KR20210142010A - 생선 알레르기의 항원 - Google Patents

생선 알레르기의 항원 Download PDF

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Abstract

본 발명은, 생선에 대한 알레르기의 신규 항원, 생선에 대한 알레르기의 진단 방법 및 진단 키트, 해당 항원을 포함하는 의약 조성물, 해당 항원이 제거된 생선, 생선알, 해당 생선 혹은 해당 생선알 가공품, 또는 해당 생선알을 낳는 혹은 해당 생선알로부터 태어난 생선, 및 대상물에 있어서의 생선 항원의 유무를 판정하기 위한 테스터를 제공한다.

Description

생선 알레르기의 항원{FISH ALLERGY ANTIGEN}
본 발명은, 생선(魚)에 대한 알레르기의 신규 항원에 관한 것이다. 본 발명은 또한, 생선에 대한 알레르기의 진단 키트, 진단용 조성물, 및 진단 방법에 관한것이다. 본 발명은 또한, 해당 항원을 포함하는 의약 조성물, 및 해당 항원이 제거 또는 저감된 생선, 생선알(魚卵), 해당 생선 혹은 해당 생선알 가공품, 또는 해당 생선알을 낳는 혹은 해당 생선알로부터 태어난 생선에 관한 것이다. 본 발명은 또한, 대상물에 있어서의 생선 항원의 유무를 판정하기 위한 테스터에 관한 것이다.
알레르기 환자의 혈액 및 조직 중에서는, 특정의 항원에 특이적인 IgE 항체가 산생(産生)된다. 이 IgE 항체와 특정의 항원의 상호작용에 의해 발생된 생리학적 결과에 의해 알레르기 반응이 야기된다.
종래의 알레르기 검사약에 있어서는, 간단히 알레르겐(allergen) 후보의 식품·식재 등을 갈아 으깨서 항원 시약을 작성한 경우가 많다(특허문헌 1). 이 때문에, 시약 중에는 무수한 단백질이 포함되어 있고, 개개의 단백질의 함유량은 매우 적은 것이었다. 이 때문에, 종래의 항원 시약 중에 포함되는 다수의 단백질 중에서, IgE 항체와의 결합에 관하여 양성 반응이 판정 가능한 역치(threshold value)를 초과하는 함유량의 단백질이 해당 알레르기 반응을 일으키는 특정의 항원 단백질(알레르겐 컴퍼넌트(allergen component))이었을 경우에만, 알레르기 검사에 있어서의 양성 반응을 검출하는 것이 가능했다. 반대로, 식품·식재 등의 알레르겐 중의 함유량이 적은 알레르겐 컴퍼넌트에 IgE 항체가 결합되는 환자에 관해서는, 종래의 알레르기 검사약을 사용해도 양성 반응을 판정할 수 없어, 진단 효율은 충분히 높다고는 할 수 없는 상태이었다.
또한, 알레르기 반응의 증상이나 중독도(重篤度)는, 알레르겐 컴퍼넌트의 함유량과는 반드시 상관되지 않는다. 알레르겐 후보의 식품·재료 중에 미량으로 포함되는 알레르겐 컴퍼넌트에 환자의 IgE 항체가 반응하는 경우이라도 알레르기 증상이 나타나거나, 중독도에 관여되거나 하는 경우가 있다.
식품·식재를 구성하는 하나 하나의 단백질에 대한 IgE 항체를 조사함으로써, 진단에 직결되는 감작(感作)과 범(汎)알레르겐 등에 의한 교차 항원성에 근거하는 감작을 구별하여 진단 효율을 올리는 시도도 진행되고 있다. 생선 알레르겐에 관해서는, 현재, 이하의 표에 나타내는 것이 알려져 있다(비특허문헌 1).
Figure pat00001
그러나, 알레르기 검사의 신뢰도를 높이기 위해서는, 알레르겐 후보의 식품·재료에 있어서, 알레르겐 컴퍼넌트를 망라적(網羅的)으로 특정할 필요가 있는데, 상기 알레르겐 컴퍼넌트의 측정에 의한 환자 검출률은 아직도 불충분하다. 생선의 신규 알레르겐을 동정(同定)하는 것은, 진단약의 정도(精度)를 높일 뿐만 아니라, 저(低)알레르겐 식품, 저(低)알레르겐 식재나 치료약의 타겟으로서도 매우 중요하다.
한편, 단백질의 분리·정제에 관해서는, 종래, 세포 추출물 등에서 단백질이나 핵산을 분리·정제하는 방법이 여러 가지로 검토되어 오고 있다. 염 농도를 이용한 투석, 원심분리 등은 그 일례이라고 할 수 있다.
또한, 단백질이나 핵산의 잔기(殘基)가 갖는 전하나, 분자량의 차이를 이용한 정제 방법도 다수 검토되고 있다. 전하를 이용한 정제 방법으로서는, 이온교환 수지를 사용한 컬럼 크로마토그래피나 등전점(等電點) 전기영동을 예시할 수 있다. 분자량의 차이를 이용한 정제 방법으로서는 원심분리, 분자량 체(篩)에 의한 컬럼 크로마토그래피나 SDS－PAGE(도데실 황산나트륨-폴리아크릴 아미도겔 전기영동)를 예시할 수 있다.
최근, 소량의 샘플로부터 다양한 단백질을 분리 정제하는 방법으로서, 1차원째에 등전점 전기영동을 실시하고, 2차원째에 SDS－PAGE를 실시하는 2차원 전기영동법이 사용되고 있다. 출원인들은 지금까지, 분리능이 높은 2차원 전기영동법을 개발해 왔다(특허문헌 2∼5).
특허문헌 1 : 일본특허공개 특개 2002－286716 특허문헌 2 : 일본특허공개 특개 2011－33544 특허문헌 3 : 일본특허공개 특개 2011－33546 특허문헌 4 : 일본특허공개 특개 2011－33547 특허문헌 5 : 일본특허공개 특개 2011－33548
비특허문헌 1 : Allergen Nomenclature, WHO/IUIS Allergen Nomenclature Sub-Committee, [평성 28년 6월 9일 검색] , 인터넷＜URL: http://www.allergen.org/search.php?allergenname=&allergensource=&TaxSource= Animalia+Chordata&TaxOrder=&foodallerg=1&bioname= ＞
본 발명은, 생선에 대한 알레르기의 신규 항원을 제공한다. 본 발명은 또한, 생선에 대한 알레르기의 진단 방법 및 진단 키트를 제공한다. 본 발명은 또한, 해당 항원을 포함하는 의약 조성물, 및 해당 항원이 제거 또는 저감된 생선, 생선알, 해당 생선 혹은 해당 생선알 가공품, 또는 해당 생선알을 낳는 혹은 해당 생선알로부터 태어난 생선을 제공한다. 본 발명은 또한, 대상물에 있어서의 생선 항원의 유무를 판정하기 위한 테스터를 제공한다.
본 발명자들은, 상기 과제를 해결하기 위해 생선에 대한 알레르기의 원인 항원 특정에 관하여 예의 (銳意) 연구를 실시했다. 그 결과, 생선 알레르기를 가지는 환자의 혈청 중의 IgE 항체가 특이적으로 결합되는 신규 항원을 특정하는 것에 성공했다. 해당 지견(知見)에 근거하여, 본 발명은 완성되었다.
즉, 일 양태(態樣)에 있어서, 본 발명은 이하와 같아도 된다.
[1] 생선 알레르기의 진단 키트로서, 이하 (1)~(9)의 단백질 중 적어도 하나：
(1) (1A) α－악티닌-3(AlphA－actinin-3) 또는 그 변이체로서, 생선에 대한 알레르기의 항원인, 이하의 (1A－a)~(1A－e) 중 어느 하나의 단백질：
(1A－a) 서열번호 2에 있어서 1 또는 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(1A－b) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열과 동일성이 70% 이상인 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(1A－c) 서열번호 1에 있어서 1 또는 수 개의 뉴클레오티드가 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(1A－d) 서열번호 1로 나타내는 염기 서열과 동일성이 70% 이상인 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；혹은
(1A－e) 서열번호 1로 나타내는 염기 서열에 대하여 상보적인 염기 서열로 이루어지는 핵산과 스트린젠트(stringent)한 조건 하에서 하이브리다이즈(hybridize) 하는 핵산에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；또는
(1B) 서열번호 2 또는 3의 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(2) (2A) EEF1A2 바인딩 프로테인-라이크(EEF1A2 binding protein-like) 또는 그 변이체로서, 생선에 대한 알레르기의 항원인, 이하의 (2A－a)~(2A－e) 중 어느 하나의 단백질：
(2A－a) 서열번호 5에 있어서 1 또는 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(2A－b) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열과 동일성이 70% 이상인 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(2A－c) 서열번호 4에 있어서 1 또는 수 개의 뉴클레오티드가 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(2A－d) 서열번호 4로 나타내는 염기 서열과 동일성이 70% 이상인 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；혹은
(2A－e) 서열번호 4로 나타내는 염기 서열에 대하여 상보적인 염기 서열로 이루어지는 핵산과 스트린젠트한 조건 하에서 하이브리다이즈하는 핵산에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；또는
(2B) 서열번호 5~8로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하는 단백질；
(3) (3A) α－1, 4－글루칸포스포릴라아제(AlphA－1,4-glucan phosphorylase) 또는 그 변이체로서, 생선에 대한 알레르기의 항원인, 이하의 (3A－a)~(3A－e) 중 어느 하나의 단백질：
(3A－a) 서열번호 10에 있어서 1 또는 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(3A－b) 서열번호 10으로 나타내는 아미노산 서열과 동일성이 70% 이상인 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(3A－c) 서열번호 9에 있어서 1 또는 수 개의 뉴클레오티드가 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(3A－d) 서열번호 9로 나타내는 염기 서열과 동일성이 70% 이상인 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；혹은
(3A－e) 서열번호 9로 나타내는 염기 서열에 대하여 상보적인 염기 서열로 이루어지는 핵산과 스트린젠트한 조건 하에서 하이브리다이즈하는 핵산에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；또는
(3B) 서열번호 10~16으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 중 적어도 1개를 포함하는 단백질；
(4) (4A) 엘론게이션 팩터 2(Elongation factor 2) 또는 그 변이체로서, 생선에 대한 알레르기의 항원인, 이하의 (4A－a)~(4A－e) 중 어느 하나의 단백질：
(4A－a) 서열번호 19에 있어서 1 또는 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(4A－b) 서열번호 19로 나타내는 아미노산 서열과 동일성이 70% 이상인 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(4A－c) 서열번호 18에 있어서 1 또는 수 개의 뉴클레오티드가 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(4A－d) 서열번호 18로 나타내는 염기 서열과 동일성이 70% 이상인 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；혹은
(4A－e) 서열번호 18로 나타내는 염기 서열에 대하여 상보적인 염기 서열로 이루어지는 핵산과 스트린젠트한 조건 하에서 하이브리다이즈하는 핵산에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；또는
(4B) 서열번호 19~24로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 중 적어도 1개를 포함하는 단백질；
(5) (5A) 히트 쇼크 코그네이트 70kDa 프로테인(Heat shock cognate 70kDa protein) 또는 그 변이체로서, 생선에 대한 알레르기의 항원인, 이하의 (5A－a)~(5A－e) 중 어느 하나의 단백질：
(5A－a) 서열번호 26에 있어서 1 또는 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(5A－b) 서열번호 26으로 나타내는 아미노산 서열과 동일성이 70% 이상인 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(5A－c) 서열번호 25에 있어서 1 또는 수 개의 뉴클레오티드가 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(5A－d) 서열번호 25로 나타내는 염기 서열과 동일성이 70% 이상인 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；혹은
(5A－e) 서열번호 25로 나타내는 염기 서열에 대하여 상보적인 염기 서열로 이루어지는 핵산과 스트린젠트한 조건 하에서 하이브리다이즈하는 핵산에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；또는
(5B) 서열번호 26~31로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 중 적어도 1개를 포함하는 단백질；
(6) (6A) 세로트란스페린(Serotransferrin) 또는 그 변이체로서, 생선에 대한 알레르기의 항원인, 이하의 (6A－a)~(6A－e) 중 어느 하나의 단백질：
(6A－a) 서열번호 33에 있어서 1 또는 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(6A－b) 서열번호 33으로 나타내는 아미노산 서열과 동일성이 70% 이상인 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(6A－c) 서열번호 32에 있어서 1 또는 수 개의 뉴클레오티드가 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(6A－d) 서열번호 32로 나타내는 염기 서열과 동일성이 70% 이상인 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；혹은
(6A－e) 서열번호 32로 나타내는 염기 서열에 대하여 상보적인 염기 서열로 이루어지는 핵산과 스트린젠트한 조건 하에서 하이브리다이즈하는 핵산에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；또는
(6B) 서열번호 33~41로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하는 단백질；
(7) (7A) 미오신 바인딩 프로테인 H－라이크(Myosin binding protein H-like) 또는 그 변이체로서, 생선에 대한 알레르기의 항원인, 이하의 (7A－a)~(7A－e) 중 어느 하나의 단백질：
(7A－a) 서열번호 43에 있어서 1 또는 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(7A－b) 서열번호 43으로 나타내는 아미노산 서열과 동일성이 70% 이상인 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(7A－c) 서열번호 42에 있어서 1 또는 수 개의 뉴클레오티드가 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(7A－d) 서열번호 42로 나타내는 염기 서열과 동일성이 70% 이상인 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；혹은
(7A－e) 서열번호 42로 나타내는 염기 서열에 대하여 상보적인 염기 서열로 이루어지는 핵산과 스트린젠트한 조건 하에서 하이브리다이즈하는 핵산에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；또는
(7B) 서열번호 43~54로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하는 단백질；
(8) (8A) 데스민(프래그먼트) (Desmin (Fragment)) 또는 그 변이체로서, 생선에 대한 알레르기의 항원인, 이하의 (8A－a)~(8A－e) 중 어느 하나의 단백질：
(8A－a) 서열번호 56에 있어서 1 또는 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(8A－b) 서열번호 56으로 나타내는 아미노산 서열과 동일성이 70% 이상인 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(8A－c) 서열번호 55에 있어서 1 또는 수 개의 뉴클레오티드가 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(8A－d) 서열번호 55로 나타내는 염기 서열과 동일성이 70% 이상인 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；혹은
(8A－e) 서열번호 55로 나타내는 염기 서열에 대하여 상보적인 염기 서열로 이루어지는 핵산과 스트린젠트한 조건 하에서 하이브리다이즈하는 핵산에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；또는
(8B) 서열번호 56~59로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하는 단백질；
(9) (9A) 캡핑 프로테인(액틴 필라멘트) 머슬 Z－라인 베타(Capping protein (Actin filament) muscle Z-line beta) 또는 그 변이체로서, 생선에 대한 알레르기의 항원인, 이하의 (9A－a)~(9A－e) 중 어느 하나의 단백질：
(9A－a) 서열번호 61에 있어서 1 또는 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(9A－b) 서열번호 61로 나타내는 아미노산 서열과 동일성이 70% 이상인 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(9A－c) 서열번호 60에 있어서 1 또는 수 개의 뉴클레오티드가 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(9A－d) 서열번호 60으로 나타내는 염기 서열과 동일성이 70% 이상인 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；혹은
(9A－e) 서열번호 60으로 나타내는 염기 서열에 대하여 상보적인 염기 서열로 이루어지는 핵산과 스트린젠트한 조건 하에서 하이브리다이즈하는 핵산에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；또는
　(9B) 서열번호 61~68로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하는 단백질；
을 항원으로서 포함하는, 상기 진단 키트.
[2] 생선 알레르기의 진단용 조성물로서, 상기 [1]에 있어서 (1)~(9)로서 특정되는 단백질 중 적어도 하나를 항원으로서 포함하는, 상기 진단용 조성물.
[3] 대상의 생선 알레르기를 진단하기 위한 지표를 제공하는 방법으로서, 이하의 공정：
(i) 대상으로부터 얻어진 시료를 항원에 접촉시키는, 여기서 해당 시료는 IgE 항체가 포함되는 용액인；
(ii) 대상으로부터 얻어진 시료 중의 IgE 항체와 해당 항원과의 결합을 검출하는；
(iii) 대상의 IgE 항체와 해당 항원과의 결합이 검출된 경우, 대상이 생선 알레르기인 것의 지표가 제공되는；
을 포함하고, 여기서 해당 항원은, 상기 [1]에 있어서 (1)~(9)로서 특정되는 단백질 중 적어도 하나인, 상기 방법.
[4] 상기 [1]에 있어서 (1)~(9)로서 특정되는 단백질 중 적어도 하나를 포함하는 의약 조성물.
[5] 생선 알레르기를 치료하기 위한, 상기 [4]에 기재된 의약 조성물.
[6] 항원이 제거 또는 저감되어 있는 것을 특징으로 하는 생선 또는 생선 가공품으로서, 해당 항원은 상기 [1]에 있어서 (1)~(9)로서 특정되는 단백질 중 적어도 하나인, 상기 생선 또는 생선 가공품.
[7] 상기 [1]에 있어서 (1)~(9)로서 특정되는 단백질 중 적어도 하나로 결합하는 항체를 포함하는 것을 특징으로 하는, 대상물에 있어서의 생선 항원의 유무를 판정하기 위한 테스터.
[8] 서열번호 1, 4, 9, 18, 25, 32, 42, 55 또는 60으로 나타내는 염기 서열 중 적어도 1개의 일부와 상보적인 염기 서열을 가지는 프라이머를 포함하는 것을 특징으로 하는, 대상물에 있어서의 생선에 대한 알레르기의 원인이 되는 항원의 유무를 판정하기 위한 테스터.
[9] 생선 알레르기의 진단 키트로서, 이하 (10)~(14)의 단백질 중 적어도 하나：
(10) (10A) 미오신 헤비 체인, 패스트 스켈레탈 머슬-라이크(myosin heavy chain, fast skeletal muscle-like) 또는 그 변이체로서, 생선에 대한 알레르기의 항원인, 이하의 (10A－a)~(10A－e) 중 어느 하나의 단백질：
(10A－a) 서열번호 70에 있어서 1 또는 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(10A－b) 서열번호 70으로 나타내는 아미노산 서열과 동일성이 70% 이상인 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(10A－c) 서열번호 69에 있어서 1 또는 수 개의 뉴클레오티드가 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(10A－d) 서열번호 69로 나타내는 염기 서열과 동일성이 70% 이상인 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；혹은
(10A－e) 서열번호 69로 나타내는 염기 서열에 대하여 상보적인 염기 서열로 이루어지는 핵산과 스트린젠트한 조건 하에서 하이브리다이즈하는 핵산에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；또는
(10B) 서열번호 70~108로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하는 단백질；
(11) (11A) 글리코겐 포스포릴라아제, 머슬 폼-라이크(glycogen phosphorylase, muscle form-like) 또는 그 변이체로서, 생선에 대한 알레르기의 항원인, 이하의 (11A－a)~(11A－e) 중 어느 하나의 단백질：
(11A－a) 서열번호 110에 있어서 1 또는 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(11A－b) 서열번호 110으로 나타내는 아미노산 서열과 동일성이 70% 이상인 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(11A－c) 서열번호 109에 있어서 1 또는 수 개의 뉴클레오티드가 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(11A－d) 서열번호 109로 나타내는 염기 서열과 동일성이 70% 이상인 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；혹은
(11A－e) 서열번호 109로 나타내는 염기 서열에 대하여 상보적인 염기 서열로 이루어지는 핵산과 스트린젠트한 조건 하에서 하이브리다이즈하는 핵산에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；또는
(11B) 서열번호 110~119로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하는 단백질；
(12) (12A) 미오신 바인딩 프로테인 C, 패스트-타입-라이크(myosin-binding protein C, fast-type-like) 또는 그 변이체로서, 생선에 대한 알레르기의 항원인, 이하의 (12A－a)~(12A－e) 중 어느 하나의 단백질：
(12A－a) 서열번호 121에 있어서 1 또는 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(12A－b) 서열번호 121로 나타내는 아미노산 서열과 동일성이 70% 이상인 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(12A－c) 서열번호 120에 있어서 1 또는 수 개의 뉴클레오티드가 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(12A－d) 서열번호 120으로 나타내는 염기 서열과 동일성이 70% 이상인 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；혹은
(12A－e) 서열번호 120으로 나타내는 염기 서열에 대하여 상보적인 염기 서열로 이루어지는 핵산과 스트린젠트한 조건 하에서 하이브리다이즈하는 핵산에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；또는
(12B) 서열번호 121~136으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하는 단백질；
(13) (13A) ATP 신타아제 서브유닛 β, 미트콘드리알(ATP synthase subunit beta, mitochondrial) 또는 그 변이체로서, 생선에 대한 알레르기의 항원인, 이하의 (13A－a)~(13A－e) 중 어느 하나의 단백질：
(13A－a) 서열번호 138에 있어서 1 또는 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(13A－b) 서열번호 138로 나타내는 아미노산 서열과 동일성이 70% 이상인 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(13A－c) 서열번호 137에 있어서 1 또는 수 개의 뉴클레오티드가 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(13A－d) 서열번호 137으로 나타내는 염기 서열과 동일성이 70% 이상인 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；혹은
(13A－e) 서열번호 137으로 나타내는 염기 서열에 대하여 상보적인 염기 서열로 이루어지는 핵산과 스트린젠트한 조건 하에서 하이브리다이즈하는 핵산에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；또는
(13B) 서열번호 138~142로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하는 단백질；
(14) (14A) L－락테이트데히드로게나아제 A 체인-라이크(L-lactate dehydrogenase A chain-like) 또는 그 변이체로서, 생선에 대한 알레르기의 항원인, 이하의 (14A－a)~(14A－e) 중 어느 하나의 단백질：
(14A－a) 서열번호 144에 있어서 1 또는 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(14A－b) 서열번호 144로 나타내는 아미노산 서열과 동일성이 70% 이상인 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(14A－c) 서열번호 143에 있어서 1 또는 수 개의 뉴클레오티드가 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
(14A－d) 서열번호 143으로 나타내는 염기 서열과 동일성이 70% 이상인 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；혹은
(14A－e) 서열번호 143으로 나타내는 염기 서열에 대하여 상보적인 염기 서열로 이루어지는 핵산과 스트린젠트한 조건 하에서 하이브리다이즈하는 핵산에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；또는
(14B) 서열번호 144~149로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하는 단백질；
을 항원으로서 포함하는, 상기 진단 키트.
[10] 생선 알레르기의 진단용 조성물로서, 상기 [9]에 있어서 (10)~(14)로서 특정되는 단백질 중 적어도 하나를 항원으로서 포함하는, 상기 진단용 조성물.
[11] 대상의 생선 알레르기를 진단하기 위한 지표를 제공하는 방법으로서, 이하의 공정：
(i) 대상으로부터 얻어진 시료를 항원에 접촉시키는, 여기서 해당 시료는 IgE 항체가 포함되는 용액인；
(ii) 대상으로부터 얻어진 시료 중의 IgE 항체와 해당 항원과의 결합을 검출하는；
(iii) 대상의 IgE 항체와 해당 항원과의 결합이 검출된 경우, 대상이 생선 알레르기인 것의 지표가 제공되는；
을 포함하고, 여기서 해당 항원은, 상기 [9]에 있어서 (10)~(14)로서 특정되는 단백질 중 적어도 하나인, 상기 방법.
[12] 상기 [9]에 있어서 (10)~(14)로서 특정되는 단백질 중 적어도 하나를 포함하는 의약 조성물.
[13] 생선 알레르기를 치료하기 위한, 상기 [12]에 기재된 의약 조성물.
[14] 항원이 제거 또는 저감되어 있는 것을 특징으로 하는 생선 또는 생선 가공품으로서, 해당 항원은 상기 [9]에 있어서 (10)~(14)로서 특정되는 단백질 중 적어도 하나인, 상기 생선 또는 생선 가공품.
[15] 상기 [9]에 있어서 (10)~(14)로서 특정되는 단백질 중 적어도 하나로 결합하는 항체를 포함하는 것을 특징으로 하는, 대상물에 있어서의 생선 항원의 유무를 판정하기 위한 테스터.
[16] 서열번호 69, 109, 120, 137 또는 143으로 나타내는 염기 서열 중 적어도 1개의 일부와 상보적인 염기 서열을 가지는 프라이머를 포함하는 것을 특징으로 하는, 대상물에 있어서의 생선에 대한 알레르기의 원인이 되는 항원의 유무를 판정하기 위한 테스터.
[17] 생선 유래의 항원으로서, 상기 [1]에 있어서 (1)~(9)로서 특정되는 단백질 중 적어도 1개이고, 그리고 생선에 대한 알레르기의 원인이 되는, 상기 항원.
[18] 생선 유래의 항원으로서, 상기 [9]에 있어서 (10)~(14)로서 특정되는 단백질 중 적어도 1개이고, 그리고 생선에 대한 알레르기의 원인이 되는, 상기 항원.
