모든 미국 특허, 미국 특허 출원 간행물, 미국 특허 출원, 외국 특허, 외국 특허 출원 및 비특허 간행물은 달리 명시적으로 언급되지 않는 한, 그 전체가 인용에 의해 본원에 포함된다. 구현예의 측면은, 다양한 특허, 출원 및 간행물의 개념을 사용하여 더 많은 구현예를 제공하기 위해 필요한 경우 변형될 수 있다.
이러한 변형 및 기타 변경은 상기 상세한 설명에 비추어 구현예에 대해 이루어질 수 있다. 일반적으로, 하기 특허청구범위에서 사용되는 용어는 명세서 및 특허청구범위에 개시된 특정 구현예로 특허청구범위를 한정하는 의미로 해석되어서는 안되나, 그러한 청구항이 권리화되는 균등물의 전체 범위와 함께 가능한 모든 구현예를 포함하는 것으로 해석되어야 한다. 따라서, 청구항은 본 개시에 의해 제한되지 않는다.
SEQUENCE LISTING <110> Mozart Therapeutics, Inc. <120> BINDING AGENTS AND METHODS OF USING THE SAME <130> 670151.403WO <150> US 63/145394 <151> 2021-02-03 <150> US 63/148016 <151> 2021-02-10 <150> US 63/161325 <151> 2021-03-15 <150> US 63/209949 <151> 2021-06-11 <150> US 63/298028 <151> 2022-01-10 <160> 201 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CD3epsilon VH <400> 1 Asp Ile Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr 20 25 30 Thr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 2 <211> 106 <212> PRT 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Phe Ser Leu Thr Ser Phe 20 25 30 Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Asn Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Asn Ser Asn His Tyr Val Ser Ser Phe Tyr Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 158 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> KIR3DL2 VL <400> 158 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Gly Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr 20 25 30 Ile Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Gly Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 His Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Pro Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Ser Phe Ser Ile Ser Asn Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Thr Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Asn Leu Trp Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 159 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> KIR3DL2 VH AZ158 HCDR1 <400> 159 Gly Phe Ser Leu Thr Ser Phe Gly Val His 1 5 10 <210> 160 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> KIR3DL2 VH AZ158 HCDR2 <400> 160 Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met Ser 1 5 10 15 <210> 161 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> KIR3DL2 VH AZ158 HCDR3 <400> 161 Gly Asn Ser Asn His Tyr Val Ser Ser Phe Tyr Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 162 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> KIR3DL2 VL LCDR1 <400> 162 Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr Ile Ala 1 5 10 <210> 163 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> KIR3DL2 VL LCDR2 <400> 163 Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Pro 1 5 <210> 164 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> KIR3DL2 VL LCDR3 <400> 164 Leu Gln Tyr Asp Asn Leu Trp Thr 1 5 <210> 165 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker <220> <221> VARIANT <222> (6)..(25) <223> amino acids 6-25, 11-25, 16-25, or 21-25 may be present or absent <400> 165 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 20 25 <210> 166 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CD3epsilon VL1 15C3 <400> 166 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 167 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CD3epsilon VL1 15C3 LCDR1 <400> 167 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 168 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CD3epsilon VL1 15C3 LCDR2 <400> 168 Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr 1 5 <210> 169 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CD3epsilon VL1 15C3 LCDR3 <400> 169 Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Trp Thr 1 5 <210> 170 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ICOS VH 422 H2L5 <400> 170 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Leu Ile Ser Ile Tyr Ser Asp His Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Gly Arg Asn Asn Tyr Gly Asn Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 171 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ICOS VL <400> 171 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr 35 40 45 Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly Ser Gly Tyr Pro Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 172 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ICOS VH 422 H2L5 HCDR1 <400> 172 Asp Tyr Ala Met His 1 5 <210> 173 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ICOS VH 422 H2L5 HCDR2 <400> 173 Leu Ile Ser Ile Tyr Ser Asp His Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 174 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ICOS VH 422 H2L5 HCDR3 <400> 174 Asn Asn Tyr Gly Asn Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 175 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ICOS VL LCDR1 <400> 175 Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met His 1 5 10 <210> 176 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ICOS VL LCDR2 <400> 176 Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser 1 5 <210> 177 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ICOS VL LCDR3 <400> 177 Phe Gln Gly Ser Gly Tyr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 178 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PD-1 VH Pembrolizumab <400> 178 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 179 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PD-1 VL <400> 179 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 35 40 45 Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 85 90 95 Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 180 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PD-1 