JPS588019A - リポソ−ム又はその溶液の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はリポソーム又はリポソーム溶液の製造方法に関
する。更に本発明は生物学的に活性な物質を含有するこ
とかでトる高濃度のゲル様リポソーム溶液に関する。

本発明による方法は、リポソーム形成剤（Ｉｉｐｏｓ−
ｏｍｅ−ｆｏｒｍｅｒ）の水溶液中において、不活性な
揮発性有機溶媒又はそのような溶媒の混合物又は不活性
な無機もしくは有機の気体の存在下に、水性相に関して
相境界を生成せしめることから成る。

リポソーム形成剤としては、脂質、特にレシチンのよう
なリン脂質が考慮される。レシチンは植物、動物又は合
成起源のものであることができる。

レシチンの例は大豆レシチン、卵レシチン又はＬ−β−
オレオイル−γ−バルミトイルー〇−レシチンである。

リポソーム形成剤としては、脂質及び助剤例えばトリグ
リセリド、フレステロール、コレステロールエステル、
抗酸化剤（例えばα−トコフェロール）及び糖の混合物
を使用することもできる。

混合物の形でも使用しうる不活性な揮発性有機溶媒の例
は、低級脂肪族アルコール（例えばエタノール、フロパ
ノール及びイソプロパ／−ル）及びエーテル、特にジエ
チルエーテルである。無機の気体の例は二酸化炭素、窒
素、及び不活性な気体例えばアルゴンである。有機の気
体の例は、炭化水素特に低級脂肪族炭化水素例えばプロ
パン、及び為素化低級脂肪族炭化水素例えば７レオンで
ある。

相境界の形成は、相平衡に影響するパラメーターを変え
ることにより、例えば圧力又は温度を変えることにより
行なうことができる。例えば、出発物質中に存在する糸
の相平衡は、高振動数エネルギー源例えば特に超音波の
作用によって変えることができる。他のエネルギー源又
はエネルギーの種類の例は、一般に物理的−化学的緩和
（ｒｅｌａｘａ−ｔｉｏｎ）法に用いるものである。

従来、超音波は予じめ形成された多層板小胞（ｍｕｌｔ
ｉｌａｍｅｌｌａｒ　ｖｅｓｉｃｌｅ）を機械的に崩壊
するために、リポソームの製造に使用されてきた。しか
しこの公知の方法の場合には、比較的低濃度のリポソー
ム溶液しか製造することができない。他の欠点は、調製
物の強加熱、高エネルギー必要量、超音波装置の材質の
摩耗及び大規模での運転の難しさである。

本発明による方法は、形成しうる系内の局所的圧力を、
例えば超音波によって変えることによって、不活性な補
助成分の溶解平衡及びこれと連動する相平衡、例えば気
体（気体状）＃気体（溶解形）をリポソームの形成に使
用するという点で、上述の欠点を回避する。局所的圧力
の変化は、例えば補助成分（即ち揮発性有機溶媒或いは
無機又は有機の気体）の脱気及び再圧縮又は溶解による
周期的に起こる相分離をもたらし、これがさらにリポソ
ーム形成剤の分子を、補助成分の生成及び崩壊する準顕
微鏡的相画分（例えば気体小胞）の周囲に配向せしめる
。

好適な具体例において、本発明による方法はリポソーム
形成剤が約２０〜５０重量％の濃度で存在する溶液を用
いて行なわれる。補助成分はリン脂質の飽和濃度までの
量で存在しうる。更なる好適な具体例において、補助成
分はリポソーム形成剤に対する溶媒として役立つ。超音
波源としては、通常の超音波装置（例えば超音波精製塔
に対する装置）が使用できる。レシチンの出発濃度が２
０−５０％の場合、短い音波照射（ａｃｏｕｓｔｉｃ　
１ｒｒａｄｉ−ａｔｉｏｎ）時間の後、水中に捕捉され
且つこの結果直径約２００ｎｍ及び重要な粒径分布（Ｋ
ＯＮＴＲＯＮＮＡＮＯ３Ｉ　ＺＥＲで測定して分散液２
〜３）のリポソームが存在するリポソーム溶液を与える
７オーム様ゲルが得られる。上述の如き濃溶液の短い音
波照射後に得られるリポソームゲルは、更なる音波照射
（約１５〜３０分間）後に、音波照射時間に依存してリ
ポソームが４０〜１３０ｎｍの直径でありそして優秀な
単分散を有するはっきりした不透明のリポソーム溶液に
変えられる。

この方法によれば、例えば孔径０．２２μのフィルター
を通過する粘埒なリポソーム溶液（例えばリポソーム２
０〜２５重量％含有）を製造することができる。過剰な
補助成分は例えば真空を適用することによって除去する
ことができる。

最初に得られるリポソームゲルはその＊までも使用する
ことができる；例えばそれは軟こうの基剤として使用す
るのに適当である。

リポソーム溶液は、例えば調製物、特に水に不溶性であ
るか又は殆んど溶解しない活性物質を含有する薬剤調製
物の製造に対して使用することができる。そのような活
性物質は親油性の製薬学的活性物質、例えばベンゾジア
ゼピン（例えばンアゼパム及びクロルジアゼポキシド、
フルニトラゼパム、メダゼパム、クロナゼパム及びプロ
マゼパム）或いは脂溶性ビタミン例えばビタミンＡ、Ｄ
、Ｅ及びＫである。本発明によるリポソーム溶液は水溶
性の活性物質（例えば、Ｂ群のビタミン、例えばビタミ
ンＢ１、及びＢ６）も含有しうる。便宜上、これらの活
性物質は音波照射に先立って、リポソーム形成剤の溶液
に（親油性活性物質の場合）或いは水溶液に（親水性活
性物質の場合）添加される。　次の実施例は本発明を例
示するものである。

実施例１ ホスホリボン（Ｐｈｏｓｐｈｏｌ　１ｐｏｎ）　１００
　（Ｐ　Ｌ　１００）４００ｇを、水蒸気浴上で十分な
容量のエタノール溶液とし、次いで濃厚物６００ｇまで
濃縮した。これを簡単な実験室用超音波装置（３００ワ
ツト、例えばＣｏｌ１１ｐａｃｔ　ＴＵＣ３００型）ニ
セットし、音波を照射して、２回蒸留した窒素飽和水２
１と共に攪拌した。混合物中での酸化を避けるために、
高度に精製した窒素流を、溶液中へゆっくりと通流した
。この方法によると、数分後においてでさえ小胞デルが
得られた。試料は、過剰の容量の水中に分散させると、
この時でさえ優秀な単分散の及び平均小胞粒径０．２０
μ（ＫＯＮＴＲ○Ｎ　　Ｎ）ＸＡＮＯ８ＩＺＥＲで測定
）ｆ）　’）　ホ’／　−ム番与えた。更に約３０分間
音波を照射した後、非常に粘禰な不透明の調製物への液
化が始まり、この調製物は更に約３０分間音波を照射し
て激しく攪Ｎｕた後粘性の小さい液体状態に変形した。

音波の照射によって誘発される溶液の自己対流は、リポ
ソーム溶液が完成するまで、最後の１５分間の音波照射
の開、適当な混合を保証するのに十分である。全工程中
、４０℃の温度を越えさせるべ鰺でなく、不活性な雰囲
気を維持すベトである。

約１００〜１２０ｒ＋ｍの平均小胞直径が達成された後
、溶液の高割合をデカンテーションし、窒素下に（約５
気圧で）孔径１．２μ、０．４５μ及び０゜２２μの膜
フィルター中を連続的に通過させた。

このようにして得られたリポソーム溶層は、０°Ｃ以下
まで冷却するばかりでなく、熱で殺菌することによって
透明なゲルに転化することができた。

これを所望しないならば、電解質（例えば生理学的緩衝
系）又は糖例えば中でもソルビトールを添加することに
よってゲルの変形を抑制することがで軽る。

実施例２ ゲルの状態が達成された後（約１５分間の音波照射時間
後）に音波の照射を中断する以外実施例１に従ってバッ
チを製造した。このようにして得たゲルを不活性な気体
下に数日間貯蔵した。続いて、これを窒素飽和の水２０
０Ｉａｌの添加後に、同一の実験条件下において更に音
波照射した。１５　　　　】〜３０分間後でさえ、良好
な分散性の及び平均小胞粒径１２０〜１３０ｎｍの最終
リポソーム溶液が得られた。この溶液は実施例１に記述
したようにつ１遇することができた。

実施例３ ＰＬｌｏｏの４ｏｏｇをジエチルエーテル約２００ｍ１
に溶解し、飽和するまで濃縮した。このようにして得た
濃厚物（約５ｏｏ〜６００ＩＩｌｌ）を前述した如き超
音波装置中に入れ、窒素を飽和した水２１で覆い、不活
性な気体下に約３０分間音波照射した。音波の照射中、
表面上の成分の浮遊物をハンドミキサーで小さく壊ゎし
、攪拌した。この結果非常に粘穐などろどろしたゲルを
得た。これは更に約１５分間音波照射した後、こは゛く
色のゼラチン状物質を与えた。これは更なる音波照射の
後、小胞の形成を伴なって液化しはじめた。このように
して得たリポソーム溶液は、窒素を導入してエーテルを
留去した後、困難（凝集）ではあった６を水中に溶解さ
せることができた。一方、アセトン及び水の１：１の割
合の混合物を添加した場合、ミルク状の不透明な溶液が
得られた。これは回転蒸発機で有機溶媒を留去させた後
、実施例１に従って容易にミ濾過することができた。ア
セトン水混合物を上記凝集調製物へ添加する代りに、エ
タノール約１００ｍ１を添加し、溶媒を上述のように除
去することによって水への溶解を達成することもできた
。平均小胞粒径は１２０〜１３０ｎｍに相当した。

実施例４ ＰＬｌｏｏの４００ｇを、アルコールに溶解し、飽和す
るまで蒸発させた。炭酸水素ナトリウム１００ｇ及びブ
ドウ糖４００ｇを攪桝によって導入した（ブドウ糖の代
りにソルビトールも使用できた）。このようにして得た
粘妹な物質を、すでに記述した方法により超音波浴中へ
入れ、窒素を飽和した水２１で覆った。連続的に及び同
時に音波照射し且つ攪拌しながら、燐酸（８０％）１０
０ｇを徐々に嫡々に添加した。気体の発生が減少しそし
て泡立つと共に、混合物を時折攪秤し、約６０〜９０分
後に最終のリポソーム溶液を前述の方法に従ってｊ濾過
した。この調製物は明らかに濁っており、平均小胞粒径
１３０ｎｍを有し、良好な単分散を示した。この溶液の
一部をエタノール約１００ｆｌｌｌで処理し、更に３０
分間、音波を照射した。

こうする際に、粘度及び透明性がはっきりと増大し、平
均小胞粒径は明らかに１１０〜１２０ｎｍまで減少した
。

実施例５ ＰＬｌｏｏの４００ｇをエーテル８００ｍ１に溶解し、
次いでアセトン８００ｍ１を添加した。この溶液を、前
述した方法で超音波浴中においた。窒素を飽和した水１
１を徐々に滴々に添加し、一方沈殿が生じないように音
波照射した。このようにして得た蜂蜜色の、透明で僅か
に粘婿な溶液を、更に約６０分間音波照射した。次いで
エーテルの大部分及び７セトンの一部分を蒸発によって
除去した。この結実用いたレシチンがアセトンに不溶で
あるが故に、リン脂質小胞の分離及び生成が促進された
。有機溶媒の残りの量を回転蒸発機で除去し、リポソー
ム溶液を前述の方法に従って３濾過した。この調製物は
実質的に無色透明であり、濁り計において着るしいチン
グル効果（Ｔｙｎｄａｌｌ　ｅｆ−ｒｅｃｔ）を示した
。溶液の単分散性は優秀であり、単層板小胞は平均粒径
４４０−５０ｎを有した。この種のリポソーム溶液も、
更に安定剤を添加することなしに優秀な安定性を示した
。

実施例６ ＰＬｌｏｏの２００ｇをエーテル３００ｍ１に溶解し、
これをジアゼパム３ｇのアセトン３００＋＋＋ｌ中溶液
に攪秤しながら添加した（沈殿物は短期間音波照射する
ことによって排除できた）。次いで混合物を、窒素を飽
和した水６５０ｍｌで覆い、実施例１に記述したように
約４５分間音波照射した。

起こるかも知れない相分離は、アセトンを数ｌｏｌ添加
することによって逆転させることができた。あとに残る
溶媒残部を回転蒸発機で除去し、燐酸塩緩衝液（ｐＨ７
）を添加した後、ソルビトール（７０％水溶液）で１１
にした。このようにして得たリポソーム溶液は、孔径０
．２２μの膜を通して直接汐過し、１２０℃で２分間殺
菌することができた。

このとき、平均粒径は６０〜７０ｎｍに相当し、電子顕
微鏡での記録では優秀な単分散を示した。

上述の方法によれば、親水性ばかりでなく親油性の活性
物質も、有機又は水性へ導入し、リポソーム懸濁液中に
効果的に混入することができた。

活性物質の対応する相への付加は、リポソーム形成剤の
溶液中に対して直接、或いは音波照射前の添加された水
性相中に対して行なわれる。

ルシャ７ト

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、リポソーム形成剤の水溶液中において、不活性な揮
   発性有機溶媒又はそのような溶媒の混合物或いは不活性
   な無機もしくは有機の気体の存在下に、水性相に関して
   相境界を生成せしめることを特徴とするリポソームの製
   造方法。 ２、リポソーム形成剤が脂質、特にレシチンのようなリ
   ン脂質である特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３、リポソーム形成剤が、工程中に高粘度の状態が達成
   され又はそれを経過するように十分な高濃度で存在する
   特許請求の範囲第１又は２項記載の方法。 ４、揮発性有機溶媒が低級脂肪族アルコール又はエーテ
   ルである特許請求の範囲第１〜３項のいずれかに記載の
   方法。 ５、無機の気体が二酸化炭素、窒素又は不活性な気体で
   あり、そして有機の気体が不活性な随時素化されていて
   もよい脂肪族炭化水素である特許請求の範囲第１〜３項
   のいずれかに記載の方法。 ６、相平衡が高振動数エネルギー源、特に超音波の作用
   によって作られる特許請求の範囲１〜５項のいずれかに
   記載の方法。 ７、更に生物的に活性な物質又は安定剤及び抗酸化剤が
   存在する特許請求の範囲第１〜６項のいずれかに記載の
   方法。 ８、リポソームを２０重量％又はそれ以上含有するリポ
   ソーム溶液及びゲル。