BR112021014686A2 - Métodos para purificar polissacarídeos bacterianos - Google Patents

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Abstract

métodos para purificar polissacarídeos bacterianos. a presente invenção refere-se a métodos para purificar polissacarídeos bacterianos, em particular para remover impurezas de lisados celulares de bactérias que produzem polissacarídeos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "MÉTO- DOS PARA PURIFICAR POLISSACARÍDEOS BACTERIANOS".
[0001] A presente invenção refere-se a métodos para purificar po- lissacarídeos bacterianos, em particular para remover impurezas de lisados celulares de bactérias que produzem polissacarídeos.
[0002] Os polissacarídeos bacterianos, em particular polissacarí- deos capsulares, são imunogenes importantes encontrados na super- fície de bactérias envolvidas em várias doenças bacterianas. Isso os levou a ser um componente importante no desenvolvimento de vaci- nas. Eles provaram ser úteis em produzir respostas imunes, especial- mente quando ligados a proteínas transportadoras.
[0003] Os polissacarídeos bacterianos são tipicamente produzidos por fermentação das bactérias (por exemplo, Streptococci (por exem- plo, S. pneumoniae, S. pyogenes, S. agalactiae ou Streptococci do Grupo C e G), Staphylococci (por exemplo, Staphylococcus aureus), Haemophilus (por exemplo, Haemophilus influenzae), Neisseria (por exemplo, Neisseria meningitidis) e Escherichia (por exemplo, Escheri- chia coli).
[0004] Tipicamente, os polissacarídeos bacterianos são produzi- dos usando cultura em regime descontínuo em meio complexo, cultura em regime descontínuo alimentado ou cultura em regime contínuo.
[0005] Há uma necessidade por processos de purificação robustos e eficazes que possam ser usados na produção em larga escala de polissacarídeos bacterianos pós-fermentação.
[0006] A maioria dos processos inclui uma etapa de precipitação do polissacarídeo capsular (por exemplo, precipitação alcoólica ou tra- tamento com detergente catiônico). A separação subsequente do pre- cipitado a partir do sobrenadante (por exemplo, por centrifugação) e a ressolubilização é trabalhosa e pode resultar na perda de polissacarí- deo, reduzindo assim o rendimento.
[0007] Além disso, a maior parte do processo de purificação re- quer várias etapas envolvendo muitas operações dispendiosas, traba- lhosas e tecnologicamente exigentes, tal como cromatografia e múlti- plas separações de membranas. A remoção de impurezas nesses pro- cessos é distribuída por muitas etapas trabalhosas e dispendiosas. O nível de proteína é a especificação mais problemática devido às pro- priedades físicas e químicas das proteínas solúveis.
[0008] Assim, há uma necessidade de um processo de purificação simplificado para reduzir os níveis de proteína solúvel em lisados bacterianos e eliminar as ineficiências do processo de purificação atual para produzir sacarídeos bacterianos substancialmente purificados adequados para incorporação em vacinas.
Figuras
[0009] Figura 1 — Fluxograma de processo para purificação de po- lissacarídeos
[0010] Figura 2 — Efeito do pH a 2% p / v de alúmen na remoção de proteínas e na clarificação do caldo de fermentação de S. pneumo- niae sorotipo 8 em vários pontos no tempo. Após 1 hora (barra da es- querda), 4 horas (barra do meio), 24 horas (barra da direita)
[0011] Figura 3 — Efeito da % de alúmen a pH 3,5 na remoção de proteínas e a clarificação do caldo de fermentação de S. pneumoniae sorotipo 8 em vários pontos no tempo. 1,0% de Alúmen (barra da es- querda), 2,0% de Alúmen (barra do meio), 3,0% de Alúmen (barra da direita)
[0012] Figura 4 — Titulação de ácido do caldo de fermentação de S. pneumoniae sorotipo 33F.
[0013] Figura 5 - Floculação de alúmen de S. pneumoniae sorotipo 33F em pH 3,5.
[0014] Figura 6 — Efeito do aquecimento no tamanho de partícula do caldo floculado de S. pneumoniae sorotipo 22F. Para o experimen-
to, a temperatura de floculação foi mantida em temperatura ambiente (RT) (menor curva de distribuição de tamanho de partícula (pico a 9,8 um)) e / ou a 45ºC (maior curva de distribuição de tamanho de partícu- la (pico de 65 um)).
1. Processo de purificação de polissacarídeos bacterianos
1.1 Material de Partida
[0015] Os métodos da invenção podem ser usados para purificar polissacarídeos bacterianos a partir de uma solução compreendendo os ditos polissacarídeos juntamente com contaminantes.
1.1.1 Células Bacterianas
[0016] As fontes de polissacarídeos bacterianos a serem purifica- dos de acordo com esta invenção são células bacterianas, em particu- lar bactérias patogênicas.
[0017] Exemplos não limitantes de bactérias gram-positivas para uso de acordo com esta invenção são Streptococci (por exemplo, S. pneumoniae, S. pyogenes, S. agalactiae ou Streptococci do Grupo C & G), Staphylococci (por exemplo, Staphylococcus aureus), Enterococci, Bacillus, Corynebacterium, Listeria, Erysipelothrix, e Clostridium. Exemplos não limitantes de bactérias gram-negativas para uso com esta invenção incluem Haemophilus, (por exemplo, Haemophilus influ- enzae), Neisseria (por exemplo, Neisseria meningitidis) e Escherichia, (por exemplo, Escherichia coli).
[0018] Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos bacteria- nos para uso de acordo com esta invenção é selecionada a partir do grupo que consiste de Aeromonas hydrophila e outras espécies (spp.); Bacillus anthracis; Bacillus cereus; espécies de Clostridium produtoras de neurotoxina Botulinum; Brucella abortus; Brucella melitensis; Bru- cella suis; Burkholderia mallei (formalmente Pseudomonas mallei); Burkholderia pseudomallei (precedentemente Pseudomonas pseudo- mallei); Campylobacter jejuni; Chlamydia psittaci; Chlamydia trachoma-
tis, Clostridium botulinum; Clostridium dificile; Clostridium perfringens; Coccidioides immitis; Coccidioides posadasii; Cowdria ruminantium (Heartwater); Coxiella burnetii; Enterococcus faecalis; grupo Escheri- chia coli Enterovirulenta (EEC Group) tal como Escherichia coli - ente- rotoxigênica (ETEC), Escherichia coli - enteropatogênica (EPEC), Es- cherichia coli - 0157:H7 enterohemorágica (EHEC), e Escherichia coli - enteroinvasiva (EIEC); Ehrlichia spp. tal como Ehrlichia chajfeensis; Francisella tularensis; Legionella pneumophilia; Liberobacter africanus; Liberobacter asiaticus; Listeria monocytogenes; miscellaneous enterics tal como Klebsiella, Enterobacter, Proteus, Citrobacter, Aerobacter, Providencia, e Serratia; Mycobacterium bovis; Mycobacterium tubercu- losis; Mycoplasma capricolum; Mycoplasma mycoides ssp mycoides; Peronosclerosporaphilippinensis; Phakopsora pachyrhizi; Plesiomonas shigelloides; Ralstonia solanacearum race 3, biovar 2; Rickettsia prowazekii; Rickettsia rickettsii; Salmonella spp.; Schlerophthora rays- siae var zeae; Shigella spp.; Staphylococcus aureus; Streptococcus; Synchytrium endobioticum; Vibrio cholerae non-01; Vibrio cholerae 01; Vibrio par ahaemo |y ticus e outros Vibrios; Vibrio vulnificus; Xantho- monas oryzae; Xylella fastidiosa (citrus variegated chlorosis strain); Yersinia enterocolitica e Yersinia pseudotuberculosis; e Yersinia pestis.
[0019] Um polissacarídeo desejado para purificação pode estar associado a um componente celular, tal como uma parede celular. À associação com a parede celular significa que o polissacarídeo é um componente da própria parede celular e / ou está ligado à parede celu- lar, direta ou indiretamente por meio de moléculas intermediárias, ou é um revestimento transiente da parede celular (por exemplo, certas ce- pas bacterianas exsudam polissacarídeos capsulares, também conhe- cidos na técnica como “exopolissacarídeos').
[0020] Em algumas modalidades, o polissacarídeo extraído da bactéria é um polissacarídeo capsular, um polissacarídeo sub-
capsular, ou um lipopolissacarídeo.
[0021] Em modalidades preferenciais, o polissacarídeo é um polis- sacarídeo capsular.
[0022] Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeo capsular bacteriano é Staphylococcus aureus. Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeo capsular bacteriano é Staphylococcus aureus tipo 5 ou Staphylococcus aureus tipo 8.
[0023] Em uma outra modalidade, a fonte de polissacarídeo cap- sular bacteriano é Enterococcus faecalis. Em ainda outra modalidade, a fonte de polissacarídeo capsular bacteriano é Haemophilus influen- zae tipo b.
[0024] Em uma outra modalidade, a fonte de polissacarídeos cap- sulares bacterianos é Neisseria meningitidis. Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos capsulares bacterianos é N. meningitidis so- rogrupo A (MenA), N. meningitidis sorogrupo W135 (MenW135), N. meningitidis sorogrupo Y (MenY), N. meningitidis sorogrupo X (MenX) ou N. meningitidis sorogrupo C (MenC). Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos capsulares bacterianos é N. meningitidis sorogrupo A (MenA). Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos capsulares bacterianos é N. meningitidis sorogrupo W135 (MenW135). Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos capsulares bacterianos é N. meningitidis sorogrupo Y (MenY). Em uma modalidade, a fonte de po- lissacarídeos capsulares bacterianos é N. meningitidis sorogrupo C (MenC). Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos capsulares bacterianos é N. meningitidis sorogrupo X (MenX).
[0025] Em uma outra modalidade, a fonte de polissacarídeo cap- sular bacteriano é Escherichia coli. Em uma outra modalidade, a fonte de polissacarídeo capsular bacteriano é Enterococcus faecalis.
[0026] Em uma outra modalidade, a fonte de polissacarídeo cap- sular bacteriano é Streptococcus agalactiae (estreptococos do Grupo
B (GBS)). Em algumas modalidades, a fonte de polissacarídeo capsu- lar bacteriano é selecionada a partir do grupo que consiste de GBS tipos la, lb, 11, III, IV, V, VI, VIl e VIII. Em algumas modalidades, a fonte de polissacarídeo capsular bacteriano é selecionada a partir do grupo que consiste de GBS tipos la, lb, Il, Ill e V.
[0027] Em uma outra modalidade, a fonte de polissacarídeo cap- sular bacteriano é Escherichia coli. Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeo capsular bacteriano é uma Escherichia coli parte do grupo Escherichia coli Enterovirulenta (Grupo EEC), tal como Escheri- chia coli - enterotoxigênica (ETEC), Escherichia coli - enteropatogênica (EPEC), Escherichia coli - 0157:H7 enterohemorrágica (EHEC) ou Es- cherichia coli - enteroinvasiva (EIEC). Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeo capsular bacteriano é uma Escherichia coli Uropatogê- nica (UPEC).
[0028] Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeo capsular bacteriano é uma Escherichia coli de sorotipo selecionado a partir do grupo que consiste dos sorotipos 0157:H7, 026:H11, 0111:H- e 0103:H2. Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeo capsular bacteriano é uma Escherichia coli de sorotipo selecionado a partir do grupo que consiste dos sorotipos O6:K2:H1 e O018:K1:H7. Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeo capsular bacteriano é uma Es- cherichia coli de sorotipo selecionado a partir do grupo que consiste dos sorotipos O45:K1, 017:K52:H18, 019:H34 e O7:K1. Em uma mo- dalidade, a fonte de polissacarídeo capsular bacteriano é uma Esche- richia coli sorotipo 0104:H4. Em uma modalidade, a fonte de polissa- carídeo capsular bacteriano é uma Escherichia coli sorotipo O01:K12:H7. Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeo capsular bacteriano é uma Escherichia coli sorotipo 0127:H6. Em uma modali- dade, a fonte de polissacarídeo capsular bacteriano é uma Escherichia coli sorotipo 0139:H28. Em uma modalidade, a fonte de polissacarí-
deo capsular bacteriano é uma Escherichia coli sorotipo 0128:H2.
[0029] Em uma modalidade preferencial, a fonte de polissacarí- deos capsulares bacterianos é Steptococcus pneumoniae. De prefe- rência, a fonte de polissacarídeos capsulares bacterianos é um Strep- tococcus pneumoniae de sorotipo selecionado a partir do grupo que consiste dos sorotipos 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 6C, 7F, 8, 9V, ON, 10A, 11A, 12F, 14, 15A, 15B, 15C, 16F, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23A, 23B, 23F, 24B, 24F, 29, 31, 33F, 34, 35B, 35F, 38, 72 e 73. Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos capsulares bacterianos é um Streptococcus pneumoniae de sorotipo selecionado a partir do grupo que consiste dos sorotipos 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, ON, 10A, 11A, 12F, 14, 15A, 15B, 15C, 16F, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23A, 23B, 23F, 24F, 29, 31, 33F, 35B, 35F, 38, 72 e 73. Em uma modalida- de, a fonte de polissacarídeos capsulares bacterianos é um Strepto- coccus pneumoniae de sorotipo selecionado a partir do grupo que consiste dos sorotipos 8, 10A, 11A, 12F, 15B, 22F e 33F. Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos capsulares bacterianos é um Streptococcus pneumoniae sorotipo 1. Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos capsulares bacterianos é um Streptococcus pneumo- niae sorotipo 2. Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos cap- sulares bacterianos é um Streptococcus pneumoniae sorotipo 3. Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos capsulares bacterianos é um Streptococcus pneumoniae sorotipo 4. Em uma modalidade, a fon- te de polissacarídeos capsulares bacterianos é um Streptococcus pneumoniae sorotipo 5. Em uma modalidade, a fonte de polissacarí- deos capsulares bacterianos é um Streptococcus pneumoniae sorotipo 6A. Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos capsulares bacte- rianos é um Streptococcus pneumoniae sorotipo 6B. Em uma modali- dade, a fonte de polissacarídeos capsulares bacterianos é um Strepto- coccus pneumoniae sorotipo 6C. Em uma modalidade, a fonte de po-
lissacarídeos capsulares bacterianos é um Streptococcus pneumoniae sorotipo 7F.
Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos capsula- res bacterianos é um Streptococcus pneumoniae sorotipo 8. Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos capsulares bacterianos é um Streptococcus pneumoniae sorotipo 9V.
Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos capsulares bacterianos é um Streptococcus pneu- moniae sorotipo 9N.
Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos capsulares bacterianos é um Streptococcus pneumoniae sorotipo 10A.
Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos capsulares bacteria- nos é um Streptococcus pneumoniae sorotipo 11A.
Em uma modalida- de, a fonte de polissacarídeos capsulares bacterianos é um Strepto- coccus pneumoniae sorotipo 12F.
Em uma modalidade, a fonte de po- lissacarídeos capsulares bacterianos é um Streptococcus pneumoniae sorotipo 14. Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos capsula- res bacterianos é um Streptococcus pneumoniae sorotipo 15A.
Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos capsulares bacterianos é um Streptococcus pneumoniae sorotipo 15B.
Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos capsulares bacterianos é um Streptococcus pneumoniae sorotipo 15C.
Em uma modalidade, a fonte de polissaca- rídeos capsulares bacterianos é um Streptococcus pneumoniae soroti- po 16F.
Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos capsulares bacterianos é um Streptococcus pneumoniae sorotipo 17F.
Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos capsulares bacterianos é um Streptococcus pneumoniae sorotipo 18C.
Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos capsulares bacterianos é um Streptococcus pneu- moniae sorotipo 19A.
Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos capsulares bacterianos é um Streptococcus pneumoniae sorotipo 19F.
Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos capsulares bacteria- nos é um Streptococcus pneumoniae sorotipo 20. Em uma modalida- de, a fonte de polissacarídeos capsulares bacterianos é um Strepto-
coccus pneumoniae sorotipo 20A. Em uma modalidade, a fonte de po- lissacarídeos capsulares bacterianos é um Streptococcus pneumoniae sorotipo 20B. Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos capsu- lares bacterianos é um Streptococcus pneumoniae sorotipo 22F. Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos capsulares bacterianos é um Streptococcus pneumoniae sorotipo 23A. Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos capsulares bacterianos é um Streptococcus pneumoniae sorotipo 23B. Em uma modalidade, a fonte de polissaca- rídeos capsulares bacterianos é um Streptococcus pneumoniae soroti- po 23F. Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos capsulares bacterianos é um Streptococcus pneumoniae sorotipo 24B. Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos capsulares bacterianos é um Streptococcus pneumoniae sorotipo 24F. Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos capsulares bacterianos é um Streptococcus pneu- moniae sorotipo 29. Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos capsulares bacterianos é um Streptococcus pneumoniae sorotipo 31. Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos capsulares bacteria- nos é um Streptococcus pneumoniae sorotipo 33F. Em uma modalida- de, a fonte de polissacarídeos capsulares bacterianos é um Strepto- coccus pneumoniae sorotipo 34. Em uma modalidade, a fonte de po- lissacarídeos capsulares bacterianos é um Streptococcus pneumoniae sorotipo 35B. Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos capsu- lares bacterianos é um Streptococcus pneumoniae sorotipo 35F. Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos capsulares bacterianos é um Streptococcus pneumoniae sorotipo 38. Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeos capsulares bacterianos é um Streptococcus pneumoniae sorotipo 72. Em uma modalidade, a fonte de polissacarí- deos capsulares bacterianos é um Streptococcus pneumoniae sorotipo
73.
[0030] As cepas bacterianas usadas para purificar os respectivos polissacarídeos que são usados na presente invenção podem ser obti- das a partir de coleções de cultura estabelecidas ou espécimes clíni- cos.
1.1.2 Crescimento de Células Bacterianas
[0031] Tipicamente, os polissacarídeos são produzidos cultivando as bactérias em um meio (por exemplo, um meio sólido ou, de prefe- rência, um meio líquido). Os polissacarídeos são então preparados tratando as células bacterianas.
[0032] Portanto, em uma modalidade, o material de partida para os métodos da presente invenção é uma cultura bacteriana e de prefe- rência uma cultura bacteriana líquida (por exemplo, um caldo de fer- mentação). A cultura bacteriana é tipicamente obtida por cultura em regime descontínuo, cultura em regime descontínuo alimentado ou cul- tura em regime contínuo (ver, por exemplo, WO 2007/052168 ou WO 2009/081276). Durante a cultura em regime contínuo, meio fresco é adicionado a uma cultura a uma taxa fixa e as células e o meio são removidos a uma taxa que mantém um volume de cultura constante.
[0033] A população do organismo é frequentemente aumentada de um frasco de sementes para garrafas de sementes e passada por um ou mais fermentadores de sementes de volume crescente até que os volumes de fermentação em escala de produção sejam alcançados.
[0034] 1.1.3 Pré-tratamento das células bacterianas, a fim de obter o material de partida
[0035] Geralmente, uma pequena quantidade de polissacarídeo é liberada no meio de cultura durante o crescimento bacteriano e, por- tanto, o material de partida pode ser o sobrenadante de uma cultura bacteriana centrifugada.
[0036] Tipicamente, no entanto, o material de partida será prepa- rado tratando as próprias bactérias, de modo que o polissacarídeo seja liberado.
[0037] Opcionalmente, após o crescimento celular, as células bac- terianas são desativadas. Este é particularmente o caso quando são utilizadas bactérias patogênicas. Um método adequado para desativa- ção é, por exemplo, o tratamento com fenol:etanol, por exemplo, con- forme descrito por Fattom e outros (1990) Infect Immun. 58 (7): 2367-
74. Nas modalidades abaixo, as células bacterianas podem ser previ- amente desativadas ou não desativadas.
[0038] Os polissacarídeos podem ser liberados das bactérias por vários métodos, incluindo tratamento químico, físico ou enzimático (ver, por exemplo; WO 2010/151544, WO 2011/051917 ou WO 2007/084856).
[0039] Em uma modalidade, as células bacterianas (desativadas ou não desativadas) são tratadas em suspensão em seu meio de cul- tura original. O processo pode, portanto, começar com as células em suspensão em seu meio de cultura original.
[0040] Em outra modalidade, as células bacterianas são centrifu- gadas antes de liberar o polissacarídeo capsular. O processo pode, portanto, começar com as células na forma de uma pasta celular úmi- da. Alternativamente, as células são tratadas em uma forma seca. Ti- picamente, no entanto, após centrifugação, as células bacterianas são ressuspensas em um meio aquoso que é adequado para a próxima etapa do processo, por exemplo, em um tampão ou em água destila- da. As células podem ser lavadas com esse meio antes da ressuspen- são.
[0041] Em uma modalidade, as células bacterianas (por exemplo, em suspensão em seu meio de cultura original, na forma de uma pasta celular úmida, em uma forma seca ou ressuspensas em um meio aquoso após a centrifugação) são tratadas com um agente lítico.
[0042] Um "agente lítico" é qualquer agente que auxilia na degra- dação da parede celular.
[0043] Em uma modalidade, o agente lítico é um detergente. Con- forme usado no presente documento, o termo "detergente" refere-se a qualquer detergente aniônico ou catiônico capaz de induzir a lise de células bacterianas. Exemplos representativos de tais detergentes pa- ra uso nos métodos da presente invenção incluem desoxicolato de só- dio (DOC), N-lauril sarcosina (NLS), ácido quenodeoxicólico de sódio, e saponinas (ver WO 2008/118752 página 13 linhas 14 a página 14 linha 10). Em uma modalidade da presente invenção, o agente lítico usado para lise de células bacterianas é DOC.
[0044] Em uma modalidade, o agente lítico é um agente lítico não derivado de animal. Em uma modalidade, o agente lítico não derivado de animal é selecionado a partir do grupo que consiste de ácido deca- nossulfônico, ter-octilfenoxi 5 poli(oxietileno) etanóis (por exemplo, Igepal& CA-630, CAS *: 9002-93-1, disponível a partir de Sigma Al- drich, St. Louis, MO), condensados de óxido de etileno octilfenol (por exemplo, Triton& X-100, disponível a partir de Sigma Aldrich, St. Louis, MO), N-lauril sarcosina de sódio (NLS), lauril iminodipropionato, dode- cil sulfato de sódio, quenodeoxicolato, hiodesoxicolato, glicodesoxico- lato, taurodesoxicolato, tauroquenodesoxicolato e colato. Em uma mo- dalidade, o agente lítico não derivado de animal é NLS.
[0045] Em uma modalidade, as células bacterianas (por exemplo, em suspensão em seu meio de cultura original, na forma de uma pasta celular úmida, em uma forma seca ou ressuspensas em um meio aquoso após a centrifugação) são tratadas enzimaticamente de modo que o polissacarídeo seja liberado. Em uma modalidade, as células bacterianas são tratadas por uma enzima selecionada a partir do gru- po que consiste de lisostafina, mutanolisina B-N- acetilglucosaminidase e uma combinação de mutanolisina e B-N- acetilglucosaminidase. Es- tes atuam no peptidoglicano bacteriano para liberar o sacarídeo capsu- lar para uso com a invenção, mas também levam à liberação do antí-
geno de carboidrato grupo-específico. Em uma modalidade, as células bacterianas são tratadas por uma fosfodiesterase tipo || (PDE2).
[0046] Opcionalmente, após a liberação do polissacarídeo, a(s) enzima(s) é / são desativada(s). Um método adequado para desativa- ção é, por exemplo, tratamento térmico ou tratamento ácido.
[0047] Em uma modalidade, as células bacterianas (por exemplo, em suspensão em seu meio de cultura original, na forma de uma pasta celular úmida, em uma forma seca ou ressuspensas em um meio aquoso após a centrifugação) são autoclavadas de modo que o polis- sacarídeo seja liberado.
[0048] Em uma outra modalidade, as células bacterianas (por exemplo, em suspensão em seu meio de cultura original, na forma de uma pasta celular úmida, em uma forma seca ou ressuspensas em um meio aquoso após a centrifugação) são tratadas quimicamente de mo- do que o polissacarídeo seja liberado. Em tal modalidade, o tratamento químico pode ser, por exemplo, hidrólise usando base ou ácido (ver por exemplo, WO 2007/084856).
[0049] Em uma modalidade, o tratamento químico das células bac- terianas é a extração de base (por exemplo, usando hidróxido de só- dio). A extração de base pode clivar a ligação fosfodiéster entre o sa- carídeo capsular e a estrutura do peptidoglicano. Em uma modalidade, a base é selecionada a partir do grupo que consiste de NaOH, KOH, LiOH, NaHCO3, Na2CO3, KzCO3, KCN, Et3N, NH3, HzN2H2, Nat, NaOMe, NaOEt e KOtBu. Após o tratamento básico, a mistura reacio- nal pode ser neutralizada. Isso pode ser conseguido pela adição de um ácido. Em uma modalidade, após o tratamento básico, a mistura reacional é neutralizada por um ácido selecionado a partir do grupo que consiste de HCl, H3PO2, ácido cítrico, ácido acético, ácido nitroso e ácido sulfúrico.
[0050] Em uma modalidade, o tratamento químico das células bac-
terianas é o tratamento com ácido (por exemplo, ácido sulfúrico). Em uma modalidade, o ácido é selecionado a partir do grupo que consiste de HCl, H3PO:,, ácido cítrico, ácido acético, ácido nitroso e ácido sulfú- rico. Após o tratamento com ácido, a mistura reacional pode ser neu- tralizada. Isso pode ser conseguido pela adição de uma base. Em uma modalidade, após o tratamento com ácido, a mistura reacional é neu- tralizada por uma base selecionada a partir do grupo que consiste de NaOH, KOH, LiOH, NaHCO3, Na2CO3, KzCO3, KCN, Et3N, NH3, HzN2H2, NaH, NaOMe, NaOEt e KOtBu.
1.2 Floculação
[0051] Os métodos da invenção compreendem uma etapa de flo- culação. Os inventores descobriram que o processo resulta em um po- lissacarídeo purificado com baixa contaminação.
[0052] O processo dos inventores pode ser rápido e simples.
[0053] Portanto, no método da invenção, a solução obtida por qualquer um dos métodos da seção 1.1 acima é tratada por floculação.
[0054] Na presente invenção, o termo "floculação" refere-se a um processo em que os coloides saem da suspensão na forma de flocos devido à adição de um agente floculante.
[0055] A etapa de floculação compreende adicionar um "agente floculante" a uma solução que compreende polissacarídeos bacteria- nos juntamente com contaminantes. Em uma modalidade, os contami- nantes compreendem detritos de células bacterianas, proteínas de cé- lulas bacterianas e ácidos nucleicos. Em uma modalidade, os conta- minantes compreendem proteínas de células bacterianas e ácidos nu- cleicos.
[0056] Como será posteriormente descrito a seguir, a etapa de flo- culação pode incluir ainda o ajuste de pH, antes ou depois da adição do agente floculante. Em particular, a solução pode ser acidificada.
[0057] Além disso, a adição do agente floculante e / ou o ajuste de pH podem ser realizados a uma temperatura ajustada para um nível desejável.
[0058] Essas etapas podem ser realizadas em qualquer ordem: — adição do agente floculante seguida de ajuste de pH se- guido de ajuste da temperatura ou; — adição do agente floculante seguida de ajuste da tempe- ratura seguido de ajuste de pH ou; — ajuste de pH seguido da adição do agente floculante se- guida do ajuste da temperatura ou; — ajuste de pH seguido do ajuste da temperatura seguido da adição do agente floculante ou; — ajuste da temperatura seguido da adição do agente flocu- lante seguida do ajuste de pH ou; — ajuste da temperatura seguido do ajuste de pH seguido da adição do agente floculante.
[0059] Além disso, após a adição do agente floculante e / ou o ajuste de pH, a solução pode ser retida por algum tempo para permitir a sedimentação dos flocos antes do processamento à jusante.
[0060] Na presente invenção, um "agente floculante" refere-se a um agente sendo capaz de permitir, em uma solução compreendendo um polissacarídeo de interesse juntamente com contaminantes, a promoção de floculação fazendo com que coloides e outras partículas suspensas se agreguem na forma de flocos, enquanto o polissacarí- deo de interesse permanece significativamente em solução.
[0061] Em uma modalidade da presente invenção, o agente flocu- lante compreende um cátion multivalente. Em uma modalidade, o agente floculante é um cátion multivalente. Em uma modalidade prefe- rencial, o dito cátion multivalente é selecionado a partir do grupo que consiste de alumínio, ferro, cálcio e magnésio. Em uma modalidade, o agente floculante é uma mistura de pelo menos dois cátions multiva-
lentes selecionados a partir do grupo que consiste de alumínio, ferro, cálcio e magnésio. Em uma modalidade, o agente floculante é uma mistura de pelo menos três cátions multivalentes selecionados a partir do grupo que consiste de alumínio, ferro, cálcio e magnésio. Em uma modalidade, o agente floculante é uma mistura de quatro cátions mul- tivalentes que consistem de alumínio, ferro, cálcio e magnésio.
[0062] Em uma modalidade, o agente floculante compreende um agente selecionado a partir do grupo que consiste de alúmen (por exemplo, alúmen de potássio, alúmen de sódio ou alúmen de amônio), cloridrato de alumínio, sulfato de alumínio, óxido de cálcio, hidróxido de cálcio, sulfato de ferro (11) (sulfato ferroso), cloreto de ferro (III) (clo- reto férrico), poliacrilamida, poliacrilamidas modificadas, poliDADMAC, polietilenimina (PEI), aluminato de sódio e silicato de sódio. Em uma modalidade, o agente floculante é selecionado a partir do grupo que consiste de alúmen (por exemplo, alúmen de potássio, alúmen de só- dio ou alúmen de amônio), cloridrato de alumínio, sulfato de alumínio, óxido de cálcio, hidróxido de cálcio, sulfato de ferro (11) (sulfato ferro- so), cloreto de ferro (III) (cloreto férrico), poliacrilamida, poliacrilamidas modificadas, poliDADMAC, aluminato de sódio e silicato de sódio. Em uma modalidade, o agente floculante é polietilenimina (PEI). Em uma modalidade, o agente floculante compreende alúmen. Em uma moda- lidade, o agente floculante é alúmen. Em uma modalidade, o agente floculante compreende alúmen de potássio. Em uma modalidade, o agente floculante é alúmen de potássio. Em uma modalidade, o agente floculante compreende alúmen de sódio. Em uma modalidade, o agen- te floculante é alúmen de sódio. Em uma modalidade, o agente flocu- lante compreende alúmen de amônio. Em uma modalidade, o agente floculante é alúmen de amônio.
[0063] Em uma modalidade, o agente floculante é uma mistura de agentes (por exemplo, dois, três ou quatro agentes) selecionados a partir do grupo que consiste de alúmen (por exemplo, alúmen de po- tássio, alúmen de sódio ou alúmen de amônio), cloridrato de alumínio, sulfato de alumínio, óxido de cálcio, cálcio hidróxido, sulfato de ferro (11) (sulfato ferroso), cloreto de ferro (III) (cloreto férrico), poliacrilamida, poliacrilamidas modificadas, poliDADMAC, polietilenimina (PEI), alu- minato de sódio e silicato de sódio. Em uma modalidade, o agente flo- culante é selecionado a partir do grupo que consiste de alúmen (por exemplo, alúmen de potássio, alúmen de sódio ou alúmen de amônio), cloridrato de alumínio, sulfato de alumínio, óxido de cálcio, hidróxido de cálcio, sulfato de ferro (II) (sulfato ferroso), cloreto de ferro (III) (clo- reto férrico), poliacrilamida, poliacrilamidas modificadas, poliDADMAC, aluminato de sódio e silicato de sódio.
[0064] Em uma modalidade, o agente floculante é uma mistura de dois agentes selecionados a partir do grupo que consiste de alúmen (por exemplo, alúmen de potássio, alúmen de sódio ou alúmen de amônio), cloridrato de alumínio, sulfato de alumínio, óxido de cálcio, hidróxido de cálcio, sulfato de ferro (11) (sulfato ferroso), cloreto de ferro (111) (cloreto férrico), poliacrilamida, poliacrilamidas modificadas, poli- DADMAC, aluminato de sódio e silicato de sódio. Em uma modalidade, o agente floculante é uma mistura de pelo menos três agentes seleci- onados a partir do grupo que consiste de alúmen (por exemplo, alú- men de potássio, alúmen de sódio ou alúmen de amônio), cloridrato de alumínio, sulfato de alumínio, óxido de cálcio, hidróxido de cálcio, sul- fato de ferro (II) (sulfato ferroso), cloreto de ferro (III) (cloreto férrico), poliacrilamida, poliacrilamidas modificadas, poliDADMAC, aluminato de sódio e silicato de sódio.
[0065] Em uma modalidade, o agente floculante compreende um agente selecionado a partir do grupo que consiste de quitosana, isin- glass, sementes de moringa oleifera (Horseradish Tree), gelatina, se- mentes de strychnos potatorum (Nirmali nut tree), goma guar e algina-
tos (por exemplo, extratos de alga marinha marrom). Em uma modali- dade, o agente floculante é selecionado a partir do grupo que consiste de quitosana, isinglass, sementes de moringa oleifera (Horseradish Tree), gelatina, sementes de strychnos potatorum (Nirmali nut tree), goma guar e alginatos (por exemplo, extratos de alga marinha mar- rom).
[0066] A concentração do agente floculante pode depender do(s) agente(s) utilizado(s), do polissacarídeo de interesse e do parâmetro da etapa de floculação (por exemplo, temperatura, etc.).
[0067] Em modalidades em que o agente floculante compreende ou é alúmen, uma concentração de agente floculante 234-237 de 0,1 e 20% (p / v) pode ser usada. De preferência, é utilizada uma concentra- ção de agente floculante entre cerca de 0,5 e 10% (p / v). Ainda mais preferencialmente, é usada uma concentração de agente floculante entre cerca de 1 e 5% (p / v).
[0068] Qualquer número dentro de qualquer uma das faixas acima é considerado como uma modalidade da descrição.
[0069] Em uma modalidade, uma concentração de agente flocu- lante de cerca de 0,1, cerca de 0,25, cerca de 0,5, cerca de 1,0, cerca de 1,5, cerca de 2,0, cerca de 2,5, cerca de 3,0, cerca de 3,5, cerca de 4,0, cerca de 4,5, cerca de 5,0, cerca de 5,5, cerca de 6,0, cerca de 6,5, cerca de 7,0, cerca de 7,5, cerca de 8,0, cerca de 8,5, cerca de 9,0, cerca de 9,5 ou cerca de 10% (p / v) é usada. Em uma modalida- de, uma concentração de agente floculante de cerca de 10,5, cerca de 11,0, cerca de 11,5, cerca de 12,0, cerca de 12,5, cerca de 13,0, cerca de 13,5, cerca de 14,0, cerca de 14,5, cerca de 15,0, cerca de 15,5, cerca de 16,0, cerca de 16,5, cerca de 17,0, cerca de 17,5, cerca de 18,0, cerca de 18,5, cerca de 19,0, cerca de 19,5 ou cerca de 20,0% (p / v) é usada. Em uma modalidade, uma concentração de agente flocu- lante de cerca de 0,5, cerca de 1,0, cerca de 1,5, cerca de 2,0, cerca de 2,5, cerca de 3,0, cerca de 3,5, cerca de 4,0, cerca de 4,5 ou cerca de 5,0% (p / v) é usada. Em uma modalidade, uma concentração de agente floculante de cerca de 1,0, cerca de 1,5, cerca de 2,0, cerca de 2,5, cerca de 3,0, cerca de 3,5 ou cerca de 4,0% (p / v) é usada.
[0070] Em algumas modalidades da presente invenção, o agente floculante é adicionado ao longo de um certo período de tempo. Em algumas modalidades da presente invenção, o agente floculante é adi- cionado ao longo de um período de alguns segundos (por exemplo, 1 a 10 segundos) e cerca de um mês. Em algumas modalidades, o agente floculante é adicionado ao longo de um período de cerca de 2 segundos a cerca de duas semanas. Em algumas modalidades da presente invenção, o agente floculante é adicionado ao longo de um período entre cerca de 1 minuto e cerca de uma semana. Em algumas modalidades, o agente floculante é adicionado ao longo de um período de cerca de 1 minuto, cerca de 5 minutos, cerca de 10 minutos, cerca de 15 minutos, cerca de 20 minutos, cerca de 25 minutos, cerca de 30 minutos, cerca de 35 minutos, cerca de 40 minutos, cerca de 45 minu- tos, cerca de 50 minutos, cerca de 55 minutos, cerca de 60 minutos, cerca de 65 minutos, cerca de 70 minutos, cerca de 80 minutos, cerca de 85 minutos, cerca de 90 minutos, cerca de 95 minutos, cerca de 100 minutos, cerca de 110 minutos, cerca de 120 minutos, cerca de 130 minutos, cerca de 140 minutos, cerca de 150 minutos, cerca de 160 minutos, cerca de 170 minutos, cerca de 3 horas, cerca de 4 ho- ras, cerca de 5 horas, cerca de 6 horas, cerca de 7 horas, cerca de 8 horas, cerca de 9 horas, cerca de 10 horas, cerca de 11 horas, cerca de 12 horas, cerca de 13 horas, cerca de 14 horas, cerca de 15 horas, cerca de 16 horas, cerca de 17 horas, cerca de 18 horas, cerca de 19 horas, cerca de 20 horas, cerca de 21 horas, cerca de 22 horas, cerca de 23 horas ou cerca de 24 horas e cerca de dois dias.
[0071] Portanto, em certas modalidades, o agente floculante é adi-
cionado ao longo de um período de cerca de 5 minutos, cerca de 10 minutos, cerca de 15 minutos, cerca de 20 minutos, cerca de 25 minu- tos, cerca de 30 minutos, cerca de 35 minutos, cerca de 40 minutos, cerca de 45 minutos, cerca de 50 minutos, cerca de 55 minutos, cerca de 60 minutos, cerca de 65 minutos, cerca de 70 minutos, cerca de 80 minutos, cerca de 85 minutos, cerca de 90 minutos, cerca de 95 minu- tos, cerca de 100 minutos, cerca de 110 minutos, cerca de 120 minu- tos, cerca de 130 minutos, cerca de 140 minutos, cerca de 150 minu- tos, cerca de 160 minutos, cerca de 170 minutos, cerca de 3 horas, cerca de 4 horas, cerca de 5 horas, cerca de 6 horas, cerca de 7 ho- ras, cerca de 8 horas, cerca de 9 horas, cerca de 10 horas, cerca de 11 horas ou cerca de 12 horas e cerca de um dia.
[0072] De preferência, o agente floculante é adicionado ao longo de um período de cerca de 15 minutos, cerca de 20 minutos, cerca de minutos, cerca de 30 minutos, cerca de 35 minutos, cerca de 40 minutos, cerca de 45 minutos, cerca de 50 minutos, cerca de 55 minu- tos, cerca de 60 minutos, cerca de 65 minutos, cerca de 70 minutos, cerca de 80 minutos, cerca de 85 minutos, cerca de 90 minutos, cerca de 95 minutos, cerca de 100 minutos, cerca de 110 minutos, cerca de 120 minutos, cerca de 130 minutos, cerca de 140 minutos, cerca de 150 minutos, cerca de 160 minutos, cerca de 170 minutos, cerca de 3 horas, cerca de 4 horas, cerca de 5 horas, cerca de 6 horas, cerca de 7 horas, cerca de 8 horas, cerca de 9 horas, cerca de 10 horas, cerca de 11 horas ou cerca de 12 horas e cerca de um dia.
[0073] Em certas modalidades, o agente floculante é adicionado ao longo de um período de cerca de 15 minutos a cerca de 3 horas. Em certas modalidades, o agente floculante é adicionado ao longo de um período de cerca de 30 minutos a cerca de 120 minutos.
[0074] Qualquer número dentro de qualquer uma das faixas acima é considerado como uma modalidade da descrição.
[0075] O agente floculante pode ser adicionado ao longo de um período de cerca de 2 segundos, cerca de 10 segundos, cerca de 30 segundos, cerca de 1 minuto, cerca de 5 minutos, cerca de 10 minu- tos, cerca de 15 minutos, cerca de 20 minutos, cerca de 25 minutos, cerca de 30 minutos, cerca de 35 minutos, cerca de 40 minutos, cerca de 45 minutos, cerca de 50 minutos, cerca de 55 minutos, cerca de 60 minutos, cerca de 65 minutos, cerca de 70 minutos, cerca de 75 minu- tos, cerca de 80 minutos, cerca de 85 minutos, cerca de 90 minutos, cerca de 95 minutos, cerca de 100 minutos, cerca de 105 minutos, cerca de 110 minutos, cerca de 115 minutos, cerca de 120 minutos, cerca de 125 minutos, cerca de 130 minutos, cerca de 135 minutos, cerca de 140 minutos, cerca de 145 minutos, cerca de 150 minutos, cerca de 155 minutos, cerca de 160 minutos, cerca de 170 minutos, cerca de 3 horas, cerca de 3,5 horas, cerca de 4 horas, cerca de 4,5 horas, cerca de 5 horas, cerca de 5,5 horas, cerca de 6 horas, cerca de 6,5 horas, cerca de 7 horas, cerca de 7,5 horas, cerca de 8 horas, cerca de 8,5 horas, cerca de 9 horas, cerca de 10 horas, cerca de 11 horas, cerca de 12 horas, cerca de 13 horas, cerca de 14 horas, cerca de 15 horas, cerca de 16 horas, cerca de 17 horas, cerca de 18 horas, cerca de 19 horas, cerca de 20 horas, cerca de 21 horas, cerca de 22 horas, cerca de 23 horas, cerca de 24 horas, cerca de 30 horas, cerca de 36 horas, cerca de 42 horas, cerca de 48 horas, cerca de 3 dias, cerca de 4 dias, cerca de 5 dias, cerca de 6 dias, cerca de 7 dias, cer- ca de 8 dias, cerca de 9 dias, cerca de 10 dias, cerca de 11 dias, cerca de 12 dias, cerca de 13 dias, cerca de 14 dias ou cerca de 15 dias.
[0076] Em uma modalidade, o agente floculante é adicionado sem agitação. Em outra modalidade, o agente floculante é adicionado sob agitação. Em outra modalidade, o agente floculante é adicionado sob agitação suave. Em outra modalidade, o agente floculante é adiciona- do sob agitação vigorosa.
[0077] Os inventores notaram ainda mais surpreendentemente que a floculação é melhorada quando realizada a um pH ácido.
[0078] Portanto, em uma modalidade da presente invenção, a eta- pa de floculação é realizada a um pH abaixo de 7,0, 6,0, 5,0 ou 4,0. Em uma modalidade particular da presente invenção, a etapa de flocu- lação é realizada a um pH entre 7,0 e 1,0. Em uma modalidade, a eta- pa de floculação é realizada a um pH entre 5,5 e 2,5, 5,0 € 2,5, 4,5 e 2,5, 4,0 e 2,5, 5,5 € 3,0, 5,0 e 3,0, 4,5 e 3,0, 4,0 e 3,0, 5,50 3,5, 5,0 e 3,5, 4,5 e 3,5 ou 4,0 e 3,5. Em uma modalidade, a etapa de floculação é realizada a um pH de cerca de 5,5, cerca de 5,0, cerca de 4,5, cerca de 4,0, cerca de 3,5, cerca de 3,0, cerca de 2,5, cerca de 2,0, cerca de 1,5 ou cerca de 1,0. Em uma modalidade, a etapa de floculação é rea- lizada a um pH de cerca de 4,0, cerca de 3,5, cerca de 3,0 ou cerca de 2,5. Em uma modalidade, a etapa de floculação é realizada a um pH de cerca de 3,5.
[0079] Qualquer número dentro de qualquer uma das faixas acima é considerado como uma modalidade da descrição.
[0080] Em uma modalidade, o dito pH ácido é obtido por acidifica- ção da solução obtida por qualquer um dos métodos da seção 1.1 acima ou ainda clarificada como descrito na seção 1.2 com um ácido. Em uma modalidade, o dito ácido é selecionado a partir do grupo que consiste de HCl, H3PO2a, ácido cítrico, ácido acético, ácido nitroso e ácido sulfúrico. Em uma modalidade, o dito ácido é um aminoácido. Em uma modalidade, o dito ácido é um aminoácido selecionado a par- tir do grupo que consiste de glicina, alanina e glutamato. Em uma mo- dalidade, o dito ácido é HCI (ácido clorídrico). Em uma modalidade, o dito ácido é ácido sulfúrico.
[0081] Em uma modalidade, o ácido é adicionado sem agitação. De preferência, o ácido é adicionado sob agitação. Em uma modalida- de, o ácido é adicionado sob agitação suave. Em uma modalidade, o ácido é adicionado sob agitação vigorosa.
[0082] Em algumas modalidades da presente invenção, após a adição do agente floculante (e a acidificação opcional), a solução é retida por algum tempo para permitir a sedimentação dos flocos antes do processamento à jusante.
[0083] Em algumas modalidades da presente invenção, a etapa de floculação é realizada com um tempo de sedimentação entre alguns segundos (por exemplo, 2 a 10 segundos) a cerca de 1 minuto. De preferência, o tempo de sedimentação é de pelo menos cerca de 2, pelo menos cerca de 3, pelo menos cerca de 4, pelo menos cerca de 5, pelo menos cerca de 10, pelo menos cerca de 15, pelo menos cerca de 20, pelo menos cerca de 25, pelo menos cerca de 30, pelo menos cerca de 35, pelo menos cerca de 40, pelo menos cerca de 45, pelo menos cerca de 50, pelo menos cerca de 55, pelo menos cerca de 60, pelo menos cerca de 65, pelo menos cerca de 70, pelo menos cerca de 75, pelo menos cerca de 80, pelo menos cerca de 85, pelo menos cerca de 90, pelo menos cerca de 95, pelo menos cerca de 100, pelo menos cerca de 105, pelo menos cerca de 110, pelo menos cerca de 115, pelo menos cerca de 120, pelo menos cerca de 125, pelo menos cerca de 130, pelo menos cerca de 135, pelo menos cerca de 140, pe- lo menos cerca de 145, pelo menos cerca de 150, pelo menos cerca de 155 ou pelo menos cerca de 160 minutos. De preferência, o tempo de sedimentação é inferior a uma semana, no entanto o tempo de se- dimentação pode ser maior.
[0084] Portanto, em certas modalidades, o tempo de sedimenta- ção está entre cerca de 1, cerca de 2, cerca de 3, cerca de 4, cerca de 5, cerca de 6, cerca de 7, cerca de 8, cerca de 9, cerca de 10, cerca de 15, cerca de 20, cerca de 25, cerca de 30, cerca de 40, cerca de 50, cerca de 60, cerca de 70, cerca de 80, cerca de 90, cerca de 100, cerca de 120, cerca de 140, cerca de 160, cerca de 180, cerca de 220,
cerca de 240, cerca de 300, cerca de 360, cerca de 420, cerca de 480, cerca de 540, cerca de 600, cerca de 660, cerca de 720, cerca de 780, cerca de 840, cerca de 900, cerca de 960, cerca de 1020, cerca de 1080, cerca de 1140, cerca de 1200, cerca de 1260, cerca de 1320, cerca de 1380, cerca de 1440 minutos, cerca de dois dias, cerca de três dias, cerca de quatro dias, cerca de cinco dias ou cerca de seis dias e | semana.
[0085] Em algumas modalidades da presente invenção, o tempo de sedimentação é entre alguns segundos (por exemplo, 1 a 10 se- gundos) e cerca de um mês. Em algumas modalidades, o tempo de sedimentação está entre cerca de 2 segundos e cerca de duas sema- nas. Em algumas modalidades da presente invenção, o tempo de se- dimentação está entre cerca de 1 minuto e cerca de uma semana. Em algumas modalidades, o tempo de sedimentação está entre cerca de 1 minuto, cerca de 5 minutos, cerca de 10 minutos, cerca de 15 minutos, cerca de 20 minutos, cerca de 25 minutos, cerca de 30 minutos, cerca de 35 minutos, cerca de 40 minutos, cerca de 45 minutos, cerca de 50 minutos, cerca de 55 minutos, cerca de 60 minutos, cerca de 65 minu- tos, cerca de 70 minutos, cerca de 80 minutos, cerca de 85 minutos, cerca de 90 minutos, cerca de 95 minutos, cerca de 100 minutos, cer- ca de 110 minutos, cerca de 120 minutos, cerca de 130 minutos, cerca de 140 minutos, cerca de 150 minutos, cerca de 160 minutos, cerca de 170 minutos, cerca de 3 horas, cerca de 4 horas, cerca de 5 horas, cerca de 6 horas, cerca de 7 horas, cerca de 8 horas, cerca de 9 ho- ras, cerca de 10 horas, cerca de 11 horas, cerca de 12 horas, cerca de 13 horas, cerca de 14 horas, cerca de 15 horas, cerca de 16 horas, cerca de 17 horas, cerca de 18 horas, cerca de 19 horas, cerca de 20 horas, cerca de 21 horas, cerca de 22 horas, cerca de 23 horas ou cerca de 24 horas e cerca de dois dias.
[0086] Portanto, em certas modalidades, o tempo de sedimenta-
ção está entre cerca de 5 minutos, cerca de 10 minutos, cerca de 15 minutos, cerca de 20 minutos, cerca de 25 minutos, cerca de 30 minu- tos, cerca de 35 minutos, cerca de 40 minutos, cerca de 45 minutos, cerca de 50 minutos, cerca de 55 minutos, cerca de 60 minutos, cerca de 65 minutos, cerca de 70 minutos, cerca de 80 minutos, cerca de 85 minutos, cerca de 90 minutos, cerca de 95 minutos, cerca de 100 mi- nutos, cerca de 110 minutos, cerca de 120 minutos, cerca de 130 mi- nutos, cerca de 140 minutos, cerca de 150 minutos, cerca de 160 mi- nutos, cerca de 170 minutos, cerca de 3 horas, cerca de 4 horas, cerca de 5 horas, cerca de 6 horas, cerca de 7 horas, cerca de 8 horas, cer- ca de 9 horas, cerca de 10 horas, cerca de 11 horas ou cerca de 12 horas e cerca de um dia.
[0087] De preferência, o tempo de sedimentação está entre cerca de 15 minutos, cerca de 20 minutos, cerca de 25 minutos, cerca de 30 minutos, cerca de 35 minutos, cerca de 40 minutos, cerca de 45 minu- tos, cerca de 50 minutos, cerca de 55 minutos, cerca de 60 minutos, cerca de 65 minutos, cerca de 70 minutos, cerca de 80 minutos, cerca de 85 minutos, cerca de 90 minutos, cerca de 95 minutos, cerca de 100 minutos, cerca de 110 minutos, cerca de 120 minutos, cerca de 130 minutos, cerca de 140 minutos, cerca de 150 minutos, cerca de 160 minutos, cerca de 170 minutos, cerca de 3 horas, cerca de 4 ho- ras, cerca de 5 horas, cerca de 6 horas, cerca de 7 horas, cerca de 8 horas, cerca de 9 horas, cerca de 10 horas, cerca de 11 horas ou cer- ca de 12 horas e cerca de um dia.
[0088] Em certas modalidades, o tempo de sedimentação está en- tre cerca de 15 minutos e cerca de 3 horas. Em certas modalidades, o tempo de sedimentação está entre cerca de 30 minutos e cerca de 120 minutos.
[0089] Qualquer número dentro de qualquer uma das faixas acima é considerado como uma modalidade da descrição.
[0090] Em certas modalidades, o tempo de sedimentação é de cerca de 2 segundos, cerca de 10 segundos, cerca de 30 segundos, cerca de 1 minuto, cerca de 5 minutos, cerca de 10 minutos, cerca de 15 minutos, cerca de 20 minutos, cerca de 25 minutos, cerca de 30 minutos, cerca de 35 minutos, cerca de 40 minutos, cerca de 45 minu- tos, cerca de 50 minutos, cerca de 55 minutos, cerca de 60 minutos, cerca de 65 minutos, cerca de 70 minutos, cerca de 75 minutos, cerca de 80 minutos, cerca de 85 minutos, cerca de 90 minutos, cerca de 95 minutos, cerca de 100 minutos, cerca de 105 minutos, cerca de 110 minutos, cerca de 115 minutos, cerca de 120 minutos, cerca de 125 minutos, cerca de 130 minutos, cerca de 135 minutos, cerca de 140 minutos, cerca de 145 minutos, cerca de 150 minutos, cerca de 155 minutos, cerca de 160 minutos, cerca de 170 minutos, cerca de 3 ho- ras, cerca de 3,5 horas, cerca de 4 horas, cerca de 4,5 horas, cerca de horas, cerca de 5,5 horas, cerca de 6 horas, cerca de 6,5 horas, cer- ca de 7 horas, cerca de 7,5 horas, cerca de 8 horas, cerca de 8,5 ho- ras, cerca de 9 horas, cerca de 10 horas, cerca de 11 horas, cerca de 12 horas, cerca de 13 horas, cerca de 14 horas, cerca de 15 horas, cerca de 16 horas, cerca de 17 horas, cerca de 18 horas, cerca de 19 horas, cerca de 20 horas, cerca de 21 horas, cerca de 22 horas, cerca de 23 horas, cerca de 24 horas, cerca de 30 horas, cerca de 36 horas, cerca de 42 horas, cerca de 48 horas, cerca de 3 dias, cerca de 4 dias, cerca de 5 dias, cerca de 6 dias, cerca de 7 dias, cerca de 8 dias, cer- ca de 9 dias, cerca de 10 dias, cerca de 11 dias, cerca de 12 dias, cer- ca de 13 dias, cerca de 14 dias ou cerca de 15 dias.
[0091] De preferência, o tempo de sedimentação está entre cerca de 5, cerca de 10, cerca de 15, cerca de 20, cerca de 25, cerca de 30, cerca de 60, cerca de 90, cerca de 120, cerca de 180, cerca de 220, cerca de 240, cerca de 300, cerca de 360, cerca de 420, cerca de 480, cerca de 540, cerca de 600, cerca de 660, cerca de 720, cerca de 780,
cerca de 840, cerca de 900, cerca de 960, cerca de 1020, cerca de 1080, cerca de 1140, cerca de 1200, cerca de 1260, cerca de 1320, cerca de 1380 ou cerca de 1440 minutos e dois dias. Em certas moda- lidades, o tempo de sedimentação está entre cerca de 5 minutos e cerca de um dia. Em certas modalidades, o tempo de sedimentação está entre cerca de 5 minutos e cerca de 120 minutos.
[0092] O tempo de sedimentação pode ser de cerca de 5 minutos, cerca de 10 minutos, cerca de 15 minutos, cerca de 20 minutos, cerca de 25 minutos, cerca de 30 minutos, cerca de 35 minutos, cerca de 40 minutos, cerca de 45 minutos, cerca de 50 minutos, cerca de 55 minu- tos, cerca de 60 minutos, cerca de 65 minutos, cerca de 70 minutos, cerca de 75 minutos, cerca de 80 minutos, cerca de 85 minutos, cerca de 90 minutos, cerca de 95 minutos, cerca de 100 minutos, cerca de 105 minutos, cerca de 110 minutos, cerca de 115 minutos, cerca de 120 minutos, cerca de 125 minutos, cerca de 130 minutos, cerca de 135 minutos, cerca de 140 minutos, cerca de 145 minutos, cerca de 150 minutos, cerca de 155 minutos ou cerca de 160 minutos.
[0093] Qualquer número dentro de qualquer uma das faixas acima é considerado como uma modalidade da descrição.
[0094] Em uma modalidade, a etapa de sedimentação opcional é conduzida sem agitação. Em uma modalidade, a etapa de sedimenta- ção opcional é conduzida sob agitação. Em outra modalidade, a etapa de sedimentação opcional é conduzida sob agitação suave. Em outra modalidade, a etapa de sedimentação opcional é conduzida sob agita- ção vigorosa.
[0095] Em uma modalidade da presente invenção, a adição do agente floculante, a sedimentação da solução e / ou o ajuste de pH é realizado a uma temperatura entre cerca de 4ºC e cerca de 30ºC. Em uma modalidade, a adição do agente floculante, a sedimentação da solução e / ou o ajuste de pH é realizado a uma temperatura de cerca de 4ºC, cerca de 5ºC, cerca de 6ºC, cerca de 7ºC, cerca de 8ºC, cerca de 9ºC, cerca de 10ºC, cerca de 11ºC, cerca de 12ºC, cerca de 13ºC, cerca de 14ºC, cerca de 15ºC, cerca de 16ºC, cerca de 17ºC, cerca de 18ºC, cerca de 19ºC, cerca de 20ºC, cerca de 21ºC, cerca de 22ºC, cerca de 23ºC, cerca de 24ºC, cerca de 25ºC, cerca de 26ºC, cerca de 27ºC, cerca de 28ºC, cerca de 29ºC ou cerca de 30ºC.
Em uma moda- lidade, a adição do agente floculante, a sedimentação da solução e / ou o ajuste de pH é realizado a uma temperatura de cerca de 20ºC.
Os inventores notaram surpreendentemente que a floculação pode ser melhorada ainda mais quando realizada em temperatura elevada.
Por- tanto, em uma modalidade particular da presente invenção, a adição do agente floculante, a sedimentação da solução e / ou o ajuste de pH é realizado a uma temperatura entre cerca de 30ºC e cerca de 95ºC.
Em uma modalidade, a adição do agente floculante, a sedimentação da solução e / ou o ajuste de pH é realizado a uma temperatura entre cerca de 35ºC e cerca de 80ºC, a uma temperatura entre cerca de 40ºC e cerca de 70ºC, a temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 65ºC, a temperatura entre cerca de 50ºC e cerca de 60ºC, a tempera- tura entre cerca de 50ºC e cerca de 55ºC, a temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC ou a uma temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC.
Em uma modalidade, a adição do agente floculante, a sedimentação da solução e / ou o ajuste de pH é realizado a uma tem- peratura de cerca de 35ºC, cerca de 36ºC, cerca de 37ºC, cerca de 38ºC, cerca de 39ºC, cerca de 40ºC, cerca de 41ºC, cerca de 42ºC, cerca de 43ºC, cerca de 44ºC, cerca de 45ºC, cerca de 46ºC, cerca de 47ºC, cerca de 48ºC, cerca de 49ºC, cerca de 50ºC, cerca de 51ºC, cerca de 52ºC, cerca de 53ºC, cerca de 54ºC, cerca de 55ºC, cerca de 56ºC, cerca de 57ºC, cerca de 58ºC, cerca de 59ºC, cerca de 60ºC, cerca de 61ºC, cerca de 62ºC, cerca de 63ºC, cerca de 64ºC, cerca de 65ºC, cerca de 66ºC, cerca de 67ºC, cerca de 68ºC, cerca de 69ºC,
cerca de 70ºC, cerca de 71ºC, cerca de 72ºC, cerca de 73ºC, cerca de 74ºC, cerca de 75ºC, cerca de 76ºC, cerca de 77ºC, cerca de 78ºC, cerca de 79ºC ou cerca de 80ºC. Em uma modalidade, a adição do agente floculante, a sedimentação da solução e / ou o ajuste de pH é realizado a uma temperatura de cerca de 50ºC.
[0096] Qualquer número dentro de qualquer uma das faixas acima é considerado como uma modalidade da descrição.
[0097] Em uma modalidade, a adição do agente floculante é reali- zada em qualquer uma das temperaturas mencionadas acima.
[0098] Em uma modalidade, a sedimentação da solução após a adição do agente floculante é realizada em qualquer uma das tempe- raturas mencionadas acima.
[0099] Em uma modalidade, o ajuste de pH é realizado em qual- quer uma das temperaturas mencionadas acima.
[00100] Em uma modalidade, a adição do agente floculante e a se- dimentação da solução após a adição do agente floculante são reali- zadas em qualquer uma das temperaturas mencionadas acima.
[00101] Em uma modalidade, a adição do agente floculante e o ajuste de pH são realizados em qualquer uma das temperaturas men- cionadas acima.
[00102] Em uma modalidade, a adição do floculante, a sedimenta- ção da solução após a adição do agente floculante e o ajuste de pH são realizados em qualquer uma das temperaturas mencionadas aci- ma.
[00103] Em uma modalidade, a etapa de floculação compreende a adição de um agente floculante (como descrito acima) sem ajuste de pH.
[00104] Em uma modalidade, a etapa de floculação compreende adicionar um agente floculante e sedimentar a solução (como descrito acima), sem ajuste de pH.
[00105] Em uma modalidade, a etapa de floculação compreende adicionar um agente floculante, ajustar o pH e sedimentar a solução (como descrito acima). Em uma modalidade, o agente floculante é adi- cionado antes de ajustar o pH. Em outra modalidade, o pH é ajustado antes da adição do agente floculante.
[00106] Em uma modalidade, a etapa de floculação compreende adicionar um agente floculante, sedimentar a solução e ajustar o pH (como descrito acima). Em uma modalidade, a adição de agente flocu- lante e sedimentação da solução é conduzida antes de ajustar o pH. Em outra modalidade, o pH é ajustado antes da adição do agente flo- culante e sedimentação da solução. Em uma modalidade, a adição do agente floculante e o ajuste de pH são realizados antes da sedimenta- ção da solução. Em outra modalidade, o pH é ajustado antes da adi- ção do agente floculante e sedimentação da solução.
[00107] Em uma modalidade, a etapa de floculação compreende adicionar um agente floculante, ajustar o pH e ajustar a temperatura (como descrito acima).
[00108] Essas etapas podem ser realizadas em qualquer ordem:
[00109] — adição do agente floculante seguida de ajuste de pH se- guido de ajuste da temperatura ou;
[00110] -— adição do agente floculante seguida de ajuste da tempe- ratura seguido de ajuste de pH ou;
[00111] -— ajuste de pH seguido de adição do agente floculante se- guido de ajuste da temperatura ou;
[00112] -— ajuste de pH seguido de ajuste da temperatura seguido de adição do agente floculante ou;
[00113] -— ajusteda temperatura seguido da adição do agente flocu- lante seguido do ajuste de pH ou;
[00114] — ajuste da temperatura seguido de ajuste de pH seguido de adição do agente floculante.
[00115] Além disso, após a adição do agente floculante e / ou o ajuste de pH, a solução pode ser retida por algum tempo para permitir a sedimentação dos flocos antes do processamento à jusante.
[00116] 1.3 Separação Sólido / Líquido
[00117] O material floculado pode ser separado do polissacarídeo de interesse por qualquer método de separação sólido / líquido ade- quado.
[00118] Portanto, em uma modalidade da presente invenção, após a floculação, a suspensão (como obtida na seção 1.2 acima) é clarifi- cada por decantação, sedimentação, filtração ou centrifugação. Em uma modalidade, a solução contendo polissacarídeo é então coletada para armazenamento e / ou processamento adicional.
[00119] Em uma modalidade da presente invenção, após a flocula- ção, a suspensão (como obtida na seção 1.2 acima) é clarificada por decantação. Decantadores são usados para separar líquidos onde há uma diferença suficiente na densidade entre os líquidos para que o floco sedimente. Em um decantador em operação, haverá três zonas distintas: líquido pesado claro, líquido disperso em separação (a zona de dispersão) e líquido leve claro. Para produzir uma solução limpa, geralmente uma pequena quantidade da solução deve ser deixada no recipiente. Os decantadores podem ser projetados para operação con- tínua.
[00120] Em uma modalidade da presente invenção, após a flocula- ção, a suspensão (como obtida na seção 1.2 acima) é clarificada por sedimentação (sedimentação). A sedimentação é a separação de par- tículas sólidas suspensas de uma mistura líquida por gravidade, sedi- mentando-se em um fluido claro e uma pasta de maior teor de sólidos. A sedimentação pode ser feita em um espessante, em um clarificador ou em um classificador. Uma vez que o espessamento e a clarificação são processos relativamente baratos quando usados para o tratamen-
to de grandes volumes de líquido, eles podem ser usados para pré- concentração de alimentos para filtragem.
[00121] Em uma modalidade da presente invenção, após a flocula- ção, a suspensão (como obtida na seção 1.2 acima) é clarificada por centrifugação. Em uma modalidade, a dita centrifugação é centrifuga- ção contínua. Em uma modalidade, a dita centrifugação é centrifuga- ção em recipiente. Em uma modalidade, o sobrenadante contendo po- lissacarídeo é então coletado para armazenamento e / ou processa- mento adicional.
[00122] Em algumas modalidades, a suspensão é centrifugada a cerca de 1.000 g cerca de 2.000 g, cerca de 3.000 g, cerca de 4.000 9, cerca de 5.000 g, cerca de 6.000 g, cerca de 8.000 g, cerca de 9.000 g, cerca de 10.000 g, cerca de 11.000 g, cerca de 12.000 g, cerca de
13.000 g, cerca de 14.000 g, cerca de 15.000 g, cerca de 16.000 9, cerca de 17.000 g, cerca de 18.000 g, cerca de 19.000 g, cerca de
20.000 g, cerca de 25.000 g, cerca de 30.000 g, cerca de 35.000 9, cerca de 40.000 g, cerca de 50.000 g, cerca de 60.000 g, cerca de
70.000 g, cerca de 80.000 g, cerca de 90.000 g, cerca de 100.000 9, cerca de 120.000 g, cerca de 140.000 g, cerca de 160.000 g ou cerca de 180.000 g. Em algumas modalidades, a suspensão é centrifugada a cerca de 8.000 g, cerca de 9.000 g, cerca de 10.000 g, cerca de
11.000 g, cerca de 12.000 g, cerca de 13.000 g, cerca de 14.000 9, cerca de 15.000 g, cerca de 16.000 g, cerca de 17.000 g, cerca de
18.000 g, cerca de 19.000 g, cerca de 20.000 g ou cerca de 25.000 g.
[00123] Em algumas modalidades, a suspensão é centrifugada en- tre cerca de 5.000 g e cerca de 25.000 g. Em algumas modalidades, a suspensão é centrifugada entre cerca de 8.000 g e cerca de 20.000 g. Em algumas modalidades, a suspensão é centrifugada entre cerca de
10.000 g e cerca de 15.000 g. Em algumas modalidades, a suspensão é centrifugada entre cerca de 10.000 g e cerca de 12.000 g.
[00124] “Qualquer número dentro de qualquer uma das faixas acima é considerado como uma modalidade da descrição.
[00125] Em algumas modalidades, a suspensão é centrifugada du- rante pelo menos 2, pelo menos 3, pelo menos 4, pelo menos 5, pelo menos 10, pelo menos 15, pelo menos 20, pelo menos 25, pelo menos 30, pelo menos 35, pelo menos 40, pelo menos 45, pelo menos 50, pelo menos 55, pelo menos 60, pelo menos 65, pelo menos 70, pelo menos 75, pelo menos 80, pelo menos 85, pelo menos 90, pelo menos 95, pelo menos 100, pelo menos 105, pelo menos 110, pelo menos 115, pelo menos 120, pelo menos 125, pelo menos 130, pelo menos 135, pelo menos 140, pelo menos 145, pelo menos 150, pelo menos 155 ou pelo menos 160 minutos. De preferência, o tempo de centrifu- gação é inferior a 24 horas.
[00126] Portanto, em certas modalidades, a suspensão é centrifu- gada durante cerca de 5, cerca de 10, cerca de 15, cerca de 20, cerca de 30, cerca de 40, cerca de 50, cerca de 60, cerca de 70, cerca de 80, cerca de 90, cerca de 100, cerca de 120, cerca de 140, cerca de 160, cerca de 180, cerca de 220, cerca de 240, cerca de 300, cerca de 360, cerca de 420, cerca de 480, cerca de 540, cerca de 600, cerca de 660, cerca de 720, cerca de 780, cerca de 840, cerca de 900, cerca de 960, cerca de 1020, cerca de 1080, cerca de 1140, cerca de 1200, cerca de 1260, cerca de 1320 ou cerca de 1380 minutos a 1440 minu- tos.
[00127] De preferência, a suspensão é centrifugada durante cerca de 5, cerca de 10, cerca de 15, cerca de 20, cerca de 25, cerca de 30, cerca de 60, cerca de 90, cerca de 120, cerca de 180, cerca de 240, cerca de 300, cerca de 360, cerca de 420, cerca de 480 ou cerca de 540 minutos a cerca de 600 minutos. Em certas modalidades, a sus- pensão é centrifugada durante cerca de 5 minutos a cerca de 3 horas. Em certos casos, a suspensão é centrifugada durante cerca de 5 mi-
nutos a cerca de 120 minutos.