VH Pembrolizumab HCDR1 <400> 180 Asn Tyr Tyr Met Tyr 1 5 <210> 181 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PD-1 VH Pembrolizumab HCDR2 <400> 181 Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Asn <210> 182 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PD-1 VH Pembrolizumab HCDR3 <400> 182 Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 183 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PD-1 VL LCDR1 <400> 183 Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Leu His 1 5 10 15 <210> 184 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PD-1 VL LCDR2 <400> 184 Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser 1 5 <210> 185 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PD-1 VL LCDR3 <400> 185 Gln His Ser Arg Asp Leu Pro Leu Thr 1 5 <210> 186 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CXCR3 VH 4Hu7 <400> 186 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Lys Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Asn Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Ser 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ser Arg Pro Ser Glu Arg Ser His Tyr Tyr Ala Thr Ser Gln Phe Ala 100 105 110 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 115 120 <210> 187 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CXCR3 VL <400> 187 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Gly Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr 35 40 45 Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Ser Pro Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Ala Gly Thr Lys Val Glu Leu Lys 100 105 <210> 188 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CXCR3 VH 4Hu7 HCDR1 <400> 188 Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala 1 5 <210> 189 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CXCR3 VH 4Hu7 HCDR2 <400> 189 Ile Ser Asn Gly Gly Ser Tyr Thr 1 5 <210> 190 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CXCR3 VH 4Hu7 HCDR3 <400> 190 Ser Arg Pro Ser Glu Arg Ser His Tyr Tyr Ala Thr Ser Gln Phe Ala 1 5 10 15 Tyr <210> 191 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CXCR3 VL LCDR1 <400> 191 Ser Ser Val Ser Tyr 1 5 <210> 192 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CXCR3 VL LCDR2 <400> 192 Asp Thr Ser 1 <210> 193 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CXCR3 VL LCDR3 <400> 193 Gln Gln Trp Ser Ser Ser Pro Leu Thr 1 5 <210> 194 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CD5 VH 5D7 H1L1 <400> 194 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Val Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Val Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Ala Ser Thr Asp Thr Val 65 70 75 80 Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Val Arg Arg Arg Ala Thr Gly Thr Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 195 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CD5 VL <400> 195 Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Thr Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys His Gln Tyr Asn Ser Tyr Asn Thr 85 90 95 Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 196 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CD5 VH 5D7 H1L1 HCDR1 <400> 196 Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Gly 1 5 <210> 197 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CD5 VH 5D7 H1L1 HCDR2 <400> 197 Trp Trp Asp Asp Asp 1 5 <210> 198 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CD5 VH 5D7 H1L1 HCDR3 <400> 198 Arg Arg Ala Thr Gly Thr Gly Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 199 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CD5 VL LCDR1 <400> 199 Gln Asp Val Gly Thr Ala 1 5 <210> 200 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CD5 VL LCDR2 <400> 200 Trp Thr Ser Thr Arg His Thr 1 5 <210> 201 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CD5 VL LCDR3 <400> 201 Tyr Asn Ser Tyr Asn Thr 1 5

Claims (161)

  1. 결합제로서,
    KIR 단백질 이외의 CD8+KIR+ T 조절 세포(트레그(Treg)) 상에서 발현되는 항원으로부터 선택된 제1 항원에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인; 및
    억제성 KIR 단백질에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하고,
    여기서 결합제는 CD8+KIR+ 트레그에 결합하는, 결합제.
  2. 제1항에 있어서, 제1 항원이 CD3, CD5, CD8, CD27, CD38, CD39, CD40L, CD45RA, CD45RB, CD45RO, CD73, CD103 (ITGAE), CD122, CD166, CD177, CCR7, CXCR3, CXCR5, HLA-DR, ICOS, LAG-3/CD223, OX-40, PD-1, S1000A8/9, TIM-3, TLT-2, 2B4, 및 41BB로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 결합제.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 제1 항원이 하기 항원 군으로부터 선택되는 것인, 결합제:
    a. CD3, CD5, CD27, CD38, CD39, CD40L, CD45RA, CD45RB, CD45RO, CD73, CD122, ICOS, OX-40, 2B4, 41BB 및 HLA-DR;
    b. LAG-3/CD223, TIM-3, PD-1, S1000A8/9 및 TLT2;
    c. CD3, CD5, CD8, CD27, CD38, CD39, CD40L, CD45RA, CD45RB, CD45RO, CD73, CD103 (ITGAE), CD122, CD166, CD177, CCR7, CXCR3, CXCR5, HLA-DR, ICOS, LAG-3/CD223, OX-40, PD-1, S1000A8/9, TIM-3, TLT-2, 2B4 및 41BB;
    d. CD103(ITGAE), CD166, CD177, CXCR3 및 S1000A8/9;
    e. CCR7, CXCR3 및 CXCR5;
    f. PD-1, ICOS 및 CXCR3;
    G. CD3, CD5 및 CD8; 및
    h. CD3 및 CD8.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합제가 이중특이적 항체, 디아바디, 항체 Fc 융합체, scFv1-ScFv2, ScFv12-Fc-scFv22, IgG-scFv, DVD-Ig, 트리오맙/쿼드로마, 투-인-원 IgG, scFv2-Fc, TandAb, scFv-HSA-scFv, scFv-VHH, Fab-scFv-Fc, Fab-VHH-Fc, dAb-IgG, IgG-VHH, 탠덤 scFv-Fc, (scFv1)2-Fc-(VHH)2, BiTe, DART, 크로스맙, scFv-Fc, 원-아암 탠덤 scFv-Fc, DART-Fc, 안티칼린, 어피바디, 아비머, DARPin 또는 애드넥틴인, 결합제.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 또는 제2 결합 도메인이 항체 또는 그의 항원 결합 부분으로부터 선택되고, 다른 결합 도메인은 항체 단편인, 결합제.