본 발명에 의해, 생선에 대한 알레르기의 신규 항원을 제공할 수 있다. 본 발명에 있어서 생선 알레르기를 일으키는 신규한 항원(알레르겐 컴퍼넌트)이 동정(同定)된 점에서, 생선에 대한 알레르기의 고감도의 진단 방법 및 진단 키트, 해당 항원을 포함하는 의약 조성물, 해당 항원이 제거 또는 저감된 생선, 생선알, 해당 생선 혹은 해당 생선알 가공품, 또는 해당 생선알을 낳는 혹은 해당 생선알로부터 태어난 생선, 및 대상물에 있어서의 생선 항원의 유무를 판정하기 위한 테스터를 제공할 수 있다.
[도 1a] 도 1a는, 연어 몸의 추출물에 포함되는 단백질에 관하여, 2차원 전기 영동에 의한 단백질의 영동패턴을 나타내는 겔의 사진(좌측 도면) 및 2차원 전기 영동 패턴에 대하여, 생선 알레르기 환자 1의 혈청을 사용한 이무노블로트(immunoblot)의 사진(우측 도면)이다. 겔 사진의 좌측의 밴드는 분자량 마커의 밴드이며, 겔 사진의 좌측의 수치는 각 분자량 마커의 분자량(KDa)이다. 사진 상부의 수치는, 등전점을 나타낸다.
[도 1b] 도 1b는, 연어 몸의 추출물에 포함되는 단백질에 대한 2차원 전기 영동 패턴에 대하여, 생선 알레르기 환자 2의 혈청을 사용한 이무노블로트의 사진(좌측 도면) 및 생선 알레르기 환자 3의 혈청을 사용한 이무노블로트의 사진(우측 도면)이다. 각 사진 상부의 수치는, 등전점을 나타낸다.
[도 2] 도 2는, 10 종류의 생선 몸의 추출물에 포함되는 단백질의 2차원 전기 영동 패턴에 대하여, 생선 알레르기 환자 1의 혈청을 사용한 이무노블로트의 사진이다.
[도 3] 도 3은, 10 종류의 생선 몸의 추출물에 포함되는 단백질의 2차원 전기 영동 패턴에 대하여, 생선 알레르기 증상을 갖지 않는 피험자(비생선 알레르기 피험자)의 혈청을 사용한 이무노블로트의 사진이다.
[도 4] 도 4는, 6 종류의 생선 몸의 추출물에 포함되는 단백질의 2차원 전기 영동 패턴에 대하여, 생선 알레르기 환자 4의 혈청을 사용한 이무노블로트의 사진이다.
이하에 본 발명을 구체적으로 설명하지만, 본 발명은 이들에 한정되는 것은 아니다.
본 명세서에서 특별히 정의되지 않는 이상, 본 발명과 관련하여 사용되는 과학 용어 및 기술 용어는, 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 의미를 가지는 것으로 한다.
본 명세서에 있어서 알레르기란, 어느 항원에 감작되고 있는 생체에, 다시 해당 항원이 들어갔을 경우에 일어나는, 생체에 적절치 않은 과민 반응을 나타내는 상태를 말한다. 음식에 있어서의 알레르기 질환의 대부분에 있어서, 혈액 및 조직에서 항원에 특이적인 IgE 항체가 산생된다. IgE 항체는, 비만세포 또는 호염기구(好鹽基球)와 결합된다. 해당 IgE 항체에 특이적인 항원이 다시 알레르기 질환 환자의 체내에 들어가면, 해당 항원은 비만세포 또는 호염기구와 결합된 IgE 항체와 조합되고, 그리고 해당 IgE 항체가 세포 표면에서 가교되어, IgE 항체-항원 상호작용의 생리학적 효과를 발생한다. 이들의 생리학적 효과로서, 히스타민, 세라토닌, 헤파린, 호산구 유주인자(好酸球遊走因子) 또는 각종 류코트리엔(leukotriene) 등의 방출을 들 수 있다. 이들 방출 물질은, IgE 항체와 특정의 항원의 조합에 의해 일어나는 알레르기 반응을 야기한다. 특정의 항원에 의한 알레르기 반응은, 상기의 경로를 통해서 나타난다.
본 명세서에 있어서 생선이란, 어류 중 경골 어류, 연골어류, 바람직하게는 경골 어류, 보다 바람직하게는 연어목(目), 농어목, 뱀장어목, 대구목, 가자미목에 속하는 것, 더욱 바람직하게는 연어과, 전갱이과, 붕장어과, 도미과, 고등어과, 대구과, 뱀장어과, 넙치과에 속하는 것, 더욱 보다 바람직하게는 연어, 전갱이, 붕장어, 감성돔, 고등어, 도미, 대구, 방어, 뱀장어, 넙치를 의미한다. 생선은 식용의 것이어도 된다.
본 명세서에 있어서 생선알이란, 생선의 알을 의미한다. 생선알은 식용의 것이어도 된다.
본 명세서에 있어서 생선에 대한 알레르기란, 생선에 포함되는 단백질 등을 항원으로서 발생되는 알레르기 반응을 갖는 상태를 말한다. 생선에 대한 알레르기는, 생선에 포함되는 항원과 접촉한 경우, 혹은 해당 항원을 섭취한 경우에, 알레르기 반응을 일으킬 수 있다. 일반적으로 음식을 섭취한 경우에 발생되는 알레르기 반응을 특히 음식 알레르기라고 한다. 생선에 대한 알레르기는 음식 알레르기이어도 된다.
본 명세서에 있어서 항원이란, 알레르기 반응을 야기시키는 물질이며, 알레르겐 컴퍼넌트라고도 칭해진다. 항원은 바람직하게는 단백질이다.
본 명세서에 있어서, 단백질은, 천연의 아미노산이 펩티드 결합에 의해 연결된 구조를 갖는 분자이다. 단백질에 포함되는 아미노산의 수는 특별히 한정되지 않지만, 2∼50개 정도의 아미노산이 펩티드 결합에 의해 연결된 단백질을, 펩티드이라고 부르는 경우가 있다. 또한, 아미노산에 관해서 광학 이성체가 있을 수 있는 경우는, 특별히 명시하지 않으면 L체를 나타낸다. 본 명세서에서 사용되는 단백질 또는 펩티드의 아미노산 서열의 표기법은, 표준적 용법 및 당업계에서 관용되고 있는 표기법에 근거하여, 아미노산이 한 글자 표기로 나타내지고, 왼쪽 방향은 아미노 말단 방향이며, 그리고 오른쪽 방향은 카복시 말단 방향이다.
항원의 특정
생선에 포함되는 단백질에 관하여, 상기의 방법을 이용하여 생선에 대한 알레르기의 항원의 특정을 실시했다. 구체적으로는, 생선의 몸으로부터 단백질을 추출하고, 하기의 조건에서 2차원 전기 영동에 제공했다.
1차원째의 전기영동은, 등전점 전기영동용 겔(gel)로서, 겔 길이가 5∼10cm의 범위 내로서, 겔의 pH 범위가 3∼10이며, 영동 방향에 대한 겔의 pH 구배가, 겔의 전체 길이를 1로 하고, pH5까지의 겔 길이를 a, pH5∼7의 겔 길이를 b, pH7 이상의 겔 길이를 c로 한 경우에 있어서, a가 0.15∼0.3의 범위 내, b가 0.4∼0.7의 범위 내, c가 0.15∼0.3의 범위 내인 겔을 사용하고, 구체적으로는, GE 헬스케어바이오사이언스 주식회사(이하, GE사로 생략한다)제의 IPG 겔 Immobiline Drystrip (pH3-10NL)를 사용하여 등전점 영동을 실시했다. 전기영동 기기는, GE사제의 IPGphor를 사용했다. 전기영동 기기의 전류값의 상한을 겔 1개 당 75μA로 설정하고, 전압 프로그램을, (1) 300V 정전압으로 750Vhr까지 정전압 공정을 실시하고(해당 공정 종료 전의 영동 30분간의 전류 변화폭이 5μA이었다), (2) 300Vhr 걸어 1000V까지 서서히 전압을 상승시키고, (3) 4500Vhr 걸어 5000V까지 서서히 전압을 더 상승시키고, (4) 그 후 5000V 정전압으로 총 Vhr이 12000이 될 때까지, 1차원째의 등전점 전기영동을 실시했다.
2차원째의 전기영동은, 영동 방향 기단부(基端部)의 겔 농도가 3∼6%로 설정되고, 영동 방향 선단측(先端側) 부분의 겔 농도가 영동 방향 기단부의 겔 농도보다 높게 설정된 폴리아크릴아미도 겔을 사용하고, 구체적으로는 life technologies사제의 NuPAGE 4-12% Bris-Tris Gels IPG well mini 1mm을 사용하여 SDS-PAGE를 실시했다. 전기영동 기기는, life technologies사제의 XCell SureLock Mini-Cell를 사용했다. 영동 완충액으로서 50mM MOPS, 50mM Tris 염기, 0.1%(w/v) SDS, 1mM EDTA를 사용하여, 200V 정전압으로 약 45분간 영동을 실시했다.
그 결과, 생선의 단백질에 관하여 상기의 조건에서 2차원 전기 영동을 실시했을 때의 겔에 있어서, 이하의 스포트가, 생선에 대한 알레르기 환자로서 즉시형 (卽時型) 알레르기이라고 진단된 환자의 IgE 항체에 특이적으로 결합되는 것을 밝혔다.
스포트 1：분자량 80~160kDa, pI3.0~7.0
스포트 2：분자량 110~260kDa, pI4.0~8.0
스포트 3：분자량 80~160kDa, pI4.0~10.0
스포트 4：분자량 80~160kDa, pI5.0~11.0
스포트 5：분자량 50~110kDa, pI3.0~7.0
스포트 6：분자량 60~110kDa, pI4.0~8.0
스포트 7：분자량 40~80kDa, pI4.0~8.0
스포트 8：분자량 40~80kDa, pI3.0~7.0
스포트 9：분자량 20~50kDa, pI3.0~7.0
스포트 10：분자량 160~300, pI3.0~7.0
스포트 11：분자량 80~160, pI4.0~8.0
스포트 12：분자량 100~160, pI4.0~7.0
스포트 13：분자량 30~70, pI3.0~7.0
스포트 14：분자량 20~50, pI5.0~9.0
항원
(1) 스포트 1의 항원
스포트 1에 관하여 질량 분석에 의한 서열 동정을 실시한 결과, 서열번호 3의 아미노산 서열이 검출되었다.
또한, 스포트 1에 관하여, 질량분석장치로부터 얻어진 질량 데이터(서열번호 3)를 NCBI의 단백질 데이터와 조합하여 해석했던바, α－악티닌-3(AlphA－actinin-3) (아미노산 서열：서열번호 2, 그것을 코드하는 염기 서열：서열번호 1)인 것이 동정되었다. 서열번호 3은 서열번호 2의 아미노산 572~585에 상당한다.
따라서, 본원에 있어서 스포트 1의 항원은, 이하 (1A－a)~(1A－e) 및 (1B) 중 어느 하나이어도 된다.
(1A－a) 서열번호 2에 있어서 1 또는 수개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(1A－b) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열과 동일성이 70% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상인 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(1A－c) 서열번호 1에 있어서 1 또는 수개의 뉴클레오티드가 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(1A－d) 서열번호 1로 나타내는 염기 서열과 동일성이 70% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상인 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(1A－e) 서열번호 1로 나타내는 염기 서열에 대하여 상보적인 염기 서열로 이루어지는 핵산과 스트린젠트한 조건 하에서 하이브리다이즈(hybridize)하는 핵산에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(1B) 서열번호 2 또는 3의 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하는 단백질, 바람직하게는 해당 아미노산 서열의 모든 서열을 포함하는 단백질. 여기에 있고, 서열번호 2 또는 3으로 나타내는 아미노산 서열은, 1 혹은 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 혹은 부가되어 있어도 된다.
상기 (1A－a)∼(1A－e) 및 (1B)의 단백질에는, 인산화(燐酸化)나 당쇄수식(糖鎖修飾), 아미노아실화, 개환(開環), 탈(脫)아미노화 등에 의해 해당 단백질의 아미노산 잔기가 수식(修飾)을 받고 있는 단백질도 또한, 포함된다.
상기 (1A－a)~(1A－e) 및 (1B)의 단백질은, 상기 「항원의 특정」의 항목에 기재한 조건에서 2차원 전기 영동을 실시했을 때의 겔에 있어서, 분자량 80kDa~160kDa, 바람직하게는 분자량 90kDa~120kDa 부근, 및 등전점 3.0~7.0, 바람직하게는 등전점 3.0~6.0의 스포트로서 나타나는 단백질이어도 된다.
바람직하게는, 스포트 1의 항원인 단백질은, 생선에 대한 알레르기의 항원이다.
(2) 스포트 2의 항원
스포트 2에 관하여 질량 분석에 의한 서열 동정을 실시한 결과, 서열번호 6~8의 아미노산 서열이 검출되었다.
또한, 스포트 2에 관하여, 질량분석장치로부터 얻어진 질량 데이터(서열번호 6~8)를 UniProt의 단백질 데이터와 조합하여 해석했던바, EEF1A2 바인딩 프로테인-라이크(EEF1A2 binding protein-like) (아미노산 서열：서열번호 5, 그것을 코드하는 염기 서열：서열번호 4)인 것이 동정되었다. 서열번호 6은 서열번호 5의 아미노산 143~159, 서열번호 7은 서열번호 5의 아미노산 395~404, 서열번호 8은 서열번호 5의 아미노산 427~447에 각각 상당한다.
따라서, 본원에 있어서 스포트 2의 항원은, 이하 (2A－a)~(2A－e) 및 (2B) 중 어느 하나이어도 된다.
(2A－a) 서열번호 5에 있어서 1 또는 수개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(2A－b) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열과 동일성이 70% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상인 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(2A－c) 서열번호 4에 있어서 1 또는 수개의 뉴클레오티드가 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(2A－d) 서열번호 4로 나타내는 염기 서열과 동일성이 70% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상인 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(2A－e) 서열번호 4로 나타내는 염기 서열에 대하여 상보적인 염기 서열로 이루어지는 핵산과 스트린젠트한 조건 하에서 하이브리다이즈하는 핵산에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(2B) 서열번호 5∼8로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하는 단백질, 바람직하게는 해당 아미노산 서열 중 적어도 2, 3종 또는 모든 서열을 포함하는 단백질. 여기에 있어서, 서열번호 5∼8 중 어느 하나로 나타내는 아미노산 서열은, 1 혹은 수개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 혹은 부가되어 있어도 된다.
상기 (2A－a)∼(2A－e) 및 (2B)의 단백질에는, 인산화나 당쇄수식, 아미노아실화, 개환, 탈아미노화 등에 의해 해당 단백질의 아미노산 잔기가 수식을 받고 있는 단백질도 또한, 포함된다.
상기 (2A－a)~(2A－e) 및 (2B)의 단백질은, 상기 「항원의 특정」의 항목에 기재한 조건에서 2차원 전기 영동을 실시했을 때의 겔에 있어서, 분자량 110kDa~260kDa, 바람직하게는 분자량 120kDa~160kDa 부근, 및 등전점 4.0~8.0, 바람직하게는 등전점 4.0~7.0의 스포트로서 나타나는 단백질이어도 된다.
바람직하게는, 스포트 2의 항원인 단백질은, 생선에 대한 알레르기의 항원이다.
(3) 스포트 3의 항원
스포트 3에 관하여 질량 분석에 의한 서열 동정을 실시한 결과, 서열번호 11~16의 아미노산 서열이 검출되었다.
또한, 스포트 3에 관하여, 질량분석장치로부터 얻어진 질량 데이터(서열번호 11~17)를 UniProt의 단백질 데이터와 조합하여 해석했던바, α－1, 4－글루칸포스포릴라아제(AlphA－1,4-glucan phosphorylase) (아미노산 서열：서열번호 10, 그것을 코드하는 염기 서열：서열번호 9)인 것이 동정되었다. 서열번호 11은 서열번호 10의 아미노산 836~844, 서열번호 12는 서열번호 10의 아미노산 13~29, 서열번호 13은 서열번호 10의 아미노산 657~681, 서열번호 14는 서열번호 10의 아미노산 471~479, 서열번호 15는 서열번호 10의 아미노산 546~555, 서열번호 16은 서열번호 10의 아미노산 727~741에 각각 상당한다.
따라서, 본원에 있어서 스포트 3의 항원은, 이하 (3A－a)~(3A－e) 및 (3B) 중 어느 하나이어도 된다.
(3A－a) 서열번호 10에 있어서 1 또는 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(3A－b) 서열번호 10으로 나타내는 아미노산 서열과 동일성이 70% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상의 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(3A－c) 서열번호 9에 있어서 1 또는 수 개의 뉴클레오티드가 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(3A－d) 서열번호 9로 나타내는 염기 서열과 동일성이 70% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상의 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(3A－e) 서열번호 9로 나타내는 염기 서열에 대하여 상보적인 염기 서열로 이루어지는 핵산과 스트린젠트한 조건 하에서 하이브리다이즈하는 핵산에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(3B) 서열번호 10~16으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하는 단백질, 바람직하게는 해당 아미노산 서열 중 적어도 2, 3, 4, 5, 6종 또는 모든 서열을 포함하는 단백질.더욱 바람직하게는, 서열번호 10, 12, 13, 15, 및 16으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하는 단백질, 바람직하게는 해당 아미노산 서열 중 적어도 2, 3, 4종 또는 모든 서열을 포함하는 단백질. 여기에 있어서, 서열번호 10~16 중 어느 하나로 나타내는 아미노산 서열은, 1 혹은 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 혹은 부가되어 있어도 된다.
상기 (3A－a)~(3A－e) 및 (3B)의 단백질에는, 인산화나 당쇄수식, 아미노 아실화, 개환, 탈아미노화 등에 의해 해당 단백질의 아미노산 잔기가 수식을 받고 있는 단백질도 또한, 포함된다.
상기 (3A－a)~(3A－e) 및 (3B)의 단백질은, 상기 「항원의 특정」의 항목에 기재한 조건에서 2차원 전기 영동을 실시했을 때의 겔에 있어서, 분자량 80kDa~160kDa, 바람직하게는 분자량 90kDa~120kDa 부근, 및 등전점 4.0~10.0, 바람직하게는 등전점 5.0~8.0의 스포트로서 나타나는 단백질이어도 된다.
바람직하게는, 스포트 3의 항원인 단백질은, 생선에 대한 알레르기의 항원이다.
(4) 스포트 4의 항원
스포트 4에 관하여 질량 분석에 의한 서열 동정을 실시한 결과, 서열번호 20~24의 아미노산 서열이 검출되었다.
또한, 스포트 4에 관하여, 질량분석장치로부터 얻어진 질량 데이터(서열번호 20~24)를 UniProt의 단백질 데이터와 조합하여 해석했던바, 엘론게이션 팩터 2(Elongation factor 2) (아미노산 서열：서열번호 19, 그것을 코드하는 염기 서열：서열번호 18)인 것이 동정되었다. 서열번호 20은 서열번호 19의 아미노산 831~840, 서열번호 21은 서열번호 19의 아미노산 560~571, 서열번호 22는 서열번호 19의 아미노산 560~572, 서열번호 23은 서열번호 19의 아미노산 677~688, 서열번호 24는 서열번호 19의 아미노산 620~629에 각각 상당한다.
따라서, 본원에 있어서 스포트 4의 항원은, 이하 (4A－a)~(4A－e) 및 (4B) 중 어느 하나이어도 된다.
(4A－a) 서열번호 19에 있어서 1 또는 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(4A－b) 서열번호 19로 나타내는 아미노산 서열과 동일성이 70% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상의 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(4A－c) 서열번호 18에 있어서 1 또는 수 개의 뉴클레오티드가 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(4A－d) 서열번호 18로 나타내는 염기 서열과 동일성이 70% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상의 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(4A－e) 서열번호 18로 나타내는 염기 서열에 대하여 상보적인 염기 서열로 이루어지는 핵산과 스트린젠트한 조건 하에서 하이브리다이즈하는 핵산에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(4B) 서열번호 19~24로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하는 단백질, 바람직하게는 해당 아미노산 서열 중 적어도 2, 3, 4, 5종 또는 모든 서열을 포함하는 단백질. 여기에 있어서, 서열번호 19~24 중 어느 하나로 나타내는 아미노산 서열은, 1 혹은 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 혹은 부가되어 있어도 된다.
상기 (4A－a)~(4A－e) 및 (4B)의 단백질에는, 인산화나 당쇄수식, 아미노 아실화, 개환, 탈아미노화 등에 의해 해당 단백질의 아미노산 잔기가 수식을 받고 있는 단백질도 또한, 포함된다.
상기 (4A－a)~(4A－e) 및 (4B)의 단백질은, 상기 「항원의 특정」의 항목에 기재한 조건에서 2차원 전기 영동을 실시했을 때의 겔에 있어서, 분자량 80kDa~160kDa, 바람직하게는 분자량 90kDa~120kDa 부근, 및 등전점 5.0~11.0, 바람직하게는 등전점 6.0~8.0의 스포트로서 나타나는 단백질이어도 된다.
바람직하게는, 스포트 4의 항원인 단백질은, 생선에 대한 알레르기의 항원이다.
(5) 스포트 5의 항원
스포트 5에 관하여 질량 분석에 의한 서열 동정을 실시한 결과, 서열번호 27~31의 아미노산 서열이 검출되었다.
또한, 스포트 5에 관하여, 질량분석장치로부터 얻어진 질량 데이터(서열번호 27~31)를 UniProt의 단백질 데이터와 조합하여 해석했던바, 히트 쇼크 코그네이트 70kDa 프로테인(Heat shock cognate 70kDa protein) (아미노산 서열：서열번호 26, 그것을 코드하는 염기 서열：서열번호 25)인 것이 동정되었다. 서열번호 27은 서열번호 26의 아미노산 113~126, 서열번호 28은 서열번호 26의 아미노산 513~526, 서열번호 29는 서열번호 26의 아미노산 89~102, 서열번호 30은 서열번호 26의 아미노산 584~597, 서열번호 31은 서열번호 26의 아미노산 138~159에 각각 상당한다.
따라서, 본원에 있어서 스포트 5의 항원은, 이하 (5A－a)~(5A－e) 및 (5B) 중 어느 하나이어도 된다.
(5A－a) 서열번호 26에 있어서 1 또는 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(5A－b) 서열번호 26으로 나타내는 아미노산 서열과 동일성이 70% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상의 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(5A－c) 서열번호 25에 있어서 1 또는 수 개의 뉴클레오티드가 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(5A－d) 서열번호 25로 나타내는 염기 서열과 동일성이 70% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상의 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(5A－e) 서열번호 25로 나타내는 염기 서열에 대하여 상보적인 염기 서열로 이루어지는 핵산과 스트린젠트한 조건 하에서 하이브리다이즈하는 핵산에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(5B) 서열번호 26~31로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하는 단백질, 바람직하게는 해당 아미노산 서열 중 적어도 2, 3, 4, 5종 또는 모든 서열을 포함하는 단백질. 여기에 있어서, 서열번호 26~31 중 어느 하나로 나타내는 아미노산 서열은, 1 혹은 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 혹은 부가되어 있어도 된다.
상기 (5A－a)~(5A－e) 및 (5B)의 단백질에는, 인산화나 당쇄수식, 아미노 아실화, 개환, 탈아미노화 등에 의해 해당 단백질의 아미노산 잔기가 수식을 받고 있는 단백질도 또한, 포함된다.
상기 (5A－a)~(5A－e) 및 (5B)의 단백질은, 상기 「항원의 특정」의 항목에 기재한 조건에서 2차원 전기 영동을 실시했을 때의 겔에 있어서, 분자량 50kDa~110kDa, 바람직하게는 분자량 60kDa~90kDa 부근, 및 등전점 3.0~7.0, 바람직하게는 등전점 3.0~6.0의 스포트로서 나타나는 단백질이어도 된다.
바람직하게는, 스포트 5의 항원인 단백질은, 생선에 대한 알레르기의 항원이다.
(6) 스포트 6의 항원
스포트 6에 관하여 질량 분석에 의한 서열 동정을 실시한 결과, 서열번호 34~41의 아미노산 서열이 검출되었다.
또한, 스포트 6에 관하여, 질량분석장치로부터 얻어진 질량 데이터(서열번호 34~41)를 UniProt의 단백질 데이터와 조합하여 해석했던바, 세로트란스페린(Serotransferrin) (아미노산 서열：서열번호 33, 그것을 코드하는 염기 서열：서열번호 32)인 것이 동정되었다. 서열번호 34는 서열번호 33의 아미노산 330~341, 서열번호 35는 서열번호 33의 아미노산 332~341, 서열번호 36은 서열번호 33의 아미노산 264~274, 서열번호 37은 서열번호 33의 아미노산 113~124, 서열번호 38은 서열번호 33의 아미노산 112~124, 서열번호 39는 서열번호 33의 아미노산 112~125, 서열번호 40은 서열번호 33의 아미노산 275~292, 서열번호 41은 서열번호 33의 아미노산 436~446에 각각 상당한다.
따라서, 본원에 있어서 스포트 6의 항원은, 이하 (6A－a)~(6A－e) 및 (6B) 중 어느 하나이어도 된다.
