KR20220012924A

KR20220012924A - 글루카곤-유사 펩티드 1 수용체 효능제

Info

Publication number: KR20220012924A
Application number: KR1020217042363A
Authority: KR
Inventors: 데이비드 앤드류 코츠; 토드 필즈; 조셉 다니엘 호; 푸청 취
Original assignee: 일라이 릴리 앤드 캄파니
Priority date: 2019-06-28
Filing date: 2020-06-19
Publication date: 2022-02-04
Also published as: HRP20231586T1; SI3989972T1; RS64940B1; US20200407347A1; WO2020263695A1; AU2020309064B2; DK3989972T3; ZA202109587B; EP3989972A1; ES2970173T3; MX2021015328A; CA3144055C; EP3989972B1; BR112021023923A2; CR20210599A; CN114008033A; HUE065080T2; SA521431209B1; TW202115040A; CL2021003419A1

Abstract

한 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 제II형 당뇨병을 치료하기 위한 상기 화합물의 사용 방법을 제공한다:

Description

글루카곤-유사 펩티드 1 수용체 효능제

본 발명은 글루카곤-유사 펩티드-1 수용체 효능제 및 제II형 당뇨병을 치료하기 위한 상기 화합물의 치료 용도에 관한 것이다.

글루카곤-유사 펩티드-1 (GLP-1)은 장의 장내분비 L-세포에 의해 분비되는 펩티드 호르몬의 인크레틴 패밀리의 구성원이다. GLP-1은 글루코스 의존성 방식으로 베타 세포로부터 인슐린의 방출을 유도한다. 그러나, GLP-1은 빠르게 대사되어 단지 적은 백분율의 GLP-1만이 인슐린 분비를 유도하는데 이용될 수 있다. 이를 상쇄하기 위해, GLP-1 수용체 (GLP-1R) 효능제가 제II형 당뇨병에 대한 치료로서 인슐린 분비를 증진시키기 위해 개발되었다.

제II형 당뇨병 치료에 승인된 대부분의 GLP-1R 효능제는 주사용 작용제이다. 환자는 종종 불편함, 통증 및 주사 부위 자극 가능성과 같은 주사와 연관된 결점 때문에 경구 투여 약물을 선호한다.

WO2018/109607은 특정 벤즈이미다졸 유도체를 개시하며, 이는 GLP-1R 효능제로서 기재된다.

그러나, 대안적인 GLP-1R 효능제가 요구된다. 특히, 경구로 투여될 수 있는 GLP-1R 효능제가 요구된다. 특히, 1일 1회 투여를 지지하는 개선된 효력, 유리한 독성학 프로파일 및/또는 약동학 프로파일을 갖는 GLP-1R 효능제가 요구된다.

따라서, 본 발명은 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다:

여기서

R¹은 H 또는 F이고;

R²는 H 또는 F이고;

R³은 H 또는 CH₃이다.

화학식 I는 모든 개별 거울상이성질체 및 그의 혼합물, 뿐만 아니라 라세미체 및 그의 제약상 허용되는 염을 포함한다.

한 실시양태에서, 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공된다:

.

한 실시양태에서, 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공되며:

여기서 R¹은 H 또는 F이다.

여기서 R¹은 H 또는 F이다.

한 실시양태에서, 화합물은 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:

.

바람직한 실시양태에서, 화합물은 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:

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특히 바람직한 실시양태에서,

의 tert-부틸아민 염 (에르부민 염으로도 공지됨)이 제공된다.

여기서 R²는 H 또는 F이다.

여기서 R²는 H 또는 F이다.

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화학식 I는 화학식 Ia, Ib, II, IIa, IIb, III, IIIa 및 IIIb를 포괄하고, 예를 들어 치료 방법 및 치료 용도에서 하기 화학식 I에 대한 언급은 또한 각각의 및 모든 이들 하위화학식에 대한 언급으로서 판독되어야 한다.

또 다른 실시양태에서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제 중 적어도 1종을 포함하는 제약상 허용되는 조성물이 제공된다. 바람직한 실시양태에서, 제약상 허용되는 조성물은 경구 투여를 위해 제제화된다.

또 다른 실시양태에서, 제II형 당뇨병에 대한 치료를 필요로 하는 포유동물에게 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제 중 적어도 1종을 포함하는 제약상 허용되는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물을 제II형 당뇨병에 대해 치료하는 방법이 제공된다. 한 실시양태에서, 제약상 허용되는 조성물은 경구 투여를 위해 제제화된다. 바람직하게는, 포유동물은 인간이다.

또 다른 실시양태에서, 제II형 당뇨병에 대한 치료를 필요로 하는 포유동물에게 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물을 제II형 당뇨병에 대해 치료하는 방법이 제공된다. 바람직한 실시양태에서, 포유동물은 인간이다.

또 다른 실시양태에서, 혈액 글루코스 수준을 저하시키는 치료를 필요로 하는 포유동물에게 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 혈액 글루코스 수준을 저하시키는 방법이 제공된다. 바람직한 실시양태에서, 포유동물은 인간이다.

또 다른 실시양태에서, 고혈당증의 치료를 필요로 하는 포유동물에게 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 고혈당증을 치료하는 방법이 제공된다. 바람직한 실시양태에서, 포유동물은 인간이다.

한 실시양태에서, 요법에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공된다.

또 다른 실시양태에서, 제II형 당뇨병의 치료에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공된다.

또 다른 실시양태에서, 혈액 글루코스 수준을 저하시키는데 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공된다.

또 다른 실시양태에서, 고혈당증을 치료하는데 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 또한 제공된다.

한 실시양태에서, 제II형 당뇨병의 치료를 위한 의약의 제조를 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도가 제공된다.

한 실시양태에서, 혈액 글루코스 수준을 저하시키기 위한 의약의 제조를 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도가 제공된다.

한 실시양태에서, 고혈당증의 치료를 위한 의약의 제조를 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도가 제공된다.

바람직한 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 경구로 투여된다. 바람직한 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 1일 1회 투여된다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 치료 용도는 인간에서의 치료 용도이다.

본원에 사용된 용어 "제약상 허용되는 염"은 임상적 및/또는 수의학적 용도에 허용되는 것으로 간주되는 본 발명의 화합물의 염을 지칭한다. 제약상 허용되는 염 및 그를 제조하기 위한 통상의 방법론의 예는 문헌 ["Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use" P. Stahl, et al., 2nd Revised Edition, Wiley-VCH, 2011] 및 [S.M. Berge, et al., "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Sciences, 1977, 66(1), 1-19]에서 찾을 수 있다.

제약 조성물 및 그의 제조 방법의 예는 문헌 ["Remington: The Science and Practice of Pharmacy", Loyd, V., et al. Eds., 22^nd Ed., Mack Publishing Co., 2012]에서 찾아볼 수 있다. 한 실시양태에서, 제약 조성물은 경구 투여를 위해 제제화될 수 있다. 바람직하게는, 제약 조성물은 정제, 캡슐 또는 용액으로서 제제화된다. 정제, 캡슐 또는 용액은 화학식 I의 화합물을 치료를 필요로 하는 환자를 치료하는데 유효한 양으로 포함할 수 있다.

용어 "유효량"은 환자에게 단일 또는 다중 용량 투여시 진단 또는 치료 하의 환자에서 목적하는 효과를 제공하는 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 양 또는 용량을 지칭한다. 주치의는, 관련 기술분야의 통상의 기술자로서, 통상적인 기술의 사용에 의해 그리고 유사한 상황 하에 수득된 결과를 관찰함으로써 유효량을 용이하게 결정할 수 있다. 화합물의 유효량 또는 유효 용량의 결정에서 고려되는 인자는 화합물 또는 그의 염이 투여될 것인지 여부; 사용되는 경우에 다른 작용제의 공-투여; 치료될 포유동물의 종; 그의 크기, 연령 및 전반적 건강; 장애의 침범도 또는 중증도; 개별 포유동물의 반응; 투여 방식; 투여되는 제제의 생체이용률 특징; 선택된 용량 요법; 및 다른 관련 상황을 포함한다. 본 발명의 화합물은 약 0.01 내지 약 15 mg/kg 체중의 범위 내에 속하는 1일 투여량에서 효과적이다.

