JP6316501B2 - アッカーマンシア・ムシニフィラ菌に由来する細胞外小胞を有効成分として含有する代謝疾患の治療または予防用の組成物 - Google Patents
アッカーマンシア・ムシニフィラ菌に由来する細胞外小胞を有効成分として含有する代謝疾患の治療または予防用の組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6316501B2 JP6316501B2 JP2017514237A JP2017514237A JP6316501B2 JP 6316501 B2 JP6316501 B2 JP 6316501B2 JP 2017514237 A JP2017514237 A JP 2017514237A JP 2017514237 A JP2017514237 A JP 2017514237A JP 6316501 B2 JP6316501 B2 JP 6316501B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- extracellular vesicles
- derived
- akkermansia
- composition
- extracellular
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 title claims description 36
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 25
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 title claims description 9
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title claims description 8
- 241000702462 Akkermansia muciniphila Species 0.000 claims description 47
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 27
- 208000016097 disease of metabolism Diseases 0.000 claims description 24
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 23
- 241000702460 Akkermansia Species 0.000 claims description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 19
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 18
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 claims description 17
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 claims description 17
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 11
- 235000021107 fermented food Nutrition 0.000 claims description 6
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 35
- 102100036009 5'-AMP-activated protein kinase catalytic subunit alpha-2 Human genes 0.000 description 26
- 101000783681 Homo sapiens 5'-AMP-activated protein kinase catalytic subunit alpha-2 Proteins 0.000 description 26
- 235000009200 high fat diet Nutrition 0.000 description 24
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 21
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 18
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 18
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 17
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 17
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 17
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 14
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 13
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 12
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 11
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 9
- XZWYZXLIPXDOLR-UHFFFAOYSA-N metformin Chemical compound CN(C)C(=N)NC(N)=N XZWYZXLIPXDOLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229960003105 metformin Drugs 0.000 description 9
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 8
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 8
- 210000000107 myocyte Anatomy 0.000 description 8
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- 208000031226 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 6
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 6
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 6
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 6
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 5
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 5
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 5
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 5
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 5
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 5
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 5
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 5
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 5
- LVTJOONKWUXEFR-FZRMHRINSA-N protoneodioscin Natural products O(C[C@@H](CC[C@]1(O)[C@H](C)[C@@H]2[C@]3(C)[C@H]([C@H]4[C@@H]([C@]5(C)C(=CC4)C[C@@H](O[C@@H]4[C@H](O[C@H]6[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O6)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]6[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O6)[C@H](CO)O4)CC5)CC3)C[C@@H]2O1)C)[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 LVTJOONKWUXEFR-FZRMHRINSA-N 0.000 description 5
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 4
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 4
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 4