  6. 제5항에 있어서, 상기 항원 결합 부분이 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv, 또는 단일 도메인 항체인, 결합제.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 결합제.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 결합제.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 결합 도메인은 CD3 또는 CD3의 서브유닛, 선택적으로 CD3엡실론에 특이적으로 결합하는, 결합제.
  10. 제9항에 있어서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, VH 및 VL 아미노산 서열은 하기로 이루어진 군으로부터 제시된 아미노산 서열의 쌍으로부터 선택되는, 결합제:
    a. 각각, 서열번호:1 및 서열번호:2;
    b. 각각, 서열번호:9 및 서열번호:10;
    c. 각각, 서열번호:17 및 서열번호:18;
    d. 각각, 서열번호:25 및 서열번호:26;
    e. 각각, 서열번호:33 및 서열번호:34;
    f. 각각, 서열번호:41 및 서열번호:34;
    g. 각각, 서열번호:45 및 서열번호:34;
    h. 각각, 서열번호:49 및 서열번호:50;
    i. 각각, 서열번호:57 및 서열번호:58;
    j. 각각, 서열번호:65 및 서열번호:66; 및
    k. 각각, 서열번호:65 및 서열번호:166.
  11. 제9항에 있어서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 hCDR1, hCDR1 및 hCDR3, 및 lCDR1, lCDR2 및 lCDR3을 포함하고, CDR은 하기로 이루어진 군에 제시된 아미노산 서열 세트로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 것인, 결합제:
    a. 각각, 서열번호:3 내지 서열번호:8;
    b. 각각, 서열번호:11 내지 서열번호:16;
    c. 각각, 서열번호:19 내지 서열번호:24;
    d. 각각, 서열번호:27 내지 서열번호:32;
    e. 각각, 서열번호:35 내지 서열번호:40;
    f. 각각, 서열번호:42 내지 서열번호:44 및 서열번호:38 내지 서열번호:40;
    g. 각각, 서열번호:46 내지 서열번호:48 및 서열번호:38 내지 서열번호:40;
    h. 각각, 서열번호:51 내지 서열번호:56;
    i. 각각, 서열번호:59 내지 서열번호:64;
    j. 각각, 서열번호:67 내지 서열번호:72; 및
    k. 각각, 서열번호: 67 내지 69 및 167 내지 169.
  12. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 결합 도메인은 CD8 또는 CD8의 서브유닛, 선택적으로 CD8알파에 특이적으로 결합하는, 결합제.
  13. 제12항에 있어서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, VH 및 VL 영역이
    a. 각각, 서열번호:73 및 서열번호:74; 및
    b. 각각, 서열번호:81 및 서열번호:82로 이루어진 군에서 제시된 아미노산 서열 쌍으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖거나,
    또는 제1 결합 도메인은 VHH 쇄를 포함하고, VHH 쇄는
    c. 서열번호:89;
    d. 서열번호 93; 및
    e. 서열번호 97로 이루어진 군에서 제시된 아미노산 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 것인, 결합제.
  14. 제12항에 있어서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 hCDR1, hCDR1 및 hCDR3, 및 lCDR1, lCDR2 및 lCDR3을 포함하고, CDR은
    a. 각각, 서열번호:75 내지 서열번호:80; 및
    b. 각각, 서열번호:83 내지 서열번호:88로 이루어진 군에 제시된 아미노산 서열 세트로부터 선택된 아미노산 서열을 갖거나,
    또는 제1 결합 도메인은 hCDR1, hCDR2 및 hCDR3을 갖는 VHH 쇄를 포함하며, VHH CDR은
    c. 각각, 서열번호:90 내지 서열번호:92;
    d. 각각, 서열번호:94 내지 서열번호:96; 및
    e. 각각, 서열번호:98 내지 서열번호:100로 이루어진 군에 제시된 아미노산 서열 세트로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는, 결합제.
  15. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 결합 도메인은 ICOS에 특이적으로 결합하는, 결합제.
  16. 제15항에 있어서, 제1 결합 도메인은 서열번호:170의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호:171의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 결합제.
  17. 제15항에 있어서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호:172, 173 및 174에 따른 hCDR1, hCDR1 및 hCDR3 아미노산 서열, 및 각각 서열번호: 175, 176 및 177에 따른 lCDR1, lCDR2 및 lCDR3 아미노산 서열을 포함하는 것인, 결합제.