본원에 사용된 용어 "치료하는", "치료하기 위해" 또는 "치료"는 인슐린 분비의 증가를 포함할 수 있는 기존 증상, 장애 또는 상태, 예컨대 고혈당증의 진행 또는 중증도의 저하, 감소 또는 역전을 지칭한다.

화학식 I의 화합물은 화합물을 생체이용가능하게 하는 임의의 경로에 의해 투여되는 제약 조성물로서 제제화될 수 있다. 바람직하게는, 이러한 조성물은 경구 투여를 위한 것이다. 이러한 제약 조성물 및 그의 제조 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Remington, J. P., "Remington: The Science and Practice of Pharmacy", L.V. Allen, Editor, 22nd Edition, Pharmaceutical Press, 2012] 참조).

화학식 I의 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염은 본 발명의 치료 용도에 유용하며, 특정 구성이 바람직하다.

본 발명의 화합물은 다음을 포함한다:

또는 그의 제약상 허용되는 염.

본 발명의 추가의 화합물은 다음을 포함한다:

또는 그의 제약상 허용되는 염.

본 발명의 추가의 화합물은 다음을 포함한다:

또는 그의 제약상 허용되는 염.

본 발명이 모든 개별 거울상이성질체, 그의 혼합물, 및 라세미체를 고려하지만, 화학식 Ia, IIa 및 IIIa의 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염이 특히 바람직하다.

개별 거울상이성질체는 선택적 결정화 기술, 키랄 크로마토그래피 (예를 들어, 문헌 [J. Jacques, et al., "Enantiomers, Racemates, and Resolutions", John Wiley and Sons, Inc., 1981], 및 [E.L. Eliel and S.H. Wilen, "Stereochemistry of Organic Compounds", Wiley-Interscience, 1994] 참조), 또는 초임계 유체 크로마토그래피 (SFC) (예를 들어, 문헌 [T. A. Berger; "Supercritical Fluid Chromatography Primer, " Agilent Technologies, July 2015] 참조)와 같은 방법에 의해, 본 발명의 화합물의 합성에서 임의의 편리한 시점에서 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 분리되거나 분해될 수 있다.

본 발명의 화합물의 제약상 허용되는 염은, 예를 들어 관련 기술분야에 널리 공지된 표준 조건 하에 적합한 용매 중에서 화학식 I의 화합물 및 적절한 제약상 허용되는 염기의 반응에 의해 형성될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Bastin, R.J., et al.; Org. Process. Res. Dev., 4, 427-435, 2000] 및 [Berge, S.M., et al.; J. Pharm. Sci., 66, 1-19, 1977] 참조). 바람직한 염은 tert-부틸 아민 (또는 에르부민) 염이다.

본원에 사용된 특정 약어는 문헌 [Daub G.H., et al., "The Use of Acronyms in Organic Chemistry" Aldrichimica Acta, 1984, 17(1), 6-23]에 따라 정의된다. 특정 약어는 하기와 같이 정의된다: "ACN"은 아세토니트릴을 지칭하고; "ATP"는 아데노신 트리포스페이트를 지칭하고; "BSA"는 소 혈청 알부민을 지칭하고; "cAMP"는 시클릭 아데노신-3',5'-모노포스페이트를 지칭하고; "DCM"은 디클로로메탄 또는 메틸렌 클로라이드를 지칭하고; "DIPEA"는 N,N-디이소프로필에틸아민을 지칭하고; "DMF"는 N,N-디메틸포름아미드를 지칭하고; "DMSO"는 디메틸 술폭시드를 지칭하고; "EC₅₀"은 미리 정의된 양성 대조군 화합물과 비교하여 표적 활성의 50% 반응을 생성하는 작용제의 농도를 지칭하고 (절대 EC₅₀); "ES/MS"는 전기분무 질량 분광측정법을 지칭하고; "EtOAc"는 에틸 아세테이트를 지칭하고; "HATU"는 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트를 지칭하고; "HEK"는 인간 배아 신장을 지칭하고; "HEPES"는 4-(2-히드록시에틸)-1-피페라진에탄술폰산을 지칭하고; "h"는 각각 시간을 지칭하고; "MeOH"는 메탄올 또는 메틸 알콜을 지칭하고; "min"은 분을 지칭하고; "Pd(dppf)Cl₂"는 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐 (II)을 지칭하고; "RT"는 실온을 지칭하고; "THF"는 테트라히드로푸란을 지칭한다.

본 발명의 화합물은 다양한 절차에 의해 제조될 수 있으며, 이들 중 일부는 하기 제조예 및 실시예에 예시되어 있다. 기재된 각각의 경로에 대한 구체적 합성 단계는 상이한 방식으로 조합되어 본 발명의 화합물 또는 그의 염을 제조할 수 있다. 하기 각 단계의 생성물은 추출, 증발, 침전, 크로마토그래피, 여과, 연화처리 및 결정화를 포함한 통상의 방법에 의해 회수될 수 있다. 시약 및 출발 물질은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 용이하게 입수가능하다. 개별 이성질체, 거울상이성질체 및 부분입체이성질체는 합성에서 임의의 편리한 시점에서 선택적 결정화 기술 또는 키랄 크로마토그래피와 같은 방법에 의해 분리 또는 분해될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [J. Jacques, et al., "Enantiomers, Racemates, and Resolutions", John Wiley and Sons, Inc., 1981], 및 [E.L. Eliel and S.H. Wilen, "Stereochemistry of Organic Compounds", Wiley-Interscience, 1994] 참조). 본 발명의 범주를 제한하지 않으면서, 하기 제조예 및 실시예가 본 발명을 추가로 예시하기 위해 제공된다.

반응식 1

반응식 1은 화학식 I의 화합물의 제조에 사용되는 중간체 6의 합성을 나타낸다. 벤조산 1은 먼저 단계 1에서 보란 디메틸술피드 착물을 사용한 환원을 거쳐 알콜 2를 제공한다. 알콜은 이탈기 (LG, 중간체 3)로 전환된다. 예를 들어, 중간체 2에서의 알콜은 단계 2에서 -15℃에서 메탄술포닐 클로라이드를 사용하여 메실레이트 기로 전환될 수 있거나 또는 이는 0℃에서 삼브로민화인을 사용하여 브로마이드로 전환될 수 있다. 중간체 3을 단계 3에서 NaCN과 반응시켜 니트릴 4를 수득한다. 니트릴 4는 단계 4에서 승온에서 KOH를 사용하여 전환되어 산 5를 제공하고, 이는 이어서 단계 5에서 옥살릴 클로라이드, DMF 및 메탄올을 사용하여 에스테르화되어 중간체 6을 제공한다.

반응식 2

반응식 2는 2가지 경로를 통한 화학식 I의 화합물의 제조를 위한 주요 중간체 12의 제조를 도시한다. 제1 경로에서, 아릴 할라이드 6은 승온에서 비스(피나콜레이토)디보론, Pd(dppf)Cl₂, 및 아세트산칼륨을 사용하여 원-포트 미야우라(Miyura) 보릴화/스즈키 커플링을 겪고, 아릴 할라이드 6은 단계 1a에서 보론산 에스테르 7로 전환되고, 이때 브로모피리딘 8 및 K₂CO₃가 반응 (단계 2a)에 첨가되어 중간체 12를 제공한다. 제2 경로에서, 2-단계 공정이 사용된다: 승온에서 Pd(dppf)Cl₂ 및 K₂CO₃를 사용하여 아릴 할라이드 6을 6-히드록시피리딘-2-보론산 피나콜 에스테르 9와 스즈키(Suzuki) 커플링시켜 (단계 1b) 중간체 10을 수득하고, 이어서 이를 승온에서 Ag₂CO₃를 사용하여 4-(브로모메틸)-3-플루오로벤조니트릴 6을 사용하여 알킬화시켜 (단계 2b) 중간체 12를 수득한다. 단계 3에서 LiOH를 사용하여 중간체 12를 에스테르 가수분해하여 산 중간체 13을 수득한다.

반응식 3

대안적으로, 주요 중간체 12 및 13은 승온에서 Pd(dppf)Cl₂ 및 탄산칼륨을 사용하여 브로모피리딘 8을 보론산 에스테르 7 또는 보론산 14와 커플링시키는 반응식 3에 따라 제조할 수 있다.

