JPH06502158A - Dnaゲル中に安定化された温泉水のリポソーム - Google Patents

Dnaゲル中に安定化された温泉水のリポソーム

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JPH06502158A JP3517391A JP51739191A JPH06502158A JP H06502158 A JPH06502158 A JP H06502158A JP 3517391 A JP3517391 A JP 3517391A JP 51739191 A JP51739191 A JP 51739191A JP H06502158 A JPH06502158 A JP H06502158A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 DNAゲル中に安定化された温泉水のりポノー二本発明は、特に皮膚病学および 美容術において有用な、DNAゲル中に安定化された温泉水のリポソームを含有 する、温泉水を主剤とする組成物に関する。
リポソームは1またはそれ以上の脂質二重層からなる微小胞であり、中心に水性 の空間を有し、多重ラメラ小胞の場合は2つの二貫層間に水性の空間を有する。
これらはり7脂質から構成され、安定性を増加させるためフレステ0−ルのよう fiミスチロールか添加されることが多い。
リボ′ノームはその大きさおよび単ラメラが多重ラメラかにより分類される。
MLV (多重う/−y小胞) 直1100−5000 ni (?!数)二重 層)LUV (大きい単うメラ小抱) 直径200〜2000 nm (1つの 二重層)SUV(小さい単ラメラ小胞) 直径20〜81)nm(1つの二重層 )大量のリポソームをつる手法が工業的に開発されたC超分散、音波処理、リボ ブレ ノ ト (Iipopred) ) 。 PUISIEIIX F、、D ELAT丁RE J、−Les liposomes、Ap垂撃奄■ a++on therpuejiques、 Technique et Do cumentalion、 Lavoisier Pari刀A1985参 詔。
これらの微小胞は、リポソームの膜と同し性質の膜を有する細胞と相互作用しつ る。
支1病字や美容術はりヂノームの活用に有望な分野である。皮′ijl二関する 主要を研究1!フル千コイトのりボノームに関する。コルチコイドのマイクロカ プセル化は製品の経皮的浸透を減らし、局所−表皮および真皮−における、11 1度を高めるよってある。#0)ILRAB W 、 LAScHJ −ヒトの 皮膚におけるリボノーふ化ヒドロコル千ノ゛ンの浸透動力学、Derma+ol og+ca 174. l8−22.1987参詔。
その他の物質も導入されたが、研究は断皆的で一般化されない EGF (上覧 増殖因子)は傷の治癒を促進すると考えられる スーパーオキ、ト、スムターグ は局所的に抗炎症作用を宵すると考えられる。巳がし、使用された調合物ではl ボソーム小抱が脆すぎて標的に到達する前に破壊されることが多重多くの人か、 水性ゲルの形態でリイノーム小抱を安定化するためのゲル化剤の使用に言及して いる。使用された主なゲル化剤にはセラチノ、カルボキノビニル重合体、メタク IJル重合体、ポリ/メチル/ロキサ、共重合体かあり、最も新しくはコラーゲ /かある。
現在用いられているゲル化剤で水性ケル中のリポソームを安定化しても、調合物 について40℃で3か月以上の安定性は得られrjい。
本発明ではデオキ/リホ核酸ケル中にリポソームを安定化することにより、この 主な欠点を解消することかできる。本発明によれば、DNAは当業者に既知の方 法で高度に重合したDNA(以後、HP DNAと称する)であり、これは市販 されている。特に、soo、 ooo〜15 XI(+’ 、好ましくは800 .000〜1.2 x+o6の分子量を有するDNAである。