  18. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 결합 도메인은 PD-1에 특이적으로 결합하는, 결합제.
  19. 제18항에 있어서, 제1 결합 도메인은 서열번호:178의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호:179의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 결합제.
  20. 제18항에 있어서, 제1 결합 도메인이 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호:180, 181 및 182에 따른 hCDR1, hCDR1 및 hCDR3 아미노산 서열, 및 각각 서열번호:183, 184 및 185에 따른 lCDR1, lCDR2 및 lCDR3 아미노산 서열을 포함하는 것인, 결합제.
  21. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 결합 도메인은 CXCR3에 특이적으로 결합하는, 결합제.
  22. 제21항에 있어서, 제1 결합 도메인은 서열번호:186의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호:187의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 결합제.
  23. 제21항에 있어서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호:188, 189 및 190에 따른 hCDR1, hCDR1 및 hCDR3 아미노산 서열, 및 각각 서열번호: 191, 192 및 193에 따른 lCDR1, lCDR2 및 lCDR3 아미노산 서열을 포함하는 것인, 결합제.
  24. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 결합 도메인은 CD5에 특이적으로 결합하는, 결합제.
  25. 제24항에 있어서, 제1 결합 도메인은 서열번호:194의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호:195의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 결합제.
  26. 제24항에 있어서, 제1 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호:196, 197 및 198에 따른 hCDR1, hCDR1 및 hCDR3 아미노산 서열, 및 각각 서열번호:199, 200 및 201에 따른 lCDR1, lCDR2 및 lCDR3 아미노산 서열을 포함하는 것인, 결합제.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 억제성 KIR 단백질은 KIR3DL1, KIR3DL2, KIR2DL1, KIR2DL2 및 KIR2DL3, 또는 이들의 조합으로부터 선택되는, 결합제.
  28. 제27항에 있어서, 제2 결합 도메인은 KIR2DL1/2/3 또는 KIR2DL1/2에 특이적으로 결합하는, 결합제.
  29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 결합 도메인이 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, VH 및 VL 영역은 하기로 이루어진 군에 제시된 아미노산 서열의 쌍으로부터 선택된 아미노산을 갖는 것인, 결합제:
    a. 각각, 서열번호:101 및 서열번호:102;
    b. 각각, 서열번호:109 및 서열번호:110;
    c. 각각, 서열번호:117 및 서열번호:118;
    d. 각각, 서열번호:125 및 서열번호:126;
    e. 각각, 서열번호:133 및 서열번호:134;
    f. 각각, 서열번호:141 및 서열번호:142;
    g. 각각, 서열번호:149 및 서열번호:150; 및
    h. 각각, 서열번호:157 및 서열번호:158.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 결합 도메인이 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 각각 hCDR1, hCDR1, 및 hCDR3, 및 lCDR1, lCDR2 및 lCDR3를 포함하고, CDR은 하기로 이루어진 군에 제시된 아미노산 서열의 세트로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 것인, 결합제:
    a. 각각, 서열번호:103 내지 서열번호:108;
    b. 각각, 서열번호:111 내지 서열번호:116;
    c. 각각, 서열번호:119 내지 서열번호:124;
    d. 각각, 서열번호:127 내지 서열번호:132;
    e. 각각, 서열번호:135 내지 서열번호:140;
    f. 각각, 서열번호:143 내지 서열번호:148;
    g. 각각, 서열번호:151 내지 서열번호:156; 및
    h. 각각, 서열번호:159 및 서열번호:164.
  31. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제가 Fc 도메인을 함유하지 않는, 결합제.
  32. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, Fc 도메인을 추가로 포함하는, 결합제.
  33. 제32항에 있어서, Fc 도메인은 IgG1 및 IgG4 Fc 도메인으로부터 선택되는, 결합제.
  34. 제33항에 있어서, 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없는, 결합제.
  35. 제32항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, Fc 도메인이 IgG1 Fc 도메인인, 결합제.
  36. 제32항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, Fc 도메인이 IgG1 Fc 눌(null)인, 결합제.
  37. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제는 2가 또는 4가인, 결합제.
  38. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제는 이중특이적인, 결합제.
  39. 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 결합제 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  40. 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 결합제를 암호화하는 핵산.
  41. 제40항의 핵산을 포함하는 벡터.
  42. 제41항의 벡터를 포함하는 세포주.
  43. 자가면역 질환을 치료하는 방법으로서, 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제39항의 약제학적 조성물을 대상체의 병원성 면역 세포의 수 또는 활성을 감소시켜 자가면역 질환의 증상을 개선하기에 효과적인 양으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법
  44. 병원성 면역 세포에 의해 매개되는 면역 반응을 억제하는 방법으로서, 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제39항의 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그(활성화 트레그)를 활성화 또는 자극하기에 효과적인 양으로 CD8+KIR+ T 조절 세포(트레그)와 접촉시키는 것을 포함하고, 이에 의해 병원성 면역 세포의 수 또는 활성이 감소되는, 방법.
