KR20210148197A - 면역 세포 제공 방법 - Google Patents
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Abstract
레시피엔트에게 신속히 면역 세포를 제공하는 것을 과제로 한다. 이하의 공정을 포함하는, 도너 (비레시피엔트) 로부터의 면역 세포를 레시피엔트에게 제공하는 시스템 : 도너로부터 채취한 면역 세포를 투여에 적합한 단위마다 제제화하는 공정 ; 제제의 평가 시험을 실시하는 공정 ; 제제를 냉장 또는 냉동시키고, 도너의 면역형 정보와 함께, 재고화하는 공정 ; 도너의 면역형 정보와 레시피엔트의 면역형 정보에 기초하여, 평가 시험이 끝난 재고 제제로부터 레시피엔트에게 적합한 제제를 선택하거나 또는 하나의 선택한 평가 시험이 끝난 재고 제제에 적합한 레시피엔트를 특정하는 공정.
Description
본 발명은 레시피엔트에게 면역 세포를 신속히 제공하는 방법에 관한 것이다.
체내에서 생긴 암 세포는 면역에 의해 배제되지만, 어떠한 원인으로 다 배제되지 않은 암 세포가 증식하고, 이윽고 암을 발증한다. 암 치료 방법으로는, 수술, 항암제 (화학 요법), 방사선 치료가 일반적이지만, 최근에는 면역 요법이 주목받고 있다. 면역 요법은, 면역의 힘을 이용하여 암을 치료하고자 하는 방법이며, 다양한 치료법을 포함한 개념이다. 세포 요법 (세포 면역 요법) 은, 면역 요법의 1 종으로, 면역 세포를 체외에서 활성화하고, 혹은 증식하여, 환자에게 이식하는 방법이다. 면역에서 중심적인 역할을 하는 것은, 혈액 중의 단구, 호중구, 호산구, 호염기구, T 세포, B 세포, 내추럴 킬러 (NK) 세포, 내추럴·킬러·티 (NKT) 세포, 수상 세포이며, 이들을 총칭하여, 면역 세포라고 부른다.
이들 중, 세포 요법으로서 가장 검토가 진행되고 있는 것은, 체외에서의 증식이 비교적 용이한 T 세포를 이용하는 요법에 관한 것이다. T 세포를 이용하는 세포 요법 중 하나, TIL (Tumor Infiltrating Lymphocyte : 종양 침윤 림프구) 요법은, 외과 수술로 절제한 환자의 암 조직 중 또는 환자로부터 채취한 흉복수 중으로부터 분리한 림프구를 체외에서 대량 배양하여, 환자에게 이식하는 것이다. 멜라노마에서 많은 환자에게 유효했던 것이 보고되어 있으며, 자궁경암, 폐암 등에 대한 적용이 기대되고 있다.
T 세포는, 특정한 항원을 인식하여 공격하는 능력을 갖는다. 따라서, T 세포를 사용하는 요법은, 치료하고자 하는 환자의 암에 특이적으로 반응할 수 있는 T 세포를 사용한다. 즉, T 세포 요법은, 개별화 치료가 되어, 범용성이 부족하다.
또, 환자에게 세포를 이식하고자 할 때에는, 거절 반응이 일어나지 않도록, 환자 자신으로부터 채취한 세포를 사용하는 것이 먼저 검토된다. 그러나, 환자 상태에 따라서는 치료에 필요한 양의 세포의 채취가 어려운 경우가 있다. 또 체외에서 활성화하고, 증식할 수 있는 정도에는 개인차가 있어, 활성화나 증식이 곤란한 케이스가 존재한다. 게다가, 세포의 활성화·증식에는 일정 기간을 필요로 하기 때문에, 즉시 치료를 개시할 수 없다는 문제가 있다. 이러한 점에서, 거절 반응이 잘 일어나지 않는 타인의 iPS 세포로부터 분화·증식시킨 면역 세포를 사용하는 것도 제안되어 있지만, iPS 세포에 관해서는, 제조 시의 외래 유전자의 도입, 분화 유도 후의 암화의 리스크 저감에 대응할 필요가 있다.
본 발명자들은, 상기의 과제를 해결하는 것으로서, 하기의 발명을 제안한다.
[1] 이하의 공정을 포함하는, 도너 (비레시피엔트) 로부터의 면역 세포를 레시피엔트에게 제공하는 시스템 :
도너로부터 채취한 면역 세포를 투여에 적합한 단위마다 제제화하는 공정 ;
제제의 평가 시험을 실시하는 공정 ;
제제를 냉장 또는 냉동시키고, 도너의 면역형 정보와 함께, 재고화하는 공정 ;
도너의 면역형 정보와 레시피엔트의 면역형 정보에 기초하여, 평가 시험이 끝난 재고 제제로부터 레시피엔트에게 적합한 제제를 선택하거나 또는 하나의 선택한 평가 시험이 끝난 재고 제제에 적합한 레시피엔트를 특정하는 공정.