[00128] A suspensão pode ser centrifugada durante cerca de 5 mi- nutos, cerca de 10 minutos, cerca de 15 minutos, cerca de 20 minutos, cerca de 25 minutos, cerca de 30 minutos, cerca de 35 minutos, cerca de 40 minutos, cerca de 45 minutos, cerca de 50 minutos, cerca de 55 minutos, cerca de 60 minutos, cerca de 65 minutos, cerca de 70 minu- tos, cerca de 75 minutos, cerca de 80 minutos, cerca de 85 minutos, cerca de 90 minutos, cerca de 95 minutos, cerca de 100 minutos, cer- ca de 105 minutos, cerca de 110 minutos, cerca de 115 minutos, cerca de 120 minutos, cerca de 125 minutos, cerca de 130 minutos, cerca de 135 minutos, cerca de 140 minutos, cerca de 145 minutos, cerca de 150 minutos ou cerca de 155 minutos a cerca de 160 minutos.
[00129] A suspensão pode ser centrifugada durante cerca de 10 minutos, cerca de 15 minutos, cerca de 20 minutos, cerca de 25 minu- tos, cerca de 30 minutos, cerca de 35 minutos, cerca de 40 minutos, cerca de 45 minutos, cerca de 50 minutos ou cerca de 55 minutos a cerca de 60 minutos.
[00130] A suspensão pode ser centrifugada durante cerca de 5, cerca de 10, cerca de 15, cerca de 20, cerca de 30, cerca de 40, cerca de 50, cerca de 60, cerca de 70, cerca de 80, cerca de 90, cerca de 100, cerca de 120, cerca de 140, cerca de 160, cerca de 180, cerca de 220, cerca de 240, cerca de 300, cerca de 360, cerca de 420, cerca de 480, cerca de 540, cerca de 600, cerca de 660, cerca de 720, cerca de 780, cerca de 840, cerca de 900, cerca de 960, cerca de 1020, cerca de 1080, cerca de 1140, cerca de 1200, cerca de 1260, cerca de 1320, cerca de 1380 minutos ou cerca de 1440 minutos.
[00131] A suspensão pode ser centrifugada durante cerca de 5 mi- nutos, cerca de 10 minutos, cerca de 15 minutos, cerca de 20 minutos, cerca de 25 minutos, cerca de 30 minutos, cerca de 35 minutos, cerca de 40 minutos, cerca de 45 minutos, cerca de 50 minutos, cerca de 55 minutos, cerca de 60 minutos, cerca de 65 minutos, cerca de 70 minu- tos, cerca de 75 minutos, cerca de 80 minutos, cerca de 85 minutos, cerca de 90 minutos, cerca de 95 minutos, cerca de 100 minutos, cer- ca de 105 minutos, cerca de 110 minutos, cerca de 115 minutos, cerca de 120 minutos, cerca de 125 minutos, cerca de 130 minutos, cerca de 135 minutos, cerca de 140 minutos, cerca de 145 minutos, cerca de 150 minutos, cerca de 155 minutos ou cerca de 160 minutos.
[00132] A suspensão pode ser centrifugada durante cerca de 10 minutos, cerca de 15 minutos, cerca de 20 minutos, cerca de 25 minu- tos, cerca de 30 minutos, cerca de 35 minutos, cerca de 40 minutos, cerca de 45 minutos, cerca de 50 minutos, cerca de 55 minutos ou cerca de 60 minutos.
[00133] Qualquer número dentro de qualquer uma das faixas acima é considerado como uma modalidade da descrição.
[00134] Em uma modalidade da presente invenção, a centrifugação é centrifugação contínua. Na dita modalidade, a taxa de alimentação pode estar entre 50 - 5000 ml / min, 100 - 4000 ml / min, 150 - 3000 ml / min, 200 - 2500 ml / min, 250 - 2000 ml / min, 300 - 1500 ml / min, 300 - 1000 ml / min, 200 - 1000 ml / min, 200 - 1500 ml / min, 400 - 1500 ml / min, 500 - 1500 ml / min, 500 - 1000 ml / min, 500 - 2000 ml / min, 500 - 2500 ml / min ou 1000 - 2500 ml / min.
[00135] Em uma modalidade, a taxa de alimentação pode ser de cerca de 10, cerca de 25, cerca de 50, cerca de 75, cerca de 100, cer- ca de 150, cerca de 200, cerca de 250, cerca de 300, cerca de 350, cerca de 400, cerca de 450, cerca de 500, cerca de 550, cerca de 600, cerca de 650, cerca de 700, cerca de 750, cerca de 800, cerca de 850, cerca de 900, cerca de 950, cerca de 1000, cerca de 1050, cerca de 1100, cerca de 1150, cerca de 1200, cerca de 1250, cerca de 1300, cerca de 1350, cerca de 1400, cerca de 1450, cerca de 1500, cerca de 1650 cerca de 1700, cerca de 1800, cerca de 1900, cerca de 2000,
cerca de 2100, cerca de 2200, cerca de 2300, cerca de 2400, cerca de 2500, cerca de 2600, cerca de 2700, cerca de 2800, cerca de 2900, cerca de 3000, cerca de 3250, cerca de 3500, cerca de 3750 cerca de 4000, cerca de 4250, cerca de 4500 ou cerca de 5000 ml / min.
[00136] Em uma modalidade da presente invenção, após a flocula- ção, a suspensão (como obtida na seção 1.2 acima) é clarificada por filtração. Na filtração, as partículas sólidas suspensas em um líquido são removidas passando a mistura por um meio poroso que retém as partículas e passa o filtrado claro. A filtração é realizada em telas por gravidade ou em filtros por vácuo, pressão ou centrifugação. O sólido pode ser retido na superfície do meio filtrante, que é a filtração em bo- lo, ou capturado dentro do meio filtrante, que é a filtração de profundi- dade. Em uma modalidade, após a floculação, a suspensão (conforme obtida na seção 1.2 acima) é clarificada por microfiltração. Em uma modalidade, a microfiltração é a microfiltração tangencial. Em outra modalidade, a microfiltração é uma filtração frontal (filtração perpendi- cular). Em uma modalidade, a microfiltração é uma filtração frontal em que terra de diatomáceas (DE), também conhecida como diatomita DE, é usada como um auxiliar filtrante para facilitar e aumentar a efici- ência da separação sólido / líquido. Portanto, em uma modalidade, após a floculação, a suspensão (como obtida na seção 1.2 acima) é clarificada por microfiltração frontal compreendendo terra de diatomá- ceas (DE). DE pode ser impregnada (ou incorporada) no filtro frontal como uma parte integrante do filtro de profundidade.
[00137] Em outro formato, a DE pode ser adicionada à solução flo- culada (conforme obtido após a seção 1.2) na forma de pó. No último caso, a solução floculada tratada com DE pode ser ainda mais clarifi- cada por filtração de profundidade.
[00138] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma faixa de retenção nominal de cerca de 0,01 - 2 micra, cerca de 0,05 - 2 micra, cerca de 0,1 - 2 micra, cerca de 0,2 - 2 micra, cerca de 0,3 - 2 micra, cerca de 0,4 - 2 micra, cerca de 0,45 - 2 micra, cerca de 0,5 - 2 micra, cerca de 0,6 - 2 micra, cerca de 0,7 - 2 micra, cerca de 0,8 - 2 micra, cerca de 0,9 - 2 micra, cerca de 1 - 2 micra, cerca de 1,25 - 2 micra, cerca de 1,5 - 2 micra ou cerca de 1,75 - 2 micra.
[00139] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma faixa de retenção nominal de cerca de 0,01 - 1 mícron, cerca de 0,05 - 1 mícron, cerca de 0,1 - 1 mícron, cerca de 0,2 - 1 mícron, cerca de 0,3 - 1 mícron, cerca de 0,4 - 1 mícron, cerca de 0,45 - 1 mícron, cerca de 0,5 - 1 mícron, cerca de 0,6 - 1 mícron, cerca de 0,7 - 1 mícron, cerca de 0,8 - 1 mícron ou cer- ca de 0,9 - 1 mícron.
[00140] “Qualquer número dentro de qualquer uma das faixas acima é considerado como uma modalidade da descrição.
[00141] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma classificação de retenção nomi- nal de cerca de 0,01, cerca de 0,05, cerca de 0,1, cerca de 0,2, cerca de 0,3, cerca de 0,4, cerca de 0,45, cerca de 0,5, cerca de 0,6, cerca de 0,7, cerca de 0,8, cerca de 0,9, cerca de 1, cerca de 1,1, cerca de 1,2, cerca de 1,3, cerca de 1,4, cerca de 1,5, cerca de 1,6, cerca de 1,7, cerca de 1,8, cerca de 1,9, ou cerca de 2 micra.
[00142] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma classificação de retenção nomi- nal de cerca de 0,45 mícron.
[00143] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma capacidade de filtro de 100 - 5000 L / m?, 200 - 5000 L / m?, 300 - 5000 L / m?, 400 - 5000 L / m?, 500 - 5000 L / m?, 750 - 5000 L / m2, 1000 - 5000 L / m?, 1500 - 5000 L / m?, 2000 - 5000 L / m?, 3000 - 5000 L / m? ou 4000 - 5000 L / m?.
[00144] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma capacidade de filtro de 100 - 2500 L / m?, 200 - 2500 L / m?, 300 - 2500 L / m?, 400 - 2500 L / m?, 500 - 2500 L / m?, 750 - 2500 L / m2, 1000 - 2500 L / m?, 1500 - 2500 L / m? ou 2000 - 2500 L / m?.
[00145] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma capacidade de filtro de 100 - 1500 L / m?, 200 - 1500 L / m?, 300 - 1500 L / m?, 400 - 1500 L / m?, 500 - 1500 L / m?, 750 - 1500 L / m? ou 1000 - 1500 L / m?.
[00146] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma capacidade de filtro de 100 - 1250 L / m?, 200 - 1250 L / m?, 300 - 1250 L / m?, 400 - 1250 L / m?, 500 - 1250 L / m?, 750 - 1250 L / m? ou 1000 - 1250 L / m?.
[00147] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma capacidade de filtro de 100 - 1000 L / m?, 200 - 1000 L / m?, 300 - 1000 L / m?, 400 - 1000 L / m?, 500 - 1000 L / m? ou 750 - 1000 L / m?.
[00148] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma capacidade de filtro de 100 - 750 L/m?, 200 - 750 L/ m?, 300 - 750 L / m?, 400 - 750 L / m? ou 500 - 750 L/m?.
[00149] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma capacidade de filtro de 100 - 600 L / m?, 200 - 600 L / m?, 300 - 600 L / m?, 400 - 600 L / m? ou 400 - 600 L/m?.
[00150] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma capacidade de filtro de 100 - 500 L / m?, 200 - 500 L / m?, 300 - 500 L / m? ou 400 - 500 L / m?.
[00151] Qualquer número dentro de qualquer uma das faixas acima é considerado como uma modalidade da descrição.
[00152] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma capacidade de filtro de cerca de 100, cerca de 150, cerca de 200, cerca de 250, cerca de 300, cerca de 350, cerca de 400, cerca de 450, cerca de 500, cerca de 550, cerca de 600, cerca de 650, cerca de 700, cerca de 750, cerca de 800, cerca de 850, cerca de 900, cerca de 950, cerca de 1000, cerca de 1050, cerca de 1100, cerca de 1150, cerca de 1200, cerca de 1250, cerca de 1300, cerca de 1350, cerca de 1400, cerca de 1450, cerca de 1500, cerca de 1550, cerca de 1600, cerca de 1650, cerca de 1700, cerca de 1750, cerca de 1800, cerca de 1850, cerca de 1900, cerca de 1950, cerca de 2000, cerca de 2050, cerca de 2100, cerca de 2150, cerca de 2200, cerca de 2250, cerca de 2300, cerca de 2350, cerca de 2400, cerca de 2450 ou cerca de 2500 L / m?.
[00153] Os métodos de separação sólido / líquido descritos acima podem ser usados em um formato autônomo ou em combinação de dois em qualquer ordem, ou em combinação de três em qualquer or- dem.
[00154] 1.4 Filtração (por exemplo, filtração de profundidade)
[00155] “Uma vez que a solução foi tratada pela etapa de floculação da seção 1.2 acima e / ou pela etapa de separação sólido / líquido da seção 1.3 acima, a solução contendo o polissacarídeo (por exemplo, o sobrenadante) pode, opcionalmente, ser clarificada ainda mais.
[00156] Em uma modalidade, a solução é filtrada, produzindo assim uma solução mais clarificada. Em uma modalidade, a filtração é apli- cada diretamente à solução obtida por qualquer um dos métodos da seção 1.2 acima. Em uma modalidade, a filtração é aplicada à solução mais clarificada pela etapa de separação sólido / líquido, conforme descrito na seção 1.3 acima.
[00157] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração selecionada a partir do grupo que consiste de filtração de pro-
fundidade, filtração através de carvão ativado, filtração por tamanho, diafiltração e ultrafiltração. Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de diafiltração, particularmente por filtração de fluxo tangencial. Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração de profundidade.
[00158] Filtros de profundidade usam um meio filtrante poroso para reter partículas em todo o meio, em vez de apenas na superfície do meio. Devido à natureza tortuosa e semelhante a um canal do meio de filtração, as partículas são retidas por todo o meio dentro de sua estru- tura, em oposição à superfície.
[00159] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração de profundidade em que o modelo do filtro de profundidade é selecionado a partir do grupo que consiste de cassetes, cartuchos, lei- to profundo (por exemplo, filtro de areia) e filtros lenticulares.
[00160] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração de profundidade, em que o filtro de profundidade tem uma fai- xa de retenção nominal de cerca de 0,01 - 100 micra, cerca de 0,05 - 100 micra, cerca de 0,1 - 100 micra, cerca de 0,2 - 100 micra, cerca de 0,3 - 100 micras, cerca de 0,4 - 100 micras, cerca de 0,5 - 100 micras, cerca de 0,6 - 100 micras, cerca de 0,7 - 100 micras, cerca de 0,8 - 100 micras, cerca de 0,9 - 100 micras, cerca de 1 - 100 micras, cerca de 1,25 - 100 micra, cerca de 1,5 - 100 micra, cerca de 1,75 - 100 mi- cra, cerca de 2 - 100 micra, cerca de 3 - 100 micra, cerca de 4 - 100 micra, cerca de 5 - 100 micra, cerca de 6 - 100 micra, cerca de 7 - 100 micra, cerca de 8 - 100 micra, cerca de 9 - 100 micra, cerca de 10 - 100 micra, cerca de 15 - 100 micra, cerca de 20 - 100 micra, cerca de - 100 micra, cerca de 30 - 100 micra, cerca de 40 - 100 micra, cerca de 50 - 100 micra ou cerca de 75 - 100 micra.
[00161] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração de profundidade, em que o filtro de profundidade tem uma fai-
xa de retenção nominal de cerca de 0,01 - 75 micra, cerca de 0,05 - 75 micra, cerca de 0,1 - 75 micra, cerca de 0,2 - 75 micra, cerca de 0,3 - 75 micra, cerca de 0,4 - 75 micra, cerca de 0,5 - 75 micra, cerca de 0,6 - 75 micra, cerca de 0,7 - 75 micra, cerca de 0,8 - 75 micra, cerca de 0,9 - 75 micra, cerca de 1 - 75 micra, cerca de 1,25 - 75 micra, cerca de 1,5 - 75 micra, cerca de 1,75 - 75 micra, cerca de 2 - 75 micra, cer- ca de 3 - 75 micra, cerca de 4 - 75 micra, cerca de 5 - 75 micra, cerca de 6 - 75 micra, cerca de 7 - 75 micra, cerca de 8 - 75 micra, cerca de 9 - 75 micra, cerca de 10 - 75 micra, cerca de 15 - 75 micra, cerca de - 75 micra, cerca de 25 - 75 micra, cerca de 30 - 75 micra, cerca de 40 - 75 micra ou cerca de 50 - 75 micra.
[00162] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração de profundidade, em que o filtro de profundidade tem uma fai- xa de retenção nominal de cerca de 0,01 - 50 micra, cerca de 0,05 - 50 micra, cerca de 0,1 - 50 micra, cerca de 0,2 - 50 micra, cerca de 0,3 - 50 micra, cerca de 0,4 - 50 micra, cerca de 0,5 - 50 micra, cerca de 0,6 - 50 micra, cerca de 0,7 - 50 micra, cerca de 0,8 - 50 micra, cerca de 0,9 - 50 micra, cerca de 1 - 50 micra, cerca de 1,25 - 50 micra, cerca de 1,5 - 50 micra, cerca de 1,75 - 50 micra, cerca de 2 - 50 micra, cer- ca de 3 - 50 micra, cerca de 4 - 50 micra, cerca de 5 - 50 micra, cerca de 6 - 50 micra, cerca de 7 - 50 micra, cerca de 8 - 50 micra, cerca de 9 - 50 micra, cerca de 10 - 50 micra, cerca de 15 - 50 micra, cerca de 20 - 50 micra, cerca de 25 - 50 micra, cerca de 30 - 50 micra, cerca de 40 - 50 micra ou cerca de 50 - 50 micra.
[00163] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração de profundidade, em que o filtro de profundidade tem uma fai- xa de retenção nominal de cerca de 0,01 - 25 micra, cerca de 0,05 - 25 micra, cerca de 0,1 - 25 micra, cerca de 0,2 - 25 micra, cerca de 0,3 - micra, cerca de 0,4 - 25 micra, cerca de 0,5 - 25 micra, cerca de 0,6 - 25 micra, cerca de 0,7 - 25 micra, cerca de 0,8 - 25 micra, cerca de
0,9 - 25 micra, cerca de 1 - 25 micra, cerca de 1,25 - 25 micra, cerca de 1,5 - 25 micra, cerca de 1,75 - 25 micra, cerca de 2 - 25 micra, cer- ca de 3 - 25 micra, cerca de 4 - 25 micra, cerca de 5 - 25 micra, cerca de 6 - 25 micra, cerca de 7 - 25 micra, cerca de 8 - 25 micra, cerca de 9 - 25 micra, cerca de 10 - 25 micra, cerca de 15 - 25 micra ou cerca de 20 - 25 micra.
[00164] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração de profundidade, em que o filtro de profundidade tem uma fai- xa de retenção nominal entre cerca de 0,01 - 10 micra, cerca de 0,05 - micra, cerca de 0,1 - 10 micra, cerca de 0,2 - 10 micra, cerca de 0,3 - 10 micra, cerca de 0,4 - 10 micra, cerca de 0,5 - 10 micra, cerca de 0,6 - 10 micra, cerca de 0,7 - 10 micra, cerca de 0,8 - 10 micra, cerca de 0,9 - 10 micra, cerca de 1 - 10 micra, cerca de 1,25 - 10 micra, cer- ca de 1,5 - 10 micra, cerca de 1,75 - 10 micra, cerca de 2 - 10 micra, cerca de 3 - 10 micra, cerca de 4 - 10 micra, cerca de 5 - 10 micra, cerca de 6 - 10 micra, cerca de 7 - 10 micra, cerca de 8 - 10 micra ou cerca de 9 - 10 micra.
[00165] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração de profundidade, em que o filtro de profundidade tem uma fai- xa de retenção nominal de cerca de 0,01 - 8 micra, cerca de 0,05 - 8 micra, cerca de 0,1 - 8 micra, cerca de 0,2 - 8 micra, cerca de 0,3 -8 micra, cerca de 0,4 - 8 micra, cerca de 0,5 - 8 micra, cerca de 0,6 - 8 micra, cerca de 0,7 - 8 micra, cerca de 0,8 - 8 micra, cerca de 0,9 - 8 micra, cerca de 1 - 8 micra, cerca de 1,25 - 8 micra, cerca de 1,5- 8 micra, cerca de 1,75 - 8 micra, cerca de 2 - 8 micra, cerca de 3 - 8 mi- cra, cerca de 4 - 8 micra, cerca de 5 - 8 micra, cerca de 6 - 8 micra ou cerca de 7 - 8 micra.
[00166] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração de profundidade, em que o filtro de profundidade tem uma fai- xa de retenção nominal de cerca de 0,01 - 5 micra, cerca de 0,05- 5 micra, cerca de 0,1 - 5 micra, cerca de 0,2 - 5 micra, cerca de 0,3 - 5 micra, cerca de 0,4 - 5 micra, cerca de 0,5 - 5 micra, cerca de 0,6 - 5 micra, cerca de 0,7 - 5 micra, cerca de 0,8 - 5 micra, cerca de 0,9- 5 micra, cerca de 1 - 5 micra, cerca de 1,25 - 5 micra, cerca de 1,5- 5 micra, cerca de 1,75 - 5 micra, cerca de 2 - 5 micra, cerca de 3 - 5 mi- cra ou cerca de 4 - 5 micra.
[00167] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração de profundidade, em que o filtro de profundidade tem uma fai- xa de retenção nominal de cerca de 0,01 - 2 micra, cerca de 0,05 - 2 micra, cerca de 0,1 - 2 micra, cerca de 0,2 - 2 micra, cerca de 0,3 - 2 micra, cerca de 0,4 - 2 micra, cerca de 0,5 - 2 micra, cerca de 0,6 - 2 micra, cerca de 0,7 - 2 micra, cerca de 0,8 - 2 micra, cerca de 0,9 - 2 micra, cerca de 1 - 2 micra, cerca de 1,25 - 2 micra, cerca de 1,5- 2 micra, cerca de 1,75 - 2 micra, cerca de 2 - 2 micra, cerca de 3 - 2 mi- cra ou cerca de 4 - 2 micra.
[00168] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração de profundidade, em que o filtro de profundidade tem uma fai- xa de retenção nominal de cerca de 0,01 - 1 mícron, cerca de 0,05 - 1 mícron, cerca de 0,1 - 1 mícron, cerca de 0,2 - 1 mícron, cerca de 0,3 - 1 mícron, cerca de 0,4 - 1 mícron, cerca de 0,5 - 1 mícron, cerca de 0,6 - 1 mícron, cerca de 0,7 - 1 mícron, cerca de 0,8 - 1 mícron ou cer- ca de 0,9 - 1 mícron.
[00169] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração de profundidade, em que o filtro de profundidade tem uma fai- xa de retenção nominal de cerca de 0,05 - 50 micra, 0,1 - 25 mícron, 0,2 - 10, micra, 0,1 - 10 micra, 0,2 - 5 micra ou 0,25 - 1 mícron.
[00170] Qualquer número dentro de qualquer uma das faixas acima é considerado como uma modalidade da descrição.
[00171] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração de profundidade, em que o filtro de profundidade tem uma ca-
pacidade de filtro de 1 - 2500 L / m?, 5- 2500 L / m?, 10 - 2500 L/ m?, - 2500 L / m?, 50 - 2500 L / m?, 75 - 2500 L / m?, 100 - 2500 L / m?, 150 - 2500 L / m?, 200 - 2500 L / m?, 300 - 2500 L / m?, 400 - 2500 L / m?, 500 - 2500 L / m?, 750 - 2500 L / m?, 1000 - 2500 L / m?, 1500 - 2500 L / m? ou 2000 - 2500 L / m?.
[00172] Emuma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração de profundidade, em que o filtro de profundidade tem uma ca- pacidade de filtro de 1 - 1000 L / m?, 5- 1000 L / m?2, 10 - 1000 L/ m?, 25 - 1000 L / m?, 50 - 1000 L / m?, 75 - 1000 L / m?, 100 - 1000 L / m?, 150 - 1000 L / m?, 200 - 1000 L / m?, 300 - 1000 L / m?, 400 - 1000 L / m?, 500 - 1000 L / m? ou 750 - 1000 L/ m?.
[00173] Emuma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração de profundidade, em que o filtro de profundidade tem uma ca- pacidade de filtro de 1 - 750 L/m?, 5- 750 L/m?, 10 - 750 L/ m?, 25 - 750 L / m?, 50 - 750 L / m?, 75 - 750 L / m?, 100 - 750 L / m2, 150 - 750 L /m?, 200 - 750 L / m?, 300 - 750 L / m?, 400 - 750 L/m2 ou 500 - 750L/m?.
[00174] Emuma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração de profundidade, em que o filtro de profundidade tem uma ca- pacidade de filtro de 1 - 500 L / m?, 5- 500 L / m?, 10 - 500 L / m?, 25 - 500 L / m?, 50 - 500 L / m?, 75 - 500 L / m?, 100 - 500 L / m?, 150 - 500 L / m?, 200 - 500 L / m?, 300 - 500 L / m? ou 400 - 500 L / m?.
[00175] Emuma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração de profundidade, em que o filtro de profundidade tem uma ca- pacidade de filtro de 1 - 400 L / m?, 5- 400 L / m?, 10 - 400 L/ m?, 25 - 400 L / m?, 50 - 400 L / m?, 75 - 400 L / m?, 100 - 400 L / m?, 150 - 400 L / m?, 200 - 400 L / m? ou 300 - 400 L / m?.
[00176] Emuma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração de profundidade, em que o filtro de profundidade tem uma ca- pacidade de filtro de 1 - 300 L / m?, 5- 300 L / m?, 10 - 3200 L / m?, 25 -
300 L / m?, 50 - 300 L / m?, 75 - 300 L / m?, 100 - 300 L / m?, 150 - 300 L/m? ou 200 - 300 L / m?.
[00177] Emuma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração de profundidade, em que o filtro de profundidade tem uma ca- pacidade de filtro de 1 - 200 L / m?, 5- 200 L / m?, 10 - 200 L / m?, 25 - 200 L / m?, 50 - 200 L / m?, 75 - 200 L / m?, 100 - 200 L / m? ou 150 - 200 L/m?.
[00178] Emuma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração de profundidade, em que o filtro de profundidade tem uma ca- pacidade de filtro de 1 - 100 L/m?, 5- 100 L /m?, 10 - 100 L/ m?, 25 - 100 L / m?, 50 - 100 L / Mm? ou 75- 100 L/ m?.
[00179] Emuma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração de profundidade em que o filtro de profundidade tem uma ca- pacidade de filtro de 1 - 50 L/m?, 5- 50 L/m?, 10 - 50 L/m?2 ou 25 - 50L/m?.
[00180] Qualquer número inteiro dentro de qualquer uma das faixas acima é considerado como uma modalidade da descrição.
[00181] Emuma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração de profundidade em que a taxa de alimentação é de 1 - 1000 LMH (litros / m? / hora), 10 - 1000 LMH, 25 - 1000 LMH, 50 - 1000 LMH, 100 - 1000 LMH, 125 - 1000 LMH, 150 - 1000 LMH, 200 - 1000 LMH, 250 - 1000 LMH, 300 - 1000 LMH, 400 - 1000 LMH, 500 - 1000 LMH, 600 - 1000 LMH, 700 - 1000 LMH, 800 - 1000 LMH ou 900 - 1000 LMH.
[00182] Emuma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração de profundidade, em que a taxa de alimentação é de 1 - 500 LMH, 10 - 500 LMH, 25 - 500 LMH, 50 - 500 LMH, 100 - 500 LMH, 125 - 500 LMH, 150 - 500 LMH, 200 - 500 LMH, 250 - 500 LMH, 300 - 500 LMH ou 400 - 500 LMH.
[00183] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração de profundidade, em que a taxa de alimentação é de 1 - 400 LMH, 10 - 400 LMH, 25 - 400 LMH, 50 - 400 LMH, 100 - 400 LMH, 125 - 400 LMH, 150 - 400 LMH, 200 - 400 LMH, 250 - 400 LMH ou 300 - 400 LMH.
[00184] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração de profundidade, em que a taxa de alimentação é de 1 - 250 LMH, 10 - 250 LMH, 25 - 250 LMH, 50 - 250 LMH, 100 - 250 LMH, 125 - 250 LMH, 150 - 250 LMH ou 200 - 250 LMH.
[00185] Qualquer número dentro de qualquer uma das faixas acima é considerado como uma modalidade da descrição.
[00186] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração de profundidade, em que a taxa de alimentação é de cerca de 1, cerca de 2, cerca de 5, cerca de 10, cerca de 25, cerca de 50, cerca de 60, cerca de 70, cerca de 80, cerca de 90, cerca de 100, cerca de 110, cerca de 120, cerca de 130, cerca de 140, cerca de 150, cerca de 160, cerca de 170, cerca de 180, cerca de 190, cerca de 200, cerca de 210, cerca de 220, cerca de 230, cerca de 240 cerca de 250, cerca de 260, cerca de 270, cerca de 280, cerca de 290, cerca de 300, cerca de 310, cerca de 320, cerca de 330, cerca de 340, cerca de 350, cerca de 360, cerca de 370, cerca de 380, cerca de 390, cerca de 400, cerca de 425, cerca de 450, cerca de 475, cerca de 500, cerca de 525, cerca de 550, cerca de 575, cerca de 600, cerca de 650, cerca de 700, cerca de 750, cerca de 800, cerca de 850, cerca de 900, cerca de 950 ou cerca de 1000 LMH.
[00187] 1.5 Filtração Adicional Opcional
[00188] Uma vez que a solução tenha sido tratada pela etapa de filtração da seção 1.4 acima, a solução obtida (isto é, o filtrado) pode ser opcionalmente ainda mais clarificada.
[00189] Em uma modalidade, a solução é submetida à microfiltra- ção. Em uma modalidade, a microfiltração é uma filtração frontal (filtra-
ção perpendicular). Em uma modalidade, a microfiltração é a microfil- tração tangencial.
[00190] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma faixa de retenção nominal de cerca de 0,01 - 2 micra, cerca de 0,05 - 2 micra, cerca de 0,1 - 2 micra, cerca de 0,2 - 2 micra, cerca de 0,3 - 2 micra, cerca de 0,4 - 2 micra, cerca de 0,45 - 2 micra, cerca de 0,5 - 2 micra, cerca de 0,6 - 2 micra, cerca de 0,7 - 2 micra, cerca de 0,8 - 2 micra, cerca de 0,9 - 2 micra, cerca de 1 - 2 micra, cerca de 1,25 - 2 micra, cerca de 1,5 - 2 micra ou cerca de 1,75 - 2 micra.
[00191] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração de profundidade, em que o filtro tem uma faixa de retenção nominal de cerca de 0,01 - 1 mícron, cerca de 0,05 - 1 mícron, cerca de 0,1 - 1 mícron, cerca de 0,2 - 1 mícron, cerca de 0,3 - 1 mícron, cerca de 0,4 - 1 mícron, cerca de 0,45 - 1 mícron, cerca de 0,5 - 1 mi- cron, cerca de 0,6 - 1 mícron, cerca de 0,7 - 1 mícron, cerca de 0,8 - 1 mícron ou cerca de 0,9 - 1 mícron.
[00192] “Qualquer número dentro de qualquer uma das faixas acima é considerado como uma modalidade da descrição.
[00193] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma classificação de retenção nomi- nal de cerca de 0,01, cerca de 0,05, cerca de 0,1, cerca de 0,2, cerca de 0,3, cerca de 0,4, cerca de 0,45, cerca de 0,5, cerca de 0,6, cerca de 0,7, cerca de 0,8, cerca de 0,9, cerca de 1, cerca de 1,1, cerca de 1,2, cerca de 1,3, cerca de 1,4, cerca de 1,5, cerca de 1,6, cerca de 1,7, cerca de 1,8, cerca de 1,9, ou cerca de 2 micra.
[00194] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma classificação de retenção nomi- nal de cerca de 0,45 mícron.
[00195] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma capacidade de filtro de 100 - 5000 L / m?, 200 - 5000 L / m?, 300 - 5000 L / m?, 400 - 5000 L / m?, 500 - 5000 L / m?, 750 - 5000 L / m2, 1000 - 5000 L / m?, 1500 - 5000 L / m?, 2000 - 5000 L / m?, 3000 - 5000 L / m? ou 4000 - 5000 L / m?.
[00196] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma capacidade de filtro de 100 - 2500 L / m?, 200 - 2500 L / m?, 300 - 2500 L / m?, 400 - 2500 L / m?, 500 - 2500 L / m?, 750 - 2500 L / m2, 1000 - 2500 L / m?, 1500 - 2500 L / m? ou 2000 - 2500 L / m?.
[00197] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma capacidade de filtro de 100 - 1500 L / m?, 200 - 1500 L / m?, 300 - 1500 L / m?, 400 - 1500 L / m?, 500 - 1500 L / m?, 750 - 1500 L / m? ou 1000 - 1500 L / m?.
[00198] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma capacidade de filtro de 100 - 1250 L / m?, 200 - 1250 L / m?, 300 - 1250 L / m?, 400 - 1250 L / m?, 500 - 1250 L / m?, 750 - 1250 L / m? ou 1000 - 1250 L / m?.
[00199] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma capacidade de filtro de 100 - 1000 L / m?, 200 - 1000 L / m?, 300 - 1000 L / m?, 400 - 1000 L / m?, 500 - 1000 L / m? ou 750 - 1000 L / m?.
[00200] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma capacidade de filtro de 100 - 750 L / m?, 200 - 750 L / m?, 300 - 750 L / m?, 400 - 750 L / m? ou 500 - 750 L/m?.
[00201] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma capacidade de filtro de 100 - 600 L / m?, 200 - 600 L / m?, 300 - 600 L / m?, 400 - 600 L / m? ou 400 - 600 L/m?.
[00202] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma capacidade de filtro de 100 - 500 L / m?, 200 - 500 L / m?, 300 - 500 L / m? ou 400 - 500 L / m?.
[00203] “Qualquer número dentro de qualquer uma das faixas acima é considerado como uma modalidade da descrição.
[00204] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma capacidade de filtro de cerca de 100, cerca de 150, cerca de 200, cerca de 250, cerca de 300, cerca de 350, cerca de 400, cerca de 450, cerca de 500, cerca de 550, cerca de 600, cerca de 650, cerca de 700, cerca de 750, cerca de 800, cerca de 850, cerca de 900, cerca de 950, cerca de 1000, cerca de 1050, cerca de 1100, cerca de 1150, cerca de 1200, cerca de 1250, cerca de 1300, cerca de 1350, cerca de 1400, cerca de 1450, cerca de 1500, cerca de 1550, cerca de 1600, cerca de 1650, cerca de 1700, cerca de 1750, cerca de 1800, cerca de 1850, cerca de 1900, cerca de 1950, cerca de 2000, cerca de 2050, cerca de 2100, cerca de 2150, cerca de 2200, cerca de 2250, cerca de 2300, cerca de 2350, cerca de 2400, cerca de 2450 ou cerca de 2500 L / m?.
[00205] 1.6 Ultrafiltração e/ou Diafiltração
[00206] Uma vez que a solução foi filtrada por qualquer um dos mé- todos da seção 1.4 acima e / ou pela etapa de filtração da seção 1.5 acima, a solução obtida (isto é, o filtrado) pode ser opcionalmente ain- da mais clarificada por ultrafiltração e / ou diafiltração.
[00207] Ultrafiltração (UF) é um processo para concentrar um fluxo de produto diluído. A UF separa as moléculas em solução com base no tamanho dos poros da membrana ou peso molecular de corte (MWCO).
[00208] Em uma modalidade da presente invenção, a solução (por exemplo, o filtrado obtido na seção 1.5 ou 1.6 acima) é tratada por ul- trafiltração.
[00209] Em uma modalidade, a solução é tratada por ultrafiltração e o peso molecular de corte da membrana está na faixa de cerca de 5 kDa - 1000 kDa. Em uma modalidade, o peso molecular de corte da membrana está na faixa de cerca de 10 kDa - 750 kDa. Em uma mo- dalidade, o peso molecular de corte da membrana está na faixa de cerca de 10 kDa - 500 kDa. Em uma modalidade, o peso molecular de corte da membrana está na faixa de cerca de 10 kDa - 300 kDa. Em uma modalidade, o peso molecular de corte da membrana está na fai- xa de cerca de 10 kDa - 100 kDa. Em uma modalidade, o peso mole- cular de corte da membrana está na faixa de cerca de 10 kDa - 50 kDa. Em uma modalidade, o peso molecular de corte da membrana está na faixa de cerca de 10 kDa - 30 kxDa. Em uma modalidade, o pe- so molecular de corte da membrana está na faixa de cerca de 5 kDa - 1000 kDa, cerca de 10 kDa - 1000 kDa cerca de 20 kDa - 1000 kDa, cerca de 30 kDa - 1000 kDa, cerca de 40 kDa - 1000 kDa, cerca de 50 kDa - 1000 kDa, cerca de 75 kDa - 1000 kDa, cerca de 100 kDa - 1000 kDa, cerca de 150 kDa - 1000 kDa, cerca de 200 kDa - 1000 kDa, cer- ca de 300 kDa - 1000 kDa, cerca de 400 kDa - 1000 kDa, cerca de 500 kDa - 1000 kDa ou cerca de 750 kDa - 1000 kDa.
[00210] Em uma modalidade, o peso molecular de corte da mem- brana está na faixa de cerca de 5 kDa - 500 kDa, cerca de 10 kDa - 500 kDa, cerca de 20 kDa - 500 kDa, cerca de 30 kDa - 500 kDa, cer- ca de 40 kDa - 500 kDa, cerca de 50 kDa - 500 kDa, cerca de 75 kDa - 500 kDa, cerca de 100 kDa - 500 kDa, cerca de 150 kDa - 500 kDa, cerca de 200 kDa - 500 kDa, cerca de 300 kDa - 500 kDa ou cerca de 400 kDa - 500 kDa.
[00211] Em uma modalidade, o peso molecular de corte da mem- brana está na faixa de cerca de 5 kDa - 300 kDa, cerca de 10 kDa - 300 kDa, cerca de 20 kDa - 300 kDa, cerca de 30 kDa - 300 kDa, cer- ca de 40 kDa - 300 kDa, cerca de 50 kDa - 300 kDa, cerca de 75 kDa - 300 kDa, cerca de 100 kDa - 300 kDa, cerca de 150 kDa - 300 kDa ou cerca de 200 kDa - 300 kDa.
[00212] Em uma modalidade, o peso molecular de corte da mem- brana está na faixa de cerca de 5 kDa - 100 kDa, cerca de 10 kDa - 100 kDa, cerca de 20 kDa - 100 kDa, cerca de 30 kDa - 100 kDa, cer- ca de 40 kDa - 100 kDa, cerca de 50 kDa - 100 kDa ou cerca de 75 kDa - 100 kDa.
[00213] Em uma modalidade, o peso molecular de corte da mem- brana é de cerca de 5 kDa, cerca de 10 kDa, cerca de 20 kDa, cerca de 30 kDa, cerca de 40 kDa, cerca de 50 kDa, cerca de 60 kDa, cerca de 70 kDa, cerca de 80 kDa, cerca de 90 kDa, cerca de 100 kDa, cer- ca de 110 kDa, cerca de 120 kDa, cerca de 130 kDa, cerca de 140 kDa, cerca de 150 kDa, cerca de 200 kDa, cerca de 250 kDa, cerca de 300 kDa, cerca de 400 kDa, cerca de 500 kDa, cerca de 750 kDa ou cerca de 1000 kDa.
[00214] Em uma modalidade, o fator de concentração da etapa de ultrafiltração é de cerca de 1,5 a 10. Em uma modalidade, o fator de concentração é de cerca de 2 a 8. Em uma modalidade, o fator de concentração é de cerca de 2a 5.
[00215] Em uma modalidade, o fator de concentração é de cerca de 1,5, cerca de 2,0, cerca de 2,5, cerca de 3,0, cerca de 3,5, cerca de 4,0, cerca de 4,5, cerca de 5,0, cerca de 5,5, cerca de 6,0, cerca de 6,5, cerca de 7,0, cerca de 7,5, cerca de 8,0, cerca de 8,5, cerca de 9,0, cerca de 9,5 ou cerca de 10,0. Em uma modalidade, o fator de concentração é cerca de 2, cerca de 3, cerca de 4, cerca de 5 ou cerca de 6.
[00216] Em uma modalidade da presente invenção, a solução (por exemplo, o filtrado obtido na seção 1.4 ou 1.5 acima) é tratada por dia- filtração.
[00217] Em uma modalidade da presente invenção, a solução obti- da após ultrafiltração (UF), conforme descrito na presente seção aci-
ma, é ainda tratada por diafiltração (tratamento UF / DF).
[00218] A diafilttação (DF) é usada para trocar o produto para uma solução tampão desejada (ou somente água). Em uma modalidade, a diafiltração é usada para alterar as propriedades químicas da solução retida sob volume constante. As partículas indesejadas passam atra- vés de uma membrana enquanto a composição do fluxo de alimenta- ção é alterada para um estado mais desejável por meio da adição de uma solução de substituição (uma solução tampão, uma solução sali- na, uma solução salina tamponada ou água).
[00219] Em uma modalidade, a solução de substituição é água.
[00220] Em uma modalidade, a solução de substituição é solução salina em água. Em algumas modalidades, o sal é selecionado a partir do grupo que consiste de cloreto de magnésio, cloreto de potássio, cloreto de sódio e uma combinação dos mesmos. Em uma modalidade particular, o sal é cloreto de sódio. Em uma modalidade, a solução de substituição é cloreto de sódio a cerca de 1 mM, cerca de 5 mM, cerca de 10 mM, cerca de 15 mM, cerca de 20 mM, cerca de 25 mM, cerca de 30 mM, cerca de 35 mM, cerca de 40 mM, cerca de 45 mM, cerca de 50 mM, cerca de 55 mM, cerca de 60 mM, cerca de 65 mM, cerca de 70 mM, cerca de 80 mM, cerca de 90 mM, cerca de 100 mM, cerca de 110 mM, cerca de 120 mM, cerca de 130 mM, cerca de 140 mM, cerca de 150 mM, cerca de 160 mM, cerca de 170 mM, cerca de 180 MM, cerca de 190 mM, cerca de 200 mM, cerca de 250 mM, cerca de 300 mM, cerca de 350 mM, cerca de 400 mM, cerca de 450 mM ou cerca de 500 mM. Em uma modalidade particular, a solução de substi- tuição é cloreto de sódio a cerca de 1 mM, cerca de 5 mM, cerca de 10 MM, cerca de 15 mM, cerca de 20 mM, cerca de 25 mM, cerca de 30 MM, cerca de 35 mM, cerca de 40 mM, cerca de 45 mM, cerca de 50 MM, cerca de 55 mM, cerca de 60 mM, cerca de 65 mM, cerca de 70 MM, cerca de 80 mM, cerca de 90 mM, cerca de 100 mM, cerca de
110 mM, cerca de 120 mM, cerca de 130 mM, cerca de 140 mM, cerca de 150 mM, cerca de 160 mM, cerca de 170 mM, cerca de 180 mM, cerca de 190 mM, cerca de 200 mM, cerca de 250 mM ou cerca de 300 mM.
[00221] Em uma modalidade, a solução de substituição é uma solu- ção tampão. Em uma modalidade, a solução de substituição é uma solução tampão em que o tampão é selecionado a partir do grupo que consiste de ácido N-(2-acetamido) -aminoetanossulfônico (ACES), um sal de ácido acético (acetato), ácido N-(2-acetamido)-iminodiacético (ADA), ácido 2-aminoetanossulfônico (AES, Taurina), amônia, 2-Amino-2- metil-1-propanol (AMP), 2-Amino-2-metil-1,3-propanodiol AMPD, am- mediol, ácido N-(1,1-Dimetil-2-hidroxietil)-3-amino-2-hidroxipropanos- sulfônico (AMPSO), ácido N,N-Bis-(2-hidroxietil)-2-aminoetanossulfô- nico (BES), hidrogênio carbonato de sódio (bicarbonato), N,N'-Bis(2- hidroxietil)-glicina (bicina), [Bis-(2-hidroxietil) -imino] -tris- (hidroxime- tilmetano) (BIS-Tris), 1,3-Bis [tris(hidroximetil)-metilamino] propano (BIS-Tris-Propano), ácido bórico, ácido dimetilarsínico (Cacodilato), ácido 3- (Ciclohexilamino)-propanossulfônico (CAPS), ácido 3-(ciclohe- xilamino) -2-hidróxi-1-propanossulfônico (CAPSO), carbonato de sódio (Carbonato), ácido ciclohexilaminoetanossulfônico (CHES), um sal de ácido cítrico (citrato), ácido 3- [N-Bis (hidroxietil) amino] -2-hidroxipro- panossulfônico (DIPSO), um sal de ácido fórmico (formato), Glicina, Glicilglicina, ácido N-(2-Hidroxietil)-piperazina-N'-etanossulfônico (HEPES), ácido N- (2-hidroxietil)-piperazina-N'-3-propanossulfônico (HEPPS, EPPS), ácido N-(2-hidroxietil)-piperazina-N'-2-hidroxipropa- nossulfônico (HEPPSO), imidazol, um sal de ácido málico (Malato), um sal de ácido maleico (Maleato), ácido 2-(N-Morfolino) -etanossulfônico (MES), ácido 3-(N-Morfolino)-propanossulfônico (MOPS), ácido 3-(N- Morfolino)-2-hidroxipropanossulfônico (MOPSO), um sal de ácido fos- fórico (Fosfato), Piperazina-N,N'-bis (ácido 2-etanossulfônico) (PIPES),
Piperazina-N, N'-bis (2 ácido -hidroxipropanossulfônico) (POPSO), pi- ridina, um sal de ácido succínico (Succinato), ácido 3 - ([Tris (hidroxi- metil)-metil] -amino) -propanossulfônico (TAPS), ácido 3- [N-Tris (hi- droximetil)-metilamino]-2-hidroxipropanossulfônico (TAPSO), Trietano- lamina (TEA), ácido 2-[Tris (hidroximetil)-metilamino]-etanossulfônico (TES), N-[Tris(hidroximetil)-metil] -glicina (Tricina) e Tris(hidroximetil)- aminometano (Tris).
[00222] Em uma modalidade, o tampão de diafiltração é seleciona- do a partir do grupo que consiste de um sal de ácido acético (acetato), um sal de ácido cítrico (citrato), um sal de ácido fórmico (formato), um sal de ácido málico (malato), um sal de ácido maleico (maleato), um sal de ácido fosfórico (fosfato) e um sal de ácido succínico (succinato). Em uma modalidade, o tampão de diafiltração é um sal de ácido cítrico (citrato). Em uma modalidade, o tampão de diafiltração é um sal de ácido succínico (succinato). Em uma modalidade, o dito sal é um sal de sódio. Em uma modalidade, o dito sal é um sal de potássio.
[00223] Em uma modalidade, o pH do tampão de diafiltração é de cerca de 4,0 - 11,0, de cerca de 5,0 - 10,0, de cerca de 5,5 - 9,0, de cerca de 6,0 - 8,0, de cerca de 6,0 - 7,0, de cerca de 6,5 - 7,5, de cer- ca de 6,5 - 7,0 ou de cerca de 6,0 - 7,5. Qualquer número dentro de qualquer uma das faixas acima é considerado como uma modalidade da descrição.
[00224] Em uma modalidade, o pH do tampão de diafiltração é de cerca de 4,0, cerca de 4,5, cerca de 5,0, cerca de 5,5, cerca de 6,0, cerca de 6,5, cerca de 7,0, cerca de 7,5, cerca de 8,0, cerca de 8,5, cerca de 9,0, cerca de 9,5, cerca de 10,0, cerca de 10,5 ou cerca de 11,0. Em uma modalidade, o pH do tampão de diafiltração é cerca de 6,0, cerca de 6,5, cerca de 7,0, cerca de 7,5, cerca de 8,0, cerca de 8,5 ou cerca de 9,0. Em uma modalidade, o pH do tampão de diafiltra- ção é de cerca de 6,5, cerca de 7,0 ou cerca de 7,5. Em uma modali-
dade, o pH do tampão de diafiltração é de cerca de 7,0.
[00225] Em uma modalidade, a concentração do tampão de diafil- tração é de cerca de 0,01 mM - 100 mM, de cerca de 0,1 mM - 100 mM, de cerca de 0,5 mM - 100 mM, de cerca de 1 mM - 100 mM, de cerca de 2 mM - 100 mM, de cerca de 3 mM - 100 mM, de cerca de 4 mM - 100 MM, de cerca de 5 mM - 100 mM, de cerca de 6 mM - 100 mM, de cerca de 7 mM - 100 mM, de cerca de 8 mM - 100 mM, de cerca de 9 mM - 100 mM, de cerca de 10 mM - 100 mM, de cerca de 11 mM - 100 MM, de cerca de 12 mM - 100 mM, de cerca de 13 mM - 100 mM, de cerca de 14 mM - 100 mM, de cerca de 15 mM - 100 mM, de cerca de 16 mM - 100 mM, de cerca de 17 mM - 100 mM, de cerca de 18 mM - 100 mM, de cerca de 19 mM - 100 mM, de cerca de 20 mM - 100 mM, de cerca de 25 mM - 100 mM, de cerca de 30 mM - 100 mM, de cerca de 35 mM - 100 mM, de cerca de 40 mM - 100 mM, de cerca de 45 mM - 100 mM, de cerca de 50 mM - 100 mM, de cerca de 55 mM - 100 mM, de cerca de 60 mM - 100 mM, de cerca de 65 mM - 100 mM, de cerca de 70 mM - 100 mM, de cerca de 75 mM - 100 MM, de cerca de 80 mM - 100 mM, de cerca de 85 mM - 100 mM, seja de cerca de 90 mM - 100 mM ou de cerca de 95 mM - 100 mM.
[00226] Em uma modalidade, a concentração do tampão de diafil- tração é de cerca de 0,01 mM - 50 mM, de cerca de 0,1 mM - 50 mM, de cerca de 0,5 mM - 50 mM, de cerca de 1 mM - 50 mM, de cerca de 2 mM - 50 mM, de cerca de 3 mM - 50 mM, de cerca de 4 mM - 50 MM, de cerca de 5 mM - 50 mM, de cerca de 6 mM - 50 mM, de cerca de 7 mM - 50 MM, de cerca de 8 mM - 50 mM, de cerca de 9 mM - 50 mM, de cerca de 10 mM - 50 mM, de cerca de 11 mM - 50 mM, de cerca de 12 mM - 50 mM, de cerca de 13 mM - 50 mM, de cerca de 14 mM - 50 mM, de cerca de 15 mM - 50 mM, de cerca de 16 mM - 50 mM, de cerca de 17 mM - 50 mM, de cerca de 18 mM - 50 mM, de cerca de 19 mM - 50 mM, de cerca de 20 mM - 50 mM, de cerca de
25 mM - 50 MM, de cerca de 30 mM - 50 mM, de cerca de 35 mM - 50 MM, de cerca de 40 mM - 50 mM ou de cerca de 45 mM - 50 mM.
[00227] Em uma modalidade, a concentração do tampão de diafil- tração é de cerca de 0,01 mM - 25 mM, de cerca de 0,1 mM - 25 mM, de cerca de 0,5 mM - 25 mM, de cerca de 1 mM - 25 mM, de cerca de 2 mM - 25 mM, de cerca de 3 mM - 25 mM, de cerca de 4 mM - 25 MM, de cerca de 5 mM - 25 mM, de cerca de 6 mM - 25 mM, de cerca de 7 mM - 25 mM, de cerca de 8 mM - 25 mM, de cerca de 9 mM - 25 mM, de cerca de 10 mM - 25 mM, de cerca de 11 mM - 25 mM, de cerca de 12 mM - 25 mM, de cerca de 13 mM - 25 mM, de cerca de 14 mM - 25 mM, de cerca de 15 mM - 25 mM, de cerca de 16 mM - 25 mM, de cerca de 17 mM - 25 mM, de cerca de 18 mM - 25 mM, de cerca de 19 mM - 25 mM ou de cerca de 20 MM - 25 mM.
[00228] Em uma modalidade, a concentração do tampão de diafil- tração é de cerca de 0,01 mM - 15 mM, de cerca de 0,1 MM - 15 mM, de cerca de 0,5 mM - 15 mM, de cerca de 1 MM - 15 mM, de cerca de 2 mM - 15 mM, de cerca de 3 mM - 15 mM, de cerca de 4 MM - 15 MM, de cerca de 5 mM - 15 mM, de cerca de 6 mM - 15 mM, de cerca de 7 mM - 15 mM, de cerca de 8 mM - 15 mM, de cerca de 9 mM - 15 mM, de cerca de 10 mM - 15 mM, de cerca de 11 mM - 15 mM, de cerca de 12 mM - 15 mM, de cerca de 13 mM - 15 mM ou de cerca de 14 MM - 15 mM.
[00229] Em uma modalidade, a concentração do tampão de diafil- tração é de cerca de 0,01 mM - 10 mM, de cerca de 0,1 MM - 10 mM, de cerca de 0,5 mM - 10 mM, de cerca de 1 MM - 10 mM, de cerca de 2 mM - 10 mM, de cerca de 3 mM - 10 mM, de cerca de 4 mM - 10 MM, de cerca de 5 mM - 10 mM, de cerca de 6 mM - 10 mM, de cerca de 7 mM - 10 mM, de cerca de 8 mM - 10 mM ou de cerca de 9 mM - MM.
[00230] “Qualquer número dentro de qualquer uma das faixas acima é considerado como uma modalidade da descrição.
[00231] Em uma modalidade, a concentração do tampão de diafil- tração é de cerca de 0,01 mM, cerca de 0,05 mM, cerca de 0,1 mM, cerca de 0,2 mM, cerca de 0,3 mM, cerca de 0,4 mM, cerca de 0,5 MM, cerca de 0,6 mM, cerca de 0,7 mM, cerca de 0,8 mM, cerca de 0,9 mM, cerca de 1 mM, cerca de 2 mM, cerca de 3 mM, cerca de 4 MM, cerca de 5 mM, cerca de 6 mM, cerca de 7 mM, cerca de 8 mM, cerca de 9 mM, cerca de 10 mM, cerca de 11 mM, cerca de 12 mM, cerca de 13 mM, cerca de 14 mM, cerca de 15 mM, cerca de 16 mM, cerca de 17 mM, cerca de 18 mM, cerca de 19 mM, cerca de 20 mM, cerca de 25 mM, cerca de 30 mM, cerca de 35 mM, cerca de 40 mM, cerca de 45 mM, cerca de 50 mM, cerca de 55 mM, cerca de 60 mM, cerca de 65 mM, cerca de 70 mM, cerca de 75 mM, cerca de 80 mM, cerca de 85 mM, cerca de 90 mM, cerca de 95 ou cerca de 100 mM.
[00232] Em uma modalidade, a concentração do tampão de diafil- tração é de cerca de 0,1 mM, cerca de 0,2 mM, cerca de 1 mM, cerca de 5 mM, cerca de 10 mM, cerca de 15 mM, cerca de 20 mM, cerca de mM, cerca de 40 mM ou cerca de 50 mM.
[00233] Em uma modalidade, a concentração do tampão de diafil- tração é de cerca de 10 mM.
[00234] Em uma modalidade, a solução de substituição compreen- de um agente quelante. Em uma modalidade, a solução de substitui- ção compreende um agente quelante de alúmen. Em algumas modali- dades, o agente quelante é selecionado a partir do grupo que consiste de etileno diamina tetra acetato (EDTA), ácido N-(2-hidroxietil) etileno- diamina-N,N', N'-triacético (EDTA-OH), ácido hidroxietileno diamina triacético (HEDTA), ácido etilenoglicol-bis(2-aminoetiléter)-N,N,N',N”- ácido tetraacético (EGTA), ácido 1,2-ciclohexanodiamina-N,N,N' N'-tetra- acético (CyDTA), ácido dietilenotriamina-N,N,N',N”,N”-penta-acético (DTPA), ácido 1,3-diaminopropan-2-ol-N,N,N' N'”-tetra-acético (DPTA-
OH), ácido etilenodiamina-N,N'-bis (2-hidroxifenilacético) (EDDHA), dicloridrato de ácido etilenodiamina-N,N'-dipropiônico (EDDP), etileno- diamina-tetraquis (ácido metilenossulfônico) (EDTPO), Nitrilotris (ácido metilenofosfônico) (NTPO), ácido imino-diacético (IDA), ácido hidroxii- mino-diacético (HIDA), ácido nitrilo-triacético (NTP), ácido trietilenotetra- mina-hexa-acético (TTHA), ácido dimercaptosuccínico (DMSA), ácido 2,3-dimercapto-1-propanossulfônico (DMPS), ácido alfalipoico (ALA), ácido nitrilotriacético (NTA), tiamina tetraidrofurfuril dissulfeto (TTFD), dimercaprol, penicilamina, deferoxamina (DFOA), deferasirox, fosfona- tos, um sal de ácido cítrico (citrato) e combinações dos mesmos.
[00235] Em algumas modalidades, o agente quelante é selecionado a partir do grupo que consiste de etileno diamina tetra acetato (EDTA), ácido N-(2-hidroxietil) etilenodiamina-N,N',N'- triacético (EDTA-OH), ácido hidroxietileno diamina triacético (HEDTA), ácido etilenoglicol-bis (2-aminoetiléter)-N,N,N' N”-ácido tetra-acético (EGTA), ácido 1,2-ciclo- hexanodiamina-N,N,N' N”-tetra-acético (CyYDTA), ácido dietilenotriami- na-N,N,N',N” ,N”-penta-acético (DTPA), 1,3-diaminopropan-2-ol-N, N, N', N'-ácido tetra-acético (DPTA-OH), ácido etilenodiamina-N,N'-bis(2- hidroxifenilacético) (EDDHA), um sal de ácido cítrico (citrato) e combi- nações dos mesmos.
[00236] Em algumas modalidades, o agente quelante é etileno dia- mina tetra acetato (EDTA).
[00237] Em algumas modalidades, o agente quelante é um sal de ácido cítrico (citrato). Em algumas modalidades, o agente quelante é citrato de sódio.
[00238] Em geral, o agente quelante é usado em uma concentração de 1 a 500 MM. Em uma modalidade, a concentração do agente que- lante na solução de substituição é de 2 a 400 MM. Em uma modalida- de, a concentração do agente quelante na solução de solução de substituição é de 10 a 400 mM. Em uma modalidade, a concentração do agente quelante na solução de substituição é de 10 a 200 mM. Em uma modalidade, a concentração do agente quelante na solução de substituição é de 10 a 100 mM. Em uma modalidade, a concentração do agente quelante na solução de substituição é de 10 a 50 MM. Em uma modalidade, a concentração do agente quelante na solução de substituição é de 10 a 30 mM.
[00239] Em uma modalidade, a concentração do agente quelante na solução de substituição é de cerca de 0,01 mM, cerca de 0,05 mM, cerca de 0,1 mM, cerca de 0,2 mM, cerca de 0,3 mM, cerca de 0,4 MM, cerca de 0,5 mM, cerca de 0,6 mM, cerca de 0,7 mM, cerca de 0,8 mM, cerca de 0,9 mM, cerca de 1 mM, cerca de 2 mM, cerca de 3 MM, cerca de 4 mM, cerca de 5 mM, cerca de 6 mM, cerca de 7 mM, cerca de 8 mM, cerca de 9 mM, cerca de 10 mM, cerca de 11 mM, cerca de 12 mM, cerca de 13 mM, cerca de 14 mM, cerca de 15 mM, cerca de 16 mM, cerca de 17 mM, cerca de 18 mM, cerca de 19 mM, cerca de 20 mM, cerca de 21 mM, cerca de 22 mM, cerca de 23 mM, cerca de 24 mM, cerca de 25 mM, cerca de 26 mM, cerca de 27 mM, cerca de 28 mM, cerca de 29 mM, cerca de 30 mM, cerca de 31 mM, cerca de 32 mM, cerca de 33 mM, cerca de 34 mM, cerca de 35 mM, cerca de 36 mM, cerca de 37 mM, cerca de 38 mM, cerca de 39 mM, cerca de 40 mM, cerca de 45 mM, cerca de 50 mM, cerca de 55 mM, cerca de 60 mM, cerca de 65 mM, cerca de 70 mM, cerca de 75 mM, cerca de 80 mM, cerca de 85 mM, cerca de 90 mM, cerca de 95 ou cerca de 100 mM.
[00240] Em uma modalidade, a concentração do agente quelante na solução de substituição é de cerca de 5 mM, cerca de 10 mM, cer- ca de 15 mM, cerca de 20 mM, cerca de 25 mM, cerca de 30 mM, cer- ca de 35 mM, cerca de 40 mM, cerca de 45 mM, cerca de 50 mM, cer- ca de 55 mM, cerca de 60 mM, cerca de 65 mM, cerca de 70 mM, cer- ca de 75 mM, cerca de 80 mM, cerca de 85 mM, cerca de 90 mM, cer-
ca de 95 mM ou cerca de 100 mM.
[00241] Em uma modalidade, a concentração do agente quelante na solução de substituição é de cerca de 15 mM, cerca de 20 mM, cerca de 25 mM, cerca de 30 mM, cerca de 35 mM, cerca de 40 mM, cerca de 45 mM ou cerca de 50 mM.
[00242] Em uma modalidade, a solução tampão de diafiltração compreende um sal. Em algumas modalidades, o sal é selecionado a partir do grupo que consiste de cloreto de magnésio, cloreto de potás- sio, cloreto de sódio e uma combinação dos mesmos. Em uma moda- lidade particular, o sal é cloreto de sódio. Em uma modalidade, a solu- ção tampão de diafiltração compreende cloreto de sódio em cerca de 1, cerca de 5, cerca de 10, cerca de 15, cerca de 20, cerca de 25, cer- ca de 30, cerca de 35, cerca de 40, cerca de 45, cerca de 50, cerca de 55, cerca de 60, cerca de 65, cerca de 70, cerca de 80, cerca de 90, cerca de 100, cerca de 110, cerca de 120, cerca de 130, cerca de 140, cerca de 150, cerca de 160, cerca de 170, cerca de 180, cerca de 190, cerca de 200, cerca de 250, cerca de 300, cerca de 350, cerca de 400, cerca de 450 ou cerca de 500 mM. Em uma modalidade particular, a solução tampão de diafiltração compreende cloreto de sódio a cerca de 1, cerca de 5, cerca de 10, cerca de 15, cerca de 20, cerca de 25, cerca de 30, cerca de 35, cerca de 40, cerca de 45, cerca de 50, cerca de 55, cerca de 60, cerca de 65, cerca de 70, cerca de 80, cerca de 90, cerca de 100, cerca de 110, cerca de 120, cerca de 130, cerca de 140, cerca de 150, cerca de 160, cerca de 170, cerca de 180, cerca de 190, cerca de 200, cerca de 250 ou cerca de 300 mM.
[00243] Em uma modalidade da presente invenção, o número de diavolumes é de pelo menos 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 ou 50. Em uma modalidade da presente invenção, o número de diavolumes é de cerca 1, cerca de 2, cerca de 3, cerca de 4, cerca de 5, cerca de 6, cerca de 7, cerca de 8, cerca de 9, cerca de 10, cerca de 11, cerca de
12, cerca de 13, cerca de 14, cerca de 15, cerca de 16, cerca de 17, cerca de 18, cerca de 19, cerca de 20, cerca de 21, cerca de 22, cerca de 23, cerca de 24, cerca de 25, cerca de 26, cerca de 27, cerca de 28, cerca de 29, cerca de 30, cerca de 31, cerca de 32, cerca de 33, cerca de 34, cerca de 35, cerca de 36, cerca de 37, cerca de 38, cerca de 39, cerca de 40, cerca de 41, cerca de 42, cerca de 43, cerca de 44, cerca de 45, cerca de 46, cerca de 47, cerca de 48, cerca de 49, cerca de 50, cerca de 55, cerca de 60, cerca de 65, cerca de 70, cerca de 75, cerca de 80, cerca de 85, cerca de 90, cerca de 95 ou cerca de
100. Em uma modalidade da presente invenção, o número de diavo- lumes é cerca de 5, cerca de 6, cerca de 7, cerca de 8, cerca de 9, cerca de 10, cerca de 11, cerca de 12, cerca de 13, cerca de 14 ou cerca de 15.
[00244] Em uma modalidade da presente invenção, as etapas de Ultrafiltração e Diafiltração são realizadas a uma temperatura entre cerca de 20ºC e cerca de 90ºC. Em uma modalidade, as etapas de Ultrafiltração e Diafiltração são realizadas a uma temperatura entre cerca de 35ºC e cerca de 80ºC, a uma temperatura entre cerca de 40ºC e cerca de 70ºC, a uma temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 65ºC, a uma temperatura entre cerca de 50ºC e cerca de 60ºC, a uma temperatura entre cerca de 50ºC e cerca de 55ºC, a uma tempe- ratura entre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC ou a uma temperatura en- tre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC.
[00245] Qualquer número dentro de qualquer uma das faixas acima é considerado como uma modalidade da descrição.
[00246] Em uma modalidade, as etapas de Ultrafiltração e Diafiltra- ção são realizadas a uma temperatura de cerca de 20ºC, cerca de 21ºC, cerca de 22ºC, cerca de 23ºC, cerca de 24ºC, cerca de 25ºC, cerca de 26ºC, cerca de 27ºC, cerca de 28ºC, cerca de 29ºC, cerca de 30ºC, cerca de 31ºC, cerca de 32ºC, cerca de 33ºC, cerca de 34ºC,
cerca de 35ºC, cerca de 36ºC, cerca de 37ºC, cerca de 38ºC, cerca de 39ºC, cerca de 40ºC, cerca de 41ºC, cerca de 42ºC, cerca de 43ºC, cerca de 44ºC, cerca de 45ºC, cerca de 46ºC, cerca de 47ºC, cerca de 48ºC, cerca de 49ºC, cerca de 50ºC, cerca de 51ºC, cerca de 52ºC, cerca de 53ºC, cerca de 54ºC, cerca de 55ºC, cerca de 56ºC, cerca de 57ºC, cerca de 58ºC, cerca de 59ºC, cerca de 60ºC, cerca de 61ºC, cerca de 62ºC, cerca de 63ºC, cerca de 64ºC, cerca de 65ºC, cerca de 66ºC, cerca de 67ºC, cerca de 68ºC, cerca de 69ºC, cerca de 70ºC, cerca de 71ºC, cerca de 72ºC, cerca de 73ºC, cerca de 74ºC, cerca de 75ºC, cerca de 76ºC, cerca de 77ºC, cerca de 78ºC, cerca de 79ºC ou cerca de 80ºC. Em uma modalidade, as etapas de Ultrafiltração e Dia- filtração são realizadas a uma temperatura de cerca de 50ºC.
[00247] Em uma modalidade da presente invenção, a etapa de Dia- filtração é realizada a uma temperatura entre cerca de 20ºC e cerca de 90ºC. Em uma modalidade, a etapa de diafiltração é realizada a uma temperatura entre cerca de 35ºC e cerca de 80ºC, a uma temperatura entre cerca de 40ºC e cerca de 70ºC, a uma temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 65ºC, em temperatura entre cerca de 50ºC e cerca de 60ºC, a temperatura entre cerca de 50ºC e cerca de 55ºC, a tempe- ratura entre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC ou a temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC.
[00248] “Qualquer número dentro de qualquer uma das faixas acima é considerado como uma modalidade da descrição.
[00249] Em uma modalidade, a etapa de Diafiltração é realizada a uma temperatura de cerca de 20ºC, cerca de 21ºC, cerca de 22ºC, cerca de 23ºC, cerca de 24ºC, cerca de 25ºC, cerca de 26ºC, cerca de 27ºC, cerca de 28ºC, cerca de 29ºC, cerca de 30ºC, cerca de 31ºC, cerca de 32ºC, cerca de 33ºC, cerca de 34ºC, cerca de 35ºC, cerca de 36ºC, cerca de 37ºC, cerca de 38ºC, cerca de 39ºC, cerca de 40ºC, cerca de 41ºC, cerca de 42ºC, cerca de 43ºC, cerca de 44ºC, cerca de
45ºC, cerca de 46ºC, cerca de 47ºC, cerca de 48ºC, cerca de 49ºC, cerca de 50ºC, cerca de 51ºC, cerca de 52ºC, cerca de 53ºC, cerca de 54ºC, cerca de 55ºC, cerca de 56ºC, cerca de 57ºC, cerca de 58ºC, cerca de 59ºC, cerca de 60ºC, cerca de 61ºC, cerca de 62ºC, cerca de 63ºC, cerca de 64ºC, cerca de 65ºC, cerca de 66ºC, cerca de 67ºC, cerca de 68ºC, cerca de 69ºC, cerca de 70ºC, cerca de 71ºC, cerca de 72ºC, cerca de 73ºC, cerca de 74ºC, cerca de 75ºC, cerca de 76ºC, cerca de 77ºC, cerca de 78ºC, cerca de 79ºC ou cerca de 80ºC. Em uma modalidade, a etapa de diafiltração é realizada a uma temperatu- ra de cerca de 50ºC.
[00250] Em uma modalidade da presente invenção, a etapa de UIl- trafiltração é realizada a uma temperatura entre cerca de 20ºC e cerca de 90ºC. Em uma modalidade, a etapa de Ultrafiltração é realizada a uma temperatura entre cerca de 35ºC e cerca de 80ºC, a uma tempe- ratura entre cerca de 40ºC e cerca de 70ºC, a uma temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 65ºC, a temperatura entre cerca de 50ºC e cerca de 60ºC, a temperatura entre cerca de 50ºC e cerca de 55ºC, a temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC ou a temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC. Qualquer número dentro de qualquer uma das faixas acima é considerado como uma modalidade da descrição.
[00251] Em uma modalidade, a etapa de Ultrafiltração é realizada a uma temperatura de cerca de 20ºC, cerca de 21ºC, cerca de 22ºC, cerca de 23ºC, cerca de 24ºC, cerca de 25ºC, cerca de 26ºC, cerca de 27ºC, cerca de 28ºC, cerca de 29ºC, cerca de 30ºC, cerca de 31ºC, cerca de 32ºC, cerca de 33ºC, cerca de 34ºC, cerca de 35ºC, cerca de 36ºC, cerca de 37ºC, cerca de 38ºC, cerca de 39ºC, cerca de 40ºC, cerca de 41ºC, cerca de 42ºC, cerca de 43ºC, cerca de 44ºC, cerca de 45ºC, cerca de 46ºC, cerca de 47ºC, cerca de 48ºC, cerca de 49ºC, cerca de 50ºC, cerca de 51ºC, cerca de 52ºC, cerca de 53ºC, cerca de
54ºC, cerca de 55ºC, cerca de 56ºC, cerca de 57ºC, cerca de 58ºC, cerca de 59ºC, cerca de 60ºC, cerca de 61ºC, cerca de 62ºC, cerca de 63ºC, cerca de 64ºC, cerca de 65ºC, cerca de 66ºC, cerca de 67ºC, cerca de 68ºC, cerca de 69ºC, cerca de 70ºC, cerca de 71ºC, cerca de 72ºC, cerca de 73ºC, cerca de 74ºC, cerca de 75ºC, cerca de 76ºC, cerca de 77ºC, cerca de 78ºC, cerca de 79ºC ou cerca de 80ºC. Em uma modalidade, a etapa de Ultrafiltração é realizada a uma tempera- tura de cerca de 50ºC.
1.7 Filtração por carvão ativado
[00252] "Uma vez que a solução foi tratada pela etapa de floculação da seção 1.2 acima, a solução contendo o polissacarídeo pode ser op- cionalmente clarificada ainda mais por uma etapa de filtração por car- vão ativado.
[00253] Em uma modalidade, a solução da seção 1.3 tratada adici- onalmente pela separação sólido / líquido da etapa da seção 1.3 (por exemplo, o sobrenadante) é clarificada ainda mais por uma etapa de filtração por carvão ativado. Em uma modalidade, a solução adicio- nalmente filtrada por qualquer um dos métodos da seção 1.4 acima e / ou pela etapa de filtração da seção 1.5 acima é clarificada ainda mais por uma etapa de filtração por carvão ativado. Em uma modalidade, a solução clarificada por uma etapa de Ultrafiltração e / ou Diafiltração da seção 1.6 acima é clarificada ainda mais por uma etapa de filtração por carvão ativado.
[00254] “Uma etapa de filtração por carvão ativado permite a remoção adicional de impurezas da célula hospedeira, tal como proteínas e ácidos nucleicos, bem como impurezas coloridas (ver WO 2008/118752).
[00255] Em uma modalidade, o carvão ativado (também denomina- do carvão ativo) é adicionado à solução em uma quantidade suficiente para absorver a maioria das proteínas e contaminantes de ácidos nu- cleicos e, em seguida, removidos uma vez que os contaminantes te-
nham sido adsorvidos no carvão ativado. Em uma modalidade, o car- vão ativado é adicionado na forma de um pó, como um leito de carvão granular, como um bloco de carvão prensado ou bloco de carvão ex- trudado (ver, por exemplo, carvão ativo Norit). Em uma modalidade, o carvão ativado é adicionado em uma quantidade de cerca de 0,1 a 20% (peso / volume), 1 a 15% (peso / volume), 1 a 10% (peso / volu- me), 2 a 10% (peso / volume), 3 a 10% (peso / volume), 4 a 10% (peso / volume), 5 a 10% (peso / volume), 1 a 5% (peso / volume) ou 2 a 5% (peso / volume). A mistura é então agitada e deixada em repouso. Em uma modalidade, a mistura é deixada em repouso por cerca de 5, 10, 15, 20, 30, 45, 60, 90, 120, 180, 240 minutos ou mais. O carvão ativa- do é então removido. O carvão ativado pode ser removido, por exem- plo, por centrifugação ou filtração.
[00256] Em uma modalidade preferencial, a solução é filtrada atra- vés de carvão ativado imobilizado em uma matriz. A matriz pode ser qualquer meio filtrante poroso permeável à solução. A matriz pode compreender um material de suporte e / ou um material ligante. O ma- terial de suporte pode ser um polímero sintético ou um polímero de origem natural. Polímeros sintéticos adequados podem incluir poliesti- reno, poliacrilamida e polimetil metacrilato, enquanto polímeros de ori- gem natural podem incluir celulose, polissacarídeo e dextrano, agaro- se. Tipicamente, o material de suporte de polímero tem a forma de uma rede de fibras para fornecer rigidez mecânica. O material ligante pode ser uma resina. A matriz pode ter a forma de uma folha de mem- brana. Em uma modalidade, o carvão ativado imobilizado na matriz está na forma de um cartucho de carvão de fluxo passante. Um cartu- cho é uma entidade independente que contém carvão ativado em pó imobilizado na matriz e preparado na forma de uma folha de membra- na. A folha de membrana pode ser capturada em um suporte permeá- vel de plástico para formar um disco.
[00257] — Alternativamente, a folha de membrana pode ser enrolada em espiral. Para aumentar a área de superfície do filtro, vários discos podem ser empilhados uns sobre os outros. Em particular, os discos empilhados uns sobre os outros têm um tubo central para coletar e remover do filtro a amostra tratada com carvão. A configuração dos discos empilhados pode ser lenticular.
[00258] O carvão ativado no filtro de carvão pode ser derivado de diferentes matérias-primas, por exemplo, turfa, linhito, madeira ou cas- ca de coco.
[00259] “Qualquer processo conhecido na técnica, tal como trata- mento com vapor ou químico, pode ser usado para ativar o carvão (por exemplo, carvão ativado com ácido fosfórico à base de madeira).
[00260] Na presente invenção, o carvão ativado imobilizado em uma matriz pode ser disposto em um alojamento para formar uma uni- dade de filtro independente. Cada unidade de filtro tem sua própria en- trada e saída para a solução a ser purificada. Exemplos de unidades de filtro que podem ser utilizadas na presente invenção são os cartu- chos de carvão da Cuno Inc. (Meriden, EUA) ou Pall Corporation (East Hill, EUA). Em particular, os filtros de zetacarbono CUNO são adequa- dos para uso na invenção. Esses filtros de carvão compreendem uma matriz de celulose na qual o pó de carvão ativado é aprisionado e liga- do por resina no lugar.
[00261] Em uma modalidade, o filtro de carvão ativado descrito acima tem uma classificação nominal em mícron de cerca de 0,01 - 100 micra, cerca de 0,05 - 100 micra, cerca de 0,1 - 100 micra, cerca de 0,2 - 100 micra, cerca de 0,3 - 100 micra, cerca de 0,4 - 100 micra, cerca de 0,5 - 100 micra, cerca de 0,6 - 100 micra, cerca de 0,7 - 100 micra, cerca de 0,8 - 100 micra, cerca de 0,9 - 100 micra, cerca de 1 - 100 micra, cerca de 1,25 - 100 micra, cerca de 1,5 - 100 micra, cerca de 1,75 - 100 micra, cerca de 2 - 100 micra, cerca de 3 - 100 micra,
cerca de 4 - 100 micra, cerca de 5 - 100 micra, cerca de 6 - 100 micra, cerca de 7 - 100 micra, cerca de 8 - 100 micra, cerca de 9 - 100 micra, cerca de 10 - 100 micra, cerca de 15 - 100 micra, cerca de 20 - 100 micra, cerca de 25 - 100 micra, cerca de 30 - 100 micra, cerca de 40 - 100 micra, cerca de 50 - 100 micra ou cerca de 75 - 100 micra.
[00262] Em uma modalidade, o filtro de carvão ativado descrito acima tem uma classificação nominal em mícron de cerca de 0,01 - 50 micra, cerca de 0,05 - 50 micra, cerca de 0,1 - 50 micra, cerca de 0,2 - 50 micra, cerca de 0,3 - 50 micra, cerca de 0,4 - 50 micra, cerca de 0,5 - 50 micra, cerca de 0,6 - 50 micra, cerca de 0,7 - 50 micra, cerca de 0,8 - 50 micra, cerca de 0,9 - 50 micra, cerca de 1 - 50 micra, cerca de 1,25 - 50 micra, cerca de 1,5 - 50 micra, cerca de 1,75 - 50 micra, cerca de 2 - 50 micra, cerca de 3 - 50 micra, cerca de 4 - 50 micra, cerca de 5 - 50 micra, cerca de 6 - 50 micra, cerca de 7 - 50 micra, cerca de 8 - 50 micra, cerca de 9 - 50 micra, cerca de 10 - 50 micra, cerca de 15 - 50 micra, cerca de 20 - 50 micra, cerca de 25 - 50 micra, cerca de 30 - 50 micra, cerca de 40 - 50 micra ou cerca de 50 - 50 mi- cra.
[00263] Em uma modalidade, o filtro de carvão ativado descrito acima tem uma classificação nominal em mícron de cerca de 0,01 - 25 micra, cerca de 0,05 - 25 micra, cerca de 0,1 - 25 micra, cerca de 0,2 - micra, cerca de 0,3 - 25 micra, cerca de 0,4 - 25 micra, cerca de 0,5 - 25 micra, cerca de 0,6 - 25 micra, cerca de 0,7 - 25 micra, cerca de 0,8 - 25 micra, cerca de 0,9 - 25 micra, cerca de 1 - 25 micra, cerca de 1,25 - 25 micra, cerca de 1,5 - 25 micra, cerca de 1,75 - 25 micra, cerca de 2 - 25 micra, cerca de 3 - 25 micra, cerca de 4 - 25 micra, cerca de 5 - 25 micra, cerca de 6 - 25 micra, cerca de 7 - 25 micra, cerca de 8 - 25 micra, cerca de 9 - 25 micra, cerca de 10 - 25 micra, cerca de 15 - 25 micra ou cerca de 20 - 25 micra.
[00264] Em uma modalidade, o filtro de carvão ativado descrito acima tem uma classificação nominal em mícron de cerca de 0,01 - 10 micra, cerca de 0,05 - 10 micra, cerca de 0,1 - 10 micra, cerca de 0,2 - micra, cerca de 0,3 - 10 micra, cerca de 0,4 - 10 micra, cerca de 0,5 - 10 micra, cerca de 0,6 - 10 micra, cerca de 0,7 - 10 micra, cerca de 0,8 - 10 micra, cerca de 0,9 - 10 micra, cerca de 1 - 10 micra, cerca de 1,25 - 10 micra, cerca de 1,5 - 10 micra, cerca de 1,75 - 10 micra, cerca de 2 - 10 micra, cerca de 3 - 10 micra, cerca de 4 - 10 micra, cerca de 5 - 10 micra, cerca de 6 - 10 micra, cerca de 7 - 10 micra, cerca de 8 - 10 micra ou cerca de 9 - 10 micra.
[00265] Em uma modalidade, o filtro de carvão ativado descrito acima tem uma classificação nominal em mícron de cerca de 0,01 - 8 micra, cerca de 0,05 - 8 micra, cerca de 0,1 - 8 micra, cerca de 0,2-8 micra, cerca de 0,3 - 8 micra, cerca de 0,4 - 8 micra, cerca de 0,5- 8 micra, cerca de 0,6 - 8 micra, cerca de 0,7 - 8 micra, cerca de 0,8 - 8 micra, cerca de 0,9 - 8 micra, cerca de 1 - 8 micra, cerca de 1,25-8 micra, cerca de 1,5 - 8 micra, cerca de 1,75 - 8 micra, cerca de 2-8 micra, cerca de 3 - 8 micra, cerca de 4 - 8 micra, cerca de 5 - 8 micra, cerca de 6 - 8 micra ou cerca de 7 - 8 micra.
[00266] Em uma modalidade, o filtro de carvão ativado descrito acima tem uma classificação nominal em mícron de cerca de 0,01 - 5 micra, cerca de 0,05 - 5 micra, cerca de 0,1 - 5 micra, cerca de 0,2- 5 micra, cerca de 0,3 - 5 micra, cerca de 0,4 - 5 micra, cerca de 0,5- 5 micra, cerca de 0,6 - 5 micra, cerca de 0,7 - 5 micra, cerca de 0,8 - 5 micra, cerca de 0,9 - 5 micra, cerca de 1 - 5 micra, cerca de 1,25-5 micra, cerca de 1,5 - 5 micra, cerca de 1,75 - 5 micra, cerca de 2- 5 micra, cerca de 3 - 5 micra ou cerca de 4 - 5 micra.
[00267] Em uma modalidade, o filtro de carvão ativado descrito acima tem uma classificação nominal em mícron de cerca de 0,01 - 2 micra, cerca de 0,05 - 2 micra, cerca de 0,1 - 2 micra, cerca de 0,2-2 micra, cerca de 0,3 - 2 micra, cerca de 0,4 - 2 micra, cerca de 0,5 - 2 micra, cerca de 0,6 - 2 micra, cerca de 0,7 - 2 micra, cerca de 0,8 - 2 micra, cerca de 0,9 - 2 micra, cerca de 1 - 2 micra, cerca de 1,25- 2 micra, cerca de 1,5 - 2 micra, cerca de 1,75 - 2 micra, cerca de 2 - 2 micra, cerca de 3 - 2 micra ou cerca de 4 - 2 micra.
[00268] Em uma modalidade, o filtro de carvão ativado descrito acima tem uma classificação nominal em mícron de cerca de 0,01 - 1 micra, cerca de 0,05 - 1 micra, cerca de 0,1 - 1 micra, cerca de 0,2-1 micra, cerca de 0,3 - 1 micra, cerca de 0,4 - 1 micra, cerca de 0,5 -1 micra, cerca de 0,6 - 1 micra, cerca de 0,7 - 1 micra, cerca de 0,8 - 1 micra ou cerca de 0,9 - 1 micra.
[00269] Em uma modalidade, o filtro de carvão ativado descrito acima tem uma classificação nominal em mícron de cerca de 0,05 - 50 micra, 0,1 - 25 micra 0,2 - 10, micra 0,1 - 10 micra, 0,2 - 5 micra ou 0,25 - 1 micra.
[00270] “Qualquer número dentro de qualquer uma das faixas acima é considerado como uma modalidade da descrição.
[00271] Em uma modalidade, a etapa de filtração por carvão ativa- do é conduzida a uma taxa de alimentação de 1 - 500 LMH, 10 - 500 LMH, 15 - 500 LMH, 20 - 500 LMH, 25 - 500 LMH, 30 - 500 LMH, 40 - 500 LMH, 50 - 500 LMH, 100 - 500 LMH, 125 - 500 LMH, 150 - 500 LMH, 200 - 500 LMH, 250 - 500 LMH, 300 - 500 LMH ou 400 - 500 LMH.
[00272] Em uma modalidade, a etapa de filtração por carvão ativa- do é conduzida a uma taxa de alimentação de 1 - 200 LMH, 10 - 200 LMH, 15 - 200 LMH, 20 - 200 LMH, 25 - 200 LMH, 30 - 200 LMH, 40 - 200 LMH, 50 - 200 LMH, 100 - 200 LMH, 125 - 200 LMH ou 150 - 200 LMH.
[00273] Em uma modalidade, a etapa de filtração por carvão ativa- do é conduzida a uma taxa de alimentação de 1 - 150 LMH, 10 - 150 LMH, 15 - 150 LMH, 20 - 150 LMH, 25 - 150 LMH, 30 - 150 LMH, 40 -
150 LMH, 50 - 150 LMH, 100 - 150 LMH ou 125 - 150 LMH.
[00274] Em uma modalidade, a etapa de filtração por carvão ativa- do é conduzida a uma taxa de alimentação de 1 - 100 LMH, 10 - 100 LMH, 15 - 100 LMH, 20 - 100 LMH, 25 - 100 LMH, 30 - 100 LMH, 40 - 100 LMH ou 50 - 100 LMH.
[00275] Em uma modalidade, a etapa de filtração por carvão ativa- do é conduzida a uma taxa de alimentação de 1 - 75 LMH, 5- 75 LMH, - 75 LMH, 15 - 75 LMH, 20 - 75 LMH, 25 - 75 LMH, 30 - 75 LMH, 35 - 75 LMH, 40 - 75 LMH, 45 - 75 LMH, 50 - 75 LMH, 55 - 75 LMH, 60 - 75 LMH, 65 - 75 LMH ou 70 - 75 LMH.
[00276] Em uma modalidade, a etapa de filtração por carvão ativa- do é conduzida a uma taxa de alimentação de 1 - 50 LMH, 5 - 50 LMH, 7 - 50 LMH, 10 - 50 LMH, 15 - 50 LMH, 20 - 50 LMH, 25 - 50 LMH, 30 - 50 LMH, 35 - 50 LMH, 40 - 50 LMH ou 45 - 50 LMH.
[00277] Qualquer número inteiro dentro de qualquer uma das faixas acima é considerado como uma modalidade da descrição.
[00278] Em uma modalidade, a etapa de filtração por carvão ativa- do é conduzida a uma taxa de alimentação de cerca de 1, cerca de 2, cerca de 5, cerca de 10, cerca de 15, cerca de 20, cerca de 25, cerca de 30, cerca de 35, cerca de 40, cerca de 45, cerca de 50, cerca de 55, cerca de 60, cerca de 65, cerca de 70, cerca de 75, cerca de 80, cerca de 85, cerca de 90, cerca de 95, cerca de 100, cerca de 110, cerca de 120, cerca de 130, cerca de 140, cerca de 150, cerca de 160, cerca de 170, cerca de 180, cerca de 190, cerca de 200, cerca de 225, cerca de 250, cerca de 300, cerca de 350, cerca de 400, cerca de 450, cerca de 500, cerca de 550, cerca de 600, cerca de 700, cerca de 800, cerca de 900, cerca de 950 ou cerca de 1000 LMH.
[00279] Em uma modalidade, a solução é tratada por um filtro de carvão ativado em que o filtro tem uma capacidade de filtro de 5 - 1000 L/m?,10-750L/m?,15-500 L/m?, 20 - 400 L/m?, 25-300 L/ m?,
- 250 L / m?, 40 - 200 L / m? ou 30 - 100 L/ m?.
[00280] “Qualquer número dentro de qualquer uma das faixas acima é considerado como uma modalidade da descrição.
[00281] Em uma modalidade, a solução é tratada por um filtro de carvão ativado em que o filtro tem uma capacidade de filtro de cerca de 5, cerca de 10, cerca de 15, cerca de 20, cerca de 25, cerca de 30, cerca de 35, cerca de 40, cerca de 45, cerca de 50, cerca de 55, cerca de 60, cerca de 65, cerca de 70, cerca de 75, cerca de 80, cerca de 85, cerca de 90, cerca de 100, cerca de 125, cerca de 150, cerca de 175, cerca de 200, cerca de 225, cerca de 250, cerca de 275, cerca de 300, cerca de 400, cerca de 500, cerca de 600, cerca de 700, cerca de 800, cerca de 900 ou cerca de 1000 L / m?.
[00282] Seoteorde contaminantes estiver acima do limite fixo após uma primeira etapa de filtração por carvão ativado, a dita etapa pode ser repetida. Em uma modalidade da presente invenção, 1, 2,3,4,5, 6, 7, 8, 9 ou 10 etapas de filtração por carvão ativado são realizadas. Em uma modalidade da presente invenção, 1, 2 ou 3 etapas de filtra- ção por carvão ativado são realizadas. Em uma modalidade da pre- sente invenção, 1 ou 2 etapas de filtração por carvão ativado são reali- zadas.
[00283] Em uma modalidade, a solução é tratada por filtros de car- vão ativado em série. Em uma modalidade, a solução é tratada por 1, 2,3,4,5,6,7, 8,9 ou 10 filtros de carvão ativado em série. Em uma modalidade, a solução é tratada por 2, 3, 4 ou 5 filtros de carvão ativa- do em série. Em uma modalidade, a solução é tratada por 2 filtros de carvão ativado em série. Em uma modalidade, a solução é tratada por 3 filtros de carvão ativado em série. Em uma modalidade, a solução é tratada por 4 filtros de carvão ativado em série. Em uma modalidade, a solução é tratada por 5 filtros de carvão ativado em série.
[00284] Em uma modalidade, a etapa de filtração por carvão ativa-
do é realizada em um modo de passagem única.
[00285] Em outra modalidade, a etapa de filtração por carvão ativa- do é realizada no modo de recirculação. Na dita modalidade (modo de recirculação), 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 ou 50 ciclos de filtração por carvão ativado são realizados. Em outra modalidade, 2, 3, 4, 5,6,7,8, 9 ou 10 ciclos de filtração por carvão ativado são realizados. Em uma modalidade, 2 ou 3 ciclos de filtração por carvão ativado são realiza- dos. Em uma modalidade, 2 ciclos de filtração por carvão ativado são realizados.
1.8 Filtragem Adicional Opcional
[00286] Uma vez que a solução foi tratada pela etapa de carvão ati- vado da seção 1.7 acima, a solução obtida (isto é, o filtrado) pode ser opcionalmente filtrada adicionalmente.
[00287] Em uma modalidade, a solução é submetida à microfiltra- ção. Em uma modalidade, a microfiltração é uma filtração frontal (filtra- ção perpendicular).
[00288] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma faixa de retenção nominal de cerca de 0,01 - 2 micra, cerca de 0,05 - 2 micra, cerca de 0,1 - 2 micra, cerca de 0,2 - 2 micra, cerca de 0,3 - 2 micra, cerca de 0,4 - 2 micra, cerca de 0,45 - 2 micra, cerca de 0,5 - 2 micra, cerca de 0,6 - 2 micra, cerca de 0,7 - 2 micra, cerca de 0,8 - 2 micra, cerca de 0,9 - 2 micra, cerca de 1 - 2 micra, cerca de 1,25 - 2 micra, cerca de 1,5 - 2 micra ou cerca de 1,75 - 2 micra.
[00289] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma faixa de retenção nominal de cerca de 0,01 - 1 micra, cerca de 0,05 - 1 micra, cerca de 0,1 - 1 micra, cerca de 0,2 - 1 micra, cerca de 0,3 - 1 micra, cerca de 0,4 - 1 micra,
cerca de 0,45 - 1 micra, cerca de 0,5 - 1 micra, cerca de 0,6 - 1 micra, cerca de 0,7 - 1 micra, cerca de 0,8 - 1 micra ou cerca de 0,9 - 1 micra.
[00290] “Qualquer número dentro de qualquer uma das faixas acima é considerado como uma modalidade da descrição.
[00291] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma classificação de retenção nomi- nal de cerca de 0,01, cerca de 0,05, cerca de 0,1, cerca de 0,2, cerca de 0,3, cerca de 0,4, cerca de 0,45, cerca de 0,5, cerca de 0,6, cerca de 0,7, cerca de 0,8, cerca de 0,9, cerca de 1,0, cerca de 1,1, cerca de 1,2, cerca de 1,3, cerca de 1,4, cerca de 1,5, cerca de 1,6, cerca de 1,7, cerca de 1,8, cerca de 1,9, ou cerca de 2,0 micra.
[00292] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma classificação de retenção nomi- nal de cerca de 0,2 mícron.
[00293] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma capacidade de filtro de 100 - 6000 L / m?, 200 - 6000 L / m?, 300 - 6000 L / m?, 400 - 6000 L / m?, 500 - 6000 L / m?, 750 - 6000 L / m2, 1000 - 6000 L / m?, 1500 - 6000 L / m?, 2000 - 6000 L / m?, 3000 - 6000 L / m? ou 4000 - 6000 L / m?.
[00294] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma capacidade de filtro de 100 - 4000 L / m?, 200 - 4000 L / m?, 300 - 4000 L / m?, 400 - 4000 L / m?, 500 - 4000 L / m?, 750 - 4000 L / m?, 1000 - 4000 L / m?, 1500 - 4000 L / m?, 2000 - 4000 L / m?, 2500 - 4000 L / m?, 3000 - 4000 L / m?, 3000 - 4000 L / m? ou 3500 - 4000 L / m?.
[00295] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma capacidade de filtro de 100 - 3750 L / m?, 200 - 3750 L / m?, 300 - 3750 L / m?, 400 - 3750 L / m?, 500 - 3750 L / m2, 750 - 3750 L / m?, 1000 - 3750 L / m2?, 1500 - 3750 L / m?, 2000 - 3750 L / m?, 2500 - 3750 L / m?, 3000 - 3750 L / m?, 3000 -
3750 L / m? ou 3500 - 3750 L / m?.
[00296] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma capacidade de filtro de 100 - 1250 L / m?, 200 - 1250 L / m?, 300 - 1250 L / m?, 400 - 1250 L / m?, 500 - 1250 L / m?, 750 - 1250 L / m? ou 1000 - 1250 L / m?.
[00297] “Qualquer número dentro de qualquer uma das faixas acima é considerado como uma modalidade da descrição.
[00298] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma capacidade de filtro de cerca de 100, cerca de 200, cerca de 300, cerca de 400, cerca de 550, cerca de 600, cerca de 700, cerca de 800, cerca de 900, cerca de 1000, cerca de 1100, cerca de 1200, cerca de 1300, cerca de 1400, cerca de 1500, cerca de 1600, cerca de 1700, cerca de 1800, cerca de 1900, cerca de 2000, cerca de 2100, cerca de 2200, cerca de 2300, cerca de 2400, cerca de 2500, cerca de 2600, cerca de 2700, cerca de 2800, cerca de 2900, cerca de 3000, cerca de 3100, cerca de 3200, cerca de 3300, cerca de 3400, cerca de 3500, cerca de 3600, cerca de 3700, cerca de 3800, cerca de 3900, cerca de 4000, cerca de 4100, cerca de 4200, cerca de 4300, cerca de 4400, cerca de 4500, cerca de 4600, cerca de 4700, cerca de 4800, cerca de 4900, cerca de 5000, cerca de 5250, cerca de 5500, cerca de 5750 ou cerca de 6000 L / m?.
1.9 Ultrafiltração / Diafiltração
[00299] Uma vez que a solução foi tratada pela etapa de filtração por carvão ativado da seção 1.7 acima e / ou pela etapa de filtração adicional da seção 1.8 acima, a solução obtida (isto é, o filtrado) pode ser opcionalmente clarificada ainda por Ultrafiltração e / ou Diafiltra- ção.
[00300] Em uma modalidade da presente invenção, a solução (por exemplo, obtida na seção 1.7 ou 1.8 acima) é tratada por ultrafiltração.
[00301] Em uma modalidade, a solução é tratada por ultrafiltração e o peso molecular de corte da membrana está na faixa de de cerca de kDa - 1000 kDa. Em uma modalidade, o peso molecular de corte da membrana está na faixa de cerca de 10 kDa - 750 kDa. Em uma mo- dalidade, o peso molecular de corte da membrana está na faixa de cerca de 10 kDa - 500 kDa. Em uma modalidade, o peso molecular de corte da membrana está na faixa de cerca de 10 kDa - 300 kDa. Em uma modalidade, o peso molecular de corte da membrana está na fai- xa de cerca de 10 kDa - 100 kDa. Em uma modalidade, o peso mole- cular de corte da membrana está na faixa de cerca de 10 kDa - 50 kDa. Em uma modalidade, o peso molecular de corte da membrana está na faixa de cerca de 10 kDa - 30 kxDa. Em uma modalidade, o pe- so molecular de corte da membrana está na faixa de cerca de 5 kDa - 1000 kDa, cerca de 10 kDa - 1000 kDa cerca de 20 kDa - 1000 kDa, cerca de 30 kDa - 1000 kDa, cerca de 40 kDa - 1000 kDa, cerca de 50 kDa - 1000 kDa, cerca de 75 kDa - 1000 kDa, cerca de 100 kDa - 1000 kDa, cerca de 150 kDa - 1000 kDa, cerca de 200 kDa - 1000 kDa, cer- ca de 300 kDa - 1000 kDa, cerca de 400 kDa - 1000 kDa, cerca de 500 kDa - 1000 kDa ou cerca de 750 kDa - 1000 kDa.
[00302] Em uma modalidade, o peso molecular de corte da mem- brana está na faixa de de cerca de 5 kDa - 500 kDa, cerca de 10 kDa - 500 kDa, cerca de 20 kDa - 500 kDa, cerca de 30 kDa - 500 kDa, cer- ca de 40 kDa - 500 kDa, cerca de 50 kDa - 500 kDa, cerca de 75 kDa - 500 kDa, cerca de 100 kDa - 500 kDa, cerca de 150 kDa - 500 kDa, cerca de 200 kDa - 500 kDa, cerca de 300 kDa - 500 kDa ou cerca de 400 kDa - 500 kDa.
[00303] Em uma modalidade, o peso molecular de corte da mem- brana está na faixa de cerca de 5 kDa - 300 kDa, cerca de 10 kDa - 300 kDa, cerca de 20 kDa - 300 kDa, cerca de 30 kDa - 300 kDa, cer- ca de 40 kDa - 300 kDa, cerca de 50 kDa - 300 kDa, cerca de 75 kDa - 300 kDa, cerca de 100 kDa - 300 kDa, cerca de 150 kDa - 300 kDa ou cerca de 200 kDa - 300 kDa.
[00304] Em uma modalidade, o peso molecular de corte da mem- brana está na faixa de cerca de 5 kDa - 100 kDa, cerca de 10 kDa - 100 kDa, cerca de 20 kDa - 100 kDa, cerca de 30 kDa - 100 kDa, cer- ca de 40 kDa - 100 kDa, cerca de 50 kDa - 100 kDa ou cerca de 75 kDa - 100 kDa.
[00305] Em uma modalidade, o peso molecular de corte da mem- brana é de cerca de 5 kDa, cerca de 10 kDa, cerca de 20 kDa, cerca de 30 kDa, cerca de 40 kDa, cerca de 50 kDa, cerca de 60 kDa, cerca de 70 kDa, cerca de 80 kDa, cerca de 90 kDa, cerca de 100 kDa, cer- ca de 110 kDa, cerca de 120 kDa, cerca de 130 kDa, cerca de 140 kDa, cerca de 150 kDa, cerca de 200 kDa, cerca de 250 kDa, cerca de 300 kDa, cerca de 400 kDa, cerca de 500 kDa, cerca de 750 kDa ou cerca de 1000 kDa.
[00306] Em uma modalidade, o fator de concentração da etapa de ultrafiltração é de cerca de 1,5 a cerca de 10,0. Em uma modalidade, o fator de concentração é de cerca de 2,0 a cerca de 8,0. Em uma mo- dalidade, o fator de concentração é de cerca de 2,0 a cerca de 5,0.
[00307] Em uma modalidade, o fator de concentração é de cerca de 1,5, cerca de 2,0, cerca de 2,5, cerca de 3,0, cerca de 3,5, cerca de 4,0, cerca de 4,5, cerca de 5,0, cerca de 5,5, cerca de 6,0, cerca de 6,5, cerca de 7,0, cerca de 7,5, cerca de 8,0, cerca de 8,5, cerca de 9,0, cerca de 9,5 ou cerca de 10,0. Em uma modalidade, o fator de concentração é de cerca de 2,0, cerca de 3,0, cerca de 4,0, cerca de 5,0 ou cerca de 6,0.
[00308] Em uma modalidade da presente invenção, a solução (por exemplo, o filtrado obtido na seção 1.7 ou 1.8 acima) é tratada por dia- filtração.
[00309] Em uma modalidade da presente invenção, a solução obti- da após ultrafiltração (UF), conforme descrito na presente seção aci-
ma, é ainda tratada por diafiltração (tratamento UF / DF).
[00310] A diafiltração (DF) é usada para trocar o produto para uma solução tampão desejada (ou somente água). Em uma modalidade, a diafiltração é usada para alterar as propriedades químicas da solução retida sob volume constante. As partículas indesejadas passam atra- vés de uma membrana enquanto a composição do fluxo de alimenta- ção é alterada para um estado mais desejável por meio da adição de uma solução de substituição (uma solução tampão, uma solução sali- na, uma solução salina tamponada ou água).
[00311] Em uma modalidade, a solução de substituição é água.
[00312] Em uma modalidade, a solução de substituição é solução salina em água. Em algumas modalidades, o sal é selecionado a partir do grupo que consiste de cloreto de magnésio, cloreto de potássio, cloreto de sódio e uma combinação dos mesmos. Em uma modalidade particular, o sal é cloreto de sódio. Em uma modalidade, a solução de substituição é o cloreto de sódio a cerca de 1, cerca de 5, cerca de 10, cerca de 15, cerca de 20, cerca de 25, cerca de 30, cerca de 35, cerca de 40, cerca de 45, cerca de 50, cerca de 55, cerca de 60, cerca de 65, cerca de 70, cerca de 80, cerca de 90, cerca de 100, cerca de 110, cerca de 120, cerca de 130, cerca de 140, cerca de 150, cerca de 160, cerca de 170, cerca de 180, cerca de 190, cerca de 200, cerca de 250, cerca de 300, cerca de 350, cerca de 400, cerca de 450 ou cerca de 500 mM. Em uma modalidade particular, a solução de substituição é cloreto de sódio a cerca de 1, cerca de 5, cerca de 10, cerca de 15, cerca de 20, cerca de 25, cerca de 30, cerca de 35, cerca de 40, cerca de 45, cerca de 50, cerca de 55, cerca de 60, cerca de 65, cerca de 70, cerca de 80, cerca de 90, cerca de 100, cerca de 110, cerca de 120, cerca de 130, cerca de 140, cerca de 150, cerca de 160, cerca de 170, cerca de 180, cerca de 190, cerca de 200, cerca de 250 ou cerca de 300 mM. Em uma modalidade particular, a solução de substituição é cloreto de sódio a cerca de 25, cerca de 30, cerca de 35, cerca de 40, cerca de 45, cerca de 50, cerca de 55, cerca de 60, cerca de 65, cerca de 70, cerca de 80, cerca de 90 ou cerca de 100 mM.
[00313] Em uma modalidade, a solução de substituição é uma solu- ção tampão. Em uma modalidade, a solução de substituição é uma solução tampão em que o tampão é selecionado a partir do grupo que consiste de ácido N-(2-acetamido) -aminoetanossulfônico (ACES), um sal de ácido acético (acetato), ácido N-(2-acetamido)-iminodiacético (ADA), ácido 2-aminoetanossulfônico (AES, Taurina), amônia, 2-Amino -2-metil-1-propanol (AMP), 2-Amino-2-metil-1,3-propanodiol AMPD, ammediol, ácido — N-(1,1-Dimetil-2-hidroxietil)-3-amino-2-hidroxipropa- Onossulfônico (AMPSO), ácido N,N-Bis-(2-hidroxietil)-2-aminoetanos- sulfônico (BES), hidrogênio carbonato de sódio (bicarbonato), N,N'-Bis(2- hidroxietil)-glicina (bicina), [Bis-(2-hidroxietil) -imino] -tris- (hidroximetilme- tano) (BIS-Tris), 1,3-Bis [tris(hidroximetil)-metilamino] propano (BIS-Tris- Propano), ácido bórico, ácido dimetilarsínico (Cacodilato), ácido 3- (Ci- clohexilamino)-propanossulfônico (CAPS), ácido 3-(ciclohexilamino) -2- hidróxi-1-propanossulfônico (CAPSO), carbonato de sódio (Carbona- to), ácido ciclohexilaminoetanossulfônico (CHES), um sal de ácido cí- trico (citrato), ácido 3- [N-Bis (hidroxietil) amino] -2-hidroxipropanossul- fônico (DIPSO), um sal de ácido fórmico (formato), Glicina, Glicilglicina, ácido N-(2-Hidroxietil)-piperazina-N'-etanossulfônico (HEPES), ácido N- (2-hidroxietil)-piperazina-N'-3-propanossulfônico (HEPPS, EPPS), ácido N-(2-hidroxietil)-piperazina-N'-2-hidroxipropanossulfônico (HEPPSO), imidazol, um sal de ácido málico (Malato), um sal de ácido maleico (Maleato), ácido 2-(N-Morfolino) -etanossulfônico (MES), ácido 3-(N- Morfolino)-propanossulfônico (MOPS), ácido 3-(N-Morfolino)-2-hidroxi- propanossulfônico (MOPSO), um sal de ácido fosfórico (Fosfato), Pipe- razina-N,N'-bis (ácido 2-etanossulfônico) (PIPES), Piperazina-N, N'-bis (2 ácido -hidroxipropanossulfônico) (POPSO), piridina, um sal de ácido succínico (Succinato), ácido 3 - ([Tris (hidroximetil)-metil] -amino) - propanossulfônico (TAPS), ácido 3- [N-Tris (hidroximetil)-metilamino]- 2-hidroxipropanossulfônico (TAPSO), Trietanolamina (TEA), ácido 2- [Tris (hidroximetil)-metilamino]-etanossulfônico (TES), N-[Tris(hidroxi- metil)-metil] -glicina (Tricina) e Tris(hidroximetil)-aminometano (Tris).
[00314] Em uma modalidade, o tampão de diafiltração é seleciona- do a partir do grupo que consiste de um sal de ácido acético (acetato), um sal de ácido cítrico (citrato), um sal de ácido fórmico (formato), um sal de ácido málico (malato), um sal de ácido maleico (maleato), um sal de ácido fosfórico (fosfato) e um sal de ácido succínico (succinato). Em uma modalidade, o tampão de diafiltração é um sal de ácido cítrico (citrato). Em uma modalidade, o tampão de diafiltração é um sal de ácido succínico (succinato). Em uma modalidade, o tampão de diafil- tração é um sal de ácido fosfórico (fosfato). Em uma modalidade, o dito sal é um sal de sódio. Em uma modalidade, o dito sal é um sal de potássio.
[00315] Em uma modalidade, o pH do tampão de diafiltração é de cerca de 4,0 - 11,0, de cerca de 5,0 - 10,0, de cerca de 5,5 - 9,0, de cerca de 6,0 - 8,0, de cerca de 6,0 - 7,0, de cerca de 6,5 - 7,5, de cer- ca de 6,5 - 7,0 ou de cerca de 6,0 - 7,5. Qualquer número dentro de qualquer uma das faixas acima é considerado como uma modalidade da descrição.
[00316] Em uma modalidade, o pH do tampão de diafiltração é de cerca de 4,0, cerca de 4,5, cerca de 5,0, cerca de 5,5, cerca de 6,0, cerca de 6,5, cerca de 7,0, cerca de 7,5, cerca de 8,0, cerca de 8,5, cerca de 9,0, cerca de 9,5, cerca de 10,0, cerca de 10,5 ou cerca de 11,0. Em uma modalidade, o pH do tampão de diafiltração é cerca de 6,0, cerca de 6,5, cerca de 7,0, cerca de 7,5, cerca de 8,0, cerca de 8,5 ou cerca de 9,0. Em uma modalidade, o pH do tampão de diafiltra- ção é cerca de 6,5, cerca de 7,0 ou cerca de 7,5. Em uma modalidade,
o pH do tampão de diafiltração é de cerca de 6,0. Em uma modalida- de, o pH do tampão de diafiltração é de cerca de 6,5. Em uma modali- dade, o pH do tampão de diafiltração é de cerca de 7,0.
[00317] Em uma modalidade, a concentração do tampão de diafil- tração é de cerca de 0,01 mM - 100 mM, de cerca de 0,1 mM - 100 mM, de cerca de 0,5 mM - 100 mM, de cerca de 1 mM - 100 mM, de cerca de 2 mM - 100 mM, de cerca de 3 mM - 100 mM, de cerca de 4 mM - 100 MM, de cerca de 5 mM - 100 mM, de cerca de 6 mM - 100 mM, de cerca de 7 mM - 100 mM, de cerca de 8 mM - 100 mM, de cerca de 9 mM - 100 mM, de cerca de 10 mM - 100 mM, de cerca de 11 mM - 100 MM, de cerca de 12 mM - 100 mM, de cerca de 13 mM - 100 mM, de cerca de 14 mM - 100 mM, de cerca de 15 mM - 100 mM, de cerca de 16 mM - 100 mM, de cerca de 17 mM - 100 mM, de cerca de 18 mM - 100 mM, de cerca de 19 mM - 100 mM, de cerca de 20 mM - 100 mM, de cerca de 25 mM - 100 mM, de cerca de 30 mM - 100 mM, de cerca de 35 mM - 100 mM, de cerca de 40 mM - 100 mM, de cerca de 45 mM - 100 mM, de cerca de 50 mM - 100 mM, de cerca de 55 mM - 100 mM, de cerca de 60 mM - 100 mM, de cerca de 65 mM - 100 mM, de cerca de 70 mM - 100 mM, de cerca de 75 mM - 100 MM, de cerca de 80 mM - 100 mM, de cerca de 85 mM - 100 mM, seja de cerca de 90 mM - 100 mM ou de cerca de 95 mM - 100 mM.
[00318] Em uma modalidade, a concentração do tampão de diafil- tração é de cerca de 0,01 mM - 50 mM, de cerca de 0,1 mM - 50 mM, de cerca de 0,5 mM - 50 mM, de cerca de 1 mM - 50 mM, de cerca de 2 mM - 50 mM, de cerca de 3 mM - 50 mM, de cerca de 4 mM - 50 MM, de cerca de 5 mM - 50 mM, de cerca de 6 mM - 50 mM, de cerca de 7 mM - 50 MM, de cerca de 8 mM - 50 mM, de cerca de 9 mM - 50 mM, de cerca de 10 mM - 50 mM, de cerca de 11 mM - 50 mM, de cerca de 12 mM - 50 mM, de cerca de 13 mM - 50 mM, de cerca de 14 mM - 50 mM, de cerca de 15 mM - 50 mM, de cerca de 16 mM - 50 mM, de cerca de 17 mM - 50 mM, de cerca de 18 mM - 50 mM, de cerca de 19 mM - 50 mM, de cerca de 20 mM - 50 mM, de cerca de mM - 50 MM, de cerca de 30 mM - 50 mM, de cerca de 35 mM - 50 MM, de cerca de 40 mM - 50 mM ou de cerca de 45 mM - 50 mM.
[00319] Em uma modalidade, a concentração do tampão de diafil- tração é de cerca de 0,01 mM - 25 mM, de cerca de 0,1 mM - 25 mM, de cerca de 0,5 mM - 25 mM, de cerca de 1 mM - 25 mM, de cerca de 2 mM - 25 mM, de cerca de 3 mM - 25 mM, de cerca de 4 mM - 25 MM, de cerca de 5 mM - 25 mM, de cerca de 6 mM - 25 mM, de cerca de 7 mM - 25 mM, de cerca de 8 mM - 25 mM, de cerca de 9 mM - 25 mM, de cerca de 10 mM - 25 mM, de cerca de 11 mM - 25 mM, de cerca de 12 mM - 25 mM, de cerca de 13 mM - 25 mM, de cerca de 14 mM - 25 mM, de cerca de 15 mM - 25 mM, de cerca de 16 mM - 25 mM, de cerca de 17 mM - 25 mM, de cerca de 18 mM - 25 mM, de cerca de 19 mM - 25 mM ou de cerca de 20 MM - 25 mM.
[00320] Em uma modalidade, a concentração do tampão de diafil- tração é de cerca de 0,01 mM - 15 mM, de cerca de 0,1 MM - 15 mM, de cerca de 0,5 mM - 15 mM, de cerca de 1 MM - 15 mM, de cerca de 2 mM - 15 mM, de cerca de 3 mM - 15 mM, de cerca de 4 MM - 15 MM, de cerca de 5 mM - 15 mM, de cerca de 6 mM - 15 mM, de cerca de 7 mM - 15 mM, de cerca de 8 mM - 15 mM, de cerca de 9 mM - 15 mM, de cerca de 10 mM - 15 mM, de cerca de 11 mM - 15 mM, de cerca de 12 mM - 15 mM, de cerca de 13 mM - 15 mM ou de cerca de 14 MM - 15 mM.
[00321] Em uma modalidade, a concentração do tampão de diafil- tração é de cerca de 0,01 mM - 10 mM, de cerca de 0,1 MM - 10 mM, de cerca de 0,5 mM - 10 mM, de cerca de 1 MM - 10 mM, de cerca de 2 mM - 10 mM, de cerca de 3 mM - 10 mM, de cerca de 4 mM - 10 MM, de cerca de 5 mM - 10 mM, de cerca de 6 mM - 10 mM, de cerca de 7 mM - 10 mM, de cerca de 8 mM - 10 mM ou de cerca de 9 mM -
MM.
[00322] “Qualquer número dentro de qualquer uma das faixas acima é considerado como uma modalidade da descrição.
[00323] Em uma modalidade, a concentração do tampão de diafil- tração é de cerca de 0,01 mM, cerca de 0,05 mM, cerca de 0,1 mM, cerca de 0,2 mM, cerca de 0,3 mM, cerca de 0,4 mM, cerca de 0,5 MM, cerca de 0,6 mM, cerca de 0,7 mM, cerca de 0,8 mM, cerca de 0,9 mM, cerca de 1 mM, cerca de 2 mM, cerca de 3 mM, cerca de 4 MM, cerca de 5 mM, cerca de 6 mM, cerca de 7 mM, cerca de 8 mM, cerca de 9 mM, cerca de 10 mM, cerca de 11 mM, cerca de 12 mM, cerca de 13 mM, cerca de 14 mM, cerca de 15 mM, cerca de 16 mM, cerca de 17 mM, cerca de 18 mM, cerca de 19 mM, cerca de 20 mM, cerca de 25 mM, cerca de 30 mM, cerca de 35 mM, cerca de 40 mM, cerca de 45 mM, cerca de 50 mM, cerca de 55 mM, cerca de 60 mM, cerca de 65 mM, cerca de 70 mM, cerca de 75 mM, cerca de 80 mM, cerca de 85 mM, cerca de 90 mM, cerca de 95 ou cerca de 100 mM.
[00324] Em uma modalidade, a concentração do tampão de diafil- tração é de cerca de 0,1 mM, cerca de 0,2 mM, cerca de 1 mM, cerca de 5 mM, cerca de 10 mM, cerca de 15 mM, cerca de 20 mM, cerca de mM, cerca de 30 mM, cerca de 40 mM, ou cerca de 50 mM. Em uma modalidade, a concentração do tampão de diafiltração é de cerca de 30 mM. Em uma modalidade, a concentração do tampão de diafil- tração é de cerca de 25 mM. Em uma modalidade, a concentração do tampão de diafiltração é de cerca de 20 MM. Em uma modalidade, a concentração do tampão de diafiltração é de cerca de 15 mM. Em uma modalidade, a concentração do tampão de diafiltração é de cerca de 10 MM.
[00325] Em uma modalidade, a solução tampão de diafiltração compreende um sal. Em algumas modalidades, o sal é selecionado a partir do grupo que consiste de cloreto de magnésio, cloreto de potás-
sio, cloreto de sódio e uma combinação dos mesmos. Em uma moda- lidade particular, o sal é cloreto de sódio. Em uma modalidade particu- lar, a solução tampão de diafiltração compreende cloreto de sódio a cerca de 1, cerca de 5, cerca de 10, cerca de 15, cerca de 20, cerca de 25, cerca de 30, cerca de 35, cerca de 40, cerca de 45, cerca de 50, cerca de 55, cerca de 60, cerca de 65, cerca de 70, cerca de 80, cerca de 90, cerca de 100, cerca de 110, cerca de 120, cerca de 130, cerca de 140, cerca de 150, cerca de 160, cerca de 170, cerca de 180, cerca de 190, cerca de 200, cerca de 250 ou cerca de 300 mM.
[00326] Em uma modalidade da presente invenção, o número de diavolumes é de pelo menos 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 ou 50. Em uma modalidade da presente invenção, o número de diavolumes é de cerca 1, cerca de 2, cerca de 3, cerca de 4, cerca de 5, cerca de 6, cerca de 7, cerca de 8, cerca de 9, cerca de 10, cerca de 11, cerca de 12, cerca de 13, cerca de 14, cerca de 15, cerca de 16, cerca de 17, cerca de 18, cerca de 19, cerca de 20, cerca de 21, cerca de 22, cerca de 23, cerca de 24, cerca de 25, cerca de 26, cerca de 27, cerca de 28, cerca de 29, cerca de 30, cerca de 31, cerca de 32, cerca de 33, cerca de 34, cerca de 35, cerca de 36, cerca de 37, cerca de 38, cerca de 39, cerca de 40, cerca de 41, cerca de 42, cerca de 43, cerca de 44, cerca de 45, cerca de 46, cerca de 47, cerca de 48, cerca de 49, cerca de 50, cerca de 55, cerca de 60, cerca de 65, cerca de 70, cerca de 75, cerca de 80, cerca de 85, cerca de 90, cerca de 95 ou cerca de
100. Em uma modalidade da presente invenção, o número de diavo- lumes é cerca de 5, cerca de 6, cerca de 7, cerca de 8, cerca de 9, cerca de 10, cerca de 11, cerca de 12, cerca de 13, cerca de 14 ou cerca de 15.
[00327] Em uma modalidade da presente invenção, as etapas de Ultrafiltração e Diafiltração são realizadas a temperaturas entre cerca de 20ºC e cerca de 90ºC. Em uma modalidade, as etapas de Ultrafil-
tração e Diafiltração são realizadas a uma temperatura entre cerca de 35ºC e cerca de 80ºC, a uma temperatura entre cerca de 40ºC e cerca de 70ºC, a uma temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 65ºC, a uma temperatura entre cerca de 50ºC e cerca de 60ºC, a uma tempe- ratura entre cerca de 50ºC e cerca de 55ºC, a uma temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC ou a uma temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC. Qualquer número dentro de qualquer uma das faixas acima é considerado como uma modalidade da descrição.
[00328] Em uma modalidade, as etapas de ultrafiltração e diafiltra- ção são realizadas a uma temperatura de cerca de 20ºC, cerca de 21ºC, cerca de 22ºC, cerca de 23ºC, cerca de 24ºC, cerca de 25ºC, cerca de 26ºC, cerca de 27ºC, cerca de 28ºC, cerca de 29ºC, cerca de 30ºC, cerca de 31ºC, cerca de 32ºC, cerca de 33ºC, cerca de 34ºC, cerca de 35ºC, cerca de 36ºC, cerca de 37ºC, cerca de 38ºC, cerca de 39ºC, cerca de 40ºC, cerca de 41ºC, cerca de 42ºC, cerca de 43ºC, cerca de 44ºC, cerca de 45ºC, cerca de 46ºC, cerca de 47ºC, cerca de 48ºC, cerca de 49ºC, cerca de 50ºC, cerca de 51ºC, cerca de 52ºC, cerca de 53ºC, cerca de 54ºC, cerca de 55ºC, cerca de 56ºC, cerca de 57ºC, cerca de 58ºC, cerca de 59ºC, cerca de 60ºC, cerca de 61ºC, cerca de 62ºC, cerca de 63ºC, cerca de 64ºC, cerca de 65ºC, cerca de 66ºC, cerca de 67ºC, cerca de 68ºC, cerca de 69ºC, cerca de 70ºC, cerca de 71ºC, cerca de 72ºC, cerca de 73ºC, cerca de 74ºC, cerca de 75ºC, cerca de 76ºC, cerca de 77ºC, cerca de 78ºC, cerca de 79ºC ou cerca de 80ºC. Em uma modalidade, as etapas de ultrafiltração e diafil- tração são realizadas a uma temperatura de cerca de 50ºC.
[00329] Em uma modalidade da presente invenção, a etapa de dia- filtração é realizada a uma temperatura entre cerca de 20ºC e cerca de 90ºC. Em uma modalidade, a etapa de diafiltração é realizada a uma temperatura entre cerca de 35ºC e cerca de 80ºC, a uma temperatura entre cerca de 40ºC e cerca de 70ºC, a uma temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 65ºC, em temperatura entre cerca de 50ºC e cerca de 60ºC, a temperatura entre cerca de 50ºC e cerca de 55ºC, a tempe- ratura entre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC ou a temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC. Qualquer número dentro de qualquer uma das faixas acima é considerado como uma modalidade da descri- ção.
[00330] Em uma modalidade, a etapa de diafiltração é realizada a uma temperatura de cerca de 20ºC, cerca de 21ºC, cerca de 22ºC, cerca de 23ºC, cerca de 24ºC, cerca de 25ºC, cerca de 26ºC, cerca de 27ºC, cerca de 28ºC, cerca de 29ºC, cerca de 30ºC, cerca de 31ºC, cerca de 32ºC, cerca de 33ºC, cerca de 34ºC, cerca de 35ºC, cerca de 36ºC, cerca de 37ºC, cerca de 38ºC, cerca de 39ºC, cerca de 40ºC, cerca de 41ºC, cerca de 42ºC, cerca de 43ºC, cerca de 44ºC, cerca de 45ºC, cerca de 46ºC, cerca de 47ºC, cerca de 48ºC, cerca de 49ºC, cerca de 50ºC, cerca de 51ºC, cerca de 52ºC, cerca de 53ºC, cerca de 54ºC, cerca de 55ºC, cerca de 56ºC, cerca de 57ºC, cerca de 58ºC, cerca de 59ºC, cerca de 60ºC, cerca de 61ºC, cerca de 62ºC, cerca de 63ºC, cerca de 64ºC, cerca de 65ºC, cerca de 66ºC, cerca de 67ºC, cerca de 68ºC, cerca de 69ºC, cerca de 70ºC, cerca de 71ºC, cerca de 72ºC, cerca de 73ºC, cerca de 74ºC, cerca de 75ºC, cerca de 76ºC, cerca de 77ºC, cerca de 78ºC, cerca de 79ºC ou cerca de 80ºC. Em uma modalidade, a etapa de diafiltração é realizada a uma temperatu- ra de cerca de 50ºC.
[00331] Em uma modalidade da presente invenção, a etapa de ul- trafiltração é realizada a uma temperatura entre cerca de 20ºC e cerca de 90ºC. Em uma modalidade, a etapa de ultrafiltração é realizada a uma temperatura entre cerca de 35ºC e cerca de 80ºC, a uma tempe- ratura entre cerca de 40ºC e cerca de 70ºC, a uma temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 65ºC, a uma temperatura entre cerca de 50ºC e cerca de 60ºC, a uma temperatura entre cerca de 50ºC e cerca de 55ºC, a uma temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC ou a uma temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC. Qualquer nú- mero dentro de qualquer uma das faixas acima é considerado como uma modalidade da descrição.
[00332] Em uma modalidade, a etapa de ultrafiltração é realizada a uma temperatura de cerca de 20ºC, cerca de 21ºC, cerca de 22ºC, cerca de 23ºC, cerca de 24ºC, cerca de 25ºC, cerca de 26ºC, cerca de 27ºC, cerca de 28ºC, cerca de 29ºC, cerca de 30ºC, cerca de 31ºC, cerca de 32ºC, cerca de 33ºC, cerca de 34ºC, cerca de 35ºC, cerca de 36ºC, cerca de 37ºC, cerca de 38ºC, cerca de 39ºC, cerca de 40ºC, cerca de 41ºC, cerca de 42ºC, cerca de 43ºC, cerca de 44ºC, cerca de 45ºC, cerca de 46ºC, cerca de 47ºC, cerca de 48ºC, cerca de 49ºC, cerca de 50ºC, cerca de 51ºC, cerca de 52ºC, cerca de 53ºC, cerca de 54ºC, cerca de 55ºC, cerca de 56ºC, cerca de 57ºC, cerca de 58ºC, cerca de 59ºC, cerca de 60ºC, cerca de 61ºC, cerca de 62ºC, cerca de 63ºC, cerca de 64ºC, cerca de 65ºC, cerca de 66ºC, cerca de 67ºC, cerca de 68ºC, cerca de 69ºC, cerca de 70ºC, cerca de 71ºC, cerca de 72ºC, cerca de 73ºC, cerca de 74ºC, cerca de 75ºC, cerca de 76ºC, cerca de 77ºC, cerca de 78ºC, cerca de 79ºC ou cerca de 80ºC. Em uma modalidade, a etapa de ultrafiltração é realizada a uma tempera- tura de cerca de 50ºC.
1.10 Homogeneização / Dimensionamento
[00333] Um polissacarídeo pode se tornar ligeiramente reduzido em tamanho durante os procedimentos de purificação.
[00334] Em uma modalidade, a solução purificada de polissacarí- deo da presente invenção (por exemplo, obtida por ultrafiltração e / ou diafiltração da seção 1.9) não é dimensionada.
[00335] Em uma modalidade, o polissacarídeo pode ser homoge- neizado por técnicas de dimensionamento. Pode ser usado dimensio- namento mecânico ou químico. A hidrólise química pode ser conduzi-
da usando, por exemplo, ácido acético. O dimensionamento mecânico pode ser conduzido usando cisalhamento de homogeneização de alta pressão.
[00336] Portanto, em uma modalidade, a solução purificada de po- lissacarídeo obtido por ultrafiltração e / ou diafiltração da seção 1.9 é dimensionada para um peso molecular alvo.
[00337] Conforme usado neste documento, o termo "peso molecu- lar" de polissacarídeo refere-se ao peso molecular calculado, por exemplo, por cromatografia de exclusão por tamanho (SEC) combina- da com detector de espalhamento multiangular de luz laser (MALLS).
[00338] Em algumas modalidades, o polissacarídeo purificado é di- mensionado para um peso molecular entre cerca de 5 kDa e cerca de
4.000 kDa. Em outras dessas modalidades, o polissacarídeo purificado é dimensionado para um peso molecular entre cerca de 10 kDa e cer- ca de 4.000 kDa. Em outras dessas modalidades, o polissacarídeo pu- rificado é dimensionado para um peso molecular entre cerca de 50 kDa e cerca de 4.000 kDa. Em outras dessas modalidades, o polissa- carídeo purificado é dimensionado para um peso molecular entre cerca de 50 kDa e cerca de 3.500 kDa; entre cerca de 50 kDa e cerca de
3.000 kDa; entre cerca de 50 kDa e cerca de 2.500 kDa; entre cerca de 50 kDa e cerca de 2.000 kDa; entre cerca de 50 kDa e cerca de
1.750 kDa; cerca de entre cerca de 50 kDa e cerca de 1.500 kDa; en- tre cerca de 50 kDa e cerca de 1.250 kDa; entre cerca de 50 kDa e cerca de 1.000 kDa; entre cerca de 50 kDa e cerca de 750 kDa; entre cerca de 50 kDa e cerca de 500 kDa; entre cerca de 100 kDa e cerca de 4.000 kDa; entre cerca de 100 kDa e cerca de 3.500 kDa; cerca de 100 kDa e cerca de 3.000 kDa; cerca de 100 kDa e cerca de 2.500 kDa; cerca de 100 kDa e cerca de 2.250 kDa; entre cerca de 100 kDa e cerca de 2.000 kDa; entre cerca de 100 kDa e cerca de 1.750 kDa; entre cerca de 100 kDa e cerca de 1.500 kDa; entre cerca de 100 kDa e cerca de 1.250 kDa; entre cerca de 100 kDa e cerca de 1.000 kDa; entre cerca de 100 kDa e cerca de 750 kDa; entre cerca de 100 kDa e cerca de 500 kDa; entre cerca de 200 kDa e cerca de 4.000 kDa; entre cerca de 200 kDa e cerca de 3.500 kDa; entre cerca de 200 kDa e cer- ca de 3.000 kDa; entre cerca de 200 kDa e cerca de 2.500 kDa; entre cerca de 200 kDa e cerca de 2.250 kDa; entre cerca de 200 kDa e cer- ca de 2.000 kDa; entre cerca de 200 kDa e cerca de 1.750 kDa; entre cerca de 200 kDa e cerca de 1.500 kDa; entre cerca de 200 kDa e cer- ca de 1.250 kDa; entre cerca de 200 kDa e cerca de 1.000 kDa; entre cerca de 200 kDa e cerca de 750 kDa; ou entre cerca de 200 kDa e cerca de 500 kDa.
Em outras dessas modalidades, o polissacarídeo purificado é dimensionado para um peso molecular entre cerca de 250 kDa e cerca de 3.500 kDa; entre cerca de 250 kDa e cerca de 3.000 kDa; entre cerca de 250 kDa e cerca de 2.500 kDa; entre cerca de 250 kDa e cerca de 2.000 kDa; entre cerca de 250 kDa e cerca de 1.750 kDa; cerca de entre cerca de 250 kDa e cerca de 1.500 kDa; entre cerca de 250 kDa e cerca de 1.250 kDa; entre cerca de 250 kDa e cer- ca de 1.000 kDa; entre cerca de 250 kDa e cerca de 750 kDa; entre cerca de 250 kDa e cerca de 500 kDa; entre cerca de 300 kDa e cerca de 4.000 kDa; entre cerca de 300 kDa e cerca de 3.500 kDa; cerca de 300 kDa e cerca de 3.000 kDa; cerca de 300 kDa e cerca de 2.500 kDa; cerca de 300 kDa e cerca de 2.250 kDa; entre cerca de 300 kDa e cerca de 2.000 kDa; entre cerca de 300 kDa e cerca de 1.750 kDa; entre cerca de 300 kDa e cerca de 1.500 kDa; entre cerca de 300 kDa e cerca de 1.250 kDa; entre cerca de 300 kDa e cerca de 1.000 kDa; entre cerca de 300 kDa e cerca de 750 kDa; entre cerca de 300 kDa e cerca de 500 kDa; entre cerca de 500 kDa e cerca de 4.000 kDa; entre cerca de 500 kDa e cerca de 3.500 kDa; entre cerca de 500 kDa e cer- ca de 3.000 kDa; entre cerca de 500 kDa e cerca de 2.500 kDa; entre cerca de 500 kDa e cerca de 2.250 kDa; entre cerca de 500 kDa e cer-
ca de 2.000 kDa; entre cerca de 500 kDa e cerca de 1.750 kDa; entre cerca de 500 kDa e cerca de 1.500 kDa; entre cerca de 500 kDa e cer- ca de 1.250 kDa; entre cerca de 500 kDa e cerca de 1.000 kDa; entre cerca de 500 kDa e cerca de 750 kDa; ou entre cerca de 500 kDa e cerca de 600 kDa.
[00339] Qualquer número dentro de qualquer uma das faixas acima é considerado como uma modalidade da descrição.
[00340] Em algumas modalidades, o polissacarídeo purificado é di- mensionado para um peso molecular de cerca de 5 kDa, cerca de 10 kDa, cerca de 15 kDa, cerca de 20 kDa, cerca de 25 kDa, cerca de 30 kDa, cerca de 35 kDa, cerca de 40 kDa, cerca de 45 kDa, cerca de 50 kDa, cerca de 75 kDa, cerca de 90 kDa, cerca de 100 kDa, cerca de 150 kDa, cerca de 200 kDa, cerca de 250 kDa, cerca de 300 kDa, cer- ca de 350 kDa, cerca de 400 kDa, cerca de 450 kDa, cerca de 500 kDa, cerca de 550 kDa, cerca de 600 kDa, cerca de 650 kDa, cerca de 700 kDa, cerca de 750 kDa, cerca de 800 kDa, cerca de 850 kDa, cer- ca de 900 kDa, cerca de 950 kDa, cerca de 1000 kDa, cerca de 1250 kDa, cerca de 1500 kDa, cerca de 1750 kDa, cerca de 2000 kDa, cer- ca de 2250 kDa, cerca de 2500 kDa, cerca de 2750 kDa, cerca de 3000 kDa, cerca de 3250 kDa, cerca de 3500 kDa, cerca de 3750 kDa ou cerca de 4.000 kDa
[00341] Em uma modalidade preferencial, os polissacarídeos purifi- cados são polissacarídeos capsulares a partir dos sorotipos 1, 3,4,5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15A, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F ou 33F de S. pneumoniae, em que o polissacarídeo capsular tem um peso molecular que está dentro de uma das faixas ou tem aproxi- madamente o tamanho conforme descrito no presente documento acima.
1.11 Filtração Estéril
[00342] Em uma modalidade, a solução purificada de polissacarí-
deo da invenção é filtrada de forma esterilizada.
[00343] Portanto, em uma modalidade, a etapa de ultrafiltração e / ou diafiltração da seção 1.9 pode ser opcionalmente seguida por uma etapa de filtração estéril.
[00344] Em uma modalidade, a etapa de homogeneização / dimen- sionamento da seção 1.10, se conduzida, pode opcionalmente ser se- guida por uma etapa de filtração estéril.
[00345] Em uma modalidade, qualquer uma das etapas das seções
1.2 a 1.8 pode ser opcionalmente seguida por uma etapa de filtração estéril.
[00346] Em uma modalidade, a filtração estéril é a filtração frontal (filtração perpendicular). Em uma modalidade, a filtração estéril é a filtração tangencial.
[00347] Emuma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração estéril em que o filtro tem uma faixa de retenção nominal de cerca de 0,01 - 0,2 mícron, cerca de 0,05 - 0,2 mícron, cerca de 0,1 - 0,2 mícron ou cerca de 0,15 - 0,2 mícron.
[00348] “Qualquer número dentro de qualquer uma das faixas acima é considerado como uma modalidade da descrição.
[00349] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração estéril em que o filtro tem uma faixa de retenção nominal de cerca de 0,05, cerca de 0,1, cerca de 0,15 ou cerca de 0,2 mícron.
[00350] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração estéril em que o filtro tem uma faixa de retenção nominal de cerca de 0,2 mícron.
[00351] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração estéril, em que o filtro tem uma capacidade de filtro de cerca de 25 - 1500 L / m?, 50 - 1500 L / m2, 75 - 1500 L / m?, 100 - 1500 L / m?, 150 - 1500 L / m?, 200 - 1500 L / m?, 250 - 1500 L / m?, 300 - 1500 L /m?, 350 - 1500 L / m?, 400 - 1500 L / m?, 500 - 1500 L / m?, 750 -
1500 L / m2, 1000 - 1500 L / m? ou 1250 - 1500 L / m?.
[00352] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração estéril, em que o filtro tem uma capacidade de filtro de cerca de 25 - 1000 L / m?, 50 - 1000 L / m2, 75 - 1000 L / m?, 100 - 1000 L / m?, 150 - 1000 L / m?, 200 - 1000 L / m?, 250 - 1000 L / m?, 300 - 1000 L/m?, 350 - 1000 L / m?, 400 - 1000 L / m?, 500 - 1000 L/m2 ou 750 - 1000 L / m?.
[00353] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração estéril, em que o filtro tem uma capacidade de filtro de 25 - 500 L / m?, 50 - 500 L / m?, 75 - 500 L / m?, 100 - 500 L / m?, 150 - 500 L / m?, 200 - 500 L / m?, 250 - 500 L / m?, 300 - 500 L / m?, 350 - 500 L / m? ou 400 - 500 L / m?.
[00354] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração estéril, em que o filtro tem uma capacidade de filtro de 25 - 300 L / m?, 50 - 300 L / m?, 75 - 300 L / m?, 100 - 300 L / m?, 150 - 300 L /m?, 200 - 300 L / m? ou 250 - 300 L / m?.
[00355] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração estéril em que o filtro tem uma capacidade de filtro de 25 - 250 L/m?, 50 - 250 L/m?, 75 - 250 L/m?, 100 - 250 L/m? ou 150 - 250 L / m?, 200 - 250 L/ m?.
[00356] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de filtração estéril em que o filtro tem uma capacidade de filtro de 25 - 100 L/m?,50- 100 L/m2 ou 75- 100 L/m?.
[00357] “Qualquer número dentro de qualquer uma das faixas acima é considerado como uma modalidade da descrição.
[00358] Em uma modalidade, a solução é tratada por uma etapa de microfiltração em que o filtro tem uma capacidade de filtro de cerca de 25, cerca de 50, cerca de 75, cerca de 100, cerca de 150, cerca de 200, cerca de 250, cerca de 300, cerca de 350, cerca de 400, cerca de 500, cerca de 600, cerca de 700, cerca de 800, cerca de 900, cerca de
1000, cerca de 1100, cerca de 1200, cerca de 1300, cerca de 1400 ou cerca de 1500 L / m?.
1.12 Material Final
[00359] O polissacarídeo pode ser finalmente preparado como uma solução líquida.
[00360] O polissacarídeo pode ser adicionalmente processado (por exemplo, liofiizado como um pó seco, ver WO 2006/110381). Portan- to, em uma modalidade, o polissacarídeo é um pó seco. Em uma mo- dalidade, o polissacarídeo é um bolo liofilizado.
2 Usos dos Polissacarídeos Purificados
[00361] O polissacarídeo purificado pelo método da presente inven- ção pode ser usado como antígenos. Polissacarídeos simples são usados como antígenos em vacinas (ver vacina pneumocócica polis- sacarídica não conjugada 23-valente Pneumovax).
[00362] O polissacarídeo purificado pelo método da presente in- venção também pode ser conjugado à(s) proteína(s) transportadora(s) para obter um glicoconjugado.
2.1 Glicoconjugados
[00363] O polissacarídeo purificado pelo método da presente inven- ção pode ser conjugado à(s) proteína(s) transportadora(s) para obter um glicoconjugado.
[00364] Para os fins da invenção, o termo “glicoconjugado' indica um sacarídeo covalentemente ligado a uma proteína transportadora.
Em uma modalidade, um sacarídeo está ligado diretamente a uma pro- teína transportadora. Em uma segunda modalidade, um sacarídeo é ligado a uma proteína transportadora através de um espaçador / ligan- te.
[00365] Em geral, a conjugação covalente de sacarídeos a trans- portadores aumenta a imunogenicidade dos sacarídeos, à medida que os converte de antígenos T-independentes em antígenos T-dependen-
tes, permitindo assim a iniciação para a memória imunológica. A con- jugação é particularmente útil para vacinas pediátricas.
[00366] Os polissacarídeos purificados pelo método da invenção podem ser ativados (por exemplo, quimicamente ativados) para torná- los capazes de reagir (por exemplo, com um ligante ou diretamente com a proteína transportadora) e, em seguida, incorporados em glico- conjugados, como descrito adicionalmente neste documento.
[00367] O polissacarídeo purificado pode ser dimensionado para um peso molecular alvo antes da conjugação, por exemplo, pelos mé- todos descritos na seção 1.11 acima. Portanto, em uma modalidade, o polissacarídeo purificado é dimensionado antes da conjugação. Em uma modalidade, o polissacarídeo purificado, conforme descrito neste documento, pode ser dimensionado antes da conjugação para obter um oligossacarídeo. Os oligossacarídeos têm um baixo número de unidades de repetição (tipicamente 5 a 15 unidades de repetição) e são tipicamente derivados por dimensionamento (por exemplo, hidróli- se) do polissacarídeo.
[00368] No entanto, de preferência, o sacarídeo a ser usado para a conjugação é um polissacarídeo. Polissacarídeos de alto peso molecu- lar são capazes de induzir certas respostas imunes de anticorpos de- vido aos epítopos presentes na superfície antigênica. O isolamento e a purificação de polissacarídeos de alto peso molecular são preferenci- almente considerados para uso nos conjugados da presente invenção.
[00369] — Portanto, em uma modalidade, o polissacarídeo é dimensi- onado e permanece um polissacarídeo. Em uma modalidade, o polis- sacarídeo não é dimensionado.
[00370] Em algumas modalidades, o polissacarídeo purificado antes da conjugação (após dimensionamento ou não dimensionado) tem um peso molecular entre 5 kDa e 4.000 kDa. Em outras dessas modalida- des, o polissacarídeo purificado tem um peso molecular entre 10 kDa e
4.000 kDa. Em outras dessas modalidades, o polissacarídeo purificado tem um peso molecular entre 50 kDa e 4.000 kDa. Em outras dessas modalidades, o polissacarídeo tem um peso molecular entre 50 kDa e
3.500 kDa; entre 50 kDa e 3.000 kDa; entre 50 kDa e 2.500 kDa; entre 50 kDa e 2.000 kDa; entre 50 kDa e 1.750 kDa; entre 50 kDa e 1.500 kDa; entre 50 kDa e 1.250 kDa; entre 50 kDa e 1.000 kDa; entre 50 kDa e 750 kDa; entre 50 kDa e 500 kDa; entre 100 kDa e 4.000 kDa; entre 100 kDa e 3.500 kDa; 100 kDa e 3.000 kDa; 100 kDa e 2.500 kDa; 100 kDa e 2.250 kDa; entre 100 kDa e 2.000 kDa; entre 100 kDa e 1.750 kDa; entre 100 kDa e 1.500 kDa; entre 100 kDa e 1.250 kDa; entre 100 kDa e 1.000 kDa; entre 100 kDa e 750 kDa; entre 100 kDa e 500 kDa; entre 200 kDa e 4.000 kDa; entre 200 kDa e 3.500 kDa; entre 200 kDa e 3.000 kDa; entre 200 kDa e 2.500 kDa; entre 200 kDa e
2.250 kDa; entre 200 kDa e 2.000 kDa; entre 200 kDa e 1.750 kDa; entre 200 kDa e 1.500 kDa; entre 200 kDa e 1.250 kDa; entre 200 kDa e 1.000 kDa; entre 200 kDa e 750 kDa; ou entre 200 kDa e 500 kDa. Em outras modalidades, o polissacarídeo tem um peso molecular entre 250 kDa e 3.500 kDa; entre 250 kDa e 3.000 kDa; entre 250 kDa e
2.500 kDa; entre 250 kDa e 2.000 kDa; entre 250 kDa e 1.750 kDa; entre 250 kDa e 1.500 kDa; entre 250 kDa e 1.250 kDa; entre 250 kDa e 1.000 kDa; entre 250 kDa e 750 kDa; entre 250 kDa e 500 kDa; entre 300 kDa e 4.000 kDa; entre 300 kDa e 3.500 kDa; 300 kDa e 3.000 kDa; 300 kDa e 2.500 kDa; 300 kDa e 2.250 kDa; entre 300 kDa e
2.000 kDa; entre 300 kDa e 1.750 kDa; entre 300 kDa e 1.500 kDa; entre 300 kDa e 1.250 kDa; entre 300 kDa e 1.000 kDa; entre 300 kDa e 750 kDa; entre 300 kDa e 500 kDa; entre 500 kDa e 4.000 kDa; entre 500 kDa e 3.500 kDa; entre 500 kDa e 3.000 kDa; entre 500 kDa e
2.500 kDa; entre 500 kDa e 2.250 kDa; entre 500 kDa e 2.000 kDa; entre 500 kDa e 1.750 kDa; entre 500 kDa e 1.500 kDa; entre 500 kDa e 1.250 kDa; entre 500 kDa e 1.000 kDa; entre 500 kDa e 750 kDa; ou entre 500 kDa e 600 kDa.
[00371] Qualquer número dentro de qualquer uma das faixas acima é considerado como uma modalidade da descrição.
[00372] Em algumas modalidades, o polissacarídeo purificado tem um peso molecular de cerca de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, 75 kDa, 90 kDa, 100 kDa, 150 kDa, 200 kDa, 250 kDa, 300 kDa, 350 kDa, 400 kDa, 450 kDa, 500 kDa, 550 kDa, 600 kDa, 650 kDa, 700 kDa, 750 kDa, 800 kDa, 850 kDa, 900 kDa, 950 kDa, 1000 kDa, 1250 kDa, 1500 kDa, 1750 kDa, 2000 kDa, 2250 kDa, 2500 kDa, 2750 kDa, 3000 kDa, 3250 kDa, 3500 kDa, 3750 kDa ou 4.000 kDa.
[00373] Em uma modalidade, o polissacarídeo purificado é um sa- carídeo capsular (polissacarídeo ou oligossacarídeo).
[00374] Em uma modalidade, o polissacarídeo purificado é um po- lissacarídeo capsular de Staphylococcus aureus. Em uma modalidade, o polissacarídeo purificado é o polissacarídeo capsular de Staphylo- coccus aureus tipo 5 ou tipo 8.
[00375] Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purificado é um polissacarídeo capsular de Enterococcus faecalis. Em ainda outra mo- dalidade, o polissacarídeo purificado é um polissacarídeo capsular de Haemophilus influenzae tipo b.
[00376] Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purificado é um polissacarídeo capsular de Neisseria meningitidis. Em uma modalida- de, o polissacarídeo purificado é um polissacarídeo capsular de N. meningitidis sorogrupo A (MenA), N. meningitidis sorogrupo W135 (MenW 135), N. meningitidis sorogrupo Y (MenY), N. meningitidis soro- grupo X (MenX) ou N. meningitidis sorogrupo C (MenC).
[00377] Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purificado é um polissacarídeo capsular de Escherichia coli. Em uma modalidade, o polissacarídeo purificado é um polissacarídeo capsular de uma parte de Escherichia coli do grupo Escherichia coli Enterovirulenta (Grupo EEC), como Escherichia coli - enterotoxigênica (ETEC), Escherichia coli - enteropatogênica (EPEC), Escherichia coli - 0157: H7 enterohe- morrágica (EHEC) ou Escherichia coli - enteroinvasiva (EIEC). Em uma modalidade, o polissacarídeo purificado é um polissacarídeo cap- sular de uma Escherichia coli Uropatogênica (UPEC).
[00378] Em uma modalidade, o polissacarídeo purificado é um po- lissacarídeo capsular de um sorotipo de Escherichia coli selecionado a partir do grupo que consiste dos sorotipos 0157:H7, 026:H11, O0111:H- e 0103:H2. Em uma modalidade, o polissacarídeo purificado é um polissacarídeo capsular de um sorotipo de Escherichia coli sele- cionado a partir do grupo que consiste dos sorotipos O6:K2:H1 e O018:K1:H7. Em uma modalidade, o polissacarídeo purificado é um po- lissacarídeo capsular de um sorotipo de Escherichia coli selecionado a partir do grupo que consiste dos sorotipos O45:K1, 017:K52:H18, 019:H34 e O7:K1. Em uma modalidade, o polissacarídeo purificado é um polissacarídeo capsular de uma Escherichia coli sorotipo 0104:H4. Em uma modalidade, o polissacarídeo purificado é um polissacarídeo capsular de Escherichia coli sorotipo 01:K12:H7. Em uma modalidade, o polissacarídeo purificado é um polissacarídeo capsular de uma Es- cherichia coli sorotipo 0127:H6. Em uma modalidade, o polissacarídeo purificado é um polissacarídeo capsular de uma Escherichia coli soro- tipo 0139:H28. Em uma modalidade, o polissacarídeo purificado é um polissacarídeo capsular de uma Escherichia coli sorotipo 0128:H2.
[00379] Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purificado é um polissacarídeo capsular de Streptococcus agalactiae (streptococcus do Grupo B (GBS)). Em algumas modalidades, o polissacarídeo purifica- do é um polissacarídeo capsular selecionado a partir do grupo que consiste de polissacarídeos capsulares dos tipos GBS la, Ib, II, III, IV, V, VI, Vil e VIII. Em algumas modalidades, o polissacarídeo purificado é um polissacarídeo capsular selecionado a partir do grupo que con- siste de polissacarídeos capsulares dos tipos GBS la, Ib, Il, Ill e V.
[00380] Em uma modalidade preferencial, o polissacarídeo purifica- do é um polissacarídeo capsular de Steptococcus pneumoniae. Em uma modalidade, o polissacarídeo purificado é o polissacarídeo capsu- lar de Streptococcus pneumoniae sorotipo 1. Em uma outra modalida- de, o polissacarídeo purificado é o polissacarídeo capsular de Strepto- coccus pneumoniae sorotipo 2. Em uma outra modalidade, o polissa- carídeo purificado é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneu- moniae sorotipo 3. Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purifi- cado é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae soro- tipo 4. Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purificado é o po- lissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 5. Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purificado é o capsular polis- sacarídeo de Streptococcus pneumoniae sorotipo 6A. Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purificado é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 6B. Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purificado é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 6C. Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purificado é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 7F. Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purificado é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 8. Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purificado é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 9V. Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purificado é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 9N. Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purificado é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 10A. Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purificado é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 11A. Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purificado é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 12F.
Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purificado é o polissacarí- deo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 14. Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purificado é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 15A.
Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purificado é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 15B.
Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purificado é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 15C.
Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purificado é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 16F.
Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purificado é o polissacarí- deo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 17F.
Em uma ou- tra modalidade, o polissacarídeo purificado é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 18C.
Em uma outra modalida- de, o polissacarídeo purificado é o polissacarídeo capsular de Strepto- coccus pneumoniae sorotipo 19A.
Em uma outra modalidade, o polis- sacarídeo purificado é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 19F.
Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purificado é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 20. Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purificado é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 20A.
Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purificado é o polissacarí- deo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 20B.
Em uma ou- tra modalidade, o polissacarídeo purificado é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 22F.
Em uma outra modalida- de, o polissacarídeo purificado é o polissacarídeo capsular de Strepto- coccus pneumoniae sorotipo 23A.
Em uma outra modalidade, o polis- sacarídeo purificado é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 23B.
Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purificado é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 23F. Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purificado é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 24B. Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purificado é o polissacarí- deo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 24F. Em uma ou- tra modalidade, o polissacarídeo purificado é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 29. Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purificado é o polissacarídeo capsular de Streptococ- cus pneumoniae sorotipo 31. Em uma outra modalidade, o polissacarí- deo purificado é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumo- niae sorotipo 33F. Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purifi- cado é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae soro- tipo 34. Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purificado é o po- lissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 35B. Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purificado é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 35F. Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purificado é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 38. Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purificado é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 72. Em uma outra modalidade, o polissacarídeo purificado é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 73.
[00381] Qualquer reação de conjugação adequada pode ser usada, com qualquer ligante adequado quando necessário. Ver, por exemplo, WO 2007/116028 páginas 17 a 22.
[00382] Os oligossacarídeos ou polissacarídeos purificados no pre- sente documento descritos são ativados quimicamente para tornar os sacarídeos capazes de reagir com a proteína transportadora.
[00383] Em uma modalidade, o glicoconjugado é preparado usando aminação redutiva. A aminação redutiva envolve duas etapas, (1) oxi- dação (ativação) do sacarídeo purificado, (2) redução do sacarídeo ativado e uma proteína transportadora (por exemplo, CRM197, DT, TT ou PD) para formar um glicoconjugado (ver, por exemplo, WO 2015/110941, WO 2015/110940).
[00384] “Como mencionado acima, antes da oxidação, o dimensio- namento do polissacarídeo para uma faixa de peso molecular alvo (MW) pode ser realizado. Pode ser usada hidrólise mecânica ou quíi- mica. A hidrólise química pode ser conduzida com ácido acético. Em uma modalidade, o tamanho do polissacarídeo purificado é reduzido por homogeneização mecânica.
[00385] Em uma modalidade, o polissacarídeo ou oligossacarídeo purificado é conjugado a uma proteína transportadora por um processo que compreende a etapa de:
[00386] (a)reagiro dito polissacarídeo ou oligossacarídeo purifica- do com um agente oxidante;
[00387] (b) opcionalmente resfriar rapidamente a reação de oxida- ção por adição de um agente de resfriamento rápido;
[00388] (c) misturar o polissacarídeo ou oligossacarídeo ativado da etapa (a) ou (b) com uma proteína transportadora; e
[00389] (d) reagir o polissacarídeo ativado ou oligossacarídeo mis- turado e a proteína transportadora com um agente redutor para formar um glicoconjugado.
[00390] Após a etapa de oxidação (a), o sacarídeo é dito como es- tando ativado e é dito como "polissacarídeo ou oligossacarídeo ativa- do".
[00391] A etapa de oxidação (a) pode envolver reação com perioda- to. Para o propósito da presente invenção, o termo "periodato" inclui tanto periodato quanto ácido periódico; o termo também inclui tanto metaperiodato (104) quanto ortoperiodato (IOs”) e os vários sais de periodato (por exemplo, periodato de sódio e periodato de potássio).
[00392] Em uma modalidade preferencial, o agente oxidante é peri-
odato de sódio. Em uma modalidade, o periodato usado para a oxida- ção é metaperiodato. Em uma modalidade, o periodato usado para a oxidação é metaperiodato de sódio.
[00393] A etapa de oxidação (a) pode envolver a reação com um composto de radical nitroxil ou nitróxido estável, tal como compostos de piperidin-N-óxi ou pirrolidin-N-óxi, na presença de um oxidante para oxidar seletivamente hidroxilas primárias do dito polissacarídeo ou oli- gossacarídeo para produzir um sacarídeo ativado contendo grupos aldeído (ver WO 2014/097099). Em um aspecto, o dito composto de radical nitroxil ou nitróxido estável é qualquer um conforme descrito na página 3, linha 14 a página 4, linha 7, de WO 2014/097099 e o oxidan- te é qualquer um como descrito na página 4, linha 8 a 15, de WO 2014/097099. Em um aspecto, o dito composto de radical nitroxil ou nitróxido estável é 2,2,6,6-tetrametil-1-piperidiniloxi (TEMPO) e o oxi- dante é N-clorossuccinimida (NCS).
[00394] Em uma modalidade, o agente de resfriamento rápido é conforme descrito em WO 2015/110941 (ver página 30, linhas 3 a 26).
[00395] Em uma modalidade, a reação de redução (d) é realizada em solvente aquoso. Em uma modalidade, a reação de redução (d) é realizada em solvente aprótico. Em uma modalidade, a reação de re- dução (d) é realizada em DMSO (dimetil sulfóxido) ou em solvente DMF (dimetilformamida)).
[00396] Em uma modalidade, o agente de redução é cianoborohi- dreto de sódio, triacetoxiborohidreto de sódio, borohidreto de sódio ou Zinco na presença de ácidos de Bronsted ou Lewis, amina boranos, tal como piridina borano, 2-Picolina Borano, 2,6-diborano-metanol, dimeti- lamina-borano, t-BuMe'PrN-BH3, benzilamina-BH3 ou 5-etil-2-metilpiri- dina borano (PEMB). Em uma modalidade preferencial, o agente redu- tor é cianoborohidreto de sódio.
[00397] Nofinalda reação de redução, podem haver grupos aldeído que não reagiram permanecendo nos conjugados, estes podem ser capeados usando um agente de capeamento adequado. Em uma mo- dalidade, este agente de capeamento é borohidreto de sódio (NaBH:).
[00398] Após a conjugação com a proteína transportadora, o glico- conjugado pode ser purificado (enriquecido em relação à quantidade de conjugado sacarídeo-proteína) por uma variedade de técnicas co- nhecidas dos versados na técnica. Essas técnicas incluem diálise, operações de concentração / diafiltração, precipitação / eluição por fil- tração de fluxo tangencial, cromatografia em coluna (DEAE ou croma- tografia de interação hidrofóbica), e filtração de profundidade.
[00399] Em uma modalidade, o glicoconjugado é preparado usando química de cianilação.
[00400] Em uma modalidade, o polissacarídeo ou oligossacarídeo purificado é ativado com brometo de cianogênio. A ativação corres- ponde à cianilação dos grupos hidroxila do polissacarídeo ou oligossa- carídeo. O polissacarídeo ou oligossacarídeo ativado é então acoplado diretamente ou por meio de um grupo espaçador (ligante) a um grupo amino na proteína transportadora.
[00401] Em uma modalidade, o polissacarídeo ou oligossacarídeo purificado é ativado com tetrafluoroborato de 1-ciano-4-dimetilamino piridínio (CDAP) para formar um éster de cianato. O polissacarídeo ou oligossacarídeo ativado é então acoplado diretamente ou por meio de um grupo espaçador (ligante) a um grupo amino na proteína transpor- tadora.
[00402] Em uma modalidade, o espaçador pode ser cistamina ou cisteamina para fornecer um polissacarídeo ou oligossacarídeo tiolado que pode ser acoplado ao transportador por meio de uma ligação tioé- ter obtida após a reação com uma proteína transportadora ativada por maleimida (por exemplo, usando N-[y-maleimidobutirlóxi] succinimida éster (GMBS)) ou uma proteína transportadora haloacetilada (por exemplo, usando iodoacetimida, N-succinimidil bromoacetato (SBA; SIB), N-succinimidil (4-iodoacetil) aminobenzoato (SIAB), sulfosuccini- midil (4-iodoacetil) aminobenzoato (sulfo-SIAB), N-succinimidil iodoa- cetato (SIA) ou succinimidil 3- [bromoacetamido] propionato (SBAP)). De preferência, o cianato éster (opcionalmente feito por química CDAP) é acoplado com hexano diamina ou di-hidrazida de ácido adí- pico (ADH) e o sacarídeo derivado de amino é conjugado à proteína transportadora (por exemplo, CRM:97) usando carbodiimida (por exemplo, EDAC ou EDC) através de um grupo carboxila na proteína transportadora. Tais conjugados são descritos, por exemplo, em WO 93/15760, WO 95/08348 e WO 96/129094.
[00403] Em uma modalidade, o glicoconjugado é preparado usando reagentes bis eletrofílicos, tal como carbonildiimidazol (CDI) ou carbo- nilditriazol (CDT). Em tal modalidade, a reação de conjugação é prefe- rencialmente feita em solventes apróticos, tal como DMF ou DMSO por meio de uma via direta ou usando ligantes bigenéricos (ver, por exem- plo, WO 2011/041003).
[00404] Em uma modalidade, o glicoconjugado é preparado por um método de produção de glicoconjugados conforme descrito em WO 2014/027302. O glicoconjugado resultante compreende um sacarídeo covalentemente conjugado a uma proteína transportadora através de um espaçador heterobifuncional bivalente (2-((2-0x0etil) tio) etil) car- bamato (eTEC). Alternativamente, o glicoconjugado é preparado por um método de produção de glicoconjugados conforme descrito em WO 2015/121783.
[00405] Outras técnicas de conjugação adequadas usam carbodii- midas (por exemplo, cloridrato de EDC (1-Etil-3-(3-dimetilaminopropil) carbodiimida, EDC mais Sulfo NHS, CMC (1-Ciclohexil-3-(2-morfolino- etil) carbodiimida, DCC (N,N'-Diciclohexil carbodiimida), ou DIC (diiso- propil carbodiimida).
[00406] Em uma modalidade, o polissacarídeo ou oligossacarídeo é conjugado à proteína transportadora por meio de um ligante, por exemplo, um ligante bifuncional. O ligante é opcionalmente heterobi- funcional ou homobifuncional, tendo, por exemplo, um grupo amino reativo e um grupo ácido carboxílico reativo, 2 grupos amino reativos ou dois grupos ácido carboxílico reativos. O ligante tem, por exemplo, entre 4 e 20, 4 e 12, 5 e 10 átomos de carbono. Um possível ligante é a di-hidrazida de ácido adípico (ADH). Outros ligantes incluem B- propionamido (WO 00/10599), nitrofenil-etilamina, haloalquil haleto), ligações glicosídicas (US4673574, US4808700), hexano diamina e ácido 6-aminocaproico (US4459286).
[00407] Proteína Transportadora
[00408] Um componente do glicoconjugado é uma proteína trans- portadora com a qual o polissacarídeo ou oligossacarídeo purificado é conjugado. Os termos "transportador de proteína" ou "proteína trans- portadora" ou "transportador" podem ser usados de forma intercambi- ável neste documento. As proteínas transportadoras devem ser passí- veis de procedimentos de conjugação padrão.
[00409] Em uma modalidade preferencial, a proteína transportadora do glicoconjugado é selecionada a partir do grupo que consiste de: DT (toxina de difteria), TT (toxina de tétano) ou fragmento C de TT, CRM1697 (uma variante não tóxica, mas antigenicamente idêntica da toxina de difteria), outros mutantes DT (tais como CRM:76, CRM 228, CRMa5 (Uchida e outros (1973) J. Biol. Chem. 218: 3838 a 3844), CRMs2, CRM: 02, CRM03 ou CRM107; e outras mutações descritas por Nicholls e Youle em Genetically Engineered Toxins, Ed: Frankel, Mae- cel Dekker Inc. (1992); deleção ou mutação de Glu-148 para Asp, Gln ou Ser e / ou Ala 158 para Gly e outras mutações descritas nas Paten- tes US Nos. 4.709.017 e 4.950.740; mutação de pelo menos um ou mais resíduos Lys 516, Lys 526, Phe 530 e / ou Lys 534 e outras mu-
tações descritas nas Patentes US Nos. 5.917.017 e 6.455.673; ou fra- gmento descrito na Patente US No. 5.843.711, pneumolisina pneumo- cócica (ply) (Kuo e outros. (1995) Infect Immun 63: 2706 a 2713) inclu- indo camadas desintoxicadas de alguma forma, por exemplo dP LY- GMBS (WO 2004/081515, WO 2006/032499) ou dPLY-formol, PhtX, incluindo PRtA, PhtB, PhtD, PhtE (sequências de PhtA, PhtB, PhtD ou PhtE são descritas em WO 00/37105 e WO 00/39299) e fusões de pro- teínas Pht, por exemplo, fusões PhtDE, fusões PhtBE, Pht A-E (WO 01/98334, WO 03/054007, WO 2009/000826), OMPC (proteína da membrana externa meningocócica), que é geralmente extraída de Neisseria meningitidis sorogrupo B (EPO0372501), PorB (de N. meningi- tidis), PD (proteína D de Haemophilus influenzae; ver, por exemplo, EPOS594610 B), ou seus equivalentes imunologicamente funcionais, peptídeos sintéticos (EP0378881, EPO0427347), proteínas de choque térmico (WO 93/17712, WO 94/03208), proteínas pertussis (WO 98/58668, EPO47 1177), citocinas, linfocinas, fatores de crescimento ou hormônios (WO 91/01146), proteínas artificiais compreendendo múlti- plos epítopos de células T CD4+ humanas de vários antígenos deriva- dos de patógenos (Falugi e outros (2001) Eur J Immunol 31: 3816 a 3824), tais como proteína N19 (Baraldoi e outros (2004) Infect Immun 72: 4884 a 4887), proteína de superfície pneumocócica PspA (WO 02/091998), proteínas de absorção de ferro (WO 01/72337), toxina À ou B de Clostridium difficie (WO 00/61761), proteínas de ligação à transferrina, proteína de adesão pneumocócica (PsaA), exotoxina A recombinante de Pseudomonas aeruginosa (em particular mutantes não tóxicos desta (tal como exotoxina A com uma substituição em áci- do glutâmico 553 (Douglas e outros (1987) J.
Bacteriol. 169 (11): 4967 a 4971)). Outras proteínas, tal como ovalbumina, hemocianina de lapa (KLH), albumina de soro bovino (BSA) ou derivado de proteína purifi- cado de tuberculina (PPD) também podem ser usados como proteínas transportadoras. Outras proteínas transportadoras adequadas incluem toxinas bacterianas inativadas, tais como toxoide da cólera (por exem- plo, como descrito em WO 2004/083251), Escherichia coli LT, E. coli ST e exotoxina A de P. aeruginosa.
[00410] Em uma modalidade preferencial, a proteína transportadora do glicoconjugado é independentemente selecionada a partir do grupo que consiste de mutantes TT, DT, DT (tal como CRM:1697), proteína D de H. influenzae, PhtX, PhtD, fusões de PhtDE (particularmente aque- las descritas em WO 01/98334 e WO 03/054007), pneumolisina desin- toxicada, PorB, proteína N19, PspA, OMPC, toxina A ou B de C. diffici- le e PsaA.
[00411] Em uma modalidade, a proteína transportadora do glicocon- jugado é DT (toxoide da difteria)). Em outra modalidade, a proteína transportadora do glicoconjugado é TT (toxoide do tétano).
[00412] Em outra modalidade, a proteína transportadora do glico- conjugado é PD (proteína D de H. influenzae; ver, por exemplo, EPOS594610 B).
[00413] Em uma modalidade preferencial, o polissacarídeo ou oli- gossacarídeo purificado é conjugado com a proteína CRM 197. A proteína CRM:197 é uma forma não tóxica da toxina da difteria, mas é imunologi- camente indistinguível da toxina da difteria. CRM197 é produzido por Corynebacterium diphtheriae infectado pelo fago não toxigênico B197'º* criado por mutagênese de nitrosoguanidina do corinefago beta toxigêni- co (Uchida e outros (1971) Nature New Biology 233: 8 a 11). A proteí- na CRM197 tem o mesmo peso molecular que a toxina da difteria, mas difere dela por uma única mudança de base (guanina para adenina) no gene estrutural. Essa única mudança de base causa uma substituição de aminoácido (ácido glutâmico por glicina) na proteína madura e eli- mina as propriedades tóxicas da toxina da difteria. A proteína CRM197 é um transportador dependente de células T seguro e eficaz para sa-
carídeos. Detalhes adicionais sobre CRM197 e sua produção podem ser encontrados, por exemplo, na Patente U.S. No. 5.614.382.
[00414] Em uma modalidade, o polissacarídeo ou oligossacarídeo purificado é conjugado com a proteína CRM:197 ou a cadeia A de CRM1697 (ver CN103495161). Em uma modalidade, o polissacarídeo ou oligossacarídeo purificado é conjugado com a cadeia A de CRM197 ob- tida através da expressão por E. coli geneticamente recombinante (ver CN103495161).
[00415] De preferência, a relação de proteína transportadora para polissacarídeo ou oligossacarídeo no glicoconjugado é de 1:5 e 5:1; por exemplo. Entre 1:0,5 e 4:1, entre 1:1 e 3,5:1, entre 1,2:1 e 3:1, en- tre 1,5:1 e 2,5:1; por exemplo. Entre 1:2 e 2,5:1 ou entre 1:1 e 2:1 (p/ p). Em uma modalidade, a razão de proteína transportadora para po- lissacarídeo ou oligossacarídeo no glicoconjugado é de cerca de 1:1, 1,1:1, 1,2:1, 1,3:1, 1,4:1, 1,5:1 ou 1,6:1.
[00416] Após a conjugação com a proteína transportadora, o glico- conjugado pode ser purificado (enriquecido em relação à quantidade de conjugado de sacarídeo-proteína) por uma variedade de técnicas conhecidas dos versados na técnica. Essas técnicas incluem diálise, operações de concentração / diafiltração, precipitação / eluição por fil- tração de fluxo tangencial, cromatografia em coluna (DEAE ou croma- tografia de interação hidrofóbica) e filtração de profundidade.
[00417] As composições podem incluir uma pequena quantidade de transportador livre. Quando uma dada proteína transportadora está presente tanto na forma livre quanto na forma conjugada em uma composição da invenção, a forma não conjugada é de preferência não mais do que 5% da quantidade total da proteína transportadora na composição como um todo, e mais preferencialmente presente em menos de 2% em peso.
[00418] 2.2Composições Imunogênicas
[00419] Em uma modalidade, a invenção refere-se a uma composi- ção imunogênica compreendendo qualquer um dos polissacarídeos e / ou glicoconjugados purificados no presente documento descritos.
[00420] Em uma modalidade, a invenção refere-se a uma composi- ção imunogênica compreendendo qualquer um dos glicoconjugados descritos neste documento.
[00421] Em uma modalidade, a invenção refere-se a uma composi- ção imunogênica compreendendo de 1 a 25 glicoconjugados diferen- tes descritos na seção 2.1.
[00422] Em uma modalidade, a invenção refere-se a uma composi- ção imunogênica compreendendo de 1 a 25 glicoconjugados de dife- rentes sorotipos de S. pneumoniae (1 a 25 conjugados pneumocóci- cos). Em uma modalidade, a invenção refere-se a uma composição imunogênica compreendendo glicoconjugados de 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 ou 25 diferentes sorotipos de S. pneumoniae. Em uma modalidade, as composições imunogêni- cas compreendem glicoconjugados de 16 ou 20 sorotipos diferentes de S. pneumoniae. Em uma modalidade, a composição imunogênica é uma composição de conjugado pneumocócico 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20-valente. Em uma modalidade, a composi- ção imunogênica é uma composição de conjugado pneumocócico 14, 15, 16, 17, 18 ou 19-valente. Em uma modalidade, a composição imu- nogênica é uma composição de conjugado pneumocócico 16-valente. Em uma modalidade, a composição imunogênica é uma composição de conjugado pneumocócico 19-valente. Em uma modalidade, a com- posição imunogênica é uma composição de conjugado pneumocócico 20-valente.
[00423] Em uma modalidade, a dita composição imunogênica com- preende glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F e 23F.
[00424] Em uma modalidade, a dita composição imunogênica com- preende, além disso, glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 1, 5 e7F.
[00425] Em uma modalidade, qualquer uma das composições imu- nogênicas acima compreende, além disso, glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 6A e 19A.
[00426] Em uma modalidade, qualquer uma das composições imu- nogênicas acima compreende, além disso, um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 3.
[00427] Em uma modalidade, qualquer uma das composições imu- nogênicas acima compreende, além disso, um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 22F e 33F.
[00428] Em uma modalidade, qualquer uma das composições imu- nogênicas acima compreende, além disso, glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 8, 10A, 11A, 12F e 15B.
[00429] Em uma modalidade, qualquer uma das composições imu- nogênicas acima compreende, além disso, um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 2.
[00430] Em uma modalidade, qualquer uma das composições imu- nogênicas acima compreende, além disso, um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 9N.
[00431] Em uma modalidade, qualquer uma das composições imu- nogênicas acima compreende, além disso, um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 17F.
[00432] Em uma modalidade, qualquer uma das composições imu- nogênicas acima compreende, além disso, um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 20.
[00433] Em uma modalidade, a composição imunogênica da inven- ção compreende glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 8, 10A, 11A, 12F, 15B, 22F e 33F.
[00434] Em uma modalidade, qualquer uma das composições imu- nogênicas acima compreende, além disso, um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 2.
[00435] Em uma modalidade, qualquer uma das composições imu- nogênicas acima compreende, além disso, um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 9N.
[00436] Em uma modalidade, qualquer uma das composições imu- nogênicas acima compreende, além disso, um glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 17F.
[00437] Em uma modalidade, qualquer uma das composições imu- nogênicas acima compreende, além disso, glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipo 20.
[00438] Em uma modalidade preferencial, porém, os sacarídeos são, cada um, individualmente conjugados a diferentes moléculas da proteína transportadora (cada molécula de proteína transportadora tendo apenas um tipo de sacarídeo conjugado a ela). Na dita modali- dade, os sacarídeos capsulares são considerados individualmente conjugados à proteína transportadora. De preferência, todos os glico- conjugados das composições imunogênicas acima são conjugados individualmente com a proteína transportadora.
[00439] Em uma modalidade de qualquer uma das composições imunogênicas acima, o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 22F é conjugado com CRM:197. Em uma modalidade de qualquer uma das composições imunogênicas acima, o glicoconjugado de S. pneumoni- ae sorotipo 33F é conjugado com CRM:97. Em uma modalidade de qualquer uma das composições imunogênicas acima, o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 15B é conjugado com CRM:197. Em uma modalidade de qualquer uma das composições imunogênicas acima, o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 12F é conjugado com CRM197. Em uma modalidade de qualquer uma das composições imu-
nogênicas acima, o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 10A é conjugado com CRM:97. Em uma modalidade de qualquer uma das composições imunogênicas acima, o glicoconjugado de S. pneumoni- ae sorotipo 11A é conjugado com CRM:97. Em uma modalidade de qualquer uma das composições imunogênicas acima, o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 8 é conjugado com CRM197. Em uma mo- dalidade de qualquer uma das composições imunogênicas acima, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F e 23F são conjugados com CRM:97. Em uma modalidade de qualquer uma das composições imunogênicas acima, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 1, 5 e 7F são conjugados com CRM197. Em uma modalidade de qualquer uma das composições imunogênicas acima, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 6A e 19A são conju- gados com CRM197. Em uma modalidade de qualquer uma das com- posições imunogênicas acima, o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 3 é conjugado com CRM 197.
[00440] Em uma modalidade, os glicoconjugados de qualquer uma das composições imunogênicas acima são todos conjugados individu- almente com CRM 197.
[00441] Em uma modalidade, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 e / ou 23F de qualquer uma das com- posições imunogênicas acima são individualmente conjugados com PD.
[00442] Em uma modalidade, o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C de qualquer uma das composições imunogênicas acima é conjugado com TT.
[00443] Em uma modalidade, o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 19F de qualquer uma das composições imunogênicas acima é conjugado com DT.
[00444] Em uma modalidade, os glicoconjugados de S. pneumoniae sorotipos 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 e / ou 23F de qualquer uma das com- posições imunogênicas acima são individualmente conjugados a PD, o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 18C é conjugado com TT, e o glicoconjugado de S. pneumoniae sorotipo 19F é conjugado com DT.
[00445] Em uma modalidade, as composições imunogênicas acima compreendem de 8 a 20 sorotipos diferentes de S. pneumoniae.
[00446] Em uma modalidade, a invenção refere-se a uma composi- ção imunogênica compreendendo de 1 a 5 glicoconjugados de diferen- tes sorogrupos de N. meningitidis (1 a 5 conjugados meningocócicos). Em uma modalidade, a invenção refere-se a uma composição imuno- gênica compreendendo glicoconjugados de 1, 2, 3, 4 ou 5 sorogrupos diferentes de N. meningitidis. Em uma modalidade, as composições imunogênicas compreendem 4 ou 5 N. meningitidis diferentes. Em uma modalidade, a composição imunogênica é uma composição de conjugado meningocócico 1, 2, 3, 4 ou 5-valente. Em uma modalidade, a composição imunogênica é uma composição de conjugado menin- gocócico 2-valente. Em uma modalidade, a composição imunogênica é uma composição de conjugado meningocócico 4-valente. Em uma modalidade, a composição imunogênica é uma composição de conju- gado meningocócico 5-valente.
[00447] Em uma modalidade, a composição imunogênica compre- ende um sacarídeo capsular de N. meningitidis sorogrupo Y conjugado (MenY) e / ou um sacarídeo capsular de N. meningitidis sorogrupo C conjugado (MenC).
[00448] Em uma modalidade, a composição imunogênica compre- ende um sacarídeo capsular de N. meningitidis sorogrupo A conjugado (MenA), um sacarídeo capsular de N. meningitidis sorogrupo W135 conjugado (MenW 135), um sacarídeo capsular de N. meningitidis so- rogrupo Y conjugado (MenY) e / ou um sacarídeo capsular de N. me- ningitidis sorogrupo C conjugado (MenC).
[00449] Em uma modalidade, as composições imunogênicas com- preendem um sacarídeo capsular de N. meningitidis sorogrupo W135 conjugado (MenW 135), um sacarídeo capsular de N. meningitidis so- rogrupo Y conjugado (MenY) e / ou um sacarídeo capsular de N. me- ningitidis sorogrupo C conjugado (MenC).
[00450] Em uma modalidade, a composição imunogênica compre- ende um sacarídeo capsular de N. meningitidis sorogrupo A conjugado (MenA), um sacarídeo capsular de N. meningitidis sorogrupo W135 conjugado (MenW 135), um sacarídeo capsular de N. meningitidis so- rogrupo Y conjugado (MenY), um sacarídeo capsular de N. meningiti- dis sorogrupo Y conjugado (MenY), um sacarídeo capsular de N. me- ningitidis sorogrupo C conjugado (MenC) e / ou um sacarídeo capsular de N. meningitidis sorogrupo X conjugado (MenX).
[00451] Em algumas modalidades, as composições imunogênicas descritas neste documento podem compreender ainda pelo menos um, dois ou três adjuvantes. Em algumas modalidades, as composições imunogênicas descritas neste documento podem compreender ainda um adjuvante. O termo "adjuvante" refere-se a um composto ou mistu- ra que aumenta a resposta imune a um antígeno. Os antígenos podem atuar principalmente como um sistema de entrega, principalmente co- mo um modulador imune ou pode ter fortes características de ambos. Os adjuvantes adequados incluem aqueles adequados para uso em mamíferos, incluindo humanos.
[00452] “Exemplos de adjuvantes do tipo de sistema de entrega adequados conhecidos que podem ser usados em humanos incluem, mas não estão limitados a, alúmen (por exemplo, fosfato de alumínio, sulfato de alumínio ou hidróxido de alumínio), fosfato de cálcio, lipos- somas, emulsões de óleo em água, tais como MF59 (4,3% p / v esqua- leno, 0,5% p / v polissorbato 80 (Tween 80), 0,5% p / v trioleato de sorbitano (Span 85)), emulsões de água em óleo como Montanide, e micropartículas ou nanopartículas de poli(D,L-lactídeo-co-glicolídeo) (PLG).
[00453] Em uma modalidade, as composições imunogênicas no presente documento descritas compreendem sais de alumínio (alú- men) como adjuvante (por exemplo, fosfato de alumínio, sulfato de alumínio ou hidróxido de alumínio). Em uma modalidade preferencial, as composições imunogênicas no presente documento descritas com- preendem fosfato de alumínio ou hidróxido de alumínio como adjuvan- te.
[00454] Outros adjuvantes exemplificativos para aumentar a eficá- cia das composições imunogênicas, conforme descrito neste docu- mento, incluem, mas não estão limitados a: (1) formulações de emul- são de óleo em água (com ou sem outros agentes imunoestimulantes específicos, tal como peptídeos de muramil (ver abaixo) ou células de parede celular bacterianas), tal como, por exemplo, (a) SAF, contendo 10% de esqualano, 0,4% de Tween 80, 5% de polímero bloqueado com plurônico L121, e thr-MDP microfluidizado em uma emulsão sub- micrônica ou agitado em vórtice para gerar uma emulsão de tamanho de partícula maior, e (b) sistema de adjuvante RIBITY (RAS), (Ribi Immunochem, Hamilton, MT) contendo 2% de esqualeno, 0,2% de Tween 80 e um ou mais componentes da parede celular bacteriana, tal como monofosforilipídio A (MPL), dimicolato de trealose (TDM), e es- queleto da parede celular (CWS), de preferência MPL + CWS (DE- TOX'TY); (2) adjuvantes de saponina, tal como QS21, STIMULONTY (Cambridge Bioscience, Worcester, MA), ABISCOG (Isconova, Suécia) ou ISCOMATRIXO (Commonwealth Serum Laboratories, Austrália), podem ser usados ou partículas geradas a partir deles, tal como IS- COMs (complexos imunoestimulantes), cujos ISCOMS podem ser desprovidos de detergente adicional (por exemplo, WO 00/07621); (3) Adjuvante Completo de Freund (CFA) e Adjuvante Incompleto de
Freund (IFA); (4) citocinas, tais como interleucinas (por exemplo, IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, I1L-12 (por exemplo, WO 99/44636)), interfe- rons ( por exemplo, interferon gama), fator estimulador de colônias de macrófagos (M-CSF), fator de necrose tumoral (TNF), etc.; (5) mono- fosforil líbido A (MPL) ou 3-O-desacilado MPL (3dMPL) (ver, por exemplo, GB-2220221, EPO689454), opcionalmente na ausência subs- tancial de alúmen quando usado com sacarídeos pneumocócicos (ver, por exemplo, WO 00/56358); (6) combinações de 3dMPL com, por exemplo, QS21 e / ou emulsões de óleo em água (ver, por exemplo, EPO0835318, EPO735898, EPO761231); (7) um éter de polioxietileno ou um éster de polioxietileno (ver, por exemplo, WO 99/52549); (8) um tensoativo de éster de polioxietileno sorbitano em combinação com um octoxinol (por exemplo, WO 01/21207) ou um tensoativo aquil éter ou éster de polioxietileno em combinação com pelo menos um tensoativo não iônico adicional, tal como um octoxinol (por exemplo, WO 01/21152); (9) uma saponina e um oligonucleotídeo imunoestimulador (por exemplo, um oligonucleotídeo CpG) (por exemplo, WO 00/62800); (10) um imunoestimulante e uma partícula de sal de metal (ver, por exemplo, WO 00/23105); (11) uma saponina e uma emulsão de óleo em água (por exemplo, WO 99/11241); (12) uma saponina (por exem- plo, QS21) + 3dMPL + IM2 (opcionalmente + um esterol) (por exemplo, WO 98/57659); (13) outras substâncias que atuam como agentes imu- noestimulantes para aumentar a eficácia da composição. Peptídeos de muramil incluem N-acetil-muramil-L-treonil-D-isoglutamina (thr-MDP), N-25 acetil-normuramil-L-alanil-D-isoglutamina (nor-MDP), N-acetilmu- ramil-L-alanil- D-isoglutarninil-L-alanina-2- (1º-2'-dipalmitoil-sn-glycero- 3-hidroxifosforilóxi)-etilamina MTP-PE), etc.
[00455] Em uma modalidade da presente invenção, as composi- ções imunogênicas conforme descritas no presente documento com- preendem um Oligonucleotídeo CpG como adjuvante.
[00456] As composições imunogênicas podem ser formuladas na forma líquida (isto é, soluções ou suspensões) ou na forma liofilizada. As formulações líquidas podem ser vantajosamente administradas di- retamente a partir da sua forma embalada e são, portanto, ideais para injeção sem a necessidade de reconstituição em meio aquoso como de outra forma exigido para as composições liofilizadas da invenção.
[00457] A formulação da composição imunogênica da presente descrição pode ser realizada usando métodos reconhecidos na técnica. Por exemplo, os polissacarídeos e / ou conjugados individuais podem ser formulados com um veículo fisiologicamente aceitável para preparar a composição. Exemplos de tais veículos incluem, mas não estão limitados a água, solução salina tamponada, polióis (por exemplo, glicerol, propi- leno glicol, polietileno glicol líquido) e soluções de dextrose.
[00458] A presente descrição fornece uma composição imunogêni- ca compreendendo qualquer combinação de polissacarídeo ou glico- conjugados no presente documento descritos e um excipiente, trans- portador ou diluente farmaceuticamente aceitável.
[00459] Em uma modalidade, a composição imunogênica da descri- ção está na forma líquida, de preferência na forma líquida aquosa.
[00460] As composições imunogênicas da descrição podem com- preender um ou mais de um tampão, um sal, um cátion divalente, um detergente não iônico, um crioprotetor tal como um açúcar, e um anti- oxidante tal como um sequestrador de radical livre ou agente quelante, ou quaisquer múltiplas combinações dos mesmos.
[00461] Em uma modalidade, as composições imunogênicas da descrição compreendem um tampão. Em uma modalidade, o dito tam- pão tem um pKa de cerca de 3,5 a cerca de 7,5. Em algumas modali- dades, o tampão é fosfato, succinato, histidina ou citrato. Em certas modalidades, o tampão é succinato a uma concentração final de 1 mM a 10 mM. Em uma modalidade particular, a concentração final do tam-
pão succinato é de cerca de 5 mM.
[00462] Em uma modalidade, as composições imunogênicas da descrição compreendem um sal. Em algumas modalidades, o sal é selecionado a partir do grupo que consiste de cloreto de magnésio, cloreto de potássio, cloreto de sódio e uma combinação dos mesmos. Em uma modalidade particular, o sal é cloreto de sódio. Em uma mo- dalidade particular, as composições imunogênicas da invenção com- preendem cloreto de sódio a 150 mM.
[00463] Em uma modalidade, as composições imunogênicas da descrição compreendem um tensoativo. Em uma modalidade, o tenso- ativo é selecionado a partir do grupo que consiste de polissorbato 20 (TWEENTY 20), polissorbato 40 (TWEENT'Y 40), polissorbato 60 (TWEEN'Y 60), polissorbato 65 (TWEEN'Y 65), polissorbato 80 (TWEEN'Y 80), polissorbato 85 (TWEEN'Y 85), TRITONTY N-101, TRITONTY X-100, oxtoxinol 40, nonoxinol-9, trietanolamina, oleato de polipeptídeo de trietanolamina, hidroxiestearato de polioxietileno-660 (PEG-15, Solutol H 15), polioxietileno-35- ricinoleato (CREMOPHORO EL), lecitina de soja e um poloxâmero. Em uma modalidade particular, o tensoativo é polissorbato 80. Em algumas das ditas modalidades, a concentração final de polissorbato 80 na formulação é de pelo menos 0,0001% a 10% de polissorbato 80 em peso (p / p). Em algumas das ditas modalidades, a concentração final de polissorbato 80 na formula- ção é de pelo menos 0,001% a 1% de polissorbato 80 em peso (peso / peso). Em algumas modalidades, a concentração final de polissorbato 80 na formulação é de pelo menos 0,01% a 1% de polissorbato 80 em peso (peso / peso). Em outras modalidades, a concentração final de polissorbato 80 na formulação é de 0,01%, 0,02%, 0,03%, 0,04%, 0,05%, 0,06%, 0,07%, 0,08%, 0,09% ou 0,1% de polissorbato 80 (p / p). Em outra modalidade, a concentração final do polissorbato 80 na formulação é 1% de polissorbato 80 (p / p).
[00464] Em uma modalidade particular, o tensoativo é polissorbato
20. Em algumas ditas modalidades, a concentração final de polissor- bato 20 na formulação é de pelo menos 0,0001% a 10% de polissorba- to 20 em peso (p / p). Em algumas das ditas modalidades, a concen- tração final de polissorbato 20 na formulação é de pelo menos 0,001% a 1% de polissorbato 20 em peso (peso / peso). Em algumas modali- dades, a concentração final de polissorbato 20 na formulação é de pe- lo menos 0,01% a 1% de polissorbato 20 em peso (peso / peso). Em outras modalidades, a concentração final de polissorbato 20 na formu- lação é 0,01%, 0,02%, 0,03%, 0,04%, 0,05%, 0,06%, 0,07%, 0,08%, 0,09% ou 0,1% de polissorbato 20 (p / p). Em outra modalidade, a concentração final do polissorbato 20 na formulação é de 1% de polis- sorbato 20 (p / p).
[00465] Em uma modalidade particular, o tensoativo é polissorbato
40. Em algumas das ditas modalidades, a concentração final de polis- sorbato 40 na formulação é de pelo menos 0,0001% a 10% de polis- sorbato 40 em peso (p / p). Em algumas das ditas modalidades, a con- centração final de polissorbato 40 na formulação é de pelo menos 0,001% a 1% de polissorbato 40 em peso (peso / peso). Em algumas modalidades, a concentração final de polissorbato 40 na formulação é de pelo menos 0,01% a 1% de polissorbato 40 em peso (peso / peso). Em outras modalidades, a concentração final de polissorbato 40 na formulação é 0,01%, 0,02%, 0,03%, 0,04%, 0,05%, 0,06%, 0,07%, 0,08%, 0,09% ou 0,1% de polissorbato 40 (p / p). Em outra modalida- de, a concentração final do polissorbato 40 na formulação é de 1% de polissorbato 40 (p / p).
[00466] Em uma modalidade particular, o tensoativo é polissorbato
60. Em algumas das ditas modalidades, a concentração final de polis- sorbato 60 na formulação é de pelo menos 0,0001% a 10% de polis- sorbato 60 em peso (p / p). Em algumas das ditas modalidades, a con-
centração final de polissorbato 60 na formulação é de pelo menos 0,001% a 1% de polissorbato 60 em peso (peso / peso). Em algumas modalidades, a concentração final de polissorbato 60 na formulação é de pelo menos 0,01% a 1% de polissorbato 60 em peso (peso / peso). Em outras modalidades, a concentração final de polissorbato 60 na formulação é 0,01%, 0,02%, 0,03%, 0,04%, 0,05%, 0,06%, 0,07%, 0,08%, 0,09% ou 0,1% de polissorbato 60 (p / p). Em outra modalida- de, a concentração final do polissorbato 60 na formulação é de 1% de polissorbato 60 (p / p).
[00467] Em uma modalidade particular, o tensoativo é polissorbato
65. Em algumas das ditas modalidades, a concentração final de polis- sorbato 65 na formulação é de pelo menos 0,0001% a 10% de polis- sorbato 65 em peso (p / p). Em algumas das ditas modalidades, a con- centração final de polissorbato 65 na formulação é de pelo menos 0,001% a 1% de polissorbato 65 em peso (peso / peso). Em algumas modalidades, a concentração final de polissorbato 65 na formulação é de pelo menos 0,01% a 1% de polissorbato 65 em peso (peso / peso). Em outras modalidades, a concentração final de polissorbato 65 na formulação é de 0,01%, 0,02%, 0,03%, 0,04%, 0,05%, 0,06%, 0,07%, 0,08%, 0,09% ou 0,1% de polissorbato 65 (p / p). Em outra modalida- de, a concentração final do polissorbato 65 na formulação é 1% de po- lissorbato 65 (p / p).
[00468] Em uma modalidade particular, o tensoativo é polissorbato
85. Em algumas ditas modalidades, a concentração final de polissor- bato 85 na formulação é de pelo menos 0,0001% a 10% de polissorba- to 85 em peso (p / p). Em algumas das ditas modalidades, a concen- tração final de polissorbato 85 na formulação é de pelo menos 0,001% a 1% de polissorbato 85 em peso (peso / peso). Em algumas modali- dades, a concentração final de polissorbato 85 na formulação é de pe- lo menos 0,01% a 1% de polissorbato 85 em peso (peso / peso). Em outras modalidades, a concentração final de polissorbato 85 na formu- lação é de 0,01%, 0,02%, 0,03%, 0,04%, 0,05%, 0,06%, 0,07%, 0,08%, 0,09% ou 0,1% de polissorbato 85 (p / p). Em outra modalida- de, a concentração final do polissorbato 85 na formulação é de 1% de polissorbato 85 (p / p).
[00469] Em certas modalidades, a composição imunogênica da descrição tem um pH de 5,5 a 7,5, mais preferencialmente um pH de 5,6 a 7,0, ainda mais preferencialmente um pH de 5,8 a 6,0.
[00470] Em uma modalidade, a presente descrição fornece um re- cipiente preenchido com qualquer uma das composições imunogêni- cas no presente documento descritas. Em uma modalidade, o recipien- te é selecionado a partir do grupo que consiste de um frasco, uma se- ringa, um fermentador, um biorreator, um saco, um jarro, uma ampola, um cartucho e uma caneta descartável. Em certas modalidades, o re- cipiente é siliconizado.
[00471] Em uma modalidade, o recipiente da presente descrição é feito de vidro, metais (por exemplo, aço, aço inoxidável, alumínio, etc.) e / ou polímeros (por exemplo, termoplásticos, elastômeros, elastôme- ros-termoplásticos). Em uma modalidade, o recipiente da presente descrição é feito de vidro.
[00472] Em uma modalidade, a presente descrição fornece uma seringa preenchida com qualquer uma das composições imunogênicas no presente documento descritas. Em certas modalidades, a seringa é siliconizada e / ou feita de vidro.
[00473] “Uma dose típica da composição imunogênica da invenção para injeção tem um volume de 0,1 mL a 2 mL, mais preferencialmente de 0,2 mL a 1 mL, ainda mais preferencialmente um volume de cerca de 0,5 mL.
2.3 Uso como Antígenos
[00474] O polissacarídeo purificado pelo método da presente inven-
ção ou os conjugados no presente documento descritos podem ser usados como antígenos. Por exemplo, eles podem fazer parte de uma vacina.
[00475] Portanto, em uma modalidade, os polissacarídeos purifica- dos pelo método da presente invenção ou os glicoconjugados obtidos usando os ditos polissacarídeos são para uso na geração de uma res- posta imune em um sujeito. Em um aspecto, o sujeito é um mamífero, tal como um ser humano, gato, ovelha, porco, cavalo, bovino ou ca- chorro. Em um aspecto, o sujeito é um humano.
[00476] Em uma modalidade, os polissacarídeos purificados pelo método da presente invenção, os glicoconjugados obtidos usando os ditos polissacarídeos ou as composições imunogênicas no presente documento descritas são para uso em uma vacina.
[00477] Em uma modalidade, os polissacarídeos purificados pelo método da presente invenção, os glicoconjugados obtidos usando os ditos polissacarídeos ou as composições imunogênicas no presente documento descritas são para uso como um medicamento.
[00478] As composições imunogênicas no presente documento descritas podem ser usadas em vários métodos terapêuticos ou profi- láticos para prevenir, tratar ou melhorar uma infecção bacteriana, do- ença ou condição em um sujeito. Em particular, as composições imu- nogênicas no presente documento descritas podem ser usadas para prevenir, tratar ou melhorar uma infecção, doença ou condição por S. pneumoniae, S. aureus, E. faecalis, Haemophilus influenzae tipo b, E. coli, Neisseria meningitidis ou S. agalactiae em um sujeito.
[00479] Assim, em um aspecto, a descrição fornece um método pa- ra prevenir, tratar ou melhorar uma infecção, doença ou condição as- sociada com S. pneumoniae, S. aureus, E. faecalis, Haemophilus in- fluenzae tipo b, E. coli, Neisseria meningitidis ou S. agalactiae em um sujeito, compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade imuno-
logicamente eficaz de uma composição imunogênica da descrição (em particular uma composição imunogênica compreendendo o polissaca- rídeo ou glicoconjugado correspondente do mesmo).
[00480] Em uma modalidade, a descrição fornece um método de induzir uma resposta imune a S. pneumoniae, S. aureus, E. faecalis, Haemophilus influenzae tipo b, E. coli, Neisseria meningitidis ou S. agalactiae em um sujeito, compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade imunologicamente eficaz de uma composição imunogênica da descrição (em particular uma composição imunogênica compreen- dendo o polissacarídeo ou glicoconjugado correspondente).
[00481] Em uma modalidade, as composições imunogênicas no presente documento descritas são para uso como uma vacina. Em tais modalidades, as composições imunogênicas no presente documento descritas podem ser usadas para prevenir a infecção por S. pneumo- niae, S. aureus, E. faecalis, Haemophilus influenzae tipo b, E. coli, Neisseria meningitidis ou S. agalactiae em um sujeito. Assim, em um aspecto, a invenção fornece um método para prevenir uma infecção por S. pneumoniae, S. aureus, E. faecalis, Haemophilus influenzae tipo b, E. coli, Neisseria meningitidis ou S. agalactiae em um sujeito, com- preendendo administrar ao sujeito uma quantidade imunologicamente eficaz de uma composição imunogênica da descrição.
[00482] Em um aspecto, o sujeito é um mamífero, tal como um ser humano, gato, ovelha, porco, cavalo, bovino ou cachorro. Em um as- pecto, o sujeito é um humano.
[00483] As composições imunogênicas da presente descrição po- dem ser usadas para proteger ou tratar um humano suscetível a uma infecção por S. pneumoniae, S. aureus, E. faecalis, Haemophilus influ- enzae tipo b, E. coli, Neisseria meningitidis ou S. agalactiae, por meio de administrar as composições imunogênicas por meio de uma via sis- têmica ou mucosa. Em uma modalidade, as composições imunogêni-
cas no presente documento descritas são administradas por via intra- muscular, intraperitoneal, intradérmica ou subcutânea. Em uma moda- lidade, as composições imunogênicas no presente documento descri- tas são administradas por injeção intramuscular, intraperitoneal, intra- dérmica ou subcutânea. Em uma modalidade, as composições imuno- gênicas descritas neste documento são administradas por injeção in- tramuscular ou subcutânea.
[00484] Em alguns casos, no mínimo uma dose da composição imunogênica de acordo com a descrição é necessária, mas em algu- mas circunstâncias, tais como condições de maior deficiência imune, uma segunda, terceira ou quarta dose pode ser dada. Após uma vaci- nação inicial, os sujeitos podem receber uma ou várias imunizações de reforço adequadamente espaçadas.
[00485] Em uma modalidade, o cronograma de vacinação da com- posição imunogênica de acordo com a descrição é uma dose única.
[00486] Em uma modalidade, o cronograma de vacinação da com- posição imunogênica de acordo com a descrição é um cronograma de doses múltiplas.
[00487] 3 Modalidades particulares da invenção são apresentadas nos seguintes parágrafos numerados:
[00488] 1. Método para purificar um polissacarídeo bacteriano a partir de uma solução compreendendo o dito polissacarídeo juntamen- te com contaminantes, em que o dito método compreende uma etapa de floculação.
[00489] 2. O método do parágrafo 1, em que o agente floculante compreende um cátion multivalente.
[00490] 3.O método do parágrafo 2, em que o dito cátion multiva- lente é selecionado a partir do grupo que consiste de alumínio, ferro, cálcio e magnésio.
[00491] 4. O método do parágrafo 2, em que o dito agente floculan-
te é uma mistura de pelo menos dois cátions multivalentes seleciona- dos a partir do grupo que consiste de alumínio, ferro, cálcio e magné- sio.
[00492] 5.O método do parágrafo 2, em que o dito agente floculan- te é uma mistura de pelo menos três cátions multivalentes seleciona- dos a partir do grupo que consiste de alumínio, ferro, cálcio e magné- sio.
[00493] 6.O método do parágrafo 2, em que o dito agente floculan- te é uma mistura de quatro cátions multivalentes que consistem de alumínio, ferro, cálcio e magnésio.
[00494] 7.0O método do parágrafo 1, em que o agente floculante compreende um agente selecionado a partir do grupo que consiste de alúmen (por exemplo, alúmen de potássio, alúmen de sódio ou alúmen de amônio), cloridrato de alumínio, sulfato de alumínio, óxido de cálcio, hidróxido de cálcio, sulfato de ferro (11) (sulfato ferroso), cloreto de ferro (111) (cloreto férrico), poliacrilamida, poliacrilamidas modificadas, poli- DADMAÇC, polietilenimina (PEI), aluminato de sódio e silicato de sódio.
[00495] 8. O método do parágrafo 1, em que o agente floculante é selecionado a partir do grupo que consiste de alúmen (por exemplo, alúmen de potássio, alúmen de sódio ou alúmen de amônio), cloridrato de alumínio, sulfato de alumínio, óxido de cálcio, hidróxido de cálcio, sulfato de ferro (II) (sulfato ferroso), cloreto de ferro (III) (cloreto férri- co), poliacrilamida, poliacrilamidas modificadas, poliDADMAC, alumi- nato de sódio e silicato de sódio.
[00496] 9. O método do parágrafo 1, em que o agente floculante é polietilenimina (PEI).
[00497] 10. O método do parágrafo 1, em que o agente floculante compreende alúmen.
[00498] 11.O método do parágrafo 1, em que o agente floculante é alúmen.
[00499] 12. O método do parágrafo 1, em que o agente floculante compreende alúmen de potássio.
[00500] 13. O método do parágrafo 1, em que o agente floculante é alúmen de potássio.
[00501] 14. O método do parágrafo 1, em que o agente floculante compreende alúmen de sódio.
[00502] 15. O método do parágrafo 1, em que o agente floculante é alúmen de sódio.
[00503] 16.O método do parágrafo 1, em que o agente floculante compreende alúmen de amônio.
[00504] 17. O método do parágrafo 1, em que o agente floculante é alúmen de amônio.
[00505] 18.O método do parágrafo 1, em que o agente floculante é uma mistura de dois agentes selecionados a partir do grupo que con- siste de alúmen (por exemplo, alúmen de potássio, alúmen de sódio ou alúmen de amônio), cloridrato de alumínio, sulfato de alumínio, óxi- do de cálcio, hidróxido de cálcio, sulfato de ferro (II) (sulfato ferroso), cloreto de ferro (III) (cloreto férrico), poliacrilamida, poliacrilamidas mo- dificadas, poliDADMAC, polietilenimina (PEI), aluminato de sódio e sili- cato de sódio. Em uma modalidade, o agente floculante é selecionado a partir do grupo que consiste de alúmen (por exemplo, alúmen de po- tássio, alúmen de sódio ou alúmen de amônio), cloridrato de alumínio, sulfato de alumínio, óxido de cálcio, hidróxido de cálcio, sulfato de fer- ro (II) (sulfato ferroso), cloreto de ferro (III) (cloreto férrico), poliacrila- mida, poliacrilamidas modificadas, poliDADMAC, aluminato de sódio e silicato de sódio.
[00506] 19.O método do parágrafo 1, em que o agente floculante é uma mistura de três agentes selecionados a partir do grupo que con- siste de alúmen (por exemplo, alúmen de potássio, alúmen de sódio ou alúmen de amônio), cloridrato de alumínio, sulfato de alumínio, óxi-
do de cálcio, hidróxido de cálcio, sulfato de ferro (II) (sulfato ferroso), cloreto de ferro (III) (cloreto férrico), poliacrilamida, poliacrilamidas mo- dificadas, poliDADMAC, polietilenimina (PEI), aluminato de sódio e sili- cato de sódio.
[00507] 20.O método do parágrafo 1, em que o agente floculante é uma mistura de quatro agentes selecionados a partir do grupo que consiste de alúmen (por exemplo, alúmen de potássio, alúmen de só- dio ou alúmen de amônio), cloridrato de alumínio, sulfato de alumínio, óxido de cálcio, hidróxido de cálcio, sulfato de ferro (11) (sulfato ferro- so), cloreto de ferro (III) (cloreto férrico), poliacrilamida, poliacrilamida modificada, poliDADMAC, aluminato de sódio e silicato de sódio.
[00508] 21.O método do parágrafo 1, em que o agente floculante compreende um agente selecionado a partir do grupo que consiste de quitosana, isinglass, sementes de moringa oleifera (Horseradish Tree), gelatina, sementes de strychnos potatorum (Nirmali nut tree), goma guar e alginatos (por exemplo, extratos de alga marinha marrom). Em uma modalidade, o agente floculante é selecionado a partir do grupo que consiste de quitosana, isinglass, sementes de moringa oleifera (Horseradish Tree), gelatina, sementes de strychnos potatorum (Nir- mali nut tree), goma guar e alginatos (por exemplo, extratos de alga marinha marrom).
[00509] 22.O método do parágrafo 1, em que o agente floculante é um agente selecionado a partir do grupo que consiste de quitosana, isinglass, sementes de moringa oleifera (Horseradish Tree), gelatina, sementes de strychnos potatorum (Nirmali nut tree), goma guar e algi- natos (por exemplo, extratos de alga marinha marrom). Em uma moda- lidade, o agente floculante é selecionado a partir do grupo que consis- te de quitosana, isinglass, sementes de moringa oleifera (Horseradish Tree), gelatina, sementes de strychnos potatorum (Nirmali nut tree), goma guar e alginatos (por exemplo, extratos de alga marinha mar-
rom)
[00510] 23. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 22, em que a concentração de agente floculante está entre cerca de 0,1 e cer- ca de 20% (p / v).
[00511] 24. O método de qualquer um dos parágrafos 1 e 22, em que a concentração de agente floculante está entre cerca de 0,5 e cer- ca de 10% (p / v).
[00512] 25. O método de qualquer um dos parágrafos 1 e 22, em que a concentração de agente floculante está entre cerca de 1 e cerca de 5% (p / v).
[00513] 26.O método de qualquer um dos parágrafos 1 e 22, em que a concentração de agente floculante é de cerca de 0,1, cerca de 0,25, cerca de 0,5, cerca de 1,0, cerca de 1,5, cerca de 2,0, cerca de 2,5, cerca de 3,0, cerca de 3,5, cerca de 4,0, cerca de 4,5, cerca de 5,0, cerca de 5,5, cerca de 6,0, cerca de 6,5, cerca de 7,0, cerca de 7,5, cerca de 8,0, cerca de 8,5, cerca de 9,0, cerca de 9,5 ou cerca de 10% (p /v).
[00514] 27.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 22, em que a concentração de agente floculante é de cerca de 10,5, cerca de 11,0, cerca de 11,5, cerca de 12,0, cerca de 12,5, cerca de 13,0, cerca de 13,5, cerca de 14,0, cerca de 14,5, cerca de 15,0, cerca de 15,5, cerca de 16,0, cerca de 16,5, cerca de 17,0, cerca de 17,5, cerca de 18,0, cerca de 18,5, cerca de 19,0, cerca de 19,5 ou cerca de 20,0% (p Iv)
[00515] 28. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 22, em que a concentração do agente floculante é de cerca de 0,5, cerca de 1,0, cerca de 1,5, cerca de 2,0, cerca de 2,5, cerca de 3,0, cerca de 3,5, cerca de 4,0, cerca de 4,5 ou cerca de 5,0% (p / v).
[00516] 29. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 22, em que a concentração de agente floculante é de cerca de 1,0, cerca de
1,5, cerca de 2,0, cerca de 2,5, cerca de 3,0, cerca de 3,5 ou cerca de 4,0% (p / v) é usada.
[00517] 30. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 29, em que o agente floculante é adicionado ao longo de um período de al- guns segundos (por exemplo, 1 a 10 segundos) a cerca de um mês.
[00518] 31.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 29, em que o agente floculante é adicionado ao longo de um período de cerca de 2 segundos a cerca de duas semanas.
[00519] 32. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 29, em que o agente floculante é adicionado ao longo de um período de cerca de 1 minuto a cerca de uma semana.
[00520] 33. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 29, em que o agente floculante é adicionado ao longo de um período de cerca de 1 minuto, cerca de 5 minutos, cerca de 10 minutos, cerca de 15 mi- nutos, cerca de 20 minutos, cerca de 25 minutos, cerca de 30 minutos, cerca de 35 minutos, cerca de 40 minutos, cerca de 45 minutos, cerca de 50 minutos, cerca de 55 minutos, cerca de 60 minutos, cerca de 65 minutos, cerca de 70 minutos, cerca de 80 minutos, cerca de 85 minu- tos, cerca de 90 minutos, cerca de 95 minutos, cerca de 100 minutos, cerca de 110 minutos, cerca de 120 minutos, cerca de 130 minutos, cerca de 140 minutos, cerca de 150 minutos, cerca de 160 minutos, cerca de 170 minutos, cerca de 3 horas, cerca de 4 horas, cerca de 5 horas, cerca de 6 horas, cerca de 7 horas, cerca de 8 horas, cerca de 9 horas, cerca de 10 horas, cerca de 11 horas, cerca de 12 horas, cer- ca de 13 horas, cerca de 14 horas, cerca de 15 horas, cerca de 16 ho- ras, cerca de 17 horas, cerca de 18 horas, cerca de 19 horas, cerca de horas, cerca de 21 horas, cerca de 22 horas, cerca de 23 horas ou cerca de 24 horas a cerca de dois dias.
[00521] 34. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 29, em que o agente floculante é adicionado ao longo de um período de cerca de 5 minutos, cerca de 10 minutos, cerca de 15 minutos, cerca de 20 minutos, cerca de 25 minutos, cerca de 30 minutos, cerca de 35 minu- tos, cerca de 40 minutos, cerca de 45 minutos, cerca de 50 minutos, cerca de 55 minutos, cerca de 60 minutos, cerca de 65 minutos, cerca de 70 minutos, cerca de 80 minutos, cerca de 85 minutos, cerca de 90 minutos, cerca de 95 minutos, cerca de 100 minutos, cerca de 110 mi- nutos, cerca de 120 minutos, cerca de 130 minutos, cerca de 140 mi- nutos, cerca de 150 minutos, cerca de 160 minutos, cerca de 170 mi- nutos, cerca de 3 horas, cerca de 4 horas, cerca de 5 horas, cerca de 6 horas, cerca de 7 horas, cerca de 8 horas, cerca de 9 horas, cerca de 10 horas, cerca de 11 horas ou cerca de 12 horas a cerca de um dia.
[00522] 35. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 29, em que o agente floculante é adicionado ao longo de um período de cerca de 15 minutos, cerca de 20 minutos, cerca de 25 minutos, cerca de 30 minutos, cerca de 35 minutos, cerca de 40 minutos, cerca de 45 minu- tos, cerca de 50 minutos, cerca de 55 minutos, cerca de 60 minutos, cerca de 65 minutos, cerca de 70 minutos, cerca de 80 minutos, cerca de 85 minutos, cerca de 90 minutos, cerca de 95 minutos, cerca de 100 minutos, cerca de 110 minutos, cerca de 120 minutos, cerca de 130 minutos, cerca de 140 minutos, cerca de 150 minutos, cerca de 160 minutos, cerca de 170 minutos, cerca de 3 horas, cerca de 4 ho- ras, cerca de 5 horas, cerca de 6 horas, cerca de 7 horas, cerca de 8 horas, cerca de 9 horas, cerca de 10 horas, cerca de 11 horas ou cer- ca de 12 horas a cerca de um dia.
[00523] 36.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 29, em que o agente floculante é adicionado ao longo de um período de cerca de 15 minutos a cerca de 3 horas.
[00524] 37.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 29, em que o agente floculante é adicionado ao longo de um período de cerca de 30 minutos a cerca de 120 minutos.
[00525] 38. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 29, em que o agente floculante é adicionado ao longo de um período de cerca de 2 segundos, cerca de 10 segundos, cerca de 30 segundos, cerca de 1 minuto, cerca de 5 minutos, cerca de 10 minutos, cerca de 15 mi- nutos, cerca de 20 minutos, cerca de 25 minutos, cerca de 30 minutos, cerca de 35 minutos, cerca de 40 minutos, cerca de 45 minutos, cerca de 50 minutos, cerca de 55 minutos, cerca de 60 minutos, cerca de 65 minutos, cerca de 70 minutos, cerca de 75 minutos, cerca de 80 minu- tos, cerca de 85 minutos, cerca de 90 minutos, cerca de 95 minutos, cerca de 100 minutos, cerca de 105 minutos, cerca de 110 minutos, cerca de 115 minutos, cerca de 120 minutos, cerca de 125 minutos, cerca de 130 minutos, cerca de 135 minutos, cerca de 140 minutos, cerca de 145 minutos, cerca de 150 minutos, cerca de 155 minutos, cerca de 160 minutos, cerca de 170 minutos, cerca de 3,0 horas, cerca de 3,5 horas, cerca de 4,0 horas, cerca de 4,5 horas, cerca de 5,0 ho- ras, cerca de 5,5 horas, cerca de 6,0 horas, cerca de 6,5 horas, cerca de 7,0 horas, cerca de 7,5 horas, cerca de 8,0 horas, cerca de 8,5 ho- ras, cerca de 9 horas, um cerca de 10 horas, cerca de 11 horas, cerca de 12 horas, cerca de 13 horas, cerca de 14 horas, cerca de 15 horas, cerca de 16 horas, cerca de 17 horas, cerca de 18 horas, cerca de 19 horas, cerca de 20 horas, cerca de 21 horas, cerca de 22 horas, cerca de 23 horas, cerca de 24 horas, cerca de 30 horas, cerca de 36 horas, cerca de 42 horas, cerca de 48 horas, cerca de 3 dias, cerca de 4 dias, cerca de 5 dias, cerca de 6 dias, cerca de 7 dias, cerca de 8 dias, cer- ca de 9 dias, cerca de 10 dias, cerca de 11 dias, cerca de 12 dias, cer- ca de 13 dias, cerca de 14 dias ou cerca de 15 dias.
[00526] 39. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 38, em que o agente floculante é adicionado sem agitação.
[00527] 40. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 38, em que o agente floculante é adicionado sob agitação.
[00528] 41.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 38, em que o agente floculante é adicionado sob agitação suave.
[00529] 42. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 38, em que o agente floculante é adicionado sob agitação vigorosa.
[00530] 43. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 42, em que a solução é retida por algum tempo para permitir a sedimentação dos flocos antes do processamento à jusante.
[00531] 44. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 43, em que a etapa de floculação é realizada com um tempo de sedimentação de alguns segundos (por exemplo, 2 a 10 segundos) a cerca de 1 mi- nuto.
[00532] 45.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 43, em que a etapa de floculação é realizada com um tempo de sedimentação de pelo menos cerca de 2, pelo menos cerca de 3, pelo menos cerca de 4, pelo menos cerca de 5, pelo menos cerca de 10, pelo menos cerca de 15, pelo menos cerca de 20, pelo menos cerca de 25, pelo menos cerca de 30, pelo menos cerca de 35, pelo menos cerca de 40, pelo menos cerca de 45, pelo menos cerca de 50, pelo menos cerca de 55, pelo menos cerca de 60, pelo menos cerca de 65, pelo menos cerca de 70, pelo menos cerca de 75, pelo menos cerca de 80, pelo menos cerca de 85, pelo menos cerca de 90, pelo menos cerca de 95, pelo menos cerca de 100, pelo menos cerca de 105, pelo menos cerca de 110, pelo menos cerca de 115, pelo menos cerca de 120, pelo me- nos cerca de 125, pelo menos cerca de 130, pelo menos cerca de 135, pelo menos cerca de 140, pelo menos cerca de 145, pelo menos cerca de 150, pelo menos cerca de 155 ou pelo menos cerca de 160 minu- tos.
[00533] 46.O método do parágrafo 1 a 43, em que o tempo de se- dimentação é inferior a uma semana.
[00534] 47. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 43, em que a etapa de floculação é realizada com um tempo de sedimentação de cerca de 1, cerca de 2, cerca de 3, cerca de 4, cerca de 5, cerca de 6, cerca de 7, cerca de 8, cerca de 9, cerca de 10, cerca de 15, cerca de 20, cerca de 25, cerca de 30, cerca de 40, cerca de 50, cerca de 60, cerca de 70, cerca de 80, cerca de 90, cerca de 100, cerca de 120, cerca de 140, cerca de 160, cerca de 180, cerca de 220, cerca de 240, cerca de 300, cerca de 360, cerca de 420, cerca de 480, cerca de 540, cerca de 600, cerca de 660, cerca de 720, cerca de 780, cerca de 840, cerca de 900, cerca de 960, cerca de 1020, cerca de 1080, cerca de 1140, cerca de 1200, cerca de 1260, cerca de 1320, cerca de 1380, cerca de 1440 minutos, cerca de dois dias, cerca de três dias, cerca de quatro dias, cerca de cinco dias ou cerca de seis dias a 1 semana.
[00535] 48. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 43, em que a etapa de floculação é realizada com um tempo de sedimentação entre alguns segundos (por exemplo, 1 a 10 segundos) e cerca de um mês.
[00536] 49. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 43, em que a etapa de floculação é realizada com um tempo de sedimentação entre cerca de 2 segundos e cerca de duas semanas.
[00537] 50.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 43, em que a etapa de floculação é realizada com um tempo de sedimentação entre cerca de 1 minuto e cerca de uma semana.
[00538] 51.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 43, em que a etapa de floculação é realizada com um tempo de sedimentação de cerca de 1 minuto, cerca de 5 minutos, cerca de 10 minutos, cerca de 15 minutos, cerca de 20 minutos, cerca de 25 minutos, cerca de 30 minutos, cerca de 35 minutos, cerca de 40 minutos, cerca de 45 minu- tos, cerca de 50 minutos, cerca de 55 minutos, cerca de 60 minutos, cerca de 65 minutos, cerca de 70 minutos, cerca de 80 minutos, cerca de 85 minutos, cerca de 90 minutos, cerca de 95 minutos, cerca de 100 minutos, cerca de 110 minutos, cerca de 120 minutos, cerca de 130 minutos, cerca de 140 minutos, cerca de 150 minutos, cerca de 160 minutos, cerca de 170 minutos, cerca de 3 horas, cerca de 4 ho- ras, cerca de 5 horas, cerca de 6 horas, cerca de 7 horas, cerca de 8 horas, cerca de 9 horas, cerca de 10 horas, cerca de 11 horas, cerca de 12 horas, cerca de 13 horas, cerca de 14 horas, cerca de 15 horas, cerca de 16 horas, cerca de 17 horas, cerca de 18 horas, cerca de 19 horas, cerca de 20 horas, cerca de 21 horas, cerca de 22 horas, cerca de 23 horas ou cerca de 24 horas a cerca de dois dias.
[00539] 52.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 43, em que a etapa de floculação é realizada com um tempo de sedimentação de cerca de 5 minutos, cerca de 10 minutos, cerca de 15 minutos, cer- ca de 20 minutos, cerca de 25 minutos, cerca de 30 minutos, cerca de minutos, cerca de 40 minutos, cerca de 45 minutos, cerca de 50 minutos, cerca de 55 minutos, cerca de 60 minutos, cerca de 65 minu- tos, cerca de 70 minutos, cerca de 80 minutos, cerca de 85 minutos, cerca de 90 minutos, cerca de 95 minutos, cerca de 100 minutos, cer- ca de 110 minutos, cerca de 120 minutos, cerca de 130 minutos, cerca de 140 minutos, cerca de 150 minutos, cerca de 160 minutos, cerca de 170 minutos, cerca de 3 horas, cerca de 4 horas, cerca de 5 horas, cerca de 6 horas, cerca de 7 horas, cerca de 8 horas, cerca de 9 ho- ras, cerca de 10 horas, cerca de 11 horas ou cerca de 12 horas a cer- ca de um dia.
[00540] 53. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 43, em que a etapa de floculação é realizada com um tempo de sedimentação de cerca de 15 minutos, cerca de 20 minutos, cerca de 25 minutos, cerca de 30 minutos, cerca de 35 minutos, cerca de 40 minutos, cerca de 45 minutos, cerca de 50 minutos, cerca de 55 minutos, cerca de 60 minutos, cerca de 65 minutos, cerca de 70 minutos, cerca de 80 minu-
tos, cerca de 85 minutos, cerca de 90 minutos, cerca de 95 minutos, cerca de 100 minutos, cerca de 110 minutos, cerca de 120 minutos, cerca de 130 minutos, cerca de 140 minutos, cerca de 150 minutos, cerca de 160 minutos, cerca de 170 minutos, cerca de 3 horas, cerca de 4 horas, cerca de 5 horas, cerca de 6 horas, cerca de 7 horas, cer- ca de 8 horas, cerca de 9 horas, cerca de 10 horas, cerca de 11 horas ou cerca de 12 horas a cerca de um dia.
[00541] 54. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 43, em que a etapa de floculação é realizada com um tempo de sedimentação entre cerca de 15 minutos e cerca de 3 horas.
[00542] 55.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 43, em que a etapa de floculação é realizada com um tempo de sedimentação entre cerca de 30 minutos e cerca de 120 minutos.
[00543] 56.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 43, em que a etapa de floculação é realizada com um tempo de sedimentação de cerca de 10 segundos, cerca de 30 segundos, cerca de 1 minuto, cerca de 5 minutos, cerca de 10 minutos, cerca de 15 minutos, cerca de 20 minutos, cerca de 25 minutos, cerca de 30 minutos, cerca de 35 minutos, cerca de 40 minutos, cerca de 45 minutos, cerca de 50 minu- tos, cerca de 55 minutos, cerca de 60 minutos, cerca de 65 minutos, cerca de 70 minutos, cerca de 75 minutos, cerca de 80 minutos, cerca de 85 minutos, cerca de 90 minutos, cerca de 95 minutos, cerca de 100 minutos, cerca de 105 minutos, cerca de 110 minutos, cerca de 115 minutos, cerca de 120 minutos, cerca de 125 minutos, cerca de 130 minutos, cerca de 135 minutos, cerca de 140 minutos, cerca de 145 minutos, cerca de 150 minutos, cerca de 155 minutos, cerca de 160 minutos, cerca de 170 minutos, cerca de 3 horas, cerca de 3,5 ho- ras, cerca de 4 horas, cerca de 4,5 horas, cerca de 5 horas, cerca de 5,5 horas, cerca de 6 horas, cerca de 6,5 horas, cerca de 7 horas, cer- ca de 7,5 horas, cerca de 8 horas, cerca de 8,5 horas, cerca de 9 ho-
ras, cerca de 10 horas, cerca de 11 horas, cerca de 12 horas, cerca de 13 horas, cerca de 14 horas, cerca de 15 horas, cerca de 16 horas, cerca de 17 horas, cerca de 18 horas, cerca de 19 horas, cerca de 20 horas, cerca de 21 horas, cerca de 22 horas, cerca de 23 horas, cerca de 24 horas, cerca de 30 horas, cerca de 36 horas, cerca de 42 horas, cerca de 48 horas, cerca de 3 dias, cerca de 4 dias, cerca de 5 dias, cerca de 6 dias, cerca de 7 dias, cerca de 8 dias, cerca de 9 dias, cer- ca de 10 dias, cerca de 11 dias, cerca de 12 dias, cerca de 13 dias, cerca de 14 dias ou cerca de 15 dias.
[00544] 57.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 43, em que a etapa de floculação é realizada com um tempo de sedimentação de cerca de 5, cerca de 10, cerca de 15, cerca de 20, cerca de 25, cerca de 30, cerca de 60, cerca de 90, cerca de 120, cerca de 180, cerca de 220, cerca de 240, cerca de 300, cerca de 360, cerca de 420, cerca de 480, cerca de 540, cerca de 600, cerca de 660, cerca de 720, cerca de 780, cerca de 840, cerca de 900, cerca de 960, cerca de 1020, cerca de 1080, cerca de 1140, cerca de 1200, cerca de 1260, cerca de 1320, cerca de 1380 ou cerca de 1440 minutos a dois dias.
[00545] 58. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 43, em que a etapa de floculação é realizada com um tempo de sedimentação entre cerca de 5 minutos e cerca de um dia.
[00546] 59. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 43, em que a etapa de floculação é realizada com um tempo de sedimentação entre cerca de 5 minutos e cerca de 120 minutos.
[00547] 60. Método, de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 43, em que a etapa de floculação é realizada com um tempo de sedi- mentação de cerca de 5 minutos, cerca de 10 minutos, cerca de 15 minutos, cerca de 20 minutos, cerca de 25 minutos, cerca de 30 minu- tos, cerca de 35 minutos, cerca de 40 minutos, cerca de 45 minutos, cerca de 50 minutos, cerca de 55 minutos, cerca de 60 minutos, cerca de 65 minutos, cerca de 70 minutos, cerca de 75 minutos, cerca de 80 minutos, cerca de 85 minutos, cerca de 90 minutos, cerca de 95 minu- tos, cerca de 100 minutos, cerca de 105 minutos, cerca de 110 minu- tos, cerca de 115 minutos, cerca de 120 minutos, cerca de 125 minu- tos, cerca de 130 minutos, cerca de 135 minutos, cerca de 140 minu- tos, cerca de 145 minutos, cerca de 150 minutos, cerca de 155 minu- tos ou cerca de 160 minutos.
[00548] 61.O método de qualquer um dos parágrafos 43 a 60, em que a etapa de sedimentação é conduzida sem agitação.
[00549] 62. O método de qualquer um dos parágrafos 43 a 60, em que a etapa de sedimentação é conduzida sob agitação.
[00550] 63. O método de qualquer um dos parágrafos 43 a 60, em que a etapa de sedimentação é conduzida sob agitação suave.
[00551] 64. O método de qualquer um dos parágrafos 43 a 60, em que a etapa de sedimentação é conduzida sob agitação vigorosa.
[00552] 65. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 64, em que a dita etapa de floculação é realizada em um pH ácido.
[00553] 66.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 64, em que a dita etapa de floculação é realizada em um pH abaixo de 7,0, 6,0, 5,0 ou 4,0.
[00554] 67.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 64, em que a dita etapa de floculação é realizada em um pH entre 7,0 e 1,0.
[00555] 68. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 64, em que a dita etapa de floculação é realizada em um pH entre 5,5 e 2,5, 5,0 e 2,5, 4,5 € 2,5, 4,0 e 2,5, 5,5 € 3,0, 5,0 e 3,0, 4,5 6 3,0, 4,0 6 3,0, 5,5 e 3,5, 5,0 e 3,5, 4,5 € 3,5 ou 4,0 e 3,5.
[00556] 69. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 64, em que a dita etapa de floculação é realizada em um pH de cerca de 5,5, cerca de 5,0, cerca de 4,5, cerca de 4,0, cerca de 3,5, cerca de 3,0, cerca de 2,5, cerca de 2,0, cerca de 1,5 ou cerca de 1,0.
[00557] 70.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 64, em que a dita etapa de floculação é realizada em um pH de cerca de 4,0, cerca de 3,5, cerca de 3,0 ou cerca de 2,5.
[00558] 71.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 64, em que a dita etapa de floculação é realizada em um pH de cerca de 3,5.
[00559] 72. O método de qualquer um dos parágrafos 65 a 71, em que o dito pH ácido é obtido acidificando a solução com um ácido.
[00560] 73. O método de qualquer um dos parágrafos 65 a 71, em que o dito pH ácido é obtido acidificando a solução com um ácido se- lecionado a partir do grupo que consiste de HCl, H3PO;, ácido cítrico, ácido acético, ácido nitroso e ácido sulfúrico.
[00561] 74. O método de qualquer um dos parágrafos 65 a 71, em que o dito pH ácido é obtido acidificando a solução com um aminoáci- do.
[00562] 75. O método de qualquer um dos parágrafos 65 a 71, em que o dito pH ácido é obtido acidificando a solução com um aminoáci- do selecionado a partir do grupo que consiste de glicina, alanina e glu- tamato.
[00563] 76.O método de qualquer um dos parágrafos 65 a 71, em que o dito pH ácido é obtido acidificando a solução com ácido sulfúri- co.
[00564] 77.O método de qualquer um dos parágrafos 65 a 71, em que o ácido é adicionado sob agitação.
[00565] 78. O método de qualquer um dos parágrafos 65 a 71, em que o ácido é adicionado sob agitação suave.
[00566] 79.O método de qualquer um dos parágrafos 65 a 71, em que o ácido é adicionado sob agitação vigorosa.
[00567] 80. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 79, em que a adição do agente floculante é realizada a uma temperatura entre cerca de 4ºC e cerca de 30ºC.
[00568] 81.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 79, em que a adição do agente floculante é realizada a uma temperatura de cerca de 4ºC, cerca de 5ºC, cerca de 6ºC, cerca de 7ºC, cerca de 8ºC, cerca de 9ºC, cerca de 10ºC, cerca de 11ºC, cerca de 12ºC, cerca de 13ºC, cerca de 14ºC, cerca de 15ºC, cerca de 16ºC, cerca de 17ºC, cerca de 18ºC, cerca de 19ºC, cerca de 20ºC, cerca de 21ºC, cerca de 22ºC, cerca de 23ºC, cerca de 24ºC, cerca de 25ºC, cerca de 26ºC, cerca de 27ºC, cerca de 28ºC, cerca de 29ºC ou cerca de 30ºC.
[00569] 82. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 79, em que a adição do agente floculante é realizada a uma temperatura de cerca de 20ºC.
[00570] 83. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 79, em que a adição do agente floculante é realizada a uma temperatura entre cerca de 30ºC e cerca de 95ºC.
[00571] 84. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 79, em que a adição do agente floculante é realizada a uma temperatura entre cerca de 35ºC e cerca de 80ºC, a uma temperatura de entre cerca de 40ºC e cerca de 70ºC, a uma temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 65ºC, a uma temperatura entre cerca de 50ºC e cerca de 60ºC, a uma temperatura entre cerca de 50ºC e cerca de 55ºC, a uma tempe- ratura entre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC ou a uma temperatura en- tre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC.
[00572] 85. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 79, em que a adição do agente floculante é realizada a uma temperatura de cerca de 35ºC, cerca de 36ºC, cerca de 37ºC, cerca de 38ºC, cerca de 39ºC, cerca de 40ºC, cerca de 41ºC, cerca de 42ºC, cerca de 43ºC, cerca de 44ºC, cerca de 45ºC, cerca de 46ºC, cerca de 47ºC, cerca de 48ºC, cerca de 49ºC, cerca de 50ºC, cerca de 51ºC, cerca de 52ºC, cerca de 53ºC, cerca de 54ºC, cerca de 55ºC, cerca de 56ºC, cerca de 57ºC, cerca de 58ºC, cerca de 59ºC, cerca de 60ºC, cerca de 61ºC,
cerca de 62ºC, cerca de 63ºC, cerca de 64ºC, cerca de 65ºC, cerca de 66ºC, cerca de 67ºC, cerca de 68ºC, cerca de 69ºC, cerca de 70ºC, cerca de 71ºC, cerca de 72ºC, cerca de 73ºC, cerca de 74ºC, cerca de 75ºC, cerca de 76ºC, cerca de 77ºC, cerca de 78ºC, cerca de 79ºC ou cerca de 80ºC.
[00573] 86. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 79, em que a adição do agente floculante é realizada a uma temperatura de cerca de 50ºC.
[00574] 87.O método de qualquer um dos parágrafos 43 a 86, em que a etapa de sedimentação, se presente, é realizada a uma tempe- ratura entre cerca de 4ºC e cerca de 30ºC.
[00575] 88. O método de qualquer um dos parágrafos 43 a 86, em que a etapa de sedimentação, se presente, é realizada a uma tempe- ratura de cerca de 4ºC, cerca de 5ºC, cerca de 6ºC, cerca de 7ºC, cer- ca de 8ºC, cerca de 9ºC, cerca de 10ºC, cerca de 11ºC, cerca de 12ºC, cerca de 13ºC, cerca de 14ºC, cerca de 15ºC, cerca de 16ºC, cerca de 17ºC, cerca de 18ºC, cerca de 19ºC, cerca de 20ºC, cerca de 21ºC, cerca de 22ºC, cerca de 23ºC, cerca de 24ºC, cerca de 25ºC, cerca de 26ºC, cerca de 27ºC, cerca de 28ºC, cerca de 29ºC ou cerca de 30ºC.
[00576] 89. O método de qualquer um dos parágrafos 43 a 86, em que a etapa de sedimentação, se presente, é realizada a uma tempe- ratura de cerca de 20ºC.
[00577] 90.O método de qualquer um dos parágrafos 43 a 86, em que a etapa de sedimentação, se presente, é realizada a uma tempe- ratura entre cerca de 30ºC e cerca de 95ºC.
[00578] 91.O método de qualquer um dos parágrafos 43 a 86, em que a etapa de sedimentação, se presente, é realizada a uma tempe- ratura entre cerca de 35ºC e cerca de 80ºC, a uma temperatura entre cerca de 40ºC e cerca de 70ºC, a uma temperatura entre cerca de
45ºC e cerca de 65ºC, a uma temperatura entre cerca de 50ºC e cerca de 60ºC, a uma temperatura entre cerca de 50ºC e cerca de 55ºC, a uma temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC ou a uma tem- peratura entre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC.
[00579] 92.O método de qualquer um dos parágrafos 43 a 86, em que a etapa de sedimentação, se presente, é realizada a uma tempe- ratura de cerca de 35ºC, cerca de 36ºC, cerca de 37ºC, cerca de 38ºC, cerca de 39ºC, cerca de 40ºC, cerca de 41ºC, cerca de 42ºC, cerca de 43ºC, cerca de 44ºC, cerca de 45ºC, cerca de 46ºC, cerca de 47ºC, cerca de 48ºC, cerca de 49ºC, cerca de 50ºC, cerca de 51ºC, cerca de 52ºC, cerca de 53ºC, cerca de 54ºC, cerca de 55ºC, cerca de 56ºC, cerca de 57ºC, cerca de 58ºC, cerca de 59ºC, cerca de 60ºC, cerca de 61ºC, cerca de 62ºC, cerca de 63ºC, cerca de 64ºC, cerca de 65ºC, cerca de 66ºC, cerca de 67ºC, cerca de 68ºC, cerca de 69ºC, cerca de 70ºC, cerca de 71ºC, cerca de 72ºC, cerca de 73ºC, cerca de 74ºC, cerca de 75ºC, cerca de 76ºC, cerca de 77ºC, cerca de 78ºC, cerca de 79ºC ou cerca de 80ºC.
[00580] 93.O método de qualquer um dos parágrafos 43 a 86, em que a etapa de sedimentação, se presente, é realizada a uma tempe- ratura de cerca de 50ºC.
[00581] 94. O método de qualquer um dos parágrafos 72 a 93, em que a etapa de acidificação, se presente, é realizada a uma temperatu- ra entre cerca de 4ºC e cerca de 30ºC.
[00582] 95.O método de qualquer um dos parágrafos 72 a 93, em que a etapa de acidificação, se presente, é realizada a uma temperatu- ra de cerca de 4ºC, cerca de 5ºC, cerca de 6ºC, cerca de 7ºC, cerca de 8ºC, cerca de 9ºC, cerca de 10ºC, cerca de 11ºC, cerca de 12ºC, cerca de 13ºC, cerca de 14ºC, cerca de 15ºC, cerca de 16ºC, cerca de 17ºC, cerca de 18ºC, cerca de 19ºC, cerca de 20ºC, cerca de 21ºC, cerca de 22ºC, cerca de 23ºC, cerca de 24ºC, cerca de 25ºC, cerca de
26ºC, cerca de 27ºC, cerca de 28ºC, cerca de 29ºC ou cerca de 30ºC.
[00583] 96.O método de qualquer um dos parágrafos 72 a 93, em que a etapa de acidificação, se presente, é realizada a uma temperatu- ra de cerca de 20ºC.
[00584] 97.O método de qualquer um dos parágrafos 72 a 93, em que a etapa de acidificação, se presente, é realizada a uma temperatu- ra entre cerca de 30ºC e cerca de 95ºC.
[00585] 98.O método de qualquer um dos parágrafos 72 a 93, em que a etapa de acidificação, se presente, é realizada a uma temperatu- ra entre cerca de 35ºC e cerca de 80ºC, a uma temperatura entre cer- ca de 40ºC e cerca de 70ºC, a uma temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 65ºC, a uma temperatura entre cerca de 50ºC e cerca de 60ºC, a uma temperatura entre cerca de 50ºC e cerca de 55ºC, a uma temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC ou a uma temperatu- ra entre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC.
[00586] 99. O método de qualquer um dos parágrafos 72 a 93, em que a etapa de acidificação, se presente, é realizada a uma temperatu- ra de cerca de 35ºC, cerca de 36ºC, cerca de 37ºC, cerca de 38ºC, cerca de 39ºC, cerca de 40ºC, cerca de 41ºC, cerca de 42ºC, cerca de 43ºC, cerca de 44ºC, cerca de 45ºC, cerca de 46ºC, cerca de 47ºC, cerca de 48ºC, cerca de 49ºC, cerca de 50ºC, cerca de 51ºC, cerca de 52ºC, cerca de 53ºC, cerca de 54ºC, cerca de 55ºC, cerca de 56ºC, cerca de 57ºC, cerca de 58ºC, cerca de 59ºC, cerca de 60ºC, cerca de 61ºC, cerca de 62ºC, cerca de 63ºC, cerca de 64ºC, cerca de 65ºC, cerca de 66ºC, cerca de 67ºC, cerca de 68ºC, cerca de 69ºC, cerca de 70ºC, cerca de 71ºC, cerca de 72ºC, cerca de 73ºC, cerca de 74ºC, cerca de 75ºC, cerca de 76ºC, cerca de 77ºC, cerca de 78ºC, cerca de 79ºC ou cerca de 80ºC.
[00587] 100. O método de qualquer um dos parágrafos 72 a 93, em que a etapa de acidificação, se presente, é realizada a uma temperatu-
ra de cerca de 50ºC.
[00588] 101. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 79, em que a adição do agente floculante e a etapa de sedimentação, se pre- sente, são realizadas a uma temperatura entre cerca de 4ºC e cerca de 30ºC.
[00589] 102. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 79, em que a adição do agente floculante e a etapa de sedimentação, se pre- sente, são realizadas a uma temperatura de cerca de 4ºC, cerca de 5ºC, cerca de 6ºC, cerca de 7ºC, cerca de 8ºC, cerca de 9ºC, cerca de 10ºC, cerca de 11ºC, cerca de 12ºC, cerca de 13ºC, cerca de 14ºC, cerca de 15ºC, cerca de 16ºC, cerca de 17ºC, cerca de 18ºC, cerca de 19ºC, cerca de 20ºC, cerca de 21ºC, cerca de 22ºC, cerca de 23ºC, cerca de 24ºC, cerca de 25ºC, cerca de 26ºC, cerca de 27ºC, cerca de 28ºC, cerca de 29ºC ou cerca de 30ºC.
[00590] 103. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 79, em que a adição do agente floculante e a etapa de sedimentação, se pre- sente, são realizadas a uma temperatura de cerca de 20ºC.
[00591] 104. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 79, em que a adição do agente floculante e a etapa de sedimentação, se pre- sente, são realizadas a uma temperatura entre cerca de 30ºC e cerca de 95ºC.
[00592] 105. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 79, em que a adição do agente floculante e a etapa de sedimentação, se pre- sente, são realizadas a uma temperatura entre cerca de 35ºC e cerca de 80ºC, a uma temperatura entre cerca de 40ºC e cerca de 70ºC, a uma temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 65ºC, a uma tempe- ratura entre cerca de 50ºC e cerca de 60ºC, a uma temperatura entre cerca de 50ºC e cerca de 55ºC, a uma temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC ou a uma temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC.
[00593] 106. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 79, em que a adição do agente floculante e a etapa de sedimentação, se pre- sente, são realizados a uma temperatura de cerca de 35ºC, cerca de 36ºC, cerca de 37ºC, cerca de 38ºC, cerca de 39ºC, cerca de 40ºC, cerca de 41ºC, cerca de 42ºC, cerca de 43ºC, cerca de 44ºC, cerca de 45ºC, cerca de 46ºC, cerca de 47ºC, cerca de 48ºC, cerca de 49ºC, cerca de 50ºC, cerca de 51ºC, cerca de 52ºC, cerca de 53ºC, cerca de 54ºC, cerca de 55ºC, cerca de 56ºC, cerca de 57ºC, cerca de 58ºC, cerca de 59ºC, cerca de 60ºC, cerca de 61ºC, cerca de 62ºC, cerca de 63ºC, cerca de 64ºC, cerca de 65ºC, cerca de 66ºC, cerca de 67ºC, cerca de 68ºC, cerca de 69ºC, cerca de 70ºC, cerca de 71ºC, cerca de 72ºC, cerca de 73ºC, cerca de 74ºC, cerca de 75ºC, cerca de 76ºC, cerca de 77ºC, cerca de 78ºC, cerca de 79ºC ou cerca de 80ºC.
[00594] 107. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 79, em que a adição do agente floculante e a etapa de sedimentação, se pre- sente, são realizadas a uma temperatura de cerca de 50ºC.
[00595] 108. O método, de acordo com qualquer um dos 72 a 79, em que a adição do agente floculante e a etapa de acidificação são realizadas a uma temperatura entre cerca de 4ºC e cerca de 30ºC.
[00596] 109. O método de qualquer um dos parágrafos 72 a 79, em que a adição do agente floculante e a etapa de acidificação são reali- zadas a uma temperatura de cerca de 4ºC, cerca de 5ºC, cerca de 6ºC, cerca de 7ºC, cerca de 8ºC, cerca de 9ºC, cerca de 10ºC, cerca de 11ºC, cerca de 12ºC, cerca de 13ºC, cerca de 14ºC, cerca de 15ºC, cerca de 16ºC, cerca de 17ºC, cerca de 18ºC, cerca de 19ºC, cerca de 20ºC, cerca de 21ºC, cerca de 22ºC, cerca de 23ºC, cerca de 24ºC, cerca de 25ºC, cerca de 26ºC, cerca de 27ºC, cerca de 28ºC, cerca de 29ºC ou cerca de 30ºC.
[00597] 110. O método de qualquer um dos parágrafos 72 a 79, em que a adição do agente floculante e a etapa de acidificação são reali-
zadas a uma temperatura de cerca de 20ºC.
[00598] 111.O método de qualquer um dos parágrafos 72 a 79, em que a adição do agente floculante e a etapa de acidificação são reali- zadas a uma temperatura entre cerca de 30ºC e cerca de 95ºC.
[00599] 112. O método de qualquer um dos parágrafos 72 a 79, em que a adição do agente floculante e a etapa de acidificação são reali- zadas a uma temperatura entre cerca de 35ºC e cerca de 80ºC, a uma temperatura entre cerca de 40ºC e cerca de 70ºC, a uma temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 65ºC, a uma temperatura entre cerca de 50ºC e cerca de 60ºC, a uma temperatura entre cerca de 50ºC e cerca de 55ºC, a uma temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC ou a uma temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC.
[00600] 113. O método de qualquer um dos parágrafos 72 a 79, em que a adição do agente floculante e a etapa de acidificação são reali- zadas a uma temperatura de cerca de 35ºC, cerca de 36ºC, cerca de 37ºC, cerca de 38ºC, cerca de 39ºC, cerca de 40ºC, cerca de 41ºC, cerca de 42ºC, cerca de 43ºC, cerca de 44ºC, cerca de 45ºC, cerca de 46ºC, cerca de 47ºC, cerca de 48ºC, cerca de 49ºC, cerca de 50ºC, cerca de 51ºC, cerca de 52ºC, cerca de 53ºC, cerca de 54ºC, cerca de 55ºC, cerca de 56ºC, cerca de 57ºC, cerca de 58ºC, cerca de 59ºC, cerca de 60ºC, cerca de 61ºC, cerca de 62ºC, cerca de 63ºC, cerca de 64ºC, cerca de 65ºC, cerca de 66ºC, cerca de 67ºC, cerca de 68ºC, cerca de 69ºC, cerca de 70ºC, cerca de 71ºC, cerca de 72ºC, cerca de 73ºC, cerca de 74ºC, cerca de 75ºC, cerca de 76ºC, cerca de 77ºC, cerca de 78ºC, cerca de 79ºC ou cerca de 80ºC.
[00601] 114. O método de qualquer um dos parágrafos 72 a 79, em que a adição do agente floculante e a etapa de acidificação são reali- zadas a uma temperatura de cerca de 50ºC.
[00602] 115. O método de qualquer um dos parágrafos 72 a 79, em que a adição do agente floculante, a etapa de sedimentação e a etapa de acidificação são realizadas a uma temperatura entre cerca de 4ºC e cerca de 30ºC.
[00603] 116.O método de qualquer um dos parágrafos 72 a 79, em que a adição do agente floculante, a etapa de sedimentação e a etapa de acidificação são realizadas a uma temperatura de cerca de 4ºC, cerca de 5ºC, cerca de 6ºC, cerca de 7ºC, cerca de 8ºC, cerca de 9ºC, cerca de 10ºC, cerca de 11ºC, cerca de 12ºC, cerca de 13ºC, cerca de 14ºC, cerca de 15ºC, cerca de 16ºC, cerca de 17ºC, cerca de 18ºC, cerca de 19ºC, cerca de 20ºC, cerca de 21ºC, cerca de 22ºC, cerca de 23ºC, cerca de 24ºC, cerca de 25ºC, cerca de 26ºC, cerca de 27ºC, cerca de 28ºC, cerca de 29ºC ou cerca de 30ºC.
[00604] 117.O método de qualquer um dos parágrafos 72 a 79, em que a adição do agente floculante, a etapa de sedimentação e a etapa de acidificação são realizadas a uma temperatura de cerca de 20ºC.
[00605] 118. O método de qualquer um dos parágrafos 72 a 79, em que a adição do agente floculante, a etapa de sedimentação e a etapa de acidificação são realizadas a uma temperatura entre cerca de 30ºC a cerca de 95ºC.
[00606] 119. O método de qualquer um dos parágrafos 72 a 79, em que a adição do agente floculante, a etapa de sedimentação e a etapa de acidificação são realizadas a uma temperatura entre cerca de 35ºC e cerca de 80ºC, a uma temperatura entre cerca de 40ºC e cerca de 70ºC, a uma temperatura de entre cerca de 45ºC e cerca de 65ºC, a uma temperatura de entre cerca de 50ºC e cerca de 60ºC, a uma tem- peratura de cerca de 50ºC e cerca de 55ºC, a uma temperatura de en- tre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC ou a uma temperatura de entre cer- ca de 45ºC e cerca de 55ºC.
[00607] 120.O método de qualquer um dos parágrafos 72 a 79, em que a adição do agente floculante, a etapa de sedimentação e a etapa de acidificação são realizadas a uma temperatura de cerca de 35ºC,
cerca de 36ºC, cerca de 37ºC, cerca de 38ºC, cerca de 39ºC, cerca de 40ºC, cerca de 41ºC, cerca de 42ºC, cerca de 43ºC, cerca de 44ºC, cerca de 45ºC, cerca de 46ºC, cerca de 47ºC, cerca de 48ºC, cerca de 49ºC, cerca de 50ºC, cerca de 51ºC, cerca de 52ºC, cerca de 53ºC, cerca de 54ºC, cerca de 55ºC, cerca de 56ºC, cerca de 57ºC, cerca de 58ºC, cerca de 59ºC, cerca de 60ºC, cerca de 61ºC, cerca de 62ºC, cerca de 63ºC, cerca de 64ºC, cerca de 65ºC, cerca de 66ºC, cerca de 67ºC, cerca de 68ºC, cerca de 69ºC, cerca de 70ºC, cerca de 71ºC, cerca de 72ºC, cerca de 73ºC, cerca de 74ºC, cerca de 75ºC, cerca de 76ºC, cerca de 77ºC, cerca de 78ºC, cerca de 79ºC ou cerca de 80ºC.
[00608] 121.O método de qualquer um dos parágrafos 72 a 79, em que a adição do agente floculante, a etapa de sedimentação e a etapa de acidificação são realizadas a uma temperatura de cerca de 50ºC.
[00609] 122. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 71,80 a 93 ou 101 a 107, em que a etapa de floculação compreende a adição de um agente floculante sem ajuste de pH.
[00610] 123. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 122, em que a etapa de floculação compreende adicionar um agente floculante, ajustar o pH e sedimentar a solução.
[00611] 124. O método do parágrafo 123, em que o agente floculan- te é adicionado antes de ajustar o pH.
[00612] 125. O método do parágrafo 123, em que o pH é ajustado antes de adicionar o agente floculante.
[00613] 126.O método do parágrafo 123, em que o pH é ajustado antes de adicionar o agente floculante e sedimentar a solução.
[00614] 127.O método do parágrafo 123, em que o agente floculan- te é adicionado e a solução é sedimentada antes de ajustar o pH.
[00615] 128.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 127, em que, após a floculação, a suspensão é clarificada por decantação, se- dimentação, filtração ou centrifugação.
[00616] 129.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 127, em que, após a floculação, a suspensão é clarificada por decantação.
[00617] 130. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 127, em que, após a floculação, a suspensão é clarificada por hidrociclone.
[00618] 131.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 127, em que, após a floculação, a suspensão é clarificada por sedimentação.
[00619] 132. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 127, em que, após a floculação, a suspensão é clarificada por flotação.
[00620] 133. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 127, em que, após a floculação, a suspensão é clarificada por filtração
[00621] 134. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 127, em que, após a floculação, a suspensão é clarificada por centrifugação.
[00622] 135. O método de qualquer um dos parágrafos 127 a 134, em que a solução contendo polissacarídeo é coletada para armaze- namento.
[00623] 136. O método de qualquer um dos parágrafos 127 a 134, em que a solução contendo polissacarídeo é coletada para processa- mento adicional.
[00624] 137. O método de qualquer um dos parágrafos 127 a 134, em que a solução contendo polissacarídeo é armazenada e, em se- guida, adicionalmente processada.
[00625] 138. O método de qualquer um dos parágrafos 134 a 137, em que a dita centrifugação é centrifugação contínua.
[00626] 139. O método de qualquer um dos parágrafos 134 a 137, em que a dita centrifugação é centrifugação em recipiente.
[00627] 140. Método, de acordo com qualquer um dos parágrafos 134 a 139, em que a suspensão é centrifugada a cerca de 1.000 9, cerca de 2.000 g, cerca de 3.000 g, cerca de 4.000 g, cerca de 5.000 g, cerca de 6.000 g, cerca de 8.000 g, cerca de 9.000 g, cerca de
10.000 g, cerca de 11.000 g, cerca de 12.000 g, cerca de 13.000 9,
cerca de 14.000 g, cerca de 15.000 g, cerca de 16.000 g, cerca de
17.000 g, cerca de 18.000 g, cerca de 19.000 g, cerca de 20.000 9, cerca de 25.000 g, cerca de 30.000 g, cerca de 35.000 g, cerca de
40.000 g, cerca de 50.000 g, cerca de 60.000 g, cerca de 70.000 9, cerca de 80.000 g, cerca de 90.000 g, cerca de 100.000 g, cerca de
120.000 g, cerca de 140.000 g, cerca de 160.000 g ou cerca de
180.000 g.
[00628] 141. Método, de acordo com qualquer um dos parágrafos 134 a 139, em que a suspensão é centrifugada a cerca de 8.000 9, cerca de 9.000 g, cerca de 10.000 g, cerca de 11.000 g, cerca de
12.000 g, cerca de 13.000 g, cerca de 14.000 g, cerca de 15.000 9, cerca de 16.000 g, cerca de 17.000 g, cerca de 18.000 g, cerca de
19.000 g, cerca de 20.000 g ou cerca de 25.000 g.
[00629] 142. O método de qualquer um dos parágrafos 134 a 139, em que a suspensão é centrifugada entre cerca de 5.000 g e cerca de
25.000 g.
[00630] 143. Método, de acordo com qualquer um dos parágrafos 134 a 139, em que a suspensão é centrifugada entre cerca de 8.000 g e cerca de 20.000 9.
[00631] 144. Método, de acordo com qualquer um dos parágrafos 134 a 139, em que a suspensão é centrifugada entre cerca de 10.000 g e cerca de 15.000 g.
[00632] 145. O método de qualquer um dos parágrafos 134 a 139, em que a suspensão é centrifugada entre cerca de 10.000 g e cerca de 12.000 g.
[00633] 146. O método de qualquer um dos parágrafos 134 a 145, em que a suspensão é centrifugada durante pelo menos 2, pelo menos 3, pelo menos 4, pelo menos 5, pelo menos 10, pelo menos 15, pelo menos 20, pelo menos 25, pelo menos 30, pelo menos 35, pelo menos 40, pelo menos 45, pelo menos 50, pelo menos 55, pelo menos 60,
pelo menos 65, pelo menos 70, pelo menos 75, pelo menos 80, pelo menos 85, pelo menos pelo menos 90, pelo menos 95, pelo menos 100, pelo menos 105, pelo menos 110, pelo menos 115, pelo menos 120, pelo menos 125, pelo menos 130, pelo menos 135, pelo menos 140, pelo menos 145, pelo menos 150, pelo menos 155 ou pelo menos 160 minutos.
[00634] 147. O método do parágrafo 146, em que a suspensão é centrifugada durante menos de 24 horas.
[00635] 148. O método de qualquer um dos parágrafos 134 a 145, em que a suspensão é centrifugada durante entre cerca de 5, cerca de 10, cerca de 15, cerca de 20, cerca de 30, cerca de 40, cerca de 50, cerca de 60, cerca de 70, cerca de 80, cerca de 90, cerca de 100, cer- ca de 120, cerca de 140, cerca de 160, cerca de 180, cerca de 220, cerca de 240, cerca de 300, cerca de 360, cerca de 420, cerca de 480, cerca de 540, cerca de 600, cerca de 660, cerca de 720, cerca de 780, cerca de 840, cerca de 900, cerca de 960, cerca de 1020, cerca de 1080, cerca de 1140, cerca de 1200, cerca de 1260, cerca de 1320 ou cerca de 1380 minutos e 1440 minutos.
[00636] 149. De preferência, a suspensão é centrifugada durante cerca de 5, cerca de 10, cerca de 15, cerca de 20, cerca de 25, cerca de 30, cerca de 60, cerca de 90, cerca de 120, cerca de 180, cerca de 240, cerca de 300, cerca de 360, cerca de 420, cerca de 480 ou cerca de 540 minutos e cerca de 600 minutos.
[00637] 150. O método de qualquer um dos parágrafos 134 a 145, em que a suspensão é centrifugada durante cerca de 5 minutos a cer- ca de 3 horas.
[00638] 151. O método de qualquer um dos parágrafos 134 a 145, em que a suspensão é centrifugada durante cerca de 5 minutos a cer- ca de 120 minutos.
[00639] 152. O método de qualquer um dos parágrafos 134 a 145,
em que a suspensão é centrifugada durante cerca de 5 minutos, cerca de 10 minutos, cerca de 15 minutos, cerca de 20 minutos, cerca de 25 minutos, cerca de 30 minutos, cerca de 35 minutos, cerca de 40 minu- tos, cerca de 45 minutos, cerca de 50 minutos, cerca de 55 minutos, cerca de 60 minutos, cerca de 65 minutos, cerca de 70 minutos, cerca de 75 minutos, cerca de 80 minutos, cerca de 85 minutos, cerca de 90 minutos, cerca de 95 minutos, cerca de 100 minutos, cerca de 105 mi- nutos, cerca de 110 minutos, cerca de 115 minutos, cerca de 120 mi- nutos, cerca de 125 minutos, cerca de 130 minutos, cerca de 135 mi- nutos, cerca de 140 minutos, cerca de 145 minutos, cerca de 150 mi- nutos ou cerca de 155 minutos e cerca de 160 minutos.
[00640] 153. Método, de acordo com qualquer um dos parágrafos 134 a 145, em que a suspensão é centrifugada durante entre cerca de minutos, cerca de 15 minutos, cerca de 20 minutos, cerca de 25 minutos, cerca de 30 minutos, cerca de 35 minutos, cerca de 40 minu- tos, cerca de 45 minutos, cerca de 50 minutos ou cerca de 55 minutos e cerca de 60 minutos.
[00641] 154. O método de qualquer um dos parágrafos 134 a 145, em que a suspensão é centrifugada durante cerca de 5, cerca de 10, cerca de 15, cerca de 20, cerca de 30, cerca de 40, cerca de 50, cerca de 60, cerca de 70, cerca de 80, cerca de 90, cerca de 100, cerca de 120, cerca de 140, cerca de 160, cerca de 180, cerca de 220, cerca de 240, cerca de 300, cerca de 360, cerca de 420, cerca de 480, cerca de 540, cerca de 600, cerca de 660, cerca de 720, cerca de 780, cerca de 840, cerca de 900, cerca de 960, cerca de 1020, cerca de 1080, cerca de 1140, cerca de 1200, cerca de 1260, cerca de 1320, cerca de 1380 minutos ou cerca de 1440 minutos.
[00642] 155. O método de qualquer um dos parágrafos 134 a 145, em que a suspensão é centrifugada durante cerca de 5 minutos, cerca de 10 minutos, cerca de 15 minutos, cerca de 20 minutos, cerca de 25 minutos, cerca de 30 minutos, cerca de 35 minutos, cerca de 40 minu- tos, cerca de 45 minutos, cerca de 50 minutos, cerca de 55 minutos, cerca de 60 minutos, cerca de 65 minutos, cerca de 70 minutos, cerca de 75 minutos, cerca de 80 minutos, cerca de 85 minutos, cerca de 90 minutos, cerca de 95 minutos, cerca de 100 minutos, cerca de 105 mi- nutos, cerca de 110 minutos, cerca de 115 minutos, cerca de 120 mi- nutos, cerca de 125 minutos, cerca de 130 minutos, cerca de 135 mi- nutos, cerca de 140 minutos, cerca de 145 minutos, cerca de 150 mi- nutos, cerca de 155 minutos ou cerca de 160 minutos.
[00643] 156.O método de qualquer um dos parágrafos 134 a 138 ou 140 a 155, em que a dita centrifugação é centrifugação contínua e a taxa de alimentação está entre 50 - 5000 ml / min, 100 - 4000 ml / min, 150 - 3000 ml / min, 200 - 2500 ml / min, 250 - 2000 ml / min, 300 - 1500 ml / min, 300 - 1000 ml / min, 200 - 1000 ml / min, 200 - 1500 ml / min, 400 - 1500 ml / min, 500 - 1500 ml / min, 500 - 1000 ml / min, 500 - 2000 ml / min, 500 - 2500 ml / min ou 1000 - 2500 ml / min.
[00644] 157.O método de qualquer um dos parágrafos 134 a 138 ou 140 a 155, em que a dita centrifugação é centrifugação contínua e a taxa de alimentação é de cerca de 10, cerca de 25, cerca de 50, cer- ca de 75, cerca de 100, cerca de 150, cerca de 200, cerca de 250, cerca de 300, cerca de 350, cerca de 400, cerca de 450, cerca de 500, cerca de 550, cerca de 600, cerca de 650, cerca de 700, cerca de 750, cerca de 800, cerca de 850, cerca de 900, cerca de 950, cerca de 1000, cerca de 1050, cerca de 1100, cerca de 1150, cerca de 1200, cerca de 1250, cerca de 1300, cerca de 1350, cerca de 1400, cerca de 1450, cerca de 1500, cerca de 1650 cerca de 1700, cerca de 1800, cerca de 1900, cerca de 2000, cerca de 2100, cerca de 2200, cerca de 2300, cerca de 2400, cerca de 2500, cerca de 2600, cerca de 2700, cerca de 2800, cerca de 2900, cerca de 3000, cerca de 3250, cerca de 3500, cerca de 3750 cerca de 4000, cerca de 4250, cerca de 4500 ou cerca de 5000 ml / min.
[00645] 158. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 157, em que a solução contendo polissacarídeo é filtrada.
[00646] 159. O método do parágrafo 158, em que a dita filtração é selecionada a partir do grupo que consiste de filtração de profundida- de, filtração através de carvão ativado, filtração por tamanho, diafiltra- ção e ultrafiltração.
[00647] 160. O método do parágrafo 158, em que a dita etapa de filtração é a diafiltração.
[00648] 161.O método do parágrafo 160, em que a dita filtração é a filtração de fluxo tangencial.
[00649] 162.O método do parágrafo 158, em que a dita filtração é a filtração de profundidade.
[00650] 163. O método do parágrafo 162, em que o modelo do filtro de profundidade é selecionado a partir do grupo que consiste de cas- setes, cartuchos, leito profundo (por exemplo, filtro de areia) e filtros lenticulares.
[00651] 164. O método de qualquer um dos parágrafos 158 a 159 ou 162 a 163, em que o filtro de profundidade tem uma faixa de reten- ção nominal de cerca de 0,01 - 100 micra, cerca de 0,05 - 100 micra, cerca de 0,1 - 100 micra, cerca de 0,2 - 100 micra, cerca de 0,3 - 100 micra, cerca de 0,4 - 100 micra, cerca de 0,5 - 100 micra, cerca de 0,6 - 100 micra, cerca de 0,7 - 100 micra, cerca de 0,8 - 100 micra, cerca de 0,9 - 100 micra, cerca de 1 - 100 micra, cerca de 1,25 - 100 micra, cerca de 1,5 - 100 micra, cerca de 1,75 - 100 micra, cerca de 2 - 100 micra, cerca de 3 - 100 micra, cerca de 4 - 100 micra, cerca de 5 - 100 micra, cerca de 6 - 100 micra, cerca de 7 - 100 micra, cerca de 8 - 100 micra, cerca de 9 - 100 micra, cerca de 10 - 100 micra, cerca de 15 - 100 micra, cerca de 20 - 100 micra, cerca de 25 - 100 micra, cerca de - 100 micra, cerca de 40 - 100 micra, cerca de 50 - 100 micra ou cerca de 75 - 100 micra.
[00652] 165. O método de qualquer um dos parágrafos 158 a 159 ou 162 a 163, em que o filtro de profundidade tem uma faixa de reten- ção nominal de cerca de 0,01 - 75 micra, cerca de 0,05 - 75 micra, cerca de 0,1 - 75 micra, cerca de 0,2 - 75 micra, cerca de 0,3 - 75 mi- cra, cerca de 0,4 - 75 micra, cerca de 0,5 - 75 micra, cerca de 0,6 - 75 micra, cerca de 0,7 - 75 micra, cerca de 0,8 - 75 micra, cerca de 0,9 - 75 micra, cerca de 1 - 75 micra, cerca de 1,25 - 75 micra, cerca de 1,5 - 75 micra, cerca de 1,75 - 75 micra, cerca de 2 - 75 micra, cerca de 3 - 75 micra, cerca de 4 - 75 micra, cerca de 5 - 75 micra, cerca de 6 - 75 micra, cerca de 7 - 75 micra, cerca de 8 - 75 micra, cerca de 9 - 75 micra, cerca de 10 - 75 micra, cerca de 15 - 75 micra, cerca de 20 - 75 micra, cerca de 25 - 75 micra, cerca de 30 - 75 micra, cerca de 40 - 75 micra ou cerca de 50 - 75 micra.
[00653] 166.O método de qualquer um dos parágrafos 158 a 159 ou 162 a 163, em que o filtro de profundidade tem uma faixa de reten- ção nominal de cerca de 0,01 - 50 micra, cerca de 0,05 - 50 micra, cerca de 0,1 - 50 micra, cerca de 0,2 - 50 micra, cerca de 0,3 - 50 mi- cra, cerca de 0,4 - 50 micra, cerca de 0,5 - 50 micra, cerca de 0,6 - 50 micra, cerca de 0,7 - 50 micra, cerca de 0,8 - 50 micra, cerca de 0,9 - 50 micra, cerca de 1 - 50 micra, cerca de 1,25 - 50 micra, cerca de 1,5 - 50 micra, cerca de 1,75 - 50 micra, cerca de 2 - 50 micra, cerca de 3 - 50 micra, cerca de 4 - 50 micra, cerca de 5 - 50 micra, cerca de 6 - 50 micra, cerca de 7 - 50 micra, cerca de 8 - 50 micra, cerca de 9 - 50 micra, cerca de 10 - 50 micra, cerca de 15 - 50 micra, cerca de 20 - 50 micra, cerca de 25 - 50 micra, cerca de 30 - 50 micra, cerca de 40 - 50 micra ou cerca de 50 - 50 micra.
[00654] 167. O método de qualquer um dos parágrafos 158 a 159 ou 162 a 163, em que o filtro de profundidade tem uma faixa de reten- ção nominal de cerca de 0,01 - 25 micra, cerca de 0,05 - 25 micra,
cerca de 0,1 - 25 micra, cerca de 0,2 - 25 micra, cerca de 0,3 - 25 mi- cra, cerca de 0,4 - 25 micra, cerca de 0,5 - 25 micra, cerca de 0,6 - 25 micra, cerca de 0,7 - 25 micra, cerca de 0,8 - 25 micra, cerca de 0,9 - 25 micra, cerca de 1 - 25 micra, cerca de 1,25 - 25 micra, cerca de 1,5 - 25 micra, cerca de 1,75 - 25 micra, cerca de 2 - 25 micra, cerca de 3 - 25 micra, cerca de 4 - 25 micra, cerca de 5 - 25 micra, cerca de 6 - 25 micra, cerca de 7 - 25 micra, cerca de 8 - 25 micra, cerca de 9 - 25 micra, cerca de 10 - 25 micra, cerca de 15 - 25 micra ou cerca de 20 - 25 micra.
[00655] 168. O método de qualquer um dos parágrafos 158 a 159 ou 162 a 163, em que o filtro de profundidade tem uma faixa de reten- ção nominal de cerca de 0,01 - 10 micra, cerca de 0,05 - 10 micra, cerca de 0,1 - 10 micra, cerca de 0,2 - 10 micra, cerca de 0,3 - 10 mi- cra, cerca de 0,4 - 10 micra, cerca de 0,5 - 10 micra, cerca de 0,6 - 10 micra, cerca de 0,7 - 10 micra, cerca de 0,8 - 10 micra, cerca de 0,9 - micra, cerca de 1 - 10 micra, cerca de 1,25 - 10 micra, cerca de 1,5 - 10 micra, cerca de 1,75 - 10 micra, cerca de 2 - 10 micra, cerca de 3 - 10 micra, cerca de 4 - 10 micra, cerca de 5 - 10 micra, cerca de 6 - 10 micra, cerca de 7 - 10 micra, cerca de 8 - 10 micra ou cerca de 9 - 10 micra.
[00656] 169. O método de qualquer um dos parágrafos 158 a 159 ou 162 a 163, em que o filtro de profundidade tem uma faixa de reten- ção nominal de cerca de 0,01 - 8 micra, cerca de 0,05 - 8 micra, cerca de 0,1 - 8 micra, cerca de 0,2 - 8 micra, cerca de 0,3 - 8 micra, cerca de 0,4 - 8 micra, cerca de 0,5 - 8 micra, cerca de 0,6 - 8 micra, cerca de 0,7 - 8 micra, cerca de 0,8 - 8 micra, cerca de 0,9 - 8 micra, cerca de 1 - 8 micra, cerca de 1,25 - 8 micra, cerca de 1,5 - 8 micra, cerca de 1,75 - 8 micra, cerca de 2 - 8 micra, cerca de 3 - 8 micra, cerca de 4 - 8 micra, cerca de 5 - 8 micra, cerca de 6 - 8 micra ou cerca de 7 - 8 mi- cra.
[00657] 170. O método de qualquer um dos parágrafos 158 a 159 ou 162 a 163, em que o filtro de profundidade tem uma faixa de reten- ção nominal de cerca de 0,01 - 5 micra, cerca de 0,05 - 5 micra, cerca de 0,1 - 5 micra, cerca de 0,2 - 5 micra, cerca de 0,3 - 5 micra, cerca de 0,4 - 5 micra, cerca de 0,5 - 5 micra, cerca de 0,6 - 5 micra, cerca de 0,7 - 5 micra, cerca de 0,8 - 5 micra, cerca de 0,9 - 5 micra, cerca de 1 - 5 micra, cerca de 1,25 - 5 micra, cerca de 1,5 - 5 micra, cerca de 1,75 - 5 micra, cerca de 2 - 5 micra, cerca de 3 - 5 micra ou cerca de 4 - 5 micra.
[00658] 171. O método de qualquer um dos parágrafos 158 a 159 ou 162 a 163, em que o filtro de profundidade tem uma faixa de reten- ção nominal de cerca de 0,01 - 2 micra, cerca de 0,05 - 2 micra, cerca de 0,1 - 2 micra, cerca de 0,2 - 2 micra, cerca de 0,3 - 2 micra, cerca de 0,4 - 2 micra, cerca de 0,5 - 2 micra, cerca de 0,6 - 2 micra, cerca de 0,7 - 2 micra, cerca de 0,8 - 2 micra, cerca de 0,9 - 2 micra, cerca de 1 - 2 micra, cerca de 1,25 - 2 micra, cerca de 1,5 - 2 micra, cerca de 1,75 - 2 micra, cerca de 2 - 2 micra, cerca de 3 - 2 micra ou cerca de 4 - 2micra.
[00659] 172. O método de qualquer um dos parágrafos 158 a 159 ou 162 a 163, em que o filtro de profundidade tem uma faixa de reten- ção nominal de cerca de 0,01 - 1 mícron, cerca de 0,05 - 1 mícron, cerca de 0,1 - 1 mícron, cerca de 0,2 - 1 mícron, cerca de 0,3 - 1 mí- cron, cerca de 0,4 - 1 mícron, cerca de 0,5 - 1 mícron, cerca de 0,6 - 1 mícron, cerca de 0,7 - 1 mícron, cerca de 0,8 - 1 mícron ou cerca de 0,9 - 1 mícron.
[00660] 173. O método de qualquer um dos parágrafos 158 a 159 ou 162 a 163, em que o filtro de profundidade tem uma faixa de reten- ção nominal de cerca de 0,05 - 50 micra, 0,1 - 25 micra 0,2 - 10, micra 0,1 - 10 micra, 0,2 - 5 micra ou 0,25 - 1 micra.
[00661] 174. O método de qualquer um dos parágrafos 158 a 159 ou 162 a 173, em que o filtro de profundidade tem uma capacidade de filtro de 1 - 2500 L / m?, 5- 2500 L / m?, 10 - 2500 L / m?, 25 - 2500 L / m?, 50 - 2500 L / m?, 75 - 2500 L / m2, 100 - 2500 L / m?, 150 - 2500 L / m?, 200 - 2500 L / m?, 300 - 2500 L / m?, 400 - 2500 L / m?, 500 - 2500 L /m?, 750 - 2500 L / m?, 1000 - 2500 L / m?, 1500 - 2500 L / m? ou
2.000 - 2500 L / m?.
[00662] 175. O método de qualquer um dos parágrafos 158 a 159 ou 162 a 173, em que o filtro de profundidade tem uma capacidade de filtro de 1 - 1000 L / m?, 5- 1000 L / m?, 10 - 1000 L / m?, 25- 1000 L / m?, 50 - 1000 L / m?, 75 - 1000 L / m2, 100 - 1000 L / m?, 150 - 1000 L / m?, 200 - 1000 L / m?, 300 - 1000 L / m?, 400 - 1000 L / m?, 500 - 1000 L/m? ou 750 - 1000 L/m?.
[00663] 176.O método de qualquer um dos parágrafos 155 a 156 ou 159 a 170, em que o filtro de profundidade tem uma capacidade de filtro de 1 - 750 L /m?, 5- 750 L / m?, 10 - 750 L / m?, 25- 750 L/ m?, 50 - 750 L / m?, 75 - 750 L / m?, 100 - 750 L / m?, 150 - 750 L / m?, 200 - 750 L / m?, 300 - 750 L / m?, 400 - 750 L / m? ou 500 - 750 L / m?.
[00664] 177.O método de qualquer um dos parágrafos 158 a 159 ou 162 a 173, em que o filtro de profundidade tem uma capacidade de filtro de 1 - 500 L / m?, 5- 500 L / m?, 10 - 500 L / m?, 25 - 500 L / m?, 50 - 500 L / m?, 75 - 500 L / m2, 100 - 500 L / m?, 150 - 500 L / m?, 200 - 500 L / m?, 300 - 500 L / m? ou 400 - 500 L / m?.
[00665] 178. O método de qualquer um dos parágrafos 158 a 159 ou 162 a 173, em que o filtro de profundidade tem uma capacidade de filtro de 1 - 400 L / m?, 5- 400 L / m?, 10 - 400 L / m?, 25 - 400 L/ m?, 50 - 400 L / m?, 75 - 400 L / m?, 100 - 400 L / m?, 150 - 400 L / m?, 200 - 400 L / m? ou 300 - 400 L / m?.
[00666] 179. O método de qualquer um dos parágrafos 158 a 159 ou 162 a 173, em que o filtro de profundidade tem uma capacidade de filtro de 1 - 3200 L / m?, 5- 300 L / m?, 10 - 300 L / m?, 25 - 300 L/ m?,
50 - 300 L / m?, 75 - 300 L / m?, 100 - 300 L / m?, 150 - 300 L / m? ou 200 - 300 L / m?.
[00667] 180. O método de qualquer um dos parágrafos 158 a 159 ou 162 a 173, em que o filtro de profundidade tem uma capacidade de filtro de 1 - 200 L / m?, 5- 200 L / m?, 10 - 200 L / m?, 25 - 200 L/ m?, 50 - 200 L / m?, 75 - 200 L / m?, 100 - 200 L / mM? ou 150 - 200 L / m?.
[00668] 181. O método de qualquer um dos parágrafos 158 a 159 ou 162 a 173, em que o filtro de profundidade tem uma capacidade de filtro de 1 - 100 L / m?, 5- 100 L / m?, 10 - 100 L / m?, 25- 100 L/ m?, 50 - 100 L /m2 ou 75 - 100 L/ m?.
[00669] 182. O método de qualquer um dos parágrafos 158 a 159 ou 162 a 173, em que o filtro de profundidade tem uma capacidade de filtro de 1 - 50 L/m?, 5- 50 L / m?, 10 - 50 L/ mM? ou 25-50 L/ m?.
[00670] 183. O método de qualquer um dos parágrafos 158 a 159 ou 162 a 182, em que a taxa de alimentação é de 1 - 1000 LMH (litros / m? / hora), 10 - 1000 LMH, 25 - 1000 LMH, 50 - 1000 LMH, 100 - 1000 LMH, 125 - 1000 LMH, 150 - 1000 LMH, 200 - 1000 LMH, 250 - 1000 LMH, 300 - 1000 LMH, 400 - 1000 LMH, 500 - 1000 LMH, 600 - 1000 LMH, 700 - 1000 LMH, 800 - 1000 LMH ou 900 - 1000 LMH.
[00671] 184. O método de qualquer um dos parágrafos 158 a 159 ou 162 a 182, em que a taxa de alimentação é de 1 - 500 LMH, 10 - 500 LMH, 25 - 500 LMH, 50 - 500 LMH, 100 - 500 LMH, 125 - 500 LMH, 150 - 500 LMH, 200 - 500 LMH, 250 - 500 LMH, 300 - 500 LMH ou 400 - 500 LMH.
[00672] 185. O método de qualquer um dos parágrafos 158 a 159 ou 162 a 182, em que a taxa de alimentação é de 1 - 400 LMH, 10 - 400 LMH, 25 - 400 LMH, 50 - 400 LMH, 100 - 400 LMH, 125 - 400 LMH, 150 - 400 LMH, 200 - 400 LMH, 250 - 400 LMH ou 300 - 400 LMH.
[00673] 186. O método de qualquer um dos parágrafos 158 a 159 ou 162 a 182, em que a taxa de alimentação é de 1 - 250 LMH, 10 - 250 LMH, 25 - 250 LMH, 50 - 250 LMH, 100 - 250 LMH, 125 - 250 LMH, 150 - 250 LMH ou 200 - 250 LMH.
[00674] 187. O método de qualquer um dos parágrafos 158 a 159 ou 162 a 182, em que a taxa de alimentação é de cerca de 1, cerca de 2, cerca de 5, cerca de 10, cerca de 25, cerca de 50, cerca de 60, cer- ca de 70, cerca de 80, cerca de 90, cerca de 100, cerca de 110, cerca de 120, cerca de 130, cerca de 140, cerca de 150, cerca de 160, cerca de 170, cerca de 180, cerca de 190, cerca de 200, cerca de 210, cerca de 220, cerca de 230, cerca de 240 cerca de 250, cerca de 260, cerca de 270, cerca de 280, cerca de 290, cerca de 300, cerca de 310, cerca de 320, cerca de 330, cerca de 340, cerca de 350, cerca de 360, cerca de 370, cerca de 380, cerca de 390, cerca de 400, cerca de 425, cerca de 450, cerca de 475, cerca de 500, cerca de 525, cerca de 550, cerca de 575, cerca de 600, cerca de 650, cerca de 700, cerca de 750, cerca de 800, cerca de 850, cerca de 900, cerca de 950 ou cerca de 1000 LMH.
[00675] 188. O método de qualquer um dos parágrafos 158 a 187, em que o filtrado é submetido à microfiltração.
[00676] 189. O método do parágrafo 188, em que a dita microfiltra- ção é uma filtração frontal.
[00677] 190. O método do parágrafo 188, em que a dita microfiltra- ção é a microfiltração tangencial.
[00678] 191. O método de qualquer um dos parágrafos 188 a 190, em que o filtro de microfiltração tem uma faixa de retenção nominal de cerca de 0,01 - 2 micra, cerca de 0,05 - 2 micra, cerca de 0,1 - 2 micra, cerca de 0,2 - 2 micra, cerca de 0,3 - 2 micra, cerca de 0,4 - 2 micra, cerca de 0,45 - 2 micra, cerca de 0,5 - 2 micra, cerca de 0,6 - 2 micra, cerca de 0,7 - 2 micra, cerca de 0,8 - 2 micra, cerca de 0,9 - 2 micra, cerca de 1 - 2 micra, cerca de 1,25 - 2 micra, cerca de 1,5 - 2 micra ou cerca de 1,75 - 2 micra.
[00679] 192. O método de qualquer um dos parágrafos 188 a 190, em que o filtro de microfiltração tem uma faixa de retenção nominal de cerca de 0,01 - 1 mícron, cerca de 0,05 - 1 mícron, cerca de 0,1 - 1 mícron, cerca de 0,2 - 1 mícron, cerca de 0,3 - 1 mícron, cerca de 0,4 - 1 mícron, cerca de 0,45 - 1 mícron, cerca de 0,5 - 1 mícron, cerca de 0,6 - 1 mícron, cerca de 0,7 - 1 mícron, cerca de 0,8 - 1 mícron ou cer- ca de 0,9 - 1 mícron.
[00680] 193. O método de qualquer um dos parágrafos 188 a 190, em que o filtro de microfiltração tem uma faixa de retenção nominal de cerca de 0,01, cerca de 0,05, cerca de 0,1, cerca de 0,2, cerca de 0,3, cerca de 0,4, cerca de 0,45, cerca de 0,5, cerca de 0,6, cerca de 0,7, cerca de 0,8, cerca de 0,9, cerca de 1, cerca de 1,1, cerca de 1,2, cer- ca de 1,3, cerca de 1,4, cerca de 1,5, cerca de 1,6, cerca de 1,7, cerca de 1,8, cerca de 1,9 ou cerca de 2 micra.
[00681] 194. O método de qualquer um dos parágrafos 188 a 190, em que o filtro de microfiltração tem uma retenção nominal de cerca de 0,45 mícron.
[00682] 195. O método de qualquer um dos parágrafos 188 a 194, em que o filtro de microfiltração tem uma capacidade de filtro de 100 - 5000 L / m?, 200 - 5000 L / m?, 300 - 5000 L / m?, 400 - 5000 L / m?, 500 - 5000 L / m?, 750 - 5000 L / m2, 1000 - 5000 L / m?, 1500 - 5000 L / m?, 2000 - 5000 L / m?, 3000 - 5000 L / m? ou 4000 - 5000 L / m?.
[00683] 196. O método de qualquer um dos parágrafos 188 a 194, em que o filtro de microfiltração tem uma capacidade de filtro de 100 - 2500 L / m?, 200 - 2500 L / m?, 300 - 2500 L / m?, 400 - 2500 L / m?, 500 - 2500 L / m?, 750 - 2500 L / m?, 1000 - 2500 L / m?, 1500 - 2500 L / m? ou 2000 - 2500 L / m?.
[00684] 197. O método de qualquer um dos parágrafos 188 a 194, em que o filtro de microfiltração tem uma capacidade de filtro de 100 -
1500 L / m?, 200 - 1500 L / m?, 300 - 1500 L / m?, 400 - 1500 L / m?, 500 - 1500 L / m?, 750 - 1500 L / m? ou 1000 - 1500 L / m?.
[00685] 198. O método de qualquer um dos parágrafos 188 a 194, em que o filtro de microfiltração tem uma capacidade de filtro de 100 - 1250 L / m?, 200 - 1250 L / m?, 300 - 1250 L / m?, 400 - 1250 L / m?, 500 - 1250 L / m?, 750 - 1250 L / m? ou 1000 - 1250 L / m?.
[00686] 199. O método de qualquer um dos parágrafos 188 a 194, em que o filtro de microfiltração tem uma capacidade de filtro de 100 - 1000 L / m?, 200 - 1000 L / m?, 300 - 1000 L / m?, 400 - 1000 L / m?, 500 - 1000 L / m? ou 750 - 1000 L / m?.
[00687] 200. O método de qualquer um dos parágrafos 188 a 194, em que o filtro de microfiltração tem uma capacidade de filtro de 100 - 750 L / m?, 200 - 750 L / m?, 300 - 750 L / m?, 400 - 750 L / m? ou 500 - 750L/m?.
[00688] 201.O método de qualquer um dos parágrafos 188 a 194, em que o filtro de microfiltração tem uma capacidade de filtro de 100 - 600 L / m?, 200 - 600 L / m?, 300 - 600 L / m?, 400 - 600 L / m? ou 400 - 600 L/m?.
[00689] 202.O método de qualquer um dos parágrafos 188 a 194, em que o filtro de microfiltração tem uma capacidade de filtro de 100 - 500 L / m?, 200 - 500 L / m?, 300 - 500 L / m? ou 400 - 500 L / m?.
[00690] 203. O método de qualquer um dos parágrafos 188 a 194, em que o filtro de microfiltração tem uma capacidade de filtro de 100, cerca de 150, cerca de 200, cerca de 250, cerca de 300, cerca de 350, cerca de 400, cerca de 450, cerca de 500, cerca de 550, cerca de 600, cerca de 650, cerca de 700, cerca de 750, cerca de 800, cerca de 850, cerca de 900, cerca de 950, cerca de 1000, cerca de 1050, cerca de 1100, cerca de 1150, cerca de 1200, cerca de 1250, cerca de 1300, cerca de 1350, cerca de 1400, cerca de 1450, cerca de 1500, cerca de 1550, cerca de 1600, cerca de 1650, cerca de 1700, cerca de 1750,
cerca de 1800, cerca de 1850, cerca de 1900, cerca de 1950, cerca de 2000, cerca de 2050, cerca de 2100, cerca de 2150, cerca de 2200, cerca de 2250, cerca de 2300, cerca de 2350, cerca de 2400, cerca de 2450 ou cerca de 2500 L / m?.
[00691] 204. O método de qualquer um dos parágrafos 158 a 203, em que o filtrado é ainda tratado por ultrafiltração e / ou diafiltração.
[00692] 205. O método de qualquer um dos parágrafos 158 a 203, em que o filtrado é tratado adicionalmente por ultrafiltração.
[00693] 206.O método de qualquer um dos parágrafos 204 a 205, em que o peso molecular de corte da membrana de ultrafiltração está na faixa de cerca de 5 kDa a 1000 kDa.
[00694] 207.O método de qualquer um dos parágrafos 204 a 205, em que o peso molecular de corte da membrana de ultrafiltração está na faixa de cerca de 10 kDa a 750 kDa.
[00695] 208. O método de qualquer um dos parágrafos 204 a 205, em que o peso molecular de corte da membrana de ultrafiltração está na faixa de cerca de 10 kDa a 500 kDa.
[00696] 209.O método de qualquer um dos parágrafos 204 a 205, em que o peso molecular de corte da membrana de ultrafiltração está na faixa de cerca de 10 kDa a 300 kDa.
[00697] 210. O método de qualquer um dos parágrafos 204 a 205, em que o peso molecular de corte da membrana de ultrafiltração está na faixa de cerca de 10 kDa a 100 kDa.
[00698] 211.O método de qualquer um dos parágrafos 204 a 205, em que o peso molecular de corte da membrana de ultrafiltração está na faixa de cerca de 10 kDa a 50 kDa.
[00699] 212. O método de qualquer um dos parágrafos 204 a 205, em que o peso molecular de corte da membrana de ultrafiltração está na faixa de cerca de 10 kDa a 30 kDa.
[00700] 213. O método de qualquer um dos parágrafos 204 a 205,
em que o peso molecular de corte da membrana de ultrafiltração está na faixa de cerca de cerca de 5 kDa - 1000 kDa, cerca de 10 kDa - 1000 kDa cerca de 20 kDa - 1000 kDa, cerca de 30 kDa - 1000 kDa, cerca de 40 kDa - 1000 kDa, cerca de 50 kDa - 1000 kDa, cerca de 75 kDa - 1000 kDa, cerca de 100 kDa - 1000 kDa, cerca de 150 kDa - 1000 kDa, cerca de 200 kDa - 1000 kDa, cerca de 300 kDa - 1000 kDa, cerca de 400 kDa - 1000 kDa, cerca de 500 kDa - 1000 kDa ou cerca de 750 kDa - 1000 kDa.
[00701] 214. O método de qualquer um dos parágrafos 204 a 205, em que o peso molecular de corte da membrana de ultrafiltração está na faixa de cerca de 5 kDa - 500 kDa, cerca de 10 kDa - 500 kDa, cer- ca de 20 kDa - 500 kDa, cerca de 30 kDa - 500 kDa, cerca de 40 kDa - 500 kDa, cerca de 50 kDa - 500 kDa, cerca de 75 kDa - 500 kDa, cer- ca de 100 kDa - 500 kDa, cerca de 150 kDa - 500 kDa, cerca de 200 kDa - 500 kDa, cerca de 300 kDa - 500 kDa ou cerca de 400 kDa - 500 kDa.
[00702] 215. O método de qualquer um dos parágrafos 204 a 205, em que o peso molecular de corte da membrana de ultrafiltração está na faixa de cerca de 5 kDa - 300 kDa, cerca de 10 kDa - 300 kDa, cer- ca de 20 kDa - 300 kDa, cerca de 30 kDa - 300 kDa, cerca de 40 kDa - 300 kDa, cerca de 50 kDa - 300 kDa, cerca de 75 kDa - 300 kDa, cer- ca de 100 kDa - 300 kDa, cerca de 150 kDa - 300 kDa ou cerca de 200 kDa - 300 kDa.
[00703] 216.O método de qualquer um dos parágrafos 204 a 205, em que o peso molecular de corte da membrana de ultrafiltração está na faixa de cerca de 5 kDa - 100 kDa, cerca de 10 kDa - 100 kDa, cer- ca de 20 kDa - 100 kDa, cerca de 30 kDa - 100 kDa, cerca de 40 kDa - 100 kDa, cerca de 50 kDa - 100 kDa ou cerca de 75 kDa - 100 kDa.
[00704] 217.O método de qualquer um dos parágrafos 204 a 205, em que o peso molecular de corte da membrana de ultrafiltração é de cerca de 5 kDa, cerca de 10 kDa, cerca de 20 kDa, cerca de 30 kDa, cerca de 40 kDa, cerca de 50 kDa, cerca de 60 kDa, cerca de 70 kDa, cerca de 80 kDa, cerca de 90 kDa, cerca de 100 kDa, cerca de 110 kDa, cerca de 120 kDa, cerca de 130 kDa, cerca de 140 kDa, cerca de 150 kDa, cerca de 200 kDa, cerca de 250 kDa, cerca de 300 kDa, cer- ca de 400 kDa, cerca de 500 kDa, cerca de 750 kDa ou cerca de 1000 kDa.
[00705] 218. O método de qualquer um dos parágrafos 204 a 217, em que o fator de concentração da etapa de ultrafiltração é de cerca de 1,5 a cerca de 10.
[00706] 219. O método de qualquer um dos parágrafos 204 a 217, em que o fator de concentração é de cerca de 2 a cerca de 8.
[00707] 220.O método de qualquer um dos parágrafos 204 a 217, em que o fator de concentração é de cerca de 2 a cerca de 5.
[00708] 221.O método de qualquer um dos parágrafos 204 a 217, em que o fator de concentração é cerca de 1,5, cerca de 2,0, cerca de 2,5, cerca de 3,0, cerca de 3,5, cerca de 4,0, cerca de 4,5, cerca de 5,0, cerca de 5,5, cerca de 6,0, cerca de 6,5, cerca de 7,0, cerca de 7,5, cerca de 8,0, cerca de 8,5, cerca de 9,0, cerca de 9,5 ou cerca de 10,0.
[00709] 222.O método de qualquer um dos parágrafos 204 a 217, em que o fator de concentração é cerca de 2, cerca de 3, cerca de 4, cerca de 5 ou cerca de 6.
[00710] 223. O método de qualquer um dos parágrafos 204 a 222, em que a dita etapa de ultrafiltração é realizada a uma temperatura entre cerca de 20ºC e cerca de 90ºC.
[00711] 224. O método de qualquer um dos parágrafos 204 a 222, em que a dita etapa de ultrafiltração é realizada a uma temperatura entre cerca de 35ºC e cerca de 80ºC, a uma temperatura entre cerca de 40ºC e cerca de 70ºC, a uma temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 65ºC, a uma temperatura entre cerca de 50ºC e cerca de 60ºC, a uma temperatura entre cerca de 50ºC e cerca de 55ºC, a uma temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC ou a uma temperatu- ra entre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC.
[00712] 225. O método de qualquer um dos parágrafos 204 a 222, em que a dita etapa de ultrafiltração é realizada a uma temperatura de cerca de 20ºC, cerca de 21ºC, cerca de 22ºC, cerca de 23ºC, cerca de 24ºC, cerca de 25ºC, cerca de 26ºC, cerca de 27ºC, cerca de 28ºC, cerca de 29ºC, cerca de 30ºC, cerca de 31ºC, cerca de 32ºC, cerca de 33ºC, cerca de 34ºC, cerca de 35ºC, cerca de 36ºC, cerca de 37ºC, cerca de 38ºC, cerca de 39ºC, cerca de 40ºC, cerca de 41ºC, cerca de 42ºC, cerca de 43ºC, cerca de 44ºC, cerca de 45ºC, cerca de 46ºC, cerca de 47ºC, cerca de 48ºC, cerca de 49ºC, cerca de 50ºC, cerca de 51ºC, cerca de 52ºC, cerca de 53ºC, cerca de 54ºC, cerca de 55ºC, cerca de 56ºC, cerca de 57ºC, cerca de 58ºC, cerca de 59ºC, cerca de 60ºC, cerca de 61ºC, cerca de 62ºC, cerca de 63ºC, cerca de 64ºC, cerca de 65ºC, cerca de 66ºC, cerca de 67ºC, cerca de 68ºC, cerca de 69ºC, cerca de 70ºC, cerca de 71ºC, cerca de 72ºC, cerca de 73ºC, cerca de 74ºC, cerca de 75ºC, cerca de 76ºC, cerca de 77ºC, cerca de 78ºC, cerca de 79ºC ou cerca de 80ºC.
[00713] 226.O método de qualquer um dos parágrafos 204 a 222, em que a dita etapa de ultrafiltração é realizada a uma temperatura de cerca de 50ºC.
[00714] 227.O método de qualquer um dos parágrafos 158 a 226, em que o filtrado de ultrafiltração é tratado por diafiltração.
[00715] 228. O método do parágrafo 227, em que a solução de substituição é água.
[00716] 229. O método do parágrafo 227, em que a solução de substituição é solução salina em água.
[00717] 230.O método do parágrafo 229, em que o sal é seleciona-
do a partir do grupo que consiste de cloreto de magnésio, cloreto de potássio, cloreto de sódio e uma combinação dos mesmos.
[00718] 231.O método do parágrafo 229, em que o sal é cloreto de sódio.
[00719] 232. O método do parágrafo 229, em que a solução de substituição é cloreto de sódio a cerca de 1 mM, cerca de 5 mM, cerca de 10 mM, cerca de 15 mM, cerca de 20 mM, cerca de 25 mM, cerca de 30 mM, cerca de 35 mM, cerca de 40 mM, cerca de 45 mM, cerca de 50 mM, cerca de 55 mM, cerca de 60 mM, cerca de 65 mM, cerca de 70 mM, cerca de 80 mM, cerca de 90 mM, cerca de 100 mM, cerca de 110 mM, cerca de 120 mM, cerca de 130 mM, cerca de 140 mM, cerca de 150 mM, cerca de 160 mM, cerca de 170 mM, cerca de 180 MM, cerca de 190 mM, cerca de 200 mM, cerca de 250 mM, cerca de 300 mM, cerca de 350 mM, cerca de 400 mM, cerca de 450 mM ou cerca de 500 mM.
[00720] 233. O método do parágrafo 227, em que a solução de substituição é uma solução tampão.
[00721] 234. O método do parágrafo 227, em que a solução de substituição é uma solução tampão em que o tampão é selecionado a partir do grupo que consiste de ácido N-(2-acetamido) -aminoeta- nossulfônico (ACES), um sal de ácido acético (acetato), ácido N-(2- acetamido)-iminodiacético (ADA), ácido 2-aminoetanossulfônico (AES, Taurina), amônia, 2-Amino-2-metil-1-propanol (AMP), 2-Amino-2-metil- 1,3-propanodiol AMPD, ammediol, ácido N-(1,1-Dimetil-2-hidroxietil)-3- amino-2-hidroxipropanossulfônico (AMPSO), ácido N,N-Bis-(2-hidroxi- etil)-2-aminoetanossulfônico (BES), hidrogênio carbonato de sódio (bi- carbonato), N,N'-Bis(2-hidroxietil)-glicina (bicina), [Bis-(2-hidroxietil) - imino] -tris- (hidroximetilmetano) (BIS-Tris), 1,3-Bis [tris(hidroximetil)- metilamino] propano (BIS-Tris-Propano), ácido bórico, ácido dimetilarsíni- co (Cacodilato), ácido 3- (Ciclohexilamino)-propanossulfônico (CAPS),
ácido 3-(ciclohexilamino) -2-hidróxi-1-propanossulfônico (CAPSO), carbonato de sódio (Carbonato), ácido ciclohexilaminoetanossulfônico (CHES), um sal de ácido cítrico (citrato), ácido 3- [N-Bis (hidroxietil) amino] -2-hidroxipropanossulfônico (DIPSO), um sal de ácido fórmico (formato), Glicina, Glicilglicina, ácido N-(2-Hidroxietil)-piperazina-N'- etanossulfônico (HEPES), ácido N- (2-hidroxietil)-piperazina-N'-3-pro- panossulfônico (HEPPS, EPPS), ácido N-(2-hidroxietil)-piperazina-N'-2- hidroxipropanossulfônico (HEPPSO), imidazol, um sal de ácido málico (Malato), um sal de ácido maleico (Maleato), ácido 2-(N-Morfolino) —eta- nossulfônico (MES), ácido 3-(N-Morfolino)-propanossulfônico (MOPS), ácido 3-(N-Morfolino)-2-hidroxipropanossulfônico (MOPSO), um sal de ácido fosfórico (Fosfato), Piperazina-N,N'-bis (ácido 2-etanossulfônico) (PIPES), Piperazina-N, N'-bis (2 ácido -hidroxipropanossulfônico) (POPSO), piridina, um sal de ácido succínico (Succinato), ácido 3 - fíTris (hidroximetil)-metil] -amino) -propanossulfônico (TAPS), ácido 3- [N-Tris (hidroximetil)-metilamino]-2-hidroxipropanossulfônico (TAPSO), Trietanolamina (TEA), ácido 2-[Tris (hidroximetil)-metilamino]-etanos- sulfônico (TES), N-[Tris(hidroximetil)-metil] -glicina (Tricina) e Tris(hi- droximetil)-aminometano (Tris).
[00722] 235. O método do parágrafo 227, em que a solução de substituição é uma solução tampão em que o tampão é selecionado a partir do grupo que consiste de um sal de ácido acético (acetato), um sal de ácido cítrico (citrato), um sal de ácido fórmico (formato), um sal de ácido málico (malato), um sal de ácido maleico (maleato), um sal de ácido fosfórico (fosfato) e um sal de ácido succínico (succinato).
[00723] 236. O método do parágrafo 227, em que a solução de substituição é uma solução tampão em que o tampão é um sal de áci- do cítrico (citrato).
[00724] 237. O método do parágrafo 227, em que a solução de substituição é uma solução tampão em que o tampão é um sal de áci-
do succínico (succinato).
[00725] 238.O método de qualquer um dos parágrafos 234 a 237, o dito sal é um sal de sódio.
[00726] 239.O método de qualquer um dos parágrafos 234 a 237, o dito sal é um sal de potássio.
[00727] 240. O método de qualquer um dos parágrafos 233 a 239, em que o pH do tampão de diafiltração é de cerca de 4,0 - 11,0, entre cerca de 5,0 - 10,0, entre cerca de 5,5 - 9,0, entre cerca de 6,0 - 8,0, entre cerca de 6,0 - 7,0, entre cerca de 6,5 - 7,5, entre cerca de 6,5 - 7,0 ou entre cerca de 6,0 - 7,5.
[00728] 241.O método de qualquer um dos parágrafos 233 a 239, em que o pH do tampão de diafiltração é cerca de 4,0, cerca de 4,5, cerca de 5,0, cerca de 5,5, cerca de 6,0, cerca de 6,5, cerca de 7,0, cerca de 7,5, cerca de 8,0, cerca de 8,5, cerca de 9,0, cerca de 9,5, cerca de 10,0, cerca de 10,5 ou cerca de 11,0.
[00729] 242.O método de qualquer um dos parágrafos 233 a 239, em que o pH do tampão de diafiltração é cerca de 6,0, cerca de 6,5, cerca de 7,0, cerca de 7,5, cerca de 8,0, cerca de 8,5 ou cerca de 9,0.
[00730] 243. O método de qualquer um dos parágrafos 226 a 231, em que o pH do tampão de diafiltração é cerca de 6,5, cerca de 7,0 ou cerca de 7,5.
[00731] 244. O método de qualquer um dos parágrafos 233 a 239, em que o pH do tampão de diafiltração é de cerca de 7,0.
[00732] 245. O método de qualquer um dos parágrafos 233 a 244, em que a concentração do tampão de diafiltração é de cerca de 0,01 mM - 100 mM, de cerca de 0,1 mM - 100 mM, de cerca de 0,5 mM - 100 mM, de cerca de 1 mM - 100 mM, de cerca de 2 mM - 100 mM, de cerca de 3 mM - 100 mM, de cerca de 4 mM - 100 mM, de cerca de mM - 100 mM, de cerca de 6 mM - 100 mM, de cerca de 7 mM - 100 mM, de cerca de 8 mM - 100 mM, de cerca de 9 mM - 100 mM, de cerca de 10 mM - 100 mM, de cerca de 11 mM - 100 mM, de cerca de 12 mM - 100 mM, de cerca de 13 mM - 100 mM, de cerca de 14 mM - 100 mM, de cerca de 15 mM - 100 mM, de cerca de 16 mM - 100 mM, de cerca de 17 mM - 100 mM, de cerca de 18 mM - 100 mM, de cerca de 19 mM - 100 mM, de cerca de 20 mM - 100 mM, de cerca de 25 mM - 100 mM, de cerca de 30 mM - 100 mM, de cerca de 35 mM - 100 MM, de cerca de 40 mM - 100 mM, de cerca de 45 mM - 100 mM, de cerca de 50 mM - 100 mM, de cerca de 55 mM - 100 mM, de cerca de 60 mM - 100 mM, de cerca de 65 mM - 100 mM, de cerca de 70 mM - 100 mM, de cerca de 75 mM - 100 mM, de cerca de 8 O mM - 100 mM, de cerca de 85 mM - 100 mM, de cerca de 90 mM - 100 mM ou de cerca de 95 mM - 100 mM.
[00733] 246. Método de qualquer um dos parágrafos 233 a 244, em que a concentração do tampão de diafiltração é de cerca de 0,01 mM - 50 mM, de cerca de 0,1 mM - 50 mM, de cerca de 0,5 mM - 50 mM, de cerca de 1 mM - 50 mM, de cerca de 2mM - 50 mM, de cerca de 3 mM - 50 mM, de cerca de 4 MM - 50 mM, de cerca de 5 MM - 50 MM, de cerca de 6 mM - 50 mM, de cerca de 7 mM - 50 mM, de cerca de 8 mM - 50 mM, de cerca de 9 mM - 50 MM, de cerca de 10 mM - 50 MM, de cerca de 11 mM - 50 mM, de cerca de 12 mM - 50 mM, de cerca de 13 mM - 50 MM, de cerca de 14 mM - 50 mM, de cerca de 15 mM - 50 mM, de cerca de 16 mM - 50 mM, de cerca de 17 mM - 50 mM, de cerca de 18 mM - 50 mM, de cerca de 19 mM - 50 mM, de cerca de 20 mM - 50 mM, de cerca de 25 mM - 50 mM, de cerca de 30 mM - 50 MM, de cerca de 35 mM - 50 mM, de cerca de 40 mM - 50 MM ou de cerca de 45 mM - 50 mM.
[00734] 247.O método de qualquer um dos parágrafos 233 a 244, em que a concentração do tampão de diafiltração é de cerca de 0,01 mM - 25 mM, de cerca de 0,1 mM - 25 mM, de cerca de 0,5 mM - 25 MM, de cerca de 1 mM - 25 mM, de cerca de 2mM - 25 mM, de cerca de 3 mM - 25 mM, de cerca de 4 mM - 25 mM, de cerca de 5 mM - 25 MM, de cerca de 6 mM - 25 mM, de cerca de 7 mM - 25 mM, de cerca de 8 mM - 25 mM, de cerca de 9 mM - 25 mM, de cerca de 10 mM - 25 mM, de cerca de 11 mM - 25 mM, de cerca de 12 mM - 25 mM, de cerca de 13 mM - 25 mM, de cerca de 14 mM - 25 mM, de cerca de 15 mM - 25 mM, de cerca de 16 mM - 25 mM, de cerca de 17 mM - 25 mM, de cerca de 18 mM - 25 mM, de cerca de 19 mM - 25 mM ou de cerca de 20 mM - 25 mM.
[00735] 248. O método de qualquer um dos parágrafos 233 a 244, em que a concentração do tampão de diafiltração é de cerca de 0,01 mM - 15 mM, de cerca de 0,1 mM - 15 mM, de cerca de 0,5 mM - 15 MM, de cerca de 1 MM - 15 mM, de cerca de 2mM - 15 mM, de cerca de 3 mM - 15 mM, de cerca de 4 mM - 15 mM, de cerca de 5 mM - 15 MM, de cerca de 6 mM - 15 mM, de cerca de 7 MM - 15 mM, de cerca de 8 mM - 15 mM, de cerca de 9 mM - 15 mM, de cerca de 10 mM - 15 mM, de cerca de 11 mM - 15 mM, de cerca de 12 mM - 15 mM, de cerca de 13 mM - 15 mM ou de cerca de 14 mM - 15 mM.
[00736] 249. O método de qualquer um dos parágrafos 233 a 244, em que a concentração do tampão de diafiltração é de cerca de 0,01 mM - 10 MM, de cerca de 0,1 mM - 10 mM, de cerca de 0,5 mM - 10 MM, de cerca de 1 MM - 10 mM, de cerca de 2mM - 10 mM, de cerca de 3 mM - 10 mM, de cerca de 4 mM - 10 mM, de cerca de 5 mM - 10 MM, de cerca de 6 mM - 10 mM, de cerca de 7 mM - 10 mM, de cerca de 8 mM - 10 MM ou de cerca de 9 mM - 10 mM.
[00737] 250.O método de qualquer um dos parágrafos 233 a 244, em que a concentração do tampão de diafiltração é de cerca de 0,01 MM, cerca de 0,05 mM, cerca de 0,1 mM, cerca de 0,2 mM, cerca de 0,3 mM, cerca de 0,4 mM, cerca de 0,5 mM, cerca de 0,6 mM, cerca de 0,7 mM, cerca de 0,8 mM, cerca de 0,9 mM, cerca de 1 mM, cerca de 2 mM, cerca de 3 mM, cerca de 4 mM, cerca de 5 mM, cerca de 6
MM, cerca de 7 mM, cerca de 8 mM, cerca de 9 mM, cerca de 10 mM, cerca de 11 mM, cerca de 12 mM, cerca de 13 mM, cerca de 14 mM, cerca de 15 mM, cerca de 16 mM, cerca de 17 mM, cerca de 18 mM, cerca de 19 mM, cerca de 20 mM, cerca de 25 mM, cerca de 30 mM, cerca de 35 mM, cerca de 40 mM, cerca de 45 mM, cerca de 50 mM, cerca de 55 mM, cerca de 60 mM, cerca de 65 mM, cerca de 70 mM, cerca de 75 mM, cerca de 80 mM, cerca de 85 mM, cerca de 90 mM, cerca de 95 ou cerca de 100 mM.
[00738] 251.O método de qualquer um dos parágrafos 233 a 244, em que a concentração do tampão de diafiltração é de cerca de 0,1 MM, cerca de 0,2 mM, cerca de 1 mM, cerca de 5 mM, cerca de 10 MM, cerca de 15 mM, cerca de 20 mM, cerca de 30 mM, cerca de 40 mM ou cerca de 50 mM.
[00739] 252.O método de qualquer um dos parágrafos 233 a 244, em que a concentração do tampão de diafiltração é de cerca de 10 mM.
[00740] 253. O método de qualquer um dos parágrafos 233 a 252, em que a solução de substituição compreende um agente quelante.
[00741] 254. O método de qualquer um dos parágrafos 233 a 252, em que a solução de substituição compreende um agente quelante de alúmen.
[00742] 255. O método de qualquer um dos parágrafos 233 a 252, em que a solução de substituição compreende um agente quelante selecionado a partir do grupo que consiste de etileno diamina tetra acetato (EDTA), ácido N-(2-hidroxietil) etilenodiamina-N,N', N'-triacé- tico (EDTA-OH), ácido hidroxietileno diamina triacético (HEDTA), ácido etilenoglicol-bis(2-aminoetiléter)-N,N,N' N'-ácido tetraacético (EGTA), ácido 1,2-ciclohexanodiamina-N,N,N' N'-tetraacético (CyDTA), ácido dietilenotriamina-N,N,N',N”,N”-penta-acético (DTPA), ácido 1,3-diami- nopropan-2-ol-N,N,N',N”-tetra-acético (DPTA- OH), ácido etilenodiami-
na-N,N”-bis (2-hidroxifenilacético) (EDDHA), dicloridrato de ácido etileno- diamina-N N'-dipropiônico (EDDP), etilenodiamina-tetraquis (ácido meti- lenossulfônico) (EDTPO), Nitrilotris (ácido metilenofosfônico) (NTPO), ácido imino-diacético (IDA), ácido hidroxiimino-diacético (HIDA), ácido nitrilo-triacético (NTP), ácido trietilenotetramina-hexa-acético (TTHA), ácido dimercaptosuccínico (DMSA), ácido 2,3-dimercapto-1-propanos- sulfônico (DMPS), ácido alfalipoico (ALA), ácido nitrilotriacético (NTA), tiamina tetraidrofurfuril dissulfeto (TTFD), dimercaprol, penicilamina, deferoxamina (DFOA), deferasirox, fosfonatos, um sal de ácido cítrico (citrato) e combinações dos mesmos.
[00743] 256.O método de qualquer um dos parágrafos 233 a 255, em que a solução de substituição compreende um agente quelante selecionado a partir do grupo que consiste de etileno diamina tetra acetato (EDTA), ácido N-(2-hidroxietil) etilenodiamina-N,N',N'- triacéti- co (EDTA-OH), ácido hidroxietileno diamina triacético (HEDTA), ácido etilenoglicol-bis (2-aminoetiléter)-N,N,N' N'-ácido tetra-acético (EGTA), ácido 1,2-ciclohexanodiamina-N,N,N' N'-tetra-acético (CyYDTA), ácido dietilenotriamina-N,N,N',N” ,N”-penta-acético (DTPA), 1,3-diaminopro pan-2-ol-N, N, N', N'-ácido tetra-acético (DPTA-OH), ácido etilenodia- mina-N,N'-bis(2-hidroxifenilacético) (EDDHA), um sal de ácido cítrico (citrato) e combinações dos mesmos.
[00744] 257.O método de qualquer um dos parágrafos 233 a 254, em que a solução de substituição compreende de etileno diamina tetra acetato (EDTA) como agente quelante.
[00745] 258. O método de qualquer um dos parágrafos 233 a 254, em que a solução de substituição compreende um sal de ácido cítrico (citrato) como agente quelante.
[00746] 259. O método de qualquer um dos parágrafos 233 a 254, em que a solução de substituição compreende citrato de sódio como agente quelante.
[00747] 260. O método de qualquer um dos parágrafos 253 a 258, em que a concentração do agente quelante na solução de substituição é de 1 a 500 mM.
[00748] 261.O método de qualquer um dos parágrafos 253 a 258, em que a concentração do agente quelante na solução de substituição é de 2 a 400 mM.
[00749] 262. O método de qualquer um dos parágrafos 253 a 258, em que a concentração do agente quelante na solução de substituição é de 10 a 400 mM.
[00750] 263. O método de qualquer um dos parágrafos 253 a 258, em que a concentração do agente quelante na solução de substituição é de 10 a 200 mM.
[00751] 264. O método de qualquer um dos parágrafos 253 a 258, em que a concentração do agente quelante na solução de substituição é de 10 a 100 mM.
[00752] 265. O método de qualquer um dos parágrafos 253 a 258, em que a concentração do agente quelante na solução de substituição é de 10 a 50 mM.
[00753] 266.O método de qualquer um dos parágrafos 253 a 258, em que a concentração do agente quelante na solução de substituição é de 10 a 30 mM.
[00754] 267.O método de qualquer um dos parágrafos 253 a 258, em que a concentração do agente quelante na solução de substituição é cerca de 0,01 mM, cerca de 0,05 mM, cerca de 0,1 mM, cerca de 0,2 MM, cerca de 0,3 mM, cerca de 0,4 mM, cerca de 0,5 mM, cerca de 0,6 mM, cerca de 0,7 mM, cerca de 0,8 mM, cerca de 0,9 mM, cerca de 1 mM, cerca de 2 mM, cerca de 3 mM, cerca de 4 mM, cerca de 5 MM, cerca de 6 mM, cerca de 7 mM, cerca de 8 mM, cerca de 9 mM, cerca de 10 mM, cerca de 11 mM, cerca de 12 mM, cerca de 13 mM, cerca de 14 mM, cerca de 15 mM, cerca de 16 mM, cerca de 17 mM,
cerca de 18 mM, cerca de 19 mM, cerca de 20 mM, cerca de 21 mM, cerca de 22 mM, cerca de 23 mM, cerca de 24 mM, cerca de 25 mM, cerca de 26 mM, cerca de 27 mM, cerca de 28 mM, cerca de 29 mM, cerca de 30 mM, cerca de 31 mM, cerca de 32 mM, cerca de 33 mM, cerca de 34 mM, cerca de 35 mM, cerca de 36 mM, cerca de 37 mM, cerca de 38 mM, cerca de 39 mM, cerca de 40 mM, cerca de 45 mM, cerca de 50 mM, cerca de 55 mM, cerca de 60 mM, cerca de 65 mM, cerca de 70 mM, cerca de 75 mM, cerca de 80 mM, cerca de 85 mM, cerca de 90 mM, cerca de 95 ou cerca de 100 mM.
[00755] 268. O método de qualquer um dos parágrafos 253 a 258, em que a concentração do agente quelante na solução de substituição é cerca de 5 mM, cerca de 10 mM, cerca de 15 mM, cerca de 20 mM, cerca de 25 mM, cerca de 30 mM, cerca de 35 mM, cerca de 40 mM, cerca de 45 mM, cerca de 50 mM, cerca de 55 mM, cerca de 60 mM, cerca de 65 mM, cerca de 70 mM, cerca de 75 mM, cerca de 80 mM, cerca de 85 mM, cerca de 90 mM, cerca de 95 mM ou cerca de 100 mM.
[00756] 269. O método de qualquer um dos parágrafos 253 a 258, em que a concentração do agente quelante na solução de substituição é cerca de 15 mM, cerca de 20 mM, cerca de 25 mM, cerca de 30 mM, cerca de 35 mM, cerca de 40 mM, cerca de 45 mM ou cerca de 50 mM.
[00757] 270.O método de qualquer um dos parágrafos 233 a 269, em que a solução de substituição compreende um sal.
[00758] 271.O método do parágrafo 270, em que o sal é seleciona- do a partir do grupo que consiste de cloreto de magnésio, cloreto de potássio, cloreto de sódio e uma combinação dos mesmos.
[00759] 272.O método do parágrafo 270, em que o sal é cloreto de sódio.
[00760] 273. O método de qualquer um dos parágrafos 270 a 272,
em que a solução de substituição compreende cloreto de sódio a 1 cerca de 1, cerca de 5, cerca de 10, cerca de 15, cerca de 20, cerca de 25, cerca de 30, cerca de 35, cerca de 40, cerca de 45, cerca de 50, cerca de 55, cerca de 60, cerca de 65, cerca de 70, cerca de 80, cerca de 90, cerca de 100, cerca de 110, cerca de 120, cerca de 130, cerca de 140, cerca de 150, cerca de 160, cerca de 170, cerca de 180, cerca de 190, cerca de 200, cerca de 250 ou cerca de 300 mM.
[00761] 274. O método de qualquer um dos parágrafos 227 a 273, em que o número de diavolumes é de pelo menos 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 ou 50.
[00762] 275. O método de qualquer um dos parágrafos 227 a 273, em que o número de diavolumes é cerca de 1, cerca de 2, cerca de 3, cerca de 4, cerca de 5, cerca de 6, cerca de 7, cerca de 8, cerca de 9, cerca de 10, cerca de 11, cerca de 12, cerca de 13, cerca de 14, cerca de 15, cerca de 16, cerca de 17, cerca de 18, cerca de 19, cerca de 20, cerca de 21, cerca de 22, cerca de 23, cerca de 24, cerca de 25, cerca de 26, cerca de 27, cerca de 28, cerca de 29, cerca de 30, cerca de 31, cerca de 32, cerca de 33, cerca de 34, cerca de 35, cerca de 36, cerca de 37, cerca de 38, cerca de 39, cerca de 40, cerca de 41, cerca de 42, cerca de 43, cerca de 44, cerca de 45, cerca de 46, cerca de 47, cerca de 48, cerca de 49, cerca de 50, cerca de 55, cerca de 60, cerca de 65, cerca de 70, cerca de 75, cerca de 80, cerca de 85, cerca de 90, cerca de 95 ou cerca de 100.
[00763] 276.O método de qualquer um dos parágrafos 227 a 273, em que o número de diavolumes é de cerca de 5, cerca de 6, cerca de 7, cerca de 8, cerca de 9, cerca de 10, cerca de 11, cerca de 12, cerca de 13, cerca de 14 ou cerca de 15.
[00764] 277.O método de qualquer um dos parágrafos 227 a 276, em que a dita etapa de diafiltração é realizada a uma temperatura en- tre cerca de 20ºC e cerca de 90ºC.
[00765] 278. O método de qualquer um dos parágrafos 227 a 276, em que a dita etapa de diafiltração é realizada a uma temperatura en- tre cerca de 35ºC e cerca de 80ºC, a uma temperatura entre cerca de 40ºC e cerca de 70ºC, a uma temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 65ºC, a uma temperatura entre cerca de 50ºC e cerca de 60ºC, a uma temperatura entre cerca de 50ºC e cerca de 55ºC, a uma tempe- ratura entre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC ou a uma temperatura en- tre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC.
[00766] 279. O método de qualquer um dos parágrafos 227 a 276, em que a dita etapa de diafiltração é realizada a uma temperatura de cerca de 20ºC, cerca de 21ºC, cerca de 22ºC, cerca de 23ºC, cerca de 24ºC, cerca de 25ºC, cerca de 26ºC, cerca de 27ºC, cerca de 28ºC, cerca de 29ºC, cerca de 30ºC, cerca de 31ºC, cerca de 32ºC, cerca de 33ºC, cerca de 34ºC, cerca de 35ºC, cerca de 36ºC, cerca de 37ºC, cerca de 38ºC, cerca de 39ºC, cerca de 40ºC, cerca de 41ºC, cerca de 42ºC, cerca de 43ºC, cerca de 44ºC, cerca de 45ºC, cerca de 46ºC, cerca de 47ºC, cerca de 48ºC, cerca de 49ºC, cerca de 50ºC, cerca de 51ºC, cerca de 52ºC, cerca de 53ºC, cerca de 54ºC, cerca de 55ºC, cerca de 56ºC, cerca de 57ºC, cerca de 58ºC, cerca de 59ºC, cerca de 60ºC, cerca de 61ºC, cerca de 62ºC, cerca de 63ºC, cerca de 64ºC, cerca de 65ºC, cerca de 66ºC, cerca de 67ºC, cerca de 68ºC, cerca de 69ºC, cerca de 70ºC, cerca de 71ºC, cerca de 72ºC, cerca de 73ºC, cerca de 74ºC, cerca de 75ºC, cerca de 76ºC, cerca de 77ºC, cerca de 78ºC, cerca de 79ºC ou cerca de 80ºC.
[00767] 280. O método de qualquer um dos parágrafos 227 a 276, em que a dita etapa de diafiltração é realizada a uma temperatura de cerca de 50ºC.
[00768] 281.O método de qualquer um dos parágrafos 204 a 277, em que as ditas etapas de ultrafiltração e diafiltração, se ambas con- duzidas, são realizadas a uma temperatura entre cerca de 20ºC e cer-
ca de 90ºC.
[00769] 282. O método de qualquer um dos parágrafos 204 a 277, em que as ditas etapas de ultrafiltração e diafiltração, se ambas con- duzidas, são realizadas a uma temperatura entre cerca de 35ºC e cer- ca de 80ºC, a uma temperatura entre cerca de 40ºC e cerca de 70ºC, a temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 65ºC, a temperatura en- tre cerca de 50ºC e cerca de 60ºC, a temperatura entre cerca de 50ºC e cerca de 55ºC, a temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC ou a uma temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC.
[00770] 283.O método de qualquer um dos parágrafos 204 a 277, em que as ditas etapas de ultrafiltração e diafiltração, se ambas con- duzidas, são realizadas a uma temperatura de cerca de 20ºC, cerca de 21ºC, cerca de 22ºC, cerca de 23ºC, cerca de 24ºC, cerca de 25ºC, cerca de 26ºC, cerca de 27ºC, cerca de 28ºC, cerca de 29ºC, cerca de 30ºC, cerca de 31ºC, cerca de 32ºC, cerca de 33ºC, cerca de 34ºC, cerca de 35ºC, cerca de 36ºC, cerca de 37ºC, cerca de 38ºC, cerca de 39ºC, cerca de 40ºC, cerca de 41ºC, cerca de 42ºC, cerca de 43ºC, cerca de 44ºC, cerca de 45ºC, cerca de 46ºC, cerca de 47ºC, cerca de 48ºC, cerca de 49ºC, cerca de 50ºC, cerca de 51ºC, cerca de 52ºC, cerca de 53ºC, cerca de 54ºC, cerca de 55ºC, cerca de 56ºC, cerca de 57ºC, cerca de 58ºC, cerca de 59ºC, cerca de 60ºC, cerca de 61ºC, cerca de 62ºC, cerca de 63ºC, cerca de 64ºC, cerca de 65ºC, cerca de 66ºC, cerca de 67ºC, cerca de 68ºC, cerca de 69ºC, cerca de 70ºC, cerca de 71ºC, cerca de 72ºC, cerca de 73ºC, cerca de 74ºC, cerca de 75ºC, cerca de 76ºC, cerca de 77ºC, cerca de 78ºC, cerca de 79ºC ou cerca de 80ºC.
[00771] 284. O método de qualquer um dos parágrafos 204 a 277, em que as ditas etapas de ultrafiltração e diafiltração, se ambas con- duzidas, são realizadas a uma temperatura de cerca de 50ºC.
[00772] 285.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 284, em que a solução contendo o polissacarídeo (por exemplo, o sobrenadan- te, o filtrado ou retentado) é tratada por uma etapa de filtração por car- vão ativado.
[00773] 286.O método do parágrafo 285, em que o carvão ativado é adicionado na forma de um pó, como um leito de carvão granular, como um bloco de carvão prensado ou bloco de carvão extrudado (ver, por exemplo, carvão ativo Norit).
[00774] 287.O método do parágrafo 286, em que o carvão ativado é adicionado em uma quantidade de cerca de 0,1 a 20% (peso / volu- me), 1 a 15% (peso / volume), 1 a 10% (peso / volume), 2 a 10% (peso / volume), 3 a 10% (peso / volume), 4 a 10% (peso / volume), 5 a 10% (peso / volume), 1 a 5% (peso / volume) ou 2 a 5% (peso / volume).
[00775] 288. O método de qualquer um dos parágrafos 286 a 287, em que a mistura é agitada e deixada em repouso.
[00776] 289. O método de qualquer um dos parágrafos 286 a 287, em que a mistura é agitada e deixada em repouso por cerca de 5, cer- ca de 10, cerca de 15, cerca de 20, cerca de 30, cerca de 45, cerca de 60, cerca de 90, cerca de 120, cerca 180, cerca de 240 minutos ou mais.
[00777] 290. O método de qualquer um dos parágrafos 286 a 289, em que o carvão ativado é, então, removido.
[00778] 291.O método de qualquer um dos parágrafos 286 a 290, em que o carvão ativado é removido por centrifugação ou filtração.
[00779] 292.O método do parágrafo 285, em que a solução é filtra- da através de carvão ativado imobilizado em uma matriz.
[00780] 293.O método do parágrafo 285, em que a dita matriz é um meio filtrante poroso permeável à solução.
[00781] 294. O método de qualquer um dos parágrafos 292 a 293, em que a dita matriz compreende um material de suporte.
[00782] 295.O método de qualquer um dos parágrafos 292 a 293,
em que a dita matriz compreende um material ligante.
[00783] 296.O método de qualquer um dos parágrafos 294 a 295, em que o dito material de suporte é um polímero sintético.
[00784] 297.O método de qualquer um dos parágrafos 294 a 295, em que o dito material de suporte é um polímero de origem natural.
[00785] 298. O método do parágrafo 296, em que os ditos políme- ros sintéticos incluem qualquer um de poliestireno, poliacrilamida ou polimetil metacrilato.
[00786] 299. O método do parágrafo 296, em que os ditos políme- ros sintéticos são selecionados a partir do grupo que consiste de poli- estireno, poliacrilamida e polimetil metacrilato.
[00787] 300.O método do parágrafo 297, em que o dito polímero de origem natural inclui qualquer um de celulose, polissacarídeo, dextrano OU agarose.
[00788] 301.O método do parágrafo 297, em que o dito polímero de origem natural é selecionado a partir do grupo que consiste de celulo- se, polissacarídeo, dextrano e agarose.
[00789] 302. O método de qualquer um dos parágrafos 294 a 301, em que o dito material de suporte de polímero, se presente, está na forma de uma rede de fibras para fornecer rigidez mecânica.
[00790] 303. O método de qualquer um dos parágrafos 294 a 302, em que o dito material ligante, se presente, é uma resina.
[00791] 304. O método de qualquer um dos parágrafos 292 a 303, em que a dita matriz tem a forma de uma folha de membrana.
[00792] 305. O método de qualquer um dos parágrafos 292 a 304, em que o carvão ativado imobilizado na matriz está na forma de um cartucho de carbono de fluxo passante.
[00793] 306.O método do parágrafo 304, em que a folha de mem- brana é enrolada em espiral.
[00794] 307.O método de qualquer um dos parágrafos 292 a 306,
em que vários discos são empilhados uns sobre os outros.
[00795] 308. O método do parágrafo 307, em que a configuração dos discos empilhados é lenticular.
[00796] 309. O método de qualquer um dos parágrafos 292 a 308, em que o carvão ativado no filtro de carvão é derivado de turfa, lignita, madeira ou casca de coco.
[00797] 310.O método de qualquer um dos parágrafos 292 a 309, em que o carvão ativado imobilizado em uma matriz é disposto em um alojamento para formar uma unidade de filtro independente.
[00798] 311.O método de qualquer um dos parágrafos 292 a 310, em que os filtros de carvão ativado compreendem uma matriz de celu- lose na qual o pó de carvão ativado é aprisionado e ligado por resina no lugar.
[00799] 312.O método de qualquer um dos parágrafos 285 a 311, em que o filtro de carvão ativado tem uma classificação nominal em mícron de cerca de 0,01 - 100 micra, cerca de 0,05 - 100 micra, cerca de 0,1 - 100 micra, cerca de 0,2 - 100 micra, cerca de 0,3 - 100 micra, cerca de 0,4 - 100 micra, cerca de 0,5 - 100 micra, cerca de 0,6 - 100 micra, cerca de 0,7 - 100 micra, cerca de 0,8 - 100 micra, cerca de 0,9 - 100 micra, cerca de 1 - 100 micra, cerca de 1,25 - 100 micra, cerca de 1,5 - 100 micra, cerca de 1,75 - 100 micra, cerca de 2 - 100 micra, cerca de 3 - 100 micra, cerca de 4 - 100 micra, cerca de 5 - 100 micra, cerca de 6 - 100 micra, cerca de 7 - 100 micra, cerca de 8 - 100 micra, cerca de 9 - 100 micra, cerca de 10 - 100 micra, cerca de 15 - 100 mi- cra, cerca de 20 - 100 micra, cerca de 25 - 100 micra, cerca de 30 - 100 micra, cerca de 40 - 100 micra, cerca de 50 - 100 micra ou cerca de 75 - 100 micra.
[00800] 313. O método de qualquer um dos parágrafos 285 a 311, em que o filtro de carvão ativado tem uma classificação nominal em mícron de cerca de 0,01 - 50 micra, cerca de 0,05 - 50 micra, cerca de
0,1 - 50 micra, cerca de 0,2 - 50 micra, cerca de 0,3 - 50 micra, cerca de 0,4 - 50 micra, cerca de 0,5 - 50 micra, cerca de 0,6 - 50 micra, cer- ca de 0,7 - 50 micra, cerca de 0,8 - 50 micra, cerca de 0,9 - 50 micra, cerca de 1 - 50 micra, cerca de 1,25 - 50 micra, cerca de 1,5 - 50 mi- cra, cerca de 1,75 - 50 micra, cerca de 2 - 50 micra, cerca de 3 - 50 micra, cerca de 4 - 50 micra, cerca de 5 - 50 micra, cerca de 6 - 50 mi- cra, cerca de 7 - 50 micra, cerca de 8 - 50 micra, cerca de 9 - 50 micra, cerca de 10 - 50 micra, cerca de 15 - 50 micra, cerca de 20 - 50 micra, cerca de 25 - 50 micra, cerca de 30 - 50 micra, cerca de 40 - 50 micra ou cerca de 50 - 50 micra.
[00801] 314. O método de qualquer um dos parágrafos 285 a 311, em que o filtro de carvão ativado tem uma classificação nominal em micra de cerca de 0,01 - 25 micra, cerca de 0,05 - 25 micra, cerca de 0,1 - 25 micra, cerca de 0,2 - 25 micra, cerca de 0,3 - 25 micra, cerca de 0,4 - 25 micra, cerca de 0,5 - 25 micra, cerca de 0,6 - 25 micra, cer- ca de 0,7 - 25 micra, cerca de 0,8 - 25 micra, cerca de 0,9 - 25 micra, cerca de 1 - 25 micra, cerca de 1,25 - 25 micra, cerca de 1,5 - 25 mi- cra, cerca de 1,75 - 25 micra, cerca de 2 - 25 micra, cerca de 3 - 25 micra, cerca de 4 - 25 micra, cerca de 5 - 25 micra, cerca de 6 - 25 mi- cra, cerca de 7 - 25 micra, cerca de 8 - 25 micra, cerca de 9 - 25 micra, cerca de 10 - 25 micra, cerca de 15 - 25 micra ou cerca de 20 - 25 mi- cra.
[00802] 315. O método de qualquer um dos parágrafos 285 a 311, em que o filtro de carvão ativado tem uma classificação nominal em micra de cerca de 0,01 - 10 micra, cerca de 0,05 - 10 micra, cerca de 0,1 - 10 micra, cerca de 0,2 - 10 micra, cerca de 0,3 - 10 micra, cerca de 0,4 - 10 micra, cerca de 0,5 - 10 micra, cerca de 0,6 - 10 micra, cer- ca de 0,7 - 10 micra, cerca de 0,8 - 10 micra, cerca de 0,9 - 10 micra, cerca de 1 - 10 micra, cerca de 1,25 - 10 micra, cerca de 1,5 - 10 mi- cra, cerca de 1,75 - 10 micra, cerca de 2 - 10 micra, cerca de 3 - 10 micra, cerca de 4 - 10 micra, cerca de 5 - 10 micra, cerca de 6 - 10 mi- cra, cerca de 7 - 10 micra, cerca de 8 - 10 micra ou cerca de 9 - 10 mi- cra.
[00803] 316.O método de qualquer um dos parágrafos 285 a 311, em que o filtro de carvão ativado tem uma classificação nominal em micra de cerca de 0,01 - 8 micra, cerca de 0,05 - 8 micra, cerca de 0,1 - 8 micra, cerca de 0,2 - 8 micra, cerca de 0,3 - 8 micra, cerca de 0,4 - 8 micra, cerca de 0,5 - 8 micra, cerca de 0,6 - 8 micra, cerca de 0,7 - 8 micra, cerca de 0,8 - 8 micra, cerca de 0,9 - 8 micra, cerca de 1 - 8 mi- cra, cerca de 1,25 - 8 micra, cerca de 1,5 - 8 micra, cerca de 1,75-8 micra, cerca de 2 - 8 micra, cerca de 3 - 8 micra, cerca de 4 - 8 micra, cerca de 5 - 8 micra, cerca de 6 - 8 micra ou cerca de 7 - 8 micra.
[00804] 317.O método de qualquer um dos parágrafos 285 a 311, em que o filtro de carvão ativado tem uma classificação nominal em micra de cerca de 0,01 - 5 micra, cerca de 0,05 - 5 micra, cerca de 0,1 - 5 micra, cerca de 0,2 - 5 micra, cerca de 0,3 - 5 micra, cerca de 0,4 - micra, cerca de 0,5 - 5 micra, cerca de 0,6 - 5 micra, cerca de 0,7 -5 micra, cerca de 0,8 - 5 micra, cerca de 0,9 - 5 micra, cerca de 1 - 5 mi- cra, cerca de 1,25- 5 micra, cerca de 1,5 - 5 micra, cerca de 1,7/5-5 micra, cerca de 2 - 5 micra, cerca de 3 - 5 micra ou cerca de 4 - 5 mi- cra.
[00805] 318. O método de qualquer um dos parágrafos 285 a 311, em que o filtro de carvão ativado tem uma classificação nominal em micra de cerca de 0,01 - 2 micra, cerca de 0,05 - 2 micra, cerca de 0,1 - 2 micra, cerca de 0,2 - 2 micra, cerca de 0,3 - 2 micra, cerca de 0,4 - 2 micra, cerca de 0,5 - 2 micra, cerca de 0,6 - 2 micra, cerca de 0,7 - 2 micra, cerca de 0,8 - 2 micra, cerca de 0,9 - 2 micra, cerca de 1 - 2 mi- cra, cerca de 1,25 - 2 micra, cerca de 1,5 - 2 micra, cerca de 1,75-2 micra, cerca de 2 - 2 micra, cerca de 3 - 2 micra ou cerca de 4 - 2 mi- cra.
[00806] 319. O método de qualquer um dos parágrafos 285 a 311, em que o filtro de carvão ativado tem uma classificação nominal em micra de cerca de 0,01 - 1 micra, cerca de 0,05 - 1 micra, cerca de 0,1 - 1 micra, cerca de 0,2 - 1 micra, cerca de 0,3 - 1 micra, cerca de 0,4 - 1 micra, cerca de 0,5 - 1 micra, cerca de 0,6 - 1 micra, cerca de 0,7 - 1 micra, cerca de 0,8 - 1 micra ou cerca de 0,9 - 1 micra.
[00807] 320.O método de qualquer um dos parágrafos 285 a 311, em que o filtro de carvão ativado tem uma classificação nominal em micra de cerca de 0,05 - 50 micra, 0,1 - 25 micra, 0,2 - 10, micra, 0,1 - micra, 0,2 - 5 micra ou 0,25 - 1 micra.
[00808] 321.O método de qualquer um dos parágrafos 285 a 320, em que o filtro de carvão ativado é conduzido a uma taxa de alimenta- ção de 1 - 500 LMH, 10 - 500 LMH, 15 - 500 LMH, 20 - 500 LMH, 25 - 500 LMH, 30 - 500 LMH, 40 - 500 LMH, 50 - 500 LMH, 100 - 500 LMH, 125 - 500 LMH, 150 - 500 LMH, 200 - 500 LMH, 250 - 500 LMH, 300 - 500 LMH ou 400 - 500 LMH.
[00809] 322. O método de qualquer um dos parágrafos 285 a 320, em que o filtro de carvão ativado é conduzido a uma taxa de alimenta- ção de 1 - 200 LMH, 10 - 200 LMH, 15 - 200 LMH, 20 - 200 LMH, 25 - 200 LMH, 30 - 200 LMH, 40 - 200 LMH, 50 - 200 LMH, 100 - 200 LMH, 125 - 200 LMH ou 150 - 200 LMH.
[00810] 323. O método de qualquer um dos parágrafos 285 a 320, em que o filtro de carvão ativado é conduzido a uma taxa de alimenta- ção de 1 - 150 LMH, 10 - 150 LMH, 15 - 150 LMH, 20 - 150 LMH, 25 - 150 LMH, 30 - 150 LMH, 40 - 150 LMH, 50 - 150 LMH, 100 - 150 LMH ou 125 - 150 LMH.
[00811] 324. O método de qualquer um dos parágrafos 285 a 320, em que o filtro de carvão ativado é conduzido a uma taxa de alimenta- ção de 1 - 100 LMH, 10 - 100 LMH, 15 - 100 LMH, 20 - 100 LMH, 25 - 100 LMH, 30 - 100 LMH, 40 - 100 LMH ou 50 - 100 LMH.
[00812] 325. O método de qualquer um dos parágrafos 285 a 320, em que o filtro de carvão ativado é conduzido a uma taxa de alimenta- ção de 1 - 75 LMH, 5 - 75 LMH, 10 - 75 LMH, 15 - 75 LMH, 20 - 75 LMH, 25 - 75 LMH, 30 - 75 LMH, 35 - 75 LMH, 40 - 75 LMH, 45 - 75 LMH, 50 - 75 LMH, 55 - 75 LMH, 60 - 75 LMH, 65 - 75 LMH ou 70 - 75 LMH.
[00813] 326.O método de qualquer um dos parágrafos 285 a 320, em que o filtro de carvão ativado é conduzido a uma taxa de alimenta- ção de 1 - 50 LMH, 5 - 50 LMH, 7 - 50 LMH, 10 - 50 LMH, 15 - 50 LMH, 20 - 50 LMH, 25 - 50 LMH, 30 - 50 LMH, 35 - 50 LMH, 40 - 50 LMH ou 45 - 50 LMH.
[00814] 327.O método de qualquer um dos parágrafos 285 a 320, em que o filtro de carvão ativado é conduzido a uma taxa de alimenta- ção de cerca de 1, cerca de 2, cerca de 5, cerca de 10, cerca de 15, cerca de 20, cerca de 25, cerca de 30, cerca de 35, cerca de 40, cerca de 45, cerca de 50, cerca de 55, cerca de 60, cerca de 65, cerca de 70, cerca de 75, cerca de 80, cerca de 85, cerca de 90, cerca de 95, cerca de 100, cerca de 110, cerca de 120, cerca de 130, cerca de 140, cerca de 150, cerca de 160, cerca de 170, cerca de 180, cerca de 190, cerca de 200, cerca de 225, cerca de 250, cerca de 300, cerca de 350, cerca de 400, cerca de 450, cerca de 500, cerca de 550, cerca de 600, cerca de 700, cerca de 800, cerca de 900, cerca de 950 ou cerca de 1000 LMH.
[00815] 328. O método de qualquer um dos parágrafos 285 a 327, em que a solução é tratada por um filtro de carvão ativado, em que o filtro tem uma capacidade de filtro de 5 - 1000 L / m?2, 10 - 750 L/ m?, - 500 L / m?, 20 - 400 L / m?, 25 - 300 L / m?, 30 - 250 L / m?, 40 - 200 L / m? ou 30 - 100 L/ m?.
[00816] 329. O método de qualquer um dos parágrafos 285 a 327, em que a solução é tratada por um filtro de carvão ativado, em que o filtro tem uma capacidade de filtro de cerca de 5, cerca de 10, cerca de 15, cerca de 20, cerca de 25, cerca de 30, cerca de 35, cerca de 40, cerca de 45, cerca de 50, cerca de 55, cerca de 60, cerca de 65, cerca de 70, cerca de 75, cerca de 80, cerca de 85, cerca de 90, cerca de 100, cerca de 125, cerca de 150, cerca de 175, cerca de 200, cerca de 225, cerca de 250, cerca de 275, cerca de 300, cerca de 400, cerca de 500, cerca de 600, cerca de 700, cerca de 800, cerca de 900 ou cerca de 1000 L / m?.
[00817] 330. O método de qualquer um dos parágrafos 285 a 329, em que 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 etapas de filtração por carvão ati- vado são realizadas.
[00818] 331.O método de qualquer um dos parágrafos 285 a 329, em que 1, 2 ou 3 etapas de filtração por carvão ativado são realizadas.
[00819] 332. O método de qualquer um dos parágrafos 285 a 329, em que 1 ou 2 etapas de filtração por carvão ativado são realizadas.
[00820] 333. O método de qualquer um dos parágrafos 285 a 332, em que a solução é tratada por filtros de carvão ativado em série.
[00821] 334. O método de qualquer um dos parágrafos 285 a 332, em que a solução é tratada por 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 filtros de carvão ativado em série.
[00822] 335. O método de qualquer um dos parágrafos 285 a 332, em que a solução é tratada por 2, 3, 4 ou 5 filtros de carvão ativado em série.
[00823] 336.O método de qualquer um dos parágrafos 285 a 332, em que a solução é tratada por 2 filtros de carvão ativado em série.
[00824] 337.O método de qualquer um dos parágrafos 285 a 332, em que a solução é tratada por 3 filtros de carvão ativado em série.
[00825] 338. O método de qualquer um dos parágrafos 285 a 332, em que a solução é tratada por 4 filtros de carvão ativado em série.
[00826] 339. O método de qualquer um dos parágrafos 285 a 332,
em que a solução é tratada por 5 filtros de carvão ativado em série.
[00827] 340. O método de qualquer um dos parágrafos 285 a 339, em que a etapa de filtração por carvão ativado é realizada em um mo- do de passagem única.
[00828] 341.O método de qualquer um dos parágrafos 285 a 339, em que a etapa de filtração por carvão ativado é realizada no modo de recirculação.
[00829] 342.O método do parágrafo 341, em que 2, 3,4,5,6,7,8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45,46, 47, 48, 49 ou 50 ciclos de filtração por carvão ativado são realizados.
[00830] 343.O método do parágrafo 341, em que 2, 3,4,5,6,7,8, 9 ou 10 ciclos de filtração por carvão ativado são realizados.
[00831] 344. O método do parágrafo 341, em que 2 ou 3 ciclos de filtração por carvão ativado são realizados.
[00832] 345. O método do parágrafo 341, em que 2 ciclos de filtra- ção por carvão ativado são realizados.
[00833] 346.O método de qualquer um dos parágrafos 285 a 345, em que o filtrado é adicionalmente filtrado.
[00834] 347.O método de qualquer um dos parágrafos 285 a 345, em que o filtrado é submetido à microfiltração.
[00835] 348.O método do parágrafo 347, em que a dita microfiltra- ção é uma filtração frontal (filtração perpendicular).
[00836] 349.O método do parágrafo 347, em que a dita microfiltra- ção é a microfiltração tangencial.
[00837] 350.O método de qualquer um dos parágrafos 347 a 349, em que o dito filtro de microfiltração tem uma faixa de retenção nomi- nal de cerca de 0,01 - 2 micra, cerca de 0,05 - 2 micra, cerca de 0,1 - 2 micra, cerca de 0,2 - 2 micra, cerca de 0,3 - 2 micra, cerca de 0,4 - 2 micra, cerca de 0,45 - 2 micra, cerca de 0,5 - 2 micra, cerca de 0,6 - 2 micra, cerca de 0,7 - 2 micra, cerca de 0,8 - 2 micra, cerca de 0,9 - 2 micra, cerca de 1 - 2 micra, cerca de 1,25 - 2 micra, cerca de 1,5- 2 micra ou cerca de 1,75 - 2 micra.
[00838] 351.O método de qualquer um dos parágrafos 347 a 349, em que o dito filtro de microfiltração tem uma faixa de retenção nomi- nal de cerca de 0,01 - 1 mícron, cerca de 0,05 - 1 mícron, cerca de 0,1 - 1 mícron, cerca de 0,2 - 1 mícron, cerca de 0,3 - 1 mícron, cerca de 0,4 - 1 mícron, cerca de 0,45 - 1 mícron, cerca de 0,5 - 1 mícron, cerca de 0,6 - 1 mícron, cerca de 0,7 - 1 mícron, cerca de 0,8 - 1 mícron ou cerca de 0,9 - 1 mícron.
[00839] 352. O método de qualquer um dos parágrafos 347 a 349, em que o dito filtro de microfiltração tem uma faixa de retenção nomi- nal de cerca de 0,01, cerca de 0,05, cerca de 0,1, cerca de 0,2, cerca de 0,3, cerca de 0,4, cerca de 0,45, cerca de 0,5, cerca de 0,6, cerca de 0,7, cerca de 0,8, cerca de 0,9, cerca de 1,0, cerca de 1,1, cerca de 1,2, cerca de 1,3, cerca de 1,4, cerca de 1,5, cerca de 1,6, cerca de 1,7, cerca de 1,8, cerca de 1,9 ou cerca de 2,0 micra.
[00840] 353. O método de qualquer um dos parágrafos 343 a 345, em que o dito filtro de microfiltração tem uma faixa de retenção nomi- nal de cerca de 0,2 mícron.
[00841] 354. O método de qualquer um dos parágrafos 347 a 353, em que o dito filtro de microfiltração tem uma capacidade de filtro de 100 - 6000 L / m?, 200 - 6000 L / m?, 300 - 6000 L / m?, 400 - 6000 L / m?, 500 - 6000 L / m?, 750 - 6000 L / m?, 1000 - 6000 L / m?, 1500 - 6000 L / m?, 2000 - 6000 L / m?, 3000 - 6000 L / m? ou 4000 - 6000 L / m?.
[00842] 355. O método de qualquer um dos parágrafos 347 a 353, em que o dito filtro de microfiltração tem uma capacidade de filtro de 100 - 4000 L / m?, 200 - 4000 L / m?, 300 - 4000 L / m?, 400 - 4000 L / m?, 500 - 4000 L / m?, 750 - 4000 L / m?, 1000 - 4000 L / m?, 1500 -
4000 L / m?, 2000 - 4000 L / m?, 2500 - 4000 L / m?, 3000 - 4000 L / m?, 3000 - 4000 L / m? ou 3500 - 4000 L / m?.
[00843] 356.O método de qualquer um dos parágrafos 347 a 353, em que o dito filtro de microfiltração tem uma capacidade de filtro de 100 - 3750 L / m?, 200 - 3750 L / m?, 300 - 3750 L / m?, 400 - 3750 L / m?, 500 - 3750 L / m?, 750 - 3750 L / m?, 1000 - 3750 L / m?, 1500 - 3750 L / m?, 2000 - 3750 L / m?, 2500 - 3750 L / m?, 3000 - 3750 L / m?, 3000 - 3750 L / m? ou 3500 - 3750 L/ m?.
[00844] 357.O método de qualquer um dos parágrafos 347 a 353, em que o dito filtro de microfiltração tem uma capacidade de filtro de 100 - 1250 L / m?, 200 - 1250 L / m?, 300 - 1250 L / m?, 400 - 1250 L / m?, 500 - 1250 L / m?, 750 - 1250 L / m? ou 1000 - 1250 L / m?.
[00845] 358. O método de qualquer um dos parágrafos 347 a 353, em que o dito filtro de microfiltração tem uma capacidade de filtro de cerca de 100, cerca de 200, cerca de 300, cerca de 400, cerca de 550, cerca de 600, cerca de 700, cerca de 800, cerca de 900, cerca 1000, cerca de 1100, cerca de 1200, cerca de 1300, cerca de 1400, cerca de 1500, cerca de 1600, cerca de 1700, cerca de 1800, cerca de 1900, cerca de 2000, cerca de 2100, cerca de 2200, cerca de 2300, cerca de 2400, cerca de 2500, cerca de 2600, cerca de 2700, cerca de 2800, cerca de 2900, cerca de 3000, cerca de 3100, cerca de 3200, cerca de 3300, cerca de 3400, cerca de 3500, cerca de 3600, cerca de 3700, cerca de 3800, cerca de 3900, cerca de 4000, cerca de 4100, cerca de 4200, cerca de 4300, cerca de 4400, cerca de 4500, cerca de 4600, cerca de 4700, cerca de 4800, cerca de 4900, cerca de 5000, cerca de 5250, cerca de 5500, cerca de 5750 ou cerca de 6000 L / m?.
[00846] 359. O método de qualquer um dos parágrafos 285 a 359, em que o filtrado é adicionalmente clarificado por ultrafiltração e / ou diafiltração.
[00847] 360. O método de qualquer um dos parágrafos 285 a 359,
em que o filtrado é adicionalmente clarificado por ultrafiltração.
[00848] 361.O método do parágrafo 359 ou 360, em que o peso molecular de corte da dita membrana de ultrafiltração está na faixa de cerca de 5 kDa a 1000 kDa.
[00849] 362. O método do parágrafo 359 ou 360, em que o peso molecular de corte da dita membrana de ultrafiltração está na faixa de cerca de 10 kDa a 750 kDa.
[00850] 363. O método do parágrafo 359 ou 360, em que o peso molecular de corte da dita membrana de ultrafiltração está na faixa de cerca de 10 kDa a 500 kDa.
[00851] 364. O método do parágrafo 359 ou 360, em que o peso molecular de corte da dita membrana de ultrafiltração está na faixa de cerca de 10 kDa a 300 kDa.
[00852] 365. O método do parágrafo 359 ou 360, em que o peso molecular de corte da dita membrana de ultrafiltração está na faixa de cerca de 10 kDa a 100 kDa.
[00853] 366. O método do parágrafo 359 ou 360, em que o peso molecular de corte da dita membrana de ultrafiltração está na faixa de cerca de 10 kDa a 50 kDa.
[00854] 367.O método do parágrafo 359 ou 360, em que o peso molecular de corte da dita membrana de ultrafiltração está na faixa de cerca de 10 kDa a 30 kDa.
[00855] 368. O método do parágrafo 359 ou 360, em que o peso molecular de corte da dita membrana de ultrafiltração está na faixa de cerca de 5 kDa - 1000 kDa, cerca de 10 kDa - 1000 kDa cerca de 20 kDa - 1000 kDa, cerca de 30 kDa - 1000 kDa, cerca de 40 kDa - 1000 kDa, cerca de 50 kDa - 1000 kDa, cerca de 75 kDa - 1000 kDa, cerca de 100 kDa - 1000 kDa, cerca de 150 kDa - 1000 kDa, cerca de 200 kDa - 1000 kDa, cerca de 300 kDa - 1000 kDa, cerca de 400 kDa - 1000 kDa, cerca de 500 kDa - 1000 kDa ou cerca de 750 kDa - 1000 kDa.
[00856] 369. O método do parágrafo 359 ou 360, em que o peso molecular de corte da dita membrana de ultrafiltração está na faixa de cerca de 5 kDa - 500 kDa, cerca de 10 kDa - 500 kDa, cerca de 20 kDa - 500 kDa, cerca de 30 kDa - 500 kDa, cerca de 40 kDa - 500 kDa, cerca de 50 kDa - 500 kDa, cerca de 75 kDa - 500 kDa, cerca de 100 kDa - 500 kDa, cerca de 150 kDa - 500 kDa, cerca de 200 kDa - 500 kDa, cerca de 300 kDa - 500 kDa ou cerca de 400 kDa - 500 kDa.
[00857] 370.O método do parágrafo 359 ou 360, em que o peso molecular de corte da dita membrana de ultrafiltração está na faixa de cerca de 5 kDa - 300 kDa, cerca de 10 kDa - 300 kDa, cerca de 20 kDa - 300 kDa, cerca de 30 kDa - 300 kDa, cerca de 40 kDa - 300 kDa, cerca de 50 kDa - 300 kDa, cerca de 75 kDa - 300 kDa, cerca de 100 kDa - 300 kDa, cerca de 150 kDa - 300 kDa ou cerca de 200 kDa - 300 kDa.
[00858] 371.O método do parágrafo 359 ou 360, em que o peso molecular de corte da dita membrana de ultrafiltração está na faixa de cerca de 5 kDa - 100 kDa, cerca de 10 kDa - 100 kDa, cerca de 20 kDa - 100 kDa, cerca de 30 kDa - 100 kDa, cerca de 40 kDa - 100 kDa, cerca de 50 kDa - 100 kDa ou cerca de 75 kDa - 100 kDa.
[00859] 372. O método do parágrafo 359 ou 360, em que o peso molecular de corte da dita membrana de ultrafiltração é de cerca de 5 kDa, cerca de 10 kDa, cerca de 20 kDa, cerca de 30 kDa, cerca de 40 kDa, cerca de 50 kDa, cerca de 60 kDa, cerca de 70 kDa, cerca de 80 kDa, cerca de 90 kDa, cerca de 100 kDa, cerca de 110 kDa, cerca de 120 kDa, cerca de 130 kDa, cerca de 140 kDa, cerca de 150 kDa, cer- ca de 200 kDa, cerca de 250 kDa, cerca de 300 kDa, cerca de 400 kDa, cerca de 500 kDa, cerca de 750 kDa ou cerca de 1000 kDa.
[00860] 373. O método de qualquer um dos parágrafos 359 a 371, em que o fator de concentração da dita etapa de ultrafiltração é de cerca de 1,5 a cerca de 10,0.
[00861] 374. O método de qualquer um dos parágrafos 359 a 371, em que o fator de concentração da dita etapa de ultrafiltração é de cerca de 2,0 a cerca de 8,0.
[00862] 375.O método de qualquer um dos parágrafos 359 a 371, em que o fator de concentração da dita etapa de ultrafiltração é de cerca de 2,0 a cerca de 5,0.
[00863] 376.O método de qualquer um dos parágrafos 359 a 371, em que o fator de concentração da dita etapa de ultrafiltração é cerca de 1,5, cerca de 2,0, cerca de 2,5, cerca de 3,0, cerca de 3,5, cerca de 4,0, cerca de 4,5, cerca de 5,0, cerca de 5,5, cerca de 6,0, cerca de 6,5, cerca de 7,0, cerca de 7,5, cerca de 8,0, cerca de 8,5, cerca de 9,0, cerca de 9,5 ou cerca de 10,0. Em uma modalidade, o fator de concentração é de cerca de 2,0, cerca de 3,0, cerca de 4,0, cerca de 5,0 ou cerca de 6,0.
[00864] 377.O método de qualquer um dos parágrafos 359 a 376, em que a dita etapa de ultrafiltração é realizada a uma temperatura entre cerca de 20ºC e cerca de 90ºC.
[00865] 378. O método de qualquer um dos parágrafos 359 a 376, em que a dita etapa de ultrafiltração é realizada a uma temperatura entre cerca de 35ºC e cerca de 80ºC, a uma temperatura entre cerca de 40ºC e cerca de 70ºC, a uma temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 65ºC, a uma temperatura entre cerca de 50ºC e cerca de 60ºC, a uma temperatura entre cerca de 50ºC e cerca de 55ºC, a uma temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC ou a uma temperatu- ra entre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC.
[00866] 379. O método de qualquer um dos parágrafos 359 a 376, em que a dita etapa de ultrafiltração é realizada a uma temperatura de cerca de 20ºC, cerca de 21ºC, cerca de 22ºC, cerca de 23ºC, cerca de 24ºC, cerca de 25ºC, cerca de 26ºC, cerca de 27ºC, cerca de 28ºC,
cerca de 29ºC, cerca de 30ºC, cerca de 31ºC, cerca de 32ºC, cerca de 33ºC, cerca de 34ºC, cerca de 35ºC, cerca de 36ºC, cerca de 37ºC, cerca de 38ºC, cerca de 39ºC, cerca de 40ºC, cerca de 41ºC, cerca de 42ºC, cerca de 43ºC, cerca de 44ºC, cerca de 45ºC, cerca de 46ºC, cerca de 47ºC, cerca de 48ºC, cerca de 49ºC, cerca de 50ºC, cerca de 51ºC, cerca de 52ºC, cerca de 53ºC, cerca de 54ºC, cerca de 55ºC, cerca de 56ºC, cerca de 57ºC, cerca de 58ºC, cerca de 59ºC, cerca de 60ºC, cerca de 61ºC, cerca de 62ºC, cerca de 63ºC, cerca de 64ºC, cerca de 65ºC, cerca de 66ºC, cerca de 67ºC, cerca de 68ºC, cerca de 69ºC, cerca de 70ºC, cerca de 71ºC, cerca de 72ºC, cerca de 73ºC, cerca de 74ºC, cerca de 75ºC, cerca de 76ºC, cerca de 77ºC, cerca de 78ºC, cerca de 79ºC ou cerca de 80ºC.
[00867] 380. O método de qualquer um dos parágrafos 359 a 376, em que a dita etapa de ultrafiltração é realizada a uma temperatura de cerca de 50ºC.
[00868] 381.O método de qualquer um dos parágrafos 359 a 380, em que o filtrado de ultrafiltração é tratado por diafiltração.
[00869] 382. O método do parágrafo 381, em que a solução de substituição é água.
[00870] 383. O método do parágrafo 381, em que a solução de substituição é solução salina em água.
[00871] 384.O método do parágrafo 383, em que o sal é seleciona- do a partir do grupo que consiste de cloreto de magnésio, cloreto de potássio, cloreto de sódio e uma combinação dos mesmos.
[00872] 385.O método do parágrafo 383, em que o sal é cloreto de sódio.
[00873] 386. O método do parágrafo 383, em que a solução de substituição é cloreto de sódio a cerca de 1 mM, cerca de 5 mM, cerca de 10 mM, cerca de 15 mM, cerca de 20 mM, cerca de 25 mM, cerca de 30 mM, cerca de 35 mM, cerca de 40 mM, cerca de 45 mM, cerca de 50 mM, cerca de 55 mM, cerca de 60 mM, cerca de 65 mM, cerca de 70 mM, cerca de 80 mM, cerca de 90 mM, cerca de 100 mM, cerca de 110 mM, cerca de 120 mM, cerca de 130 mM, cerca de 140 mM, cerca de 150 mM, cerca de 160 mM, cerca de 170 mM, cerca de 180 MM, cerca de 190 mM, cerca de 200 mM, cerca de 250 mM, cerca de 300 mM, cerca de 350 mM, cerca de 400 mM, cerca de 450 mM ou cerca de 500 mM.
[00874] 387. O método do parágrafo 381, em que a solução de substituição é uma solução tampão.
[00875] 388. O método do parágrafo 381, em que a solução de substituição é uma solução tampão em que o tampão é selecionado a partir do grupo que consiste de ácido N-(2-acetamido) -aminoetanos- sulfônico (ACES), um sal de ácido acético (acetato), ácido N-(2-aceta- mido)-iminodiacético (ADA), ácido 2-aminoetanossulfônico (AES, Tau- rina), amônia, 2-Amino-2-metil-1-propanol (AMP), 2-Amino-2-metil-1,3- propanodiol AMPD, ammediol, ácido N-(1,1-Dimetil-2-hidroxietil)-3-a- mino-2-hidroxipropanossulfônico (AMPSO), ácido N,N-Bis-(2-hidroxi- etil)-2-aminoetanossulfônico (BES), hidrogênio carbonato de sódio (bi- carbonato), N,N'-Bis(2-hidroxietil)-glicina (bicina), [Bis-(2-hidroxietil) - imino] -tris- (hidroximetilmetano) (BIS-Tris), 1,3-Bis [tris(hidroximetil)- metilamino] propano (BIS-Tris-Propano), ácido bórico, ácido dimetilarsíni- co (Cacodilato), ácido 3- (Ciclohexilamino)-propanossulfônico (CAPS), ácido 3-(ciclohexilamino) -2-hidróxi-1-propanossulfônico (CAPSO), car- bonato de sódio (Carbonato), ácido ciclohexilaminoetanossulfônico (CHES), um sal de ácido cítrico (citrato), ácido 3- [N-Bis (hidroxietil) amino] -2-hidroxipropanossulfônico (DIPSO), um sal de ácido fórmico (formato), Glicina, Glicilglicina, ácido N-(2-Hidroxietil)-piperazina-N'- etanossulfônico (HEPES), ácido N- (2-hidroxietil)-piperazina-N'-3-pro- panossulfônico (HEPPS, EPPS), ácido N-(2-hidroxietil)-piperazina-N'- 2-hidroxipropanossulfônico (HEPPSO), imidazol, um sal de ácido málico
(Malato), um sal de ácido maleico (Maleato), ácido 2-(N-Morfolino) —eta- nossulfônico (MES), ácido 3-(N-Morfolino)-propanossulfônico (MOPS), ácido 3-(N-Morfolino)-2-hidroxipropanossulfônico (MOPSO), um sal de ácido fosfórico (Fosfato), Piperazina-N,N'-bis (ácido 2-etanossulfônico) (PIPES), Piperazina-N, N'-bis (2 ácido -hidroxipropanossulfônico) (POPSO), piridina, um sal de ácido succínico (Succinato), ácido 3 - fíTris (hidroximetil)-metil] -amino) -propanossulfônico (TAPS), ácido 3- [N-Tris (hidroximetil)-metilamino]-2-hidroxipropanossulfônico (TAPSO), Trietanolamina (TEA), ácido 2-[Tris (hidroximetil)-metilamino]-etanos- sulfônico (TES), N-[Tris(hidroximetil)-metil] -glicina (Tricina) e Tris(hi- droximetil)-aminometano (Tris).
[00876] 389. O método do parágrafo 381, em que a solução de substituição é uma solução tampão em que o tampão é selecionado a partir do grupo que consiste de um sal de ácido acético (acetato), um sal de ácido cítrico (citrato), um sal de ácido fórmico (formato), um sal de ácido málico (malato), um sal de ácido maleico (maleato), um sal de ácido fosfórico (fosfato) e um sal de ácido succínico (succinato).
[00877] 390. O método do parágrafo 381, em que a solução de substituição é uma solução tampão em que o tampão é um sal de áci- do cítrico (citrato).
[00878] 391. O método do parágrafo 381, em que a solução de substituição é uma solução tampão em que o tampão é um sal de áci- do succínico (succinato).
[00879] 392. O método do parágrafo 381, em que a solução de substituição é uma solução tampão em que o tampão é um sal de áci- do fosfórico (fosfato).
[00880] 393.O método de qualquer um dos parágrafos 388 a 392, o dito sal é um sal de sódio.
[00881] 394.O método de qualquer um dos parágrafos 388 a 392, o dito sal é um sal de potássio.
[00882] 395. O método do parágrafo 381, em que a solução de substituição é uma solução tampão em que o tampão é fosfato de po- tássio.
[00883] 396.O método de qualquer um dos parágrafos 381 a 395, em que o pH do tampão de diafiltração é de cerca de 4,0 - 11,0, de cerca de 5,0 - 10,0, de cerca de 5,5 - 9,0, de cerca de 6,0 - 8,0, de cerca de 6,0 - 7,0, de cerca de 6,5 - 7,5, de cerca de 6,5 - 7,0 ou de cerca de 6,0 - 7,5.
[00884] 397. O método do parágrafo 381 a 395, em que o pH do tampão de diafiltração é de cerca de 4,0, cerca de 4,5, cerca de 5,0, cerca de 5,5, cerca de 6,0, cerca de 6,5, cerca de 7,0, cerca de 7,5, cerca de 8,0, cerca de 8,5, cerca de 9,0, cerca de 9,5, cerca de 10,0, cerca de 10,5 ou cerca de 11,0.
[00885] 398. O método de qualquer um dos parágrafos 381 a 395, em que o pH do tampão de diafiltração é de cerca de 6,0, cerca de 6,5, cerca de 7,0, cerca de 7,5, cerca de 8,0, cerca de 8,5 ou cerca de 9,0.
[00886] 399. O método de qualquer um dos parágrafos 381 a 395, em que o pH do tampão de diafiltração é de cerca de 6,5, cerca de 7,0 Ou cerca de 7,5.
[00887] 400. O método de qualquer um dos parágrafos 381 a 395, em que o pH do tampão de diafiltração é cerca de 6,0.
[00888] 401.O método de qualquer um dos parágrafos 381 a 395, em que o pH do tampão de diafiltração é de cerca de 6,5.
[00889] 402. O método de qualquer um dos parágrafos 381 a 395, em que o pH do tampão de diafiltração é de cerca de 7,0.
[00890] 403. O método de qualquer um dos parágrafos 387 a 402, em que a concentração do tampão de diafiltração é de cerca de 0,01 mM - 100 mM, de cerca de 0,1 mM - 100 mM, de cerca de 0,5 mM - 100 mM, de cerca de 1 mM - 100 mM, de cerca de 2 mM - 100 mM, de cerca de 3 mM - 100 mM, de cerca de 4 mM - 100 mM, de cerca de mM - 100 mM, de cerca de 6 mM - 100 mM, de cerca de 7 mM - 100 mM, de cerca de 8 mM - 100 mM, de cerca de 9 mM - 100 mM, de cerca de 10 mM - 100 mM, de cerca de 11 mM - 100 mM, de cerca de 12 mM - 100 mM, de cerca de 13 mM - 100 mM, de cerca de 14 mM - 100 mM, de cerca de 15 mM - 100 mM, de cerca de 16 mM - 100 mM, de cerca de 17 mM - 100 mM, de cerca de 18 mM - 100 mM, de cerca de 19 mM - 100 mM, de cerca de 20 mM - 100 mM, de cerca de 25 mM - 100 mM, de cerca de 30 mM - 100 mM, de cerca de 35 mM - 100 MM, de cerca de 40 mM - 100 mM, de cerca de 45 mM - 100 mM, de cerca de 50 mM - 100 mM, de cerca de 55 mM - 100 mM, de cerca de 60 mM - 100 mM, de cerca de 65 mM - 100 mM, de cerca de 70 mM - 100 mM, de cerca de 75 mM - 100 mM, de cerca de 8 O mM - 100 mM, de cerca de 85 mM - 100 mM, de cerca de 90 mM - 100 mM ou de cerca de 95 mM - 100 mM.
[00891] 404. O método de qualquer um dos parágrafos 387 a 402, em que a concentração do tampão de diafiltração é de cerca de 0,01 mM - 50 mM, de cerca de 0,1 mM - 50 mM, de cerca de 0,5 mM - 50 MM, de cerca de 1 mM - 50 MM, de cerca de 2mM - 50 mM, de cerca de 3 mM - 50 mM, de cerca de 4 mM - 50 mM, de cerca de 5 mM - 50 MM, de cerca de 6 mM - 50 mM, de cerca de 7 mM - 50 mM, de cerca de 8 mM - 50 MM, de cerca de 9 mM - 50 mM, de cerca de 10 mM - 50 mM, de cerca de 11 mM - 50 mM, de cerca de 12 mM - 50 mM, de cerca de 13 mM - 50 mM, de cerca de 14 mM - 50 mM, de cerca de 15 mM - 50 mM, de cerca de 16 mM - 50 mM, de cerca de 17 mM - 50 mM, de cerca de 18 mM - 50 mM, de cerca de 19 mM - 50 mM, de cerca de 20 mM - 50 mM, de cerca de 25 mM - 50 mM, de cerca de 30 mM - 50 mM, de cerca de 35 mM - 50 mM, de cerca de 40 mM - 50 mM ou de cerca de 45 mM - 50 mM.
[00892] 405. O método de qualquer um dos parágrafos 387 a 402, em que a concentração do tampão de diafiltração é de cerca de 0,01 mM - 25 mM, de cerca de 0,1 mM - 25 mM, de cerca de 0,5 mM - 25 MM, de cerca de 1 mM - 25 mM, de cerca de 2mM - 25 mM, de cerca de 3 mM - 25 mM, de cerca de 4 mM - 25 mM, de cerca de 5 mM - 25 MM, de cerca de 6 mM - 25 mM, de cerca de 7 mM - 25 mM, de cerca de 8 mM - 25 mM, de cerca de 9 mM - 25 mM, de cerca de 10 mM - 25 mM, de cerca de 11 mM - 25 mM, de cerca de 12 mM - 25 mM, de cerca de 13 mM - 25 mM, de cerca de 14 mM - 25 mM, de cerca de 15 mM - 25 mM, de cerca de 16 mM - 25 mM, de cerca de 17 mM - 25 mM, de cerca de 18 mM - 25 mM, de cerca de 19 mM - 25 mM ou de cerca de 20 mM - 25 mM.
[00893] 406.O método de qualquer um dos parágrafos 387 a 402, em que a concentração do tampão de diafiltração é de cerca de 0,01 mM - 15 mM, de cerca de 0,1 mM - 15 mM, de cerca de 0,5 mM - 15 MM, de cerca de 1 MM - 15 mM, de cerca de 2mM - 15 mM, de cerca de 3 mM - 15 mM, de cerca de 4 mM - 15 mM, de cerca de 5 mM - 15 MM, de cerca de 6 mM - 15 mM, de cerca de 7 MM - 15 mM, de cerca de 8 mM - 15 mM, de cerca de 9 mM - 15 mM, de cerca de 10 mM - 15 mM, de cerca de 11 mM - 15 mM, de cerca de 12 mM - 15 mM, de cerca de 13 mM - 15 mM ou de cerca de 14 mM - 15 mM.
[00894] 407.O método de qualquer um dos parágrafos 387 a 402, em que a concentração do tampão de diafiltração é de cerca de 0,01 mM - 10 MM, de cerca de 0,1 mM - 10 mM, de cerca de 0,5 mM - 10 MM, de cerca de 1 MM - 10 mM, de cerca de 2mM - 10 mM, de cerca de 3 mM - 10 mM, de cerca de 4 mM - 10 mM, de cerca de 5 mM - 10 MM, de cerca de 6 mM - 10 mM, de cerca de 7 mM - 10 mM, de cerca de 8 mM - 10 MM ou de cerca de 9 mM - 10 mM.
[00895] 408. O método de qualquer um dos parágrafos 387 a 402, em que a concentração do tampão de diafiltração é de cerca de 0,01 MM, cerca de 0,05 mM, cerca de 0,1 mM, cerca de 0,2 mM, cerca de 0,3 mM, cerca de 0,4 mM, cerca de 0,5 mM, cerca de 0,6 mM, cerca de 0,7 mM, cerca de 0,8 mM, cerca de 0,9 mM, cerca de 1 mM, cerca de 2 mM, cerca de 3 mM, cerca de 4 mM, cerca de 5 mM, cerca de 6 MM, cerca de 7 mM, cerca de 8 mM, cerca de 9 mM, cerca de 10 mM, cerca de 11 mM, cerca de 12 mM, cerca de 13 mM, cerca de 14 mM, cerca de 15 mM, cerca de 16 mM, cerca de 17 mM, cerca de 18 mM, cerca de 19 mM, cerca de 20 mM, cerca de 25 mM, cerca de 30 mM, cerca de 35 mM, cerca de 40 mM, cerca de 45 mM, cerca de 50 mM, cerca de 55 mM, cerca de 60 mM, cerca de 65 mM, cerca de 70 mM, cerca de 75 mM, cerca de 80 mM, cerca de 85 mM, cerca de 90 mM, cerca de 95 ou cerca de 100 mM.
[00896] 409. O método de qualquer um dos parágrafos 387º 402, em que a concentração do tampão de diafiltração é de cerca de 0,1 MM, cerca de 0,2 mM, cerca de 1 mM, cerca de 5 mM, cerca de 10 MM, cerca de 15 mM, cerca de 20 mM, cerca de 30 mM, cerca de 40 mM ou cerca de 50 mM.
[00897] 410. O método de qualquer um dos parágrafos 387 a 402, em que a concentração do tampão de diafiltração é de cerca de 30 mM.
[00898] 411.O método de qualquer um dos parágrafos 387 a 402, em que a concentração do tampão de diafiltração é de cerca de 25 mM.
[00899] 412. O método de qualquer um dos parágrafos 387 a 402, em que a concentração do tampão de diafiltração é de cerca de 20 mM.
[00900] 413. O método de qualquer um dos parágrafos 387 a 402, em que a concentração do tampão de diafiltração é de cerca de 15 mM.
[00901] 414. O método de qualquer um dos parágrafos 387 a 402, em que a concentração do tampão de diafiltração é de cerca de 10 mM.
[00902] 415. O método de qualquer um dos parágrafos 381 a 414, em que a solução de substituição compreende um agente quelante.
[00903] 416.O método de qualquer um dos parágrafos 381 a 414, em que a solução de substituição compreende um agente quelante de alúmen.
[00904] 417. O método de qualquer um dos parágrafos 381 a 414, em que a solução de substituição compreende um agente quelante selecionado a partir do grupo que consiste de etileno diamina tetra acetato (EDTA), ácido N-(2-hidroxietil) etilenodiamina-NN', N*- triacético (EDTA-OH), ácido hidroxietileno diamina triacético (HEDTA), ácido — etilenoglicol-bis(2-aminoetiléter)-N,N,N' N'-ácido — tetraacético (EGTA), ácido 1,2-ciclohexanodiamina-N,N,N' N'-tetraacético (CyYDTA), ácido dietilenotriamina-N,N,N',N”,N”-penta-acético (DTPA), ácido 1,3- diaminopropan-2-ol-N,N,N',N”-tetra-acético (DPTA- OH), ácido etileno- diamina-N,N'-bis (2-hidroxifenilacético) (EDDHA), dicloridrato de ácido etilenodiamina-N,N'-dipropiônico (EDDP), etilenodiamina-tetraquis (ácido metilenossulfônico) (EDTPO), Nitrilotris (ácido metilenofosfônico) (NTPO), ácido imino-diacético (IDA), ácido hidroxiimino-diacético (Hl- DA), ácido nitrilo-triacético (NTP), ácido trietilenotetramina-hexa-acé- tico (TTHA), ácido dimercaptosuccínico (DMSA), ácido 2,3-dimercapto- 1-propanossulfônico (DMPS), ácido alfalipoico (ALA), ácido nitrilotria- cético (NTA), tiamina tetraidrofurfuril dissulfeto (TTFD), dimercaprol, penicilamina, deferoxamina (DFOA), deferasirox, fosfonatos, um sal de ácido cítrico (citrato) e combinações dos mesmos.
[00905] 418.O método de qualquer um dos parágrafos 381-414, em que a solução de substituição compreende um agente quelante seleci- onado a partir do grupo que consiste de etileno diamina tetra acetato (EDTA), ácido N-(2-hidroxietil) etilenodiamina-N,N'N'- triacético (EDTA-OH), ácido hidroxietileno diamina triacético (HEDTA), ácido eti- lenoglicol-bis (2-aminoetiléter)-N,N,N' N'-ácido tetra-acético (EGTA),
ácido 1,2-ciclohexanodiamina-N,N,N' N'-tetra-acético (CyYDTA), ácido dietilenotriamina-N,N,N',N” N”-penta-acético (DTPA), 1,3-diaminopro- pan-2-ol-N, N, N', N'-ácido tetra-acético (DPTA-OH), ácido etilenodia- mina-N,N'-bis(2-hidroxifenilacético) (EDDHA), um sal de ácido cítrico (citrato) e combinações dos mesmos.
[00906] 419. O método de qualquer um dos parágrafos 381 a 414, em que a solução de substituição compreende etileno diamina tetra cetato (EDTA) como agente quelante.
[00907] 420. O método de qualquer um dos parágrafos 381 a 414, em que a solução de substituição compreende um sal de ácido cítrico (citrato) como agente quelante.
[00908] 421.O método de qualquer um dos parágrafos 381 a 414, em que a solução de substituição compreende citrato de sódio como agente quelante.
[00909] 422. O método de qualquer um dos parágrafos 415 a 421, em que a concentração do agente quelante na solução de substituição é de 1 a 500 mM.
[00910] 423. O método de qualquer um dos parágrafos 415 a 421, em que a concentração do agente quelante na solução de substituição é de 2 a 400 mM.
[00911] 424. O método de qualquer um dos parágrafos 415 a 421, em que a concentração do agente quelante na solução de substituição é de 10 a 400 mM.
[00912] 425. O método de qualquer um dos parágrafos 415 a 421, em que a concentração do agente quelante na solução de substituição é de 10 a 200 mM.
[00913] 426.O método de qualquer um dos parágrafos 415 a 421, em que a concentração do agente quelante na solução de substituição é de 10 a 100 MM.
[00914] 427. O método de qualquer um dos parágrafos 415 a 421,
em que a concentração do agente quelante na solução de substituição é de 10 a 50 mM.
[00915] 428. O método de qualquer um dos parágrafos 415 a 421, em que a concentração do agente quelante na solução de substituição é de 10 a 30 mM.
[00916] 429. O método de qualquer um dos parágrafos 415 a 421, em que a concentração do agente quelante na solução de substituição é cerca de 0,01 mM, cerca de 0,05 mM, cerca de 0,1 mM, cerca de 0,2 MM, cerca de 0,3 mM, cerca de 0,4 mM, cerca de 0,5 mM, cerca de 0,6 mM, cerca de 0,7 mM, cerca de 0,8 mM, cerca de 0,9 mM, cerca de 1 mM, cerca de 2 mM, cerca de 3 mM, cerca de 4 mM, cerca de 5 MM, cerca de 6 mM, cerca de 7 mM, cerca de 8 mM, cerca de 9 mM, cerca de 10 mM, cerca de 11 mM, cerca de 12 mM, cerca de 13 mM, cerca de 14 mM, cerca de 15 mM, cerca de 16 mM, cerca de 17 mM, cerca de 18 mM, cerca de 19 mM, cerca de 20 mM, cerca de 21 mM, cerca de 22 mM, cerca de 23 mM, cerca de 24 mM, cerca de 25 mM, cerca de 26 mM, cerca de 27 mM, cerca de 28 mM, cerca de 29 mM, cerca de 30 mM, cerca de 31 mM, cerca de 32 mM, cerca de 33 mM, cerca de 34 mM, cerca de 35 mM, cerca de 36 mM, cerca de 37 mM, cerca de 38 mM, cerca de 39 mM, cerca de 40 mM, cerca de 45 mM, cerca de 50 mM, cerca de 55 mM, cerca de 60 mM, cerca de 65 mM, cerca de 70 mM, cerca de 75 mM, cerca de 80 mM, cerca de 85 mM, cerca de 90 mM, cerca de 95 ou cerca de 100 mM.
[00917] 430. O método de qualquer um dos parágrafos 415 a 421, em que a concentração do agente quelante na solução de substituição é cerca de 5 mM, cerca de 10 mM, cerca de 15 mM, cerca de 20 mM, cerca de 25 mM, cerca de 30 mM, cerca de 35 mM, cerca de 40 mM, cerca de 45 mM, cerca de 50 mM, cerca de 55 mM, cerca de 60 mM, cerca de 65 mM, cerca de 70 mM, cerca de 75 mM, cerca de 80 mM, cerca de 85 mM, cerca de 90 mM, cerca de 95 mM ou cerca de 100 mM.
[00918] 431.O método de qualquer um dos parágrafos 415 a 421, em que a concentração do agente quelante na solução de substituição é de cerca de 15 mM, cerca de 20 mM, cerca de 25 mM, cerca de 30 MM, cerca de 35 mM, cerca de 40 mM, cerca de 45 mM ou cerca de 50 mM.
[00919] 432. O método de qualquer um dos parágrafos 387 a 431, em que a solução de substituição compreende um sal.
[00920] 433. O método do parágrafo 432, em que o sal é seleciona- do a partir do grupo que consiste de cloreto de magnésio, cloreto de potássio, cloreto de sódio e uma combinação dos mesmos.
[00921] 434. O método do parágrafo 432, em que o sal é cloreto de sódio.
[00922] 435. O método de qualquer um dos parágrafos 432 a 434, em que a solução de substituição compreende cloreto de sódio a 1 cerca de 1, cerca de 5, cerca de 10, cerca de 15, cerca de 20, cerca de 25, cerca de 30, cerca de 35, cerca de 40, cerca de 45, cerca de 50, cerca de 55, cerca de 60, cerca de 65, cerca de 70, cerca de 80, cerca de 90, cerca de 100, cerca de 110, cerca de 120, cerca de 130, cerca de 140, cerca de 150, cerca de 160, cerca de 170, cerca de 180, cerca de 190, cerca de 200, cerca de 250 ou cerca de 300 mM.
[00923] 436.O método de qualquer um dos parágrafos 381 a 435, em que o número de diavolumes é de pelo menos 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 ou 50.
[00924] 437.O método de qualquer um dos parágrafos 381 a 435, em que o número de diavolumes é de cerca de 1, cerca de 2, cerca de 3, cerca de 4, cerca de 5, cerca de 6, cerca de 7, cerca de 8, cerca de 9, cerca de 10, cerca de 11, cerca de 12, cerca de 13, cerca de 14, cerca de 15, cerca de 16, cerca de 17, cerca de 18, cerca de 19, cerca de 20, cerca de 21, cerca de 22, cerca de 23, cerca de 24, cerca de
25, cerca de 26, cerca de 27, cerca de 28, cerca de 29, cerca de 30, cerca de 31, cerca de 32, cerca de 33, cerca de 34, cerca de 35, cerca de 36, cerca de 37, cerca de 38, cerca de 39, cerca de 40, cerca de 41, cerca de 42, cerca de 43, cerca de 44, cerca de 45, cerca de 46, cerca de 47, cerca de 48, cerca de 49, cerca de 50, cerca de 55, cerca de 60, cerca de 65, cerca de 70, cerca de 75, cerca de 80, cerca de 85, cerca de 90, cerca de 95 ou cerca de 100.
[00925] 438. O método de qualquer um dos parágrafos 381 a 435, em que o número de diavolumes é de cerca de 5, cerca de 6, cerca de 7, cerca de 8, cerca de 9, cerca de 10, cerca de 11, cerca de 12, cerca de 13, cerca de 14 ou cerca de 15.
[00926] 439. O método de qualquer um dos parágrafos 381 a 438, em que a dita etapa de diafiltração é realizada a uma temperatura en- tre cerca de 20ºC e cerca de 90ºC.
[00927] 440. O método de qualquer um dos parágrafos 381 a 438, em que a dita etapa de diafiltração é realizada a uma temperatura en- tre cerca de 35ºC e cerca de 80ºC, a uma temperatura entre cerca de 40ºC e cerca de 70ºC, a uma temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 65ºC, a uma temperatura entre cerca de 50ºC e cerca de 60ºC, a uma temperatura entre cerca de 50ºC e cerca de 55ºC, a uma tempe- ratura entre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC ou a uma temperatura en- tre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC.
[00928] 441.O método de qualquer um dos parágrafos 381 a 438, em que a dita etapa de diafiltração é realizada a uma temperatura de cerca de 20ºC, cerca de 21ºC, cerca de 22ºC, cerca de 23ºC, cerca de 24ºC, cerca de 25ºC, cerca de 26ºC, cerca de 27ºC, cerca de 28ºC, cerca de 29ºC, cerca de 30ºC, cerca de 31ºC, cerca de 32ºC, cerca de 33ºC, cerca de 34ºC, cerca de 35ºC, cerca de 36ºC, cerca de 37ºC, cerca de 38ºC, cerca de 39ºC, cerca de 40ºC, cerca de 41ºC, cerca de 42ºC, cerca de 43ºC, cerca de 44ºC, cerca de 45ºC, cerca de 46ºC,
cerca de 47ºC, cerca de 48ºC, cerca de 49ºC, cerca de 50ºC, cerca de 51ºC, cerca de 52ºC, cerca de 53ºC, cerca de 54ºC, cerca de 55ºC, cerca de 56ºC, cerca de 57ºC, cerca de 58ºC, cerca de 59ºC, cerca de 60ºC, cerca de 61ºC, cerca de 62ºC, cerca de 63ºC, cerca de 64ºC, cerca de 65ºC, cerca de 66ºC, cerca de 67ºC, cerca de 68ºC, cerca de 69ºC, cerca de 70ºC, cerca de 71ºC, cerca de 72ºC, cerca de 73ºC, cerca de 74ºC, cerca de 75ºC, cerca de 76ºC, cerca de 77ºC, cerca de 78ºC, cerca de 79ºC ou cerca de 80ºC.
[00929] 442. O método de qualquer um dos parágrafos 381 a 438, em que a dita etapa de diafiltração é realizada a uma temperatura de cerca de 50ºC.
[00930] 443. O método de qualquer um dos parágrafos 359 a 438, em que as ditas etapas de ultrafiltração e diafiltração, se ambas con- duzidas, são realizadas a uma temperatura entre cerca de 20ºC e cer- ca de 90ºC.
[00931] 444. O método de qualquer um dos parágrafos 359 a 438, em que as ditas etapas de ultrafiltração e diafiltração, se ambas con- duzidas, são realizadas a uma temperatura entre cerca de 35ºC e cer- ca de 80ºC, a uma temperatura entre cerca de 40ºC e cerca de 70ºC, a temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 65ºC, a temperatura en- tre cerca de 50ºC e cerca de 60ºC, a temperatura entre cerca de 50ºC e cerca de 55ºC, a temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC ou a uma temperatura entre cerca de 45ºC e cerca de 55ºC.
[00932] 445. O método de qualquer um dos parágrafos 359 a 438, em que as ditas etapas de ultrafiltração e diafiltração, se ambas con- duzidas, são realizadas a uma temperatura de cerca de 20ºC, cerca de 21ºC, cerca de 22ºC, cerca de 23ºC, cerca de 24ºC, cerca de 25ºC, cerca de 26ºC, cerca de 27ºC, cerca de 28ºC, cerca de 29ºC, cerca de 30ºC, cerca de 31ºC, cerca de 32ºC, cerca de 33ºC, cerca de 34ºC, cerca de 35ºC, cerca de 36ºC, cerca de 37ºC, cerca de 38ºC, cerca de
39ºC, cerca de 40ºC, cerca de 41ºC, cerca de 42ºC, cerca de 43ºC, cerca de 44ºC, cerca de 45ºC, cerca de 46ºC, cerca de 47ºC, cerca de 48ºC, cerca de 49ºC, cerca de 50ºC, cerca de 51ºC, cerca de 52ºC, cerca de 53ºC, cerca de 54ºC, cerca de 55ºC, cerca de 56ºC, cerca de 57ºC, cerca de 58ºC, cerca de 59ºC, cerca de 60ºC, cerca de 61ºC, cerca de 62ºC, cerca de 63ºC, cerca de 64ºC, cerca de 65ºC, cerca de 66ºC, cerca de 67ºC, cerca de 68ºC, cerca de 69ºC, cerca de 70ºC, cerca de 71ºC, cerca de 72ºC, cerca de 73ºC, cerca de 74ºC, cerca de 75ºC, cerca de 76ºC, cerca de 77ºC, cerca de 78ºC, cerca de 79ºC ou cerca de 80ºC.
[00933] 446. O método de qualquer um dos parágrafos 359 a 438, em que as ditas etapas de ultrafiltração e diafiltração, se ambas con- duzidas, são realizadas a uma temperatura de cerca de 50ºC.
[00934] 447. O método de qualquer um dos parágrafos 359 a 446, em que a dita solução purificada de polissacarídeo é homogeneizada por dimensionamento.
[00935] 448. O método de qualquer um dos parágrafos 359 a 446, em que a dita solução purificada de polissacarídeo é submetida a di- mensionamento mecânico.
[00936] 449. O método de qualquer um dos parágrafos 359 a 446, em que a dita solução purificada de polissacarídeo é submetida a cisa- lhamento de homogeneização de alta pressão.
[00937] 450. O método de qualquer um dos parágrafos 359 a 446, em que a dita solução purificada de polissacarídeo é submetida à hi- drólise química.
[00938] 451.O método de qualquer um dos parágrafos 359 a 450, em que a dita solução purificada de polissacarídeo é dimensionada para um peso molecular alvo.
[00939] 452.O método de qualquer um dos parágrafos 359 a 451, em que a dita solução purificada de polissacarídeo é dimensionada para um peso molecular entre cerca de 5 kDa e cerca de 4.000 kDa.
[00940] 453. O método de qualquer um dos parágrafos 359 a 451, em que a dita solução purificada de polissacarídeo é dimensionada para um peso molecular entre cerca de 10 kDa e cerca de 4.000 kDa.
[00941] 454. O método de qualquer um dos parágrafos 359 a 451, em que a dita solução purificada de polissacarídeo é dimensionada para um peso molecular entre cerca de 50 kDa e cerca de 4.000 kDa.
[00942] 455. O método de qualquer um dos parágrafos 359 a 451, em que a dita solução purificada de polissacarídeo é dimensionada para um peso molecular entre cerca de 50 kDa e cerca de 3.500 kDa; entre cerca de 50 kDa e cerca de 3.000 kDa; entre cerca de 50 kDa e cerca de 2.500 kDa; entre cerca de 50 kDa e cerca de 2.000 kDa; en- tre cerca de 50 kDa e cerca de 1.750 kDa; cerca de entre cerca de 50 kDa e cerca de 1.500 kDa; entre cerca de 50 kDa e cerca de 1.250 kDa; entre cerca de 50 kDa e cerca de 1.000 kDa; entre cerca de 50 kDa e cerca de 750 kDa; entre cerca de 50 kDa e cerca de 500 kDa; entre cerca de 100 kDa e cerca de 4.000 kDa; entre cerca de 100 kDa e cerca de 3.500 kDa; cerca de 100 kDa e cerca de 3.000 kDa; cerca de 100 kDa e cerca de 2.500 kDa; cerca de 100 kDa e cerca de 2.250 kDa; entre cerca de 100 kDa e cerca de 2.000 kDa; entre cerca de 100 kDa e cerca de 1.750 kDa; entre cerca de 100 kDa e cerca de 1.500 kDa; entre cerca de 100 kDa e cerca de 1.250 kDa; entre cerca de 100 kDa e cerca de 1.000 kDa; entre cerca de 100 kDa e cerca de 750 kDa; entre cerca de 100 kDa e cerca de 500 kDa; entre cerca de 200 kDa e cerca de 4.000 kDa; entre cerca de 200 kDa e cerca de 3.500 kDa; entre cerca de 200 kDa e cerca de 3.000 kDa; entre cerca de 200 kDa e cerca de 2.500 kDa; entre cerca de 200 kDa e cerca de 2.250 kDa; entre cerca de 200 kDa e cerca de 2.000 kDa; entre cerca de 200 kDa e cerca de 1.750 kDa; entre cerca de 200 kDa e cerca de 1.500 kDa; entre cerca de 200 kDa e cerca de 1.250 kDa; entre cerca de 200 kDa e cerca de 1.000 kDa; entre cerca de 200 kDa e cerca de 750 kDa; ou entre cerca de 200 kDa e cerca de 500 kDa. Em outras des- sas modalidades, o polissacarídeo purificado é dimensionado para um peso molecular entre cerca de 250 kDa e cerca de 3.500 kDa; entre cerca de 250 kDa e cerca de 3.000 kDa; entre cerca de 250 kDa e cer- ca de 2.500 kDa; entre cerca de 250 kDa e cerca de 2.000 kDa; entre cerca de 250 kDa e cerca de 1.750 kDa; cerca de entre cerca de 250 kDa e cerca de 1.500 kDa; entre cerca de 250 kDa e cerca de 1.250 kDa; entre cerca de 250 kDa e cerca de 1.000 kDa; entre cerca de 250 kDa e cerca de 750 kDa; entre cerca de 250 kDa e cerca de 500 kDa; entre cerca de 300 kDa e cerca de 4.000 kDa; entre cerca de 300 kDa e cerca de 3.500 kDa; cerca de 300 kDa e cerca de 3.000 kDa; cerca de 300 kDa e cerca de 2.500 kDa; cerca de 300 kDa e cerca de 2.250 kDa; entre cerca de 300 kDa e cerca de 2.000 kDa; entre cerca de 300 kDa e cerca de 1.750 kDa; entre cerca de 300 kDa e cerca de 1.500 kDa; entre cerca de 300 kDa e cerca de 1.250 kDa; entre cerca de 300 kDa e cerca de 1.000 kDa; entre cerca de 300 kDa e cerca de 750 kDa; entre cerca de 300 kDa e cerca de 500 kDa; entre cerca de 500 kDa e cerca de 4.000 kDa; entre cerca de 500 kDa e cerca de 3.500 kDa; entre cerca de 500 kDa e cerca de 3.000 kDa; entre cerca de 500 kDa e cerca de 2.500 kDa; entre cerca de 500 kDa e cerca de 2.250 kDa; entre cerca de 500 kDa e cerca de 2.000 kDa; entre cerca de 500 kDa e cerca de 1.750 kDa; entre cerca de 500 kDa e cerca de 1.500 kDa; entre cerca de 500 kDa e cerca de 1.250 kDa; entre cerca de 500 kDa e cerca de 1.000 kDa; entre cerca de 500 kDa e cerca de 750 kDa; ou entre cerca de 500 kDa e cerca de 600 kDa.
[00943] 456.O método de qualquer um dos parágrafos 359 a 451, em que a dita solução purificada de polissacarídeo é dimensionada para um peso molecular de cerca de 5 kDa, cerca de 10 kDa, cerca de kDa, cerca de 20 kDa, cerca de 25 kDa, cerca de 30 kDa, cerca de kDa, cerca de 40 kDa, cerca de 45 kDa, cerca de 50 kDa, cerca de 75 kDa, cerca de 90 kDa, cerca de 100 kDa, cerca de 150 kDa, cerca de 200 kDa, cerca de 250 kDa, cerca de 300 kDa, cerca de 350 kDa, cerca de 400 kDa, cerca de 450 kDa, cerca de 500 kDa, cerca de 550 kDa, cerca de 600 kDa, cerca de 650 kDa, cerca de 700 kDa, cerca de 750 kDa, cerca de 800 kDa, cerca de 850 kDa, cerca de 900 kDa, cer- ca de 950 kDa, cerca de 1000 kDa, cerca de 1250 kDa, cerca de 1500 kDa, cerca de 1750 kDa, cerca de 2000 kDa, cerca de 2250 kDa, cer- ca de 2500 kDa, cerca de 2750 kDa, cerca de 3000 kDa, cerca de 3250 kDa, cerca de 3500 kDa, cerca de 3750 kDa ou cerca de 4.000 kDa.
[00944] 457.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 456, em que a dita solução purificada de polissacarídeo é filtrada de forma es- téril.
[00945] 458. O método do parágrafo 457, em que a dita filtração estéril é uma filtração frontal.
[00946] 459. O método do parágrafo 457, em que a dita filtração estéril é filtração tangencial.
[00947] 460. O método de qualquer um dos parágrafos 457 a 459, em que o filtro tem uma faixa de retenção nominal de cerca de 0,01 - 0,2 mícron, cerca de 0,05 - 0,2 mícron, cerca de 0,1 - 0,2 mícron ou cerca de 0,15 - 0,2 mícron.
[00948] 461.O método de qualquer um dos parágrafos 457 a 459, em que o filtro tem uma faixa de retenção nominal de cerca de 0,05, cerca de 0,1, cerca de 0,15 ou cerca de 0,2 mícron.
[00949] 462. O método de qualquer um dos parágrafos 457 a 459, em que o filtro tem uma faixa de retenção nominal de cerca de 0,2 mií- cron.
[00950] 463. O método de qualquer um dos parágrafos 457 a 462, em que o filtro tem uma capacidade de filtro de cerca de 25 - 1500 L /
m?, 50 - 1500 L / m2?, 75 - 1500 L / m2, 100 - 1500 L / m2, 150 - 1500 L / m?, 200 - 1500 L / m?, 250 - 1500 L / m?, 300 - 1500 L / m?, 350 - 1500 L / m?, 400 - 1500 L / m?, 500 - 1500 L / m?, 750 - 1500 L / m?, 1000 - 1500 L / m? ou 1250 - 1500 L / m?.
[00951] 464. O método de qualquer um dos parágrafos 457 a 462, em que o filtro tem uma capacidade de filtro de cerca de 25 - 1000 L / m?, 50 - 1000 L / m?, 75 - 1000 L / m2, 100 - 1000 L / m?, 150 - 1000 L / m?, 200 - 1000 L / m?, 250 - 1000 L / m?, 300 - 1000 L / m?, 350 - 1000 L / m?, 400 - 1000 L / m?, 500 - 1000 L / m? ou 750 - 1000 L / m?.
[00952] 465. O método de qualquer um dos parágrafos 457 a 462, em que o filtro tem uma capacidade de filtro de uma capacidade de filtro de 25 - 500 L / m?, 50 - 500 L / m?, 75 - 500 L / m?, 100 - 500 L / m?, 150 - 500 L / m?, 200 - 500 L / m?, 250 - 500 L / m?, 300 - 500 L / m?, 350 - 500 L / m? ou 400 - 500 L / m?.
[00953] 466. O método de qualquer um dos parágrafos 457 a 462, em que o filtro tem uma capacidade de filtro de 25 - 300 L / m?, 50 - 300 L / m?, 75 - 300 L / m?, 100 - 300 L / m2, 150 - 300 L / m?, 200 - 300 L / m? ou 250 - 300 L / m?.
[00954] 467. O método de qualquer um dos parágrafos 457 a 462, em que o filtro tem uma capacidade de filtro de 25 - 250 L / m?, 50 - 250 L / m?, 75 - 250 L / m2, 100 - 250 L / m? ou 150 - 250 L / m?, 200 - 250L/m?.
[00955] 468. O método de qualquer um dos parágrafos 457 a 462, em que o filtro tem uma capacidade de filtro de 25 - 100 L / m?, 50 - 100 L /m? ou 75- 100 L/ m?.
[00956] 469. O método de qualquer um dos parágrafos 457 a 462, em que o filtro tem uma capacidade de filtro de cerca de 25, cerca de 50, cerca de 75, cerca de 100, cerca de 150, cerca de 200, cerca de 250, cerca de 300, cerca de 350, cerca de 400, cerca de 500, cerca de 600, cerca de 700, cerca de 800, cerca de 900, cerca de 1000, cerca de 1100, cerca de 1200, cerca de 1300, cerca de 1400 ou cerca de 1500 L/ m?.
[00957] 470. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 469, em que o polissacarídeo purificado obtido está em solução líquida.
[00958] 471.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 469, em que o polissacarídeo purificado obtido é um pó seco.
[00959] 472. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 469, em que a solução de polissacarídeo purificada obtida é liofilizada.
[00960] 473. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 469 ou 472, em que a solução de polissacarídeo purificado obtida é um bolo liofilizado.
[00961] 474. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é um polissacarídeo capsular, um polissacarídeo sub-capsular ou um lipopolissacarídeo.
[00962] 475. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é um polissacarídeo capsular.
[00963] 476.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é um polissacarídeo capsular de Staphylococcus aureus.
[00964] 477.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Staphylococcus aureus tipo 5.
[00965] 478. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Staphylococcus aureus tipo 8.
[00966] 479.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é um polissacarídeo capsular de Enterococcus faecalis.
[00967] 480. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de
Haemophilus influenzae tipo b.
[00968] 481.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é um polissacarídeo capsular de Neisseria meningitíidis.
[00969] 482. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de N. meningitidis sorogrupo A (MenA), N. meningitidis sorogrupo W135 (MenW 135), N. meningitidis sorogrupo Y (MenY), N. meningitidis soro- grupo X de (MenX) ou N. meningitidis sorogrupo C (MenC).
[00970] 483.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é um polissacarídeo capsular de Escherichia coli.
[00971] 484. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é um polissacarídeo capsular de Streptococcus agalactiae (streptococcus do Grupo B (GBS)).
[00972] 485.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é um polissacarídeo capsular se- lecionado a partir do grupo que consiste do polissacarídeo capsular de GBS tipos la, lb, II, III, IV, V, VI, Vil e VIII.
[00973] 486.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é um polissacarídeo capsular de uma cepa de Escherichia coli parte do grupo de Escherichia coli Ente- rovirulenta (Grupo EEC).
[00974] 487.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é um polissacarídeo capsular de uma cepa de Escherichia coli parte do grupo Enterovirulent Escheri- chia coli (Grupo EEC), tal como Escherichia coli - enterotoxigênica (ETEC), Escherichia coli - enteropatogênica (EPEC), Escherichia coli - O0157:H7 enterohemorrágica (EHEC), ou Escherichia coli - enteroinva- siva (EIEC). Em uma modalidade, a fonte de polissacarídeo capsular bacteriano é uma Escherichia coli Uropatogênica (UPEC).
[00975] 488.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é um polissacarídeo capsular de um sorotipo de Escherichia coli selecionado a partir do grupo que con- siste dos sorotipos 0157:H7, 026:H11, 0111:H- e 0103:H2.
[00976] 489.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é um polissacarídeo capsular de um sorotipo de Escherichia coli selecionado a partir do grupo que con- siste dos sorotipos O6:K2:H1 e 018:K1:H7.
[00977] 490.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é um polissacarídeo capsular de um sorotipo de Escherichia coli selecionado a partir do grupo que con- siste dos sorotipos O45:K1, 017:K52:H18, 019:H34 e O7:K1.
[00978] 491.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é um polissacarídeo capsular de Escherichia coli sorotipo 0104:H4.
[00979] 492.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é um polissacarídeo capsular de Escherichia coli sorotipo 01:K12:H7.
[00980] 493.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é um polissacarídeo capsular de Escherichia coli sorotipo 0127:H6.
[00981] 494. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é um polissacarídeo capsular de Escherichia coli sorotipo 0139: H28.
[00982] 495.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é um polissacarídeo capsular de Escherichia coli um sorotipo 0128:H2.
[00983] 496.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é um polissacarídeo capsular de
Steptococcus pneumoniae.
[00984] 497.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de um sorotipo de Streptococcus pneumoniae selecionado a partir do grupo que consiste dos sorotipos 1, 2, 3, 4, 5, GA, 6B, 6C, 7F, 8, 9V, 9N, 10A, 11A, 12F, 14, 15A, 15B, 15C, 16F, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23A, 23B, 23F, 24B, 24F, 29, 31, 33F, 34, 35B, 35F, 38, 72 e 73.
[00985] 498.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de um sorotipo de Streptococcus pneumoniae selecionado a partir do grupo que consiste dos sorotipos 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, ON, 10A, 11A, 12F, 14, 15A, 15B, 15C, 16F, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23A, 23B, 23F, 24F, 29, 31, 33F, 35B, 35F, 38, 72 e 73.
[00986] 499.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de um sorotipo de Streptococcus pneumoniae selecionado a partir do grupo que consiste dos sorotipos 8, 10A, 11A, 12F, 15B, 22F e 33F.
[00987] —500.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 1.
[00988] 501.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 2.
[00989] 502.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 3.
[00990] 503. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 4.
[00991] 504. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 5.
[00992] —505.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 6A.
[00993] 506.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 6B.
[00994] 507.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 6C.
[00995] — 508.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 7F.
[00996] 509.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 8.
[00997] 510.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 9V.
[00998] 511.O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 9N.
[00999] 512. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 10A.
[001000] 513. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 11A.
[001001] 514. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 12F.
[001002] 515. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 14.
[001003] 516. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 15A.
[001004] 517. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 15B.
[001005] 518. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 15C.
[001006] 519. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 16F.
[001007] 520. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 17F.
[001008] 521. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 18C.
[001009] 522. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 19A.
[001010] 523. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 19F.
[001011] 524. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 20.
[001012] 525. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 20A.
[001013] 526. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 20B.
[001014] 527. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 22F.
[001015] 528. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 23A.
[001016] 529. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 23B.
[001017] 530. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 23F.
[001018] 531. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 24B.
[001019] 532. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 24F.
[001020] 533. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 29.
[001021] 534. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 31.
[001022] 535. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 33F.
[001023] 536. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 34.
[001024] 537. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 35B.
[001025] 538. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 35F.
[001026] 539. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 38.
[001027] 540. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 72.
[001028] 541. O método de qualquer um dos parágrafos 1 a 473, em que o dito polissacarídeo bacteriano é o polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae sorotipo 73.
[001029] 542. Um polissacarídeo bacteriano purificado obtido pelo método de qualquer um dos parágrafos 1 a 541.
[001030] 543. Um polissacarídeo bacteriano purificado que pode ser obtido pelo método de qualquer um dos parágrafos 1 a 541.
[001031] 544. Um polissacarídeo bacteriano purificado obtido pelo método de qualquer um dos parágrafos 1 a 541 para uso como um an- tígeno.
[001032] 545. Um polissacarídeo bacteriano purificado obtido pelo método de qualquer um dos parágrafos 1 a 541 conjugado com a pro- teína transportadora.
[001033] 546. Um polissacarídeo bacteriano purificado obtido pelo método de qualquer um dos parágrafos 1 a 541 adicionalmente conju- gado a uma proteína transportadora.
[001034] 547. Glicoconjugado de um polissacarídeo bacteriano puri- ficado obtido pelo método de qualquer um dos parágrafos 1 a 541.
[001035] 548. Uma composição imunogênica que compreende qual- quer polissacarídeo purificado de qualquer um dos parágrafos 542 a
543.
[001036] 549. Uma composição imunogênica que compreende um glicoconjugado de qualquer um dos parágrafos 546 a 547.
[001037] 550. Uma composição imunogênica que compreende qual- quer um dos glicoconjugados no presente documento descritos.
[001038] 551. Composição imunogênica que compreende qualquer combinação de glicoconjugados no presente documento descritos.
[001039] Conforme usado neste documento, o termo "cerca de" sig- nifica dentro de uma faixa estatisticamente significativa de um valor, tal como uma faixa de concentração declarada, período de tempo, peso molecular, temperatura ou pH. Essa faixa pode estar dentro de uma ordem de magnitude, tipicamente dentro de 20%, mais tipicamente dentro de 10% e ainda mais tipicamente dentro de 5% ou dentro de 1% de um determinado valor ou faixa. Às vezes, tal faixa pode estar dentro do erro experimental típico dos métodos padrão usados para a medição e / ou determinação de um determinado valor ou faixa. A va- riação permitida abrangida pelo termo "cerca de" dependerá do siste- ma particular em estudo e pode ser facilmente apreciada por um ver- sado na técnica. Sempre que uma faixa é citada neste pedido, cada número dentro da faixa também é considerado como uma modalidade da descrição.
[001040] Os termos "compreendendo", "compreendem" e "compre- ende" neste documento são pretendidos pelos inventores como sendo opcionalmente substituíveis pelos termos "consistindo essencialmente de", "consiste essencialmente de", "consiste essencialmente de", "con- siste de", "consistem de" e "consiste de", respectivamente, em cada caso.
[001041] Uma "quantidade imunogênica", uma "quantidade imunolo- gicamente eficaz", uma "quantidade terapeuticamente eficaz", uma "quantidade profilaticamente eficaz" ou "dose", cada uma das quais é usada de forma intercambiável neste documento, geralmente refere-se à quantidade de antígeno ou composição imunogênica suficiente para produzir uma resposta imune, uma resposta celular (célula T) ou hu- moral (célula B ou anticorpo), ou ambas, conforme medido por ensaios padrão conhecidos por um versado na técnica.
[001042] Qualquer número inteiro dentro de qualquer uma das faixas do presente documento é considerado como uma modalidade da des- crição.
[001043] Todas as referências ou pedidos de patente citados nesta especificação de patente são incorporados no presente documento por referência.
[001044] A invenção é ilustrada nos exemplos que a acompanham. Os exemplos abaixo são realizados usando técnicas padrão, que são bem conhecidas e rotineiras para aqueles versados na técnica, exceto quando, de outra forma, descrito em detalhes. Os exemplos são ilus- trativos, mas não limitam a invenção.
EXEMPLO Exemplo 1. Purificação do polissacarídeo pneumocócico sorotipo 8
[001045] O fluxograma de processo para a purificação é mostrado na Figura 1. O processo começa com o caldo de fermentação inativado com NLS (ver EP2129693) e inclui operações unitárias de recuperação (floculação, centrifugação e filtração de profundidade) seguidas por operações unitárias de purificação (ultrafiltração e filtração por carvão).
1. Material de Partida
[001046] O processo começa com o caldo de fermentação inativado com NLS de S. pneumonia sorotipo 8. As culturas foram cultivadas em meio Hy-Soy. No final do cultivo (conforme indicado por nenhum au- mento adicional na densidade óptica), as culturas foram inativadas com NLS (ver EP2129693).
2. Floculação
[001047] O objetivo principal desta etapa é precipitar resíduos celula- res, proteínas da célula hospedeira e ácidos nucleicos. Também auxi- lia nas operações unitárias de clarificação à jusante. A floculação foi realizada com caldo de fermentação que foi lisado pela adição de NLS.
2.1 Efeito do pH e Alúmen
[001048] Os experimentos foram conduzidos para examinar o efeito do pH, porcentagem de alúmen e tempo de retenção.
[001049] Uma quantidade predefinida de caldo de fermentação foi alíquotada em diferentes recipientes, e uma solução estoque de alú- men de 10% (p / p) (preparada usando sulfato de potássio e alumínio dodeca-hidratado e água deionizada) foi adicionada a uma concentra- ção final de 2% (p / v).
[001050] Em seguida, o pH foi ajustado para os níveis desejados. Os recipientes foram então centrifugados após vários pontos no tempo de retenção a 12.000 g durante 15 minutos. O sobrenadante foi testado quanto à proteína, polissacarídeo e clarificação. O efeito do pH na re- moção de proteína e clarificação na presença de alúmen 2% nos tem- pos de espera de 1, 4 e 24 horas é mostrado na Figura 2. Esses dados mostram que a remoção de proteína em pH 2,5 - 4,0 e alúmen 2% foi bastante eficaz. Mais de 80% das impurezas de proteína foram remo-
vidas nesta única etapa. A clarificação do concentrado foi afetada tan- to pelo pH quanto pelo tempo de retenção. A Figura 2 mostra que um pH de 3,5 forneceu a maior clarificação do concentrado.
[001051] O efeito da concentração de alúmen e do tempo de reten- ção na remoção da proteína e clarificação do concentrado em pH 3,5 é mostrado na Figura 3. O estudo do tempo de retenção foi conduzido em temperatura ambiente (20 + 2º C). Os resultados mostram que alúmen 1,0% não foi suficiente nem para a remoção da proteína nem para a clarificação do concentrado. A diferença entre alúmen 2% e 3% não foi significativa.
2.2 Efeito da Temperatura
[001052] O caldo floculado (pH 3,5 e alúmen 2%) foi aquecido a 50º C e mantido por 30 e 60 minutos. Após resfriamento para temperatura ambiente, as amostras foram centrifugadas a 12.000 g. A clarificação do concentrado foi medida em comparação com o concentrado a partir de uma floculação realizada em temperatura ambiente. O OD600 do concentrado a partir da floculação em temperatura ambiente foi de 0,99. Após 30 minutos a 50º C, o OD600 diminui para 0,13 e após 60 minutos a 50º C, o OD600 é reduzido ainda mais para 0,04. Isso de- monstra claramente que a clarificação do concentrado pode ser signifi- cativamente melhorada realizando a floculação em temperatura mais alta.
2.3 Efeito das variáveis que afetam a floculação
[001053] Para definir melhor o efeito das variáveis que impactam no processo de floculação de sorotipo 8, um estudo foi realizado. Exami- nou-se os fatores de concentração de alúmen, pH, temperatura e tem- po de retenção na recuperação de polissacarídeo, clarificação e remo- ção de impurezas.
[001054] A quantidade especificada de alúmen foi adicionada ao cal- do em temperatura ambiente e, em seguida, o pH foi ajustado com
H2SOs 5N ou NaOH 5N. As amostras foram colocadas em banho- maria, que foi regulado na temperatura desejada, e a cada ponto no tempo, as amostras foram retiradas para análise e, em seguida, centri- fugadas a 12.000 x g. O sobrenadante foi analisado quanto à concen- tração de polissacarídeo, proteína e turbidez (OD600).
Amostra | Alúmen | pH Temp Tempo de|Polisac (% | Proteína (% (%) (ºC) retenção (h) | recuperação) | remoção) e a des ea Ba
E RR A CO A LO ES CR LA ECO CE A
E RR A E O A ae a e a as Ra A a sas Ba a ae za Te ara eae A ea A Ba ode a e a
[001055] A análise dos resultados mostrou que a conveniência para o pH, a porcentagem de alúmen e o tempo de retenção para a opera- ção da unidade de floculação era bastante ampla, pH: 2,75 - 3,75; Alúmen: 1,5 - 3,0% p / v; e tempo de retenção: 1,5 - 3 horas. A faixa de temperatura desejada ficava em torno de 45 - 60º C.
3. Centrifugação
[001056] A centrifugação foi conduzida para clarificar o concentrado de forma que ele possa ser filtrado com capacidade razoável. A velo- cidade centrífuga foi fixada em 12.000 xd.
4. Filtração de Profundidade
[001057] Embora a centrifugação seja a principal operação da unida- de de separação sólido / líquido, ela não remove todas as partículas do fluxo de alimentação, uma operação da unidade de filtração de pro- fundidade foi incorporada entre a centrifugação e a primeira operação da unidade de ultrafiltração.
[001058] Os estudos iniciais foram conduzidos usando um filtro com uma faixa de retenção nominal de 0,25 a 1,0 mícron. A clarificação do concentrado teve impacto na capacidade do filtro.