  45. 자가 항원과 같은 항원에 대한 면역 반응을 억제하는 방법으로서, 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제39항의 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극하기에 효과적인 양으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 이에 의해 항원 또는 자가항원에 반응하는 병원성 면역 세포의 수 또는 활성이 감소되는, 방법.
  46. 제44항에 있어서, CD8+KIR+ 트레그가 생체 내에서 결합제와 접촉되는 것인, 방법.
  47. 제44항에 있어서, CD8+KIR+ 트레그가 생체 외에서 결합제와 접촉되는 것인, 방법.
  48. 제47항에 있어서, 활성화된 CD8+KIR+ 트레그가 이를 필요로 하는 대상체에게 유효량으로 투여되는 것인, 방법.
  49. 제43항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 병원성 면역 세포는 자가반응성 CD4+ T 세포, 자가항체 생성 B 세포, 또는 자가 항원 제시 수지상 세포인, 방법.
  50. 제43항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 병원성 면역 세포가 자기 항원 제시 세포인, 방법.
  51. 제45항에 있어서, 자가항체의 역가는 대상체에서 감소되는 것인, 방법.
  52. 제43항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 셀리악병, 크론병, 소아 특발성 관절염, 염증성 장 질환(IBD), 인슐린 의존성 당뇨병(IDDM 또는 1형 당뇨병), 루푸스 신염, 중증 근무력증, 심근염, 다발성 경화증(MS), 천포창/유천포창, 류마티스 관절염(RA), 경피증/전신 경화증, 쇼그렌 증후군(SjS), 전신성 홍반성 루푸스(SLE), 및 궤양성 대장염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 자가면역 질환으로 이루어진 군으로부터 선택된 자가면역 질환을 갖는, 방법.
  53. 제52항에 있어서, 자가면역 질환은 셀리악병, 크론병, 염증성 장 질환(IBD), 인슐린 의존성 당뇨병(IDDM 또는 1형 당뇨병), 루푸스 신염, 다발성 경화증(MS), 류마티스 관절염(RA), 경피증/전신 경화증, 쇼그렌 증후군(SjS), 전신성 홍반성 루푸스(SLE) 및 궤양성 대장염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
  54. 제43항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제가 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD8에 특이적으로 결합하는, 방법.
  55. 제43항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제가 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD3에 특이적으로 결합하는, 방법.
  56. 제43항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제가 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD5에 특이적으로 결합하는, 방법.
  57. 제43항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제가 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 PD-1에 특이적으로 결합하는, 방법.
  58. 제43항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제가 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 ICOS에 특이적으로 결합하는, 방법.
  59. 제43항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제가 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CXCR3에 특이적으로 결합하는, 방법.
  60. 제43항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, CD8+KIR+ 트레그는 MHC 클래스 I 제한적인, 방법.
  61. 제43항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, CD8+KIR+ 트레그는 MHC HLA E(Qa-1b) 제한적이지 않은, 방법.
  62. 제43항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에게 면역억제제를 투여하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
  63. 제43항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에 대한 결합제의 투여는 대상체에서 개선된 치료 결과를 초래하는, 방법.
  64. 제63항에 있어서, 개선된 치료 결과는 질환 발적의 감소된 빈도 또는 중증도, 감소된 전신 염증성 사이토카인, 또는 자가면역 질환과 관련된 증상의 감소된 자가보고인, 방법.
  65. 제43항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제가 정맥내로 투여되는, 방법.
  66. 제43항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제가 피하로 투여되는, 방법.
  67. 제43항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제가 약 0.01 mg/kg 내지 약 20 mg/kg의 용량으로 투여되는, 방법.
  68. 제43항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없는 것인, 방법.
  69. CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극함으로써 대상체에서 자가면역 질환을 치료하기 위한 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제39항의 약제학적 조성물의 용도.
  70. CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극함으로써 병원성 면역 세포에 의한 면역 반응의 감소를 위한 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제39항의 약제학적 조성물의 용도.
  71. CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극함으로써 대상체에서 자가항체 역가의 감소를 위한 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제39항의 약제학적 조성물의 용도.
  72. 암을 치료하는 방법으로서, 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제39항의 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극하여 암 증상을 개선시키기에 효과적인 양으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 상기 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없는 것인, 방법.
  73. 암과 관련된 항원(암 항원)에 대한 면역 반응을 자극하는 방법으로서, 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제39항의 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그(활성화된 트레그)를 활성화 또는 자극하기에 효과적인 양으로 CD8+KIR+ T 조절 세포(트레그)와 접촉시키는 것을 포함하고, 이에 의해 암 항원에 대한 면역 반응이 증가하고, 상기 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없는 것인, 방법.