(6A－a) 서열번호 33에 있어서 1 또는 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(6A－b) 서열번호 33으로 나타내는 아미노산 서열과 동일성이 70% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상의 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(6A－c) 서열번호 32에 있어서 1 또는 수 개의 뉴클레오티드가 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(6A－d) 서열번호 32로 나타내는 염기 서열과 동일성이 70% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상의 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(6A－e) 서열번호 32로 나타내는 염기 서열에 대하여 상보적인 염기 서열로 이루어지는 핵산과 스트린젠트한 조건 하에서 하이브리다이즈하는 핵산에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(6B) 서열번호 33~41로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하는 단백질, 바람직하게는 해당 아미노산 서열 중 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8종 또는 모든 서열을 포함하는 단백질. 여기에 있어서, 서열번호 33~41 중 어느 하나로 나타내는 아미노산 서열은, 1 혹은 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 혹은 부가되어 있어도 된다.
상기 (6A－a)~(6A－e) 및 (6B)의 단백질에는, 인산화나 당쇄수식, 아미노 아실화, 개환, 탈아미노화 등에 의해 해당 단백질의 아미노산 잔기가 수식을 받고 있는 단백질도 또한, 포함된다.
상기 (6A－a)~(6A－e) 및 (6B)의 단백질은, 상기 「항원의 특정」의 항목에 기재한 조건에서 2차원 전기 영동을 실시했을 때의 겔에 있어서, 분자량 60kDa~110kDa, 바람직하게는 분자량 70kDa~100kDa 부근, 및 등전점 4.0~8.0, 바람직하게는 등전점 5.0~7.0의 스포트로서 나타나는 단백질이어도 된다.
바람직하게는, 스포트 6의 항원인 단백질은, 생선에 대한 알레르기의 항원이다.
(7) 스포트 7의 항원
스포트 7에 관하여 질량 분석에 의한 서열 동정을 실시한 결과, 서열번호 44~54의 아미노산 서열이 검출되었다.
또한, 스포트 7에 관하여, 질량분석장치로부터 얻어진 질량 데이터(서열번호 44~54)를 UniProt의 단백질 데이터와 조합하여 해석했던바, 미오신 바인딩 프로테인 H－라이크(Myosin binding protein H-like) (아미노산 서열：서열번호 43, 그것을 코드하는 염기 서열：서열번호 42)인 것이 동정되었다. 서열번호 44는 서열번호 43의 아미노산 275~292, 서열번호 45는 서열번호 43의 아미노산 49~66, 서열번호 46은 서열번호 43의 아미노산 67~77, 서열번호 47은 서열번호 43의 아미노산 310~323, 서열번호 48은 서열번호 43의 아미노산 382~401, 서열번호 49는 서열번호 43의 아미노산 402~418, 서열번호 50은 서열번호 43의 아미노산 210~219, 서열번호 51은 서열번호 43의 아미노산 210~228, 서열번호 52는 서열번호 43의 아미노산 152~183, 서열번호 53은 서열번호 43의 아미노산 100~112, 서열번호 54는 서열번호 43의 아미노산 113~129에 각각 상당한다.
따라서, 본원에 있어서 스포트 7의 항원은, 이하 (7A－a)~(7A－e) 및 (7B) 중 어느 하나이어도 된다.
(7A－a) 서열번호 43에 있어서 1 또는 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(7A－b) 서열번호 43으로 나타내는 아미노산 서열과 동일성이 70% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상의 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(7A－c) 서열번호 42에 있어서 1 또는 수 개의 뉴클레오티드가 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(7A－d) 서열번호 42로 나타내는 염기 서열과 동일성이 70% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상의 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(7A－e) 서열번호 42로 나타내는 염기 서열에 대하여 상보적인 염기 서열로 이루어지는 핵산과 스트린젠트한 조건 하에서 하이브리다이즈하는 핵산에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(7B) 서열번호 43~54로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하는 단백질, 바람직하게는 해당 아미노산 서열의 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11종 또는 모든 서열을 포함하는 단백질. 여기에 있어서, 서열번호 43~54 중 어느 하나로 나타내는 아미노산 서열은, 1 혹은 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 혹은 부가되어 있어도 된다.
상기 (7A－a)~(7A－e) 및 (7B)의 단백질에는, 인산화나 당쇄수식, 아미노 아실화, 개환, 탈아미노화 등에 의해 해당 단백질의 아미노산 잔기가 수식을 받고 있는 단백질도 또한, 포함된다.
상기 (7A－a)~(7A－e) 및 (7B)의 단백질은, 상기 「항원의 특정」의 항목에 기재한 조건에서 2차원 전기 영동을 실시했을 때의 겔에 있어서, 분자량 40kDa~80kDa, 바람직하게는 분자량 50kDa~60kDa 부근, 및 등전점 4.0~8.0, 바람직하게는 등전점 4.0~7.0의 스포트로서 나타나는 단백질이어도 된다.
바람직하게는, 스포트 7의 항원인 단백질은, 생선에 대한 알레르기의 항원이다.
(8) 스포트 8의 항원
스포트 8에 관하여 질량 분석에 의한 서열 동정을 실시한 결과, 서열번호 57~59의 아미노산 서열이 검출되었다.
또한, 스포트 8에 관하여, 질량분석장치로부터 얻어진 질량 데이터(서열번호 57~59)를 UniProt의 단백질 데이터와 조합하여 해석했던바, 데스민(프래그먼트)(Desmin (Fragment))(아미노산 서열：서열번호 56, 그것을 코드하는 염기 서열：서열번호 55)인 것이 동정되었다. 서열번호 57은 서열번호 56의 아미노산 364~380, 서열번호 58은 서열번호 56의 아미노산 74~94, 서열번호 59는 서열번호 56의 아미노산 273~282에 각각 상당한다.
따라서, 본원에 있어서 스포트 8의 항원은, 이하 (8A－a)~(8A－e) 및 (8B) 중 어느 하나이어도 된다.
(8A－a) 서열번호 56에 있어서 1 또는 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(8A－b) 서열번호 56으로 나타내는 아미노산 서열과 동일성이 70% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상의 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(8A－c) 서열번호 55에 있어서 1 또는 수 개의 뉴클레오티드가 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(8A－d) 서열번호 55로 나타내는 염기 서열과 동일성이 70% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상의 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(8A－e) 서열번호 55로 나타내는 염기 서열에 대하여 상보적인 염기 서열로 이루어지는 핵산과 스트린젠트한 조건 하에서 하이브리다이즈하는 핵산에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(8B) 서열번호 56~59로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하는 단백질, 바람직하게는 해당 아미노산 서열의 적어도 2, 3종 또는 모든 서열을 포함하는 단백질. 여기에 있어서, 서열번호 56~59 중 어느 하나로 나타내는 아미노산 서열은, 1 혹은 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 혹은 부가되어 있어도 된다.
상기 (8A－a)~(8A－e) 및 (8B)의 단백질에는, 인산화나 당쇄수식, 아미노 아실화, 개환, 탈아미노화 등에 의해 해당 단백질의 아미노산 잔기가 수식을 받고 있는 단백질도 또한, 포함된다.
상기 (8A－a)~(8A－e) 및 (8B)의 단백질은, 상기 「항원의 특정」의 항목에 기재한 조건에서 2차원 전기 영동을 실시했을 때의 겔에 있어서, 분자량 40kDa~80kDa, 바람직하게는 분자량 50kDa~60kDa 부근, 및 등전점 3.0~7.0, 바람직하게는 등전점 4.0~6.0의 스포트로서 나타나는 단백질이어도 된다.
바람직하게는, 스포트 8의 항원인 단백질은, 생선에 대한 알레르기의 항원이다.
(9) 스포트 9의 항원
스포트 9에 관하여 질량 분석에 의한 서열 동정을 실시한 결과, 서열번호 62~68의 아미노산 서열이 검출되었다.
또한, 스포트 9에 관하여, 질량분석장치로부터 얻어진 질량 데이터(서열번호 62~68)를 UniProt의 단백질 데이터와 조합하여 해석했던바, 캡핑 프로테인(액틴 필라멘트) 머슬 Z－라인 베타(Capping protein (Actin filament) muscle Z-line beta)(아미노산 서열：서열번호 61, 그것을 코드하는 염기 서열：서열번호 60)인 것이 동정되었다. 서열번호 62는 서열번호 61의 아미노산 200~223, 서열번호 63은 서열번호 61의 아미노산 238~254, 서열번호 64는 서열번호 61의 아미노산 261~274, 서열번호 65는 서열번호 61의 아미노산 224~235, 서열번호 66은 서열번호 61의 아미노산 169~181, 서열번호 67은 서열번호 61의 아미노산 245~254, 서열번호 68은 서열번호 61의 아미노산 79~95에 각각 상당한다.
따라서, 본원에 있어서 스포트 9의 항원은, 이하 (9A－a)~(9A－e) 및 (9B) 중 어느 하나이어도 된다.
(9A－a) 서열번호 61에 있어서 1 또는 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(9A－b) 서열번호 61로 나타내는 아미노산 서열과 동일성이 70% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상의 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(9A－c) 서열번호 60에 있어서 1 또는 수 개의 뉴클레오티드가 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(9A－d) 서열번호 60으로 나타내는 염기 서열과 동일성이 70% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상의 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(9A－e) 서열번호 60으로 나타내는 염기 서열에 대하여 상보적인 염기 서열로 이루어지는 핵산과 스트린젠트한 조건 하에서 하이브리다이즈하는 핵산에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(9B) 서열번호 61~68로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하는 단백질, 바람직하게는 해당 아미노산 서열의 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7종 또는 모든 서열을 포함하는 단백질. 여기에 있어서, 서열번호 61~68 중 어느 하나로 나타내는 아미노산 서열은, 1 혹은 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 혹은 부가되어 있어도 된다.
상기 (9A－a)~(9A－e) 및 (9B)의 단백질에는, 인산화나 당쇄수식, 아미노 아실화, 개환, 탈아미노화 등에 의해 해당 단백질의 아미노산 잔기가 수식을 받고 있는 단백질도 또한, 포함된다.
상기 (9A－a)~(9A－e) 및 (9B)의 단백질은, 상기 「항원의 특정」의 항목에 기재한 조건에서 2차원 전기 영동을 실시했을 때의 겔에 있어서, 분자량 20kDa~50kDa, 바람직하게는 분자량 30kDa~40kDa 부근, 및 등전점 3.0~7.0, 바람직하게는 등전점 4.0~6.0의 스포트로서 나타나는 단백질이어도 된다.
바람직하게는, 스포트 9의 항원인 단백질은, 생선에 대한 알레르기의 항원이다.
(10) 스포트 10의 항원
스포트 10에 대하여 질량 분석에 의한 서열 동정을 실시한 결과, 서열번호 71~108의 아미노산 서열이 검출되었다.
또한, 스포트 10에 관하여, 질량분석장치로부터 얻어진 질량 데이터 (서열번호 71~108)를 NCBI 단백질 데이터와 조화하여 분석하였던바, 미오신 헤비 체인, 패스트 스켈레탈 머슬-라이크 (myosin heavy chain, fast skeletal muscle-like) (아미노산 서열 : 서열번호 70, 그것을 코딩하는 염기 서열 : 서열번호 69) 인 것이 동정되었다. 서열번호 71은 서열번호 70의 아미노산 13~19, 서열번호 72은 서열번호 70의 아미노산 262~271, 서열번호 73은 서열번호 70의 아미노산 996~1014, 서열번호 74은 서열번호 70의 아미노산 951~961, 서열번호 75은 서열번호 70의 아미노산 1293~1303, 서열번호 76은 서열번호 70의 아미노산 1082~1091, 서열번호 77은 서열번호 70의 아미노산 1847~1856, 서열번호 78은 서열번호 70의 아미노산 172~186, 서열번호 79은 서열번호 70의 아미노산 919~937, 서열번호 80은 서열번호 70의 아미노산 249~258, 서열번호 81은 서열번호 70의 아미노산 706~717, 서열번호 82은 서열번호 70의 아미노산 50~59, 서열번호 83은 서열번호 70의 아미노산 415~430, 서열번호 84은 서열번호 70의 아미노산 834~845, 서열번호 85은 서열번호 70의 아미노산 617~630, 서열번호 86은 서열번호 70의 아미노산 1556~1567, 서열번호 87은 서열번호 70의 아미노산 1391~1408, 서열번호 88은 서열번호 70의 아미노산 1025~1040, 서열번호 89은 서열번호 70의 아미노산 1813~1836, 서열번호 90은 서열번호 70의 아미노산 743~755, 서열번호 91은 서열번호 70의 아미노산 1172~1192, 서열번호 92은 서열번호 70의 아미노산 353~364, 서열번호 93은 서열번호 70의 아미노산 1261~1292, 서열번호 94은 서열번호 70의 아미노산 1783~1789, 서열번호 95은 서열번호 70의 아미노산 1502~1519, 서열번호 96은 서열번호 70의 아미노산 1484~1497, 서열번호 97은 서열번호 70의 아미노산 1194~1212, 서열번호 98은 서열번호 70의 아미노산 1304~1314, 서열번호 99은 서열번호 70의 아미노산 369~384, 서열번호 100는 서열번호 70의 아미노산 1315~1322, 서열번호 101은 서열번호 70의 아미노산 1536~1555, 서열번호 102은 서열번호 70의 아미노산 237~248, 서열번호 103는 서열번호 70의 아미노산 1699~1725, 서열번호 104은 서열번호 70의 아미노산 1092~1104, 서열번호 105은 서열번호 70의 아미노산 407~414, 서열번호 106 서열번호 70의 아미노산 1897~1917, 서열번호 107은 서열번호 70의 아미노산 1458~1470, 서열번호 108은 서열번호 70의 아미노산 1373~1388에 각각 상당(相當)한다.
따라서, 본원에 있어서 스포트 10의 항원은, 이하 (10A－a)~(10A－e) 및 (10B) 중 어느 하나이어도 된다.
(10A－a) 서열번호 70에 있어서 1 또는 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(10A－b) 서열번호 70으로 나타내는 아미노산 서열과 동일성이 70% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상의 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(10A－c) 서열번호 69에 있어서 1 또는 수 개의 뉴클레오티드가 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(10A－d) 서열번호 69로 나타내는 염기 서열과 동일성이 70% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상의 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(10A－e) 서열번호 69로 나타내는 염기 서열에 대하여 상보적인 염기 서열로 이루어지는 핵산과 스트린젠트한 조건 하에서 하이브리다이즈하는 핵산에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(10B) 서열번호 70~108로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하는 단백질, 바람직하게는 해당 아미노산 서열의 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38종 또는 모든 서열을 포함하는 단백질. 여기에 있어서, 서열번호 70~108 중 어느 하나로 나타내는 아미노산 서열은, 1 혹은 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 혹은 부가되어 있어도 된다.
상기 (10A－a)~(10A－e) 및 (10B)의 단백질에는, 인산화나 당쇄수식, 아미노 아실화, 개환, 탈아미노화 등에 의해 해당 단백질의 아미노산 잔기가 수식을 받고 있는 단백질도 또한, 포함된다.
상기 (10A－a)~(10A－e) 및 (10B)의 단백질은, 상기 「항원의 특정」의 항목에 기재한 조건에서 2차원 전기 영동을 실시했을 때의 겔에 있어서, 분자량 160kDa~300kDa, 바람직하게는 분자량 160kDa~260kDa, 더욱 바람직하게는 분자량 200kDa~230kDa 부근, 및 등전점 3.0~7.0, 바람직하게는 등전점 4.0~6.0, 더욱 바람직하게는 등전점 4.5~5.5의 스포트로서 나타나는 단백질이어도 된다.
바람직하게는, 스포트 10의 항원인 단백질은, 생선에 대한 알레르기의 항원이다.
(11) 스포트 11의 항원
스포트 11에 관하여 질량 분석에 의한 서열 동정을 실시한 결과, 서열번호 111~119의 아미노산 서열이 검출되었다.
또한, 스포트 11에 관하여, 질량분석장치로부터 얻어진 질량 데이터(서열번호 111~119)를 NCBI의 단백질 데이터와 조합하여 해석했던바, 글리코겐포스포릴라아제, 머슬 폼-라이크(glycogen phosphorylase, muscle form-like)(아미노산 서열：서열번호 110, 그것을 코드하는 염기 서열：서열번호 109)인 것이 동정되었다. 서열번호 111은 서열번호 110의 아미노산 471~479, 서열번호 112는 서열번호 110의 아미노산 547~555, 서열번호 113은 서열번호 110의 아미노산 203~215, 서열번호 114는 서열번호 110의 아미노산 727~741, 서열번호 115는 서열번호 110의 아미노산 508~520, 서열번호 116은 서열번호 110의 아미노산 742~755, 서열번호 117은 서열번호 110의 아미노산 13~29, 서열번호 118은 서열번호 110의 아미노산 775~784, 서열번호 119는 서열번호 110의 아미노산 643~656에 각각 상당한다.
따라서, 본원에 있어서 스포트 11의 항원은, 이하 (11A－a)~(11A－e) 및 (11B) 중 어느 하나이어도 된다.
(11A－a) 서열번호 110에 있어서 1 또는 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(11A－b) 서열번호 110으로 나타내는 아미노산 서열과 동일성이 70% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상의 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(11A－c) 서열번호 109에 있어서 1 또는 수 개의 뉴클레오티드가 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(11A－d) 서열번호 109로 나타내는 염기 서열과 동일성이 70% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상의 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(11A－e) 서열번호 109로 나타내는 염기 서열에 대하여 상보적인 염기 서열로 이루어지는 핵산과 스트린젠트한 조건 하에서 하이브리다이즈하는 핵산에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(11B) 서열번호 110~119로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하는 단백질, 바람직하게는 해당 아미노산 서열의 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9종 또는 모든 서열을 포함하는 단백질. 여기에 있어서, 서열번호 110~119 중 어느 하나로 나타내는 아미노산 서열은, 1 혹은 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 혹은 부가되어 있어도 된다.
상기 (11A－a)~(11A－e) 및 (11B)의 단백질에는, 인산화나 당쇄수식, 아미노 아실화, 개환, 탈아미노화 등에 의해 해당 단백질의 아미노산 잔기가 수식을 받고 있는 단백질도 또한, 포함된다.
상기 (11A－a)~(11A－e) 및 (11B)의 단백질은, 상기 「항원의 특정」의 항목에 기재한 조건에서 2차원 전기 영동을 실시했을 때의 겔에 있어서, 분자량 80kDa~160kDa, 바람직하게는 분자량 80kDa~110kDa, 더욱 바람직하게는 분자량 90kDa~110kDa 부근, 및 등전점 4.0~8.0, 바람직하게는 등전점 5.0~7.5, 더욱 바람직하게는 등전점 6.5~7.0의 스포트로서 나타나는 단백질이어도 된다.
바람직하게는, 스포트 11의 항원인 단백질은, 생선에 대한 알레르기의 항원이다.
(12) 스포트 12의 항원
스포트 12에 관하여 질량 분석에 의한 서열 동정을 실시한 결과, 서열번호 122~136의 아미노산 서열이 검출되었다.
또한, 스포트 12에 관하여, 질량분석장치로부터 얻어진 질량 데이터(서열번호 122~136)를 NCBI의 단백질 데이터와 조합하여 해석했던바, 미오신 바인딩 그프로테인 C, 패스트-타입-라이크(myosin-binding protein C, fast-type-like)(아미노산 서열：서열번호 121, 그것을 코드하는 염기 서열：서열번호 120)인 것이 동정되었다. 서열번호 122는 서열번호 121의 아미노산 197~204, 서열번호 123은 서열번호 121의 아미노산 421~434, 서열번호 124는 서열번호 121의 아미노산 329~336, 서열번호 125는 서열번호 121의 아미노산 413~420, 서열번호 126은 서열번호 121의 아미노산 240~246, 서열번호 127은 서열번호 121의 아미노산 214~228, 서열번호 128은 서열번호 121의 아미노산 1014~1024, 서열번호 129는 서열번호 121의 아미노산 842~855, 서열번호 130은 서열번호 121의 아미노산 260~274, 서열번호 131은 서열번호 121의 아미노산 672~685, 서열번호 132는 서열번호 121의 아미노산 506~512, 서열번호 133은 서열번호 121의 아미노산 205~213, 서열번호 134는 서열번호 121의 아미노산 165~182, 서열번호 135는 서열번호 121의 아미노산 321~328, 서열번호 136은 서열번호 121의 아미노산 70~82에 각각 상당한다.
따라서, 본원에 있어서 스포트 12의 항원은, 이하 (12A－a)~(12A－e) 및 (12B) 중 어느 하나이어도 된다.
(12A－a) 서열번호 121에 있어서 1 또는 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(12A－b) 서열번호 121로 나타내는 아미노산 서열과 동일성이 70% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상의 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(12A－c) 서열번호 119에 있어서 1 또는 수 개의 뉴클레오티드가 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(12A－d) 서열번호 119로 나타내는 염기 서열과 동일성이 70% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상의 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(12A－e) 서열번호 119로 나타내는 염기 서열에 대하여 상보적인 염기 서열로 이루어지는 핵산과 스트린젠트한 조건 하에서 하이브리다이즈하는 핵산에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(12B) 서열번호 121~136으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하는 단백질, 바람직하게는 해당 아미노산 서열의 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15종 또는 모든 서열을 포함하는 단백질. 여기에 있어서, 서열번호 121~136 중 어느 하나로 나타내는 아미노산 서열은, 1 혹은 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 혹은 부가되어 있어도 된다.
상기 (12A－a)~(12A－e) 및 (12B)의 단백질에는, 인산화나 당쇄수식, 아미노 아실화, 개환, 탈아미노화 등에 의해 해당 단백질의 아미노산 잔기가 수식을 받고 있는 단백질도 또한, 포함된다.
상기 (12A－a)~(12A－e) 및 (12B)의 단백질은, 상기 「항원의 특정」의 항목에 기재한 조건에서 2차원 전기 영동을 실시했을 때의 겔에 있어서, 분자량 100kDa~160kDa, 바람직하게는 분자량 110kDa~150kDa, 더욱 바람직하게는 분자량 120kDa~140kDa 부근, 및 등전점 4.0~7.0, 바람직하게는 등전점 4.0~6.0, 더욱 바람직하게는 등전점 5.0~6.0의 스포트로서 나타나는 단백질이어도 된다.
바람직하게는, 스포트 12의 항원인 단백질은, 생선에 대한 알레르기의 항원이다.
(13) 스포트 13의 항원
스포트 13에 관하여 질량 분석에 의한 서열 동정을 실시한 결과, 서열번호 139~142의 아미노산 서열이 검출되었다.
또한, 스포트 13에 관하여, 질량분석장치로부터 얻어진 질량 데이터(서열번호 139~142)를 NCBI의 단백질 데이터와 조합하여 해석했던바, ATP 신타아제 서브유닛 β, 미트콘드리알(ATP synthase subunit beta, mitochondrial)(아미노산 서열：서열번호 138, 그것을 코드하는 염기 서열：서열번호 137)인 것이 동정되었다. 서열번호 139는 서열번호 138의 아미노산 191~201, 서열번호 140은 서열번호 138의 아미노산 449~469, 서열번호 141은 서열번호 138의 아미노산 202~214, 서열번호 142는 서열번호 138의 아미노산 178~187에 각각 상당한다.
따라서, 본원에 있어서 스포트 13의 항원은, 이하 (13A－a)~(13A－e) 및 (13B) 중 어느 하나이어도 된다.
(13A－a) 서열번호 138에 있어서 1 또는 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(13A－b) 서열번호 138로 나타내는 아미노산 서열과 동일성이 70% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상의 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(13A－c) 서열번호 137에 있어서 1 또는 수 개의 뉴클레오티드가 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(13A－d) 서열번호 137으로 나타내는 염기 서열과 동일성이 70% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상의 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(13A－e) 서열번호 137으로 나타내는 염기 서열에 대하여 상보적인 염기 서열로 이루어지는 핵산과 스트린젠트한 조건 하에서 하이브리다이즈하는 핵산에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(13B) 서열번호 138~142로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하는 단백질, 바람직하게는 해당 아미노산 서열의 적어도 2, 3, 4종 또는 모든 서열을 포함하는 단백질. 여기에 있어서, 서열번호 138~142 중 어느 하나로 나타내는 아미노산 서열은, 1 혹은 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 혹은 부가되어 있어도 된다.
상기 (13A－a)~(13A－e) 및 (13B)의 단백질에는, 인산화나 당쇄수식, 아미노 아실화, 개환, 탈아미노화 등에 의해 해당 단백질의 아미노산 잔기가 수식을 받고 있는 단백질도 또한, 포함된다.
상기 (13A－a)~(13A－e) 및 (13B)의 단백질은, 상기 「항원의 특정」의 항목에 기재한 조건에서 2차원 전기 영동을 실시했을 때의 겔에 있어서, 분자량 30kDa~70kDa, 바람직하게는 분자량 40kDa~60kDa, 더욱 바람직하게는 분자량 45kDa~55kDa 부근, 및 등전점 3.0~7.0, 바람직하게는 등전점 3.0~6.0, 더욱 바람직하게는 등전점 4.0~5.5의 스포트로서 나타나는 단백질이어도 된다.
바람직하게는, 스포트 13의 항원인 단백질은, 생선에 대한 알레르기의 항원이다.