또한 시스템은, 방법 또는 장치라고 바꿔 말할 수 있다.
[2] 제제화하는 공정의 전에, 도너로부터 채취한 면역 세포를 증식 및/또는 활성화하는 공정을 포함하는, 1 에 기재된 시스템.
[3] 제제화하는 공정이, 1 단위의 면역 세포를 수지제 백에 격납함으로써 실시되는, 1 또는 2 에 기재된 제조 방법.
[4] 1 단위가, 1.0 x 107 ∼ 1.0 x 1010 cells 인, 1 ∼ 3 중 어느 한 항에 기재된 시스템.
[5] 평가 시험이, 무균 시험을 포함하는, 1 ∼ 4 중 어느 한 항에 기재된 시스템.
[6] 평가 시험이, 세포의 성능을 평가하는 시험을 포함하는, 1 ∼ 5 중 어느 한 항에 기재된 시스템.
[7] 점적 정맥내 주사에 적합한 형태로 하는 공정이, 제제를 등장액으로 희석함으로써 실시되는, 1 ∼ 6 중 어느 한 항에 기재된 시스템.
[8] 면역 세포가 NK 세포이고, 레시피엔트가 암 환자인, 1 ∼ 7 중 어느 한 항에 기재된 시스템.
[9] 도너가 정상인인, 1 ∼ 8 중 어느 한 항에 기재된 시스템.
[10] 증식 및/또는 활성화하는 공정이, 복수의 도너로부터 채취한 면역 세포를 혼합하여, 증식 및/또는 활성화하는 것인, 2 에 기재된 시스템.
도 1 은, 혈액에 포함되는 면역 세포의 종류
도 2 는, 혈액으로부터의 면역 세포의 채취 방법의 예의 개략도
도 3 은, 본 발명의 시스템의 예의 개략도. D 는 도너, R 은 레시피엔트를 나타낸다.
도 2 는, 혈액으로부터의 면역 세포의 채취 방법의 예의 개략도
도 3 은, 본 발명의 시스템의 예의 개략도. D 는 도너, R 은 레시피엔트를 나타낸다.
본 발명은, 이하의 공정을 포함하는, 도너 (비레시피엔트) 로부터의 면역 세포를 레시피엔트에게 제공하는 시스템을 제공한다.
도너로부터 채취한 면역 세포를 투여에 적합한 단위마다 제제화하는 공정 ;
제제의 평가 시험을 실시하는 공정 ;
제제를 냉장 또는 냉동시키고, 도너의 면역형 정보와 함께, 재고화하는 공정 ;
도너의 면역형 정보와 레시피엔트의 면역형 정보에 기초하여, 평가 시험이 끝난 재고 제제로부터 레시피엔트에게 적합한 제제를 선택하거나 또는 하나의 선택한 평가 시험이 끝난 재고 제제에 적합한 레시피엔트를 특정하는 공정 ;
선택한 제제를, 점적 정맥내 주사에 적합한 형태로 하는 공정.
[제제화]
본 발명에서는, 도너로부터 채취한 면역 세포는, 투여에 적합한 단위마다 제제화된다.
본 발명은, 면역 세포가 미리 도너로부터 채취되어 있고, 면역 요법의 대상이 되는 환자 본인으로부터 채취되는 것은 아닌 것을 특징으로 한다. 즉, 본 발명에서는, 도너는, 레시피엔트는 아니다 (비레시피엔트). 도너는 정상인인 것이 바람직하고, 레시피엔트는 암 환자인 경우가 있다.
또 본 발명은, 도너로부터 「채취한」 세포를 사용하는 것을 특징으로 한다. 「채취한」 세포란, 유전적인 개변을 수반하지 않고 얻은 세포를 말하며, 유전자 조작을 거친 세포, 예를 들어 iPS 세포를 제외한 취지이다.
종래부터 면역 세포 요법에서의 이용이 검토되고 있는 세포로서, 호중구, NK 세포, T 세포, NKT 세포, 수상 세포를 들 수 있지만 (도 1 참조), 본 발명의 바람직한 양태에 있어서는, 면역 세포로서, NK 세포가 사용된다. NK 세포는, 정상 세포와 이상 세포를 분별하는 능력이 있고, 암 세포나 바이러스 감염 세포 등의 이상한 세포를 공격할 수 있다. 이러한 점에서, 항원 특이적으로 특정한 세포를 인식하는 T 세포보다, 공격할 수 있는 대상이 광범위하게 걸쳐 있다.