  74. 암의 치료 방법으로서, 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제39항의 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그를 고갈시시켜 암 증상을 개선시키기에 효과적인 양으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 상기 결합제는 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는 것인, 방법.
  75. 암과 관련된 항원(암 항원)에 대한 면역 반응을 자극하는 방법으로서, 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제39항의 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그(활성화된 트레그)를 고갈시키기에 효과적인 양으로 CD8+KIR+ T 조절 세포(트레그)와 접촉시키는 것을 포함하고, 이에 의해 암 항원에 대한 면역 반응이 증가하고, 상기 결합제는 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는 것인, 방법.
  76. 제73항 또는 제75항에 있어서, CD8+KIR+ 트레그가 생체 내에서 결합제와 접촉되는 것인, 방법.
  77. 제73항에 있어서, CD8+KIR+ 트레그가 생체 외에서 결합제와 접촉되는 것인, 방법.
  78. 제77항에 있어서, 활성화된 CD8+KIR+ 트레그가 이를 필요로 하는 대상체에게 유효량으로 투여되는 것인, 방법.
  79. 제73항 및 제75항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서, 증가된 면역 반응은 암세포의 감소 또는 면역 억제성 면역 세포의 고갈을 포함하는, 방법.
  80. 제72항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 이에 의해 대상체의 암세포가 감소되는, 방법.
  81. 제72항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 암종, 림프종, 모세포종, 육종, 골수종 및 백혈병으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  82. 제72항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 유방암, 자궁경부암, 난소암, 폐암, CRC(및 장의 다른 암), 피부암, 식도암, 선암, 방광암 및 전립선암과 같은 고형 종양; 및 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  83. 제72항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD8에 특이적으로 결합하는, 방법.
  84. 제72항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD3에 특이적으로 결합하는, 방법.
  85. 제72항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD5에 특이적으로 결합하는, 방법.
  86. 제72항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 PD-1에 특이적으로 결합하는, 방법.
  87. 제72항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 ICOS에 특이적으로 결합하는, 방법.
  88. 제72항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CXCR3에 특이적으로 결합하는, 방법.
  89. 제72항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, CD8+KIR+ 트레그가 MHC 클래스 I 제한적인, 방법.
  90. 제72항 내지 제89항 중 어느 한 항에 있어서, CD8+KIR+ 트레그가 MHC HLA E(Qa-1b) 제한적이지 않은, 방법.
  91. 제72항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에게 화학요법제를 투여하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
  92. 제72항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에 대한 결합제의 투여가 대상체에서 개선된 치료 결과를 초래하는, 방법.
  93. 제92항에 있어서, 개선된 치료 결과는 부분 반응 또는 완전 반응인, 방법.
  94. 제92항에 있어서, 개선된 치료 결과는 완화(remission)인, 방법.
  95. 제72항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제가 정맥 내로 투여되는, 방법.
  96. 제72항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제가 피하로 투여되는, 방법.
  97. 제72항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제가 약 0.01 mg/kg 내지 약 20 mg/kg의 용량으로 투여되는, 방법.
  98. CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극함으로써 대상체에서 암을 치료하기 위한 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제39항의 약제학적 조성물의 용도로서, 상기 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없는 것인, 용도.
  99. CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극함으로써 면역 억제성 면역 세포에 의한 면역 억제의 감소를 위한 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제39항의 약제학적 조성물의 용도로서, 상기 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없는 것인, 용도.
  100. CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극함으로써 대상체에서 종양 부하의 감소를 위한 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제39항의 약제학적 조성물의 용도로서, 상기 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없는 것인, 용도.
  101. CD8+KIR+ 트레그를 고갈시킴으로써 대상체에서 암을 치료하기 위한 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제39항의 약제학적 조성물의 용도로서, 상기 결합제는 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는 것인, 용도.
  102. CD8+KIR+ 트레그를 고갈을 위한 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제39항의 약제학적 조성물의 용도로서, 상기 결합제는 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는 것인, 용도.
  103. 대상체에서 종양 부하의 감소를 위한 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제39항의 약제학적 조성물의 용도로서, 상기 결합제는 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는 것인, 용도.
  104. 감염을 치료하는 방법으로서, 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제39항의 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극하여 감염의 증상을 개선하기에 효과적인 양으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  105. 감염에 의해 유발된 감염된 세포에 대한 면역 반응을 자극하는 방법으로서, 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제39항의 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그(활성화된 트레그)를 활성화하거나 자극하기에 효과적인 양으로 CD8+KIR+ T 조절 세포(트레그)와 접촉시키는 것을 포함하고, 이에 의해 감염된 세포에 대한 면역 반응이 증가되는, 방법.
  106. 제105항에 있어서, CD8+KIR+ 트레그는 생체 내에서 결합제와 접촉되는 것인, 방법.
