CN111321089B

CN111321089B - 鼠源Akkermansia muciniphila 139菌株及其用途

Info

Publication number: CN111321089B
Application number: CN201811541031.2A
Authority: CN
Inventors: 张晨虹; 翟芮
Original assignee: Shanghai Gouben Technology Co ltd
Current assignee: Shanghai Gouben Technology Co ltd
Priority date: 2018-12-17
Filing date: 2018-12-17
Publication date: 2022-03-15
Anticipated expiration: 2038-12-17
Also published as: CN111321089A

Abstract

本发明公开了一株新的鼠源阿克曼氏菌（Akkermansia muciniphila）139菌株，该菌株保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC NO.16758，保藏日期2018年11月21日。本发明还公开了该菌株的用途。本发明通过分离并鉴定，获得了Akkermansia muciniphila的一株新的菌株——鼠源Akkermansia muciniphila 139，该菌株体外发酵能够产生大量短链脂肪酸，维持宿主的肠道健康；体外发酵上清能够诱导小鼠淋巴细胞调节性T细胞的分化，增强宿主的免疫功能；另外，该菌株还能缓解肠炎，特别是DSS诱导的慢性肠炎，具有益生作用。

Description

鼠源Akkermansia muciniphila 139菌株及其用途

技术领域

本发明涉及微生物领域，特别是涉及阿克曼氏菌（Akkermansia muciniphila），更具体地说，是涉及具有益生作用的鼠源阿克曼氏菌（Akkermansia muciniphila）139菌株以及该菌株的用途。

背景技术

阿克曼氏菌（Akkermansia muciniphila）是一种能够以肠道黏膜蛋白为唯一碳源、定殖在肠道黏膜处的肠道微生物。研究显示，阿克曼氏菌在多种疾病模型（如肥胖、糖尿病、酒精肝以及心血管疾病等）中都能够起到有益的作用。同时，它的一种胞外囊泡提取物能够缓解DSS诱导的小鼠急性结肠炎，并且通过增加肠道通透性，可以增强宿主的肠屏障功能。因此，阿克曼氏菌被认为是一种有成为益生菌潜能的菌种。

目前，已经被分离鉴定并且进行了相关功能研究的阿克曼氏菌十分少。关于阿克曼氏菌功能的研究主要围绕标准菌株阿克曼氏菌ATCC BAA-835，该菌株分离自一位成年健康女性的粪便。目前关于Akkermansia muciniphila ATCC BAA-835的研究主要围绕其对小鼠肥胖及糖尿病的缓解作用以及其中的机制，较少涉及到其对小鼠炎症及免疫方面的作用。同时，Akkermansia muciniphila ATCC BAA-835为一株人源菌株，不存在于小鼠原本的肠道中，因此其在小鼠体内所发挥的作用可能会与小鼠本身肠道中所定殖的阿克曼氏菌株有所差异。

发明内容

本发明要解决的技术问题之一是提供一种鼠源阿克曼氏菌（Akkermansiamuciniphila） 139菌株，它具有益生作用。

为解决上述技术问题，本发明的鼠源阿克曼氏菌（Akkermansia muciniphila）139菌株，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号（邮政编码100101），保藏编号为CGMCC NO.16758，保藏日期为2018年11月21日，分类命名为Akkermansia muciniphila。

本发明的鼠源阿克曼氏菌（Akkermansia muciniphila）139菌株具有下述生物学特征：

菌株形态：菌体大小约为0.9×0.5µm，表面光滑，呈椭圆状，无鞭毛。

本发明要解决的技术问题之二是提供上述鼠源阿克曼氏菌（Akkermansiamuciniphila）139菌株的用途。

本发明的鼠源阿克曼氏菌（Akkermansia muciniphila）139菌株的用途之一是用作肠道益生菌。该菌株体外发酵产生的大量短链脂肪酸能够参与肠上皮细胞的供能，调节肠粘膜通透性，抑制炎症反应，维持肠道的稳态和健康。

本发明的鼠源阿克曼氏菌（Akkermansia muciniphila）139菌株的用途之二是将该菌株的体外发酵上清用于促进淋巴细胞调节性T细胞的分化，提高宿主的免疫功能。