(14) 스포트 14의 항원
스포트 14에 관하여 질량 분석에 의한 서열 동정을 실시한 결과, 서열번호 145~149의 아미노산 서열이 검출되었다.
또한, 스포트 14에 관하여, 질량분석장치로부터 얻어진 질량 데이터(서열번호 145~149)를 NCBI의 단백질 데이터와 조합하여 해석했던바, L－락테이트데히드로게나아제 A 체인-라이크(L-lactate dehydrogenase A chain-like)(아미노산 서열：서열번호 144, 그것을 코드하는 염기 서열：서열번호 143)인 것이 동정되었다. 서열번호 145는 서열번호 144의 아미노산 119~126, 서열번호 146은 서열번호 144의 아미노산 7~22, 서열번호 147은 서열번호 144의 아미노산 9~22, 서열번호 148은 서열번호 144의 아미노산 270~278, 서열번호 149는 서열번호 144의 아미노산 91~118에 각각 상당한다.
따라서, 본원에 있어서 스포트 14의 항원은, 이하 (14A－a)~(14A－e) 및 (14B) 중 어느 하나이어도 된다.
(14A－a) 서열번호 144에 있어서 1 또는 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(14A－b) 서열번호 144로 나타내는 아미노산 서열과 동일성이 70% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상의 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(14A－c) 서열번호 143에 있어서 1 또는 수 개의 뉴클레오티드가 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(14A－d) 서열번호 143으로 나타내는 염기 서열과 동일성이 70% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상의 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(14A－e) 서열번호 143으로 나타내는 염기 서열에 대하여 상보적인 염기 서열로 이루어지는 핵산과 스트린젠트한 조건 하에서 하이브리다이즈하는 핵산에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(14B) 서열번호 144~149로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하는 단백질, 바람직하게는 해당 아미노산 서열의 적어도 2, 3, 4, 5종 또는 모든 서열을 포함하는 단백질. 여기에 있어서, 서열번호 144~149 중 어느 하나로 나타내는 아미노산 서열은, 1 혹은 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 혹은 부가되어 있어도 된다.
상기 (14A－a)~(14A－e) 및 (14B)의 단백질에는, 인산화나 당쇄수식, 아미노 아실화, 개환, 탈아미노화 등에 의해 해당 단백질의 아미노산 잔기가 수식을 받고 있는 단백질도 또한, 포함된다.
상기 (14A－a)~(14A－e) 및 (14B)의 단백질은, 상기 「항원의 특정」의 항목에 기재한 조건에서 2차원 전기 영동을 실시했을 때의 겔에 있어서, 분자량 20kDa~50kDa, 바람직하게는 분자량 30kDa~50kDa, 더욱 바람직하게는 분자량 30kDa~40kDa 부근, 및 등전점 5.0~9.0, 바람직하게는 등전점 6.0~8.0, 더욱 바람직하게는 등전점 6.5~7.5의 스포트로서 나타나는 단백질이어도 된다.
바람직하게는, 스포트 14의 항원인 단백질은, 생선에 대한 알레르기의 항원이다.
본 명세서에 있어서, 아미노산 서열에 대하여 「1 혹은 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 혹은 부가되었다」라고 하는 경우는, 대상이 되는 아미노산 서열에 있어서, 1개 혹은 수 개의 아미노산(예를 들면, 아미노산 서열의 전체 길이에 대하여 30%, 바람직하게는 25%, 20%, 15%, 10%, 5%, 3%, 2% 또는 1%의 아미노산)이 결실되어 있거나, 다른 아미노산에 치환되어 있거나, 다른 아미노산이 삽입되어 있거나, 및/또는 다른 아미노산이 부가되어 있는 아미노산 서열을 말한다.
상기 중, 치환은, 바람직하게는 보존적 치환이다. 보존적 치환이란, 특정의 아미노산 잔기를 유사한 물리 화학적 특징을 가지는 잔기로 치환하는 것이나, 원래의 서열의 구조에 관한 특징을 실질적으로 변화시키지 않으면 어떠한 치환이어도 되고, 예를 들면, 치환 아미노산이, 원래의 서열에 존재하는 나선을 파괴하거나, 원래의 서열을 특징짓는 다른 종류의 2차 구조를 파괴하거나 하지 않으면 어떠한 치환이어도 된다. 이하에, 아미노산 잔기의 보존적 치환에 관하여 치환 가능한 잔기 마다 분류하여 예시하지만, 치환 가능한 아미노산 잔기는 이하에 기재되어 있는 것에 한정되는 것은 아니다.
A군：로이신, 이소로이신, 바린, 알라닌, 메티오닌
B군：아스파라긴산, 글루타민산
C군：아스파라긴, 글루타민
D군：리진, 아르기닌,
E군：세린, 트레오닌
F군：페닐알라닌, 티로신
비보존적 치환의 경우는, 상기 종류 중, 어느 1개의 멤버(member)와 다른 종류의 멤버를 교환할 수 있다. 예를 들면, 부주의한 당쇄수식을 배제하기 위해서 상기의 B, D, E군의 아미노산을 그 이외의 군의 아미노산으로 치환해도 된다. 또는, 3차 구조에서 단백질 안으로 접어지는 것을 방지하기 위해서 시스테인을 결실시키거나, 다른 아미노산으로 치환해도 된다. 혹은, 친수성/소수성의 밸런스가 유지되도록, 또는 합성을 용이하게 하기 위해서 친수도(親水度)를 올리도록, 아미노산에 관한 소수성/친수성의 지표인 아미노산의 하이드로퍼씨(hydropathy) 지수(J. Kyte 및 R. Doolittle, J. Mol. Biol., Vol.157, p.105-132, 1982)를 고려하여, 아미노산을 치환해도 된다.
본 명세서에 있어서, 2개의 아미노산 서열의 동일성%는, 시각적 검사 및 수학적 계산에 의해 결정할 수 있다. 또한, 컴퓨터 프로그램을 사용하여 동일성%를 결정할 수도 있다. 그와 같은 컴퓨터 프로그램으로서는, 예를 들면, BLAST 및 ClustalW 등을 들 수 있다. 특히, BLAST 프로그램에 의한 동일성 검색의 각종 조건(파라미터)은, Altschul 등(Nucl. Acids. Res., 25, p.3389-3402, 1997)에 기재된 것으로, 미국 바이오테크놀로지 정보 센터(NCBI)나 DNA Data Bank of Japan(DDBJ)의 웹 사이트로부터 공적으로 입수할 수 있다(BLAST 메뉴얼, Altschul 등 NCB/NLM/NIH Bethesda, MD 20894；Altschul 등). 또한, 유전 정보 처리 소프트웨어 GENETYX Ver.7(제네틱스), DINASIS Pro(히타치 소프트), Vector NTI(Infomax) 등의 프로그램을 사용하여 결정할 수도 있다.
본 명세서에 있어서, 염기 서열에 관하여 「1 혹은 수개의 뉴클레오티드가 결실, 치환, 삽입 혹은 부가되었다」라고 하는 경우는, 대상이 되는 염기 서열에 있어서, 1개 혹은 수개의 뉴클레오티드(예를 들면, 염기 서열의 전체 길이에 대하여 30%, 바람직하게는 25%, 20%, 15%, 10%, 5%, 3%, 2% 또는 1%의 아미노산)가 결실되어 있거나, 다른 뉴클레오티드로 치환되어 있거나, 다른 뉴클레오티드가 삽입되어 있거나, 및/또는 다른 뉴클레오티드가 부가되어 있는 염기 서열을 말한다. 상기 뉴클레오티드의 결실, 치환, 삽입 혹은 부가에 의해, 아미노산을 코드하는 서열에 프레임 시프트를 발생하지 않는 것이 바람직하다.
본 명세서에 있어서, 2개의 염기 서열의 동일성%는, 시각적 검사 및 수학적 계산에 의해 결정할 수 있다. 또한, 컴퓨터 프로그램을 사용하여 동일성%를 결정할 수도 있다. 그와 같은 서열 비교 컴퓨터 프로그램으로서는, 예를 들면, 미국 국립 의학 라이브러리의 웹 사이트：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/bl2seq/bls. html로부터 이용할 수 있는 BLASTN 프로그램(Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-10)：버젼 2.2.7, 또는 WU-BLAST2.0 알고리즘 등을 들 수 있다. WU-BLAST2.0에 관한 표준적인 디폴트 파라미터의 설정은, 이하의 인터넷 사이트：http://blast.wustl.edu에 기재되어 있는 것을 사용할 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「스트린젠트한 조건 하」란, 중간 정도 또는 고도로 스트린젠트한 조건에 있어서 하이브리다이즈한 것을 의미한다. 구체적으로는, 중간 정도로 스트린젠트한 조건으로서는, 예를 들면, DNA의 길이에 근거하여, 일반적인 기술을 갖는 당업자에 의해, 용이하게 결정하는 것이 가능하다. 기본적인 조건은, Sambrook 등, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 제3판, 제6－7장, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001에 나타나 있다. 바람직하게는, 중간 정도로 스트린젠트한 조건은, 하이브리다이제이션 조건으로서, 1×SSC∼6×SSC, 42℃∼55℃의 조건, 보다 바람직하게는, 1×SSC∼3×SSC, 45℃∼50℃의 조건, 가장 바람직하게는, 2×SSC, 50℃의 조건을 들 수 있다. 하이브리다이제이션 용액 중에, 예를 들면, 약 50%의 폼아미드를 포함하는 경우에는, 상기 온도보다도 5 내지 15℃ 낮은 온도를 채용한다. 세정 조건으로서는, 0.5×SSC∼6×SSC, 40℃∼60℃를 들 수 있다. 하이브리다이제이션 및 세정 시에는, 일반적으로, 0.05%∼0.2%, 바람직하게는 약 0.1%SDS를 첨가해도 된다. 고도로 스트린젠트한 조건도 또한, 예를 들면 DNA의 길이에 근거하여, 당업자에 의해, 용이하게 결정하는 것이 가능하다. 일반적으로, 고도로 스트린젠트(하이 스트린젠트)인 조건으로서는, 중간 정도로 스트린젠트한 조건보다도 높은 온도 및/또는 낮은 염 농도에서의 하이브리다이제이션 및/또는 세정을 포함한다. 예를 들면, 하이브리다이제이션 조건으로서, 0.1×SSC∼2×SSC, 55℃∼65℃의 조건, 보다 바람직하게는, 0.1×SSC∼1×SSC, 60℃∼65℃의 조건, 가장 바람직하게는, 0.2×SSC, 63℃의 조건을 들 수 있다. 세정 조건으로서, 0.2×SSC∼2×SSC, 50℃∼68℃, 보다 바람직하게는, 0.2×SSC, 60∼65℃를 들 수 있다.
항원은, 생선으부터 당업자에게 주지된 단백질 정제 방법을 조합하여 분리·정제함으로써 얻어도 된다. 또는, 항원은, 당업자에게 주지된 유전자 재조합 기술에 의해 항원을 재조합 단백질로서 발현시키고, 그리고 당업자에게 주지된 단백질 정제 방법에 의해 분리·정제함으로써 얻어도 된다.
단백질의 정제 방법으로서는, 예를 들면, 염석, 용매 침전법 등의 용해도를 이용하는 방법, 투석, 한외여과, 겔여과, SDS-PAGE 등 분자량의 차(差)를 이용하는 방법, 이온 교환 크로마토그래피나 히드록시어퍼타이트 크로마토그래피 등의 하전(荷電)을 이용하는 방법, 어피니티(affinity) 크로마토그래피 등의 특이적 친화성을 이용하는 방법, 역상(逆相) 고속 액체 크로마토그래피 등의 소수성의 차를 이용하는 방법, 등전점 전기영동 등의 등전점의 차를 이용하는 방법 등을 들 수 있다.
유전자 재조합 기술에 의한 단백질의 조제는, 항원을 코드하는 핵산을 포함하는 발현 벡터를 조제하고, 해당 발현 벡터를 적절한 숙주 세포 중에 유전자 도입 또는 형질 전환에 의해 도입하고, 해당 숙주 세포를 재조합 단백질의 발현에 적절한 조건 하에서 배양하고, 그리고 해당 숙주 세포 중에서 발현된 재조합 단백질을 회수함으로써 실시된다.
「벡터」는, 그것에 연결시킨 핵산을 숙주 세포 내에 도입하기 위해 사용하는 것이 가능한 핵산이며, 「발현 벡터」는 벡터에 의해 도입된 핵산이 코드되는 단백질의 발현을 유도하는 것이 가능한 벡터이다. 벡터에는, 플라스미드(plasmid) 벡터, 바이러스 벡터 등이 포함된다. 당업자는, 사용하는 숙주 세포의 종류에 따라, 재조합 단백질의 발현에 적절한 발현 벡터를 선택할 수 있다. 정제를 용이하게 하기 위해서, His×6 잔기 등의 어피니티 태그를 포함하도록 해도 된다. 또한, 시그널 서열을 포함하여 세포 바깥으로 배출되도록 합성해도 된다.
「숙주 세포」는, 벡터에 의해 유전자 도입 또는 형질 전환을 받는 세포이다. 숙주 세포는, 사용되는 벡터에 따라 당업자가 적절히 선택할 수 있다. 숙주 세포는, 예를 들면, 대장균(E. coli) 등의 원핵생물 유래인 것이 가능하다. 대장균과 같은 원핵세포를 숙주로서 사용하는 경우, 본 발명의 항원은, 원핵세포 내에서의 재조합 단백질의 발현을 용이하게 하기 위해 N말단 메티오닌 잔기를 포함하도록 해도 된다. 이 N말단 메티오닌은, 발현 후에 재조합 단백질로부터 떼어낼 수도 있다.혹은, 효모 등의 단세포 진핵생물, 식물 세포, 동물 세포(예를 들면, 사람 세포, 원숭이 세포, 햄스터 세포, 래트 세포, 마우스 세포 또는 곤충 세포) 등의, 진핵생물 유래의 세포나 누에인 것이 가능하다.
발현 벡터의 숙주 세포에의 유전자 도입 또는 형질 전환은, 당업자에게 공지된 방법에 의해 적절히 실시할 수 있다. 또한, 당업자는, 숙주 세포의 종류에 따라 재조합 단백질의 발현에 적절한 조건을 적절히 선택하여, 숙주 세포를 배양함으로써 재조합 단백질을 발현시킬 수 있다. 그리고, 재조합 단백질을 발현한 숙주 세포를 호모지나이즈(homogenize)하고, 얻어진 호모지네이트(homogenate)로부터 상술한 단백질의 정제 방법을 적절히 조합하여 실시함으로써, 재조합 단백질로서 발현된 항원을 분리·정제할 수 있다.
진단 키트·진단 방법
본 발명은, 대상의 생선 알레르기를 진단하기 위한 지표를 제공하는 방법으로서, 이하의 공정：
(i) 대상으로부터 얻어진 시료를 항원에 접촉시키는, 여기서 해당 시료는 IgE 항체가 포함되는 용액인；
(ii) 대상으로부터 얻어진 시료 중의 IgE 항체와 해당 항원과의 결합을 검출하는；
(iii) 대상의 IgE 항체와 해당 항원과의 결합이 검출된 경우, 대상이 생선 알레르기인 것의 지표가 제공되는；
을 포함하고, 여기서 해당 항원은 상기 (1)~(9)의 항원으로서 특정되는 단백질 중 적어도 하나, 또는 상기 (10)~(14)의 항원으로서 특정되는 단백질 중 적어도 하나인, 상기 방법을 제공한다.
대상으로부터 얻어진 시료란, 대상으로부터 채취된 IgE 항체가 포함되는 용액이다. 그와 같은 용액에는, 예를 들면, 혈액, 타액, 가래, 콧물, 소변, 땀, 눈물이 포함된다. 대상으로부터 얻어진 시료는, 항원에 접촉시키기 전에, 시료 중의 Ig항체 농도를 높이기 위한 전처리(前處理)가 되어 있어도 된다. 시료의 전처리로서는, 예를 들면 혈액으로부터 혈청, 혈장을 얻는 것이 포함되어도 된다. 또한, 항원과의 결합부분인 Fab 부분을 정제해도 된다. 특히 바람직한 양태에 있어서, 상기 공정(i)은, 대상으로부터 얻어진 혈청 중의 IgE 항체와 항원을 접촉시킴으로써 실시된다.
IgE 항체는, IgE 항체 그 자체이어도 되고, IgE 항체가 결합된 비만세포 등이어도 된다.
대상으로부터 얻어진 시료와 항원과의 접촉 및 그 결합의 검출은, 기지(旣知)의 방법에 의해 실시하는 것이 가능하다. 그와 같은 방법에는, 예를 들면, ELISA(Enzyme-Linked Immunosorvent Assay), 샌드위치 면역 측정법, 이무노블로트법, 면역 침강법, 이무노크로마토(immunochromato)법에 의한 검출을 이용할 수 있다. 이들은 모두, 항원에 대상의 IgE 항체를 접촉시켜 결합시키고, 항원에 특이적으로 결합된 IgE 항체를 검출하는 방법이다. 예를 들면, 효소 표식(標識)한 2차 항체를 작용시키고, 효소의 기질(통상은 발색 혹은 발광 시약)을 첨가하여 효소 반응의 생성물을 검출하는 방법, 비오틴 표식한 2차 항체를 작용시키고, 아비딘 결합 색소를 첨가하여 색소를 검출하는 방법, 형광 표식한 2차 항체를 검출하는 방법 등을 들 수 있다. 혹은, 표면 플라즈몬 공명(SPR) 등의, 항원과 IgE 항체의 결합을 평가 가능한 측정 방법에 의한 검출을 이용할 수도 있다. 복수종의 항원 특이적 IgE 항체가 혼합되고 있어도 된다.
항원은, 단리(單離)된 항원이 담체에 고정되어 있는 상태이어도 된다. 이 경우는 상기 공정(i) 및 (ii)에 있어서 ELISA, 샌드위치 면역 측정법, 이무노크로마토법, 표면 플라즈몬 공명 등을 이용할 수 있고, 또한, 상기 공정(i)에서는, 대상으로부터 얻어진 시료를 항원을 고정한 면에 접촉시킴으로써 실시한다. 단리된 항원은, 생선으로부터 당업자에게 주지(周知)인 단백질 정제 방법을 조합하여 분리·정제함으로써, 또는 유전자 재조합 기술에 의해 조제함으로써 얻어도 된다. 또한, 항원을 결합하는 항체가 고정되어 있는 상태이어도 된다.
항원은 담체에 고정되어 있지 않은 상태이어도 된다. 이 경우는, 상기 공정(i) 및 (ii)에 있어서, 플로우 사이토메트리(flow cytometry) 등을 이용할 수 있고, 레이저광에 의해 항체가 결합된 항원의 존재를 확인할 수 있다. 예를 들면, 항원이 항체와 결합되어, 시료 중의 호염기구를 활성화하면 발현되는 표면 항원 CD203c의 양을 측정하는 호염기구 활성화 시험(BAT) 등을 들 수 있다. 또한, 항원을 시료 중의 항체와의 결합을 통하여 혈구(血球)에 접촉시킴으로써, 히스타민을 유리(遊離)할지를 조사하는 히스타민 유리 시험(遊離試驗)(HRT)도 들 수 있다.
또한, 항원은 2차원 전기 영동에 의해 분리된 상태로부터 전사되어 이무노블로트법에 의한 검출을 실시해도 된다. 2차원 전기 영동은, 1차원째에 등전점 전기 영동, 2차원째에 SDS－PAGE(SDS－폴리아크릴 아미도겔 전기 영동)를 실시함으로써, 단백질 시료를 분리하는 방법이다. 이 경우, 2차원 전기 영동의 조건은, 본원발명의 항원을 분리할 수 있는 조건이면 특별히 한정되지 않는다. 예를 들면, 상기 「항원의 특정」의 항목에서 기재한 2차원 전기 영동의 조건을 이용할 수 있다. 혹은, 상술의 특허문헌 1~4의 기재를 참고로 하여 전기 영동의 조건을 정할 수도 있고, 예를 들면, 이하：
(A) 1차원째의 등전점 전기 영동 겔로서, 겔 길이가 5~10cm의 범위 내로서, 겔의 pH 범위가 3~10이며, 영동방향에 대한 겔의 pH구배가, pH5까지의 겔 길이를 a, pH5~7의 겔 길이를 b, pH7 이상의 겔 길이를 c로 한 경우에 있어서, 「a＜b］및 「b＞c」의 관계를 만족하는；
(B) (A)의 경우로서, 겔의 전체 길이를 1로 한 경우, a가 0.15∼0.3의 범위 내, b가 0.4∼0.7의 범위 내, c가 0.15∼0.3의 범위 내인；
(C) 1차원째의 등전점 전기영동에 있어서, 검체를 포함하는 겔 1개에 대하여 100V∼600V의 범위 내의 값의 정전압의 인가에 의한 정전압 공정을 실시하고, 영동 30분 당의 영동 변화폭이 5μA의 범위 내가 된 후에 상기 정전압으로부터 전압을 상승시키는 전압 상승 행정을 시작하는；
(D) (C)의 경우에, 전압 상승 공정의 최종 전압을 3000V∼6000V의 범위 내로 하는；
(E) 1차원째의 등전점 전기영동 겔의 긴 방향의 겔 길이가 5∼10cm이며, 2차원째 전기영동 겔의 영동 방향 기단부(基端部)의 겔 농도를 3∼6%로 하는； 및
(F) (E)의 경우에, 2차원째 전기영동 겔의 영동 방향 선단측의 부분의 겔 농도가, 영동 방향 기단부의 겔 농도보다 높게 설정하는；
으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나를 만족하는 조건에서 2차원 전기영동을 실시할 수 있다.
상기 (1)~(9)의 항원 또는 상기 (10)~(14)의 항원은, 생선에 대한 알레르기의 환자의 IgE 항체와 특이적으로 결합되는 항원이다. 따라서, 대상의 IgE 항체와 해당 항원과의 결합이 검출된 경우, 대상이 생선에 대한 알레르기인 것의 지표가 제공된다.
본 발명은 또한, 상기 (1)~(9)의 항원 중 적어도 하나, 또는 상기 (10)~(14)의 항원 중 적어도 하나를 포함하는 생선에 대한 알레르기의 진단 키트를 제공한다. 본 발명의 진단 키트는, 상기의 생선에 대한 알레르기를 진단하기 위한 지표를 제공하는 방법, 또는 하기의 진단 방법에 사용해도 된다. 본 발명의 진단 키트는, 상기 (1)~(9)의 항원 중 적어도 하나, 또는 상기 (10)~(14)의 항원 중 적어도 하나를 포함하는 것 외에 효소 표식된 항IgE 항체 및 해당 효소의 기질이 되는 발색 기질 혹은 발광 기질, 또는 비오틴 표식된 항IgE 항체 및 해당 비오틴과 결합되는 아비딘 결합 색소를 포함하고 있어도 된다. 또한, 형광 표식된 항IgE 항체를 사용해도 된다. 본 발명의 진단 키트에 있어서, 항원은 담체에 고정화된 상태로 제공되어도 된다. 본 발명의 진단 키트는 또한, 진단을 위한 순서에 대한 설명서나 해당 설명을 포함하는 패키지와 함께 제공되어도 된다.
다른 태양에 있어서, 상기의 진단 키트는, 생선에 대한 알레르기에 관한 컴퍼니언 진단약을 포함한다. 컴퍼니언 진단약이란, 의약품의 효과가 기대되는 환자의 특정 또는 의약품의 위중한 부작용 리스크를 가지는 환자의 특정, 혹은 의약품을 사용한 치료의 최적화를 위해서 해당 의약품의 반응성을 검토하기 위해 사용하는 것이다. 여기서 치료의 최적화란, 예를 들면, 용법 용량의 결정이나 투여 중지의 판단, 어느 알레르겐 컴퍼넌트를 사용하여 면역 관용할지의 확인 등이 포함된다.
본 발명은 또한, 상기 (1)~(9)의 항원 중 적어도 하나, 또는 상기 (10)~(14)의 항원 중 적어도 하나를 포함하는 생선에 대한 알레르기의 진단용 조성물을 제공한다. 본 발명의 진단용 조성물은, 하기의 진단 방법에 사용할 수 있다. 본 발명의 진단용 조성물은, 필요에 따라 본 발명의 항원과 함께 일반적으로 사용되는, 약학적으로 허용되는 담체나 첨가제를 포함하고 있어도 된다.
일 태양에 있어서, 본 발명은, 대상의 생선에 대한 알레르기를 진단하는 방법으로서, 이하의 공정：
(i) 대상으로부터 얻어진 시료를 항원에 접촉시키는；
(ii) 대상으로부터 얻어진 시료 중의 IgE 항체와 해당 항원과의 결합을 검출하는；
(iii) 대상의 IgE 항체와 해당 항원과의 결합이 검출된 경우, 대상이 생선에 대한 알레르기이라고 판단하는；
것을 포함하고, 여기서 해당 항원은 상기 (1)~(9)의 항원으로서 특정되는 단백질 중 적어도 하나, 또는 상기 (10)~(14)의 항원으로서 특정되는 단백질 중 적어도 하나인, 상기 방법을 제공한다. 여기에 있어서 (i) 및 (ii)의 각 공정은, 생선에 대한 알레르기를 진단하기 위한 지표를 제공하는 방법의 각 공정에 관하여 설명한 바와 같이 실시된다.
다른 태양에 있어서, 본 발명은, 대상의 생선에 대한 알레르기를 진단하는 방법으로서, 상기 (1)~(9)의 항원 중 적어도 하나, 또는 상기 (10)~(14)의 항원 중 적어도 하나를 대상으로 투여하는 것을 포함하는, 상기 방법을 제공한다. 해당 방법은, 피부에 항원을 적용하는 것을 특징으로 하는 피부 테스트의 형식으로 실시해도 된다. 피부 테스트에는, 피부 상에 진단용 조성물을 적용한 후에, 출혈되지 않을 정도로 미소한 상처를 냄으로써 피부에 항원을 침투시켜 피부 반응을 관찰하는 프릭 테스트(prick test), 진단용 조성물을 적용한 후에 피부를 조금 세게 긁어 반응을 관찰하는 스크래치 테스트, 크림이나 연고등의 형태의 진단용 조성물을 피부에 적용하여 반응을 관찰하는 패치 테스트, 항원을 피내(皮內)에 투여하여 반응을 관찰하는 피내 테스트등의 형태가 포함된다. 프릭 테스트나 스크래치 테스트에 있어서 피부에 진단용 조성물을 침투시키는 방법으로서는, 런 세트의 선단(先端)을 진단용 조성물에 접촉하고, 그 접촉 부위를 피부에 찌름으로써 상처를 내어 침투시키는 방법이어도 된다. 항원을 적용한 부분의 피부에 붓기 등의 피부 반응이 발생된 경우, 그 대상은 생선에 대한 알레르기를 가진다고 진단한다. 여기서, 피부에 적용하는 항원의 양은, 예를 들면, 1회당 100μg 이하의 용량이어도 된다.
알레르기의 진단에 있어서는, 항원의 특정을 목적으로 한 부하 시험이 자주 실시되고 있다. 상기 (1)~(9)의 항원 중 적어도 하나, 또는 상기 (10)~(14)의 항원 중 적어도 하나는, 생선에 대한 알레르기인 것을 진단하기 위한 부하 시험의 유효 성분으로서 사용할 수 있다. 여기서, 부하 시험에 사용되는 항원 단백질로서는, 발현 정제한 단백질이어도 되고, 예를 들면, 벼에 삼나무 화분(花粉) 항원의 유전자를 형질 전환하고, 그 항원 단백질을 쌀 중에 발현시킨 화분미(花粉米)와 같이, 식품·식재에 있어서 발현시킨 것이어도 된다.
또 다른 태양에 있어서, 본 발명은 생선에 대한 알레르기의 진단에 사용하기 위한 상기 (1)~(9)의 항원 중 적어도 하나, 또는 상기 (10)~(14)의 항원 중 적어도 하나를 제공한다. 여기서, 상기 (1)~(9)의 항원 중 적어도 하나, 또는 상기 (10)~(14)의 항원 중 적어도 하나를, 기존의 항원과 혼합하여 제공하는 것도 포함한다.
또 다른 태양에 있어서, 본 발명은 생선에 대한 알레르기의 진단약의 제조를 위한 상기 (1)~(9)의 항원 중 적어도 하나, 또는 상기 (10)~(14)의 항원 중 적어도 하나의 사용을 제공한다.
의약 조성물·치료 방법
본 발명은, 상기 (1)~(9)의 항원 중 적어도 하나, 또는 상기 (10)~(14)의 항원 중 적어도 하나를 포함하는 의약 조성물을 제공한다.
일 태양에 있어서, 상기의 의약 조성물은, 생선에 대한 알레르기를 치료하기 위해 사용된다.
본 발명은 또한, 생선에 대한 알레르기의 치료를 필요로 하는 환자에 대하여, 상기 (1)~(9)의 항원 중 적어도 하나, 또는 상기 (10)~(14)의 항원 중 적어도 하나를 투여하는 것을 포함하는, 생선에 대한 알레르기를 치료하는 방법을 제공한다.
다른 태양에 있어서, 본 발명은 생선에 대한 알레르기의 치료에 사용하기 위한 상기 (1)~(9)의 항원 중 적어도 하나, 또는 상기 (10)~(14)의 항원 중 적어도 하나를 제공한다. 또 다른 태양에 있어서 본 발명은, 생선에 대한 알레르기의 치료약의 제조를 위한 상기 (1)~(9)의 항원 중 적어도 하나, 또는 상기 (10)~(14)의 항원 중 적어도 하나의 사용을 제공한다.
알레르기의 치료에 있어서는, 환자에게 항원을 투여함으로써 면역 관용으로 유도하는 것을 목표로 한, 감감작 요법(減感作療法)이 자주 실시되고 있다. 상기 (1)~(9)의 항원 중 적어도 하나, 또는 상기 (10)~(14)의 항원 중 적어도 하나는, 생선에 대한 알레르기에 대한 감감작 요법을 위한 유효 성분으로서 사용할 수 있다. 여기서, 감감작 요법에 사용되는 항원 단백질로서는, 발현 정제한 단백질이어도 되고, 예를 들면, 벼에 삼나무 화분 항원의 유전자를 형질 전환하고, 그 항원 단백질을 쌀 중에 발현시킨 화분미와 같이, 식품·식재에서 발현시킨 것이어도 된다.
본 발명의 의약 조성물은, 통상의 투여 경로에 의해 투여할 수 있다. 통상의 투여 경로에는 예를 들면, 경구(經口), 설하(舌下), 경피(經皮), 피내(皮內), 피하(皮下), 혈액내(血液內), 비강내(鼻腔內), 근육내(筋肉內), 복강내(腹腔內), 직장내(直腸內)의 투여가 포함된다.
본 발명의 의약 조성물은, 필요에 따라 본 발명의 항원과 함께, 일반적으로 사용되는 약학적으로 허용되는 아쥬번트(adjuvant), 부형제(賦形劑), 또는 각종의 첨가제(예를 들면 안정제, 용해보조제, 유탁화제, 완충제, 보존제, 착색제 등)를 상법(常法)에 의해 첨가한 의약 조성물로서 사용할 수 있다. 의약 조성물의 제형은, 투여 경로에 따라 당업자가 적절히 선택할 수 있다. 예를 들면, 정제, 캡슐제, 트로키(troche), 설하정(舌下錠), 주사제, 비강내 분무제, 파프(PAP)제, 액제(液劑), 크림제, 로션제, 좌제(坐劑) 등의 형태이어도 된다. 본 발명의 의약 조성물의 투여량, 투여 회수 및／또는 투여 기간은, 투여 경로, 증상, 연령이나 체중 등의 환자의 특성 등에 따라 의사가 적절히 선택할 수 있다. 예를 들면, 성인의 경우, 1회당 100μg 이하의 용량으로 투여해도 된다. 투여 간격은, 예를 들면, 매일, 매주 1회, 월에 2회, 또는 3개월에 1회 정도이어도 된다. 투여 기간은 예를 들면, 수 주간에서 수 년이어도 된다. 투여 기간 내에 있어서, 투여량을 단계적으로 증가시키는 투여 방법이어도 된다.
테스터
본 발명은, 상기 (1)~(9)의 항원 중 적어도 하나, 또는 상기 (10)~(14)의 항원 중 적어도 하나에 대한 항체를 포함하는 테스터를 제공한다.
해당 항체는, 상법에 의해 제작할 수 있다. 예를 들면, 토끼 등의 포유동물을 상기 (1)~(9)의 항원 또는 상기 (10)~(14)의 항원으로 면역함으로써 제작해도 된다. 해당 항체는, Ig항체, 폴리크로날 항체, 모노크로날 항체, 또는 그들의 항원 결합 프래그먼트(fragment)(예를 들면, Fab, F(ab')2, Fab')이어도 된다.
또한, 상기의 테스터에 있어서, 해당 항체는 담체에 결합된 형태로 제공되어 있어도 된다. 담체는, 항체와 항원의 결합의 검출에 이용 가능한 담체이면 특별히 한정되지 않는다. 당업자에게 공지된 임의의 담체를 이용할 수 있다.
항원 함유의 유무를 조사하는 방법으로서는, 예를 들면, 이하의 방법을 들 수 있다.
· 제작한 IgE 항체를 포함하는 테스터를 식품·식재 등으로부터 얻어진 시료에 접촉시키고, 예를 들면 ELISA법 등을 이용하여 해당 IgE 항체와 시료 중의 항원과의 결합을 검출하고, 해당 IgE 항체와 항원과의 결합이 검출된 경우에, 대상 식품·식재 등에 해당 항원이 잔류되어 있다고 판단하는 방법.
· 식품·식재 등으로부터 단백질을 추출하고, 전기 영동하여 항원의 스포트 밴드가 있는지를 항체에 의해 검출하는 방법.
· 여과지 등에 식품·식재 등을 스며들게 하고, 그것에 포함되는 항원을 검출하도록, 항체 용액을 반응시키는 방법.
본 발명의 다른 태양에 있어서, 서열번호 1, 4, 9, 18, 25, 32, 42, 55, 60, 69, 109, 120, 137 또는 143으로 나타내는 염기 서열 중 적어도 1개의 일부와 상보적인 염기 서열을 가지는 프라이머를 포함하는 것을 특징으로 하는, 대상물에 있어서의 생선에 대한 알레르기의 항원의 유무를 판정하기 위한 테스터를 포함한다. 비한정적으로, 상기 프라이머는 예를 들면, 서열번호 1, 4, 9, 18, 25, 32, 42, 55, 60, 69, 109, 120, 137 또는 143으로 나타내는 염기 서열 중 적어도 1개의 서열의 일부의 3＇말단 또는 중앙 부분의 서열의, 바람직하게는, 12 잔기, 15 염기, 20 염기, 25 염기와 상보적인 염기 서열을 가진다. 특히 mRNA를 대상으로 하는 경우는, 폴리 A 테일의 상보 프라이머를 가진다. 바람직한 태양에 있어서, 상기의 프라이머를 포함하는 테스터는, 또한 서열번호 1, 4, 9, 18, 25, 32, 42, 55, 60, 69, 109, 120, 137 또는 143으로 나타내는 염기 서열 중 적어도 1개의 서열의 5＇말단의 부분의 염기 서열, 바람직하게는 12 염기, 15 염기, 20 염기, 25 염기로 이루어지는 염기 서열을 포함하는 프라이머를 포함해도 된다.
예를 들면, 생선으로부터 얻어진 DNA 또는 mRNA를 주형(鑄型)으로 하여, 상기 프라이머를 사용하고, RT－PCR를 포함하는 PCR(Polymerase Chain Reaction)로 DNA 또는 cDNA를 증폭하고, 증폭된 DNA 또는 cDNA의 서열을 서열번호 1, 4, 9, 18, 25, 32, 42, 55, 60, 69, 109, 120, 137 또는 143과 비교함으로써, 항원의 유무를 판단한다. mRNA를 PCR로 증폭하는 방법은, RACE법 등을 예시할 수 있다. 이 때, 증폭된 DNA 또는 cDNA와 서열번호 1, 4, 9, 18, 25, 32, 42, 55, 60, 69, 109, 120, 137 또는 143과의 비교에 있어서, 동일한 아미노산을 코드하는 점변이(点變異)가 존재하는 경우, 또는, 증폭된 DNA 또는 cDNA의 염기 서열에 있어서, 서열번호 1, 4, 9, 18, 25, 32, 42, 55, 60, 69, 109, 120, 137 또는 143의 염기 서열에 대한 염기의 삽입, 결실, 치환 혹은 부가가 존재해도, 해당 DNA 또는 cDNA가 코드되는 아미노산 서열이 서열번호 2, 5, 10, 19, 26, 33, 43, 56, 61, 70, 110, 121, 138 또는 144의 아미노산 서열에 대하여 동일성이 70% 이상, 바람직하게는 80, 90, 95, 98, 99% 이상이 되는 경우는, 항원이 존재한다고 판단한다.
일 태양에 있어서, 상기의 테스터는, 식재(생선 혹은 생선알(魚卵)) 또는 식품 제조 라인 중 등의 대상물 중의 항원 함유의 유무를 조사하기 위해 사용된다. 상기 테스터는, 제조업자에 의한 제조 라인 및 출하 전 제품의 품질 검사용으로 사용해도 되고, 끽식자(喫食者) 자신에 의한 대상 식품·식재의 항원 함유의 유무의 체크용으로서 사용해도 된다.
알레르겐 제거 식품 등
본 발명은, 상기 (1)~(9)의 항원 중 적어도 하나, 또는 상기 (10)~(14)의 항원 중 적어도 하나가 제거 또는 저감되어 있는 것을 특징으로 하는 생선, 생선알, 해당 생선 혹은 해당 생선알 가공품, 또는 해당 생선알을 낳는 혹은 해당 생선알으로부터 태어난 생선을 제공한다.
생선, 생선알, 해당 생선 혹은 해당 생선알 가공품, 또는 해당 생선알을 낳는 혹은 해당 생선알으로부터 태어난 생선에 있어서, 본 발명의 항원을 제거 또는 저감하는 방법은 한정되지 않는다. 항원의 제거 또는 저감은, 본 발명의 항원이 제거 또는 저감되는 한, 어떠한 방법에 의해 실시해도 된다.
예를 들면, 본 발명의 항원이 제거 또는 저감된 생선 또는 생선알은, 유전자 녹아웃(knock-out) 기술을 이용하여, 본 발명의 항원의 발현이 녹아웃된 생선 또는 생선알을 조제(調製)해도 된다.
유전자 녹아웃 기술은, 당업자에게 공지된 방법 중 어느 하나를 사용할 수 있다. 예를 들면, Oishi, et al.(Scientific Reports, Vol.6, Article number: 23980, 2016, doi:10.1038/srep23980)는, 게놈 편집 기술인 CRISPER/Cas9를 시원(始原) 생식 세포에 적용하여, 알레르겐 단백질 유전자 결실 개체를 얻는 것을 기재하고 있다. 동일한 방법을 이용하여, 본 발명의 항원이 제거된 생선 또는 생선알을 얻어도 된다. 또한, 항원을 함유하지 않는 또는 함유량이 적은 생선 또는 생선알과의 인공 수정에 의한 교배에 의해, 본 발명의 항원이 제거·저감된 생선 또는 생선알을 얻어도 된다. 생선 또는 생선알의 인공 교배는, 상법에 의해 실시할 수 있다.
본 발명의 항원이 제거 또는 저감된 생선 가공품 또는 생선알 가공품은, 본 발명의 항원이 제거 또는 저감된 생선을 원료로 한 가공품이어도 된다. 통상의 생선 또는 생선알을 원료로 하는 경우는, 생선 가공품 또는 생선알 가공품의 조제 전 또는 조제 후에 본 발명의 항원을 제거 또는 저감하는 처리를 실시한다. 통상의 생선 또는 생선알을 원료로 한 생선 가공품 또는 생선알 가공품에 있어서 본 발명의 항원을 제거 또는 저감하는 방법으로서 고압 처리 및 중성염 용액에 의한 용출이나, 고온 스팀 등의, 식품·식재 중의 단백질 성분을 제거하는 방법이나, 열처리 및 산처리에 의한 가수분해·변성·아미노산 변화(측쇄의 화학 수식·이탈 등)하는 방법을 들 수 있다.　본 발명의 항원이 제거 또는 저감된 생선은, 상기 본 발명의 항원이 제거 또는 저감된 생선알을 부화하여, 성장시킨 생선이어도 된다. 또한, 본 발명의 항원이 제거 또는 저감된 생선알은, 상기 본 발명의 항원이 제거 또는 저감된 생선으로부터 얻어진 것이어도 된다.
실시예
이하에 본 발명의 실시예를 설명한다. 본 발명의 기술적 범위는, 이들 실시예에 의해서 한정되지 않는다.
실시예 1：단백질 패턴의 확인
하기의 2차원 전기 영동 방법을 사용하여, 연어에 포함되는 단백질을 조사했다.
단백질의 추출
연어에 포함되는 단백질의 추출 및 정제는 다음과 같이 실시했다. 연어의 몸에, 가용화제(Mammalian Lysis Buffer (MCLI), SIGMA사)를 첨가하여 단백질을 추출한 후, 요소(尿素) 버퍼를 첨가하여 단백질 추출액을 얻었다. 요소 버퍼의 조성은 이하와 같다.
30mM　Tris
2M　티오 요소
7M　요소
4%(w/v) 　CHAPS：
3－[(3－코라미드프로필)디메틸암모니오]프로판설포네이트
적당량의 희염산
증류수를 첨가하여 전체를 100mL로 조정했다. pH는 8.5이었다.
그 후, 단백질 중량으로서 25μg씩을 혼합하여 추출액을 얻었다.
그 후, 2D-CleanUP 키트(GE사제)를 사용하여 2회의 침전 조작을 실시했다. 제1회째의 침전 조작은, 회수한 상기 단백질 추출액에 TCA(트리클로로아세트산)를 첨가하고 침전을 실시하여, 해당 조작으로 발생된 침전(TCA 침전)을 회수했다. 제2회째의 침전 조작은, 회수한 상기 TCA 침전에 아세톤을 첨가하고 침전을 실시하여, 해당 조작으로 얻어진 침전(검체)을 회수했다.
검체 용액의 조제
얻어진 검체의 일부(단백질 중량으로서 40μg)를, 1차원째 등전점 전기 영동용 겔의 팽윤용 완충액인 DeStreak Rehydration Solution(GE사제) 150μl에 용해하여, 1차원째 등전점 전기 영동용의 검체 용액(팽윤용 검체 용액)으로 했다. DeStreak Rehydration Solution의 조성은 이하와 같다.
7M　티오 요소
2M　요소
4%(w/v)　CHAPS
0.5%(v/v)　IPG 버퍼；GE사제
적당량의 BPB(브로모페놀 블루)
1차원째 등전점 전기 영동용 겔에의 검체의 침투
1차원째 등전점 전기영동용 겔(GE사제：IPG 겔 Immobiline Drystrip (pH3-10NL))를 상기한 1차원째 등전점 전기영동용의 검체 용액(팽창용 검체 용액) 140μl에 침지하고, 하룻밤 실온에서 침투시켰다.
본 실시예에 있어서는, 전기영동 기기로서 GE사제의 IPGphor를 사용했다.
영동 트레이(tray)에 실리콘 오일을 채웠다. 검체를 침투시킨 겔의 양단(兩端)에 물로 적신 여과지를 설치하고, 겔을 실리콘 오일에 덮이도록, 영동 트레이에 세트하고, 겔과의 사이에 해당 여과지를 사이에 둔 상태로 전극을 세트했다.
등전점 전기영동 기기의 전류값의 상한을 겔 1개 당 75μA로 설정하고, 전압 프로그램을, (1) 300V 정전압으로 750Vhr까지 정전압 공정을 실시하고(해당 공정 종료 전의 영동 30분간의 전류 변화폭이 5μA인), (2) 300Vhr 걸쳐 1000V까지 서서히 전압을 상승시키고, (3) 4500Vhr 걸쳐 5000V까지 서서히 전압을 더 상승시키고, (4) 그 후 5000V 정전압으로 총Vhr가 12000이 될 때까지, 1차원째의 등전점 전기영동을 실시했다.
등전점 전기영동 겔의 SDS 평형화
상기의 1차원째의 등전점 전기영동을 실시한 후, 등전점 전기영동 기기로부터 겔을 제거하고, 환원제를 포함하는 평형화 완충액에 해당 겔을 침지하여, 15분·실온에서 진탕했다. 상기 환원제를 포함하는 평형화 완충액의 조성은 이하와 같다.
100mM Tris－HCl(pH8.0)
6M 요소
30%(v／v) 글리세롤
2%(w/v) SDS
1%(w/v) DTT
다음으로, 상기 환원제를 포함하는 평형화 완충액을 제거하고, 겔을 알킬화제를 포함하는 평형화 완충액에 침지하고, 15분·실온에서 진탕하여, SDS 평형화한 겔을 얻었다. 상기 알킬화제를 포함하는 평형화 완충액의 조성은 이하와 같다.
100mM Tris－HCl(pH8.0)
6M 요소
30%(v／v) 글리세롤
2%(w/v) SDS
2.5%(w/v) 요오드아세트아미드
2차원째의 SDS－PAGE
본 실시예에 있어서는, 전기영동 기기로서 life technologies사제의 XCell SureLock Mini-Cell를 사용했다. 2차원째 영동용 겔은 life technologies사제 NuPAGE 4-12%Bis-Tris Gels를 사용했다. 또한, 이하의 조성의 영동용 완충액을 조제하여, 사용했다.
50mM MOPS
50mM Tris 염기
0.1%(w/v) SDS
1mM EDTA
또한, 본 실시예에 있어서는 영동용 완충액에 0.5%(w/v)의 아가로오스 S(니폰진사제)와 적당량의 BPB(브로모페놀 블루)를 용해시킨 접착용 아가로오스 용액을 사용했다.
SDS－PAGE의 웰중을 충분히 상기 영동용 완충액으로 세정한 후, 해당 세정에 사용한 완충액을 제거했다. 다음으로, 웰 안에 충분히 용해시킨 접착용 아가로오스 용액을 첨가했다. 다음으로, SDS 평형화한 겔을 아가로오스 중에 침지시켜, 핀셋으로 SDS 평형화한 겔과 2차원째 영동용 겔을 밀착시켰다. 해당 양(兩) 겔이 밀착된 상태에서 아가로오스가 충분히 굳어진 것을 확인하고, 200V 정전압으로 약 45분간 영동을 실시했다.
겔의 형광 염색
SYPRO Ruby(life technologies사제)를 사용하여 겔의 형광 염색을 실시했다.
우선, 사용하는 밀폐 용기를 사전에 98%(v／v)의 에탄올로 충분히 세정했다. SDS－PAGE 기기로부터 영동 후의 2차원째 영동용 겔을 제거하여, 세정한 밀폐 용기에 놓고, 50%(v／v) 메탄올 및 7%(v／v) 아세트산 함유 수용액에 30분간 침지하는 처리를 2회 실시했다. 그 후, 해당 수용액을 물로 치환하여, 10분간 침지했다. 다음으로, 2차원째 영동용 겔을 40ml의 SYPRO Ruby에 침지하고, 실온에서 하룻밤 진탕했다. 다음으로, SYPRO Ruby를 제거하고, 2차원째 영동용 겔을 물로 세정한 후, 10%(v／v) 메탄올 및 7%(v／v) 아세트산 함유 수용액에서 30분간 진탕했다. 또한 해당 수용액을 물로 치환하여, 30분 이상 진탕했다.
해석
상기 일련의 처리를 실시한 2차원째 영동용 겔을 Typhoon9500(GE사제)를 사용한 형광 이미지의 스캔에 제공했다. 연어의 몸에 포함되는 단백질에 관하여, 2차원 전기 영동의 결과를 도 1a 좌측 도면에 나타낸다. 겔의 사진의 좌측에는, 분자량 마커의 밴드를 볼 수 있고, 밴드의 위치가 특정의 분자량(KDa)을 나타낸다.
실시예 2： 이무노블로트에서의 항원 확인(1)
이무노블로트에서의 항원 확인은, 실시예 1에 기재한 순서를 「2차원째의 SDS－PAGE」까지 실시한 후, 이하의 「멤브레인에의 전사」 「이무노블로트」 「해석」의 조작을 함으로써 실시했다.
멤브레인(membrane)에의 전사
멤브레인에의 전사는, 이하의 전사 장치 및 전사용 완충액을 사용하여 실시했다.
전사 장치：XCell SureLock Mini-Cell 및 XCell II 블롯 모듈(life technologies사제)
전사용 완충액：NuPAGE 트랜스퍼 버퍼(×20) (life technologies사제)를 milliQ수(水)로 20배 희석하여 사용했다.
구체적으로는 이하의 순서에 따라 2차원째 영동용 겔 중의 단백질을 멤브레인(PVDF막)에 전사했다.
(1) PVDF막을, 100% 메탄올에 침지하고, 다음으로 milliQ수에 침지하고, 그 후, 전사용 완충액으로 옮겨서, PVDF막의 친수화 처리를 실시했다.
(2) 스펀지, 여과지, 2차원째의 SDS－PAGE가 끝난 2차원째 영동용 겔, 친수화 처리가 끝난 PVDF막, 여과지, 스펀지의 순서로 세트하고, 전사 장치 중, 30V 정전압으로 1시간 통전(通電)시켰다.
이무노블로트
멤브레인의 이무노블로트를, 1차 항체로서 생선에 대한 알레르기를 가지는 환자 1의 혈청 또는 비생선 알레르기 피험자의 혈청을 사용해서 실시했다. 이 생선 알레르기의 환자 1은, 생선에 의한 즉시형(卽時型) 알레르기이라고 진단된 환자이다. 또한, 이 환자는, 연어, 전갱이, 붕장어, 감성돔, 고등어, 도미, 대구, 방어에 대하여 알레르기 증상을 발병하고, 프릭 테스트로 양성을 나타냈다.
멤브레인의 이무노블로트는, 이하의 순서에 따라 실시했다.
(1) 전사한 멤브레인을 5% 스킴 밀크/PBST 용액(비이온 계면활성제 Tween 20을 0.1% 포함하는 PBS 버퍼) 중, 실온에서 1시간 진탕했다.
(2) 1차 항체로서, 5% 혈청/5% 스킴 밀크/PBST 용액 중, 실온에서 1시간 정치(靜置)했다.
(3) PBST 용액으로 세정했다(5분×3회).
(4) 2차 항체로서 항히트 IgE－HRP(세이요우와사비페르오키시다제)를 5% 스킴 밀크/PBST 용액으로 5000배로 희석한 용액 중, 실온에서 1시간 정치했다.
(5) PBST 용액으로 세정했다(5분×3회).
(6) Pierce Western Blotting Substrate Plus(Thermo사제)로, 5분간 정치했다.
해석
상기 일련의 처리를 실시한 멤브레인을 Typhoon9500(GE사제)를 사용한 형광 이미지의 스캔에 제공했다.
생선 알레르기 환자 1의 혈청을 사용한 이무노블로트를, 대조(對照)인 비생선 알레르기 피험자의 혈청을 사용한 이무노블로트와 비교했다. 연어의 몸에 포함되는 단백질에 관하여 생선 알레르기 환자 1의 혈청을 사용하여 실시한 이무노블로트(도 1a 우측 도면)에 있어서, 비생선 알레르기 피험자의 혈청을 사용한 경우(도 3)와는 상이하고, 또한 공지의 연어 알레르겐 단백질과는 상이한 9개의 스포트가 검출되었다. 검출된 스포트를 이무노블로트 상에 나타낸다(도 1a 우측 도면).
상기 9개의 스포트의 분자량 및 등전점은 각각 이하와 같다.
스포트 1：분자량 90~120kDa, pI3.0~6.0
스포트 2：분자량 120~160kDa, pI4.0~7.0
스포트 3：분자량 90~120kDa, pI5.0~8.0
스포트 4：분자량 90~120kDa, pI6.0~8.0
스포트 5：분자량 60~90kDa, pI3.0~6.0
스포트 6：분자량 70~100kDa, pI5.0~7.0
스포트 7：분자량 40~70kDa, pI4.0~7.0
스포트 8：분자량 40~70kDa, pI4.0~7.0
스포트 9：분자량 20~50kDa, pI4.0~7.0
실시예 3：질량 분석 및 항원의 동정(1)
상기 9개의 스포트를 발생시키는 항원에 관하여, 질량 분석에 의한 아미노산 서열의 동정을 실시했다.
구체적으로는, 이하의 순서로 단백질의 추출 및 질량 분석을 실시했다.
(1) 연어의 몸에 관하여, 실시예 1 및 2의 순서에 따라 단백질 추출, 2차원 전기 영동 및 멤브레인 전사를 실시하고, 0.008% Direct blue/40% 에탄올·10% 아세트산으로 진탕에 의해 염색했다.
(2) 그 후, 40% 에탄올·10% 아세트산으로 5분간의 처리를 3회 실시하여 탈색하고, 물로 5분간 세정 후, 건풍(乾風)시켰다.
(3) 목적의 스포트를 깨끗한 커터날로 잘라내어, 원심 튜브에 넣었다. 50μL의 메탄올로 멤브레인 친수 처리 후, 100μL의 물로 2회 세정 후 원심 제거하여, 20μL의 20mM NH4HCO3·50% 아세토니트릴을 첨가했다.
(4) 1pmol/μL 리실엔도펩티다아제(WAKO) 1μL를 첨가하고, 37℃에서 60분간 정치한 후, 용액을 새로운 원심 튜브에 회수했다. 20μL의 20mM NH4HCO3·70% 아세토니트릴을 멤브레인에 첨가하고, 실온에서 10분간 담가, 더 회수했다. 0.1% 폼산, 4% 아세토니트릴 10μL로 용해하고, 튜브로 옮겼다.
(5) 회수한 용액을 감압 건조한 후, A액(0.1% 폼산, 4% 아세토니트릴 용액) 15μl로 용해하여, 질량 분석(ESI-TOF5600, AB Sciex사제)을 실시했다.
(6) 질량 분석계로부터 얻어진 질량 데이터에 근거하는 단백질의 동정은, NCBI 또는 UniProt를 서치(search)함으로써 실시했다.
결과
각 스포트에 관하여, 질량 분석을 실시했던바, 이하의 아미노산 서열이 검출되었다.
스포트 1：서열번호 3으로 나타내는 아미노산 서열
스포트 2：서열번호 6~8로 나타내는 아미노산 서열
스포트 3：서열번호 11~17로 나타내는 아미노산 서열
스포트 4：서열번호 20~24로 나타내는 아미노산 서열
스포트 5：서열번호 27~31로 나타내는 아미노산 서열
스포트 6：서열번호 34~41로 나타내는 아미노산 서열
스포트 7：서열번호 44~54로 나타내는 아미노산 서열
스포트 8：서열번호 57~59로 나타내는 아미노산 서열
스포트 9：서열번호 62~68로 나타내는 아미노산 서열
또한, 각 스포트에 관하여, 질량 분석계로부터 얻어진 질량 데이터를 스포트 1에 관하여는 NCBI로, 스포트 2~9에 관하여는 UniProt로 해석했던바, 각각의 스포트는 이하의 단백질인 것이 동정되었다.
스포트 1：α－악티닌-3(AlphA－actinin-3) (NCBI의 단백질 액세션 번호 XP_014051545.1, DNA 액세션 번호 XM_014196070.1) (아미노산 서열：서열번호 2, 그것을 코드하는 염기 서열：서열번호 1)
스포트 2：EEF1A2 바인딩 프로테인-라이크(EEF1A2 binding protein-like) (UniProt의 단백질 액세션 번호 B5RI29, DNA 액세션 번호 ACH85270.1) (아미노산 서열：서열번호 5, 그것을 코드하는 염기 서열：서열번호 4)
스포트 3：α－1, 4－글루칸포스포릴라아제(AlphA－1,4-glucan phosphorylase) (UniProt의 단백질 액세션 번호 B5DG55, DNA 액세션 번호 ACH70729.1) (아미노산 서열：서열번호 10, 그것을 코드하는 염기 서열：서열번호 9)
스포트 4：엘론게이션 팩터 2(Elongation factor 2) (UniProt의 단백질 액세션 번호 C0H9N2, DNA 액세션 번호 ACN10751.1) (아미노산 서열：서열번호 19, 그것을 코드하는 염기 서열：서열번호 18)
스포트 5：히트 쇼크 코그네이트 70kDa 프로테인(Heat shock cognate 70kDa protein) (UniProt의 단백질 액세션 번호 B5X3U6, DNA 액세션 번호 ACI33977.1) (아미노산 서열：서열번호 26, 그것을 코드하는 염기 서열：서열번호 25)
스포트 6：세로트란스페린(Serotransferrin) (UniProt의 단백질 액세션 번호 P79815, DNA 액세션 번호 BAA13759.1) (아미노산 서열：서열번호 33, 그것을 코드하는 염기 서열：서열번호 32)
스포트 7：미오신 바인딩 프로테인 H－라이크(Myosin binding protein H-like) (UniProt의 단백질 액세션 번호 B5DG45, DNA 액세션 번호 ACH70719.1) (아미노산 서열：서열번호 43, 그것을 코드하는 염기 서열：서열번호 42)
스포트 8：데스민(프래그먼트) (Desmin (Fragment)) (UniProt의 단백질 액세션 번호 Q8UWF1, DNA 액세션 번호 CAC83053.1) (아미노산 서열：서열번호 56, 그것을 코드하는 염기 서열：서열번호 55)
스포트 9：캡핑 프로테인(액틴 필라멘트) 머슬 Z－라인 베타(Capping protein (Actin filament) muscle Z-line beta) (UniProt의 단백질 액세션 번호 B5DFX6, DNA 액세션 번호 ACH70650.1) (아미노산 서열：서열번호 61, 그것을 코드하는 염기 서열：서열번호 60)
실시예 4：다른 어종(魚種)에서의 항원 확인(1)
연어 이외의 전갱이, 붕장어, 감성돔, 고등어, 도미, 대구, 방어, 뱀장어, 및 넙치의 9종의 생선의 몸을 이용하여, 실시예 1 및 실시예 2에 기재한 순서와 동일한 순서에 의해, 항원의 확인을 실시했다.
생선 알레르기 환자 1의 혈청을 사용한 이무노블로트를, 대조인 비(非)생선 알레르기 피험자의 혈청을 사용한 이무노블로트와 비교했다. 9종의 생선의 몸 각각에 포함되는 단백질에 관하여 생선 알레르기 환자 1의 혈청을 사용해서 실시한 이무노블로트(도 2)에 있어서, 비생선 알레르기 피험자의 혈청을 사용한 경우(도 3) 와는 달리, 연어에서 얻어진 9개의 스포트의 일부에 상당하는 스포트가 검출되었다.
각각의 어종에서 검출된 스포트는 이하와 같다.
전갱이：스포트 1, 3~5, 8, 및 9
붕장어：스포트 1, 3, 5, 및 9
감성돔：스포트 1~6, 8, 및 9
고등어：스포트 1, 3, 5, 8, 및 9
도미：스포트 1, 3~6, 8, 및 9
대구：스포트 1, 3, 5, 7~9
방어：스포트 1, 3~5, 8, 9
뱀장어：스포트 1, 3, 4, 6, 9
넙치：스포트 1, 4, 6
실시예 5： 이무노블로트에서의 항원 확인(2)
실시예 2와 동일하게, 생선 알레르기 환자의 혈청을 사용한 이무노블로트를, 대조인 비생선 알레르기 피험자의 혈청을 사용한 이무노블로트와 비교했다. 연어의 몸에 포함되는 단백질에 관하여 생선 알레르기 환자 2의 혈청을 사용해서 실시한 이무노블로트(도 1b 좌측 도면)에 있어서, 실시예 2에서 검출된 9개의 스포트 중 7개(스포트 1~6, 9) 외, 비생선 알레르기 피험자의 혈청을 사용한 경우(도 3)와는 상이하고, 또한 공지의 연어 알레르겐 단백질과는 상이한 3개의 스포트(스포트 11, 12, 14)가 새롭게 검출되었다. 검출된 합계 10의 스포트를 이무노블로트 상에 나타낸다(도 1b 좌측 도면).
새롭게 검출된 상기 3개의 스포트의 분자량 및 등전점은 각각 이하와 같다.
스포트 11：분자량 90~110, pI6.5~7.0
스포트 12：분자량 120~140, pI5.0~6.0
스포트 14：분자량 30~40, pI6.5~7.5
실시예 6：질량 분석 및 항원의 동정(2)
실시예 3과 동일하게, 새롭게 검출된 상기의 3개의 스포트를 발생시키는 항원에 관하여, 질량 분석에 의한 아미노산 서열의 동정을 실시했다.
각 스포트에 관하여, 질량 분석을 실시했던바, 이하의 아미노산 서열이 검출되었다.
스포트 11：서열번호 111~119로 나타내는 아미노산 서열
스포트 12：서열번호 122~136으로 나타내는 아미노산 서열
스포트 14：서열번호 145~149로 나타내는 아미노산 서열
또한, 각 스포트에 관하여, 질량 분석계로부터 얻어진 질량 데이터를 NCBI로 해석했던바, 각각의 스포트는 이하의 단백질인 것이 동정되었다.
스포트 11：글리코겐 포스포릴라아제, 머슬 폼-라이크(glycogen phosphorylase, muscle form-like) (NCBI의 단백질 액세션 번호 XP_013984904.1, DNA 액세션 번호 XM_014129429.1) (아미노산 서열：서열번호 110, 그것을 코드하는 염기 서열：서열번호 109)
스포트 12：미오신 바인딩 프로테인 C, 패스트-타입-라이크(myosin-binding protein C, fast-type-like) (NCBI의 단백질 액세션 번호 XP_014014310.1, DNA 액세션 번호 XM_014158835.1) (아미노산 서열：서열번호 121, 그것을 코드하는 염기 서열：서열번호 120)
스포트 14：L－락테이트데히드로게나아제 A 체인-라이크(L-lactate dehydrogenase A chain-like) (NCBI의 단백질 액세션 번호 XP_014003141.1, DNA 액세션 번호 XM_014147666.1) (아미노산 서열：서열번호 144, 그것을 코드하는 염기 서열：서열번호 143)
실시예 7： 이무노블로트에서의 항원 확인(3)
실시예 2와 동일하게, 생선 알레르기 환자의 혈청을 사용한 이무노블로트를, 대조인 비생선 알레르기 피험자의 혈청을 사용한 이무노블로트와 비교했다. 연어의 몸에 포함되는 단백질에 관하여 생선 알레르기 환자 3의 혈청을 사용해서 실시한 이무노블로트(도 1b 우측 도면)에 있어서, 실시예 2에서 검출된 9개의 스포트 중 2개(스포트 7, 8)외, 비생선 알레르기 피험자의 혈청을 사용한 경우(도 3)와는 상이하고, 또한 공지의 연어 알레르겐 단백질과는 상이한 2개의 스포트(스포트 10, 13)가 새롭게 검출되었다. 검출된 합계 4개의 스포트를 이무노블로트 상에 나타낸다(도 1b 우측 도면).
새롭게 검출된 상기 2개의 스포트의 분자량 및 등전점은 각각 이하와 같다.
스포트 10：분자량 200~230, pI4.5~5.5
스포트 13：분자량 45~55, pI4.0~5.5
실시예 8：질량 분석 및 항원의 동정(3)
실시예 3과 동일하게, 새롭게 검출된 상기의 2개의 스포트를 발생시키는 항원에 관하여, 질량 분석에 의한 아미노산 서열의 동정을 실시했다.
각 스포트에 관하여, 질량 분석을 실시했던바, 이하의 아미노산 서열이 검출되었다.
스포트 10：서열번호 71~108로 나타내는 아미노산 서열
스포트 13：서열번호 139~142로 나타내는 아미노산 서열
또한, 각 스포트에 관하여, 질량 분석계로부터 얻어진 질량 데이터를 NCBI로 해석했던바, 각각의 스포트는 이하의 단백질인 것이 동정되었다.
스포트 10：미오신 헤비 체인, 패스트 스켈레탈 머슬-라이크(myosin heavy chain, fast skeletal muscle-like) (NCBI의 단백질 액세션 번호 XP_014039990.1, DNA 액세션 번호 XM_014184515.1) (아미노산 서열：서열번호 70, 그것을 코드하는 염기 서열：서열번호 69)
스포트 13：ATP 신타아제 서브유닛 β, 미트콘드리알(ATP synthase subunit beta, mitochondrial) (NCBI의 단백질 액세션 번호 XP_014007238.1, DNA 액세션 번호 XM_014151763.1) (아미노산 서열：서열번호 138, 그것을 코드하는 염기 서열：서열번호 137)
실시예 9：다른 어종에서의 항원 확인(2)
전갱이, 붕장어, 연어, 고등어, 도미, 및 대구의 6종의 생선의 몸을 이용하여, 실시예 4와 동일하게, 항원의 확인을 실시했다. 생선 알레르기 환자 4의 혈청을 사용한 이무노블로트를, 대조인 비생선 알레르기 피험자의 혈청을 사용한 이무노블로트와 비교했다. 6종의 생선의 몸 각각에 포함되는 단백질에 관하여 생선 알레르기 환자 4의 혈청을 사용해서 실시한 이무노블로트(도 4)에 있어서, 비생선 알레르기 피험자의 혈청을 사용한 경우(도 3)와는 달리, 연어에서 생선 알레르기 환자 1~3의 혈청으로 얻어진 합계 14의 스포트의 일부에 상당하는 스포트가 검출되었다.
각각의 어종에서 검출된 스포트는 이하와 같다.
전갱이：스포트 1, 3, 4, 8, 10, 11, 및 14
붕장어：스포트 1, 4, 10, 및 11
연어：스포트 2, 8, 및 10~14
고등어：스포트 4, 8, 10, 11, 13, 및 14
도미：스포트 1, 4, 6, 8, 10, 및 13
대구：스포트 1, 5, 8, 10, 11, 및 13
산업상의 이용 가능성
본 발명에 의해, 생선에 대한 알레르기의 신규 항원, 생선에 대한 알레르기의 진단 방법 및 진단 키트, 해당 항원을 포함하는 의약 조성물, 및 해당 항원이 제거 또는 저감된 생선, 생선알, 해당 생선 혹은 해당 생선알 가공품, 또는 해당 생선알을 낳는 혹은 해당 생선알로부터 태어난 생선을 제공할 수 있다. 본 발명은 또한, 대상물에 있어서의 생선 항원의 유무를 판정하기 위한 테스터를 제공할 수 있다.
SEQUENCE LISTING <110> FUJITA ACADEMY Hoyu Co., Ltd. <120> Antigens that causes allergy to fish <130> FA1621-17013 <150> JP2016-119919 <151> 2016-06-16 <160> 149 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 2685 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PREDICTED: alpha-actinin-3 <400> 1 atgacggcaa tcgaaactca ggtgcaatat ggctcctaca tgacttcgga gcaagtctac 60 atgacccaag aggatgattg ggacagggac cttctgttgg accctgcctg ggagaaacag 120 cagcgcaaga ccttcaccgc ctggtgcaac tctcacctgc gtaaagcggg cacacagatt 180 gagaacattg aggaggactt caggaatggg ctcaagctca tgttgctgtt agaggtcatc 240 tcaggtgaaa ggcttcccaa accagacaaa ggcaaaatgc gtttccacaa aatcgccaac 300 gtgaacaagg ccctggattt catctgcagc aagggagtca agctggtgtc catcggtgcc 360 gaggagattg tggatggtaa tgtgaagatg accctgggga tgatctggac catcattctg 420 cgtttcgcca tccaggacat ctctgtagag gagacctctg ctaaggaggg tctgttgctg 480 tggtgccaga ggaagactgc cccctacagg aatgtcaatg tgcagaactt ccacatcagt 540 tggaaggatg gcctggcact gtgtgccctc atccacagac acagacctga cctcattgac 600 tactccaaac 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agctggaaca gcaagtggac gaccttgagg gttctctgga gcaagagaag 3120 aagctccgca tggaccttga gagatccaag agaaagctgg agggagatct gaaactggcc 3180 caggagtcca taatggacct ggagaatgac aagcagcaag ctgatgagaa aatcaagaag 3240 aaggagtttg agaccactca gctcctcagc aaggttgagg atgagcagtc tctgggagct 3300 cagctgcaga agaagatcaa ggaactccag gcccgtattg aggaactgga ggaggaaatt 3360 gaggctgagc gtgctgccag ggctaaggtt gagaagcaga gggctgatct ctccagggaa 3420 cttgaggaga tcagcgagag gctggaggag gccggaggcg ccactgctgc tcagattgag 3480 atgaacaaga agcgtgaggc tgagttccag aagctgcgtc gtgatcttga agagtccacc 3540 ctgcagcatg aggccacagc cgccgctctg cgcaagaagc aggccgacag tgtggctgag 3600 ctcggggagc agatcgacaa cctgcagcgc gtcaagcaga agctggagaa ggagaagagc 3660 gagtacaaga tggagattga tgacctctcc agcaacatgg aggccgttgc caaggctaag 3720 ggcaatctag agaagatgtg ccgtactctt gaggaccagc tgagcgagct caagactaag 3780 aatgatgaga atgttcgcca ggtcaacgac atcagcggac agagggccag actcctgaca 3840 gaaaatggtg agtttggtag gcagctggag gagaaggaag ccctggtgtc tcagctgacc 3900 agaggcaaac 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tcaagaggaa cagccagagg atggttgact ccatgcagag caccctggac 4800 tctgaggtca ggagcaggaa tgatgccctg agggtgaaga agaagatgga gggagacctg 4860 aacgagatgg agatccagct gagccactcc aacaggcagg ccgctgaggc ccagaaacag 4920 ctgaggaatg tccagggaca gctcaaggat gcccaattgc accttgatga tgccgtccgt 4980 gtcgcagagg acatgaagga gcaggcagcc atggtggagc gcagaaacgg tctgatggtg 5040 gctgagatcg aggagctgag agttgctctg gagcagacag agagaggccg caaagtggct 5100 gagactgagc tggtagacgc cagcgagcgt gttggactgc tgcactccca gaacaccagc 5160 cttctgaaca ccaagaagaa gctggagact gacctggtgc aggtgcaggg agaggtggat 5220 gacatcgtcc aggaggccag gaatgcagaa gagaaggcca agaaggcaat cactgatgcg 5280 gcaatgatgg ctgaggagct gaagaaggag caggacacca gctctcacct ggagagaatg 5340 aagaagaacc tggagatcac agtcaaggac ctgcagcacc gcctggatga ggctgagaat 5400 ctggccatga agggaggcaa gaaacaactc cagaaactgg aatccagggt gcgtgagctt 5460 gagactgagg tggaggctga gcagagaaga ggtgtagacg cggtaaaggg agtccgcaag 5520 tatgagcgca gagtcaagga gctcacttac cagactgagg aggataagaa gaatgttaac 5580 agacttcagg acctggtaga taagctgcag atgaaagtga aggcctacaa gaggcacgct 5640 gaggaagcgg aggaagcagc aaaccagcac atgtctaagt tcaggaaggt tcagcatgag 5700 ctggaggagg ctgaggagcg tgctgacatc gctgagactc aggtcaacaa gctcagagcc 5760 aagacccgtg actctggaaa gggaaaagaa gttgctgaa 5799 <210> 70 <211> 1933 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin heavy chain, fast skeletal muscle-like <400> 70 Met Ser Thr Asp Ala Glu Met Gln Val Tyr Gly Lys Ala Ala Ile Tyr 1 5 10 15 Leu Arg Lys Ser Glu Lys Glu Arg Met Glu Ala Gln Ala Met Pro Phe 20 25 30 Asp Ser Lys Asn Ala Cys Tyr Val Thr Asp Lys Val Glu Leu Tyr Leu 35 40 45 Lys Gly Leu Val Thr Ala Arg Ala Asp Gly Lys Cys Thr Val Thr Ala 50 55 60 Leu Asp Phe Arg Glu Gly Lys Glu Phe Lys Asp Ala Asp Ile Tyr Glu 65 70 75 80 Met Asn Pro Pro Lys Tyr Asp Lys Ile Glu Asp Met Ala Met Met Thr 85 90 95 Tyr Leu Asn Glu Ala Ser Val Leu Tyr Asn Leu Lys Glu Arg Tyr Ala 100 105 110 Ala Trp Met Ile Tyr Thr Tyr Ser Gly Leu Phe Cys Ala Thr Val Asn 115 120 125 Pro Tyr Lys Trp Leu Pro Val Tyr 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<400> 82 Gly Leu Val Thr Ala Arg Ala Asp Gly Lys 1 5 10 <210> 83 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin heavy chain, fast skeletal muscle-like fragment <400> 83 Gly Gln Thr Val Ala Gln Val Asn Asn Ser Val Ser Ala Leu Ala Lys 1 5 10 15 <210> 84 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin heavy chain, fast skeletal muscle-like fragment <400> 84 Ile Lys Pro Leu Leu Gln Ser Ala Glu Thr Glu Lys 1 5 10 <210> 85 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin heavy chain, fast skeletal muscle-like fragment <400> 85 Ile Leu Ala Ala Leu Tyr Pro Pro Pro Pro Pro Glu Asp Lys 1 5 10 <210> 86 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin heavy chain, fast skeletal muscle-like fragment <400> 86 Ile Leu Arg Val Gln Leu Glu Leu Asn Gln Ile Lys 1 5 10 <210> 87 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin heavy chain, fast skeletal muscle-like fragment <400> 87 Leu Ala Gln Arg Leu Gln Asp Ala Glu Glu Thr Ile 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muscle-like fragment <400> 92 Leu Thr Gly Ala Val Val His His Gly Asn Leu Lys 1 5 10 <210> 93 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin heavy chain, fast skeletal muscle-like fragment <400> 93 Asn Asp Glu Asn Val Arg Gln Val Asn Asp Ile Ser Gly Gln Arg Ala 1 5 10 15 Arg Leu Leu Thr Glu Asn Gly Glu Phe Gly Arg Gln Leu Glu Glu Lys 20 25 30 <210> 94 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin heavy chain, fast skeletal muscle-like fragment <400> 94 Asn Leu Glu Ile Thr Val Lys 1 5 <210> 95 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin heavy chain, fast skeletal muscle-like fragment <400> 95 Asn Leu Gln Gln Glu Ile Ser Asp Leu Thr Glu Gln Ile Gly Glu Thr 1 5 10 15 Gly Lys <210> 96 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin heavy chain, fast skeletal muscle-like fragment <400> 96 Asn Ser Tyr Glu Glu Ala Leu Asp His Leu Glu Thr Leu Lys 1 5 10 <210> 97 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin heavy chain, fast skeletal muscle-like fragment <400> 97 Gln Ala Asp Ser Val Ala Glu Leu Gly Glu Gln Ile Asp Asn Leu Gln 1 5 10 15 Arg Val Lys <210> 98 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin heavy chain, fast skeletal muscle-like fragment <400> 98 Gln Ala Phe Thr Gln Gln Val Glu Glu Leu Lys 1 5 10 <210> 99 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin heavy chain, fast skeletal muscle-like fragment <400> 99 Gln Arg Glu Glu Gln Ala Glu Pro Asp Gly Thr Glu Val Ala Asp Lys 1 5 10 15 <210> 100 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin heavy chain, fast skeletal muscle-like fragment <400> 100 Arg Ala Ile Glu Glu Glu Val Lys 1 5 <210> 101 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin heavy chain, fast skeletal muscle-like fragment <400> 101 Ser Glu Ile Gln Thr Ala Leu Glu Glu Ala Glu Gly Thr Leu Glu His 1 5 10 15 Glu Glu Ser Lys 20 <210> 102 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin heavy chain, fast skeletal muscle-like fragment <400> 102 Thr Val Arg Asn Asp Asn Ser Ser Arg Phe Gly Lys 1 5 10 <210> 103 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin heavy chain, fast skeletal muscle-like fragment <400> 103 Val Ala Glu Thr Glu Leu Val Asp Ala Ser Glu Arg Val Gly Leu Leu 1 5 10 15 His Ser Gln Asn Thr Ser Leu Leu Asn Thr Lys 20 25 <210> 104 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin heavy chain, fast skeletal muscle-like fragment <400> 104 Val Glu Asp Glu Gln Ser Leu Gly Ala Gln Leu Gln Lys 1 5 10 <210> 105 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin heavy chain, fast skeletal muscle-like fragment <400> 105 Val Gly Asn Glu Tyr Val Thr Lys 1 5 <210> 106 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin heavy chain, fast skeletal muscle-like fragment <400> 106 Val Gln His Glu Leu Glu Glu Ala Glu Glu Arg Ala Asp Ile Ala Glu 1 5 10 15 Thr Gln Val Asn Lys 20 <210> 107 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin heavy chain, fast skeletal muscle-like fragment <400> 107 Tyr Glu Glu Gly Gln Ala Glu Leu Glu Gly Ala Gln Lys 1 5 10 <210> 108 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin heavy chain, fast skeletal muscle-like fragment <400> 108 Tyr Glu Thr Asp Ala Ile Gln Arg Thr Glu Glu Leu Glu Glu Ala Lys 1 5 10 15 <210> 109 <211> 2532 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> glycogen phosphorylase, muscle form-like <400> 109 atgtcaaaac cattgtcaga ccacgataaa aggaagcaga tctccgtgag aggtcttgct 60 ggtgtggaaa atgtcgcaga actgaaggtc gctttcaaca ggcatctcca ttttacactg 120 gtcaaggaca gaaatgtggc aaacaaacgg gattactact ttgctctcgc caacaccgtg 180 cgtgaccact tggtgggcag gtggatcaga acccagcagt actactatga gaaagatccc 240 aaacgtgtgt actacatctc cctggagttt tatatgggtc gcaccctgca gaacactatg 300 gtgaacctgg ccctggagaa cgcttgtgat gaggccatat accagctggg tctggacatg 360 gaggagctgg aggacatgga agaggatgct ggcctgggaa acggtggtct tggccgtctt 420 gccgcatgct tcctggactc aatggcttct ctaggccttg ctgcctatgg ctatggtatc 480 cgctatgagt ttggcatctt caatcagaag atcgtcaatg gctggcaggt tgaggaggcc 540 gatgattggt tgcgttacgg caacccctgg gagaaggccc gccctgagta catgcgcccc 600 gtcaagttct atggcaggac cgagcacacc ccagatggtg tgaaatgggt tgacactcag 660 gtagtgttgg ctctgccata tgacacccct attcccggct acagaaacaa cattgtcaac 720 accatgagac tgtggtctgc taaggcccca tgcgacttca acctgaaaga cttcaacgtt 780 ggtggctaca ttcaggctgt gttggacaga aacttgtgtg agaacatttc ccgcgtgctg 840 taccccaatg ataatttctt tgagggcaag gagctgcgtc tgaagcagga gtactttgtg 900 gtggccgcca ctctgcagga cgtcgtccgt cgtttcaagg cctctaagtt tggctccaga 960 gagattgtcc gcacagactt cgccgagcta ccaaacaaag ttgccatcca gctgaatgac 1020 actcaccctg ccatggctat tcctgagctg atgagggtcc tggttgatga ggagaagctg 1080 ggttgggaca aggcctggga cgtgtgtgtc cgtacctgtg cctacacaaa ccacaccgtg 1140 ctgcctgagg ccctggagcg ctggcccatt gacctgttcc atcacctgct gccacgtcac 1200 ctggagatca tctacgagat caaccgtcgc ttcatggagt atgttgcctc gaagttccct 1260 ggagacaacg accgtctgcg tcgcatgtcc ctgattgagg agggaggatg caagaaagtc 1320 aacatggctc atctgtgtat cgttggttcc catgctgtca acggcgtggc ccgcatccac 1380 tctgagatcc tcatcgccac tctgttcaag gacttctatg agttggaccc acacaagttt 1440 cagaacaaga ccaatgggat caccccccgt cgctggctgg ttatgtgcaa ccccggcttg 1500 gcggaggtca tcgcagagaa aattggagag gagtttatcc gtgaccttga ccagcttaag 1560 cgactgttga agttcgttaa tgatgatgct ttcatccgtg acatcgccaa agtcaagcag 1620 gagaacaagc tgaagttcgc tgtgcacctg gaagagcact acaaggtcaa gatcaacccc 1680 cagtccatgt ttgacttcca agtcaaaaga atccacgagt acaaaagaca gctgctcaac 1740 tgtctgcaca tgatcaccta ctacaaccgt atcaagaagg agcccaacaa gcactggacc 1800 ccaagaacca tcatggtcgg aggaaaggct gcaccaggct accacacagc caagatgatc 1860 atccgtctca tcacagctat cggtgaggtt gtcaaccacg accccgttgt cggcgaccgc 1920 ctcaaagtta tcttcctgga gaactacaga gtcaccctgg ctgagaaagc catcccctct 1980 gccgacctgt ctgagcagat ctctacagct ggcaccgagg cctctggcac tggtaacatg 2040 aagttcatgc tgaacggtgc tcttaccatt ggcaccatgg atggagccaa tgtggagatg 2100 gccgaggagg ccggagagga aaacttcttc atcttcggta tgagagtgga ggatgtggac 2160 gcaatggacg ccggcaaagg ataccacgcc tctgagtact acaaccgtat tcccgagctg 2220 aagcaggcca tggaccagat tgctggcggc ttcttcagtc ccaagcagcc tgacctcttc 2280 aaggaacttg tggacctgct gatgcaccat gacaggttca aggtgtttgc tgactacgaa 2340 gcctacatca aatgccagga caaggtcaac caactgtaca agaatcccaa ggaatggacc 2400 aagatggtga tccataacat tgcgggctgt ggtaaattct ccagcgaccg caccattgcc 2460 cagtacgccc gagagatctg gggcatggag cccagcctgg agaagatccc tgcccccgat 2520 gagaaactca aa 2532 <210> 110 <211> 844 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> glycogen phosphorylase, muscle form-like <400> 110 Met Ser Lys Pro Leu Ser Asp His Asp Lys Arg Lys Gln Ile Ser Val 1 5 10 15 Arg Gly Leu Ala Gly Val Glu Asn Val Ala Glu Leu Lys Val Ala Phe 20 25 30 Asn Arg His Leu His Phe Thr Leu Val Lys Asp Arg Asn Val Ala Asn 35 40 45 Lys Arg Asp Tyr Tyr Phe Ala Leu Ala Asn Thr Val Arg Asp His Leu 50 55 60 Val Gly Arg Trp Ile Arg Thr Gln Gln Tyr Tyr Tyr Glu Lys Asp Pro 65 70 75 80 Lys Arg Val Tyr Tyr Ile Ser Leu Glu Phe Tyr Met Gly Arg Thr Leu 85 90 95 Gln Asn Thr Met Val Asn Leu Ala Leu Glu Asn Ala Cys Asp Glu Ala 100 105 110 Ile Tyr Gln Leu Gly Leu Asp Met Glu Glu Leu Glu Asp Met Glu Glu 115 120 125 Asp Ala Gly Leu Gly Asn Gly Gly Leu Gly Arg Leu Ala Ala Cys Phe 130 135 140 Leu Asp Ser Met Ala Ser Leu Gly Leu Ala Ala Tyr Gly Tyr Gly Ile 145 150 155 160 Arg Tyr Glu Phe Gly Ile Phe Asn Gln Lys Ile Val Asn Gly Trp Gln 165 170 175 Val Glu Glu Ala Asp Asp Trp Leu Arg Tyr Gly Asn Pro Trp Glu Lys 180 185 190 Ala Arg Pro Glu Tyr Met Arg Pro Val Lys Phe Tyr Gly Arg Thr Glu 195 200 205 His Thr Pro Asp Gly Val Lys Trp Val Asp Thr Gln Val Val Leu Ala 210 215 220 Leu Pro Tyr Asp Thr Pro Ile Pro Gly Tyr Arg Asn Asn Ile Val Asn 225 230 235 240 Thr Met Arg Leu Trp Ser Ala Lys Ala Pro Cys Asp Phe Asn Leu Lys 245 250 255 Asp Phe Asn Val Gly Gly Tyr Ile Gln Ala Val Leu Asp Arg Asn Leu 260 265 270 Cys Glu Asn Ile Ser Arg Val Leu Tyr Pro Asn Asp Asn Phe Phe Glu 275 280 285 Gly Lys Glu Leu Arg Leu Lys Gln Glu Tyr Phe Val 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Gly Glu Glu Phe 500 505 510 Ile Arg Asp Leu Asp Gln Leu Lys Arg Leu Leu Lys Phe Val Asn Asp 515 520 525 Asp Ala Phe Ile Arg Asp Ile Ala Lys Val Lys Gln Glu Asn Lys Leu 530 535 540 Lys Phe Ala Val His Leu Glu Glu His Tyr Lys Val Lys Ile Asn Pro 545 550 555 560 Gln Ser Met Phe Asp Phe Gln Val Lys Arg Ile His Glu Tyr Lys Arg 565 570 575 Gln Leu Leu Asn Cys Leu His Met Ile Thr Tyr Tyr Asn Arg Ile Lys 580 585 590 Lys Glu Pro Asn Lys His Trp Thr Pro Arg Thr Ile Met Val Gly Gly 595 600 605 Lys Ala Ala Pro Gly Tyr His Thr Ala Lys Met Ile Ile Arg Leu Ile 610 615 620 Thr Ala Ile Gly Glu Val Val Asn His Asp Pro Val Val Gly Asp Arg 625 630 635 640 Leu Lys Val Ile Phe Leu Glu Asn Tyr Arg Val Thr Leu Ala Glu Lys 645 650 655 Ala Ile Pro Ser Ala Asp Leu Ser Glu Gln Ile Ser Thr Ala Gly Thr 660 665 670 Glu Ala Ser Gly Thr Gly Asn Met Lys Phe Met Leu Asn Gly Ala Leu 675 680 685 Thr Ile Gly Thr Met Asp Gly Ala Asn Val Glu Met Ala Glu Glu Ala 690 695 700 Gly Glu Glu Asn Phe Phe Ile Phe Gly Met Arg Val Glu 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Artificial Sequence <220> <223> glycogen phosphorylase, muscle form-like fragment <400> 113 Phe Tyr Gly Arg Thr Glu His Thr Pro Asp Gly Val Lys 1 5 10 <210> 114 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> glycogen phosphorylase, muscle form-like fragment <400> 114 Gly Tyr His Ala Ser Glu Tyr Tyr Asn Arg Ile Pro Glu Leu Lys 1 5 10 15 <210> 115 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> glycogen phosphorylase, muscle form-like fragment <400> 115 Ile Gly Glu Glu Phe Ile Arg Asp Leu Asp Gln Leu Lys 1 5 10 <210> 116 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> glycogen phosphorylase, muscle form-like fragment <400> 116 Gln Ala Met Asp Gln Ile Ala Gly Gly Phe Phe Ser Pro Lys 1 5 10 <210> 117 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> glycogen phosphorylase, muscle form-like fragment <400> 117 Gln Ile Ser Val Arg Gly Leu Ala Gly Val Glu Asn Val Ala Glu Leu 1 5 10 15 Lys <210> 118 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> glycogen phosphorylase, muscle form-like fragment <400> 118 Val Phe Ala Asp Tyr Glu Ala Tyr Ile Lys 1 5 10 <210> 119 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> glycogen phosphorylase, muscle form-like fragment <400> 119 Val Ile Phe Leu Glu Asn Tyr Arg Val Thr Leu Ala Glu Lys 1 5 10 <210> 120 <211> 3399 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin-binding protein C, fast-type-like <400> 120 atgcctgaag ccgctgatgc agtgaagccg gagggcgagg agggagaagc accagcagaa 60 gccgaagaaa atactgcaga agatgatgag ccactgcctg aaggagagga gggtgcccat 120 cagtcacagg agattacagg actgtttctt cagcaccctg agactacggt tgccataaca 180 ggtacggaca ttgtgtttac tgccaaagtg gactctacta cactatcaag gaaacccacc 240 attaaatggc tgaaggggaa gtggctggac ctgggcagca aagcaggaaa acacatgcag 300 ttcaaagaga cttttgacag agccacaaag atctacacct gggacatgaa gataatcaag 360 gtggtccctg gtgacgctgg ggcctacagg tgtgaggtca cctccaaaga caagtgtgac 420 agcagcgctt tcgacatctc cgtggaggct gtgcaaattg aggaggaaca tgattctttg 480 gccgcattca aaagaacgga tgctggagag gatgaaggca gtttggattt cagtgctttg 540 ctgaaagcta ccaagaagaa gaagaagcca gtcgtagatg aggagaaggc agacgtgtgg 600 gaaatcctga agaacgctca acccagcgag tatgagaaga ttgcttttga gtacggcatt 660 acagacctga ggggtctgct caagcgactg aagaagatga agactgttga gcccaagcac 720 agcgacgctt tcctaaagag aatggagtct gcctactctg tggataaggg caagaaaatc 780 gtactgcagg tggaagtggt tgacccaaat gcccaggtca aatggttgaa gaacggtcag 840 gagataaaat catcagccaa gtacatcata gaatcagttg gcaacatcag gacgctcacc 900 atcaacaagt gtagcctggc tgacgacgct gcgtacgagt gtgtgattgg ggaagagaag 960 tccttcacag aggtgtttgt caaagagccc ccggtcacca tcaccaagct gctggatgat 1020 taccacgtgg tggtgggaga gagagtggag tttgaggtgg aggtgtctgt ggagggagca 1080 cacgttaact ggatgtttga ggaccaagaa ctctccaggg acacccataa gtaccgcttt 1140 aagaaggacg ggttgaagca catgctcatc atccaagagg ctacgctgga tgacattgga 1200 atgtactggt gcttcaccaa cggcgggcga accaaaggag agctagaagt tgaagagaaa 1260 gaactggagg tgttgcagaa catcgctgac ctgacggtga aggccgagga ccaggccatg 1320 ttcaagtgtg aggtgtctga tgagaaggta acagggaaat ggctcaaaga tggcgtggag 1380 gtgctgccca gcagtcgcat caagctgacc cacatcggaa gaatccatcg gcttaccata 1440 gacgacgtca agcccgagga cgctggagac tataccttta tcccagacgg atatgccctc 1500 tcactgtccg ccaaactcaa cttcctggaa attaagatcg actatgtccc ccgccaagag 1560 ccacccaaga tccatctaga caccaccggc aacatggttt cccagaacac catcattgtg 1620 gtggctggca acaagctgcg cctggacgtg gagatctctg gagagcctcc tcccactgtc 1680 gtctgggcaa agggagacac ggcaatcaca gctgtggagg ggcgtgtgag gactgagagc 1740 cggaaggacc tgagctgctt cgtcatagag ggggcagaga gagaggatga gggcaactac 1800 accatcattg tcaccaaccc tgccggagag gacaaggctc atctgtttgt caagattgtt 1860 gatgtgcctg actgccctga gaatgtaaag tgtacctcgg tgggagaaga ctgtgccacc 1920 atggtctggg acccacccaa gttcgacgga ggcgcaccag tcacaggcta tctcatggag 1980 aggaagaaga agggctccac caggtggacg aagctcaact ttgacgtgta cgagggggtg 2040 acgtacgaag ccaagaggat gattgagggc gtgctctacg agatgagagt gtacgccgtc 2100 aatggcattg gcatgtccca gcccagcctc aattccaaac ccttcatgcc catcgctgca 2160 accagtgagc ctctgggcct caaggtgcat gatgtcacag acaccacatg taccctgaag 2220 tggctggccc ctgagaagat cggtgccgga ggcctggacg gatacgttat tgagtactgc 2280 aaggagggag acacggagtg ggtggtggcg aacactgagc tggtggagag acagaattac 2340 acagtccgca acctccccac cgcggagaag atcaacttca gagtggtggc cgtgaacatt 2400 gctggacgca gcccccctac cggcctgagc cagcccgtca ctatccgcga gatcgtggaa 2460 ctgcccaaga tccgcctccc tcgctacttg agacagaagt acattagaag agtgggcgac 2520 aaaatcaacc tgaccatccc cttccagggt aagccacgtc ccaaagtgca atggtacaag 2580 gatggggaag agcttgacac tcgagttgcc agcatacgca attccgaagt ggactctatc 2640 ctgttcatcc gctcggctga gagatcccac tctgggaagt acgagttggt cctgcagatt 2700 gagaacatgg aggccagggc tattctggaa atcaggatcg tagaggcacc tgggcctccc 2760 gaggtagtga aggtcacaga cgtttggggc ttcaacgctg cgctggagtg gaagccaccg 2820 aaggacgacg gcaactgcga gatcaccggt tacacaatac agaaggcgga caagaagaca 2880 aatgaatggt tcactatcta cgagcacaac aggaggacaa actgcacagc ctcagacctg 2940 atcatgggaa atgagtacat gttccgtgtc ttcagcgaga acctcgttgg aaagagtgag 3000 gatttctgcc tcagcaagga cacagccatc atacctaaga taggattgga gtacaaccca 3060 cctccattca aggagaagga tatgcaaagc gcccccaagt tcatacagcc cctgcttgac 3120 aggtctgtgg tggcaggcta cagtaccacc atcagctctg ctgtcaagac ttgtcctaaa 3180 cctaagatca ggtggttgag gaataagatt cccctggacg agaaccctag gttcctgatg 3240 cagaacaacc agggggtttt gaccctgaac atccgcaagc ccagtcagta tgacgggggc 3300 aagttcacct gcaaggctat caactctttg ggggaggacg tcgtggagtg caccctactc 3360 gtacgagctc tcaaggacaa ggaagatgga gacgagaaa 3399 <210> 121 <211> 1133 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin-binding protein C, fast-type-like <400> 121 Met Pro Glu Ala Ala Asp Ala Val Lys Pro Glu Gly Glu Glu Gly Glu 1 5 10 15 Ala Pro Ala Glu Ala Glu Glu Asn Thr Ala Glu Asp Asp Glu Pro Leu 20 25 30 Pro Glu Gly Glu Glu Gly Ala His Gln Ser Gln Glu Ile Thr Gly Leu 35 40 45 Phe Leu Gln His Pro Glu Thr Thr Val Ala Ile Thr Gly Thr Asp Ile 50 55 60 Val Phe Thr Ala Lys Val Asp Ser Thr Thr Leu Ser Arg Lys Pro Thr 65 70 75 80 Ile Lys Trp Leu Lys Gly Lys Trp Leu Asp Leu Gly Ser Lys Ala Gly 85 90 95 Lys His Met Gln Phe Lys Glu Thr Phe Asp Arg Ala Thr Lys Ile Tyr 100 105 110 Thr Trp Asp Met Lys Ile Ile Lys Val Val Pro Gly Asp Ala Gly Ala 115 120 125 Tyr Arg Cys Glu Val Thr Ser Lys Asp Lys Cys Asp Ser Ser Ala Phe 130 135 140 Asp Ile Ser Val Glu Ala Val Gln Ile Glu Glu Glu His Asp Ser Leu 145 150 155 160 Ala Ala Phe Lys Arg Thr Asp Ala Gly Glu Asp Glu Gly Ser Leu Asp 165 170 175 Phe Ser Ala Leu Leu Lys Ala Thr Lys Lys Lys Lys Lys Pro Val Val 180 185 190 Asp Glu Glu Lys Ala Asp Val Trp Glu Ile Leu Lys Asn Ala Gln Pro 195 200 205 Ser Glu Tyr Glu Lys Ile Ala Phe Glu Tyr Gly Ile Thr Asp Leu Arg 210 215 220 Gly Leu Leu Lys Arg Leu Lys Lys Met Lys Thr Val Glu Pro Lys His 225 230 235 240 Ser Asp Ala Phe Leu Lys Arg Met Glu Ser Ala Tyr Ser Val Asp Lys 245 250 255 Gly Lys Lys Ile Val Leu Gln Val Glu Val Val Asp Pro Asn Ala Gln 260 265 270 Val Lys Trp Leu Lys Asn Gly Gln Glu Ile Lys Ser Ser Ala Lys Tyr 275 280 285 Ile Ile Glu Ser Val Gly Asn Ile Arg Thr Leu Thr Ile Asn Lys Cys 290 295 300 Ser Leu Ala Asp Asp Ala Ala Tyr Glu Cys Val Ile Gly Glu Glu Lys 305 310 315 320 Ser Phe Thr Glu Val Phe Val Lys Glu Pro Pro Val Thr Ile Thr Lys 325 330 335 Leu Leu Asp Asp Tyr His Val Val Val Gly Glu Arg Val Glu Phe Glu 340 345 350 Val Glu Val Ser Val Glu Gly Ala His Val Asn Trp Met Phe Glu Asp 355 360 365 Gln Glu Leu Ser Arg Asp Thr His Lys Tyr Arg Phe Lys Lys Asp Gly 370 375 380 Leu Lys His Met Leu Ile Ile Gln Glu Ala Thr Leu Asp Asp Ile Gly 385 390 395 400 Met Tyr Trp Cys Phe Thr Asn Gly Gly Arg Thr Lys Gly Glu Leu Glu 405 410 415 Val Glu Glu Lys Glu Leu Glu Val Leu Gln Asn Ile Ala Asp Leu Thr 420 425 430 Val Lys Ala Glu Asp Gln Ala Met Phe Lys Cys Glu Val Ser Asp Glu 435 440 445 Lys Val Thr Gly Lys Trp Leu Lys Asp Gly Val Glu Val Leu Pro Ser 450 455 460 Ser Arg Ile Lys Leu Thr His Ile Gly Arg Ile His Arg Leu Thr Ile 465 470 475 480 Asp Asp Val Lys Pro Glu Asp Ala Gly Asp Tyr Thr Phe Ile Pro Asp 485 490 495 Gly Tyr Ala Leu Ser Leu Ser Ala Lys Leu Asn Phe Leu Glu Ile Lys 500 505 510 Ile Asp Tyr Val Pro Arg Gln Glu Pro Pro Lys Ile His Leu Asp Thr 515 520 525 Thr Gly Asn Met Val Ser Gln Asn Thr Ile Ile Val Val Ala Gly Asn 530 535 540 Lys Leu Arg Leu Asp Val Glu Ile Ser Gly Glu Pro Pro Pro Thr Val 545 550 555 560 Val Trp Ala Lys Gly Asp Thr Ala Ile Thr Ala Val Glu Gly Arg Val 565 570 575 Arg Thr Glu Ser Arg Lys Asp Leu Ser Cys Phe Val Ile Glu Gly Ala 580 585 590 Glu Arg Glu Asp Glu Gly Asn Tyr Thr Ile Ile Val Thr Asn Pro Ala 595 600 605 Gly Glu Asp Lys Ala His Leu Phe Val Lys Ile Val Asp Val Pro Asp 610 615 620 Cys Pro Glu Asn Val Lys Cys Thr Ser Val Gly Glu Asp Cys Ala Thr 625 630 635 640 Met Val Trp Asp Pro Pro Lys Phe Asp Gly Gly Ala Pro Val Thr Gly 645 650 655 Tyr Leu Met Glu Arg Lys Lys Lys Gly Ser Thr Arg Trp Thr Lys Leu 660 665 670 Asn Phe Asp Val Tyr Glu Gly Val Thr Tyr Glu Ala Lys Arg Met Ile 675 680 685 Glu Gly Val Leu Tyr Glu Met Arg Val Tyr Ala Val Asn Gly Ile Gly 690 695 700 Met Ser Gln Pro Ser Leu Asn Ser Lys Pro Phe Met Pro Ile Ala Ala 705 710 715 720 Thr Ser Glu Pro Leu Gly Leu Lys Val His Asp Val Thr Asp Thr Thr 725 730 735 Cys Thr Leu Lys Trp Leu Ala Pro Glu Lys Ile Gly Ala Gly Gly Leu 740 745 750 Asp Gly Tyr Val Ile Glu Tyr Cys Lys Glu Gly Asp Thr Glu Trp Val 755 760 765 Val Ala Asn Thr Glu Leu Val Glu Arg Gln Asn Tyr Thr Val Arg Asn 770 775 780 Leu Pro Thr Ala Glu Lys Ile Asn Phe Arg Val Val Ala Val Asn Ile 785 790 795 800 Ala Gly Arg Ser Pro Pro Thr Gly Leu Ser Gln Pro Val Thr Ile Arg 805 810 815 Glu Ile Val Glu Leu Pro Lys Ile Arg Leu Pro Arg Tyr Leu Arg Gln 820 825 830 Lys Tyr Ile Arg Arg Val Gly Asp Lys Ile Asn Leu Thr Ile Pro Phe 835 840 845 Gln Gly Lys Pro Arg Pro Lys Val Gln Trp Tyr Lys Asp Gly Glu Glu 850 855 860 Leu Asp Thr Arg Val Ala Ser Ile Arg Asn Ser Glu Val Asp Ser Ile 865 870 875 880 Leu Phe Ile Arg Ser Ala Glu Arg Ser His Ser Gly Lys Tyr Glu Leu 885 890 895 Val Leu Gln Ile Glu Asn Met Glu Ala Arg Ala Ile Leu Glu Ile Arg 900 905 910 Ile Val Glu Ala Pro Gly Pro Pro Glu Val Val Lys Val Thr Asp Val 915 920 925 Trp Gly Phe Asn Ala Ala Leu Glu Trp Lys Pro Pro Lys Asp Asp Gly 930 935 940 Asn Cys Glu Ile Thr Gly Tyr Thr Ile Gln Lys Ala Asp Lys Lys Thr 945 950 955 960 Asn Glu Trp Phe Thr Ile Tyr Glu His Asn Arg Arg Thr Asn Cys Thr 965 970 975 Ala Ser Asp Leu Ile Met Gly Asn Glu Tyr Met Phe Arg Val Phe Ser 980 985 990 Glu Asn Leu Val Gly Lys Ser Glu Asp Phe Cys Leu Ser Lys Asp Thr 995 1000 1005 Ala Ile Ile Pro Lys Ile Gly Leu Glu Tyr Asn Pro Pro Pro Phe 1010 1015 1020 Lys Glu Lys Asp Met Gln Ser Ala Pro Lys Phe Ile Gln Pro Leu 1025 1030 1035 Leu Asp Arg Ser Val Val Ala Gly Tyr Ser Thr Thr Ile Ser Ser 1040 1045 1050 Ala Val Lys Thr Cys Pro Lys Pro Lys Ile Arg Trp Leu Arg Asn 1055 1060 1065 Lys Ile Pro Leu Asp Glu Asn Pro Arg Phe Leu Met Gln Asn Asn 1070 1075 1080 Gln Gly Val Leu Thr Leu Asn Ile Arg Lys Pro Ser Gln Tyr Asp 1085 1090 1095 Gly Gly Lys Phe Thr Cys Lys Ala Ile Asn Ser Leu Gly Glu Asp 1100 1105 1110 Val Val Glu Cys Thr Leu Leu Val Arg Ala Leu Lys Asp Lys Glu 1115 1120 1125 Asp Gly Asp Glu Lys 1130 <210> 122 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin-binding protein C, fast-type-like fragment <400> 122 Ala Asp Val Trp Glu Ile Leu Lys 1 5 <210> 123 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin-binding protein C, fast-type-like fragment <400> 123 Glu Leu Glu Val Leu Gln Asn Ile Ala Asp Leu Thr Val Lys 1 5 10 <210> 124 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin-binding protein C, fast-type-like fragment <400> 124 Glu Pro Pro Val Thr Ile Thr Lys 1 5 <210> 125 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin-binding protein C, fast-type-like fragment <400> 125 Gly Glu Leu Glu Val Glu Glu Lys 1 5 <210> 126 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin-binding protein C, fast-type-like fragment <400> 126 His Ser Asp Ala Phe Leu Lys 1 5 <210> 127 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin-binding protein C, fast-type-like fragment <400> 127 Ile Ala Phe Glu Tyr Gly Ile Thr Asp Leu Arg Gly Leu Leu Lys 1 5 10 15 <210> 128 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin-binding protein C, fast-type-like fragment <400> 128 Ile Gly Leu Glu Tyr Asn Pro Pro Pro Phe Lys 1 5 10 <210> 129 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin-binding protein C, fast-type-like fragment <400> 129 Ile Asn Leu Thr Ile Pro Phe Gln Gly Lys Pro Arg Pro Lys 1 5 10 <210> 130 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin-binding protein C, fast-type-like fragment <400> 130 Ile Val Leu Gln Val Glu Val Val Asp Pro Asn Ala Gln Val Lys 1 5 10 15 <210> 131 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin-binding protein C, fast-type-like fragment <400> 131 Leu Asn Phe Asp Val Tyr Glu Gly Val Thr Tyr Glu Ala Lys 1 5 10 <210> 132 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin-binding protein C, fast-type-like fragment <400> 132 Leu Asn Phe Leu Glu Ile Lys 1 5 <210> 133 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin-binding protein C, fast-type-like fragment <400> 133 Asn Ala Gln Pro Ser Glu Tyr Glu Lys 1 5 <210> 134 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin-binding protein C, fast-type-like fragment <400> 134 Arg Thr Asp Ala Gly Glu Asp Glu Gly Ser Leu Asp Phe Ser Ala Leu 1 5 10 15 Leu Lys <210> 135 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin-binding protein C, fast-type-like fragment <400> 135 Ser Phe Thr Glu Val Phe Val Lys 1 5 <210> 136 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> myosin-binding protein C, fast-type-like fragment <400> 136 Val Asp Ser Thr Thr Leu Ser Arg Lys Pro Thr Ile Lys 1 5 10 <210> 137 <211> 1551 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> ATP synthase subunit beta, mitochondrial <400> 137 atgttaggag ctgtgggacg ctgctgcacc ggggctctcc aggcacttaa gcctggggtc 60 cagcccctga aggcccttgt aggatcgcca tctgtccttg gacgcagaga ctactctgca 120 cctgctgctg ctgccgcctt cgcccatggc aggatcgtag cggtcatcgg tgccgtcgtc 180 gacgtccagt tcgatgaggg cctcccaccc atcctcaatg ccctggaagt tgctgggcgt 240 gagtccaggc tagttctgga ggtggcacag catcttggtg agaacactgt gcgtaccatt 300 gccatggatg gtactgaagg tcttgtccgt ggacagaagg ttgtggacac tggcgatccc 360 atcagaatcc cagtgggtcc cgagacccta ggcagaatca tgaatgtcat tggagagccc 420 attgatgaga gggggccaat ctccaccaag cagactgccg ccatccacgc tgaggcccca 480 gagttcactg acatgagtgt ggagcaggag atcctggtaa ctggcatcaa ggtggtagat 540 ctgctggctc cctatgccaa gggaggcaaa atcggtctgt tcggtggtgc tggtgtgggc 600 aagactgtgt tgatcatgga gctgatcaac aatgtggcca aggcccatgg tggttactct 660 gtgtttgccg gagtgggaga gcgtacccgc gagggaaatg acttgtacca cgagatgatt 720 gagtcgggtg tcatcaacct gaaggatgac acctccaagg tggcgctggt gtacggacaa 780 atgaacgagc ccccaggcgc ccgtgcccgt gtggctctga ctggtctgac cgtggcagag 840 tatttccgtg accaggaggg tcaggatgtg ctgctcttca tcgataacat cttccgtttc 900 acccaggctg gctccgaggt gtctgccctg ctgggtcgta tcccctccgc tgtgggttac 960 cagcccaccc tggccactga catgggtacc atgcaggaga gaatcaccac caccaagaag 1020 ggttccatca cctctgtgca ggccatctat gtgccggctg acgatttgac tgatcccgcc 1080 cctgccacca ccttcgctca cttggacgcc accactgtgc tgtcccgtgc aatcgctgag 1140 ctgggtatct accctgctgt ggatcccctg gattccacct cccgtatcat ggaccccaac 1200 attgtcggcg ctgagcacta tgatgttgct cgtggcgtgc agaagatcct ccaggactac 1260 aagtccctgc aggatatcat tgccatcctg ggtatggatg agttgtctga ggaggacaag 1320 ctgattgtct ctcgcgcccg caagatccag cgtttcctgt cccagccctt ccaggtggcg 1380 gaggtattca ccggtcatgc tggcaagctg gtgccactca aggagaccat cagtggcttc 1440 cagagcattc taaatggtga gtacgatgcc ctgcccgagc aggctttcta catggttgga 1500 cccatcgagg aggtggttga gaaggctgca cagatggcca aggatctcgc a 1551 <210> 138 <211> 517 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ATP synthase subunit beta, mitochondrial <400> 138 Met Leu Gly Ala Val Gly Arg Cys Cys Thr Gly Ala Leu Gln Ala Leu 1 5 10 15 Lys Pro Gly Val Gln Pro Leu Lys Ala Leu Val Gly Ser Pro Ser Val 20 25 30 Leu Gly Arg Arg Asp Tyr Ser Ala Pro Ala Ala Ala Ala Ala Phe Ala 35 40 45 His Gly Arg Ile Val Ala Val Ile Gly Ala Val Val Asp Val Gln Phe 50 55 60 Asp Glu Gly Leu Pro Pro Ile Leu Asn Ala Leu Glu Val Ala Gly Arg 65 70 75 80 Glu Ser Arg Leu Val Leu Glu Val Ala Gln His Leu Gly Glu Asn Thr 85 90 95 Val Arg Thr Ile Ala Met Asp Gly Thr Glu Gly Leu Val Arg Gly Gln 100 105 110 Lys Val Val Asp Thr Gly Asp Pro Ile Arg Ile Pro Val Gly Pro Glu 115 120 125 Thr Leu Gly Arg Ile Met Asn Val Ile Gly Glu Pro Ile Asp Glu Arg 130 135 140 Gly Pro Ile Ser Thr Lys Gln Thr Ala Ala Ile His Ala Glu Ala Pro 145 150 155 160 Glu Phe Thr Asp Met Ser Val Glu Gln Glu Ile Leu Val Thr Gly Ile 165 170 175 Lys Val Val Asp Leu Leu Ala Pro Tyr Ala Lys Gly Gly Lys Ile Gly 180 185 190 Leu Phe Gly Gly Ala Gly Val Gly Lys Thr Val Leu Ile Met Glu Leu 195 200 205 Ile Asn Asn Val Ala Lys Ala His Gly Gly Tyr Ser Val Phe Ala Gly 210 215 220 Val Gly Glu Arg Thr Arg Glu Gly Asn Asp Leu Tyr His Glu Met Ile 225 230 235 240 Glu Ser Gly Val Ile Asn Leu Lys Asp Asp Thr Ser Lys Val Ala Leu 245 250 255 Val Tyr Gly Gln Met Asn Glu Pro Pro Gly Ala Arg Ala Arg Val Ala 260 265 270 Leu Thr Gly Leu Thr Val Ala Glu Tyr Phe Arg Asp Gln Glu Gly Gln 275 280 285 Asp Val Leu Leu Phe Ile Asp Asn Ile Phe Arg Phe Thr Gln Ala Gly 290 295 300 Ser Glu Val Ser Ala Leu Leu Gly Arg Ile Pro Ser Ala Val Gly Tyr 305 310 315 320 Gln Pro Thr Leu Ala Thr Asp Met Gly Thr Met Gln Glu Arg Ile Thr 325 330 335 Thr Thr Lys Lys Gly Ser Ile Thr Ser Val Gln Ala Ile Tyr Val Pro 340 345 350 Ala Asp Asp Leu Thr Asp Pro Ala Pro Ala Thr Thr Phe Ala His Leu 355 360 365 Asp Ala Thr Thr Val Leu Ser Arg Ala Ile Ala Glu Leu Gly Ile Tyr 370 375 380 Pro Ala Val Asp Pro Leu Asp Ser Thr Ser Arg Ile Met Asp Pro Asn 385 390 395 400 Ile Val Gly Ala Glu His Tyr Asp Val Ala Arg Gly Val Gln Lys Ile 405 410 415 Leu Gln Asp Tyr Lys Ser Leu Gln Asp Ile Ile Ala Ile Leu Gly Met 420 425 430 Asp Glu Leu Ser Glu Glu Asp Lys Leu Ile Val Ser Arg Ala Arg Lys 435 440 445 Ile Gln Arg Phe Leu Ser Gln Pro Phe Gln Val Ala Glu Val Phe Thr 450 455 460 Gly His Ala Gly Lys Leu Val Pro Leu Lys Glu Thr Ile Ser Gly Phe 465 470 475 480 Gln Ser Ile Leu Asn Gly Glu Tyr Asp Ala Leu Pro Glu Gln Ala Phe 485 490 495 Tyr Met Val Gly Pro Ile Glu Glu Val Val Glu Lys Ala Ala Gln Met 500 505 510 Ala Lys Asp Leu Ala 515 <210> 139 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ATP synthase subunit beta, mitochondrial fragment <400> 139 Ile Gly Leu Phe Gly Gly Ala Gly Val Gly Lys 1 5 10 <210> 140 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ATP synthase subunit beta, mitochondrial fragment <400> 140 Ile Gln Arg Phe Leu Ser Gln Pro Phe Gln Val Ala Glu Val Phe Thr 1 5 10 15 Gly His Ala Gly Lys 20 <210> 141 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ATP synthase subunit beta, mitochondrial fragment <400> 141 Thr Val Leu Ile Met Glu Leu Ile Asn Asn Val Ala Lys 1 5 10 <210> 142 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ATP synthase subunit beta, mitochondrial fragment <400> 142 Val Val Asp Leu Leu Ala Pro Tyr Ala Lys 1 5 10 <210> 143 <211> 996 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> L-lactate dehydrogenase A chain-like <400> 143 atgactacca aggagaagct gatcacccat gtgttggctg gtgagcctgt tggctcccgg 60 agcaaggtga cagttgttgg cgtcggcatg gttggcatgg cctccgcagt cagcgtcctg 120 ctcaaggacc tgtgcgatga gctgtgcctg attgacgtga tggaagataa actgaagggt 180 gaggtcatgg acctgcagca tggcagcctc ttctgcaaga ctcacaagat tgtgggcgac 240 aaggactaca gtacgactgc ccactccaag gtggtggtgg tcacagccgg tgctcgtcag 300 caagagggtg agagccgtct gaacctggtg cagcgtaacg tcaacatctt caaattcata 360 attccccaga tcgtcaagta cagccccaac gccatcctgc tggtcgtctc caatcctgtt 420 gacatcctaa cctacgtggc ttggaagctg agtggtttcc cccgtcaccg cgtcatcggt 480 tccggcacca acctggactc tggtcgtttc cgccacctga tgggcgagaa gctacacctt 540 cacccatcca gctgtcacgg ctggatcatt ggagaacacg gagactccag cgtgcccgta 600 tggagcggtg tgaatgttgc cggtgtttcc ctgaagggcc tgaacccaga catgggcaca 660 gacgcagaca aggaggactg gaagcacgtc cacaagatgg tggtcgacgg tgcctatgag 720 gtcatcaagc tgaagggtta cacctcctgg gctatcggca tgtccgtcgc tgacctggtt 780 gagagcatcc tgaagaacct ccacaaagtc caccctgtgt ccaccctggt caagggaatg 840 cacggtgtga aggaggaggt gtttctcagc gtgccctgcg tgctgggaaa cagcggtctg 900 accgacgtca tccacatgac tctgaagccc gaggaggaga agcagctgag caacagtgcc 960 gagaccctat ggggcgtaca gaaagagctc accttg 996 <210> 144 <211> 332 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> L-lactate dehydrogenase A chain-like <400> 144 Met Thr Thr Lys Glu Lys Leu Ile Thr His Val Leu Ala Gly Glu Pro 1 5 10 15 Val Gly Ser Arg Ser Lys Val Thr Val Val Gly Val Gly Met Val Gly 20 25 30 Met Ala Ser Ala Val Ser Val Leu Leu Lys Asp Leu Cys Asp Glu Leu 35 40 45 Cys Leu Ile Asp Val Met Glu Asp Lys Leu Lys Gly Glu Val Met Asp 50 55 60 Leu Gln His Gly Ser Leu Phe Cys Lys Thr His Lys Ile Val Gly Asp 65 70 75 80 Lys Asp Tyr Ser Thr Thr Ala His Ser Lys Val Val Val Val Thr Ala 85 90 95 Gly Ala Arg Gln Gln Glu Gly Glu Ser Arg Leu Asn Leu Val Gln Arg 100 105 110 Asn Val Asn Ile Phe Lys Phe Ile Ile Pro Gln Ile Val Lys Tyr Ser 115 120 125 Pro Asn Ala Ile Leu Leu Val Val Ser Asn Pro Val Asp Ile Leu Thr 130 135 140 Tyr Val Ala Trp Lys Leu Ser Gly Phe Pro Arg His Arg Val Ile Gly 145 150 155 160 Ser Gly Thr Asn Leu Asp Ser Gly Arg Phe Arg His Leu Met Gly Glu 165 170 175 Lys Leu His Leu His Pro Ser Ser Cys His Gly Trp Ile Ile Gly Glu 180 185 190 His Gly Asp Ser Ser Val Pro Val Trp Ser Gly Val Asn Val Ala Gly 195 200 205 Val Ser Leu Lys Gly Leu Asn Pro Asp Met Gly Thr Asp Ala Asp Lys 210 215 220 Glu Asp Trp Lys His Val His Lys Met Val Val Asp Gly Ala Tyr Glu 225 230 235 240 Val Ile Lys Leu Lys Gly Tyr Thr Ser Trp Ala Ile Gly Met Ser Val 245 250 255 Ala Asp Leu Val Glu Ser Ile Leu Lys Asn Leu His Lys Val His Pro 260 265 270 Val Ser Thr Leu Val Lys Gly Met His Gly Val Lys Glu Glu Val Phe 275 280 285 Leu Ser Val Pro Cys Val Leu Gly Asn Ser Gly Leu Thr Asp Val Ile 290 295 300 His Met Thr Leu Lys Pro Glu Glu Glu Lys Gln Leu Ser Asn Ser Ala 305 310 315 320 Glu Thr Leu Trp Gly Val Gln Lys Glu Leu Thr Leu 325 330 <210> 145 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> L-lactate dehydrogenase A chain-like fragment <400> 145 Phe Ile Ile Pro Gln Ile Val Lys 1 5 <210> 146 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> L-lactate dehydrogenase A chain-like fragment <400> 146 Leu Ile Thr His Val Leu Ala Gly Glu Pro Val Gly Ser Arg Ser Lys 1 5 10 15 <210> 147 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> L-lactate dehydrogenase A chain-like fragment <400> 147 Thr His Val Leu Ala Gly Glu Pro Val Gly Ser Arg Ser Lys 1 5 10 <210> 148 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> L-lactate dehydrogenase A chain-like fragment <400> 148 Val His Pro Val Ser Thr Leu Val Lys 1 5 <210> 149 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> L-lactate dehydrogenase A chain-like fragment <400> 149 Val Val Val Val Thr Ala Gly Ala Arg Gln Gln Glu Gly Glu Ser Arg 1 5 10 15 Leu Asn Leu Val Gln Arg Asn Val Asn Ile Phe Lys 20 25

Claims (7)

  1. 생선 알레르기의 진단 키트로서, 이하 (2), (7), (10) 또는 (12)의 단백질 중 적어도 하나：
    (2) (2A) EEF1A2 바인딩 프로테인-라이크(EEF1A2 binding protein-like) 또는 그 변이체로서, 생선에 대한 알레르기의 항원인, 이하의 (2A－a)~(2A－e) 중 어느 하나의 단백질：
    (2A－a) 서열번호 5에 있어서 1 또는 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
    (2A－b) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열과 동일성이 70% 이상인 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
    (2A－c) 서열번호 4에 있어서 1 또는 수 개의 뉴클레오티드가 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
    (2A－d) 서열번호 4로 나타내는 염기 서열과 동일성이 70% 이상인 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질； 혹은
    (2A－e) 서열번호 4로 나타내는 염기 서열에 대하여 상보적인 염기 서열로 이루어지는 핵산과 스트린젠트한 조건 하에서 하이브리다이즈하는 핵산에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질； 또는
    (2B) 서열번호 5~8로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하는 단백질；
    (7) (7A) 미오신 바인딩 프로테인 H－라이크(Myosin binding protein H-like) 또는 그 변이체로서, 생선에 대한 알레르기의 항원인, 이하의 (7A－a)~(7A－e) 중 어느 하나의 단백질：
    (7A－a) 서열번호 43에 있어서 1 또는 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
    (7A－b) 서열번호 43으로 나타내는 아미노산 서열과 동일성이 70% 이상인 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
    (7A－c) 서열번호 42에 있어서 1 또는 수 개의 뉴클레오티드가 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
    (7A－d) 서열번호 42로 나타내는 염기 서열과 동일성이 70% 이상인 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질； 혹은
    (7A－e) 서열번호 42로 나타내는 염기 서열에 대하여 상보적인 염기 서열로 이루어지는 핵산과 스트린젠트한 조건 하에서 하이브리다이즈하는 핵산에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질； 또는
    (7B) 서열번호 43~54로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하는 단백질；
    (10) (10A) 미오신 헤비 체인, 패스트 스켈레탈 머슬-라이크(myosin heavy chain, fast skeletal muscle-like) 또는 그 변이체로서, 생선에 대한 알레르기의 항원인, 이하의 (10A－a)~(10A－e) 중 어느 하나의 단백질：
    (10A－a) 서열번호 70에 있어서 1 또는 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
    　 (10A－b) 서열번호 70으로 나타내는 아미노산 서열과 동일성이 70% 이상인 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
    　 (10A－c) 서열번호 69에 있어서 1 또는 수 개의 뉴클레오티드가 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
    　 (10A－d) 서열번호 69로 나타내는 염기 서열과 동일성이 70% 이상인 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질； 혹은
    　 (10A－e) 서열번호 69로 나타내는 염기 서열에 대하여 상보적인 염기 서열로 이루어지는 핵산과 스트린젠트한 조건 하에서 하이브리다이즈하는 핵산에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질； 또는
    　 (10B) 서열번호 70~108로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하는 단백질；
    (12) (12A) 미오신 바인딩 프로테인 C, 패스트-타입-라이크(myosin-binding protein C, fast-type-like) 또는 그 변이체로서, 생선에 대한 알레르기의 항원인, 이하의 (12A－a)~(12A－e) 중 어느 하나의 단백질：
    　 (12A－a) 서열번호 121에 있어서 1 또는 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
    　 (12A－b) 서열번호 121로 나타내는 아미노산 서열과 동일성이 70% 이상인 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
    　 (12A－c) 서열번호 120에 있어서 1 또는 수 개의 뉴클레오티드가 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질；
    　 (12A－d) 서열번호 120으로 나타내는 염기 서열과 동일성이 70% 이상인 염기 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질； 혹은
    　 (12A－e) 서열번호 120으로 나타내는 염기 서열에 대하여 상보적인 염기 서열로 이루어지는 핵산과 스트린젠트한 조건 하에서 하이브리다이즈하는 핵산에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하는 단백질； 또는
    　 (12B) 서열번호 121~136으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 중 적어도 하나를 포함하는 단백질；
    을 항원으로서 포함하는, 상기 진단 키트.
  2. 생선 알레르기의 진단용 조성물로서, 청구항 1에 있어서 (2), (7), (10) 또는 (12)로서 특정되는 단백질 중 적어도 하나를 항원으로서 포함하는, 상기 진단용 조성물.
  3. 대상의 생선 알레르기를 진단하기 위한 지표를 제공하는 방법으로서, 이하의 공정：
    (i) 대상으로부터 얻어진 시료를 항원에 접촉시키는, 여기서 해당 시료는 IgE 항체가 포함되는 용액인；
    (ii) 대상으로부터 얻어진 시료 중의 IgE 항체와 해당 항원과의 결합을 검출하는；
    (iii) 대상의 IgE 항체와 해당 항원과의 결합이 검출된 경우, 대상이 생선 알레르기인 것의 지표가 제공되는；
    을 포함하고, 여기서 해당 항원은, 청구항 1에 있어서 (2), (7), (10) 또는 (12)로서 특정되는 단백질 중 적어도 하나인, 상기 방법.
  4. 항원이 제거 또는 저감되어 있는 것을 특징으로 하는 생선 또는 생선 가공품으로서, 해당 항원은 청구항 1에 있어서 (2), (7), (10) 또는 (12)로서 특정되는 단백질 중 적어도 하나인, 상기 생선 또는 생선 가공품.
  5. 청구항 1에 있어서 (2), (7), (10) 또는 (12)로서 특정되는 단백질 중 적어도 하나와 결합되는 항체를 포함하는 것을 특징으로 하는, 대상물에 있어서의 생선 항원의 유무를 판정하기 위한 테스터.
  6. 서열번호 4, 42, 69, 또는 120으로 나타내는 염기 서열 중 적어도 1개의 일부와 상보적인 염기 서열을 가지는 프라이머를 포함하는 것을 특징으로 하는, 대상물에 있어서의 생선에 대한 알레르기의 원인이 되는 항원의 유무를 판정하기 위한 테스터.
  7. 생선 유래의 항원으로서, 청구항 1에 있어서 (2), (7), (10) 또는 (12)로서 특정되는 단백질 중 적어도 하나이며, 그리고 생선에 대한 알레르기의 원인이 되는, 상기 항원.
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