  107. 제105항에 있어서, CD8+KIR+ 트레그는 생체 외에서 결합제와 접촉되는 것인, 방법.
  108. 제107항에 있어서, 활성화된 CD8+KIR+ 트레그를 이를 필요로 하는 대상체에게 유효량으로 투여하는, 방법.
  109. 제104항 내지 제108항 중 어느 한 항에 있어서, 면역 반응은 감염된 세포의 감소 또는 CD4+ T 조절 세포 및 관용(tolerizing) DC로부터 선택된 면역 억제성 면역 세포의 감소를 포함하는, 방법.
  110. 제109항에 있어서, 이에 의해 대상체에서 감염된 세포의 수가 감소되는, 방법.
  111. 제104항 내지 제110항 중 어느 한 항에 있어서, 감염은 세균성 질환, 전신성 진균성 질환, 리케차성 질환, 기생충성 질환 및 바이러스성 질환으로부터 선택되는, 방법.
  112. 제111항에 있어서, 감염은 HIV 감염, C형 간염 바이러스(HCV) 감염, 인유두종 바이러스(HPV) 감염, 엡스타인 바 바이러스(EBV) 감염, SARS-COV2 감염(Covid-19)과 같은 코로나바이러스 감염, 거대세포바이러스(CMV) 감염 및 독감 바이러스 감염으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  113. 제104항 내지 제112항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD8에 특이적으로 결합하는 것인, 방법.
  114. 제104항 내지 제112항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD3에 특이적으로 결합하는 것인, 방법.
  115. 제104항 내지 제112항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD5에 특이적으로 결합하는 것인, 방법.
  116. 제104항 내지 제112항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 PD-1에 특이적으로 결합하는 것인, 방법.
  117. 제104항 내지 제112항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 ICOS에 특이적으로 결합하는 것인, 방법.
  118. 제104항 내지 제112항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CXCR3에 특이적으로 결합하는 것인, 방법.
  119. 제104항 내지 제118항 중 어느 한 항에 있어서, CD8+KIR+ 트레그는 MHC 클래스 I 제한적인, 방법.
  120. 제104항 내지 제119항 중 어느 한 항에 있어서, CD8+KIR+ 트레그가 MHC HLA E(Qa-1b) 제한적이지 않은, 방법.
  121. 제104항 내지 제120항 중 어느 한 항에 있어서, 항균제 또는 항바이러스제를 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
  122. 제104항 내지 제121항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에 대한 결합제의 투여가 대상체에서 개선된 치료 결과를 초래하는, 방법.
  123. 제122항에 있어서, 개선된 치료 결과는 감염의 감소 또는 감염된 세포의 감소인, 방법.
  124. 제104항 내지 제123항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제가 정맥 내로 투여되는, 방법.
  125. 제104항 내지 제123항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제가 피하로 투여되는, 방법.
  126. 제104항 내지 제125항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제가 약 0.01 mg/kg 내지 약 20 mg/kg의 용량으로 투여되는, 방법.
  127. 제104항 내지 제126항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없는 것인, 방법.
  128. CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극함으로써 대상체에서 감염을 치료하기 위한 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제39항의 약제학적 조성물의 용도.
  129. CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극하여 면역 억제성 면역 세포를 억제함으로써 면역 반응을 자극하기 위한 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제39항의 약제학적 조성물의 용도.
  130. CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극함으로써 대상체에서 감염 또는 감염된 세포의 감소를 위한 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제39항의 약제학적 조성물의 용도.
  131. 이식 후 이식편 대 숙주 질환(GVHD)의 발병을 감소시키거나 예방하는 방법으로서, 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제39항의 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극하여 GVHD의 적어도 하나의 증상을 감소 또는 개선하기에 효과적인 양으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 상기 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없는 것인, 방법.
  132. 이식을 받은 대상체를 치료하는 방법으로서, 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제39항의 약제학적 조성물을 D8+KIR+ 트레그(활성화된 트레그)를 활성화 또는 자극하기에 효과적인 양으로 CD8+KIR+ T 조절 세포(트레그)와 접촉시키는 것을 포함하고, 이에 의해 GVHD가 감소 또는 억제되며, 상기 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없는 것인, 방법.
  133. 이식을 받은 대상체를 치료하는 방법으로서, 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제39항의 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그를 고갈시켜 GVHD의 증상을 완화시키기에 효과적인 양으로 이를 필요로 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 상기 결합제는 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는 것인, 방법.
  134. 이식에 대한 GVHD를 억제하는 방법으로서, 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제39항의 약제학적 조성물을 CD8+KIR+ 트레그를 고갈시키기에 효과적인 양으로 CD8+KIR+ T 조절 세포(트레그)와 접촉시키는 것을 포함하고, 이에 의해 GVHD 또는 그의 증상이 감소되고, 상기 결합제는 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는 것인, 방법.
