KR20210133239A - 박테리아 다당류를 정제하는 방법 - Google Patents

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스콧 앤드류 쿡
니시스 머천트
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Abstract

본 발명은 박테리아 다당류 정제, 특히 다당류를 생성하는 박테리아의 세포 용해물로부터 불순물을 제거하는 방법에 관한 것이다.

Description

박테리아 다당류를 정제하는 방법
본 발명은 박테리아 다당류를 정제하는 방법, 특히 다당류를 생성하는 박테리아의 세포 용해물로부터 불순물을 제거하는 방법에 관한 것이다.
박테리아 다당류, 특히 캡슐 다당류는 다양한 박테리아 질환에 연루되는 박테리아의 표면에서 발견되는 중요한 면역원이다. 이는 박테리아 다당류가 백신의 설계에 중요한 요소이게 한다. 박테리아 다당류는 특히 담체 단백질과 결합될 때 면역 반응을 발휘하는데 유용한 것으로 증명된 바 있다.
박테리아 다당류는 전형적으로 박테리아(예컨대 스트렙토코커스(Streptococcus)(예컨대 스트렙토코커스 뉴모니에(S. pneumoniae), 스트렙토코커스 피오젠스(S. pyogenes), 스트렙토코커스 아갈락티에(S. agalactiae) 또는 그룹 C 및 G 스트렙토 코커스(Group C & G Streptococcus)), 스타필로코커스(Staphylococcus)(예컨대 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus)), 헤모필러스(Haemophilus)(예컨대 헤모필러스 인플루엔제(Haemophilus influenzae), 네이세리아(Neisseria)(예컨대 네이세리아 메닌기티디스(Neisseria meningitidis)) 및 에셔리키아(Escherichia)(예컨대 에셔리키아 콜라이(Escherichia coli))의 발효의 의해 생성된다.
전형적으로, 박테리아 다당류는 복합 배지에서의 배치 배양(batch culture), 유가식 배양 또는 연속식 배양에서 배치를 사용하여 제조된다.
박테리아 다당류 후-발효(post-fermentation)의 대량 생산에 사용될 수 있는 강력하고 효율적인 정제 공정이 필요하다.
대부분의 공정은 캡슐 다당류의 침전 단계(예컨대 알코올 침전 또는 양이온성 계면활성제 처리)를 포함한다. 이어서, 상청액으로부터 (예컨대 원심분리에 의한) 침전물의 분리 및 재가용화는 번거롭고, 다당류의 손실을 야기하여 수율을 감소시킬 수 있다.
또한, 대부분의 정제 공정은 다수의 비용 및 노동 집약적이고 기술적으로 부담이 큰 수행, 에컨대 크로마토그래피 및 다중 막 분리를 수반하는 몇몇 단계를 요한다. 이러한 공정에서 불순물의 제거는 다수의 노동 집약적이고 고비용인 단계에 걸쳐 분포되어 있다. 단백질 수준은 가용성 단백질의 물리적 및 화학적 특성에 기인하여 가장 충족하기에 난해한 사양이다.
따라서, 박테리아 용해물 중 가용성 단백질 수준을 감소시키고 현행 정제 공정의 비효율성을 없앰으로써, 백신에 혼입되기에 적합한 상당히 정제된 박테리아 다당류를 제조하는 단순화된 정제 공정이 필요하다.
도 1은 다당류의 정제의 공정 흐름도를 도시한 것이다.
도 2는 다양한 시간점에서 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 8 발효 브로스의 단백질 제거 및 청징도(clarity)에 대한 2% w/v 명반에서 pH의 효과를 도시한 것이다. 좌측 막대는 1시간 후, 중앙 막대는 4시간 후, 우측 막대 24시간 후이다.
도 3은 다양한 시간점에서 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 8 발효 브로스의 단백질 제거 및 청징도(에 대한 pH 3.5에서 명반의 %의 효과를 도시한 것이다. 좌측 막대는 1.0% 명반, 중앙 막대는 2.0% 명반, 우측 막대는 3.0% 명반이다.
도 4는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 33F 발효 브로스의 산 적정을 도시한 것이다.
도 5는 pH 3.5에서 스트렙토코커스 뉴모니에 33F의 명반 응집을 도시한 것이다.
도 6은 스트렙토코커스 뉴모니에 22F 응집된 브로스 입자 크기에 대한 가열의 효과를 도시한 것이다. 본 실험의 경우, 응집 온도는 실온(RT)(더 작은 입도 분포 곡선(9.8 μm에서 피크)) 및 45℃(더 큰 입도 분포 곡선(65 μm에서의 피크))로 유지하였다.
1. 박테리아 다당류의 정제 방법
1.1. 출발 물질
본 발명의 방법은 박테리아 다당류와 함께 오염물을 포함하는 용액으로부터 상기 박테리아 다당류를 정제하는데 사용될 수 있다.
1.1.1 박테리아 세포
본 발명에 따라 정제되는 박테리아 다당류의 공급원은 박테리아 세포, 특히 병원성 박테리아이다. 본 발명에 따라 사용되는 그람양성 박테리아의 비제한적인 예는 스트렙토코커스(Streptococcus)(예컨대 스트렙토코커스 뉴모니에(S. pneumoniae), 스트렙토코커스 피오젠스(S. pyogenes), 스트렙토코커스 아갈락티에(S. agalactiae) 또는 그룹 C 및 G 스트렙토 코커스(Group C & G Streptococcus)), 스타필로코커스(Staphylococcus)(예컨대 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus)), 엔테로코커스(Enterococcus), 바실러스(Bacillus), 코리네박테리움(Corynebacterium), 리스테리아(Listeria), 에리시펠로트릭스(Erysipelothrix) 및 클로스트리디움(Clostridium)이다. 본 발명에 따라 사용되는 그람음성 박테리아의 비제한적인 예는 헤모필러스(Haemophilus)(예컨대 헤모필러스 인플루엔제(Haemophilus influenzae), 네이세리아(Neisseria)(예컨대 네이세리아 메닌기티디스(Neisseria meningitidis)) 및 에셔리키아(Escherichia)(예컨대 에셔리키아 콜라이(Escherichia coli))이다.
하나의 양태에서, 본 발명에 따라 사용되는 박테리아 다당류의 공급원은 에어로모나스 하이드로필라(Aeromonas hydrophila) 및 기타 종(spp.); 바실러스 안트라시스(Bacillus anthracis); 바실러스 세레우스(Bacillus cereus); 클로스트리디움의 보툴리눔(Botulinum) 신경독소 생성 종; 브루셀라 아보르투스(Brucella abortus); 브루셀라 멜리텐시스(Brucella melitensis); 브루셀라 슈이스(Brucella suis); 버콜데리아 말레이(Burkholderia mallei)(원명 슈도모나스 말레이(Pseudomonas mallei)); 버콜데리아 슈도말레이(Burkholderia pseudomallei)(원명 슈도모나스 슈도말레이(Pseudomonas pseudomallei)); 캄필로박터 제주니(Campylobacter jejuni); 클라미디아 시타시(Chlamydia psittaci); 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis), 클로스트리디움 보툴리눔(Clostridium botulinum); 클로스트리디움 디피실레(Clostridium dificile); 클로스트리디움 퍼프린젠스(Clostridium perfringens); 코시디오드스 이미티스(Coccidioides immitis); 코시디오드스 포사다시이(Coccidioides posadasii); 카우드리아 루미난티움(Cowdria ruminantium)(하트워터(Heartwater)); 콕시엘라 버네티이(Coxiella burnetii); 엔테로코커스 페칼리스(Enterococcus faecalis); 장병독성 에셔리키아 콜라이 그룹(Enterovirulent Escherichia coli group)(EEC Group), 예컨대 에셔리키아 콜라이 - 장독소원성(enterotoxigenic)(ETEC), 에셔리키아 콜라이 - 장병원성(EPEC), 에셔리키아 콜라이 - O157:H7 장출혈성(EHEC), 및 에셔리키아 콜라이 - 장침습성(EIEC); 에를리키아(Ehrlichia) spp., 예컨대 에를리키아 차츠피엔시스(Ehrlichia chajfeensis); 프란시셀라 툴라렌시스(Francisella tularensis); 레지오넬라 뉴모필리아(Legionella pneumophilia); 리베로박터 아프리카누스(Liberobacter africanus); 리베로박터 아시아티쿠스(Liberobacter asiaticus); 리스테리아 모노사이토젠스(Listeria monocytogenes); 기타 장균(miscellaneous enterics), 예컨대 클레브시엘라(Klebsiella), 엔테로박터(Enterobacter), 프로테우스(Proteus), 시트로박터(Citrobacter), 에어로박터(Aerobacter), 프로비덴시아(Providencia), 및 세라티아(Serratia); 바이코박테리움 보비스(Mycobacterium bovis); 마이코박테리움 튜버큘로시스(Mycobacterium tuberculosis); 마이코플라즈마 카프리콜룸(Mycoplasma capricolum); 마이코플라즈마 마이코이드스 subsp. 마이코이드스(Mycoplasma mycoides subsp. mycoides); 페로노스클레로스포라필리피네시스(Peronosclerosporaphilippinensis); 파코스포라 파키리지(Phakopsora pachyrhizi); 플레시오모나스 시겔로이드스(Plesiomonas shigelloides); 라스토니아 솔라네이세룸 레이스 3, 바이오바 2(Ralstonia solanacearum race 3, biovar 2); 리케차 프로와제키이(Rickettsia prowazekii); 리케차 리케치이(Rickettsia rickettsii); 살모넬라(Salmonella) spp.; 슐레로프토라 레이시에 var. 지에(Schlerophthora rayssiae var. zeae); 시켈라(Shigella) spp.; 스타필로코커스 아우레우스; 스트렙토코커스; 신키트리움 엔도바이오티쿰(Synchytrium endobioticum); 비브리오 콜레레 논-01(Vibrio cholerae non-01); 비브리오 콜레레 01; 비브리오 파라헤몰리티쿠스(Vibrio parahaemolyticus) 및 기타 비브리오; 비브리오 벌니피쿠스(Vibrio vulnificus); 잔토모나스 오리제(Xanthomonas oryzae); 자일렐라 패스티디오사(Xylella fastidiosa)(감귤류 얼룩 황백화 균주(citrus variegated chlorosis strain)); 이르시니아 엔테로콜리티카(Yersinia enterocolitica) 및 이르시니아 슈도튜버큘로시스(Yersinia pseudotuberculosis); 및 이르시니아 페스티스(Yersinia pestis)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 정제 목적인 다당류는 세포 요소, 예컨대 세포벽과 회합될 수 있다. 세포벽과의 회합은 다당류가 세포벽 자체의 요소이고/거나 세포벽에 중간 분자를 통해 직접적 또는 간접적으로 부착되거나, 세포벽의 일시적 코팅임(예컨대 특정 박테리아 균주는 당업계에 '외다당류(exopolysaccharide)'로도 공지된 캡슐 다당류를 분비함)을 의미한다.
일부 양태에서, 박테리아로부터 추출된 다당류는 캡슐 다당류, 서브-캡슐 다당류, 또는 지다당류이다. 바람직한 양태에서, 다당류는 캡슐 다당류이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스타필로코커스 아우레우스이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스타필로코커스 아우레우스 타입 5 또는 스타필로코커스 아우레우스 타입 8이다.
추가 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 엔테로코커스 페칼리스이다. 추가 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 헤모필러스 인플루엔제 타입 b이다.
추가 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 네이세리아 메닌기티디스이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A(MenA), 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W135(MenW135), 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y(MenY), 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 X(MenX) 또는 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C(MenC)이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A(MenA)이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W135(MenW135)이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y(MenY)이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C(MenC)이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 X(MenX)이다. 추가 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 에셔리키아 콜라이이다. 추가 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 엔테로코커스 페칼리스이다.
추가 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 아갈락티에(그룹 B 스트렙토코커스(GBS))이다. 일부 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 GBS 타입 Ia, Ib, II, III, IV, V, VI, VII 및 VIII로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 GBS 타입 Ia, Ib, II, III 및 V로 이루어진 군으로부터 선택된다.
추가 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 에셔리키아 콜라이이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 장병독성 에셔리키아 콜라이 그룹(EEC 그룹)의 에셔리키아 콜라이 부분, 예컨대 에셔리키아 콜라이 - 장독소원성(ETEC), 에셔리키아 콜라이 - 장병원성(EPEC), 에셔리키아 콜라이 - O157:H7 장출혈성(EHEC) 또는 에셔리키아 콜라이 - 장침습성(EIEC)이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 요로병원성 에셔리키아 콜라이(UPEC)이다.
하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 혈청형 O157:H7, O26:H11, O111:H- 및 O103:H2로 이루어진 군으로부터 선택되는 에셔리키아 콜라이 혈청형이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 혈청형 O6:K2:H1 및 O18:K1:H7로 이루어진 군으로부터 선택되는 에셔리키아 콜라이 혈청형이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 혈청형 O45:K1, O17:K52:H18, O19:H34 및 O7:K1로 이루어진 군으로부터 선택되는 에셔리키아 콜라이 혈청형 이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 에셔리키아 콜라이 혈청형 O104:H4이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 에셔리키아 콜라이 혈청형 O1:K12:H7이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 에셔리키아 콜라이 혈청형 O127:H6이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 에셔리키아 콜라이 혈청형 O139:H28이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 에셔리키아 콜라이 혈청형 O128:H2이다.
바람직한 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에이다. 바람직하게는 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 혈청형 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 6C, 7F, 8, 9V, 9N, 10A, 11A, 12F, 14, 15A, 15B, 15C, 16F, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23A, 23B, 23F, 24B, 24F, 29, 31, 33F, 34, 35B, 35F, 38, 72 및 73으로 이루어진 군으로부터 선택되는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형이다. 하나의 양태에서 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 혈청형 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 9N, 10A, 11A, 12F, 14, 15A, 15B, 15C, 16F, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23A, 23B, 23F, 24F, 29, 31, 33F, 35B, 35F, 38, 72 및 73으로 이루어진 군으로부터 선택되는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형이다. 하나의 양태에서 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 혈청형 8, 10A, 11A, 12F, 15B, 22F 및 33F로 이루어진 군으로부터 선택되는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 1이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 2이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 3이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 4이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 5이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 6A이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 6B이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 6C이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 7F이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 8이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 9V이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 9N이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 10A이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 11A이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 12F이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 14이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 15A이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 15B이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 15C이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 16F이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 17F이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 18C이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 19A이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 19F이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 20이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 20A이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 20B이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 22F이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 23A이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 23B이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 23F이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 24B이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 24F이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 29이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 31이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 33F이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 34이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 35B이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 35F이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 38이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 72이다. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 73이다. 본 발명에 사용되는 각각의 다당류를 정제하는데 사용되는 박테리아 균주는 확정된 배양 채집물 또는 임상 표본으로부터 수득될 수 있다.
1.1.2. 박테리아 세포 성장
전형적으로, 다당류는 배지(예컨대 고형, 또는 바람직하게 액체 배지)에서 박테리아를 성장시킴으로써 생성된다. 이어서, 다당류는 박테리아 세포를 처리함으로써 제조된다.
따라서, 하나의 양태에서, 본 발명의 방법을 위한 출발 물질은 박테리아 배양 및 바람직하게는 액체 박테리아 배양(예컨대 발효 브로스(broth))이다. 박테리아 배양은 전형적으로 배치 배양, 유가식 배양 또는 연속식 배양에 의해 수득된다(예컨대 WO 2007/052168 또는 WO 2009/081276 참고). 연속식 배양 동안, 신선한 배지가 고정 속도로 배양에 첨가되고, 세포 및 배지는 일정한 배양 부피를 유지하는 속도로 제거된다.
통상적으로, 개체수는 시드 바이알(seed vial)로부터 시드 보틀(seed bottle)로 규모 증대되고, 생산 규모 발효 부피에 도달할 때까지 증가하는 부피의 하나 이상의 시드 발효기를 통과한다.
1.1.3. 출발 물질을 수득하기 위한 박테리아 세포의 전처리
일반적으로, 소량의 다당류는 박테리아 성장 동안 배양 배지로 방출되고, 이에 따라, 출발 물질은 원심분리된 박테리아 배양으로부터의 상청액일 수 있다.
그러나, 전형적으로는, 출발 물질은 다당류가 방출되도록 박테리아 자체를 처리함으로써 제조될 것이다.
임의적으로, 세포 성장 후, 박테리아 세포는 불활성화된다. 이는 특히 병원성 박테리아가 사용될 때의 경우이다. 불활성화에 적합한 방법은 페놀:에탄올에 의한 처리이고, 이는 예컨대 문헌[Fattom et al. (1990) Infect lmmun. 58(7):2367-74]에 기재되어 있다. 하기 양태에서, 박테리아 세포는 선행적으로 불활성화되거나 불활성화되지 않을 수 있다.
다당류는 다양한 방법, 예컨대 화학적, 물리적 또는 효소적 처리에 의해 박테리아로부터 방출될 수 있다(예컨대 WO 2010/151544, WO 2011/051917 또는 WO 2007/084856 참고).
하나의 양태에서, 박테리아 세포(불활성화 또는 불활성화되지 않음)는 원래 배양 배지에서 현탁액 중 처리된다. 따라서, 공정은 원래 배양 배지에서의 현탁액 중 세포에 의해 시작될 수 있다.
또다른 양태에서, 박테리아 세포는 캡슐 다당류의 방출 전에 원심분리된다. 따라서, 공정은 습윤한 세포 페이스트 형태의 세포에 의해 시작될 수 있다. 다르게는, 세포는 건조된 형태로 처리될 수 있다. 그러나, 전형적으로, 원심분리 후, 박테리아 세포는 공정에서 후속 단계에 적합한 수성 배지, 예컨대 완충액 또는 증류수 중 재현탁된다. 세포는 재현탁 전에 상기 배지에 의해 세척될 수 있다.
하나의 양태에서, 박테리아 세포(예컨대 이의 원래 배양 배지에서의 현탁액 중, 습윤한 세포 페이스트 형태, 건조된 형태, 또는 원심분리 후 수성 배지 중 재현탁된 것)는 용해제로 처리된다. "용해제"는 세포벽 파괴를 보조하는 임의의 제제이다.
하나의 양태에서, 용해제는 계면활성제이다. 본원에 사용된 용어 "계면활성제"는 박테리아 세포의 용해를 유도할 수 있는 임의의 음이온성 또는 양이온성 계면활성제를 지칭한다. 본 발명의 방법에 사용되는 이러한 계면활성제의 대표적인 예는 데옥시콜레이트 나트륨(DOC), N-라우릴 사르코신(NLS), 케노데옥시콜산 나트륨 및 사포닌을 포함한다(WO 2008/118752의 13쪽 14번째 줄에서 14쪽 10번째 줄). 본 발명의 하나의 양태에서, 박테리아 세포를 용해시키는데 사용되는 용해제는 DOC이다.
하나의 양태에서, 용해제는 비동물성 유래 용해제이다. 하나의 양태에서, 비동물성 유래 용해제는 데칸설폰산, tert-옥틱페녹시 5 폴리(옥시에틸렌)에탄올(예컨대 아이제팔(Igepal: 등록상표), CA-630, CAS #: 9002-93-1, 미국 미주리주 세인트루이스의 시그마 알드리치(Sigma Aldrich)로부터 입수가능), 옥틸페놀 에틸렌 옥사이드 축합물(예컨대 트라이톤(Triton: 등록상표) X-100, 미국 미주리주 세인트루이스의 시그마 알드리치로부터 입수가능), N-라우릴 사르코신 나트륨(NLS), 라우릴 아미노다이프로피오네이트, 나트륨 도데실 설페이트, 케노데옥시콜레이트, 하이오데옥시콜레이트, 글리코데옥시콜레이트, 타우로데옥시콜레이트, 타우로케노데옥시콜레이트 및 콜레이트로 이루어진 군으로부터 선택된다. 하나의 양태에서, 비동물성 유래 용해제는 NLS이다.
하나의 양태에서, 박테리아 세포(예컨대 이의 원래 배양 배지에서의 현탁액 중, 습윤한 세포 페이스트 형태, 건조된 형태, 또는 원심분리 후 수성 배지 중 재현탁된 것)는 다당류가 방출되도록 효소 처리된다. 하나의 양태에서, 박테리아 세포는 리소스타핀, 뮤타놀리신 β-N-아세틸글루코스아미니다제, 및 뮤타놀리신과 β-N-아세틸글루코스아미니다제의 조합으로 처리된다. 이는 박테리아 펩티도글리칸에 작용하여 본 발명에 사용되는 캡슐 당류를 방출시키지만, 군-특이성 탄수화물 항원의 방출도 야기한다. 하나의 양태에서, 박테리아 세포는 타입 II 포스포다이에스터라제(PDE2)로 처리된다. 임의적으로, 다당류 방출 후, 효소는 불활성화된다. 불활성화에 적합한 방법은 열 처리 또는 산성 처리이다.
하나의 양태에서, 하나의 양태에서, 박테리아 세포(예컨대 이의 원래 배양 배지에서의 현탁액 중, 습윤한 세포 페이스트 형태, 건조된 형태, 또는 원심분리 후 수성 배지 중 재현탁된 것)는 다당류가 방출되도록 고압멸균(autoclaving)된다.
추가 양태에서, 박테리아 세포(예컨대 이의 원래 배양 배지에서의 현탁액 중, 습윤한 세포 페이스트 형태, 건조된 형태, 또는 원심분리 후 수성 배지 중 재현탁된 것)는 다당류가 방출되도록 화학 처리된다. 이러한 양태에서, 상기 화학 처리는 염기 또는 산을 사용한 가수분해일 수 있다(예컨대 WO 2007/084856 참고). 하나의 양태에서, 박테리아 세포는 (예컨대 수산화나트륨을 사용하여) 염기 추출된다. 염기 추출은 캡슐 당류와 펩티도글리칸 골격간의 포스포다이에스터 결합을 절단할 수 있다. 하나의 양태에서, 염기는 NaOH, KOH, LiOH, NaHC03, Na2C03, KzC03, KCN, Et3N, NH3, HzN2H2, NaH, NaOMe, NaOEt 및 KOtBu로 이루어진 군으로부터 선택된다. 염기 처리 후, 반응 혼합물은 중화될 수 있다. 이는 산의 첨가에 의해 성취될 수 있다. 하나의 양태에서, 염기 처리 후, 반응 혼합물은 HCl, H3PO4, 시트르산, 아세트산, 아질산 및 황산으로 이루어진 군으로부터 선택되는 산에 의해 중화될 수 있다.
하나의 양태에서, 박테리아 세포의 화학 처리는 산(예컨대 황산) 처리이다. 하나의 양태에서, 산은 HCl, H3PO4, 시트르산, 아세트산, 아질산 및 황산으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 처리 후, 반응 혼합물은 중화될 수 있다. 이는 염기의 첨가에 의해 성취될 수 있다. 하나의 양태에서, 산 처리 후, 반응 혼합물은 NaOH, KOH, LiOH, NaHC03, Na2C03, KzC03, KCN, Et3N, NH3, HzN2H2, NaH, NaOMe, NaOEt 및 KOtBu로 이루어진 군으로부터 선택되는 염기에 의해 중화될 수 있다.
1.2. 응집
본 발명의 방법은 응집 단계를 포함한다. 본 발명자들은 공정이 저 오염으로 정제된 다당류를 야기함을 발견하였다. 본 발명자들의 공정은 신속하고 간편하다.
따라서, 본 발명의 방법에서, 1.1 부분의 임의의 방법에 의해 수득되는 용액은 응집에 의해 처리된다.
본 발명에서, 용어 "응집"은 응집제의 첨가에 기인하여 콜로이드가 현탁액으로부터 응집체 또는 박편(flake) 형태로 방출되는 공정을 지칭한다.
응집 단계는 박테리아 다당류와 오염물을 포함하는 용액에 응집제를 첨가하는 단계를 포함한다. 하나의 양태에서, 오염물은 박테리아 세포 파편, 박테리아 세포 단백질 및 핵산을 포함한다. 하나의 양태에서, 오염물은 박테리아 세포 단백질 및 핵산을 포함한다. 본원에서 더 후술되는 바와 같이, 응집 단계는 응집제의 첨가 전 또는 후, pH의 조정을 추가로 포함할 수 있다. 특히, 용액은 산성화될 수 이다. 또한, 응집제의 첨가 및/또는 pH의 조정은 바람직한 수준으로 조정된 온도에서 수행될 수 있다. 상기 단계는 하기 중 임의의 순서로 수행될 수 있다:
- 응집제의 첨가 후, pH의 조정 후, 온도의 조정;
- 응집제의 첨가 후, 온도의 조정 후, pH의 조정;
- pH의 조정 후, 응집제의 첨가 후, 온도의 조정;
- pH의 조정 후, 온도의 조정 후, 응집제의 첨가;
- 온도의 조정 후, 응집제의 첨가 후, pH의 조정; 또는
- 온도의 조정 후, pH의 조정 후, 응집제의 첨가.
또한, 응집제의 첨가 및/또는 pH의 조정 후, 용액은 다운스트림 가공 전 응집체가 침강하도록 일정 시간 동안 유지될 수 있다.
본 발명에서, 응집제는 대상 다당류와 오염물을 포함하는 용액에서 콜로이드 및 기타 현탁된 입자가 응집체 또는 박편의 형태로 응집되고 대상 다당류는 용액에 상당히 머물도록 함을 야기하여 응집을 촉진할 수 있는 제제를 지칭한다.
본 발명의 하나의 양태에서, 응집제는 다가 양이온을 포함한다. 하나의 양태에서, 응집제는 다가 양이온이다. 바람직한 양태에서, 상기 다가 양이온은 알루미늄, 철, 칼슘 및 마그네슘으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 하나의 양태에서, 응집제는 알루미늄, 철, 칼슘 및 마그네슘으로 이루어진 군으로부터 선택되는 2개 이상의 다가 양이온의 혼합물이다. 하나의 양태에서, 응집제는 알루미늄, 철, 칼슘 및 마그네슘으로 이루어진 군으로부터 선택되는 3개 이상의 다가 양이온의 혼합물이다. 하나의 양태에서, 응집제는 알루미늄, 철, 칼슘 및 마그네슘으로 이루어진 4개의 다가 양이온의 혼합물이다.
하나의 양태에서, 응집제는 명반(예컨대 칼륨 명반, 나트륨 명반 또는 암모늄 명반), 알루미늄 클로로하이드레이트, 알루미늄 설페이트, 칼슘 옥사이드, 수산화칼슘, 철(II) 설페이트(제1철 설페이트), 철(III) 클로라이드(제2철 클로라이드), 폴리아크릴아미드, 개질된 폴리아크릴아미드, 폴리DADMAC, 폴리에틸렌이민(PEI), 나트륨 알루미네이트 및 나트륨 실리케이트로 이루어진 군으로부터 선택되는 제제를 포함한다. 하나의 양태에서, 응집제는 명반(예컨대 칼륨 명반, 나트륨 명반 또는 암모늄 명반), 알루미늄 클로로하이드레이트, 알루미늄 설페이트, 칼슘 옥사이드, 수산화칼슘, 철(II) 설페이트(제1철 설페이트), 철(III) 클로라이드(제2철 클로라이드), 폴리아크릴아미드, 개질된 폴리아크릴아미드, 폴리DADMAC, 나트륨 알루미네이트 및 나트륨 실리케이트로 이루어진 군으로부터 선택된다. 하나의 양태에서, 응집제는 폴리에틸렌이민(PEI)이다. 하나의 양태에서, 응집제는 명반을 포함한다. 하나의 양태에서, 응집제는 명반이다. 하나의 양태에서, 응집제는 칼륨 명반을 포함한다. 하나의 양태에서, 응집제는 칼륨 명반이다. 하나의 양태에서, 응집제는 나트륨 명반을 포함한다. 하나의 양태에서, 응집제는 나트륨 명반이다. 하나의 양태에서, 응집제는 암모늄 명반을 포함한다. 하나의 양태에서, 응집제는 암모늄 명반이다.
하나의 양태에서, 응집제는 명반(예컨대 칼륨 명반, 나트륨 명반 또는 암모늄 명반), 알루미늄 클로로하이드레이트, 알루미늄 설페이트, 칼슘 옥사이드, 수산화칼슘, 철(II) 설페이트(제1철 설페이트), 철(III) 클로라이드(제2철 클로라이드), 폴리아크릴아미드, 개질된 폴리아크릴아미드, 폴리DADMAC, 폴리에틸렌이민(PEI), 나트륨 알루미네이트 및 나트륨 실리케이트로 이루어진 군으로부터 선택되는 제제(예컨대 2개, 3개 또는 4개의 제제)의 혼합물이다. 하나의 양태에서, 응집제는 명반(예컨대 칼륨 명반, 나트륨 명반 또는 암모늄 명반), 알루미늄 클로로하이드레이트, 알루미늄 설페이트, 칼슘 옥사이드, 수산화칼슘, 철(II) 설페이트(제1철 설페이트), 철(III) 클로라이드(제2철 클로라이드), 폴리아크릴아미드, 개질된 폴리아크릴아미드, 폴리DADMAC, 나트륨 알루미네이트 및 나트륨 실리케이트로 이루어진 군으로부터 선택된다.
하나의 양태에서, 응집제는 명반(예컨대 칼륨 명반, 나트륨 명반 또는 암모늄 명반), 알루미늄 클로로하이드레이트, 알루미늄 설페이트, 칼슘 옥사이드, 수산화칼슘, 철(II) 설페이트(제1철 설페이트), 철(III) 클로라이드(제2철 클로라이드), 폴리아크릴아미드, 개질된 폴리아크릴아미드, 폴리DADMAC, 나트륨 알루미네이트 및 나트륨 실리케이트로 이루어진 군으로부터 선택되는 2개의 제제의 혼합물이다. 하나의 양태에서, 응집제는 명반(예컨대 칼륨 명반, 나트륨 명반 또는 암모늄 명반), 알루미늄 클로로하이드레이트, 알루미늄 설페이트, 칼슘 옥사이드, 수산화칼슘, 철(II) 설페이트(제1철 설페이트), 철(III) 클로라이드(제2철 클로라이드), 폴리아크릴아미드, 개질된 폴리아크릴아미드, 폴리DADMAC, 나트륨 알루미네이트 및 나트륨 실리케이트로 이루어진 군으로부터 선택되는 3개 이상의 제제의 혼합물이다.
하나의 양태에서, 응집제는 키토산, 부레풀, 모링가 올레이페라(Moringa oleifera) 씨(서양 고추냉이 나무), 젤라틴, 스트리크노스 포테이토룸(Strychnos potatorum) 씨(니르말리 너트(Nirmali nut) 나무), 구아검 및 알기네이트(예컨대 갈색 해조류 추출물)로 이루어진 군으로부터 선택되는 제제를 포함한다. 하나의 양태에서, 응집제는 키토산, 부레풀, 모링가 올레이페라 씨 (서양 고추냉이 나무), 젤라틴, 스트리크노스 포테이토룸 씨(니르말리 너트 나무), 구아검 및 알기네이트(예컨대 갈색 해조류 추출물)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
응집제의 농도는 사용되는 제제, 대상 다당류 및 응집 단계의 매개변수(예컨대 농도 등)에 종속될 수 있다.
응집제가 명반을 포함하거나 명반인 양태에서, 약 0.1 내지 20%(w/v)의 농도의 응집제가 사용될 수 있다. 바람직하게는, 전체적으로, 0.5 내지 10%(w/v)의 농도의 응집제가 사용될 수 있다. 보다 더 바람직하게는, 1 내지 5%(w/v)의 농도의 응집제가 사용될 수 있다.
상기 임의의 범위 내의 임의의 수는 본 발명의 양태로서 간주된다.
하나의 양태에서, 약 0.1, 약 0.25, 약 0.5, 약 1.0, 약 1.5, 약 2.0, 약 2.5, 약 3.0, 약 3.5, 약 4.0, 약 4.5, 약 5.0, 약 5.5, 약 6.0, 약 6.5, 약 7.0, 약 7.5, 약 8.0, 약 8.5, 약 9.0, 약 9.5 또는 약 10% (w/v)의 농도의 응집제가 사용된다. 하나의 양태에서, 약 10.5, 약 11.0, 약 11.5, 약 12.0, 약 12.5, 약 13.0, 약 13.5, 약 14.0, 약 14.5, 약 15.0, 약 15.5, 약 16.0, 약 16.5, 약 17.0, 약 17.5, 약 18.0, 약 18.5, 약 19.0, 약 19.5 또는 약 20.0% (w/v)의 농도의 응집제가 사용된다. 하나의 양태에서, 약 0.5, 약 1.0, 약 1.5, 약 2.0, 약 2.5, 약 3.0, 약 3.5, 약 4.0, 약 4.5 또는 약 5.0% (w/v)의 농도의 응집제가 사용된다. 하나의 양태에서, 약 1.0, 약 1.5, 약 2.0, 약 2.5, 약 3.0, 약 3.5 또는 약 4.0% (w/v)의 농도의 응집제가 사용된다.
본 발명의 일부 양태에서, 응집제는 특정 시간에 걸쳐 첨가될 수 있다. 본 발명의 일부 양태에서, 응집제는 수초(예컨대 1 내지 10초) 내지 약 1개월의 시간에 걸쳐 첨가된다. 일부 양태에서, 응집제는 약 2초 내지 약 2주의 시간에 걸쳐 첨가된다. 본 발명의 일부 양태에서, 응집제는 약 1분 내지 약 1주의 시간에 걸쳐 첨가된다. 일부 양태에서, 응집제는 약 1분, 약 5분, 약 10분, 약 15분, 약 20분, 약 25분, 약 30분, 약 35분, 약 40분, 약 45분, 약 50분, 약 55분, 약 60분, 약 65분, 약 70분, 약 80분, 약 85분, 약 90분, 약 95분, 약 100분, 약 110분, 약 120분, 약 130분, 약 140분, 약 150분, 약 160분, 약 170분, 약 3시간, 약 4시간, 약 5시간, 약 6시간, 약 7시간, 약 8시간, 약 9시간, 약 10시간, 약 11시간, 약 12시간, 약 13시간, 약 14시간, 약 15시간, 약 16시간, 약 17시간, 약 18시간, 약 19시간, 약 20시간, 약 21시간, 약 22시간, 약 23시간 또는 약 24시간 내지 약 2일의 시간에 걸쳐 첨가된다.
따라서, 특정 양태에서, 응집제는 약 5분, 약 10분, 약 15분, 약 20분, 약 25분, 약 30분, 약 35분, 약 40분, 약 45분, 약 50분, 약 55분, 약 60분, 약 65분, 약 70분, 약 80분, 약 85분, 약 90분, 약 95분, 약 100분, 약 110분, 약 120분, 약 130분, 약 140분, 약 150분, 약 160분, 약 170분, 약 3시간, 약 4시간, 약 5시간, 약 6시간, 약 7시간, 약 8시간, 약 9시간, 약 10시간, 약 11시간 또는 약 12시간 내지 약 1일의 시간에 걸쳐 첨가된다.
바람직하게는 응집제는 약 15분, 약 20분, 약 25분, 약 30분, 약 35분, 약 40분, 약 45분, 약 50분, 약 55분, 약 60분, 약 65분, 약 70분, 약 80분, 약 85분, 약 90분, 약 95분, 약 100분, 약 110분, 약 120분, 약 130분, 약 140분, 약 150분, 약 160분, 약 170분, 약 3시간, 약 4시간, 약 5시간, 약 6시간, 약 7시간, 약 8시간, 약 9시간, 약 10시간, 약 11시간 또는 약 12시간 내지 약 1일의 시간에 걸쳐 첨가된다.
특정 양태에서, 응집제는 약 15분 내지 약 3시간의 시간에 걸쳐 첨가된다. 특정 양태에서, 응집제는 약 30분 내지 약 120분의 시간에 걸쳐 첨가된다.
상기 임의의 범위 내의 임의의 수는 본 발명의 양태로서 간주된다.
응집제는 약 2초, 약 10초, 약 30초, 약 1분, 약 5분, 약 10분, 약 15분, 약 20분, 약 25분, 약 30분, 약 35분, 약 40분, 약 45분, 약 50분, 약 55분, 약 60분, 약 65분, 약 70분, 약 75분, 약 80분, 약 85분, 약 90분, 약 95분, 약 100분, 약 105분, 약 110분, 약 115분, 약 120분, 약 125분, 약 130분, 약 135분, 약 140분, 약 145분, 약 150분, 약 155분, 약 160분, 약 170분, 약 3시간, 약 3.5시간, 약 4시간, 약 4.5시간, 약 5시간, 약 5.5시간, 약 6시간, 약 6.5시간, 약 7시간, 약 7.5시간, 약 8시간, 약 8.5시간, 약 9시간, 약 10시간, 약 11시간, 약 12시간, 약 13시간, 약 14시간, 약 15시간, 약 16시간, 약 17시간, 약 18시간, 약 19시간, 약 20시간, 약 21시간, 약 22시간, 약 23시간, 약 24시간, 약 30시간, 약 36시간, 약 42시간, 약 48시간, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 6일, 약 7일, 약 8일, 약 9일, 약 10일, 약 11일, 약 12일, 약 13일, 약 14일 또는 약 15일의 시간에 걸쳐 첨가될 수 있다.
하나의 양태에서, 응집제는 교반없이 첨가된다. 또다른 양태에서, 응집제는 교반하에 첨가된다. 또다른 양태에서, 응집제는 온화한 교반에 의해 첨가된다. 또다른 양태에서, 응집제는 격렬한 교반하에 첨가된다.
놀랍게도, 본 발명자들은 응집이 산성 pH에서 수행될 때 향상됨을 추가적으로 주목하였다.
따라서, 본 발명의 하나의 양태에서, 응집 단계는 7.0, 6.0, 5.0 또는 4.0보다 낮은 pH에서 수행된다. 본 발명의 특정 양태에서, 응집 단계는 7.0 내지 1.0의 pH에서 수행된다. 하나의 양태에서, 응집 단계는 5.5 내지 2.5, 5.0 내지 2.5, 4.5 내지 2.5, 4.0 내지 2.5, 5.5 내지 3.0, 5.0 내지 3.0, 4.5 내지 3.0, 4.0 내지 3.0, 5.5 내지 3.5, 5.0 내지 3.5, 4.5 내지 3.5, 또는 4.0 내지 3.5의 pH에서 수행된다. 하나의 양태에서, 응집 단계는 약 5.5, 약 5.0, 약 4.5, 약 4.0, 약 3.5, 약 3.0, 약 2.5, 약 2.0, 약 1.5 또는 약 1.0의 pH에서 수행된다. 하나의 양태에서, 응집 단계는 약 4.0, 약 3.5, 약 3.0 또는 약 2.5의 pH에서 수행된다. 하나의 양태에서, 응집 단계는 약 3.5의 pH에서 수행된다.
상기 임의의 범위 내의 임의의 수는 본 발명의 양태로서 간주된다.
하나의 양태에서, 상기 산성 pH는 상기 1.1 부분의 임의의 방법에 의해 수득되거나 1.2 부분에 개시된 바와 같이 추가 청징(clarifying)된 용액을 산에 의해 산성화시킴으로써 수득된다. 하나의 양태에서, 상기 산은 HCl, H3PO4, 시트르산, 아세트산, 아질산 및 황산으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 하나의 양태에서, 상기 산은 아미노산이다. 하나의 양태에서, 상기 산은 아미노산 글리신, 알라닌 및 글루타메이트으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이다. 하나의 양태에서, 상기 산은 HCl(염산)이다. 하나의 양태에서, 상기 산은 황산이다.
하나의 양태에서, 산은 교반없이 첨가된다. 또다른 양태에서, 산은 교반하에 첨가된다. 또다른 양태에서, 산은 온화한 교반에 의해 첨가된다. 또다른 양태에서, 산은 격렬한 교반하에 첨가된다.
본 발명의 일부 양태에서, 응집제의 첨가(및 임의적인 산성화) 후, 용액은 일정 시간 동안 유지되어 다운스트림 가공 전 응집체가 침강된다.
본 발명의 일부 양태에서, 응집 단계는 수초(예컨대 2 내지 10초) 내지 약 1분의 침강 시간에 의해 수행된다. 바람직하게는 침강 시간은 약 2분 이상, 약 3분 이상, 약 4분 이상, 약 5분 이상, 약 10분 이상, 약 15분 이상, 약 20분 이상, 약 25분 이상, 약 30분 이상, 약 35분 이상, 약 40분 이상, 약 45분 이상, 약 50분 이상, 약 55분 이상, 약 60분 이상, 약 65분 이상, 약 70분 이상, 약 75분 이상, 약 80분 이상, 약 85분 이상, 약 90분 이상, 약 95분 이상, 약 100분 이상, 약 105분 이상, 약 110분 이상, 약 115분 이상, 약 120분 이상, 약 125분 이상, 약 130분 이상, 약 135분 이상, 약 140분 이상, 약 145분 이상, 약 150분 이상, 약 155분 이상 또는 약 160분 이상이다. 바람직하게는 침강 시간은 1주 미만이지만, 침강 시간이 더 길 수 있다.
따라서, 특정 양태에서, 침강 시간은 약 1, 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 약 10, 약 15, 약 20, 약 25, 약 30, 약 40, 약 50, 약 60, 약 70, 약 80, 약 90, 약 100, 약 120, 약 140, 약 160, 약 180, 약 220, 약 240, 약 300, 약 360, 약 420, 약 480, 약 540, 약 600, 약 660, 약 720, 약 780, 약 840, 약 900, 약 960, 약 1020, 약 1080, 약 1140, 약 1200, 약 1260, 약 1320, 약 1380, 약 1440분, 약 2일, 약 3일, 약 4일, 약 5일 또는 약 6일 내지 1주이다.
본 발명의 일부 양태에서, 침강 시간은 수초 (예컨대 1 내지 10초) 내지 약 1개월. 일부 양태에서, 침강 시간은 약 2초 내지 약 2주이다. 본 발명의 일부 양태에서, 침강 시간은 약 1분 내지 약 1주이다. 일부 양태에서, 침강 시간은 약 1분, 약 5분, 약 10분, 약 15분, 약 20분, 약 25분, 약 30분, 약 35분, 약 40분, 약 45분, 약 50분, 약 55분, 약 60분, 약 65분, 약 70분, 약 80분, 약 85분, 약 90분, 약 95분, 약 100분, 약 110분, 약 120분, 약 130분, 약 140분, 약 150분, 약 160분, 약 170분, 약 3시간, 약 4시간, 약 5시간, 약 6시간, 약 7시간, 약 8시간, 약 9시간, 약 10시간, 약 11시간, 약 12시간, 약 13시간, 약 14시간, 약 15시간, 약 16시간, 약 17시간, 약 18시간, 약 19시간, 약 20시간, 약 21시간, 약 22시간, 약 23시간 또는 약 24시간 내지 약 2일이다.
따라서, 특정 양태에서, 침강 시간은 약 5분, 약 10분, 약 15분, 약 20분, 약 25분, 약 30분, 약 35분, 약 40분, 약 45분, 약 50분, 약 55분, 약 60분, 약 65분, 약 70분, 약 80분, 약 85분, 약 90분, 약 95분, 약 100분, 약 110분, 약 120분, 약 130분, 약 140분, 약 150분, 약 160분, 약 170분, 약 3시간, 약 4시간, 약 5시간, 약 6시간, 약 7시간, 약 8시간, 약 9시간, 약 10시간, 약 11시간 또는 약 12시간 내지 약 1일이다.
바람직하게는 침강 시간은 약 15분, 약 20분, 약 25분, 약 30분, 약 35분, 약 40분, 약 45분, 약 50분, 약 55분, 약 60분, 약 65분, 약 70분, 약 80분, 약 85분, 약 90분, 약 95분, 약 100분, 약 110분, 약 120분, 약 130분, 약 140분, 약 150분, 약 160분, 약 170분, 약 3시간, 약 4시간, 약 5시간, 약 6시간, 약 7시간, 약 8시간, 약 9시간, 약 10시간, 약 11시간 또는 약 12시간 내지 약 1일이다.
특정 양태에서, 침강 시간은 약 15분 내지 약 3시간이다. 특정 양태에서, 침강 시간은 약 30분 내지 약 120분이다.
상기 임의의 범위 내의 임의의 수는 본 발명의 양태로서 간주된다.
특정 양태에서, 침강 시간은 약 2초, 약 10초, 약 30초, 약 1분, 약 5분, 약 10분, 약 15분, 약 20분, 약 25분, 약 30분, 약 35분, 약 40분, 약 45분, 약 50분, 약 55분, 약 60분, 약 65분, 약 70분, 약 75분, 약 80분, 약 85분, 약 90분, 약 95분, 약 100분, 약 105분, 약 110분, 약 115분, 약 120분, 약 125분, 약 130분, 약 135분, 약 140분, 약 145분, 약 150분, 약 155분, 약 160분, 약 170분, 약 3시간, 약 3.5시간, 약 4시간, 약 4.5시간, 약 5시간, 약 5.5시간, 약 6시간, 약 6.5시간, 약 7시간, 약 7.5시간, 약 8시간, 약 8.5시간, 약 9시간, 약 10시간, 약 11시간, 약 12시간, 약 13시간, 약 14시간, 약 15시간, 약 16시간, 약 17시간, 약 18시간, 약 19시간, 약 20시간, 약 21시간, 약 22시간, 약 23시간, 약 24시간, 약 30시간, 약 36시간, 약 42시간, 약 48시간, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 6일, 약 7일, 약 8일, 약 9일, 약 10일, 약 11일, 약 12일, 약 13일, 약 14일 또는 약 15일이다.
바람직하게는 침강 시간은 약 5, 약 10, 약 15, 약 20, 약 25, 약 30, 약 60, 약 90, 약 120, 약 180, 약 220, 약 240, 약 300, 약 360, 약 420, 약 480, 약 540, 약 600, 약 660, 약 720, 약 780, 약 840, 약 900, 약 960, 약 1020, 약 1080, 약 1140, 약 1200, 약 1260, 약 1320, 약 1380 또는 약 1440분 내지 2일이다. 특정 양태에서, 침강 시간은 약 5분 내지 약 1일이다. 특정 양태에서, 침강 시간은 약 5분 내지 약 120분이다.
침강 시간은 약 5분, 약 10분, 약 15분, 약 20분, 약 25분, 약 30분, 약 35분, 약 40분, 약 45분, 약 50분, 약 55분, 약 60분, 약 65분, 약 70분, 약 75분, 약 80분, 약 85분, 약 90분, 약 95분, 약 100분, 약 105분, 약 110분, 약 115분, 약 120분, 약 125분, 약 130분, 약 135분, 약 140분, 약 145분, 약 150분, 약 155분 또는 약 160분일 수 있다.
상기 임의의 범위 내의 임의의 수는 본 발명의 양태로서 간주된다.
하나의 양태에서, 임의적인 침강 단계는 교반없이 수행된다. 또다른 양태에서, 임의적인 침강 단계는 교반하에 수행된다. 또다른 양태에서, 임의적인 침강 단계는 온화한 교반에 의해 수행된다. 또다른 양태에서, 임의적인 침강 단계는 격렬한 교반하에 수행된다.
본 발명의 하나의 양태에서, 응집제의 첨가, 용액의 침강 및/또는 pH의 조정은 약 4℃ 내지 약 30℃의 온도에서 수행된다. 하나의 양태에서, 응집제의 첨가, 용액의 침강 및/또는 pH의 조정은 약 4℃, 약 5℃, 약 6℃, 약 7℃, 약 8℃, 약 9℃, 약 10℃, 약 11℃, 약 12℃, 약 13℃, 약 14℃, 약 15℃, 약 16℃, 약 17℃, 약 18℃, 약 19℃, 약 20℃, 약 21℃, 약 22℃, 약 23℃, 약 24℃, 약 25℃, 약 26℃, 약 27℃, 약 28℃, 약 29℃ 또는 약 30℃의 온도에서 수행된다. 하나의 양태에서, 응집제의 첨가, 용액의 침강 및/또는 pH의 조정은 약 20℃의 온도에서 수행된다. 놀랍게도, 본 발명자들은 응집이 고온에서 수행될 때 더 향상됨에 주목하였다. 따라서, 본 발명의 특정 양태에서, 응집제의 첨가, 용액의 침강 및/또는 pH의 조정은 약 30℃ 내지 약 95℃의 온도에서 수행된다. 하나의 양태에서, 응집제의 첨가, 용액의 침강 및/또는 pH의 조정은 약 35℃ 내지 약 80℃의 온도, 약 40℃ 내지 약 70℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 65℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 60℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 55℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 55℃의 온도 또는 약 45℃ 내지 약 55℃의 온도에서 수행된다. 하나의 양태에서, 응집제의 첨가, 용액의 침강 및/또는 pH의 조정은 약 35℃, 약 36℃, 약 37℃, 약 38℃, 약 39℃, 약 40℃, 약 41℃, 약 42℃, 약 43℃, 약 44℃, 약 45℃, 약 46℃, 약 47℃, 약 48℃, 약 49℃, 약 50℃, 약 51℃, 약 52℃, 약 53℃, 약 54℃, 약 55℃, 약 56℃, 약 57℃, 약 58℃, 약 59℃, 약 60℃, 약 61℃, 약 62℃, 약 63℃, 약 64℃, 약 65℃, 약 66℃, 약 67℃, 약 68℃, 약 69℃, 약 70℃, 약 71℃, 약 72℃, 약 73℃, 약 74℃, 약 75℃, 약 76℃, 약 77℃, 약 78℃, 약 79℃ 또는 약 80℃의 온도에서 수행된다. 하나의 양태에서, 응집제의 첨가, 용액의 침강 및/또는 pH의 조정은 약 50℃의 온도에서 수행된다.
상기 임의의 범위 내의 임의의 수는 본 발명의 양태로서 간주된다.
하나의 양태에서, 응집제의 첨가는 전술된 임의의 온도에서 수행된다.
하나의 양태에서, 응집제의 첨가 후 용액의 침강 전술된 임의의 온도에서 수행된다.
하나의 양태에서, pH의 조정은 전술된 임의의 온도에서 수행된다.
하나의 양태에서, 응집제의 첨가 및 응집제의 첨가 후 용액의 침강은 전술된 임의의 온도에서 수행된다.
하나의 양태에서, 응집제의 첨가 및 pH의 조정은 전술된 임의의 온도에서 수행된다.
하나의 양태에서, 응집제의 첨가, 응집제의 첨가 후 용액의 침강 및 pH의 조정은 전술된 임의의 온도에서 수행된다.
하나의 양태에서, 응집 단계는 pH의 조정없이 (전술된 바와 같이) 응집제를 첨가함을 포함한다.
하나의 양태에서, 응집 단계는 pH의 조정없이 (전술된 바와 같이) 응집제를 첨가함 및 용액을 침강시킴을 포함한다.
하나의 양태에서, 응집 단계는 (전술된 바와 같이) 응집제를 첨가함, pH를 조정함 및 용액을 침강시킴을 포함한다. 하나의 양태에서, 응집제는 pH의 조정 전 첨가된다. 또다른 양태에서, pH는 응집제 첨가 전 조정된다.
하나의 양태에서, 응집 단계는 (전술된 바와 같이) 응집제를 첨가함, 용액을 침강시킴 및 pH를 조정함을 포함한다. 하나의 양태에서, 응집제의 첨가 및 용액의 침강은 pH의 조정 전 수행된다. 또다른 양태에서, pH는 응집제의 첨가 및 용액의 침강 전 조정된다. 하나의 양태에서, 응집제의 첨가 및 pH의 조정은 용액의 침강 전 수행된다. 또다른 양태에서, pH는 응집제의 첨가 및 용액의 침강 전 조정된다.
하나의 양태에서, 응집 단계는 (전술된 바와 같이) 응집제를 첨가함, pH를 조정함 및 온도를 조정함을 포함한다.
하기 단계는 임의의 순서로 수행될 수 있다:
- 응집제의 첨가 후, pH의 조정 후, 온도의 조정;
- 응집제의 첨가 후, 온도의 조정 후, pH의 조정;
- pH의 조정 후, 응집제의 첨가 후, 온도의 조정;
- pH의 조정 후, 온도의 조정 후, 응집제의 첨가;
- 온도의 조정 후, 응집제의 첨가 후, pH의 조정; 또는
- 온도의 조정 후, pH의 조정 후, 응집제의 첨가.
또한, 응집제의 첨가 및/또는 pH의 조정 후, 용액이 일정 시간 동안 유지되어 다운스트림 가공 전 응집체가 침강된다.
1.3. 고체/액체 분리
응집된 물질은 임의의 적합한 고체/액체 분리 방법에 의해 대상 다당류로부터 분리될 수 있다.
따라서, 본 발명의 하나의 양태에서, 응집 후, 현탁액(상기 1.2 부분에서 수득됨)은 디캔테이션(decantation), 침전, 여과 또는 원심분리에 의해 청징된다. 이어서, 하나의 양태에서, 다당류-함유 용액은 보관 및/또는 추가 가공을 위해 채집된다.
따라서, 본 발명의 하나의 양태에서, 응집 후, 현탁액(상기 1.2 부분에서 수득됨)은 디캔테이션에 의해 청징된다. 디캔터는 액체간의 밀도에 충분한 차이가 있는 경우, 응집체를 침강하켜 상기 액체을 분리하는데 사용된다. 디캔터 작동에있어서, 3개의 구분된 영역, 즉 투명하고 무거운 액체, 분리되는 분산된 액체(분산액 영역), 및 투명하고 가벼운 액체이 있을 것이다. 투명한 용액을 생성하기 위해, 일반적으로, 소량의 용액이 용기에 남아 있어야 한다. 디캔터는 연속식 작동을 위해 설계된다.
본 발명의 하나의 양태에서, 따라서, 본 발명의 하나의 양태에서, 응집 후, 현탁액(상기 1.2 부분에서 수득됨)은 침전(침강)에 의해 청징된다. 침전은 중력 침강에 의해 액체 혼합물로부터 현탁된 고체 입자를 투명한 유체 및 더 높은 고체 함량의 슬러리로 분리하는 것이다. 침전은 증점제, 농축조(thickener), 청징조(clarifier) 또는 분급기(classifier)에서 수행될 수 있다. 농축 및 청징은 큰 부피의 액체의 처리에 사용될 때 비교적 저렴한 공정이고, 이는 여과를 위한 공급물의 사전농축에 사용될 수 있다.
본 발명의 하나의 양태에서, 따라서, 본 발명의 하나의 양태에서, 응집 후, 현탁액(상기 1.2 부분에서 수득됨)은 원심분리에 의해 청징된다. 하나의 양태에서, 상기 원심분리는 연속식 원심분리이다. 하나의 양태에서, 상기 원심분리는 버킷 원심분리(bucket centrifugation)이다. 이어서, 하나의 양태에서, 다당류-함유 상청액은 보관 및/또는 추가 가공을 위해 채집된다.
일부 양태에서, 현탁액은 약 1,000 g 약 2,000 g, 약 3,000 g, 약 4,000 g, 약 5,000 g, 약 6,000 g, 약 8,000 g, 약 9,000 g, 약 10,000 g, 약 11,000 g, 약 12,000 g, 약 13,000 g, 약 14,000 g, 약 15,000 g, 약 16,000 g, 약 17,000 g, 약 18,000 g, 약 19,000 g, 약 20,000 g, 약 25,000 g, 약 30,000 g, 약 35,000 g, 약 40,000 g, 약 50,000 g, 약 60,000 g, 약 70,000 g, 약 80,000 g, 약 90,000 g, 약 100,000 g, 약 120,000 g, 약 140,000 g, 약 160,000 g 또는 약 180,000 g로 원심분리된다. 일부 양태에서, 현탁액은 약 8,000 g, 약 9,000 g, 약 10,000 g, 약 11,000 g, 약 12,000 g, 약 13,000 g, 약 14,000 g, 약 15,000 g, 약 16,000 g, 약 17,000 g, 약 18,000 g, 약 19,000 g, 약 20,000 g 또는 약 25,000 g로 원심분리된다.
일부 양태에서, 현탁액은 약 5,000 g 내지 약 25,000 g로 원심분리된다. 일부 양태에서, 현탁액은 약 8,000 g 내지 약 20,000 g로 원심분리된다. 일부 양태에서, 현탁액은 약 10,000 g 내지 약 15,000 g로 원심분리된다. 일부 양태에서, 현탁액은 약 10,000 g 내지 약 12,000 g로 원심분리된다.
상기 임의의 범위 내의 임의의 수는 본 발명의 양태로서 간주된다.
일부 양태에서, 현탁액은 2분 이상, 3분 이상, 4분 이상, 5분 이상, 10분 이상, 15분 이상, 20분 이상, 25분 이상, 30분 이상, 35분 이상, 40분 이상, 45분 이상, 50분 이상, 55분 이상, 60분 이상, 65분 이상, 70분 이상, 75분 이상, 80분 이상, 85분 이상, 90분 이상, 95분 이상, 100분 이상, 105분 이상, 110분 이상, 115분 이상, 120분 이상, 125분 이상, 130분 이상, 135분 이상, 140분 이상, 145분 이상, 150분 이상, 155분 이상 또는 160분 이상 동안 원심분리된다. 바람직하게는, 원심분리 시간은 24시간 미만이다.
따라서, 특정 양태에서, 현탁액은 약 5, 약 10, 약 15, 약 20, 약 30, 약 40, 약 50, 약 60, 약 70, 약 80, 약 90, 약 100, 약 120, 약 140, 약 160, 약 180, 약 220, 약 240, 약 300, 약 360, 약 420, 약 480, 약 540, 약 600, 약 660, 약 720, 약 780, 약 840, 약 900, 약 960, 약 1020, 약 1080, 약 1140, 약 1200, 약 1260, 약 1320 또는 약 1380분 및 1440분 동안 원심분리된다.
바람직하게는 현탁액은 약 5, 약 10, 약 15, 약 20, 약 25, 약 30, 약 60, 약 90, 약 120, 약 180, 약 240, 약 300, 약 360, 약 420, 약 480 또는 약 540분 내지 약 600분 동안 원심분리된다. 특정 양태에서, 현탁액은 약 5분 내지 약 3시간 동안 원심분리된다. 특정 양태에서, 현탁액은 약 5분 내지 약 120분 동안 원심분리된다.
현탁액은 약 5분, 약 10분, 약 15분, 약 20분, 약 25분, 약 30분, 약 35분, 약 40분, 약 45분, 약 50분, 약 55분, 약 60분, 약 65분, 약 70분, 약 75분, 약 80분, 약 85분, 약 90분, 약 95분, 약 100분, 약 105분, 약 110분, 약 115분, 약 120분, 약 125분, 약 130분, 약 135분, 약 140분, 약 145분, 약 150분 또는 약 155분 내지 약 160분 동안 원심분리될 수 있다.
현탁액은 약 10분, 약 15분, 약 20분, 약 25분, 약 30분, 약 35분, 약 40분, 약 45분, 약 50분 또는 약 55분 내지 약 60분 동안 원심분리될 수 있다.
현탁액은 약 5, 약 10, 약 15, 약 20, 약 30, 약 40, 약 50, 약 60, 약 70, 약 80, 약 90, 약 100, 약 120, 약 140, 약 160, 약 180, 약 220, 약 240, 약 300, 약 360, 약 420, 약 480, 약 540, 약 600, 약 660, 약 720, 약 780, 약 840, 약 900, 약 960, 약 1020, 약 1080, 약 1140, 약 1200, 약 1260, 약 1320, 약 1380분 또는 약 1440분 동안 원심분리될 수 있다.
현탁액은 약 5분, 약 10분, 약 15분, 약 20분, 약 25분, 약 30분, 약 35분, 약 40분, 약 45분, 약 50분, 약 55분, 약 60분, 약 65분, 약 70분, 약 75분, 약 80분, 약 85분, 약 90분, 약 95분, 약 100분, 약 105분, 약 110분, 약 115분, 약 120분, 약 125분, 약 130분, 약 135분, 약 140분, 약 145분, 약 150분, 약 155분 또는 약 160분 동안 원심분리될 수 있다.
현탁액은 약 10분, 약 15분, 약 20분, 약 25분, 약 30분, 약 35분, 약 40분, 약 45분, 약 50분, 약 55분 또는 약 60분 동안 원심분리될 수 있다.
상기 임의의 범위 내의 임의의 수는 본 발명의 양태로서 간주된다.
본 발명의 하나의 양태에서, 원심분리는 연속식 원심분리이다. 상기 양태에서, 공급 속도는 50 내지 5000 mL/분, 100 내지 4000 mL/분, 150 내지 3000 mL/분, 200 내지 2500 mL/분, 250 내지 2000 mL/분, 300 내지 1500 mL/분, 300 내지 1000 mL/분, 200 내지 1000 mL/분, 200 내지 1500 mL/분, 400 내지 1500 mL/분, 500 내지 1500 mL/분, 500 내지 1000 mL/분, 500 내지 2000 mL/분, 500 내지 2500 mL/분 또는 1000 내지 2500 mL/분일 수 있다.
하나의 양태에서, 공급 속도는 약 10, 약 25, 약 50, 약 75, 약 100, 약 150, 약 200, 약 250, 약 300, 약 350, 약 400, 약 450, 약 500, 약 550, 약 600, 약 650, 약 700, 약 750, 약 800, 약 850, 약 900, 약 950, 약 1000, 약 1050, 약 1100, 약 1150, 약 1200, 약 1250, 약 1300, 약 1350, 약 1400, 약 1450, 약 1500, 약 1650, 약 1700, 약 1800, 약 1900, 약 2000, 약 2100, 약 2200, 약 2300, 약 2400, 약 2500, 약 2600, 약 2700, 약 2800, 약 2900, 약 3000, 약 3250, 약 3500, 약 3750, 약 4000, 약 4250, 약 4500 또는 약 5000 mL/분일 수 있다.
본 발명의 하나의 양태에서, 응집 후, 현탁액(상기 1.2 부분에서 수득됨)은 여과에 의해 청징된다. 여과에서, 액체 중 현탁된 고체 입자는 입자를 보유하고 투명한 여과물은 통과시키는 다공성 매질을 통해 혼합물을 통과시킴으로써 제거된다. 여과는 중력에 의한 스크린(screen), 또는 진공, 압력 또는 원심분리에 의한 필터에서 수행된다. 고체는 필터 매질의 표면에 보유될 수 있거나(케이크(cake) 여과), 필터 매질 내에 포획될 수 있다(심층여과). 하나의 양태에서, 응집 후, 현탁액(상기 1.2 부분에서 수득됨)은 마이크로여과에 의해 청징된다. 하나의 양태에서, 마이크로여과는 접선(tangential) 마이크로여과이다. 또다른 양태에서, 마이크로여과는 데드-엔드(dead-end) 여과(수직 여과)이다. 하나의 양태에서, 마이크로여과는 규조토(DE)(DE 다이아토마이트로도 공지되어 있음)가 고체/액체 분리의 효율을 용이하게 하고 증대시킴을 보조하는 필터로서 사용되는 데드-엔드 여과이다. 따라서, 하나의 양태에서, 응집 후, 현탁액(상기 1.2 부분에서 수득됨)은 규조토(DE)를 포함하는 데드-엔드 마이크로여과에 의해 청징된다. DE는 심층 필터의 구성요소로서 데드-엔드 필터에 포함(또는 혼입)될 수 있다.