면역 세포는, 말초혈, 제대혈, 골수 및/또는 림프절로부터 채취되는 혈액 세포 등으로부터 원심 분리 또는 여과 분리에 의해 단핵구를 얻고, 얻어진 단핵구로부터 불필요한 세포를 제거함으로써 얻을 수 있다. 본 발명의 특히 바람직한 양태에 있어서는, 단핵구를 얻는 원료는 말초혈이며, 말초혈은 아페레이시스법에 의해 채취된 것이어도 된다. 또 말초혈은, 신선한 것이어도 되고, 동결 보존된 것이어도 된다 (도 2 참조).
면역 세포는, 냉장 또는 냉동 보존에 적합한 액으로 현탁되어, 제제화된다. 1 제제 중에 포함되는 면역 세포의 수는, 투여에 적합한 수로 하는 것이 바람직하다. 예를 들어, 1 회의 세포 요법으로 투여되는 세포수를 1 단위로 하고, 그 1/3 배량, 1/2 배량, 1 배량을, 1 제제로 할 수 있다. 1 단위는, 예를 들어 1.0 x 107 cells 이상이며, 5.0 x 107 cells 이상으로 해도 되고, 1.0 x 108 cells 이상으로 해도 된다. 상한값은 어느 경우이더라도 1.0 x 1010 cells 이하로 할 수 있으며, 5.0 x 109 cells 이하로 해도 되고, 1.0 x 109 cells 이하로 해도 된다.
면역 세포를 현탁하기 위한 액 (현탁매) 은, 등장액이어도 되고, 고장액이어도 된다. 제제를 냉동 보존하는 경우에는, 무기염류, 및 디메틸술폭시드 (DMSO), 에틸렌글리콜, 포비돈요오드, 또는 트레할로스 등의 세포 보호제를 함유하는 고장액을 사용하는 것이 바람직하다. 등장액이란, 삼투압이 혈장의 삼투압 (285 ± 5 mOsm/ℓ) 에 거의 동등한 액을 말한다. 고장액이란, 삼투압이, 혈장의 삼투압보다 높은 액을 말한다. 세포 보호제를 함유하는 고장액에 세포를 현탁한 경우에는, 현탁 후 15 분 이내에 동결 처리를 개시하는 것이 바람직하다. 또한 고장액을 사용한 경우, 제제의 점적 정맥내 투여 (후술한다) 시에는, 삼투압을 낮추기 위한 희석이 실시된다.
제제화는, 의약품 및 의약 부외품의 제조 관리 및 품질 관리 규칙에 적합한 조건 (good manufacturing practice, GMP) 및 재생 의료 등 제품의 제조 관리 및 품질 관리의 기준 (Good Gene, Cellular, and Tissue-based Products Manufacturing Practice, GCTP) 으로 실시되는 것이 바람직하다.
[증식 및/또는 활성화]
본 발명의 바람직한 양태에 있어서는, 제제화 공정의 전에, 면역 세포를 증식 및/또는 활성화하는 공정이 실시된다. 특히 바람직한 양태에 있어서는, 면역 세포는 증식 및 활성화된다. 또한, 「증식 및/또는 활성화한다」 라는 것은, 증식과 활성화 중, 적어도 일방을 실시하는 것을 가리킨다.
면역 세포의 증식 및/또는 활성화는, 예를 들어, 적합한 배지를 사용하여, 37 ℃, 5 ％ CO2 및 포화 수증기 분위기하에서 인큐베이트하는 것에 의한다. 증식 기간이 길수록 보다 많은 면역 세포가 얻어지므로 유리하다. 증식 기간은, 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, 7 ∼ 28 일간 실시할 수 있으며, 10 ∼ 18 일간으로 해도 되고, 12 ∼ 16 일간, 예를 들어 14 일로 해도 된다.