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 4
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 4
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 4
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 4
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 4
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 4
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000013218 HFD mouse model Methods 0.000 description 3
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 3
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 3
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 235000021590 normal diet Nutrition 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010011376 AMP-Activated Protein Kinases Proteins 0.000 description 2
- 102000014156 AMP-Activated Protein Kinases Human genes 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 2
- 230000019439 energy homeostasis Effects 0.000 description 2
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 2
- 238000000703 high-speed centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 230000008558 metabolic pathway by substance Effects 0.000 description 2
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004278 EU approved seasoning Substances 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000018711 Facilitative Glucose Transport Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010027279 Facilitative Glucose Transport Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 102000003746 Insulin Receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010001127 Insulin Receptor Proteins 0.000 description 1
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 description 1
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 208000034189 Sclerosis Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- RFATXFFJHVRRPA-GRFIIANRSA-N [2-[2-[3-[[(2R)-4-[[[(2R,3S,4R,5R)-5-(6-aminopurin-9-yl)-4-hydroxy-3-phosphonooxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxy-2-hydroxy-3,3-dimethylbutanoyl]amino]propanoylamino]ethylsulfanyl]-2-oxoethyl]phosphonic acid Chemical compound P(=O)(O)(O)CC(=O)SCCNC(CCNC([C@@H](C(COP(OP(OC[C@@H]1[C@H]([C@H]([C@@H](O1)N1C=NC=2C(N)=NC=NC1=2)O)OP(=O)(O)O)(=O)O)(=O)O)(C)C)O)=O)=O RFATXFFJHVRRPA-GRFIIANRSA-N 0.000 description 1
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001668 ameliorated effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 208000031513 cyst Diseases 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000036576 dermal application Effects 0.000 description 1
- 238000013118 diabetic mouse model Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000011194 food seasoning agent Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000001997 free-flow electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 235000015203 fruit juice Nutrition 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 1
- 230000004190 glucose uptake Effects 0.000 description 1
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 235000003642 hunger Nutrition 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000011503 in vivo imaging Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 230000031146 intracellular signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 235000021109 kimchi Nutrition 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 238000010859 live-cell imaging Methods 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 238000013116 obese mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229940045870 sodium palmitate Drugs 0.000 description 1
- GGXKEBACDBNFAF-UHFFFAOYSA-M sodium;hexadecanoate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O GGXKEBACDBNFAF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000037351 starvation Effects 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/12—Antihypertensives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Description
本発明はアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）に由来する細胞外小胞（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｖｅｓｉｃｌｅｓ）を有効成分として含有する代謝疾患の治療、予防または改善用の薬学および食品組成物に関するものである。
代謝疾患（Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ）は生体内での物質代謝の障害により発生する疾患を総称する。一般的に糖質、脂質、たんぱく質、ビタミン、電解質および水分などの不均衡によって発生するようになるが、その例としては、肥満、糖尿病、高脂血症、動脈硬化症、高血圧などがある。この中でも、２型糖尿病の場合には主に成人期に現れる糖尿病として、インスリンに対する抵抗性の増加を特徴とする。インスリン受容体そのもの減少、またはその敏感度が落ちったり、細胞内のグリコーゲン合成を引き起こすセカンドメッセンジャーに問題が発生すると、インスリンに対する敏感度が落ちることになる。したがって、２型糖尿病をインスリン非依存型糖尿病と呼ばれ、糖尿の８５〜９０％を占めている。
