JPS63277618A - リポソ−ムの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、新規な薬物保持リポソームの製造方法に関す
る。

（従来の技術） リポソーム（Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ　）は、その形態より
多重層リポソーム（ＭＬＶ　；　Ｍｕｌｔｉｌａｍｅｌ
ｌａｒ　Ｖｅｓｉ−ｃｌｅ）、小さな一枚膜リポソーム
（ＳＵＶ　；　ＳｍａｌｌＬｌｎｉｌａｍｅｌｌａｒ　
Ｖｅｓｉｃｌｅ　）　、大きな一枚膜すポ゛ノーム（Ｌ
ＵＶ　；　Ｌａｒｇｅ　Ｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒ　Ｖｅ
ｓｉｃｌｅ　）の３種に大別され、それぞれ種々の調製
法が既に報告されている。

主な調製方法としては、 ■脂質を有機溶媒に溶かし、Ｎ２ガスをふきつけるか減
圧留去するかして溶媒を除去し、ガラス壁に１ｉｐｉｄ
　ｆｉｌｍを形成させる。　次にこのｌｉｐｉｄｆｉｌ
ｍに水溶液を加え、脂質の相転移温度（Ｔｃ）以上で膨
潤または、水和させてさらに振盪するポルチクスイング
法。

■脂質を含むエーテル溶液を薬物を含有する５５〜６０
℃の水溶液中に注入すると、注入したエーテルが水と接
触し蒸気となって水溶液表面に上がる間にリポソームを
形成するエーテル注入法。

■脂質を含むエタノール溶液を薬物を含有し、脂質のＴ
ｃ以上の水溶液中に注入するエタノール注入法。

■１ｉｐｉｄ　ｆｉｌｍにコール酸ナトリウムやデオキ
シコール酸ナトリウムを加えて混合ミセルを作り、ここ
から透析、ゲル濾過、超遠心あるいは希釈によってコー
ル酸類を除くコール酸除去法。

■リン脂質とＳｐａ口８０のｎ−ヘキサン溶液に水溶液
を加えてホモジナイズし、Ｗ１０エマルジョンを作り、
減圧下でｎ−へキサンを留去してＷ／Ｌ混合物にし、親
水性の高い界面活性剤の入った水溶液を加えてホモジナ
イズし、Ｗ／Ｌ／Ｗを形成させ最後に透析等により余分
な界面活性剤を除去するＷ１０／Ｗエマルジ習ン法。

■脂質のエーテル溶液に水溶液を加えて超音波処理し、
Ｗ１０エマルジタンを作る。　次に減圧下でエーテルを
留去してゲル化させ、軽く振盪後再び減圧下で残った有
機溶媒を留去する逆相蒸発法。

■リポソーム膜成分物質を水溶性の非揮発性有機溶媒と
混合し、次いで水性溶液に分散させる方法。（特開昭６
０−７９３２．同６０−１５３９３８　）■リポソーム
膜成分物質と水性溶媒とを、膜成分物質自体のＴｃ以上
にて攪拌する方法。（特開昭６０−７９３３．同６０−
７９３４　）などが知られている。

（発明が解決しようとする問題点） しかしながら、■〜■の方法をそのまま工業的生産に結
びつけるには、保安上及び安全作業上の問題の他、操作
技術上の困難さ等があり、有機溶剤を使用する場合には
、形成されたリポソーム状薬剤からこの溶剤の除去が不
完全になるというような欠点を有していた。

また■、■は操作も容易であり、工業的生産も可能であ
るが、リポソームに内包させる薬剤をＴｃ以上で攪拌す
る必要があり、たとえばタンパク質、ペプチド、アスコ
ルビン酸のように熱に弱い物質であれば、部分的分解や
変性をまねく。

（問題点を解決するための手段） 本発明者らはこうした事情に鑑み、有機溶媒を使用せず
にリポソームを調製する方法、即ちただ単に脂質を水溶
性溶媒中に分散させる方法に注目し、その改良について
鋭意検討した結果、リポソーム膜成分物質を少量の水性
溶液と、膜成分物質のＴｃ以上に加熱、ゲル化させ、冷
却後リポソームに内包される薬剤を添加し、超音波処理
によりリポソームが形成されることを見い出し、本発明
を完成するに至った。

本発明において使用される膜成分物質としては、例えば
ホスファチジルコリン、ホスファチルジルエタノールア
ミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシト
ール、リゾホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン
、卵黄レシチン、大豆レシチン等に代表されるリン脂質
およびその水素添加物が望ましい。　なお、これにコレ
ステロール、コレスタン等の膜安定化剤、ジセチルホス
フェート、ホスファチジン酸。

ステアリルアミン等の荷電物質、α−トコフェロール等
の酸化防止剤を加えて膜成分物質を形成させてもよい。

また、膜成分物質を分散させる水性溶媒としては、水、
生理食塩水、緩衝液、糖類の水溶液及びこれらの混合液
が好ましく使用される。

膜成分物質との使用比率は、膜成分物質１重量部に対し
０．５〜５０重量部、好ましくは１〜ｌＯ重量部程度で
ある。

（作用） 本発明法が既知のリポソーム状薬剤法に比して、優れて
いるところは次の点である。

■）有機溶媒をいっさい使用しない為、保安上。

作業上及び使用上安全である。

２）リポソームに内包せしめる薬剤を加熱しないため、
熱に不安定な薬剤も使用可能である。

３）製造は非常に簡便である。

４）スケールアンプが容易であり、リポソーム製剤の工
業的生産が可能である。

次に本発明の実施例を挙げて、更に詳細に説明する。　
配合量は重量％である。

実施例１ ■水素添加精製大豆【／シチ：／　（ＩＶ＝７．６）　
　０．５■精製水　　　　　　４．０ ■カゼイン水溶液（１，０重量％）３．。

■精製水　　　　　　３０．０ ■精　　製　　水　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　６２．５■および■の成分を８０℃に加熱し、充
分に混練、攪拌した後冷却し、■、■の成分を加え、超
音波ホモゲナイザーで３分間処理する。　最後に■の成
分を加え、リポソーム懸濁液を得る。

比較例工 実施例１と同一処方で、 ■〜■の成分を８０℃に加熱し、充分に混練。

攪拌した後、予め８０℃に加温しておいた■の成分を加
え、８０℃に保ったまま超音波ホモゲナイザーで３分間
処理する。　最後に■の成分を加え、リポソームの懸濁
液を得る。

比較例２ 実施例１と同一処方で、 ■〜■の成分を４０℃にて充分に撹拌した後、■の成分
を加え、超音波ホモゲナイザーで３分間処理したが均一
に分散せず、■の成分を加えたところ、沈澱物及び浮遊
物が認められたことから、リポソームが完全にはできて
いないものと判断された。

比較例３ 実施例Ｉと同一処方で、 ■および■の成分を８０℃に加熱し、充分に混練、攪拌
した後、冷却し、■、■の成分を加えホモミキサーで３
分間攪拌し、最後に■の成分を加え、リポソームの懸濁
液を得る。

以上の方法で得たリポソーム懸濁液を、ＵＣＣセロハン
チューブ透析バックに入れ、等張のリン酸緩衝液に対し
て透析（５℃、ＩＩ！ｘ１時間×６回）して、リポソー
ム内に保持されなかったカゼインを分離除去した。　次
いで得られたリポソームをエーテル：クロロホルムＦＪ
Ｅ（１：５）で破壊し、内包されていたカゼインを定量
する。（Ｌｏｗｒｙ法） 実施例及び比較例のリポソームのカゼイン保持率を表１
に示した。

保持率は で表した。

表１ 表１より明らかなように、本発明法は従来法（比較例１
）と同等の高い保持率を示す。

実施例２ ■完全水素添加精製卵黄レシチン　　１．００■ジセチ
ルホスフエート　　　　　　Ｏ，ＯＳ■生理食塩水　　
　　　　　　　　　４．００■ＡＴＰ水溶液（１，０ｊ
ｉｉ　ｉ　％　）　　　　ｌＱ、００■生理食塩水　　
　　　　　　　　２０．００■生−即食塩水　　　　　
　　　　　　６４．９２１００．００ ＊ＡＴＰ＝アデノシン三リン酸 ■〜■の成分を８０℃に加熱し、充分に混練。

攪拌した後、冷却し、■、■の成分を加え、超音波ホモ
ゲナイザーで２分間処理する。　最後に■の成分を加え
軽く攪拌し、リポソームの懸濁液を得る。

比較例４ 実施例２と同じ処方で、 ■〜■の成分を８０℃に加熱し、充分に混練。

攪拌した後、予め８０℃に加温しておいた■の成分を加
え、８０℃に保ったまま超音波ホモゲナイザーで２分間
処理する。　最後に■の成分を加え、軽く攪拌しリポソ
ームの懸濁液を得る。

以上の方法で得たリポソーム懸濁液を、生理塩水を加え
て超遠心分ｍ　（８５０００Ｘ　ｇ　３０分間）を用い
て２回洗浄した。

リポソームに含まれた薬物量は、エーテル：メタノール
混液（５：　１）により破壊し、２６０ｎｍにおける吸
光度から算出した。

実施例２及び比較例２のリポソームのＡＴＰの取り込み
率を表２に示した。

表２ 表２より明らかなように、本発明法はリポソームに内包
させる薬剤を加熱しないため、ＡＴＰのように熱に弱い
物質も保持させることが可能である。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）リポソーム膜成分物質を少量の水性溶液と、膜成
   分物質の相転移温度（Ｔｃ）以上まで加熱、ゲル化させ
   、冷却後、リポソームに内包させる薬剤及び水性溶媒を
   添加し、超音波処理によりリポソームの形成させること
   を特徴とするリポソームの製造方法。
2. （２）リポソーム膜成分が、リン脂質および／または水
   素添加リン脂質である特許請求の範囲第一項記載のリポ
   ソームの製造方法。
3. （３）リポソーム膜成分と当初の水性溶液の重量比が１
   ：０．５〜５０である特許請求の範囲第一項記載のリポ
   ソームの製造方法。