  135. 제132항 또는 제134항에 있어서, CD8+KIR+ 트레그가 생체 내에서 결합제와 접촉되는 것인, 방법.
  136. 제132항에 있어서, CD8+KIR+ 트레그가 생체 외에서 결합제와 접촉되는 것인, 방법.
  137. 제136항에 있어서, 활성화된 CD8+KIR+ 트레그를 이를 필요로 하는 대상체에게 유효량으로 투여하는, 방법.
  138. 제132항 및 제134항 내지 제137항 중 어느 한 항에 있어서, 감소되거나(reduced) 감소된(decreased) GVHD는 GVHD에서 활성인 CD4+ T 세포의 감소를 포함하는, 방법.
  139. 제131항 내지 제138항 중 어느 한 항에 있어서, 이식은 장기 이식, 조혈 줄기세포 이식, 제대혈 줄기세포 이식, 유도 만능 줄기세포 유래 전구세포 또는 분화세포 이식, 및 골수 이식으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  140. 제139항에 있어서, 이식은 조혈 줄기세포 이식, 제대혈 줄기세포 이식, 유도 만능 줄기세포 유래 전구세포 또는 분화세포 이식, 또는 골수 이식인, 방법.
  141. 제131항 내지 제140항 중 어느 한 항에 있어서, 이식이 동종이식인, 방법.
  142. 제131항 내지 제141항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD8에 특이적으로 결합하는, 방법.
  143. 제131항 내지 제141항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD3에 특이적으로 결합하는, 방법.
  144. 제131항 내지 제141항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CD5에 특이적으로 결합하는, 방법.
  145. 제131항 내지 제141항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 PD-1에 특이적으로 결합하는, 방법.
  146. 제131항 내지 제141항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 ICOS에 특이적으로 결합하는, 방법.
  147. 제131항 내지 제141항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제는 CD8+KIR+ 트레그 상의 억제성 KIR 단백질 및 CXCR3에 특이적으로 결합하는, 방법.
  148. 제131항 내지 제147항 중 어느 한 항에 있어서, CD8+KIR+ 트레그가 MHC 클래스 I 제한적인, 방법.
  149. 제131항 내지 제148항 중 어느 한 항에 있어서, CD8+KIR+ 트레그가 MHC HLA E (Qa-1b)에 제한적이지 않은, 방법.
  150. 제131항 내지 제149항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에게 면역억제제를 투여하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
  151. 제131항 내지 제150항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에 대한 결합제의 투여는 대상체에서 개선된 치료 결과를 초래하는, 방법.
  152. 제151항에 있어서, 개선된 치료 결과는 GVHD와 관련된 증상의 감소, 감소된 전신 염증성 사이토카인, GVHD에 의해 영향을 받는 조직에서 감소된 병리, 숙주 조직에서 부작용과 관련된 면역 반응과 관련된 증상의 자가 보고 감소, 개선되거나 연장된 이식 생착, 하나 이상의 증상(들)의 완화, 및/또는 이식 거부의 발병 또는 진행의 예방, 지연 또는 둔화, 또는 광범위한 스펙트럼의 면역 억제제, 예컨대 코르티코스테로이드의 사용 감소에 의한 이식 생착 연장인, 방법.
  153. 제131항 내지 제152항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제가 정맥 내로 투여되는, 방법.
  154. 제131항 내지 제152항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제가 피하로 투여되는, 방법.
  155. 대상체에서 이식과 관련된 GVHD의 치료를 위한 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제39항의 약제학적 조성물의 용도로서, 상기 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없는 것인, 용도.
  156. CD8+ KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극함으로써 대상체에서 이식과 관련된 GVHD의 치료를 위한 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제39항의 약제학적 조성물의 용도로서, 상기 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없는 것인, 용도.
  157. CD8+KIR+ 트레그를 활성화 또는 자극함으로써 이식과 관련된 GVHD의 감소를 위한 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제39항의 약제학적 조성물의 용도로서, 상기 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없는 것인, 용도.
  158. 이식에 대한 GVHD의 감소를 위한 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제39항의 약제학적 조성물의 용도로서, 상기 결합제는 실질적으로 이펙터 기능 활성이 없는 것인, 용도.
  159. CD8+KIR+ 트레그의 고갈에 의한 대상체의 이식과 관련된 GVHD의 치료를 위한 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제39항의 약제학적 조성물의 용도로서, 상기 결합제는 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는, 용도.
  160. CD8+KIR+ 트레그의 고갈을 위한 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제39항의 약제학적 조성물의 용도로서, 상기 결합제는 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는, 용도.
  161. 이식을 받은 대상체에서 CD8+KIR+ 트레그를 고갈시켜 GVHD를 감소시키기 위한 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제39항의 약제학적 조성물의 용도로서, 상기 결합제는 적어도 ADCC를 포함하는 이펙터 기능 활성을 갖는, 용도.
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