반응식 4

반응식 4는 주요 중간체 13의 화학식 I의 화합물로의 전환을 보여준다. 단계 1에서 HATU 및 디아닐린 15를 사용한 아미드 커플링은 중간체 16을 제공한다. 고리화 (단계 2)는 아세트산 중에서 중간체 16을 가열함으로써 달성되어 벤즈이미다졸 17을 제공한다. 최종적으로, 단계 3에서 화학식 I의 화합물은 LiOH를 사용한 17의 가수분해에 의해 수득된다.

제조예 및 실시예

LC-ES/MS는 애질런트(AGILENT)® HP1200 액체 크로마토그래피 시스템 상에서 수행하였다. 전기분무 질량 분광측정법 측정 (양성 및/또는 음성 모드에서 획득됨)은 ELSD를 갖거나 갖지 않을 수 있는 HPLC에 인터페이스된 질량 선택적 검출기 사중극자 질량 분광계 상에서 수행된다. LC-ES/MS 조건 (낮은 pH): 칼럼: 페노메넥스(PHENOMENEX)® 제미니® NX C18 2.0 x 50 mm 3.0 μm, 110Å; 구배: 1.5분 내에 5-95% B, 이어서 0.5분 동안 95% B; 칼럼 온도: 50℃+/-10℃; 유량: 1.2 mL/분; 1 μL 주입 부피; 용매 A: 탈이온수, 0.1% HCOOH 함유; 용매 B: ACN, 0.1% 포름산 함유; 파장 200-400 nm 및 212-216 nm. HPLC에 ELSD가 장착된 경우, 설정은 45℃ 증발기 온도, 40℃ 네뷸라이저 온도 및 1.6 SLM 기체 유량이었다. 대안적 LC-MS 조건 (높은 pH): 칼럼: 워터스 엑스브리지(Waters xBridge)® C18 칼럼 2.1 x 50 mm, 3.5 μm; 구배: 1.5분 내 5-95% B, 이어서 0.50분 동안 95% B; 칼럼 온도: 50℃+/-10℃; 유량: 1.2 mL/분; 1 μL 주입 부피; 용매 A: 10 mM NH₄HCO₃ pH 9; 용매 B: ACN; 파장: 200-400 nm 및 212-216 nm; ELSD가 장착된 경우: 45℃ 증발기 온도, 40℃ 네뷸라이저 온도 및 1.60 SLM 기체 유량.

결정질 고체의 X선 분말 회절 (XRPD) 패턴은 CuKα 공급원 및 반텍(Vantec) 검출기가 장착되어 있으며 35 kV 및 50 mA에서 작동하는 브루커(Bruker) D4 엔데버(Endeavor) X선 분말 회절계 상에서 수득하였다. 샘플을 0.008 2θ°의 스텝 크기 및 0.5초/스텝의 스캔 속도로, 1.0 mm 발산, 6.6 mm 고정 산란방지 및 11.3 mm 검출기 슬릿을 사용하여 4 내지 40 2θ°에서 스캐닝하였다. 건조 분말을 석영 샘플 홀더에 패킹하고 유리 슬라이드를 사용하여 평활면을 얻었다. 주위 온도 및 상대 습도에서 결정 형태 회절 패턴을 수집하였다. 결정 피크 위치는 8.853 및 26.774 2θ°에서의 피크를 갖는 내부 NIST 675 표준에 기초한 전체 패턴 이동 후에 MDI-제이드(MDI-Jade)에서 결정하였다. 임의의 주어진 결정 형태에 대해, 회절 피크의 상대 강도는 결정 형태 및 습성과 같은 인자로부터 기인한 바람직한 배향으로 인해 달라질 수 있다는 것이 결정학 분야에 널리 공지되어 있다. 바람직한 배향의 효과가 존재하는 경우, 피크 강도는 변경되지만, 다형체의 특징적인 피크 위치는 변하지 않는다. 예를 들어, 문헌 [The United States Pharmacopeia #23, National Formulary #18, pages 1843-1844, 1995]을 참조한다. 더욱이, 결정학 분야에서, 임의의 주어진 결정 형태의 경우 각 피크 위치가 약간 다를 수 있다는 것이 또한 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 피크 위치는 샘플이 분석되는 온도의 변동, 샘플 변위(sample displacement), 또는 내부 표준의 존재 또는 부재로 인해 이동할 수 있다. 본 경우에, ± 0.2 2θ°의 피크 위치 가변성은 지시된 결정 형태의 명백한 확인을 방해하지 않으면서 이들 잠재적 변동을 고려하는 것으로 추정된다. 결정 형태의 확인은 특징적인 피크들의 임의의 고유한 조합에 기초하여 이루어질 수 있다.

제조예 1

(4-브로모-2-플루오로-5-메틸페닐)메탄올

플라스크에 4-브로모-2-플루오로-5-메틸벤조산 (100 g, 421 mmol), THF (200 mL) 및 보란 (디메틸 술피드 착물, THF 중 2 mol/L 용액, 210 mL, 10 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 HCl (1.0 N 수용액, 50 mL)로 켄칭하고, 혼합물을 여과하였다. 여과물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 EtOAc (400 mL)와 물 (400 mL) 사이에 분배하였다. 유기부를 포화 수성 NaCl (400 mL)로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물을 고체 (93.5 g, 99%)로서 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.29 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.69 (s, 2H), 2.38 (s, 3H).

제조예 2

(4-브로모-2-플루오로-3-메틸-페닐)메탄올

4-브로모-2-플루오로-3-메틸벤조산을 사용하여 본질적으로 제조예 1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 생성물을 헥산 중 10에서 35% EtOAc의 구배를 사용하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하였다. LC-ES/MS 피크 체류 시간: 1.01분.

제조예 3

2-(4-브로모-2-플루오로-5-메틸페닐)아세토니트릴

(4-브로모-2-플루오로-5-메틸페닐)메탄올 (92 g, 420 mmol)을 DCM (500 mL) 중에 용해시키고, 트리에틸아민 (120 mL, 861 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 -15℃로 냉각시키고, DCM (30 mL) 중 메탄술포닐 클로라이드 (40 mL, 517 mmol)의 용액을 반응 혼합물에 적가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM (500 mL)과 물 (500 mL) 사이에 분배하였다. 유기부를 포화 수성 NaCl (500 mL)로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 DMF (400 mL) 중에 용해시키고, 혼합물을 빙조로 냉각시켰다. NaCN (21.0 g, 429 mmol)을 1 부분으로 반응 혼합물에 첨가하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 EtOAc (400 mL)와 물 (500 mL) 사이에 분배하였다. 유기부를 포화 수성 NaCl (500 mL)로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 헥산 중 10에서 30% EtOAc의 구배를 사용하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 (47.0 g, 48%)을 오일로서 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.34 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 3.71 (s, 2H), 2.41 (s, 3H).

제조예 4

2-(4-브로모-2-플루오로-3-메틸-페닐)아세토니트릴

(4-브로모-2-플루오로-3-메틸-페닐)메탄올 (1.90 g, 8.67 mmol) 및 DCM (20 mL)을 함께 혼합하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시킨 다음, 삼브로민화인 (1.0 mL, 11 mmol)을 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반한 다음, 혼합물을 포화 수성 NaHCO₃ (10 mL)로 염기성화시켰다. 혼합물을 DCM (40 mL)으로 추출하였다. 유기부를 염수 (30 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과하고, 농축시켜 고체를 수득하였다. 고체를 DMSO (10 mL) 중에 용해시킨 다음, NaCN (0.60 g, 13.0 mmol)을 첨가하고, 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc (50 mL)와 물 (50 mL) 사이에 분배하였다. 유기부를 염수 (50 mL)로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 생성물을 고체 (1.3 g, 64%)로서 수득하였다. LC-ES/MS 피크 체류 시간: 1.17분

제조예 5

메틸 2-(4-브로모-2-플루오로-5-메틸-페닐)아세테이트

플라스크에 2-(4-브로모-2-플루오로-5-메틸페닐)아세토니트릴 (1.20 g, 5.10 mmol), 에탄올 (5 mL), 물 (3 mL), 및 수산화칼륨 (0.90 g, 16 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 90℃에서 밤새 가열하였다. 혼합물을 빙조로 냉각시키고, 1.0 M HCl을 사용하여 pH 4-5로 산성화시킨 다음, 혼합물을 EtOAc (30 mL)와 물 (30 mL) 사이에 분배하였다. 유기부를 포화 수성 NaCl (30 mL)로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 2-(4-브로모-2-플루오로-5-메틸-페닐)아세트산을 고체로서 수득하였다. 이를 DCM (10 mL) 중에 용해시킨 다음, DMF (0.05 mL, 0.6 mmol) 및 옥살릴 클로라이드 (0.5 mL, 6 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, MeOH (2 mL, 49.4 mmol)를 적가하였다. 30분 후, 용매를 진공에서 제거하고, 잔류물을 EtOAc (40 mL)와 5% NaHCO₃ (30 mL) 사이에 분배하였다. 유기부를 포화 수성 NaCl (40 mL)로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물을 오일 (1.1 g, 80%)로서 수득하였다. ES/MS m/z (⁷⁹Br,⁸¹Br) 278,280 (M+NH₄ ⁺).