本発明の組成物は有利には01〜10%、より好ましくは05〜5%のD N  Aを含有する。
本発明によれば、温泉水、より具体的にはアヴエ:/ (AVENE)水または コートレ(CAII冗ETS)水、をリポソーム中に入れる。アヴ二ノ水は湿疹 、播床、乾癖、治癒の遅れ、火傷の処置に有用な冶1!i効果を有する。基礎研 究らまたアヴ二ノ水の効能を裏付けている。このように一連の研究により、7ヴ エノ水かヒト好塩基球の顆粒消失を阻止する効果を発揮することか示唆される。
これはまた、皮膚の炎症に重要な役割を果たす多核細胞の遁走を阻止する。
リポソーム形態の硫化フートレ水は皮膚病、より詳しくは乾艙、湿疹、挫瘉、擾 痒、脂漏症、脱毛の治療に重要である。
アヴ二ノ水の組成は以下の通りである。
コートレ水の組成はり下の通りである。
本発明によれば当鉾、治療および/または美容上の効能のあるその他いTれの温 泉水も、表皮および直皮中に目障とする浸透か可能なようにマイクロカプセル化 しうる。
本発明の別の特徴によれば、本組成物はさらに併用添加した有効成分を任意に含 有していてもよい。このようt追I70有効成分としては、抗菌剤、より具体的 に1=フエノニツプ(Phenonip) 、 EDTA、安9香酸、p−ヒト ロキ7安二香酸ブ千ル、′ノルピノ酸、ビタミ/E、ヒタこノC等の付随するヒ タミ/成分、またはルリヂサ油Lborage owl)やアーカノ油(arg an owl)等の油Oもちろん、これらの例示は制昭を!味するしのではti い。
これらの追加有効成分は具体的には組F&物のO〜50叙特に01〜3重量00 の量で存在する。
本発明組成物は、有利にはりイノーム構成成分とfiる脂質を01〜10重量% 、特に05〜5重量%含有し、 (脂質)/(すfノームに被包された温泉水) の重量比は約1/3である。
1つの具体例においては、本発明で使用されるリポソームはフランス特許第26 34、375号により調製された多重うI″7型のものである。この具体例では 、リポソームゲルは次のようにして製造される。
a)リポソーム 両tl[性脂質溶液と、任意に親油性の前記追加有効成分とから本質的にする脂 質相を宵機溶媒、より具体的には工2ノール中で2節する。
次に、この相を親水性の前記追加成ガを任意に含汀していてもよい温泉水溶液に 槍やかに攪拌し−から添加する。
減圧下で蒸発させて、所望1度の一1fノームの一濁順を得る。
両護媒性脂質は糖脂質、ホスjニア ’−/指賃および特にり7脂質、例えはレ ジ千)(卵、大豆等の)等であれはよい 溶媒は、いかfiる割合でも水と昆!′0可能f本アルコールか好ましく、こく にエフノールか好ましい。
mna性脂xの溶液にはさらに、フしステロール、ステアリルアこノ、”スフ7 チ/ノ酸等のようt、壁の物理的性質(111E荷、剛さ)や化学的性質を変化 させるように設計されたM711!性を有する物質を含有させてもよい。
溶媒中の脂質濃度は0.1〜10重量%、好ましくは1〜5重量%である。
小さいリボ゛ノーム(特に100〜300nm)を得るには、相(1)に用いら れる溶媒の量か体積で、相(2)の水の30〜lOO%、例えば50%であるの か有利である。
b)リポソームゲルの調製 上記懸4P&へ、穏やかに攪拌しなからDNA (特にHP [lN^)と任意 に保存量および香料を添加する。
本発明によればゲル中で完全に安定な温泉水のリポソームを得ることかできる本 発明により得られるこれらの調合物は、皮膚美容術に、特に、局所用担体を含有 する場合は局所用に使用でき、チューブや主にポンプによる機械的装置に充填し たゲルであるか、またはゲルの形で噴出するスプレー組成物であればよい。
以下の実施例は本発明を説明するためのものであり、限定のためではない。
