KR20190016045A - 초음파 조영제의 제조 방법 - Google Patents
초음파 조영제의 제조 방법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20190016045A KR20190016045A KR1020187038022A KR20187038022A KR20190016045A KR 20190016045 A KR20190016045 A KR 20190016045A KR 1020187038022 A KR1020187038022 A KR 1020187038022A KR 20187038022 A KR20187038022 A KR 20187038022A KR 20190016045 A KR20190016045 A KR 20190016045A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- phospholipid
- stock
- aqueous solvent
- mpeg5000
- solution
- Prior art date
Links
- 239000002961 echo contrast media Substances 0.000 title claims description 92
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract description 28
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims abstract description 737
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 238
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims description 363
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 351
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 328
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 323
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 claims description 320
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 claims description 302
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 229
- KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 0.000 claims description 221
- SORGEQQSQGNZFI-UHFFFAOYSA-N [azido(phenoxy)phosphoryl]oxybenzene Chemical compound C=1C=CC=CC=1OP(=O)(N=[N+]=[N-])OC1=CC=CC=C1 SORGEQQSQGNZFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 213
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 152
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 120
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 101
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 claims description 84
- TXEYQDLBPFQVAA-UHFFFAOYSA-N tetrafluoromethane Chemical compound FC(F)(F)F TXEYQDLBPFQVAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 47
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 36
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 claims description 32
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 claims description 30
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- 238000002607 contrast-enhanced ultrasound Methods 0.000 claims description 15
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 claims description 12
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 10
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 claims description 9
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims description 4
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims description 4
- DURPTKYDGMDSBL-UHFFFAOYSA-N 1-butoxybutane Chemical compound CCCCOCCCC DURPTKYDGMDSBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 abstract description 54
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 122
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 117
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 98
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 92
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 92
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 56
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 41
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 40
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 36
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 31
- -1 DPPA lipid Chemical class 0.000 description 29
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 28
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 27
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 26
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 23
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 20
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 20
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 19
- 239000013011 aqueous formulation Substances 0.000 description 19
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 18
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 17
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 17
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 17
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 15
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 15
- 230000008569 process Effects 0.000 description 14
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 13
- TXLHNFOLHRXMAU-UHFFFAOYSA-N 2-(4-benzylphenoxy)-n,n-diethylethanamine;hydron;chloride Chemical compound Cl.C1=CC(OCCN(CC)CC)=CC=C1CC1=CC=CC=C1 TXLHNFOLHRXMAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 12
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 12
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 11
- XQKKWWCELHKGKB-UHFFFAOYSA-L calcium acetate monohydrate Chemical compound O.[Ca+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O XQKKWWCELHKGKB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 11
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000001639 calcium acetate Substances 0.000 description 10
- 235000011092 calcium acetate Nutrition 0.000 description 10
- 229960005147 calcium acetate Drugs 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- NQLVQOSNDJXLKG-UHFFFAOYSA-N prosulfocarb Chemical compound CCCN(CCC)C(=O)SCC1=CC=CC=C1 NQLVQOSNDJXLKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 9
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 9
- JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N Magnesium ion Chemical compound [Mg+2] JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 8
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000001479 atomic absorption spectroscopy Methods 0.000 description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 description 8
- QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N octafluoropropane Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 8
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 8
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 8
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 8
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 7
- 229910001425 magnesium ion Inorganic materials 0.000 description 7
- 229960004065 perflutren Drugs 0.000 description 7
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 7
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 7
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 6
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 5
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 5
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 5
- 238000001095 inductively coupled plasma mass spectrometry Methods 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 239000003225 biodiesel Substances 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 4
- 239000013557 residual solvent Substances 0.000 description 4
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 4
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 4
- 238000012285 ultrasound imaging Methods 0.000 description 4
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 3
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 3
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 3
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 3
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 3
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 3
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 3
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 3
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 3
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 2
- RBNPOMFGQQGHHO-UWTATZPHSA-N D-glyceric acid Chemical compound OC[C@@H](O)C(O)=O RBNPOMFGQQGHHO-UWTATZPHSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 2
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 2
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 2
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 2
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001045 blue dye Substances 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 2
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000012062 charged aerosol detection Methods 0.000 description 2
- AMMWFYKTZVIRFN-UHFFFAOYSA-M chembl2028442 Chemical compound [Na+].C1=CC=CC2=C(O)C(N=NC3=C4C=CC(=CC4=C(C=C3O)S([O-])(=O)=O)[N+]([O-])=O)=CC=C21 AMMWFYKTZVIRFN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 2
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LVXHNCUCBXIIPE-UHFFFAOYSA-L disodium;hydrogen phosphate;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O LVXHNCUCBXIIPE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 238000001007 flame atomic emission spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 2
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 2
- JFCQEDHGNNZCLN-UHFFFAOYSA-N glutaric acid Chemical compound OC(=O)CCCC(O)=O JFCQEDHGNNZCLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000002354 inductively-coupled plasma atomic emission spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 229960001860 salicylate Drugs 0.000 description 2
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-M salicylate Chemical compound OC1=CC=CC=C1C([O-])=O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N salicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000008362 succinate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003828 vacuum filtration Methods 0.000 description 2
- SLKDGVPOSSLUAI-PGUFJCEWSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine zwitterion Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC SLKDGVPOSSLUAI-PGUFJCEWSA-N 0.000 description 1
- 241000173529 Aconitum napellus Species 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- YFPJFKYCVYXDJK-UHFFFAOYSA-N Diphenylphosphine oxide Chemical compound C=1C=CC=CC=1[P+](=O)C1=CC=CC=C1 YFPJFKYCVYXDJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N Fe2+ Chemical compound [Fe+2] CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N Manganese Chemical compound [Mn] PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WAEMQWOKJMHJLA-UHFFFAOYSA-N Manganese(2+) Chemical compound [Mn+2] WAEMQWOKJMHJLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004695 Polyether sulfone Substances 0.000 description 1
- GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N Propylene oxide Chemical compound CC1CO1 GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910018503 SF6 Inorganic materials 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical class [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ABBQHOQBGMUPJH-UHFFFAOYSA-M Sodium salicylate Chemical compound [Na+].OC1=CC=CC=C1C([O-])=O ABBQHOQBGMUPJH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 229940023019 aconite Drugs 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical class 0.000 description 1
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 238000000429 assembly Methods 0.000 description 1
- 230000000712 assembly Effects 0.000 description 1
- 238000000559 atomic spectroscopy Methods 0.000 description 1
- XDFCIPNJCBUZJN-UHFFFAOYSA-N barium(2+) Chemical compound [Ba+2] XDFCIPNJCBUZJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-VQEHIDDOSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C[13CH]=C1 WPYMKLBDIGXBTP-VQEHIDDOSA-N 0.000 description 1
- PWOSZCQLSAMRQW-UHFFFAOYSA-N beryllium(2+) Chemical compound [Be+2] PWOSZCQLSAMRQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- WLZRMCYVCSSEQC-UHFFFAOYSA-N cadmium(2+) Chemical compound [Cd+2] WLZRMCYVCSSEQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940067460 calcium acetate monohydrate Drugs 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- SXYCCJAPZKHOLS-UHFFFAOYSA-N chembl2008674 Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C2C(N=NC3=C4C=CC=CC4=CC=C3O)=C(O)C=C(S(O)(=O)=O)C2=C1 SXYCCJAPZKHOLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- UZEDIBTVIIJELN-UHFFFAOYSA-N chromium(2+) Chemical compound [Cr+2] UZEDIBTVIIJELN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- XLJKHNWPARRRJB-UHFFFAOYSA-N cobalt(2+) Chemical compound [Co+2] XLJKHNWPARRRJB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013329 compounding Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 description 1
- ODDZENUCCGSDGC-UHFFFAOYSA-N copper;n'-[2-[2-(2-aminoethylamino)ethylamino]ethyl]ethane-1,2-diamine;gold(1+);tetracyanide Chemical compound [Cu+2].[Au+].[Au+].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].NCCNCCNCCNCCN ODDZENUCCGSDGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013016 damping Methods 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 229940061607 dibasic sodium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- SZXQTJUDPRGNJN-UHFFFAOYSA-N dipropylene glycol Chemical compound OCCCOCCCO SZXQTJUDPRGNJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- NFRFUGBXJTXTMZ-QYKZUBHNSA-L disodium;[(2r)-2,3-di(hexadecanoyloxy)propyl] phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])([O-])=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC NFRFUGBXJTXTMZ-QYKZUBHNSA-L 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- MGVUQZZTJGLWJV-UHFFFAOYSA-N europium(2+) Chemical compound [Eu+2] MGVUQZZTJGLWJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000005048 flame photometry Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- GNPVGFCGXDBREM-UHFFFAOYSA-N germanium atom Chemical compound [Ge] GNPVGFCGXDBREM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- WMIYKQLTONQJES-UHFFFAOYSA-N hexafluoroethane Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)F WMIYKQLTONQJES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007970 homogeneous dispersion Substances 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000009616 inductively coupled plasma Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 238000013383 initial experiment Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- QPRFPZGRQQKMEX-UHFFFAOYSA-N lanthanum(2+) Chemical compound [La+2] QPRFPZGRQQKMEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- RVPVRDXYQKGNMQ-UHFFFAOYSA-N lead(2+) Chemical compound [Pb+2] RVPVRDXYQKGNMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013554 lipid monolayer Substances 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000004973 liquid crystal related substance Substances 0.000 description 1
- 235000015073 liquid stocks Nutrition 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 238000012792 lyophilization process Methods 0.000 description 1
- UEGPKNKPLBYCNK-UHFFFAOYSA-L magnesium acetate Chemical compound [Mg+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O UEGPKNKPLBYCNK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000011654 magnesium acetate Substances 0.000 description 1
- 229940069446 magnesium acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000011285 magnesium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 238000009140 magnesium supplementation Methods 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011572 manganese Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 229940045641 monobasic sodium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000012454 non-polar solvent Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- MQZFZDIZKWNWFX-UHFFFAOYSA-N osmium(2+) Chemical compound [Os+2] MQZFZDIZKWNWFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N papa-hydroxy-benzoic acid Natural products OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229960004692 perflenapent Drugs 0.000 description 1
- 229960004624 perflexane Drugs 0.000 description 1
- KAVGMUDTWQVPDF-UHFFFAOYSA-N perflubutane Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F KAVGMUDTWQVPDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950003332 perflubutane Drugs 0.000 description 1
- ZJIJAJXFLBMLCK-UHFFFAOYSA-N perfluorohexane Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F ZJIJAJXFLBMLCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NJCBUSHGCBERSK-UHFFFAOYSA-N perfluoropentane Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F NJCBUSHGCBERSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- HRGDZIGMBDGFTC-UHFFFAOYSA-N platinum(2+) Chemical compound [Pt+2] HRGDZIGMBDGFTC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920006393 polyether sulfone Polymers 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 238000011045 prefiltration Methods 0.000 description 1
- 238000011085 pressure filtration Methods 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- 238000007670 refining Methods 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 1
- YAYGSLOSTXKUBW-UHFFFAOYSA-N ruthenium(2+) Chemical compound [Ru+2] YAYGSLOSTXKUBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004889 salicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000013535 sea water Substances 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M sodium benzoate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004299 sodium benzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010234 sodium benzoate Nutrition 0.000 description 1
- 229960004025 sodium salicylate Drugs 0.000 description 1
- RPACBEVZENYWOL-XFULWGLBSA-M sodium;(2r)-2-[6-(4-chlorophenoxy)hexyl]oxirane-2-carboxylate Chemical group [Na+].C=1C=C(Cl)C=CC=1OCCCCCC[C@]1(C(=O)[O-])CO1 RPACBEVZENYWOL-XFULWGLBSA-M 0.000 description 1
- 239000008234 soft water Substances 0.000 description 1
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- PWYYWQHXAPXYMF-UHFFFAOYSA-N strontium(2+) Chemical compound [Sr+2] PWYYWQHXAPXYMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- SFZCNBIFKDRMGX-UHFFFAOYSA-N sulfur hexafluoride Chemical compound FS(F)(F)(F)(F)F SFZCNBIFKDRMGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000909 sulfur hexafluoride Drugs 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- 150000004685 tetrahydrates Chemical class 0.000 description 1
- IUTCEZPPWBHGIX-UHFFFAOYSA-N tin(2+) Chemical compound [Sn+2] IUTCEZPPWBHGIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910021654 trace metal Inorganic materials 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YNIRKEZIDLCCMC-UHFFFAOYSA-K trisodium;phosphate;hydrate Chemical compound [OH-].[Na+].[Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O YNIRKEZIDLCCMC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- APTCBRLTBRHWIW-UHFFFAOYSA-N uranium(2+) Chemical compound [U+2] APTCBRLTBRHWIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005292 vacuum distillation Methods 0.000 description 1
- 229910052720 vanadium Inorganic materials 0.000 description 1
- GPPXJZIENCGNKB-UHFFFAOYSA-N vanadium Chemical compound [V]#[V] GPPXJZIENCGNKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 1
- 238000010792 warming Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/22—Echographic preparations; Ultrasound imaging preparations ; Optoacoustic imaging preparations
- A61K49/222—Echographic preparations; Ultrasound imaging preparations ; Optoacoustic imaging preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, liposomes
- A61K49/223—Microbubbles, hollow microspheres, free gas bubbles, gas microspheres
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
- A61B8/00—Diagnosis using ultrasonic, sonic or infrasonic waves
- A61B8/48—Diagnostic techniques
- A61B8/481—Diagnostic techniques involving the use of contrast agent, e.g. microbubbles introduced into the bloodstream
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/22—Echographic preparations; Ultrasound imaging preparations ; Optoacoustic imaging preparations
- A61K49/222—Echographic preparations; Ultrasound imaging preparations ; Optoacoustic imaging preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, liposomes
- A61K49/226—Solutes, emulsions, suspensions, dispersions, semi-solid forms, e.g. hydrogels
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/22—Echographic preparations; Ultrasound imaging preparations ; Optoacoustic imaging preparations
- A61K49/222—Echographic preparations; Ultrasound imaging preparations ; Optoacoustic imaging preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, liposomes
- A61K49/227—Liposomes, lipoprotein vesicles, e.g. LDL or HDL lipoproteins, micelles, e.g. phospholipidic or polymeric
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1277—Processes for preparing; Proliposomes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
- C07F9/08—Esters of oxyacids of phosphorus
- C07F9/09—Esters of phosphoric acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
- C07F9/08—Esters of oxyacids of phosphorus
- C07F9/09—Esters of phosphoric acids
- C07F9/10—Phosphatides, e.g. lecithin
- C07F9/106—Adducts, complexes, salts of phosphatides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Radiology & Medical Imaging (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Acoustics & Sound (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Pathology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Surgery (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Ultra Sonic Daignosis Equipment (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
인지질 UCA 제제를 포함하는 인지질 제제를 제조하기 위한 개선된 방법이 본 명세서에서 제공된다.
Description
지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어는 초음파 영상 적용 분야에서 조영제로서 사용된다.
본 개시 내용은 인지질계 초음파 조영제를 제조하기 위한 개선된 방법을 제공한다. 본 개시 내용은 특정 인지질계 초음파 조영제 제제가 2가 금속 양이온에 민감하다는 예기치 않은 발견에 부분적으로 기초한다. 그러한 특정 양이온의 특정 수준의 존재 하에, 제제 내의 인지질과 잠재적인 다른 성분들이 제제를 사용할 수 없도록 침전시킨다. 특정 2가 금속 양이온이 초음파 조영제 제제에 매우 부정적인 영향을 미칠 수 있다는 것이 지금까지는 알려지지 않았다.
이러한 발견에 기초하여, 본 개시 내용은 이러한 원하지 않는 인지질 침전을 방지하는 그러한 제제를 합성하기 위한 개선된 방법과 그 방법으로부터 생성된 제제에 관한 것이다. 또한, 개선된 초음파 조영제를 합성하는 데 이들 개선된 제제를 사용하는 방법, 그리고 이를 필요로 하는 대상체의 영상화에서 그의 용도를 제공한다.
따라서, 일 양태에서, DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE 스톡을 제공하는 단계, DPPC, DPPA 및 MPEG5000-DPPE 스톡 중 하나 이상 또는 이들 모두의 칼슘 농도를 측정하는 단계, DPPA, DPPC 및/또는 MPEG5000-DPPE 스톡을 비-수성 용매와 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및 인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법이 본 명세서에서 제공된다. 일부 구현예에서, 본 방법은 비-수성 용매의 칼슘 농도를 측정하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, DPPA, DPPC 및/또는 MPEG5000-DPPE 스톡의 측정된 조합 칼슘 농도는 낮다(즉, 측정된 스톡이 DPPA 단독, DPPC 단독, MPEG5000-DPPE 단독, DPPA 및 DPPC, DPPA 및 MPEG5000-DPPE, DPPC 및 MPEG5000-DPPE, 또는 DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE인지의 여부에 관계 없이, 그러한 측정된 스톡에 대해 칼슘 농도의 합계 또는 조합 칼슘 농도가 낮음).
일부 구현예에서, DPPA, DPPC 및/또는 MPEG-DPPE 스톡 및 비-수성 용매의 측정된 조합 칼슘 농도는 낮다(즉, 측정된 성분이 DPPA 단독 또는 DPPA 및 비-수성 용매, DPPC 단독 또는 DPPA 및 비-수성 용매, MPEG5000-DPPE 단독 또는 MPEG5000-DPPE 및 비-수성 용매, DPPA 및 DPPC 또는 DPPA, DPPC 및 비-수성 용매, DPPA 및 MPEG5000-DPPE 또는 DPPA, MPEG5000-DPPE 및 비-수성 용매, DPPC 및 MPEG5000-DPPE 또는 DPPC, MPEG5000-DPPE 및 비-수성 용매, DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE 또는 DPPA, DPPC, MPEG5000-DPPE 및 비-수성 용매인지의 여부에 관계 없이, 그러한 측정된 성분에 대한 칼슘 농도의 합계 또는 조합 칼슘 농도가 낮음).
일부 구현예에서, DPPC, DPPA 및 MPEG5000-DPPE 스톡의 칼슘 농도가 측정된다.
일부 구현예에서, DPPC, DPPA 및 MPEG5000-DPPE 스톡의 칼슘 농도가 측정되고, DPPA, DPPC, MPEG-DPPE 스톡 및 비-수성 용매의 측정된 조합 칼슘 농도는 낮다.
따라서, 구현예에 따라, DPPA의 칼슘 농도만이 측정되거나, DPPC의 칼슘 농도만이 측정되거나, MPEG5000-DPPE의 칼슘 농도만이 측정되거나, DPPA 및 DPPC의 칼슘 농도만이 측정되거나(그리고 그러한 농도를 합하여 측정된 조합 칼슘 농도를 산출함), DPPA 및 MPEG5000-DPPE의 칼슘 농도만이 측정되거나(그리고 그러한 농도를 합하여 측정된 조합 칼슘 농도를 산출함), DPPC 및 MPEG5000-DPPE의 칼슘 농도만이 측정되거나(그리고 그러한 농도를 합하여 측정된 조합 칼슘 농도를 산출함), DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE의 칼슘 농도만이 측정되거나(그리고 그러한 농도를 합하여 측정된 조합 칼슘 농도를 산출함), DPPA 및 비-수성 용매의 칼슘 농도만이 측정되거나(그리고 그러한 농도를 합하여 측정된 조합 칼슘 농도를 산출함), DPPC 및 비-수성 용매의 칼슘 농도만이 측정되거나(그리고 그러한 농도를 합하여 측정된 조합 칼슘 농도를 산출함), MPEG5000-DPPE 및 비-수성 용매의 칼슘 농도만이 측정되거나(그리고 그러한 농도를 합하여 측정된 조합 칼슘 농도를 산출함), DPPA, DPPC 및 비-수성 용매의 칼슘 농도만이 측정되거나(그리고 그러한 농도를 합하여 측정된 조합 칼슘 농도를 산출함), DPPA, MPEG5000-DPPE 및 비-수성 용매의 칼슘 농도만이 측정되거나(그리고 그러한 농도를 합하여 측정된 조합 칼슘 농도를 산출함), DPPC, MPEG5000-DPPE 및 비-수성 용매의 칼슘 농도만이 측정되거나(그리고 그러한 농도를 합하여 측정된 조합 칼슘 농도를 산출함), DPPA, DPPC, MPEG5000-DPPE 및 비-수성 용매의 칼슘 농도가 측정된다(그리고 그러한 농도를 합하여 측정된 조합 칼슘 농도를 산출함). 측정된 조합 칼슘 농도 또는 특성화된(하기에 논의되는 바와 같음) 칼슘 농도에 도달하는 데 있어서, 성분의 모든 조합이 고려된다는 것이 명백하다. 용어 DPPA, DPPA 지질, DPPA 인지질, DPPA 스톡, DPPA 지질 스톡, 및 DPPA 인지질 스톡은 명백히 달리 언급되지 않는 한 상호 교환 가능하게 사용되는 것으로 이해되어야 한다. DPPC 및 MPEG5000-DPPE에도 유사한 상호 교환 가능 용어가 사용된다.
또 다른 양태에서, 상기 방법의 변형이 제공된다. 그러한 방법은 DPPC 및 MPEG5000-DPPE 스톡을 제공하는 단계, DPPC 및 MPEG5000-DPPE 스톡 중 하나 또는 이들 둘 모두의 칼슘 농도를 측정하는 단계, DPPC 및 MPEG5000-DPPE 스톡을 비-수성 용매와 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및 인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 비-수성 용매의 칼슘 농도를 측정하는 단계를 추가로 포함한다. 상기 다양한 구현예가 이 방법에 동일하게 적용되고, 그렇게 이해되어야 한다.
본 개시 내용은 또 다른 양태에서, DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE 스톡을 제공하는 단계, DPPC, DPPA 및 MPEG5000-DPPE 스톡 중 하나 이상 또는 이들 모두의 칼슘 농도를 측정하는 단계, 측정된 조합 칼슘 농도가 낮은 DPPA, DPPC 및/또는 MPEG5000-DPPE 스톡을 비-수성 용매와 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및 인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법을 추가로 제공한다. 일부 구현예에서, 본 방법은 비-수성 용매 및 DPPA, DPPC, MPEG500-DPPE 스톡의 칼슘 농도를 측정하는 단계를 추가로 포함하고, 비-수성 용매는 측정된 조합 칼슘 농도가 낮다.
본 개시 내용은 또 다른 양태에서, 각각 특성화된 칼슘 농도를 갖는, MPEG5000-DPPE 스톡, DPPA 스톡, DPPC 스톡 및 비-수성 용매를 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계로서, 여기서 MPEG5000-DPPE 스톡, DPPA 스톡, DPPC 스톡 및 비-수성 용매의 특성화된 조합 칼슘 농도는 저 칼슘 농도인 단계, 및 인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법을 추가로 제공한다.
본 개시 내용은 또 다른 양태에서, 각각 특성화된 칼슘 농도를 갖는 MPEG5000-DPPE 스톡, DPPC 스톡 및 비-수성 용매를 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계로서, 여기서 MPEG5000-DPPE 스톡, DPPC 스톡 및 비-수성 용매의 특성화된 조합 칼슘 농도는 저 칼슘 농도인 단계, 및 인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계를 포함하는, 인지질 현탁액의 제조 방법을 추가로 제공한다.
본 개시 내용은 또 다른 양태에서, MPEG5000-DPPE 스톡, DPPA 스톡 및 DPPC 스톡 중에서 선택하는 단계로서, 이들 중 하나, 둘 또는 셋 모두가 특성화된 칼슘 농도를 갖고, 여기서 특성화된 조합 칼슘 농도는 저 칼슘 농도인 단계, 상기 MPEG5000-DPPE 스톡, DPPA 스톡, DPPC 스톡 및 비-수성 용매를 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및 인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법을 추가로 제공한다. 인지질 스톡 및/또는 비-수성 용매와 같은 성분은 특성화된 개별 칼슘 농도 또는 특성화된 조합 칼슘 농도를 갖는 것에 기초하여 선택된다.
본 개시 내용은 또 다른 양태에서, MPEG5000-DPPE 스톡 및 DPPC 스톡을 선택하는 단계로서, 하나 또는 이들 모두가 특성화된 칼슘 농도를 갖고, 여기서 조합된 특성화된 칼슘 용액은 저 칼슘 농도인 단계, 상기 MPEG5000-DPPE 스톡, DPPC 스톡 및 비-수성 용매를 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및 인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법을 추가로 제공한다. 인지질 스톡 및/또는 비-수성 용매와 같은 성분은 특성화된 개별 칼슘 농도 또는 특성화된 조합 칼슘 농도를 갖는 것에 기초하여 그렇게 선택될 수 있다.
본 개시 내용은 또 다른 양태에서, 각각 특성화된 칼슘 농도를 갖는 MPEG5000-DPPE 스톡, DPPA 스톡 및 DPPC 스톡을 선택하는 단계로서, 여기서 특성화된 조합 칼슘 농도는 저 칼슘 농도인 단계, 상기 MPEG5000-DPPE 스톡, DPPA 스톡, DPPC 스톡 및 비-수성 용매를 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및 인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법을 추가로 제공한다. 일부 구현예에서, 비-수성 용매는 특성화된 칼슘 농도를 갖고, MPEG5000-DPPE, DPPA 및 DPPC 스톡 및 비-수성 용매의 특성화된 조합 칼슘 농도는 낮다.
본 개시 내용은 또 다른 양태에서, MPEG5000-DPPE 스톡의 칼슘 농도를 측정하는 단계, 측정된 저 칼슘 농도를 갖는 MPEG5000-DPPE 스톡을 DPPA 스톡, DPPC 스톡 및 비-수성 용매와 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및 인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법을 추가로 제공한다. 일부 구현예에서, 저 칼슘 농도는 115 ppm 미만이다.
본 개시 내용은 또 다른 양태에서, MPEG5000-DPPE 스톡의 칼슘 농도를 측정하는 단계, 측정된 저 칼슘 농도를 갖는 MPEG5000-DPPE 스톡을 DPPC 스톡 및 비-수성 용매와 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및 인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법을 추가로 제공한다. 일부 구현예에서, 저 칼슘 농도는 115 ppm 미만이다.
본 개시 내용은 또 다른 양태에서, DPPC 스톡의 칼슘 농도를 측정하는 단계, 측정된 저 칼슘 농도를 갖는 DPPC 스톡을 DPPA 스톡, MPEG5000-DPPE 스톡, 및 비-수성 용매와 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및 인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법을 추가로 제공한다. 일부 구현예에서, 저 칼슘 농도는 90 ppm 미만이다.
본 개시 내용은 또 다른 양태에서, DPPC 스톡의 칼슘 농도를 측정하는 단계, 측정된 저 칼슘 농도를 갖는 DPPC 스톡을 MPEG5000-DPPE 스톡 및 비-수성 용매와 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및 인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법을 추가로 제공한다. 일부 구현예에서, 저 칼슘 농도는 90 ppm 미만이다.
본 개시 내용은 또 다른 양태에서, DPPA 스톡의 칼슘 농도를 측정하는 단계, 측정된 저 칼슘 농도를 갖는 DPPA 스톡을 DPPC 스톡, MPEG5000-DPPE 스톡, 및 비-수성 용매와 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및 인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법을 추가로 제공한다. 일부 구현예에서, 저 칼슘 농도는 780 ppm 미만이다.
본 개시 내용은 또 다른 양태에서, 비-수성 용매의 칼슘 농도를 측정하는 단계, 측정된 저 칼슘 농도를 갖는 비-수성 용매를 DPPA 스톡, DPPC 스톡, 및 MPEG5000-DPPE 스톡과 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및 인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법을 추가로 제공한다. 일부 구현예에서, 저 칼슘 농도는 0.7 ppm 미만이다.
본 개시 내용은 또 다른 양태에서, MPEG5000-DPPE, DPPA 및 DPPC 스톡을 비-수성 용매와 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 인지질 용액의 칼슘 농도를 측정하는 단계, 및 측정된 저 칼슘 농도를 갖는 인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법을 추가로 제공한다.
본 개시 내용은 또 다른 양태에서, 칼슘 농도가 낮거나 없는 것으로 특성화되는 MPEG5000-DPPE 스톡을 선택하는 단계, 상기 MPEG5000-DPPE 스톡, DPPA 스톡, DPPC 스톡 및 비-수성 용매를 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및 인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법을 추가로 제공한다. 일부 구현예에서, MPEG5000-DPPE 스톡은 2가 금속 양이온이 없거나 그 함량이 낮은 것으로서 추가로 특성화된다.
본 개시 내용은 또 다른 양태에서, MPEG5000-DPPE 스톡, DPPA 스톡, DPPC 스톡 및 비-수성 용매를 조합하여 칼슘 농도가 낮거나 없는 것으로 특성화되는 인지질 용액을 형성하는 단계, 및 인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법을 추가로 제공한다.
본 개시 내용은 또 다른 양태에서, 인지질 현탁액을 퍼플루오로카본 가스와 조합하여 인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 포함하는 초음파 조영제를 형성하는 단계, 대상체에게 초음파 조영제를 투여하는 단계, 및 대상체의 하나 이상의 조영 증강 초음파 조영 영상을 수득하는 단계를 포함하고, 여기서 인지질 현탁액은 상기 방법 중 임의의 것에 의해 제조되는 것인, 대상체의 영상화 방법을 추가로 제공한다.