一方、原核細胞や真核細胞は細胞外小胞を分泌して、分泌された小胞が様々な機能を行うことが最近報告された。細菌から分泌された細胞外小胞は内毒素（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ＬＰＳ）と細菌由来のたんぱく質を含有しており、炎症性疾患を誘導することが知られている。しかし、病原性細菌に由来する小胞による局所炎症反応の発生を抑制する機制についてはよく知られていない状態である。
また、ヒトや動物のいくつかの分泌物、排泄物または組織の洗浄液などで細胞外小胞が発見されたことが報告されて、組織に存在する細胞外小胞は小胞を分泌する組織の状態を反映することと知られており、疾病の診断に用いることができると報告された。
大腸には宿主細胞の数の約１０倍程度の数の腸内共生細菌が生息している。アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）菌はヒトを含めた哺乳類の腸内に共生しながら粘液を分解して生存するグラム陰性菌として糖尿や肥満と関連がある菌として知られている。また、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）菌そのものは炎症性腸炎を悪化させると知られている。最近、本発明者はアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）が細胞外小胞を分泌して、この菌に由来する細胞外小胞が炎症性腸炎を予防する効果があることを報告したことがある（Ｋａｎｇ ＣＳ ｅｔ ａｌ．Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｖｅｓｉｃｌｅｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ Ｇｕｔ ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ， ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ，ｐｒｏｔｅｃｔ ｔｈｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｄｅｘｔｒａｎ ｓｕｌｆａｔｅ ｓｏｄｉｕｍ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｏｌｉｔｉｓ．ＰＬＯＳ ＯＮＥ ２０１３）。
一方、５’ＡＭＰ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ（ＡＭＰＫ）は細胞でエネルギー恒常性に重要な役割をする酵素として、肝臓、脳、筋肉、脂肪、膵臓などに発現される。ＡＭＰＫを活性化させると、肝臓でのコレステロール、中性脂肪（ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ）の合成を抑制して、筋肉で脂肪酸の酸化、ブドウ糖の吸収を増加させ、膵臓でインスリン分泌を調節すると知られている。糖尿病の治療剤の中でインスリン抵抗性を回復させるメトホルミン（ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ）や運動などがＡＭＰＫを活性化して代謝疾患を好転させると知られている。
しかし、いまだにアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）菌そのものではなく、この菌に由来される細胞外小胞が肥満や糖尿病などの代謝疾患を軽減または治療できるという研究結果は報告されていない。
本発明者は、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）が分泌する細胞外小胞が高脂肪の食餌によって誘導される肥満と糖尿を抑制し、高脂肪の食餌が原因で発生する糖尿病の病因に重要なインスリン抵抗性を回復させて、これはＡＭＰＫの活性化を通じて起こることができることを発見し、本発明を完成することになった。
したがって、本発明はアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）に由来する細胞外小胞を用いて、肥満、糖尿病、高脂血症、高血圧などの代謝疾患の治療または予防用の薬学および食品組成物を提供することを目的とする。
上記のような課題を解決するために、本発明はアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）菌に由来する細胞外小胞を有効成分として含有する、代謝疾患の治療または予防用の薬学組成物を提供する。
また、本発明は、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）菌に由来する細胞外小胞を含有する、代謝疾患の予防または改善用の食品組成物を提供する。
また、本発明はアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）菌に由来する細胞外小胞を個体に投与する段階を含む、代謝疾患の予防または治療方法を提供する。
また、本発明は、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）菌に由来する細胞外小胞を代謝疾患の予防または治療に用いる用途を提供する。
本発明の一実施例として、上記の細胞外小胞はアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）菌で自然的または人工的に分泌されるものを特徴とする。
本発明の他の実施例として、上記の細胞外小胞は平均直径が２０〜３００ｎｍであり、望ましくは５０〜２００ｎｍであることを特徴とする。
本発明の他の実施例として、上記の代謝疾患は肥満、糖尿病、高脂血症、および高血圧からなる群より選ばれることを特徴とする。
本発明の他の実施例として、上記の食品はアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）菌を添加して発酵させた発酵食品であることを特徴とする。
本発明のアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）に由来する細胞外小胞を有効成分として含有する薬学組成物は、高脂肪の食餌によって誘導される肥満、糖尿病、高脂血症および高血圧などの代謝疾患を治療および予防することできる。
また、本発明のアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）に由来する細胞外小胞を含有する発酵食品の組成物は、高脂肪の食餌によって誘導される肥満、糖尿病、高脂血症および高血圧などの代謝疾患を予防及び改善することができる。
本発明は腸内の細菌、特にアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）に由来する細胞外小胞を有効成分として含有する、代謝疾患の治療または改善用の薬学・食品組成物に関するものである。
本発明者は高脂肪の食餌により誘導された代謝疾患のマウスモデルで、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）に由来する細胞外小胞を胃腸に投与した時に、肥満が抑制されて、脂肪酸によるインスリン抵抗性が回復されると同時に糖尿病の表現型が抑制されて、免疫機能が向上されることを確認した。
また、本発明者はアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）細菌そのものとアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞のたんぱく質発現様相が相違することを確認した。
また、本発明者はアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）細菌そのものとアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞の体内吸収様相を比較した結果、細胞外小胞の体内吸収がはるかに優れていることを知ることができた。
また、本発明者は筋肉細胞にアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞を投与した時、ＡＭＰＫ活性化により筋肉細胞でのブドウ糖の吸収受容体（ＧＬＵＴ４）の発現が促進されて、結局ブドウ糖の吸収が増加されることを確認した。
本明細書で「代謝疾患（Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ）」とは、生体内での物質代謝障害により発生する疾患を総称する。一般的に糖質、脂質、たんぱく質、ビタミン、電解質および水分などの不均衡により発生するようになるが、代表的な例としては高脂肪の食餌により発生する肥満、糖尿病、高脂血症、動脈硬化症などがある。
本明細書で「代謝疾患の治療または予防」とは、代謝疾患の軽減、緩和および症状の改善を含め、また代謝疾患にかかる可能性を低くすることを含む意味である。
本明細書で「アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）に由来する細胞外小胞」とは、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）の培養液から分離されたり、またはアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）で発酵させた食品から分離されることができる。上記の細菌培養液または上記の細菌添加発酵食品で上記の細胞外小胞を分離する方法は細胞外小胞を含むことであれば特に制限されなく、例えば、細菌培養液や発酵食品で、遠心分離、超高速遠心分離、フィルターによるろ過、ゲルろ過クロマトグラフィー、フリーフロー電気泳動、毛細管電気泳動、ポリマーを用いた分離などの方法およびこれらの組み合わせを用いて細胞外小胞を分離することができる。また、不純物の除去のための洗浄、収得された細胞外小胞の濃縮などの過程をさらに含むことができる。