実施例I 脂質2%を含有するアヴエン水のリポソームの5にバッチの調製原料 1−有機相 一リン脂質(リポイド80)セビック(SEPPIC) 100 g−コレステ ロールBP 15 g −95%エタノール 2.5リットル 2−水相 一アヴエン水 5リットル −EDTA にナトリウム4) 10 g操作 1−有機相1の!A製 エタノール2.51中に、室温で激しく攪拌しながら、リン脂質100g、コレ ステロールlogおよびフェノニップIOgを加える。溶解と淡黄色均質相の生 成か起こるまで攪拌を172時間続ける。
アラ五ノ水5p中に撹拌しなからEDTA二ナトリウムlOgを加える。
3−リポソームの2製 クレムリン(Kreslin)装置と螺動ずノブを使用して、水相■中に1ir 機相1を薄層ジェット状で導入する。
レイネリ(Rayneri)装置を使用して激しく攪拌しながら、この添加を1 5分間かイナて行う。有機相は攪拌コーン(攪拌でできる円錐部)の外7111 11こ導入すべきである。乳白色の相か生成する。
減圧下で2.71(エタノール+水)を蒸発させる。水浴の温度は50℃であろ う礼白色rs液4.81か生成し、これをアヴ五ノ水で51に調整して、2%の 脂質を含有する溶液を得る。
実施例21 8P DNAゲルで安定化された温泉水のりポノーム組成物の調製 上記の脂質2%を含有する乳白色溶液に、穏やかに攪拌しriから、Hp DN A i/ヤバ不lり(JAVERNECH)社より市販3100gを少しつつ添 加する。溶解を室温でゆっくり行う。1時間攪拌すると、Hp DNAゲル2% とリポ゛ノーム2%とを含有する・安定化された調合物か得られる。
実施例3 性互男 以下の処方例Jこおいて、リポソーム中に肢包された温泉水の量(重量基準)( まリポソームを構成する脂質の量の3@程度である。
処方1 脂質 2 % HP DNA 2 % フェノニップ 0.5% EDTΔ 0.2% アヴエノ水を加えて 100 処方2 脂質 296 HP DNA 05% フェノニップ 0.5% EDTA 0.2% アヴ工/水を加えて +00 処方3 脂質 2 % HP DNA O,1% フェノニップ 05°10 EDTA 0.2% アヴエノ水を加えて +00 処方4 脂質 05% HPDNA O,2% p−ヒドロキシ安色香酸ブチル 02%フローラル水(Floral wate r) 1 0bアヴエン水を加えて +00 処方5 脂質 2 % HP DNA 05% ソルビン酸 03% コートレ水を加えて 100 処方6 脂質 1 % HP DNA 05% フローラル水 I 九 コートレ水を加えて 100 処方7− 脂質 2 % HP DNA 0.5% 銀杏エキス(Gingko extract) l %フェノニップ 05% フローラル水 1 % 温泉水を加えて io。
処方8 脂質 0196 HP DNA 0.59δ ルリヂサ油 106 フエノニノブ 1 % 温泉水を加えて +00 処方9 脂質 10 % HP DNA 5 % 温泉水を加えて 100 実施例4 安定性の検討 アヴ二/温泉水のりボノームを280含亙する処方について安定性の検j1を行 った。
電子顕微鏡を使用して視覚検査を行った。ニの視覚検査1=、’、1 ノア / り’7. + ’7酸ナトリウムの2%溶液を用いてリポソームをネガティア染 色すること1こよ・)毎月行う。
この検討の結果を次の表暴こまとめて示すっ+=良好な安定性(リヂ/−ム30 0 t30 nm)二−リポソームの寸法か増大(膜の融合)−一相分Wt(処 方の不安定性) 写真検量では、すfクレムはHPD呂格子中でその形状とT2去か(化せずに適 正に分散されていることか示され、基本処方中でリポソームの驚くべき安定性か 確認される。
実施した他の実験からし、本発明によるDNAの存在によって、本発明による鉱 水のりfクレムの製造中および製剤処方において、リポソーム、つ顕著−安定化 を得ることかできるという結論に達する。
05〜20ものHP DNAJ度でリポソームを24力呵安定化することかでき るのに利して、従来のカーナポールおよび/またb;:ラーケノ型のゲル化記1 で1諜リヂl−ム膜の安定性は最大で6力月間保持されるたけてあろうこの安定 性は、水性媒質中でHP DNA繊維の架橋結合か起こることで、リポソームの 分散か可能とtす、脂質小抱の融着か防止されることにより説明できる。
実施例5 薬学的および化学的活性 本発明によるリポソーム形態の鉱水のベクトル化(νectoriza+1on )により、予想外にも、この水の薬理および臨床活性の効力を強化することかで きる。
得られた結果を次にまとめる。
1、 ヒト好塩基球の悦14粒反応の阻止ヒト好塩基球の脱顆粒反応を次の手順 に従って検査する。
アレルギー性ぞ者からの検体または特異的1gE抗体に富む血清によりトナーの 好塩基球の受動感作後の検体からの所定抗原に感作された好塩基球の調製も作さ れた好塩基球をアレルギー性患者から得る場合には、1gでの単なる沈降および 白血球の多い血漿のJ七・分離による高11度化を行うことか必要である。
こうして得られた白血球ペレットは1500〜3000個/IIII′の好塩基 球を含有している。
得られた白血球を次いで無ll緩衝液に!濁させた後、遠心・分離する。次に、 感作させる抗原をRPMI +640 fflows Labol中で希釈する (希釈率5倍での連続希釈を7回)。最初の濃度は、グリセリ/処理したエキス の場合で、例えば10−3である。
この感作させるアレルゲノー好塩基球でのアヴエン水のベクトル化を検討するた めに、純水と蒸留水とを一定量の旧胞ベレットと接触させておき、25℃で30 分間インキユベーンヨノする。このイ/キュヘー/9ノ時間か経過した後、細胞 懸4液を同体積量の抗原希釈液と混合する。1昭として、抗原を含有しない液と の混合も行う。
細胞−抗原混合物を37℃で15分間イノキュへ−ノ3ノした後、トルイノノ膏 で染色する。
その後、脱顆粒反応を受けtiかった好塩基球を、マラセノ(Malassez lまたはフノフスーローセノタール(Fuchs−Rosenlha l)血球 gfて計数する。
敬! 次の表は、各種の呼吸アレルケノ(pneuma l lergen)の存在下 での15回の脱顆粒化試験に列する最大脱顆粒化工で表した結果を示す。15回 の実験での平均脱顆粒化率は、蒸留水での対11g実験で57.106.7ヴエ /水で29.3%、安定化りfノームを使用して行った試験では14.1%であ った(この差異は高度に膏!、p<Q。Olである)。
リポソームによるアヴエン水のベクトル化により、好塩基球の脱顆粒化の阻止効 果の100%の効力増強が可能である。
2、 薬理臨床検討 ヒトにおける抗刺激原活性の増強を、ラウリル硫酸ナトリウム(SLS)により 引き起こされる皮膚刺激のモデルを使用して検Nした。
(c)アヴLノ水(リポソーム、I(P [lNA濃度5%)試験するこれら3 種類の物質を、刺激モデルとなる対照用のSLS溶液と同じ1度の溶液を調製す るために、SLSの溶媒として使用する。これらの溶液を対間溶液と一緒に、閉 !(occlusive)パIチ試験により24時間適用する。
皮膚刺激の強さの評価は、ドツプラー・レーザー速度計法(Doppler L a5er Velocime+ry、 DLV)による皮膚面?f[の変動を測 定することにより行う。
表作(被験者数:20名) 検査する物質(a、 b、 c)を使用して075%の3種類のSLS 1g液 を調製する。月日用のSLS i’g液とa、 b、 cの各溶液を、65μl /crs’の量でそれぞれ円形濾紙上にラノダムに滴下してパl千を用!する。