본 개시 내용은 또 다른 양태에서, 인지질 현탁액을 퍼플루오로카본 가스와 조합하여 인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 포함하는 초음파 조영제를 형성하는 단계, 대상체에게 초음파 조영제를 투여하는 단계, 및 대상체의 하나 이상의 조영 증강 초음파 조영 영상을 수득하는 단계를 포함하고, 여기서 인지질 현탁액은 MPEG5000-DPPE 스톡의 칼슘 농도를 측정하는 단계, 측정된 저 칼슘 농도를 갖는 MPEG5000-DPPE 스톡을 DPPA 스톡, DPPC 스톡, 및 비-수성 용매와 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및 인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 것인, 대상체의 영상화 방법을 추가로 제공한다.
본 개시 내용은 또 다른 양태에서, 인지질 현탁액을 퍼플루오로카본 가스와 조합하여 인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 포함하는 초음파 조영제를 형성하는 단계, 대상체에게 초음파 조영제를 투여하는 단계, 및 대상체의 하나 이상의 조영 증강 초음파 조영 영상을 수득하는 단계를 포함하고, 여기서 인지질 현탁액은 MPEG5000-DPPE, DPPA 및 DPPC 스톡을 비-수성 용매와 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 인지질 용액의 칼슘 농도를 측정하는 단계, 및 측정된 저 칼슘 농도를 갖는 인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 것인, 대상체의 영상화 방법을 추가로 제공한다.
본 개시 내용은 또 다른 양태에서, 인지질 현탁액을 퍼플루오로카본 가스와 조합하여 인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 포함하는 초음파 조영제를 형성하는 단계, 대상체에게 초음파 조영제를 투여하는 단계, 및 대상체의 하나 이상의 조영 증강 초음파 조영 영상을 수득하는 단계를 포함하고, 여기서 인지질 현탁액은 칼슘 농도가 없거나 낮은 것으로 특성화되는 MPEG5000-DPPE 스톡을 선택하는 단계, 상기 MPEG5000-DPPE 스톡, DPPA 스톡, DPPC 스톡 및 비-수성 용매를 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및 인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 것인, 대상체의 영상화 방법을 추가로 제공한다.
본 개시 내용은 또 다른 양태에서, 인지질 현탁액을 퍼플루오로카본 가스와 조합하여 인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 포함하는 초음파 조영제를 형성하는 단계, 대상체에게 초음파 조영제를 투여하는 단계, 및 대상체의 하나 이상의 조영 증강 초음파 조영 영상을 수득하는 단계를 포함하고, 여기서 인지질 현탁액은 MPEG5000-DPPE 스톡, DPPA 스톡, DPPC 스톡 및 비-수성 용매를 조합하여 칼슘 농도가 없거나 낮은 것으로 특성화되는 인지질 용액을 형성하는 단계, 및 인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 것인, 대상체의 영상화 방법을 추가로 제공한다.
본 개시 내용은 또 다른 양태에서, 칼슘이 적거나 없는 조건 하에서, DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE 스톡을 PG-포함 비-수성 용매와 개별적으로 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및 인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법을 추가로 제공한다. 일부 구현예에서, 칼슘이 없거나 적은 조건은 0.7 ppm 미만이다.
본 개시 내용은 또 다른 양태에서, 칼슘이 적거나 없는 조건 하에서, 순서와 관계 없는 방식으로 DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE 스톡을 PG-포함 비-수성 용매와 연속적으로 조합하여, 인지질 용액을 형성하는 단계, 및 인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법을 추가로 제공한다. 일부 구현예에서, 칼슘이 없거나 적은 조건은 0.7 ppm 미만이다.
본 개시 내용은 또 다른 양태에서, 메탄올 및 톨루엔이 없는 조건 하에서, DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE 스톡을 조합하여 인지질 블렌드를 형성하는 단계, 칼슘이 적거나 없는 조건 하에서, 인지질 블렌드를 PG-포함 비-수성 용매와 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및 인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법을 추가로 제공한다. 일부 구현예에서, 칼슘이 없거나 적은 조건은 0.7 ppm 미만이다.
본 개시 내용은 또 다른 양태에서, DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE 스톡을 혼합 용매와 조합하여 인지질 블렌드를 형성하는 단계, 혼합 용매를 증발시켜 건조된 인지질 블렌드를 형성하는 단계, 칼슘이 적거나 없는 조건 하에서, 건조된 인지질 블렌드를 PG-포함 비-수성 용매와 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및 인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법을 추가로 제공한다. 일부 구현예에서, 칼슘이 없거나 적은 조건은 0.7 ppm 미만이다.
본 개시 내용은 또 다른 양태에서, DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE 스톡을 혼합 용매와 조합하여 인지질 블렌드를 형성하는 단계, MTBE가 없는 조건 하에서, 제2 혼합 용매를 이용하여 인지질 블렌드를 침전시키는 단계, 칼슘이 적거나 없는 조건 하에서, 침전된 인지질 블렌드를 비-수성 용매와 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및 인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법을 추가로 제공한다. 일부 구현예에서, 칼슘이 없거나 적은 조건은 0.7 ppm 미만이다.
상기 방법 중 임의의 일부 구현예에서, 방법은 인지질 현탁액을 퍼플루오로카본 가스와 조합하여 인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 포함하는 초음파 조영제를 형성하는 단계를 추가로 포함한다. 상기 방법 중 임의의 일부 구현예에서, 방법은 대상체에게 초음파 조영제를 투여하는 단계 및 대상체의 하나 이상의 조영 증강 초음파 영상을 수득하는 단계를 추가로 포함한다.
본 개시 내용은 또 다른 양태에서, 인지질 현탁액을 퍼플루오로카본 가스와 조합하여 인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 포함하는 초음파 조영제를 형성하는 단계, 대상체에게 초음파 조영제를 투여하는 단계, 및 대상체의 하나 이상의 조영 증강 초음파 조영 영상을 수득하는 단계를 포함하고, 여기서 인지질 현탁액은 상기 방법들 중 하나에 의해 제조되는 것인, 대상체의 영상화 방법을 추가로 제공한다.
본 개시 내용은 다른 양태에서, 비-수성 용매 중 DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE를 포함하고 저 칼슘 농도를 갖는 인지질 용액을 포함하는 조성물, 및 비-수성 용매 중 DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE를 포함하는 인지질 용액을 포함하고, 여기서 DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE 및 비-수성 용매는 특성화된 조합 칼슘 이온 함량이 낮은 조성물을 추가로 제공한다. 일부 구현예에서, 비-수성 용매는 프로필렌 글리콜(예를 들어, 프로필렌 글리콜은 단독의 비-수성 용매일 수 있거나, 하나 이상의 다른 용매와 함께 사용되어 비-수성 용매를 만들 수 있음)을 포함한다. 일부 구현예에서, 비-수성 용매는 프로필렌 글리콜 및 글리세롤을 포함한다. 일부 구현예에서, 비-수성 용매는 완충액을 포함한다. 일부 구현예에서, 완충액은 아세테이트 완충액이다. 일부 구현예에서, 조성물은 퍼플루오로카본 가스를 포함한다. 일부 구현예에서, 퍼플루오로카본 가스는 퍼플루트렌이다. 따라서, 일부 경우에, 조성물은 바이알과 같은 용기 내에 제공되며, 가스는 용기의 헤드스페이스 내에 제공된다. 인지질 용액을 퍼플루오로카본 가스와 조합하여 인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 포함하는 초음파 조영제를 형성하는 방법이 또한 제공된다. 방법은 대상체에게 초음파 조영제를 투여하는 단계 및 대상체의 하나 이상의 조영 증강 초음파 영상을 수득하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
본 명세서에서 제공되는 다양한 양태의 일부 구현예에서, 비-수성 용매는 (i) 프로필렌 글리콜 또는 (ii) 프로필렌 글리콜 및 글리세롤을 포함한다.
본 명세서에서 제공되는 다양한 양태의 일부 구현예에서, 비-수성 용매는 완충액을 포함한다. 본 명세서에서 제공되는 다양한 양태의 일부 구현예에서, 비-수성 용매는 아세테이트 완충액을 포함한다.
본 명세서에서 제공되는 다양한 양태의 일부 구현예에서, 수성 용매는 완충액을 포함한다. 본 명세서에서 제공되는 다양한 양태의 일부 구현예에서, 수성 용매는 포스페이트 완충액을 포함한다.
본 명세서에서 제공되는 다양한 양태의 일부 구현예에서, DPPC, DPPA 및 MPEG5000-DPPE 스톡은 개별적으로 비-수성 용매와 조합되어 인지질 용액을 형성한다.
본 명세서에서 제공되는 다양한 양태의 일부 구현예에서, DPPC, DPPA 및 MPEG5000-DPPE 스톡은, 이어서 순서와 관계 없는 방식으로 비-수성 용매와 조합되어 인지질 용액을 형성한다.
본 명세서에서 제공되는 다양한 양태의 일부 구현예에서, DPPC, DPPA 및 MPEG5000-DPPE 스톡은 서로 조합되어 인지질 혼합물을 형성하고, 인지질 혼합물은 이어서 비-수성 용매와 조합되어 인지질 용액을 형성한다. 인지질 혼합물은 이종성 또는 동종성일 수 있다.
본 명세서에서 제공되는 다양한 양태의 일부 구현예에서, DPPC, DPPA 및 MPEG5000-DPPE 스톡을 서로 조합하여 인지질 블렌드를 형성하고, 인지질 블렌드를 비-수성 용매와 조합하여 인지질 용액을 형성한다. 본 명세서에서 제공되는 다양한 양태의 일부 구현예에서, 인지질 블렌드는 DPPC, DPPA 및 MPEG5000-DPPE 스톡을 메탄올 및 톨루엔의 혼합물 내로 용해시키는 단계, 선택적으로 인지질/메탄올/톨루엔 혼합물을 농축시키는 단계, 및 이어서 농축된 인지질/메탄올/톨루엔 혼합물을 메틸 t-부틸 에테르(MTBE)와 접촉시켜 인지질을 침전시켜 인지질 블렌드를 형성하는 단계를 포함하는 유기 용매 용해-침전 공정을 이용하여 형성된다. 본 명세서에서 제공되는 다양한 양태의 일부 구현예에서, 인지질 블렌드는 DPPC, DPPA 및 MPEG5000-DPPE 스톡을, 메탄올/톨루엔 용매계 외의, 혼합 용매계 내로 용해시키는 단계, 선택적으로 인지질/용매 혼합물을 농축시키는 단계, 및 이어서 농축된 인지질/용매 혼합물을 메틸 t-부틸 에테르(MTBE)와 접촉시켜 인지질을 침전시켜 인지질 블렌드를 형성하는 단계에 의해 형성된다. 본 명세서에서 제공되는 다양한 양태의 일부 구현예에서, 인지질 블렌드는 DPPC, DPPA 및 MPEG5000-DPPE 스톡을, 이로 제한되지는 않지만 메탄올/톨루엔 용매계와 같은 혼합 용매계 내로 용해시키고, 이어서 혼합물을 동결건조하거나 다르게는 건조시켜 용매를 제거하고 인지질 블렌드를 남기는 단계에 의해 형성된다.
본 명세서에서 제공되는 다양한 양태의 일부 구현예에서, 본 방법은 인지질 현탁액을 바이알 내에 위치시키는 단계 및 퍼플루오로카본 가스를 바이알의 헤드스페이스 내로 도입시키는 단계를 추가로 포함한다.
본 명세서에서 제공되는 다양한 양태의 일부 구현예에서, 본 방법은 인지질 현탁액을 퍼플루오로카본 가스로 활성화하여 인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 포함하는 초음파 조영제를 형성하는 단계를 추가로 포함한다.
본 명세서에서 제공되는 다양한 양태의 일부 구현예에서, 본 방법은 대상체에게 초음파 조영제를 투여하는 단계 및 대상체의 하나 이상의 조영 증강 초음파 영상을 수득하는 단계를 추가로 포함한다.
본 명세서에서 제공되는 다양한 양태의 일부 구현예에서, 본 방법은 DPPA 스톡 및/또는 DPPC 스톡 및/또는 인지질 혼합물 및/또는 인지질 블렌드의 칼슘 농도를 측정하는 단계를 추가로 포함한다.
본 개시 내용과 본 개시 내용의 기타 양태 및 구현예는 본 명세서에서 더욱 상세히 설명될 것이다.
도 1은 상이한 정도의 침전을 갖는 4 개의 인지질 용액의 사진이다. 도는 실시예에서 사용된 바와 같이, ), +, ++, 및 +++의 외관 척도 정의를 예시한다.
도 2는 DPPC, MPEG5000-DPPE, DPPA, 및 칼슘 아세테이트의 연속적인 첨가에 따른 용액의 외관을 보여주는 사진이다.
도 3은 실시예에 설명된 연구 4에 대해 적정된 용액의 외관을 보여주는 사진이다.
도 4는 상이한 비의 MPEG5000-DPPE 및 고 칼슘(Ca+2) 수준을 함유하는 MPEG5000-DPPE로 제조된 용액의 외관을 보여주는 사진이다.
도 5는 많거나 저 칼슘을 함유하는 개별 인지질 또는 인지질 블렌드로 제조된 인지질 수성 제제에 대한 여과 유량을 보여주는 그래프이다. 연구 19 및 연구 23은 저 칼슘 성분으로 제조된 반면, 연구 20 및 연구 24는 고 칼슘 수준을 함유한다(상세한 내용은 표 6 참조). 각각의 그래프 포인트는 각각의 연구에서 상응하는 시간을 갖는 3회 연속 여과 속도 측정의 평균값이다.
도 6은 많거나 저 칼슘을 함유하는 개별 인지질 또는 인지질 블렌드로 제조된 인지질 비-수성 제제에 대한 여과 유량을 보여주는 그래프이다. 연구 33 및 연구 35는 저 칼슘 성분으로 제조된 반면, 연구 34 및 연구 36은 고 칼슘 수준을 함유한다(상세한 내용은 표 9 참조). 각각의 그래프 포인트는 각각의 연구에서 상응하는 시간을 갖는 3회 연속 여과 속도 측정의 평균값이다.
도 2는 DPPC, MPEG5000-DPPE, DPPA, 및 칼슘 아세테이트의 연속적인 첨가에 따른 용액의 외관을 보여주는 사진이다.
도 3은 실시예에 설명된 연구 4에 대해 적정된 용액의 외관을 보여주는 사진이다.
도 4는 상이한 비의 MPEG5000-DPPE 및 고 칼슘(Ca+2) 수준을 함유하는 MPEG5000-DPPE로 제조된 용액의 외관을 보여주는 사진이다.
도 5는 많거나 저 칼슘을 함유하는 개별 인지질 또는 인지질 블렌드로 제조된 인지질 수성 제제에 대한 여과 유량을 보여주는 그래프이다. 연구 19 및 연구 23은 저 칼슘 성분으로 제조된 반면, 연구 20 및 연구 24는 고 칼슘 수준을 함유한다(상세한 내용은 표 6 참조). 각각의 그래프 포인트는 각각의 연구에서 상응하는 시간을 갖는 3회 연속 여과 속도 측정의 평균값이다.
도 6은 많거나 저 칼슘을 함유하는 개별 인지질 또는 인지질 블렌드로 제조된 인지질 비-수성 제제에 대한 여과 유량을 보여주는 그래프이다. 연구 33 및 연구 35는 저 칼슘 성분으로 제조된 반면, 연구 34 및 연구 36은 고 칼슘 수준을 함유한다(상세한 내용은 표 9 참조). 각각의 그래프 포인트는 각각의 연구에서 상응하는 시간을 갖는 3회 연속 여과 속도 측정의 평균값이다.
인지질계 초음파 조영제(UCA)를 제조하기 위한 개선된 방법이 본 명세서에서 제공된다. 이들 개선은 초음파 조영제의 제조에 사용하기 위해 의도된, 특정 인지질계 제제가 특정 2가 금속 양이온의 존재 및 양에 민감하다는 놀라운 발견에 부분적으로 기초한다. 구체적으로, 칼슘과 같은 2가 금속 양이온이, 특정 농도로, 선도적인 초음파 조영제 데피니티(DEFINITY)®를 생성하는 데 사용되는 인지질계 제제 내로 도입된 경우, 이는 인지질과 제제의 잠재적인 다른 성분이 용액으로부터 침전되어 나오는 것을 유발하여, 제제를 사용할 수 없게 만든다는 것이 예기치 않게 발견되었다. 그러한 제제는 통상적으로 큰 규모의 배치로 제조되므로, 예를 들어 칼슘의 우연한 첨가는 전체 배치를 사용할 수 없게 만들 수 있다. 이는 제조 능력을 저하시킬 수 있다.
놀랍게도, 특정 인지질은 칼슘과 같은 2가 금속 양이온의 존재에 의해 유도된 침전에 더욱 민감하다는 것이 또한 발견되었다. 구체적으로, 프로필렌 글리콜과 같은 비-수성 용매 중 DPPA는 칼슘과 같은 2가 금속 양이온의 특정 농도의 존재 하에서 침전되기 더욱 쉽다. DPPC 및 DPPE와 같은 기타 인지질을 이용해서는, 이와 동일한 민감성은 관찰되지 않았거나, 동일한 수준으로 관찰되지 않았다. 이러한 상이한 침전 프로파일은, 계획되거나 원하는 것과 상이한 인지질 조성을 갖는, 인지질 제제, 궁극적으로 UCA를 쉽게 생성할 수 있다. 따라서, 2가 금속 양이온의 존재는 (예를 들어, 본 명세서에 설명된 인지질 현탁액과 같은 침전-함유 인지질 제제의 비여과성 때문에) UCA의 총 수율을 감소시킬 뿐만 아니라, UCA의 인지질 분포를 간섭할 수도 있다. 이것은 완전히 미지의 인지질 함량의 UCA 제제를 생성할 수 있기 때문에 문제가 된다. 제약학 분야에서 잘 알려진 바와 같이, 그러한 UCA 제제의 조성은 일정하게 유지되고, 견고하게 재현 가능해야 하며, 배치-배치(batch-to-batch) 변동성을 가능한 한 최대로 회피하거나 최소화해야 한다.
따라서, 본 개시 내용은 본 명세서에 설명되는 바와 같이, 인지질 용액 및 인지질 현탁액과 같은 인지질 제제를 제조하기 위한 개선된 방법을 제공한다. 이들 방법은 인지질 침전의 가능성을 감소시킴으로써 그러한 제제의 수율을 개선한다. 이들은 또한 더욱 견고하고 재현 가능한 방식으로, 의도한 인지질 프로파일 및 분포를 갖는 인지질 제제를 제조한다. 이들 방법은 본 명세서에 설명된 신규하고 놀라운 발견을 이용하며, 침전물을 검출하지 않고 원하는 인지질 함량 및 비율의 인지질 제제를 제공한다.
일반적인, 인지질 제제
개선된 인지질 용액, 인지질 현탁액 및 궁극적으로 UCA 제제를 제조하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 더욱 상세히 설명되는 바와 같이, 일부 경우들에서, UCA 제제는 퍼플루트렌과 같은 가스와 조합된 비-수성 인지질 용액으로부터 형성될 수 있다. 다른 경우들에서, UCA 제제는 비-수성 인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 퍼플루트렌과 같은 가스와 조합된 인지질 현탁액을 형성하는 단계로부터 형성될 수 있다. 이들 조성물 및 다른 인지질-함유 조성물은 본 명세서에서 총괄적으로 인지질 제제로서 지칭된다. 특정 제제 각각이 하기에 더욱 상세하게 설명될 것이다. 본 개시 내용의 인지질 제제는 FDA-승인된 데피니티® 마이크로스피어의 제조에 사용되는 3 개의 인지질을 포함할 수 있다. 이들 3 개의 인지질은,
(1) 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스파티딜콜린(본 명세서에서 DPPC로서 지칭됨),
(2) 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스파티딘산(본 명세서에서 DPPA로서 지칭됨), 및
(3) N-(메톡시 폴리에틸렌 글리콜 5000 카바모일)-1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스파티딜에탄올아민(본 명세서에서 MPEG5000-DPPE로서 지칭됨).
본 개시 내용의 인지질 제제는 DPPC 및 MPEG-5000-DPPE를 포함할 수 있다.
일부 경우들에서, 이들 인지질 중 하나 이상의 변경된 형태가 사용될 수 있다. 예를 들어, 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스파티딜에탄올아민(DPPE)은 폴리에틸렌 글리콜(PEG)와 컨쥬게이트될 수 있다. DPPE에 또는 다른 인지질에 컨쥬게이트된 PEG는, 일부 비제한적인 경우에서, 1000 내지 10,000으로부터 선택된 분자량(MW, 또는 길이)을 가질 수 있다. 더욱 통상적으로, PEG는 약 5000의 MW를 가질 수 있으며, 이 경우 PEG5000으로 지칭되며, DPPE에 컨쥬게이트된 경우에는 PEG5000-DPPE로 지칭된다. PEG는 통상적으로 지방족 사슬 말단보다는 인지질 헤드(head) 기에서 DPPE와 같은 인지질에 컨쥬게이트된다. PEG는 히드록시 또는 메톡시 말단을 가질 수 있고, HO-PEG5000 또는 MPEG5000으로 각각 지칭될 수 있다.
예로서, DPPE에 컨쥬게이트된 경우, 컨쥬게이트는 HO-PEG5000-DPPE 또는 MPEG5000-DPPE로서 지칭될 수 있다. 후자의 컨쥬게이트의 완전한 화학명은 N-(메톡시 폴리에틸렌 글리콜 5000 카바모일)-1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스파티딜에탄올아민, 일나트륨염(본 명세서에서 MPEG5000-DPPE로서 지칭됨)이다.
DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE는, 약 77 내지 90 몰% DPPC, 약 5 내지 15 몰% DPPA, 및 MPEG5000-DPPE를 포함하여 약 5 내지 15 몰% DPPE의 몰 백분율로 사용될 수 있다. 각각의 인지질의 바람직한 비율은 6.0 대 53.5 대 40.5(DPPA:DPPC:MPEG5000-DPPE)의 중량% 비 또는 10 대 82 대 8(10:82:8)(DPPA:DPPC:MPEG5000-DPPE)의 몰% 비를 포함한다.
본 개시 내용의 나머지 부분은 편의 및 간결성을 위해 구체적으로 DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE를 지칭할 것이지만, 본 명세서에서 제공된 교시는 이들 또는 다른 인지질을, 단독으로 또는 DPPC 및 MPEG5000-DPPE의 조합(이로 제한되지는 않음)과 같이 조합하여 이용하는 방법 및/또는 그를 포함하는 조성물을 포괄하고자 하는 것으로 이해되어야 한다.
본 명세서에 제공되는 다양한 방법은 본 명세서에 기재된 인지질 제제를 제조하는 데 사용된 성분들의 2가 금속 농도를 측정하는 단계를 포함한다. 인지질 용액을 만드는 데 사용된 성분들이 특히 중요한데, 특히 침전이 인지질 현탁액 단계보다는 인지질 용액 단계에서 먼저 관찰되는 현상인 것으로 나타나기 때문이다. 칼슘 및 마그네슘 농도와 같은 2가 금속 양이온 농도를 측정하는 데 사용될 수 있는 방법은 실시예를 포함하여 본 명세서에서 더욱 상세히 기재되어 있다. 일부 방법은, 예를 들어 MPEG5000-DPPE와 같은 단지 하나의 성분의 2가 금속 양이온 농도를 측정하는 단계를 포함할 수 있다. 기타 방법은 예를 들어 둘 이상의 성분, 예컨대 2 종 또는 3 종의 인지질의 2가 금속 양이온 농도를 측정하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 성분들은 측정하기 전에 함께 조합될 수 있다. 또 다른 방법은, 인지질 제제, 예컨대 비-수성 용매를 포함하는 인지질 용액을 만드는 데 사용된 모든 성분들의 2가 금속 양이온 농도를 측정하는 단계를 포함한다. 측정은 성분들을 조합하기 전이나 후에 이루어질 수 있다. 예를 들어, 인지질 용액을 제조하기 위해 사용된 개별적인 성분들을 측정하거나 인지질 용액 그 자체를 측정할 수 있다.
본 명세서에서 제공되는 다양한 기타 방법들은, 2가 금속 양이온 농도에 기초하여, 인지질 용액과 같은 인지질 제제를 제조하는 데 사용되는 성분들을 선택하는 단계를 포함한다. 더욱 구체적으로, 본 방법은, 칼슘 농도가 없거나 낮은 것, 또는 마그네슘 농도가 없거나 낮은 것을 포함하여, 2가 금속 금속 양이온 농도가 없거나 낮은 것으로 특성화되거나 동정된 하나 이상의 성분을 선택하는 단계를 포함한다. 일부 방법은, 칼슘 농도가 없거나 낮은 것, 또는 마그네슘 농도가 없거나 낮은 것을 포함하여, 2가 금속 금속 양이온 농도가 없거나 낮은 것으로 특성화되거나 동정된 하나의 성분, 예컨대 MPEG5000-DPPE를 선택하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 방법은 조합된 2가 금속 양이온 농도에 기초하여 둘 이상의 성분 또는 모든 성분들을 선택하는 단계를 포함할 수 있다. 따라서, DDPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE뿐만 아니라, 비-수성 용매(이로 제한되지는 않음)와 같은 기타 성분 및/또는 그의 개별적인 성분들은, 2가 금속 양이온 농도가 없거나 낮은 것으로 개별적으로 특성화될 수 있지만, 함께 사용되는 경우 이들이 조합된 2가 금속 양이온 농도는 2가 금속 양이온 농도가 없거나 낮은 요건을 더 이상 만족시키지 않을 것이며, 침전을 일으킬 것임이 고려된다. 따라서, 이들 경우 및 기타 경우에서, 성분들 중 2 개, 3 개 또는 모두, 예컨대 2 종 또는 3 종의 인지질은 이들이 조합된 2가 금속 양이온 농도가 없거나 낮은 2가 금속 양이온 농도로 특성화되도록 선택될 수 있다.
인지질 용액
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 인지질 용액은 비-수성 용매 중 하나 이상의 인지질을 포함하는 조성물을 지칭한다. 인지질 용액은 비-수성 용매 중 DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE를 최소로 포함할 수 있다. 인지질 용액은 비-수성 용매 중 DPPC 및 MPEG5000-DPPE를 최소로 포함할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 비-수성 용매는 인지질을 용해시킴으로써 용액(즉, 인지질 용액)을 형성하는 용매이다. 바람직하게는, 인지질 용액 중 존재하는 비-수성 용매는, 특히 인간 대상체를 포함하는 대상체에게 투여되는 최종 UCA 제제에까지 전달되기 때문에, 약학적으로 허용 가능하다. 특정 구현예에서, 인지질 용액을 만드는 데 사용되는 비-수성 용매는 메탄올 또는 톨루엔 또는 메틸 t-부틸 에테르(MTBE)가 아니거나, 이를 포함하지 않는다.
인지질 용액의 비-수성 용매는 단일 용매일 수 있거나, 용매의 조합일 수 있다. 비-수성 용매는 프로필렌 글리콜(본 명세서에서 PG로 지칭될 수 있음) 및 글리세롤(본 명세서에서 G로서 지칭될 수 있음)을 포함하지만 이로 제한되지는 않는다. 이들은 모두 액체 스톡으로서 제공된다. 일부 경우들에서, 인지질 용액의 비-수성 용매는 PG 단독일 수 있거나, PG 및 G의 혼합물(이는 PG/G로서 지칭될 수 있음)일 수 있다. 적어도 PG를 포함하는 비-수성 용매는 PG-포함 비-수성 용매로서 본 명세서에서 지칭될 수 있다. PG/G 혼합물은 5:1 내지 1:5(중량 대 중량) 범위의 비를 포함한다. 일부 구현예에서, PG:G의 중량/중량 비 1:1이 사용된다(그리고 이는 본 명세서에서 1:1 혼합물로서 지칭됨).
인지질 용액은 하나 이상의 완충액을 추가로 포함할 수 있다. 그러한 완충액은 상기 언급된 것들과 같은 비-수성 용매를 완충할 수 있는 것들이다. 예로는 아세테이트 완충액(예를 들어, 나트륨 아세테이트 및 아세트산의 조합), 벤조에이트 완충액(예를 들어, 나트륨 벤조에이트 및 벤조산의 조합), 및 살리실레이트 완충액(예를 들어, 나트륨 살리실레이트 및 살리실산의 조합)을 포함하지만, 이로 제한되지는 않는다. 사용될 수 있는 기타 완충액은 디에탄올아민 완충액, 트리에탄올아민 완충액, 보레이트 완충액, 카보네이트 완충액, 글루타메이트 완충액, 숙시네이트 완충액, 말레이트 완충액, 타르트레이트 완충액, 글루타레이트 완충액, 아코나이트 완충액, 시트레이트 완충액, 락테이트 완충액, 글리세레이트 완충액, 글루코네이트 완충액, 및 트리스 완충액을 포함한다. 일부 구현예에서, 아세테이트 완충액이 사용된다. 비-수성 용매에 사용된 완충액은 포스페이트 완충액이 아닌 것을 의도한 비-포스페이트 완충액일 수 있다.
완충액 농도는 사용된 완충액의 유형에 따라 달라질 수 있으며, 당업자의 기술 범주에서 이해되고 결정될 것이다. 비-수성 용매 중 완충액 농도는 약 1 mM 내지 약 100 mM의 범위일 수 있고, 이는 약 1 mM 내지 약 50 mM, 또는 약 1 mM 내지 약 20 mM, 또는 약 1 mM 내지 약 10 mM, 또는 약 1 mM 내지 약 5 mM을 포함하며, 이는 약 5 mM을 포함한다.
따라서, 인지질 용액은 DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE와 같은 하나 이상의 인지질, PG이거나 PG를 포함하는 비-수성 용매, 및 선택적으로 아세테이트 완충액과 같은 완충액을 포함할 수 있다.
