KR20200096791A - 비알콜성 지방간염 치료용 지방산 유도체 - Google Patents

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KR20200096791A
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Abstract

본 발명은 비알콜성 지방간(NASH) 및/또는 알콜성 지방간염(ASH)의 치료 및/또는 예방치료 용도의 화합물을 제공한다. 본 발명에 따른 용도의 화합물은 β-위치에 결합된 산소를 갖고 추가로 α-치환기를 포함하는 불포화 지방산이다. 특히, 본 발명은 NASH 및/또는 ASH의 치료의 용도의 화합물 및 이를 이용하는 방법을 제공하고, 여기서 상기 화합물은 화학식(II)의 화합물이고　:
Figure pct00130
(II)
여기서, R1, R2, R3, X, 및 Y는 본 명세서에서 정의된 바와 같고;
상기 화합물은 단독으로 또는 추가 활성제와 조합으로 투여될 수 있다.

Description

비알콜성 지방간염 치료용 지방산 유도체
본 출원은 2017년 12월 6일 출원된 노르웨이 출원 제20171944호, 2017년 12월 6일 출원된 노르웨이 출원 제 20171945호 및 2018년 10월 9일 미국 출원 제 62/734,013호에 대한 우선권 주장 출원이고, 이는 모두 본 명세서의 내용에 참고로서 포함된다.
본 발명은 비알콜성 지방간염(NASH), 알콜성 지방간염(ASH), 및 섬유증 및/또는 간염을 특징으로 하는 기타 간질환의 치료를 필요로 하는 대상체의 상기 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 비알콜성 지방간염(NASH), 알콜성 지방간염(ASH), 및 섬유증 및/또는 간염을 특징으로 하는 기타 간질환의 치료를 필요로 하는 대상체의 상기 질환의 치료 용도의 화합물 및 이를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 용도를 위한 화합물은 β-위치에 결합된 산소 및 α-치환기를 추가로 포함하는 불포화 지방산이다.
긴사슬 오메가-3 지방산, 예를 들어(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔산(EPA) 및 (4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-도코사-4,7,10,13,16,19-헥사엔산(DHA)은 혈장 지질 수치, 심혈관 및 면역 기능, 인슐린 작용, 신경 발달 및 시각 기능에 영향을 미치는 광범위한 생물학적 효과를 가지고 있다. 고용량의 EPA/DHA는 현재 심각한 트리글리세리드 과잉혈증(HTG)의 치료를 위해 처방되고 있다. 이러한 효과는 간에서의 지방산 대사에 대한 영향에 의해 적어도 부분적으로 매개된다.
비알콜성 지방간염(NASH)을 치료하기 위해 EPA 및 DHA와 같은 오메가-3 화합물의 사용이 종래 기술에서 제안되어 왔다. 예를 들어, Mochida의 WO 2014/057522는 NASH 증상의 치료 또는 완화에 사용하기 위한 에틸이코사펜테이트를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
Dignity Science LTD(WO2014/118097)는 비알콜성 지방 간질환(NAFLD) 및 NASH와 같은 지방 간질환을 치료하기 위해 15-히드록시에이코사펜타엔산(15-OHEPA)과 같은 변형된 오메가-3 화합물의 사용을 제안했다. Krisani Biosciences(WO2014/045293)는 NASH를 포함한 다른 질병을 치료하기 위해 변형된 오메가-3 화합물의 사용을 제안했다. 보다 최근에, Pronova Biopharma AS(WO2016173923 A1)는 NASH의 치료를 위해 구조적으로 변형된 황-함유 지방산의 사용을 제안했다.
NAFLD는 단독 지방간염(isolated hepatosteatosis, 조직학적으로 간세포의 > 5%)을 포함하여 훨씬 더 넓은 범위의 간질환을 포함한다는 사실에도 불구하고 비알콜성 지방 간질환(NAFLD) 및 비알콜성 지방간염(NASH)은 상호 교환적으로 자주 사용된다. 지방간염은, 염증 반응과 세포 손상을 동반하지 않을 때, 비교적 양성질환(benign disorder)이다. 그러나, NAFLD 환자의 하위군(subgroup)은 비알콜성 지방간염(NASH)으로 알려진 증상인 지방간염 외에도 간세포 손상 및 염증을 갖는다. NASH는 알콜성 지방간염(ASH)과 조직학적으로 구분할 수 없다. NAFLD에서 보이는 단순한 지방증은 증가된 단기 질병률(morbidity) 또는 사망률(mortality)과 관련이 없지만, NASH는 간경변, 간부전 및 간세포 암종(HCC)의 위험을 매우 증가시킨다. NASH로 인한 간경변은 간 이식으로 인한 증가하는 빈번한 이유이다. NASH 환자에서 간 원인으로 인한 질병률 및 사망률이 크게 증가하는 반면, 심혈관 질환으로 인한 질병률 및 사망률과 훨씬 더 밀접한 관련이 있다.
NASH 진단 및 병기결정(staging)에 대한 통일된 기준은 여전히 논란의 여지가 있다(하기 상세한 설명 참조). NASH의 주요 조직학적 성분은 지방증, 간세포 팽창 및 소엽염증이다; 섬유증은 NASH의 조직학적 정의의 일부가 아니다. 그러나 간생검(liver biopsy)(병기(stage))에서 섬유증의 정도는 예후를 예측하는 반면, 간생검(등급(grade))에서는 염증과 괴사의 정도는 그렇지 않다.
다양한 조직학적 성분과 관련하여, 오메가-3 지방산으로의 치료는 NAFLD 환자에서 지방간염을 효과적으로 감소시키는 것으로 나타났다(Scorletti E, et al., Effects of purified eicosapentaenoic and docosahexanoic acids in non-alcoholic fatty liver disease(비알콜성 지방간질환에서 정제된 에이코사펜타엔산 및 도코사헥사엔산의 효과): 결과 * WELCOME 연구, Hepatology . 2014 Oct;60(4):1211-2 nd, 질병의 초기 단계에서 치료가 이루어지면, 후자의 더 심각한 단계로의 진행이 느려질 수 있다. 그러나, 오메가-3 지방산이 현저한 조직학적/염증성 변화가 발생한 경우, NASH를 치료 및/또는 역전시키기에 충분히 유력한지는 의심스럽다(Sanyal AJ, et al; EPE-A Study Group, Gastroenterology. 2014 Aug; 147(2):377-84.e1).
NASH의 치료에서 오메가-3 지방산의 보통의 효능은 NASH의 발병기전(pathogenesis)의 기초가 되는 다른 경로에 대한 온화한 효과에 이차적일 수 있다. NASH의 인간 및 동물 모델 둘 다에 대한 연구는, 단독 지방간염과는 대조적으로, 지방간염 및 섬유증의 발생에 관련된 여러 요인이 있음을 설득력있게 입증하였다. 여기에는 인슐린 저항성, 산화 스트레스, 염증, 장에서 유래된 엔도톡신 및 과도한 간 콜레스테롤 및 담즙산이 포함된다. 이러한 모든 요인들이 유전적으로 민감한 개체에서 중요한 역할을 하는 것으로 나타났으며, 따라서 이러한 경로를 목표로 하는 약제가 NASH의 치료를 위해 개발되고 있다.
NASH와 마찬가지로, 알콜성 간질환(ALD)은 지방간 또는 단순 지방증에서 알콜성 간염(즉, ASH)으로 및 최종적으로 간섬유증 또는 간경변을 갖는 만성 간염으로의 전환을 나타내는 조직학적 병기로 분류될 수 있다. 따라서, ASH 및 NASH의 기원이 상이할지라도, 각각의 만성 손상에 대한 간반응(hepatic respons)은 대식세포 활성화 및 사이토카인 생성 및 생성된 활성화된 성상세포(stellate cell)를 수반하는 염증반응 촉진 및 섬유화 촉진 캐스케이드, 즉 근섬유아세포(myofibroblasts)의 증식을 포함하여 많은 유사성을 갖는다(예를 들어, Friedman, SL; Alcoholism: Clinical and Experimental Research. 1999 May; 23(5): 904-910. 참조).
NASH 및 ASH를 표적으로 하는 약물 개발에 있어서 문제는 인간에서 이러한 질병을 개별적으로 나타내는 전임상 모델이 부족하다는 것이다. 이상지질혈증 및 인슐린 저항성과 같이 NASH에 전형적으로 동반되는 대사장애를 더 대표할 수 있는 설치류 모델은 매우 가벼운 간염 및 섬유증을 특징으로 한다. 다른 접근은 화학적으로 유도된 섬유증 모델, 예를 들어, 사염화탄소(CCl4) 또는 티오아세트아미드로 유도된 섬유증이 있고, 이는 더욱 심각한 섬유증을 유발하지만 인슐린 저항성 및 비만과 같은 대사 성분과 관련하여 인간으로의 번역(translation)이 부족할 수 있다. 잠재적인 NASH 및 ASH 약물의 확인을 위해 동맥 병원성 스펙트럼(aetiopathogenic spectrum, 신진대사 혼란―염증 반응―섬유증)의 양쪽 끝을 다루는 다수의 전임상 모델이 필요하다.
설치류와 인간 간섬유증을 비교할 때 고려해야 할 중요한 다른 요소는 유도된 섬유증의 위치 및 기능적 관련성이다. 예를 들어, 짧은 지속 기간의 중증의 섬유증(severe fibrosis) 모델은 기능적으로 보다 관련성이 있고 종종 대량의 간 콜라겐을 나타내는 실질성 콜라겐 축적(parenchymal collagen deposits) 보다는 큰 콜라겐-밀도 문맥계(collagen-dense large portal tracts)를 나타낼 수 있다. 따라서, 설치류 모델에서 섬유증의 생화학적(예를 들어: 히드록시프롤린) 및 조직학적(예를 들어: 시리우스 레드 형태분석(Sirius Red morphometry)) 평가의 조합의 사용은 간 콜라겐 축적의 양, 위치 및 기능적 관련성에 대해 최적이다.
간섬유증이, 크게 증가된 질병률 및 사망률과 관련이 있는, 간경변으로 진행될 수 있기 때문에, NASH 및 ASH의 섬유증 성분을 표적으로 하는 약물을 찾는 것이 중요하다. 이는 또한 만성 간질환의 임상 연구에서 주요 어려운 평가항목을 나타낸다. 예를 들어, 새로운 데이터는, NASH 자체가 아닌, 섬유증이 간 및 비-간(non-liver) 관련 사망의 가장 중요한 조직학적 예측 인자임을 시사한다. 또한 간경변은 원발성 간암의 강력한 보조인자이다. 따라서 NASH 및 ASH의 치료를 위해 개발중인 신약은 확립된 섬유증의 발병을 예방 및/또는 역전시키기에 충분히 강력해야 한다.
Pronova Biopharma Norge AS의 WO2016173923A1은 2-에틸-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타에닐티오)부탄산(화합물 N)과 같은 황-함유하는 구조적으로 변형된 지방산이 NASH의 치료에 유용할 수 있음을 개시하고 있다. 이는 화합물 N이 식이-유발 간섬유증을 예방하는데 있어서 PPAR-감마 작용제인 로시글리타존(rosiglitazone) 보다 우수하다는 발견에 기초한다. 또한 화합물 N은 염증세포가 간으로 유입되는 것을 막았다는 것을 의미하였다. APOE*3Leiden.CETP 마우스에서 화합물 N이 섬유증(히드록시프롤린/프롤린 비율에 의해 측정된)을 감소시키는 효능이 있음이 입증되었다. 중요하게는, APOE*3Leiden.CETP 마우스는 히드록시프롤린(HYP) 함량을 평가하는 생화학적 분석을 통해 측정될 때 매우 가벼운 간섬유증 반응(세포 외 기질에서 20-30% 증가)만 나타낸다. 또한, WO2016173923A1에 기재된 특정 모델(그 내용이 본원에 참고로 포함됨)에서, 시리우스 레드(SR) 형태분석법에 의해 측정된 간섬유증의 양은 유사한 실험 세트를 사용하는 5 개의 이전 연구에서 발견된 것보다 훨씬 더 낮았다. 이들 연구에서, 20 주 후 약 4-5% 섬유증 및 25-30 주 후 7-8%가 SR 형태분석법에 의해 측정되었고, 이는 WO2016173923A1에 제시된 연구에서의 1.5%와 비교되었다. 섬유증 측정의 경우, SR 형태분석법은 생화학적 분석(HYP) 보다 민감하며, 기능적으로 덜 관련이 있지만 양적으로 우세한 포털 콜라겐(portal collagen)과는 대조적으로, 주로 실질(parenchymal) 보다 기능적으로 관련된 콜라겐을 과소 평가할 수 있다.
따라서, 간섬유증을 예방적으로 치료하거나 역전시키는 것과 같은 NASH 및 ASH 치료를 위한 강력한 약물의 필요성에 기초하여, 간질환의 이러한 측면을 치료하는데 사용될 수 있은 화합물을 찾고, 더 높은 수치의 섬유증으로 새로운 평가 및 더 나은 모델을 기반으로 한 효과를 확인하기 위한 몇몇 새로운 연구가 이루어졌다.
간섬유증을 예방적으로 치료하거나 역전시키는 것과 같은 NASH 및 ASH 치료를 위한 강력한 약물의 필요성에 기초하여, 간질환의 이러한 측면을 치료하는데 사용될 수 있은 화합물을 찾고, 새로운 평가 및 더 나은 모델을 기반으로 한 효과를 확인하기 위한 몇몇 새로운 연구가 이루어졌다.
본 발명은 비알콜성 지방간염 및/또는 알콜성 지방간염의 치료를 필요로 하는 대상체에게 약학적 유효량의 화학식(II)의 화합물, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물 또는 염의 용매화물을 투여하는 단계를 포함하는 비알콜성 지방간염 및/또는 알콜성 지방간염의 치료방법에 관한 것이다:
Figure pct00001
(II)
여기서 R1은 3-6 개의 이중결합을 갖는 C10-C22 알케닐로부터 선택되고;
R2 및 R3은 동일하거나 상이하고, 수소원자, 히드록시기, 알킬기, 할로겐원자, 알콕시기, 아실옥시기, 아실기, 알케닐기, 알키닐기, 아릴기, 알킬티오기, 알콕시카르보닐기, 카르복실기, 알킬술피닐기, 알킬술포닐기, 아미노기 및 알킬아미노기로 구성된 치환기 군으로부터 선택되고, 단 R2 및 R3은 시클로프로판, 시클로부탄, 시클로펜탄 또는 시클로헥산과 같은 시클로알칸을 형성하기 위해 연결될 수 있고;
X는 카르복실산 또는 이의 유도체이고; 여기서 상기 유도체는 카르복실산 에스테르와 같은 카르복실레이트; 글리세리드; 무수물; 카르복스아미드; 인지질; 또는 하이드록시메틸; 또는 이의 전구약물이다. 본 발명은 화합물이 단독으로 또는 하나 또는 그 이상의 추가 활성제와 조합으로 투여될 수 있음을 제공한다.
본 발명의 동일한 측면은 비알콜성 지방간염 및/또는 알콜성 지방간염의 치료 및/또는 예방치료 용도의 화학식(II)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물 또는 염의 용매화물을 제공한다:
Figure pct00002
(II)
여기서 R1은 3-6 개의 이중결합을 갖는 C10-C22 알케닐로부터 선택되고;
R2 및 R3은 동일하거나 상이하고, 수소원자, 히드록시기, 알킬기, 할로겐원자, 알콕시기, 아실옥시기, 아실기, 알케닐기, 알키닐기, 아릴기, 알킬티오기, 알콕시카르보닐기, 카르복실기, 알킬술피닐기, 알킬술포닐기, 아미노기 및 알킬아미노기로 구성된 치환기 군으로부터 선택되고, 여기서 R2 및 R3은 시클로프로판, 시클로부탄, 시클로펜탄 또는 시클로헥산과 같은 시클로알칸을 형성하기 위해 연결될 수 있고;
X는 카르복실산 또는 이의 유도체이고; 여기서 상기 유도체는 카르복실산 에스테르와 같은 카르복실레이트; 글리세리드; 무수물; 카르복스아미드; 인지질; 또는 하이드록시메틸; 또는 이의 전구약물이다. 본 발명은 또한 용도의 화합물이 단독으로 또는 하나 또는 그 이상의 추가 활성제와 조합으로 투여될 수 있음을 제공한다.
적어도 하나의 실시예에 있어서, R2 및 R3은 동일하거나 상이하고, 수소원자, 알킬기, 알콕시기, 알케닐기로 구성된 치환기 군으로부터 선택될 수 있고; 또는 R2 및 R3은 시클로프로판, 시클로부탄, 시클로펜탄 또는 시클로헥산과 같은 시클로알칸을 형성하기 위해 연결될 수 있고;
X는 카르복실산 또는 이의 유도체를 나타내고, 여기서 상기 유도체는 카르복실산 에스테르, 글리세리드 또는 인지질인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물 또는 염의 용매화물이 제공된다.
특히, 본 발명은 비알콜성 지방간염 및/또는 알콜성 지방간염의 치료를 필요로 하는 대상체에게 약학적 유효량의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물 또는 염의 용매화물을 투여하는 단계를 포함하는 비알콜성 지방간염 및/또는 알콜성 지방간염의 치료방법에 관한 것이다:
Figure pct00003
(I)
여기서, R2 및 R3 및 X는 화학식(II)에 정의된 바와 같다. 특히, R2 및 R3은 독립적으로 수소원자 또는 선형, 분지형 및/또는 시클릭 C1-C6 알킬기로부터 선택되고;
X는 카르복실산 또는 이의 유도체이고, 여기서 상기 유도체는 카르복실산 에스테르, 글리세리드, 또는 인지질이다.
또한, 본 발명은 비알콜성 지방간염 치료 용도의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물 또는 염의 용매화물을 제공한다:
Figure pct00004
(I)
여기서, R2 및 R3 및 X는 화학식(II)에 정의된 바와 같다. 특히, R2 및 R3은 독립적으로 수소원자 또는 선형, 분지형 및/또는 시클릭 C1-C6 알킬기로부터 선택되고;
X는 카르복실산 또는 이의 유도체이고, 여기서 상기 유도체는 카르복실산 에스테르, 글리세리드 또는 인지질이다.
본 발명은 비알콜성 지방간염 및/또는 알콜성 지방간의 치료를 필요로 하는 대상체에게 약학적 유효량의 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산(화합물 A) 또는 이의 약학적으로 허용가능한염 또는 에스테르를 투여하는 단계를 포함하는 비알콜성 지방간염 및/또는 알콜성 지방간염의 치료방법을 제공한다.
Figure pct00005
(화합물 A)
본 발명은 또한 비알콜성 지방간염 및/또는 알콜성 지방간염 치료 용도의 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산(화합물 A) 또는 이의 약학적으로 허용가능한염 또는 에스테르를 제공한다.
도 1A-1C는 CDAA/고-지방 식이 마우스 모델에서 콜라겐 섬유수(fiber number)(도 1A), 두께(도 1B) 및 길이(도 1C)에 대한 화합물 A의 영향을 도시한다.
도 2A-2D는 CDAA/고-지방 식이 마우스 모델에서 트리글리세리드(TG, 도 2A), 디글리세리드(DG, 도 2B), 유리 지방산(FFA, 도 2C), 및 콜레스테릴에스테르(도 2D)의 간지질 함량에 대한 화합물 A의 영향을 도시한다.
도 3A-3D는 화합물 A가 ob/ob AMLN-공급된 마우스에서 4 주간의 치료 후 체중(도 3A) 또는 간 중량(도 3B)에 대한 또는 8 주간의 치료 후 체중(도 3C) 또는 간 중량(도 3D)에 대한 유의한 영향을 미치지 않음을 도시한다.
도 4A-4는 ob/ob AMLN-공급된 마우스에서 간섬유증을 조절하는 표준 유전자(canonical genes)의 발현에 대한 화합물 A의 4주의 처리 효과를 도시한다.
도 5A-5D 는 ob/ob AMLN-공급된 마우스에서 세포 외 기질(ECM) 안정성 또는 섬유용해(fibrolysis)를 조절하는 유전자의 발현에 대한 화합물 A의 4주의 처리 효과를 도시한다.
도 6A-6F는 화합물 A의 8 주 처리는 ob/ob AMLN-공급된 마우스에서 간 α-SMA(도 6A-6B), col1a1(도 6C-6D), 및 콜라겐(도 6E-6F) 함량을 감소시킴을 도시한다.
도 7A-7B는 ob/ob AMLN-공급된 마우스 화합물 A의 8 주 처리는, 전처리 수치와 각각 비교하여, 간 α-SMA(도 7A) 및 col1a1(도 7B) 함량의 감소에 의해 입증된 바와 같이 활성화된 간 성상세포(근섬유아세포(myofibroblasts))를 감소시키고 섬유증의 퇴행을 유도함을 도시한다.
도 8A-8F는 112 mg/kg의 화합물 A의 4 주 처리는 ob/ob AMLN 마우스에서 염증과 관련된 간 유전자의 발현이 낮아짐을 도시한다.
도 9A-9B는 ob/ob AMLN 마우스에서 간 갈렉틴-3(Gal-3) 수치에 대한 화합물 A의 8 주 처리의 영향을 도시한다.
도 10A-10B는 간 효소 아미노트랜스퍼라아제(ALT)(도 10A) 및 아스파테이트 트랜스아미나아제(AST)(도 10B)의 수치에 의해 결정된 ob/ob AMLN 마우스에서의 간세포 손상에 대한 화합물 A의 8 주 처리의 영향을 도시한다.
도 11A-11E는 ob/ob AMLN 마우스에서 면적(도 11A), 총 간지질(도 11B), 콜레스테롤 함량(도 11C), 혈장 트리글리세리드(도 11D) 및 콜레스테롤(도 11E) 수치의 백분율에 의해 결정된 간지방증에 대한 화합물 A의 8 주 처리의 영향을 도시한다.
도 12A-12C는 ob/ob AMLN 마우스에서 혈당조절에 대한 화합물 A의 3 주 처리의 영향을 도시한다.
도 13A-13B는 비트로에서 인간 간 성상세포(LX-2)에 대한 화합물 A의 영향을 도시한다.
본 개시의 일 양태의 맥락에서 설명된 실시예들 및 특징들은 본 발명의 다른 양태들에 적용된다는 것은 자명하다. 특히, 본 발명에 따른 비알콜성 지방간염 또는 알콜성 지방간염의 치료방법에 적용되는 실시예는 또한 본 발명에 따른 모든 비알콜성 지방간염 또는 알콜 지방간염의 치료에 사용하기 위한 화합물 또는 화합물을 포함하는 조성물에 관한 양태에도 적용된다. 일부 실시예에 있어서, 화합물 또는 화합물을 포함하는 조성물은 하나 이상의 추가 활성제와 조합으로 투여된다.
본 개시의 특정 양태는 하기에서 보다 상세하게 설명된다. 본 출원에서 사용되고 명확히 설명된 용어 및 정의는 본 발명의 의미를 나타내기 위한 것이다.
단수의 표현은 문맥상 다르게 뜻하지 않는 한, 복수의 표현을 포함한다.
용어 "대략" 및 "약"은 언급된 숫자 또는 수치에 거의 동일함을 의미한다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "대략" 및 "약"은 일반적으로 특정 양, 빈도, 또는 수치의 ±5%까지를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
용어 "치료하는", "처리하는" 및 "치료"는 인간 또는 비인간 포유동물에 유리할 수 있는 임의의 치료적 또는 예방적 적용을 포함한다. 인간 및 수의학적 치료는 모두 본 발명의 범위 내에 있다. 치료는 기존 상태에 반응할 수 있거나 예방적, 예를 들어 방지적일 수 있다.
본원에 사용된 용어 "투여" 및 "투여하는"은 (1) 건강 관리인 또는 그의 공인 대리인에 의해 또는 그의 지시에 따라 본 발명에 따른 화합물 또는 조성물을 제공, 수여, 투여 및/또는 처방하는 것, 및(2) 인간 환자 또는 사람 자신 또는 비인간 포유동물에 의해 본 발명에 따른 화합물 또는 조성물을 섭취되거나, 또는 소비되는 것을 의미한다.
용어 "예방 및/또는 치료" 및 "치료적 및/또는 예방적 치료"는 상호 교환적으로 사용될 수 있다. 일반적으로, 화학식(I) 또는 화학식(II)의 화합물은 치료, 즉 NASH 또는 ASH의 치료적 치료에 사용될 것이다. 그러나, 일부 경우에, 화학식(I) 또는 화학식(II)의 화합물은 NASH 또는 ASH의 예방치료, 예를 들어 환자가 NASH 또는 ASH와 관련된 하나 또는 그 이상의 위험 요소를 가지는 경우에 사용될 것이다.
용어 "조합으로 투여되는" 또는 "함께 투여되는" 및 "공동-투여" 또는 "공-투여"는 상호 교환적으로 사용되며, (a) 화학식(I) 또는(II)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물 또는 염의 용매화물; 및 (b) 하나 이상의 추가 활성제를 함께 조정된 방식의 투여를 의미한다. 예를 들어, 공-투여는 동시 투여, 순차적 투여, 중첩 투여, 간격 투여, 연속 투여 또는 이들의 조합일 수 있다. 투여 방식은 화합물 및 추가 제제(들)에 따라 상이할 수 있으며, 공-투여는 경구, 피하, 설하, 경점막, 비경구, 정맥내, 동맥내, 복막내, 구강, 설하, 국소, 질, 직장, 안구, 귀, 비강, 흡입, 및 경피, 또는 이들의 조합과 같은 임의의 투여 방식을 포함한다. 비경구 투여의 예는 정맥내(IV) 투여, 동맥내 투여, 근육 내 투여, 피하 투여, 골내 투여, 수막강내 투여, 또는 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 화학식(I) 또는 (II)의 화합물 및 추가 활성제는 독립적으로, 예를 들어 경구 또는 비경구 투여될 수 있다. 일 실시예에 있어서, 화학식(I) 또는 (II)의 화합물은 경구 투여되고; 추가 활성제는 비경구 투여된다. 비경구 투여는 주사 또는 주입을 통해 수행될 수 있다. 일부 실시예에 있어서, 본 발명의 방법 및/또는 용도는 2 이상의 상이한 활성제, 화학식(I) 또는 (II)의 화합물, 및 추가 활성제를 사용하여 NASH 또는 ASH의 치료 및/또는 예방치료에 관한 것이다. 2 이상의 활성제는 "결합된 제품"으로 볼 수 있으며, 여기서 활성제는 별도로 포장되고, 여기서 두 활성제는 최적의 의도된 효과를 달성하기 위해 요구된다.
용어 "약학적 유효량"은 목적하는 약리학적 및/또는 치료적 효과를 이를 수 있는 양, 즉 의도된 목적을 달성하기에 충분한 본원의 화합물의 효과적인 양을 의미한다. 개개의 대상체/환자에 따라 필요량이 다르나, 본원의 화합물의 유효량에 관한 최적 범위의 결정은 당업자의 소관이다. 일반적으로, 본 발명의 화합물을 이용하여 질환 및/또는 증상을 치료하기 위한 투여 요법은 대상체/환자의 체형, 나이, 체중, 성별, 식단 및/또는 의학 질환을 비롯한 다양한 요소들에 따라 선택된다.
용어 "약학 조성물"은 본 발명에 따른 의학적 용도에 적합한 임의의 형태의 화합물을 의미한다.
화학식(I) 및 (II)의 화합물은 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체 또는 이들의 혼합물을 비롯한 다양한 입체 이성질체 형태로 존재할 수 있다. 본 발명은 화학식(I) 및 (II)의 화합물의 모든 광학 이성질체 및 이들의 혼합물을 포함하는 것으로 이해될 것이다. 따라서, 부분입체 이성질체, 라세미체 및/또는 거울상 이성질체로서 존재하는 화학식(I) 및(II)의 화합물은 본 발명의 범주 내에 있다.
일 측면에 있어서, 본 발명에 따른 용도의 화합물은 화학식(II)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물 또는 염의 용매화물이다
Figure pct00006
(II)
여기서 R1은 3-6 개의 이중결합을 갖는 C10-C22 알케닐로부터 선택되고;
R2 및 R3은 동일하거나 상이하고, 수소원자, 히드록시기, 알킬기, 할로겐원자, 알콕시기, 아실옥시기, 아실기, 알케닐기, 알키닐기, 아릴기, 알킬티오기, 알콕시카르보닐기, 카르복실기, 알킬술피닐기, 알킬술포닐기, 아미노기 및 알킬아미노기로 구성된 치환기 군으로부터 선택되고, 여기서 R2 및 R3은 시클로프로판, 시클로부탄, 시클로펜탄 또는 시클로헥산과 같은 시클로알칸을 형성하기 위해 연결될 수 있고;
X는 카르복실산 또는 이의 유도체이고, 여기서 상기 유도체는 카르복실산 에스테르와 같은 카르복실레이트; 글리세리드; 무수물; 카르복스아미드; 인지질; 또는 하이드록시메틸; 또는 이의 전구약물이다.
일 실시예에 있어서, R1은 3-6 개의 이중결합, 예컨대 5 또는 6 개의 이중결합을 갖는 C18-C22 알케닐이고, 바람직하게는 하나의 이중결합이 오메가-3 위치에 있다.
R2 및 R3은 보다 바람직하게는 수소원자 또는 선형, 분지형 및/또는 시클릭 C1-C6 알킬기로부터 독립적으로 선택된다. 일 실시예에 있어서, R2 및 R3 중 적어도 하나는 수소원자, 메틸기, 에틸기, n-프로필기 및 이소프로필기, 부틸기 또는 펜틸기이다.
X는 바람직하게는 카르복실산 또는 카르복실산 에스테르; 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물 또는 염의 용매화물를 나타낸다.
용도의 화학식(II)의 화합물은 단독으로 또는 하나 또는 그 이상의 추가 활성제와 조합으로 투여될 수 있다.
보다 구체적으로, 본 발명은 비알콜성 지방간염 또는 알콜성 지방간염의 치료를 필요로 하는 대상체에게 약학적 유효량의 화학식(I)의 화합물을 투여하는 단계를 포함하는 비알콜성 지방간염 또는 알콜성 지방간염의 치료방법을 제공한다:
Figure pct00007
(I)
여기서, R2, R3 및 X는 화학식(II)에 정의된 바와 같다.
바람직하게는, 화학식(I)의 화합물에 있어서, R2 및 R3은 독립적으로 수소원자 또는 선형, 분지형 및/또는 시클릭 C1-C6 알킬기로부터 선택되고; 및
X는 카르복실산 또는 카르복실산 에스테르; 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물 또는 염의 용매화물이다.
화학식(I)의 화합물은 단독으로 또는 하나 또는 그 이상의 추가 활성제와 조합으로 투여될 수 있다.
일부 실시예에 있어서, 본 발명은 비알콜성 지방간염 또는 알콜성 지방간염의 치료 용도의 화학식(I)의 화합물을 제공한다:
Figure pct00008
(I)
여기서, R2, R3 및 X는 화학식(II)에 정의된 바와 같다.
바람직하게는, 화학식(I)의 화합물에 있어서, R2 및 R3은 독립적으로 수소원자 또는 선형, 분지형 및/또는 시클릭 C1-C6 알킬기로부터 선택되고;
X는 카르복실산 또는 카르복실산 에스테르; 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물 또는 염의 용매화물이다.
R2 및 R3이 다른 경우에, 화학식(I) 및 화학식(II)의 화합물은 입체 이성질체 형태로 존재할 수 있다. 본 발명은 화학식(I) 및 화학식(II)의 화합물의 모든 광학 이성질체 및 이들의 혼합물을 포함하는 것으로 이해될 것이다.
적어도 하나의 실시예에 있어서, R2 및 R3은 수소원자, 메틸기, 에틸기, n-프로필기, 이소프로필기, 부틸기 및 펜틸기의 군으로부터 독립적으로 선택된다.
적어도 하나의 실시예에 있어서, R2 및 R3은 수소원자, 메틸기 및 에틸기의 군으로부터 독립적으로 선택된다.
적어도 하나의 실시예에 있어서, R2 및 R3 중 하나는 수소원자이고, R2 및 R3 중 다른 하나는 C1-C3 알킬기로부터 선택된다. 일 실시예에 있어서, R2 및 R3 중 하나는 수소원자이고, R2 및 R3 중 다른 하나는 메틸기 및 에틸기의 군으로부터 선택되고, 가장 바람직하게는 R2 및 R3 중 하나는 수소원자이고, 다른 하나는 에틸기이다.
화학식(I) 및 화학식(II)의 화합물의 경우, 일부 실시예에 있어서, R2 및 R3은 독립적으로 C1-C6 알킬기이다. 일부 실시예에 있어서, R2 및 R3은 모두 C1-C3 알킬기이다. 일부 실시예에 있어서, R2 및 R3는 동일하거나 상이하고, 각각은 독립적으로 메틸기, 에틸기, n-프로필기 또는 이소프로필기에서 선택된다. 일부 실시예에 있어서, R2 및 R3은 동일하고, 한 쌍의 메틸기, 한 쌍의 에틸기, 한 쌍의 n-프로필기 또는 한 쌍의 이소프로필기로부터 선택된다. 하나 이상의 바람직한 일 실시예에 있어서, R2 및 R3는 에틸기이다. 일부 실시예에 있어서, R2 및 R3 중 하나는 메틸기이고 다른 하나는 에틸기이다. 일부 실시예에 있어서, R2 및 R3 중 하나는 에틸기이고 다른 하나는 n-프로필기다.
적어도 하나의 실시예에 있어서, 화합물은 거울상 이성질체(R 또는 S), 부분입체 이성질체, 또는 이들의 혼합물과 같은 다양한 입체 이성질체 형태로 존재한다. 적어도 하나의 실시예에 있어서, 화합물은 라세미 형태로 존재한다.
화학식(I)에 따른 화합물이 하나 이상의 입체 중심을 갖는 반대 이온의 염, 또는 하나 이상의 입체 중심을 갖는 알콜의 에스테르인 경우, 화합물은 다수의 입체 중심을 가질 수 있다. 이러한 상황에서, 본 발명의 화합물은 부분입체 이성질체로서 존재할 수 있다. 따라서, 적어도 하나의 실시예에 있어서, 본 발명의 화합물은 하나 이상의 부분입체 이성질체로서 존재한다.
적어도 하나의 실시예에 있어서, 본 발명의 화합물은 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산(화합물 A)이다:
Figure pct00009
(화합물 A).
적어도 하나의 실시예에 있어서, 본 발명의 화합물은 다음의 화학식으로 표시되는 S 및/또는 R 형태의 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산(화합물 A)이다:
Figure pct00010
및
Figure pct00011
.
일부 실시예에 있어서, 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산(화합물 A)은 단독으로 투여된다. 일부 실시예에 있어서, 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산(화합물 A)은 하나 또는 그 이상의 추가 활성제와 조합으로 투여된다.
전술한 바와 같이, 다수의 독립적이고 상호 의존적인 대사성, 염증성 및 궁극적으로 섬유성 성분은 인간 NASH의 발병에 이르게 된다. 모든 성공적인 치료는 바람직하게는 업스트림 대사성/염증성 표적을 통해 NASH의 여러 측면을 다룰 필요가 있을 것이다. 그러나, 섬유증 발생이 임상 결과와 관련이 있기 때문에, 이상적인 NASH 요법은 염증 성분을 표적으로 하고, 또한 섬유증의 발생 및 기존의 섬유증을 역전적으로 감소시키거나 예방적으로 치료해야 한다. 본원의 실시예는 화합물 A와 같은 산소-함유 구조적으로 변형된 지방산의 놀랍고도 예상치 못한 강력한 항-염증 및 항-섬유화 효과를 보여준다. 여러 전임상 NASH 모델에 나타난 이러한 결과는 인간 대상체에서 NASH 및 ASH의 치료 및 예방치료에 있어서 본 발명의 산소-함유 화합물의 용도를 뒷받침한다.
예를 들어 CDAA(콜린-결핍 1-아미노산), 식이유발 섬유증 마우스 모델(세포 외 기질(ECM)의 2-400% 증가 vs 더 가벼운 APOE*3Leiden.CETP 마우스 모델에서 ECM의 20-30% 증가)에서 히드록시프롤린 함량을 평가하는 생화학적 분석에 의해 측정된 바와 같이, 화합물 A가 섬유증의 발병을 감소시키거나 예방적으로 치료하고 간섬유증을 역전시키는데 현저하게 활성이라는 것을 발견하는 것은 놀라운 일이었다.
CDAA-유도 NASH 모델에서의 새로운 발견은 화합물 A가 또한 시리우스 레드 형태분석(Sirius Red morphometry, SR 형태분석)을 사용하여 조직학적으로 측정될 때 간섬유증을 감소시킨다는 것이었다. 큰 혈관에서 콜라겐을 측정하는 히드록시프롤린(HYP) 함량의 생화학적 평가와 달리, SR 형태분석은 보다 더 기능적으로 관련된 시누소이드 콜라겐 축적(sinusoidal collagen deposits)을 정량화한다.
NASH-관련 질병률 및 사망률에서 섬유증의 중추적 중요성을 고려할 때, CDAA-유도성 NASH 모델 결과는 화합물 A와 같은 산소-함유 구조적으로 변형된 지방산이 NASH 관련 합병증의 치료에 효과적이라는 개념을 지지한다. 이러한 발견도 또한 섬유증-관련 간 유전자 발현(Col1a1) 및 염증 반응(간 TNF-α 유전자 발현)의 변화에 의해 지지되었다. SR 형태분석에 의해 측정된 보다 기능적으로 관련된 시누소이드 콜라겐의 현저한 감소는 또한 인간 NASH에서 화합물 A의 시험 및 용도를 지지한다.
임상 결과에서 섬유증의 매우 중요성에도 불구하고, NASH의 치료를 위한 신규하고 효과적인 약물의 규제 승인은 섬유증의 악화없이 NASH의 해결과 관련이 있다. NAS 점수 성분의 개선이 새로운 화합물에 의해 개선되는 것이 또한 중요하다. 따라서, 섬유증의 바람직한 개선 외에 지방증, 소엽염증 및 간세포 팽창의 개선이 이상적으로 발생해야 한다.
다른 NASH 모델인 STAM 마우스 모델에서 발견된 새로운 발견은 지방증 및 염증의 개선 외에, 화합물 A가 간세포 팽창을 개선시켰다는 것이었다. 간세포 팽창은 일반적으로 희귀 세포질을 갖는 정상 간세포 직경의 1.5-2 배의 세포 확대로 정의되며, 섬유증과 관련이 있고 간 손상과 관련이 있는 것으로 나타났다.
APOE*3L.CETP 이중형질전환 마우스에서 화합물 A에 의해 세포 확대(간세포 비대로 정의됨)이 또한 방지되었다. 비대화 vs 풍선확장화의 정의는 설치류 vs 인간 간세포에 대한 특이적인 조직학적 차이와 관련이 있다.
상기 기재된 항-염증 효과와 함께, 간세포 팽창/비대와 관련된 이러한 새로운 발견은 화합물 A가 임상 개발 및 후속 규제 승인에서 긍정적인 결과에 기여하는 모든 NAS 점수 성분을 향상시키는데 있어서 가능성이 있음을 강조한다.
상기 기재되고 실시예에 나타낸 바와 같이, 심각도 범위의 다수의 NASH 설치류 모델에서 염증성 및 섬유성 성분 둘 모두를 조절하는데 있어서 화합물 A의 효능을 발견하는 것은 놀라운 일이었다.
NASH에서 적응성 및 비적응성 면역세포 모집, 활성화, 분화 및 증식의 복잡한 상호 작용은 임의의 하나의 염증 파라미터에 대한 의존이 그러한 판독의 기능적 중요성을 해석하기 위해 섬유증의 동시 측정을 필요로 한다는 것을 유추한다. 따라서, CDAA 모델에서 화합물 A의 항-섬유화 효과는 산소-치환 구조적으로 변형된 지방산에서 관찰되는 항-염증 효과를 임상적으로 관련시킬 수 있다.
NASH 치료를 위한 새로운 효과적인 약물의 규제 승인은 섬유증을 악화시키지 않고 NASH의 해결에 의존하기 때문에, 2 개의 별개의 NASH 설치류 모델에서 화합물 A 처리로 관찰된 간세포 팽창/비대의 개선은 중요하고도 새로운 발견이다(CDAA 마우스 모델에서는 풍선확장/비대가 측정되지 않음).
상기 기재된 항-염증 효과와 함께, 간세포 팽창/비대와 관련된 이러한 새로운 발견은 화합물 A가 임상 개발 및 후속 규제 승인에서 긍정적인 결과에 기여하는 모든 NAS 점수 성분을 향상시키는데 있어서 가능성이 있음을 강조한다.
중요하게는, 원인병리론(aetiopathogenesis)이 다른 여러 전임상 NASH 모델에서 문맥(portal tracts) 및 실질(parenchyma)과 관련된 모든 NAS 점수 성분 및 섬유증을 개선하는 화합물 A와 같은 화합물의 능력은 인간 NASH 대상체의 시험에 대한 강력한 지원을 제공한다.
또한, 상당한 비율의 NASH 환자가 제2형 당뇨병을 갖기 때문에, 화합물 A와 같은 약제로의 치료 지연성이 간지방증, 염증 및 섬유증에 미치는 영향 및 NASH의 비만 식이유발 모델에서 혈당조절에 미치는 영향을 연구하는 것이 중요하다. 상기 기재된 화합물 A의 항-염증, 항-섬유증 및 지방증-감소 효과는 비만 식이유발 NASH 모델(ob/ob AMLN 고지방-공급된 마우스)에서 추가로 입증되었다. 화합물 A는 또한 체중에 악영향을 미치는 티아졸리딘디온(예를 들어, 피오글리타존)과 달리 체중에 영향을 미치지 않으면서 상기 모델에서 혈당조절에 긍정적인 영향을 미쳤다. 또한, 화합물 A는 알라닌 아미노트랜스퍼라아제(ALT) 및 아스파테이트 트랜스아미나아제 (AST)의 혈장 수치를 감소시켰으며, 이는 간세포 손상 및/또는 악영향이 감소되었음을 나타낸다.
이러한 발견에 기초하여, 화학식(II)의 화합물 또는 바람직하게는 화학식(I)의 화합물은 비알콜성 지방간염(NASH), 또는 섬유증, 염증 및/또는 간세포 팽창을 특징으로 하는 다른 간질환을 치료 및/또는 역전시키기 위해 투여될 수 있다. 일부 실시예에 있어서, NASH의 치료는 예방적일 수 있다. 또한, 화합물은 NASH와 관련된 하나 이상의 질환, 상태 또는 위험 인자를 치료하기 위해 투여될 수 있다. 일부 실시예에 있어서, NASH와 관련된 적어도 하나의 질병, 상태 또는 위험 인자의 치료는 예방적일 수 있다.
NASH와 알콜성 지방간염(ASH) 사이의 염증반응 촉진 및 섬유화 촉진 메카니즘의 유사성을 고려하여, NASH 모델 및 시험관내(in vitro) 실험에서 본원에 기재된 화합물의 항-염증 및 항-섬유증 효과는 ASH의 치료 및/또는 역전, 특히 진행된 ASH 및 관련 섬유증의 진행의 방지 및 퇴행의 유도의 예방과 관련이 있다. 예를 들어, 시험관내에서 단리된 LX-2(인간 성상) 세포 증식에 대한 화합물 A의 억제 효과는 실질(parenchyma) 세포 및/또는 쿠퍼 세포(Kupffer cell)로부터의 파라크린(paracrine) 신호와 무관하며, 이는 화합물 A의 항-섬유화 효과가 업스트림 자극이 NASH- 또는 ASH-관련 간 손상에서 유래하는지의 여부와 무관하게 달성될 수 있음을 시사한다.
따라서, 화학식(II)의 화합물, 또는 바람직하게는 화학식(I)의 화합물은 ASH를 치료 및/또는 역전시키기 위해 투여될 수 있다. 일부 실시예에 있어서, ASH의 치료는 예방적일 수 있다. 또한, 화합물은 ASH와 관련된 하나 이상의 질환, 상태 또는 위험 인자를 치료하기 위해 투여될 수 있다. 일부 실시예에 있어서, ASH와 관련된 하나 이상의 질환, 상태, 또는 위험 인자의 치료는 예방적일 수 있다.
따라서, 본 발명은 간섬유증의 발생을 감소시키거나 예방적으로 치료하고 기존의 간섬유증을 감소시키는 방법을 포함한다. 상기 방법에 의해, 섬유증은 섬유 면적, 섬유 함량 또는 섬유증의 중증도를 감소시킴으로써 치료된다. 적어도 하나의 실시예에 있어서, 상기 방법은 간섬유증의 표면적 백분율에서 현저한 감소와 같은 감소를 제공한다. 적어도 하나의 실시예에 있어서, 상기 방법은 NAS 점수의 현저한 감소와 같은 복합 NAS 점수의 감소를 제공한다. 또한, 상기 방법은 소엽염증과 같은 간염의 감소; 간세포 팽창의 감소; 및 지방간염의 감소; 및 섬유성 상태를 개선하는 것을 포함한다.
일부 실시예에 있어서, 본 발명의 화합물은 시리우스 레드 형태분석에 의해 측정시 간섬유증 면적을 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 또는 70% 감소시킨다. 일부 실시예에 있어서, 본 발명의 화합물은 간섬유증 면적을 20-30%, 30-40%, 10-40%, 40-50%, 40-60%, 50-60%, 50-70%, 또는 60-70% 감소시킨다. 일부 실시예에 있어서, 본 발명의 화합물은 간 히드록시프롤린 함량에 의해 측정시 간섬유증 함량을 20%, 25%, 30%, 35%, 또는 40% 감소시킨다.
일부 실시예에 있어서, 본 발명의 화합물은 간섬유증 함량을 20-30%, 20-25%, 24-30%, 또는 30-40%, 30-35% 또는 35-40% 감소시킨다. 일부 실시예에 있어서, 본 발명의 화합물은 간 콜라겐 함량을 20%, 25%, 30%, 35% 또는 40% 감소시킨다. 일부 실시예에 있어서, 본 발명의 화합물은 간 콜라겐 함량을 20-30%, 20-25%, 25-30%, 30-40%, 30-35% 또는 35-40% 감소시킨다. 일부 실시예에 있어서, 본 발명의 화합물은 전처리 수치과 비교하여 간 α-SMA 함량 면적을 3% 감소시킨다.
일부 실시예에 있어서, 본 발명의 화합물은 지방증을 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% 또는 90% 감소시킨다. 일부 실시예에 있어서, 본 발명의 화합물은 지방증을 40-50%, 50-60%, 60-70%, 50-70%, 70-80%, 60-80%, 70-90% 또는 80-90% 감소시킨다. 일부 실시예에 있어서, 본 발명의 화합물은 총 간지질 함량을 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45% 또는 50% 감소시킨다. 일부 실시예에 있어서, 본 발명의 화합물은 총 간지질 함량을 20-30%, 30-40%, 또는 40-50% 감소시킨다.
일부 실시예에 있어서, 본 발명의 화합물은 간세포 팽창을 30%, 35%, 40%, 45% 또는 50% 감소시킨다. 일부 실시예에 있어서, 본 발명의 화합물은 간세포 팽창을 30-40%, 30-35%, 35-40%, 40-50%, 40-45% 또는 45-50% 감소시킨다. 일부 실시예에 있어서, 본 발명의 화합물은 간세포 비대를 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75% 또는 80% 감소시킨다. 일부 실시예에 있어서, 본 발명의 화합물은 간세포 비대를 40-50%, 50-60%, 60-70% 또는 70-80% 감소시킨다. 일부 실시예에 있어서, 본 발명의 화합물은 NAS 점수를 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% 또는 70% 감소시킨다. 일부 실시예에 있어서, 본 발명의 화합물은 NAS 점수를 30-40%, 40-50%, 30-50%, 50-60%, 60-70%, 또는 50-70% 감소시킨다.
일부 실시예에 있어서, 본 발명의 화합물은 갈렉틴(Gal-3) 수치에 의해 측정될 때 간염을 20%, 30% 또는 40% 감소시킨다. 일부 실시예에 있어서, 본 발명의 화합물은 간염을 20-30%, 20-25%, 25-30%, 30-40%, 30-35%, 또는 35-40% 감소시킨다. 일부 실시예에 있어서, 본 발명의 화합물은 혈장 알라닌 아미노트랜스퍼라아제(ALT) 수치를 20%, 35%, 30%, 35% 또는 40% 감소시킨다. 일부 실시예에 있어서, 본 발명의 화합물은 ALT 수치를 20-30%, 20-25%, 25-30%, 30-40%, 30-35% 또는 35-40% 감소시킨다. 일부 실시예에 있어서, 본 발명의 화합물은 혈장 아스파테이트 트랜스아미나제(AST) 수치를 10%, 15% 또는 20% 감소시킨다. 일부 실시예에 있어서, 본 발명의 화합물은 AST 수치를 10-15%, 10-20%, 또는 15-20% 감소시킨다.
일부 실시예에 있어서, 본 발명의 화합물 및/또는 본 발명의 화합물로의, 예를 들어 화합물 A 로의 처리는, 대조군과 비교하여, 간생검으로부터의 NAS 점수, MRI LiveMultiMultiScan 평가 PDFF 및 cT1, 간기능 검사(들), HOMA-IR, 및/또는 염증 및 섬유증(hsCRP, Pro-C3, ELF 패널, 및 다른 적합한 바이오마커 포함)의 바이오마커(들)를 개선한다.
일부 실시예에 있어서, 본 발명의 화합물 및/또는 본 발명의 화합물로의, 예를 들어 화합물 A 로의 처리는, 대조군과 비교하여, 풍선확장의 감소(예를 들어, 점수 =0), 예를 들어, 소엽염증 점수의 0 또는 1로의 감소 및 섬유증의 악화가 없는 것과 같은 개선을 초래한다. 일부 실시예에 있어서, 본 발명의 화합물 및/또는 본 발명의 화합물로의, 예를 들어 화합물 A 로의 처리는, 대조군과 비교하여, 간조직 검사로부터 NAS 점수, 지방증, 풍선확장, 염증 및 섬유증에 대한 개별적 조직학적 점수, 간 효소, 영상화 파라미터, 및/또는 바이오마커(hsCRP, Pro-C3, ELF 패널, 사이토카인 및 기타 적합한 바이오마커 포함)의 개선과 같은 변화를 초래한다.
일부 실시예에 있어서, 환자에서 본 발명의 화합물, 예를 들어 화합물 A의 안전성 및 내약성은, 대조군과 비교하여, 환자의 부작용을 모니터링하고, 검사 수치(혈액학, 생화학 및 소변 검사), 활력 징후(혈압, 맥박수 및 온도), hsCRP 및/또는 안정시 12 리드 ECG를 모니터링함으로써 평가될 수 있다. 환자에서 화합물 A의 약물 동력학은 예를 들어 규칙적인 간격으로 취한 화합물 A에 대한 정상 상태에서의 평균최저혈장농도(mean trough plasma concentrations)의 비교에 의해 연구될 수 있다. 예를 들어, 평균최저혈장농도는 화합물 A의 약물 동력학을 결정하기 위해 8 주 간격으로 취해질 수 있다.
다음 기준 중 하나 이상을 충족하는 환자는, 동일한 하나 이상의 기준을 충족하지 않는 환자와 비교하여, 화합물 A로의 치료에 대한 개선된 반응을 보일 수 있다: NASH 조직 진단, 섬유증 점수 1 내지 3(30%으로 제한된 F1), MRI에서 PDFF> 10%, 프로토콜 진입에 대해 다음과 같은 혈액학적 및 생화학적 기준을 갖는 보상성 간질환: ALT < 5 x ULN, AST >30, 헤모글로빈 > 11 g/dL(여성) 및 > 12 g/dL(남성), 백혈구(WBC) > 2.5 K/μL, 호중구수(Neutrophil count) > 1.5 K/μL, 혈소판 > 100 K/μL, 총 빌리루빈 < 35μmol/L (길버트 증후군 설정에서 비공액 빌리루빈인 경우 빌리루빈이 > 35μmol/L 인 환자도 포함), 알부민 > 36 g/L, 국제표준화비율(International Normalized Ratio, INR) < 1.4, 혈청크레아티닌 <1.3 mg/dL(남성) 또는 <1.1(여성) 또는 사구체 여과 속도 추정(estimated glomerular filtration rate) ≥ 60 mL/min/1.73m2, 만성 간질환의 다른 원인 없음(예를 들어, 자가면역, 원발담즙성담관염, HBV, HCV, 윌슨병(Wilson’s), α-1-항트립신 결핍, 혈색소 침착증), 및/또는, 해당되는 경우, 안정적인 제2형 당뇨병(HgbA1c < 9.5% 및 공복혈당증(fasting glycemia) <10 mmol/L로 정의됨, 지난 6 개월 동안 약물에 변화가 없음, 및/또는 지난 3 개월 동안 비보상성 당뇨병과 관련된 새로운 증상이 없음).
반대로, 다음 기준 중 하나 이상을 충족하는 환자는 동일한 하나 이상의 기준을 충족하지 않는 환자와 비교하여 화합물 A 로의 치료에 대한 반응을 나타내지 않을 수 있다: 지속적인 과도한 알콜 섭취 병력, 불안정한 대사상태(예를 들어, 지난 3 개월 동안 5kg을 초과하는 체중 증가 또는 감소, 혈당조절이 불량한 당뇨병(HgbA1c > 9.5%), 또는 검사 전 6개월 동안 항당뇨병제 또는 항-비만 약물/흡수억제형 또는 섭취제한형 비만대사(체중 감소) 수술의 도입에 의해 정의된 바와 같이), 5 년 이내에 위장관 흡수억제형 비만대사 수술의 병력 또는 지난 6개월 동안 코르티코스테로이드, 고용량의 에스트로겐, 메토트렉세이트, 테트라사이클린 또는 아미오다론을 포함하여 간지방증을 유발하는 것으로 알려진 약물의 섭취, HB 항원 >0, HCV PCR >0(HCV PCR이 3년 초과 동안 음성인 경우, HCV 감염 병력이 있는 환자는 포함될 수 있다), 또는 HIV 감염, 인슐린으로 치료된 제2형 당뇨병 또는 제1형 당뇨병, 당뇨병성 케톤산증, 공복 트리글리세리드 > 300 mg/dL, 지혈 장애 또는 최근 항응고제 치료, 잘 통제된 고혈압 환자를 제외한 최근 심부정맥의 병력 및/또는 심근경색을 포함한 심혈관 질환의 병력, 및 임상적으로 유의한 ECG 이상(abnormality), 및/또는 피오글리타존, 및 GLP-1 수용체 작용제와 같은 NASH에 대해 활성이 있는 것으로 알려진 당뇨병 치료제를 섭취.
화학식(I) 및 화학식(II)의 화합물은 예를 들어 PCT WO2009/061208, WO2010/128401, WO2011/089529, WO2016/156912 및 하기 실시예에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 또한, 화합물 A는 예를 들어 PCT WO2010/128401 및 WO2014/132135 및 하기 실시예 2에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다.
하기 제공된 실시예는 예시적이며, 당업자는 이러한 일반적인 방법을 적용하여 화학식(I) 및 화학식(II)의 범위 내의 다른 화합물에 도달하는 방법을 이해할 것이다. 본 발명의 화합물은 약학적으로 허용가능한 염 또는 에스테르의 형태일 수 있다. 예를 들어, 화학식(I) 및 화학식(II)의 화합물은 인지질, 글리세리드 또는 C1-C6-알킬 에스테르와 같은 에스테르 형태일 수 있다. 적어도 하나의 실시예에 있어서, 에스테르는 글리세리드 또는 C1-C6-알킬 에스테르로부터 선택된다. 적어도 하나의 실시예에 있어서, 에스테르는 트리글리세리드, 1,2-디글리세리드, 1,3-디글리세리드, 1-모노글리세리드, 2-모노글리세리드, 메틸에스테르, 에틸에스테르, 프로필에스테르, 이소프로필에스테르, n-부틸에스테르 및 tert-부틸에스테르로부터 선택된다. 적어도 하나의 실시예에 있어서, 화학식(I)의 화합물은 메틸에스테르, 에틸에스테르, 이소프로필에스테르, n-부틸에스테르 또는 tert-부틸에스테르, 예를 들어 메틸에스테르 또는 에틸에스테르로 존재한다. 전형적으로, 화학식(I)로 표시되는 에스테르(예를 들어, 에틸에스테르)는 위장관에서 가수분해될 것이다.
본 발명에 적합한 염은 NH4+의 염; Li+, Na+, K+, Mg2+, 또는 Ca2+와 같은 금속 이온; tert-부틸 암모늄, (3S,5S,7S)-아다만탄-1-암모늄, 1,3-디하이드록시-2-(하이드록시메틸)프로판-2-암모늄, 양성화된 아미노피리딘(예를 들어, 피리딘-2-암모늄)과 같은 양성화된 일차아민; 디에틸암모늄, 2,3,4,5,6-펜타하이드록시-N-메틸헥산-1-암모늄, N-에틸나프탈렌-1-암모늄과 같은 양성화된 이차아민, 4-메틸모르폴린-4-이움과 같은 양성화된 삼차아민, 2-하이드록시-N,N,N-트리메틸에탄-1-아미니움과 같은 양성화된 사차아민 및 아미노((4-아미노-4-카르복시부틸)아미노)메탄이미늄과 같은 양성화된 구아니딘 또는 1H-이미다졸-3-이움과 같은 양성화된 헤테로사이클을 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다. 추가의 적합한 염의 예는 에탄-1,2-디암모늄 또는 피페라진-1,4-디이움과 같은 이양성화된(diprotonated) 디아민의 염을 포함한다. 본 발명에 따른 다른 염은 양성화된 키토산을 포함 할 수 있다:
Figure pct00012
적어도 하나의 실시예에 있어서, 염은 나트륨염, 칼슘염 및 콜린염으로부터 선택된다. 일 실시예에 있어서, 염은 나트륨염 또는 칼슘염이다.
본 발명은 약학적 유효량의 화학식(I) 또는 화학식(II)의 화합물을 NASH 또는 ASH의 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 상기 대상체의 NASH 또는 ASH를 치료하는 방법을 제공한다. 상기 대상체는 인간 또는 비인간 포유 동물일 수 있다. 본원의 화합물은 예들 들어 약학 조성물 내의 약제로 투여될 수 있다. 일 측면에 있어서, 본 발명은 비알콜성 지방간염의 치료에 사용하기 위한 화학식(II)의 화합물, 예컨대 화학식(I)의 화합물, 예컨대 화합물 A를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 본원의 조성물은 개시된 바와 같은 하나 이상의 화합물 및 선택적으로 하나 이상의 비활성의 약학적 성분, 즉 부형제를 포함할 수 있다. 비활성의 성분은 가용화, 현탁, 농축, 희석, 유화, 안정화, 보존, 보호, 착색, 향미 및/또는 유효성분을 적용 가능하고 효과적인 제제로 제조될 수 있어, 안전하고 편리하며 및/또는 사용될 수 있다. 부형제의 예는 용매, 담체, 희석제, 바인더, 충전제, 감미제, 아로마, pH 조절제, 점도 조절제, 항산화제, 증량제, 보수제, 붕해제, 용액-지연제, 흡수 촉진제, 습윤제, 흡수제, 윤활제, 착색제, 분산제 및 방부제를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 부형제는 하나 이상의 역할 또는 기능을 가질 수 있거나 하나 이상의 그룹으로 분류될 수 있다; 분류는 설명을 위한 것일뿐 제한하기 위한 것이 아니다. 일부 실시예에 있어서, 예를 들어, 하나 이상의 부형제는 옥수수 전분, 락토스, 글루코스, 미세결정질 셀룰로스, 마그네슘 스테아레이트, 폴리비닐피롤리돈, 시트르산, 타르타르산, 물, 에탄올, 글리세롤, 소르비톨, 폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 세틸스테아릴 알콜, 카르복시메틸 셀룰로스 및 경질 지방과 같은 지방 물질 또는 이들의 적합한 혼합물로부터 선택될 수 있다. 일부 실시예에 있어서, 본원에 개시된 조성물은 하나 이상의 화학식(II)의 화합물, 예컨대 하나 이상의 화학식(I), 및 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 항산화제, 예를 들어 알파-토코페롤, 베타-토코페롤, 감마-토코페롤, 및 델타-토코페롤, 또는 이들의 혼합물과 같은 토코페롤, 2-tert-부틸-4-하이드록시아니솔 및 3-tert-부틸-4-하이드록시아니솔, 또는 이들의 혼합물과 같은 BHA 및 BHT(3,5-디-tert-부틸-4-하이드록시톨루엔), 또는 이들의 혼합물을 포함한다.
본원의 조성물은 경구투여 형태, 예를 들어 정제 또는 젤라틴 연질 또는 경질 캡슐로 제형화될 수 있다. 투여 형태는 구형, 타원형, 타원체, 입방체형, 규칙형 및/또는 불규칙형과 같은 경구투여에 적합한 임의의 형태일 수 있다. 당업계에 공지된 통상적인 제형 기술이 본 발명에 따른 화합물의 제형화에 사용될 수 있다. 일부 실시예에 있어서, 조성물은 젤라틴 캡슐 또는 정제 형태일 수 있다.
화학식(I)의 화합물 또는 화학식(II)의 화합물과 같은 개시된 화합물의 적합한 일일 투여량은 약 5 mg 내지 약 4 g, 예를 들어 약 5 mg 내지 약 2 g의 범위일 수 있다. 예를 들어, 일부 실시예에 있어서, 일일 투여량은 약 10 mg 내지 약 1.5 g, 약 50 mg 내지 약 1 g, 약 100 mg 내지 약 1 g, 약 150 mg 내지 약 900 mg, 약 50 mg 내지 약 800 mg, 약 100 mg 내지 약 800 mg, 약 100 mg 내지 약 600 mg, 약 150 내지 약 550 mg, 또는 약 200 내지 약 500 mg의 범위이다. 적어도 하나의 실시예에 있어서, 일일 투여량은 약 200 mg 내지 약 600 mg의 범위이다. 적어도 하나의 실시예에 있어서, 일일 투여량은 약 50 mg, 약 100 mg, 약 150 mg, 약 200 mg, 약 250 mg, 약 300 mg, 약 350 mg, 약 400 mg, 약 450 mg, 약 500 mg, 약 550 mg, 약 600 mg, 약 650 mg, 약 700 mg, 약 750 mg, 약 800 mg, 약 850 mg 또는 약 900 mg이다. 화합물(들)은 예를 들어 하루에 1 회, 2 회 또는 3 회 투여될 수 있다.
적어도 하나의 실시예에 있어서, 화학식(I)의 화합물은 용량 당 약 200 mg 내지 약 800 mg 범위의 양으로 투여된다. 적어도 하나의 실시예에 있어서, 화학식(I)의 화합물은 하루에 1회 투여된다. 적어도 하나의 실시예에 있어서, 화학식(I)의 화합물은 하루에 1 회 750 mg의 용량으로 투여된다. 일부 실시예에 있어서, 화학식(I)의 화합물은 하루에 1 회 600 mg의 용량으로 투여된다. 일부 실시예에 있어서, 화학식(I)의 화합물은 하루에 1 회 500 mg의 용량으로 투여된다. 일부 실시예에 있어서, 화학식(I)의 화합물은 하루에 1 회 300 mg의 용량으로 투여된다. 화학식(I)의 화합물은 하루에 1 회 250 mg의 용량으로 투여된다. 바람직하게는, 화학식(I)의 화합물은 하루에 1 회 300 mg 또는 600 mg의 용량으로 투여된다.
적어도 하나의 실시예에 있어서, 화학식(II)의 화합물은 용량 당 약 200 mg 내지 약 800 mg 범위의 양으로 투여된다. 적어도 하나의 실시예에 있어서, 화학식(II)의 화합물은 하루에 1회 투여된다. 적어도 하나의 실시예에 있어서, 화학식(II)의 화합물은 하루에 1 회 750 mg의 용량으로 투여된다. 일부 실시예에 있어서, 화학식(II)의 화합물은 하루에 1 회 600 mg의 용량으로 투여된다. 일부 실시예에 있어서, 화학식(II)의 화합물은 하루에 1 회 500 mg의 용량으로 투여된다. 일부 실시예에 있어서, 화학식(II)의 화합물은 하루에 1 회 300 mg의 용량으로 투여된다. 일부 실시예에 있어서, 화학식(II)의 화합물은 하루에 1 회 250 mg의 용량으로 투여된다. 바람직하게는, 화학식(II)의 화합물은 하루에 1 회 300 mg 또는 600 mg의 용량으로 투여된다.
본 발명에 따르면, 화학식(I) 또는 (II)의 화합물은 단독으로 또는 하나 또는 그 이상의 추가 활성제와 조합으로 투여될 수 있다. 공-투여의 경우, 추가 활성제는 바람직하게는 약물과 같은 치료적 활성제이고, 이는 바람직하게는 NASH 또는 ASH의 발병 및/또는 악화와 관련된 하나 이상의 요인과 같은 NASH 또는 ASH에 대한 치료 효과를 갖는다. 바람직하게는, 조합된 생성물, 즉 하나 이상의 추가 활성제와 조합된 화학식(I) 또는 (II)의 화합물의 사용은 NASH 또는 ASH의 예방 및/또는 치료에 상승효과를 갖는다.
일 실시예에 있어서, 하나 또는 그 이상의 추가 치료제는 알로스테릭 아세틸-CoA 카르복실라아제(ACC) 억제제, 안지오텐신 (II) 수용체 길항제, 안지오텐신 전환효소(ACE) 억제제, 아폽토시스 신호조절 키나아제-1(ASK1) 억제제, 카스파아제 억제제, 카셉신 B 억제제, CCR2 케모카인 길항제, CCR5 케모카인 길항제, 클로라이드 채널 자극제, 콜레스테롤 가용화제, 디아실 글리세롤 O-아실트랜스퍼라아제 1(DGAT1) 억제제, 디펩티딜 펩티다아제 IV(DPP IV) 억제제, 섬유모세포-성장인자(FGF)-21 작용제, 파네소이드 X 수용체(FXR) 작용제, 항-CD3 mAb, 갈렉틴-3 억제제, 글루카곤-유사 펩티드 1(GLP1) 작용제, 글루타티온 전구체, C형 간염 바이러스 NS3 프로테아제 억제제, HMG CoA 리덕타아제 억제제, 1 Ιβ-하이드록시스테로이드 데하이드로제나아제(ΙΙβ-HSDl) 억제제, 열충격단백질(Hsp)47 억제제, IL-Ιβ 길항제, IL-6 길항제, IL-10 작용제, IL-17 길항제, 회장 나트륨 담즙산 공동-수송체 억제제, 렙틴 유사체, 5-리폭시게나아제 억제제, LPL 유전자 자극제, 라이실옥시다아제 동족체 2(LOXL2) 억제제, 리소포스파티드산 1(LPA1) 수용체 길항제, 오메가-3 지방산, PDE3 억제제, PDE4 억제제, 포스포리파아제 C(PLC) 억제제, PPARa 작용제, PPARy 작용제, PPAR5 작용제, 재조합 인간 펜트락신-2 단백질(PRF-1), Rho 관련 단백질 키나아제 2(ROCK2) 억제제, 세미카바지드-민감성 아민 옥시다아제(SSAO) 억제제, 나트륨 포도당 수송체-2(SGLT2) 억제제, 스테아로일 CoA 불포화효소-1 억제제, 갑상선 호르몬 수용체 β 작용제, 종양괴사인자 α(TNFα) 리간드 억제제, 트랜스글루타미나아제 억제제, 트랜스글루타미나아제 억제제 전구체 및 작은 활성화 RNA(saRNA)로부터 독립적으로 선택된다.
특히, 일부 실시예에 있어서, 하나 또는 그 이상의 추가 활성제는 글루카곤-유사 펩티드 1(GLP-1) 작용제; 디펩티딜 펩티다아제 억제제(DPP-4 길항제) 및 오메가-3(n-3) 지방산의 군으로부터 선택된다.
GLP-1 수용체 작용제 또는 인크레틴 유사체로도 알려진 글루카곤-유사 펩티드-1 수용체 작용제는 GLP-1 수용체의 작용제이다. 이 부류의 약물은 일반적으로 제2형 당뇨병 치료에 사용된다. GLP 작용제의 비제한적인 예는 엑세나타이드, 리라글루티드, 릭시세나티드, 알비글루티드, 둘라글루티드, 타스포글루티드 및 세마글루티드를 포함한다.
일부 실시예에 있어서, 추가 활성제는 디펩티딜 펩티다아제 억제제(DPP-4 길항제)이다. DPP-4 길항제는 DPP-4(DPP-IV)를 차단하는 일종의 경구 저혈당증 부류이다. 이들은 제2형 당뇨병을 치료하는데 사용될 수 있다. 글루카곤은 혈당 수치를 증가시키고, DPP-4 억제제는 글루카곤 및 혈당 수치를 감소시킨다. DPP-4 억제제의 메카니즘은 인크레틴 수치(GLP-1 및 GIP)를 증가시켜, 글루카곤 분비를 억제하여, 인슐린 분비를 증가시키고 위 배출(gastric emptying)을 감소시키며 혈당 수치를 감소시킨다. 디펩티딜 펩티다아제 억제제의 비제한적 예는 시타글립틴, 빌다글립틴, 삭사글립틴, 리나글립틴, 게미글립틴, 아나글립틴, 테네리글립틴, 알로글립틴, 트레라글립틴, 오마르글립틴, 에보글립틴, 두토글립틴을 포함한다.
일부 실시예에 있어서, 추가의 약제는 오메가-3 지방산이다. 추가 활성제가 오메가-3 지방산인 경우, 오메가-3 지방산은 일반적으로 장쇄 다중불포화 오메가-3 지방산(LC n-3 PUFA)이다. 바람직하게는, 이것은 (all-Z 오메가-3)-5,8,11,14,17-에이코사펜타엔산(EPA) 및 (all-Z 오메가-3)-4,7,10,13,16,19-도코사헥사엔산(DHA), 또는 이의 유도체 중 적어도 하나를 포함한다. EPA 및 DHA를 포함하는 n-3 PUFA는 상이한 형태일 수 있으며, 유리 지방산 형태; 에스테르화된 형태, 예컨대 C1-C4 알킬 에스테르, 바람직하게는 에틸에스테르; 인지질; 모노/디/트리-글리세리드; 및 이들의 염 중 하나 이상으로 제공된다. 오메가-3 지방산은 경구투여용 조성물과 같은 조성물의 형태로 제공될 수 있다. 이러한 조성물은 활성 오메가-3 지방산의 적어도 40%, 예컨대 적어도 50%, 60%, 70% 또는 80%를 포함할 수 있다. 추가 활성제는 EPA 및 DHA 중 하나 이상, 바람직하게는 에틸에스테르 형태로 적어도 70%의 농도로 포함되는 조성물이다.
일부 실시예에 있어서, 하나 또는 그 이상의 추가 활성제는 아세틸살리실산, 알리포진 티파보벡, 아람콜, 아토르바스타틴, BI 1467335, BLX-1002, BMS-986036, BMS-986020, 세니크리비로코, 코비프로스톤, 콜레세벨람, 엠리카산, 에날라프릴, 포라무라브, GFT-505, GR-MD-02, GS-0976, GS-9674, 히드로클로로티아지드, 이코사펜에틸에스테르(에틸에이코사펜타엔산, EPA 에틸에스테르), IMM-124E, IVA337, K-877, KD-025, 리나글립틴, 리라글루티드, 머캅타민, MGL-3196, ND-L02-s0201, 오베티콜산, 올레속자임, 페길로데카킨, 피오글리타존, PRM-151, PX-102, 레모글리플로진 에타보네이트, 셀론세르티브, 시투주맙, SHP-626, 솔리트로마이신, 티펠루카스트, TRX-318, 우르소데옥시콜산, 및 VBY-376의 군으로부터 독립적으로 선택된다. 조합된 생성물의 제1 성분, 즉 화학식(I) 또는(II)의 화합물은 상기 기재한 바와 같이 임의의 방식으로 투여되거나 제형화될 수 있다. 조합된 생성물의 제2 성분, 추가 활성제는 약제의 유형에 적합하도록 제형화 될 수 있으며, 약제의 투여 방식을 포함하여 몇 가지 요인에 의존한다. 추가 활성제의 용량은 선택된 약제의 유형에 따라 다르며, 특정 약제의 승인된 양에 따라야 한다. 실시예에 제공된 바와 같이, CDAA(콜린-결핍 1-아미노산) 식이유발 NASH 모델의 사용은 간섬유증 및 염증 둘 다에 대한 모델을 제공한다. 실시예에 의해 지지되는 바와 같이, GLP-1 단독으로의 치료와 비교하여, GLP-1 작용제와 화학식(I) 또는 (II)의 화합물, 예컨대 화합물 A의 조합은 NASH 관련 섬유증 및 염증에 대해 우수한 효과를 갖는다. 간섬유증은 주로 염증 반응에 대한 반응이므로, 이는 또한 염증-관련 간 유전자 발현(TNF-α)의 입증된 변화에 의해 지지되며, 이는 GLP-1 작용제 단독과 비교하여, 산소-함유 구조적으로 변형된 지방산(화합물 A)과 GLP-1 작용제와의 조합의 우수성을 입증한다. 전반적으로 데이터는 GLP-1 작용제(또는 대안적으로 DPP-4 길항제)와 본 발명의 화합물의 조합이 간염 및 섬유증 둘 다의 치료에 대해 상승효과를 달성할 수 있음을 시사한다.
간지방증은 그 자체가 양성상태일 수 있지만, 염증 반응을 유발하는 다른 요인들로부터 간을 "2차 적중(2nd hit)"으로 민감하게 할 수 있다. 따라서, 다른 또는 계속된 간 손상에 대한 잠재적인 "프라이밍(priming)" 요인으로서 NAS 점수에 대한 이의 기여 및 NASH의 해소에 대한 지방증의 감소가 바람직하다. 특히, 어느 화합물도 ApoE*3L-CETP 형질전환 마우스에서 간 트리글리세리드(TG) 단독의 현저한 감소를 달성하지 못하였기 때문에, 고용량의 오메가-3 에틸에스테르와 저용량의 산소-함유 구조적으로 변형된 지방산(화합물 A)의 조합으로 달성된 간지질의 신규하고 현저한 개선은 상승효과가 달성되었음을 강력하게 시사한다.
놀랍게도, 오메가-3 에틸에스테르에 대해 <10 유전자 발현 프로브(데이터 미도시)인 것과 비교하여, 오메가-3 에틸에스테르 용량의 일부인 화합물 A는 APOE*3.CETP 형질전환 마우스의 간에서 유의미하게 > 1094 유전자 발현 프로브로 상향- 또는 하향-조절되었다. 이론에 구애되지 않고, 간 전사체(transcriptome)에 대한 이러한 발산 효과(diverging effect)는 관찰된 상승효과가 누적 용량 효과와는 상이한 경로를 표적화하는데 이차적임을 시사할 수 있다. 간 콜레스테롤 함량에 대한 유의 한 영향은 NASH 및 ASH의 발병기전과 관련된 염증 반응에 긍정적인 영향을 줄 수 있다. APOE*3.CETP 마우스의 전체 데이터는 간지방증의 감소, 이에 따른 NASH 및/또는 ASH의 치료에 대한 강력한 치료법으로 EPA 에틸에스테르와 같은 오메가-3 PUFA 제형과 화학식(I) 또는(II)에 따른 산소-함유 구조적으로 변형된 지방산의 조합을 지지한다.
화학식(II)의 화합물, 또는 바람직하게는 화학식(I)의 화합물은, 비알콜성 지방간염(NASH) 또는 알콜성 지방간염(ASH)을 치료 및/또는 역전시키기 위해, 단독으로 또는 하나 이상의 추가의 활성제와 조합하여 투여될 수 있다. 일부 실시예에 있어서, 하나 이상의 추가 활성제는 GLP-1 작용제이다. 추가로, APOE*3.CETP 형질전환 마우스에서의 발견에 기초하여, 화학식(II)의 화합물, 또는 바람직하게는 화학식(I)의 화합물은, 치료학적 및/또는 예방학적으로 간지방증(트리글리세리드 및/또는 콜레스테롤 함량)의 치료 및/또는 역전시키기 위해, 하나 이상의 추가 활성제와 조합하여 투여될 수 있다. 일부 실시예에 있어서, 하나 이상의 추가 활성제는 오메가 3 PUFA 에틸에스테르와 같은 오메가-3 지방산이다.
상기 예는 산소-함유 구조적으로 변형된 지방산이 NASH 및/또는 ASH의 치료를 위해 다수의 다른 활성제와 조합될 가능성을 강조한다. 이러한 조합은 단독 요법에 비해 효능 관련 결과를 개선할뿐만 아니라 안전성을 개선할 수 있다. 후자의 예로서, 화합물 A는 APOE*3.CETP 마우스에서 CETP 발현을 현저하게 감소시키고, 설치류 및 인간 둘 다에서 지질 프로파일을 개선시키는 것으로 입증되었다. 이는, 화합물 A와 대조적으로, APOE*3.CETP 마우스 및 인간 모두에서 CETP 발현을 증가시키고 지질 프로파일을 악화시키는 오베티콜산(FXR 작용제)과의 조합에 유리할 수 있다.
본 발명자들은 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산과 같은 화학식(I)의 화합물이 현저하게 우수한 약학적 활성을 갖는다는 것을 발견하였다. 놀랍게도, 본원의 화학식(I)의 화합물은 NASH 관련 간섬유증 및 염증을 치료하기 위해 글루카곤-유사 펩티드 1 수용체(GLP-1R) 작용제와 비교하여 개선된 생물학적 활성을 나타낸다. 화학식(I)의 화합물은 또한 추가 활성제와 조합으로 투여될 때 상승적인 효과를 나타낸다.
실시예
본 발명은 하기 비제한적 실시를 통하여 더욱 상세하게 기술될 것이며, 본 기술분야의 숙련된 화학자에게 알려진 표준 기술 및 본 실시예에 기재된 것과 유사한 기술은 적절하게 사용될 수 있다. 당업자는 본 명세서에 제공된 개시 내용과 일치하는 추가 실시예를 예상할 수 있음을 이해해야 한다.
달리 언급되지 않는 한, 반응은 무수 조건하에서 HPLC 등급의 용매와 실온, 일반적으로 18-25 ℃의 범위에서 수행되었다. 증발는 진공하에서 회전 증발에 의해 수행되었다. 컬럼 크로마토그래피는 실리카겔 40-63 μm(Merck)에서의 플래쉬 절차 또는 미리 패킹된 실리카겔 컬럼 "MiniVarioflash", "SuperVarioflash", "SuperVarioPrep" 또는 "EasyVarioPrep"(Merck)을 사용하여 아르멘 스팟플래쉬(Armen Spotflash)에 의해 수행되었다. 자기공명영상(NMR) 이동값은 다음과 같이 기술된 피크 다중도를 갖는 Bruker Avance DPX 200 또는 300 기기에서 기록되었다: s, 단일; d, 이중; dd, 이중 이중; t, 삼중; q, 사중; p, 오중; m, 다중; br, 넓다. 질량 스펙트럼은 LC/MS 분광계로 기록했다. 분리는 구배 용리가 있는 Eclipse XDB-C18 2.1 x 150 mm 컬럼에서 Agilent 1100 시리즈 모듈을 사용하여 수행되었다.
용리액은 0.01% 트리 플루오로 아세트산 또는 0.005% 포름산 나트륨을 함유하는 완충액에서 5-95% 아세토니트릴의 구배가 사용되었다. 질량 스펙트럼은 양성 및 음성 이온화 모드를 전환하는 Gl956A 질량 분석기(전자 분무, 3000 V)로 기록되었다. 보고된 수율은 다만 예시를 위해 제공되고 달성할 수 있는 최대치라고는 할 수 없다.
화합물의 제조
실시예 1: tert -부틸 2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부타노에이트의 제조:
Figure pct00013
테트라부틸암모늄 클로라이드(0.55 g, 1.98 mmol)가 톨루엔(35 mL) 내의 (5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-올,(3.50 g, 12.1 mmol)의 용액에 실온 및 질소하에서 첨가되었다. 수산화나트륨 수용액(50%(w/w), 11.7 mL)은 실온에서 격렬하게 교반된 후, t-부틸 2-브로모부티레이트(5.41 g, 24.3 mmol)가 첨가되었다. 생성된 혼합물은 50 ℃로 가열되고, 1.5 시간(2.70 g, 12.1 mmol), 3.5 시간(2.70 g, 12.1 mmol) 및 4.5 시간(2.70 g, 12.1 mmol) 후에 추가의 t-부틸 2-브로모부티레이트가 첨가하고 총 12 시간 교반되었다. 실온으로 냉각 후, 얼음물(25 mL)이 첨가되고, 생성된 두 상은 분리되었다. NaOH(5%) 및 브라인의 혼합물로 세척, 건조(MgSO4), 여과 및 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄 및 에틸아세테이트(100:0 -> 95:5)의 혼합물의 극성을 증가시킴으로써 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 1.87 g(36% 수율)의 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCI3): δ 0.85-1.10(m, 6H), 1.35-1.54(m, 11H), 1.53-1.87(m, 4H), 1.96-2.26(m, 4H), 2.70-3.02(m, 8H), 3.31(dt, 1H), 3.51 내지 3.67(m, 2H), 5.10-5.58(m, 10H).
실시예 2: 2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타에닐옥시)부탄산(화합물 A)의 제조:
Figure pct00014
tert-부틸 2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부타노에이트(19.6 g, 45.5 mmol)가 디클로로메탄(200 mL)에 용해되었고 질소하에 놓였다. 트리플루오로아세트산(50 mL) 첨가되고, 반응 혼합물은 실온에서 1 시간 동안 교반되었다. 물이 첨가되고 수용액상은 디클로로메탄으로 2회 추출되었다. 혼합된 유기 추출물은 브라인으로 세척, 건조(Na2SO4), 여과 및 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄, 에틸아세테이트, 및 포름산(90:10:1-> 80:20:1)의 혼합물의 극성을 증가시킴으로써 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 수행되었다. 적절한 분획의 농축으로 12.1 g(71% 수율)의 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
1H-NMR(300 MHz, CDCl3): δ 0.90-1.00(m, 6H), 1.50(m, 2H), 1.70(m, 2H), 1.80(m, 2H), 2.10(m, 4H), 2.80-2.90(m, 8H), 3.50(m, 1H), 3.60(m, 1H), 3.75(t, 1H), 5.30-5.50(m, 10H); MS(전자스프레이): 373.2 [M-H]-.
실시예 3: 칼슘 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노에이트의 제조
Figure pct00015
2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산(1.87 g, 4.99 mmol, 93%)이 CaCO3(0.25 g, 2.50 mmol)와 혼합되었다. 물(1 ml)이 첨가되고, 혼합물은 실온에서 1 시간 동안 기계적 교반으로 교반되었다. CO2가 발생하였다. 조밀하고 균질한 페이스트가 형성되었다. 교반되면서, 아세톤(7 ml)이 첨가되었다. 고체 물질은 분리되었다. 고체 물질은 여과, 질소하에서 건조, 밀봉 및 냉장고에 4 ℃에서 보관되었다. 수율: 1.86 g(95%). 고체는 분석 또는 분광법에 의해 추가로 특성화되지 않았지만, 칼슘염이 형성되었음을 나타내는 몇 가지 실험이 수행되었다:
● 고체 물질은 100 ℃ 미만의 열판에서 녹는다. 날카로운 녹는점은 측정되지 않았다.
● 물질은 산 첨가시 CO2를 방출하지 않지만, "용해" 및 오일로 침전된다.
실시예 4: 소듐 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노에이트의 제조
Figure pct00016
2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산(1.87 g, 4.99 mmol, 93%)이 NaHCO3(0.420 g, 5.00 mmol)와 함께 혼합되었다. 물(1 ml)이 첨가되고, 혼합물은 실온에서 1 시간 동안 기계적 교반으로 교반되었다. 이산화탄소가 발생되고, 걸쭉한 균질의 페이스트가 형성되었다. 교반되면서, 에탄올(7 ml)이 반응 플라스크에 첨가되었다. 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산으로부터 형성된 나트륨염이 에탄올(7 ml)의 첨가시 용액이 되었다(7 ml). 소량의 미반응 NaHCO3는 여과되고 용액은 증발 건조되었다. 약간 점성의 크루드 오일이 96% 에탄올과 함께 2 회 증발되어 미량의 물이 제거되었다.
실시예 5: 2-하이드록시-N,N,N-트리메틸에탄-1-아미니움 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노에이트의 제조
Figure pct00017
물 내의 콜린 하이드록시드(327.7 μL), 약 2.5mL MTBE 및 7.5 mL의 n-헵탄이 신틸레이션 바이알(scintillation vial)로 피펫팅되었다. 질소 챔버 내에서, 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산(500 mg, 95.8%)이 상기 바이알로 옮겨졌다. 질소 챔버 내에서, 약1.0 mL의 물이 바이알에 천천히 교반하에서 첨가되었다. 이어서 바이알은 밀봉되었다. 반응 혼합물은 약 30분 동안 교반되었다. 형성된 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산 콜린염은 경질의 겔형 물질이었고, 부흐너(Buchner) 깔때기에서 여과되었다. 필터상의 습윤 물질은 1mL의 MTBE를 사용하여 3 회 세척되었다. 세척된 물질은 단단한 겔형 고체로 나타났다.
실시예 6: (4S,5R)-3-((S)-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타에닐옥시)부타노일)-4-메틸-5-페닐옥사졸리딘-2-온 및 (4S,5R)-3-((R)-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타에닐옥시)부타노일)-4-메틸-5-페닐옥사졸리딘-2-온의 제조:
Figure pct00018
DMAP(1.10 g, 8.90 mmol) 및 DCC(1.90 g, 9.30 mmol)가 0 ℃에서 질소하에 유지되는 건조 디클로로메탄(100 mL) 내의 2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타에닐옥시)부탄산(3.20 g, 8.50 mmol) 혼합물에 첨가되었다. 생성된 혼합물은 0 ℃에서 20 분 동안 교반되었다. (4S,5R)-4-메틸-5-페닐옥사졸리딘-2-온(1.50 g, 8.50 mmol)이 첨가되고, 생성된 혼탁 혼합물은 주위 온도에서 5 일 동안 교반되었다. 혼합물은 여과되고 감압하에서 농축되어 목적 생성물을 2 개의 부분입체 이성질체의 혼합물로서 함유하는 크루드 생성물이 수득되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄 내의 15% 에틸아세테이트를 사용하여 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 2 개의 부분입체 이성질체는 분리되고, 적절한 분획은 농축되었다. (4S,5R)-3-((S)-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타에닐옥시)부타노일)-4-메틸-5-페닐옥사졸리딘-2-온이 먼저 용리되어 오일로서 1.1 g(40% 수율) 수득되었다.(4S,5R)-3-((R)-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타에닐옥시)부타노일)-4-메틸-5-페닐옥사졸리딘-2-온이 오일로서 0.95 g(수율 34%) 수득되었다.
(4S,5R)-3-((S)-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타에닐옥시)부타노일)-4-메틸-5-페닐옥사졸리딘-2-온(E1): 1H-NMR(300 MHz, CDCl3): δ 0.90(d, 3H), 1.00(t, 3H), 1.07(t, 3H), 1.45-1.57(m, 2H), 1.62-1.76(m, 3H), 1.85-1.95(m, 1H), 2.05-2.15(m, 4H), 2.87(m, 8H), 3.39(m, 1H), 3.57(m, 1H), 4.85-4.92(m, 2H), 5.30-5.45(m, 10H), 5.75(d, 1H), 7.32(m, 2H), 7.43(m, 3H).
(4S,5R)-3-((R)-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타에닐옥시)부타노일)-4-메틸-5-페닐옥사졸리딘-2-온(E2): 1H-NMR(300 MHz, CDCl3): δ 0.98(d, 3H), 0.99(t, 3H), 1.08(t, 3H), 1.40-1.52(m, 2H), 1.55-1.75(m, 3H), 1.80-1.90(m, 1H), 2.05-2.15(m, 4H), 2.84(m, 8H), 3.39(m, 1H), 3.56(m, 1H), 4.79(pent, 1H), 4.97(dd, 1H), 5.30-5.45(m, 10H), 5.71(d, 1H), 7.33(m, 2H), 7.43(m, 3H).
실시예 7: (S)-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타에닐옥시)부탄산의 제조:
Figure pct00019
과산화수소(물, 0.75 mL 내의 35%, 8.54 mmol) 및 리듐 하이드록시드 모노하이드레이트(0.18 g, 4.27 mmol)가 질소하에 0 ℃에서 유지되는 테트라하이드로퓨란(12 mL) 및 물(4 mL) 내의 (4S,5R)-3-((S)-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타에닐옥시)부타노일)-4-메틸-5-페닐옥사졸리딘-2-온(1.10 g, 2.13 mmol) 용액으로 첨가되었다. 반응 혼합물은 0 ℃에서 30 분 동안 교반되었다. 10% Na2SO3(aq)(30 mL)이 첨가되고, 2M HCl로 pH는 ~ 2로 조정되고, 혼합물은 헵탄(30 mL)으로 2 회 추출되었다. 혼합된 유기 추출물은 건조 (Na2SO4), 여과, 및 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄 및 에틸아세테이트(98:8 -> 1:1)의 혼합물의 극성을 증가시킴으로써 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 수행되었다. 적절한 분획의 농축으로 0.48 g(60% 수율)의 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
1HNMR(300 MHz, CDCl3): δ 0.90-1.00(m, 6H), 1.48(m, 2H), 1.65(m, 2H), 1.85(m, 2H), 2.10(m, 4H), 2.80-2.90(m, 8H), 3.55(m, 1H), 3.60(m, 1H), 3.88(t, 1H), 5.35-5.45(m, 10H); MS(전자스프레이): 373.3 [M-H]-; [α]D-37°(c=0.104, 에탄올).
실시예 8: (R)-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타에닐옥시)부탄산의 제조:
Figure pct00020
과산화수소(물 내의 35%, 0.65mL, 7.37mmol) 및 리듐 하이드록시드 모노하이드레이트(0.15 g, 3.69 mmol)가 질소하에 0 ℃에서 유지되는 테트라하이드로퓨란(12 mL) 및 물(4 mL) 내의 (4S,5R)-3-((R)-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타에닐옥시)부타노일)-4-메틸-5-페닐옥사졸리딘-2-온(0.95 g, 1.84 mmol) 용액에 첨가되었다. 반응 혼합물은 0 ℃에서 30 분 동안 교반되었다. 10% Na2SO3(aq)(30 mL)이 첨가되고, 2M HCl로 pH는 2로 조정되고, 혼합물은 헵탄(30 mL)으로 2 회 추출되었다. 혼합된 유기 추출물은 건조(Na2SO4), 여과 및 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄 및 에틸아세테이트(98:8 -> 50:50)의 혼합물의 극성을 증가시킴으로써 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 수행되었다. 적절한 분획의 농축으로 0.19 g(29% 수율)의 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
1H-NMR(300 MHz, CDCl3): δ 0.90-1.00(m, 6H), 1.48(m, 2H), 1.65(m, 2H), 1.85(m, 2H), 2.10(m, 4H), 2.80-2.90(m, 8H), 3.55(m, 1H), 3.60(m, 1H), 3.88(t, 1H), 5.35-5.45(m, 10H); MS(전자스프레이): 373.3 [M-H]-; [α]D-31°(c=0.088, 에탄올).
실시예 9: 에틸 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노에이트의 제조:
Figure pct00021
디사이클로헥실메탄디이민(DCC)(304 mg, 1.47 mmol) 및 N,N-디메틸피리딘-4-아민(DMAP)(10 mg, 0.067 mmol)이 디클로로메탄(DCM)(4 mL) 내의 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산(501.3 mg, 1.335 mmol) 의 교반 용액에 0 ℃에서 질소 분위기하에서 첨가되었다. 혼합물은 5 분 동안 교반되고, 에탄올(EtOH)(0.16 mL, 2.67 mmol)이 첨가되었다. 생성된 혼합물은 실온에서 20 시간 동안 교반되었다. 반응 혼합물은 용리액으로서 헵탄 및 에틸아세테이트(100:0 → 99:1)의 혼합물을 사용하여 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 473 mg(88% 수율)의 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, 클로로포름-d) δ 0.95(2 x t, 6H), 1.37-1.48(m, 2H), 1.54-1.79(m, 4H), 2.01-2.10(m, 4H), 2.77-2.84(m, 8H), 3.27-3.34(m, 1H), 3.53-3.60(m, 1H), 3.69-3.73(dd, 1H), 4.13-4.24(m, 2H), 5.25-5.33(m, 10H), MS(전자스프레이); 425.3 [M+Na]+; HRMS(전자스프레이): Found 425.3021 [M+Na]+, calcd. for [C26H42O3+Na]+ 425.3031.
실시예 10: 이소프로필 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노에이트의 제조
Figure pct00022
DCC(310 mg, 1.47 mmol) 및 DMAP(9 mg, 0.067 mmol)이 DCM(4 mL) 내의 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산(501 mg, 1.335 mmol)의 교반된 용액에 0 ℃에서 질소 분위기하에서 첨가되었다. 혼합물은 5 분 동안 교반되고, 이소프로판올(iPrOH)(0.16 mL, 2.67 mmol)이 첨가되었다. 생성된 혼합물은 실온에서 20 시간 동안 교반되었다. 혼합물은 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 헵탄(50 mL)에 첨가, 여과, 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄 내의 1% 에틸아세테이트를 사용하여 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 496 mg(89% 수율)의 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3): δ 0.97(2 x t, 6H), 1.25(m, 6H), 1.42-1.50(m, 2H), 1.61-1.70(m, 2H), 1.70-1.77(m, 2H), 2.05-2.12(m, 4H), 2.79-2.86(m, 8H), 3.29-3.34(m, 1H), 3.54-3.59(m, 1H), 3.67-3.71(m, 1H), 5.06-5.10(m, 1H), 5.31-5.42(m, 10 H); MS(전자스프레이): 439.3 [M+Na]+.
실시예 11: 메틸 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노에이트의 제조:
Figure pct00023
황산(0.049 ml, 0.918 mmol)이 에탄올(20 ml) 내의 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산((385 mg, 1,028 mmol) 용액에 실온에서 질소 분위기하에서 첨가되었고, 생성된 혼합물은 실온에서 밤새도록 교반되었다.
MS(전자스프레이): 389.3 [M+1]+.
실시예 12: 부틸 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노에이트의 제조:
Figure pct00024
황산(0.049 ml, 0.918 mmol)이 부탄-1-올(400 mL, 4.37 mol) 내의 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산((33 g, 88 mmol)의 용액에 실온에서 질소 분위기하에서 첨가되었고, 반응 혼합물은 120 시간 동안 교반되었다. 헵탄(400 mL) 및 에틸아세테이트(400 mL)가 첨가되고, 용액은 포화 aq. NaHCO3(3x300 mL) 및 물(2x300 mL)로 세척되었다. 혼합된 수용액상은 헵탄/에테르(1:1)(2x300 mL)로 추출되었다. 혼합된 유기상은 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로 헵탄 및 에틸아세테이트(99:1 → 96:4)의 혼합물을 사용하여 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 26.3 g(67% 수율)의 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 0.93-1.02(m, 9H), 1.36-1.51(m, 4H), 1.60-1.70(m, 4H), 1.72-1.84(m, 2H), 2.05-2.16(m,4H), 2.78-2.92(m, 8H), 3.28-3.39(m, 1H), 3.54-3.65(m, 1H), 3.70-3.82(m, 1H), 4.08-4.24(m, 2H), 5.27-5.48(m, 10H), MS(전자스프레이): 453.2 [M+Na]+.
실시예 13: 2,3-디하이드록시프로필 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노에이트의 제조:
단계 a) (2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메틸 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노에이트의 제조
Figure pct00025
2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산(25 g, 66,7 mmol) 및 DMAP(8.15 g, 66.7 mmol)가 질소 분위기하에서 클로로포름(150 mL) 내의 2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-메탄올(7.54 mL, 60.7 mmol)의 용액에 첨가되었다. 클로로포름(65 mL) 내의 DCC(13.77 g, 66,7 mmol)의 용액은 주위 온도에서 적가되었다. 혼합물은 밤새 교반되었고 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄 내의 10% 에틸아세테이트의 혼합물의 극성을 증가시킴으로써 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 19.6 g(66% 수율)의 오일의 목표 생성물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 0.99(t, 6H), 1.37-1.40(m, 3H), 1.41-1.53(m, 5H), 1.59-1.71(m, 2H), 1.72-1.85(m, 2H), 2.05-2.14(m, 4H), 2.74-2.95(m, 8H), 3.31 내지 3.38(m, 1H), 3.57-3.65(m, 1H), 3.72-3.86(m, 2H), 4.07-4.12(m, 1H), 4.15-4.27(m, 2H), 4.29-4.40(m, 1H), 5.23-5.50(m, 10H). MS(전자스프레이): 511.3 [M+Na]+.
단계 b) 2,3-디하이드록시프로필 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노에이트의 제조
Figure pct00026
디옥산(280 mL) 내의 ((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메틸 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노에이트(27.5 g, 56.3 mmol)의 용액에 aq. HCl(37%(w/w), 28 mL, 341 mmol)이 실온 및 질소하에서 첨가되었다. 혼합물은 혼합물은 60분 동안 교반되었다. 이어서 혼합물은 포화 aq. NaHCO3(500 mL)에 첨가되었고, EtOAc(2x300 mL)로 추출되었다. 유기상은 1M HCl(200 mL) 및 브라인(200 mL)로 세척, 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로 헵탄 및 에틸아세테이트(50:50)을 사용하여 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 ~10%의 이성질체 1,3-디하이드록시프로판-2-일 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노에이트를 포함하는 19 g의 오일의 목표 생성물이 수득되었다. 물질은 1.35 g의 다른 배치와 혼합된 후, prep HPLC에 의해 추가로 정제되었다. 물/아세토니트릴(9:1) 대 아세토니트릴(100%)의 등용매 17:83 혼합물은 용리액으로 사용되었다. 적절한 분획의 농축으로 11.3 g(38% 수율)의 오일의 목표 생성물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 0.97-1.03(m, 6H), 1.41-1.51(m, 2H), 1.59-1.69(m, 2H), 1.72-1.87(m, 2H), 2.05-2.14(m, 5H), 2.56(s, 1H), 2.73-2.94(m, 8H), 3.33-3.40(m, 1H), 3.55-3.68(m, 2H), 3.69-3.77(m, 1H), 3.79-3.85(m, 1H), 3.93-4.03(m, 1H), 4.15-4.37(m, 2H), 5.25-5.51(m, 10H). MS(전자스프레이): 471.3 [M+Na]+.
실시예 14: 1,3-디하이드록시프로판-2-일 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노에이트의 제조
단계 a) 옥시란-2-일메틸 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노에이트의 제조
Figure pct00027
건조 DCM(7 mL) 내의 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산(800 mg, 2.14 mmol), 글리시돌(0.17 mL, 2.56 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드(EDC*HCl)(491 mg, 2.56 mmol) 및 4-디메틸아미노피리딘(DMAP)(313 mg, 2.56 mmol)의 혼합물은 N2-분위기하에서 실온에서 교반되었다. 반응 혼합물은 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄 및 에틸아세테이트(99:1 → 95:5) 혼합물의 극성을 증가시킴으로써 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 527 mg(57% 수율)의 오일의 목표 생성물이 수득되었다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 0.94-0.98(m, 6H), 1.40-1.44(m, 2H), 1.57-1.64(m, 2H), 1.70-1.82(m, 2H), 2.02-2.12(m, 4H), 2.63(bs, 1H), 2.78-2.84(m, 9H), 3.20(bs, 1H), 3.30-3.35(m, 1H), 3.55-3.61(m, 1H), 3.77-3.80(m, 1H), 3.94-4.01(m, 1H), 4.42-4.48(m, 1H), 5.36-5.26(m, 10H). MS(전자스프레이): 453.3 [M+Na]+ .
단계 b) 2-((2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노일)옥시)프로판-1,3-디일 비스(2,2,2-트리플루오로아세테이트)의 제조
Figure pct00028
건조 DCM(3 mL) 내의 트리플루오로아세트산 무수물(TFAA)(0.55 mL, 3.96 mmol)이 건조 DCM(3 mL) 내의 옥시란-2-일메틸 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노에이트(286 mg, 0.66 mmol)의 예냉된 용액에 조금씩 N2-분위기하에서 -20 ℃에서 첨가되었다. 냉각조는 제거되고, 혼합물은 주위 온도에서 19 시간 동안 교반된 후, 반응 혼합물은 진공 압력하에서 농축되었다. 잔류물은 톨루엔(6 mL)에 용해되고, 톨루엔(150 mL)으로 용리되면서 실리카 패드(6.5 g)를 통과되었다. 진공하에서의 농축으로 357 mg(84% 수율)의 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 0.95(2xt, 6H), 1.38-1.45(m, 2H), 1.57-1.63(m, 2H), 1.66-1.78(m, 2H), 2.09-2.02(m, 4H), 2.78-2.84(m, 8H), 3.27-3.33(m, 1H), 3.51 내지 3.56(m, 1H), 3.77(dd, 1H), 4.30-4.53(m, 2H), 4.60-4.69(m, 2H), 5.17-5.43(m, 10H), 5.43-5.55(m, 1H). MS(전자스프레이): 661.1 [M+Na]+.
단계 c) 1,3-디하이드록시프로판-2-일 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노에이트의 제조
Figure pct00029
펜탄/DCM(2:1)(4.5 mL) 내의 피리딘(0.4 mL, 4.95 mmol) 및 메탄올(0.3 mL, 7.41 mmol)의 용액이 N2-분위기하에서 -20 ℃로 냉각된 펜탄/DCM(2:1)(5 mL) 내의 -((2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노일)옥시)프로판-1,3-디일 비스(2,2,2-트리플루오로아세테이트)(354 mg, 0.552 mmol)에 서서히 첨가되었다. 냉각조는 제거되었고, 혼합물은 실온에서 3 시간 동안 교반된 후, 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄 및 에틸아세테이트(95:5 → 90:10 → 80:20 → 50:50)의 혼합물의 극성을 증가시킴으로써 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 223 mg의 크루드 오일의 목표 생성물이 수득되었다. prep HPLC로 정제되어 58 mg(22% 수율)의 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 0.95(t, 3H), 0.96(t, 3H), 1.38-1.45(m, 2H), 1.54-1.64(m, 2H), 1.67-1.84(m, 2H), 2.01-2.09(m, 4H), 2.45(bs, 2H), 2.83-2.77(m, 8H), 3.36-3.30(m, 1H), 3.60-3.55(m, 1H), 3.84-3.78(m, 5H), 4.98-4.93(m, 1H), 5.65-5.09(m, 10H). MS(전자스프레이): 471.1 [M+Na]+.
실시예 15: 3-하이드록시프로판-1,2-디일 비스 (2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노에이트)의 제조
단계 a) tert-부틸((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)디메틸실란의 제조
Figure pct00030
tert-부틸-클로로디메틸실란(14.41 g, 91 mmol)이 THF(100 mL) 내의 (2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메탄올(10 g, 76 mmol) 및 이미다졸(7.73 g, 114 mmol)의 용액에 질소 분위기하에서 주위 온도에서 첨가되었다. 혼합물은 1.5 시간 동안 교반되고, 물(200mL)에 부어지고, tert-부틸메틸에테르(2x150 mL)로 추출되었다. 상은 분리되고, 유기층은 물(100 mL) 및 브라인(100 mL)으로 세척, 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄 내의 3% 에틸아세테이트를 사용하여 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 18 g(97% 수율)의 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 0.02-0.05(m, 6H), 0.85-0.89(m, 9H), 1.31-1.35(m, 3H), 1.35-1.40(m, 3H), 3.50-3.60(m, 1H), 3.63-3.72(m, 1H), 3.75-3.85(m, 1H), 3.96-4.05(m, 1H), 4.07-4.18(m, 1H). MS(전자스프레이): 229.2 [M+Na]+.
단계 b) 3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)프로판-1,2-디올의 제조
Figure pct00031
클로로포름(60 mL) 내의 tert-부틸((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)디메틸실란의 용액에 실리카겔(30 g, 11.9 mmol)에 흡수된 FeCl3x6H2O 첨가되었고, 혼합물은 밤새 교반되었다. 혼합물은 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄 및 에틸아세테이트(50:50 → 25:75)의 혼합물의 극성을 증가시킴으로써 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 760 mg(9% 수율)의 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 0.09-0.12(m, 6H). 0.91-0.95(m, 9H), 2.11-2.17(m, 1H), 2.60(d, 1H), 3.57-3.85(m, 5H). MS(전자스프레이): 229.2 [M+Na]+.
단계 c) 3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)프로판-1,2-디일 비스(2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노에이트)의 제조
Figure pct00032
DMF(20 ml) 내의 3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)프로판-1,2-디올(0.91 g, 4.41 mmol)의 용액에 주위 온도에서 N2-분위기하에서 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산(3.47 g, 9.3 mmol), DMAP(1.13 g, 9.3 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드(DCI)(1.776 g, 9.26 mmol) 및 건조 DCM(60 ml)가 첨가되었다. 혼합물은 밤새 교반된 후, 반응 혼합물은 디에틸에테르(200 mL)로 희석되었다. 혼합물은 1M HCl(100 mL) 및 브라인(100 mL)으로 세척, 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄 내의 3% 에틸아세테이트를 사용하여 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 2.26 g(56% 수율)의 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 0.08(s, 6H), 0.90(d, 9H), 0.95-1.03(m, 12H), 1.40-1.52(m, 4H), 1.58-1.69(m, 4H), 1.70-1.83(m, 4H), 2.04-2.15(m, 8H), 2.77-2.92(m, 16H), 3.27-3.37(m, 2H), 3.57-3.67(m, 2H), 3.72-3.80(m, 4H), 4.14-4.32(m, 1H), 4.41-4.56(m, 1H), 5.09-5.22(m, 1H), 5.23-5.49(m, 20H). MS(전자스프레이): 941.6 [M+Na]+.
단계 d) 3-하이드록시프로판-1,2-디일 비스(2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노에이트)의 제조
Figure pct00033
디옥산(100 mL) 내의 3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)프로판-1,2-디일 비스(2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노에이트)(2.26 g, 2.46 mmol) 용액에 aq. HCl(37%(w/w, 2 mL)이 첨가되었고, 혼합물은 주위 온도에서 질소 분위기하에서 3 시간 동안 교반된 후, 진공하에서 농축되었다.
잔류물은 헵탄 내의 15% 에틸아세테이트를 사용하여 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 0.83 g(42% 수율)의 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 0.96-1.03(m, 12H), 1.40-1.53(m, 4H), 1.58-1.68(m, 4H), 1.70-1.85(m, 4H), 1.87-2.01(m, 1H), 2.05-2.15(m, 8H), 2.75-2.95(m, 16H), 3.28-3.41(m, 2H), 3.56-3.65(m, 2H), 3.73-3.85(m, 4H), 4.24-4.37(m, 1H), 4.42-4.53(m, 1H), 5.14-5.23(m, 1H), 5.26-5.51(m, 20H). MS(전자스프레이): 827.5 [M+Na]+.
실시예 16: 2-하이드록시프로판-1,3-디일 비스(2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노에이트)의 제조:
단계 a) 2-옥소프로판-1,3-디일 비스(2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노에이트)
Figure pct00034
2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산 (5.0 g, 13.4 mmol) 및 DMAP(1.63 g, 13.4 mmol)가 클로로포름(25 mL) 내의 1,3-디하이드록시아세톤 다이머(1.145 g, 6.36 mmol)의 용액에 질소 분위기하에서 첨가되었다. 클로로포름(10 mL) 내의 DCC(2.75 g, 13.35 mmol) 용액이 주위 온도에서 적가되었다. 혼합물은 실온에서 밤새 교반된 후, 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄 및 에틸아세테이트(90:10 → 88:12)의 혼합물의 극성을 증가시킴으로써 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 2.4 g(47% 수율)의 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 0.97-1.06(m, 12H). 1.38-1.53(m, 4H), 1.57-1.73(m, 4H), 1.73-1.96(m, 4H), 2.03-2.17(m, 8H), 2.76-2.92(m, 16H), 3.35-3.42(m, 2H), 3.63-3.70(m, 2H), 3.89(dd, 2H), 4.75-4.93(m, 4H), 5.27-5.49(m, 20H). MS(전자스프레이): 827.5 [M+Na]+.
단계 b) 2-하이드록시프로판-1,3-디일 비스(2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노에이트)
Figure pct00035
NaBH4(0.336 g, 8.87 mmol)가 THF(55 mL) 및 물(4 mL) 내의 2-옥소프로판-1,3-디일 비스(2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노에이트)(3.24 g, 4.03 mmol) 용액에 0 ℃에서 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에서 15 분 동안 교반되었다. 이어서 아세트산(1 mL)이 조심스럽게 첨가된 후, 에틸아세테이트(100 mL)가 첨가되었다. 혼합물은 물(100 mL), 포화 aq. NaHCO3(100 mL) 및 브라인로 세척된 후, 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 다른 배치의 물질과 혼합된 잔류물은 용리액으로서 헵탄 내의 15% 에틸아세테이트를 사용하여 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 1.62 g(50% 수율)의 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 0.97-1.03(m, 12H), 1.41-1.52(m, 4H), 1.58-1.69(m, 6H), 1.71-1.87(m, 4H), 2.05-2.14(m, 8H), 2.38-2.42(m, 1H), 2.78-2.92(m, 16H), 3.32-3.39(m, 2H), 3.57-3.64(m, 2H), 3.80-3.84(m, 2H), 4.05-4.34(m, 5H), 5.26-5.49(m, 20H). MS(전자스프레이): 827.5 [M+Na]+.
실시예 17: 프로판-1,2,3-트리일 트리스( 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노에이트)의 제조
Figure pct00036
22-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산(4.0 g, 10.7 mmol), 4-디메틸아미노피리딘(1.305 g, 10.7 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드(2.047 g, 10.7 mmol) 및 건조 DCM(30 ml)가 DMF(10 ml) 내의 글리세롤(0,173 ml, 2,373 mmol)의 용액에 실온에서 N2-분위기하에서 첨가되었다. 혼합물은 밤새 교반된 후, 반응 혼합물은 디에틸에테르(250 mL)로 희석되었다. 혼합물은 aq. 1M HCl(100 mL) 및 브라인(100 mL)으로 세척된 후, 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 증발되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄 내의 5% 에틸아세테이트를 사용하여 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 2.1 g(73% 수율)의 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 0.91-1.05(m, 18H), 1.40-1.52(m, 6H), 1.57-1.69(m, 6H), 1.69-1.86(m, 6H), 2.01-2.17(m, 12H), 2.69-2.96(m, 24H), 3.27-3.38(m, 3H), 3.53-3.67(m, 3H), 3.73-3.81(m, 3H), 4.17-4.27(m, 2H), 4.37-4.54(m, 2H), 5.28-5.47(m, 30H). MS(전자스프레이): 1183.8 [M+Na]+.
실시예 18: tert -부틸 2-((2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부타노일)옥시)벤조에이트의 제조:
Figure pct00037
1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필) 카보디이미드(EDC)(316 mg, 1.65 mmol) 및 4-디메틸아미노피리딘(DMAP)(20 mg, 0.15 mmol)은 DCM(10 mL) 내의 2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄산(561 mg, 1.5 mmol)의 용액에 첨가되었고, 반응 혼합물은 10 분 동안 교반되었다. tert-부틸 2-하이드록시벤조에이트(291 mg, 1.5 mmol)가 첨가되고, 혼합물은 3 시간 동안 교반되었다. 브라인이 첨가되고, 생성된 두 상은 분리되었다. 수용액상은 DCM으로 추출되었고, 혼합된 유기상은 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄 내의 5% EtOAc의 혼합물을 사용하여 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 표제 화합물 500 mg(61% 수율)이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3): δ 0.98(t, 3H), 1.11(t, 3H), 1.13(t, 3H), 1.45-1.75(m, 4H), 1.56(s, 9H), 1.90-2.20(m, 6H), 2.80-2.90(m, 8H), 3.45-3.60(m, 1H), 3.80-3.90(m, 1H), 4.05-4.15(m, 1H), 5.25-5.50(m, 10H), 7.06(m, 1H), 7.28(m, 1H), 7.52(m, 1H), 7.89(m, 1H). MS(ESI): 573 [M+Na]+.
실시예 19: 2-((2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부타노일)옥시)벤조산의 제조:
Figure pct00038
FA(10 mL) 내의 tert-부틸 2-((2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부타노일)옥시)벤조에이트(500 mg, 0.9 mmol)의 용액이 2 일 동안 교반되었다. 용매는 감압하에 제거되고, 잔류물은 용리액으로서 헵탄(5% FA를 포함하는) 내의 1-5% EtOAc(5% FA를 포함하는)의 구배를 사용하여 플래쉬 크로마토그래피에 적용되었다. 적절한 분획은 모으고 농축되고, 잔류물은 용리액으로서 헵탄 내의 1-10% EtOAc의 구배를 사용하여 제 2 플래쉬 크로마토그래피에 의해 추가로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 75 mg(17% 수율)의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3): δ 0.99(t, 3H), 1.13(t, 3H), 1.45-1.60(m, 2H), 1.65-1.70(m, 2H), 1.90-2.15(m, 6H), 2.80-2.90(m, 8H), 3.45-3.55(m, 1H), 3.80-3.90(m, 1H), 4.05-4.15(m, 1H), 5.30-5.45(m, 10H), 7.14(d, 1H), 7.35-7.45(m, 1H), 7.60-7.70(m, 1H), 8.10-8.15(m, 1H). MS(ESI): 517 [M+Na]+.
실시예 20: 2-(( tert -부톡시카르보닐)아미노)에틸 2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부타노에이트의 제조:
Figure pct00039
O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라 메틸 우로늄헥사플루오로포스페이트(HATU)(800 mg, 2.1 mmol) 및 TEA(0.56 mL, 4 mmol)는 DCM(10 mL) 내의 2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄산(748 mg, 2 mmol)의 용액에 첨가되었고, 반응 혼합물은 20 분 동안 교반되었다. DCM(1 mL) 내의 tert-부틸 N-(2-하이드록시에틸)카바메이트(340 mg, 2.1 mmol)의 용액을이 첨가되고, 생성된 혼합물은 밤새 실온에서 교반되었다. Et2O(100 mL)가 첨가되고, 혼합물은 물, 1M HCl(aq), 포화 NaHCO3(aq) 및 브라인으로 세척, 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄 내의 10-20% EtOAc의 구배를 사용하여 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 780 mg(76% 수율)의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3): δ 0.98(t, 6H), 1.40-1.55(m, 2H), 1.45(s, 9H), 1.60-1.85(m, 4H), 2.05-2.20(m, 4H), 2.75-2.90(m, 8H), 3.30-3.45(m, 3H), 3.55-3.65(m, 1H), 3.75-3.80(m, 1H), 4.20-4.25(m, 2H), 4.76(br s, 1H), 5.30-5.45(m, 10H). MS(ESI): 540 [M+Na]+.
실시예 21: 2-(2-아세톡시벤자미도)에틸 2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부타노에이트의 제조:
Figure pct00040
아세틸 클로라이드(1 mL)는 MeOH(5 mL) 내의 2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)에틸 2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부타노에이트(300 mg, 0.58 mmol)의 용액에 0 ℃에서 첨가되었다. 반응 혼합물은 실온에서 1 시간 동안 교반되었다. 혼합물은 진공하에서 농축되어 크루드 생성물로 2-아미노에틸 2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부타노에이트(286 mg)의 HCl 염이 수득되었다. TEA(109 μL, 0.78 mmol)가 DCM(10 mL) 내의 아세틸 살리실산(137 mg, 0.76 mmol)의 용액에 첨가되고 혼합물은 0 ℃로 냉각되었다. 에틸클로로포르메이트(75 μL, 0.78 mmol)가 적가되고, 반응 혼합물은 2 시간 동안 교반되었다. 이어서 상기 용액은 DCM(10 mL) 및 TEA(2 mL)의 혼합물 내의 크루드 생성물인 2-아미노에틸 2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부타노에이트의 HCl 염의 용액에 첨가되었다. 생성된 혼합물은 실온에서 3.5 시간 동안 교반된 후, 물이 첨가되었다. 생성된 2 개의 상은 분리되고, 수용액상은 DCM으로 2 회 추출되었다. 혼합된 유기상은 1M HCl(aq), 포화 NaHCO3(aq) 및 물로 세척, 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄 내의 20% EtOAc를 사용하는 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 90 mg(23% 수율)의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3): δ 0.95-1.05(m, 6H), 1.35-1.45(m, 2H), 1.55-1.70(m, 2H), 1.70-1.85(m, 2H), 2.05-2.15(m, 4H), 2.35(s, 3H), 2.80-2.90(m, 8H), 3.30-3.40(m, 1H), 3.55-3.65(m, 1H), 3.70-3.85(m, 3H), 4.33(t, 2H), 5.30-5.45(m, 10H), 6.61(br s, 1H), 7.10-7.15(m, 1H), 7.25-7.35(m, 1H), 7.45-7.50(m, 1H), 7.70-7.75(m, 1H). MS(ESI); 602 [M+Na]+.
실시예 22: 2 -(2- 하이드록시벤즈아미도 )에틸 2-(( 5Z,8Z,11Z,14Z,17Z )- 이코사 -5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부타노에이트의 제조:
Figure pct00041
암모니아(aq, 28%, 20 드롭)가 2-프로판올(9 mL) 및 물(3 mL) 내의 2-(2-아세톡시벤자미도)에틸 2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부타노에이트(99 mg, 0.17 mmol)의 용액에 적가되었다. 반응 혼합물은 10 분 동안 교반되었다. 물이 첨가되고, 생성된 혼합물은 Et2O 로 2 회 추출되었다. 혼합된 유기상은 브라인으로 세척, 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄 내의 0-40% EtOAc의 구배를 사용하여 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 33 mg(36% 수율)의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3): δ 0.95-1.05(m, 6H), 1.35-1.45(m, 2H), 1.60-1.70(m, 2H), 1.70-1.85(m, 2H), 2.05-2.20(m, 4H), 2.80-2.90(m, 8H), 3.35-3.45(m, 1H), 3.50-3.60(m, 1H), 3.75-3.85(m, 3H), 4.40-4.50(m, 2H), 5.30-5.45(m, 10H), 6.80-6.90(m, 2H), 6.95-7.05(m, 1H), 7.35-7.45(m, 1H), 12.22(s, 1H). MS(ESI): 560 [M+Na]+.
실시예 23: N-벤질-2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄아미드의 제조
Figure pct00042
DCM(10 mL) 내의 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산(302.1 mg, 0.807 mmol) 및 o-벤조트리아졸-1-일-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트(TBTU)(285 mg, 0.888 mmol)의 용액에 트리에틸아민(123 μL, 0.887 mmol)이 실온에서 N2-분위기하에서 첨가되었다. 15 분 동안 교반된 후, 혼합물에 벤질아민(97 μL, 0.887 mmol)이 첨가되고, 반응 혼합물은 밤새 실온에서 교반되었다. 포화 NaHCO3(25 mL)이 첨가되고, 혼합물은 tert-부틸메틸에테르(2x50 mL)로 추출되었다. 유기상은 혼합, 건조(Na2SO4), 여과, 및 진공하에서 증발되었다. 잔류물은 용리액으로 헵탄 및 에틸아세테이트(95:5 → 50:50)의 혼합물의 극성을 증가시킴으로써 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 0.253 g(66% 수율)의 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3) d 0.97 - 0.90(m, 6H), 1.41 - 1.35(m, 2H), 1.59 - 1.52(m, 2H), 1.75 - 1.68(m, 1H), 1.86 - 1.80(m, 1H), 2.09 - 2.03(m, 4H), 2.82 - 2.77(m, 8H), 3.44(t, J = 6.4, 2H), 3.72 - 3.71(m, 1H), 4.46(d, J = 5.8, 2H), 5.36 - 5.28(m, 10H), 6.83(s, 1H), 7.26 - 7.24(m, 3H), 7.33 - 7.30(m, 2H).
실시예 24: 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)-N,N-디메틸부탄아미드의 제조
Figure pct00043
DCM(10 mL) 내의 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산(300.2 mg, 0.801 mmol) 및 o-벤조트리아졸-1-일-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트(TBTU)(286.4 mg, 0.892 mmol)의 용액에 트리에틸아민(123 μL, 0.884 mmol)이 실온에서 N2-분위기하에서 첨가되었다. 15 분 동안 교반된 후, 혼합물에 디메틸아민(THF 내의 2.0 M)(0.80 mL, 1.60 mmol)이 첨가되고, 반응 혼합물은 밤새 실온에서 교반되었다. 포화 NaHCO3(25 mL)가 첨가되고, 혼합물은 tert-부틸메틸에테르(2x50 mL)로 추출되었다. 유기상은 혼합, 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 증발되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄 및 에틸아세테이트(95:5 → 50:50)의 혼합물의 극성을 증가시킴으로써 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 0.268 g(81% 수율)의 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) d 0.95(t, 3 H), 0.96(t, 3 H), 1.35 - 1.46(m, 2H), 1.53 - 1.63(m, 2H), 1.66 - 1.79(m, 2H), 2.01 - 2.10(m, 4H), 2.77 - 2.87(m, 8H), 2.93(s, 3H), 3.10(s, 3H), 3.28(dt, J = 9.1, 6.5, 1H), 3.46(dt, J = 9.1, 6.3, 1H), 3.96(dd, J = 7.7, 6.1, 1H), 4.97 - 5.70(m, 10H).
실시예 25: N-에틸-2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄아미드의 제조
Figure pct00044
DCM(10 mL) 내의 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산(304.6 mg, 0.813 mmol) 및 o-벤조트리아졸-1-일-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트(TBTU)(286.9 mg, 0.894 mmol)의 용액에 트리에틸아민(123 μL, 0.884 mmol)이 실온에서 N2-분위기하에서 첨가되었다. 15 분 동안 교반된 후, 혼합물에 에틸아민(THF 내의 2.0 M)(0.80 mL, 1.60 mmol)이 첨가되고, 반응 혼합물은 밤새 실온에서 교반되었다. 포화 NaHCO3(25 mL)가 첨가되고, 혼합물은 tert-부틸메틸에테르(2x50 mL)로 추출되었다. 유기상은 혼합, 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 증발되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄 및 에틸아세테이트(95:5 → 50:50)의 혼합물의 극성을 증가시킴으로써 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 0.186 g(56% 수율)의 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) d 0.90(t, 3H), 0.95(t, 3H), 1.13(t, 3H), 1.55 - 1.62(m, 2H), 1.64 - 1.66(m, 2H), 1.69 - 1.69(m, 1H), 1.74 - 1.83(m, 1H), 2.01 - 2.12(m, 4H), 2.78 - 2.84(m, 8H), 3.25 - 3.34(m, 2H), 3.44(t, 2H), 3.64(dd, 1H), 5.50-5.13(m, 10H), 6.50(s, 1H).
실시예 26: tert-부틸(2-(2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄아미도)에틸)카바메이트의 제조
Figure pct00045
디사이클로헥실메탄디이민(DCC)(1.73 g, 8.4 mmol) 및 1H-벤조[d][1,2,3]트리아졸-1-올(HOBt)(1.14 g, 8.4 mmol)은 THF(25 mL) 내의 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산(3.14 g, 8.4 mmol)의 용액에 0 ℃에서 질소 분위기하에서 첨가되었다. 혼합물은 20 분 동안 교반된 후, THF(1 mL) 내의 N-Boc-에틸렌디아민(1.12 g)의 용액이 적가되었다. 생성된 혼합물은 실온에서 1.5 시간 동안 교반되었다. 디에틸에테르(200 mL)이 첨가되고, 혼합물은 물, 1 M HCl, 포화 NaHCO3 및 브라인으로 세척되었다. 유기상은 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로 헵탄 내의 25% 에틸아세테이트(0.5% HCOOH 첨가)를 사용하여 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 3.0 g(83% 수율)의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3): d 0.90(t, 3H), 0.96(t, 3H), 1.43(s, 9H), 1.40 - 1.80(m, 6H), 2.05 - 2.20(m, 4H), 2.75 - 2.90(m, 8H), 3.20 - 3.60(m, 6H), 3.65 - 3.75(m, 1H), 5.02(br s, 1H), 5.30 - 5.45(m, 10H), 7.01(br s, 1H). MS(전자스프레이); 539 [M+Na]+
실시예 27: N-(2-아미노에틸)-2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄아미드의 제조
Figure pct00046
DCM(8 mL) 내의 tert-부틸(2-(2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄아미도)에틸)카바메이트(774 mg, 1.5 mmol)의 용액에 TFA(2 mL)가 주위 온도에서 N2-분위기하에서 첨가되었다. 반응물은 실온에서 30 분 동안 교반된 후, 진공하에서 농축되었다. 디에틸에테르(50 mL) 및 NaOH(aq, 1M, 50 mL)가 잔류물에 첨가되고, 혼합물은 30 분 동안 격렬하게 교반되었다. 상은 분리되고, 유기상은 브라인으로 세척, 건조(NaSO4), 여과, 및 진공하에서 농축되어 560 mg(90%)의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3): d 0.85 - 1.05(2xt, 6H), 1.35 - 1.50(m, 2H), 1.55 - 1.85(m, 4H), 2.05 - 2.20(m, 4H), 2.75 - 2.95(m, 8H), 3.10 - 3.20(m, 1H), 3.30 - 3.80(m, 6H), 4.05 - 4.20(br m, 1H), 4.25 - 4.75(br s, 2H), 5.30 - 5.50(m, 10H). MS(전자스프레이); 417 [M+H]+, 439 [M+Na]+
실시예 28: N-(2-하이드록시에틸)-2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄아미드의 제조
Figure pct00047
DCM(100 mL) 내의 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산(4.5 g, 12 mmol) 용액에 옥살릴클로라이드(8.4 mL, 100 mmol)가 실온에서 N2-분위기하에서 첨가된 후, DMF 2 방울이 첨가되었다. 혼합물은 실온에서 30 분 동안 교반되고 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 N2-분위기하에 DCM(100 mL)에 용해되었다. 트리에틸아민(3.34 mL, 24 mmol)이 첨가된 후, 에탄올아민(1.08 mL, 18 mmol)이 첨가되었다. 반응 혼합물은 실온에서 2 시간 동안 교반되었다. 물(300 mL)이 첨가되고 혼합물은 디클로로메탄으로 2 회 추출되었다. 유기상은 혼합되고, 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로 헵탄 및 에틸아세테이트(50:50 → 20:80)의 혼합물의 극성을 증가시킴으로써 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 4.6 g(92% 수율)의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3): d 0.90 - 1.05(m, 6H), 1.40 - 1.55(m, 2H), 1.60 - 1.90(m, 4H), 2.05 - 2.20(m, 4H), 2.75 - 2.90(m, 8H), 3.05(br s, 1H), 3.40 - 3.55(m, 4H), 3.70 - 3.80(m, 3H), 5.30 - 5.45(m, 10H), 7.04(br s, 1H). MS(전자스프레이); 440 [M+Na]+
실시예 29: 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)-N-이소프로필부탄아미드의 제조
Figure pct00048
DCM(10 mL) 내의 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산(300 mg, 0.801 mmol) 및 o-벤조트리아졸-1-일-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트(TBTU)(284 mg, 0.884 mmol)의 용액에 트리에틸아민(123 μL, 0.884 mmol)이 실온에서 N2-분위기하에서 첨가되었다. N2-분위기하에 실온에서 15 분 동안 교반된 후, 이소프로필아민(76 μL, 0,884 mmol)이 첨가되었다. 반응 혼합물은 밤새 실온에서 교반되었다. 포화 NaHCO3(25 mL)가 첨가되고, 혼합물은 tert-부틸메틸에테르(2x50 mL)로 추출되었다. 유기상은 혼합되고, 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 증발되었다. 잔류물은 용리액으로 헵탄 및 에틸아세테이트(95:5 → 50:50)의 혼합물의 극성을 증가시킴으로써 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 0.207 g(59% 수율)의 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3) d 0.83-0.93(m, 3H), 0.95(t, J = 7.5, 3H), 1.14(t, J = 6.1, 6H), 1.39 - 1.47(m, 2H), 1.56 - 1.73(m, 3H), 1.73 - 1.83(m, 1H), 2.02 - 2.11(m, 4H), 2.80 - 2.84(m, 8H), 3.43(t, J = 6.4, 2H), 3.60(dd, J = 6.6, 4.4, 1H), 4.02 - 4.11(m, 1H), 5.66 - 5.01(m, 10H), 6.33(d, J = 5.9, 1H).
실시예 30: 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)-N-메틸부탄아미드의 제조
Figure pct00049
DCM(10 mL) 내의 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산(303.6 mg, 0.811 mmol) 및 o-벤조트리아졸-1-일-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트(TBTU)(285.3 mg, 0.889 mmol)의 용액에 트리에틸아민(123 μL, 0.884 mmol)이 실온에서 N2-분위기하에서 첨가되었다. 실온에서 15 분 동안 교반된 후, THF(0,8 ml, 1,600 mmol) 내의 메틸아민 2.0 M이 실온에서 N2-분위기하에서 첨가되고, 반응 혼합물은 밤새 실온에서 교반되었다. 포화 NaHCO3(25 mL)가 첨가되고, 혼합물은 tert-부틸메틸에테르(2x50 mL)로 추출되었다. 유기상은 혼합, 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 증발되었다. 잔류물은 용리액으로 헵탄 및 에틸아세테이트(95:5 → 50:50)의 혼합물의 극성을 증가시킴으로써 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 0.235 g(72% 수율)의 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) d 0.89(t, J = 7.4, 3H), 0.95(t, J = 7.5, 3H), 1.37 - 1.47(m, 2H), 1.56 - 1.72(m, 3H), 1.74 - 1.84(m, 1H), 2.01 - 2.15(m, 4H), 2.78 - 2.84(m, 11H), 3.44(t, J = 6.4, 2H), 3.66(dd, J = 6.4, 4.4, 1H), 5.18 - 5.52(m, 10H), 6.51(s, 1H).
실시예 31: 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)-1-(피페리딘-1-일)부탄-1-온의 제조
Figure pct00050
DCM(8 mL) 내의 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산(302.2 mg, 0.807 mmol) 및 o-벤조트리아졸-1-일-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트(TBTU)(284 mg, 0.884 mmol)의 용액에 트리에틸아민(123 μL, 0.884 mmol)이 실온에서 N2-분위기하에서 첨가되었다. 15 분 동안 교반된 후, 실온에서 N2-분위기하에서 피페리딘(87 μL, 0,884 mmol)이 첨가되고, 반응 혼합물은 실온에서 밤새 교반되었다. 포화 NaHCO3(25 mL)가 첨가되고, 혼합물은 tert-부틸메틸에테르(2x50 mL)로 추출되었다. 유기상은 혼합, 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 증발되었다. 잔류물은 용리액으로 헵탄 및 에틸아세테이트(95:5 → 50:50)의 혼합물의 극성을 증가시킴으로써 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 0.270 g(73% 수율)의 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3) d 0.93 - 0.98(m, 6H) 1.37 - 1.46(m, 2H), 1.51 - 1.62(m, 8H), 1.66 - 1.77(m, 2H), 2.02 - 2.09(m, 4H), 2.77 - 2.83(m, 8H), 3.30(dt, J = 9.1, 6.6, 1H), 3.47 - 3.52(m, 2H), 3.54 - 3.62(m, 3H), 3.95(dd, J = 7.9, 6.1, 1H), 5.02 - 5.65(m, 10H).
실시예 32: 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄아미드의 제조:
Figure pct00051
톨루엔(2500 mL) 내의 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산(320 g, 854 mmol) 용액에 옥살릴클로라이드(276 mL, 3.15 mol)이 첨가되었다. DMF(10 mL)이 조심스럽게 적가된 후, 혼합물은 주위 온도에서 1 시간 동안 교반되고 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 DCM(750 mL)에 용해되고, 교반 및 냉각된(0 ℃) 암모니아(28%, aq.)(528 mL, 6.84 mol) 용액에 천천히 첨가되었다. 혼합물은 주위 온도에서 30 분 동안 교반되었다. 상은 분리되고, 메틸 tert-부틸 에테르(700 mL)로 추출되었다. 혼합된 유기상은 3 M HCl(2x300 mL), sat. aq. NaHCO3(500 mL), 및 브라인(2x300 mL)으로 세척, 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로 헵탄 및 에틸아세테이트(70:30 → 60:40)의 혼합물의 극성을 증가시킴으로써 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 249.8 g(76% 수율)의 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3) d 0.87 - 0.92(m, 6H), 1.32 - 1.46(m, 2H), 1.52 - 1.59(m, 2H), 1.62 - 1.79(m, 2H), 1.97 - 2.06(m, 4H), 2.68 - 2.85(m, 8H), 3.34 - 3.51(m, 2H), 3.60(dd, J = 6.5, 4.5, 1H), 5.18 - 5.42(m, 10H), 5.61(s, 1H), 6.42(s, 1H).
실시예 33: N-(tert-부틸)-2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄아미드의 제조:
Figure pct00052
DCM(10 mL) 내의 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산(301.3 mg, 0.804 mmol) 용액에 실온에서 N2-분위기하에서 o-벤조트리아졸-1-일-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트(TBTU)(285.6 mg, 0.889 mmol)에 이어 트리에틸아민(0.123 ml, 0.885 mmol)이 첨가되었다. 혼합물은 실온에서 N2-분위기하에 15 분 동안 교반된 후, 2-아미노-2-메틸프로판(0.10 mL, 0.952 mmol)이 첨가되었다. 반응 혼합물은 실온에서 밤새 교반되었다. 포화 NaHCO3(25 mL)가 첨가되고, 혼합물은 t-부틸메틸에테르(2x50 mL)로 추출되었다. 혼합된 유기상은 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 증발되었다. 잔류물은 용리액으로 헵탄 및 에틸아세테이트(95:5
Figure pct00053
50:50)의 혼합물의 극성을 증가시킴으로써 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 244.1 mg(70% 수율)의 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3) d 0.89(t, J = 7.4, 3H), 0.96(t, J = 7.5, 3H), 1.34(s, 9H), 1.41 - 1.46(m, 2H), 1.57 - 1.70(m, 3H), 1.74 - 1.81(m, 1H), 2.02 - 2.11(m, 4H), 2.80 - 2.83(m, 8H), 3.27 - 3.48(m, 2H), 3.48 - 3.56(m, 1H), 4.93 - 5.55(m, 10H), 6.38(s, 1H).
실시예 34: (R)-2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)-N-((R)-1-페닐에틸)부탄아미드의 제조
Figure pct00054
건조 DMF(3 mL) 내의 (R)-2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산(40 mg, 0.11 mmol) 및 (R)-1-페닐에탄-1-아민(14 μL, 0.11 mmol)의 용액에 0 ℃에서 질소하에서 N-메틸모르폴린(14 μL, 0.13 mmol)에 이어 o-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄헥사플루오로포스페이트(HBTU)(45 mg, 0.14 mmol)이 첨가되었다. 반응 혼합물은 실온에서 N2-분위기하에 30 분 동안 교반되었다. 물(10 mL)이 첨가되고, 혼합물은 헵탄(10 mL)으로 추출되었다. 상은 분리되고, 수용액상은 헵탄(10 mL), 이에 이어 디에틸에테르(10 mL)로 추출되었다. 유기상은 혼합되고 sat. aq. NH4Cl(10 mL) 및 브라인(10 mL)로 세척되었다. 유기상은 건조(Na2SO4), 여과, 및 진공하에서 증발되어 오일의 목표 화합물(20 mg 0.042 mmol, 38% 수율)이 수득되었다.
실시예 35: (2S)-에틸 2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄아미도)-4-메틸펜타노에이트의 제조:
Figure pct00055
N,N'-디사이클로헥실카보디이미드(DCC)(1.13 g, 5.5 mmol), 하이드록시벤조트리아졸(HOBt)(0.74 g, 5.5 mmol) 및 트리에틸아민(TEA)(1.58 mL, 11.4 mmol)이 테트라하이드로퓨란(THF)(20 mL) 내의 2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄산(1.87 g, 5.0 mmol) 용액에 첨가되고, 혼합물은 10 분 동안 교반되었다. L-류신 에틸에스테르 하이드로클로라이드(0.89 g, 4.6 mmol)가 첨가되고, 생성된 혼합물은 2 시간 동안 교반되었다. 혼합물은 진공하에서 농축되고, Et2O(100 mL)에 용해되고, 1M HCl(aq), 포화 NaHCO3(aq) 및 브라인으로 세척되었다. 유기상은 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로 헵탄 내의 10-15% EtOAc의 구배를 사용하여 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 1.88 g(80% 수율)의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3): δ 0.90-1.05(m, 12H), 1.25-1.35(m, 3H), 1.45-1.85(m, 9H), 2.05-2.20(m, 4H), 2.80-2.90(m, 8H), 3.40-3.70(m, 3H), 4.18(q, 2H), 4.55-4.70(m, 1H), 5.30-5.45(m, 10H), 6.80-6.95(m, 1H). MS(ESI): 538 [M+Na]+.
실시예 36: (2S)-2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄아미도)-4-메틸펜타엔산의 제조:
Figure pct00056
물(10 mL) 내의 LiOH(700 mg, 29 mmol) 용액이 EtOH(20 mL) 내의 (2S)-에틸 2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄아미도)-4-메틸펜타노에이트(1.88 g, 3.65 mmol) 용액에 첨가되고, 반응 혼합물은 40 ℃에서 1 시간 동안 교반되었다. 혼합물은 주위 온도로 냉각되고, pH 2가 될 때까지 3M HCl(aq)이 첨가되었다. 생성된 혼합물은 Et2O로 2 회 추출되고, 혼합된 유기상은 건조(NaSO4), 여과, 및 감압하에서 농축되어 1.55 g(87% 수율)의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3): δ 0.90-1.05(m, 12H), 1.45-1.55(m, 2H), 1.65-1.85(m, 7H), 2.05-2.20(m, 4H), 2.80-2.90(m, 8H), 3.45-3.65(m, 2H), 3.70-3.80(m, 1H), 4.55-4.70(m, 1H), 5.30-5.45(m, 10H), 6.85-7.00(m, 1H), 10.30(br s, 1H). MS(ESI); 510 [M+Na]+.
실시예 37: tert -부틸 2-(((2S)-2-(2-(( 5Z,8Z,11Z,14Z,17Z )- 이코사 -5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄아미도)-4-메틸펜타노일)옥시)벤조에이트의 제조:
Figure pct00057
2-하이드록시-벤조산 tert-부틸에스테르(291 mg, 1.5 mmol), TEA(0.46 mL, 3.3 mmol) 및 O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N ',N'-테트라 메틸 우로늄헥사플루오로포스페이트(TBTU)(500 mg, 1.65 mmol)이 디메틸포름아미드(DMF)(10 mL) 내의 (2S)-2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄아미도)-4-메틸펜타엔산(730 mg, 1.5 mmol) 용액에 첨가되었다. 반응 혼합물은 65 ℃에서 2 시간 동안 가열되고, 실온으로 냉각되고, Et20(100mL)가 첨가되었다. 생성된 2 개의 상은 분리되고, 유기상은 10% NH4Cl(aq) 및 브라인으로 세척, 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로 헵탄 내의 10% EtOAc를 사용하여 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 404 mg(41% 수율)의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3): δ 0.90-1.05(m, 12H), 1.40-1.55(m, 2H), 1.57(s, 9H), 1.60-1.85(m, 6H), 2.00-2.20(m, 5H), 2.80-2.90(m, 8H), 3.40-3.60(m, 2H), 3.70-3.80(m, 1H), 4.90-5.05(m, 1H), 5.30-5.45(m, 10H), 7.10(d, 2H), 7.25-7.35(m, 1H), 7.50-7.55(m, 1H), 7.85-7.95(m, 1H). MS(ESI): 686 [M+Na]+.
실시예 38: 2-(((2S)-2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄아미도)-4-메틸펜타노일)옥시)벤조산의 제조:
Figure pct00058
TFA(1 mL)가 DCM(4 mL) 내의 tert-부틸 2-(((2S)-2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄아미도)-4-메틸펜타노일)옥시)벤조에이트(150 mg, 0.23 mmol) 용액에 0 ℃에서 첨가되고, 반응 혼합물은 40 분 동안 교반되었다. 톨루엔(10 mL)이 첨가되고, 혼합물은 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄(0.1% FA를 포함) 내의 13% EtOAc(0.1% FA를 포함)를 사용하여 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획은 농축되고, 잔류물(100 mg)은 Et2O(50 mL)에 용해되었다. 용액은 포화 NaHCO3(aq)으로 세척, 건조 (Na2SO4), 여과, 및 진공하에서 농축되어 60 mg의 목적 생성물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3): δ 0.85-1.05(m, 12H), 1.35-2.15(m, 13H), 2.75-2.90(m, 8H), 3.40-3.60(m, 2H), 3.70-3.80(m, 1H), 4.85-5.05(m, 1H), 5.30-5.45(m, 10H), 7.0-7.20(m, 2H), 7.25-7.40(m, 1H), 7.50-7.65(m, 1H), 8.00-8.15(m, 1H). MS(ESI); 630 [M+Na]+. HR-MS(ESI): calc for C37H53NO6+Na: 630.3770, found: 630.3786.
실시예 39: tert -부틸(2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄아미도)에틸)카바메이트의 제조:
Figure pct00059
DCC(1.73 g, 8.4 mmol) 및 HOBt(1.14 g, 8.4 mmol)가 THF(25 mL) 내의 2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄산(3.14 g, 8.4 mmol) 용액에 0 ℃에서 첨가되고, 혼합물은 20 분 동안 교반되었다. THF(1 mL) 내의 N-Boc-에틸렌디아민 용액이 적가되고, 생성된 혼합물은 실온에서 1.5 시간 동안 교반되었다. Et2O(200 mL)가 첨가되고, 혼합물은 물, 1M HCl(aq), 포화 NaHCO3(aq) 및 브라인으로 세척되었다. 유기상은 건조 (Na2SO4), 여과, 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄(0.5% FA를 포함) 내의 25% EtOAc(0.5% FA 함유)를 사용하여 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 3.0 g(83% 수율)의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3): δ 0.90(t, 3H), 0.96(t, 3H), 1.43(s, 9H), 1.40-1.80(m, 6H), 2.05-2.20(m, 4H), 2.75-2.90(m, 8H), 3.20-3.60(m, 6H), 3.65-3.75(m, 1H), 5.02(br s, 1H), 5.30-5.45(m, 10H), 7.01(br s, 1H). MS(ESI): 539 [M+Na]+.
실시예 40: 2-하이드록시- N -(2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄아미도)에틸)벤즈아미드의 제조:
Figure pct00060
TFA(2 mL)가 DCM(8 mL) 내의 tert-부틸(2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄아미도)에틸)카바메이트(668 mg, 1.3 mmol) 용액에 첨가되고, 생성된 혼합물은 1.5 시간 동안 교반되었다. 혼합물은 진공하에서 농축되어 크루드 생성물로 N-(2-아미노에틸)-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄아미드의 TFA 염이 수득되었다(800 mg, MS(ESI): 417 [M+H]+, 439 [M+Na]+). 잔류물은 DCM(10 mL)에 용해되고, DCC(320 mg, 1.55 mmol), TEA(0.36 mL, 2.6 mmol) 및 HOBt(210 mg, 1.55 mmol)가 첨가되었다. 15 분 후, DCM(1 mL) 내의 살리실산(214 mg, 1.55 mmol)의 용액이 적가되고, 생성된 혼합물은 밤새 교반되었다. 혼합물은 농축되고, 잔류물은 Et2O(100 mL)에 용해되고, 물, 1M HCl(aq), 포화 NaHCO3(aq) 및 브라인으로 세척되었다. 유기상은 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 크루드 오일은 용리액으로 헵탄(5% FA를 포함) 내의 4-15% EtOAc(5% FA 함유)의 구배를 사용하여 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 110 mg(2 단계에 걸쳐 16% 수율)의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3): δ 0.89(t, 3H), 0.99(t, 3H), 1.35-1.50(m, 2H), 1.60-1.90(m, 4H), 2.05-2.20(m, 4H), 2.8-2.9(m, 8H), 3.47(t, 2H), 3.50-3.70(m, 4H), 3.70-3.80(m, 1H), 5.30-5.45(m, 10H), 6.85-6.95(m, 1H), 6.97(dd, 1H), 7.14(br s, 1H), 7.35-7.45(m, 1H), 7.48(dd, 1H), 7.95(br s, 1H), 12.51(br s, 1H). MS(ESI): 537 [M+H]+, 559 [M+Na]+.
실시예 41: 2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄아미도)에틸 2-아세톡시벤조에이트의 제조:
Figure pct00061
TBTU(0.85 g, 2.64 mmol) 및 TEA(0.8 mL, 5.3 mmol)이 DCM(20 mL) 내의 아세틸살리실산(0.4 g, 2.4 mmol) 용액에 첨가되고, 혼합물은 10 분 동안 교반되었다. DCM(10 mL) 내의 N-(2-하이드록시에틸)-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄아미드(1.0 g, 1.4 mmol) 용액이 첨가되고, 반응 혼합물은 실온에서 1 시간 동안 교반된 후, 밤새 환류되었다. 물이 첨가되고, 생성된 혼합물은 DCM으로 2 회 추출되었다. 혼합된 유기상은 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄 내의 0-20% EtOAc의 구배를 사용하여 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 900 mg(65% 수율)의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3): δ 0.85-1.00(m, 6H), 1.35-1.50(m, 2H), 1.50-1.85(m, 4H), 2.00-2.20(m, 4H), 2.37(s, 3H), 2.75-2.90(m, 8H), 3.40-3.55(m, 2H), 3.55-3.75(m, 3H), 4.15-4.45(m, 2H), 5.30-5.50(m, 10H), 6.80-95(m, 1H), 7.10-7.15(m, 1H), 7.30-7.40(m, 1H), 7.55-7.65(m, 1H), 8.00-8.05(m, 1H). MS(ESI): 602 [M+Na]+.
실시예 42: 2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄아미도)에틸 2-하이드록시벤조에이트의 제조:
Figure pct00062
암모니아(aq, 28%, 3 mL)가 2-프로판올(27 mL) 및 물(9 mL) 내의 2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄아미도)에틸 2-아세톡시벤조에이트(390 mg, 0.67 mmol) 용액에 첨가되고, 혼합물은 10 분 동안 교반되었다. 물이 첨가되고, 생성된 혼합물은 Et2O로 2 회 추출되었다. 혼합된 유기상은 브라인으로 세척, 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄 내의 0-20% EtOAc의 구배를 사용하여 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 63 mg(18% 수율)의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3): δ 0.91(t, 3H), 0.97(t, 3H), 1.35-1.45(m, 2H), 1.55-1.90(m, 4H), 2.00-2.15(m, 4H), 2.80-2.90(m, 8H), 3.44(t, 2H), 3.65-3.80(m, 3H), 4.40-4.50(m, 2H), 5.30-5.45(m, 10H), 6.85-6.95(m, 2H), 6.95-7.05(m, 1H), 7.40-7.50(m, 1H), 7.80-7.85(m, 1H), 10.63(s, 1H). MS(ESI): 560 [M+Na]+.
실시예 43: 메틸 2-하이드록시-5-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄아미도)벤조에이트의 제조:
Figure pct00063
2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄산(300 mg, 0.80 mmol), 메틸 5-아미노살리실레이트(140 mg, 0.83 mmol) 및 TEA(0.22 mL, 1.60 mmol)가 MeCN(3 mL)에 용해되었다. HATU(320 mg, 0.83 mmol)가 첨가되고, 반응 혼합물은 밤새 교반되었다. 혼합물은 감압하에 농축되고, 잔류물은 Et2O(30 mL)와 브라인(20 mL) 사이에서 분리되었다. 수용액상은 Et2O(20 mL)로 추출되고, 혼합된 유기상은 2M HCl(aq, 15 mL), 포화 NaHCO3(aq, 15 mL) 및 브라인(15 mL)로 세척, 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄 내의 5% EtOAc를 사용하는 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 320 mg(77% 수율)의 목표 화합물이 수득되었다.
MS(ESI): 546 [M+Na]+.
실시예 44: 2-하이드록시-5-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄아미도)벤조산의 제조:
Figure pct00064
2M NaOH(aq, 6 mL)가 MeOH(3 mL) 내의 메틸 2-하이드록시-5-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄아미도)벤조에이트(320 mg, 0.61 mmol) 용액에 첨가되고, 반응 혼합물은 밤새 50 ℃에서 가열되었다. 혼합물은 주위 온도로 냉각되고 5M HCl(aq)로 pH 2로 산성화되었다. 생성된 혼합물은 EtOAc로 추출되고 유기상은 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 EtOAc에서 1-2% MeOH의 구배를 사용하여 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 85 mg(27% 수율)의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3): δ 0.90-1.05(t, 3H), 1.20-1.30(m, 1H), 1.45-1.60(m, 2H), 1.65-1.75(m, 2H), 1.80-1.95(m, 2H), 2.05-2.20(m, 4H), 2.80-2.90(m, 8H), 3.50-3.65(m, 2H), 3.85-3.95(m, 1H), 5.30-5.45(m, 10H), 6.90-7.00(m, 1H), 7.58(br s, 1H), 8.11(br s, 1H), 8.40(s, 1H). MS(ESI): 508 [M-H]-.
실시예 45: (2S)-에틸 2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄아미도)-4-메틸펜타노에이트의 제조:
Figure pct00065
DCC(1.13 g, 5.5 mmol) 및 HOBt(0.74 g, 5.5 mmol)에 이어 TEA(1.58 mL, 11.4 mmol)가 THF(20 mL) 내의 2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄산(1.87 g, 5.0 mmol) 용액에 첨가되고, 혼합물은 10 분 동안 교반되었다. L-류신 에틸에스테르 하이드로클로라이드(0.89 g, 4.6 mmol)가 첨가되고, 생성된 혼합물은 2 시간 동안 교반되었다. EtOAc(100 mL)가 첨가되고, 혼합물은 물, 1M HCl(aq), 포화 NaHCO3(aq) 및 브라인으로 세척되었다. 유기상은 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄 내의 10-15% EtOAc의 구배를 사용하여 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 1.84 g(79% 수율)의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3): δ 0.85-1.05(m, 12H), 1.25-1.35(m, 3H), 1.40-1.85(m, 9H), 2.05-2.20(m, 4H), 2.80-2.90(m, 8H), 3.45-3.75(m, 3H), 4.15-4.25(m, 2H), 4.55-4.75(m, 1H), 5.30-5.45(m, 10H), 6.80-6.95(m, 1H). MS(ESI): 538 [M+Na]+.
실시예 46: (2S)-2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄아미도)-4-메틸펜타엔산의 제조:
Figure pct00066
1M LiOH(aq, 28 mL)가 EtOH(50 mL) 내의 (2S)-에틸 2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄아미도)-4-메틸펜타노에이트(1.79 g, 3.5 mmol) 용액에 첨가되고, 반응 혼합물은 2 시간 동안 50 ℃로 가열되었다. 혼합물은 주위 온도로 냉각되고, pH~2가 되도록 6M HCl(aq)이 첨가되었다. 생성된 혼합물은 Et2O로 2 회 추출되고, 혼합된 유기상은 건조(NaSO4), 여과 및 감압하에서 농축되어 1.61 g(95% 수율)의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3): δ 0.85-1.05(m, 12H), 1.45-1.55(m, 2H), 1.60-1.85(m, 7H), 2.05-2.20(m, 4H), 2.80-2.90(m, 8H), 3.45-3.65(m, 2H), 3.70-3.80(m, 1H), 4.60-4.75(m, 1H), 5.30-5.45(m, 10H), 6.90-7.05(m, 1H), 10.15(br s, 1H). MS(ESI): 486 [M-H]-.
실시예 47: 메틸 2-하이드록시-5-((2S)-2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄아미도)-4-메틸펜탄아미도)벤조에이트의 제조:
Figure pct00067
DCC(248 mg, 1.2 mmol) 및 HOBt(163 mg, 1.2 mmol)가 THF(8 mL) 내의 (2S)-2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄아미도)-4-메틸펜타엔산(487 mg, 1.0 mmol) 용액에 0oC에서 첨가되었다. THF(1 mL) 내의 메틸 5-아미노 살리실레이트(201 mg, 1.2 mmol) 용액이 적가되고, 반응 혼합물은 실온에서 3 시간 동안 교반되었다. Et2O(100 mL)가 첨가되고, 혼합물은 물, 1M HCl(aq), 포화 NaHCO3(aq) 및 브라인으로 세척되었다. 유기상은 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄(5% FA를 포함) 내의 3-15% EtOAc(5% FA 함유)의 구배를 사용하여 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 197 mg(31% 수율)의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3): δ 0.85-1.05(m, 12H), 1.40-1.50(m, 2H), 1.60-1.90(m, 7H), 2.05-2.20(m, 4H), 2.80-2.90(m, 8H), 3.45-3.55(m, 2H), 3.75-3.80(m, 1H), 3.94(s, 1H), 4.55-4.65(m, 1H), 5.30-5.45(m, 10H), 6.90-7.00(m, 2H), 7.45-7.50(m, 1H), 8.00-8.10(m, 1H), 8.66(s, 1H), 10.59(s, 1H). MS(ESI): 659 [M+Na]+.
실시예 48: 2-하이드록시-5-((2S)-2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄아미도)-4-메틸펜탄아미도)벤조산의 제조:
Figure pct00068
1M LiOH(aq, 2.5 mL)가 MeOH(5 mL) 내의 메틸 2-하이드록시-5-((2S)-2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄아미도)-4-메틸펜탄아미도)벤조에이트(190 mg, 0.3 mmol) 용액에 첨가되었다. 반응 혼합물은 50 ℃에서 5 시간 동안 가열되고, 실온에서 3 일 동안 교반되었다. 혼합물은 6M HCl(aq)로 pH ~ 2로 산성화하고 대부분의 용매는 진공하에서 제거되었다. 잔류물은 Et2O로 2 회 추출되고, 혼합된 유기상은 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄(5% FA를 포함) 내의 5-25% EtOAc(5% FA 함유)의 구배를 사용하여 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 100 mg(54% 수율)의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3): δ 0.90-1.05(m, 12H), 1.40-1.50(m, 2H), 1.60-1.90(m, 7H), 2.05-2.20(m, 4H), 2.80-2.90(m, 8H), 3.45-3.60(m, 2H), 3.80-3.90(m, 1H), 4.60-4.75(m, 1H), 5.30-5.45(m, 10H), 6.89(d, 1H), 7.24(d, 1H), 7.70-7.90(m, 2H), 9.02(d, 1H), 10.37(d, 1H). MS(ESI): 623 [M+H]+.
실시예 49: 메틸 2-하이드록시-5-(((2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄아미도)에톡시)카르보닐)아미노)벤조에이트의 제조:
Figure pct00069
디포스겐(0.16 mL, 1.3 mmol) 및 디이소프로필아민(0.16 mL, 0.96 mmol)이 DCM(15 mL) 내의 N-(2-하이드록시에틸)-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄아미드(0.4 g, 0.96 mmol) 용액에 0 ℃에서 첨가되었다. 반응 혼합물은 0 ℃에서 1 시간 동안 교반되고, 실온에서 2 시간 동안 교반되었다. 혼합물은 감압하에서 농축되고, 잔류물은 THF(20 mL)에 현탁되었다. 현탁액은 여과되고, 여액은 감압하에 농축되었다. 잔류물은 Et2O에 현탁시키고, 실리카 패드를 통해 여과되고, 진공하에서 농축되어 크루드 생성물로 0.66 g의 2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄아미도)에틸 카보노클로리데이트가 수득되었다. 잔류물은 DCM(15 mL)에 용해되고, 메틸 5-아미노살리실레이트(0.13 g, 0.77 mmol) 및 TEA(0.2 mL, 1.54 mmol)가 첨가되었다. 반응 혼합물은 2 시간 동안 교반되고, 물이 첨가되었다. 생성된 혼합물은 DCM으로 2 회 추출되고, 혼합된 유기상은 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄 내의 30-50% EtOAc의 구배를 사용하여 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 145 mg(30% 수율)의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3): δ 0.85-1.00(m, 6H), 1.35-1.50(m, 2H), 1.50-1.85(m, 4H), 2.00-2.20(m, 4H), 2.75-2.90(m, 8H), 3.40-3.55(m, 2H), 3.55-3.75(m, 3H), 3.95(s, 3H), 4.25-4.35(m, 2H), 5.25-5.45(m, 10H), 6.68(br s, 1H), 6.85-7.00(m, 2H), 7.35-7.45(m, 1H), 7.91(br s, 1H), 10.57(s, 1H). MS(ESI): 633 [M+Na]+.
실시예 50: 2-하이드록시-5-(((2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄아미도)에톡시)카르보닐)아미노)벤조산의 제조:
Figure pct00070
1M LiOH(aq, 1.9 mL)가 MeOH(20 mL) 내의 메틸 2-하이드록시-5-(((2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄아미도)에톡시)카르보닐)아미노)벤조에이트(145 mg, 0.24 mmol) 용액에 첨가되고, 혼합물은 50 ℃에서 밤새 가열되었다. 반응 혼합물은 1M HCl(aq)로 pH~2로 산성화되고, Et2O로 2 회 추출되었다. 혼합된 유기상은 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄(5% FA를 포함) 내의 20% EtOAc(5% FA 함유)를 사용하는 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획이 수집되고 농축되었다. 잔류물(46 mg)은 용리액으로서 물(5% MeCN 및 0.01% TFA 함유) 내의 30-95% MeCN의 구배를 사용하여 prep HPLC에 의해 추가로 정제되었다. 적절한 분획이 수집되고 농축되었다. 잔류물은 톨루엔에 용해되었다. 용액의 농축으로 24 mg(17% 수율)의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3): δ 0.91-1.01(m, 6H), 1.35-1.50(m, 2H), 1.55-1.90(m, 4H), 2.05-2.15(m, 4H), 2.80-2.90(m, 8H), 3.45-3.55(m, 2H), 3.65-3.75(m, 2H), 3.75-3.85(m, 1H), 4.25-4.35(m, 2H), 5.30-5.45(m, 10H), 6.90-7.00(m, 2H), 7.00-7.10(m, 1H), 7.63(br s, 1H), 7.83(s, 1H), 10.43(br s, 1H). MS(ESI): 597 [M+H]+.
실시예 51: 2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)- N -(2-이소시아네토에틸)부탄아미드의 제조:
Figure pct00071
1,8-비스(디메틸아미노)나프탈렌(577 mg, 2.7 mmol)이 DCM(10 mL) 내의 N-(2-아미노에틸)-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄아미드(560 mg, 1.35 mmol) 용액에 첨가되고, 혼합물은 0 ℃로 냉각되었다. 트리클로로메틸 클로로포르메이트(98 μL, 0.81 mmol)이 적가되고, 15분 동안 교반된 후, 냉각조는 제거되었다. 1M HCl(aq, 30 mL) 및 DCM(30 mL)이 첨가되었다. 생성된 2 개의 상은 분리되고, 유기상은 1M HCl(aq)로 4 회 및 1M NaOH(aq)로 1 회 세척, 건조 (NaSO4), 여과 및 감압하에서 농축되어 500mg(84% 수율)의 크루드 생성물의 500 mg(84% 수율)의 목표 화합물이 수득되었다.
MS(ESI): 465 [M+Na]+.
실시예 52: 메틸 2-하이드록시-5-(3-(2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄아미도)에틸)우레이도)벤조에이트의 제조:
Figure pct00072
메틸 5-아미노살리실레이트(189 mg, 1.13 mmol)가 DCM(5 mL) 내의 2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)-N-(2-이소시아네토에틸)부탄아미드(500 mg, 1.13 mmol) 용액에 첨가되었다. 반응 혼합물은 2 시간 동안 교반되고, 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 EtOAc 내의 40-0% 헵탄의 구배를 사용하여 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 230 mg(33% 수율)의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3): δ 0.85-1.05(2xt, 6H), 1.35-1.50(m, 2H), 1.55-1.85(m, 4H), 2.05-2.20(m, 4H), 2.75-2.95(m, 8H), 3.35-3.50(m, 6H), 3.65-3.75(m, 1H), 3.94(s, 3H), 5.30-5.50(m, 10H), 6.95(d, 1H), 7.10(br s, 1H), 7.40(dd, 1H), 7.88(d, 1H), 10.62(s, 1H). MS(ESI); 632 [M+Na]+.
실시예 53: 2-하이드록시-5-(3-(2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄아미도)에틸)우레이도)벤조산의 제조:
Figure pct00073
1M LiOH(aq, 2.9 mL)가 MeOH(10 mL) 내의 메틸 2-하이드록시-5-(3-(2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄아미도)에틸)우레이도)벤조에이트(220 mg, 0.36 mmol) 용액에 첨가되었다. 혼합물은 50 ℃에서 밤새 가열되었다. 혼합물은 주위 온도로 냉각된 후, 6M HCl(aq)을 사용하여 약 pH 2로 산성화되었다. 생성된 혼합물은 EtOAc로 2 회 추출되고, 혼합된 유기상은 브라인으로 세척, 건조 (NaSO4), 여과 및 감압하에 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄(5% FA를 포함) 내의 5-40% EtOAc(5% FA를 포함)의 구배를 사용하여 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 92 mg(43% 수율)의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3): δ 0.91(t, 3H), 0.98(t, 3H), 1.40-1.50(m, 2H), 1.60-1.90(m, 4H), 2.05-2.20(m, 4H), 2.80-2.90(m, 8H), 3.40-3.60(m, 6H), 3.75-3.80(m, 1H), 5.30-5.45(m, 10H), 6.90(d, 1H), 7.25-7.35(m, 1H), 7.45-7.55(m, 1H), 7.80-7.95(m, 2H), 10.56(br s, 1H). MS(ESI): 596 [M+H]+, 618 [M+Na]+.
실시예 54: tert -부틸 2-(( 5Z,8Z,11Z,14Z,17Z )- 이코사 -5,8,11,14,17- 펜타에닐옥시 )프로파노에이트의 제조:
Figure pct00074
(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-올,(1.00 g, 3.47 mmol), 테트라부틸암모늄 클로라이드(0.24 g, 0.87 mmol) 및 t-부틸 2-브로모프로 피오네이트(3.62 g, 17.3 mmol)의 혼합물이 톨루엔(36 mL)에 용해되고, 질소하에 놓여졌다. 수산화나트륨 수용액(50%, 8 mL)이 격렬히 교반되면서 천천히 첨가되고, 생성된 혼합물은 주위 온도에서 20 시간 동안 교반되었다. 물이 첨가되고, 혼합물은 에테르로 3 회 추출되었다. 혼합된 유기 추출물은 브라인으로 세척, 건조(Na2SO4), 여과 및 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄 내의 2% 에틸아세테이트를 사용하여 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 1.40 g(90% 수율)의 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
1H-NMR(300 MHz, CDCl3): δ 0.95(t, 3H), 1.41(d, 3H), 1.48(s, 9H), 1.48-1.66(m, 4H), 2.05(m, 4H), 2.83(m, 8H), 3.35(m, 1H), 3.55(m, 1H), 3.79(q, 1H), 5.32-5.44(m, 10H).
실시예 55: 2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타에닐옥시)프로파논산의 제조:
Figure pct00075
트리플루오로아세트산(2 mL)이 질소하에 유지된 디클로로메탄(10 mL) 내의 2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타에닐옥시)프로파노에이트(1.40 g, 3.36 mmol) 용액에 첨가되었다. 반응 혼합물은 실온에서 3 시간 동안 교반되었다. 디에틸에테르(50 mL)가 첨가되고, 유기상은 물(30 mL)로 세척, 건조(Na2SO4) 및 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄, 에틸아세테이트 및 포름산(95:5:0.25 -> 80:20:1)의 혼합물의 극성을 증가시킴으로써 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 수행되었다. 적절한 분획의 농축으로 0.67 g의 약간 불순한 생성물이 수득되었다. 상기 생성물은 헵탄(15mL)에 용해되고, 물(5mL)로 3 회 세척, 건조 (Na2SO4), 여과 및 농축되어 0.50g(41% 수율)의 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
1H-NMR(300 MHz, CDCl3): δ 0.99(t, 3H), 1.40-1.48(m, 5H), 1.67(m, 2H), 2.09(m, 4H), 2.80-2.60(m, 8H), 3.53(m, 2H), 4.01(q, 1H), 5.31-5.47(m, 10H); MS(전자스프레이): 359.2 [M-H]-.
실시예 56: tert -부틸 2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타에닐옥시)-2-메틸프로파노에이트의 제조:
Figure pct00076
(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-올,(0.83 g, 3.14 mmol), 테트라부틸암모늄 클로라이드(0.24 g, 0.85 mmol) 및 t-부틸 2-브로모이소부티레이트(3.50 g, 15.7 mmol)의 혼합물이 톨루엔(15 mL)에 용해되고, 질소하에 놓여졌다. 수산화나트륨 수용액(50%, 5 mL)은 격렬히 교반되면서 천천히 첨가되었다. 생성된 혼합물은 60 ℃로 가열되고, 6 시간 동안 교반되었다. 혼합물은 냉각되고, 물이 첨가되고, 에테르로 3 회 추출되었다. 혼합된 유기 추출물은 브라인으로 세척, 건조(Na2SO4), 여과 및 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄 내의 5-10% 에틸아세테이트의 구배를 사용하여 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 0.60 g(44% 수율)의 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
MS(전자스프레이): 453.3 [M+Na]+.
실시예 57: 2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타에닐옥시)-2-메틸프로파논산의 제조:
Figure pct00077
트리플루오로아세트산(5 mL)이 질소하에서 디클로로메탄(20 mL) 내의 tert-부틸 2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타에닐옥시)-2-메틸프로파노에이트(600 mg, 1.39 mmol) 용액에 첨가되었다. 반응 혼합물은 실온에서 2 시간 동안 교반되었다. 물이 첨가되고, 수용액상은 디클로로메탄으로 2회 추출되었다. 혼합된 유기 추출물은 브라인으로 세척, 건조(Na2SO4), 여과 및 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄, 에틸아세테이트 및 포름산(80:20:1)의 혼합물을 사용하여 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획은 농축되고, 잔류물(135 mg)은 용리액으로서 헵탄 내의 에틸아세테이트 및 포름산(95:5)의 혼합물의 5-10%의 구배를 사용하여 실리카겔상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 추가로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 80 mg의 약간 불순한 생성물이 제공되었다. 이 물질은 헵탄(5 mL)에 용해되고, 물(5mL)로 2 회 세척, 건조 (Na2SO4), 여과 및 농축되어 40 mg(8% 수율)의 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
1H-NMR(300 MHz, CDCl3): δ 0.99(t, 3H), 1.47(s, 6H), 1.64(m, 2H), 2.07(m, 4H), 2.81-2.88(m, 8H), 3.46(t, 2H), 5.29-5.44(m, 10H); MS(전자스프레이): 373.3 [M-H]-.
실시예 58: tert -부틸 2-에틸-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부타노에이트의 제조:
Figure pct00078
tert-부틸 2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부타노에이트(480 mg, 1.11 mmol)가 -70 ℃에서 질소하에서 유지된 건조 테트라하이드로퓨란(10 mL) 내의 리듐 디이소프로필아민(LDA)(2.0 M, 750 μL, 1.50 mmol) 용액에 30분에 걸쳐 적가되었다. 반응 혼합물은 30 분 동안 교반되었다. 에틸아이오다이드(312 mg, 2.00 mmol)가 한번에 첨가되고, 생성된 혼합물은 1 시간 동안 주위 온도로 가온되었다. 반응 혼합물은 주위 온도에서 17 시간 동안 교반되었다. 혼합물은 포화 NH4Cl(aq.)(50 mL)에 부어지고, 헵탄(2 x 50mL)으로 추출되었다. 혼합된 유기상은 브라인(50 mL), 0.25 M HCl(50 mL) 및 브라인(50 mL)으로 세척, 건조 (MgSO4), 여과 및 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄 및 에틸아세테이트(100:0 -> 95:5)의 혼합물의 극성을 증가시킴으로써 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 343 mg(67% 수율)의 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCI3): δ 0.84(t, 6H), 0.99(td, 3H), 1.35-1.55(m, 11 H), 1.54-1.69(m, 2H), 1.68-1.87(m, 4H), 1.99-2.24(m, 4H), 2.74-2.99(m, 8H), 3.31(t, 2H), 5.23-5.52(m, 10H); MS(전자스프레이): 401.3 [M-1]-.
실시예 59: 2-에틸-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄산의 제조:
Figure pct00079
포름산(5 ml) 및 tert-부틸 2-에틸-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부타노에이트(250 mg, 0.55 mmol)의 혼합물이 4.5 시간 동안 실온에서 질소하에서 격렬하게 교반되었다. 포름산은 진공하에서 제거되었다. 잔류물은 용리액으로 헵탄 및 에틸아세테이트(100:0 -> 80:20)의 혼합물의 극성을 증가시킴으로써 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 163 mg(74% 수율)의 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3): δ 0.86(t, 6H), 0.99(t, 3H), 1.36-1.57(m, 2H), 1.68(dd, 2H), 1.73-1.98(m, 4H), 2.11(tt, 4H), 2.70-3.01(m, 8H), 3.39(t, 2H), 5.20-5.56(m, 10H). MS(전자스프레이): 481.4 [M+Na]+.
실시예 60: tert-부틸 2-(((3Z,6Z,9Z,12Z)-펜타데카-3,6,9,12-테트라엔-1-일)옥시)부타노에이트의 제조
단계 a)(8Z,11Z,14Z,17Z)-5,6-디하이드록시이코사-8,11,14,17-테트라엔산
Figure pct00080
MeOH(150 mL) 및 물(7.5 mL)의 혼합물 내의 6-((3Z,6Z,9Z,12Z)-1-아이오도펜타데카-3,6,9,12-테트라엔-1-일)테트라하이드로-2H-피란-2-온(12.5 g, 29,2 mmol) 및 KOH(5.73 g, 102 mmol) 용액이 60 ℃에서 질소하에서 4 시간 동안 교반되었다. 반응 혼합물은 실온으로 냉각되고, 2 M HCl(aq.)로 산성화되고, EtOAc(300mL)로 추출되었다. 유기층은 물(일부 브라인과 함께 300mL)로 세척, 건조 (Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되어 오일의 9.8 g(100% 수율)이 수득되었다.
단계 b)(3Z,6Z,9Z,12Z)-펜타데카-3,6,9,12-테트라엔-1-올
Figure pct00081
과요오드산나트륨(9,34 g, 43,7 mmol)이 THF : 물(150 mL) 내의 (8Z,11Z,14Z,17Z)-5,6-디하이드록시이코사-8,11,14,17-테트라엔산(9.8 g, 29.1 mmol) 용액에 0 ℃에서 질소하에서 1 시간 동안 교반되었다. 반응 혼합물은 EtOAc(300 mL)로 추출되었다. 유기층은 분리되고, 희석된 브라인(200 mL)로 세척, 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 MeOH(100 ml)에 용해되고, 0 ℃로 냉각되었다. NaBH4(3.31 g, 87 mmol)가 조심스럽게 나누어 첨가되고, 혼합물은 0 ℃에서 30 분 동안 교반되었다. 물(300 mL)이 조심스럽게 첨가되고, 혼합물은 EtOAc(2 × 200 mL)로 추출되었다. 유기상은 혼합되고, 물(200 mL)로 세척, 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 헵탄 내의 20% 에틸아세테이트를 사용하여 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 4.06 g(63% 수율)의 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3) d 0.91(t, 3H), 1.97 - 2.05(m, 2H), 2.27-2.32(m, 2H), 2.73-2.81(m, 6H), 3.57-3.62(m, 2H), 5.17 - 5.41(m, 7H), 5.42 - 5.56(m, 1H).
단계 c) tert-부틸 2-(((3Z,6Z,9Z,12Z)-펜타데카-3,6,9,12-테트라엔-1-일)옥시)부타노에이트
Figure pct00082
테트라부틸암모늄클로라이드(0.10 g, 0.33 mmol)가 톨루엔(10 ml) 내의 ((3Z,6Z,9Z,12Z)-펜타데카-3,6,9,12-테트라엔-1-올(0.22 g, 1.00 mmol) 용액에 주위 온도에서 질소하에서 첨가되었다. t-부틸 2-브로모부티레이트(1.11 g, 5.00 mmol)이 이어 첨가되었다. 수산화나트륨 수용액(50%(w/w), 4 mL)이 실온에서 격렬한 교반하에서 첨가되었다. 생성된 혼합물은 50 ℃로 가열되고, 2 시간 동안 교반되고, 주위 온도에서 밤새 교반되었다. 실온으로 냉각 후, 물이 첨가되고, 수용액상은 디에틸에테르로 추출되었다. 상은 분리되고, 수용액상은 디에틸에테르로 2회 추출되었다. 유기상은 혼합되고, 물 및 브라인으로 세척, 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로 헵탄 내의 5% 에틸아세테이트를 사용하여 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 0.30 g(83%) of 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
실시예 61: 2-(((3Z,6Z,9Z,12Z)-펜타데카-3,6,9,12-테트라엔-1-일)옥시)부탄산의 제조
Figure pct00083
트리플루오로 아세트산(2 ml)이 디클로로메탄(10 mL) 내의 tert-부틸 2-(((3Z,6Z,9Z,12Z)-펜타데카-3,6,9,12-테트라엔-1-일)옥시)부타노에이트 용액에 질소하에서 첨가되었다. 반응 혼합물은 실온에서 1 시간 동안 교반되고, 물이 첨가되었다. 수용액상은 디클로로메탄으로 2 회 추출되었다. 유기상은 혼합되고, 브라인으로 세척, 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로 헵탄 내의 5% 에틸아세테이트(1% HCOOH 첨가)를 사용하여 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획의 농축으로 0.18 g(71% 수율)의 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
1H-NMR(300 MHz, CDCl3): δ 0.90 - 1.05(2xt, 6H), 1.75 - 1.90(m, 2H), 2.05 - 2.15(m, 2H), 2.30 - 2.50(m, 2H), 2.85(m, 6H), 3.60(m, 2H), 3.85(t, 1H), 5.25 - 5.60(m, 8H).
실시예 62: 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-노나데카-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산의 제조
Figure pct00084
단계 1:
0 ℃로 냉각된 THF(100 ml) 내의 데카-2,5,8-트라이린-1-올(0.94 g, 6.43 mmol) 용액이 메탄술포닐 클로라이드(720 μL, 9.24 mmol)에 질소하에서 첨가되고, TEA(1.97 mL, 14.13 mmol)가 15분에 걸쳐 적가되었다. 혼합물은 0 ℃에서 2 시간 동안 교반되었다. 혼합물은 물:얼음 1:1(200 g)에 부어지고, 디에틸에테르(2x100)로 추출되었다. 혼합된 유기층은 sat.(aq.) NaHCO3(200 mL), 물(200 mL) 및 브라인(200 mL)으로 세척, 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 증발되어 크루드 생성물이 수득되었다. 크루드 생성물은 실리카겔 상의 건조-플래쉬로 추가로 정제되었다. 분획 1 내지 3은 헵탄을, 분획 4 내지 6은 EtOAc:헵탄 2.5:100를, 분획 7 내지 10은 EtOAc:헵탄 5:100을 및 분획 11은 EtOAc를 사용하여 수집되었다. 적절한 분획은 수집되고 농축되어 1.07 g(4.77 mmol, 74.1% 수율)의 노나-2,5,7-트라이린-1-일 메탄술포네이트가 수득되었다.
단계 2:
건조 THF(25 mL)로 희석된 에틸마그네슘브로마이드(4.00 mL, 12.00 mmol) 용액에 프로파길 알콜(0.35 mL, 5.99 mmol) 용액이 20분에 걸쳐 조금씩 첨가되었다. 반응 혼합물은 90 분 동안 환류된 후, 30 분 동안 0 ℃로 냉각되었다. 촉매량의 브로모(디메틸설파이드) 코퍼(I)(330 mg, 1.605 mmol)가 첨가되고, 냉각조를 제거되었다. 15 분 동안 교반된 후, THF(5 ml)에 용해된 노나-2,5,7-트라이린-1-일 메탄술포네이트(1.05 g, 4.68 mmol)이 가열되어 5 분에 걸쳐 적가되었다. 반응 혼합물은 가열되어 환류되고, 밤새 환류에서 교반되었다. 반응물은 주위 온도로 냉각되고, 50 mL sat. aq. NH4Cl의 조심스러운 첨가에 의해 퀀칭되었다. 생성된 혼합물은 디에틸에테르(100 mL)를 포함하는 분리 깔때기로 옮겨졌다. 유기상은 분리되고, 수용액상은 디에틸에테르(2x100 mL)로 2 회 추출되었다. 혼합된 유기상은 브라인(50 mL)로 세척되고 건조되었다(Na2SO4). 잔류물은 진공하에서 농축된 후, 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획은 수집되고 농축되어 0.49 g(2.65 mmol, 56.6% 수율)의 도데카-2,5,8,10-테트라린-1-올이 수득되었다.
단계 3:
질소하에서 0 ℃로 냉각된 THF(30 ml) 내의 도데카-2,5,8,10-테트라린-1-올(465 mg, 2,52 mmol) 용액에 메탄술포닐 클로라이드(0.256 ml, 3.28 mmol)가 첨가되고, TEA(0.704 ml, 5.05 mmol)가 15분에 걸쳐 적가되었다. 혼합물은 0 ℃에서 1 시간 동안 교반되었다. 혼합물은 물:얼음 1:1(100 g)에 부어지고, 디에틸에테르(2x100 mL)로 추출되었다. 혼합된 유기층은 sat.(aq.) NaHCO3(200 mL), 물(200 mL) 및 브라인(200 mL)으로 세척, 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 증발되어 622 mg의 크루드 생성물이 수득되고, 크루드 생성물은 건식-플래쉬로 추가로 정제되었다. 분획 1 내지 3은 헵탄을, 분획 4 내지 6는 EtOAc:헵탄 2.5:100을, 분획 7 내지 10은 EtOAc:헵탄 5:100을, 및 분획 11은 EtOAc를 사용하여 수집되었다. 적절한 분획은 수집되고 농축되어 466 mg(1.78 mmol, 70.4% 수율)의 트라이데카-2,5,8,11-테트라린-1-일 메탄술포네이트이 수득되었다.
단계 4:
DMF(건조)(15 ml) 내의 세슘카보네이트(553 mg, 1.696 mmol), 소듐 아이오다이드(280 mg, 1.866 mmol) 및 코퍼(I) 아이오다이드(323 mg, 1.696 mmol)의 용액/현탁액에 DMF(건조)(5 ml) 내의 에틸헥사-5-이노에이트(262 mg, 1.866 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 질소 분위기하에서 실온에서 40 분 동안 교반되었다. DMF(건조)(5 ml) 내의 트라이데카-2,5,8,11-테트라린-1-일 메탄술포네이트(445 mg, 1.696 mmol)가 첨가되고, 혼합물은 실온에서 밤새 교반되었다. 포화 NH4Cl(200 ml)이 첨가되고, 혼합물은 EtOAc:헵탄(1:1, 3x150 ml)로 추출되었다. 혼합된 유기상은 브라인(200 ml)로 세척, 건조 (MgSO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로 헵탄 및 에틸아세테이트의 혼합물의 극성을 증가시킴으로써 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획은 수집되고 농축되어 51 mg(0.166 mmol, 9.8% 수율)의 에틸 노나데카-5,8,11,14,17-펜타노에이트가 수득되었다.
단계 5:
헵탄(10 ml) 및 톨루엔(15 mL) 내의 에틸 노나데카-5,8,11,14,17-펜타노에이트(60 mg, 0.196 mmol) 용액에 N2-기체로 버블링된 후, 퀴놀린(10 μL, 0.084 mmol) 및 린들러(Lindlar) 촉매(50 mg, 0.023 mmol)가 N2-분위기하에 첨가되었다. 현탁액은 H2 분위기(1 atm)하에서 15 시간 동안 교반되었다. 반응 혼합물은 셀라이트를 통해 여과 및 진공하에서 증발되었다. 크루드 생성물은 용리액으로 헵탄 내의 2% EtOAc의 혼합물을 사용하여 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획은 수집되고 농축되어 오일의 (5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-에틸 노나데카-5,8,11,14,17-펜타에노에이트(24.6 mg, 0.078 mmol, 39.7% 수율)가 수득되었다.
단계 6:
0 ℃로 냉각된 테트라하이드로퓨란(5 ml) 내의 (5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-에틸 노나데카-5,8,11,14,17-펜타에노에이트(22 mg, 0.070 mmol) 용액에 LAH(8 mg, 0.211 mmol)가 한번에 첨가되었다. 반응 혼합물은 0 ℃에서 30 분 동안 교반된 후, 주위 온도에서 90 분 동안 교반되었다. 반응 혼합물은 sat. NH4Cl(aq.)(10 mL) 및 얼음(10 g)에 부어지고, 혼합물은 10% HCl(aq.)을 사용하여 pH ~1-2로 산성화되었다. 혼합물은 Et2O(25 ml)로 2 회 추출되고, 혼합된 유기층은 물(25 mL) 및 브라인(25 mL)로 세척, 건조 (MgSO4), 여과 및 진공하에서 농축되어 오일의 (5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-노나데카-5,8,11,14,17-펜타엔-1-올(15.5 mg, 0.056 mmol, 81% 수율)이 수득되었다.
단계 7:
2-브로모부티르산(100 mg, 0.599 mmol)이 테트라하이드로퓨란(10 ml) 내의 17%(w/w)의 (5Z,8Z,11Z,14 Z,17Z)-노나데카-5,8,11,14,17-펜타엔-1-올(8 mg, 0.029 mmol) 용액에 첨가되었다. 혼합물은 5 ℃로 냉각되고, tert-부틸메틸에테르(30 ml) 내의 소듐 tert-부톡사이드(500 μl, 0.678 mmol) 용액이 5분에 걸쳐 적가되었다. 3 시간 후, 추가의 소듐 tert-부톡사이드(100 μL 0 ,136 mmol)가 첨가되고, 반응 혼합물은 추가 3 시간 동안 교반되었다. 반응은 포름산(0.100 ml, 2.61 mmol) 및 물(10 ml)의 첨가에 의해 퀀칭되었다. 생성된 혼합물은 tert-부틸메틸에테르(30 ml)로 추출되었다. 유기상은 물(4x10 ml)로 4회 세척, 건조 (MgSO4), 여과 및 진공하에서 증발되었다. 농축물은 Me-THF(50 ml)에 용해되고, sat. aq. NH4CI(20 ml)으로 4회 세척되었다. 유기상은 건조(MgSO4), 여과 및 진공하에서 증발되어 오일의 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-노나데카-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산(6 mg, 0.017 mmol, 57.1%)이 수득되었다.
HRMS(전자스프레이), [M-H]-: Calculated: 359.2586, found: 359.2578.
실시예 63: 2-(((6Z,9Z,12Z,15Z)-옥타데카-6,9,12,15-테트라엔-1-일)옥시)부탄산의 제조
Figure pct00085
톨루엔(3 mL) 내의 (6Z,9Z,12Z,15Z)-옥타데카-6,9,12,15-테트라엔-1-올(90 mg, 0.343 mmol) 용액에 테트라부틸암모늄하이드록사이드(TBAOH)(2 mg, 0.008 mmol), tert-부틸 2-브로모부타노에이트(190 mg, 0.819 mmol) 및 NaOH(50 w/w%, 1 mL)가 첨가되었다. 혼합물은 45 ℃에서 3 시간 동안 교반되었다. 반응 혼합물에 추가의 tert-부틸 2-브로모부타노에이트(190 mg, 0.819 mmol)이 첨가되고, 반응 혼합물은 45 ℃에서 24 시간 동안 교반되었다. 혼합물은 실온으로 냉각되고, Et2O(2x30 mL)로 2 회 추출되었다. 혼합된 유기 추출물은 물(3x25 mL) 및 브라인(25 mL)로 세척, 여과 및 진공하에서 증발되어 크루드 생성물인 tert-부틸 2-(((6Z,9Z,12Z,15Z)-옥타데카-6,9,12,15-테트라엔-1-일)옥시)부타노에이트가 수득되었다. 크루드 생성물인 tert-부틸 2-(((6Z,9Z,12Z,15Z)-옥타데카-6,9,12,15-테트라엔-1-일)옥시)부타노에이트는 포름산(FA)(5 mL)에 용해되고, 생성된 용액은 실온에서 3 시간 동안 교반되었다. 혼합물은 진공하에서 25 ℃에서 농축되고, 잔류물은 EtOAc(30 mL)에 용해되었다. 용액은 물(4x25 mL)로 세척, EtOAc(20 mL)로 희석 및 건조되었다(MgSO4). 용매는 진공하에서 제거되고, 크루드 생성물은 용리액으로 헵탄 및 아세톤(1:0 → 5:1)의 혼합물의 극성을 증가시킴으로써 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 분획은 수집되고 진공하에 증발되었다. 잔류물은 FA(5 mL)에 용해되고, 실온에서 3 시간 동안 교반된 후, 용매는 진공하에 증발되었다. 잔류물에 EtOAc(30 mL)가 첨가되고, 물(4x25 mL) 및 브라인(25 mL)으로 세척, 건조 (MgSO4) 및 진공하에서 증발되었다. 잔류물은 용리액으로서 물 내의 85% MeCN을 사용하여 prep HPLC에 의해 정제되었다. 적절한 분획은 수집되고 농축되었다. 잔류물은 EtOAc 용해, 건조 (MgSO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 생성물은 Et2O에 용해되고, 진공하에서 농축되어 10 mg(8% 수율)의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 1.09 - 0.81(m, 6H), 1.41(dt, 4H), 1.67(d, 2H), 1.97 - 1.74(m, 2H), 2.10(t, 4H), 2.84(q, 6H), 3.55 - 3.42(m, 1H), 3.65 - 3.54(m, 1H), 3.88(dd, 4.8 Hz, 1H), 5.53 - 5.25(m, 8H). HRMS(전자스프레이), [M-H]-: Calculated: 347.2592, found: 347.2576.
실시예 64: 2-(((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-노나데카-4,7,10,13,16-펜타엔-1-일)옥시)부탄산의 제조
Figure pct00086
단계 1:
톨루엔(5 ml) 내의 (4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-노나데카-4,7,10,13,16-펜타엔-1-올(446 mg, 1.625 mmol) 및 tert-부틸 2-브로모부티레이트(501 mg, 2.246 mmol)의 용액에 테트라부틸암모늄 하이드로겐술페이트(102 mg, 0.300 mmol)가 첨가되었다. 수산화나트륨(2,5 mL, 46.9 mmol)이 교반하에서 첨가되고, 반응물은 바로 50 ℃로 가온되었다. 1 시간 후, 추가의 tert-부틸 2-브로모부티레이트(533 mg, 2.389 mmol)이 첨가되고, 반응물은 3 시간 더 방치된 후, 밤새 교반되면서 냉각되었다. Et2O(50 mL)이 첨가되고 에멀젼이 생성되었다. 포화 NH4Cl(aq.)(50 mL)이 첨가되고 혼합물은 진탕되었다. 상은 분리되고, 수용액상은 Et2O(50 mL)로 추출되었다. 혼합된 유기상은 5% w/w의 NaOH(aq.)(2 x 50 mL)로 세척, 건조 (MgSO4), 여과 및 증발되었다. 잔류물은 진공 라인에서 5 일 동안 건조된 후, 헵탄(1 mL)으로 희석되고, 2x50 mL 헵탄에 이어 6x50mL의 헵탄:EtOAc(95:5)의 혼합물로 용리되는 실리카겔(5 g)을 사용하여 건식-플래쉬에 의해 총 8개의 분획으로 정제하였다. 수집된 분획 3 내지4는 증발되어 tert-부틸 2-((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-노나데카-4,7,10,13,16-펜타에닐옥시)부타노에이트(455 mg, 1.092 mmol, 67.2% 수율)가 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, 클로로포름-d) δ 0.98(td, 6H), 1.49(s, 9H), 1.57 - 1.84(m, 4H), 2.00 - 2.28(m, 4H), 2.74 - 2.94(m, 8H), 3.33(dt, 1H), 3.50 - 3.70(m, 2H), 5.24 - 5.50(m, 10H).
단계 2:
HCOOH(10 mL) 내의 tert-부틸 2-((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-노나데카-4,7,10,13,16-펜타에닐옥시)부타노에이트(373 mg, 0.895 mmol)의 혼합물은 2.5 시간 동안 격렬하게 교반되었다. 혼합물은 총 3 시간의 반응시간 후에 농축되고, 에틸아세테이트(50mL)로 희석되고, 물(3 x 50mL)로 세척되어 수용액상에서 중성 pH가 제공되었다. 유기상은 건조(MgSO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 실리카겔(8 g)을 사용하고 헵탄:EtoAc 90:10(3 x 30 mL)에 이어 80:20(7 x 50 mL)으로 용리되는 건식-플래쉬로 정제되었다. 분획 4 내지 6은 수집하고 진공하에서 농축되어 2-((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-노나데카-4,7,10,13,16-펜타에닐옥시)부탄산(122 mg, 0.338 mmol, 37.8% 수율)이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, 클로로포름-d) δ 1.00(td, 2.6 Hz, 6H), 1.62 - 1.79(m, 2H), 1.79 - 1.92(m, 2H), 1.99 - 2.13(m, 2H), 2.19(dd, 2H), 2.85(dtd, 8H), 3.47 - 3.67(m, 2H), 3.88(dd, 1H), 5.31 - 5.47(m, 10H). HRMS(전자스프레이), [M-H]-: Calculated: 359.2586, found: 359.2590.
실시예 65: 2-(((8Z,11Z,14Z)-옥타데카-8,11,14,17-테트라엔-1-일)옥시)부탄산의 제조
Figure pct00087
단계 1:
DMF(20 ml) 내의 세슘카보네이트(2.67 g, 8.20 mmol), NaI(1.23 g, 8.20 mmol) 및 코퍼(I)아이오다이드(1.56 g, 8.20 mmol)의 용액에 DMF(5 ml) 내의 메틸논-8-이노에이트(1.38 g, 8.20 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 질소 분위기하에서 실온에서 40 분 동안 교반되었다. DMF(5 ml) 내의 노나-8-엔-2,5-디린-1-일 메탄술포네이트(1.74 g, 8.20 mmol)이 첨가되고, 혼합물은 실온에서 밤새 교반되었다. 포화 NH4Cl(200 ml)이 첨가되고, 혼합물은 EtOAc:헵탄(1:1, 3x150 ml)로 추출되었다. 혼합된 유기상은 브라인(100 ml)로 세척, 건조 (Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 플래쉬 크로마토그래피(헵탄/EtOAc 92/8)는 오일의 메틸 옥타데카-17-엔-8,11,14-트리이노에이트(1.43 g, 5.03 mmol, 61.3% 수율)가 수득되었다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 5.80 - 5.67(m, 1H), 5.29 - 5.18(m, 1H), 5.08 - 4.99(m, 1H), 3.60(s, 3H), 3.15 - 3.09(m, 2H), 3.09 - 3.05(m, 2H), 2.93 - 2.85(m, 2H), 2.24(t, 2H), 2.11 - 2.05(m, 2H), 1.60 - 1.52(m, 2H), 1.46 - 1.38(m, 2H), 1.35 - 1.23(m, 4H). MS(전자스프레이): 307.1 [M+Na]+.
단계 2:
N2-분위기하에서 헵탄(15 ml) 내의 린들러 촉매(1.063 g, 0.499 mmol)의 현탁액이 헵탄(5 ml) 내의 메틸 옥타데카-17-엔-8,11,14-트리이노에이트(1.42 g, 4.99 mmol) 용액 및 퀴놀린(0.177 ml, 1.498 mmol)에 첨가되었다. 혼합물은 H2 분위기(1 atm)하에서 밤새 교반되었다. 혼합물은 여과 및 진공하에서 농축되었다. 플래쉬 크로마토그래피(헵탄/EtOAc 98.5/1.5)는 오일의 (8Z,11Z,14Z)-메틸 옥타데카-8,11,14,17-테트라에노에이트(0.830 g, 2.86 mmol, 57.2% 수율)이 수득되었다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 5.84 - 5.65(m, 1H), 5.43 - 5.19(m, 6H), 5.05 - 4.85(m, 2H), 3.60(s, 3H), 2.81 - 2.68(m, 6H), 2.23(t, 2H), 2.02 - 1.92(m, 2H), 1.59 - 1.52(m, 2H), 1.34 - 1.18(m, 6H). MS(전자스프레이): 313.2 [M+Na]+.
단계 3:
THF(2 ml) 내의 (8Z,11Z,14Z)-메틸 옥타데카-8,11,14,17-테트라에노에이트(830 mg, 2.86 mmol) 용액이 THF(10 ml) 내의 LAH(114 mg, 3.00 mmol)의 냉각된(0 ℃) 현탁액에 N2-분위기 하에서 적가되었다. 혼합물은 0 ℃에서 40분 동안 교반되고, 냉각된 포화 NH4Cl(20 mL)에 조심스럽게 부어졌다. 수용액층은 HCl(2M)로 pH ~ 2로 산성화되었다. 상은 분리되고, 수용액상은 헵탄(3x20 ml)으로 추출되었다. 혼합된 유기상은 브라인(20 mL)로 세척, 건조 (Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되어 오일의 (8Z,11Z,14Z)-옥타데카-8,11,14,17-테트라엔-1-올(730 mg, 2.78 mmol, 97% 수율)이 수득되었다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 5.84 - 5.66(m, 1H), 5.43 - 5.20(m, 6H), 5.03 - 4.82(m, 2H), 3.57(t, 2H), 2.84 - 2.62(m, 6H), 2.06 - 1.90(m, 4H), 1.58 - 1.42(m, 3H), 1.33 - 1.20(m, 6H). MS(전자스프레이): 285.1 [M+Na]+.
단계 4:
NaOH(2 ml, 37.9 mmol) 용액이 격렬히 교반되는 톨루엔(8 ml) 내의 (8Z,11Z,14Z)-옥타데카-8,11,14,17-테트라엔-1-올(720 mg, 2.74 mmol), tert-부틸 2-브로모부타노에이트(918 mg, 4.12 mmol) 및 테트라부틸암모늄 하이드로겐술페이트(279 mg, 0.823 mmol)의 용액에 N2-분위기하에서 서서히 첨가되었다. 혼합물은 40 ℃에서 밤새 가열되었다. 추가의 tert-부틸 2-브로모부타노에이트(306 mg, 1.372 mmol)가 5시간 및 24시간 후에 2회 첨가되었다. 48 시간 후, 혼합물은 5-10 ℃로 냉각되고 포화 NH4Cl(20 ml)이 첨가되었다. 상은 분리되고, 수용액상은 EtOAc(50 ml)로 추출되었다. 혼합된 유기상은 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 플래쉬 크로마토그래피(헵탄/EtOAc 99/1)로 오일의 tert-부틸 2-(((8Z,11Z,14Z)-옥타데카-8,11,14,17-테트라엔-1-일)옥시)부타노에이트(675 mg, 1.668 mmol, 60.8% 수율)가 수득되었다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 5.86 - 5.65(m, 1H), 5.41 - 5.21(m, 6H), 5.04 - 4.83(m, 2H), 3.57 - 3.46(m, 2H), 3.30 - 3.19(m, 1H), 2.81 - 2.68(m, 6H), 2.02 - 1.89(m, 4H), 1.71 - 1.60(m, 2H), 1.54 - 1.50(m, 2H), 1.41(s, 12H), 1.32 - 1.20(m, 8H), 0.89(t, 3H).
단계 5:
HCOOH(6.75 ml, 179 mmol) 내의 tert-부틸 2-(((8Z,11Z,14Z)-옥타데카-8,11,14,17-테트라엔-1-일)옥시)부타노에이트(675 mg, 1.668 mmol) 용액이 N2-분위기하에서 40 ℃에서 21 시간 동안 교반되었다. 반응 혼합물은 감압하에서 증발되고, CH3CN:H2O-90:10 및 0.02% HCOOH로 용리되는 prep HPLC에 의해 정제되었다. 순수한 생성물을 포함하는 prep-분획은 감압하에서 증발되어 CH3CN이 제거되었다. tert-부틸메틸에테르 및 브라인이 잔류물에 첨가되고, 상은 분리되었다. 유기상은 건조(Na2SO4), 여과 및 감압하에서 증발되어 오일의 2-((8Z,11Z,14Z)-옥타데카-8,11,14,17-테트라엔-1-일옥시)부탄산(163 mg, 0.464 mmol, 27.8% 수율)이 수득되었다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 5.89-5.70(m, 1H), 5.51-5.22(m, 6H), 5.00(dd, 2H), 3.84(t, 1H), 3.62-3.38(m, 2H), 2.79(m, 6H), 2.12-1.95(m, 2H), 1.88-1.75(m, 2H), 1.64-1.58(m, 2H), 1.31(s, 8H), 0.96(t, 3H). HRMS(전자스프레이) [M-H]-: Calculated: 347.2586, found: 347.2589.
실시예 66: 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z)-노나데카-5,8,11,14-테트라엔-1-일)옥시)부탄산의 제조
Figure pct00088
단계 1:
THF(50 ml) 내의 (5Z,8Z,11Z,14Z)-에틸 노나데카-5,8,11,14-테트라에노에이트(21 g, 65.9 mmol) 용액이 15 분에 걸쳐 냉각된(0 ℃) 건조 THF(300 ml) 내의 LAH(2.503 g, 65.9 mmol) 현탁액에 질소 분위기하에서 15분에 걸쳐 적가되었다. 혼합물은 0 ℃에서 1 시간 동안 교반되고, 냉각된 포화 NH4Cl(300 mL)로 조심스럽게 부어졌다. 수용액층은 HCl(2 M)로 pH ~ 2로 산성화되었다. 상은 분리되고, 수용액상은 헵탄(2x250 mL)으로 추출되었다. 혼합된 유기상은 브라인(300 mL)으로 세척, 건조 (Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되어 오일의 (5Z,8Z,11Z,14Z)-노나데카-5,8,11,14-테트라엔-1-올(17.9 g, 64.7 mmol, 98% 수율)이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 5.46 - 5.11(m, 8H), 3.68 - 3.57(m, 2H), 2.89 - 2.69(m, 6H), 2.12-1.98(m, 4H), 1.62-1.51(m, 2H), 1.47 - 1.23(m, 6H), 0.91-0.85(m, 3H).
단계 2:
THF(350 ml) 내의 (5Z,8Z,11Z,14Z)-노나데카-5,8,11,14-테트라엔-1-올(17.9 g, 64.7 mmol) 용액에 2-브로모부탄산(10.35 ml, 97 mmol)이 첨가되었다. 반응 혼합물은 8-10 ℃로 냉각되었다. 온도는 8-10 ℃로 유지되면서 소듐-t-부톡사이드(17.42 g, 181 mmol)(MTBE(120 mL) 내의 17%) 용액이 25 분에 걸쳐 첨가되었다. 반응물은 8-10 ℃에서 30 분 동안 교반되었다. 추가의 소듐-t-부톡사이드(2.489 g, 25.9 mmol)(MTBE(25mL) 내의 17%)가 5 분에 걸쳐 첨가되었다. 혼합물은 8-10 ℃에서 30분 동안 교반된 후, 5분에 걸쳐 추가의 2-브로모부티르산(6.90 ml, 64.7 mmol)이 첨가되었다. 혼합물은 8-10 ℃에서 30 분 동안 교반되었다. 추가의 소듐-t-부톡사이드(4.98 g, 51.8 mmol)(MTBE(40 mL) 내의 17%)가 5 분에 걸쳐 첨가되었다. 혼합물은 8-10 ℃에서 30 분 동안 교반되었다. 추가의 소듐-t-부톡사이드(2.489 g, 25.9 mmol)(MTBE(25mL) 내의 17%)가 5 분에 걸쳐 첨가되었다. 혼합물은 8-10 ℃에서 30 분 동안 교반되었다. HCOOH(3mL)에 이어 2M HCl(aq)가 첨가하여 pH 2가 되었다. 상은 분리되고, 수용액상은 MTBE(2x300mL)로 추출되었다. 혼합된 유기상은 물(300 mL), 포화 NaHCO3(4x200 ml) 및 브라인(300 ml)로 세척, 건조 (Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 플래쉬 크로마토그래피(헵탄/EtOAc/HCOOH 90/10/0,5)로 정제되고, 적절한 분획이 수집되고 진공하에서 농축되었다. 이어서, 잔류물은 용리액으로서 물(10% MeCN 및 0.02% HCOOH 함유) 내의 88% MeCN(0.02% HCOOH 함유)을 사용하여 prep HPLC 에 의해 추가로 정제되었다. 용매는 제거되어 오일의 10.16 g의 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z)-노나데카-5,8,11,14-테트라엔-1-일)옥시)부탄산(26.8 mmol, 41.5% 수율)이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 9.93(s, 1H), 5.51 - 5.21(m, 8H), 3.84-3.80(m, 1H), 3.62-3.54(m, 1H), 3.50 - 3.39(m, 1H), 2.96 - 2.61(m, 6H), 2.12-2.01(m, 4H), 1.90 - 1.71(m, 2H), 1.69 - 1.57(m, 2H), 1.49 - 1.37(m, 2H), 1.36 - 1.23(m, 4H), 0.97(t, 3H), 0.91 - 0.84(m, 3H). MS(전자스프레이): 361.2 [M-H]-.
실시예 67: 2-(((8Z,11Z,14Z)-옥타데카-8,11,14-트리엔-1-일)옥시)부탄산의 제조
Figure pct00089
단계 1
DMF(750 ml) 내의 Cs2CO3(106 g, 326 mmol), 소듐 아이오다이드(44.8 g, 299 mmol) 및 코퍼(I) 아이오다이드(56.9 g, 299 mmol)의 교반된 용액에 에틸 논-8-이노에이트(49.5 g, 272 mmol)에 이어 1-브로모노나-2,5-디이네(54.1 g, 272 mmol)가 질소 분위기하에서 주위 온도에서 첨가되었다. 혼합물은 주위 온도에서 밤새 교반되고, 포화 NH4Cl(600 mL)에 부어졌다. 혼합물은 MTBE(3x300 mL)로 추출되고, 혼합된 유기상은 브라인(400 mL)로 세척, 건조 (Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 플래쉬 크로마토그래피(헵탄/EtOAc 95/5-92/8-90/10)로 오일의 에틸 옥타데카-8,11,14-트리이노에이트(52.8 g, 176 mmol, 64.7% 수율)가 수득되었다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 4.09(q, 2H), 3.15 - 3.06(m, 4H), 2.26(t, 2H), 2.15 - 2.06(m, 4H), 1.63-1.56(m, 2H), 1.53-1.42(m, 4H), 1.40 - 1.26(m, 4H), 1.22(t, 3H), 0.93(t, 3H). MS(전자스프레이): 323.2 [M+Na]+.
단계 2:
절대 EtOH(150 ml) 내의 니켈로우스 아세테이트, 4-하이드레이트(7.67 ml, 55.4 mmol)의 교반된 용액에 고체 NaBH4(2.097 g, 55.4 mmol)가 H2 분위기(1 atm)하에서 실온에서 첨가되었다. 생성된 현탁액은 30 분 동안 교반된 후, 에틸렌디아민(12.38 ml, 185 mmol)이 첨가되었다. 완전히 첨가된 후, 현탁액은을 추가 15 분 동안 교반되고, 절대 EtOH(50 ml) 내의 에틸 옥타데카-8,11,14-트리이노에이트(11.1 g, 36.9 mmol)가 첨가되었다. 반응 혼합물은 실온에서 H2(1 atm)하에서 3 일 동안 교반되었다. 디에틸에테르(500 mL)가 첨가되어 반응 혼합물이 희석되었다. 생성된 혼합물은 짧은 실리카겔 컬럼에 통과되었다. 여액은 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 플래쉬 컬럼 크로마토그래피(헵탄/EtOAc 98/2)로 정제되어 오일의 에틸(8Z,11Z,14Z)-옥타데카-8,11,14-트리에노에이트(10 g, 32.6 mmol, 88% 수율)가 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 5.46 - 5.23(m, 6H), 4.10(q, 2H), 2.87 - 2.67(m, 3H), 2.26(t, 2H), 2.07-1.97(m, 4H), 1.66 - 1.55(m, 2H), 1.41 - 1.18(m, 11H), 0.91-0.84(m, 3H).
단계 3:
THF(50 ml) 내의 에틸(8Z,11Z,14Z)-옥타데카-8,11,14-트리에노에이트(24.6 g, 80 mmol) 용액에 건조 THF(300 ml) 내의 LAH(3.05 g, 80 mmol)의 냉각된(0 ℃) 현탁액에 질소하에서 15 분에 걸쳐 적가되었다. 혼합물은 0 ℃에서 1 시간 동안 교반되었다. 혼합물은 조심스럽게 냉각된 포화 NH4Cl(300 mL)에 부어졌다. 수용액층은 HCl(2 M)로 pH ~ 2로 산성화되었다. 상은 분리되고, 수용액상은 헵탄(2x250 mL)으로 추출되었다. 혼합된 유기상은 브라인(300 mL)로 세척, 건조 (Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되어 오일의 (8Z,11Z,14Z)-옥타데카-8,11,14-트리엔-1-올(20.7 g, 78 mmol, 98% 수율)이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 5.49 - 5.23(m, 6H), 3.61(t, 2H), 2.86 - 2.67(m, 4H), 2.11 - 1.92(m, 4H), 1.59-1.49(m, 2H), 1.43 - 1.21(m, 10H), 0.94 - 0.83(m, 3H).
단계 4:
THF(350 ml) 내의 (8Z,11Z,14Z)-옥타데카-8,11,14-트리엔-1-올(20.7 g, 78 mmol) 용액에 2-브로모부탄산(12.51 ml, 117 mmol)이 첨가되었다. 반응 혼합물은 8-10 ℃로 냉각되었다. 소듐-t-부톡사이드(21.06 g, 219 mmol)(MTBE(130 mL) 내의 17%) 용액이, 온도는 8-10 ℃로 유지되면서, 15 분에 걸쳐 첨가되었다. 반응물은 8-10 ℃에서 30 분 동안 교반되었다. 추가의 소듐-t-부톡사이드(3.01 g, 31,3 mmol)(MTBE(25mL) 내의 17%)가 5 분에 걸쳐 첨가되었다. 혼합물은 8-10 ℃에서 30 분 동안 교반된 후, 추가의 2-브로모부티르산(8.34 ml, 78 mmol)이 5 분에 걸쳐 첨가되었다. 그 후, 반응물은 8-10 ℃에서 30 분 동안 교반되었다. 추가의 소듐-t-부톡사이드(6.02 g, 62.6 mmol)(MTBE(40 mL) 내의 17%)가 5 분에 걸쳐 첨가되었다. 혼합물은 8-10 ℃에서 30 분 동안 교반되었다. 추가의 소듐-t-부톡사이드(3.01 g, 31.3 mmol)(MTBE(25mL) 내의 17%)가 5 분에 걸쳐 첨가되었다. 반응물은 8-10 ℃에서 30 분 동안 교반되었다. HCOOH(3mL)에 이어 2M HCl(aq)가 첨가되어 pH ~2가 되었다. 상은 분리되고, 수용액상은 MTBE(2x300mL)로 추출되었다. 혼합된 유기상은 물(300 mL), 포화 NaHCO3(4x200 ml) 및 브라인(300 ml)로 세척, 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 플래쉬 크로마토그래피(헵탄/EtOAc/HCOOH 90/10/0,5)에 의해 정제되고, 적절한 분획은 수집되고 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로 물(10% MeCN 및 0.02% HCOOH 함유) 내의 88% MeCN(0.02% HCOOH 함유)을 상용하여 prep HPLC에 의해 추가로 정제되었다. 용매는 제거되어 오일의 10.55 g의 2-(((8Z,11Z,14Z)-옥타데카-8,11,14-트리엔-1-일)옥시)부탄산(28.8 mmol, 36.8% 수율)이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 9.70(s, 1H), 5.47 - 5.25(m, 6H), 3.85-3.81(m, 1H), 3.60-3.52(m, 1H), 3.49-3.42(m, 1H), 2.87 - 2.68(m, 4H), 2.10 - 1.94(m, 4H), 1.89 - 1.69(m, 2H), 1.66 - 1.54(m, 2H), 1.43 - 1.24(m, 10H), 0.96(t, 3H), 0.89(t, 3H). MS(전자스프레이): 349.2 [M-H]-.
실시예 68: 2-(((9Z,12Z,15Z)-옥타데카-9,12,15-트리엔-1-일)옥시)부탄산의 제조
Figure pct00090
THF(400 ml) 내의 (9Z,12Z,15Z)-옥타데카-9,12,15-트리엔-1-올(29.6 g, 112 mmol) 용액에 2-브로모부탄산(17.89 ml, 168 mmol)이 첨가되었다. 반응 혼합물은 8-10 ℃로 냉각되었다. 소듐-t-부톡사이드(30.1 g, 313 mmol)(MTBE(180 mL) 내의 17%) 용액이 5 분에 걸쳐 첨가되었다, 온도는 8-10 ℃로 유지되면서. 반응물은 8-10
Figure pct00091
에서 30 분 동안 교반되었다. 추가의 소듐-t-부톡사이드(4.30 g, 44.8 mmol)(MTBE(30 mL) 내의 17%)가 5 분에 걸쳐 첨가되었다. 반응물은 8-10 ℃에서 30 분 동안 교반되었다. 추가의 2-브로모부티르산(11.93 ml, 112 mmol)이 5 분에 걸쳐 첨가되었다. 반응물은 8-10 ℃에서 30 분 동안 교반되었다. 추가의 소듐-t-부톡사이드(8.61 g, 90 mmol)(MTBE(55 mL) 내의 17%)가 5 분에 걸쳐 첨가되었다. 반응물은 8-10 ℃에서 30 분 동안 교반되었다. 추가의 소듐-t-부톡사이드(4.30 g, 44.8 mmol)(MTBE(30 mL) 내의 17%)가 5 분에 걸쳐 첨가되었다. 반응물은 8-10 ℃에서 30 분 동안 교반되었다. HCOOH(3mL)에 이어 2M HCl(aq)가 첨가되어 pH ~2가 되었다. 상은 분리되고, 수용액상은 MTBE(2x300mL)로 추출되었다. 혼합된 유기상은 물(300 mL), 포화 NaHCO3(4x200 ml) 및 브라인(300 ml)으로 세척, 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피(헵탄/EtOAc/HCOOH 90/10/0,5)에 의해 정제되었다. 적절한 분획은 수집되고 진공하에서 농축되어 오일의 2-(((9Z,12Z,15Z)-옥타데카-9,12,15-트리엔-1-일)옥시)부탄산(28 g, 78 mmol, 69.9% 수율)이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 10.07(s, 1H), 5.48 - 5.16(m, 6H), 3.84-3.80(m, 1H), 3.60-3.53(m, 1H), 3.48-3.40(m, 1H), 2.87 - 2.70(m, 4H), 2.12 - 1.97(m, 4H), 1.91 - 1.70(m, 2H), 1.66 - 1.53(m, 2H), 1.38-1.27(m, 10H), 0.99-0.93(m, 6H). MS(전자스프레이): 373.3 [M+Na]+.
실시예 69: 2-(((6Z,9Z,12Z)-옥타데카-6,9,12-트리엔-1-일)옥시)부탄산의 제조
Figure pct00092
THF(400 ml) 내의 (6Z,9Z,12Z)-옥타데카-6,9,12-트리엔-1-올(29.6 g, 112 mmol) 용액에 2-브로모부탄산(17.89 ml, 168 mmol)이 첨가되었다. 반응 혼합물은 8-10 ℃로 냉각되었다. 소듐-t-부톡사이드(30.1 g, 313 mmol)(MTBE(180 mL) 내의 17%) 용액이 25분에 걸쳐 첨가되었다. 온도는 8-10 ℃로 유지되면서. 반응물은 8-10 ℃에서 30 분 동안 교반되었다. 추가의 소듐-t-부톡사이드(4.30 g, 44.8 mmol)(MTBE(30 mL) 내의 17%)가 5 분에 걸쳐 첨가되었다. 반응물은 8-10 ℃에서 30 분 동안 교반되었고, 추가의 2-브로모부티르산(11.93 ml, 112 mmol)이 5분에 걸쳐 첨가되었다. 반응물은 8-10 ℃에서 30 분 동안 교반되었다. 추가의 소듐-t-부톡사이드(8.61 g, 90 mmol)(MTBE(55 mL) 내의 17%)이 5 분에 걸쳐 첨가되었다. 반응물은 8-10 ℃에서 30 분 동안 교반되었다. 추가의 소듐-t-부톡사이드(4.30 g, 44.8 mmol)(MTBE(30 mL) 내의 17%)이 5 분에 걸쳐 첨가되었다. 반응물은 8-10 ℃에서 30 분 동안 교반되었다.
HCOOH(3mL)에 이어 2M HCl(aq)가 첨가되어 pH ~2가 되었다. 상은 분리되고, 수용액상은 MTBE(2x300mL)로 추출되었다. 혼합된 유기상은 물(300 mL), 포화 NaHCO3(4x200 ml) 및 브라인(300 ml)으로 세척, 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피(헵탄/EtOAc/HCOOH 90/10/0,5)에 의해 정제되었다. 적절한 분획은 수집되고 진공하에서 농축되어 오일의 2-((6Z,9Z,12Z)-옥타데카-6,9,12-트리엔-1-일옥시)부탄산(30,2 g, 83 mmol, 74,1% 수율)이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 9.56(s, 1H), 5.46 - 5.22(m, 6H), 3.84-3.80(m, 1H), 3.61 내지 3.54(m, 1H), 3.47-3.40(m, 1H), 2.86 - 2.71(m, 4H), 2.10-1.99(m, 4H), 1.91 - 1.70(m, 2H), 1.65-1.56(m, 2H), 1.45 - 1.18(m, 10H), 0.97(t, 3H), 0.87(t, 3H). MS(전자스프레이): 373.2 [M+Na]+.
실시예 70: 2-(((6Z,9Z,12Z,15Z,18Z)-hen이코사-6,9,12,15,18-펜타엔-1-일)옥시)부탄산의 제조
Figure pct00093
THF(350 ml) 내의 (6Z,9Z,12Z,15Z,18Z)-hen이코사-6,9,12,15,18-펜타엔-1-올(23 g, 76 mmol)의 용액에 2-브로모부탄산(12.15 ml, 114 mmol)이 첨가되었다. 반응 혼합물은 8-10 ℃로 냉각되었다. 온도를 8-10 ℃로 유지하면서 소듐-t-부톡사이드(20.46 g, 213 mmol)(MTBE(1140 mL) 내의 17%) 용액이 25 분에 걸쳐 첨가되었다. 반응물은 8-10 ℃에서 30 분 동안 교반되었다. 추가의 소듐-t-부톡사이드(2.92 g, 30.4 mmol)(MTBE(25mL) 내의 17%)이 5 분에 걸쳐 첨가되었다. 반응물은 8-10 ℃에서 30 분 동안 교반되었고, 추가의 2-브로모부티르산(8.10 ml, 76 mmol)이 5분에 걸쳐 첨가되었다. 반응물은 8-10 ℃에서 30 분 동안 교반되었다. 추가의 소듐-t-부톡사이드(5.85 g, 60.8 mmol)(MTBE(45 mL) 내의 17%)이 5 분에 걸쳐 첨가되었다. 반응물은 8-10 ℃에서 30 분 동안 교반되었다. 추가의 소듐-t-부톡사이드(2.92 g, 30.4 mmol)(MTBE(25mL) 내의 17%)이 5 분에 걸쳐 첨가되었다. 반응물은 8-10 ℃에서 30 분 동안 교반되었다. HCOOH(3mL)에 이어 2M HCl(aq)가 첨가되어 pH ~2가 되었다. 상은 분리되고, 수용액상은 MTBE(2x300mL)로 추출되었다. 혼합된 유기상은 물(300 mL), 포화 NaHCO3(4x200 ml) 및 브라인(300 ml)으로 세척, 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피(헵탄/EtOAc/HCOOH 90/10/0,5)에 의해 정제되었다. 적절한 분획은 수집되고 진공하에서 농축되어 오일의 2-(((6Z,9Z,12Z,15Z,18Z)-hen이코사-6,9,12,15,18-펜타엔-1-일)옥시)부탄산(18.9 g, 47.3 mmol, 62.2% 수율)이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 9.85(s, 1H), 5.48 - 5.21(m, 10H), 3.84-3.81(m, 1H), 3.61 내지 3.53(m, 1H), 3.48-3.41(m, 1H), 2.93 - 2.71(m, 8H), 2.18 - 1.96(m, 4H), 1.91 - 1.70(m, 2H), 1.66-1.57(m, 2H), 1.45 - 1.30(m, 4H), 0.99-0.93(m, 6H). MS(전자스프레이): 411.4 [M+Na]+.
실시예 71: 2-(((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-도코사-4,7,10,13,16,19-헥센-1-일)옥시)부탄산의 제조
Figure pct00094
톨루엔(11 ml) 및 THF(400 ml) 내의 (4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-도코사-4,7,10,13,16,19-헥센-1-올(30 g, 95 mmol)의 용액에 2-브로모부티르산(17.28 ml, 162 mmol)이 첨가되고, 온도는 8-10 ℃로 유지되면서 THF(160 ml) 내의 소듐-t-부톡사이드(25,7 g, 267 mmol) 용액이 35분에 걸쳐 첨가되었다. 반응물은 8-10 ℃에서 40 분 동안 교반되었다. THF(60 ml) 내의 소듐-t-부톡사이드(4,17 g, 43,4 mmol)가 10분에 걸쳐 첨가되었다. 생성된 혼합물은 8-10 ℃에서 40 분 동안 교반된 후, 추가의 2-브로모부티르산(10,17 ml, 95 mmol)이 한번에 첨가되었다. 혼합물은 8-10 ℃에서 1 시간 동안 교반된 후, 온도를 12 ℃ 미만으로 유지하면서, THF(100 ml) 내의 추가의 소듐-t-부톡사이드(7.33 g, 76 mmol)가 10분에 걸쳐 첨가되었다. 반응물은 10 ℃에서 60분 동안 교반되었다. 소듐-t-부톡사이드(4.17 g, 43.4 mmol)가 한번에 첨가된 후, 추가로 1시간 동안 교반되었다. 추가의 2-브로모부티르산(8.5 ml, 50 mmol) 및 소듐-t-부톡사이드(4.8 g, 50 mmol)가 첨가되고, 혼합물은 1 시간 동안 8-10 ℃에서 교반되었다. 추가의 2-브로모부티르산(8.5 ml, 50 mmol) 및 소듐-t-부톡사이드(4.8 g, 50 mmol)이 첨가되고, 혼합물은 1 시간 동안 8-10 ℃에서 교반되었다. 추가의 THF(200 ml)가 첨가되고, 반응 혼합물은 실온에서 밤새 교반되었다. 추가의 2-브로모부티르산(17 ml, 100 mmol) 및 소듐-t-부톡사이드(9.6 g, 100 mmol)이 첨가되고, 반응 혼합물은 8-10 ℃에서 1 시간 동안 교반되었다. 반응물에 포름산(1 ml)이 첨가되고, 생성된 혼합물은 8-10 ℃에서 10 분 동안 교반되고, 6M HCl이 첨가하여 pH ~ 2가 수득되었다. 물(100 mL)이 첨가되고, 수용액상 및 유기상은 분리되었다. 수용액상은 디에틸에테르(2x 500 mL)로 2 회 추출되었다. 혼합된 유기상은 물(3x 1000 ml), sat. NaHCO3(3x 500 ml) 및 브라인 1x100 ml)으로 세척, Na2SO4로 건조, 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피(EtOAc/Heptan/5% HCOOH)(90/10)에 의해 정제되어 오일의 2-(((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-도코사-4,7,10,13,16,19-헥센-1-일)옥시)부탄산(10.3 g, 25.07 mmol, 26.3% 수율)이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 5.49 - 5.20(m, 12H), 3.90 - 3.75(m, 1H), 3.65 - 3.52(m, 1H), 3.51 - 3.35(m, 1H), 2.91 - 2.69(m, 10H), 2.21 - 1.98(m, 4H), 1.91 - 1.59(m, 4H), 1.05 - 0.88(m, 6H). MS(전자스프레이): 423.3 [M+Na]+.
실시예 72: 2-(((8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-8,11,14,17-테트라엔-1-일)옥시)부탄산의 제조
Figure pct00095
단계 1:
THF(3 ml) 내의 마그네슘(0.217 g, 8.93 mmol)의 가열된 현탁액에 1,2-디브로모에탄(2 드롭)가 첨가되고, 이어 THF(15 ml) 내의 2-((5-브로모펜틸)옥시)테트라하이드로-2H-피란(2.07 g, 8.24 mmol)의 용액이 질소 분위기하에서 적가되었다. 혼합물은 1 시간 동안 환류되고 주위 온도로 냉각되었다. THF(10 ml) 내의 (3Z,6Z,9Z,12Z)-펜타데카-3,6,9,12-테트라에날(1.5 g, 6.87 mmol) 용액이 적가되고, 혼합물은 주위 온도에서 1 시간 동안 교반되었다. 1M HCl이 첨가되고, 혼합물은 EtOAc(2x50 mL)로 추출되었다. 혼합된 유기상은 브라인(50 mL)로 세척, 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피(헵탄/EtOAc 80/20-75/25)로 오일의 (8Z,11Z,14Z,17Z)-1-((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)이코사-8,11,14,17-테트라엔-6-올(0.74 g, 1.895 mmol, 27.6% 수율)이 수득되었다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 5.59 - 5.49(m, 1H), 5.49 - 5.25(m, 7H), 4.56-4.53(m, 1H), 3.88-3.82(m, 1H), 3.77 - 3.67(m, 1H), 3.65-3.59(m, 1H), 3.52 - 3.43(m, 1H), 3.40-3.34(m, 1H), 2.85-2.77(m, 6H), 2.23(t, 2H), 2.13 - 1.97(m, 2H), 1.84-1.77(m, 1H), 1.73-1.67(m, 1H), 1.63-1.34(m, 12H), 0.96(t, 3H). MS(전자스프레이): 413.3 [M+Na]+.
단계 2:
THF(20 ml) 내의 (8Z,11Z,14Z,17Z)-1-((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)이코사-8,11,14,17-테트라엔-6-올(0.74 g, 1.895 mmol) 용액에 TEA(0.528 ml, 3.79 mmol)이 첨가되고, 이어 메탄술포닐 클로라이드(0.192 ml, 2.463 mmol)이 첨가되었다. 혼합물은 질소 분위기하에서 주위 온도에서 3 시간 동안 교반되었다. 시트르산(5%, 수성, 50mL)이 첨가되고, 혼합물은 EtOAc(2x50mL)로 추출되었다. 혼합된 유기상은 포화 NaHCO3(50 mL) 및 브라인(50 mL)로 세척, 건조 (Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되어 0.82 g의 중간체 메실레이트가 수득되었다. 중간체 메실레이트는 Et2O(10 ml)에 용해되고, Et2O(25 ml) 내의 LAH(0.288 g, 7.58 mmol) 교반된 현탁액에 적가되었다. 혼합물은 주위 온도에서 1 시간 동안 교반되었다. 1 M HCl(50 mL)이 조심스럽게 첨가되었다. 혼합물은 MTBE(2x50 mL)로 추출되었다. 혼합된 유기상은 포화 NaHCO3(50 mL) 및 브라인(50 mL)로 세척, 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 실리카겔상에서 플래쉬 크로마토그래피(헵탄/EtOAc 97/3)로 오일의 2-(((8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-8,11,14,17-테트라엔-1-일)옥시)테트라하이드로-2H-피란(0.46 g, 1.228 mmol, 64.8% 수율)이 수득되었다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 5.46 - 5.20(m, 8H), 4.57-4.54(m, 1H), 3.88-3.82(m, 1H), 3.74-3.68(m, 1H), 3.51 내지 3.44(m, 1H), 3.39-3.33(m, 1H), 2.84-2.77(m, 6H), 2.14 - 1.96(m, 4H), 1.85-1.77(m, 1H), 1.73 - 1.65(m, 1H), 1.62 - 1.46(m, 6H), 1.37-1.24(m, 8H), 0.96(t, 3H). MS(전자스프레이): 397.3 [M+Na]+.
단계 3:
EtOH 내의 2-(((8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-8,11,14,17-테트라엔-1-일)옥시)테트라하이드로-2H-피란(0.46 g, 1.228 mmol) 용액에 피리디늄-p-톨루엔술포네이트(PPTS, 0.309 g, 1.228 mmol)이 첨가되고, 혼합물은 50 ℃에서 2 시간 동안 가열되었다. 혼합물은 주위 온도로 냉각되었다. 포화 NaHCO3(50 mL)가 첨가되고, 혼합물은 EtOAc(2x50 mL)로 추출되었다. 혼합된 유기층은 브라인(50 mL)으로 세척, 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피(헵탄/EtOAc 80/20)로 오일의 (8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-8,11,14,17-테트라엔-1-올(0.26 g, 0.895 mmol, 72.9% 수율)이 수득되었다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 5.41 - 5.17(m, 8H), 3.57(t, 2H), 2.84 - 2.68(m, 6H), 2.06 - 1.94(m, 4H), 1.54-1.46(m, 2H), 1.34 - 1.21(m, 8H), 1.20-1.13(m, 1H), 0.91(t, 3H).
단계 4:
톨루엔(3 mL) 내의 (8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-8,11,14,17-테트라엔-1-올(93 mg, 0.32 mmol) 용액에 tert-부틸 2-브로모부타노에이트(143 mg, 0.64 mmol), 테트라부틸암모늄하이드록사이드(TBAOH)(5 mg, 0.02 mmol) 및 NaOH(50 w/w%, 1 mL)가 첨가되었다. 혼합물은 45 ℃로 가열되었다. 1.5 시간 동안 교반된 후, 71.4 mg(0.32 mmol) tert-부틸 2-브로모부타노에이트가 반응 혼합물에 첨가되고, 3 시간 후, 71.4 mg(0.32 mmol) tert-부틸 2-브로모부타노에이트가 반응 혼합물에 첨가되고, 45 ℃에서 8 시간 후, 143 mg(0.64 mmol) tert-부틸 2-브로모부타노에이트가 반응 혼합물에 첨가되었다. 24 시간 후, 혼합물은 실온으로 냉각되고, 물(40 mL)이 첨가되었다. 생성된 혼합물은 Et2O(25 + 40 mL)로 2 회 추출되고, 혼합된 유기 추출물은 물(4x25 mL) 및 브라인(25 mL)으로 세척, 건조(MgSO4), 여과 및 진공하에서 증발되었다. 잔류물은 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피(헵탄 → 헵탄:아세톤-5:1)로 정제되었다. 적절한 분획은 수집되고 농축되어 15 mg의 tert-부틸 2-(((8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-8,11,14,17-테트라엔-1-일)옥시)부타노에이트가 수득되었다. 상기 중간체는 포름산(5 mL)에 용해되고, 생성된 혼합물은 실온에서 1 시간 45 분 동안 교반되었다. 용매는 진공하에서 제거되고, 잔류물에 EtOAc(30 mL)이 첨가되었다. 용액은 물(4x25 mL) 및 브라인(25 mL)으로 세척, 건조 (MgSO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 용리액으로서 물 내의 85% MeCN을 사용하여 prep HPLC에 의해 정제되었다. 적절한 분획은 수집되고 농축되어 15 mg(0.04 mmol, 12% 수율)의 2-(((8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-8,11,14,17-테트라엔-1-일)옥시)부탄산이 수득되었다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 1.00(td, 6H), 1.49 - 1.20(m, 8H), 1.64(t, 2H), 1.96 - 1.73(m, 2H), 2.08(dt, 4H), 2.84(q, 6H), 3.55 - 3.43(m, 1H), 3.65 - 3.54(m, 1H), 3.87(dd, 1H), 5.49 - 5.24(m, 8H). HRMS(전자스프레이), [M-H]-: Calculated: 375.2899, found: 375.2892.
실시예 73: 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z)-이코사-5,8,11,14-테트라엔-1-일)옥시)부탄산의 제조
Figure pct00096
단계 1:
건조 THF(1 ml) 내의 (5Z,8Z,11Z,14Z)-에틸 이코사-5,8,11,14-테트라에노에이트(501.9 mg, 1,509 mmol) 용액이 건조 THF(3 ml) 내의 LiAlH4(64.8 mg, 1.707 mmol)의 냉각된(0 ℃) 현탁액에 N2-분위기하에서 적가되었다. 혼합물은 0 ℃에서 55 분 동안 교반되었다. 물(5 ml)가 적가되고, 1 M HCl(10 ml)가 첨가되었다. 냉각조는 제거되었고, 반응 혼합물은 5 분 동안 교반되었다. 반응 혼합물은 tert-부틸메틸에테르(2x50 ml)로 추출되고, 유기상은 1 M HCl(20 ml)로 세척, 건조 (Na2SO4), 여과 및 감압하에서 증발되어 액체의 (5Z,8Z,11Z,14Z)-이코사-5,8,11,14-테트라엔-1-올(397.7 mg, 1.369 mmol, 91% 수율)이 수득되었다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 5.41-5.29(m, 8H), 3.63(t, 2H), 2.83-2.77(m, 6H), 2.20-1.91(m, 4H), 1.61-1.54(m, 2H), 1.46-1.41(m, 2H), 1.35-1.28(m, 8H), 0.87(t, 3H).
단계 2:
톨루엔(5 mL) 내의 (5Z,8Z,11Z,14Z)-이코사-5,8,11,14-테트라엔-1-올(349 mg, 1.20 mmol) 용액에 tert-부틸 2-브로모부타노에이트(535 mg, 2.40 mmol), 테트라부틸암모늄하이드록사이드(TBAOH)(156 mg, 0.24 mmol, 40%w/w) 및 NaOH(50 w/w%, 2 mL)가 첨가되었다. 혼합물은 45 ℃로 가열되었다. 12 시간 후에 혼합물은 실온으로 냉각되고, 얼음물(25 mL) 및 Et2O(20 mL)가 첨가되었다. 상은 분리되고, 수용액상은 Et2O(20 mL)로 추출되었다. 혼합된 유기 추출물은 물(25 mL) 및 브라인(25 mL)로 세척, 건조 (MgSO4), 여과 및 진공하에서 증발되었다.
잔류물은 EtOH(20 mL)에 용해되고, 진공하에서 증발되었다. 잔류물은 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피(헵탄:아세톤-1:20 → 헵탄:아세톤-1:10)로 정제되었다. 적절한 분획은 수집되고 농축되어 360 mg(0.83 mmol, 69% 수율)의 중간체인 tert-부틸 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z)-이코사-5,8,11,14-테트라엔-1-일)옥시)부타노에이트가 수득되었다. 342 mg(0.79 mmol)의 상기 중간체가 포름산(7 mL)에 용해되고, 생성된 혼합물은 실온에서 3 시간 동안 교반되었다. 용매는 진공하에서 제거되고, 잔류물은 EtOAc(75 mL)에 첨가되었다. 용액은 물(3x50 mL)로 세척, 건조 (MgSO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 잔류물은 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피(아세톤:헵탄:HOAc-10:10:1 → 아세톤:헵탄:HOAc-30:70:1)로 정제되었다. 적절한 분획은 수집되고 농축되어 181 mg(0.48 mmol, 58% 수율)의 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z)-이코사-5,8,11,14-테트라엔-1-일)옥시)부탄산이 수득되었다.
실시예 74: 2-(((7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-도코사-7,10,13,16,19-펜타엔-1-일)옥시)부탄산의 제조
Figure pct00097
단계 1:
THF(4 ml) 내의 (7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-에틸 도코사-7,10,13,16,19-펜타에노에이트(1.5 g, 4.18 mmol) 용액이 건조 THF(20 ml) 내의 LAH(0.159 g, 4.18 mmol)의 냉각된(0 ℃) 현탁액에 질소하에서 적가되었다. 혼합물은 0 ℃에서 1 시간 동안 교반되었다. 혼합물은 1M HCl(100 mL)에 조심스럽게 부어졌다. 상은 분리되고, 수용액상은 헵탄(100 mL)으로 추출되었다. 혼합된 유기상은 브라인(30 mL)로 세척, 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되어 오일의 (7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-도코사-7,10,13,16,19-펜타엔-1-올(1.16 g, 3.66 mmol, 88% 수율)이 수득되었다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 5.44 - 5.23(m, 10H), 3.62(t, 2H), 2.87 - 2.73(m, 8H), 2.10 - 1.99(m, 4H), 1.60 - 1.51(m, 2H), 1.40 - 1.29(m, 6H), 0.95(t, 3H).
단계 2:
THF(50 ml) 내의 (7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-도코사-7,10,13,16,19-펜타엔-1-올(1.16 g, 3.66 mmol) 용액에 2-브로모부탄산(0.918 g, 5.50 mmol)이 첨가되었다. 반응 혼합물은 8-10 ℃로 냉각되었다. MTBE(15 mL) 내의 소듐 tert-부톡사이드(0.986 g, 10.26 mmol)가 5 분에 걸쳐 첨가되었다. 반응물은 8-10 ℃에서 30 분 동안 교반되었다. 추가의 MTBE(4 mL) 내의 소듐 tert-부톡사이드(0.141 g, 1.466 mmol)가 첨가되었다. 반응물은 8-10 ℃에서 30 분 동안 교반되었고, 추가의 2-브로모부탄산(0.612 g, 3.66 mmol)가 5분에 걸쳐 첨가되었다. 반응물은 8-10 ℃에서 30 분 동안 교반되었다. 추가의 MTBE(8 mL) 내의 소듐 tert-부톡사이드(0.282 g, 2.93 mmol가 첨가되었다. 반응물은 8-10 ℃에서 30 분 동안 교반되었다. 추가의 MTBE(4 mL) 내의 소듐 tert-부톡사이드(0.141 g, 1.466 mmol)가 첨가되었다. 반응물은 8-10 ℃에서 30 분 동안 교반되었다. HCOOH(0.5mL)에 이어 1M HCl(aq)가 첨가되어 pH 2가 되었다. 상은 분리되고, 수용액상은 MTBE(2x50mL)로 추출되었다. 혼합된 유기상은 물(50 mL), 포화 NaHCO3(4x30 ml) 및 브라인(30 ml)로 세척, 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 용리액으로 물(10% MeCN 및 0.02% HCOOH 함유) 내의 90% MeCN(0.02% HCOOH 함유) 사용하는 prep HPLC로 오일의 2-(((7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-도코사-7,10,13,16,19-펜타엔-1-일)옥시)부탄산(1 g, 2.439 mmol, 66.6% 수율)이 수득되었다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 5.44 - 5.24(m, 10H), 3.84-3.81(m, 1H), 3.59-3.64(m, 1H), 3.47-3.41(m, 1H), 2.90 - 2.73(m, 8H), 2.11 - 1.98(m, 4H), 1.90 - 1.71(m, 2H), 1.64-1.57(m, 2H), 1.41 - 1.26(m, 6H), 0.98-0.93(m, 6H). HRMS(전자스프레이), [M]+: Calculated: 402.3134, found: 402.3141.
실시예 75: (5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노에이트의 제조
Figure pct00098
2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄산(14.28 g, 38.1 mmol) 및(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-올(10.00 g, 34.7 mmol)이 사이클로헥산(50 mL) 내의 D(+)-10-캄포술폰산(0.530 g, 2.282 mmol)의 혼합물에 첨가되고, 환류로 가열되고, 물이 딘-스타크 장치(Dean-Stark apparatus)에 제거되었다. 반응 혼합물은 실온으로 냉각되고, 실리카겔(100 g)을 사용하고 사이클로헥산(50 mL) 이에 이어 헵탄(50 mL), 헵탄(2x200 mL) 내의 2% EtOAc 및 헵탄 (2x200 mL) 4% EtOAc으로 용리하는 건조 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제되었다. 적절한 분획이 수집되고 진공하에서 농축되어 오일의 (5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일 2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부타노에이트(20.3 g, 30.5 mmol, 88% 수율)이 수득되었다.
1H NMR(300 MHz, 클로로포름-d) δ 0.99(t, 9H), 1.45(ddd, 4H), 1.56 - 1.93(m, 6H), 2.09(p, 8H), 2.85(dt, 16H), 3.34(dt, 1H), 3.60(dt, 1H), 3.76(dd, 1H), 4.16(td, 2H), 5.05 - 5.76(m, 20H). MS(전자스프레이): 645.5 [M+H]+.
실시예 76: (2R)-2-((2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노일)옥시)부탄산의 제조
Figure pct00099
단계 1:
CDM(10 mL) 내의 2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일옥시)부탄산(400 mg, 1.07 mmol) 용액에 N-메틸모르폴린(235 μL, 2.15 mmol) 및 TBTU(2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸아미니움 테트라플루오로보레이트)(344 mg, 1.07 mmol)이 첨가되었다. 반응 혼합물은 30 분 동안 교반된 후, tert-부틸(R)-2-하이드록시부타노에이트(250 mg, 2.14 mmol)가 첨가되었다. 생성된 혼합물은 실온에서 22 시간 동안 교반되고, 물(10 mL), 1M HCl(10 mL), 포화 NaHCO3(10 mL) 및 브라인(10 mL)으로 세척되었다. 유기상은 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 161 mg(0.312 mmol, 29.2% 수율)의 중간체인 (R)-1-(tert-부톡시)-1-옥소부탄-2-일 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노에이트가 오일로 분리되었다.
MS(전자스프레이): 539.4 [M+Na]+.
단계 2:
(R)-1-(tert-부톡시)-1-옥소부탄-2-일 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노에이트(161 mg, 0.312 mmol)가 포름산(4 mL)에 용해되고, 반응 혼합물은 실온에서 17 시간 동안 교반되었다. 혼합물에 EtOAc(10 mL)를 첨가되고, 생성된 혼합물은 물(10 mL) 및 브라인(10 mL)로 세척되었다. 유기상은 건조(Na2SO4), 여과 및 진공하에서 농축되었다. 60 mg(0.130 mmol, 41.8% 수율)의 (2R)-2-((2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노일)옥시)부탄산이 오일로 분리되었다.
MS(전자스프레이): 459.3 [M-H]-.
실시예 77: (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트리하이드록시-6-((2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노일)옥시)테트라하이드로-2H-피란-2-카르복실산의 제조
Figure pct00100
단계 1:
아세토니트릴(85 ml) 내의 4-메톡시벤질(2S,3S,4S,5R,6R)-3,4,5,6-테트라하이드록시테트라하이드로-2H-피란-2-카르복실레이트(2.47 g, 7.86 mmol), 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산(2.94 g, 7.85 mmol) 및 HATU(1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸o[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로 포스페이트)(3.00 g, 7.90 mmol)의 혼합물에 4-메틸모르폴린(1.75 ml, 15.92 mmol)이 첨가되었다. 반응 혼합물은 실온에서 N2-분위기하에서 23.5 시간 동안 교반되었다. Amberlyst-15(4.7 mEq/g)(3.35 g)가 첨가되고, 혼합물은 약 5 분 동안 교반되었다. 반응 혼합물은 여과되고, 감압하에서 농축되고, 잔류물은 CH2Cl2-CH2Cl2:EtOH(95:5)로 용리되는 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획이 수집되고 진공하에서 농축되어 2.64 g의 불순한 혼합물이 수득되었다. 잔류물은 CH2Cl2-CH2Cl2:EtOH(95:5)에 이어서 CH2Cl2-CH2Cl2:EtOH(97:3)로 용리되는 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제되었다. 적절한 분획이 수집되고 진공하에서 농축되어 오일의 중간체인 (4-메톡시사이클로헥실)메틸(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트리하이드록시-6-((2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노일)옥시)테트라하이드로-2H-피란-2-카르복실레이트(1.27 g, 1.78 mmol, 22.4% 수율)가 수득되었다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 7.26-7.22(m, 2H), 6.83-6.81(m, 2H), 5.60-5.57(m, 1H), 5.40-5.26(m, 10H), 5.12-5.10(m, 2H), 4.60-4.56(m, 1H), 4.14-4.13(m, 1H), 3.98(t, 1H), 3.93-3.67(m, 3H), 3.74(s, 3H), 3.61 내지 3.56(m, 3H), 3.31 내지 3.25(m, 1H), 2.82-2.77(m, 8H), 2.07-2.02(m, 4H), 1.80-1.67(m, 2H), 1.57-1.54(s, 2H), 1.43-1.36(m, 2H), 1.05-0.77(m, 6H). MS(전자스프레이): 693.4 [M+Na]+.
단계 2:
(4-메톡시사이클로헥실)메틸(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트리하이드록시-6-((2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노일)옥시)테트라하이드로-2H-피란-2-카르복실레이트(1.20 g, 1.79 mmol)가 DCM(8 mL) 내의 10% TFA으로 0 ℃에서 질소 분위기하에서 처리되었다. 주위 온도에서 3 시간 동안 교반된 후, 용매는 진공하에서 제거되었다. 플래쉬 크로마토그래피(DCM/MeOH/HCOOH-95/5/0.2)로 500mg의 불순한 생성물이 수득되었다. 생성물은 용리액으로서 물(10% MeCN 및 0.02% HCOOH 함유) 내의 85% MeCN(0.02% HCOOH 함유)을 사용하는 prep HPLC에 의해 추가로 정제되었다. 적절한 분획은 수집되고 농축되어 고체의 (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트리하이드록시-6-((2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노일)옥시)테트라하이드로-2H-피란-2-카르복실산(80 mg, 0.139 mmol, 7.8% 수율)이 수득되었다.
1H NMR(400 MHz, MeOD) δ 5.60-5.56(m, 1H), 5.51 - 5.27(m, 10H), 3.99 - 3.88(m, 2H), 3.71 내지 3.63(m, 1H), 3.62 - 3.54(m, 1H), 3.53 - 3.38(m, 3H), 2.93-2.83(m, 8H), 2.19 - 2.07(m, 4H), 1.93-1.83(m, 1H), 1.81 - 1.72(m, 1H), 1.69 - 1.60(m, 2H), 1.53-1.45(m, 2H), 1.04-0.98(m, 6H). MS(전자스프레이): 549.3 [M-H]-.
실시예 78: 2 -((( 5Z,8Z,11Z,14Z,17Z )- 이코사 -5,8,11,14,17-펜타엔-1-일) 옥 시)부탄-1-올의 제조
Figure pct00101
건조 THF(3 ml) 내의 부틸 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부타노에이트(1.008 g, 2.34 mmol) 용액이 건조 THF(10 ml) 내의 LiAlH4(94.9 mg, 2.50 mmol) 현탁액에 0 ℃에서 질소 분위기하에서 적가되었다. 반응 혼합물은 0 ℃에서 1.5 시간 동안 교반된 후, 냉각조는 제거되고, 반응 혼합물은 실온에서 20 시간 동안 교반되었다. 반응 혼합물은 얼음-물 냉각조에서 냉각된 후, 물(2.5 ml) 및 1 M HCl(10 ml)이 적가되었다. 냉각조는 제거되었고, 혼합물은 실온에서 10 분 동안 교반되었다. 생성된 혼합물은 헵탄(2x50 ml)으로 추출되고, 1 M HCl(10 ml)로 세척, 건조(Na2SO4), 여과 및 감압하에 농축되었다. 헵탄-EtOAc(90:10)으로 용리되는 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 0.705 g(83% 수율)의 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 5.71 - 4.93(m, 10H), 3.63(dd, 1H), 3.58 - 3.34(m, 3H), 3.29-3.23(m, 1H), 2.95 - 2.65(m, 8H), 2.18 - 1.98(m, 4H), 1.88(bs, 1H), 1.66 - 1.51(m, 3H), 1.45(dt, 3H), 0.95(t, 3H), 0.89(t, 3H). MS(ESI, pos) 383 [M+Na]+.
실시예 79: 2 -((( 5Z,8Z,11Z,14Z,17Z )- 이코사 -5,8,11,14,17-펜타엔-1-일) 옥 시)부틸 아세테이트의 제조
Figure pct00102
건조 CH2Cl2(5 ml) 내의 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄-1-올(300.9 mg, 0.834 mmol), 트리에틸아민(140 ml, 1.00 mmol) 및 DMAP(4.7 mg, 0.038 mmol)의 혼합물이 아세트산 무수물(95 ml, 1.00 mmol)에 첨가되었다. 반응 혼합물은 N2-분위기 하에서 실온에서 80 분 동안 교반되었다. 물(10 ml)이 첨가되고, 혼합물은 헵탄(2x50 ml)으로 추출되고, 브라인(20 ml)로 세척, 건조(Na2SO4), 여과되고 감압하에 농축되었다. 헵탄-EtOAc(100:1)로 용리되는 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 0.319 g(95%)의 오일의 목표 화합물이 수득되었다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 5.59 - 5.14(m, 10H), 4.10(dd, 1H), 4.02(dd, 1H), 3.54(dt, 1H), 3.43(dt, 1H), 3.38 - 3.29(m, 1H), 2.92 - 2.65(m, 8H), 2.14 - 1.95(m, 4H), 2.05(s, 3H), 1.63 - 1.47(m, 4H), 1.45-1.38(m, 2H), 0.96(t, 3H), 0.92(t, 3H). MS(ESI, pos) 425 [M+Na]+.
생물학적 실시예
식이유발 NASH 마우스 모델( CDAA /고지방 식이)에서 화합물 A의 평가
메티오닌 및/콜린이 결핍된 마우스 모델(각각 MCD 및 CDAA)은 전임상 약물 개발에서 NASH의 발병 및 치료를 연구하기 위해 잘 확립되어 있다. 포스파티딜콜린의 합성을 위한 전구체로서, 메티오닌/콜린의 식이결핍은 중증의 간지방증, 염증 및 섬유증을 초래하는 트리글리세리드의 이출을 위한 간 지방단백질을 합성할 수 없게 한다.
널리 사용되는 메티오닌-콜린 결핍(MCD) 식이는 마우스에서 중증의 NASH-유사 간염 및 섬유증을 일관되게 재현하지만, 이는 또한 심각한 체중 감소(골격 및 지방 질량 모두의 손실)와 관련이 있다. 이것은 사망의 위험 증가와 관련이 있으며, 이는 장기 섬유화 실험에서 주요 문제점을 제시한다.
차선의 복용량의 메티오닌(0.17%)을 첨가함으로써, CDAA 식이모델은 이러한 문제를 극복하고, 덜 심각한 체중감소로 지방간염, 간섬유증 및 간암을 순차적으로 생성함으로써 마우스 및 랫트에서 인간 NASH를 모방하는 것으로 입증되었다.
생물학적 실시예 1 내지 7에서, 수컷 C56BL/6J 마우스(9 주령)에서 연구가 수행되었다. 마우스에게 콜린-충분한(CS) 또는 콜린-결핍된 고지방 식이(총 칼로리 31%; "CDAA/고지방")가 공급되었다. 연구를 예방보다는 치료/역전 셋업으로 설계하기 위해 치료 개시 6 주 전에 NASH-유도 식이가 개시되었다.
생물학적 실시예 1 내지 5에서, 마우스는 6 개의 실험 그룹(그룹당 n = 9)으로 분류되었고, CS 또는 CDAA/고지방 식이가 공급되었다. CS-또는 CDAA 식이의 6 주 후, 마우스에게 화합물 A 또는 비교 화합물 N이 2 회 용량, 0.15mmol/kg bw/일(저용량, LD) 및 0.3mmol/kg bw/일(고용량, HD), 경구투여되었다. 시험 물질은 고지방 식이에 혼합되어 경구투여되었다. 간섬유증은 히드록시프롤린(HYP) 함량 및 시리우스 레드(SR) 형태분석 둘 다에 의해 평가되었다. 섬유화, 염증 및 대사관련 전사체 수치는 정량적 실시간 중합효소 연쇄반응(qPCR)에 의해 측정되었다.
생물학적 실시예 6 및 7에서, 마우스에게 상기 기재된 바와 같이 CS 또는 CDAA/고지방 식이가 공급되었다. 실시예 6에서, CS 또는 CDAA/고지방 식이의 6 주 후, 마우스에게 하루에 56 mg/kg bw의 화합물 A가 경구투여되거나, 6 주 동안 주당 0.4 mg/kg으로 장기간 작용하는 GLP-1R 작용제인, 제2형 당뇨병의 치료를 위해 승인된, Bydureon®(엑세나타이드)가 피하 주사되었다. 간 콜라겐 섬유수, 두께 및 길이에 대한 효과는 비히클 대조군(n = 8), 화합물 A(n = 9) 및 GLP-1R(n = 8) 공급된 그룹으로부터 분리된 간 샘플에서 비선형 다광자 광학 이미징 시스템(nonlinear multiphoton optical imaging system)을 통해 결정되었다.
생물학적 실시예 7에서, CS 또는 CDAA/고지방 식이의 6 주 후, 마우스에게 하루에 112 mg/kg bw의 화합물 A, 또는 등몰 용량의 에이코사펜타엔산(EPA)가 경구로 투여되었다. CS(n = 9), 화합물 A(n = 9) 및 EPA(n = 8) 그룹으로부터 분리된 간 시료에서 간의 리피도믹 분석(lipidomic analysis)이 수행되었다.
생물학적 실시예 21 내지 24에서, 화합물 A 단독 및 GLP-1 작용제 엑세나타이드와의 조합의 효과가 연구되었다. 수컷 C56BL/6J 마우스(9 주령)에서 연구가 수행되었다. 마우스는, 상기 기재된 바와 같이, CS 또는 CDAA/고지방 식이를 포함하는 6 개의 실험 그룹(그룹당 n = 9)으로 분류되었다. NASH-유도하는 CDAA/고지방 식이는 예방보다는 치료/역전을 평가하기 위해 치료 시작 6 주 전에 개시되었다. 따라서, CS 또는 CDAA/고지방 식이의 6 주 후, 마우스에게 (A) 경구로 0.3 mmol/kg bw/일의 화합물 A가 단독으로, (B) 복강내 주사로 일주일에 한번 0.4 mg/kg의 GLP-1 작용제가 단독으로, 또는(C) 복강내 주사로 0.3 mmol/kg bw/일의 화합물 A 및 일주일에 한번 0.4 mg/kg(과체중 감소로 인해 마지막 3 주 동안 0.1 mg/kg으로 감소됨)의 GLP-1 작용제가 조합으로 투여되었다. GLP-1 작용제는 복강내 주사(i.p.)를 통해 전달되는 반면, 화합물 A는 고지방 식이에 혼합으로서 경구투여되었다. 섬유증, 염증 및 대사관련 전사체 수치는 단리된 간조직에서 정량적 실시간 중합효소 연쇄반응(qPCR)에 의해 측정되었다.
스트렙토조토신 주사/고지방 식이-유도성 NASH 모델( STAM 모델)에서의 화합물 A의 평가
생물학적 실시예 8에서, 병원체가 없는 15-일 임신 C57BL/6 마우스는 일본 Inc.(일본 가나가와 소재)의 찰스 리버 연구소(Charles River Laboratories)로부터 구입되었다. NASH는 출생 후 스트렙토조토신(STZ)(미국, 시그마(Sigma))의 단일 피하주사에 의해 수컷 마우스에서 확립되었고, 4 주령 후(28±2일)에 고지방 식이(HFD; CLEA) 일본)가 임의량으로 공급되었다. 치료 시작 전날, 마우스는 6 주령에 비히클(식염수), 화합물 A 및 텔미사르탄(양성 대조군)의 3 개 그룹으로 8 마리씩 무작위로 분류되었다. 고지방 식이와 함께 경구투여를 통해 하루에 37 mg/kg bw의 용량의 화합물 A의 처리가 희생 전 6 주 동안 제공되었다. NAFLD 활성점수(NAS)는 표준화된 기준에 따라 계산되었고, 섬유증 면적은 시리우스 레드 염색을 통해 평가되었다.
식이유발 NASH 마우스 모델( APOE * 3Leiden.CETP 이중형질전환 마우스)에서의 화합물 A의 효과 평가
APOE*3Leiden.CETP 이중형질전환 마우스는 인간 아포지질단백질 C1(APOC1) 및 CETP 외에 인간 아포지질단백질 E3(APOE3), APOE*3Leiden의 변이체를 발현한다. APOE*3Leiden.CETP 이중형질전환 마우스는 주로 VLDL/LDL 크기의 지단백질 분획에 국한된, 상승된 혈장 콜레스테롤 및 트리글리세리드 수치를 나타낸다. 상기 모델에서 식이의 콜레스테롤 함량을 증가시킴으로써 인간 NASH의 모든 특성이 나타난다.
생물학적 실시예 9에서, 다양한 콜레스테롤 함량(0.25-1% 콜레스테롤 w/w)을 갖는 고지방 식이(24% 지방 w/w)에 배치된 APOE*3Leiden.CETP 마우스에서 연구가 수행되었다. 한 연구에서(1% 콜레스테롤 w/w 사용), 3 주의 관찰기간 후, 저-반응 마우스(전체의 20%)는 연구에서 제거되었고, 나머지 마우스는 12 마리씩(대조군에서 +5) 4 개 그룹으로 분류되었다. 혈장 콜레스테롤, 트리글리세리드, 혈당, 체중 및 연령(t = 0)에 대해 매칭되고 치료가 시작되었다. 마우스는 하루에 0.3 mmol/kg bw의 화합물 A, 비교화합물 화합물 N(하루에 0.3 mmol/kg bw), 로시글리타존(하루에 13 mg/kg bw) 또는 대조군(옥수수 기름)을 07hr00와 10hr00 사이에 매일 위관 영양법(gavage)으로 투여되었다. 처리 20 주 후, 마우스는 C02 질식에 의해 희생되었고, 간은 수집되고, 간세포 비대 수치는 등급화되었다.
생물학적 실시예 25에서, 화합물 A의 단독 효과 및 오메가-3 지방산과의 조합 효과가 연구되었다. APOE*3Leiden.CETP 마우스는 0.25 콜레스테롤 w/w의 반-합성 고지방 식이(24% 지방 w/w)에 투입되었다. 4-주의 관찰기간 후, 저-반응 마우스는 연구에서 제거되었고, 나머지 마우스는 8 마리씩 그룹으로 분류되었고, 혈장 콜레스테롤, 트리글리세리드, 혈당, 체중 및 연령(t = 0)에 대해 매칭되고 치료가 시작되었다. 화합물의 혼합을 용이하게 하기 위해, 해바라기 오일이 총 오일 부피 10 mL/kg식이에 첨가되었다. 화합물 A는 0.3 mmol/kg bw/일로 투여되는 반면, 오메가-3 지방산 에틸에스테르(85% w/w EPA/DHA 에틸에스테르)는 3.0 mmol/kg bw/일로 투여되었다. 화합물 A 및 오메가-3 에틸에스테르 둘 다는 고지방 식이에 혼합되어 경구투여되었다. 4 주간의 치료 후, 마우스는 CO2 질식에 의해 희생되고, 간은 수집되고, 유리 콜레스테롤, 콜레스테롤 에스테르 및 트리글리세리드의 간 함량은 HPTLC(high performance thin layer chromatography)에 의해 추출 및 분리 후 측정되었다.
비만 식이유발 NASH 마우스 모델( ob/ob AMLN 모델)에서 화합물 A의 효과 평가
콜레스테롤(2%), 40% 지방(18% 트랜스-지방산 포함) 및 20% 과당이 고-칼로리 식이(예를 들어, AMLN 고지방 식이)에 첨가될 때, 비만 식이유발 B6.V-Lepob/Jrj 마우스(ob/ob)는 지속적으로 섬유증(간)에 취약하다. AMLN식이 요법에서 ob/ob 마우스('ob/ob AMLN 마우스'라고 함)는 동일한 식이를 섭취한 와일드 타입 C57BL/6 마우스(AMLN 마우스)와 비교하여 짧은 기간(≤12 주) 내에 지방간염 및 섬유증을 발생시킨다. ob/ob AMLN 마우스는 혈당조절에 미치는 영향을 연구할 수 있은 비만 식이유발 NASH 모델을 제공하다. ob/ob AMLN 모델에서 NASH의 발병은 생검(biopsy)에 의해 확인된다.
생물학적 실시예 10 내지 12, 15 및 19에 있어서, AMLN 고지방 식이가 15 주 동안 공급된 수컷 ob/ob 마우스(5 주령)에서 연구가 수행된 후, 3 개의 그룹(n = 10)으로 무작위로 분류되어, 4주 동안 식이 요법을 통해 하루에 112 mg/kg bw의 화합물 A, 식이 요법을 통해 하루에 30 mg/kg bw의 피오글리타존이 섭취되거나 치료(비히클)를 받지 않았다. 경구포도당부하검사(OGTT)은 3 주차에 수행되었다. 4 주차에 RNA 서열 분석에 의한 간 섬유질/섬유용해 유전자 발현의 측정을 통해 간섬유증이 평가되었다.
생물학적 실시예 10, 13 내지 14 및 16 내지 18에 있어서, 18 주 동안 AMLN 고지방 식이가 공급된 수컷 ob/ob 마우스(5 주령)에서 연구가 수행된 후, 6 개의 그룹으로 (그룹당 n = 10) 무작위로 분류되어, 추가의 8주 동안 식이 요법을 통해 화합물 A(3 가지 상이한 일일 복용량, 45 mg/kg, 90 mg/kg 또는 135 mg/kg), 식이 요법을 통해 하루 30 mg/kg bw 오베티콜산(OCA)이 섭취되거나 치료를 받지 않는다. NASH 관련 파라미터 및 섬유증의 평가는 정량적 면역 조직화학(IHC) 측정에 의해 연구 종료시에 이루어졌다.
임상적 번역(clinical translation)과 관련하여, 본원에 사용된 화합물 A의 복용량(8 주 연구에서 45mg/kg, 90mg/kg 및 135mg/kg, 4 주 연구에서 112mg/kg)은, 종간 사이에 대해 보정될 때, 70 kg 인간에 대해서 약 250 mg/day, 500 mg/day, 및 750 mg/day(및 4-주 연구에서 600 mg/day)의 인간 복용량에 해당한다. 종간용량전환(interspecies dose conversion)에 대한 지침으로 Nair, A.B., 및 Jacob, S., J Basic Clin Pharm, 2016; 7(2): 27-31 참조.
시험관내 인간 간성상세포에 대한 화합물 A의 효과 평가
성상세포는 상주 간세포 및 간섬유증의 개시 및 진행에 관여하는 주요 세포 유형이다. 생물학적 실시예 20에서, 배양된 인간 성상세포(LX-2 세포)에 대한 시험관내 연구가 수행되어 이들 세포에 대한 화합물 A의 직접적인 효과가 평가되었다. 세포는 화합물 A(10 μM, 25 μM, 50 μM 또는 75 μM) 또는 올레산(OA; 75 μM)으로 24 시간 동안 처리되었고, 브로모데옥시우리딘(BrdU) 결합이 평가되어 증식에 대한 영향이 확인되었다. MTS(3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-5-(3-카르복시메톡시페닐)-2-(4-술포페닐)-2H-테트라졸륨) 분석이 세포 생존능(cell viability)을 측정하기 위해 이용되었다.
생물학적 실시예 1. 간당 총 히드록시프롤린( HYP ) 함량에 의해 측정된 간섬 유증 함량에 대한 화합물 A 및 화합물 N의 효과
CDAA/고지방-공급된 마우스에 투여된 저용량(LD) 및 고용량(HD)의 화합물 A는 대조군(각각 p <0.01 * 및 0.001 **)에 비해 간섬유증(간당 HYP 함량)의 현저한 감소를 유도하였다. 비교화합물 N 에 대해서는 유의한 영향이 관찰되지 않았다. 간 HYP 함량에 대한 화합물 A의 효과는 표 1에서 제공된다. 표 1은 간당 총 히드록시프롤린 함량(간당 HYP μg)을 나타낸다.
Figure pct00103
생물학적 실시예 2. 상대 히드록시프롤린( HYP ) 함량( 100 mg 간당 HYP ug )에 의해 측정된 간섬유증 함량에 대한 화합물 A 및 화합물 N의 효과
CDAA/고지방-공급된 마우스에 투여된 저용량(LD) 및 고용량(HD)의 화합물 A는 간섬유증(간당 HYP 함량)을 감소시키는 반면, 화합물 N에 대한 효과는 관찰되지 않았다. HYP 함량은 표 2에서 제공된다. 표 2는 상대 히드록시프롤린 함량(100mg 간 당 HYPμg))을 나타낸다.
Figure pct00104
생물학적 실시예 3. 간염증성 유전자 발현( TNF -a mRNA 발현)에 대한 화합물 A 및 화합물 N의 효과
CDAA/고지방-공급된 마우스에 투여된 저용량(LD) 및 고용량(HD)의 화합물 A는 대조군(둘 다 p <0.001 ***)에 비해 간염(TNF-a mRNA)의 현저한 감소를 유도하였다. 화합물 N에서도 상당한 감소(p <0001)가 관찰되었으나, 고용량(HD)에서는 그렇지 않았다. 간 TNF-α에 대한 화합물 A의 효과가 표 3에서 제공된다. 표 3은 간염증성 유전자 발현(TNF-a mRNA)을 나타낸다.
Figure pct00105
생물학적 실시예 4. 섬유증-관련 유전자 발현( Col1a1 mRNA 발현)에 대한 화합물 A 및 화합물 N의 효과
CDAA/고지방-공급된 마우스에 투여된 저용량(LD) 및 고용량(HD)의 화합물 A는 대조군(각각 p <0.001 ***)에 비해 간섬유증 관련 유전자 발현(Col1a1 mRNA)에 있어 현저한 감소를 유도하였다. 화합물 N에 대해서는 유의한 영향이 관찰되지 않았다. 간 Col1a1에 대한 화합물 A의 효과가 표 4에서 제공된다. 표 4는 간섬유증 관련 유전자 발현(Col1a1 mRNA)을 나타낸다.
Figure pct00106
생물학적 실시예 5. 시리우스 레드 형태분석에 의해 측정된 간섬유증 함량에 대한 화합물 A의 효과
간섬유증의 양 위치 및 기능적 관련성을 보다 정확하게 정량하기 위해, 시리우스 레드(SR) 형태분석이 수행되었다. 큰 혈관의 히드록시프롤린(HYP) 함량 측정 콜라겐의 생화학적 평가가 사용된 실시예 1 및 2와 대조적으로, SR 형태분석은 보다 기능적으로 관련된 시누소이드 콜라겐 축적을 정량화한다. 100x 배율을 사용하여 슬라이드당 10 개의 영역이 측정되었다. CDAA/고지방-공급된 마우스에 투여된 저용량(LD) 및 고용량(HD)의 화합물 A는 대조군(각각 p <0.001 *** 및 0.05 *)에 비해 간섬유증의 표면적 백분율이 현저하게 감소하였다. SR 형태분석에 의해 측정된 간섬유증에 대한 화합물 A의 효과가 표 5에서 제공된다. 표 5는 SR 형태분석에 의한 간섬유증 면적을 나타낸다.
Figure pct00107
생물학적 실시예 6. 콜라겐 섬유에 대한 화합물 A 및 Bydureon ®의 효과
CDAA/고지방-공급된 마우스에 저용량(56 mg/kg)으로 투여된 경우, 화합물 A는 콜라겐 섬유수(도 1A)를 51%(p = 0.01)로 상당히 감소하였다. 이러한 효과는 도 1B 및 도 1C의 화합물 A에 의해 섬유 두께 및 길이의 약간의 증가에 각각 반영된 바와 같이 짧은(<8.5 μm) 및 얇은(<3.5 μm) 콜라겐 섬유의 거의 완전한 소멸에 반영되었다. Bydureon®(매주 0.4 mg/kg 피하주사)은 별다른 효과가 없었다.
생물학적 실시예 7. 간지질 대사에 대한 화합물 A 및 EPA의 효과
간지질 대사에 대한 화합물 A의 효과를 추가로 이해하기 위해, 단리된 간조직에서 CS-및 CDAA/고지방-공급된 마우스("CD")의 리피도믹 분석이 수행되었다. CDAA/고지방-공급된 마우스에 고용량(112 mg/kg)으로 투여된 경우, 화합물 A는 간 트리글리세리드(TG)(도 2A), 간 디글리세리드(DG)(도 2B), 간 유리 지방산(FFA)(도 2C) 또는 콜레스테릴 에스테르(도 2D)에 의해 측정된 콜린 결핍의 효과가 유의하게 감소되었다. 대조적으로, 등몰량의 EPA로의 처리는 콜린 결핍식이와 관련된 간 TG, DG, FFA 또는 콜레스테릴 에스테르의 증가가 감소되지 않았다.
생물학적 실시예 8. 간세포 팽창, 소엽염증 , 지방증, 복합 NAS 점수 및 섬유증 면적에 대한 화합물 A의 효과
STAM(모델) 마우스에 투여된 화합물 A는 지방증 및 소엽염증 이외에 간세포 팽창을 감소시켰다. 복합 NAS 점수(p<0.001*) 및 섬유증 면적(시리우스 레드 양성 면적) 둘 다 화합물 A에 의해 감소되었다. 표 6은 간세포 팽창, 총 NAS 점수 및 섬유증 면적을 나타낸다.
Figure pct00108
생물학적 실시예 9. 간세포 비대에 대한 화합물 A 및 화합물 N의 효과
ApoE*3L-CETP 마우스(0.25% 콜레스테롤 다이어트 w/w)에 투여된 화합물 A는 간세포 비대(p <0.01 *)의 현저한 감소를 유도하여 대조군(p<0.01)에 비해 83% 감소를 보였다. 화합물 N에서는 효과가 관찰되지 않았다. 표 7은 간세포 비대를 나타낸다.
Figure pct00109
생물학적 실시예 10. 간 중량 및 체중에 대한 화합물 A, 피오글리타존 및 OCA의 효과
도 3A에 도시된 바와 같이, 4 주에, 화합물 A(112mg/kg)는 ob/ob AMLN 마우스의 체중에 영향을 미치지 않았지만, 피오글리타존은 체중의 15% 증가를 유도하였다(p <0.01). 도 3b에 도시된 바와 같이, 4 주차에 모든 그룹에서 간 중량은 변하지 않았다. 도 3C에 도시된 바와 같이, 8 주에 화합물 A(45mg/kg, 90mg/kg, 및 135mg/kg) 또는 OCA는 체중에 유의한 영향을 미치지 않았으며, 음식 섭취는 어느 그룹에서도 영향을 받지 않았다. 도 3D에 도시된 바와 같이, OCA는 8 주에 간 중량을 상당히 감소시킨(p <0.05) 반면에, 화합물 A는 비히클과 비교하여 임의의 용량에서 유의한 영향을 미치지 않았다.
생물학적 실시예 11. 간 섬유질 및 섬유용해 유전자 발현에 대한 화합물 A 및 피오글리타존의 효과
ob/ob AML 마우스 단리된 간 샘플에서 화합물 A(112 mg/kg) 또는 피오글리타존(30 mg/kg)으로 4주의 처리 효과가 섬유질 및 섬유용해 유전자 발현에 미치는 영향을 도 4A- 4F 에 나타내었다. 화합물 A는 혈소판 유래 성장인자-β(PDGF-β)(도 4A), 혈소판 유래 성장인자 수용체-β(PDGFR-β)(도 4B), 콜라겐1α1 (col1A1)(도 4C), col3A1(도 4D), col4A1(도 4E) 및 열충격단백질-47 (heat-shock protein-47, HSP47) (도 4F)을 포함하여 간섬유증을 조절하는 표준 유전자의 발현을 상당히 감소시켰다. 피오글리타존은 시험된 콜라겐 이소형(col1A1, col3A1, col4A1) 및 HSP47의 발현을 유의적으로 감소시켰지만 PDGF-β 또는 PDGFR-β 발현에는 영향을 미치지 않았다.
생물학적 실시예 12. 간 세포 외 기질 안정성 및 섬유용해( fibrolysis ) 유전자 발현에 대한 화합물 A 및 피오글리타존의 효과
도 5A- 5D 에 도시된 바와 같이. 세포 외 기질(ECM) 안정성 또는 섬유용해(fibrolysis)를 조절하는 유전자와 관련하여, 화합물 A로 4 주 처리는 ob/ob AMLN 마우스에서의 메탈로프로테이나 제(TIMP1)의 조직-억제제(도 5D) 뿐만 아니라 라이실옥시다아제(LOX)(도 5A), LOX-유사 2(LOXL2)(도 5B), 및 LOXL1(도 5C)의 간 발현을 현저히 감소시켰다. 피오글리타존도 또한 이들 전사체의 전사 수치를 유의하게 감소시켰지만, 효과는 화합물 A에 의해 수득된 효과보다 작았다.
생물학적 실시예 13. 간섬유증 진행에 대한 화합물 A 및 OCA의 효과
ob/ob AMLN 마우스에서 간섬유증 진행에 대한 화합물 A(45 mg/kg, 90 mg/kg 또는 135 mg/kg) 또는 OCA(30 mg/kg)의 8 주 투여효과를 평가하기 위해, 정량적 IHC(immuno histochemistry)가 col1A1 및 α-SMA(smooth muscle actin) 함량을 측정하여 수행되었다. 도 6A 및 도 6B 에 도시된 바와 같이, 90 mg/kg 및 135 mg/kg 용량에서, 화합물 A는 아근섬유세포 마커(myofibroblast marker) α-SMA(부분 면적 함량의 전체 및 %로 표시됨)를 현저하게 감소시켰으나, OCA는 중요한 영향을 나타내지 않았다.
유사하게, 90 및 135 mg/kg으로 투여된 화합물 A는 총 col1A1 함량을 감소시킨 반면(도 6C), OCA는 유의한 영향을 미치지 않았다. 총 표면적의 백분율로 표현될 때(도 6D), 90 mg/kg 용량은 col1A1 수치에서 상당한 감소를 유도한 반면 45 및 135 mg/kg 용량에서의 감소는 통계적으로 크지 않았다. 정량적 IHC에서 보이는 항-섬유화 효과를 확증하기 위해, 도 6E 및 도 6F에 도시된 바와 같이, 히드록시프롤린(HYP)의 간 농도가 측정되었다. 화합물 A만이 HYP 함량을 감소시켰으며, 총량(90 및 135 mg/kg 용량의 경우 p <0.01) 또는 상대적(90 및 135 mg/kg 용량의 경우 p <0.05) 함량으로 표시되었다.
생물학적 실시예 14. 간섬유증 퇴행에 대한 화합물 A 및 OCA의 효
간 col1A1 및 α-SMA 둘 다의 IHC 측정을 포함하는 ob/ob AMLN 마우스의 기준선(전처리) 생검을 수행함에 따라, col1A1 및 α-SMA 의 말단값이 모든 그룹에서의 기준선(전처리 생검) 값과 비교되어, 연구 종료시 화합물 A 처리와 비히클 후 관찰된 현저한 감소가 섬유증 퇴행과 관련이 있는지 확인되었다. 도 7A 에 도시된 바와 같이, 135mg/kg 화합물 A로의 처리는, 전처리 생검에서의 α-SMA 함량과 비교하여, 면역조직화학 염색에 의해 평가된 α-SMA 함량의 면적 백분율을 감소시켰다. 화합물 A의 45 mg/kg 및 90 mg/kg 용량은 유의하지 않은 경향을 초래하였다. OCA는 큰 영향을 미치지 않았다. 유사하게, 90 mg/kg 용량만 통계적으로 상당하였으나(p <0.005)(도 7B), 모든 화합물 A 용량은, 생검 전 함량과 비교하여, col1A1 함량이 감소된 경향을 보였다. 비히클 및 OCA 처리는 8 주 투여 기간 후 간 col1A1 함량이 약간 증가하였지만, 증가는 OCA에 대해서만 유의적이었다(p <0.05).
생물학적 실시예 15. 염증성 유전자 발현에 대한 화합물 A 및 피오글리타존 의 효과
ob/ob AMLN 마우스에서 섬유증 진행에 특이적 관련에서, 112 mg/kg의 화합물 A로 4 주 처리하면 비히클-투여된 대조군 마우스와 비교하여 염증성 유전자의 발현이 유의하게 감소되었다. 구체적으로, 도 8A 및 도 8B 각각에 도시된 바와 같이, 화합물 A는 형질전환-성장인자 베타 1(TGF-β1)(p <0.05) 및 TGF-β1 수용체(TGFRβ(p <0.01))의 전사 수치를 감소시켰다. 피오글리타존은 각각 TGFRβ의 발현은 감소시켰으나(p <0.05), TGF-β1은 감소시키지 않았다. 도 8C, 8D, 및 8F에 도시된 바와 같이, CCR2, MAC-2(데이터 미도시), CD68 및 CD14(all p<0.001)에 있어서의 상당한 감소는 대조군과 비교한 화합물 A 처리 후 발견되었다. 화합물 A 처리는 또한 비히클-투여된 대조군과 비교하여 갈렉틴-3(Gal-3) 수치를 상당히 감소시켰다(도 8E). 피오글리타존은 CCR2(p<0.01)(도 8C), CD68(p<0.01)(도 8D), 및 CD14(p<0.001)(도 8F)를 상당히 감소시켰다. 어느 화합물도 인터루킨(IL)-1β 또는 MCP-1 전사 수치를 유의하게 감소시키지 않았다(데이터는 표시되지 않음).
생물학적 실시예 16. 간 Gal-3에 의해 측정된 간염에 대한 화합물 A 및 OCA의 효과
ob/ob AMLN 마우스에서 간염에 대한 화합물 A(45 mg/kg, 90 mg/kg 또는 135 mg/kg) 또는 OCA(30 mg/kg)로 8주의 치료 효과를 평가하기 위해, IHC를 수행하여 갈렉틴-3(Gal-3) 수치를 평가하였다. 도 9A 및 도 9B에 도시된 바와 같이, 화합물 A에 의한 처리는, 총 함량 또는 면적 백분율로 측정될 때, Gal-3 발현 수치의 용량 반응 감소를 초래한 반면, OCA는, 총 함량으로 측정될 때, Gal-3 발현 수치만 감소시켰다.
생물학적 실시예 17. 간세포 손상에 대한 화합물 A 및 OCA의 효과
ob/ob AMLN 마우스에서 간세포 손상 또는 훼손에 대한 화합물 A 및 피오글리타존의 효과를 평가하기 위해, 혈장 알라닌 아미노트랜스퍼라아제(ALT) 및 아스파테이트 트랜스아미나제(AST)가 투여 8 주 후에 측정되었다. 도 10A에 도시된 바와 같이, 90 mg/kg 및 135 mg/kg 용량의 화합물 A(각각 p <0.01 및 p <0.001)에 의해 ALT의 현저한 감소가 달성되었으나, OCA는 효과가 없었다. 90 mg/kg 및 135 mg/kg 용량에서, 화합물 A는 또한 AST를 현저하게 감소시켰으며(각각 p <0.05 및 p <0.01), OCA는 AST 수치에 영향을 미치지 않았다(도 10B).
생물학적 실시예 18. 간지방증 , 간지질 수치 및 혈장지질 수치에 대한 화합물 A 및 OCA의 효과
도 11A 및 도 11B에 도시된 바와 같이, 화합물 A 및 OCA 둘 다는 투여 8 주 후(면적 백분율 또는 총 지질 함량으로 표현된) ob/ob AMLN 마우스에서 지방증을 유의하게 감소시켰으며, OCA는 화합물 A의 가장 높은 용량(135 mg/kg)으로 유사한 효능을 나타냈다(p <0.001). 유사하게, OCA 및 화합물 A(90 mg/kg 및 135 mg/kg 용량) 둘 다는, 도 11D 및 도 11E에 도시된 바와 같이, 혈장 트리글리세리드 및 총 콜레스테롤 수치의 유사한 감소를 나타냈다. 화합물 A가 아닌 OCA 처리는 총 간 콜레스테롤 함량이 감소된 것으로 나타났다(p <0.01)(도 11C).
생물학적 실시예 19. 혈당조절에 대한 화합물 A 및 피오글리타존의 효과
화합물 A(112 mg/kg), 피오글리타존 또는 비히클 대조군의 3 주 투여 후, ob/ob AMLN 마우스에서 경구포도당부하검사(OGTT)가 수행되었다. 도 12A에 도시된 바와 같이, 화합물 A 및 피오글리타존 둘 다는 글루코오스 로딩(AUC 0-240 분) 후 처음 240 분 후 혈당의 변동 폭(glucose excursion)을 유의하게 감소시켰으나, 효과는 피오글리타존에 의해 더욱 두드러졌다. 유사하게, 공복 혈장 포도당 수치의 현저한 감소가 두 화합물 모두에서 달성되었지만, 효과는 화합물 A와 비교하여 피오글리타존에 의해 더 두드러졌다(도 12B). 화합물 A가 아닌 피오글리타존은 공복 인슐린을 감소시켰다(p <0.001)(도 12C).
생물학적 실시예 20. 시험관내의 성상세포 증식 및 생존력에 대한 화합물 A 및 올레산의 효과
10-75 μM의 화합물 A 또는 올레산(OA)(75 μM)으로 24 시간 동안 처리된 LX-2 인간 간 성상세포의 세포 증식이 BrdU 결합(BrdU incorporation)에 의해 평가되었다. 결과는 정규화된 평균값 ± 이코사부테이트에 대한 5 개의 독립적인 실험 및 OA에 대한 2 개의 독립적인 실험의 S.E.M.이다. 도 13A에 나타낸 바와 같이, 화합물 A 25 μM(p < 0.005), 50 μM(p < 0.0001), 및 75 μM(p < 0.005)로 처리된 LX-2 세포는 OA 또는 비히클과 비교할 때 덜 증식성이었다. 화합물 A에 의한 증식 감소는 24 시간에 25-34% 였지만, OA는 영향을 미치지 않았다. 다중 비교를 위한 던넷 교정(Dunnett's correction)으로 일원분산분석(one-way ANOVA)을 통해 비교가 수행되었다. 도 13B에 도시된 바와 같이, 화합물 A 또는 OA는 2 개의 독립적인 실험에서 MTS 분석에 의해 측 될 때 세포 생존력에 유의한 영향을 나타내지 않았다.
생물학적 실시예 21. 간섬유증 관련 유전자 발현( Col1a1 mRNA 발현)에 대한 화합물 A 및 GLP-1 작용제(GLP-1a, 엑세나타이드 )의 단독 및 조합의 효과
CDAA/고지방 공급된 마우스에 투여된 화합물 A, GLP-1a, 및 조합의 화합물 A + GLP-1a는 CDAA 공급된 마우스에 비해 Col1a1 mRNA 발현의 현저한 감소를 유도하였다(모두 p <0.001 ***). 간 Col1a1 mRNA에 대한 화합물 A 단독 및 GLP-1a와의 조합으로의 효과가 표 8에서 제공된다. 표 8은 간섬유증 관련 유전자 발현(Col1a1 mRNA)을 나타낸다.
Figure pct00110
생물학적 실시예 22. 간섬유증 관련 유전자 발현( TIMP (기질 메탈로프로테이나아제의 조직 억제제)-1a mRNA 발현에 대한 화합물 A 및 GLP-1 작용제(GLP-1a, 엑세나타이드의 단독 및 조합의 효과
CDAA/고지방 공급된 마우스에 투여된 화합물 A, GLP-1a 및 조합의 화합물 A + GLP-1a는 CDAA 공급 마우스에 비해 간 TIMP-1a mRNA 발현의 현저한 감소를 유도하였다(모두 p <0.001 ***). 간 TIMP-1a mRNA에 대한 화합물 A 단독 및 GLP-1a와의 조합의 효과가 표 9에서 제공된다. 표 9는 간섬유증 관련 유전자 발현(TIMP-1a mRNA)을 나타낸다.
Figure pct00111
생물학적 실시예 23. 간섬유증 관련 유전자 발현( MMP (기질 메탈로프로테이나아제 )-13 mRNA 발현)에 대한 화합물 A 및 GLP-1 작용제(GLP-1a, 엑세나타이드 ) 단독 및 조합의 효과
CDAA/고지방 공급된 마우스에 투여된 화합물 A, GLP-1a 및 조합의 화합물 A + GLP-1a는 CDAA 공급 마우스에 비해 간 MMP-13 mRNA 발현의 현저한 감소를 유도하였다(모두 p <0.001 ***). 간 MMP-13 mRNA에 대한 화합물 A 단독 및 GLP-1a와의 조합의 효과가 표 10에서 제공된다. 표 10은 간섬유증 관련 유전자 발현(MMP-13 mRNA)을 나타낸다.
Figure pct00112
생물학적 실시예 24. 간염 관련 유전자 발현( TNF -α mRNA 발현)에 대한 화합물 A 및 GLP-1 작용제(GLP-1a, 엑세나타이드 ) 단독 및 조합의 효과
CDAA/고지방 공급된 마우스에 투여된 화합물 A, GLP-1a 및 조합의 화합물 A + GLP-1a는 CDAA 공급 마우스에 비해 간 TNF-α mRNA 발현의 현저한 감소를 유도하였다(화합물 A 단독 또는 GLP-1a와의 조합의 경우 p< 0.001, GLP-1a 단독의 경우 p <0.05). 간 TNF-α mRNA에 대한 화합물 A 단독 및 GLP-1a와의 조합의 효과가 표 11에서 제공된다. 표 11은 간섬유증 관련 유전자 발현(TNF-α mRNA)을 나타낸다.
Figure pct00113
생물학적 실시예 25. 간지질(콜레스테롤 에스테르 -CE, 유리 콜레스테롤- FC , 트리글리세리드-TG)에 대한 화합물 A 및 농축 오메가-3 에틸에스테르의 단독 및 조합의 효과
0.25% 콜레스테롤과 고용량(3mmol/kg bw/day) 85% EPA/DHA 에틸-에스테르 오메가-3(HD)와 조합으로 웨스턴 식이요법으로 공급된 ApoE*3L-CETP 형질전환 마우스에 투여된 저용량(0.3mmol/kg bw/일) 화합물 A(LD)는 FC(p<0.01), CE(p<0.001) 및 TG(p<0.01)의 현저한 감소를 유도하였다. 상기 모델에서 단독으로 간 TG를 현저하게 감소시킨 화합물은 없었다. 표 12는 간지질을 나타낸다.
Figure pct00114
생물학적 실시예 26: 비알콜성 지방간염 (NASH) 환자에서 화합물 A의 다기관, 무작위, 이중- 맹검 , 위약-대조, 평행군 연구
임상시험의 목표는 섬유증을 악화시키지 않고 환자에서 NASH를 치료하는 데 있어서 상이한 용량의 화합물 A의 효능을 평가하고, NASH로 고통받는 환자에서 화합물 A의 안전성 및 내약성을 측정하는 것이다.
환자 수
NASH를 앓고 있는 600명의 환자를 약 30개 사이트에서 선별하여 적합성을 검사한다: 약 264 명은 하기 제시된 선정기준과 호환되는 것으로 예상되며, 약 198 명은 전체 시험을 완료할 것으로 예상된다(환자 중 25%가 탈락한다고 가정하면, 치료군당 66 명의 대상체에게 제공).
치료 과제
본 연구에 적합한 것으로 밝혀진 환자는 각각 88 명의 환자로 구성된 3 개의 평행군으로 무작위로 분류되었다. 그룹 1은 위약 화합물 A가 투여되고, 그룹 2는 300 mg의 화합물 A가 투여되고, 그룹 3은 600 mg의 화합물 A를 투여된다. 화합물 A 또는 위약은 52 주 동안 1 캡슐(300 mg) 또는 2 캡슐(600 mg)로 하루에 1회 투여된다. F1 대 F2 / F3에 대한 계층화.
화합물 A에 의한 치료 효능은 예를 들어 간생검의 NAS 점수, MRI LiveMultiMultiScan 평가 PDFF 및 cT1, 간기능 검사(들), HOMA-IR, 및/또는 염증 및 섬유증(hsCRP, Pro-C3, ELF 패널, 및 다른 적합한 바이오마커 포함)의 바이오마커(들)에 의해 평가된다.
안전성 및 내약성은 부작용 보고, 활력 징후 모니터링, 신체 검사, 혈액학 및 생화학(신장, 간), 소변 검사 및 안정기 12 리드 ECG에 의해 평가된다.
혈압은 방문할 때마다 세 번의 혈압 측정값으로 모니터링된다.
연구 설계
스크리닝, 이중 맹검 치료기간 및 치료 후 추적 관찰을 포함하여 환자 당 58 주 및 10 회의 임상 방문에 대해 연구가 수행되었다. 각 방문에서 수행되는 절차는 하기 설명되고 표 13에 요약되어 있다.
● 1차 방문(치료 투여 시작 1 내지 42 일 전): 환자는 하기 설명된 기준에 따라 호환성에 대해 검사받고 환자의 동의를 얻는다. 평가는 두 번 이상의 방문에서 수행될 수 있다.
● 2차 방문: 환자는 3 개의 치료 그룹 중 하나로 무작위로 분류된다. 각각의 치료그룹은 52 주 동안 매일 300 또는 600mg의 화합물 A 또는 위약을 투여받는다. 간영상 검사(MRI - PDFF 및 cT1), 활력 징후, 안전성 검사(기준 혈액학, 생화학 및 소변검사), 안정시 12 리드 ECG 및 바이오마커(HOMA-IR, hsCRP, Pro-C3 및 ELF 패널)를 포함한 기준 평가에 대해 평가된다.
● 3차 방문(치료 4 주 후): 환자는 부작용, 활력 징후, 안전성 검사(혈액학, 생화학 및 소변검사), 안정시 12 리드 ECG, 및 최저 PK 샘플에 대해 평가된다.
● 4차 방문(치료 10 주 후): 환자는 부작용, 활력 징후, 안전성 검사(혈액학, 생화학 및 소변검사), 안정시 12 리드 ECG, 및 최저 PK 샘플에 대해 평가된다.
● 5차 방문(16 주 치료 후): 환자는 부작용, 간 영상(MRI - PDFF 및 cT1), 활력 징후, 안전성 검사(혈액학, 생화학 및 소변검사), 안정시 12 리드 ECG, 바이오마커(HOMA-IR, hsCRP, Pro-C3 및 ELF 패널), 및 최저 PK 샘플 샘플에 대해 평가된다.
● 6차, 7차, 8차 방문(치료 후 24, 32 및 40 주 후): 환자는 부작용, 활력 징후, 안전성 검사(혈액학, 생화학 및 소변검사), 안정시 12 리드 ECG, 바이오마커(hsCRP), 및 최저 PK 샘플에 대해 평가된다.
● 9차 방문(치료 52 주 후): 환자는 간생검, 간 영상(MRI - PDFF 및 cT1), 활력 징후, 안전성 검사(혈액학, 생화학 및 소변검사), 안정시 12 리드 ECG, 바이오마커(HOMA-IR, hsCRP, Pro-C3 및 ELF 패널) 및 최저 PK 샘플에 대해 평가된다.
● 10차 방문(임상약물 중단 후 14 내지 21 일): 환자는 안전성 추적 검사를 받고, 부작용, 활력 징후, 안전성 검사(혈액학, 생화학 및 소변검사), 안정시 12 리드 ECG, 및 최저 PK 샘플에 대해 평가된다.
완료 전에 연구에서 탈락한 환자는 부작용, 활력 징후, 안전성 검사(혈액학, 생화학 및 소변검사), 안정시 12 리드 ECG, 최저 PK 샘플, 및 바이오마커(HOMA-IR, hsCRP, Pro-C3 및 ELF 패널)에 대해 평가된다.
환자선정기준:
환자는 임상에 선정되기 위해 하기 기준을 충족한다.
● 18 세에서 75 세 사이.
● 비가임기 여성 또는 피임 수단을 사용할 수 있는 여성.
● 남성 환자의 여성 파트너가 가임기인 경우, 남성 환자는 피임(예: 콘돔)을 한다. 또한, 여성 파트너는 피임(예: 호르몬, 자궁 내 장치 등)을 한다. 이중 피임은 연구 약물의 최조 복용으로부터 마지막 복용 후 90 일까지 한다.
● 서면 고지동의서.
● 생검 전의 선택적 간섬유화 스캔 기준.
● 스크리닝 또는 스크리닝 후 6 개월 이내에 NASH의 조직진단.
● NAS 점수 ≥4.
● 섬유증 점수 1 내지 3(30%으로 제한된 F1).
● MRI에서 선택적 PDFF >10%
● 52 주 치료 후 간생검 받기.
● 프로토콜 진입에 대해 다음과 같은 혈액학적 및 생화학적 기준을 갖는 보상성 간질환:
● ALT <5 x ULN
● AST> 30
● 여성의 경우 헤모글로빈 > 11g/dL 및 남성의 경우 12g/dL
● 백혈구(WBC)> 2.5 K/μL
● 호중구수 > 1.5 K/μL
● 혈소판 > 100 K/μL
● 총 빌리루빈 <35μmol/L. 길버트 증후군 설정에서 비공액 빌리루빈인 경우 빌리루빈 > 35μmol/L인 환자가 포함될 수 있다.
● 알부민> 36 g/L
● 국제표준화비율(INR) <1.4
● 혈청크레아티닌 <1.3 mg/dL(남성) 또는 <1.1(여성) 또는 추정 사구체 여과율 ≥ 60 mL/분 /1.73m2
● 만성 간질환의 다른 원인은 없다(자가면역, 원발담즙성담관염, HBV, HCV, 윌슨병, α-1-안티 항트립신 결핍, 혈색소 침착증 등…)
● 해당되는 경우, 안정적인 제2형 당뇨병(defined as HgbA1c < 9.5% 및 공복혈당증(fasting glycemia) <10 mmol/L, 지난 6 개월 동안 약물에 변화가 없음, 및 지난 3 개월 동안 비보상성 당뇨병과 관련된 새로운 증상이 없음).
● 간생검을 실시한 이후 안정된 체중 갖기, 여기서 안정은 초기 체중의 5% 이하로 정의된다.
환자제외기준
환자는 다음 제외기준을 충족하지 않는다.
● 알콜섭취 설문지에 의해 평가된 지속적인 과도한 알콜섭취 병력.
● 지난 3 개월 동안 5kg을 초과하는 체중 증가 또는 감소, 혈당조절이 불량한 당뇨병(HgbA1c > 9.5%), 또는 검사 전 6개월 동안 항당뇨병제 또는 항-비만 약물/흡수억제형 또는 섭취제한형 비만대사(체중 감소) 수술의 도입에 의해 정의된 불안정한 대사상태.
● 5 년 이내에 위장관 흡수억제형 비만대사 수술 또는 코르티코스테로이드를 포함하여 간지방증을 유발하는 것으로 알려진 약물의 섭취의 병력, 지난 6개월 동안 고용량의 에스트로겐, 메토트렉세이트, 테트라사이클린 또는 아미오다론의 섭취.
● 조사관의 소견에 따른, 화합물 A의 처리를 배제할 울혈성 심부전(AHA의 클래스 C 및 D), 불안정한 관상동맥질환, 뇌혈관 질환, 폐 질환, 신부전, 장기이식, 심각한 정신질환, 또는 악성 종양을 포함한 간질환 외의 중요한 전신성 또는 주요 질병.
● HB 항원 >0, HCV PCR >0(HCV PCR이 3년 초과 동안 음성인 경우, HCV 감염 병력이 있는 환자는 포함될 수 있다), 또는 HIV 감염.
● 조사관의 조견에 따른, 역량 또는 준수를 방해하거나, 연구 완료를 저해할 수 있는 기타 상태.
● 체질량지수(BMI) >45 kg/m2.
● 인슐린으로 치료된 제2형 당뇨병 또는 제1형 당뇨병.
● 당뇨병성 케톤산증.
● 공복 트리글리세리드 > 300 mg/dL.
● 지혈 장애 또는 최근 항응고제 치료.
● 간생검에 대한 부작용.
● 잘 통제된 고혈압 환자를 제외한 최근 심부정맥의 병력 및/또는 심근경색을 포함한 심혈관 질환의 병력, 및 임상적으로 유의한 ECG 이상(abnormality).
● 지난 3 개월 또는 상기 약물의 5 반감기 내에 다른 임의의 임상시험 연구에 참여.
● IMP의 성분 또는 부형제 중 임의의 하나에 대한 알려진 과민증.
● 피오글리타존, 및 GLP-1 수용체 작용제와 같은 NASH에 대해 활성이 있는 것으로 알려진 당뇨병 치료제 복용.
평가항목 기준
화합물 A의 효능에 대한 1 차 평가항목은 소엽염증 점수가 0 또는 1 및 섬유증의 악화가 없는 풍선확장(점수 =0)에 의해 정의된 NASH의 해소를 갖는 환자의 백분율이다.
화합물 A의 효능에 대한 2 차 평가항목은 NAS 점수의 기준선으로부터의 변화, 지방증, 풍선확장, 염증 및 섬유증에 대한 개별 조직학적 점수의 변화, 간 효소의 변화, 영상화 파라미터의 변화 및 바이오마커(hsCRP, Pro-C3, ELF 패널 및 사이토카인 포함)의 변화이다.
안전성/내약성에 대한 2 차 평가항목은 보고된 부작용, 검사치(혈액학, 생화학 및 소변검사), 활력 징후(혈압, 맥박수 및 온도) 및 hsCRP을 포함한다.
약물 동력학에 대한 2 차 평가항목은 4차, 5차, 6차, 7차, 및 8차 방문시 복용한 3 회 용량의 화합물 A에 대한 정상상태에서의 평균최저혈장농도의 비교를 포함한다.
통계적 방법
그룹당 88 명의 환자의 샘플 크기는 위약 반응률이 18%이고 탈락률이 25%라고 가정할 때 활성 대 위약에 대한 40% 응답자 비율을 검출하기 위해 80% 검정력을 제공한다. 16 주간의 중간 분석 후에, 샘플 크기 재-추정이 이루어질 수 있다. 기준선 및 적어도 하나의 기준선 이후 효능 측정을 갖는 집단으로 구성된 집단을 치료하기 위한 변형된 의도에 대해 효능 분석이 수행된다. 각 개별 용량과 위약 사이의 비교가 이루어진다. 표 13: 평가 스케줄을 나타낸다.
Figure pct00115

Claims (99)

  1. 비알콜성 지방간염의 치료 및/또는 예방치료 용도의 화학식(II)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물 또는 염의 용매화물:
    Figure pct00116

    (II)
    여기서 R1은 3-6 개의 이중결합을 갖는 C10-C22 알케닐로부터 선택되고;
    R2 및 R3은 동일하거나 상이하고, 수소원자, 히드록시기, 알킬기, 할로겐원자, 알콕시기, 아실옥시기, 아실기, 알케닐기, 알키닐기, 아릴기, 알킬티오기, 알콕시카르보닐기, 카르복실기, 알킬술피닐기, 알킬술포닐기, 아미노기 및 알킬아미노기의 군으로부터 선택되고; 여기서 R2 및 R3은 시클로프로판, 시클로부탄, 시클로펜탄 또는 시클로헥산과 같은 시클로알칸을 형성하기 위해 연결될 수 있고;
    X는 카르복실산 또는 이의 유도체이고; 여기서 상기 유도체는 카르복실산 에스테르와 같은 카르복실레이트; 글리세리드; 무수물; 카르복스아미드; 인지질; 또는 하이드록시메틸; 또는 이의 전구약물이다.
  2. 제1항에 따른 용도의 제1항에 있어서, 상기 화합물은 화학식(I)의 화합물이고, R2, R3 및 X는 화학식(II)에 대한 정의와 동일한 화합물:
    Figure pct00117

    (I).
  3. 제1항에 따른 용도의 제1항 또는 제2항에 있어서, R2 및 R3은 독립적으로 수소원자 또는 선형, 분지형 및/또는 시클릭 C1-C6 알킬기로부터 선택되고;
    X는 카르복실산 또는 이의 유도체이고; 여기서 상기 유도체는 카르복실산 에스테르와 같은 카르복실레이트; 글리세리드; 무수물; 카르복스아미드; 인지질; 또는 하이드록시메틸; 또는 이의 전구약물인 비알콜성 지방간염 치료 용도의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물 또는 염의 용매화물.
  4. 제1항에 따른 용도의 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, R2 및 R3은 독립적으로 수소원자, 메틸기, 에틸기, n-프로필기 및 이소프로필기로부터 선택되는 화합물.
  5. 제1항에 따른 용도의 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, R2 및 R3은 모두 독립적으로 C1-C6 알킬기인 화합물.
  6. 제1항에 따른 용도의 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, R2 및 R3 중 하나는 수소원자이고 다른 하나는 에틸기인 화합물.
  7. 제1항에 따른 용도의 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, X는 카르복실산인 화합물.
  8. 제1항에 따른 용도의 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, X는 C1-C6 알킬 에스테르인 화합물.
  9. 제1항에 따른 용도의 제8 항에 있어서, X는 메틸에스테르, 에틸에스테르, 이소프로필에스테르, n-부틸에스테르 및 tert-부틸에스테르로부터 선택되는 화합물.
  10. 제1항에 따른 용도의 제1항, 제8항 및 제9항 중 어느 한 항에 있어서, X는 메틸에스테르 및 에틸에스테르의 군으로부터 선택되는 화합물.
  11. 제1항에 따른 용도의 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, X는 트리글리세리드, 1,2-디글리세리드, 1,3-디글리세리드, 1-모노글리세리드, 및 2-모노글리세리드로부터 선택된 글리세리드인 화합물.
  12. 제1항에 따른 용도의 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체 또는 이들의 혼합물의 형태로 존재하는 화합물.
  13. 제1항에 따른 용도의 제12항에 있어서, 상기 화합물은 R 형태, S 형태 또는 라세미 형태로 존재하는 화합물.
  14. 제1항에 따른 용도의 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 화합물은 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산(화합물 A), 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 또는 에스테르이고, 상기 화학식은 다음과 같은 화합물:
    Figure pct00118

    (화합물 A).
  15. 제1항에 따른 용도의 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 용량 당 약 5 mg 내지 약 4 g의 용량으로 투여되는 화합물.
  16. 제1항에 따른 용도의 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 하루에 1회 투여되는 화합물.
  17. 제1항에 따른 용도의 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용도는 비알콜성 지방간염(NASH)을 치료하거나 역전(reverse)시키는 화합물.
  18. 제1항에 따른 용도의 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용도는 간섬유증의 발생을 감소시키거나 예방적으로 치료하거나 기존 간섬유증을 감소시키는 화합물.
  19. 제1항에 따른 용도의 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용도는 소엽염증과 같은 간염의 감소; 간세포 팽창의 감소; 및 지방간염의 감소 중 하나를 제공하는 화합물.
  20. 비알콜성 지방간염 및/또는 알콜성 지방간염의 치료 및/또는 예방치료 용도의 화학식(II)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물 또는 염의 용매화물을 포함하는 약학 조성물:
    Figure pct00119

    (II)
    여기서 R1은 3-6 개의 이중결합을 갖는 C10-C22 알케닐로부터 선택되고;
    R2 및 R3은 동일하거나 상이하고, 수소원자, 히드록시기, 알킬기, 할로겐원자, 알콕시기, 아실옥시기, 아실기, 알케닐기, 알키닐기, 아릴기, 알킬티오기, 알콕시카르보닐기, 카르복실기, 알킬술피닐기, 알킬술포닐기, 아미노기 및 알킬아미노기로 구성된 치환기로부터 선택되고; 여기서 R2 및 R3은 시클로프로판, 시클로부탄, 시클로펜탄 또는 시클로헥산과 같은 시클로알칸을 형성하기 위해 연결될 수 있고;
    X는 카르복실산 또는 이의 유도체이고; 여기서 상기 유도체는 카르복실산 에스테르와 같은 카르복실레이트; 글리세리드; 무수물; 카르복스아미드; 인지질; 또는 하이드록시메틸; 또는 이의 전구약물이다.
  21. 제20항에 따른 용도의 제20항에 있어서, 상기 화합물은 화학식(I)의 화합물인 약학 조성물:
    Figure pct00120

    (I)
    여기서 R2 및 R3은 독립적으로 수소원자 또는 선형, 분지형 및/또는 시클릭 C1-C6 알킬기로부터 선택되고;
    X는 카르복실산 또는 이의 유도체이고, 여기서, the 유도체 is 카르복실산 에스테르와 같은 카르복실레이트, 글리세리드; 무수물; 카르복스아미드; 인지질; 또는 하이드록시메틸; 또는 이의 전구약물이다.
  22. 제20항에 따른 용도의 제20항 또는 제21항에 있어서, 상기 조성물은 경구투여용으로 제형화되는 약학 조성물.
  23. 제20항에 따른 용도의 제20항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학 조성물은 하나 이상의 바인더, 부형제, 희석제 또는 산화 방지제 또는 이들의 임의의 조합을 더 포함하는 약학 조성물.
  24. 제20항에 따른 용도의 제20항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산인 약학 조성물.
  25. 제1항 내지 제16항 및 제18항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용도는 비알콜성 지방간염(NASH) 및/또는 알콜성 지방간염의 예방치료를 위한 것인 약학 조성물.
  26. 비알콜성 지방간염 및/또는 알콜성 지방간염의 치료를 필요로 하는 대상체에게 약학적 유효량의 화학식(II)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물 또는 염의 용매화물을 투여하는 단계를 포함하는 상기 대상체의 비알콜성 지방간염 및/또는 알콜성 지방간염을 치료하는 방법:
    Figure pct00121

    (II)
    여기서 R1은 3-6 개의 이중결합을 갖는 C10-C22 알케닐로부터 선택되고;
    R2 및 R3은 동일하거나 상이하고, 수소원자, 히드록시기, 알킬기, 할로겐원자, 알콕시기, 아실옥시기, 아실기, 알케닐기, 알키닐기, 아릴기, 알킬티오기, 알콕시카르보닐기, 카르복실기, 알킬술피닐기, 알킬술포닐기, 아미노기 및 알킬아미노기; 여기서 R2 및 R3은 시클로프로판, 시클로부탄, 시클로펜탄 또는 시클로헥산과 같은 시클로알칸을 형성하기 위해 연결될 수 있고;
    X는 카르복실산 또는 이의 유도체이고; 여기서 상기 유도체는 카르복실산 에스테르와 같은 카르복실레이트; 글리세리드; 무수물; 카르복스아미드; 인지질; 또는 하이드록시메틸; 또는 이의 전구약물이다.
  27. 제26항에 있어서, 상기 화합물은 화학식(I)의 화합물인 방법:
    Figure pct00122
    .
  28. 제26항 또는 제27항에 있어서, R2 및 R3은 독립적으로 수소원자 또는 선형, 분지형 및/또는 시클릭 C1-C6 알킬기로부터 선택되고; 및
    X는 카르복실산 또는 이의 유도체이고; 여기서 상기 유도체는 카르복실산 에스테르와 같은 카르복실레이트; 글리세리드; 무수물; 카르복스아미드; 인지질; 또는 하이드록시메틸; 또는 이의 전구약물인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물 또는 염의 용매화물인 방법.
  29. 제26항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, R2 및 R3은 독립적으로 수소원자, 메틸기, 에틸기, n-프로필기 및 이소프로필기로부터 선택되는 방법.
  30. 제26항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, R2 및 R3은 모두 독립적으로 C1-C6 알킬기인 방법.
  31. 제26항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, R2 및 R3 중 하나는 수소원자이고 다른 하나는 에틸기인 방법.
  32. 제26항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, X는 카르복실산인 방법.
  33. 제26항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, X는 C1-C6 알킬 에스테르인 방법.
  34. 제33항에 있어서, X는 메틸에스테르, 에틸에스테르, 이소프로필에스테르, n-부틸에스테르 및 tert-부틸에스테르로부터 선택되는 방법.
  35. 제26항, 제33항 또는 제34항 중 어느 한 항에 있어서, X는 메틸에스테르 및 에틸에스테르로부터 선택되는 방법.
  36. 제26항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, X는 트리글리세리드, 1,2-디글리세리드, 1,3-디글리세리드, 1-모노글리세리드, 및 2-모노글리세리드로부터 선택된 글리세리드인 방법.
  37. 제26항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체 또는 이들의 혼합물의 형태로 존재하는 방법.
  38. 제37항에 있어서, 상기 화합물은 R 형태, S 형태 또는 라세미 형태로 존재하는 방법.
  39. 제26항에 있어서, 상기 화합물은 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산(화합물 A), 또는 이의 약학적으로 허용가능한염 또는 에스테르이고, 상기 화학식은 다음과 같은 방법.
    Figure pct00123

  40. 제26항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 용량 당 약 5 mg 내지 약 4 g의 용량으로 투여되는 방법.
  41. 제26항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 하루에 1회 투여되는 방법.
  42. 제26항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 비알콜성 지방간염 및/또는 알콜성 지방간염을 치료하거나 역전시키는 방법.
  43. 제26항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 비알콜성 지방간염 및/또는 알콜성 지방간염을 예방적으로 치료하는 단계를 포함하는 방법.
  44. 제26항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 간섬유증의 발생을 감소시키거나 예방적으로 치료하거나 기존 간섬유증을 감소시키는 방법.
  45. 제26항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 간염, 간세포 팽창, 지방간염, 섬유증, 및/또는 염증 및/또는 섬유증, 예를 들어, hsCRP, Pro-C3, ELF 패널의 바이오마커의 감소; 및/또는 간생검, 간기능 검사, MRI 리버멀티스캔 평가(간MultiScan assessment) PDFF 및 cT1, 및/또는 HOMA-IR로부터 NAS 점수의 개선을 제공하는 방법.
  46. 제45항에 있어서, 상기 간염의 감소는 소엽염증의 감소인 방법.
  47. 제26항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 약학 조성물로서 제형화되는 방법.
  48. 제47항에 있어서, 상기 약학 조성물은 경구투여용으로 제형화되는 방법.
  49. 제47항 또는 제48항에 있어서, 상기 약학 조성물은 하나 이상의 바인더, 부형제, 희석제 또는 산화 방지제 또는 이들의 임의의 조합을 더 포함하는 방법.
  50. 제47항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산인 방법.
  51. 제26항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료방법은 예방치료인 방법.
  52. 알콜성 지방간염의 치료 및/또는 예방치료 용도의 화학식(II)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물 또는 염의 용매화물:
    Figure pct00124

    (II)
    여기서 R1은 3-6 개의 이중결합을 갖는 C10-C22 알케닐로부터 선택되고;
    R2 및 R3은 동일하거나 상이하고, 수소원자, 히드록시기, 알킬기, 할로겐원자, 알콕시기, 아실옥시기, 아실기, 알케닐기, 알키닐기, 아릴기, 알킬티오기, 알콕시카르보닐기, 카르복실기, 알킬술피닐기, 알킬술포닐기, 아미노기 및 알킬아미노기로부터 선택되고; 여기서 R2 및 R3은 시클로프로판, 시클로부탄, 시클로펜탄 또는 시클로헥산과 같은 시클로알칸을 형성하기 위해 연결될 수 있고;
    X는 카르복실산 또는 이의 유도체이고; 여기서 상기 유도체는 카르복실산 에스테르와 같은 카르복실레이트; 글리세리드; 무수물; 카르복스아미드; 인지질; 또는 하이드록시메틸; 또는 이의 전구약물이다.
  53. 제52항에 따른 용도의 제52항에 있어서, 상기 화합물은 화학식(I)의 화합물이고, R2, R3 및 X는 화학식(II)에 대한 정의와 동일한 화합물:
    Figure pct00125

    (I).
  54. 제52항에 따른 용도의 제52항 또는 제53항에 있어서, R2 및 R3은 독립적으로 수소원자 또는 선형, 분지형 및/또는 시클릭 C1-C6 알킬기로부터 선택되고;
    X는 카르복실산 또는 이의 유도체이고; 여기서 상기 유도체는 카르복실산 에스테르와 같은 카르복실레이트; 글리세리드; 무수물; 카르복스아미드; 인지질; 또는 하이드록시메틸; 또는 이의 전구약물인 알콜성 지방간염의 예방 및/또는 치료 용도의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물 또는 염의 용매화물.
  55. 제52항에 따른 용도의 제52항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, R2 및 R3은 독립적으로 수소원자, 메틸기, 에틸기, n-프로필기 및 이소프로필기로부터 선택되는 화합물.
  56. 제52항에 따른 용도의 제52항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, R2 및 R3은 모두 독립적으로 C1-C6 알킬기인 화합물.
  57. 제52항에 따른 용도의 제52항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, R2 및 R3 중 하나는 수소원자이고 다른 하나는 에틸기인 화합물.
  58. 제52항에 따른 용도의 제52항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, X는 카르복실산인 화합물.
  59. 제52항에 따른 용도의 제52항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, X는 C1-C6 알킬 에스테르인 화합물.
  60. 제52항에 따른 용도의 제59항에 있어서, X는 메틸에스테르, 에틸에스테르, 이소프로필에스테르, n-부틸에스테르 및 tert-부틸에스테르로부터 선택되는 화합물.
  61. 제52항에 따른 용도의 제52항 내지 제57항, 제59항 및 제60항 중 어느 한 항에 있어서, X는 메틸에스테르 및 에틸에스테르의 군으로부터 선택되는 화합물.
  62. 제52항에 따른 용도의 제52항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, X는 트리글리세리드, 1,2-디글리세리드, 1,3-디글리세리드, 1-모노글리세리드, 및 2-모노글리세리드로부터 선택된 글리세리드인 화합물.
  63. 제52항에 따른 용도의 제52항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체 또는 이들의 혼합물의 형태로 존재하는 화합물.
  64. 제52항에 따른 용도의 제63항에 있어서, 상기 화합물은 R 형태, S 형태 또는 라세미 형태로 존재하는 화합물.
  65. 제52항에 따른 용도의 제52항 또는 제53항에 있어서, 상기 화합물은 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산(화합물 A), 또는 이의 약학적으로 허용가능한염 또는 에스테르이고, 상기 화학식은 다음과 같은 화합물.
    Figure pct00126

    (화합물 A)
  66. 제52항에 따른 용도의 제52항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 용량 당 약 5 mg 내지 약 4 g의 용량으로 투여되는 화합물.
  67. 제52항에 따른 용도의 제52항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 하루에 1회 투여되는 화합물.
  68. 제52항에 따른 용도의 제52항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용도는 알콜성 지방간염을 치료하거나 역전시키는 화합물.
  69. 제52항에 따른 용도의 제52항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용도는 간섬유증의 발생을 예방하거나 기존의 간섬유증을 감소시키는 화합물.
  70. 제52항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용도는 소엽염증과 같은 간염의 감소; 간세포 팽창의 감소; 및 지방간염의 감소 중 하나를 제공하는 화합물.
  71. 전 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 하루에 600 mg의 용량으로 투여되는 화합물, 조성물 및 방법.
  72. 전 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 하루에 300 mg의 용량으로 투여되는 화합물, 조성물 및 방법.
  73. 전 항 중 어느 한 항에 있어서, 혈장 알라닌 아미노트랜스퍼라아제 수치가 30-40% 감소되는 화합물, 조성물 및 방법.
  74. 전 항 중 어느 한 항에 있어서, 혈장 아스파테이트 트랜스아미나제 수치가 10-20% 감소하는 화합물, 조성물 및 방법.
  75. 전 항 중 어느 한 항에 있어서, 간지방증이 70-90% 감소하는 화합물, 조성물 및 방법.
  76. 전 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 NAS 점수가 50-70% 감소하는 화합물, 조성물 및 방법.
  77. 전 항 중 어느 한 항에 있어서, 간섬유증 면적이 40-60% 감소하는 화합물, 조성물 및 방법.
  78. 제26항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 단독으로 투여되는 방법.
  79. 제26항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 추가 활성제를 공동투여하는 단계를 더 포함하는 방법.
  80. 제79항에 있어서, 상기 하나 또는 그 이상의 추가 활성제는 독립적으로 알로스테릭 아세틸-CoA 카르복실라아제(ACC) 억제제, 안지오텐신 (II) 수용체 길항제, 안지오텐신 전환효소(ACE) 억제제, 아폽토시스 신호조절 키나아제-1(ASK1) 억제제, 카스파아제 억제제, 카셉신 B 억제제, CCR2 케모카인 길항제, CCR5 케모카인 길항제, 클로라이드 채널 자극제, 콜레스테롤 가용화제, 디아실 글리세롤 O-아실트랜스퍼라아제 1(DGAT1) 억제제, 디펩티딜 펩티다아제 IV(DPP IV) 억제제, 섬유모세포-성장인자(FGF)-21 작용제, 파네소이드 X 수용체(FXR) 작용제, 항-CD3 mAb, 갈렉틴-3 억제제, 글루카곤-유사 펩티드 1(GLP1) 작용제, 글루타티온 전구체, C형 간염 바이러스 NS3 프로테아제 억제제, HMG CoA 리덕타아제 억제제, 1 Ιβ 하이드록시스테로이드 데하이드로제나아제(Ι Ιβ-HSDl) 억제제, 열충격단백질(Hsp)47 억제제, IL-Ιβ 길항제, IL-6 길항제, IL-10 작용제, IL-17 길항제, 회장 나트륨 담즙산 공동-수송체 억제제, 렙틴 유사체, 5-리폭시게나아제 억제제, LPL 유전자 자극제, 라이실옥시다아제 동족체 2(LOXL2) 억제제, 리소포스파티드산 1(LPA1) 수용체 길항제, 오메가-3 지방산, PDE3 억제제, PDE4 억제제, 포스포리파아제 C(PLC) 억제제, PPARa 작용제, PPARy 작용제, PPAR5 작용제, 재조합 인간 펜트락신-2 단백질(PRF-1), Rho 관련 단백질 키나아제 2(ROCK2) 억제제, 세미카바지드-민감성 아민 옥시다아제(SSAO) 억제제, 나트륨 포도당 수송체-2(SGLT2) 억제제, 스테아로일 CoA 불포화효소-1 억제제, 갑상선 호르몬 수용체 β 작용제, 종양괴사인자 α(TNFα) 리간드 억제제, 트랜스글루타미나아제 억제제, 트랜스글루타미나아제 억제제 전구체 및 작은 활성화 RNA(saRNA)로부터 선택되는 방법.
  81. 제79항 또는 제80항에 있어서, 상기 하나 또는 그 이상의 추가 활성제는 독립적으로 글루카곤-유사 펩티드 1(GLP-1) 작용제; 디펩티딜 펩티다아제(DPP IV) 억제제 및 오메가-3 지방산(n-3 PUFA)로부터 선택되는 방법.
  82. 제79항에 있어서, 상기 하나 또는 그 이상의 추가 활성제는 독립적으로 아세틸살리실산, 알리포진 티파보벡, 아람콜, 아토르바스타틴, BI 1467335,　BLX-1002, BMS-986036, BMS-986020, 세니크리비로코, 코비프로스톤, 콜레세벨람, 엠리카산, 에날라프릴, 포라무라브, GFT-505, GR-MD-02, GS-0976, GS-9674, 히드로클로로티아지드, 이코사펜에틸에스테르(에틸에이코사펜타엔산), IMM-124E, IVA337, K-877, KD-025, 리나글립틴, 리라글루티드, 머캅타민, MGL-3196, ND-L02-s0201, 오베티콜산, 올레옥심, 페그-일로데카킨, 피오글리타존, PRM-151, PX-102,　레모글리플로진 에타보네이트, 셀론세르티브, 시투주맙,　SHP-626, 솔리트로마이신, 티펠루카스트, TRX-318, 우르소데옥시콜산, 및 VBY-376로부터 선택되는 방법.
  83. 제79항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 공-투여는 동시 투여, 순차적 투여, 중첩 투여, 간격 투여, 연속 투여 또는 이들의 조합에 의한 것인 방법.
  84. 제1항 내지 제19항 및 제52항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 단독으로 투여되는 화합물.
  85. 제1항 내지 제19항 및 제52항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 하나 이상의 추가 활성제와 공-투여되는 화합물.
  86. 제85항에 있어서, 상기 하나 또는 그 이상의 추가 활성제는 독립적으로 알로스테릭 아세틸-CoA 카르복실라아제(ACC) 억제제, 안지오텐신 (II) 수용체 길항제, 안지오텐신 전환효소(ACE) 억제제, 아폽토시스 신호조절 키나아제-1(ASK1) 억제제, 카스파아제 억제제, 카셉신 B 억제제, CCR2 케모카인 길항제, CCR5 케모카인 길항제, 클로라이드 채널 자극제, 콜레스테롤 가용화제, 디아실 글리세롤 O-아실트랜스퍼라아제 1(DGAT1) 억제제, 디펩티딜 펩티다아제 IV(DPP IV) 억제제, 섬유모세포-성장인자(FGF)-21 작용제, 파네소이드 X 수용체(FXR) 작용제, 항-CD3 mAb, 갈렉틴-3 억제제, 글루카곤-유사 펩티드 1(GLP1) 작용제, 글루타티온 전구체, C형 간염 바이러스 NS3 프로테아제 억제제, HMG CoA 리덕타아제 억제제, 1 Ιβ 하이드록시스테로이드 데하이드로제나아제(Ι Ιβ-HSDl) 억제제, 열충격단백질(Hsp)47 억제제, IL-Ιβ 길항제, IL-6 길항제, IL-10 작용제, IL-17 길항제, 회장 나트륨 담즙산 공동-수송체 억제제, 렙틴 유사체, 5-리폭시게나아제 억제제, LPL 유전자 자극제, 라이실옥시다아제 동족체 2(LOXL2) 억제제, 리소포스파티드산 1(LPA1) 수용체 길항제, 오메가-3 지방산, PDE3 억제제, PDE4 억제제, 포스포리파아제 C(PLC) 억제제, PPARa 작용제, PPARy 작용제, PPAR5 작용제, 재조합 인간 펜트락신-2 단백질(PRF-1), Rho 관련 단백질 키나아제 2(ROCK2) 억제제, 세미카바지드-민감성 아민 옥시다아제(SSAO) 억제제, 나트륨 포도당 수송체-2(SGLT2) 억제제, 스테아로일 CoA 불포화효소-1 억제제, 갑상선 호르몬 수용체 β 작용제, 종양괴사인자 a(TNFα) 리간드 억제제, 트랜스글루타미나아제 억제제, 트랜스글루타미나아제 억제제 전구체 및 작은 활성화 RNA(saRNA)로부터 선택되는 화합물.
  87. 제85항 또는 제86항에 있어서, 상기 하나 또는 그 이상의 추가 활성제는 독립적으로 글루카곤-유사 펩티드 1(GLP-1) 작용제; 디펩티딜 펩티다아제(DPP IV) 억제제) 및 오메가-3 지방산(n-3 PUFA)로부터 선택되는 방법.
  88. 제85항에 있어서, 상기 하나 또는 그 이상의 추가 활성제는 독립적으로 아세틸살리실산, 알리포진 티파보벡, 아람콜, 아토르바스타틴, BI 1467335,　BLX-1002, BMS-986036, BMS-986020, 세니크리비로코, 코비프로스톤, 콜레세벨람, 엠리카산, 에날라프릴, 포라무라브, GFT-505, GR-MD-02, GS-0976, GS-9674, 히드로클로로티아지드, 이코사펜에틸에스테르(에틸에이코사펜타엔산), IMM-124E, IVA337, K-877, KD-025, 리나글립틴, 리라글루티드, 머캅타민, MGL-3196, ND-L02-s0201, 오베티콜산, 올레옥심, 페그-일로데카킨, 피오글리타존, PRM-151, PX-102,　레모글리플로진 에타보네이트, 셀론세르티브, 시투주맙,　SHP-626, 솔리트로마이신, 티펠루카스트, TRX-318, 우르소데옥시콜산, 및 VBY-376로부터 선택되는 방법.
  89. 제85항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 공-투여는 동시 투여, 순차적 투여, 중첩 투여, 간격 투여, 연속 투여, 또는 이들의 조합에 의한 것인 방법.
  90. 하나 또는 그 이상의 추가 활성제와 공-투여 되는, 비알콜성 지방간염의 치료 및/또는 예방치료 용도의 화학식(II)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물 또는 염의 용매화물:
    Figure pct00127

    (II)
    여기서 R1은 3-6 개의 이중결합을 갖는 C10-C22 알케닐로부터 선택되고;
    R2 및 R3은 동일하거나 상이하고, 수소원자, 히드록시기, 알킬기, 할로겐원자, 알콕시기, 아실옥시기, 아실기, 알케닐기, 알키닐기, 아릴기, 알킬티오기, 알콕시카르보닐기, 카르복실기, 알킬술피닐기, 알킬술포닐기, 아미노기 및 알킬아미노기의 군으로부터 선택되고; 여기서 R2 및 R3은 시클로프로판, 시클로부탄, 시클로펜탄 또는 시클로헥산과 같은 시클로알칸을 형성하기 위해 연결될 수 있고;
    X는 카르복실산 또는 이의 유도체이고; 여기서 상기 유도체는 카르복실산 에스테르와 같은 카르복실레이트; 글리세리드; 무수물; 카르복스아미드; 인지질; 또는 하이드록시메틸; 또는 이의 전구약물이다.
  91. 제90항에 따른 용도의 제90항에 있어서, 상기 화합물은 화학식(I)의 화합물이고, R2, R3 및 X는 화학식(II)에 대한 정의와 동일한 화합물.
    Figure pct00128

    (I)
  92. 제90항에 따른 용도의 제90항 또는 제91항에 있어서, R2 및 R3은 독립적으로 수소원자, 메틸기, 에틸기, n-프로필기 및 이소프로필기로부터 선택되는 화합물.
  93. 제90항에 따른 용도의 제90항 내지 제92항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔-1-일)옥시)부탄산(화합물 A), 또는 이의 약학적으로 허용가능한염 또는 에스테르이고, 상기 화학식은 다음과 같은 화합물.
    Figure pct00129

    (화합물 A)
  94. 제90항에 따른 용도의 제90항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 또는 그 이상의 추가 활성제는 독립적으로 알로스테릭 아세틸-CoA 카르복실라아제(ACC) 억제제, 안지오텐신 (II) 수용체 길항제, 안지오텐신 전환효소(ACE) 억제제, 아폽토시스 신호조절 키나아제-1(ASK1) 억제제, 카스파아제 억제제, 카셉신 B 억제제, CCR2 케모카인 길항제, CCR5 케모카인 길항제, 클로라이드 채널 자극제, 콜레스테롤 가용화제, 디아실 글리세롤 O-아실트랜스퍼라아제 1(DGAT1) 억제제, 디펩티딜 펩티다아제 IV(DPP IV) 억제제, 섬유모세포-성장인자(FGF)-21 작용제, 파네소이드 X 수용체(FXR) 작용제, 항-CD3 mAb, 갈렉틴-3 억제제, 글루카곤-유사 펩티드 1(GLP1) 작용제, 글루타티온 전구체, C형 간염 바이러스 NS3 프로테아제 억제제, HMG CoA 리덕타아제 억제제, 1 Ιβ-하이드록시스테로이드 데하이드로제나아제(ΙΙβ-HSDl) 억제제, 열충격단백질(Hsp)47 억제제, IL-Ιβ 길항제, IL-6 길항제, IL-10 작용제, IL-17 길항제, 회장 나트륨 담즙산 공동-수송체 억제제, 렙틴 유사체, 5-리폭시게나아제 억제제, LPL 유전자 자극제, 라이실옥시다아제 동족체 2(LOXL2) 억제제, 리소포스파티드산 1(LPA1) 수용체 길항제, 오메가-3 지방산, PDE3 억제제, PDE4 억제제, 포스포리파아제 C(PLC) 억제제, PPARa 작용제, PPARy 작용제, PPAR5 작용제, 재조합 인간 펜트락신-2 단백질(PRF-1), Rho 관련 단백질 키나아제 2(ROCK2) 억제제, 세미카바지드-민감성 아민 옥시다아제(SSAO) 억제제, 나트륨 포도당 수송체-2(SGLT2) 억제제, 스테아로일 CoA 불포화효소-1 억제제, 갑상선 호르몬 수용체 β 작용제, 종양괴사인자 a(TNFα) 리간드 억제제, 트랜스글루타미나아제 억제제, 트랜스글루타미나아제 억제제 전구체 및 작은 활성화 RNA(saRNA)로부터 선택되는 화합물.
  95. 제90항에 따른 용도의 제90항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 또는 그 이상의 추가 활성제는 독립적으로 글루카곤-유사 펩티드 1(GLP-1) 작용제; 디펩티딜 펩티다아제(DPP IV) 억제제 및 오메가-3 지방산(n-3 PUFA)로부터 선택되는 화합물.
  96. 제90항에 따른 용도의 제90항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 또는 그 이상의 추가 치료제는 독립적으로 아세틸살리실산, 알리포진 티파보벡, 아람콜, 아토르바스타틴, BI 1467335,　BLX-1002, BMS-986036, BMS-986020, 세니크리비로코, 코비프로스톤, 콜레세벨람, 엠리카산, 에날라프릴, 포라무라브, GFT-505, GR-MD-02, GS-0976, GS-9674, 히드로클로로티아지드, 이코사펜에틸에스테르(에틸에이코사펜타엔산), IMM-124E, IVA337, K-877, KD-025, 리나글립틴, 리라글루티드, 머캅타민, MGL-3196, ND-L02-s0201, 오베티콜산, 올레옥심, 페그-일로데카킨, 피오글리타존, PRM-151, PX-102,　레모글리플로진 에타보네이트, 셀론세르티브, 시투주맙,　SHP-626, 솔리트로마이신, 티펠루카스트, TRX-318, 우르소데옥시콜산, 및 VBY-376로부터 선택되는 화합물.
  97. 제90항에 따른 용도의 제90항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 공-투여는 동시 투여, 순차적 투여, 중첩 투여, 간격 투여, 연속 투여, 또는 이들의 조합에 의한 것인 화합물.
  98. 제90항에 따른 용도의 제90항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용도는 비알콜성 지방간염(NASH), 또는 섬유증, 염증 및/또는 간세포 팽창을 특징으로 하는 다른 간질환을 예방, 치료 또는 역전시키는 화합물.
  99. 제90항에 따른 용도의 제90항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용도는 간섬유증의 발생의 예방 또는 기존의 간섬유증을 감소시키는 화합물.
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