次いて、閉塞包帯で24時間皮膚に百着させる。、包帯をはずした後、閉塞で起 0り得る効果を排除するように、測定開始まで30分間皮膚を開放空気にさらし ておく。
皮膚血液流の測定は6部分について10分間のLDV測定記録をとることにより 行うか、測定は生理学的基準値を得るようにバッチの適用前と、上記のバッチを はずしてから30分後との2回行う。
結果は、LDV曲線曲線面積によって表される。
SLSによる欠症の阻止率は次式Jこより算出される。
AUCSLS = SLS単独の1g4での曲線下の面積^υCp=a、bおよ びclllfの溶液での曲線下の面積試験し二冬物質の活性か有意であるか否か を決定するtこめに、イ尋られtこ結果ζ二月して7′l (Ila + re d)スチューテント(検定を利用し!こ統j士学的検討を行う。
唯黒 SLSにより引き起こされる刺激の明止工は次の通りである。
臨床学的検討により、リポソームでベクトル化されたアヴ二/水の抗炎症活性の 非富に明w戸功力増強(>100%)か確認される。
国際v4斎報告 フロントページの続き (51) Int、 C1,S 識別記号 庁内整理番号A61K 7100  T 9164−4C(72)発明者 ムザン、ギルベール フランス、31000トウールーズ、リュー・デ・ベニタン・ブラン11 I (72)発明者 トレポ、マリ一一テレーゼフランス、81100カストレ、リ ュー・バロン・カシャン19

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 1.デオキシリボ核酸ゲル中に安定化された温泉水のリボソームを含有すること を特徴とする、温泉水を主剤とする組成物。 2.使用したデオキシリボ核酸が高度に重合したもの(HPDNA)であること を特徴とする、請求の範囲第1項記載の組成物。 3.リボソームを構成する脂質を0.1〜10%含有することを特徴とする、請 求の範囲第1項または第2項記載の組成物。 4.0.1〜10%のDNAを含有することを特徴とする、請求の範囲第1項な いし第3項のいずれか1項に記載の組成物。 5、抗菌剤、より具体的にはフエノニツプ、EDTA、p−ヒドロキシ安息香酸 ブチル、ソルビン酸から選ばれたものを、追加有効成分として含有することを特 徴とする、請求の範囲第1項ないし第4項のいずれか1項に記載の組成物。 6.ビタミンE、ビタシンC、ルリヂサ油、アーガン油、銀杏バイローバ(gi ngkobiloba)エキスから選ばれた追加有効成分を含有することを特徴 とする、請求の範囲第1項ないし第5項のいずれか1項に記載の組成物。 7.使用した温泉水がより具体的にはコートレ水またはアヴェン水であることを 特徴とする、請求の範囲第1項ないし第6項のいずれか1項に記載の組成物。 8.組成物が0.1〜3重量%の前記追加有効成分を含有することを特徴とする 、請求の範囲第5項ないし第7項のいずれか1項に記載の組成物。 9.さらに、美容術用、持に皮膚美容術用に適した1種もしくは2種以上のビヒ クルを含有することを特徴とする、請求の範囲第1項ないし第8項のいずれか1 項に記載の組成物。 10.請求の範囲第1項ないし第9項のいずれか1項に記載のリボソームゲルを 含有する組成物の製造方法であって、下記工程からなることを特徴とする方法。 1)両親媒性脂質溶液と任意に親油性の前記追加有効成分とから本質的になる脂 質相を有機溶媒、より具体的にはエタノール中で調製し、2)この相を次いで、 任意に親水性の前記追加有効成分を含有していてもよい温泉水溶液に、穏やかに 撹拌しながら加え、3)減圧下で蒸発させて、所望のリボソーム濃度の懸濁液を 得、4)上記懸濁液中に穏やかに撹拌しながら前記DNAを導入する。
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