인지질 용액은 다양한 방식으로 제조될 수 있으며, 이들 중 몇몇은 아래에서 더욱 상세히 설명된다. 일반적으로, 비-수성 용매는 인지질과의 접촉 전에 가온될 수 있고, 사용된 경우 완충액은 인지질과의 접촉 전에 용매 중에 먼저 존재할 수 있다. 용매에 이어서 용액을 교반하여 인지질의 용해를 촉진할 수 있다.
중요하게는, 2가 금속 양이온과 연관된 인지질 침전은 비-수성 용매 중에서, 그리고 이에 따라 인지질 용액의 제조 공정에서 일어난다는 것이 발견되었다. 따라서, 본 명세서에서 기재된 바와 같이, 다양한 방법들이, 개별적이거나 총괄적인지의 여부에 관계 없이, 인지질, PG 및 G와 같은 비-수성 용매, 사용된 경우, 아세테이트 완충액과 같은 완충액 등을 포함하는, 인지질 용액을 만드는 데 사용된 다양한 성분의 2가 금속 양이온 농도를 측정하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 인지질 용액의 2가 금속 양이온 농도의 측정 대신 또는 이들에 추가하여, 인지질 현탁액의 2가 금속 양이온 농도가 측정될 수 있다.
인지질 용액의 시각적 관찰은 침전물을 검출하기 위해 수행될 수 있지만, 필수는 아니다. 도 1은 상이한 정도의 침전물을 갖는 다양한 인지질 용액을 보여주는 사진이다.
일부 구현예에서, 인지질 용액은 이후 아래에서 더욱 상세히 기재되는 인지질 현탁액의 제조에 사용된다.
일부 구현예에서, 인지질 용액은, 인지질 용액을 수성 용매와 먼저 접촉시키지 않고, 인지질 캡슐화된 가스 마이크로스피어를 제조하기 위하여 가스, 예컨대 퍼플루오로카본 가스와 직접 접촉된다. 즉, 일부 경우들에서, 인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어는 (비-수성) 인지질 용액 및 가스의 접촉과 격렬한 진탕(활성화로서 지칭됨)을 통해 제조된다. 이후 그러한 마이크로스피어는 수성 용매와 접촉되어 UCA를 형성할 수 있다.
인지질 현탁액
본 명세서에서 사용된 바와 같은, 인지질 현탁액은 인지질 용액 및 수성 용매를 포함하는 수성 인지질 제제를 지칭한다. 인지질 현탁액은 하나 이상의 인지질, 예컨대 DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE를 포함할 수 있다. 인지질 현탁액은 최소 하나 이상의 인지질, PG와 같은 비-수성 용매, 및 수성 용매를 포함할 것이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 수성 용매는 주성분(중량부)으로서 물이거나 물을 포함한다. 수성 용매는 하나 이상의 염을 추가로 포함할 수 있으며, 이에 따라 수성 식염수 용매로서 지칭될 수 있다. 이는 추가적으로 또는 대안적으로 완충액을 포함할 수 있으며, 이에 따라 수성 완충화된 식염수 용매 또는 수성 완충화된 용매로서 지칭될 수 있다. 바람직하게는, 염(들) 또는 완충액(들)을 포함하는지의 여부에 관계없이 수성 용매는 약학적으로 허용 가능하며, 이는 인지질 용액과 같이 인간 피험체를 포함하는 피험체에게 투여되는 최종 UCA 제제까지 전달되기 때문이다.
수성 용매 중에 포함될 수 있는 염은 염화나트륨을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
수성 용매 중에 포함될 수 있는 완충액은 포스페이트 완충액, 아세테이트 완충액, 벤조에이트 완충액, 살리실레이트 완충액, 디에탄올아민 완충액, 트리에탄올아민 완충액, 보레이트 완충액, 카보네이트 완충액, 글루타메이트 완충액, 숙시네이트 완충액, 말레이트 완충액, 타르트레이트 완충액, 글루타레이트 완충액, 아코나이트 완충액, 시트레이트 완충액, 락테이트 완충액, 글리세레이트 완충액, 글루코네이트 완충액, 및 트리스 (트리스(히드록시메틸)메틸아민) 완충액을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 통상적으로, 비-수성 용매 또는 수성 용매 중 어느 하나는 완충액을 포함하지만, 둘 모두는 아니다. 완충액 농도는 사용된 완충액의 유형에 따라 달라질 것이며, 당업자의 기술 범주에서 이해되고 결정될 것이다. 수성 용매 중 완충액 농도는 약 1 mM 내지 약 100 mM의 범위일 수 있고, 이는 약 1 mM 내지 약 50 mM, 또는 약 10 mM 내지 약 30 mM, 또는 약 20 mM 내지 약 30 mM, 또는 약 20 mM 내지 약 25 mM을 포함하고, 이는 약 25 mM를 포함한다.
따라서, 인지질 현탁액은 DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE와 같은 하나 이상의 인지질, PG이거나 PG를 포함하는 비-수성 용매, 염화나트륨과 같은 하나 이상의 염을 포함할 수 있는 수성 용매, 및 선택적으로 아세테이트 완충액 또는 포스페이트 완충액과 같은 완충액을 포함할 수 있다. 인지질 현탁액은, 수성 용매 중에 용해되기 보다는, 현탁된 인지질로서 물리적으로 특성화될 수 있다.
인지질 현탁액은 일반적으로, 비-수성인 인지질 용액을 수성 용매와 접촉시킴으로써 제조된다. 수성 용매는 임의의 염 및/또는 임의의 완충액을 이미 포함할 수 있거나, 대안적으로 이들을 인지질 용액과 접촉시킨 후 첨가할 수 있다. 인지질 용액과 수성 용매의 혼합을 확실하게 하기 위해 수성 용매는 교반될 수 있다. 수성 용매는 일부 경우들에서 또한 가온될 수 있는 인지질 용액과의 접촉 전에 또한 가온될 수 있다.
놀랍게도, 수성 용매의 2가 금속 양이온 농도는 비-수성 인지질 용액(및 이의 조합된 성분)의 농도만큼 중요하지 않다. 예를 들어, 침전물이 없는 인지질 용액이 일단 제조되면, 인식 가능한 임의의 인지질 침전물을 유도하지 않으면서 높은 2가 금속 양이온 농도를 갖는 수성 용매와 조합될 수 있음이 예기치 않게 발견되었다. 따라서, 높은 2가 금속 양이온 함량에 대한 인지질 민감도는 인지질 용액 내 또는 비-수성 용매의 존재 하에서만 존재하고, 그 이상은 아님이 놀랍게도 발견되었다. 유사하게, 침전물이 인지질 용액 내에 일단 형성되면, 수성 용매와의 접촉은, 가온되더라도 용해를 유도하지 않음이 발견되었다. 인지질, 구체적으로 DPPA의, 높은 2가 금속 양이온 수준, 예컨대 칼슘 수준에 대한 이러한 상이한 민감도는 이전까지는 인지되지 않았으며, 놀라운 발견으로 여겨졌다.
수성 용매의 2가 금속 양이온 농도가 하나 이상의 인지질의 침전을 유도하는 것으로 보이지 않지만, 놀랍게도 포스페이트 완충액이 수성 용매 중에 사용되는 경우 존재할 수 있는 것과 같은 다른 성분, 가장 현저하게는 포스페이트의 침전을 유도한다. 따라서, 일부 경우들에서, 본 명세서에서 제공된 방법은 포스페이트를 포함하는 수성 인지질 현탁액을 제조하는 데 사용된 성분들의 2가 금속 양이온 농도를 측정하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 대안적으로, 방법은, 개별적으로 또는 조합하여, 2가 금속 양이온 농도가 없거나 낮은 것으로 특성화되는, 개별적인 성분 또는 조합된 성분을 선택하는 단계를 포함할 수 있다.
인지질 현탁액은 이후 인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 제조하는 데 사용될 수 있다.
인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어, 및 그를 포함하는 UCA 제제
명백한 바와 같이, 본 개시 내용의 인지질계 초음파 조영제는 인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어다. 이들 마이크로스피어는 다양한 방법으로 제조될 수 있다. 예를 들어, 인지질 용액은 수성 용매와 접촉하여 인지질 현탁액을 형성할 수 있고, 인지질 현탁액은 퍼플루오로카본 가스와 같은 가스와 접촉되어 인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 형성할 수 있다. 또 다른 예로, 비-수성 인지질 용액은 퍼플루오로카본 가스와 같은 가스와 접촉되어 인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 형성할 수 있다. 어느 경우이든, 인지질 제제는 비-수성 인지질 용액이거나 수성 인지질 현탁액일 수 있으며, 인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 생성하기에 충분한 방식으로 가스와 조합된다. 이는 격렬한 진탕 또는 기타 교반을 일반적으로 포함한다. 충분한 진탕 또는 교반은 통상적으로, 바이알믹스(VIALMIX)®와 같은 장치를 이용하여 달성되고, 통상적으로 수동으로 달성되지는 않는다.
인지질 용액 또는 인지질 현탁액은, 가스 헤드스페이스를 갖는 용기, 예컨대 바이알 내에 제공된다. 퍼플루오로카본 가스, 예컨대 퍼플루트렌은 일반적으로 가스 교환의 공정을 통하여 그러한 용기의 헤드스페이스 내로 도입된다. 이어서 이 바이알은 인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 형성하기 위하여 격렬하게 진탕된다. 활성화로 알려진 이 공정은, 대상체 내로 투여하기 직전에 최종 사용자 또는 의료인에 의해 수행된다.
마이크로스피어는 가스, 예컨대 퍼플루트렌 가스를 포함하는 퍼플루오로카본 가스를 그 내부 공동에 포함하지만, 이로 제한되지는 않는다. 가스를 캡슐화하는 인지질 쉘(shell)은, 단일라멜라(unilamellar) 또는 다중라멜라 이중층을 포함하는, 막 단일층 또는 이중층으로서 배열될 수 있다. 마이크로스피어는 10 미크론 미만, 또는 6 미크론 미만, 또는 3 미크론 미만, 또는 더욱 바람직하게는 2 미크론 미만의 평균 직경을 가질 수 있다. 이들 평균 직경은, 마이크로스피어의 개체군이 분석된 경우, 개체군의 평균 직경이 10 미크론 미만, 또는 6 미크론 미만, 또는 3 미크론 미만, 또는 더욱 바람직하게는 2 미크론 미만임을 의미한다. 마이크로스피어는 0.5 내지 3 미크론, 또는 1 내지 2 미크론, 또는 1.4 내지 1.8 미크론, 또는 1.4 내지 1.6 미크론의 범위 내의 평균 직경을 가질 수 있다. 평균 직경은 약 1.4 미크론일 수 있다.
인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 생성하는 공정은 활성화로서 알려져 있다. 인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어의 충분한 농도를 포함하는 제제는 본 명세서에 활성화된 제제로서 지칭될 수 있다.
"충분한" 가스 마이크로스피어의 농도는 가스 마이크로스피어가 인지질 용액(수성 용매의 중간 사용 없이)을 이용하여 제조되는지 또는 인지질 현탁액을 이용하여 제조되는지의 여부에 따라 달라질 것임이 이해될 것이다. 통상적으로, 대상체에게 투여되는 UCA 제제는, 투여된 제제 1 ml 당 적어도 약 1 Х 107 마이크로스피어, 또는 1 ml 당 적어도 약 5 Х 107 마이크로스피어, 또는 1 ml 당 적어도 약 7.5 Х 107 마이크로스피어, 또는 1 ml 당 적어도 약 1 Х 108 마이크로스피어, 또는 1 ml 당 적어도 약 1 Х 109 마이크로스피어, 또는 1 ml 당 약 5 Х 109 마이크로스피어를 대략 포함할 것이다. 마이크로스피어 농도의 범위는 일부 경우들에서, 투여된 제제 1 ml 당 1 Х 107 내지 1 Х 1010 마이크로스피어, 더욱 통상적으로 1 ml 당 5 Х 107 내지 5 Х 109 마이크로스피어일 수 있다.
어떻게 제조되었는지의 여부에 따라, 가스 마이크로스피어는 비-수성 용매 또는 수성 용매 중에 존재할 수 있다. 이와 관계없이, 대상체에게로의 투여 전에, 이들은 통상적으로 식염수 또는 완충된 수성 용액 또는 완충된 식염수일 수 있는 수성 용액 내에 희석된다.
인간 대상체를 포함한 대상체에게 통상적으로 정맥주사로 투여되는 UCA 제제는 4 내지 8의 범위 또는 4.5 내지 7.5의 범위의 pH를 가질 수 있다. 일부 경우에서, pH는 약 6 내지 약 7.5의 범위, 또는 6.2 내지 약 6.8의 범위일 수 있다. 또 다른 경우에서, pH는 약 6.5(예를 들어, 6.5 +/- 0.5 또는 +/-0.3)일 수 있다. 일부 경우에서, pH는 5 내지 6.5의 범위, 또는 5.2 내지 6.3의 범위, 또는 5.5 내지 6.1의 범위, 또는 5.6 내지 6의 범위, 또는 5.65 내지 5.95의 범위일 수 있다. 또 다른 경우에서, pH는 약 5.7 내지 약 5.9(예를 들어, +/- 0.1 또는 +/- 0.2 또는 +/- 0.3 범위의 어느 하나 또는 양 말단)의 범위일 수 있다. 또 다른 경우에서, pH는 약 5.8(예를 들어, 5.8 +/- 0.15 또는 5.8 +/- 0.1)일 수 있다.
가스는 바람직하게는 실질적으로, 인지질 용액 및 인지질 현탁액을 포함하는, 본 명세서에서 제공된 인지질 제제에 불용성이다. 가스는 불용성 플루오르화 가스, 예컨대 황 헥사플루오라이드 또는 퍼플루오로카본 가스일 수 있다. 퍼플루오로카본 가스의 예로는 퍼플루오로프로판, 퍼플루오로메탄, 퍼플루오로에탄, 퍼플루오로부탄, 퍼플루오로펜탄, 퍼플루오로헥산을 포함한다. 사용될 수 있는 가스의 예가 미국 특허 제5,656,211호에 기재되어 있으며, 본 명세서에 참고문헌으로 포함된다. 중요한 구현예에서, 가스는 퍼플루오로프로판이다.
2가 금속 양이온, 및 그의 측정 방법
2가 금속 양이온은 2가의 2가 금속 이온이다. 이들은 바륨(2+), 베릴륨(2+), 카드뮴(2+), 칼슘(2+), 크롬(2+), 코발트(2+), 구리(2+), 유로퓸(2+), 가돌리늄(2+), 게르마늄(2+), 철(2+), 란타늄(2+), 납(2+), 마그네슘(2+), 망간(2+), 수은(2+), 니켈(2+), 오스뮴(2+), 플라티늄(2+), 루테늄(2+), 스트론튬(2+), 주석(2+), 우라늄(2+), 바나듐(2+), 이트륨(2+), 및 아연(2+)을 포함한다.
일부 구현예에서, 관심 대상의 2가 금속 양이온은 칼슘, 마그네슘 및 망간이다. 일부 구현예에서, 관심 대상의 2가 금속 양이온은 칼슘 및 마그네슘이고, 따라서 단지 칼슘 및 마그네슘만이 측정되거나, 성분들은 그들의 단지 칼슘 및 마그네슘 함량에 기초하여 선택된다. 일부 구현예에서, 관심 대상의 2가 금속 양이온은 칼슘이고, 따라서 단지 칼슘만이 측정되거나, 성분들은 그들의 칼슘 농도에 기초하여 선택된다.
2가 금속 양이온의 효과
본 명세서에서 설명된 바와 같이, 2가 금속 양이온은 UCA 제제를 만드는 데 사용된 하나 이상의 성분 내에 존재할 수 있다. 이들의 존재는, 예를 들어 인지질 침전이 유도될 수 있는 지점인, 그러한 성분들이 비-수성 용매와 조합되어 인지질 용액을 형성할 때까지, 또는 예를 들어 포스페이트 침전이 형성될 수 있는 지점인, 그러한 성분들이 수성 용매와 조합되어 인지질 현탁액을 형성할 때까지 인지되지 않을 수 있다. 놀랍게도, 이는 MPEG5000-DPPE 인지질 스톡이 일단 조합되면 적어도 DPPA 인지질의 침전을 일으키기에 충분히 높은 농도로 칼슘 및 마그네슘을 함유하였음이, 본 개시 내용에 따라 발견되었다. 따라서, 2가 금속 양이온은 상이한 인지질에 대해 상이한 효과를 가질 수 있으며, 인지질(또는 기타 성분)이 침전을 유도하기에 충분한 농도로 그러한 양이온을 함유하는지의 여부는 사용자에게 쉽게 명백하지 않을 수 있다.
다양한 UCA 제제의 제조 공정에서, DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE 인지질을 포함하는 인지질 블렌드와 조합된 경우 비-수성 용매가 혼탁하게 되었음을 본 발명자들은 발견하였다. 혼탁한 외관이 DPPA 인지질의 침전 때문일 수 있음이 추가로 판단되었다. 그러나, 발명자에게 알려지지 않은 것은, MPEG5000-DPPE가 고농도의 칼슘 및 마그네슘 이온을 함유하고 있으며, 이들 칼슘 및 마그네슘 농도가 DPPA 침전의 원인일 가능성이 높다는 사실이다. 흥미롭게도, 그러한 양이온은 MPEG5000-DPPE가 용액에 남아 있는 능력에 영향을 미치지 않는 것으로 보였으므로, 사용자는 그러한 인지질이 비-수성 혼합물에서 다른 것들과 조합될 때까지 그 사실을 인지하지 못할 것이었다. 본 명세서에서 더욱 상술되는 추가 연구는, 이후 고 칼슘 농도를 갖는 것으로서 특성화된 MPEG5000-DPPE 스톡이 DPPA와 조합된 경우, 기타 인지질, 예컨대 DPPC 및 DPPA와 같은 다른 성분의 첨가 순서 또는 존재와 무관하게, 침전이 발생되었음을 발견하였다. 충분히 높은 2가 금속 양이온 농도, 예컨대 칼슘 및 마그네슘 농도 존재 하에 PG를 포함하는 비-수성 용매 중에서, 그러나 유사하게 높은 농도의 칼슘 및 마그네슘 중 어느 하나 또는 이들 모두를 갖는 수성 용매 중에서는 아닌, 침전물에 대한 DPPA의 민감도는 훨씬 더 놀라운 것이었다. 즉, PG를 포함하는 비-수성 용매 중에서 DPPA 침전을 일으킨 칼슘의 농도는 수성 용매에서는 DPPA 침전을 일으키지 않았으며, 이 역시 매우 놀라운 것이었다.
없거나 낮은 2가 금속 양이온 농도
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 칼슘 농도가 없거나 낮은 것을 포함하여, 2가 금속 양이온 농도가 없거나 낮은 것으로 특성화되거나 동정된 성분들이 선택된다. 그러한 2가 금속 양이온 농도는 중량 대 중량 측정(즉, 관심 대상의 성분이 존재하는 기본 기질 또는 용매의 단위 중량 당 2가 금속 양이온의 중량)으로서 표시된다. 1 g당 마이크로그램 농도는 1 백만 당 부 또는 ppm으로서 대안적으로 지칭될 수 있다.
그러한 성분의 없거나 낮은 칼슘 농도는 그 성분이 얼마나 많이 사용되는지 또는 달리 말하면 그러한 성분이 얼마나 많이 희석되어 인지질 용액 또는 인지질 현탁액을 형성하는지에 따라 추가로 달라질 것이다.
가장 간단한 경우, 단지 하나의 성분이 관심 대상이고, 그의 칼슘 농도만이 측정되거나 단지 그 성분만이 그의 칼슘 농도를 기초로 선택된다. 이러한 개시 내용에 기초하여, 본 기술분야의 당업자는, 인지질 용액 또는 인지질 현탁액 중에서 침전을 방지하기 위하여 얼마나 많은 칼슘이 그 성분 내에서 허용될 수 있을 것인지를 이해하고 결정할 수 있을 것이다.
예로서, 인지질 스톡(통상적으로, 고체, 예컨대 분말로서 제공됨) 내 칼슘 농도는 인지질 1 g 당 칼슘 중량으로 표시된다. 예로는, MPEG5000-DPPE 1 g 당 칼슘 중량 또는 DPPC 1 g 당 칼슘 중량이다. 두 성분, 예컨대 2 개의 인지질이 조합된 경우, 측정치는 조합된 MPEG5000-DPPE 및 DPPC 1 g 당 칼슘 중량일 수 있다.
2가 금속 양이온이 없는 것, 예컨대 칼슘이 없는 것은 당 기술 분야에 알려지고/거나 본 명세서에서 제공된 방법을 이용하여 검출 가능하지 않은 그러한 양이온의 농도를 지칭한다.
인지질 스톡에서 없거나 낮은 2가 금속 양이온 농도는 특정 성분에 따라 달라질 것이다.
MPEG5000-DPPE 인지질 스톡에서 없거나 낮은 2가 금속 양이온 농도는 510 마이크로그램/그램 미만(즉, MPEG5000-DPPE 1 g 당 2가 금속 양이온의 마이크로그램)(510 ppm 미만으로도 지칭됨)이며, 이는 345 ppm 미만, 230 ppm 미만, 115 ppm 미만, 57.5 ppm 미만 및 11.5 미만을 포함한다.
DPPC 인지질 스톡에서 없거나 낮은 2가 금속 양이온 농도는 390 마이크로그램/그램(즉, DPPC 1 g 당 2가 금속 양이온의 마이크로그램) 미만(390 ppm 미만으로도 지칭됨)이며, 이는 270 ppm 미만, 180 ppm 미만, 90 ppm 미만, 45 ppm 미만, 및 9 ppm 미만을 포함한다.
DPPA 인지질 스톡에서 없거나 낮은 2가 금속 양이온 농도는 3440 마이크로그램/그램(즉, DPPA 1 g 당 2가 금속 양이온의 마이크로그램) 미만(3440 ppm 미만으로도 지칭됨)이며, 이는 2340 ppm 미만, 1560 ppm 미만, 780 ppm 미만, 390 ppm 미만, 및 78 ppm 미만을 포함한다.
인지질 블랜드에서 없거나 낮은 2가 금속 양이온 농도는 210 마이크로그램/그램(즉, 인지질 블랜드 또는 MPEG5000-DPPE 및 DPPC 및 DPPA의 조합된 중량의 1 g 당 2가 금속 양이온의 마이크로그램) 미만(210 ppm 미만으로도 지칭됨)이며, 이는 150 ppm 미만, 100 ppm 미만, 50 ppm 미만, 25 ppm 미만 및 5 ppm 미만을 포함한다.
프로필렌 글리콜에서 없거나 낮은 2가 금속 양이온 농도는 3.1 마이크로그램/그램(즉, 프로필렌 글리콜 1 g 당 2가 금속 양이온의 마이크로그램) 미만(3.1 ppm 미만으로도 지칭됨)이며, 이는 2.1 ppm 미만, 1.4 ppm 미만, 0.7 ppm 미만, 0.35 ppm 미만, 및 0.07 ppm 미만을 포함한다.
1:1(중량 대 중량) 프로필렌 글리콜 및 글리세롤 혼합물에서 없거나 낮은 2가 금속 양이온 농도는 10.4 마이크로그램/그램(즉, 조합된 프로필렌 글리콜 및 글리세롤 1 g 당 2가 금속 양이온의 마이크로그램) 미만(10.4 ppm 미만으로도 지칭됨)이며, 이는 7.8 ppm 미만, 5.2 ppm 미만, 2.6 ppm 미만, 1.3 ppm 미만, 및 0.26 ppm 미만을 포함한다.
글리세롤에서 없거나 낮은 2가 금속 양이온 농도는 20.4 마이크로그램/그램(즉, 글리세롤 1 g 당 2가 금속 양이온의 마이크로그램) 미만(20.4 ppm 미만으로도 지칭됨)이며, 이는 15.3 ppm 미만, 10.2 ppm 미만, 5.10 ppm 미만, 2.6 ppm 미만, 0.51 ppm 미만을 포함한다.
비-수성 용매로서 프로필렌 글리콜만을 포함하는 인지질 용액에서 없거나 낮은 2가 금속 양이온 농도는 3.1 마이크로그램/그램(즉, 인지질 용액의 모든 성분들의 1 g 당 2가 금속 양이온의 마이크로그램) 미만(3.1 ppm 미만으로도 지칭됨)이며, 이는 2.1 ppm 미만, 1.4 ppm 미만, 0.7 ppm 미만, 0.35 ppm 미만 및 0.07 ppm 미만을 포함한다. 이는 인지질 용액의 조성에 기초하여 이해될 것임에 따라, 중량 기준 주요 성분은 비-수성 용매이며, 이러한 특정 경우에서 프로필렌 글리콜이다.
동일한 농도 제한이 칼슘 농도 및 마그네슘 농도뿐만 아니라 조합된 칼슘 및 마그네슘 농도에 적용된다는 것이 이해되어야 한다.
본 개시 내용은, 선택적으로, 인지질 용액의 성질에 따라, 비-수성 용매, 예컨대 프로필렌 글리콜 및/또는 글리세롤의 2가 금속 양이온 농도의 측정과 함께, 예를 들어 인지질 스톡 중 1 개, 2 개 또는 3 개의 성분 모두를 포함하여, 인지질 용액의 하나 이상의 성분에서 2가 금속 양이온 농도를 측정하는 것에 관한 것이다. 이들 성분들 중 임의의 것이 상기 언급된 수준을 초과하는 2가 금속 양이온 농도를 함유하는 경우, 일단 인지질 용액이 그러한 성분과 함께 제조되면, 그러한 인지질 용액은 침전되는 경향이 있을 것으로 예측된다.
일부 구현예는, 단일 성분이 2가 금속 양이온 농도에 대해 분석될 것이고, 만일 그 농도가 "없거나 낮은 2가 금속 양이온 농도"인 경우, 성분이 2가 금속 양이온 농도에 대해 분석되지 않는다 하더라도, 그 성분이 남아 있는 성분과 함께 조합될 수 있음이 고려된다. 인지질 용액의 성분은, 개별적으로 또는 블렌드로서 제공되었는지의 여부에 관계 없이, 비-수성 용매, 예컨대 프로필렌 글리콜 및 글리세롤, 및 선택적으로 완충액을 포함한다.
일부 구현예는, 인지질 용액의 하나 초과이지만 모두는 아닌 성분들이 그의 2가 금속 양이온 농도에 대해 측정될 것임을 고려한다. 일부 경우들에서, 성분들 중 하나가 상기에 언급된 "없거나 더 낮은 2가 금속 양이온 농도" 제한을 초과하는 2가 금속 양이온 농도를 갖는 경우, 인지질 용액(또는 인지질 블렌드)을 제조하는 데 사용되지 않을 수 있다. 일부 경우들에서, 하나의 성분도 "없거나 낮은 2가 금속 양이온 농도" 초과인 2가 금속 양이온 농도를 갖는 것으로 특성화되거나 동정되지 않을 수 있다. 그러나, 그러한 성분이 조합되어 사용되는 경우, 조합된 2가 금속 양이온 농도는 인지질 용액에 각각 기여하는 양에 기초하여 결정될 수 있다. 조합된 2가 금속 양이온 농도는 인지질 용액에 대해 상기 정의된 바와 같은 "없거나 낮은 2가 금속 양이온 농도"를 초과하거나 초과하지 않을 수 있음이 고려된다
논의되어온 바와 같이, 2가 금속 양이온을 지칭하면서 본 명세서에서 설명된 다양한 수준은 칼슘에 동일하게 적용된다. 인지질의 침전이 명백한 최저 칼슘 농도는 비-수성 용매 1 g 당 약 0.7 마이크로그램 칼슘인 것으로 실시예에서 입증되었으며(실시예 1 및 실시예 2 참조), 다르게는 약 0.7 ppm으로 언급된다. 따라서, 비-수성 인지질 용액에서 없거나 낮은 2가 금속 양이온 농도, 예컨대 없거나 낮은 칼슘 농도는 0.7 ppm 미만, 0.35 ppm 미만, 또는 0.07 ppm 미만이다. 0.7 ppm 미만의 인지질 용액 중 2가 금속 양이온 농도 또한 없거나 낮은 2가 금속 이온 농도로서 간주될 것임이 이해되어야 한다.
수성 인지질 현탁액 중 2가 금속 양이온 농도는 수성 용매 1 g 당 2가 금속 양이온의 중량으로서 제공될 수 있다. 통상적으로, 인지질 현탁액은 비-수성 인지질 용액을 수성 용매 내로 약 20배 희석함으로써 형성된다. 따라서, 인지질 현탁액 중 없거나 낮은 2가 금속 이온 농도는 인지질 현탁액 1 g 당 0.035 마이크로그램 미만이다. 유사하게, 인지질 용액으로부터 유래하는 인지질 현탁액 중 칼슘 농도는 인지질 현탁액 1 g 당 0.035 마이크로그램 미만이다.
2가 금속 양이온이 인지질을 침전시키는 농도는 온도 의존적일 수 있다. 더 높은 온도에서는, 침전이 관찰되기 이전에 더 높은 농도의 양이온이 허용될 수 있다. 더 낮은 온도에서는, 더 낮은 농도의 양이온이 침전을 발생시킬 수 있다.
예로서, 약 55℃(예를 들어, 50℃ 내지 60℃)의 온도에서, 없거나 낮은 2가 금속 양이온 농도는 인지질 용액 또는 비-수성 용매의 1 g 당 0.7 마이크로그램 칼슘 미만의 2가 금속 양이온 농도이다. 이러한 수준은 인지질 용액이 더 낮은 온도에서 제조되는 경우 약간 더 낮을 수 있다. 대안적으로, 이러한 수준은 인지질 용액이 더 높은 온도에서 제조되는 경우 약간 더 높을 수 있다.