NK 세포에 관해서, 증식 및 활성화하기 위해서 유효한 조건은, NK 세포의 증식에 적합한 배지를 사용하는 것을 포함한다. 그러한 배지의 예는, KBM501 배지 (코진 바이오 주식회사), CellGro SCGM 배지 (셀제닉스, 이와이 화학 약품 주식회사), X-VIVO15 배지 (론자, 다카라 바이오 주식회사), IMDM, MEM, DMEM, RPMI-1640 등을 포함하는데, 이들에 한정되지 않는다. 배지에는, 인터류킨 2 (IL-2) 가, 본 발명의 목적을 달성할 수 있는 농도로 첨가되는 경우가 있다. IL-2 의 농도는, 2000 IU/㎖ 를 초과하는 경우가 있으며, 2500 ∼ 2813 IU/㎖ 인 경우가 있다. IL-2 는, 인간의 아미노산 서열을 갖는 것이 바람직하고, 안전상, 재조합 DNA 기술로 생산되는 것이 바람직하다. IL-2 의 농도는, 일본내 표준 단위 (JRU) 및 국제 단위 (IU) 로 나타내는 경우가 있다. 1 IU 가 약 0.622 JRU 이기 때문에, 1750 JRU/㎖ 는 약 2813 IU/㎖ 이다. 배지에는, BioWhittaker 사 그 외로부터 입수 가능한 인간 AB 형 혈청이나, 일본 적십자사로부터 입수 가능한 헌혈 인간 혈청 알부민이 첨가되는 경우가 있다. 인간 AB 형 혈청은 1 ∼ 10 ％ 의 농도로 첨가되는 것이 바람직하고, 헌혈 인간 혈청 알부민은 1 ∼ 10 ％ 의 농도로 첨가되는 것이 바람직하다. 또, 배지에는 혈청 대신에 또는 혈청과 함께, 면역 세포의 증식을 위해서 배합된 조성물이 첨가되는 경우가 있다. 이와 같은 조성물은 시판되고 있다. 예를 들어 UltraGro 시리즈 (AventaCell 사), CTS I㎜une Cell SR (Thermo Fisher Scientific 사) 을 본 발명을 위해서도 사용할 수 있다. 배지에는, NK 세포의 증식 효과를 저해하지 않는 것을 조건으로 하여, 적절한 단백질, 사이토카인, 항체, 화합물 그 밖의 성분이 포함되는 경우가 있다. 사이토카인은, 인터류킨 3 (IL-3), 인터류킨 7 (IL-7), 인터류킨 12 (IL-12), 인터류킨 15 (IL-15), 인터류킨 18 (IL-18), 인터류킨 21 (IL-21), 간(幹)세포 인자 (SCF), 및/또는, FMS 형 티로신 키나아제 3 리간드 (Flt3L) 의 경우가 있다. IL-3, IL-7, IL-12, IL-15, IL-18, IL-21, SCF 및 Flt3L 은, 인간의 아미노산 서열을 갖는 것이 바람직하고, 안전상, 재조합 DNA 기술로 생산되는 것이 바람직하다.
본 발명의 바람직한 양태에 있어서는, 면역 세포는, 체외에서 어떠한 사이토카인을 사용하는 것에 따른 활성화 조작을 거친다. 이와 같은 활성화 조작을 거친 면역 세포는, 세포 상해 활성이 높은 NK 세포 (고활성 NK 세포) 등이 된다. 활성화 조작은, 전형적으로는 인터류킨 (IL)-2 를 포함하는 배지를 사용하여 세포를 인큐베이트하는 것에 의한다.
고활성 NK 세포 등에는, 하기의 [1], [2], [3] 및 [4] 가 포함된다.
[1] 하기 (1) 및 (2) 의 특징을 구비하는 NK 세포 :
(1) CD16 양성, CD56 고발현성, 또한 CD57 음성이다.
(2) NKG2C 양성, NKG2A 음성 ∼ 저발현성, 및 CD94 양성이다.
[1] 의 고활성 NK 세포는, CD16 고발현성이어도 된다. 또 [1] 의 고활성 NK 세포는, CD16 고발현성인지 여부에 상관없이, 추가로 하기의 특징을 갖추고 있어도 된다.
(3) 그 NK 세포를 이펙터 세포 (E) 로 하고, K562 세포를 표적 세포 (T) 로하여 혼합비 (E : T) 1 : 1 로 공배양했을 경우의 세포 상해 활성이 50 ％ 이상이다.
[1] 의 고활성 NK 세포는, 하기와 같이 나타낼 수도 있다 :
정상인 유래 말초혈 단핵구로부터, CD3 비즈 (예를 들어, CliniMACS CD3, 밀테니 바이오텍사, 카탈로그 번호 130-017-601), LD 칼럼 (예를 들어, 밀테니 바이오텍, 카탈로그 번호 130-042-901) 및 분리 버퍼 (예를 들어, 0.5 ％ 인간 AB 형 혈청 (비동화 처리한 것), 2 mM EDTA 를 포함하는 PBS) 를 사용하여 CD3 양성 세포를 제거한 세포 집단을, 적절한 배지 (예를 들어, 5 ％ 인간 AB 형 혈청 (비동화 처리한 것) 을 첨가한 코스미디움 008) 에서 14 일간 배양하여 얻어지고, 하기 (1) 및 (3) 의 특징을 구비하는 NK 세포 :
(1) CD16 양성, CD56 고발현성, 또한 CD57 음성이다.
