KR20210032478A - 알콕시 페닐 유도체, 뉴클레오시드 보호체 및 뉴클레오티드 보호체, 올리고뉴클레오티드 제조 방법, 및 치환기 제거 방법 - Google Patents

알콕시 페닐 유도체, 뉴클레오시드 보호체 및 뉴클레오티드 보호체, 올리고뉴클레오티드 제조 방법, 및 치환기 제거 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 종래보다도 간이 신속한 액상 합성법에 의한 올리고뉴클레오티드의 합성이 가능해지는 알콕시페닐 유도체, 상기 알콕시페닐 유도체가 결합된 뉴클레오시드 보호체 및 뉴클레오티드 보호체, 이들을 이용한 올리고뉴클레오티드의 제조 방법, 및 해당 알콕시페닐 유도체 부분의 선택적인 제거 방법 등을 제공하는 것에 관한 것이다.
본 발명에 따르면, 일반식 (1)로 표시되는 화합물 또는 그 유도체가 제공된다.
[화학식 1]
Figure pct00142

(식중,
R은 각각 독립적으로 치환되어 있을 수 있는 탄소수 10 내지 40의 알킬기를 나타낸다.
m은 1 내지 5의 정수를 나타낸다. m이 2 이상인 경우에는 복수개 존재하는 RO는 동일하거나 상이할 수 있다.
X는 O, S, NH, 또는 NRN을 나타낸다.
n은 1 내지 4의 정수를 나타낸다.
RN은 치환되어 있을 수 있는 탄소수 1 내지 6의 알킬기를 나타낸다.)

Description

알콕시 페닐 유도체, 뉴클레오시드 보호체 및 뉴클레오티드 보호체, 올리고뉴클레오티드 제조 방법, 및 치환기 제거 방법
본 발명은 액상 합성법에 의한 올리고뉴클레오티드의 합성을 가능하게 하는 알콕시 페닐 유도체, 이것을 결합한 뉴클레오시드 보호체 및 뉴클레오티드 보호체, 이것을 이용한 간이적으로 구축 가능한 올리고뉴클레오티드 제조 방법, 및 알콕시 페닐 유도체를 결합한 뉴클레오시드 보호체 또는 뉴클레오티드 보호체의 선택적인 알콕시 페닐 유도체 부분의 제거 방법 등에 관한 것이다.
최근, 올리고뉴클레오티드는 일반적으로는 원료가 되는 뉴클레오티드를 축차적으로 연결해 감으로써 합성 가능하지만, 20 mer 정도 이상의 올리고뉴클레오티드를 합성하는 경우에는 2 내지 3 mer 뉴클레오티드의 빌딩 블록 군을 미리 조제해 두고, 이것의 연결을 반복함으로써 소망하는 사슬 길이의 생성물을 얻는 블록 코폴리머 합성법이나, 10 염기 정도 이상의 올리고뉴클레오티드 간의 연결로 올리고뉴클레오티드를 얻는 유닛 커플링 (프래그먼트 축합) 합성법 등도 이용되고 있다 (예를 들면, 비특허문헌 1 내지 3). 포스포르아미다이트(phosphoramidite)법을 이용한 올리고뉴클레오티드의 고상 합성법은 목적 물질인 올리고뉴클레오티드의 수율을 높이기 위해서는 대과잉 뉴클레오시드포스포르아미다이트 화합물 및 테트라졸계 화합물을 사용해야 한다는 문제점이 있다. 또한, 고상 합성법에서는, 설비면 등의 스케일업에 제한이 있고, 또한 도중 단계에서의 반응 진행 상황의 확인이나 중간체의 구조 해석이 어려운 면이 있다.
한편, 지금까지의 액상 합성법에서는, 뉴클레오티드의 탈보호, 커플링, 산화 등의 각 공정에서의 정제 조작이 필요하여 번잡하게 되는 등, 다중합도의 올리고뉴클레오티드를 신속히 대량으로 합성하는 것이 어려웠다. 이 때문에, 예를 들면, 특허문헌 1, 2에서는, 의사(疑似) 고상 보호기를 이용한 액상 합성이 제안되고 있지만, 예를 들면, 해당 의사(疑似) 고상 보호기의 제거에도 시간을 요하고, 게다가, 의사(疑似) 고상 보호기를 갖는 올리고뉴클레오티드로부터 해당 의사(疑似) 고상 보호기만을 선택적으로 제거하는 것이 곤란하기 때문에, 빌딩 블록이나 프래그먼트의 전구체가 되는 핵산 염기나 인산기가 보호된 뉴클레오티드 (이하, 본 명세서에 있어서, "뉴클레오티드 보호체"라고 부르는 경우도 있다.)의 합성도 곤란했다. 또한, 비특허문헌 4에서는, Pd 촉매를 이용하는 접촉 환원에 의해 의사(疑似) 고상 보호기의 제거가 행해지고 있지만, 독성이 있는 중금속이나 위험한 수소 가스를 사용하여, 탈보호에는 20 내지 40 시간의 장시간을 필요로 하고 있다. 또한, 뉴클레오티드의 보호기의 일반적인 탈보호 조건에서의 의사(疑似) 고상 보호기의 제거는 행해지지 않고 있으며, 그 범용성에 과제가 있었다.
특허문헌 1: 일본 특허 제5548852호 특허문헌 2: 국제공개 제2012/157723호
비특허문헌 1: S. L. Beaucage, D. E. Bergstorm, G. D. Glick, R. A. Jones; Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry; John Wiley & Sons (2000) 비특허문헌 2: 세키네 미츠오, 사이토 이사오 편저, "게놈 케미스트리 - 인공 핵산을 활용하는 과학적 어프로치", 고단샤 사이언티픽 (2003) 비특허문헌 3: C. -H. Chen, et al., Aust. J. Chem., 2010, 63, 227-235. 비특허문헌 4: Y. Matsuno, et al., Org. Lett., 2016, 18, 800-803.
본 발명은 이러한 사정을 감안하여, 올리고뉴클레오티드의 합성뿐만 아니라, 종래에는 곤란했던 올리고뉴클레오티드 보호체의 간이 신속한 합성이 가능해지는 범용성이 높은 알콕시페닐 유도체를 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 올리고뉴클레오티드의 합성뿐만 아니라, 종래에는 곤란했던 올리고뉴클레오티드 보호체의 간이 신속한 합성이 가능해지는 범용성이 높은 상기 알콕시페닐 유도체가 결합된 (이하, 본 명세서에 있어서, "Tag화"라고 부르는 경우도 있다.) 뉴클레오시드 보호체 및 뉴클레오티드 보호체 (이하, 본 명세서에 있어서, 각각, "Tag화 뉴클레오시드 보호체", "Tag화 뉴클레오티드 보호체"라고 부르는 경우도 있다.)를 제공하는 것을 목적으로 한다.
게다가, 본 발명은 상기 알콕시페닐 유도체, 또는 상기 Tag화 뉴클레오시드 보호체 또는 Tag화 뉴클레오티드 보호체를 이용한, 종래보다도 범용성이 높은 올리고뉴클레오티드의 제조 방법 (합성 방법)을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 Tag화 뉴클레오시드 보호체 또는 Tag화 뉴클레오티드 보호체에 있어서의, Tag 부분의 선택적인 제거 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다. 한편, 본 발명에 있어서, "Tag 부분"이란 상기 Tag화 뉴클레오시드 보호체 또는 Tag화 뉴클레오티드 보호체에 있어서의, 상기 알콕시페닐 유도체 유래 부분을 말한다.
본 발명자들은 상기 과제를 해결하기 위하여 심도 깊게 검토한 결과, 이하에 나타낸 신규 알콕시페닐 화합물 및 그 유도체의 창제에 성공하고, 상기 화합물에 의해 상기 목적을 달성할 수 있음을 발견하여, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
즉 본 발명의 화합물 및 그 유도체는 일반식 (1) (이하, 본 명세서에 있어서, "화합물(1)"이라고 부르는 경우도 있다. 또한, 다른 일반식으로 표시되는 화합물도 이것에 준한다.)로 표시된다.
Figure pct00001
(식중,
R은 각각 독립적으로 치환되어 있을 수 있는 탄소수 10 내지 40의 알킬기를 나타낸다.
m은 1 내지 5의 정수를 나타낸다. m이 2 이상인 경우에는 복수개 존재하는 RO는 동일하거나 상이할 수 있다.
X는 O, S, NH, 또는 NRN을 나타낸다.
n은 1 내지 4의 정수를 나타낸다.
RN은 치환되어 있을 수 있는 탄소수 1 내지 6의 알킬기를 나타낸다.)
본 발명의 화합물 또는 그 유도체에 따르면, 상기 일반식 (1)로 표시되는 구조를 가짐으로써, 액상 합성법에 의한 올리고뉴클레오티드의 합성뿐만 아니라, 종래에는 곤란했던 올리고뉴클레오티드 보호체의 합성이 가능해진다. 보다 상세하게는, 본 발명의 화합물 또는 그 유도체 (알콕시페닐 유도체)는 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드와의 결합 반응을 통하여, Tag화 뉴클레오시드 보호체 및 Tag화 뉴클레오티드 보호체를 얻는 것이 가능하다. 그리고, 얻어진 Tag화 뉴클레오시드 보호체 및 Tag화 뉴클레오티드 보호체는 해당 Tag 부분이 상기 구조를 갖기 때문에, 극성 용매의 첨가에 의해, 아미다이트 모노머 등의 부원료 등과 여과 조작 등에 의해 간편하게 분리할 수 있고, 부가적으로 Tag 부분만을 선택적으로 및 신속하게 제거하는 것이 가능하고, 나아가서는 올리고뉴클레오티드의 합성뿐만 아니라, 종래에는 곤란했던 올리고뉴클레오티드 보호체의 합성(제조)이 가능해진다.
한편, 상기 화합물의 유도체는 본 발명의 작용 효과를 손상하지 않는 것이라면, 상기 화합물의 화학 구조를 일부 치환한 것이 널리 포함되고, 예를 들면, 말단의 카르복실기 (-COOH)기의 OH기 부분이 치환기로 치환된 화합물이 포함된다. 상기 치환기로는, 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드와 결합 형성하기 쉽도록 탈리능이 높은 치환기 등을 들 수 있으며, 예를 들면, F, Cl, Br, I 등의 할로겐 원자나, 알콕시기로 치환된 알킬에스테르 구조 등을 들 수 있다. 또한, 상기 치환기로서, 공지의 탈리기를 적절히 이용해도 무방하다.
또한, 본 발명의 화합물 또는 그 유도체에 있어서, 일반식 (2)로 표시되는 화합물 또는 그 유도체인 것이 바람직하다.
Figure pct00002
(식중,
R1, R2, 및 R3은 각각 독립적으로 치환되어 있을 수 있는 탄소수 10 내지 40의 알킬기를 나타낸다.
X는 O, S, NH, 또는 NRN을 나타낸다.
n은 1 내지 4의 정수를 나타낸다.
RN은 치환되어 있을 수 있는 탄소수 1 내지 6의 알킬기를 나타낸다.)
또한, 본 발명의 화합물 또는 그 유도체에 있어서, 일반식 (3)으로 표시되는 화합물 또는 그 유도체일 수 있다.
Figure pct00003
(식중,
R은 각각 독립적으로 치환되어 있을 수 있는 탄소수 10 내지 40의 알킬기를 나타낸다.
m은 1 내지 5의 정수를 나타낸다. m이 2 이상인 경우에는 복수개 존재하는 RO는 동일하거나 상이할 수 있다.
X는 O, S, NH, 또는 NRN을 나타낸다.
n은 1 내지 4의 정수를 나타낸다.
RN은 치환되어 있을 수 있는 탄소수 1 내지 6의 알킬기를 나타낸다.
Y는 하기 일반식 (4) 또는 일반식 (5)를 나타낸다.)
Figure pct00004
(식중,
Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
B는 수소 원자, 보호되어 있을 수 있는 수산기, 또는 할로겐을 나타낸다. B가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 B는 동일하거나 상이할 수 있다.
W는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
R4는 전자 구인성 기를 갖는 탄소수 1 내지 4의 알킬기를 나타낸다. R4가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 R4는 동일하거나 상이할 수 있다.
Z는 O 또는 S를 나타낸다. Z가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Z는 동일하거나 상이할 수 있다.
y1은 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.
*은 상기 일반식 (3)에 있어서의 결합 부위를 나타낸다.)
Figure pct00005
(식중,
Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
Q는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
V는 탄소수 1 내지 6의 알콕시기, 디(C1-6 알킬)아미노기, 또는 4위치 질소 원자가 보호기로 보호되고, 부가적으로 치환되어 있을 수 있는 피페라지노기를 나타낸다. V가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 V는 동일하거나 상이할 수 있다.
y2는 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.
*은 상기 일반식 (3)에 있어서의 결합 부위를 나타낸다.)
상기 구성을 갖는 경우, 상기 Tag화 뉴클레오시드 보호체 및 Tag화 뉴클레오티드 보호체가 되지만, Tag 부분이 상기 구조를 갖기 때문에, 특히 액상 합성 (의사(疑似) 액상 합성을 포함한다)에 있어서, 극성 용매의 첨가에 의해, 아미다이트 모노머 등의 부원료 등과 여과 조작 등에 의해 간편하게 분리할 수 있고, 부가적으로 Tag 부분만을 선택적으로 및 신속하게 제거하는 것이 가능하고, 올리고뉴클레오티드의 합성뿐만 아니라, 종래에는 곤란했던 올리고뉴클레오티드 보호체의 합성이 가능해진다.
또한, 본 발명에 있어서의 뉴클레오시드는 일반적으로는 퓨린 또는 피리미딘 염기와 당이 글리코시드 결합된 것을 나타내지만, 본 발명의 작용 효과를 손상하지 않는 것이라면, 그 유사체나 해당 일반 구조를 일부 치환한 것이 널리 포함된다. 예를 들면, 염기 부분이 반드시 퓨린 또는 피리미딘 구조가 아닌 것 (예를 들면, 수식 염기 등)이나, 당 부분이 D-리보오스 또는 데옥시-D-리보오스가 아닌 것 (예를 들면, 일반식 (5), (8)로 표시되는 것 같은 몰포리노형 몰포리노뉴클레오시드) 등을 들 수 있다.
또한, 본 발명에 있어서의 뉴클레오티드는 일반적으로는 퓨린 또는 피리미딘 염기와 당이 글리코시드 결합된 상기 뉴클레오시드의 인산 에스테르를 나타내지만, 본 발명의 작용 효과를 손상하지 않는 것이라면, 그 유사체나 해당 일반 구조를 일부 치환한 것이 널리 포함된다. 예를 들면, 염기 부분이 반드시 퓨린 또는 피리미딘 구조가 아닌 것 (예를 들면, 수식 염기 등)이나, 당 부분이 D-리보오스 또는 데옥시-D-리보오스가 아닌 것 (예를 들면, 몰포리노형 몰포리노뉴클레오티드), 또한, 인산 에스테르 부분의 하나의 O 원자가 S 원자로 치환된 포스포로티오에이트의 경우 등을 들 수 있다.
또한, 본 발명의 화합물 또는 그 유도체에 있어서, 일반식 (6)으로 표시되는 화합물 또는 그 유도체인 것이 바람직하다.
Figure pct00006
(식중,
R1, R2, 및 R3은 각각 독립적으로 치환되어 있을 수 있는 탄소수 10 내지 40의 알킬기를 나타낸다.
X는 O, S, NH, 또는 NRN을 나타낸다.
n은 1 내지 4의 정수를 나타낸다.
RN은 치환되어 있을 수 있는 탄소수 1 내지 6의 알킬기를 나타낸다.
Y는 하기 일반식 (4) 또는 일반식 (5)를 나타낸다.)
Figure pct00007
(식중,
Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
B는 수소 원자, 보호되어 있을 수 있는 수산기, 또는 할로겐을 나타낸다. B가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 B는 동일하거나 상이할 수 있다.
W는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
R4는 전자 구인성 기를 갖는 탄소수 1 내지 4의 알킬기를 나타낸다. R4가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 R4는 동일하거나 상이할 수 있다.
Z는 O 또는 S를 나타낸다. Z가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Z는 동일하거나 상이할 수 있다.
y1은 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.
*은 상기 일반식 (6)에 있어서의 결합 부위를 나타낸다.)
Figure pct00008
(식중,
Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
Q는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
V는 탄소수 1 내지 6의 알콕시기, 디(C1-6 알킬)아미노기, 또는 4위치 질소 원자가 보호기로 보호되고, 더 치환되어 있을 수 있는 피페라지노기를 나타낸다. V가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 V는 동일하거나 상이할 수 있다.
y2는 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.
*은 상기 일반식 (6)에 있어서의 결합 부위를 나타낸다.)
또한, 본 발명의 화합물 또는 그 유도체에 있어서, W는 수소 원자, 트리틸기, 디(C1-6 알콕시)트리틸기, 모노(C1-18 알콕시)트리틸기, 9-(9-페닐)크산테닐기, 또는 9-(9-페닐)티오크산테닐기인 것이 바람직하다. W가 상기 중 어느 하나인 경우, 보다 간편하게 올리고뉴클레오티드의 합성을 행할 수 있다.
또한, 본 발명의 화합물 또는 그 유도체에 있어서, R4는 2위치에 전자 구인성 기를 갖는 에틸기인 것이 바람직하다.
또한, 본 발명의 화합물 또는 그 유도체에 있어서, Q는 수소 원자, 트리틸기, 디(C1-6 알콕시)트리틸기, 모노(C1-18 알콕시)트리틸기, 9-(9-페닐)크산테닐기, 또는 9-(9-페닐)티오크산테닐기인 것이 바람직하다. Q가 상기 중 어느 하나인 경우, 보다 간편하게 올리고뉴클레오티드의 합성을 행할 수 있다.
또한, 본 발명의 화합물 또는 그 유도체에 있어서, y1 또는 y2가 1 내지 100일 수 있다.
또한, 본 발명의 화합물 또는 그 유도체에 있어서, y1 또는 y2가 1 내지 30일 수 있다.
또한, 본 발명의 화합물 또는 그 유도체에 있어서, y1 또는 y2가 0일 수 있다.
또한, 본 발명의 화합물 또는 그 유도체에 있어서, n이 1 또는 2인 것이 바람직하다.
또한, 본 발명의 화합물 또는 그 유도체에 있어서, m이 2 내지 4의 정수인 것이 바람직하다.
한편, 본 발명의 제조 방법은 일반식 (3)으로 표시되는 화합물 또는 그 유도체를 환원 처리하는 일반식 (7) 또는 (8)로 표시되는 화합물을 얻는 공정 (1)을 포함하는 것이다.
Figure pct00009
(식중,
R은 각각 독립적으로 치환되어 있을 수 있는 탄소수 10 내지 40의 알킬기를 나타낸다.
m은 1 내지 5의 정수를 나타낸다. m이 2 이상인 경우에는 복수개 존재하는 RO는 동일하거나 상이할 수 있다.
X는 O, S, NH, 또는 NRN을 나타낸다.
n은 1 내지 4의 정수를 나타낸다.
RN은 치환되어 있을 수 있는 탄소수 1 내지 6의 알킬기를 나타낸다.
Y는 하기 일반식 (4) 또는 일반식 (5)를 나타낸다.)
Figure pct00010
(식중,
Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
B는 수소 원자, 보호되어 있을 수 있는 수산기, 또는 할로겐을 나타낸다. B가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 B는 동일하거나 상이할 수 있다.
W는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
R4는 전자 구인성 기를 갖는 탄소수 1 내지 4의 알킬기를 나타낸다. R4가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 R4는 동일하거나 상이할 수 있다.
Z는 O 또는 S를 나타낸다. Z가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Z는 동일하거나 상이할 수 있다.
y1은 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.
*은 상기 일반식 (3)에 있어서의 결합 부위를 나타낸다.)
Figure pct00011
(식중,
Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
Q는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
V는 탄소수 1 내지 6의 알콕시기, 디(C1-6 알킬)아미노기, 또는 4위치 질소 원자가 보호기로 보호되고, 더 치환되어 있을 수 있는 피페라지노기를 나타낸다. V가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 V는 동일하거나 상이할 수 있다.
y2는 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.
*은 상기 일반식 (3)에 있어서의 결합 부위를 나타낸다.)
Figure pct00012
(식중,
Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
B는 수소 원자, 보호되어 있을 수 있는 수산기, 또는 할로겐을 나타낸다. B가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 B는 동일하거나 상이할 수 있다.
W는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
R4는 전자 구인성 기를 갖는 탄소수 1 내지 4의 알킬기를 나타낸다. R4가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 R4는 동일하거나 상이할 수 있다.
Z는 O 또는 S를 나타낸다. Z가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Z는 동일하거나 상이할 수 있다.
y1은 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.)
Figure pct00013
(식중,
Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
Q는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
V는 탄소수 1 내지 6의 알콕시기, 디(C1-6 알킬)아미노기, 또는 4위치 질소 원자가 보호기로 보호되고, 더 치환되어 있을 수 있는 피페라지노기를 나타낸다. V가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 V는 동일하거나 상이할 수 있다.
y2는 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.)
본 발명의 제조 방법에 따르면, 상기 Tag화 뉴클레오시드 보호체 및 Tag화 뉴클레오티드 보호체를 이용하기 때문에, 특히 액상 합성 (의사(疑似) 액상 합성을 포함한다)에 있어서, 극성 용매의 첨가에 의해, 아미다이트 모노머 등의 부원료 등과 여과 조작 등에 의해 간편하게 분리할 수 있고, 부가적으로 Tag 부분만을 선택적으로 및 신속하게 제거하는 것이 가능하고, 올리고뉴클레오티드의 합성뿐만 아니라, 종래에는 곤란했던 올리고뉴클레오티드 보호체의 합성이 가능해진다. 또한, 예를 들면, 특허문헌 2의 제안에 비하여, 본 발명의 제조 방법에서는, 보다 온화한 조건하 (예를 들면, 암모니아수 중 35℃)에서의 치환기 제거 (Tag 부분의 탈리 반응)이 가능해지고, 또한, 보다 단시간에서의 제조가 가능해진다.
또한, 본 발명의 올리고뉴클레오티드 보호체의 제조 방법에 있어서, 일반식 (6)으로 표시되는 화합물 또는 그 유도체를 환원 처리하는 공정 (1)을 포함하는 것이 바람직하다.
Figure pct00014
(식중,
R1, R2, 및 R3은 각각 독립적으로 치환되어 있을 수 있는 탄소수 10 내지 40의 알킬기를 나타낸다.
X는 O, S, NH, 또는 NRN을 나타낸다.
n은 1 내지 4의 정수를 나타낸다.
RN은 치환되어 있을 수 있는 탄소수 1 내지 6의 알킬기를 나타낸다.
Y는 하기 일반식 (4) 또는 일반식 (5)를 나타낸다.)
Figure pct00015
(식중,
Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
B는 수소 원자, 보호되어 있을 수 있는 수산기, 또는 할로겐을 나타낸다. B가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 B는 동일하거나 상이할 수 있다.
W는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
R4는 전자 구인성 기를 갖는 탄소수 1 내지 4의 알킬기를 나타낸다. R4가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 R4는 동일하거나 상이할 수 있다.
Z는 O 또는 S를 나타낸다. Z가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Z는 동일하거나 상이할 수 있다.
y1은 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.
*은 상기 일반식 (6)에 있어서의 결합 부위를 나타낸다.)
Figure pct00016
(식중,
Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
Q는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
V는 탄소수 1 내지 6의 알콕시기, 디(C1-6 알킬)아미노기, 또는 4위치 질소 원자가 보호기로 보호되고, 더 치환되어 있을 수 있는 피페라지노기를 나타낸다. V가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 V는 동일하거나 상이할 수 있다.
y2는 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.
*은 상기 일반식 (6)에 있어서의 결합 부위를 나타낸다.)
Figure pct00017
(식중,
Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
B는 수소 원자, 보호되어 있을 수 있는 수산기, 또는 할로겐을 나타낸다. B가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 B는 동일하거나 상이할 수 있다.
W는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
R4는 전자 구인성 기를 갖는 탄소수 1 내지 4의 알킬기를 나타낸다. R4가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 R4는 동일하거나 상이할 수 있다.
Z는 O 또는 S를 나타낸다. Z가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Z는 동일하거나 상이할 수 있다.
y1은 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.)
Figure pct00018
(식중,
Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
Q는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
V는 탄소수 1 내지 6의 알콕시기, 디(C1-6 알킬)아미노기, 또는 4위치 질소 원자가 보호기로 보호되고, 더 치환되어 있을 수 있는 피페라지노기를 나타낸다. V가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 V는 동일하거나 상이할 수 있다.
y2는 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.)
또한, 본 발명의 제조 방법에 있어서, 상기 환원 처리는 붕소 함유 환원제를 이용하거나 또는 붕소 함유 환원제 및 아민을 이용하는 것임이 바람직하다. 상기 구성을 가짐으로써, 올리고뉴클레오티드 보호체를 보다 간편하게 합성할 수 있다.
또한, 본 발명의 제조 방법에 있어서, 상기 붕소 함유 환원제는 수소화 붕소 리튬, 수소화 붕소 나트륨, 수소화 트리에틸 붕소 리튬, 수소화 붕소 테트라부틸암모늄인 것이 바람직하다. 상기 구성을 가짐으로써, 올리고뉴클레오티드 보호체를 보다 수율 좋게 간편하게 합성할 수 있다.
또한, 본 발명의 제조 방법에 있어서, W는 수소 원자, 트리틸기, 디(C1-6 알콕시)트리틸기, 모노(C1-18 알콕시)트리틸기, 9-(9-페닐)크산테닐기, 또는 9-(9-페닐)티오크산테닐기인 것이 바람직하다. W가 상기 중 어느 하나인 경우, 보다 간편하게 올리고뉴클레오티드 보호체의 합성을 행할 수 있다.
또한, 본 발명의 제조 방법에 있어서, R4는 2위치에 전자 구인성 기를 갖는 에틸기인 것이 바람직하다.
또한, 본 발명의 제조 방법에 있어서, Q는 수소 원자, 트리틸기, 디(C1-6 알콕시)트리틸기, 모노(C1-18 알콕시)트리틸기, 9-(9-페닐)크산테닐기, 또는 9-(9-페닐)티오크산테닐기인 것이 바람직하다. Q가 상기 중 어느 하나인 경우, 보다 간편하게 올리고뉴클레오티드의 합성을 행할 수 있다.
또한, 본 발명의 제조 방법에 있어서, y1 또는 y2가 1 내지 100일 수 있다.
또한, 본 발명의 제조 방법에 있어서, y1 또는 y2가 1 내지 30일 수 있다.
또한, 본 발명의 제조 방법에 있어서, y1 또는 y2가 0일 수 있다.
또한, 본 발명의 제조 방법에 있어서, n이 1 또는 2인 것이 바람직하다.
또한, 본 발명의 제조 방법에 있어서, m이 2 내지 4의 정수인 것이 바람직하다.
다른 한편, 본 발명의 Tag 부분 제거 방법 (치환기 제거 방법)은 일반식 (3)으로 표시되는 화합물 또는 그 유도체를 환원 처리하는 공정 (1)을 포함한다.
Figure pct00019
(식중,
R은 각각 독립적으로 치환되어 있을 수 있는 탄소수 10 내지 40의 알킬기를 나타낸다.
m은 1 내지 5의 정수를 나타낸다. m이 2 이상인 경우에는 복수개 존재하는 RO는 동일하거나 상이할 수 있다.
X는 O, S, NH, 또는 NRN을 나타낸다.
n은 1 내지 4의 정수를 나타낸다.
RN은 치환되어 있을 수 있는 탄소수 1 내지 6의 알킬기를 나타낸다.
Y는 하기 일반식 (4) 또는 일반식 (5)를 나타낸다.)
Figure pct00020
(식중,
Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
B는 수소 원자, 보호되어 있을 수 있는 수산기, 또는 할로겐을 나타낸다. B가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 B는 동일하거나 상이할 수 있다.
W는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
R4는 전자 구인성 기를 갖는 탄소수 1 내지 4의 알킬기를 나타낸다. R4가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 R4는 동일하거나 상이할 수 있다.
Z는 O 또는 S를 나타낸다. Z가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Z는 동일하거나 상이할 수 있다.
y1은 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.
*은 상기 일반식 (3)에 있어서의 결합 부위를 나타낸다.)
Figure pct00021
(식중,
Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
Q는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
V는 탄소수 1 내지 6의 알콕시기, 디(C1-6 알킬)아미노기, 또는 4위치 질소 원자가 보호기로 보호되고, 더 치환되어 있을 수 있는 피페라지노기를 나타낸다. V가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 V는 동일하거나 상이할 수 있다.
y2는 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.
*은 상기 일반식 (3)에 있어서의 결합 부위를 나타낸다.)
본 발명의 Tag 부분 제거 방법에 따르면, 상기 Tag화 뉴클레오시드 보호체 및 Tag화 뉴클레오티드 보호체를 이용하기 때문에, 해당 Tag 부분만을 선택적으로 및 신속하게 제거하는 것이 가능하다. 또한, 상기 작용 효과를 발휘하는 것은 일반식 (3) 등에 있어서의 페닐기에 직접 결합되어 있는 카르보닐기 (C=O기), 및 해당 카르보닐기에 결합되어 있는 X 원자 (O, S, NH, 또는 NRN)가 LiBH4 등의 환원제와 어떠한 상호 작용을 형성하고, 보다 바람직하게 환원 반응이 Tag 화합물 부위에서 행해지기 쉽게 되기 때문에, 선택적으로, 보다 신속하게 제거 반응이 진행되는 것이 아닐까라고 추측하고 있지만, 해당 추측에 의해 권리 범위를 한정하는 것은 아니다.
또한, 본 발명의 Tag 부분 제거 방법에 있어서, 일반식 (6)으로 표시되는 화합물 또는 그 유도체를 환원 처리하는 공정 (1)을 포함하는 것이 바람직하다.
Figure pct00022
(식중,
R1, R2, 및 R3은 각각 독립적으로 치환되어 있을 수 있는 탄소수 10 내지 40의 알킬기를 나타낸다.
X는 O, S, NH, 또는 NRN을 나타낸다.
n은 1 내지 4의 정수를 나타낸다.
RN은 치환되어 있을 수 있는 탄소수 1 내지 6의 알킬기를 나타낸다.
Y는 하기 일반식 (4) 또는 일반식 (5)를 나타낸다.)
Figure pct00023
(식중,
Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
B는 수소 원자, 보호되어 있을 수 있는 수산기, 또는 할로겐을 나타낸다. B가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 B는 동일하거나 상이할 수 있다.
W는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
R4는 전자 구인성 기를 갖는 탄소수 1 내지 4의 알킬기를 나타낸다. R4가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 R4는 동일하거나 상이할 수 있다.
Z는 O 또는 S를 나타낸다. Z가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Z는 동일하거나 상이할 수 있다.
y1은 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.
*은 상기 일반식 (6)에 있어서의 결합 부위를 나타낸다.)
Figure pct00024
(식중,
Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
Q는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
V는 탄소수 1 내지 6의 알콕시기, 디(C1-6 알킬)아미노기, 또는 4위치 질소 원자가 보호기로 보호되고, 더 치환되어 있을 수 있는 피페라지노기를 나타낸다. V가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 V는 동일하거나 상이할 수 있다.
y2는 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.
*은 상기 일반식 (6)에 있어서의 결합 부위를 나타낸다.)
또한, 본 발명의 Tag 부분 제거 방법에 있어서, 상기 환원 처리는 붕소 함유 환원제를 이용하거나 또는 붕소 함유 환원제 및 아민을 이용하는 것임이 바람직하다. 상기 구성을 가짐으로써, Tag화 뉴클레오시드 보호체 또는 Tag화 뉴클레오티드 보호체에 있어서의, Tag 부분의 선택적 제거를 간편하게 행할 수 있다.
또한, 본 발명의 Tag 부분 제거 방법에 있어서, 상기 붕소 함유 환원제는 수소화 붕소 리튬, 수소화 붕소 나트륨, 수소화 트리에틸 붕소 리튬, 수소화 붕소 테트라부틸암모늄인 것이 바람직하다. 상기 구성을 가짐으로써, Tag화 뉴클레오시드 보호체 또는 Tag화 뉴클레오티드 보호체에 있어서의, Tag 부분의 선택적 제거를 보다 수율 좋게 행할 수 있다.
본 발명의 화합물 또는 그 유도체 (화합물 (1), (2) 등. 알콕시페닐 유도체.) 는 신규 화합물이며, 이것을 이용함으로써, 상기 Tag화 뉴클레오시드 보호체 및 뉴클레오티드 보호체를 간편하게 얻는 것이 가능해진다.
또한, 본 발명의 화합물 또는 그 유도체 (화합물 (3), (6) 등. Tag화 뉴클레오시드 보호체 및 Tag화 뉴클레오티드 보호체 등.)는 Tag 부분이 상기 구조를 갖기 때문에, 특히 액상 합성 (의사(疑似) 액상 합성을 포함한다)에 있어서, 극성 용매의 첨가에 의해, 아미다이트 모노머 등의 부원료 등과 여과 조작 등에 의해 간편하게 분리할 수 있고, 부가적으로 Tag 부분만을 선택적으로 및 신속하게 제거하는 것이 가능하고, 액상 합성법에 의한 올리고뉴클레오티드의 합성뿐만 아니라, 종래에는 곤란했던 올리고뉴클레오티드 보호체의 합성이 가능해진다.
또한, 본 발명의 화합물 또는 그 유도체 (화합물(7), (8) 등. 올리고뉴클레오티드 등.)의 제조 방법은 상기 Tag화 뉴클레오시드 보호체 및 Tag화 뉴클레오티드 보호체를 이용하기 때문에, 종래보다도 간이 신속한 액상 합성법에 의한 올리고뉴클레오티드의 합성이 가능해진다.
또한, 본 발명의 화합물 또는 그 유도체 (화합물(1), (2), (3), (6) 등. 알콕시페닐 유도체, Tag화 뉴클레오시드 보호체 및 Tag화 뉴클레오티드 보호체 등.)의 Tag 부분 제거 방법 (치환기 제거 방법)은 상기 Tag화 뉴클레오시드 보호체 및 Tag화 뉴클레오티드 보호체를 이용하기 때문에, 해당 Tag 부분만을 온화한 조건하에서 선택적으로 및 신속하게 제거하는 것이 가능하다.
이하, 본 발명의 실시형태에 대하여 상세하게 설명한다.
〔알콕시페닐 화합물 및 그 유도체〕
본 발명의 알콕시페닐 화합물 및 그 유도체는 일반식 (1)로 표시되는 화합물 또는 그 유도체이다.
Figure pct00025
(식중,
R은 각각 독립적으로 치환되어 있을 수 있는 탄소수 10 내지 40의 알킬기를 나타낸다.
m은 1 내지 5의 정수를 나타낸다. m이 2 이상인 경우에는 복수개 존재하는 RO는 동일하거나 상이할 수 있다.
X는 O, S, NH, 또는 NRN을 나타낸다.
n은 1 내지 4의 정수를 나타낸다.
RN은 치환되어 있을 수 있는 탄소수 1 내지 6의 알킬기를 나타낸다.)
상기 일반식 (1)에 있어서, R은 각각 독립적으로 치환되어 있을 수 있는 탄소수 10 내지 40의 알킬기를 나타낸다. 상기 R은 탄소수 13 내지 30의 알킬기일 수 있고, 탄소수 15 내지 20의 알킬기일 수 있고, 그 중에서도 탄소수 18의 알킬기가 바람직한 것으로 들 수 있다. 또한, 상기 R은 복수개 존재하는 경우에는 각각 독립적으로 직쇄 알킬기일 수 있고, 분기 알킬기일 수 있지만, 직쇄 알킬기인 것이 바람직하다. 또한, 상기 R이 탄소원자수 10 내지 40의 알킬기인 것에 의해, 본 발명의 Tag화 뉴클레오시드 보호체 및 Tag화 뉴클레오티드 보호체의 합성이 용이하게 됨과 아울러, 용해도나 분리능의 향상 작용도 얻을 수 있다.
상기 일반식 (1)에 있어서, m은 1 내지 5의 정수를 나타낸다. m이 2 이상인 경우에는 복수개 존재하는 RO는 동일하거나 상이할 수 있다. m이 2 내지 4의 정수인 것이 바람직하고, m이 3인 것이 보다 바람직하다. 또한, 상기 RO기는 페닐기에 직접 결합되어 있는 카르보닐기 (C = O기)를 1위치로 한 경우, 3위치, 4위치 또는 5위치에 결합되어 있는 것이 바람직하고, m = 3인 경우에는 3위치, 4위치, 또는 5위치에 결합되어 있는 것이 바람직하다. 또한, 상기 m의 값을 상기 범위 내에서 조정함으로써, 본 발명의 Tag화 뉴클레오시드 보호체 및 Tag화 뉴클레오티드 보호체의 비극성 용매에 대한 용해 능력을 조정할 수 있다.
상기 일반식 (1)에 있어서, X는 O, S, NH, 또는 NRN을 나타낸다. 그 중에서도, X가 O인 것이 바람직하다.
상기 일반식 (1)에 있어서, n은 1 내지 4의 정수를 나타낸다. 그 중에서도, n이 1 또는 2인 것이 바람직하다.
상기 일반식 (1)에 있어서, RN은 치환되어 있을 수 있는 탄소수 1 내지 6의 알킬기를 나타낸다. 상기 RN으로는, 예를 들면, 메틸기, 에틸기, 1-프로필기, 1-메틸-1-에틸기, 1-부틸기, 1-메틸-1-프로필기, 1,1-디메틸-1-에틸기, 2-메틸-1-프로필기, 1-펜틸기, 2-펜틸기를 들 수 있다.
또한, 본 발명에 있어서, 상기 알콕시페닐 화합물 및 그 유도체는 일반식 (2)로 표시되는 화합물 또는 그 유도체인 것이 바람직하다.
Figure pct00026
(식중,
R1, R2, 및 R3은 각각 독립적으로 치환되어 있을 수 있는 탄소수 10 내지 40의 알킬기를 나타낸다.
X는 O, S, NH, 또는 NRN을 나타낸다.
n은 1 내지 4의 정수를 나타낸다.
RN은 치환되어 있을 수 있는 탄소수 1 내지 6의 알킬기를 나타낸다.)
상기 일반식 (2)에 있어서, R1, R2, 및 R3은 각각 독립적으로 치환되어 있을 수 있는 탄소수 10 내지 40의 알킬기를 나타낸다. 상기 R1, R2, 및 R3은 탄소수 13 내지 30의 알킬기일 수 있고, 탄소수 15 내지 20의 알킬기일 수 있고, 그 중에서도 탄소수 18의 알킬기가 바람직한 것으로 들 수 있다. 또한, 상기 R1, R2, 및 R3은 각각 독립적으로 직쇄 알킬기일 수 있고, 분기 알킬기일 수 있지만, 모두 직쇄 알킬기인 것이 바람직하다.
상기 일반식 (2)에 있어서, X, n, 및 RN은 상기 일반식 (1)과 마찬가지이다.
또한, 본 발명의 알콕시페닐 화합물 및 그 유도체는 그 합성 수법을 실시예에 예시하고 있지만, 기타 시판 원료를 이용하여 공지의 방법을 이용하여 합성해도 무방하다.
〔Tag화 뉴클레오시드 보호체 및 Tag화 뉴클레오티드 보호체 등〕
본 발명에 있어서의 Tag화 뉴클레오시드 보호체 및 Tag화 뉴클레오티드 보호체는 일반식 (3)으로 표시되는 화합물 또는 그 유도체이다.
Figure pct00027
(식중,
R은 각각 독립적으로 치환되어 있을 수 있는 탄소수 10 내지 40의 알킬기를 나타낸다.
m은 1 내지 5의 정수를 나타낸다. m이 2 이상인 경우에는 복수개 존재하는 RO는 동일하거나 상이할 수 있다.
X는 O, S, NH, 또는 NRN을 나타낸다.
n은 1 내지 4의 정수를 나타낸다.
RN은 치환되어 있을 수 있는 탄소수 1 내지 6의 알킬기를 나타낸다.
Y는 하기 일반식 (4) 또는 일반식 (5)를 나타낸다.)
Figure pct00028
(식중,
Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
B는 수소 원자, 보호되어 있을 수 있는 수산기, 또는 할로겐을 나타낸다. B가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 B는 동일하거나 상이할 수 있다.
W는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
R4는 전자 구인성 기를 갖는 탄소수 1 내지 4의 알킬기를 나타낸다. R4가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 R4는 동일하거나 상이할 수 있다.
Z는 O 또는 S를 나타낸다. Z가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Z는 동일하거나 상이할 수 있다.
y1은 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.
*은 상기 일반식 (3)에 있어서의 결합 부위를 나타낸다.)
Figure pct00029
(식중,
Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
Q는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
V는 탄소수 1 내지 6의 알콕시기, 디(C1-6 알킬)아미노기, 또는 4위치 질소 원자가 보호기로 보호되고, 더 치환되어 있을 수 있는 피페라지노기를 나타낸다. V가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 V는 동일하거나 상이할 수 있다.
y2는 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.
*은 상기 일반식 (3)에 있어서의 결합 부위를 나타낸다.)
상기 일반식 (3)에 있어서, R, m, X, n, RN은 상기 일반식 (1)과 마찬가지이다.
상기 일반식 (3)에 있어서, Y는 하기 일반식 (4) 또는 일반식 (5)를 나타낸다.
상기 일반식 (4)에 있어서, Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
상기 Base로는, 예를 들면, 아데닐기, 구아닐기, 시토실기, 티미닐기, 또는 우라실기, 및 이들의 유도체, 및 이들의 수식체를 들 수 있다. 상기 수식체로는, 예를 들면, 극성기 등의 공지의 보호기 등으로 보호된 것일 수 있다. 또한, 올리고뉴클레오티드 중에 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
상기 일반식 (4)에 있어서, B는 수소 원자, 보호되어 있을 수 있는 수산기, 또는 할로겐을 나타낸다. B가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 B는 동일하거나 상이할 수 있다. 또한, 보호되어 있는 수산기의 경우에는 보호기, 보호 방법으로서 공지의 수법을 적절히 이용할 수 있다.
상기 일반식 (4)에 있어서, W는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다. W가 보호기인 경우에는 보호기, 보호 방법으로서 공지의 수법을 적절히 이용할 수 있다.
또한, W는 수소 원자, 트리틸기, 디(C1-6 알콕시)트리틸기, 모노(C1-18 알콕시)트리틸기, 9-(9-페닐)크산테닐기, 또는 9-(9-페닐)티오크산테닐기인 것이 바람직하다. W가 상기 중 어느 하나인 경우, 보다 간편하게 올리고뉴클레오티드의 합성을 행할 수 있다.
상기 일반식 (4)에 있어서, R4는 전자 구인성 기를 갖는 탄소수 1 내지 4의 알킬기를 나타낸다. R4가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 R4는 동일하거나 상이할 수 있다. 또한, R4는 2위치에 전자 구인성 기를 갖는 에틸기인 것이 바람직하다. 또한, 상기 전자 구인성 기로는, 예를 들면, 시아노기를 바람직한 예로서 들 수 있다.
상기 일반식 (4)에 있어서, Z는 O 또는 S를 나타낸다. Z가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Z는 동일하거나 상이할 수 있다.
상기 일반식 (4)에 있어서, y1은 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다. y1은 1 내지 100일 수 있고, 1 내지 50일 수 있고, 1 내지 30일 수 있고, 1 내지 20일 수 있고, 1 내지 10일 수 있고, 0일 수 있다.
상기 일반식 (4)에 있어서, *은 상기 일반식 (3)에 있어서의 결합 부위를 나타낸다.
상기 일반식 (5)에 있어서, Base는 상기 일반식 (4)와 마찬가지이다.
상기 일반식 (5)에 있어서, Q는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다. Q가 보호기인 경우에는 보호기, 보호 방법으로서 공지의 수법을 적절히 이용할 수 있다.
또한, Q는 수소 원자, 트리틸기, 디(C1-6 알콕시)트리틸기, 모노(C1-18 알콕시)트리틸기, 9-(9-페닐)크산테닐기, 또는 9-(9-페닐)티오크산테닐기인 것이 바람직하다. Q가 상기 중 어느 하나인 경우, 보다 간편하게 올리고뉴클레오티드의 합성을 행할 수 있다.
상기 일반식 (5)에 있어서, V는 탄소수 1 내지 6의 알콕시기, 디(C1-6 알킬)아미노기, 또는 4위치 질소 원자가 보호기로 보호되고, 더 치환되어 있을 수 있는 피페라지노기를 나타낸다. V가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 V는 동일하거나 상이할 수 있다.
상기 일반식 (5)에 있어서, y2는 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다. y2는 1 내지 100일 수 있고, 1 내지 50일 수 있고, 1 내지 30일 수 있고, 1 내지 20일 수 있고, 1 내지 10일 수 있고, 0일 수 있다.
상기 일반식 (5)에 있어서, *은 상기 일반식 (3)에 있어서의 결합 부위를 나타낸다.
또한, 본 발명의 Tag화 뉴클레오시드 보호체 및 Tag화 뉴클레오티드 보호체는 일반식 (6)으로 표시되는 화합물 또는 그 유도체인 것이 바람직하다.
Figure pct00030
(식중,
R1, R2, 및 R3은 각각 독립적으로 치환되어 있을 수 있는 탄소수 10 내지 40의 알킬기를 나타낸다.
X는 O, S, NH, 또는 NRN을 나타낸다.
n은 1 내지 4의 정수를 나타낸다.
RN은 치환되어 있을 수 있는 탄소수 1 내지 6의 알킬기를 나타낸다.
Y는 하기 일반식 (4) 또는 일반식 (5)를 나타낸다.)
Figure pct00031
(식중,
Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
B는 수소 원자, 보호되어 있을 수 있는 수산기, 또는 할로겐을 나타낸다. B가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 B는 동일하거나 상이할 수 있다.
W는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
R4는 전자 구인성 기를 갖는 탄소수 1 내지 4의 알킬기를 나타낸다. R4가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 R4는 동일하거나 상이할 수 있다.
Z는 O 또는 S를 나타낸다. Z가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Z는 동일하거나 상이할 수 있다.
y1은 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.
*은 상기 일반식 (6)에 있어서의 결합 부위를 나타낸다.)
Figure pct00032
(식중,
Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
Q는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
V는 탄소수 1 내지 6의 알콕시기, 디(C1-6 알킬)아미노기, 또는 4위치 질소 원자가 보호기로 보호되고, 더 치환되어 있을 수 있는 피페라지노기를 나타낸다. V가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 V는 동일하거나 상이할 수 있다.
y2는 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.
*은 상기 일반식 (6)에 있어서의 결합 부위를 나타낸다.)
상기 일반식 (6)에 있어서, R1, R2, R3, X, n, 및 RN은 상기 일반식 (2)와 마찬가지이다.
상기 일반식 (6)에 있어서, Y는 상기 일반식 (3)과 마찬가지이다.
또한, 본 발명의 Tag화 뉴클레오시드 보호체 및 Tag화 뉴클레오티드 보호체는 그 합성 수법을 실시예에 예시하고 있지만, 기타 시판 원료를 이용하여 공지의 방법을 이용하여 합성해도 무방하다.
본 발명의 Tag화 뉴클레오시드 보호체 및 Tag화 뉴클레오티드 보호체의 제조 방법 (합성 방법)으로서, 예를 들면, 상기 알콕시페닐 화합물 또는 그 유도체와, 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드를 결합시키는 방법으로 얻을 수 있다. 결합 수법으로서, 예를 들면, 상기 알콕시페닐 화합물 또는 그 유도체와, 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드를 축합 반응시키는 방법을 들 수 있다. 상기 축합 반응을 이용하는 경우, 예를 들면, 일반식 (1) 또는 (2)로 표시되는 상기 알콕시페닐 화합물과 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드를 축합제를 이용하여 결합시키는 방법이나, 치환기 등으로 반응성을 높인 일반식 (1) 또는 (2)로 표시되는 상기 알콕시페닐 화합물의 유도체 (예를 들면, 에스테르 유도체, 산 클로라이드 유도체 등)와, 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드를 축합제를 이용하여 결합시키는 방법이나, 일반식 (1) 또는 (2)로 표시되는 상기 알콕시페닐 화합물과, 치환기 등으로 반응성을 높인 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드를 축합제를 이용하여 결합시키는 방법을 적절히 이용할 수 있다.
〔올리고뉴클레오티드 보호체의 제조 방법, 및 Tag 부분 제거 방법 등〕
본 발명의 올리고뉴클레오티드 보호체의 제조 방법 (합성 방법), 및 본 발명의 Tag 부분 제거 방법 (치환기 제거 방법)은 일반식 (3)으로 표시되는 화합물 또는 그 유도체를 환원 처리하는 공정 (1)을 포함하는 것이다.
Figure pct00033
(식중,
R은 각각 독립적으로 치환되어 있을 수 있는 탄소수 10 내지 40의 알킬기를 나타낸다.
m은 1 내지 5의 정수를 나타낸다. m이 2 이상인 경우에는 복수개 존재하는 RO는 동일하거나 상이할 수 있다.
X는 O, S, NH, 또는 NRN을 나타낸다.
n은 1 내지 4의 정수를 나타낸다.
RN은 치환되어 있을 수 있는 탄소수 1 내지 6의 알킬기를 나타낸다.
Y는 하기 일반식 (4) 또는 일반식 (5)를 나타낸다.)
Figure pct00034
(식중,
Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
B는 수소 원자, 보호되어 있을 수 있는 수산기, 또는 할로겐을 나타낸다. B가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 B는 동일하거나 상이할 수 있다.
W는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
R4는 전자 구인성 기를 갖는 탄소수 1 내지 4의 알킬기를 나타낸다. R4가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 R4는 동일하거나 상이할 수 있다.
Z는 O 또는 S를 나타낸다. Z가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Z는 동일하거나 상이할 수 있다.
y1은 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.
*은 상기 일반식 (3)에 있어서의 결합 부위를 나타낸다.)
Figure pct00035
(식중,
Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
Q는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
V는 탄소수 1 내지 6의 알콕시기, 디(C1-6 알킬)아미노기, 또는 4위치 질소 원자가 보호기로 보호되고, 더 치환되어 있을 수 있는 피페라지노기를 나타낸다. V가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 V는 동일하거나 상이할 수 있다.
y2는 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.
*은 상기 일반식 (3)에 있어서의 결합 부위를 나타낸다.)
Figure pct00036
(식중,
Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
B는 수소 원자, 보호되어 있을 수 있는 수산기, 또는 할로겐을 나타낸다. B가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 B는 동일하거나 상이할 수 있다.
W는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
R4는 전자 구인성 기를 갖는 탄소수 1 내지 4의 알킬기를 나타낸다. R4가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 R4는 동일하거나 상이할 수 있다.
Z는 O 또는 S를 나타낸다. Z가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Z는 동일하거나 상이할 수 있다.
y1은 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.)
Figure pct00037
(식중,
Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
Q는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
V는 탄소수 1 내지 6의 알콕시기, 디(C1-6 알킬)아미노기, 또는 4위치 질소 원자가 보호기로 보호되고, 더 치환되어 있을 수 있는 피페라지노기를 나타낸다. V가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 V는 동일하거나 상이할 수 있다.
y2는 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.)
상기 올리고뉴클레오티드 보호체의 제조 방법에 있어서, 상기 일반식 (3), (4), (5)는 상기와 마찬가지이다.
상기 올리고뉴클레오티드 보호체의 제조 방법에 있어서의, 상기 일반식 (7)에 있어서, Base, B, W, R4, Z, 및 y1은 상기 일반식 (4)와 마찬가지이다.
상기 올리고뉴클레오티드 보호체의 제조 방법에 있어서의, 상기 일반식 (8)에 있어서, Base, Q, V, 및 y2는 상기 일반식 (5)와 마찬가지이다.
본 발명의 올리고뉴클레오티드 보호체의 제조 방법, 및 본 발명의 Tag 부분 제거 방법에 있어서, 일반식 (6)으로 표시되는 화합물 또는 그 유도체를 환원 처리하는 공정 (1)을 포함하는 것이 바람직하다.
Figure pct00038
(식중,
R1, R2, 및 R3은 각각 독립적으로 치환되어 있을 수 있는 탄소수 10 내지 40의 알킬기를 나타낸다.
X는 O, S, NH, 또는 NRN을 나타낸다.
n은 1 내지 4의 정수를 나타낸다.
RN은 치환되어 있을 수 있는 탄소수 1 내지 6의 알킬기를 나타낸다.
Y는 하기 일반식 (4) 또는 일반식 (5)를 나타낸다.)
Figure pct00039
(식중,
Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
B는 수소 원자, 보호되어 있을 수 있는 수산기, 또는 할로겐을 나타낸다. B가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 B는 동일하거나 상이할 수 있다.
W는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
R4는 전자 구인성 기를 갖는 탄소수 1 내지 4의 알킬기를 나타낸다. R4가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 R4는 동일하거나 상이할 수 있다.
Z는 O 또는 S를 나타낸다. Z가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Z는 동일하거나 상이할 수 있다.
y1은 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.
*은 상기 일반식 (6)에 있어서의 결합 부위를 나타낸다.)
Figure pct00040
(식중,
Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
Q는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
V는 탄소수 1 내지 6의 알콕시기, 디(C1-6 알킬)아미노기, 또는 4위치 질소 원자가 보호기로 보호되고, 더 치환되어 있을 수 있는 피페라지노기를 나타낸다. V가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 V는 동일하거나 상이할 수 있다.
y2는 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.
*은 상기 일반식 (6)에 있어서의 결합 부위를 나타낸다.)
Figure pct00041
(식중,
Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
B는 수소 원자, 보호되어 있을 수 있는 수산기, 또는 할로겐을 나타낸다. B가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 B는 동일하거나 상이할 수 있다.
W는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
R4는 전자 구인성 기를 갖는 탄소수 1 내지 4의 알킬기를 나타낸다. R4가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 R4는 동일하거나 상이할 수 있다.
Z는 O 또는 S를 나타낸다. Z가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Z는 동일하거나 상이할 수 있다.
y1은 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.)
Figure pct00042
(식중,
Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
Q는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
V는 탄소수 1 내지 6의 알콕시기, 디(C1-6 알킬)아미노기, 또는 4위치 질소 원자가 보호기로 보호되고, 더 치환되어 있을 수 있는 피페라지노기를 나타낸다. V가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 V는 동일하거나 상이할 수 있다.
y2는 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.)
상기 올리고뉴클레오티드 보호체의 제조 방법, 및 본 발명의 Tag 부분 제거 방법에 있어서, 상기 일반식 (3), (4), (5)는 상기와 마찬가지이다.
상기 올리고뉴클레오티드 보호체의 제조 방법, 및 본 발명의 Tag 부분 제거 방법에 있어서, 상기 일반식 (7)에 있어서, Base, B, W, R4, Z, 및 y1은 상기 일반식 (4)와 마찬가지이다.
상기 올리고뉴클레오티드 보호체의 제조 방법, 및 본 발명의 Tag 부분 제거 방법에 있어서, 상기 일반식 (8)에 있어서, Base, Q, V, 및 y2는 상기 일반식 (5)와 마찬가지이다.
상기 올리고뉴클레오티드 보호체의 제조 방법, 및 본 발명의 Tag 부분 제거 방법에 있어서, 상기 환원 처리가 붕소 함유 환원제를 이용하거나 또는 붕소 함유 환원제 및 아민을 이용하는 것이 바람직하다. 상기 구성을 가짐으로써, 올리고뉴클레오티드 보호체를 보다 간편하게 합성할 수 있다.
상기 붕소 함유 환원제로서, 공지의 것을 이용할 수 있지만, 그 중에서도, 수소화 붕소 리튬, 수소화 붕소 나트륨, 수소화 트리에틸 붕소 리튬, 수소화 붕소 테트라부틸암모늄 등인 것이 바람직하다. 이들 화합물은 단독으로 사용해도 무방하고, 또한 2종 이상을 혼합하여 사용해도 무방하다. 상기 구성을 가짐으로써, 올리고뉴클레오티드 보호체를 보다 수율 좋게 간편하게 합성할 수 있다.
상기 붕소 함유 환원제 및 아민을 이용하는 경우, 상기 아민으로는, 공지의 것을 이용할 수 있지만, 그 중에서도, 디이소프로필에틸아민, 트리에틸아민, 피리딘 등인 것이 바람직하다. 이들 화합물은 단독으로 사용해도 무방하고, 또한 2종 이상을 혼합하여 사용해도 무방하다. 상기 구성을 가짐으로써, 올리고뉴클레오티드 보호체를 보다 수율 좋게 간편하게 합성할 수 있다.
상기 공정 (1)은 그 합성 수법, 반응 수법을 일반식 (6) 등으로 표시되는 화합물 또는 그 유도체의 화학 구조를 손상시키지 않는 한, 기타 시판 원료를 이용하여 공지의 방법을 이용해도 무방하다.
상기 공정 (1)은 예를 들면, 일반식 (6) 등으로 표시되는 화합물 또는 그 유도체를, 붕소 함유 환원제, 또는 붕소 함유 환원제와 아민을 유기 용매에 용해 또는 혼합시키고, -10℃ 또는 실온 하에서 교반하여 반응시키는 공정을 들 수 있다.
또한, 본 발명의 올리고뉴클레오티드 보호체의 제조 방법, 및 본 발명의 Tag 부분 제거 방법은 그 합성 수법, 반응 수법을 실시예에 예시하고 있지만, 기타, 시판 원료를 이용하여 공지의 방법을 이용해도 무방하다.
본 발명의 Tag화 올리고뉴클레오티드 보호체의 제조 방법으로는, 예를 들면, 2량체를 예로 들면, 상기 Tag화 뉴클레오시드 보호체 또는 Tag화 뉴클레오티드 보호체와 아미다이트화한 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드를 커플링 반응시키고 (공정 A), 얻어진 2량체를 산화 공정으로 인산 에스테르화하고 (공정 B), 보호기 W의 탈보호를 행하고 (공정 C), 여과분별 (공정 D)을 행함으로써, Tag화 뉴클레오티드 보호체의 2량체를 얻는 방법을 들 수 있다. 또한, 보다 고차의 (n+1)량체는 해당 수법을 마찬가지로 n회 반복하여 얻는 방법이나, 일정 정도의 길이의 뉴클레오티드 유도체를 이용하여 이들을 결합시켜서 얻는 방법 등을 들 수 있다.
[실시예]
이하, 본 발명의 구성과 효과를 구체적으로 나타낸 실시예 등에 대하여 설명한다. 이하, 실시예에 있어서의 농축 조작은 특히 지정이 없는 한, 감압 하에서 행하였다. 한편, 실시예 등에 있어서의 평가 항목은 하기와 같이 하여 측정을 행하였다.
<1H-NMR 스펙트럼의 측정>
1H-NMR 스펙트럼의 측정은 핵자기 공명 장치 (니혼 덴시사, 제품명 AL400 및 니혼 덴시사, 제품명 ECS-600)을 이용하고, 내부 표준으로서 테트라메틸실란을 이용하여 행하였다.
<13C-NMR 스펙트럼의 측정>
13C-NMR 스펙트럼의 측정은 핵자기 공명 장치 (니혼 덴시사, 제품명 AL400 및 니혼 덴시사, 제품명 ECS-600)을 이용하고, 내부 표준으로서 테트라메틸실란을 이용하여 행하였다.
<TOF/MS 스펙트럼의 측정>
TOF/MS 스펙트럼의 측정은 비행시간형 질량 분석계 (Waters사, 제품명 LCT-PremierXE 및 니혼 덴시사, 제품명 JMS T-100LP)을 이용하여 행하였다.
1. 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산의 합성
(A) tert-부틸에스테르를 경유하는 방법
〔실시예 1-1〕
(1) 3,4,5-트리스(옥타데실옥시)안식향산 2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸의 합성
Figure pct00043
3,4,5-트리스(옥타데실옥시)안식향산 (1.80 g, 1.94 mmol)의 THF (10 mL) 현탁액에 트리에틸아민 (0.39 g, 3.87 mmol), 2-브로모아세트산 tert-부틸 (0.76 g, 3.87 mmol)을 첨가한 후, 60℃에서 2시간 교반했다. 반응액을 실온으로 냉각한 후, 메탄올 (54 mL)을 적하함으로써 석출한 고체를 여과했다. 고체를 메탄올로 세정한 후, 50℃에서 감압 건조하고, 표제 화합물 (1.95 g, 97%)을 백색 고체로서 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=6.8 Hz), 1.16-1.41 (m, 84H), 1.41-1.57 (m, 6H), 1.49(s, 9H), 1.66-1.88 (m, 6H), 3.95-4.11 (m, 6H), 4.70(s, 2H), 7.31(s, 2H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ14.02, 22.48, 22.66, 22.83, 26.08, 26.11, 27.88, 28.08, 29.35, 29.40, 29.56, 29.64, 29.65, 29.70, 29.97, 30.22, 30.36, 31.76, 31.93, 32.10, 61.66, 69.35, 73.51, 82.32, 108.69, 108.90, 123.82, 123.93, 143.11, 143.38, 152.93, 165.83, 166.90.
TOF/MS (ESI): calcd for C67H124O7Na [M+Na]+ 1063.9245, found 1063.9254.
〔실시예 1-2〕
(2) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산의 합성
Figure pct00044
3,4,5-트리스(옥타데실옥시)안식향산 2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸 (5.21 g, 5.0 mmol)의 클로로포름 (20 mL) 용액에 트리플루오로아세트산 (11.40 g, 100.0 mmol)을 첨가한 후, 50℃에서 17시간 교반했다. 반응액을 실온으로 냉각한 후, 아세토니트릴 (50 mL)을 적하함으로써 석출한 고체를 여과했다. 고체를 아세토니트릴-클로로포름 혼합 용매로 세정한 후, 50℃에서 감압 건조하고, 표제 화합물 (4.89 g, 99%)을 백색 고체로서 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=7.0 Hz), 1.16-1.54 (m, 90H), 1.69-1.88 (m, 6H), 3.95-4.11 (m, 6H), 4.87 (s, 2H), 7.30 (s, 2H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ14.08, 22.68, 26.06, 26.10, 29.36, 29.41, 29.57, 29.65, 29.66, 29.72, 30.35, 31.93, 60.49, 69.30, 73.57, 108.53, 123.31, 143.17, 152.96, 165.74.
TOF/MS (ESI): calcd for C63H116O7Na [M+Na]+ 1007.8619, found 1007.8639.
(B) 벤질에스테르를 경유하는 방법
〔실시예 1-3〕
(1) 3,4,5-트리스(옥타데실옥시)안식향산 2-벤질옥시-2-옥소에틸의 합성
Figure pct00045
3,4,5-트리스(옥타데실옥시)안식향산 (0.90 g, 0.97 mmol)의 클로로포름 (5 mL) 현탁액에 트리에틸아민 (0.20 g, 1.94 mmol), 2-브로모아세트산벤질 (0.45 g, 1.94 mmol)을 첨가한 후, 50℃에서 14시간 교반했다. 반응액을 실온으로 냉각한 후, 메탄올 (18 mL)을 적하함으로써 석출한 고체를 여과했다. 고체를 메탄올로 세정한 후, 50℃에서 감압 건조하고, 표제 화합물 (1.02 g, 97%)을 백색 고체로서 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=6.8 Hz), 1.16-1.41 (m, 84H), 1.41-1.54 (m, 6H), 1.66-1.91 (m, 6H), 3.95-4.08 (m, 6H), 4.86(s, 2H), 5.23(s, 2H), 7.24-7.41 (m, 7H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ14.08, 22.71, 26.13, 26.16, 29.40, 29.43, 29.46, 29.62, 29.69, 29.71, 29.76, 30.00, 30.43, 31.98, 61.24, 67.07, 69.40, 73.59, 108.76, 123.69, 128.32, 128.50, 128.65, 135.35, 143.28, 152.96, 153.01, 165.84, 167.77.
〔실시예 1-4〕
(2) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산의 합성
Figure pct00046
3,4,5-트리스(옥타데실옥시)안식향산 2-벤질옥시-2-옥소에틸 (0.91 g, 0.85 mmol)의 THF (4.3 mL) 용액에 10% Pd-C (0.09g)을 첨가한 후, 수소 풍선 하에서, 40℃에서 19시간 교반했다. 반응액을 실온으로 냉각한 후, 셀라이트 여과에 의해 10% Pd-C를 제거했다. 여과액을 농축한 후, 잔사에 아세토니트릴 (18 mL)을 적하함으로써 석출한 고체를 여과했다. 고체를 아세토니트릴로 세정한 후, 50℃에서 감압 건조하고, 표제 화합물 (0.84 g, 100%)을 백색 고체로서 얻었다.
2. 티미디닐-[3'→5']데옥시시티디닐-[3'→5']-데옥시시티디닐-[3'→5']-데옥시시티디닐-[3'→5']-데옥시구아니딜-[3'→5']-데옥시시티디닐-[3'→5']-데옥시시티디닐-[3'→5']-티미디닐-[3'→5']-데옥시구아니딜-[3'→5']-티미디닐-[3'→5']-데옥시구아니딜-[3'→5']-데옥시아데니릴-[3'→5']-데옥시시티디닐-[3'→5']-데옥시아데니릴-[3'→5']-티미디닐-[3'→5']-데옥시구아니딜-[3'→5']-데옥시시티디닐-[3'→5']-데옥시아데니릴-[3'→5']-티미디닐-[3'→5']-티미딘 (20 mer 올리고핵산)의 합성
〔실시예 2-1〕
(1) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일의 합성
Figure pct00047
2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 (4.95 g, 5.02 mmol), 5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘 (3.28 g, 6.03 mmol), 1-메틸이미다졸 (2.27 g, 27.62 mmol)의 THF (50 mL) 현탁액에 COMU (4.73 g, 11.05 mmol)을 첨가한 후, 실온에서 3.5시간 교반했다. 반응액에 아세토니트릴 (248 mL)을 적하함으로써 석출한 고체를 여과했다. 고체를 아세토니트릴-THF 혼합 용매로 세정한 후, 50℃에서 감압 건조하고, 표제 화합물 (7.16 g, 95%)을 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=6.8 Hz), 1.16-1.54 (m, 93H), 1.69-1.88 (m, 6H), 2.42-2.58 (m, 2H), 3.42-3.55 (m, 2H), 3.78 (s, 6H), 3.95-4.05 (m, 6H), 4.18 (s, 1H), 4.82 (s, 2H), 5.56 (d, 1H, J=5.6 Hz), 6.40-6.50 (m, 1H), 6.80-6.90 (m, 4H), 7.20-7.40 (m, 9H), 7.61 (s, 1H), 8.03 (s, 1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ11.62, 14.10, 22.71, 26.11, 26.15, 29.38, 29.45, 29.61, 29.68, 29.75, 30.40, 31.96, 37.88, 55.28, 61.12, 63.68, 69.35, 73.60, 83.93, 84.40, 87.36, 108.59, 111.66, 113.43, 123.26, 127.29, 128.08, 128.19, 130.10, 130.15, 135.20, 135.25, 135.32, 144.22, 150.11, 153.02, 158.92, 163.16, 165.85, 167.50.
TOF/MS (ESI): calcd for C94H146N2O13Na [M+Na]+ 1534.0723, found 1534.0759.
〔실시예 2-2〕
(2) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 티미딘-3'-일의 합성
Figure pct00048
2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일 (6.95 g, 4.60 mmol)의 디클로로메탄 용액 (174 mL)에 피롤 (1.54 g, 22.98 mmol), 트리플루오로아세트산 (0.66 g, 5.75 mmol)을 첨가한 후, 실온에서 2.5시간 교반했다. 반응액에 아세톤 (52 mL)과 아세토니트릴 (156 mL)을 적하함으로써 석출한 고체를 여과했다. 고체를 아세토니트릴-아세톤-디클로로메탄 혼합 용매와 아세토니트릴로 세정한 후, 50℃에서 감압 건조하고, 표제 화합물 (5.04 g, 91%)을 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=6.8 Hz), 1.11-1.39 (m, 84H), 1.43-1.51 (m, 6H), 1.66 (s, 1H), 1.71-1.85 (m, 6H), 1.95 (s, 3H), 2.36-2.58 (m, 3H), 3.89-3.97 (m, 2H), 3.97-4.08 (m, 6H), 4.15 (dd, 1H, J=2.0, 2.4 Hz), 4.84 (s, 2H), 5.45-5.53 (m, 1H), 6.20 (dd, 1H, J=6.0, 8.8 Hz), 7.29 (s, 2H), 7.45 (d, 1H, J=1.2 Hz), 8.59 (s, 1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ12.58, 14.12, 22.70, 26.07, 26.11, 29.33, 29.38, 29.43, 29.59, 29.67, 29.68, 29.73, 30.35, 31.94, 36.99, 61.12, 62.57, 69.24, 73.58, 75.97, 84.91, 86.46, 108.36, 111.48, 123.17, 136.41, 143.09, 150.29, 152.96, 163.40, 165.91, 167.71.
TOF/MS (ESI): calcd for C73H128N2O11Na [M+Na]+ 1231.9416, found 1231.9432.
〔실시예 2-3〕
(3) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-((시아노에톡시)(티미딘-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일의 합성
Figure pct00049
아르곤 하에서, 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 티미딘-3'-일 (1.00 g, 0.83 mmol), 5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일-포스포르아미다이트 (1.23 g, 1.65 mmol)의 디클로로메탄 현탁액 (15 mL)에 5-벤질티오-1H-테트라졸 (0.32 g, 1.65 mmol)을 첨가한 후, 실온에서 1.5시간 교반했다. 다음으로, 쿠멘 히드로퍼옥시드 (함량 82%) (0.23 g, 1.24 mmol)을 첨가한 후, 실온에서 2시간 교반했다. 반응액에 피롤 (0.56 g, 8.27 mmol), 트리플루오로아세트산 (0.28 g, 2.48 mmol)을 첨가한 후, 실온에서 2시간 교반했다. 반응액에 아세톤 (15 mL)과 아세토니트릴 (45 mL)을 적하함으로써 석출한 고체를 여과했다. 고체를 아세토니트릴-아세톤-디클로로메탄 혼합 용매와 아세토니트릴로 세정한 후, 50℃에서 감압 건조하고, 표제 화합물 (1.20 g, 92%)을 백색 고체로서 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=6.8 Hz), 1.11-1.55 (m, 90H), 1.65-2.05 (m, 12H), 2.40-2.60 (m, 4H), 2.75-2.90 (m, 2H), 3.84 (s, 2H), 3.95-4.10 (m, 6H), 4.15-4.50 (m, 6H), 4.85 (s, 2H), 5.15-5.25 (m, 1H), 5.35-5.55 (m, 1H), 6.10-6.35 (m, 2H), 7.29 (s, 2H), 7.35 (d, 1H, J=1.2 Hz), 7.47(s, 1H), 9.60-9.95 (m, 2H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ12.42, 12.46, 14.10, 19.72, 19.79, 22.71, 26.12, 26.19, 29.38, 29.43, 29.49, 29.63, 29.70, 29.75, 30.43, 31.96, 36.47, 36.56, 38.46, 61.14, 61.91, 62.00,62.63,62.68, 62.75, 62.80, 67.53, 69.42, 73.64, 74.66, 74.77, 78.94, 79.12, 82.33, 82.40, 82.48, 85.60, 85.66, 85.79, 86.02, 86.21, 86.35, 108.61, 111.27, 111.33, 111.73, 111.82, 116.58, 116.66, 123.15, 135.87, 135.94, 136.53, 136.62, 143.41, 150.49, 150.59, 153.07, 163.94, 164.02, 165.96, 167.79, 167.83.
TOF/MS (ESI): calcd for C86H144N5O18PNa [M+Na]+ 1589.0142, found 1589.0104.
〔실시예 2-4〕
(4) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(티미딘-3'-일)포스포릴)-N4-벤조일데옥시시티딘-3'-일)포스포릴)-N4-벤조일데옥시시티딘-3'-일)포스포릴)-N4-벤조일데옥시시티딘-3'-일)포스포릴)-N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일)포스포릴)-N4-벤조일데옥시시티딘-3'-일)포스포릴)-N4-벤조일데옥시시티딘-3'-일)포스포릴)-티미딘-3'-일)포스포릴)-N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일)포스포릴)-N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일)포스포릴)-N6-벤조일데옥시아데노신-3'-일)포스포릴)-N4-벤조일데옥시시티딘-3'-일)포스포릴)-N6-벤조일데옥시아데노신-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일)포스포릴)-N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일)포스포릴)-N4-벤조일데옥시시티딘-3'-일)포스포릴)-N6-벤조일데옥시아데노신-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일의 합성
실시예 2-3과 마찬가지의 조작을 18회 반복하여, 표제 화합물 (1.10 g)을 얻었다.
TOF/MS (ESI): m/z3114.3[M-3H]3-, 2335.6[M-4H]4-, 1868.9[M-5H]5-, 1557.6[M-6H]6-.
〔실시예 2-5〕
(5) 탈보호 및 정제 공정
실시예 2-4에서 합성한 화합물 (50 mg, 5.4 μmol)에 28% 암모니아수 (2.1 mL)을 첨가한 후, 80℃에서 1.5시간 가열 교반했다. 반응액을 감압 하에서 농축한 후, 농축 잔사에 0.1 mol/L-아세트산 트리에틸아민 완충액을 첨가함으로써 석출한 불용물을 여과에 의해 제거했다. 여과액의 C-18 카트리지 정제에 의해 얻어진 용출액을 건조하고, 목적물인 티미디닐-[3'→5']데옥시시티디닐-[3'→5']-데옥시시티디닐-[3'→5']-데옥시시티디닐-[3'→5']-데옥시구아니딜-[3'→5']-데옥시시티디닐-[3'→5']-데옥시시티디닐-[3'→5']-티미디닐-[3'→5']-데옥시구아니딜-[3'→5']-티미디닐-[3'→5']-데옥시구아니딜-[3'→5']-데옥시아데니릴-[3'→5']-데옥시시티디닐-[3'→5']-데옥시아데니릴-[3'→5']-티미디닐-[3'→5']-데옥시구아니딜-[3'→5']-데옥시시티디닐-[3'→5']-데옥시아데니릴-[3'→5']-티미디닐-[3'→5']-티미딘을 얻었다.
HPLC (shodexODP (4.6 Φ × 150 mm), 유속: 1.0 mL/min, 이동: 0.1 mol/L 트리에틸아민-아세트산 완충액, 아세토니트릴 gradient: 0 - 15 min (2 to 98% 아세토니트릴), Rt = 3.9 min (98.6%)
TOF/MS (ESI): m/z3020.9[M-2H]2-, 2013.4[M-3H]3-, 1509.8[M-4H]4-.
(6) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일의 합성
〔실시예 2-6〕
(축합제로서 EDCI-HCl을 이용하는 경우)
Figure pct00050
2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 (0.87 g, 0.89 mmol), 5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘 (0.97 g, 1.77 mmol)의 THF (9 mL) 용액에 4-디메틸아미노피리딘 (0.02 g, 0.18 mmol)과 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보이미드염산염 (0.34 g, 1.77 mmol)을 첨가한 후, 실온에서 14시간 교반했다. 반응액에 아세토니트릴 (18 mL)을 적하함으로써 석출한 고체를 여과했다. 고체를 아세토니트릴-THF 혼합 용매로 세정한 후, 50℃에서 감압 건조하고, 조체(粗體) (1.28g)를 얻었다. 조체(粗體)를 컬럼 크로마토그래피 (구형태 중성 실리카겔, 전개 용매: 클로로포름-THF)로 정제함으로써, 표제 화합물 (1.06 g, 79%)을 백색 고체로서 얻었다.
〔실시예 2-7〕
(축합제로서 CDI를 이용하는 경우)
Figure pct00051
2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 (9.86 g, 10.0 mmol), 4-디메틸아미노피리딘 (0.12 g, 1.0 mmol)의 디클로로메탄 (210 mL) 현탁액에 1, 1'-카르보디이미다졸 (2.43 g, 15.0 mmol)을 첨가하고, 실온에서 1시간 교반한 후, 30 내지 35℃에서 4시간 교반했다. 다음으로, 5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘(10.89 g, 20.0 mmol)을 첨가하고, 실온에서 17시간 교반했다. 게다가, 반응액에 5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘 (1.09 g, 0.4 mmol)을 첨가한 후, 실온에서 4.5시간 교반했다. 반응액에 디클로로메탄 (10 mL)을 첨가한 후, 아세토니트릴 (400 mL)을 적하함으로써 석출한 고체를 여과했다. 고체를 아세토니트릴-디클로로메탄 혼합 용매로 세정한 후, 50℃에서 감압 건조하고, 조체(粗體) (14.44g)를 얻었다. 조체(粗體)를 컬럼 크로마토그래피 (구형태 중성 실리카겔, 전개 용매: 디클로로메탄-메탄올)로 정제함으로써, 표제 화합물 (11.11 g, 74%)을 백색 고체로서 얻었다.
3. 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일)포스포릴)-N6-벤조일데옥시아데노신-3'-일의 합성
〔실시예 3-1〕
(1) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-N6-벤조일데옥시아데노신-3'-일의 합성
Figure pct00052
실시예 2-1의 방법에 따라서, 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 (1.97 g, 2.00 mmol)과 5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-N6-벤조일데옥시아데노신 (1.58 g, 2.40 mmol)으로부터 표제 화합물 (3.11 g, 96%)을 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t,9H, J=6.8 Hz),1.11-1.40 (m,84H),1.42-1.50 (m,6H), 1.71-1.84 (m,7H), 2.73 (dd, 1H, J=4.4, 12.8 Hz), 3.04-3.13 (m,1H), 3.46 (d, 2H, J=4.0 Hz), 3.77 (s,6H), 3.99-4.05 (m,6H), 4.34-4.37 (m,1H), 4.86 (s,2H), 5.67 (d, 1H, J=5.6 Hz), 6.51 (dd, 1H, J=5.6, 8.4 Hz), 6.79 (d, 2H, J=9.4 Hz), 7.18-7.29 (m,7H), 7.31 (s,2H), 7.38 (d, 2H, J=7.2 Hz), 7.53 (dd, 2H, J=7.2, 7.6 Hz), 7.59-7.63 (m,1H), 8.03 (d, 2H, J=7.2 Hz), 8.17 (s,1H), 8.74 (s,1H), 8.98(s,1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ14.13, 22.71, 26.08, 26.11, 29.33, 29.38, 29.43, 29.60, 29.67, 29.74, 30.36, 31.94, 38.00, 55.23, 61.16, 63.52, 69.23, 73.58, 84.35, 84.48, 86.82, 108.35, 113.25, 123.22, 123.32, 127.03, 127.85, 127.95, 128.08, 128.91, 129.99, 130.04, 132.82, 133.66, 135.38, 135.42, 141.21, 143.07, 144.33, 149.53, 151.56, 152.75, 152.97, 158.63, 164.48, 165.89, 167.38.
TOF/MS (ESI): calcd for C101H149N5O12Na [M+Na]+ 1647.1100, found 1647.1149.
〔실시예 3-2〕
(2) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 N6-벤조일데옥시아데노신-3'-일의 합성
Figure pct00053
실시예 2-2의 방법에 따라서, 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-N6-벤조일데옥시아데노신-3'-일 (3.00 g, 1.85 mmol)로부터 표제 화합물 (2.25 g, 92%)을 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=6.8 Hz), 1.11-1.40 (m,84H), 1.44-1.50 (m,6H), 1.71-1.85 (m,7H), 2.53 (dd, 1H, J=5.6, 14.0 Hz), 3.21-3.28 (m,1H), 3.89-3.96 (m,1H), 3.98-4.06 (m,6H), 4.36 (s,1H), 4.87 (s,2H), 5.70 (d, 1H, J=5.2 Hz), 5.91 (brs,1H), 6.32 (dd, 1H, J=5.6, 10.0 Hz), 7.32 (s,2H), 7.54 (dd, 2H, J=7.2, 8.0 Hz), 7.61-7.65 (m,1H), 8.03 (d, 2H, J=7.2 Hz), 8.07 (s,1H), 8.79 (s,1H), 9.07 (s,1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ14.12, 22.70, 26.07, 26.11, 29.33, 29.37, 29.42, 29.59, 29.67, 29.73, 30.35, 31.94, 37.76, 61.20, 63.17, 69.28, 73.60, 87.18, 87.61, 108.39, 123.17, 124.66, 127.90, 128.96, 133.01, 133.39, 142.42, 143.17, 150.40, 150.68, 152.26, 153.00, 164.42, 165.97, 167.41.
TOF/MS (ESI): calcd for C80H131N5O10Na [M+Na]+ 1344.9794, found 1344.9828.
〔실시예 3-3〕
(3) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(티미딘-3'-일)포스포릴)-N6-벤조일데옥시아데노신-3'-일의 합성
Figure pct00054
실시예 2-3의 방법에 따라서, 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 N6-벤조일데옥시아데노신-3'-일 (2.00 g, 1.51 mmol)과 DMTr-dT-CE-포스포르아미다이트 (2.25 g, 3.02 mmol)로부터 표제 화합물 (2.50 g, 97%)을 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=6.8 Hz), 1.12-1.40 (m,84H), 1.43-1.50 (m, 6H), 1.71-1.85 (m,9H), 1.94 (s,1H), 2.22-2.51 (m,2H), 2.70-2.78 (m,3H), 3.14-3.26 (m,1H), 3.45-3.56 (m,1H), 3.69-3.85 (m,2H), 3.95-4.07 (m,6H), 4.07-4.32 (m,3H), 4.40-4.48 (m,3H), 4.88 (s,2H), 4.99-5.11 (m,1H), 5.67-5.73 (m,1H), 6.11-6.22 (m,1H), 6.50-6.58 (m,1H), 7.30 (s,2H), 7.41-7.53 (m,3H), 7.57-7.61 (m,1H), 8.02-8.06 (m,2H), 8.38 (m,1H), 8.81 (m,1H), 9.58-9.67 (m,2H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ12.43, 14.14, 19.66, 19.73, 19.78, 22.71, 26.09, 26.15, 29.35, 29.38, 29.46, 29.61, 29.68, 29.74, 29.99, 30.38, 31.94, 36.57, 36.87, 38.35, 61.13, 61.84, 61.92, 62.45, 62.49, 62.58, 62.62, 67.39, 69.27, 73.61, 74.81, 75.06, 78.89, 79.19, 79.24, 82.98, 83.05, 83.12, 84.47, 84.54, 85.43, 85.48, 85.62, 85.67, 85.79, 85.93, 108.34, 111.22, 111.27, 116.52, 116.64, 123.01, 123.82, 124.08, 128.27, 128.31, 128.69, 128.72, 132.87, 132.94, 133.17, 133.41, 136.45, 141.68, 141.86, 143.18, 149.93, 150.00, 150.47, 151.84, 152.05, 152.67, 153.01, 163.81, 163.86, 165.43, 165.53, 165.99, 167.76.
TOF/MS (ESI): calcd for C93H147N8O17PNa [M+Na]+ 1702.0520, found 1702.0604.
〔실시예 3-4〕
(4) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일)포스포릴)-N6-벤조일데옥시아데노신-3'-일의 합성
Figure pct00055
2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(티미딘-3'-일)포스포릴)-N6-벤조일데옥시아데노신-3'-일 (7.98 g, 4.75 mmol), N2-이소부티릴-DMTr-dG-CE 포스포르아미다이트 (11.97 g, 14.25 mmol)의 디클로로메탄 현탁액 (90 mL)에 5-벤질티오-1H-테트라졸 (2.74 g, 14.25 mmol)을 첨가한 후, 실온에서 3시간 교반했다. 다음으로, 쿠멘 히드로퍼옥시드 (함량 82%) (2.64 g, 14.25 mmol)를 첨가한 후, 실온에서 1시간 교반했다. 반응액에 아세톤 (120 mL)과 아세토니트릴 (359 mL)을 적하함으로써 석출한 고체를 여과했다. 고체를 아세토니트릴-아세톤-디클로로메탄 혼합 용매와 아세토니트릴, 메탄올로 세정한 후, 50℃에서 감압 건조하고, 표제 화합물 (10.86 g, 94%)을 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=6.8 Hz), 1.12-1.40 (m,90H), 1.43-1.50 (m,6H), 1.71-1.93 (m,9H), 1.95-2.16 (m,2H), 2.35-2.87 (m,9H), 3.16-3.37 (m,3H), 3.76 (s,6H), 3.99-4.05 (m,6H), 4.09-4.43 (m,10H), 4.86 (s,2H), 5.07-5.26 (m,2H), 5.65-5.71 (m,1H), 5.91-6.22 (m,2H), 6.49-6.54 (m,1H), 6.78 (d, 4H, J=8.4 Hz), 7.15-7.27 (m, 8H), 7.30 (s, 2H), 7.34-7.36 (m, 2H), 7.43-7.48 (m, 2H), 7.54-7.59(m, 1H), 7.69-7.71 (m, 1H), 7.98-8.02 (m, 2H), 8.30-8.41 (m, 1H), 8.75-8.82 (m, 1H), 9.43-9.58 (m,1H), 9.88-10.27 (m,1H), 12.09-12.22 (m,1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ12.23, 12.36, 14.13, 18.84, 19.00, 19.05, 19.65, 19.73, 22.70, 26.09, 26.15, 29.35, 29.37, 29.46, 29.61, 29.68, 29.74, 29.77, 30.38, 31.94, 35.89, 36.47, 36.63, 55.26, 61.13, 62.47, 62.63, 62.68, 63.42, 67.55, 69.28, 73.61, 74.86, 75.05, 79.76, 81.43, 83.08, 83.59, 84.68, 86.85, 108.33, 111.11, 111.17, 113.15, 113.26, 116.48, 116.75, 116.88, 121.42, 121.59, 123.03, 124.05, 127.07, 127.12, 127.78, 127.85, 127.98, 128.06, 128.74, 129.14, 130.05, 132.88, 133.37, 135.23, 139.48, 141.92, 142.01, 143.18, 144.23, 147.35, 148.11, 148.27, 148.49, 149.98, 150.09, 151.80, 152.60, 153.01, 155.40, 155.47, 158.62, 158.68, 164.77, 165.20, 165.96, 167.71, 167.74, 179.81, 180.21.
TOF/MS (ESI): calcd for C131H186N14O26P2Na [M+Na]+ 2456.3036, found 2456.2988.
2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일)포스포릴)-N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일)포스포릴)-N4-벤조일데옥시시티딘-3'-일의 합성
〔실시예 3-5〕
(1) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-N4-벤조일데옥시시티딘-3'-일의 합성
Figure pct00056
실시예 2-1의 방법에 따라서, 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 (1.97 g, 2.00 mmol)과 5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-N4-벤조일데옥시시티딘 (1.52 g, 2.40 mmol)으로부터 표제 화합물 (3.10 g, 97%)을 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=6.8 Hz), 1.12-1.53 (m,90H), 1.71-1.85 (m, 6H), 2.36-2.43 (m, 1H), 2.83-2.95 (m,1H), 3.49 (ddd, 2H, J=3.2, 10.4, 18.0 Hz), 3.78 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.95-4.07 (m, 6H), 4.30-4.35 (m, 1H), 4.83 (dd, 2H, J=16.0, 23.6 Hz), 5.51-5.58 (m, 1H), 6.33 (dd, 1H, J=6.0, 7.6 Hz), 6.86 (dd, 4H, J=2.4, 8.8 Hz), 7.20-7.38 (m, 11H), 7.50-7.54 (m, 2H), 7.60-7.64 (m, 1H), 7.88 (d, 2H, J=7.2 Hz), 8.14 (d, 1H, J=7.6 Hz), 8.40-8.60 (brs, 1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ14.09, 22.70, 26.10, 26.15, 29.38, 29.46, 29.61, 29.68, 29.75, 30.40, 31.95, 39.47, 55.26, 61.10, 63.17, 69.33, 73.59, 75.77, 84.68, 87.32, 108.54, 113.46, 123.32, 127.22, 128.10, 128.13, 129.10, 130.04, 130.10, 133.20, 135.13, 135.30, 144.07, 153.01, 158.84, 165.81, 167.43.
TOF/MS (ESI): calcd for C100H149N3O13Na [M+Na]+ 1623.0988, found 1623.1069.
〔실시예 3-6〕
(2) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 N4-벤조일데옥시시티딘-3'-일의 합성
Figure pct00057
실시예 2-2의 방법에 따라서, 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-N6-벤조일데옥시시티딘-3'-일 (3.04 g, 1.90 mmol)로부터 표제 화합물 (2.39 g, 97%)을 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=6.8 Hz), 1.20-1.51 (m, 90H), 1.71-1.85 (m, 6H), 2.46-2.53 (m, 1H), 2.69-2.80 (m, 1H), 3.92-4.04 (m, 8H), 4.27 (d, 1H, J=2.4 Hz), 4.84 (dd, 2H, J=16.4, 20.4 Hz), 5.51-5.53 (m, 1H), 6.26 (dd, 1H, J=5.6, 7.6 Hz), 7.29 (s, 2H), 7.48-7.62 (m, 4H), 7.88 (d, 2H, J=7.6 Hz), 8.28 (d, 1H, J=7.2 Hz), 8.66-8.91 (brs, 1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ14.10, 22.71, 26.10, 26.14, 29.38, 29.45, 29.61, 29.68, 29.75, 30.39, 31.95, 38.46, 61.15, 62.37, 69.34, 73.61, 75.80, 85.82, 88.44, 108.55, 123.25, 127.61, 129.07, 133.25, 143.25, 145.32, 153.01, 162.38, 165.89, 167.79.
TOF/MS (ESI): calcd for C79H131N3O11Na [M+Na]+ 1320.9681, found 1320.9723.
〔실시예 3-7〕
(3) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일)포스포릴)-N4-벤조일데옥시시티딘-3'-일의 합성
Figure pct00058
실시예 2-3의 방법에 따라서, 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 N4-벤조일데옥시시티딘-3'-일 (2.27 g, 1.75 mmol)과 N2-이소부티릴 DMTr-dG-CE-포스포르아미다이트 (2.94 g, 3.50 mmol)로부터 표제 화합물 (3.02 g, 99%)을 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=6.8 Hz), 1.08-1.53 (m, 96H), 1.70-1.84 (m, 6H), 2.36-2.62 (m, 2H), 2.75-3.30 (m, 7H), 3.75-3.87 (m, 2H), 3.98-4.04 (m, 6H), 4.26-4.53 (m, 6H), 4.78-4.89 (m, 2H), 5.26-5.29 (m, 1H), 5.42-5.52 (m, 1H), 5.92-6.11 (m, 1H), 6.24-6.38 (m, 1H), 7.26-7.28 (m, 2H), 7.38-7.67 (m, 4H), 7.80-7.89 (m, 2H), 7.95-8.00 (m, 1H), 8.14-8.24 (m, 1H), 10.22-10.70 (m, 1H), 12.08-12.22 (m, 1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ14.14, 18.96, 18.99, 19.05, 19.81, 19.87, 22.71, 26.08, 26.15, 29.34, 29.38, 29.46, 29.61, 29.68, 29.75, 30.37, 31.94, 36.01, 36.06, 38.37, 38.83, 39.11, 61.09, 62.01, 62.59, 62.64, 62.77, 62.82, 67.20, 67.51, 69.25, 73.60, 74.76, 75.03, 80.49, 83.50, 83.75, 84.57, 84.81, 86.32, 87.91, 88.04, 97.29, 97.50, 108.30, 116.55, 116.68, 120.72, 121.05, 123.01, 127.73, 127.80, 128.88, 128.93, 132.71, 132.81, 133.28, 138.19, 138.30, 143.13, 144.20, 144.42, 147.79, 147.99, 148.16, 148.33, 152.99, 155.25, 155.65, 162.86, 163.04, 165.92, 165.95, 167.77, 167.85, 179.77, 180.03.
TOF/MS (ESI): calcd for C96H152N9O18PNa [M+Na]+ 1773.0891, found 1773.0914.
〔실시예 3-8〕
(4) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일)포스포릴)-N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일)포스포릴)-N4-벤조일데옥시시티딘-3'-일의 합성
Figure pct00059
실시예 3-4의 방법에 따라서, 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일)포스포릴)-N4-벤조일데옥시시티딘-3'-일 (2.80 g, 1.60 mmol)과 DMTr-dT-CE 포스포르아미다이트 (3.58 g, 4.80 mmol)로부터 표제 화합물 (3.44 g, 89%)을 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=6.8 Hz), 1.13-1.55 (m, 99H), 1.71-1.84 (m, 6H), 1.95-2.14 (m, 2H), 2.27-2.95 (m, 9H), 3.00-3.55 (m, 3H), 3.73-3.81 (m, 6H), 3.99-4.04 (m, 6H), 4.14-4.48 (m, 11H), 4.82-4.85 (m, 2H), 5.05-5.53 (m, 3H), 6.00-6.46 (m, 3H), 6.76-6.87 (m, 4H), 7.20-7.36 (m, 11H), 7.44-7.64 (m, 4H), 7.72-7.88 (m, 3H), 8.11-8.22 (m, 1H), 9.00-9.15 (m, 1H), 10.29-10.49 (m, 1H), 12.14-12.17 (m, 1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ11.67, 11.71, 14.13, 18.86, 18.90, 18.94, 18.98, 19.00, 19.59, 19.67, 19.81, 19.88, 22.70, 26.08, 26.15, 29.35, 29.37, 29.46, 29.61, 29.67, 29.74, 29.77, 30.37, 31.94, 35.88, 38.67, 55.29, 61.13, 62.66, 62.73, 62.87, 63.33, 69.25, 73.59, 84.20, 84.28, 85.31, 87.29, 108.31, 111.69, 111.73, 113.15, 113.35, 116.64, 116.79, 123.01, 127.31, 127.71, 127.77, 128.08, 128.99, 129.14, 130.09, 133.33, 134.93, 134.97, 135.01, 135.17, 143.14, 143.96, 144.04, 147.84, 147.93, 148.16, 150.40, 150.48, 152.99, 155.48, 158.83, 163.52, 165.96, 167.86, 179.65, 179.76.
TOF/MS (ESI): calcd for C130H186N12O27P2Na [M+Na]+ 2432.2923, found 2432.2937.
2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일)포스포릴)-N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일의 합성
〔실시예 3-9〕
(1) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일의 합성
Figure pct00060
실시예 2-1의 방법에 따라서, 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 (1.97 g, 2.00 mmol)과 5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-N2-이소부티릴데옥시구아노신 (1.54 g, 2.40 mmol)으로부터 표제 화합물 (3.14 g, 98%)을 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.86-0.89 (m, 12H), 1.03 (d, 3H, J=6.8 Hz), 1.11-1.40 (m, 84H), 1.42-1.50 (m, 6H), 1.70-1.83 (m, 6H), 1.95 (sept, 1H, J=6.8 Hz), 2.51 (dd, 1H, J=5.2, 12.4 Hz), 3.17-3.29 (m, 2H), 3.42 (dd, 1H, J=3.2, 10.4 Hz), 3.76 (s, 3H), 3.77 (s, 3H), 3.98-4.05 (m, 6H), 4.22 (s, 1H), 4.83 (s, 2H), 5.70 (d, 1H, J=6.0 Hz), 6.07 (dd, 1H, J=5.2, 9.2 Hz), 6.76-6.82 (m, 4H), 7.16-7.38 (m, 9H), 7.43-7.50 (m, 2H), 7.71 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 11.96 (s, 1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ14.13, 18.64, 18.77, 22.71, 26.05, 26.11, 29.32, 29.37, 29.42, 29.60, 29.66, 29.68, 29.74, 29.75, 29.77, 30.33, 31.94, 36.17, 37.21, 55.24, 61.24, 63.48, 69.30, 73.64, 76.16, 83.94, 84.44, 86.49, 108.33, 113.27, 113.29, 122.34, 123.24, 127.15, 128.02, 129.99, 135.47, 135.77, 137.83, 143.04, 144.70, 147.18, 148.02, 152.94, 155.38, 158.74, 166.00, 167.35, 178.30.
TOF/MS (ESI): calcd for C98H151N5O13Na [M+Na]+ 1629.1206, found 1629.1240.
〔실시예 3-10〕
(2) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일의 합성
Figure pct00061
실시예 2-2의 방법에 따라서, 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일 (3.05 g, 1.90 mmol)로부터 표제 화합물 (2.42 g, 98%)을 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=6.8 Hz), 1.20-1.50 (m, 96H), 1.71-1.85 (m, 6H), 2.48(dd, 1H, J=5.6, 14.0 Hz), 2.72(sept, 1H, J=6.8 Hz), 2.97-3.05 (m, 1H), 3.49(brs, 2H), 3.86-4.05 (m, 8H), 4.26(s, 1H), 4.86(s, 2H), 5.59(d, 1H, J=6.0), 6.13(dd, 1H, J=5.6, 9.2 Hz), 7.30(s, 2H), 7.86(s, 2H), 8.82(s, 1H), 12.16(s, 1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ14.10, 18.94, 18.97, 22.71, 26.09, 26.15, 29.38, 29.45, 29.61, 29.69, 29.75, 30.39, 31.96, 36.50, 37.85, 61.26, 62.92, 69.43, 73.67, 86.27, 86.34, 108.59, 122.49, 123.26, 138.42, 143.34, 147.09, 147.73, 153.04, 155.01, 166.02, 167.52, 178.69.
TOF/MS (ESI): calcd for C77H133N5O11Na [M+Na]+ 1326.9899, found 1326.9879.
〔실시예 3-11〕
(3) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(티미딘-3'-일)포스포릴)-N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일의 합성
Figure pct00062
실시예 2-3의 방법에 따라서, 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일 (2.25 g, 1.72 mmol)과 DMTr-dT-CE-포스포르아미다이트 (2.57 g, 3.45 mmol)로부터 표제 화합물 (2.68 g, 94%)을 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=6.8 Hz), 1.05-1.52 (m, 96H), 1.71-1.89 (m, 9H), 2.24-2.78 (m, 8H), 3.38-3.49 (m, 1H), 3.69-4.05 (m, 8H), 4.17-4.89 (m, 7H), 5.20-5.29 (m, 1H), 5.55-5.66 (m, 1H), 6.08-6.24 (m, 2H), 7.30(s, 2H), 7.42-7.54 (m, 1H), 7.68-7.73 (m, 1H), 8.64-8.83 (m, 1H), 10.20-10.32 (m, 1H), 12.11-12.22 (m, 1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ12.46, 14.14, 18.59, 18.93, 19.06, 19.42, 19.66, 19.71, 19.73, 19.78, 22.71, 26.07, 26.14, 29.33, 29.38, 29.45, 29.61, 29.68, 29.74, 30.36, 31.94, 35.57, 35.93, 38.42, 61.12, 61.24, 61.71, 61.89, 62.56, 62.64, 62.69, 69.26, 73.62, 75.69, 75.81, 79.29, 82.80, 85.73, 86.04, 86.41, 108.29, 111.23, 111.32, 116.46, 116.51, 122.39, 122.98, 123.03, 136.55, 136.78, 139.04, 143.11, 143.18, 147.93, 147.98, 150.30, 150.37, 152.98, 155.39, 155.59, 163.53, 163.62, 166.00, 166.12, 167.69, 167.86, 179.92, 180.04.
TOF/MS (ESI): calcd for C90H149N8O18PNa [M+Na]+ 1684.0625, found 1684.0648.
〔실시예 3-12〕
(4) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일)포스포릴)-N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일의 합성
Figure pct00063
실시예 3-4의 방법에 따라서, 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(티미딘-3'-일)포스포릴)-N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일 (2.50 g, 1.50 mmol)과 DMTr-dT-CE 포스포르아미다이트 (3.36 g, 4.51 mmol)로부터 표제 화합물 (3.11 g, 89%)을 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=6.4 Hz), 1.05-1.53 (m, 96H), 1.71-1.88 (m, 13H), 2.24-2.87 (m, 10H), 3.25-3.53 (m, 3H), 3.72-3.81 (m, 7H), 3.95-4.05 (m, 6H), 4.05-4.72 (m, 10H), 4.81-4.91 (m, 2H), 5.03-5.24 (m, 2H), 5.55-5.61 (m, 1H), 5.95-6.43 (m, 3H), 6.82-6.85 (m, 4H), 7.18-7.37 (m, 12H), 7.53(s, 1H), 7.73(s, 1H), 9.10-9.31 (m, 2H), 10.05-10.09 (m, 1H), 12.18(s, 1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ11.68, 11.72, 12.33, 12.37, 14.14, 18.78, 18.88, 19.13, 19.24, 19.58, 19.65, 19.70, 19.77, 22.70, 26.08, 26.16, 29.34, 29.38, 29.46, 29.62, 29.68, 29.74, 29.77, 30.36, 31.94, 35.84, 35.99, 37.65, 38.95, 55.29, 61.18, 62.62, 62.77, 62.83, 63.26, 67.10, 67.45, 69.27, 73.63, 75.55, 79.91, 82.62, 82.87, 84.27, 87.31, 108.29, 111.50, 111.80, 113.15, 113.35, 116.66, 116.74, 116.86, 122.51, 122.59, 123.07, 127.32, 128.08, 128.13, 129.13, 130.13, 134.95, 135.12, 136.32, 138.75, 143.10, 143.99, 147.93, 147.97, 148.04, 150.28, 150.37, 150.60, 150.69, 152.98, 155.49, 155.54, 158.81, 163.63, 163.68, 163.79, 166.02, 167.69, 167.71, 179.73, 179.77.
TOF/MS (ESI): calcd for C124H183N11O27P2Na [M+Na]+ 2343.2658, found 2343.2742.
2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일)포스포릴)-N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일의 합성
〔실시예 3-13〕
(1) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일의 합성
Figure pct00064
실시예 2-3의 방법에 따라서, 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 티미딘-3'-일 (1.82 g, 1.50 mmol)과 N2-이소부티릴-DMTr-dG-CE 포스포르아미다이트 (2.52 g, 3.00 mmol)로부터 표제 화합물 (2.43 g, 98%)을 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=7.2 Hz), 1.00-1.41 (m, 90H), 1.41-1.54 (m, 6H), 1.71-1.85 (m, 6H), 1.92-2.00 (m, 3H), 2.24-2.97 (m, 6H), 3.68-4.08 (m, 8H), 4.14-4.54 (m, 6H), 4.78-4.92 (m, 2H), 5.14-5.78 (m, 2H), 5.95-6.24 (m, 2H), 7.27-7.43 (m, 3H), 7.87-7.95 (m, 1H), 10.19-10.49 (m, 2H), 12.24-12.38 (m, 1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ12.35, 14.14, 19.01, 19.06, 19.10, 19.73, 19.80, 19.85, 22.70, 26.07, 26.14, 29.33, 29.38, 29.45, 29.61, 29.68, 29.74, 30.02, 30.36, 31.77, 31.94, 35.80, 35.92, 36.62, 38.19, 38.48, 61.05, 61.13, 62.26, 62.44, 62.49, 62.70, 62.75, 66.12, 67.37, 69.21, 73.58, 74.51, 80.47, 80.64, 82.33, 82.40, 85.33, 85.52, 86.12, 86.55, 86.84, 87.31, 108.24, 111.24, 112.18, 116.50, 116.83, 121.43, 121.59, 123.05, 123.08, 136.55, 137.73, 138.66, 138.99, 143.02, 143.06, 147.75, 147.78, 148.49, 150.42, 151.06, 152.96, 152.97, 155.23, 155.27, 164.76, 164.83, 165.92, 165.96, 167.73, 167.80, 180.26, 180.45.
TOF/MS (ESI): calcd for C90H149N8O18PNa [M+Na]+ 1684.0625, found 1684.0643.
〔실시예 3-14〕
(2) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일)포스포릴)-N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일의 합성
Figure pct00065
실시예 3-4의 방법에 따라서, 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일 (2.20 g, 1.32 mmol)과 DMTr-dT-CE-포스포르아미다이트 (2.96 g, 3.97 mmol)로부터 표제 화합물 (2.76 g, 90%)을 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=6.8 Hz), 1.13-1.47 (m, 96H), 1.71-2.01 (m, 15H), 2.35-2.85 (m, 10H), 3.31-3.51 (m, 2H), 3.78 (s, 6H), 3.96-4.04 (m, 6H), 4.05-4.59 (m, 10H), 4.84 (s, 2H), 5.13-5.55 (m, 3H), 6.11-6.42 (m, 3H), 6.83 (d, 4H, J=8.8 Hz), 7.16-7.37 (m, 12H), 7.45-7.55 (m, 1H), 7.72-7.80 (m, 1H), 9.23-10.39 (m, 3H), 12.15-12.21 (m, 1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ11.70, 12.39, 12.45, 14.14, 18.82, 18.86, 19.04, 19.08, 19.58, 19.65, 19.74, 19.80, 22.70, 26.08, 26.15, 29.34, 29.38, 29.46, 29.61, 29.68, 29.74, 29.77, 30.37, 31.94, 35.89, 36.13, 36.52, 38.68, 55.29, 61.12, 62.74, 62.89, 63.22, 63.32, 67.12, 69.23, 73.60, 74.76, 79.03, 79.98, 82.49, 84.28, 85.14, 87.28, 108.26, 111.37, 111.49, 111.69, 111.72, 113.14, 113.34, 116.74, 116.84, 116.92, 121.89, 121.96, 123.02, 127.08, 127.31, 127.76, 127.85, 128.08, 129.13, 130.11, 134.94, 134.99, 135.03, 135.20, 135.30, 136.93, 138.26, 139.46, 143.07, 143.96, 144.04, 147.98, 148.02, 148.14, 148.23, 150.46, 150.57, 150.62, 152.97, 155.42, 158.60, 158.79, 163.79, 164.43, 164.50, 165.96, 167.79, 179.87, 179.95.
TOF/MS (ESI): calcd for C124H183N11O27P2Na [M+Na]+ 2343.2658, found 2343.2693.
〔실시예 3-15〕
2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-티미딘-3'-일)포스포로티오일)-티미딘-3'-일의 합성
Figure pct00066
2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 티미딘-3'-일 (1.82 g, 1.50 mmol), DMTr-dT-CE 포스포르아미다이트 (2.23 g, 3.00 mmol)의 디클로로메탄 현탁액 (27 mL)에 5-벤질티오-1H-테트라졸 (0.58 g, 3.00 mmol)을 첨가한 후, 실온에서 1.5시간 교반했다. 다음으로, ((N,N-디메틸아미노메틸리덴)아미노)-3H-1,2,4-디티아졸린-3-티온 (1.13 g, 4.50 mmol)과 피리딘 (0.87 g, 9.00 mmol)을 첨가한 후, 실온에서 1.5시간 교반했다. 반응액에 아세토니트릴 (109 mL)을 적하함으로써 석출한 고체를 여과했다. 고체를 아세토니트릴-디클로로메탄 혼합 용매와 아세토니트릴, 메탄올로 세정한 후, 50℃에서 감압 건조하고, 표제 화합물 (2.71 g, 96%)을 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=6.8 Hz), 1.11-1.53 (m, 93H), 1.72-1.84 (m, 6H), 1.92-1.95 (m, 3H), 2.28-2.49 (m, 3H), 2.57-2.66 (m, 2H), 2.77 (dd, 1H, J=6.0, 7.2 Hz), 3.39-3.50(m, 2H), 3.79(s, 6H), 3.97-4.04(m, 6H), 4.09-4.40 (m, 6H), 4.83 (d, 2H, J=6.8 Hz), 5.31-5.43 (m, 2H), 6.27-6.32 (m, 1H), 6.35-6.41 (m, 1H), 6.82-6.86 (m, 4H), 7.22-7.32 (m, 10H), 7.37-7.39 (m, 2H), 7.56 (s, 1H), 8.69-8.91 (m, 2H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ11.79, 12.58, 14.14, 19.31, 19.40, 19.47, 19.55, 22.70, 26.07, 26.13, 29.32, 29.38, 29.44, 29.60, 29.68, 29.73, 30.35, 31.94, 36.78, 39.00, 55.29, 61.06, 62.65, 62.69, 62.90, 62.94, 63.21, 67.63, 69.19, 73.56, 75.01, 75.09, 80.18, 82.27, 82.36, 84.40, 84.53, 84.91, 85.39, 87.31, 108.25, 111.74, 111.90, 113.37, 116.15, 116.39, 123.06, 127.28, 128.05, 128.11, 130.09, 134.97, 135.03, 135.06, 135.30, 143.01, 144.04, 150.22, 150.27, 150.35, 152.94, 158.78, 163.36, 163.46, 165.86, 165.88, 167.71, 167.76.
TOF/MS (ESI): calcd for C107H162N5O19PSNa [M+Na]+ 1907.1220, found 1907.1223.
4. 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 N4-벤조일-5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-O-메틸우리딘-3'-일)포스포릴)-2'-O-메틸시티딘-3'-일의 합성
〔실시예 4-1〕
(1) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 N4-벤조일-5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-O-메틸시티딘-3'-일의 합성
Figure pct00067
실시예 2-1의 방법에 따라서, 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 (1.97 g, 2.00 mmol)과 N4-벤조일-5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-O-메틸시티딘 (1.59 g, 2.40 mmol)으로부터 표제 화합물 (2.96 g, 91%)을 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=6.8 Hz), 1.10-1.38 (m, 84H), 1.42-1.50 (m, 6H), 1.70-1.85 (m, 6H), 3.48 (d, 1H, J=11.6 Hz), 3.62 (s, 3H), 3.69 (d, 1H, J=11.2 Hz), 3.71 (s, 1H), 3.83 (s, 5H), 3.97-4.04 (m, 6H), 4.18 (d, 1H, J=4.8 Hz), 4.36 (d, 1H, J=8.4 Hz), 4.80-4.89 (m, 2H), 5.29 (dd, 1H, J=4.8 Hz, 8.4 Hz), 6.11 (d, 1H, J=1.6 Hz), 6.90 (dd, 4H, J=2.0, 8.8 Hz), 7.27-7.42 (m, 11H), 7.52 (t, 2H, J=7.6 Hz), 7.62 (t, 1H, J=7.6 Hz), 7.89 (d, 2H, J=7.6 Hz), 8.55 (d, 1H, J=6.4 Hz), 8.61-8.72 (brs, 1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ14.14, 22.70, 26.07, 26.09, 26.11, 29.31, 29.38, 29.43, 29.59, 29.66, 29.68, 29.73, 30.34, 31.94, 52.31, 55.24, 59.15, 60.47, 60.72, 61.06, 69.14, 70.07, 73.53, 80.42, 82.21, 87.49, 88.91, 108.22, 113.43, 123.33, 123.50, 127.27, 127.49, 128.17, 129.06, 130.06, 130.08, 133.17, 135.07, 135.22, 142.85, 143.86, 152.87, 152.90, 158.75, 165.64, 165.84, 167.17, 168.42.
TOF/MS (ESI): calcd for C101H151N3O14Na [M+Na]+ 1653.1094, found 1653.1171.
〔실시예 4-2〕
(2) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 N4-벤조일-2'-O-메틸시티딘-3'-일의 합성
Figure pct00068
실시예 2-2의 방법에 따라서, 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 N4-벤조일-5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-O-메틸시티딘-3'-일 (2.80 g, 1.72 mmol)로부터 표제 화합물 (2.26 g, 99%)을 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=6.8 Hz), 1.10-1.55 (m, 90H), 1.70-1.85 (m, 6H), 3.51 (s, 3H), 3.79-3.83 (m, 2H), 3.95-4.08 (m, 7H), 4.34 (d, 1H, J=4.8 Hz), 4.50 (t, 1H, J=4.8 Hz), 4.83-4.90 (m, 2H), 5.44 (t, 1H, J=4.8 Hz), 5.73 (d, 1H, J=4.4 Hz), 7.29-7.30 (m, 2H), 7.47-7.66 (m, 3H), 7.90 (d, 2H, J=7.6 Hz), 8.16 (d, 1H, J=7.6 Hz), 8.75-9.00 (brs, 1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ14.14, 22.71, 26.07, 26.11, 29.30, 29.38, 29.42, 29.59, 29.66, 29.68, 29.73, 30.34, 31.94, 52.32, 59.19, 60.97, 61.07, 61.24, 69.15, 69.20, 71.18, 73.56, 80.58, 83.43, 92.64, 108.28, 123.20, 123.50, 127.61, 129.09, 132.80, 133.36, 142.99, 147.07, 152.87, 152.93, 162.63, 165.85, 167.66, 168.43.
TOF/MS (ESI): calcd for C80H133N3O12Na [M+Na]+ 1350.9787, found 1350.9855.
〔실시예 4-3〕
(3) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 N4-벤조일-5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-O-메틸우리딘-3'-일)포스포릴)-2'-O-메틸시티딘-3'-일의 합성
Figure pct00069
실시예 3-4의 방법에 따라서, 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 N4-벤조일-2'-O-메틸시티딘-3'-일 (2.10 g, 1.58 mmol)과 5'-O-DMTr-2'-O-메틸우리딘-CE 포스포르아미다이트 (2.40 g, 3.16 mmol)로부터 조체(粗體) (2.80 g)를 얻었다. 조체(粗體)를 컬럼 크로마토그래피 (구형태 중성 실리카겔, 전개 용매: 디클로로메탄-메탄올)로 정제함으로써, 표제 화합물 (2.21 g, 70%)을 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=6.8 Hz), 1.10-1.53 (m, 90H), 1.71-1.83 (m, 6H), 2.50-2.74 (m, 1H), 2.79 (t, 1H, J=6.4 Hz), 3.46-3.76 (m, 8H), 3.77 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.97-4.04 (m, 6H), 4.11-4.58 (m, 7H), 4.82-4.95 (m, 2H), 5.13-5.30 (m, 3H), 5.86-6.08 (m, 2H), 6.82-6.88 (m, 4H), 7.23-7.36 (m, 11H), 7.51 (t, 2H, 8.0 Hz), 7.61 (t, 1H, J=7.2 Hz), 7.82-8.05 (m, 4H), 8.69-8.96 (m, 2H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ14.14, 19.52, 19.58, 22.70, 26.07, 26.13, 29.33, 29.38, 29.45, 29.60, 29.68, 29.73, 30.35, 31.94, 55.25, 55.30, 58.84, 59.27, 60.82, 61.14, 62.35, 62.40, 62.68, 62.73, 65.55, 66.16, 69.19, 69.90, 70.16, 73.56, 74.28, 74.38, 79.38, 79.46, 79.52, 79.60, 81.32, 81.38, 81.52, 82.19, 86.71, 86.87, 87.46, 90.07, 90.64, 102.58, 102.62, 108.24, 113.34, 113.36, 116.36, 116.43, 123.19, 127.39, 127.44, 127.64, 128.10, 128.12, 128.26, 128.29, 129.04, 130.21, 130.27, 130.30, 133.28, 134.64, 134.73, 139.53, 139.75, 142.96, 143.82, 143.90, 150.02, 150.07, 152.93, 158.81, 158.84, 158.86, 162.70, 162.73, 165.77, 165.81, 167.22, 167.26.
TOF/MS (ESI): calcd for C114H167N6O22PNa [M+Na]+ 2026.1769, found 2026.1764.
2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-플루오로데옥시우리딘-3'-일)포스포릴)-2'-플루오로-N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일의 합성
〔실시예 4-4〕
(1) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-플루오로-N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일의 합성
Figure pct00070
실시예 2-1의 방법에 따라서, 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 (1.97 g, 2.00 mmol)과 5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-플루오로-N2-이소부티릴데옥시구아노신 (1.58 g, 2.40 mmol)으로부터 표제 화합물 (3.13 g, 96%)을 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.81 (d, 3H, J=6.8 Hz), 0.88 (t, 9H, J=6.8 Hz), 0.94 (d, 3H, J=7.2 Hz), 1.10-1.53 (m, 90H), 1.70-1.87 (m, 6H), 1.93 (sept, 1H, J=6.8 Hz), 3.17 (d, 1H, J=11.2 Hz), 3.59 (d, 1H, J=11.2 Hz), 3.77 (s, 6H), 3.97-4.05 (m, 6H), 4.32-4.34 (m, 1H), 4.85 (d, 1H, J=16.0 Hz), 4.92 (d, 1H, J=16.0 Hz), 5.92-6.07 (m, 2H), 6.18-6.24 (m, 1H), 6.78 (dd, 4H, J=5.2, 8.8 Hz), 7.16-7.29 (m, 7H), 7.30 (s, 2H), 7.36 (d, 2H, J=8.0 Hz), 7.79 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 11.92 (s, 1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ14.14, 18.39, 18.47, 18.88, 18.91, 22.70, 25.61, 26.06, 26.11, 29.30, 29.38, 29.42, 29.59, 29.66, 29.68, 29.73, 30.34, 31.94, 36.25, 36.43, 55.24, 55.25, 60.68, 60.84, 61.24, 67.98, 69.25, 70.85, 71.00, 73.61, 79.97, 81.44, 83.15, 86.36, 86.47, 86.67, 90.96, 108.26, 113.15, 113.22, 122.23, 123.17, 127.08, 127.13, 127.76, 127.85, 127.89, 127.98, 129.13, 129.85, 129.92, 135.20, 135.66, 138.43, 138.70, 139.43, 143.05, 144.47, 147.30, 147.34, 147.47, 147.90, 152.93, 152.96, 155.04, 155.31, 158.62, 158.69, 165.65, 165.89, 167.23, 167.60, 178.18, 178.76.
TOF/MS (ESI): calcd for C98H150N5O13F[M+H]+ 1623.1136, found 1623.1160.
〔실시예 4-5〕
(2) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 2'-플루오로-N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일의 합성
Figure pct00071
실시예 2-2의 방법에 따라서, 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-플루오로-N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일 (3.00 g, 1.85 mmol)로부터 표제 화합물 (2.40 g, 98%)을 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=6.8 Hz), 1.10-1.55 (m, 96H), 1.70-1.85 (m, 6H), 2.71 (sept, 1H, J=6.8 Hz), 3.37-3.72 (brs, 2H), 3.80 (d, 1H, J=11.6 Hz), 3.99-4.05 (m, 7H), 4.34 (d, 1H, J=4.0 Hz), 4.94 (s, 2H), 5.69(dt, 1H, J=4.4, 52.0 Hz), 5.78-5.84 (m, 1H), 5.97 (dd, 1H, J=4.0, 16.0 Hz), 7.31 (s, 2H), 7.90 (s, 1H), 9.22 (s, 1H), 12.15 (s, 1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ14.14, 18.85, 18.95, 22.70, 26.06, 26.11, 29.30, 29.38, 29.43, 29.60, 29.68, 29.74, 30.33, 31.94, 36.32, 60.86, 69.24, 71.25, 71.39, 73.60, 82.89, 87.22, 87.55, 89.60, 91.55, 108.27, 121.56, 123.15, 138.45, 142.99, 147.29, 148.08, 152.91, 155.03, 165.91, 167.26, 179.15.
TOF/MS (ESI): calcd for C77H132N5O11FNa [M+Na]+ 1344.9805, found 1344.9834.
〔실시예 4-6〕
(3) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-플루오로데옥시우리딘-3'-일)포스포릴)-2'-플루오로-N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일의 합성
Figure pct00072
실시예 3-4의 방법에 따라서, 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 2'-플루오로-N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일 (2.20 g, 1.66 mmol)과 5'-O-DMTr-2'-플루오로-데옥시우리딘-CE 포스포르아미다이트 (2.49 g, 3.33 mmol)로부터 표제 화합물 (3.07 g, 93%)을 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 0.88 (t, 9H, J=7.2 Hz), 0.97-1.53 (m, 96H), 1.71-1.83 (m, 6H), 2.56-2.75 (m, 3H), 3.37-3.66 (m, 2H), 3.74-3.79 (m, 6H), 3.97-4.55 (m, 12H), 4.78-5.08 (m, 2H), 5.08-5.50 (m, 3H), 5.70-6.01 (m, 4H), 6.80-6.84 (m, 4H), 7.17-7.40 (m, 11H), 7.57-7.73 (m, 2H), 8.94-9.07 (m, 1H), 10.00 (s, 1H), 12.18-12.26 (m, 1H).
δ13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ14.14, 18.51, 18.76, 18.92, 19.20, 19.55, 19.62, 22.70, 26.07, 26.14, 29.33, 29.38, 29.45, 29.60, 29.68, 29.74, 30.36, 31.94, 35.90, 35.99, 55.23, 55.30, 60.70, 60.88, 62.85, 69.26, 73.61, 79.54, 79.63, 87.17, 87.21, 102.93, 108.31, 113.31, 116.34, 116.52, 122.55, 122.61, 122.95, 122.98, 127.25, 127.31, 128.07, 128.10, 130.14, 134.79, 134.88, 134.92, 138.65, 140.55, 143.15, 143.19, 143.92, 144.02, 147.71, 147.74, 148.30, 148.43, 149.68, 149.98, 152.98, 152.99, 155.30, 155.48, 158.74, 158.79, 162.67, 165.89, 166.00, 167.20, 179.68.
TOF/MS (ESI): calcd for C110H163N8O20F2PNa [M+Na]+ 2008.1587, found 2008.1593.
2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-O-(tert-부틸디메틸실릴)우리딘-3'-일)포스포릴)-2'-O-(tert-부틸디메틸실릴)우리딘-3'-일의 합성
〔실시예 4-7〕
(1) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-O-(tert-부틸디메틸실릴)우리딘-3'-일의 합성
Figure pct00073
2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 (2.46 g, 2.50 mmol)과 5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-O-(tert-부틸디메틸실릴)우리딘 (1.98 g, 3.00 mmol)의 디클로로메탄 (25 mL) 현탁액에, 4-디메틸아미노피리딘 (0.03 g, 0.25 mmol)과 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보이미드염산염 (0.58 g, 3.00 mmol)을 첨가한 후, 실온에서 5시간 교반했다. 반응액에 아세토니트릴 (148 mL)을 적하함으로써 석출한 고체를 여과했다. 고체를 아세토니트릴-디클로로메탄 혼합 용매로 세정한 후, 50℃에서 감압 건조하고, 조체(粗體) (2.89g)를 얻었다. 조체(粗體)를 컬럼 크로마토그래피 (구형태 중성 실리카겔, 전개 용매: 디클로로메탄-THF)로 정제함으로써, 표제 화합물 (2.76 g, 68%)을 백색 고체로서 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.08 (s, 3H), 0.11 (s, 3H), 0.81-0.92 (m, 18H), 1.04-1.53 (m, 90H), 1.70-1.84 (m, 6H), 3.49 (dd, 2H, J=10.8, 27.6 Hz), 3.79 (s, 6H), 3.79-4.04 (m, 6H), 4.26-4.27 (m, 1H), 4.56 (t, 1H, J=5.2 Hz), 4.81 (d, 1H, J=16.0 Hz), 4.96 (d, 1H, 16.4 Hz), 5.30 (d, 1H, J=8.0 Hz), 5.47 (t, 1H, J=4.0 Hz), 6.02 (d, 1H, J=5.6 Hz), 6.85 (d, 4H, J=8.4 Hz), 7.23-7.37 (m, 11H), 7.85 (d, 1H, J=8.4 Hz), 8.37 (s, 1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ-5.22, -5.09, 14.14, 17.87, 22.71, 25.51, 26.07, 26.11, 29.30, 29.38, 29.43, 29.59, 29.67, 29.74, 30.34, 31.94, 55.25, 60.75, 62.47, 69.14, 73.36, 73.54, 74.40, 81.20, 87.58, 88.03, 102.56, 108.25, 113.40, 113.43, 123.33, 127.33, 128.03, 128.14, 130.03, 130.17, 134.71, 134.83, 140.00, 142.87, 144.10, 150.14, 152.89, 158.78, 158.83, 162.59, 165.67, 167.10.
TOF/MS (ESI): calcd for C99H158N2O14SiNa [M+Na]+ 1650.1380, found 1650.1455.
〔실시예 4-8〕
(2) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 2'-O-(tert-부틸디메틸실릴)우리딘-3'-일의 합성
Figure pct00074
실시예 2-2의 방법에 따라서, 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-O-(tert-부틸디메틸실릴)우리딘-3'-일 (2.60 g, 1.60 mmol)로부터 표제 화합물 (2.05 g, 97%)을 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.04 (s, 3H), 0.07 (s, 3H), 0.81-0.92 (m, 18H), 1.11-1.53 (m, 90H), 1.70-1.85 (m, 6H), 2.95-3.10 (brs, 1H), 3.77-3.82 (m, 1H), 3.93-4.04 (m, 7H), 4.25-4.28 (m, 1H), 4.67 (t, 1H, J=5.2 Hz), 4.81 (d, 1H, 16.0 Hz), 4.96 (d, 1H, 16.0 Hz), 5.34 (dd, 1H, J=3.2, 4.8 Hz), 5.60 (d, 1H, J=5.6 Hz), 5.76 (d, 1H, J=8.0 Hz), 7.29 (s, 2H), 7.63 (d, 1H, J=8.0 Hz), 8.71 (s, 1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ-5.22, -5.19, 14.14, 17.88, 22.71, 25.52, 26.07, 26.10, 29.30, 29.38, 29.42, 29.59, 29.66, 29.68, 29.73, 30.34, 31.94, 60.84, 61.84, 69.20, 72.78, 73.24, 73.57, 82.99, 92.46, 102.70, 108.32, 123.24, 141.88, 142.99, 150.17, 152.92, 162.72, 165.78, 167.38.
TOF/MS (ESI): calcd for C78H140N2O12SiNa [M+Na]+ 1348.0073, found 1348.0115.
〔실시예 4-9〕
(3) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-O-(tert-부틸디메틸실릴)우리딘-3'-일)포스포릴)-2'-O-(tert-부틸디메틸실릴)우리딘-3'-일의 합성
Figure pct00075
실시예 3-4의 방법에 따라서, 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 2'-O-(tert-부틸디메틸실릴)우리딘-3'-일 (1.95 g, 1.47 mmol)과 5'-O-DMTr-2'-O-(tert-부틸디메틸실릴)우리딘-CE 포스포르아미다이트 (2.53 g, 2.94 mmol)로부터 표제 화합물 (2.84 g, 92%)을 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.03-0.13 (m, 12H), 0.86-0.90 (m, 27H), 1.02-1.53 (m, 90H), 1.68-1.84 (m, 6H), 2.45-2.69 (m, 1H), 2.73 (t, 1H, J=6.0 Hz), 3.48 (d, 1H, J=10.8 Hz), 3.60-3.68 (m, 1H), 3.76-3.84 (m, 6H), 3.97-4.04 (m, 6H), 4.10-4.58 (m, 8H), 4.73-4.84 (m, 1H), 4.90-5.03 (m, 2H), 5.20-5.25 (m, 2H), 5.67-5.78 (m, 2H), 5.95-6.03 (m, 1H), 6.80-6.89 (m, 4H), 7.21-7.44 (m, 12H), 7.84 (d, 1H, J=8.0 Hz), 8.72-8.83 (m, 2H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ-5.27, -5.24, -5.07, -4.94, -4.92, 14.14, 17.86, 18.06, 19.50, 19.57, 19.65, 22.70, 25.50, 25.55, 25.60, 26.07, 26.13, 29.32, 29.38, 29.44, 29.60, 29.68, 29.74, 30.35, 31.94, 55.27, 55.30, 60.69, 61.96, 62.37, 62.42, 62.58, 62.63, 69.19, 71.39, 71.60, 72.86, 73.00, 73.57, 74.47, 79.43, 79.51, 81.75, 87.65, 87.68, 87.99, 88.18, 90.56, 91.22, 102.54, 102.64, 103.05, 103.13, 108.28, 113.39, 116.31, 116.40, 123.21, 127.43, 128.13, 128.21, 128.25, 130.25, 130.27, 130.32, 134.56, 134.65, 134.70, 134.73, 139.84, 140.05, 140.15, 142.97, 143.01, 143.92, 143.97, 149.95, 150.19, 150.40, 152.92, 158.83, 158.87, 162.53, 162.58, 162.69, 165.64, 165.68, 167.05, 167.12.
TOF/MS (ESI): calcd for C117H186N5O22Si2PNa [M+Na]+ 2123.2763, found 2123.2769.
5. 3-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)프로피온산의 합성
〔실시예 5-1〕
(1) 3-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)프로피온산 tert-부틸의 합성
Figure pct00076
3,4,5-트리스(옥타데실옥시)안식향산 (2.78 g, 3.0 mmol), 4-디메틸아미노피리딘 (0.04 g, 0.3 mmol), 3-히드록시프로피온산 tert-부틸 (4.39 g, 30.0 mmol), 트리에틸아민 (0.46 g, 4.5 mmol)의 디클로로메탄 (60 mL) 현탁액에 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보이미드염산염 (0.86 g, 4.5 mmol)을 첨가한 후, 실온에서 20시간 교반했다. 반응액에 아세토니트릴 (180 mL)을 적하함으로써 석출한 고체를 여과했다. 고체를 아세토니트릴-디클로로메탄 혼합 용매로 세정한 후, 50℃에서 감압 건조하고, 조체(粗體) (3.07g)를 얻었다. 조체(粗體)를 컬럼 크로마토그래피 (구형태 중성 실리카겔, 전개 용매: 디클로로메탄)로 정제함으로써, 표제 화합물 (1.90 g, 60%)을 백색 고체로서 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=7.0 Hz), 1.15-1.55 (m, 99H), 1.70-1.85 (m, 6H), 2.68 (t, 2H, J=6.4 Hz), 3.95-4.05 (m, 6H), 4.53 (t, 2H, J=6.4 Hz), 7.23(s, 2H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ14.08, 22.68, 26.08, 28.09, 29.35, 29.40, 29.57, 29.65, 29.71, 30.35, 31.93, 35.42, 60.72, 69.25, 73.51, 80.97, 108.19, 124.57, 152.84, 166.14, 169.93.
TOF/MS (ESI): calcd for C68H126O7Na [M+Na]+ 1077.9401, found 1077.9427.
〔실시예 5-2〕
(2) 3-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)프로피온산의 합성
Figure pct00077
3-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)프로피온산 tert-부틸 (2.75 g, 2.6 mmol)의 디클로로메탄 (52 mL) 용액에 메탄술폰산 (3.75 g, 39.0 mmol)을 첨가한 후, 실온에서 20시간 교반했다. 반응액에 아세토니트릴 (156 mL)을 적하함으로써 석출한 고체를 여과했다. 고체를 아세토니트릴-디클로로메탄 혼합 용매와 아세토니트릴로 세정한 후, 50℃에서 감압 건조하고, 표제 화합물 (2.54 g, 98%)을 백색 고체로서 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=7.0 Hz), 1.15-1.55 (m, 90H), 1.70-1.85 (m, 6H), 2.85 (t, 2H, J=6.6 Hz), 3.95-4.10 (m, 6H), 4.57 (t, 2H, J=6.4 Hz), 7.23 (s, 2H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ14.10, 22.71, 26.10, 26.13, 29.38, 29.45, 29.61, 29.68, 29.75, 30.38, 31.96, 33.54, 59.99, 69.34, 73.57, 108.35, 124.32, 142.88, 152.91, 166.17.
TOF/MS (ESI): calcd for C64H118O7Na [M+Na]+ 1021.8775, found 1021.8817.
2-(N-메틸-3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤즈아미드)아세트산의 합성
〔실시예 5-3〕
(1) 2-(N-메틸-3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤즈아미드)아세트산 tert-부틸의 합성
Figure pct00078
3,4,5-트리스(옥타데실옥시)안식향산 (2.78 g, 3.0 mmol), 4-디메틸아미노피리딘 (0.04 g, 0.3 mmol), 사르코신 tert-부틸염산염 (2.73 g, 15.0 mmol), 트리에틸아민 (1.52 g, 15.0 mmol)의 디클로로메탄 (60 mL) 현탁액에 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보이미드염산염 (0.86 g, 4.5 mmol)을 첨가한 후, 실온에서 20시간 교반했다. 반응액에 아세토니트릴 (180 mL)을 적하함으로써 석출한 고체를 여과했다. 고체를 아세토니트릴-디클로로메탄 혼합 용매로 세정한 후, 50℃에서 감압 건조하고, 조체(粗體) (3.07g)를 얻었다. 조체(粗體)를 컬럼 크로마토그래피 (구형태 중성 실리카겔, 전개 용매: 디클로로메탄-THF)로 정제함으로써, 표제 화합물 (2.66 g, 84%)을 백색 고체로서 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=7.0 Hz), 1.15-1.55 (m, 99H), 1.70-1.85 (m, 6H), 3.04 (s, 3H), 3.80-4.20 (m, 8H), 6.63 (s, 2H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ14.01, 22.66, 26.13, 26.15, 28.16, 29.35, 29.42, 29.48, 29.65, 29.71, 30.39, 31.93, 69.51, 73.52, 82.02, 106.19, 130.61, 139.93, 153.25, 168.33, 172.01.
TOF/MS (ESI): calcd for C68H127NO6Na [M+Na]+ 1076.9561, found 1076.9591.
〔실시예 5-4〕
(2) 2-(N-메틸-3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤즈아미드)아세트산의 합성
Figure pct00079
실시예 5-2의 방법에 따라서, 2-(N-메틸-3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤즈아미드)아세트산 tert-부틸 (2.53 g, 2.4 mmol)로부터 표제 화합물 (2.38 g, 99%)을 백색 고체로서 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=7.0 Hz), 1.15-1.55 (m, 90H), 1.70-1.85 (m, 6H), 3.11 (s, 3H), 3.85-4.35 (m, 8H), 6.15-6.30 (brs, 1H), 6.66 (s, 2H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ14.05, 22.67, 26.12, 29.36, 29.43, 29.61, 29.66, 29.72, 29.98, 30.36, 31.93, 39.20, 50.02, 69.49, 73.56, 106.47, 129.16, 140.27, 152.97, 153.24, 172.11, 172.92.
TOF/MS (ESI): calcd for C64H118NO6 [M-H]- 996.8959, found 996.8947.
3-(3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤즈아미드)프로피온산의 합성
〔실시예 5-5〕
(1) 3-(3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤즈아미드)프로피온산 tert-부틸의 합성
Figure pct00080
3,4,5-트리스(옥타데실옥시)안식향산 (2.78 g, 3.0 mmol), 4-디메틸아미노피리딘 (0.04 g, 0.3 mmol), β-알라닌 tert-부틸에스테르염산염 (2.73 g, 15.0 mmol), 트리에틸아민 (1.52 g, 15.0 mmol)의 디클로로메탄 (60 mL) 현탁액에 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보이미드염산염 (0.86 g, 4.5 mmol)을 첨가한 후, 실온에서 19.5시간 교반했다. 반응액에 아세토니트릴 (180 mL)을 적하함으로써 석출한 고체를 여과했다. 고체를 아세토니트릴-디클로로메탄 혼합 용매로 세정한 후, 50℃에서 감압 건조하고, 조체(粗體) (3.12g)를 얻었다. 조체(粗體)를 컬럼 크로마토그래피 (구형태 중성 실리카겔, 전개 용매: 디클로로메탄-THF)로 정제함으로써, 표제 화합물 (2.75 g, 87%)을 백색 고체로서 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=7.0 Hz), 1.15-1.55 (m, 99H), 1.70-1.85 (m, 6H), 2.55 (t, 2H, J=5.8 Hz), 3.66 (q, 2H, J=6.0 Hz), 3.95-4.05 (m, 6H), 6.72 (t, 1H, J=6.0 Hz), 6.94 (s, 2H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ14.09, 22.71, 26.11, 28.16, 29.38, 29.43, 29.61, 29.68, 29.74, 30.36, 31.95, 35.18, 35.58, 69.45, 73.53, 81.19, 105.86, 129.57, 141.32, 153.14, 167.20, 172.27.
TOF/MS (ESI): calcd for C68H127NO6Na [M+Na]+ 1076.9561, found 1076.9579.
〔실시예 5-6〕
(2) 3-(3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤즈아미드)프로피온산의 합성
Figure pct00081
실시예 5-2의 방법에 따라서, 3-(3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤즈아미드)프로피온산 tert-부틸 (2.64 g, 2.5 mmol)로부터 표제 화합물 (2.52 g, 101%)을 백색 고체로서 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=7.0 Hz), 1.15-1.55 (m, 90H), 1.65-1.85 (m, 6H), 2.74 (t, 2H, J=5.8 Hz), 3.72 (t, 2H, J=5.8 Hz), 3.90-4.05 (m, 6H), 6.95 (s, 2H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ14.06, 22.71, 26.16, 26.19, 29.40, 29.50, 29.53, 29.65, 29.71, 29.77, 30.44, 31.98, 33.68, 35.85, 39.37, 69.77, 73.67, 106.51, 128.33, 142.29, 153.35, 168.43, 175.46.
TOF/MS (ESI): calcd for C64H118NO6 [M-H]- 996.8959, found 996.8912.
3-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)프로피온산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일의 합성
〔실시예 5-7〕
(1) 3-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)프로피온산 티미딘-3'-일의 합성
Figure pct00082
3-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)프로피온산 (2.40 g, 2.40 mmol), 5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘 (1.57 g, 2.88 mmol), 1-메틸이미다졸 (0.99 g, 12.00 mmol)의 THF (24 mL) 현탁액에 COMU (2.06 g, 4.80 mmol)을 첨가한 후, 실온에서 6.5시간 교반했다. 부가적으로 COMU (0.21 g, 0.48 mmol)을 첨가한 후, 실온에서 17.5시간 교반했다. 반응액에 아세토니트릴 (120 mL)을 적하함으로써 석출한 고체를 여과했다. 고체를 아세토니트릴-THF 혼합 용매로 세정한 후, 50℃에서 감압 건조하고, 조체(粗體) (2.76g)를 얻었다. 조체(粗體)를 정제하지 않고 다음 반응에 사용했다.
조체(粗體) (2.60g)의 디클로로메탄 용액 (68 mL)에 피롤 (0.57 g, 8.50 mmol), 트리플루오로아세트산 (0.24 g, 2.13 mmol)을 첨가한 후, 실온에서 3.5시간 교반했다. 부가적으로 트리플루오로아세트산 (0.05 g, 0.43 mmol)을 첨가한 후, 실온에서 1.5시간 교반했다. 반응액에 아세톤 (20 mL)과 아세토니트릴 (61 mL)을 적하함으로써 석출한 고체를 여과했다. 고체를 아세토니트릴-아세톤-디클로로메탄 혼합 용매와 아세토니트릴로 세정한 후, 50℃에서 감압 건조하고, 조체(粗體) (2.44g)를 얻었다. 조체(粗體)를 컬럼 크로마토그래피 (구형태 중성 실리카겔, 전개 용매: 디클로로메탄-THF)로 정제함으로써, 표제 화합물 (0.52 g, 18%)을 백색 고체로서 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=6.8 Hz), 1.15-1.55 (m, 90H), 1.65-1.85 (m, 7H), 1.92 (s, 3H), 2.30-2.40 (m, 1H), 2.45-2.55 (m, 1H), 2.60-2.70 (m, 1H), 2.80-2.90 (m, 2H), 3.85-3.95 (m, 2H), 3.95-4.05 (m, 6H), 4.05-4.10 (m, 1H), 4.55-.65 (m, 2H), 5.40-5.55 (m, 1H), 6.10-6.20 (m, 1H), 7.22 (s, 2H), 7.41(s, 1H), 8.58-8.64 (m, 1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ12.57, 14.14, 22.71, 26.07, 26.11, 29.33, 29.38, 29.43, 29.59, 29.67, 29.74, 30.02, 30.34, 31.94, 34.16, 36.90, 60.05, 62.58, 69.24, 73.54, 75.25, 85.10, 86.67, 108.06, 111.42, 124.14, 136.56, 142.69, 150.26, 152.87, 163.40, 166.10, 170.43.
TOF/MS (ESI): calcd for C74H130N2O11Na [M+Na]+ 1245.9572, found 1245.9548.
〔실시예 5-8〕
(2) 3-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)프로피온산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일의 합성
Figure pct00083
실시예 3-4의 방법에 따라서, 3-((3,4,5-트리스((옥타데실옥시)벤조일)옥시)프로피온산 티미딘-3'-일 (1.50 g, 1.23 mmol)과 DMTr-dT-CE 포스포르아미다이트 (1.83 g, 2.45 mmol)로부터 표제 화합물 (2.22 g, 96%)을 백색 고체로서 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=6.8 Hz), 1.10-1.38 (m, 84H), 1.41-1.50 (m, 9H), 1.70-1.83 (m, 7H), 1.91 (s, 3H), 2.30-2.46 (m, 3H), 2.62-2.68 (m, 2H), 2.75 (t, 1H, J=6.0 Hz), 2.84 (dd, 2H, J=4.8, 6.4 Hz), 3.37-3.42 (m, 1H), 3.50-3.55 (m, 1H), 3.79 (s, 6H), 3.98-4.02 (m, 6H), 4.12-4.38 (m, 6H), 4.56 (dd, 2H, J=4.8, 7.2 Hz), 5.16-5.20 (m, 1H), 5.28-5.35 (m, 1H), 6.21-6.26 (m, 1H), 6.38-6.44 (m, 1H), 6.84 (d, 4H, J=7.6 Hz), 7.21-7.32 (m, 10H), 7.34-7.37 (m, 2H), 7.50-7.59 (m, 1H), 8.91-9.06 (m, 2H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ11.72, 12.46, 14.13, 19.59, 19.66, 19.75, 22.70, 26.08, 26.15, 29.37, 29.46, 29.61, 29.67, 29.74, 30.36, 31.94, 33.94, 36.62, 38.95, 55.29, 59.89, 59.93, 62.39, 62.45, 62.54, 62.59, 63.23, 67.62, 69.27, 73.55, 74.09, 79.77, 79.82, 79.87, 79.92, 82.52, 84.29, 84.34, 84.46, 84.53, 85.36, 85.57, 87.34, 108.14, 111.70, 111.82, 113.36, 116.17, 116.36, 124.17, 127.34, 128.08, 128.14, 130.13, 134.94, 135.03, 135.07, 135.35, 135.49, 142.74, 143.97, 143.99, 150.23, 150.27, 150.38, 150.46, 152.89, 158.84, 163.40, 163.50, 166.14, 170.29, 170.34.
TOF/MS (ESI): calcd for C108H164N5O20PNa [M+Na]+ 1905.1605, found 1905.1636.
2-(N-메틸-3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤즈아미드)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일의 합성
〔실시예 5-9〕
(1) 2-(N-메틸-3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤즈아미드)아세트산 5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일의 합성
Figure pct00084
2-(N-메틸-3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤즈아미드)아세트산 (2.10 g, 2.10 mmol), 5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘 (1.37 g, 2.52 mmol), 1-메틸이미다졸 (0.86 g, 10.50 mmol)의 THF (32 mL) 현탁액에 COMU (1.80 g, 4.20 mmol)을 첨가한 후, 실온에서 3.5시간 교반했다. 부가적으로 COMU (0.27 g, 0.63 mmol)을 첨가한 후, 실온에서 20시간 교반했다. 반응액에 아세토니트릴 (158 mL)을 적하함으로써 석출한 고체를 여과했다. 고체를 아세토니트릴-THF 혼합 용매로 세정한 후, 50℃에서 감압 건조하고, 조체(粗體) (2.96g)를 얻었다. 조체(粗體)를 컬럼 크로마토그래피 (구형태 중성 실리카겔, 전개 용매: 디클로로메탄-THF)로 정제함으로써, 표제 화합물 (2.51 g, 78%)을 백색 고체로서 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=6.8 Hz), 1.15-1.55 (m, 93H), 1.65-1.90 (m, 6H), 2.35-2.60 (m, 2H), 3.08 (s, 3H), 3.45-3.55 (m, 2H), 3.79 (s, 6H), 3.85-4.00 (m, 6H), 4.10-4.40 (m, 3H), 5.50-5.60 (m, 1H), 6.40-6.50 (m, 1H), 6.65 (s, 2H), 6.80-6.90 (m, 4H), 7.20-7.40 (m, 9H), 7.62 (s, 1H), 8.36 (s, 1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ11.64, 14.07, 22.71, 26.17, 29.38, 29.48, 29.65, 29.70, 29.75, 30.41, 31.97, 38.01, 55.30, 63.79, 69.54, 73.58, 76.72, 84.09, 84.54, 87.42, 106.36, 111.64, 113.49, 127.31, 128.09, 128.26, 129.90, 130.15, 135.30, 135.38, 140.18, 144.29, 150.20, 153.29, 159.01, 163.21, 168.70, 172.20.
TOF/MS (ESI): calcd for C95H149N3O12Na [M+Na]+ 1547.1039, found 1547.1042.
〔실시예 5-10〕
(2) 2-(N-메틸-3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤즈아미드)아세트산 티미딘-3'-일의 합성
Figure pct00085
실시예 2-2의 방법에 따라서, 2-(N-메틸-3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤즈아미드)아세트산 5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일 (2.36 g, 1.55 mmol)로부터 표제 화합물 (1.86 g, 98%)을 백색 고체로서 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=6.8 Hz), 1.05-1.55 (m, 90H), 1.65-1.85 (m, 6H), 1.92 (s, 3H), 2.30-2.60 (m, 3H), 3.09 (s, 3H), 3.85-4.05 (m, 8H), 4.05-4.35 (m, 3H), 5.45 (s, 1H), 6.05-6.30 (brs, 1H), 6.64 (s, 2H), 7.44 (s, 1H), 8.28 (s, 1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ12.50, 14.08, 22.71, 26.17, 29.38, 29.47, 29.51, 29.65, 29.70, 29.75, 30.41, 31.97, 37.20, 39.06, 62.67, 69.59, 73.60, 75.74, 85.09, 86.62, 106.33, 111.45, 129.86, 136.38, 140.23, 150.26, 153.33, 163.22, 168.96, 172.29.
TOF/MS (ESI): calcd for C74H131N3O10Na [M+Na]+ 1244.9732, found 1244.9786.
〔실시예 5-11〕
(3) 2-(N-메틸-3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤즈아미드)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일의 합성
Figure pct00086
실시예 3-4의 방법에 따라서, 2-(N-메틸-3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤즈아미드)아세트산 티미딘-3'-일 (1.71 g, 1.40 mmol)과 DMTr-dT-CE-포스포르아미다이트 (2.09 g, 2.80 mmol)로부터 표제 화합물 (2.54 g, 96%)을 백색 고체로서 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=6.6 Hz), 1.05-1.55 (m, 93H), 1.65-1.85 (m, 6H), 1.91 (s, 3H), 2.30-2.55 (m, 3H), 2.60-2.80 (m, 3H), 3.08 (s, 3H), 3.35-3.45 (m, 1H), 3.50-3.60 (m, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.90-4.05 (m, 6H), 4.10-4.45 (m, 8H), 5.10-5.20 (m, 1H), 5.30-5.45 (m, 1H), 6.10-6.30 (brs, 1H), 6.35-6.45 (m, 1H), 6.64 (s, 2H), 6.75-6.90 (m, 4H), 7.15-7.40 (m, 10H), 7.49 (d, 1H, J=6.4 Hz), 8.50-8.75 (m, 2H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ11.76, 12.41, 12.46, 14.07, 19.63, 19.70, 19.78, 19.85, 22.70, 26.20, 29.37, 29.50, 29.52, 29.70, 29.75, 29.79, 30.43, 31.96, 36.86, 38.50, 39.03, 55.30, 55.34, 61.99, 62.10, 62.50, 62.55, 62.63, 63.33, 67.69, 69.61, 69.64, 73.60, 74.61, 79.78, 81.51, 82.43, 84.41, 84.52, 84.57, 85.65, 85.88, 86.36, 87.47, 106.43, 111.40, 111.78, 111.83, 111.89, 113.31, 113.50, 116.07, 116.42, 127.09, 127.38, 127.86, 128.11, 128.27, 129.21, 130.20, 135.07, 135.18, 135.45, 135.54, 136.37, 139.66, 140.30, 144.12, 147.51, 150.16, 150.21, 150.26, 150.38, 153.30, 158.81, 159.03, 163.33, 168.90, 172.25, 172.43.
TOF/MS (ESI): calcd for C108H165N6O19PNa [M+Na]+ 1904.1765, found 1904.1780.
3-(3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤즈아미드)프로피온산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일의 합성
〔실시예 5-12〕
(1) 3-(3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤즈아미드)프로피온산 5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일의 합성
Figure pct00087
3-(3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤즈아미드)프로피온산 (2.20 g, 2.20 mmol), 5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘 (1.44 g, 2.64 mmol), 1-메틸이미다졸 (0.90 g, 11.00 mmol)의 THF (44 mL) 현탁액에 COMU (1.88 g, 4.40 mmol)을 첨가한 후, 실온에서 3.5시간 교반했다. 부가적으로 1-메틸이미다졸 (0.36 g, 4.4 mmol), COMU (0.94 g, 2.20 mmol)을 첨가한 후, 실온에서 68시간 교반했다. 반응액에 아세토니트릴 (220 mL)을 적하함으로써 석출한 고체를 여과했다. 고체를 아세토니트릴-THF혼합 용매와 메탄올로 세정한 후, 50℃에서 감압 건조하고, 조체(粗體) (3.07g)를 얻었다. 조체(粗體)를 컬럼 크로마토그래피 (구형태 중성 실리카겔, 전개 용매: 디클로로메탄-THF)로 정제함으로써, 표제 화합물 (2.01 g, 60%)을 백색 고체로서 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=6.8 Hz), 1.15-1.55 (m, 93H), 1.60-1.85 (m, 6H), 2.40-2.55 (m, 2H), 2.65-2.75 (m, 2H), 3.40-3.55 (m, 2H), 3.65-3.75 (m, 2H), 3.78 (s, 6H), 3.95-4.05 (m, 6H), 4.14 (d, 1H, J=1.6 Hz), 5.47 (d, 1H, J=4.8 Hz), 6.42 (t, 1H, J=6.2 Hz), 6.59 (t, 1H, J=6.0 Hz), 6.80-6.90 (m, 4H), 6.94 (s, 2H), 7.20-7.45 (m, 9H), 7.60 (s, 1H), 8.43 (s, 1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ11.62, 14.14, 22.71, 26.11, 29.38, 29.45, 29.61, 29.68, 29.74, 30.33, 31.94, 34.05, 35.35, 37.92, 55.24, 63.65, 69.36, 73.51, 75.85, 83.94, 84.34, 87.24, 105.67, 111.65, 113.15, 113.32, 127.26, 127.76, 127.85, 128.06, 128.10, 129.12, 130.04, 130.08, 135.03, 135.24, 135.35, 141.26, 144.12, 150.23, 153.10, 158.78, 163.39, 167.36, 172.25.
TOF/MS (ESI): calcd for C95H149N3O12Na [M+Na]+ 1547.1039, found 1547.1014.
〔실시예 5-13〕
(2) 3-(3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤즈아미드)프로피온산 티미딘-3'-일의 합성
Figure pct00088
실시예 2-2의 방법에 따라서, 3-(3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤즈아미드)프로피온산 5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일 (1.91 g, 1.25 mmol)로부터 표제 화합물 (1.51 g, 99%)을 백색 고체로서 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=6.8 Hz), 1.15-1.55 (m, 90H), 1.65-1.85 (m, 6H), 1.91 (s, 3H), 2.30-2.55 (m, 2H), 2.55-2.75 (m, 3H), 3.65-3.75 (m, 2H), 3.85-3.95 (m, 2H), 3.95-4.05 (m, 6H), 4.05-4.10 (m, 1H), 5.35-5.40 (m, 1H), 6.16 (dd, 1H, J=6.0, 8.4 Hz), 6.55-6.65 (m, 1H), 6.95 (s, 2H), 7.43 (s, 1H), 8.25-8.55 (m, 1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ12.51, 14.09, 22.71, 26.13, 26.16, 29.38, 29.47, 29.62, 29.69, 29.75, 29.99, 30.38, 31.96, 34.26, 35.57, 37.12, 62.57, 69.57, 73.59, 75.09, 85.06, 86.65, 106.04, 111.41, 129.08, 136.51, 141.64, 150.33, 153.20, 163.40, 167.46, 172.39.
TOF/MS (ESI): calcd for C74H131N3O10Na [M+Na]+ 1244.9732, found 1244.9789.
〔실시예 5-14〕
(3) 3-(3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤즈아미드)프로피온산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일의 합성
Figure pct00089
실시예 3-4의 방법에 따라서, 3-(3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤즈아미드)프로피온산 티미딘-3'-일 (1.41 g, 1.15 mmol)과 DMTr-dT-CE-포스포르아미다이트 (1.71 g, 2.30 mmol)로부터 표제 화합물 (2.07 g, 95%)을 백색 고체로서 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t,9H, J=6.8 Hz), 1.15-1.55 (m, 93H), 1.65-1.85 (m, 7H), 1.90 (d, 3H, J=1.2 Hz), 2.25-2.55 (m, 3H), 2.55-2.80 (m, 5H), 3.30-3.45 (m, 1H), 3.50-3.60 (m, 1H), 3.60-3.75 (m, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.90-4.05 (m, 6H), 4.05-4.40 (m, 6H), 5.10-5.25 (m, 1H), 5.30-5.40 (m, 1H), 6.15-6.25 (m, 1H), 6.40-6.50 (m, 1H), 6.75-6.90 (m, 4H), 6.99 (d, 2H, J=3.6 Hz), 7.20-7.40 (m, 9H), 7.50-7.60 (m, 1H), 8.95-9.05 (m, 1H), 9.05-9.15 (m, 1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ11.72, 12.49, 14.14, 19.59, 19.67, 19.75, 22.71, 26.11, 26.14, 29.38, 29.47, 29.63, 29.69, 29.75, 29.78, 30.35, 31.94, 34.03, 35.53, 35.58, 36.64, 38.95, 55.29, 62.36, 62.41, 62.52, 62.57, 63.24, 67.60, 69.38, 73.53, 73.84, 79.90, 82.35, 82.44, 84.25, 84.32, 84.39, 85.48, 85.67, 87.35, 105.86, 111.64, 111.74, 111.88, 113.14, 113.35, 116.25, 116.44, 127.34, 127.76, 127.85, 128.09, 129.03, 129.13, 130.13, 134.91, 134.95, 135.00, 135.07, 135.48, 135.61, 141.22, 143.93, 143.97, 150.21, 150.26, 150.46, 150.49, 153.03, 158.83, 163.48, 163.53, 167.47, 167.51, 172.19.
TOF/MS (ESI): calcd for C108H165N6O19PNa [M+Na]+ 1904.1765, found 1904.1807.
6. 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 (4-(((6-(N6-벤조일아데닌-9-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)-6-(티민-1-일)모르폴린-2-일)메틸의 합성
〔실시예 6-1〕
(1) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 (6-(티민-1-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메틸의 합성
Figure pct00090
실시예 2-1의 방법에 따라서, 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 (1.97 g, 2.00 mmol)과 6-(히드록시메틸)-4-트리틸모르폴린-2-일)-5-메틸피리미딘-2,4-(1H,3H)-디온 (1.16 g, 2.40 mmol)으로부터 표제 화합물 (2.85 g, 98%)을 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=6.8 Hz), 1.11-1.53 (m, 91H), 1.68-1.83 (m, 6H), 1.84 (s, 3H), 3.13 (d, 1H, J=12.0 Hz), 3.37 (d, 1H, J=11.2 Hz), 3.98-4.04 (m, 6H), 4.17 (d, 2H, J=5.2 Hz), 4.37-4.41 (m, 1H), 4.78 (s, 2H), 6.13 (dd, 1H, J=2.0, 9.6 Hz), 7.00 (s, 1H), 7.15-7.26 (m, 3H), 7.26-7.38 (m, 8H), 7.34-7.58 (m, 6H), 8.34 (s, 1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ12.45, 14.13, 22.70, 26.07, 26.11, 29.32, 29.38, 29.42, 29.59, 29.66, 29.68, 29.73, 30.35, 31.94,49.01, 51.85, 60.89, 65.08, 69.19, 73.55, 74.58, 80.50, 108.31, 110.68, 123.33, 126.64, 127.97, 129.13, 135.33, 142.95, 149.63, 152.91, 163.23, 165.75, 167.64.
TOF/MS (ESI): calcd for C92H143N3O10Na [M+Na]+ 1473.0671, found 1473.0629.
〔실시예 6-2〕
(2) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 (6-(티민-1-일)모르폴린-2-일)메틸트리플루오로아세트산염의 합성
Figure pct00091
실시예 2-2의 방법에 따라서, 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산(6-(티민-1-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메틸 (2.76 g, 1.90 mmol)로부터 표제 화합물 (2.44 g, 97%)을 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=6.8 Hz), 1.10-1.39 (m, 84H), 1.42-1.50 (m, 6H), 1.70-1.83 (m, 6H), 1.87 (s, 3H), 2.95-3.16 (m, 2H), 3.42 (d, 1H, J=11.2 Hz), 3.62-3.75 (m, 1H), 3.95-4.05 (m, 6H), 4.31 (d, 1H, J=8.4 Hz), 4.46 (d, 2H, J=10.0 Hz), 4.86 (s, 2H), 6.17 (d, 1H, J=9.6 Hz), 7.25 (s, 1H), 7.30 (s, 2H), 10.15-10.75 (brs, 1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ12.48, 14.13, 22.71, 26.09, 26.15, 29.35, 29.39, 29.47, 29.63, 29.69, 29.75, 29.78, 30.38, 31.94, 43.24, 44.99, 60.87, 63.56, 69.21, 72.38, 73.57, 108.30, 112.18, 114.99, 117.90, 123.12, 134.33, 143.10, 150.40, 152.99, 162.55, 162.90, 163.78, 166.02, 167.45.
TOF/MS (ESI): calcd for C73H129N3O10-CF3COOH [M-H]- 1320.9528, found 1320.9517.
〔실시예 6-3〕
(3) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 (4-(((6-(N6-벤조일아데닌-9-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)-6-(티민-1-일)모르폴린-2-일)메틸의 합성
Figure pct00092
2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 (6-(티민-1-일)모르폴린-2-일)메틸트리플루오로아세트산염 (2.32 g, 1.76 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민 (4.16 g, 32.16 mmol)의 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논 (16 mL)-THF 용액 (18 mL)에 (6-(N6-벤조일아데닌-9-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메틸디메틸포스포로아미드클로리데이트 (3.81 g, 5.27 mmol)을 첨가한 후, 실온에서 2.5시간 교반했다. 반응액에 메탄올 (93 mL)을 첨가하여 얻어진 슬러리액을 감압 농축했다. 농축 잔사에 메탄올을 첨가하여 얻어진 슬러리액을 실온에서 30분간 교반한 후, 여과했다. 고체를 메탄올로 세정한 후, 50℃에서 감압 건조하고, 조체(粗體) (3.23g)를 얻었다. 조체(粗體)를 컬럼 크로마토그래피 (구형태 중성 실리카겔, 전개 용매: 디클로로메탄-메탄올)로 정제함으로써, 표제 화합물 (1.96 g, 59%)을 백색 고체로서 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=6.8 Hz), 1.10-1.53 (m, 90H), 1.55-1.97 (m, 12H), 2.46 (d, 3H, J=10.4 Hz), 2.63 (d, 3H, J=9.6 Hz), 2.46-2.63 (m, 1H), 3.12-3.60 (m, 4H), 3.75-4.07 (m, 10H), 4.15-4.50 (m, 2H), 4.78-4.91 (m, 2H), 5.41-5.53 (m, 1H), 6.42 (d, 1H, J=10.4 Hz), 7.12-7.20 (m, 4H), 7.20-7.32 (m, 9H), 7.40-7.58 (m, 8H), 8.05 (d, 2H, J=7.6 Hz), 8.07-8.10 (m, 1H), 8.68-8.80 (m, 1H), 9.50-9.76 (m, 2H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ12.44, 12.53, 14.14, 22.70, 26.08, 26.12, 29.32, 29.38, 29.43, 29.60, 29.68, 29.73, 30.35, 31.94, 36.47, 36.51, 36.63, 36.67, 44.56, 44.84, 47.02, 48.64, 48.78, 52.81, 53.10, 60.93, 64.23, 65.34, 65.69, 69.19, 73.56, 74.90, 74.97, 75.34, 79.53, 79.61, 79.97, 80.79, 108.27, 110.92, 111.25, 122.82, 123.26, 126.65, 128.00, 128.22, 128.29, 128.57, 128.63, 129.16, 132.47, 132.57, 133.49, 133.92, 134, 74, 134.80, 140.75, 140.78, 142.97, 143.00, 149.31, 149.68, 149.82, 150.12, 150.89, 151.40, 152.65, 152.77, 152.92, 152.94, 163.62, 165.02, 165.23, 165.82, 165.84, 167.56, 167.63.
TOF/MS (ESI): calcd for C111H165N10O14PNa [M+Na]+ 1916.2142, found 1916.2216.
2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 (4-(((6-(N4-벤조일시토신-1-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)-6-(N2-이소부티릴구아닌-9-일)모르폴린-2-일)메틸의 합성
〔실시예 6-4〕
(1) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 (6-(N2-이소부티릴구아닌-9-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메틸의 합성
Figure pct00093
실시예 2-1의 방법에 따라서, 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 (1.97 g, 2.00 mmol)과 N-(9-(6-(히드록시메틸)-4-트리틸모르폴린-2-일))-6-옥소-6,9-디히드로-1H-퓨린-2-일)이소부틸아미드 (1.51 g, 2.60 mmol)로부터 표제 화합물 (3.00 g, 97%)을 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=6.8 Hz), 1.10-1.60 (m, 97H), 1.70-1.90 (m, 7H), 2.64 (sept, 1H), 3.18 (d, 1H, J=12.0 Hz), 3.45 (d, 1H, J=11.6 Hz), 3.95-4.15 (m, 6H), 4.13-4.25 (m, 2H), 4.37-4.46 (m, 1H), 4.72 (d, 1H, J=16.0 Hz), 4.84 (d, 1H, J=16.0 Hz), 5.89 (dd, 1H, J=2.2, 9.8 Hz), 7.06-7.37 (m, 12H), 7.39-7.55 (m, 5H), 7.61 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 11.92 (s, 1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ14.14, 18.93, 19.03, 22.71, 26.07, 26.12, 29.33, 29.37, 29.42, 29.60, 29.67, 29.74, 30.35, 31.94, 36.64,49.04, 52.24, 60.90, 65.03, 69.25, 73.58, 74.22, 80.36, 108.38, 121.30, 123.27, 126.69, 127.96, 129.18, 136.12, 143.08, 147.32, 147.42, 152.95, 155.36, 165.98, 167.61, 177.85.
TOF/MS (ESI): calcd for C96H148N6O10Na [M+Na]+ 1568.1155, found 1568.1176.
〔실시예 6-5〕
(2) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 (6-(N2-이소부티릴구아닌-9-일)모르폴린-2-일)메틸트리플루오로아세트산염의 합성
Figure pct00094
실시예 2-2의 방법에 따라서, 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 (6-(N2-이소부티릴구아닌-9-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메틸 (2.78 g, 1.80 mmol)로부터 표제 화합물 (2.45 g, 96%)을 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.87 (t, 9H, J=6.8 Hz), 1.00-1.53 (m, 96H), 1.69-1.88 (m, 6H), 2.72-2.88 (m, 1H), 3.19-3.38 (m, 1H), 3.44-3.63 (m, 1H), 3.75-4.13 (m, 8H), 4.25-4.63 (m, 3H), 4.69-4.94 (m, 2H), 6.06-6.31 (m, 1H), 7.20-7.30 (m, 3H), 7.87-8.06 (m, 1H), 10.19-10.63 (brs, 1H), 12.19-12.63 (brs, 1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ14.12, 18.92, 22.70, 26.09, 26.16, 29.35, 29.38, 29.47, 29.63, 29.68, 29.75, 29.79, 30.04, 30.38, 31.94, 36.17, 42.86, 60.73, 63.62, 69.21, 71.44, 73.57, 108.29, 115.13, 118.04, 123.10, 143.09, 148.28, 152.95, 156.00, 165.93, 167.50, 180.39.
TOF/MS (ESI): calcd for C77H134N6O10-CF3COOH [M-H]- 1416.0012, found 1415.9960.
〔실시예 6-6〕
(3) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 (4-(((6-(N4-벤조일시토신-1-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)-6-(N2-이소부티릴구아닌-9-일)모르폴린-2-일)메틸의 합성
Figure pct00095
실시예 6-3의 방법에 따라서, 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 (6-(N2-이소부티릴구아닌-9-일)모르폴린-2-일)메틸트리플루오로아세트산염 (2.27 g, 1.60 mmol)과 (6-(N4-벤조일시토신-1-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메틸디메틸포스포로아미드클로리데이트 (3.35 g, 4.80 mmol)로부터 표제 화합물 (2.87 g, 91%)을 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.88 (t, 9H, J=6.8 Hz), 1.00-1.56 (m, 96H), 1.69-1.88 (m, 9H), 2.38-2.97 (m, 8H), 3.06-3.69 (m, 5H), 3.75-4.56 (m, 12H), 4.69-4.94 (m, 2H), 5.34-5.63 (m, 1H), 6.28-6.50 (m, 1H), 7.13-8.00 (m, 23H), 8.69-8.94 (brs, 1H), 9.31-9.63 (brs, 1H), 10.06-10.31 (brs, 1H), 12.13-12.31 (m, 1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ14.13, 19.01, 19.04, 19.17, 19.22, 22.70, 26.07, 26.12, 29.32, 29.37, 29.43, 29.60, 29.67, 29.73, 29.98, 30.35, 31.94, 36.17, 36.27, 36.64, 36.68, 36.74, 36.78, 45.00, 45.08, 46.96, 47.43, 48.25, 48.76, 52.48, 60.82, 60.90, 64.27, 65.84, 69.20, 69.22, 73.57, 74.31, 74.51, 75.41, 79.30, 80.47, 81.36, 81.59, 108.31, 121.25, 122.00, 123.26, 123.33, 126.67, 126.73, 127.73, 127.99, 128.80, 128.98, 132.71, 133.07, 133.27, 136.19, 137.10, 142.90, 143.01, 147.88, 148.00, 148.09, 152.89, 152.93, 155.79, 155.90, 165.79, 165.91, 167.56, 167.58, 178.67, 179.37.
TOF/MS (ESI): calcd for C114H170N11O15PNa [M+Na]+ 1987.2513, found 1987.2521.
7. 탈Tag화의 확인
〔실시예 7-1〕
5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일)포스포릴)-N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일)포스포릴)티미딘의 합성
Figure pct00096
2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일)포스포릴)-N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일 (233 mg, 0.10 mmol)의 THF (9 mL)-2-프로판올 (1 mL) 혼합 용액을 0℃로 냉각했다. 냉각 하에서, 4 mol/L-수소화 붕소 리튬-THF 용액 (0.125 mL, 0.50 mmol)을 첨가한 후, 동온도에서 30분간 교반했다. 반응액에 염화 암모니아 수용액을 첨가한 후, 디클로로메탄으로 3회 추출했다. 유기층을 식염수로 세정한 후, 무수 황산 나트륨으로 건조하고, 여과에 의해 황산 나트륨을 제거한 후, 여과액을 농축했다. 농축 잔사를 아세토니트릴에 현탁시킴으로써 석출한 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액을 농축했다. 농축 잔사의 디메틸술폭시드-메탄올 혼합 용액 (1:1, 5 mL)의 일부 (2.5 mL)를 분취 크로마토 장치로 5회에 나누어서 정제함으로써, 표제 화합물 (64 mg, 95%)을 백색 고체로서 얻었다.
분취 크로마토 조건: 칼럼 간토 카가쿠사 MightysilRP-18GP (5 μm, 20 Φ × 250 mm), 유속 5 mL/min, 이동상 아세토니트릴-물 (그라디언트 0 - 30 분 (아세토니트릴의 비율 50 → 60%).
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ1.12 (d, 6H, J=6.0 Hz), 1.42 (d, 3H, J=7.2 Hz), 1.74 (d, 3H, J=2.8 Hz), 2.07 (s, 1H), 2.30-2.41 (m, 3H), 2.60-2.90 (m, 6H), 3.18-3.29 (m, 2H), 3.73 (d, 6H, J=4.2 Hz), 4.00-4.43 (m, 12H), 4.97 (s, 1H), 5.10 (s, 1H), 5.51-5.52 (m, 1H), 6.15-6.25 (m, 3H), 6.88 (d, 4H, J=9.0 Hz), 7.20-7.50 (m, 11H), 8.17 (q, 1H, J=1.8 Hz), 11.33-12.07 (m, 3H).
13C-NMR (151 MHz, DMSO-d6): δ10.56, 10.88, 17.66, 33.65, 35.78, 52.00, 53.86, 56.34, 61.48, 61.80, 65.49, 66.58, 68.73, 76.58, 77.11, 81.63, 82.11, 82.52, 82.87, 84.98, 90.73, 108.72, 112.08, 116.98, 119.14, 125.69, 126.46, 126.77, 128.53, 133.81, 134.00, 134.26, 134.70, 136.15, 143.26, 147.04, 147.32, 149.14, 153.53, 156.99, 162.50, 168.14, 178.89.
TOF/MS (ESI): calcd for C61H69N11O21P2Na [M+Na]+ 1376.4, found 1376.6.
〔실시예 7-2〕
5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일)포스포릴)-N6-벤조일데옥시아데노신의 합성
Figure pct00097
실시예 7-1의 방법에 따라서, 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일)포스포릴)-N6-벤조일데옥시아데노신-3'-일 (244 mg, 0.10 mmol)로부터 표제 화합물 (55 mg, 75%)을 황색 고체로서 얻었다.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ1.17-1.30 (m, 7H), 1.74-1.79 (m, 3H), 1.97-2.30 (m, 2H), 2.45-2.51 (m, 2H), 2.68-2.76 (m, 1H), 2.79-2.83 (m, 1H), 2.96 (dt, 4H, J=6.4, 12.4 Hz), 3.03-3.12 (m, 1H), 3.22 (t, 1H, J=11.3 Hz), 3.77 (s, 6H), 3.93 (s, 1H), 4.07-4.38 (m, 11H), 5.07-5.45 (m, 5H), 6.05-6.45 (m, 3H), 6.85 (t, 4H, J=10.7 Hz), 7.24 (d, 5H, J=8.9 Hz), 7.29 (t, 2H, J=7.6 Hz), 7.36 (d, 2H, J=7.6 Hz), 7.49-7.56 (m, 3H), 7.65 (t, 1H, J=7.2 Hz), 7.90 (dt, 1H, J=3.0, 8.1 Hz), 8.07 (d, 2H, J=7.6 Hz), 8.13-8.16 (m, 1H), 10.89-12.13 (m, 3H).
13C-NMR (151 MHz, DMSO-d6): δ12.52, 14.58, 19.33, 35.33, 36.13, 37.02, 55.48, 60.34, 62.73, 63.24, 64.06, 67.31, 68.33, 70.66, 77.30, 79.12, 82.64, 83.37, 84.09, 84.74, 86.25, 113.58, 118.69, 121.00, 123.54, 127.24, 128.19, 128.72, 128.94, 130.23, 132.68, 133.50, 134.55, 135.77, 136.46, 137.81, 139.68, 145.08, 148.56, 149.12, 150.82, 155.31, 158.56, 161.08, 164.11, 165.03, 180.61.
TOF/MS (ESI): calcd for C68H72N14O20P2Na [M+Na]+ 1489.4, found 1489.4.
〔실시예 7-3〕
5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일)포스포릴)-N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일)포스포릴)-N4-벤조일데옥시시티딘의 합성
Figure pct00098
실시예 7-1의 방법에 따라서, 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일)포스포릴)-N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일)포스포릴)-N4-벤조일데옥시시티딘-3'-일 (243 mg, 0.10 mmol)로부터 표제 화합물 (57 mg, 79%)을 백색 고체로서 얻었다.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ1.09-1.12 (m, 6H), 1.42 (s, 3H), 1.75-2.10 (m, 4H), 2.61-2.95 (m, 7H), 3.15-3.25 (m, 3H), 3.70-3.77 (m, 7H), 4.08-4.36 (m, 11H), 5.09 (d, 2H, J=41.9 Hz), 5.32 (d, 2H, J=44.0 Hz), 6.18-6.29 (m, 3H), 6.85-6.88 (m, 4H), 7.20-7.22 (m, 5H), 7.29 (q, 2H, J=6.9 Hz), 7.34 (d, 2H, J=7.6 Hz), 7.41-7.53 (m, 4H), 7.86 (d, 2H, J=7.6 Hz), 8.19 (dt, 1H, J=4.4, 8.2 Hz), 8.84 (q, 1H, J=6.4 Hz), 11.34-12.05 (m, 3H).
13C-NMR (151 MHz, DMSO-d6): δ12.17, 19.35, 27.86, 35.35, 55.56, 57.07, 63.19, 63.61, 67.29, 68.60, 70.86, 78.19, 78.93, 82.62, 83.40, 83.86, 84.14, 86.67, 110.47, 113.78, 118.59, 118.88, 120.91, 127.38, 128.02, 128.69, 130.24, 131.86, 134.55, 135.51, 135.97, 137.92, 144.97, 148.76, 149.02, 150.84, 154.36, 155.25, 158.69, 164.09, 165.95, 166.18, 180.60.
TOF/MS (ESI): calcd for C67H72N12O21P2Li [M+Li]+ 1449.5, found 1449.6.
〔실시예 7-4〕
5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일)포스포릴)-N2-이소부티릴데옥시구아노신의 합성
Figure pct00099
실시예 7-1의 방법에 따라서, 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일)포스포릴)-N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일 (232 mg, 0.10 mmol)로부터 표제 화합물 (63 mg, 93%)을 백색 고체로서 얻었다.
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ1.12 (d, 6H, J=6.2 Hz), 1.42 (d, 3H, J=7.6 Hz), 1.73 (d, 3H, J=2.7 Hz), 2.07 (s, 1H), 2.32-2.43 (m, 3H), 2.61-2.91 (m, 6H), 3.20-3.29 (m, 2H), 3.73 (d, 6H, J=3.8 Hz), 4.04-4.43 (m, 12H), 4.97 (s, 1H), 5.10 (s, 1H), 5.51-5.52 (m, 1H), 6.13-6.26 (m, 3H), 6.88 (d, 4H, J=8.9 Hz), 7.23 (d, 5H, J=7.6 Hz), 7.30 (t, 2H, J=6.2 Hz), 7.36 (d, 2H, J=8.2 Hz), 7.43-7.47 (m, 2H), 7.89-8.18 (m, 1H), 11.33-12.07 (m, 3H).
13C-NMR (151 MHz, DMSO-d6): δ10.46, 10.84, 17.69, 17.83, 33.61, 35.32, 36.22, 53.86, 61.50, 61.98, 65.53, 66.44, 68.89, 75.88, 77.15, 80.92, 81.78, 82.16, 82.47, 82.92, 83.51, 85.00, 108.75, 108.90, 112.08, 116.92, 119.11, 125.71, 126.48, 126.77, 128.55, 133.80, 134.02, 134.33, 134.53, 136.24, 143.27, 146.96, 147.20, 149.17, 153.63, 157.01, 162.41, 178.92.
TOF/MS (ESI): calcd for C61H69N11O21P2Na [M+Na]+ 1376.4, found 1376.6.
〔실시예 7-5〕
5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-티미딘-3'-일)포스포로티오일)-티미딘의 합성
Figure pct00100
2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-티미딘-3'-일)포스포로티오일)-티미딘-3'-일 (189 mg, 0.10 mmol)의 THF (9 mL)-2-프로판올 (1 mL) 혼합 용액을 0℃로 냉각했다. 냉각 하에서, 4 mol/L-수소화 붕소 리튬-THF 용액 (0.125 mL, 0.50 mmol)을 첨가한 후, 동온도에서 30분간 교반했다. 반응액에 염화 암모니아 수용액을 첨가한 후, 디클로로메탄으로 3회 추출했다. 유기층을 식염수로 세정한 후, 무수 황산 나트륨으로 건조하고, 여과에 의해 황산 나트륨을 제거한 후, 여과액을 농축했다. 농축 잔사를 아세토니트릴에 현탁시킴으로써 석출한 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액을 농축했다. 농축 잔사를 칼럼 크로마토그래피 (실리카겔, 전개 용매: 클로로포름-메탄올)로 정제함으로써, 표제 화합물 (86 mg, 93%)을 백색 고체로서 얻었다.
1H-NMR (600 MHz, CDCl3): δ1.46 (d, 3H, J=15.8 Hz), 1.91 (d, 3H, J=8.2 Hz), 2.21-2.79 (m, 6H), 3.39-3.49 (m, 2H), 3.79 (d, 6H, J=3.4 Hz), 4.08-4.52 (m, 8H), 5.26-5.31 (m, 1H), 6.25-6.41 (m, 2H), 6.85 (dd, 4H, J=2.7, 8.9 Hz), 7.22-7.38 (m, 9H), 7.58(d, 1H, J=24.1 Hz), 9.45-10.50 (m, 2H).
13C-NMR (151 MHz, CDCl3): δ11.90, 12.57, 19.43, 38.92, 39.90, 55.30, 62.59, 63.36, 67.70, 71.03, 80.38, 84.66, 85.46, 87.28, 111.32, 111.97, 113.38, 116.54, 127.28, 128.00, 128.11, 130.06, 135.00, 135.80, 144.09, 150.64, 150.92, 158.74, 163.98.
TOF/MS (ESI): calcd for C44H48N5O13PSNa [M+Na]+ 940.3, found 940.2.
〔실시예 7-6〕
5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-플루오로데옥시우리딘-3'-일)포스포릴)-2'-플루오로-N2-이소부티릴데옥시구아노신의 합성
Figure pct00101
2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-플루오로데옥시우리딘-3'-일)포스포릴)-2'-플루오로-N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일 (0.397 g, 0.200 mmol)의 THF (27 mL)-2-프로판올 (3 mL)의 혼합 용액을 0 내지 -10℃로 냉각했다. 냉각 하에서, 4 mol/L-수소화 붕소 리튬-THF 용액 (0.10 mL, 0.400 mmol)을 첨가한 후, 동온도에서 20분간 교반했다. 반응액에 10% 염화 암모니아 수용액 (4 mL)을 첨가한 후 분액하고, 유기층을 10% 식염수로 세정했다. 유기층을 무수 황산 나트륨으로 건조하고, 여과에 의해 황산 나트륨을 제거한 후, 여과액을 농축했다. 농축 잔사에 메탄올을 첨가함으로써 석출한 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액을 농축, 건조했다. 농축 잔사를 칼럼 크로마토그래피 (구형태 중성 실리카겔, 전개 용매: 디클로로메탄-메탄올)로 정제함으로써, 표제 화합물 (0.137 g, 67%)을 백색 고체로서 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ1.16-1.26 (m, 6H), 2.19 (s, 2H), 2.45-2.87 (m, 3H), 3.44-3.66 (m, 2H), 3.72-3.75 (m, 6H), 3.92-4.18 (m, 2H), 4.25-4.50 (m, 4H), 4.89-5.55 (m, 6H), 5.85-6.00 (m, 2H), 6.80-6.82 (m, 4H), 7.15-7.30 (m, 7H), 7.33-7.37 (m, 2H), 7.71-7.82 (m, 2H), 10.05-10.42 (brs, 1H), 10.55-10.87 (brs, 1H), 12.36 (s, 1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ18.75, 18.85, 19.01, 19.07, 19.38, 19.45, 36.01, 50.81, 55.26, 55.28, 60.65, 62.85, 67.86, 80.26, 81.13, 87.13, 87.19, 87.53, 87.88, 90.59, 92.53, 102.62, 113.33, 116.74, 121.28, 127.26, 128.05, 128.19, 130.22, 134.80, 134.91, 134.96, 135.07, 140.41, 144.01, 144.11, 148.00, 148.06, 148.50, 148.55, 150.44, 155.70, 158.76, 163.72, 180.33, 180.39.
TOF/MS (ESI): calcd for C47H49N8O14F2PNa [M+Na]+ 1041.2972, found 1041.2975.
〔실시예 7-7〕
N4-벤조일-5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-O-메틸우리딘-3'-일)포스포릴)-2'-O-메틸시티딘의 합성
Figure pct00102
N,N-디이소프로필에틸아민 (0.065 g, 0.50 mmol)의 THF (13.5 mL)와 2-프로판올 (1.5 mL)의 혼합 용액을 0 내지 -10℃로 냉각했다. 냉각 하에서, 4 mol/L-수소화 붕소 리튬-THF 용액 (0.125 mL, 0.50 mmol)을 첨가한 후, 동온도에서 10분간 교반했다. 다음으로 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 N4-벤조일-5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-O-메틸우리딘-3'-일)포스포릴)-2'-O-메틸시티딘-3'-일 (0.200 g, 0.10 mmol)의 THF (0.9 mL)-2-프로판올 (0.1 mL)의 혼합 용액을 첨가한 후, 동온도에서 0.5시간 교반했다. 반응액에 10% 염화 암모니아 수용액 (2 mL)을 첨가한 후 분액하고, 유기층을 10% 식염수로 세정했다. 유기층을 무수 황산 나트륨으로 건조하고, 여과에 의해 황산 나트륨을 제거한 후, 여과액을 농축했다. 농축 잔사에 메탄올을 첨가함으로써 석출한 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액을 농축, 건조했다. 농축 잔사를 칼럼 크로마토그래피 (구형태 중성 실리카겔, 전개 용매: 디클로로메탄-메탄올)로 정제함으로써, 표제 화합물 (0.055 g, 53%)을 백색 고체로서 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ2.00-2.27 (brs, 2H), 2.55-2.74 (m, 1H), 2.80 (t, 1H, J=6.2 Hz), 3.14-3.41 (m, 1H), 3.44-3.92 (m, 14H), 4.03-4.64 (m, 7H), 5.12 (q, 1H, J=5.6 Hz), 5.27 (t, 1H, J=8.0 Hz), 5.87-6.05 (m, 2H), 6.78-6.89 (m, 4H), 7.19-7.64 (m, 12H), 7.76-8.16 (m, 4H), 9.05-9.42 (brs, 1H), 9.50-9.87 (brs, 1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ19.54, 19.56, 19.61, 19.64, 55.28, 55.32, 58.80, 58.82, 58.93, 61.30, 61.34, 62.38, 62.43, 62.68, 62.73, 66.03, 66.08, 66.41, 66.46, 67.85, 67.95, 74.30, 74.34, 74.42, 74.47, 81.32, 81.41, 81.49, 81.58, 81.64, 81.72, 82.17, 82.99, 83.08, 86.58, 86.79, 87.46, 87.48, 89.42, 89.51, 96.78, 102.69, 102.71, 113.39, 116.35, 116.48, 127.37, 127.42, 127.80, 127.85, 128.12, 128.25, 128.29, 128.57, 128.90, 128.93, 130.22, 130.27, 130.30, 131.01, 132.94, 133.02, 133.14, 133.17, 134.72, 134.75, 134.82, 134.84, 139.51, 139.66, 143.90, 143.97, 144.26, 150.43, 154.73, 158.81, 158.85, 162.82, 162.86, 163.22, 166.72.
TOF/MS (ESI): calcd for C51H53N6O16PNa [M+Na]+ 1059.3153, found 1059.3202.
〔실시예 7-8〕
5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-O-(tert-부틸디메틸실릴)우리딘-3'-일)포스포릴)-2'-O-(tert-부틸디메틸실릴)우리딘의 합성
Figure pct00103
2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-O-(tert-부틸디메틸실릴)우리딘-3'-일)포스포릴)-2'-O-(tert-부틸디메틸실릴)우리딘-3'-일 (0.420 g, 0.20 mmol)의 THF (27 mL)-2-프로판올 (3 mL)의 혼합 용액을 0 내지 -10℃로 냉각했다. 냉각 하에서, 4 mol/L-수소화 붕소 리튬-THF 용액 (0.25 mL, 1.00 mmol)을 첨가한 후, 동온도에서 1.5시간 교반했다. 반응액에 10% 염화 암모니아 수용액 (4 mL)을 첨가한 후 분액하고, 유기층을 10% 식염수로 세정했다. 유기층을 무수 황산 나트륨으로 건조하고, 여과에 의해 황산 나트륨을 제거한 후, 여과액을 농축했다. 농축 잔사에 메탄올을 첨가함으로써 석출한 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액을 농축, 건조했다. 농축 잔사를 칼럼 크로마토그래피 (구형태 중성 실리카겔, 전개 용매: 디클로로메탄-메탄올)로 정제함으로써, 표제 화합물 (0.135 g, 60%)을 백색 고체로서 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.11-0.15 (m, 12H), 0.89-0.93 (m, 18H), 1.66-1.84 (brs, 2H), 2.50-2.77 (m, 3H), 3.46-3.67 (m, 2H), 3.80 (s, 6H), 3.98-4.55 (m, 9H), 4.92-4.96 (m, 1H), 5.23-5.27 (m, 1H), 5.61-5.75 (m, 2H), 5.97-6.00 (m, 1H), 6.84-6.87 (m, 4H), 7.14-7.45 (m, 10H), 7.77-7.87 (m, 1H), 9.00-9.50 (brs, 2H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ-5.14, -4.98, -4.96, -4.90, -4.82, -4.76, -4.74, -4.70, -4.68, 17.96, 18.02, 18.06, 19.54, 19.60, 19.67, 25.56, 25.60, 25.66, 25.69, 55.31, 62.02, 62.29, 62.34, 62.52, 62.57, 62.62, 67.06, 67.12, 67.32, 69.38, 69.54, 70.49, 70.93, 73.61, 74.57, 74.63, 74.71, 74.88, 81.55, 81.60, 81.73, 81.84, 81.93, 82.01, 87.37, 87.65, 87.85, 87.95, 88.05, 91.58, 91.81, 93.18, 93.89, 102.60, 102.67, 102.76, 102.82, 102.86, 113.41, 116.26, 116.30, 127.41, 127.45, 128.13, 128.17, 128.21, 130.16, 130.23, 130.29, 130.34, 134.65, 134.69, 134.72, 134.75, 139.67, 139.75, 140.36, 140.40, 141.65, 141.77, 143.99, 144.03, 149.97, 150.09, 150.19, 150.40, 150.55, 150.75, 158.83, 158.88, 162.93, 163.00, 163.18.
TOF/MS (ESI): calcd for C54H72N5O16Si2PNa [M+Na]+ 1156.4148, found 1156.4148.
5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일)포스포릴)티미딘의 합성
〔실시예 7-9〕
(1) 3-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)프로피온산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일로부터의 합성
Figure pct00104
실시예 7-8의 방법에 따라서, 3-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)프로피온산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일 (0.377 g, 0.200 mmol)로부터 표제 화합물 (0.136 g, 76%)을 백색 고체로서 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ1.41(d, 3H, J=5.4 Hz), 1.87(d, 3H, J=2.0 Hz), 2.19-2.27 (m, 1H), 2.34-2.48 (m, 2H), 2.62-2.77 (m, 3H), 3.39 (t, 1H, J=7.2 Hz), 3.47-3.52 (m, 1H), 3.78(s, 6H), 4.07-4.55 (m, 8H), 5.12-5.18 (m, 1H), 6.18-6.24 (m, 1H), 6.35-6.40 (m, 1H), 6.84(d, 4H, J=8.8 Hz), 7.21-7.31 (m, 8H), 7.32-7.38 (m, 2H), 7.51-7.58 (m, 1H), 9.92-10.14 (m, 2H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ11.78, 12.45, 12.49, 19.59, 19.67, 19.71, 38.83, 39.01, 39.61, 39.67, 55.31, 62.45, 62.50, 62.60, 62.65, 63.31, 67.74, 70.84, 80.08, 84.40, 84.50, 85.60, 87.30, 87.36, 111.23, 111.34, 111.91, 112.00, 113.37, 116.49, 116.74, 127.32, 128.10, 130.11, 130.14, 134.98, 135.01, 135.04, 135.19, 136.00, 144.01, 144.06, 150.69, 151.00, 151.05, 158.80, 163.96, 164.16.
TOF/MS (ESI): calcd for C44H48N5O14PNa [M+Na]+ 924.2833, found 924.2836.
〔실시예 7-10〕
(2) 2-(N-메틸-3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤즈아미드)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일로부터의 합성
Figure pct00105
2-(N-메틸-3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤즈아미드)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일 (189 mg, 0.10 mmol)의 THF (9 mL)-2-프로판올 (1 mL) 혼합 용액을 0℃로 냉각했다. 냉각 하에서, 4 mol/L-수소화 붕소 리튬-THF 용액 (0.125 mL, 0.50 mmol)을 첨가한 후, 동온도에서 30분간 교반했다. 반응액에 염화 암모니아 수용액을 첨가한 후, 디클로로메탄으로 3회 추출했다. 유기층을 식염수로 세정한 후, 무수 황산 나트륨으로 건조하고, 여과에 의해 황산 나트륨을 제거한 후, 여과액을 농축했다. 농축 잔사를 아세토니트릴에 현탁시킴으로써 석출한 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액을 농축했다. 농축 잔사를 칼럼 크로마토그래피 (실리카겔, 전개 용매: 클로로포름-메탄올)로 정제함으로써, 표제 화합물 (89 mg, 98%)을 백색 고체로서 얻었다.
TOF/MS (ESI): calcd for C44H48N5O14PNa [M+Na]+ 924.3, found 924.2.
〔실시예 7-11〕
(3) 3-(3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤즈아미드)프로피온산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일로부터 합성
Figure pct00106
3-(3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤즈아미드)프로피온산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일 (189 mg, 0.10 mmol)의 THF (9 mL)-2-프로판올 (1 mL) 혼합 용액을 0℃로 냉각했다. 냉각 하에서, 4 mol/L-수소화 붕소 리튬-THF 용액 (0.125 mL, 0.50 mmol)을 첨가한 후, 실온에서 1시간 동안 교반했다. 반응액에 염화 암모니아 수용액을 첨가한 후, 디클로로메탄으로 3회 추출했다. 유기층을 식염수로 세정한 후, 무수 황산 나트륨으로 건조하고, 여과에 의해 황산 나트륨을 제거한 후, 여과액을 농축했다. 농축 잔사를 아세토니트릴에 현탁시킴으로써 석출한 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액을 농축했다. 농축 잔사를 칼럼 크로마토그래피 (실리카겔, 전개 용매: 클로로포름-메탄올)로 정제함으로써, 표제 화합물 (74 mg, 82%)을 백색 고체로서 얻었다.
TOF/MS (ESI): calcd for C44H48N5O14PNa [M+Na]+ 924.3, found 924.2.
〔실시예 7-12〕
(6-(N6-벤조일아데닌-9-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메틸 P-(2-(히드록시메틸)-6-티민-1-일)모르폴리노)-N,N-디메틸포스포로아미데이트의 합성
Figure pct00107
실시예 7-7의 방법에 따라서, 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산(4-(((6-(N6-벤조일아데닌-9-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)-6-(티민-1-일)모르폴린-2-일)메틸 (0.379 g, 0.20 mmol)로부터 표제 화합물 (0.114 g, 61%)을 백색 고체로서 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.87-1.95 (m, 6H), 2.01 (s, 1H), 2.45-2.64 (m, 7H), 3.06-4.04 (m, 9H), 4.43-4.46 (m, 1H), 5.52 (dd, 1H, J=2.4, 10.4 Hz), 6.41 (dt, 1H, J=2.4, 10.0 Hz), 7.05-7.64 (m, 19H), 8.03 (d, 2H, J=8.4 Hz), 8.09 (s, 1H), 8.71-8.80 (m, 1H), 9.69-9.78 (m, 1H), 10.28 (s, 1H), 10.75-11.05 (brs, 1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ12.41, 12.45, 36.54, 36.58, 36.62, 36.66, 44.61, 44, 82, 47.13, 48.68, 48.78, 52.80, 52.85, 62.72, 62.78, 65.46, 65.61, 75.07, 75.14, 75.45, 75.52, 78.06, 78.13, 78.27, 78.33, 79.60, 79.65, 80.01, 80.49, 110.96, 111.03, 122.47, 122.78, 126.65, 128.00, 128.24, 128.41, 128.49, 128.62, 129.17, 132.61, 132.69, 133.48, 133.64, 134.86, 134.96, 140.94, 149.54, 149.75, 149.82, 150.02, 151.23, 151.42, 152.66, 152.75, 163.75, 163.79, 165.25.
TOF/MS (ESI): calcd for C48H51N10O8PNa [M+Na]+ 949.3527, found 949.3545.
〔실시예 7-13〕
(6-(N4-벤조일시토신-1-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메틸 P-(2-(히드록시메틸)-6-(N2-이소부티릴구아닌-9-일)모르폴리노)-N,N-디메틸포스포로아미데이트의 합성
Figure pct00108
실시예 7-7의 방법에 따라서, 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산(4-(((6-(N4-벤조일시토신-1-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)-6-(N2-이소부티릴구아닌-9-일)모르폴린-2-일)메틸 (0.197 g, 0.10 mmol)로부터 표제 화합물 (0.052 g, 52%)을 백색 고체로서 얻었다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ0.78-1.55 (m, 9H), 2.37-2.95 (m, 8H), 3.08-3.94 (m, 9H), 4.13-4.43 (m, 2H), 5.42-5.54 (m, 1H), 6.22-6.38 (m, 1H), 7.05-7.80 (m, 19H), 7.93 (d, 2H, J=7.2 Hz), 9.58-9.92 (brs, 1H), 10.64-10.86 (brs, 1H), 12.05-12.21 (brs, 1H).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ13.91, 14.12, 19.03, 19.06, 19.28, 22.69, 25.76, 28.55, 29.36, 29.70, 31.72, 31.92, 35.99, 36.05, 36.62, 36.65, 36.69, 44.63, 44.92, 47.15, 47.56, 48.44, 48.79, 52.26, 52.42, 61.85, 62.58, 62.73, 65.66, 66.15, 71.09, 71.69, 75.40, 75.86, 75.91, 78.19, 79.73, 80.56, 81.37, 81.76, 97.87, 120.56, 120.92, 126.65, 127.96, 128.04, 128.70, 128.83, 128.92, 129.13, 131.00, 132.21, 132.97, 133.02, 133.14, 136.66, 137.43, 144.02, 144.54, 147.92, 147.98, 148.00, 154.99, 155.57, 155.62, 162.69, 163.09, 167.24, 179.62, 179.86.
TOF/MS (ESI): calcd for C51H56N11O9PNa [M+Na]+ 1020.3898, found 1020.3942.
〔실시예 7-14〕
8량체의 탈Tag화의 확인
(1) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(N4-벤조일데옥시시티딘-3'-일)포스포릴)-N6-벤조일데옥시아데노신-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일)포스포릴)-N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일)포스포릴)-N4-벤조일데옥시시티딘-3'-일)포스포릴)-N6-벤조일데옥시아데노신-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일 (8량체)의 합성
아르곤 하에서, 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 티미딘-3'-일 (1.19 g, 0.98 mmol), 5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일-포스포르아미다이트 (1.46 g, 1.96 mmol)의 디클로로메탄 현탁액 (10 mL)에 5-벤질티오-1H-테트라졸 (0.38 g, 1.96 mmol)을 첨가한 후, 실온에서 1.5시간 교반했다. 다음으로, 피리딘 (0.93 g, 11.77 mmol)과 물 (0.11 g, 5.89 mmol), 요오드 (1.25 g, 4.91 mmol)를 첨가한 후, 실온에서 4시간 교반했다. 반응액에 1.2 mol/L-아스코르빈산 수용액 (3 mL)을 첨가한 후, 실온에서 15분간 교반했다. 반응액에 아세토니트릴 (24 mL)을 적하함으로써 석출한 고체를 여과했다. 고체를 아세토니트릴-디클로로메탄 혼합 용매로 세정한 후, 50℃에서 감압 건조하고, DMTr 물질 (2.22g)을 얻었다.
다음으로, DMTr 물질 (1.83 g, 0.98 mmol)의 디클로로메탄 현탁액 (15 mL)에 피롤 (0.33 g, 4.91 mmol), 트리플루오로아세트산 (0.13 g, 1.18 mmol)을 첨가한 후, 실온에서 1.5시간 교반했다. 반응액에 아세토니트릴 (37 mL)과 메탄올 (18 mL)을 적하함으로써 석출한 고체를 여과했다. 고체를 아세토니트릴-메탄올-디클로로메탄 혼합 용매로 세정한 후, 50℃에서 감압 건조하고, 2량체 (1.48g)를 얻었다.
상기와 마찬가지의 조작을 6회 반복하여, 8량체 (2.94g)를 얻었다.
TOF/MS (ESI): m/z 2106.3 [M+2H]2+, 1403.9 [M+3H]3+.
〔실시예 7-15〕
(2) 2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(N4-벤조일데옥시시티딘-3'-일)포스포릴)-N6-벤조일데옥시아데노신-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일)포스포릴)-N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일)포스포릴)-N4-벤조일데옥시시티딘-3'-일)포스포릴)-N6-벤조일데옥시아데노신-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일의 탈Tag화
N,N-디이소프로필에틸아민 (65 mg, 0.50 mmol)을 디클로로메탄 (0.4 mL)과 THF (0.2 mL), 2-프로판올 (0.04 mL)의 혼합 용액에 첨가하고, 0 내지 -10℃로 냉각했다. 다음으로, 4 mol/L-수소화 붕소 리튬-THF 용액 (0.125 mL, 0.50 mmol)을 첨가한 후, 동온도에서 20분간 교반하고, 환원 시약을 조제했다. 미리, 0 내지 -10℃로 냉각한 8량체 (84 mg, 0.02 mmol)의 디클로로메탄 (4.2 mL)-THF (1.8 mL)-2-프로판올 (0.4 mL) 혼합액에 환원 시약을 첨가하고, 동온도에서 40분간 교반했다. 반응액에 10% 염화 암모니아 수용액 (5 mL)을 첨가한 후, 디클로로메탄으로 추출했다. 유기층을 식염수로 세정한 후, 유기층을 농축, 건조했다. 농축 잔사를 디클로로메탄에 현탁시킴으로써 석출한 고체를 여과하여 취했다. 고체를 디클로로메탄으로 세정한 후, 감압 건조하고, 5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(5'-O-((2-시아노에톡시)(N4-벤조일데옥시시티딘-3'-일)포스포릴)-N6-벤조일데옥시아데노신-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일)포스포릴)-N2-이소부티릴데옥시구아노신-3'-일)포스포릴)-N4-벤조일데옥시시티딘-3'-일)포스포릴)-N6-벤조일데옥시아데노신-3'-일)포스포릴)티미딘-3'-일)포스포릴)티미딘 (25mg)을 얻었다.
TOF/MS (ESI): m/z 1621.9 [M+2H]2+, 1081.6 [M+3H]3+, 811.2 [M+4H]4+.
8. 탈Tag화 진행 속도의 비교
〔실시예 8〕
2-((3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일)옥시)아세트산 5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일 (A-Tag-dT-DMTr로 약칭한다)과 호박산 3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤질 5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)티미딘-3'-일 (S-Tag-dT-DMTr로 약칭한다)에 대하여, 하기에 나타낸 암모니아성 염기성 조건 하에서의 탈Tag화 진행 속도를 비교했다.
<탈Tag화 조건>
A-Tag-dT-DMTr or S-Tag-dT-DMTr 50 μmol
28% 암모니아수 2.0 mL
에탄올 0.5 mL
THF 0.5 mL
반응 온도 35℃
<dT-DMTr (탈Tag 물질)의 생성률>
1hr 2hr 3hr 4hr 5hr
A-Tag-dT-DMTr 34% 74% 91% 98% 100%
S-Tag-dT-DMTr 0% 2% 3% 4% 5%
<HPLC 조건>
칼럼: Inertsil WP300 Diol (5 μm, 4.6 Φ × 150 mm)
유속: 1.0 mL/min
이동상: n-hexane, CHCl3-MeOH (1/1)
Gradient: 0 - 11 min; 5 to 30% (CHCl3-MeOH)
검출 방법: UV (λ = 254 nm)
유지 시간: A-Tag-dT-DMTr: Rt = 4.23 min, S-Tag-dT-DMTr: Rt = 4.17 min, dT-DMTr: Rt = 9.40 min
생성률: (dT-DMTr)/[(A-Tag-dT-DMTr or S-Tag-dT-DMTr) + (dT-DMTr)]
이상과 같이, A-Tag는 올리고 핵산 합성이 일반적인 탈보호 조건에 있어서, 호박산 에스테르 물질보다도 신속하게 탈Tag화되는 것을 확인했다.
9. 합성예 정리
이하, 상술한 각 실시예에 있어서의 합성예를 정리한 것을 나타낸다.
9.1 3량체의 합성
Figure pct00109
상기 표 2에 나타낸 바와 같이, 여러가지 Tag 결합 3량체 DNA 올리고머를 높은 수율로 얻을 수 있었다.
9.2 2량체의 합성
Figure pct00110
상기 표 3에 나타낸 바와 같이, 여러 가지 Tag 결합 올리고뉴클레오티드 (2량체)를 높은 수율로 얻을 수 있었다.
9.3 2량체의 합성
Figure pct00111
상기 표 4에 나타낸 바와 같이, 여러 가지 Tag 결합 올리고뉴클레오티드 (2량체)를 높은 수율로 얻을 수 있었다.
9.4 2량체의 합성
Figure pct00112
상기 표 5에 나타낸 바와 같이, 여러 가지 Tag 결합 올리고뉴클레오티드 (2량체)를 높은 수율로 얻을 수 있었다.
9.5 20량체의 합성 및 전체 탈보호
Figure pct00113
본 발명의 알콕시페닐 유도체 및 Tag화 뉴클레오티드 보호체를 이용함으로써, 상기의 Tag화 올리고뉴클레오티드 보호체 (20량체)를 간이하게 얻을 수 있었다. 부가적으로, Tag 부분 및 보호기를 제거함으로써, 올리고뉴클레오티드를 간편하게 얻을 수 있었다.
9.6 3량체의 탈Tag
Figure pct00114
상기 표 6에 나타낸 바와 같이, 여러 가지 Tag화 올리고뉴클레오티드 보호체 (3량체)의 Tag 부분을 제거하고, 각 올리고뉴클레오티드 보호체 (3량체)를 높은 수율로 얻을 수 있었다.
9.7 2량체의 탈Tag
Figure pct00115
상기 표 7에 나타낸 바와 같이, 여러 가지 Tag화 올리고뉴클레오티드 보호체 (2량체)의 Tag 부분을 제거하고, 각 올리고뉴클레오티드 보호체 (2량체)를 높은 수율로 얻을 수 있었다.
9.8 2량체의 탈Tag
Figure pct00116
상기 표 8에 나타낸 바와 같이, 여러 가지 Tag화 올리고뉴클레오티드 보호체 (2량체)의 Tag 부분을 제거하고, 각 올리고뉴클레오티드 보호체 (2량체)를 높은 수율로 얻을 수 있었다.
9.9 2량체의 탈Tag
Figure pct00117
상기 표 9에 나타낸 바와 같이, 여러 가지 Tag화 올리고뉴클레오티드 보호체 (2량체)의 Tag 부분을 제거하고, 각 올리고뉴클레오티드 보호체 (2량체)를 높은 수율로 얻을 수 있었다.
[산업상의 이용 가능성]
본 발명의 알콕시페닐 유도체는 상기 Tag화 뉴클레오시드 보호체 및 Tag화 뉴클레오티드 보호체의 제조 등에 이용 가능하다. 또한, 본 발명의 Tag화 뉴클레오시드 보호체 및 Tag화 뉴클레오티드 보호체 등, 올리고뉴클레오티드의 제조 방법, 및 Tag화 뉴클레오시드 보호체 또는 Tag화 뉴클레오티드 보호체의 선택적인 Tag 부분 제거 방법은 특히 액상 합성 (의사(疑似) 액상 합성을 포함함)에 있어서의 올리고뉴클레오티드 보호체의 합성에 이용 가능하다. 이들은 모두 핵산 의약 개발이나 생체 메카니즘 해석 등에 매우 유용한 화합물 및 수법이다.

Claims (28)

  1. 일반식 (1)로 표시되는 화합물 또는 그 유도체.
    [화학식 1]
    Figure pct00118

    (식중,
    R은 각각 독립적으로 치환되어 있을 수 있는 탄소수 10 내지 40의 알킬기를 나타낸다.
    m은 1 내지 5의 정수를 나타낸다. m이 2 이상인 경우에는 복수개 존재하는 RO는 동일하거나 상이할 수 있다.
    X는 O, S, NH, 또는 NRN을 나타낸다.
    n은 1 내지 4의 정수를 나타낸다.
    RN은 치환되어 있을 수 있는 탄소수 1 내지 6의 알킬기를 나타낸다.)
  2. 제1항에 있어서,
    일반식 (2)로 표시되는, 화합물 또는 그 유도체.
    [화학식 2]
    Figure pct00119

    (식중,
    R1, R2, 및 R3은 각각 독립적으로 치환되어 있을 수 있는 탄소수 10 내지 40의 알킬기를 나타낸다.
    X는 O, S, NH, 또는 NRN을 나타낸다.
    n은 1 내지 4의 정수를 나타낸다.
    RN은 치환되어 있을 수 있는 탄소수 1 내지 6의 알킬기를 나타낸다.)
  3. 일반식 (3)으로 표시되는 화합물 또는 그 유도체.
    [화학식 3]
    Figure pct00120

    (식중,
    R은 각각 독립적으로 치환되어 있을 수 있는 탄소수 10 내지 40의 알킬기를 나타낸다.
    m은 1 내지 5의 정수를 나타낸다. m이 2 이상인 경우에는 복수개 존재하는 RO는 동일하거나 상이할 수 있다.
    X는 O, S, NH, 또는 NRN을 나타낸다.
    n은 1 내지 4의 정수를 나타낸다.
    RN은 치환되어 있을 수 있는 탄소수 1 내지 6의 알킬기를 나타낸다.
    Y는 하기 일반식 (4) 또는 일반식 (5)를 나타낸다.)
    [화학식 4]
    Figure pct00121

    (식중,
    Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
    B는 수소 원자, 보호되어 있을 수 있는 수산기, 또는 할로겐을 나타낸다. B가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 B는 동일하거나 상이할 수 있다.
    W는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
    R4는 전자 구인성 기를 갖는 탄소수 1 내지 4의 알킬기를 나타낸다. R4가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 R4는 동일하거나 상이할 수 있다.
    Z는 O 또는 S를 나타낸다. Z가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Z는 동일하거나 상이할 수 있다.
    y1은 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.
    *은 상기 일반식 (3)에 있어서의 결합 부위를 나타낸다.)
    [화학식 5]
    Figure pct00122

    (식중,
    Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
    Q는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
    V는 탄소수 1 내지 6의 알콕시기, 디(C1-6 알킬)아미노기, 또는 4위치 질소 원자가 보호기로 보호되고, 더 치환되어 있을 수 있는 피페라지노기를 나타낸다. V가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 V는 동일하거나 상이할 수 있다.
    y2는 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.
    *은 상기 일반식 (3)에 있어서의 결합 부위를 나타낸다.)
  4. 제3항에 있어서,
    일반식 (6)으로 표시되는, 화합물 또는 그 유도체.
    [화학식 6]
    Figure pct00123

    (식중,
    R1, R2, 및 R3은 각각 독립적으로 치환되어 있을 수 있는 탄소수 10 내지 40의 알킬기를 나타낸다.
    X는 O, S, NH, 또는 NRN을 나타낸다.
    n은 1 내지 4의 정수를 나타낸다.
    RN은 치환되어 있을 수 있는 탄소수 1 내지 6의 알킬기를 나타낸다.
    Y는 하기 일반식 (4) 또는 일반식 (5)를 나타낸다.)
    [화학식 7]
    Figure pct00124

    (식중,
    Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
    B는 수소 원자, 보호되어 있을 수 있는 수산기, 또는 할로겐을 나타낸다. B가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 B는 동일하거나 상이할 수 있다.
    W는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
    R4는 전자 구인성 기를 갖는 탄소수 1 내지 4의 알킬기를 나타낸다. R4가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 R4는 동일하거나 상이할 수 있다.
    Z는 O 또는 S를 나타낸다. Z가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Z는 동일하거나 상이할 수 있다.
    y1은 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.
    *은 상기 일반식 (6)에 있어서의 결합 부위를 나타낸다.)
    [화학식 8]
    Figure pct00125

    (식중,
    Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
    Q는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
    V는 탄소수 1 내지 6의 알콕시기, 디(C1-6 알킬)아미노기, 또는 4위치 질소 원자가 보호기로 보호되고, 더 치환되어 있을 수 있는 피페라지노기를 나타낸다. V가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 V는 동일하거나 상이할 수 있다.
    y2는 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.
    *은 상기 일반식 (6)에 있어서의 결합 부위를 나타낸다.)
  5. 제3항 또는 제4항에 있어서,
    W는 수소 원자, 트리틸기, 디(C1-6 알콕시)트리틸기, 모노(C1-18 알콕시)트리틸기, 9-(9-페닐)크산테닐기, 또는 9-(9-페닐)티오크산테닐기인, 화합물 또는 그 유도체.
  6. 제3항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    R4는 2위치에 전자 구인성 기를 갖는 에틸기인, 화합물 또는 그 유도체.
  7. 제3항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    Q는 수소 원자, 트리틸기, 디(C1-6 알콕시)트리틸기, 모노(C1-18 알콕시)트리틸기, 9-(9-페닐)크산테닐기, 또는 9-(9-페닐)티오크산테닐기인, 화합물 또는 그 유도체.
  8. 제3항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    y1 또는 y2가 1 내지 100인, 화합물 또는 그 유도체.
  9. 제3항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    y1 또는 y2가 1 내지 30인, 화합물 또는 그 유도체.
  10. 제3항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    y1 또는 y2가 0인, 화합물 또는 그 유도체.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    n이 1 또는 2인, 화합물 또는 그 유도체.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    m이 2 내지 4의 정수인, 화합물 또는 그 유도체.
  13. 일반식 (3)으로 표시되는 화합물 또는 그 유도체를 환원 처리하는 공정 (1)을 포함하는, 일반식 (7) 또는 (8)로 표시되는 화합물 또는 그 유도체의 제조 방법.
    [화학식 9]
    Figure pct00126

    (식중,
    R은 각각 독립적으로 치환되어 있을 수 있는 탄소수 10 내지 40의 알킬기를 나타낸다.
    m은 1 내지 5의 정수를 나타낸다. m이 2 이상인 경우에는 복수개 존재하는 RO는 동일하거나 상이할 수 있다.
    X는 O, S, NH, 또는 NRN을 나타낸다.
    n은 1 내지 4의 정수를 나타낸다.
    RN은 치환되어 있을 수 있는 탄소수 1 내지 6의 알킬기를 나타낸다.
    Y는 하기 일반식 (4) 또는 일반식 (5)를 나타낸다.)
    [화학식 10]
    Figure pct00127

    (식중,
    Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
    B는 수소 원자, 보호되어 있을 수 있는 수산기, 또는 할로겐을 나타낸다. B가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 B는 동일하거나 상이할 수 있다.
    W는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
    R4는 전자 구인성 기를 갖는 탄소수 1 내지 4의 알킬기를 나타낸다. R4가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 R4는 동일하거나 상이할 수 있다.
    Z는 O 또는 S를 나타낸다. Z가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Z는 동일하거나 상이할 수 있다.
    y1은 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.
    *은 상기 일반식 (3)에 있어서의 결합 부위를 나타낸다.)
    [화학식 11]
    Figure pct00128

    (식중,
    Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
    Q는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
    V는 탄소수 1 내지 6의 알콕시기, 디(C1-6 알킬)아미노기, 또는 4위치 질소 원자가 보호기로 보호되고, 더 치환되어 있을 수 있는 피페라지노기를 나타낸다. V가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 V는 동일하거나 상이할 수 있다.
    y2는 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.
    *은 상기 일반식 (3)에 있어서의 결합 부위를 나타낸다.)
    [화학식 12]
    Figure pct00129

    (식중,
    Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
    B는 수소 원자, 보호되어 있을 수 있는 수산기, 또는 할로겐을 나타낸다. B가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 B는 동일하거나 상이할 수 있다.
    W는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
    R4는 전자 구인성 기를 갖는 탄소수 1 내지 4의 알킬기를 나타낸다. R4가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 R4는 동일하거나 상이할 수 있다.
    Z는 O 또는 S를 나타낸다. Z가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Z는 동일하거나 상이할 수 있다.
    y1은 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.)
    [화학식 13]
    Figure pct00130

    (식중,
    Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
    Q는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
    V는 탄소수 1 내지 6의 알콕시기, 디(C1-6 알킬)아미노기, 또는 4위치 질소 원자가 보호기로 보호되고, 더 치환되어 있을 수 있는 피페라지노기를 나타낸다. V가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 V는 동일하거나 상이할 수 있다.
    y2는 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.)
  14. 제13항에 있어서,
    일반식 (6)으로 표시되는 화합물 또는 그 유도체를 환원 처리하는 공정 (1)을 포함하는, 제조 방법.
    [화학식 14]
    Figure pct00131

    (식중,
    R1, R2, 및 R3은 각각 독립적으로 치환되어 있을 수 있는 탄소수 10 내지 40의 알킬기를 나타낸다.
    X는 O, S, NH, 또는 NRN을 나타낸다.
    n은 1 내지 4의 정수를 나타낸다.
    RN은 치환되어 있을 수 있는 탄소수 1 내지 6의 알킬기를 나타낸다.
    Y는 하기 일반식 (4) 또는 일반식 (5)를 나타낸다.)
    [화학식 15]
    Figure pct00132

    (식중,
    Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
    B는 수소 원자, 보호되어 있을 수 있는 수산기, 또는 할로겐을 나타낸다. B가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 B는 동일하거나 상이할 수 있다.
    W는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
    R4는 전자 구인성 기를 갖는 탄소수 1 내지 4의 알킬기를 나타낸다. R4가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 R4는 동일하거나 상이할 수 있다.
    Z는 O 또는 S를 나타낸다. Z가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Z는 동일하거나 상이할 수 있다.
    y1은 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.
    *은 상기 일반식 (6)에 있어서의 결합 부위를 나타낸다.)
    [화학식 16]
    Figure pct00133

    (식중,
    Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
    Q는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
    V는 탄소수 1 내지 6의 알콕시기, 디(C1-6 알킬)아미노기, 또는 4위치 질소 원자가 보호기로 보호되고, 더 치환되어 있을 수 있는 피페라지노기를 나타낸다. V가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 V는 동일하거나 상이할 수 있다.
    y2는 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.
    *은 상기 일반식 (6)에 있어서의 결합 부위를 나타낸다.)
    [화학식 17]
    Figure pct00134

    (식중,
    Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
    B는 수소 원자, 보호되어 있을 수 있는 수산기, 또는 할로겐을 나타낸다. B가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 B는 동일하거나 상이할 수 있다.
    W는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
    R4는 전자 구인성 기를 갖는 탄소수 1 내지 4의 알킬기를 나타낸다. R4가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 R4는 동일하거나 상이할 수 있다.
    Z는 O 또는 S를 나타낸다. Z가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Z는 동일하거나 상이할 수 있다.
    y1은 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.)
    [화학식 18]
    Figure pct00135

    (식중,
    Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
    Q는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
    V는 탄소수 1 내지 6의 알콕시기, 디(C1-6 알킬)아미노기, 또는 4위치 질소 원자가 보호기로 보호되고, 더 치환되어 있을 수 있는 피페라지노기를 나타낸다. V가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 V는 동일하거나 상이할 수 있다.
    y2는 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.)
  15. 제13항 또는 제14항에 있어서,
    상기 환원 처리는 붕소 함유 환원제를 이용하거나 또는 붕소 함유 환원제 및 아민을 이용하는, 제조 방법.
  16. 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 붕소 함유 환원제는 수소화 붕소 리튬, 수소화 붕소 나트륨, 수소화 트리에틸 붕소 리튬, 수소화 붕소 테트라부틸암모늄인, 제조 방법.
  17. 제13항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서,
    W는 수소 원자, 트리틸기, 디(C1-6 알콕시)트리틸기, 모노(C1-18 알콕시)트리틸기, 9-(9-페닐)크산테닐기, 또는 9-(9-페닐)티오크산테닐기인, 제조 방법.
  18. 제13항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서,
    R4는 2위치에 전자 구인성 기를 갖는 에틸기인, 제조 방법.
  19. 제13항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서,
    Q는 수소 원자, 트리틸기, 디(C1-6 알콕시)트리틸기, 모노(C1-18 알콕시)트리틸기, 9-(9-페닐)크산테닐기, 또는 9-(9-페닐)티오크산테닐기인, 제조 방법.
  20. 제13항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서,
    y1 또는 y2가 1 내지 100인, 제조 방법.
  21. 제13항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서,
    y1 또는 y2가 1 내지 30인, 제조 방법.
  22. 제13항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서,
    y1 또는 y2가 0인, 제조 방법.
  23. 제13항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서,
    n이 1 또는 2인, 제조 방법.
  24. 제13항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서,
    m이 2 내지 4의 정수인, 제조 방법.
  25. 일반식 (3)으로 표시되는 화합물 또는 그 유도체를 환원 처리하는 공정 (1)을 포함하는 치환기 제거 방법.
    [화학식 19]
    Figure pct00136

    (식중,
    R은 각각 독립적으로 치환되어 있을 수 있는 탄소수 10 내지 40의 알킬기를 나타낸다.
    m은 1 내지 5의 정수를 나타낸다. m이 2 이상인 경우에는 복수개 존재하는 RO는 동일하거나 상이할 수 있다.
    X는 O, S, NH, 또는 NRN을 나타낸다.
    n은 1 내지 4의 정수를 나타낸다.
    RN은 치환되어 있을 수 있는 탄소수 1 내지 6의 알킬기를 나타낸다.
    Y는 하기 일반식 (4) 또는 일반식 (5)를 나타낸다.)
    [화학식 20]
    Figure pct00137

    (식중,
    Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
    B는 수소 원자, 보호되어 있을 수 있는 수산기, 또는 할로겐을 나타낸다. B가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 B는 동일하거나 상이할 수 있다.
    W는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
    R4는 전자 구인성 기를 갖는 탄소수 1 내지 4의 알킬기를 나타낸다. R4가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 R4는 동일하거나 상이할 수 있다.
    Z는 O 또는 S를 나타낸다. Z가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Z는 동일하거나 상이할 수 있다.
    y1은 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.
    *은 상기 일반식 (3)에 있어서의 결합 부위를 나타낸다.)
    [화학식 21]
    Figure pct00138

    (식중,
    Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
    Q는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
    V는 탄소수 1 내지 6의 알콕시기, 디(C1-6 알킬)아미노기, 또는 4위치 질소 원자가 보호기로 보호되고, 더 치환되어 있을 수 있는 피페라지노기를 나타낸다. V가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 V는 동일하거나 상이할 수 있다.
    y2는 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.
    *은 상기 일반식 (3)에 있어서의 결합 부위를 나타낸다.)
  26. 제25항에 있어서,
    일반식 (6)으로 표시되는 화합물 또는 그 유도체를 환원 처리하는 공정 (1)을 포함하는, 치환기 제거 방법.
    [화학식 22]
    Figure pct00139

    (식중,
    R1, R2, 및 R3은 각각 독립적으로 치환되어 있을 수 있는 탄소수 10 내지 40의 알킬기를 나타낸다.
    X는 O, S, NH, 또는 NRN을 나타낸다.
    n은 1 내지 4의 정수를 나타낸다.
    RN은 치환되어 있을 수 있는 탄소수 1 내지 6의 알킬기를 나타낸다.
    Y는 하기 일반식 (4) 또는 일반식 (5)를 나타낸다.)
    [화학식 23]
    Figure pct00140

    (식중,
    Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
    B는 수소 원자, 보호되어 있을 수 있는 수산기, 또는 할로겐을 나타낸다. B가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 B는 동일하거나 상이할 수 있다.
    W는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
    R4는 전자 구인성 기를 갖는 탄소수 1 내지 4의 알킬기를 나타낸다. R4가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 R4는 동일하거나 상이할 수 있다.
    Z는 O 또는 S를 나타낸다. Z가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Z는 동일하거나 상이할 수 있다.
    y1은 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.
    *은 상기 일반식 (6)에 있어서의 결합 부위를 나타낸다.)
    [화학식 24]
    Figure pct00141

    (식중,
    Base는 수식(修飾)되어 있을 수 있는 핵산 염기를 나타낸다. Base가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 Base는 동일하거나 상이할 수 있다.
    Q는 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다.
    V는 탄소수 1 내지 6의 알콕시기, 디(C1-6알킬)아미노기, 또는 4위치 질소 원자가 보호기로 보호되고, 더 치환되어 있을 수 있는 피페라지노기를 나타낸다. V가 2 이상 존재하는 경우에는 복수개 존재하는 V는 동일하거나 상이할 수 있다.
    y2는 0 이상의 임의의 정수를 나타낸다.
    *은 상기 일반식 (6)에 있어서의 결합 부위를 나타낸다.)
  27. 제25항 또는 제26항에 있어서,
    상기 환원 처리는 붕소 함유 환원제를 이용하거나 또는 붕소 함유 환원제 및 아민을 이용하는, 치환기 제거 방법.
  28. 제25항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 붕소 함유 환원제는 수소화 붕소 리튬, 수소화 붕소 나트륨, 수소화 트리에틸 붕소 리튬, 수소화 붕소 테트라부틸암모늄인, 치환기 제거 방법.
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