제조예 6

메틸 2-(4-브로모-2-플루오로-3-메틸-페닐)아세테이트

2-(4-브로모-2-플루오로-3-메틸-페닐)아세토니트릴을 사용하여 본질적으로 제조예 5에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. LC-ES/MS 피크 체류 시간: 1.22분.

제조예 7

메틸 2-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)아세테이트

4-브로모-2,6-디플루오로페닐아세트산 (3.30 g, 12.5 mmol), DCM (20 mL), DMF (0.05 mL, 0.6 mmol) 및 옥살릴 클로라이드 (1.3 mL, 15 mmol)를 혼합하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, MeOH (1.5 mL, 37 mmol, 100 질량%)를 적가하였다. 혼합물을 농축시키고, EtOAc (30 mL)와 포화 수성 NaHCO₃ (15 mL) 사이에 분배하였다. 유기부를 포화 수성 NaCl (30 mL)로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물을 오일 (3.41 g, 정량적 수율)로서 수득하였으며, 이를 제조예 10에 추가 정제 없이 사용하였다. ES/MS m/z (⁷⁹Br,⁸¹Br) 265,267 (M+H).

제조예 8

4-[(6-브로모-2-피리딜)옥시메틸]-3-플루오로-벤조니트릴

2-브로모-6-플루오로피리딘 (2.50 g, 13.8 mmol) 및 3-플루오로-4-(히드록시메틸)벤조니트릴 (2.15 g, 13.8 mmol)을 1,4-디옥산 (25 mL) 중에 용해시키고, 포타슘 tert-부톡시드의 용액 (THF 중 20 중량%, 10.0 mL, 16.6 mmol)을 실온에서 12분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 30분 동안 가열하였다. 혼합물을 수성 K₂CO₃ (1 M)에 붓고, EtOAc로 2회 추출하였다. 유기부를 물 및 포화 수성 NaCl로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 진공 오븐에서 50℃에서 건조시켜 표제 화합물 (4.23 g, 95%)을 담황색 고체로서 수득하였다. ES/MS m/z (⁷⁹Br,⁸¹Br) 307,309 (M+H).

제조예 9

메틸 2-[2-플루오로-4-(6-히드록시-2-피리딜)-5-메틸-페닐]아세테이트

플라스크에 6-히드록시피리딘-2-보론산 피나콜 에스테르 (1.6 g, 6.9 mmol), 메틸 2-(4-브로모-2-플루오로-5-메틸-페닐)아세테이트 (2.2 g, 8.4 mmol), THF (15 mL), 물 (1 mL), 및 탄산칼륨 (2.0 g, 14 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 질소 퍼징한 다음, Pd(dppf)Cl₂ (0.26 g, 0.35 mmol)를 첨가하고, 75℃에서 2시간 동안 가열하였다. 혼합물을 EtOAc (30 mL)와 물 (30 mL) 사이에 분배하였다. 유기부를 포화 수성 NaCl (30 mL)로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물 (1.4 g, 74%)을 고체로서 수득하였다. ES/MS m/z 276 (M+H), 274 (M-H).

제조예 10

메틸 2-[2,6-디플루오로-4-(6-히드록시-2-피리딜)페닐]아세테이트

메틸 2-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)아세테이트를 사용하고, 반응물을 75℃에서 밤새 가열하여, 본질적으로 제조예 9에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. ES/MS m/z 280 (M+H).

제조예 11

메틸 2-[2-플루오로-4-(6-히드록시-2-피리딜)-3-메틸-페닐]아세테이트

메틸 2-(4-브로모-2-플루오로-3-메틸-페닐)아세테이트를 사용하고, 반응물을 75℃에서 밤새 (18시간) 가열하여, 본질적으로 제조예 9에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. ES/MS m/z 276 (M+H), 274 (M-H).

제조예 12

메틸 2-[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-3-메틸-페닐]아세테이트

2-(4-브로모-3-메틸페닐)아세트산 (10.7 g, 45.8 mmol)을 DCM (50 mL) 중에 용해시켰다. 혼합물을 빙수조에서 냉각시킨 다음, 옥살릴 클로라이드 (4.8 mL, 55 mmol) 및 DMF (0.1 mL)를 첨가하였다. 빙수조를 제거하고, 실온에서 2시간 동안 교반하였다. MeOH (6.0 mL)를 2분에 걸쳐 적가하고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 EtOAc 중에 용해시켰다. 유기부를 포화 수성 NaHCO₃ 및 포화 수성 NaCl로 세척하였다. 유기부를 Na₂SO₄ 상에서 건조시킨 다음, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물에 비스(피나콜레이토)디보론 (12.8 g, 50.4 mmol) 및 아세트산칼륨 (13.6 g, 137 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 통해 15분 동안 질소를 버블링한 다음, Pd(dppf)Cl₂ (DCM과의 착물, 1.13 g, 1.37 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 질소 하에 85℃에서 15시간 동안 오일 조에서 가열한 다음, 반응 플라스크를 오일 조로부터 제거하였다. 탄산칼륨 (9.49 g, 68.7 mmol)을 물 (60 mL) 중에 용해시키고, 용액을 통해 10분 동안 질소를 버블링한 다음, 이 용액을 반응 혼합물에 첨가하고, 이어서 4-[(6-브로모-2-피리딜)옥시메틸]-3-플루오로-벤조니트릴 (14.1 g, 45.8 mmol)을 첨가하였다. 전체 반응 혼합물을 통해 5분 동안 질소를 버블링하고, 질소 하에 85℃에서 6시간 동안 가열하였다. 반응물을 실온 근처로 냉각시키고, 진공 하에 농축시켜 대부분의 1,4-디옥산을 제거하였다. 이 혼합물을 EtOAc (200 mL)로 희석하고, 물 및 포화 수성 NaCl로 세척하였다. 유기부를 Na₂SO₄ 상에서 건조시킨 다음, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 헥산 중 5에서 50% EtOAc의 구배를 사용하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 (13.3 g, 70%)을 담황색 고체로서 수득하였다. ES/MS m/z 391 (M+H).

제조예 13

메틸 2-[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-2-플루오로-5-메틸-페닐]아세테이트

플라스크에 메틸 2-[2-플루오로-4-(6-히드록시-2-피리딜)-5-메틸-페닐]아세테이트 (1.40 g, 5.09 mmol), 1,4-디옥산 (35 mL), 탄산은 (1.7 g, 6.2 mmol), 및 4-(브로모메틸)-3-플루오로벤조니트릴 (1.4 g, 6.2 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 밤새 가열하였다. 고체를 여과하고, 여과물을 농축시켰다. 잔류물을 헥산 중 12에서 55% EtOAc를 사용하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 (1.60 g, 77%)을 고체로서 수득하였다. ES/MS m/z 409 (M+H), 407 (M-H).

제조예 14

메틸 2-[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-2-플루오로-페닐]아세테이트

플라스크에 4-[(6-브로모-2-피리딜)옥시메틸]-3-플루오로-벤조니트릴 (2.02 g, 6.58 mmol), 메틸 2-(2-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐)아세테이트 (2.99 g, 9.88 mmol), K₂CO₃ (2.30 g, 16.5 mmol), 1,4-디옥산 (30 mL) 및 물 (10 mL)을 충전하였다. 혼합물을 통해 10분 동안 질소를 버블링하였다. Pd(dppf)Cl₂ DCM 착물 (492 mg, 0.658 mmol)을 혼합물에 첨가하고, 질소 하에 80℃로 5시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 냉각시키고, EtOAc (75 mL)로 희석하고, 셀라이트(Celite)® 패드를 통해 여과하였다. 여과물을 물 및 포화 수성 NaCl로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 5에서 90% EtOAc의 구배로 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 (2.68 g, 94%)을 수득하였다. ES/MS m/z 395 (M+H).