칼슘 공급원
실시예에서 입증된 바와 같이, 인지질 용액은 특정 수준의 칼슘에 대해 예기치 않게 그리고 특유하게 민감하다. 이러한 특유한 민감도는 이제까지 인지되지 않았다. 인지질 용액의 침전에 대한 칼슘의 영향, 및 따라서 궁극적으로 UCA에 대한 영향을 고려하면, 인지질 용액의 칼슘 농도를 측정하고 그에 따라 제어하는 것은 중요하다. 칼슘은 아래에 설명되는 바와 같이, 인지질 스톡 및 비-수성 용매를 포함하는 인지질 용액의 각 성분들에 존재할 수 있다.
칼슘 및 마그네슘은 주기율표의 2족의 2가 알칼리 토금속이다. 칼슘은 지각에서 질량으로 5번째로 가장 풍부한 원소이고, 양이온 Ca2+ 또한 해수에서 5번째로 가장 풍부하게 용해되어 있는 원소이다. 이는 "경도"에 따라, 수도물에서 다양한 수준으로 발견된다. 총 물의 경도는 Ca2+ 및 Mg2+의 몰 농도의 합계로, 0 내지 60 ppm의 연수에서부터 매우 경수인 181 이상까지의 범위이다.
칼슘 및 마그네슘은 또한 바이오디젤의 미정제 글리세롤 추출물에서 다양한 농도로 발견된다. 칼슘 및 마그네슘의 수준은, 바이오디젤 생산을 위한 종자유에 따라 각각 12 내지 163 ppm 및 4 내지 127 ppm의 범위로 보고되었다(문헌[J. C. Thompson 2006 Applied Engineering in Agriculture Vol. 22(2): 261-265]). 글리세롤은 주로 바이오디젤 부산물로부터 공급된다. 미정제 글리세롤 추출물은 유기 불순물을 제거하기 위해 활성탄으로, 미반응된 글리세롤 에스테르를 제거하기 위해 알칼리로, 그리고 염을 제거하기 위해 이온 교환으로 처리함으로써 정제될 수 있다. 고순도 글리세롤(> 99.5%)은 다단계 증류에 의해 수득된다; 진공은 글리세롤의 높은 끓는점(290℃)으로 인해 도움이 된다.
산업적으로, 프로필렌 글리콜은 프로필렌 산화물로부터 생성된다. 다른 제조자는 200℃(392℉) 내지 220℃(428℉)에서의 비촉매적 고온 공정, 또는 이온 교환 수지 또는 소량의 황산이나 알칼리 존재 하에서, 150℃(302℉) 내지 180℃(356℉)에서 진행하는 촉매적 방법 중 하나를 이용한다. 최종 생성물은 20% 프로필렌 글리콜, 1.5%의 디프로필렌 글리콜 및 소량의 기타 폴리프로필렌 글리콜을 함유한다. 추가의 정제는 완제품 산업 등급 또는 통상적으로 99.5% 이상인 USP/JP/EP/BP 등급의 프로필렌 글리콜을 생성한다. 프로필렌 글리콜은 또한 바이오디젤 부산물인 글리세롤로부터 전환될 수 있다.
약전 등급의 프로필렌 글리콜 및 글리세롤의 칼슘 및 마그네슘 함량은 미국 약전, 유럽 약전, 영국 약전 또는 일본 약전의 분석 요건의 인증으로 정량화되지 않는다.
인지질 DPPA는 적절한 pH에서 이온화될 수 있는 포스페이트를 함유한다. 포스페이트의 두 개의 히드록실 기에 대한 pKa는 6.2 및 1.8이다(문헌[Tatulian Ionization and Binding, 511-552 Phospholipid Handbook, Ed. G Ceve 1993]). DPPA는 상이한 염 형태로 구매 가능하다. 일반적으로, Na 염이 사용되지만 Ca 염 또한 이용할 수 있다.
DPPC는 양쪽성 이온이며, 따라서 반대 이온을 필요로 하지 않는다.
MPEG5000-DPPE는, 포스페이트의 히드록실 및 에탄올아민의 아민에 대해 1.9 및 9.3의 pKa를 갖는 개질된 DPPE이다(문헌[Tatulian Ionization and Binding, 511-552 phospholipid Handbook, Ed. G Ceve 1993]). MPEG500-DPPE는 Na 염 형태로 이용할 수 있다.
2가 금속 양이온 농도의 측정 방법
2가 금속 양이온 농도의 정량은 몇몇 알려진 기술들 중 하나를 이용하여 수행될 수 있다. 이들은 원자 분광법, 예컨대 원자 흡수 분광법(AAS), 불꽃 광도법 또는 불꽃 원자 방출 분광법(FAES), 유도 결합 플라즈마-원자 방출 분광법(ICP-AES), 및 기타 방법, 예컨대 유도 결합 플라즈마-질량 분석법 또는 착염 적정법을 포함한다. 분광분석적 시도는, 불꽃원에 의해 제공된 열 에너지로 인해 분해된 경우 알칼리 금속(1족) 및 알칼리 토금속(II족) 금속의 금속 이온의 흡수 또는 방출 특징을 이용한다. ICP-MS는 매우 낮은 농도에서 금속을 검출할 수 있는 질량 분석법의 한 유형이다. 이는 샘플을 유도 결합 플라즈마로 이온화하고, 이어서 질량 분석기를 이용하여 그러한 이온들을 분리하고 정량화함으로써 달성된다. 이들 방법의 일부가 실시예에 사용된다.
착염 적정은 2가 금속 양이온 농도를 검출하기 위한 또 다른 방법이다. 이 방법은 색상 지시약에 비견되는, EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산)과 칼슘 및 마그네슘 이온의 착화물을 이용한다. 이것은 신속한 비색 정량을 가능하게 한다. EDTA는 칼슘 및 마그네슘 이온과 착물을 형성한다. 에리오크롬 블랙(Eriochrome Black) T(ErioT)로 명명되는 청색 염료가 지시약으로 사용된다. 이러한 청색 염료는 또한 칼슘 및 마그네슘 이온과 착물을 형성하고, 과정 중에 색상은 청색에서 분홍색으로 변화된다. 염료-금속 이온 착물은 EDTA-금속 이온 착물보다 덜 안정적이다. 적정을 위해, 칼슘 및 마그네슘 이온을 함유하는 샘플 용액은 과량의 EDTA와 반응된다. 지시약이 첨가되고, 존재하는 모든 Ca2+ 및 Mg2+ 이온이 EDTA와 착화됨에 따라 청색으로 유지된다.
역적정은 염화마그네슘 용액을 이용하여 수행된다. 이는 모든 과량의 EDTA가 착화된 때, 종말점까지 과량의 EDTA 분자와 착물을 형성한다. 이어서 염화마그네슘 용액 중 잔류하는 마그네슘 이온은 ErioT 지시약과 착화되기 시작하고, 즉시 색상이 청색에서 분홍으로 변한다.
합성 방법
본 개시 내용은 인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 포함하는 UCA 제제를 형성하기 위해 퍼플루오로카본 가스와 함께 사용하기 위한 인지질 용액 및 인지질 현탁액의 제조 방법을 제공한다. 바람직한 구현예에서, 인지질은 DPPA, DPPC 및 DPPE, 예컨대 MPEG5000-DPPE이다.
인지질 용액은 아래에 설명되는 바와 같이, 다양한 방법으로 제조될 수 있다. 이들 방법은 혼합 및 비-혼합 방법에 따라 광범위하게 특성화된다. 출발 인지질 스톡은 고체(예를 들어, 분말) 형태 또는 액체 형태일 수 있다.
혼합 방법
혼합 방법은 인지질 함량 및 인지질 분포와 관련하여 더욱 균일한 (그리고 이에 따라 더욱 균질한) 고체 인지질 혼합물을 만들기 위하여, 그리고 일부 경우에서는 인지질의 단순 혼합물에 비해 더 높은 순도를 갖도록 하기 위하여 인지질들이 서로 밀접하게 혼합되는 방법을 지칭한다.
이 방법은 세 개의 인지질을 적절한 혼합 용매계 중에 용해하거나 현탁시킴으로써 이들의 균질한 분산을 생성하고, 이어서 균일하게 분산된 인지질을 용매로부터 분리한다. 인지질로부터 혼합 용매의 분리는 건조, 동결건조, 증류 등을 포함하거나, 추가의 혼합 용매를 이용하는 침전을 포함할 수 있다. 중성 지질용 혼합 용매는 상대적으로 비극성 용매, 예컨대 디에틸 에테르 또는 클로로포름이다. 더 극성인 혼합 용매, 예컨대 알코올(예를 들어, 메탄올 및 에탄올)은 그 자신이 더욱 극성인 막-결합 지질을 위해 요구된다. 클로로포름 또한, 특히 중간 극성의 지질에 사용될 수 있다. 메탄올과 혼합된 경우, 클로로포름은 일반 용매가 된다. 디클로로메탄(또는 2염화메틸렌)은 유사한 추출 용매이지만 덜 산화성이다. 헥산은 낮은 극성의 지질에 사용될 수 있다. 이는 물/알코올 혼합물로부터 중성 지질을 추출하기 위하여 사용될 수 있다. 석유 에테르는 5 내지 8 개의 탄소 원자를 갖는 다양한 탄화수소의 혼합물이며, 일부 경우에서는 헥산 대신 사용될 수 있다. 기타 혼합 용매는 제한 없이, 시클로헥산 및 톨루엔을 포함한다.
아래에서 더욱 상세히 기재되는 바와 같이, 특정 블렌드는 혼합 용매계 내에서 하나 이상의 바람직한 인지질(예를 들어, DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE)을 접촉시켜 그 인지질을 먼저 용해시키고, 이어서 선택적으로 그 용액을 농축하고, 이어서 혼합 용매를 제거하거나 그 용매로부터 인지질 블렌드를 침전시킴으로써 형성된다. 혼합 용매는, 인지질을 이후 용해시킴으로써 인지질 용액을 형성하기 위해 사용되는 비-수성 용매와 혼동되지 않는다. 또한, 이러한 침전은 바람직한 경우이며, 칼슘, 또 다른 2가 양이온, 또는 2가 양이온들의 조합의 존재에 의해 인지질 용액을 형성하는 이후의 단계 동안 발생할 수 있는 바람직하지 않은 인지질 침전과 혼동되지 않는 것이 분명해야 한다.
인지질 용액을 제조하는 일부 방법은 인지질 블렌드를 비-수성 용매와 접촉시키는 단계를 포함한다. 인지질 블렌드를 제조하는 다양한 방법이 존재하며, 이는 유기 용매(또는 본 명세서에 사용된 바와 같은, 혼합 용매) 용해-침전 방법 및 수성 현탁액-동결건조 방법을 포함하지만 이로 제한되지는 않는다.
유기 용매 용해-침전 방법은 미국 특허 제8,084,056호에 상세하게 설명되어 있으며, 국제 특허 출원 제 WO99/36104호에 공개되어 있고, 이들 둘 모두의 전체 내용은 본 명세서에 참고문헌으로 포함된다. 이 방법의 일 구현예는 하기 단계를 포함한다:
(a) 원하는 인지질(예를 들어, DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE 또는 DPPC 및 MPEG5000-DPPE)을 제1 혼합 용매계와 접촉하는 단계. 이 계는 통상적으로 용매, 예를 들어 CHCl3/MeOH, CH2Cl2/MeOH, 및 톨루엔/MeOH의 조합이다. 결과 용액을 완전한 용해를 달성하기에 충분한 온도까지 가온시키는 것이 바람직할 수 있다. 그러한 온도는 바람직하게는 약 25℃ 내지 75℃, 더욱 바람직하게는 약 35℃ 내지 65℃이다. 용해 후, 용해되지 않은 이물질은 가열-여과하거나 실온까지 냉각하고 여과함으로써 제거할 수 있다. 알려진 여과 방법(예를 들어, 중력 여과, 진공 여과, 또는 가압 여과)을 사용할 수 있다.
(b) 이어서 용액을 진한 겔/준고체로 농축한다. 바람직하게는 진공 증류에 의해 농축을 수행한다. 용액을 농축하는 다른 방법, 예컨대 회전 증발을 사용할 수도 있다. 이 단계의 온도는 바람직하게는 약 20℃ 내지 60℃, 더욱 바람직하게는 30℃ 내지 50℃이다.
(c) 이어서 진한 겔/준고체를 제2 혼합 용매 중에 분산한다. 혼합물은, 바람직하게는 상온 가까이에서 슬러리화시킨다(예를 들어, 15℃ 내지 30℃). 유용한 제2 혼합 용매는 인지질을 침전시키는 것들이다. 제2 혼합 용매는 바람직하게는 메틸 t-부틸 에테르(MTBE)이다. 다른 에테르 및 알코올을 사용할 수 있다.
(d) 이어서 제2 혼합 용매의 첨가에 따라 생성된 고체를 수집한다. 바람직하게는 수집된 고체를 또 다른 분량의 제2 혼합 용매(예를 들어, MTBE)로 세척한다. 수집은 진공 여과 또는 원심분리를 통해, 바람직하게는 상온에서 수행될 수 있다. 수집 후, 고체를 약 20℃ 내지 60℃의 온도에서 진공 하에서 건조하는 것이 바람직하다.
결과 고체는 본 명세서에서 인지질 블렌드로서 지칭된다.
본 명세서에서 설명된 특정 방법은 인지질 블렌드의 형태로 인지질을 사용하며, 이는 상기 설명된 혼합 방법 중 임의의 것에 따라 제조된 인지질 블렌드를 포함한다. 일부 방법은 인지질 블렌드를 이용하며, 메탄올 및 톨루엔 혼합물이 제1 혼합 용매로서 사용되고 MTBE가 제2 혼합 용매로서 사용된, 상기 설명된 메탄올/톨루엔/MTBE 방법에 따라 제조된 인지질 블렌드는 제외한다. 명확성을 위해, 상기 설명된 방법은 본 명세서에서 메탄올/톨루엔/MTBE 인지질 혼합 방법으로 지칭된다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 인지질 블렌드는, 본 명세서에서 설명된 바와 같이, 고체(분말 포함) 형태의 인지질을 단순 조합함으로써 제조된 그러한 혼합물을 포함하는, 다른 인지질 혼합물과 구분된다.
수성 현탁액-동결건조 방법에서, 인지질은 승온된 온도에서 물에 현탁되고, 이어서 동결건조에 의해 농축된다.
유기 용매 용해-침전 공정은, 미국 특허 제8,084,056호 및 공개된 PCT 출원 WO 99/36104호에 개괄된 바와 같이 다양한 이유로 수성 현탁액/동결건조 공정에 대해 바람직하며, 이는 유기 용해법을 이용한 결과로 균일하게 분포된 인지질 고체를 포함한다.
상기 언급된 메탄올/톨루엔/MTBE 인지질 혼합 방법이 아닌 일부 혼합 방법은 메탄올 및 톨루엔 외의 혼합 용매계를 이용한다. 이들 방법에서, 인지질은 메탄올이 없고, 톨루엔이 없는 조건(메탄올 및 톨루엔이 없는 조건으로도 지칭됨)에서 조합되어 인지질 블렌드를 형성한다. 따라서, 메탄올 및 톨루엔이 없는 조건은 이들 용매 모두를 포함하지 않는 조건을 지칭한다.
일부 혼합 방법은 혼합 용매 중에서 인지질을 조합하여 인지질 블렌드를 형성하고, 이어서 예를 들어 건조 또는 증류에 의해 혼합 용매를 완전하게 증발시켜 건조된 인지질 블렌드를 형성한다. 이는 본 명세서에서 제공된 방법에서, 이어서 비-수성 용매, 예컨대 PG와 접촉되는 이러한 건조된 인지질 블렌드이다.
일부 혼합 방법은 수성 용매 중에서 인지질을 조합하고, 이어서 그 혼합물을 동결건조하여 동결건조된 인지질 조성물을 형성한다. 기타 혼합 방법은 인지질을 물 대신 다른 용매계, 예컨대 이로 제한되지는 않지만, (1) 에탄올 및 시클로헥산(예를 들어, 1:1, 부피:부피) 혼합물 및 (2) 삼차 부탄올(t-부탄올 또는 1,1 디메틸 에탄올)과 조합한다. 이들 다양한 용매 중에서의 용해에 이어, 조성물은 동결건조된다. 동결건조는, 생성물의 외관이 건조되고 응집된(flocculent) 것으로 보일 때까지 이소프로판올/CO2 조 또는 아세톤/CO2 조에서 동결되고, 비르티스(Virtis) 동결건조기 상에서 건조됨으로써 수행될 수 있다.
상기 언급된 메탄올/톨루엔/MTBE 인지질 혼합 방법이 아닌 다양한 혼합 방법이, 그 전체 내용이 본 명세서에 참고문헌으로 포함된 유럽 공개 특허 0923383(WO1997040858)에 기재되어 있다.
상기 언급된 메탄올/톨루엔/MTBE 인지질 혼합 방법이 아닌 일부 혼합 방법은, 톨루엔 및 메탄올의 혼합물일 수 있는 혼합 용매 중에서 인지질을 조합하여 인지질 블렌드를 형성하고, 이어서 그 인지질 블렌드를 MTBE 부재 하에서 침전시킨다. 이들 방법에서, 침전은 MTBE가 없는 조건 하에서 발생된다.
다른 혼합 방법에서, DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE(또는 DPPC 및 MPEG5000-DPPE)는, 그의 건조한, 고체 형태로 조합될 수 있고, 그러한 조합물은 이어서 건조 형태로 능동적이고 직접적으로 (예를 들어, 인지질의 균일한 블렌드(예를 들어, 혼합물 전체에 걸쳐 균일한 인지질 분산물)를 제조하기 위한 목적으로, 분말을 수동으로 교반하거나 혼합 장치, 예컨대 텀블러 싸일로(silo) 믹서, 궤도(orbiting) 스크류 믹서, 리본 믹서, 압출기, 시클로믹스(cyclomix), 헨켈(henschel) 믹서, 로지(lodige)형 믹서, 아이리히(Eirich)형 믹서, 또는 약제 분말 혼합을 위해 설계된 기타 유형의 장치를 이용하여) 혼합될 수 있다. 균일한 건조 생성물을 생성하기 위한 추가의 방법론을 위해 문헌[Deveswaran et al. Research J. Pharm. and Tech.2 (2): April.-June. 2009]을 참조할 수 있다.
비-혼합 방법
혼합 방법과 대조적으로, 특정 비-혼합 방법은 고체 인지질들의 단순 혼합을 포함하며, 이는 덜 균일한(그러므로 덜 균질하게 분산되거나 더 이종성으로 분산된) 혼합물을 초래하는 경향이 있다. 이들 후자의 혼합물은, 이들을 인지질 블렌드와 구분하기 위하여 본 명세서에서 인지질 혼합물(또는 비-혼합 인지질 혼합물)로서 지칭된다.
인지질 용액을 제조하는 일부 방법은 고체 형태의 인지질을 비-수성 용매와 단순 접촉시키는 단계를 포함한다. 인지질은 동시에 또는 연속적으로 비-수성 용매와 접촉될 수 있다. 연속적인 경우, 임의의 첨가 순서가 사용될 수 있다. 인지질은 비-수성 용매에 개별적으로 첨가될 수 있거나, 먼저 함께 임의의 조합으로 조합된 후에 비-수성 용매에 첨가될 수 있다. 따라서, 인지질은 개별적으로 그리고 동시에, 개별적으로 그리고 연속적으로, 조합되어 동시에, 및 부분적으로 조합되어 연속적으로 비-수성 용매에 첨가될 수 있는 것으로 고려된다. 후자의 예는 인지질 둘을 고체 형태로 함께 조합하고, 이어서 잔류하는 인지질이 비-수성 용매와 접촉되기 전 또는 후에 비-수성 용매와 접촉되는 경우이다.
따라서, 예로서, DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE(또는 DPPC 및 MPEG5000-DPPE) 인지질은 개별적으로 비-수성 용매에 첨가될 수 있다. 그러한 개별적인 첨가는 연속적인 첨가이거나 동시 첨가일 수 있다. 연속적인 경우, 일부 경우에서 DPPA는, 최소로 풍부하고 최소로 가용성이고 그의 용해는 다른 인지질들 중 하나의 존재에 의해 촉진될 수 있기 때문에, 두 번째 또는 마지막에 첨가될 수 있지만, 첨가 순서는 임의의 순서일 수 있다. 일부 경우들에서, 인지질이 개별적으로 또는 단순 혼합물로서, 또는 인지질 블렌드로서 제공되는지의 여부와 무관하게, 이어서 이들은 PG 또는 PG/G 혼합물을 포함하는 비-수성 용매 중에 용해되어, 상기 언급된 바와 같이 인지질 용액을 형성한다. 인지질 용액은 가스와 조합될 수 있거나, 수성 용매와 조합되어 결국 가스와 접촉되는 인지질 현탁액을 형성할 수 있다.
다른 경우에서, 인지질 블렌드는 예를 들어, 물, 또는 에탄올 및 시클로헥산(예를 들어, 1:1, 부피:부피) 혼합물 또는 3차 부탄올(t-부탄올 또는 1,1 디메틸 에탄올) 중에서 인지질을 조합함으로써 제조될 수 있고, 이어서 그 혼합물은 동결건조되고, 건조된 생성물은 수성 용매 중에 재현탁된다. 이들 경우에, 최종 재현탁된 생성물은 가스, 예컨대 퍼플루트렌과 조합될 수 있다. 본 개시 내용은, 본 제조에서 사용된 성분들 중 임의의 성분 또는 모든 성분들이 그의 2가 금속 양이온 농도에 대해 분석될 수 있고, 그러한 개별적이거나 조합된 2가 금속 양이온 농도가 정량되고 UCA를 선택하고/거나 제조하는 데 사용될 수 있음을 고려한다.
활성화를 포함하는, 초음파 조영제의 제조 방법
인지질 캡슐화된 가스 마이크로스피어는 인지질 용액 또는 인지질 현탁액을 가스, 예컨대 퍼플루오로카본 가스와 조합하고 격렬히 진탕함으로써 형성된다. 이러한 공정은 본 명세서에서 활성화로서 지칭된다. 이렇게 형성된 UCA 제제는 최소 인지질, PG와 같은 비-수성 용매, 및 가스를 포함하고, 이에 따라 활성화는 최소 가스-충전된 인지질 마이크로스피어를 생성한다. 인지질은 데피니티®의 경우에서와 같이, 수성 용액 중에 존재할 수 있거나, 예를 들어 본 명세서에서 더욱 상세히 설명되는 데피니티-II를 포함하는 신규 UCA 제제의 경우에서와 같이, 비-수성 용액 중에 존재할 수 있다. 따라서, 일부 경우들에서, 활성화는 가스, 예컨대 퍼플루오로카본 가스(예를 들어, 퍼플루트렌)의 존재 하에서 수성 인지질 현탁액을 진탕하는 단계를 포함한다. 다른 경우에서, 활성화는 가스, 퍼플루오로카본 가스(예를 들어, 퍼플루트렌) 존재 하에서 인지질 용액을 진탕하는 단계를 포함한다. 퍼플루트렌, 퍼플루트렌 가스 및 옥타플루오로프로판이 본 명세서에서 교환 가능하게 사용됨을 이해하여야 한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 진탕은, 수성이든 비-수성이든 용액을 교반하여, 가스가 용기(예를 들어, 바이알) 내의 국소적인 주위 환경으로부터 용액으로 도입되도록 하는 운동을 지칭한다. 용액을 교반하고 가스를 도입시키는 임의의 유형의 운동이 진탕을 위해 사용될 수 있다. 진탕은 일정 기간 후에 폼의 형성을 일어나게 하기에 충분한 힘 또는 속도여야만 한다. 바람직하게는, 진탕은 특정 UCA 제제에 의해 규정된 바와 같이, 폼이 짧은 기간 내에 형성되기에 충분한 힘 또는 속도이다. 따라서, 일부 경우에서 그러한 진탕은 약 30 초 동안, 또는 약 45 초 동안, 또는 약 60 초 동안, 또는 약 75 초 동안, 또는 약 90 초 동안, 또는 약 120 초 동안 일어나며, 이는 예를 들어 30 초 동안, 또는 45 초 동안, 또는 60 초 동안, 또는 75 초 동안, 또는 90 초 동안, 또는 120초 동안을 포함한다. 일부 경우들에서, 활성화는 60 내지 120 초의 범위, 또는 90 내지 120 초의 범위에서의 기간 동안 일어날 수 있다.
본 개시 내용은 일부 경우들에서, 활성화되는 UCA 제제의 유형에 따라 진탕 시간(또는 기간)이 달라질 것임을 고려한다. 예를 들어, 일부 경우들에서, 수성 UCA 제제는 비-수성 UCA 제제보다 더 짧은 기간 동안 진탕될 수 있다. 본 개시 내용은, 그러한 경우, 진탕 속도가 일정할 수 있다. 따라서, 활성화 또는 진탕 수단, 예컨대 활성화 또는 진탕 장치는 둘 이상의 상이한 예정된 기간 동안, 하나의 속도(예를 들어, 1 분 당 진탕 운동의 횟수 면에서 정의됨)로 진탕되도록 설정될 수 있다.
본 개시 내용은, 일부 경우들에서, 활성화되는 UCA 제제의 유형에 따라 진탕 속도가 달라질 것임을 추가로 고려한다. 예를 들어, 일부 경우들에서 (수성) 인지질 현탁액은 (비-수성) 인지질 용액보다 더 느린 진탕 속도에서 진탕될 수 있다. 본 개시 내용은 그러한 경우, 진탕 시간(또는 기간, 이들 용어는 본 명세서에서 상호교환 가능하게 사용됨)이 일정할 수 있는 것으로 고려한다.
데피니티®는 하기에 기재되는 바와 같이, 바이알믹스®로 활성화될 수 있다. 퍼플루트렌의 존재 하에서, (수성) 인지질 현탁액의 격렬한 진탕을 포함하는 데피니티® 활성화는 바이알믹스®를 이용하여 약 45 초 동안 지속된다. 달리 표시되지 않는 한, 활성화 시간과 관련하여 용어 "약"은 나타낸 시간의 +/- 20%인 시간(즉, 45 +/- 9 초)을 의도한다.
데피니티-II 역시 바이알믹스®로 활성화될 수 있다. 퍼플루트렌 존재 하에서 (비-수성) 인지질 용액의 격렬한 잔탕을 포함하는 데피니티-II 활성화는 약 60 내지 120 초 동안 지속된다. 일부 경우들에서, 데피니티-II는 약 75 초(즉, 75 +/- 15 초) 동안 활성화된다. 데피니티-II는 90 내지 120 초를 포함하는 더 긴 기간 동안 활성화될 수 있다.
진탕은 소용돌이(예컨대 와동), 좌우 또는 상하 운동에 의한 것일 수 있다. 추가로, 상이한 유형의 운동이 조합될 수 있다. 진탕은 수성 또는 비-수성 인지질 용액을 보유하는 용기(예를 들어, 바이알)를 진탕함으로써, 또는 용기(예를 들어, 바이알) 자체의 진탕 없이 용기(예를 들어, 바이알) 내의 수성 또는 비-수성 용액을 진탕함으로써 일어날 수 있다. 진탕은 공정을 표준화하기 위하여 기계에 의해 수행된다. 기계식 진탕기는 당 기술 분야에 알려져 있으며, 이들의 진탕 메커니즘 또는 수단은 본 개시 내용의 장치에서 사용될 수 있다. 예로는 치과 응용을 위해 사용되는 것들과 같은 수은혼합기(amalgamator)를 포함한다. 격렬한 진탕은 적어도 1000 회, 적어도 2000 회, 적어도 3000 회, 적어도 4000 회, 적어도 4500 회, 적어도 5000 회 또는 그 이상의 1 분 당 진탕 운동을 포함한다. 일부 경우에서, 격렬한 진탕은 1 분 당 4000 내지 4800 회의 진탕 운동의 범위에서의 진탕을 포함한다. 예를 들어 바이알믹스®는 1 분 당 4530 회의 "8 자 모양" 회전을 위한 진탕을 목표로 하며, 1 분 당 4077 내지 4756 회의 회전 범위에서 진탕 속도를 허용한다. 와동은 1 분 당 적어도 250 회, 적어도 500 회, 적어도 750 회, 적어도 1000 회 또는 그 이상의 회전을 포함한다. 1 분 당 적어도 1000 회의 회전 속도에서의 와동은 격렬한 진탕의 예이며, 일부 경우에서 더욱 바람직하다. 1 분 당 1800 회의 회전에서의 와동이 가장 바람직하다.
진탕 속도는 필요한 진탕 기간에 영향을 줄 수 있다. 더 빠른 진탕 속도는 최적의 마이크로버블 형성을 달성하는 데 필요한 진탕 시간의 기간을 짧게 하는 경향이 있을 것이다. 예를 들어, 45 초의 기간 동안 4530 rpm에서의 진탕은 바이알믹스® 상에서 3398 회의 총 회전을 달성할 것이다. 3000 rpm에서의 진탕은 동일한 회전수를 달성하기 위해 68 초가 필요할 것이다. 필요한 기간 및 진탕 속도는 또한 진탕의 이동 경로 및 진폭의 형태에 의해 영향 받을 것이다. 용기 내 액체가 도달하는 속도, 및 방향의 변화에 따라 가해지는 힘은 가스 혼입에 영향을 미칠 것이다. 이들 양태는 진탕기 아암 길이 및 경로에 기초하여, 용기 형태 및 크기, 충전 부피 및 제제 점도에 영향을 줄 것이다. 물은 15℃에서 대략 1.14 cps의 점도를 갖는다(문헌[Khattab, I.S. et al., Density, viscosity, surface tension, and molar volume of propylene glycol + water mixtures from 293 to 323 K and correlations by the Jouyban-Acree model Arabian Journal of Chemistry (2012)]). 대조적으로, 프로필렌 글리콜은 25℃에서 42 cps의 점도를 갖고(문헌[Khattab, I.S. et al., Density, viscosity, surface tension, and molar volume of propylene glycol + water mixtures from 293 to 323 K and correlations by the Jouyban-Acree model Arabian Journal of Chemistry (2012)]), 글리세롤은 15℃에서 2200 cps의 점도를 갖는다(문헌[Secut JB, Oberstak HE Viscosity of glycerol and Its Aqueous Solutions. Industrial and Engineering Chemistry 43. 9 2117- 2120 1951]). 데피니티-II는 15℃에서 1150 cps의 높은 점도를 갖는다. 데피니티®는 주로 물이기 때문에, 데피니티-II보다 훨씬 더 낮은 점도를 갖는다.