(3) 그 NK 세포를 이펙터 세포 (E) 로 하고, K562 세포를 표적 세포 (T) 로 하여 혼합비 (E : T) 1 : 1 로 공배양했을 경우의 세포 상해 활성이 50 ％ 이상이다.
[1] 의 고활성 NK 세포의 특징의 상세한 내용이나, 보다 구체적인 제조 방법은, 일본 공개특허공보 2018-193303 을 참조할 수 있다.
[2] 하기의 세포 :
CCR5 양성, CCR6 양성 및 CXCR3 양성이고 또한 CD3 음성인 세포.
[2] 의 세포는, 또한 CD11c 고발현성이어도 된다.
[2] 의 세포는, 하기와 같이 나타낼 수도 있다 :
CCR5 양성, CCR6 양성, CXCR3 양성, Integrin α1 양성, Integrin α3 양성 및 Integrin β3 음성이고 또한 CD3 음성인 세포. 혹은, CCR5 양성, CCR6 양성, CXCR3 양성, CD11a 고발현성 및 CD11c 고발현성이고 또한 CD3 음성이며, 고발현성은, 말초혈로부터 얻은, 실질적인 배양을 실시하고 있지 않은 NK 세포의 집단에 있어서의 발현과의 비교에 의해 판단되는, 세포.
[2] 의 세포는, 본 발명자들의 검토에 의하면, 종양 덩어리를 형성한 고형 암에 대하여, 매우 높은 세포 상해 활성을 나타낸다. [2] 의 세포의 특징의 상세한 내용이나, 보다 구체적인 제조 방법은, 일본 공개특허공보 2019-170176 을 참조할 수 있다.
[3] 하기 방법으로 얻어질 수 있는, 고활성 NK 세포 :
신선 말초혈로부터, 또는 동결 아페레이시스 혈액으로부터 얻은 단핵구에 CD3 beads (예를 들어, CliniMACS CD3, 밀테니 바이오텍, 130-017-601 (1 x 107 세포당 5 ㎕)), 및 동결 아페레이시스 혈액을 사용한 경우에는 또한 CD34 beads (예를 들어, CliniMACS CD34, 밀테니 바이오텍, 130-017-501 (1 x 107 세포당 2.5 ㎕)) 을 첨가·현탁하고, 4 ℃, 15 분간 인큐베이트 후, 분리 버퍼 (예를 들어, 0.5 ％ 인간 AB 형 혈청 (56 ℃ 에서 30 분의 비동화 처리한 것), 2 mM EDTA 를 포함하는 PBS) 를 첨가하여 잘 현탁하고, 원심한다. 상청을 제거하고, LD 칼럼 (예를 들어, 밀테니 바이오텍, 130-042-901) 1 칼럼당 최대 1 x 108 cells 까지의 세포수가 되도록 0.5 ㎖ 의 분리 버퍼에 현탁한다. 분리 버퍼 2 ㎖ 를 미리 첨가한 후, LD 칼럼에 세포 현탁액을 첨가하여, LD 칼럼으로부터의 용출액을 회수하였다. 추가로 분리 버퍼 1 ㎖ 를 LD 칼럼에 첨가하고, 용출액을 회수한다. 회수한 액의 원심 분리를 실시하고, 상청을 제거 후, 말초혈을 사용한 경우에는 5 x 105 cells/㎖, 동결 아페레이시스 혈액을 사용한 경우에는 1 x 106 cells/㎖ 가 되도록 적절한 배지 (예를 들어, 5 ％ 인간 AB 형 혈청 (56 ℃ 에서 30 분의 비동화 처리한 것) 혹은 5 ％ UltraGRO (AventaCell, HPCPLCRL10) 에 2 U/㎖ 헤파린나트륨을 첨가한 것, 중 어느 일방을 포함하는 KBM501 배지) 에 세포를 현탁하고, 적절히 배지 교환하면서, 14 일째까지 배양한다.
[3] 의 고활성 NK 세포의, 구체적인 제조 방법은, 일본 특허출원 2020-035297호 (본원의 출원 시에 있어서 미공개) 의 실시예의 항을 참조할 수 있다.
[4] [1] ∼ [3] 의 세포를 얻을 때에, IL-2 와 동시에 또는 IL-2 대신에, IL-12, IL-15, 및 IL-18 로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 것이 본 발명의 목적을 달성할 수 있는 농도로 첨가하고, 배양함으로써 얻어지는 세포. 이와 같은 세포의 구체적인 제조 방법은, Leong JW et al. Biol Blood Marrow Transplant 20 (2014) 463-473 을 참조할 수 있다.
