CN113855812B - 聚乙二醇洛塞那肽或其药物组合物的新医药用途 - Google Patents

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Abstract

本发明属于生物医药领域，涉及聚乙二醇洛塞那肽或其药物组合物的医药用途。具体而言，本发明提供了聚乙二醇洛塞那肽或其药物组合物在制备治疗/预防肝脏疾病药物，或治疗/预防心肌损伤药物中的应用。本发明提供的聚乙二醇洛塞那肽或其药物组合物新的医药用途具有广阔的临床应用前景。

Description

聚乙二醇洛塞那肽或其药物组合物的新医药用途
技术领域
本发明属于生物医药领域，具体涉及胰高血糖素样肽-1受体激动剂（GLP-1RAs）聚乙二醇洛塞那肽或其药物组合物在制备治疗或预防肝脏疾病药物中的用途。
背景技术
糖尿病是由多种病因引起的代谢紊乱疾病。根据国际糖尿病联盟(InternationalDiabetes Federation，IDF)统计，2012年全球糖尿病患者已超过3.71亿，死亡人数高达480万，估计到2030年全球将有近5.52亿患者。其中，II型糖尿病患者占90％以上。长期慢性高血糖可导致多种并发症，包括肝脏、肾脏、心血管和视网膜损害等，给世界医疗系统带来巨大的经济负担。目前II型糖尿病的治疗药物主要包括口服降糖药物和胰岛素。传统降糖药物，如二甲双胍、磺脲类、噻唑烷二酮类、α-葡萄糖苷酶抑制剂和胰岛素，虽然可通过不同的机制发挥降糖作用，但容易引起低血糖、体重增加、肝脏细胞出现氧化应激和炎症反应进而引起脂肪变性、严重的酮尿和乳酸血症等不良反应。因此，临床上亟需具有稳定降糖作用且不良反应发生率较低的药物。另外，心肌损伤是糖尿病患者死亡的重要原因之一，目前尚未有有效的改善II型糖尿病患者心肌功能的药物。
聚乙二醇洛塞那肽是江苏豪森自主开发的1类创新药，属于PEG化的长效降糖药物。聚乙二醇洛塞那肽在糖尿病经典模型动物上显示出良好的降血糖作用，具有明显的II型糖尿病治疗作用，且能避免低血糖及体重增加的不良反应。聚乙二醇洛塞那肽以艾塞那肽作为阳性化合物，通过对天然存在的GLP-1模拟肽Ex-4(Exenatide)进行修饰改造，使其在体内能进一步抵抗DPP-IV的快速降解。同时注意到很多蛋白类及多肽类药物经聚乙二醇(PEG)修饰后能减轻药物的毒性及其抗原免疫性，延长药物在体内的半衰期及作用时间，提高其生物利用度，进而提高药物的治疗效果，在保证疗效的前提下，延长给药间隔，减少给药次数，提高病人的顺应性。聚乙二醇洛塞那肽在糖尿病经典模型动物上显示出良好的降血糖作用，具有明显的II型糖尿病治疗作用，且能避免低血糖及体重增加的不良反应；已有临床试验结果表明，本品降糖效果明显，药效持续时间长，同时无明显毒副作用。
目前，尚未有关于聚乙二醇洛塞那肽对于肝脏疾病的治疗的研究，也没有关于对同时伴有肝损伤或是脂肪肝、肝炎、肝纤维化的II型糖尿病患者治疗效果的研究，也未有任何关于聚乙二醇洛塞那肽对同时伴有心肌损伤的II型糖尿病患者治疗效果的研究，因此急需对相关治疗方案进行深入的研究，为临床患者提供更多的治疗方案。
发明内容
一方面，本发明提供了聚乙二醇洛塞那肽或其药物组合物在制备治疗或预防肝脏疾病药物中的用途。
在本发明优选的实施方案中，其中，肝脏疾病选自肝损伤、脂肪肝、肝炎或肝纤维化。
在本发明优选的实施方案中，其中，患有肝脏疾病的患者同时伴有II型糖尿病。
在本发明优选的实施方案中，其中，聚乙二醇洛塞那肽的单次给药剂量范围选自10-500μg；优选100-300μg；更优选100μg或200μg；
或者，聚乙二醇洛塞那肽的给药频次为一周一次或两周一次；优选一周一次。
在本发明优选的实施方案中，其中，聚乙二醇洛塞那肽的单次给药剂量为100μg，给药频次为一周一次；
或者聚乙二醇洛塞那肽的单次给药剂量为200μg，给药频次为一周一次。
在本发明优选的实施方案中，其中，聚乙二醇洛塞那肽或其药物组合物用于制备经过二甲双胍或磺酰脲类药物治疗后血糖和/或肝脏情况未改善患者在治疗或预防肝脏疾病药物中的用途。
在本发明优选的实施方案中，其中，经治疗后患者血清TC和TG的含量降低。
在本发明优选的实施方案中，其中，经治疗后患者肝脏TC、TG和LDL-C的含量降低，HDL-C的含量升高。
在本发明优选的实施方案中，其中，经治疗后患者肝脏ALT和AST的含量降低。
在本发明优选的实施方案中，其中，经治疗后患者肝脏组织中脂滴沉积和纤维化程度降低。
另一方面，本发明提供了聚乙二醇洛塞那肽或其药物组合物在制备治疗或预防心肌损伤药物中的用途。
在本发明优选的实施方案中，患有心肌损伤的患者同时伴有II型糖尿病。
在本发明进一步优选的实施方案中，经治疗后患者心脏LVEF、LVFS增加。
在本发明优选的实施方案中，其中，聚乙二醇洛塞那肽的单次给药剂量范围选自10-500μg；优选100-300μg；更优选100μg或200μg；
或者，聚乙二醇洛塞那肽的给药频次为一周一次或两周一次；优选一周一次。
在本发明优选的实施方案中，其中，聚乙二醇洛塞那肽的单次给药剂量为100μg，给药频次为一周一次；
或者聚乙二醇洛塞那肽的单次给药剂量为200μg，给药频次为一周一次。
本发明中所述的聚乙二醇洛塞那肽的单次给药剂量的示例性剂量选自10.0μg、10.5μg、11.0μg、11.5μg、12.0μg、12.5μg、13.0μg、13.5μg、14.0μg、14.5μg、15.0μg、15.5μg、16.0μg、16.5μg、17.0μg、17.5μg、18.0μg、18.5μg、19.0μg、19.5μg、20μg、22.5μg、25μg、27.5μg、30μg、32.5μg、35μg、37.5μg、40μg、42.5μg、45μg、47.5μg、50mg、52.5μg、55μg、60μg、65μg、70μg、75μg、80μg、85μg、90μg、95μg、100μg、105μg、110μg、120μg、130μg、140μg、150μg、160μg、170μg、180μg、190μg、200μg、210μg、220μg、230μg、240μg、250μg、260μg、270μg、280μg、290μg、300μg、350μg、400μg、450μg或500μg。
本发明所述聚乙二醇洛塞那肽或其组合物的给药途径选自胃肠外给药，所述胃肠外给药包括但不限于静脉注射、静脉滴注、皮下注射、肌肉注射，优选皮下注射，更优选腹部皮下注射。
本发明还涉及包含聚乙二醇洛塞那肽以及一种或多种药用载体、赋形剂、稀释剂的药物组合物。所述药物组合物可以制成药学上可接受的注射剂（包括注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液）。
在本发明优选的实施方案中，聚乙二醇洛塞那肽为注射剂，注射剂中包括治疗有效量的聚乙二醇洛塞那肽、缓冲液和稀释剂；优选的，所述缓冲液为醋酸盐缓冲液，所述稀释剂选自甘露醇或山梨醇。
在本发明进一步优选的实施方案中，药物组合物中包含0.1%～2%（W/V）的聚乙二醇洛塞那肽，0.3%～3.0%（W/V）的醋酸/醋酸钠，2.0%～5.0%（W/V）的甘露醇。
本发明提供的长效GLP-1受体激动剂聚乙二醇洛塞那肽或其药物组合物，对伴有II型糖尿病的脂肪变性、炎症或肝损伤的患者在起到明显的降糖作用的同时，还可以有效改善脂肪变性、减轻炎症反应和肝损伤、减轻肝纤维化的作用。本发明提供的治疗方案在实现治疗II型糖尿病的同时也具有达到保护肝损伤，治疗肝纤维化的效果，具有广阔的临床应用前景。此外，本发明提供的聚乙二醇洛塞那肽或其组合物还能够有效治疗II型糖尿病导致的心肌损伤，能够显著增加LVEF、LVFS，达到治疗II型糖尿病的同时具有显著的心肌保护作用。
附图说明
图1为给药PEG-Loxe后对糖尿病小鼠肝组织的HE、ORO和天狼星红染色实验；
图2为给药PEG-Loxe后对糖尿病小鼠肝组织中氧化应激和炎症指标测定的ELISA实验；
图3为测定给药PEG-Loxe后对糖尿病小鼠肝组织中氧化应激相关蛋白的DHE染色实验；
图4为测定给药PEG-Loxe后对糖尿病小鼠肝组织中Sirt1-AMPK通路相关蛋白表达的Western blot实验；
图5为糖尿病小鼠胰腺组织HE染色和免疫组化实验；
图6为测定糖尿病小鼠胰腺组织中凋亡相关蛋白表达的Western blot实验；
图7为测定给药PEG-Loxe后对糖尿病小鼠肝脏组织中PI3K/AKT通路相关蛋白表达的Western blot实验；
图8为测定高糖处理过的肝癌细胞HepG2中PI3K/AKT通路相关蛋白表达的Westernblot实验。
图9为PEG-Loxe对T2DM小鼠心肌收缩功能指标影响。
图10为PEG-Loxe对T2DM小鼠心肌收缩力指标影响的B超图像。
具体实施方式
以下将结合具体实施例进一步阐释本发明，本发明的实施例仅用于理解和说明本发明的技术方案，本发明的保护范围并非限定于具体实施例。
动物模型的建立
从常州Cavins实验动物有限公司购买8周龄的C57BL/6.BKS.Cg-Dock7m+/+Leprdb /J（000697）（C57BL/6-db/db）和C57BL/6-m/m背景的雄性小鼠。适应性喂养1周后，10只健康的m/m小鼠和40只db/db小鼠分为5组。I组（NC）：健康小鼠，每3天1次皮下注射与聚乙二醇洛赛那肽（PEG-Loxe）等体积的生理盐水；II组（T2DM）：db/db小鼠，每3天1次皮下注射与PEG-Loxe等体积的生理盐水； III组（PEG-Loxe）：db/db小鼠，每3天1次皮下注射PEG-Loxe（1mg/kg）；IV组（Lira）：db/db小鼠，每天1次皮下注射Lira（0.4 mg/kg）;V组（Loxe）：db/db小鼠，每天1次皮下注射Loxe（0.3 mg/kg）。各组给药连续治疗4周。
所有小鼠在4周后检测空腹血糖。使用戊巴比妥进行麻醉后，从眼眶采集血液样本。然后处死小鼠，剥离肝脏和胰腺组织称重。部分肝脏和胰腺组织用10%多聚甲醛固定，剩余保存在-80℃用于后续分析。
实施例1. PEG-Loxe改善T2DM小鼠的脂质紊乱
1.1实验方法
血液标本，立即离心(1200 g, 4℃，15 min)获得血清。采用全自动生化分析仪（BS-420, Mindray, China）检测血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C、HbA1c和insulin水平。
肝组织用9× (wt/vol)冰冷的磷酸盐缓冲盐水均质，然后3500 rpm离心15min，收集上清液。按照制造商的说明，采用ELISA试剂盒检测肝组织中脂质（TC、TG、HDL-C、LDL-C）、AST、ALT）、氧化因子（ROS、MDA、SOD、GSH、CAT）和炎性因子（IL-10、TNF-α、IL-6、MCP-1）含量。
1.2实验结果
表 1. PEG-Loxe可改善db/db小鼠的各种生化参数水平
Figure 118481DEST_PATH_IMAGE001
注：NC为正常对照组；T2DM是指2型糖尿病组。数据用平均值±标准差表示（n=8）。###p < 0.001表示与正常对照组比较具有统计学意义；*p < 0.05, **p < 0.01 和***p < 0.001表示与T2DM相比具有统计学意义。
由表1的结果可知：
与正常小鼠相比，T2DM小鼠血清TC、TG水平和肝脏TC、TG、LDL-C含量显著升高（P＜ 0.001），肝脏HDL-C明显降低。然而，给予PEG-Loxe、Lira（利拉鲁肽）和Loxe干预4周后，肝脏TC、TG、LDL-C、HDL-C和血清TG的变化显著逆转(P＜0.05)。此外，PEG-Loxe还能升高T2DM小鼠血清HDL-C水平，降低LDL-C含量，特别是在1 mg/kg剂量组，差异有统计学意义。
实施例2. PEG-Loxe改善T2DM小鼠的肝脂肪变性和肝损伤
1.1实验方法
将动物肝和胰腺组织固定在10%福尔马林溶液中，脱水后石蜡包埋。包埋切片（3-5μm厚度）用苏木精伊红(H&E)染色进行组织病理学分析。肝脏切片用天狼星红和油红O染色，使用奥林巴斯BX51显微镜(Tokyo, Japan)在400倍观察和捕捉所有切片。
1.2实验结果
肝切片H&E染色显示空白组小鼠肝细胞形态规则、分布均匀且排列紧密；T2DM小鼠出现胞浆空泡和肝细胞坏死。然而， PEG-Loxe、Lira和Loxe治疗4周后，肝脏病变明显减轻(附图1A)。为了评价T2DM小鼠的肝损伤，我们测定了肝脏ALT和AST的水平，发现与正常对照组相比，T2DM小鼠出现了严重的肝脏损伤，表现为ALT、AST水平明显升高（P＜0.001）。然而，PEG-Loxe、Lira和Loxe干预显著改善了它们的异常水平(如实施例中表1中数据)。
此外，肝脏油红O和天狼星红染色显示T2DM小鼠肝细胞内有大面积的脂滴沉积和肝纤维化，给予PEG-Loxe、Lira和Loxe治疗4周后，脂滴和纤维化显著减少(附图1A和附图1B)。这些结果表明，PEG-Loxe、Lira和Loxe对T2DM引起的肝损伤有保护作用。肝脏油红O和天狼星红染色结果如表2。
表2. PEG-Loxe对db/db小鼠肝脏油红O和天狼星红染色的定量结果
Figure 724037DEST_PATH_IMAGE002
注：数据用平均值±标准差表示（n=3）。###p < 0.001和##p < 0.01表示与正常对照组比较具有统计学意义；*p < 0.05，**p < 0.01和***p < 0.001表示与T2DM相比具有统计学意义。
实施例3：PEG-Loxe减轻T2DM小鼠肝脏氧化应激和炎症反应
1.1实验方法
肝组织用9× (wt/vol)冰冷的磷酸盐缓冲盐水均质，然后3500 rpm离心15min，收集上清液。按照制造商的说明，采用ELISA试剂盒检测肝组织中脂质（TC、TG、HDL-C、LDL-C）、AST、ALT）、氧化因子（ROS、MDA、SOD、GSH、CAT）和炎性因子（IL-10、TNF-α、IL-6、MCP-1）含量。
通过DHE染色进一步检测肝脏中ROS的产生。简单地说，使用冷冻切片机(CM1900,Leica, Germany)获得10 μm厚的冷冻肝组织，制作切片。随后，组织用5 mmol/L荧光标记的DHE在避光环境中37°C孵育30 min，DHE以1:1000稀释，然后用4',6'-二氨基-2-苯基吲哚(DAPI, AS1075, Aspen Biological, Wuhan, China)染色。在200倍放大的荧光显微镜下(MicroPublisher, MP3.3-RTV-CLR-10, Q-IMAGING, Canada)拍摄图像。采用Image-ProPlus 6.0 (IPP, Media Cybernetics, Rockville, MD, USA)定量分析DHE平均荧光强度。
1.2实验结果
通过对肝脏的氧化因子和炎性因子进行检测，结果如附图2和表3所示，（1）与正常小鼠相比，T2DM小鼠的肝脏ROS、MDA水平和促炎因子TNF-α、IL-6、MCP-1水平显著升高；肝脏抗氧化酶SOD、GSH、CAT和抗炎细胞因子IL-10水平均显著降低，表明长期高血糖刺激肝脏可能发生氧化应激和炎症反应。（2）附图3和表4显示T2DM小鼠肝组织ROS荧光强度显著增强，ROS含量明显升高，与生化实验结果一致。而PEG-Loxe、Lira和Loxe治疗可逆转以上变化，表明PEG-Loxe可通过降低T2DM小鼠的肝脏氧化应激和炎性损伤，保护肝脏。
表3. PEG-Loxe对db/db小鼠肝脏氧化因子和炎性因子水平的影响
Figure 254506DEST_PATH_IMAGE003
注：数据用平均值±标准差表示（n=8）。###p < 0.001表示与正常对照组比较具有统计学意义；*p < 0.05, **p < 0.01 和 ***p < 0.001表示与T2DM相比具有统计学意义。
表4. PEG-Loxe对db/db小鼠肝脏ROS荧光图像定量结果
Figure 462765DEST_PATH_IMAGE004
注：数据用平均值±标准差表示（n=3）。###p < 0.001表示与正常对照组比较具有统计学意义；***p < 0.001表示与T2DM相比具有统计学意义。
实施例4：PEG-Loxe调节脂代谢Sirt1-AMPK通路改善T2DM肝脏损伤
1.1实验方法
肝或胰腺组织用含1% PMSF蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂的RIPA裂解液进行匀浆，离心10 min提取组织总蛋白。采用BCA试剂盒进行蛋白浓度测定。将等量的蛋白用10-15%的SDS-PAGE进行电泳分离，然后转移到PVDF膜上。室温下用5% BSA孵育3 h。肝组织孵育一抗p-IRS-1, IRS-1, p-PI3K, PI3K, p-AKT, AKT, p-GSK-3β, GSK-3β, GLUT4, p-AMPK, AMPK, p-ACC, ACC和Sir1。胰腺组织孵育一抗Bcl-2, Bax, Cleaved Caspase-3和Caspase-3。随后用TBST洗涤膜3次，室温二抗孵育1 h。最后用化学增强发光溶液显色，自动成像系统（Gene Gnome5, Synoptics Ltd, UK）成像。假设β-肌动蛋白在所有样品中含量相似，并作为对照。
1.2实验结果
Western blot的结果如附图4和表5所示，与正常组相比，T2DM小鼠肝脏Sirt1、p-AMPK、p-ACC表达均显著下降（P＜0.001），经PEG-Loxe和Lira治疗后明显升高。提示PEG-Loxe和Lira可通过调节脂代谢Sirt1-AMPK通路抑制肝脏脂质合成和氧化应激，改善T2DM肝脏损伤。
表5. PEG-Loxe对db/db小鼠肝脏Sirt1/AMPK/ACC信号通路蛋白的影响
Figure 762290DEST_PATH_IMAGE005
注：数据用平均值±标准差表示（n=3）。###p < 0.001表示与正常对照组比较具有统计学意义；**p < 0.01，***p < 0.001表示与T2DM相比具有统计学意义。
实施例5：PEG-Loxe激活PI3K/ AKT通路提高胰岛素水平达到降糖效果
1.1实验方法
HE染色、免疫组化和Westeron blot的实验方法如前所述。
1.2实验结果
（1）PEG-Loxe改善胰腺胰岛损伤，促进T2DM小鼠胰腺胰岛素分泌
HE染色结果显示（400×），空白组小鼠胰腺组织的胰岛形态规则（圆形、椭圆形）、边界清晰，胰岛细胞分布均匀；T2DM组小鼠胰岛肿胀、形态不规则（多边形）且边界模糊；PEG-Loxe、Lira和Loxe给药治疗组小鼠胰岛形态较T2DM组有所改善（如附图5A）。
采用免疫组化法检测小鼠胰岛胰岛素的表达，棕黄色颜色越深且分布面积越广，表明胰岛素含量越高；相反则表达越低。与正常组相比，T2DM组小鼠胰岛胰岛素水平显著降低，表明T2DM小鼠胰岛β细胞分泌胰岛素能力减弱、胰岛功能发生障碍（如附图5-A和5-B）。与T2DM组相比，PEG-Loxe-H、Lira和Loxe均能明显增加2型糖尿病小鼠胰岛素水平（附图5-B和表6，P＜0.05）。结果提示PEG-Loxe、Lira和Loxe能修复受损的胰岛细胞，促进胰岛β细胞胰岛素的分泌，从而发挥降血糖作用。
表6. PEG-Loxe对db/db小鼠胰腺胰岛素和GLP-1R含量的影响（免疫组化定量）
Figure 663381DEST_PATH_IMAGE006
注：数据用平均值±标准差表示（n=3）。#p < 0.05表示与正常对照组比较具有统计学意义；*p < 0.05，**p < 0.01表示与T2DM相比具有统计学意义。
(2)PEG-Loxe抑制T2DM小鼠胰腺β细胞凋亡
采用Western blot法检测胰腺组织凋亡相关蛋白的表达。结果显示，与正常组相比，T2DM组小鼠抑凋亡蛋白Bcl-2明显减少，促凋亡蛋白Bax、Cleaved-caspase-3显著增加，表明胰岛细胞凋亡增加。而PEG-Loxe、Lira和Loxe干预显著降低Bax、Cleaved-caspase-3水平，促进Bcl-2表达，有效抑制β细胞凋亡（如附图6和表7）。
表7. PEG-Loxe对db/db小鼠凋亡相关蛋白的影响
Figure 149989DEST_PATH_IMAGE007
注：数据用平均值±标准差表示（n=3）。###p < 0.001表示与正常对照组比较具有统计学意义；*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001表示与T2DM相比具有统计学意义。
（3）PEG-Loxe增加胰腺GLP-1R表达
实验结果表明，与T2DM组相比，PEG-Loxe、Lira和Loxe均能明显增加T2DM小鼠胰腺GLP-1R水平，从而促进胰岛素分泌。PEG-Loxe为GLP-1R的激动剂，可通过与GLP-1R结合，促进胰岛素的合成和释放（如附图5所示）。
（4）PEG-Loxe激活胰岛素信号通路，增加T2DM小鼠血清胰岛素水平
实验结果表明，T2DM小鼠血清胰岛素水平明显高于正常小鼠(约为正常小鼠的2倍)。PEG-Loxe和Lira治疗可显著提高血清胰岛素水平（分别提高26.80%, 12.24%, P＜0.05）（如表1所示）。
采用Western blot法测定了肝脏胰岛素PI3K/AKT通路的相关蛋白表达以进一步研究PEG-Loxe对胰岛素信号转导的影响。肝脏胰岛素信号通路由胰岛素与胰岛素受体-β结合启动，然后由胰岛素受体底物-1 (IRS-1)激活，通过IRS-1激活PI3K/ AKT通路。结果表明，与正常组相比，T2DM小鼠肝脏p-IRS-1、p-PI3K、p-AKT、GLUT4蛋白表达显著降低，p-GSK-3β明显升高，表明T2DM小鼠胰岛素通路受阻。给予PEG-Loxe、Lira和Loxe治疗后，可以激活T2DM小鼠肝脏胰岛素信号通路，表现为p-IRS-1、p-PI3K、p-AKT、GLUT4水平显著升高，p-GSK-3β表达降低（如附图7和表8）。
表8. PEG-Loxe对db/db小鼠肝脏PI3K/AKT通路蛋白的影响
Figure 365201DEST_PATH_IMAGE008
注：数据用平均值±标准差表示（n=3）。###p < 0.001表示与正常对照组比较具有统计学意义；*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001表示与T2DM相比具有统计学意义。
实施例6 PEG-Loxe激活高糖的肝癌细胞中PI3K/AKT信号通路
1.1 实验方法
HepG2细胞暴露于30 mM的高糖中24小时，然后分别与不同剂量（100, 200 nmol/L）的PEG-Loxe、Lira、Loxe以及以上药物+PI3K抑制剂（LY294002,货号：S1105，厂家：美国Selleck Chemicals 20 μM）再共同培养24小时。
1.2实验结果
实验结果表明，高糖培养后，HepG2细胞的p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT均显著抑制（P＜0.001），表明 PI3K/AKT信号通路受阻。与高糖组相比，PEG-Loxe、Lira和Loxe组均显著提高各蛋白含量（P＜0.01）。当加入PI3K抑制剂LY294002后，与给药组相比，p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白含量均显著降低（P＜0.05），抵消PEG-Loxe、Lira和Loxe的胰岛素通路激活作用，进一步证实PEG-Loxe可以激活PI3K/AKT胰岛素信号通路（如附图8和表9-11）。
表9. 聚乙二醇洛塞那肽对肝细胞PI3K/AKT通路蛋白的影响
Figure 761374DEST_PATH_IMAGE009
注：数据用平均值±标准差表示（n=3）。###p < 0.001表示与空白对照组比较具有统计学意义；***p < 0.001表示与高糖组相比具有统计学意义；&p < 0.05, &&p < 0.01表示与高糖+聚乙二醇洛塞那肽组相比具有统计学意义。
表10. 利拉鲁肽对肝细胞PI3K/AKT通路蛋白的影响
Figure 833367DEST_PATH_IMAGE010
注：数据用平均值±标准差表示（n=3）。###p < 0.001表示与空白对照组比较具有统计学意义；***p < 0.001表示与高糖组相比具有统计学意义；&p < 0.05表示与高糖+利拉鲁肽组相比具有统计学意义。
表11. 洛塞那肽对肝细胞PI3K/AKT通路蛋白的影响
Figure 72849DEST_PATH_IMAGE011
注：数据用平均值±标准差表示（n=3）。###p < 0.001表示与空白对照组比较具有统计学意义；***p < 0.001表示与高糖组相比具有统计学意义；&p < 0.05表示与高糖+洛塞那肽组相比具有统计学意义。
实施例7. PEG-Loxe提高小鼠心肌功能
1.1实验方法
本研究初步探讨GLP-1受体激动剂对2型糖尿病小鼠的心肌保护作用。左室射血分数（Left ventricular ejection fraction, LVEF）、左室短轴缩短率（Fractionalshortening, LVFS）、每搏输出量（Stroke volume, SV）为反映心肌收缩功能的常用指标。受检小鼠用异氟烷吸入麻醉，采用Visual Sonics Vevo 3100高分辨率小动物超声诊断仪检测各组小鼠LVEF、LVFS和SV。所有超声测值均取3个连续心动周期的平均值。
1.2实验结果
与空白组相比，T2DM组小鼠LVEF、LVFS显著降低（P＜0.05），SV无明显变化。给予PEG-Loxe、Lira和Loxe后，PEG-Loxe和Loxe均能显著增加LVEF、LVFS，SV虽有升高，但无显著影响。利拉鲁肽可显著增加LVEF，对SV、LVFS却无明显影响。结果表明PEG-Loxe和利拉鲁肽可能有效提高糖尿病小鼠心脏功能（如表12、图9和图10）。本研究PEG-Loxe和Lira组小鼠空腹血糖、肝脏TC、TG、LDL显著低于T2DM组，HDL显著高于T2DM组，说明PEG-Loxe和利拉鲁肽可能通过有效降低糖尿病小鼠血糖、血脂水平，减轻糖尿病小鼠心肌损伤。
表12 PEG-Loxe对T2DM小鼠心肌收缩功能指标变化（n=4）
Figure 154069DEST_PATH_IMAGE012

Claims (13)

1.聚乙二醇洛塞那肽或其药物组合物在制备治疗或预防肝脏疾病药物中的用途；
其中，肝脏疾病选自II型糖尿病引发的肝炎或肝纤维化。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，聚乙二醇洛塞那肽的单次给药剂量范围选自10-500μg；
或者，聚乙二醇洛塞那肽的给药频次为一周一次或两周一次。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，聚乙二醇洛塞那肽的单次给药剂量范围选自100-300μg；
或者，聚乙二醇洛塞那肽的给药频次为一周一次或两周一次。
4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，聚乙二醇洛塞那肽的单次给药剂量选自100μg或200μg；
或者，聚乙二醇洛塞那肽的给药频次为一周一次或两周一次。
5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，聚乙二醇洛塞那肽的单次给药剂量为100μg，给药频次为一周一次；
或者，聚乙二醇洛塞那肽的单次给药剂量为200μg，给药频次为一周一次。
6.如权利要求1所述的用途，其特征在于，药物组合物为注射剂，其中包含治疗有效量的聚乙二醇洛塞那肽、缓冲液和稀释剂。
7.如权利要求6所述的用途，其特征在于，药物组合物为注射剂，其中包含治疗有效量的聚乙二醇洛塞那肽、醋酸盐缓冲液、甘露醇或山梨醇。
8.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述药物组合物包含0.1%～2%（W/V）的聚乙二醇洛塞那肽，0.3%～3.0%（W/V）的醋酸/醋酸钠，2.0%～5.0%（W/V）的甘露醇。
9.如权利要求1-8任意一项所述的用途，其特征在于，聚乙二醇洛塞那肽或其药物组合物用于制备经过二甲双胍或磺酰脲类药物治疗后血糖和/或肝脏情况未改善患者在治疗或预防肝脏疾病药物中的用途。
10.如权利要求1-8任意一项所述的用途，其特征在于，经治疗后患者血清TC和TG的含量降低。
11.如权利要求1-8任意一项所述的用途，其特征在于，经治疗后患者肝脏TC、TG和LDL-C的含量降低，HDL-C的含量升高。
12.如权利要求1-8任意一项所述的用途，其特征在于，经治疗后患者肝脏ALT和AST的含量降低。
13.如权利要求1-8任意一项所述的用途，其特征在于，经治疗后患者肝脏组织中脂滴沉积和纤维化程度降低。
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