제조예 15

메틸 2-[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-2,6-디플루오로-페닐]아세테이트

메틸 2-[2,6-디플루오로-4-(6-히드록시-2-피리딜)페닐]아세테이트를 사용하고, 반응물을 80℃에서 밤새 가열하여, 본질적으로 제조예 13에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. ES/MS m/z 413 (M+H).

제조예 16

메틸 2-[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-2-플루오로-3-메틸-페닐]아세테이트

메틸 2-[2-플루오로-4-(6-히드록시-2-피리딜)-3-메틸-페닐]아세테이트를 사용하고, 반응물을 80℃에서 3시간 동안 가열하여, 본질적으로 제조예 13에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. ES/MS m/z 409 (M+H).

제조예 17

2-[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-3-메틸-페닐]아세트산

플라스크에 메틸 2-[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-3-메틸-페닐]아세테이트 (1.20 g, 3.07 mmol), ACN (20 mL), 물 (10 mL), 및 수산화리튬 (0.35 g, 15 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 45℃에서 3시간 동안 가열하였다. 혼합물을 빙조로 냉각시키고, 1.0 M HCl을 사용하여 pH = 4-5로 산성화시켰다. 혼합물을 EtOAc (30 mL)와 물 (30 mL) 사이에 분배하였다. 유기부를 염수 (30 mL)로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물 (1.1 g, 95%)을 고체로서 수득하였다. ES/MS m/z 377 (M+H).

제조예 18

2-[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-2-플루오로-5-메틸-페닐]아세트산

바이알에 메틸 2-[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-2-플루오로-5-메틸-페닐]아세테이트 (1.6 g, 3.9 mmol), ACN (20 mL), 물 (6 mL), 및 수산화리튬 (0.45 g, 19 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 45℃에서 2시간 동안 가열하고, 혼합물을 빙조로 냉각시키고, 1.0 M HCl을 사용하여 pH = 4-5로 산성화시켰다. 혼합물을 EtOAc (50 mL)와 물 (50 mL) 사이에 분배하였다. 유기부를 포화 수성 NaCl (50 mL)로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물 (1.55 g, 100%)을 고체로서 수득하였다. ES/MS m/z 395 (M+H).

제조예 19

2-[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-2-플루오로-페닐]아세트산

메틸 2-[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-2-플루오로-페닐]아세테이트 (2.68 g, 6.25 mmol)를 THF (50 mL) 중에 용해시킨 다음, 수산화리튬 (797 mg, 32.9 mmol) 및 물 (20 mL)을 첨가하였다. 실온에서 5시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물의 pH를 수성 HCl (1 M)을 사용하여 5로 조정하였다. 휘발성 용매를 진공 하에 제거하여 수성 슬러리를 수득하였다. 여과하고, 고체를 건조시켜 표제 화합물 (2.24 g, 88%)을 수득하였다. ES/MS m/z 381 (M+H).

제조예 20

2-[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-2,6-디플루오로-페닐]아세트산

메틸 2-[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-2,6-디플루오로-페닐]아세테이트를 사용하여 본질적으로 제조예 18에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. ES/MS m/z 399 (M+H).

제조예 21

2-[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-2-플루오로-3-메틸-페닐]아세트산

메틸 2-[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-2-플루오로-3-메틸-페닐]아세테이트를 사용하여 본질적으로 제조예 17에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. ES/MS m/z 395 (M+H).

제조예 22

2-[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]페닐]아세트산

4-[(6-브로모-2-피리딜)옥시메틸]-3-플루오로-벤조니트릴 (0.70 g, 2.3 mmol) 및 2-(4-보로노페닐)아세트산 (0.64 g, 3.4 mmol), THF (15 mL), 물 (5 mL) 및 탄산칼륨 (0.63 g, 4.6 mmol)을 함께 혼합하였다. 혼합물을 10분 동안 질소 퍼징한 다음, Pd(dppf)Cl₂ (0.085 g, 0.11 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 75℃에서 8시간 동안 가열하였다. 혼합물을 수성 HCl (1 M)을 사용하여 pH 4-5로 산성화시켰다. 혼합물을 EtOAc (50 mL)와 물 (50 mL) 사이에 분배하였다. 유기부를 염수 (50 mL)로 세척하고, 건조시킨 다음 (Na₂SO₄), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 헥산 중 25에서 65% EtOAc의 구배를 사용하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 (800 mg, 97% 수율)을 고체로서 수득하였다. ES/MS m/z 363.0 (M+H).

제조예 23

메틸 4-아미노-3-[[(2S)-옥세탄-2-일메틸]아미노]벤조에이트

THF (10 mL) 및 DMF (10 mL) 중 메틸 3-플루오로-4-니트로-벤조에이트 (2.0 g, 10 mmol)의 용액에 실온에서 트리에틸아민 (3.1 mL, 22 mmol)을 첨가하였다. 미황색 용액에 [(2S)-옥세탄-2-일]메탄아민 (오스틴 케미칼 캄파니(Austin Chemical Company), 1.0 g, 11 mmol)을 첨가하고, 적갈색 용액을 밤새 교반하였다. 반응물을 EtOAc (100 mL) 및 물 (50 mL)로 희석하였다. 유기 층을 분리한 다음, 수성 층을 EtOAc (2 x 50 mL)로 역추출하였다. 유기부를 합하고, 포화 수성 NaCl로 세척하였다. 유기부를 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 잔류물을 고진공 하에 건조시켰다. 이로써 조 메틸 4-니트로-3-[[(2S)-옥세탄-2-일메틸]아미노]벤조에이트 (2.8 g, 10 mmol)를 황색 고체로서 수득하였다 (ES/MS m/z 267 (M+H)).

다음에, 메틸 4-니트로-3-[[(2S)-옥세탄-2-일메틸]아미노]벤조에이트 (2.8 g, 10 mmol)를 THF (50 mL) 중에 용해시키고, 탄소 상 팔라듐 (물로 사전-습윤된 5%, 0.5 g)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 수소로 진공 퍼징한 다음, 수소 풍선 하에 실온에서 2시간 동안 교반하였고, 그 시간 동안 황색이 사라졌다. 혼합물을 셀라이트®를 통해 여과하고, 농축시켜 표제 화합물 (2.4 g, 99%)을 수득하였다. ES/MS m/z 237 (M+H).

제조예 24

메틸 4-[[2-[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-3-메틸-페닐]아세틸]아미노]-3-[[(2S)-옥세탄-2-일메틸]아미노]벤조에이트

바이알에 2-[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-3-메틸-페닐]아세트산 (1.10 g, 2.92 mmol), DMF (10 mL), HATU (1.4 g, 3.6 mmol), 메틸 4-아미노-3-[[(2S)-옥세탄-2-일메틸]아미노]벤조에이트 (0.76 g, 3.2 mmol), 및 DIPEA (1.5 mL, 8.6 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, EtOAc (30 mL)와 물 (30 mL) 사이에 분배하였다. 유기부를 포화 수성 NaCl (30 mL)로 세척한 다음, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 DCM 중 10에서 35% EtOAc의 구배를 사용하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 (1.2 g, 69%)을 고체로서 수득하였다. ES/MS m/z 595 (M+1), 593 (M-1).

제조예 25

메틸 4-[[2-[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-2-플루오로-5-메틸-페닐]아세틸]아미노]-3-[[(2S)-옥세탄-2-일메틸]아미노]벤조에이트

플라스크에 2-[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-2-플루오로-5-메틸-페닐]아세트산 (1.20 g, 3.04 mmol), DMF (15 mL), HATU (1.2 g, 3.1 mmol), 메틸 4-아미노-3-[[(2S)-옥세탄-2-일메틸]아미노]벤조에이트 (0.80 g, 3.4 mmol) 및 DIPEA (1.5 mL, 8.6 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, EtOAc (30 mL)와 물 (30 mL) 사이에 분배하였다. 유기부를 포화 수성 NaCl (30 mL)로 세척한 다음, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 DCM 중 10에서 35% EtOAc의 구배를 사용하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 고체 (1.20 g, 64%)로서 수득하였다. ES/MS m/z 613 (M+1), 611 (M-H).

제조예 26

메틸 2-[[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-2-플루오로-페닐]메틸]-3-[[(2S)-옥세탄-2-일]메틸]벤즈이미다졸-5-카르복실레이트

둥근 바닥 플라스크에 2-[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-2-플루오로-페닐]아세트산 (205 mg, 0.540 mmol), 메틸 4-아미노-3-[[(2S)-옥세탄-2-일메틸]아미노]벤조에이트 (116 mg, 0.490 mmol), HATU (224 mg, 0.589 mmol), DIPEA (0.26 mL, 1.5 mmol), 및 DMF (5 mL)를 첨가하였다. 실온에서 3.5시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 EtOAc (30 mL)로 희석하고, 물 및 포화 수성 NaCl로 세척하였다. 유기부를 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 DCM 중 0에서 10% MeOH의 구배를 사용하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 중간체 아미드 (326 mg)를 수득하였다. ES/MS m/z 599 (M+H).

중간체 아미드를 아세트산 (5 mL)과 함께 50℃에서 15시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 나머지 잔류물을 EtOAc (25 mL) 중에 용해시켰다. 유기부를 포화 수성 NaHCO₃ 및 포화 수성 NaCl로 세척하였다. 유기부를 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 생성물을 헥산 중 20에서 100% EtOAc의 구배를 사용하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 (152 mg, 52%)을 수득하였다. ES/MS m/z 581 (M+H).

제조예 27

메틸 4-[[2-[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-2,6-디플루오로-페닐]아세틸]아미노]-3-[[(2S)-옥세탄-2-일메틸]아미노]벤조에이트

2-[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-2,6-디플루오로-페닐]아세트산을 사용하여 본질적으로 제조예 24에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 수성 후처리 동안 침전된 생성물을 여과에 의해 수집하고, 추가 정제 없이 사용하였다. ES/MS m/z 617 (M+H), 615 (M-H).

제조예 28

메틸 4-[[2-[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-2-플루오로-3-메틸-페닐]아세틸]아미노]-3-[[(2S)-옥세탄-2-일메틸]아미노]벤조에이트

2-[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-2-플루오로-3-메틸-페닐]아세트산을 사용하여 본질적으로 제조예 24에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. ES/MS m/z 613 (M+H), 611 (M-H).

제조예 29

메틸 4-[[2-[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]페닐]아세틸]아미노]-3-[[(2S)-옥세탄-2-일메틸]아미노]벤조에이트

2-[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]페닐]아세트산을 사용하여 본질적으로 제조예 25에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. ES/MS m/z 581.0 (M+H), 579.0 (M-H).

실시예 1

2-[[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-3-메틸-페닐]메틸]-3-[[(2S)-옥세탄-2-일]메틸]벤즈이미다졸-5-카르복실산

바이알에 메틸 4-[[2-[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-3-메틸-페닐]아세틸]아미노]-3-[[(2S)-옥세탄-2-일메틸]아미노]벤조에이트 (1.2 g, 2.0 mmol) 및 아세트산 (6 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 가열한 다음, 용매를 진공 하에 제거하였다. 잔류물을 EtOAc (30 mL)와 수성 NaHCO₃ (5%, 20 mL) 사이에 분배하였다. 유기부를 포화 수성 NaCl (30 mL)로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 ACN (5 mL) 및 물 (3 mL) 중에 용해시킨 다음, 혼합물에 LiOH (0.22 g, 9.2 mmol)를 첨가하고, 50℃에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하였다. 잔류물을 5% 수성 NH₄HCO₃ 중 20에서 35% ACN의 구배를 사용하는 역상 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 (900 mg, 79%)을 고체로서 수득하였다. ES/MS m/z 563 (M+H), 561 (M-H).

실시예 2

2-[[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-2-플루오로-5-메틸-페닐]메틸]-3-[[(2S)-옥세탄-2-일]메틸]벤즈이미다졸-5-카르복실산

바이알에 메틸 4-[[2-[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-2-플루오로-5-메틸-페닐]아세틸]아미노]-3-[[(2S)-옥세탄-2-일메틸]아미노]벤조에이트 (1.20 g, 1.96 mmol) 및 아세트산 (15 mL)을 첨가한 다음, 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 가열하였다. 용매를 진공 하에 제거하였다. 잔류물을 EtOAc (30 mL)와 수성 NaHCO₃ (5%, 20 mL) 사이에 분배하였다. 유기부를 포화 수성 NaCl (30 mL)로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 ACN (10 mL) 및 물 (4 mL) 중에 용해시킨 다음, 혼합물에 LiOH (0.24 g, 10 mmol)를 첨가하고, 50℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 수성 시트르산을 사용하여 pH = 4-5로 산성화시켰다. 용매를 진공 하에 제거하였다. 잔류물을 5% 수성 NH₄HCO₃ 중 20에서 35% ACN의 구배를 사용하는 역상 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 (745 mg, 66%)을 고체로서 수득하였다. ES/MS m/z 581 (M+H), 579 (M-H).

실시예 2a

tert-부틸암모늄;2-[[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-2-플루오로-5-메틸-페닐]메틸]-3-[[(2S)-옥세탄-2-일]메틸]벤즈이미다졸-5-카르복실레이트

방법 1 - 시드 결정 없이 제조

2-[[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-2-플루오로-5-메틸-페닐]메틸]-3-[[(2S)-옥세탄-2-일]메틸]벤즈이미다졸-5-카르복실산 (555 mg, 0.96 mmol)을 50℃에서 800 rpm으로 교반하면서 아세톤 (6 mL) 중에 현탁시켜 백색 고체의 슬러리를 수득하였다. tert-부틸아민 (115 μL, 1.09 mmol, 1.14 당량)을 첨가하여 혼합물의 짧은 정화가 관찰된 다음, 백색 고체가 침전되었다. 이 슬러리를 50℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 가열을 멈추고, 샘플이 실온이 될 때까지 교반되도록 하였다. 고체를 진공 여과에 의해 여과하고, 질소의 스트림 하에 제자리에서 15분 동안 건조시킨 다음, 진공 하에 50℃에서 1시간 동안 건조시켜 표제 화합물 (612 mg, 98%)을 수득하였다.

방법 2 - 시드 결정을 사용한 제조

2-[[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-2-플루오로-5-메틸-페닐]메틸]-3-[[(2S)-옥세탄-2-일]메틸]벤즈이미다졸-5-카르복실산 (50 g, 86.1 mmol), 아세톤 (658 mL) 및 물 (42 mL)을 함께 혼합하고, 혼합물을 50℃로 가열하였다. 혼합물을 GF/F 종이 상에서 여과하고, 94:6 v:v 아세톤:물 (25 mL)로 헹구었다. 생성된 용액을 50℃에서 가열하였다. tert-부틸아민 (10 mL, 94.7 mmol, 1.1 당량) 및 94:6 v:v 아세톤:물 (25 mL)의 용액을 제조하였다. tert-부틸아민 용액의 일부분 (7 mL)에 이어서 tert-부틸암모늄; 2-[[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-2-플루오로-5-메틸-페닐]메틸]-3-[[(2S)-옥세탄-2-일]메틸]벤즈이미다졸-5-카르복실레이트의 시드 결정 (50 mg)를 첨가하였다. 나머지 tert-부틸아민 용액을 대략 1시간에 걸쳐 시린지 펌프를 통해 0.47 mL/분의 속도로 첨가하였다. 생성된 현탁액을 50℃에서 2시간 동안 가열한 다음, 혼합물을 주위 온도로 밤새 냉각시켰다. 슬러리를 여과하고, 아세톤 (2 x 100 mL)으로 헹구었다. 습윤 케이크를 진공 하에 50℃에서 일정한 중량으로 건조시켜 표제 화합물 (51.8 g, 92%)을 연황색 고체로서 수득하였다.

제조된 표제 화합물의 샘플은 하기 표 1에 기재된 바와 같은 회절 피크 (2-세타 값)를 갖는, 특히 16.3 및 22.5로 이루어진 군으로부터 선택된 피크 중 1개 이상과 함께 6.9에서의 피크를 갖는 CuKα 방사선을 사용한 XRD 패턴을 특징으로 하며; 회절각에 대한 허용오차는 0.2도이다.