활성화 시 가스-충전된 마이크로스피어의 형성은 수성 또는 비-수성 용액의 최상단에서 폼의 존재에 의해 검출될 수 있으며, 용액은 백색이 된다.
활성화는 사용된 지질의 겔 상태에서 액체 결정 상태로의 상 전이 온도 미만의 온도에서 수행된다. "겔 상태에서 액체 결정 상태로의 상 전이 온도"는, 인지질 층(예컨대 지질 단층 또는 이중층)이 겔 상태에서 액체 결정 상태로 전환하는 온도를 의미한다. 이러한 전이는 예를 들어 문헌[Chapman et al., J. Biol. Chem. 1974 249, 2512-2521]에 기재되어 있다. 다양한 인지질의 겔 상태에서 액체 결정 상태로의 상 전이 온도는 당업자에게 쉽게 명백할 것이며, 예를 들어 문헌[Gregoriadis, ed., Liposome Technology, Vol. I, 1-18 (CRC Press, 1984) 및 Derek Marsh, CRC Handbook of Lipid Bilayers (CRC Press, Boca Raton, Fla. 1990), at p. 139]에 기재되어 있다. 격렬한 진탕은 진탕 속도, 기간, 진탕기 아암 길이 및 경로, 용기 형태 및 크기, 충전 부피 및 제제 점도에 기초하여 제제를 가열시킬 수 있다.
본 발명의 개시 내용의 관점에서, 인지질 또는 인지질 마이크로스피어가, 본 명세서에서 제공된 방법에 투입되기 전 또는 후에 조작될 수 있음이 당업자에 의해 이해될 것이다. 예를 들어, 진탕이 완료된 후, 가스-충전된 마이크로스피어는 그의 용기(예를 들어, 바이알)로부터 추출될 수 있다. 추출은 시린지의 바늘 또는 바늘이 없는 스파이크(spike)(예를 들어, PINSYNC®)를, 적절한 경우 폼 내로 삽입하는 것을 포함하여 용기 내로 삽입하고, 플런저(plunger)를 인출하여 예정된 양의 액체를 시린지의 배럴(barrel) 내로 뽑아냄으로써, 또는 수성 액체를 첨가, 혼합하고, 플런저를 인출하여 예정된 양의 액체를 시린지의 배럴 내로 뽑아냄으로써 달성될 수 있다. 또 다른 예로서, 가스-충전된 마이크로스피어는 여과되어 실질적으로 균일한 크기의 마이크로스피어를 수득할 수 있다. 여과 어셈블리는 서로 바로 인접하거나 인접하지 않을 수 있는 하나 초과의 필터를 함유할 수 있다.
대상체의 영상화를 위한 초음파 조영제의 이용 방법
또한, 본 명세서는 인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어 및 그의 제제를 이용하는 방법을 제공한다. 가스 마이크로스피어 및 그의 제제는 인간 또는 비-인간 대상체의 생체 내에서 사용될 수 있거나, 시험관 내에서 사용될 수 있다. 이들은 진단 또는 치료 목적으로 또는 진단 및 치료 목적이 조합되어 사용될 수 있다.
인간 대상체에서 사용되는 경우, 인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어 및 그의 제제는 직접(순수한 상태로) 사용될 수 있거나, 약학적으로 허용 가능한 용액을 포함하는 용액 내에서 추가로 희석될 수 있으며, 하나 이상의 볼러스(bolus) 주사로 또는 연속 주입에 의해 투여될 수 있다. 투여는 통상적으로 정맥 주사이다. 이어서 영상화는 그 직후에 수행된다. 영상화 응용은 심장에 대한 것일 수 있거나, 초음파 영상화에 민감한 신체의 또 다른 부위를 포함할 수 있다. 영상화는 심장, 혈관, 심장맥관구조, 간, 신장 및 머리를 제한하지 않고 포함하는 신체의 하나 이상의 기관 또는 영역의 영상화일 수 있다.
본 발명의 대상체는 인간 및 동물을 포함하지만 이로 제한되지 않는다. 인간은 일부 경우들에서 바람직하다. 동물은 반려 동물, 예컨대 개와 고양이, 및 가축 또는 상품 동물, 예컨대 황소 및 말을 포함하지만 이로 제한되지 않는다.
UCA는 유효량으로 투여된다. 유효량은 의도된 생체 내 반응 및/또는 적용을 용이하게 하거나 일으키는 양일 것이다. 영상화 적용, 예컨대 초음파 적용과 관련하여, 유효량은 대상체 또는 대상체의 영역의 영상화를 가능하게 하는 인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어의 양일 수 있다.
실시예
1. 실시예 방법
1.1 인지질과 인지질 블렌드 및 시약
인지질은 분말로서 함께 조합된 개별적인 분말로서 사용되었고, 혼합물로서 사용되거나 용해 및 건조에 의해 혼합되었다(상세한 내용은 아래에 설명됨). 블렌드를 직접 측정하지 않은 경우 비-수성 농축물 또는 수성 제제에서의 최종 칼슘 또는 마그네슘 농도를 추산하기 위해 개별적인 인지질의 측정된 함량이 사용되었다. 모든 연구에 대해 저 칼슘을 갖는 용매가 사용되었다.
1.1.1 인지질 블렌드
DPPC, DPPA, MPEG5000-DPPE(0.401:0.045:0.304(중량:중량:중량))를 톨루엔/메탄올에 용해시켜 하나의 인지질 블렌드(LB)를 제조하고, 진공 및 가온으로 농축하고, 이어서 메틸 t-부틸 에테르(MTBE)를 첨가하여 슬러리화하였다. 고체 재료를 수집하고, MTBE로 세척하고 건조시켰다(특허 US8084056과 일치함). 대안적으로, DPPC, DPPA, 및 MPEG5000-DPPE(0.401:0.045:0.304(중량:중량:중량))를 메탄올 중 55℃에서 용해시켰다. 이어서 메탄올을 증발시키고, 고형물을 인지질 블렌드로서 회수하였다. 유사하게, DPPC, DPPA, 및 MPEG5000-DPPE(0.401:0.045:0.304(중량:중량:중량))를 고체 분말로서 함께 조합하고, 분말을 약숟가락으로 함께 혼합하였다.
1.1.1.1 인지질 블렌드를 위한 잔류 용매법
인지질 블렌드 내 잔류 용매를 GC 헤드스페이스를 이용하여 FID에 의해 결정하였다. 샘플을 칭량하고, 별개의 20 cc 헤드스페이스 바이알 내로 이동시키고, N-메틸피롤리돈 내에 용해시켰다. 한 세트의 잔류 용매 표준품을 N-메틸피롤리돈 내에서 제조하였다. 표준품 및 샘플을 GC 헤드스페이스를 이용하여 FID에 의해 분석하였다. 각각의 잔류 용매의 농도를 그 용매에 대한 보정 곡선으로부터 계산하였다.
1.1.2 칼슘 측정
ICP-MS 또는 AA를 이용하여, 칼슘 수준을 개별적인 지질, 지질 블렌드, 글리세롤 및 프로필렌 글리콜 중에서 정량하였다. 마그네슘 및 기타 금속 이온 또한 일부 샘플에서 이들 방법을 이용하여 측정하였다.
1.1.1.2 ICP-MS 방법(유도 결합 플라즈마-질량 분석법)
미리-세정된 석영 분해 용기 내로 칭량하여 샘플을 준비하였다. 기질 스파이크(spike)를 첨가하고, 이어서 질산 및 염산을 혼합하였다. 샘플을 밀폐용기 마이크로파 분해 시스템 내에서 분해시켰다. 냉각 후 내부 표준 용액을 첨가하고 He 충돌 모드를 이용하여 ICP-MS에 의해 희석하고 분석하였다.
1.1.1.3 AA(원자 흡수 분광)법
건조된 "미량 금속 세정된" 분해 용기 내로 칭량하여 샘플을 제조하고, 질산 및 염산을 이용하여 용해시키고 H2O2를 이용하여 환류시켰다. 샘플 용액을 물로 세척하고 여과하였다. 한 세트의 표준품을 이용하여 AA를 보정한 후, 보정 곡선으로부터 샘플의 흡광도를 판독하였다. 개별적인 지질, 인지질 블렌드, 및 제제 용매에 대한 결과를 표 1에 제공한다.
1.2 수성 제제 제조
1.2.1 비-수성 인지질 농축물:
인지질 농축물을, 25 내지 115 mL의 프로필렌 글리콜(PG), 또는 1:1 부피/부피 프로필렌 글리콜/글리세롤(PG/G), 또는 글리세롤 비히클에, 55℃ 내지 70℃에서 일정하게 교반하면서, 개별적인 지질(DPPC, DPPA, 및 MPEG5000-DPPE 저 Ca+2, 또는 MPEG5000-DPPE 고 Ca+2, 또는 조합)을 임의의 순서로 첨가하거나, 인지질 블렌드(LB)를 첨가하거나, 높은 수준의 Ca+2를 함유하는 LB를 첨가하여 제조하였다. 일부 경우에서는, 지질 농축물을 DPPA 없이 또는 지질 첨가 전에 첨가된 칼슘 아세테이트를 이용하여 제조하였다.
1.2.2 수성 제제:
수성 제제를, 55℃ 내지 70℃에서 일정하게 교반하면서, 2염기성 인산나트륨, 7수화물; 1염기성 인산나트륨, 1수화물; 염화나트륨; 프로필렌 글리콜; 글리세롤 및 최종적으로 비-수성 인지질 농축물을, 400 내지 500 mL의 물에 첨가하여 제조하였다. 일부 경우에서, 비-수성 인지질 농축물을 벌크 배합 용액에 첨가하기 전 또는 후에 칼슘 아세테이트를 첨가하였다. 다른 경우에서, 포스페이트 완충액은 포함되지 않았다.
1.3 비-수성 제제 제조
1.3.1 비-수성 제제
임의의 순서로 개별적인 지질(DPPC, DPPA, 및 MPEG5000-DPPE 저 Ca+2 또는 MPEG5000-DPPE 고 Ca+2, 또는 둘의 조합), LB, 또는 높은 수준의 Ca+2를 함유하는 LB를, 60℃ ± 5℃에서 일정하게 교반하면서 0.005 M 아세테이트 완충액(90/10, 나트륨 아세테이트/빙초산) 비히클을 함유하는 25 내지 100 mL의 프로필렌 글리콜(PG)에 첨가하였다. 용해 후, 이어서 글리세롤을 첨가하여 비-수성 제제를 생성하였다.
1.4 스톡 용액을 이용한 칼슘 및/또는 마그네슘 첨가
1.4.1 초기 연구
칼슘 아세테이트, 마그네슘 아세테이트 단독 및 이들 둘의 혼합물의 스톡 용액을 프로필렌 글리콜 중에서 제조하였다(각각 25.4 ㎍ Ca+2/g, 28.0 ㎍ Mg+2/g, 및 12.7 ㎍ Mg+2/g과 함께 14.0 ㎍ Ca+2/g). 개별적인 스톡 용액을 지질 블렌드(15 mg/mL)를 함유하는 프로필렌 글리콜 33 mL에 총 1 mL 이하로 나누어 첨가하였다. 용액을 프로필렌 글리콜 단독과 비교하여, 처음 혼탁함을 나타내는 용액을 기록하였다.
1.4.2 기준 척도를 이용한 후속 연구
칼슘 아세테이트 1수화물의 스톡 용액을, 프로필렌 글리콜(299 Ca+2 ㎍/g), 프로필렌 글리콜 및 글리세롤(299 Ca+2 ㎍/g), 또는 물(6085 Ca+2 ㎍/g) 및 프로필렌 글리콜, 비-수성 인지질 농축물 또는 수성 제제에 (비-수성 인지질 농축물을 첨가하기 전 또는 후에) 첨가될 때 매칭된 비히클 중에서 제조하였다. 최대 첨가된 칼슘 스톡은 항상 총 부피의 12% 미만이었다.
일부 비-수성 인지질 농축물은 칼슘 아세테이트로 적정되었다. 외관은 시각적 검사에 의해 0, +, ++, +++의 척도로 평가되었다. 도 1은 결정을 위해 사용된 척도를 제공하며, 이는 15 mg 총 지질/mL로 프로필렌 글리콜 중에서 제조된 저 Ca+2 지질(DPPC, DPPA 및 MPEG5000-DPPE; 0.401:0.045:0.304(중량:중량:중량))을 이용하여 생성되었다.
1.5 여과:
1.5.1 수성 제제
제조된 인지질 수성 현탁액 샘플을 여과 전에 55℃에서 유지하였다. 샘플을 13 mm 친수성 폴리비닐리덴 플루오라이드(PVDF) 0.22 ㎛ 막 시린지 필터가 부착된, 온도가 55℃로 조절된 60 mL 시린지 내에 위치시켰다. 5 psi 질소 헤드 압력을 시린지에 적용하였다. 매 30초 마다 판독하며, 시간 경과에 따라 여과된 용액을 칭량함으로써 유량을 결정하였다. 시점 당 유량을 계산하고, 9 내지 10 분에서 평균 유동을 초기 유동(0 내지 1 분)과 비교하고, 백분율로 표시하였다. 인지질 농도의 분석을 위해 여과 전 샘플을 여과하는 동안 내내 샘플과 함께 수집하였다.
1.5.2 비-수성 제제
제조된 인지질 비-수성 용액 샘플을 여과 전에 60℃에서 유지하였다. 샘플을 25 mm 친수성 폴리에테르설폰(PVDF) 0.2 ㎛ 막 시린지 필터가 부착된, 온도가 60℃로 조절된, 60 mL 시린지 내에 위치시켰다. 10 psi 질소 헤드 압력을 시린지에 적용하였다. 매 30 초마다 판독하며, 시간 경과에 따라 여과된 용액을 칭량함으로써 유량을 결정하였다. 시점 당 유량을 계산하고, 8 내지 9 분 사이에서 평균 유동을 초기 유동(0 내지 1 분)과 비교하고, 백분율로 표시하였다. 투명한 용액에서 유량은 필터가 가온됨에 따라 시간 경과에 따라 증가하는 것으로 나타났다. 샘플을 상기 개괄된 바와 같이 수집하였다.
1.6 인지질 분석:
일부 경우들에서, 샘플을 인지질 함량에 대해 분석하였다. 샘플을 HPLC 바이알로 이동시키고, 역상 HPLC 분리 및 코로나 하전 에어로졸 검출(CAD; 상이한 지질 부류의 측정을 위해 하전된 에어로졸 검출을 이용한 HPLC, 문헌[I.N. Acworth, P.H. Gamache, R. McCarthy and D. Asa, ESA Biosciences Inc., Chelmsford, MA, USA; J. Waraska and I.N. Acworth, American Biotechnology Laboratory, January 2008]) 및 정량화 표준 대 기준 표준에 의해 분석하였다.
1.7 생성물 제조 및 시험
1.7.1 수성 제제
여과된 수성 제제(섹션 1.5.1 참조)를 분취하여(1.76 mL), 2 cc 휘톤(Wheaton) 바이알에 넣고, 헤드스페이스 공기를 퍼플루오로프로판(PFP) 가스로 대체하였으며, 바이알을 웨스트 그레이 부틸 스토퍼로 밀봉하고, 알루미늄 실(seal)로 크림핑(crimping)하였다.
1.7.2 비-수성 제제
여과된 수성 제제(섹션 1.5.2 참조)를 분취하여(0.35 mL), 2 cc 휘톤 바이알에 넣고, 헤드스페이스 공기를 퍼플루오로프로판(PFP) 가스로 대체하였으며, 바이알을 웨스트 그레이 부틸 스토퍼로 밀봉하고, 알루미늄 씨일로 크림핑하였다.
1.7.3 시스멕스(Sysmex) 마이크로스피어 크기 분석:
입자 크기 분석기(맬번(Malvern) FPIA-3000 시스멕스)를 이용하여 샘플을 개수 및 크기 분포에 대해 분석하였다. 수성 또는 비-수성 샘플을 바이알믹스®를 이용하여 최적으로 활성화하였으며, 활성화된 생성물의 일부를 식염수로 희석하고, 이어서 시스멕스의 샘플 용기로 옮겼다. 시스멕스는 적절한 시쓰(sheath) 용액을 사용하고, 저 출력장 및 고 출력장 모두를 이용하여 샘플을 분석하여, 특정 크기 범위(본 연구에서 1 내지 80 ㎛)에 대한 크기 분석 데이터를 생성하였다.
1.7.4 활성화된 생성물의 초음파 조영:
필립스 소노스(Philips Sonos) 5500 임상 초음파 영상화 시스템을 이용하여 선택된 샘플에 대해 음파 감쇠(acoustic attenuation)를 측정하였다. 바이알믹스®을 이용한 최적 활성화 후 10 마이크로리터 샘플을 실온에서 200 ml의 0.9% 식염수를 함유하는 250 mL 비커 내로 피페팅하였다. 둥근, 날개가 있는(vaned) 38 mm 직경의 교반 막대는 용액 균일성을 유지시켰으며, 음향 반사면으로서 제공되었다. 초음파 시스템의 s3 임상 변환기를 비커의 최상부에서 용액 바로 내에, 교반 막대의 위쪽 마진의 4.8 cm 위에 위치시켰다. 이어서 5 초의 120 Hz 이미지가 디지털로 획득되고, 샘플 도입 후 10 초에 시작하는 디스크에 기록되었다. US 시스템이 IPS 모드에 사용되었으며, TGC를 모든 깊이에 대해 최소 값으로 고정시키고, LGC를 사용하지 않도록 하였다. 기계 지표(MI)는 최대 18 dB 미만의 파워 셋으로 0.2였다. 수신 획득(receive gain)은 90에서 고정되었고, 0에서 압축되었다. 각각의 샘플이 시험되는 동안, US 데이터 획득은 (블랭크) 전 및 샘플 주사 후에 획득되었다.
필립스 QLab 버전 2.0을 이용하여 이미지 분석을 수행하였으며, 이는 US 시스템에 의해 생성되고 IBS 모드에 대해 dB로 계산된 값을 판독한다. 관심 영역을 교반 막대 상에서 끌어내고, dB 값을 엑셀(Excel)로 내보냈다. 이어서 이들을 전체 5 초(대략 360 비디오 프레임)에 걸쳐 평균내었다. 감쇠 측정은 평균화된 블랭크 ROI 값에서 평균화된 샘플 ROI 값(모두 dB/cm 단위)을 뺌으로써 얻었다. 이것은 US 변환기와 교반 막대의 상부 마진 사이의 거리의 두 배로 나눔으로써 dB/cm로 감쇠를 산출하였다. 그런 다음 값을 비커 내 계산된 마이크로버블 농도로 나누고, 1 백만 마이크로버블/mL 당 센티미터 당 dB 감쇠로 표시하였다.
실시예 1: 비-수성 인지질 용액에 대한 칼슘 첨가의 효과
본 실시예는 인지질 침전에 대한 칼슘 및 마그네슘 이온의 효과를 입증한다.
실시예 1.1: 비-수성 용매에 대한 칼슘 및 마그네슘 첨가의 영향에 대한 초기 연구
초기 연구에서, 낮은 2가 금속 이온 농도를 갖는 것으로 특성화된 지질 블렌드(LB, 로트 1)(실시예 방법의 표 1)를 55℃±5℃에서 프로필렌 글리콜에 첨가하고 교반하였다. 인지질이 완전히 용해되었고, 생성된 용액이 투명함을 시각적 관찰에 의해 확인하였다. 이 LB 용액을 칼슘(25.4㎍ Ca+2/g), 마그네슘(28.0 ㎍ Mg+2/g) 또는 조합(14.0 ㎍ Ca+2/g 및 12.7 ㎍ Mg+2/g을 함유하는 용액을 만들기 위해 1:1로)으로 적정하였으며, 각각 3.60㎍ Ca+2/g, 4.23㎍ Mg+2/g 및 2.35㎍/g의 조합 금속 이온/g 비-수성 인지질 용액에서 혼탁함을 나타냈다.
실시예 1.2: 비-수성 용액으로의 칼슘 첨가의 효과에 대한 후속 연구
실험을 다음과 같이 수행하였다: 낮은 2가 금속 이온 농도를 갖는 것으로 특성화된 DPPC, DPPA 및 MPEG5000-DPPE 분말(실시예 방법의 표 1 참조)을 개별적으로 (표 2에 나타낸 순서로) 또는 분말 또는 블렌드로서, 가열되고(55℃ ± 5℃) 교반된 프로필렌 글리콜(PG) 또는 프로필렌 글리콜과 글리세롤(PG/G)의 1:1 혼합물에 첨가하였다. 인지질은 완전히 용해되었고, 생성된 용액이 투명함을 시각적 관찰에 의해 확인하였다(=0: 평가 척도에 대해서는 실시예 방법의 섹션 1.4.2, 도 1 참조). 도 2는 DPPC, MPEG5000-DPPE, DPPA 및 칼슘 아세테이트 스톡(스톡 1 mL 당 299 ㎍의 Ca+2을 첨가하여 1 g의 용액 당 11.1 ㎍의 Ca+2를 갖는 지질 농축물을 생성하였음)의 연속적으로 첨가했을 때 프로필렌 글리콜 중 지질 농축물의 출현을 도시한다. 지질 농축물은 칼슘이 첨가될 때까지 혼탁해지지 않았다.
PG 또는 1:1 혼합물 PG/G의 인지질 용액을 일련의 소량의 칼슘 첨가에 의해 적정하였다. 각각의 첨가 후, 용액의 투명도를 평가하고(평가 척도에 대해서는 실시예 방법의 섹션 1.4.2, 도 1 참조), +, ++, 및 +++ 점수를 산출하는 최저 칼슘 농도를 표 2에 나타내었다. 도 3은 연구 4의 적정에 대한 대표적인 용액을 나타낸다.
칼슘 적정은 인지질이 프로필렌 글리콜에 첨가된 방법(개별적으로, 혼합물로서 또는 블렌드로서)에 관계없이, 인지질 용액에서 명확하게 농도 의존적인 침전을 생성하였다(표 2 참조). 지질은 글리세롤 단독 또는 25 mL의 1:1 PG/G에 용해되지 않았지만, 100 mL의 1:1 PG/G(연구 8)에 첨가된 경우 투명한 용액을 얻었다. 칼슘은 처음 발견에 일치하는 이러한 지질 용액에서 농도 의존적인 침전을 생성하였다(표 2 참조). 전반적으로, 이들 적정 연구는 침전을 생성시킨 최저 칼슘, 마그네슘 및 조합 농도가 1.5 ㎍ Ca+2/g, 4.23 ㎍ Mg+2/g, 및 2.35 ㎍ 조합 금속 이온/g 비-수성 인지질 용액임을 나타내었다.
실시예 2: 혼합 시 칼슘을 함유하는 인지질 용액 성분의 효과
실시예 2.1: PG 중의 칼슘
연구 9를 다음과 같이 수행하였다: 저 칼슘 농도를 갖는 것으로 특성화된 DPPC, MPEG5000-DPPE 및 DPPA 분말(실시예 방법의 표 1 참조)을 개별적으로 (표 3에 나타낸 순서로), 가열되고(55℃ ± 5℃) 교반된 11 ㎍/g의 칼슘을 함유하는 PG에 첨가하였다. 투명도를 평가하였으며(섹션 1.4 참조), DPPC가 용해된 후 용액은 투명하였고, DPPA 첨가 후 혼탁해지고 계속 혼탁하였으며, MPEG5000-DPPE의 첨가 후 혼탁하게 유지되었다. 관찰된 혼탁도는 +++로 점수가 매겨졌다(도 1, 섹션 1.4). 이것은 이러한 인지질(DPPA 포함)이 저 칼슘을 함유하는 PG에 첨가된 경우 생성된 투명 용액(연구 1의 경우 출발 용액)과 대조되었다. 이것은 단지 인지질 DPPC 및 높은 Ca+2 수준을 함유하는 MPEG5000-DPPE만이 용해된, 연구 12에 의해 추가로 강조되었으며, 이 용액은 칼슘이 존재하더라도 투명하게 유지되었다.
실시예 2.2: MPEG5000-DPPE로부터의 지질 블렌드 중의 칼슘
초기 실험을, 각각 가열되고(55℃ ± 5℃) 교반된 프로필렌 글리콜에 첨가된, DPPC, DPPA, 및 저 칼슘 및 마그네슘 함유 MPEG5000-DPPE(Ca+2이 검출되지 않거나, 1 ㎍ Mg+2/g, MPEG5000-DPPE) 또는 고 칼슘 및 마그네슘 함유 MPEG5000-DPPE(980 ㎍ Ca+2/g 및 150 ㎍ Mg+2/g, MPEG5000-DPPE 로트 1)를 함유하는 인지질 블렌드(톨루엔 및 메탄올을 이용하여 용해하고 MTBE를 첨가하여 지질 블렌드를 침전시켜 제조됨) 상에서 수행하였다. 두 개의 지질 블렌드를 혼합하여 비-수성 인지질 용액 1 g 당 대략 0, 1.75, 4.11 및 12.9 ㎍의 조합된 Ca+2 및 Mg+2를 갖는 샘플을 제공하였다. 비-수성 인지질 용액 1 g 당 1.75 ㎍의 조합된 Ca+2 및 Mg+2는 혼탁함을 나타내었다.
후속 연구 10 및 연구 11을 다음과 같이 수행하였다: DPPC, DPPA 및 고 칼슘 함유 MPEG5000-DPPE(980 ppm Ca+2, 150 ppm Mg+2, 로트 1) 또는 저 칼슘 함유 MPEG5000-DPPE(4 ppm Ca+2)를 함유하는 인지질 블렌드(톨루엔 및 메탄올을 이용하여 용해하고 MTBE를 첨가하여 인지질 블렌드를 침전시켜 제조됨)를, 가열되고(55℃±5℃) 교반된 PG에 첨가하였다. 투명도를 평가하였으며(섹션 1.4 참조), 고 칼슘(370 ppm Ca+2 및 54 ppm Mg+2로서 측정됨)을 함유하는 인지질 블렌드의 경우 약간의 혼탁함이 관찰되었다(+; 섹션 1.4에서 실시예 방법 참조). 이것은 저 칼슘(검출 가능하지 않은 수준의 Ca+2 및 Mg+2) 함유 인지질 블렌드를 용해시킴으로써 생성되는 투명한 용액과 대조되었다(표 3 참조).
실시예 2.3: 개별적으로 첨가된 MPEG5000-DPPE로부터의 칼슘
연구 13 내지 연구 17을 다음과 같이 수행하였다: 저 칼슘 농도를 갖는 것으로 특성화된 DPPA 및 DPPC(실시예 방법의 표 1 참조)를 개별적으로 (표 4에 나타낸 순서로), 가열되고(55℃ ± 5℃) 교반된 PG에 첨가하였다. 상이한 비율의 "저" 및 "고" 칼슘 및 마그네슘 재료를 함유하는 MPEG5000-DPPE를 첨가하였다. 투명도를 평가하였으며(섹션 1.4의 실시예 방법, 도 1 참조), 칼슘 및 마그네슘 농도 의존적인 침전이 관찰되었다(표 4 및 도 4 참조).
실시예 2의 요약
전반적으로, 이들 연구는, 비-수성 용매 중에 또는 인지질 블렌드를 통해 또는 개별 화합물로서 MPEG5000-DPPE로서 첨가된 경우, 칼슘의 첨가가 모두 침전을 일으켰음을 입증하였다. 효과가 나타나는 농도는 실시예 1의 농도에 비해, 실시예 2와 유사하였다. 혼탁도 (+)를 생성하는 최저 칼슘 농도는 0.7 ㎍/g Ca+2(0.8 ㎍/g 총 Ca+2 및 Mg+2)이었다. 이것은 실시예 1에 나타난 1.5 내지 2.6 ㎍/g과 유사한 농도이다.
실시예 3: 수성 용매에 비-수성 인지질 용액의 첨가
실시예 3.1: 비-수성 인지질 용액 중의 칼슘을 수성 용매에 첨가하는 효과
수성 제제 내로 옮기기 전에 비-수성 인지질 용액 내에 칼슘의 충격을 시험하기 위해 일련의 연구를 수행하였다. 이들은 다음 단계: 1) 비-수성 인지질 용액을 제조하는 단계, 2) 수성 용액을 제조하는 단계 및 3) 단계 1) 및 단계 2)의 용액을 조합하는 단계를 포함한다.
실시예 3.1.1: 비-수성 용액의 제조: 인지질이 용해된 후 비-수성 용액에 첨가된 칼슘
실시예 2와 일치하여, 연구 19, 연구 20 및 연구 22의 제1 단계는 다음과 같았다: 저 칼슘 농도를 갖는 것으로 특성화된 DPPC, DPPA, 및 MPEG5000-DPPE 분말(실시예 방법의 표 1 참조)을, 가열되고(55℃ ± 5℃, 70℃까지 가열된 연구 22는 제외함) 교반된 프로필렌 글리콜에 개별적으로 (표 5에 나타낸 순서로) 첨가하였다. 인지질을 완전히 용해시켜 생성된 용액이 투명하였음을 시각적 관찰에 의해 확인하였다(섹션 1.4의 실시예 방법, 도 1 참조). 프로필렌 글리콜 중 칼슘 아세테이트(Ca(OAc)2)의 용액을 표 5에 나타낸 바와 같이 첨가하였고, 용액을 교반하고 외관의 변화에 대해 용매 블랭크와 비교하여 관찰하였으며, 투명도의 평가를 기록하였다. 칼슘 아세테이트의 첨가에 따라, 용액은 혼탁하게 변하였다. 이들 프로필렌 글리콜 농축물을 아래에 설명되는 바와 같이 수성 상으로 옮겼다.
실시예 3.1.2 비-수성 용액의 제조: MPEG5000-DPPE 내 칼슘
연구 21 및 연구 25의 제1 단계는 다음과 같았다: DPPC, DPPA(연구 25에 포함되지 않음), 및 칼슘 함유 MPEG5000-DPPE 분말(980 ppm, MPEG5000-DPPE 로트 1; 실시예 방법의 표 1 참조)을, 가열되고(55℃ ± 5℃) 교반된 PG에 개별적으로 (표 5에 나타낸 순서로) 첨가하였다. 투명도를 평가하였고, DPPA 첨가 후 연구 21에서 현저한 혼탁도가 관찰되었으며(+++; 섹션 1.4의 실시예 방법, 도 1 참조), MPEG5000-DPPE의 첨가 후 혼탁하게 유지된 반면, DPPA를 함유하지 않은 연구 25에서는 혼탁함이 관찰되지 않았다. 이들 비-수성 인지질 용액을 아래에 설명되는 바와 같은 수성 상으로 옮겼다.
실시예 3.1.3: 비-수성 용액의 제조: MPEG5000-DPPE로부터의 지질 블렌드 중의 칼슘
실시예 2에서와 일치하여, 연구 23 및 연구 24의 제1 단계를 다음과 같이 수행하였다: DPPC, DPPA 및 저 칼슘 함유 MPEG5000-DPPE(4 ppm, 로트 2) 또는 고 칼슘 함유 MPEG5000-DPPE(980 ppm, MPEG5000-DPPE 로트 1)를 함유하는 인지질 블렌드(톨루엔 및 메탄올을 이용하여 용해하고, MTBE를 첨가하여 지질 블렌드를 침전시켜 제조됨)를, 각각, 가열되고(55℃ ± 5℃) 교반된 프로필렌 글리콜에 첨가하였다. 투명도를 평가하였으며, 고 칼슘 함유 인지질 블렌드에서 현저한 혼탁이 관찰되었다(+++; 섹션 1.4의 실시예 방법, 도 1 참조). 이것은 저 칼슘 함유 인지질 블렌드를 용해시켜 생성된 투명한 용액과 대조되었다(표 5 참조). 이들 비-수성 인지질 용액을 아래에 설명되는 바와 같이 수성 상으로 옮겼다.
실시예 3.1.4: 비-수성 용액의 제조: 인지질 첨가 전 PG 중의 칼슘
실시예 2와 일치하여, 연구 28 및 연구 30의 제1 단계를 다음과 같이 수행하였다: 저 칼슘 농도를 갖는 것으로 특성화된 DPPC, MPEG5000-DPPE 및 DPPA 분말(실시예 방법의 표 1 참조)을, 각각, 가열되고(55℃ ± 5℃) 교반된, 11 ㎍/g 칼슘을 함유하거나 인지질 첨가 후에 첨가된 칼슘을 함유하는 PG에 (표 5에 나타낸 순서로) 개별적으로 첨가하였다. 투명도를 평가하였고(섹션 1.4에서 실시예 방법, 도 1 참조), 연구 28에서, DPPC 및 MPEG5000-DPPE가 용해된 후에 용액은 투명하였으나, DPPA 첨가 후에는 혼탁하게 변하여 유지되었다. 연구 30에서 용액은 DPPC, DPPA 및 MPEG5000-DPPE가 용해된 후 투명하였으며, Ca+2의 첨가 후 혼탁해졌다. 두 연구 모두의 혼탁도는 +++로 점수가 매겨졌다(표 5 참조). 이들 비-수성 인지질 용액을 아래에 설명되는 바와 같이 수성 상으로 옮겼다.
실시예 3.2: 수성 용액의 제조:
모든 연구에 대해 수성 용액을 다음과 같이 제조하였다: 별개의 용기 내에 염화나트륨(NaCl), 인산나트륨 2염기 7수화물(Na2HPO4·7H2O), 및 1염기성 인산나트륨(NaH2PO4·H2O)을 교반된 용기 내의 물에 첨가하고, 용해될 때까지 혼합하였다. 또한 프로필렌 글리콜 및 글리세롤을 필요에 따라 첨가하였고, 따라서 인지질 농축물의 최종 첨가는 8:1:1의 물:글리세롤:프로필렌 글리콜 조성물로 재구성할 것이다. 이러한 교반된 용액은 55℃ ± 5℃에서 유지되었다(수성 용액을 70℃에서 유지한 연구 22는 제외함).
실시예 3.3: 비-수성 및 수성 용액의 조합
모든 연구에 대해, 비-수성 인지질 농축물을 수성 용액에 첨가하는 것을 다음과 같이 수행하였다: 프로필렌 글리콜에 가온된 인지질을 첨가하고 100 내지 150 rpm에서 교반하였다. 시각적 관찰을 기록하였고, 완전한 분산 또는 용해를 위한 시간을 (투명 또는 혼탁 중 어느 하나로) 메모하였다. 이어서 이들 수성 현탁액을 수집하고 5 psi 헤드 압력 하에서 55℃에서 0.2 ㎛ 필터를 통해 여과하였다. 유량을 측정하고, 인지질 측정을 위해 샘플을 수집하였다(절차에 대해 실시예 방법 참조). 여과 전 및 여과 후의 샘플을 분석하여 여과와 관련된 인지질 손실의 수준을 결정하였다.
이전의 실시예들과 일치하여, 이들 연구는 고 칼슘 또는 칼슘 및 마그네슘이 존재하는 경우, 비-수성 인지질 용액에서 침전이 발생함을 보여주었다. 이것은 칼슘이 인지질 첨가 전에 프로필렌 글리콜 중에 존재하는지, 인지질 첨가 후에 첨가되었는지, 또는 인지질의 성분들 중 하나와 함께(MPG5000 DPPE와 함께 또는 인지질 블렌드 중에서) 첨가되었는지의 여부와 관계없이 발생하였다. 일단 침전물이 형성되면 수성 용매와 혼합되었을 때 분산되지 않았다. 이는 혼탁한 수성 제제를 초래하였으며, 초기에는 여과 속도를 감소시켰고, 0.2 ㎛ 필터를 종종 차단시켰다(표 5; 도 5). 혼탁한 수성 제제의 여과물은 투명하였지만, 인지질 측정은 일관되게 감소된 DPPA 수준을 나타내었다. 이러한 효과는 개별적으로 첨가된 인지질 및 블렌드로서 첨가된 인지질 모두에서 명백하였다.
실시예 3.4: 비-수성 인지질 용액을 칼슘을 함유하는 수성 용매에 첨가하는 효과
일련의 연구를 수행하여 인지질 현탁액 제조에 대한 수성 용액 중 칼슘의 영향을 조사하였다. 이들은 1) 비-수성 인지질 용액을 제조하는 단계, 2) 수성 용액을 제조하는 단계, 및 3) 단계 1) 및 단계 2)의 용액을 조합하는 단계를 포함하였다.
실시예 3.4.1: 비-수성 용액의 제조
실시예 1과 일치하여, 연구 26, 연구 27 및 연구 29의 제1 단계를 다음과 같이 수행하였다: 저 칼슘 농도를 갖는 것으로 특성화된 DPPC, DPPA 및 MPEG5000-DPPE 분말(실시예 방법의 표 1 참조)을, 가열(55℃ ± 5℃)되고 교반된 프로필렌 글리콜에 개별적으로 (표 6에 나타낸 순서로) 첨가하였다. 인지질이 완전히 용해되었으며, 생성된 용액은 투명함이 시각적 관찰에 의해 확인되었다. 이들 프로필렌 글리콜 농축물을 아래에 설명되는 바와 같이 수성 상으로 옮겼다.
실시예 3.4.2: 수성 용액의 제조
별개의 용기에서, 염화나트륨(NaCl), 인산나트륨 2염기 7수화물(Na2HPO4·7H2O), 및 인산나트륨 1염기(NaH2PO4·H2O)를 교반 용기 내의 물에 첨가하고, 용해될 때까지 혼합하였다(연구 29의 경우, 인산염은 제제에서 제외되었음). 또한 프로필렌 글리콜 및 글리세롤을 필요에 따라 첨가하였고, 따라서 비-수성 인지질 용액의 최종 첨가는 8:1:1의 물:글리세롤:프로필렌 글리콜 조성물로 재구성할 것이다. 일부 연구에서, 물 중 칼슘 아세테이트의 용액(Ca(OAc)2)이 표 6에 나타낸 바와 같이 첨가되었다. 이 수성 용액을 교반하고, 55℃±5℃에서 유지하였다. 48.4 ㎍/g 칼슘의 첨가는 임의의 인지질의 부재 하에서 수성 용액의 현저한 응집을 유발하였음이 확인되었다(표 6, 연구 A 참조). 12.2 ㎍/g 칼슘에서는 수성 용액에서 침전이 생성되지 않았다(표 6, 연구 B 참조).
실시예 3.4.3: 비-수성 및 수성 용액의 조합
모든 연구에 대해, 비-수성 인지질 농축물을 수성 용액에 첨가하는 것을 다음과 같이 수행하였다: 프로필렌 글리콜 중에 용해된 따뜻한 인지질을 첨가하고 100 내지 150 rpm에서 교반하였다. 시각적 관찰을 기록하고, 완전한 분산 또는 용해가 안정화(투명 또는 혼탁 둘 중 하나)되는 시간을 기록하였다. 연구 27의 경우, 수성 제제는 처음에 투명하였다. 칼슘을 적정하였으며, 30.4 ㎍/g 이상의 농도에서 혼탁한 침전물이 형성되었다(표 6 참조). 그러나 인지질이 없는 수성 용액은 48.4 ㎍/g에서 현저히 침전을 나타냈다(연구 A: 표 6). 연구 27에서, 수성 용액 단독으로는 영향받지 않는 칼슘 수준(연구 B에 기초하여 12.2 ㎍/g, 표 6)에서, 수성 인지질 제제의 투명도에 대한 효과는 나타나지 않았다. 이것은 비-수성 인지질 농축물과 조합하기 전에 칼슘이 수성 용액에 첨가(12.2 ㎍/g)된 연구 26에서 확인되었다. 이것은 연구 29에서 추가로 확장되었으며, 여기서 포스페이트 완충액은 수성 용액으로부터 배제되었다. 초기에, 비-수성 인지질 농축물과 조합하기 전에, 칼슘이 수성 용액에 첨가(12.2 ㎍/g)되었으며, 제제는 투명하였다. 인지질 첨가 후 추가의 칼슘을 제제에 96 ㎍/g 이하로 첨가하였으며, 침전은 관찰되지 않았다.
이어서 연구 26 및 연구 29로부터 수성 제제를 수집하고, 5 psi 헤드 압력 하에서 55℃에서 0.2 ㎛ 필터를 통해 여과시켰다. 10 분에서의 유량은 최초 유동에 비해 감소되지 않았다; 모든 샘플을 여과하였고, 전체 여과는 칼슘을 함유하지 않는 제제와 유사하였다(연구 19, 연구 23 및 연구 25 참조). 여과 전 및 여과 후 샘플을 수집하고 비교하여, 여과와 관련된 인지질의 손실을 결정하였다. 중요한 인지질 손실은 뚜렷이 나타나지 않았다(표 6 참조).
이들 연구는 칼슘이 심지어 96 ㎍/g까지 수성 제제에서 인지질 침전을 일으키지 않는다는 것을 입증한다. 그러나, 12.2 ㎍/g 초과의 칼슘 농도에서, 인산염은 침전하기 시작한다.
실시예 4: 완충된 프로필렌 글리콜 중 및 글리세롤 첨가를 이용한 인지질 용해에 대한 2가 금속 이온의 효과
실시예 4.1: 완충된 비-수성 인지질 농축물 중의 칼슘 적정
연구 31 및 연구 32를 다음과 같이 수행하였다: 저 칼슘 농도를 갖는 것으로 특성화된(실시예 방법의 표 1 참조) DPPC, DPPA 및 MPEG5000-DPPE 분말을 개별적으로 (표 7에 나타낸 순서로) 또는 인지질 블렌드(톨루엔 및 메탄올을 이용하여 용해하고, MTBE를 첨가하여 지질 블렌드를 침전시켜 제조됨)로서, 가열되고(55℃ ± 5℃) 교반된 아세테이트 완충된 프로필렌 글리콜에 첨가하였다. 지질은 완전히 용해되었고, 생성된 용액이 투명함을 시각적 관찰에 의해 확인하였다(실시예 방법 섹션 1.4 참조). 프로필렌 글리콜 중 칼슘 아세테이트(Ca(OAc)2) 용액을 일련의 소량으로 첨가하여 인지질 용액을 적정하였다. 용액을 교반하고 적정하는 동안 외관의 변화를 관찰하였으며, 각각의 첨가 및 투명도의 평가를 기록한 후 용매 블랭크와 비교하였다. 이러한 평가에 기초하여 혼탁도 점수(방법에 대해 섹션 1.4, 도 1 참조)를 만들었으며, +, ++, 및 +++ 점수를 생성하는 최저 칼슘 농도를 표 7에 나타낸다.
실시예 4.2: MPEG5000-DPPE로부터의 완충된 비-수성 인지질 농축물 중 칼슘 적정
연구 33 내지 연구 36을 다음과 같이 수행하였다: DPPC, DPPA 및 고 Ca+2 함유 MPEG5000-DPPE(980 ppm, 로트 1) 또는 저 Ca+2 함유 MPEG5000-DPPE(4 ppm) 분말을, 개별적으로 (표 8에 나타낸 순서로) 또는 인지질 블렌드(톨루엔 및 메탄올을 이용하여 용해하고, MTBE를 첨가하여 지질 블렌드를 침전시켜 제조됨)로서, 가열되고(55℃ ± 5℃) 교반된 아세테이트 완충된 프로필렌 글리콜에 첨가하였다. 투명도를 평가하였으며(실시예 방법 섹션 1.4 참조), 고 칼슘 함유 인지질 블렌드에서 혼탁함이 관찰되었다(+ 또는 ++; 실시예 방법, 도 1 참조). 이것은 저 칼슘 함유 인지질 블렌드를 용해시켜 생성된 투명 용액과 대조되었다(표 8 참조).
실시예 4.3: 글리세롤 첨가
이들 완충된 비-수성 인지질 용액에, 글리세롤을 300 rpm에서 교반하면서 옮겼다. 많은 기포가 혼합 용액에 갇혀 있었지만, 일단 교반기가 멈추면 투명해졌다. 시각적 관찰을 기록하였고, 투명도 수준(투명 또는 혼탁)을 기록하였다. 이어서 이들 PG/G 용액을 수집하고, 60℃에서 10 psi 헤드 압력 하에서 0.2 ㎛ 필터를 통해 여과시켰다. 유량을 측정하고, 인지질 측정을 위해 샘플을 수집하였다. 여과 전 및 여과 후 샘플을 비교하여 여과와 관련된 인지질의 손실을 결정하였다.
이들 연구는 완충된 비-수성 인지질 용액에서 칼슘 농도 의존적 방식으로 침전이 발생함을 보여주었다. 이것은 완충된 비-수성 인지질 용액이 개별적인 인지질 또는 지질 블렌드로 제조되었는지 및 중요하게 상이하지 않은 농도에 관계 없이 발생하였다. 완충된 용액에 대해 초기 침전을 유발하는 농도는, 완충되지 않은 용액의 경우(1.5 내지 2.3 ㎍ Ca+2/g: 표 2 참조, 연구 1 내지 연구 4)보다 더 높았으며(5.8 내지 11.3 ㎍/g Ca+2), 이는 완충액의 영향을 나타낸다.
완충되지 않은 용액에서 보이는 바와 같이 지질 블렌드로부터의 칼슘은 완충된 비-수성 인지질 용액에서 침전을 일으켰다. 침전이 일단 형성되면, 글리세롤과 혼합될 때 분산되지 않았다. 이것은 초기에는 여과 속도를 감소시키고, 0.2 ㎛ 필터를 종종 막는 혼탁한 비-수성 제제를 생성한다(표 8, 도 6). 혼탁한 제제의 여과액은 투명하였지만, 인지질 측정은 DPPA의 수준이 약간 감소됨을 나타내었다.
실시예 5: 마이크로스피어의 형성 및 제조된 생성물의 음향 검출
실시예 5.1:
수성 인지질 현탁액
연구 37 및 연구 38을 다음과 같이 수행하였다: 연구 19 및 연구 23의 여과된 재료를 바이알 내에서 제조하였다(실시예의 방법 섹션 1.7.1 참조). 바이알믹스® 후, 활성화 샘플을 마이크로스피어 크기 및 수(방법 섹션 1.7.3 참조)와 임상 초음파 음향 속성(방법 섹션 1.7.4 참조)에 대해 분석하였다(표 9 참조).
이들 연구는, 성분들이 저 칼슘 농도를 갖는 경우, 개별적인 인지질 또는 인지질 블렌드를 이용하여 수성 인지질 현탁액이 생성될 수 있음을 입증한다. 두 생성물 모두, 데피니티®(데피니티® 포장 내용물 참조)의 명세사항 내의 마이크로스피어 직경을 갖고, 임상적 초음파 기기 상에서 강한 음향 감쇠를 갖는다.
양태 및 구현예
본 개시 내용에 의해 제공되는 다양한 양태 및 구현예가 아래에 열거된다.
조항 1. DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE 스톡을 제공하는 단계,
DPPC, DPPA 및 MPEG5000-DPPE 스톡 중 하나 이상의 칼슘 농도를 측정하는 단계,
DPPA, DPPC 및/또는 MPEG5000-DPPE 스톡을 비-수성 용매와 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법.
조항 2. 조항 1에 있어서, 비-수성 용매의 칼슘 농도를 측정하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
조항 3. 조항 1에 있어서, DPPA, DPPC 및/또는 MPEG-DPPE 스톡의 측정된 조합 칼슘 농도가 낮은 방법.
조항 4. 조항 1 또는 조항 3에 있어서, DPPA, DPPC 및/또는 MPEG-DPPE 스톡 및 비-수성 용매의 측정된 조합 칼슘 농도가 낮은 방법.
조항 5. 조항 1에 있어서, DPPC, DPPA 및 MPEG5000-DPPE 스톡의 칼슘 농도가 측정되는 방법.
조항 6. 조항 2에 있어서, DPPC, DPPA 및 MPEG5000-DPPE 스톡의 칼슘 농도가 측정되고, DPPA, DPPC, MPEG-DPPE 스톡 및 비-수성 용매의 측정된 조합 칼슘 농도가 낮은 방법.
조항 7. DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE 스톡을 제조하는 단계,
DPPC, DPPA 및 MPEG5000-DPPE 스톡 중 하나 이상의 칼슘 농도를 측정하는 단계,
낮은 측정된 조합 농도를 갖는 DPPA, DPPC 및/또는 MPEG5000-DPPE 스톡을 비-수성 용매와 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법.
조항 8. 조항 7에 있어서, 비-수성 용매의 칼슘 농도가 측정되고, DPPA, DPPC, MPEG500-DPPE 스톡 및 비-수성 용매는 측정된 조합 칼슘 농도가 낮은 방법.
조항 9. 각각 특성화된 칼슘 농도를 갖는 MPEG5000-DPPE 스톡, DPPA 스톡, DPPC 스톡 및 비-수성 용매를 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계로서, 여기서 MPEG5000-DPPE 스톡, DPPA 스톡, DPPC 스톡 및 비-수성 용매의 특성화된 조합 칼슘 농도는 저 칼슘 농도인 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법.
조항 10. MPEG5000-DPPE 스톡, DPPA 스톡 및 DPPC 스톡을 선택하는 단계로서, 이들 중 하나, 둘 또는 셋 모두는 특성화된 칼슘 농도를 갖고, 여기서 특성화된 조합 칼슘 농도는 저 칼슘 농도인 단계,
상기 MPEG5000-DPPE 스톡, DPPA 스톡, DPPC 스톡 및 비-수성 용매를 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법.
조항 11. 각각 특성화된 칼슘 농도를 갖는 MPEG5000-DPPE 스톡, DPPA 스톡 및 DPPC 스톡을 선택하는 단계로서, 여기서 특성화된 조합 칼슘 농도는 저 칼슘 농도인 단계,
상기 MPEG5000-DPPE 스톡, DPPA 스톡, DPPC 스톡 및 비-수성 용매를 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법.
조항 12. 조항 11에 있어서, 비-수성 용매는 특성화된 칼슘 농도를 갖고, MPEG5000-DPPE, DPPA 및 DPPC 스톡 및 비-수성 용매의 특성화된 조합 칼슘 농도는 낮은 방법.
조항 13. MPEG5000-DPPE 스톡의 칼슘 농도를 측정하는 단계,
측정된 저 칼슘 농도를 갖는 MPEG5000-DPPE 스톡을 DPPA 스톡, DPPC 스톡, 및 비-수성 용매와 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법.
조항 14. 조항 11에 있어서, 비-수성 용매는 (i) 프로필렌 글리콜 또는 (ii) 프로필렌 글리콜 및 글리세롤을 포함하는 방법.
조항 15. 조항 13 또는 조항 14에 있어서, 비-수성 용매는 완충액을 포함하는 방법.
조항 16. 조항 13 또는 조항 14에 있어서, 비-수성 용매는 아세테이트 완충액을 포함하는 방법.
조항 17. 조항 13 또는 조항 14에 있어서, 수성 용매는 완충액을 포함하는 방법.
조항 18. 조항 13 또는 조항 14에 있어서, 수성 용매는 포스페이트 완충액을 포함하는 방법.
조항 19. 조항 13 내지 조항 18 중 어느 하나에 있어서, DPPC, DPPA 및 MPEG5000-DPPE 스톡은 비-수성 용매와 개별적으로 조합되어 인지질 용액을 형성하는 방법.
조항 20. 조항 13 내지 조항 18 중 어느 하나에 있어서, DPPC, DPPA 및 MPEG5000-DPPE 스톡은 연속적으로, 순서와 관계 없는 방식으로 비-수성 용매와 조합되어 인지질 용액을 형성하는 방법.
조항 21. 조항 13 내지 조항 18 중 어느 하나에 있어서, DPPC, DPPA 및 MPEG5000-DPPE 스톡은 서로 조합되어 인지질 혼합물을 형성하고, 이어서 인지질 혼합물은 비-수성 용매와 조합되어 인지질 용액을 형성하는 방법.
조항 22. 조항 13 내지 조항 18 중 어느 하나에 있어서, DPPC, DPPA 및 MPEG5000-DPPE 스톡은 서로 조합되어 인지질 블렌드를 형성하고, 인지질 블렌드는 비-수성 용매와 조합되어 인지질 용액을 형성하는 방법.
조항 23. 조항 22에 있어서, 인지질 블렌드는 유기 용매 용해-침전 공정을 이용하여 형성되며, 이 공정은 DPPC, DPPA 및 MPEG5000-DPPE 스톡을 메탄올 및 톨루엔의 혼합물 내로 용해시키는 단계, 선택적으로 인지질/메탄올/톨루엔 혼합물을 농축시키는 단계, 및 이어서 농축된 인지질/메탄올/톨루엔 혼합물을 메틸 t-부틸 에테르(MTBE)와 접촉시켜 인지질을 침전시켜서 인지질 블렌드를 형성하는 단계를 포함하는 방법.
조항 24. 조항 13 내지 조항 23 중 어느 하나에 있어서, 저 칼슘 농도는 115 ppm 미만인 방법.
조항 25. 조항 13 내지 조항 24 중 어느 하나에 있어서, 바이알 내에 인지질 현탁액을 위치시키고, 퍼플루오로카본 가스를 바이알의 헤드스페이스 내로 도입시키는 것을 추가로 포함하는 방법.
조항 26. 조항 25에 있어서, 인지질 현탁액을 퍼플루오로카본 가스를 이용하여 활성화하여 인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 포함하는 초음파 조영제를 형성하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
조항 27. 조항 26에 있어서, 초음파 조영제를 대상체에게 투여하는 단계 및 대상체의 하나 이상의 조영 증강 초음파 영상을 수득하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
조항 28. 조항 13 내지 조항 27 중 어느 하나에 있어서, DPPA 스톡 및/또는 DPPC 스톡 및/또는 인지질 혼합물 및/또는 인지질 블렌드의 칼슘 농도를 측정하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
조항 29. DPPC 스톡의 칼슘 농도를 측정하는 단계,
측정된 저 칼슘 농도를 갖는 DPPC 스톡을 DPPA 스톡, MPEG5000-DPPE 스톡, 및 비-수성 용매와 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법.
조항 30. 조항 29에 있어서, 저 칼슘 농도는 90 ppm 미만인 방법.
조항 31. DPPA 스톡의 칼슘 농도를 측정하는 단계,
측정된 저 칼슘 농도를 갖는 DPPA 스톡을 DPPC 스톡, MPEG5000-DPPE 스톡, 및 비-수성 용매와 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법.
조항 32. 조항 31에 있어서, 저 칼슘 농도는 780 ppm 미만인 방법.
조항 33. 비-수성 용매의 칼슘 농도를 측정하는 단계,
측정된 저 칼슘 농도를 갖는 비-수성 용매를 DPPA 스톡, DPPC 스톡, 및 MPEG5000-DPPE 스톡과 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법.
조항 34. 조항 33에 있어서, 저 칼슘 농도는 0.7 ppm 미만인 방법.
조항 35. 칼슘 농도가 없거나 낮은 것을 특징으로 하는 MPEG5000-DPPE 스톡을 선택하는 단계,
상기 MPEG5000-DPPE 스톡, DPPA 스톡, DPPC 스톡 및 비-수성 용매를 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법.
조항 36. 조항 35에 있어서, MPEG5000-DPPE 스톡은 2가 금속 양이온 함량이 없거나 낮은 것으로 추가로 특성화되는 방법.
조항 37. MPEG5000-DPPE 스톡, DPPA 스톡, DPPC 스톡 및 비-수성 용매를 조합하여 칼슘 농도가 없거나 낮은 것을 특징으로 하는 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법.
조항 38. 인지질 현탁액을 퍼플루오로카본 가스와 조합하여 인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 포함하는 초음파 조영제를 형성하는 단계,
대상체에게 초음파 조영제를 투여하는 단계, 및
대상체의 하나 이상의 조영 증강 초음파 조영 영상을 수득하는 단계로서, 여기서 인지질 현탁액은 조항 1 내지 조항 37 중 어느 한 조항의 방법에 의해 제조되는 단계
를 포함하는, 대상체의 영상화 방법.
조항 39. 인지질 현탁액을 퍼플루오로카본 가스와 조합하여 인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 포함하는 초음파 조영제를 형성하는 단계,
대상체에게 초음파 조영제를 투여하는 단계, 및
대상체의 하나 이상의 조영 증강 초음파 조영 영상을 수득하는 단계
를 포함하는 대상체의 영상화 방법으로서,
여기서 인지질 현탁액은:
MPEG5000-DPPE 스톡의 칼슘 농도를 측정하는 단계,
측정된 저 칼슘 농도를 갖는 MPEG5000-DPPE 스톡을 DPPA 스톡, DPPC 스톡, 및 비-수성 용매와 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 방법에 의해 제조되는, 영상화 방법.
조항 40. 인지질 현탁액을 퍼플루오로카본 가스와 조합하여 인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 포함하는 초음파 조영제를 형성하는 단계,
대상체에게 초음파 조영제를 투여하는 단계, 및
대상체의 하나 이상의 조영 증강 초음파 조영 영상을 수득하는 단계
를 포함하는 대상체의 영상화 방법으로서,
여기서 인지질 현탁액은:
칼슘 농도가 없거나 낮은 것을 특징으로 하는 MPEG5000-DPPE 스톡을 선택하는 단계,
상기 MPEG5000-DPPE 스톡, DPPA 스톡, DPPC 스톡, 및 비-수성 용매를 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 방법에 의해 제조되는, 영상화 방법.
조항 41. 인지질 현탁액을 퍼플루오로카본 가스와 조합하여 인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 포함하는 초음파 조영제를 형성하는 단계,
대상체에게 초음파 조영제를 투여하는 단계, 및
대상체의 하나 이상의 조영 증강 초음파 조영 영상을 수득하는 단계
를 포함하는 대상체의 영상화 방법으로서,
여기서 인지질 현탁액은:
MPEG5000-DPPE 스톡, DPPA 스톡, DPPC 스톡 및 비-수성 용매를 조합하여 칼슘 농도가 없거나 낮은 것을 특징으로 하는 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 방법에 의해 제조되는, 영상화 방법.
조항 42. DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE 스톡을, 칼슘이 적거나 없는 조건 하에서, 개별적으로 프로필렌 글리콜(PG)-포함 비-수성 용매와 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법.
조항 43. DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE 스톡을, 순서와 관계 없는 방식으로, 칼슘이 적거나 없는 조건 하에서, PG-포함 비-수성 용매와 연속적으로 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법.
조항 44. DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE 스톡을, 메탄올 및 톨루엔이 없는 조건 하에서 조합하여 인지질 블렌드를 형성하는 단계,
인지질 블렌드를 PG-포함 비-수성 용매와 조합하여, 칼슘이 적거나 없는 조건 하에서, 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법.
조항 45. DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE 스톡을 혼합 용매와 조합하여 인지질 블렌드를 형성하는 단계,
블렌드 용매를 증발시켜 건조된 인지질 블렌드를 형성하는 단계,
건조된 인지질 블렌드를, 칼슘이 적거나 없는 조건 하에서, PG-포함 비-수성 용매와 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법.
조항 46. DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE 스톡을 블렌드 용매와 조합하여 인지질 블렌드를 형성하는 단계,
MTBE가 없는 조건 하에서, 제2 혼합 용매를 이용하여 인지질 블렌드를 침전시키는 단계,
침전된 인지질 블렌드를, 칼슘이 적거나 없는 조건 하에서, 비-수성 용매와 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법.
조항 47. 조항 42 내지 조항 46 중 어느 하나에 있어서, 없거나 낮은 칼슘 농도는 0.7 ppm 미만인 방법.
조항 48. 조항 42 내지 조항 47 중 어느 하나에 있어서, 인지질 현탁액을 퍼플루오로카본 가스와 조합하여 인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 포함하는 초음파 조영제를 형성하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
조항 49. 조항 48에 있어서, 초음파 조영제를 대상체에게 투여하는 단계 및 대상체의 하나 이상의 조영 증강 초음파 영상을 수득하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
조항 50. 인지질 현탁액을 퍼플루오로카본 가스와 조합하여 인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 포함하는 초음파 조영제를 형성하는 단계,
대상체에게 초음파 조영제를 투여하는 단계, 및
대상체의 하나 이상의 조영 증강 초음파 조영 영상을 수득하는 단계
를 포함하는 대상체의 영상화 방법으로서,
여기서 인지질 현탁액은 조항 42 내지 조항 47 중 어느 한 조항의 방법에 의해 제조되는, 방법.
조항 51. 비-수성 용매 중에 DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE를 포함하고, 저 칼슘 농도를 갖는 인지질 용액
을 포함하는 조성물.
조항 52. 비-수성 용매 중에 DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE를 포함하는 인지질 용액
을 포함하는 조성물로서, 여기서 DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE 및 비-수성 용매는 특성화된 조합 칼슘 이온 함량이 낮은 조성물.
조항 53. 조항 51 또는 조항 52에 있어서, 비-수성 용매는 프로필렌 글리콜을 포함하는 조성물.
조항 54. 조항 51 또는 조항 52에 있어서, 비-수성 용매는 프로필렌 글리콜 및 글리세롤을 포함하는 조성물.
조항 55. 조항 51 내지 조항 54 중 어느 하나에 있어서, 비-수성 용매는 완충액을 포함하는 조성물.
조항 56. 조항 55에 있어서, 완충액은 아세테이트 완충액인 조성물.
조항 57. 조항 51 내지 조항 56 중 어느 하나에 있어서, 퍼플루오로카본 가스를 추가로 포함하는 조성물.
조항 58. 조항 57에 있어서, 퍼플루오로카본 가스는 퍼플루트렌인 조성물.
조항 59. (a) 인지질 현탁액을 퍼플루오로카본 가스로 활성화하여 지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 형성하는 단계로서, 여기서 인지질 현탁액은 하나 이상의 인지질 및 비-수성 용매를 갖는 인지질 용액을 포함하고, 이들 중 하나 이상은 특성화된 저 칼슘 농도를 갖는 단계,
(b) 대상체에게 지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 투여하는 단계, 및
(c) 대상체의 초음파 영상을 수득하는 단계
를 포함하는 대상체의 초음파 조영 영상화 방법.
조항 60. 조항 59에 있어서, 하나 이상의 인지질은 DPPC 및 MPEG-5000-DPPE를 포함하는 방법.
조항 61. 조항 59에 있어서, 하나 이상의 인지질은 DPPA, DPPC 및 MPEG-5000-DPPE를 포함하는 방법.
조항 62. 조항 61에 있어서, DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE는 10 대 82 대 8(10:82:8)의 몰% 비로 존재하는 방법.
조항 63. 조항 60 내지 조항 62 중 어느 하나에 있어서, 특성화된 저 칼슘 농도는 DPPA에 대해 780 ppm 미만, DPPC에 대해 90 ppm 미만, 및 MPEG5000-DPPE에 대해 115 ppm 미만인 방법.
조항 64. 조항 59 내지 조항 63 중 어느 하나에 있어서, 비-수성 용매는 (a) 프로필렌 글리콜, 또는 (b) 프로필렌 글리콜 및 글리세롤을 포함하는 방법.
조항 65. 조항 59 내지 조항 64 중 어느 하나에 있어서, 비-수성 용매에 대해 특성화된 저 칼슘 농도는 0.7 ppm 미만인 방법.
조항 66. 조항 59 내지 조항 65 중 어느 하나에 있어서, 인지질 용액은 검출 가능한 인지질 침전물을 갖지 않는 방법.
조항 67. (a) 인지질 현탁액을 퍼플루오로카본 가스로 활성화하여 지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 형성하는 단계로서, 여기서 인지질 현탁액은 하나 이상의 인지질 및 비-수성 용매를 갖는 인지질 용액을 포함하고, 메탄올 및 톨루엔이 없는 조건 및 메틸 t-부틸 에테르가 없는 조건 하에서 제조되며, 여기서 하나 이상의 인지질 및 비-수성 용매는 저 칼슘 농도를 갖는 단계,
(b) 대상체에게 지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 투여하는 단계, 및
(c) 대상체의 초음파 영상을 수득하는 단계
를 포함하는 대상체의 초음파 조영 영상화 방법.
조항 68. 조항 67에 있어서, 하나 이상의 인지질은 DPPC 및 MPEG-5000-DPPE를 포함하는 방법.
조항 69. 조항 67에 있어서, 하나 이상의 인지질은 DPPA, DPPC 및 MPEG-5000-DPPE를 포함하는 방법.
조항 70. 조항 69에 있어서, DPPA, DPPC 및 MPEG-5000-DPPE는 10 대 82 대 8(10:82:8)의 몰% 비로 존재하는 방법.
조항 71. 조항 67 내지 조항 70 중 어느 하나에 있어서, 저 칼슘 농도는 DPPA에 대해 780 ppm 미만, DPPC에 대해 90 ppm 미만, 및 MPEG5000-DPPE에 대해 115 ppm 미만인 방법.
조항 72. 조항 67 내지 조항 71 중 어느 하나에 있어서, 비-수성 용매는 (a) 프로필렌 글리콜, 또는 (b) 프로필렌 글리콜 및 글리세롤을 포함하는 방법.
조항 73. 조항 67 내지 조항 72 중 어느 하나에 있어서, 저 칼슘 농도는 비-수성 용매에 대해 0.7 ppm 미만인 방법.
조항 74. 조항 67 내지 조항 73 중 어느 하나에 있어서, 인지질 용액은 검출 가능한 인지질 침전물이 없는 방법.
조항 75. 하나 이상의 인지질 및 비-수성 용매를 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계로서, 여기서 하나 이상의 인지질 및/또는 비-수성 용매는 특성화된 저 칼슘 농도를 갖는 단계,
인지질 용액을 수성 용액과 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계, 및
인지질 현탁액을 퍼플루오로카본 가스로 활성화하여 지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 형성하는 단계
를 포함하는 지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어의 제조 방법.
조항 76. 조항 75에 있어서, 하나 이상의 인지질은 DPPC 및 MPEG-5000-DPPE을 포함하는 방법.
조항 77. 조항 75에 있어서, 하나 이상의 인지질은 DPPA, DPPC 및 MPEG-5000-DPPE을 포함하는 방법.
조항 78. 조항 77에 있어서, DPPA, DPPC 및 MPEG-5000-DPPE는 10 대 82 대 8(10:82:8)의 몰% 비로 존재하는 방법.
조항 79. 조항 75 내지 조항 78 중 어느 하나에 있어서, 특성화된 저 칼슘 농도는 DPPA에 대해 780 ppm 미만, DPPC에 대해 90 ppm 미만, 및 MPEG5000-DPPE에 대해 115 ppm 미만인 방법.
조항 80. 조항 75 내지 조항 79 중 어느 하나에 있어서, 비-수성 용매는 (a) 프로필렌 글리콜 또는 (b) 프로필렌 글리콜 및 글리세롤을 포함하는 방법.
조항 81. 조항 75 내지 조항 80 중 어느 하나에 있어서, 특성화된 저 칼슘 농도는 비-수성 용매에 대해 0.7 ppm 미만인 방법.
조항 82. 조항 75 내지 조항 81 중 어느 하나에 있어서, 인지질 용액은 검출 가능한 인지질 침전물이 없는 방법.
조항 83. 하나 이상의 인지질 및 비-수성 용매를, 메탄올 및 톨루엔이 없고 메틸 t-부틸 에테르가 없는 조건 하에서 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계로서, 여기서 하나 이상의 인지질 및/또는 비-수성 용매는 저 칼슘 농도를 갖는 단계,
인지질 용액을 수성 용액과 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계, 및
인지질 현탁액을 퍼플루오로카본 가스로 활성화하여 지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 형성하는 단계
를 포함하는 지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어의 제조 방법.
조항 84. 조항 83에 있어서, 하나 이상의 지질은 (a) DPPC 및 MPEG-5000-DPPE, 또는 (b) DPPA, DPPC 및 MPEG-5000-DPPE 및/또는 (c) DPPA, DPPC 및 MPEG-5000-DPPE를 10 대 82 대 8(10:82:8)의 몰% 비로 포함하는 방법.
조항 85. 조항 84에 있어서, 저 칼슘 농도는 DPPA에 대해 780 ppm 미만, DPPC에 대해 90 ppm 미만, 및 MPEG5000-DPPE에 대해 115 ppm 미만인 방법.
조항 86. 조항 83 내지 조항 85 중 어느 하나에 있어서, 비-수성 용매는 (a) 프로필렌 글리콜, 또는 (b) 프로필렌 글리콜 및 글리세롤을 포함하는 방법.
조항 87. 조항 83 내지 조항 86 중 어느 하나에 있어서, 저 칼슘 농도는 비-수성 용매에 대해 0.7 ppm 미만인 방법.
조항 88. 조항 83 내지 조항 87 중 어느 하나에 있어서, 인지질 용액은 검출 가능한 인지질 침전물이 없는 방법.
조항 89. 조항 67 내지 조항 74 중 어느 하나에 있어서, 하나 이상의 인지질 또는 비-수성 용매는 특성화된 저 칼슘 농도를 갖는 방법.
조항 90. 조항 89에 있어서, 특성화된 저 칼슘 농도는 원자 흡수 분광법을 이용하여 결정되는 방법.
조항 91. 조항 67 내지 조항 74 중 어느 하나에 있어서, 저 칼슘 농도는 원자 흡수 분광법을 이용하여 결정되는 방법.
등가물
본 발명의 몇몇 구현예가 본 명세서에서 설명되고 예시되었지만, 당업자는 본 명세서에 기재된 기능을 수행하고/거나 결과 및/또는 하나 이상의 장점을 수득하기 위한 다양한 기타 수단 및/또는 구조를 쉽게 구현할 수 있을 것이며, 그러한 각각의 변화 및/또는 변경은 본 명세서에 기재된 본 발명의 구현예의 범주 내에 있는 것으로 간주된다. 더욱 일반적으로, 당업자는 본 명세서에 기재된 모든 파라미터, 크기, 재료 및 구성이 예시적인 것을 의미하며, 실질적인 파라미터, 크기, 재료 및/또는 구성은 본 발명의 교시가 사용되는 특정 적용 또는 적용들에 따라 달라질 것임을 쉽게 이해할 것이다. 당업자는 단지 일상적인 실험을 이용하여, 본 명세서에 기재된 특정한 본 발명의 구현예의 많은 등가물을 인지하거나 확인할 수 있을 것이다. 따라서, 전술한 구현예는 단지 예로서 제시되며, 첨부된 청구범위 및 그의 등가물의 범주 내에서, 본 발명의 구현예는 특정하게 기재되고 청구된 바와 달리 실시될 수 있음이 이해되어야 한다. 본 개시 내용의 발명의 구현예는 본 명세서에 기재된 각각의 개별적인 특징, 시스템, 물품, 재료, 키트 및/또는 방법에 관한 것이다. 추가적으로, 둘 이상의 그러한 특징, 시스템, 물품, 재료, 키트 및/또는 방법의 임의의 조합은, 그러한 특징, 시스템, 물품, 재료, 키트 및/또는 방법이 서로 불일치되지 않는다면, 본 발명의 개시 내용의 발명의 범주 내에 포함된다.
본 명세서에 정의되고 사용된 바와 같은 모든 정의는, 사전적 정의, 참고문헌으로서 포함된 문헌에서의 정의, 및/또는 정의된 용어의 일반적인 의미에 우선하는 것으로 이해되어야 한다.
본 명세서에 개시된 모든 참고문헌, 특허 및 특허 출원은 각각 언급된 주제에 관련하여 참고문헌으로 포함되며, 일부 경우에 문헌의 전체 내용을 포괄할 수 있다.
본 명세서와 청구범위에서 사용된 바와 같은, 부정관사("a" 및 "an")는 명확하게 반대로 지시되지 않는 한, "적어도 하나"를 의미하는 것으로 이해되어야 한다.
본 명세서와 청구범위에서 사용된 바와 같은 어구 "및/또는"은 그렇게 결합된 요소, 즉 일부 경우들에서 결합하여 존재하고 다른 경우들에서는 분리되어 존재하는 요소들의 "어느 하나 또는 둘 모두"를 의미하는 것으로 이해되어야 한다. "및/또는"과 함께 열거된 복수의 요소는 동일한 방식, 즉 그렇게 결합된 요소들의 "하나 이상"으로 해석되어야 한다. 다른 요소는, 특정하게 인식된 그러한 요소에 관련되든 관련되지 않든, "및/또는" 절에 의해 특정하게 식별되는 요소 외에 다른 것으로 선택적으로 존재할 수 있다. 따라서, 비제한적인 예로서, "포함하는"과 같은 열린종지의 언어와 함께 사용된 경우, "A 및/또는 B"에 대한 언급은, 일 구현예에서는 단지 A만(B 외의 요소를 선택적으로 포함함); 다른 구현예에서는, 단지 B만(A 외의 요소를 선택적으로 포함함); 또 다른 구현예에서, A와 B(다른 요소를 선택적으로 포함함) 등을 지칭할 수 있다.
본 명세서 및 청구범위에서 사용된 바와 같은, "또는"은 상기 정의된 바와 같은 "및/또는"과 동일한 의미를 갖는 것으로 이해되어야 한다. 예를 들어, 목록에서 항목을 구별하는 경우, "또는"이나 "및/또는"은 포함적인 것, 즉 다수의 요소 또는 요소들의 목록 중 하나 초과를 포함하는 적어도 하나를 포함하고, 선택적으로 추가의 열거되지 않은 항목을 포함하는 것으로서 해석되어야 할 것이다. 단지 용어가 명확히 반대로 표시된 경우, 예컨대 "중 단지 하나" 또는 "중 정확히 하나", 또는 청구범위에서 사용된 경우, "이루어지는"은 다수의 요소 또는 요소들의 목록 중 정확히 하나의 성분을 포함하는 것을 지칭할 것이다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "또는"은, "어느 하나", "중 하나", "중 단지 하나" 또는 "중 정확히 하나"와 같은, 배타성의 용어가 뒤에 오는 경우, 단지 배타적인 대체물(즉, "하나 또는 다른 하나이지만, 둘 모두는 아님")을 가리키는 것으로서 해석되어야 할 것이다. 청구범위에서 사용된 경우, "본질적으로 이루어지는"은 특허법 분야에서 사용되는 바와 같은 일반적인 의미를 가질 것이다.
본 명세서 및 청구범위에서 사용된 바와 같은, 하나 이상의 요소의 열거와 관련하여 어구 "적어도 하나"는 요소의 목록에서 임의의 하나 이상의 요소로부터 선택된 적어도 하나의 요소를 의미하는 것으로 이해되어야 하지만, 요소의 목록 내에서 특정하게 열거된 각각의 모든 구성 요소 중 적어도 하나를 필수적으로 포함하지는 않으며, 요소의 열거 내의 구성 요소들의 임의의 조합을 배제하지 않는다. 이러한 정의는 또한 특정하게 식별된 그러한 구성 요소들과 관련되든 관련되지 않든, 어구 "적어도 하나"가 지칭하는 요소의 목록 내에서 특정하게 식별된 요소 외에 요소가 선택적으로 존재할 수 있음을 가능하게 한다. 이에 따라, 비제한적인 예로서, "A 및 B 중 적어도 하나"(또는, 등가적으로, "A 또는 B 중 적어도 하나" 또는 등가적으로 "A 및/또는 B 중 적어도 하나"는 일 구현예에서, 선택적으로 하나 초과를 포함하는, B는 없는 적어도 하나의 A(및 B 외의 다른 구성 요소를 선택적으로 포함); 다른 구현예에서, 선택적으로 하나 초과를 포함하는, A는 없는 적어도 하나의 B(및 A 외의 다른 구성 요소를 선택적으로 포함); 또 다른 구현예에서, 선택적으로 하나 초과를 포함하는, 적어도 하나의 A, 및 선택적으로 하나 초과를 포함하는, 적어도 하나의 B(및 선택적으로 다른 구성 요소를 포함) 등을 지칭할 수 있다.
명확히 반대로 나타내지 않는 한, 하나 초과의 단계 또는 작동을 포함하는 본 명세서에서 청구된 임의의 방법에서, 방법의 단계 또는 작동의 순서는, 그 방법의 단계 또는 작동이 언급된 순서에 반드시 제한되지 않는 것임이 또한 이해되어야 한다.
상기 명세서 및 청구범위에서, "포함하는", "포함", "담은", "갖는", "함유하는", "포괄하는", "유지하는", "구성된" 등과 같은 모든 접속구는 열린 종지로(즉 포함하지만 제한되지는 않음을 의미함) 이해되어야 한다. 단지 접속구 "이루어지는" 및 "본질적으로 이루어지는"은 미국 특허청의 특허 심사 절차 매뉴얼, 섹션 2111.03에서 설명된 바와 같이, 각각 닫힌 접속구 또는 준-닫힌 접속구일 것이다.
Claims (27)
- DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE 스톡(stock)을 제공하는 단계,
DPPC, DPPA 및 MPEG5000-DPPE 스톡 중 하나 이상의 칼슘 농도를 측정하는 단계,
DPPA, DPPC 및/또는 MPEG5000-DPPE 스톡을 비-수성 용매와 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법. - DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE 스톡을 제조하는 단계,
DPPC, DPPA 및 MPEG5000-DPPE 스톡 중 하나 이상의 칼슘 농도를 측정하는 단계,
측정된 조합 칼슘 농도가 낮은, DPPA, DPPC 및/또는 MPEG 5000-DPPE 스톡을 비-수성 용매와 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법. - 각각 특성화된 칼슘 농도를 갖는, MPEG5000-DPPE 스톡, DPPA 스톡, DPPC 스톡 및 비-수성 용매를 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계로서, 여기서 MPEG5000-DPPE 스톡, DPPA 스톡, DPPC 스톡 및 비-수성 용매의 특성화된 조합 칼슘 농도는 저 칼슘 농도인 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법. - MPEG5000-DPPE 스톡, DPPA 스톡 및 DPPC 스톡을 선택하는 단계로서, 이들 중 하나, 둘 또는 셋 모두는 특성화된 칼슘 농도를 갖고, 여기서 특성화된 조합 칼슘 농도는 저 칼슘 농도인 단계,
상기 MPEG5000-DPPE 스톡, DPPA 스톡, DPPC 스톡 및 비-수성 용매를 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법. - 각각 특성화된 칼슘 농도를 갖는, MPEG5000-DPPE 스톡, DPPA 스톡 및 DPPC 스톡을 선택하는 단계로서, 여기서 특성화된 조합 칼슘 농도는 저 칼슘 농도인 단계,
상기 MPEG5000-DPPE 스톡, DPPA 스톡, DPPC 스톡 및 비-수성 용매를 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법. - MPEG5000-DPPE 스톡의 칼슘 농도를 측정하는 단계,
측정된 저 칼슘 농도를 갖는 MPEG5000-DPPE 스톡을, DPPA 스톡, DPPC 스톡, 및 비-수성 용매와 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법. - DPPC 스톡의 칼슘 농도를 측정하는 단계,
측정된 저 칼슘 농도를 갖는 DPPC 스톡을, DPPA 스톡, MPEG5000-DPPE 스톡, 및 비-수성 용매와 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법. - DPPA 스톡의 칼슘 농도를 측정하는 단계,
측정된 저 칼슘 농도를 갖는 DPPA 스톡을, DPPC 스톡, MPEG5000-DPPE 스톡, 및 비-수성 용매와 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법. - 비-수성 용매의 칼슘 농도를 측정하는 단계,
측정된 저 칼슘 농도를 갖는 비-수성 용매를, DPPA 스톡, DPPC 스톡, 및 MPEG5000-DPPE 스톡과 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법. - 칼슘 농도가 없거나 낮은 것을 특징으로 하는 MPEG5000-DPPE 스톡을 선택하는 단계,
상기 MPEG5000-DPPE 스톡, DPPA 스톡, DPPC 스톡 및 비-수성 용매를 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법. - MPEG5000-DPPE 스톡, DPPA 스톡, DPPC 스톡 및 비-수성 용매를 조합하여 칼슘 농도가 없거나 낮은 것을 특징으로 하는 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법. - 인지질 현탁액을 퍼플루오로카본 가스와 조합하여 인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 포함하는 초음파 조영제를 형성하는 단계,
대상체에게 초음파 조영제를 투여하는 단계, 및
대상체의 하나 이상의 조영 증강 초음파 조영 영상을 수득하는 단계로서, 여기서 인지질 현탁액은 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항의 방법에 의해 제조되는 단계
를 포함하는 대상체의 영상화 방법. - 인지질 현탁액을 퍼플루오로카본 가스와 조합하여 인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 포함하는 초음파 조영제를 형성하는 단계,
대상체에게 초음파 조영제를 투여하는 단계, 및
대상체의 하나 이상의 조영 증강 초음파 조영 영상을 수득하는 단계
를 포함하는 대상체의 영상화 방법으로서,
여기서 인지질 현탁액은:
MPEG5000-DPPE 스톡의 칼슘 농도를 측정하는 단계,
측정된 저 칼슘 농도를 갖는 MPEG5000-DPPE 스톡을, DPPA 스톡, DPPC 스톡, 및 비-수성 용매와 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 방법에 의해 제조되는, 영상화 방법. - 인지질 현탁액을 퍼플루오로카본 가스와 조합하여 인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 포함하는 초음파 조영제를 형성하는 단계,
대상체에게 초음파 조영제를 투여하는 단계, 및
대상체의 하나 이상의 조영 증강 초음파 조영 영상을 수득하는 단계
를 포함하는 대상체의 영상화 방법으로서,
여기서 인지질 현탁액은:
칼슘 농도가 없거나 낮은 것을 특징으로 하는 MPEG5000-DPPE 스톡을 선택하는 단계,
상기 MPEG5000-DPPE 스톡, DPPA 스톡, DPPC 스톡, 및 비-수성 용매를 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 방법에 의해 제조되는 영상화 방법. - 인지질 현탁액을 퍼플루오로카본 가스와 조합하여 인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 포함하는 초음파 조영제를 형성하는 단계,
대상체에게 초음파 조영제를 투여하는 단계, 및
대상체의 하나 이상의 조영 증강 초음파 조영 영상을 수득하는 단계
를 포함하는 대상체의 영상화 방법으로서,
여기서 인지질 현탁액은:
MPEG5000-DPPE 스톡, DPPA 스톡, DPPC 스톡 및 비-수성 용매를 조합하여 칼슘 농도가 없거나 낮은 것을 특징으로 하는 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 방법에 의해 제조되는 영상화 방법. - DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE 스톡을, 칼슘이 적거나 없는 조건 하에서, 개별적으로 프로필렌 글리콜(PG)-포함 비-수성 용매와 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법. - DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE 스톡을, 순서와 관계 없는 방식으로, 칼슘이 적거나 없는 조건 하에서, PG-포함 비-수성 용매와 연속적으로 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법. - DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE 스톡을, 메탄올 및 톨루엔이 없는 조건 하에서 조합하여 인지질 블렌드를 형성하는 단계,
인지질 블렌드를 PG-포함 비-수성 용매와 조합하여, 칼슘이 적거나 없는 조건 하에서, 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법. - DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE 스톡을 혼합 용매와 조합하여 인지질 블렌드를 형성하는 단계,
혼합 용매를 증발시켜 건조된 인지질 블렌드를 형성하는 단계,
건조된 인지질 블렌드를, 칼슘이 적거나 없는 조건 하에서, PG-포함 비-수성 용매와 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법. - DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE 스톡을 혼합 용매와 조합하여 인지질 블렌드를 형성하는 단계,
MTBE가 없는 조건 하에서, 제2 혼합 용매를 이용하여 인지질 블렌드를 침전시키는 단계,
침전된 인지질 블렌드를, 칼슘이 적거나 없는 조건 하에서, 비-수성 용매와 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계, 및
인지질 용액을 수성 용매와 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계
를 포함하는 인지질 현탁액의 제조 방법. - 인지질 현탁액을 퍼플루오로카본 가스와 조합하여 인지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 포함하는 초음파 조영제를 형성하는 단계,
대상체에게 초음파 조영제를 투여하는 단계, 및
대상체의 하나 이상의 조영 증강 초음파 조영 영상을 수득하는 단계
를 포함하는 대상체의 영상화 방법으로서,
여기서 인지질 현탁액은 제42항 내지 제47항 중 어느 한 항의 방법에 의해 제조되는 방법. - 비-수성 용매 중에 DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE를 포함하고, 저 칼슘 농도를 갖는 인지질 용액을 포함하는 조성물.
- 비-수성 용매 중에 DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE를 포함하는 인지질 용액을 포함하는 조성물로서, 여기서 DPPA, DPPC 및 MPEG5000-DPPE 및 비-수성 용매는 특성화된 조합 칼슘 이온 함량이 낮은 조성물.
- (a) 인지질 현탁액을 퍼플루오로카본 가스로 활성화하여 지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 형성하는 단계로서, 여기서 인지질 현탁액은 하나 이상의 인지질 및 비-수성 용매를 갖는 인지질 용액을 포함하고, 이들 중 하나 이상은 특성화된 저 칼슘 농도를 갖는 단계,
(b) 대상체에게 지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 투여하는 단계, 및
(c) 대상체의 초음파 영상을 수득하는 단계
를 포함하는 대상체의 초음파 조영 영상화 방법. - (a) 인지질 현탁액을 퍼플루오로카본 가스로 활성화하여 지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 형성하는 단계로서, 여기서 인지질 현탁액은 하나 이상의 인지질 및 비-수성 용매를 갖는 인지질 용액을 포함하고, 메탄올 및 톨루엔이 없는 조건 및 메틸 t-부틸 에테르가 없는 조건 하에서 제조되며, 하나 이상의 인지질 및 비-수성 용매는 저 칼슘 농도를 갖는 단계,
(b) 대상체에게 지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 투여하는 단계, 및
(c) 대상체의 초음파 영상을 수득하는 단계
를 포함하는 대상체의 초음파 조영 영상화 방법. - 하나 이상의 인지질 및 비-수성 용매를 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계로서, 여기서 하나 이상의 인지질 및/또는 비-수성 용매는 특성화된 저 칼슘 농도를 갖는 단계,
인지질 용액을 수성 용액과 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계, 및
인지질 현탁액을 퍼플루오로카본 가스로 활성화하여 지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 형성하는 단계
를 포함하는 지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어의 제조 방법. - 하나 이상의 인지질 및 비-수성 용매를, 메탄올 및 톨루엔이 없는 조건 및 메틸 t-부틸 에테르가 없는 조건 하에서 조합하여 인지질 용액을 형성하는 단계로서, 여기서 하나 이상의 인지질 및/또는 비-수성 용매는 저 칼슘 농도를 갖는 단계,
인지질 용액을 수성 용액과 조합하여 인지질 현탁액을 형성하는 단계, 및
인지질 현탁액을 퍼플루오로카본 가스로 활성화하여 지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어를 형성하는 단계
를 포함하는 지질-캡슐화된 가스 마이크로스피어의 제조 방법.