[001059] Em particular, quando a floculação foi realizada a cerca de 20ºC, a clarificação do concentrado não foi tão boa, com OD600 na faixa de 0,8 - 1,4 e a capacidade do filtro foi afetada. Quando usando condições de floculação em temperaturas mais altas, o processo de filtração de profundidade apresentou capacidade mais robusta e con- sistente, com capacidade de filtro maior do que 400 L / m?, mesmo com OD600 de concentrado variando de 0,04 a 0,2.
5. Filtragem Opcional de 0,45 mícron
[001060] Embora opcional, um filtro de 0,45 mícron foi usado em al- gumas amostras após a filtração de profundidade.
6. Ultrafiltração / Diafiltração-(UFDF-1)
[001061] A purificação começa com o filtrado de profundidade (da etapa 4 ou 5 acima).
[001062] Esta operação substitui o meio de fermentação gasto por um tampão enquanto reduz os níveis de impurezas da célula hospe- deira de baixo peso molecular e floculante residual (alumínio).
[001063] Antes do primeiro UFDF, o filtrado de profundidade foi ajus- tado para 7,0 usando hidróxido de sódio SN. Alternativamente, o pH não é ajustado antes da diafiltração UFDF ser conduzida contra citrato de sódio / fosfato de sódio, pH 7,0 (por exemplo, fosfato 10 mM / citra- to 25 mM pH 7,0) como tampão de diafiltração.
7. Filtração por Carvão
[001064] Esta operação unitária reduz o nível de impurezas da célula hospedeira, tal como proteínas e ácidos nucleicos, bem como impure- zas coloridas (ver WO 2008/118752).
[001065] A eficácia da remoção de impurezas de proteínas por filtro de carvão foi estudada. Três filtros de carvão R32SP de 7” de diâme- tro em série. O retentado a partir de UFDF-1 foi filtrado a uma vazão de 40 LMH e o UV280 para o filtrado de carvão foi registrado.
[001066] O sinal UV280 para o retentado foi de apenas 460-mAU antes da filtração por carvão, bastante baixo em comparação com a linha de base do enxágue com água (380-mAU). Isso sugeriu que a maioria das impurezas relacionadas à proteína já havia sido removida pelas operações unitárias precedentes. No entanto, os filtros de carvão ainda removeram as impurezas residuais restantes de forma bastante eficaz. Isso é mostrado na redução do sinal UV280 depois que os filtros foram colocados em linha, onde o sinal UV caiu para a linha de base.
Estes dados indicaram que as impurezas relacionadas com proteínas foram removidas por uma única passagem pelos filtros de carvão.
8. Ultrafiltração / Diafiltração-(UFDF-2)
[001067] Esta operação unitária concentra o produto na concentra- ção desejada e substitui o citrato de sódio 25 mM, fosfato de sódio 10 mM, pH 7,0 pelo tampão correto para conjugação. Esta etapa é reali- zada usando um filtro de peso molecular de corte de 30 kDa.
[001068] A presença de citrato residual pode interferir na química de conjugação. Diferentes soluções têm sido usadas como tampão de diafiltração: uma combinação de NaCl 50mM e água, ou fosfato de po- tássio 25mMM pH 6,0 como tampão de diafiltração.
[001069] O efeito de fosfato de potássio 25 mM pH 6,0 na remoção de citrato foi avaliado. Neste experimento, o filtrado de carvão foi con- centrado 2,6 vezes e, em seguida, diafiltrado contra fosfato de potás- sio 25 mM, pH 6,0. As amostras foram removidas e analisadas quanto a citrato residual nos vários pontos de diafiltração.
[001070] Foi obtido um coeficiente de rejeição de 0,13. Menos de sete diavolumes de fosfato de potássio 25 mM pH 6,0 são necessários para atingir uma redução de 6 logs.
9. Consistência
[001071] Para demonstrar que o processo de recuperação e purifica- ção descrito acima poderia produzir resultados reproduzíveis, três lo- tes de consistência foram fabricados. Todo o lote de fermentação foi floculado e centrifugado usando o processo descrito acima.
[001072] Os rendimentos de etapa e geral para os três lotes de con- sistência são mostrados na Tabela 2. Todos os rendimentos de etapa são de aproximadamente 77-99%, muito reproduzíveis e robustos. Tabela 2 — Rendimentos de etapa e geral para lotes de consistência de sorotipo 8 em ear ns | Fttrado de profundidade | rm 9 | as po em ea es ses a e ss ss as as Ts) Rama | rr a
[001073] Os resultados analíticos para os três lotes de consistência são mostrados na Tabela 3. Os três lotes de consistência atenderam a todos os critérios de aceitação predefinidos. Tabela 3 — Resultados analíticos para lotes de consistência de sorotipo 8 o ensato ee ee ees Ácidos Nucleico Exemplo 2. Purificação de polissacarídeo pneumocócico sorotipo 33F
[001074] O fluxograma do processo para a purificação do polissaca- rídeo pneumocócico 33F é mostrado na Figura 1. O processo começa com o caldo de fermentação tratado com NLS e inclui operações unitá- rias de recuperação (floculação, centrifugação e filtração de profundi- dade) seguidas por operações unitárias de purificação (ultrafiltração e filtração de carbono).
1. Material de Partida
[001075] O processo começa com o caldo de fermentação inativado com NLS de S. pneumonia sorotipo 33F. As culturas foram cultivadas em meio Hy-Soy. No final do cultivo (conforme indicado por nenhum aumento adicional na densidade óptica), as culturas foram tratadas com NLS (ver EP2129693).
2. Floculação
[001076] O objetivo principal desta etapa é precipitar detritos celula- res, proteínas da célula hospedeira e ácidos nucleicos. Ela também auxilia nas operações unitárias de clarificação à jusante. A floculação foi realizada com caldo de fermentação que foi lisado pela adição de NLS.
2.1 Efeito do pH
[001077] Os experimentos foram conduzidos para examinar o efeito do pH.
[001078] Para determinar o pH ótimo para floculação do sorotipo 33F, um estudo de titulação de ácido foi realizado em caldo de fermen- tação 33F inativado. Os resultados desse estudo são mostrados na Figura 4. O gráfico de remoção de impurezas versus pH mostra que a remoção máxima de impurezas é alcançada em / abaixo de pH 3,5.
[001079] Usando o pH identificado no experimento precedente, um estudo de floculação de alúmen foi conduzido. Os resultados desse estudo são mostrados na Figura 5. A taxa de sedimentação medida pelo OD600 é amplamente invariante em concentrações de alúmen > 1,0%. A maior remoção de impurezas é com alúmen 1,5%, embora não haja uma diferença significativa observada entre alúmen 1-3%. Não houve alteração significativa na concentração de polissacarídeo ao longo da faixa de titulação.
2.2 Efeito de Outros Parâmetros
[001080] Para determinar o efeito da taxa de adição de alúmen, um lote de fermentação foi dividido em dois e a solução estoque de alú- men foi adicionada ao longo de 3 min ou ao longo de 60 min. Não houve efeito significativo na clarificação após a centrifugação ou na capacidade do filtro de profundidade. Isso indica que a taxa de adição de alúmen não é um parâmetro de processo significativo.
[001081] Para refinar ainda mais as condições de floculação, um modelo de experimento (DOE) que foi estabelecido examinou o efeito da concentração de alúmen, pH, temperatura e tempo de retenção na recuperação de polissacarídeo, clarificação e remoção de proteína. Os fatores examinados são apresentados na Tabela 4. Tabela 4 — Fatores DOE examinados no estudo de floculação de 33F
[001082] A recuperação do polissacarídeo não foi significativamente afetada em nenhuma das condições testadas, pois todas as condições forneceram uma recuperação superior a 95%. Da mesma forma, a re- moção da proteína foi superior a 90% para todas as condições testa- das. A concentração de alúmen tem o maior impacto na clarificação, conforme medido pelo OD600. Em baixas concentrações de alúmen, o ODG600 aumentou. Houve também ligeiros aumentos na clarificação à medida que a temperatura diminuía e o pH aumentava.
[001083] Para determinar o efeito das condições de floculação nas operações unitárias de clarificação, foi realizado um estudo de centri- fugação contínua em caldo de fermentação floculado a 50ºC.
[001084] Conforme observado com o caldo floculado a 20ºC, não houve aumento significativo na clarificação do concentrado em taxas de alimentação de 400 a 1200 mL / min para o caldo floculado a 50ºC. No entanto, tanto a clarificação do concentrado quanto a capacidade do filtro de profundidade aumentaram significativamente em compara- ção com a floculação a 20ºC. Usando as novas condições de flocula- ção, a capacidade do filtro de profundidade é superior a 400 L / m?.
[001085] Para confirmar que o aumento da temperatura de flocula- ção de 20ºC para 50ºC melhorou a clarificação do concentrado e, por-
tanto, a capacidade dos filtros de profundidade (ver abaixo), a clarifi- cação do concentrado e do filtrado de profundidade foram medidas (ver Tabela 5). Tabela 5 — Efeito da temperatura de floculação na clarificação do filtra- do de profundidade e concentrado Temperatura de ODG600 do Concentrado ODG600 do Filtrado de [ess sai
3. Centrifugação
[001086] A centrifugação foi conduzida para clarificar o concentrado de forma que ele possa ser filtrado com capacidade razoável. A velo- cidade centrífuga foi fixada em 12.000 xd.
4. Filtração de Profundidade
[001087] Embora a centrifugação seja a principal operação unitária de separação sólido / líquido, ela não remove todas as partículas do fluxo de alimentação, uma operação unitária de filtração de profundi- dade foi incorporada entre a centrifugação e a primeira operação unitá- ria de ultrafiltração.
5. Filtragem Opcional de 0,45 mícron
[001088] Embora opcional, um filtro de 0,45 mícron foi usado em al- gumas amostras após a filtração de profundidade.
6. Ultrafiltração / Diafiltração-(UFDF-1)
[001089] A purificação começa com o filtrado de profundidade (da etapa 4 ou 5 acima).
[001090] Esta operação substitui o meio de fermentação gasto por um tampão enquanto reduz os níveis de impurezas da célula hospe- deira de baixo peso molecular e floculante residual (alumínio).
[001091] Em experimentos iniciais, o pH do filtrado de profundidade foi ajustado de 3,5 para 7,0 usando hidróxido de sódio SN. Embora is-
so não tenha afetado o peso molecular do polissacarídeo, resultou na desacetilação parcial dos grupos O-acetil em 33F.
[001092] Foi proposto que a desacetilação foi devido ao alto pH local que resultou durante a neutralização com hidróxido de sódio SN. Portan- to, foi decidido ajustar o pH da solução de 33F durante a diafiltração após concentrar o filtrado de profundidade a um volume administrável.
[001093] A diafiltração foi realizada contra citrato de sódio / fosfato de sódio, pH 7,0 (por exemplo, fosfato 10 mM / citrato 25 mM pH 7,0).
[001094] Alternativamente, EDTA 25 mM também pode ser usado em vez de citrato.
7. Filtração por Carvão
[001095] Esta operação unitária reduz o nível de impurezas da célula hospedeira, tal como proteínas e ácidos nucleicos, bem como impure- zas coloridas (ver WO 2008/118752).
[001096] A etapa de filtração por carvão pode ser realizada como um modo de passagem única ou em um modo de recirculação. Para de- terminar qual modo de operação funciona melhor para o sorotipo 33F, foi realizado um estudo de filtração por carvão de recirculação. Neste experimento, o retentado de UFDF-1 foi filtrado através de dois discos Cuno R32SP de 47 mm em série (área total de 35 cm?) a 170LMH e o nível de impureza foi determinado após cada ciclo (total de 5 ciclos). À remoção de impurezas foi melhor com a provocação de alimentação mais baixa de — 30L / m?. A remoção adicional de impurezas em mais de um ciclo foi insignificante, indicando que há pouco ou nenhum be- nefício em usar o modo de recirculação.
8. Filtragem Opcional de 0,2 mícron
[001097] Embora opcional, um filtro de 0,2 mícron foi usado em al- gumas amostras de filtração de carbono.
9. Ultrafiltração / Diafiltração-(UFDF-2)
[001098] Esta operação unitária concentra o produto na concentra-
ção desejada e substitui o citrato de sódio 25 mM, fosfato de sódio 10 mM, pH 7,0 pelo tampão correto para conjugação. Esta etapa é reali- zada usando um filtro de peso molecular de corte de 30 kDa.
[001099] A presença de citrato residual pode interferir na química de conjugação. Para ser altamente reduzido o nível de citrato, experimen- tos de diafiltração foram realizados usando diferentes tampões.
[001100] Nesses experimentos, o filtrado de carvão foi concentrado 4 vezes e, em seguida, diafiltrado contra diferentes tampões. As amos- tras foram removidas e analisadas quanto ao citrato residual.
[001101] A água teve o maior coeficiente de rejeição de 50% e teria exigido aproximadamente 22 diavolumes para atingir a redução dese- jada.
[001102] Ambos o fosfato de sódio 10 mM pH 7,0 quanto o fosfato de potássio 10 mM pH 6,5 tiveram coeficientes de rejeição similares de aproximadamente 20% e exigiriam 10 diavolumes para atingir a redu- ção alvo de 6-logs.
[001103] O cloreto de sódio a 25 mM teve o menor coeficiente de rejeição de 8% e alcançaria a redução desejada em 7 diavolumes. À redução da concentração de cloreto de sódio para 10 mM resultou em um aumento do coeficiente de rejeição para 28%.
[001104] Para garantir que o nível de citrato residual fosse alcança- do, a concentração de cloreto de sódio foi aumentada para 50 mM.
Após seis diavolumes de cloreto de sódio 50 mM, o retentado foi diafil- trado contra água para mais seis diavolumes.
10. Filtração Estéril
[001105] A operação unitária final antes do enchimento dos frascos de armazenamento é uma filtração estéril (filtração de 0,2 mícron).
11. Consistência
[001106] Para demonstrar que o processo de recuperação e purifica- ção descrito acima pode produzir resultados reproduzíveis, três lotes de consistência foram fabricados. O lote de fermentação foi floculado e centrifugado usando o processo descrito acima.
[001107] Os rendimentos da etapa e geral para os três lotes de con- sistência são mostrados na Tabela 6. Todos os rendimentos de etapa são de aproximadamente 90% ou mais e muito reproduzíveis. O ren- dimento geral médio é de 73%.
[001108] Tabela 6 — Rendimentos de etapa e geral para lotes de consistência do sorotipo 33F po em pe es [Pesos potmadas | o | o ss [o e ss ssa a pesa a es Rendimento
[001109] Os resultados analíticos para os três lotes de consistência são mostrados na Tabela 3. Os três lotes de consistência atenderam a todos os critérios de aceitação predefinidos.
[001110] Os resultados analíticos para os três lotes de consistência são mostrados na Tabela 7. Tabela 7 — Resultados analíticos para lotes de consistência de 33F (floculação a 20ºC) se mm e Ts [ori | o os | so
Ácidos Nucleicos
[001111] Mais dois lotes foram fabricados usando o mesmo procedi- mento, exceto que a floculação foi realizada a 50ºC em vez de 20ºC. Os resultados analíticos desses lotes juntamente com os resultados médios dos lotes de consistência são mostrados na Tabela 8. Esses resultados mostram claramente que o aumento da temperatura de flo- culação não teve nenhum impacto na qualidade do produto. Tabela 8 — Resultados analíticos para floculação de 33F a 50ºC Css [se] se Exemplo 3. Purificação do polissacarídeo pneumocócico sorotipo 15B
[001112] O fluxograma do processo para a purificação do polissaca- rídeo pneumocócico 15B é mostrado na Figura 1. O processo começa com o caldo de fermentação tratado com NLS e inclui operações unitá- rias de recuperação (floculação, centrifugação e filtração de profundi- dade) seguidas por operações unitárias de purificação (ultrafiltração e filtração por carvão).
1. Material de Partida
[001113] O processo começa com o caldo de fermentação inativado com NLS de S. pneumonia sorotipo 15B. As culturas foram cultivadas em meio Hy-Soy. No final do cultivo (conforme indicado por nenhum aumento adicional na densidade óptica), as culturas foram inativadas com NLS (ver EP2129693).
2. Floculação
[001114] O objetivo principal desta etapa é precipitar detritos celula- res, proteínas da célula hospedeira e ácidos nucleicos. Ela também auxilia nas operações unitárias de clarificação à jusante. A floculação foi realizada com caldo de fermentação que foi lisado pela adição de NLS.
[001115] Similarmente aos Exemplos 1 e 2, experimentos foram conduzidos para examinar o efeito de diferentes parâmetros na flocu- lação.
[001116] O efeito das variáveis foram pH, porcentagem de alúmen e tempo de retenção.
[001117] Estes dados mostraram que a remoção da proteína em pH 2,5-4,0 e alúmen 1-3% foi bastante eficaz com mais de 90% das im- purezas de proteína removidas nesta única etapa. Esta eficiência de remoção de impurezas não foi afetada pelo tempo de retenção (1, 4 ou 24 horas).
[001118] Para confirmar as condições de floculação desenvolvidas para 15B, um estudo DOE foi realizado para examinar o efeito da con- centração de alúmen, pH e tempo de retenção na recuperação de po- lissacarídeo, clarificação e remoção de impurezas. A faixa de fatores para pH, porcentagem de alúmen e tempo de retenção são: 2 - 4,0 - 4% p / ve 1-4 horas, respectivamente.
[001119] Os dados experimentais para este estudo DOE são mos- trados na Tabela 9. Um total de 20 experimentos foram realizados dentro do espaço de projeto.
Tabela 9 Amostra | Alúmen pH Tempo de |Polisac (%]|] Proteína (% o meto raseas anão. a NM CC e E CR CR CO A a
RM CR
DN A CC [Rr
E [E 2 CC E a a RN DR CR O o
ER A O A
[001120] Os resultados sugeriram que dentro do espaço de projeto, a conveniência para o pH, porcentagem de alúmen e tempo de retenção para a operação unitária de floculação foi bastante ampla, pH: 2,7 - 3,8; alúmen: 1 - 2,5% (p / v); e tempo de retenção: 1,5 - 3 horas. Re- sultados similares foram observados nos estudos DOE de outros soro- tipos.
[001121] Os experimentos precedentes foram realizados a 20ºC.
[001122] Para determinar ainda o efeito das condições de floculação nas operações unitárias de clarificação, um estudo de centrifugação contínua foi conduzido em caldo de fermentação que havia sido flocu- lado a 50ºC.
[001123] Conforme observado com o caldo floculado a 20ºC, não houve aumento significativo na clarificação do concentrado em taxas de alimentação de 400 a 800 mL / min para o caldo floculado a 50ºC.
3. Centrifugação
[001124] A centrifugação foi conduzida para clarificar o concentrado de forma que ele possa ser filtrado com capacidade razoável. A velo- cidade centrífuga foi fixada em 12.000 xd.
4. Filtração de Profundidade
[001125] Embora a centrifugação seja a principal operação unitária de separação sólido / líquido, ela não remove todas as partículas do fluxo de alimentação, uma operação unitária de filtração de profundi- dade foi incorporada entre a centrifugação e a primeira operação unitá- ria de ultrafiltração.
5. Filtragem Opcional de 0,45 mícron
[001126] Embora opcional, um filtro de 0,45 mícron foi usado em al- gumas amostras após a filtração de profundidade.
6. Ultrafiltração / Diafiltração-(UFDF-1)
[001127] A purificação começa com o filtrado de profundidade (da etapa 4 ou 5 acima).
[001128] Esta operação substitui o meio de fermentação gasto por um tampão enquanto reduz os níveis de impurezas da célula hospe- deira de baixo peso molecular e floculante residual (alumínio).
[001129] Em experimentos iniciais, o pH do filtrado de profundidade foi ajustado de 3,5 para 7,0 usando hidróxido de sódio SN. No entanto, isso pode resultar na desacetilação parcial dos grupos O-acetil em 15B.
[001130] Portanto, foi decidido ajustar o pH da solução de 15B du-
rante a diafiltração após concentrar o filtrado de profundidade a um volume administrável.
[001131] Nos estudos de seleção de tampão para 15B, as concen- trações de citrato entre 10 e 50 mM foram testadas com diferentes concentrações de fosfato de sódio.
[001132] A diafiltração foi realizada contra citrato de sódio / fosfato de sódio, pH 7,0 (por exemplo, fosfato 10 mM / citrato 25 mM pH 7,0).
7. Filtração por Carvão
[001133] Esta operação unitária reduz o nível de impurezas da célula hospedeira, tal como proteínas e ácidos nucleicos, bem como impure- zas coloridas (ver WO 2008/118752).
[001134] Três filtros de carbono Cuno R32SP de 7” de diâmetro fo- ram usados em série. O retentado de UFDF-1 foi primeiro passado pe- lo filtro de modo que o sinal de UV a 280 nm foi registrado para a solu- ção de partida. Depois disso, o retentado foi filtrado a uma vazão de 32 LMH e o UV280 para o filtrado de carvão foi registrado e compara- do com o do retentado. Uma redução de cerca de 95% no sinal UV280 demonstrou que as impurezas relacionadas à proteína são removidas pela passagem única através dos filtros de carvão.
[001135] A etapa de filtração por carvão pode ser realizada como um modo de passagem única ou múltipla ou em um modo de recirculação. Para determinar se a passagem de adição através do carvão adiciona- ria qualquer benefício para o sorotipo 15B, um experimento foi realiza- do onde o retentado de UFDF-1 foi filtrado através de três discos Cuno R32SP de 7” em série a 64 LMH. O nível de impureza, o nível de UV280 e ensaio de Borato Lowry para proteína foram determinados após cada passagem. Os resultados mostraram que uma única pas- sagem foi suficiente para remover a maioria das impurezas. A concen- tração de proteína para o filtrado de passagem única e o filtrado de segunda passagem foi de 25,2 e 20,6 ug / mL, respectivamente. Ao fatorar a diluição devido ao enxague dos filtros, a quantidade de prote- ína no filtrado da primeira passagem e no filtrado da segunda passa- gem foi aproximadamente a mesma.
8. Ultrafiltração / Diafiltração-(UFDF-2)
[001136] Esta operação unitária concentra o produto na concentra- ção desejada e substitui o citrato de sódio 25 mM, fosfato de sódio 10 mM, pH 7,0 pelo tampão correto para conjugação. Esta etapa é reali- zada usando um filtro de peso molecular de corte de 30 kDa.
[001137] A presença de citrato residual pode interferir na química de conjugação. Para reduzir bastante o nível de citrato, os experimentos de diafiltração foram realizados usando diferentes tampões (ver exem- plos 1e 2).
9. Homogeneização
[001138] Os polissacarídeos 15B purificados podem ser homogenei- zados, por exemplo, dimensionados mecanicamente (ver, por exem- plo, WO 2015/110942).
10. Filtração Estéril
[001139] A operação unitária final antes do enchimento dos frascos de armazenamento é uma filtração estéril (filtração de 0,2 mícron).
11. Consistência
[001140] Para demonstrar que o processo de recuperação e purifica- ção descrito acima pode produzir resultados reproduzíveis, três lotes de consistência foram fabricados. O lote de fermentação foi floculado e centrifugado usando o processo descrito acima.
[001141] Os rendimentos de etapa e geral para os três lotes de con- sistência são mostrados na Tabela 10. Todos os rendimentos de etapa são de aproximadamente 75-98%, muito reproduzíveis e robustos. O rendimento médio geral é de 60%. Tabela 10 — Rendimentos de etapa e geral para lotes de consistência do sorotipo 15B po em ee a
ERR CI sete so as as Fsseaão a a a ss a ss [Foros — a e [Ramen sea Ts
[001142] Os resultados analíticos para os três lotes de consistência são mostrados na Tabela 11. Os três lotes de consistência atenderam a todos os critérios de aceitação predefinidos.
[001143] Os resultados analíticos para os três lotes de consistência são mostrados na Tabela 11. Tabela 11 — Resultados analíticos para lotes de consistência de 15B
[001144] Mais dois lotes foram fabricados usando o mesmo procedi- mento, exceto que a floculação foi realizada a 50ºC em vez de 20ºC. Os resultados analíticos desses lotes juntamente com os resultados médios dos lotes de consistência são mostrados na Tabela 8. Esses resultados mostram claramente que o aumento da temperatura de flo- culação não teve nenhum impacto na qualidade do produto. Tabela 12 — Comparação de lotes a 50ºC ss e ez Exemplo 4. Purificação do polissacarídeo pneumocócico sorotipo 22F
[001145] O fluxograma do processo para a purificação do polissaca- rídeo pneumocócico 22F é mostrado na Figura 1. O processo começa com o caldo de fermentação inativado com NLS e inclui as operações unitárias de recuperação (floculação, centrifugação e filtração de pro- fundidade), seguidas das operações unitárias de purificação (ultrafil- tração e filtração por carvão).
1. Material de Partida
[001146] O processo começa com o caldo de fermentação inativado com NLS de S. pneumonia sorotipo 22F. As culturas foram cultivadas em meio Hy-Soy. No final do cultivo (conforme indicado por nenhum aumento adicional na densidade óptica), as culturas foram tratadas com NLS. (ver EP2129693).
2. Floculação
[001147] O objetivo principal desta etapa é precipitar detritos celula- res, proteínas da célula hospedeira e ácidos nucleicos. Ela também auxilia nas operações unitárias de clarificação à jusante. A floculação foi realizada com caldo de fermentação que foi lisado pela adição de NLS.
2.1 Efeito do pH e Alúmen
[001148] Similarmente aos Exemplos 1 e 2, experimentos foram conduzidos para examinar o efeito de diferentes parâmetros na flocu- lação.
[001149] Estes dados mostraram que a remoção de proteína em pH 2,5 - 4,0 e alúmen 1,5-3% foi bastante eficaz com mais de 90% das impurezas de proteína removidas nesta única etapa.
[001150] Para confirmar as condições de floculação desenvolvidas para 22F, um estudo DOE foi realizado para examinar o efeito da con- centração de alúmen e pH na recuperação de polissacarídeo, clarifica- ção e remoção de impurezas.
[001151] A eficiência de remoção de proteínas foi muito alta em pH reduzido. Alúmen e pH combinados foram eficazes.
2.2 Efeito da Temperatura
[001152] Um estudo foi conduzido para examinar o efeito da tempe- ratura no tamanho das partículas do caldo floculado. Após floculação (2% p / v de alúmen, pH 3,5) a 20ºC, o caldo floculado foi aquecido até a temperatura desejada e mantido por uma hora. Após resfriamento até a temperatura ambiente (15-25ºC), o caldo floculado foi centrifuga- do a 12.000 xg e a clarificação (OD600) foi determinada.
[001153] Os resultados são mostrados na Tabela 13. Tabela 13 — Resultados do tamanho de partícula floculada e OD de concentrado em várias temperaturas Temperatura após 1 h de Tamanho da partícula de ODG600 de con-
[001154] Houve uma diminuição significativa no OD600 do concen- trado em temperaturas aumentadas.
[001155] Em experimentos precedentes, foi observado que o tama- nho das partículas do caldo floculado foi maior em temperaturas mais altas. Uma comparação visual mostrando a alteração no tamanho de partícula com a temperatura de floculação é mostrada na Figura 6. Pa- ra o primeiro experimento, a temperatura de floculação foi mantida em temperatura ambiente (RT) e para o segundo experimento ela foi au- mentada para 45ºC por 1 hora.
[001156] Na figura 6, o tamanho médio de partícula do caldo flocula- do após 1 hora mantido em temperatura ambiente e aquecido a 45ºC foi de 9,8 um e 65 um, respectivamente. Houve um aumento significa- tivo no tamanho das partículas para o caldo floculado aquecido a 45ºC. Além do tamanho de partícula maior, há também uma redução na quantidade de partículas finas (< 1 um). A formação de partículas grandes e redução de partículas finas ajuda com as etapas adicionais (por exemplo, centrifugação e filtração de profundidade) e resulta em um concentrado mais claro.
[001157] Dois lotes adicionais de 22F foram fabricados em que a única alteração foi a temperatura de floculação (20ºC ou 50ºC). A clari- ficação do concentrado (pós-centrifugação) e pós-filtração de profun- didade (ver abaixo) desses lotes são mostradas na Tabela 14. Tabela 14 — Efeito da temperatura de floculação na clarificação do fil- trado de profundidade e concentrado Lote OD600 do Concentrado ODG600 do Filtrado de o omaã ea o a
3. Centrifugação
[001158] A centrifugação foi conduzida para clarificar o concentrado de forma que ele possa ser filtrado com capacidade razoável. A velo- cidade centrífuga foi fixada em 12.000 xd.
4. Filtração de Profundidade
[001159] Embora a centrifugação seja a principal operação unitária de separação sólido / líquido, ela não remove todas as partículas do fluxo de alimentação, uma operação unitária de filtração de profundi- dade foi incorporada entre a centrifugação e a primeira operação unitá- ria de ultrafiltração.
5. Filtragem Opcional de 0,45 mícron
[001160] Embora opcional, um filtro de 0,45 mícron foi usado em al- gumas amostras após a filtração de profundidade.
6. Ultrafiltração / Diafiltração-(UFDF-1)
[001161] A purificação começa com o filtrado de profundidade (da etapa 4 ou 5 acima).
[001162] Esta operação substitui o meio de fermentação gasto por um tampão enquanto reduz os níveis de impurezas da célula hospe- deira de baixo peso molecular e floculante residual (alumínio).
[001163] Antes de realizar a filtração por carvão, o pH do polissaca- rídeo 22F foi ajustado para 7,0 + 0,5. Como mostrado acima, o uso de NaOH para ajustar o pH pode resultar na desacetilação parcial dos grupos O-acetila. Uma vez que o polissacarídeo 22F também contém um grupo O-acetila, foi decidido ajustar o pH da solução de 22F duran- te a diafiltração após concentrar o filtrado de profundidade para um volume administrável.
[001164] Nos estudos de seleção de tampão para o sorotipo 22F, concentrações de citrato entre O e 40 mM foram testadas com diferen- tes concentrações de fosfato de sódio.
[001165] Os fluxos de diafiltração mais elevados são obtidos quando a concentração de citrato é superior a 20 mM e a concentração de fos- fato é de 10 mM ou menos.
7. Filtração por Carvão
[001166] Esta operação unitária reduz o nível de impurezas da célula hospedeira, tal como proteínas e ácidos nucleicos, bem como impure- zas coloridas (ver WO 2008/118752).
[001167] O retentado de UFDF1 foi filtrado através de três ou quatro filtros de carvão R32SP de 7” de diâmetro empilhados em série. Uma série de experimentos foi realizada para medir a eficácia dos filtros de carvão R32SP na remoção de UV residual e impurezas RI do retenta- do de UFDF1. Houve pelo menos 95% de redução na absorbância de UV 260/280 nm. Isto indica uma remoção significativa de impurezas rela- cionadas com proteínas e ácidos nucleicos do retentado de UFDF1. Os resultados mostram que o carvão tem excelente capacidade de remo- ção de impurezas relacionadas a proteínas.
8. Ultrafiltração / Diafiltração-(UFDF-2)
[001168] Esta operação unitária concentra o produto na concentra- ção desejada e substitui o citrato de sódio 25 mM, fosfato de sódio 10 mM, pH 7,0 pelo tampão correto para conjugação. Esta etapa é reali- zada usando um filtro de peso molecular de corte de 30 kDa.
[001169] A presença de citrato residual pode interferir na química de conjugação. Para reduzir bastante o nível de citrato, os experimentos de diafiltração foram realizados usando diferentes tampões (ver exem- plos 1e 2).
9. Homogeneização
[001170] Os polissacarídeos 22F purificados podem ser homogenei- zados, por exemplo, dimensionados mecanicamente (ver, por exem- plo, WO 2015/110942).
10. Filtração Estéril
[001171] A operação unitária final antes do enchimento dos frascos de armazenamento é uma filtração estéril (filtração de 0,2 mícron).
11. Consistência
[001172] Para demonstrar que o processo de recuperação e purifica- ção descrito acima pode produzir resultados reproduzíveis, três lotes de consistência foram fabricados (temperatura de floculação 20ºC). O lote de fermentação foi floculado e centrifugado usando o processo descrito acima.
[001173] Os rendimentos de etapa e geral para os três lotes de con- sistência são mostrados na Tabela 14. Todos os rendimentos de etapa são de aproximadamente 90% ou mais e muito reproduzíveis. O ren- dimento geral médio é de 58%. Tabela 14 — Rendimentos de etapa e geral para lotes de consistência de polissacarídeo 22F eee Do [e [Fessodspernaddo Ts a | a [ses dorarR a a [as eai a sesta a e | ss 101 e 03 não foram homogeneizados
[001174] Os resultados analíticos para os três lotes de consistência são mostrados na Tabela 15. Tabela 15 — Resultados analíticos para lotes de consistência de 22F e am am am O-Acetilação nativa/dimen
RM NA
[001175] Mais dois lotes foram fabricados usando o mesmo procedi- mento, exceto que a floculação foi realizada a 50ºC em vez de 20ºC. Os resultados analíticos desses lotes juntamente com os resultados médios dos lotes de consistência são mostrados na Tabela 16. Esses resultados mostram claramente que o aumento da temperatura de flo- culação não teve nenhum impacto na qualidade do produto. Tabela 16 — Comparação de lotes de Demo e Consistência a 50ºC Lotes de Consistência o [EE [ee] Ácidos Nucleicos Resi- ? os lotes não foram analisados quanto ao NLS residual Exemplo 5. Purificação do polissacarídeo pneumocócico sorotipo 10A
[001176] O fluxograma do processo para a purificação do polissaca- rídeo pneumocócico 10A é mostrado na Figura 1. O processo começa com o caldo de fermentação inativado com NLS e inclui operações uni- tárias de recuperação (floculação, centrifugação e filtração de profun- didade), seguidas por operações unitárias de purificação (ultrafiltração e filtração por carvão).
1. Material de Partida
[001177] O processo começa com o caldo de fermentação inativado com NLS de S. pneumonia sorotipo 10A. As culturas foram cultivadas em meio Hy-Soy. No final do cultivo (conforme indicado por nenhum aumento adicional na densidade óptica), as culturas foram inativadas com NLS (ver EP2129693).
2. Floculação
[001178] O objetivo principal desta etapa é precipitar detritos celula- res, proteínas da célula hospedeira e ácidos nucleicos. Ela também auxilia nas operações unitárias de clarificação à jusante. A floculação foi realizada com caldo de fermentação que foi lisado pela adição de NLS.
[001179] O pH ótimo para floculação do sorotipo 10A foi determinado por um DOE (ver, por exemplo, Exemplos 1 e 3).
[001180] Com base no Diagrama de predição, a conveniência é qua- se ótima em pH 3,5 e alúmen 2%. Ele também mostra que o pH ligei- ramente inferior a 3,5 ajudará com pequenas melhorias na remoção da proteína e clarificação do concentrado com uma ligeira diminuição no rendimento de polissacarídeo, mas ao mesmo tempo, o pico de pureza pode ser um pouco mais alto.
[001181] O trabalho de desenvolvimento em outros sorotipos mos- trou que o aumento da temperatura durante a floculação resultou em maior capacidade do filtro de profundidade. No entanto, o aquecimento do caldo pode afetar o peso molecular do polissacarídeo. Os experi- mentos foram realizados em 10A para determinar se temperaturas elevadas resultaram em uma diminuição do peso molecular. No pri- meiro experimento, caldos floculados foram incubados nas temperatu- ras de 20, 50, 60 e 70º C e tempos de retenção de 1, 4 e 22 horas. Apenas as amostras do tempo de retenção de 4 horas em cada tem- peratura foram purificadas. Todas as amostras apresentaram o mesmo espectro de 'H NMR, porém as amostras de 60º C e 70º C apresenta- ram redução significativa no peso molecular. Em um segundo experi- mento, os caldos floculados foram incubados nas temperaturas de 20, 35, 45 e 55º C com tempos de retenção de 1, 2 e 4 horas, e todas as amostras foram purificadas. Este estudo mostrou alterações muito pe- quenas no peso molecular por até 4 horas a 45º C. Houve uma ligeira diminuição do peso molecular observada na primeira hora de exposi- ção a 55º C, mas a diferença ficou dentro do erro do ensaio.
3. Centrifugação
[001182] A centrifugação foi conduzida para clarificar o concentrado de forma que ele possa ser filtrado com capacidade razoável. A velo- cidade centrífuga foi fixada em 12.000 xd.
4. Filtração de Profundidade
[001183] Embora a centrifugação seja a principal operação unitária de separação sólido / líquido, ela não remove todas as partículas do fluxo de alimentação, uma operação unitária de filtração de profundi- dade foi incorporada entre a centrifugação e a primeira operação unitá- ria de ultrafiltração.
5. Filtragem Opcional de 0,45 mícron
[001184] Embora opcional, um filtro de 0,45 mícron foi usado em al- gumas amostras após a filtração de profundidade.
6. Ultrafiltração / Diafiltração-(UFDF-1)
[001185] A purificação começa com o filtrado de profundidade (da etapa 4 ou 5 acima).
[001186] Esta operação substitui o meio de fermentação gasto por um tampão enquanto reduz os níveis de impurezas da célula hospe- deira de baixo peso molecular e floculante residual (alumínio).
[001187] Antes de realizar a filtração por carvão, o pH do polissaca- rídeo 22F foi ajustado para 7,0 + 0,5.
[001188] Inicialmente, a diafiltração foi realizada contra fosfato de sódio 10 mM pH 7,0. Isso foi bem-sucedido em ajustar o pH para o va- lor desejado. No entanto, durante as diafiltrações em que apenas fos- fato de sódio foi usado, um precipitado branco se formou. O sólido branco foi isolado e determinado como contendo fosfato de alumínio. O fosfato de alumínio é insolúvel em água em pH neutro e é formado devido ao alumínio residual presente após a etapa de floculação. Para prevenir a formação de fosfato de alumínio, foi decidido adicionar um agente quelante ao tampão de diafiltração. Com base no trabalho em outros sorotipos, o citrato de sódio foi selecionado. Concentrações de citrato maiores que 10 mM foram eficazes na prevenção da formação de névoa ao longo do tempo. Demonstrou-se que concentrações de citrato de 25 mM removem o alumínio residual para menos de 1 ppm.
7. Filtração por Carvão
[001189] Esta operação unitária reduz o nível de impurezas da célula hospedeira, tal como proteínas e ácidos nucleicos, bem como impure- zas coloridas (ver WO 2008/118752).
[001190] O retentado de UFDF1 foi filtrado através de um filtro de disco de carvão R32SP. Os resultados mostram que o carvão tem exce- lente capacidade de remoção de impurezas relacionadas a proteínas.
8. Ultrafiltração / Diafiltração-(UFDF-2)
[001191] Esta operação unitária concentra o produto na concentra- ção desejada e substitui o citrato de sódio 25 mM, fosfato de sódio 10 mM, pH 7,0 pelo tampão correto para conjugação. Esta etapa é reali- zada usando um filtro de peso molecular de corte de 30 kDa.
[001192] A presença de citrato residual pode interferir na química de conjugação. Para reduzir bastante o nível de citrato, os experimentos de diafiltração foram realizados usando diferentes tampões (ver exem- plos 1e 2).
9. Filtração Estéril
[001193] A operação unitária final antes do enchimento dos frascos de armazenamento é uma filtração estéril (filtração de 0,2 mícron).
10. Consistência
[001194] Para demonstrar que o processo de recuperação e purifica- ção descrito acima pode produzir resultados reproduzíveis, três lotes de consistência foram fabricados (temperatura de floculação de 45ºC). O lote de fermentação foi floculado e centrifugado usando o processo descrito acima.
[001195] Os rendimentos de etapa e geral para os três lotes de con- sistência são mostrados na Tabela 17. Todos os rendimentos da etapa são maiores do que 72% e muito reproduzíveis. O rendimento médio geral é de 68%. Tabela 17 — Rendimentos de etapa e geral para lotes de consistência de 10A soe ss ss a seres asa ss a | Pesa ss a | ss seres A es |
[001196] Os resultados analíticos para os três lotes de consistência são mostrados na Tabela 18. Tabela 18 — Resultados analíticos para lotes de consistência de 10A eso oo | ioxios | roxas Ácidos Nucleicos ss ea | ioms | 1oraos Exemplo 6. Purificação de polissacarídeo pneumocócico sorotipo 11A
[001197] O fluxograma do processo para a purificação do polissaca- rídeo pneumocócico 11A é mostrado na Figura 1. O processo começa com o caldo de fermentação inativado com NLS e inclui as operações unitárias de recuperação (floculação, centrifugação e filtração de pro- fundidade), seguidas pelas operações unitárias de purificação (ultrafil- tração e filtração por carvão).
1. Material de Partida
[001198] O processo começa com o caldo de fermentação inativado com NLS de S. pneumonia sorotipo 11A. As culturas foram cultivadas em meio Hy-Soy. No final do cultivo (conforme indicado por nenhum aumento adicional na densidade óptica), as culturas foram inativadas com NLS (ver EP2129693).
2. Floculação
[001199] O objetivo principal desta etapa é precipitar detritos celula- res, proteínas da célula hospedeira e ácidos nucleicos. Ela também auxilia nas operações unitárias de clarificação à jusante. A floculação foi realizada com caldo de fermentação que foi lisado pela adição de NLS.
[001200] Trabalhos precedentes sobre o processo de purificação de outros sorotipos mostraram que a operação unitária de clarificação foi afetada pelo pH da solução e pela concentração de alúmen adiciona- do. Para entender o impacto desses fatores na floculação do sorotipo 11A, foi realizado um estudo DOE, que também inclui outro fator — o tempo de floculação, que pode ter impacto no processo de floculação.
[001201] Os intervalos para cada parâmetro estão listados na Tabela
19. Tabela 19 — Faixa de parâmetros para estudo DOE de floculação do sorotipo 11A
[001202] Uma série de 20 experimentos variando esses 3 parâme- tros foi conduzida.
[001203] A relação entre cada variável (concentração de alúmen, pH e tempo de floculação) e as respostas (recuperação de PS, OD600 e remoção de proteína) durante o processo de floculação foi analisada por diagramas de predição. A variável menos importante é o tempo de floculação, que quase não tem impacto na remoção ou na clarificação da proteína, e um impacto muito menor na recuperação do polissaca- rídeo, quando a concentração de alúmen e o pH são ajustados em seus pontos médios. A concentração de alúmen afeta principalmente a clarificação. A concentração ideal de alúmen está em torno de 2,5%, o que resultou na melhor clarificação. Embora a diferença de OD600 se- ja pequena quando a concentração de alúmen está entre 1,5% a 3%. O pH da floculação, por outro lado, afeta principalmente a remoção de proteínas, com maior remoção de proteínas em pH mais baixo. Em pH 3,5 e abaixo, a remoção máxima de impurezas é alcançada.
[001204] Experimentos adicionais foram projetados para determinar se o aumento da temperatura de floculação melhorava as operações à jusante.
[001205] Para determinar o efeito da temperatura na floculação do sorotipo 11A, um experimento foi conduzido em três temperaturas dife- rentes. Além da temperatura, duas taxas de agitação diferentes duran- te a floculação foram examinadas. O caldo de fermentação 11A foi flo-
culado usando alúmen 2%, pH 3,5 em várias temperaturas durante uma hora. Após a floculação, o caldo foi centrifugado e a clarificação do concentrado foi medida. O concentrado foi então filtrado através de um filtro de profundidade e a capacidade do filtro foi determinada. As condições experimentais e os resultados são mostrados na Tabela 20. O filtrado do filtro de profundidade foi ainda filtrado através de um filtro frontal de 0,45 um usando um modelo Vmax.
[001206] Não houve diferença na capacidade do filtro de profundida- de para todas as quatro condições, pois todas eram maiores que 400 L / m?. No entanto, houve uma diferença significativa nos resultados de Vmax de 0,45 mícron. A floculação a 50º C teve um Vmax de — 1300L / m? que foi aproximadamente 8 vezes maior do que as outras condi- ções. Da mesma forma, a floculação a 10º C apresentou o menor Vmax. Tabela 20 — Floculação do sorotipo 11A com diferentes temperaturas e velocidades de agitação Co Tógeirero1 [Eseimero2 | Eseimeros | Exseimento 4 Velocidade de Capacidade do filtro de > 400 Lim? > 400 L/m? > 400 L/m? > 400 L/m? cum me | cenie | ae | cane | micron
[001207] Uma preocupação potencial para a floculação em tempera- tura elevada é o impacto da temperatura elevada na estrutura molecu- lar 11A e no peso molecular de. O sorotipo 11A tem três grupos O- acetila, e um grupo glicerol conectado à unidade de repetição de polis- sacarídeo através de fosfato. Todos esses grupos podem potencial- mente se clivar durante a floculação em pH baixo e temperatura ele-
vada. O outro impacto da temperatura elevada na molécula está no peso molecular. Durante a floculação nesta condição (pH 3,5), a ca- deia mais longa de polissacarídeos pode se degradar em cadeias mais curtas, o que pode resultar em menor peso molecular. Este experimen- to mostra que o produto é idêntico ao 11A original purificado após flo- culação em temperatura ambiente (ver Tabela 24).
3. Centrifugação
[001208] A centrifugação foi conduzida para clarificar o concentrado de forma que ele possa ser filtrado com capacidade razoável. A velo- cidade centrífuga foi fixada em 12.000 xd.
4. Filtração de Profundidade
[001209] Embora a centrifugação seja a principal operação unitária de separação sólido / líquido, ela não remove todas as partículas do fluxo de alimentação, uma operação unitária de filtração de profundi- dade foi incorporada entre a centrifugação e a primeira operação unitá- ria de ultrafiltração.
[001210] Para determinar o efeito do tempo de retenção do caldo na capacidade do filtro de profundidade, o concentrado de uma floculação a 20ºC usando alúmen 2% e pH 3,5 foi mantido por até três dias a 2- 8ºC. O concentrado foi então filtrado usando um filtro de profundidade e a capacidade do filtro foi determinada. Não houve diferenças signifi- cativas na capacidade do filtro de profundidade ao longo dos dois dias de retenção (Tabela 21). Tabela 21 — Impacto do tempo de retenção do caldo na capacidade do filtro FB o bet | Dez
5. Filtração Opcional de 0,45 mícron
[001211] Embora opcional, um filtro de 0,45 mícron foi usado em al- gumas amostras após a filtração de profundidade.
6. Ultrafiltração / Diafiltração-(UFDF-1)
[001212] A purificação começa com o filtrado de profundidade (da etapa 4 ou 5 acima).
[001213] Esta operação substitui o meio de fermentação gasto por um tampão enquanto reduz os níveis de impurezas da célula hospe- deira de baixo peso molecular e floculante residual (alumínio).
[001214] No trabalho de desenvolvimento para outros sorotipos (ver acima), foi concluído que fosfato de sódio 10 MM, citrato de sódio 25 mM, pH 7,0 é um bom tampão para usar no processo UF / DF. O tam- pão fosfato é usado para ajustar o pH para neutro. O tampão citrato é usado como agente quelante para remover o alumínio.
7. Filtração por Carvão
[001215] Esta operação unitária reduz o nível de impurezas da célula hospedeira, tal como proteínas e ácidos nucleicos, bem como impure- zas coloridas (ver WO 2008/118752).
[001216] O retentado de UFDF1 foi filtrado através de um filtro de disco de carvão R32SP. Os resultados mostram que o carvão tem ex- celente capacidade de remoção de impurezas relacionadas a proteí- nas.
8. Ultrafiltração / Diafiltração-(UFDF-2)
[001217] Esta operação unitária concentra o produto na concentra- ção desejada e substitui o citrato de sódio 25 mM, fosfato de sódio 10 mM, pH 7,0 pelo tampão correto para conjugação. Esta etapa é reali- zada usando um filtro de peso molecular de corte de 30 kDa.
[001218] A presença de citrato residual pode interferir na química de conjugação. Para reduzir bastante o nível de citrato, experimentos de diafiltração foram realizados usando diferentes tampões (ver exemplos 1e2).
9. Homogeneização
[001219] Os polissacarídeos 11A purificados podem ser homogenei-
zados, por exemplo, dimensionados mecanicamente (ver, por exem- plo, WO 2015/110942).
10. Filtração Estéril
[001220] A operação unitária final antes do enchimento dos frascos de armazenamento é uma filtração estéril (filtração de 0,2 mícron).
11. Consistência
[001221] Para demonstrar que o processo de recuperação e purifica- ção descrito acima pode produzir resultados reproduzíveis, três lotes de consistência foram fabricados. O lote de fermentação foi floculado e centrifugado usando o processo descrito acima.
[001222] Os rendimentos de etapa e geral para os três lotes de con- sistência são mostrados na Tabela 17.
[001223] Tabela 22 - Rendimentos de etapa e geral para lotes de consistência 11A EFE Es e sesta | ss seat Ro 6 [Rss seorara as ss | ss [Foregemeaço — ass sz | re | 1 Perda de produto devido à válvula aberta
[001224] Os resultados analíticos para os três lotes de consistência são mostrados na Tabela 23. Tabela 23 — Resultados analíticos para lotes de consistência 11A gsm mm | ao T qu O-Acetilação Nativa /
Ss e | ao T qua Glicerol Nativo / Dimen- Ácidos Nucleicos resi- C poly Residual
[001225] A floculação em diferentes temperaturas foi conduzida. Uma das floculações foi realizada a 50ºC, e uma parte deste material foi purificada usando o processo acima. Os resultados analíticos desta purificação juntamente com os resultados médios dos lotes de consis- tência são mostrados na Tabela 24. Esses resultados mostram clara- mente que o aumento da temperatura de floculação não teve nenhum impacto na qualidade do produto. Tabela 24 — Comparação de lotes Demo e Consistência a 50ºC Consistência média de Lote a 50ºC mn Same | FR ass |
Exemplo 7. Purificação do polissacarídeo pneumocócico sorotipo 12F
[001226] O fluxograma do processo para a purificação do polissaca- rídeo pneumocócico 12F é mostrado na Figura 1. O processo começa com o caldo de fermentação inativado com NLS e inclui as operações unitárias de recuperação (floculação, centrifugação e filtração de pro- fundidade), seguidas por operações unitárias de purificação (ultrafiltra- ção e filtração por carvão).
[001227] A etapa de homogeneização é opcional.
1. Material de Partida
[001228] O processo começa com o caldo de fermentação inativado com NLS de S. pneumonia sorotipo 12F. As culturas foram cultivadas em meio Hy-Soy. No final do cultivo (conforme indicado por nenhum aumento adicional na densidade óptica), as culturas foram tratadas com NLS (ver EP2129693).
2. Floculação
[001229] O objetivo principal desta etapa é precipitar detritos celula- res, proteínas da célula hospedeira e ácidos nucleicos. Ela também auxilia nas operações unitárias de clarificação à jusante. A floculação foi realizada com caldo de fermentação que foi lisado pela adição de NLS.
[001230] Trabalhos precedentes sobre o processo de purificação pa- ra outros sorotipos mostraram que a operação unitária de clarificação foi impactada pelo pH da solução e a concentração de alúmen, mas não pelo tempo de agitação de floculação. A fim de compreender o impacto desses fatores na floculação do sorotipo 12F, um estudo DOE foi conduzido.
[001231] As faixas para cada parâmetro estão listadas na Tabela 25.
Tabela 25 — Faixa de parâmetros para o estudo DOE de floculação do sorotipo 12F EP A Ts
[001232] Uma série de 16 experimentos variando esses 3 parâme- tros foi conduzida (em temperatura ambiente).
[001233] A relação entre cada variável (concentração de alúmen, pH e tempo de floculação) e as respostas (recuperação de PS, OD600 e remoção de proteína) durante o processo de floculação foi analisada por diagramas de predição. A variável menos importante é o tempo de floculação, que quase não tem impacto na remoção da proteína ou na recuperação do polissacarídeo e um impacto muito menor na clarifica- ção, quando a concentração de alúmen e o pH são ajustados em seus pontos médios.
[001234] A concentração de alúmen afeta principalmente a clarifica- ção. A concentração ideal de alúmen está em torno de 2,7%, o que resultou na melhor clarificação, embora a diferença de OD600 seja pequena quando a concentração de alúmen está entre 1,5% a 3,5%. À concentração de alúmen tem algum impacto na recuperação de polis- sacarídeos. Quando aumenta para cerca de 4%, a recuperação do po- lissacarídeo é ligeiramente inferior. O pH da floculação, por outro lado, afeta principalmente a remoção de proteína, com maior remoção de proteína em pH mais baixo. Em pH 3,5 e abaixo, a remoção máxima de impurezas é alcançada.
[001235] Trabalhos em outros sorotipos mostraram que o aumento da temperatura durante a floculação resultou em maior capacidade de filtro de profundidade. Quando a temperatura de floculação foi aumen- tada para 50º C, a clarificação do concentrado aumentou dramatica-
mente (OD600 diminuiu de 0,338 (a 20ºC) para 0,073 (a 50ºC)) e a capacidade do filtro aumentou mais de 8 vezes. Quando uma tempera- tura mais alta foi usada para a floculação, os tamanhos de partícula mudaram dramaticamente para a faixa de tamanho de partícula gran- de, o que tornou a centrifugação mais fácil.
[001236] Outros experimentos também foram realizados para enten- der o impacto da temperatura de floculação no processo de floculação. O caldo de fermentação do sorotipo 12F foi floculado usando alúmen 2%, pH 3,5 a duas temperaturas diferentes durante uma hora. Após a floculação, o caldo foi centrifugado e a clarificação do concentrado foi medida (OD600). O concentrado foi então filtrado através de filtros de profundidade para determinar a capacidade do filtro. O filtrado do filtro de profundidade foi filtrado adicionalmente através de um filtro frontal de 0,45 um usando um modelo Vmax. Os resultados desses experi- mentos são mostrados na Tabela 26. Tabela 26 — Floculação do sorotipo 12F com diferentes temperaturas Lo AA es | Carnanação |U | coure Lranue| sei | cana | >400L/mM? | >90Lm2 |>400Lm? | >80LM2 | >400Lm? de Profundidade
[001237] Pode ser visto na Tabela 26 que o OD600 é menor quando 50ºC foi usado como a temperatura de floculação. Não houve diferen- ça na capacidade do filtro de profundidade para todas as condições, pois a capacidade do filtro não foi atingida para todas elas. No entanto, dados de Vmax a 0,45 um ainda mostram que a floculação em tempe- raturas mais altas é muito melhor.
3. Centrifugação
[001238] A centrifugação foi conduzida para clarificar o concentrado de forma que ele possa ser filtrado com capacidade razoável. A velo- cidade centrífuga foi fixada em 12.000 xd.
4. Filtração de Profundidade
[001239] Embora a centrifugação seja a principal operação unitária de separação sólido / líquido, ela não remove todas as partículas do fluxo de alimentação, uma operação unitária de filtração de profundi- dade foi incorporada entre a centrifugação e a primeira operação unitá- ria de ultrafiltração.
5. Filtragem Opcional de 0,45 mícron
[001240] Embora opcional, um filtro de 0,45 mícron foi usado em al- gumas amostras após a filtração de profundidade.
6. Ultrafiltração / Diafiltração-(UFDF-1)
[001241] A purificação começa com o filtrado de profundidade (da etapa 4 ou 5 acima).
[001242] Esta operação substitui o meio de fermentação gasto por um tampão enquanto reduz os níveis de impurezas da célula hospe- deira de baixo peso molecular e floculante residual (alumínio).
[001243] No trabalho de desenvolvimento para outros sorotipos (ver acima), foi concluído que fosfato de sódio 10 MM, citrato de sódio 25 mM, pH 7,0 é um bom tampão para usar no processo UF / DF. O tam- pão fosfato é usado para ajustar o pH para neutro. O tampão citrato é usado como agente quelante para remover o alumínio.
7. Filtração por Carvão
[001244] Esta operação unitária reduz o nível de impurezas da célula hospedeira, tal como proteínas e ácidos nucleicos, bem como impure- zas coloridas (ver WO 2008/118752).
[001245] O retentado de UFDF1 foi filtrado através de um filtro de disco de carvão R32SP. Os resultados mostram que o carvão tem ex-
celente capacidade de remoção de impurezas relacionadas a proteí- nas e a recuperação do produto da filtração por carvão é muito boa.
[001246] Uma filtração de 0,2 um pós-filtração por carvão foi realiza- da para algumas amostras (opcional).
8. Ultrafiltração / Diafiltração-(UFDF-2)
[001247] Esta operação unitária concentra o produto na concentra- ção desejada e substitui o citrato de sódio 25 mM, fosfato de sódio 10 mM, pH 7,0 pelo tampão correto para conjugação. Esta etapa é reali- zada usando um filtro de peso molecular de corte de 30 kDa.
[001248] A presença de citrato residual pode interferir na química de conjugação. Para reduzir bastante o nível de citrato, os experimentos de diafiltração foram realizados usando diferentes tampões (ver exem- plos 1e 2).
9. Filtração Estéril
[001249] A operação unitária final antes do enchimento dos frascos de armazenamento é uma filtração estéril (filtração de 0,2 mícron).
10. Consistência
[001250] Para demonstrar que o processo de recuperação e purifica- ção descrito acima pode produzir resultados reproduzíveis, três lotes de consistência foram fabricados. O lote de fermentação foi floculado e centrifugado usando o processo descrito acima.
[001251] Os rendimentos de etapa e geral para os três lotes de con- sistência são mostrados na Tabela 27.
Tabela 27 — Rendimentos de etapa e geral para lotes de consistência 12F [operçio União — Tarot T iara T raroos Pretas Ds De Rseestm D | s rsss as a e Pesa a a ss
[001252] Os resultados analíticos para os três lotes de consistência são mostrados na Tabela 28.
Tabela 28 — Resultados analíticos para lotes de consistência de 12F |ensato | tao ao | 11A00s | Ácidos Nucleicos Residuais Exemplo 8. Purificação de polissacarídeos Cp5 e Cp8 de S. aureus
[001253] Este exemplo descreve um processo de purificação para o isolamento de polissacarídeos capsulares tipo 5 (Cp5) e tipo 8 (Cp8) de Staphylococcus aureus.
1. Material de Partida
[001254] O material de partida para o processo de purificação foi a colheita de fermentação de células integrais (não lisadas) de S. au- reus.
2. Hidrólise Ácida
[001255] Após a colheita da fermentação de S. aureus, o caldo de células integrais foi ajustado para pH ácido por adição de ácido forte (por exemplo, ácido sulfúrico), aquecido e, em seguida, incubado por um período de tempo (ver WO 2011/041003). Após a hidrólise, o caldo foi resfriado e então neutralizado pela adição de solução de hidróxido de sódio.
3. Floculação
[001256] A floculação foi realizada pela adição de solução aquosa de alúmen (fosfato de sódio e alumínio) a 10% (p / v) ao caldo neutraliza- do frio (20 - 30ºC) (da etapa 2 acima), com agitação, para gerar a so- lução de alúmen 2% (p / v) final em caldo. O caldo foi neutralizado (pH 6,9 - 7,1) pela adição de solução de hidróxido de sódio (1 - 10 N). Após a neutralização, o caldo floculado foi incubado em temperatura ambiente por pelo menos 10 minutos antes da clarificação por microfil- tração.
4. Clarificação do Caldo (Microfiltração ou Centrifugação)
[001257] O caldo floculado foi clarificado por microfiltração de fluxo tangencial, usando uma membrana de fibra oca de 0,2 um de diâmetro de poro. O produto desejado desta clarificação foi o permeado de am- bos os estágios de concentração e de diafiltração; o retentado é final- mente descartado. O caldo floculado foi concentrado aproximadamen- te 4 vezes sob condições de fluxo constante a uma taxa de cisalha- mento de 4.000 - 8.000 s. Após a concentração, a diafiltração em vo- lume constante (5 diavolumes) foi realizada contra água deionizada. À diafiltração também é realizada em condições de fluxo constante.
[001258] Após a diafiltração, o permeado combinado de ambos os estágios de concentração e diafiltração serviu como alimentação para a próxima operação.
5. Ultrafiltração / Diafiltração-(UFDF-1)
[001259] O permeado de microfiltração foi concentrado e diafiltrado usando uma membrana de ultrafiltração de fluxo tangencial de fibra oca. O retentado foi coletado como produto; o permeado foi descarta- do como resíduo. A alimentação (permeado de microfiltração) foi con- centrada aproximadamente 8 a 15 vezes. Após a concentração, o re- tentado foi diafiltrado (volume constante) contra pelo menos 10 diavo-
lumes de tampão fosfato de sódio 125 mM, pH 7,5.
[001260] Após a diafiltração, o retentado foi recuperado drenando do aparelho de filtro.
[001261] Alternativamente, a centrifugação também pode ser usada como um método de clarificação para separar os detritos de células precipitadas no caldo floculado a partir do líquido. O sobrenadante po- de então ser processado por meio da subsequente etapa de filtração por carvão.
6. Filtração por Carvão
[001262] O retentado de ultrafiltração / diafiltração em seguida foi filtrado usando filtração por carvão. Tanto para a purificação de Cp5 quanto para a purificação de Cp8, foram usados filtros de carvão de grau Cuno R32SP. O retentado foi tipicamente alimentado através do(s) filtro(s) de carvão em operação de passagem única. O filtrado de carvão foi coletado como produto. Após a filtração do produto, o car- vão foi enxaguado com tampão fosfato de sódio 125 mM (pH 7,5). Es- te enxague foi combinado com o produto filtrado, e prossegue para a oxidação com periodato.
7. Oxidação com Periodato
[001263] O filtrado de carvão combinado e o enxágue do filtro pas- sam em seguida por uma reação de oxidação com periodato. Em tem- peratura ambiente, uma solução 1,0 M de ácido periódico é adicionada ao filtrado de carvão / enxague da etapa de purificação precedente (gerando uma concentração final de 50 mM de periodato). Esta mistu- ra reacional foi incubada em temperatura ambiente durante 30 minu- tos. Em seguida, um excesso molar de propileno glicol foi adicionado à mistura reacional para resfriar rapidamente a reação. Após o resfria- mento, os produtos da reação foram neutralizados (pH 6,9 - 7,1) por adição de hidróxido de sódio. A solução do produto reacional segue então para a operação final de ultrafiltração / diafiltração.
8. Ultrafiltração / Diafiltração-(UFDF-2)
[001264] A mistura de produto de oxidação de periodato foi concen- trada e diafiltrada por meio de uma membrana de ultrafiltração de fluxo tangencial de fibra oca. O material foi concentrado 2 - 4 vezes (para cerca de 4 - 8 g / L de Cp5 / Cp8) sob condições TMP constantes e uma taxa de cisalhamento constante. Em seguida, o retentado é diafil- trado (volume constante) contra pelo menos 10 diavolumes de água DI.
[001265] Após a diafiltração, o retentado foi recuperado, e o filtro foi então enxaguado usando um volume mínimo de água DI. O enxague foi drenado e coletado com o retentado; o material combinado foi en- tão esterilizado por filtração.
9. Filtração Estéril
[001266] O retentado e o enxague combinados foram filtrados atra- vés de um filtro de grau esterilizante frontal de tamanho apropriado (poro de 0,2 um) em um recipiente estéril. Este filtrado foi então arma- zenado a 4ºC.
[001267] Todas as publicações e pedidos de patente mencionados na especificação são indicativos do nível dos versados na técnica ao qual esta invenção pertence. Todas as publicações e pedidos de pa- tente são no presente documento incorporados por referência na mesma medida como se cada publicação individual ou pedido de pa- tente fosse específica e individualmente indicado para ser incorporado por referência.
[001268] Embora a invenção precedente tenha sido descrita com al- gum detalhe a título de ilustração e exemplo para fins de esclareci- mento de compreensão, certas alterações e modificações podem ser praticadas dentro do escopo das reivindicações em anexo.

Claims (27)

REIVINDICAÇÕES
1. Método para purificar um polissacarídeo bacteriano a partir de uma solução compreendendo o dito polissacarídeo juntamen- te com contaminantes, caracterizado pelo fato de que o dito método compreende uma etapa de floculação.
2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o agente floculante compreende um cátion multivalen- te selecionado a partir do grupo que consiste de alumínio, ferro, cálcio e magnésio.
3. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o agente floculante compreende um agente selecio- nado a partir do grupo que consiste de alúmen (por exemplo, alúmen de potássio, alúmen de sódio ou alúmen de amônio), cloridrato de alumínio, sulfato de alumínio, óxido de cálcio, hidróxido de cálcio, sul- fato de ferro (II) (sulfato ferroso), cloreto de ferro (III) (cloreto férrico), poliacrilamida, poliacrilamidas modificadas, poliDADMAC, polietileni- mina (PEI), aluminato de sódio e silicato de sódio.
4. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o agente floculante é selecionado a partir do grupo que consiste de alúmen (por exemplo, alúmen de potássio, alúmen de sódio ou alúmen de amônio), cloridrato de alumínio, sulfato de alumí- nio, óxido de cálcio, hidróxido de cálcio, sulfato de ferro (II) (ferroso sulfato), cloreto de ferro (III) (cloreto férrico), poliacrilamida, poliacrila- midas modificadas, poliDADMAC, aluminato de sódio e silicato de só- dio.
5. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que a concentração de agente flocu- lante está entre cerca de 0,1 e cerca de 20% (p / v).
6. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a5, caracterizado pelo fato de que a solução é retida por algum tempo para permitir a sedimentação dos flocos antes do processamen- to à jusante.
7. Método, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que a dita etapa de floculação é realizada em um pH áci- do.
8. Método, de acordo com a reivindicação 6 ou 7, caracteri- zado pelo fato de que a etapa de sedimentação, se presente, é reali- zada a uma temperatura entre cerca de 4ºC e cerca de 30ºC.
9. Método, de acordo com a reivindicação 6 ou 7, caracteri- zado pelo fato de que a etapa de sedimentação, se presente, é reali- zada a uma temperatura entre cerca de 30ºC e cerca de 95ºC.
10. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 9, caracterizado pelo fato de que, após a floculação, a sus- pensão é clarificada por decantação, sedimentação, filtração ou centri- fugação.
11. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracteriza- do pelo fato de que a solução contendo polissacarídeo é filtrada.
12. Método, de acordo com a reivindicação 11, caracteriza- do pelo fato de que a dita filtração é uma filtração de profundidade.
13. Método, de acordo com a reivindicação 11 ou 12, carac- terizado pelo fato de que o filtrado é submetido à microfiltração.
14. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 11 a 13, caracterizado pelo fato de que o filtrado é adicionalmen- te tratado por ultrafiltração e diafiltração.
15. Método, de acordo com a reivindicação 14, caracteriza- do pelo fato de que a dita etapa de ultrafiltração é realizada a uma temperatura entre cerca de 20ºC e cerca de 90ºC.
16. Método, de acordo com a reivindicação 14 ou 15, carac- terizado pelo fato de que a solução de substituição compreende um agente quelante.
17. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 14 a 16, caracterizado pelo fato de que a dita etapa de diafiltra- ção é realizada a uma temperatura entre cerca de 20ºC e cerca de 90ºC.
18. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 10 a 17, caracterizado pelo fato de que a solução contendo o po- lissacarídeo é tratada por uma etapa de filtração por carvão ativado.
19. Método, de acordo com a reivindicação 18, caracteriza- do pelo fato de que o filtrado é submetido à microfiltração.
20. Método, de acordo com a reivindicação 18 ou 19, carac- terizado pelo fato de que o filtrado é adicionalmente clarificado por ul- trafiltração e diafiltração.
21. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracteriza- do pelo fato de que a solução de substituição compreende um agente quelante.
22. Método, de acordo com a reivindicação 20 ou 21, carac- terizado pelo fato de que a dita etapa de diafiltração é realizada a uma temperatura entre cerca de 20ºC e cerca de 90ºC.
23. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 20 a 22, caracterizado pelo fato de que a dita solução purificada de polissacarídeo é homogeneizada por dimensionamento.
24. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 23, caracterizado pelo fato de que a dita solução purificada de polissacarídeo é filtrada de forma estéril.
25. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 24, caracterizado pelo fato de que o dito polissacarídeo bac- teriano é um polissacarídeo capsular.
26. Glicoconjugado de um polissacarídeo bacteriano purifi- cado, caracterizado pelo fato de que é obtido pelo método como defi- nido em qualquer uma das reivindicações 1 a 25.
27. Composição imunogênica, caracterizado pelo fato de que compreende um glicoconjugado como definido na reivindicação
26.
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