표 1. tert-부틸암모늄;2-[[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-2-플루오로-5-메틸-페닐]메틸]-3-[[(2S)-옥세탄-2-일]메틸]벤즈이미다졸-5-카르복실레이트의 X선 분말 회절 피크

실시예 3

2-[[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-2-플루오로-페닐]메틸]-3-[(2S)-옥세탄-2-일메틸]벤즈이미다졸-5-카르복실산

메틸 2-[[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-2-플루오로-페닐]메틸]-3-[[(2S)-옥세탄-2-일]메틸]벤즈이미다졸-5-카르복실레이트 (152 mg, 0.256 mmol)를 THF (6 mL) 중에 용해시킨 다음, 수산화리튬 (31 mg, 1.26 mmol) 및 물 (2 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음, 수성 HCl (1 N)을 사용하여 pH를 6으로 조정하였다. THF를 진공 하에 제거하고, 잔류 고체를 여과에 의해 수집하였다. 수성 NH₄HCO₃ (10 mM, pH 10) 중 10에서 40% ACN의 구배를 사용하는 역상 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 (60 mg, 41%)을 수득하였다. ES/MS m/z 567 (M+H).

실시예 4

2-[[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-2,6-디플루오로-페닐]메틸]-3-[(2S)-옥세탄-2-일메틸]벤즈이미다졸-5-카르복실산

메틸 4-[[2-[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-2,6-디플루오로-페닐]아세틸]아미노]-3-[[(2S)-옥세탄-2-일메틸]아미노]벤조에이트를 사용하여 본질적으로 실시예 1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 생성물을 수성 NH₄HCO₃ (10 mM, pH 10) 중 30에서 50% ACN의 구배를 사용하는 역상 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하였다. ES/MS m/z 585 (M+H), 583 (M-H).

실시예 5

2-[[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-2-플루오로-3-메틸-페닐]메틸]-3-[[(2S)-옥세탄-2-일]메틸]벤즈이미다졸-5-카르복실산

메틸 4-[[2-[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]-2-플루오로-3-메틸-페닐]아세틸]아미노]-3-[[(2S)-옥세탄-2-일메틸]아미노]벤조에이트를 사용하여 본질적으로 실시예 2에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 생성물을 5% 수성 NH₄HCO₃ 중 5에서 40% ACN의 구배를 사용하는 역상 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하였다. ES/MS m/z 581 (M+H), 579 (M-H).

실시예 6

2-[[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]페닐]메틸]-3-[[(2S)-옥세탄-2-일]메틸]벤즈이미다졸-5-카르복실산

메틸 4-[[2-[4-[6-[(4-시아노-2-플루오로-페닐)메톡시]-2-피리딜]페닐]아세틸]아미노]-3-[[(2S)-옥세탄-2-일메틸]아미노]벤조에이트를 사용하여 본질적으로 실시예 1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 5% 수성 NH₄HCO₃ 중 20에서 35% ACN의 구배를 사용하는 역상 플래쉬 크로마토그래피에 의해 조 생성물을 정제하였다. ES/MS m/z 549.0 (M+H), 547.1 (M-H).

생물학적 검정

인간 GLP-1 수용체 HEK293 세포 cAMP 검정

GLP-1 수용체 기능적 활성은 581 ± 94 (n=6) 및 104 ± 12 (n=5) fmol/mg 단백질의 발현 밀도 ([¹²⁵I]GLP-1(7-36)NH₂ 상동 경쟁 결합 분석을 사용하여 결정됨)로 인간 GLP-1R (NCBI 수탁 번호 NP_002053)을 발현하는 HEK293 클론 세포주에서의 cAMP 형성을 사용하여 결정하였다. hGLP-1R 수용체 발현 세포를 1X 글루타맥스(GlutaMAX)™ (깁코(Gibco) Cat# 35050), 0.1% 소 카세인 (시그마 C4765-10ML), 250 μM IBMX (3-이소부틸-1-메틸크산틴, 아크로스(Acros) Cat# 228420010) 및 20 mM HEPES (깁코 Cat# 15630)가 보충된 DMEM (깁코 Cat# 31053) 중에서 화합물 (DMSO 중 20점 농도-반응 곡선, 2.75배 랩사이트 에코(Labcyte Echo) 직접 희석, 384 웰 플레이트 코닝(Corning) Cat# 3570)로 20 μL 검정 부피 (최종 DMSO 농도는 0.5%임)로 처리하였다. 37℃에서 30분 인큐베이션한 후, 발생한 세포내 cAMP의 증가를 시스바이오(CisBio) cAMP 다이나믹(Dynamic) 2 HTRF 검정 키트 (62AM4PEJ)를 사용하여 정량적으로 결정하였다. 간략하게, 세포 용해 완충제 (10 μL) 중 cAMP-d2 접합체를 첨가하고 이어서 또한 세포 용해 완충제 (10 μL) 중 항체 항-cAMP-Eu³⁺-크립테이트를 첨가함으로써 세포 내의 cAMP 수준을 검출하였다. 생성된 경쟁 검정물을 실온에서 적어도 60분 동안 인큐베이션한 다음, 퍼킨엘머(PerkinElmer) 엔비전(Envision)® 기기를 사용하여 320 nm에서의 여기 및 665 nm 및 620 nm에서의 방출로 검출하였다. 엔비전 단위 (665 nm/620 nm에서의 방출 * 10,000)는 존재하는 cAMP의 양에 반비례하고, 이를 cAMP 표준 곡선을 사용하여 웰당 cAMP (nM)로 변환하였다. 각각의 웰에서 생성된 cAMP의 양 (nM)을, 인간 GLP-1(7-36)NH₂에 의해 관찰되는 최대 반응의 퍼센트로 변환하였다. 상대 EC₅₀ 값 및 최고 퍼센트 (E_max)를, 4-파라미터 로지스틱 방정식에 피팅된, 퍼센트 최대 반응 vs. 첨가된 화합물의 농도를 사용하여 비-선형 회귀 분석에 의해 유도하였다. 실시예 1-6의 화합물을, 581 및 104 fmol/mg GLP-1R을 발현하는 HEK293 세포를 사용하여 상기 기재된 cAMP 검정에서 시험한 경우의 EC₅₀ 및 E_max 데이터를 각각 표 2 및 3에 나타냈다. 이들 데이터는 실시예 1-6의 화합물이 인간 GLP-1 수용체의 효능제임을 나타낸다.

표 2. 581 fmol/mg의 GLP-1R 발현 밀도를 갖는 HEK293 세포주, 세포내 cAMP 반응

표 3. 104 fmol/mg의 GLP-1R 발현 밀도를 갖는 HEK293 세포주, 세포내 cAMP 반응

인간 GLP-1R 녹-인 마우스에서의 생체내 복강내 글루코스 내성 시험

생체내 혈액 글루코스의 농도를 저하시키는 예시된 화합물의 효력을 마우스 Glp-1r 유전자좌로부터 인간 GLP-1R (NCBI 수탁 번호 NP_002053)을 발현하는 마우스를 사용하여 결정하였다 (Jun, L.S., et al., PLoS One. 2014 9:e93746). 밤새 금식시킨 마우스에게 폴리에틸렌 글리콜 400 (PEG400) 중 10% 콜리포르(Kolliphor)® (HS15) 중에 가용화된 시험 화합물을 경구로 투여하였다. 투여 1시간 후에, 동물에게 글루코스를 복강내 주사 (2 g/kg)에 의해 투여하고, 혈액 글루코스 수준을 혈당측정기를 사용하여 다음 2시간에 걸쳐 간헐적으로 측정하였다. 시험 화합물의 용량 범위를 전달하고, 각각의 용량 군에 대한 곡선하 면적 계산치를 결정하고, 95% 신뢰 구간으로 ED₅₀으로서 생체내 효력을 계산하기 위한 4-파라미터 로지스틱 모델에 피팅하였다. 상기 기재된 생체내 복강내 글루코스 내성 검사에서 시험되었을 때, 실시예 1-3의 화합물은 인간 GLP-1R을 발현하는 마우스에서 표 4에 제시된 바와 같은 ED₅₀ (및 95% 신뢰 구간) 값으로 혈액 글루코스의 농도를 저하시키는 효능을 나타냈으며, 이는 이들 화합물들이 마우스에서 경구 이용가능한 강력한 GLP-1R 효능제임을 나타낸다.

표 4. 인간 GLP-1R을 발현하는 마우스에서의 혈액 글루코스 저하 효능

비-인간 영장류 (NHP) 약동학:

시험 화합물을 0.5 mg/kg (1 mL/kg의 용량 부피를 사용함)으로 공복 수컷 시노몰구스 원숭이에게 정맥내로 (IV) 투여하였다. 일련의 혈액 샘플을 IV 볼루스의 경우 투여 후 0.08, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 8, 12 및 24시간에 수집하였다. EDTA 응고제로 처리한 후, 혈장을 원심분리에 의해 수득하고, LC-MS/MS에 의해 분석할 때까지 -70℃에서 저장하였다. 혈장 중 시험 물품 농도를 결정하였다. 비구획 분석을 사용하여 혈장 클리어런스 및 정상-상태 분포 부피를 계산하였다. 표 5는 본 검정에서 실시예 1-3의 화합물에 대한 약동학적 데이터를 보여준다. 이들 데이터는 부분적으로, 인간 약동학적 프로파일이 1일 1회 투여를 지지하는 것을 시사하는 인간 기계론적 PK 예측을 알아내기 위해 사용된다.

표 5. 시노몰구스 원숭이 약동학적 데이터

*비히클 A - 5% DMSO 및 95% (물 중 20% 캅티솔(CAPTISOL)® (w/v)); 비히클 B - 물 중 20% 캅티솔 (w/v) + 1 몰 당량 NaOH

포스포디에스테라제 10 (PDE10) 효소 활성 검정

포스포디에스테라제 10A1 (PDE10A1) 단백질을 생성하기 위해, 진뱅크(GenBank) ID AAD32595.1에 상응하는 전장 PDE10A1 클론을 pFastBac1 (인비트로젠(Invitrogen)) 내로 클로닝하였다. C-말단 FLAG-태그를 갖는 PDE10A1 단백질을 곤충 세포의 바큘로바이러스 감염에 의해 발현시키고, 항-FLAG M2-아가로스 (시그마(Sigma)) 및 슈퍼덱스(Superdex) 200 칼럼 (지이 헬스케어(GE Healthcare)) 상의 크기 배제 크로마토그래피를 사용하여 정제하고, -80℃에서 작은 분취물 (20 mM 트리스-HCl, Ph 7.5, 150 mM NaCl, 10% 글리세롤) 중에 저장하였다.

PDE10A1 효소 활성은 시클릭 모노포스페이트가 아닌 방사성 뉴클레오티드 모노포스페이트를 검출하는 이트륨 실리케이트 기반 섬광 근접 검정 (SPA)으로 측정하였다. 검정 완충제는 50 mM 트리스-HCl pH 7.5, 8 mM MgCl₂, 3.4 mM EDTA 및 0.1% BSA (시그마)로 구성된다. 검정을 384 웰 플레이트 (3706, 코닝)에서 총 부피 50 μl (24 μl PDE10A1 효소, 1 μl 시험 화합물 및 25 μl 시클릭 뉴클레오티드로 구성됨)로 수행하였다. 시험 화합물을 3-배 희석 배율로 10-점 농도 반응 곡선을 사용하여 순수한 DMSO 중에 희석하고, 1 μl를 에코555 (랩사이트)를 사용하여 검정 플레이트 내로 음향 분배하였다. 24 μl PDE10A1 단백질을 1 μl 화합물과 함께 30분 동안 인큐베이션한 후, [8-³H]-cGMP 기질 (6.5 Ci/mmol, 퍼킨 엘머)의 첨가에 의해 반응을 시작하였다. 성분의 최종 농도는 검정 완충제 중 70 pM PDE10A1, 80 nM (³H-cGMP) 및 2% DMSO였다. 반응 혼합물 중 최대 화합물 농도는 10 μM이었다. 반응물을 실온에서 60분 동안 인큐베이션한 후, 켄칭하고, 웰당 400 mg SPA 비드 (RPNQ0150, 퍼킨 엘머)를 첨가하였다. 비드 결합된 방사능 (생성물)을 마이크로베타(Microbeta) 계수기 (퍼킨 엘머)로 12시간 후에 정량화하였다. 데이터를 % 억제로 정규화하고, IC₅₀ 값을 기재된 바와 같은 4 파라미터 로지스틱 방정식을 사용하여 계산하였다 (Campbell, R.M.; Dymshitz, J.; Eastwood, B.J.; et al. "Data Standardization for Results Management." In: Sittampalam, G.S.; Grossman, A.; Brimacombe, K.; et al.; eds. Assay Guidance Manual. Bethesda (MD): Eli Lilly & Company and the National Center for Advancing Translational Sciences; 2004.). 표 6은 본 검정에서 실시예 1-4의 화합물의 활성을 보여준다. 이들 데이터는 실시예 1 내지 4의 화합물이 PDE10A에 대해 약한 결합 친화도를 갖는다는 것을 보여주며, 이는 감소된 독성 위험을 나타낸다.

표 6. PDE10A1의 시험관내 억제 효력

인간 hERG K⁺ 채널 친화도 방사성리간드 결합 검정

형질감염된 HEK-293 세포에서 인간 hERG K⁺ 채널에 대한 화합물의 친화도를 본원에 기재된 바와 같은 방사성리간드 결합 검정에서 평가하였다. 세포 막 균질물 (약 40 μg 단백질)을, 50 mM 트리스-HCl (pH 7.4), 10 mM KCl 및 1 mM MgCl₂를 함유하는 완충제 중에서 시험 화합물의 부재 또는 존재 하에 3 nM [³H]도페틸리드와 함께 22℃에서 60분 동안 인큐베이션하였다. 검정은 시험 화합물의 초기 가용화에서부터 최대 1% DMSO를 함유하는, 200μL의 부피를 갖는 96-웰 플레이트 포맷에서 수행하였다. 인큐베이션 후, 샘플을 0.3% PEI로 예비침지시킨 유리 섬유 필터 (GF/B, 팩커드(Packard))를 통해 진공 하에 신속하게 여과하고, 96-샘플 세포 수거기 (유니필터(Unifilter), 팩커드)를 사용하여 빙냉 50 mM 트리스-HCl, 10 mM KCl 및 1 mM MgCl₂로 수회 헹구었다. 필터를 건조시킨 다음, 섬광 칵테일 (마이크로신트(Microscint) 0, 팩커드)을 사용하여 섬광 계수기 (탑카운트(Topcount), 팩커드)에서 방사능에 대해 계수하였다. 표 7은 본 검정에서의 실시예 1-3의 활성을 나타내며, 대조군 방사성리간드 특이적 결합의 퍼센트 억제로서 표현된다. 이들 데이터는 실시예 1 내지 3의 화합물이 약한 hERG 억제 활성을 갖는다는 것을 보여주며, 이는 감소된 독성 위험을 나타낸다.

표 7. 인간 hERG K⁺ 채널 친화도 방사성리간드 퍼센트 억제

Claims

하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:

여기서
R¹은 H 또는 F이고;
R²는 H 또는 F이고;
R³은 H 또는 CH₃이다.
제1항에 있어서, 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:

.
제1항 또는 제2항에 있어서, R²이 H이고, R³이 CH₃인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제3항에 있어서,
인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제4항에 있어서,
의 tert-부틸아민 염인 화합물.
제1항 또는 제2항에 있어서, R¹이 F이고 R³이 H인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 적어도 1종의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물.
포유동물에게 유효량의 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 제II형 당뇨병을 치료하는 방법.
유효량의 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 혈액 글루코스 수준을 저하시키는 방법.
포유동물에게 유효량의 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 고혈당증을 치료하는 방법.
제8항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물이 경구로 투여되는 것인 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 요법에 사용하기 위한 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 제II형 당뇨병의 치료에 사용하기 위한 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 혈액 글루코스 수준을 저하시키는데 사용하기 위한 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 고혈당증의 치료에 사용하기 위한 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제12항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 경구로 투여되는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제II형 당뇨병의 치료를 위한 의약의 제조에서의 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도.
혈액 글루코스 수준을 저하시키기 위한 의약의 제조에서의 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도.
고혈당증의 치료를 위한 의약의 제조에서의 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도.