Applications Claiming Priority (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201662359181P | 2016-07-06 | 2016-07-06 | |
| US62/359,181 | 2016-07-06 | ||
| US15/461,469 US9789210B1 (en) | 2016-07-06 | 2017-03-16 | Methods for making ultrasound contrast agents |
| US15/461,469 | 2017-03-16 | ||
| US15/602,580 US9913919B2 (en) | 2016-07-06 | 2017-05-23 | Methods for making ultrasound contrast agents |
| US15/602,580 | 2017-05-23 | ||
| PCT/US2017/040755 WO2018009570A1 (en) | 2016-07-06 | 2017-07-05 | Methods for making ultrasound contrast agents |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20190016045A true KR20190016045A (ko) | 2019-02-15 |
| KR102500959B1 KR102500959B1 (ko) | 2023-02-17 |
Family
ID=60022856
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020187038022A KR102500959B1 (ko) | 2016-07-06 | 2017-07-05 | 초음파 조영제의 제조 방법 |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (12) | US9789210B1 (ko) |
| EP (1) | EP3458110A4 (ko) |
| JP (2) | JP7316793B2 (ko) |
| KR (1) | KR102500959B1 (ko) |
| CN (2) | CN109562194A (ko) |
| AU (1) | AU2017291815A1 (ko) |
| BR (1) | BR112018074469A2 (ko) |
| CA (1) | CA3025580A1 (ko) |
| EA (1) | EA201892568A1 (ko) |
| IL (2) | IL297660A (ko) |
| MX (2) | MX2018015930A (ko) |
| SG (2) | SG10201913353YA (ko) |
| TW (1) | TW201815424A (ko) |
| WO (1) | WO2018009570A1 (ko) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IL296875A (en) | 2014-12-31 | 2022-12-01 | Lantheus Medical Imaging Inc | Fat-wrapped gas microsphere preparations and related methods |
| CN115531560B (zh) | 2016-05-04 | 2024-05-17 | 蓝瑟斯医学影像公司 | 用于制备超声波造影剂的方法及装置 |
| US9789210B1 (en) | 2016-07-06 | 2017-10-17 | Lantheus Medical Imaging, Inc. | Methods for making ultrasound contrast agents |
| US10508503B2 (en) * | 2016-09-23 | 2019-12-17 | Baker Hughes, A Ge Company, Llc | Cutting elements, earth-boring tools including the cutting elements, and methods of forming the earth-boring tools |
| CN108020602B (zh) * | 2016-11-02 | 2021-01-29 | 广东嘉博制药有限公司 | 一种同时定量测定药物制剂中磷脂及脂肪酸甘油酯的方法 |
| US11166846B2 (en) | 2019-01-04 | 2021-11-09 | California Institute Of Technology | Method for eye lens removal using cavitating microbubbles |
| US11717570B2 (en) | 2019-05-15 | 2023-08-08 | Bracco Suisse Sa | Gas-filled microvesicles |
| US20200360289A1 (en) | 2019-05-15 | 2020-11-19 | Bracco Suisse Sa | Freeze-dried product and gas-filled microvesicles suspension |
| CN112618734A (zh) * | 2020-12-24 | 2021-04-09 | 南京恒远科技开发有限公司 | 一种注射用脂质体微泡制剂及制备工艺 |
| NL2027237B1 (en) * | 2020-12-27 | 2022-07-21 | Solstice Pharmaceuticals B V | Process for controlled manufacturing of mono-disperse microbubbles |
| EP4267203A1 (en) * | 2020-12-27 | 2023-11-01 | Solstice Pharmaceuticals B.V. | A cartridge for mixing a phospholipid composition intended for intracorporeal use |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20010034106A (ko) * | 1998-01-14 | 2001-04-25 | 블레어 큐. 퍼거슨 | 지질 블렌드 및 그 지질을 함유하는 인지질 현탁액의 제조방법 |
| US20070071685A1 (en) * | 2003-12-22 | 2007-03-29 | Bracco Research S.A. | Gas-filled microvesicle assembly for contrast imaging |
| US20160030596A1 (en) * | 2013-03-15 | 2016-02-04 | Children's Medical Center Corporation | Gas-filled stabilized particles and methods of use |
Family Cites Families (142)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3873564A (en) | 1971-03-03 | 1975-03-25 | Synvar Ass | 2-Imidazolinyl-3-oxide-1-oxypropionic acid |
| CH588887A5 (ko) | 1974-07-19 | 1977-06-15 | Battelle Memorial Institute | |
| CH624011A5 (ko) | 1977-08-05 | 1981-07-15 | Battelle Memorial Institute | |
| CH621479A5 (ko) | 1977-08-05 | 1981-02-13 | Battelle Memorial Institute | |
| US4276885A (en) | 1979-05-04 | 1981-07-07 | Rasor Associates, Inc | Ultrasonic image enhancement |
| CA1170569A (en) | 1980-11-17 | 1984-07-10 | Julia S. Rasor | Microbubble precursors and methods for their production and use |
| DE3141641A1 (de) | 1981-10-16 | 1983-04-28 | Schering Ag, 1000 Berlin Und 4619 Bergkamen | Ultraschall-kontrastmittel und dessen herstellung |
| US4718433A (en) | 1983-01-27 | 1988-01-12 | Feinstein Steven B | Contrast agents for ultrasonic imaging |
| SE463651B (sv) | 1983-12-21 | 1991-01-07 | Nycomed As | Diagnostikum och kontrastmedel |
| DE3585967D1 (de) | 1984-03-08 | 1992-06-11 | Phares Pharma Holland | Liposombildende zusammensetzung. |
| DE3785054T2 (de) | 1986-01-24 | 1993-07-08 | Childrens Hosp Medical Center | Stabile emulsionen von stark fluorierten, organischen verbindungen. |
| JPS6360943A (ja) | 1986-09-01 | 1988-03-17 | Green Cross Corp:The | 超音波診断造影剤 |
| FR2608942B1 (fr) | 1986-12-31 | 1991-01-11 | Centre Nat Rech Scient | Procede de preparation de systemes colloidaux dispersibles d'une substance, sous forme de nanocapsules |
| FR2634375B3 (fr) | 1988-06-30 | 1991-07-05 | Centre Nat Rech Scient | Procede de preparation de systemes colloidaux dispersibles de lipide amphiphiles sous forme de liposomes submicroniques |
| US5219538A (en) | 1987-03-13 | 1993-06-15 | Micro-Pak, Inc. | Gas and oxygen carrying lipid vesicles |
| JPS63277618A (ja) | 1987-03-31 | 1988-11-15 | Noebia:Kk | リポソ−ムの製造方法 |
| CH672733A5 (ko) | 1987-05-22 | 1989-12-29 | Bracco Ind Chimica Spa | |
| IE61591B1 (en) | 1987-12-29 | 1994-11-16 | Molecular Biosystems Inc | Concentrated stabilized microbubble-type ultrasonic imaging agent and method of production |
| DE3803972A1 (de) | 1988-02-05 | 1989-08-10 | Schering Ag | Ultraschallkontrastmittel |
| DE3812816A1 (de) | 1988-04-16 | 1989-11-02 | Lawaczeck Ruediger Dipl Phys P | Verfahren zur solubilisierung von liposomen und/oder biologischer membranen sowie deren verwendung |
| US5171755A (en) | 1988-04-29 | 1992-12-15 | Hemagen/Pfc | Emulsions of highly fluorinated organic compounds |
| US5045304A (en) | 1988-08-31 | 1991-09-03 | Wayne State University | Contras agent having an imaging agent coupled to viable granulocytes for use in magnetic resonance imaging of abscess and a method of preparing and using same |
| GB8824593D0 (en) | 1988-10-20 | 1988-11-23 | Royal Free Hosp School Med | Liposomes |
| US5114703A (en) | 1989-05-30 | 1992-05-19 | Alliance Pharmaceutical Corp. | Percutaneous lymphography using particulate fluorocarbon emulsions |
| FR2649335B1 (fr) | 1989-07-05 | 1991-09-20 | Texinfine Sa | Procede et dispositif de production directe de liposomes |
| US5843473A (en) | 1989-10-20 | 1998-12-01 | Sequus Pharmaceuticals, Inc. | Method of treatment of infected tissues |
| US5469854A (en) | 1989-12-22 | 1995-11-28 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Methods of preparing gas-filled liposomes |
| US5352435A (en) | 1989-12-22 | 1994-10-04 | Unger Evan C | Ionophore containing liposomes for ultrasound imaging |
| US6088613A (en) | 1989-12-22 | 2000-07-11 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Method of magnetic resonance focused surgical and therapeutic ultrasound |
| US5585112A (en) | 1989-12-22 | 1996-12-17 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Method of preparing gas and gaseous precursor-filled microspheres |
| US5705187A (en) | 1989-12-22 | 1998-01-06 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Compositions of lipids and stabilizing materials |
| US5149319A (en) | 1990-09-11 | 1992-09-22 | Unger Evan C | Methods for providing localized therapeutic heat to biological tissues and fluids |
| US6146657A (en) | 1989-12-22 | 2000-11-14 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Gas-filled lipid spheres for use in diagnostic and therapeutic applications |
| US5230882A (en) | 1989-12-22 | 1993-07-27 | Unger Evan C | Liposomes as contrast agents for ultrasonic imaging and methods for preparing the same |
| US5776429A (en) | 1989-12-22 | 1998-07-07 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Method of preparing gas-filled microspheres using a lyophilized lipids |
| US6001335A (en) | 1989-12-22 | 1999-12-14 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Contrasting agents for ultrasonic imaging and methods for preparing the same |
| US5305757A (en) | 1989-12-22 | 1994-04-26 | Unger Evan C | Gas filled liposomes and their use as ultrasonic contrast agents |
| US5656211A (en) | 1989-12-22 | 1997-08-12 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Apparatus and method for making gas-filled vesicles of optimal size |
| US6551576B1 (en) | 1989-12-22 | 2003-04-22 | Bristol-Myers Squibb Medical Imaging, Inc. | Container with multi-phase composition for use in diagnostic and therapeutic applications |
| US5922304A (en) | 1989-12-22 | 1999-07-13 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Gaseous precursor filled microspheres as magnetic resonance imaging contrast agents |
| US5088499A (en) | 1989-12-22 | 1992-02-18 | Unger Evan C | Liposomes as contrast agents for ultrasonic imaging and methods for preparing the same |
| US5228446A (en) | 1989-12-22 | 1993-07-20 | Unger Evan C | Gas filled liposomes and their use as ultrasonic contrast agents |
| US5773024A (en) | 1989-12-22 | 1998-06-30 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Container with multi-phase composition for use in diagnostic and therapeutic applications |
| US5123414A (en) | 1989-12-22 | 1992-06-23 | Unger Evan C | Liposomes as contrast agents for ultrasonic imaging and methods for preparing the same |
| US5542935A (en) | 1989-12-22 | 1996-08-06 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Therapeutic delivery systems related applications |
| US5209720A (en) | 1989-12-22 | 1993-05-11 | Unger Evan C | Methods for providing localized therapeutic heat to biological tissues and fluids using gas filled liposomes |
| US5334381A (en) | 1989-12-22 | 1994-08-02 | Unger Evan C | Liposomes as contrast agents for ultrasonic imaging and methods for preparing the same |
| US5580575A (en) | 1989-12-22 | 1996-12-03 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Therapeutic drug delivery systems |
| US5733572A (en) | 1989-12-22 | 1998-03-31 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Gas and gaseous precursor filled microspheres as topical and subcutaneous delivery vehicles |
| US5578292A (en) | 1991-11-20 | 1996-11-26 | Bracco International B.V. | Long-lasting aqueous dispersions or suspensions of pressure-resistant gas-filled microvesicles and methods for the preparation thereof |
| IN172208B (ko) | 1990-04-02 | 1993-05-01 | Sint Sa | |
| US5445813A (en) | 1992-11-02 | 1995-08-29 | Bracco International B.V. | Stable microbubble suspensions as enhancement agents for ultrasound echography |
| DK0526503T3 (da) | 1990-04-10 | 1997-10-27 | Imarx Pharmaceutical Corp | Polymerer som kontrastmedier til magnetisk resonansimagografi |
| US5368840A (en) | 1990-04-10 | 1994-11-29 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Natural polymers as contrast media for magnetic resonance imaging |
| US5358702A (en) | 1990-04-10 | 1994-10-25 | Unger Evan C | Methoxylated gel particle contrast media for improved diagnostic imaging |
| AU636481B2 (en) | 1990-05-18 | 1993-04-29 | Bracco International B.V. | Polymeric gas or air filled microballoons usable as suspensions in liquid carriers for ultrasonic echography |
| IS1685B (is) | 1990-12-11 | 1998-02-24 | Bracco International B.V. | Aðferð við að búa til fitukúlur (liposomes) sem eru gæddar auknum hæfileika til að draga í sig og halda í sér aðskotaefnum |
| GB9106673D0 (en) | 1991-03-28 | 1991-05-15 | Hafslund Nycomed As | Improvements in or relating to contrast agents |
| US5874062A (en) | 1991-04-05 | 1999-02-23 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Methods of computed tomography using perfluorocarbon gaseous filled microspheres as contrast agents |
| US5205290A (en) | 1991-04-05 | 1993-04-27 | Unger Evan C | Low density microspheres and their use as contrast agents for computed tomography |
| CA2110490C (en) | 1991-06-18 | 2008-07-29 | Evan C. Unger | Drug delivery systems comprising gas-filled liposomes at least 90% devoid of liquid in their interior |
| MX9205298A (es) | 1991-09-17 | 1993-05-01 | Steven Carl Quay | Medios gaseosos de contraste de ultrasonido y metodo para seleccionar gases para usarse como medios de contraste de ultrasonido |
| CA2119129C (en) | 1991-09-17 | 1999-11-09 | Steven C. Quay | Gaseous ultrasound contrast media and method for selecting gases for use as ultrasound contrast media |
| US5409688A (en) | 1991-09-17 | 1995-04-25 | Sonus Pharmaceuticals, Inc. | Gaseous ultrasound contrast media |
| AU2789192A (en) | 1991-10-04 | 1993-05-03 | Mallinckrodt Medical, Inc. | Gaseous ultrasound contrast agents |
| GB9200387D0 (en) | 1992-01-09 | 1992-02-26 | Nycomed As | Improvements in or relating to contrast agents |
| IL104084A (en) | 1992-01-24 | 1996-09-12 | Bracco Int Bv | Sustainable aqueous suspensions of pressure-resistant and gas-filled blisters, their preparation, and contrast agents containing them |
| ES2158892T3 (es) | 1993-01-25 | 2001-09-16 | Sonus Pharma Inc | Coloides de desplazamiento de fase como agentes de contraste de ultrasonidos. |
| US5558855A (en) | 1993-01-25 | 1996-09-24 | Sonus Pharmaceuticals | Phase shift colloids as ultrasound contrast agents |
| GB9305351D0 (en) | 1993-03-16 | 1993-05-05 | Nycomed Imaging As | Improvements in or relating to contrast agents |
| GB9305349D0 (en) | 1993-03-16 | 1993-05-05 | Nycomed Imaging As | Improvements in or relating to contrast agents |
| DE4313402A1 (de) | 1993-04-23 | 1994-10-27 | Hexal Pharma Gmbh | Transdermale Wirkstoffzubereitung |
| US5853755A (en) | 1993-07-28 | 1998-12-29 | Pharmaderm Laboratories Ltd. | Biphasic multilamellar lipid vesicles |
| AU694135B2 (en) | 1993-07-30 | 1998-07-16 | Imcor Pharmaceutical Company | Stabilized microbubble compositions for ultrasound |
| GB9318288D0 (en) | 1993-09-03 | 1993-10-20 | Nycomed Imaging As | Improvements in or relating to contrast agents |
| ATE197124T1 (de) | 1993-09-09 | 2000-11-15 | Schering Ag | Wirkstoffe und gas enthaltende mikropartikel |
| CA2153251C (en) | 1993-11-05 | 1998-09-01 | David Samuel Collins | Liposome preparation and material encapsulation method |
| US7083572B2 (en) | 1993-11-30 | 2006-08-01 | Bristol-Myers Squibb Medical Imaging, Inc. | Therapeutic delivery systems |
| JPH10508284A (ja) | 1993-12-15 | 1998-08-18 | ブラッコ リサーチ ソシエテ アノニム | 超音波造影媒体、この媒体を含む造影剤及び方法 |
| NO940711D0 (no) | 1994-03-01 | 1994-03-01 | Nycomed Imaging As | Preparation of gas-filled microcapsules and contrasts agents for diagnostic imaging |
| KR970701551A (ko) | 1994-03-11 | 1997-04-12 | 고야 마사시 | 리포좀 제제(liposome preparation) |
| ZA952485B (en) | 1994-03-28 | 1995-12-15 | Nycomed Imaging As | Liposomes |
| US5736121A (en) | 1994-05-23 | 1998-04-07 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Stabilized homogenous suspensions as computed tomography contrast agents |
| US6066331A (en) | 1994-07-08 | 2000-05-23 | Barenholz; Yechezkel | Method for preparation of vesicles loaded with biological structures, biopolymers and/or oligomers |
| US5562893A (en) | 1994-08-02 | 1996-10-08 | Molecular Biosystems, Inc. | Gas-filled microspheres with fluorine-containing shells |
| JPH08151335A (ja) | 1994-09-27 | 1996-06-11 | Otsuka Pharmaceut Co Ltd | 超音波造影剤およびその製造方法 |
| US5540909A (en) | 1994-09-28 | 1996-07-30 | Alliance Pharmaceutical Corp. | Harmonic ultrasound imaging with microbubbles |
| US5830430A (en) | 1995-02-21 | 1998-11-03 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Cationic lipids and the use thereof |
| US5997898A (en) | 1995-06-06 | 1999-12-07 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Stabilized compositions of fluorinated amphiphiles for methods of therapeutic delivery |
| US5558092A (en) | 1995-06-06 | 1996-09-24 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Methods and apparatus for performing diagnostic and therapeutic ultrasound simultaneously |
| US5897851A (en) | 1995-06-07 | 1999-04-27 | Sonus Pharmaceuticals, Inc. | Nucleation and activation of a liquid-in-liquid emulsion for use in ultrasound imaging |
| US6231834B1 (en) | 1995-06-07 | 2001-05-15 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Methods for ultrasound imaging involving the use of a contrast agent and multiple images and processing of same |
| US5804162A (en) | 1995-06-07 | 1998-09-08 | Alliance Pharmaceutical Corp. | Gas emulsions stabilized with fluorinated ethers having low Ostwald coefficients |
| US6521211B1 (en) | 1995-06-07 | 2003-02-18 | Bristol-Myers Squibb Medical Imaging, Inc. | Methods of imaging and treatment with targeted compositions |
| US6139819A (en) | 1995-06-07 | 2000-10-31 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Targeted contrast agents for diagnostic and therapeutic use |
| US6033645A (en) | 1996-06-19 | 2000-03-07 | Unger; Evan C. | Methods for diagnostic imaging by regulating the administration rate of a contrast agent |
| JP4215820B2 (ja) | 1995-06-07 | 2009-01-28 | イマアーレクス・フアーマシユーチカル・コーポレーシヨン | 診断的および治療的使用のための新規な標的化組成物 |
| US6120794A (en) | 1995-09-26 | 2000-09-19 | University Of Pittsburgh | Emulsion and micellar formulations for the delivery of biologically active substances to cells |
| CA2252617A1 (en) | 1996-05-01 | 1997-11-06 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Methods for delivering compounds into a cell |
| US6214375B1 (en) | 1996-07-16 | 2001-04-10 | Generex Pharmaceuticals, Inc. | Phospholipid formulations |
| US5837221A (en) | 1996-07-29 | 1998-11-17 | Acusphere, Inc. | Polymer-lipid microencapsulated gases for use as imaging agents |
| US6414139B1 (en) | 1996-09-03 | 2002-07-02 | Imarx Therapeutics, Inc. | Silicon amphiphilic compounds and the use thereof |
| US5846517A (en) | 1996-09-11 | 1998-12-08 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Methods for diagnostic imaging using a renal contrast agent and a vasodilator |
| ATE231004T1 (de) | 1996-09-11 | 2003-02-15 | Imarx Pharmaceutical Corp | Verbesserte verfahren zur diagnostischen bilderzeugung unter verwendung eines kontrastmittels und eines vasodilators |
| AP885A (en) | 1996-10-21 | 2000-11-03 | Nycomed Imaging As | Ultrasonic visualisation using a gas containing contrast agent. |
| WO1998018495A2 (en) | 1996-10-28 | 1998-05-07 | Marsden, John, Christopher | Improvements in or relating to diagnostic/therapeutic agents |
| HUP0000357A2 (hu) | 1996-10-28 | 2000-06-28 | Nycomed Imaging A/S | Továbbfejlesztett diagnosztikai/terápiás szerek |
| EP0963209A2 (en) | 1996-10-28 | 1999-12-15 | Marsden, John Christopher | Improvements in or relating to diagnostic/therapeutic agents |
| WO1998018501A2 (en) | 1996-10-28 | 1998-05-07 | Marsden, John, Christopher | Improvements in or relating to diagnostic/therapeutic agents |
| US6090800A (en) | 1997-05-06 | 2000-07-18 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Lipid soluble steroid prodrugs |
| US6143276A (en) | 1997-03-21 | 2000-11-07 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Methods for delivering bioactive agents to regions of elevated temperatures |
| US6537246B1 (en) | 1997-06-18 | 2003-03-25 | Imarx Therapeutics, Inc. | Oxygen delivery agents and uses for the same |
| US6416740B1 (en) | 1997-05-13 | 2002-07-09 | Bristol-Myers Squibb Medical Imaging, Inc. | Acoustically active drug delivery systems |
| GB9717588D0 (en) | 1997-08-19 | 1997-10-22 | Nycomed Imaging As | Improvements in or relating to contrast agents |
| GB9717542D0 (en) | 1997-08-19 | 1997-10-22 | Nycomed Imaging As | Process |
| US6548047B1 (en) | 1997-09-15 | 2003-04-15 | Bristol-Myers Squibb Medical Imaging, Inc. | Thermal preactivation of gaseous precursor filled compositions |
| US6123923A (en) | 1997-12-18 | 2000-09-26 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Optoacoustic contrast agents and methods for their use |
| NZ506051A (en) | 1998-02-09 | 2003-08-29 | Bracco Res S | Targeted delivery of biologically active media |
| US6572840B1 (en) | 1999-07-28 | 2003-06-03 | Bristol-Myers Squibb Pharma Company | Stable microbubbles comprised of a perfluoropropane encapsulated lipid moiety for use as an ultrasound contrast agent |
| EP1371041A4 (en) | 2001-02-02 | 2006-04-19 | Bristol Myers Squibb Pharma Co | APPARATUS AND METHOD FOR ON-LINE MONITORING OF FLUORIZED MATERIAL IN THE HEADLACE OF A LIQUID |
| US20030044354A1 (en) | 2001-08-16 | 2003-03-06 | Carpenter Alan P. | Gas microsphere liposome composites for ultrasound imaging and ultrasound stimulated drug release |
| US20040062748A1 (en) | 2002-09-30 | 2004-04-01 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Polymer conjugates with decreased antigenicity, methods of preparation and uses thereof |
| CN102600485B (zh) * | 2004-06-04 | 2014-10-22 | 阿库斯菲尔公司 | 超声对比剂剂量配方 |
| US20080009561A1 (en) | 2004-09-03 | 2008-01-10 | Imarx Therapeutics, Inc. | Apparatus And Method To Prepare A Microsphere-Forming Composition |
| CN101229382A (zh) | 2008-02-04 | 2008-07-30 | 许川山 | 一种适用于多种成像模式的新型造影剂 |
| US8459462B2 (en) | 2008-10-10 | 2013-06-11 | Quest Diagnostics Investments Incorporated | System and method for sorting specimen |
| JP2012213475A (ja) | 2011-03-31 | 2012-11-08 | Panasonic Corp | 超音波造影剤注入装置 |
| US9101895B2 (en) | 2011-04-15 | 2015-08-11 | General Electric Company | System for mixing and dispersing microbubble pharmaceuticals |
| US10279053B2 (en) | 2011-07-19 | 2019-05-07 | Nuvox Pharma Llc | Microbubble compositions, method of making same, and method using same |
| WO2013028942A1 (en) | 2011-08-24 | 2013-02-28 | The Regents Of The University Of California | Targeting microbubbles |
| JP2015002752A (ja) | 2011-12-09 | 2015-01-08 | パナソニック株式会社 | 薬剤容器 |
| CN104661737B (zh) | 2012-07-18 | 2019-05-28 | 莱伯曼兹有限公司 | 自动化溶液分配器 |
| JP6318177B2 (ja) | 2013-02-11 | 2018-04-25 | アンドリュー イー． ブロック | 非対称振動をもたらすための装置 |
| EP2787352A1 (en) | 2013-04-05 | 2014-10-08 | F. Hoffmann-La Roche AG | Analysis system for a biological sample |
| TWI552761B (zh) | 2013-05-03 | 2016-10-11 | 博信生物科技股份有限公司 | 一種脂質微／奈米氣泡、及其最佳化之製備方法及製備裝置 |
| TWI504413B (zh) | 2013-07-24 | 2015-10-21 | Univ Nat Chiao Tung | 奈米級複合高分子顯影劑及藥物載體 |
| GB201405735D0 (en) | 2014-03-31 | 2014-05-14 | Ge Healthcare As | Ultrasound precursor preparation method |
| JP6594909B2 (ja) | 2014-06-12 | 2019-10-23 | エヴァン， シー． アンガー， | リン脂質組成物、その凍結乾燥方法および凍結乾燥物 |
| KR20230015509A (ko) | 2014-10-30 | 2023-01-31 | 랜티우스 메디컬 이메징, 인크. | 지질 캡슐화된 기체 마이크로스피어 조성물 및 관련된 방법 |
| IL296875A (en) | 2014-12-31 | 2022-12-01 | Lantheus Medical Imaging Inc | Fat-wrapped gas microsphere preparations and related methods |
| CN115531560B (zh) | 2016-05-04 | 2024-05-17 | 蓝瑟斯医学影像公司 | 用于制备超声波造影剂的方法及装置 |
| US9789210B1 (en) | 2016-07-06 | 2017-10-17 | Lantheus Medical Imaging, Inc. | Methods for making ultrasound contrast agents |
-
2017
- 2017-03-16 US US15/461,469 patent/US9789210B1/en active Active
- 2017-05-23 US US15/602,580 patent/US9913919B2/en active Active
- 2017-07-05 KR KR1020187038022A patent/KR102500959B1/ko active IP Right Grant
- 2017-07-05 WO PCT/US2017/040755 patent/WO2018009570A1/en unknown
- 2017-07-05 SG SG10201913353YA patent/SG10201913353YA/en unknown
- 2017-07-05 EA EA201892568A patent/EA201892568A1/ru unknown
- 2017-07-05 CN CN201780040503.3A patent/CN109562194A/zh active Pending
- 2017-07-05 CN CN202310597151.9A patent/CN116370659A/zh active Pending
- 2017-07-05 IL IL297660A patent/IL297660A/en unknown
- 2017-07-05 AU AU2017291815A patent/AU2017291815A1/en active Pending
- 2017-07-05 IL IL263205A patent/IL263205B2/en unknown
- 2017-07-05 MX MX2018015930A patent/MX2018015930A/es unknown
- 2017-07-05 BR BR112018074469-7A patent/BR112018074469A2/pt unknown
- 2017-07-05 US US16/315,643 patent/US11266749B2/en active Active
- 2017-07-05 SG SG11201810455XA patent/SG11201810455XA/en unknown
- 2017-07-05 CA CA3025580A patent/CA3025580A1/en active Pending
- 2017-07-05 JP JP2018568907A patent/JP7316793B2/ja active Active
- 2017-07-05 EP EP17824829.0A patent/EP3458110A4/en active Pending
- 2017-07-06 TW TW106122700A patent/TW201815424A/zh unknown
-
2018
- 2018-02-06 US US15/889,429 patent/US11344636B2/en active Active
- 2018-03-29 US US15/940,932 patent/US10220104B2/en active Active
- 2018-12-17 MX MX2022011694A patent/MX2022011694A/es unknown
-
2019
- 2019-01-31 US US16/264,176 patent/US10583208B2/en active Active
-
2021
- 2021-05-19 US US17/325,173 patent/US11857646B2/en active Active
- 2021-05-19 US US17/325,176 patent/US11266750B2/en active Active
-
2022
- 2022-03-07 US US17/688,532 patent/US11529431B2/en active Active
- 2022-03-07 US US17/688,601 patent/US20220184237A1/en active Pending
-
2023
- 2023-04-12 JP JP2023064866A patent/JP2023100646A/ja active Pending
- 2023-05-19 US US18/320,890 patent/US20230330274A1/en active Pending
- 2023-05-22 US US18/321,714 patent/US11925695B2/en active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20010034106A (ko) * | 1998-01-14 | 2001-04-25 | 블레어 큐. 퍼거슨 | 지질 블렌드 및 그 지질을 함유하는 인지질 현탁액의 제조방법 |
| US8747892B2 (en) * | 1998-01-14 | 2014-06-10 | Lantheus Medical Imaging, Inc. | Preparation of a lipid blend and a phospholipid suspension containing the lipid blend |
| US20070071685A1 (en) * | 2003-12-22 | 2007-03-29 | Bracco Research S.A. | Gas-filled microvesicle assembly for contrast imaging |
| US20160030596A1 (en) * | 2013-03-15 | 2016-02-04 | Children's Medical Center Corporation | Gas-filled stabilized particles and methods of use |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR102500959B1 (ko) | 초음파 조영제의 제조 방법 | |
| US7385395B2 (en) | Apparatus for preparing a solution of a hyperpolarized noble gas for NMR and MRI analysis | |
| Kloefer et al. | Study of a standardized taurocholate-lecithin powder for preparing the biorelevant media FeSSIF and FaSSIF | |
| Zhu et al. | A fluorinated ionic liquid-based activatable 19F MRI platform detects biological targets | |
| US20140227343A1 (en) | Method of monitoring the release from liposomes of a product of interest using superparamagnetic nanoparticles | |
| WO1990003800A1 (en) | Iron-containing preparation for use as nmr contrast medium | |
| CN1121314A (zh) | 造影剂或与其相关的改进 | |
| Taraban et al. | Conformational transition of a non-associative fluorinated amphiphile in aqueous solution. II. Conformational transition vs. supramolecular assembly | |
| NZ790021A (en) | Methods for making ultrasound contrast agents | |
| EA040910B1 (ru) | Способы получения контрастных средств для ультразвукового исследования | |
| Kumar et al. | Design Development and Characterization of Nicardipine Solid Lipid Nano-Particulars | |
| Maa et al. | Three-dimensional Angiography Fused with CT/MRI for Multimodal Imaging of Nanoparticles Based on Ba4Yb3F17: Lu 3, Gd 3 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant |