JP2000506849A

JP2000506849A - オリゴヌクレオチド類似体

Info

Publication number: JP2000506849A
Application number: JP9531546A
Authority: JP
Inventors: バクスター，アンソニー・デイビッド; コリングウッド，スティーブン・ポール; ダグラス，マーク・エドワード; テイラー，ロジャー・ジョン
Original assignee: ノバルティスアクチエンゲゼルシャフト
Priority date: 1996-03-05
Filing date: 1997-02-24
Publication date: 2000-06-06
Also published as: BR9707918A; AU1886797A; WO1997032887A1; ATE249475T1; EP0885237A1; EP0885237B1; DE69724768D1; US6562960B1; CA2247480A1; ZA971849B; GB9604669D0; CN1212701A; DE69724768T2

Abstract

(57)【要約】ヌクレオシド間結合の少なくとも１つは式［式中、表記メチレン基はヌクレオシドの３'炭素原子に結合し、表記酸素原子は隣のヌクレオシドの５'炭素原子に結合し、Ｒ₁は水素、ヒドロキシ、Ｏ^-、チオール、Ｓ^-、−ＮＨ₂、または、式Ｒ¹ _a、−ＯＲ¹ _a、−ＳＲ¹ _a、−ＮＨＲ¹ _bまたは−ＮＲ¹ _bＲ¹ _c(ただし、Ｒ¹ _aは非置換または置換Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル、Ｃ₂−Ｃ₁₀アルケニル、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ₆−Ｃ₁₀アリールまたはＣ₇−Ｃ₁₃アラルキル基であり、Ｒ¹ _bおよびR¹ _cは、各々独立して、非置換または置換Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル、Ｃ₂−Ｃ₁₀アルケニル、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ₆−Ｃ₁₀アリールまたはＣ₇−Ｃ₁₃アラルキル基であるか、またはＲ¹ _bおよびＲ¹ _cはそれらが結合している窒素原子と共に５員または６員のヘテロ環を示す）で示される基であり、Ｘは酸素または硫黄である］で示される、ヌクレオシド間の結合により連結している１０から２００の天然および／または合成ヌクレオシド単位を有するオリゴヌクレオチド類似体。

Description

【発明の詳細な説明】オリゴヌクレオチド類似体本発明は、オリゴヌクレオチド類似体(analogues)、その製造、およびその使用に関する。本発明により、一本鎖および二本鎖核酸に良好にハイブリダイズする特性、ＲＮａｓｅＨ活性化特性、加水分解に対する良好な安定性、およびヌクレアーゼによる開裂に対する良好な安定性を有するオリゴヌクレオチド類似体が製造でき、アンチセンス相互作用などによる遺伝子発現の阻害剤として、および癌並びにインフルエンザ、ヘルペスおよびＨＩＶなどのウイルス等の疾患の処置における医薬品としての使用に利点がある。従って、本発明はヌクレオシド間の結合により連結している１０から２００個の天然および／または合成ヌクレオシド単位を有するオリゴヌクレオチド類似体を提供するものであって、かかるヌクレオシド間の結合の少なくとも１つは式［式中、表記メチレン基はヌクレオシドの３'炭素原子に結合し、表記酸素原子は隣のヌクレオシドの５'炭素原子に結合し、Ｒ₁は水素、ヒドロキシ、Ｏ^-、チオール、Ｓ^-、−ＮＨ₂、または、式Ｒ¹ _a、−ＯＲ¹ _a、−ＳＲ¹ _a、−ＮＨＲ¹ _bまたは−ＮＲ¹ _b Ｒ¹ _c（ただし、Ｒ¹ _aは非置換または置換Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル、Ｃ₂−Ｃ₁₀アルケニル、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ₆−Ｃ₁₀アリールまたはＣ₇−Ｃ₁₃アラルキル基であり、Ｒ¹ _bおよびＲ¹ _cは、各々独立して、非置換または置換Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル、Ｃ₂−Ｃ₁₀アルケニル、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ₆−Ｃ₁₀アリールまたはＣ₇−Ｃ₁₃アラルキル基であるか、またはＲ¹ _bおよびＲ¹ _cはそれらが結合している窒素原子と共に５員または６員のヘテロ環を示す）で示される基であり、Ｘは酸素または硫黄である］で示される。オリゴヌクレオチド類似体のヌクレオシド単位数は、オリゴヌクレオチド類似体が標的とする核酸配列の性質により、例えば１５−１００に変化し得る。好ましくは、オリゴヌクレオチド類似体は１５−４０、特に１５−２５のヌクレオシド単位を有する。オリゴヌクレオチド類似体は、より好ましくは、ある標的に対して１５−２０ヌクレオシド単位、別の標的に対して２０−２５ヌクレオシド単位、さらに別の標的に対して１８−２５ヌクレオシド単位、またさらに別の標的に対して１８−２２ヌクレオシド単位を有し得る。本発明のオリゴヌクレオチド類似体における式Ｉで示されるヌクレオシド間結合の数は所望の特性によって変化し得る。例えば、ある目的においては、式Ｉで示されるヌクレオシド間結合は１つで十分であり、一方、別の目的においては、全てのヌクレオシド間結合が式Ｉで示されることがあり、これは同一または相違することがある。ほとんどの場合、ヌクレオシド間結合の７５％まで、例えば５０％まで、特に２５％までが式Ｉで示されるものであり得る。本発明のいくつかの態様において、オリゴヌクレオチド類似体における少なくとも２つ、例えば２、３、４、５または６つの連続的なヌクレオシド間結合（これは同一でも相違してもよい）は式Ｉで示される。オリゴヌクレオチド類似体の各末端には、このような連続的なヌクレオシド間結合の配列があり得、通常、別のヌクレオシド間結合を有するヌクレオシド配列の間に１つの連続した式Ｉで示されるヌクレオシド間結合がある。式Ｉで示されるヌクレオシド間結合を２つ以上有する本発明の別の態様において、式Ｉで示されるヌクレオシド間結合は、例えばオリゴヌクレオチド類似体の全長において、またはオリゴヌクレオチド類似体の一端または両端領域において、またはオリゴヌクレオチド類似体の中間領域において、他のヌクレオシド間結合と交替し得る。全てのヌクレオシド間結合が式Ｉで示されるものではない本発明の態様において、残りのヌクレオシド間の結合は、天然ホスホジエステル結合または他の合成代替結合、例えばホスホチオエート、ホスホロジチオエート、アルキルホスホネート（−Ｏ−Ｐ(Ｏ)(Ｒ)Ｏ−）、ホスホルアミデート、短鎖アルキル、シクロアルキル、短鎖ヘテロ原子、−ＮＨＣＯＣＨ₂−、−ＣＨ₂ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨＣＨ₂−、−ＣＨ₂ＣＯＮＨ−、−ＣＨ₂ＮＨＯ−、−ＣＨ₂Ｎ(ＣＨ₃)Ｏ−、−ＣＨ₂ＯＮ(ＣＨ₃)−、−ＣＨ₂Ｎ(ＣＨ₃)Ｎ(ＣＨ₃)−または−ＯＮ(ＣＨ₃)ＣＨ₂− 結合、またはかかる結合を２つ以上組合せたものであり得る。好ましくは、残りのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル、ホスホチオエートまたはホスホロジチオエート結合、またはこれら３つの型を２つ以上混合したもの、特にホスホジエステル、ホスホチオエート、またはホスホジエステルおよびホスホチオエート結合を混合したものである。ある特に好ましい態様において、残りのヌクレオシド間の結合はホスホチオエート結合である。好ましくは、ホスホチオエート結合はヌクレオシド間結合の５０％以下である。本発明のある態様において、オリゴヌクレオチドは、式Ｉで示されるヌクレオシド間結合、またはそれとホスホチオエートまたはホスホジエステル結合が組み合わされたものを有する２つの領域の間に、ホスホジエステルおよび／またはホスホチオエートおよび／またはホスホロジチオエートによるヌクレオシド間結合を有する領域、特に、式Ｉで示されるヌクレオシド間結合、またはそれとホスホチオエートまたはホスホジエステル結合が組み合わされたものを有する２つの領域の間にホスホチオエート結合を有する領域を含む。いくつかの特に好ましい態様において、本発明のオリゴヌクレオチド類似体は、式Ｉで示されるヌクレオシド間結合によってのみ連結したヌクレオシドを有する２つの領域の間に、ホスホチオエート結合により連結した少なくとも６つのヌクレオシドからなる領域を含む。本発明のオリゴヌクレオチド類似体において、ヌクレオシド単位は、天然または合成ヌクレオシドであり得、これは、プリンまたはピリミジン塩基、例えばアデニン、グアニン、シトシン、チミンまたはウラシル、または上記の塩基の類似体、例えば２−アミノアデニン、６−ヒドロキシプリン、５−メチルシトシン、５−プロピニルシトシン、５−フルオロウラシル、５−プロピニルウラシルまたはジヒドロウラシルを有し、かかる塩基はフラノース糖の１'炭素原子に結合している。当業者により良く理解されているように、オリゴヌクレオチドをアンチセンス反応に使用する場合、ヌクレオシド配列は標的ＲＮＡ配列に相補的になるように選択する。例えば、本発明のオリゴヌクレオチド類似体はヒトｃ−ｒａｆキナーゼのｍＲＮＡ領域に相補的であり得、その場合、好ましい配列はＷＯ９５／３２９８７の配列番号８に記載の５'−ＴＣＣＣＧＣＣＴＧＴＧＡＣＡＴＧＣＡＴＴ−３'であるか、または本発明のオリゴヌクレオチド類似体はヒトＰＫＣ−αのｍＲＮＡ領域に相補的でり得、その場合、好ましい配列はＷＯ９５／０２０６９の配列番号２に記載の５'−ＧＴＴＣＴＣＧＣＴＧＧＴＧＡＧＴＴＴＣＡ−３'である。本発明のいくつかのオリゴヌクレオチド類似体において、例えば特定の標的に対する結合親和性を高めるため、および／またはヌクレアーゼに対する抵抗性を高めるために、少なくとも１つのヌクレオシドをその２'位で修飾する。全てのヌクレオシドをこのように修飾し得るか、または８０％まで、例えば７０％まで、６０％まで、５０％まで、４０％まで、３０％まで、２０％まで、または１０％までのヌクレオシドをこのように修飾し得る。２'修飾原子および基、すなわち、水素原子またはヒドロキシ基の代わりにヌクレオシドの２'位に結合して修飾し得る原子または基は、フッ素、塩素および臭素原子などのハロゲン原子；Ｃ₁ −Ｃ₁₀非置換または置換アルキル基、例えば、メチル、トリフルオロメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、オクチルまたはデシル；Ｃ₆ −Ｃ₁₀アリール基、例えば、フェニル、トリルまたはキシリル；Ｃ₇−Ｃ₁₃アラルキル基、例えば、ベンジル；アミノ、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキルアミノ、例えばメチルアミノ、エチルアミノまたはオクチルアミノ；Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキルチオ、例えば、メチルチオ、エチルチオまたはオクチルチオ；アジド；硝酸；亜硝酸；シアニド；シアネート；メタンスルホネート；Ｃ₁−Ｃ₁₀アミノアルキルアミノ；式 −ＯＲ²（式中、Ｒ²はＣ₁−Ｃ₁₀脂肪族基である）で示される基；置換シリル；ＲＮＡ開裂基；コレステリル基；コンジュゲート；リポーター基；オリゴヌクレオチドの薬物動態学特性を改善する基である挿入基；およびオリゴヌクレオチドの薬力学特性を改善する基が含まれる。好ましい２'位修飾原子および基は、ハロゲン原子、特にフッ素、および式− ＯＲ²（式中、Ｒ²はＣ₁−Ｃ₁₀脂肪族基であり、これは、メチル、エチル、イソプロピル、ブチル、ヘキシル、オクチル、デシル、トリフルオロメチル、エトキシエチル、メトキシエチル、またはブトキシエチルなどの非置換または置換Ｃ₁ −Ｃ₁₀アルキル基、または、ビニル、アリルまたはメタリルなどのＣ₂−Ｃ₆アルケニル基であり得る）で示される基である。特に好ましい修飾原子および基は、フッ素および式−ＯＲ²（式中、Ｒ²は非置換または置換Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル基、好ましくはＣ₁−Ｃ₄アルキル、Ｃ₁−Ｃ₄アルコキシ置換Ｃ₁−Ｃ₄アルキルである）で示される基、または式−(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)−_nＲ³（式中、Ｒ³はメチルまたはエチルであり、ｎは２−４である）で示される基である。特に好ましい式−ＯＲ² で示される基は、式中Ｒ²がメチル、エチル、メトキシエチル、エトキシエチルまたは式−(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)−₃ＣＨ₃で示される基であるものである。２'位が修飾されたヌクレオシドが存在する場合、本発明のオリゴヌクレオチド類似体は、例えば、２'位が修飾され、ホスホジエステル・ヌクレオチド間結合により連結した少なくとも２つの連続したヌクレオシドを有し得、および／または２'位が非修飾のヌクレオシドと２'位が修飾されたヌクレオシドの５'炭素原子の間に式Ｉで示されるヌクレオシド間結合を有し得る。当業者にも良く理解されているように、オリゴヌクレオチド類似体の末端ヌクレオシドはそれぞれ遊離５'および３'ヒドロキシ基を有し得るか、または、該ヒドロキシ基の一方または両方は、リン酸、チオール、アルキルチオ、チオアルキル、ホスホチオエート、アミノアルキル、アクリジニル、コレステリルまたはフルオレセイン基などの修飾基により置換されていてもよい。式Ｉで示される結合において、置換アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールまたはアラルキル基といったＲ¹ _a、Ｒ¹ _bまたはＲ¹ _cは、例えば、ヒドロキシ、Ｃ₁−Ｃ₄アルコキシ、ハロゲン(好ましくは塩素またはフッ素)、シアノ、トリ(Ｃ₁−Ｃ₁₅ヒドロカルビル)シリル、または一級、二級または三級アミノにより置換されていてもよい。式Ｉ（式中、Ｒ¹はＲ¹ _a、−ＯＲ¹ _aまたは−ＳＲ¹ _aである）で示される結合において、Ｒ¹ _aがＣ₁−Ｃ₁₀アルキルである場合、Ｒ¹ _aは、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ペンチル、ヘキシル、オクチル、ノニルまたはデシル、好ましくはＣ₁−Ｃ₄アルキルであり得；Ｒ¹ _a がＣ₂−Ｃ₁₀アルケニルである場合、Ｒ¹ _aは、ビニル、アリル、メタリル、１ −プロペニル、イソプロペニル、２−ブテニル、１−ブテニル、イソブテニル、ペンテニル、ヘキセニル、オクテニルまたはデセニル、好ましくはＣ₂−Ｃ₅アルケニルであり得；Ｒ¹ _aがＣ₃−Ｃ₈シクロアルキルである場合、Ｒ¹ _aは、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、メチルシクロペンチル、シクロヘキシル、メチルシクロヘキシル、ジメチルシクロヘキシル、シクロヘプチルまたはシクロオクチル、好ましくはＣ₅−Ｃ₈シクロアルキルであり得；Ｒ¹ _aがＣ₆ −Ｃ₁₀アリールである場合、Ｒ¹ _aは、例えば、フェニル、ｏ−トリル、ｍ−トリル、ｐ−トリル、ｏ−キシリル、ｍ−キシリル、ｐ−キシリルまたはナフチル、好ましくはＣ₆−Ｃ₈アリールであり得；Ｒ¹ _aがＣ₇−Ｃ₁₃アラルキルである場合、Ｒ¹ _aは、例えば、ベンジル、４−メチルベンジル、２−フェニルエチル、２ −フェニルプロピル、３−フェニルプロピルまたはジフェニルメチル、好ましくはＣ₇−Ｃ₉アラルキルであり得る。Ｒ¹が−ＮＨＲ¹ _bである場合、Ｒ¹は、Ｃ₁− Ｃ₁₀アルキルアミノ、例えば、メチルアミノ、エチルアミノ、イソプロピルアミノ、ブチルアミノ、ペンチルアミノ、ヘキシルアミノ、オクチルアミノまたはデシルアミノ、好ましくはＣ₁−Ｃ₄アルキルアミノ；Ｃ₂−Ｃ₁₀アルケニルアミノ、例えば、アリルアミノ、メタリルアミノ、１−プロペニルアミノ、イソプロペニルアミノ、イソブテニルアミノ、ヘキセニルアミノ、オクテニルアミノまたはデセニルアミノ、好ましくはＣ₃−Ｃ₅アルケニルアミノ；Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキルアミノ、例えば、シクロプロピルアミノ、シクロブチルアミノ、シクロペンチルアミノ、シクロヘキシルアミノ、シクロヘプチルアミノ、シクロオクチルアミノまたはジメチルシクロヘキシルアミノ、好ましくはＣ₅−Ｃ₈シクロアルキルアミノ；Ｃ₆−Ｃ₁₀アリールアミノ、例えば、フェニルアミノ、オルト−、メタ− またはパラ−トリルアミノ、オルト−、メタ−またはパラ−キシリルアミノまたはナフチルアミノ、好ましくはＣ₆−Ｃ₈アリールアミノ；Ｃ₇−Ｃ₁₃アラルキルアミノ、例えば、ベンジルアミノ、４−メチルベンジルアミノ、２−フェニルエチルアミノ、３−フェニルプロピルアミノまたはジフェニルメチルアミノ、好ましくはＣ₇ −Ｃ₉アラルキルアミノであり得る。Ｒ¹が−ＮＨ¹ _bＲ¹ _cである場合、Ｒ¹は、ジ (Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル)アミノ、例えば、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、メチルエチルアミノ、ジイソプロピルアミノ、ジブチルアミノまたはジオクチルアミノ、好ましくはジ(Ｃ₁−Ｃ₄アルキル)アミノ；Ｎ,Ｎ−ジ(Ｃ₂−Ｃ₁₀アルケニル) アミノ、例えば、ジアリルアミノ、ジメタリルアミノ、アリメタリルアミノ、ジプロペニルアミノ、ジブテニルアミノ、ジペンテニルアミノ、ジヘキセニルアミノ、ジオクテニルアミノまたはジデセニルアミノ、好ましくはジ(Ｃ₃−Ｃ₅アルケニル)アミノ；Ｎ,Ｎ−ジ(Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキル)アミノ、例えば、ジシクロプロピルアミノ、シクロプロピルシクロペンチルアミノ、ジシクロブチルアミノ、ジシクロペンチルアミノ、ジシクロヘキシルアミノ、ジシクロヘプチルアミノまたはジシクロオクチルアミノ、好ましくはＮ,Ｎ−ジ(Ｃ₅−Ｃ₈シクロアルキル )アミノ；Ｎ−Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキル−Ｎ−Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキルアミノ、例えば、Ｎ−シクロペンチル−Ｎ−メチルアミノ、Ｎ−シクロペンチル−Ｎ−エチルアミノ、Ｎ−シクロヘキシル−Ｎ−メチルアミノ、Ｎ−シクロヘキシル−Ｎ−エチルアミノ、好ましくはＮ−(Ｃ₅−Ｃ₈シクロアルキル)−Ｎ−Ｃ₁−Ｃ₄アルキルアミノ；Ｎ−Ｃ₆−Ｃ₁₀アリール−Ｎ−Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキルアミノ、好ましくはＮ− Ｃ₆−Ｃ₈−アリール−Ｃ₁−Ｃ₄アルキルアミノ、例えばＮ−フェニル−Ｎ−メチルアミノ、Ｎ−トリル−Ｎ−メチルアミノまたはＮ−フェニル−Ｎ−エチルアミノ；Ｎ,Ｎ−ジ(Ｃ₇−Ｃ₁₃アラルキル)アミノ、例えばジベンジルアミン、ジ(４ −メチルベンジル)アミン、ジ(フェニルエチル)アミノまたはジ(フェニルプロピル)アミノ、好ましくはＮ,Ｎ−ジ(Ｃ₇−Ｃ₉アラルキル)アミノ；またはＮ−Ｃ₇ −Ｃ₁₃アラルキル−Ｎ−Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキルアミノ、好ましくはＮ−Ｃ₇−Ｃ₉アラルキル−Ｎ−Ｃ₁−Ｃ₄アルキルアミノ、例えばＮ−ベンジル−Ｎ−メチルアミノまたはＮ−ベンジル−Ｎ−エチルアミノまたは窒素原子を経由して式Ｉの表記リン原子に結合した５または６員のＮ−ヘテロ環基、例えば１−ピロリジニル、１−ピペリジル、１−ピペラジニルまたはモルホリノであり得る。上記の基はいずれも前記したように非置換または置換され得る。ある好ましい態様において、Ｒ¹は水素、ヒドロキシ、Ｏ^-、ＳＨ、Ｓ^-、非置換または置換Ｃ₁−Ｃ₄アルキルまたはフェニル基、式−ＯＲ¹ _a（式中、Ｒ¹ _aは非置換または置換Ｃ₁−Ｃ₄アルキル、Ｃ₃−Ｃ₅アルケニル、Ｃ₅−Ｃ₈シクロアルキルまたはＣ₇−Ｃ₉アラルキル基である）で示される基、または式−ＳＲ¹ _a（式中、Ｒ¹ _aは非置換または置換Ｃ₁−Ｃ₄アルキルまたはフェニル基である）で示される基であり、上記において選択した置換基は前記した通りである。ある特に好ましい態様において、Ｒ¹は水素、ヒドロキシ、Ｏ^-、ＳＨ、Ｓ^-、メトキシ、エトキシまたは２−シアノエトキシである。式ＩにおけるＲ¹がＯ^-である場合、本発明のオリゴヌクレオチド類似体は、医薬的に許容される塩の形であり、例えば金属塩、好ましくはアルカリ金属塩、または非置換または置換アンモニウム塩、例えばモノ−、ジ−またはトリ−Ｃ₁− Ｃ₁₀アルキル−またはヒドロキシアルキル−アンモニウム塩、Ｎ−エチルピペリジニリウム塩またはＮ,Ｎ¹−ジメチルピペラジニリウム塩であり得る。Ｒ¹がＯ^- である特に好ましい態様において、オリゴヌクレオチド類似体はナトリウムまたはアンモニウム塩の形である。式Ｉにおけるリン原子がキラル中心である場合、リン位における立体化学により、ハイブリダイゼーションおよびヌクレアーゼに対する抵抗性および生物学的効力に違いが認められることがある。中、ｎは８−１９８であり、各Ｖは、独立して、天然または合成ヌクレオシド基であり、各ｎ＋２個の残基Ｖは、隣接基Ｖと同一または相違し、各Ｌはヌクレオシド間結合であり、各ｎ＋１個の結合Ｌは隣の結合Ｌと同一または相違し、少なくとも１つのＬは式Ｉで示されるものである）で示される基により示され得る。本発明はまた、式Ｉで示されるヌクレオシド間結合を少なくとも１つ有するオリゴヌクレオチド類似体、例えば２−２００ヌクレオシド単位を有するオリゴヌクレオチド、例えば前記したオリゴヌクレオチド類似体を製造する方法を提供するものであって、かかる方法は、（ｉ）５'−ヒドロキシ基を有する天然または合成ヌクレオシドまたはオリゴヌクレオチド(Ａ)、および３'位に該５'−ヒドロキシ基と反応する基を有する天然または合成ヌクレオシドまたはジヌクレオチド（Ｂ）との間で、所望の数のヌクレオシドを有するオリゴヌクレオチドが得られるまで、カップリング反応または連続的カップリング反応を行い、ここで、少なくとも１つの上記のカップリング反応において、（Ｂ）は式［式中、Ｂ¹はヌクレオシド塩基であり、Ｒ⁴はヒドロキシ保護基であり、Ｒ⁵は水素、ヒドロキシまたは２'修飾原子または基であり、Ｍ⁺は金属あるいは非置換または置換アンモニウムイオン、または、ピロリジン、ピペリジン、Ｎ−エチルピペリジン、Ｎ,Ｎ¹−ジメチルピペラジン、モルホリンまたは１,８ジアザビシクロ[５. ４.０]ウンデック−７−エン（ＤＢＵ）などのヘテロ環状塩基のカチオンであり、Ｘは酸素または硫黄である］で示されるヌクレオシドであり、立体障害の大きい有機酸ハロゲン化物または無水物の存在下で（Ａ）と反応させ、式［式中、Ｘは酸素または硫黄である］で示されるホスフィネートによるヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオチド類似体を合成し、(ii)(ａ)ホスフィネート結合を酸化するか、または（ｂ）ホスフィネート結合を硫化するか、または（ｃ）ホスフィネート結合を式Ｒ¹ _aＹ（式中、Ｒ¹ _aは前記で定義した通りであり、Ｙは脱離原子または基である）で示される化合物と反応させるか、または（ｄ）ホスフィネート結合を酸化し、式Ｒ¹ _a ＯＨで示されるアルコール、または式Ｒ¹ _bＮＨ₂またはＲ¹ _bＲ¹ _cＮＨ（式中、Ｒ¹ _a、Ｒ¹ _bおよびＲ¹ _cは前記で定義した通りである）で示されるアミンと反応させるか、または（ｅ）ホスフィネート結合をシリル化し、シリル結合をチオアルキル化またはチオアリール化剤と反応させ、式Ｉ（式中、Ｒ¹は−ＳＲ¹ _aであり、Ｒ¹ _aは前記で定義した通りである）で示されるホスフィネート結合を形成することを含む。前記で定義した方法は、溶液中または固体担体上で、例えば公知のオリゴヌクレオチド合成法を用いて行い得る。この方法で得られたオリゴヌクレオチド類似体を反応させ、保護基Ｒ⁴（ただし、Ｒ⁴はオリゴヌクレオチド類似体の末端ヌクレオシドである）を水素または前記した５'修飾基で置換してもよい。本発明のオリゴヌクレオチド類似体は、固相合成法により、例えばＨ−ホスホネート、ホスホトリエステルまたはホスホルアミジト法を用いて、またはそれらの方法を２つ以上組み合わせて、例えば市販の核酸シンセサイザーを用いて機械で製造し得る。固相合成法は、固相支持体に付着したヌクレオシドまたはオリゴヌクレオチド（Ａ）を用いて（ｉ）前記した連続的カップリング反応、および（ ii）上記工程を行い、次いで、（iii）固相支持体からオリゴヌクレオチドを脱着し、保護基を脱離し、５'末端遊離ヒドロキシル基を有するオリゴヌクレオチドを得、（iv）所望により５'遊離ヒドロキシル基を反応させて５'末端に修飾基を導入することを含み得る。式IIで示されるヌクレオシドにおいて、Ｂ¹は前記したプリンまたはピリミジン塩基またはその類似体であり得る。Ｂ¹が天然ヌクレオシド塩基、より好ましくはピリミジン塩基、特にチミンである化合物が好ましい。Ｒ⁴は望ましくない反応から５'ヒドロキシル基を保護できる任意のヒドロキシ保護基であり得る。このような基はよく知られており、これにはＣ₁−Ｃ₁₀脂肪族基、例えばアルキル；Ｃ₃−Ｃ₈シクロ脂肪族基、例えばシクロアルキル；Ｃ₆−Ｃ₁₀芳香族基、例えばアリール；Ｃ₇−Ｃ₄₀アラリファティック基、例えばアラルキル、またはＣ₁ −Ｃ₄アルコキシ置換アラルキル基；式−ＣＯＲ⁶または−ＳＯ₂Ｒ⁶（式中、Ｒ⁶ はＣ₁−Ｃ₁₀脂肪族基、Ｃ₃−Ｃ₈シクロ脂肪族基、Ｃ₆−Ｃ₁₀芳香族基またはＣ₇ −Ｃ₄₀アラリファティック基である）で示される基；およびトリ(Ｃ₁−Ｃ₁₅ヒドロカルビル)シリル基が含まれる。好ましくは、Ｒ⁴は、オリゴヌクレオチド合成に慣用的に使用されている５'保護基であり、特にメトキシトリチル、ジメトキシトリチルまたはトリスｔｅｒｔ−ブチルトリチル基である。２'修飾原子または基であるＲ⁵は前記した原子または基であり得；好ましくはＲ⁵は水素である。Ｍ⁺は、例えば、アルカリ金属イオン、または、好ましくは非置換アンモニウムイオン、モノ−、ジ−またはトリ−Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル−またはヒドロキシアルキル−アンモニウムイオン、またはピロリジン、ピペリジン、Ｎ−エチルピペリジン、Ｎ,Ｎ−ジメチルピペラジン、モルホリンまたはＤＢＵなどのヘテロ環状塩基のカチオンであり得る。特に好ましいＭ⁺はトリエチルアンモニウムイオンである。式IIで示されるヌクレオシドの好ましい立体異性体は、式［式中、Ｂ¹、Ｒ⁴、Ｒ⁵、ＸおよびＭ⁺は前記で定義した通りである］で示されるものである。式IIで示されるヌクレオシドは、ａ）式［式中、Ｂ¹およびＲ⁴は前記で定義した通りであり、Ｒ⁵ _aは水素、フッ素、または−ＯＲ² （ただし、Ｒ²は前記で定義した通りである）であり、Ｌは脱離原子または基、好ましくはヨウ素原子である］で示される化合物を、カリウムビス(トリメチルシリル)アミドなどの塩基の存在下、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中、−８０℃から４０℃で(１,１−ジエトキシエチル)ホスフィン酸エチルと反応させると、式［式中、Ｂ¹およびＲ⁵ _aは前記で定義した通りである］で示される化合物が得られ、ｂ）式IVで示される化合物を、１％エタノール含有クロロホルム中、アルゴン下、周囲温度で塩化トリメチルシリルと反応させると、リンに結合した保護ケタール基が水素で置換され、ｃ）ｂ）で得られた生成物をチタニウム（IV）イソプロポキシドの存在下、乾燥ＴＨＦ中、周囲温度でアセトンと反応させると、式で示される化合物が得られ、ｄ）式Ｖで示される化合物を、ＴＨＦ中、周囲温度でテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオライドおよび酢酸と反応させると、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル保護基が脱離し、ｅ）得られた５'−ヒドロキシ含有化合物を、有機塩基の存在下、式Ｒ⁴Ｙ（式中、Ｒ⁴は前記で定義した通りであり、Ｙはハロゲンである）で示される化合物と反応させると、式［式中、Ｂ¹、Ｒ⁴およびＲ⁵ _aは前記で定義した通りである］で示される化合物が得られ、ｆ）式VIで示される化合物を、無水エタノール中でアルカリ金属メトキシドを用いて、または水中でＤＢＵを用いて、周囲温度で反応させると、エチル基が脱離し、−Ｃ(ＣＨ₃)₂ＯＨ基が水素で置換され、ｇ）所望であれば、かかる生成物をアンモニアまたはアミンで処理し、対応する非置換または置換アンモニウム塩を形成し、ｈ）所望であれば、例えば、J.Org.Chem.1995,60,8241に記載の方法を用いて、塩化ピバロイル、次に、(ＣＨ₃)₃Ｓi−Ｓ−Ｓi(ＣＨ₃)₃と反応させることなどにより、かかる生成物を硫化すると、式II（式中、Ｘは硫黄である）で示されるヌクレオシドが得られる。式IV、ＶまたはVIで示される化合物は、例えば２'修飾原子または基をヌクレオシドに導入する慣用的な方法を用いて、２'位に別の修飾原子またはＲ⁵基を導入し得る。式IIIで示される化合物は、ＷＯ９２／２０８２３に記載の方法により製造した、式［式中、Ｂ¹およびＲ⁵ _aは前記で定義した通りである］で示されるアルデヒドを、無水エタノール中、周囲温度で、ＮａＢＨ₄と反応させることにより対応するアルコールに還元し、得られたアルコールを２,６−ルチジンの存在下、乾燥ジメチルホルムアミド中、０℃から３０℃でヨウ化メチルトリフェノキシホスホニウムと反応させることにより製造し得る。 (１,１−ジエトキシエチル)ホスフィン酸エチルはＥＰ０３０７３６２に記載のように製造し得る。固相合成を用いる典型的な方法では、５'保護ヒドロキシル基を有する天然または合成ヌクレオシドを、無水コハク酸などのリンカーを用いて、長鎖アルキルアミノ基を含有する制御多孔性ガラス（ＣＰＧ）などの不活性なシリカ基本支持体に３'位において共有結合させ、固相支持体に付着した３'−末端ヌクレオシドを得る。固相支持体は、所望のオリゴヌクレオチドの３'末端修飾基として働く基も含有し得る。次いで、付着した末端ヌクレオシドの５'ヒドロキシ上の保護基、例えばジメトキシトリチル基を脱離すると、５'遊離ヒドロキシ基が得られる。次いで、末端ヌクレオシドを、保護した、例えばジメトキシトリチル保護した５'ヒドロキシル基を有し、３'位に、末端ヌクレオシド上の５'遊離ヒドロキシ基と反応する、または活性化されて反応性を示す基を有する天然または合成ヌクレオシドまたはジヌクレオチド（Ｂ）とカップリングさせると、固相支持体に付着した二量体オリゴヌクレオチド（または（Ｂ）がジヌクレオチドの場合には、三量体オリゴヌクレオチド）が得られる。付着したオリゴヌクレオチド上の５ '保護基を脱離した後、３'反応基を有する天然または合成５'保護ヌクレオシドまたはジヌクレオチド（Ｂ）を用いて反応サイクルを、所望の数のオリゴヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチドが合成されるまで繰り返す。式Ｉで示されるもの以外のヌクレオシド間結合を形成するために、ヌクレオシドまたはジヌクレオチド（Ｂ）の３'位にある反応性基、または活性化されて反応性を示す基を、慣用的なオリゴヌクレオチド合成法により選択し、これは、例えば、Ｈ−ホスホネート基、ホスホルアミジト基またはホスホジエステル基であり得る。かかるヌクレオシド間結合、例えば、ホスホトリエステル、ホスホチオエートまたはホスホロジチオエート結合を形成するために、カップリング反応、および必要であれば、続いて酸化、硫化または他の処理を、慣用的な方法を用いて行い得る。本発明のオリゴヌクレオチド類似体の製造において、少なくとも１つのカップリング反応は、（Ｂ）として式IIで示されるヌクレオシドを用いて、これを固相合成で固体支持体に付着したヌクレオシドまたはオリゴヌクレオチド（Ａ）と、立体障害のある有機酸ハロゲン化物または無水物、例えば、塩化ピバロイル、塩化アダマントイル、２,４,６−トリイソプロピルベンゼンスルホニルクロライド、塩化ジフェニルホスフィン酸、塩化ビス(２−オキソ−３−オキサゾリジニル) ホスフィン酸、２−クロロ−２−オキソ−５,５−ジメチル−１,３,２−ジオキサホスフィナンまたはビス(ペンタフルオロフェニル)無水物の存在下で反応させる。好ましくは、環に３級窒素原子を有するヘテロ環状塩基、または該塩基の酸化物、例えばピリジン、キノリン、Ｎ−メチルイミダゾールまたはピリジン−Ｎ −オキシド、特にアセトニトリルなどの有機溶媒の存在下、反応を行う。カップリング反応は、周囲温度またはやや高温、例えば５０℃までで行い得る。（Ｂ）として式IIで示されるヌクレオシドを用いたカップリング反応により形成された式IAで示されるホスフィネートによるヌクレオシド間結合を、次のカップリング反応を行う前、または、好ましくは、所望の数のヌクレオシドを有するオリゴヌクレオチド類似体を合成した後、酸化または硫化し、その時に、式IIで示されるヌクレオシドを用いた他のカップリング反応により形成された１つ以上の他のホスフィン酸によるヌクレオシド間結合、または３'Ｈホスホネート置換ヌクレオシドを用いたカップリング反応により形成された亜リン酸結合が共に酸化または硫化されることがある。酸化(ii)(ａ)は、ヨウ素および水、またはtert −ブチルヒドロペルオキシドを用いて処理することにより、例えば亜リン酸によるヌクレオシド間結合の慣用的な酸化法を用いて行い得る。硫化(ii)(ｂ)は、硫黄を用いて、３級アミンの存在下、有機溶媒、通常二硫化炭素中、例えば既知の方法を用いて処理することで行い得る。式IAで示されるホスフィネートによるヌクレオシド間結合と式Ｒ¹ _aＹ（式中、Ｒ¹ _aおよびＹは前記で定義した通りであり、Ｙは好ましくはハロゲン原子またはトリフルオロメタンスルホネート基である）で示される化合物との反応(ii)(ｃ) は、Ｒ¹ _aがアルキル、シクロアルキルまたはアラルキルである場合、公知のアルキル化法を用いて、例えば、式IAで示されるホスフィネートによる結合を式Ｒ¹ _a Ｙ（式中、Ｙはハロゲンである）で水素化ナトリウムなどの強塩基の存在下、反応させることにより行い得る。Ｒ¹ _aＹがハロゲン化アルケニルまたはアリールまたはトリフラートの場合、ホスフィネートによる結合とＲ¹ _aＹとの間の反応は、公知の方法を用いて、例えばＰd(ＰＰｈ₃)₄などのパラジウム触媒および３級アミンの存在下、例えばY.Xu et al.,Tetrahedron Lett.,30,949(1989)またはK.S. Petrakis et al.,J.Am.Chem.Soc.,109,2831(1987)に記載されているように行い得る。次のカップリング反応の前、または所望の数のヌクレオシドを有するオリゴヌクレオチドが合成された後、式Ｒ¹ _aＯＨで示されるアルコールを用いる式IAで示されるホスフィネートによるヌクレオシド間結合の酸化反応(ii)(ｄ)は、ヨウ素、四塩化炭素またはブロモトリクロロメタンなどの酸化剤を用いて、式Ｒ¹ _aＯＨで示されるアルコールおよびピリジンなどの塩基の存在下、例えば亜リン酸によるヌクレオシド間結合の酸化に慣用的な条件下で行い得る。式IAで示されるホスフィネートによるヌクレオシド間結合の酸化反応(ii)(ｄ) は、次のカップリング反応の前、または所望の数のヌクレオシドが合成された後、式Ｒ¹ _bＮＨ₂またはＲ¹ _bＲ¹ _cＮＨ（式中、Ｒ¹ _bおよびＲ¹ _cは前記で定義した通りである）で示されるアミン、および四塩化炭素またはブロモトリクロロメタンまたはヨウ素を用いて行い得、それぞれ、Ｒ¹が−ＮＨＲ¹ _bまたは−ＮＨ¹ _bＲ¹ _c である本発明のオリゴヌクレオチド類似体が得られる。この反応は、アサトン・トッド（Atherton-Todd）反応で公知の条件および方法を用いて行ってよい。式IAで示されるホスフィネート結合の反応(ii)(ｅ)は、公知のシリル化法を用いて、例えばハロゲン化トリアルキルシリルおよび例えばトリエチルアミンなどの塩基を用いて結合をシリル化し、シリル結合を、式ＡrＳＯ₂ＳＲ¹ _a（式中、Ｒ¹ _a は前記で定義した通りであり、Ａrはフェニルまたはトリルなどの芳香族基である）で示されるチオスルホネートなどのチオアルキル化またはチオアリール化剤で反応させることにより行い得る。この反応に適当な方法は、W.K.D.Brill,Te trahedron Lett,36,703(1995)に記載されている。式IAで示されるホスフィネート結合を反応させて、リンに結合している水素原子をアミノなどの反応性置換基を有するＲ¹基で置換する際に、Ｒ¹導入反応時に、もしその反応条件下で反応性があるならば保護し、次いで脱保護すべきであることは当業者には自明である。所望の数のヌクレオシドを有するオリゴヌクレオチド類似体が固体支持体上で合成されれば、例えば濃アンモニア水で処理するなどの慣用的な方法を用いて固体支持体から脱着し、またこの処理によりオリゴヌクレオチドの合成に使用した１つ以上のヌクレオシドの環外窒素原子に存在し得る保護基が脱離し、処理前後に、ジメトキシトリチル基などのヒドロキシ保護基を脱離し、これはまた慣用的な方法で、例えばトリフルオロ酢酸などの水性有機酸で処理することにより行い得る。固体支持体からオリゴヌクレオチドを脱着する前後に、脱保護の際に生成した５'末端ヒドロキシルを、例えばBeaucage and lyer,Tetrahedron 49,1925-63(19 93)により記載された方法を用いて反応させると、リン酸基などの５'修飾基または前記した他の５'末端修飾基を導入することができる。前記した合成法の別法では、式IIで示されるヌクレオシドを、式［式中、Ｂ¹、Ｒ¹、Ｒ⁴およびＲ⁵は前記で定義した通りであり、Ｂ²はヌクレオシド塩基であり、これはＢ¹で前記した天然または合成ヌクレオシド塩基であり得、Ｒ⁶は水素、ヒドロキシ、または前記Ｒ⁵で定義した２'修飾原子または基であり、Ｒ⁷ はヌクレオシドの５'ヒドロキシル基と反応するか、または活性化されて反応性を示す基である］で示されるジヌクレオチドで置換してもよい。この別法では、式VIIIで示されるジヌクレオチドのＲ⁷Ｏ基はＨ−ホスホネート基であり得、その場合、式VIIIで示されるジヌクレオチドを、固相合成で固体支持体に付着したヌクレオシドまたはオリゴヌクレオチド（Ａ）で、立体障害のある有機酸ハロゲン化物の存在下、例えば３'Ｈホスホネートを用いたオリゴヌクレオチドの慣用的な合成法を用いて反応させ、亜リン酸によるヌクレオシド間結合を形成させ、次いで、酸化、硫化または式Ｒ¹ _aＹで示される化合物と反応させるか、または式IIで示されるヌクレオシドと（Ａ）との反応により形成された式IAで示されるホスフィネートによるヌクレオシド間結合について前記したような別の(ii)(ａ)から(ii)(ｅ)の反応を行い得る。この別法では、式VIIIで示されるジヌクレオチドのＲ⁷Ｏ基は、任意によりホスホルアミジト基であり得、その場合、式VIIIで示されるジヌクレオチドは、例えば３'ホスホルアミジトを用いた慣用的なオリゴヌクレオチド合成法により、ヌクレオシドまたはオリゴヌクレオチド（Ａ）と反応し得る。この別法の片方の態様において、式VIIIで示されるジヌクレオチドのＲ⁷Ｏ基はホスホジエステル基であり得、その場合、式VIIIで示されるジヌクレオチドは、例えば３'ホスホジエステルを用いた慣用的なオリゴヌクレオチド合成法により、ヌクレオシドまたはオリゴヌクレオチド（Ａ）と反応し得る。式VIIIで示されるジヌクレオチドは、式IIで示されるヌクレオシドを、式［式中、Ｂ²およびＢ⁶は前記で定義した通りであり、Ｒ⁸はヒドロキシ保護基である］で示されるヌクレオシドと、カルビジイミドなどの脱水カップリング試薬または立体障害のある有機酸ハロゲン化物または無水物の存在下で反応させて、式で示されるジヌクレオチドを生成し、所望により、式Ｘのヌクレオシド間結合を前記した(ii)(ａ)から(ii)(ｅ)のいずれかの反応にかけ、Ｒ⁸Ｏ−基をＲ⁷Ｏ−基に変換することにより製造し得る。ヒドロキシ保護基Ｒ⁸は、Ｒ⁴で前に特記した基から選択し得る。好ましくはＲ⁸ はヌクレオシド化学で慣用的に使用される３'保護基であり、特にtert−ブチルジフェニルシリル基である。式IXで示されるヌクレオシドは、３'保護天然または合成ヌクレオシドであり、これは、水素、ヒドロキシまたは２'位に２'修飾原子または基を有し得る。かかるヌクレオシドは公知であるか、または公知の方法により製造し得る。立体障害のある有機酸ハロゲン化物の存在下における式IIで示されるヌクレオシドと式IXで示されるヌクレオシドとの間の反応は、好ましくは、ヘテロ環状塩基またはその酸化物、および式IIで示されるヌクレオシドとヌクレオシドまたはオリゴヌクレオチド（Ａ）との反応で前記した有機溶媒の存在下で行い得る。Ｒ⁸Ｏ−基からＲ⁷Ｏ−基（式中、Ｒ⁸およびＲ⁷は前記で定義した通りである）への変換は、３'保護ヒドロキシル基から、Ｈ−ホスホネート、ホスホルアミジトまたはホスホジエステル基などの５'ヒドロキシ基と反応する、または活性化されて反応性を示す基に変換するための慣用的な方法を用いて行い得る。例えば、保護基Ｒ⁸を脱離し、３^'遊離ヒドロキシ基を形成し、これを次いで２−シアノエチルビス(Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル)ホスホルアミジトなどの脂肪族ビス(Ｎ,Ｎ −ジアルキル)ホスホルアミジトと反応させ、３'ホスホルアミジト基を形成させ得る。式VIII（式中、Ｒ⁵およびＲ⁶の一方または各々は前記で定義した２'修飾原子または基であり、特に前記で定義した式−ＯＲ²で示される基である）で示されるジヌクレオチドは、新規である。式Ｘで示されるジヌクレオチドは新規である。従って、本発明は、また、式［式中、Ｂ¹、Ｂ²、Ｒ¹、Ｒ⁴は前記で定義した通りであり、Ｒ⁵およびＲ⁶は前記で定義した通りである、ただし、Ｒ¹が水素以外の場合には、Ｒ⁵およびＲ⁶の少なくとも１つは前記で定義した２'修飾原子または基であり、Ｒ⁹は、前記で定義したＲ₇ またはＲ⁸であり、特に、Ｒ⁵が水素またはヒドロキシであり、Ｒ⁶が前記で定義した２'修飾原子または基である場合、特に前記で定義した式−ＯＲ²で示される基である］で示される新規ジヌクレオチドを提供する。式VIII（式中、Ｒ¹はＣ₁−Ｃ₁₀アルコキシである）で示されるジヌクレオチドは、式［式中、Ｂ¹、Ｒ⁴およびＲ⁵は前記で定義した通りである］で示されるヌクレオシドを、式IXで示されるヌクレオシドで、ジメチルアミノピリジンンなどの３級アミンおよびジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）などの脱水剤の存在下で反応させると、式Ｘで示されるジヌクレオチドが生成し、次いで、これを前記したように処理すると、式VIIIで示されるジヌクレオチドが得られる。式XIIおよびIXで示されるヌクレオシド間の反応は周囲温度でＴＨＦなどの溶媒中で行い得る。式XIIで示されるヌクレオシドは、式II（式XIIの酸の塩形）で示されるヌクレオシドを慣用的な方法を用いて酸で処理することにより製造することができる。式Ｉで示されるヌクレオシド間結合を少なくとも１つ有するオリゴヌクレオチド、例えば２−２００ヌクレオシド単位を有するオリゴヌクレオチド、例えば前記で定義したようなオリゴヌクレオチド類似体は、また、５'保護ヒドロキシ基を有し、３'位に式［式中、Ｒ¹ _aは前記で定義した通りであり、Ｒ¹⁰およびＲ¹¹は各々独立して非置換または置換Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル、Ｃ₂−Ｃ₁₀アルケニル、Ｃ₄−Ｃ₁₀シクロアルキルアルキル、Ｃ₆−Ｃ₁₀アリールまたはＣ₇−Ｃ₁₃アラルキル基であるか、またはＲ¹⁰は上記の基であり、Ｒ¹¹は水素であるか、またはＲ¹⁰およびＲ¹¹はそれらが結合している窒素原子と共に５−１３員のヘテロ環を示す］で示される基を有するヌクレオシドを、５'遊離ヒドロキシ基を有する天然または合成ヌクレオシドまたはオリゴヌクレオチドを用いてヌクレオシドカップリング反応を行い、式［式中、Ｒ¹ _aは前記で定義した通りである］で示されるヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオチド前駆体を形成し、かかる前駆体を酸化して、前駆体を式［式中、Ｒ¹ _aは前記で定義した通りであり、Ｘは酸素または硫黄である］で示されるヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオチドに変換すると、式XV （式中、Ｘは酸素である）で示されるヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオチドが得られるか、または、前駆体を硫化することにより式XV（式中、Ｘは硫黄である）で示されるヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオチドが得られる。式XIVで示される結合を有する前駆体を形成する反応は、テトラゾールまたは５−(４−ニトロフェニル)テトラゾールなどのアミン−プロトン化カップリング触媒（活性化剤）の存在下で行い得る。反応は−２０℃から５０℃で、好ましくは室温で行い得る。得られた前駆体の酸化または硫化は、それぞれ亜リン酸ヌクレオシド間結合の酸化または硫化に使用した方法により行い得る。従って、酸化はヨウ素および水で、またはtert−ブチルヒドロペルオキシドなどのヒドロペルオキシドで、例えばオリゴヌクレオチド合成における亜リン酸によるヌクレオシド間の結合の酸化で公知の条件および方法を用いて処理することにより行い得る。硫化は硫黄を用いて、３級アミンの存在下、有機溶媒、通常二硫化炭素中、[ ３Ｈ]１,２−ベンゾジチオール−３−オン−１,１−ジオキシド（Beaucage試薬）で処理、またはテトラエチルチウラムで処理することにより、例えば亜リン酸によるヌクレオシド間結合の硫化で公知の方法を用いて処理することにより行い得る。５'保護ヒドロキシ基および３'位に式XIIIで示される基を有するヌクレオシドは、５'保護ヒドロキシ基を有し、３'位に式［式中、Ｒ¹ _aは前記で定義した通りであり、Ｚはハロゲンである］で示される基を有するヌクレオシドを、式［式中、Ｒ¹⁰およびＲ¹¹は前記で定義した通りである］で示される化合物と反応させて製造し得る。反応は、有機溶媒、例えばクロロホルムなどのハロゲン化炭化水素中、ピリジンなどの３級窒素塩基の存在下、−７８℃から５０℃の温度で、好ましくは−３０℃から２５℃で行い得る。５'保護ヒドロキシ基および３'位に式XVIで示される基を有するヌクレオシドは、５'保護ヒドロキシ基および３'位に式で示される基を有するヌクレオシドを非酸化的にハロゲン化することにより製造し得る。非酸化的ハロゲン化は、非酸化的ハロゲン化剤、例えばトリフェニルジクロロホスホランまたはジクロロトリス(２，４，６−トリブロモフェノキシ)ホスホランなどのハロホスホランなどを用いて、塩基、好ましくはピリジンなどの３級窒素塩基の存在下、有機溶媒中(これはピリジンでもよいが、好ましくはクロロホルムなどのハロゲン化炭化水素である)、−２０℃から６０℃の温度で、好ましくは０℃から５０℃で行い得る。５'保護ヒドロキシ基および３'位に式XVIIIで示される基を有するヌクレオシドはＷＯ９６／０８５０３に記載したように製造し得る。式XVで示される結合を有するオリゴヌクレオチドが固体支持体上で形成されれば、処理して５'保護基を脱離し、得られた５'ヒドロキシ末端オリゴヌクレオチドを、保護５'ヒドロキシ基、および固体支持体に付着した脱保護オリゴヌクレオチド上の５'遊離ヒドロキシ基と反応するか、または活性化されて反応性を示す３'位の基を有する天然または合成ヌクレオシドまたはオリゴヌクレオチドを用いて、所望の長さのオリゴヌクレオチドが得られるまで、連続的にカップリング・サイクルを行う。従って、式XVで示される結合を有するオリゴヌクレオチドは、３'ホスホルアミジト、Ｈ−ホスホネート、ホスホジエステル基または式XII Iの３'基および５'保護ヒドロキシル基を有するヌクレオシドまたはオリゴヌクレオチドを用いてカップリングすると、鎖が伸長したオリゴヌクレオチドが得られ、所望の長さのオリゴヌクレオチドが得られるまでかかる任意の反応によりさらに鎖を伸長し得る。３'ホスホルアミジト、Ｈ−ホスホネートまたはホスホジエステル基を有するヌクレオシドまたはオリゴヌクレオチドを使用する場合、カップリング反応はオリゴヌクレオチド合成で公知の方法を用いて行い得る。式XI IIの３'基を有するヌクレオシドを使用する場合、カップリング反応は前記したように行い得る。従って、３'ホスホルアミジトまたは式XIIIの３'基を使用する場合、カップリング・サイクルには酸化または硫化が含まれるが、３'Ｈ−ホスホネートを使用する場合には、鎖伸長反応が完了した後に酸化または硫化を行い、３'ホスホジエステルを使用する場合には酸化する必要は全くない。本発明のオリゴヌクレオチド類似体は、治療、例えばタンパク質により調節されている疾患を患うヒトまたは他の動物の処置に、または、インフルエンザ、ヘルペスおよびＨＩＶなどのウイルスの処置に使用できる。従って、本発明はまた有効成分として本発明のオリゴヌクレオチド類似体を含有する医薬組成物を提供する。最適の投与量および処置計画は当業者によって容易に決定できる。約７０ｋｇの体重の哺乳動物に投与する場合、投与量は１日当たり０.０１から１０００ｍｇであり得る。一般的に本発明の治療薬は、内服、例えば経口、吸入、静脈内または筋肉内投与することが好ましい。経皮、局所または創傷内法、および坐剤への包含などの他の方法も有用である。ある治療処置では医薬的に許容できる担体と混合して使用することが好ましい。本発明に記載のオリゴヌクレオチド類似体はヌクレアーゼによる分解に対して驚くほど高い安定性を示す。また、相補的核酸鎖、特にＲＮＡ型のものと良好に対を形成することが認められる。従って、本発明に記載のオリゴヌクレオチド類似体は、特にアンチセンス技術、すなわち、適当な核酸の相補的ヌクレオチド配列への結合による望ましくないタンパク質産物の発現阻害に特に適している(ＥＰ０２６６０９９、ＷＯ８７／０７３００およびＷＯ８９／０８１４６参照)。それらは、例えば、核酸段階（例えば癌遺伝子）における生物活性タンパク質の発現阻害により、感染および疾病の処置に使用できる。本発明に記載のオリゴヌクレオチド類似体はまた診断剤にも適しており、一本鎖または二本鎖の核酸段階における選択的相互作用によるウイルス感染または遺伝子関連疾患の検出のための遺伝子プローブとして使用できる。特に、ヌクレアーゼに対する安定性が高いことから、診断剤の使用はインビトロだけでなくインビボでも可能である(例えば組織サンプル、血漿および血清)。この形式での使用の可能性は、例えばＷＯ９１／０６５５６に記載されている。式XIで示される新規ジヌクレオチドは、例えば抗ウイルス剤などの医薬品として使用できる。本発明に記載の医薬的に活性なオリゴヌクレオチド類似体およびジヌクレオチドは、非経口投与製剤または注射液の形で使用できる。この型の溶液は、好ましくは、等張水溶液または懸濁液であり、例えば、有効成分を単独で、または担体例えばマンニトールと共に含有する凍結乾燥製剤の場合、使用前に調製することが可能である。医薬製剤は滅菌し、および／または保存剤、安定化剤、湿潤剤および／または乳化剤、溶解剤、浸透圧を調節するための塩および／または緩衝液などの添加剤を含むことができる。医薬製剤は、所望であれば薬理学的活性物質、例えば抗生物質などをさらに含有することができ、これはそれ自体公知の方法で、例えば慣用的な溶解または凍結乾燥法を用いて調製し、約０．１から９０％、特に約０.５％から約３０％、例えば１％から５％の有効成分を含有する。本発明を以下の実施例により説明する。実施例に使用した化合物およびその前駆体は以下のように製造する。これらの化合物および実施例の全³¹Ｐデータは¹Ｈデカップリングしている。ＷＯ９２／２０８２３に記載のように製造した、式XIII（式中、Ｒ²は水素であり、Ｂ¹は１−チミニルであり、Ｒ¹はtert−ブチルジフェニルシリルである）で示されるアルデヒド（１１.２g ２３mmol）の無水エタノール（１２０ml）溶液に、室温で、少しずつ５分間かけてＮaＢＨ₄（８６５mg、２３mmol）を添加する。１時間後、反応混合物を水で反応停止し、酢酸エチル（５００ml）で希釈し水（２×５０ml）で洗浄する。水層を逆抽出した後、合わせた有機層を乾燥（Ｍ gＳＯ₄）させ、濃縮すると白色固体の化合物Ａが得られる。¹ Ｈｎｍｒ(ＣＤＣl₃、４００ＭＨz)δ９．１０(１Ｈ，s，ＮＨ)、７.６５(４Ｈ，d，Ａr４×ＣＨオルト)、７.４０(７Ｈ，m，Ａr４×ＣＨメタ，２×ＣＨパラ＋Ｈ６)、６.１３(１Ｈ，t，Ｈ１')、４.００(１Ｈ，dd，Ｈ５')、３.９３(１Ｈ，m，Ｈ４')、３.８２(１Ｈ，dd，Ｈ５')、３.６２(２Ｈ，m，ＣＨ ₂ＯＨ)、２. ６０(１Ｈ，m，Ｈ３')、２.３２(１Ｈ，m，Ｈ２')、２.１２(１Ｈ，m，Ｈ２')、１.６２(３Ｈ，s，Ｔ−ＣＨ ₃)および１.１０(９Ｈ，s，^tＢu)ppm。化合物Ａ（９g、１８.１mmol）の乾燥ＤＭＦ（１００ml）溶液に０−５℃で２，６−ルチジン(４.２５ml、３６.５mmol)、続いてヨウ化メチルトリフェノキシホスホニウム（９.４５g、２０.９mmol）を添加する。得られた混合物を室温まで加温する。１時間後、混合物を希釈（２００ml酢酸エチル）し、０.１ＮＮaＳ₂ Ｏ₃(２×２０ml)、０.５Ｎ塩酸（２×２０ml）および水（２×２０ml）で洗浄する。乾燥、濃縮、フラッシュ・シリカ・カラム・クロマトグラフィー（勾配溶離クロロホルム：酢酸エチル２０：１−７：１）により精製すると白色固体の化合物Ｂが得られる。¹ Ｈｎｍｒ(ＣＤＣl₃、４００ＭＨz)δ１０.２(１Ｈ，s，ＮＨ)、７.６６(４Ｈ， d，４×ＣＨオルト)、７．４０(７Ｈ，Ｍ，４×ＣＨメタ，２×ＣＨパラ＋Ｈ６) 、６.１９(１Ｈ，ｔ，Ｈ１')、４.０２(１Ｈ，dd，Ｈ５')、３.８２(１Ｈ，m，Ｈ４')、３.７８(１Ｈ，dd，ＨＳ')、３.１７(１Ｈ，dd，ＣＨ ₂Ｉ)、３.１０(１Ｈ，ddＣＨ ₂Ｉ)、２.６８(１Ｈ，m，Ｈ３')、２.３０(１Ｈ，m，Ｈ２')、２.２３（１Ｈ，m，Ｈ２')、１.６６(３Ｈ，s，ＣＨ₃−Ｔ)、１.１０(９Ｈ，s，^tＢu) ppm。 (１,１−ジエトキシエチル)ホスフィン酸エチル（５.５１g、２６.２mmol）の乾燥ＴＨＦ（１７０ml）溶液に、アルゴン下、−７８℃でカリウムビス(トリメチルシリル)アミド（３４.６ml、０.７５Ｍトルエン溶液）を５分間かけて滴下して加える。得られた溶液を−７８℃で１時間撹拌する。次いで、化合物Ｂ（５ .０g、８.２５mmol）の乾燥ＴＨＦ（２０ml）溶液を５分間かけて滴下して加える。−７８℃で１時間撹拌し、その後、２時間かけて室温まで加温する。次いで、飽和塩化アンモニム水（５０ml）を添加し、全混合物を酢酸エチル（５００ml ）で抽出する。有機層を飽和塩化アンモニウム（２×５０ml）および水（２×５０ml)で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮する。フラッシュ・シリカ・カラム・クロマトグラフィー（溶出液酢酸エチル：エタノール３０：１）により精製すると、化合物Ｃがリン位におけるジアステレオ異性体エピマーの１：１混合物として得られる。アルゴン下、室温でトリメチルシリルクロライド（４.４４ml、３５mmol）を、化合物Ｃ（２.４g、３.５mmol）のエタノール（１％）含有クロロホルム（２５ml）撹拌溶液に滴下（２分間）して加える。−２０℃で６０時間放置した後、さらにトリメチルシリルクロライド（２.２２ml、１７.５mmol）をエタノール（２００μlと共に加え、得られた溶液を室温で７時間撹拌する。クロロホルム（５０ml）と共に濃縮し、共蒸発させると、白色固体が得られ、これをフラッシュ・シリカ・カラム・クロマトグラフィー（溶出液クロロホルム：エタノール１３：１）により精製すると、化合物Ｄがジアステレオ異性体の１：１混合物として単離された白色固体として得られる。化合物Ｄ（１.２g、２.１mmol）のアセトン（３.２ml）含有乾燥ＴＨＦ（３０ ml）溶液に、チタニウム（IV）イソプロポキシド（７３８μl、２.４８mmol）を添加する。１５分後に濃縮し、短いシリカ・カラム(溶出液酢酸エチル：エタノール４：１)(５００ml)を通過させると、化合物Ｅが２つのジアステレオ異性体の混合物として単離される。³¹ Ｐｎｍｒ¹Ｈデカップリング(ＣＤＣl₃、１６２ＨＭｚ)δ５５.０、５４.７ppm 。実測値:Ｃ５７.７、Ｈ７.０５、Ｎ４.０５％Ｃ₃₂Ｈ₄₅Ｎ₂Ｏ₇ＰＳｉ.２Ｈ₂Ｏ計算値Ｃ５７.８、Ｈ７.４、Ｎ４.２％。化合物Ｅ（１.０２g、１.６２mmol）および酢酸（９２μl、１６.１mmol）のＴＨＦ（１０ml）溶液に、テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオライド（１. ６３ml、１.０モル）溶液を添加する。室温で１時間撹拌した後、混合物をクロロホルム（５０ml）と共に濃縮し蒸発させる。フラッシュ・シリカ・カラム・クロマトグラフィー（溶出液クロロホルム：エタノール９：１）により精製すると２つのジアステレオ異性体の混合物として化合物Ｆが単離される。実測値:Ｃ４５.５５、Ｈ６.８５、Ｎ６.４％Ｃ₁₆Ｈ₂₇Ｎ₂Ｏ₇Ｐ.１_2/3Ｈ₂Ｏ計算値Ｃ４５.７、Ｈ７.２５、Ｎ６.６％ ³¹Ｐｎｍｒ¹Ｈデカップリング（ＣＤＣl₃、１６２ＭＨz）δ５６.７、５６.５ｐｐｍ。化合物Ｆ（５５０mg、１.４１mmol）のピリジン（１０ml）溶液に、ジメトキシトリチルクロライド（９５８mg、２.８３mmol）を添加する。室温で２０時間撹拌した後、濃縮し、フラシュ・シリカ・カラム・クロマトグラフィー（溶出液クロロホルム、メタノール、トリエチルアミン１００：５：１）で精製すると、２つのジアステレオ異性体の混合物として単離された化合物Ｇが得られる。³¹ Ｐｎｍｒ¹デカップリング（ＣＤＣl₃、１６２ＭＨz）δ５４.９、５４.７ppm 。化合物Ｇ（０.８５g、１.２２mmol）の無水メタノール（１０ml）溶液にナトリウムメトキシド（１.５ml４.４Ｎメタノール溶液）を添加する。室温で１６時間撹拌した後、濃縮し、フラシュ・シリカ・カラム・クロマトグラフィー（勾配溶離−クロロホルム、メタノール、トリエチルアミン１００：２０：１−１００：３５：１）により精製し、次いでさらにDowex５０Ｗ−Ｘ２イオン交換カラム（トリエチルアミン形）に生成物の０.５％トリエチルアミン水溶液を通して精製すると、濃縮後に化合物Ｈが得られる。³¹ Ｐｎｍｒ¹デカップリング（ＣＤ₃ＯＤ、１６２ＭＨz）δ２３.７ppm。化合物ＪはＷＯ９６／０８５０３の実施例９８に記載のように製造する。化合物ＫからＭの式において、Ｔは１−チミニルであり、ＤＭＴｒはジメトキシトリチルである。化合物Ｈ（５００mg、０.７１mmol）およびジシクロヘキシルカルボジイミド（１８９mg、０.９２mmol）の乾燥ＹＨＦ（５.４ml）溶液に、アルゴン下、室温で３−ヒドロキシプロピオニトリル（５８μl、０.８５mmol）を添加する。得られた溶液を５５℃で２時間加熱する。冷却後、混合物を濾過し、酢酸エチル（２０ml）で希釈し、水および食塩水で洗浄し、Ｎa₂ＳＯ₄で乾燥し、濾過し濃縮する。得られた生成物をジクロロメタン（５ml）に取り、濾過し、濃縮する。この操作をジシクロヘキシル尿素が除去されるまで繰り返すと、リン位でのジアステレオ異性体混合物として単離された化合物Ｋが得られる。³¹ Ｐｎｍｒ(¹Ｈカップリング)(ＣＤＣl₃、１６２ＭＨz)δ３７.４、３７.３ppm。注意深く乾燥させた化合物Ｋ（７１mg、２２０μmol）のピリジン（５０μl、１mmol）含有重クロロホルム（０.５ml）溶液にジクロロトリフェニルホスホラン（１１３mg、３５０μmol）を添加する。得られた混合物を振盪しホスホランを溶かし、次いで周囲温度で放置する。反応の工程は³¹Ｐｎｍｒで監視する。生成物は化合物Ｌである。１６時間後、追加のジクロロトリフェニルホスホラン（２８mg、８９７μmol）を添加する。さらに２４時間後、³¹Ｐｎｍｒにより反応が９５％終了していることが示される。全量で５６μl（０.６７mmol）のピロリジンを−３０℃で少しずつ粗反応混合物に添加する。得られた混合物を室温まで加温し、次いでジクロロメタン（２０ml）で希釈し、脱イオン水（２×１０ml）で２回洗浄し、乾燥（Ｎa₂ＳＯ₄）させ濃縮する。フラッシュ・シリカ・カラム・クロマトグラフィーにより精製すると化合物Ｍが得られる。実施例１−１３以下の実施例において、化合物Ｈおよび化合物Ｊはオリゴヌクレオチド類似体の合成においてモノマーとして使用する。非修飾５'−ジメトキシトリチル置換ヌクレオシドＨ−ホスホネートもまた市販のトリエチルアンモニウム塩として使用し、以下のように略す。Ｔｐ＝チミジンＨ−ホスホネートＣｐ＝Ｎ⁴−ベンゾイル−デオキシシチジン−Ｈ−ホスホネートＡｐ＝Ｎ⁶−ベンゾイル−デオキシアデノシン−Ｈ−ホスホネートＧｐ＝Ｎ²−イソブチリル−デオキシグアノシン−Ｈ−ホスホネートオリゴヌクレオチド合成は、ポリプロピレンシリンジ中で、市販のヌクレオシド（Ｔｐ、ＣｐまたはＡｐ）誘導体化長鎖アルキルアミン制御多孔性ガラスを用いて行う。以下の実施例の３'末端の最初の残基はこの市販の原料由来である。合成は３'から５'方向に０.２μmolの規模で行う。実施例１オリゴヌクレオチド類似体１ ⁵ ’ＴＴＴＴ＊ＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴ³’ 上記において、＊は式Ｉ（式中、Ｘは酸素であり、Ｒ¹はヒドロキシである）で示されるヌクレオシド間結合であり、他の全ての結合はホスホジエステル結合である。支持体（６.８mg）をジクロロメタンで洗浄し、５'-保護基をジクロロ酢酸で処理して脱離し、支持体をカップリングするために再度洗浄する。カップリングを非修飾ヌクレオシドＨ−ホスホネートを用いて行う場合、支持体を、５'-保護ヌクレオシドＨ−ホスホネート（チミジンでは３０ｍＭ；シチジンでは２０ｍＭ）のピリジン−アセトニトリル（１：１v/v；チミジンでは２００μl、シチジンでは３００μl）溶液で、塩化ピバロイル（１８２ｍＭ）のピリジン−アセトニトリル（１：１ｖ／ｖ；２００μl）溶液の存在下、１分間処理する。必要なオリゴヌクレオチド類似体を得るために、通常のＨ−ホスホネートＤＮＡ合成を行う。ただし、合成がＴ＊位に達したときにモノマー化合物Ｈを非修飾ヌクレオシドＨ−ホスホネートに置換する。修飾カップリングおよび酸化条件は以下の通りである。モノマーが式IIで示される３'−メチレンホスフィネートである場合、支持体を、２回、化合物Ｈ（６０ｍＭ）のピリジン−アセトニトリル（１：１v/v；２００μl）溶液で、塩化ピバロイル（１２１ｍＭ）のピリジン−アセトニトリル（１：１ｖ/ｖ；２００μl）溶液の存在下、１処理につき３０分間、すなわち２ ×３０分間処理する。さらに洗浄し、５'−保護基を脱離し、新しいモノマーである化合物Ｈまたは３'−Ｈ−ホスホネートのいずれかを伸長オリゴヌクレオチド鎖の５'−遊離ヒドロキシル基にカップリングするサイクルを繰り返す。これらの工程は、オリゴヌクレオチド類似体１である全長１５残基の前駆体が製造されるまで繰り返す。合成サイクルの工程は、下記のように要約できる。工程試薬／溶媒容量１−洗浄ジクロロメタン 4ml ２−脱保護 2.5％(v/v)ジクロロ酢酸 4-5ml のジクロロメタン溶液３−洗浄ジクロロメタン 4ml ４−洗浄ピリジン−アセトニトリル(1:1v/v) 4ml ５−カップリングｉ）化合物Ｈ（60ｍＭ） 400μl のピリジン−アセトニトリル(1:1v/v)溶液を塩化ピバロイル（121ｍＭ）のピリジン−アセトニトリル(1:1v/v;200μl) 溶液で処理し、２×３０分間反応させる ii）非修飾Ｈ−ホスホネートであるモノマー。400μl(T) ピリジン−アセトニトリル(1:1v/v；200μlＴｐ、 200μl＋100μlピリジンＣp)のモノマー溶液 500μl(C) を塩化ピバロイル(182ｍＭ)のピリジン−アセトニトリル(1:1v/v;200μl) 溶液で処理し、１分間反応させる。６−洗浄ピリジン−アセトニトリル(1:1v/v) 4ml ７．工程１−６を、オリゴヌクレオチド類似体１のオリゴヌクレオチド前駆体合成が完了するまで適当なモノマーを用いて繰り返す。モノマー添加の最終サイクルを実施した後、支持体に付着したオリゴマーをヨウ素（０.２Ｍ）のピリジン −水(8:2v/v)溶液で１時間、周囲温度で処理し、所望により、さらにヨウ素（０ .２Ｍ）のピリジン−トリエチルアミン−水（６：１：１v/v）溶液で１時間、周囲温度で処理する。これによりヌクレオシド間結合が酸化される。次いで、支持体をピリジン−アセトニトリル（１：１v/v）で洗浄し、ヨウ素を除去し、次いでジエチルエーテルで洗浄する。次いで、支持体を自然乾燥し、プラスティックチューブに移し、アンモニア水溶液（３０％）で５５℃で一晩処理する。これにより、支持体からオリゴヌクレオチド類似体が離れ、塩基保護基が脱離するが、５'−ｏ−ジメトキシトリチル基はそのままである。この処置の後、オリゴヌクレオチド類似体溶液を、標準的な方法（Evaluating and Isolating Synthetic O ligonucleotides、Applied Biosystems、1992）により、オリゴヌクレオチド精製カートリッジ上で、５'−ｏ−ジメトキシトリチルを脱離する。次いで、オリゴヌクレオチド類似体を標準的な方法によりポリアクリルアミドゲル電気泳動により精製する。オリゴヌクレオチド類似体１のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析：計算値:４４２４.３Ｄａ実測値：４４２３.８Ｄａ実施例２オリゴヌクレオチド類似体２ ⁵’ＴＴＴＴ＊ＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴ³’ 上記において、＊は式Ｉ（式中、Ｘは硫黄であり、Ｒ¹はヒドロキシである）で示されるヌクレオシド間結合である。他の全てのヌクレオシド間結合はホスホロチオエートである。上記オリゴヌクレオチドの固相合成は、モノマー添加の最終サイクルまで上記実施例１の方法を用いて行う。実施例１で使用したヨウ素を用いるオリゴマーの処理を、硫化反応と置き換える。従って、最終のカップリング段階の後、オリゴヌクレオチド類似体２の前駆体が付着した支持体を硫黄（５％w/v）の炭素ジスルフィド−ピリジン−トリエチルアミン（１０：１０：１v/v ；２ml）溶液で１−１８時間、室温で、A.Audrus and G.Zon、Nucleic Acids Re search Symposium Series No.20 ,1988,121の方法により処理する。インキュベ− ション時間が終了すれば、支持体をピリジン−アセトニトリル（１：１v/v）およびジエチルエーテルで洗浄し、自然乾燥させる。オリゴヌクレオチド類似体を支持体から脱離し、保護基を実施例１に記載のように脱離する。オリゴヌクレオチド類似体２のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ（負のモード）質量分析：計算値：４６４９.３Ｄａ実測値：４６４２.８Ｄａ実施例３オリゴヌクレオチド類似体３ ⁵ ’ＴＴＴＴ＊Ｔ^MeＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴ³’ 上記において＊は式Ｉ（式中、Ｘは酸素であり、Ｒ¹はヒドロキシである）で示されるヌクレオシド間結合である。他の全てのヌクレオシド間結合はホスホジエステルである。Ｔ^Meは、水素原子ではなく２'位にα−メトキシ基が存在するチミジン残基である。上記オリゴヌクレオチドの固相合成は、ヌクレオシド残基１１まで実施例１に記載のように行う。ここで、オリゴヌクレオチド類似体３の前駆体が付着した支持体を、５'−ジメトキシトリチル−２'−Ｏ−メチルチミジンＨ−ホスホネート（３０ｍＭ）のピリジン−アセトニトリル（１：１v/v；２００μl）溶液で、塩化ピバロイル（１８２ｍＭ）のピリジン−アセトニトリル（１：１v/v;２００μl）溶液の存在下、１分間処理する。残りの合成は実施例１に記載のように行う。オリゴヌクレオチド類似体３のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ（負のモード）質量分析：実測値：４４５４.４Ｄａ計算値：４４４８.６Ｄａ実施例４−オリゴヌクレオチド類似体４ ⁵ ’ＴＴＴＴ＊Ｔ^MeＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴ³’ 上記において、＊は式Ｉ（式中、Ｘは硫黄であり、Ｒ¹はヒドロキシである）で示されるヌクレオシド間結合である。他の全てのヌクレオシド間結合はホスホロチオエートである。Ｔ^Meは、水素原子ではなく２'−位にα−メトキシ基が存在するチミジン残基である。固相合成は実施例３に記載のように行い、硫化および続く後処理および脱保護は上記実施例２に記載のように行う。オリゴヌクレオチド類似体４のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ（負のモード）質量分析：計算値：４６７９.３Ｄａ実測値：４６６４.１Ｄａ実施例５オリゴヌクレオチド類似体５５’ＴＴＴ＊ＴＴ３’ 上記において、＊は式Ｉ（式中、Ｘは酸素であり、Ｒ¹はヒドロキシである）で示されるヌクレオシド間結合である。他の全てのヌクレオシド間結合はホスホジエステル結合である。これは実施例１の方法を用いて製造するが、ただし、使用するヌクレオシドは化合物Ｈおよび化合物Ｔｐのみである。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析：計算値：１４５７.１Ｄａ実測値：１４５７.７Ｄａ実施例６−オリゴヌクレオチド類似体６５’ＴＴＴＴＴ＊ＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴ３’ 上記において、＊は式Ｉ（式中、Ｘは酸素であり、Ｒ¹はヒドロキシである）で示されるヌクレオシド間結合である。他の全てのヌクレオシド間結合はホスホジエステル結合である。これは実施例１の一般的な方法を用いて製造する。実施例７−オリゴヌクレオチド類似体７５’Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊ＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴ３’ 上記において、＊は式Ｉ（式中、Ｘは酸素であり、Ｒ¹はヒドロキシである）で示されるヌクレオシド間結合である。他の全ての結合はホスホジエステル結合である。これは実施例１の一般的な方法を用いて製造するが、５つの化合物Ｈのヌクレオシド残基を導入する。実施例８−オリゴヌクレオチド類似体８５’ＣＧＡＣＴＡＴＧＣＡＴ＊ＴＴ＊ＴＣ３’ 上記において、＊は式Ｉ（式中、Ｘは酸素であり、Ｒ¹はヒドロキシである）で示されるヌクレオシド間結合である。他の全ての結合はホスホジエステル結合である。これは実施例１の一般的な方法を用いて製造するが、２つの化合物Ｈのヌクレオシド残基を導入する。配列にＡまたはＧヌクレオシドを使用する必要がある場合、実施例１の方法のカップリング工程を以下のように修飾する：ｉ）３０ｍＭＡｐまたは３０ｍＭＧｐのピリジン−アセトニトリル（１：１v/ v；２００μlのＡｐまたはＧｐ）溶液を、塩化ピバロイル（１８２ｍＭ）のピリジン−アセトニトリル（１：１v/v；２００μl）溶液で処理し、１分間反応させる。オリゴヌクレオチド類似体８のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析：計算値：４５１４.１Ｄａ実測値：４５１７.３Ｄａ実施例９−オリゴヌクレオチド類似体９５’ＧＣＧＴ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊ＧＣＧ３’ 上記において、＊は式Ｉ（式中、Ｘは酸素であり、Ｒ¹はヒドロキシである）で示されるヌクレオシド間結合である。他の全ての結合はホスホジエステル結合である。これは実施例１および８の一般的な方法を用いて製造するが、１０の化合物Ｈのヌクレオシド残基を導入する。実施例１０−オリゴヌクレオチド類似体１０５’ＴＴＴＴＴ＊Ｃ＊ＴＣＴＣＴＣＴＣＴ３’ 上記において、＊は式Ｉ（式中、Ｘは酸素であり、Ｒ¹はヒドロキシである）で示されるヌクレオシド間結合である。他の全ての結合はホスホジエステル結合である。これは実施例１の一般的な方法を用いて製造するが、Ｃ＊残基が導入される場合には、モノマー化合物Ｊを化合物Ｈの直接その代わりとして使用する。実施例１１−オリゴヌクレオチド類似体１１５’ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ３’ 上記において、＊は式Ｉ（式中、Ｘは酸素であり、Ｒ¹はヒドロキシである）で示されるヌクレオシド間結合である。他の全ての結合はホスホジエステル結合である。これは実施例１の一般的な方法を用いて製造するが、３つの化合物Ｈのヌクレオシド残基を導入する。実施例１２−オリゴヌクレオチド類似体１２５’Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｔ＊Ｃ＊ＧＣＣＣＧＣＴＣＣ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｃ３ ’ 上記において、＊は式Ｉ（式中Ｘは硫黄であり、Ｒ¹はヒドロキシである）で示されるヌクレオシド間結合である。他の全ての結合はホスホロチオエート結合である。これは実施例２の一般的な方法を用いて製造する。Ｇ残基は実施例８に記載のように導入し、Ｃ＊残基は実施例１０に記載のように導入する。実施例１３−オリゴヌクレオチド類似体１３５’Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｔ＊Ｃ＊ＧＣＴＧＧＴＧＡＧＴ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ａ３’ 上記において、＊は式Ｉ（式中、Ｘは硫黄であり、Ｒ¹はヒドロキシである）で示されるヌクレオシド間結合である。他の全ての結合はホスホロチオエート結合である。これは実施例１２の一般的な方法を用いて製造する。残基は実施例８に記載のように導入する。実施例１４配列５’ＴＴＴｔＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴ３'（式中、ｔは化合物Ｍ由来のヌクレオシド単位を示す）を有するオリゴヌクレオチド類似体１は、“Oligon ucleotides and Analogues A Practical Approach”F.Eckstein編、IRL Press19 91に記載のように固相ホスホルアミジトオリゴヌクレオチド合成により製造する。ただし、合成の適当な時点で、化合物Ｍを、通常の３'−ホスホルアミジト置換ヌクレオシドの代わりに使用する。これにより、式XIV（式中、Ｒ¹ _aは−ＯＣＨ₂ＣＨ₂ＣＮである）で示されるヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオチド前駆体が形成され、次いで、標準的な酸化段階で酸化し、式XV（式中、Ｒ¹ _aは −ＯＣＨ₂ＣＨ₂ＣＮであり、Ｘは酸素である）で示されるヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオチドを形成し、このオリゴヌクレオチドをさらにカップリングするとオリゴヌクレオチド類似体１が得られる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡＣ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＵ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＥＥ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ (72)発明者ダグラス，マーク・エドワードイギリス、エスケイ11・７キューキュー、チェシャー、マックルズフィールド、ハイ・ストリート71番 (72)発明者テイラー，ロジャー・ジョンイギリス、エスケイ10・２ジェイディ、チェシャー、マックルズフィールド、ラグビー・ドライブ49番

Claims

【特許請求の範囲】１．ヌクレオシド間結合の少なくとも１つは式［式中、表記メチレン基はヌクレオシドの３'炭素原子に結合し、表記酸素原子は隣のヌクレオシドの５'炭素原子に結合し、Ｒ₁は水素、ヒドロキシ、Ｏ^-、チオール、Ｓ^-、−ＮＨ₂、または、式Ｒ¹ _a、−ＯＲ¹ _a、−ＳＲ¹ _a、−ＮＨＲ¹ _bまたは−ＮＲ¹ _b Ｒ¹ _c（ただし、Ｒ¹ _aは非置換または置換Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル、Ｃ₂−Ｃ₁₀アルケニル、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ₆−Ｃ₁₀アリールまたはＣ₇−Ｃ₁₃アラルキル基であり、Ｒ¹ _bおよびＲ¹ _cは、各々独立して、非置換または置換Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル、Ｃ₂−Ｃ₁₀アルケニル、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ₆−Ｃ₁₀アリールまたはＣ₇−Ｃ₁₃アラルキル基であるか、またはＲ¹ _bおよびＲ¹ _cはそれらが結合している窒素原子と共に５員または６員のヘテロ環を示す）で示される基であり、Ｘは酸素または硫黄である］で示される、ヌクレオシド間の結合により連結している１０から２００個の天然および／または合成ヌクレオシド単位を有するオリゴヌクレオチド類似体。２．１５−４０のヌクレオシド単位を有する、請求項１に記載のオリゴヌクレオチド類似体。３．１５−２５のヌクレオシド単位を有する、請求項１に記載のオリゴヌクレオチド類似体。４．全ヌクレオシド間結合が式Ｉで示される、請求項１、２または３に記載のオリゴヌクレオチド類似体。５．ヌクレオシド間結合の７５％までが式Ｉで示される、請求項１、２または３に記載のオリゴヌクレオチド類似体。６．ヌクレオシド間結合の５０％までが式Ｉで示される、請求項５に記載のオリゴヌクレオチド類似体。７．ヌクレオシド間結合の２５％までが式Ｉで示される、請求項６に記載のオリゴヌクレオチド類似体。８．少なくとも２つの連続したヌクレオシド間結合が式Ｉで示される、請求項１−７のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド類似体。９．式Ｉで示されるヌクレオシド間結合が他のヌクレオシド間結合と交替する、請求項１−７のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド類似体。１０．残りのヌクレオシド間結合が、ホスホジエステル、ホスホロチオエートまたはホスホロジチオエート結合、またはそれを２つ以上組み合わせたものである、請求項１−３および５−９のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド類似体。１１．残りのヌクレオシド間結合がホスホロチオエートである、請求項１０に記載のオリゴヌクレオチド類似体。１２．式Ｉで示されるヌクレオシド間結合、またはそれとホスホロチオエートまたはホスホジエステル結合が組み合わされたものを有する２つの領域の間に、ホスホジエステルおよび／またはホスホロチオエートおよび／またはホスホロジチオエートによるヌクレオシド間結合を有する領域を含む、請求項１０または１１に記載のオリゴヌクレオチド類似体。１３．少なくとも１つのヌクレオシドが、その２'位で修飾されている、請求項１−１２のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド類似体。１４．少なくとも１つのヌクレオシドが、２'位にハロゲン原子または式−ＯＲ²（式中、Ｒ²はＣ₁−Ｃ₁₀脂肪族基である）で示される基を有する、請求項１３に記載のオリゴヌクレオチド類似体。１５．少なくとも１つのヌクレオシドが、２'位に式−ＯＲ²（式中、Ｒ²は非置換または置換Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル基である）で示される基を有する、請求項１４に記載のオリゴヌクレオチド類似体。１６．Ｒ²が、Ｃ₁−Ｃ₄アルキル、Ｃ₁−Ｃ₄アルコキシ置換Ｃ₁−Ｃ₄アルキルまたは式−(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)−_nＲ³（式中、Ｒ³はメチルまたはエチルであり、ｎは２−４である）で示される基である、請求項１５に記載のオリゴヌクレオチド類似体。１７．Ｒ²が、メチル、エチル、メトキシエチル、エトキシエチルまたは式−( ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)−₃ＣＨ₃で示される基である、請求項１６に記載のオリゴヌクレオチド類似体。１８．少なくとも２つの連続したヌクレオシドが２'位で修飾され、ホスホジエステルによるヌクレオシド間結合により連結し、および／または２'位が非修飾のヌクレオシドと２'位が修飾されたヌクレオシドの５'炭素原子の間に式Ｉで示される結合がある、請求項１３−１７のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド類似体。１９．Ｒ¹ _a、Ｒ¹ _bまたはＲ¹ _cが、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールまたはアラルキルである場合、これらは非置換であるか、またはヒドロキシ、Ｃ₁−Ｃ₄アルコキシ、ハロゲン、シアノ、トリ(Ｃ₁−Ｃ₁₅ヒドロカルビル) シリルまたは１級、２級または３級アミノにより置換されている、請求項１−１８のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。２０．Ｒ¹が、水素、ヒドロキシ、Ｏ^-、ＳＨ、Ｓ^-、非置換または置換Ｃ₁−Ｃ₄ アルキルまたはフェニル基、式−ＯＲ¹ _a（式中、Ｒ¹ _aは、非置換または置換Ｃ₁ −Ｃ₄アルキル、Ｃ₃−Ｃ₅アルケニル、Ｃ₅−Ｃ₈シクロアルキルまたはＣ₇−Ｃ₉ アラルキル基である）で示される基、または式−ＳＲ¹ _a（式中、Ｒ¹ _aは、非置換または置換Ｃ₁−Ｃ₄アルキルまたはフェニル基である）で示される基である、請求項１−１９のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド類似体。２１．Ｒ¹が、水素、ヒドロキシ、Ｏ^-、ＳＨ、Ｓ^-、メトキシ、エトキシまたは２−シアノエトキシである、請求項２０に記載のオリゴヌクレオチド類似体。２２．ヒトｃ−ｒａｆキナーゼのｍＲＮＡ領域に相補的である、請求項１−２１のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド類似体。２３．ヌクレオシド配列が、５'−ＴＣＣＣＧＣＣＴＧＴＧＡＣＡＴＧＣＡＴＴ−３'である請求項２２に記載のオリゴヌクレオチド類似体。２４．ヒトＰＫＣ−αのｍＲＮＡ領域に相補的である、請求項１−２１のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド類似体。２５．ヌクレオシド配列が、５'−ＧＴＴＣＴＣＧＣＴＧＧＴＧＡＧＴＴＴＣＡ−３'である、請求項２４に記載のオリゴヌクレオチド類似体。２６．（ｉ）５'−ヒドロキシ基を有する天然または合成ヌクレオシドまたはオリゴヌクレオチド(Ａ)、および３'位に該５'−ヒドロキシ基と反応する基を有する天然または合成ヌクレオシドまたはジヌクレオチド（Ｂ）との間で、所望の数のヌクレオシドを有するオリゴヌクレオチドが得られるまで、カップリング反応または連続的カップリング反応を行い、ここで、少なくとも１つの上記のカップリング反応において、（Ｂ）は式［式中、Ｂ¹はヌクレオシド塩基であり、Ｒ⁴はヒドロキシ保護基であり、Ｒ⁵は水素、ヒドロキシまたは２'修飾原子または基であり、Ｍ⁺は金属あるいは非置換または置換アンモニウムイオンまたはヘテロ環状塩基のカチオンであり、Ｘは酸素または硫黄である］で示されるヌクレオシドであり、立体障害の大きい有機酸ハロゲン化物または無水物の存在下で（Ａ）と反応させ、式［式中、Ｘは酸素または硫黄である］で示されるホスフィネートによるヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオチド類似体を合成し、(ii)(ａ)ホスフィネート結合を酸化するか、または（ｂ）ホスフィネート結合を硫化するか、または（ｃ）ホスフィネート結合を式Ｒ¹ _aＹ（式中、Ｒ¹ _aは請求項１で定義した通りであり、Ｙは脱離原子または基である）で示される化合物と反応させるか、または（ｄ）ホスフィネート結合を酸化し、式Ｒ¹ _aＯＨで示されるアルコール、または式Ｒ¹ _bＮＨ₂またはＲ¹ _bＲ¹ _cＮＨ（式中、Ｒ¹ _a、Ｒ¹ _bおよびＲ¹ _cは請求項１で定義した通りである）で示されるアミンと反応させるか、または（ｅ）ホスフィネート結合をシリル化し、シリル結合をチオアルキル化またはチオアリール化剤と反応させ、式Ｉ（式中、Ｒ¹は−ＳＲ¹ _a であり、Ｒ¹ _aは請求項１で定義した通りである）で示されるホスフィネート結合を形成することを含む、式Ｉで示されるヌクレオシド間結合を少なくとも１つ有するオリゴヌクレオチド類似体製造する方法。２７．オリゴヌクレオチド類似体をさらに反応させて保護基Ｒ⁴（式中、Ｒ⁴はオリゴヌクレオチド類似体の末端ヌクレオシドにある）を、水素または５'修飾基で置換する、請求項２６に記載の方法。２８．固相支持体に付着したヌクレオシドまたはオリゴヌクレオチド（Ａ）を用いて、請求項２６に特記した（ｉ）連続的カップリング反応および（ii）工程を行い、次いで、（iii）固相支持体からオリゴヌクレオチドを脱着し、保護基を脱離し、５'末端遊離ヒドロキシル基を有するオリゴヌクレオチドを得、（iv ）所望により５'遊離ヒドロキシル基を反応させて５'末端位に修飾基を導入することを含む、請求項２６または２７に記載の方法。２９．式IIにおいて、Ｂ¹はピリミジン塩基であり、Ｒ⁴はメトキシトリチル、ジメトキシトリチルまたはトリスｔｅｒｔ−ブチルトリチル基であり、Ｒ⁵は水素であり、Ｍ⁺は非置換アンモニウム、モノ−、ジ−またはトリ−Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル−またはヒドロキシアルキル−アンモニウムイオンまたはヘテロ環状塩基のカチオンである、請求項２６、２７または２８のいずれか１つに記載の方法。３０．式IIで示されるヌクレオシドが、式［式中、Ｂ¹、Ｒ⁴、Ｒ⁵、ＸおよびＭ⁺は請求項２６で定義した通りである］で示される立体異性体である、請求項２６−２９のいずれかに記載の方法。３１．立体障害のある有機酸ハロゲン化物の存在下における式IIで示されるヌクレオシドと（Ａ）とのカップリング反応を、環に３級窒素原子を有するヘテロ環状塩基またはその酸化物の存在下で行う、請求項２６−３０のいずれかに記載の方法。３２．酸化(ii)(ａ)を、ヨウ素および水、またはｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシドで処理することにより行う、請求項２６−３１のいずれかに記載の方法。３３．(ii)(ｂ)を、硫黄を用いて３級アミンの存在下、有機溶媒中で処理することにより行う、請求項２６−３１のいずれかに記載の方法。３４．式IAで示されるホスフィネートによるヌクレオシド間結合と式Ｒ¹ _aＹ（式中、Ｒ¹ _aは、請求項１に定義したようにアルキル、シクロアルキルまたはアラルキルであり、Ｙはハロゲンである）で示される化合物との反応(ii)(ｃ)を強塩基の存在下で行う、請求項２６−３１のいずれかに記載の方法。３５．式IAで示される結合と式Ｒ¹ _aＹ（式中、Ｒ¹ _aＹは、ハロゲン化アルケニルまたはアリールまたはトリフラートである）で示される化合物との反応(ii)( ｃ)を、パラジウム触媒の存在下で行う、請求項２６−３１のいずれかに記載の方法。３６．式IAで示されるホスフィネートによるヌクレオシド間結合と式Ｒ¹ _aＯＨで示されるアルコールとの酸化反応(ii)(ｄ)を、酸化剤を用いて、Ｒ¹ _aＯＨおよび塩基の存在下で行う、請求項２６−３１のいずれかに記載の方法。３７．酸化剤が、ヨウ素、四塩化炭素またはブロモトリクロロメタンであり、塩基がピリジンである、請求項３６に記載の方法。３８．式IAで示されるホスフィネートによるヌクレオシド間結合の酸化反応(i i)(ｄ)を、式Ｒ¹ _bＮＨ₂またはＲ¹ _bＲ¹ _cＮＨ（式中、Ｒ¹ _bおよびＲ¹ _cは、請求項１で定義した通りである）で示されるアミンおよび四塩化炭素またはブロモトリクロロメタンまたはヨウ素を用いて行うと、本発明のオリゴヌクレオチド類似体（それぞれ、Ｒ¹は−ＮＨＲ¹ _bまたは−ＮＲ¹ _bＲ¹ _cである）が得られる、請求項２６−３１のいずれかに記載の方法。３９．式IAで示されるホスフィネート結合の反応(ii)(ｅ)は、ハロゲン化トリアルキルシリルおよび塩基を用いて結合をシリル化し、シリル結合をチオアルキル化剤またはチオアリール化剤と反応することにより行う、請求項２６−３１のいずれかに記載の方法。４０．チオアルキル化またはチオアリール化剤は式ＡｒＳＯ₂ＳＲ¹ _a（式中、Ｒ¹ _aは、請求項１に定義した通りであり、Ａｒは芳香族基である）で示されるチオスルホネートである、請求項３９に記載の方法。４１．所望の数のヌクレオシドを有するオリゴヌクレオチド類似体が固相指示体上で製造されれば、濃アンモニア水溶液で処理して固相支持体から脱着し、処理の前後でヒドロキシ保護基を脱離する、請求項２６−４０のいずれかに記載の方法。４２．ヒドロキシ保護基は、水性有機酸で処理することにより脱離する、請求項２６−４０のいずれかに記載の方法。４３．式IIで示されるヌクレオシドを、式［式中、Ｂ¹、Ｒ¹、Ｒ⁴およびＲ⁵は請求項２６で定義した通りであり、Ｂ²はヌクレオシド塩基であり、Ｒ⁶は水素、ヒドロキシまたは２'修飾原子または基であり、Ｒ⁷ はヌクレオシドの５'ヒドロキシ基と反応するか、または活性化されて反応性を示す基である］で示されるジヌクレオチドにより置換されている、請求項２６−４２のいずれかに記載の方法。４４．式VIIIのＲ₇Ｏは、Ｈ−ホスホネート基、ホスホルアミジト基またはホスホジエステル基である、請求項４３に記載の方法。４５．式［式中、Ｂ¹、Ｂ²、Ｒ¹、Ｒ⁴は、請求項４３で定義した通りであり、Ｒ⁵およびＲ⁶は請求項４３で定義した通りであるが、ただし、Ｒ¹が水素以外の場合には、Ｒ⁵およびＲ⁶の少なくとも１つは２'修飾原子または基であり、Ｒ⁹は請求項４３で定義したＲ⁷またはヒドロキシ保護基である］で示されるジヌクレオチド。４６．有効成分として、請求項１−２５のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド類似体または請求項４５に記載のジヌクレオチドを含有する医薬組成物。４７．処置を必要とする哺乳動物に請求項１−２５のいずれかに記載のオリゴヌクレオチド類似体または請求項４５に記載のジヌクレオチドを投与することを含む、タンパク質により調節されているウイルスまたは疾患の処置法。