또다른 형식에서, DE는 응집된 용액(1.2 부분 후 수득됨)에 분말 형태로 첨가될 수 있다. 이러한 경우, 응집된 용액으로 처리된 DE는 심층여과에 의해 추가로 청징될 수 있다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 약 0.01 내지 2 μm, 약 0.05 내지 2 μm, 약 0.1 내지 2 μm, 약 0.2 내지 2 μm, 약 0.3 내지 2 μm, 약 0.4 내지 2 μm, 약 0.45 내지 2 μm, 약 0.5 내지 2 μm, 약 0.6 내지 2 μm, 약 0.7 내지 2 μm, 약 0.8 내지 2 μm, 약 0.9 내지 2 μm, 약 1 내지 2 μm, 약 1.25 내지 2 μm, 약 1.5 내지 2 μm, 또는 약 1.75 내지 2 μm의 공칭 보유 범위(nominal retention range)를 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 약 0.01 내지 1 μm, 약 0.05 내지 1 μm, 약 0.1 내지 1 μm, 약 0.2 내지 1 μm, 약 0.3 내지 1 μm, 약 0.4 내지 1 μm, 약 0.45 내지 1 μm, 약 0.5 내지 1 μm, 약 0.6 내지 1 μm, 약 0.7 내지 1 μm, 약 0.8 내지 1 μm 또는 약 0.9 내지 1 μm의 공칭 보유 범위를 가진다.
상기 임의의 범위 내의 임의의 수는 본 발명의 양태로서 간주된다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 약 0.01, 약 0.05, 약 0.1, 약 0.2, 약 0.3, 약 0.4, 약 0.45, 약 0.5, 약 0.6, 약 0.7, 약 0.8, 약 0.9, 약 1, 약 1.1, 약 1.2, 약 1.3, 약 1.4, 약 1.5, 약 1.6, 약 1.7, 약 1.8, 약 1.9 또는 약 2 μm의 공칭 보유 등급(rating)을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 약 0.45 μm의 공칭 보유 등급을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 100 내지 5000 L/m2, 200 내지 5000 L/m2, 300 내지 5000 L/m2, 400 내지 5000 L/m2, 500 내지 5000 L/m2, 750 내지 5000 L/m2, 1000 내지 5000 L/m2, 1500 내지 5000 L/m2, 2000 내지 5000 L/m2, 3000 내지 5000 L/m2 또는 4000 내지 5000 L/m2의 필터 용량을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 100 내지 2500 L/m2, 200 내지 2500 L/m2, 300 내지 2500 L/m2, 400 내지 2500 L/m2, 500 내지 2500 L/m2, 750 내지 2500 L/m2, 1000 내지 2500 L/m2, 1500 내지 2500 L/m2 또는 2000 내지 2500 L/m2의 필터 용량을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 100 내지 1500 L/m2, 200 내지 1500 L/m2, 300 내지 1500 L/m2, 400 내지 1500 L/m2, 500 내지 1500 L/m2, 750 내지 1500 L/m2 또는 1000 내지 1500 L/m2의 필터 용량을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 100 내지 1250 L/m2, 200 내지 1250 L/m2, 300 내지 1250 L/m2, 400 내지 1250 L/m2, 500 내지 1250 L/m2, 750 내지 1250 L/m2 또는 1000 내지 1250 L/m2의 필터 용량을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 100 내지 1000 L/m2, 200 내지 1000 L/m2, 300 내지 1000 L/m2, 400 내지 1000 L/m2, 500 내지 1000 L/m2 또는 750 내지 1000 L/m2의 필터 용량을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 100 내지 750 L/m2, 200 내지 750 L/m2, 300 내지 750 L/m2, 400 내지 750 L/m2 또는 500 내지 750 L/m2의 필터 용량을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 100 내지 600 L/m2, 200 내지 600 L/m2, 300 내지 600 L/m2, 400 내지 600 L/m2 또는 400 내지 600 L/m2의 필터 용량을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 100 내지 500 L/m2, 200 내지 500 L/m2, 300 내지 500 L/m2 또는 400 내지 500 L/m2의 필터 용량을 가진다.
상기 임의의 범위 내의 임의의 수는 본 발명의 양태로서 간주된다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 약 100, 약 150, 약 200, 약 250, 약 300, 약 350, 약 400, 약 450, 약 500, 약 550, 약 600, 약 650, 약 700, 약 750, 약 800, 약 850, 약 900, 약 950, 약 1000, 약 1050, 약 1100, 약 1150, 약 1200, 약 1250, 약 1300, 약 1350, 약 1400, 약 1450, 약 1500, 약 1550, 약 1600, 약 1650, 약 1700, 약 1750, 약 1800, 약 1850, 약 1900, 약 1950, 약 2000, 약 2050, 약 2100, 약 2150, 약 2200, 약 2250, 약 2300, 약 2350, 약 2400, 약 2450 또는 약 2500 L/m2의 필터 용량을 가진다.
전술된 고체/액체 분리 방법은 단일 형식, 임의의 순서로 2개의 조합, 또는 임의의 순서로 3개의 조합으로 사용될 수 있다.
1.4. 여과(예컨대 심층여과)
용액이 상기 1.2 부분의 응집 단계에 의하고/거나 상기 1.3 부분의 고체/액체 분리 단계에 의해 처리된 후, 다당류-함유 용액(예컨대 상청액)은 임의적으로 추가 청징될 수 있다.
하나의 양태에서, 용액은 여과되어 추가 청징된 용액이 생성된다. 하나의 양태에서, 여과는 상기 1.2 부분의 임의의 방법에 의해 수득된 용액에 바로 적용된다. 하나의 양태에서, 여과는 상기 1.3 부분에 기재된 고체/액체 분리 단계에 의해 추가 청징된 용액에 적용된다. 하나의 양태에서, 용액은 심층여과, 활성탄을 통한 여과, 크기 여과, 정용여과(diafiltration) 및 한외여과로 이루어진 군으로부터 선택된다. 하나의 양태에서, 용액은 정용여과 단계, 특히 접선 유동 여과에 의해 처리된다. 하나의 양태에서, 용액은 심층여과 단계에 의해 처리된다.
심층여과는 매질의 표면에 바로 위가 아닌, 매질 전체에 걸쳐 입자를 보유한다. 여과 매질의 굴곡적 및 통로적 성질에 기인하여, 입자는 표면이 아니라 매질의 구조 내의 매질 전체에 걸쳐 보유된다. 하나의 양태에서, 용액은 심층여과 단계에 의해 처리되되, 심층 필터는 카세트, 카트리지, 심층(예컨대 모래 필터) 및 렌즈형 필터로 이루어진 군으로부터 선택된다.
하나의 양태에서, 용액은 심층여과 단계에 의해 처리되되, 심층 필터는 약 0.01 내지 100 μm, 약 0.05 내지 100 μm, 약 0.1 내지 100 μm, 약 0.2 내지 100 μm, 약 0.3 내지 100 μm, 약 0.4 내지 100 μm, 약 0.5 내지 100 μm, 약 0.6 내지 100 μm, 약 0.7 내지 100 μm, 약 0.8 내지 100 μm, 약 0.9 내지 100 μm, 약 1 내지 100 μm, 약 1.25 내지 100 μm, 약 1.5 내지 100 μm, 약 1.75 내지 100 μm, 약 2 내지 100 μm, 약 3 내지 100 μm, 약 4 내지 100 μm, 약 5 내지 100 μm, 약 6 내지 100 μm, 약 7 내지 100 μm, 약 8 내지 100 μm, 약 9 내지 100 μm, 약 10 내지 100 μm, 약 15 내지 100 μm, 약 20 내지 100 μm, 약 25 내지 100 μm, 약 30 내지 100 μm, 약 40 내지 100 μm, 약 50 내지 100 μm 또는 약 75 내지 100 μm의 공칭 보유 범위를 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 심층여과 단계에 의해 처리되되, 심층 필터는 약 0.01 내지 75 μm, 약 0.05 내지 75 μm, 약 0.1 내지 75 μm, 약 0.2 내지 75 μm, 약 0.3 내지 75 μm, 약 0.4 내지 75 μm, 약 0.5 내지 75 μm, 약 0.6 내지 75 μm, 약 0.7 내지 75 μm, 약 0.8 내지 75 μm, 약 0.9 내지 75 μm, 약 1 내지 75 μm, 약 1.25 내지 75 μm, 약 1.5 내지 75 μm, 약 1.75 내지 75 μm, 약 2 내지 75 μm, 약 3 내지 75 μm, 약 4 내지 75 μm, 약 5 내지 75 μm, 약 6 내지 75 μm, 약 7 내지 75 μm, 약 8 내지 75 μm, 약 9 내지 75 μm, 약 10 내지 75 μm, 약 15 내지 75 μm, 약 20 내지 75 μm, 약 25 내지 75 μm, 약 30 내지 75 μm, 약 40 내지 75 μm 또는 약 50 내지 75 μm의 공칭 보유 범위를 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 심층여과 단계에 의해 처리되되, 심층 필터는 약 0.01 내지 50 μm, 약 0.05 내지 50 μm, 약 0.1 내지 50 μm, 약 0.2 내지 50 μm, 약 0.3 내지 50 μm, 약 0.4 내지 50 μm, 약 0.5 내지 50 μm, 약 0.6 내지 50 μm, 약 0.7 내지 50 μm, 약 0.8 내지 50 μm, 약 0.9 내지 50 μm, 약 1 내지 50 μm, 약 1.25 내지 50 μm, 약 1.5 내지 50 μm, 약 1.75 내지 50 μm, 약 2 내지 50 μm, 약 3 내지 50 μm, 약 4 내지 50 μm, 약 5 내지 50 μm, 약 6 내지 50 μm, 약 7 내지 50 μm, 약 8 내지 50 μm, 약 9 내지 50 μm, 약 10 내지 50 μm, 약 15 내지 50 μm, 약 20 내지 50 μm, 약 25 내지 50 μm, 약 30 내지 50 μm, 약 40 내지 50 μm 또는 약 50 내지 50 μm의 공칭 보유 범위를 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 심층여과 단계에 의해 처리되되, 심층 필터는 약 0.01 내지 25 μm, 약 0.05 내지 25 μm, 약 0.1 내지 25 μm, 약 0.2 내지 25 μm, 약 0.3 내지 25 μm, 약 0.4 내지 25 μm, 약 0.5 내지 25 μm, 약 0.6 내지 25 μm, 약 0.7 내지 25 μm, 약 0.8 내지 25 μm, 약 0.9 내지 25 μm, 약 1 내지 25 μm, 약 1.25 내지 25 μm, 약 1.5 내지 25 μm, 약 1.75 내지 25 μm, 약 2 내지 25 μm, 약 3 내지 25 μm, 약 4 내지 25 μm, 약 5 내지 25 μm, 약 6 내지 25 μm, 약 7 내지 25 μm, 약 8 내지 25 μm, 약 9 내지 25 μm, 약 10 내지 25 μm, 약 15 내지 25 μm 또는 약 20 내지 25 μm의 공칭 보유 범위를 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 심층여과 단계에 의해 처리되되, 심층 필터는 약 0.01 내지 10 μm, 약 0.05 내지 10 μm, 약 0.1 내지 10 μm, 약 0.2 내지 10 μm, 약 0.3 내지 10 μm, 약 0.4 내지 10 μm, 약 0.5 내지 10 μm, 약 0.6 내지 10 μm, 약 0.7 내지 10 μm, 약 0.8 내지 10 μm, 약 0.9 내지 10 μm, 약 1 내지 10 μm, 약 1.25 내지 10 μm, 약 1.5 내지 10 μm, 약 1.75 내지 10 μm, 약 2 내지 10 μm, 약 3 내지 10 μm, 약 4 내지 10 μm, 약 5 내지 10 μm, 약 6 내지 10 μm, 약 7 내지 10 μm, 약 8 내지 10 μm 또는 약 9 내지 10 μm의 공칭 보유 범위를 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 심층여과 단계에 의해 처리되되, 심층 필터는 약 0.01 내지 8 μm, 약 0.05 내지 8 μm, 약 0.1 내지 8 μm, 약 0.2 내지 8 μm, 약 0.3 내지 8 μm, 약 0.4 내지 8 μm, 약 0.5 내지 8 μm, 약 0.6 내지 8 μm, 약 0.7 내지 8 μm, 약 0.8 내지 8 μm, 약 0.9 내지 8 μm, 약 1 내지 8 μm, 약 1.25 내지 8 μm, 약 1.5 내지 8 μm, 약 1.75 내지 8 μm, 약 2 내지 8 μm, 약 3 내지 8 μm, 약 4 내지 8 μm, 약 5 내지 8 μm, 약 6 내지 8 μm 또는 약 7 내지 8 μm의 공칭 보유 범위를 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 심층여과 단계에 의해 처리되되, 심층 필터는 약 0.01 내지 5 μm, 약 0.05 내지 5 μm, 약 0.1 내지 5 μm, 약 0.2 내지 5 μm, 약 0.3 내지 5 μm, 약 0.4 내지 5 μm, 약 0.5 내지 5 μm, 약 0.6 내지 5 μm, 약 0.7 내지 5 μm, 약 0.8 내지 5 μm, 약 0.9 내지 5 μm, 약 1 내지 5 μm, 약 1.25 내지 5 μm, 약 1.5 내지 5 μm, 약 1.75 내지 5 μm, 약 2 내지 5 μm, 약 3 내지 5 μm 또는 약 4 내지 5 μm의 공칭 보유 범위를 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 심층여과 단계에 의해 처리되되, 심층 필터는 약 0.01 내지 2 μm, 약 0.05 내지 2 μm, 약 0.1 내지 2 μm, 약 0.2 내지 2 μm, 약 0.3 내지 2 μm, 약 0.4 내지 2 μm, 약 0.5 내지 2 μm, 약 0.6 내지 2 μm, 약 0.7 내지 2 μm, 약 0.8 내지 2 μm, 약 0.9 내지 2 μm, 약 1 내지 2 μm, 약 1.25 내지 2 μm, 약 1.5 내지 2 μm, 약 1.75 내지 2 μm, 약 2 내지 2 μm, 약 3 내지 2 μm 또는 약 4 내지 2 μm의 공칭 보유 범위를 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 심층여과 단계에 의해 처리되되, 심층 필터는 약 0.01 내지 1 μm, 약 0.05 내지 1 μm, 약 0.1 내지 1 μm, 약 0.2 내지 1 μm, 약 0.3 내지 1 μm, 약 0.4 내지 1 μm, 약 0.5 내지 1 μm, 약 0.6 내지 1 μm, 약 0.7 내지 1 μm, 약 0.8 내지 1 μm 또는 약 0.9 내지 1 μm의 공칭 보유 범위를 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 심층여과 단계에 의해 처리되되, 심층 필터는 약 0.05 내지 50 μm, 0.1 내지 25 μm 0.2 내지 10, μm 0.1 내지 10 μm, 0.2 내지 5 μm 또는 0.25 내지 1 μm의 공칭 보유 범위를 가진다.
상기 임의의 범위 내의 임의의 수는 본 발명의 양태로서 간주된다.
하나의 양태에서, 용액은 심층여과 단계에 의해 처리되되, 심층 필터는 1 내지 2500 L/m2, 5 내지 2500 L/m2, 10 내지 2500 L/m2, 25 내지 2500 L/m2, 50 내지 2500 L/m2, 75 내지 2500 L/m2, 100 내지 2500 L/m2, 150 내지 2500 L/m2, 200 내지 2500 L/m2, 300 내지 2500 L/m2, 400 내지 2500 L/m2, 500 내지 2500 L/m2, 750 내지 2500 L/m2, 1000 내지 2500 L/m2, 1500 내지 2500 L/m2 또는 2000 내지 2500 L/m2의 필터 용량을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 심층여과 단계에 의해 처리되되, 심층 필터는 1 내지 1000 L/m2, 5 내지 1000 L/m2, 10 내지 1000 L/m2, 25 내지 1000 L/m2, 50 내지 1000 L/m2, 75 내지 1000 L/m2, 100 내지 1000 L/m2, 150 내지 1000 L/m2, 200 내지 1000 L/m2, 300 내지 1000 L/m2, 400 내지 1000 L/m2, 500 내지 1000 L/m2 또는 750 내지 1000 L/m2의 필터 용량을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 심층여과 단계에 의해 처리되되, 심층 필터는 1 내지 750 L/m2, 5 내지 750 L/m2, 10 내지 750 L/m2, 25 내지 750 L/m2, 50 내지 750 L/m2, 75 내지 750 L/m2, 100 내지 750 L/m2, 150 내지 750 L/m2, 200 내지 750 L/m2, 300 내지 750 L/m2, 400 내지 750 L/m2 또는 500 내지 750 L/m2의 필터 용량을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 심층여과 단계에 의해 처리되되, 심층 필터는 1 내지 500 L/m2, 5 내지 500 L/m2, 10 내지 500 L/m2, 25 내지 500 L/m2, 50 내지 500 L/m2, 75 내지 500 L/m2, 100 내지 500 L/m2, 150 내지 500 L/m2, 200 내지 500 L/m2, 300 내지 500 L/m2 또는 400 내지 500 L/m2의 필터 용량을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 심층여과 단계에 의해 처리되되, 심층 필터는 1 내지 400 L/m2, 5 내지 400 L/m2, 10 내지 400 L/m2, 25 내지 400 L/m2, 50 내지 400 L/m2, 75 내지 400 L/m2, 100 내지 400 L/m2, 150 내지 400 L/m2, 200 내지 400 L/m2 또는 300 내지 400 L/m2의 필터 용량을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 심층여과 단계에 의해 처리되되, 심층 필터는 1 내지 300 L/m2, 5 내지 300 L/m2, 10 내지 300 L/m2, 25 내지 300 L/m2, 50 내지 300 L/m2, 75 내지 300 L/m2, 100 내지 300 L/m2, 150 내지 300 L/m2 또는 200 내지 300 L/m2의 필터 용량을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 심층여과 단계에 의해 처리되되, 심층 필터는 1 내지 200 L/m2, 5-200 L/m2, 10 내지 200 L/m2, 25 내지 200 L/m2, 50 내지 200 L/m2, 75 내지 200 L/m2, 100 내지 200 L/m2 또는 150 내지 200 L/m2의 필터 용량을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 심층여과 단계에 의해 처리되되, 심층 필터는 1 내지 100 L/m2, 5 내지 100 L/m2, 10 내지 100 L/m2, 25 내지 100 L/m2, 50 내지 100 L/m2 또는 75 내지 100 L/m2의 필터 용량을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 심층여과 단계에 의해 처리되되, 심층 필터는 1 내지 50 L/m2, 5 내지 50 L/m2, 10 내지 50 L/m2 또는 25 내지 50 L/m2의 필터 용량을 가진다.
상기 임의의 범위 내의 전체 정수는 본 발명의 양태로서 간주된다.
하나의 양태에서, 용액은 심층여과 단계에 의해 처리되되, 공급 속도는 1 내지 1000 LMH(L/m2/h), 10 내지 1000 LMH, 25 내지 1000 LMH, 50 내지 1000 LMH, 100 내지 1000 LMH, 125 내지 1000 LMH, 150 내지 1000 LMH, 200 내지 1000 LMH, 250 내지 1000 LMH, 300 내지 1000 LMH, 400 내지 1000 LMH, 500 내지 1000 LMH, 600 내지 1000 LMH, 700 내지 1000 LMH, 800 내지 1000 LMH 또는 900 내지 1000 LMH이다.
하나의 양태에서, 용액은 심층여과 단계에 의해 처리되되, 공급 속도는 1 내지 500 LMH, 10 내지 500 LMH, 25 내지 500 LMH, 50 내지 500 LMH, 100 내지 500 LMH, 125 내지 500 LMH, 150 내지 500 LMH, 200 내지 500 LMH, 250 내지 500 LMH, 300 내지 500 LMH 또는 400 내지 500 LMH이다.
하나의 양태에서, 용액은 심층여과 단계에 의해 처리되되, 공급 속도는 1 내지 400 LMH, 10 내지 400 LMH, 25 내지 400 LMH, 50 내지 400 LMH, 100 내지 400 LMH, 125 내지 400 LMH, 150 내지 400 LMH, 200 내지 400 LMH, 250 내지 400 LMH 또는 300 내지 400 LMH이다.
하나의 양태에서, 용액은 심층여과 단계에 의해 처리되되, 공급 속도는 1 내지 250 LMH, 10 내지 250 LMH, 25 내지 250 LMH, 50 내지 250 LMH, 100 내지 250 LMH, 125 내지 250 LMH, 150 내지 250 LMH 또는 200 내지 250 LMH이다.
상기 임의의 범위 내의 임의의 수는 본 발명의 양태로서 간주된다.
하나의 양태에서, 용액은 심층여과 단계에 의해 처리되되, 공급 속도는 약 1, 약 2, 약 5, 약 10, 약 25, 약 50, 약 60, 약 70, 약 80, 약 90, 약 100, 약 110, 약 120, 약 130, 약 140, 약 150, 약 160, 약 170, 약 180, 약 190, 약 200, 약 210, 약 220, 약 230, 약 240, 약 250, 약 260, 약 270, 약 280, 약 290, 약 300, 약 310, 약 320, 약 330, 약 340, 약 350, 약 360, 약 370, 약 380, 약 390, 약 400, 약 425, 약 450, 약 475, 약 500, 약 525, 약 550, 약 575, 약 600, 약 650, 약 700, 약 750, 약 800, 약 850, 약 900, 약 950 또는 약 1000 LMH이다.
1.5. 임의적인 추가 정제
용액이 상기 1.4 부분의 여과 단계에 의해 처리된 후, 수득된 용액(즉 여과물)은 임의적으로 추가 청징될 수 있다. 하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과된다. 하나의 양태에서, 마이크로여과는 데드-엔드 여과(수직 여과)이다. 하나의 양태에서, 마이크로여과는 접선 마이크로여과이다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 약 0.01 내지 2 μm, 약 0.05 내지 2 μm, 약 0.1 내지 2 μm, 약 0.2 내지 2 μm, 약 0.3 내지 2 μm, 약 0.4 내지 2 μm, 약 0.45 내지 2 μm, 약 0.5 내지 2 μm, 약 0.6 내지 2 μm, 약 0.7 내지 2 μm, 약 0.8 내지 2 μm, 약 0.9 내지 2 μm, 약 1 내지 2 μm, 약 1.25 내지 2 μm, 약 1.5 내지 2 μm, 또는 약 1.75 내지 2 μm의 공칭 보유 범위를 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 심층여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 약 0.01 내지 1 μm, 약 0.05 내지 1 μm, 약 0.1 내지 1 μm, 약 0.2 내지 1 μm, 약 0.3 내지 1 μm, 약 0.4 내지 1 μm, 약 0.45 내지 1 μm, 약 0.5 내지 1 μm, 약 0.6 내지 1 μm, 약 0.7 내지 1 μm, 약 0.8 내지 1 μm 또는 약 0.9 내지 1 μm의 공칭 보유 범위를 가진다.
상기 임의의 범위 내의 임의의 수는 본 발명의 양태로서 간주된다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 약 0.01, 약 0.05, 약 0.1, 약 0.2, 약 0.3, 약 0.4, 약 0.45, 약 0.5, 약 0.6, 약 0.7, 약 0.8, 약 0.9, 약 1, 약 1.1, 약 1.2, 약 1.3, 약 1.4, 약 1.5, 약 1.6, 약 1.7, 약 1.8, 약 1.9 또는 약 2 μm의 공칭 보유 등급을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 약 0.45 μm의 공칭 보유 등급을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 100 내지 5000 L/m2, 200 내지 5000 L/m2, 300 내지 5000 L/m2, 400 내지 5000 L/m2, 500 내지 5000 L/m2, 750 내지 5000 L/m2, 1000 내지 5000 L/m2, 1500 내지 5000 L/m2, 2000 내지 5000 L/m2, 3000 내지 5000 L/m2 또는 4000 내지 5000 L/m2의 필터 용량을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 100 내지 2500 L/m2, 200 내지 2500 L/m2, 300 내지 2500 L/m2, 400 내지 2500 L/m2, 500 내지 2500 L/m2, 750 내지 2500 L/m2, 1000 내지 2500 L/m2, 1500 내지 2500 L/m2 또는 2000 내지 2500 L/m2의 필터 용량을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 100 내지 1500 L/m2, 200 내지 1500 L/m2, 300 내지 1500 L/m2, 400 내지 1500 L/m2, 500 내지 1500 L/m2, 750 내지 1500 L/m2 또는 1000 내지 1500 L/m2의 필터 용량을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 100 내지 1250 L/m2, 200 내지 1250 L/m2, 300 내지 1250 L/m2, 400 내지 1250 L/m2, 500 내지 1250 L/m2, 750 내지 1250 L/m2 또는 1000 내지 1250 L/m2의 필터 용량을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 100 내지 1000 L/m2, 200 내지 1000 L/m2, 300 내지 1000 L/m2, 400 내지 1000 L/m2, 500 내지 1000 L/m2 또는 750 내지 1000 L/m2의 필터 용량을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 100 내지 750 L/m2, 200 내지 750 L/m2, 300 내지 750 L/m2, 400 내지 750 L/m2 또는 500 내지 750 L/m2의 필터 용량을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 100 내지 600 L/m2, 200 내지 600 L/m2, 300 내지 600 L/m2, 400 내지 600 L/m2 또는 400 내지 600 L/m2의 필터 용량을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 100 내지 500 L/m2, 200 내지 500 L/m2, 300 내지 500 L/m2 또는 400 내지 500 L/m2의 필터 용량을 가진다.
상기 임의의 범위 내의 임의의 수는 본 발명의 양태로서 간주된다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 약 100, 약 150, 약 200, 약 250, 약 300, 약 350, 약 400, 약 450, 약 500, 약 550, 약 600, 약 650, 약 700, 약 750, 약 800, 약 850, 약 900, 약 950, 약 1000, 약 1050, 약 1100, 약 1150, 약 1200, 약 1250, 약 1300, 약 1350, 약 1400, 약 1450, 약 1500, 약 1550, 약 1600, 약 1650, 약 1700, 약 1750, 약 1800, 약 1850, 약 1900, 약 1950, 약 2000, 약 2050, 약 2100, 약 2150, 약 2200, 약 2250, 약 2300, 약 2350, 약 2400, 약 2450 또는 약 2500 L/m2의 필터 용량을 가진다.
1.6. 한외여과 및/또는 정용여과
용액이 상기 부분 1.4의 임의의 방법에 의하고/거나 상기 1.5 부분의 여과 단계에 의해 여과된 후, 수득된 용액(즉 여과물)은 한외여과 및/또는 정용여과에 의해 임의적으로 추가 청징될 수 있다.
한외여과(UF)는 희석 생성물 스트림을 농축시키기 위한 공정이다. UF는 용액 중 분자를 막 세공 크기 또는 컷 오프 분자량(molecular weight cutoff, MWCO)을 기준으로 분리한다. 본 발명의 하나의 양태에서, 용액(예컨대 상기 1.5 또는 1.6 부분에서 수득된 여과물)은 한외여과에 의해 처리된다.
하나의 양태에서, 용액은 한외여과에 의해 처리되고, 막의 MWCO는 약 5 kDa 내지 1000 kDa이다.
하나의 양태에서, 막의 MWCO는 약 10 kDa 내지 750 kDa이다. 하나의 양태에서, 막의 MWCO는 약 10 kDa 내지 500 kDa이다. 하나의 양태에서, 막의 MWCO는 약 10 kDa 내지 300 kDa이다. 하나의 양태에서, 막의 MWCO는 약 10 kDa 내지 100 kDa이다. 하나의 양태에서, 막의 MWCO는 약 10 kDa 내지 50 kDa이다. 하나의 양태에서, 막의 MWCO는 약 10 kDa 내지 30 kDa이다. 하나의 양태에서, 막의 MWCO는 약 5 kDa 내지 1000 kDa, 약 10 kDa 내지 1000 kDa 약 20 kDa 내지 1000 kDa, 약 30 kDa 내지 1000 kDa, 약 40 kDa 내지 1000 kDa, 약 50 kDa 내지 1000 kDa, 약 75 kDa 내지 1000 kDa, 약 100 kDa 내지 1000 kDa, 약 150 kDa 내지 1000 kDa, 약 200 kDa 내지 1000 kDa, 약 300 kDa 내지 1000 kDa, 약 400 kDa 내지 1000 kDa, 약 500 kDa 내지 1000 kDa 또는 약 750 kDa 내지 1000 kDa이다.
하나의 양태에서, 막의 MWCO는 약 5 kDa 내지 500 kDa, 약 10 kDa 내지 500 kDa, 약 20 kDa 내지 500 kDa, 약 30 kDa 내지 500 kDa, 약 40 kDa 내지 500 kDa, 약 50 kDa 내지 500 kDa, 약 75 kDa 내지 500 kDa, 약 100 kDa 내지 500 kDa, 약 150 kDa 내지 500 kDa, 약 200 kDa 내지 500 kDa, 약 300 kDa 내지 500 kDa 또는 약 400 kDa 내지 500 kDa이다.
하나의 양태에서, 막의 MWCO는 약 5 kDa 내지 300 kDa, 약 10 kDa 내지 300 kDa, 약 20 kDa 내지 300 kDa, 약 30 kDa 내지 300 kDa, 약 40 kDa 내지 300 kDa, 약 50 kDa 내지 300 kDa, 약 75 kDa 내지 300 kDa, 약 100 kDa 내지 300 kDa, 약 150 kDa 내지 300 kDa 또는 약 200 kDa 내지 300 kDa이다.
하나의 양태에서, 막의 MWCO는 약 5 kDa 내지 100 kDa, 약 10 kDa 내지 100 kDa, 약 20 kDa 내지 100 kDa, 약 30 kDa 내지 100 kDa, 약 40 kDa 내지 100 kDa, 약 50 kDa 내지 100 kDa 또는 약 75 kDa 내지 100 kDa이다.
하나의 양태에서, 막의 컷 오프 분자량은 약 5 kDa, 약 10 kDa, 약 20 kDa, 약 30 kDa, 약 40 kDa, 약 50 kDa, 약 60 kDa, 약 70 kDa, 약 80 kDa, 약 90 kDa, 약 100 kDa, 약 110 kDa, 약 120 kDa, 약 130 kDa, 약 140 kDa, 약 150 kDa, 약 200 kDa, 약 250 kDa, 약 300 kDa, 약 400 kDa, 약 500 kDa, 약 750 kDa 또는 약 1000 kDa이다.
하나의 양태에서, 한외여과의 농축 계수는 약 1.5 내지 10이다. 하나의 양태에서, 농축 계수는 약 2 내지 8이다. 하나의 양태에서, 농축 계수는 약 2 내지 5이다.
하나의 양태에서, 농축 계수는 약 1.5, 약 2.0, 약 2.5, 약 3.0, 약 3.5, 약 4.0, 약 4.5, 약 5.0, 약 5.5, 약 6.0, 약 6.5, 약 7.0, 약 7.5, 약 8.0, 약 8.5, 약 9.0, 약 9.5 또는 약 10.0이다. 하나의 양태에서, 농축 계수는 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 또는 약 6이다.
본 발명의 하나의 양태에서, 용액(예컨대 상기 1.5 또는 1.6 부분에서 수득된 여과물)은 정용여과에 의해 처리된다.
본 발명의 하나의 양태에서, 상기 본 부분에 개시된 한외여과(UF)에 의해 수득되는 용액은 정용여과에 의해 추가 처리된다(UF/DF 처리).
정용여과(DF)는 목적하는 완충 용액(또는 단지 물) 내로 생성물을 교환하는데 사용된다. 하나의 양태에서, 정용여과는 일정 부피하에 보유된 용액의 화학적 특성을 변화시키는데 사용된다. 원치않는 입자는 막을 통과하는 한편, 공급 스트림을 이루는 나머지는 대체 용액(완충 용액, 염수 용액, 완충 염수 용액 또는 물)의 첨가를 통해 보다 더 바람직한 상태로 변화된다.
하나의 양태에서, 대체 용액은 물이다.
하나의 양태에서, 대체 용액은 물 중 염수이다. 일부 양태에서, 염은 마그네슘 클로라이드, 칼륨 클로라이드, 나트륨 클로라이드 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 하나의 특정 양태에서, 염은 나트륨 클로라이드이다. 하나의 양태에서, 대체 용액은 약 1 mM, 약 5 mM, 약 10 mM, 약 15 mM, 약 20 mM, 약 25 mM, 약 30 mM, 약 35 mM, 약 40 mM, 약 45 mM, 약 50 mM, 약 55 mM, 약 60 mM, 약 65 mM, 약 70 mM, 약 80 mM, 약 90 mM, 약 100 mM, 약 110 mM, 약 120 mM, 약 130 mM, 약 140 mM, 약 150 mM, 약 160 mM, 약 170 mM, 약 180 mM, 약 190 mM, 약 200 mM, 약 250 mM, 약 300 mM, 약 350 mM, 약 400 mM, 약 450 mM 또는 약 500 mM의 나트륨 클로라이드이다. 하나의 특정 양태에서, 대체 용액은 약 1 mM, 약 5 mM, 약 10 mM, 약 15 mM, 약 20 mM, 약 25 mM, 약 30 mM, 약 35 mM, 약 40 mM, 약 45 mM, 약 50 mM, 약 55 mM, 약 60 mM, 약 65 mM, 약 70 mM, 약 80 mM, 약 90 mM, 약 100 mM, 약 110 mM, 약 120 mM, 약 130 mM, 약 140 mM, 약 150 mM, 약 160 mM, 약 170 mM, 약 180 mM, 약 190 mM, 약 200 mM, 약 250 mM 또는 약 300 mM의 나트륨 클로라이드이다.
하나의 양태에서, 대체 용액은 완충 용액이다. 하나의 양태에서, 대체 용액은 완충제가 N-(2-아세트아미도)-아미노에탄설폰산(ACES), 아세트산의 염(아세테이트), N-(2-아세트아미도)-이미노다이아세트산(ADA), 2-아미노에탄설폰산(AES, 타우린), 암모니아, 2-아미노-2-메틸-1-프로판올(AMP), 2-아미노-2-메틸-1,3-프로판다이올(AMPD), 암메다이올, N-(1,1-다이메틸-2-하이드록시에틸)-3-아미노-2-하이드록시프로판설폰산(AMPSO), N,N-비스-(2-하이드록시에틸)-2-아미노에탄설폰산(BES), 나트륨 수소 카보네이트(바이카보네이트), N,N'-비스(2-하이드록시에틸)-글리신(바이신(bicine)), [비스-(2-하이드록시에틸)-이미노]-트리스-(하이드록시메틸메탄)(비스-트리스), 1,3-비스[트리스(하이드록시메틸)-메틸아미노]프로판(비스-트리스-프로판), 붕산, 다이메틸아르신산(카코딜레이트), 3-(사이클로헥실아미노)-프로판설폰산(CAPS), 3-(사이클로헥실아미노)-2-하이드록시-1-프로판설폰산(CAPSO), 나트륨 카보네이트(카보네이트), 사이클로헥실아미노에탄설폰산(CHES), 시트르산의 염(시트레이트), 3-[N-비스(하이드록시에틸)아미노]-2-하이드록시프로판설폰산(DIPSO), 포름산의 염(포르메이트), 글리신, 글리실글리신, N-(2-하이드록시에틸)-피페라진-N'-에탄설폰산(HEPES), N-(2-하이드록시에틸)-피페라진-N'-3-프로판설폰산(HEPPS, EPPS), N-(2-하이드록시에틸)-피페라진-N'-2-하이드록시프로판설폰산(HEPPSO), 이미다졸, 말산의 염(말레이트), 말레산의 염(말리에이트), 2-(N-모르폴리노)-에탄설폰산(MES), 3-(N-모르폴리노)-프로판설폰산(MOPS), 3-(N-모르폴리노)-2-하이드록시프로판설폰산(MOPSO), 인산의 염(포스페이트), 피페라진-N,N'-비스(2-에탄설폰산)(PIPES), 피페라진-N,N'-비스(2-하이드록시프로판설폰산)(POPSO), 피리딘, 숙신산의 염(숙시네이트), 3-{[트리스(하이드록시메틸)-메틸]-아미노}-프로판설폰산(TAPS), 3-[N-트리스(하이드록시메틸)-메틸아미노]-2-하이드록시프로판설폰산(TAPSO), 트라이에탄올아민(TEA), 2-[트리스(하이드록시메틸)-메틸아미노]-에탄설폰산(TES), N-[트리스(하이드록시메틸)-메틸]-글리신(트라이신(tricine)) 및 트리스(하이드록시메틸)-아미노메탄(트리스)로 이루어진 군으로부터 선택되는 완충 용액이다.
하나의 양태에서, 정용여과 완충제는 아세트산의 염(아세테이트), 시트르산의 염(시트레이트), 포름산의 염(포르메이트), 말산의 염(말레이트), 말레산의 염(말리에이트), 인산의 염(포스페이트) 및 숙신산의 염(숙시네이트)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 하나의 양태에서, 정용여과 완충제는 시트르산의 염(시트레이트)이다. 하나의 양태에서, 정용여과 완충제는 숙신산의 염(숙시네이트)이다. 하나의 양태에서, 상기 염 나트륨 염이다. 하나의 양태에서, 상기 염은 칼륨 염이다.
하나의 양태에서, 정용여과 완충제의 pH는 약 4.0 내지 11.0, 약 5.0 내지 10.0, 약 5.5 내지 9.0, 약 6.0 내지 8.0, 약 6.0 내지 7.0, 약 6.5 내지 7.5, 약 6.5 내지 7.0 또는 약 6.0 내지 7.5이다. 상기 임의의 범위 내의 임의의 수는 본 발명의 양태로서 간주된다.
하나의 양태에서, 정용여과 완충제의 pH는 약 4.0, 약 4.5, 약 5.0, 약 5.5, 약 6.0, 약 6.5, 약 7.0, 약 7.5, 약 8.0, 약 8.5, 약 9.0, 약 9.5, 약 10.0, 약 10.5 또는 약 11.0이다. 하나의 양태에서, 정용여과 완충제의 pH는 약 6.0, 약 6.5, 약 7.0, 약 7.5, 약 8.0, 약 8.5 또는 약 9.0이다. 하나의 양태에서, 정용여과 완충제의 pH는 약 6.5, 약 7.0 또는 약 7.5이다. 하나의 양태에서, 정용여과 완충제의 pH는 약 7.0이다.
하나의 양태에서, 정용여과 완충제의 농도는 약 0.01 mM 내지 100 mM, 약 0.1 mM 내지 100 mM, 약 0.5 mM 내지 100 mM, 약 1 mM 내지 100 mM, 약 2 mM 내지 100 mM, 약 3 mM 내지 100 mM, 약 4 mM 내지 100 mM, 약 5 mM 내지 100 mM, 약 6 mM 내지 100 mM, 약 7 mM 내지 100 mM, 약 8 mM 내지 100 mM, 약 9 mM 내지 100 mM, 약 10 mM 내지 100 mM, 약 11 mM 내지 100 mM, 약 12 mM 내지 100 mM, 약 13 mM 내지 100 mM, 약 14 mM 내지 100 mM, 약 15 mM 내지 100 mM, 약 16 mM 내지 100 mM, 약 17 mM 내지 100 mM, 약 18 mM 내지 100 mM, 약 19 mM 내지 100 mM, 약 20 mM 내지 100 mM, 약 25 mM 내지 100 mM, 약 30 mM 내지 100 mM, 약 35 mM 내지 100 mM, 약 40 mM 내지 100 mM, 약 45 mM 내지 100 mM, 약 50 mM 내지 100 mM, 약 55 mM 내지 100 mM, 약 60 mM 내지 100 mM, 약 65 mM 내지 100 mM, 약 70 mM 내지 100 mM, 약 75 mM 내지 100 mM, 약 80 mM 내지 100 mM, 약 85 mM 내지 100 mM, 약 90 mM 내지 100 mM 또는 약 95 mM 내지 100 mM이다.
하나의 양태에서, 정용여과 완충제의 농도는 약 0.01 mM 내지 50 mM, 약 0.1 mM 내지 50 mM, 약 0.5 mM 내지 50 mM, 약 1 mM 내지 50 mM, 약 2 mM 내지 50 mM, 약 3 mM 내지 50 mM, 약 4 mM 내지 50 mM, 약 5 mM 내지 50 mM, 약 6 mM 내지 50 mM, 약 7 mM 내지 50 mM, 약 8 mM 내지 50 mM, 약 9 mM 내지 50 mM, 약 10 mM 내지 50 mM, 약 11 mM 내지 50 mM, 약 12 mM 내지 50 mM, 약 13 mM 내지 50 mM, 약 14 mM 내지 50 mM, 약 15 mM 내지 50 mM, 약 16 mM 내지 50 mM, 약 17 mM 내지 50 mM, 약 18 mM 내지 50 mM, 약 19 mM 내지 50 mM, 약 20 mM 내지 50 mM, 약 25 mM 내지 50 mM, 약 30 mM 내지 50 mM, 약 35 mM 내지 50 mM, 약 40 mM 내지 50 mM 또는 약 45 mM 내지 50 mM이다.
하나의 양태에서, 정용여과 완충제의 농도는 약 0.01 mM 내지 25 mM, 약 0.1 mM 내지 25 mM, 약 0.5 mM 내지 25 mM, 약 1 mM 내지 25 mM, 약 2 mM 내지 25 mM, 약 3 mM 내지 25 mM, 약 4 mM 내지 25 mM, 약 5 mM 내지 25 mM, 약 6 mM 내지 25 mM, 약 7 mM 내지 25 mM, 약 8 mM 내지 25 mM, 약 9 mM 내지 25 mM, 약 10 mM 내지 25 mM, 약 11 mM 내지 25 mM, 약 12 mM 내지 25 mM, 약 13 mM 내지 25 mM, 약 14 mM 내지 25 mM, 약 15 mM 내지 25 mM, 약 16 mM 내지 25 mM, 약 17 mM 내지 25 mM, 약 18 mM 내지 25 mM, 약 19 mM 내지 25 mM 또는 약 20 mM 내지 25 mM이다.
하나의 양태에서, 정용여과 완충제의 농도는 약 0.01 mM 내지 15 mM, 약 0.1 mM 내지 15 mM, 약 0.5 mM 내지 15 mM, 약 1 mM 내지 15 mM, 약 2 mM 내지 15 mM, 약 3 mM 내지 15 mM, 약 4 mM 내지 15 mM, 약 5 mM 내지 15 mM, 약 6 mM 내지 15 mM, 약 7 mM 내지 15 mM, 약 8 mM 내지 15 mM, 약 9 mM 내지 15 mM, 약 10 mM 내지 15 mM, 약 11 mM 내지 15 mM, 약 12 mM 내지 15 mM, 약 13 mM 내지 15 mM 또는 약 14 mM 내지 15 mM이다.
하나의 양태에서, 정용여과 완충제의 농도는 약 0.01 mM 내지 10 mM, 약 0.1 mM 내지 10 mM, 약 0.5 mM 내지 10 mM, 약 1 mM 내지 10 mM, 약 2 mM 내지 10 mM, 약 3 mM 내지 10 mM, 약 4 mM 내지 10 mM, 약 5 mM 내지 10 mM, 약 6 mM 내지 10 mM, 약 7 mM 내지 10 mM, 약 8 mM 내지 10 mM 또는 약 9 mM 내지 10 mM이다.
상기 임의의 범위 내의 임의의 수는 본 발명의 양태로서 간주된다.
하나의 양태에서, 정용여과 완충제의 농도는 약 0.01 mM, 약 0.05 mM, 약 0.1 mM, 약 0.2 mM, 약 0.3 mM, 약 0.4 mM, 약 0.5 mM, 약 0.6 mM, 약 0.7 mM, 약 0.8 mM, 약 0.9 mM, 약 1 mM, 약 2 mM, 약 3 mM, 약 4 mM, 약 5 mM, 약 6 mM, 약 7 mM, 약 8 mM, 약 9 mM, 약 10 mM, 약 11 mM, 약 12 mM, 약 13 mM, 약 14 mM, 약 15 mM, 약 16 mM, 약 17 mM, 약 18 mM, 약 19 mM, 약 20 mM, 약 25 mM, 약 30 mM, 약 35 mM, 약 40 mM, 약 45 mM, 약 50 mM, 약 55 mM, 약 60 mM, 약 65 mM, 약 70 mM, 약 75 mM, 약 80 mM, 약 85 mM, 약 90 mM, 약 95 또는 약 100 mM이다.
하나의 양태에서, 정용여과 완충제의 농도는 약 0.1 mM, 약 0.2 mM, 약 1 mM, 약 5 mM, 약 10 mM, 약 15 mM, 약 20 mM, 약 30 mM, 약 40 mM, 또는 약 50 mM이다.
하나의 양태에서, 정용여과 완충제의 농도는 약 10 mM이다.
하나의 양태에서, 대체 용액은 킬레이트제를 포함한다. 하나의 양태에서, 대체 용액은 명반 킬레이트제를 포함한다. 일부 양태에서, 킬레이트제는 에틸렌다이아민테트라이세테이트(EDTA), N-(2-하이드록시에틸)에틸렌다이아민-N,N',N'-트라이아세트산(EDTA-OH), 하이드록시 에틸렌다이아민 트라이아세트산(HEDTA), 에틸렌글리콜-비스(2-아미노에틸에터)-N,N,N',N'-테트라아세트산(EGTA), 1,2-사이클로헥산다이아민-N,N,N',N'-테트라아세트산(CyDTA), 다이에틸렌트라이아민-N,N,N',N",N"-펜타아세트산(DTPA), 1,3-다이아미노프로판-2-올-N,N,N',N'-테트라아세트산(DPTA-OH), 에틸렌다이아민-N,N'-비스(2-하이드록시페닐아세트산)(EDDHA), 에틸렌다이아민-N,N'-다이프로피온산 다이하이드로클로라이드(EDDP), 에틸렌다이아민테트라키스(메틸렌설폰산)(EDTPO), 니트릴로트리스(메틸렌포스폰산)(NTPO), 이미노다이아세트산(IDA), 하이드록시이미노다이아세트산(HIDA), 니트릴로트라이아세트산(NTP), 트라이에틸렌테트라민헥사아세트산(TTHA), 다이머캅토숙신산(DMSA), 2,3-다이머캅토-1-프로판설폰산(DMPS), 알파리포산(ALA), 니트릴로트라이아세트산(NTA), 티아민테트라하이드로퓨르퓨르일다이설파이드(TTFD), 다이머캅롤, 페니실아민, 데페록사민(DFOA), 데페라시록스, 포스포네이트, 시트르산의 염(시트레이트) 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 양태에서, 킬레이트제는 에틸렌다이아민테트라이세테이트(EDTA), N-(2-하이드록시에틸)에틸렌다이아민-N,N',N'-트라이아세트산(EDTA-OH), 하이드록시 에틸렌다이아민 트라이아세트산(HEDTA), 에틸렌글리콜-비스(2-아미노에틸에터)-N,N,N',N'-테트라아세트산(EGTA), 1,2-사이클로헥산다이아민-N,N,N',N'-테트라아세트산(CyDTA), 다이에틸렌트라이아민-N,N,N',N",N"-펜타아세트산(DTPA), 1,3-다이아미노프로판-2-올-N,N,N',N'-테트라아세트산(DPTA-OH), 에틸렌다이아민-N,N'-비스(2-하이드록시페닐아세트산)(EDDHA), 시트르산의 염(시트레이트) 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 양태에서, 킬레이트제는 에틸렌다이아민테트라이세테이트(EDTA)이다.
일부 양태에서, 킬레이트제는 시트르산의 염(시트레이트)이다. 일부 양태에서, 킬레이트제는 나트륨 시트레이트이다.
일반적으로, 킬레이트제는 1 내지 500 mM의 농도로 사용된다. 하나의 양태에서, 대체 용액 중 킬레이트제의 농도는 2 내지 400 mM이다. 하나의 양태에서, 대체 용액 중 킬레이트제의 농도는 10 내지 400 mM이다. 하나의 양태에서, 대체 용액 중 킬레이트제의 농도는 10 내지 200 mM이다. 하나의 양태에서, 대체 용액 중 킬레이트제의 농도는 10 내지 100 mM이다. 하나의 양태에서, 대체 용액 중 킬레이트제의 농도는 10 내지 50 mM이다. 하나의 양태에서, 대체 용액 중 킬레이트제의 농도는 10 내지 30 mM이다.
하나의 양태에서, 대체 용액 중 킬레이트제의 농도는 약 0.01 mM, 약 0.05 mM, 약 0.1 mM, 약 0.2 mM, 약 0.3 mM, 약 0.4 mM, 약 0.5 mM, 약 0.6 mM, 약 0.7 mM, 약 0.8 mM, 약 0.9 mM, 약 1 mM, 약 2 mM, 약 3 mM, 약 4 mM, 약 5 mM, 약 6 mM, 약 7 mM, 약 8 mM, 약 9 mM, 약 10 mM, 약 11 mM, 약 12 mM, 약 13 mM, 약 14 mM, 약 15 mM, 약 16 mM, 약 17 mM, 약 18 mM, 약 19 mM, 약 20 mM, 약 21 mM, 약 22 mM, 약 23 mM, 약 24 mM, 약 25 mM, 약 26 mM, 약 27 mM, 약 28 mM, 약 29 mM, 약 30 mM, 약 31 mM, 약 32 mM, 약 33 mM, 약 34 mM, 약 35 mM, 약 36 mM, 약 37 mM, 약 38 mM, 약 39 mM, 약 40 mM, 약 45 mM, 약 50 mM, 약 55 mM, 약 60 mM, 약 65 mM, 약 70 mM, 약 75 mM, 약 80 mM, 약 85 mM, 약 90 mM, 약 95 또는 약 100 mM이다.
하나의 양태에서, 대체 용액 중 킬레이트제의 농도는 약 5 mM, 약 10 mM, 약 15 mM, 약 20 mM, 약 25 mM, 약 30 mM, 약 35 mM, 약 40 mM, 약 45 mM, 약 50 mM, 약 55 mM, 약 60 mM, 약 65 mM, 약 70 mM, 약 75 mM, 약 80 mM, 약 85 mM, 약 90 mM, 약 95 mM 또는 약 100 mM이다.
하나의 양태에서, 대체 용액 중 킬레이트제의 농도는 약 15 mM, 약 20 mM, 약 25 mM, 약 30 mM, 약 35 mM, 약 40 mM, 약 45 mM 또는 약 50 mM이다.
하나의 양태에서, 정용여과 완충 용액은 염을 포함한다. 일부 양태에서, 염은 마그네슘 클로라이드, 칼륨 클로라이드, 나트륨 클로라이드 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 하나의 특정 양태에서, 염은 나트륨 클로라이드이다. 하나의 양태에서, 정용여과 완충 용액은 나트륨 클로라이드를 약 1, 약 5, 약 10, 약 15, 약 20, 약 25, 약 30, 약 35, 약 40, 약 45, 약 50, 약 55, 약 60, 약 65, 약 70, 약 80, 약 90, 약 100, 약 110, 약 120, 약 130, 약 140, 약 150, 약 160, 약 170, 약 180, 약 190, 약 200, 약 250, 약 300, 약 350, 약 400, 약 450 또는 약 500 mM로 포함한다. 하나의 특정 양태에서, 정용여과 완충 용액은 나트륨 클로라이드를 약 1, 약 5, 약 10, 약 15, 약 20, 약 25, 약 30, 약 35, 약 40, 약 45, 약 50, 약 55, 약 60, 약 65, 약 70, 약 80, 약 90, 약 100, 약 110, 약 120, 약 130, 약 140, 약 150, 약 160, 약 170, 약 180, 약 190, 약 200, 약 250 또는 약 300 mM로 포함한다.
본 발명의 하나의 양태에서, 정용여과 부피(diavolum)는 적어도 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 또는 50이다. 본 발명의 하나의 양태에서, 정용여과 부피는 약 1, 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 약 10, 약 11, 약 12, 약 13, 약 14, 약 15, 약 16, 약 17, 약 18, 약 19, 약 20, 약 21, 약 22, 약 23, 약 24, 약 25, 약 26, 약 27, 약 28, 약 29, 약 30, 약 31, 약 32, 약 33, 약 34, 약 35, 약 36, 약 37, 약 38, 약 39, 약 40, 약 41, 약 42, 약 43, 약 44, 약 45, 약 46, 약 47, 약 48, 약 49, 약 50, 약 55, 약 60, 약 65, 약 70, 약 75, 약 80, 약 85, 약 90, 약 95 또는 약 100이다. 본 발명의 하나의 양태에서, 정용여과 부피는 약 5, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 약 10, 약 11, 약 12, 약 13, 약 14 또는 약 15이다.
본 발명의 하나의 양태에서, 한외여과 및 정용여과 단계는 약 20℃ 내지 약 90℃의 온도에서 수행된다. 하나의 양태에서, 한외여과 및 정용여과 단계는 약 35℃ 내지 약 80℃의 온도, 약 40℃ 내지 약 70℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 65℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 60℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 55℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 55℃ 또는 약 45℃ 내지 약 55℃의 온도의 온도에서 수행된다.
상기 임의의 범위 내의 임의의 수는 본 발명의 양태로서 간주된다.
하나의 양태에서, 한외여과 및 정용여과 단계는 약 20℃, 약 21℃, 약 22℃, 약 23℃, 약 24℃, 약 25℃, 약 26℃, 약 27℃, 약 28℃, 약 29℃, 약 30℃, 약 31℃, 약 32℃, 약 33℃, 약 34℃, 약 35℃, 약 36℃, 약 37℃, 약 38℃, 약 39℃, 약 40℃, 약 41℃, 약 42℃, 약 43℃, 약 44℃, 약 45℃, 약 46℃, 약 47℃, 약 48℃, 약 49℃, 약 50℃, 약 51℃, 약 52℃, 약 53℃, 약 54℃, 약 55℃, 약 56℃, 약 57℃, 약 58℃, 약 59℃, 약 60℃, 약 61℃, 약 62℃, 약 63℃, 약 64℃, 약 65℃, 약 66℃, 약 67℃, 약 68℃, 약 69℃, 약 70℃, 약 71℃, 약 72℃, 약 73℃, 약 74℃, 약 75℃, 약 76℃, 약 77℃, 약 78℃, 약 79℃ 또는 약 80℃의 온도에서 수행된다. 하나의 양태에서, 한외여과 및 정용여과 단계는 약 50℃의 온도에서 수행된다.
본 발명의 하나의 양태에서, 정용여과 단계는 약 20℃ 내지 약 90℃의 온도에서 수행된다. 하나의 양태에서, 정용여과 단계는 약 35℃ 내지 약 80℃의 온도, 약 40℃ 내지 약 70℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 65℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 60℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 55℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 55℃ 또는 약 45℃ 내지 약 55℃의 온도의 온도에서 수행된다.
상기 임의의 범위 내의 임의의 수는 본 발명의 양태로서 간주된다.
하나의 양태에서, 정용여과 단계는 약 20℃, 약 21℃, 약 22℃, 약 23℃, 약 24℃, 약 25℃, 약 26℃, 약 27℃, 약 28℃, 약 29℃, 약 30℃, 약 31℃, 약 32℃, 약 33℃, 약 34℃, 약 35℃, 약 36℃, 약 37℃, 약 38℃, 약 39℃, 약 40℃, 약 41℃, 약 42℃, 약 43℃, 약 44℃, 약 45℃, 약 46℃, 약 47℃, 약 48℃, 약 49℃, 약 50℃, 약 51℃, 약 52℃, 약 53℃, 약 54℃, 약 55℃, 약 56℃, 약 57℃, 약 58℃, 약 59℃, 약 60℃, 약 61℃, 약 62℃, 약 63℃, 약 64℃, 약 65℃, 약 66℃, 약 67℃, 약 68℃, 약 69℃, 약 70℃, 약 71℃, 약 72℃, 약 73℃, 약 74℃, 약 75℃, 약 76℃, 약 77℃, 약 78℃, 약 79℃ 또는 약 80℃의 온도에서 수행된다. 하나의 양태에서, 정용여과 단계는 약 50℃의 온도에서 수행된다.
본 발명의 하나의 양태에서, 한외여과 단계는 약 20℃ 내지 약 90℃의 온도에서 수행된다. 하나의 양태에서, 한외여과 단계는 약 35℃ 내지 약 80℃의 온도, 약 40℃ 내지 약 70℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 65℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 60℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 55℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 55℃ 또는 약 45℃ 내지 약 55℃의 온도의 온도에서 수행된다. 상기 임의의 범위 내의 임의의 수는 본 발명의 양태로서 간주된다.
하나의 양태에서, 한외여과 단계는 약 20℃, 약 21℃, 약 22℃, 약 23℃, 약 24℃, 약 25℃, 약 26℃, 약 27℃, 약 28℃, 약 29℃, 약 30℃, 약 31℃, 약 32℃, 약 33℃, 약 34℃, 약 35℃, 약 36℃, 약 37℃, 약 38℃, 약 39℃, 약 40℃, 약 41℃, 약 42℃, 약 43℃, 약 44℃, 약 45℃, 약 46℃, 약 47℃, 약 48℃, 약 49℃, 약 50℃, 약 51℃, 약 52℃, 약 53℃, 약 54℃, 약 55℃, 약 56℃, 약 57℃, 약 58℃, 약 59℃, 약 60℃, 약 61℃, 약 62℃, 약 63℃, 약 64℃, 약 65℃, 약 66℃, 약 67℃, 약 68℃, 약 69℃, 약 70℃, 약 71℃, 약 72℃, 약 73℃, 약 74℃, 약 75℃, 약 76℃, 약 77℃, 약 78℃, 약 79℃ 또는 약 80℃의 온도에서 수행된다. 하나의 양태에서, 한외여과 단계는 약 50℃의 온도에서 수행된다.
1.7. 활성탄 여과
용액이 상기 1.2 부분의 응집 단계에 의해 처리된 후, 다당류-함유 용액은 활성탄 여과 단계에 의해 임의적으로 추가 청징될 수 있다.
하나의 양태에서, 1.3 부분의 고체/액체 분리 단계에 의해 추가 처리된 1.3 부분의 용액(예컨대 상청액)은 활성탄 여과 단계에 의해 추가 청징된다. 하나의 양태에서, 상기 1.4 부분의 임의의 방법에 의하고/거나 상기 1.5 부분의 여과 단계에 의해 추가 여과된 용액은 활성탄 여과 단계에 의해 추가 청징된다. 하나의 양태에서, 상기 1.6 부분의 한외여과 및/또는 정용여과 단계에 의해 추가 청징된 용액은 활성탄 여과 단계에 의해 추가 청징된다.
활성탄 여과는 숙주 세포 불순물, 예컨대 단백질 및 핵산, 및 착색된 불순물이 추가로 제거되게 한다(WO 2008/118752).
하나의 양태에서, 활성탄(활성 차콜(charcoal)로도 지칭됨)은 대부분의 단백질 및 핵산 오염물을 흡착하기에 충분한 양으로 용액에 첨가된 후, 상기 오염물이 활성탄에 흡착된 후 제거된다. 하나의 양태에서, 활성탄은 약 0.1 내지 20%(중량 부피), 1 내지 15%(중량 부피), 1 내지 10%(중량 부피), 2 내지 10%(중량 부피), 3 내지 10%(중량 부피), 4 내지 10%(중량 부피), 5 내지 10%(중량 부피), 1 내지 5%(중량 부피) 또는 2 내지 5%(중량 부피)의 양으로 첨가된다. 이어서, 혼합물은 교반되어 방치된다. 하나의 양태에서, 혼합물은 5, 10, 15, 20, 30, 45, 60, 90, 120, 180, 240분 또는 그 이상 동안 방치된다. 이어서, 활성탄은 제거된다. 활성탄은 예컨대 원심분리 또는 여과에 의해 제거될 수 있다.
바람직한 양태에서, 용액은 매트릭스 중 부동화된 활성탄을 통해 여과된다. 매트릭스는 용액에 대해 투과성인 임의의 다공성 필터 매질일 수 있다. 매트릭스는 지지 물질 및/또는 결합제 물질을 포함할 수 있다. 지지 물질은 합성 중합체 또는 천연 유래 중합체일 수 있다. 적합한 합성 중합체는 폴리스티렌, 폴리아크릴아미드 및 폴리메틸메트아크릴레이트를 포함할 수 있고, 천연 유래 중합체는 셀룰로스, 다당류, 덱스트란 및 아가로스를 포함할 수 있다. 전형적으로, 중합체 지지 물질은 역학적 강성을 제공하는 섬유 네트워크 형태이다. 매트릭스는 막 시트 형태일 수 있다. 하나의 양태에서, 매트릭스 중 부동화된 활성탄은 유동-통과 탄소 카트리지 형태이다. 카트리지는 매트릭스 중 부동화된 분말 활성탄을 함유하는 자체-함유 일체이고 막 시트의 형태로 제조된다. 막 시트는 플라스틱 투과성 지지체에 포획되어 디스크를 형성할 수 있다.
다르게는, 막 시트는 나선형으로 꼬일 수 있다. 필터 표면적을 증가시키기 위해, 몇몇 디스크는 서로 적층될 수 있다. 특히, 서로 적층된 디스크는 필터로부터 탄소-처리된 샘플을 채집 및 제거하기 위한 중심 코어 파이프를 가진다. 적층된 디스크의 형태는 렌즈형일 수 있다.
탄소 필터에서, 활성탄은 상이한 원료, 예컨대 이탄, 갈탄, 목재 또는 코코넛 껍질로부터 유래할 수 있다.
당업계에 공지되어 있는 임의의 방법, 예컨대 증기 또는 화학 처리가 탄소를 활성화시키는데 사용될 수 있다(예컨대 목재-기반 인산-활성탄).
본 발명에서, 매트릭스에 부동화된 활성탄은 하우징(housing) 내에 위치되어 독립적인 필터 단위를 형성할 수 있다. 각각의 필터 단위는 정제되는 용액을 위한 이 자체의 입구부 및 출구부를 가진다. 본 발명에 사용가능한 필터 단위의 예는 쿠노 인코포레이티드(Cuno Inc.)(미국 코네티컷주 메리덴) 또는 팔 코포레이셔(Pall Corporation)(미국 오레건주 이스트 힐)로부터의 탄소 카트리지이다. 특히, 쿠노(CUNO) 제타탄소 필터가 본 발명에 적합하다. 이러한 탄소 필터는 활성탄 분말이 포획되고 그 자리에서 수지-결합되는 셀룰로스 매트릭스를 포함한다.
