CN115032405A - 鱼变态反应的抗原 - Google Patents

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矢上晶子
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Abstract

本发明提供鱼变态反应的新型抗原、鱼变态反应的诊断方法和诊断试剂盒、包含该抗原的药物组合物、去除了该抗原的鱼、鱼卵、该鱼或该鱼卵加工品、或者产生该鱼卵或由该鱼卵孵化的鱼、以及用于判定对象物中有无鱼抗原的检测仪。

Description

鱼变态反应的抗原
本申请是申请日为2017年4月28日,申请号为201780037718.X、发明名称为“鱼变态反应的抗原”的申请的分案申请。
技术领域
本发明涉及鱼变态反应的新型抗原。本发明还涉及鱼变态反应的诊断试剂盒、诊断用组合物以及诊断方法。本发明还涉及包含该抗原的药物组合物、以及去除或降低了该抗原的鱼、鱼卵、该鱼或该鱼卵加工品、或者产生该鱼卵或由该鱼卵孵化的鱼。本发明进而还涉及用于判断对象物中有无鱼抗原的检测仪。
背景技术
变态反应患者的血液和组织中产生了特定抗原特异的IgE抗体。通过该IgE抗体与特定抗原的相互作用产生的生理学结果,引起了变态反应。
现有的变态反应检测试剂中,大多是简单地将变应原候补食品/食材等磨碎而制成抗原试剂(专利文献1)。因此,试剂中包含有无数蛋白质,各种蛋白质的含量非常少。因此,现有的抗原试剂中所包含的多数蛋白质中,对于与IgE抗体的结合,只有在超过可判定阳性反应阈值的含量的蛋白质为引起该变态反应的特定的抗原蛋白质(变应原成分)时,才能在变态反应检查中检测出阳性反应。相反地,对于食品/食材等变应原中含量少的变应原成分与IgE抗体结合的患者,即便使用现有的变态反应检测试剂也不能判定阳性反应,是诊断效率还不能说是充分高的状态。
另外,变态反应的症状、严重程度也不一定与变应原成分的含量有关。即便在变应原候补食品/食材中微量含有的变应原成分与患者的IgE抗体反应时,也有变态反应症状出现、与严重程度相关的情况。
也尝试了通过对构成食品/食材的一个一个蛋白质调查IgE抗体,由此在诊断中能够将直接的致敏与基于常见变应原等的交叉抗原性的致敏相区别来提高诊断效率。关于鱼变应原,现在已知有以下表中所示的物质(非专利文献1)。
[表1]
Figure BDA0003691268210000021
然而,为了提高变态反应检查的可靠度,在变应原候補食品/食材中,需要对变应原成分全面地进行鉴定,结果通过上述变应原成分测定的患者检测率还不充分。鉴定鱼的新型变应原不仅需要提高诊断试剂的精度,作为低变应原食品、低变应原食材、治疗药的靶标也是非常重要的。
另一方面,关于蛋白质的分离/纯化,以往对于从细胞提取物等中分离/纯化蛋白质、核酸的方法进行了各种研究。可以说利用盐浓度的透析、离心分离等是其中的一例。
另外,还研究了很多利用了蛋白质或核酸残基所具有的电荷、分子量的差异的纯化方法。作为利用了电荷的纯化方法,可例示出使用了离子交换树脂的柱色谱、等电点电泳。作为利用分子量差异的纯化方法,可例示出利用离心分离、分子量筛选的柱色谱、SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)。
近年来、作为从少量样品中对多种蛋白质进行分离纯化的方法,使用了第一维进行等电点电泳、第二维进行SDS-PAGE的二维电泳法。申请人等到目前为止,开发出了分离能力高的二维电泳法(专利文献2~5)。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:日本特开2002-286716
专利文献2:日本特开2011-33544
专利文献3:日本特开2011-33546
专利文献4:日本特开2011-33547
专利文献5:日本特开2011-33548
非专利文献
非专利文献1:Allergen Nomenclature,WHO/IUIS Allergen Nomenclature Sub-Committee,[平成28年6月9日检索],网址<URL:http://www.allergen.org/search.php?allergenname=&allergensource=&TaxSource=Animalia+Chordata&TaxOrder=&foodallerg=1&bioname=>
发明内容
发明要解决的问题
本发明提供鱼变态反应的新型抗原。本发明还提供鱼变态反应的诊断方法和诊断试剂盒。本发明还提供包含该抗原的药物组合物、以及去除或降低了该抗原的鱼、鱼卵、该鱼或该鱼卵加工品、或者产生该鱼卵或由该鱼卵孵化的鱼。本发明进一步提供用于判断对象物中有无鱼抗原的检测仪。
用于解决问题的方案
本发明人等为了解决上述问题,对于鱼变态反应的原因的抗原鉴定进行了深入研究。结果成功地鉴定出患有鱼变态反应的患者血清中IgE抗体所特异地结合的新型的抗原。基于该见解完成了本发明
即,一实施方式中,本发明如下。
[1]一种鱼变态反应的诊断试剂盒,其包含以下(1)~(9)的蛋白质中的至少一种作为抗原:
(1)(1A)α-辅肌动蛋白-3(Alpha-actinin-3)或其突变体,其是作为鱼变态反应的抗原的、以下(1A-a)~(1A-e)中的任一蛋白质:
(1A-a)含有在序列号2中缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸的氨基酸序列的蛋白质;
(1A-b)含有与序列号2所示的氨基酸序列的同一性为70%以上的氨基酸序列的蛋白质;
(1A-c)含有由在序列号1中缺失、置换、插入或附加有1个或多个核苷酸的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质;
(1A-d)含有由与序列号1所示的碱基序列的同一性为70%以上的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质;或
(1A-e)含有由下述核酸编码的氨基酸序列的蛋白质,所述核酸和由与序列号1所示的碱基序列互补的碱基序列构成的核酸在严格的条件下杂交;或者
(1B)含有序列号2或3的氨基酸序列的蛋白质;
(2)(2A)EEF1A2结合蛋白样(EEF1A2 binding protein-like)或其突变体,其是作为鱼变态反应的抗原的、以下(2A-a)~(2A-e)中的任一蛋白质:
(2A-a)含有在序列号5中缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸的氨基酸序列的蛋白质;
(2A-b)含有与序列号5所示的氨基酸序列的同一性为70%以上的氨基酸序列的蛋白质;
(2A-c)含有由在序列号4中缺失、置换、插入或附加有1个或多个核苷酸的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质;
(2A-d)含有由与序列号4所示的碱基序列的同一性为70%以上的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质;或
(2A-e)含有由下述核酸编码的氨基酸序列的蛋白质,所述核酸和由与序列号4所示的碱基序列互补的碱基序列构成的核酸在严格的条件下杂交;或者
(2B)含有选自由序列号5~8组成的组中的氨基酸序列中的至少一种的蛋白质;
(3)(3A)α-1,4-葡聚糖磷酸化酶(Alpha-1,4-glucan phosphorylase)或其突变体,其是作为鱼变态反应的抗原的、以下(3A-a)~(3A-e)中的任一蛋白质:
(3A-a)含有在序列号10中缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸的氨基酸序列的蛋白质;
(3A-b)含有与序列号10所示的氨基酸序列的同一性为70%以上的氨基酸序列的蛋白质;
(3A-c)含有由在序列号9中缺失、置换、插入或附加有1个或多个核苷酸的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质;
(3A-d)含有由与序列号9所示的碱基序列的同一性为70%以上的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质;或
(3A-e)含有由下述核酸编码的氨基酸序列的蛋白质,所述核酸和由与序列号9所示的碱基序列互补的碱基序列构成的核酸在严格的条件下杂交;或者
(3B)含有选自由序列号10~16组成的组中的氨基酸序列中的至少一种的蛋白质;
(4)(4A)延伸因子2(Elongation factor 2)或其突变体,其是作为鱼变态反应的抗原的、以下(4A-a)~(4A-e)中的任一蛋白质:
(4A-a)含有在序列号19中缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸的氨基酸序列的蛋白质;
(4A-b)含有与序列号19所示的氨基酸序列的同一性为70%以上的氨基酸序列的蛋白质;
(4A-c)含有由在序列号18中缺失、置换、插入或附加有1个或多个核苷酸的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质;
(4A-d)含有由与序列号18所示的碱基序列的同一性为70%以上的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质;或
(4A-e)含有由下述核酸编码的氨基酸序列的蛋白质,所述核酸和由与序列号18所示的碱基序列互补的碱基序列构成的核酸在严格的条件下杂交;或者
(4B)含有选自由序列号19~24组成的组中的氨基酸序列中的至少一种的蛋白质;
(5)(5A)热激关联蛋白70kDa(Heat shock cognate 70kDa protein)或其突变体,其是作为鱼变态反应的抗原的、以下(5A-a)~(5A-e)中的任一蛋白质:
(5A-a)含有在序列号26中缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸的氨基酸序列的蛋白质;
(5A-b)含有与序列号26所示的氨基酸序列的同一性为70%以上的氨基酸序列的蛋白质;
(5A-c)含有由在序列号25中缺失、置换、插入或附加有1个或多个核苷酸的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质;
(5A-d)含有由与序列号25所示的碱基序列的同一性为70%以上的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质;或
(5A-e)含有由下述核酸编码的氨基酸序列的蛋白质,所述核酸和由与序列号25所示的碱基序列互补的碱基序列构成的核酸在严格的条件下杂交;或者
(5B)含有选自由序列号26~31组成的组中的氨基酸序列中的至少一种的蛋白质;
(6)(6A)血清转铁蛋白(Serotransferrin)或其突变体,其是作为鱼变态反应的抗原的、以下(6A-a)~(6A-e)中的任一蛋白质:
(6A-a)含有在序列号33中缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸的氨基酸序列的蛋白质;
(6A-b)含有与序列号33所示的氨基酸序列的同一性为70%以上的氨基酸序列的蛋白质;
(6A-c)含有由在序列号32中缺失、置换、插入或附加有1个或多个核苷酸的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质;
(6A-d)含有由与序列号32所示的碱基序列的同一性为70%以上的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质;或
(6A-e)含有由下述核酸编码的氨基酸序列的蛋白质,所述核酸和由与序列号32所示的碱基序列互补的碱基序列构成的核酸在严格的条件下杂交;或者
(6B)含有选自由序列号33~41组成的组中的氨基酸序列中的至少一种的蛋白质;
(7)(7A)肌球蛋白结合蛋白H-样(Myosin binding protein H-like)或其突变体,其是作为鱼变态反应的抗原的、以下(7A-a)~(7A-e)中的任一蛋白质:
(7A-a)含有在序列号43中缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸的氨基酸序列的蛋白质;
(7A-b)含有与序列号43所示的氨基酸序列的同一性为70%以上的氨基酸序列的蛋白质;
(7A-c)含有由在序列号42中缺失、置换、插入或附加有1个或多个核苷酸的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质;
(7A-d)含有由与序列号42所示的碱基序列的同一性为70%以上的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质;或
(7A-e)含有由下述核酸编码的氨基酸序列的蛋白质,所述核酸和由与序列号42所示的碱基序列互补的碱基序列构成的核酸在严格的条件下杂交;或者
(7B)含有选自由序列号43~54组成的组中的氨基酸序列中的至少一种的蛋白质;
(8)(8A)肌间线蛋白(片段)(Desmin(Fragment))或其突变体,其是作为鱼变态反应的抗原的、以下(8A-a)~(8A-e)中的任一蛋白质:
(8A-a)含有在序列号56中缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸的氨基酸序列的蛋白质;
(8A-b)含有与序列号56所示的氨基酸序列的同一性为70%以上的氨基酸序列的蛋白质;
(8A-c)含有由在序列号55中缺失、置换、插入或附加有1个或多个核苷酸的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质;
(8A-d)含有由与序列号55所示的碱基序列的同一性为70%以上的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质;或
(8A-e)含有由下述核酸编码的氨基酸序列的蛋白质,所述核酸和由与序列号55所示的碱基序列互补的碱基序列构成的核酸在严格的条件下杂交;或者
(8B)含有选自由序列号56~59组成的组中的氨基酸序列中的至少一种的蛋白质;
(9)(9A)加帽蛋白(肌动蛋白丝)肌肉Z-线β(Capping protein(Actin filament)muscle Z-line beta)或其突变体,其是作为鱼变态反应的抗原的、以下(9A-a)~(9A-e)中的任一蛋白质:
(9A-a)含有在序列号61中缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸的氨基酸序列的蛋白质;
(9A-b)含有与序列号61所示的氨基酸序列的同一性为70%以上的氨基酸序列的蛋白质;
(9A-c)含有由在序列号60中缺失、置换、插入或附加有1个或多个核苷酸的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质;
(9A-d)含有由与序列号60所示的碱基序列的同一性为70%以上的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质;或
(9A-e)含有由下述核酸编码的氨基酸序列的蛋白质,所述核酸和由与序列号60所示的碱基序列互补的碱基序列构成的核酸在严格的条件下杂交;或者
(9B)含有选自由序列号61~68组成的组中的氨基酸序列中的至少一种的蛋白质。
[2]一种鱼变态反应的诊断用组合物,其包含上述[1]中作为(1)~(9)限定的蛋白质中的至少一种作为抗原。
[3]一种提供用于诊断对象的鱼变态反应的指标的方法,其包括以下工序:
(i)使由对象得到的试样与抗原接触,此处,该试样是包含有IgE抗体的溶液;
(ii)对由对象得到的试样中的IgE抗体与该抗原的结合进行检测;
(iii)检测到对象IgE抗体与该抗原结合时,提供对象为鱼变态反应的指标;
此处,该抗原是上述[1]中作为(1)~(9)限定的蛋白质的至少一种。
[4]一种药物组合物,其包含上述[1]中作为(1)~(9)限定的蛋白质的至少一种。
[5]根据上述[4]所述的药物组合物,其用于治疗鱼变态反应。
[6]一种鱼或鱼加工品,其特征在于,其抗原被去除或降低了,该抗原是上述[1]中作为(1)~(9)限定的蛋白质的至少一种。
[7]一种用于判断对象物中有无鱼抗原的检测仪,其特征在于,其包含与上述[1]中作为(1)~(9)限定的蛋白质的至少一种结合的抗体。
[8]一种用于判断对象物中有无成为鱼变态反应原因的抗原的检测仪,其特征在于,其包含具有与序列号1、4、9、18、25、32、42、55或60所示碱基序列中至少一个序列的一部分互补的碱基序列的引物。
[9]一种鱼变态反应的诊断试剂盒,其包含以下(10)~(14)的蛋白质中的至少一种作为抗原:
(10)(10A)肌球蛋白重链快缩型骨骼肌样(myosin heavy chain,fast skeletalmuscle-like)或其突变体,其是作为鱼变态反应的抗原的、以下(10A-a)~(10A-e)中的任一蛋白质:
(10A-a)含有在序列号70中缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸的氨基酸序列的蛋白质;
(10A-b)含有与序列号70所示的氨基酸序列的同一性为70%以上的氨基酸序列的蛋白质;
(10A-c)含有由在序列号69中缺失、置换、插入或附加有1个或多个核苷酸的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质;
(10A-d)含有由与序列号69所示的碱基序列的同一性为70%以上的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质;或
(10A-e)含有由下述核酸编码的氨基酸序列的蛋白质,所述核酸和由与序列号69所示的碱基序列互补的碱基序列构成的核酸在严格的条件下杂交;或者
(10B)含有选自由序列号70~108组成的组中的氨基酸序列中的至少一种的蛋白质;
(11)(11A)糖原磷酸化酶肌肉型样(glycogen phosphorylase,muscle form-like)或其突变体,其是作为鱼变态反应的抗原的、以下(11A-a)~(11A-e)中的任一蛋白质:
(11A-a)含有在序列号110中缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸的氨基酸序列的蛋白质;
(11A-b)含有与序列号110所示的氨基酸序列的同一性为70%以上的氨基酸序列的蛋白质;
(11A-c)含有由在序列号109中缺失、置换、插入或附加有1个或多个核苷酸的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质;
(11A-d)含有由与序列号109所示的碱基序列的同一性为70%以上的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质;或
(11A-e)含有由下述核酸编码的氨基酸序列的蛋白质,所述核酸和由与序列号109所示的碱基序列互补的碱基序列构成的核酸在严格的条件下杂交;或者
(11B)含有选自由序列号110~119组成的组中的氨基酸序列中的至少一种的蛋白质;
(12)(12A)肌球蛋白结合蛋白C快缩型样(myosin-binding protein C,fast-type-like)或其突变体,其是作为鱼变态反应的抗原的、以下(12A-a)~(12A-e)中的任一蛋白质:
(12A-a)含有在序列号121中缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸的氨基酸序列的蛋白质;
(12A-b)含有与序列号121所示的氨基酸序列的同一性为70%以上的氨基酸序列的蛋白质;
(12A-c)含有由在序列号120中缺失、置换、插入或附加有1个或多个核苷酸的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质;
(12A-d)含有由与序列号120所示的碱基序列的同一性为70%以上的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质;或
(12A-e)含有由下述核酸编码的氨基酸序列的蛋白质,所述核酸和由与序列号120所示的碱基序列互补的碱基序列构成的核酸在严格的条件下杂交;或者
(12B)含有选自由序列号121~136组成的组中的氨基酸序列中的至少一种的蛋白质;
(13)(13A)ATP合成酶亚单元β线粒体(ATP synthase subunit beta,mitochondrial)或其突变体,其是作为鱼变态反应的抗原的、以下(13A-a)~(13A-e)中的任一蛋白质:
(13A-a)含有在序列号138中缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸的氨基酸序列的蛋白质;
(13A-b)含有与序列号138所示的氨基酸序列的同一性为70%以上的氨基酸序列的蛋白质;
(13A-c)含有由在序列号137中缺失、置换、插入或附加有1个或多个核苷酸的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质;
(13A-d)含有由与序列号137所示的碱基序列的同一性为70%以上的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质;或
(13A-e)含有由下述核酸编码的氨基酸序列的蛋白质,所述核酸和由与序列号137所示的碱基序列互补的碱基序列构成的核酸在严格的条件下杂交;或者
(13B)含有选自由序列号138~142组成的组中的氨基酸序列中的至少一种的蛋白质;
(14)(14A)L-乳酸脱氢酶A链样(L-lactate dehydrogenase A chain-like)或其突变体,其是作为鱼变态反应的抗原的、以下(14A-a)~(14A-e)中的任一蛋白质:
(14A-a)含有在序列号144中缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸的氨基酸序列的蛋白质;
(14A-b)含有与序列号144所示的氨基酸序列的同一性为70%以上的氨基酸序列的蛋白质;
(14A-c)含有由在序列号143中缺失、置换、插入或附加有1个或多个核苷酸的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质;
(14A-d)含有由与序列号143所示的碱基序列的同一性为70%以上的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质;或
(14A-e)含有由下述核酸编码的氨基酸序列的蛋白质,所述核酸和由与序列号143所示的碱基序列互补的碱基序列构成的核酸在严格的条件下杂交;或者
(14B)含有选自由序列号144~149组成的组中的氨基酸序列中的至少一种的蛋白质。
[10]一种鱼变态反应的诊断用组合物,其包含上述[9]中作为(10)~(14)限定的蛋白质的至少一种作为抗原。
[11]一种提供用于诊断对象的鱼变态反应的指标的方法,其包括以下工序:
(i)使由对象得到的试样与抗原接触,此处,该试样是包含有IgE抗体的溶液;
(ii)对由对象得到的试样中的IgE抗体与该抗原的结合进行检测;
(iii)检测到对象的IgE抗体与该抗原结合时,提供对象为鱼变态反应的指标;
此处,该抗原是上述[9]中作为(10)~(14)限定的蛋白质的至少一种。
[12]一种药物组合物,其包含上述[9]中作为(10)~(14)限定的蛋白质的至少一种。
[13]根据上述[12]所述的药物组合物,其用于治疗鱼变态反应。
[14]一种鱼或鱼加工品,其特征在于,其抗原被去除或降低了,该抗原是上述[9中作为(10)~(14)限定的蛋白质的至少一种。
[15]一种用于判断对象物中有无鱼抗原的检测仪,其特征在于,其包含与上述[9]中作为(10)~(14)限定的蛋白质的至少一种结合的抗体。
[16]一种用于判断对象物中有无成为鱼变态反应原因的抗原的检测仪,其特征在于,其包含具有与序列号69、109、120、137或143所示碱基序列中至少一个序列的一部分互补的碱基序列的引物。
[17]一种源自鱼的抗原,其是上述[1]中作为(1)~(9)限定的蛋白质的至少一种,并且成为鱼变态反应的原因。
[18]一种源自鱼的抗原,其是上述[9]中作为(10)~(14)限定的蛋白质的至少一种,并且成为鱼变态反应的原因。
发明的效果
通过本发明,能够提供鱼变态反应的新型的抗原。本发明中,鉴定出了引起鱼变态反应的新型的抗原(变应原成分),因此能够提供鱼变态反应的高灵敏度的诊断方法和诊断试剂盒、包含该抗原的药物组合物、去除或降低了该抗原的鱼、鱼卵、该鱼或该鱼卵加工品、或者产生该鱼卵或由该鱼卵孵化的鱼、以及用于判断对象物中有无鱼抗原的检测仪。
附图说明
图1A是表示对于鲑鱼的身体的提取物所包含的蛋白质、利用二维电泳的蛋白质的泳动图的凝胶的照片(左图);以及、对于二维电泳图使用鱼变态反应患者1的血清进行的免疫印迹的照片(右图)。凝胶的照片左侧的条带是分子量标记物的条带,凝胶的照片左侧的数值是各分子量标记物的分子量(KDa)。照片上部的数值表示等电点。
图1B是对于鲑鱼的身体的提取物所包含的蛋白质的二维电泳图、使用鱼变态反应患者2的血清进行的免疫印迹的照片(左图);以及、使用鱼变态反应患者3的血清进行的免疫印迹的照片(右图)。各照片上部的数值表示等电点。
图2是对于10种鱼的身体的提取物所包含的蛋白质的二维电泳图,使用鱼变态反应患者1的血清进行免疫印迹的照片。
图3是对于10种鱼的身体的提取物所包含的蛋白质的二维电泳图,使用不具有鱼变态反应症状的被检者(非鱼变态反应被检者)的血清进行的免疫印迹的照片。
图4是对于6种鱼的身体的提取物所包含的蛋白质的二维电泳图,使用鱼变态反应患者4的血清进行免疫印迹的照片。
具体实施方式
以下具体地对本发明进行说明,但本发明不限于这些内容。
本说明书中,只要没有特别的定义,与本发明相关联而使用的科学术语和技术术语为本领域技术人员通常理解的意思。
本说明书中变态反应是指:在对某抗原敏感的生物体中,该抗原再次进入时产生的、使生物体表现出不舒服的过敏反应的状态。食物中的大多变态反应疾病,在血液和组织中产生对抗原特异的IgE抗体。IgE抗体与肥大细胞或嗜碱性粒细胞结合。对该IgE抗体特异的抗原再次进入变态反应疾病患者的体内时,该抗原与结合有肥大细胞或嗜碱性粒细胞的IgE抗体组合,然后该IgE抗体在细胞表面交联,产生IgE抗体-抗原相互作用的生理学效果。作为它们的生理学的效果,可列举出组胺、5-羟色胺、肝素、嗜酸性粒细胞趋化因子或各种白三烯等的释放。这些释放物质引起由IgE抗体与特定抗原组合产生的变态反应。由特定抗原产生的变态反应通过上述路径来实现。
本说明书中,鱼是指:鱼类中的硬骨鱼类、软骨鱼类,优选为硬骨鱼类,更优选为属于鲑鱼目、鲈鱼目、鳗鱼目、鳕鱼目、鲽鱼目的鱼;进而优选为属于鲑鱼科、鲹鱼科(Carangidae)、海鳗科、鲷鱼科、鲭鱼科、鳕鱼科、鳗鱼科、比目鱼科的鱼;进而优选为鲑鱼、竹荚鱼、海鳗、黑鲷鱼、鲭鱼、鲷鱼、鳕鱼、小鰤鱼、鳗鱼、比目鱼。鱼也可以为食用的鱼类。
本说明书中,鱼卵是指鱼的卵。鱼卵也可以为食用的鱼卵。
本说明书中,鱼变态反应是指:具有将鱼所包含的蛋白质等作为抗原而产生的变态反应的状态。鱼变态反应是指:与鱼所包含的抗原接触时或者摄取该抗原时能够产生变态反应。通常将摄取食物时产生的变态反应特别地称为食物变态反应。鱼变态反应也可以是食物变态反应。
本说明书中,抗原是指引起变态反应的物质,也被称为变应原成分。抗原优选为蛋白质。
本说明书中,蛋白质是具有天然氨基酸通过肽键连接而成的结构的分子。对于蛋白质所包含的氨基酸的个数没有特别的限定,有时将2~50个左右的氨基酸通过肽键连接而成的蛋白质称为肽。另外,关于氨基酸,在可能存在旋光异构体的情况下,只要没有特别明示则表示L体。本说明书中使用的蛋白质或肽的氨基酸序列的标记法如下:基于标准的用法和本领域中惯用的标记法,氨基酸用一文字标记表示,左方向是氨基末端方向并且右方向是羧基末端方向。
抗原的限定
对于鱼所包含的蛋白质,利用上述的手法对于鱼变态反应的抗原进行限定。具体而言,从鱼的身体提取蛋白质,按照下述条件供于二维电泳。
第一维电泳作为等电点电泳用凝胶使用凝胶长度5~10cm范围内并且凝胶的pH范围为3~10、凝胶相对于泳动方向的pH梯度在将凝胶的全长设为1、至pH5为止的凝胶长度设为a、pH5~7的凝胶长度设为b、pH7以上的凝胶长度设为c时,a为0.15~0.3的范围内、b为0.4~0.7的范围内、c为0.15~0.3范围内的凝胶,具体而言,使用GE HealthcareBioscience(以下,简称为GE公司)制的IPG凝胶Immobiline Drystrip(pH3-10NL)进行等电点泳动。电泳仪使用GE公司制的IPGphor。将电泳仪电流值的上限设定为每1根凝胶75μA,将电压程序如下进行设置:(1)以300V恒定电压升压至750Vhr为止,从而进行恒定电压工序(该工序结束前的泳动30分钟的电流变化幅度为5μA);(2)缓缓地使电压从300Vhr升压至1000V为止;(3)进一步,缓缓地使电压从4500Vhr升压至5000V为止;(4)之后,以5000V恒定电压直至Vhr成为12000,进行第一维的等电点电泳。
第二维电泳使用:泳动方向基端部的凝胶浓度被设定为3~6%且泳动方向前端侧部分的凝胶浓度被设定为高于泳动方向基端部凝胶浓度的聚丙烯酰胺凝胶,具体而言,使用Life technologies公司制的NuPAGE 4-12%Bris-Tris Gels IPG well mini 1mm进行SDS-PAGE。电泳仪使用Life technologies公司制的XCell SureLock Mini-Cell。作为泳动缓冲液,使用50mM MOPS、50mM Tris碱、0.1%(w/v)SDS、1mM EDTA,在200V恒定电压下进行约45分钟泳动。
结果可知,对于鱼蛋白质在上述的条件下进行二维电泳时的凝胶中,以下的斑点表明与被诊断为鱼变态反应且为速发型变态反应的患者的IgE抗体特异地结合。
斑点1:分子量80~160kDa、pI3.0~7.0
斑点2:分子量110~260kDa、pI4.0~8.0
斑点3:分子量80~160kDa、pI4.0~10.0
斑点4:分子量80~160kDa、pI5.0~11.0
斑点5:分子量50~110kDa、pI3.0~7.0
斑点6:分子量60~110kDa、pI4.0~8.0
斑点7:分子量40~80kDa、pI4.0~8.0
斑点8:分子量40~80kDa、pI3.0~7.0
斑点9:分子量20~50kDa、pI3.0~7.0
斑点10:分子量160~300kDa、pI3.0~7.0
斑点11:分子量80~160kDa、pI4.0~8.0
斑点12:分子量100~160kDa、pI4.0~7.0
斑点13:分子量30~70kDa、pI3.0~7.0
斑点14:分子量20~50kDa、pI5.0~9.0
抗原
(1)斑点1的抗原
对于斑点1,利用质谱分析进行序列鉴定的结果,检测到了序列号3的氨基酸序列。
另外,对于斑点1,将由质谱分析装置得到的质谱数据(序列号3)与NCBI的蛋白质数据进行对照并解析,鉴定为α-辅肌动蛋白-3(Alpha-actinin-3)(氨基酸序列:序列号2、编码其的碱基序列:序列号1)。序列号3相当于序列号2的氨基酸572~585。
因此,本申请中,斑点1的抗原为以下(1A-a)~(1A-e)和(1B)中的任一者。
(1A-a)含有在序列号2中缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸的氨基酸序列的蛋白质。
(1A-b)含有与序列号2所示的氨基酸序列的同一性为70%以上、优选为75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上的氨基酸序列的蛋白质。
(1A-c)含有由在序列号1中缺失、置换、插入或附加有1个或多个核苷酸的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质。
(1A-d)含有由与序列号1所示的碱基序列的同一性为70%以上、优选为75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质。
(1A-e)含有由下述核酸编码的氨基酸序列的蛋白质,所述核酸和由与序列号1所示的碱基序列互补的碱基序列构成的核酸在严格的条件下杂交。
(1B)含有序列号2或3的氨基酸序列中的至少一种的蛋白质、优选为包含该氨基酸序列的所有序列的蛋白质。其中,序列号2或3所示的氨基酸序列任选缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸。
上述(1A-a)~(1A-e)和(1B)的蛋白质中还包含有:该蛋白质的氨基酸残基通过磷酸化、糖链修饰、氨基酰化、开环、脱氨基化等被修饰而成的蛋白质。
上述(1A-a)~(1A-e)和(1B)的蛋白质还可以是:上述“抗原的限定”项目中记载的条件下进行二维电泳时的凝胶中,作为分子量80kDa~160kDa、优选为分子量90kDa~120kDa以及等电点3.0~7.0、优选为等电点3.0~6.0的斑点出现的蛋白质。
优选的是,作为斑点1的抗原的蛋白质是鱼变态反应的抗原。
(2)斑点2的抗原
对于斑点2,利用质谱分析进行序列鉴定的结果,检测到了序列号6~8的氨基酸序列。
另外,对于斑点2,将由质谱分析装置得到的质谱数据(序列号6~8)与Uniprot的蛋白质数据进行对照并解析,鉴定为EEF1A2结合蛋白样(EEF1A2binding protein-like)(氨基酸序列:序列号5、编码其的碱基序列:序列号4)。分别地,序列号6相当于序列号5的氨基酸143~159;序列号7相当于序列号5的氨基酸395~404;序列号8相当于序列号5的氨基酸427~447。
因此,本申请中,斑点2的抗原为以下(2A-a)~(2A-e)和(2B)中的任一者。
(2A-a)含有在序列号5中缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸的氨基酸序列的蛋白质。
(2A-b)含有与序列号5所示的氨基酸序列的同一性为70%以上、优选为75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上的氨基酸序列的蛋白质。
(2A-c)含有由在序列号4中缺失、置换、插入或附加有1个或多个核苷酸的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质。
(2A-d)含有由与序列号4所示的碱基序列的同一性为70%以上、优选为75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质。
(2A-e)含有由下述核酸编码的氨基酸序列的蛋白质,所述核酸和由与序列号4所示的碱基序列互补的碱基序列构成的核酸在严格的条件下杂交。
(2B)含有选自由序列号5~8组成的组中的氨基酸序列中的至少一种的蛋白质、优选为包含该氨基酸序列的至少2、3种序列或所有序列的蛋白质。其中,序列号5~8中的任一者所示的氨基酸序列任选缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸。
上述(2A-a)~(2A-e)和(2B)的蛋白质中还包含有:该蛋白质的氨基酸残基通过磷酸化、糖链修饰、氨基酰化、开环、脱氨基化等被修饰而成的蛋白质。
上述(2A-a)~(2A-e)和(2B)的蛋白质还可以是:上述“抗原的限定”项目中记载的条件下进行二维电泳时的凝胶中,作为分子量110kDa~260kDa、优选为分子量120kDa~160kDa附近以及等电点4.0~8.0、优选为等电点4.0~7.0的斑点出现的蛋白质。
优选的是,作为斑点2的抗原的蛋白质是鱼变态反应的抗原。
(3)斑点3的抗原
对于斑点3,利用质谱分析进行序列鉴定的结果,检测到了序列号11~16的氨基酸序列。
另外,对于斑点3,将由质谱分析装置得到的质谱数据(序列号11~17)与Uniprot的蛋白质数据进行对照并解析,鉴定为α-1,4-葡聚糖磷酸化酶(Alpha-1,4-glucanphosphorylase)(氨基酸序列:序列号10、编码其的碱基序列:序列号9)。分别地,序列号11相当于序列号10的氨基酸836~844;序列号12相当于序列号10的氨基酸13~29;序列号13相当于序列号10的氨基酸657~681;序列号14相当于序列号10的氨基酸471~479;序列号15相当于序列号10的氨基酸546~555;序列号16相当于序列号10的氨基酸727~741。
因此,本申请中,斑点3的抗原为以下(3A-a)~(3A-e)和(3B)中的任一者。
(3A-a)含有在序列号10中缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸的氨基酸序列的蛋白质。
(3A-b)含有与序列号10所示的氨基酸序列的同一性为70%以上、优选为75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上的氨基酸序列的蛋白质。
(3A-c)含有由在序列号9中缺失、置换、插入或附加有1个或多个核苷酸的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质。
(3A-d)含有由与序列号9所示的碱基序列的同一性为70%以上、优选为75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质。
(3A-e)含有由下述核酸编码的氨基酸序列的蛋白质,所述核酸和由与序列号9所示的碱基序列互补的碱基序列构成的核酸在严格的条件下杂交。
(3B)含有选自由序列号10~16组成的组中的氨基酸序列中的至少一种的蛋白质、优选为包含该氨基酸序列的至少2、3、4、5、6种或所有序列的蛋白质。进而优选:含有选自由序列号10、12、13、15和16组成的组中的氨基酸序列中的至少一种的蛋白质、优选为包含该氨基酸序列的至少2、3、4种或所有序列的蛋白质。其中,序列号10~16中的任一者所示的氨基酸序列任选缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸。
上述(3A-a)~(3A-e)和(3B)的蛋白质中还包含有:该蛋白质的氨基酸残基通过磷酸化、糖链修饰、氨基酰化、开环、脱氨基化等被修饰而成的蛋白质。
上述(3A-a)~(3A-e)和(3B)的蛋白质还可以是:上述“抗原的限定”项目中记载的条件下进行二维电泳时的凝胶中,作为分子量80kDa~160kDa、优选为分子量90kDa~120kDa附近以及等电点4.0~10.0、优选为等电点5.0~8.0的斑点出现的蛋白质。
优选的是,作为斑点3的抗原的蛋白质是鱼变态反应的抗原。
(4)斑点4的抗原
对于斑点4,利用质谱分析进行序列鉴定的结果,检测到了序列号20~24的氨基酸序列。
另外,对于斑点4,将由质谱分析装置得到的质谱数据(序列号20~24)与Uniprot的蛋白质数据进行对照并解析,鉴定为延伸因子-2(Elongation factor 2)(氨基酸序列:序列号19、编码其的碱基序列:序列号18)。分别地,序列号20相当于序列号19的氨基酸831~840;序列号21相当于序列号19的氨基酸560~571;序列号22相当于序列号19的氨基酸560~572;序列号23相当于序列号19的氨基酸677~688;序列号24相当于序列号19的氨基酸620~629。
因此,本申请中,斑点4的抗原为以下(4A-a)~(4A-e)和(4B)中的任一者。
(4A-a)含有在序列号19中缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸的氨基酸序列的蛋白质。
(4A-b)含有与序列号19所示的氨基酸序列的同一性为70%以上、优选为75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上的氨基酸序列的蛋白质。
(4A-c)含有由在序列号18中缺失、置换、插入或附加有1个或多个核苷酸的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质。
(4A-d)含有由与序列号18所示的碱基序列的同一性为70%以上、优选为75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质。
(4A-e)含有由下述核酸编码的氨基酸序列的蛋白质,所述核酸和由与序列号18所示的碱基序列互补的碱基序列构成的核酸在严格的条件下杂交。
(4B)含有选自由序列号19~24组成的组中的氨基酸序列中的至少一种的蛋白质、优选为包含该氨基酸序列的至少2、3、4、5种或所有序列的蛋白质。其中,序列号19~24中的任一者所示的氨基酸序列任选缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸。
上述(4A-a)~(4A-e)和(4B)的蛋白质中还包含有:该蛋白质的氨基酸残基通过磷酸化、糖链修饰、氨基酰化、开环、脱氨基化等被修饰而成的蛋白质。
上述(4A-a)~(4A-e)和(4B)的蛋白质还可以是:上述“抗原的限定”项目中记载的条件下进行二维电泳时的凝胶中,作为分子量80kDa~160kDa、优选为分子量90kDa~120kDa附近以及等电点4.0~11.0、优选为等电点6.0~8.0的斑点出现的蛋白质。
优选的是,作为斑点4的抗原的蛋白质是鱼变态反应的抗原。
(5)斑点5的抗原
对于斑点5,利用质谱分析进行序列鉴定的结果,检测到了序列号27~31的氨基酸序列。
另外,对于斑点5,将由质谱分析装置得到的质谱数据(序列号27~31)与Uniprot的蛋白质数据进行对照并解析,鉴定为热激关联蛋白70kDa(Heat shock cognate 70kDaprotein)(氨基酸序列:序列号26、编码其的碱基序列:序列号25)。分别地,序列号27相当于序列号26的氨基酸113~126;序列号28相当于序列号26的氨基酸513~526;序列号29相当于序列号26的氨基酸89~102;序列号30相当于序列号26的氨基酸584~597;序列号31相当于序列号26的氨基酸138~159。
因此,本申请中,斑点5的抗原为以下(5A-a)~(5A-e)和(5B)中的任一者。
(5A-a)含有在序列号26中缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸的氨基酸序列的蛋白质。
(5A-b)含有与序列号26所示的氨基酸序列的同一性为70%以上、优选为75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上的氨基酸序列的蛋白质。
(5A-c)含有由在序列号25中缺失、置换、插入或附加有1个或多个核苷酸的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质。
(5A-d)含有由与序列号25所示的碱基序列的同一性为70%以上、优选为75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质。
(5A-e)含有由下述核酸编码的氨基酸序列的蛋白质,所述核酸和由与序列号25所示的碱基序列互补的碱基序列构成的核酸在严格的条件下杂交。
(5B)含有选自由序列号26~31组成的组中的氨基酸序列中的至少一种的蛋白质、优选为包含该氨基酸序列的至少2、3、4、5种或所有序列的蛋白质。其中,序列号26~31中的任一者所示的氨基酸序列任选缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸。
上述(5A-a)~(5A-e)和(5B)的蛋白质中还包含有:该蛋白质的氨基酸残基通过磷酸化、糖链修饰、氨基酰化、开环、脱氨基化等被修饰而成的蛋白质。
上述(5A-a)~(5A-e)和(5B)的蛋白质还可以是:上述“抗原的限定”项目中记载的条件下进行二维电泳时的凝胶中,作为分子量50kDa~110kDa、优选为分子量60kDa~90kDa附近以及等电点3.0~7.0、优选为等电点3.0~6.0的斑点出现的蛋白质。
优选的是,作为斑点5的抗原的蛋白质是鱼变态反应的抗原。
(6)斑点6的抗原
对于斑点6,利用质谱分析进行序列鉴定的结果,检测到了序列号34~41的氨基酸序列。
另外,对于斑点6,将由质谱分析装置得到的质谱数据(序列号34~41)与Uniprot的蛋白质数据进行对照并解析,鉴定为血清转铁蛋白(Serotransferrin)(氨基酸序列:序列号33、编码其的碱基序列:序列号32)。分别地,序列号34相当于序列号33的氨基酸330~341;序列号35相当于序列号33的氨基酸332~341;序列号36相当于序列号33的氨基酸264~274;序列号37相当于序列号33的氨基酸113~124;序列号38相当于序列号33的氨基酸112~124;序列号39相当于序列号33的氨基酸112~125;序列号40相当于序列号33的氨基酸275~292;序列号41相当于序列号33的氨基酸436~446。
因此,本申请中,斑点6的抗原为以下(6A-a)~(6A-e)和(6B)中的任一者。
(6A-a)含有在序列号33中缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸的氨基酸序列的蛋白质。
(6A-b)含有与序列号33所示的氨基酸序列的同一性为70%以上、优选为75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上的氨基酸序列的蛋白质。
(6A-c)含有由在序列号32中缺失、置换、插入或附加有1个或多个核苷酸的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质。
(6A-d)含有由与序列号32所示的碱基序列的同一性为70%以上、优选为75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质。
(6A-e)含有由下述核酸编码的氨基酸序列的蛋白质,所述核酸和由与序列号32所示的碱基序列互补的碱基序列构成的核酸在严格的条件下杂交。
(6B)含有选自由序列号33~41组成的组中的氨基酸序列中的至少一种的蛋白质、优选为包含该氨基酸序列的至少2、3、4、5、6、7、8种或所有序列的蛋白质。其中,序列号33~41中的任一者所示的氨基酸序列任选缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸。
上述(6A-a)~(6A-e)和(6B)的蛋白质中还包含有:该蛋白质的氨基酸残基通过磷酸化、糖链修饰、氨基酰化、开环、脱氨基化等被修饰而成的蛋白质。
上述(6A-a)~(6A-e)和(6B)的蛋白质还可以是:上述“抗原的限定”项目中记载的条件下进行二维电泳时的凝胶中,作为分子量60kDa~110kDa、优选为分子量70kDa~1100kDa附近以及等电点4.0~8.0、优选为等电点5.0~7.0的斑点出现的蛋白质。
优选的是,作为斑点6的抗原的蛋白质是鱼变态反应的抗原。
(7)斑点7的抗原
对于斑点7,利用质谱分析进行序列鉴定的结果,检测到了序列号44~54的氨基酸序列。
另外,对于斑点7,将由质谱分析装置得到的质谱数据(序列号44~54)与Uniprot的蛋白质数据进行对照并解析,鉴定为肌球蛋白结合蛋白H-样(Myosin binding proteinH-like)(氨基酸序列:序列号43、编码其的碱基序列:序列号42)。分别地,序列号44相当于序列号43的氨基酸275~292;序列号45相当于序列号43的氨基酸49~66;序列号46相当于序列号43的氨基酸67~77;序列号47相当于序列号43的氨基酸310~323;序列号48相当于序列号43的氨基酸382~401;序列号49相当于序列号43的氨基酸402~418;序列号50相当于序列号43的氨基酸210~219;序列号51相当于序列号43的氨基酸210~228;序列号52相当于序列号43的氨基酸152~183;序列号53相当于序列号43的氨基酸100~112;序列号54相当于序列号43的氨基酸113~129。
因此,本申请中,斑点7的抗原为以下(7A-a)~(7A-e)和(7B)中的任一者。
(7A-a)含有在序列号43中缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸的氨基酸序列的蛋白质。
(7A-b)含有与序列号43所示的氨基酸序列的同一性为70%以上、优选为75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上的氨基酸序列的蛋白质。
(7A-c)含有由在序列号42中缺失、置换、插入或附加有1个或多个核苷酸的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质。
(7A-d)含有由与序列号42所示的碱基序列的同一性为70%以上、优选为75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质。
(7A-e)含有由下述核酸编码的氨基酸序列的蛋白质,所述核酸和由与序列号42所示的碱基序列互补的碱基序列构成的核酸在严格的条件下杂交。
(7B)含有选自由序列号43~54组成的组中的氨基酸序列中的至少一种的蛋白质、优选为包含该氨基酸序列的至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11种或所有序列的蛋白质。其中,序列号43~54中的任一者所示的氨基酸序列任选缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸。
上述(7A-a)~(7A-e)和(7B)的蛋白质中还包含有:该蛋白质的氨基酸残基通过磷酸化、糖链修饰、氨基酰化、开环、脱氨基化等被修饰而成的蛋白质。
上述(7A-a)~(7A-e)和(7B)的蛋白质还可以是:上述“抗原的限定”项目中记载的条件下进行二维电泳时的凝胶中,作为分子量40kDa~80kDa、优选为分子量50kDa~60kDa附近以及等电点4.0~8.0、优选为等电点4.0~7.0的斑点出现的蛋白质。
优选的是,作为斑点7的抗原的蛋白质是鱼变态反应的抗原。
(8)斑点8的抗原
对于斑点8,利用质谱分析进行序列鉴定的结果,检测到了序列号57~59的氨基酸序列。
另外,对于斑点8,将由质谱分析装置得到的质谱数据(序列号57~59)与Uniprot的蛋白质数据进行对照并解析,鉴定为肌间线蛋白(片段)(Desmin(Fragment))(氨基酸序列:序列号56、编码其的碱基序列:序列号55)。分别地,序列号57相当于序列号56的氨基酸364~380;序列号58相当于序列号56的氨基酸74~94;序列号59相当于序列号56的氨基酸273~282。
因此,本申请中,斑点8的抗原为以下(8A-a)~(8A-e)和(8B)中的任一者。
(8A-a)含有在序列号56中缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸的氨基酸序列的蛋白质。
(8A-b)含有与序列号56所示的氨基酸序列的同一性为70%以上、优选为75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上的氨基酸序列的蛋白质。
(8A-c)含有由在序列号55中缺失、置换、插入或附加有1个或多个核苷酸的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质。
(8A-d)含有由与序列号55所示的碱基序列的同一性为70%以上、优选为75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质。
(8A-e)含有由下述核酸编码的氨基酸序列的蛋白质,所述核酸和由与序列号55所示的碱基序列互补的碱基序列构成的核酸在严格的条件下杂交。
(8B)含有选自由序列号56~59组成的组中的氨基酸序列中的至少一种的蛋白质、优选为包含该氨基酸序列的至少2、3种序列或所有序列的蛋白质。其中,序列号56~59中的任一者所示的氨基酸序列任选缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸。
上述(8A-a)~(8A-e)和(8B)的蛋白质中还包含有:该蛋白质的氨基酸残基通过磷酸化、糖链修饰、氨基酰化、开环、脱氨基化等被修饰而成的蛋白质。
上述(8A-a)~(8A-e)和(8B)的蛋白质还可以是:上述“抗原的限定”项目中记载的条件下进行二维电泳时的凝胶中,作为分子量40kDa~80kDa、优选为分子量50kDa~60kDa附近以及等电点4.0~7.0、优选为等电点4.0~6.0的斑点出现的蛋白质。
优选的是,作为斑点8的抗原的蛋白质是鱼变态反应的抗原。
(9)斑点9的抗原
对于斑点9,利用质谱分析进行序列鉴定的结果,检测到了序列号62~68的氨基酸序列。
另外,对于斑点9,将由质谱分析装置得到的质谱数据(序列号62~68)与Uniprot的蛋白质数据进行对照并解析,鉴定为加帽蛋白(肌动蛋白丝)肌肉Z-线β(Cappingprotein(Actin filament)muscle Z-line beta)(氨基酸序列:序列号61、编码其的碱基序列:序列号60)。分别地,序列号62相当于序列号61的氨基酸200~223;序列号63相当于序列号61的氨基酸238~254;序列号64相当于序列号61的氨基酸261~274;序列号65相当于序列号61的氨基酸224~235;序列号66相当于序列号61的氨基酸169~181;序列号67相当于序列号61的氨基酸245~254;序列号68相当于序列号61的氨基酸79~95。
因此,本申请中,斑点9的抗原为以下(9A-a)~(9A-e)和(9B)中的任一者。
(9A-a)含有在序列号61中缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸的氨基酸序列的蛋白质。
(9A-b)含有与序列号61所示的氨基酸序列的同一性为70%以上、优选为75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上的氨基酸序列的蛋白质。
(9A-c)含有由在序列号60中缺失、置换、插入或附加有1个或多个核苷酸的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质。
(9A-d)含有由与序列号60所示的碱基序列的同一性为70%以上、优选为75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质。
(9A-e)含有由下述核酸编码的氨基酸序列的蛋白质,所述核酸和由与序列号60所示的碱基序列互补的碱基序列构成的核酸在严格的条件下杂交。
(9B)含有选自由序列号61~68组成的组中的氨基酸序列中的至少一种的蛋白质、优选为包含该氨基酸序列的至少2、3、4、5、6、7种或所有序列的蛋白质。其中,序列号61~68中的任一者所示的氨基酸序列任选缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸。
上述(9A-a)~(9A-e)和(9B)的蛋白质中还包含有:该蛋白质的氨基酸残基通过磷酸化、糖链修饰、氨基酰化、开环、脱氨基化等被修饰而成的蛋白质。
上述(9A-a)~(9A-e)和(9B)的蛋白质还可以是:上述“抗原的限定”项目中记载的条件下进行二维电泳时的凝胶中,作为分子量20kDa~50kDa、优选为分子量30kDa~40kDa附近以及等电点3.0~7.0、优选为等电点4.0~6.0的斑点出现的蛋白质。
优选的是,作为斑点9的抗原的蛋白质是鱼变态反应的抗原。
(10)斑点10的抗原
对于斑点10,利用质谱分析进行序列鉴定的结果,检测到了序列号71~108的氨基酸序列。
另外,对于斑点10,将由质谱分析装置得到的质谱数据(序列号71~108)与NCBI的蛋白质数据进行对照并解析,鉴定为肌球蛋白重链快缩型骨骼肌样(myosin heavy chain,fast skeletal muscle-like)(氨基酸序列:序列号70、编码其的碱基序列:序列号69)。分别地,序列号71相当于序列号70的氨基酸13~19;序列号72相当于序列号70的氨基酸262~271;序列号73相当于序列号70的氨基酸996~1014;序列号74相当于序列号70的氨基酸951~961;序列号75相当于序列号70的氨基酸1293~1303;序列号76相当于序列号70的氨基酸1082~1091;序列号77相当于序列号70的氨基酸1847~1856;序列号78相当于序列号70的氨基酸172~186;序列号79相当于序列号70的氨基酸919~937;序列号80相当于序列号70的氨基酸249~258;序列号81相当于序列号70的氨基酸706~717;序列号82相当于序列号70的氨基酸50~59;序列号83相当于序列号70的氨基酸415~430;序列号84相当于序列号70的氨基酸834~845;序列号85相当于序列号70的氨基酸617~630;序列号86相当于序列号70的氨基酸1556~1567;序列号87相当于序列号70的氨基酸1391~1408;序列号88相当于序列号70的氨基酸1025~1040;序列号89相当于序列号70的氨基酸1813~1836;序列号90相当于序列号70的氨基酸743~755;序列号91相当于序列号70的氨基酸1172~1192;序列号92相当于序列号70的氨基酸353~364;序列号93相当于序列号70的氨基酸1261~1292;序列号94相当于序列号70的氨基酸1783~1789;序列号95相当于序列号70的氨基酸1502~1519;序列号96相当于序列号70的氨基酸1484~1497;序列号97相当于序列号70的氨基酸1194~1212;序列号98相当于序列号70的氨基酸1304~1314;序列号99相当于序列号70的氨基酸369~384;序列号100相当于序列号70的氨基酸1315~1322;序列号101相当于序列号70的氨基酸1536~1555;序列号102相当于序列号70的氨基酸237~248;序列号103相当于序列号70的氨基酸1699~1725;序列号104相当于序列号70的氨基酸1092~1104;序列号105相当于序列号70的氨基酸407~414;序列号106相当于序列号70的氨基酸1897~1917;序列号107相当于序列号70的氨基酸1458~1470;序列号108相当于序列号70的氨基酸1373~1388。
因此,本申请中,斑点10的抗原为以下(10A-a)~(10A-e)和(10B)中的任一者。
(10A-a)含有在序列号70中缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸的氨基酸序列的蛋白质。
(10A-b)含有与序列号70所示的氨基酸序列的同一性为70%以上、优选为75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上的氨基酸序列的蛋白质。
(10A-c)含有由在序列号69中缺失、置换、插入或附加有1个或多个核苷酸的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质。
(10A-d)含有由与序列号69所示的碱基序列的同一性为70%以上、优选为75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质。
(10A-e)含有由下述核酸编码的氨基酸序列的蛋白质,所述核酸和由与序列号69所示的碱基序列互补的碱基序列构成的核酸在严格的条件下杂交。
(10B)含有选自由序列号70~108组成的组中的氨基酸序列中的至少一种的蛋白质、优选为包含该氨基酸序列的至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38种或所有序列的蛋白质。其中,序列号70~108中的任一者所示的氨基酸序列任选缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸。
上述(10A-a)~(10A-e)和(10B)的蛋白质中还包含有:该蛋白质的氨基酸残基通过磷酸化、糖链修饰、氨基酰化、开环、脱氨基化等被修饰而成的蛋白质。
上述(10A-a)~(10A-e)和(10B)的蛋白质还可以是:上述“抗原的限定”项目中记载的条件下进行二维电泳时的凝胶中,作为分子量160kDa~300kDa、优选为分子量160kDa~260kDa、更优选为分子量200kDa~230kDa附近、以及等电点3.0~7.0、优选为等电点4.0~6.0、进而优选为等电点4.5~5.5的斑点出现的蛋白质。
优选的是,作为斑点10的抗原的蛋白质是鱼变态反应的抗原。
(11)斑点11的抗原
对于斑点11,利用质谱分析进行序列鉴定的结果,检测到了序列号111~119的氨基酸序列。
另外,对于斑点11,将由质谱分析装置得到的质谱数据(序列号111~119)与NCBI的蛋白质数据进行对照并解析,鉴定为糖原磷酸化酶肌肉型样(glycogen phosphorylase,muscle form-like)(氨基酸序列:序列号110、编码其的碱基序列:序列号109)。分别地,序列号111相当于序列号110的氨基酸471~479;序列号112相当于序列号110的氨基酸547~555;序列号113相当于序列号110的氨基酸203~215;序列号114相当于序列号110的氨基酸727~741;序列号115相当于序列号110的氨基酸508~520;序列号116相当于序列号110的氨基酸742~755;序列号117相当于序列号110的氨基酸13~29;序列号118相当于序列号110的氨基酸775~784;序列号119相当于序列号110的氨基酸643~656。
因此,本申请中,斑点11的抗原为以下(11A-a)~(11A-e)和(11B)中的任一者。
(11A-a)含有在序列号110中缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸的氨基酸序列的蛋白质。
(11A-b)含有与序列号110所示的氨基酸序列的同一性为70%以上、优选为75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上的氨基酸序列的蛋白质。
(11A-c)含有由在序列号109中缺失、置换、插入或附加有1个或多个核苷酸的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质。
(11A-d)含有由与序列号109所示的碱基序列的同一性为70%以上、优选为75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质。
(11A-e)含有由下述核酸编码的氨基酸序列的蛋白质,所述核酸和由与序列号109所示的碱基序列互补的碱基序列构成的核酸在严格的条件下杂交。
(11B)含有选自由序列号110~119组成的组中的氨基酸序列中的至少一种的蛋白质、优选为包含该氨基酸序列的至少2、3、4、5、6、7、8、9种或所有序列的蛋白质。其中,序列号110~119中的任一者所示的氨基酸序列任选缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸。
上述(11A-a)~(11A-e)和(11B)的蛋白质中还包含有:该蛋白质的氨基酸残基通过磷酸化、糖链修饰、氨基酰化、开环、脱氨基化等被修饰而成的蛋白质。
上述(11A-a)~(11A-e)和(11B)的蛋白质还可以是:上述“抗原的限定”项目中记载的条件下进行二维电泳时的凝胶中,作为分子量80kDa~160kDa、优选为分子量80kDa~110kDa、更优选为分子量90kDa~110kDa附近、以及等电点4.0~8.0、优选为等电点5.0~7.5、进而优选为等电点6.5~7.0的斑点出现的蛋白质。
优选的是,作为斑点11的抗原的蛋白质是鱼变态反应的抗原。
(12)斑点12的抗原
对于斑点12,利用质谱分析进行序列鉴定的结果,检测到了序列号122~136的氨基酸序列。
另外,对于斑点12,将由质谱分析装置得到的质谱数据(序列号122~136)与NCBI的蛋白质数据进行对照并解析,鉴定为肌球蛋白结合蛋白C快缩型样(myosin-bindingprotein C,fast-type-like)(氨基酸序列:序列号121、编码其的碱基序列:序列号120)。分别地,序列号122相当于序列号121的氨基酸197~204;序列号123相当于序列号121的氨基酸421~434;序列号124相当于序列号121的氨基酸329~336;序列号125相当于序列号121的氨基酸413~420;序列号126相当于序列号121的氨基酸240~246;序列号127相当于序列号121的氨基酸214~228;序列号128相当于序列号121的氨基酸1014~1024;序列号129相当于序列号121的氨基酸842~855;序列号130相当于序列号121的氨基酸260~274;序列号131相当于序列号121的氨基酸672~685;序列号132相当于序列号121的氨基酸506~512;序列号133相当于序列号121的氨基酸205~213;序列号134相当于序列号121的氨基酸165~182;序列号135相当于序列号121的氨基酸321~328;序列号136相当于序列号121的氨基酸70~82。
因此,本申请中,斑点12的抗原为以下(12A-a)~(12A-e)和(12B)中的任一者。
(12A-a)含有在序列号121中缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸的氨基酸序列的蛋白质。
(12A-b)含有与序列号121所示的氨基酸序列的同一性为70%以上、优选为75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上的氨基酸序列的蛋白质。
(12A-c)含有由在序列号119中缺失、置换、插入或附加有1个或多个核苷酸的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质。
(12A-d)含有由与序列号119所示的碱基序列的同一性为70%以上、优选为75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质。
(12A-e)含有由下述核酸编码的氨基酸序列的蛋白质,所述核酸和由与序列号119所示的碱基序列互补的碱基序列构成的核酸在严格的条件下杂交。
(12B)含有选自由序列号121~136组成的组中的氨基酸序列中的至少一种的蛋白质、优选为包含该氨基酸序列的至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15种或所有序列的蛋白质。其中,序列号121~136中的任一者所示的氨基酸序列任选缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸。
上述(12A-a)~(12A-e)和(12B)的蛋白质中还包含有:该蛋白质的氨基酸残基通过磷酸化、糖链修饰、氨基酰化、开环、脱氨基化等被修饰而成的蛋白质。
上述(12A-a)~(12A-e)和(12B)的蛋白质还可以是:上述“抗原的限定”项目中记载的条件下进行二维电泳时的凝胶中,作为分子量100kDa~160kDa、优选为分子量110kDa~150kDa、更优选为分子量120kDa~140kDa附近、以及等电点4.0~7.0、优选为等电点4.0~6.0、进而优选为等电点5.0~6.0的斑点出现的蛋白质。
优选的是,作为斑点12的抗原的蛋白质是鱼变态反应的抗原。
(13)斑点13的抗原
对于斑点13,利用质谱分析进行序列鉴定的结果,检测到了序列号139~142的氨基酸序列。
另外,对于斑点13,将由质谱分析装置得到的质谱数据(序列号139~142)与NCBI的蛋白质数据进行对照并解析,鉴定为ATP合成酶亚单元β线粒体(ATP synthase subunitbeta,mitochondrial)(氨基酸序列:序列号138、编码其的碱基序列:序列号137)。分别地,序列号139相当于序列号138的氨基酸191~201;序列号140相当于序列号138的氨基酸449~469;序列号141相当于序列号138的氨基酸202~214;序列号142相当于序列号138的氨基酸178~187。
因此,本申请中,斑点13的抗原为以下(13A-a)~(13A-e)和(13B)中的任一者。
(13A-a)含有在序列号138中缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸的氨基酸序列的蛋白质。
(13A-b)含有与序列号138所示的氨基酸序列的同一性为70%以上、优选为75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上的氨基酸序列的蛋白质。
(13A-c)含有由在序列号137中缺失、置换、插入或附加有1个或多个核苷酸的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质。
(13A-d)含有由与序列号137所示的碱基序列的同一性为70%以上、优选为75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质。
(13A-e)含有由下述核酸编码的氨基酸序列的蛋白质,所述核酸和由与序列号137所示的碱基序列互补的碱基序列构成的核酸在严格的条件下杂交。
(13B)含有选自由序列号138~142组成的组中的氨基酸序列中的至少一种的蛋白质、优选为包含该氨基酸序列的至少2、3、4种或所有序列的蛋白质。其中,序列号138~142中的任一者所示的氨基酸序列任选缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸。
上述(13A-a)~(13A-e)和(13B)的蛋白质中还包含有:该蛋白质的氨基酸残基通过磷酸化、糖链修饰、氨基酰化、开环、脱氨基化等被修饰而成的蛋白质。
上述(13A-a)~(13A-e)和(13B)的蛋白质还可以是:上述“抗原的限定”项目中记载的条件下进行二维电泳时的凝胶中,作为分子量30kDa~70kDa、优选为分子量40kDa~60kDa、更优选为分子量45kDa~55kDa附近、以及等电点3.0~7.0、优选为等电点3.0~6.0、进而优选为等电点4.0~5.5的斑点出现的蛋白质。
优选的是,作为斑点13的抗原的蛋白质是鱼变态反应的抗原。
(14)斑点14的抗原
对于斑点14,利用质谱分析进行序列鉴定的结果,检测到了序列号145~149的氨基酸序列。
另外,对于斑点14,将由质谱分析装置得到的质谱数据(序列号145~149)与NCBI的蛋白质数据进行对照并解析,鉴定为L-乳酸脱氢酶A链样(L-lactate dehydrogenase Achain-like)(氨基酸序列:序列号144、编码其的碱基序列:序列号143)。分别地,序列号145相当于序列号144的氨基酸119~126;序列号146相当于序列号144的氨基酸7~22;序列号147相当于序列号144的氨基酸9~22;序列号148相当于序列号144的氨基酸270~278;序列号149相当于序列号144的氨基酸91~118。
因此,本申请中,斑点14的抗原为以下(14A-a)~(14A-e)和(14B)中的任一者。
(14A-a)含有在序列号144中缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸的氨基酸序列的蛋白质。
(14A-b)含有与序列号144所示的氨基酸序列的同一性为70%以上、优选为75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上的氨基酸序列的蛋白质。
(14A-c)含有由在序列号143中缺失、置换、插入或附加有1个或多个核苷酸的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质。
(14A-d)含有由与序列号143所示的碱基序列的同一性为70%以上、优选为75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质。
(14A-e)含有由下述核酸编码的氨基酸序列的蛋白质,所述核酸和由与序列号143所示的碱基序列互补的碱基序列构成的核酸在严格的条件下杂交。
(14B)含有选自由序列号144~149组成的组中的氨基酸序列中的至少一种的蛋白质、优选为包含该氨基酸序列的至少2、3、4、5种或所有序列的蛋白质。其中,序列号144~149中的任一者所示的氨基酸序列任选缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸。
上述(14A-a)~(14A-e)和(14B)的蛋白质中还包含有:该蛋白质的氨基酸残基通过磷酸化、糖链修饰、氨基酰化、开环、脱氨基化等被修饰而成的蛋白质。
上述(14A-a)~(14A-e)和(14B)的蛋白质还可以是:上述“抗原的限定”项目中记载的条件下进行二维电泳时的凝胶中,作为分子量20kDa~50kDa、优选为分子量30kDa~50kDa、更优选为分子量30kDa~40kDa附近、以及等电点5.0~9.0、优选为等电点6.0~8.0、进而优选为等电点6.5~7.5的斑点出现的蛋白质。
优选的是,作为斑点14的抗原的蛋白质是鱼变态反应的抗原。
本说明书中,氨基酸序列中,“缺失、置换、插入或附加有1个或多个氨基酸”这样的情况是指:在成为对象的氨基酸序列中,缺失有1个或多个氨基酸(例如,相对于氨基酸序列的全长为30%、优选为25%、20%、15%、10%、5%、3%、2%或1%的氨基酸)、或者置换为其他氨基酸、或者插入有其他氨基酸、和/或附加其他氨基酸而成的氨基酸序列。
上述中,置换优选为保守的置换。保守的置换是指将特定的氨基酸残基用具有类似物理化学特征的残基进行置换;只要是不使原序列结构相关的特征实质上变化就可以为任意的置换,例如,置换氨基酸只要不破坏原序列中存在的螺旋、或者不破坏作为原序列特征的其他种类的二次结构就可以为任意的置换。以下,关于氨基酸残基的保守的置换,根据能够置换的残基分类而例示,但作为能够置换的氨基酸残基不限定于以下记载的物质。
A组:亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、丙氨酸、蛋氨酸
B组:天冬氨酸、谷氨酸
C组:天冬酰胺、谷氨酰胺
D组:赖氨酸、精氨酸
E组:丝氨酸、苏氨酸
F组:苯丙氨酸、酪氨酸
非保守的置换的情况下,也可以将上述种类中的、某一个成员替换为其他种类成员。例如,为了排除预料之外的糖链修饰,也可以将上述B、D、E组的氨基酸置换成除此以外组的氨基酸。或者,为了防止三维结构的蛋白质中被折叠,可以缺失半胱氨酸或者置换为其他氨基酸。或者,为了保持亲水性/疏水性平衡,或者为了容易地进行合成,为了提高亲水度而考虑与氨基酸相关的作为疏水性/亲水性指标的氨基酸的亲水指数(hydropathy index)(J.Kyte和R.Doolittle,J.Mol.Biol.,Vol.157,p.105-132,1982),也可以置换氨基酸。
本说明书中,2个氨基酸序列的同一性%可以通过视觉的检查和数学计算来确定。另外,也可以使用计算机程序确定同一性%。作为这样的计算机程序,可列举出例如:BLAST和ClustalW等。特别是,利用BLAST程序进行的同一性检索的各种条件(参数)可以按照Altschul等(Nucl.Acids.Res.,25,p.3389-3402,1997)记载的、从美国国立生物技术信息中心(NCBI)、DNA Data Bank of Japan(DDBJ)网站等公开得到(BLAST手册、Altschul等NCB/NLM/NIH Bethesda,MD 20894;Altschul等)。另外,也可以使用遗传信息处理软件GENETYX Ver.7(GENETYX)、DINASIS Pro(Hitachi Soft,Ltd.)、Vector NTI(Infomax)等程序来决定。
本说明书中,碱基序列中,“缺失、置换、插入或附加有1个或多个核苷酸”这样的情况是指:在成为对象的碱基序列中,缺失有1个或多个核苷酸(例如,相对于碱基序列的全长为30%、优选为25%、20%、15%、10%、5%、3%、2%或1%的氨基酸)、或者置换为其他核苷酸、或者插入有其他核苷酸、和/或附加其他核苷酸而成的碱基序列。通过上述核苷酸的缺失、置换、插入或附加,优选在编码氨基酸的序列中不产生移码。
本说明书中,2个碱基序列的同一性%可以通过视觉的检查和数学计算来确定。另外,也可以使用计算机程序确定同一性%。作为这样的序列比较计算机程序,可列举出例如:从美国国立医学图书馆的网站:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/bl2seq/bls.html能够利用的BLASTN程序(Altschul et al.(1990)J.Mol.Biol.215:403-10):version 2.2.7或者WU-BLAST2.0 algorithm等。对于WU-BLAST2.0的标准的默认参数(Default Parameter)的设定可以使用以下互联网网站:http://blast.wustl.edu记载的。
本说明书中“严格条件下”是指中等程度或高度严格的条件下进行杂交。具体而言,作为中等程度严格的条件,例如可以由具有一般技术的本领域技术人员基于DNA的长度容易地决定。基本的条件如Sambrook等,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第3版,第6-7章,Cold Spring Harbor Laboratory Press,2001所示。优选的是,中等程度严格的条件作为杂交条件可列举出:1×SSC~6×SSC、42℃~55℃的条件;更优选为1×SSC~3×SSC、45℃~50℃的条件;最优选为2×SSC、50℃的条件。杂交溶液中包含例如约50%甲酰胺的情况下,可以采用比上述温度低5~15℃的温度。洗涤条件可列举出:0.5×SSC~6×SSC、40℃~60℃。在杂交和洗涤时,通常加入0.05%~0.2%、优选约0.1%SDS。作为高度严格的条件,还可以例如由本领域技术人员基于DNA的长度容易地决定。通常,作为高度严格(high stringent)的条件,包括比中等程度严格的条件温度更高和/或盐浓度更低的杂交和/或洗涤。例如,作为杂交条件,可列举出:0.1×SSC~2×SSC、55℃~65℃的条件;更优选为0.1×SSC~1×SSC、60℃~65℃的条件;最优选为0.2×SSC、63℃的条件。作为洗涤条件,可列举出:0.2×SSC~2×SSC、50℃~68℃、更优选为0.2×SSC、60~65℃。
抗原也可以通过组合本领域技术人员公知的蛋白质纯化方法由鱼进行分离/纯化来得到。或者,抗原也可以通过本领域技术人员公知的基因重组技术表达抗原作为重组蛋白质,然后通过本领域技术人员公知的蛋白质纯化方法进行分离/纯化来得到。
作为蛋白质的纯化方法,可列举出例如:盐析、溶剂沉淀法等利用溶解度的方法;透析、超滤、凝胶过滤、SDS-PAGE等利用分子量的差的方法;离子交换色谱、羟磷灰石色谱等利用荷电的方法;亲和色谱等利用特异的亲和性的方法;反相高效液相色谱等利用疏水性的差的方法;等电点电泳等利用等电点的差的方法等。
利用基因重组技术制备蛋白质可以如下进行:制备包含编码抗原的核酸的表达载体,将该表达载体通过基因导入或转化导入至适宜的宿主细胞中,在适合于重组蛋白质表达的条件下培养该宿主细胞,然后对该宿主细胞中表达的重组蛋白质进行回收。
“载体”是能够用于将与之连接的核酸导入宿主细胞内的核酸;“表达载体”是能够引导被载体导入的核酸所编码的蛋白质表达的载体。作为载体包括质粒载体、病毒载体等。本领域技术人员可以根据使用的宿主细胞的种类选择适合于重组蛋白质表达的表达载体。为了容易地进行纯化,也可以包含His×6残基等亲和标记。另外,也可以以包含信号序列而被排出至细胞外的方式合成。
“宿主细胞”是通过载体进行了基因导入或接受了转化的细胞。宿主细胞可以由本领域技术人员根据使用的载体适宜选择。宿主细胞可以来自例如大肠杆菌(E.coli)等原核生物。使用大肠杆菌这样的原核细胞作为宿主时,为了使原核细胞内的重组蛋白质的表达变得容易,本发明的抗原优选包含N末端蛋氨酸残基。该N末端蛋氨酸也可以在表达后从重组蛋白质切离。或者,可以是酵母等单细胞真核生物;植物细胞、动物细胞(例如,人细胞、猿猴细胞、仓鼠细胞、大鼠细胞、小鼠细胞或昆虫细胞)等来自真核生物的细胞、蚕。
表达载体向宿主细胞的基因导入或转化可以通过本领域技术人员公知的方法适宜进行。另外,本领域技术人员会根据宿主细胞的种类适宜选择适合于表达重组蛋白质的条件来培养宿主细胞,从而能够表达重组蛋白质。然后,对表达重组蛋白质的宿主细胞进行均质化处理,对由得到的均质混合物纯化成上述蛋白质的方法进行适宜组合,由此能够分离/纯化作为重组蛋白质表达的抗原。
诊断试剂盒/诊断方法
本发明是提供用于诊断对象的鱼变态反应的指标的方法,其包括以下的工序:
(i)使由对象得到的试样与抗原接触,此处,该试样是包含有IgE抗体的溶液;
(ii)对由对象得到的试样中的IgE抗体与该抗原的结合进行检测;
(iii)检测到对象的IgE抗体与该抗原结合时,提供对象为鱼变态反应的指标;
此处,该抗原是作为上述(1)~(9)的抗原而限定的蛋白质的至少一种、或者作为(10)~(14)的抗原而限定的蛋白质的至少一种。
由对象得到的试样是指包含有由对象采集的IgE抗体的溶液。这样的溶液中包含有例如血液、唾液、痰、鼻涕、尿、汗、泪。在与抗原接触之前,也可以对由对象得到的试样实施用于提高试样中IgE抗体浓度的前处理。作为试样的前处理,也可以包括例如由血液得到血清、血浆。另外,也可以进一步对作为与抗原结合部分的Fab部分进行纯化。在特别优选的方式中,上述工序(i)通过使由对象得到的血清中的IgE抗体与抗原接触来进行。
IgE抗体可以是IgE抗体自身,也可以是IgE抗体所结合的肥大细胞等。
由对象得到的试样与抗原的接触以及它们的结合的检测可以通过已知的方法来进行。作为这样的方法,可以使用利用例如:ELISA(酶联免疫吸附试验,Enzyme-LinkedImmunosorvent Assay)、夹层免疫测定法(sandwich immunoassays)、蛋白质免疫印迹法、免疫沉淀法、免疫层析法进行的检测。这些均是使抗原与对象IgE抗体接触而结合,检测与抗原特异地结合的IgE抗体的方法。可列举出例如:使进行了酶标记的二次抗体起作用,加入酶的底物(通常为显色或发光试剂)而检测酶反应的产物的方法;使进行了生物素标记的二次抗体起作用,加入抗生物素结合色素来检测色素的方法;对进行了荧光标记的二次抗体进行检测的方法等。或者,也可以使用表面等离子共振(SPR)等能够评价抗原与IgE抗体结合的测定方法进行检测。也可以混合多种抗原特异的IgE抗体。
抗原也可以是分离的抗原被固定于载体的状态。该情况下,上述工序(i)和(ii)中可以利用ELISA、夹层免疫测定法、免疫层析法、表面等离子共振等;另外,上述工序(i)中,由对象得到的试样与固定了抗原的面接触来进行。所分离的抗原可以通过组合本领域技术人员公知的蛋白质纯化方法由鱼分离/纯化来得到,或者也可以通过基因重组技术来制备。另外,也可以是结合抗原的抗体被固定的状态。
抗原也可以是被固定于载体的状态。该情况下,在上述工序(i)和(ii)中,可以利用流式细胞仪等,可以通过激光确认结合有抗体的抗原的存在。可列举出例如:对于抗原与抗体结合、将试样中的嗜碱性粒细胞激活化时所表达的表面抗原CD203c的量进行测定的嗜碱性粒细胞激活试验(BAT)等。另外,也可列举出通过使抗原介由与试样中的抗体的结合而与血细胞接触来确认是否使组胺游离的组胺游离试验(HRT)。
另外,抗原也可以由通过二维电泳分离的状态转印、通过蛋白质免疫印迹进行检测。二维电泳通过第一维进行等电点电泳、第二维进行SDS-PAGE(SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳),由此分离蛋白质试样的方法。该情况下,二维电泳的条件只要是能够分离本发明抗原的条件就没有特别的限定。例如,可以利用上述“抗原的限定”项目中记载的二维电泳的条件。或者,也可以参考上述专利文献1~4的记载设定电泳条件,例如,满足选自由以下组成的组中的至少一个条件下进行二维电泳:
(A)作为第一维等电点电泳凝胶,在凝胶长度为5~10cm的范围内且凝胶的pH范围为3~10、将相对于泳动方向的凝胶的pH梯度直至pH5为止的凝胶长度设为a、pH5~7的凝胶长度设为b、pH7以上的凝胶长度设为c的情况下,满足“a<b”和“b>c”的关系;
(B)在(A)的情况下,将凝胶的全长设为1时,a为0.15~0.3的范围内、b为0.4~0.7的范围内、c为0.15~0.3的范围内;
(C)在第一维的等电点电泳中,对于每1根包含被检体的凝胶施加100V~600V范围内值的恒定电压进行恒定电压工序,在每泳动30分钟的泳动变化幅度为5μA范围内之后,开始由前述恒定电压使电压上升的电压上升工序;
(D)在(C)的情况下,将电压上升工序的最终电压设为3000V~6000V的范围内;
(E)第一维等电点电泳凝胶的长边方向的凝胶长度设为5~10cm、第二维电泳凝胶的泳动方向基端部的凝胶浓度设为3~6%;以及
(F)在(E)的情况下,将第二维电泳凝胶的泳动方向前端侧部分的凝胶浓度设定为高于泳动方向基端部的凝胶浓度。
上述(1)~(9)的抗原或上述(10)~(14)的抗原为与鱼变态反应患者的IgE抗体特异结合的抗原。因此,检测到对象的IgE抗体与该抗原结合的情况下,提供对象为鱼变态反应的指标。
本发明还提供包含上述(1)~(9)的抗原的至少一种、或者上述(10)~(14)抗原的至少一种的鱼变态反应的诊断试剂盒。本发明的诊断试剂盒可以在上述提供用于诊断鱼变态反应指标的方法或下述诊断方法中应用。本发明的诊断试剂盒除了包含上述(1)~(9)的抗原的至少一种、或者上述(10)~(14)的抗原的至少一种之外,还可以包含被酶标记的抗IgE抗体以及成为该酶底物的显色底物或发光底物、或者被生物素标记的抗lgE抗体和与该生物素结合的抗生物素结合色素。另外,也可以使用被荧光标记的抗IgE抗体。本发明的诊断试剂盒中,也可以以抗原被固定化于载体的状态提供。本发明的诊断试剂盒还可以与关于用于诊断的步骤的说明书、包含该说明的方法包一起提供。
在另外的方式中,上述的诊断试剂盒包含:鱼变态反应的伴侣诊断药物。伴侣诊断药物是指用于以下用途的物质:期待医药品效果的患者的特定或医药品的具有重度副作用风险的患者的特定、或者为了最优化使用了医药品的治疗而研究该医药品的反应性。此处,治疗的最优化包括例如:用法容量的确定、给药中止的判断、使用何种变应原成分来确认是否获得免疫耐受。
本发明还提供包含上述(1)~(9)的抗原的至少一种、或者上述(10)~(14)抗原的至少一种的鱼变态反应的诊断用组合物。本发明的诊断用组合物可以用于下述的诊断方法中。本发明的诊断用组合物还可以根据需要包含通常与本发明的抗原一起使用的、药学上允许的载体、添加剂。
一方式中,本发明为诊断对象的鱼变态反应的方法,其包括以下工序:
(i)使由对象得到的试样与抗原接触;
(ii)对由对象得到的试样中的IgE抗体与该抗原的结合进行检测;
(iii)检测到对象的IgE抗体与该抗原结合的情况下,判断对象为鱼变态反应;
此处,该抗原是作为上述(1)~(9)的抗原而限定的蛋白质的至少一种、或者作为(10)~(14)的抗原而限定的蛋白质的至少一种。其中,(i)和(ii)的各工序按照对于提供用于诊断鱼变态反应指标的方法的各工序的说明来进行。
在另一个方式中,本发明提供诊断对象的鱼变态反应的方法,其包括对对象给予上述(1)~(9)的抗原的至少一种、或者上述(10)~(14)的抗原的至少一种。该方法也可以以特征在于对皮肤施用抗原的皮肤测试的形式进行。皮肤测试中包含如下形式:对皮肤上施用诊断用组合物之后、以不出血程度地轻微抓伤,使皮肤浸透抗原再观察皮肤反应的点刺试验(prick test);施用了诊断用组合物的基础上轻挠皮肤再观察反应的划痕试验(scratch test);对皮肤施用霜、软膏等形式的诊断用组合物再观察反应的肤斑试验(Patch test);对皮内给予抗原再观察反应的皮内测试;等。在点刺试验、划痕试验中,作为使皮肤浸透诊断用组合物的方法,可以为如下方法:使小刮刀的前端与诊断用组合物接触,用该接触部位刺皮肤而造成伤口而使之浸透。在施用了抗原部分的皮肤出现肿胀等皮肤反应的情况下,诊断为该对象具有鱼变态反应。此处,对皮肤施用的抗原的量也可以为例如每1次100μg以下的用量。
在变态反应的诊断中,经常进行的是以限定抗原为目的的负荷试验。上述(1)~(9)的抗原的至少一种、或者上述(10)~(14)的抗原的至少一种可以作为诊断鱼变态反应的负荷试验的有效成分来使用。此处,作为负荷试验中使用的抗原蛋白质,可以为表达纯化的蛋白质,也可以为例如在稻子中转化杉木花粉抗原的基因,并且在米内使该抗原蛋白质表达的花粉米那样的、在食品/食材中表达的蛋白质。
另外,在另一个方式中,本发明提供鱼变态反应的诊断中使用的上述(1)~(9)的抗原的至少一种、或者上述(10)~(14)的抗原的至少一种。此处,也包含将上述(1)~(9)的抗原的至少一种、或者上述(10)~(14)抗原的至少一种与已知的抗原混合来提供。
进而在另一个实施方式中,本发明提供上述(1)~(9)的抗原的至少一种、或者上述(10)~(14)的抗原的至少一种在制备鱼变态反应的诊断药物中的应用。
药物组合物/治疗方法
本发明提供包含上述(1)~(9)的抗原的至少一种、或者上述(10)~(14)的抗原的至少一种的药物组合物。
一个方式中,上述的药物组合物用于治疗鱼变态反应。
本发明还提供治疗鱼变态反应的方法,其包括:对于需要治疗鱼变态反应的患者,给予上述(1)~(9)的抗原的至少一种、或者上述(10)~(14)的抗原的至少一种。
在另一个方式中,本发明提供鱼变态反应的治疗中使用的上述(1)~(9)的抗原的至少一种、或者上述(10)~(14)的抗原的至少一种。进而在另一个实施方式中,本发明提供上述(1)~(9)的抗原的至少一种、或者上述(10)~(14)的抗原的至少一种在制备鱼变态反应的治疗药物中的应用。
在变态反应的治疗中,经常进行的是目的在于通过对患者给予抗原来诱导免疫耐受的、脱敏治疗法。上述(1)~(9)的抗原的至少一种、或者上述(10)~(14)的抗原的至少一种可以作为治疗鱼变态反应的脱敏治疗法的有效成分来使用。此处,作为脱敏治疗法中使用的抗原蛋白质,可以为表达纯化的蛋白质,也可以为例如在稻子中转化杉木花粉抗原的基因,并且在米内使该抗原蛋白质表达的花粉米那样的、在食品/食材中表达的蛋白质。
本发明的药物组合物可以通过通常的给药途径进行给药。通常的给药途径包括例如:经口、舌下、经皮、皮内、皮下、血液内、鼻腔内、肌肉内、腹腔内、直肠内的给药。
本发明的药物组合物可以使用根据需要与本发明的抗原一起通过常规方法添加了通常使用的药学上允许的佐剂、赋形剂、或者各种添加剂(例如稳定剂、助溶剂、乳浊化剂、缓冲剂、储存剂、着色剂等)而成的药物组合物。药物组合物的剂型可以由本领域技术人员根据给药途径而适宜选择。也可以是例如:片剂、胶囊剂、糖浆剂、舌下片、注射剂、鼻腔内喷雾剂、膏剂、溶液剂、霜剂、露剂、栓剂等形式。本发明的药物组合物的给药量、给药次数和/或给药期间可以由医师根据给药途径、症状、年龄、体重等患者的特性等适宜选择。例如是成人的情况下,也可以以每1次100μg以下的用量给药。给药间隔可以是例如每天1次、每周1次、每月2次或者3个月1次左右。给药期间可以为例如数周~数年。在给药期间内,也可以是梯度地增加给药量的给药方法。
检测仪
本发明提供一种检测仪,其包含针对上述(1)~(9)的抗原的至少一种、或者上述(10)~(14)的抗原的至少一种的抗体。
该抗体可以通过常规方法来制作。例如,对兔子等哺乳动物用上述(1)~(9)的抗原或上述(10)~(14)的抗原进行免疫来制作。该抗体可以为IgE抗体、多克隆抗体、单克隆抗体、或者它们的抗原结合片段(例如、Fab、F(ab’)2、Fab’)。
另外,上述检测仪中,该抗体可以以与载体结合的形式提供。载体只要是在抗体与抗原结合的检测中能够利用的载体,就没有特别的限定。可以利用本领域技术人员公知的任意载体。
作为用于检查是否含有抗原的方法,可列举出例如以下的方法。
·使包含制作的IgE抗体的检测仪与由食品/食材等得到的试样接触,例如使用ELISA法等检测该IgE抗体与试样中的抗原的结合,在检测到该IgE抗体与抗原结合的情况下,判断为对象食品/食材等中残留有该抗原的方法等。
·从食品/食材等中提取蛋白质,通过抗体进行电泳来检测是否有抗原的斑点条带的方法。
·使滤纸等包裹食品/食材,使之与抗体溶液反应来检测其中所包含的抗原的方法。
本发明另外的实施方式中包含用于判断对象物中有无鱼变态反应的抗原的检测仪,其特征在于,其包含具有与序列号1、4、9、18、25、32、42、55、60、69、109、120、137或143所示的碱基序列的至少一个部分互补的碱基序列的引物。非限定地,上述引物具有例如:与序列号1、4、9、18、25、32、42、55、60、69、109、120、137或143所示的碱基序列的至少一个序列的一部分3’末端或中央部分的序列的、优选12个碱基、15个碱基、20个碱基、25个碱基互补的碱基序列。特别是在将mRNA作为对象的情况下,具有Poly(A)tail(多腺嘌呤尾)的互补引物。在优选的方式中,包含上述引物的检测仪进一步包含含有序列号1、4、9、18、25、32、42、55、60、69、109、120、137或143所示的碱基序列的至少一个序列的5’末端部分的碱基序列、优选由12个碱基、15个碱基、20个碱基、25个碱基构成的碱基序列的引物。
例如,以由鱼得到的DNA或mRNA作为模板、使用所述引物,用包含RT-PCR的PCR(聚合酶链式反应,Polymerase Chain Reaction)对DNA或cDNA进行扩增,将所扩增的DNA或cDNA的序列与序列号1、4、9、18、25、32、42、55、60、69、109、120、137或143进行比较,从而判断抗原的有无。用PCR对mRNA进行扩增的方法可例示出RACE法等。此时,在扩增的DNA或cDNA与序列号1、4、9、18、25、32、42、55、60、69、109、120、137或143的比较中,编码相同氨基酸的点突变存在的情况下;或者、扩增的DNA或cDNA的碱基序列中即便存在有对于序列号1、4、9、18、25、32、42、55、60、69、109、120、137或143的碱基序列的碱基插入、缺失、置换或添加时,编码该DNA或cDNA的氨基酸序列相对于序列号2、5、10、19、26、33、43、56、61、70、110、121、138或144的氨基酸序列的同一性为70%以上、优选为80、90、95、98、99%以上时,判定为抗原存在。
一个方式中,上述检测仪可以用来检测在食材(鱼或鱼卵)中或食品生产线中等对象物中是否含有抗原。上述检测仪可以由制造业者用在生产线和出厂前产品的质量检查;也可以由品尝者自己用来检查对象食品/食材是否含有抗原。
去除变应原的食品等
本发明提供特征在于去除或降低了上述(1)~(9)的抗原的至少一种、或者上述(10)~(14)的抗原的至少一种的鱼、鱼卵、该鱼或该鱼卵加工品、或者产生该鱼卵或由该鱼卵孵化的鱼。
对于鱼、鱼卵、该鱼或该鱼卵加工品、或者产生该鱼卵或由该鱼卵孵化的鱼而言,对于本发明的去除或降低抗原的方法没有限定。抗原的去除或降低不限定于本发明抗原的去除或降低,可以使用任意的方法来进行。
例如,去除或降低了本发明抗原的鱼或鱼卵可以使用基因敲除技术来制备本发明的抗原的表达被敲除了的鱼或鱼卵。
基因敲除技术可以使用本领域技术人员公知的方法的任一项。例如,Oishi,etal.(Scientific Reports,Vol.6,Article number:23980,2016,doi:10.1038/srep23980)记载了作为基因组编辑技术的、将CRISPER/Cas9应用于原始生殖细胞,从而得到变应原蛋白质基因缺失个体。也可以利用同样的方法得到本发明的去除了抗原的鱼或鱼卵。另外,也可以与不含有抗原或抗原含量少的鱼或鱼卵通过人工授精进行交配,从而得到本发明的去除或降低了抗原的鱼或鱼卵。鱼或鱼卵的人工交配可以通过常规方法进行。
本发明的去除或降低了抗原的鱼加工品或鱼卵加工品也可以是以去除或降低了本发明抗原的鱼作为原料的加工品。将通常的鱼或鱼卵作为原料的情况下,在鱼加工品或鱼卵加工品的制备前或制备后进行本发明的去除或降低抗原的处理。在以通常的鱼或鱼卵作为原料的鱼加工品或鱼卵加工品中,作为本发明的去除或降低抗原的方法,可列举出:高压处理和利用中性盐溶液的洗脱、高温蒸汽等去除食品/食材中的蛋白质成分的方法;通过热处理和酸处理进行水解、变性、氨基酸变性(侧链的化学修饰/脱离等)的方法。本发明的去除或降低了抗原的鱼也可以是由上述去除或降低了本发明抗原的鱼卵孵化、成长的鱼。本发明的去除或降低了抗原的鱼卵也可以是由去除或降低了本发明抗原的鱼得到的。
实施例
以下,对于本发明的实施例进行说明。本发明的技术范围不限定于这些实施例。
实施例1:蛋白质图谱的确认
使用下述二维电泳方法,检测鲑鱼所包含的蛋白质。
蛋白质的提取
鲑鱼所包含的蛋白质的提取和纯化如下进行。向鲑鱼的身体中加入增溶剂(Mammalian Lysis Buffer(MCLI),SIGMA公司)而提取蛋白质之后,添加尿素缓冲液而得到蛋白质提取液。尿素缓冲液的组成如下。
30mM Tris
2M 硫脲
7M 尿素
4%(w/v)CHAPS:
3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐
适量的稀盐酸
加入蒸馏水将整体调节为100mL。pH为8.5。
之后,以蛋白质重量计各混合25μg来得到提取液。
之后,使用2D-CleanUP试剂盒(GE公司制)进行2次沉淀操作。第1次的沉淀操作向回收的上述蛋白质提取液中加入TCA(三氯乙酸)进行沉淀,对该操作所产生的沉淀(TCA沉淀)进行回收。第2次沉淀操作通过向回收的前述TCA沉淀中加入丙酮进行沉淀,对该操作得到的沉淀(被检体)进行回收。
被检体溶液的制备
将得到的被检体的一部分(以蛋白质重量计40μg)溶解于第一维等电点电泳用凝胶的溶胀用缓冲液DeStreak Rehydration Solution(GE公司制)150μl中,作为第一维等电点电泳用的被检体溶液(溶胀用被检体溶液)。DeStreak Rehydration Solution的组成如下。
7M 硫脲
2M 尿素
4%(w/v)CHAPS
0.5%(v/v)IPG缓冲液;GE公司制
适量的BPB(溴酚蓝)
被检体向第一维等电点电泳用凝胶的浸透
将第一维等电点电泳用凝胶(GE公司制:IPG凝胶Immobiline Drystrip(pH3-10NL))浸渍于前述的第一维等电点电泳用的被检体溶液(膨胀用被检体溶液)140μl中,在室温下使之浸透一晚。
本实施例中,作为电泳仪使用GE公司制的IPGphor。
泳道中填满了硅油。在浸透了被检体的凝胶两端设置被水润湿的滤纸,以凝胶被硅油覆盖的方式设置泳道,在与凝胶之间以夹着该滤纸的状态设置电极。
将等电点电泳仪电流值的上限设定为每1根凝胶75μA,将电压程序如下进行设置:(1)以300V恒定电压升压至750Vhr为止,从而进行恒定电压工序(该工序结束前的泳动30分钟的电流变化幅度为5μA);(2)缓缓地使电压从300Vhr升压至1000V为止;(3)进一步,缓缓地使电压从4500Vhr升压至5000V为止;(4)之后,以5000V恒定电压直至总Vhr成为12000,进行第一维的等电点电泳。
等电点电泳凝胶的SDS平衡化
进行了上述第一维等电点电泳之后,从等电点电泳仪将凝胶卸下,在包含还原剂的平衡化缓冲液中浸渍该凝胶,在室温下振荡15分钟。上述包含还原剂的平衡化缓冲液的组成如下。
100mM Tris-HCl(pH8.0)
6M尿素
30%(v/v)甘油
2%(w/v)SDS
1%(w/v)DTT
接着,去除上述包含还原剂的平衡化缓冲液,使凝胶浸渍于包含烷基化剂的平衡化缓冲液中,在室温下振荡15分钟,得到进行了SDS平衡化的凝胶。上述包含烷基化剂的平衡化缓冲液的组成如下。
100mM Tris-HCl(pH8.0)
6M尿素
30%(v/v)甘油
2%(w/v)SDS
2.5%(w/v)碘乙酰胺
第二维的SDS-PAGE
本实施例中,作为电泳仪使用Life technologies公司制的XCell SureLockMini-Cell。第二维泳动用凝胶使用Life technologies公司制NuPAGE 4-12%Bis-TrisGels。另外,制备以下的组成的泳动用缓冲液并使用。
50mM MOPS
50mM Tris碱
0.1%(w/v)SDS
1mM EDTA
另外,本实施例中,使用在泳动用缓冲液中溶解0.5%(w/v)的琼脂糖S(NIPPONGENE CO.,LTD制)和适量的BPB(溴酚蓝)而成的粘接用琼脂糖溶液。
将SDS-PAGE的孔中充分地用上述泳动用缓冲液进行清洗之后,去除该洗涤中使用的缓冲液。接着,向孔中添加充分溶解的粘接用琼脂糖溶液。接着,使进行了SDS平衡化的凝胶浸渍于琼脂糖中,用镊子使进行了SDS平衡化的凝胶与第二维泳动用凝胶密合。在该两凝胶密合的状态下确认到琼脂糖充分地凝固,以200V恒定电压进行约45分钟泳动。
凝胶的荧光染色
使用SYPRO Ruby(Life technologies公司制)进行凝胶的荧光染色。
首先,将所使用的密闭容器事先用98%(v/v)的乙醇充分地进行清洗。进行2次如下处理:从SDS-PAGE仪器将泳动后的第二维泳动用凝胶卸下,放置于洗净的密闭容器中,在含有50%(v/v)甲醇和7%(v/v)乙酸的水溶液中浸渍30分钟的处理。之后,将该水溶液置换为水,浸渍10分钟。接着,将第二维泳动用凝胶浸渍于40ml的SYPRO Ruby中,在室温下振荡一晩。接着,去除SYPRO Ruby,将第二维泳动用凝胶用水洗涤之后,用含有10%(v/v)甲醇和7%(v/v)乙酸的水溶液振荡30分钟。进一步,将该水溶液置换为水,振荡30分钟以上。
解析
将实施了上述一系列处理的第二维泳动用凝胶供于使用了Typhoon9500(GE公司制)的荧光图像的扫描中。对于鲑鱼的身体所包含的蛋白质,将2维电泳的结果示于图1A左图。凝胶的照片的左侧可见分子量标记物的带,带的位置表示特定的分子量(KDa)。
实施例2:用免疫印迹确认抗原(1)
用免疫印迹确认抗原是如下进行的:将实施例1中记载的步骤进行至“第二维的SDS-PAGE”为止,之后进行以下的“向膜的转印”、“免疫印迹”、“解析”的操作。
向膜的转印
向膜的转印使用以下的转印装置和转印用缓冲液进行。
转印装置:XCell SureLock Mini-Cell和XCell II blot module(Lifetechnologies公司制)
转印用缓冲液:将NuPAGE transfer缓冲液(×20)(Life technologies公司制)用milliQ水稀释20倍然后使用。
具体而言,按照以下的步骤,将第二维电泳凝胶中的蛋白质转印到膜(PVDF膜)。
(1)将PVDF膜浸渍于100%甲醇中,然后浸渍于milliQ水中,然后转移至转印用缓冲液中,进行PVDF膜的亲水化处理。
(2)按照海绵、滤纸、第二维SDS-PAGE结束后的第二维泳动用凝胶、亲水化处理后的PVDF膜、滤纸、海绵的顺序进行设置,在转印装置中、30V恒定电压下通电1小时。
免疫印迹
作为第一抗体使用具有鱼变态反应的患者1的血清或者非鱼变态反应被检者的血清进行膜的免疫印迹。该鱼变态反应的患者1是被诊断为由鱼导致的速发型变态反应的患者。需要说明的是,该患者对鲑鱼、竹荚鱼、海鳗、黑鲷鱼、鲭鱼、鲷鱼、鳕鱼、小鰤鱼产生变态反应症状,点刺试验中显示出阳性。
膜的免疫印迹按照以下的步骤进行。
(1)将转印的膜在5%脱脂奶/PBST溶液(包含0.1%非离子表面活性剂Tween 20的PBS缓冲液)中、室温下振荡1小时。
(2)作为第一抗体,在5%血清/5%脱脂奶/PBST溶液中、室温下静置1小时。
(3)用PBST溶液进行洗涤(5分钟×3次)。
(4)作为第二抗体将抗人IgE-HRP(西洋山葵过氧化酶)在用5%脱脂奶/PBST溶液稀释了5000倍的溶液中、室温下静置1小时。
(5)用PBST溶液进行洗涤(5分钟×3次)。
(6)在Pierce Western Blotting Substrate Plus(Thermo公司制)中静置5分钟。
解析
将实施了上述一系列处理的膜供于使用了Typhoon9500(GE公司制)的荧光图像的扫描中。
将使用了鱼变态反应患者1的血清的免疫印迹与作为对照的使用了非鱼变态反应被检者血清的免疫印迹进行比较。对于鲑鱼的身体所包含的蛋白质使用了鱼变态反应患者1的血清进行的免疫印迹(图1A右图)中,与使用了非鱼变态反应被检者的血清的情况(图3)不同,并且检测到与公知的鲑鱼变应原蛋白质不同的9个斑点。将检测到的斑点示于免疫印迹上(图1A右图)。
上述9个斑点的分子量和等电点分别如下。
斑点1:分子量90~120kDa、pI3.0~6.0
斑点2:分子量120~160kDa、pI4.0~7.0
斑点3:分子量90~120kDa、pI5.0~8.0
斑点4:分子量90~120kDa、pI6.0~8.0
斑点5:分子量60~90kDa、pI3.0~6.0
斑点6:分子量70~100kDa、pI5.0~7.0
斑点7:分子量40~70kDa、pI4.0~7.0
斑点8:分子量40~70kDa、pI4.0~7.0
斑点9:分子量20~50kDa、pI4.0~7.0
实施例3:质谱分析和抗原的鉴定(1)
对于上述产生9个斑点的抗原,利用质谱分析进行氨基酸序列的鉴定。
具体而言,按照以下的步骤进行蛋白质的提取和质谱分析。
(1)对于鲑鱼的身体,按照实施例1和2的步骤进行蛋白质提取、2维电泳和膜转印,用0.008%直接蓝(direct blue)/40%乙醇/10%乙酸进行振荡而染色。
(2)之后,用40%乙醇/10%乙酸进行5分钟的处理3次进行脱色,用水洗涤5分钟之后进行风干。
(3)将目标的斑点用干净的裁刀切取,加入至离心管中。用50μL的甲醇进行膜亲水处理之后,用100μL的水洗涤2次之后离心除去,加入20μL的20mM NH4HCO3·50%乙腈。
(4)加入1pmol/μL赖氨酸-肽链内切酶(WAKO)1μL,在37℃下静置60分钟之后,将溶液回收至新的离心管中。对膜加入20μL的20mM NH4HCO3·70%乙腈,在室温下浸渍10分钟,进一步进行回收。用0.1%甲酸、4%乙腈10μL溶解,转移至试管中。
(5)对回收的溶液进行减压干燥之后,用A液(0.1%甲酸、4%乙腈溶液)15μl进行溶解,进行质谱分析(ESI-TOF6600,AB Sciex公司制)。
(6)基于由质谱仪得到的质谱数据的蛋白质鉴定通过搜索NCBI或UniProt来进行。
结果
对于各斑点进行了质谱分析的结果,检测到以下的氨基酸序列。
斑点1:序列号3所示的氨基酸序列
斑点2:序列号6~8所示的氨基酸序列
斑点3:序列号11~17所示的氨基酸序列
斑点4:序列号20~24所示的氨基酸序列
斑点5:序列号27~31所示的氨基酸序列
斑点6:序列号34~41所示的氨基酸序列
斑点7:序列号44~54所示的氨基酸序列
斑点8:序列号57~59所示的氨基酸序列
斑点9:序列号62~68所示的氨基酸序列
进一步,对于各斑点,针对斑点1,将由质谱仪得到的质谱数据用NCBI进行解析;针对斑点2~9,将由质谱仪得到的质谱数据用UniProt进行解析,结果鉴定出各斑点为以下的蛋白质。
斑点1:α-辅肌动蛋白-3(Alpha-actinin-3)(NCBI的蛋白质登录号XP_014051545.1、DNA登录号XM_014196070.1)(氨基酸序列:序列号2、编码其的碱基序列:序列号1)
斑点2:EEF1A2结合蛋白样(EEF1A2 binding protein-like)(UniProt的蛋白质登陆号B5RI29、DNA登陆号ACH85270.1)(氨基酸序列:序列号5、编码其的碱基序列:序列号4)
斑点3:α-1,4-葡聚糖磷酸化酶(Alpha-1,4-glucan phosphorylase)(UniProt的蛋白质登录号B5DG55、DNA登录号ACH70729.1)(氨基酸序列:序列号10、编码其的碱基序列:序列号9)
斑点4:延伸因子-2(Elongation factor 2)(UniProt的蛋白质登录号C0H9N2、DNA登录号ACN10751.1)(氨基酸序列:序列号19、编码其的碱基序列:序列号18)
斑点5:热激关联蛋白70kDa(Heat shock cognate 70kDa protein)(UniProt的蛋白质登录号B5X3U6、DNA登录号ACI33977.1)(氨基酸序列:序列号26、编码其的碱基序列:序列号25)
斑点6:血清转铁蛋白(Serotransferrin)(UniProt的蛋白质登录号P79815、DNA登录号BAA13759.1)(氨基酸序列:序列号33、编码其的碱基序列:序列号32)
斑点7:肌球蛋白结合蛋白H-样(Myosin binding protein H-like)(UniProt的蛋白质登录号B5DG45、DNA登录号ACH70719.1)(氨基酸序列:序列号43、编码其的碱基序列:序列号42)
斑点8:肌间线蛋白(片段)(Desmin(Fragment))(UniProt的蛋白质登陆号Q8UWF1、DNA登录号CAC83053.1)(氨基酸序列:序列号56、编码其的碱基序列:序列号55)
斑点9:加帽蛋白(肌动蛋白丝)肌肉Z-线β(Capping protein(Actin filament)muscle Z-line beta)(UniProt的蛋白质登陆号B5DFX6、DNA登陆号ACH70650.1)(氨基酸序列:序列号61、编码其的碱基序列:序列号60)
实施例4:用其他鱼种确认抗原(1)
使用鲑鱼以外的竹荚鱼、海鳗、黑鲷鱼、鲭鱼、鲷鱼、鳕鱼、小鰤鱼、鳗鱼和比目鱼的9种鱼的身体,按照与实施例1和实施例2中记载的步骤相同的步骤进行抗原的确认。
将使用了鱼变态反应患者1的血清的免疫印迹与作为对照的使用了非鱼变态反应被检者血清的免疫印迹进行比较。对于9种鱼的身体分别所包含的蛋白质使用了鱼变态反应患者1的血清进行的免疫印迹(图2)中,与使用了非鱼变态反应被检者的血清的情况(图3)不同,并且在鲑鱼中检测到与得到的9个斑点的一部分相当的斑点。
各鱼种中检测到的斑点如下。
竹荚鱼:斑点1、3~5、8和9
海鳗:斑点1、3、5和9
黑鲷鱼:斑点1~6、8和9
鲭鱼:斑点1、3、5、8和9
鲷鱼:斑点1、3~6、8和9
鳕鱼:斑点1、3、5、7~9
小鰤鱼:斑点1、3~5、8、9
鳗鱼:斑点1、3、4、6、9
比目鱼:斑点1、4、6
实施例5:用免疫印迹确认抗原(2)
与实施例2同样地,将使用了鱼变态反应患者血清的免疫印迹与作为对照的使用了非鱼变态反应被检者血清的免疫印迹进行比较。对于鲑鱼的身体所包含的蛋白质使用了鱼变态反应患者2的血清进行的免疫印迹(图1B左图)中,除了实施例2中检测到的9个斑点中的7个(斑点1~6、9)之外,与使用了非鱼变态反应被检者的血清的情况(图3)不同,并且新检测到与公知的鲑鱼变应原蛋白质不同的3个斑点(斑点11、12、14)。将检测到的总计10个斑点示于免疫印迹上(图1B左图)。
新检测到的上述3个斑点的分子量和等电点分别如下。
斑点11:分子量90~110kDa、pI6.5~7.0
斑点12:分子量120~140kDa、pI5.0~6.0
斑点14:分子量30~40kDa、pI6.5~7.5
实施例6:质谱分析和抗原的鉴定(2)
与实施例3同样地,对于产生新检测到的上述3个斑点的抗原,利用质谱分析进行氨基酸序列的鉴定。
对于各斑点进行了质谱分析的结果,检测到以下的氨基酸序列。
斑点11:序列号111~119所示的氨基酸序列
斑点12:序列号122~136所示的氨基酸序列
斑点14:序列号145~149所示的氨基酸序列
进一步,对于各斑点,将由质谱仪得到的质谱数据用NCBI进行解析的结果,鉴定出各斑点为以下的蛋白质。
斑点11:糖原磷酸化酶肌肉型样(glycogen phosphorylase,muscle form-like)(NCBI的蛋白质登录号XP_013984904.1、DNA登录号XM_014129429.1)(氨基酸序列:序列号110、编码其的碱基序列:序列号109)
斑点12:肌球蛋白结合蛋白C快缩型样(myosin-binding protein C,fast-type-like)(NCBI的蛋白质登录号XP_014014310.1、DNA登录号XM_014158835.1)(氨基酸序列:序列号121、编码其的碱基序列:序列号120)
斑点14:L-乳酸脱氢酶A链样(L-lactate dehydrogenase A chain-like)(NCBI的蛋白质登录号XP_014003141.1、DNA登录号XM_014147666.1)(氨基酸序列:序列号144、编码其的碱基序列:序列号143)
实施例7:用免疫印迹确认抗原(3)
与实施例2同样地,将使用了鱼变态反应患者血清的免疫印迹与作为对照的使用了非鱼变态反应被检者血清的免疫印迹进行比较。对于鲑鱼的身体所包含的蛋白质使用了鱼变态反应患者3的血清进行的免疫印迹(图1B右图)中,除了实施例2中检测到的9个斑点中的2个(斑点7、8)之外,与使用了非鱼变态反应被检者的血清的情况(图3)不同,并且新检测到与公知的鲑鱼变应原蛋白质不同的2个斑点(斑点10、13)。将检测到的总计4个斑点示于免疫印迹上(图1B右图)。
新检测到的上述2个斑点的分子量和等电点分别如下。
斑点10:分子量200~230、pI4.5~5.5
斑点13:分子量45~55、pI4.0~5.5
实施例8:质谱分析和抗原的鉴定(3)
与实施例3同样地,对于产生新检测到的上述2个斑点的抗原,利用质谱分析进行氨基酸序列的鉴定。
对于各斑点进行了质谱分析的结果,检测到以下的氨基酸序列。
斑点10:序列号71~108所示的氨基酸序列
斑点13:序列号139~142所示的氨基酸序列
进一步,对于各斑点,将由质谱仪得到的质谱数据用NCBI进行解析的结果,鉴定出各斑点为以下的蛋白质。
斑点10:肌球蛋白重链快缩型骨骼肌样(myosin heavy chain,fast skeletalmuscle-like)(NCBI的蛋白质登陆号XP_014039990.1、DNA登陆号XM_014184515.1)(氨基酸序列:序列号70、编码其的碱基序列:序列号69)
斑点13:ATP合成酶亚单元β线粒体(ATP synthase subunit beta,mitochondrial)(NCBI的蛋白质登录号XP_014007238.1、DNA登录号XM_014151763.1)(氨基酸序列:序列号138、编码其的碱基序列:序列号137)
实施例9:用其它鱼种确认抗原(2)
使用竹荚鱼、海鳗、鲑鱼、鲭鱼、鲷鱼和鳕鱼的6种鱼的身体,与实施例4同样地进行抗原的确认。将使用了鱼变态反应患者4的血清的免疫印迹与作为对照的使用了非鱼变态反应被检者血清的免疫印迹进行比较。对于6种鱼的身体分别所包含的蛋白质使用了鱼变态反应患者4的血清进行的免疫印迹(图4)中,与使用了非鱼变态反应被检者的血清的情况(图3)不同,并且在鲑鱼中检测到与由鱼变态反应患者1~3的血清得到的总计14个斑点的一部分相当的斑点。
各鱼种中检测到的斑点如下。
竹荚鱼:斑点1、3、4、8、10、11和14
海鳗:斑点1、4、10和11
鲑鱼:斑点2、8和10~14
鲭鱼:斑点4、8、10、11、13和14
鲷鱼:斑点1、4、6、8、10和13
鳕鱼:斑点1、5、8、10、11和13
产业上的可利用性
通过本发明能够提供鱼变态反应的新型抗原、鱼变态反应的诊断方法和诊断试剂盒、包含该抗原的药物组合物、以及去除或降低了该抗原的鱼、鱼卵、该鱼或该鱼卵加工品、或者产生该鱼卵或由该鱼卵孵化的鱼。本发明还能够提供用于判断对象物中有无鱼抗原的检测仪。
序列表
<110> 学校法人藤田学园(FUJITA ACADEMY)
朋友股份有限公司(Hoyu Co., Ltd.)
<120> 鱼变态反应的抗原
<130> FA1621-17013
<150> JP2016-119919
<151> 2016-06-16
<160> 149
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 2685
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 预测: α-辅肌动蛋白-3
<400> 1
atgacggcaa tcgaaactca ggtgcaatat ggctcctaca tgacttcgga gcaagtctac 60
atgacccaag aggatgattg ggacagggac cttctgttgg accctgcctg ggagaaacag 120
cagcgcaaga ccttcaccgc ctggtgcaac tctcacctgc gtaaagcggg cacacagatt 180
gagaacattg aggaggactt caggaatggg ctcaagctca tgttgctgtt agaggtcatc 240
tcaggtgaaa ggcttcccaa accagacaaa ggcaaaatgc gtttccacaa aatcgccaac 300
gtgaacaagg ccctggattt catctgcagc aagggagtca agctggtgtc catcggtgcc 360
gaggagattg tggatggtaa tgtgaagatg accctgggga tgatctggac catcattctg 420
cgtttcgcca tccaggacat ctctgtagag gagacctctg ctaaggaggg tctgttgctg 480
tggtgccaga ggaagactgc cccctacagg aatgtcaatg tgcagaactt ccacatcagt 540
tggaaggatg gcctggcact gtgtgccctc atccacagac acagacctga cctcattgac 600
tactccaaac tgcgcaagga tgaccccatg ggcaatctca acactgcctt tgaggtggca 660
gagaagtacc tggacatccc caagatgttg gatgcagaag atattgtgaa caccccgaag 720
cccgacgaga aagccatcat gacctatgtg tcctgcttct atcatgcctt cgctggagcc 780
gagcaggccg agacagctgc caataggatc tgcaaggtgt tggctgtcaa ccaggagaac 840
gagaagctca tggaggagta tgagaagctg gccagtgagc tgctggagtg gatccgtcgc 900
accatcccct ggctggagaa ccgcgtggct gagcagacca tgcgcgccat gcagcagaag 960
ctggaggact tccgtgacta ccgtcgcgtc cacaagcctc ccaaggtgca ggagaagtgt 1020
cagctggaga ttaacttcaa caccctgcag accaagctga ggctgagcaa caggcccgcc 1080
ttcatgccct ccgagggcaa gatggtgtcg gacattgcca atgcctggaa gggtctggag 1140
caggtagaga agggctatga ggagtggctg ctcactgaga tcagacgcct ggagaggctg 1200
gaccacctgg ctgagaagtt caagcagaag tcttccctgc atgagtcctg gacctcaggt 1260
aaggtggagc tgctgtccat gaaggactat gagtctgcct cactgatgga gatccgtgcc 1320
ctgatgagga agcacgaggc gtttgagagc gacctggctg cccaccagga cagagtggag 1380
cagattgctg ccatcgccca ggagctcaat gagctggact atcatgatgc cgtcaccatc 1440
aacgcccgct gccagggtat ttgtgaccag tgggacaacc tgggcacctt gacccagaag 1500
aggagagact cactggagcg tgtggagaag ctgtgggaga ccatcgacca gctgtacctg 1560
gagtttgcca agagagcagc ccccttcaac aactggatgg acggagccat ggaggactta 1620
caggacatgt tcattgtgca cagcattgag gagatccaga gtctgatcac agcccatgac 1680
cagttcaagg ccaccctgcc agaggcagat aaggagcgcg ttgcaaccat gggaatccag 1740
aatgagatcg tgaagatcgc tcagacctac ggcatcaagc tgtcaggagt caacccctac 1800
accaaccttt ccccccagga catcaccgac aaatgggatg ctgtgaaaca cctggtgccc 1860
ctcagggatc agatgctgca ggaggaggtg gccaggcagc agtccaacga gaggctgagg 1920
cgccagttcg ctgcccaggc caacatcatc ggaccctgga tccagaccaa gatggaggag 1980
atcagccatg tgtctgtgga catcgccggc tccctggagg aacagatgag caacctgaag 2040
cagtacgagc agaacatcat caactacaag tgcaacatcg acaagctgga gggagaccac 2100
caactcagcc aggagtccct catctttgac aacaagcaca ccaactacac catggagcat 2160
gtgcgtgtgg gctgggagca gctcctcacc accatcgccc gcaccatcaa cgaggtggag 2220
aaccagatcc tgacccgaga tgccaagggc atcagccagg agcagctcaa cgagttcaga 2280
gcctccttca accactttga caggaagaga aatggtatga tggacccaga tgacttccgt 2340
gcctgtctca tctccatggg ctacgatctg ggtgaggtgg agtttgcccg catcatgacg 2400
ctggtggatt ccaacaacac aggtgtggtg accttccagg ccttcatcga cttcatgacc 2460
cgcgagacgg ccgagacaga caccgccgat caggtcatgg cctcattcaa gatcctggcc 2520
tctgacaaga catacatcac agtggaagaa ctgcgcaggg agctgccccc agagcaggcc 2580
gactactgca tcagccgcat gaccagttac atcggcagcg gcgcaccccc aggcgccctg 2640
gactacatct ccttctccag tgccctgtac ggagagagcg actta 2685
<210> 2
<211> 895
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 预测: α-辅肌动蛋白-3
<400> 2
Met Thr Ala Ile Glu Thr Gln Val Gln Tyr Gly Ser Tyr Met Thr Ser
1 5 10 15
Glu Gln Val Tyr Met Thr Gln Glu Asp Asp Trp Asp Arg Asp Leu Leu
20 25 30
Leu Asp Pro Ala Trp Glu Lys Gln Gln Arg Lys Thr Phe Thr Ala Trp
35 40 45
Cys Asn Ser His Leu Arg Lys Ala Gly Thr Gln Ile Glu Asn Ile Glu
50 55 60
Glu Asp Phe Arg Asn Gly Leu Lys Leu Met Leu Leu Leu Glu Val Ile
65 70 75 80
Ser Gly Glu Arg Leu Pro Lys Pro Asp Lys Gly Lys Met Arg Phe His
85 90 95
Lys Ile Ala Asn Val Asn Lys Ala Leu Asp Phe Ile Cys Ser Lys Gly
100 105 110
Val Lys Leu Val Ser Ile Gly Ala Glu Glu Ile Val Asp Gly Asn Val
115 120 125
Lys Met Thr Leu Gly Met Ile Trp Thr Ile Ile Leu Arg Phe Ala Ile
130 135 140
Gln Asp Ile Ser Val Glu Glu Thr Ser Ala Lys Glu Gly Leu Leu Leu
145 150 155 160
Trp Cys Gln Arg Lys Thr Ala Pro Tyr Arg Asn Val Asn Val Gln Asn
165 170 175
Phe His Ile Ser Trp Lys Asp Gly Leu Ala Leu Cys Ala Leu Ile His
180 185 190
Arg His Arg Pro Asp Leu Ile Asp Tyr Ser Lys Leu Arg Lys Asp Asp
195 200 205
Pro Met Gly Asn Leu Asn Thr Ala Phe Glu Val Ala Glu Lys Tyr Leu
210 215 220
Asp Ile Pro Lys Met Leu Asp Ala Glu Asp Ile Val Asn Thr Pro Lys
225 230 235 240
Pro Asp Glu Lys Ala Ile Met Thr Tyr Val Ser Cys Phe Tyr His Ala
245 250 255
Phe Ala Gly Ala Glu Gln Ala Glu Thr Ala Ala Asn Arg Ile Cys Lys
260 265 270
Val Leu Ala Val Asn Gln Glu Asn Glu Lys Leu Met Glu Glu Tyr Glu
275 280 285
Lys Leu Ala Ser Glu Leu Leu Glu Trp Ile Arg Arg Thr Ile Pro Trp
290 295 300
Leu Glu Asn Arg Val Ala Glu Gln Thr Met Arg Ala Met Gln Gln Lys
305 310 315 320
Leu Glu Asp Phe Arg Asp Tyr Arg Arg Val His Lys Pro Pro Lys Val
325 330 335
Gln Glu Lys Cys Gln Leu Glu Ile Asn Phe Asn Thr Leu Gln Thr Lys
340 345 350
Leu Arg Leu Ser Asn Arg Pro Ala Phe Met Pro Ser Glu Gly Lys Met
355 360 365
Val Ser Asp Ile Ala Asn Ala Trp Lys Gly Leu Glu Gln Val Glu Lys
370 375 380
Gly Tyr Glu Glu Trp Leu Leu Thr Glu Ile Arg Arg Leu Glu Arg Leu
385 390 395 400
Asp His Leu Ala Glu Lys Phe Lys Gln Lys Ser Ser Leu His Glu Ser
405 410 415
Trp Thr Ser Gly Lys Val Glu Leu Leu Ser Met Lys Asp Tyr Glu Ser
420 425 430
Ala Ser Leu Met Glu Ile Arg Ala Leu Met Arg Lys His Glu Ala Phe
435 440 445
Glu Ser Asp Leu Ala Ala His Gln Asp Arg Val Glu Gln Ile Ala Ala
450 455 460
Ile Ala Gln Glu Leu Asn Glu Leu Asp Tyr His Asp Ala Val Thr Ile
465 470 475 480
Asn Ala Arg Cys Gln Gly Ile Cys Asp Gln Trp Asp Asn Leu Gly Thr
485 490 495
Leu Thr Gln Lys Arg Arg Asp Ser Leu Glu Arg Val Glu Lys Leu Trp
500 505 510
Glu Thr Ile Asp Gln Leu Tyr Leu Glu Phe Ala Lys Arg Ala Ala Pro
515 520 525
Phe Asn Asn Trp Met Asp Gly Ala Met Glu Asp Leu Gln Asp Met Phe
530 535 540
Ile Val His Ser Ile Glu Glu Ile Gln Ser Leu Ile Thr Ala His Asp
545 550 555 560
Gln Phe Lys Ala Thr Leu Pro Glu Ala Asp Lys Glu Arg Val Ala Thr
565 570 575
Met Gly Ile Gln Asn Glu Ile Val Lys Ile Ala Gln Thr Tyr Gly Ile
580 585 590
Lys Leu Ser Gly Val Asn Pro Tyr Thr Asn Leu Ser Pro Gln Asp Ile
595 600 605
Thr Asp Lys Trp Asp Ala Val Lys His Leu Val Pro Leu Arg Asp Gln
610 615 620
Met Leu Gln Glu Glu Val Ala Arg Gln Gln Ser Asn Glu Arg Leu Arg
625 630 635 640
Arg Gln Phe Ala Ala Gln Ala Asn Ile Ile Gly Pro Trp Ile Gln Thr
645 650 655
Lys Met Glu Glu Ile Ser His Val Ser Val Asp Ile Ala Gly Ser Leu
660 665 670
Glu Glu Gln Met Ser Asn Leu Lys Gln Tyr Glu Gln Asn Ile Ile Asn
675 680 685
Tyr Lys Cys Asn Ile Asp Lys Leu Glu Gly Asp His Gln Leu Ser Gln
690 695 700
Glu Ser Leu Ile Phe Asp Asn Lys His Thr Asn Tyr Thr Met Glu His
705 710 715 720
Val Arg Val Gly Trp Glu Gln Leu Leu Thr Thr Ile Ala Arg Thr Ile
725 730 735
Asn Glu Val Glu Asn Gln Ile Leu Thr Arg Asp Ala Lys Gly Ile Ser
740 745 750
Gln Glu Gln Leu Asn Glu Phe Arg Ala Ser Phe Asn His Phe Asp Arg
755 760 765
Lys Arg Asn Gly Met Met Asp Pro Asp Asp Phe Arg Ala Cys Leu Ile
770 775 780
Ser Met Gly Tyr Asp Leu Gly Glu Val Glu Phe Ala Arg Ile Met Thr
785 790 795 800
Leu Val Asp Ser Asn Asn Thr Gly Val Val Thr Phe Gln Ala Phe Ile
805 810 815
Asp Phe Met Thr Arg Glu Thr Ala Glu Thr Asp Thr Ala Asp Gln Val
820 825 830
Met Ala Ser Phe Lys Ile Leu Ala Ser Asp Lys Thr Tyr Ile Thr Val
835 840 845
Glu Glu Leu Arg Arg Glu Leu Pro Pro Glu Gln Ala Asp Tyr Cys Ile
850 855 860
Ser Arg Met Thr Ser Tyr Ile Gly Ser Gly Ala Pro Pro Gly Ala Leu
865 870 875 880
Asp Tyr Ile Ser Phe Ser Ser Ala Leu Tyr Gly Glu Ser Asp Leu
885 890 895
<210> 3
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 预测: α-辅肌动蛋白-3片段
<400> 3
Glu Arg Val Ala Thr Met Gly Ile Gln Asn Glu Ile Val Lys
1 5 10
<210> 4
<211> 3591
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> EEF1A2结合蛋白样
<400> 4
atgtggaaaa agaaatcaaa gctcacggac cagacggcca ctggccaagt tgggatcaag 60
aagagatcaa aagtccctgg agttatgatc acgcagtatg tggagaaaat accagatggg 120
aaaagccacc ctgacttcac ccgcaagcct atcgcgttga ccattcagga gggtaaattc 180
gccttcttca aagccctggt tattggagat ccagaaccaa ccgtgacatg gggcagaaat 240
aatggagatg tgtcagatac atcaaaatat gtgacaaaat atgaccctgc tacacgtgag 300
cacttatttg agatggccaa tgtaaaacca gaacaagcag acacctacaa atgctttgca 360
gctaatgagt ttggaagagc agtggtcaca gtggtcctca atgttattga agttgggttc 420
aagaaagcac aagcggactc acaggtgcaa ccagaggcag ctgttgcaga ttttaaatct 480
gtattgaaga gaaaaagtaa aattcagccc aaaatggaaa agaaagaaga tggagaaata 540
gatccaagat tttgggaact cttgataagt gctgacaaga aagactatga gagcctcatg 600
ttggagtttg gagtcactga cttccgcttt atgctgaaga cactgaatga gattaagaag 660
gaaagagagg aagagcaagc acagttcatt gaaaacctag ctaacctgaa acctattgaa 720
gttggacccg atggctgtgc aaccttttca atagacatgg atctcattga acaaagcagc 780
aggatcttcc tctacaagga tggagtgatg attccataca gcaaggagtt gggagataca 840
atcaaacaca gcctaaagat agtgggccga aagtatcagt tcagcataag ggatctgttt 900
cctgatgatg ctgggctcta ccaggtggat gttgaggacg taaatgtatt ctccaccgat 960
tttaagattc ccatggtgga cttcctggtc aagattcagg agtgtaaggc catggagaga 1020
gaggatgctg tgtttgagtg tgtcctgtca cagcccttcg gcaagatcat gtgggttggc 1080
aagaacttac cattggaggc aggggataaa tatgatattg aggtttcaga agacaagctc 1140
atccacagac taatcattaa agacgttgct atggtggaca aaggcatcta tgccgctgtg 1200
gcaggaatca aatcttgcaa tgcctttctt gtggttgaag ccgacaaggg tgaacccggc 1260
aaaaagaaac aacgtaaaac cacaagggca ggaggagctg gagttgacct gacggcgatt 1320
gcccaagagc aggcagttaa aaacacggca gacagagagg tgctgaagga gaaggtgaaa 1380
gcaatcaatg acgagagagc ggctaatgcc actgcagcac ctgagacttc agctgaagct 1440
aaagctaaag ttaaggtggt agaggcttcc caaacaggag ctccaaaaca gggaccggca 1500
gttaaagggt ctgaccataa atccgtggat aatgagggat acagcattaa gagtggactc 1560
tcagatgtct ttgctctccg tggcaagaaa ggtgaactgg tttgtgagat gagccatgaa 1620
gttgatgggg cctggttcaa ggatggagag aagttatcca ccacagatgg aatagccata 1680
gtgaaagatg gaacgagaca cacgatgacc attcatagca gtagtgaaga cgacactgga 1740
gtctatcaca ttgaagcggg gggatttaaa tcagaggcaa aagtcactgt gggagaatta 1800
cctgccattg atgctgatga cctccacaag ttttctaagc ctgtgacaat aaaagtgggc 1860
cagaatgcat cctggaagat gccttataca ccacaggaca acttggaggt gaaatggttt 1920
aaggatggca aagagttgaa ggatggtggt ggggtgaagt tggtgaagga ggtcaagcac 1980
agccggctgc tgctccggga gtgtctgcgt tctgacgctg gggagatcaa gattcaactc 2040
aaaaacccct ttggcactat agaggccaca tctcgactga ttgtccttga caagcccggc 2100
ccaccagaag gcccggtgga aatcttggag accacctcca ctgtgattga gctgcagtgg 2160
ggcgctccta aggacgacgg tggctccccg gtgactaact acatcattga gcgccagcag 2220
ctgggacaga ccgtgtggaa gaagatgggt gatgtcgcag ctgacaaaac cacctacagg 2280
gacaggaatg tggtccatgg gaaactgtac atctacaata tctacgcagt gaacccagag 2340
gggaccagtg atgcactgca gactgaggaa acaatggctg gcgtattgat atttgctggc 2400
cgacctggag caccaaaagt ggtcagcgca tcaaagacct gcatcaacct gaaatgggag 2460
cccccagaag atgacggagg aattaagatt gatggctatc aactggaaaa acgcaaaaag 2520
gacacagctc agtggattgc tttgaaccca gtaactgagc ctattgaagt gctggagtac 2580
gcagtgaagg atgttgttga gggggcggag tatgagttca gggtatcggc catcaacgtt 2640
tctggggcgg gagagttcag tctcccctct gtgatggtga ctgcaaagaa tcccaacatg 2700
aggcctacat tcaaagatcc agaggacttc atggtgatca gggcgggaaa ctctgtgaga 2760
atcaaagttc tctatgaggc tgagcctcca ccggagatca cttggatgaa ggacaatgag 2820
cctgtatcca gttttataca gatcatcaac acagagggct gttcccagct tgtgatcccc 2880
tcaacaaaac gctctgattc aggaaattac accattgtgg ctaagaataa agttggagag 2940
gccagctttg acattgaggt cctagtcaca gatgagccaa agcctcctgg tgcagtggag 3000
ctggagcaga ttgtccatgg caaagttatt gtgtcctggg aggcctctcc agaccaggag 3060
ctggacaaca ggctgtatta catggtggcc gagcacgact ccagcacacg catgtggcac 3120
actgtggcag accgcatctt tgacaattca tacacagcca ataacatcat gcctggaagg 3180
gagtaccact tcaaaatcta tgccaagaac gacatgggca tgtcagaccc ctccatgtca 3240
cccacctggg gcatcaacag caacagaatt cctataaaca caaacacgcc agtggaagtc 3300
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ctgaacaacg tctgcatcaa tggtgacagc aactactaca tcaccaactc gtatggcgtg 3480
tgctccatgt acatccttag ggtcaggccc aaggacgccg gagaatacaa agttgtcgca 3540
gttaactcct tcggcaaggc agaatgctcc actaaacttg ttgttaaaga c 3591
<210> 5
<211> 1197
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> EEF1A2 结合蛋白样
<400> 5
Met Trp Lys Lys Lys Ser Lys Leu Thr Asp Gln Thr Ala Thr Gly Gln
1 5 10 15
Val Gly Ile Lys Lys Arg Ser Lys Val Pro Gly Val Met Ile Thr Gln
20 25 30
Tyr Val Glu Lys Ile Pro Asp Gly Lys Ser His Pro Asp Phe Thr Arg
35 40 45
Lys Pro Ile Ala Leu Thr Ile Gln Glu Gly Lys Phe Ala Phe Phe Lys
50 55 60
Ala Leu Val Ile Gly Asp Pro Glu Pro Thr Val Thr Trp Gly Arg Asn
65 70 75 80
Asn Gly Asp Val Ser Asp Thr Ser Lys Tyr Val Thr Lys Tyr Asp Pro
85 90 95
Ala Thr Arg Glu His Leu Phe Glu Met Ala Asn Val Lys Pro Glu Gln
100 105 110
Ala Asp Thr Tyr Lys Cys Phe Ala Ala Asn Glu Phe Gly Arg Ala Val
115 120 125
Val Thr Val Val Leu Asn Val Ile Glu Val Gly Phe Lys Lys Ala Gln
130 135 140
Ala Asp Ser Gln Val Gln Pro Glu Ala Ala Val Ala Asp Phe Lys Ser
145 150 155 160
Val Leu Lys Arg Lys Ser Lys Ile Gln Pro Lys Met Glu Lys Lys Glu
165 170 175
Asp Gly Glu Ile Asp Pro Arg Phe Trp Glu Leu Leu Ile Ser Ala Asp
180 185 190
Lys Lys Asp Tyr Glu Ser Leu Met Leu Glu Phe Gly Val Thr Asp Phe
195 200 205
Arg Phe Met Leu Lys Thr Leu Asn Glu Ile Lys Lys Glu Arg Glu Glu
210 215 220
Glu Gln Ala Gln Phe Ile Glu Asn Leu Ala Asn Leu Lys Pro Ile Glu
225 230 235 240
Val Gly Pro Asp Gly Cys Ala Thr Phe Ser Ile Asp Met Asp Leu Ile
245 250 255
Glu Gln Ser Ser Arg Ile Phe Leu Tyr Lys Asp Gly Val Met Ile Pro
260 265 270
Tyr Ser Lys Glu Leu Gly Asp Thr Ile Lys His Ser Leu Lys Ile Val
275 280 285
Gly Arg Lys Tyr Gln Phe Ser Ile Arg Asp Leu Phe Pro Asp Asp Ala
290 295 300
Gly Leu Tyr Gln Val Asp Val Glu Asp Val Asn Val Phe Ser Thr Asp
305 310 315 320
Phe Lys Ile Pro Met Val Asp Phe Leu Val Lys Ile Gln Glu Cys Lys
325 330 335
Ala Met Glu Arg Glu Asp Ala Val Phe Glu Cys Val Leu Ser Gln Pro
340 345 350
Phe Gly Lys Ile Met Trp Val Gly Lys Asn Leu Pro Leu Glu Ala Gly
355 360 365
Asp Lys Tyr Asp Ile Glu Val Ser Glu Asp Lys Leu Ile His Arg Leu
370 375 380
Ile Ile Lys Asp Val Ala Met Val Asp Lys Gly Ile Tyr Ala Ala Val
385 390 395 400
Ala Gly Ile Lys Ser Cys Asn Ala Phe Leu Val Val Glu Ala Asp Lys
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420 425 430
Ala Gly Val Asp Leu Thr Ala Ile Ala Gln Glu Gln Ala Val Lys Asn
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Thr Ala Asp Arg Glu Val Leu Lys Glu Lys Val Lys Ala Ile Asn Asp
450 455 460
Glu Arg Ala Ala Asn Ala Thr Ala Ala Pro Glu Thr Ser Ala Glu Ala
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Lys Ala Lys Val Lys Val Val Glu Ala Ser Gln Thr Gly Ala Pro Lys
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Gln Gly Pro Ala Val Lys Gly Ser Asp His Lys Ser Val Asp Asn Glu
500 505 510
Gly Tyr Ser Ile Lys Ser Gly Leu Ser Asp Val Phe Ala Leu Arg Gly
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Trp Phe Lys Asp Gly Glu Lys Leu Ser Thr Thr Asp Gly Ile Ala Ile
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Val Lys Asp Gly Thr Arg His Thr Met Thr Ile His Ser Ser Ser Glu
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Asp Asp Thr Gly Val Tyr His Ile Glu Ala Gly Gly Phe Lys Ser Glu
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Ala Lys Val Thr Val Gly Glu Leu Pro Ala Ile Asp Ala Asp Asp Leu
595 600 605
His Lys Phe Ser Lys Pro Val Thr Ile Lys Val Gly Gln Asn Ala Ser
610 615 620
Trp Lys Met Pro Tyr Thr Pro Gln Asp Asn Leu Glu Val Lys Trp Phe
625 630 635 640
Lys Asp Gly Lys Glu Leu Lys Asp Gly Gly Gly Val Lys Leu Val Lys
645 650 655
Glu Val Lys His Ser Arg Leu Leu Leu Arg Glu Cys Leu Arg Ser Asp
660 665 670
Ala Gly Glu Ile Lys Ile Gln Leu Lys Asn Pro Phe Gly Thr Ile Glu
675 680 685
Ala Thr Ser Arg Leu Ile Val Leu Asp Lys Pro Gly Pro Pro Glu Gly
690 695 700
Pro Val Glu Ile Leu Glu Thr Thr Ser Thr Val Ile Glu Leu Gln Trp
705 710 715 720
Gly Ala Pro Lys Asp Asp Gly Gly Ser Pro Val Thr Asn Tyr Ile Ile
725 730 735
Glu Arg Gln Gln Leu Gly Gln Thr Val Trp Lys Lys Met Gly Asp Val
740 745 750
Ala Ala Asp Lys Thr Thr Tyr Arg Asp Arg Asn Val Val His Gly Lys
755 760 765
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850 855 860
Val Val Glu Gly Ala Glu Tyr Glu Phe Arg Val Ser Ala Ile Asn Val
865 870 875 880
Ser Gly Ala Gly Glu Phe Ser Leu Pro Ser Val Met Val Thr Ala Lys
885 890 895
Asn Pro Asn Met Arg Pro Thr Phe Lys Asp Pro Glu Asp Phe Met Val
900 905 910
Ile Arg Ala Gly Asn Ser Val Arg Ile Lys Val Leu Tyr Glu Ala Glu
915 920 925
Pro Pro Pro Glu Ile Thr Trp Met Lys Asp Asn Glu Pro Val Ser Ser
930 935 940
Phe Ile Gln Ile Ile Asn Thr Glu Gly Cys Ser Gln Leu Val Ile Pro
945 950 955 960
Ser Thr Lys Arg Ser Asp Ser Gly Asn Tyr Thr Ile Val Ala Lys Asn
965 970 975
Lys Val Gly Glu Ala Ser Phe Asp Ile Glu Val Leu Val Thr Asp Glu
980 985 990
Pro Lys Pro Pro Gly Ala Val Glu Leu Glu Gln Ile Val His Gly Lys
995 1000 1005
Val Ile Val Ser Trp Glu Ala Ser Pro Asp Gln Glu Leu Asp Asn
1010 1015 1020
Arg Leu Tyr Tyr Met Val Ala Glu His Asp Ser Ser Thr Arg Met
1025 1030 1035
Trp His Thr Val Ala Asp Arg Ile Phe Asp Asn Ser Tyr Thr Ala
1040 1045 1050
Asn Asn Ile Met Pro Gly Arg Glu Tyr His Phe Lys Ile Tyr Ala
1055 1060 1065
Lys Asn Asp Met Gly Met Ser Asp Pro Ser Met Ser Pro Thr Trp
1070 1075 1080
Gly Ile Asn Ser Asn Arg Ile Pro Ile Asn Thr Asn Thr Pro Val
1085 1090 1095
Glu Val Ser Phe Glu Lys Pro Pro Ser Val Leu Val Pro Leu Lys
1100 1105 1110
Met His Ser Pro Pro Lys Gly Phe Gln Met Tyr Met Thr Cys Ala
1115 1120 1125
Ile Arg Gly Cys Pro Thr Pro Ser Val Thr Trp His Leu Asn Asn
1130 1135 1140
Val Cys Ile Asn Gly Asp Ser Asn Tyr Tyr Ile Thr Asn Ser Tyr
1145 1150 1155
Gly Val Cys Ser Met Tyr Ile Leu Arg Val Arg Pro Lys Asp Ala
1160 1165 1170
Gly Glu Tyr Lys Val Val Ala Val Asn Ser Phe Gly Lys Ala Glu
1175 1180 1185
Cys Ser Thr Lys Leu Val Val Lys Asp
1190 1195
<210> 6
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> EEF1A2 结合蛋白样片段
<400> 6
Ala Gln Ala Asp Ser Gln Val Gln Pro Glu Ala Ala Val Ala Asp Phe
1 5 10 15
Lys
<210> 7
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> EEF1A2 结合蛋白样片段
<400> 7
Gly Ile Tyr Ala Ala Val Ala Gly Ile Lys
1 5 10
<210> 8
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> EEF1A2 结合蛋白样片段
<400> 8
Thr Thr Arg Ala Gly Gly Ala Gly Val Asp Leu Thr Ala Ile Ala Gln
1 5 10 15
Glu Gln Ala Val Lys
20
<210> 9
<211> 2532
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> α-1,4-葡聚糖磷酸化酶
<400> 9
atgtcaaaac cgttgtcaga tcacgataga aagaagcaga tctccgtgag aggtcttgct 60
ggtgtggaaa atgtggcaga actgaaggtc gctttcaaca ggcatctcca ttttacgctg 120
gtcaaggaca gaaatgtggc atccaaacgg gattactact ttgctctcgc caacaccgtg 180
cgtgaccact tggtgggcag gtggatcaga acccagcaat actactatga gaaagatccc 240
aaacgtgtgt actacatctc cctggagttc tacatgggtc gcaccctgca gaacaccatg 300
gtgaacctgg cgctggaaaa cgcctgtgat gaggccatat accagctggg tctggacatg 360
gaggagctgg aggacatgga ggaggacgca ggcctgggaa acggtggtct tggacgtctt 420
gccgcctgct tcctggactc tatggcttct ctgggtctgg ctgcgtatgg ctacggtatc 480
cgctatgagt ttggcatctt taaccagaag atcgtcaatg gatggcaggt tgaggaggct 540
gatgactggc tgcgttacgg caacccctgg gagaaggccc gacccgagta catgcgcccc 600
gtcaagttct atggcagaac cgagcacacc ccagagggtg tgaaatgggt tgacactcag 660
gtagtgttgg ctctgccata tgacacccct atccccgggt acagaaacaa cattgtcaac 720
accatgagac tgtggtctgc aaaggcccca tgcgacttca acctgaaaga cttcaacgtt 780
ggtgggtaca ttcaggctgt gttggacaga aacctatgcg agaacatttc ccgtgtgctg 840
taccccaatg ataacttctt tgagggcaag gagctgcgtc tgaagcagga gtactttgtg 900
gtggccgcca cccttcagga catcgtccgt cgtttcaagg cctctaagtt tggctccaga 960
gagatcgtcc gcacagactt cgcccagctg cccaacaaag ttgccatcca gctgaatgac 1020
actcaccctg ccatggccat tcctgagctg atgagggtac tggttgatga ggagaagctg 1080
gagtgggaca aggcctggga cgtgtgtgtc cgtacctgtg cctacacaaa ccacaccgtg 1140
ctgcctgagg ccctggagcg ctggcccatt gacctgttcc atcacctgct gccccgtcac 1200
ctggagatta tctacgagat caaccgtcgc ttcctgcagt acgtcgcctc gaagttccct 1260
ggcgacaacg accgtctgcg ccgcatgtcc ctgattgagg agggagaatg caagaaagtc 1320
aacatggctc atatgtgtat cgttggatcc catgctgtca acggcgtggc ccgcatccac 1380
tcggagatcc tcgtcgccac tctgttcaag gacttttatg agttggaccc acacaagttc 1440
cagaacaaga ccaatggcat caccccccgt cgctggctgg ttatgtgcaa ccccggcttg 1500
gctgaggtca tcgcagagag aattggagag gagtttgtcc gtgaccttga ccagctgaag 1560
aaactgttga agttcattga tgatgatgct ttcatccgtg acatagccaa agtcaagcag 1620
gagaacaagc tgaagttcgc tgtgcacctg gaagaacact acaaagtaaa gatcaacccc 1680
cagtccatgt ttgacttcca agtcaaaaga atccacgagt acaagagaca gctgctcaac 1740
tgtctgcaca tgatcaccta ctacaaccgt atcaagaagg agccaaacaa gcactggacc 1800
ccaagaacca tcatggtcgg aggaaaggct gccccaggct accacacagc caagatgatc 1860
attcgtctca tcaccgctat cggtgaggtt gtcaaccacg accccgtgat cggcgaccgc 1920
ctcaaagtca tcttcttgga gaactacaga gtcaccctgg ctgagaaagc catcccctct 1980
gctgacctgt ctgagcagat ctctacagct ggcactgagg cctctggcac tggcaacatg 2040
aagttcatgc tgaatggcgc tctgaccatc ggcaccatgg acggagccaa cgtggagatg 2100
gccgaggagg ccggagagaa gaacctcttc atcttcggca tgagagtgga ggaagtggac 2160
gcaatggacg ccggcaaagg ataccacgcc tctgagtact acaaccgtat tcccgagctg 2220
aaacaggcca tggaccagat ctctggtggc ttcttcagcc ataagcagcc agacctcttc 2280
aaggaacttg tggacctgct gatgcaccac gacaggttca aggtgtttgc tgactacgaa 2340
gcctacatca aaagtcagga taaggtcaac gaactgtaca agaaacccaa ggaatggacc 2400
aagatggtga tccataacat tgcaggctgt ggtaaattct ccagcgaccg caccatttcc 2460
cagtacgccc gggagatctg gggcatggag cccagcctgg agaagatccc tgcccccgat 2520
gagcaactca aa 2532
<210> 10
<211> 844
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> α-1,4-葡聚糖磷酸化酶
<400> 10
Met Ser Lys Pro Leu Ser Asp His Asp Arg Lys Lys Gln Ile Ser Val
1 5 10 15
Arg Gly Leu Ala Gly Val Glu Asn Val Ala Glu Leu Lys Val Ala Phe
20 25 30
Asn Arg His Leu His Phe Thr Leu Val Lys Asp Arg Asn Val Ala Ser
35 40 45
Lys Arg Asp Tyr Tyr Phe Ala Leu Ala Asn Thr Val Arg Asp His Leu
50 55 60
Val Gly Arg Trp Ile Arg Thr Gln Gln Tyr Tyr Tyr Glu Lys Asp Pro
65 70 75 80
Lys Arg Val Tyr Tyr Ile Ser Leu Glu Phe Tyr Met Gly Arg Thr Leu
85 90 95
Gln Asn Thr Met Val Asn Leu Ala Leu Glu Asn Ala Cys Asp Glu Ala
100 105 110
Ile Tyr Gln Leu Gly Leu Asp Met Glu Glu Leu Glu Asp Met Glu Glu
115 120 125
Asp Ala Gly Leu Gly Asn Gly Gly Leu Gly Arg Leu Ala Ala Cys Phe
130 135 140
Leu Asp Ser Met Ala Ser Leu Gly Leu Ala Ala Tyr Gly Tyr Gly Ile
145 150 155 160
Arg Tyr Glu Phe Gly Ile Phe Asn Gln Lys Ile Val Asn Gly Trp Gln
165 170 175
Val Glu Glu Ala Asp Asp Trp Leu Arg Tyr Gly Asn Pro Trp Glu Lys
180 185 190
Ala Arg Pro Glu Tyr Met Arg Pro Val Lys Phe Tyr Gly Arg Thr Glu
195 200 205
His Thr Pro Glu Gly Val Lys Trp Val Asp Thr Gln Val Val Leu Ala
210 215 220
Leu Pro Tyr Asp Thr Pro Ile Pro Gly Tyr Arg Asn Asn Ile Val Asn
225 230 235 240
Thr Met Arg Leu Trp Ser Ala Lys Ala Pro Cys Asp Phe Asn Leu Lys
245 250 255
Asp Phe Asn Val Gly Gly Tyr Ile Gln Ala Val Leu Asp Arg Asn Leu
260 265 270
Cys Glu Asn Ile Ser Arg Val Leu Tyr Pro Asn Asp Asn Phe Phe Glu
275 280 285
Gly Lys Glu Leu Arg Leu Lys Gln Glu Tyr Phe Val Val Ala Ala Thr
290 295 300
Leu Gln Asp Ile Val Arg Arg Phe Lys Ala Ser Lys Phe Gly Ser Arg
305 310 315 320
Glu Ile Val Arg Thr Asp Phe Ala Gln Leu Pro Asn Lys Val Ala Ile
325 330 335
Gln Leu Asn Asp Thr His Pro Ala Met Ala Ile Pro Glu Leu Met Arg
340 345 350
Val Leu Val Asp Glu Glu Lys Leu Glu Trp Asp Lys Ala Trp Asp Val
355 360 365
Cys Val Arg Thr Cys Ala Tyr Thr Asn His Thr Val Leu Pro Glu Ala
370 375 380
Leu Glu Arg Trp Pro Ile Asp Leu Phe His His Leu Leu Pro Arg His
385 390 395 400
Leu Glu Ile Ile Tyr Glu Ile Asn Arg Arg Phe Leu Gln Tyr Val Ala
405 410 415
Ser Lys Phe Pro Gly Asp Asn Asp Arg Leu Arg Arg Met Ser Leu Ile
420 425 430
Glu Glu Gly Glu Cys Lys Lys Val Asn Met Ala His Met Cys Ile Val
435 440 445
Gly Ser His Ala Val Asn Gly Val Ala Arg Ile His Ser Glu Ile Leu
450 455 460
Val Ala Thr Leu Phe Lys Asp Phe Tyr Glu Leu Asp Pro His Lys Phe
465 470 475 480
Gln Asn Lys Thr Asn Gly Ile Thr Pro Arg Arg Trp Leu Val Met Cys
485 490 495
Asn Pro Gly Leu Ala Glu Val Ile Ala Glu Arg Ile Gly Glu Glu Phe
500 505 510
Val Arg Asp Leu Asp Gln Leu Lys Lys Leu Leu Lys Phe Ile Asp Asp
515 520 525
Asp Ala Phe Ile Arg Asp Ile Ala Lys Val Lys Gln Glu Asn Lys Leu
530 535 540
Lys Phe Ala Val His Leu Glu Glu His Tyr Lys Val Lys Ile Asn Pro
545 550 555 560
Gln Ser Met Phe Asp Phe Gln Val Lys Arg Ile His Glu Tyr Lys Arg
565 570 575
Gln Leu Leu Asn Cys Leu His Met Ile Thr Tyr Tyr Asn Arg Ile Lys
580 585 590
Lys Glu Pro Asn Lys His Trp Thr Pro Arg Thr Ile Met Val Gly Gly
595 600 605
Lys Ala Ala Pro Gly Tyr His Thr Ala Lys Met Ile Ile Arg Leu Ile
610 615 620
Thr Ala Ile Gly Glu Val Val Asn His Asp Pro Val Ile Gly Asp Arg
625 630 635 640
Leu Lys Val Ile Phe Leu Glu Asn Tyr Arg Val Thr Leu Ala Glu Lys
645 650 655
Ala Ile Pro Ser Ala Asp Leu Ser Glu Gln Ile Ser Thr Ala Gly Thr
660 665 670
Glu Ala Ser Gly Thr Gly Asn Met Lys Phe Met Leu Asn Gly Ala Leu
675 680 685
Thr Ile Gly Thr Met Asp Gly Ala Asn Val Glu Met Ala Glu Glu Ala
690 695 700
Gly Glu Lys Asn Leu Phe Ile Phe Gly Met Arg Val Glu Glu Val Asp
705 710 715 720
Ala Met Asp Ala Gly Lys Gly Tyr His Ala Ser Glu Tyr Tyr Asn Arg
725 730 735
Ile Pro Glu Leu Lys Gln Ala Met Asp Gln Ile Ser Gly Gly Phe Phe
740 745 750
Ser His Lys Gln Pro Asp Leu Phe Lys Glu Leu Val Asp Leu Leu Met
755 760 765
His His Asp Arg Phe Lys Val Phe Ala Asp Tyr Glu Ala Tyr Ile Lys
770 775 780
Ser Gln Asp Lys Val Asn Glu Leu Tyr Lys Lys Pro Lys Glu Trp Thr
785 790 795 800
Lys Met Val Ile His Asn Ile Ala Gly Cys Gly Lys Phe Ser Ser Asp
805 810 815
Arg Thr Ile Ser Gln Tyr Ala Arg Glu Ile Trp Gly Met Glu Pro Ser
820 825 830
Leu Glu Lys Ile Pro Ala Pro Asp Glu Gln Leu Lys
835 840
<210> 11
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> α-1,4-葡聚糖磷酸化酶片段
<400> 11
Ile Pro Ala Pro Asp Glu Gln Leu Lys
1 5
<210> 12
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> α-1,4-葡聚糖磷酸化酶片段
<400> 12
Gln Ile Ser Val Arg Gly Leu Ala Gly Val Glu Asn Val Ala Glu Leu
1 5 10 15
Lys
<210> 13
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> α-1,4-葡聚糖磷酸化酶片段
<400> 13
Ala Ile Pro Ser Ala Asp Leu Ser Glu Gln Ile Ser Thr Ala Gly Thr
1 5 10 15
Glu Ala Ser Gly Thr Gly Asn Met Lys
20 25
<210> 14
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> α-1,4-葡聚糖磷酸化酶片段
<400> 14
Asp Phe Tyr Glu Leu Asp Pro His Lys
1 5
<210> 15
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> α-1,4-葡聚糖磷酸化酶片段
<400> 15
Phe Ala Val His Leu Glu Glu His Tyr Lys
1 5 10
<210> 16
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> α-1,4-葡聚糖磷酸化酶片段
<400> 16
Gly Tyr His Ala Ser Glu Tyr Tyr Asn Arg Ile Pro Glu Leu Lys
1 5 10 15
<210> 17
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> α-1,4-葡聚糖磷酸化酶片段
<400> 17
Ile Pro Ala Pro Asp Glu Gln Leu Lys
1 5
<210> 18
<211> 2574
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 延伸因子2
<400> 18
atggtgaact ttacagtgga ccagatccgt gccatcatgg acaagaaatc caacattcgt 60
aacatgtctg tgatcgctca cgtggaccac ggcaagtcca cgctgaccga ctccctggtg 120
tctaaagccg ggatcatcgc ggggtctcgc gccggagaga cacgcttcac agacactcgc 180
aaagacgagc aggagcgctg tattaccatc aagtccacgg ctatctcgat gtactatgag 240
ctgggggaaa acgacatggc cttcatcaag cagtctaagg atgggcttgg cttcctcatc 300
aacctgattg actcaccggg ccatgtggac ttctcctctg aggtcacagc cgcccttagg 360
gtcaccgacg gcgccctggt ggtggttgac tgcgtctcag gtgtgtgtgt gcagacagag 420
accgtgttga ggcaggccat tgctgagcgc atcaagccag tgctgatgat gaacaagatg 480
gaccgggccc tgctggagct gcagctggag cctgaggacc tgttccagac cttccagcgc 540
atcgtggaga atgtcaacgt catcattgcc acctacggag aggatgaagc gggaccaatg 600
ggtgccatca tgattgaccc tgtgattggt accgtggggt ttgggtctgg cctccacggc 660
tgggccttca ctctaaagca gtttgctgag atgtacgtga caaagttttc tgccggcaaa 720
gacacccagc tgggatcggc ggagaggtgt aagaaggtgg aggacatgat gaagaagctg 780
tggggggaga ggttttttga cccagccact gggaagttca gtaagtccaa cctcggccct 840
gacggtaaga agctgccccg caccttctct cagctggtcc tggaccctat cttcaaggta 900
tttgatgcca tcatgaactt caagaaggat gagacagcca agctgataga gaagctggac 960
atcaagctgg actctgagga caaggagaag gagggcaagc ccctgttgaa ggcagtgatg 1020
cgtcgctggc tcccagccgg agaagccctg ctccagatga tcaccatcca cctgccctcc 1080
cccgtcacgg cccagaagta ccgctgtgag ctgctctacg agggaccagg agacgacgag 1140
gccgccatgg gtatcaagaa ctgcgacccc aaggctcccc tgatgatgta catatctaag 1200
atggtgccca ccacagacaa gggtcgcttc tatgcctttg gccgtgtgtt ctctggctgt 1260
gtgtccaccg gtctgaaggt gcgcatcatg ggaccaaact tcacccctgg gaagaaggaa 1320
gacctctaca tcaagcccat ccagaggacc attctgatga tggggcgtta tgtggagccc 1380
attgaggatg taccatgtgg gaacatcgtt gggctggttg gagttgacca gtatctgatt 1440
aagactggga ccatcaccac ctttgaacag gcccacaaca tgcgtgtgat gaagttcagc 1500
gtcagccctg tggtgagggt ggctgtggag gccaagaacc ctgctgacct gcccaagctg 1560
gtggaggggc tgaagcgtct ggccaagtct gaccccatgg tgcagtgtat catcgaggag 1620
tctggagagc acatcatcgc cggggccgga gagcttcatc tggagatctg tctcaaggat 1680
ctggaggagg accacgccgg cattcccctg aagaaatctg atccagtggt gtcctacagg 1740
gagactgtgt ctgaggagtc tgaagtgatg tgtctatcca agtcccctaa caagcacaac 1800
cgtctgtaca tgcgggctaa acctttccct gacggcctgg ccgaggacat cgagaagggg 1860
gacgtcagcc cccgacagga gctgaaaatc cgcgcccgtt tcctggctga caagtacgag 1920
tgggacgtgt cggaggcccg taagatctgg tgcttcggcc ctgacggtac cggtcccaac 1980
ctgctgatgg atgttaccaa gggagtccag tacctgaatg agatcaagga cagtgttgtg 2040
gctggcttcc agtgggctgt caaggagggt gtgttgtgtg aggagaacat gcgtgcagtc 2100
cgcttcgaca tccacgacgt gaccctgcac acagacgcaa ttcaccgcgg tggcggacag 2160
atcatcccca cggcccgcag agtgctgtat gcctgccagc tcaccgccca gccacgactc 2220
atggagccgg tctacttagt ggagatccag tgcccagagc aggtagtggg tgggatctac 2280
ggcgtgctga acaggaagcg aggccatgtg ttcgaggagt cccaggtgat gggcacgccc 2340
atgttcatcg tcaaggccta cctgcctgtc aacgagtcat ttgggttcac cgctgacctg 2400
cgctccaaca cgggcggcca ggctttcccc cagtgtgtgt ttgatcactg gcagatcctc 2460
cagggagatc cccaggaccc caccaccaag accgccattg tggtggccga gaccaggaaa 2520
cgcaaggggc tgaaagaggg catcccggcc ctggacaact acctggacaa attg 2574
<210> 19
<211> 858
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 延伸因子2
<400> 19
Met Val Asn Phe Thr Val Asp Gln Ile Arg Ala Ile Met Asp Lys Lys
1 5 10 15
Ser Asn Ile Arg Asn Met Ser Val Ile Ala His Val Asp His Gly Lys
20 25 30
Ser Thr Leu Thr Asp Ser Leu Val Ser Lys Ala Gly Ile Ile Ala Gly
35 40 45
Ser Arg Ala Gly Glu Thr Arg Phe Thr Asp Thr Arg Lys Asp Glu Gln
50 55 60
Glu Arg Cys Ile Thr Ile Lys Ser Thr Ala Ile Ser Met Tyr Tyr Glu
65 70 75 80
Leu Gly Glu Asn Asp Met Ala Phe Ile Lys Gln Ser Lys Asp Gly Leu
85 90 95
Gly Phe Leu Ile Asn Leu Ile Asp Ser Pro Gly His Val Asp Phe Ser
100 105 110
Ser Glu Val Thr Ala Ala Leu Arg Val Thr Asp Gly Ala Leu Val Val
115 120 125
Val Asp Cys Val Ser Gly Val Cys Val Gln Thr Glu Thr Val Leu Arg
130 135 140
Gln Ala Ile Ala Glu Arg Ile Lys Pro Val Leu Met Met Asn Lys Met
145 150 155 160
Asp Arg Ala Leu Leu Glu Leu Gln Leu Glu Pro Glu Asp Leu Phe Gln
165 170 175
Thr Phe Gln Arg Ile Val Glu Asn Val Asn Val Ile Ile Ala Thr Tyr
180 185 190
Gly Glu Asp Glu Ala Gly Pro Met Gly Ala Ile Met Ile Asp Pro Val
195 200 205
Ile Gly Thr Val Gly Phe Gly Ser Gly Leu His Gly Trp Ala Phe Thr
210 215 220
Leu Lys Gln Phe Ala Glu Met Tyr Val Thr Lys Phe Ser Ala Gly Lys
225 230 235 240
Asp Thr Gln Leu Gly Ser Ala Glu Arg Cys Lys Lys Val Glu Asp Met
245 250 255
Met Lys Lys Leu Trp Gly Glu Arg Phe Phe Asp Pro Ala Thr Gly Lys
260 265 270
Phe Ser Lys Ser Asn Leu Gly Pro Asp Gly Lys Lys Leu Pro Arg Thr
275 280 285
Phe Ser Gln Leu Val Leu Asp Pro Ile Phe Lys Val Phe Asp Ala Ile
290 295 300
Met Asn Phe Lys Lys Asp Glu Thr Ala Lys Leu Ile Glu Lys Leu Asp
305 310 315 320
Ile Lys Leu Asp Ser Glu Asp Lys Glu Lys Glu Gly Lys Pro Leu Leu
325 330 335
Lys Ala Val Met Arg Arg Trp Leu Pro Ala Gly Glu Ala Leu Leu Gln
340 345 350
Met Ile Thr Ile His Leu Pro Ser Pro Val Thr Ala Gln Lys Tyr Arg
355 360 365
Cys Glu Leu Leu Tyr Glu Gly Pro Gly Asp Asp Glu Ala Ala Met Gly
370 375 380
Ile Lys Asn Cys Asp Pro Lys Ala Pro Leu Met Met Tyr Ile Ser Lys
385 390 395 400
Met Val Pro Thr Thr Asp Lys Gly Arg Phe Tyr Ala Phe Gly Arg Val
405 410 415
Phe Ser Gly Cys Val Ser Thr Gly Leu Lys Val Arg Ile Met Gly Pro
420 425 430
Asn Phe Thr Pro Gly Lys Lys Glu Asp Leu Tyr Ile Lys Pro Ile Gln
435 440 445
Arg Thr Ile Leu Met Met Gly Arg Tyr Val Glu Pro Ile Glu Asp Val
450 455 460
Pro Cys Gly Asn Ile Val Gly Leu Val Gly Val Asp Gln Tyr Leu Ile
465 470 475 480
Lys Thr Gly Thr Ile Thr Thr Phe Glu Gln Ala His Asn Met Arg Val
485 490 495
Met Lys Phe Ser Val Ser Pro Val Val Arg Val Ala Val Glu Ala Lys
500 505 510
Asn Pro Ala Asp Leu Pro Lys Leu Val Glu Gly Leu Lys Arg Leu Ala
515 520 525
Lys Ser Asp Pro Met Val Gln Cys Ile Ile Glu Glu Ser Gly Glu His
530 535 540
Ile Ile Ala Gly Ala Gly Glu Leu His Leu Glu Ile Cys Leu Lys Asp
545 550 555 560
Leu Glu Glu Asp His Ala Gly Ile Pro Leu Lys Lys Ser Asp Pro Val
565 570 575
Val Ser Tyr Arg Glu Thr Val Ser Glu Glu Ser Glu Val Met Cys Leu
580 585 590
Ser Lys Ser Pro Asn Lys His Asn Arg Leu Tyr Met Arg Ala Lys Pro
595 600 605
Phe Pro Asp Gly Leu Ala Glu Asp Ile Glu Lys Gly Asp Val Ser Pro
610 615 620
Arg Gln Glu Leu Lys Ile Arg Ala Arg Phe Leu Ala Asp Lys Tyr Glu
625 630 635 640
Trp Asp Val Ser Glu Ala Arg Lys Ile Trp Cys Phe Gly Pro Asp Gly
645 650 655
Thr Gly Pro Asn Leu Leu Met Asp Val Thr Lys Gly Val Gln Tyr Leu
660 665 670
Asn Glu Ile Lys Asp Ser Val Val Ala Gly Phe Gln Trp Ala Val Lys
675 680 685
Glu Gly Val Leu Cys Glu Glu Asn Met Arg Ala Val Arg Phe Asp Ile
690 695 700
His Asp Val Thr Leu His Thr Asp Ala Ile His Arg Gly Gly Gly Gln
705 710 715 720
Ile Ile Pro Thr Ala Arg Arg Val Leu Tyr Ala Cys Gln Leu Thr Ala
725 730 735
Gln Pro Arg Leu Met Glu Pro Val Tyr Leu Val Glu Ile Gln Cys Pro
740 745 750
Glu Gln Val Val Gly Gly Ile Tyr Gly Val Leu Asn Arg Lys Arg Gly
755 760 765
His Val Phe Glu Glu Ser Gln Val Met Gly Thr Pro Met Phe Ile Val
770 775 780
Lys Ala Tyr Leu Pro Val Asn Glu Ser Phe Gly Phe Thr Ala Asp Leu
785 790 795 800
Arg Ser Asn Thr Gly Gly Gln Ala Phe Pro Gln Cys Val Phe Asp His
805 810 815
Trp Gln Ile Leu Gln Gly Asp Pro Gln Asp Pro Thr Thr Lys Thr Ala
820 825 830
Ile Val Val Ala Glu Thr Arg Lys Arg Lys Gly Leu Lys Glu Gly Ile
835 840 845
Pro Ala Leu Asp Asn Tyr Leu Asp Lys Leu
850 855
<210> 20
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 延伸因子2 片段
<400> 20
Thr Ala Ile Val Val Ala Glu Thr Arg Lys
1 5 10
<210> 21
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 延伸因子2 片段
<400> 21
Asp Leu Glu Glu Asp His Ala Gly Ile Pro Leu Lys
1 5 10
<210> 22
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 延伸因子2 片段
<400> 22
Asp Leu Glu Glu Asp His Ala Gly Ile Pro Leu Lys Lys
1 5 10
<210> 23
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 延伸因子2 片段
<400> 23
Asp Ser Val Val Ala Gly Phe Gln Trp Ala Val Lys
1 5 10
<210> 24
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 延伸因子2 片段
<400> 24
Gly Asp Val Ser Pro Arg Gln Glu Leu Lys
1 5 10
<210> 25
<211> 1989
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 热激关联蛋白70 kDa
<400> 25
atgtcaaagg gaccagcagt tggcattgac ctgggcacca cctactcctg tgtgggtgtg 60
tttcagcatg gcaaagtgga gatcatagcc aacgaccagg gaaacaggac cacacccagt 120
tatgtcgcct tcacagacac agaaaggctg attggggacg cagccaagaa ccaagtggcc 180
atgaacccca caaacacagt gtttgatgct aagcggctga tagggcggaa gtttgacgac 240
agtgtcgtcc aggcagacat gaaacactgg ccgtttacag tgatcaacga ctcgacacgg 300
cccaaggtcc aagtggagta caagggagag accaaggcct tctacccaga ggagatctcc 360
tccatggtgc tggtcaagat gaaggagatt gcagaggcct acctgggcaa gactataacc 420
aatgcagtgg tcactgtgcc agcttacttc aacgactctc agcgccaggc caccaaagat 480
gcagggacta tctcaggact caacgtactc cgcatcatca atgagccaac tgctgctgct 540
atcgcctatg gcctggacaa gaaggtggga gtggagagaa acgtcctaat ctttgaccta 600
ggcggaggta cgtttgatgt gtctatcctg accatcgaag acgggatctt tgaggtgaag 660
tccacggccg gagacaccca tcttggagga gaggacttcg acaaccgcat ggtcaaccac 720
ttcatctctg agttcaagcg caaatacaag aaggacatca gcgataacaa gagggccgtg 780
cgtcgtctgc gcaccgcctg tgaacgtgcc aagcgcaccc tgtcctccag tacccaggcc 840
agcattgaga ttgactctct gtatgagggc gtcgacttct acacctccat caccagggct 900
cgctttgagg agctgaacgc tgacctgttc agaggcaccc tggaccccgt ggagaagtct 960
ctgagggacg ccaagatgga caaggcccag gttcacgaca tcgtcctagt gggaggctcc 1020
acacgcatcc ccaagatcca aaagttgctg caggacttct tcaatgggaa ggagctcaac 1080
aagagcatca accctgatga ggcggttgcc tatggtgcag ctgttcaggc ggccatcttg 1140
tccggagaca agtctgagaa cgtgcaggac ctgctgctgc tggacgtcac gccactgtcc 1200
ctgggcattg agacggccgg aggggtcatg accgtgctca tcaagaggaa caccaccatc 1260
cccaccaagc agacgcagac cttcacaaca tactcagaca accagcctgg ggtgctcatt 1320
caggtatatg agggggaaag agccatgacc aaagacaaca acctactggg gaagtttgag 1380
ttgtgtggga ttccaccagc cccccggggt gtgcctcaga tcgaggtcac ctttgacatt 1440
gacgccaacg gcatcatgaa cgtgtctgcc gctgacaaga gcaccggcaa ggagaataag 1500
atcaccatca ccaatgacaa aggtcgtctg agtaaggagg acatagagcg catggtccag 1560
gaggctgaac agtacaaagc tgcggacgat gtccagaggg acaaggtggc gtccaagaat 1620
ggcctggagt catacgcctt caacatgaag tccaccgtgg aggacgagaa gctcaagggc 1680
aagctcagcg acgaggacaa acagaagatc ctggacaaat gcaatgaggt catcagctgg 1740
ctggacaaga accagtctgc agagaaggag gagtttgagc accaccagaa ggagctggag 1800
aaggtctgta accccatcat caccaagctg taccagggtg ctggggggat gcctggaggg 1860
atgcctggag ggatgcctgg agggatgcct ggagggatgc ctggggggat gcctggaggg 1920
atgcccgggg ctggtggtgc cgcacccgga ggaggtggat cctctggacc aacaattgag 1980
gaagtcgac 1989
<210> 26
<211> 663
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 热激关联蛋白70 kDa
<400> 26
Met Ser Lys Gly Pro Ala Val Gly Ile Asp Leu Gly Thr Thr Tyr Ser
1 5 10 15
Cys Val Gly Val Phe Gln His Gly Lys Val Glu Ile Ile Ala Asn Asp
20 25 30
Gln Gly Asn Arg Thr Thr Pro Ser Tyr Val Ala Phe Thr Asp Thr Glu
35 40 45
Arg Leu Ile Gly Asp Ala Ala Lys Asn Gln Val Ala Met Asn Pro Thr
50 55 60
Asn Thr Val Phe Asp Ala Lys Arg Leu Ile Gly Arg Lys Phe Asp Asp
65 70 75 80
Ser Val Val Gln Ala Asp Met Lys His Trp Pro Phe Thr Val Ile Asn
85 90 95
Asp Ser Thr Arg Pro Lys Val Gln Val Glu Tyr Lys Gly Glu Thr Lys
100 105 110
Ala Phe Tyr Pro Glu Glu Ile Ser Ser Met Val Leu Val Lys Met Lys
115 120 125
Glu Ile Ala Glu Ala Tyr Leu Gly Lys Thr Ile Thr Asn Ala Val Val
130 135 140
Thr Val Pro Ala Tyr Phe Asn Asp Ser Gln Arg Gln Ala Thr Lys Asp
145 150 155 160
Ala Gly Thr Ile Ser Gly Leu Asn Val Leu Arg Ile Ile Asn Glu Pro
165 170 175
Thr Ala Ala Ala Ile Ala Tyr Gly Leu Asp Lys Lys Val Gly Val Glu
180 185 190
Arg Asn Val Leu Ile Phe Asp Leu Gly Gly Gly Thr Phe Asp Val Ser
195 200 205
Ile Leu Thr Ile Glu Asp Gly Ile Phe Glu Val Lys Ser Thr Ala Gly
210 215 220
Asp Thr His Leu Gly Gly Glu Asp Phe Asp Asn Arg Met Val Asn His
225 230 235 240
Phe Ile Ser Glu Phe Lys Arg Lys Tyr Lys Lys Asp Ile Ser Asp Asn
245 250 255
Lys Arg Ala Val Arg Arg Leu Arg Thr Ala Cys Glu Arg Ala Lys Arg
260 265 270
Thr Leu Ser Ser Ser Thr Gln Ala Ser Ile Glu Ile Asp Ser Leu Tyr
275 280 285
Glu Gly Val Asp Phe Tyr Thr Ser Ile Thr Arg Ala Arg Phe Glu Glu
290 295 300
Leu Asn Ala Asp Leu Phe Arg Gly Thr Leu Asp Pro Val Glu Lys Ser
305 310 315 320
Leu Arg Asp Ala Lys Met Asp Lys Ala Gln Val His Asp Ile Val Leu
325 330 335
Val Gly Gly Ser Thr Arg Ile Pro Lys Ile Gln Lys Leu Leu Gln Asp
340 345 350
Phe Phe Asn Gly Lys Glu Leu Asn Lys Ser Ile Asn Pro Asp Glu Ala
355 360 365
Val Ala Tyr Gly Ala Ala Val Gln Ala Ala Ile Leu Ser Gly Asp Lys
370 375 380
Ser Glu Asn Val Gln Asp Leu Leu Leu Leu Asp Val Thr Pro Leu Ser
385 390 395 400
Leu Gly Ile Glu Thr Ala Gly Gly Val Met Thr Val Leu Ile Lys Arg
405 410 415
Asn Thr Thr Ile Pro Thr Lys Gln Thr Gln Thr Phe Thr Thr Tyr Ser
420 425 430
Asp Asn Gln Pro Gly Val Leu Ile Gln Val Tyr Glu Gly Glu Arg Ala
435 440 445
Met Thr Lys Asp Asn Asn Leu Leu Gly Lys Phe Glu Leu Cys Gly Ile
450 455 460
Pro Pro Ala Pro Arg Gly Val Pro Gln Ile Glu Val Thr Phe Asp Ile
465 470 475 480
Asp Ala Asn Gly Ile Met Asn Val Ser Ala Ala Asp Lys Ser Thr Gly
485 490 495
Lys Glu Asn Lys Ile Thr Ile Thr Asn Asp Lys Gly Arg Leu Ser Lys
500 505 510
Glu Asp Ile Glu Arg Met Val Gln Glu Ala Glu Gln Tyr Lys Ala Ala
515 520 525
Asp Asp Val Gln Arg Asp Lys Val Ala Ser Lys Asn Gly Leu Glu Ser
530 535 540
Tyr Ala Phe Asn Met Lys Ser Thr Val Glu Asp Glu Lys Leu Lys Gly
545 550 555 560
Lys Leu Ser Asp Glu Asp Lys Gln Lys Ile Leu Asp Lys Cys Asn Glu
565 570 575
Val Ile Ser Trp Leu Asp Lys Asn Gln Ser Ala Glu Lys Glu Glu Phe
580 585 590
Glu His His Gln Lys Glu Leu Glu Lys Val Cys Asn Pro Ile Ile Thr
595 600 605
Lys Leu Tyr Gln Gly Ala Gly Gly Met Pro Gly Gly Met Pro Gly Gly
610 615 620
Met Pro Gly Gly Met Pro Gly Gly Met Pro Gly Gly Met Pro Gly Gly
625 630 635 640
Met Pro Gly Ala Gly Gly Ala Ala Pro Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly
645 650 655
Pro Thr Ile Glu Glu Val Asp
660
<210> 27
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 热激关联蛋白70 kDa 片段
<400> 27
Ala Phe Tyr Pro Glu Glu Ile Ser Ser Met Val Leu Val Lys
1 5 10
<210> 28
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 热激关联蛋白70 kDa 片段
<400> 28
Glu Asp Ile Glu Arg Met Val Gln Glu Ala Glu Gln Tyr Lys
1 5 10
<210> 29
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 热激关联蛋白70 kDa 片段
<400> 29
His Trp Pro Phe Thr Val Ile Asn Asp Ser Thr Arg Pro Lys
1 5 10
<210> 30
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 热激关联蛋白70 kDa 片段
<400> 30
Asn Gln Ser Ala Glu Lys Glu Glu Phe Glu His His Gln Lys
1 5 10
<210> 31
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 热激关联蛋白70 kDa 片段
<400> 31
Thr Ile Thr Asn Ala Val Val Thr Val Pro Ala Tyr Phe Asn Asp Ser
1 5 10 15
Gln Arg Gln Ala Thr Lys
20
<210> 32
<211> 2061
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 血清转铁蛋白
<400> 32
atgaaactgc ttctcgtctc agcgctgctg gggtgcttcg ctacggtgta tgctgcccca 60
gctgagggaa tggttagatg gtgcgtaaag tcggaaaaag agctgaagaa atgccacgat 120
ctcgcagcca atgtggcggg gttttcatgc gtgaggaggg acgactctct tgaatgcatc 180
caagccatca agagggaaga ggctgatgct atcactctgg atggaggaga tatttacata 240
gctggcctcc acaactacaa cctgcagccc atcattgcag aggactatgg tgaggactct 300
gacacctgct attatgctgt ggccgtggcc aaaaagggca ctgaatttgg gttcctcgac 360
ctccgtggca agaagtcctg ccacaccggg ttgggcaaat ctgcaggctg gaacattccc 420
atcggtaccc tggtgactgt gggccagatc caatgggccg gcatcgagga cagacctgtg 480
gagtcggcgg tgagcgactt cttcaatgcc agctgtgctc caggagccaa tagggattct 540
caactgtgcc agttgtgtat gggagactgc tccagatctc acaacgagcc ctactatgac 600
tattccgggg ccttccagtg cctgaaggat ggagcaggag aggttgcctt catcaagcac 660
ctgactgtac ctgccgcaga gaaggcaagc tatgagttgc tgtgcaagga taacaccaga 720
gctcccatcg acagctacaa gacctgccac ctggccagag tacccgccca cgctgtggtc 780
agccgcaagg accccaggct ggccaatctc atctacagca agctgatggc cgtcacgaac 840
ttcaacctgt tctcctccga tggttatgct gccaagaacc tgatgttcaa ggactccact 900
cagaatctag tacagctgcc aatgaccacc gactccttcc tctacctggg agctgagtac 960
atgagcacta tacgctccct gacaaaagcg caggccacag gtgtcacctc cagggccatc 1020
aaatggtgtg ccgtgggcca taaggagaag gtcaagtgtg acgcctggac aatcaacagc 1080
ttcacagatg gtgactccag gatcgaatgc caggacgcac ccacagtgga tgaatgcatc 1140
aagaagatca tgcgtaaaga ggcagatgcc atagcggtgg atggtgggga ggtgttcact 1200
gctggaaaat gtggtctggt ccctgtcatg gtggagcagt atgatgaagt tcggtgcagc 1260
gcccctggtg aggcgtcatc ctactttgcg gtggcggtgg caaagagggg atctgggttg 1320
acctggacaa ccctgaaggg caagaggtca tgccacaccg gcttgggcag gaccgcaggc 1380
tggaacatac ccatgggtct tatccatagg aggactatga actgcgactt caccacatac 1440
ttcagtaagg gctgtgctcc tggatttgag gtggactctc ccttctgtgc ccagtgtaag 1500
ggcagtggga agtccgtggg aggagatggg tccaagtgca aagccagctc tgaagagcag 1560
tactacggct ataacggagc attcagatgt ctggttgaag atgctggaga tgttgccttc 1620
attaaacaca ctattgtacc agagatgact gatggtagtg gtccagtttg ggcacagaac 1680
ctgatgtcct ctgactttga actactctgc caggatggta ctaccaagcc agtcacacat 1740
ttccgtgagt gccacctggc caaggtgccc gcccatgctg tgataacacg cccagagtcc 1800
cgtggagagg ttgtgtccat ccttctggag cagcaggcca ggttcggctc aagcggcagc 1860
gattcctcat ttaatatgtt caagccagat tttggaaaga acttgctctt caaggattcc 1920
acaaagtgtc tccaggagat cccaagcggc accaaattcc agggtttcct tggggaagag 1980
tacatgatcg ccatgcaatc gctcagggag tgctccaaca gtacctcaga tttggagaag 2040
gcatgcactt tccattcctg c 2061
<210> 33
<211> 687
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 血清转铁蛋白
<400> 33
Met Lys Leu Leu Leu Val Ser Ala Leu Leu Gly Cys Phe Ala Thr Val
1 5 10 15
Tyr Ala Ala Pro Ala Glu Gly Met Val Arg Trp Cys Val Lys Ser Glu
20 25 30
Lys Glu Leu Lys Lys Cys His Asp Leu Ala Ala Asn Val Ala Gly Phe
35 40 45
Ser Cys Val Arg Arg Asp Asp Ser Leu Glu Cys Ile Gln Ala Ile Lys
50 55 60
Arg Glu Glu Ala Asp Ala Ile Thr Leu Asp Gly Gly Asp Ile Tyr Ile
65 70 75 80
Ala Gly Leu His Asn Tyr Asn Leu Gln Pro Ile Ile Ala Glu Asp Tyr
85 90 95
Gly Glu Asp Ser Asp Thr Cys Tyr Tyr Ala Val Ala Val Ala Lys Lys
100 105 110
Gly Thr Glu Phe Gly Phe Leu Asp Leu Arg Gly Lys Lys Ser Cys His
115 120 125
Thr Gly Leu Gly Lys Ser Ala Gly Trp Asn Ile Pro Ile Gly Thr Leu
130 135 140
Val Thr Val Gly Gln Ile Gln Trp Ala Gly Ile Glu Asp Arg Pro Val
145 150 155 160
Glu Ser Ala Val Ser Asp Phe Phe Asn Ala Ser Cys Ala Pro Gly Ala
165 170 175
Asn Arg Asp Ser Gln Leu Cys Gln Leu Cys Met Gly Asp Cys Ser Arg
180 185 190
Ser His Asn Glu Pro Tyr Tyr Asp Tyr Ser Gly Ala Phe Gln Cys Leu
195 200 205
Lys Asp Gly Ala Gly Glu Val Ala Phe Ile Lys His Leu Thr Val Pro
210 215 220
Ala Ala Glu Lys Ala Ser Tyr Glu Leu Leu Cys Lys Asp Asn Thr Arg
225 230 235 240
Ala Pro Ile Asp Ser Tyr Lys Thr Cys His Leu Ala Arg Val Pro Ala
245 250 255
His Ala Val Val Ser Arg Lys Asp Pro Arg Leu Ala Asn Leu Ile Tyr
260 265 270
Ser Lys Leu Met Ala Val Thr Asn Phe Asn Leu Phe Ser Ser Asp Gly
275 280 285
Tyr Ala Ala Lys Asn Leu Met Phe Lys Asp Ser Thr Gln Asn Leu Val
290 295 300
Gln Leu Pro Met Thr Thr Asp Ser Phe Leu Tyr Leu Gly Ala Glu Tyr
305 310 315 320
Met Ser Thr Ile Arg Ser Leu Thr Lys Ala Gln Ala Thr Gly Val Thr
325 330 335
Ser Arg Ala Ile Lys Trp Cys Ala Val Gly His Lys Glu Lys Val Lys
340 345 350
Cys Asp Ala Trp Thr Ile Asn Ser Phe Thr Asp Gly Asp Ser Arg Ile
355 360 365
Glu Cys Gln Asp Ala Pro Thr Val Asp Glu Cys Ile Lys Lys Ile Met
370 375 380
Arg Lys Glu Ala Asp Ala Ile Ala Val Asp Gly Gly Glu Val Phe Thr
385 390 395 400
Ala Gly Lys Cys Gly Leu Val Pro Val Met Val Glu Gln Tyr Asp Glu
405 410 415
Val Arg Cys Ser Ala Pro Gly Glu Ala Ser Ser Tyr Phe Ala Val Ala
420 425 430
Val Ala Lys Arg Gly Ser Gly Leu Thr Trp Thr Thr Leu Lys Gly Lys
435 440 445
Arg Ser Cys His Thr Gly Leu Gly Arg Thr Ala Gly Trp Asn Ile Pro
450 455 460
Met Gly Leu Ile His Arg Arg Thr Met Asn Cys Asp Phe Thr Thr Tyr
465 470 475 480
Phe Ser Lys Gly Cys Ala Pro Gly Phe Glu Val Asp Ser Pro Phe Cys
485 490 495
Ala Gln Cys Lys Gly Ser Gly Lys Ser Val Gly Gly Asp Gly Ser Lys
500 505 510
Cys Lys Ala Ser Ser Glu Glu Gln Tyr Tyr Gly Tyr Asn Gly Ala Phe
515 520 525
Arg Cys Leu Val Glu Asp Ala Gly Asp Val Ala Phe Ile Lys His Thr
530 535 540
Ile Val Pro Glu Met Thr Asp Gly Ser Gly Pro Val Trp Ala Gln Asn
545 550 555 560
Leu Met Ser Ser Asp Phe Glu Leu Leu Cys Gln Asp Gly Thr Thr Lys
565 570 575
Pro Val Thr His Phe Arg Glu Cys His Leu Ala Lys Val Pro Ala His
580 585 590
Ala Val Ile Thr Arg Pro Glu Ser Arg Gly Glu Val Val Ser Ile Leu
595 600 605
Leu Glu Gln Gln Ala Arg Phe Gly Ser Ser Gly Ser Asp Ser Ser Phe
610 615 620
Asn Met Phe Lys Pro Asp Phe Gly Lys Asn Leu Leu Phe Lys Asp Ser
625 630 635 640
Thr Lys Cys Leu Gln Glu Ile Pro Ser Gly Thr Lys Phe Gln Gly Phe
645 650 655
Leu Gly Glu Glu Tyr Met Ile Ala Met Gln Ser Leu Arg Glu Cys Ser
660 665 670
Asn Ser Thr Ser Asp Leu Glu Lys Ala Cys Thr Phe His Ser Cys
675 680 685
<210> 34
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 血清转铁蛋白片段
<400> 34
Ala Gln Ala Thr Gly Val Thr Ser Arg Ala Ile Lys
1 5 10
<210> 35
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 血清转铁蛋白片段
<400> 35
Ala Thr Gly Val Thr Ser Arg Ala Ile Lys
1 5 10
<210> 36
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 血清转铁蛋白片段
<400> 36
Asp Pro Arg Leu Ala Asn Leu Ile Tyr Ser Lys
1 5 10
<210> 37
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 血清转铁蛋白片段
<400> 37
Gly Thr Glu Phe Gly Phe Leu Asp Leu Arg Gly Lys
1 5 10
<210> 38
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 血清转铁蛋白片段
<400> 38
Lys Gly Thr Glu Phe Gly Phe Leu Asp Leu Arg Gly Lys
1 5 10
<210> 39
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 血清转铁蛋白片段
<400> 39
Lys Gly Thr Glu Phe Gly Phe Leu Asp Leu Arg Gly Lys Lys
1 5 10
<210> 40
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 血清转铁蛋白片段
<400> 40
Leu Met Ala Val Thr Asn Phe Asn Leu Phe Ser Ser Asp Gly Tyr Ala
1 5 10 15
Ala Lys
<210> 41
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 血清转铁蛋白片段
<400> 41
Arg Gly Ser Gly Leu Thr Trp Thr Thr Leu Lys
1 5 10
<210> 42
<211> 1518
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白结合蛋白H-样
<400> 42
atgcctgcga agcctgcccc tatcaagaag gcagccccga aagagcctgc tcctaagaag 60
gaggaagcac ctgcacctgc acccgcggag gcggctcctg ctgaagttgc tccccctgcc 120
gaggtcgaag ctccaccggc agaggctgcc cctgccgaag cagctgcccc tgctgaggca 180
gctccaaccg aagaaaaggc tcccgcagaa cccgcgcctg agcagcccaa agcacccaca 240
ccccctcctc cagatgagcc caccagtgag cccctggaag tgacagtgga cgacaagagc 300
gacacttcag tgaccatcac ctggaggcct ccaaagacta ttccagccaa ctctggcctg 360
gatggataca ctgtggaaat caccaaggag ggaactgaag actggaaagc agccaacgag 420
gatctgaccg tgtcctgccg ttatgtcatc aagaaccaga ctaccggcga ccgtctgctg 480
atccgagtgg ttgctgtaaa ccctggtggc cgcagccccc ctgctaccat cgccgacccc 540
gttctggtca aggaggttgg ggctcgcccc aaagtccgcc tccctcgttt cctgaggcag 600
aggtatgtca agaaagtcgg cgagaagatc aacattgtca tcccgtactc tggcaaacct 660
aagccagtgg ttagctggtt aaaggatgga cagcccctcg actcaaagag ggccaacatc 720
cgtacatctg acagagacag catcctgttc atccgtcaag cagagagggt ggactctggc 780
tcatacgaaa tgtgcgtgaa ggtggacgac tttgaggaca aagctgctat catcatccag 840
attattgagt tacccgggcc accagccagc attaagattg tggatgtctg gggattcaac 900
gttgctttgg agtggaccgt acccaaagat aatggaaaca cagagatcac aggctacact 960
gtccagaaag ctgacaagaa gaccggggac tggttcaaca ttttggagca ctacgccaga 1020
ctaaatgcca ccatctcaga cctcattatg ggcaacacct acaccttcag ggtctttgca 1080
gagaacaagt gcggactcag tgaggaatgt gccgtgacca agggagaagc caccattgtg 1140
aaggaggtta ttgactacaa acctaccccg ttcgtggagc atgacttcac cgaggctccc 1200
aagttcacca ctgttctgaa cgacaggtcc accactgttg gctacagcac caagctgctg 1260
tgttctgtga ggggatgccc caagcctaag attatgtgga tgaagaacaa gatgattctc 1320
aacaacatgg acaaccccaa gtacaggatg atcagcacag ggggcatctg caccctggag 1380
atccgtaagc ctggcccata cgacggtggt gagtatgtct gcagagccga gaatacactg 1440
gggaaggtcg acaccggctg caagctggag gtcagaaagc ctgggcaagc agatgctgac 1500
aaagacaaga aggaacag 1518
<210> 43
<211> 506
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白结合蛋白H-样
<400> 43
Met Pro Ala Lys Pro Ala Pro Ile Lys Lys Ala Ala Pro Lys Glu Pro
1 5 10 15
Ala Pro Lys Lys Glu Glu Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Glu Ala Ala
20 25 30
Pro Ala Glu Val Ala Pro Pro Ala Glu Val Glu Ala Pro Pro Ala Glu
35 40 45
Ala Ala Pro Ala Glu Ala Ala Ala Pro Ala Glu Ala Ala Pro Thr Glu
50 55 60
Glu Lys Ala Pro Ala Glu Pro Ala Pro Glu Gln Pro Lys Ala Pro Thr
65 70 75 80
Pro Pro Pro Pro Asp Glu Pro Thr Ser Glu Pro Leu Glu Val Thr Val
85 90 95
Asp Asp Lys Ser Asp Thr Ser Val Thr Ile Thr Trp Arg Pro Pro Lys
100 105 110
Thr Ile Pro Ala Asn Ser Gly Leu Asp Gly Tyr Thr Val Glu Ile Thr
115 120 125
Lys Glu Gly Thr Glu Asp Trp Lys Ala Ala Asn Glu Asp Leu Thr Val
130 135 140
Ser Cys Arg Tyr Val Ile Lys Asn Gln Thr Thr Gly Asp Arg Leu Leu
145 150 155 160
Ile Arg Val Val Ala Val Asn Pro Gly Gly Arg Ser Pro Pro Ala Thr
165 170 175
Ile Ala Asp Pro Val Leu Val Lys Glu Val Gly Ala Arg Pro Lys Val
180 185 190
Arg Leu Pro Arg Phe Leu Arg Gln Arg Tyr Val Lys Lys Val Gly Glu
195 200 205
Lys Ile Asn Ile Val Ile Pro Tyr Ser Gly Lys Pro Lys Pro Val Val
210 215 220
Ser Trp Leu Lys Asp Gly Gln Pro Leu Asp Ser Lys Arg Ala Asn Ile
225 230 235 240
Arg Thr Ser Asp Arg Asp Ser Ile Leu Phe Ile Arg Gln Ala Glu Arg
245 250 255
Val Asp Ser Gly Ser Tyr Glu Met Cys Val Lys Val Asp Asp Phe Glu
260 265 270
Asp Lys Ala Ala Ile Ile Ile Gln Ile Ile Glu Leu Pro Gly Pro Pro
275 280 285
Ala Ser Ile Lys Ile Val Asp Val Trp Gly Phe Asn Val Ala Leu Glu
290 295 300
Trp Thr Val Pro Lys Asp Asn Gly Asn Thr Glu Ile Thr Gly Tyr Thr
305 310 315 320
Val Gln Lys Ala Asp Lys Lys Thr Gly Asp Trp Phe Asn Ile Leu Glu
325 330 335
His Tyr Ala Arg Leu Asn Ala Thr Ile Ser Asp Leu Ile Met Gly Asn
340 345 350
Thr Tyr Thr Phe Arg Val Phe Ala Glu Asn Lys Cys Gly Leu Ser Glu
355 360 365
Glu Cys Ala Val Thr Lys Gly Glu Ala Thr Ile Val Lys Glu Val Ile
370 375 380
Asp Tyr Lys Pro Thr Pro Phe Val Glu His Asp Phe Thr Glu Ala Pro
385 390 395 400
Lys Phe Thr Thr Val Leu Asn Asp Arg Ser Thr Thr Val Gly Tyr Ser
405 410 415
Thr Lys Leu Leu Cys Ser Val Arg Gly Cys Pro Lys Pro Lys Ile Met
420 425 430
Trp Met Lys Asn Lys Met Ile Leu Asn Asn Met Asp Asn Pro Lys Tyr
435 440 445
Arg Met Ile Ser Thr Gly Gly Ile Cys Thr Leu Glu Ile Arg Lys Pro
450 455 460
Gly Pro Tyr Asp Gly Gly Glu Tyr Val Cys Arg Ala Glu Asn Thr Leu
465 470 475 480
Gly Lys Val Asp Thr Gly Cys Lys Leu Glu Val Arg Lys Pro Gly Gln
485 490 495
Ala Asp Ala Asp Lys Asp Lys Lys Glu Gln
500 505
<210> 44
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白结合蛋白H-样片段
<400> 44
Ala Ala Ile Ile Ile Gln Ile Ile Glu Leu Pro Gly Pro Pro Ala Ser
1 5 10 15
Ile Lys
<210> 45
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白结合蛋白H-样片段
<400> 45
Ala Ala Pro Ala Glu Ala Ala Ala Pro Ala Glu Ala Ala Pro Thr Glu
1 5 10 15
Glu Lys
<210> 46
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白结合蛋白H-样片段
<400> 46
Ala Pro Ala Glu Pro Ala Pro Glu Gln Pro Lys
1 5 10
<210> 47
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白结合蛋白H-样片段
<400> 47
Asp Asn Gly Asn Thr Glu Ile Thr Gly Tyr Thr Val Gln Lys
1 5 10
<210> 48
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白结合蛋白H-样片段
<400> 48
Glu Val Ile Asp Tyr Lys Pro Thr Pro Phe Val Glu His Asp Phe Thr
1 5 10 15
Glu Ala Pro Lys
20
<210> 49
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白结合蛋白H-样片段
<400> 49
Phe Thr Thr Val Leu Asn Asp Arg Ser Thr Thr Val Gly Tyr Ser Thr
1 5 10 15
Lys
<210> 50
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白结合蛋白H-样片段
<400> 50
Ile Asn Ile Val Ile Pro Tyr Ser Gly Lys
1 5 10
<210> 51
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白结合蛋白H-样片段
<400> 51
Ile Asn Ile Val Ile Pro Tyr Ser Gly Lys Pro Lys Pro Val Val Ser
1 5 10 15
Trp Leu Lys
<210> 52
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白结合蛋白H-样片段
<400> 52
Asn Gln Thr Thr Gly Asp Arg Leu Leu Ile Arg Val Val Ala Val Asn
1 5 10 15
Pro Gly Gly Arg Ser Pro Pro Ala Thr Ile Ala Asp Pro Val Leu Val
20 25 30
Lys
<210> 53
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白结合蛋白H-样片段
<400> 53
Ser Asp Thr Ser Val Thr Ile Thr Trp Arg Pro Pro Lys
1 5 10
<210> 54
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白结合蛋白H-样片段
<400> 54
Thr Ile Pro Ala Asn Ser Gly Leu Asp Gly Tyr Thr Val Glu Ile Thr
1 5 10 15
Lys
<210> 55
<211> 1377
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌间线蛋白(片段)
<400> 55
atttcctctt accgccgcac tttcggttct ggtattggat ccaccccagg catgtcctcc 60
atgttctccc acggtggacg cggctcctcc ggctcggccc acatgtcctc cagagtctac 120
gagatgacca aaagctccgc ccgccccagc tactcctccg gcagtattcg ctcctcctcc 180
ggcggcgcga tgcgctcgta cgccgggatg ggcgagaagc tggacttcaa cctggccgac 240
gccactaacc gcgacttcct ggacaccaga accaatgaga aggcagagtt gcagcacctg 300
aacgaccggt tcgccagcta catcgagaag gtccgtttcc tggagcagca gaacgctact 360
ctggtggtgg agatcgagag gctgaggggt cacgagccga cccgcgtggc cgagatgtac 420
gaggaggaga tgagagagct gaggcgtcag gtggacggca tgtccaatga ccgagcccgc 480
atggaggtgg agagagacaa cttggctgac gacctgcaga aactcaaact cagactgcag 540
gaggtgatcc accagaggga agaggcagag aacaacctgt ctgccttcag agctgacgtg 600
gactctgcca cgctggccag gctggacctg gagagacgca ttgaaagcct gcaggaggag 660
atcaccttcc tcaagaagat ccacgaggag gagatccatg agctgacgag ccagatgcag 720
gagacctcgg tgcaggtcca gatggacatg tccaaaccag acctgaccgt tgccctcagg 780
gacatccgta tgcagtacga gggtatcgca gccaagaaca tctctgaggc agaggactgg 840
tacaagtcca aggtgtcaga cctgaaccag gctgtgaaca agaacaacga tgctctgaga 900
caggccaaac aggagagcat ggagttcagg catcagatcc agtcctacac ctgtgagatc 960
gactctctca agggaaccaa cgagtctctg ctgaggcaga tgagggagat ggaggatcgt 1020
ctgggaaacg aggctggagg ttaccaggac tccgtcaccc gtctggaggc tgagatcgcc 1080
aagatgaagg atgagatggc tcgtcacctc agagagtacc aggacctcct caatgtcaag 1140
atggccctgg atatagagat cgctacctac aggaagctac tggagggaga ggagagccga 1200
atcactgtat ctggctccaa gtcttctcac tctggctccc actctgctgc ctcattatat 1260
tccactgttg gattcagaga gaccagccca gacgtcggac gatcagcaga ggtccactcc 1320
aagaagactg tcctgatcaa gaccatcgag acccgcgatg gagaggtcgt cagcgag 1377
<210> 56
<211> 459
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌间线蛋白(片段)
<400> 56
Ile Ser Ser Tyr Arg Arg Thr Phe Gly Ser Gly Ile Gly Ser Thr Pro
1 5 10 15
Gly Met Ser Ser Met Phe Ser His Gly Gly Arg Gly Ser Ser Gly Ser
20 25 30
Ala His Met Ser Ser Arg Val Tyr Glu Met Thr Lys Ser Ser Ala Arg
35 40 45
Pro Ser Tyr Ser Ser Gly Ser Ile Arg Ser Ser Ser Gly Gly Ala Met
50 55 60
Arg Ser Tyr Ala Gly Met Gly Glu Lys Leu Asp Phe Asn Leu Ala Asp
65 70 75 80
Ala Thr Asn Arg Asp Phe Leu Asp Thr Arg Thr Asn Glu Lys Ala Glu
85 90 95
Leu Gln His Leu Asn Asp Arg Phe Ala Ser Tyr Ile Glu Lys Val Arg
100 105 110
Phe Leu Glu Gln Gln Asn Ala Thr Leu Val Val Glu Ile Glu Arg Leu
115 120 125
Arg Gly His Glu Pro Thr Arg Val Ala Glu Met Tyr Glu Glu Glu Met
130 135 140
Arg Glu Leu Arg Arg Gln Val Asp Gly Met Ser Asn Asp Arg Ala Arg
145 150 155 160
Met Glu Val Glu Arg Asp Asn Leu Ala Asp Asp Leu Gln Lys Leu Lys
165 170 175
Leu Arg Leu Gln Glu Val Ile His Gln Arg Glu Glu Ala Glu Asn Asn
180 185 190
Leu Ser Ala Phe Arg Ala Asp Val Asp Ser Ala Thr Leu Ala Arg Leu
195 200 205
Asp Leu Glu Arg Arg Ile Glu Ser Leu Gln Glu Glu Ile Thr Phe Leu
210 215 220
Lys Lys Ile His Glu Glu Glu Ile His Glu Leu Thr Ser Gln Met Gln
225 230 235 240
Glu Thr Ser Val Gln Val Gln Met Asp Met Ser Lys Pro Asp Leu Thr
245 250 255
Val Ala Leu Arg Asp Ile Arg Met Gln Tyr Glu Gly Ile Ala Ala Lys
260 265 270
Asn Ile Ser Glu Ala Glu Asp Trp Tyr Lys Ser Lys Val Ser Asp Leu
275 280 285
Asn Gln Ala Val Asn Lys Asn Asn Asp Ala Leu Arg Gln Ala Lys Gln
290 295 300
Glu Ser Met Glu Phe Arg His Gln Ile Gln Ser Tyr Thr Cys Glu Ile
305 310 315 320
Asp Ser Leu Lys Gly Thr Asn Glu Ser Leu Leu Arg Gln Met Arg Glu
325 330 335
Met Glu Asp Arg Leu Gly Asn Glu Ala Gly Gly Tyr Gln Asp Ser Val
340 345 350
Thr Arg Leu Glu Ala Glu Ile Ala Lys Met Lys Asp Glu Met Ala Arg
355 360 365
His Leu Arg Glu Tyr Gln Asp Leu Leu Asn Val Lys Met Ala Leu Asp
370 375 380
Ile Glu Ile Ala Thr Tyr Arg Lys Leu Leu Glu Gly Glu Glu Ser Arg
385 390 395 400
Ile Thr Val Ser Gly Ser Lys Ser Ser His Ser Gly Ser His Ser Ala
405 410 415
Ala Ser Leu Tyr Ser Thr Val Gly Phe Arg Glu Thr Ser Pro Asp Val
420 425 430
Gly Arg Ser Ala Glu Val His Ser Lys Lys Thr Val Leu Ile Lys Thr
435 440 445
Ile Glu Thr Arg Asp Gly Glu Val Val Ser Glu
450 455
<210> 57
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 部分肌间线蛋白(片段)
<400> 57
Asp Glu Met Ala Arg His Leu Arg Glu Tyr Gln Asp Leu Leu Asn Val
1 5 10 15
Lys
<210> 58
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 部分肌间线蛋白(片段)
<400> 58
Leu Asp Phe Asn Leu Ala Asp Ala Thr Asn Arg Asp Phe Leu Asp Thr
1 5 10 15
Arg Thr Asn Glu Lys
20
<210> 59
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 部分肌间线蛋白(片段)
<400> 59
Asn Ile Ser Glu Ala Glu Asp Trp Tyr Lys
1 5 10
<210> 60
<211> 822
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 加帽蛋白(肌动蛋白丝)肌肉Z-线 β
<400> 60
atgaatgacc agcagctgga ctgtgctctg gacctgatga ggcgtcttcc tccccagcag 60
atcgagaaga atctcagtga cctcatcgac ctggtgccca gtctgtgtga ggacctactc 120
tcctctgtgg accagcctct gaagatcgcc cgggacaagg tagtggggaa agactacctg 180
ctctgtgact ataacagaga cggtgactcc tacagatccc catggagtaa taagtatgag 240
ccacccatcg acgatggtgc catgccatct gcccgcctgc gcaaactaga ggtggaagcc 300
aacaatgcct ttgaccagta tagagacctg tactttgagg gtggcgtatc gtctgtgtat 360
ctgtgggact tggatcatgg ctttgctggg gtcatcctca tcaagaaggc tggagacggc 420
tccaagaaga tcaaaggctg ctgggactcc atccatgtgg tggaggtgca ggagaagtcc 480
agcggacgga ccgctcacta caaactcacc tccaccgtca tgctgtggct ccagacgacc 540
aaggccgggt ctggaaccat gaacctgggt ggcagtctga caagacagat ggagaaagac 600
gagacagttg gagagtcttc cccacatatt gccaacatcg gccgcctggt ggaggatatg 660
gagaataaga ttcgctccac tctcaacgag atctactttg ggaagaccaa ggacatcgtc 720
aatggtttaa gatctattga ctctctgcct gataaccaaa agtaccggca gctccagaag 780
gagctgtctc aggtccttac ccagcgccag atcttcattg ac 822
<210> 61
<211> 274
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 加帽蛋白(肌动蛋白丝)肌肉Z-线 β
<400> 61
Met Asn Asp Gln Gln Leu Asp Cys Ala Leu Asp Leu Met Arg Arg Leu
1 5 10 15
Pro Pro Gln Gln Ile Glu Lys Asn Leu Ser Asp Leu Ile Asp Leu Val
20 25 30
Pro Ser Leu Cys Glu Asp Leu Leu Ser Ser Val Asp Gln Pro Leu Lys
35 40 45
Ile Ala Arg Asp Lys Val Val Gly Lys Asp Tyr Leu Leu Cys Asp Tyr
50 55 60
Asn Arg Asp Gly Asp Ser Tyr Arg Ser Pro Trp Ser Asn Lys Tyr Glu
65 70 75 80
Pro Pro Ile Asp Asp Gly Ala Met Pro Ser Ala Arg Leu Arg Lys Leu
85 90 95
Glu Val Glu Ala Asn Asn Ala Phe Asp Gln Tyr Arg Asp Leu Tyr Phe
100 105 110
Glu Gly Gly Val Ser Ser Val Tyr Leu Trp Asp Leu Asp His Gly Phe
115 120 125
Ala Gly Val Ile Leu Ile Lys Lys Ala Gly Asp Gly Ser Lys Lys Ile
130 135 140
Lys Gly Cys Trp Asp Ser Ile His Val Val Glu Val Gln Glu Lys Ser
145 150 155 160
Ser Gly Arg Thr Ala His Tyr Lys Leu Thr Ser Thr Val Met Leu Trp
165 170 175
Leu Gln Thr Thr Lys Ala Gly Ser Gly Thr Met Asn Leu Gly Gly Ser
180 185 190
Leu Thr Arg Gln Met Glu Lys Asp Glu Thr Val Gly Glu Ser Ser Pro
195 200 205
His Ile Ala Asn Ile Gly Arg Leu Val Glu Asp Met Glu Asn Lys Ile
210 215 220
Arg Ser Thr Leu Asn Glu Ile Tyr Phe Gly Lys Thr Lys Asp Ile Val
225 230 235 240
Asn Gly Leu Arg Ser Ile Asp Ser Leu Pro Asp Asn Gln Lys Tyr Arg
245 250 255
Gln Leu Gln Lys Glu Leu Ser Gln Val Leu Thr Gln Arg Gln Ile Phe
260 265 270
Ile Asp
<210> 62
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 加帽蛋白(肌动蛋白丝)肌肉Z-线 β片段
<400> 62
Asp Glu Thr Val Gly Glu Ser Ser Pro His Ile Ala Asn Ile Gly Arg
1 5 10 15
Leu Val Glu Asp Met Glu Asn Lys
20
<210> 63
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 加帽蛋白(肌动蛋白丝)肌肉Z-线 β片段
<400> 63
Asp Ile Val Asn Gly Leu Arg Ser Ile Asp Ser Leu Pro Asp Asn Gln
1 5 10 15
Lys
<210> 64
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 加帽蛋白(肌动蛋白丝)肌肉Z-线 β片段
<400> 64
Glu Leu Ser Gln Val Leu Thr Gln Arg Gln Ile Phe Ile Asp
1 5 10
<210> 65
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 加帽蛋白(肌动蛋白丝)肌肉Z-线 β片段
<400> 65
Ile Arg Ser Thr Leu Asn Glu Ile Tyr Phe Gly Lys
1 5 10
<210> 66
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 加帽蛋白(肌动蛋白丝)肌肉Z-线 β片段
<400> 66
Leu Thr Ser Thr Val Met Leu Trp Leu Gln Thr Thr Lys
1 5 10
<210> 67
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 加帽蛋白(肌动蛋白丝)肌肉Z-线 β片段
<400> 67
Ser Ile Asp Ser Leu Pro Asp Asn Gln Lys
1 5 10
<210> 68
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 加帽蛋白(肌动蛋白丝)肌肉Z-线 β片段
<400> 68
Tyr Glu Pro Pro Ile Asp Asp Gly Ala Met Pro Ser Ala Arg Leu Arg
1 5 10 15
Lys
<210> 69
<211> 5799
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样
<400> 69
atgagtacgg acgcggagat gcaagtctac ggcaaggctg ccatatacct tcgtaagtct 60
gagaaggaga ggatggaggc acaagccatg ccctttgatt caaagaacgc ctgctatgtg 120
acagacaagg tggagctgta ccttaagggt ttagtcactg ccagggccga cgggaagtgt 180
actgtgacag ctttagactt tcgtgaagga aaagagttca aagatgcaga catctatgag 240
atgaaccccc ctaagtacga caagattgag gacatggcca tgatgaccta cctgaatgaa 300
gcctctgtgt tgtataacct caaagagcgt tatgcagcat ggatgatcta tacctactct 360
gggctcttct gtgccacggt gaacccctac aagtggctcc cagtgtacga cgaagaggtt 420
gtcaacgcct acagagggaa gaagagggtg gaggctccac cacatatctt ctccgtctct 480
gacaacgcct ttcagttcat gatgattgat aaggagaacc agtccgtcct gattactgga 540
gaatccggtg caggaaagac tgtcaacacc aagcgtgtca tccagtactt tgccaccatt 600
gcagtgtctg gtggcaagaa ggaagcagac cccaacaaaa tgcaggggtc tcttgaggat 660
cagatcattg cagctaaccc tctgctagag tcttacggta atgccaagac agtgaggaac 720
gacaactcgt ctcgctttgg taaattcatc aggattcact tccaagctgg taaactggct 780
aaagctgaca ttgagaccta cctgctggag aagtccagag tgtccttcca actgcccgat 840
gagagaggct accacatctt cttccagatg atgacaggcc acaaacctga gctagttgaa 900
ttggcactcc tcaccaccaa cccctacgac ttccccatgt gcagccaggg tcagattgct 960
gtggccagca tcaacgacaa tgaagagctg gatgccacag atgaagccat tacaatcctg 1020
ggcttcacta atgaggagaa gcttggaata tacaagctga caggagctgt agtgcaccat 1080
ggcaacttga aattcaagca gaagcagcgt gaggagcagg ccgagccaga cggcacagag 1140
gtggctgata aaatcgccta cctgctgggc ctgaactcag ctgagatgtt gaaagctctg 1200
tgctacccca gagtgaaggt cggcaacgag tatgtgacca agggacagac tgtggctcag 1260
gttaataact cagtcagtgc tctggccaag tccatctatg agaggatgtt cttgtggatg 1320
gtcatccgta tcaatgagat gttggacacc aagaatccaa ggcagttcta tatcggtgtg 1380
cttgacattg ccgggtttga gatctttgat tacaacagca tggagcagct gtgcatcaac 1440
ttcaccaatg agaaactgca acagtttttc aaccacacca tgttcgtcct ggagcaagag 1500
gagtacaaga aggagggaat cgtctgggcc ttcattgact tcggcatgga tttggctgcc 1560
tgcattgagc ttattgagaa gccattgggc atcttctcca tccttgaaga ggagtgcatg 1620
ttccccaagt cttcagacac taccttcaag gacaagctgt acgcccagca tcttggtaaa 1680
acaaaggcgt ttgagaagcc caagcctgcc aaaggcaagg cagaggccca cttctccctg 1740
gtgcattacg ccggtactgt ggactacaac atcactggct ggctggagaa gaacaaggac 1800
cccttgaacg actcagtttg tcaactgtat gggaagtccg gagtcaaaat tttggctgcc 1860
ctgtatcccc ctccccctcc tgaggataaa gccaagaaag gaggcaagaa gaagggtggt 1920
tccatgcaga ctgtgtcctc ccagttcagg gagaacttac ataagctgat gaccaacttg 1980
aggagcactc atcctcactt tgtgcgctgc ctgatcccca acgagtcaaa gactccaggt 2040
ctgatggaga acttcctggt tatccaccag ctcaggtgta atggtgtact ggagggtatc 2100
aggatctgca gaaagggctt ccccagcaga atcatctatg ctgacttcaa gcaaaggtac 2160
aaagtactga atgccagcgt catccctgag ggccagttca tggacaacaa gaaggcttct 2220
gagaagctgc ttggatccat tgatgtgaat cacgaggatt acaagtttgg acacaccaag 2280
gtgttcttca aagccggtct gctgggtgtc ctggaggaga tgagagatga gaagctggcc 2340
tctctagtcg gcatgctcca ggctctcagc cgtggattcc tcatgaggag agagttcacc 2400
aagatgatgg agaggagaga atcaatttac tccatccagt acaacatccg ctcattcatg 2460
aatgtgaaaa cctggccatg gatgaagttg tacttcaaga tcaagcccct gctgcagagc 2520
gctgagactg agaaggagct ggccaacatg aaggagaact atgagaaaat gaagacagac 2580
ctggccaagg ctctgtctac aaagaagcaa atggaggaga agttggtgtc cctgacgcag 2640
gagaagaacg acctggcact ccaagtcgca tctgaaggag agagtctgaa cgatgctgag 2700
gaaaggtgcg aggggctcat caagagcaag atccagcagg aggccaaact caaagagacg 2760
accgagaggc tggaggatga ggaggagatc aatgctgagt tgactgccaa gaagaggaag 2820
ctggaggatg agtgctctga gctgaagaag gacattgatg atctggagct caccctggcc 2880
aaagtggaga aggagaagca cgccactgaa aacaaggtta aaaacctgac agaggagatg 2940
gcgtctatgg atgagagtgt tgccaagctg accaaggaga agaaagccct acaagaggcc 3000
caccagcaga cactggatga cctgcaggca gaggaggaca aagtcaacac tctgaccaag 3060
gccaagacca agctggaaca gcaagtggac gaccttgagg gttctctgga gcaagagaag 3120
aagctccgca tggaccttga gagatccaag agaaagctgg agggagatct gaaactggcc 3180
caggagtcca taatggacct ggagaatgac aagcagcaag ctgatgagaa aatcaagaag 3240
aaggagtttg agaccactca gctcctcagc aaggttgagg atgagcagtc tctgggagct 3300
cagctgcaga agaagatcaa ggaactccag gcccgtattg aggaactgga ggaggaaatt 3360
gaggctgagc gtgctgccag ggctaaggtt gagaagcaga gggctgatct ctccagggaa 3420
cttgaggaga tcagcgagag gctggaggag gccggaggcg ccactgctgc tcagattgag 3480
atgaacaaga agcgtgaggc tgagttccag aagctgcgtc gtgatcttga agagtccacc 3540
ctgcagcatg aggccacagc cgccgctctg cgcaagaagc aggccgacag tgtggctgag 3600
ctcggggagc agatcgacaa cctgcagcgc gtcaagcaga agctggagaa ggagaagagc 3660
gagtacaaga tggagattga tgacctctcc agcaacatgg aggccgttgc caaggctaag 3720
ggcaatctag agaagatgtg ccgtactctt gaggaccagc tgagcgagct caagactaag 3780
aatgatgaga atgttcgcca ggtcaacgac atcagcggac agagggccag actcctgaca 3840
gaaaatggtg agtttggtag gcagctggag gagaaggaag ccctggtgtc tcagctgacc 3900
agaggcaaac aggccttcac ccagcaggtg gaggagctga agagggcgat tgaggaggag 3960
gtcaaggcta aaaatgcact ggcccacgga gttcagtctg cccgccatga ctgtgacctc 4020
ctgagggagc agtttgagga ggagcaggag gccaaggcag agctgcaacg cggcatgtcc 4080
aaggccaata gtgaggtggc tcagtggagg actaagtatg aaactgatgc catccagcgc 4140
acagaggagc tggaggaggc caagaagaag ctggcccagc gtctgcagga tgccgaggag 4200
accattgagg cgaccaactc caagtgcgcc tccctggaga agaccaagca gagactacag 4260
ggagaggtgg aggacctcat gattgatgtt gagagagcca acgcattggc cgccaacctc 4320
gacaagaagc agaggaactt tgacaaggtt ctggcagagt ggaagcagaa gtatgaggag 4380
ggtcaggctg agctggaagg agctcagaag gaggctcgct ctatgagcac tgagctcttc 4440
aagatgaaga actcctacga ggaggctctg gatcatctgg agactctgaa gagagagaac 4500
aagaacctgc aacaggagat ctctgacctt actgagcaga ttggagagac tggcaagagc 4560
atccatgagc tggagaaggc caagaagacc gtggagacag agaagtctga gatccagacc 4620
gctctggagg aggctgaggg cacactggag cacgaggaat ccaagattct gcgtgtgcag 4680
ctggagctga accagatcaa gggtgaggtg gacaggaaga tcgctgagaa ggacgaggag 4740
atggagcaga tcaagaggaa cagccagagg atggttgact ccatgcagag caccctggac 4800
tctgaggtca ggagcaggaa tgatgccctg agggtgaaga agaagatgga gggagacctg 4860
aacgagatgg agatccagct gagccactcc aacaggcagg ccgctgaggc ccagaaacag 4920
ctgaggaatg tccagggaca gctcaaggat gcccaattgc accttgatga tgccgtccgt 4980
gtcgcagagg acatgaagga gcaggcagcc atggtggagc gcagaaacgg tctgatggtg 5040
gctgagatcg aggagctgag agttgctctg gagcagacag agagaggccg caaagtggct 5100
gagactgagc tggtagacgc cagcgagcgt gttggactgc tgcactccca gaacaccagc 5160
cttctgaaca ccaagaagaa gctggagact gacctggtgc aggtgcaggg agaggtggat 5220
gacatcgtcc aggaggccag gaatgcagaa gagaaggcca agaaggcaat cactgatgcg 5280
gcaatgatgg ctgaggagct gaagaaggag caggacacca gctctcacct ggagagaatg 5340
aagaagaacc tggagatcac agtcaaggac ctgcagcacc gcctggatga ggctgagaat 5400
ctggccatga agggaggcaa gaaacaactc cagaaactgg aatccagggt gcgtgagctt 5460
gagactgagg tggaggctga gcagagaaga ggtgtagacg cggtaaaggg agtccgcaag 5520
tatgagcgca gagtcaagga gctcacttac cagactgagg aggataagaa gaatgttaac 5580
agacttcagg acctggtaga taagctgcag atgaaagtga aggcctacaa gaggcacgct 5640
gaggaagcgg aggaagcagc aaaccagcac atgtctaagt tcaggaaggt tcagcatgag 5700
ctggaggagg ctgaggagcg tgctgacatc gctgagactc aggtcaacaa gctcagagcc 5760
aagacccgtg actctggaaa gggaaaagaa gttgctgaa 5799
<210> 70
<211> 1933
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样
<400> 70
Met Ser Thr Asp Ala Glu Met Gln Val Tyr Gly Lys Ala Ala Ile Tyr
1 5 10 15
Leu Arg Lys Ser Glu Lys Glu Arg Met Glu Ala Gln Ala Met Pro Phe
20 25 30
Asp Ser Lys Asn Ala Cys Tyr Val Thr Asp Lys Val Glu Leu Tyr Leu
35 40 45
Lys Gly Leu Val Thr Ala Arg Ala Asp Gly Lys Cys Thr Val Thr Ala
50 55 60
Leu Asp Phe Arg Glu Gly Lys Glu Phe Lys Asp Ala Asp Ile Tyr Glu
65 70 75 80
Met Asn Pro Pro Lys Tyr Asp Lys Ile Glu Asp Met Ala Met Met Thr
85 90 95
Tyr Leu Asn Glu Ala Ser Val Leu Tyr Asn Leu Lys Glu Arg Tyr Ala
100 105 110
Ala Trp Met Ile Tyr Thr Tyr Ser Gly Leu Phe Cys Ala Thr Val Asn
115 120 125
Pro Tyr Lys Trp Leu Pro Val Tyr Asp Glu Glu Val Val Asn Ala Tyr
130 135 140
Arg Gly Lys Lys Arg Val Glu Ala Pro Pro His Ile Phe Ser Val Ser
145 150 155 160
Asp Asn Ala Phe Gln Phe Met Met Ile Asp Lys Glu Asn Gln Ser Val
165 170 175
Leu Ile Thr Gly Glu Ser Gly Ala Gly Lys Thr Val Asn Thr Lys Arg
180 185 190
Val Ile Gln Tyr Phe Ala Thr Ile Ala Val Ser Gly Gly Lys Lys Glu
195 200 205
Ala Asp Pro Asn Lys Met Gln Gly Ser Leu Glu Asp Gln Ile Ile Ala
210 215 220
Ala Asn Pro Leu Leu Glu Ser Tyr Gly Asn Ala Lys Thr Val Arg Asn
225 230 235 240
Asp Asn Ser Ser Arg Phe Gly Lys Phe Ile Arg Ile His Phe Gln Ala
245 250 255
Gly Lys Leu Ala Lys Ala Asp Ile Glu Thr Tyr Leu Leu Glu Lys Ser
260 265 270
Arg Val Ser Phe Gln Leu Pro Asp Glu Arg Gly Tyr His Ile Phe Phe
275 280 285
Gln Met Met Thr Gly His Lys Pro Glu Leu Val Glu Leu Ala Leu Leu
290 295 300
Thr Thr Asn Pro Tyr Asp Phe Pro Met Cys Ser Gln Gly Gln Ile Ala
305 310 315 320
Val Ala Ser Ile Asn Asp Asn Glu Glu Leu Asp Ala Thr Asp Glu Ala
325 330 335
Ile Thr Ile Leu Gly Phe Thr Asn Glu Glu Lys Leu Gly Ile Tyr Lys
340 345 350
Leu Thr Gly Ala Val Val His His Gly Asn Leu Lys Phe Lys Gln Lys
355 360 365
Gln Arg Glu Glu Gln Ala Glu Pro Asp Gly Thr Glu Val Ala Asp Lys
370 375 380
Ile Ala Tyr Leu Leu Gly Leu Asn Ser Ala Glu Met Leu Lys Ala Leu
385 390 395 400
Cys Tyr Pro Arg Val Lys Val Gly Asn Glu Tyr Val Thr Lys Gly Gln
405 410 415
Thr Val Ala Gln Val Asn Asn Ser Val Ser Ala Leu Ala Lys Ser Ile
420 425 430
Tyr Glu Arg Met Phe Leu Trp Met Val Ile Arg Ile Asn Glu Met Leu
435 440 445
Asp Thr Lys Asn Pro Arg Gln Phe Tyr Ile Gly Val Leu Asp Ile Ala
450 455 460
Gly Phe Glu Ile Phe Asp Tyr Asn Ser Met Glu Gln Leu Cys Ile Asn
465 470 475 480
Phe Thr Asn Glu Lys Leu Gln Gln Phe Phe Asn His Thr Met Phe Val
485 490 495
Leu Glu Gln Glu Glu Tyr Lys Lys Glu Gly Ile Val Trp Ala Phe Ile
500 505 510
Asp Phe Gly Met Asp Leu Ala Ala Cys Ile Glu Leu Ile Glu Lys Pro
515 520 525
Leu Gly Ile Phe Ser Ile Leu Glu Glu Glu Cys Met Phe Pro Lys Ser
530 535 540
Ser Asp Thr Thr Phe Lys Asp Lys Leu Tyr Ala Gln His Leu Gly Lys
545 550 555 560
Thr Lys Ala Phe Glu Lys Pro Lys Pro Ala Lys Gly Lys Ala Glu Ala
565 570 575
His Phe Ser Leu Val His Tyr Ala Gly Thr Val Asp Tyr Asn Ile Thr
580 585 590
Gly Trp Leu Glu Lys Asn Lys Asp Pro Leu Asn Asp Ser Val Cys Gln
595 600 605
Leu Tyr Gly Lys Ser Gly Val Lys Ile Leu Ala Ala Leu Tyr Pro Pro
610 615 620
Pro Pro Pro Glu Asp Lys Ala Lys Lys Gly Gly Lys Lys Lys Gly Gly
625 630 635 640
Ser Met Gln Thr Val Ser Ser Gln Phe Arg Glu Asn Leu His Lys Leu
645 650 655
Met Thr Asn Leu Arg Ser Thr His Pro His Phe Val Arg Cys Leu Ile
660 665 670
Pro Asn Glu Ser Lys Thr Pro Gly Leu Met Glu Asn Phe Leu Val Ile
675 680 685
His Gln Leu Arg Cys Asn Gly Val Leu Glu Gly Ile Arg Ile Cys Arg
690 695 700
Lys Gly Phe Pro Ser Arg Ile Ile Tyr Ala Asp Phe Lys Gln Arg Tyr
705 710 715 720
Lys Val Leu Asn Ala Ser Val Ile Pro Glu Gly Gln Phe Met Asp Asn
725 730 735
Lys Lys Ala Ser Glu Lys Leu Leu Gly Ser Ile Asp Val Asn His Glu
740 745 750
Asp Tyr Lys Phe Gly His Thr Lys Val Phe Phe Lys Ala Gly Leu Leu
755 760 765
Gly Val Leu Glu Glu Met Arg Asp Glu Lys Leu Ala Ser Leu Val Gly
770 775 780
Met Leu Gln Ala Leu Ser Arg Gly Phe Leu Met Arg Arg Glu Phe Thr
785 790 795 800
Lys Met Met Glu Arg Arg Glu Ser Ile Tyr Ser Ile Gln Tyr Asn Ile
805 810 815
Arg Ser Phe Met Asn Val Lys Thr Trp Pro Trp Met Lys Leu Tyr Phe
820 825 830
Lys Ile Lys Pro Leu Leu Gln Ser Ala Glu Thr Glu Lys Glu Leu Ala
835 840 845
Asn Met Lys Glu Asn Tyr Glu Lys Met Lys Thr Asp Leu Ala Lys Ala
850 855 860
Leu Ser Thr Lys Lys Gln Met Glu Glu Lys Leu Val Ser Leu Thr Gln
865 870 875 880
Glu Lys Asn Asp Leu Ala Leu Gln Val Ala Ser Glu Gly Glu Ser Leu
885 890 895
Asn Asp Ala Glu Glu Arg Cys Glu Gly Leu Ile Lys Ser Lys Ile Gln
900 905 910
Gln Glu Ala Lys Leu Lys Glu Thr Thr Glu Arg Leu Glu Asp Glu Glu
915 920 925
Glu Ile Asn Ala Glu Leu Thr Ala Lys Lys Arg Lys Leu Glu Asp Glu
930 935 940
Cys Ser Glu Leu Lys Lys Asp Ile Asp Asp Leu Glu Leu Thr Leu Ala
945 950 955 960
Lys Val Glu Lys Glu Lys His Ala Thr Glu Asn Lys Val Lys Asn Leu
965 970 975
Thr Glu Glu Met Ala Ser Met Asp Glu Ser Val Ala Lys Leu Thr Lys
980 985 990
Glu Lys Lys Ala Leu Gln Glu Ala His Gln Gln Thr Leu Asp Asp Leu
995 1000 1005
Gln Ala Glu Glu Asp Lys Val Asn Thr Leu Thr Lys Ala Lys Thr
1010 1015 1020
Lys Leu Glu Gln Gln Val Asp Asp Leu Glu Gly Ser Leu Glu Gln
1025 1030 1035
Glu Lys Lys Leu Arg Met Asp Leu Glu Arg Ser Lys Arg Lys Leu
1040 1045 1050
Glu Gly Asp Leu Lys Leu Ala Gln Glu Ser Ile Met Asp Leu Glu
1055 1060 1065
Asn Asp Lys Gln Gln Ala Asp Glu Lys Ile Lys Lys Lys Glu Phe
1070 1075 1080
Glu Thr Thr Gln Leu Leu Ser Lys Val Glu Asp Glu Gln Ser Leu
1085 1090 1095
Gly Ala Gln Leu Gln Lys Lys Ile Lys Glu Leu Gln Ala Arg Ile
1100 1105 1110
Glu Glu Leu Glu Glu Glu Ile Glu Ala Glu Arg Ala Ala Arg Ala
1115 1120 1125
Lys Val Glu Lys Gln Arg Ala Asp Leu Ser Arg Glu Leu Glu Glu
1130 1135 1140
Ile Ser Glu Arg Leu Glu Glu Ala Gly Gly Ala Thr Ala Ala Gln
1145 1150 1155
Ile Glu Met Asn Lys Lys Arg Glu Ala Glu Phe Gln Lys Leu Arg
1160 1165 1170
Arg Asp Leu Glu Glu Ser Thr Leu Gln His Glu Ala Thr Ala Ala
1175 1180 1185
Ala Leu Arg Lys Lys Gln Ala Asp Ser Val Ala Glu Leu Gly Glu
1190 1195 1200
Gln Ile Asp Asn Leu Gln Arg Val Lys Gln Lys Leu Glu Lys Glu
1205 1210 1215
Lys Ser Glu Tyr Lys Met Glu Ile Asp Asp Leu Ser Ser Asn Met
1220 1225 1230
Glu Ala Val Ala Lys Ala Lys Gly Asn Leu Glu Lys Met Cys Arg
1235 1240 1245
Thr Leu Glu Asp Gln Leu Ser Glu Leu Lys Thr Lys Asn Asp Glu
1250 1255 1260
Asn Val Arg Gln Val Asn Asp Ile Ser Gly Gln Arg Ala Arg Leu
1265 1270 1275
Leu Thr Glu Asn Gly Glu Phe Gly Arg Gln Leu Glu Glu Lys Glu
1280 1285 1290
Ala Leu Val Ser Gln Leu Thr Arg Gly Lys Gln Ala Phe Thr Gln
1295 1300 1305
Gln Val Glu Glu Leu Lys Arg Ala Ile Glu Glu Glu Val Lys Ala
1310 1315 1320
Lys Asn Ala Leu Ala His Gly Val Gln Ser Ala Arg His Asp Cys
1325 1330 1335
Asp Leu Leu Arg Glu Gln Phe Glu Glu Glu Gln Glu Ala Lys Ala
1340 1345 1350
Glu Leu Gln Arg Gly Met Ser Lys Ala Asn Ser Glu Val Ala Gln
1355 1360 1365
Trp Arg Thr Lys Tyr Glu Thr Asp Ala Ile Gln Arg Thr Glu Glu
1370 1375 1380
Leu Glu Glu Ala Lys Lys Lys Leu Ala Gln Arg Leu Gln Asp Ala
1385 1390 1395
Glu Glu Thr Ile Glu Ala Thr Asn Ser Lys Cys Ala Ser Leu Glu
1400 1405 1410
Lys Thr Lys Gln Arg Leu Gln Gly Glu Val Glu Asp Leu Met Ile
1415 1420 1425
Asp Val Glu Arg Ala Asn Ala Leu Ala Ala Asn Leu Asp Lys Lys
1430 1435 1440
Gln Arg Asn Phe Asp Lys Val Leu Ala Glu Trp Lys Gln Lys Tyr
1445 1450 1455
Glu Glu Gly Gln Ala Glu Leu Glu Gly Ala Gln Lys Glu Ala Arg
1460 1465 1470
Ser Met Ser Thr Glu Leu Phe Lys Met Lys Asn Ser Tyr Glu Glu
1475 1480 1485
Ala Leu Asp His Leu Glu Thr Leu Lys Arg Glu Asn Lys Asn Leu
1490 1495 1500
Gln Gln Glu Ile Ser Asp Leu Thr Glu Gln Ile Gly Glu Thr Gly
1505 1510 1515
Lys Ser Ile His Glu Leu Glu Lys Ala Lys Lys Thr Val Glu Thr
1520 1525 1530
Glu Lys Ser Glu Ile Gln Thr Ala Leu Glu Glu Ala Glu Gly Thr
1535 1540 1545
Leu Glu His Glu Glu Ser Lys Ile Leu Arg Val Gln Leu Glu Leu
1550 1555 1560
Asn Gln Ile Lys Gly Glu Val Asp Arg Lys Ile Ala Glu Lys Asp
1565 1570 1575
Glu Glu Met Glu Gln Ile Lys Arg Asn Ser Gln Arg Met Val Asp
1580 1585 1590
Ser Met Gln Ser Thr Leu Asp Ser Glu Val Arg Ser Arg Asn Asp
1595 1600 1605
Ala Leu Arg Val Lys Lys Lys Met Glu Gly Asp Leu Asn Glu Met
1610 1615 1620
Glu Ile Gln Leu Ser His Ser Asn Arg Gln Ala Ala Glu Ala Gln
1625 1630 1635
Lys Gln Leu Arg Asn Val Gln Gly Gln Leu Lys Asp Ala Gln Leu
1640 1645 1650
His Leu Asp Asp Ala Val Arg Val Ala Glu Asp Met Lys Glu Gln
1655 1660 1665
Ala Ala Met Val Glu Arg Arg Asn Gly Leu Met Val Ala Glu Ile
1670 1675 1680
Glu Glu Leu Arg Val Ala Leu Glu Gln Thr Glu Arg Gly Arg Lys
1685 1690 1695
Val Ala Glu Thr Glu Leu Val Asp Ala Ser Glu Arg Val Gly Leu
1700 1705 1710
Leu His Ser Gln Asn Thr Ser Leu Leu Asn Thr Lys Lys Lys Leu
1715 1720 1725
Glu Thr Asp Leu Val Gln Val Gln Gly Glu Val Asp Asp Ile Val
1730 1735 1740
Gln Glu Ala Arg Asn Ala Glu Glu Lys Ala Lys Lys Ala Ile Thr
1745 1750 1755
Asp Ala Ala Met Met Ala Glu Glu Leu Lys Lys Glu Gln Asp Thr
1760 1765 1770
Ser Ser His Leu Glu Arg Met Lys Lys Asn Leu Glu Ile Thr Val
1775 1780 1785
Lys Asp Leu Gln His Arg Leu Asp Glu Ala Glu Asn Leu Ala Met
1790 1795 1800
Lys Gly Gly Lys Lys Gln Leu Gln Lys Leu Glu Ser Arg Val Arg
1805 1810 1815
Glu Leu Glu Thr Glu Val Glu Ala Glu Gln Arg Arg Gly Val Asp
1820 1825 1830
Ala Val Lys Gly Val Arg Lys Tyr Glu Arg Arg Val Lys Glu Leu
1835 1840 1845
Thr Tyr Gln Thr Glu Glu Asp Lys Lys Asn Val Asn Arg Leu Gln
1850 1855 1860
Asp Leu Val Asp Lys Leu Gln Met Lys Val Lys Ala Tyr Lys Arg
1865 1870 1875
His Ala Glu Glu Ala Glu Glu Ala Ala Asn Gln His Met Ser Lys
1880 1885 1890
Phe Arg Lys Val Gln His Glu Leu Glu Glu Ala Glu Glu Arg Ala
1895 1900 1905
Asp Ile Ala Glu Thr Gln Val Asn Lys Leu Arg Ala Lys Thr Arg
1910 1915 1920
Asp Ser Gly Lys Gly Lys Glu Val Ala Glu
1925 1930
<210> 71
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 71
Ala Ala Ile Tyr Leu Arg Lys
1 5
<210> 72
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 72
Ala Asp Ile Glu Thr Tyr Leu Leu Glu Lys
1 5 10
<210> 73
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 73
Ala Leu Gln Glu Ala His Gln Gln Thr Leu Asp Asp Leu Gln Ala Glu
1 5 10 15
Glu Asp Lys
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 74
Asp Ile Asp Asp Leu Glu Leu Thr Leu Ala Lys
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<210> 75
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 75
Glu Ala Leu Val Ser Gln Leu Thr Arg Gly Lys
1 5 10
<210> 76
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 76
Glu Phe Glu Thr Thr Gln Leu Leu Ser Lys
1 5 10
<210> 77
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 77
Glu Leu Thr Tyr Gln Thr Glu Glu Asp Lys
1 5 10
<210> 78
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 78
Glu Asn Gln Ser Val Leu Ile Thr Gly Glu Ser Gly Ala Gly Lys
1 5 10 15
<210> 79
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 79
Glu Thr Thr Glu Arg Leu Glu Asp Glu Glu Glu Ile Asn Ala Glu Leu
1 5 10 15
Thr Ala Lys
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 80
Phe Ile Arg Ile His Phe Gln Ala Gly Lys
1 5 10
<210> 81
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 81
Gly Phe Pro Ser Arg Ile Ile Tyr Ala Asp Phe Lys
1 5 10
<210> 82
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 82
Gly Leu Val Thr Ala Arg Ala Asp Gly Lys
1 5 10
<210> 83
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 83
Gly Gln Thr Val Ala Gln Val Asn Asn Ser Val Ser Ala Leu Ala Lys
1 5 10 15
<210> 84
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 84
Ile Lys Pro Leu Leu Gln Ser Ala Glu Thr Glu Lys
1 5 10
<210> 85
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 85
Ile Leu Ala Ala Leu Tyr Pro Pro Pro Pro Pro Glu Asp Lys
1 5 10
<210> 86
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 86
Ile Leu Arg Val Gln Leu Glu Leu Asn Gln Ile Lys
1 5 10
<210> 87
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 87
Leu Ala Gln Arg Leu Gln Asp Ala Glu Glu Thr Ile Glu Ala Thr Asn
1 5 10 15
Ser Lys
<210> 88
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 88
Leu Glu Gln Gln Val Asp Asp Leu Glu Gly Ser Leu Glu Gln Glu Lys
1 5 10 15
<210> 89
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 89
Leu Glu Ser Arg Val Arg Glu Leu Glu Thr Glu Val Glu Ala Glu Gln
1 5 10 15
Arg Arg Gly Val Asp Ala Val Lys
20
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 90
Leu Leu Gly Ser Ile Asp Val Asn His Glu Asp Tyr Lys
1 5 10
<210> 91
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 91
Leu Arg Arg Asp Leu Glu Glu Ser Thr Leu Gln His Glu Ala Thr Ala
1 5 10 15
Ala Ala Leu Arg Lys
20
<210> 92
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 92
Leu Thr Gly Ala Val Val His His Gly Asn Leu Lys
1 5 10
<210> 93
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 93
Asn Asp Glu Asn Val Arg Gln Val Asn Asp Ile Ser Gly Gln Arg Ala
1 5 10 15
Arg Leu Leu Thr Glu Asn Gly Glu Phe Gly Arg Gln Leu Glu Glu Lys
20 25 30
<210> 94
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 94
Asn Leu Glu Ile Thr Val Lys
1 5
<210> 95
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 95
Asn Leu Gln Gln Glu Ile Ser Asp Leu Thr Glu Gln Ile Gly Glu Thr
1 5 10 15
Gly Lys
<210> 96
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 96
Asn Ser Tyr Glu Glu Ala Leu Asp His Leu Glu Thr Leu Lys
1 5 10
<210> 97
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 97
Gln Ala Asp Ser Val Ala Glu Leu Gly Glu Gln Ile Asp Asn Leu Gln
1 5 10 15
Arg Val Lys
<210> 98
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 98
Gln Ala Phe Thr Gln Gln Val Glu Glu Leu Lys
1 5 10
<210> 99
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 99
Gln Arg Glu Glu Gln Ala Glu Pro Asp Gly Thr Glu Val Ala Asp Lys
1 5 10 15
<210> 100
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 100
Arg Ala Ile Glu Glu Glu Val Lys
1 5
<210> 101
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 101
Ser Glu Ile Gln Thr Ala Leu Glu Glu Ala Glu Gly Thr Leu Glu His
1 5 10 15
Glu Glu Ser Lys
20
<210> 102
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 102
Thr Val Arg Asn Asp Asn Ser Ser Arg Phe Gly Lys
1 5 10
<210> 103
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 103
Val Ala Glu Thr Glu Leu Val Asp Ala Ser Glu Arg Val Gly Leu Leu
1 5 10 15
His Ser Gln Asn Thr Ser Leu Leu Asn Thr Lys
20 25
<210> 104
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 104
Val Glu Asp Glu Gln Ser Leu Gly Ala Gln Leu Gln Lys
1 5 10
<210> 105
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 105
Val Gly Asn Glu Tyr Val Thr Lys
1 5
<210> 106
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 106
Val Gln His Glu Leu Glu Glu Ala Glu Glu Arg Ala Asp Ile Ala Glu
1 5 10 15
Thr Gln Val Asn Lys
20
<210> 107
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 107
Tyr Glu Glu Gly Gln Ala Glu Leu Glu Gly Ala Gln Lys
1 5 10
<210> 108
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白重链 快缩型骨骼肌样片段
<400> 108
Tyr Glu Thr Asp Ala Ile Gln Arg Thr Glu Glu Leu Glu Glu Ala Lys
1 5 10 15
<210> 109
<211> 2532
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 糖原磷酸化酶 肌肉型样
<400> 109
atgtcaaaac cattgtcaga ccacgataaa aggaagcaga tctccgtgag aggtcttgct 60
ggtgtggaaa atgtcgcaga actgaaggtc gctttcaaca ggcatctcca ttttacactg 120
gtcaaggaca gaaatgtggc aaacaaacgg gattactact ttgctctcgc caacaccgtg 180
cgtgaccact tggtgggcag gtggatcaga acccagcagt actactatga gaaagatccc 240
aaacgtgtgt actacatctc cctggagttt tatatgggtc gcaccctgca gaacactatg 300
gtgaacctgg ccctggagaa cgcttgtgat gaggccatat accagctggg tctggacatg 360
gaggagctgg aggacatgga agaggatgct ggcctgggaa acggtggtct tggccgtctt 420
gccgcatgct tcctggactc aatggcttct ctaggccttg ctgcctatgg ctatggtatc 480
cgctatgagt ttggcatctt caatcagaag atcgtcaatg gctggcaggt tgaggaggcc 540
gatgattggt tgcgttacgg caacccctgg gagaaggccc gccctgagta catgcgcccc 600
gtcaagttct atggcaggac cgagcacacc ccagatggtg tgaaatgggt tgacactcag 660
gtagtgttgg ctctgccata tgacacccct attcccggct acagaaacaa cattgtcaac 720
accatgagac tgtggtctgc taaggcccca tgcgacttca acctgaaaga cttcaacgtt 780
ggtggctaca ttcaggctgt gttggacaga aacttgtgtg agaacatttc ccgcgtgctg 840
taccccaatg ataatttctt tgagggcaag gagctgcgtc tgaagcagga gtactttgtg 900
gtggccgcca ctctgcagga cgtcgtccgt cgtttcaagg cctctaagtt tggctccaga 960
gagattgtcc gcacagactt cgccgagcta ccaaacaaag ttgccatcca gctgaatgac 1020
actcaccctg ccatggctat tcctgagctg atgagggtcc tggttgatga ggagaagctg 1080
ggttgggaca aggcctggga cgtgtgtgtc cgtacctgtg cctacacaaa ccacaccgtg 1140
ctgcctgagg ccctggagcg ctggcccatt gacctgttcc atcacctgct gccacgtcac 1200
ctggagatca tctacgagat caaccgtcgc ttcatggagt atgttgcctc gaagttccct 1260
ggagacaacg accgtctgcg tcgcatgtcc ctgattgagg agggaggatg caagaaagtc 1320
aacatggctc atctgtgtat cgttggttcc catgctgtca acggcgtggc ccgcatccac 1380
tctgagatcc tcatcgccac tctgttcaag gacttctatg agttggaccc acacaagttt 1440
cagaacaaga ccaatgggat caccccccgt cgctggctgg ttatgtgcaa ccccggcttg 1500
gcggaggtca tcgcagagaa aattggagag gagtttatcc gtgaccttga ccagcttaag 1560
cgactgttga agttcgttaa tgatgatgct ttcatccgtg acatcgccaa agtcaagcag 1620
gagaacaagc tgaagttcgc tgtgcacctg gaagagcact acaaggtcaa gatcaacccc 1680
cagtccatgt ttgacttcca agtcaaaaga atccacgagt acaaaagaca gctgctcaac 1740
tgtctgcaca tgatcaccta ctacaaccgt atcaagaagg agcccaacaa gcactggacc 1800
ccaagaacca tcatggtcgg aggaaaggct gcaccaggct accacacagc caagatgatc 1860
atccgtctca tcacagctat cggtgaggtt gtcaaccacg accccgttgt cggcgaccgc 1920
ctcaaagtta tcttcctgga gaactacaga gtcaccctgg ctgagaaagc catcccctct 1980
gccgacctgt ctgagcagat ctctacagct ggcaccgagg cctctggcac tggtaacatg 2040
aagttcatgc tgaacggtgc tcttaccatt ggcaccatgg atggagccaa tgtggagatg 2100
gccgaggagg ccggagagga aaacttcttc atcttcggta tgagagtgga ggatgtggac 2160
gcaatggacg ccggcaaagg ataccacgcc tctgagtact acaaccgtat tcccgagctg 2220
aagcaggcca tggaccagat tgctggcggc ttcttcagtc ccaagcagcc tgacctcttc 2280
aaggaacttg tggacctgct gatgcaccat gacaggttca aggtgtttgc tgactacgaa 2340
gcctacatca aatgccagga caaggtcaac caactgtaca agaatcccaa ggaatggacc 2400
aagatggtga tccataacat tgcgggctgt ggtaaattct ccagcgaccg caccattgcc 2460
cagtacgccc gagagatctg gggcatggag cccagcctgg agaagatccc tgcccccgat 2520
gagaaactca aa 2532
<210> 110
<211> 844
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 糖原磷酸化酶 肌肉型样
<400> 110
Met Ser Lys Pro Leu Ser Asp His Asp Lys Arg Lys Gln Ile Ser Val
1 5 10 15
Arg Gly Leu Ala Gly Val Glu Asn Val Ala Glu Leu Lys Val Ala Phe
20 25 30
Asn Arg His Leu His Phe Thr Leu Val Lys Asp Arg Asn Val Ala Asn
35 40 45
Lys Arg Asp Tyr Tyr Phe Ala Leu Ala Asn Thr Val Arg Asp His Leu
50 55 60
Val Gly Arg Trp Ile Arg Thr Gln Gln Tyr Tyr Tyr Glu Lys Asp Pro
65 70 75 80
Lys Arg Val Tyr Tyr Ile Ser Leu Glu Phe Tyr Met Gly Arg Thr Leu
85 90 95
Gln Asn Thr Met Val Asn Leu Ala Leu Glu Asn Ala Cys Asp Glu Ala
100 105 110
Ile Tyr Gln Leu Gly Leu Asp Met Glu Glu Leu Glu Asp Met Glu Glu
115 120 125
Asp Ala Gly Leu Gly Asn Gly Gly Leu Gly Arg Leu Ala Ala Cys Phe
130 135 140
Leu Asp Ser Met Ala Ser Leu Gly Leu Ala Ala Tyr Gly Tyr Gly Ile
145 150 155 160
Arg Tyr Glu Phe Gly Ile Phe Asn Gln Lys Ile Val Asn Gly Trp Gln
165 170 175
Val Glu Glu Ala Asp Asp Trp Leu Arg Tyr Gly Asn Pro Trp Glu Lys
180 185 190
Ala Arg Pro Glu Tyr Met Arg Pro Val Lys Phe Tyr Gly Arg Thr Glu
195 200 205
His Thr Pro Asp Gly Val Lys Trp Val Asp Thr Gln Val Val Leu Ala
210 215 220
Leu Pro Tyr Asp Thr Pro Ile Pro Gly Tyr Arg Asn Asn Ile Val Asn
225 230 235 240
Thr Met Arg Leu Trp Ser Ala Lys Ala Pro Cys Asp Phe Asn Leu Lys
245 250 255
Asp Phe Asn Val Gly Gly Tyr Ile Gln Ala Val Leu Asp Arg Asn Leu
260 265 270
Cys Glu Asn Ile Ser Arg Val Leu Tyr Pro Asn Asp Asn Phe Phe Glu
275 280 285
Gly Lys Glu Leu Arg Leu Lys Gln Glu Tyr Phe Val Val Ala Ala Thr
290 295 300
Leu Gln Asp Val Val Arg Arg Phe Lys Ala Ser Lys Phe Gly Ser Arg
305 310 315 320
Glu Ile Val Arg Thr Asp Phe Ala Glu Leu Pro Asn Lys Val Ala Ile
325 330 335
Gln Leu Asn Asp Thr His Pro Ala Met Ala Ile Pro Glu Leu Met Arg
340 345 350
Val Leu Val Asp Glu Glu Lys Leu Gly Trp Asp Lys Ala Trp Asp Val
355 360 365
Cys Val Arg Thr Cys Ala Tyr Thr Asn His Thr Val Leu Pro Glu Ala
370 375 380
Leu Glu Arg Trp Pro Ile Asp Leu Phe His His Leu Leu Pro Arg His
385 390 395 400
Leu Glu Ile Ile Tyr Glu Ile Asn Arg Arg Phe Met Glu Tyr Val Ala
405 410 415
Ser Lys Phe Pro Gly Asp Asn Asp Arg Leu Arg Arg Met Ser Leu Ile
420 425 430
Glu Glu Gly Gly Cys Lys Lys Val Asn Met Ala His Leu Cys Ile Val
435 440 445
Gly Ser His Ala Val Asn Gly Val Ala Arg Ile His Ser Glu Ile Leu
450 455 460
Ile Ala Thr Leu Phe Lys Asp Phe Tyr Glu Leu Asp Pro His Lys Phe
465 470 475 480
Gln Asn Lys Thr Asn Gly Ile Thr Pro Arg Arg Trp Leu Val Met Cys
485 490 495
Asn Pro Gly Leu Ala Glu Val Ile Ala Glu Lys Ile Gly Glu Glu Phe
500 505 510
Ile Arg Asp Leu Asp Gln Leu Lys Arg Leu Leu Lys Phe Val Asn Asp
515 520 525
Asp Ala Phe Ile Arg Asp Ile Ala Lys Val Lys Gln Glu Asn Lys Leu
530 535 540
Lys Phe Ala Val His Leu Glu Glu His Tyr Lys Val Lys Ile Asn Pro
545 550 555 560
Gln Ser Met Phe Asp Phe Gln Val Lys Arg Ile His Glu Tyr Lys Arg
565 570 575
Gln Leu Leu Asn Cys Leu His Met Ile Thr Tyr Tyr Asn Arg Ile Lys
580 585 590
Lys Glu Pro Asn Lys His Trp Thr Pro Arg Thr Ile Met Val Gly Gly
595 600 605
Lys Ala Ala Pro Gly Tyr His Thr Ala Lys Met Ile Ile Arg Leu Ile
610 615 620
Thr Ala Ile Gly Glu Val Val Asn His Asp Pro Val Val Gly Asp Arg
625 630 635 640
Leu Lys Val Ile Phe Leu Glu Asn Tyr Arg Val Thr Leu Ala Glu Lys
645 650 655
Ala Ile Pro Ser Ala Asp Leu Ser Glu Gln Ile Ser Thr Ala Gly Thr
660 665 670
Glu Ala Ser Gly Thr Gly Asn Met Lys Phe Met Leu Asn Gly Ala Leu
675 680 685
Thr Ile Gly Thr Met Asp Gly Ala Asn Val Glu Met Ala Glu Glu Ala
690 695 700
Gly Glu Glu Asn Phe Phe Ile Phe Gly Met Arg Val Glu Asp Val Asp
705 710 715 720
Ala Met Asp Ala Gly Lys Gly Tyr His Ala Ser Glu Tyr Tyr Asn Arg
725 730 735
Ile Pro Glu Leu Lys Gln Ala Met Asp Gln Ile Ala Gly Gly Phe Phe
740 745 750
Ser Pro Lys Gln Pro Asp Leu Phe Lys Glu Leu Val Asp Leu Leu Met
755 760 765
His His Asp Arg Phe Lys Val Phe Ala Asp Tyr Glu Ala Tyr Ile Lys
770 775 780
Cys Gln Asp Lys Val Asn Gln Leu Tyr Lys Asn Pro Lys Glu Trp Thr
785 790 795 800
Lys Met Val Ile His Asn Ile Ala Gly Cys Gly Lys Phe Ser Ser Asp
805 810 815
Arg Thr Ile Ala Gln Tyr Ala Arg Glu Ile Trp Gly Met Glu Pro Ser
820 825 830
Leu Glu Lys Ile Pro Ala Pro Asp Glu Lys Leu Lys
835 840
<210> 111
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 糖原磷酸化酶 肌肉型样片段
<400> 111
Asp Phe Tyr Glu Leu Asp Pro His Lys
1 5
<210> 112
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 糖原磷酸化酶 肌肉型样片段
<400> 112
Phe Ala Val His Leu Glu Glu His Tyr Lys
1 5 10
<210> 113
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 糖原磷酸化酶 肌肉型样片段
<400> 113
Phe Tyr Gly Arg Thr Glu His Thr Pro Asp Gly Val Lys
1 5 10
<210> 114
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 糖原磷酸化酶 肌肉型样片段
<400> 114
Gly Tyr His Ala Ser Glu Tyr Tyr Asn Arg Ile Pro Glu Leu Lys
1 5 10 15
<210> 115
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 糖原磷酸化酶 肌肉型样片段
<400> 115
Ile Gly Glu Glu Phe Ile Arg Asp Leu Asp Gln Leu Lys
1 5 10
<210> 116
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 糖原磷酸化酶 肌肉型样片段
<400> 116
Gln Ala Met Asp Gln Ile Ala Gly Gly Phe Phe Ser Pro Lys
1 5 10
<210> 117
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 糖原磷酸化酶 肌肉型样片段
<400> 117
Gln Ile Ser Val Arg Gly Leu Ala Gly Val Glu Asn Val Ala Glu Leu
1 5 10 15
Lys
<210> 118
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 糖原磷酸化酶 肌肉型样片段
<400> 118
Val Phe Ala Asp Tyr Glu Ala Tyr Ile Lys
1 5 10
<210> 119
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 糖原磷酸化酶 肌肉型样片段
<400> 119
Val Ile Phe Leu Glu Asn Tyr Arg Val Thr Leu Ala Glu Lys
1 5 10
<210> 120
<211> 3399
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白结合蛋白C 快缩型样
<400> 120
atgcctgaag ccgctgatgc agtgaagccg gagggcgagg agggagaagc accagcagaa 60
gccgaagaaa atactgcaga agatgatgag ccactgcctg aaggagagga gggtgcccat 120
cagtcacagg agattacagg actgtttctt cagcaccctg agactacggt tgccataaca 180
ggtacggaca ttgtgtttac tgccaaagtg gactctacta cactatcaag gaaacccacc 240
attaaatggc tgaaggggaa gtggctggac ctgggcagca aagcaggaaa acacatgcag 300
ttcaaagaga cttttgacag agccacaaag atctacacct gggacatgaa gataatcaag 360
gtggtccctg gtgacgctgg ggcctacagg tgtgaggtca cctccaaaga caagtgtgac 420
agcagcgctt tcgacatctc cgtggaggct gtgcaaattg aggaggaaca tgattctttg 480
gccgcattca aaagaacgga tgctggagag gatgaaggca gtttggattt cagtgctttg 540
ctgaaagcta ccaagaagaa gaagaagcca gtcgtagatg aggagaaggc agacgtgtgg 600
gaaatcctga agaacgctca acccagcgag tatgagaaga ttgcttttga gtacggcatt 660
acagacctga ggggtctgct caagcgactg aagaagatga agactgttga gcccaagcac 720
agcgacgctt tcctaaagag aatggagtct gcctactctg tggataaggg caagaaaatc 780
gtactgcagg tggaagtggt tgacccaaat gcccaggtca aatggttgaa gaacggtcag 840
gagataaaat catcagccaa gtacatcata gaatcagttg gcaacatcag gacgctcacc 900
atcaacaagt gtagcctggc tgacgacgct gcgtacgagt gtgtgattgg ggaagagaag 960
tccttcacag aggtgtttgt caaagagccc ccggtcacca tcaccaagct gctggatgat 1020
taccacgtgg tggtgggaga gagagtggag tttgaggtgg aggtgtctgt ggagggagca 1080
cacgttaact ggatgtttga ggaccaagaa ctctccaggg acacccataa gtaccgcttt 1140
aagaaggacg ggttgaagca catgctcatc atccaagagg ctacgctgga tgacattgga 1200
atgtactggt gcttcaccaa cggcgggcga accaaaggag agctagaagt tgaagagaaa 1260
gaactggagg tgttgcagaa catcgctgac ctgacggtga aggccgagga ccaggccatg 1320
ttcaagtgtg aggtgtctga tgagaaggta acagggaaat ggctcaaaga tggcgtggag 1380
gtgctgccca gcagtcgcat caagctgacc cacatcggaa gaatccatcg gcttaccata 1440
gacgacgtca agcccgagga cgctggagac tataccttta tcccagacgg atatgccctc 1500
tcactgtccg ccaaactcaa cttcctggaa attaagatcg actatgtccc ccgccaagag 1560
ccacccaaga tccatctaga caccaccggc aacatggttt cccagaacac catcattgtg 1620
gtggctggca acaagctgcg cctggacgtg gagatctctg gagagcctcc tcccactgtc 1680
gtctgggcaa agggagacac ggcaatcaca gctgtggagg ggcgtgtgag gactgagagc 1740
cggaaggacc tgagctgctt cgtcatagag ggggcagaga gagaggatga gggcaactac 1800
accatcattg tcaccaaccc tgccggagag gacaaggctc atctgtttgt caagattgtt 1860
gatgtgcctg actgccctga gaatgtaaag tgtacctcgg tgggagaaga ctgtgccacc 1920
atggtctggg acccacccaa gttcgacgga ggcgcaccag tcacaggcta tctcatggag 1980
aggaagaaga agggctccac caggtggacg aagctcaact ttgacgtgta cgagggggtg 2040
acgtacgaag ccaagaggat gattgagggc gtgctctacg agatgagagt gtacgccgtc 2100
aatggcattg gcatgtccca gcccagcctc aattccaaac ccttcatgcc catcgctgca 2160
accagtgagc ctctgggcct caaggtgcat gatgtcacag acaccacatg taccctgaag 2220
tggctggccc ctgagaagat cggtgccgga ggcctggacg gatacgttat tgagtactgc 2280
aaggagggag acacggagtg ggtggtggcg aacactgagc tggtggagag acagaattac 2340
acagtccgca acctccccac cgcggagaag atcaacttca gagtggtggc cgtgaacatt 2400
gctggacgca gcccccctac cggcctgagc cagcccgtca ctatccgcga gatcgtggaa 2460
ctgcccaaga tccgcctccc tcgctacttg agacagaagt acattagaag agtgggcgac 2520
aaaatcaacc tgaccatccc cttccagggt aagccacgtc ccaaagtgca atggtacaag 2580
gatggggaag agcttgacac tcgagttgcc agcatacgca attccgaagt ggactctatc 2640
ctgttcatcc gctcggctga gagatcccac tctgggaagt acgagttggt cctgcagatt 2700
gagaacatgg aggccagggc tattctggaa atcaggatcg tagaggcacc tgggcctccc 2760
gaggtagtga aggtcacaga cgtttggggc ttcaacgctg cgctggagtg gaagccaccg 2820
aaggacgacg gcaactgcga gatcaccggt tacacaatac agaaggcgga caagaagaca 2880
aatgaatggt tcactatcta cgagcacaac aggaggacaa actgcacagc ctcagacctg 2940
atcatgggaa atgagtacat gttccgtgtc ttcagcgaga acctcgttgg aaagagtgag 3000
gatttctgcc tcagcaagga cacagccatc atacctaaga taggattgga gtacaaccca 3060
cctccattca aggagaagga tatgcaaagc gcccccaagt tcatacagcc cctgcttgac 3120
aggtctgtgg tggcaggcta cagtaccacc atcagctctg ctgtcaagac ttgtcctaaa 3180
cctaagatca ggtggttgag gaataagatt cccctggacg agaaccctag gttcctgatg 3240
cagaacaacc agggggtttt gaccctgaac atccgcaagc ccagtcagta tgacgggggc 3300
aagttcacct gcaaggctat caactctttg ggggaggacg tcgtggagtg caccctactc 3360
gtacgagctc tcaaggacaa ggaagatgga gacgagaaa 3399
<210> 121
<211> 1133
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白结合蛋白C 快缩型样
<400> 121
Met Pro Glu Ala Ala Asp Ala Val Lys Pro Glu Gly Glu Glu Gly Glu
1 5 10 15
Ala Pro Ala Glu Ala Glu Glu Asn Thr Ala Glu Asp Asp Glu Pro Leu
20 25 30
Pro Glu Gly Glu Glu Gly Ala His Gln Ser Gln Glu Ile Thr Gly Leu
35 40 45
Phe Leu Gln His Pro Glu Thr Thr Val Ala Ile Thr Gly Thr Asp Ile
50 55 60
Val Phe Thr Ala Lys Val Asp Ser Thr Thr Leu Ser Arg Lys Pro Thr
65 70 75 80
Ile Lys Trp Leu Lys Gly Lys Trp Leu Asp Leu Gly Ser Lys Ala Gly
85 90 95
Lys His Met Gln Phe Lys Glu Thr Phe Asp Arg Ala Thr Lys Ile Tyr
100 105 110
Thr Trp Asp Met Lys Ile Ile Lys Val Val Pro Gly Asp Ala Gly Ala
115 120 125
Tyr Arg Cys Glu Val Thr Ser Lys Asp Lys Cys Asp Ser Ser Ala Phe
130 135 140
Asp Ile Ser Val Glu Ala Val Gln Ile Glu Glu Glu His Asp Ser Leu
145 150 155 160
Ala Ala Phe Lys Arg Thr Asp Ala Gly Glu Asp Glu Gly Ser Leu Asp
165 170 175
Phe Ser Ala Leu Leu Lys Ala Thr Lys Lys Lys Lys Lys Pro Val Val
180 185 190
Asp Glu Glu Lys Ala Asp Val Trp Glu Ile Leu Lys Asn Ala Gln Pro
195 200 205
Ser Glu Tyr Glu Lys Ile Ala Phe Glu Tyr Gly Ile Thr Asp Leu Arg
210 215 220
Gly Leu Leu Lys Arg Leu Lys Lys Met Lys Thr Val Glu Pro Lys His
225 230 235 240
Ser Asp Ala Phe Leu Lys Arg Met Glu Ser Ala Tyr Ser Val Asp Lys
245 250 255
Gly Lys Lys Ile Val Leu Gln Val Glu Val Val Asp Pro Asn Ala Gln
260 265 270
Val Lys Trp Leu Lys Asn Gly Gln Glu Ile Lys Ser Ser Ala Lys Tyr
275 280 285
Ile Ile Glu Ser Val Gly Asn Ile Arg Thr Leu Thr Ile Asn Lys Cys
290 295 300
Ser Leu Ala Asp Asp Ala Ala Tyr Glu Cys Val Ile Gly Glu Glu Lys
305 310 315 320
Ser Phe Thr Glu Val Phe Val Lys Glu Pro Pro Val Thr Ile Thr Lys
325 330 335
Leu Leu Asp Asp Tyr His Val Val Val Gly Glu Arg Val Glu Phe Glu
340 345 350
Val Glu Val Ser Val Glu Gly Ala His Val Asn Trp Met Phe Glu Asp
355 360 365
Gln Glu Leu Ser Arg Asp Thr His Lys Tyr Arg Phe Lys Lys Asp Gly
370 375 380
Leu Lys His Met Leu Ile Ile Gln Glu Ala Thr Leu Asp Asp Ile Gly
385 390 395 400
Met Tyr Trp Cys Phe Thr Asn Gly Gly Arg Thr Lys Gly Glu Leu Glu
405 410 415
Val Glu Glu Lys Glu Leu Glu Val Leu Gln Asn Ile Ala Asp Leu Thr
420 425 430
Val Lys Ala Glu Asp Gln Ala Met Phe Lys Cys Glu Val Ser Asp Glu
435 440 445
Lys Val Thr Gly Lys Trp Leu Lys Asp Gly Val Glu Val Leu Pro Ser
450 455 460
Ser Arg Ile Lys Leu Thr His Ile Gly Arg Ile His Arg Leu Thr Ile
465 470 475 480
Asp Asp Val Lys Pro Glu Asp Ala Gly Asp Tyr Thr Phe Ile Pro Asp
485 490 495
Gly Tyr Ala Leu Ser Leu Ser Ala Lys Leu Asn Phe Leu Glu Ile Lys
500 505 510
Ile Asp Tyr Val Pro Arg Gln Glu Pro Pro Lys Ile His Leu Asp Thr
515 520 525
Thr Gly Asn Met Val Ser Gln Asn Thr Ile Ile Val Val Ala Gly Asn
530 535 540
Lys Leu Arg Leu Asp Val Glu Ile Ser Gly Glu Pro Pro Pro Thr Val
545 550 555 560
Val Trp Ala Lys Gly Asp Thr Ala Ile Thr Ala Val Glu Gly Arg Val
565 570 575
Arg Thr Glu Ser Arg Lys Asp Leu Ser Cys Phe Val Ile Glu Gly Ala
580 585 590
Glu Arg Glu Asp Glu Gly Asn Tyr Thr Ile Ile Val Thr Asn Pro Ala
595 600 605
Gly Glu Asp Lys Ala His Leu Phe Val Lys Ile Val Asp Val Pro Asp
610 615 620
Cys Pro Glu Asn Val Lys Cys Thr Ser Val Gly Glu Asp Cys Ala Thr
625 630 635 640
Met Val Trp Asp Pro Pro Lys Phe Asp Gly Gly Ala Pro Val Thr Gly
645 650 655
Tyr Leu Met Glu Arg Lys Lys Lys Gly Ser Thr Arg Trp Thr Lys Leu
660 665 670
Asn Phe Asp Val Tyr Glu Gly Val Thr Tyr Glu Ala Lys Arg Met Ile
675 680 685
Glu Gly Val Leu Tyr Glu Met Arg Val Tyr Ala Val Asn Gly Ile Gly
690 695 700
Met Ser Gln Pro Ser Leu Asn Ser Lys Pro Phe Met Pro Ile Ala Ala
705 710 715 720
Thr Ser Glu Pro Leu Gly Leu Lys Val His Asp Val Thr Asp Thr Thr
725 730 735
Cys Thr Leu Lys Trp Leu Ala Pro Glu Lys Ile Gly Ala Gly Gly Leu
740 745 750
Asp Gly Tyr Val Ile Glu Tyr Cys Lys Glu Gly Asp Thr Glu Trp Val
755 760 765
Val Ala Asn Thr Glu Leu Val Glu Arg Gln Asn Tyr Thr Val Arg Asn
770 775 780
Leu Pro Thr Ala Glu Lys Ile Asn Phe Arg Val Val Ala Val Asn Ile
785 790 795 800
Ala Gly Arg Ser Pro Pro Thr Gly Leu Ser Gln Pro Val Thr Ile Arg
805 810 815
Glu Ile Val Glu Leu Pro Lys Ile Arg Leu Pro Arg Tyr Leu Arg Gln
820 825 830
Lys Tyr Ile Arg Arg Val Gly Asp Lys Ile Asn Leu Thr Ile Pro Phe
835 840 845
Gln Gly Lys Pro Arg Pro Lys Val Gln Trp Tyr Lys Asp Gly Glu Glu
850 855 860
Leu Asp Thr Arg Val Ala Ser Ile Arg Asn Ser Glu Val Asp Ser Ile
865 870 875 880
Leu Phe Ile Arg Ser Ala Glu Arg Ser His Ser Gly Lys Tyr Glu Leu
885 890 895
Val Leu Gln Ile Glu Asn Met Glu Ala Arg Ala Ile Leu Glu Ile Arg
900 905 910
Ile Val Glu Ala Pro Gly Pro Pro Glu Val Val Lys Val Thr Asp Val
915 920 925
Trp Gly Phe Asn Ala Ala Leu Glu Trp Lys Pro Pro Lys Asp Asp Gly
930 935 940
Asn Cys Glu Ile Thr Gly Tyr Thr Ile Gln Lys Ala Asp Lys Lys Thr
945 950 955 960
Asn Glu Trp Phe Thr Ile Tyr Glu His Asn Arg Arg Thr Asn Cys Thr
965 970 975
Ala Ser Asp Leu Ile Met Gly Asn Glu Tyr Met Phe Arg Val Phe Ser
980 985 990
Glu Asn Leu Val Gly Lys Ser Glu Asp Phe Cys Leu Ser Lys Asp Thr
995 1000 1005
Ala Ile Ile Pro Lys Ile Gly Leu Glu Tyr Asn Pro Pro Pro Phe
1010 1015 1020
Lys Glu Lys Asp Met Gln Ser Ala Pro Lys Phe Ile Gln Pro Leu
1025 1030 1035
Leu Asp Arg Ser Val Val Ala Gly Tyr Ser Thr Thr Ile Ser Ser
1040 1045 1050
Ala Val Lys Thr Cys Pro Lys Pro Lys Ile Arg Trp Leu Arg Asn
1055 1060 1065
Lys Ile Pro Leu Asp Glu Asn Pro Arg Phe Leu Met Gln Asn Asn
1070 1075 1080
Gln Gly Val Leu Thr Leu Asn Ile Arg Lys Pro Ser Gln Tyr Asp
1085 1090 1095
Gly Gly Lys Phe Thr Cys Lys Ala Ile Asn Ser Leu Gly Glu Asp
1100 1105 1110
Val Val Glu Cys Thr Leu Leu Val Arg Ala Leu Lys Asp Lys Glu
1115 1120 1125
Asp Gly Asp Glu Lys
1130
<210> 122
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白结合蛋白C 快缩型样片段
<400> 122
Ala Asp Val Trp Glu Ile Leu Lys
1 5
<210> 123
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白结合蛋白C 快缩型样片段
<400> 123
Glu Leu Glu Val Leu Gln Asn Ile Ala Asp Leu Thr Val Lys
1 5 10
<210> 124
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白结合蛋白C 快缩型样片段
<400> 124
Glu Pro Pro Val Thr Ile Thr Lys
1 5
<210> 125
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白结合蛋白C 快缩型样片段
<400> 125
Gly Glu Leu Glu Val Glu Glu Lys
1 5
<210> 126
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白结合蛋白C 快缩型样片段
<400> 126
His Ser Asp Ala Phe Leu Lys
1 5
<210> 127
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白结合蛋白C 快缩型样片段
<400> 127
Ile Ala Phe Glu Tyr Gly Ile Thr Asp Leu Arg Gly Leu Leu Lys
1 5 10 15
<210> 128
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白结合蛋白C 快缩型样片段
<400> 128
Ile Gly Leu Glu Tyr Asn Pro Pro Pro Phe Lys
1 5 10
<210> 129
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白结合蛋白C 快缩型样片段
<400> 129
Ile Asn Leu Thr Ile Pro Phe Gln Gly Lys Pro Arg Pro Lys
1 5 10
<210> 130
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白结合蛋白C 快缩型样片段
<400> 130
Ile Val Leu Gln Val Glu Val Val Asp Pro Asn Ala Gln Val Lys
1 5 10 15
<210> 131
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白结合蛋白C 快缩型样片段
<400> 131
Leu Asn Phe Asp Val Tyr Glu Gly Val Thr Tyr Glu Ala Lys
1 5 10
<210> 132
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白结合蛋白C 快缩型样片段
<400> 132
Leu Asn Phe Leu Glu Ile Lys
1 5
<210> 133
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白结合蛋白C 快缩型样片段
<400> 133
Asn Ala Gln Pro Ser Glu Tyr Glu Lys
1 5
<210> 134
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白结合蛋白C 快缩型样片段
<400> 134
Arg Thr Asp Ala Gly Glu Asp Glu Gly Ser Leu Asp Phe Ser Ala Leu
1 5 10 15
Leu Lys
<210> 135
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白结合蛋白C 快缩型样片段
<400> 135
Ser Phe Thr Glu Val Phe Val Lys
1 5
<210> 136
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 肌球蛋白结合蛋白C 快缩型样片段
<400> 136
Val Asp Ser Thr Thr Leu Ser Arg Lys Pro Thr Ile Lys
1 5 10
<210> 137
<211> 1551
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> ATP合成酶亚单元β 线粒体
<400> 137
atgttaggag ctgtgggacg ctgctgcacc ggggctctcc aggcacttaa gcctggggtc 60
cagcccctga aggcccttgt aggatcgcca tctgtccttg gacgcagaga ctactctgca 120
cctgctgctg ctgccgcctt cgcccatggc aggatcgtag cggtcatcgg tgccgtcgtc 180
gacgtccagt tcgatgaggg cctcccaccc atcctcaatg ccctggaagt tgctgggcgt 240
gagtccaggc tagttctgga ggtggcacag catcttggtg agaacactgt gcgtaccatt 300
gccatggatg gtactgaagg tcttgtccgt ggacagaagg ttgtggacac tggcgatccc 360
atcagaatcc cagtgggtcc cgagacccta ggcagaatca tgaatgtcat tggagagccc 420
attgatgaga gggggccaat ctccaccaag cagactgccg ccatccacgc tgaggcccca 480
gagttcactg acatgagtgt ggagcaggag atcctggtaa ctggcatcaa ggtggtagat 540
ctgctggctc cctatgccaa gggaggcaaa atcggtctgt tcggtggtgc tggtgtgggc 600
aagactgtgt tgatcatgga gctgatcaac aatgtggcca aggcccatgg tggttactct 660
gtgtttgccg gagtgggaga gcgtacccgc gagggaaatg acttgtacca cgagatgatt 720
gagtcgggtg tcatcaacct gaaggatgac acctccaagg tggcgctggt gtacggacaa 780
atgaacgagc ccccaggcgc ccgtgcccgt gtggctctga ctggtctgac cgtggcagag 840
tatttccgtg accaggaggg tcaggatgtg ctgctcttca tcgataacat cttccgtttc 900
acccaggctg gctccgaggt gtctgccctg ctgggtcgta tcccctccgc tgtgggttac 960
cagcccaccc tggccactga catgggtacc atgcaggaga gaatcaccac caccaagaag 1020
ggttccatca cctctgtgca ggccatctat gtgccggctg acgatttgac tgatcccgcc 1080
cctgccacca ccttcgctca cttggacgcc accactgtgc tgtcccgtgc aatcgctgag 1140
ctgggtatct accctgctgt ggatcccctg gattccacct cccgtatcat ggaccccaac 1200
attgtcggcg ctgagcacta tgatgttgct cgtggcgtgc agaagatcct ccaggactac 1260
aagtccctgc aggatatcat tgccatcctg ggtatggatg agttgtctga ggaggacaag 1320
ctgattgtct ctcgcgcccg caagatccag cgtttcctgt cccagccctt ccaggtggcg 1380
gaggtattca ccggtcatgc tggcaagctg gtgccactca aggagaccat cagtggcttc 1440
cagagcattc taaatggtga gtacgatgcc ctgcccgagc aggctttcta catggttgga 1500
cccatcgagg aggtggttga gaaggctgca cagatggcca aggatctcgc a 1551
<210> 138
<211> 517
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> ATP合成酶亚单元β 线粒体
<400> 138
Met Leu Gly Ala Val Gly Arg Cys Cys Thr Gly Ala Leu Gln Ala Leu
1 5 10 15
Lys Pro Gly Val Gln Pro Leu Lys Ala Leu Val Gly Ser Pro Ser Val
20 25 30
Leu Gly Arg Arg Asp Tyr Ser Ala Pro Ala Ala Ala Ala Ala Phe Ala
35 40 45
His Gly Arg Ile Val Ala Val Ile Gly Ala Val Val Asp Val Gln Phe
50 55 60
Asp Glu Gly Leu Pro Pro Ile Leu Asn Ala Leu Glu Val Ala Gly Arg
65 70 75 80
Glu Ser Arg Leu Val Leu Glu Val Ala Gln His Leu Gly Glu Asn Thr
85 90 95
Val Arg Thr Ile Ala Met Asp Gly Thr Glu Gly Leu Val Arg Gly Gln
100 105 110
Lys Val Val Asp Thr Gly Asp Pro Ile Arg Ile Pro Val Gly Pro Glu
115 120 125
Thr Leu Gly Arg Ile Met Asn Val Ile Gly Glu Pro Ile Asp Glu Arg
130 135 140
Gly Pro Ile Ser Thr Lys Gln Thr Ala Ala Ile His Ala Glu Ala Pro
145 150 155 160
Glu Phe Thr Asp Met Ser Val Glu Gln Glu Ile Leu Val Thr Gly Ile
165 170 175
Lys Val Val Asp Leu Leu Ala Pro Tyr Ala Lys Gly Gly Lys Ile Gly
180 185 190
Leu Phe Gly Gly Ala Gly Val Gly Lys Thr Val Leu Ile Met Glu Leu
195 200 205
Ile Asn Asn Val Ala Lys Ala His Gly Gly Tyr Ser Val Phe Ala Gly
210 215 220
Val Gly Glu Arg Thr Arg Glu Gly Asn Asp Leu Tyr His Glu Met Ile
225 230 235 240
Glu Ser Gly Val Ile Asn Leu Lys Asp Asp Thr Ser Lys Val Ala Leu
245 250 255
Val Tyr Gly Gln Met Asn Glu Pro Pro Gly Ala Arg Ala Arg Val Ala
260 265 270
Leu Thr Gly Leu Thr Val Ala Glu Tyr Phe Arg Asp Gln Glu Gly Gln
275 280 285
Asp Val Leu Leu Phe Ile Asp Asn Ile Phe Arg Phe Thr Gln Ala Gly
290 295 300
Ser Glu Val Ser Ala Leu Leu Gly Arg Ile Pro Ser Ala Val Gly Tyr
305 310 315 320
Gln Pro Thr Leu Ala Thr Asp Met Gly Thr Met Gln Glu Arg Ile Thr
325 330 335
Thr Thr Lys Lys Gly Ser Ile Thr Ser Val Gln Ala Ile Tyr Val Pro
340 345 350
Ala Asp Asp Leu Thr Asp Pro Ala Pro Ala Thr Thr Phe Ala His Leu
355 360 365
Asp Ala Thr Thr Val Leu Ser Arg Ala Ile Ala Glu Leu Gly Ile Tyr
370 375 380
Pro Ala Val Asp Pro Leu Asp Ser Thr Ser Arg Ile Met Asp Pro Asn
385 390 395 400
Ile Val Gly Ala Glu His Tyr Asp Val Ala Arg Gly Val Gln Lys Ile
405 410 415
Leu Gln Asp Tyr Lys Ser Leu Gln Asp Ile Ile Ala Ile Leu Gly Met
420 425 430
Asp Glu Leu Ser Glu Glu Asp Lys Leu Ile Val Ser Arg Ala Arg Lys
435 440 445
Ile Gln Arg Phe Leu Ser Gln Pro Phe Gln Val Ala Glu Val Phe Thr
450 455 460
Gly His Ala Gly Lys Leu Val Pro Leu Lys Glu Thr Ile Ser Gly Phe
465 470 475 480
Gln Ser Ile Leu Asn Gly Glu Tyr Asp Ala Leu Pro Glu Gln Ala Phe
485 490 495
Tyr Met Val Gly Pro Ile Glu Glu Val Val Glu Lys Ala Ala Gln Met
500 505 510
Ala Lys Asp Leu Ala
515
<210> 139
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> ATP合成酶亚单元β 线粒体片段
<400> 139
Ile Gly Leu Phe Gly Gly Ala Gly Val Gly Lys
1 5 10
<210> 140
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> ATP合成酶亚单元β 线粒体片段
<400> 140
Ile Gln Arg Phe Leu Ser Gln Pro Phe Gln Val Ala Glu Val Phe Thr
1 5 10 15
Gly His Ala Gly Lys
20
<210> 141
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> ATP合成酶亚单元β 线粒体片段
<400> 141
Thr Val Leu Ile Met Glu Leu Ile Asn Asn Val Ala Lys
1 5 10
<210> 142
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> ATP合成酶亚单元β 线粒体片段
<400> 142
Val Val Asp Leu Leu Ala Pro Tyr Ala Lys
1 5 10
<210> 143
<211> 996
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> L-乳酸脱氢酶A链样
<400> 143
atgactacca aggagaagct gatcacccat gtgttggctg gtgagcctgt tggctcccgg 60
agcaaggtga cagttgttgg cgtcggcatg gttggcatgg cctccgcagt cagcgtcctg 120
ctcaaggacc tgtgcgatga gctgtgcctg attgacgtga tggaagataa actgaagggt 180
gaggtcatgg acctgcagca tggcagcctc ttctgcaaga ctcacaagat tgtgggcgac 240
aaggactaca gtacgactgc ccactccaag gtggtggtgg tcacagccgg tgctcgtcag 300
caagagggtg agagccgtct gaacctggtg cagcgtaacg tcaacatctt caaattcata 360
attccccaga tcgtcaagta cagccccaac gccatcctgc tggtcgtctc caatcctgtt 420
gacatcctaa cctacgtggc ttggaagctg agtggtttcc cccgtcaccg cgtcatcggt 480
tccggcacca acctggactc tggtcgtttc cgccacctga tgggcgagaa gctacacctt 540
cacccatcca gctgtcacgg ctggatcatt ggagaacacg gagactccag cgtgcccgta 600
tggagcggtg tgaatgttgc cggtgtttcc ctgaagggcc tgaacccaga catgggcaca 660
gacgcagaca aggaggactg gaagcacgtc cacaagatgg tggtcgacgg tgcctatgag 720
gtcatcaagc tgaagggtta cacctcctgg gctatcggca tgtccgtcgc tgacctggtt 780
gagagcatcc tgaagaacct ccacaaagtc caccctgtgt ccaccctggt caagggaatg 840
cacggtgtga aggaggaggt gtttctcagc gtgccctgcg tgctgggaaa cagcggtctg 900
accgacgtca tccacatgac tctgaagccc gaggaggaga agcagctgag caacagtgcc 960
gagaccctat ggggcgtaca gaaagagctc accttg 996
<210> 144
<211> 332
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> L-乳酸脱氢酶A链样
<400> 144
Met Thr Thr Lys Glu Lys Leu Ile Thr His Val Leu Ala Gly Glu Pro
1 5 10 15
Val Gly Ser Arg Ser Lys Val Thr Val Val Gly Val Gly Met Val Gly
20 25 30
Met Ala Ser Ala Val Ser Val Leu Leu Lys Asp Leu Cys Asp Glu Leu
35 40 45
Cys Leu Ile Asp Val Met Glu Asp Lys Leu Lys Gly Glu Val Met Asp
50 55 60
Leu Gln His Gly Ser Leu Phe Cys Lys Thr His Lys Ile Val Gly Asp
65 70 75 80
Lys Asp Tyr Ser Thr Thr Ala His Ser Lys Val Val Val Val Thr Ala
85 90 95
Gly Ala Arg Gln Gln Glu Gly Glu Ser Arg Leu Asn Leu Val Gln Arg
100 105 110
Asn Val Asn Ile Phe Lys Phe Ile Ile Pro Gln Ile Val Lys Tyr Ser
115 120 125
Pro Asn Ala Ile Leu Leu Val Val Ser Asn Pro Val Asp Ile Leu Thr
130 135 140
Tyr Val Ala Trp Lys Leu Ser Gly Phe Pro Arg His Arg Val Ile Gly
145 150 155 160
Ser Gly Thr Asn Leu Asp Ser Gly Arg Phe Arg His Leu Met Gly Glu
165 170 175
Lys Leu His Leu His Pro Ser Ser Cys His Gly Trp Ile Ile Gly Glu
180 185 190
His Gly Asp Ser Ser Val Pro Val Trp Ser Gly Val Asn Val Ala Gly
195 200 205
Val Ser Leu Lys Gly Leu Asn Pro Asp Met Gly Thr Asp Ala Asp Lys
210 215 220
Glu Asp Trp Lys His Val His Lys Met Val Val Asp Gly Ala Tyr Glu
225 230 235 240
Val Ile Lys Leu Lys Gly Tyr Thr Ser Trp Ala Ile Gly Met Ser Val
245 250 255
Ala Asp Leu Val Glu Ser Ile Leu Lys Asn Leu His Lys Val His Pro
260 265 270
Val Ser Thr Leu Val Lys Gly Met His Gly Val Lys Glu Glu Val Phe
275 280 285
Leu Ser Val Pro Cys Val Leu Gly Asn Ser Gly Leu Thr Asp Val Ile
290 295 300
His Met Thr Leu Lys Pro Glu Glu Glu Lys Gln Leu Ser Asn Ser Ala
305 310 315 320
Glu Thr Leu Trp Gly Val Gln Lys Glu Leu Thr Leu
325 330
<210> 145
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> L-乳酸脱氢酶A链样片段
<400> 145
Phe Ile Ile Pro Gln Ile Val Lys
1 5
<210> 146
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> L-乳酸脱氢酶A链样片段
<400> 146
Leu Ile Thr His Val Leu Ala Gly Glu Pro Val Gly Ser Arg Ser Lys
1 5 10 15
<210> 147
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> L-乳酸脱氢酶A链样片段
<400> 147
Thr His Val Leu Ala Gly Glu Pro Val Gly Ser Arg Ser Lys
1 5 10
<210> 148
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> L-乳酸脱氢酶A链样片段
<400> 148
Val His Pro Val Ser Thr Leu Val Lys
1 5
<210> 149
<211> 28
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> L-乳酸脱氢酶A链样片段
<400> 149
Val Val Val Val Thr Ala Gly Ala Arg Gln Gln Glu Gly Glu Ser Arg
1 5 10 15
Leu Asn Leu Val Gln Arg Asn Val Asn Ile Phe Lys
20 25

Claims (9)

1.抗原在制造鱼变态反应的诊断试剂盒中的应用,所述试剂盒包含以下(2)、(7)、(10)和(12)的蛋白质中的至少一种作为抗原:
(2)(2A)EEF1A2结合蛋白样(EEF1A2 binding protein-like)或其突变体,其是作为鱼变态反应的抗原的、以下(2A-a)~(2A-b)中的任一蛋白质:
(2A-a)序列号5所示的氨基酸序列的蛋白质;
(2A-b)由序列号4所示的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质;或者
(2B)选自由序列号5~8组成的组中的氨基酸序列的蛋白质;
(7)(7A)肌球蛋白结合蛋白H-样(Myosin binding protein H-like)或其突变体,其是作为鱼变态反应的抗原的、以下(7A-a)~(7A-b)中的任一蛋白质:
(7A-a)序列号43所示的氨基酸序列的蛋白质;
(7A-b)由序列号42所示的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质;或者
(7B)选自由序列号43~54组成的组中的氨基酸序列的蛋白质;
(10)(10A)肌球蛋白重链快缩型骨骼肌样(myosin heavy chain,fast skeletalmuscle-like)或其突变体,其是作为鱼变态反应的抗原的、以下(10A-a)~(10A-b)中的任一蛋白质:
(10A-a)序列号70所示的的氨基酸序列的蛋白质;
(10A-b)由序列号69所示的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质;或者
(10B)选自由序列号70~108组成的组中的氨基酸序列的蛋白质;
(12)(12A)肌球蛋白结合蛋白C快缩型样(myosin-binding protein C,fast-type-like)或其突变体,其是作为鱼变态反应的抗原的、以下(12A-a)~(12A-b)中的任一蛋白质:
(12A-a)序列号121所示的氨基酸序列的蛋白质;
(12A-b)由序列号120所示的碱基序列编码的氨基酸序列的蛋白质;或者
(12B)选自由序列号121~136组成的组中的氨基酸序列的蛋白质。
2.权利要求1中作为(2)、(7)、(10)和(12)限定的蛋白质的至少一种作为抗原在制造鱼变态反应的诊断用组合物中的应用。
3.一种抗原的利用下述方法的、在制造提供用于诊断对象的鱼变态反应的指标的试剂盒中的应用,所述方法包括以下工序:
(i)使由对象得到的试样与抗原接触,此处,该试样是包含有IgE抗体的溶液;
(ii)对由对象得到的试样中的IgE抗体与该抗原的结合进行检测;
(iii)检测到对象的IgE抗体与该抗原结合时,提供对象为鱼变态反应的指标;
此处,该抗原是权利要求1中作为(2)、(7)、(10)和(12)限定的蛋白质的至少一种。
4.权利要求1中作为(2)、(7)、(10)和(12)限定的蛋白质的至少一种在制造药物组合物中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用,所述药物组合物用于治疗鱼变态反应。
6.一种鱼加工品,其特征在于,其抗原被去除或者降低了,该抗原是权利要求1中作为(2)、(7)、(10)和(12)限定的蛋白质的至少一种。
7.与权利要求1中作为(2)、(7)、(10)和(12)限定的蛋白质的至少一种结合的抗体在制造用于判断对象物中有无鱼抗原的检测仪中的应用。
8.引物在制造用于判断对象物中有无成为鱼变态反应原因的抗原的检测仪中的应用,其特征在于,所述检测仪包含具有与序列号4、42、69或120所示碱基序列中至少一个序列的一部分互补的碱基序列的引物。
9.权利要求1中作为(2)、(7)、(10)和(12)限定的蛋白质的至少一种作为源自鱼的抗原的应用,所述抗原成为鱼变态反应的原因。
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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109503699B (zh) * 2019-01-08 2021-08-31 福建农林大学 一种带鱼鱼肉降血压肽
CN111474281B (zh) * 2020-05-27 2022-08-05 中国检验检疫科学研究院 一种利用特征标识肽段鉴别三文鱼种类的方法

Family Cites Families (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU6602890A (en) * 1989-10-05 1991-04-28 Exoxemis, Inc. Haloperoxidase acid optimum chemiluminescence assay system
ATE426170T1 (de) * 1998-01-30 2009-04-15 Allertein Therapeutics Llc Prognostischer allergie- oder entzundungstest
JP2000125775A (ja) * 1998-10-23 2000-05-09 Nippon Meat Packers Inc 低アレルゲン性ゼラチン
CO5271699A1 (es) * 2000-01-24 2003-04-30 Pfizer Prod Inc Procedimiento para el tratamiento de cardiomiopatia utilizando inhibidores de la glucogeno fosforilasa
WO2002050269A1 (fr) * 2000-12-21 2002-06-27 Genox Research, Inc. Methode d'etude de maladies allergiques
JP4578709B2 (ja) 2001-03-28 2010-11-10 三菱化学メディエンス株式会社 複数項目同時分析可能なイムノクロマトグラフ法及びイムノクロマトグラフ用ストリップ
AU2002951411A0 (en) * 2002-09-16 2002-09-26 The University Of Sydney Genotype screen
JP4841494B2 (ja) * 2006-12-11 2011-12-21 株式会社マルハニチロ水産 食品中タンパク質の高感度検出法
JP2009236809A (ja) 2008-03-28 2009-10-15 Itea Inc アレルゲン特定用標準アレルゲン及びアレルゲン検出用抗体並びにその利用
CN101492495B (zh) * 2009-02-24 2011-08-31 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 一组抗原表位多肽及其应用
JP5190423B2 (ja) 2009-08-04 2013-04-24 ホーユー株式会社 2次元電気泳動方法
JP5475358B2 (ja) 2009-08-04 2014-04-16 ホーユー株式会社 2次元電気泳動方法
JP5513802B2 (ja) 2009-08-04 2014-06-04 ホーユー株式会社 等電点電気泳動用ゲル及び等電点電気泳動方法
JP5433341B2 (ja) 2009-08-04 2014-03-05 ホーユー株式会社 等電点電気泳動方法及び粗雑物除去の判定方法
WO2011032097A1 (en) * 2009-09-14 2011-03-17 Mount Sinai School Of Medicine Methods for characterizing antibody binding affinity and epitope diversity in food allergy
KR101046284B1 (ko) 2009-09-25 2011-07-04 한국건설기술연구원 자연환기식 유니트의 필터 교체구조
KR101123843B1 (ko) 2009-09-25 2012-03-19 홍석희 가시설 구조체의 평형 상태 평가, 조정, 예측 방법 및 그 장치
KR101060752B1 (ko) 2009-09-25 2011-08-30 한국전력공사 나선형 파형관용 이음장치
KR20110033546A (ko) 2009-09-25 2011-03-31 장동원 바스켓이 구비된 저수형 오수받이
US20110243993A1 (en) * 2010-03-29 2011-10-06 Broo Kerstin S Method for diagnosing and creating immunogenic tolerance in contact allergy and other epithelial immunotoxicological ailments
WO2013113325A1 (en) * 2012-01-31 2013-08-08 Curevac Gmbh Negatively charged nucleic acid comprising complexes for immunostimulation
WO2014210114A1 (en) * 2013-06-27 2014-12-31 Ppg Industries Ohio, Inc. Glass manufacturing system incorporating an optical low-coherence interferometry assembly
US20160030459A1 (en) * 2014-01-21 2016-02-04 Immune Design Corp. Compositions and methods for treating allergic conditions
CN103931936B (zh) * 2014-04-09 2015-08-19 长沙学院 一种淡水鱼小清蛋白过敏原抑制剂
JP5894695B1 (ja) * 2015-05-25 2016-03-30 ホーユー株式会社 ウズラの卵アレルギーの抗原

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