本发明的鼠源阿克曼氏菌（Akkermansia muciniphila）139菌株的用途之三是用于促进体内肠系膜淋巴结Treg细胞的分化。

本发明的鼠源阿克曼氏菌（Akkermansia muciniphila）139菌株的用途之四是用于缓解肠炎，特别是DSS诱导的慢性肠炎。

本发明的鼠源阿克曼氏菌（Akkermansia muciniphila）139菌株的用途之五是用于抑制人结肠癌细胞HT-29的炎症反应。

与现有技术相比，本发明具有以下优点和有益效果：

1.本发明提供了阿克曼氏菌（Akkermansia muciniphila）的一株新的菌株——鼠源Akkermansia muciniphila 139。

2.本发明的鼠源Akkermansia muciniphila 139菌株能够利用培养基中的底物产生大量的乙酸、丙酸和微量的丁酸，这些短链脂肪酸能够参与肠上皮细胞的供能，调节肠粘膜通透性，抑制炎症反应等，从而有助于维持宿主的肠道稳态和健康。

3.本发明的鼠源Akkermansia muciniphila 139菌株体外发酵过程中能产生短链脂肪酸，诱导小鼠淋巴细胞调节性T细胞的分化，增强宿主的免疫功能，从而提高宿主的健康水平。

4.本发明的鼠源Akkermansia muciniphila 139菌株能显著缓解DSS诱导的慢性肠炎引起的小鼠脾脏、结肠肿大现象，修复小鼠结肠粘膜损伤，减轻炎症浸润程度，下调小鼠结肠中促炎因子TNF-a、TGF-β、IFN-γ的基因表达水平，促进小鼠体内肠系膜淋巴结Treg细胞分化，从而能够缓解DSS诱导的小鼠慢性肠炎的症状。

附图说明

图1是代表菌株16S rRNA基因全长序列的进化树。

图2是Akkermansia muciniphila 139菌株在扫描电镜下的形态。

图3是Akkermansia muciniphila 139菌株分别在Mucin培养基和合成培养基中的生长曲线。

图4是Akkermansia muciniphila 139菌株在两种培养基中发酵前后体系短链脂肪酸的含量变化。其中，a图为菌株在Mucin培养基中发酵23h后，发酵上清的短链脂肪酸含量；b图为菌株在合成培养基中发酵40h后，发酵上清的短链脂肪酸含量。NC为培养基对照。***表示P<0.001，*表示P<0.05。

图5是Akkermansia muciniphila 139菌株体外发酵上清对小鼠淋巴细胞调节性T细胞分化的影响。其中，n=3，组间差异采用One-way ANOVA方法进行检验，*代表P<0.05，**代表P<0.01，***代表P<0.001。

图6是3% DSS诱导的慢性肠炎模型动物实验设计。

图7是Akkermansia muciniphila 139菌株对DSS诱导的慢性肠炎小鼠表型指标的影响。其中，a图为体重随时间的变化率，b图为灌喂第46天、56天的脾脏重量（相对于体重），c图为灌喂第46天、56天的结肠重量与长度的比值，d图为灌喂第46天、56天的结肠末端组织学评分，e图为灌喂第46天、56天的结肠末端HE染色切片（比例尺：100µm）。n=5，组间差异采用One-way ANOVA方法进行检验，* 代表P<0.05，**代表P<0.01，****代表P<0.0001。

图8是Akkermansia muciniphila 139菌株对结肠炎症因子相关基因表达的影响。其中，a图为灌喂46天时TNF-a mRNA的相对表达量，b图为灌喂46天时TGF-βmRNA的相对表达量，c图为灌喂56天时IFN-γ mRNA的相对表达量。n=5，组间差异采用One-way ANOVA方法进行检验，*代表P<0.05。

图9是Akkermansia muciniphila 139菌株对小鼠肠系膜淋巴结CD4+FoxP3+Treg细胞分化的影响。其中，n=5，组间差异采用One-way ANOVA方法进行检验，*代表P<0.05。

图10是Akkermansia muciniphila 139菌株发酵上清对炎症HT-29细胞IL-8的影响。其中，a图使用的是mucin培养基中培养的Akkermansia muciniphila 139发酵上清，b图使用的是合成培养基中培养的Akkermansia muciniphila 139发酵上清。**表示P <0.01，***表示P <0.001。

具体实施方式

为对本发明的技术内容、特点与功效有更具体的了解，现结合附图及具体实施例，对本发明的技术方案做进一步详细的说明。

实施例1 Akkermansia muciniphila 139菌株的分离鉴定

选取新鲜的无特定病原菌（Specific pathogen free，SPF）级雄性C57/BL6小鼠粪便，进行10-3～10-13梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到培养基的表面，进行培养。选择菌落生长较多且清晰的平板，将所有菌落使用Akkermansia muciniphila种特异性引物进行PCR鉴定。将表现为阳性的菌落进行三次划线纯化，最后使用变性梯度凝胶电泳（DGGE）、ERIC指纹图谱以及16S rRNA基因全长进行Sanger测序鉴定。