하나의 양태에서, 상기 개시된 활성화 탄소 필터는 약 0.01 내지 100 μm, 약 0.05 내지 100 μm, 약 0.1 내지 100 μm, 약 0.2 내지 100 μm, 약 0.3 내지 100 μm, 약 0.4 내지 100 μm, 약 0.5 내지 100 μm, 약 0.6 내지 100 μm, 약 0.7 내지 100 μm, 약 0.8 내지 100 μm, 약 0.9 내지 100 μm, 약 1 내지 100 μm, 약 1.25 내지 100 μm, 약 1.5 내지 100 μm, 약 1.75 내지 100 μm, 약 2 내지 100 μm, 약 3 내지 100 μm, 약 4 내지 100 μm, 약 5 내지 100 μm, 약 6 내지 100 μm, 약 7 내지 100 μm, 약 8 내지 100 μm, 약 9 내지 100 μm, 약 10 내지 100 μm, 약 15 내지 100 μm, 약 20 내지 100 μm, 약 25 내지 100 μm, 약 30 내지 100 μm, 약 40 내지 100 μm, 약 50 내지 100 μm 또는 약 75 내지 100 μm의 공칭 μm 등급을 가진다.
하나의 양태에서, 상기 개시된 활성화 탄소 필터는 약 0.01 내지 50 μm, 약 0.05 내지 50 μm, 약 0.1 내지 50 μm, 약 0.2 내지 50 μm, 약 0.3 내지 50 μm, 약 0.4 내지 50 μm, 약 0.5 내지 50 μm, 약 0.6 내지 50 μm, 약 0.7 내지 50 μm, 약 0.8 내지 50 μm, 약 0.9 내지 50 μm, 약 1 내지 50 μm, 약 1.25 내지 50 μm, 약 1.5 내지 50 μm, 약 1.75 내지 50 μm, 약 2 내지 50 μm, 약 3 내지 50 μm, 약 4 내지 50 μm, 약 5 내지 50 μm, 약 6 내지 50 μm, 약 7 내지 50 μm, 약 8 내지 50 μm, 약 9 내지 50 μm, 약 10 내지 50 μm, 약 15 내지 50 μm, 약 20 내지 50 μm, 약 25 내지 50 μm, 약 30 내지 50 μm, 약 40 내지 50 μm 또는 약 50 내지 50 μm의 공칭 μm 등급을 가진다.
하나의 양태에서, 상기 개시된 활성화 탄소 필터는 약 0.01 내지 25 μm, 약 0.05 내지 25 μm, 약 0.1 내지 25 μm, 약 0.2 내지 25 μm, 약 0.3 내지 25 μm, 약 0.4 내지 25 μm, 약 0.5 내지 25 μm, 약 0.6 내지 25 μm, 약 0.7 내지 25 μm, 약 0.8 내지 25 μm, 약 0.9 내지 25 μm, 약 1 내지 25 μm, 약 1.25 내지 25 μm, 약 1.5 내지 25 μm, 약 1.75 내지 25 μm, 약 2 내지 25 μm, 약 3 내지 25 μm, 약 4 내지 25 μm, 약 5 내지 25 μm, 약 6 내지 25 μm, 약 7 내지 25 μm, 약 8 내지 25 μm, 약 9 내지 25 μm, 약 10 내지 25 μm, 약 15 내지 25 μm 또는 약 20 내지 25 μm의 공칭 μm 등급을 가진다.
하나의 양태에서, 상기 개시된 활성화 탄소 필터는 약 0.01 내지 10 μm, 약 0.05 내지 10 μm, 약 0.1 내지 10 μm, 약 0.2 내지 10 μm, 약 0.3 내지 10 μm, 약 0.4 내지 10 μm, 약 0.5 내지 10 μm, 약 0.6 내지 10 μm, 약 0.7 내지 10 μm, 약 0.8 내지 10 μm, 약 0.9 내지 10 μm, 약 1 내지 10 μm, 약 1.25 내지 10 μm, 약 1.5 내지 10 μm, 약 1.75 내지 10 μm, 약 2 내지 10 μm, 약 3 내지 10 μm, 약 4 내지 10 μm, 약 5 내지 10 μm, 약 6 내지 10 μm, 약 7 내지 10 μm, 약 8 내지 10 μm 또는 약 9 내지 10 μm의 공칭 μm 등급을 가진다.
하나의 양태에서, 상기 개시된 활성화 탄소 필터는 약 0.01 내지 8 μm, 약 0.05 내지 8 μm, 약 0.1 내지 8 μm, 약 0.2 내지 8 μm, 약 0.3 내지 8 μm, 약 0.4 내지 8 μm, 약 0.5 내지 8 μm, 약 0.6 내지 8 μm, 약 0.7 내지 8 μm, 약 0.8 내지 8 μm, 약 0.9 내지 8 μm, 약 1 내지 8 μm, 약 1.25 내지 8 μm, 약 1.5 내지 8 μm, 약 1.75 내지 8 μm, 약 2 내지 8 μm, 약 3 내지 8 μm, 약 4 내지 8 μm, 약 5 내지 8 μm, 약 6 내지 8 μm 또는 약 7 내지 8 μm의 공칭 μm 등급을 가진다.
하나의 양태에서, 상기 개시된 활성화 탄소 필터는 약 0.01 내지 5 μm, 약 0.05 내지 5 μm, 약 0.1 내지 5 μm, 약 0.2 내지 5 μm, 약 0.3 내지 5 μm, 약 0.4 내지 5 μm, 약 0.5 내지 5 μm, 약 0.6 내지 5 μm, 약 0.7 내지 5 μm, 약 0.8 내지 5 μm, 약 0.9 내지 5 μm, 약 1 내지 5 μm, 약 1.25 내지 5 μm, 약 1.5 내지 5 μm, 약 1.75 내지 5 μm, 약 2 내지 5 μm, 약 3 내지 5 μm 또는 약 4 내지 5 μm의 공칭 μm 등급을 가진다.
하나의 양태에서, 상기 개시된 활성화 탄소 필터는 약 0.01 내지 2 μm, 약 0.05 내지 2 μm, 약 0.1 내지 2 μm, 약 0.2 내지 2 μm, 약 0.3 내지 2 μm, 약 0.4 내지 2 μm, 약 0.5 내지 2 μm, 약 0.6 내지 2 μm, 약 0.7 내지 2 μm, 약 0.8 내지 2 μm, 약 0.9 내지 2 μm, 약 1 내지 2 μm, 약 1.25 내지 2 μm, 약 1.5 내지 2 μm, 약 1.75 내지 2 μm, 약 2 내지 2 μm, 약 3 내지 2 μm 또는 약 4 내지 2 μm의 공칭 μm 등급을 가진다.
하나의 양태에서, 상기 개시된 활성화 탄소 필터는 약 0.01 내지 1 μm, 약 0.05 내지 1 μm, 약 0.1 내지 1 μm, 약 0.2 내지 1 μm, 약 0.3 내지 1 μm, 약 0.4 내지 1 μm, 약 0.5 내지 1 μm, 약 0.6 내지 1 μm, 약 0.7 내지 1 μm, 약 0.8 내지 1 μm 또는 약 0.9 내지 1 μm의 공칭 μm 등급을 가진다.
하나의 양태에서, 상기 개시된 활성화 탄소 필터는 약 0.05 내지 50 μm, 0.1 내지 25 μm 0.2 내지 10, μm 0.1 내지 10 μm, 0.2 내지 5 μm 또는 0.25 내지 1 μm의 공칭 μm 등급을 가진다.
상기 임의의 범위 내의 임의의 수는 본 발명의 양태로서 간주된다.
하나의 양태에서, 활성탄 여과 단계는 1 내지 500 LMH, 10 내지 500 LMH, 15 내지 500 LMH, 20 내지 500 LMH, 25 내지 500 LMH, 30 내지 500 LMH, 40 내지 500 LMH, 50 내지 500 LMH, 100 내지 500 LMH, 125 내지 500 LMH, 150 내지 500 LMH, 200 내지 500 LMH, 250 내지 500 LMH, 300 내지 500 LMH 또는 400 내지 500 LMH의 공급 속도로 수행된다.
하나의 양태에서, 활성탄 여과 단계는 1 내지 200 LMH, 10 내지 200 LMH, 15 내지 200 LMH, 20 내지 200 LMH, 25 내지 200 LMH, 30 내지 200 LMH, 40 내지 200 LMH, 50 내지 200 LMH, 100 내지 200 LMH, 125 내지 200 LMH 또는 150 내지 200 LMH의 공급 속도로 수행된다.
하나의 양태에서, 활성탄 여과 단계는 1 내지 150 LMH, 10 내지 150 LMH, 15 내지 150 LMH, 20 내지 150 LMH, 25 내지 150 LMH, 30 내지 150 LMH, 40 내지 150 LMH, 50 내지 150 LMH, 100 내지 150 LMH 또는 125 내지 150 LMH의 공급 속도로 수행된다.
하나의 양태에서, 활성탄 여과 단계는 1 내지 100 LMH, 10 내지 100 LMH, 15 내지 100 LMH, 20 내지 100 LMH, 25 내지 100 LMH, 30 내지 100 LMH, 40 내지 100 LMH 또는 50 내지 100 LMH의 공급 속도로 수행된다.
하나의 양태에서, 활성탄 여과 단계는 1 내지 75 LMH, 5 내지 75 LMH, 10 내지 75 LMH, 15 내지 75 LMH, 20 내지 75 LMH, 25 내지 75 LMH, 30 내지 75 LMH, 35 내지 75 LMH, 40 내지 75 LMH, 45 내지 75 LMH, 50 내지 75 LMH, 55 내지 75 LMH, 60 내지 75 LMH, 65 내지 75 LMH 또는 70 내지 75 LMH의 공급 속도로 수행된다.
하나의 양태에서, 활성탄 여과 단계는 1 내지 50 LMH, 5 내지 50 LMH, 7 내지 50 LMH, 10 내지 50 LMH, 15 내지 50 LMH, 20 내지 50 LMH, 25 내지 50 LMH, 30 내지 50 LMH, 35 내지 50 LMH, 40 내지 50 LMH 또는 45 내지 50 LMH의 공급 속도로 수행된다,
상기 임의의 범위 내의 전체 정수는 본 발명의 양태로서 간주된다.
하나의 양태에서, 활성탄 여과 단계는 약 1, 약 2, 약 5, 약 10, 약 15, 약 20, 약 25, 약 30, 약 35, 약 40, 약 45, 약 50, 약 55, 약 60, 약 65, 약 70, 약 75, 약 80, 약 85, 약 90, 약 95, 약 100, 약 110, 약 120, 약 130, 약 140, 약 150, 약 160, 약 170, 약 180, 약 190, 약 200, 약 225, 약 250, 약 300, 약 350, 약 400, 약 450, 약 500, 약 550, 약 600, 약 700, 약 800, 약 900, 약 950 또는 약 1000 LMH의 공급 속도로 수행된다.
하나의 양태에서, 용액은 활성탄 필터에 의해 처리되되, 상기 필터는 5 내지 1000 L/m2, 10 내지 750 L/m2, 15 내지 500 L/m2, 20 내지 400 L/m2, 25 내지 300 L/m2, 30 내지 250 L/m2, 40 내지 200 L/m2 또는 30 내지 100 L/m2의 필터 용량을 가진다.
상기 임의의 범위 내의 임의의 수는 본 발명의 양태로서 간주된다.
하나의 양태에서, 용액은 활성탄 필터에 의해 처리되되, 상기 필터는 약 5, 약 10, 약 15, 약 20, 약 25, 약 30, 약 35, 약 40, 약 45, 약 50, 약 55, 약 60, 약 65, 약 70, 약 75, 약 80, 약 85, 약 90, 약 100, 약 125, 약 150, 약 175, 약 200, 약 225, 약 250, 약 275, 약 300, 약 400, 약 500, 약 600, 약 700, 약 800, 약 900, 또는 약 1000 L/m2의 필터 용량을 가진다.
최초 활성탄 여과 단계 후, 오염물 함량이 고정 한계값을 초과하는 경우, 상기 단계는 반복될 수 있다. 본 발명의 하나의 양태에서, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10회의 활성탄 여과 단계가 수행된다. 본 발명의 하나의 양태에서, 1, 2 또는 3회의 활성탄 여과 단계가 수행된다. 본 발명의 하나의 양태에서, 1 또는 2회의 활성탄 여과 단계가 수행된다.
하나의 양태에서, 용액은 일련의 활성탄 필터에 의해 처리된다. 하나의 양태에서, 용액은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 일련의 활성탄 필터로 처리된다. 하나의 양태에서, 용액은 2, 3, 4 또는 5개의 일련의 활성탄 필터로 처리된다. 하나의 양태에서, 용액은 2개의 일련의 활성탄 필터로 처리된다. 하나의 양태에서, 용액은 3개의 일련의 활성탄 필터로 처리된다. 하나의 양태에서, 용액은 4개의 일련의 활성탄 필터로 처리된다. 하나의 양태에서, 용액은 5개의 일련의 활성탄 필터로 처리된다.
하나의 양태에서, 활성탄 여과 단계는 단일 경로 모드로 수행된다.
또다른 양태에서 활성탄 여과 단계는 재순환 모드로 수행된다. 상기 양태(재순환 모드)에서 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 또는 50 사이클의 활성탄 여과가 수행된다. 또다른 양태에서 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 사이클의 활성탄 여과가 수행된다. 하나의 양태에서, 2 또는 3 사이클의 활성탄 여과가 수행된다. 하나의 양태에서, 2 사이클의 활성탄 여과가 수행된다.
1.8. 임의적인 추가 여과
용액이 상기 1.7 부분의 활성탄 단계에 의해 처리된 후, 수득된 용액(즉 여과물)은 임의적으로 추가 여과될 수 있다. 하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과된다. 하나의 양태에서, 마이크로여과는 데드-엔드여과(수직 여과)이다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 약 0.01 내지 2 μm, 약 0.05 내지 2 μm, 약 0.1 내지 2 μm, 약 0.2 내지 2 μm, 약 0.3 내지 2 μm, 약 0.4 내지 2 μm, 약 0.45 내지 2 μm, 약 0.5 내지 2 μm, 약 0.6 내지 2 μm, 약 0.7 내지 2 μm, 약 0.8 내지 2 μm, 약 0.9 내지 2 μm, 약 1 내지 2 μm, 약 1.25 내지 2 μm, 약 1.5 내지 2 μm, 또는 약 1.75 내지 2 μm의 공칭 보유 범위를 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 약 0.01 내지 1 μm, 약 0.05 내지 1 μm, 약 0.1 내지 1 μm, 약 0.2 내지 1 μm, 약 0.3 내지 1 μm, 약 0.4 내지 1 μm, 약 0.45 내지 1 μm, 약 0.5 내지 1 μm, 약 0.6 내지 1 μm, 약 0.7 내지 1 μm, 약 0.8 내지 1 μm 또는 약 0.9 내지 1 μm의 공칭 보유 범위를 가진다.
상기 임의의 범위 내의 임의의 수는 본 발명의 양태로서 간주된다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 약 0.01, 약 0.05, 약 0.1, 약 0.2, 약 0.3, 약 0.4, 약 0.45, 약 0.5, 약 0.6, 약 0.7, 약 0.8, 약 0.9, 약 1.0, 약 1.1, 약 1.2, 약 1.3, 약 1.4, 약 1.5, 약 1.6, 약 1.7, 약 1.8, 약 1.9 또는 약 2.0 μm의 공칭 보유 등급을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 약 0.2 μm의 공칭 보유 등급을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 100 내지 6000 L/m2, 200 내지 6000 L/m2, 300 내지 6000 L/m2, 400 내지 6000 L/m2, 500 내지 6000 L/m2, 750 내지 6000 L/m2, 1000 내지 6000 L/m2, 1500 내지 6000 L/m2, 2000 내지 6000 L/m2, 3000 내지 6000 L/m2 또는 4000 내지 6000 L/m2의 필터 용량을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 100 내지 4000 L/m2, 200 내지 4000 L/m2, 300 내지 4000 L/m2, 400 내지 4000 L/m2, 500 내지 4000 L/m2, 750 내지 4000 L/m2, 1000 내지 4000 L/m2, 1500 내지 4000 L/m2, 2000 내지 4000 L/m2, 2500 내지 4000 L/m2, 3000 내지 4000 L/m2, 3000 내지 4000 L/m2 또는 3500 내지 4000 L/m2의 필터 용량을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 100 내지 3750 L/m2, 200 내지 3750 L/m2, 300 내지 3750 L/m2, 400 내지 3750 L/m2, 500 내지 3750 L/m2, 750 내지 3750 L/m2, 1000 내지 3750 L/m2, 1500 내지 3750 L/m2, 2000 내지 3750 L/m2, 2500 내지 3750 L/m2, 3000 내지 3750 L/m2, 3000 내지 3750 L/m2 또는 3500 내지 3750 L/m2의 필터 용량을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 100 내지 1250 L/m2, 200 내지 1250 L/m2, 300 내지 1250 L/m2, 400 내지 1250 L/m2, 500 내지 1250 L/m2, 750 내지 1250 L/m2 또는 1000 내지 1250 L/m2의 필터 용량을 가진다.
상기 임의의 범위 내의 임의의 수는 본 발명의 양태로서 간주된다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 약 100, 약 200, 약 300, 약 400, 약 550, 약 600, 약 700, 약 800, 약 900, 약 1000, 약 1100, 약 1200, 약 1300, 약 1400, 약 1500, 약 1600, 약 1700, 약 1800, 약 1900, 약 2000, 약 2100, 약 2200, 약 2300, 약 2400, 약 2500, 약 2600, 약 2700, 약 2800, 약 2900, 약 3000, 약 3100, 약 3200, 약 3300, 약 3400, 약 3500, 약 3600, 약 3700, 약 3800, 약 3900, 약 4000, 약 4100, 약 4200, 약 4300, 약 4400, 약 4500, 약 4600, 약 4700, 약 4800, 약 4900, 약 5000, 약 5250, 약 5500, 약 5750 또는 약 6000 L/m2의 필터 용량을 가진다.
1.9. 한외여과 /정용여과
용액이 상기 1.7 부분의 활성탄 여과 단계 및/또는 상기 1.8 부분의 추가 여과 단계로 처리된 후, 수득된 용액(즉 여과물)은 한외여과 및/또는 정용여과에 의해 임의적으로 추가 청징될 수 있다.
본 발명의 하나의 양태에서, 용액(예컨대 상기 1.7 또는 1.8 부분에서 수득됨)은 한외여과에 의해 처리된다.
하나의 양태에서, 용액은 한외여과에 의해 처리되고 막의 MWCO는 약 5 kDa 내지 1000 kDa이다. 하나의 양태에서, 막의 MWCO는 약 10 kDa 내지 750 kDa이다. 하나의 양태에서, 막의 MWCO는 약 10 kDa 내지 500 kDa이다. 하나의 양태에서, 막의 MWCO는 약 10 kDa 내지 300 kDa이다. 하나의 양태에서, 막의 MWCO는 약 10 kDa 내지 100 kDa이다. 하나의 양태에서, 막의 MWCO는 약 10 kDa 내지 50 kDa이다. 하나의 양태에서, 막의 MWCO는 약 10 kDa 내지 30 kDa이다. 하나의 양태에서, 막의 MWCO는 약 5 kDa 내지 1000 kDa, 약 10 kDa 내지 1000 kDa 약 20 kDa 내지 1000 kDa, 약 30 kDa 내지 1000 kDa, 약 40 kDa 내지 1000 kDa, 약 50 kDa 내지 1000 kDa, 약 75 kDa 내지 1000 kDa, 약 100 kDa 내지 1000 kDa, 약 150 kDa 내지 1000 kDa, 약 200 kDa 내지 1000 kDa, 약 300 kDa 내지 1000 kDa, 약 400 kDa 내지 1000 kDa, 약 500 kDa 내지 1000 kDa 또는 약 750 kDa 내지 1000 kDa이다.
하나의 양태에서, 막의 MWCO는 약 5 kDa 내지 500 kDa, 약 10 kDa 내지 500 kDa, 약 20 kDa 내지 500 kDa, 약 30 kDa 내지 500 kDa, 약 40 kDa 내지 500 kDa, 약 50 kDa 내지 500 kDa, 약 75 kDa 내지 500 kDa, 약 100 kDa 내지 500 kDa, 약 150 kDa 내지 500 kDa, 약 200 kDa 내지 500 kDa, 약 300 kDa 내지 500 kDa 또는 약 400 kDa 내지 500 kDa이다.
하나의 양태에서, 막의 MWCO는 약 5 kDa 내지 300 kDa, 약 10 kDa 내지 300 kDa, 약 20 kDa 내지 300 kDa, 약 30 kDa 내지 300 kDa, 약 40 kDa 내지 300 kDa, 약 50 kDa 내지 300 kDa, 약 75 kDa 내지 300 kDa, 약 100 kDa 내지 300 kDa, 약 150 kDa 내지 300 kDa 또는 약 200 kDa 내지 300 kDa이다.
하나의 양태에서, 막의 MWCO는 약 5 kDa 내지 100 kDa, 약 10 kDa 내지 100 kDa, 약 20 kDa 내지 100 kDa, 약 30 kDa 내지 100 kDa, 약 40 kDa 내지 100 kDa, 약 50 kDa 내지 100 kDa 또는 약 75 kDa 내지 100 kDa이다.
하나의 양태에서, 막의 컷 오프 분자량은 약 5 kDa, 약 10 kDa, 약 20 kDa, 약 30 kDa, 약 40 kDa, 약 50 kDa, 약 60 kDa, 약 70 kDa, 약 80 kDa, 약 90 kDa, 약 100 kDa, 약 110 kDa, 약 120 kDa, 약 130 kDa, 약 140 kDa, 약 150 kDa, 약 200 kDa, 약 250 kDa, 약 300 kDa, 약 400 kDa, 약 500 kDa, 약 750 kDa 또는 약 1000 kDa이다.
하나의 양태에서, 한여여과 단계의 농축 계수는 약 1.5 내지 약 10.0이다. 하나의 양태에서, 농축 계수는 약 2.0 내지 약 8.0이다. 하나의 양태에서, 농축 계수는 약 2.0 내지 약 5.0이다.
하나의 양태에서, 농축 계수는 약 1.5, 약 2.0, 약 2.5, 약 3.0, 약 3.5, 약 4.0, 약 4.5, 약 5.0, 약 5.5, 약 6.0, 약 6.5, 약 7.0, 약 7.5, 약 8.0, 약 8.5, 약 9.0, 약 9.5 또는 약 10.0이다. 하나의 양태에서, 농축 계수는 약 2.0, 약 3.0, 약 4.0, 약 5.0, 또는 약 6.0이다.
본 발명의 하나의 양태에서, 용액(예컨대 상기 1.7 또는 1.8 부분에서 수득된 여과물)은 정용여과에 의해 처리된다. 본 발명의 하나의 양태에서, 본원에 개시된 한외여과(UF) 후 수득된 용액은 정용여과에 의해 추가 처리된다(UF/DF 처리). 정용여과(DF)는 목적하는 완충 용액(또는 단지 물) 내로 생성물을 교환하는데 사용된다. 하나의 양태에서, 정용여과는 일정 부피하에 보유된 용액의 화학적 특성을 변화시키는데 사용된다. 원치않는 입자는 막을 통과하는 한편, 공급 스트림을 이루는 나머지는 대체 용액(완충 용액, 염수 용액, 완충 염수 용액 또는 물)의 첨가를 통해 보다 더 바람직한 상태로 변화된다.
하나의 양태에서, 대체 용액은 물이다. 하나의 양태에서, 대체 용액은 물 중 염수이다. 일부 양태에서, 염은 마그네슘 클로라이드, 칼륨 클로라이드, 나트륨 클로라이드 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 하나의 특정 양태에서, 염은 나트륨 클로라이드이다. 하나의 양태에서, 대체 용액은 하나의 양태에서, 대체 용액은 약 1, 약 5, 약 10, 약 15, 약 20, 약 25, 약 30, 약 35, 약 40, 약 45, 약 50, 약 55, 약 60, 약 65, 약 70, 약 80, 약 90, 약 100, 약 110, 약 120, 약 130, 약 140, 약 150, 약 160, 약 170, 약 180, 약 190, 약 200, 약 250, 약 300, 약 350, 약 400, 약 450 또는 약 500 mM의 나트륨 클로라이드이다. 하나의 특정 양태에서, 대체 용액은 약 1, 약 5, 약 10, 약 15, 약 20, 약 25, 약 30, 약 35, 약 40, 약 45, 약 50, 약 55, 약 60, 약 65, 약 70, 약 80, 약 90, 약 100, 약 110, 약 120, 약 130, 약 140, 약 150, 약 160, 약 170, 약 180, 약 190, 약 200, 약 250 또는 약 300 mM의 나트륨 클로라이드이다. 하나의 특정 양태에서, 대체 용액은 약 25, 약 30, 약 35, 약 40, 약 45, 약 50, 약 55, 약 60, 약 65, 약 70, 약 80, 약 90 또는 약 100 mM의 나트륨 클로라이드이다.
하나의 양태에서, 대체 용액은 완충 용액이다. 하나의 양태에서, 대체 용액은 완충 용액이되, 완충제는 N-(2-아세트아미도)-아미노에탄설폰산(ACES), 아세트산의 염(아세테이트), N-(2-아세트아미도)-이미노다이아세트산(ADA), 2-아미노에탄설폰산(AES, 타우린), 암모니아, 2-아미노-2-메틸-1-프로판올(AMP), 2-아미노-2-메틸 내지 1,3-프로판다이올(AMPD), 암메다이올, N-(1,1-다이메틸-2-하이드록시에틸)-3-아미노-2-하이드록시프로판설폰산(AMPSO), N,N-비스-(2-하이드록시에틸)-2-아미노에탄설폰산(BES), 나트륨 수소 카보네이트(바이카보네이트), N,N'-비스(2-하이드록시에틸)-글리신(바이신), [비스-(2-하이드록시에틸)-이미노]-트리스-(하이드록시메틸메탄)(비스-트리스), 1,3-비스[트리스(하이드록시메틸)-메틸아미노]프로판(비스-트리스-프로판), 붕산, 다이메틸아르신산(카코딜레이트), 3-(사이클로헥실아미노)-프로판설폰산(CAPS), 3-(사이클로헥실아미노)-2-하이드록시-1-프로판설폰산(CAPSO), 나트륨 카보네이트(카보네이트), 사이클로헥실아미노에탄설폰산(CHES), 시트르산의 염(시트레이트), 3-[N-비스(하이드록시에틸)아미노]-2-하이드록시프로판설폰산(DIPSO), 포름산의 염(포르메이트), 글리신, 글리실글리신, N-(2-하이드록시에틸)-피페라진-N'-에탄설폰산(HEPES), N-(2-하이드록시에틸)-피페라진-N'-3-프로판설폰산(HEPPS, EPPS), N-(2-하이드록시에틸)-피페라진-N'-2-하이드록시프로판설폰산(HEPPSO), 이미다졸, 말산의 염(말레이트), 말레산의 염(말리에이트), 2-(N-모르폴리노)-에탄설폰산(MES), 3-(N-모르폴리노)-프로판설폰산(MOPS), 3-(N-모르폴리노)-2-하이드록시프로판설폰산(MOPSO), 인산의 염(포스페이트), 피페라진-N,N'-비스(2-에탄설폰산)(PIPES), 피페라진-N,N'-비스(2-하이드록시프로판설폰산)(POPSO), 피리딘, 숙신산의 염(숙시네이트), 3-{[트리스(하이드록시메틸)-메틸]-아미노}-프로판설폰산(TAPS), 3-[N-트리스(하이드록시메틸)-메틸아미노]-2-하이드록시프로판설폰산(TAPSO), 트라이에탄올아민(TEA), 2-[트리스(하이드록시메틸)-메틸아미노]-에탄설폰산(TES), N-[트리스(하이드록시메틸)-메틸]-글리신(트라이신) 및 트리스(하이드록시메틸)-아미노메탄(트리스)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
하나의 양태에서, 정용여과 완충제는 아세트산의 염(아세테이트), 시트르산의 염(시트레이트), 포름산의 염(포르메이트), 말산의 염(말레이트), 말레산의 염(말리에이트), 인산의 염(포스페이트) 및 숙신산의 염(숙시네이트)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 하나의 양태에서, 정용여과 완충제는 시트르산의 염(시트레이트)이다. 하나의 양태에서, 정용여과 완충제는 숙신산의 염(숙시네이트)이다. 하나의 양태에서, 정용여과 완충제는 인산의 염(포스페이트). 하나의 양태에서, 상기 염은 나트륨 염이다. 하나의 양태에서, 상기 염은 칼륨 염이다.
하나의 양태에서, 정용여과 완충제의 pH는 약 4.0 내지 11.0, 약 5.0 내지 10.0, 약 5.5 내지 9.0, 약 6.0 내지 8.0, 약 6.0 내지 7.0, 약 6.5 내지 7.5, 약 6.5 내지 7.0 또는 약 6.0 내지 7.5이다. 상기 임의의 범위 내의 임의의 수는 본 발명의 양태로서 간주된다.
하나의 양태에서, 정용여과 완충제의 pH는 약 4.0, 약 4.5, 약 5.0, 약 5.5, 약 6.0, 약 6.5, 약 7.0, 약 7.5, 약 8.0, 약 8.5, 약 9.0, 약 9.5, 약 10.0, 약 10.5 또는 약 11.0이다. 하나의 양태에서, 정용여과 완충제의 pH는 약 6.0, 약 6.5, 약 7.0, 약 7.5, 약 8.0, 약 8.5 또는 약 9.0이다. 하나의 양태에서, 정용여과 완충제의 pH는 약 6.5, 약 7.0 또는 약 7.5이다. 하나의 양태에서, 정용여과 완충제의 pH는 약 6.0. 하나의 양태에서, 정용여과 완충제의 pH는 약 6.5이다. 하나의 양태에서, 정용여과 완충제의 pH는 약 7.0이다.
하나의 양태에서, 정용여과 완충제의 농도는 약 0.01 mM 내지 100 mM, 약 0.1 mM 내지 100 mM, 약 0.5 mM 내지 100 mM, 약 1 mM 내지 100 mM, 약 2 mM 내지 100 mM, 약 3 mM 내지 100 mM, 약 4 mM 내지 100 mM, 약 5 mM 내지 100 mM, 약 6 mM 내지 100 mM, 약 7 mM 내지 100 mM, 약 8 mM 내지 100 mM, 약 9 mM 내지 100 mM, 약 10 mM 내지 100 mM, 약 11 mM 내지 100 mM, 약 12 mM 내지 100 mM, 약 13 mM 내지 100 mM, 약 14 mM 내지 100 mM, 약 15 mM 내지 100 mM, 약 16 mM 내지 100 mM, 약 17 mM 내지 100 mM, 약 18 mM 내지 100 mM, 약 19 mM 내지 100 mM, 약 20 mM 내지 100 mM, 약 25 mM 내지 100 mM, 약 30 mM 내지 100 mM, 약 35 mM 내지 100 mM, 약 40 mM 내지 100 mM, 약 45 mM 내지 100 mM, 약 50 mM 내지 100 mM, 약 55 mM 내지 100 mM, 약 60 mM 내지 100 mM, 약 65 mM 내지 100 mM, 약 70 mM 내지 100 mM, 약 75 mM 내지 100 mM, 약 80 mM 내지 100 mM, 약 85 mM 내지 100 mM, 약 90 mM 내지 100 mM 또는 약 95 mM 내지 100 mM이다.
하나의 양태에서, 정용여과 완충제의 농도는 약 0.01 mM 내지 50 mM, 약 0.1 mM 내지 50 mM, 약 0.5 mM 내지 50 mM, 약 1 mM 내지 50 mM, 약 2 mM 내지 50 mM, 약 3 mM 내지 50 mM, 약 4 mM 내지 50 mM, 약 5 mM 내지 50 mM, 약 6 mM 내지 50 mM, 약 7 mM 내지 50 mM, 약 8 mM 내지 50 mM, 약 9 mM 내지 50 mM, 약 10 mM 내지 50 mM, 약 11 mM 내지 50 mM, 약 12 mM 내지 50 mM, 약 13 mM 내지 50 mM, 약 14 mM 내지 50 mM, 약 15 mM 내지 50 mM, 약 16 mM 내지 50 mM, 약 17 mM 내지 50 mM, 약 18 mM 내지 50 mM, 약 19 mM 내지 50 mM, 약 20 mM 내지 50 mM, 약 25 mM 내지 50 mM, 약 30 mM 내지 50 mM, 약 35 mM 내지 50 mM, 약 40 mM 내지 50 mM 또는 약 45 mM 내지 50 mM이다.
하나의 양태에서, 정용여과 완충제의 농도는 약 0.01 mM 내지 25 mM, 약 0.1 mM 내지 25 mM, 약 0.5 mM 내지 25 mM, 약 1 mM 내지 25 mM, 약 2 mM 내지 25 mM, 약 3 mM 내지 25 mM, 약 4 mM 내지 25 mM, 약 5 mM 내지 25 mM, 약 6 mM 내지 25 mM, 약 7 mM 내지 25 mM, 약 8 mM 내지 25 mM, 약 9 mM 내지 25 mM, 약 10 mM 내지 25 mM, 약 11 mM 내지 25 mM, 약 12 mM 내지 25 mM, 약 13 mM 내지 25 mM, 약 14 mM 내지 25 mM, 약 15 mM 내지 25 mM, 약 16 mM 내지 25 mM, 약 17 mM 내지 25 mM, 약 18 mM 내지 25 mM, 약 19 mM 내지 25 mM 또는 약 20 mM 내지 25 mM이다.
하나의 양태에서, 정용여과 완충제의 농도는 약 0.01 mM 내지 15 mM, 약 0.1 mM 내지 15 mM, 약 0.5 mM 내지 15 mM, 약 1 mM 내지 15 mM, 약 2 mM 내지 15 mM, 약 3 mM 내지 15 mM, 약 4 mM 내지 15 mM, 약 5 mM 내지 15 mM, 약 6 mM 내지 15 mM, 약 7 mM 내지 15 mM, 약 8 mM 내지 15 mM, 약 9 mM 내지 15 mM, 약 10 mM 내지 15 mM, 약 11 mM 내지 15 mM, 약 12 mM 내지 15 mM, 약 13 mM 내지 15 mM 또는 약 14 mM 내지 15 mM이다.
하나의 양태에서, 정용여과 완충제의 농도는 약 0.01 mM 내지 10 mM, 약 0.1 mM 내지 10 mM, 약 0.5 mM 내지 10 mM, 약 1 mM 내지 10 mM, 약 2 mM 내지 10 mM, 약 3 mM 내지 10 mM, 약 4 mM 내지 10 mM, 약 5 mM 내지 10 mM, 약 6 mM 내지 10 mM, 약 7 mM 내지 10 mM, 약 8 mM 내지 10 mM 또는 약 9 mM 내지 10 mM이다.
상기 임의의 범위 내의 임의의 수는 본 발명의 양태로서 간주된다.
하나의 양태에서, 정용여과 완충제의 농도는 약 0.01 mM, 약 0.05 mM, 약 0.1 mM, 약 0.2 mM, 약 0.3 mM, 약 0.4 mM, 약 0.5 mM, 약 0.6 mM, 약 0.7 mM, 약 0.8 mM, 약 0.9 mM, 약 1 mM, 약 2 mM, 약 3 mM, 약 4 mM, 약 5 mM, 약 6 mM, 약 7 mM, 약 8 mM, 약 9 mM, 약 10 mM, 약 11 mM, 약 12 mM, 약 13 mM, 약 14 mM, 약 15 mM, 약 16 mM, 약 17 mM, 약 18 mM, 약 19 mM, 약 20 mM, 약 25 mM, 약 30 mM, 약 35 mM, 약 40 mM, 약 45 mM, 약 50 mM, 약 55 mM, 약 60 mM, 약 65 mM, 약 70 mM, 약 75 mM, 약 80 mM, 약 85 mM, 약 90 mM, 약 95 또는 약 100 mM이다.
하나의 양태에서, 정용여과 완충제의 농도는 약 0.1 mM, 약 0.2 mM, 약 1 mM, 약 5 mM, 약 10 mM, 약 15 mM, 약 20 mM, 약 25 mM, 약 30 mM, 약 40 mM, 또는 약 50 mM이다. 하나의 양태에서, 정용여과 완충제의 농도는 약 30 mM이다. 하나의 양태에서, 정용여과 완충제의 농도는 약 25 mM이다. 하나의 양태에서, 정용여과 완충제의 농도는 약 20 mM이다. 하나의 양태에서, 정용여과 완충제의 농도는 약 15 mM이다. 하나의 양태에서, 정용여과 완충제의 농도는 약 10 mM이다.
하나의 양태에서, 정용여과 완충 용액은 염을 포함한다. 일부 양태에서, 염은 마그네슘 클로라이드, 칼륨 클로라이드, 나트륨 클로라이드 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 하나의 특정 양태에서, 염은 나트륨 클로라이드이다. 하나의 특정 양태에서, 정용여과 완충 용액은 나트륨 클로라이드를 약 1, 약 5, 약 10, 약 15, 약 20, 약 25, 약 30, 약 35, 약 40, 약 45, 약 50, 약 55, 약 60, 약 65, 약 70, 약 80, 약 90, 약 100, 약 110, 약 120, 약 130, 약 140, 약 150, 약 160, 약 170, 약 180, 약 190, 약 200, 약 250 또는 약 300 mM로 포함한다.
본 발명의 하나의 양태에서, 정용여과 부피는 적어도 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 또는 50이다. 본 발명의 하나의 양태에서, 정용여과 부피는 약 1, 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 약 10, 약 11, 약 12, 약 13, 약 14, 약 15, 약 16, 약 17, 약 18, 약 19, 약 20, 약 21, 약 22, 약 23, 약 24, 약 25, 약 26, 약 27, 약 28, 약 29, 약 30, 약 31, 약 32, 약 33, 약 34, 약 35, 약 36, 약 37, 약 38, 약 39, 약 40, 약 41, 약 42, 약 43, 약 44, 약 45, 약 46, 약 47, 약 48, 약 49, 약 50, 약 55, 약 60, 약 65, 약 70, 약 75, 약 80, 약 85, 약 90, 약 95 또는 약 100이다. 본 발명의 하나의 양태에서, 정용여과 부피는 약 5, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 약 10, 약 11, 약 12, 약 13, 약 14 또는 약 15이다.
본 발명의 하나의 양태에서, 한외여과 및 정용여과 단계는 약 20℃ 내지 약 90℃의 온도에서 수행된다. 하나의 양태에서, 한외여과 및 정용여과 단계는 약 35℃ 내지 약 80℃의 온도, 약 40℃ 내지 약 70℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 65℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 60℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 55℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 55℃ 또는 약 45℃ 내지 약 55℃의 온도에서 수행된다. 상기 임의의 범위 내의 임의의 수는 본 발명의 양태로서 간주된다.
하나의 양태에서, 한외여과 및 정용여과 단계는 약 20℃, 약 21℃, 약 22℃, 약 23℃, 약 24℃, 약 25℃, 약 26℃, 약 27℃, 약 28℃, 약 29℃, 약 30℃, 약 31℃, 약 32℃, 약 33℃, 약 34℃, 약 35℃, 약 36℃, 약 37℃, 약 38℃, 약 39℃, 약 40℃, 약 41℃, 약 42℃, 약 43℃, 약 44℃, 약 45℃, 약 46℃, 약 47℃, 약 48℃, 약 49℃, 약 50℃, 약 51℃, 약 52℃, 약 53℃, 약 54℃, 약 55℃, 약 56℃, 약 57℃, 약 58℃, 약 59℃, 약 60℃, 약 61℃, 약 62℃, 약 63℃, 약 64℃, 약 65℃, 약 66℃, 약 67℃, 약 68℃, 약 69℃, 약 70℃, 약 71℃, 약 72℃, 약 73℃, 약 74℃, 약 75℃, 약 76℃, 약 77℃, 약 78℃, 약 79℃ 또는 약 80℃의 온도에서 수행된다. 하나의 양태에서, 한외여과 및 정용여과 단계는 약 50℃의 온도에서 수행된다.
본 발명의 하나의 양태에서, 정용여과 단계는 약 20℃ 내지 약 90℃의 온도에서 수행된다. 하나의 양태에서, 정용여과 단계는 약 35℃ 내지 약 80℃의 온도, 약 40℃ 내지 약 70℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 65℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 60℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 55℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 55℃ 또는 약 45℃ 내지 약 55℃의 온도에서 수행된다. 상기 임의의 범위 내의 임의의 수는 본 발명의 양태로서 간주된다.
하나의 양태에서, 정용여과 단계는 약 20℃, 약 21℃, 약 22℃, 약 23℃, 약 24℃, 약 25℃, 약 26℃, 약 27℃, 약 28℃, 약 29℃, 약 30℃, 약 31℃, 약 32℃, 약 33℃, 약 34℃, 약 35℃, 약 36℃, 약 37℃, 약 38℃, 약 39℃, 약 40℃, 약 41℃, 약 42℃, 약 43℃, 약 44℃, 약 45℃, 약 46℃, 약 47℃, 약 48℃, 약 49℃, 약 50℃, 약 51℃, 약 52℃, 약 53℃, 약 54℃, 약 55℃, 약 56℃, 약 57℃, 약 58℃, 약 59℃, 약 60℃, 약 61℃, 약 62℃, 약 63℃, 약 64℃, 약 65℃, 약 66℃, 약 67℃, 약 68℃, 약 69℃, 약 70℃, 약 71℃, 약 72℃, 약 73℃, 약 74℃, 약 75℃, 약 76℃, 약 77℃, 약 78℃, 약 79℃ 또는 약 80℃의 온도에서 수행된다. 하나의 양태에서, 정용여과 단계는 약 50℃의 온도에서 수행된다.
본 발명의 하나의 양태에서, 한외여과 단계는 약 20℃ 내지 약 90℃의 온도에서 수행된다. 하나의 양태에서, 한외여과 단계는 약 35℃ 내지 약 80℃의 온도, 약 40℃ 내지 약 70℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 65℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 60℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 55℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 55℃ 또는 약 45℃ 내지 약 55℃의 온도에서 수행된다. 상기 임의의 범위 내의 임의의 수는 본 발명의 양태로서 간주된다.
하나의 양태에서, 한외여과 단계는 약 20℃, 약 21℃, 약 22℃, 약 23℃, 약 24℃, 약 25℃, 약 26℃, 약 27℃, 약 28℃, 약 29℃, 약 30℃, 약 31℃, 약 32℃, 약 33℃, 약 34℃, 약 35℃, 약 36℃, 약 37℃, 약 38℃, 약 39℃, 약 40℃, 약 41℃, 약 42℃, 약 43℃, 약 44℃, 약 45℃, 약 46℃, 약 47℃, 약 48℃, 약 49℃, 약 50℃, 약 51℃, 약 52℃, 약 53℃, 약 54℃, 약 55℃, 약 56℃, 약 57℃, 약 58℃, 약 59℃, 약 60℃, 약 61℃, 약 62℃, 약 63℃, 약 64℃, 약 65℃, 약 66℃, 약 67℃, 약 68℃, 약 69℃, 약 70℃, 약 71℃, 약 72℃, 약 73℃, 약 74℃, 약 75℃, 약 76℃, 약 77℃, 약 78℃, 약 79℃ 또는 약 80℃의 온도에서 수행된다. 하나의 양태에서, 한외여과 단계는 약 50℃의 온도에서 수행된다.
1.10. 균질화 / 사이징 (sizing)
다당류는 정제 절차 동안 크기가 약간 감소될 수 있다. 하나의 양태에서, 본 발명의 다당류의 정제된 용액(예컨대 1.9 부분의 한외여과 및/또는 정용여과에 의해 수득됨)은 사이징되지 않는다. 하나의 양태에서, 다당류는 사이징 기법에 의해 균질화될 수 있다. 기계적 또는 화학적 사이징이 사용될 수 있다. 화학적 가수분해는 예컨대 아세트산을 사용하여 수행될 수 있다. 기계적 사이징은 고압 균질화 전단을 사용하여 수행될 수 있다.
따라서, 하나의 양태에서, 1.9 부분의 한외여과 및/또는 정용여과에 의해 수득된 다당류의 정제된 용액은 표적 분자량으로 사이징된다.
본원에 사용된 용어 다당류의 "분자량"은 예컨대 크기 배제 크로마토그래피(SEC)와 다각도 레이저 광 산란 검출(MALLS)의 조합에 의해 계산된 분자량을 지칭한다.
일부 양태에서, 정제된 다당류는 약 5 kDa 내지 약 4,000 kDa의 분자량으로 사이징된다. 다른 이러한 양태에서, 정제된 다당류는 약 10 kDa 내지 약 4,000 kDa의 분자량으로 사이징된다. 다른 이러한 양태에서, 정제된 다당류는 약 50 kDa 내지 약 4,000 kDa의 분자량으로 사이징된다. 추가의 이러한 양태에서, 정제된 다당류는 약 50 kDa 내지 약 3,500 kDa; 약 50 kDa 내지 약 3,000 kDa; 약 50 kDa 내지 약 2,500 kDa; 약 50 kDa 내지 약 2,000 kDa; 약 50 kDa 내지 약 1,750 kDa; 약 50 kDa 내지 약 1,500 kDa; 약 50 kDa 내지 약 1,250 kDa; 약 50 kDa 내지 약 1,000 kDa; 약 50 kDa 내지 약 750 kDa; 약 50 kDa 내지 약 500 kDa; 약 100 kDa 내지 약 4,000 kDa; 약 100 kDa 내지 약 3,500 kDa; 약 100 kDa 내지 약 3,000 kDa; 약 100 kDa 내지 약 2,500 kDa; 약 100 kDa 내지 약 2,250 kDa; 약 100 kDa 내지 약 2,000 kDa; 약 100 kDa 내지 약 1,750 kDa; 약 100 kDa 내지 약 1,500 kDa; 약 100 kDa 내지 약 1,250 kDa; 약 100 kDa 내지 약 1,000 kDa; 약 100 kDa 내지 약 750 kDa; 약 100 kDa 내지 약 500 kDa; 약 200 kDa 내지 약 4,000 kDa; 약 200 kDa 내지 약 3,500 kDa; 약 200 kDa 내지 약 3,000 kDa; 약 200 kDa 내지 약 2,500 kDa; 약 200 kDa 내지 약 2,250 kDa; 약 200 kDa 내지 약 2,000 kDa; 약 200 kDa 내지 약 1,750 kDa; 약 200 kDa 내지 약 1,500 kDa; 약 200 kDa 내지 약 1,250 kDa; 약 200 kDa 내지 약 1,000 kDa; 약 200 kDa 내지 약 750 kDa; 또는 약 200 kDa 내지 약 500 kDa의 분자량으로 사이징된다. 추가의 이러한 양태에서, 정제된 다당류는 약 250 kDa 내지 약 3,500 kDa; 약 250 kDa 내지 약 3,000 kDa; 약 250 kDa 내지 약 2,500 kDa; 약 250 kDa 내지 약 2,000 kDa; 약 250 kDa 내지 약 1,750 kDa; 약 250 kDa 내지 약 1,500 kDa; 약 250 kDa 내지 약 1,250 kDa; 약 250 kDa 내지 약 1,000 kDa; 약 250 kDa 내지 약 750 kDa; 약 250 kDa 내지 약 500 kDa; 약 300 kDa 내지 약 4,000 kDa; 약 300 kDa 내지 약 3,500 kDa; 약 300 kDa 내지 약 3,000 kDa; 약 300 kDa 내지 약 2,500 kDa; 약 300 kDa 내지 약 2,250 kDa; 약 300 kDa 내지 약 2,000 kDa; 약 300 kDa 내지 약 1,750 kDa; 약 300 kDa 내지 약 1,500 kDa; 약 300 kDa 내지 약 1,250 kDa; 약 300 kDa 내지 약 1,000 kDa; 약 300 kDa 내지 약 750 kDa; 약 300 kDa 내지 약 500 kDa; 약 500 kDa 내지 약 4,000 kDa; 약 500 kDa 내지 약 3,500 kDa; 약 500 kDa 내지 약 3,000 kDa; 약 500 kDa 내지 약 2,500 kDa; 약 500 kDa 내지 약 2,250 kDa; 약 500 kDa 내지 약 2,000 kDa; 약 500 kDa 내지 약 1,750 kDa; 약 500 kDa 내지 약 1,500 kDa; 약 500 kDa 내지 약 1,250 kDa; 약 500 kDa 내지 약 1,000 kDa; 약 500 kDa 내지 약 750 kDa; 또는 약 500 kDa 내지 약 600 kDa의 분자량으로 사이징된다.
상기 임의의 범위 내의 임의의 수는 본 발명의 양태로서 간주된다.
일부 양태에서, 정제된 다당류는 약 5 kDa, 약 10 kDa, 약 15 kDa, 약 20 kDa, 약 25 kDa, 약 30 kDa, 약 35 kDa, 약 40 kDa, 약 45 kDa, 약 50 kDa, 약 75 kDa, 약 90 kDa, 약 100 kDa, 약 150 kDa, 약 200 kDa, 약 250 kDa, 약 300 kDa, 약 350 kDa, 약 400 kDa, 약 450 kDa, 약 500 kDa, 약 550 kDa, 약 600 kDa, 약 650 kDa, 약 700 kDa, 약 750 kDa, 약 800 kDa, 약 850 kDa, 약 900 kDa, 약 950 kDa, 약 1000 kDa, 약 1250 kDa, 약 1500 kDa, 약 1750 kDa, 약 2000 kDa, 약 2250 kDa, 약 2500 kDa, 약 2750 kDa, 약 3000 kDa, 약 3250 kDa, 약 3500 kDa, 약 3750 kDa 또는 약 4,000 kDa의 분자량으로 사이징된다.
바람직한 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에의 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15A, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F 또는 33F로부터의 캡슐 다당류이되, 상기 캡슐 다당류는 본원에 전술된 범위 중 하나에 속하거나 이의 대략적인 크기의 분자량을 가진다.
1.11. 멸균여과
하나의 양태에서, 본 발명의 다당류의 정제된 용액은 멸균여과된다.
따라서, 하나의 양태에서, 임의적으로, 1.9 부분의 한외여과 및/또는 정용여과 단계에 멸균여과 단계가 이어질 수 있다. 하나의 양태에서, 수행되는 경우, 1.10 부분의 균질화/사이징 단계에 멸균여과 단계가 이어질 수 있다. 하나의 양태에서, 임의적으로, 1.2 내지 1.8 부분의 임의의 단계에 멸균여과 단계가 이어질 수 있다.
하나의 양태에서, 멸균여과는 데드-엔드 여과(수직 여과)이다. 하나의 양태에서, 멸균여과는 접선 마이크로여과이다.
하나의 양태에서, 용액은 멸균여과 단계에 의해 처리되되, 상기 필터는 약 25 내지 1500 L/m2, 50 내지 1500 L/m2, 75 내지 1500 L/m2, 100 내지 1500 L/m2, 150 내지 1500 L/m2, 200 내지 1500 L/m2, 250 내지 1500 L/m2, 300 내지 1500 L/m2, 350 내지 1500 L/m2, 400 내지 1500 L/m2, 500 내지 1500 L/m2, 750 내지 1500 L/m2, 1000 내지 1500 L/m2 또는 1250 내지 1500 L/m2의 필터 용량을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 멸균여과 단계에 의해 처리되되, 상기 필터는 약 25 내지 1000 L/m2, 50 내지 1000 L/m2, 75 내지 1000 L/m2, 100 내지 1000 L/m2, 150 내지 1000 L/m2, 200 내지 1000 L/m2, 250 내지 1000 L/m2, 300 내지 1000 L/m2, 350 내지 1000 L/m2, 400 내지 1000 L/m2, 500 내지 1000 L/m2 또는 750 내지 1000 L/m2의 필터 용량을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 멸균여과 단계에 의해 처리되되, 상기 필터는 25 내지 500 L/m2, 50 내지 500 L/m2, 75 내지 500 L/m2, 100 내지 500 L/m2, 150 내지 500 L/m2, 200 내지 500 L/m2, 250 내지 500 L/m2, 300 내지 500 L/m2, 350 내지 500 L/m2 또는 400 내지 500 L/m2의 필터 용량을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 멸균여과 단계에 의해 처리되되, 상기 필터는 25 내지 300 L/m2, 50 내지 300 L/m2, 75 내지 300 L/m2, 100 내지 300 L/m2, 150 내지 300 L/m2, 200 내지 300 L/m2 또는 250 내지 300 L/m2의 필터 용량을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 멸균여과 단계에 의해 처리되되, 상기 필터는 25 내지 250 L/m2, 50 내지 250 L/m2, 75 내지 250 L/m2, 100 내지 250 L/m2 또는 150 내지 250 L/m2, 200 내지 250 L/m2의 필터 용량을 가진다.
하나의 양태에서, 용액은 멸균여과 단계에 의해 처리되되, 상기 필터는 25 내지 100 L/m2, 50 내지 100 L/m2 또는 75 내지 100 L/m2의 필터 용량을 가진다.
상기 임의의 범위 내의 임의의 수는 본 발명의 양태로서 간주된다.
하나의 양태에서, 용액은 마이크로여과 단계에 의해 처리되되, 필터는 약 25, 약 50, 약 75, 약 100, 약 150, 약 200, 약 250, 약 300, 약 350, 약 400, 약 500, 약 600, 약 700, 약 800, 약 900, 약 1000, 약 1100, 약 1200, 약 1300, 약 1400 또는 약 1500 L/m2의 필터 용량을 가진다.
1.12. 최종 물질
다당류는 최종적으로 액상 용액으로서 제조될 수 있다. 다당류는 추가 가공(예컨대 건조 분말로서 동결건조, WO 2006/110381 참고)될 수 있다. 따라서, 하나의 양태에서, 다당류는 건조 분말이다. 하나의 양태에서, 다당류는 동결건조 케이크이다.
2. 정제된 다당류의 용도
본 발명의 방법에 의해 정제된 다당류는 항원으로서 사용될 수 있다. 그대로의 다당류는 백신에서 항원으로서 사용된다(23가 미접합 폐렴구균 다당류 백신 뉴모백스(Pneumovax) 참고). 본 발명의 방법에 의해 정제된 다당류는 또한 당접합체를 수득하기 위해 담체 단백질에 접합될 수 있다.
2.1. 당접합체
본 발명의 방법에 의해 정제된 다당류는 당접합체를 수득하기 위해 담체 단백질에 접합될 수 있다. 본 발명의 목적에 있어서, 용어 "당접합체"는 담체 단백질에 공유결합된 당류를 지칭한다. 하나의 양태에서, 당류는 담체 단백질에 직접 결합된다. 제2의 양태에서, 당류는 스페이서(spacer)/링커(linker)를 통해 담체 단백질에 결합된다.
일반적으로, 담체에 대한 당류의 공유 접합은 당류의 면역원성을 증대시키는데, 이는 당류를 T-독립성 항원에서 T-의존성 항원으로 전환시켜, 면역적 기억을 위한 밑바탕이 되게 한다. 접합은 소아용 백신에 특히 유용하다.
본 발명의 방법에 의해 정제된 다당류는 (예컨대 링커에 의하거나 직접적으로 담체 단백질에 의해) 반응한 후, 본원에 추가로 기재된 당접합체에 혼입되도록 활성화(예컨대 화학적으로 활성화)될 수 있다.
정제된 다당류는 예컨대 상기 1.11 부분에 개시된 방법에 의한 접합 전 표적 분자량으로 사이징될 수 있다. 따라서, 하나의 양태에서, 정제된 다당류는 접합 전 사이징된다. 하나의 양태에서, 본원에 개시된 정제된 다당류는 접합 전 사이징되어 올리고당이 수득될 수 있다. 올리고당은 적은 수의 반복 단위(전형적으로 5 내지 15개의 반복 단위)를 갖고, 전형적으로, 다당류의 사이징(예컨대 가수분해)에 의해 유도된다.
그러나, 바람직하게는, 접합에 사용되는 당류는 다당류이다. 고분자 다당류는 항원 표면에 존재하는 에피토프에 기인하는 특정한 항체 면역 반응을 유도할 수 있다. 바람직하게는, 고분자 다당류의 단리 및 정제가 본 발명의 접합체에 사용됨이 의도된다. 따라서, 하나의 양태에서, 다당류는 사이징되어 다당류로 유지된다. 하나의 양태에서, 다당류는 사이징되지 않는다.
일부 양태에서, 접합 전(사이징되거나 사이징되지 않은 후)의 정제된 다당류는 5 내지 4,000 kDa의 분자량을 가진다. 다른 이러한 양태에서, 정제된 다당류는 10 내지 4,000 kDa의 분자량을 가진다. 다른 이러한 양태에서, 정제된 다당류는 50 내지 4,000 kDa의 분자량을 가진다. 추가의 이러한 양태에서, 다당류는 50 내지 3,500 kDa; 50 내지 3,000 kDa; 50 내지 2,500 kDa; 50 내지 2,000 kDa; 50 내지 1,750 kDa; 50 내지 1,500 kDa; 50 내지 1,250 kDa; 50 내지 1,000 kDa; 50 내지 750 kDa; 50 내지 500 kDa; 100 내지 4,000 kDa; 100 내지 3,500 kDa; 100 내지 3,000 kDa; 100 내지 2,500 kDa; 100 내지 2,250 kDa; 100 내지 2,000 kDa; 100 내지 1,750 kDa; 100 내지 1,500 kDa; 100 내지 1,250 kDa; 100 내지 1,000 kDa; 100 내지 750 kDa; 100 내지 500 kDa; 200 내지 4,000 kDa; 200 내지 3,500 kDa; 200 내지 3,000 kDa; 200 내지 2,500 kDa; 200 내지 2,250 kDa; 200 내지 2,000 kDa; 200 내지 1,750 kDa; 200 내지 1,500 kDa; 200 내지 1,250 kDa; 200 내지 1,000 kDa; 200 내지 750 kDa; 또는 200 내지 500 kDa의 분자량을 가진다. 추가의 이러한 양태에서, 다당류는 250 내지 3,500 kDa; 250 내지 3,000 kDa; 250 내지 2,500 kDa; 250 내지 2,000 kDa; 250 내지 1,750 kDa; 250 내지 1,500 kDa; 250 내지 1,250 kDa; 250 내지 1,000 kDa; 250 내지 750 kDa; 250 내지 500 kDa; 300 내지 4,000 kDa; 300 내지 3,500 kDa; 300 내지 3,000 kDa; 300 내지 2,500 kDa; 300 내지 2,250 kDa; 300 내지 2,000 kDa; 300 내지 1,750 kDa; 300 내지 1,500 kDa; 300 내지 1,250 kDa; 300 내지 1,000 kDa; 300 내지 750 kDa; 300 내지 500 kDa; 500 내지 4,000 kDa; 500 내지 3,500 kDa; 500 내지 3,000 kDa; 500 내지 2,500 kDa; 500 내지 2,250 kDa; 500 내지 2,000 kDa; 500 내지 1,750 kDa; 500 내지 1,500 kDa; 500 내지 1,250 kDa; 500 내지 1,000 kDa; 500 내지 750 kDa; 또는 500 내지 600 kDa의 분자량을 가진다.
상기 임의의 범위 내의 임의의 수는 본 발명의 양태로서 간주된다.
일부 양태에서, 정제된 다당류는 약 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, 75 kDa, 90 kDa, 100 kDa, 150 kDa, 200 kDa, 250 kDa, 300 kDa, 350 kDa, 400 kDa, 450 kDa, 500 kDa, 550 kDa, 600 kDa, 650 kDa, 700 kDa, 750 kDa, 800 kDa, 850 kDa, 900 kDa, 950 kDa, 1000 kDa, 1250 kDa, 1500 kDa, 1750 kDa, 2000 kDa, 2250 kDa, 2500 kDa, 2750 kDa, 3000 kDa, 3250 kDa, 3500 kDa, 3750 kDa 또는 4,000 kDa의 분자량을 가진다.
하나의 양태에서, 정제된 다당류는 캡슐 당류(다당류 또는 올리고당)이다. 하나의 양태에서, 정제된 다당류는 스타필로코커스 아우레우스로부터의 캡슐 당류이다. 하나의 양태에서, 정제된 다당류는 스타필로코커스 아우레우스 타입 5 또는 8 캡슐 당류이다. 하나의 양태에서, 정제된 다당류는 엔테로코커스 패칼리스로부터의 캡슐 당류이다. 하나의 양태에서, 정제된 다당류는 헤모필러스 인플루엔제 타입 b로부터의 캡슐 당류이다.
추가 양태에서, 정제된 다당류는 네이세리아 메닌기티디스로부터의 캡슐 다당류이다. 하나의 양태에서, 정제된 다당류는 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 A(MenA), 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W135(MenW135), 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y(MenY), 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 X(MenX) 또는 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C(MenC)으로부터의 캡슐 다당류이다.
추가 양태에서, 정제된 다당류는 에셔리키아 콜라이로부터의 캡슐 다당류이다. 하나의 양태에서, 정제된 다당류는 장병독성 에셔리키아 콜라이 그룹(EEC 그룹)의 에셔리키아 콜라이 부분, 예컨대 에셔리키아 콜라이 - 장독소원성(ETEC), 에셔리키아 콜라이 - 장병원성(EPEC), 에셔리키아 콜라이 - O157:H7 장출혈성(EHEC) 또는 에셔리키아 콜라이 - 장침습성(EIEC)으로부터의 캡슐 다당류이다. 하나의 양태에서, 정제된 다당류는 요로병원성 에셔리키아 콜라이(UPEC)로부터의 캡슐 다당류이다.
하나의 양태에서, 정제된 다당류는 혈청형 O157:H7, O26:H11, O111:H- 및 O103:H2로 이루어진 군으로부터 선택되는 에셔리키아 콜라이 혈청형으로부터의 캡슐 다당류이다. 정제된 다당류는 혈청형 O6:K2:H1 및 O18:K1:H7로 이루어진 군으로부터 선택되는 에셔리키아 콜라이 혈청형으로부터의 캡슐 다당류이다. 하나의 양태에서, 정제된 다당류는 혈청형 O45:K1, O17:K52:H18, O19:H34 및 O7:K1로 이루어진 군으로부터 선택되는 에셔리키아 콜라이 혈청형으로부터의 캡슐 다당류이다. 하나의 양태에서, 정제된 다당류는 에셔리키아 콜라이 혈청형 O104:H4로부터의 캡슐 다당류이다. 하나의 양태에서, 정제된 다당류는 정제된 다당류는 에셔리키아 콜라이 혈청형 O1:K12:H7로부터의 캡슐 다당류이다. 하나의 양태에서, 정제된 다당류는 정제된 다당류는 에셔리키아 콜라이 혈청형 O127:H6으로부터의 캡슐 다당류이다. 하나의 양태에서, 정제된 다당류는 정제된 다당류는 에셔리키아 콜라이 혈청형 O139:H28로부터의 캡슐 다당류이다. 하나의 양태에서, 정제된 다당류는 정제된 다당류는 에셔리키아 콜라이 혈청형 O128:H2로부터의 캡슐 다당류이다.
추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 아갈락티에(그룹 B 스트렙토코커스(GBS))로부터의 캡슐 다당류이다. 일부 양태에서, 정제된 다당류는 GBS 타입 Ia, Ib, II, III, IV, V, VI, VII 및 VIII 캡슐 다당류로 이루어진 군으로부터 선택되는 캡슐 다당류이다. 일부 양태에서, 정제된 다당류는 GBS 타입 Ia, Ib, II, III 및 V 캡슐 다당류로 이루어진 군으로부터 선택되는 캡슐 다당류이다.
바람직한 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에로부터의 캡슐 다당류이다. 하나의 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 1로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 2로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 3으로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 4로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 5로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 6A로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 6B로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 6C로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 7F로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 8로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 9V로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 9N으로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 10A로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 11A로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 12F로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 14로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 15A로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 15B로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 15C로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 16F로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 17F로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 18C로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 19A로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 19F로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 20으로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 20A로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 20B로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 22F로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 23A로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 23B로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 23F로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 24B로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 24F로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 29로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 31로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 33F로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 34로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 35B로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 35F로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 38로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 72로부터의 캡슐 다당류이다. 추가 양태에서, 정제된 다당류는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 73으로부터의 캡슐 다당류이다.
임의의 적합한 접합 반응이 필요에 따라 임의의 적합한 링커에 의해 사용될 수 있다. 예컨대 WO 2007/116028의 페이지 17 내지 22를 참고한다. 본원에 기재된 정제된 올리고당 또는 다당류는 당류가 담체 단백질과의 반응할 수 있도록 화학적으로 활성화된다.
하나의 양태에서, 당접합체는 환원성 아민화를 사용하여 제조된다. 환원성 아민화는 2개의 단계 (1) 정제된 당류의 산화(활성화) 단계, 및 (2) 활성화된 당류 및 담체 단백질의 환원으로 당접합체가 생성되는 단계를 수반한다(예컨대 WO 2015/110941 및 WO 2015/110940 참고). 전술된 바와 같이, 산화 전, 다당류를 표적 분자량(MW) 범위로 사이징함이 수행될 수 있다. 기계적 또는 화학적 가수분해가 사용될 수 있다. 화학적 가수분해는 아세트산을 사용하여 수행될 수 있다. 하나의 양태에서, 정제된 다당류의 크기는 기계적 균질화에 의해 감소된다.
하나의 양태에서, 정제된 다당류 또는 올리고당은 하기 단계들을 포함하는 방법에 의해 담체 단백질에 접합된다:
(a) 상기 정제된 다당류 또는 올리고당을 산화제와 반응시키는 단계;
(b) 임의적으로, 산화 반응을 ??칭제(quenching agent)의 첨가에 의해 ??칭하는 단계;
(c) 상기 단계 a 또는 b의 활성화된 다당류 또는 올리고당을 담체 단백질과 컴파운딩(compounding)하는 단계; 및
(d) 상기 컴파운딩된 활성화된 다당류 또는 올리고당 및 담체 단백질을 환원제와 반응시켜 당접합체를 생성하는 단계.
산화 단계 a 후, 당류는 활성화된 것으로 설명되고 "활성화된 다당류 또는 올리고당"으로서 지칭된다.
산화 단계 a는 퍼요오데이트와의 반응을 수반할 수 있다. 본 발명의 목적에 있어서, 용어 "퍼요오데이트"는 퍼요오데이트 및 퍼요오드산 둘다를 포함하고, 상기 용어는 메타퍼요오데이트(IO4 -) 및 오르쏘퍼요오데이트(IO6 5-) 둘다, 및 퍼요오데이트의 다양한 염(예컨대 나트륨 퍼요오데이트 및 칼륨 퍼요오데이트)도 포함한다.
바람직하게는, 산화제는 나트륨 퍼요오데이트이다. 하나의 양태에서, 산화에 사용되는 퍼요오데이트는 메타퍼요오데이트이다. 하나의 양태에서, 산화에 사용되는 퍼요오데이트는 나트륨 메타퍼요오데이트이다.
산화 단계 a는 알데히드 기를 함유하는 활성화된 당류를 제조하기 위해, 상기 다당류 또는 올리고당의 1차 하이드록시 기를 선택적으로 산화시키는 산화제의 존재하에 안정한 니트록실 또는 니트로옥사이드 라디칼 화합물, 예컨대 피페리딘-N-옥시 또는 피롤리딘-N-옥시 화합물과의 반응을 수반할 수 있다(WO 2014/097099 참고). 하나의 양상에서, 상기 안정한 니트록실 또는 니트로옥사이드 라디칼 화합물은 WO 2014/097099의 페이지 3의 14번째 줄 내지 페이지 4의 7번째 줄에 개시된 임의의 것이고, 산화제는 WO 2014/097099의 페이지 4의 8 내지 15번째 줄에 개시된 임의의 것이다. 하나의 양태에서, 상기 안정한 니트록실 또는 니트로옥사이드 라디칼 화합물은 2,2,6,6-테트라메틸-1-피페리딘일옥시(TEMPO)이고, 산화제는 N-클로로숙신이미드(NCS)이다.
하나의 양태에서, ??칭제는 WO 2015/110941(페이지 30의 3 내지 26번째 줄 참고)에 개시된 것이다.
하나의 양태에서, 환원 반응 d는 수용성 용매 중 수행된다. 하나의 양태에서, 환원 반응 d는 비양성자성 용매 중 수행된다. 하나의 양태에서, 환원 반응 d는 DMSO(다이메틸설폭사이드) 또는 DMF(다이메틸포름아미드) 용매 중 수행된다.
하나의 양태에서, 환원제는 나트륨 시아노보로하이드라이드, 나트륨 트라이아세토보로하이드라이드, 브뢴스테드 또는 루이스 산의 존재하의 나트륨 또는 아연 보로하이드라이드, 아민 보란, 예컨대 피리딘 보란, 2-피콜린 보란, 2,6-다이보란-메탄올, 다이메틸아민-보란, t-BuMeiPrN-BH3, 벤질아민-BH3 또는 5-에틸-2-메틸피리딘 보란(PEMB)이다. 바람직한 양태에서, 환원제는 나트륨 시아노보로하이드라이드이다.
환원 반응 종료시, 접합체에 남아있는 미반응한 알데히드 기가 있을 수 있을 수 있고, 이는 적합한 캐핑제(capping agent)를 사용하여 캐핑될 수 있다. 하나의 양태에서, 상기 캐핑제는 나트륨 보로하이드라이드(NaBH4)이다.
담체 단백질에 접한 후, 당접합체는 당업자에 공지되어 있는 다양한 기법에 의해 정제(당류-단백질 접합체의 양이 풍부화됨)될 수 있다. 이러한 기법은 투석, 농축/정용여과 조작, 접선 유동 여과 침전/용리, 컬럼 크로마토그래피(DEAE 또는 소수성 상호작용 크로마토그래피), 및 심층여과를 포함한다.
하나의 양태에서, 당접합체는 시아닐화(cyanylation) 화학을 사용하여 제조된다. 하나의 양태에서, 정제된 다당류 또는 올리고당은 시아노젠(cyanogen) 브로마이드에 의해 활성화된다. 활성화는 다당류 또는 올리고당의 하이드록시 기의 시아닐화에 상응한다. 이어서, 활성화된 다당류 또는 올리고당은 직접 또는 스페이서(링커) 기를 통해 담체 단백질의 아미노 기에 결합된다.
하나의 양태에서, 정제된 다당류 또는 올리고당은 1-시아노-4-다이메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트(CDAP)에 의해 활성화되어 시아네이트 에스터가 생성된다. 이어서, 성화된 다당류 또는 올리고당은 직접 또는 스페이서(링커) 기를 통해 담체 단백질의 아미노 기에 결합된다.
하나의 양태에서, 스페이서는 티올화된 다당류 또는 올리고당을 생성하는 시스타민 또는 시스테아민일 수 있고, 말레이미드-활성화된 담체 단백질(예컨대 N-[γ-말레이미도부티릴옥시]숙신이미드 에스터(GMBS)를 사용함) 또는 할로겐화된 담체 단백질(예컨대 요오도아세트이미드, N-숙신이미딜 브로모아세테이트(SBA; SIB), N-숙신이미딜(4-요오도아세틸)아미노벤조에이트(SlAB), 설포숙신이미딜(4-요오도아세틸)아미노벤조에이트(설포-SIAB), N-숙신이미딜 요오도아세테이트(SIA) 또는 숙신이미딜 3-[브로모아세트아미도]프로피오네이트(SBAP)를 사용함)과의 반응 후 생성되는 티오에터 결합을 통해 담체에 결합될 수 있다. 바람직하게는, 시아네이트 에스터(임의적으로, CDAP 화학에 의해 제조됨)는 헥산 다이아민 또는 아디프산 다이하이드라지드(ADH)와 결합되고, 아미노-유도화된 당류는 단백질 담체의 카복시 기를 통해 카보다이이미드(예컨대 EDAC 또는 EDC) 화학을 사용하여 담체 단백질(예컨대 CRM197)에 접합된다. 이러한 접합체는 예컨대 WO 93/15760, WO 95/08348 및 WO 96/129094에 기재되어 있다.
하나의 양태에서, 당접합체는 2친전자성(biselectrophilic) 시약, 예컨대 카보닐다이이미다졸(CDI) 또는 카보닐다이트라이아졸(CDT)을 사용하여 제조된다. 이러한 양태에서, 접합 반응은 직접적 경로를 통해 또는 2속(bigeneric) 링커를 사용하여 바람직하게는 비양성자성 용매, 예컨대 DMF 또는 DMSO 중 수행된다(예컨대 WO 2011/041003).
하나의 양태에서, 당접합체는 WO 2014/027302에 개시되어 있는 당접합체의 제조 방법에 의해 제조된다. 결과적인 당접합체는 2가의 이종2작용성 스페이서(2-((2-옥소에틸)티오)에틸)카바메이트(eTEC)를 통해 담체 단백질에 접합된다. 다르게는, 당접합체는 WO 2015/121783에 개시되어 있는 당접합체의 제조 방법에 의해 제조된다.
기타 적합한 접합 기법은 카보다이이미드(예컨대 EDC(1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필) 카보다이이미드 하이드로클로라이드, EDC와 설포 NHS, CMC(1-사이클로헥실-3-(2-모르폴리노에틸)카보다이이미드, DCC(N,N'-다이사이클로헥실 카보다이이미드) 또는 DIC(다이이소프로필 카보다이이미드)를 사용한다.
하나의 양태에서, 다당류 또는 올리고당는 링커, 예컨대 2작용성 링커를 통해 담체 단백질에 접합된다. 임의적으로, 링커는 예컨대 반응성 아미노 기 및 반응성 카복시산 기, 2반응성 아미노 기 또는 2반응성 카복시산 기를 갖는 이종2작용성 또는 동종2작용성이다. 링커는 예컨대 4 내지 20개, 4 내지 12개, 또는 5 내지 10개의 탄소 원자를 가진다. 가능한 링커는 아디프산 다이하이드라지드(ADH)이다. 기타 링커는 B-프로피오아미노(WO 00/10599) 니트로페닐-에틸아민, 할로알킬 할라이드, 글리코시드 결합(US 4,673,574, US 4,808,700), 헥산 다이아민 및 6-아미노 카프로산(US 4,459,286)을 포함한다.
당접합체의 담체 단백질 성분은 정제된 다당류 또는 올리고당이 접합되는 담체 단백질이다. 용어 "단백질 담체", "담체 단백질" 또는 "담체"는 본원에서 서로 대체가능하게 사용될 수 있다. 담체 단백질은 표준적인 접합 절차에 적합해야 한다.
바람직한 양태에서, 당접합체의 담체 단백질은 DT(디프테리아 독소), TT(테타누스 독소) 또는 TT의 단편 C, CRM197(비독성이지만 디프테리아 독소와 항원적으로 일치하는 변이), 기타 DT 돌연변이(예컨대 CRM176, CRM228, CRM45(문헌[Uchida et al.(1973) J. Biol. Chem. 218:3838-3844]), CRM9, CRM102, CRM103 또는 CRM107; 및 문헌[Nicholls and Youle in Genetically Engineered Toxins, Ed: Frankel, Maecel Dekker Inc.(1992)]에 기재되어 있는 기타 돌연변이; Glu 148에서 Asp, Gln 또는 Ser로 및/또는 Ala 158 에서 GIy로의 결실 또는 돌연변이 및 US 4,709,017 및 4,950,740에 기재되어 있는 기타 돌연변이; Lys 516, Lys 526, Phe 530 및/또는 Lys 534 중 하나 이상의 잔기의 돌연변이 및 US 5,917,017 및 6,455,673에 개시되어 있는 기타 돌연변이; 또는 US 5,843,711에 개시되어 있는 단편, 폐렴구균의 폐렴구균용혈소(ply)(문헌[Kuo et al.(1995) Infect lmmun 63:2706-2713]), 예컨대 일부 방식으로 해독된 ply, 예컨대 dPLY-GMBS(WO 2004/081515, WO 2006/032499) 또는 dPLY-포몰(formol), PhtX, 예컨대 PhtA, PhtB, PhtD, PhtE(PhtA, PhtB, PhtD 또는 PhtE의 서열은 WO 00/37105 및 WO 00/39299에 개시되어 있음) 및 Pht 단백질의 융합, 예컨대 PhtDE 융합, PhtBE 융합, Pht A-E(WO 01/98334, WO 03/054007, WO 2009/000826), OMPC(수막구균 외막 단백질)(이는 통상적으로 네이세리아 메닌기티디스 혈청형 B(EP0372501), PorB(네이세리아 메닌기티디스), PD(헤모필러스 인플루엔제 단백질 D로부터 추출됨)(예컨대, EP0594610 B 참고), 또는 이의 면역 작용상 등가물, 합성 펩티드(EP 0378881, EP 0427347), 열충격 단백질(WO 93/17712, WO 94/03208), 페르투시스 단백질(WO 98/58668, EP0471177), 시토카인, 림포카인, 성장 인자 또는 호르몬(WO 91/01146), 인공 단백질(다양한 병원체에서 유래된 항원으로부터의 다수의 인간 CD4+ T 세포 에피토프를 포함함)(문헌[Falugi et al.(2001) Eur J Immunol 31:3816-3824]), 예컨대 N19 단백질(문헌[Baraldoi et al.(2004) Infect lmmun 72:4884-4887]), 폐렴구균 표면 단백질 PspA(WO 02/091998), 철 흡수(uptake) 단백질(WO 01/72337), 클로스트리디움 디피실레의 독소 또는 B(WO 00/61761), 트랜스페린 결합 단백질, 폐렴구균 부착 단백질(PsaA) 및 재조합 슈도모나스 에루지노사 외독소(특히 이의 비독성 돌연변이(예컨대 글루탐산 553에서의 치환을 보유하는 외독소(문헌[Douglas et al.(1987) J. Bacteriol. 169(11):4967-4971])로부 이루어진 군으로부터 선택된다. 기타 단백질, 에컨대 오브알부민, 키홀 림펫(keyhole limpet) 헤모시아닌(KLH), 소 혈청 알부민(BSA), 또는 튜베르큘린의 정제된 유도체(PPD)도 담체 단백질로서 사용될 수 있다. 기타 적합한 담체 단백질은 불활성화된 박테리아 독소, 예컨대 콜레라 독소(예컨대 WO 2004/083251에 기재되어 있음), 에셔리키아 콜라이 LT, 에셔리키아 콜라이 ST, 및 슈도모나스 에루지노사로부터의 외독소를 포함한다.
바람직한 양태에서, 당단백질의 담체 단백질은 서로 독립적으로 TT, DT, DT 돌연변이(예컨대 CRM197), 헤모필러스 인플루엔제 단백질 D, PhtX, PhtD, PhtDE 융합(특히 WO 01/98334 및 WO 03/054007에 개시된 것), 해독된 폐렴구균용혈소, PorB, N19 단백질, PspA, OMPC, 클로스트리디움 디피실레의 독소 및 PsaA로 이루어진 군으로부터 선택된다.
하나의 양태에서, 당단백질의 담체 단백질은 DT(디프테리아 독소)이다. 또다른 양태에서, 당단백질의 담체 단백질은 TT(tetanus 독소)이다.
또다른 양태에서, 당단백질의 담체 단백질은 PD(헤모필러스 인플루엔제 단백질 D, 예컨대 EP 0594610 B 참고)이다.
바람직한 양태에서, 정제된 다당류 또는 올리고당은 CRM197 단백질에 접합된다. CRM197 단백질은 디프테리아 독소의 비독성 형태이지만 디프테리아 독소와는 면역적으로 구별불가능하다. CRM197은 독소원성 코리네파지 베타의 니트로소구아니딘 돌연변이생성에 의해 생성된 비독소원성 파지 β197tox -로 감염된 코리네박테리움 디프테리에에 의해 제조된다(문헌[Uchida et al.(1971) Nature New Biology 233:8-11]). CRM197 단백질은 디프테리아와 동일한 분자량을 갖지만, 유전자 구조에서 단일 염기 변화(구아닌에서 아데닌으로)로 이와는 상이하다. 이러한 단일 염기 변화는 성숙 단백질에서 아미노산 치환(글루탐산에서 글리신으로)을 야기하고 디프테리아 독소의 독성적 특성을 제거한다. CRM197 단백질은 안전하고, 당류를 위한 효과적인 T 세포 의존성 담체이다. CRM197에 대한 추가 세부사항 및 이의 제조는 예컨대 US 5,614,382에서 찾을 수 있다.
하나의 양태에서, 정제된 다당류 또는 올리고당은 CRM197 단백질 또는 CRM197의 쇄에 접합된다(CN 103495161 참고). 하나의 양태에서, 정제된 다당류 또는 올리고당은 유전자 재조합 에셔리키아 콜라이의 발현을 통해 수득된 CRM197의 쇄에 접합된다.
바람직하게는, 접합체에서 담체 단백질 대 다당류 또는 올리고당의 비는 1:5(w/w) 내지 5:1, 예컨대 1:0.5 내지 4:1, 1:1 내지 3.5:1, 1.2:1 내지 3:1, 1.5:1 내지 2.5:1; 예컨대 1:2 내지 2.5:1 또는 1:1 내지 2:1이다. 접합체에서 담체 단백질 대 다당류 또는 올리고당의 비는 약 1:1, 1.1:1, 1.2:1, 1.3:1, 1.4:1, 1.5:1 또는 1.6:1이다.
담체 단백질에 접합 후, 당접합체는 당업자에 공지되어 있는 다양한 기법에 의해 정제(당류-단백질 접합체의 양이 풍부화됨)될 수 있다. 이러한 기법은 투석, 농축/정용여과 조작, 접선 유동 여과 침전/용리, 컬럼 크로마토그래피(DEAE 또는 소수성 상호작용 크로마토그래피), 및 심층여과를 포함한다.
조성물은 소량의 자유 담체를 포함할 수 있다. 담체 단백질이 본 발명의 조성물 중 자유 형태 또는 접합된 형태 둘다로 존재할 때, 미접합된 형태는 전체 조성물 중 담체 단백질의 총량의 5% 이하이고, 보다 바람직하게는 2 중량% 미만으로 존재한다.
2.2. 면역원성 조성물
하나의 양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 임의의 정제된 다당류 및/또는 당접합체를 포함하는 면역원성 조성물에 관한 것이다.
하나의 양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 임의의 당접합체를 포함하는 면역원성 조성물에 관한 것이다.
하나의 양태에서, 본 발명은 본원의 2.1 부분에 개시된 1 내지 25개의 상이한 당접합체를 포함하는 면역원성 조성물에 관한 것이다.
하나의 양태에서, 본 발명은 1 내지 25개의 상이한 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형(1 내지 25 폐렴구균 접합체)을 포함하는 면역원성 조성물에 관한 것이다. 하나의 양태에서, 본 발명은 당접합체 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 또는 25 개의 상이한 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형으로부터의 당접합체를 포함하는 면역원성 조성물에 관한 것이다. 하나의 양태에서, 면역원성 조성물 16 또는 20 개의 상이한 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형으로부터의 당접합체를 포함한다. 하나의 양태에서, 면역원성 조성물는 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20가 폐렴구균 접합체 조성물이다. 하나의 양태에서, 면역원성 조성물은 14, 15, 16, 17, 18 또는 19가 폐렴구균 접합체 조성물이다. 하나의 양태에서, 면역원성 조성물은 16가 폐렴구균 접합체 조성물이다. 하나의 양태에서, 면역원성 조성물은 19가 폐렴구균 접합체 조성물이다. 하나의 양태에서, 면역원성 조성물은 20가 폐렴구균 접합체 조성물이다.
하나의 양태에서, 상기 면역원성 조성물은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F로부터의 당접합체를 포함한다.
하나의 양태에서, 상기 면역원성 조성물은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 1, 5 및 7F로부터의 당접합체를 추가로 포함한다.
하나의 양태에서, 임의의 상기 면역원성 조성물은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 6A 및 19A로부터의 당접합체를 추가로 포함한다.
하나의 양태에서, 임의의 상기 면역원성 조성물은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 3으로부터의 당접합체를 추가로 포함한다.
하나의 양태에서, 임의의 상기 면역원성 조성물은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 22F 및 33F로부터의 당접합체를 추가로 포함한다.
하나의 양태에서, 임의의 상기 면역원성 조성물은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 8, 10A, 11A, 12F 및 15B로부터의 당접합체를 추가로 포함한다.
하나의 양태에서, 임의의 상기 면역원성 조성물은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 2로부터의 당접합체를 추가로 포함한다.
하나의 양태에서, 임의의 상기 면역원성 조성물은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 9N으로부터의 당접합체를 추가로 포함한다.
하나의 양태에서, 임의의 상기 면역원성 조성물은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 17F로부터의 당접합체를 추가로 포함한다.
하나의 양태에서, 임의의 상기 면역원성 조성물은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 20으로부터의 당접합체를 추가로 포함한다.
하나의 양태에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 8, 10A, 11A, 12F, 15B, 22F 및 33F로부터의 당접합체를 추가로 포함한다.
하나의 양태에서, 임의의 상기 면역원성 조성물은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 2로부터의 당접합체를 추가로 포함한다.
하나의 양태에서, 임의의 상기 면역원성 조성물은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 9N로부터의 당접합체를 추가로 포함한다.
하나의 양태에서, 임의의 상기 면역원성 조성물은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 17F로부터의 당접합체를 추가로 포함한다.
하나의 양태에서, 임의의 상기 면역원성 조성물은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 20로부터의 당접합체를 추가로 포함한다.
그러나, 바람직한 양태에서, 당류는 각각 개별적으로 단백질 담체의 상이한 분자에 접합된다(단백질 담체의 각각의 분자가 이에 접합되는 하나의 유형의 당류만을 가짐). 상기 양태에서, 캡슐 당류는 개별적으로 담체 단백질에 접합되는 것으로 설명된다. 바람직하게는, 상기 면역원성 조성물의 모든 당접합체는 개별적으로 담체 단백질에 접합된다.
하나의 양태에서, 임의의 상기 면역원성 조성물의 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 22F로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다. 하나의 양태에서, 임의의 상기 면역원성 조성물의 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 33F로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다. 하나의 양태에서, 임의의 상기 면역원성 조성물의 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 15B로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다. 하나의 양태에서, 임의의 상기 면역원성 조성물의 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 12F로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다. 하나의 양태에서, 임의의 상기 면역원성 조성물의 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 10A로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다. 하나의 양태에서, 임의의 상기 면역원성 조성물의 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 11A로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다. 하나의 양태에서, 임의의 상기 면역원성 조성물의 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 8로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다. 하나의 양태에서, 임의의 상기 면역원성 조성물의 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다. 하나의 양태에서, 임의의 상기 면역원성 조성물의 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 1, 5 및 7F로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다. 하나의 양태에서, 임의의 상기 면역원성 조성물의 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 6A 및 19A로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다. 하나의 양태에서, 임의의 상기 면역원성 조성물의 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 3로부터의 당접합체는 CRM197에 접합된다.
하나의 양태에서, 임의의 상기 면역원성 조성물의 당접합체는 모두 개별적으로 CRM197에 접합된다.
하나의 양태에서, 임의의 상기 면역원성 조성물 중 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 및/또는 23F의 당접합체는 개별적으로 PD에 접합된다.
하나의 양태에서, 임의의 상기 면역원성 조성물의 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 18C로부터의 당접합체는 TT에 접합된다.
하나의 양태에서, 임의의 상기 면역원성 조성물의 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 19F로부터의 당접합체는 DT에 접합된다.
하나의 양태에서 임의의 상기 면역원성 조성물의 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 및/또는 23F로부터의 당접합체는 개별적으로 PD에 접합되고, 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 18C로부터의 당접합체는 TT에 접합되고, 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 19F로부터의 당접합체는 DT에 접합된다.
하나의 양태에서, 상기 면역원성 조성물은 8 내지 20개의 상이한 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형을 포함한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 상이한 네이세리아 메닌기티디스 혈청군으로부터의 1 내지 5개의 당접합체(1 내지 5개의 수막구균 접합체)를 포함하는 면역원성 조성물에 관한 것이다. 하나의 양태에서, 본 발명은 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 상이한 네이세리아 메닌기티디스 혈청군으로부터의 당접합체를 포함하는 면역원성 조성물에 관한 것이다. 하나의 양태에서, 면역원성 조성물은 4 또는 5개의 상이한 네이세리아 메닌기티디스를 포함한다. 하나의 양태에서, 면역원성 조성물은 1, 2, 3, 4 또는 5가 수막구균 접합체 조성물이다. 하나의 양태에서, 면역원성 조성물은 2가 수막구균 접합체 조성물이다. 하나의 양태에서, 면역원성 조성물은 4가 수막구균 접합체 조성물이다. 하나의 양태에서, 면역원성 조성물은 5가 수막구균 접합체 조성물이다.
하나의 양태에서, 면역원성 조성물은 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y 캡슐 당류(MenY) 및/또는 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C 캡슐 당류(MenC)를 포함한다.
하나의 양태에서, 면역원성 조성물은 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 캡슐 당류(MenA), 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W135 캡슐 당류(MenW135), 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y 캡슐 당류(MenY) 및/또는 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C 캡슐 당류(MenC)를 포함한다.
하나의 양태에서, 면역원성 조성물은 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W135 캡슐 당류(MenW135), 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y 캡슐 당류(MenY) 및/또는 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C 캡슐 당류(MenC)를 포함한다.
하나의 양태에서, 면역원성 조성물은 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 캡슐 당류(MenA), 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W135 캡슐 당류(MenW135), 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y 캡슐 당류(MenY), 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C 캡슐 당류(MenC) 및/또는 접합된 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 X 캡슐 당류(MenX)를 포함한다.
일부 양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물은 적어도 1, 2 또는 3개의 보조제를 추가로 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물은 1개의 보조제를 추가로 포함할 수 있다. 용어 "보조제"는 항원에 대한 면역 반응을 강화하는 화합물 또는 혼합물을 지칭한다. 항원은 주로 전달 시스템으로서 또는 주로 면역 조절인자로서 작용하거나, 상기 둘다의 강한 특징을 가진다. 적합한 보조제는 포유류, 예컨대 인간에게 적합한 것을 포함한다.
인간에게 사용될 수 있는 적합한 전달 시스템 유형 보조제의 예는 비제한적으로 명반(예컨대, 알루미늄 포스페이트, 알루미늄 설페이트 또는 알루미늄 하이드록사이드), 칼슘 포스페이트, 리포솜, 수 중 유(oil in water) 유화액, 예컨대 MF59(4.3% w/v 스쿠알렌, 0.5% w/v 폴리솔베이트 80(트윈(Tween) 80), 0.5% w/v 솔비탄 트라이올리에이트(스팬(Span) 85)), 유 중 수 유화액, 예컨대 몬타니드(Montanide), 및 폴리(D,L-락티드-co-글리콜리드)(PLG) 마이크로입자 또는 나노입자를 포함한다.
하나의 양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물은 알루미늄 염(명반)(예컨대, 알루미늄 포스페이트, 알루미늄 설페이트 또는 알루미늄 하이드록사이드)을 보조제로서 포함한다. 바람직한 양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물은 알루미늄 포스페이트 또는 알루미늄 하이드록사이드를 보조제로서 포함한다.
본원에 개시된 면역원성 조성물의 효과를 강화시키기 위한 추가의 예시적인 보조제는 비제한적으로 하기를 포함한다: (1) 수 중 유 유화액 제형(기타 특정 면역자극제, 예컨대 무라밀 펩티드(하기 참고) 또는 박테리아 세포벽 성분을 함유하거나 함유하지 않음), (a) 예컨대 SAF(10% 스쿠알렌, 0.4% 트윈 80, 5% 플루로닉(pluronic)-차단된 중합체 L121, 및 thr-MDP(μm 하위 크기로 마이크로유동화(microfluidizing)되거나, 와류되어 더 큰 입도의 유화액으로 제조됨)를 함유함), 및 (b) 리비(RIBI: 상표명) 보조제 시스템(RAS)(미국 몬타나주 해밀턴의 리비 이뮤노켐(Ribi Immunochem))(2% 스쿠알렌, 0.2% 트윈 80, 및 하나 이상의 박테리아 세포벽 성분, 예컨대 모노인지질(MPL), 트레할로스 다이마이콜레이트(TDM), 및 세포벽 골격(CWS), 바람직하게는 MPL + CWS(디톡스(DETOX: 상표명))를 함유함; (2) 사포닌 보조제, 예컨대 QS21, 스티뮬론(STIMULON: 상표명)(미국 메사추세츠주 워체스터의 캠프리지 바이오사이언스(Cambridge Bioscience)), 아비스코(ABISCO: 등록상표)(스웨덴의 이스코노바(Isconova)), 또는 이스코매트릭스(ISCOMATRIX: 등록상표)(호주의 커먼웰스 세럼 레버러토리스(Commonwealth Serum Laboratories))(전술한 것이 사용되거나 이로부터 생성된 입자 예컨대 ISCOM(면역자극 복합체)가 사용될 수 있는데, ISCOM은 추가적인 계면활성제를 함유하지 않음(예컨대 WO 00/07621)); (3) 완전 프로인트 보조제(Complete Freund's Adjuvant, CFA) 및 불완전 프로인트 보조제(IFA); (4) 시토카인, 예컨대 인터루킨(예컨대 IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-12(예컨대, WO 99/44636)), 인터페론(예컨대 감마 인터페론), 대식세포 군체 자극 인자(M-CSF), 종양 괴사 인자(TNF) 등; (5) 모노인지질(MPL) 또는 3-O-탈아시화된 MPL(3dMPL)(예컨대 GB 2220221 및 EP 0689454 참고)(폐럼구균 당류와 사용될 때, 임의적으로, 명반이 실질적으로 부재함)(예컨대 WO 00/56358 참고); (6) 3dMPL과 예컨대 QS21 및/또는 수 중 유 유화액의 조합(예컨대 EP 0835318, EP 0735898 또는 EP 0761231 참고); (7) 폴리옥시에틸렌 에터 또는 폴리옥시에틸렌 에스터(예컨대 WO 99/52549 참고); (8) 폴리옥시에틸렌 솔비탄 계면활성제와 옥토신올의 조합(예컨대 WO 01/21207), 또는 폴리옥시에틸렌 알킬 에터 또는 에스터 계면활성제와 하나 이상의 추가적인 비이온성 계면활성제, 예컨대 옥토신올의 조합(예컨대 WO 01/21152); (9) 사포닌 및 면역자극성 올리고뉴클레오티드(예컨대 CpG 올리고뉴클레오티드)(예컨대 WO 00/62800); (10) 면역자극제 및 금속 염의 입자(WO 00/23105 참고); (11) 사포닌 및 수 중 유 유화액(예컨대 WO 99/11241); (12) 사포닌(예컨대 QS21) + 3dMPL + IM2(임의적으로 스테롤 포함)(예컨대 WO 98/57659); (13) 조성물의 효능을 강화하는 면역자극제로서 작용하는 기타 물질. 무라밀 펩티드는 N-아세틸-무라밀-L-트레오닐-D-이소글루타민(thr-MDP), N-25 아세틸-노르무라밀-L-알라닐-D-이소글루타민(nor-MDP), N-아세틸무라밀-L-알라닐-D-이소글루타르닌일-L-알라닌-2-(1'-2'-다이팔미토일-sn-글리세로-3-하이드록시포스포릴옥시)-에틸아민 MTP-PE) 등을 포함한다.
본 발명의 하나의 양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물은 CpG 올리고뉴클레오티드를 보조제로서 포함한다.
면역원성 조성물은 액체 형태(용액 또는 현탁액) 또는 동결건조된 형태로 제형화될 수 있다. 액체 형태는 이의 패키징된 형태로부터 바로 유리하게 투여될 수 있고, 이에 따라, 본 발명의 동결건조된 조성물에 요하는 바와 달리, 수성 매질 중 재구성이 필요 없는 주사에 이상적이다.
본 발명의 면역원성 조성물의 제형화는 당업계에 공지된 방법을 사용하여 성취될 수 있다. 예컨대, 조성물 제조를 위해 개별 다당류 및/또는 접합체가 생리적으로 허용되는 비히클(vehicle)에 의해 제형화될 수 있다. 이러한 비히클의 예는 비제한적으로 물, 완충된 염수, 폴리올(예컨대 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 액체 폴리에틸렌 글리콜) 및 덱스트로스 용액을 포함한다.
본 발명은 본원에 개시된 다당류 또는 당접합체와 약학적으로 허용되는 부형제, 담체 또는 희석제의 임의의 조합을 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
하나의 양태에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 액체 형태, 바람직하게는 수용성 액체 형태이다.
본 발명의 면역원성 조성물은 하나 이상의 완충제, 염, 2가 양이온, 비이온성 계면활성제, 동결보호제(cryoprotectant), 예컨대 당, 및 항산화제, 예컨대 자유 라디칼 소거제 또는 킬레이트제, 또는 이의 임의의 다중 조합을 포함할 수 있다.
하나의 양태에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 완충제를 포함한다. 하나의 양태에서, 상기 완충제는 약 3.5 내지 약 7.5의 pKa를 가진다. 일부 양태에서, 완충제는 포스페이트, 숙시네이트, 히스티딘 또는 시트레이트이다. 특정 양태에서, 완충제는 1 내지 10 mM의 최종 농도의 숙시네이트이다. 하나의 특정 양태에서, 숙시네이트 완충제의 최종 농도는 약 5 mM이다.
하나의 양태에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 염을 포함한다. 일부 양태에서, 염은 마그네슘 클로라이드, 칼륨 클로라이드, 나트륨 클로라이드 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 하나의 특정 양태에서, 염은 나트륨 클로라이드이다. 하나의 특정 양태에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 나트륨 클로라이드를 150 mM로 포함한다.
하나의 양태에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 계면활성제를 포함한다. 하나의 양태에서, 계면활성제는 폴리솔베이트 20(트윈(상표명) 20), 폴리솔베이트 40(트윈(상표명) 40), 폴리솔베이트 60(트윈(상표명) 60), 폴리솔베이트 65(트윈(상표명) 65), 폴리솔베이트 80(트윈(상표명) 80), 폴리솔베이트 85(트윈(상표명) 85), 트라이톤(TRITON: 상표명) N-101, 트라이톤(상표명) X-100, 옥스톡신올 40, 노녹신올-9, 트라이에탄올아민, 트라이에탄올아민 폴리펩티드 올리에이트, 폴리옥시에틸렌 내지 660 하이드록시스테아레이트(PEG-15, 솔루톨(Solutol) H 15), 폴리옥시에틸렌 내지 35-리시놀리에이트(크레모포르(CREMOPHOR: 등록상표) EL), 대두 레시틴 및 폴록사머로 이루어진 군으로부터 선택된다. 하나의 특정 양태에서, 계면활성제는 폴리솔베이트 80. 일부 상기 양태에서, 제형 중 폴리솔베이트 80의 최종 농도는 적어도 중량:중량(w/w)으로 0.0001% 내지 10% 폴리솔베이트 80이다. 일부 상기 양태에서, 제형 중 폴리솔베이트 80의 최종 농도는 적어도 중량:중량(w/w)으로 0.001 내지 1% 폴리솔베이트 80이다. 일부 상기 양태에서, 제형 중 폴리솔베이트 80의 최종 농도는 적어도 중량:중량(w/w)으로 0.01 내지 1% 폴리솔베이트 80이다. 다른 양태에서, 제형 중 폴리솔베이트 80의 최종 농도(w/w)는 0.01%, 0.02%, 0.03%, 0.04%, 0.05%, 0.06%, 0.07%, 0.08%, 0.09% 또는 0.1% 폴리솔베이트 80이다. 또다른 양태에서, 제형 중 폴리솔베이트 80의 최종 농도(w/w)는 1% 폴리솔베이트 80이다.
하나의 특정 양태에서, 계면활성제는 폴리솔베이트 20이다. 일부 상기 양태에서, 제형 중 폴리솔베이트 20의 최종 농도는 적어도 중량:중량(w/w)으로 0.0001% 내지 10% 폴리솔베이트 20이다. 일부 상기 양태에서, 제형 중 폴리솔베이트 20의 최종 농도는 적어도 중량:중량(w/w)으로 0.001 내지 1% 폴리솔베이트 20이다. 일부 상기 양태에서, 제형 중 폴리솔베이트 20의 최종 농도는 적어도 중량:중량(w/w)으로 0.01 내지 1% 폴리솔베이트 20이다. 다른 양태에서, 제형 중 폴리솔베이트 20의 최종 농도(w/w)는 0.01%, 0.02%, 0.03%, 0.04%, 0.05%, 0.06%, 0.07%, 0.08%, 0.09% 또는 0.1% 폴리솔베이트 20이다. 또다른 양태에서, 제형 중 폴리솔베이트의 최종 농도는 1% 폴리솔베이트 20이다.
하나의 특정 양태에서, 계면활성제는 폴리솔베이트 40이다. 일부 상기 양태에서, 제형 중 폴리솔베이트 40의 최종 농도는 적어도 중량:중량(w/w)으로 0.0001% 내지 10% 폴리솔베이트 40이다. 일부 상기 양태에서, 제형 중 폴리솔베이트 40의 최종 농도는 적어도 중량:중량(w/w)으로 0.001 내지 1% 폴리솔베이트 40이다. 일부 상기 양태에서, 제형 중 폴리솔베이트 40의 최종 농도는 적어도 중량:중량(w/w)으로 0.01 내지 1% 폴리솔베이트 40이다. 다른 양태에서, 제형 중 폴리솔베이트 40의 최종 농도(w/w)는 0.01%, 0.02%, 0.03%, 0.04%, 0.05%, 0.06%, 0.07%, 0.08%, 0.09% 또는 0.1% 폴리솔베이트 40이다. 또다른 양태에서, 제형 중 폴리솔베이트 40의 최종 농도(w/w)는 1% 폴리솔베이트 40이다.
하나의 특정 양태에서, 계면활성제는 폴리솔베이트 60이다. 일부 상기 양태에서, 제형 중 폴리솔베이트 60의 최종 농도는 적어도 중량:중량(w/w)으로 0.0001% 내지 10% 폴리솔베이트 60이다. 일부 상기 양태에서, 제형 중 폴리솔베이트 60의 최종 농도는 적어도 중량:중량(w/w)으로 0.001 내지 1% 폴리솔베이트 60이다. 일부 상기 양태에서, 제형 중 폴리솔베이트 60의 최종 농도는 적어도 중량:중량(w/w)으로 0.01 내지 1% 폴리솔베이트 60이다. 다른 양태에서, 제형 중 폴리솔베이트 60의 최종 농도(w/w)는 0.01%, 0.02%, 0.03%, 0.04%, 0.05%, 0.06%, 0.07%, 0.08%, 0.09% 또는 0.1% 폴리솔베이트 60이다. 또다른 양태에서, 제형 중 폴리솔베이트 60의 최종 농도(w/w)는 1% 폴리솔베이트 60이다.
하나의 특정 양태에서, 계면활성제는 폴리솔베이트 65이다. 일부 상기 양태에서, 제형 중 폴리솔베이트 65의 최종 농도는 적어도 중량:중량(w/w)으로 0.0001% 내지 10% 폴리솔베이트 65이다. 일부 상기 양태에서, 제형 중 폴리솔베이트 65의 최종 농도는 적어도 중량:중량(w/w)으로 0.001 내지 1% 폴리솔베이트 65이다. 일부 상기 양태에서, 제형 중 폴리솔베이트 65의 최종 농도는 적어도 중량:중량(w/w)으로 0.01 내지 1% 폴리솔베이트 65이다. 다른 양태에서, 제형 중 폴리솔베이트 65의 최종 농도(w/w)는 0.01%, 0.02%, 0.03%, 0.04%, 0.05%, 0.06%, 0.07%, 0.08%, 0.09% 또는 0.1% 폴리솔베이트 65이다. 또다른 양태에서, 제형 중 폴리솔베이트 65의 최종 농도(w/w)는 1% 폴리솔베이트 65이다.
하나의 특정 양태에서, 계면활성제는 폴리솔베이트 85이다. 일부 상기 양태에서, 제형 중 폴리솔베이트 85의 최종 농도는 적어도 중량:중량(w/w)으로 0.0001% 내지 10% 폴리솔베이트 85이다. 일부 상기 양태에서, 제형 중 폴리솔베이트 85의 최종 농도는 적어도 중량:중량(w/w)으로 0.001 내지 1% 폴리솔베이트 85이다. 일부 상기 양태에서, 제형 중 폴리솔베이트 85의 최종 농도는 적어도 중량:중량(w/w)으로 0.01 내지 1% 폴리솔베이트 85이다. 다른 양태에서, 제형 중 폴리솔베이트 85의 최종 농도(w/w)는 0.01%, 0.02%, 0.03%, 0.04%, 0.05%, 0.06%, 0.07%, 0.08%, 0.09% 또는 0.1% 폴리솔베이트 85이다. 또다른 양태에서, 제형 중 폴리솔베이트 85의 최종 농도(w/w)는 1% 폴리솔베이트 85이다.
특정 양태에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 5.5 내지 7.5의 pH, 보다 바람직하게는 5.6 내지 7.0의 pH, 보다 더 바람직하게는 5.8 내지 6.0의 pH를 가진다.
하나의 양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 임의의 면역원성 조성물이 충전된 용기를 제공한다. 하나의 양태에서, 용기는 바이알, 주사기, 플라스크, 발효기, 생물반응기(bioreactor), 낭(bag), 병(jar), 앰플, 카트리지 및 일회용 펜(pen)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 양태에서, 용기는 실리콘화된다.
하나의 양태에서, 본 발명의 용기는 유리, 금속(예컨대 강, 스테인리스 강, 알루미늄 등) 및/또는 중합체(예컨대 열가소성, 엘라스토머(elastomer), 열가소성-엘라스토머)로 제조된다. 하나의 양태에서, 본 발명의 용기는 유리로 제조된다.
하나의 양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 임의의 면역원성 조성물이 충전된 주사기를 제공한다. 특정 양태에서, 주사기는 실리콘화되고/거나 유리로 제조된다.
주사를 위한 본 발명의 면역원성 조성물의 전형적인 용량은 0.1 내지 2 mL, 보다 바람직하게는 0.2 내지 1 mL의 부피, 보다 더 바람직하게는 약 0.5 mL의 부피이다.
2.3. 항원으로서의 용도
본 발명의 방법에 의해 정제된 다당류 또는 본원에 개시된 접합체는 항원으로서 사용될 수 있다. 예컨대, 이는 백신의 부분일 수 있다.
따라서, 하나의 양태에서, 본 발명의 방법에 의해 정제된 다당류 또는 상기 다당류를 사용하여 수득되는 당접합체는 대상에서 면역 반응을 생성하는데 사용된다. 하나의 양상에서, 대상은 포유류, 예컨대 인간, 고양이, 양, 돼지, 말, 소 또는 개이다. 하나의 양상에서, 대상은 인간이다.
하나의 양태에서, 본 발명의 방법에 의해 정제된 다당류, 상기 다당류를 사용하여 수득되는 당접합체, 또는 본원에 개시된 면역원성 조성물은 백신에 사용하기 위한 것이다.
하나의 양태에서, 본 발명의 방법에 의해 정제된 다당류, 상기 다당류를 사용하여 수득되는 당접합체, 또는 본원에 개시된 면역원성 조성물은 약제로서 사용하기 위한 것이다.
본원에 기재된 면역원성 조성물은 대상의 박테리아 감염, 질환 또는 병태를 예방, 치료 또는 완화하는 다양한 치료적 또는 예방적 방법에 사용될 수 있다. 특히, 본원에 기재된 면역원성 조성물은 대상의 스트렙토코커스 뉴모니에, 스타필로코커스 아우레우스, 엔테로코커스 페칼리스, 헤모필러스 인플루엔제 타입 b, 에셔리키아 콜라이, 네이세리아 메닌기티디스 또는 스트렙토코커스 아갈락티에 감염, 질환 또는 병태를 예방, 치료 또는 완화하는데 사용될 수 있다. 따라서, 하나의 양태에서, 본 발명은 면역적 효과량의 본 발명의 면역원성 조성물(특히 상응하는 다당류 또는 이의 당접합체를 포함하는 면역원성 조성물)을 대상에게 투여함을 포함하는, 상기 대상의 스트렙토코커스 뉴모니에, 스타필로코커스 아우레우스, 엔테로코커스 페칼리스, 헤모필러스 인플루엔제 타입 b, 에셔리키아 콜라이, 네이세리아 메닌기티디스 또는 스트렙토코커스 아갈락티에와 관련된 감염, 질환 또는 병태를 예방, 치료 또는 완화시키는 방법을 제공한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 면역적 효과량의 본 발명의 면역원성 조성물(특히 상응하는 다당류 또는 이의 당접합체를 포함하는 면역원성 조성물)을 대상에게 투여함을 포함하는, 상기 대상의 스트렙토코커스 뉴모니에, 스타필로코커스 아우레우스, 엔테로코커스 페칼리스, 헤모필러스 인플루엔제 타입 b, 에셔리키아 콜라이, 네이세리아 메닌기티디스 또는 스트렙토코커스 아갈락티에에 대한 면역 반응을 유도하는 방법을 제공한다.
하나의 양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물은 백신으로서 사용하기 위한 것이다. 이러한 양태에서, 본원에 기재된 면역원성 조성물은 대상의 스트렙토코커스 뉴모니에, 스타필로코커스 아우레우스, 엔테로코커스 페칼리스, 헤모필러스 인플루엔제 타입 b, 에셔리키아 콜라이, 네이세리아 메닌기티디스 또는 스트렙토코커스 아갈락티에 감염을 예방하는데 사용될 수 있다. 따라서, 하나의 양상에서, 본 발명은 면역적 효과량의 본 발명의 면역원성 조성물을 대상에게 투여함을 포함하는 상기 대상의 스트렙토코커스 뉴모니에, 스타필로코커스 아우레우스, 엔테로코커스 페칼리스, 헤모필러스 인플루엔제 타입 b, 에셔리키아 콜라이, 네이세리아 메닌기티디스 또는 스트렙토코커스 아갈락티에에 의함 감염을 예방하는 방법을 제공한다.
하나의 양상에서, 대상은 포유류, 예컨대 인간, 고양이, 양, 돼지, 소 또는 개이다. 하나의 양상에서, 대상은 인간이다.
본 발명의 면역원성 조성물은 전신 또는 점막 경로를 통해 면역원성 조성물을 투여함으로써 스트렙토코커스 뉴모니에, 스타필로코커스 아우레우스, 엔테로코커스 페칼리스, 헤모필러스 인플루엔제 타입 b, 에셔리키아 콜라이, 네이세리아 메닌기티디스 또는 스트렙토코커스 아갈락티에 감염에 취약한 인간을 보호 또는 치료하는데 사용될 수 있다. 하나의 양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물은 근육내, 복강내, 피내 또는 피하 경로로 투여된다. 하나의 양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물은 근육내 또는 피하 주사에 의해 투여된다.
일부 경우, 단 1개 용량의 본 발명에 따른 면역원성 조성물이 필요하지만, 일부 경우, 예컨대 더 큰 면역 결함하에, 제2, 제3 또는 제4 투여가 제공될 수 있다. 초기 백신 접종 후, 환자는 적절한 간격으로 1회 또는 수회의 부스터(booster) 예방 접종을 받을 수 있다.
하나의 양태에서, 본 발명에 따른 면역원성 조성물의 백신 접종 스케쥴은 1회 용량이다.
하나의 양태에서, 본 발명에 따른 면역원성 조성물의 백신 접종 스케쥴은 다회 용량 스케쥴이다.
3. 본 발명의 특정 양태는 하기 번호부여된 문단에 제시됨
1. 박테리아 다당류 및 오염물질을 포함하는 용액으로부터 상기 박테리아 다당류를 정제하는 방법으로서, 응집 단계를 포함하는 방법.
2. 1에 있어서, 응집제가 다가 양이온을 포함하는, 방법.
3. 2에 있어서, 상기 다가 양이온이 알루미늄, 철, 칼슘 및 마그네슘으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
4. 2에 있어서, 상기 응집제가 알루미늄, 철, 칼슘 및 마그네슘으로 이루어진 군으로부터 선택되는 2개 이상의 다가 양이온의 혼합물인, 방법.
5. 2에 있어서, 상기 응집제가 알루미늄, 철, 칼슘 및 마그네슘 마그네슘으로 이루어진 군으로부터 선택되는 3개 이상의 다가 양이온의 혼합물인, 방법.
6. 2에 있어서, 상기 응집제가 알루미늄, 철, 칼슘 및 마그네슘으로 이루어진 4개의 다가 양이온의 혼합물인, 방법.
7. 1에 있어서, 응집제가 명반(예컨대 칼륨 명반, 나트륨 명반 또는 암모늄 명반), 알루미늄 클로로하이드레이트, 알루미늄 설페이트, 칼슘 옥사이드, 수산화칼슘, 철(II) 설페이트(제1철 설페이트), 철(III) 클로라이드(제2철 클로라이드), 폴리아크릴아미드, 개질된 폴리아크릴아미드, 폴리DADMAC, 폴리에틸렌이민(PEI), 나트륨 알루미네이트 및 나트륨 실리케이트로 이루어진 군으로부터 선택되는 제제를 포함하는, 방법.
8. 1에 있어서, 응집제가 명반(예컨대 칼륨 명반, 나트륨 명반 또는 암모늄 명반), 알루미늄 클로로하이드레이트, 알루미늄 설페이트, 칼슘 옥사이드, 수산화칼슘, 철(II) 설페이트(제1철 설페이트), 철(III) 클로라이드(제2철 클로라이드), 폴리아크릴아미드, 개질된 폴리아크릴아미드, 폴리DADMAC, 나트륨 알루미네이트 및 나트륨 실리케이트로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
9. 1에 있어서, 응집제가 폴리에틸렌이민(PEI) 인, 방법.
10. 1에 있어서, 응집제가 명반을 포함하는, 방법.
11. 1에 있어서, 응집제가 명반인, 방법.
12. 1에 있어서, 응집제가 칼륨 명반을 포함하는, 방법.
13. 1에 있어서, 응집제가 칼륨 명반인, 방법.
14. 1에 있어서, 응집제가 나트륨 명반을 포함하는, 방법.
15. 1에 있어서, 응집제가 나트륨 명반인, 방법.
16. 1에 있어서, 응집제가 암모늄 명반을 포함하는, 방법.
17. 1에 있어서, 응집제가 암모늄 명반인, 방법.
18. 1에 있어서, 응집제가 명반(예컨대 칼륨 명반, 나트륨 명반 또는 암모늄 명반), 알루미늄 클로로하이드레이트, 알루미늄 설페이트, 칼슘 옥사이드, 수산화칼슘, 철(II) 설페이트(제1철 설페이트), 철(III) 클로라이드(제2철 클로라이드), 폴리아크릴아미드, 개질된 폴리아크릴아미드, 폴리DADMAC, 폴리에틸렌이민(PEI), 나트륨 알루미네이트 및 나트륨 실리케이트로 이루어진 군으로부터 선택되는 2개의 제제의 혼합물인, 방법. 하나의 양태에서, 응집제는 명반(예컨대 칼륨 명반, 나트륨 명반 또는 암모늄 명반), 알루미늄 클로로하이드레이트, 알루미늄 설페이트, 칼슘 옥사이드, 수산화칼슘, 철(II) 설페이트(제1철 설페이트), 철(III) 클로라이드(제2철 클로라이드), 폴리아크릴아미드, 개질된 폴리아크릴아미드, 폴리DADMAC, 나트륨 알루미네이트 및 나트륨 실리케이트로 이루어진 군으로부터 선택된다.
19. 1에 있어서, 응집제가 명반(예컨대 칼륨 명반, 나트륨 명반 또는 암모늄 명반), 알루미늄 클로로하이드레이트, 알루미늄 설페이트, 칼슘 옥사이드, 수산화칼슘, 철(II) 설페이트(제1철 설페이트), 철(III) 클로라이드(제2철 클로라이드), 폴리아크릴아미드, 개질된 폴리아크릴아미드, 폴리DADMAC, 폴리에틸렌이민(PEI), 나트륨 알루미네이트 및 나트륨 실리케이트로 이루어진 군으로부터 선택되는 3개의 제제의 혼합물인, 방법.
20. 1에 있어서, 응집제가 명반(예컨대 칼륨 명반, 나트륨 명반 또는 암모늄 명반), 알루미늄 클로로하이드레이트, 알루미늄 설페이트, 칼슘 옥사이드, 수산화칼슘, 철(II) 설페이트(제1철 설페이트), 철(III) 클로라이드(제2철 클로라이드), 폴리아크릴아미드, 개질된 폴리아크릴아미드, 폴리DADMAC, 나트륨 알루미네이트 및 나트륨 실리케이트 실리케이트로 이루어진 군으로부터 선택되는 4개의 제제의 혼합물인, 방법.
21. 1에 있어서, 응집제가 키토산, 부레풀, 모링가 올레이페라 씨(서양 고추냉이 나무), 젤라틴, 스트리크노스 포테이토룸 씨(Strychnos potatorum seed)(니르말리 너트 나무), 구아검 및 알기네이트(예컨대 갈색 해조류 추출물)로 이루어진 군으로부터 선택되는 제제를 포함하는, 방법. 하나의 양태에서, 응집제가 키토산, 부레풀, 모링가 올레이페라 씨(서양 고추냉이 나무), 젤라틴, 스트리크노스 포테이토룸 씨(니르말리 너트 나무), 구아검 및 알기네이트(예컨대 갈색 해조류 추출물)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
22. 1에 있어서, 응집제가 키토산, 부레풀, 모링가 올레이페라 씨(서양 고추냉이 나무), 젤라틴, 스트리크노스 포테이토룸 씨(니르말리 너트 나무), 구아검 및 알기네이트(예컨대 갈색 해조류 추출물) 로 이루어진 군으로부터 선택되는 제제인, 방법. 하나의 양태에서, 응집제는 키토산, 부레풀, 모링가 올레이페라 씨(서양 고추냉이 나무), 젤라틴, 스트리크노스 포테이토룸 씨(니르말리 너트 나무), 구아검 및 알기네이트(예컨대 갈색 해조류 추출물) 로 이루어진 군으로부터 선택된다.
23. 1 내지 22 중 어느 하나에 있어서, 응집제의 농도가 약 0.1 내지 약 20%(w/v)인, 방법.
24. 1 내지 22 중 어느 하나에 있어서, 응집제의 농도가 약 0.5 내지 약 10%(w/v)인, 방법.
25. 1 내지 22 중 어느 하나에 있어서, 응집제의 농도가 약 1 내지 약 5%(w/v)인, 방법.
26. 1 내지 22 중 어느 하나에 있어서, 응집제의 농도가 약 0.1, 약 0.25, 약 0.5, 약 1.0, 약 1.5, 약 2.0, 약 2.5, 약 3.0, 약 3.5, 약 4.0, 약 4.5, 약 5.0, 약 5.5, 약 6.0, 약 6.5, 약 7.0, 약 7.5, 약 8.0, 약 8.5, 약 9.0, 약 9.5 또는 약 10%(w/v)인, 방법.
27. 1 내지 22 중 어느 하나에 있어서, 응집제의 농도가 약 10.5, 약 11.0, 약 11.5, 약 12.0, 약 12.5, 약 13.0, 약 13.5, 약 14.0, 약 14.5, 약 15.0, 약 15.5, 약 16.0, 약 16.5, 약 17.0, 약 17.5, 약 18.0, 약 18.5, 약 19.0, 약 19.5 또는 약 20.0%(w/v)
28. 1 내지 22 중 어느 하나에 있어서, 응집제의 농도가 약 0.5, 약 1.0, 약 1.5, 약 2.0, 약 2.5, 약 3.0, 약 3.5, 약 4.0, 약 4.5 또는 약 5.0%(w/v)
29. 1 내지 22 중 어느 하나에 있어서, 응집제의 농도가 약 1.0, 약 1.5, 약 2.0, 약 2.5, 약 3.0, 약 3.5 또는 약 4.0%(w/v)로 사용되는, 방법.
30. 1 내지 29 중 어느 하나에 있어서, 응집제가 수초(예컨대 1 내지 10초) 내지 약 1개월의 시간에 걸쳐 첨가되는, 방법.
31. 1 내지 29 중 어느 하나에 있어서, 응집제가 약 2초 내지 약 2주의 시간에 걸쳐 첨가되는, 방법.
32. 1 내지 29 중 어느 하나에 있어서, 응집제가 약 1분 내지 약 1주의 시간에 걸쳐 첨가되는, 방법.
33. 1 내지 29 중 어느 하나에 있어서, 응집제가 약 1분, 약 5분, 약 10분, 약 15분, 약 20분, 약 25분, 약 30분, 약 35분, 약 40분, 약 45분, 약 50분, 약 55분, 약 60분, 약 65분, 약 70분, 약 80분, 약 85분, 약 90분, 약 95분, 약 100분, 약 110분, 약 120분, 약 130분, 약 140분, 약 150분, 약 160분, 약 170분, 약 3시간, 약 4시간, 약 5시간, 약 6시간, 약 7시간, 약 8시간, 약 9시간, 약 10시간, 약 11시간, 약 12시간, 약 13시간, 약 14시간, 약 15시간, 약 16시간, 약 17시간, 약 18시간, 약 19시간, 약 20시간, 약 21시간, 약 22시간, 약 23시간 또는 약 24시간 내지 약 2일의 시간에 걸쳐 첨가되는, 방법.
34. 1 내지 29 중 어느 하나에 있어서, 응집제가 약 5분, 약 10분, 약 15분, 약 20분, 약 25분, 약 30분, 약 35분, 약 40분, 약 45분, 약 50분, 약 55분, 약 60분, 약 65분, 약 70분, 약 80분, 약 85분, 약 90분, 약 95분, 약 100분, 약 110분, 약 120분, 약 130분, 약 140분, 약 150분, 약 160분, 약 170분, 약 3시간, 약 4시간, 약 5시간, 약 6시간, 약 7시간, 약 8시간, 약 9시간, 약 10시간, 약 11시간 또는 약 12시간 내지 약 1일의 시간에 걸쳐 첨가되는, 방법.
35. 1 내지 29 중 어느 하나에 있어서, 응집제가 약 15분, 약 20분, 약 25분, 약 30분, 약 35분, 약 40분, 약 45분, 약 50분, 약 55분, 약 60분, 약 65분, 약 70분, 약 80분, 약 85분, 약 90분, 약 95분, 약 100분, 약 110분, 약 120분, 약 130분, 약 140분, 약 150분, 약 160분, 약 170분, 약 3시간, 약 4시간, 약 5시간, 약 6시간, 약 7시간, 약 8시간, 약 9시간, 약 10시간, 약 11시간 또는 약 12시간 내지 약 1일의 시간에 걸쳐 첨가되는, 방법.
36. 1 내지 29 중 어느 하나에 있어서, 응집제가 약 15분 내지 약 3시간의 시간에 걸쳐 첨가되는, 방법.
37. 1 내지 29 중 어느 하나에 있어서, 응집제가 약 30분 내지 약 120분의 시간에 걸쳐 첨가되는, 방법.
38. 1 내지 29 중 어느 하나에 있어서, 응집제가 약 2초, 약 10초, 약 30초, 약 1분, 약 5분, 약 10분, 약 15분, 약 20분, 약 25분, 약 30분, 약 35분, 약 40분, 약 45분, 약 50분, 약 55분, 약 60분, 약 65분, 약 70분, 약 75분, 약 80분, 약 85분, 약 90분, 약 95분, 약 100분, 약 105분, 약 110분, 약 115분, 약 120분, 약 125분, 약 130분, 약 135분, 약 140분, 약 145분, 약 150분, 약 155분, 약 160분, 약 170분, 약 3.0시간, 약 3.5시간, 약 4.0시간, 약 4.5시간, 약 5.0 시간, 약 5.5시간, 약 6.0 시간, 약 6.5시간, 약 7.0시간, 약 7.5시간, 약 8.0시간, 약 8.5시간, 약 9시간, 약 10시간, 약 11시간, 약 12시간, 약 13시간, 약 14시간, 약 15시간, 약 16시간, 약 17시간, 약 18시간, 약 19시간, 약 20시간, 약 21시간, 약 22시간, 약 23시간, 약 24시간, 약 30시간, 약 36시간, 약 42시간, 약 48시간, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 6일, 약 7일, 약 8일, 약 9일, 약 10일, 약 11일, 약 12일, 약 13일, 약 14일 또는 약 15일의 시간에 걸쳐 첨가되는, 방법.
39. 1 내지 38에 있어서 중 어느 하나에 있어서, 응집제가 교반 첨가되는, 방법.
40. 1 내지 38에 있어서 중 어느 하나에 있어서, 응집제가 교반하에 첨가되는, 방법.
41. 1 내지 38에 있어서 중 어느 하나에 있어서, 응집제가 온화한 교반하에 첨가되는, 방법.
42. 1 내지 38에 있어서 중 어느 하나에 있어서, 응집제가 격렬한 교반하에 첨가되는, 방법.
43. 1 내지 42 중 어느 하나에 있어서, 다운스트림 가공 전 응집체가 침강하도록 용액이 일정 시간 동안 유지되는, 방법.
44. 1 내지 43에 있어서 중 어느 하나에 있어서, 응집 단계가 수초(예컨대 2 내지 10초) 내지 약 1분의 침강 시간에 의해 수행되는, 방법.
45. 1 내지 43에 있어서 중 어느 하나에 있어서, 응집 단계가 약 2이상, 약 3이상, 약 4이상, 약 5이상, 약 10이상, 약 15이상, 약 20이상, 약 25이상, 약 30이상, 약 35이상, 약 40이상, 약 45이상, 약 50이상, 약 55이상, 약 60이상, 약 65이상, 약 70이상, 약 75이상, 약 80이상, 약 85이상, 약 90이상, 약 95이상, 약 100이상, 약 105이상, 약 110이상, 약 115이상, 약 120이상, 약 125이상, 약 130이상, 약 135이상, 약 140이상, 약 145이상, 약 150이상, 약 155 또는 약 160분 이상의 침강 시간에 의해 수행되는, 방법.
