KR20210029709A - 항체-약물 컨쥬게이트 및 이의 암 치료 용도 - Google Patents

항체-약물 컨쥬게이트 및 이의 암 치료 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 항체-약물 컨쥬게이트에 관한 것으로, 항체는 TfR, 트랜스페린 수용체에 특이적으로 결합하고, 약물은 바람직하게는 세포독성 약물 중에서 선택된다. 그러한 항체-약물 컨쥬게이트는 특히 암을 포함한 증식성 질환, 예컨대 림프종 또는 백혈병을 치료하는데 유용하다.

Description

항체-약물 컨쥬게이트 및 이의 암 치료 용도
이하 항체-약물 컨쥬게이트가 개시되되, 항체는 트랜스페린 수용체인 TfR에 특이적으로 결합하며, 약물은 바람직하게는 세포독성 약물 중에서 선택된다. 그러한 항체-약물 컨쥬게이트는 특히 림프종 또는 백혈병과 같은 암을 포함하는 증식성 질환을 치료하는데 유용하다.
항체-약물 컨쥬게이트(이하 "ADC"로 언급됨)는 새로운 종류의 치료제, 특히 암 치료제이다. 그러한 ADC는 적어도 하나의 항체 및 페이로드(예를 들어, 세포독성 약물)를 포함하며, 둘 다 링커에 의해 결합된다. 따라서, ADC는 항체 표적의 특이성과 페이로드의 효능(예를 들어, 화학요법제의 세포독성)을 결합하도록 설계된다. 효율적인 ADC는 높은 특이성 및 낮은 독성을 나타내야 한다.
독성의 맥락 안에서, ADC의 항체는 정확히 및 효율적으로 이의 항원에 결합해야 하는데, 이는 적당한 표적 항원이 표적 세포에서 우선적으로 또는 독점적으로 발현된다는 것을 의미한다.
US 6,214,345, WO 03/026577, WO 03/043583, WO 2004/010957, WO 2005/082023 및 WO 2015/001117과 같은 몇몇 특허 또는 특허 출원은 ADC를 제조하는데 사용될 수 있는 링커를 개시한다. 항체에 세포독소 또는 약물을 컨쥬게이트 하는데 사용된 링커 유형의 예시는 히드라존, 티오에테르, 에스테르, 디설파이드 및 펩타이드-함유 링커를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 링커는 예를 들어 리소좀 구획 내 낮은 pH에 의해 절단되기 쉽거나 또는 종양 조직에서 우선적으로 발현되는 프로테아제, 예를 들어, 카뎁신(예를 들어, 카뎁신 B, C D)와 같은 프로테아제에 의해 절단되기 쉬운 것들 중에서 선택된다. 효율적인 링커는 페이로드의 정확하고 시기 적절한 방출을 보장할 수 있다. 독성의 맥락 안에서, 또한 링커 자체가 독성을 유발하는 것으로 보이지 않더라도 링커의 안정성은 페이로드에 의해 가해지는 독성에 영향을 미칠수 있는 것으로 보인다. 실제로, 안정한 링커는 표적-특이적인 방식으로 페이로드를 방출할 수 있지만 안정하지 않은 링커는 비-특이적인 독성으로 이어지는 페이로드의 부정확한 방출(예를 들어, 비-특이적인 절단으로 인해)을 겪을 가능성이 더 높다.
ADC에 사용된 페이로드는 종종 피코몰 범위에서 매우 강력한 세포독성 약물이다. 일반적인 페이로드는 예를 들어 미세관 억제제(예를 들어, 메이탄신(maytansine) 유도체(DM1/DM4) 또는 아우리스타틴(auristatins)(MMAE/MMAF)), DNA 합성 억제제(예를 들어, 칼리케아미신(calicheamicin), 독소루비신, 피롤로벤조디아제피네스(pyrrolobenzodiazepines), 인돌리노벤조디아제피네스(indolinobenzodiazepines) 또는 두오카르마이신(duocarmycin) 유도체) 또는 토포-이성질화효소 억제제(예를 들어, SN-38)이다.
ADC는 전도유망한 치료제로 보이나, 일부 ADC는 독성이 강하여 이들 화합물의 치료 범위(therapeutic window)를 제한하거나 또는 추가 임상 개발을 방해할 수 있다.
따라서, 높은 특이성, 최대 효율 및 낮은 독성을 나타내는 효율적인 ADC는 각각의 이의 성분들의 적당한 조합을 필요로 한다.
트랜스페린 수용체(CD71)(이하 "TfR"이라고 함)는 각각 대략 90 kDa의 2개의 760-아미노산 단량체로 구성된 이황화-결합된 동종이량체 막관통 당단백질이다. TfR은 철의 섭취 및 세포 성장 조절에서 중요한 역할을 담당한다(Gill et al., N Engl J Med., 332,1744-1748, 1995 - Hermine et al., N Engl J Med., 332, 1749-1751, 1995). 디페릭 트랜스페린(diferric transferrin)이 이의 세포 표면 수용체에 결합할 때, 그것은 클라트린-코팅된 피츠(clathrin-coated pits)에 의해 철-트랜스페린 복합체가 해리되는 산성 소포체에 내재화된다. 방출 후, 수용체 및 아포-트랜스페린은 세포 표면으로 다시 재순환된다.
TfR은 골수에서 혈구세포의 전구체, 간에서 간세포, 상피에서 각질세포 및 장 상피의 장샘(crypts)에서 장세포와 같이 일정하게 재생되는 조직의 세포막에서 구성 요소로서 발현된다.
여러 연구에서 TfR은 그들의 건강한 조직보다 악성 조직에서 더 많이 발현됨을 보여주었다(Gatter et al., J Clin Pathol., 36,539-545, 1983 - Faulk et al., Lancet., 2,390-392, 1980 - Shindelman et al., Int J Cancer, 27,329-334, 1981). 몇몇 저자들은 악성 세포를 죽이기 위해 항-TfR 항체 또는 약물에 컨쥬게이트 된 트랜스페린 자체를 이용하는 이 아이디어에 기반한 치료 접근법을 보고하였다. 또한, 트랜스페린과 TfR 간의 상호작용을 차단하고 결과적으로 철의 흡수를 방해하여 철의 결핍 및 세포 성장의 부정적인 조절을 유발하기 위해 항-TfR 항체를 사용하는 것이 제안되었다. 그러나, 많은 간행물이 항-TfR 항체의 제조를 기술하고 있지만, 항증식 활성을 갖는 항-TfR 단클론 항체(mAb)에 대한 보고는 거의 없다.
이전 간행물에서(Moura et al., J Exp Med, 194, 417-425, 2001), 저자들은 인간 TfR에 결합하는 A24로 명명된 마우스 단클론 IgG(IgG2kappa)를 보고하였다.
WO 2005/111082는 T 세포 증식을 차단할 수 있고, T 세포의 증식을 억제함에 있어서 앞서 기술된 mAb 42/6보다 더 효율적으로 보이는 뮤린 항체인 A24 항체를 개시한다. A24는 또한 세포 표면에서 TfR 발현을 감소시키고 TfR 재순환을 손상시켰다. A24는 또한 급성 및 만성 형태의 ATL 둘 다로부터의 악성 T 세포의 생체 외 증식을 차단할 수 있다(Moura et al., Blood, 103,5, 1838-45,1 March 2004, Callens et al., 2010; J. Exp. Med. , Vol 207 No 4, pp731-750). 이 항체는 또한 인 비트로 및 인 비보 둘 다에서 외투막 세포 림프종 종양 발생을 예방할 수 있는 것으로 기술되어 있다(Lepelletier et al. Cancer Res 2007; 67:1145-1154; Callens et al. 2008, Leukemia, 22, 42-48).
WO 2017/013230는 A24 항체의 인간화 버전 및 증식성 장애를 치료하는데 있어 그들의 사용을 추가로 개시한다. 그것은 또한 세포독소 또는 약물과 같은 치료 모이어터에 컨쥬게이트된 항-TfR 항체를 개시한다. 그러나, WO 2017/013230에는 특정 ADC가 개시되지는 않는다.
따라서, 높은 특이성 및 낮은 독성을 보유한 효율적인 항-TfR 항체를 포함하는 ADC가 필요하다.
따라서, 본 발명자들은 그러한 ADC를 개발하였다. 본 발명은 실제로 본 발명의 ADC(즉, 특정 링커 및 약물과 조합된 특정 항-TfR 항체를 포함하는)가 다음의 장점을 보유함을 보여주는 그들의 예상치 못한 결과를 따른다:
- A24 및 ADC는 TfR을 발현하는 세포에 대해 유사한 결합 효능을 가진다;
- ADC는 단지 CD71 양성 세포의 세포사멸을 유도한다;
- ADC는 여러 세포주에서 효율적이다;
- ADC는 인 비트로 및 또한 인 비보에서 효율적이다;
- ADC는 표적외 효과(예를 들어, 전-염증성 사이토카인을 방출하지 않음) 또는 인 비보에서 독성 효과를 유발하지 않는다.
따라서, 본 개시물은 화학식 I의 ADC에 관한 것이다:
[화학식 I]
Ab-L-Z-X-D
상기 식에서,
Ab는 항-TfR 항체이고,
L은 상기 항체에 결합된 링커 분자이고, 상기 링커 분자는 화학식 II이며:
[화학식 II]
Figure pct00001
상기 식에서,
n은 2 내지 20으로 이루어진 정수이고,
Z는 L에 결합된 발린-시트룰린의 디펩타이드이며,
X는 Z에 결합된 아미노벤질 에스테르 자기-희생기이고,
D는 X에 결합된 약물이다.
다른 구체예와 조합될 수 있는 특정 구체예에서, D는 세포독성 약물이다. 바람직하게는, 그러한 D는 약물 모노메틸 아우리스타틴 E(monomethyl auristatin E)(이하 "MMAE"이라 함)이다.
다른 구체예와 조합될 수 있는 특정 구체예에서, X는 Z에 공유적으로 결합된 파라-아미노벤질 에스테르기이고, 상기 X는 하기 화학식 III이다:
[화학식 III]
Figure pct00002
상기 식에서,
J는 F, Cl, Br, NO2, NHCOCH3, N(CH3)2, NHCOCF3, 알킬 및 할로알킬 중에서 선택된 선택적 치환기이고, m은 0, 1, 2, 3 및 4의 정수이다. 바람직하게는, X는 파라-아미노벤질 에스테르이고, m은 0이다.
다른 구체예와 조합될 수 있는 특정 구체예에서, L은 상기 항체의 하나 이상의 티올 잔기에 공유적으로 결합된다. 바람직하게는, L은 화학식 IV의 링커 분자에 상응한다:
[화학식 IV]
Figure pct00003
다른 구체예와 조합될 수 있는 다른 특정 구체예에서, 상기 항체는 전장 항체 또는 항원 결합 부분을 포함하는 항체 단편을 포함한다.
다른 특정 구체예에서, 다른 구체예와 조합될 수 있으며, 상기 항체는 SEQ ID NO:16의 트랜스페린 수용체에 특이적으로 결합한다.
다른 구체예와 조합될 수 있는 다른 특정 구체예에서, 상기 항체는 10 nM 이하의 KD, 바람직하게는 1 nM 이하의 KD로 트랜스페린 수용체에 결합한다.
다른 구체예와 조합될 수 있는 다른 특정 구체예에서, 상기 항체는 SEQ ID NO:9의 VH 및 SEQ ID NO:10의 VL을 갖는 모(parent) 뮤린 가변 영역을 갖는 상응하는 키메라 항체로 측정된 유도 수준과 동일하거나 또는 우수한 수준으로 HL-60 세포주의 세포사멸을 유도한다.
다른 구체예와 조합될 수 있는 다른 특정 구체예에서, 상기 항체는 단클론 항체이다.
다른 구체예와 조합될 수 있는 다른 특정 구체예에서, 상기 항체는 인간화 항체이다.
다른 구체예와 조합될 수 있는 다른 특정 구체예에서, 상기 항체는 인간 IgG4 이소타입 불변 영역, 또는 돌연변이 또는 화학적으로 변형된 불변 영역을 포함하되, 상기 돌연변이 또는 화학적으로 변형된 불변 영역은 야생형 IgG1 이소타입 불변 영역에 상응하는 항체와 비교하여 상기 항체에 없거나 감소된 ADCC 활성을 부여한다. 또는, 상기 항체는 인간 IgG1 이소타입 불변 영역, 또는 돌연변이 또는 화학적으로 변형된 불변 영역을 포함하되, 상기 돌연변이 또는 화학적으로 변형된 불변 영역은 야생형 IgG1 이소타입 불변 영역에 상응하는 항체와 비교하여 상기 항체에 증가된 ADCC 활성을 부여한다.
다른 구체예와 조합될 수 있는 다른 특정 구체예에서, 상기 항-TfR 항체는 IgG4 이소타입의 단클론 및 인간화 항체이다.
다른 구체예와 조합될 수 있는 다른 특정의 바람직한 구체예에서, 상기 항-TfR 항체는
(a) SEQ ID NO:1의 HCDR1, SEQ ID NO:2의 HCDR2, SEQ ID NO:3의 HCDR3을 포함하는 가변성 중쇄 폴리펩타이드 및 SEQ ID NO:4의 LCDR1, SEQ ID NO:5의 LCDR2 및 SEQ ID NO:6의 LCDR3을 포함하는 가변성 경쇄 폴리펩타이드;
(b) SEQ ID NO:1의 HCDR1, SEQ ID NO:2의 HCDR2, SEQ ID NO:3의 HCDR3을 포함하는 가변성 중쇄 폴리펩타이드 및 SEQ ID NO:4의 LCDR1, SEQ ID NO:8의 LCDR2 및 SEQ ID NO:6의 LCDR3을 포함하는 가변성 경쇄 폴리펩타이드;
(c) SEQ ID NO:11의 VH를 포함하는 가변성 중쇄 폴리펩타이드 및 SEQ ID NO:13의 VL을 포함하는 가변성 경쇄 폴리펩타이드;
(d) SEQ ID NO:11의 VH를 포함하는 가변성 중쇄 폴리펩타이드 및 SEQ ID NO:14의 VL을 포함하는 가변성 경쇄 폴리펩타이드;
(e) SEQ ID NO:11의 VH를 포함하는 가변성 중쇄 폴리펩타이드 및 SEQ ID NO:15의 VL을 포함하는 가변성 경쇄 폴리펩타이드;
(f) SEQ ID NO:12의 VH를 포함하는 가변성 중쇄 폴리펩타이드 및 SEQ ID NO:13의 VL을 포함하는 가변성 경쇄 폴리펩타이드;
(g) SEQ ID NO:12의 VH를 포함하는 가변성 중쇄 폴리펩타이드 및 SEQ ID NO:14의 VL을 포함하는 가변성 경쇄 폴리펩타이드;
(h) SEQ ID NO:12의 VH를 포함하는 가변성 중쇄 폴리펩타이드 및 SEQ ID NO:15의 VL을 포함하는 가변성 경쇄 폴리펩타이드 중 하나를 포함한다.
본 발명의 ADC에 사용될 수 있는 항체의 예시는 하기 특히 표 1에서 기술된 바와 같이 인간화 항-TfR 항체 mAb1 내지 mAb16을 포함한다. 바람직하게는, 상기 항체는 SEQ ID NO:18의 중쇄 및 SEQ ID NO:17의 경쇄를 포함하는 mAb1이다.
의약으로 사용하기 위한, 특히 암의 치료에 사용하기 위한 상기 정의된 바와 같은 ADC가 또한 본 명세서에서 개시된다. 상기 암은 바람직하게는 혈액 종양이고, 보다 구체적으로는, 림프종 또는 백혈병이다. 또는, 상기 ADC는 또한 고형 종양의 치료에 사용될 수 있다.
본 개시물은 또한 상기 정의된 바와 같은 ADC를 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제, 희석제 또는 담체와 조합하여 포함하고, 선택적으로 다른 활성 성분을 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 개시물은 또한 상기 정의된 바와 같은 ADC를 포함하고, 추가로 히스티딘을 포함하며, pH 6.5인 조성물에 관한 것이다. 그러한 조성물은 또한 수크로스 및 폴리소르베이트 80을 포함할 수 있다.
특정 구체예에서, 상기 조성물은 동결건조물 제형이고, 또는 상기 ADC는 치료적으로 허용가능한 양으로 미리 충전된 주사기 또는 미리 충전된 바이알에 포함된다.
본 개시물은 또한 상기 정의된 바와 같은 ADC의 획득 공정에 관한 것으로, 상기 방법은
- 상기 정의된 바와 같은 항체를 인코딩하는 핵산의 발현에 적합한 조건 하에서 숙주세포를 배양하는 단계,
- 항체를 분리하는 단계,
- 화학식 V의 링커 L-Z-X에 결합된 모노메틸 아우리스타틴 E의 합성 단계:
[화학식 V]
Figure pct00004
,
- 상기 항체를 화학식 V의 링커 L-Z-X에 결합된 모노메틸 아우리스타틴 E에 컨쥬게이션 시키는 단계를 포함한다.