其中，Akkermansia muciniphila种特异性引物的序列如下：

AM1: 5’-CAGCACGTGAAGGTGGGGAC-3’ （SEQ ID NO:1）

AM2: 5’-CCTTGCGGTTGGCTTCAGAT-3’ （SEQ ID NO:2）

25µL PCR反应体系为：10×缓冲液2.5µL、25mM Mg2+ 2µL、2.5mM dNTP 2µL、引物AM1 1µL、引物AM2 1µL、TaKaRa Taq酶0.3µL、DNA模板20ng，加ddH2O至总体积25µL。

PCR反应条件为：95℃预变性5min；95℃ 15s，60℃ 40s，72℃ 30s，共40个循环；72℃延伸5min。

培养基配方如表1所示，菌株的分离使用Mucin培养基，后期培养使用两种培养基，一种为Mucin培养基，另一种为合成培养基。该菌株的分离以及培养均在厌氧工作站（美国，Don Whitley Scientific）中进行，气体组成为80% N2、10% CO2、10% H2，温度为37℃。

表1 培养基配方 (1L)

培养得到的菌株的16S rRNA基因全长核酸序列（SEQ ID NO:3）如下：

AACGAACGCTGGCGGCGTGGATAAGACATGCAAGTCGAACGAGAGAATTGCTAGCTTGCTAATAATTCTCTAGTGGCGCACGGGTGAGTAACACGTGAGTAACCTGCCCCCGAGAGCGGGATAGCCCTGGGAAACTGGGATTAATACCGCATAGTATCGAAAGATTAAAGCAGCAATGCGCTTGGGGATGGGCTCGCGGCCTATTAGTTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGATGACGGGTAGCCGGTCTGAGAGGATGTCCGGCCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACACCTACGGGTGGCAGCAGTCGAGAATCATTCACAATGGGGGAAACCCTGATGGTGCGACGCCGCGTGGGGGAATGAAGGTCTTCGGATTGTAAACCCCTGTCATGTGGGAGCAAATTAAAAAGATAGTACCACAAGAGGAAGAGACGGCTAACTCTGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACAGAGGTCTCAAGCGTTGTTCGGAATCACTGGGCGTAAAGCGTGCGTAGGCTGTTTCGTAAGTCGTGTGTGAAAGGCGCGGGCTCAACCCGCGGACGGCACATGATACTGCGAGACTAGAGTAATGGAGGGGGAATCGGAATTCTCGGTGTAGCAGTGAAATGCGTAGATATCGAGAGGAACACTCGTGGCGAAGGCGGGTTCCTGGACATTAACTGACGCTGAGGCACGAAGGCCAGGGGAGCGAAAGGGATTAGATACCCCTGTAGTCCTGGCAGTAAACGGTGCACGCTTGGTGTGCGGGGAATCGACCCCCTGCGTGCCGGAGCTAACGCGTTAAGCGTGCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGATTAAAACTCAAAGAAATTGACGGGGACCCGCACAAGCGGTGGAGTATGTGGCTTAATTCGATGCAACGCGATGAACCTTACCTGGGCTTGACATGTAATGAACAACATGTGAAAGCATGCGACTCTTCGGAGGCGTTACACAGGTGCTGCATGGCCGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTTGGTTAAGTCCAGCAACGAGCGCAACCCCTGTTGCCAGTTACCAGCACGTGAAGGTGGGGACTCTGGCGAGACTGCCCAGATCAACTGGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAGGTCAGTATGGCCCTTATGCCCAGGGCTGCACACGTACTACAATGCCCAGTACAGAGGGGGCCGAAGCCGCGAGGCGGAGGAAATCCTAAAAACTGGGCCCAGTTCGGACTGTAGGCTGCAACCCGCCTACACGAAGCCGGAATCGCTAGTAATGGCGCATCGGCTACGGCGCCGTGAATACGTTCCCGGGTCTTGTACACACCGCCCGTCACATCATGGAAGCCGGTCGCACCCGAAGTATCTGAAGCCAACCGCAAGGAGGCAGGGTCCTAAGGTGAGACTGGTAACTGGGATG

利用NCBI数据库对上述所得菌株的16S rRNA基因全长序列进行比对分析，并采用neighbor-joining法构建系统发育树（如图1所示）。结果显示该菌株与人源Akkermansiamuciniphila ATCC BAA-835的16S rRNA基因相似度达到99%，从系统进化树也可以看出，与该菌株相邻的菌株均属于Akkermansia muciniphila，因此，可以确定，该菌株为一株新的鼠源Akkermansia muciniphila，我们将该菌株命名为Akkermansia muciniphila 139。

实施例2 Akkermansia muciniphila 139菌株的形态与生长曲线

通过扫描电镜对上述实施例1分离得到的Akkermansia muciniphila 139菌株的形态进行观察，观察到该菌株的菌体大小约为0.9×0.5µm，表面光滑，呈椭圆状，无鞭毛，如图2所示。

测定该Akkermansia muciniphila 139菌株分别在Mucin培养基和合成培养基中的生长曲线，发酵体系为200ml，每个时间点设置3个重复，测定结果表示为平均值±标准误。生长曲线测定结果如图3所示，由图3可以看出，该菌株在Mucin培养基中生长较快，约23h到达平台期，平台期时生长量约1.58×109cfu/ml；而在合成培养基中，该菌株要生长约40h才能到达平台期，平台期时生长量约为4.2×108cfu/ml。

实施例3 Akkermansia muciniphila 139菌株体外发酵

对上述Akkermansia muciniphila 139菌株分别在Mucin培养基和合成培养基中到达平台期后的发酵上清pH值进行测定，结果显示，在这两种培养基中，Akkermansiamuciniphila 139的发酵均使得发酵上清的pH值发生显著的下降（参见表2所示）。

表2 Akkermansia muciniphila 139菌株到达平台期pH值变化

注：发酵体系为200ml，每组设有3个重复，测定结果表示为平均值±标准误。

为进一步研究pH值下降的原因，采用气相色谱（美国Agilent）测定该Akkermansiamuciniphila 139菌株分别在Mucin培养基和合成培养基中发酵至平台期时，发酵上清的短链脂肪酸含量。其中，发酵体系为200ml，每组设置3个重复，测定结果表示为平均值±标准误。两组之间的差异采用Two-tailed unpaired t test进行检验。

发酵上清短链脂肪酸含量测定结果如图4所示，由图4可以看出，该Akkermansiamuciniphila 139菌株在Mucin培养基和合成培养基这两种培养基中均能够利用培养基中的底物产生大量的乙酸、丙酸和微量的丁酸。大量研究表明，短链脂肪酸能够参与肠上皮细胞的供能、调节肠粘膜通透性、抑制炎症反应等，对维持宿主的肠道稳态和健康有着重要作用。因此，该菌株的体外发酵产物有成为益生产品的潜能。

实施例4 Akkermansia muciniphila 139菌株体外发酵上清对小鼠淋巴细胞调节性T细胞分化的影响

有研究显示，短链脂肪酸能够诱导小鼠结肠调节性T细胞的分化。调节性T细胞，即Treg细胞，是一类控制体内自身免疫反应性的CD+ T细胞亚群，其标志性分子为FoxP3转录因子。

为检测本发明的Akkermansia muciniphila 139菌株的体外发酵上清是否能够对小鼠调节性T细胞的分化产生影响，本实施例收集了正常小鼠的肠系膜淋巴结以及脾脏细胞，经过CD4+细胞分选后布板，布板密度为1×106 cells/well。实验分为4组，第1组是既未添加细胞因子、也未进行过处理的NC组，第2组是添加了细胞因子但未进行过处理的CN组，第3组是添加了细胞因子并添加未发酵合成培养基进行处理的SM组，第4组是添加了细胞因子并添加Akkermansia muciniphila 139菌株发酵上清进行处理的Akk139组，每组设有3个重复。所述细胞因子为hTGF-β和rmIL-2，这两种细胞因子可以协助诱导Treg细胞的分化。所述未发酵合成培养基和Akkermansia muciniphila 139菌株发酵上清的添加量均为10%（v/v）。处理72h后收集细胞采用CD3、CD4以及FoxP3抗体染色，并通过流式细胞仪进行检测。实验结果如图5所示，Akkermansia muciniphila 139菌株的体外发酵上清显著增加了小鼠淋巴细胞CD4+FoxP3+Treg细胞的分化，表明Akkermansia muciniphila 139菌株的发酵过程中产生的短链脂肪酸能够通过诱导淋巴细胞CD4+FoxP3+Treg细胞的分化，增强宿主的免疫功能，从而改善宿主的健康水平。

实施例5 Akkermansia muciniphila 139菌株对DSS诱导的小鼠慢性肠炎的缓解作用

本实施例使用SPF级的C57BL/6雄性小鼠（购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，饲养于上海交通大学实验动物中心SPF屏障）。

30只SPF级8周龄C57BL/6雄性小鼠随机分为3组，每组10只，2只一笼饲养。实验设计如图6所示，第一组为NC组，该组小鼠始终饮用纯水，每天灌喂200µl PBS+2.5%甘油。第二组（DSS组）和第三组（DSS+139组）的小鼠饮用含3% DSS（硫酸葡聚糖钠，Dextran SulfateNa，w/v）的水溶液，构建慢性肠炎模型。

慢性肠炎模型构建方法为：饲喂3% DSS水溶液3天、换为纯水饲喂11天，重复一次上述两个步骤即再次饲喂3% DSS水溶液3天、换为纯水饲喂11天，第三次饲喂3% DSS水溶液3天，共需31天。实验第31天开始，所有动物饮水均换为纯水。

实验过程中，DSS组每天灌喂200µl PBS+2.5%甘油，DSS+139组每天灌喂200µlAkkermansia muciniphila 139活菌菌体（2*108cfu，去除培养基重悬于PBS+2.5%甘油中）。在实验第46天和第56天对每组一半数量的动物进行解剖采样。

实验开始至灌喂31天即慢性肠炎模型构建结束，小鼠的体重变化并不显著，然而在后期恢复阶段，三组肠炎小鼠的体重相对于健康小鼠始终维持在一个较低的水平。而在灌喂第56天时，灌喂了Akkermansia muciniphila 139活菌菌体的DSS+139组的小鼠体重相对于DSS对照组小鼠有所回升（参见图7中的a图）。在灌喂第46天、第56天，分别解剖每组一半的小鼠，称量组织重量，结果显示，灌喂Akkermansia muciniphila 139活菌菌体显著地缓解了DSS诱导的慢性肠炎引起的小鼠脾脏、结肠肿大现象（参见图7中的b图、c图）。同时，参考Welz, P. S.的研究方法（Welz, P.S., et al., FADD prevents RIP3-mediatedepithelial cell necrosis and chronic intestinal inflammation. Nature, 2011.477(7364): p330-4），对小鼠的结肠末端苏木精-伊红（HE）染色切片进行组织学评分（参见图7中的d图）。结果显示慢性肠炎小鼠的结肠相对于健康小鼠存在严重的粘膜损伤、炎症浸润以及隐窝畸形等情况。而在灌喂第46天时，灌喂Akkermansia muciniphila 139活菌菌体的DSS+139组小鼠的结肠粘膜损伤、炎症浸润等的程度都要显著地低于DSS对照组小鼠（参见图7中的e图）。

提取小鼠的结肠RNA，并对炎症因子相关基因进行定量。结果如图8所示，发现灌喂46天Akkermansia muciniphila 139活菌菌体使得小鼠结肠中促炎因子TNF-a以及TGF-β的基因表达相对于DSS对照组发生了显著下调，更加接近健康小鼠水平。同时，灌喂56天Akkermansia muciniphila 139活菌菌体使得小鼠结肠中促炎因子IFN-γ的基因表达水平相对于DSS对照组也发生了显著下调。

综合以上实验结果，证实灌喂Akkermansia muciniphila 139能够促进小鼠DSS诱导的慢性肠炎生理症状的改善，缓解小鼠DSS诱导的慢性肠炎。

实施例6 Akkermansia muciniphila 139菌株对小鼠体内肠系膜淋巴结Treg细胞分化的影响

Treg细胞是一类能够缓解肠炎的免疫细胞，通过流式细胞仪检测前述灌喂46天时小鼠肠系膜淋巴结的Treg细胞数量，结果如图9所示，灌喂Akkermansia muciniphila 139活菌菌体显著诱导了小鼠体内肠系膜淋巴结CD4+FoxP3+Treg细胞的分化，进一步验证了该Akkermansia muciniphila 139菌株具有缓解小鼠DSS诱导的慢性肠炎的能力。

实施例7 Akkermansia muciniphila 139菌株发酵上清抑制人HT-29细胞的炎症反应

实验采用10ng/ml TNF-⍺刺激人结肠癌细胞HT-29的炎症反应，同时加入10%的Akkermansia muciniphila 139发酵上清或对应培养基，共培养6h后，通过检测细胞培养液中IL-8的含量反映细胞的炎症情况。

实验设置两组对照组，分别为不加TNF-⍺刺激的NC组以及只加入TNF-⍺刺激不加入其他处理的TNF-⍺组。实验结果显示（参见图10所示），mucin培养基和合成培养基培养的Akkermansia muciniphila 139发酵上清均能够显著地抑制炎症HT-29细胞中IL-8的生成，说明Akkermansia muciniphila 139发酵上清具有一定的抗炎作用。

序列表

<110> 上海交通大学

<120> 鼠源Akkermansia muciniphila 139菌株及其用途

<130> LHJ-NP-18-100081-2

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

cagcacgtga aggtggggac 20

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

ccttgcggtt ggcttcagat 20

<210> 3

<211> 1434

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

aacgaacgct ggcggcgtgg ataagacatg caagtcgaac gagagaattg ctagcttgct 60

aataattctc tagtggcgca cgggtgagta acacgtgagt aacctgcccc cgagagcggg 120

atagccctgg gaaactggga ttaataccgc atagtatcga aagattaaag cagcaatgcg 180

cttggggatg ggctcgcggc ctattagtta gttggtgagg taacggctca ccaaggcgat 240

gacgggtagc cggtctgaga ggatgtccgg ccacactgga actgagacac ggtccagaca 300

cctacgggtg gcagcagtcg agaatcattc acaatggggg aaaccctgat ggtgcgacgc 360

cgcgtggggg aatgaaggtc ttcggattgt aaacccctgt catgtgggag caaattaaaa 420

agatagtacc acaagaggaa gagacggcta actctgtgcc agcagccgcg gtaatacaga 480

ggtctcaagc gttgttcgga atcactgggc gtaaagcgtg cgtaggctgt ttcgtaagtc 540

gtgtgtgaaa ggcgcgggct caacccgcgg acggcacatg atactgcgag actagagtaa 600

tggaggggga atcggaattc tcggtgtagc agtgaaatgc gtagatatcg agaggaacac 660

tcgtggcgaa ggcgggttcc tggacattaa ctgacgctga ggcacgaagg ccaggggagc 720

gaaagggatt agatacccct gtagtcctgg cagtaaacgg tgcacgcttg gtgtgcgggg 780

aatcgacccc ctgcgtgccg gagctaacgc gttaagcgtg ccgcctgggg agtacggtcg 840

caagattaaa actcaaagaa attgacgggg acccgcacaa gcggtggagt atgtggctta 900

attcgatgca acgcgatgaa ccttacctgg gcttgacatg taatgaacaa catgtgaaag 960

catgcgactc ttcggaggcg ttacacaggt gctgcatggc cgtcgtcagc tcgtgtcgtg 1020

agatgtttgg ttaagtccag caacgagcgc aacccctgtt gccagttacc agcacgtgaa 1080

ggtggggact ctggcgagac tgcccagatc aactgggagg aaggtgggga cgacgtcagg 1140

tcagtatggc ccttatgccc agggctgcac acgtactaca atgcccagta cagagggggc 1200

cgaagccgcg aggcggagga aatcctaaaa actgggccca gttcggactg taggctgcaa 1260

cccgcctaca cgaagccgga atcgctagta atggcgcatc ggctacggcg ccgtgaatac 1320

gttcccgggt cttgtacaca ccgcccgtca catcatggaa gccggtcgca cccgaagtat 1380

ctgaagccaa ccgcaaggag gcagggtcct aaggtgagac tggtaactgg gatg 1434

Claims

1.鼠源嗜黏蛋白阿克曼氏菌（Akkermansia muciniphila）139菌株，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.16758，保藏日期为2018年11月21日。

2.权利要求1所述菌株的用途，其特征在于，用作肠道益生菌。

3.权利要求1所述菌株在制备促进淋巴细胞调节性T细胞分化的药物中的用途。

4.权利要求1所述菌株在制备促进体内肠系膜淋巴结Treg细胞分化的药物中的用途。

5.权利要求1所述菌株在制备缓解肠炎的药物中的用途。

6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述肠炎为DSS诱导的慢性肠炎。

7.权利要求1所述菌株在制备抑制人结肠癌细胞HT-29的炎症反应的药物中的用途。