NK 세포를 증식 및/또는 활성화할 때, 복수의 도너로부터 채취한 세포 재료를 혼합해도 된다. 본 발명자들의 검토에 의하면, NK 세포의 경우, 복수의 도너로부터 채취한 것을 혼합함으로써, 증식이 좋아지는 것을 알 수 있다.
면역 세포를 증식 및/또는 활성화하기 위한 용기는, 상업적으로 입수 가능한 디쉬, 플라스크, 플레이트, 멀티 웰 플레이트, 백을 포함하는데, 이들에 한정되지 않는다. 많은 세포를 증식할 수 있고, 취급이 용이한 용기를 사용하는 것이 바람직하다. 이와 같은 용기의 예로서, 높은 가스 투과성을 가진 소재로 이루어지는 세포 증식용 백을 들 수 있다.
백을 사용하는 경우, 증식 및/또는 활성화의 기간 중에 상하를 반전하면서 사용하는 것이 바람직하다. 면역 세포의 일부에는 용기 바닥면에 대한 접착이 보인다. 일반적으로, 접착성 세포의 경우, 용적당 세포수와 함께, 용기 내의 세포가 접착 가능한 단위면적당 세포수가, 증식 효율에 크게 영향을 미친다. 면역 세포의 증식 및/또는 활성화의 기간 중에 백을 반전시킴으로써, 그때까지 상측이었기 때문에 세포의 접착이 비교적 적었던 면도 유효하게 이용되어, 증식을 보다 효율적으로 실시할 수 있다.
[재고화]
제제화된 면역 세포는, 냉장 (예를 들어 4 ℃) 또는 냉동 (예를 들어 약 -196 ℃) 되어, 도너의 면역형 정보와 함께 재고화된다. 냉장 또는 냉동을 위한 설비는, 혈액 제재의 냉장·냉동을 위한 설비 등, 비슷한 목적으로 사용되는 종래의 설비를 이용할 수 있다.
면역형 정보란, ABO 식 혈액형, RH 식 혈액형, HLA 형, KIR 형 등의, 면역에 관련한 정보를 가리킨다. 면역형 정보는, 후술하는 재고 제제의 선택 등을 위해서 이용된다. 어느 도너로부터 얻은 면역 세포를 포함하는 제제와, 동일한 도너로부터 얻은 면역형 정보가 대응하도록 재고화한다. 예를 들어 도너마다 고유 번호를 부여하고, 제제와 면역형 정보 쌍방에, 당해 번호를 부여함으로써, 대응지어진다. 면역형 정보 및 당해 번호는, 문서화 또는 전자화할 수 있다. 또, 재고화하는 제제에 부수시키는 정보에는, 후술하는 평가 시험의 결과를 포함시켜도 된다.
[평가 시험]
본 발명에 있어서는, 제제에 대해, 세포 제제로서의 평가 시험이 실시된다. 평가 시험은, 재고화를 위한 처리와 병행하여 실시할 수 있다.
평가 시험에는, 안전성 시험과 성능 시험 (세포의 성능을 평가하는 시험) 이 포함된다. 안전성 시험에는, 무균 시험, 엔도톡신 시험, 마이코플라스마 부정 시험, 바이러스 부정 시험이 포함된다. 평가 시험 중, 의약품으로서의 품질 보증상 필수인 것은, 후술하는 레시피엔트에게 적합한 제제를 선택하거나 또는 하나의 선택한 평가 시험이 끝난 재고 제제에 적합한 레시피엔트를 특정하는 공정의 전에, 종료해 두는 것이 바람직하다. 특히, 긴 시험 기간을 필요로 하는 무균 시험을 종료시켜 두는 것이 바람직하다. 이에 따라, 레시피엔트에 대한 면역 세포의 신속한 제공이 담보되기 때문이다.
성능 시험에는, 세포 상해 활성 시험이 포함된다. 세포 상해 활성이란, 특별히 기재한 경우를 제외하고, 대상이 되는 면역 세포 (이펙터 세포, E) 의 표적 세포 (T) 에 대한 상해능을 가리킨다. 세포 상해 활성은, 이펙터 세포에 의해 죽음에 이른 표적 세포의 백분율 (％) 로 나타낼 수 있으며, 예를 들어 다음 식에 의해 구해진다.