도 1은 "INA01-SDV1" 또는 "INA01-SDV#1"라 부르는 ADC의 개략도를 나타낸다. INA01는 Ab, APN은 L, VC-PAB는 Z-X에 해당하며, MMAE는 D에 해당한다.
도 2는 조혈세포주에서 INA01-SDV1 및 A24의 비교 결합을 나타낸 것으로, 도 2A는 THP-1 세포주의 결과, 도 2B는 MFC-1 세포주의 결과를 나타낸다.
도 3은 인간 CD71로 형질감염되거나 그렇지 않은 CHO 세포에 대한 프로그램 된 세포사(세포사멸)의 유도를 나타낸 것으로, 도 3A는 CD71 음성 세포의 결과, 도 3B는 CD71 양성 세포의 결과를 나타낸다.
도 4는 여러 세포주에서 INA01-SDV#1의 증식 감소에 의한 인 비트로 효능을 나타낸 것으로, 도 4A는 Ramos 세포주의 결과, 도 4B는 THP-1 세포주의 결과를 나타낸다.
도 5는 INA01-SDV#1의 인 비보 효능을 나타낸다. 도 5는 처리 후 THP-1 세포주가 이종이식된 종양이 없는 마우스의 비율에 대한 카플란-메이어 플롯을 나타낸다. 처리는 INA01-SDV#1라 부르는 ADC의 1회 투여만으로 구성된다. 처리는 종양 크기가 대략 100 mm3일 때 복강내(IP)로 주사되었다. 두 가지 투여가 시험되었다(5 mg/kg 및 0.5 mg/kg). n은 마우스 수이다.
도 6은 3 mg/kg으로 복강내 투여된 야생형 B6(WT) 마우스 및 CD71/트랜스페린 이중 노킹 마우스(TfR/Tf 2Ki)에서 INA01-SDV#1의 독성 분석을 나타낸다. 4일마다 5회 주사(q4dx5). 도 6A는 WT에서 거시적 장기 분석을 나타내고, 도 6B는 TfR/Tf 2Ki 마우스에서 거시적 장기 분석을 나타낸다. 도 6A 및 6B에서 묘사된 각 장기의 조직학적 검사는 표 7에서 언급된다.
도 7은 0.02 내지 10 ㎍/mL 범위의 INA01-SDV#1이라 불리는 ADC의 10가지 농도로 37℃에서 72시간 동안 인큐베이션 된 HL-60 급성 골수성 백혈병 세포주의 세포 증식을 나타낸다. 적합 곡선은 IC50(0.08 ㎍/mL)를 계산하는데 사용되었다
도 8은 3가지 상이한 조건에서 INA01-SDV#1이라 불리는 ADC와 PBMC(말초 혈액 단핵구 세포)의 인큐베이션 후 TNF-α 생산(pg/mL)을 나타낸다: 고 코팅(공기중 건조), 저 코팅(습식-코팅) 또는 용액(수성)에서. ADC의 3가지 상이한 농도가 시험되었다: 0.1, 1 및 10 ㎍/mL.
도 9는 INA01-SDV#1의 인 비보 효능을 나타낸다. 도 9는 처리 후 THP-1 세포주가 이종이식된 종양이 없는 마우스의 비율에 대한 카플란-메이어 플랏을 나타낸다. 처리는 INA01-SDV#1이라 불리는 ADC의 4일마다 4회 투여로 구성된다. 처리는 종양 크기가 대략 100 mm3일때 복강내(IP)로 주사된다. 두 가지 용량이 시험되었다(1 mg/kg 및 0.5 mg/kg). n은 마우스 수이다. p 값은 로그-랭크 테스트를 이용하여 측정되었다. *P= 0.025.
도 10은 INA01-SDV#1의 인 비보 효능을 나타낸다. 도 10은 처리 후 THP-1 세포주가 이종이식된 종양이 없는 마우스의 비율에 대한 카플란-메이어 플랏을 나타낸다. 처리는 INA01-SDV#1이라 불리는 ADC의 4일 마다 4회 투여로 구성된다. 처리는 종양 크기가 대략 100 mm3일 때, 정맥내(IV)로 주사된다. 두 가지 용량(3 mg/kg 및 0.5 mg/kg)으로 시험되었다. n은 마우스 수이다. p 값은 로그-랭크 테스트를 이용하여 측정되었다. **P= 0.0015.
정의
본 개시물이 보다 용이하게 이해될 수 있도록 하기 위해, 특정 용어가 먼저 정의된다. 구체적인 설명 전체에 부가적인 정의들이 명시된다.
용어 "CD71" 또는 "트랜스페린 수용체" 또는 "TfR"은 달리 기술되지 않는 한 SEQ ID NO: 16에 정의된 바와 같은 인간 TfR을 지칭한다. 이 서열은 트랜스페린 수용체 단백질 1 이소폼 1(homo sapiens)(NCBI Reference Sequence NP_003225.2)에 해당한다.
본 명세서에서 언급된 바와 같은 용어 "항체"는 전체 항체 및 이의 임의의 항원 결합 단편(즉, "항원-결합 부분") 또는 단일 쇄를 포함한다. 자연적으로 발생하는 "항체"는 이황화 결합에 의해 서로 연결된 적어도 2개의 중쇄(H) 및 2개의 경쇄(L)를 포함하는 당단백질이다. 각 중쇄는 중쇄 가변 영역(본 명세서에서 VH로 약칭됨) 및 중쇄 불변 영역으로 이루어진다. 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인, CH1, CH2 및 CH3로 이루어진다. 각 경쇄는 경쇄 가변 영역(본 명세서에서 VL로 약칭됨) 및 경쇄 불변 영역으로 이루어진다. 경쇄 불변 영역은 하나의 도메인 CL로 이루어진다. VH 및 VL 영역은 프레임워크 영역(FR)으로 명명된 보다 보존된 영역이 산재된 상보성 결정 영역(CDR)으로 명명된 초가변성의 영역으로 더 세분화될 수 있다. 각 VH 및 VL은 다음의 순서, FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4로 아미노-말단에서 카르복시-말단까지 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성된다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 포함한다. 항체의 불변 영역은 면역계의 다양한 세포(예를 들어, 효과기 세포) 및 고전적인 보체계의 제1성분(C1q)을 포함하여 숙주 조직 또는 인자들과 면역글로불린의 결합을 매개할 수 있다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 항체의 "항원-결합 부분"(또는 간단히 "항원 부분")은 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 보유한 항체의 전장 또는 하나 이상의 단편(예를 들어, TfR의 부분)을 지칭한다. 항체의 항원-결합 기능은 전장 항체의 단편에 의해 수행될 수 있음이 밝혀졌다. 용어 항체의 "항원-결합 부분" 내에 포함된 결합 단편의 예시는 VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 구성된 1가 단편인 Fab 단편; F(ab)2 단편; 힌지 영역에서 이황화 브릿지에 의해 결합된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편; VH 및 CH1 도메인으로 구성된 Fd 단편; 항체의 단일 암의 VL 및 VH 도메인으로 구성된 Fv 단편; 힌지 영역에서 변형된 IgG 중쇄, 예를 들어 IgG4를 갖는 단일 암으로 구성된 유니바디(UniBody), 도메인 항체 단편(Ward et al., 1989 Nature 341:544-546), 또는 VH 도메인으로 구성된 나노바디 단편; 및 분리된 상보성 결정 영역(CDR); 또는 그러한 항원-결합 부분을 포함하는 임의의 융합 단백질을 포함한다. 또한, Fv 단편의 두 도메인, VL 및 VH는 별도의 유전자들에 의해 코딩되지만, 그들은 재조합 방법을 이용하여 그들을 VL 및 VH 영역이 쌍을 이루어 1가 분자를 형성하는 단일 쇄 단백질로 만들 수 있는 합성 링커에 의해 결합될 수 있다(단일 쇄 Fv(scFv)로 알려짐; 예를 들어, Bird et al., 1988 Science 242:423-426; 및 Huston et al., 1988 Proc. Natl. Acad. Sci. 85:5879-5883 참조). 그러한 단일 쇄 항체는 또한 용어 항체의 "항원 결합 부분" 내에 포함되는 것으로 의도된다. 이들 항체 단편은 당업자에게 공지된 전통적인 기술을 이용하여 얻으며, 단편은 온전한 항체와 동일한 방식으로 유용성에 대해 스크리닝된다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "분리된 항체"는 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체가 실질적으로 없는 항체를 지칭한다(예를 들어, TfR에 특이적으로 결합하는 분리된 항체는 TfR 이외의 다른 항원에 특이적으로 결합하는 항체가 실질적으로 없다). 그러나, TfR에 특이적으로 결합하는 분리된 항체는 다른 종 유래의 TfR 분자와 같은 다른 항원과 교차-반응성을 가질 수 있다. 더욱이, 분리된 항체는 다른 세포성 물질 및/또는 화학물질이 실질적으로 없을 수 있다. 어구 "항원을 인식하는 항체" 및 "항원에 특이적인 항체"는 본 명세서에서 용어 "항원에 특이적으로 결합하는 항체"와 상호교환적으로 사용된다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "단클론 항체" 또는 "단클론 항체 조성물"은 단일 분자 조성물의 항체 분자의 제제를 지칭한다. 단클론 항체 조성물은 특정 에피토프에 대해 단일 결합 특이성 및 친화성을 나타낸다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "이소타입"은 중쇄 불변 영역 유전자에 의해 제공되는 항체 클래스(예를 들어, IgM, IgE, IgG1 또는 IgG4와 같은 IgG)를 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "항원에 특이적으로 결합하는", 예를 들어 "TfR에 특이적으로 결합하는" 항체 또는 단백질은 상기 항원(예를 들어, SEQ ID NO:16의 인간 TfR)에 100 nM 이하, 10 nM 이하, 1 nM 이하의 KD로 결합하는 항체 또는 단백질을 지칭하는 것으로 의도된다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "KD"는 해리 상수를 지칭하는 것으로 의도되며, Kd 대 Ka의 비율(즉, Kd/Ka)로부터 얻으며, 몰 농도(M)로 표현된다. 항체에 대한 KD 값은 종래 기술에서 잘 확립된 방법을 사용하여 측정될 수 잇다. 항체의 KD를 측정하는 방법은 표면 플라즈몬 공명을 이용하거나, Biacore® system과 같은 바이오센서 시스템을 이용하는 것이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "Kassoc" 또는 "Ka"는 특정 항체-항원 상호작용의 결합 속도를 지칭하는 것으로 의도되나, 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "Kdis" 또는 "Kd"는 특정 항체-항원 상호작용의 해리 속도를 지칭하는 것으로 의도된다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "친화성"은 단일 항원 부위에서 항체 및 항원 간의 상호작용의 힘을 지칭한다. 각 항원 부위 내에서, 항체 "암"의 가변 영역은 수 많은 부위에서 항원과 약한 비-공유적인 힘을 통해 상호작용한다; 상호작용이 많을수록 친화성이 강해진다.
본 명세서에서, 용어 "HL-60 세포주"는 Collins et al. (PNAS 1978, 75:2458-1462)에 의해 유래된 전골수성을 지칭하며, 또한 Gallagher et al. (Blood, 1979, 54:713-733)에 기술되며, 예를 들어 카달로그 번호 CCL-240TM로 ATCC® 컬렉션에서 이용할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "숙주세포"는 원핵 또는 진핵 세포를 지칭한다. 진핵 세포는 예를 들어 포유동물 숙주세포, 효모 또는 사상진균이 바람직하며, 특히 포유동물 세포는 그들이 원핵 세포보다 적절히 폴딩되고 면역학적으로 활성이 있는 항체를 조립 및 분비할 가능성이 높기 때문에 바람직하다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 항체 "A24"는 WO 2005/111082에 개시된 바와 같은 항체를 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "ADCC" 또는 "항체 의존적 세포 세포독성(antibody dependent cell cytotoxicity)" 활성은 세포 고갈 활성을 지칭한다. ADCC 활성은 상업적으로 이용가능한 ADCC 분석, 예를 들어 Promega 사에서 Ref# G7015로 시판되는 ADCC Reporter Bioassay에 의해 측정될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "세포사멸"은 프로그램 된 세포사를 지칭한다. 세포사멸에 관한 더 많은 정보는 "Apoptosis: A Review of Programmed Cell Death, Susan Elmore, Toxicol Pathol. 2007; 35(4): 495-516에서 찾을 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "EC50"은 특정 노출 시간 후 기준선 및 최대 사이의 중간의 반응을 유도하는 항체의 농도를 지칭한다. 예를 들어, 그러한 농도는 GraphPad 소프트웨어에 의해 측정될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "대상체"는 임의의 인간 또는 비인간 동물을 포함한다. 용어 "비인간 동물"은 모든 척추동물, 예를 들어, 포유동물 및 비-포유동물, 예컨대 비인간 영장류, 양, 개, 고양이, 말, 소, 닭, 양서류, 파충류...를 포함한다. 용어 "대상체"는 또한 용어 "환자"를 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "약물"은 또한 "페이로드", 즉 항체(또는 단편)에 컨쥬게이트되는 모이어티를 지칭한다. D는 고전적인 화학적 치료제로 제한되는 것으로 해석되어서는 안된다. 예를 들어, D는 단백질, 펩타이드 또는 원하는 생물학적 활성을 보유한 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 그것은 세포독소와 같은 치료 모이어티를 지칭한다. "세포독소" 또는 "세포독소제"는 세포에 해로운(예를 들어, 죽이는) 임의의 약제를 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "링커 분자"는 화학식 II 또는 IV의 화합물을 지칭한다. 그러한 링커 분자는 티올기를 포함하는 화합물, 예컨대 항체에 연결되기에 적절하다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "발린-시트룰린의 디펩타이드"(이하 "디펩타이드 VC"라 지칭함)는 2개의 아미노산 발린 및 시트룰린으로 구성된 링커를 나타낸다. 이 디펩타이드는 특히 화학식 VI이다:
[화학식 VI]
Figure pct00005
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "아미노벤질 에스테르 자기-희생기(aminobenzyl ester self-immolative group)"는 자기 희생기로 기능을 하는 아미노벤질 에스테르기를 지칭한다. 그러한 기는 화학식 III의 화합물로 표현된다. "자기-희생기"는 (i) 적어도 2개의 다른 화학적 모이어티를 안정한 분자에 공유적으로 결합할 수 있고, (ii) 효소적 절단에 의해 분자로부터 이격된 화학적 모이어티 중 하나로부터 방출될 수 있으며, 및 (iii) 효소적 절단 후에 이격된 화학적 모이어티 중 다른 것을 방출하기 위해 분자의 나머지로부터 자발적으로 절단할 수 있는 이작용성 화학적 모이어티로서 정의될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "알킬"은 1가 포화된 탄화수소 쇄(직쇄 또는 분지쇄를 갖는)를 지칭한다. 예를 들어, 알킬은 C1-C20 알킬을 지칭한다. 바람직하게는, 알킬은 "저급 알킬", 즉, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6의 탄소를 갖는 알킬기(직쇄 또는 분지쇄 C1-C6 알킬기)이다. 예를 들어, 이것은 메틸, 에틸, n-프로필, i-프로필, n-부틸, i-부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, n-헥실 등을 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "할로알킬"은 하나 이상의 탄소 원자가 하나 이상의 할로겐 원자로 대체된 알킬을 지칭한다. 바람직하게는, 할로알킬은 "저급 할로알킬", 즉 1, 2, 3, 4, 5 또는 6의 탄소를 갖는 할로알킬기(직쇄 또는 분지쇄 C1-C6 할로알킬기)이다. 예를 들어, 이것은 CF3, CF2Br, CH2F, CHFCH3, CF3CH2, CF3CF2, CHF2CF2, CH2Cl 또는 CH2CH2C1를 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "결합된"은 결합을 지칭한다. 이 결합은 또한 화학식 I에서 대시 "-"로 표현된다. 결합은 공유결합, 또는 정전기력과 같은 비-공유 상호작용일 수 있다. 바람직하게는, 결합은 공유결합이다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 화학식에 있는 "물결선"은 본 개시물의 ADC의 각 부분(Ab, L, Z, X 및 D) 간의 부착 부위를 표현한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "치료적으로 허용가능한 양"은 원하는 결과를 달성하기에 충분한 양을 지칭한다(예를 들어, 종양 크기의 감소, 종양 성장의 억제, 전이 예방, 세포사멸 유도 등).
재조합 항체
본 개시물의 항체는 항-TfR 항체이다. 바람직하게는, 그러한 항체는 인간화 재조합 항체 mAb1-mAb16를 포함하며, 아래 표 1에 기술된 바와 같이 그들의 가변 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열 및 인간 불변 이소타입에 의해 분리되고 구조적으로 특징화 된다.
mAb1-mAb16의 가변 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열
항체 VH 아미노산 서열 VL 아미노산 서열 이소타입 불변 영역
mAb1 SEQ ID NO:11 (VH4) SEQ ID NO:13 (VL4) IgG4
mAb2 SEQ ID NO:11 (VH4) SEQ ID NO:14 (VL5) IgG4
mAb3 SEQ ID NO:12 (VH5) SEQ ID NO:13 (VL4) IgG4
mAb4 SEQ ID NO:12 (VH5) SEQ ID NO:15 (VL6) IgG4
mAb5 SEQ ID NO:11 (VH4) SEQ ID NO:13 (VL4) IgG1
mAb6 SEQ ID NO:11 (VH4) SEQ ID NO:14 (VL5) IgG1
mAb7 SEQ ID NO:12 (VH5) SEQ ID NO:13 (VL4) IgG1
mAb8 SEQ ID NO:12 (VH5) SEQ ID NO:15 (VL6) IgG1
mAb9 SEQ ID NO:11 (VH4) SEQ ID NO:13 (VL4) IgG1 (AA)
mAb10 SEQ ID NO:11 (VH4) SEQ ID NO:14 (VL5) IgG1 (AA)
mAb11 SEQ ID NO:12 (VH5) SEQ ID NO:13 (VL4) IgG1 (AA)
mAb12 SEQ ID NO:12 (VH5) SEQ ID NO:15 (VL6) IgG1 (AA)
mAb13 SEQ ID NO:11 (VH4) SEQ ID NO:13 (VL4) IgG1 N297A
mAb14 SEQ ID NO:11 (VH4) SEQ ID NO:14 (VL5) IgG1 N297A
mAb15 SEQ ID NO:12 (VH5) SEQ ID NO:13 (VL4) IgG1 N297A
mAb16 SEQ ID NO:12 (VH5) SEQ ID NO:15 (VL6) IgG1 N297A
mAb1 내지 mAb16을 생성하기 위해 사용된 IgG4, IgG1 및 그들의 돌연변이 버전 IgG1 AA 및 IgG1 N297A의 불변 이소타입 영역의 상응하는 아미노산 및 뉴클레오티드 코딩 서열은 당업계에 잘 알려져 있다. mAb1의 전장 경쇄 및 중쇄 및 상응하는 코딩 서열은 아래 표 2에 도시된다.
전장 중쇄 및 경쇄 DNA 코딩 서열
항체 아미노산 서열 DNA 코딩 서열
mAb1 중쇄: SEQ ID NO:18
경쇄: SEQ ID NO:17		 중쇄: SEQ ID NO:20
경쇄: SEQ ID NO:19
본 개시물에 따른 일부 항체의 VH CDR1s(HCDR1로도 불림), VH CDR2s(HCDR2로도 불림), VH CDR3s(HCDR1로도 불림), VL CDR1s(LCDR1로도 불림), VL CDR2s(LCDR2로도 불림), VL CDR3s(HCDR3로도 불림)의 아미노산 서열의 예시는 표 3에 도시된다.
표 3에서, 본 개시물의 일부 항체의 CDR 영역은 Chothia 시스템(Chothia C, Lesk AM. 1987, J Mol Biol 196, 901-917)을 사용하여 묘사된다. 읽기 쉽도록, CDR 영역은 이하 각각 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, LCDR3이라고 부른다.
Chothia에 따른 mAb1 내지 mAb16 및 레퍼런스 A24 항체의 CDR 영역
오리지널 항체 HCDR1 HCDR2 HCDR3 LCDR1 LCDR2 LCDR3
A24 SEQ ID NO:1 SEQ ID NO:2 SEQ ID NO:3 SEQ ID NO:4 SEQ ID NO:7 SEQ ID NO:6
mAb1
mAb5
mAb9
mAb13		 SEQ ID NO:1 SEQ ID NO:2 SEQ ID NO:3 SEQ ID NO:4 SEQ ID NO:5 SEQ ID NO:6
mAb2
mAb6
mAb10
mAb14		 SEQ ID NO:1 SEQ ID NO:2 SEQ ID NO:3 SEQ ID NO:4 SEQ ID NO:8 SEQ ID NO:6
mAb3
mAb7
mAb11
mAb15		 SEQ ID NO:1 SEQ ID NO:2 SEQ ID NO:3 SEQ ID NO:4 SEQ ID NO:5 SEQ ID NO:6
mAb4
mAb8
mAb12
mAb16		 SEQ ID NO:1 SEQ ID NO:2 SEQ ID NO:3 SEQ ID NO:4 SEQ ID NO:7 SEQ ID NO:6
표 4, 5 및 6은 ADC의 항체와 관련된 유용한 아미노산 및 뉴클레오티드 서열을 기술한다.
본 발명을 실행하기 위한 유용한 아미노산 및 뉴클레오티드 서열의 간단한 설명
SEQ ID NO: 서열 설명
1 A24, VH4 및 VH5의 HCDR1 아미노산 서열
2 A24, VH4 및 VH5의 HCDR2 아미노산 서열
3 A24, VH4 및 VH5의 HCDR3 아미노산 서열
4 A24, VL4, VL5 및 VL6의 LCDR1 아미노산 서열
5 VL4의 LCDR2 아미노산 서열
6 A24, VL4, VL5 및 VL6의 LCDR3 아미노산 서열
7 A24의 LCDR2 아미노산 서열
8 VL5의 LCDR2 아미노산 서열
9 A24의 VH0 아미노산 서열
10 A24의 VL0 아미노산 서열
11 VH4 아미노산 서열
12 VH5 아미노산 서열
13 VL4 아미노산 서열
14 VL5 아미노산 서열
15 VL6 아미노산 서열
16 인간 트랜스페린 수용체 아미노산 서열
17 mAb1, mAb3, mAb5, mAb7, mAb9, mAb11, mAb13, mAb15 (with VL4)의 전장 경쇄
18 mAb1, mAb2 (with VH4-IgG4 이소타입)의 전장 중쇄
19 SEQ ID NO:19의 mAb1, mAb3, mAb5, mAb7, mAb9, mAb11, mAb13, mAb15 (with VL4)의 전장 경쇄를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열
20 SEQ ID NO:22의 mAb1, mAb2 (with VH4-IgG4 이소타입)의 전장 중쇄를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열
본 발명을 실행하기 위한 유용한 아미노산 및 뉴클레오티드 서열의 간단한 설명
SEQ ID NO: 아래 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열에 대한 설명
1 GYTFTNQ
2 NTYTGE
3 EGWDSMDY
4 SASSSVNYMH
5 STSNRAT
6 QQRSSYPLT
7 STSNLAS
8 STSNRAS
9 QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTNQGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYTGEPINADDFKGRFAISLETSASTAYLQINNLKNEDMATYFCVREGWDSMDYWGQGTSVTVSS
10 QIVLTQSPAIMSASPGEKVTITCSASSSVNYMHWFQQKPGTSPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQRSSYPLTFGAGTKLELKR
11 QVQLVQSGPELKKPGASVKVSCKASGYTFTNQGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYTGEPINADDFKGRFVISLDTSASTAYLQISSLKAEDTAVYFCVREGWDSMDYWGQGTSVTVSS
12 MEWSWVFLFFLSVTTGVHSQVQLVQSGPELKKPGASVKVSCKASGYTFTNQGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYTGEPINADDFKGRFVISLETSASTAYLQISNLKNEDTAVYFCVREGWDSMDYWGQGTSVTVSS
13 QIVLTQSPATLSVSPGERATLSCSASSSVNYMHWFQQKPGQSPRLLIYSTSNRATGIPARFSGSGSGTSYTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSYPLTFGQGTKLEIKR
14 QIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSASSSVNYMHWFQQKPGQSPRLLIYSTSNRASGVPARFSGSGSGTSYTLTISRLEPEDFAVYYCQQRSSYPLTFGQGTKLEIKR
15 QIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSASSSVNYMHWFQQKPGQSPRLLIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTSYTLTISRLEPEDAAVYYCQQRSSYPLTFGAGTKLELKR
16 MMDQARSAFSNLFGGEPLSYTRFSLARQVDGDNSHVEMKLAVDEEENADNNTKANVTKPKRCSGSICYGTIAVIVFFLIGFMIGYLGYCKGVEPKTECERLAGTESPVREEPGEDFPAARRLYWDDLKRKLSEKLDSTDFTGTIKLLNENSYVPREAGSQKDENLALYVENQFREFKLSKVWRDQHFVKIQVKDSAQNSVIIVDKNGRLVYLVENPGGYVAYSKAATVTGKLVHANFGTKKDFEDLYTPVNGSIVIVRAGKITFAEKVANAESLNAIGVLIYMDQTKFPIVNAELSFFGHAHLGTGDPYTPGFPSFNHTQFPPSRSSGLPNIPVQTISRAAAEKLFGNMEGDCPSDWKTDSTCRMVTSESKNVKLTVSNVLKEIKILNIFGVIKGFVEPDHYVVVGAQRDAWGPGAAKSGVGTALLLKLAQMFSDMVLKDGFQPSRSIIFASWSAGDFGSVGATEWLEGYLSSLHLKAFTYINLDKAVLGTSNFKVSASPLLYTLIEKTMQNVKHPVTGQFLYQDSNWASKVEKLTLDNAAFPFLAYSGIPAVSFCFCEDTDYPYLGTTMDTYKELIERIPELNKVARAAAEVAGQFVIKLTHDVELNLDYERYNSQLLSFVRDLNQYRADIKEMGLSLQWLYSARGDFFRATSRLTTDFGNAEKTDRFVMKKLNDRVMRVEYHFLSPYVSPKESPFRHVFWGSGSHTLPALLENLKLRKQNNGAFNETLFRNQLALATWTIQGAANALSGDVWDIDNEF
17 MSVPTQVLGLLLLWLTDARCQIVLTQSPATLSVSPGERATLSCSASSSVNYMHWFQQKPGQSPRLLIYSTSNRATGIPARFSGSGSGTSYTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
18 MEWSWVFLFFLSVTTGVHSQVQLVQSGPELKKPGASVKVSCKASGYTFTNQGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYTGEPINADDFKGRFVISLDTSASTAYLQISSLKAEDTAVYFCVREGWDSMDYWGQGTSVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
19 AAGCTTGCCGCCACCATGTCCGTGCCTACCCAGGTGCTGGGACTGCTGCTGCTGTGGCTGACCGATGCCAGGTGCCAGATCGTGCTGACCCAGTCTCCTGCCACCCTGTCTGTGTCTCCCGGCGAGAGAGCTACCCTGTCCTGCTCCGCCTCCTCCTCCGTGAACTACATGCACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCCAGTCCCCCAGACTGCTGATCTACTCCACCTCCAACCGGGCCACCGGCATCCCTGCCAGATTTTCCGGCTCTGGCTCCGGCACCTCCTATACCCTGACCATCTCCAGCCTGGAACCCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCAGCGGTCCTCCTACCCCCTGACCTTTGGCCAGGGCACCAAGCTGGAAATCAAGCGTACGGTGGCCGCTCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCAAGCGACGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAACTTCTACCCCAGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTCACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGGGGCGAGTGCTGATGAATTC
20 AAGCTTGCCGCCACCATGGAATGGTCCTGGGTGTTCCTGTTCTTCCTGTCCGTGACCACCGGCGTGCACTCCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCCCCGAGCTGAAGAAACCTGGCGCCTCCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCTTCCGGCTACACCTTTACAAACCAGGGCATGAACTGGGTCAAGCAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGAAGTGGATGGGCTGGATCAACACCTACACCGGCGAGCCCATCAACGCCGACGACTTCAAGGGCAGATTCGTGATCTCCCTGGACACCTCCGCCTCCACCGCCTACCTGCAGATCAGCTCTCTGAAGGCCGAGGATACCGCCGTGTACTTCTGCGTGCGGGAAGGCTGGGACTCCATGGACTATTGGGGCCAGGGCACCTCCGTGACCGTGTCTAGCGCTTCTACAAAGGGCCCAAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCTGCTCCAGAAGCACCAGCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCAAGACCTACACCTGTAACGTGGACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGGGTGGAGAGCAAGTACGGCCCACCCTGCCCCCCCTGCCCAGCCCCCGAGTTCCTGGGCGGACCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCAGGAGGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTTTAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAAGAGTACAAGTGTAAGGTCTCCAACAAGGGCCTGCCAAGCAGCATCGAAAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTAGAGAGCCCCAGGTCTACACCCTGCCACCCAGCCAAGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTCTACCCAAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCAGTGCTGGACAGCGACGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAGGCTGACCGTGGACAAGTCCAGATGGCAGGAGGGCAACGTCTTTAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCTGGGCTGATGAATTC
mAb1-mAb16의 가변 영역 및 IgG Fc 영역의 설명
예시 가변 영역 및 IgG Fc 영역
mAb1 IgG4 Fc 영역을 갖는 VH4/VL4
mAb2 IgG4 Fc 영역을 갖는 VH4/VL5
mAb3 IgG4 Fc 영역을 갖는 VH5/VL4
mAb4 IgG4 Fc 영역을 갖는 VH5/VL6
mAb5 IgG1 Fc 영역을 갖는 VH4/VL4
mAb6 IgG1 Fc 영역을 갖는 VH4/VL5
mAb7 IgG1 Fc 영역을 갖는 VH5/VL4
mAb8 IgG1 Fc 영역을 갖는 VH5/VL6
mAb9 IgG1 AlaAla 돌연변이 Fc 영역을 갖는 VH4/VL4
mAb10 IgG1 AlaAla 돌연변이 Fc 영역을 갖는 VH4/VL5
mAb11 IgG1 AlaAla 돌연변이 Fc 영역을 갖는 VH5/VL4
mAb12 IgG1 AlaAla 돌연변이 Fc 영역을 갖는 VH5/VL6
mAb13 IgG1 N297A 돌연변이 Fc 영역을 갖는 VH4/VL4
mAb14 IgG1 N297A 돌연변이 Fc 영역을 갖는 VH4/VL5
mAb15 IgG1 N297A 돌연변이 Fc 영역을 갖는 VH5/VL4
mAb16 IgG1 N297A 돌연변이 Fc 영역을 갖는 VH5/VL6
일 구체예에서, 분리된 재조합 항체는 SEQ ID NO: 1의 HCDR1, SEQ ID NO: 2의 HCDR2, SEQ ID NO: 3의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; SEQ ID NO: 4의 LCDR1, SEQ ID NO: 5 또는 8의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 6의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가지되, 상기 항체는 SEQ ID NO:16의 트랜스페린 수용체에 특이적으로 결합한다.
특정 구체예에서, 본 개시물에 따른 분리된 재조합 항체는
(a) SEQ ID NO: 1의 HCDR1, SEQ ID NO: 2의 HCDR2, SEQ ID NO: 3의 HCDR3을 포함하는 가변성 중쇄 폴리펩타이드 및 SEQ ID NO: 4의 LCDR1, SEQ ID NO: 5의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 6의 LCDR3을 포함하는 가변성 경쇄 폴리펩타이드;
(b) SEQ ID NO: 1의 HCDR1, SEQ ID NO: 2의 HCDR2, SEQ ID NO: 3의 HCDR3을 포함하는 가변성 중쇄 폴리펩타이드 및 SEQ ID NO: 4의 LCDR1, SEQ ID NO: 8의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 6의 LCDR3을 포함하는 가변성 경쇄 폴리펩타이드;
(c) SEQ ID NO:11의 VH를 포함하는 가변성 중쇄 폴리펩타이드 및 SEQ ID NO:13의 가변성 경쇄 폴리펩타이드 VL;
(d) SEQ ID NO:11의 VH를 포함하는 가변성 중쇄 폴리펩타이드 및 SEQ ID NO:14의 가변성 경쇄 폴리펩타이드 VL;
(e) SEQ ID NO:11의 VH를 포함하는 가변성 중쇄 폴리펩타이드 및 SEQ ID NO:15의 가변성 경쇄 폴리펩타이드 VL;
(f) SEQ ID NO:12의 VH를 포함하는 가변성 중쇄 폴리펩타이드 및 SEQ ID NO:13의 가변성 경쇄 폴리펩타이드 VL;
(g) SEQ ID NO:12의 VH를 포함하는 가변성 중쇄 폴리펩타이드 및 SEQ ID NO:14의 가변성 경쇄 폴리펩타이드 VL; 또는
(h) SEQ ID NO:12의 VH를 포함하는 가변성 중쇄 폴리펩타이드 및 SEQ ID NO:15의 가변성 경쇄 폴리펩타이드 VL 중 하나를 포함한다.
특정 구체예에서, 상기 정의된 바와 같은 상기 재조합 항-TfR 항체는 다음 특징 중 하나 이상을 갖는다:
(i) 그것은 SPR로 측정될 때, 10 nM 이하의 KD, 바람직하게는 1 nM 이하의 KD로 트랜스페린 수용체에 결합한다;
(ii) 그것은 ELISA 분석으로 측정될 때, 0.1 ㎍/mL 이하, 바람직하게는 0.05 ㎍/mL 이하의 EC50으로 트랜스페린 수용체에 결합한다(더 많은 정보는 PCT/EP2016/067465 참조);
(iii) 그것은 예를 들어, HL-60 세포사멸 유도 분석을 이용하여 측정될 때, SEQ ID NO:9의 VH 및 SEQ ID NO:10의 VL을 갖는 모(parent) 뮤린 가변 영역을 갖는 상응하는 레퍼런스 키메라 항체로 측정된 유도 수준과 동일하거나 또는 우수한 수준으로 HL-60 세포주의 세포사멸을 유도한다. 전형적으로, 본 개시물의 재조합 항체의 10 ㎍/mL의 함량은 SEQ ID NO:9의 VH 및 SEQ ID NO:10의 VL을 포함하는 A24의 모(parent) 뮤린 가변 영역을 갖는 레퍼런스 키메라 항체의 동량과 비교하여 HL-60 세포주의 세포사멸의 유도에 대해 분석될 수 있다. 시험된 항체의 HL-60 세포사멸 유도 분석에서 세포사멸 유도는 시험된 항체로 측정될 때 양성 세포의 비율이 레퍼런스 항체로 측정될 때 양성 세포의 비율보다 유의적으로 낮지 않으면 레퍼런스 항체와 동일하다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "상응하는" 레퍼런스 키메라 항체는 특별한 특징, 예를 들어 세포사멸의 유도를 위해 시험되는 항체의 이소타입 불변 영역과 100% 동일한 이소타입 불변 영역을 갖는 레퍼런스 항체를 지칭한다.
이전 구체예들과 조합될 수 있는 특정 구체예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 상기 정의된 항체의 항체 단편이다. 항체 단편은 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv, 유니바디 및 scFv 단편, 디아바디, 단일 도메인 또는 나노바디 및 다른 단편들을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 용어 "디아바디"는 2개의 항원-결합 부위를 갖는 작은 항체 단편을 지칭하며, 단편들은 같은 폴리펩타이드 쇄에서 경쇄 가변성 도메인(VL)에 연결된 중쇄 가변성 도메인(VH)(VH-VL)을 포함한다. 같은 쇄에서 2개의 도메인 사이에 쌍을 이룰 수 있을 정도로 짧은 링커를 이용하여, 도메인은 다른 쇄의 상보성 도메인과 쌍을 이루게 하여 2개의 항원-결합 부위를 만든다. 단일-도메인 항체는 항체의 중쇄 가변성 도메인의 전부 또는 일부, 또는 경쇄 가변성 도메인의 전부 또는 일부를 포함하는 항체 단편이다. 특정 구체예에서, 단일-도메인 항체는 인간 단일-도메인 항체이다(Domantis, Inc., Waltham, MA; 예를 들어, U.S. Patent No. 6,248,516 B1 참조). 항체 단편은 본 명세서에서 기술된 바와 같은 재조합 숙주세포에 의한 생성뿐만 아니라 온전한 항체의 단백질분해성 소화를 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 기술에 의해 제조될 수 있다.
특정 구체예에서, 본 개시물의 항체는 인간화 항체이다. 전형적으로, 비-인간 항체는 모(parent) 비-인간 항체의 적어도 동일한 친화성(또는 우수한 친화성)을 가지면서 인간에 대한 면역원성을 줄이기 위해 인간화된다. 바람직한 구체예에서, 본 개시물의 항체는 모(parent) 항체 A24의 인간화 항체이다. 일반적으로, 인간화 항체는 CDR(또는 이의 일부)은 비-인간 항체, 예를 들어, 뮤린 A24 항체로부터 유래되고, FR(또는 이의 일부)은 인간 항체 서열로부터 유래되는 하나 이상의 도메인을 포함한다. 인간화 항체는 또한 선택적으로 인간 불변 영역의 적어도 한 부분을 포함할 것이다. 일부 구체예에서, 인간화 항체에서 일부 FR 잔기는 예를 들어 항체 특이성 또는 친화성을 회복 또는 개선하기 위해 비-인간 항체(예를 들어, CDR 잔기가 유래되는 A24 항체)로부터 상응하는 잔기로 대체된다. 일부 특정 구체예에서, 인간화 항체에서 일부 CDR 잔기는 또한 예를 들어 항체 특이성 또는 친화성을 회복 또는 개선하기 위해 치환된다. 인간화 항체 및 이들을 제조하는 방법은 예를 들어 Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13: 1619-1633 (2008)에서 검토되며, 예를 들어, Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); Queen et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA 86: 10029-10033 (1989); 미국특허 제5,821,337호, 제7,527,791호, 제6,982,321호 및 제7,087,409호; Kashmiri et al., Methods 36:25-34 (2005)(특이성 결정 영역(specificity determining region(SDR) 이식을 기술함); Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991)("재표면술(resurfacing)"을 기술함); Dall'Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005)("FR 셔플링"을 기술함); 및 Osbourn et al., Methods 36:61-68 (2005) 및 Klimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000)(FR 셔플링에 대한 "가이드 선별" 접근법을 기술함)에서 추가로 기술된다. 바람직하게는 본 개시물에 따른 재조합 항체는 인간화 침묵 항체, 바람직하게는 인간화 침묵 IgG1 또는 IgG4 항체이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "침묵"은 ADCC 활성 분석에서 측정될 때 없거나 또는 낮은 ADCC 활성을 나타내는 항체를 지칭한다.
일 구체예에서, 용어 "없거나 또는 낮은 ADCC 활성"은 침묵 항체가 적어도 10% 미만의 ADCC 활성, 예를 들어, 야생형 인간 IgG1 이소타입을 갖는 상응하는 항체로 관찰되는 ADCC 활성의 50% 미만을 나타냄을 의미한다.
침묵된 효과기 기능은 항체의 Fc 불변 부분에서의 돌연변이에 의해 얻을 수 있으며, 종래기술에 기술되어 있다: Strohl 2009 (AA & N297A); Baudino 2008, D265A (Baudino et al., J.Immunol. 181 (2008): 6664-69, Strohl, CO Biotechnology 20 (2009): 685-91). 침묵 IgG1 항체의 예시들은 IgG1 Fc 아미노산 서열에서 L234A 및 L235A 돌연변이를 포함하는 소위 AA 돌연변이를 포함한다. 다른 침묵 IgG1 항체는 N297A 돌연변이를 포함하여, 당화되지 않는 또는 비-당화된 항체들을 생성한다.
돌연변이 아미노산 서열을 갖는 항체는 코딩 핵산 분자의 돌연변이 유발(예를 들어, 부위-지정 또는 PCR-매개 돌연변이 유발), 이어서 본 명세서에서 기술된 기능성 분석을 이용하여 보유된 기능(즉, 상기 기재된 기능)에 대해 인코딩된 변경된 항체의 검사에 의해 수득될 수 있다.
보존적 변형을 갖는 항체
특정 구체예에서, 본 개시물의 항체(또는 이의 항원 결합 부분을 포함하는 결합 단백질)는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가지되, 하나 이상의 이들 CDR 서열은 본 명세서에서 기술된 mAb1 내지 mAb16 항체 또는 이들의 보존적 변형에 기초한 아미노산 서열을 특화하며, 항체 또는 단백질은 본 개시물의 항-TfR 항체의 원하는 기능적 특징들을 보유한다.
항-TfR 항체의 원하는 기능적 특징들은 제한없이 다음을 포함한다:
(i) 그것은 SPR 분석에 의해, 예를 들어 Biacore®을 이용하여 측정될 때, 10 nM 이하의 KD, 바람직하게는 1 nM 이하의 KD로 트랜스페린 수용체에 결합한다;
(ii) 그것은 ELISA 분석에서 측정될 때(더 많은 정보를 위해서는 PCT/EP2016/067465 참조), 0.1 ㎍/mL 이하, 바람직하게는 0.05 ㎍/mL 이하의 EC50으로 트랜스페린 수용체에 결합한다;
(iii) 그것은 예를 들어 HL-60 세포사멸 유도 분석을 이용하여 측정될 때, SEQ ID NO:9의 VH 및 SEQ ID NO:10의 VL의 모체 뮤린 가변 영역을 갖는 상응하는 레퍼런스 키메라 항체로 측정된 유도 수준과 동일하거나 또는 우수한 수준으로 HL-60 세포주의 세포사멸을 유도한다. 전형적으로, 본 개시물의 재조합 항체의 10 ㎍/mL의 양은 SEQ ID NO:9의 VH 및 SEQ ID NO:10의 VL을 포함하는 A24의 모(parent) 뮤린 가변 영역을 갖는 레퍼런스 키메라 항체의 동량과 비교하여 HL-60 세포주의 세포사멸의 유도를 위해 분석될 수 있다. 시험된 항체의 HL-60 세포사멸 유도 분석에서 세포사멸 유도는 시험된 항체로 측정될 때 양성 세포의 비율이 레퍼런스 항체로 측정될 때 양성 세포의 비율보다 유의적으로 더 낮지 않은 경우 레퍼런스 항체와 동일하다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "보존적 서열 변형"은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체되는 아미노산 치환을 지칭하도록 의도된다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리는 당업게에 정의되어 있다. 이들 패밀리는 염기성 측쇄(예를 들어, 리신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄(예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 하전되지 않은 극성 측쇄(예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인, 트립토판), 비극성 측쇄(예를 들어, 알라닌, 발린, 루신, 이소루신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), 베타-분지된 측쇄(예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소루신) 및 방향족 측쇄(예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 갖는 아미노산을 포함한다. 따라서, 본 개시물의 항체의 CDR 영역 내 하나 이상의 아미노산 잔기는 같은 측쇄 패밀리로부터의 다른 아미노산 잔기로 대체될 수 있고, 변경된 항체는 본 명세서에서 기술된 기능적 분석을 이용하여 보유된 기능에 대해 검사될 수 있다.
변형은 당업계에 공지된 표준 기술, 예컨대 부위-지정 돌연변이 유발 및 PCR-매개 돌연변이 유발에 의해 본 개시물의 항체에 도입될 수 있다.
프레임워크 또는 Fc 가공
본 개시물의 가공된 항체는 예를 들어, 항체의 특징들을 개선하기 위해 VH 및/또는 VL 내 프레임워크 잔기에 변형이 만들어진 것들을 포함한다. 전형적으로 그러한 프레임워크 변형은 항체의 면역원성을 감소시키도록 제조된다. 예를 들어, 하나의 접근법은 하나 이상의 프레임워크 잔기를 상응하는 생식세포 서열로 "역돌연변이"시키는 것이다. 보다 구체적으로, 체세포 돌연변이를 겪은 항체는 항체가 유래된 생식세포 서열과는 상이한 프레임워크 잔기를 포함할 수 있다. 그러한 잔기는 항체 프레임워크 서열을 항체가 유래된 생식세포 서열과 비교함으로써 확인될 수 있다. 프레임워크 영역 서열을 그들의 생식세포 배열로 되돌리려면, 체세포 돌연변이는 예를 들어 부위-지정 돌연변이 유발 또는 PCR-매개 돌연변이 유발에 의해 생식세포 서열로 "역돌연변이"될 수 있다. 그러한 "역돌연변이된" 항체 또한 본 발명에 포함되는 것으로 의도된다.
프레임워크 변형의 다른 유형은 T 세포-에피토프를 제거하여 항체의 잠재적 면역원성을 감소시키기 위해 프레임워크 영역 내 또는 심지어 하나 이상의 CDR 영역 내 하나 이상의 잔기를 돌연변이하는 것을 포함한다.
특히, Antitope 사(Cambridge UK)는 치료용 항체 및 단백질에서 T 세포 에피토프의 위치를 확인하는데 기반을 두고 면역원성을 평가하고 제거하기 위한 다양한 독점적인 기술들을 개발하였다. 이들 기술은 아래에 요약된다:
- iTope™ - 인간 MHC 클래스 II 대립유전자에 대한 펩타이드 결합을 예측하기 위한 인 실리코 기술(Perry et al. 2008 Drugs in R&D, 9(6):385-396).
- TCED™ - 특히 항체 V 영역의 EpiScreen™ T 세포 에피토프 매핑 분석을 이용한 연구에서 확인된 공지의 T 세포 에피토프의 데이터베이스(Bryson et al. 2010 Biodrugs 24(1):1-8). 데이터베이스는 공통 모티프를 확인하기 위해 BLAST 검색에 의해 조사될 수 있다(Altschul et al. 1997 Nucleic Acids Res. (1997) 25:3389-3402).
프레임워크 또는 CDR 영역 내에 만들어진 변형에 대한 추가 또는 대안으로, 본 개시물의 항체는 Fc 영역 내 변형을 포함하고, 전형적으로 항체의 하나 이상의 기능적 특징들, 예컨대 혈청 반감기, 보체 고정, Fc 수용체 결합 및/또는 항원-의존적 세포성 세포독성을 변경하기 위해 가공될 수 있다.
또한, 본 개시물의 항체는 화학적으로 변형되거나(예를 들어, 하나 이상의 화학적 모이어티가 항체에 부착될 수 있다) 또는 이의 당화를 변경하고 다시 항체의 하나 이상의 기능적 특징들을 변경하기 위해 변형될 수 있다. 이들 구체예 각각은 아래에 보다 구체적으로 기술된다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "이소타입 불변 영역" 또는 "Fc 영역"은 네이티브 서열 Fc 영역 및 가변성 Fc 영역을 포함하여, 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하기 위해 상호교환적으로 사용된다. 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 일반적으로 위치 C226 또는 P230으로부터 IgG 항체의 카르복실 말단에 이르는 아미노산 잔기를 포함하는 것으로 정의된다. Fc 영역에서 잔기의 넘버링은 kabat의 EU 색인 번호이다. Fc 영역의 C-말단 리신(잔기 K447)은 예를 들어, 항체의 생산 또는 정제 동안 제거될 수 있다. 따라서, 본 개시물의 항체의 조성은 모든 K447 잔기가 제거된 항체 집단, K447 잔기가 제거되지 않은 항체 집단, 및 K447 잔기가 있거나 없는 항체의 혼합물을 갖는 항체 집단을 포함할 수 있다.
하나의 특정 구체예에서, CH1의 힌지 영역은 힌지 영역에서 시스테인 잔기의 수가 변경, 예를 들어 증가 또는 감소되도록 변형된다. 이 접근법은 Bodmer et al.의 미국 특허 제5,677,425호에서 추가로 기술된다. CH1의 힌지 영역에서 시스테인 잔기의 수는 예를 들어 경쇄 및 중쇄의 조립을 촉진하거나 또는 항체의 안정성을 증가 또는 감소하기 위해 변경된다.
다른 구체예에서, 항체의 Fc 힌지 영역은 항체의 생물학적 반감기를 감소시키기 위해 돌연변이 된다. 보다 구체적으로, 하나 이상의 아미노산 돌연변이가 Fc-힌지 단편의 CH2-CH3 도메인 인터페이스 영역에 도입되어 항체는 네이티브 Fc-힌지 도메인 SpA 결합에 비해 포도상구균 단백질 A(SpA) 결합을 손상시킨다. 이 접근법은 Ward et al.의 미국 특허 제6,165,745호에 보다 구체적으로 기술된다.
다른 구체예에서, 항체는 이의 생물학적 반감기를 증가시키도록 변형된다. 다양한 접근법이 가능하다. 예를 들어, 하나 이상의 다음의 돌연변이가 도입될 수 있다: Ward의 미국 특허 제6,277,375호에 기술된 바와 같이 T252L, T254S, T256F. 대안으로, 생물학적 반감기를 증가시키기 위해, 항체는 Presta et al.의 미국 특허 제5,869,046호 및 제6,121,022호에 기술된 바와 같이 IgG의 Fc 영역의 CH2 도메인의 2개의 로프로부터 얻은 우회 수용체(salvage receptor) 결합 에피토프를 포함하도록 CH1 또는 CL 영역 내에서 변경될 수 있다.
또 다른 구체예에서, Fc 영역은 항체의 효과기 기능을 변경하기 위해 적어도 하나의 아미노산 잔기를 상이한 아미노산 잔기로 대체하여 변경된다. 예를 들어, 하나 이상의 아미노산은 상이한 아미노산 잔기로 대체될 수 있으므로 항체는 효과기 리간드에 대해 변경된 친화성을 가지나 모(parent) 항체의 항원-결합능은 보유한다. 친화성이 변경된 효과기 리간드는 예를 들어, Fc 수용체 또는 보체의 C1 성분일 수 있다. 이 접근법은 Winter et al.의 미국 특허 제5,624,821호 및 제5,648,260호에 보다 구체적으로 기술된다.
다른 구체예에서, 아미노산 잔기로부터 선택된 하나 이상의 아미노산은 상이한 아미노산 잔기로 대체될 수 있으므로 항체는 변경된 C1q 결합 및/또는 감소 또는 폐지된 보체 의존적 세포독성(complement dependent cytotoxicity(CDC))을 갖는다. 이 접근법은 Idusogie et al.의 미국 특허 제6,194,551호에 보다 구체적으로 기술된다.
다른 구체예에서, 하나 이상의 아미노산 잔기는 보체를 고정하는 항체의 능력을 변경하도록 변경된다. 이 접근법은 Bodmer et al.의 PCR 공개 WO 94/29351에서 또한 기술된다.
또 다른 구체예에서, Fc 영역은 하나 이상의 아미노산을 변형하여 항체 의존적 세포성 세포독성(ADCC)을 매개하는 항체의 능력을 증가하고 및/또는 Fcγ 수용체에 대한 항체의 친화성을 증가시키도록 변형된다. 이 접근법은 Presta의 PCT 공개 WO 00/42072에서 또한 기술된다. 더욱이, FcγRl, FcγRII, FcγRIII 및 FcRn에 대한 인간 IgG1에서의 결합 부위가 매핑되어 있고, 개선된 결합을 갖는 변이체들이 기술되어 있다(Shields, R.L. et al., 2001 J. Biol. Chem 276:6591-6604 참조).
다른 구체예에서, Fc 영역은 하나 이상의 아미노산을 변형하여 항체 의존적 세포성 세포독성(ADCC)을 매개하는 항체의 능력을 감소시키고 및/또는 Fcγ 수용체에 대해 항체의 친화성을 감소시키도록 변형된다. 감소된 효과기 기능 및 특히 감소된 ADCC를 갖는 항체는 침묵 항체를 포함한다.
특정 구체예에서, IgG1 이소타입의 Fc 도메인이 사용된다. 일부 특정 구체예에서, IgG1 Fc 단편의 돌연변이 변이체, 예를 들어, 항체 의존적 세포성 세포독성(ADCC)을 매개하고 및/또는 Fcγ 수용체에 결합하는 융합 폴리펩타이드의 능력을 감소 또는 제거하는 침묵 IgG1 Fc가 사용된다. IgG1 이소타입 침묵 돌연변이의 예시는 IgG1이며, 여기서, 루신은 Hezareh et al. 의 J. Virol 2001 Dec;75(24):12161-8에서 기술된 바와 같이 아미노산 위치 234 및 235에서 알라닌으로 대체된다.
특정 구체예에서, Fc 도메인은 Fc 도메인의 위치 297에서 당화를 방해하는 침묵 Fc 돌연변이이다. 예를 들어, Fc 도메인은 위치 297에서 아스파라긴의 아미노산 치환을 포함한다. 그러한 아미노산 치환의 예시는 글리신 또는 알라닌에 의한 N297의 대체이다.
또 다른 구체예에서, 항체의 당화가 변형된다. 예를 들어, 당화되지 않은 항체가 제조될 수 있다(즉, 당화가 없는 항체). 당화는 예를 들어 항원에 대한 항체의 친화성을 증가하기 위해 변경될 수 있다. 그러한 탄수화물 변형은 예를 들어 항체 서열 내에서 하나 이상의 당화 부위를 변경하여 달성될 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 아미노산 치환이 만들어져 하나 이상의 가변 영역 프레임워크 당화 부위를 제거함으로써 그 부위에서의 당화를 제거할 수 있다. 그러한 비-당화는 항원에 대한 항체의 친화성을 증가시킬 수 있다. 그러한 접근법은 Co et al.의 미국 특허 제5,714,350호 및 제6,350,861호에서 보다 구체적으로 기술된다.
추가로 또는 대안으로, 항체는 당화의 변경된 유형, 예컨대 푸코실 잔기의 감소된 양을 갖는 하이포푸코실화 된 항체 또는 증가된 GlcNac 구조의 양분화를 갖는 항체를 갖도록 제조될 수 있다. 그러한 변경된 당화 패턴은 항체의 ADCC 능력을 증가시키는 것으로 입증되었다. 그러한 탄수화물 변형은 예를 들어 변경된 당화 기계를 갖는 숙주세포에서 항체를 발현시킴으로써 달성될 수 있다. 변경된 당화 기계를 갖는 세포는 종래 기술에 기술되어 있으며, 본 개시물의 재조합 항체를 발현하기 위한 숙주세포로서 사용되어 변경된 당화를 갖는 항체를 생산할 수 있다. 예를 들어, Hang et al.의 EP 1　176 195는 푸코실 트랜스퍼레이즈를 인코딩하는 기능적으로 붕괴된 FUT8 유전자를 갖는 세포주를 기술하며, 그러한 세포주에서 발현된 항체는 하이포푸코실화를 나타낸다. 따라서, 일 구체예에서, 본 개시물의 항체는 하이포푸코실화 패턴을 나타내는 세포주, 예를 들어 푸코실트랜스퍼레이즈를 인코딩하는 FUT8 유전자의 발현이 결핍된 포유동물 세포주에서 재조합 발현에 의해 생산된다. Presta의 PCT 공개 WO 03/035835는 푸코스가 Asn(297)-결합된 탄수화물에 부착하는 능력이 감소되어 그 숙주세포에서 발현된 항체의 하이포푸코실화를 유발하는 변이체 CHO 세포주, Lec13 세포를 기술한다(또한, Shields, R.L. et al., 2002 J. Biol. Chem. 277:26733-26740 참조). Umana et al.의 PCT 공개 WO 99/54342는 당단백질-변형된 글리코실 트랜스퍼라아제(예를 들어, beta(1,4)-N acetylglucosaminyltransferase III (GnTIII))를 발현하도록 가공된 세포주를 기술하며, 그 가공된 세포주에서 발현된 항체는 증가된 GlcNac 구조 양분화를 나타내어 항체의 증가된 ADCC 활성을 유발한다(또한, Umana et al., 1999 Nat. Biotech. 17:176-180 참조).
본 개시물에 의해 고려되는 본 명세서에서 항체의 다른 변형은 페길화 또는 헤실화 또는 연관된 기술이다. 항체는 예를 들어 항체의 생물학적 반감기(예를 들어, 혈청)를 증가하도록 페길화될 수 있다. 항체를 페길화하기 위해, 항체 또는 이의 단편은 전형적으로 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 예컨대 PEG의 반응성 에스테르 또는 알데히드 유도체와 하나 이상의 PEG 기가 항체 또는 항체 단편에 부착되는 조건 하에서 반응된다. 페길화는 반응성 PEG 분자(또는 유사한 반응성 수용성 고분자)와의 아실화 반응 또는 알킬화 반응에 의해 시행될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "폴리에틸렌 글리콜"은 다른 단백질을 유도체화하는데 사용되어 온 임의의 PEG의 형태, 예컨대 모노(C1-C10) 알콕시- 또는 아릴옥시-폴리에틸렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜-말레이미드를 포함하도록 의도된다. 특정 구체예에서, 페길화되는 항체는 당화되지 않은 항체이다. 단백질의 페길화 방법은 당업계에 공지되어 있으며, 본 개시물의 항체에 적용될 수 있다. 예를 들어, Nishimura et al. 의 EP 0 154 316 및 Ishikawa et al.의 EP 0 401 384를 참조할 것.
본 개시물에 의해 고려되는 항체의 다른 변형은 생성된 분자의 반감기를 증가하기 위한 혈청 단백질, 예컨대 인간 혈청 알부민 또는 이의 단편과 본 개시물의 항체의 적어도 항원-결합 영역의 컨쥬게이트 또는 단백질 융합이다. 그러한 접근법은 예를 들어 Ballance et al. EP 0　322 094에 기술된다.
다른 가능성은 생성된 분자의 반감기를 증가하기 위해 본 개시물의 항체의 적어도 항원-결합 영역과 혈청 단백질, 예컨대 인간 혈청 알부민과 결합할 수 있는 단백질의 융합이다. 그러한 접근법은 예를 들어 Nygren et al., EP 0 486　525에 기술된다.
하나의 특정 구체예에서, 본 개시물에 따른 항체의 효과기 기능 또는 보체 활성화 기능은 같은 이소타입의 야생형 항체에 비해 감소 또는 제거되어 있다. 일 양태에서, 효과기 기능은 항체의 당화의 감소, 자연적으로 감소 또는 제거된 효과기 기능을 갖는 이소타입으로의 항체 이소타입의 변형, 및 Fc 영역의 변형으로부터 선택된 방법에 의해 감소 또는 제거된다. 특히 관련된 구체예에서, 감소 또는 제거된 효과기 기능을 갖는 상기 이소타입은 IgG4 이소타입이다.
본 개시물의 항체의 생산
본 개시물의 항체는 당업자에게 공지된 전통적인 기술을 이용하여 얻을 수 있다. 본 개시물의 항체를 인코딩하는 핵산 그리고 이들 항체를 생산하는 트랜스펙토마스(transfectomas)의 생성에 관한 더 많은 정보를 위해, 당업자는 또한 국제출원 제PCT/EP2016/067465호를 참조할 수 있다.
링커
본 개시물의 ADC는 3개의 상이한 링커, L, Z 및 X를 포함한다. 이들 3개의 링커가 함께 결합된 일반 식은 화학식 V로 표현된다. 링커들은 항체 및 약물 사이를 결합하도록 한다. 바람직하게는, 결합은 공유적이다. 따라서, 본 발명의 한 구체예에서, D는 X에 공유적으로 결합되고 및/또는 X는 Z에 공유적으로 결합되며 및/또는 Z는 L에 공유적으로 결합되고 및/또는 L은 Ab에 공유적으로 결합된다. 보다 바람직하게는, D는 X에 공유적으로 결합되고 X는 Z에 공유적으로 결합되며 Z는 L에 공유적으로 결합되고, L은 Ab에 공유적으로 결합된다.
L은 화학식 II 또는 IV의 링커 분자이며, 여기서, n은 2 내지 20이 포함된 정수이다. L은 PEG-아릴프로피올로니트릴(PEG-arylpropiolonitril)이며, "APN"으로도 불린다. 본 명세서에서 개시된 바와 같이, 따라서, n은 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20을 포함한다. L은 넓은 범위의 조건에서 ADC의 안정성을 부여한다. L에 관한 자세한 정보는 PCT/EP2014/064387에 개시된다.
다른 구체예와 조합될 수 있는 한 구체예에서, L은 적어도 하나의 티올 모이어티(항체의 시스테인으로부터)에 의해 항체에 결합된다. 한 구체에에서, L 및 항체 간의 결합은 화학식 II 또는 IV에서 이중결합 C=C 쪽에 있다.
Z는 L에 결합된 발린-시트룰린의 디펩타이드이다. Z는 L에서 카르보닐기(즉, 카르보닐 작용기) 쪽에서 L에 결합된다. 한 구체예에서, L 및 Z 간의 결합은 L의 카르보닐기 및 Z의 아미노 작용기(예를 들어, 발린의 아미노 작용기) 사이에 일어난다. 디펩타이드 VC는 절단가능한 링커이다. 절단가능한 링커는 혈류에서의 상태 및 표적 세포(특히 암세포) 내 세포질 상태 간의 차이를 이용한다. 디펩타이드 VC는 리소좀 프로테아제, 예컨대 카뎁신 B에 의해 리소좀 내 산성 환경에서 절단된다. 표적 세포에서 ADC의 내재화 후, Z 및 X 사이에 카뎁신 B에 의한 세포내 절단 메카니즘이 있다(예를 들어, 아민 작용기 쪽에서 시트룰린 및 아미노벤질 에스테르 자기-희생기 사이의 절단)(화학식 VII에서
Figure pct00006
참조):
[화학식 VII]
Figure pct00007
생성된 X-약물은 안정한 중간체가 아니며 자발적으로 제거되어 약물이 산물로 남는다(즉, 1,6-제거(자기-희생))). 카뎁신 B에 의한 세포내 절단 메카니즘으로서 발린-시트룰린 디펩타이드에 관한 자세한 정보는 예를 들어, Dubowchik GM, Firestone RA, Padilla L, Willner D, Hofstead SJ, Mosure K, et al. Bioconjug Chem.　2002;13:855-69를 참조할 것.
X는 화학식 III의 Z에 결합된 아미노벤질 에스테르 자기-희생기이다. X는 Z의 카르복실기(즉, 카르보닐 작용기) 쪽에서 Z에 결합된다. 한 구체예에서, Z 및 X 간의 결합은 Z의 카르보닐기 및 X의 아미노 작용기 사이에서 일어난다. 아미노벤질 에스테르 자기-희생기에 관한 자세한 정보는 WO 03/026577 또는 WO 2004/010957를 참조할 것. 따라서, 본 명세서에서 개시된 바와 같이, X는 (i) 적어도 2개의 다른 화학 모이어티를 안정한 분자(특히 D 및 Z)에 공유적으로 함께 결합할 수 있고, (ii) 효소적 절단에 의해 분자로부터 이격된 화학 모이어티 중 하나로부터 방출될 수 있으며(카뎁신 B에 의한 절단 후, X-D가 방출됨), 및 (iii) 효소적 절단에 이어서, 분자의 나머지로부터 자발적으로 절단하여 이격된 화학 모이어티의 다른 것을 방출할 수 있는(마지막으로 D가 방출됨) 이기능성 화학 모이어티 스페이서이다.
페이로드(payload)
일 구체예에서, 본 개시물의 D는 X의 카르보닐 작용기 쪽에서 X에 결합되는 페이로드이다. 한 구체예에서, X 및 D 간의 결합은 X의 카르보닐 작용기 및 D의 아미노기 사이에서 일어난다.
특정 구체예에서, 본 개시물의 ADC에서 D는 세포독성 약물이다.
한 구체예에서, 세포독성 약물은 탁손, 사이토찰라신 B, 아우리스타틴, 그라미시딘 D, 에티디움 브로마이드, 이메틴, 마이토마이신, 에토포사이드, 테노포사이드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 콜키친, 독소루비신, 다우노루비신, 디하이드록시 안트라신 디온, 미토잔트론, 미트라마이신, 악티노마이신 D, 1-디하이드로테스토스테론, 글루코코티코이드, 프로카인, 테트라카인, 리도카인, 프로프라놀롤 및 푸로마이신 및 이의 유사체 또는 상동체로 구성된 군으로부터 선택된다. 이것은 또한 항대사산물(에를 들어, 메토트렉세이트, 6-머캅토퓨린, 6-티오구아닌, 시타라빈, 5-플루오로우라실 디카바진), 흡열제(ablating agent)(예를 들어, 메클로레타민, 티오에파 클로락신부실, 메이팔란, 카르무스틴(BSNU) 및 로무스틴(CCNU), 시클로토스파미드, 부술판, 디브로모만니톨, 스트렙토조토신, 마이토마이신 C 및 시스-디클로로디아민 플라티넘(II) (DDP), 시스플라틴, 안트라사이클린(예를 들어, 다우노루비신(이전의 다우노마이신) 및 독소루비신), 항생제(예를 들어, 닥티노마이신(이전의 악티노마이신), 블레오마이신, 미트라마이신, 및 안트라마이신(AMC)), 및 항유사분열제(예를 들어, 빈크리스틴 및 빈블라스틴)을 포함한다. 바람직하게는, 약물은 모노메틸 아우리스타틴 E이다.
본 개시물의 ADC
한 구체예에서, 본 개시물은 항-TfR 항체가 약물(특히 MMAE)에 결합된 ADC를 제공한다. 링커는 상기 정의된 바와 같은 분자 L, Z 및 X이다. 바람직하게는, 그러한 ADC는 선택적으로 유효량의 MMAE를 TfR을 발현하는 종양 조직으로 전달할 수 있다.
한 구체예에서, 본 개시물은 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 ADC를 제공한다.
보다 바람직한 구체예에서, 본 개시물의 ADC는 다음과 같다:
- Ab는 상기 정의된 바와 같은 항-TfR 항체, 특히 mAb1이다.
- L은 상기 항체에 결합된 링커 분자이며, 상기 링커 분자는 화학식 IV이다.
- Z는 L에 결합된 발린-시트룰린의 디펩타이드이다.
- X는 Z에 결합되며, 화학식 III의 파라-아미노벤질 에스테르 자기-희생기이며, m은 0이다.
- D는 X에 결합된 약물, 특히 MMAE이다.
다른 보다 바람직한 구체예에서, "INA01-SDV1"라 불리는 본 개시물의 ADC는 다음과 같다:
- Ab는 SEQ ID NO:18로 표현되는 중쇄 및 SEQ ID NO:17로 표현되는 경쇄를 특징으로 하는 항-TfR 항체 mAb1이다.
- L은 상기 항체에 결합된 링커 분자이며, 상기 링커 분자는 화학식 IV이다.
- Z는 L에 결합된 발린-시트룰린의 디펩타이드이다.
- X는 Z에 결합되며, 화학식 III의 파라-아미노벤질 에스테르 자기-희생기이며, m은 0이다.
- D는 MMAE이다.
도 1은 "INA01-SDV1" 또는 "INA01-SDV#1"로 명명된 본 개시물의 바람직한 ADC 중 하나의 개략도를 나타낸다. 인간화 항체 INA01(Ab)에 시스테인 잔기를 통해 링커 APN(L), 효소 카뎁신 B에 의해 절단될 수 있는 디펩타이드 서열 발린-시트룰린(Z), 화학식 III의 파라-아미노벤질 에스테르(여기서 m은 O)(X) 및 세포독성 모노메틸 아우리스타틴 E 'MMAE'(D)가 부착되었다.
약물 대 항체의 비율은 특정 ADC에 대해 정확한 값을 갖지만, 그 값은 종종 많은 ADC를 포함하는 샘플을 기술하는데 사용될 때 전형적으로 컨쥬게이션 단계와 관련된 어느 정도의 불균일성으로 인해 평균값인 것으로 이해될 것이다. ADC의 샘플에 대한 평균 로딩은 본 명세서에서 약물 대 항체의 비율로 또는 "DAR"로 지칭된다. 일부 구체예에서, DAR은 약 1 및 약 8 사이(즉, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5 및 8), 바람직하게는 평균 약 4이다.
약학적 조성물-제형
다른 양태에서, 본 개시물은 본 명세서에서 개시된 ADC 단독 또는 조합을 포함하는 조성물, 예를 들어, 약학적 조성물을 제공한다(예를 들어, 화학식 IV의 링커 분자에 결합된, 그 자체로 Z에 결합된, 그 자체로 화학식 III의 파라-아미노벤질 에스테르 자기-희생기(m은 0)인 X에 결합된 mAb1-mAb16, 특히 mAb1로 구성된 군으로부터 선택된 하나의 ADC는 약학적으로 허용가능한 담체와 함께 제형화된다)
바람직한 구체예에서, 본 개시물의 조성물(예를 들어, 제형)은 (i) 본 명세서에서 개시된 ADC 단독 또는 조합(예를 들어, 화학식 IV의 링커 분자에 결합된, 그 자체로 Z에 결합된, 그 자체로 화학식 III의 파라-아미노벤질 에스테르 자기-희생기(m은 0)인 X에 결합된, 그 자체로 MMAE와 같은 약물에 결합된 mAb1-mAb16, 특히 mAb1로 구성된 군으로부터 선택된 하나의 ADC), (ii) 히스티딘, (iii) 및 선택적으로 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하며, 상기 조성물의 pH는 6.5이다. 다른 구체예에서, 본 개시물의 조성물(예를 들어, 제형)은 (i) 본 명세서에서 개시된 ADC 단독 또는 조합, (ii) 히스티딘, (iii) 수크로스, (iv) 폴리소르베이트 80을 포함하고, 상기 조성물의 pH는 6.5이다. 바람직하게는, 히스티딘의 몰 농도는 20 mM이다. 다른 구체예에서, 본 개시물의 조성물(예를 들어, 제형)은 (i) 본 명세서에서 개시된 ADC 단독 또는 조합, (ii) 20 mM의 히스티딘, (iii) 6% 수크로스(100 mL의 완충액에 대해 6g), (iv) 0.02% 폴리소르베이트 80을 포함하고, 상기 조성물의 pH는 6.5이다. 바람직하게는, 그러한 조성물은 40℃에서 안정하며, 이는 ADC의 평균 DAR이 4 내지 4.5를 유지한다는 의미이다. pH는 당업자에게 공지된 임의의 기술에 의해 측정될 수 있다.
본 명세서에서 개시된 약학적 조성물은 병용요법, 즉 다른 약제와 함께 조합되어 투여될 수 있다. 예를 들어, 병용요법은 적어도 하나의 항-바이러스, 항-염증 또는 다른 항-증식제와 조합된 본 개시물의 ADC를 포함할 수 있다. 병용요법에 사용될 수 있는 치료제의 예시는 아래 본 개시물의 ADC의 용도에 대한 섹션에서 더 구체적으로 기술된다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "약학적으로 허용가능한 담체"는 생리학적으로 적합한 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 항균 및 항진균제, 등장성 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 담체는 정맥내, 근육내, 피하, 비경구, 척추 및 표피 투여(예를 들어, 주사 또는 주입에 의해)에 적합해야 한다. 일 구체예에서, 담체는 피하 경로에 적합해야 한다. 투여 경로에 따라, 활성 화합물, 즉 ADC는 화합물을 불활성시킬 수 있는 산의 작용 및 다른 자연 조건으로부터 화합물을 보호하기 위해 물질로 코팅될 수 있다. 멸균 인산염 완충된 식염수는 약학적으로 허용가능한 담체의 한 예시이다. 다른 적당한 담체는 당업자에게 잘 알려져 있다(예를 들어, Gennaro (ed.), Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company, 19th ed. 1995) 참조). 제형은 추가로 하나 이상의 부형제, 보존제, 가용화제, 완충제, 알부민을 포함하여, 바이알 표면에서 단백질 손실 등을 방지할 수 있다.
약학적 조성물의 형태, 투여 경로, 투여량 및 요법은 물론 치료할 상태, 질병의 중증도, 연령, 체중 및 환자의 성별 등에 따라 달라진다.
본 개시물의 약학적 조성물은 국소, 경구, 비경구, 복강내, 비강내, 정맥내, 근육내, 피하 또는 안내 투여 등, 바람직하게는 복강내 또는 정맥내 투여용으로 제형화될 수 있다.
바람직하게는, 약학적 조성물은 주사될 수 있는 제형에 대해 약학적으로 허용가능한 비히클을 포함한다. 이들은 특히 등장성, 멸균, 식염수(모노소듐 또는 다이소듐 포스페이트, 소듐, 포타슘, 칼슘 또는 마그네슘 클로라이드 등 또는 그러한 염의 혼합물)일 수 있거나, 또는 건조, 특히 동결-건조된 조성물일 수 있으며, 경우에 따라 멸균수 또는 생리 식염수를 첨가하면 주사액의 구성이 가능하다.
투여에 사용된 용량은 다양한 파라미터의 함수, 특히 사용된 투여 방식, 관련 병리, 또는 대안으로 원하는 치료 기간의 함수로 조정될 수 있다.
약학적 조성물을 제조하기 위해, ADC의 유효량은 약학적으로 허용가능한 담체 또는 수용성 매질에 용해 또는 분산될 수 있다.
주사 용도에 적합한 약학적 형태는 멸균 수용액 또는 분산액; 참기름, 땅콩유 또는 수용성 프로필렌 글리콜을 포함하는 제형; 및 멸균 주사액 또는 분산액의 즉석 제제를 위한 멸균 분말 또는 동결 건조물을 포함한다. 모든 경우에, 그 형태는 멸균되어야 하며, 주사가 용이할 정도로 유동적이어야 한다. 제조 및 저장 조건 하에서 안정해야 하며, 세균 및 진균과 같은 미생물의 오염 작용에 대해 보존되어야 한다.
유리 염기 또는 약리학적으로 허용가능한 염으로서 활성 화합물의 용액은 히드록시프로필셀룰로스와 같은 계면활성제와 적절히 혼합된 물에서 제조될 수 있다. 분산액은 또한 글리세롤, 액상의 폴리에틸렌 글리콜 및 이들의 혼합에서 및 오일에서 제조될 수 있다. 일반적인 저장 및 사용 조건에서, 이들 제제는 미생물의 성장을 방지하는 보존제를 포함한다.
본 개시물의 ADC는 중성 또는 염의 형태로 조성물로 제형화될 수 있다. 약학적으로 허용가능한 염은 산 부가 염(단백질의 유리 아미노기로 형성됨)을 포함하고, 예를 들어, 염산 또는 인산과 같은 무기산 또는 아세트산, 옥살산, 타르타르산, 만델산 등과 같은 유기산으로 형성된다. 유리 카르복실기로 형성된 염은 또한 예를 들어 소듐, 포타슘, 암모늄, 칼슘 또는 하이드록사이드와 같은 무기 염기 및 이소프로필아민, 트리메틸아민, 히스티딘, 프로카인 등과 같은 유기 염기로부터 유래될 수 있다.
담체는 또한 예를 들어 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액상 프로필렌 글리콜 등), 이들의 적당한 혼합 및 식물성 오일을 포함하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 적당한 유동성은 예를 들어 레시틴과 같은 코팅제의 이용, 분산의 경우 필요한 입자 크기의 유지 및 계면활성제의 이용에 의해 유지될 수 있다. 미생물의 작용의 방지는 다양한 항세균제 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르브산, 티메로살 등에 의해 야기될 수 있다. 많은 경우에서, 등장제, 예를 들어 당 또는 소듐 클로라이드를 포함하는 것이 바람직할 것이다. 주사가능한 조성물의 연장된 흡수는 흡수를 지연시키는 약제, 예를 들어 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴의 조성물에 사용하여 야기될 수 있다.
멸균 주사 용액은 필요에 따라 상기 열거된 다양한 다른 성분들과 함께 적당한 용매에 필요한 양의 활성 화합물을 혼입하고 여과 멸균하여 제조된다. 일반적으로, 분산액은 기본 분산 매질 및 상기 나열된 것들 중 필요한 다른 성분들을 포함하는 멸균 비히클에 다양한 멸균된 활성 성분들을 혼합하여 제조된다. 멸균 주사 용액을 제조하기 위한 멸균 분말의 경우에, 바람직한 제조 방법은 진공-건조 및 동결-건조 기술이며, 이는 활성 성분의 분말과 이전에 멸균-여과된 용액으로부터 임의의 추가의 원하는 성분을 생성한다.
용매로 DMSO가 사용되면 매우 빠르게 침투하여 작은 종양 영역에 고농도의 활성제를 전달할 수 있는 직접 주사를 위한 더 많거나 또는 매우 농축된 용액의 제조도 고려된다.
제형화 시, 용액은 투여 제형과 양립할 수 있는 방식으로 및 치료적으로 유효한 양으로 투여될 것이다. 제형은 상기 기술된 주사가능한 용액의 유형과 같은 다양한 투여 형태로 쉽게 투여되지만 약물 방출 캡슐 등이 사용될 수도 있다.
수용액에서의 비경구 투여를 위해, 예를 들어, 용액은 필요한 경우 적당히 완충되어야 하며, 액체 희석제는 우선 충분한 식염수 또는 글루코스로 등장성이 되도록 해야 한다. 이들 특정 수용액은 특히 정맥내, 근육내, 피하 및 복강내 투여에 적합하다. 이와 관련하여, 사용될 수 있는 멸균 수용성 매질은 본 개시물의 내용에 비추어 당업자에게 공지될 것이다. 예를 들어, 1회 투여량은 등장성 NaCl 용액 1 mL에 용해될 수 있으며, 피하 유체 1000 mL에 첨가되거나 또는 제안된 주입 부위에 주사될 수 있다(예를 들어, "Remington's Pharmaceutical Sciences" 15th Edition, pages 1035-1038 and 1570-1580 참조). 투여량에서의 일부 변형은 치료받는 대상체의 상태에 따라 필연적으로 발생할 것이다. 투여 책임자는 어떠한 경우에도 개별 대상체를 위한 적당한 용량을 결정할 것이다.
본 개시물의 ADC는 용량 당 약 0.0001 내지 1.0 mg, 또는 약 0.001 내지 0.1 mg 또는 약 0.1 내지 1.0 또는 심지어 1.0 내지 약 10 mg을 포함하도록 치료 혼합물 내에 제형화될 수 있다. 여러 번 투여될 수도 있다.
정맥내 또는 근육내 주사와 같은 비경구 투여를 위해 제형화된 화합물에 추가하여, 다른 약학적으로 허용가능한 형태는 예를 들어 구강 투여용 정제 또는 다른 고체; 서방성 캡슐; 및 현재 사용되는 임의의 다른 형태를 포함한다.
특정 구체예에서, 리포좀 및/또는 나노입자의 사용이 고려될 수 있다. 리포좀 및/또는 나노입자의 제형 및 사용은 당업자에게 공지되어 있다.
나노캡슐은 일반적으로 안정하고 재현가능한 방식으로 화합물을 포획할 수 있다. 세포 내 고분자 과부하로 인한 부작용을 피하기 위해, 그러한 초미립자(약 0.1 ㎛의 크기)는 일반적으로 인 비보에서 분해될 수 있는 고분자를 이용하도록 설계된다. 이들 요건을 충족하는 생분해성 폴리알킬시아노아크릴레이트 나노입자가 본 개시물에서 사용하기 위해 고려되며, 그러한 입자는 쉽게 제조될 수 있다.
리포좀은 수용성 매질에서 분산되는 인지질로부터 형성되고, 자발적으로 다중막 동심 이중층 소포체(다중막 소포체(multilamellar vesicles(MLVs))라고도 함)를 형성한다. MLVs는 일반적으로 25 nm 내지 4 ㎛의 직경을 갖는다. MLVs의 초음파처리는 코어에 수용액을 포함하는 200 내지 500 Å 범위의 직경을 갖는 작은 단일막 소포체(unilamellar vesicles(SUVs))를 형성한다. 리포좀의 물리적 특성은 pH, 이온 강도 및 2가 양이온의 존재에 따라 달라진다.
본 개시물의 ADC의 용도 및 방법
본 개시물의 ADC는 인 비트로 및 인 비보 진단 및 치료 유용성을 갖는다. 예를 들어, 이들 분자는 배양 중인 세포, 예를 들어 인 비트로 또는 인 비보, 또는 대상체에서, 예를 들어 인 비보에서 다양한 장애를 치료, 예방 또는 진단하기 위해 투여될 수 있다.
본 개시물의 ADC는 세포 증식을 억제할 뿐만 아니라 고도의 증식성 세포, 예컨대 활성화 T 세포의 세포사멸을 유도할 수 있다.
의약으로서 특히 세포 증식성 장애, 예컨대 높은 수준의 TfR을 발현하는 종양, 보다 구체적으로, 림프종과 같은 혈액 종양, 및 특히 ATL, MCL, 호지킨병, 거대 B 세포 림프종, 말초 T 세포 림프종, 급성 백혈병(골수성 및 림프성) 그리고 고형 종양, 예컨대 신장 암종, 폐암(소세포), 유방암 등을 치료, 예방 또는 진단하는데 사용하기 위해 본 개시물의 ADC를 사용하는 것이 본 명세서에서 고려된다.
고형 종양의 치료에 사용하기 위한 본 개시물의 ADC가 추가로 개시된다.
상기 개시된 바와 같이 사용하기 위한 ADC는 유일한 유효 성분으로서 또는 예를 들어 다른 약물, 예를 들어, 상기 언급된 질환의 치료 또는 예방을 위해 예를 들어, 항-바이러스제, 항-염증제 또는 세포독성제, 항-증식제, 화학요법제 또는 항종양제에 대한 어쥬번트로서 또는 조합하여 투여될 수 있다. 예를 들어, 상기 개시된 바와 같이 사용하기 위한 ADC는 AZT, IFN-알파, 항-CD20 mAb, 항-CD25 mAb, 항-PD1 mAb, 항-PDL-1 mAb, 화학요법제와 조합하여 사용될 수 있다. 적당한 항신생물제는 알킬화제(예컨대 시클로포스파미드, 메클로레타민, 클로람부실, 멜팔란, 니트로수레아스, 테모졸로미드), 안트라사이클린(예컨대 다우노루비신, 독소루비신, 에피루비신, 이다루비신, 미톡산트론, 발루비신), 탁산(예컨대 파클리탁셀, 도세탁셀), 에포틸론, 토포이성질화효소 I 억제제(예컨대 이리노테칸 또는 토포테칸), 토포이성질화효소 II 억제제(예컨대 에토포사이드, 테니포사이드 또는 타플루포사이드), 뉴클레오티드 유사체 및 전구체 유사체(예컨대 아자시티딘, 아자티오프린, 카페시타빈, 시타라빈, 플루오로우라실, 겜시타빈, 히드록시우레아, 머캅토푸린, 메토트렉세이트, 또는 티오구아닌), 펩타이드 항생제(예컨대 카보플라틴, 시스플라틴 및 옥살리플라틴), 레티노이드(예컨대 트레티노인, 알리트레티노인, 벡사로텐), 빈카알칼로이드 및 유도체(예컨대 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 비노렐빈), 키나아제 억제제와 같은 표적화 치료(예컨대 이브루티닙, 이델라리십, 엘로티닙, 제피티닙, 이마티닙, 베무라페닙, 비스모데깁), 프로테아좀 억제제(예컨대 보르테조밉, 카르필조밉), 히스톤 디아세틸라아제 억제제(예컨대 포리노스타트 또는 로미뎁신)을 포함할 수 있으나 제한되지는 않는다.
전술한 내용에 따라, 본 개시물은 또 다른 추가 양태에서 본 개시물의 ADC의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.
전술한 내용에 따라, 본 개시물은 또 다른 추가 양태에서 본 개시물의 ADC의 치료적 유효량 및 적어도 하나의 제2 약물 물질을 예를 들어 동시에 또는 순차적으로 공동-투여하는 것을 포함하는 방법을 제공하며, 상기 제2 약물 물질은 예를 들어, 상기 표시된 대로 항-바이러스제 또는 항-증식제이다.
본 개시물의 범위 내에는 또한 본 명세서에서 개시된 조성물(예를 들어, ADC를 포함하는) 및 사용설명서로 구성된 키트가 있다. 키트는 적어도 하나의 추가 시약, 또는 하나 이상의 추가 항체 또는 단백질(예를 들어, 제1 항체와 다른 표적 항원의 에피토프에 결합하는 상보적인 활성을 갖는 항체)를 더 포함할 수 있다. 키트는 전형적으로 키트의 내용물의 의도된 용도를 나타내는 라벨을 포함한다. 용어 라벨은 키트 상에 또는 키트와 함께 제공되거나, 키트와 함께 제공되는 임의의 서면, 또는 기록된 자료를 포함한다. 키트는 상기 정의된 바와 같이 환자가 ADC 치료에 반응할 그룹에 속하는지 여부를 진단하기 위한 도구를 더 포함할 수 있다.
본 개시물의 ADC의 제조 공정
본 개시물의 항체는 당업계에 공지된 임의의 기술에 의해 링커 L-Z-X에 의해 적어도 하나의 약물에 컨쥬게이트될 수 있다. 그러한 기술은 예를 들어, US 7,811,572; US 7,368,565; US 2011/0003969; US 2011/0166319; US 2012/0253021 및 US 2012/0259100에 기재된다. 치료제를 항체에 컨쥬게이트하는 방법에 관한 자세한 정보는 또한 항체 약물 컨쥬게이트에 관한 검토에 대한 Panowksi S et al. 2014 Jan 1; 6(1): 34-45를 참조할 것.
한 구체예에서, 본 개시물의 ADC의 획득 공정은 다음의 단계를 포함한다:
- 상기 정의된 바와 같은 항체를 인코딩하는 핵산을 발현하는데 적합한 조건 하에서 숙주세포를 배양하는 단계,
- 항체를 분리하는 단계,
- 화학식 V의 링커 L-Z-X에 결합된 모노메틸 아우리스타틴 E의 합성 단계,
- 상기 항체를 화학식 V의 링커 L-Z-X에 결합된 모노메틸 아우리스타틴 E에 컨쥬게이션 시키는 단계.
항체는 상기 설명된 바와 같이 획득될 수 있다. 항체는 잠재적인 컨쥬게이션 부위로서 사용될 수 있는 4개의 사슬간 이황화 결합을 포함한다. 4개의 사슬간 이황화 결합은 예를 들어 트리스(2-카르복시에틸)포스핀(TCEP) 또는 디티오트레이톨(DTT)에 의해 환원될 수 있으며, 이는 컨쥬게이션에 이용될 수 있는 8개의 티올기를 생성한다.
링커 L은 PCT/EP2014/064387에 개시된 바와 같이 획득될 수 있다. 링커 X는 WO 03/026577 또는 WO 2004/010957에 개시된 바와 같이 획득될 수 있다. 링커 Z는 그것을 획득하는 방법을 아는 당업자에게 또한 잘 알려져 있다.
완전히 기술된 본 발명은 이제 다음 실시예에 의해 추가로 설명되며, 단지 예시일 뿐 추가로 제한하는 것을 의미하지는 않는다.
<실시예 1> 조혈세포주에서 A24 및 INA01-SDV1 간의 결합 비교
비오틴화 된 항체 둘 다(항체 A24 및 ADC INA01-SDV1의 항체)의 연속 희석(5 내지 0.05 ㎍/mL)이 수행되었고, THP-1 및 MEC-1 세포주에서 인큐베이션 되었다. 희석된 항체의 결합은 스트렙타비딘 알렉사 F488(ThermoFisher scientific에서 구입 가능)을 이용한 유세포 분석법에 의해 검출되었다.
A24 및 INA01-SDV1 둘 다 CD71+ 세포주에 대해 동일한 친화성을 보여준다(도 2A 및 2B).
<실시예 2> 세포사멸
CHO 세포는 인간 CD71로 형질감염되었고, 클론은 FACS에 의해 선별되었다. 네이티브 CHO 세포(인간 CD71에 대해 음성) 및 hCD71 양성 세포는 37℃에서 완전 배지에서 96시간 동안 여러 농도의 INA01-SDV#1과 인큐베이션 되었다. 4일째에 세포는 아넥신 V 및 Topro 3와 인큐베이션 되었다. 세포사멸성 세포는 이중 양성 아넥신 V/Topro 3 세포로서 FACS에 의해 측정되었다.
결과는 도 3A 및 3B에 도시된다. 막대는 세포사멸성 세포의 비율을 나타낸다.
<실시예 3> 여러 세포주에서 INA01-SDV#1의 인 비트로 효능
세포 증식의 억제는 Promega 사의 세포 생존능 분석 CellTiter-Glo®를 사용하여 제조업체의 프로토콜에 따라 측정되었다. 간단히 말해, 세포를 48-웰 플레이트에 위치시키고, INA01-SDV1의 농도를 높이면서(0 내지 20 ㎍/mL) 있거나 없이 96시간 동안 인큐베이션 하였다.
결과는 도 4A 및 4B에 도시된다. 세포 생존능은 Ramos 및 THP-1 세포주 둘 다에서 손상되었다.
<실시예 4> INA01-SDV1의 인 비보 효능
INA01-SDV#1의 인 비보 효능을 평가하기 위해, 누드 마우스에 5×106 THP-1 세포를 피하 주사하였다. 종양이 100 mm3에 도달할 때, 마우스에 5 mg/kg, 0.5 mg/kg 또는 PBS를 복강내 치료 모드로 주사하였다. 종양 성장은 매일 모니터링하고, 마우스는 종양이 1000 mm3에 도달할 때 희생시켰다.
도 5의 데이터는 INA01-SDV#1의 단일 주사 후 며칠 동안 마우스의 생존을 나타낸다.
<실시예 5> 독성 분석
INA01-SDV#1의 독성 분석은 야생형 B6(WT) 마우스 및 CD71/트랜스페린 이중 노킹 마우스(TfR/Tf 2Ki)에서 평가되었다. 마우스는 4일 마다 3 mg/kg의 INA01-SDV#1로 5회 IP 주사되었고, 마지막 주사 후 2일에 희생되었다.
도 6은 WT(도 6A) 및 TfR/Tf 2Ki 마우스(도 6B)에서 거시적 장기 분석을 나타낸다. 표 7은 도 6A 및 도 6B에 묘사된 각 장기의 독립적인 병리학적 분석을 나타낸다.
도 6A 및 도 6B에 묘사된 각 장기의 독립적인 병리학적 분석
유전자형 야생형 마우스 TfR/Tf KI 마우스
처리 4일 마다 3 mg/kg을 5회 주사 4일 마다 3 mg/kg을 5회 주사
신장 N/A N/A
심장 일부 분산된 핵에서의 불규칙성.
세포 밀도에서의 일부 불규칙성		 일부 분산된 핵에서의 불규칙성.
세포 밀도에서의 일부 불규칙성
비장 적색 수질에서 작은 혈구생성 적색 수질에서 작은 혈구생성
폐 일부 대식세포 일부 대식세포
간 작은 혈구생성
괴사 없음
지방증 없음
섬유증 없음		 작은 혈구생성
괴사 없음
지방증 없음
섬유증 없음
뇌 N/A N/A
<실시예 6> 제형
4개의 상이한 제형이 비교되었다. 제형 1 및 2 그리고 제형 3 및 4는 그들의 pH 만 상이하다. 제형은 ADC, 20 mM 히스티딘 또는 20 mM 시트레이트, 6% 수크로스(완충액 100 mL 당 6g) 및 0.02% 폴리소르베이트 80를 포함한다. 제형 1은 본 개시물에 따른 ADC, 특히 INA01 및 히스티딘을 포함하며, 이 제형의 pH는 5.5이다. 제형 2는 본 개시물에 따른 ADC, 특히 INA01 및 히스티딘을 포함하며, 이 제형의 pH는 6.5이다. 제형 3은 본 개시물에 따른 ADC, 특히 INA01 및 시트레이트를 포함하며, 이 제형의 pH는 5.5이다. 제형 4는 본 개시물에 따른 ADC, 특히 INA01 및 시트레이트를 포함하며, 이 제형의 pH는 6.5이다.
결과는 아래 표 8에 묘사된다. 그들은 5℃/40℃에서 T=0 및 T=2 주 저장 및 5℃/25℃에서 T=4 주 저장에서 제형 1 내지 4에 대한 DAR(약물 항체 비율) 값을 나타낸다. 40℃에서, 제형 2를 제외하고 DAR 값의 전체 감소가 측정된다. 이들 결과는 제형 2가 제형 1, 3 및 4와 비교하여 안정함을 보여준다.
4개 제형의 비교
샘플 T=0 T=2 주 T=4 주
제형 1(히스티딘, pH5.5) 4.2 4.1 (5℃) 4.3 (5℃)
3.6 (40℃) 4.3 (25℃)
제형 2(히스티딘, pH6.5) 4.2 4.1 (5℃) 4.3 (5℃)
4.0 (40℃) 4.3 (25℃)
제형 3(시트레이트, pH5.5) 4.2 4.1 (5℃) 4.2 (5℃)
2.1 (40℃) 4.2 (25℃)
제형 4(시트레이트, pH6.5) 4.1 4.1 (5℃) 4.3 (5℃)
3.8 (40℃) 4.3 (25℃)
<실시예 7> IC50의 측정
HL-60 급성 골수성 백혈병 세포주(즉, CD71을 발현하는 세포)를 37℃에서 0.02 내지 10 ㎍/mL의 10개 농도의 INA01-SDV#1와 인큐베이션 하였다. 세포 증식에 대한 ADC의 효과는 도 7에 도시된다. 적합 곡선은 IC50를 계산하는데 사용되었다. 따라서, 계산된 INA01-SDV#1의 IC50은 0.08 ㎍/mL이다.
<실시예 8> TNF-α의 분비
INA01-SDV#1이 환자에서 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 유도할 수 있는지를 평가하기 위해, 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)에 의한 TNF-α 분비를 시험하였다. TNF-α 생성은 상이한 농도의 ADC를 나타내는 3개의 상이한 조건에서 PBMC와 INA01-SDV#1의 인큐베이션 후 시험되었다: 고도로 코팅됨(공기중 건조), 낮게 코팅됨(습식-코팅) 또는 용액으로(수성).
재료 및 방법
PBMC를 Ficoll에 의해 분리하고, 여러 활성화 과정에 대해 이전에 보고된 바와 같이 공기중 건조된, 습식-코팅된 또는 수용액의 INA01-SDV#1 0.1, 1 또는 10 ㎍/mL이 첨가된 배양 배지에서 현탁되었다(Findlay L et al. J. Immunol. Meth 2008; Stebbings R et al. J. Immunol. 2007). 37℃에서 24시간 동안 인큐베이션 후, TNF-α는 ELISA에 의해 평가되었다. 천연 및 재조합 인간 TNF-α를 측정하기 위해 샌드위치 ELISA의 개발에 필요한 기본 성분들을 포함하는 DuoSet ELISA 개발 키트를 사용하였다.
INA01-SDV#1 코팅
INA01-SDV#1는 3개의 상이한 프로토콜에서 PBMC에 제공된다: 공기중 건조, 습식-코팅 또는 수용액.
- 공기중 건조: INA01-SDV#1를 50 ㎕로 5x 작업 농도로 첨가하였다(최종 농도 0.1, 1 및 10 ㎍/mL). 플레이트는 후드 하에서 밤새도록 유지되고 나서 2회 세척되었다.
- 습식-코팅: INA01-SDV#1를 200 ㎕로 5x 작업 농도로 첨가하였다(최종 농도 0.1, 1 및 10 ㎍/mL). 건조를 피하기 위해 웰을 테이프로 붙였으며, 이후 2회 세척되었다.
- 수용액: PBMC 및 INA01-SDV#1를 배양 배지에서 함께 배양하였다.
결과
결과는 도 8에 있으며, TNF-α는 모든 INA01-SDV#1 인큐베이션 조건에서 PBMC에서 방출되지 않음을 보여준다. 그러나, 1 ng/mL의 LPS와의 24시간 인큐베이션으로 TNF-α가 강하게 방출되었다.
<실시예 9> IP 투여 후 INA01-SDV#1의 인 비보 효능
INA01-SDV#1의 인 비보 효능을 평가하기 위해, 누드 마우스에 5x106 THP-1 세포를 피하 주사하였다. 종양이 100 mm3에 도달할 때, 마우스에 치료 모드로 4일 마다 4회 투여로 1 mg/kg, 0.5 mg/kg 또는 PBS를 복강내 주사하였다. 종양 성장은 매일 모니터링하고, 마우스는 종양이 1000 mm3에 도달할 때 희생시켰다.
도 9의 데이터는 INA01-SDV#1의 4회 주사 후 며칠 동안 마우스의 생존을 나타낸다.
<실시예10> IV 투여 후 INA01-SDV#1의 인 비보 효능
INA01-SDV#1의 인 비보 효능을 평가하기 위해, 누드 마우스에 5x106 THP-1 세포를 피하 주사하였다. 종양이 100 mm3에 도달할 때, 마우스에 치료 모드로 4일 마다 4회 투여로 3 mg/kg, 0.5 mg/kg 또는 PBS를 정맥내 주사하였다. 종양 성장은 매일 모니터링하고, 마우스는 종양이 1000 mm3에 도달할 때 희생시켰다.
도 10의 데이터는 INA01-SDV#1의 4회 피하 주사 후 며칠 동안 마우스의 생존을 나타낸다.
SEQUENCE LISTING <110> INATHERYS <120> Antibody-drug conjugates and their uses for the treatment of cancer <130> INA03 <150> EP18305427.9 <151> 2018-04-10 <160> 20 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Gln 1 5 <210> 2 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Asn Thr Tyr Thr Gly Glu 1 5 <210> 3 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Glu Gly Trp Asp Ser Met Asp Tyr 1 5 <210> 4 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Ser Ala Ser Ser Ser Val Asn Tyr Met His 1 5 10 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Ser Thr Ser Asn Arg Ala Thr 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 7 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 <210> 8 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Ser Thr Ser Asn Arg Ala Ser 1 5 <210> 9 <211> 117 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Gln 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Ile Asn Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Ala Ile Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Met Ala Thr Tyr Phe Cys 85 90 95 Val Arg Glu Gly Trp Asp Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 10 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 10 Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Asn Tyr Met 20 25 30 His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr 35 40 45 Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg 100 105 <210> 11 <211> 117 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Gln 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Ile Asn Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Val Ile Ser Leu Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Val Arg Glu Gly Trp Asp Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 12 <211> 136 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 12 Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly 1 5 10 15 Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Thr Asn Gln Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Lys Trp Met Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Ile Asn Ala 65 70 75 80 Asp Asp Phe Lys Gly Arg Phe Val Ile Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Leu Gln Ile Ser Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Phe Cys Val Arg Glu Gly Trp Asp Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln 115 120 125 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 130 135 <210> 13 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 13 Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Asn Tyr Met 20 25 30 His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr 35 40 45 Ser Thr Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 14 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 14 Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Asn Tyr Met 20 25 30 His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr 35 40 45 Ser Thr Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 15 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 15 Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Asn Tyr Met 20 25 30 His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr 35 40 45 Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu 65 70 75 80 Asp Ala Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg 100 105 <210> 16 <211> 760 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16 Met Met Asp Gln Ala Arg Ser Ala Phe Ser Asn Leu Phe Gly Gly Glu 1 5 10 15 Pro Leu Ser Tyr Thr Arg Phe Ser Leu Ala Arg Gln Val Asp Gly Asp 20 25 30 Asn Ser His Val Glu Met Lys Leu Ala Val Asp Glu Glu Glu Asn Ala 35 40 45 Asp Asn Asn Thr Lys Ala Asn Val Thr Lys Pro Lys Arg Cys Ser Gly 50 55 60 Ser Ile Cys Tyr Gly Thr Ile Ala Val Ile Val Phe Phe Leu Ile Gly 65 70 75 80 Phe Met Ile Gly Tyr Leu Gly Tyr Cys Lys Gly Val Glu Pro Lys Thr 85 90 95 Glu Cys Glu Arg Leu Ala Gly Thr Glu Ser Pro Val Arg Glu Glu Pro 100 105 110 Gly Glu Asp Phe Pro Ala Ala Arg Arg Leu Tyr Trp Asp Asp Leu Lys 115 120 125 Arg Lys Leu Ser Glu Lys Leu Asp Ser Thr Asp Phe Thr Gly Thr Ile 130 135 140 Lys Leu Leu Asn Glu Asn Ser Tyr Val Pro Arg Glu Ala Gly Ser Gln 145 150 155 160 Lys Asp Glu Asn Leu Ala Leu Tyr Val Glu Asn Gln Phe Arg Glu Phe 165 170 175 Lys Leu Ser Lys Val Trp Arg Asp Gln His Phe Val Lys Ile Gln Val 180 185 190 Lys Asp Ser Ala Gln Asn Ser Val Ile Ile Val Asp Lys Asn Gly Arg 195 200 205 Leu Val Tyr Leu Val Glu Asn Pro Gly Gly Tyr Val Ala Tyr Ser Lys 210 215 220 Ala Ala Thr Val Thr Gly Lys Leu Val His Ala Asn Phe Gly Thr Lys 225 230 235 240 Lys Asp Phe Glu Asp Leu Tyr Thr Pro Val Asn Gly Ser Ile Val Ile 245 250 255 Val Arg Ala Gly Lys Ile Thr Phe Ala Glu Lys Val Ala Asn Ala Glu 260 265 270 Ser Leu Asn Ala Ile Gly Val Leu Ile Tyr Met Asp Gln Thr Lys Phe 275 280 285 Pro Ile Val Asn Ala Glu Leu Ser Phe Phe Gly His Ala His Leu Gly 290 295 300 Thr Gly Asp Pro Tyr Thr Pro Gly Phe Pro Ser Phe Asn His Thr Gln 305 310 315 320 Phe Pro Pro Ser Arg Ser Ser Gly Leu Pro Asn Ile Pro Val Gln Thr 325 330 335 Ile Ser Arg Ala Ala Ala Glu Lys Leu Phe Gly Asn Met Glu Gly Asp 340 345 350 Cys Pro Ser Asp Trp Lys Thr Asp Ser Thr Cys Arg Met Val Thr Ser 355 360 365 Glu Ser Lys Asn Val Lys Leu Thr Val Ser Asn Val Leu Lys Glu Ile 370 375 380 Lys Ile Leu Asn Ile Phe Gly Val Ile Lys Gly Phe Val Glu Pro Asp 385 390 395 400 His Tyr Val Val Val Gly Ala Gln Arg Asp Ala Trp Gly Pro Gly Ala 405 410 415 Ala Lys Ser Gly Val Gly Thr Ala Leu Leu Leu Lys Leu Ala Gln Met 420 425 430 Phe Ser Asp Met Val Leu Lys Asp Gly Phe Gln Pro Ser Arg Ser Ile 435 440 445 Ile Phe Ala Ser Trp Ser Ala Gly Asp Phe Gly Ser Val Gly Ala Thr 450 455 460 Glu Trp Leu Glu Gly Tyr Leu Ser Ser Leu His Leu Lys Ala Phe Thr 465 470 475 480 Tyr Ile Asn Leu Asp Lys Ala Val Leu Gly Thr Ser Asn Phe Lys Val 485 490 495 Ser Ala Ser Pro Leu Leu Tyr Thr Leu Ile Glu Lys Thr Met Gln Asn 500 505 510 Val Lys His Pro Val Thr Gly Gln Phe Leu Tyr Gln Asp Ser Asn Trp 515 520 525 Ala Ser Lys Val Glu Lys Leu Thr Leu Asp Asn Ala Ala Phe Pro Phe 530 535 540 Leu Ala Tyr Ser Gly Ile Pro Ala Val Ser Phe Cys Phe Cys Glu Asp 545 550 555 560 Thr Asp Tyr Pro Tyr Leu Gly Thr Thr Met Asp Thr Tyr Lys Glu Leu 565 570 575 Ile Glu Arg Ile Pro Glu Leu Asn Lys Val Ala Arg Ala Ala Ala Glu 580 585 590 Val Ala Gly Gln Phe Val Ile Lys Leu Thr His Asp Val Glu Leu Asn 595 600 605 Leu Asp Tyr Glu Arg Tyr Asn Ser Gln Leu Leu Ser Phe Val Arg Asp 610 615 620 Leu Asn Gln Tyr Arg Ala Asp Ile Lys Glu Met Gly Leu Ser Leu Gln 625 630 635 640 Trp Leu Tyr Ser Ala Arg Gly Asp Phe Phe Arg Ala Thr Ser Arg Leu 645 650 655 Thr Thr Asp Phe Gly Asn Ala Glu Lys Thr Asp Arg Phe Val Met Lys 660 665 670 Lys Leu Asn Asp Arg Val Met Arg Val Glu Tyr His Phe Leu Ser Pro 675 680 685 Tyr Val Ser Pro Lys Glu Ser Pro Phe Arg His Val Phe Trp Gly Ser 690 695 700 Gly Ser His Thr Leu Pro Ala Leu Leu Glu Asn Leu Lys Leu Arg Lys 705 710 715 720 Gln Asn Asn Gly Ala Phe Asn Glu Thr Leu Phe Arg Asn Gln Leu Ala 725 730 735 Leu Ala Thr Trp Thr Ile Gln Gly Ala Ala Asn Ala Leu Ser Gly Asp 740 745 750 Val Trp Asp Ile Asp Asn Glu Phe 755 760 <210> 17 <211> 233 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 17 Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr 1 5 10 15 Asp Ala Arg Cys Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser 20 25 30 Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser 35 40 45 Val Asn Tyr Met His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg 50 55 60 Leu Leu Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg 65 70 75 80 Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser 85 90 95 Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser 100 105 110 Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr 115 120 125 Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu 130 135 140 Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro 145 150 155 160 Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly 165 170 175 Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr 180 185 190 Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His 195 200 205 Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val 210 215 220 Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 <210> 18 <211> 462 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18 Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly 1 5 10 15 Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Thr Asn Gln Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Lys Trp Met Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Ile Asn Ala 65 70 75 80 Asp Asp Phe Lys Gly Arg Phe Val Ile Ser Leu Asp Thr Ser Ala Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Phe Cys Val Arg Glu Gly Trp Asp Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln 115 120 125 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 130 135 140 Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 145 150 155 160 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 165 170 175 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 180 185 190 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 195 200 205 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 210 215 220 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro 225 230 235 240 Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val 245 250 255 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 260 265 270 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu 275 280 285 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 290 295 300 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 305 310 315 320 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 325 330 335 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 340 345 350 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 355 360 365 Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 370 375 380 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 385 390 395 400 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 405 410 415 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 420 425 430 Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 435 440 445 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 450 455 460 <210> 19 <211> 724 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 19 aagcttgccg ccaccatgtc cgtgcctacc caggtgctgg gactgctgct gctgtggctg 60 accgatgcca ggtgccagat cgtgctgacc cagtctcctg ccaccctgtc tgtgtctccc 120 ggcgagagag ctaccctgtc ctgctccgcc tcctcctccg tgaactacat gcactggttc 180 cagcagaagc ccggccagtc ccccagactg ctgatctact ccacctccaa ccgggccacc 240 ggcatccctg ccagattttc cggctctggc tccggcacct cctataccct gaccatctcc 300 agcctggaac ccgaggactt cgccgtgtac tactgccagc agcggtcctc ctaccccctg 360 acctttggcc agggcaccaa gctggaaatc aagcgtacgg tggccgctcc cagcgtgttc 420 atcttccccc caagcgacga gcagctgaag agcggcaccg ccagcgtggt gtgtctgctg 480 aacaacttct accccaggga ggccaaggtg cagtggaagg tggacaacgc cctgcagagc 540 ggcaacagcc aggagagcgt caccgagcag gacagcaagg actccaccta cagcctgagc 600 agcaccctga ccctgagcaa ggccgactac gagaagcaca aggtgtacgc ctgtgaggtg 660 acccaccagg gcctgtccag ccccgtgacc aagagcttca acaggggcga gtgctgatga 720 attc 724 <210> 20 <211> 1411 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 20 aagcttgccg ccaccatgga atggtcctgg gtgttcctgt tcttcctgtc cgtgaccacc 60 ggcgtgcact cccaggtgca gctggtgcag tctggccccg agctgaagaa acctggcgcc 120 tccgtgaagg tgtcctgcaa ggcttccggc tacaccttta caaaccaggg catgaactgg 180 gtcaagcagg cccctggcaa gggcctgaag tggatgggct ggatcaacac ctacaccggc 240 gagcccatca acgccgacga cttcaagggc agattcgtga tctccctgga cacctccgcc 300 tccaccgcct acctgcagat cagctctctg aaggccgagg ataccgccgt gtacttctgc 360 gtgcgggaag gctgggactc catggactat tggggccagg gcacctccgt gaccgtgtct 420 agcgcttcta caaagggccc aagcgtgttc cccctggccc cctgctccag aagcaccagc 480 gagagcacag ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg 540 tcctggaaca gcggagccct gaccagcggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 600 agcggcctgt acagcctgag cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcaccaag 660 acctacacct gtaacgtgga ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa gagggtggag 720 agcaagtacg gcccaccctg ccccccctgc ccagcccccg agttcctggg cggacccagc 780 gtgttcctgt tcccccccaa gcccaaggac accctgatga tcagcagaac ccccgaggtg 840 acctgtgtgg tggtggacgt gtcccaggag gaccccgagg tccagttcaa ctggtacgtg 900 gacggcgtgg aggtgcacaa cgccaagacc aagcccagag aggagcagtt taacagcacc 960 taccgggtgg tgtccgtgct gaccgtgctg caccaggact ggctgaacgg caaagagtac 1020 aagtgtaagg tctccaacaa gggcctgcca agcagcatcg aaaagaccat cagcaaggcc 1080 aagggccagc ctagagagcc ccaggtctac accctgccac ccagccaaga ggagatgacc 1140 aagaaccagg tgtccctgac ctgtctggtg aagggcttct acccaagcga catcgccgtg 1200 gagtgggaga gcaacggcca gcccgagaac aactacaaga ccaccccccc agtgctggac 1260 agcgacggca gcttcttcct gtacagcagg ctgaccgtgg acaagtccag atggcaggag 1320 ggcaacgtct ttagctgctc cgtgatgcac gaggccctgc acaaccacta cacccagaag 1380 agcctgagcc tgtccctggg ctgatgaatt c 1411

Claims (15)

  1. 화학식 I의 항체-약물 컨쥬게이트:
    [화학식 I]
    Ab-L-Z-X-D
    상기 식에서,
    Ab는 항-TfR 항체이고,
    L은 상기 항체에 결합된 링커 분자이고, 상기 링커는 화학식 II이며:
    [화학식 II]
    Figure pct00008

    상기 식에서,
    n은 2 내지 20으로 이루어진 정수이고,
    Z는 L에 결합된 발린-시트룰린의 디펩타이드이며,
    X는 Z에 결합된 아미노벤질 에스테르 자기-희생기이고,
    D는 X에 결합된 약물이다.
  2. 제1항에 있어서,
    약물은 세포독성 약물, 특히 모노메틸 아우리스타틴 E(monomethyl auristatin E)인 항체-약물 컨쥬게이트.
  3. 제1항 내지 제2항 중 어느 한 항에 있어서,
    X는 Z에 공유적으로 결합된 파라-아미노벤질 에스테르기이고, 상기 X는 하기 화학식 III이며:
    [화학식 III]
    Figure pct00009

    상기 식에서,
    J는 F, Cl, Br, NO2, NHCOCH3, N(CH3)2, NHCOCF3, 알킬 및 할로알킬 중에서 선택된 선택적 치환기이고, m은 0, 1, 2, 3 및 4의 정수이며,
    상기 X는 바람직하게는 파라-아미노벤질 에스테르이고, m은 0인 항체-약물 컨쥬게이트.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    L은 상기 항체의 하나 이상의 티올 잔기에 공유적으로 결합되고, 바람직하게는, 상기 L은 화학식 IV의 링커 분자에 상응하는 항체-약물 컨쥬게이트:
    [화학식 IV]
    Figure pct00010
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체는 전장 항체 또는 항원 결합 부분을 함유하는 항체 단편을 포함하는 항체-약물 컨쥬게이트.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체는 SEQ ID NO:16의 트랜스페린 수용체에 특이적으로 결합하는 항체-약물 컨쥬게이트.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체는 10 nM 이하, 바람직하게는 1 nM 이하의 KD로 트랜스페린 수용체에 결합하는 항체-약물 컨쥬게이트.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체는 단클론 항체 및/또는 인간화 항체인 항체-약물 컨쥬게이트.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체는 인간 IgG4 이소타입 불변 영역, 또는 돌연변이 또는 화학적으로 변형된 불변 영역을 포함하되, 상기 돌연변이 또는 화학적으로 변형된 불변 영역은 야생형 IgG1 이소타입 불변 영역을 갖는 상응하는 항체와 비교하여 상기 항체에 없거나 또는 감소된 ADCC 활성을 부여하며, 또는
    상기 항체는 인간 IgG1 이소타입 불변 영역, 또는 돌연변이 또는 화학적으로 변형된 불변 영역을 포함하되, 상기 돌연변이 또는 화학적으로 변형된 불변 영역은 야생형 IgG1 이소타입 불변 영역을 갖는 상응하는 항체와 비교하여 상기 항체에 증가된 ADCC 활성을 부여하는 항체-약물 컨쥬게이트.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-TfR 항체는
    (a) SEQ ID NO:1의 HCDR1, SEQ ID NO:2의 HCDR2, SEQ ID NO:3의 HCDR3을 포함하는 가변성 중쇄 폴리펩타이드 및 SEQ ID NO:4의 LCDR1, SEQ ID NO:5의 LCDR2 및 SEQ ID NO:6의 LCDR3을 포함하는 가변성 경쇄 폴리펩타이드;
    (b) SEQ ID NO:1의 HCDR1, SEQ ID NO:2의 HCDR2, SEQ ID NO:3의 HCDR3을 포함하는 가변성 중쇄 폴리펩타이드 및 SEQ ID NO:4의 LCDR1, SEQ ID NO:8의 LCDR2 및 SEQ ID NO:6의 LCDR3을 포함하는 가변성 경쇄 폴리펩타이드;
    (c) SEQ ID NO:11의 VH를 포함하는 가변성 중쇄 폴리펩타이드 및 SEQ ID NO:13의 VL을 포함하는 가변성 경쇄 폴리펩타이드;
    (d) SEQ ID NO:11의 VH를 포함하는 가변성 중쇄 폴리펩타이드 및 SEQ ID NO:14의 VL을 포함하는 가변성 경쇄 폴리펩타이드;
    (e) SEQ ID NO:11의 VH를 포함하는 가변성 중쇄 폴리펩타이드 및 SEQ ID NO:15의 VL을 포함하는 가변성 경쇄 폴리펩타이드;
    (f) SEQ ID NO:12의 VH를 포함하는 가변성 중쇄 폴리펩타이드 및 SEQ ID NO:13의 VL을 포함하는 가변성 경쇄 폴리펩타이드;
    (g) SEQ ID NO:12의 VH를 포함하는 가변성 중쇄 폴리펩타이드 및 SEQ ID NO:14의 VL을 포함하는 가변성 경쇄 폴리펩타이드;
    (h) SEQ ID NO:12의 VH를 포함하는 가변성 중쇄 폴리펩타이드 및 SEQ ID NO:15의 VL을 포함하는 가변성 경쇄 폴리펩타이드 중 하나를 포함하고,
    바람직하게는 상기 항체는 SEQ ID NO:18의 중쇄 및 SEQ ID NO:17의 경쇄를 포함하는 mAb1인 항체-약물 컨쥬게이트.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    의약으로 사용하기 위한, 바람직하게는 종양, 예를 들어, 고형 종양 또는 혈액 종양, 보다 구체적으로 림프종 또는 백혈병의 치료에 사용하기 위한 항체-약물 컨쥬게이트.
  12. 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제, 희석제 또는 담체와 조합하여 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 항체-약물 컨쥬게이트를 포함하고, 선택적으로 다른 활성성분을 포함하는 약학적 조성물.
  13. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 항체-약물 컨쥬게이트를 포함하고, pH 6.5를 가지며, 히스티딘 및 선택적으로 수크로스 및 폴리소르베이트 80을 더 포함하는 조성물.
  14. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 항체-약물 컨쥬게이트를 포함하는 동결건조물 제형, 미리 충전된 주사기 또는 바이알.
  15. 제1항 내지 제10항에서 정의된 바와 같은 항체를 인코딩하는 핵산의 발현에 적합한 조건 하에서 숙주세포를 배양하는 단계;
    항체를 분리하는 단계;
    화학식 V의 링커 L-Z-X에 결합된 모노메틸 아우리스타틴 E의 합성 단계:
    [화학식 V]
    Figure pct00011
    ;
    상기 항체를 화학식 V의 링커 L-Z-X에 결합된 모노메틸 아우리스타틴 E에 컨쥬게이션 시키는 단계를 포함하는 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 항체-약물 컨쥬게이트의 획득 공정.
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