46. 1 내지 43에 있어서 중 어느 하나에 있어서, 침강 시간이 1주 미만인, 방법.
47. 1 내지 43에 있어서 중 어느 하나에 있어서, 응집 단계가 약 1, 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 약 10, 약 15, 약 20, 약 25, 약 30, 약 40, 약 50, 약 60, 약 70, 약 80, 약 90, 약 100, 약 120, 약 140, 약 160, 약 180, 약 220, 약 240, 약 300, 약 360, 약 420, 약 480, 약 540, 약 600, 약 660, 약 720, 약 780, 약 840, 약 900, 약 960, 약 1020, 약 1080, 약 1140, 약 1200, 약 1260, 약 1320, 약 1380, 약 1440분, 약 2일, 약 3일, 약 4일, 약 5일 또는 약 6일 및 1주의 침강 시간에 의해 수행되는, 방법.
48. 1 내지 43에 있어서 중 어느 하나에 있어서, 응집 단계가 수초(예컨대 1 내지 10초) 내지 약 1개월의 침강 시간에 의해 수행되는, 방법.
49. 1 내지 43에 있어서 중 어느 하나에 있어서, 응집 단계가 약 2초 내지 약 2주의 침강 시간에 의해 수행되는, 방법.
50. 1 내지 43에 있어서 중 어느 하나에 있어서, 응집 단계가 약 1분 내지 약 1주의 침강 시간에 의해 수행되는, 방법.
51. 1 내지 43에 있어서 중 어느 하나에 있어서, 응집 단계가 약 1분, 약 5분, 약 10분, 약 15분, 약 20분, 약 25분, 약 30분, 약 35분, 약 40분, 약 45분, 약 50분, 약 55분, 약 60분, 약 65분, 약 70분, 약 80분, 약 85분, 약 90분, 약 95분, 약 100분, 약 110분, 약 120분, 약 130분, 약 140분, 약 150분, 약 160분, 약 170분, 약 3시간, 약 4시간, 약 5시간, 약 6시간, 약 7시간, 약 8시간, 약 9시간, 약 10시간, 약 11시간, 약 12시간, 약 13시간, 약 14시간, 약 15시간, 약 16시간, 약 17시간, 약 18시간, 약 19시간, 약 20시간, 약 21시간, 약 22시간, 약 23시간 또는 약 24시간 내지 약 2일의 침강 시간에 의해 수행되는, 방법.
52. 1 내지 43에 있어서 중 어느 하나에 있어서, 응집 단계가 약 5분, 약 10분, 약 15분, 약 20분, 약 25분, 약 30분, 약 35분, 약 40분, 약 45분, 약 50분, 약 55분, 약 60분, 약 65분, 약 70분, 약 80분, 약 85분, 약 90분, 약 95분, 약 100분, 약 110분, 약 120분, 약 130분, 약 140분, 약 150분, 약 160분, 약 170분, 약 3시간, 약 4시간, 약 5시간, 약 6시간, 약 7시간, 약 8시간, 약 9시간, 약 10시간, 약 11시간 또는 약 12시간 내지 약 1일의 침강 시간에 의해 수행되는, 방법.
53. 1 내지 43에 있어서 중 어느 하나에 있어서, 응집 단계가 약 15분, 약 20분, 약 25분, 약 30분, 약 35분, 약 40분, 약 45분, 약 50분, 약 55분, 약 60분, 약 65분, 약 70분, 약 80분, 약 85분, 약 90분, 약 95분, 약 100분, 약 110분, 약 120분, 약 130분, 약 140분, 약 150분, 약 160분, 약 170분, 약 3시간, 약 4시간, 약 5시간, 약 6시간, 약 7시간, 약 8시간, 약 9시간, 약 10시간, 약 11시간 또는 약 12시간 내지 약 1일의 침강 시간에 의해 수행되는, 방법.
54. 1 내지 43에 있어서 중 어느 하나에 있어서, 응집 단계가 약 15분 내지 약 3시간의 침강 시간에 의해 수행되는, 방법.
55. 1 내지 43에 있어서 중 어느 하나에 있어서, 응집 단계가 약 30분 내지 약 120분의 침강 시간에 의해 수행되는, 방법.
56. 1 내지 43에 있어서 중 어느 하나에 있어서, 응집 단계가 약 10초, 약 30초, 약 1분, 약 5분, 약 10분, 약 15분, 약 20분, 약 25분, 약 30분, 약 35분, 약 40분, 약 45분, 약 50분, 약 55분, 약 60분, 약 65분, 약 70분, 약 75분, 약 80분, 약 85분, 약 90분, 약 95분, 약 100분, 약 105분, 약 110분, 약 115분, 약 120분, 약 125분, 약 130분, 약 135분, 약 140분, 약 145분, 약 150분, 약 155분, 약 160분, 약 170분, 약 3시간, 약 3.5시간, 약 4시간, 약 4.5시간, 약 5시간, 약 5.5시간, 약 6시간, 약 6.5시간, 약 7시간, 약 7.5시간, 약 8시간, 약 8.5시간, 약 9시간, 약 10시간, 약 11시간, 약 12시간, 약 13시간, 약 14시간, 약 15시간, 약 16시간, 약 17시간, 약 18시간, 약 19시간, 약 20시간, 약 21시간, 약 22시간, 약 23시간, 약 24시간, 약 30시간, 약 36시간, 약 42시간, 약 48시간, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 6일, 약 7일, 약 8일, 약 9일, 약 10일, 약 11일, 약 12일, 약 13일, 약 14일 또는 약 15일의 침강 시간에 의해 수행되는, 방법.
57. 1 내지 43에 있어서 중 어느 하나에 있어서, 응집 단계가 약 5, 약 10, 약 15, 약 20, 약 25, 약 30, 약 60, 약 90, 약 120, 약 180, 약 220, 약 240, 약 300, 약 360, 약 420, 약 480, 약 540, 약 600, 약 660, 약 720, 약 780, 약 840, 약 900, 약 960, 약 1020, 약 1080, 약 1140, 약 1200, 약 1260, 약 1320, 약 1380 또는 약 1440분 및 2일의 침강 시간에 의해 수행되는, 방법.
58. 1 내지 43에 있어서 중 어느 하나에 있어서, 응집 단계가 약 5분 내지 약 1일의 침강 시간에 의해 수행되는, 방법.
59. 1 내지 43에 있어서 중 어느 하나에 있어서, 응집 단계가 약 5분 내지 약 120분의 침강 시간에 의해 수행되는, 방법.
60. 1 내지 43에 있어서 중 어느 하나에 있어서, 응집 단계가 약 5분, 약 10분, 약 15분, 약 20분, 약 25분, 약 30분, 약 35분, 약 40분, 약 45분, 약 50분, 약 55분, 약 60분, 약 65분, 약 70분, 약 75분, 약 80분, 약 85분, 약 90분, 약 95분, 약 100분, 약 105분, 약 110분, 약 115분, 약 120분, 약 125분, 약 130분, 약 135분, 약 140분, 약 145분, 약 150분, 약 155분 또는 약 160분의 침강 시간에 의해 수행되는, 방법.
61. 43 내지 60 중 어느 하나에 있어서, 침강 단계가 교반없이 수행되는, 방법.
62. 43 내지 60 중 어느 하나에 있어서, 침강 단계가 교반하에 수행되는, 방법.
63. 43 내지 60 중 어느 하나에 있어서, 침강 단계가 온화한 교반하에 수행되는, 방법.
64. 43 내지 60 중 어느 하나에 있어서, 침강 단계가 격렬한 교반하에 수행되는, 방법.
65. 1 내지 64 중 어느 하나에 있어서, 상기 응집 단계가 산성 pH에서 수행되는, 방법.
66. 1 내지 64 중 어느 하나에 있어서, 상기 응집 단계가 7.0 미만, 6.0 미만, 5.0 미만 또는 4.0 미만의 pH에서 수행되는, 방법.
67. 1 내지 64 중 어느 하나에 있어서, 상기 응집 단계가 7.0 내지 1.0의 pH에서 수행되는, 방법.
68. 1 내지 64 중 어느 하나에 있어서, 상기 응집 단계가 5.5 내지 2.5, 5.0 내지 2.5, 4.5 내지 2.5, 4.0 내지 2.5, 5.5 내지 3.0, 5.0 내지 3.0, 4.5 내지 3.0, 4.0 내지 3.0, 5.5 내지 3.5, 5.0 내지 3.5, 4.5 내지 3.5 또는 4.0 내지 3.5 의 pH에서 수행되는, 방법.
69. 1 내지 64 중 어느 하나에 있어서, 상기 응집 단계가 약 5.5, 약 5.0, 약 4.5, 약 4.0, 약 3.5, 약 3.0, 약 2.5, 약 2.0, 약 1.5 또는 약 1.0 의 pH에서 수행되는, 방법.
70. 1 내지 64 중 어느 하나에 있어서, 상기 응집 단계가 약 4.0, 약 3.5, 약 3.0 또는 약 2.5 의 pH에서 수행되는, 방법.
71. 1 내지 64 중 어느 하나에 있어서, 상기 응집 단계가 약 3.5 의 pH에서 수행되는, 방법.
72. 65 내지 71 중 어느 하나에 있어서, 상기 산성 pH가 산성화 용액과 산에 의해 수득되는, 방법.
73. 65 내지 71 중 어느 하나에 있어서, 상기 산성 pH가 산성화 용액과 HCl, H3PO4, 시트르산, 아세트산, 아질산 및 황산으로 이루어진 군으로부터 선택되는 산에 의해 수득되는, 방법.
74. 65 내지 71 중 어느 하나에 있어서, 상기 산성 pH가 산성화 용액과 아미노산에 의해 수득되는, 방법.
75. 65 내지 71 중 어느 하나에 있어서, 상기 산성 pH가 산성화 용액과 글리신, 알라닌 및 글루타메이트로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산에 의해 수득되는, 방법.
76. 65 내지 71 중 어느 하나에 있어서, 상기 산성 pH가 산성화 용액과 황산에 의해 수득되는, 방법.
77. 65 내지 71 중 어느 하나에 있어서, 산이 교반하에 첨가되는, 방법.
78. 65 내지 71 중 어느 하나에 있어서, 산이 온화한 교반하에 첨가되는, 방법.
79. 65 내지 71 중 어느 하나에 있어서, 산이 격렬한 교반하에 첨가되는, 방법.
80. 1 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 응집제의 첨가가 약 4℃ 내지 약 30℃의 온도에서 수행되는, 방법.
81. 1 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 응집제의 첨가가 약 4℃, 약 5℃, 약 6℃, 약 7℃, 약 8℃, 약 9℃, 약 10℃, 약 11℃, 약 12℃, 약 13℃, 약 14℃, 약 15℃, 약 16℃, 약 17℃, 약 18℃, 약 19℃, 약 20℃, 약 21℃, 약 22℃, 약 23℃, 약 24℃, 약 25℃, 약 26℃, 약 27℃, 약 28℃, 약 29℃ 또는 약 30℃의 온도에서 수행되는, 방법.
82. 1 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 응집제의 첨가가 약 20℃의 온도에서 수행되는, 방법.
83. 1 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 응집제의 첨가가 약 30℃ 내지 약 95℃의 온도에서 수행되는, 방법.
84. 1 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 응집제의 첨가가 약 35℃ 내지 약 80℃의 온도, 약 40℃ 내지 약 70℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 65℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 60℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 55℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 55℃ 또는 약 45℃ 내지 약 55℃의 온도에서 수행되는, 방법.
85. 1 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 응집제의 첨가가 약 35℃, 약 36℃, 약 37℃, 약 38℃, 약 39℃, 약 40℃, 약 41℃, 약 42℃, 약 43℃, 약 44℃, 약 45℃, 약 46℃, 약 47℃, 약 48℃, 약 49℃, 약 50℃, 약 51℃, 약 52℃, 약 53℃, 약 54℃, 약 55℃, 약 56℃, 약 57℃, 약 58℃, 약 59℃, 약 60℃, 약 61℃, 약 62℃, 약 63℃, 약 64℃, 약 65℃, 약 66℃, 약 67℃, 약 68℃, 약 69℃, 약 70℃, 약 71℃, 약 72℃, 약 73℃, 약 74℃, 약 75℃, 약 76℃, 약 77℃, 약 78℃, 약 79℃ 또는 약 80℃의 온도에서 수행되는, 방법.
86. 1 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 응집제의 첨가가 약 50℃의 온도에서 수행되는, 방법.
87. 43 내지 86 중 어느 하나에 있어서, 침강 단계가 존재하는 경우, 상기 단계가 약 4℃ 내지 약 30℃의 온도에서 수행되는, 방법.
88. 43 내지 86 중 어느 하나에 있어서, 침강 단계가 존재하는 경우, 상기 단계가 약 4℃, 약 5℃, 약 6℃, 약 7℃, 약 8℃, 약 9℃, 약 10℃, 약 11℃, 약 12℃, 약 13℃, 약 14℃, 약 15℃, 약 16℃, 약 17℃, 약 18℃, 약 19℃, 약 20℃, 약 21℃, 약 22℃, 약 23℃, 약 24℃, 약 25℃, 약 26℃, 약 27℃, 약 28℃, 약 29℃ 또는 약 30℃의 온도에서 수행되는, 방법.
89. 43 내지 86 중 어느 하나에 있어서, 침강 단계가 존재하는 경우, 상기 단계가 약 20℃의 온도에서 수행되는, 방법.
90. 43 내지 86 중 어느 하나에 있어서, 침강 단계가 존재하는 경우, 상기 단계가 약 30℃ 내지 약 95℃의 온도에서 수행되는, 방법.
91. 43 내지 86 중 어느 하나에 있어서, 침강 단계가 존재하는 경우, 상기 단계가 약 35℃ 내지 약 80℃의 온도, 약 40℃ 내지 약 70℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 65℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 60℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 55℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 55℃ 또는 약 45℃ 내지 약 55℃의 온도에서 수행되는, 방법.
92. 43 내지 86 중 어느 하나에 있어서, 침강 단계가 존재하는 경우, 상기 단계가 약 35℃, 약 36℃, 약 37℃, 약 38℃, 약 39℃, 약 40℃, 약 41℃, 약 42℃, 약 43℃, 약 44℃, 약 45℃, 약 46℃, 약 47℃, 약 48℃, 약 49℃, 약 50℃, 약 51℃, 약 52℃, 약 53℃, 약 54℃, 약 55℃, 약 56℃, 약 57℃, 약 58℃, 약 59℃, 약 60℃, 약 61℃, 약 62℃, 약 63℃, 약 64℃, 약 65℃, 약 66℃, 약 67℃, 약 68℃, 약 69℃, 약 70℃, 약 71℃, 약 72℃, 약 73℃, 약 74℃, 약 75℃, 약 76℃, 약 77℃, 약 78℃, 약 79℃ 또는 약 80℃의 온도에서 수행되는, 방법.
93. 43 내지 86 중 어느 하나에 있어서, 침강 단계가 존재하는 경우, 상기 단계가 약 50℃의 온도에서 수행되는, 방법.
94. 72 내지 93 중 어느 하나에 있어서, 산성화 단계가 존재하는 경우, 상기 단계가 약 4℃ 내지 약 30℃의 온도에서 수행되는, 방법.
95. 72 내지 93 중 어느 하나에 있어서, 산성화 단계가 존재하는 경우, 상기 단계가 약 4℃, 약 5℃, 약 6℃, 약 7℃, 약 8℃, 약 9℃, 약 10℃, 약 11℃, 약 12℃, 약 13℃, 약 14℃, 약 15℃, 약 16℃, 약 17℃, 약 18℃, 약 19℃, 약 20℃, 약 21℃, 약 22℃, 약 23℃, 약 24℃, 약 25℃, 약 26℃, 약 27℃, 약 28℃, 약 29℃ 또는 약 30℃의 온도에서 수행되는, 방법.
96. 72 내지 93 중 어느 하나에 있어서, 산성화 단계가 존재하는 경우, 상기 단계가 약 20℃의 온도에서 수행되는, 방법.
97. 72 내지 93 중 어느 하나에 있어서, 산성화 단계가 존재하는 경우, 상기 단계가 약 30℃ 내지 약 95℃의 온도에서 수행되는, 방법.
98. 72 내지 93 중 어느 하나에 있어서, 산성화 단계가 존재하는 경우, 상기 단계가 약 35℃ 내지 약 80℃의 온도, 약 40℃ 내지 약 70℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 65℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 60℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 55℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 55℃ 또는 약 45℃ 내지 약 55℃의 온도에서 수행되는, 방법.
99. 72 내지 93 중 어느 하나에 있어서, 산성화 단계가 존재하는 경우, 상기 단계가 약 35℃, 약 36℃, 약 37℃, 약 38℃, 약 39℃, 약 40℃, 약 41℃, 약 42℃, 약 43℃, 약 44℃, 약 45℃, 약 46℃, 약 47℃, 약 48℃, 약 49℃, 약 50℃, 약 51℃, 약 52℃, 약 53℃, 약 54℃, 약 55℃, 약 56℃, 약 57℃, 약 58℃, 약 59℃, 약 60℃, 약 61℃, 약 62℃, 약 63℃, 약 64℃, 약 65℃, 약 66℃, 약 67℃, 약 68℃, 약 69℃, 약 70℃, 약 71℃, 약 72℃, 약 73℃, 약 74℃, 약 75℃, 약 76℃, 약 77℃, 약 78℃, 약 79℃ 또는 약 80℃의 온도에서 수행되는, 방법.
100. 72 내지 93 중 어느 하나에 있어서, 산성화 단계가 존재하는 경우, 상기 단계가 약 50℃의 온도에서 수행되는, 방법.
101. 1 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 응집제의 첨가 및 침강 단계가 존재하는 경우, 상기 단계가 약 4℃ 내지 약 30℃의 온도에서 수행되는, 방법.
102. 1 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 응집제의 첨가 및 침강 단계가 존재하는 경우, 상기 단계가 약 4℃, 약 5℃, 약 6℃, 약 7℃, 약 8℃, 약 9℃, 약 10℃, 약 11℃, 약 12℃, 약 13℃, 약 14℃, 약 15℃, 약 16℃, 약 17℃, 약 18℃, 약 19℃, 약 20℃, 약 21℃, 약 22℃, 약 23℃, 약 24℃, 약 25℃, 약 26℃, 약 27℃, 약 28℃, 약 29℃ 또는 약 30℃의 온도에서 수행되는, 방법.
103. 1 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 응집제의 첨가 및 침강 단계가 존재하는 경우, 상기 단계가 약 20℃의 온도에서 수행되는, 방법.
104. 1 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 응집제의 첨가 및 침강 단계가 존재하는 경우, 상기 단계가 약 30℃ 내지 약 95℃의 온도에서 수행되는, 방법.
105. 1 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 응집제의 첨가 및 침강 단계가 존재하는 경우, 상기 단계가 약 35℃ 내지 약 80℃의 온도, 약 40℃ 내지 약 70℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 65℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 60℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 55℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 55℃ 또는 약 45℃ 내지 약 55℃의 온도에서 수행되는, 방법.
106. 1 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 응집제의 첨가 및 침강 단계가 존재하는 경우, 상기 단계가 약 35℃, 약 36℃, 약 37℃, 약 38℃, 약 39℃, 약 40℃, 약 41℃, 약 42℃, 약 43℃, 약 44℃, 약 45℃, 약 46℃, 약 47℃, 약 48℃, 약 49℃, 약 50℃, 약 51℃, 약 52℃, 약 53℃, 약 54℃, 약 55℃, 약 56℃, 약 57℃, 약 58℃, 약 59℃, 약 60℃, 약 61℃, 약 62℃, 약 63℃, 약 64℃, 약 65℃, 약 66℃, 약 67℃, 약 68℃, 약 69℃, 약 70℃, 약 71℃, 약 72℃, 약 73℃, 약 74℃, 약 75℃, 약 76℃, 약 77℃, 약 78℃, 약 79℃ 또는 약 80℃의 온도에서 수행되는, 방법.
107. 1 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 응집제의 첨가 및 침강 단계가 존재하는 경우, 상기 단계가 약 50℃의 온도에서 수행되는, 방법.
108. 72 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 응집체의 첨가 및 산성화 단계가 약 4℃ 내지 약 30℃의 온도에서 수행되는, 방법.
109. 72 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 응집제의 첨가 및 산성화 단계가 약 4℃, 약 5℃, 약 6℃, 약 7℃, 약 8℃, 약 9℃, 약 10℃, 약 11℃, 약 12℃, 약 13℃, 약 14℃, 약 15℃, 약 16℃, 약 17℃, 약 18℃, 약 19℃, 약 20℃, 약 21℃, 약 22℃, 약 23℃, 약 24℃, 약 25℃, 약 26℃, 약 27℃, 약 28℃, 약 29℃ 또는 약 30℃의 온도에서 수행되는, 방법.
110. 72 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 응집제의 첨가 및 산성화 단계가 약 20℃의 온도에서 수행되는, 방법.
111. 72 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 응집제의 첨가 및 산성화 단계가 약 30℃ 내지 약 95℃의 온도에서 수행되는, 방법.
112. 72 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 응집제의 첨가 및 산성화 단계가 약 35℃ 내지 약 80℃의 온도, 약 40℃ 내지 약 70℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 65℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 60℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 55℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 55℃ 또는 약 45℃ 내지 약 55℃의 온도에서 수행되는, 방법.
113. 72 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 응집제의 첨가 및 산성화 단계가 약 35℃, 약 36℃, 약 37℃, 약 38℃, 약 39℃, 약 40℃, 약 41℃, 약 42℃, 약 43℃, 약 44℃, 약 45℃, 약 46℃, 약 47℃, 약 48℃, 약 49℃, 약 50℃, 약 51℃, 약 52℃, 약 53℃, 약 54℃, 약 55℃, 약 56℃, 약 57℃, 약 58℃, 약 59℃, 약 60℃, 약 61℃, 약 62℃, 약 63℃, 약 64℃, 약 65℃, 약 66℃, 약 67℃, 약 68℃, 약 69℃, 약 70℃, 약 71℃, 약 72℃, 약 73℃, 약 74℃, 약 75℃, 약 76℃, 약 77℃, 약 78℃, 약 79℃ 또는 약 80℃의 온도에서 수행되는, 방법.
114. 72 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 응집제의 첨가 및 산성화 단계가 약 50℃의 온도에서 수행되는, 방법.
115. 72 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 응집제의 첨가, 침강 및 산성화 단계가 약 4℃ 내지 약 30℃의 온도에서 수행되는, 방법.
116. 72 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 응집제의 첨가, 침강 및 산성화 단계가 약 4℃, 약 5℃, 약 6℃, 약 7℃, 약 8℃, 약 9℃, 약 10℃, 약 11℃, 약 12℃, 약 13℃, 약 14℃, 약 15℃, 약 16℃, 약 17℃, 약 18℃, 약 19℃, 약 20℃, 약 21℃, 약 22℃, 약 23℃, 약 24℃, 약 25℃, 약 26℃, 약 27℃, 약 28℃, 약 29℃ 또는 약 30℃의 온도에서 수행되는, 방법.
117. 72 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 응집제의 첨가, 침강 및 산성화 단계가 약 20℃의 온도에서 수행되는, 방법.
118. 72 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 응집제의 첨가, 침강 및 산성화 단계가 약 30℃ 내지 약 95℃의 온도에서 수행되는, 방법.
119. 72 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 응집제의 첨가, 침강 및 산성화 단계가 약 35℃ 내지 약 80℃의 온도, 약 40℃ 내지 약 70℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 65℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 60℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 55℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 55℃ 또는 약 45℃ 내지 약 55℃의 온도에서 수행되는, 방법.
120. 72 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 응집제의 첨가, 침강 및 산성화 단계가 약 35℃, 약 36℃, 약 37℃, 약 38℃, 약 39℃, 약 40℃, 약 41℃, 약 42℃, 약 43℃, 약 44℃, 약 45℃, 약 46℃, 약 47℃, 약 48℃, 약 49℃, 약 50℃, 약 51℃, 약 52℃, 약 53℃, 약 54℃, 약 55℃, 약 56℃, 약 57℃, 약 58℃, 약 59℃, 약 60℃, 약 61℃, 약 62℃, 약 63℃, 약 64℃, 약 65℃, 약 66℃, 약 67℃, 약 68℃, 약 69℃, 약 70℃, 약 71℃, 약 72℃, 약 73℃, 약 74℃, 약 75℃, 약 76℃, 약 77℃, 약 78℃, 약 79℃ 또는 약 80℃의 온도에서 수행되는, 방법.
121. 72 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 응집제의 첨가, 침강 및 산성화 단계가 약 50℃의 온도에서 수행되는, 방법.
122. 1 내지 71, 80 내지 93 또는 101 내지 107 중 어느 하나에 있어서, 응집 단계가 pH 조정없이 응집제를 첨가함을 포함하는, 방법.
123. 1 내지 122 중 어느 하나에 있어서, 응집 단계가 응집제를 첨가함, pH를 조정함 용액을 침강시킴을 포함하는, 방법.
124. 123에 있어서, 응집제가 pH 조정 전 첨가되는, 방법.
125. 123에 있어서, pH가 응집체 첨가 전 조정되는, 방법.
126. 123에 있어서, pH가 응집체 첨가 및 용액 침강 전 조정되는, 방법.
127. 123에 있어서, 응집제가 첨가되고, 용액이 침강된 후, pH가 조정되는, 방법.
128. 1 내지 127 중 어느 하나에 있어서, 응집 후 현탁액이 디캔테이션, 침전, 여과 또는 원심분리에 의해 청징되는, 방법.
129. 1 내지 127 중 어느 하나에 있어서, 응집 후 현탁액이 디캔테이션에 의해 청징되는, 방법.
130. 1 내지 127 중 어느 하나에 있어서, 응집 후 현탁액이 하이드로사이클론(hydrocyclone)에 의해 청징되는, 방법.
131. 1 내지 127 중 어느 하나에 있어서, 응집 후 현탁액이 침전에 의해 청징되는, 방법.
132. 1 내지 127 중 어느 하나에 있어서, 응집 후 현탁액이 부유선별에 의해 청징되는, 방법.
133. 1 내지 127 중 어느 하나에 있어서, 응집 후 현탁액이 여과
134. 1 내지 127 중 어느 하나에 있어서, 응집 후 현탁액이 원심분리에 의해 청징되는, 방법.
135. 127 내지 134에 있어서, 다당류-함유 용액이 보관을 위해 채집되는, 방법.
136. 127 내지 134에 있어서, 다당류-함유 용액이 추가적인 가공을 위해 채집되는, 방법.
137. 127 내지 134에 있어서, 다당류-함유 용액이 보관된 후, 추가로 가공되는, 방법.
138. 134 내지 137 중 어느 하나에 있어서, 상기 원심분리가 연속 원심분리인, 방법.
139. 134 내지 137 중 어느 하나에 있어서, 상기 원심분리가 버켓(bucket) 원심분리인, 방법.
140. 134 내지 139에 있어서, 현탁액이 약 1,000 g, 약 2,000 g, 약 3,000 g, 약 4,000 g, 약 5,000 g, 약 6,000 g, 약 8,000 g, 약 9,000 g, 약 10,000 g, 약 11,000 g, 약 12,000 g, 약 13,000 g, 약 14,000 g, 약 15,000 g, 약 16,000 g, 약 17,000 g, 약 18,000 g, 약 19,000 g, 약 20,000 g, 약 25,000 g, 약 30,000 g, 약 35,000 g, 약 40,000 g, 약 50,000 g, 약 60,000 g, 약 70,000 g, 약 80,000 g, 약 90,000 g, 약 100,000 g, 약 120,000 g, 약 140,000 g, 약 160,000 g 또는 약 180,000 g로 원심분리되는, 방법.
141. 134 내지 139에 있어서, 현탁액이 약 8,000 g, 약 9,000 g, 약 10,000 g, 약 11,000 g, 약 12,000 g, 약 13,000 g, 약 14,000 g, 약 15,000 g, 약 16,000 g, 약 17,000 g, 약 18,000 g, 약 19,000 g, 약 20,000 g 또는 약 25,000 g로 원심분리되는, 방법.
142. 134 내지 139에 있어서, 현탁액이 약 5,000 g 내지 약 25,000 g로 원심분리되는, 방법.
143. 134 내지 139에 있어서, 현탁액이 약 8,000 g 내지 약 20,000 g로 원심분리되는, 방법.
144. 134 내지 139에 있어서, 현탁액이 약 10,000 g 내지 약 15,000 g로 원심분리되는, 방법.
145. 134 내지 139에 있어서, 현탁액이 약 10,000 g 내지 약 12,000 g로 원심분리되는, 방법.
146. 134 내지 145 중 어느 하나에 있어서, 현탁액이 2분 이상, 3분 이상, 4분 이상, 5분 이상, 10분 이상, 15분 이상, 20분 이상, 25분 이상, 30분 이상, 35분 이상, 40분 이상, 45분 이상, 50분 이상, 55분 이상, 60분 이상, 65분 이상, 70분 이상, 75분 이상, 80분 이상, 85분 이상, 90분 이상, 95분 이상, 100분 이상, 105분 이상, 110분 이상, 115분 이상, 120분 이상, 125분 이상, 130분 이상, 135분 이상, 140분 이상, 145분 이상, 150분 이상, 155분 이상 또는 160분 이상 동안 원심분리되는, 방법.
147. 146에 있어서, 현탁액이 24시간 미만 동안 원심분리되는, 방법.
148. 134 내지 145 중 어느 하나에 있어서, 현탁액이 약 5, 약 10, 약 15, 약 20, 약 30, 약 40, 약 50, 약 60, 약 70, 약 80, 약 90, 약 100, 약 120, 약 140, 약 160, 약 180, 약 220, 약 240, 약 300, 약 360, 약 420, 약 480, 약 540, 약 600, 약 660, 약 720, 약 780, 약 840, 약 900, 약 960, 약 1020, 약 1080, 약 1140, 약 1200, 약 1260, 약 1320 또는 약 1380분 및 1440분 동안 원심분리되는, 방법.
149. 바람직하게는 현탁액이 약 5, 약 10, 약 15, 약 20, 약 25, 약 30, 약 60, 약 90, 약 120, 약 180, 약 240, 약 300, 약 360, 약 420, 약 480 또는 약 540분 내지 약 600분 동안 원심분리되는, 방법.
150. 134 내지 145 중 어느 하나에 있어서, 현탁액이 약 5분 내지 약 3시간 동안 원심분리되는, 방법.
151. 134 내지 145 중 어느 하나에 있어서, 현탁액이 약 5분 내지 약 120분 동안 원심분리되는, 방법.
152. 134 내지 145 중 어느 하나에 있어서, 현탁액이 약 5분, 약 10분, 약 15분, 약 20분, 약 25분, 약 30분, 약 35분, 약 40분, 약 45분, 약 50분, 약 55분, 약 60분, 약 65분, 약 70분, 약 75분, 약 80분, 약 85분, 약 90분, 약 95분, 약 100분, 약 105분, 약 110분, 약 115분, 약 120분, 약 125분, 약 130분, 약 135분, 약 140분, 약 145분, 약 150분 또는 약 155분 내지 약 160분 동안 원심분리되는, 방법.
153. 134 내지 145 중 어느 하나에 있어서, 현탁액이 약 10분, 약 15분, 약 20분, 약 25분, 약 30분, 약 35분, 약 40분, 약 45분, 약 50분 또는 약 55분 내지 약 60분 동안 원심분리되는, 방법.
154. 134 내지 145 중 어느 하나에 있어서, 현탁액이 약 5, 약 10, 약 15, 약 20, 약 30, 약 40, 약 50, 약 60, 약 70, 약 80, 약 90, 약 100, 약 120, 약 140, 약 160, 약 180, 약 220, 약 240, 약 300, 약 360, 약 420, 약 480, 약 540, 약 600, 약 660, 약 720, 약 780, 약 840, 약 900, 약 960, 약 1020, 약 1080, 약 1140, 약 1200, 약 1260, 약 1320, 약 1380분 또는 약 1440분 동안 원심분리되는, 방법.
155. 134 내지 145 중 어느 하나에 있어서, 현탁액이 약 5분, 약 10분, 약 15분, 약 20분, 약 25분, 약 30분, 약 35분, 약 40분, 약 45분, 약 50분, 약 55분, 약 60분, 약 65분, 약 70분, 약 75분, 약 80분, 약 85분, 약 90분, 약 95분, 약 100분, 약 105분, 약 110분, 약 115분, 약 120분, 약 125분, 약 130분, 약 135분, 약 140분, 약 145분, 약 150분, 약 155분 또는 약 160분 동안 원심분리되는, 방법.
156. 134 내지 138 및 140 내지 155 중 어느 하나에 있어서, 상기 원심분리가 연속 원심분리이고, 공급 속도가 50 내지 5000 mL/분, 100 내지 4000 mL/분, 150 내지 3000 mL/분, 200 내지 2500 mL/분, 250 내지 2000 mL/분, 300 내지 1500 mL/분, 300 내지 1000 mL/분, 200 내지 1000 mL/분, 200 내지 1500 mL/분, 400 내지 1500 mL/분, 500 내지 1500 mL/분, 500 내지 1000 mL/분, 500 내지 2000 mL/분, 500 내지 2500 mL/분 또는 1000 내지 2500 mL/분인, 방법.
157. 134 내지 138 및 140 내지 155 중 어느 하나에 있어서, 상기 원심분리가 연속 원심분리이고, 공급 속도가 약 10, 약 25, 약 50, 약 75, 약 100, 약 150, 약 200, 약 250, 약 300, 약 350, 약 400, 약 450, 약 500, 약 550, 약 600, 약 650, 약 700, 약 750, 약 800, 약 850, 약 900, 약 950, 약 1000, 약 1050, 약 1100, 약 1150, 약 1200, 약 1250, 약 1300, 약 1350, 약 1400, 약 1450, 약 1500, 약 1650, 약 1700, 약 1800, 약 1900, 약 2000, 약 2100, 약 2200, 약 2300, 약 2400, 약 2500, 약 2600, 약 2700, 약 2800, 약 2900, 약 3000, 약 3250, 약 3500, 약 3750, 약 4000, 약 4250, 약 4500 또는 약 5000 mL/분인, 방법.
158. 1 내지 157에 있어서, 다당류-함유 용액이 여과되는, 방법.
159. 158항에 있어서, 상기 여과가 심층여과, 활성탄을 통한 여과, 크기여과, 정용여과 및 한외여과로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
160. 158항에 있어서, 상기 여과 단계가 정용여과인, 방법.
161. 160항에 있어서, 상기 여과가 접선 유동 여과인, 방법.
162. 158항에 있어서, 상기 여과가 심층여과인, 방법.
163. 162에 있어서, 심층 필터 디자인이 카세트, 카트리지, 심층(예컨대 모래 필터) 및 렌즈형 필터로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
164. 158, 159, 162 및 163 중 어느 하나에 있어서, 심층 필터가 약 0.01 내지 100 μm, 약 0.05 내지 100 μm, 약 0.1 내지 100 μm, 약 0.2 내지 100 μm, 약 0.3 내지 100 μm, 약 0.4 내지 100 μm, 약 0.5 내지 100 μm, 약 0.6 내지 100 μm, 약 0.7 내지 100 μm, 약 0.8 내지 100 μm, 약 0.9 내지 100 μm, 약 1 내지 100 μm, 약 1.25 내지 100 μm, 약 1.5 내지 100 μm, 약 1.75 내지 100 μm, 약 2 내지 100 μm, 약 3 내지 100 μm, 약 4 내지 100 μm, 약 5 내지 100 μm, 약 6 내지 100 μm, 약 7 내지 100 μm, 약 8 내지 100 μm, 약 9 내지 100 μm, 약 10 내지 100 μm, 약 15 내지 100 μm, 약 20 내지 100 μm, 약 25 내지 100 μm, 약 30 내지 100 μm, 약 40 내지 100 μm, 약 50 내지 100 μm 또는 약 75 내지 100 μm의 공칭 보유 범위를 갖는, 방법.
165. 158, 159, 162 및 163 중 어느 하나에 있어서, 심층 필터가 약 0.01 내지 75 μm, 약 0.05 내지 75 μm, 약 0.1 내지 75 μm, 약 0.2 내지 75 μm, 약 0.3 내지 75 μm, 약 0.4 내지 75 μm, 약 0.5 내지 75 μm, 약 0.6 내지 75 μm, 약 0.7 내지 75 μm, 약 0.8 내지 75 μm, 약 0.9 내지 75 μm, 약 1 내지 75 μm, 약 1.25 내지 75 μm, 약 1.5 내지 75 μm, 약 1.75 내지 75 μm, 약 2 내지 75 μm, 약 3 내지 75 μm, 약 4 내지 75 μm, 약 5 내지 75 μm, 약 6 내지 75 μm, 약 7 내지 75 μm, 약 8 내지 75 μm, 약 9 내지 75 μm, 약 10 내지 75 μm, 약 15 내지 75 μm, 약 20 내지 75 μm, 약 25 내지 75 μm, 약 30 내지 75 μm, 약 40 내지 75 μm 또는 약 50 내지 75 μm의 공칭 보유 범위를 갖는, 방법.
166. 158, 159, 162 및 163 중 어느 하나에 있어서, 심층 필터가 약 0.01 내지 50 μm, 약 0.05 내지 50 μm, 약 0.1 내지 50 μm, 약 0.2 내지 50 μm, 약 0.3 내지 50 μm, 약 0.4 내지 50 μm, 약 0.5 내지 50 μm, 약 0.6 내지 50 μm, 약 0.7 내지 50 μm, 약 0.8 내지 50 μm, 약 0.9 내지 50 μm, 약 1 내지 50 μm, 약 1.25 내지 50 μm, 약 1.5 내지 50 μm, 약 1.75 내지 50 μm, 약 2 내지 50 μm, 약 3 내지 50 μm, 약 4 내지 50 μm, 약 5 내지 50 μm, 약 6 내지 50 μm, 약 7 내지 50 μm, 약 8 내지 50 μm, 약 9 내지 50 μm, 약 10 내지 50 μm, 약 15 내지 50 μm, 약 20 내지 50 μm, 약 25 내지 50 μm, 약 30 내지 50 μm, 약 40 내지 50 μm 또는 약 50 내지 50 μm의 공칭 보유 범위를 갖는, 방법.
167. 158, 159, 162 및 163 중 어느 하나에 있어서, 심층 필터가 약 0.01 내지 25 μm, 약 0.05 내지 25 μm, 약 0.1 내지 25 μm, 약 0.2 내지 25 μm, 약 0.3 내지 25 μm, 약 0.4 내지 25 μm, 약 0.5 내지 25 μm, 약 0.6 내지 25 μm, 약 0.7 내지 25 μm, 약 0.8 내지 25 μm, 약 0.9 내지 25 μm, 약 1 내지 25 μm, 약 1.25 내지 25 μm, 약 1.5 내지 25 μm, 약 1.75 내지 25 μm, 약 2 내지 25 μm, 약 3 내지 25 μm, 약 4 내지 25 μm, 약 5 내지 25 μm, 약 6 내지 25 μm, 약 7 내지 25 μm, 약 8 내지 25 μm, 약 9 내지 25 μm, 약 10 내지 25 μm, 약 15 내지 25 μm 또는 약 20 내지 25 μm의 공칭 보유 범위를 갖는, 방법.
168. 158, 159, 162 및 163 중 어느 하나에 있어서, 심층 필터가 약 0.01 내지 10 μm, 약 0.05 내지 10 μm, 약 0.1 내지 10 μm, 약 0.2 내지 10 μm, 약 0.3 내지 10 μm, 약 0.4 내지 10 μm, 약 0.5 내지 10 μm, 약 0.6 내지 10 μm, 약 0.7 내지 10 μm, 약 0.8 내지 10 μm, 약 0.9 내지 10 μm, 약 1 내지 10 μm, 약 1.25 내지 10 μm, 약 1.5 내지 10 μm, 약 1.75 내지 10 μm, 약 2 내지 10 μm, 약 3 내지 10 μm, 약 4 내지 10 μm, 약 5 내지 10 μm, 약 6 내지 10 μm, 약 7 내지 10 μm, 약 8 내지 10 μm 또는 약 9 내지 10 μm의 공칭 보유 범위를 갖는, 방법.
169. 158, 159, 162 및 163 중 어느 하나에 있어서, 심층 필터가 약 0.01 내지 8 μm, 약 0.05 내지 8 μm, 약 0.1 내지 8 μm, 약 0.2 내지 8 μm, 약 0.3 내지 8 μm, 약 0.4 내지 8 μm, 약 0.5 내지 8 μm, 약 0.6 내지 8 μm, 약 0.7 내지 8 μm, 약 0.8 내지 8 μm, 약 0.9 내지 8 μm, 약 1 내지 8 μm, 약 1.25 내지 8 μm, 약 1.5 내지 8 μm, 약 1.75 내지 8 μm, 약 2 내지 8 μm, 약 3 내지 8 μm, 약 4 내지 8 μm, 약 5 내지 8 μm, 약 6 내지 8 μm 또는 약 7 내지 8 μm의 공칭 보유 범위를 갖는, 방법.
170. 158, 159, 162 및 163 중 어느 하나에 있어서, 심층 필터가 약 0.01 내지 5 μm, 약 0.05 내지 5 μm, 약 0.1 내지 5 μm, 약 0.2 내지 5 μm, 약 0.3 내지 5 μm, 약 0.4 내지 5 μm, 약 0.5 내지 5 μm, 약 0.6 내지 5 μm, 약 0.7 내지 5 μm, 약 0.8 내지 5 μm, 약 0.9 내지 5 μm, 약 1 내지 5 μm, 약 1.25 내지 5 μm, 약 1.5 내지 5 μm, 약 1.75 내지 5 μm, 약 2 내지 5 μm, 약 3 내지 5 μm 또는 약 4 내지 5 μm의 공칭 보유 범위를 갖는, 방법.
171. 158, 159, 162 및 163 중 어느 하나에 있어서, 심층 필터가 약 0.01 내지 2 μm, 약 0.05 내지 2 μm, 약 0.1 내지 2 μm, 약 0.2 내지 2 μm, 약 0.3 내지 2 μm, 약 0.4 내지 2 μm, 약 0.5 내지 2 μm, 약 0.6 내지 2 μm, 약 0.7 내지 2 μm, 약 0.8 내지 2 μm, 약 0.9 내지 2 μm, 약 1 내지 2 μm, 약 1.25 내지 2 μm, 약 1.5 내지 2 μm, 약 1.75 내지 2 μm, 약 2 내지 2 μm, 약 3 내지 2 μm 또는 약 4 내지 2 μm의 공칭 보유 범위를 갖는, 방법.
172. 158, 159, 162 및 163 중 어느 하나에 있어서, 심층 필터가 약 0.01 내지 1 μm, 약 0.05 내지 1 μm, 약 0.1 내지 1 μm, 약 0.2 내지 1 μm, 약 0.3 내지 1 μm, 약 0.4 내지 1 μm, 약 0.5 내지 1 μm, 약 0.6 내지 1 μm, 약 0.7 내지 1 μm, 약 0.8 내지 1 μm 또는 약 0.9 내지 1 μm의 공칭 보유 범위를 갖는, 방법.
173. 158, 159, 162 및 163 중 어느 하나에 있어서, 심층 필터가 약 0.05 내지 50 μm, 0.1 내지 25 μm 0.2 내지 10, μm 0.1 내지 10 μm, 0.2 내지 5 μm 또는 0.25 내지 1 μm의 공칭 보유 범위를 갖는, 방법.
174. 158, 159 및 162 내지 173 중 어느 하나에 있어서, 심층 필터가 1 내지 2500 L/m2, 5 내지 2500 L/m2, 10 내지 2500 L/m2, 25 내지 2500 L/m2, 50 내지 2500 L/m2, 75 내지 2500 L/m2, 100 내지 2500 L/m2, 150 내지 2500 L/m2, 200 내지 2500 L/m2, 300 내지 2500 L/m2, 400 내지 2500 L/m2, 500 내지 2500 L/m2, 750 내지 2500 L/m2, 1000 내지 2500 L/m2, 1500 내지 2500 L/m2 또는 2000 내지 2500 L/m2의 필터 용량을 갖는, 방법.
175. 158, 159 및 162 내지 173 중 어느 하나에 있어서, 심층 필터가 1 내지 1000 L/m2, 5 내지 1000 L/m2, 10 내지 1000 L/m2, 25 내지 1000 L/m2, 50 내지 1000 L/m2, 75 내지 1000 L/m2, 100 내지 1000 L/m2, 150 내지 1000 L/m2, 200 내지 1000 L/m2, 300 내지 1000 L/m2, 400 내지 1000 L/m2, 500 내지 1000 L/m2 또는 750 내지 1000 L/m2의 필터 용량을 갖는, 방법.
176. 155 내지 156 또는 159 내지 170 중 어느 하나에 있어서, 심층 필터가 1 내지 750 L/m2, 5 내지 750 L/m2, 10 내지 750 L/m2, 25 내지 750 L/m2, 50 내지 750 L/m2, 75 내지 750 L/m2, 100 내지 750 L/m2, 150 내지 750 L/m2, 200 내지 750 L/m2, 300 내지 750 L/m2, 400 내지 750 L/m2 또는 500 내지 750 L/m2의 필터 용량을 갖는, 방법.
177. 158, 159 및 162 내지 173 중 어느 하나에 있어서, 심층 필터가 1 내지 500 L/m2, 5 내지 500 L/m2, 10 내지 500 L/m2, 25 내지 500 L/m2, 50 내지 500 L/m2, 75 내지 500 L/m2, 100 내지 500 L/m2, 150 내지 500 L/m2, 200 내지 500 L/m2, 300 내지 500 L/m2 또는 400 내지 500 L/m2의 필터 용량을 갖는, 방법.
178. 158, 159 및 162 내지 173 중 어느 하나에 있어서, 심층 필터가 1 내지 400 L/m2, 5 내지 400 L/m2, 10 내지 400 L/m2, 25 내지 400 L/m2, 50 내지 400 L/m2, 75 내지 400 L/m2, 100 내지 400 L/m2, 150 내지 400 L/m2, 200 내지 400 L/m2 또는 300 내지 400 L/m2의 필터 용량을 갖는, 방법.
179. 158, 159 및 162 내지 173 중 어느 하나에 있어서, 심층 필터가 1 내지 300 L/m2, 5 내지 300 L/m2, 10 내지 300 L/m2, 25 내지 300 L/m2, 50 내지 300 L/m2, 75 내지 300 L/m2, 100 내지 300 L/m2, 150 내지 300 L/m2 또는 200 내지 300 L/m2의 필터 용량을 갖는, 방법.
180. 158, 159 및 162 내지 173 중 어느 하나에 있어서, 심층 필터가 1 내지 200 L/m2, 5 내지 200 L/m2, 10 내지 200 L/m2, 25 내지 200 L/m2, 50 내지 200 L/m2, 75 내지 200 L/m2, 100 내지 200 L/m2 또는 150 내지 200 L/m2의 필터 용량을 갖는, 방법.
181. 158, 159 및 162 내지 173 중 어느 하나에 있어서, 심층 필터가 1 내지 100 L/m2, 5 내지 100 L/m2, 10 내지 100 L/m2, 25 내지 100 L/m2, 50 내지 100 L/m2 또는 75 내지 100 L/m2의 필터 용량을 갖는, 방법.
182. 158, 159 및 162 내지 173 중 어느 하나에 있어서, 심층 필터가 1 내지 50 L/m2, 5 내지 50 L/m2, 10 내지 50 L/m2 또는 25 내지 50 L/m2의 필터 용량을 갖는, 방법.
183. 158, 159, 162 및 182 중 어느 하나에 있어서, 공급 속도가 1 내지 1000 LMH(L/m2/h), 10 내지 1000 LMH, 25 내지 1000 LMH, 50 내지 1000 LMH, 100 내지 1000 LMH, 125 내지 1000 LMH, 150 내지 1000 LMH, 200 내지 1000 LMH, 250 내지 1000 LMH, 300 내지 1000 LMH, 400 내지 1000 LMH, 500 내지 1000 LMH, 600 내지 1000 LMH, 700 내지 1000 LMH, 800 내지 1000 LMH 또는 900 내지 1000 LMH인, 방법.
184. 158, 159, 162 및 182 중 어느 하나에 있어서, 공급 속도가 1 내지 500 LMH, 10 내지 500 LMH, 25 내지 500 LMH, 50 내지 500 LMH, 100 내지 500 LMH, 125 내지 500 LMH, 150 내지 500 LMH, 200 내지 500 LMH, 250 내지 500 LMH, 300 내지 500 LMH 또는 400 내지 500 LMH인, 방법.
185. 158, 159, 162 및 182 중 어느 하나에 있어서, 공급 속도가 1 내지 400 LMH, 10 내지 400 LMH, 25 내지 400 LMH, 50 내지 400 LMH, 100 내지 400 LMH, 125 내지 400 LMH, 150 내지 400 LMH, 200 내지 400 LMH, 250 내지 400 LMH 또는 300 내지 400 LMH인, 방법.
186. 158, 159, 162 및 182 중 어느 하나에 있어서, 공급 속도가 1 내지 250 LMH, 10 내지 250 LMH, 25 내지 250 LMH, 50 내지 250 LMH, 100 내지 250 LMH, 125 내지 250 LMH, 150 내지 250 LMH 또는 200 내지 250 LMH인, 방법.
187. 158, 159, 162 및 182 중 어느 하나에 있어서, 공급 속도가 약 1, 약 2, 약 5, 약 10, 약 25, 약 50, 약 60, 약 70, 약 80, 약 90, 약 100, 약 110, 약 120, 약 130, 약 140, 약 150, 약 160, 약 170, 약 180, 약 190, 약 200, 약 210, 약 220, 약 230, 약 240, 약 250, 약 260, 약 270, 약 280, 약 290, 약 300, 약 310, 약 320, 약 330, 약 340, 약 350, 약 360, 약 370, 약 380, 약 390, 약 400, 약 425, 약 450, 약 475, 약 500, 약 525, 약 550, 약 575, 약 600, 약 650, 약 700, 약 750, 약 800, 약 850, 약 900, 약 950 또는 약 1000 LMH인, 방법.
188. 158 내지 187 중 어느 하나에 있어서, 여과물이 마이크로여과되는, 방법.
189. 188에 있어서, 상기 마이크로여과가 데드-엔드 여과인, 방법.
190. 188에 있어서, 상기 마이크로여과가 접선 마이크로여과인, 방법.
191. 188 내지 190 중 어느 하나에 있어서, 마이크로여과 필터가 약 0.01 내지 2 μm, 약 0.05 내지 2 μm, 약 0.1 내지 2 μm, 약 0.2 내지 2 μm, 약 0.3 내지 2 μm, 약 0.4 내지 2 μm, 약 0.45 내지 2 μm, 약 0.5 내지 2 μm, 약 0.6 내지 2 μm, 약 0.7 내지 2 μm, 약 0.8 내지 2 μm, 약 0.9 내지 2 μm, 약 1 내지 2 μm, 약 1.25 내지 2 μm, 약 1.5 내지 2 μm, 또는 약 1.75 내지 2 μm의 공칭 보유 범위를 갖는, 방법.
192. 188 내지 190 중 어느 하나에 있어서, 마이크로여과 필터가 약 0.01 내지 1 μm, 약 0.05 내지 1 μm, 약 0.1 내지 1 μm, 약 0.2 내지 1 μm, 약 0.3 내지 1 μm, 약 0.4 내지 1 μm, 약 0.45 내지 1 μm, 약 0.5 내지 1 μm, 약 0.6 내지 1 μm, 약 0.7 내지 1 μm, 약 0.8 내지 1 μm 또는 약 0.9 내지 1 μm의 공칭 보유 범위를 갖는, 방법.
193. 188 내지 190 중 어느 하나에 있어서, 마이크로여과 필터가 약 0.01, 약 0.05, 약 0.1, 약 0.2, 약 0.3, 약 0.4, 약 0.45, 약 0.5, 약 0.6, 약 0.7, 약 0.8, 약 0.9, 약 1, 약 1.1, 약 1.2, 약 1.3, 약 1.4, 약 1.5, 약 1.6, 약 1.7, 약 1.8, 약 1.9 또는 약 2 μm의 공칭 보유 범위를 갖는, 방법.
194. 188 내지 190 중 어느 하나에 있어서, 마이크로여과 필터가 약 0.45 μm의 공칭 보유 범위를 갖는, 방법.
195. 188 내지 194 중 어느 하나에 있어서, 마이크로여과 필터가 100 내지 5000 L/m2, 200 내지 5000 L/m2, 300 내지 5000 L/m2, 400 내지 5000 L/m2, 500 내지 5000 L/m2, 750 내지 5000 L/m2, 1000 내지 5000 L/m2, 1500 내지 5000 L/m2, 2000 내지 5000 L/m2, 3000 내지 5000 L/m2 또는 4000 내지 5000 L/m2의 필터 용량을 갖는, 방법.
196. 188 내지 194 중 어느 하나에 있어서, 마이크로여과 필터가 100 내지 2500 L/m2, 200 내지 2500 L/m2, 300 내지 2500 L/m2, 400 내지 2500 L/m2, 500 내지 2500 L/m2, 750 내지 2500 L/m2, 1000 내지 2500 L/m2, 1500 내지 2500 L/m2 또는 2000 내지 2500 L/m2의 필터 용량을 갖는, 방법.
197. 188 내지 194 중 어느 하나에 있어서, 마이크로여과 필터가 100 내지 1500 L/m2, 200 내지 1500 L/m2, 300 내지 1500 L/m2, 400 내지 1500 L/m2, 500 내지 1500 L/m2, 750 내지 1500 L/m2 또는 1000 내지 1500 L/m2의 필터 용량을 갖는, 방법.
198. 188 내지 194 중 어느 하나에 있어서, 마이크로여과 필터가 100 내지 1250 L/m2, 200 내지 1250 L/m2, 300 내지 1250 L/m2, 400 내지 1250 L/m2, 500 내지 1250 L/m2, 750 내지 1250 L/m2 또는 1000 내지 1250 L/m2의 필터 용량을 갖는, 방법.
199. 188 내지 194 중 어느 하나에 있어서, 마이크로여과 필터가 100 내지 1000 L/m2, 200 내지 1000 L/m2, 300 내지 1000 L/m2, 400 내지 1000 L/m2, 500 내지 1000 L/m2 또는 750 내지 1000 L/m2의 필터 용량을 갖는, 방법.
200. 188 내지 194 중 어느 하나에 있어서, 마이크로여과 필터가 100 내지 750 L/m2, 200 내지 750 L/m2, 300 내지 750 L/m2, 400 내지 750 L/m2 또는 500 내지 750 L/m2의 필터 용량을 갖는, 방법.
201. 188 내지 194 중 어느 하나에 있어서, 마이크로여과 필터가 100 내지 600 L/m2, 200 내지 600 L/m2, 300 내지 600 L/m2, 400 내지 600 L/m2 또는 400 내지 600 L/m2의 필터 용량을 갖는, 방법.
202. 188 내지 194 중 어느 하나에 있어서, 마이크로여과 필터가 100 내지 500 L/m2, 200 내지 500 L/m2, 300 내지 500 L/m2 또는 400 내지 500 L/m2의 필터 용량을 갖는, 방법.
203. 188 내지 194 중 어느 하나에 있어서, 마이크로여과 필터가 100, 약 150, 약 200, 약 250, 약 300, 약 350, 약 400, 약 450, 약 500, 약 550, 약 600, 약 650, 약 700, 약 750, 약 800, 약 850, 약 900, 약 950, 약 1000, 약 1050, 약 1100, 약 1150, 약 1200, 약 1250, 약 1300, 약 1350, 약 1400, 약 1450, 약 1500, 약 1550, 약 1600, 약 1650, 약 1700, 약 1750, 약 1800, 약 1850, 약 1900, 약 1950, 약 2000, 약 2050, 약 2100, 약 2150, 약 2200, 약 2250, 약 2300, 약 2350, 약 2400, 약 2450 또는 약 2500 L/m2의 필터 용량을 갖는, 방법.
204. 158 내지 203 중 어느 하나에 있어서, 여과물이 한외여과 및/또는 정용여과에 의해 추가 처리되는, 방법.
205. 158 내지 203 중 어느 하나에 있어서, 여과물이 한외여과에 의해 추가 처리되는, 방법.
206. 204 또는 205에 있어서, 한외여과 막의 분자량 컷 오프가 약 5 kDa 내지 1000 kDa인, 방법.
207. 204 또는 205에 있어서, 한외여과 막의 분자량 컷 오프가 약 10 kDa 내지 750 kDa인, 방법.
208. 204 또는 205에 있어서, 한외여과 막의 분자량 컷 오프가 약 10 kDa 내지 500 kDa인, 방법.
209. 204 또는 205에 있어서, 한외여과 막의 분자량 컷 오프가 약 10 kDa 내지 300 kDa인, 방법.
210. 204 또는 205에 있어서, 한외여과 막의 분자량 컷 오프가 약 10 kDa 내지 100 kDa인, 방법.
211. 204 또는 205에 있어서, 한외여과 막의 분자량 컷 오프가 약 10 kDa 내지 50 kDa인, 방법.
212. 204 또는 205에 있어서, 한외여과 막의 분자량 컷 오프가 약 10 kDa 내지 30 kDa인, 방법.
213. 204 또는 205에 있어서, 한외여과 막의 분자량 컷 오프가 약 5 kDa 내지 1000 kDa, 약 10 kDa 내지 1000 kDa 약 20 kDa 내지 1000 kDa, 약 30 kDa 내지 1000 kDa, 약 40 kDa 내지 1000 kDa, 약 50 kDa 내지 1000 kDa, 약 75 kDa 내지 1000 kDa, 약 100 kDa 내지 1000 kDa, 약 150 kDa 내지 1000 kDa, 약 200 kDa 내지 1000 kDa, 약 300 kDa 내지 1000 kDa, 약 400 kDa 내지 1000 kDa, 약 500 kDa 내지 1000 kDa 또는 약 750 kDa 내지 1000 kDa인, 방법.
214. 204 또는 205에 있어서, 한외여과 막의 분자량 컷 오프가 약 5 kDa 내지 500 kDa, 약 10 kDa 내지 500 kDa, 약 20 kDa 내지 500 kDa, 약 30 kDa 내지 500 kDa, 약 40 kDa 내지 500 kDa, 약 50 kDa 내지 500 kDa, 약 75 kDa 내지 500 kDa, 약 100 kDa 내지 500 kDa, 약 150 kDa 내지 500 kDa, 약 200 kDa 내지 500 kDa, 약 300 kDa 내지 500 kDa 또는 약 400 kDa 내지 500 kDa인, 방법.
215. 204 또는 205에 있어서, 한외여과 막의 분자량 컷 오프가 5 kDa 내지 300 kDa, 약 10 kDa 내지 300 kDa, 약 20 kDa 내지 300 kDa, 약 30 kDa 내지 300 kDa, 약 40 kDa 내지 300 kDa, 약 50 kDa 내지 300 kDa, 약 75 kDa 내지 300 kDa, 약 100 kDa 내지 300 kDa, 약 150 kDa 내지 300 kDa 또는 약 200 kDa 내지 300 kDa인, 방법.
216. 204 또는 205에 있어서, 한외여과 막의 분자량 컷 오프가 약 5 kDa 내지 100 kDa, 약 10 kDa 내지 100 kDa, 약 20 kDa 내지 100 kDa, 약 30 kDa 내지 100 kDa, 약 40 kDa 내지 100 kDa, 약 50 kDa 내지 100 kDa 또는 약 75 kDa 내지 100 kDa인, 방법.
217. 204 또는 205에 있어서, 한외여과 막의 분자량 컷 오프가 약 5 kDa, 약 10 kDa, 약 20 kDa, 약 30 kDa, 약 40 kDa, 약 50 kDa, 약 60 kDa, 약 70 kDa, 약 80 kDa, 약 90 kDa, 약 100 kDa, 약 110 kDa, 약 120 kDa, 약 130 kDa, 약 140 kDa, 약 150 kDa, 약 200 kDa, 약 250 kDa, 약 300 kDa, 약 400 kDa, 약 500 kDa, 약 750 kDa 또는 약 1000 kDa인, 방법.
218. 204 내지 217에 중 어느 하나에 있어서, 한외여과 단계의 농축 계수가 약 1.5 내지 약 10인, 방법.
219. 204 내지 217에 중 어느 하나에 있어서, 농축 계수가 약 2 내지 약 8인, 방법.
220. 204 내지 217에 중 어느 하나에 있어서, 농축 계수가 약 2 내지 약 5인, 방법.
221. 204 내지 217에 중 어느 하나에 있어서, 농축 계수가 약 1.5, 약 2.0, 약 2.5, 약 3.0, 약 3.5, 약 4.0, 약 4.5, 약 5.0, 약 5.5, 약 6.0, 약 6.5, 약 7.0, 약 7.5, 약 8.0, 약 8.5, 약 9.0, 약 9.5 또는 약 10.0인, 방법.
222. 204 내지 217에 중 어느 하나에 있어서, 농축 계수가 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 또는 약 6인, 방법.
223. 204 내지 222 중 어느 하나에 있어서, 상기 한외여과 단계가 약 20℃ 내지 약 90℃의 온도에서 수행되는, 방법.
224. 204 내지 222 중 어느 하나에 있어서, 상기 한외여과 단계가 약 35℃ 내지 약 80℃의 온도, 약 40℃ 내지 약 70℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 65℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 60℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 55℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 55℃ 또는 약 45℃ 내지 약 55℃의 온도에서 수행되는, 방법.
225. 204 내지 222 중 어느 하나에 있어서, 상기 한외여과 단계가 약 20℃, 약 21℃, 약 22℃, 약 23℃, 약 24℃, 약 25℃, 약 26℃, 약 27℃, 약 28℃, 약 29℃, 약 30℃, 약 31℃, 약 32℃, 약 33℃, 약 34℃, 약 35℃, 약 36℃, 약 37℃, 약 38℃, 약 39℃, 약 40℃, 약 41℃, 약 42℃, 약 43℃, 약 44℃, 약 45℃, 약 46℃, 약 47℃, 약 48℃, 약 49℃, 약 50℃, 약 51℃, 약 52℃, 약 53℃, 약 54℃, 약 55℃, 약 56℃, 약 57℃, 약 58℃, 약 59℃, 약 60℃, 약 61℃, 약 62℃, 약 63℃, 약 64℃, 약 65℃, 약 66℃, 약 67℃, 약 68℃, 약 69℃, 약 70℃, 약 71℃, 약 72℃, 약 73℃, 약 74℃, 약 75℃, 약 76℃, 약 77℃, 약 78℃, 약 79℃ 또는 약 80℃의 온도에서 수행되는, 방법.
226. 204 내지 222 중 어느 하나에 있어서, 상기 한외여과 단계가 약 50℃의 온도에서 수행되는, 방법.
227. 158 내지 226 중 어느 하나에 있어서, 한외여과 여과물이 정용여과에 의해 처리되는, 방법.
228. 227에 있어서, 대체 용액이 물인, 방법.
229. 227에 있어서, 대체 용액이 물 중 염수인, 방법.
230. 229에 있어서, 염이 마그네슘 클로라이드, 칼륨 클로라이드, 나트륨 클로라이드 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
231. 229에 있어서, 염이 나트륨 클로라이드인, 방법.
232. 229에 있어서, 대체 용액이 약 1 mM, 약 5 mM, 약 10 mM, 약 15 mM, 약 20 mM, 약 25 mM, 약 30 mM, 약 35 mM, 약 40 mM, 약 45 mM, 약 50 mM, 약 55 mM, 약 60 mM, 약 65 mM, 약 70 mM, 약 80 mM, 약 90 mM, 약 100 mM, 약 110 mM, 약 120 mM, 약 130 mM, 약 140 mM, 약 150 mM, 약 160 mM, 약 170 mM, 약 180 mM, 약 190 mM, 약 200 mM, 약 250 mM, 약 300 mM, 약 350 mM, 약 400 mM, 약 450 mM 또는 약 500 mM의 나트륨 클로라이드인, 방법.
233. 227에 있어서, 대체 용액이 완충 용액인, 방법.
234. 227에 있어서, 대체 용액이 완충 용액이되, 완충제가 N-(2-아세트아미도)-아미노에탄설폰산(ACES), 아세트산의 염(아세테이트), N-(2-아세트아미도)-이미노다이아세트산(ADA), 2-아미노에탄설폰산(AES, 타우린), 암모니아, 2-아미노-2-메틸-1-프로판올(AMP), 2-아미노-2-메틸 내지 1,3-프로판다이올(AMPD), 암메다이올, N-(1,1-다이메틸-2-하이드록시에틸)-3-아미노-2-하이드록시프로판설폰산(AMPSO), N,N-비스-(2-하이드록시에틸)-2-아미노에탄설폰산(BES), 나트륨 수소 카보네이트(바이카보네이트), N,N'-비스(2-하이드록시에틸)-글리신(바이신), [비스-(2-하이드록시에틸)-이미노]-트리스-(하이드록시메틸메탄)(비스-트리스), 1,3-비스[트리스(하이드록시메틸)-메틸아미노]프로판(비스-트리스-프로판), 붕산, 다이메틸아르신산(카코딜레이트), 3-(사이클로헥실아미노)-프로판설폰산(CAPS), 3-(사이클로헥실아미노)-2-하이드록시-1-프로판설폰산(CAPSO), 나트륨 카보네이트(카보네이트), 사이클로헥실아미노에탄설폰산(CHES), 시트르산의 염(시트레이트), 3-[N-비스(하이드록시에틸)아미노]-2-하이드록시프로판설폰산(DIPSO), 포름산의 염(포르메이트), 글리신, 글리실글리신, N-(2-하이드록시에틸)-피페라진-N'-에탄설폰산(HEPES), N-(2-하이드록시에틸)-피페라진-N'-3-프로판설폰산(HEPPS, EPPS), N-(2-하이드록시에틸)-피페라진-N'-2-하이드록시프로판설폰산(HEPPSO), 이미다졸, 말산의 염(말레이트), 말레산의 염(말리에이트), 2-(N-모르폴리노)-에탄설폰산(MES), 3-(N-모르폴리노)-프로판설폰산(MOPS), 3-(N-모르폴리노)-2-하이드록시프로판설폰산(MOPSO), 인산의 염(포스페이트), 피페라진-N,N'-비스(2-에탄설폰산)(PIPES), 피페라진-N,N'-비스(2-하이드록시프로판설폰산)(POPSO), 피리딘, 숙신산의 염(숙시네이트), 3-{[트리스(하이드록시메틸)-메틸]-아미노}-프로판설폰산(TAPS), 3-[N-트리스(하이드록시메틸)-메틸아미노]-2-하이드록시프로판설폰산(TAPSO), 트라이에탄올아민(TEA), 2-[트리스(하이드록시메틸)-메틸아미노]-에탄설폰산(TES), N-[트리스(하이드록시메틸)-메틸]-글리신(트라이신) 및 트리스(하이드록시메틸)-아미노메탄(트리스)으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
235. 227에 있어서, 대체 용액이 완충 용액이되, 완충제가 아세트산의 염(아세테이트), 시트르산의 염(시트레이트), 포름산의 염(포르메이트), 말산의 염(말레이트), 말레산의 염(말리에이트), 인산의 염(포스페이트) 및 숙신산의 염(숙시네이트)으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
236. 227에 있어서, 대체 용액이 완충 용액이되, 완충제가 시트르산의 염(시트레이트) 으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
237. 227에 있어서, 대체 용액이 완충 용액이되, 완충제가 숙신산의 염(숙시네이트)인, 방법.
238. 234 내지 237 중 어느 하나에 있어서, 상기 염이 나트륨 염인, 방법.
239. 234 내지 237 중 어느 하나에 있어서, 상기 염이 칼륨 염인, 방법.
240. 233 내지 239 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 완충제의 pH가 약 4.0 내지 11.0, 약 5.0 내지 10.0, 약 5.5 내지 9.0, 약 6.0 내지 8.0, 약 6.0 내지 7.0, 약 6.5 내지 7.5, 약 6.5 내지 7.0 또는 약 6.0 내지 7.5인, 방법.
241. 233 내지 239 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 완충제의 pH가 약 4.0, 약 4.5, 약 5.0, 약 5.5, 약 6.0, 약 6.5, 약 7.0, 약 7.5, 약 8.0, 약 8.5, 약 9.0, 약 9.5, 약 10.0, 약 10.5 또는 약 11.0인, 방법.
242. 233 내지 239 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 완충제의 pH가 약 6.0, 약 6.5, 약 7.0, 약 7.5, 약 8.0, 약 8.5 또는 약 9.0인, 방법.
243. 226 내지 231 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 완충제의 pH가 약 6.5, 약 7.0 또는 약 7.5인, 방법.
244. 233 내지 239 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 완충제의 pH는 약 7.0인, 방법.
245. 233 내지 244 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 완충제의 농도가 약 0.01 mM 내지 100 mM, 약 0.1 mM 내지 100 mM, 약 0.5 mM 내지 100 mM, 약 1 mM 내지 100 mM, 약 2 mM 내지 100 mM, 약 3 mM 내지 100 mM, 약 4 mM 내지 100 mM, 약 5 mM 내지 100 mM, 약 6 mM 내지 100 mM, 약 7 mM 내지 100 mM, 약 8 mM 내지 100 mM, 약 9 mM 내지 100 mM, 약 10 mM 내지 100 mM, 약 11 mM 내지 100 mM, 약 12 mM 내지 100 mM, 약 13 mM 내지 100 mM, 약 14 mM 내지 100 mM, 약 15 mM 내지 100 mM, 약 16 mM 내지 100 mM, 약 17 mM 내지 100 mM, 약 18 mM 내지 100 mM, 약 19 mM 내지 100 mM, 약 20 mM 내지 100 mM, 약 25 mM 내지 100 mM, 약 30 mM 내지 100 mM, 약 35 mM 내지 100 mM, 약 40 mM 내지 100 mM, 약 45 mM 내지 100 mM, 약 50 mM 내지 100 mM, 약 55 mM 내지 100 mM, 약 60 mM 내지 100 mM, 약 65 mM 내지 100 mM, 약 70 mM 내지 100 mM, 약 75 mM 내지 100 mM, 약 80 mM 내지 100 mM, 약 85 mM 내지 100 mM, 약 90 mM 내지 100 mM 또는 약 95 mM 내지 100 mM인, 방법.
246. 233 내지 244 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 완충제의 농도가 약 0.01 mM 내지 50 mM, 약 0.1 mM 내지 50 mM, 약 0.5 mM 내지 50 mM, 약 1 mM 내지 50 mM, 약 2 mM 내지 50 mM, 약 3 mM 내지 50 mM, 약 4 mM 내지 50 mM, 약 5 mM 내지 50 mM, 약 6 mM 내지 50 mM, 약 7 mM 내지 50 mM, 약 8 mM 내지 50 mM, 약 9 mM 내지 50 mM, 약 10 mM 내지 50 mM, 약 11 mM 내지 50 mM, 약 12 mM 내지 50 mM, 약 13 mM 내지 50 mM, 약 14 mM 내지 50 mM, 약 15 mM 내지 50 mM, 약 16 mM 내지 50 mM, 약 17 mM 내지 50 mM, 약 18 mM 내지 50 mM, 약 19 mM 내지 50 mM, 약 20 mM 내지 50 mM, 약 25 mM 내지 50 mM, 약 30 mM 내지 50 mM, 약 35 mM 내지 50 mM, 약 40 mM 내지 50 mM 또는 약 45 mM 내지 50 mM인, 방법.
247. 233 내지 244 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 완충제의 농도가 약 0.01 mM 내지 25 mM, 약 0.1 mM 내지 25 mM, 약 0.5 mM 내지 25 mM, 약 1 mM 내지 25 mM, 약 2 mM 내지 25 mM, 약 3 mM 내지 25 mM, 약 4 mM 내지 25 mM, 약 5 mM 내지 25 mM, 약 6 mM 내지 25 mM, 약 7 mM 내지 25 mM, 약 8 mM 내지 25 mM, 약 9 mM 내지 25 mM, 약 10 mM 내지 25 mM, 약 11 mM 내지 25 mM, 약 12 mM 내지 25 mM, 약 13 mM 내지 25 mM, 약 14 mM 내지 25 mM, 약 15 mM 내지 25 mM, 약 16 mM 내지 25 mM, 약 17 mM 내지 25 mM, 약 18 mM 내지 25 mM, 약 19 mM 내지 25 mM 또는 약 20 mM 내지 25 mM인, 방법.
248. 233 내지 244 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 완충제의 농도가 약 0.01 mM 내지 15 mM, 약 0.1 mM 내지 15 mM, 약 0.5 mM 내지 15 mM, 약 1 mM 내지 15 mM, 약 2 mM 내지 15 mM, 약 3 mM 내지 15 mM, 약 4 mM 내지 15 mM, 약 5 mM 내지 15 mM, 약 6 mM 내지 15 mM, 약 7 mM 내지 15 mM, 약 8 mM 내지 15 mM, 약 9 mM 내지 15 mM, 약 10 mM 내지 15 mM, 약 11 mM 내지 15 mM, 약 12 mM 내지 15 mM, 약 13 mM 내지 15 mM 또는 약 14 mM 내지 15 mM인, 방법.
249. 233 내지 244 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 완충제의 농도가 약 0.01 mM 내지 10 mM, 약 0.1 mM 내지 10 mM, 약 0.5 mM 내지 10 mM, 약 1 mM 내지 10 mM, 약 2 mM 내지 10 mM, 약 3 mM 내지 10 mM, 약 4 mM 내지 10 mM, 약 5 mM 내지 10 mM, 약 6 mM 내지 10 mM, 약 7 mM 내지 10 mM, 약 8 mM 내지 10 mM 또는 약 9 mM 내지 10 mM인, 방법.
250. 233 내지 244 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 완충제의 농도가 약 0.01 mM, 약 0.05 mM, 약 0.1 mM, 약 0.2 mM, 약 0.3 mM, 약 0.4 mM, 약 0.5 mM, 약 0.6 mM, 약 0.7 mM, 약 0.8 mM, 약 0.9 mM, 약 1 mM, 약 2 mM, 약 3 mM, 약 4 mM, 약 5 mM, 약 6 mM, 약 7 mM, 약 8 mM, 약 9 mM, 약 10 mM, 약 11 mM, 약 12 mM, 약 13 mM, 약 14 mM, 약 15 mM, 약 16 mM, 약 17 mM, 약 18 mM, 약 19 mM, 약 20 mM, 약 25 mM, 약 30 mM, 약 35 mM, 약 40 mM, 약 45 mM, 약 50 mM, 약 55 mM, 약 60 mM, 약 65 mM, 약 70 mM, 약 75 mM, 약 80 mM, 약 85 mM, 약 90 mM, 약 95 또는 약 100 mM인, 방법.
251. 233 내지 244 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 완충제의 농도가 약 0.1 mM, 약 0.2 mM, 약 1 mM, 약 5 mM, 약 10 mM, 약 15 mM, 약 20 mM, 약 30 mM, 약 40 mM, 또는 약 50 mM인, 방법.
252. 233 내지 244 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 완충제의 농도가 약 10 mM인, 방법.
253. 233 내지 252 중 어느 하나에 있어서, 대체 용액이 킬레이트제를 포함하는, 방법.
254. 233 내지 252 중 어느 하나에 있어서, 대체 용액이 명반 킬레이트제를 포함하는, 방법.
255. 233 내지 252 중 어느 하나에 있어서, 대체 용액이 에틸렌다이아민테트라이세테이트(EDTA), N-(2-하이드록시에틸)에틸렌다이아민-N,N',N'-트라이아세트산(EDTA-OH), 하이드록시 에틸렌다이아민 트라이아세트산(HEDTA), 에틸렌글리콜-비스(2-아미노에틸에터)-N,N,N',N'-테트라아세트산(EGTA), 1,2-사이클로헥산다이아민-N,N,N',N'-테트라아세트산(CyDTA), 다이에틸렌트라이아민-N,N,N',N",N"-펜타아세트산(DTPA), 1,3-다이아미노프로판-2-올-N,N,N',N'-테트라아세트산(DPTA-OH), 에틸렌다이아민-N,N'-비스(2-하이드록시페닐아세트산)(EDDHA), 에틸렌다이아민-N,N'-다이프로피온산 다이하이드로클로라이드(EDDP), 에틸렌다이아민테트라키스(메틸렌설폰산)(EDTPO), 니트릴로트리스(메틸렌포스폰산)(NTPO), 이미노다이아세트산(IDA), 하이드록시이미노다이아세트산(HIDA), 니트릴로트라이아세트산(NTP), 트라이에틸렌테트라민헥사아세트산(TTHA), 다이머캅토숙신산(DMSA), 2,3-다이머캅토-1-프로판설폰산(DMPS), 알파리포산(ALA), 니트릴로트라이아세트산(NTA), 티아민테트라하이드로퓨르퓨르일다이설파이드(TTFD), 다이머캅롤, 페니실아민, 데페록사민(DFOA), 데페라시록스, 포스포네이트, 시트르산의 염(시트레이트) 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 킬레이트제를 포함하는, 방법.
256. 233 내지 255 중 어느 하나에 있어서, 대체 용액이 에틸렌다이아민테트라이세테이트(EDTA), N-(2-하이드록시에틸)에틸렌다이아민-N,N',N'-트라이아세트산(EDTA-OH), 하이드록시 에틸렌다이아민 트라이아세트산(HEDTA), 에틸렌글리콜-비스(2-아미노에틸에터)-N,N,N',N'-테트라아세트산(EGTA), 1,2-사이클로헥산다이아민-N,N,N',N'-테트라아세트산(CyDTA), 다이에틸렌트라이아민-N,N,N',N",N"-펜타아세트산(DTPA), 1,3-다이아미노프로판-2-올-N,N,N',N'-테트라아세트산(DPTA-OH), 에틸렌다이아민-N,N'-비스(2-하이드록시페닐아세트산)(EDDHA), 시트르산의 염(시트레이트) 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 킬레이트제를 포함하는, 방법.
257. 233 내지 254 중 어느 하나에 있어서, 대체 용액이 에틸렌다이아민테트라이세테이트(EDTA)를 킬레이트제로서 포함하는, 방법.
258. 233 내지 254 중 어느 하나에 있어서, 대체 용액이 시트르산의 염(시트레이트)을 킬레이트제로서 포함하는, 방법.
259. 233 내지 254 중 어느 하나에 있어서, 대체 용액이 나트륨 시트레이트를 킬레이트제로서 포함하는, 방법.
260. 253 내지 258 중 어느 하나에 있어서, 대체 용액 중 킬레이트제의 농도는 1 내지 500 mM인, 방법.
261. 253 내지 258 중 어느 하나에 있어서, 대체 용액 중 킬레이트제의 농도는 2 내지 400 mM인, 방법.
262. 253 내지 258 중 어느 하나에 있어서, 대체 용액 중 킬레이트제의 농도가 10 내지 400 mM인, 방법.
263. 253 내지 258 중 어느 하나에 있어서, 대체 용액 중 킬레이트제의 농도가 10 내지 200 mM인, 방법.
264. 253 내지 258 중 어느 하나에 있어서, 대체 용액 중 킬레이트제의 농도가 10 내지 100 mM인, 방법.
265. 253 내지 258 중 어느 하나에 있어서, 대체 용액 중 킬레이트제의 농도가 10 내지 50 mM인, 방법.
266. 253 내지 258 중 어느 하나에 있어서, 대체 용액 중 킬레이트제의 농도가 10 내지 30 mM인, 방법.
267. 253 내지 258 중 어느 하나에 있어서, 대체 용액 중 킬레이트제의 농도가 약 0.01 mM, 약 0.05 mM, 약 0.1 mM, 약 0.2 mM, 약 0.3 mM, 약 0.4 mM, 약 0.5 mM, 약 0.6 mM, 약 0.7 mM, 약 0.8 mM, 약 0.9 mM, 약 1 mM, 약 2 mM, 약 3 mM, 약 4 mM, 약 5 mM, 약 6 mM, 약 7 mM, 약 8 mM, 약 9 mM, 약 10 mM, 약 11 mM, 약 12 mM, 약 13 mM, 약 14 mM, 약 15 mM, 약 16 mM, 약 17 mM, 약 18 mM, 약 19 mM, 약 20 mM, 약 21 mM, 약 22 mM, 약 23 mM, 약 24 mM, 약 25 mM, 약 26 mM, 약 27 mM, 약 28 mM, 약 29 mM, 약 30 mM, 약 31 mM, 약 32 mM, 약 33 mM, 약 34 mM, 약 35 mM, 약 36 mM, 약 37 mM, 약 38 mM, 약 39 mM, 약 40 mM, 약 45 mM, 약 50 mM, 약 55 mM, 약 60 mM, 약 65 mM, 약 70 mM, 약 75 mM, 약 80 mM, 약 85 mM, 약 90 mM, 약 95 또는 약 100 mM인, 방법.
268. 253 내지 258 중 어느 하나에 있어서, 대체 용액 중 킬레이트제의 농도가 약 5 mM, 약 10 mM, 약 15 mM, 약 20 mM, 약 25 mM, 약 30 mM, 약 35 mM, 약 40 mM, 약 45 mM, 약 50 mM, 약 55 mM, 약 60 mM, 약 65 mM, 약 70 mM, 약 75 mM, 약 80 mM, 약 85 mM, 약 90 mM, 약 95 mM 또는 약 100 mM인, 방법.
269. 253 내지 258 중 어느 하나에 있어서, 대체 용액 중 킬레이트제의 농도가 약 15 mM, 약 20 mM, 약 25 mM, 약 30 mM, 약 35 mM, 약 40 mM, 약 45 mM 또는 약 50 mM인, 방법.
270. 233 내지 269 중 어느 하나에 있어서, 대체 용액이 염을 포함하는, 방법.
271. 270에 있어서, 염이 마그네슘 클로라이드, 칼륨 클로라이드, 나트륨 클로라이드 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
272. 270에 있어서, 염이 나트륨 클로라이드인 방법.
273. 270 내지 272 중 어느 하나에 있어서, 대체 용액이 나트륨 클로라이드를 1 약 1, 약 5, 약 10, 약 15, 약 20, 약 25, 약 30, 약 35, 약 40, 약 45, 약 50, 약 55, 약 60, 약 65, 약 70, 약 80, 약 90, 약 100, 약 110, 약 120, 약 130, 약 140, 약 150, 약 160, 약 170, 약 180, 약 190, 약 200, 약 250 또는 약 300 mM으로 포함하는, 방법.
274. 227 내지 273 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 부피가 적어도 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 또는 50이다.
275. 227 내지 273 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 부피가 약 1, 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 약 10, 약 11, 약 12, 약 13, 약 14, 약 15, 약 16, 약 17, 약 18, 약 19, 약 20, 약 21, 약 22, 약 23, 약 24, 약 25, 약 26, 약 27, 약 28, 약 29, 약 30, 약 31, 약 32, 약 33, 약 34, 약 35, 약 36, 약 37, 약 38, 약 39, 약 40, 약 41, 약 42, 약 43, 약 44, 약 45, 약 46, 약 47, 약 48, 약 49, 약 50, 약 55, 약 60, 약 65, 약 70, 약 75, 약 80, 약 85, 약 90, 약 95 또는 약 100.
276. 227 내지 273 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 부피가 약 5, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 약 10, 약 11, 약 12, 약 13, 약 14 또는 약 15.
277. 227 내지 276 중 어느 하나에 있어서, 상기 정용여과 단계가 약 20℃ 내지 약 90℃의 온도에서 수행되는, 방법.
278. 227 내지 276 중 어느 하나에 있어서, 상기 정용여과 단계가 약 35℃ 내지 약 80℃의 온도, 약 40℃ 내지 약 70℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 65℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 60℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 55℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 55℃ 또는 약 45℃ 내지 약 55℃의 온도에서 수행된다.
279. 227 내지 276 중 어느 하나에 있어서, 상기 정용여과 단계가 약 20℃, 약 21℃, 약 22℃, 약 23℃, 약 24℃, 약 25℃, 약 26℃, 약 27℃, 약 28℃, 약 29℃, 약 30℃, 약 31℃, 약 32℃, 약 33℃, 약 34℃, 약 35℃, 약 36℃, 약 37℃, 약 38℃, 약 39℃, 약 40℃, 약 41℃, 약 42℃, 약 43℃, 약 44℃, 약 45℃, 약 46℃, 약 47℃, 약 48℃, 약 49℃, 약 50℃, 약 51℃, 약 52℃, 약 53℃, 약 54℃, 약 55℃, 약 56℃, 약 57℃, 약 58℃, 약 59℃, 약 60℃, 약 61℃, 약 62℃, 약 63℃, 약 64℃, 약 65℃, 약 66℃, 약 67℃, 약 68℃, 약 69℃, 약 70℃, 약 71℃, 약 72℃, 약 73℃, 약 74℃, 약 75℃, 약 76℃, 약 77℃, 약 78℃, 약 79℃ 또는 약 80℃의 온도에서 수행되는, 방법.
280. 227 내지 276 중 어느 하나에 있어서, 상기 정용여과 단계가 약 50℃의 온도에서 수행되는, 방법.
281. 204 내지 277 중 어느 하나에 있어서, 상기 한외여과 및 정용여과 단계가 수행되는 경우 약 20℃ 내지 약 90℃의 온도에서 수행되는, 방법.
282. 204 내지 277 중 어느 하나에 있어서, 상기 한외여과 및 정용여과 단계가 수행되는 경우 약 35℃ 내지 약 80℃의 온도, 약 40℃ 내지 약 70℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 65℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 60℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 55℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 55℃ 또는 약 45℃ 내지 약 55℃의 온도에서 수행된다.
283. 204 내지 277 중 어느 하나에 있어서, 상기 한외여과 및 정용여과 단계가 수행되는 경우 약 20℃, 약 21℃, 약 22℃, 약 23℃, 약 24℃, 약 25℃, 약 26℃, 약 27℃, 약 28℃, 약 29℃, 약 30℃, 약 31℃, 약 32℃, 약 33℃, 약 34℃, 약 35℃, 약 36℃, 약 37℃, 약 38℃, 약 39℃, 약 40℃, 약 41℃, 약 42℃, 약 43℃, 약 44℃, 약 45℃, 약 46℃, 약 47℃, 약 48℃, 약 49℃, 약 50℃, 약 51℃, 약 52℃, 약 53℃, 약 54℃, 약 55℃, 약 56℃, 약 57℃, 약 58℃, 약 59℃, 약 60℃, 약 61℃, 약 62℃, 약 63℃, 약 64℃, 약 65℃, 약 66℃, 약 67℃, 약 68℃, 약 69℃, 약 70℃, 약 71℃, 약 72℃, 약 73℃, 약 74℃, 약 75℃, 약 76℃, 약 77℃, 약 78℃, 약 79℃ 또는 약 80℃의 온도에서 수행되는, 방법.
284. 204 내지 277 중 어느 하나에 있어서, 상기 한외여과 및 정용여과 단계가 수행되는 경우 약 50℃의 온도에서 수행되는, 방법.
285. 1 내지 284 중 어느 하나에 있어서, 다당류를 함유하는 용액(예컨대 상청액, 여과물 또는 농축물)이 활성탄 여과 단계에 의해 처리되는, 방법.
286. 285에 있어서, 활성탄이 분말, 과립 탄소층, 압착된 탄소 블럭 또는 압출된 탄소 블럭(예컨대 노리트(Norit) 활성 차콜 참고)의 형태인, 방법.
287. 286에 있어서, 활성탄이 약 0.1 내지 20%(중량 부피), 1 내지 15%(중량 부피), 1 내지 10%(중량 부피), 2 내지 10%(중량 부피), 3 내지 10%(중량 부피), 4 내지 10%(중량 부피), 5 내지 10%(중량 부피), 1 내지 5%(중량 부피) 또는 2 내지 5%(중량 부피)로 첨가되는, 방법.
288. 286 또는 287에 있어서, 혼합물이 교반되고 방치되는, 방법.
289. 286 또는 287에 있어서, 혼합물이 교반되고 약 5, 약 10, 약 15, 약 20, 약 30, 약 45, 약 60, 약 90, 약 120, 약 180, 약 240분 또는 그 이상 동안 방치되는, 방법.
290. 286 내지 289 중 어느 하나에 있어서, 이어서, 활성탄이 제거되는, 방법.
291. 286 내지 290 중 어느 하나에 있어서, 활성탄이 원심분리 또는 여과에 의해 제거되는, 방법.
292. 285에 있어서, 용액이 매트릭스 내에 부동화된 활성탄을 통해 여과되는, 방법.
293. 285에 있어서, 상기 매트릭스가 용액에 투과성인 다공성 필터 매질인, 방법.
294. 292 내지 293 중 어느 하나에 있어서, 상기 매트릭스가 지지체 물질을 포함하는, 방법.
295. 292 내지 293 중 어느 하나에 있어서, 상기 매트릭스가 결합제 물질을 포함하는, 방법.
296. 294 내지 295 중 어느 하나에 있어서, 상기 지지체 물질이 합성 중합체인, 방법.
297. 294 내지 295 중 어느 하나에 있어서, 상기 지지체 물질이 천연 유래 중합체인 방법.
298. 296에 있어서, 상기 합성 중합체가 폴리스티렌, 폴리아크릴아미드 또는 폴리메틸 메트아크릴레이트 중 임의의 하나를 포함하는, 방법.
299. 296에 있어서, 상기 합성 중합체가 폴리스티렌, 폴리아크릴아미드 및 폴리메틸 메트아크릴레이트로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
300. 297에 있어서, 상기 천연 유래 중합체가 셀룰로스, 다당류, 덱스트란 또는 아가로스 중 임의의 하나를 포함하는, 방법.
301. 297에 있어서, 상기 천연 유래 중합체가 셀룰로스, 다당류, 덱스트란 및 아가로스로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
302. 294 내지 301 중 어느 하나에 있어서, 상기 중합체 지지체 물질이 존재하는 경우, 상기 중합체 지지체 물질이 역학적 강성을 제공하기 위한 섬유 네트워크 형태인, 방법.
303. 294 내지 302 중 어느 하나에 있어서, 상기 결합제 물질이 존재하는 경우, 상기 결합제 물질이 수지인, 방법.
304. 292 내지 303 중 어느 하나에 있어서, 상기 매트릭스가 막 시트의 형태인, 방법.
305. 292 내지 304 중 어느 하나에 있어서, 매트릭스 내에 부동화된 활성탄이 유동-통과 탄소 카트리지 형태인, 방법.
306. 304에 있어서, 막 시트가 나선형으로 꼬인, 방법.
307. 292 내지 306 중 어느 하나에 있어서, 수개의 디스크가 서로 적층되는, 방법.
308. 307에 있어서, 적층된 디스크의 형태가 렌즈형인, 방법.
309. 292 내지 308 중 어느 하나에 있어서, 탄소 필터 내의 활성탄이 토탄, 갈탄, 목재 또는 코코넛 껍질로부터 유래하는, 방법.
310. 292 내지 309 중 어느 하나에 있어서, 활성탄이 하우징 내에 위치되어 독립적인 필터 단위를 형성하는, 방법.
311. 292 내지 310 중 어느 하나에 있어서, 활성탄이 셀룰로스 매트릭스를 포함하되, 여기에 활성탄 분말이 포획되고 그 자리에서 수지-결합되는, 방법.
312. 285 내지 311 중 어느 하나에 있어서, 활성탄 필터가 약 0.01 내지 100 μm, 약 0.05 내지 100 μm, 약 0.1 내지 100 μm, 약 0.2 내지 100 μm, 약 0.3 내지 100 μm, 약 0.4 내지 100 μm, 약 0.5 내지 100 μm, 약 0.6 내지 100 μm, 약 0.7 내지 100 μm, 약 0.8 내지 100 μm, 약 0.9 내지 100 μm, 약 1 내지 100 μm, 약 1.25 내지 100 μm, 약 1.5 내지 100 μm, 약 1.75 내지 100 μm, 약 2 내지 100 μm, 약 3 내지 100 μm, 약 4 내지 100 μm, 약 5 내지 100 μm, 약 6 내지 100 μm, 약 7 내지 100 μm, 약 8 내지 100 μm, 약 9 내지 100 μm, 약 10 내지 100 μm, 약 15 내지 100 μm, 약 20 내지 100 μm, 약 25 내지 100 μm, 약 30 내지 100 μm, 약 40 내지 100 μm, 약 50 내지 100 μm 또는 약 75 내지 100 μm의 공칭 μm 등급을 갖는, 방법.
313. 285 내지 311 중 어느 하나에 있어서, 활성탄 필터가 약 0.01 내지 50 μm, 약 0.05 내지 50 μm, 약 0.1 내지 50 μm, 약 0.2 내지 50 μm, 약 0.3 내지 50 μm, 약 0.4 내지 50 μm, 약 0.5 내지 50 μm, 약 0.6 내지 50 μm, 약 0.7 내지 50 μm, 약 0.8 내지 50 μm, 약 0.9 내지 50 μm, 약 1 내지 50 μm, 약 1.25 내지 50 μm, 약 1.5 내지 50 μm, 약 1.75 내지 50 μm, 약 2 내지 50 μm, 약 3 내지 50 μm, 약 4 내지 50 μm, 약 5 내지 50 μm, 약 6 내지 50 μm, 약 7 내지 50 μm, 약 8 내지 50 μm, 약 9 내지 50 μm, 약 10 내지 50 μm, 약 15 내지 50 μm, 약 20 내지 50 μm, 약 25 내지 50 μm, 약 30 내지 50 μm, 약 40 내지 50 μm 또는 약 50 내지 50 μm의 공칭 μm 등급을 갖는, 방법.
314. 285 내지 311 중 어느 하나에 있어서, 활성탄 필터가 약 0.01 내지 25 μm, 약 0.05 내지 25 μm, 약 0.1 내지 25 μm, 약 0.2 내지 25 μm, 약 0.3 내지 25 μm, 약 0.4 내지 25 μm, 약 0.5 내지 25 μm, 약 0.6 내지 25 μm, 약 0.7 내지 25 μm, 약 0.8 내지 25 μm, 약 0.9 내지 25 μm, 약 1 내지 25 μm, 약 1.25 내지 25 μm, 약 1.5 내지 25 μm, 약 1.75 내지 25 μm, 약 2 내지 25 μm, 약 3 내지 25 μm, 약 4 내지 25 μm, 약 5 내지 25 μm, 약 6 내지 25 μm, 약 7 내지 25 μm, 약 8 내지 25 μm, 약 9 내지 25 μm, 약 10 내지 25 μm, 약 15 내지 25 μm 또는 약 20 내지 25 μm의 공칭 μm 등급을 갖는, 방법.
315. 285 내지 311 중 어느 하나에 있어서, 활성탄 필터가 약 0.01 내지 10 μm, 약 0.05 내지 10 μm, 약 0.1 내지 10 μm, 약 0.2 내지 10 μm, 약 0.3 내지 10 μm, 약 0.4 내지 10 μm, 약 0.5 내지 10 μm, 약 0.6 내지 10 μm, 약 0.7 내지 10 μm, 약 0.8 내지 10 μm, 약 0.9 내지 10 μm, 약 1 내지 10 μm, 약 1.25 내지 10 μm, 약 1.5 내지 10 μm, 약 1.75 내지 10 μm, 약 2 내지 10 μm, 약 3 내지 10 μm, 약 4 내지 10 μm, 약 5 내지 10 μm, 약 6 내지 10 μm, 약 7 내지 10 μm, 약 8 내지 10 μm 또는 약 9 내지 10 μm의 공칭 μm 등급을 갖는, 방법.
316. 285 내지 311 중 어느 하나에 있어서, 활성탄 필터가 약 0.01 내지 8 μm, 약 0.05 내지 8 μm, 약 0.1 내지 8 μm, 약 0.2 내지 8 μm, 약 0.3 내지 8 μm, 약 0.4 내지 8 μm, 약 0.5 내지 8 μm, 약 0.6 내지 8 μm, 약 0.7 내지 8 μm, 약 0.8 내지 8 μm, 약 0.9 내지 8 μm, 약 1 내지 8 μm, 약 1.25 내지 8 μm, 약 1.5 내지 8 μm, 약 1.75 내지 8 μm, 약 2 내지 8 μm, 약 3 내지 8 μm, 약 4 내지 8 μm, 약 5 내지 8 μm, 약 6 내지 8 μm 또는 약 7 내지 8 μm의 공칭 μm 등급을 갖는, 방법.
317. 285 내지 311 중 어느 하나에 있어서, 활성탄 필터가 약 0.01 내지 5 μm, 약 0.05 내지 5 μm, 약 0.1 내지 5 μm, 약 0.2 내지 5 μm, 약 0.3 내지 5 μm, 약 0.4 내지 5 μm, 약 0.5 내지 5 μm, 약 0.6 내지 5 μm, 약 0.7 내지 5 μm, 약 0.8 내지 5 μm, 약 0.9 내지 5 μm, 약 1 내지 5 μm, 약 1.25 내지 5 μm, 약 1.5 내지 5 μm, 약 1.75 내지 5 μm, 약 2 내지 5 μm, 약 3 내지 5 μm 또는 약 4 내지 5 μm의 공칭 μm 등급을 갖는, 방법.
318. 285 내지 311 중 어느 하나에 있어서, 활성탄 필터가 약 0.01 내지 2 μm, 약 0.05 내지 2 μm, 약 0.1 내지 2 μm, 약 0.2 내지 2 μm, 약 0.3 내지 2 μm, 약 0.4 내지 2 μm, 약 0.5 내지 2 μm, 약 0.6 내지 2 μm, 약 0.7 내지 2 μm, 약 0.8 내지 2 μm, 약 0.9 내지 2 μm, 약 1 내지 2 μm, 약 1.25 내지 2 μm, 약 1.5 내지 2 μm, 약 1.75 내지 2 μm, 약 2 내지 2 μm, 약 3 내지 2 μm 또는 약 4 내지 2 μm의 공칭 μm 등급을 갖는, 방법.
319. 285 내지 311 중 어느 하나에 있어서, 활성탄 필터가 약 0.01 내지 1 μm, 약 0.05 내지 1 μm, 약 0.1 내지 1 μm, 약 0.2 내지 1 μm, 약 0.3 내지 1 μm, 약 0.4 내지 1 μm, 약 0.5 내지 1 μm, 약 0.6 내지 1 μm, 약 0.7 내지 1 μm, 약 0.8 내지 1 μm 또는 약 0.9 내지 1 μm의 공칭 μm 등급을 갖는, 방법.
320. 285 내지 311 중 어느 하나에 있어서, 활성탄 필터가 약 0.05 내지 50 μm, 0.1 내지 25 μm 0.2 내지 10, μm 0.1 내지 10 μm, 0.2 내지 5 μm 또는 0.25 내지 1 μm의 공칭 μm 등급을 갖는, 방법.
321. 285 내지 320 중 어느 하나에 있어서, 활성탄 여과가 1 내지 500 LMH, 10 내지 500 LMH, 15 내지 500 LMH, 20 내지 500 LMH, 25 내지 500 LMH, 30 내지 500 LMH, 40 내지 500 LMH, 50 내지 500 LMH, 100 내지 500 LMH, 125 내지 500 LMH, 150 내지 500 LMH, 200 내지 500 LMH, 250 내지 500 LMH, 300 내지 500 LMH 또는 400 내지 500 LMH의 공급 속도로 수행되는, 방법.
322. 285 내지 320 중 어느 하나에 있어서, 활성탄 여과가 1 내지 200 LMH, 10 내지 200 LMH, 15 내지 200 LMH, 20 내지 200 LMH, 25 내지 200 LMH, 30 내지 200 LMH, 40 내지 200 LMH, 50 내지 200 LMH, 100 내지 200 LMH, 125 내지 200 LMH 또는 150 내지 200 LMH의 공급 속도로 수행되는, 방법.
323. 285 내지 320 중 어느 하나에 있어서, 활성탄 여과가 1 내지 150 LMH, 10 내지 150 LMH, 15 내지 150 LMH, 20 내지 150 LMH, 25 내지 150 LMH, 30 내지 150 LMH, 40 내지 150 LMH, 50 내지 150 LMH, 100 내지 150 LMH 또는 125 내지 150 LMH의 공급 속도로 수행되는, 방법.
324. 285 내지 320 중 어느 하나에 있어서, 활성탄 여과가 1 내지 100 LMH, 10 내지 100 LMH, 15 내지 100 LMH, 20 내지 100 LMH, 25 내지 100 LMH, 30 내지 100 LMH, 40 내지 100 LMH, 또는 50 내지 100 LMH의 공급 속도로 수행되는, 방법.
325. 285 내지 320 중 어느 하나에 있어서, 활성탄 여과가 1 내지 75 LMH, 5 내지 75 LMH, 10 내지 75 LMH, 15 내지 75 LMH, 20 내지 75 LMH, 25 내지 75 LMH, 30 내지 75 LMH, 35 내지 75 LMH, 40 내지 75 LMH, 45 내지 75 LMH, 50 내지 75 LMH, 55 내지 75 LMH, 60 내지 75 LMH, 65 내지 75 LMH 또는 70 내지 75 LMH의 공급 속도로 수행되는, 방법.
326. 285 내지 320 중 어느 하나에 있어서, 활성탄 여과가 1 내지 50 LMH, 5 내지 50 LMH, 7 내지 50 LMH, 10 내지 50 LMH, 15 내지 50 LMH, 20 내지 50 LMH, 25 내지 50 LMH, 30 내지 50 LMH, 35 내지 50 LMH, 40 내지 50 LMH 또는 45 내지 50 LMH의 공급 속도로 수행되는, 방법.
327. 285 내지 320 중 어느 하나에 있어서, 활성탄 여과가 약 1, 약 2, 약 5, 약 10, 약 15, 약 20, 약 25, 약 30, 약 35, 약 40, 약 45, 약 50, 약 55, 약 60, 약 65, 약 70, 약 75, 약 80, 약 85, 약 90, 약 95, 약 100, 약 110, 약 120, 약 130, 약 140, 약 150, 약 160, 약 170, 약 180, 약 190, 약 200, 약 225, 약 250, 약 300, 약 350, 약 400, 약 450, 약 500, 약 550, 약 600, 약 700, 약 800, 약 900, 약 950 또는 약 1000 LMH의 공급 속도로 수행되는, 방법.
328. 285 내지 327에 중 어느 하나에 있어서, 용액이 활성탄 필터에 의해 처리되되, 상기 필터가 5 내지 1000 L/m2, 10 내지 750 L/m2, 15 내지 500 L/m2, 20 내지 400 L/m2, 25 내지 300 L/m2, 30 내지 250 L/m2, 40 내지 200 L/m2 또는 30 내지 100 L/m2의 필터 용량을 갖는, 방법.
329. 285 내지 327에 중 어느 하나에 있어서, 용액이 활성탄 필터에 의해 처리되되, 상기 필터는 약 5, 약 10, 약 15, 약 20, 약 25, 약 30, 약 35, 약 40, 약 45, 약 50, 약 55, 약 60, 약 65, 약 70, 약 75, 약 80, 약 85, 약 90, 약 100, 약 125, 약 150, 약 175, 약 200, 약 225, 약 250, 약 275, 약 300, 약 400, 약 500, 약 600, 약 700, 약 800, 약 900, 또는 약 1000 L/m2의 필터 용량을 갖는, 방법.
330. 285 내지 329 중 어느 하나에 있어서, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10회의 활성탄 여과 단계가 수행되는, 방법.
331. 285 내지 329 중 어느 하나에 있어서, 1, 2 또는 3회의 활성탄 여과 단계가 수행되는, 방법.
332. 285 내지 329 중 어느 하나에 있어서, 1 또는 2회의 활성탄 여과 단계가 수행되는, 방법.
333. 285 내지 332 중 어느 하나에 있어서, 용액이 일련의 활성탄 필터로 처리되는, 방법.
334. 285 내지 332 중 어느 하나에 있어서, 용액이 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 일련의 활성탄 필터로 처리되는, 방법.
335. 285 내지 332 중 어느 하나에 있어서, 용액이 2, 3, 4 또는 5개의 일련의 활성탄 필터로 처리되는, 방법.
336. 285 내지 332 중 어느 하나에 있어서, 용액이 2개의 일련의 활성탄 필터로 처리되는, 방법.
337. 285 내지 332 중 어느 하나에 있어서, 용액이 3개의 일련의 활성탄 필터로 처리되는, 방법.
338. 285 내지 332 중 어느 하나에 있어서, 용액이 4개의 일련의 활성탄 필터로 처리되는, 방법.
339. 285 내지 332 중 어느 하나에 있어서, 용액이 5개의 일련의 활성탄 필터로 처리되는, 방법.
340. T285 내지 339 중 어느 하나에 있어서, 활성탄 여과 단계가 단일 경로 모드로 수행되는, 방법.
341. T285 내지 339 중 어느 하나에 있어서, 활성탄 여과 단계가 재순환 모드로 수행되는, 방법.
342. 341에 있어서, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 또는 50 사이클의 활성탄 여과가 수행되는, 방법.
343. 341에 있어서, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 사이클의 활성탄 여과가 수행되는, 방법.
344. 341에 있어서, 2 또는 3 사이클의 활성탄 여과가 수행되는, 방법.
345. 341에 있어서, 2 사이클의 활성탄 여과가 수행되는, 방법.
346. 285 내지 345 중 어느 하나에 있어서, 여과물이 추가로 여과되는, 방법.
347. 285 내지 345 중 어느 하나에 있어서, 여과물이 마이크로여과되는, 방법.
348. 347에 있어서, 상기 마이크로여과가 데드-엔드 여과(수직 여과)인, 방법.
349. 347에 있어서, 상기 마이크로여과가 접선 마이크로여과인 방법.
350. 347 내지 349 중 어느 하나에 있어서, 상기 마이크로여과 필터가 약 0.01 내지 2 μm, 약 0.05 내지 2 μm, 약 0.1 내지 2 μm, 약 0.2 내지 2 μm, 약 0.3 내지 2 μm, 약 0.4 내지 2 μm, 약 0.45 내지 2 μm, 약 0.5 내지 2 μm, 약 0.6 내지 2 μm, 약 0.7 내지 2 μm, 약 0.8 내지 2 μm, 약 0.9 내지 2 μm, 약 1 내지 2 μm, 약 1.25 내지 2 μm, 약 1.5 내지 2 μm, 또는 약 1.75 내지 2 μm의 공칭 보유 범위를 갖는, 방법.
351. 347 내지 349 중 어느 하나에 있어서, 상기 마이크로여과 필터가 약 0.01 내지 1 μm, 약 0.05 내지 1 μm, 약 0.1 내지 1 μm, 약 0.2 내지 1 μm, 약 0.3 내지 1 μm, 약 0.4 내지 1 μm, 약 0.45 내지 1 μm, 약 0.5 내지 1 μm, 약 0.6 내지 1 μm, 약 0.7 내지 1 μm, 약 0.8 내지 1 μm 또는 약 0.9 내지 1 μm의 공칭 보유 범위를 갖는, 방법.
352. 347 내지 349 중 어느 하나에 있어서, 상기 마이크로여과 필터가 약 0.01, 약 0.05, 약 0.1, 약 0.2, 약 0.3, 약 0.4, 약 0.45, 약 0.5, 약 0.6, 약 0.7, 약 0.8, 약 0.9, 약 1.0, 약 1.1, 약 1.2, 약 1.3, 약 1.4, 약 1.5, 약 1.6, 약 1.7, 약 1.8, 약 1.9 또는 약 2.0 μm의 공칭 보유 범위를 갖는, 방법.
353. 343 내지 345 중 어느 하나에 있어서, 상기 마이크로여과 필터가 약 0.2 μm의 공칭 보유 범위를 갖는, 방법.
354. 347 내지 353 중 어느 하나에 있어서, 상기 마이크로여과 필터가 100 내지 6000 L/m2, 200 내지 6000 L/m2, 300 내지 6000 L/m2, 400 내지 6000 L/m2, 500 내지 6000 L/m2, 750 내지 6000 L/m2, 1000 내지 6000 L/m2, 1500 내지 6000 L/m2, 2000 내지 6000 L/m2, 3000 내지 6000 L/m2 또는 4000 내지 6000 L/m2의 필터 용량을 갖는, 방법.
355. 347 내지 353 중 어느 하나에 있어서, 상기 마이크로여과 필터가 100 내지 4000 L/m2, 200 내지 4000 L/m2, 300 내지 4000 L/m2, 400 내지 4000 L/m2, 500 내지 4000 L/m2, 750 내지 4000 L/m2, 1000 내지 4000 L/m2, 1500 내지 4000 L/m2, 2000 내지 4000 L/m2, 2500 내지 4000 L/m2, 3000 내지 4000 L/m2, 3000 내지 4000 L/m2 또는 3500 내지 4000 L/m2의 필터 용량을 갖는, 방법.
356. 347 내지 353 중 어느 하나에 있어서, 상기 마이크로여과 필터가 100 내지 3750 L/m2, 200 내지 3750 L/m2, 300 내지 3750 L/m2, 400 내지 3750 L/m2, 500 내지 3750 L/m2, 750 내지 3750 L/m2, 1000 내지 3750 L/m2, 1500 내지 3750 L/m2, 2000 내지 3750 L/m2, 2500 내지 3750 L/m2, 3000 내지 3750 L/m2, 3000 내지 3750 L/m2 또는 3500 내지 3750 L/m2의 필터 용량을 갖는, 방법.
357. 347 내지 353 중 어느 하나에 있어서, 상기 마이크로여과 필터가 100 내지 1250 L/m2, 200 내지 1250 L/m2, 300 내지 1250 L/m2, 400 내지 1250 L/m2, 500 내지 1250 L/m2, 750 내지 1250 L/m2 또는 1000 내지 1250 L/m2의 필터 용량을 갖는, 방법.
358. 347 내지 353 중 어느 하나에 있어서, 상기 마이크로여과 필터가 약 100, 약 200, 약 300, 약 400, 약 550, 약 600, 약 700, 약 800, 약 900, 약 1000, 약 1100, 약 1200, 약 1300, 약 1400, 약 1500, 약 1600, 약 1700, 약 1800, 약 1900, 약 2000, 약 2100, 약 2200, 약 2300, 약 2400, 약 2500, 약 2600, 약 2700, 약 2800, 약 2900, 약 3000, 약 3100, 약 3200, 약 3300, 약 3400, 약 3500, 약 3600, 약 3700, 약 3800, 약 3900, 약 4000, 약 4100, 약 4200, 약 4300, 약 4400, 약 4500, 약 4600, 약 4700, 약 4800, 약 4900, 약 5000, 약 5250, 약 5500, 약 5750 또는 약 6000 L/m2의 필터 용량을 갖는, 방법.
359. 285 내지 359 중 어느 하나에 있어서, 여과물이 한외여과 및/또는 정용여과에 의해 추가 청징되는, 방법.
360. 285 내지 359 중 어느 하나에 있어서, 여과물이 한외여과에 의해 추가 청징되는, 방법.
361. 359 또는 360에 있어서, 한외여과 막의 분자량 컷 오프가 약 5 kDa 내지 1000 kDa인, 방법.
362. 359 또는 360에 있어서, 한외여과 막의 분자량 컷 오프가 약 10 kDa 내지 750 kDa인, 방법.
363. 359 또는 360에 있어서, 한외여과 막의 분자량 컷 오프가 약 10 kDa 내지 500 kDa인, 방법.
364. 359 또는 360에 있어서, 한외여과 막의 분자량 컷 오프가 약 10 kDa 내지 300 kDa인, 방법.
365. 359 또는 360에 있어서, 한외여과 막의 분자량 컷 오프가 약 10 kDa 내지 100 kDa인, 방법.
366. 359 또는 360에 있어서, 한외여과 막의 분자량 컷 오프가 약 10 kDa 내지 50 kDa인, 방법.
367. 359 또는 360에 있어서, 한외여과 막의 분자량 컷 오프가 약 10 kDa 내지 30 kDa인, 방법.
368. 359 또는 360에 있어서, 한외여과 막의 분자량 컷 오프가 약 5 kDa 내지 1000 kDa, 약 10 kDa 내지 1000 kDa 약 20 kDa 내지 1000 kDa, 약 30 kDa 내지 1000 kDa, 약 40 kDa 내지 1000 kDa, 약 50 kDa 내지 1000 kDa, 약 75 kDa 내지 1000 kDa, 약 100 kDa 내지 1000 kDa, 약 150 kDa 내지 1000 kDa, 약 200 kDa 내지 1000 kDa, 약 300 kDa 내지 1000 kDa, 약 400 kDa 내지 1000 kDa, 약 500 kDa 내지 1000 kDa 또는 약 750 kDa 내지 1000 kDa인, 방법.
369. 359 또는 360에 있어서, 한외여과 막의 분자량 컷 오프가 약 5 kDa 내지 500 kDa, 약 10 kDa 내지 500 kDa, 약 20 kDa 내지 500 kDa, 약 30 kDa 내지 500 kDa, 약 40 kDa 내지 500 kDa, 약 50 kDa 내지 500 kDa, 약 75 kDa 내지 500 kDa, 약 100 kDa 내지 500 kDa, 약 150 kDa 내지 500 kDa, 약 200 kDa 내지 500 kDa, 약 300 kDa 내지 500 kDa 또는 약 400 kDa 내지 500 kDa인, 방법.
370. 359 또는 360에 있어서, 한외여과 막의 분자량 컷 오프가 약 5 kDa 내지 300 kDa, 약 10 kDa 내지 300 kDa, 약 20 kDa 내지 300 kDa, 약 30 kDa 내지 300 kDa, 약 40 kDa 내지 300 kDa, 약 50 kDa 내지 300 kDa, 약 75 kDa 내지 300 kDa, 약 100 kDa 내지 300 kDa, 약 150 kDa 내지 300 kDa 또는 약 200 kDa 내지 300 kDa인, 방법.
371. 359 또는 360에 있어서, 한외여과 막의 분자량 컷 오프가 약 5 kDa 내지 100 kDa, 약 10 kDa 내지 100 kDa, 약 20 kDa 내지 100 kDa, 약 30 kDa 내지 100 kDa, 약 40 kDa 내지 100 kDa, 약 50 kDa 내지 100 kDa 또는 약 75 kDa 내지 100 kDa인, 방법.
372. 359 또는 360에 있어서, 한외여과 막의 분자량 컷 오프가 약 5 kDa, 약 10 kDa, 약 20 kDa, 약 30 kDa, 약 40 kDa, 약 50 kDa, 약 60 kDa, 약 70 kDa, 약 80 kDa, 약 90 kDa, 약 100 kDa, 약 110 kDa, 약 120 kDa, 약 130 kDa, 약 140 kDa, 약 150 kDa, 약 200 kDa, 약 250 kDa, 약 300 kDa, 약 400 kDa, 약 500 kDa, 약 750 kDa 또는 약 1000 kDa인, 방법.
373. 359 내지 371 중 어느 하나에 있어서, 한외여과 단계의 농축 계수가 약 1.5 내지 약 10.0인, 방법.
374. 359 내지 371 중 어느 하나에 있어서, 한외여과 단계의 농축 계수가 약 2.0 내지 약 8.0 인, 방법.
375. 359 내지 371 중 어느 하나에 있어서, 한외여과 단계의 농축 계수가 약 2.0 내지 약 5.0 인, 방법.
376. 359 내지 371 중 어느 하나에 있어서, 한외여과 단계의 농축 계수가 약 1.5, 약 2.0, 약 2.5, 약 3.0, 약 3.5, 약 4.0, 약 4.5, 약 5.0, 약 5.5, 약 6.0, 약 6.5, 약 7.0, 약 7.5, 약 8.0, 약 8.5, 약 9.0, 약 9.5 또는 약 10.0. 하나의 양태에서, 농축 계수는 약 2.0, 약 3.0, 약 4.0, 약 5.0, 또는 약 6.0인, 방법.
377. 359 내지 376 중 어느 하나에 있어서, 상기 한외여과 단계가 약 20℃ 내지 약 90℃의 온도에서 수행되는, 방법.
378. 359 내지 376 중 어느 하나에 있어서, 상기 한외여과 단계가 약 35℃ 내지 약 80℃의 온도, 약 40℃ 내지 약 70℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 65℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 60℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 55℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 55℃ 또는 약 45℃ 내지 약 55℃의 온도에서 수행되는, 방법.
379. 359 내지 376 중 어느 하나에 있어서, 상기 한외여과 단계가 약 20℃, 약 21℃, 약 22℃, 약 23℃, 약 24℃, 약 25℃, 약 26℃, 약 27℃, 약 28℃, 약 29℃, 약 30℃, 약 31℃, 약 32℃, 약 33℃, 약 34℃, 약 35℃, 약 36℃, 약 37℃, 약 38℃, 약 39℃, 약 40℃, 약 41℃, 약 42℃, 약 43℃, 약 44℃, 약 45℃, 약 46℃, 약 47℃, 약 48℃, 약 49℃, 약 50℃, 약 51℃, 약 52℃, 약 53℃, 약 54℃, 약 55℃, 약 56℃, 약 57℃, 약 58℃, 약 59℃, 약 60℃, 약 61℃, 약 62℃, 약 63℃, 약 64℃, 약 65℃, 약 66℃, 약 67℃, 약 68℃, 약 69℃, 약 70℃, 약 71℃, 약 72℃, 약 73℃, 약 74℃, 약 75℃, 약 76℃, 약 77℃, 약 78℃, 약 79℃ 또는 약 80℃의 온도에서 수행되는, 방법.
380. 359 내지 376 중 어느 하나에 있어서, 상기 한외여과 단계가 약 50℃의 온도에서 수행되는, 방법.
381. 359 내지 380 중 어느 하나에 있어서, 한외여과 여과물이 정용여과에 의해 처리되는, 방법.
382. 381에 있어서, 대체 용액이 물인, 방법.
383. 381에 있어서, 대체 용액이 물 중 염수인, 방법.
384. 383에 있어서, 염이 마그네슘 클로라이드, 칼륨 클로라이드, 나트륨 클로라이드 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
385. 383에 있어서, 염이 나트륨 클로라이드인, 방법.
386. 383에 있어서, 대체 용액이 약 1 mM, 약 5 mM, 약 10 mM, 약 15 mM, 약 20 mM, 약 25 mM, 약 30 mM, 약 35 mM, 약 40 mM, 약 45 mM, 약 50 mM, 약 55 mM, 약 60 mM, 약 65 mM, 약 70 mM, 약 80 mM, 약 90 mM, 약 100 mM, 약 110 mM, 약 120 mM, 약 130 mM, 약 140 mM, 약 150 mM, 약 160 mM, 약 170 mM, 약 180 mM, 약 190 mM, 약 200 mM, 약 250 mM, 약 300 mM, 약 350 mM, 약 400 mM, 약 450 mM 또는 약 500 Mm의 나트륨 클로라이드인, 방법.
387. 381에 있어서, 대체 용액이 완충 용액인, 방법.
388. 381에 있어서, 대체 용액이 완충 용액이되, 완충제가 N-(2-아세트아미도)-아미노에탄설폰산(ACES), 아세트산의 염(아세테이트), N-(2-아세트아미도)-이미노다이아세트산(ADA), 2-아미노에탄설폰산(AES, 타우린), 암모니아, 2-아미노-2-메틸-1-프로판올(AMP), 2-아미노-2-메틸 내지 1,3-프로판다이올(AMPD), 암메다이올, N-(1,1-다이메틸-2-하이드록시에틸)-3-아미노-2-하이드록시프로판설폰산(AMPSO), N,N-비스-(2-하이드록시에틸)-2-아미노에탄설폰산(BES), 나트륨 수소 카보네이트(바이카보네이트), N,N'-비스(2-하이드록시에틸)-글리신(바이신), [비스-(2-하이드록시에틸)-이미노]-트리스-(하이드록시메틸메탄)(비스-트리스), 1,3-비스[트리스(하이드록시메틸)-메틸아미노]프로판(비스-트리스-프로판), 붕산, 다이메틸아르신산(카코딜레이트), 3-(사이클로헥실아미노)-프로판설폰산(CAPS), 3-(사이클로헥실아미노)-2-하이드록시-1-프로판설폰산(CAPSO), 나트륨 카보네이트(카보네이트), 사이클로헥실아미노에탄설폰산(CHES), 시트르산의 염(시트레이트), 3-[N-비스(하이드록시에틸)아미노]-2-하이드록시프로판설폰산(DIPSO), 포름산의 염(포르메이트), 글리신, 글리실글리신, N-(2-하이드록시에틸)-피페라진-N'-에탄설폰산(HEPES), N-(2-하이드록시에틸)-피페라진-N'-3-프로판설폰산(HEPPS, EPPS), N-(2-하이드록시에틸)-피페라진-N'-2-하이드록시프로판설폰산(HEPPSO), 이미다졸, 말산의 염(말레이트), 말레산의 염(말리에이트), 2-(N-모르폴리노)-에탄설폰산(MES), 3-(N-모르폴리노)-프로판설폰산(MOPS), 3-(N-모르폴리노)-2-하이드록시프로판설폰산(MOPSO), 인산의 염(포스페이트), 피페라진-N,N'-비스(2-에탄설폰산)(PIPES), 피페라진-N,N'-비스(2-하이드록시프로판설폰산)(POPSO), 피리딘, 숙신산의 염(숙시네이트), 3-{[트리스(하이드록시메틸)-메틸]-아미노}-프로판설폰산(TAPS), 3-[N-트리스(하이드록시메틸)-메틸아미노]-2-하이드록시프로판설폰산(TAPSO), 트라이에탄올아민(TEA), 2-[트리스(하이드록시메틸)-메틸아미노]-에탄설폰산(TES), N-[트리스(하이드록시메틸)-메틸]-글리신(트라이신) 및 트리스(하이드록시메틸)-아미노메탄(트리스)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
389. 381에 있어서, 대체 용액이 완충 용액이되, 완충제가 아세트산의 염(아세테이트), 시트르산의 염(시트레이트), 포름산의 염(포르메이트), 말산의 염(말레이트), 말레산의 염(말리에이트), 인산의 염(포스페이트) 및 숙신산의 염(숙시네이트)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
390. 381에 있어서, 대체 용액이 완충 용액이되, 완충제가 시트르산의 염(시트레이트)인, 방법.
391. 381에 있어서, 대체 용액이 완충 용액이되, 완충제가 숙신산의 염(숙시네이트)인, 방법.
392. 381에 있어서, 대체 용액이 완충 용액이되, 완충제가 인산의 염(포스페이트)인, 방법.
393. 388 내지 392 중 어느 하나에 있어서, 상기 염이 나트륨 염인, 방법.
394. 388 내지 392 중 어느 하나에 있어서, 상기 염은 칼륨 염인, 방법.
395. 381에 있어서, 대체 용액이 완충 용액이되, 완충제가 칼륨 포스페이트인, 방법.
396. 381 내지 395 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 완충제의 pH가 약 4.0 내지 11.0, 약 5.0 내지 10.0, 약 5.5 내지 9.0, 약 6.0 내지 8.0, 약 6.0 내지 7.0, 약 6.5 내지 7.5, 약 6.5 내지 7.0 또는 약 6.0 내지 7.5인, 방법.
397. 381 내지 395 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 완충제의 pH가 약 4.0, 약 4.5, 약 5.0, 약 5.5, 약 6.0, 약 6.5, 약 7.0, 약 7.5, 약 8.0, 약 8.5, 약 9.0, 약 9.5, 약 10.0, 약 10.5 또는 약 11.0인, 방법.
398. 381 내지 395 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 완충제의 pH가 약 6.0, 약 6.5, 약 7.0, 약 7.5, 약 8.0, 약 8.5 또는 약 9.0인, 방법.
399. 381 내지 395 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 완충제의 pH가 약 6.5, 약 7.0 또는 약 7.5인, 방법.
400. 381 내지 395 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 완충제의 pH가 약 6.0인, 방법.
401. 381 내지 395 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 완충제의 pH는 약 6.5인, 방법.
402. 381 내지 395 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 완충제의 pH가 약 7.0인, 방법.
403. 387 내지 402에 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 완충제의 농도가 약 0.01 mM 내지 100 mM, 약 0.1 mM 내지 100 mM, 약 0.5 mM 내지 100 mM, 약 1 mM 내지 100 mM, 약 2 mM 내지 100 mM, 약 3 mM 내지 100 mM, 약 4 mM 내지 100 mM, 약 5 mM 내지 100 mM, 약 6 mM 내지 100 mM, 약 7 mM 내지 100 mM, 약 8 mM 내지 100 mM, 약 9 mM 내지 100 mM, 약 10 mM 내지 100 mM, 약 11 mM 내지 100 mM, 약 12 mM 내지 100 mM, 약 13 mM 내지 100 mM, 약 14 mM 내지 100 mM, 약 15 mM 내지 100 mM, 약 16 mM 내지 100 mM, 약 17 mM 내지 100 mM, 약 18 mM 내지 100 mM, 약 19 mM 내지 100 mM, 약 20 mM 내지 100 mM, 약 25 mM 내지 100 mM, 약 30 mM 내지 100 mM, 약 35 mM 내지 100 mM, 약 40 mM 내지 100 mM, 약 45 mM 내지 100 mM, 약 50 mM 내지 100 mM, 약 55 mM 내지 100 mM, 약 60 mM 내지 100 mM, 약 65 mM 내지 100 mM, 약 70 mM 내지 100 mM, 약 75 mM 내지 100 mM, 약 80 mM 내지 100 mM, 약 85 mM 내지 100 mM, 약 90 mM 내지 100 mM 또는 약 95 mM 내지 100 mM인, 방법.
404. 387 내지 402에 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 완충제의 농도가 약 0.01 mM 내지 50 mM, 약 0.1 mM 내지 50 mM, 약 0.5 mM 내지 50 mM, 약 1 mM 내지 50 mM, 약 2 mM 내지 50 mM, 약 3 mM 내지 50 mM, 약 4 mM 내지 50 mM, 약 5 mM 내지 50 mM, 약 6 mM 내지 50 mM, 약 7 mM 내지 50 mM, 약 8 mM 내지 50 mM, 약 9 mM 내지 50 mM, 약 10 mM 내지 50 mM, 약 11 mM 내지 50 mM, 약 12 mM 내지 50 mM, 약 13 mM 내지 50 mM, 약 14 mM 내지 50 mM, 약 15 mM 내지 50 mM, 약 16 mM 내지 50 mM, 약 17 mM 내지 50 mM, 약 18 mM 내지 50 mM, 약 19 mM 내지 50 mM, 약 20 mM 내지 50 mM, 약 25 mM 내지 50 mM, 약 30 mM 내지 50 mM, 약 35 mM 내지 50 mM, 약 40 mM 내지 50 mM 또는 약 45 mM 내지 50 mM인, 방법.
405. 387 내지 402에 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 완충제의 농도가 약 0.01 mM 내지 25 mM, 약 0.1 mM 내지 25 mM, 약 0.5 mM 내지 25 mM, 약 1 mM 내지 25 mM, 약 2 mM 내지 25 mM, 약 3 mM 내지 25 mM, 약 4 mM 내지 25 mM, 약 5 mM 내지 25 mM, 약 6 mM 내지 25 mM, 약 7 mM 내지 25 mM, 약 8 mM 내지 25 mM, 약 9 mM 내지 25 mM, 약 10 mM 내지 25 mM, 약 11 mM 내지 25 mM, 약 12 mM 내지 25 mM, 약 13 mM 내지 25 mM, 약 14 mM 내지 25 mM, 약 15 mM 내지 25 mM, 약 16 mM 내지 25 mM, 약 17 mM 내지 25 mM, 약 18 mM 내지 25 mM, 약 19 mM 내지 25 mM 또는 약 20 mM 내지 25 mM인, 방법.
406. 387 내지 402에 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 완충제의 농도가 약 0.01 mM 내지 15 mM, 약 0.1 mM 내지 15 mM, 약 0.5 mM 내지 15 mM, 약 1 mM 내지 15 mM, 약 2 mM 내지 15 mM, 약 3 mM 내지 15 mM, 약 4 mM 내지 15 mM, 약 5 mM 내지 15 mM, 약 6 mM 내지 15 mM, 약 7 mM 내지 15 mM, 약 8 mM 내지 15 mM, 약 9 mM 내지 15 mM, 약 10 mM 내지 15 mM, 약 11 mM 내지 15 mM, 약 12 mM 내지 15 mM, 약 13 mM 내지 15 mM 또는 약 14 mM 내지 15 mM인, 방법.
407. 387 내지 402에 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 완충제의 농도가 약 0.01 mM 내지 10 mM, 약 0.1 mM 내지 10 mM, 약 0.5 mM 내지 10 mM, 약 1 mM 내지 10 mM, 약 2 mM 내지 10 mM, 약 3 mM 내지 10 mM, 약 4 mM 내지 10 mM, 약 5 mM 내지 10 mM, 약 6 mM 내지 10 mM, 약 7 mM 내지 10 mM, 약 8 mM 내지 10 mM 또는 약 9 mM 내지 10 mM인, 방법.
408. 387 내지 402에 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 완충제의 농도가 약 0.01 mM, 약 0.05 mM, 약 0.1 mM, 약 0.2 mM, 약 0.3 mM, 약 0.4 mM, 약 0.5 mM, 약 0.6 mM, 약 0.7 mM, 약 0.8 mM, 약 0.9 mM, 약 1 mM, 약 2 mM, 약 3 mM, 약 4 mM, 약 5 mM, 약 6 mM, 약 7 mM, 약 8 mM, 약 9 mM, 약 10 mM, 약 11 mM, 약 12 mM, 약 13 mM, 약 14 mM, 약 15 mM, 약 16 mM, 약 17 mM, 약 18 mM, 약 19 mM, 약 20 mM, 약 25 mM, 약 30 mM, 약 35 mM, 약 40 mM, 약 45 mM, 약 50 mM, 약 55 mM, 약 60 mM, 약 65 mM, 약 70 mM, 약 75 mM, 약 80 mM, 약 85 mM, 약 90 mM, 약 95 또는 약 100 mM인, 방법.
409. 387 내지 402에 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 완충제의 농도가 약 0.1 mM, 약 0.2 mM, 약 1 mM, 약 5 mM, 약 10 mM, 약 15 mM, 약 20 mM, 약 30 mM, 약 40 mM, 또는 약 50 mM인, 방법.
410. 387 내지 402에 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 완충제의 농도가 약 30 mM인, 방법.
411. 387 내지 402에 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 완충제의 농도가 약 25 mM인, 방법.
412. 387 내지 402에 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 완충제의 농도가 약 20 mM인, 방법.
413. 387 내지 402에 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 완충제의 농도가 약 15 mM인, 방법.
414. 387 내지 402에 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 완충제의 농도가 약 10 mM인, 방법.
415. 381 내지 414에 있어서, 대체 용액이 킬레이트제를 포함하는, 방법.
416. 381 내지 414에 있어서, 대체 용액이 명반 킬레이트제를 포함하는, 방법.
417. 381 내지 414에 있어서, 대체 용액이 에틸렌다이아민테트라이세테이트(EDTA), N-(2-하이드록시에틸)에틸렌다이아민-N,N',N'-트라이아세트산(EDTA-OH), 하이드록시 에틸렌다이아민 트라이아세트산(HEDTA), 에틸렌글리콜-비스(2-아미노에틸에터)-N,N,N',N'-테트라아세트산(EGTA), 1,2-사이클로헥산다이아민-N,N,N',N'-테트라아세트산(CyDTA), 다이에틸렌트라이아민-N,N,N',N",N"-펜타아세트산(DTPA), 1,3-다이아미노프로판-2-올-N,N,N',N'-테트라아세트산(DPTA-OH), 에틸렌다이아민-N,N'-비스(2-하이드록시페닐아세트산)(EDDHA), 에틸렌다이아민-N,N'-다이프로피온산 다이하이드로클로라이드(EDDP), 에틸렌다이아민테트라키스(메틸렌설폰산)(EDTPO), 니트릴로트리스(메틸렌포스폰산)(NTPO), 이미노다이아세트산(IDA), 하이드록시이미노다이아세트산(HIDA), 니트릴로트라이아세트산(NTP), 트라이에틸렌테트라민헥사아세트산(TTHA), 다이머캅토숙신산(DMSA), 2,3-다이머캅토-1-프로판설폰산(DMPS), 알파리포산(ALA), 니트릴로트라이아세트산(NTA), 티아민테트라하이드로퓨르퓨르일다이설파이드(TTFD), 다이머캅롤, 페니실아민, 데페록사민(DFOA), 데페라시록스, 포스포네이트, 시트르산의 염(시트레이트) 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 킬레이트제를 포함하는, 방법.
418. 381 내지 414에 있어서, 대체 용액이 에틸렌다이아민테트라이세테이트(EDTA), N-(2-하이드록시에틸)에틸렌다이아민-N,N',N'-트라이아세트산(EDTA-OH), 하이드록시 에틸렌다이아민 트라이아세트산(HEDTA), 에틸렌글리콜-비스(2-아미노에틸에터)-N,N,N',N'-테트라아세트산(EGTA), 1,2-사이클로헥산다이아민-N,N,N',N'-테트라아세트산(CyDTA), 다이에틸렌트라이아민-N,N,N',N",N"-펜타아세트산(DTPA), 1,3-다이아미노프로판-2-올-N,N,N',N'-테트라아세트산(DPTA-OH), 에틸렌다이아민-N,N'-비스(2-하이드록시페닐아세트산)(EDDHA), 시트르산의 염(시트레이트) 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 킬레이트제를 포함하는, 방법.
419. 381 내지 414에 있어서, 대체 용액이 에틸렌다이아민테트라이세테이트(EDTA)를 킬레이트제로서 포함하는, 방법.
420. 381 내지 414에 있어서, 대체 용액이 시트르산의 염(시트레이트)을 킬레이트제로서 포함하는, 방법.
421. 381 내지 414에 있어서, 대체 용액이 나트륨 시트레이트를 킬레이트제로서 포함하는, 방법.
422. 415 내지 421 중 어느 하나에 있어서, 대체 용액 중 킬레이트제의 농도가 1 내지 500 mM인, 방법.
423. 415 내지 421 중 어느 하나에 있어서, 대체 용액 중 킬레이트제의 농도가 2 내지 400 mM인, 방법.
424. 415 내지 421 중 어느 하나에 있어서, 대체 용액 중 킬레이트제의 농도가 10 내지 400 mM인, 방법.
425. 415 내지 421 중 어느 하나에 있어서, 대체 용액 중 킬레이트제의 농도가 10 내지 200 mM인, 방법.
426. 415 내지 421 중 어느 하나에 있어서, 대체 용액 중 킬레이트제의 농도가 10 내지 100 mM인, 방법.
427. 415 내지 421 중 어느 하나에 있어서, 대체 용액 중 킬레이트제의 농도가 10 내지 50 mM인, 방법.
428. 415 내지 421 중 어느 하나에 있어서, 대체 용액 중 킬레이트제의 농도가 10 내지 30 mM인, 방법.
429. 415 내지 421 중 어느 하나에 있어서, 대체 용액 중 킬레이트제의 농도가 약 0.01 mM, 약 0.05 mM, 약 0.1 mM, 약 0.2 mM, 약 0.3 mM, 약 0.4 mM, 약 0.5 mM, 약 0.6 mM, 약 0.7 mM, 약 0.8 mM, 약 0.9 mM, 약 1 mM, 약 2 mM, 약 3 mM, 약 4 mM, 약 5 mM, 약 6 mM, 약 7 mM, 약 8 mM, 약 9 mM, 약 10 mM, 약 11 mM, 약 12 mM, 약 13 mM, 약 14 mM, 약 15 mM, 약 16 mM, 약 17 mM, 약 18 mM, 약 19 mM, 약 20 mM, 약 21 mM, 약 22 mM, 약 23 mM, 약 24 mM, 약 25 mM, 약 26 mM, 약 27 mM, 약 28 mM, 약 29 mM, 약 30 mM, 약 31 mM, 약 32 mM, 약 33 mM, 약 34 mM, 약 35 mM, 약 36 mM, 약 37 mM, 약 38 mM, 약 39 mM, 약 40 mM, 약 45 mM, 약 50 mM, 약 55 mM, 약 60 mM, 약 65 mM, 약 70 mM, 약 75 mM, 약 80 mM, 약 85 mM, 약 90 mM, 약 95 또는 약 100 mM인, 방법.
430. 415 내지 421 중 어느 하나에 있어서, 대체 용액 중 킬레이트제의 농도가 약 5 mM, 약 10 mM, 약 15 mM, 약 20 mM, 약 25 mM, 약 30 mM, 약 35 mM, 약 40 mM, 약 45 mM, 약 50 mM, 약 55 mM, 약 60 mM, 약 65 mM, 약 70 mM, 약 75 mM, 약 80 mM, 약 85 mM, 약 90 mM, 약 95 mM 또는 약 100 mM인, 방법.
431. 415 내지 421 중 어느 하나에 있어서, 대체 용액 중 킬레이트제의 농도가 약 15 mM, 약 20 mM, 약 25 mM, 약 30 mM, 약 35 mM, 약 40 mM, 약 45 mM 또는 약 50 mM인, 방법.
432. 387 내지 431 중 어느 하나에 있어서, 대체 용액이 염을 포함하는, 방법.
433. 432에 있어서, 염이 마그네슘 클로라이드, 칼륨 클로라이드, 나트륨 클로라이드 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
434. 432에 있어서, 염이 나트륨 클로라이드인, 방법.
435. 432 내지 434에 있어서, 대체 용액이 나트륨 클로라이드를 1 약 1, 약 5, 약 10, 약 15, 약 20, 약 25, 약 30, 약 35, 약 40, 약 45, 약 50, 약 55, 약 60, 약 65, 약 70, 약 80, 약 90, 약 100, 약 110, 약 120, 약 130, 약 140, 약 150, 약 160, 약 170, 약 180, 약 190, 약 200, 약 250 또는 약 300 mM로 포함하는, 방법.
436. 381 내지 435 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 부피가 적어도 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 또는 50인, 방법.
437. 381 내지 435 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 부피가 약 1, 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 약 10, 약 11, 약 12, 약 13, 약 14, 약 15, 약 16, 약 17, 약 18, 약 19, 약 20, 약 21, 약 22, 약 23, 약 24, 약 25, 약 26, 약 27, 약 28, 약 29, 약 30, 약 31, 약 32, 약 33, 약 34, 약 35, 약 36, 약 37, 약 38, 약 39, 약 40, 약 41, 약 42, 약 43, 약 44, 약 45, 약 46, 약 47, 약 48, 약 49, 약 50, 약 55, 약 60, 약 65, 약 70, 약 75, 약 80, 약 85, 약 90, 약 95 또는 약 100인, 방법.
438. 381 내지 435 중 어느 하나에 있어서, 정용여과 부피가 약 5, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 약 10, 약 11, 약 12, 약 13, 약 14 또는 약 15인, 방법.
439. 381 내지 438 중 어느 하나에 있어서, 상기 정용여과 단계가 약 20℃ 내지 약 90℃의 온도에서 수행되는, 방법.
440. 381 내지 438 중 어느 하나에 있어서, 상기 정용여과 단계가 약 35℃ 내지 약 80℃의 온도, 약 40℃ 내지 약 70℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 65℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 60℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 55℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 55℃ 또는 약 45℃ 내지 약 55℃의 온도에서 수행되는, 방법.
441. 381 내지 438 중 어느 하나에 있어서, 상기 정용여과 단계가 약 20℃, 약 21℃, 약 22℃, 약 23℃, 약 24℃, 약 25℃, 약 26℃, 약 27℃, 약 28℃, 약 29℃, 약 30℃, 약 31℃, 약 32℃, 약 33℃, 약 34℃, 약 35℃, 약 36℃, 약 37℃, 약 38℃, 약 39℃, 약 40℃, 약 41℃, 약 42℃, 약 43℃, 약 44℃, 약 45℃, 약 46℃, 약 47℃, 약 48℃, 약 49℃, 약 50℃, 약 51℃, 약 52℃, 약 53℃, 약 54℃, 약 55℃, 약 56℃, 약 57℃, 약 58℃, 약 59℃, 약 60℃, 약 61℃, 약 62℃, 약 63℃, 약 64℃, 약 65℃, 약 66℃, 약 67℃, 약 68℃, 약 69℃, 약 70℃, 약 71℃, 약 72℃, 약 73℃, 약 74℃, 약 75℃, 약 76℃, 약 77℃, 약 78℃, 약 79℃ 또는 약 80℃의 온도에서 수행되는, 방법.
442. 381 내지 438 중 어느 하나에 있어서, 상기 정용여과 단계가 약 50℃의 온도에서 수행되는, 방법.
443. 359 내지 438 중 어느 하나에 있어서, 상기 한외여과 및 정용여과 단계가 수행되는 경우 약 20℃ 내지 약 90℃의 온도에서 수행되는, 방법.
444. 359 내지 438 중 어느 하나에 있어서, 상기 한외여과 및 정용여과 단계가 수행되는 경우 약 35℃ 내지 약 80℃의 온도, 약 40℃ 내지 약 70℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 65℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 60℃의 온도, 약 50℃ 내지 약 55℃의 온도, 약 45℃ 내지 약 55℃ 또는 약 45℃ 내지 약 55℃의 온도에서 수행되는, 방법.
445. 359 내지 438 중 어느 하나에 있어서, 상기 한외여과 및 정용여과 단계가 수행되는 경우 약 20℃, 약 21℃, 약 22℃, 약 23℃, 약 24℃, 약 25℃, 약 26℃, 약 27℃, 약 28℃, 약 29℃, 약 30℃, 약 31℃, 약 32℃, 약 33℃, 약 34℃, 약 35℃, 약 36℃, 약 37℃, 약 38℃, 약 39℃, 약 40℃, 약 41℃, 약 42℃, 약 43℃, 약 44℃, 약 45℃, 약 46℃, 약 47℃, 약 48℃, 약 49℃, 약 50℃, 약 51℃, 약 52℃, 약 53℃, 약 54℃, 약 55℃, 약 56℃, 약 57℃, 약 58℃, 약 59℃, 약 60℃, 약 61℃, 약 62℃, 약 63℃, 약 64℃, 약 65℃, 약 66℃, 약 67℃, 약 68℃, 약 69℃, 약 70℃, 약 71℃, 약 72℃, 약 73℃, 약 74℃, 약 75℃, 약 76℃, 약 77℃, 약 78℃, 약 79℃ 또는 약 80℃의 온도에서 수행되는, 방법.
446. 359 내지 438 중 어느 하나에 있어서, 상기 한외여과 및 정용여과 단계가 수행되는 경우 약 50℃의 온도에서 수행되는, 방법.
447. 359 내지 446 중 어느 하나에 있어서, 정제된 다당류 용액이 사이징에 의해 균질화되는, 방법.
448. 359 내지 446 중 어느 하나에 있어서, 정제된 다당류 용액이 기계적 사이징되는, 방법.
449. 359 내지 446 중 어느 하나에 있어서, 정제된 다당류 용액이 고압 균질화 전단되는, 방법.
450. 359 내지 446 중 어느 하나에 있어서, 정제된 다당류 용액이 화학적 가수분해되는, 방법.
451. 359 내지 450 중 어느 하나에 있어서, 정제된 다당류 용액이 표적 분자량으로 사이징되는, 방법.
452. 359 내지 451 중 어느 하나에 있어서, 정제된 다당류 용액이 약 5 kDa 내지 약 4,000 kDa의 분자량으로 사이징되는, 방법.
453. 359 내지 451 중 어느 하나에 있어서, 정제된 다당류 용액이 약 10 kDa 내지 약 4,000 kDa의 분자량으로 사이징되는, 방법.
454. 359 내지 451 중 어느 하나에 있어서, 정제된 다당류 용액이 약 50 kDa 내지 약 4,000 kDa의 분자량으로 사이징되는, 방법.
455. 359 내지 451 중 어느 하나에 있어서, 정제된 다당류 용액이 약 50 kDa 내지 약 3,500 kDa; 약 50 kDa 내지 약 3,000 kDa; 약 50 kDa 내지 약 2,500 kDa; 약 50 kDa 내지 약 2,000 kDa; 약 50 kDa 내지 약 1,750 kDa; 약 50 kDa 내지 약 1,500 kDa; 약 50 kDa 내지 약 1,250 kDa; 약 50 kDa 내지 약 1,000 kDa; 약 50 kDa 내지 약 750 kDa; 약 50 kDa 내지 약 500 kDa; 약 100 kDa 내지 약 4,000 kDa; 약 100 kDa 내지 약 3,500 kDa; 약 100 kDa 내지 약 3,000 kDa; 약 100 kDa 내지 약 2,500 kDa; 약 100 kDa 내지 약 2,250 kDa; 약 100 kDa 내지 약 2,000 kDa; 약 100 kDa 내지 약 1,750 kDa; 약 100 kDa 내지 약 1,500 kDa; 약 100 kDa 내지 약 1,250 kDa; 약 100 kDa 내지 약 1,000 kDa; 약 100 kDa 내지 약 750 kDa; 약 100 kDa 내지 약 500 kDa; 약 200 kDa 내지 약 4,000 kDa; 약 200 kDa 내지 약 3,500 kDa; 약 200 kDa 내지 약 3,000 kDa; 약 200 kDa 내지 약 2,500 kDa; 약 200 kDa 내지 약 2,250 kDa; 약 200 kDa 내지 약 2,000 kDa; 약 200 kDa 내지 약 1,750 kDa; 약 200 kDa 내지 약 1,500 kDa; 약 200 kDa 내지 약 1,250 kDa; 약 200 kDa 내지 약 1,000 kDa; 약 200 kDa 내지 약 750 kDa; 또는 약 200 kDa 내지 약 500 kDa. 추가의 이러한 양태에서, 정제된 다당류는 약 250 kDa 내지 약 3,500 kDa; 약 250 kDa 내지 약 3,000 kDa; 약 250 kDa 내지 약 2,500 kDa; 약 250 kDa 내지 약 2,000 kDa; 약 250 kDa 내지 약 1,750 kDa; 약 250 kDa 내지 약 1,500 kDa; 약 250 kDa 내지 약 1,250 kDa; 약 250 kDa 내지 약 1,000 kDa; 약 250 kDa 내지 약 750 kDa; 약 250 kDa 내지 약 500 kDa; 약 300 kDa 내지 약 4,000 kDa; 약 300 kDa 내지 약 3,500 kDa; 약 300 kDa 내지 약 3,000 kDa; 약 300 kDa 내지 약 2,500 kDa; 약 300 kDa 내지 약 2,250 kDa; 약 300 kDa 내지 약 2,000 kDa; 약 300 kDa 내지 약 1,750 kDa; 약 300 kDa 내지 약 1,500 kDa; 약 300 kDa 내지 약 1,250 kDa; 약 300 kDa 내지 약 1,000 kDa; 약 300 kDa 내지 약 750 kDa; 약 300 kDa 내지 약 500 kDa; 약 500 kDa 내지 약 4,000 kDa; 약 500 kDa 내지 약 3,500 kDa; 약 500 kDa 내지 약 3,000 kDa; 약 500 kDa 내지 약 2,500 kDa; 약 500 kDa 내지 약 2,250 kDa; 약 500 kDa 내지 약 2,000 kDa; 약 500 kDa 내지 약 1,750 kDa; 약 500 kDa 내지 약 1,500 kDa; 약 500 kDa 내지 약 1,250 kDa; 약 500 kDa 내지 약 1,000 kDa; 약 500 kDa 내지 약 750 kDa; 또는 약 500 kDa 내지 약 600 kDa의 분자량으로 사이징되는, 방법.
456. 359 내지 451 중 어느 하나에 있어서, 정제된 다당류 용액이 약 5 kDa, 약 10 kDa, 약 15 kDa, 약 20 kDa, 약 25 kDa, 약 30 kDa, 약 35 kDa, 약 40 kDa, 약 45 kDa, 약 50 kDa, 약 75 kDa, 약 90 kDa, 약 100 kDa, 약 150 kDa, 약 200 kDa, 약 250 kDa, 약 300 kDa, 약 350 kDa, 약 400 kDa, 약 450 kDa, 약 500 kDa, 약 550 kDa, 약 600 kDa, 약 650 kDa, 약 700 kDa, 약 750 kDa, 약 800 kDa, 약 850 kDa, 약 900 kDa, 약 950 kDa, 약 1000 kDa, 약 1250 kDa, 약 1500 kDa, 약 1750 kDa, 약 2000 kDa, 약 2250 kDa, 약 2500 kDa, 약 2750 kDa, 약 3000 kDa, 약 3250 kDa, 약 3500 kDa, 약 3750 kDa 또는 약 4,000 kDa의 분자량으로 사이징되는.
457. 1 내지 456에 있어서, 정제된 다당류 용액이 멸균여과되는, 방법.
458. 457에 있어서, 멸균여과가 데드-엔드 여과인, 방법.
459. 457에 있어서, 멸균여과가 접선 여과인, 방법.
460. 457 내지 459 중 어느 하나에 있어서, 필터가 약 0.01내지 0.2 μm, 약 0.05내지 0.2 μm, 약 0.1내지 0.2 μm 또는 약 0.15내지 0.2 μm의 공칭 보유 범위를 갖는, 방법.
461. 457 내지 459 중 어느 하나에 있어서, 필터가 약 0.05, 약 0.1, 약 0.15 또는 약 0.2 μm의 공칭 보유 범위를 갖는, 방법.
462. 457 내지 459 중 어느 하나에 있어서, 필터가 약 0.2 μm의 공칭 보유 범위를 갖는, 방법.
463. 457 내지 462 중 어느 하나에 있어서, 필터가 약 25 내지 1500 L/m2, 50 내지 1500 L/m2, 75 내지 1500 L/m2, 100 내지 1500 L/m2, 150 내지 1500 L/m2, 200 내지 1500 L/m2, 250 내지 1500 L/m2, 300 내지 1500 L/m2, 350 내지 1500 L/m2, 400 내지 1500 L/m2, 500 내지 1500 L/m2, 750 내지 1500 L/m2, 1000 내지 1500 L/m2 또는 1250 내지 1500 L/m2의 필터 용량을 갖는, 방법.
464. 457 내지 462 중 어느 하나에 있어서, 필터가 약 25 내지 1000 L/m2, 50 내지 1000 L/m2, 75 내지 1000 L/m2, 100 내지 1000 L/m2, 150 내지 1000 L/m2, 200 내지 1000 L/m2, 250 내지 1000 L/m2, 300 내지 1000 L/m2, 350 내지 1000 L/m2, 400 내지 1000 L/m2, 500 내지 1000 L/m2 또는 750 내지 1000 L/m2의 필터 용량을 갖는, 방법.
465. 457 내지 462 중 어느 하나에 있어서, 필터가 25 내지 500 L/m2, 50 내지 500 L/m2, 75 내지 500 L/m2, 100 내지 500 L/m2, 150 내지 500 L/m2, 200 내지 500 L/m2, 250 내지 500 L/m2, 300 내지 500 L/m2, 350 내지 500 L/m2 또는 400 내지 500 L/m2의 필터 용량을 갖는, 방법.
466. 457 내지 462 중 어느 하나에 있어서, 필터가 25 내지 300 L/m2, 50 내지 300 L/m2, 75 내지 300 L/m2, 100 내지 300 L/m2, 150 내지 300 L/m2, 200 내지 300 L/m2 또는 250 내지 300 L/m2의 필터 용량을 갖는, 방법.
467. 457 내지 462 중 어느 하나에 있어서, 필터가 25 내지 250 L/m2, 50 내지 250 L/m2, 75 내지 250 L/m2, 100 내지 250 L/m2 또는 150 내지 250 L/m2, 200 내지 250 L/m2의 필터 용량을 갖는, 방법.
468. 457 내지 462 중 어느 하나에 있어서, 필터가 25 내지 100 L/m2, 50 내지 100 L/m2 또는 75 내지 100 L/m2의 필터 용량을 갖는, 방법.
469. 457 내지 462 중 어느 하나에 있어서, 필터가 약 25, 약 50, 약 75, 약 100, 약 150, 약 200, 약 250, 약 300, 약 350, 약 400, 약 500, 약 600, 약 700, 약 800, 약 900, 약 1000, 약 1100, 약 1200, 약 1300, 약 1400 또는 약 1500 L/m2의 필터 용량을 갖는, 방법.
470. 1 내지 469 중 어느 하나에 있어서, 수득된 정제된 다당류가 액체 용액 중 존재하는, 방법.
471. 1 내지 469 중 어느 하나에 있어서, 수득된 정제된 다당류가 건조된 분말인, 방법.
472. 1 내지 469 중 어느 하나에 있어서, 수득된 정제된 다당류 용액이 동결건조되는, 방법.
473. 1 내지 469 및 472 중 어느 하나에 있어서, 수득된 정제된 다당류 용액이 동결건조된 케이크인, 방법.
474. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 캡슐 다당류, 서브(sub)-캡슐 다당류 또는 지질다당류인, 방법.
475. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 캡슐 다당류인, 방법.
476. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스타필로코커스 아우레우스로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
477. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스타필로코커스 아우레우스 타입 5로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
478. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스타필로코커스 아우레우스 타입 8로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
479. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 캡슐 다당류 from 엔테로코커스 페칼리스로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
480. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 헤모필러스 인플루엔제 타입 b로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
481. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 캡슐 다당류 from 네이세리아 메닌기티디스로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
482. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 네이세리아 메닌기티디스 혈청군(MenA), 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 W135(MenW135), 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 Y(MenY), 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 X(MenX) 또는 네이세리아 메닌기티디스 혈청군 C(MenC)로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
483. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 캡슐 다당류 from 에셔리키아 콜라이로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
484. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 캡슐 다당류 from 스트렙토코커스 아갈락티에(Group B 스트렙토코커스(GBS))로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
485. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 캡슐 다당류가 GBS 타입 Ia, Ib, II, III, IV, V, VI, VII 및 VIII로 이루어진 군으로부터 선택되는 캡슐 다당류인, 방법.
486. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 캡슐 다당류가 장병독성 에셔리키아 콜라이 그룹(EEC Group)의 에셔리키아 콜라이 균주 부분으로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
487. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 캡슐 다당류가 장병독성 에셔리키아 콜라이 그룹(EEC Group), 예컨대 에셔리키아 콜라이 - 장독소원성(ETEC), 에셔리키아 콜라이 - 장병원성(EPEC), 에셔리키아 콜라이 - O157:H7 장출혈성(EHEC) 또는 에셔리키아 콜라이 - 장출혈성(EIEC)의 에셔리키아 콜라이 균주 부분으로부터의 캡슐 다당류인, 방법. 하나의 양태에서, 박테리아 캡슐 다당류의 공급원은 요로병원성 에셔리키아 콜라이(UPEC)이다.
488. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 혈청형 O157:H7, O26:H11, O111:H- 및 O103:H2로 이루어진 군으로부터 선택되는 에셔리키아 콜라이 혈청형으로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
489. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 캡슐 다당류가 혈청형 O6:K2:H1 및 O18:K1:H7로 이루어진 군으로부터 선택되는 에셔리키아 콜라이 혈청형으로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
490. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 캡슐 다당류가 혈청형 O45:K1, O17:K52:H18, O19:H34 및 O7:K1로 이루어진 군으로부터 선택되는 에셔리키아 콜라이 혈청형으로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
491. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 캡슐 다당류가 에셔리키아 콜라이 혈청형 O104:H4로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
492. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 캡슐 다당류가 에셔리키아 콜라이 혈청형 O1:K12:H7로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
493. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 캡슐 다당류가 에셔리키아 콜라이 혈청형 O127:H6으로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
494. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 캡슐 다당류가 에셔리키아 콜라이 혈청형 O139:H28로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
495. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 캡슐 다당류가 에셔리키아 콜라이 혈청형 O128:H2로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
496. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 캡슐 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
497. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 혈청형 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 6C, 7F, 8, 9V, 9N, 10A, 11A, 12F, 14, 15A, 15B, 15C, 16F, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23A, 23B, 23F, 24B, 24F, 29, 31, 33F, 34, 35B, 35F, 38, 72 및 73으로 이루어진 군으로부터 선택되는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형으로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
498. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 혈청형 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 9N, 10A, 11A, 12F, 14, 15A, 15B, 15C, 16F, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23A, 23B, 23F, 24F, 29, 31, 33F, 35B, 35F, 38, 72 및 73으로 이루어진 군으로부터 선택되는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형으로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
499. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 혈청형 8, 10A, 11A, 12F, 15B, 22F 및 33F로 이루어진 군으로부터 선택되는 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형으로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
500. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 1로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
501. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 2로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
502. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 3으로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
503. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 4로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
504. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 5로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
505. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 6A로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
506. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 6B로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
507. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 6C로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
508. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 7F로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
509. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 8로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
510. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 9V로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
511. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 9N으로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
512. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 10A로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
513. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 11A로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
514. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 12F로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
515. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 14로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
516. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 15A로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
517. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 15B로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
518. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 15C로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
519. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 16F로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
520. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 17F로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
521. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 18C로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
522. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 19A로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
523. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 19F로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
524. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 20으로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
525. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 20A로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
526. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 20B로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
527. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 22F로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
528. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 23A로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
529. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 23B로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
530. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 23F로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
531. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 24B로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
532. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 24F로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
533. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 29로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
534. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 31로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
535. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 33F로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
536. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 34로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
537. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 35B로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
538. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 35F로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
539. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 38로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
540. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 72로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
541. 1 내지 473 중 어느 하나에 있어서, 박테리아 다당류가 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 73으로부터의 캡슐 다당류인, 방법.
542. 1 내지 541 중 어느 하나의 방법에 의해 수득된 정제된 박테리아 다당류.
543. 1 내지 541 중 어느 하나의 방법에 의해 수득가능한 정제된 박테리아 다당류.
544. 항원으로서 사용하기 위한 1 내지 541 중 어느 하나의 방법에 의해 수득된 정제된 박테리아 다당류.
545. 담체 단백질에 접합된 1 내지 541 중 어느 하나의 방법에 의해 수득된 정제된 박테리아 다당류.
546. 담체 단백질에 추가 접합된 1 내지 541 중 어느 하나의 방법에 의해 수득된 정제된 박테리아 다당류.
547. 1 내지 541 중 어느 하나의 방법에 의해 수득된 정제된 박테리아 다당류의 당접합체.
548. 542 내지 543 중 어느 하나의 정제된 다당류를 포함하는 면역원성 조성물.
549. 546 내지 547중 어느 하나의 당접합체를 포함하는 면역원성 조성물.
550. 본원에 개시된 임의의 당접합체를 포함하는 면역원성 조성물.
551. 본원에 개시된 임의의 당접합체의 조합을 포하하는 면역원성 조성물.
본원에 사용된 용어 "약"은 값, 예컨대 언급된 농도 범위, 시간 틀, 분자량, 온도 또는 pH의 통계적으로 유의한 범위 내를 의미한다. 이러한 범위는 차수(order of magnitude) 내, 전형적으로 20% 이내, 보다 전형적으로 10% 이내, 보다 더 전형적으로 5% 이내 또는 1% 이내의 소정 값 또는 범위일 수 있다. 일부 경우, 이러한 범위는소정 값 또는 범위의 측정 및/또는 결정에 사용되는 표준적인 방법의 전형적인 시험 오차 내일 수 있다. 용어 "약"에 의해 포괄되는 허용가능한 변동은 연구의 특정 시스템에 의존할 것이고, 당업자에게 용이하게 이해될 수 이다. 본원에서 범위가 언급되는 경우마다, 상기 범위 내의 모든 수도 본 발명의 양태로서 간주된다.
본원에서 용어 "포함하는" 및 "포함한다"는 매 경우마다 용어 "~로 본질적으로 이루어진", "~로 본질적으로 이루어진다", "~로 이루어지는" 및 "~로 이루어진다"로 임의적으로 대체가능하도록 본 발명자들에 의해 의도된 것이다.
"면역원성 양", "면역적 효과량", "치료 효과량", "예방 효과량" 또는 "용량" 각각은 본원에서 상호대체가능하게 사용되고, 일반적으로는 면역 반응, 즉 세포성(T 세포) 또는 체액성(B 세포 또는 항체) 반응, 또는 둘다를 유발하기에 충분한 양의 항원 또는 면역원성 조성물을 지칭하고, 이는 당업자에게 공지된 표준적인 분적에 의해 측정되는 바와 같다.
본원의 임의의 범위 내의 전체 정수는 본 발명의 양태로서 간주된다.
본원에 인용된 모든 참조 또는 특허 출원은 본원에 참조로 혼입된다.
본 발명은 하기 실시예에 예시된다. 하기 실시예는 달리 상세 설명되지 않는 경우를 제외하고는, 당업자에게 공지되고 통상적인 표준 기법을 사용하여 수행된다.
실시예
실시예 1. 폐렴구균 다당류 혈청형 8의 정제
정제에 대한 공정 흐름도를 도 1에 도시하였다. 공정은 NLS 불활성화된 발효 브로스(EP 2129693 참고)에 의해 시작하고, 회수 단위 조작(응집, 원심분리 및 심층여과)에 이어서, 정제 단위 조작(한외여과 및 탄소여과)을 포함한다.
1. 출발 물질
공정은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 8의 NLS 불활성화된 발효 브로스에 의해 시작한다.
배양을 하이-소이(Hy-Soy) 배지에서 성장시켰다. 배양 종료시(광학적 밀도에 더 이상의 증가가 없음에 의해 나타남), 배양을 NLS(EP 2129693 참고)에 의해 불활성화시켰다.
2. 응집
본 단계의 주 목적은 세포 파편, 호스트 세포 단백질 및 핵산을 침전시키는 것이다. 또한, 이는 다운스트림 청징 단위 조작을 보조한다. NLS의 첨가에 의해 용해된 발효 브로스를 사용하여 응집을 수행하였다.
2.1 pH 및 명반의 영향
실험을 수행하여 pH, 명반(%) 및 체류 시간의 효과를 시험하였다.
발효 브로스의 미리 설정된 양을 상이한 용기에 분취로 넣고, 10%(w/w) 명반 모액(알루미늄 칼륨 설페이트 도데카하이드레이트 및 탈이온수를 사용하여 제조함)을 2%(w/v)의 최종 농도로 첨가하였다.
이어서, pH를 목적 수준으로 조정하였다. 이어서, 용기를 다양한 체료 시간점 후 15분 동안 12,000 g로 원심분리하였다. 상청액을 단백질, 다당류 및 청징도에 대해 분석하여다. 1, 4 및 24시간의 체류 시간 동안 2% 명반의 단백질 제거 및 청징도에 대한 pH의 효과를 도 2에 나타냈다. 데이터는 pH 2.5 내지 4.0 및 2% 명반으로 단백질 제거가 상당히 효과적임을 나타낸다. 80%를 초과하는 단백질 분순물을 본 단일 단계에서 제거하였다. 원심분리물의 청징도는 pH 및 체류 시간 둘다에 영향을 받았다. 도 2는 3.5의 pH가 가장 높은 원심분리물 청징도를 야기함을 나타낸다.
pH 3.5에서 단백질 제거 및 원심분리물 청징도에 대한 명반 농도 및 체류 시간의 효과를 도 3에 나타냈다. 체류 시간 연구를 주위 온도(20±2℃)에서 수행하였다. 결과는 1.0% 명반은 단백질 제거나 원심분리물 청징에 충분하지 않음을 나타냈다. 2 내지 3% 명반의 차이는 유의하지 않았다.
2.2. 온도의 영향
응집된 브로스(pH 3.5 및 2% 명반)를 50℃로 가열하고, 30분 및 60분 동안 체류시켰다. 주위 온도까지 냉각한 후, 샘플을 12,000 g로 원심분리하였다. 원심분리물의 청징도를 주위 온도에서 수행된 응집으로부터의 원심분리물과 비교하였다. 주위 온도 응집으로부터의 원심분리물의 OD600은 0.99였다. 50℃에서 30분 후, OD600은 0.13으로 감소하였고, 60분 후, OD600이 0.04로 더 감소하였다. 이는 원심분리물의 청징도가 더 고온에서의 응집을 수행함으로써 현저히 향상될 수 있음을 명확히 입증한다.
2.3. 응집에 영향을 주는 변수들의 영향
혈청형 8 응집 공정에 영향을 주는 변수들의 효과를 더 잘 정의하기 위해 연구를 수행하였다. 본 발명자들은 다당류 회수율, 청징도 및 불순물 제거에 대한 명반 농도, pH, 온도 및 체류 시간의 요인들을 시험하였다.
특정된 양의 명반을 실온에서 브로스에 첨가한 후, 5N H2SO4 또는 5N NaOH에 의해 pH를 조정하였다. 샘플을 목적 온도로 설정된 수조에 넣고, 각각의 시간점에서 샘플을 취하여 분석한 후, 12,000 g로 원심분리하였다. 상청액을 다당류 농도, 단백질 및 탁도(OD600)에 대해 분석하였다.
샘플 명반(%) pH 온도(℃) 체류 시간
(h)		 다당류
(% 회수율)		 단백질
(% 제거율)
1 2 3 40 2 88 94
2 2 2 40 2 82 95
3 2 3 40 3 84 95
4 4 2 60 1 81 95
5 2 3 40 2 86 94
6 4 4 60 3 73 94
7 0 4 60 3 71 79
8 4 4 20 1 61 93
9 0 2 20 3 50 93
10 4 2 20 3 69 91
11 0 2 60 1 71 95
12 0 3 40 2 41 94
13 4 2 20 1 56 92
14 2 4 40 2 87 95
15 0 4 20 1 94 81
16 4 4 60 1 83 94
17 4 4 20 3 53 93
18 4 2 60 3 92 94
19 2 3 20 2 59 95
20 0 2 20 1 79 73
21 0 4 20 3 79 76
22 2 3 40 1 74 95
23 2 3 60 2 88 94
24 2 3 40 2 89 94
25 4 3 40 2 84 94
26 0 4 60 1 83 65
27 0 2 60 3 100 93
결과 분석은 응집 단위 조작에 대한 pH, 명반(%) 및 체류시간에 대한 바람직함이 상당히 광범위함을 나타냈다(pH: 2.75 내지 3.75, 명반: 1.5 내지 3.0%(w/v), 및 체류 시간: 1.5 내지 3시간). 온도에 대한 목적 범위는 약 45 내지 60℃였다.
3. 원심분리
합리적인 용량으로 여과될 수 있도록, 원심분리를 수행하여 투명한 원심분리물을 수득하였다. 원심분리 속도는 12,000 g였다.
4. 심층여과
원심분리가 1차적인 고체/액체 분리 단위 조작이지만, 이는 공급 스트림으로부터 모든 입자를 제거하진 않고, 심층여과 단위 조작을 원심분리와 제1 한외여과 단위 조작 사이에 혼입하였다.
초기 연구는 0.25 내지 1.0 μm의 공칭 보유 범위를 갖는 필터를 사용하여 수행하였다. 원심분리물의 청징도는 필터 용량에 영향을 주었다.
특히, 응집에 20℃에서 수행되는 경우, 원심분리물 청징도는 0.8 내지 1.4의 범위의 OD600으로 그리 우수하지 않았고 필터 용량에 영향을 주었다. 더 고온의 응집 조건을 사용시, 심층여과 공정은 심저어 0.04 내지 0.2의 원심분리물 OD600으로, 400 L/m2 초과의 필터 용량으로 더 강력하고 확고한 용량을 나타났다.
5. 임의적인, 0.45 μm 여과
임의적이기는 하지만, 0.45 μm 필터를 심층여과 후의 일부 샘플에 사용하였다.
6. 한외여과/정용여과(UF/DF-1)
정제는 (상기 단계 4 또는 5로부터의) 심층여과물에 의해 시작하였다.
본 조작은 사용된 발효 배지를 완충제에 의해 대체하고, 저분자 호스트 세포 불순물 및 잔류 응집체(알루미늄)의 수준을 감소시킨다.
UF/DF, 심층여과물의 pH를 5N 나트륨 하이드록사이드를 사용하여 7.0으로 조정하였다. 다르게는, 완충제로서 나트륨 시트레이트/나트륨 포스페이트, pH 7.0(예컨대 10 mM 포스페이트/25 mM 시트레이트 pH 7.0)으로 UF/DF 정용여과를 수행하기 전, pH를 조정하지 않았다.
7. 탄소여과
본 단위 조작은 호스트 세포 불순물, 예컨대 단백질 및 핵산, 및 유색 불순물의 수준을 감소시킨다(WO 2008/118752 참고).
탄소 필터에 의한 단백질 불순물 제거의 효과를 연구하였다. 일련의 3개의 7인치 직경 R32SP 필터를 사용하였다. UF/DF-1로부터의 농축물을 40 LMH의 유속으로 여과하고 탄소여과물의 UV280을 기록하였다.
농축물에 대한 UV280 신호는 탄소여과 전에는 단지 460 mAU였는데, 이는 물로 헹궈낸 기준치(380 mAU)에 비해 상당히 낮은 것이다. 이는 불순물과 관련된 대부분의 단백질이 이전의 단위 조작에서 이미 제거됨을 입증한다. 그러나, 탄소 필터는 잔류 불순물을 여전히 꽤 효과적으로 제거하였다. 이는 필터가 공정에 투입된 후 UV280의 감소에서 나타나는데, UV 신호가 기준치까지 떨어진다. 데이터는 불순물과 관련된 단백질이 탄소 필터를 통한 단일 통과에 의해 제거되었음을 시사한다.
8. 한외여과/정용여과(UF/DF-2)
본 단위 조작은 생성물을 목적 농도로 농축하고 25 mM 나트륨 시트레이트, 10 mM 나트륨 포스페이트, pH 7.0을 접합에 적합한 완충제로 대체한다. 본 단계는 30 kDa 분자량 컷 오프 필터를 사용하여 수행된다.
잔류 시트레이트의 존재는 접합 화학을 방해할 수 있다. 상이한 용액을 정용여과 완충제로서 사용하였다: 정용여과 완충제로서 50 mM NaCl 및 물, 또는 25 mM 칼륨 포스페이트 pH 6.0.
시트레이트 제거에 대한 25 mM 칼륨 포스페이트 pH 6.0의 영향을 평가하였다. 본 실험에서, 탄소여과물을 2.6배로 농축한 후, 25 mM 칼륨 포스페이트 pH 6.0로 정용여과하였다. 샘플을 제거하고 정용여과의 다양한 지점에서 잔류 시트레이트에 대해 분석하였다.
0.13의 배제 계수(rejection coefficient)가 도출되었다. 7 정용여과 부피 미만의 25 mM 칼륨 포스페이트 pH 6.0이 6 log의 감소에 도달하는데 필요하였다.
9. 일관성
전술된 회수 및 정제 과정이 재현가능한 결과를 야기함을 입증하기 위해, 3개의 일관성 뱃취를 제조하였다. 전술된 공정을 사용하여, 전체 발효 뱃취(batch)를 응집시키고 원심분리하였다.
3개의 일관성 뱃취에 대한 단계 및 전체 수율을 하기 표 2에 나타냈다. 모든 단계의 수율은 약 77 내지 99%로, 고도로 재현가능하고 강력하였다.
혈청형 8 일관성 뱃취에 대한 단계 및 전체 수율
혈청형 8 VRU 일관성 뱃취
001 002 003
발효 브로스 NA NA NA
원심분리물 100 100 100
심층여과물 77 90 88
UF/DF-1 농축물 102 102 100
탄소여과물 95 93 92
UF/DF-2 농축물 97 97 96
최종 여과물 99 99 99
전체 수율 72 84 78
3개의 일관성 뱃취로부터의 분석 결과를 하기 표 3에 나타냈다. 3개의 일관성 뱃취는 사전 규정된 허용 기준을 모두 만족하였다.
혈청형 8 일관성 뱃취에 대한 분석 결과
혈청형 8 일관성
분석 001 002 003
잔류 NLS < LOQ <LOQ <LOQ
잔류핵산 < 0.16% <0.15% <0.14%
잔류 단백질 0.3% 0.3% 0.3%
잔류 C 폴리 2.5 중량% 2.8 중량% 2.4 중량%
실시예 2. 폐렴구균 다당류 혈청형 33F의 정제
폐렴구균 다당류 33F의 정제에 대한 공정 흐름도를 도 1에 도시하였다. 공정은 NLS로 처리된 발효 브로스에 의해 시작되고, 회수 단위 조작(응집, 원심분리 및 심층여과)에 이어서, 정제 단위 조작(한외여과 및 탄소여과)을 포함한다.
1. 출발 물질
공정은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 33F 의 NLS 불활성화된 발효 브로스에 의해 시작한다. 배양을 하이-소이 배지에서 성장시켰다. 배양 종료시(광학적 밀도에 더 이상의 증가가 없음에 의해 나타남), 배양을 NLS(EP 2129693 참고)로 처리하였다.
2. 응집
본 단계의 주 목적은 세포 파편, 호스트 세포 단백질 및 핵산을 침전시키는 것이다. 또한, 이는 다운스트림 청징 단위 조작을 보조한다. NLS의 첨가에 의해 용해된 발효 브로스를 사용하여 응집을 수행하였다.
2.1. pH의 영향
실험을 수행하여 pH의 효과를 시험하였다.
혈청형 33F의 응집에 대한 최적 pH를 측정하기 위해, 산 적정 연구를 불활성화된 33F 발효 브로스에서 수행하였다. 상기 연구로부터의 결과를 도 4에 나타냈다. 불순물 제거 대 pH의 그래프는 최대 불순물 제거가 pH 3.5에서 성취됨을 나타낸다.
이전 실험에서 확인된 pH를 사용하여, 명반 응집 연구를 수행하였다. 이 연구로부터의 결과를 도 5에 나타냈다. OD600에 의해 측정된 침전 속도는 1.0% 초과의 명반 농도에서 거의 불변하였다. 최고 불순물 제거는 1.5% 명반에서 였지만, 1 내지 3% 명반에서는 유의한 차이가 없었다. 적정 범위 전반에 걸쳐 다당류 농도의 유의한 변화는 없었다.
2.2. 기타 변수의 영향
명반의 첨가 속도의 효과를 측정하기 위해, 발효 뱃취를 2개로 분할하고 3 내지 60분에 걸쳐 명반 모액을 첨가하였다. 원심분리 후 청징도 또는 심층 필터 용량에 대한 유의한 효과는 없었다. 이는 명반 첨가 속도가 유의한 공정 변수가 아님을 시사한다.
응집 조건을 더 정밀화하기 위해, 다당류 회수, 청징도 및 단백질 제거에 대한 명반 농도, pH, 온도 및 체류시간의 효과를 시험하는 실험 설계(DOE)를 구축하였다.
33F 응집 연구에서 시험된 DOE 요인들
요인 범위
명반 농도(%(w/v)) 0 내지 4
pH 2 내지 5
온도(℃) 20 내지 60
체류 시간(분) 30 내지 90
다당류 회수는 모든 조건이 95% 초과의 회수를 야기하여, 시험되는 임의의 조건하에 유의하게 영향을 받지 았았다. 유사하게, 단백질 제거는 모든 시험되는 조건에 대해 90% 초과였다. 명반의 농도는 OD600에 의해 측정되는 청징도에 가장 큰 영향을 주었다. 낮은 명반 농도에서, OD600이 증가하였다. 또한, 온도가 감소하고 pH가 증가함에 따라 청징도에도 약간의 증가가 있었다. 응집 조건이 청징 단위 조작에 주는 효과를 측정하기 위해, 50℃에서 응집된 발효 브로스에서 연속 원심분리를 수행하였다.
20℃에서 응집된 브로스에서 관찰된 바와 같이, 50℃에서 응집된 브로스에 대해 400 내지 1,200 mL/분의 공급 속도에서 원심분리물 청징도의 유의한 증가는 없었다. 그러나, 원심분리물 청징도 및 심층 필터 용량이 20℃ 응집에 비해 유의하게 증가하였다. 새로운 응집 조건을 사용하여, 심층 필터 용량은 400 L/m2 초과였다.
응집온도를 20에서 50℃로 증가시킴이 향상된 원심분리물 청징도 및 이에 따른 필터의 용량을 향상시킴을 확인하였다. 원심분리물 및 심층여과물의 청징도를 측정하였다(표 5).
원심분리물 및 심층여과물 청징도에 대한 응집 온도의 영향
응집 온도 원심분리물 OD600 심층여과물 OD600
20℃ 0.060 0.025
50℃ 0.031 0.016
3. 원심분리
합리적인 용량으로 여과될 수 있도록, 원심분리를 수행하여 투명한 원심분리물을 수득하였다. 원심분리 속도는 12,000 g였다.
4. 심층여과
원심분리가 1차적인 고체/액체 분리 단위 조작이지만, 이는 공급 스트림으로부터 모든 입자를 제거하진 않고, 심층여과 단위 조작을 원심분리와 제1 한외여과 단위 조작 사이에 혼입하였다.
5. 임의적인, 0.45 μm 여과
임의적이기는 하지만, 0.45 μm 필터를 심층여과 후의 일부 샘플에 사용하였다.
6. 한외여과/정용여과(UF/DF-1)
정제는 (상기 단계 4 또는 5로부터의) 심층여과물에 의해 시작하였다.
본 조작은 사용된 발효 배지를 완충제에 의해 대체하고, 저분자 호스트 세포 불순물 및 잔류 응집체(알루미늄)의 수준을 감소시킨다.
초기 실험에서, 5N 나트륨 하이드록사이드를 사용하여 심층여과물의 pH를 3.5에서 7.0으로 조정하였다. 이는 다당류의 분자량에는 영향을 주지 않았지만, 33F의 O-아세틸 기의 부분적 탈아세틸화를 야기하였다.
탈아세틸화가 높은 국소 pH에 기인하고 5N 나트륨 하이드록사이드에 의한 중화 동안 야기됨이 제안되었다. 따라서, 심층여과물을 제어가능한 부피로 농축한 후 정용여과 동안 33F의 pH를 조정하도록 결정하였다.
정용여과를 나트륨 시트레이트/나트륨 포스페이트, pH 7.0(예컨대 10 mM 포스페이트/25 mM 시트레이트 pH 7.0)으로 수행하였다.
다르게는, 25 mM EDTA가 시트레이트 대신 사용될 수도 있다.
7. 탄소여과
본 단위 조작은 호스트 세포 불순물, 예컨대 단백질 및 핵산, 및 유색 불순물의 수준을 감소시킨다(WO 2008/118752 참고).
탄소여과 단계는 단일 통과 모든 또는 재순환 모드로 수행될 수 있다. 혈청형 33F에 가장 잘 작용하는 조작의 모드를 결정하기 위해, 재순환 탄소여과 연구를 수행하였다. 본 실험에서 UF/DF-1으로부터의 농축물을 일련의 2개의 47 mm Cuno R32SP 디스크(35 cm2 총 단면적)를 통해 170 LMH로 여과하고 각각의 사이클(총 5 사이클) 후 불순도 수준을 측정하였다. 불순물 제거는 약 30 L/m2의 최저 공급 시도에서 가장 우수하였다. 1 사이클 초과에서 추가적인 불순물 제거는 재순환 모드를 사용하는데 유익이 거의 또는 전혀 없으므로 유의하지 않았다.
8. 임의적인, 0.2 μm 여과
임의적이기는 하지만, 0.2 μm 필터를 샘플 탄소여과에 사용하였다.
9. 한외여과/정용여과(UF/DF-2)
본 단위 조작은 생성물을 목적 농도로 농축하고 25 mM 나트륨 시트레이트, 10 mM 나트륨 포스페이트, pH 7.0을 접합에 적합한 완충제로 대체한다. 본 단계는 30 kDa 분자량 컷 오프 필터를 사용하여 수행된다.
잔류 시트레이트의 존재는 접합 화학을 방해할 수 있다. 시트레이트의 수준을 현저히 감소시키기 위해, 정용여과 실험을 상이한 완충제를 사용하여 수행하였다.
본 실험에서, 탄소여과물을 4배 희석한 후, 상이한 완충제로 정용여과하였다. 샘플을 꺼내 잔류 시트레이트에 대해 분석하였다.
물은 50%의 가장 높은 배제 계수를 가졌고, 표적 감소에 도달하는데 약 22 정용여과 부피를 요하였다.
10 mM 나트륨 포스페이트 pH 7.0 및 10 mM 칼륨 포스페이트 pH 6.5 둘다는 약 20%의 유사한 배제 계수를 가졌고 6 log의 표적 감소에 도달하는데 10 정용여과 부피를 요하였다.
25 mM의 나트륨 클로라이드는 8%의 배제 계수를 가졌고, 7 정용여과 부피로 표적 감소에 도달할 수 있었다. 나트륨 클로라이드 농도를 10 mM로 감소시킴은 28%로의 배제 계수의 증가를 야기하였다.
잔류 시트레이트 수준이 성취됨을 확실히 하기 위해, 나트륨 클로라이드의 농도를 50 mM으로 증가시켰다. 50 mM 나트륨 클로라이드의 6 정용여과 부피 후, 농축물을 6 정용여과 부피로 더 정용여과하였다.
10. 멸균여과
보관용 병에 채우기 전 최종 단위 조작은 멸균여과(0.2 μm 여과)였다.
11. 일관성
전술된 회수 및 정제 과정이 재현가능한 결과를 야기함을 입증하기 위해, 3개의 일관성 뱃취를 제조하였다. 발효 뱃취를 전술된 공정을 사용하여 응집시키고 원심분리하였다.
3개의 일관성 뱃취의 단계 및 전체 수율을 하기 표 6에 나타냈다. 모든 단계의 수율은 약 90% 이상이고 고도로 재현가능하였다. 전체 수율 평균은 73%였다.
혈청형 33F 일관성 뱃취에 대한 단계 및 전체 수율
혈청형 33F 일관성 뱃취
001 002 003
발효 브로스 NA NA NA
원심분리물 100 100 100
심층여과물 90 90 91
UF/DF-1 농축물 101 102 99
탄소여과물 87 86 87
UF/DF-2 농축물 92 95 93
최종 여과물 99 99 99
전체 수율 72 74 72
3개의 일관성 뱃취로부터의 분석 결과를 표 3에 나타냈다. 3개의 일관성 뱃취는 사전 규정된 허용 기준을 모두 만족하였다. 3개의 일관성 뱃취로부터의 분석 결과를 표 7에 나타냈다.
33F 일관성 뱃취(20℃에서 응집)에 대한 분석 결과
분석 001 002 003
O-아세틸화 0.87 0.85 0.90
잔류 시트레이트 <LOQ <LOQ <LOQ
잔류 NLS < LOQ <LOQ <LOQ
잔류 핵산 < 0.02% <0.02% <0.04%
잔류 단백질 0.2% 0.2% 0.3%
잔류 C 폴리 4.4 중량% 4.2 중량% 4.7 중량%
잔류 Al <1 ppm <1 ppm <1 ppm
동일한 절차를 사용하여 뱃취를 2개 더 제조하되, 응집을 20℃ 대신 50℃에서 수행하였다. 상기 뱃취로부터의 분석 결과를 일관성 뱃취로부터의 평균 결과와 함께 표 8에 나타냈다. 이 결과는 응집 온도를 증가시킴이 생성물 품질에 어떠한 영향도 주지 않음을 명확히 나타낸다.
33F(50℃에서 응집)에 대한 분석 결과
분석 50℃-1 50℃-2
O-아세틸화 1.03 1.04
잔류 시트레이트 <LOQ <LOQ
잔류 NLS < LOQ < LOQ
잔류 핵산 0.02% 0.02%
잔류 단백질 0.2% 0.2%
잔류 C 폴리 4.1 3.2
전체 수율 68% 57%
실시예 3. 폐렴구균 다당류 혈청형 15B의 정제
폐렴구균 다당류 15B의 정제에 대한 공정 흐름도를 도 1에 도시하였다. 공정은 NLS로 처리된 발효 브로스에 의해 시작되고, 회수 단위 조작(응집, 원심분리 및 심층여과)에 이어서, 정제 단위 조작(한외여과 및 탄소여과)을 포함한다.
1. 출발 물질
공정은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 15B 의 NLS 불활성화된 발효 브로스에 의해 시작한다. 배양을 하이-소이 배지에서 성장시켰다. 배양 종료시(광학적 밀도에 더 이상의 증가가 없음에 의해 나타남), 배양을 NLS(EP 2129693 참고)에 의해 불활성화시켰다.
2. 응집
본 단계의 주 목적은 세포 파편, 호스트 세포 단백질 및 핵산을 침전시키는 것이다. 또한, 이는 다운스트림 청징 단위 조작을 보조한다. NLS의 첨가에 의해 용해된 발효 브로스를 사용하여 응집을 수행하였다.
실시예 1 및 2와 유사하게, 실험을 수행하여 응집에 대한 상이한 변수의 효과를 시험하였다.
변수의 효과는 pH, 명반(%) 및 체류 시간이었다.
데이터는 pH 2.5 내지 4.0 및 1 내지 3% 명반에서의 단백질 제거가 본 단일 단계에서 90%의 단백질 불순물이 제거됨으로 상당히 효과적임을 나타낸다. 불순물 제거의 이러한 효율은 체류 시간(1, 4 또는 24시간)에 의해 영향을 받지 않는다.
5B에 대해 적용된 응집 조건을 확인하기 위해, DOE 연구를 수행하여 다당류 회수, 청징도 및 불순물 제거에 대한 명반 농도, pH 및 체류 시간의 효과를 시험하였다. pH, 명반(%) 및 체류시간에 대한 요인의 범위는 각각 2 내지 4 또는 0 내지 4%(w/v), 및 1 내지 4시간이었다.
상기 DOE 연구에 대한 실험 데이터를 표 9에 나타냈다. 총 20개의 실험을 설계 허용 내에서 수행하였다.
샘플 명반
(%)		 pH 체류 시간
(h)		 다당류
(% 회수율)		 단백질
(% 제거율)
1 2 3 2 93 93
2 2 4 2 97 91
3 4 2 3 92 92
4 4 4 3 92 89
5 2 3 3 92 93
6 2 3 2 93 93
7 0 3 2 89 94
8 2 3 1 89 93
9 4 3 2 90 92
10 2 3 2 93 93
11 2 3 2 93 93
12 0 4 1 97 90
13 0 2 1 92 94
14 2 3 2 93 93
15 4 4 1 89 88
16 2 3 2 93 93
17 0 2 3 92 94
18 2 2 2 92 92
19 0 4 3 96 91
20 4 2 1 90 92
결과는 설계 허용 내에서, 응집 단위 조작에 대한 pH, 명반(%) 및 체류 시간에 대한 바람직함이 상당히 광범위함을 나타냈다: pH: 2.7 내지 3.8; 명반: 1 내지 2.5%(w/v); 및 체류 시간: 1.5 내지 3시간. 유사한 결과가 다른 혈청형의 DOE 연구에서 관찰되었다. 상기 실험을 20℃에서 수행하였다.
응집 조건이 청징 단위 조작에 효과적인지를 추가로 측정하기 위해, 50℃에서 응집된 발효 브로스에서 연속 원심분리 연구를 수행하였다.
20℃에서 응집된 브로스에서 관찰된 바와 같이, 50℃에서 응집된 400 내지 800 mL/분의 공급 속도에서 원심분리물 청징도에는 유의한 증가가 없었다.
3. 원심분리
합리적인 용량으로 여과될 수 있도록, 원심분리를 수행하여 투명한 원심분리물을 수득하였다. 원심분리 속도는 12,000 g였다.
4. 심층여과
원심분리가 1차적인 고체/액체 분리 단위 조작이지만, 이는 공급 스트림으로부터 모든 입자를 제거하진 않고, 심층여과 단위 조작을 원심분리와 제1 한외여과 단위 조작 사이에 혼입하였다.
5. 임의적인, 0.45 μm 여과
임의적이기는 하지만, 0.45 μm 필터를 심층여과 후의 일부 샘플에 사용하였다.
6. 한외여과/정용여과(UF/DF-1)
정제는 (상기 단계 4 또는 5로부터의) 심층여과물에 의해 시작하였다.
본 조작은 사용된 발효 배지를 완충제에 의해 대체하고, 저분자 호스트 세포 불순물 및 잔류 응집체(알루미늄)의 수준을 감소시킨다.
초기 실험에서, 5N 나트륨 하이드록사이드를 사용하여 심층여과물의 pH를 3.5에서 7.0으로 조정하였다. 그러나, 이는 15B의 O-아세틸의 부분적인 탈아세틸화를 야기할 수 있다.
따라서, 심층여과물을 제어가능한 부피로 농축한 후 정용여과 동안 15B의 pH를 조정하도록 결정하였다.
15B에 대한 완충제 선택 연구에서, 10 내지 50 Mm의 시트레이트 농도를 상이한 농도의 나트륨 포스페이트에 의해 시험하였다.
정용여과를 나트륨 시트레이트/나트륨 포스페이트, pH 7.0(예컨대 10 mM 포스페이트/25 mM 시트레이트 pH 7.0)으로 수행하였다.
7. 탄소여과
본 단위 조작은 호스트 세포 불순물, 예컨대 단백질 및 핵산, 및 유색 불순물의 수준을 감소시킨다(WO 2008/118752 참고).
3개의 7인치 쿠노(Cuno) R32SP 탄소 필터를 일련으로 사용하였다. 먼저, UF/DF-1로부터의 농축물을 필터로 통과시켜 출발 용액에 대해 280 nm UV 신호를 기록하였다. 이어서, 농축물을 32 LMH의 유속으로 여과시키고 탄소여과물에 대한 UV280을 기록하고 농축물의 UV280과 비교하였다. UV280의 약 95% 감소는 불순물과 관련된 단백질이 탄소 필터를 통한 단일 통과에 의해 제거되었음을 입증하였다.
탄소여과 단계는 단일 또는 다수 통과 모드 또는 재순환 모드로 수행될 수 있다. 탄소를 통한 투가의 통과가 혈청형 15B에 어떠한 유익을 부가할 수 있는지를 측정하기 위해, UF/DF-1로부터의 농축물이 일련의 3개의 7인치 쿠노 R32SP 디스크를 통해 64 LMH로 여과되는 실험을 수행하였다. 단백질에 대한 불순물 수준, UV280 수준 및 브뢴스테드 로리 분석을 각각의 통과 후 측정하였다. 결과는 단일 통과가 대부분의 불순물을 제거하는데 충분함을 나타냈다. 단일 통과 여과물 및 2회 통과 여과물의 단백질 농도는 각각 25.2 및 20.6 μg/mL이었다. 필터 헹굼에 기인하는 희석을 감안할 때, 1회 통과 여과물에서의 단백질 양 및 2회 통과 여과물에서의 단백질 양은 거의 동일하다.
8. 한외여과/정용여과(UF/DF-2)
본 단위 조작은 생성물을 목적 농도로 농축하고 25 mM 나트륨 시트레이트, 10 mM 나트륨 포스페이트, pH 7.0을 접합에 적합한 완충제로 대체한다. 본 단계는 30 kDa 분자량 컷 오프 필터를 사용하여 수행된다.
잔류 시트레이트의 존재는 접합 화학을 방해할 수 있다. 시트레이트의 수준을 현저히 감소시키기 위해, 정용여과 실험을 상이한 완충제를 사용하여 수행하였다(실시예 1 및 2 참고).
9. 균질화
정제된 15B 다당류는 예컨대 기계적 사이징으로 균질화될 수 있다(예컨대 WO 2015/110942 참고).
10. 멸균여과
보관용 병에 채우기 전 최종 단위 조작은 멸균여과(0.2 μm 여과)였다.
11. 일관성
전술된 회수 및 정제 과정이 재현가능한 결과를 야기함을 입증하기 위해, 3개의 일관성 뱃취를 제조하였다. 발효 뱃취를 전술된 공정을 사용하여 응집시키고 원심분리하였다.
3개의 일관성 뱃취의 단계 및 전체 수율을 하기 표 10에 나타냈다. 모든 단계의 수율은 약 75 내지 98%였고, 고도로 재현가능하고 강력하였다. 전체 수율 평균은 60%였다.
혈청형 15B 일관성 뱃취에 대한 단계 및 전체 수율
혈청형 15B 일관성 뱃취
001 002 003
발효 브로스 NA NA NA
원심분리물 100 100 100
심층여과물 98 88 83
UF/DF-1 농축물 75 86 85
탄소여과물 90 88 88
UF/DF-2 농축물 93 96 97
균질화 90 92 95
전체 수율 55 66 57
3개의 일관성 뱃취로부터의 분석 결과를 하기 표 11에 나타냈다. 3개의 일관성 뱃취는 사전 규정된 허용 기준을 모두 만족하였다.
3개의 일관성 뱃취로부터의 분석 결과를 하기 표 11에 나타냈다.
15B 일관성 뱃취에 대한 분석 결과
시험 15B-001 15B-002 15B-003
O-아세틸화 0.94 0.88 0.87
글리세롤 0.97 0.92 0.93
잔류 시트레이트 < LOQ < LOQ < LOQ
잔류 NLS < LOQ <LOQ <LOQ
잔류 핵산 <0.12 <0.13 <0.13
잔류 단백질 0.2% 0.2% 0.2%
잔류 C 폴리 1.5% 1.8% 1.8%
잔류 Al <0.05 ppm <0.05 ppm <0.05 ppm
동일한 절차를 사용하여 뱃취를 2개 더 제조하되, 응집을 20℃ 대신 50℃에서 수행하였다. 상기 뱃취로부터의 분석 결과를 일관성 뱃취로부터의 평균 결과와 함께 하기 표 12에 나타냈다. 이 결과는 응집 온도를 증가시킴이 생성물 품질에 어떠한 영향도 주지 않음을 명확히 나타낸다.
50℃ 뱃취의 비교
분석 50℃-1 50℃-2
O-아세틸화 0.94 0.94
잔류 시트레이트 <LOQ <LOQ
잔류 NLS < LOQ < LOQ
잔류 핵산 <0.02 N/A
잔류 단백질 N/A N/A
잔류 C 폴리 1.0% 0.9%
전체 수율 43% N/A
실시예 4. 폐렴구균 다당류 혈청형 22F의 정제
폐렴구균 다당류 22F의 정제에 대한 공정 흐름도를 도 1에 도시하였다. NLS 불활성화된 발효 브로스에 의해 시작하고, 회수 단위 조작(응집, 원심분리 및 심층여과)에 이어서, 정제 단위 조작(한외여과 및 탄소여과)을 포함한다.
1. 출발 물질
공정은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 22F 의 NLS 불활성화된 발효 브로스에 의해 시작한다. 배양을 하이-소이 배지에서 성장시켰다. 배양 종료시(광학적 밀도에 더 이상의 증가가 없음에 의해 나타남), 배양을 NLS로 처리하였다(EP 2129693 참고).
2. 응집
본 단계의 주 목적은 세포 파편, 호스트 세포 단백질 및 핵산을 침전시키는 것이다. 또한, 이는 다운스트림 청징 단위 조작을 보조한다. NLS의 첨가에 의해 용해된 발효 브로스를 사용하여 응집을 수행하였다.
2.1 pH 및 명반의 영향
실시예 1 및 2와 유사하게, 실험을 수행하여 응집에 대한 상이한 변수의 효과를 시험하였다.
데이터는 pH 2.5 내지 4.0 및 3% 명반에서의 단백질 제거가 본 단일 단계에서 90%의 단백질 불순물이 제거됨으로 상당히 효과적임을 나타낸다.
22F에 대해 적용된 응접 조건을 확인하기 위해, DOE 연구를 수행하여 다당류 회수, 청징도 및 불순물 제거에 대한 명반의 농도 및 pH의 효과를 시험하였다.
단백질 제거 효율은 감소된 pH에서 매우 높았다. 명반과 pH의 조합은 효과적이었다.
2.2. 온도의 영향
연구를 수행하여 응집된 브로스 입도에 대한 온도의 효과를 시험하였다. 20℃에서 응집(2%(w/v) 명반, pH 3.5) 후, 응집된 브로스를 목적 온도로 가열하고 1시간 동안 유지하였다. 주위 온도(15 내지 25℃)로 냉각한 후, 응집된 브로스를 12,000 g로 원심분리하고 청징도(OD600)를 측정하였다.
결과는 하기 표 13과 같다.
다양한 온도에서 응집된 입도 및 원심분리물 OD의 결과
응집 후 1시간 유지 온도(℃) 응집된 브로스 입도(μm) 원심분리물 OD600
브로스 10.3 NA
20℃ 178 0.066
30℃ 206 0.033
40℃ 210 0.028
50℃ 203 0.027
증가된 온도에서 원심분리물의 OD600의 현저한 감소가 있었다. 선행 실험에서, 응집된 브로스 입도가 더 높은 온도에서 더 큰 것을 관찰하였다. 응집 온도에 의한 입도의 변화를 나타내는 시각적 비교를 도 6에 나타냈다. 처음 실험의 경우, 응집 온도를 실온(RT)으로 유지하고 두번째 실험에서는 이를 1시간 동안 45℃로 증가시켰다.
도 6에서, 응집된 브로스는 실온 및 45℃로 가열 1시간 후 입도가 각각 9.8 μm 및 65 μm임을 나타낸다. 45℃로 가열된 응집된 브로스의 경우 입도에 현저한 증가가 있었다. 더 큰 입도 외에도, 미세 입자(1 μm 미만)의 양에도 감소가 있었다. 큰 입자의 형성 및 미세 입자의 감소는 추가 단계(예컨대 원심분리 및 심층여과)에 도움이 되고 더 맑은 원심분리물을 야기한다.
2개의 추가 22F 뱃취를 제조하되, 응집 온도(20℃ 또는 50℃)만을 달리하였다. 상기 뱃취로부터 원심분리물(원심분리 후) 및 심층여과 후의 청징도는 하기와 같다.
[표 14a]
Figure pct00001
3. 원심분리합리적인 용량으로 여과될 수 있도록, 원심분리를 수행하여 투명한 원심분리물을 수득하였다. 원심분리 속도는 12,000 g였다.
4. 심층여과
원심분리가 1차적인 고체/액체 분리 단위 조작이지만, 이는 공급 스트림으로부터 모든 입자를 제거하진 않고, 심층여과 단위 조작을 원심분리와 제1 한외여과 단위 조작 사이에 혼입하였다.
5. 임의적인, 0.45 μm 여과
임의적이기는 하지만, 0.45 μm 필터를 심층여과 후의 일부 샘플에 사용하였다.
6. 한외여과/정용여과(UF/DF-1)
정제는 (상기 단계 4 또는 5로부터의) 심층여과물에 의해 시작하였다.
본 조작은 사용된 발효 배지를 완충제에 의해 대체하고, 저분자 호스트 세포 불순물 및 잔류 응집체(알루미늄)의 수준을 감소시킨다.
탄소여과를 수행하기 전, 22F 다당류의 pH를 7.0±0.5로 조정하였다. 상기 제시된 바와 같이, pH 조정에 NaOH를 사용하는 것은 O-아세틸 기의 부분적 탈 아세틸화를 야기할 수 있다. 22F 다당류도 O-아세틸 기를 함유하므로, 심층여과물을 제어가능한 부피로 농축한 후 정용여과 동안 22F의 pH를 조정하도록 결정하였다.
혈청형 22F에 대한 완충제 선택 연구에서, 0 내지 40 mM의 시트레이트 농도를 상이한 농도의 나트륨 포스페이트로 시험하였다.
20 mM 초과의 시트레이트 농도 및 10 mM 이하의 포스페이트 농도에서 최고 정용여과 유동을 얻었다.
7. 탄소여과
본 단위 조작은 호스트 세포 불순물, 예컨대 단백질 및 핵산, 및 유색 불순물의 수준을 감소시킨다(WO 2008/118752 참고).
UF/DF-1 농축물을 일련으로 적층된 4개의 7인치 직경 R32SP 탄소 필터를 통해 여과하였다. 일련의 실험을 수행하여 UF/DF-1 농축물로부터 잔류 UV 및 RI 불순물을 제거하는 R32SP 탄소 필터의 효과를 측정하였다. UV 260/280 nm 흡수에서 95% 이상의 감소가 있었다. 이는 UF/DF-1 농축물로부터의 단백질 및 핵산 관련 불순물의 유의한 제거를 시사한다. 결과는 탄소 필터가 단백질 관련 불순물 제거에 탁월한 능력이 있음을 나타냈다.
8. 한외여과/정용여과(UF/DF-2)
본 단위 조작은 생성물을 목적 농도로 농축하고 25 mM 나트륨 시트레이트, 10 mM 나트륨 포스페이트, pH 7.0을 접합에 적합한 완충제로 대체한다. 본 단계는 30 kDa 분자량 컷 오프 필터를 사용하여 수행된다.
잔류 시트레이트의 존재는 접합 화학을 방해할 수 있다. 시트레이트의 수준을 현저히 감소시키기 위해, 정용여과 실험을 상이한 완충제를 사용하여 수행하였다(실시예 1 및 2 참고).
9. 균질화
정제된 22F 다당류는 예컨대 기계적 사이징으로 균질화될 수 있다(예컨대 WO 2015/110942 참고).
10. 멸균여과
보관용 병에 채우기 전 최종 단위 조작은 멸균여과(0.2 μm 여과)였다.
11. 일관성
전술된 회수 및 정제 과정이 재현가능한 결과를 야기함을 입증하기 위해, 3개의 일관성 뱃취를 제조하였다(응집 온도 20℃). 발효 뱃취를 전술된 공정을 사용하여 응집시키고 원심분리하였다.
3개의 일관성 뱃취의 단계 및 전체 수율을 하기 표 14에 나타냈다. 모든 단계의 수율은 약 90% 이상이었고 고도로 재현가능하였다. 전체 수율 평균은 58%였다.
[표 14b]
Figure pct00002
3개의 일관성 뱃취로부터의 분석 결과를 표 15에 나타냈다.
22F 일관성 뱃취에 대한 분석 결과
분석 001 002 003
O-아세틸화
원래/사이징 후		 0.91/
0.94 		1.04/
0.94 		1.09/
0.89
잔류 시트레이트 <LOQ <LOQ <LOQ
잔류 NLS < LOQ <LOQ <LOQ
잔류 핵산 < 0.02% <0.02% <0.02%
잔류 단백질 0.2% 0.2% 0.2%
잔류 C 폴리 2.3 중량% 2.8 중량% 1.9 중량%
잔류 Al <1 ppm <1 ppm <1 ppm
동일한 절차를 사용하여 뱃취를 2개 더 제조하되, 응집을 20℃ 대신 50℃에서 수행하였다. 상기 뱃취로부터의 분석 결과를 일관성 뱃취로부터의 평균 결과와 함께 표 16에 나타냈다. 이 결과는 응집 온도를 증가시킴이 생성물 품질에 어떠한 영향도 주지 않음을 명확히 나타낸다.
50℃ 데모(demo) 및 일관성 뱃취의 비교
분석 22F 일관성
뱃취(평균) 		50℃-1 50℃-2
O-아세틸화 1.01 1.08 1.07
잔류 시트레이트 <LOQ <LOQ <LOQ
잔류 NLS <LOQ NA1 NA1
잔류 핵산 <0.02% 0.01% 0.01%
잔류 단백질 0.2% 0.2% 0.2%
잔류 C 폴리 2.3 2.5 1.8
전체 수율 58% 70.6% 71.2
1 뱃취를 잔류 NLS에 대해 분석하지 않음
실시예 5. 폐렴구균 다당류 혈청형 10A의 정제
폐렴구균 다당류 10A의 정제에 대한 공정 흐름도를 도 1에 도시하였다. NLS 불활성화된 발효 브로스에 의해 시작하고, 회수 단위 조작(응집, 원심분리 및 심층여과)에 이어서, 정제 단위 조작(한외여과 및 탄소여과)을 포함한다.
1. 출발 물질
공정은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 10A 의 NLS 불활성화된 발효 브로스에 의해 시작한다. 배양을 하이-소이 배지에서 성장시켰다. 배양 종료시(광학적 밀도에 더 이상의 증가가 없음에 의해 나타남), 배양을 NLS(EP 2129693 참고)에 의해 불활성화시켰다.
2. 응집
본 단계의 주 목적은 세포 파편, 호스트 세포 단백질 및 핵산을 침전시키는 것이다. 또한, 이는 다운스트림 청징 단위 조작을 보조한다. NLS의 첨가에 의해 용해된 발효 브로스를 사용하여 응집을 수행하였다.
혈청형 10A에 대한 최적 pH를 DOE에 의해 측정하였다(예컨대 실시예 1 및 3 참고).
예측 프로파일러를 토대로, pH 3.5 및 2% 명반에서의 최적화가 종합적으로 바람직하였다. 또한, 이는 3.5 보다 약간 낮은 pH가 다당류 수율의 약간의 감소와 함께 단백질 제거 및 원심분리물 청징도에 약간의 향상에 도움이되지만, 이와 동시에 피크 순도가 약간 더 높을 수 있다.
다른 혈청형에 대한 수행 작업은 응집 동안의 온도 증가가 더 높은 심층여과 용량을 야기함을 나타냈다. 그러나, 브로스의 가열은 다당류 분자량에 영향을 줄 수 있다. 실험을 10A에서 수행하여 고온이 분자량 감소를 야기하는지 여부를 판단하였다. 제1 실험에서, 응집된 브로스를 20, 50, 60 및 70℃의 온도 및 1, 4 및 22시간의 체류 시간으로 항온처리하였다. 각각의 온도에서 4시간 동안 유지된 샘플들만이 정제되었다. 모든 샘플은 동일한 1H-NMR 스펙트럼을 나타냈지만, 60℃ 및 70℃ 샘플은 분자량의 현저한 감소를 나타냈다. 제2 실험에서, 응집된 브로스를 20, 35, 45 및 55℃의 온도 및 1, 2 및 4시간의 유지 시간으로 항온처리하였고, 모든 샘플들이 정제되었다. 본 연구는 45℃로 4시간 까지는 분자량의 매우 미미한 변화를 나타냈다. 55℃에서 처음 1시간 노출에서 분자량의 미미한 감소가 관찰되었지만, 차이는 분석 오차 이내였다.
3. 원심분리
합리적인 용량으로 여과될 수 있도록, 원심분리를 수행하여 투명한 원심분리물을 수득하였다. 원심분리 속도는 12,000 g였다.
4. 심층여과
원심분리가 1차적인 고체/액체 분리 단위 조작이지만, 이는 공급 스트림으로부터 모든 입자를 제거하진 않고, 심층여과 단위 조작을 원심분리와 제1 한외여과 단위 조작 사이에 혼입하였다.
5. 임의적인, 0.45 μm 여과
임의적이기는 하지만, 0.45 μm 필터를 심층여과 후의 일부 샘플에 사용하였다.
6. 한외여과/정용여과(UF/DF-1)
정제는 (상기 단계 4 또는 5로부터의) 심층여과물에 의해 시작하였다.
본 조작은 사용된 발효 배지를 완충제에 의해 대체하고, 저분자 호스트 세포 불순물 및 잔류 응집체(알루미늄)의 수준을 감소시킨다.
탄소여과를 수행하기 전, 22F 다당류의 pH를 7.0±0.5로 조정하였다.
10 mM 나트륨 포스페이트 pH 7.0로 초기 정용여과를 수행하였다. 이는 pH를 목적값으로 조정하는데 성공적이었다. 그러나, 나트륨 포스페이트만이 사용된 정용여과 동안, 백색 침전물이 형성되었다. 상기 백색 고체를 단리하고, 알루미늄 포스페이트를 함유함을 확인하였다. 알루미늄 포스페이트는 중성 pH에서 물에 불용성이고 응집 단계 후 존재하는 잔류 알루미늄에 기인하여 형성된다. 알루미늄 포스페이트의 형성을 방지하기 위해, 킬레이트제를 정용여과 완충제에 첨가하였다. 다른 혈청형에서의 작업을 토대로, 나트륨 시트레이트를 선택하였다. 10 mM 초과의 시트레이트 농도가 시간 경과에도 탁함 형성을 방지하는데 효과적이었다. 25 mM의 시트레이트 농도는 1 ppm 미만의 잔류 알루미늄을 제거하는 것으로 나타났다.
7. 탄소여과
본 단위 조작은 호스트 세포 불순물, 예컨대 단백질 및 핵산, 및 유색 불순물의 수준을 감소시킨다(WO 2008/118752 참고).
UF/DF-1 농축물을 R32SP 디스크 탄소 필터를 통해 여과하였다. 결과는 탄소 필터가 단백질 관련 불순물 제거에 탁월한 능력이 있음을 나타냈다.
8. 한외여과/정용여과(UF/DF-2)
본 단위 조작은 생성물을 목적 농도로 농축하고 25 mM 나트륨 시트레이트, 10 mM 나트륨 포스페이트, pH 7.0을 접합에 적합한 완충제로 대체한다. 본 단계는 30 kDa 분자량 컷 오프 필터를 사용하여 수행된다.
잔류 시트레이트의 존재는 접합 화학을 방해할 수 있다. 시트레이트의 수준을 현저히 감소시키기 위해, 정용여과 실험을 상이한 완충제를 사용하여 수행하였다(실시예 1 및 2 참고).
9. 멸균여과
보관용 병에 채우기 전 최종 단위 조작은 멸균여과(0.2 μm 여과)였다.
10. 일관성
전술된 회수 및 정제 과정이 재현가능한 결과를 야기함을 입증하기 위해, 3개의 일관성 뱃취를 제조하였다(응집 온도 45℃). 발효 뱃취를 전술된 공정을 사용하여 응집시키고 원심분리하였다.
3개의 일관성 뱃취의 단계 및 전체 수율을 하기 표 17에 나타냈다. 모든 단계 수율은 72% 초과였고 고도로 재현가능하였다. 전체 수율 평균은 68%였다.
10A 일관성 뱃취에 대한 단계 및 전체 수율
단위 조작 10A-001 10A-002 10A-003
발효 브로스 NA NA NA
원심분리물 100 100 100
심층여과물 100 100 99
UF/DF-1 농축물 91 93 97
탄소여과물 80 76 72
UF/DF-2 농축물 98 89 99
최종 여과물 99 99 99
전체 수율 71 63 69
3개의 일관성 뱃취로부터의 분석 결과를 표 18에 나타냈다.
10A 일관성 뱃취에 대한 분석 결과
분석 10A-001 10A-002 10A-003
잔류 시트레이트 <LOQ <LOQ <LOQ
잔류 NLS < LOQ <LOQ <LOQ
잔류 핵산 < 0.15% <0.11% <0.21%
잔류 단백질 0.5% 0.4% 0.4%
잔류 C 폴리 5.0 중량% 4.9 중량% 4.4 중량%
잔류 Al <0.05 ppm <0.05 ppm <0.05 ppm
실시예 6. 폐렴구균 다당류 혈청형 11A의 정제
폐렴구균 다당류 11A의 정제에 대한 공정 흐름도를 도 1에 도시하였다. NLS 불활성화된 발효 브로스에 의해 시작하고, 회수 단위 조작(응집, 원심분리 및 심층여과)에 이어서, 정제 단위 조작(한외여과 및 탄소여과)을 포함한다.
1. 출발 물질
공정은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 11A 의 NLS 불활성화된 발효 브로스에 의해 시작한다. 배양을 하이-소이 배지에서 성장시켰다. 배양 종료시(광학적 밀도에 더 이상의 증가가 없음에 의해 나타남), 배양을 NLS(EP 2129693 참고)에 의해 불활성화시켰다.
2. 응집
본 단계의 주 목적은 세포 파편, 호스트 세포 단백질 및 핵산을 침전시키는 것이다. 또한, 이는 다운스트림 청징 단위 조작을 보조한다. NLS의 첨가에 의해 용해된 발효 브로스를 사용하여 응집을 수행하였다.
다른 혈청형의 정제 공정에 대한 선행 작업은 청징 단위 조작이 용액 pH 및 첨가되는 명반의 농도에 영향을 받음을 나타냈다. 혈청형 11A의 응집에 대한 상기 요인의 영향을 이해하기 위해, DOE 연구를 수행하되, 응집 공정에 영향을 줄 수 있는 또다른 요인, 즉 응집 시간을 포함시켰다.
각각의 변수에 대한 범위를 하기 표 19에 나타냈다.
혈청형 11A 응집 DOE 연구에 대한 변수 범위
범위 낮음 높음
pH 2 5
명반 농도 0% 4%
시간 15분 105분
상기 3개의 변수를 달리하여 일련의 20개의 실험을 수행하였다.
각각의 변수(명반 농도, pH 및 응집 시간)간의 상관관계 및 응집 공정 동안의 반응(다당류 회수, OD600 및 단백질 제거)을 예측 프로파일러에 의해 분석하였다. 가장 중요도가 낮은 변수는 응집 시간이었는데, 이는 명반 농도 및 pH가 중간점으로 설정될 때 단백질 제거 또는 청징도에 거의 영향을 주지 않고 다당류 회수에 매우 미미한 영향을 주었다. 명반 농도가 청징도에 주된 영향을 주었다. 최적 명반 농도는 약 2.5%이고, 이는 가장 우수한 청징도를 야기하였다. 하지만, 명반 농도가 1.5 내지 3%일 때에는 OD600 차이가 작았다. 한편으로 응집 pH는 단백질 제거에 주된 영향을 주었는데, pH가 낮을수록 단백질 제거율이 더 높았다. 3.5 이하의 pH에서, 불순물 제거 최고치가 성취되었다.
추가적인 실험을 설계하여 응집 온도 증가가 다운스트림 조작도 향상시켰는지 여부를 판단하였다.
혈청형 11A의 응집에 대한 온도의 효과를 판단하기 위해, 실험을 3개의 상이한 온도에서 수행하였다. 온도 이외에도, 응집 동안 2가지의 상이한 교반 속도로 시험하였다. 11A 발효 브로스를 1시간 동안 다양한 온도에서 2% 명반 및 pH 3.5를 사용하여 침전시켰다. 이어서, 원심분리물을 심층 필터를 통해 여과하고 필터 용량을 측정하였다. 실험 조건 및 결과를 하기 표 20에 나타냈다. 심층 필터 여과물을 Vmax 모델을 사용하여 0.45 μm 데드-엔드 필터를 통해 추가 여과하였다.
모두 400 L/ m2 초과로 4개 모든 조건에 대해 심층 필터의 용량에는 차이가 없었다. 그러나, 50℃에서의 응집은 약 1300 L/m2의 Vmax를 가졌고, 이는 다른 조건들보다 약 8배 더 높았다. 유사하게, 10℃에서의 응집은 가장 낮은 Vmax를 가졌다.
상이한 온도 및 교반 속도에 의한 혈청형 11A 응집
실험 1 실험 2 실험 3 실험 4
온도 20℃ 50℃ 10℃ 20℃
교반 속도 214 rpm 214 rpm 214 rpm 321 rpm
OD600 0.064 0.055 0.062 0.056
심층 필터 용량 >400 L/m2 >400 L/m2 >400 L/m2 >400 L/m2
0.45μm Vmax 177 L/m2 1367 L/m2 146 L/m2 171 L/m2
고온 응집에 대한 잠재적인 관심대상은 11A 분자 구조 및 분자량에 대한 고온의 영향이었다. 혈청형 11A은 3개의 O-아세틸 기, 및 포스페이트를 통해 다당류 반복 단위에 연결된 1개의 글리롤 기를 가진다. 상기 기 모두는 낮은 pH 및 고온에서의 응집 동안 잠재적으로 절단될 수 있다. 분자에 대한 고온의 다른 영향은 분자량에 대한 것이다. 상기 조건(pH 3.5)에서의 응집 동안 다당류의 더 긴 쇄는 더 짧은 쇄로 분해되는데, 이는 더 작은 분자량을 야기할 수 있다. 본 발명자들의 실험은 생성물이 실온 온도 응집 후 정제된 원래의 11A와 동일함을 나타냈다(표 24 참고).
3. 원심분리
합리적인 용량으로 여과될 수 있도록, 원심분리를 수행하여 투명한 원심분리물을 수득하였다. 원심분리 속도는 12,000 g였다.
4. 심층여과
원심분리가 1차적인 고체/액체 분리 단위 조작이지만, 이는 공급 스트림으로부터 모든 입자를 제거하진 않고, 심층여과 단위 조작을 원심분리와 제1 한외여과 단위 조작 사이에 혼입하였다.
심층 필터 용량에 대한 브로스 유지 시간의 효과를 판단하기 위해, 2% 명반 및 pH 3.5를 사용한 20℃ 응집으로부터의 원심분리물을 2 내지 8℃에서 3일까지 유지시켰다. 이어서, 원심분리물을 심층 필터를 사용하여 여과하고 필터 용량을 측정하였다. 2일의 유지에 걸쳐 심층 필터의 용량에는 유의한 차이가 없었다(표 21).
필터 용량에 대한 브로스 유지 시간의 영향
시간 0일 1일 2일
필터 용량(L/m2) 193 185 243
5. 임의적인, 0.45 μm 여과임의적이기는 하지만, 0.45 μm 필터를 심층여과 후의 일부 샘플에 사용하였다.
6. 한외여과/정용여과(UF/DF-1)
정제는 (상기 단계 4 또는 5로부터의) 심층여과물에 의해 시작하였다.
본 조작은 사용된 발효 배지를 완충제에 의해 대체하고, 저분자 호스트 세포 불순물 및 잔류 응집체(알루미늄)의 수준을 감소시킨다.
다른 혈청형에 대한 수행 작업에서(상기 참고), 10 mM 나트륨 포스페이트, 25 mM 나트륨 시트레이트, pH 7.0이 UF/DF 공정에 사용하기에 우수한 완충제임이 밝혀졌다. 포스페이트 완충제는 pH를 중성으로 조절하는데 사용된다. 시트레이트 완충제는 알루미늄을 제거하는 킬레이트제로서 사용된다.
7. 탄소여과
본 단위 조작은 호스트 세포 불순물, 예컨대 단백질 및 핵산, 및 유색 불순물의 수준을 감소시킨다(WO 2008/118752 참고).
UF/DF-1 농축물을 R32SP 디스크 탄소 필터를 통해 여과하였다. 결과는 탄소 필터가 단백질 관련 불순물 제거에 탁월한 능력이 있음을 나타냈다.
8. 한외여과/정용여과(UF/DF-2)
본 단위 조작은 생성물을 목적 농도로 농축하고 25 mM 나트륨 시트레이트, 10 mM 나트륨 포스페이트, pH 7.0을 접합에 적합한 완충제로 대체한다. 본 단계는 30 kDa 분자량 컷 오프 필터를 사용하여 수행된다.
잔류 시트레이트의 존재는 접합 화학을 방해할 수 있다. 시트레이트의 수준을 현저히 감소시키기 위해, 정용여과 실험을 상이한 완충제를 사용하여 수행하였다(실시예 1 및 2 참고).
9. 균질화
정제된 11다당류는 예컨대 기계적 사이징으로 균질화될 수 있다(예컨대 WO 2015/110942 참고).
10. 멸균여과
보관용 병에 채우기 전 최종 단위 조작은 멸균여과(0.2 μm 여과)였다.
11. 일관성
전술된 회수 및 정제 과정이 재현가능한 결과를 야기함을 입증하기 위해, 3개의 일관성 뱃취를 제조하였다. 발효 뱃취를 전술된 공정을 사용하여 응집시키고 원심분리하였다.
3개의 일관성 뱃취의 단계 및 전체 수율을 하기 표 22에 나타냈다.
11A 일관성 뱃취에 대한 단계 및 전체 수율
단위 조작 11A-001 11A-002 11A-003
발효 브로스 NA NA NA
원심분리물 100 100 100
심층여과물 89 89 92
UF/DF-1 농축물 99 98 98
탄소여과물 91 89 94
UF/DF-2 농축물 95 98 561
균질화 99.9 96.7 91.6
전체 수율 78 77 48
1 개방 밸브에 기인하는 생성물 손실
3개의 일관성 뱃취로부터의 분석 결과를 하기 표 23에 나타냈다.
11A 일관성 뱃취에 대한 분석 결과
분석 11A-001 11A-002 11A-003
O-아세틸화
원래/사이징 후		 2.8/3.05 2.8/3.23 3.0/3.25
글리세롤
원래/사이징 후		 0.91/0.9 0.90/1.05 1.0/1.02
잔류 시트레이트 <LOQ <LOQ <LOQ
잔류 NLS < LOQ <LOQ <LOQ
잔류 핵산(w/w) < 0.02% <0.03% <0.03%
잔류 단백질(w/w) 0.2% 0.2% 0.3%
잔류 C 폴리
원래/사이징 후		 1.5%/1.6% 1.5%/1.6% 2.1%/2.2%
잔류 Al <1 ppm <1 ppm <1 ppm
상이한 온도에서 응집을 수행하였다. 응집 중 하나는 50℃에서 수행하였고, 상기 물질 중 일부를 상기 공정을 사용하여 정제하였다. 상기 정제로부터의 분석 결과 및 일관성 뱃취로부터의 평균 결과를 하기 표 24에 나타냈다. 이 결과는 응집 온도를 증가시킴이 생성물 품질에 어떠한 영향도 주지 않음을 명확히 나타낸다.
50℃ 데모와 일관성 뱃취의 비교
분석 11A 일관성
평균(실온) 		50℃ 뱃취
O-아세틸화 2.9 3.09
잔류 시트레이트 <LOQ 9.6 μg/ml
잔류 NLS < LOQ N/A
잔류 핵산 0.03% 0.03%
잔류 단백질 0.2% 0.0%
잔류 C 폴리 1.7 중량% 1.0 중량%
글리세롤 0.94 0.96
전체 수율 77% 69%
실시예 7. 폐렴구균 다당류 혈청형 12F의 정제
폐렴구균 다당류 12F의 정제에 대한 공정 흐름도를 도 1에 도시하였다. NLS 불활성화된 발효 브로스에 의해 시작하고, 회수 단위 조작(응집, 원심분리 및 심층여과)에 이어서, 정제 단위 조작(한외여과 및 탄소여과)을 포함한다.
균질화 단계는 임의적이다.
1. 출발 물질
공정은 스트렙토코커스 뉴모니에 혈청형 12F 의 NLS 불활성화된 발효 브로스에 의해 시작한다. 배양을 하이-소이 배지에서 성장시켰다. 배양 종료시(광학적 밀도에 더 이상의 증가가 없음에 의해 나타남), 배양을 NLS(EP 2129693 참고)로 처리하였다.
2. 응집
본 단계의 주 목적은 세포 파편, 호스트 세포 단백질 및 핵산을 침전시키는 것이다. 또한, 이는 다운스트림 청징 단위 조작을 보조한다. NLS의 첨가에 의해 용해된 발효 브로스를 사용하여 응집을 수행하였다.
다른 혈청형의 정제 공정에 대한 선행 작업은 청징 단위 조작이 용액 pH 및 명반 농도에 의해 영향을 받지만, 응집 교반 시간에 의해서는 영향을 받지 않음을 나타냈다. 혈청형 12F의 응집에 대한 상기 요인들의 영향을 이해하기 위해, DOE 연구를 수행하였다.
각각의 변수에 대한 범위를 하기 표 25에 나타냈다.
혈청형 12F 응집 DOE 연구에 대한 변수 범위
범위 낮음 높음
pH 2 5
명반 농도 0% 4%
시간 30분 90분
상기 3개 변수를 달리한 일련의 16개 실험을 (실온에서) 수행하였다. 각각의 변수(명반 농도, pH 및 응집 시간)간의 상관관계 및 응집 공정 동안의 반응(다당류 회수, OD600 및 단백질 제거)을 예측 프로파일러에 의해 분석하였다. 가장 중요도가 낮은 변수는 응집 시간이었는데, 이는 명반 농도 및 pH가 중간점으로 설정될 때 단백질 제거 또는 청징도에 거의 영향을 주지 않고 다당류 회수에 매우 미미한 영향을 주었다.
명반 농도가 청징도에 주된 영향을 주었다. 최적 명반 농도는 약 2.7%이고, 이는 가장 우수한 청징도를 야기하였다. 하지만, 명반 농도가 1.5 내지 3.5%일 때에는 OD600 차이가 작았다. 한편으로 응집 pH는 단백질 제거에 주된 영향을 주었는데, pH가 낮을수록 단백질 제거율이 더 높았다. 3.5 이하의 pH에서, 불순물 제거 최고치가 성취되었다.
다른 혈청형에 대한 작업은 응집 동안 온도 증가가 더 큰 심층 필터 용량을 야기함을 나타냈다. 응집온도가 50℃로 증가될 때, 원심분리물 청징도가 급격히 증가하였고(OD600이 0.338(20℃)에서 0.073(50℃)로 증가함), 필터 용량이 8배를 초과하여 증가하였다. 더 높은 온도가 응집에 사용될 때, 입도는 큰 입도 범위로 급격히 전환되었고, 이는 원심분리를 더 용이하게 하였다.
또한, 응집 공정에 대한 응집 온도의 영향을 이해하기 위해 다른 실험도 수행하였다. 혈청형 12F 발효 브로스는 상이한 2개의 온도에서 1시간 동안 2% 명반, pH 3.5를 사용하여 응집되었다. 응집 후, 브로스를 원심분리하고 원심분리물의 청징도(OD600)를 측정하였다. 이어서, 원심분리물을 심층 필터를 통해 여과하여 필터 용량을 측정하였다. 심층 필터 여과물을 Vmax 모델을 사용하여 0.45 μm 데드-엔드 필터를 통해 추가 여과하였다. 상기 실험으로부터의 결과를 하기 표 26에 나타냈다.
상이한 온도에 의한 혈청형 12F 응집
실험 1 실험 2
온도 20℃ 50℃
교반 속도 214 rpm 214 rpm
OD600 0.076 0.030
필터 1 2 1 2 3
여과 후 OD 0.022 0.014 0.019 0.014 0.020
심층 필터 용량 >400 L/m2 >90 L/m2 >400 L/m2 >80 L/m2 >400 L/m2
0.45 μm Vmax 503 L/m2 ≥1866 L/m2 1490 L/m2 ≥1934 L/m2 ≥1985 L/m2
Vmax 초기 유동 8503 LMH 10129 LMH 8555 LMH 11085 LMH 8495 LMH
표 26에서, 50℃가 응집 온도로서 사용될 때, OD600이 더 작음을 볼 수 있다. 모두 필터의 용량에 도달하지 못한 것으로, 모든 조건에 대한 심층 필터 용량의 차이는 없었다. 그러나, 여전히 0.45 μm Vmax데이터는 더 높은 온도의 응집이 더 우수함을 나타낸다.
3. 원심분리
합리적인 용량으로 여과될 수 있도록, 원심분리를 수행하여 투명한 원심분리물을 수득하였다. 원심분리 속도는 12,000 g였다.
4. 심층여과
원심분리가 1차적인 고체/액체 분리 단위 조작이지만, 이는 공급 스트림으로부터 모든 입자를 제거하진 않고, 심층여과 단위 조작을 원심분리와 제1 한외여과 단위 조작 사이에 혼입하였다.
5. 임의적인, 0.45 μm 여과
임의적이기는 하지만, 0.45 μm 필터를 심층여과 후의 일부 샘플에 사용하였다.
6. 한외여과/정용여과(UF/DF-1)
정제는 (상기 단계 4 또는 5로부터의) 심층여과물에 의해 시작하였다.
본 조작은 사용된 발효 배지를 완충제에 의해 대체하고, 저분자 호스트 세포 불순물 및 잔류 응집체(알루미늄)의 수준을 감소시킨다.
다른 혈청형에 대한 수행 작업에서(상기 참고), 10 mM 나트륨 포스페이트, 25 mM 나트륨 시트레이트, pH 7.0이 UF/DF 공정에 사용하기에 우수한 완충제임이 밝혀졌다. 포스페이트 완충제는 pH를 중성으로 조절하는데 사용된다. 시트레이트 완충제는 알루미늄을 제거하는 킬레이트제로서 사용된다.
7. 탄소여과
본 단위 조작은 호스트 세포 불순물, 예컨대 단백질 및 핵산, 및 유색 불순물의 수준을 감소시킨다(WO 2008/118752 참고).
UF/DF-1 농축물을 R32SP 디스크 탄소 필터를 통해 여과하였다. 결과는 탄소 필터가 단백질 관련 불순물 제거에 탁월한 능력이 있음을 나타냈고, 탄소여과로부터의 생성물 회수는 매우 우수했다.
탄소여과 후 0.2 μm 여과를 일부 샘플에 대해 (임의적으로) 수행하였다.
8. 한외여과/정용여과(UF/DF-2)
본 단위 조작은 생성물을 목적 농도로 농축하고 25 mM 나트륨 시트레이트, 10 mM 나트륨 포스페이트, pH 7.0을 접합에 적합한 완충제로 대체한다. 본 단계는 30 kDa 분자량 컷 오프 필터를 사용하여 수행된다.
잔류 시트레이트의 존재는 접합 화학을 방해할 수 있다. 시트레이트의 수준을 현저히 감소시키기 위해, 정용여과 실험을 상이한 완충제를 사용하여 수행하였다(실시예 1 및 2 참고).
9. 멸균여과
보관용 병에 채우기 전 최종 단위 조작은 멸균여과(0.2 μm 여과)였다.
10. 일관성
전술된 회수 및 정제 과정이 재현가능한 결과를 야기함을 입증하기 위해, 3개의 일관성 뱃취를 제조하였다. 발효 뱃취를 전술된 공정을 사용하여 응집시키고 원심분리하였다.
3개의 일관성 뱃취의 단계 및 전체 수율을 하기 표 27에 나타냈다.
12F 일관성 뱃취에 대한 단계 및 전체 수율
단위 조작 12F-001 12F-002 12F-003
발효 브로스 NA NA NA
원심분리물 100 100 100
심층여과물 89 88 91
UF/DF-1 농축물 97 97 96
탄소여과물 83 86 82
UF/DF-2 농축물 93 94 94
최종 여과물 94 99 96
전체 수율 63 67 65
3개의 일관성 뱃취로부터의 분석 결과를 하기 표 28에 나타냈다.
12F 일관성 뱃취에 대한 분석 결과
분석 11A-001 11A-002 11A-003
잔류 시트레이트 <LOQ <LOQ <LOQ
잔류 NLS < LOQ <LOQ <LOQ
잔류 핵산(w/w) < 0.03% <0.03% <0.03%
잔류 단백질(w/w) 0.5% 0.5% 0.5%
잔류 C 폴리 0.6 중량% 0.5 중량% 0.6 중량%
잔류 Al 5 ppm 6 ppm 6 ppm
실시예 8. 스타필로코커스 아우레우스 Cp5 및 Cp8 다당류의 정제
본 실시예는 스타필로코커스 아우레우스로부터 캡슐 다당류 타입 5(Cp5) 및 타입 8(Cp8)의 단리를 위한 정제 공정을 설명한다.
1. 출발 물질
정제 공정을 위한 출발 물질은 세포 전체(비용해된 것) 스타필로코커스 아우레우스 발효 수확물이었다.
2. 산 가수분해
스타필로코커스 아우레우스 발효 수확 후, 세포 전체 브로스의 pH를 강산(예컨대 황산)의 첨가에 의해 산성으로 조정하고 가열한 후, 일정 시간 동안 항온처리하였다(WO 2011/041003 참고). 가수분해 후, 브로스를 냉각한 후, 나트륨 하이드록사이드 용액의 첨가에 의해 중화시켰다.
3. 응집
10%(w/v) 명반(나트륨 알루미늄 포스페이트) 수용액을 차가운(20 내지 30℃) 중화된 브로스(상기 단계 2의 것)에 교반에 의해 첨가하여 최종적으로 브로스 중 2%(w/v) 명반 용액을 생성하여 응집을 수행하였다. 브로스를 나트륨 하이드록사이드 용액(1 내지 10 N)의 첨가에 의해 중화시켰다(pH 6.9 내지 7.1). 중화 후, 마이크로여과로 청징하기 전, 응집된 브로스를 실온에서 10분 이상 동안 항온처리하였다.
4. 브로스 청징(마이크로여과 또는 원심분리)
응집된 브로스를 0.2 μm 세공 직경 구멍(hollow) 섬유 막을 사용하여 접선 유동 마이크로여과에 의해 청징하였다. 상기 청징의 목적 생성물은 농축 및 정용여과 단계로부터의 투과물이었는데, 농축물은 결과적으로 폐기하였다. 응집된 브로스를 4000 내지 8000초-1의 전단 속도로 일정한 유동 조건하에 약 4배 농축하였다. 농축 후, 일정-부피 정용여과(5 정용여과 부피)를 탈이온수에 의해 수행하였다. 상기 정용여과도 일정한 유동 조건하에 수행하였다.
정용여과 후, 농축물 및 정용여과 단계로부터의 합친 여과물을 후속 조작을 위한 공급물로서 사용하였다.
5. 한외여과/정용여과(UF/DF-1)
마이크로여과 투과물을 구멍 섬유 접선 유동 마이크로여과 막을 사용하여 농축 및 정용여과하였다. 농축물을 생성물로서 채집하고, 투과물은 폐기물로서 폐기하였다. 공급물(마이크로여과 투과물)을 약 8 내지 15배로 농축하였다. 농축 후, 농축물을 10 정용여과 부피 이상의 125 mM 나트륨 포스페이트, pH 7.5 완충제에 의해 정용여과(일정-부피)하였다.
정용여과 후, 농축물을 필터 장치로부터의 배수에 의해 회수하였다.
다르게는, 원심분리도 액체로부터 응집된 브로스 중 침전된 세포 파편을 분리하는 청징 방법으로서 사용될 수 있다. 이어서, 상청액이 후속의 탄소여과 단계에 의해 처리될 수 있다.
6. 탄소여과
이어서, 한외여과/정용여과 농축물을 탄소여과를 사용하여 여과하였다. Cp5 정제 및 Cp8 정제 둘다에, 쿠노 R32SP 등급 탄소 필터를 사용하였다. 전형적으로, 농축물은 단일 통과 조작으로 탄소 필터를 통해 공급된다. 탄소여과물을 생성물로서 채집하였다. 생성물 여과 후, 탄소를 125 mM 나트륨 포스페이트(pH 7.5) 완충제로 헹구었다. 헹군 것을 생성물 여과물과 합치고 퍼요오데이트 산화를 진행하였다.
7. 퍼요오데이트 산화
이어서, 합친 탄소여과물과 필터 헹군 것을 퍼요오데이트에 의해 산화 반응시켰다. 실온에서, 퍼요오드산의 1.0 M 용액을 선행 정제 단계로부터의 탄소여과물/헹군 것에 첨가하였다(50 mM 최종 농도의 퍼요오데이트가 생성됨). 상기 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 항온처리하였다. 이어서, 과량의 몰의 프로필렌 글리콜을 반응 혼합물에 첨가하여 반응을 ??칭시켰다. ??칭 후, 반응 생성물을 나트륨 하이드록사이드의 첨가에 의해 중화시켰다(pH 6.9 내지 7.1). 이어서, 반응 생성물 용액을 한외여과/정용여과 조작으로 처리하였다.
8. 한외여과/정용여과(UF/DF-2)
퍼요오데이트 산화 생성물 혼합물을 원심분리하고 구멍 섬유 접선 유동 한외여과 막에 의해 정용여과하였다. 물질을 일정한 TMP 조건 및 일정한 전단 속도하에 2 내지 4배(약 4 내지 8 g/L Cp5/Cp8)로 농축하였다. 이어서, 농축물을 10 정용여과 부피 이상의 탈이온수에 의해 정용여과(일정-부피)하였다.
정용여과 후, 농축물을 회수한 후, 필터를 최소 부피의 탈이온수를 사용하여 세척하였다. 헹군 것을 배수하여 농축물과 함께 채집하고, 합친 물질을 멸균여과하였다.
9. 멸균여과
합친 농축물과 헹군 것을 적절히 사이징된 데드-엔드 멸균 등급 필터(0.2 μm 세공)을 통해 멸균 용기로 여과하였다. 이어서, 상기 여과물을 4℃에서 보관하였다.
본원에 언급된 모든 문헌 및 특허 출원은 본 발명이 속한 분야의 당업자에게 공지되어 있다. 모든 문헌 및 특허 출원은 각각의 개별 문헌 또는 특허 출원이 특정하고 개별적으로 참조로 혼입되는 바와 마찬가지로 참조로 혼입된다.
전술한 본 발명이 이해의 명확성을 위해 설명 및 예시로써 다소 상세히 기재되었지만, 특정 변경 및 변형이 첨부된 청구범위의 범주내에서 실시될 수 있다.

Claims (27)

  1. 박테리아 다당류와 함께 오염물을 포함하는 용액으로부터 상기 박테리아 다당류를 정제하는 방법으로서, 응집 단계를 포함하는 방법.
  2. 제1항에 있어서,
    응집제가 알루미늄, 철, 칼슘 및 마그네슘으로 이루어진 군으로부터 선택되는 다가 양이온을 포함하는, 방법.
  3. 제1항에 있어서,
    응집제가 명반(예컨대 칼륨 명반, 나트륨 명반 또는 암모늄 명반), 알루미늄 클로로하이드레이트, 알루미늄 설페이트, 칼슘 옥사이드, 수산화칼슘, 철(II) 설페이트(제1철 설페이트), 철(III) 클로라이드(제2철 클로라이드), 폴리아크릴아미드, 개질된 폴리아크릴아미드, 폴리DADMAC, 폴리에틸렌이민(PEI), 나트륨 알루미네이트 및 나트륨 실리케이트로 이루어진 군으로부터 선택되는 제제를 포함하는, 방법.
  4. 제1항에 있어서,
    응집제가 명반(예컨대 칼륨 명반, 나트륨 명반 또는 암모늄 명반), 알루미늄 클로로하이드레이트, 알루미늄 설페이트, 칼슘 옥사이드, 수산화칼슘, 철(II) 설페이트(제1철 설페이트), 철(III) 클로라이드(제2철 클로라이드), 폴리아크릴아미드, 개질된 폴리아크릴아미드, 폴리DADMAC, 나트륨 알루미네이트 및 나트륨 실리케이트로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    응집제의 농도가 약 0.1 내지 약 20%(w/v)인, 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    용액이 일정 시간 동안 유지되어 다운스트림(downstream) 가공 전 응집체가 침강되게 하는, 방법.
  7. 제6항에 있어서,
    응집 단계가 산성 pH에서 수행되는, 방법.
  8. 제6항 또는 제7항에 있어서,
    침강 단계가 존재하는 경우 약 4 내지 약 30℃의 온도에서 수행되는, 방법.
  9. 제6항 또는 제7항에 있어서,
    침강 단계가 존재하는 경우 약 30 내지 약 95℃의 온도에서 수행되는, 방법.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    응집 후 현탁액이 디캔테이션(decantation), 침전, 여과 또는 원심분리에 의해 청징(clarifying)되는, 방법.
  11. 제10항에 있어서,
    다당류-함유 용액이 여과되는, 방법.
  12. 제11항에 있어서,
    여과가 심층여과인, 방법.
  13. 제11항 또는 제12항에 있어서,
    여과물이 마이크로여과되는, 방법.
  14. 제11항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
    여과물이 한외여과 및 정용여과로 추가 처리되는, 방법.
  15. 제14항에 있어서,
    한외여과 단계가 약 20 내지 약 90℃의 온도에서 수행되는, 방법.
  16. 제14항 또는 제15항에 있어서,
    대체 용액이 킬레이트제를 포함하는, 방법.
  17. 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서,
    정용여과 단계가 약 20 내지 약 90℃의 온도에서 수행되는, 방법.
  18. 제10항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서,
    다당류를 함유하는 용액이 활성탄 여과 단계에 의해 처리되는, 방법.
  19. 제18항에 있어서,
    여과물이 마이크로여과되는, 방법.
  20. 제18항 또는 제19항에 있어서,
    여과물이 한외여과 및 정용여과에 의해 추가 청징되는, 방법.
  21. 제20항에 있어서,
    대체 용액이 킬레이트제를 포함하는, 방법.
  22. 제20항 또는 제21항에 있어서,
    정용여과 단계가 약 20 내지 약 90℃의 온도에서 수행되는, 방법.
  23. 제20항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서,
    정제된 다당류 용액이 사이징(sizing)에 의해 균질화되는, 방법.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서,
    정제된 다당류 용액이 멸균여과되는, 방법.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서,
    박테리아 다당류가 캡슐 다당류인, 방법.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 방법에 의해 수득된 정제된 박테리아 다당류의 당접합체.
  27. 제26항의 당접합체를 포함하는 면역원성 조성물.
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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP4232593A1 (en) * 2020-10-22 2023-08-30 Pfizer Inc. Methods for purifying bacterial polysaccharides
US20230405137A1 (en) 2020-11-10 2023-12-21 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
WO2023161817A1 (en) 2022-02-25 2023-08-31 Pfizer Inc. Methods for incorporating azido groups in bacterial capsular polysaccharides
CN114957509B (zh) * 2022-08-01 2022-10-21 深圳柏垠生物科技有限公司 一种可放大的可拉酸纯化方法

Family Cites Families (71)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4673574A (en) 1981-08-31 1987-06-16 Anderson Porter W Immunogenic conjugates
JPS5985297A (ja) * 1982-11-04 1984-05-17 Mitsubishi Petrochem Co Ltd 多糖類の回収法
US4459286A (en) 1983-01-31 1984-07-10 Merck & Co., Inc. Coupled H. influenzae type B vaccine
US4808700A (en) 1984-07-09 1989-02-28 Praxis Biologics, Inc. Immunogenic conjugates of non-toxic E. coli LT-B enterotoxin subunit and capsular polymers
US4709017A (en) 1985-06-07 1987-11-24 President And Fellows Of Harvard College Modified toxic vaccines
US4950740A (en) 1987-03-17 1990-08-21 Cetus Corporation Recombinant diphtheria vaccines
GB8815795D0 (en) 1988-07-02 1988-08-10 Bkl Extrusions Ltd Glazing bead
DE3841091A1 (de) 1988-12-07 1990-06-13 Behringwerke Ag Synthetische antigene, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
EP0378881B1 (en) 1989-01-17 1993-06-09 ENIRICERCHE S.p.A. Synthetic peptides and their use as universal carriers for the preparation of immunogenic conjugates suitable for the development of synthetic vaccines
EP0482068A1 (en) 1989-07-14 1992-04-29 American Cyanamid Company Cytokine and hormone carriers for conjugate vaccines
IT1237764B (it) 1989-11-10 1993-06-17 Eniricerche Spa Peptidi sintetici utili come carriers universali per la preparazione di coniugati immunogenici e loro impiego per lo sviluppo di vaccini sintetici.
SE466259B (sv) 1990-05-31 1992-01-20 Arne Forsgren Protein d - ett igd-bindande protein fraan haemophilus influenzae, samt anvaendning av detta foer analys, vacciner och uppreningsaendamaal
DE69113564T2 (de) 1990-08-13 1996-05-30 American Cyanamid Co Faser-Hemagglutinin von Bordetella pertussis als Träger für konjugierten Impfstoff.
NZ249704A (en) 1992-02-11 1996-11-26 Jackson H M Found Military Med A two carrier immunogenic construct comprising a 70+ kd molecule conjugated to at least 1 t-dependent antigen, preparation, compositions containing the construct
IT1262896B (it) 1992-03-06 1996-07-22 Composti coniugati formati da proteine heat shock (hsp) e oligo-poli- saccaridi, loro uso per la produzione di vaccini.
AU4230493A (en) 1992-05-06 1993-11-29 President And Fellows Of Harvard College Diphtheria toxin receptor-binding region
KR100278157B1 (ko) 1992-06-25 2001-01-15 장 스테판느 보조약을 함유하는 백신 조성물
IL102687A (en) 1992-07-30 1997-06-10 Yeda Res & Dev Conjugates of poorly immunogenic antigens and synthetic pepide carriers and vaccines comprising them
DK0616034T3 (da) 1993-03-05 2005-02-21 Wyeth Corp Plasmid til fremstilling af CRM-protein og diphtheria toxin
DK0812593T4 (da) 1993-03-23 2008-05-13 Smithkline Beecham Biolog Vaccinepræparater indeholdende 3-O-deacyleret monophosphoryllipid-A
ATE254475T1 (de) 1993-09-22 2003-12-15 Jackson H M Found Military Med Verfahren zur aktivierung von löslichem kohlenhydraten durch verwendung von neuen cyanylierungsreagenzien, zur herstellung von immunogenischen konstrukten
GB9326253D0 (en) 1993-12-23 1994-02-23 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
US5917017A (en) 1994-06-08 1999-06-29 President And Fellows Of Harvard College Diphtheria toxin vaccines bearing a mutated R domain
US6455673B1 (en) 1994-06-08 2002-09-24 President And Fellows Of Harvard College Multi-mutant diphtheria toxin vaccines
ES2200059T3 (es) 1995-03-22 2004-03-01 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Produccion de construcciones inmunogenicas usando carbohidratos solubles activados mediante reactivos cianilados organicos.
GB9513261D0 (en) 1995-06-29 1995-09-06 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
GB9712347D0 (en) 1997-06-14 1997-08-13 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
GB9713156D0 (en) 1997-06-20 1997-08-27 Microbiological Res Authority Vaccines
WO1999011241A1 (en) 1997-09-05 1999-03-11 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Oil in water emulsions containing saponins
US6303114B1 (en) 1998-03-05 2001-10-16 The Medical College Of Ohio IL-12 enhancement of immune responses to T-independent antigens
WO1999052549A1 (en) 1998-04-09 1999-10-21 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Adjuvant compositions
GB9817052D0 (en) 1998-08-05 1998-09-30 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
AU771330B2 (en) 1998-08-19 2004-03-18 Baxter Healthcare Sa Immunogenic beta-propionamido-linked polysaccharide protein conjugate useful as a vaccine produced using an N-acryloylated polysaccharide
ATE357252T1 (de) 1998-10-16 2007-04-15 Glaxosmithkline Biolog Sa Adjuvanzsysteme und impfstoffe
DK1140157T3 (da) 1998-12-21 2009-06-08 Medimmune Inc Streptococcus pneumoniae-proteiner og immunogene fragmenter til vacciner
WO2000039299A2 (en) 1998-12-23 2000-07-06 Shire Biochem Inc. Streptococcus antigens
PL203917B1 (pl) 1999-03-19 2009-11-30 Glaxosmithkline Biolog Sa Kompozycja immunogenna, sposób jej wytwarzania oraz zastosowanie
AU781027B2 (en) 1999-04-09 2005-04-28 Department Of Health & Human Services Recombinant toxin a protein carrier for polysaccharide conjugate vaccines
CZ303515B6 (cs) 1999-04-19 2012-11-07 Smithkline Beecham Biologicals S. A. Adjuvantní prostredek
EP1221971A2 (en) 1999-09-24 2002-07-17 SmithKline Beecham Biologics SA Use of the combination of polyoxyethylene sorbitan ester and octoxynol as adjuvant and its use in vaccines
TR200200777T2 (tr) 1999-09-24 2002-09-23 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Polioksietilen alkil eteri veya esteriyle en az bir iyonik olmayan yüzey aktif maddeli adjuvant.
GB0007432D0 (en) 2000-03-27 2000-05-17 Microbiological Res Authority Proteins for use as carriers in conjugate vaccines
KR100927767B1 (ko) 2000-06-20 2009-11-20 아이디 바이오메디칼 코포레이션 스트렙토코커스 항원
AU2002309706A1 (en) 2001-05-11 2002-11-25 Aventis Pasteur, Inc. Novel meningitis conjugate vaccine
WO2003054007A2 (en) 2001-12-20 2003-07-03 Shire Biochem Inc. Streptococcus antigens
DE602004010376T2 (de) 2003-03-13 2008-10-23 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Verfahren zur reinigung von bakteriellem cytolysin
WO2004083251A2 (en) 2003-03-17 2004-09-30 Wyeth Holdings Corporation Mutant cholera holotoxin as an adjuvant and an antigen carrier protein
GB0421083D0 (en) 2004-09-22 2004-10-27 Glaxosmithkline Biolog Sa Purification process
GB0502096D0 (en) 2005-02-01 2005-03-09 Chiron Srl Purification of streptococcal capsular polysaccharide
EP3466982B1 (en) 2005-04-08 2020-06-17 Wyeth LLC Separation of contaminants from streptococcus pneumoniae polysaccharide by ph manipulation
KR20150061019A (ko) 2005-04-08 2015-06-03 와이어쓰 엘엘씨 다가 폐렴구균 다당류-단백질 접합체 조성물
GB0522303D0 (en) 2005-11-01 2005-12-07 Chiron Srl Culture method
GB0607088D0 (en) 2006-04-07 2006-05-17 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
JP5286089B2 (ja) 2006-01-13 2013-09-11 バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド ポリサッカライドを精製する方法
CN101081296B (zh) 2006-05-29 2010-08-04 北京民海生物科技有限公司 一种b型流感嗜血杆菌荚膜多糖制备方法及其联合疫苗
PL3406635T3 (pl) 2007-03-23 2022-08-22 Wyeth Llc Skrócony sposób oczyszczania do wytwarzania polisacharydów otoczkowych Streptococcus pneumoniae
EA200901578A1 (ru) 2007-06-26 2010-08-30 Глаксосмитклайн Байолоджикалс С.А. Вакцина, содержащая конъюгаты капсульных полисахаридов streptococcus pneumoniae
GB0818453D0 (en) 2008-10-08 2008-11-12 Novartis Ag Fermentation processes for cultivating streptococci and purification processes for obtaining cps therefrom
BRPI1015567A2 (pt) 2009-06-22 2021-08-31 Wyeth Llc Composições imunogênicas de antígenos de staphylococcus aureus
SG10201406432RA (en) 2009-06-22 2014-11-27 Wyeth Llc Compositions and methods for preparing staphylococcus aureus serotype 5 and 8 capsular polysaccharide conjugate immunogenic compositions
EP3199177A1 (en) 2009-10-30 2017-08-02 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Purification of staphylococcus aureus type 5 and type 8 capsular saccharides
CN102078604A (zh) * 2010-12-31 2011-06-01 北京民海生物科技有限公司 脑膜炎球菌荚膜多糖多价结合疫苗，其制备方法和应用
MY167579A (en) 2012-08-16 2018-09-20 Pfizer Glycoconjugation processes and compositions
JP5905649B2 (ja) 2012-09-07 2016-04-20 エスケー ケミカルズ カンパニー, リミテッドSk Chemicals Co., Ltd. 肺炎球菌血清型を有する莢膜多糖類の製造方法
CA2943263C (en) 2012-12-20 2018-12-04 Pfizer Inc. Glycoconjugation process
JP2016504918A (ja) 2013-01-31 2016-02-18 グラクソ グループ リミテッドＧｌａｘｏ Ｇｒｏｕｐ Ｌｉｍｉｔｅｄ タンパク質を製造する方法
CN103495161B (zh) 2013-10-08 2019-06-18 江苏康泰生物医学技术有限公司 一种多元肺炎球菌荚膜多糖-蛋白质结合物的混合物及其制备方法
EP3096785B1 (en) 2014-01-21 2020-09-09 Pfizer Inc Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
KR102049826B1 (ko) 2014-01-21 2019-12-03 화이자 인코포레이티드 스트렙토코쿠스 뉴모니아에 피막 폴리사카라이드 및 그의 접합체
EP4286000A3 (en) 2014-01-21 2024-02-14 Pfizer Inc. Streptococcus pneumoniae capsular polysaccharides and conjugates thereof
EP3443983B1 (en) 2014-02-14 2022-07-20 Pfizer Inc. Immunogenic glycoprotein conjugates

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