(이펙터 세포와 공배양했을 경우의 세포사 ― 자연 세포사 (음성 컨트롤)) / (최대 세포사 (양성 컨트롤) ― 자연 세포사 (음성 컨트롤)) × 100
세포 상해 활성의 측정 시에는, 일반적으로는, 이펙터 세포의 세포 상해 활성의 정도 등에 따라, 이펙터 세포와 표적 세포의 혼합비 (E : T), 이펙터 세포와 표적 세포의 공배양의 시간은, 사용하는 세포의 종류나 활성의 강도에 따라 적절하게 할 수 있다. NK 세포를 이펙터 세포로 할 때, 표적 세포는, K562 세포, 급성 골수성 백혈병 세포, 만성 골수성 백혈병 세포인 경우가 있지만, 이들에 한정되지 않는다.
이펙터 세포와 표적 세포, 생세포와 사세포는, 방사성 물질, 형광 색소 등으로 표지한 항체 등의 시약에 의해, 구별하고, 또 정량할 수 있다. NK 세포를 이펙터 세포로 할 때의 세포 상해 활성은, 예를 들어 K562 세포를 표적 세포로 하고, E : T = 1 : 0.05 ∼ 10, 바람직하게는 1 : 0.1 ∼ 5 로 하고, 인큐베이트 시간을 0.5 ∼ 18 시간, 바람직하게는 1 ∼ 12 시간의 조건으로 측정할 수 있다.
NK 세포의 경우, 표적 세포를 K562 세포로 하고, E : T = 1 : 1 로 혼합하고, 1 ∼ 3 시간, 보다 특정하면 2 시간, 공배양했을 경우의 세포 상해 활성이 50 ％ 이상이고, 60 ％ 이상인 것이 바람직하고, 70 ％ 이상인 것이 보다 바람직하다.
[재고 제제의 선택 등]
본 발명에 있어서는, 평가 시험이 끝난 재고 제제 중에서, 도너의 면역형 정보와 레시피엔트의 면역형 정보에 기초하여, 레시피엔트에게 적합한 제제가 선택된다. 혹은, 하나의 선택한 평가 시험이 끝난 재고 제제에 적합한 레시피엔트가 특정된다.
면역형 정보에 기초하는 선택은, 다양한 사정을 고려하여 실시할 수 있다. 예를 들어, 재고 제제에 부수하는 도너의 HLA 형 정보와 레시피엔트의 HLA 형 정보를 대조하고, 적합도 (미리 평가해 둔다) 가 높은 재고 제제를 선택하거나, 또는 재고 제제에 대한 적합도가 높은 도너를 특정할 수 있다.
NK 세포의 경우, KIR 리간드 미스매치에 기초한 선택은, NK 세포의 동종 항원 반응성에 의해, 재발, GvHD (Graft-versus-Host Disease : 이식편대 숙주병), 예후에 관해서 보다 좋은 결과를 가져올 가능성이 있다. 예를 들어, 혈액암에 대한 골수 이식 시에는 KIR 리간드 미스매치가 많은 경우에 예후가 양호한 것이 알려져 있다 (Symons HJ, et al. Biol Blood Marrow Transplant. 2010). 대상이 고형 종양이었을 경우에도 동일한 현상이 보고되어 있다 (Leung W, et al. Br J Cancer. 2007). 일본인의 86 ％ 를 차지하는 HLA-C1/C1 에 대하여 높은 효과를 기대할 수 있는 면역형의 재고를 구비하는 것, 혹은 배리에이션이 풍부한 면역형의 재고를 갖춤으로써, 신속성 뿐만 아니라, 범용성이 높아지는 것으로 생각된다.
[점적 정맥내 주사제화]
본 발명에 있어서는, 선택한 제제는, 레시피엔트에 대한 점적 정맥내 주사에 적합한 형태로 할 수 있다. 이것은, 통상적으로, 제제를 등장액 등의 경정맥내 투여에 적합한 액체로 희석함으로써 실시된다. 이와 같은 액은, 예를 들어, 생리 식염수, 인산 완충 생리 식염수 (PBS), 젖산 링거액, Plasma-Lyte A 등을 포함한다. 의약 조성물 또는 용액은 또한, 약학적으로 허용되는 첨가제를 포함하고 있어도 된다.
주사제화할 때에, 면역 세포가 NK 세포인 경우는, 항체를 첨가해도 된다. 항체 의약품의 상당수는 정맥내 투여 후, ADCC (Antibody Dependent Cellular Cytotoxicity : 항체 의존성 세포 상해) 활성에 의한 항종양 효과를 나타내는 것으로 알려져 있다. 그 한편으로, ADCC 활성을 발휘할 때에는 NK 세포 외에 단구/매크로파지나 호중구도 동원된다. 그리고 NK 세포 이외의 이펙터는, 정상 세포와 암 세포를 구별하지 않고 ADCC 활성을 나타내고, 그것은 부작용의 발현으로도 이어지고 있는 것으로 생각된다. 본 발명에 있어서는, NK 세포와 항체를, 투여 전에 혼합하고, NK 세포에 미리 항체를 장비시켜도 된다. 이에 따라 이펙터가 NK 세포에 한정되어, 투여하는 항체의 양을 줄일 수 있고, 또 부작용의 저감에도 매우 유효한 것으로 생각된다.
[치료]
본 발명에 있어서는, 조제된 점적 정맥내 주사제는, 레시피엔트의 정맥내에 점적되어, 레시피엔트의 질환 처치가 행해진다. 면역 세포가 NK 세포이고, 레시피엔트가 암 환자인 경우, 조제된 점적 정맥내 주사제의 투여에 의해, 레시피엔트의 체내에서, NK 세포가 암 세포를 상해한다.
[본 발명의 시스템의 이점]
본 발명의 시스템의 예의 개략도를 도 3 에 나타내었다. 본 발명의 시스템은, 면역 세포를 재고화함으로써, 레시피엔트에게 면역 세포를 신속히 제공할 수 있다. 본 발명의 시스템은 범용성도 구비한다. 본 발명의 시스템은, NK 세포를 포함하는 제제의 제공을 위해서, 특히 적합하다.
종래의 T 세포 요법은, 개별화 치료가 되어, 범용성이 부족하다. T 세포는, 자기 HLA (Human Leukocyte Antigen : 인간 백혈구 항원) 상의 특정한 항원을 인식하여 공격하는 능력을 갖기 때문에, 종래의 T 세포를 사용하는 요법은, 치료하고자 하는 환자의 암에 특이적으로 반응할 수 있는 T 세포를 사용한다. 또, 자기 HLA 상의 항원이 아니라 세포막 상의 특정 항원을 인식하여 공격하는 능력을 갖는 CAR-T 세포를 사용하는 경우에는, GvHD 억제를 위해서 원칙적으로 자기의 T 세포를 사용한다. 이 타개책으로서, CAR 의 도입에 더하여 HLA 나 TCR (T Cell Receptor : T 세포 수용체. T 세포는, TCR 을 개재하여 항원을 인식한다.) 과 같은 유전자를 개변, 혹은 제거하는 조작을 더하는 수법이 개발 중이지만, 모두 실용화에 이르지 않았다.
산업상 이용가능성
본 발명에 의해 제공되는 시스템은, 레시피엔트에게 신속히 면역 세포를 제공할 수 있기 때문에, 의료 등의 분야에서 이용 가능성이 있다. 면역 세포를 신속히 제공할 수 있는 것은, 생명 예후가 불량이고 비교적 긴급성이 높은 악성 종양 환자에 대해서, 매우 유용한 것으로 생각된다.
Claims (10)
- 이하의 공정을 포함하는, 도너 (비레시피엔트) 로부터의 면역 세포를 레시피엔트에게 제공하는 방법 :
도너로부터 채취한 면역 세포를 투여에 적합한 단위마다 제제화하는 공정 ;
제제의 평가 시험을 실시하는 공정 ;
제제를 냉장 또는 냉동시키고, 도너의 면역형 정보와 함께, 재고화하는 공정 ;
도너의 면역형 정보와 레시피엔트의 면역형 정보에 기초하여, 평가 시험이 끝난 재고 제제로부터 레시피엔트에게 적합한 제제를 선택하거나 또는 하나의 선택한 평가 시험이 끝난 재고 제제에 적합한 레시피엔트를 특정하는 공정. - 제 1 항에 있어서,
제제화하는 공정의 전에, 도너로부터 채취한 면역 세포를 증식 및/또는 활성화하는 공정을 포함하는, 방법. - 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
제제화하는 공정이, 1 단위의 면역 세포를 수지제 백에 격납함으로써 실시되는, 방법. - 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
1 단위가, 1.0 x 107 ∼ 1.0 x 1010 cells 인, 방법. - 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
평가 시험이, 무균 시험을 포함하는, 방법. - 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,
평가 시험이, 세포의 성능을 평가하는 시험을 포함하는, 방법. - 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
점적 정맥내 주사에 적합한 형태로 하는 공정이, 제제를 등장액으로 희석함으로써 실시되는, 방법. - 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,
면역 세포가 NK 세포이고, 레시피엔트가 암 환자인, 방법. - 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,
도너가 정상인인, 방법. - 제 2 항에 있어서,
증식 및/또는 활성화하는 공정이, 복수의 도너로부터 채취한 면역 세포를 혼합하여, 증식 및/또는 활성화하는 것인, 방법.
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