上記の細胞外小胞は自然的に分泌されたものであったり、あるいは人工的に分泌された細胞外小胞を含む。
上記の方法により分離された細胞外小胞は平均直径が２０〜３００ｎｍであることができるが、望ましくは３０〜２００ｎｍである。
本発明の一実施例によれば、上記の代謝疾患の治療または予防用の組成物は薬学的組成物で製造することができる。治療および予防に用いるために本発明の細胞外小胞そのものを投与することができるが、薬学的組成物の活性成分として、上記の細胞外小胞が含まれることが好ましい。
上記の薬学的組成物は、上記の分離された細胞外小胞を有効成分として含有して薬学的に許容できる担体を含むことができる。上記の薬学的に許容できる担体は製剤の際に通常的に用いられるものであり、食塩水、滅菌水、リンゲル液、緩衝食塩水、シクロデキストリン、デキストロース溶液、マルトデキストリン溶液、グリセロール、エタノール、リポソームなどを含むが、これに限定されなく、必要に応じて抗酸化剤、緩衝液など他の通常の添加剤をさらに含むことができる。また、希釈剤、分散剤、界面活性剤、結合剤、潤滑剤などを付加的に添加して、水溶液、懸濁液、乳濁液などのような注射用の剤形、丸剤、カプセル、顆粒または錠剤に製剤化することができる。適合な薬学的に許容される担体および製剤化に関しては、レミントンの文献（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ‘ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ ＰＡ）に開示されている方法を用いて、各成分に基づいて、好ましく製剤化することができる。本発明の薬学的組成物は、剤形に特別な制限はないが、注射剤、吸入剤、皮膚外用剤などに製剤化することができる。
本発明の薬学的組成物の投与方法は特別に制限されるものではないが、目的とする方法により静脈内、皮下、腹腔内、吸入、皮膚塗布または局所適用のように非経口投与したり、経口投与することができる。
投与量は患者の体重、年齢、性別、健康状態、食餌、投与時間、投与方法、排泄率および疾患の重症度によりその範囲が様々である。一日投与量は治療を必要とする個体に投与されることにより軽減された疾病の状態に対して治療に十分な、本発明の治療用の物質の量を意味する。治療用の物質の効果的な量は特定化合物、疾病の状態およびその深刻さ、治療を必要とする個体により異なり、これは同業者により通常的に決定されることができる。非制限的な例として、本発明による組成物の人体に対する投与量は患者の年齢、体重、性別、投与の形態、健康状態および病気の程度によって異なる場合があり、体重が７０ｋｇの成人患者を基準にする時、一般的には０．０１〜１０００ｍｇ／日、好ましくは１〜５００ｍｇ／日であり、一定時間の間で１日１回ないし数回に分割投与することもできる。
本発明の一実施例によれば、上記の代謝疾患の予防または改善用の組成物は食品組成物で製造されることができる。本発明の組成物が食品組成物で製造される場合、有効成分として上記の細胞外小胞を含有するだけでなく、食品製造の際に通常的に添加される成分を含めて、例えば、たんぱく質、炭水化物、脂肪、栄養素、調味剤および香味剤を含むことができる。例えば、本発明の食品組成物がドリンク剤に製造される場合には、本発明の細胞外小胞以外に、クエン酸、液状果糖、砂糖、ブドウ糖、酢酸、リンゴ酸、果汁などをさらに含むことができる。
本発明の組成物が食品組成物で製造される場合、キムチのような発酵食品そのものを用いることができる。
以下、本発明の理解を助けるために実施例を提示する。しかし、下記の実施例は本発明をより解りやすくするために提供されているものだけであり、実施例により本発明の内容が限定されることではない。
実施例１．アッカーマンシア・ムシニフィラ培養液から細胞外小胞の分離
アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ、ＡＴＣＣＢＡＡ−８３５）菌株を滅菌された（ａｕｔｏｃｌａｖｅｄ）Ｂｒａｉｎ ｈｅａｒｔ ｉｎｆｕｓｉｏｎ ｂｒｏｔｈ（ＢＤ２３７５００）２Ｌで７２時間の間、Ｏ．Ｄ １．５になるように嫌気性チャンバーで培養した後、培養液を２０分間高速遠心分離（１０，０００×ｇ）し、菌の沈殿ペレットを除いた上澄み液を得た。上澄み液は０．４５μｍフィルターと０．２２μｍフィルターでろ過を行い、Ｑｕｉｘｓｔａｎｄ ｂｅｎｃｈｔｏｐ ｓｙｓｔｅｍを用いて約１４倍程度濃縮した培養液を得た。この培養液をさらに１５０，０００×ｇ、４℃で２時間の間、超高速遠心分離を行って、ペレットを得た後、滅菌生理食塩水（ＰＢＳ）で溶かしてタンパク質定量した。
実施例２．細胞外小胞の特性分析
上記の実施例１の方法で獲得したのがアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞であるかを確認するために、タンパク質定量により５０μｇ／ｍｌのサンプルを得た後、ＪＥＭ１０１１電子顕微鏡（Ｊｅｏｌ、Ｊａｐａｎ）で観察した。その結果、図１に示したように、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞が球形であることを確認することができた。
また、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）から分離した細胞外小胞の大きさを光散乱法（ｄｙｎａｍｉｃ ｌｉｇｈｔ ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ、ＤＬＳ）で確認するために、５０μｇ／ｍｌのサンプルをｚｅｔａｓｉｚｅｒ ｎａｎｏ ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｋ、ＵＫ）を通じて確認した。その結果、図２に示したように、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞の平均直径が２０〜３００ｎｍの範囲であることが分かった。
また、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）から分離した細胞外小胞のタンパク質パタンを確認するために、１０ｕｇ／ｍｌのサンプルをＳＤＳ−ＰＡＧＥを通じて確認した。その結果、図３に示したように、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞（ＥＶ）のタンパク質発現様相がアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）細菌（Ｂａｃｔｅｒｉａ）タンパク質発現と異なることを知ることができた。
また、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）から分離した細胞外小胞の抗炎症の効果を評価するために、マクロファージにＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）を処理する前に細胞外小胞（１ｕｇ／ｍｌ）を前処理した後、ＥＬＩＳＡを通じて分泌される炎症性サイトカインを測定した。その結果、図４に示したように、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞をマクロファージに前処理するとＬＰＳにより誘導されるＩＬ−６の分泌量が減少することが分かった。
実施例３．高脂肪食餌で誘導された肥満および糖尿病マウスでのアッカーマンシア・ムシニフィラ由来の細胞外小胞の治療効果
上記の実施例１から得られたアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞が高脂肪食餌により誘導された肥満と糖尿病を抑制するかを確認するために、次のような方法で実験を行った。
正常食餌（Ｒｅｇｕｌａｒ ｄｉｅｔ；ＲＤ）を２カ月間与えられた正常マウスと、高脂肪食餌（Ｈｉｇｈ ｆａｔ ｄｉｅｔ；ＨＦＤ）を２カ月間与えられた肥満および糖尿病を誘導したマウスモデルに、実施例１から得られた細胞外小胞をマウス当たり１０ｕｇずつ３週間二日の間隔で投与した（図５参考）。この際に、対照群（ｎａｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ）では正常食餌のみを与えられた正常マウスと正常食餌および細胞外小胞を投与したマウスグループを用いた。
二日の間隔で細胞外小胞を投与すると同時に体重を測定した結果、図６に示したように、高脂肪食餌のみを与えられたマウスグループ（ＨＦＤ）に比べて、細胞外小胞を投与した高脂肪食餌マウスグループ（ＨＦＤ＿Ａｋｋ ＥＶ）は３週間の間体重の増加が表れないことを確認した。
また、細胞外小胞の投与が終わった後、６時間の間飢えさせた後、空腹時の血糖を測定した結果、図７に示したように、細胞外小胞を投与した高脂肪食餌マウスグループ（ＨＦＤ＋Ａｋｋ ＥＶ）の血糖が高脂肪食餌のみを与えられたマウスグループ（ＨＦＤ−Ａｋｋ ＥＶ）に比べて減少されていることを確認した。
また、細胞外小胞の投与が終わってから２４時間の後、マウスの心臓から採取した血液でインスリンの濃度を測定した結果、図８に示したように、細胞外小胞を投与した高脂肪食餌マウスグループ（ＨＦＤ＋Ａｋｋ ＥＶ）が高脂肪食餌のみを与えられたマウスグループ（ＨＦＤ−Ａｋｋ ＥＶ）に比べてインスリン濃度がより増加されていることを確認した。
上記の結果からアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）に由来した細胞外小胞が高脂肪食餌により誘導された肥満および糖尿を治療するのに効果があることを知ることができる。
実施例４．免疫機能の調節効果
上記の実施例１から得られたアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞が免疫機能でも影響を及ぶかを確認するために、次のような方法で実験を行った。
上記の実施例３と同じ方法で細胞外小胞の投与を終了した後、２４時間の後にマウス血液を採取すると同時に脾臓を一緒に採取した。採取した各マウスグループの脾臓は１００μｍと４０μｍのｃｅｌｌ ｓｔｒａｉｎｅｒを用いて組織にある免疫細胞を抽出した。抽出物を４００×ｇ、５分間遠心分離して、細胞の数を数えてｗｅｌｌ当たり５×１０５ｃｅｌｌを細胞培養プレート（ｐｌａｔｅ）に入れた後、Ｔ細胞のｃｏ−ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ｍｏｌｅｃｕｌｅを刺激（サイトカイン分泌刺激）するａｎｔｉ−ＣＤ３およびａｎｔｉ−ＣＤ２８をそれぞれ１ｕｇ／ｍＬ、０．５ｕｇ／ｍＬを入れて、４８時間の間、培養した。
培養が終わった後、各グループの間の炎症性サイトカイン（ｃｙｔｏｋｉｎｅ）分泌の差を確認するために、細胞培養プレートで各グループの上澄み液を収めて４００×ｇ、５分間遠心分離で上澄み液に存在する細胞を除去して、再びその上澄み液のみを収めた。収めた上澄み液はＥＬＩＳＡでＩＦＮ−γとＩＬ−１７の濃度を確認した結果、図９に示したように、高脂肪食餌のみを投与したマウスグループ（ＨＦＤ−Ａｋｋ ＥＶ）では増加したＩＦＮ−γとＩＬ−１７の濃度が、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞と一緒に投与した高脂肪食餌マウスグループ（ＨＦＤ＋Ａｋｋ ＥＶ）では減少されたことを確認した。
肥満および糖尿は炎症と関連があるため、ＩＦＮ−γとＩＬ−１７のような炎症性サイトカインが減少されたことは肥満および糖尿の治療に免疫機能を好転させ、効果を表すことを意味することである。
実施例５．インスリン抵抗性によるシグナル伝達の抑制に及ぶ影響
上記の実施例１から得られたアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞がインスリン抵抗性を回復させるかを確認するために次のような方法で実験を行った。
Ｉｎ ｖｉｔｒｏでインスリン抵抗性を実現するために、マウス由来の筋肉細胞（Ｃ２Ｃ１２、ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１７７２）培養液に、脂肪酸（ｓｏｄｉｕｍ ｐａｌｍｉｔａｔｅ、ＳＩＧＭＡ）１ｍＭと４％のＢＳＡ（Ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ ａｌｂｕｍｉｎ）を４８時間処理した。この後、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞を１ｕｇ／ｍｌ濃度で入れ、６時間培養して、インスリンを２ｎＭの濃度で処理して細胞内部のシグナル伝達を確認した。
インスリンを処理していない群と処理した群で、細胞内インスリンシグナル伝達で重要な指標であるｐｈｏｓｐｈｏ−Ｉｎｓｕｌｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ−１（ｐ−ＩＲＳ−１）の量の差をｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔで確認した結果、図１０に示したように、細胞外小胞が処理された群でｐ−ＩＲＳ−１が示されたことから、インスリン抵抗性により阻害された細胞内シグナル伝達が回復されたことが分かった。
上記の結果はアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞が高脂肪酸によって筋肉細胞で誘導されたインスリン抵抗性、すなわち、インスリンによる細胞内シグナル伝達が阻害されたことを回復させてくれる役割をすることができることを意味する。
実施例６．細菌および細菌由来の細胞外小胞の体内吸収、分布、排泄の様相
アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）細菌とアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞が胃腸管を介して全身的に吸収されるかを比較評価するために次のような方法で実験を行った。
まず、対照群ではＰＢＳを用いており、それぞれ蛍光で表示した５０ｕｇのアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）細菌とアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞をマウスの胃腸管に投与して、０分、５分、３時間、６時間、１２時間後に蛍光発光映像装置（ＩＶＩＳ；Ｉｎ Ｖｉｖｏ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ）を用いて蛍光を測定した。その結果、図１１に示したように、細菌の場合には全身的に吸収されていないが、細菌由来の細胞外小胞の場合には投与した後、５分で全身的に吸収されて、投与の後３時間目では膀胱に蛍光が濃く観察されて細胞外小胞が泌尿器に排泄されることを知ることができたし、投与の後１２時間までも体内に存在することを知ることができた。
また、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞が全身的に吸収された後、様々な臓器に浸潤された様相を確認するために、蛍光で表示された５０μｇの細胞外小胞をマウス胃腸管に投与して、１２時間後に血液、心臓、肺、肝臓、腎臓、脾臓、脂肪、筋肉を採取した。採取した組織でＩＶＩＳ方法で蛍光を観察した結果、図１２に示したように、細胞外小胞が胃腸管に投与されてから１２時間目に血液および上記のすべての臓器に分布されることを知ることができたが、細菌そのものの蛍光は観察されなかった。
また、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞が腸内防御壁を透過するかを確認するために、マウスの大腸に１０ｕｇのアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）細菌とアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞をそれぞれ１０分間投与した。この後、大腸を分離して免疫組織化学法（ＩＨＣ；ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）で確認した結果、図１３に示したように、細菌である場合には腸内防御壁を通過しなかったが、細胞外小胞の場合には腸内防御壁に通過して組織に吸収されることが分かった。
また、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞が腸内防御壁を透過して毛細血管に吸収されるかを確認するために、マウスの大腸に蛍光で表示した１０μｇの細胞外小胞を注入した。この後、Ｌｉｖｅ ｉｍａｇｉｎｇ法で大腸に位置した毛細血管を観察した結果、図１４に示したように、血管内で細胞外小胞が吸収されて移動することが分かった。
実施例７．アッカーマンシア・ムシニフィラ由来の細胞外小胞が筋肉細胞でＡＭＰＫの活性化に及ぶ影響
ＡＭＰＫはエネルギー恒常性の維持に重要なタンパク質として知られているので、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞が筋肉細胞（ｍｙｏｃｙｔｅ）でＡＭＰＫ活性化を通じてブドウ糖の代謝に及ぶ影響を評価するために次のような方法で実験を行った。
まず、体外でアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞の処理濃度によるＡＭＰＫ活性を評価するために、筋肉細胞に細胞外小胞を０、０．１、１、１０ｕｇ／ｍｌの濃度で１時間処理した。この後、ＡＭＰＫシグナル伝達で重要な指標であるｐＡＭＰＫ（Ｐｈｏｓｐｈｏ−５’ＡＭＰ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ）とｐＡＣＣ（Ｐｈｏｓｐｈｏ−Ａｃｅｔｙｌ−ＣｏＡ Ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ）の発現量の差をｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔで測定した結果、図１５に示したように、細胞外小胞の処理濃度によりｐＡＭＰＫおよびｐＡＣＣの発現が増加したため、細胞外小胞が濃度に依存的でＡＭＰＫを活性化することが分かった。
また、体外でアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞の処理時間によるＡＭＰＫ活性を評価するために、筋肉細胞に細胞外小胞を１０ｕｇ／ｍｌの濃度で０、１０、２０、３０、６０分処理した。この後、ＡＭＰＫシグナル伝達で重要な指標であるｐＡＭＰＫとｐＡＣＣの発現様相をｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔで測定した結果、図１６に示したように、ｐＡＭＰＫとｐＡＣＣの発現様相が細胞外小胞の処理の１０分後に増加し始めて６０分間持続されることが分かった。
一方、上記のアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）以外の菌で由来された細胞外小胞がＡＭＰＫ活性に及ぶ効果をさらに比較するために、筋肉細胞にＥ．ｃｏｌｉ由来の細胞外小胞を１０ｕｇ／ｍｌの濃度で処理した。この後、ＡＭＰＫシグナル伝達で重要な指標であるｐＡＭＰＫとｐＡＣＣの発現量をｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔで測定した結果、図１７に示したように、ｐＡＭＰＫとｐＡＣＣの発現量が著しく減少したため、ＡＭＰＫシグナル伝達が阻害されたことを知ることができた。逆に、ＡＭＰＫのシグナル伝達はｍｅｔｆｏｒｍｉｎ（糖尿病の治療剤）により増加して、ｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｃ（ＡＭＰＫシグナル伝達の抑制剤）により減少した。
実施例８．アッカーマンシア・ムシニフィラ由来の細胞外小胞が筋肉細胞でブドウ糖の吸収に及ぶ影響
アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞が筋肉細胞（ｍｙｏｃｙｔｅ）でブドウ糖の吸収に及ぶ影響を評価するために、体外で筋肉細胞に１０ｕｇ／ｍｌのアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞を１時間処理した後、ブドウ糖の吸収量を放射性同位元素（２−［１４Ｃ］ｄｅｏｘｙｇｌｕｃｏｓｅ）で確認した。その結果、図１８に示したように、対照群（ＮＴ；Ｎｏ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）に比べて、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞（ＥＶ）により筋肉細胞でブドウ糖の吸収が増加して、これはインスリン（１０ｎｍ）やメトホルミン（ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ、５０ｍＭ）処理による増加と類似する程度であることが分かった。
また、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞が筋肉細胞（ｍｙｏｃｙｔｅ）でブドウ糖の運送たんぱく質（ＧＬＵＴ４ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ）の発現に及ぶ影響を評価するために、体外で筋肉細胞に１０ｕｇ／ｍｌのアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞を１時間処理した後、細胞膜でのＧＬＵＴ４発現程度をＯ−ＰｈｅｎｙｌｅｎｅＤｉａｍｉｎｅ（ＯＰＤ）ａｓｓａｙで測定した。その結果、図１９に示したように、対照群（ＮＴ；Ｎｏ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）に比べて、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞（ＥＶ）によりＧＬＵＴ４の発現が増加して、これはインスリン（１０ｎｍ）やメトホルミン（ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ、５０ｍＭ）処理による増加と類似する程度であることが分かった。
また、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞により増加されるブドウ糖の吸収がＡＭＰＫシグナル伝達により抑制されるかを評価するために、筋肉細胞にｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｃ（ＡＭＰＫシグナル伝達阻害剤）を前処理して、１０ｕｇ／ｍｌの細胞外小胞を１時間処理した後、ブドウ糖の吸収量を放射性同位元素（２−［１４Ｃ］ｄｅｏｘｙｇｌｕｃｏｓｅ）で測定した。その結果、図２０に示したように、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞により増加されるブドウ糖の吸収がｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｃにより減少されることがわかった。このように、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞により筋肉細胞でインスリン抵抗性が好転されることは、ＡＭＰＫシグナル伝達過程と密接な関係があることを意味することである。
上記では本発明の好ましい実施例を参考に説明したが、当該技術分野で通常の知識を有する者であれば、下記の特許請求の範囲に記載された本発明の思想および領域から逸脱しない範囲内で、本発明を多様に修正および変更できることを理解できるだろう。
Claims (9)
- アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）
菌に由来する細胞外小胞を有効成分として含有する、代謝疾患の治療または予防用の薬学
組成物であって、
上記の代謝疾患は、肥満および糖尿病からなる群より選ばれることを特徴とする、薬学組成物。 - 上記の細胞外小胞はアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃ
ｉｎｉｐｈｉｌａ）菌で自然的または人工的に分泌されるものを特徴とする、請求項１に
記載の代謝疾患の治療または予防用の薬学組成物。 - 上記の細胞外小胞は平均直径が２０〜３００ｎｍであることを特徴とする、請求項１に記
載の代謝疾患の治療または予防用の薬学組成物。 - アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）
菌に由来する細胞外小胞を含有する、代謝疾患の予防または改善用の食品組成物であって、
上記の代謝疾患は、肥満および糖尿病からなる群より選ばれることを特徴とする、食品組成物。 - 上記の細胞外小胞はアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃ
ｉｎｉｐｈｉｌａ）菌で自然的または人工的に分泌されることを特徴とする、請求項４に
記載の代謝疾患の予防または改善用の食品組成物。 - 上記の細胞外小胞は平均直径２０〜３００ｎｍであることを特徴とする、請求項４に記載
の代謝疾患の予防または改善用の食品組成物。 - 上記の食品は、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎ
ｉｐｈｉｌａ）菌を添加して発酵させた発酵食品であることを特徴とする、請求項４に記
載の代謝疾患の予防または改善用の食品組成物。 - 請求項１の組成物を個体（ただし、人間を除く。）に投与する段階を含む代謝疾患の治療方法。
- 代謝疾患の治療用途の請求項１の組成物。
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR20140060409 | 2014-05-20 | ||
| KR10-2014-0060409 | 2014-05-20 | ||
| KR10-2015-0068864 | 2015-05-18 | ||
| KR1020150068864A KR101740893B1 (ko) | 2014-05-20 | 2015-05-18 | Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ 균에서 유래하는 세포밖 소포를 유효성분으로 함유하는 대사질환의 치료 또는 예방용 조성물 |
| PCT/KR2015/004983 WO2015178653A1 (ko) | 2014-05-20 | 2015-05-19 | Akkermansia muciniphila 균에서 유래하는 세포밖 소포를 유효성분으로 함유하는 대사질환의 치료 또는 예방용 조성물 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2017517569A JP2017517569A (ja) | 2017-06-29 |
| JP6316501B2 true JP6316501B2 (ja) | 2018-04-25 |
Family
ID=54868062
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2017514237A Active JP6316501B2 (ja) | 2014-05-20 | 2015-05-19 | アッカーマンシア・ムシニフィラ菌に由来する細胞外小胞を有効成分として含有する代謝疾患の治療または予防用の組成物 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20170087195A1 (ja) |
| EP (1) | EP3165227B2 (ja) |
| JP (1) | JP6316501B2 (ja) |
| KR (1) | KR101740893B1 (ja) |
| CN (1) | CN106535907A (ja) |
| AU (1) | AU2015262214B2 (ja) |
| CA (1) | CA2949644C (ja) |
Families Citing this family (37)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101740893B1 (ko) * | 2014-05-20 | 2017-06-13 | 주식회사 엠디헬스케어 | Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ 균에서 유래하는 세포밖 소포를 유효성분으로 함유하는 대사질환의 치료 또는 예방용 조성물 |
| DK3292135T3 (da) * | 2015-05-06 | 2022-10-31 | Univ Wageningen | Anvendelse af et polypeptid til at fremkalde immunsignalering og/eller påvirke tarmbarrierefunktion og/eller modulere metabolsk status |
| KR20170103140A (ko) * | 2016-03-03 | 2017-09-13 | 주식회사 엠디헬스케어 | 아커만시아 뮤시니필라균 유래 나노소포 및 이의 용도 |
| KR101923969B1 (ko) * | 2016-07-08 | 2018-11-30 | 주식회사 엠디헬스케어 | 프로피오니박테리움 속 세균 유래 나노소포 및 이의 용도 |
| WO2018008895A1 (ko) * | 2016-07-08 | 2018-01-11 | 주식회사 엠디헬스케어 | 프로피오니박테리움 속 세균 유래 나노소포 및 이의 용도 |
| EP3483256A4 (en) * | 2016-07-11 | 2019-12-04 | Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology | AKKERMANSIA MUCINIPHILA TRIBE WITH EFFECT FOR PREVENTING OR TREATING DEGENERATIVE BRAIN DISEASES OR METABOLIC DISEASES AND USE THEREOF |
| KR102085787B1 (ko) * | 2016-08-12 | 2020-03-06 | 주식회사 엠디헬스케어 | 바실러스 속 세균 유래 나노소포 및 이의 용도 |
| KR101903592B1 (ko) | 2016-12-08 | 2018-10-04 | 고려대학교 산학협력단 | 신규한 α1-아드레날린 수용체 효능제 |
| KR102011375B1 (ko) * | 2017-06-30 | 2019-08-16 | 주식회사 엠디헬스케어 | 프로테우스 속 세균 유래 나노소포 및 이의 용도 |
| AU2018330322A1 (en) | 2017-09-08 | 2020-03-19 | Evelo Biosciences, Inc. | Bacterial extracellular vesicles |
| KR20200053532A (ko) * | 2017-09-08 | 2020-05-18 | 에벨로 바이오사이언시즈, 인크. | 프레보텔라로부터의 세포외 소포 |
| WO2019139279A1 (ko) * | 2018-01-12 | 2019-07-18 | 주식회사 엠디헬스케어 | 모르가넬라 속 세균 유래 나노소포 및 이의 용도 |
| KR102095355B1 (ko) | 2018-01-12 | 2020-03-31 | 주식회사 엠디헬스케어 | 모르가넬라 속 세균 유래 나노소포 및 이의 용도 |
| US11771742B2 (en) | 2018-02-21 | 2023-10-03 | Md Healthcare Inc. | Nano-vesicles derived from genus cupriavidus bacteria and use thereof |
| KR102087105B1 (ko) * | 2018-02-21 | 2020-03-10 | 주식회사 엠디헬스케어 | 큐프리아비더스 속 세균 유래 나노소포 및 이의 용도 |
| KR102118198B1 (ko) * | 2018-02-28 | 2020-06-02 | 주식회사 엠디헬스케어 | 리조비움 속 세균 유래 나노소포 및 이의 용도 |
| KR102118989B1 (ko) * | 2018-03-05 | 2020-06-05 | 주식회사 엠디헬스케어 | 엔히드로박터 세균 유래 나노소포 및 이의 용도 |
| KR102225939B1 (ko) * | 2018-04-19 | 2021-03-10 | 주식회사 고바이오랩 | 신규한 Bacteroides vulgatus 균주 및 이를 유효 성분으로 하는 면역 및 대사성 질환 예방 또는 치료용 조성물 |
| WO2020071660A1 (ko) * | 2018-10-01 | 2020-04-09 | 한국생명공학연구원 | 아커만시아 뮤시니필라 균주 또는 이의 배양물을 유효성분으로 함유하는 노화방지용 조성물 |
| WO2020076136A2 (ko) | 2018-10-11 | 2020-04-16 | 서울대학교산학협력단 | 아커만시아 뮤시니필라 균주 및 이의 용도 |
| KR102197180B1 (ko) * | 2018-10-11 | 2020-12-31 | 주식회사 고바이오랩 | 아커만시아 뮤시니필라 균주 및 이를 포함하는 식욕 억제 및 대사성 질환 예방, 개선, 완화 및 치료용 조성물 |
| CN111321089B (zh) * | 2018-12-17 | 2022-03-15 | 上海究本科技有限公司 | 鼠源Akkermansia muciniphila 139菌株及其用途 |
| CN110227085A (zh) * | 2019-07-16 | 2019-09-13 | 江苏省中医院 | Akkermansia Muciniphila在制备抗抑郁药物或者保健品中的应用 |
| KR102128289B1 (ko) | 2019-08-23 | 2020-06-30 | 주식회사 엔테로바이옴 | 아커만시아 뮤시니필라 eb-amdk27 균주 및 그의 용도 |
| KR102128287B1 (ko) * | 2019-08-23 | 2020-06-30 | 주식회사 엔테로바이옴 | 아커만시아 뮤시니필라 eb-amdk19 균주 및 그의 용도 |
| KR102397916B1 (ko) * | 2019-10-01 | 2022-05-17 | (주)헬스바이옴 | 건강한 임산부 모유 유래 혐기성 인체 균주 및 이를 이용한 대사성 질환의 예방 또는 치료방법 |
| CN111450233B (zh) * | 2020-03-19 | 2021-04-13 | 中国农业大学 | 一种微生物代谢产物在缓解糖脂代谢紊乱中的应用 |
| CA3174352A1 (en) * | 2020-04-03 | 2021-10-07 | Sofia FORSSTEN | Compositions for metabolic health |
| EP4141023A1 (en) | 2020-04-24 | 2023-03-01 | Kobiolabs, Inc. | Protein variant having glp-1 inducing activity and use thereof |
| JP2022550494A (ja) | 2020-11-11 | 2022-12-02 | エンテロバイオーム インコーポレイテッド | 難培養性嫌気性微生物の高収率培養のための培地サプリメント及びそれを含む培地組成物 |
| KR102222953B1 (ko) * | 2020-11-11 | 2021-03-04 | 주식회사 엔테로바이옴 | 난배양성 혐기성 미생물의 고수율 배양을 위한 배지 보충제 및 그를 포함하는 배지 조성물 |
| KR102271821B1 (ko) * | 2020-12-18 | 2021-07-01 | 주식회사 엔테로바이옴 | 오를리스타트 및 아커만시아 뮤시니필라 eb-amdk19 균주를 포함하는 조성물 |
| CN113265359A (zh) * | 2021-05-26 | 2021-08-17 | 广西壮族自治区兽医研究所 | 一种改良的嗜黏蛋白阿克曼氏菌液体培养方法 |
| CN113322202B (zh) * | 2021-05-31 | 2022-03-01 | 君维安(武汉)生命科技有限公司 | 一种阿克曼氏菌、其培养方法及其应用 |
| TW202346570A (zh) * | 2022-05-20 | 2023-12-01 | 日商大塚製藥股份有限公司 | 屬於艾克曼氏菌(Akkermansia)屬之微生物 |
| WO2024048449A1 (ja) * | 2022-08-29 | 2024-03-07 | 株式会社ヤクルト本社 | 腸内細菌を有効成分とする抗肥満剤およびその作製方法 |
| CN116211896B (zh) * | 2022-12-02 | 2023-09-29 | 广东悦创生物科技有限公司 | 嗜黏蛋白阿克曼菌jf3在干预放射性直肠病中改善组织纤维化和修复黏膜破损的应用 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101072164B1 (ko) | 2009-05-07 | 2011-10-10 | 이화여자대학교 산학협력단 | 지모추출물을 유효성분으로 함유하는 지질대사 질환의 예방 및 치료용 조성물 |
| EP2494865A4 (en) * | 2009-09-01 | 2014-05-14 | Aeon Medix Inc | EXTRACELLULAR VESICLES OBTAINED FROM THE DARMFLORA, AND METHOD FOR SEARCHING FOR A DISEASE MODEL, VACCINE AND CANDIDATE AND DIAGNOSTIC METHOD THEREFOR |
| US9386793B2 (en) * | 2010-08-20 | 2016-07-12 | New York University | Compositions and methods for treating obesity and related disorders by characterizing and restoring mammalian bacterial microbiota |
| KR20130021920A (ko) * | 2011-08-24 | 2013-03-06 | 포항공과대학교 산학협력단 | Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ 또는 Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ａｃｉｄｉｆａｃｉｅｎｓ 유래 세포밖 소포체를 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 치료 또는 예방용 조성물 |
| IN2014DN07752A (ja) * | 2012-02-29 | 2015-05-15 | Ethicon Endo Surgery Inc | |
| US20150211053A1 (en) | 2012-08-01 | 2015-07-30 | Bgi-Shenzhen | Biomarkers for diabetes and usages thereof |
| WO2014075745A1 (en) † | 2012-11-19 | 2014-05-22 | Université Catholique de Louvain | Use of akkermansia for treating metabolic disorders |
| KR101740893B1 (ko) * | 2014-05-20 | 2017-06-13 | 주식회사 엠디헬스케어 | Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ 균에서 유래하는 세포밖 소포를 유효성분으로 함유하는 대사질환의 치료 또는 예방용 조성물 |
-
2015
- 2015-05-18 KR KR1020150068864A patent/KR101740893B1/ko active IP Right Grant
- 2015-05-19 EP EP15796520.3A patent/EP3165227B2/en active Active
- 2015-05-19 JP JP2017514237A patent/JP6316501B2/ja active Active
- 2015-05-19 US US15/312,419 patent/US20170087195A1/en not_active Abandoned
- 2015-05-19 CN CN201580025750.7A patent/CN106535907A/zh active Pending
- 2015-05-19 CA CA2949644A patent/CA2949644C/en active Active
- 2015-05-19 AU AU2015262214A patent/AU2015262214B2/en active Active
-
2020
- 2020-03-19 US US16/824,111 patent/US11291694B2/en active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20200222470A1 (en) | 2020-07-16 |
| CA2949644A1 (en) | 2015-11-26 |
| US20170087195A1 (en) | 2017-03-30 |
| CA2949644C (en) | 2019-01-15 |
| EP3165227B2 (en) | 2021-10-27 |
| KR20150133646A (ko) | 2015-11-30 |
| CN106535907A (zh) | 2017-03-22 |
| EP3165227A1 (en) | 2017-05-10 |
| US11291694B2 (en) | 2022-04-05 |
| AU2015262214A1 (en) | 2016-11-10 |
| AU2015262214B2 (en) | 2017-12-21 |
| EP3165227B1 (en) | 2019-03-13 |
| EP3165227A4 (en) | 2017-10-25 |
| KR101740893B1 (ko) | 2017-06-13 |
| JP2017517569A (ja) | 2017-06-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6316501B2 (ja) | アッカーマンシア・ムシニフィラ菌に由来する細胞外小胞を有効成分として含有する代謝疾患の治療または予防用の組成物 | |
| KR101713166B1 (ko) | 말똥진흙버섯 추출물을 포함하는 다발성 경화증 및 자가면역성 질환의 예방 및 치료용 조성물 | |
| CN110248646A (zh) | 包含吡非尼酮的缓释组合物用于治疗和逆转人脂肪性肝炎(nafld/nash)的药物用途 | |
| KR102282490B1 (ko) | 패칼리박테리움 프라우스니찌 유래 나노소포 및 이의 용도 | |
| JP4556009B2 (ja) | 抗炎症剤、アレルギー性疾患予防又は改善剤及び機能性食品 | |
| US20160067270A1 (en) | Use of ginsenoside f2 for prophylaxis and treatment of liver disease | |
| WO2015178653A1 (ko) | Akkermansia muciniphila 균에서 유래하는 세포밖 소포를 유효성분으로 함유하는 대사질환의 치료 또는 예방용 조성물 | |
| JP6913402B2 (ja) | 非アルコール性脂肪性肝炎（ｎａｓｈ）の治療と予防に適した配合剤 | |
| CN103037901B (zh) | 抑制cd36以控制肥胖和胰岛素敏感性 | |
| WO2018177376A1 (zh) | 一种治疗自身免疫病及糖尿病的病毒载体及其构建方法和应用 | |
| JP7013052B2 (ja) | エンヒドロバクター細菌由来のナノ小胞及びその用途 | |
| US20090022757A1 (en) | Method for treating photoreceptor cell degeneration | |
| JP4599480B2 (ja) | 感染免疫機能強化剤、新陳代謝機能促進剤、生体諸機能低下予防改善剤及びこれらを含有する機能食品 | |
| KR101550390B1 (ko) | 유홍초속에서 분리한 신규화합물 및 이를 유효성분으로 포함하는 당뇨병의 예방 또는 치료용 조성물 | |
| JP7441534B2 (ja) | ロドコッカス属細菌由来ナノ小胞およびその用途 | |
| CN112274535B (zh) | 亚精胺修饰巨噬细胞在免疫治疗药物开发中的应用 | |
| KR102194274B1 (ko) | 카테니박테리움 속 세균 유래 나노소포 및 이의 용도 | |
| CN104125958B (zh) | 从茑萝属分离的化合物以及作为有效成分包含该化合物的用于预防或治疗糖尿病的组合物 | |
| An et al. | Relationship and mechanism of gut microbiota and susceptibility to type 2 diabetes mellitus | |
| CN117695266A (zh) | 罗伊氏乳杆菌及其代谢产物gaba在制备预防和治疗心肌缺血/再灌注损伤药物中的应用 | |
| JP2022529095A (ja) | 糖尿病を処置するための組成物および方法 | |
| CN116350667A (zh) | 酿酒酵母在制备治疗和/或改善非酒精性脂肪肝药物中的应用 | |
| TW201716076A (zh) | 台灣冬蟲夏草在第一型糖尿病及其併發症上的醫藥用途 | |
| KR20230146170A (ko) | 마슬린산을 이용한 신장섬유화증 예방, 개선 또는 치료용 조성물 | |
| CN115381818A (zh) | 一种促进细胞自噬降解功能的方法及应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| RD01 | Notification of change of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7426 Effective date: 20170324 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20170324 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20171024 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180116 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20180309 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20180327 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6316501 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |