KR20180081180A - 올리고머 및 올리고머 접합체 - Google Patents

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하싼 야판바크트
모르텐 린도우
쇠렌 오또센
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에프. 호프만-라 로슈 아게
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Abstract

본 발명은 바이러스성 질환의 치료에 사용하기 위한 올리고머 접합체에 관한 것이다. 상기 올리고머 접합체는 a) 상기 바이러스성 질환을 치료하기 위해 B형 간염 바이러스(HBV)의 HBx 및/또는 HBsAg의 표적 서열을 조절할 수 있는 올리고머; 및 b) 상기 올리고머에 결합된, 바람직하게는 접합된, 상기 올리고머를 간에 전달할 수 있는 담체 성분을 포함한다.

Description

올리고머 및 올리고머 접합체{OLIGOMERS AND OLIGOMER CONJUGATES}
본 발명은 올리고머 치료제의 분야, 및 특히 B형 간염 바이러스(HBV)를 표적화하는 올리고머 및 올리고머 접합체에 관한 것이다. 특히 본 발명은 안티센스 올리고뉴클레오타이드가 담체 성분에 부착된 올리고머 접합체 치료제의 분야에 관한 것이다. 몇몇 태양에서, 본 발명은 안티센스 올리고뉴클레오타이드가 생리학적으로 불안정한 링커에 의해 담체 성분에 공유 부착된 올리고머 접합체 치료제의 분야에 관한 것이다.
보다 구체적으로, 본 발명은 세포에서 HBV mRNA를 표적화하여 바이러스성 질환의 치료를 유도하는 올리고머, 특히 올리고머 접합체 치료제에 관한 것이다.
분자 전략은 질병 상태를 직접 유발하거나, 상기 상태에 관여하거나 상기 상태를 악화시키는 불필요한 유전자 발현을 조절하기 위해 개발되고 있는 중이다. 하나의 상기와 같은 전략은 유해 표적 유전자의 전령 RNA에 대해 서열 상보성인 올리고뉴클레오타이드로 유전자 발현을 억제함을 수반한다. 상기 전령 RNA 가닥은 암호화 DNA 가닥의 사본이며, 따라서 상기 가닥은 DNA 가닥으로서 센스 가닥이라 지칭된다. 상기 센스 가닥에 하이브리드화하는 올리고뉴클레오타이드를 안티센스 올리고뉴클레오타이드라 칭한다. 이들 가닥의 mRNA에의 결합은 번역 과정 및 결과적으로 유전자 발현을 방해한다.
몇몇 뉴클레오타이드-기재 화합물이 다양한 치료 용도에 사용되어 왔다. 특히, 단일 가닥 및 이중 가닥 올리고뉴클레오타이드 및 유사체를 포함한 다양한 올리고뉴클레오타이드가 연구되어 왔다. 올리고뉴클레오타이드는 생체내 용도에 유용하기 위해서 세포막에 침투하는 능력을 포함한 다수의 능력을 가져야 하며, 세포외- 및 세포내 뉴클레아제에 대해 양호한 내성을 갖고, 표적에 대해 높은 친화성 및 특이성을 가지며, 바람직하게는 내인성 효소들, 예를 들어 RNAseH, RNAaseIII, RNAseL 등을 모집하는 능력을 가져야 한다.
다수의 잠재적인 치료 용도에 기저한 올리고뉴클레오타이드의 근본적인 성질은 와트슨-크리크 수소 결합(A-T 및 G-C) 또는 후그스틴/역 후그스틴 모드와 같은 다른 수소 결합 기구를 사용하여 상보성 단일 가닥 핵산을 인식하고 이에 특이적으로 하이브리드화하는 능력이다. 친화성 및 특이성은 특정한 올리고뉴클레오타이드의 하이브리드화 특성을 특성화하는데 통상적으로 사용되는 성질들이다. 친화성은 상기 올리고뉴클레오타이드의 그의 상보성 표적에 대한 결합 강도의 척도이다(듀플렉스의 열안정성(Tm)으로서 나타낸다). 상기 듀플렉스 중의 각각의 핵염기쌍은 열안정성을 증가시키며, 따라서 친화성은 상기 올리고뉴클레오타이드의 크기(핵염기의 수)의 증가에 따라 증가한다. 특이성은 완전한 상보성과 미스매치된 표적 서열을 구분하는 상기 올리고뉴클레오타이드의 능력의 척도이다.
변형 핵산은 예를 들어 상기 올리고뉴클레오타이드의 안정화의 개선에, 특히 하나 이상의 변형 뉴클레오타이드가 날개 영역 중 어느 하나 또는 둘 다에 존재할 때, 갭머(gapmer) 설계에 사용되는 것으로 공지되어 있다. 변형의 예는 2'-O-알킬-RNA 단위, 2'-아미노-DNA 단위, 2'-플루오로-DNA-단위, LNA 단위, 아라비노 핵산(ANA) 단위, 2'-플루오로-ANA 단위, HNA 단위, INA(문헌[intercalating nucleic acid -Christensen, 2002. Nucl. Acids. Res. 2002 30: 4918-4925](본 발명에 참고로 인용된다)) 단위, 2'-MOE 단위, ENA(에틸렌 핵산), UNA(문헌[Unlocked Nucleic Acid, Fluiter et al., Mol. Biosyst., 2009, 10, 1039]), 트라이사이클로 DNA(문헌[R. Steffens & C. J. Leumann, J. Am. Chem. Soc, 1997, 119, 11548-49]), cET-LNA(본 명세서에 도시됨), 및 LNA를 포함한다. 도 4는 이들 유사체 중 일부의 도면을 나타낸다.
특히 유효한 변형 핵산을 잠금 핵산(LNA)이라 지칭한다. LNA는 당해 분야에 보고되어 있다, 예를 들어 국제 특허 출원 WO 99/14226; 문헌[P. Nielsen et al, J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 1997, 3423]; 문헌[P. Nielsen et al., Chem. Commun., 1997, 9, 825]; 문헌[N. K. Christensen et al., J. Am. Chem. Soc., 1998, 120, 5458]; 문헌[A. A. Koshkin et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 2778]; 문헌[A. A Koshkin et al. J. Am. Chem. Soc. 1998, 120, 13252-53]; 문헌[Kumar et al. Bioorg, & Med. Chem. Lett.,1998, 8, 2219-2222]; 및 문헌[S. Obika et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1999, 515]을 참조하시오. 흥미롭게, 올리고뉴클레오타이드 서열내로의 2'-O,4'-C-메틸렌 가교를 함유하는 LNA 단위의 통합은 상기 변형 올리고뉴클레오타이드의 하이브리드화 안정화에 전례없는 개선을 유도한다(상기 및 예를 들어 문헌[S. K. Singh et al., Chem. Commun, 1998, 455]을 참조하시오). 상기 2'-O,4'-C-메틸렌 가교(LNA) 단위 및 또한 상응하는 2'-티오-LNA(티오-LNA), 2'-HN-LNA(아미노-LNA) 및 2'-N(R)-LNA(아미노-R-LNA) 유사체를 포함하는 올리고뉴클레오타이드는 바이- 및 트라이사이클릭 뉴클레오사이드 변형 올리고뉴클레오타이드에 대해 앞서 관찰되지 않았던 열 안정성을 갖는 상보성 DNA 및 RNA와의 듀플렉스를 형성한다. 변형에 따른 Tm의 증가는 +3℃에서부터 +11℃까지 변하며, 더욱이, 선택성도 또한 개선된다. 다른 DNA 유사체는 핵산에 대해 상기와 같은 높은 친화성을 재현가능하게 나타내지 않는다.
특정한 태양에서, 본 발명은 B형 간염 바이러스(HBV) 치료법에 관한 것이다. B형 간염은 B형 간염 바이러스(HBV)에 의해 유발되는 바이러스성 질병이다. 상기 질병은 혈액 및 혈액 제품과 같은 오염된 물질, 오염된 바늘에 의해 비경구적으로, 성적으로, 및 감염된 어머니 또는 보균자 어머니로부터 그의 자녀에게로 수직으로 전염된다. 상기 질병이 흔한 세계의 지역들에서, 어린 시절의 수직 전염은 감염된 개인의 상당 비율을 B형 간염의 만성 보균자가 되게 한다. 세계 보건기구 추산, 20억명이 넘는 인구가 전세계적으로 감염되었으며, 급성 사례는 매년 약 4백만 명이고, 매년 1백만명이 사망하며, 3억5천만명에서 4억명이 만성 보균자로 된다. 보균자의 대략 25%가 만성 간염, 간경변 또는 간암으로 사망하며 만성 보균자의 거의 75%는 아시아인이다. B형 간염 바이러스는 담배 다음 두 번째로 가장 중대한 발암인자로, 모든 원발성 간암의 60% 내지 80%의 원인이다. HBV는 HIV보다 100배 더 전염성이다.
B형 간염 바이러스(HBV)는 외막이 있는 부분 이중 가닥 DNA 바이러스이다. 조밀한 3.2 kb HBV 게놈은 4개의 중복 개방 판독 프레임(ORF)으로 이루어지며, 코어, 폴리머라제(Pol), 외막 및 X-단백질을 암호화한다. 상기 Pol ORF가 가장 길며 상기 외막 ORF는 상기 내에 위치하는 반면, 상기 X 및 코어 OFR는 상기 Pol ORF와 겹친다. HBV의 생활사는 하기 2개의 주요 사건을 갖는다: 1) 이완환상(RC DNA)으로부터 폐쇄환상 DNA(cccDNA)의 생성, 및 2) RC DNA를 생성시키는 전게놈 RNA(pgRNA)의 역전사. 숙주 세포의 감염 전에, 상기 HBV 게놈은 상기 비리온내에 RC DNA로서 존재한다. HBV 비리온은, 인간 간세포의 표면상에 존재하는 음으로 하전된 프로테오글리칸에 비특이적으로 결합함으로써 및 HBV 표면 항원(HBV sAg)의 특이적 결합을 통해 숙주 세포내로 진입할 수 있는 것으로 밝혀졌다. 상기 비리온은 일단 세포내로 들어가면, 바이러스 코어 및 캡시드화된 RC DNA가 숙주 인자에 의해, 핵 국소화 신호를 통해, Impβ/Impα 핵 수송 수용체를 통해 핵내로 수송된다. 상기 핵내에서, 숙주 DNA 수복 효소가 상기 RC DNA를 cccDNA로 전환시킨다. cccDNA는 모든 바이러스 mRNA에 대한 주형으로서 작용하며, 그 자체가 감염된 개인에서 HBV 지속을 책임진다. 상기 cccDNA로부터 생성된 전사물은 2 개의 범주, 즉 pgRNA 및 하위게놈 RNA로 분류된다. 하위게놈 전사물은 3개의 외막(L, M 및 S) 및 X 단백질을 암호화하고, pgRNA는 전-코어, 코어 및 Pol 단백질을 암호화한다. HBV 유전자 발현 또는 HBV RNA 합성의 억제는 HBV 바이러스 복제 및 항원 생성의 억제를 유도한다. 예를 들어, IFN-α는 HBV 공유 폐쇄환상 DNA(cccDNA) 미니염색체로부터 전게놈 RNA(pgRNA) 및 하위게놈 RNA의 전사를 감소시킴으로써 HBV 복제 및 바이러스 HBsAg 생성을 억제하는 것으로 나타났다. 모든 HBV 바이러스 mRNA는 캡핑되고 폴리아데닐화되고, 이어서 번역을 위해 세포질로 수출된다. 상기 세포질에서, 새로운 비리온들의 조립이 개시되며, pgRNA의 단일 가닥 DNA 중간체를 통한 RC DNA로의 역전사가 개시될 수 있도록 발생기 pgRNA를 바이러스 Pol로 패키징한다. RC DNA를 함유하는 성숙 뉴클레오캡시드는 세포 지질 및 바이러스 L, M, 및 S 단백질로 둘러싸이며 이어서 감염성 HBV 입자가 세포내막에서의 출아에 의해 방출된다. 흥미롭게, 비-감염성 입자가 또한 감염성 비리온보다 크게 우세한 수로 생성된다. 이들 빈, 외막으로 둘러싸인 입자(L, M 및 S)를 서브바이러스 입자라 칭한다. 중요하게, 서브바이러스 입자는 감염성 입자와 동일한 외막 단백질을 공유하므로, 상기 입자는 숙주 면역계에 대한 미끼로서 작용하는 것으로 생각되어 HBV 백신에 사용되어 왔다. 상기 S, M 및 L 외막 단백질은 3개의 상이한 개시 코돈을 함유하는 단일 ORF로부터 발현된다. 3개의 단백질은 모두 그들의 C-말단에 S-도메인인 226aa 서열을 공유한다. M 및 L은 각각 추가적인 전-S 도메인, 전-S2 및 전-S2 및 전-S1을 갖는다. 그러나, S-도메인은 HBsAg 에피토프를 갖는다.
B형 간염 바이러스 감염은 임의의 빠르게-복제하는 감염인자처럼, HBV의 일부 하위집단이 현행 치료 섭생에 내성으로 되게 하는데 일조하는 연속 돌연변이가 존재하기 때문에 계속되는 의학적 문제이다. 현재 미국 간질환 연구협회(AASLD) 및 유럽 간 연구 협회(EASL)에 의해 만성 HBV 감염에 대해 권장되는 치료법은 인터페론 알파(INFa), peg화된 인터페론 알파-2a(Peg-IFN2a), 엔테카비어, 및 테노포비어를 포함한다. 그러나, 전형적인 인터페론 치료법은 48-주이며 심하고 불쾌한 부작용을 생성시키고, 치료 중지 후 24주째에 HBeAg 혈청전환 범위는 단지 27 내지36%이다. HBsAg의 혈청전환은 치료 중지 직후에 훨씬 더 낮아, 단지 3%이며, 5년 후에 12%로 증가한다.
간세포 및/또는 간내 면역세포에 의한 HBV 감염에 응답하는 항바이러스 사이토킨의 분비는 감염된 간의 바이러스 제거에 중심적인 역할을 한다. 그러나, 만성적으로 감염된 환자는, 숙주 세포 인식 체계를 방해하고 후속으로 항바이러스 응답을 방해하는 상기 바이러스에 의해 채용된 다양한 탈출 전략으로 인해 단지 약한 면역 반응을 나타낼 뿐이다.
다수의 관찰은 다수의 HBV 바이러스 단백질이 바이러스 인식 신호전달 체계 및 후속으로 인터페론(IFN) 항바이러스 활성을 방해함으로써 초기 숙주 세포 응답을 방해할 수 있음을 입증하였다. 이들 중에서, HBV 빈 서브바이러스 입자(SVP, HBsAg)의 과도한 분비는 만성적으로 감염된 환자(CHB)에서 관찰되는 면역학적 내성 상태의 유지에 관여할 수 있다. 특히, SVP는 HBV-특이성 T 세포 면역 활성화의 결여와 함께 수지상 세포에 의한 항원 제공의 부재에 기여하여 바이러스 지속을 가능하게 할 수 있다. HBsAg 정량분석은 감염 결과를 예측하는 중요한 바이오마커이나; HBsAg 혈청전환의 성취는 만성적으로 감염된 환자에서 좀처럼 관찰되지 않는다. 상기 SVP 및 HBsAg 부담의 감소는 항-바이러스 면역 기능을 회복하는 경로로서 생각되고 항바이러스 치료법 후 HBsAg-음성으로의 혈청전환은 기능적 완치의 암시로서 볼 수 있으며 여전히 치료법의 최종적인 목표이다. 따라서, CHB 환자에서 HBV DNA 수준과 함께 HBsAg의 감소를 유도하는 HBV 유전자 발현의 표적화는 CHB 환자 면역 재활성화 및 진정을 현저하게 개선시킬 수 있다.
상기 뉴클레오사이드 및 뉴클레오타이드 치료법 엔테카비어 및 테노포비어는 바이러스 부하의 감소에 성공적이나, HBeAg 혈청전환 및 HBsAg 손실률은 IFNa 치료법을 사용하여 획득된 경우보다 훨씬 더 낮다. 라미뷰딘(3TC), 텔비뷰딘(LdT) 및 아데포비어를 포함한 다른 유사한 치료법들도 또한 사용되나, 일반적으로 뉴클레오사이드/뉴클레오타이드 치료법의 경우, 내성의 발생이 치료 효능을 제한한다.
미국특허 제 8,598,334 호 및 WO 2012/145697은 HBV를 표적화하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 용도를 언급한다.
바이러스 감염의 억제는 감염후 수분 내지 수시간내에 응답하여 상기 바이러스의 초기 성장에 영향을 주고 만성 및 지속 감염의 발생을 제한할 수 있는 숙주 고유 면역계의 엄격한 관리를 필요로 한다. IFN 및 뉴클레오사(타)이드 유사체에 기반한 이용가능한 현행 치료에도 불구하고, B형 간염 바이러스(HBV) 감염은 간경변증 및 간세포 암종의 위험성이 높은 3억5천만명의 만성적인 보균자들이 우려하는, 여전히 전세계적으로 중요한 보건 문제이다.
신규의 항-바이러스 치료법, 특히 항-HBV 치료법이 필요하다. 또한, 상이한 유형의 HBV 유전자형의 표적화를 가능하게 하는 치료학적 전략이 필요하다.
본 발명은 바이러스성 질환의 치료와 같은 의학에 사용하기에 적합한 올리고머 접합체, 그의 용도, 상기 접합체를 사용하는 방법에 관한 것이다.
특히, 본 발명은 바이러스성 질환의 치료에 사용하기에 적합한 올리고머 또는 올리고머 접합체를 제공하며, 이때 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머는 B형 간염 바이러스(HBV), 바람직하게는 HBV의 HBsAg 또는 HBx의 표적 서열을 조절할 수 있다. 몇몇 실시태양에서 담체 성분을 상기 올리고머에 접합시킨다.
본 발명은 올리고머 또는 올리고머 접합체의 올리고머 성분이 HBV HBx 유전자 또는 HBsAg 유전자에 상응하는 영역 또는 HBV HBx 또는 HBV HBsAg를 암호화하는 핵산의 표적 영역의 역보체와 적어도 80% 일치하는, 바람직하게는 적어도 85% 일치하는, 바람직하게는 적어도 90% 일치하는, 바람직하게는 적어도 91% 일치하는, 바람직하게는 적어도 92% 일치하는, 바람직하게는 적어도 93% 일치하는, 바람직하게는 적어도 94% 일치하는, 바람직하게는 적어도 95% 일치하는, 바람직하게는 적어도 96% 일치하는, 바람직하게는 적어도 97% 일치하는, 바람직하게는 적어도 98% 일치하는, 바람직하게는 적어도 99% 일치하는, 바람직하게는 일치하는 적어도 6개, 바람직하게는 적어도 7개, 바람직하게는 적어도 8개, 바람직하게는 적어도 9개, 바람직하게는 적어도 10개 단위, 바람직하게는 적어도 11개 단위, 바람직하게는 적어도 12개 단위, 바람직하게는 적어도 13개 단위, 바람직하게는 적어도 14개 단위, 바람직하게는 적어도 15개 단위, 바람직하게는 적어도 16개 단위를 포함하는 본 명세서에 정의된 올리고머 또는 올리고머 접합체를 제공한다.
본 발명은 올리고머 또는 올리고머 접합체의 올리고머 성분이 HBV HBx 유전자 또는 HBsAg 유전자에 상응하는 영역 또는 HBV HBx 또는 HBV HBsAg를 암호화하는 핵산의 표적 영역의 역보체와 일치하는 적어도 6개, 바람직하게는 적어도 7개, 바람직하게는 적어도 8개, 바람직하게는 적어도 9개, 바람직하게는 적어도 10개 단위를 포함하는 본 명세서에 정의된 올리고머 또는 올리고머 접합체를 제공한다.
몇몇 실시태양의 경우, 본 발명은 올리고머 또는 올리고머 접합체의 올리고머 성분이 20개 미만의 단위, 예를 들어 19개 미만의 단위, 예를 들어 18개 미만의 단위, 예를 들어 17개 미만의 단위, 예를 들어 16개 이하의 단위를 포함하는 본 명세서에 정의된 올리고머 또는 올리고머 접합체를 제공한다.
몇몇 실시태양의 경우, 본 발명은 올리고머 또는 올리고머 접합체의 올리고머 성분이 15개 단위 또는 16개 단위를 포함하는 본 명세서에 정의된 올리고머 또는 올리고머 접합체를 제공한다.
본 발명은 본 발명에 따른 올리고머, 및 상기 올리고머에 공유적으로 부착된 하나 이상의 비-뉴클레오타이드 또는 비-폴리뉴클레오타이드 부분을 포함하는 접합체를 제공한다.
본 발명은 본 발명에 따른 올리고머 또는 접합체, 및 약학적으로 허용가능한 희석제(예를 들어 물 또는 염수), 담체, 염 또는 보조제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
본 발명은 바이러스성 질환의 치료를 위한 약제로서 사용하기 위한 본 발명에 따른 올리고머 또는 접합체를 제공한다.
본 발명은 바이러스성 질환 치료용 약제의 제조를 위한 본 발명에 따른 올리고머 또는 접합체의 용도를 제공한다.
본 발명은 바이러스성 질환의 치료 방법을 제공하며, 상기 방법은 유효량의 본 발명에 따른 올리고머, 올리고머 접합체 또는 약학 조성물을 바이러스성 질환을 앓고 있거나 앓을 것 같은 동물(예를 들어 상기 질병 또는 질환을 앓고 있거나 상기 질병 또는 질환에 민감한 동물)에게 투여함을 포함한다.
본 발명은 바이러스성 질환의 치료 방법을 제공하며, 상기 방법은 유효량의 본 발명에 따른 올리고머, 올리고머 접합체 또는 약학 조성물을 바이러스성 질환을 앓고 있거나 앓을 것 같은 비-인간 동물(예를 들어 상기 질병 또는 질환을 앓고 있거나 상기 질병 또는 질환에 민감한 비-인간 동물)에게 투여함을 포함한다.
본 발명은 바이러스성 질환의 치료 방법을 제공하며, 상기 방법은 유효량의 본 발명에 따른 올리고머, 올리고머 접합체 또는 약학 조성물을 바이러스성 질환을 앓고 있거나 앓을 것 같은 인간(예를 들어 상기 질병 또는 질환을 앓고 있거나 상기 질병 또는 질환에 민감한 인간)에게 투여함을 포함한다.
또한 HBx 또는 HBsAg의 발현 또는 과-발현과 관련된 질병 또는 상태가 있는 것으로 의심이 가거나 상기 질병 또는 상태에 민감한 동물(비-인간 동물 또는 인간)에게 치료학적 또는 예방학적 유효량의 본 발명의 올리고머, 접합체 또는 약학 조성물을 투여함으로써 상기 비-인간 동물 또는 인간을 치료하는 방법을 개시한다. 더욱이, HBx 또는 HBsAg의 발현의 억제, 및 HBx 또는 HBsAg의 활성과 관련된 질병의 치료를 위해 올리고머를 사용하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명에 따른 약학 조성물 및 추가적인 약학적 존재/치료학적 존재를 포함하는 약학 시스템을 제공한다. 상기 추가적인 약학적 존재는 본 발명에 따른 올리고머 또는 올리고머 접합체일 수 있다. 상기 추가적인 약학적 존재는 HBx 또는 HBsAg 내에 있지 않은 HBV 중의 표적 서열을 조절할 수 있는 올리고머 또는 올리고머 접합체일 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 올리고머 또는 올리고머 접합체는 HBV HBsAg, HBeAg 또는 DNA 폴리머라제에 대한 유전자 또는 mRNA 내의 표적 서열을 조절할 수 있다.
하나의 실시태양에서, 본 발명에 따른 다수의 올리고머 또는 접합체를 치료가 필요한 피실험자에게 투여한다. 상기 올리고머 또는 접합체를 추가적인 약제/치료제와 함께 투여할 수 있다.
하나의 실시태양에서, 상기 질병 또는 질환 또는 상태는 HBx 또는 HBsAg의 과발현과 관련된다.
본 발명은 세포 또는 조직에서 HBx 또는 HBsAg의 발현을 조절하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 세포 또는 조직을 시험관내 또는 생체내에서 유효량의 하나 이상의 올리고머, 접합체 또는 그의 약학 조성물과 접촉시켜 HBx 또는 HBsAg의 발현의 조절을 수행하는 단계를 포함한다.
본 발명은 세포 또는 조직에서 HBx의 발현을 억제(예를 들어 하향-조절)하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 세포 또는 조직을 시험관내 또는 생체내에서 유효량의 하나 이상의 올리고머, 접합체 또는 그의 약학 조성물과 접촉시켜 HBx 또는 HBsAg의 발현의 하향-조절을 수행하는 단계를 포함한다.
본 발명은 HBx 또는 HBsAg를 발현하는 세포에서 HBx 또는 HBsAg의 억제 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 세포에서 HBx 또는 HBsAg의 억제를 수행하기 위해 본 발명에 따른 올리고머 또는 접합체를 상기 세포에 투여함을 포함한다.
추가로 세포 또는 조직을 시험관내 또는 생체내에서 유효량의 하나 이상의 본 발명의 올리고머, 올리고머 접합체 또는 조성물과 접촉시킴을 포함하는, 상기 세포 또는 조직에서 HBx 또는 HBsAg의 발현을 하향-조절하는 방법을 제공한다.
이제 본 발명의 태양을 제공한다.
하나의 태양에서, 본 발명은 바이러스성 질환의 치료에 사용하기 위한 올리고머 접합체를 제공하며, 이때 상기 올리고머 접합체는
a) 상기 바이러스성 질환을 치료하기 위해 B형 간염 바이러스(HBV), 바람직하게는 HBV의 HBx 또는 HBsAg의 표적 서열을 조절할 수 있는 하나 이상의 제 1 올리고머 영역; 및
b) 바람직하게는 상기 제 1 올리고머를 간에 전달하기 위한 담체 성분
을 포함한다.
하나의 태양에서, 본 발명은 바이러스성 질환의 치료에 적합한 올리고머 접합체를 제공하며, 이때 상기 올리고머 접합체는
a) 상기 바이러스성 질환을 치료하기 위해 B형 간염 바이러스(HBV), 바람직하게는 HBV의 HBx 또는 HBsAg의 표적 서열을 조절할 수 있는 하나 이상의 제 1 올리고머 영역; 및
b) 바람직하게는 상기 제 1 올리고머를 간에 전달하기 위한 담체 성분
을 포함한다.
하나의 태양에서, 본 발명은 바이러스성 질환의 치료에 적합한 조성물을 제공하며, 이때 상기 조성물은 올리고머 접합체 및 하나 이상의 추가적인 상이한 올리고뉴클레오타이드를 포함하며; 상기 올리고머 접합체는
a) 상기 바이러스성 질환을 치료하기 위해 B형 간염 바이러스(HBV), 바람직하게는 HBV의 HBx 또는 HBsAg의 표적 서열을 조절할 수 있는 하나 이상의 제 1 올리고머 영역; 및
b) 바람직하게는 상기 제 1 올리고머를 간에 전달하기 위한 담체 성분
을 포함한다.
하나의 태양에서, 본 발명은 서열번호 3의 1530 내지 1598번, 1264 내지 1278번 및 670 내지 706번 위치 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택된 표적 서열에 하이브리드화하는 올리고머 또는 올리고머 접합체의 올리고머 성분을 제공한다.
하나의 태양에서, 본 발명은 바이러스성 질환을 치료하기 위해 HBV의 HBx 또는 HBsAg 중의 표적 서열을 조절할 수 있는 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택된 코어 모티프를 기본으로 하는 올리고머를 제공한다:
GCGTAAAGAGAGG (서열번호 13);
GCGTAAAGAGAGGT (서열번호 11);
AGCGAAGTGCACACG (서열번호 20);
AGGTGAAGCGAAGTG (서열번호 26);
AGCGAAGTGCACACGG (서열번호 18);
CGAACCACTGAACA (서열번호 7);
GAACCACTGAACAAA (서열번호 4);
CGAACCACTGAACAAA (서열번호 5);
CGAACCACTGAACAA (서열번호 6);
CGAACCACTGAAC (서열번호 8);
CCGCAGTATGGATCG (서열번호 9);
CGCAGTATGGATC (서열번호 10);
CGCGTAAAGAGAGGT (서열번호 12);
AGAAGGCACAGACGG (서열번호 14);
GAGAAGGCACAGACGG (서열번호 15);
GAAGTGCACACGG (서열번호 16);
GCGAAGTGCACACGG (서열번호 17);
CGAAGTGCACACG (서열번호 19);
AGGTGAAGCGAAGT (서열번호 27); 및
TAGTAAACTGAGCCA (서열번호 834).
하나의 태양에서, 본 발명은 바이러스성 질환의 치료에 적합한 조성물을 제공하며, 이때 상기 조성물은 올리고머 및 하나 이상의 추가적인 상이한 올리고뉴클레오타이드를 포함하고; 상기 올리고머는 바이러스성 질환을 치료하기 위해 B형 간염 바이러스(HBV), 바람직하게는 HBV의 HBx 또는 HBsAg의 표적 서열을 조절할 수 있는 하나 이상의 제 1 올리고머 영역을 포함한다.
하나의 태양에서, 본 발명은 바이러스성 질환의 치료 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 치료가 필요한 피실험자에게 유효량의 본 발명에 따른 올리고머 접합체를 투여함을 포함한다.
하나의 태양에서, 본 발명은 바이러스성 질환의 치료 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 치료가 필요한 피실험자에게 유효량의 본 발명에 따른 조성물을 투여함을 포함한다.
하나의 태양에서, 본 발명은 바이러스성 질환의 치료 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 치료가 필요한 피실험자에게 유효량의 본 발명에 따른 올리고머를 투여함을 포함한다.
하나의 태양에서, 본 발명은 본 발명에 따른 올리고머 접합체; 및 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 희석제, 담체, 염 또는 보조제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
하나의 태양에서, 본 발명은 본 발명에 따른 조성물; 및 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 희석제, 담체, 염 또는 보조제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
하나의 태양에서, 본 발명은 본 발명에 따른 올리고머; 및 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 희석제, 담체, 염 또는 보조제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
하나의 태양에서, 본 발명은 본 발명에 따른 약학 조성물 및 추가적인 약학적 존재를 포함하는 약학적 시스템을 제공한다.
하나의 태양에서, 본 발명은 본 발명에 따른 올리고머 접합체의 제조를 위한 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택된 모티프를 제공한다:
GCGTAAAGAGAGG (서열번호 13);
GCGTAAAGAGAGGT (서열번호 11);
AGCGAAGTGCACACG (서열번호 20);
AGGTGAAGCGAAGTG (서열번호 26);
AGCGAAGTGCACACGG (서열번호 18).
하나의 태양에서, 본 발명은 본 발명에 따른 조성물의 제조를 위한 GCGTAAAGAGAGG (서열번호 13); GCGTAAAGAGAGGT (서열번호 11) 및 CGCGTAAAGAGAGGT (서열번호 12) 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택된 모티프를 제공한다.
하나의 태양에서, 본 발명은 본 발명에 따른 올리고머의 제조를 위한 AGCGAAGTGCACACG (서열번호 20); AGGTGAAGCGAAGTG (서열번호 26); AGCGAAGTGCACACGG (서열번호 18); GAAGTGCACACGG (서열번호 16); GCGAAGTGCACACGG (서열번호 17); CGAAGTGCACACG (서열번호 19) 및 AGGTGAAGCGAAGT (서열번호 27) 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택된 모티프를 제공한다.
하나의 태양에서, 본 발명은 본 발명에 따른 하나 이상의 올리고머를 본 발명에 따른 담체 성분과 접합시킴을 포함하는, 본 발명에 따른 올리고머 접합체의 제조 방법을 제공한다.
하나의 태양에서, 본 발명은 본 발명에 따른 올리고머 접합체를 약학적으로 허용가능한 희석제, 담체, 염 또는 보조제와 혼합함을 포함하는, 본 발명에 따른 조성물의 제조 방법을 제공한다.
도 1은 LNA 올리고머 GalNAc 접합 단계에 대한 반응식을 나타낸다.
도 2는 담체 성분을 올리고머(영역 A 또는 생리학적으로 불안정한 링커 영역 PL, 예를 들어 PO 링커)에 결합시키는데 사용되는 C6 링커 부분(영역 E)을 포함하는 콜레스테롤 또는 모노-GalNAc 담체 성분의 예들을 나타낸다. 물결선은 상기 올리고머 또는 영역 PL에 대한 공유 결합을 나타낸다.
도 3은 트라이-GalNAc 담체 성분의 예들을 나타낸다. 접합체 1 내지 4는 4개의 적합한 GalNAc 담체 성분들을 예시하고, 접합체 1a 내지 4a는 상기 담체 성분을 상기 올리고머(영역 A 또는 생리학적으로 불안정한 링커, 영역 PL, 예를 들어 PO 링커)에 결합시키는데 사용되는 추가적인 C6 링커 부분(영역 E)을 갖는 동일한 담체 성분들을 지칭한다. 물결선은 상기 올리고머 또는 영역 PL에 대한 공유 결합을 나타낸다.
도 4는 3가 GalNAc 담체 성분들과의 올리고머 접합체의 예를 나타낸다.
도 5는 일련의 뉴클레오사이드 유사체에 대한 구조를 나타낸다.
도 6은 서열번호 808의 구조를 나타낸다.
도 7은 서열번호 814의 구조를 나타낸다.
도 8은 서열번호 815의 구조를 나타낸다.
도 9는 서열번호 825의 구조를 나타낸다.
도 10은 서열번호 826의 구조를 나타낸다.
도 11은 용량 0.28 mpk(■), 1.4 ㎎/㎏(▲) 및 7.1 mpk(▼)에서의 서열번호 807; 용량 7.1 ㎎/㎏(■), 1.42 ㎎/㎏(▲) 및 0.29 ㎎/㎏(▼)에서의 서열번호 808; 용량 0.252 ㎎/㎏(▲), 1.26 ㎎/㎏(▼) 및 6.15 ㎎/㎏(◆)에서의 서열번호 814; 용량 0.3 ㎎/㎏(■), 1.5 ㎎/㎏(▲) 및 7.5 ㎎/㎏(▼)에서의 서열번호 815; 용량 0.3 ㎎/㎏(▲), 1.5 ㎎/㎏(▼) 및 7.5 ㎎/㎏(◆)에서의 서열번호 825; 용량 7.1 ㎎/㎏(■), 1.42 ㎎/㎏(▲) 및 0.29 ㎎/㎏(▼)에서의 서열번호 826의 HBsAG 감소를 나타낸다.
도 12는 용량 0.28 mpk(■), 1.4 ㎎/㎏(▲) 및 7.1 mpk(▼)에서의 서열번호 807; 용량 7.1 ㎎/㎏(■), 1.42 ㎎/㎏(▲) 및 0.29 ㎎/㎏(▼)에서의 서열번호 808; 용량 0.252 ㎎/㎏(▲), 1.26 ㎎/㎏(▼) 및 6.15 ㎎/㎏(◆)에서의 서열번호 814; 용량 0.3 ㎎/㎏(■), 1.5 ㎎/㎏(▲) 및 7.5 ㎎/㎏(▼)에서의 서열번호 815; 용량 0.3 ㎎/㎏(▲), 1.5 ㎎/㎏(▼) 및 7.5 ㎎/㎏(◆)에서의 서열번호 825; 용량 7.1 ㎎/㎏(◆), 1.42 ㎎/㎏(▲) 및 0.29 ㎎/㎏(▼)에서의 서열번호 826의 HBeAG 감소를 나타낸다.
도 13은 용량 0.28 mpk(■), 1.4 ㎎/㎏(▲) 및 7.1 mpk(▼)에서의 서열번호 807; 용량 7.1 ㎎/㎏(■), 1.42 ㎎/㎏(▲) 및 0.29 ㎎/㎏(▼)에서의 서열번호 808; 용량 0.252 ㎎/㎏(▲), 1.26 ㎎/㎏(▼) 및 6.15 ㎎/㎏(◆)에서의 서열번호 814; 용량 0.3 ㎎/㎏(■), 1.5 ㎎/㎏(▲) 및 7.5 ㎎/㎏(▼)에서의 서열번호 815; 용량 0.3 ㎎/㎏(▲), 1.5 ㎎/㎏(▼) 및 7.5 ㎎/㎏(◆)에서의 서열번호 825; 용량 7.1 ㎎/㎏(◆), 1.42 ㎎/㎏(▲) 및 0.29 ㎎/㎏(▼)에서의 서열번호 826의 HBV DNA 감소를 나타낸다.
도 14는 용량 0.2 ㎎/㎏, 1.0 ㎎/㎏ 및 5.0 ㎎/㎏에서의 서열번호 807의 피하(SC) 및 정맥내(IV) 투여 경로로부터의 결과를 나타낸다. A) HBsAG 감소를 나타낸다. B) HBeAG 감소를 나타낸다. C) DNA 감소를 나타낸다.
도 15는 동몰의 올리고머 투여량에서 시험된 접합되지 않은 올리고머(■)(서열번호 308 및 303) 및 접합된 올리고머(▼)(서열번호 807 및 815)에 대한 결과를 나타낸다. A) HBsAG 감소를 나타낸다. B) HBeAG 감소를 나타낸다. C) DNA 감소를 나타낸다.
발명의 정의/요소
하기는 본 발명의 모든 태양에 적용되는 용어들의 정의를 제공한다. 이들 정의는 상호 배타적이지 않다. 이들 정의는 또한 본 발명의 모든 태양에 관한 추가적인 실시태양들을 교시한다.
올리고머/올리고뉴클레오타이드
본 발명과 관련하여, 본 명세서에 사용되는 바와 같은 "올리고머" 및 "올리고뉴클레오타이드"에 대한 언급은 또한 제 1 올리고머 영역 및/또는 제 2 올리고머 영역 - 예를 들어 상기 제 1 올리고머 영역이 올리고머 접합체 중에 있거나 상기 영역이 유리 형태로 있지 않을 때(즉 상기 올리고머 접합체 중에 있지 않을 때) -에 적용된다.
"올리고머"란 용어는 2개 이상의 뉴클레오타이드의 공유 결합에 의해 형성된 분자(즉 올리고뉴클레오타이드)를 지칭한다. 따라서 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "올리고머" 및 "올리고뉴클레오타이드"는 호환가능하며 동일한 의미를 갖는다. 본 명세서에서 단일 뉴클레오타이드(단위)는 또한 단량체 또는 단위를 지칭할 수 있다. 일부 실시태양에서, "뉴클레오사이드", "뉴클레오타이드", "단위" 및 "단량체"란 용어들은 호환가능하게 사용된다. 뉴클레오타이드 또는 단위의 서열을 지칭할 때, 지칭되는 것은 염기, 예를 들어 A, T, G, C 또는 U의 서열임을 알 것이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "올리고머" 및 "올리고뉴클레오타이드"란 용어는 천연 및/또는 변형 단위 또는 결합의 선형 또는 환상 올리고머, 예를 들어 단위-단위 상호작용의 규칙적인 패턴, 예를 들어 와트슨-크리크 유형의 염기 짝짓기, 후그스틴 또는 역 후그스틴 유형의 염기 짝짓기 등에 의해 표적 폴리뉴클레오타이드에 특이적으로 결합할 수 있는 데옥시리보뉴클레오사이드, 리보뉴클레오사이드, 그의 치환된 및 알파-아노머 형태를 포함한다.
상기 올리고뉴클레오타이드는 단일 영역으로 구성되거나 다수의 영역들로 구성될 수 있다. 상기 올리고뉴클레오타이드는 "키메릭"일 수 있다. 즉 상이한 영역들로 구성될 수 있다. 본 발명과 관련하여, "키메릭" 안티센스 화합물은 2개 이상의 화학 영역, 예를 들어 DNA 영역(들), RNA 영역(들), PNA 영역(들) 등을 함유하는 안티센스 화합물, 특히 올리고뉴클레오타이드이다. 각각의 화학 영역은 하나 이상의 단위, 즉 올리고뉴클레오타이드 화합물의 경우에 뉴클레오타이드로 구성된다. 이들 올리고뉴클레오타이드는 전형적으로 상기 올리고뉴클레오타이드가 하나 이상의 추구하는 성질을 나타내도록 변형된 하나 이상의 영역을 함유한다. 상기 올리고뉴클레오타이드의 추구하는 성질은 뉴클레아제 분해에 대한 증가된 내성, 증가된 세포 흡수, 및/또는 표적 핵산에 대한 증가된 결합 친화성일 수 있다. 따라서 상기 올리고뉴클레오타이드의 상이한 영역들은 상이한 성질들을 가질 수 있다. 상기 올리고뉴클레오타이드의 하나 이상의 영역은 RNA:DNA 또는 RNA:RNA 하이브리드를 절단할 수 있는 효소들에 대한 기질로서 작용할 수 있다. 상기와 같은 촉매 효과를 갖는 다수의 효소들이 존재한다. 특정한 위치에서 안티센스 올리고뉴클레오타이드 및 RNaseH에 의한 RNA의 절단 방법이 문헌[Minshull et al., Nucleic Acids Research, 14:6433-6451 (1986)]에서 입증되었다. RNaseH는 RNA:DNA 듀플렉스의 RNA 가닥을 절단하는 세포성 엔도뉴클레아제이다. 따라서, RNaseH의 활성화는 RNA 표적의 절단을 생성시킨다. 따라서 유전자 발현의 올리고뉴클레오타이드 억제의 효율이 증대될 수 있다. 절단할 수 있는 다른 효소는 Rnase L 및 Rnase P이다.
핵염기
"핵염기"란 용어는 뉴클레오타이드의 염기 부분을 지칭하며 천연뿐만 아니라 비-천연 변이체 모두를 포함한다.
따라서, "핵염기"는 공지된 퓨린 및 피리미딘 헤테로사이클뿐만 아니라 그의 헤테로사이클릭 유사체 및 호변 이성질체를 포함한다.
핵염기의 예로는 비제한적으로 아데닌, 구아닌, 시토신, 티미딘, 유라실, 잔틴, 하이포잔틴, 5-메틸시토신, 아이소시토신, 슈도아이소시토신, 5-브로모유라실, 5-프로피닐유라실, 6-아미노퓨린, 2-아미노퓨린, 이노신, 다이아미노퓨린, 및 2-클로로-6-아미노퓨린을 포함한다.
일부 실시태양에서, 상기 올리고머 중에 존재하는 핵염기의 하나 이상은 5-메틸시토신, 아이소시토신, 슈도아이소시토신, 5-브로모유라실, 5-프로피닐유라실, 6-아미노퓨린, 2-아미노퓨린, 이노신, 다이아미노퓨린 및 2-클로로-6-아미노퓨린으로 이루어진 군으로부터 선택된 변형 핵염기이다.
단위
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "단위" 또는 "단량체"란 용어는 전형적으로 포스포다이에스터 결합 또는 그의 유사체에 의해 결합하여 수 단량체 단위, 예를 들어 약 3 또는 4 단위에서부터 약 수백 단량체 단위의 크기 범위의 올리고뉴클레오타이드를 형성하는 뉴클레오사이드 단위를 가리킨다. 포스포다이에스터 결합의 유사체는 포스포로티오에이트, 포스포로다이티오에이트, 메틸포스포네이트, 포스포로셀레노에이트, 포스포르아미데이트 등을 포함한다.
뉴클레오사이드 및 뉴클레오사이드 유사체
일부 실시태양에서, "뉴클레오사이드 유사체" 및 "뉴클레오타이드 유사체"란 용어는 호환가능하게 사용된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "뉴클레오타이드"란 용어는 당 부분, 염기 부분 및 공유 결합기(결합기), 예를 들어 포스페이트 또는 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드간 결합기를 포함하는 글리코사이드를 지칭하며, 천연 뉴클레오타이드, 예를 들어 DNA 또는 RNA, 및 변형 당 및/또는 염기 부분을 포함하는 비-천연 뉴클레오타이드(또한 본 명세서에서 "뉴클레오타이드 유사체"라 지칭된다)를 모두 포함한다. 본 명세서에서 단일 뉴클레오타이드(단위)는 또한 단량체 또는 핵산 단위라 지칭될 수 있다.
생화학 분야에서, "뉴클레오사이드"란 용어는 당 부분 및 염기 부분을 포함하는 글리코사이드를 지칭하는데 통상적으로 사용되며, 따라서 상기 올리고머의 뉴클레오타이드들 사이의 뉴클레오타이드간 결합에 의해 공유 결합되는 뉴클레오타이드 단위를 지칭할 때 사용될 수 있다.
생물공학 분야에서, "뉴클레오타이드"란 용어는 종종 핵산 단량체 또는 단위를 지칭하는데 사용되며, 그 자체로서 올리고뉴클레오타이드와 관련하여 염기, 예를 들어 "뉴클레오타이드 서열"을 지칭할 수 있고 전형적으로는 핵염기 서열(즉 당 주쇄 및 뉴클레오사이드간 결합의 존재를 암시한다)을 지칭할 수 있다.
마찬가지로, 특히 뉴클레오사이드간 결합기 중 하나 이상이 변형된 올리고뉴클레오타이드의 경우에, "뉴클레오타이드"란 용어는 "뉴클레오사이드"를 지칭할 수 있으며, 예를 들어 상기 "뉴클레오타이드"란 용어는 심지어 상기 뉴클레오사이드간의 결합의 존재 또는 성질을 명시하는 경우에도 사용될 수 있다.
당해 분야의 통상적인 숙련가가 인식하는 바와 같이, 올리고뉴클레오타이드의 5' 말단 뉴클레오타이드는 5' 뉴클레오타이드간 결합기를 포함하지 않지만, 5' 말단기는 포함하거나 포함하지 않을 수도 있다.
비-천연 뉴클레오타이드는 변형 당 부분을 갖는 뉴클레오타이드, 예를 들어 바이사이클릭 뉴클레오타이드 또는 2' 변형 뉴클레오타이드, 예를 들어 2' 치환된 뉴클레오타이드를 포함한다.
"뉴클레오타이드 유사체"는 당 및/또는 염기 부분의 변형에 의한 천연 뉴클레오타이드, 예를 들어 DNA 또는 RNA 뉴클레오타이드의 변이체이다. 유사체는 원칙적으로는 상기 올리고뉴클레오타이드와 관련하여 천연 뉴클레오타이드에 단지 "잠재성"이거나 "등가"일 수 있다. 즉 상기 올리고뉴클레오타이드가 표적 유전자 발현을 억제하기 위해 작용하는 방식에 대해 기능적 효과가 없다. 그럼에도 불구하고 상기와 같은 "등가" 유사체는, 예를 들어 상기 유사체가 제조에 더 용이하고 더 저렴하거나 보관 또는 제조 조건에 더 안정성이거나, 태그 또는 표지를 나타내는 경우 유용할 수 있다. 그러나, 바람직하게, 상기 유사체는 상기 올리고머가 발현을 억제하기 위해 작용하는 방식에; 예를 들어 상기 표적에 대해 증가된 결합 친화성 및/또는 세포내 뉴클레아제에 대해 증가된 내성 및/또는 세포내로의 수송에 증가된 용이성을 생성시킴으로써 기능적 효과를 가질 것이다. 뉴클레오사이드 유사체의 구체적인 예는 예를 들어 문헌[Freier & Altmann; Nucl. Acid Res., 1997, 25, 4429-4443] 및 문헌[Uhlmann; Curr. Opinion in Drug Development, 2000, 3(2), 293-213] 및 도 4에 제공된 반응식 1에 개시되어 있다.
링커/링커기 등
"링커기", "결합기", "링커", "링커 분자" 또는 "뉴클레오사이드간 결합"이란 용어들은 2개의 존재, 예를 들어 뉴클레오타이드들을 함께 공유 결합시킬 수 있는 기를 의미하고자 한다. 구체적인 예는 포스페이트기 및 포스포로티오에이트기를 포함한다. 상기와 같은 링커는 하나 이상의 활성화된 기 또는 작용기에 공유 부착된 이격자 분자를 함유할 수 있다. 임의로, 상기 링커 분자의 작용기를 커플링제로 처리하여 활성화된 기를 형성시킬 수 있다. 상기와 같은 링커는 또한 본 명세서에 기재된 바와 같은 구속 분자를 포함한다.
"분지제 영역"이란 용어는 2개 이상의 존재, 예를 들어 뉴클레오타이드들을 함께 공유 결합시킬 수 있거나 담체 성분 클러스터, 예를 들어 갈락토스 클러스터의 생성을 위한 기 또는 영역을 의미하고자 한다.
한편으로, 본 명세서에 기재된 바와 같은 "링커기" 및 "분지제 영역"은 뉴클레오타이드 영역 및 비-뉴클레오타이드 영역을 공유 결합시키는데 사용될 수 있으며, 상기와 같은 링커기를 L이라 칭한다. 예를 들어, 링커기를 사용하여 본 발명의 올리고머를 본 명세서에 기재된 담체 성분에 접합시킬 수 있다. 예를 들어, 분지제 영역을 사용하여 본 발명의 올리고머를 본 명세서에 기재된 하나 이상의 담체 성분에 접합시킬 수 있다. 예를 들어, 분지제 영역을 사용하여 본 발명의 하나 이상의 올리고머를 본 명세서에 기재된 담체 성분에 접합시킬 수 있다. 예를 들어, 분지제 영역을 사용하여 본 발명의 하나 이상의 올리고머를 본 명세서에 기재된 하나 이상의 담체 성분에 접합시킬 수 있다.
올리고머 접합체
"올리고머 접합체"란 용어는 본 명세서에 기재된 바와 같은 올리고머의 담체 성분에의 부착("접합")에 의해, 예를 들어 공유 부착에 의해 형성된 이종 분자를 가리키고자 한다.
공유 접합과 같은 결합은 사실상, 예를 들어 링커기를 통해 화학적이거나, 사실상, 예를 들어 리포터 분자(예를 들어 녹색 형광 단백질, β-갈락토시다제, Histag 등)와의 융합 단백질에서와 같이 재조합 유전자 공학에 의해 유전학적일 수 있다. 한편으로, 상기 올리고머를 임의의 구속 분자 또는 링커기의 필요 없이 직접적으로 담체 성분에 접합시킬 수도 있다.
담체 성분
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "담체 성분"이란 용어는 본 발명의 올리고머를 그의 목적하는 장소, 예를 들어 목적하는 해부학적 장소로 운반하거나 전달하도록 되어 있는 분자 비히클에 관한 것이다.
본 발명에 따른 담체 성분을 사용하여 상기 올리고머의 활성, 세포 분배 및/또는 세포 흡수를 증대시킬 수 있다.
임의의 적합한 담체 성분을 사용할 수 있다.
상기 담체 성분은 폴리뉴클레오타이드일 수 있다. 그러나, 전형적으로, 상기 담체 성분은 비-뉴클레오타이드 부분 또는 비-폴리뉴클레오타이드 부분이다.
비-뉴클레오타이드 또는 비-폴리뉴클레오타이드 부분의 예는 탄수화물, 세포 표면 수용체 리간드, 약물 물질, 호르몬, 친지성 물질, 중합체, 단백질, 펩타이드, 독소(예를 들어 세균성 독소), 비타민, 바이러스 단백질 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 거대분자 작용제를 포함한다. 전형적인 중합체는 폴리에틸렌 글리콜 및/또는 폴리프로필렌 글리콜(PPG)일 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 담체 성분은 아미노산, 단백질, 펩타이드 또는 폴리펩타이드일 수 있다. 전형적으로 단백질은 효소, 혈청 단백질(예를 들어 인간 혈청 알부민(HSA), 트랜스페린 또는 당단백질), 수용체, 항체 또는 목적하는 표적 항원에 결합하도록 설계된 단일-쇄 가변 단편, 이중특이성 항체, 트라이바디 등과 같은 그의 항체 유도체일 수 있다.
펩타이드 담체 성분의 예는 세포 침투를 현저하게 증가시키는 폴리(L-리신), 및 안테나페디아 수송 펩타이드이다. 상기와 같은 접합체는 문헌[Lemaitre et al, "Specific antiviral activity of a poly(L-lysine)-conjugated oligodeoxyribonucleotide sequence complementary to vesicular stomatitis virus N protein mRNA initiation site," Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84:648-652, 1987]; 미국특허 제 6,166,089 호 및 미국특허 제 6,086,900 호에 기재되어 있다. 상기 간행물에서의 과정은 3'-말단 뉴클레오타이드가 리보뉴클레오타이드일 것을 요한다. 이어서 생성되는 알데하이드기를 쉬프 염기 형성에 의해 폴리(L-리신)의 리신 잔기의 입실론-아미노기에 랜덤하게 커플링시키고, 이어서 나트륨 시아노보로하이드라이드로 환원시킨다. 이 과정은 상기 3'-말단 리보스 고리를 모폴린 구조 안티센스 올리고머로 전환시킨다. 상기 펩타이드 분절을 또한, DNA/RNA 합성에 적합한 전략, 예를 들어 Mmt/Fmoc 전략에 의해 합성할 수 있다. 이 경우에 상기 펩타이드를 상기 올리고뉴클레오타이드 분절 앞이나 뒤에 직접 합성시킬 수 있다. 또한 상기 펩타이드 올리고뉴클레오타이드 접합체를 후 합성적으로, 예를 들어 다이설파이드 결합의 형성에 의해 제조하는 방법이 존재한다.
일부 실시태양에서, 상기 접합체 모이어티는 친지성 접합체 모이어티이거나 상기 부분을 포함할 수 있다. 친지성 접합체 모이어티는 스테롤, 스타놀, 스테로이드, 폴리사이클릭 방향족기, 지방족기, 지질, 인지질, 친지성 알콜, 지방산 및 지방 에스터로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 접합체 모이어티는 콜레스테롤을 포함한다.
상기 담체 성분은 약동학적 조절제, 예를 들어 친지성 또는 소수성 부분이거나 상기 부분을 포함할 수 있다. 상기와 같은 부분은 WO 2012/082046에서 siRNA 접합체와 관련하여 개시된다. 상기 소수성 부분은 포화되거나 불포화될 수 있는 C8-C36 지방산을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, C10, C12, C14, C16, C18, C20, C22, C24, C26, C28, C30, C32 및 C34 지방산을 사용할 수 있다. 상기 소수성기는 16개 이상의 탄소 원자를 가질 수 있다. 예시적인 적합한 소수성기는 스테롤, 콜레스테롤, 팔미토일, 헥사데크-8-에노일, 올레일, (9E,12E)-옥타데카-9,12-다이에노일, 다이옥타노일 및 C16-C20 아실을 포함하는 군으로부터 선택될 수 있다. WO 2012/082046에 따라, 16개 미만의 탄소 원자를 갖는 소수성기는 폴리뉴클레오타이드 표적화의 증대에 덜 유효하나, 다수의 사본(예를 들어 2x, 예를 들어 2x C8 또는 C10, C12 또는 C14)으로 사용하여 효능을 증대시킬 수 있다. 폴리뉴클레오타이드 표적화 모이어티로서 유용한 약동학적 조절제는 콜레스테롤, 알킬기, 알케닐기, 알키닐기, 아릴기, 아르알킬기, 아르알케닐기 및 아르알키닐기(이들은 각각 선형이거나, 분지되거나 환상일 수 있다)로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 약동학적 조절제는 바람직하게는 오직 탄소와 수소 원자만을 함유하는 탄화수소이다. 약동학적 조절제는 바람직하게는 오직 탄소와 수소 원자만을 함유하는 탄화수소이다. 그러나, 소수성을 유지하는 치환 또는 이종원자, 예를 들어 불소가 허용될 수도 있다.
WO 2007/031091은 다른 적합한 리간드 및 담체 성분들의 예를 제공하며, 본 발명에 참고로 인용된다.
일부 실시태양에서, 상기 담체 성분은 탄수화물 부분이거나 상기 부분을 포함한다. 탄수화물 접합체 모이어티는 비제한적으로 갈락토스, 락토스, n-아세틸-갈락토스아민, 만노스 및 만노스-6-포스페이트를 포함한다. 탄수화물 접합체를 사용하여 일련의 조직, 예를 들어 간 및/또는 근육에서 전달 또는 활성을 증대시킬 수 있다. 예를 들어 EP 1495769, WO 99/65925, 문헌[Yang et al., Bioconjug Chem (2009) 20(2): 213-21], 문헌[Zatsepin & Oretskaya Chem Biodivers. (2004) 1(10): 1401-17]을 참조하시오.
또한, 상기 올리고머는 친지성 또는 소수성 부분이 특히 중요한 하나 이상의 추가적인 접합체 모이어티를 추가로 포함할 수 있다. 이들은 예를 들어 약동학적 조절제로서 작용할 수 있으며 이들을 탄수화물 접합체, 상기 탄수화물 접합체를 상기 올리고머에 결합시키는 링커, 또는 다수의 탄수화물 접합체(다가) 접합체를 상기 올리고머에 결합시키는 링커에, 임의로 링커, 예를 들어 생리학적으로 불안정한 링커를 통해 공유 결합시킬 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 담체 성분은 갈락토스의 경우와 동등하거나 이보다 큰 친화성을 갖는 아시아당단백질 수용체(ASGP-R) 표적화 모이어티를 포함한다. 상기 ASPG-R 표적화 모이어티는 갈락토스, 갈락토스아민, N-폼일-갈락토스아민, N-아세틸-갈락토스아민(GalNAc), N-프로피오닐-갈락토스아민, N-n-부타노일-갈락토스아민, 및 N-아이소부타노일-갈락토스아민으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 일부 실시태양에서 상기 아시알로당단백질 수용체 표적화 접합체 모이어티는 1가이다. 다른 실시태양에서 상기 담체 성분은 갈락토스 클러스터, 예를 들어 2가, 3가 또는 4가 아시알로당단백질 수용체 표적화 접합체 모이어티(즉 상기 아시알로당단백질 수용체에 결합할 수 있는 1, 2, 3 또는 4개의 말단 탄수화물 부분을 함유하는)를 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 담체 성분은 GalNAc(N-아세틸-갈락토스아민), 예를 들어 1가, 2가, 3가 또는 4가 GalNAc를 포함한다. GalNAc 접합체를 사용하여 상기 화합물을 간에 표적화할 수 있다. 바람직한 담체 성분은 N-아세틸-갈락토스아민 삼량체이다. GalNAc 접합체는 메틸포스포네이트 및 PNA 안티센스 올리고뉴클레오타이드(예를 들어 미국특허 제 5,994,517 호 및 문헌[Hangeland et al., Bioconjug Chem. 1995 Nov-Dec; 6(6): 695-701]) 및 siRNA(예를 들어 WO 2009/126933, WO 2012/089352 및 WO 2012/083046) 및 LNA 및 2'-MOE 변형 뉴클레오사이드(WO 2014/076196, WO 2014/207232, WO 2014/179620 및 WO 2014/179627)와 함께 사용되어 왔다. 본 명세서에 사용된 상기 GalNAc 참고문헌 및 구체적인 접합체들은 본 발명에 참고로 인용된다. WO 2012/083046은 본 발명에 사용하기에 적합한 절단성 약동학적 조절제를 포함하는 GalNAc 접합체 모이어티를 갖는 siRNA를 개시하며, 바람직한 약동학적 조절제는 C16 소수성기, 예를 들어 팔미토일, 헥사데크-8-에노일, 올레일, (9E,12E)-옥타데카-9,12-다이에노일, 다이옥타노일, 및 C16-C20 아실이다. WO 2012/083046 절단성 약동학적 조절제는 또한 콜레스테롤일 수 있다.
상기 담체 성분은 갈락토스, 갈락토스아민, N-폼일-갈락토스아민, N-아세틸-갈락토스아민, N-프로피오닐-갈락토스아민, N-n-부타노일-갈락토스아민, N-아이소부타노일-갈락토스아민, 갈락토스 클러스터, 및 N-아세틸-갈락토스아민 삼량체로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있으며, 16개 이상의 탄소 원자를 갖는 소수성기, 16 내지 20개 탄소 원자를 갖는 소수성기, 팔미토일, 헥사데크-8-에노일, 올레일, (9E,12E)-옥타데카-9,12-다이에노일, 다이옥타노일, 및 C16-C20 아실, 및 콜레스테롤로 이루어진 군으로부터 선택된 약동학적 조절제를 가질 수 있다. '046에 개시된 몇몇 GalNac 클러스터는 (E)-헥사데크-8-에노일(C16), 올레일(C18), (9E,12E)-옥타데카-9,12-다이에노일(C18), 옥타노일(C8), 도데세카노일(C12), C20 아실, C24 아실, 다이옥타노일(2xC8)을 포함한다. 상기 담체 성분-약동학적 조절제를 생리학적으로 불안정한 결합, 또는 예를 들어 다이설파이드 결합(PO-링커) 또는 PEG 링커를 통해 상기 폴리뉴클레오타이드에 결합시킬 수 있다. 본 발명은 또한 상기 올리고머와 담체 성분 사이(적합하게는 상기 올리고머와 탄수화물 접합체 기 사이에 위치한)의 포스포다이에스터 링커의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 하나의 실시태양에서, 상기 올리고머를, 예를 들어 올리고머의 세포 흡수를 증가시킴으로써 피실험자의 간에 올리고머를 전달하는데 사용될 수 있는 담체 성분에 결합, 바람직하게는 접합시킨다.
특정한 실시태양에서, 상기 담체 성분은 GalNAc 또는 GalNAc 클러스터일 수 있다. 도 2 및 3은 일부 담체 성분을 나타낸다.
간에서 간세포를 표적화하기 위해서, 바람직한 표적화 리간드는 갈락토스 클러스터이다.
갈락토스 클러스터는 예를 들어 2 내지 4개의 말단 갈락토스 유도체를 갖는, 예를 들어 포함하는 분자를 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 갈락토스 유도체란 용어는 갈락토스, 및 갈락토스의 경우와 같거나 더 큰 ASGP-R에 대한 친화성을 갖는 갈락토스의 유도체 모두를 포함한다. 말단 갈락토스 유도체를 그의 C-I 탄소를 통해 분자에 부착시킨다. 상기 ASGP-R은 간세포에 특유하며 분지된 갈락토스-말단 당단백질에 결합한다. 바람직한 갈락토스 클러스터는 3개의 말단 갈락토스아민 또는 갈락토스아민 유도체를 가지며, 이들은 각각 아시알로당단백질 수용체에 대해 친화성을 갖는다. 보다 바람직한 갈락토스 클러스터는 3개의 말단 N-아세틸-갈락토스아민을 갖는다. 당해 분야에 통상적인 다른 용어들은 3-안테나 갈락토스, 3가 갈락토스 및 갈락토스 삼량체를 포함한다. 3-안테나 갈락토스 유도체 클러스터는 2-안테나 또는 1-안테나 갈락토스 유도체 구조보다 더 큰 친화성으로 ASGP-R에 결합한다(문헌[Baenziger and Fiete, 1980, Cell, 22, 611-620]; 문헌[Connolly et al., 1982, 1. Biol. Chern., 257,939-945]). nM 친화성을 성취하기 위해서는 다가가 필요하다.
바람직한 갈락토스 유도체는 N-아세틸-갈락토스아민(GalNAc)이다. 아시알로당단백질 수용체에 대해 친화성을 갖는 다른 사카라이드는 갈락토스아민, N-n-부타노일-갈락토스아민, 및 N-아이소부타노일-갈락토스아민을 포함하는 목록 중에서 선택될 수 있다. 상기 아시알로당단백질 수용체에 대한 다수의 갈락토스 유도체의 친화성은 연구되어 있거나(예를 들어 문헌[Jobst, S.T. and Drickamer, K. JB.C. 1996,271,6686]을 참조하시오), 당해 분야에 전형적인 방법을 사용하여 쉽게 측정된다.
갈락토스 클러스터는 중심 분지점에 각각 결합된 2개 또는 바람직하게는 3개의 갈락토스 유도체를 포함할 수 있다. 상기 갈락토스 유도체를 사카라이드의 C-I 탄소를 통해 중심 분지점에 부착시킨다. 상기 갈락토스 유도체를 바람직하게는 링커 또는 이격자를 통해 상기 분지점에 결합시킨다. 바람직한 이격자는 가요성 친수성 이격자이다(미국특허 제 5,885,968 호; 문헌[Biessen et al. J. Med. Chern. 1995 Vol. 39 p. 1538-1546]). 바람직한 가요성 친수성 이격자는 PEG 이격자이다. 바람직한 PEG 이격자는 PEG3 이격자(3개의 에틸렌 단위)이다. 상기 분지점은 상기 3개의 갈락토스 유도체의 부착을 허용하고 상기 올리고머에 상기 분지점의 부착을 추가로 허용하는 임의의 소분자일 수 있다. GalNAc 클러스터(예를 들어 GalNAc) 중의 각각의 갈락토스 유도체(탄수화물 부분)를 이격자, 예를 들어 (폴리)에틸렌 글리콜 링커(PEG), 예를 들어 2, 3, 4, 5, 6-에틸렌 글리콜 링커를 통해 상기 올리고머에 결합시킬 수 있다. 상기 PEG 부분은 상기 갈락토스 유도체 당 부분과 펩타이드(다이-리신이 도시된다) 링커 사이에 이격자를 형성할 수 있다. 예시적인 분지점 기는 다이-리신이다. 다이-리신 분자는 3개의 아민기(이를 통해 3개의 갈락토스 유도체가 부착될 수 있다) 및 하나의 카복실 반응기(이를 통해 상기 다이-리신이 상기 올리고머에 부착될 수 있다)를 함유한다(예를 들어 도 4를 참조하시오).
상기 탄수화물 접합체(예를 들어 GalNAc) 또는 탄수화물-링커 부분(예를 들어 탄수화물-PEG 부분)을 분지점 기, 예를 들어 아미노산, 또는 펩타이드(적합하게는 2개 이상의 아미노기(예를 들어 3, 4 또는 5개), 예를 들어 리신, 다이-리신, 또는 트라이-리신 또는 테트라-리신을 포함한다)를 통해 상기 올리고머에 공유 결합(연결)시킬 수 있다. 트라이-리신 분자는 4개의 아민기(이를 통해 3개의 탄수화물 접합체 기, 예를 들어 갈락토스 및 유도체(예를 들어 GalNAc) 및 추가의 접합체, 예를 들어 소수성 또는 친지성 부분/기가 부착될 수 있다) 및 하나의 카복실 반응기(이를 통해 상기 트라이-리신이 상기 올리고머에 부착될 수 있다)를 함유한다. 추가의 접합체, 예를 들어 친지성/소수성 부분이 상기 리신 잔기에 부착될 수 있으며, 상기 잔기는 올리고머에 부착된다.
일부 실시태양에서, 상기 GalNac 클러스터는 펩타이드 링커, 예를 들어 Tyr-Asp(Asp) 트라이펩타이드 또는 Asp(Asp) 다이펩타이드(바이라디칼 링커를 통해 상기 올리고머에 부착된다)를 포함한다, 예를 들어 상기 GalNac 클러스터는 도 3에서 Conj3, 3a, 4 및 4a로서 예시된 것들과 같은 바이라디칼 링커를 포함할 수 있다.
선택적인 분지제 분자를 1,3-비스[5-(4,4'-다이메톡시트리틸옥시)펜틸아미도]프로필-2-[(2-시아노에틸)-(N,N-다이아이소프로필)]포스포아미다이트(글렌 리써치(Glen Research) 카탈로그 번호: 10-1920-xx), 트리스-2,2,2-[3-(4,4'-다이메톡시트리틸옥시)프로필옥시메틸]에틸-[(2-시아노에틸)-(N,N-다이아이소프로필)]-포스포아미다이트(글렌 리써치 카탈로그 번호: 10-1922-xx), 트리스-2,2,2-[3-(4,4'-다이메톡시트리틸옥시)프로필옥시메틸]메틸렌옥시프로필-[(2-시아노에틸)-(N,N-다이아이소프로필)]-포스포아미다이트 및 1-[5-(4,4'-다이메톡시-트리틸옥시)펜틸아미도]-3-[5-플루오레노메톡시-카보닐-옥시-펜틸아미도]-프로필-2-[(2-시아노에틸)-(N,N-다이아이소프로필)]-포스포아미다이트(글렌 리써치 카탈로그 번호: 10-1925-xx)로 이루어진 군으로부터 선택할 수 있다. WO 2014/179620 및 유럽 출원 제 14188444.5 호는 다양한 GalNAc 접합체 모이어티의 생성을 기재한다(본 발명에 참고로 인용된다). 올리고머에 대한 상기 분지점의 부착은 링커 또는 이격자를 통해 발생할 수 있다. 바람직한 이격자는 가요성 친수성 이격자이다. 바람직한 가요성 친수성 이격자는 PEG 이격자 또는 C6 링커이다. 바람직한 PEG 이격자는 PEG3 이격자(3개의 에틸렌 단위)이다. 바람직한 실시태양에서 상기 링커는 생리학적으로 불안정한 링커이다. 상기 갈락토스 클러스터를 당해 분야에 공지된 방법을 사용하여 상기 올리고머의 3' 또는 5' 단부에 부착시킬 수 있다. 바람직한 실시태양에서 상기 아시알로당단백질 수용체 표적화 접합체 모이어티를 상기 올리고뉴클레오타이드의 5'-단부에 결합시킨다.
바람직한 갈락토스 클러스터는 PEG 이격자를 통해 다이-리신 분지제 분자(GalNAc 클러스터)에 결합된 3개의 말단 GalNAc 모이어티를 포함한다. 바람직하게, 상기 PEG 이격자는 3PEG 이격자이다. 바람직한 GalNAc 클러스터는 Conj1, 1a, 2 및 2a이다. Conj2a(또한 GalNAc2라 칭한다)가 가장 바람직하다.
갈락토스 클러스터를 도 3 담체 성분 링커에 나타낸다
상기 담체 성분을 링커(L)에 의해, 제 1 올리고머 영역 및/또는 제 2 올리고머 영역에 결합시킬 수 있다. 임의의 적합한 링커를 사용할 수 있다.
탄수화물 접합체(예를 들어 GalNAc)를 또한 생리학적으로 불안정한 링커라 지칭되는 생물절단성 링커를 통해 상기 올리고머에 결합시킬 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 생리학적으로 불안정한 결합은 포유동물 신체내에서 통상적으로 접하게 되는 조건 또는 접하게 되는 조건과 유사한 조건하에서 절단성인 불안정한 결합(또한 생리학적으로 불안정한 링커라 칭한다)이다. 생리학적으로 불안정한 결합기는 상기 기가 몇몇 생리학적 조건하에 존재할 때 화학적 변형(예를 들어 절단)을 겪도록 선택된다. 포유동물 세포내 조건은 포유동물 세포에서 발견되거나 접하게 되는 경우와 유사한 pH, 온도, 산화 또는 환원 조건 또는 인자, 및 염 농도를 포함한다. 포유동물 세포내 조건은 단백질분해 또는 가수분해 효소와 같은 포유동물 세포 중에 통상적으로 존재하는 효소 활성의 존재를 또한 포함한다.
화학적 형질전환(상기 불안정한 결합의 절단)은 상기 세포에 약학적으로 허용가능한 작용제의 첨가에 의해 개시되거나 상기 불안정한 결합을 함유하는 분자가 적합한 세포내 및/또는 세포외 환경에 도달할 때 자발적으로 발생할 수 있다. 예를 들어, pH 불안정한 결합은 상기 분자가 산성화된 엔도솜에 진입할 때 절단될 수 있다. 따라서, pH 불안정한 결합은 엔도솜 절단성 결합인 것으로 간주될 수 있다. 효소 절단성 결합은 엔도솜 또는 리소솜 또는 세포질 중에 존재하는 것들과 같은 효소에 노출될 때 절단될 수 있다. 다이설파이드 결합은 상기 분자가 상기 세포 세포질의 보다 환원성 환경에 진입될 때 절단될 수 있다. 따라서, 다이설파이드는 세포질 절단성 결합인 것으로 간주될 수 있다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, pH-불안정한 결합은 산성 조건(pH<7)하에서 선택적으로 절단되는 불안정한 결합이다. 상기와 같은 결합을 또한, 세포 엔도솜 및 리소솜이 7 미만의 pH를 가지므로, 엔도솜 불안정한 결합이라 칭할 수 있다. 또 다른 생리학적으로 불안정한 링커의 일례는 도 3에서 GalNAc 클러스터에 사용되는 바와 같은 다이-리신이다.
일부 실시태양에서, 본 발명의 올리고머 접합체는 본 발명의 올리고머(영역 A)를 담체 성분(또는 성분 C)에 결합시키는 생리학적으로 불안정한 링커(영역 PL, 또한 생물절단성 링커 또는 뉴클레아제 민감성 링커라 칭한다)를 포함한다.
표적화된 전달을 위한 담체 성분과 결합된 생리학적으로 불안정한 링커에 대해서, 표적 조직(예를 들어 근육, 간, 신장 또는 종양)에서 관찰되는 절단율은 혈청에서 발견되는 것보다 더 크다. 표적 조직 대 혈청 중의 절단 수준(%)의 적합한 측정 방법은 "조직 특이적인 시험관내 링커 절단 분석" 섹션에 기재되어 있다. 일부 실시태양에서, 본 발명의 화합물 중 생리학적으로 불안정한 링커(또한 생물절단성 링커 또는 뉴클레아제 민감성 링커로서 지칭된다)는 "물질 및 방법" 섹션의 "조직 특이적인 시험관내 링커 절단 분석"에서 적어도 약 20% 절단되고, 예를 들어 적어도 약 30% 절단되고, 예를 들어 적어도 약 40% 절단되고, 예를 들어 적어도 약 50% 절단되고, 예를 들어 적어도 약 60% 절단되고, 예를 들어 적어도 약 70% 절단되고, 예를 들어 적어도 약 75% 절단된다. 일부 실시태양에서, 상기 "조직 특이적인 시험관내 링커 절단 분석"에 사용되는 혈청 중 절단(%)은 약 20% 미만, 예를 들어 약 10% 미만, 예를 들어 5% 미만, 예를 들어 약 1% 미만이다.
일부 실시태양에서, 본 발명의 올리고머 접합체는 3개의 영역, 즉 i) 10 내지 18개의 연속적인 뉴클레오타이드를 포함하는 제 1 영역(영역 A); ii) 생리학적으로 불안정한 링커를 포함하는 제 2 영역(영역 PL); 및 iii) 담체 성분을 포함하는 제 3 영역(C)을 포함하며, 이때 상기 제 3 영역은 상기 제 2 영역에 공유 결합되고, 상기 제 2 영역은 상기 제 1 영역에 공유 결합된다.
일부 실시태양에서 영역 A 및 영역 PL은 포스페이트 뉴클레오사이드 결합(예를 들어 포스포다이에스터, 포스포로티오에이트, 포스포다이티오에이트, 보라노포스페이트 또는 메틸포스포네이트) 또는 트라이아졸기를 통해 공유 결합된다. 일부 실시태양에서 영역 PL 및 영역 C는 포스페이트 뉴클레오사이드 결합(예를 들어 포스포다이에스터, 포스포로티오에이트, 포스포다이티오에이트, 보라노포스페이트 또는 메틸포스포네이트) 또는 트라이아졸기를 통해 공유 결합된다. 일부 실시태양에서 영역 PL 및 영역 C는 하기에 기재되는 영역 E 링커와 같은 제 2 링커를 통해 공유 결합된다.
일부 실시태양에서, 상기 생리학적으로 불안정한 링커는 상기 올리고머(영역 A)의 5' 단부 및/또는 3'-단부에 위치할 수 있다. 바람직한 실시태양에서 상기 생리학적으로 불안정한 링커는 5'-단부에 있다.
일부 실시태양에서, 상기 생리학적으로 불안정한 링커는 그의 3'-단부에서 영역 A의 5'-단부에 부착되고 상기 담체 성분(영역 C)은 임의로 추가적인 링커 영역 E를 통해, 상기 5'-단부 또는 상기 생리학적으로 불안정한 링커(예를 들어 PO-링커)에 부착된다.
뉴클레아제 민감성 링커 - 포스포다이에스터 링커(PO-링커)
일부 실시태양에서, 상기 생리학적으로 불안정한 링커는, 예를 들어 표적 세포에서 발현될 수 있는 뉴클레아제(들)에 민감하며, 그 자체로서, 본 명세서에 상세히 설명된 바와 같이, 상기 링커는 짧은 영역(예를 들어 1 내지 10) 포스포다이에스터 결합된 뉴클레오사이드, 예를 들어 DNA 뉴클레오사이드일 수 있다.
일부 실시태양에서 동일하거나 상이할 수 있는, 상기 생리학적으로 불안정한 링커(영역 PL)는 S1 뉴클레아제 절단에 민감하다. S1 절단에 대한 민감성을 "S1 뉴클레아제 절단 분석" 섹션에 기재된 S1 뉴클레아제 분석을 사용하여 평가할 수 있다. 일부 실시태양에서, 본 발명의 화합물 중의 상기 생리학적으로 불안정한 링커(또한 생리학적으로 불안정한 링커 또는 뉴클레아제 민감성 링커로서 지칭된다), 예를 들어 영역 PL은 "물질 및 방법" 섹션의 "S1 뉴클레아제 절단 분석"에 기재된 바와 같이 S1 뉴클레아제와 120분 배양 후에 적어도 약 30% 절단되고, 예를 들어 적어도 약 40% 절단되고, 예를 들어 적어도 약 50% 절단되고, 예를 들어 적어도 약 60% 절단되고, 예를 들어 적어도 약 70% 절단되고, 예를 들어 적어도 약 80% 절단되고, 예를 들어 적어도 약 90% 절단되고, 예를 들어 적어도 95% 절단된다.
일부 실시태양에서, 상기 생리학적으로 불안정한 링커(영역 PL)는 뉴클레아제 민감성 링커이며, 1 내지 10개의 뉴클레오사이드, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 뉴클레오사이드, 보다 바람직하게는 2 내지 6개의 뉴클레오사이드 및 가장 바람직하게는 2 내지 4개의 결합된 뉴클레오사이드를 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 뉴클레아제 민감성 링커는 포스포다이에스터 뉴클레오타이드 링커이며, 상기와 같은 링커를 또한 PO-링커라 칭한다. 바람직한 실시태양에서 상기 뉴클레아제 민감성 링커(PO-링커)는 하나 이상의 포스포다이에스터 결합된 뉴클레오사이드를 포함한다. 바람직하게는, 상기 뉴클레아제 민감성 PO-링커는 적어도 2개의 연속적인 포스포다이에스터 결합, 예를 들어 적어도 3 또는 4 또는 5개의 연속적인 포스포다이에스터 결합을 포함한다.
일부 실시태양에서, 상기 PO-링커 중의 뉴클레오사이드는 DNA 및 RNA, 및 뉴클레아제 절단을 방해하지 않는 그의 변형으로 이루어진 군으로부터 (임의로 독립적으로) 선택된다. 뉴클레아제 절단을 방해하지 않는 DNA 및 RNA 뉴클레오사이드의 변형은 비-천연 핵염기일 수 있다. 몇몇 당-변형 뉴클레오사이드, 예를 들어 알파-L-옥시-LNA가 또한 뉴클레아제 절단을 허용할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 PO-링커의 모든 뉴클레오사이드는 2'-OH 리보스 당(RNA) 또는 2'-H 당, 즉 RNA 또는 DNA를 (임의로 독립적으로) 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 PO-링커의 뉴클레오사이드는 DNA 뉴클레오사이드이다. 일부 실시태양에서, 상기 PO-링커의 적어도 2개의 연속적인 뉴클레오사이드는 DNA 또는 RNA 뉴클레오사이드(예를 들어 적어도 3 또는 4 또는 5개의 연속적인 DNA 또는 RNA 뉴클레오사이드)이다. 바람직하게, 상기 PO-링커는 1 내지 5 또는 1 내지 4, 예를 들어 2, 3, 4개의 연속적인 포스포다이에스터 결합된 DNA 뉴클레오사이드로 이루어진다. 바람직한 실시태양에서 상기 PO-링커는 너무 짧아서 RNAseH를 모집하지 못한다. 일부 실시태양에서, 상기 PO-링커는 3개 이하 또는 4개 이하의 연속적인 포스포다이에스터 결합된 DNA 및/또는 RNA 뉴클레오사이드(예를 들어 DNA 뉴클레오사이드)를 포함한다.
일부 실시태양에서, 상기 PO-링커는 표적 핵산 서열 또는 영역 A 중의 올리고머에 상보성이 아니다.
일부 실시태양에서, 상기 PO-링커는 표적 핵산 서열과 상보성이다. 이 태양에서 영역 A 및 상기 PO-링커는 함께 표적 서열에 상보성인 단일의 연속적인 서열을 형성할 수 있다.
일부 실시태양에서, 영역 A 및 상기 PO-링커는 10 내지 22, 예를 들어 12 내지 20 뉴클레오타이드 길이의 단일의 연속적인 뉴클레오타이드 서열을 형성한다. 이와 관련하여 영역 A는, 표적 핵산(예를 들어 LNA 또는 2' 치환된 당 부분을 갖는 뉴클레오사이드)에 대해 증가된 결합 친화성을 갖는 하나 이상, 바람직하게는 적어도 2개의 변형 뉴클레오사이드로 출발하고 영역 A가 단독으로 관련된 세포주에서 표적 핵산의 발현을 조절할 수 있다는 점에서 상기 PO-링커와 구별될 수 있다. 더욱 또한, 영역 A가 DNA 또는 RNA 뉴클레오사이드를 포함하는 경우, 이들은 뉴클레아제 내성 뉴클레오사이드간 결합, 예를 들어 포스포로티오에이트 또는 보라노포스페이트와 결합한다.
일부 태양에서 상기 제 1(영역 A) 및 제 2 영역(PO-링커)간의 뉴클레오사이드간 결합은 상기 제 2 영역의 부분으로 간주될 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 PO-링커 중의 염기의 서열을 표적 조직 또는 세포 또는 세포-이하 구획 중에 존재하는 우세한 엔도뉴클레아제 절단 효소를 근거로, 최적의 엔도뉴클레아제 절단 부위를 제공하도록 선택한다. 이에 관하여, 표적 조직 및 비-표적 조직으로부터 세포 추출물을 단리함으로써, 상기 PO-링커에 사용하기 위한 엔도뉴클레아제 절단 서열을 비-표적 세포(예를 들어 신장)에 비해 목적하는 표적 세포(예를 들어 간/간세포)에서의 우선적인 절단 활성을 기준으로 선택할 수 있다. 이에 관하여, 표적 하향조절을 위한 상기 화합물의 효능을 목적하는 조직/세포에 대해 최적화할 수 있다.
일부 실시태양에서 상기 PO-링커는 서열 AA, AT, AC, AG, TA, TT, TC, TG, CA, CT, CC, CG, GA, GT, GC, 또는 GG의 다이뉴클레오타이드를 포함하며, 이때 C는 5-메틸시토신이고/이거나, T는 U로 치환될 수 있다. 바람직하게, 상기 뉴클레오사이드간 결합은 포스포다이에스터 결합이다. 바람직한 실시태양에서 상기 PO-링커는 적어도 2개의 포스포다이에스터 결합(하나는 영역 A에 대한 것이다)을 갖는 CA 다이뉴클레오타이드이다. 일부 실시태양에서, 상기 PO-링커는 서열 AAA, AAT, AAC, AAG, ATA, ATT, ATC, ATG, ACA, ACT, ACC, ACG, AGA, AGT, AGC, AGG, TAA, TAT, TAC, TAG, TTA, TTT, TTC, TAG, TCA, TCT, TCC, TCG, TGA, TGT, TGC, TGG, CAA, CAT, CAC, CAG, CTA, CTG, CTC, CTT, CCA, CCT, CCC, CCG, CGA, CGT, CGC, CGG, GAA, GAT, GAC, CAG, GTA, GTT, GTC, GTG, GCA, GCT, GCC, GCG, GGA, GGT, GGC, 및 GGG의 트라이뉴클레오타이드를 포함하며, 이때 C는 5-메틸시토신이고/이거나, T는 U로 치환될 수 있다. 바람직하게, 상기 뉴클레오사이드간 결합은 포스포다이에스터 결합이다. 일부 실시태양에서 상기 PO-링커는 서열 AAAX, AATX, AACX, AAGX, ATAX, ATTX, ATCX, ATGX, ACAX, ACTX, ACCX, ACGX, AGAX, AGTX, AGCX, AGGX, TAAX, TATX, TACX, TAGX, TTAX, TTTX, TTCX, TAGX, TCAX, TCTX, TCCX, TCGX, TGAX, TGTX, TGCX, TGGX, CAAX, CATX, CACX, CAGX, CTAX, CTGX, CTCX, CTTX, CCAX, CCTX, CCCX, CCGX, CGAX, CGTX, CGCX, CGGX, GAAX, GATX, GACX, CAGX, GTAX, GTTX, GTCX, GTGX, GCAX, GCTX, GCCX, GCGX, GGAX, GGTX, GGCX, 및 GGGX의 트라이뉴클레오타이드를 포함하며, 이때 X는 A, T, U, G, C 및 이들의 유사체로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있고, 이때 C는 5-메틸시토신이고/이거나, T는 U로 치환될 수 있다. 바람직하게, 상기 뉴클레오사이드간 결합은 포스포다이에스터 결합이다. (천연)핵염기 A, T, U, G, C를 언급하는 경우, 이들은 동등한 천연 핵염기(예를 들어 상보성 뉴클레오사이드와의 염기쌍)로서 기능하는 핵염기 유사체로 치환될 수 있다.
일부 실시태양에서, 영역 PL은 친지성 접합체 모이어티, 예를 들어 지질, 지방산, 스테롤, 예를 들어 콜레스테롤 또는 토코페롤에 공유 부착된 포스포다이에스터 뉴클레오타이드 링커(PO-링커)이다. 일부 실시태양에서, 영역 PL은 아시알로당단백질 수용체 표적화 모이어티, 예를 들어 GalNAc 담체 성분에 공유 부착된 포스포다이에스터 뉴클레오타이드 링커(PO-링커)이다.
상기 올리고머와 상기 담체 성분 사이에 생리학적으로 불안정한 링커를 삽입하는 개념은 WO 2014/076195(본 발명에 참고로 인용되며, 특히 도 3 및 4가 참고로 인용된다)에 상세히 기재되어 있다.
선택적 링커(영역 E)
일부 실시태양에서 링커는 반드시 생리학적으로 불안정할 필요는 없으며 주로 제 3 영역, 예를 들어 담체 성분(영역 C)을 올리고머(영역 A)에 공유 결합시키는 작용을 한다. 본 명세서에서 이들 링커를 또한 영역 E라 칭한다. 본 발명의 올리고머 접합체는 하기의 영역 요소들 A-C/C-A, A-PL-C/C-PL-A, A-PL-E-C/C-E-PL-A, A-E-PL-C/C-PL-E-A 또는 A-E-C/C-E-A로 구성될 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 링커 E는 쇄 구조 또는 반복하는 단위, 예를 들어 에틸렌 글리콜, 아미노산 단위 또는 아미노 알킬기의 올리고머를 포함한다. 상기 링커 E는 적어도 2개의 작용기, 즉 상기 올리고머에 부착하기 위한 하나(임의로 생리학적으로 불안정한 링커와 함께) 및 상기 담체 성분에 부착하기 위한 다른 하나를 가질 수 있다. 예시적인 링커 작용기는 상기 올리고머 또는 담체 성분상의 친핵성기와 반응하기 위한 친전자체, 또는 친전자성기와 반응하기 위한 친핵제일 수 있다. 일부 실시태양에서, 링커 작용기는 아미노, 하이드록실, 카복실산, 티올, 포스포르아미데이트, 포스포로티오에이트, 포스페이트, 포스파이트, 불포화기(예를 들어 이중 또는 삼중 결합) 등을 포함한다. 예를 들어, 탄수화물 담체 성분(예를 들어 GalNAc)을 링커, 예를 들어 (폴리)에틸렌 글리콜 링커(PEG), 예를 들어 다이, 트라이, 테트라, 펜타, 헥사-에틸렌 글리콜 링커를 통해 상기 올리고머에 결합시킬 수 있다.
일부 실시태양에서 상기 링커(영역 E)는 아미노 알킬, 예를 들어 C2-C36 아미노 알킬기, 예를 들어 C6 내지 C12 아미노 알킬기이다. 바람직한 실시태양에서 상기 링커(영역 E)는 C6 아미노 알킬기이다. 상기 아미노 알킬기를 예를 들어 (예를 들어 보호된) 아미노 알킬 포스포아미다이트를 사용하여 표준 올리고머 합성의 부분으로서 상기 올리고머(영역 A 또는 영역 A-L/L-A)에 가할 수 있다. 상기 아미노 알킬과 상기 올리고머 사이의 결합기는 예를 들어 포스포로티오에이트 또는 포스포다이에스터, 또는 본 명세서에서 지칭되는 다른 뉴클레오사이드 결합기들 중 하나일 수 있다. 상기 아미노 알킬기는 상기 올리고머의 5' 또는 3'-단부에 공유 결합된다. 상업적으로 입수할 수 있는 아미노 알킬 링커는 예를 들어 상기 올리고머의 3'-단부에서의 결합의 경우 3'-아미노-변형제 시약이고 상기 올리고머의 5'-단부에서의 결합의 경우에는 5'-아미노-변형제 C6을 입수할 수 있다. 이들 시약은 글렌 리써치 코포레이션(미국 버지니아주 스털링 소재)으로부터 입수할 수 있다. 이들 화합물 또는 유사한 화합물들은 크리그(Krieg) 등(문헌[Antisense Research and Development 1991, 1, 161])에 의해 플루오레세인을 올리고머의 5'-말단에 결합시키기 위해 사용되었다. 광범위하게 다양한 추가의 링커기들이 당해 분야에 공지되어 있으며 이들은 담체 성분의 올리고머에의 부착에 유용할 수 있다. 상기 유용한 링커기들 중 다수에 대한 재고찰이 예를 들어 문헌[Antisense Research and Applications, S. T. Crooke and B. Lebleu, Eds., CRC Press, Boca Raton, Fla., 1993, p. 303-350]에서 발견될 수 있다. 다른 화합물들, 예를 들어 아크리딘이 폴리메틸렌 결합을 통해 올리고머의 3'-말단 포스페이트기에 부착되었다(문헌[Asseline, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1984, 81, 3297]). 상기 기들 중 어느 하나를 단일 링커(영역 E)로서 또는 하나 이상의 추가의 링커(영역 E-E' 또는 영역 E-L 또는 L-E)와 함께 사용할 수 있다.
올리고머의 접합체들의 제조에서 링커들 및 이들의 용도가 당해 분야 전체를 통해, 예를 들어 WO 96/11205 및 WO 98/52614 및 미국특허 제 4,948,882 호; 미국특허 제 5,525,465 호; 미국특허 제 5,541,313 호; 미국특허 제 5,545,730 호; 미국특허 제5,552,538 호; 미국특허 제 5,580,731 호; 미국특허 제 5,486,603 호; 미국특허 제 5,608,046 호; 미국특허 제 4,587,044 호; 미국특허 제 4,667,025 호; 미국특허 제 5,254,469 호; 미국특허 제 5,245,022 호; 미국특허 제 5,112,963 호; 미국특허 제 5,391,723 호; 미국특허 제 5,510475 호; 미국특허 제 5,512,667 호; 미국특허 제 5,574,142 호; 미국특허 제 5,684,142 호; 미국특허 제 5,770,716 호; 미국특허 제 6,096,875 호; 미국특허 제 6,335,432 호; 및 미국특허 제 6,335,437 호, WO 2012/083046(이들은 각각 내용 전체가 본 발명에 참고로 인용된다)에 제공되어 있다. 도 3은 GalNac 클러스터를 상기 올리고머에 결합시키는 선택적인 C6 링커를 갖는 GalNAc 클러스터 Conj 1, 2, 3, 4 및 Conj1a, 2a, 3a 및 4a를 나타낸다.
아시아당단백질 수용체(ASGP-R) 표적화 모이어티
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "아시아당단백질 수용체(ASGP-R) 표적화 모이어티"란 용어는 ASGP-R과 상호작용하고 이에 의해 올리고머를 표면 ASGP-R을 발현하는 세포와 접촉되게 하거나 상기 세포에 가깝게 가져가는 모이어티에 관한 것이다.
접합체 모이어티
일부 실시태양에서, 상기 담체 성분은 접합체 모이어티이다.
또한, 하나 이상의 접합체 모이어티를 상기 담체 성분 외에 상기 올리고머 또는 올리고머 접합체에 부착시킬 수 있다.
일부 실시태양에서, 하나 이상의 접합체 모이어티를 본 발명의 올리고머에 부착시킬 수 있다.
상기 접합체 모이어티는 비-뉴클레오타이드 부분 또는 비-폴리뉴클레오타이드 부분일 수 있다.
상기 접합체 모이어티는 본 발명의 올리고머의 활성, 세포 분배 또는 세포 흡수를 증대시킬 수 있다. 상기와 같은 부분은 비제한적으로 항체, 폴리펩타이드, 지질 부분, 예를 들어 콜레스테롤 부분, 콜산, 티오에테르, 예를 들어 헥실-s-트리틸티올, 티오콜레스테롤, 지방족 쇄, 예를 들어 도데칸다이올 또는 운데실 잔기, 인지질, 예를 들어 다이-헥사데실-rac-글리세롤 또는 트라이에틸암모늄 1,2-다이-o-헥사데실-rac-글리세로-3-h-포스포네이트, 폴리아민 또는 폴리에틸렌 글리콜 쇄, 아다만탄 아세트산, 팔미틸 부분, 옥타데실아민 또는 헥실아미노-카보닐-옥시콜레스테롤 부분을 포함한다.
본 발명의 올리고머를 또한 활성 약물 물질, 예를 들어 아스피린, 이부프로펜, 설파 약물, 당뇨병치료제, 항균제 또는 항생제에 접합시킬 수 있다.
몇몇 실시태양에서 상기 접합된 부분은 스테롤, 예를 들어 콜레스테롤이다.
다양한 실시태양에서, 상기 접합체 모이어티는 양으로 하전된 중합체, 예를 들어 1 내지 50, 예를 들어 2 내지 20, 예를 들어 3 내지 10 아미노산 잔기 길이의 양으로 하전된 펩타이드, 및/또는 폴리알킬렌 옥사이드, 예를 들어 폴리에틸렌글리콜(PEG) 또는 폴리프로필렌 글리콜을 포함하거나 이들로 이루어진다(본 발명에 참고로 인용된 WO 2008/034123을 참조하시오). 적합하게는 양으로 하전된 중합체, 예를 들어 폴리알킬렌 옥사이드를 WO 2008/034123에 기재된 이형성 링커와 같은 링커를 통해 본 발명의 올리고머에 부착시킬 수 있다.
본 발명의 올리고머 및 올리고머 접합체는 접합체 모이어티로서 적합한 리간드-결합 분자를 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 올리고뉴클레오타이드를 치료학적 투여를 위해, 예를 들어 국제특허출원공개 WO 91/04753에 따라, 세포-표면 분자를 인식하는 리간드-결합 분자에 접합시킬 수 있다. 상기 리간드-결합 분자는 예를 들어 세포 표면 항원에 대한 항체, 세포 표면 수용체에 대한 항체, 상응하는 세포 표면 수용체를 갖는 성장 인자, 상기와 같은 성장 인자에 대한 항체, 또는 성장 인자 및 그의 수용체의 복합체를 인식하는 항체를 포함할 수 있다. 올리고뉴클레오타이드에 리간드-결합 분자를 접합시키는 방법은 WO 91/04753에 상세히 기재되어 있다. 더욱이, 사용될 수 있는 접합 방법 및 세포 흡수를 개선시키는 방법은 하기의 국제특허출원공개들 WO 96/40961, WO 99/64449, WO 99/02673, WO 98/03533, WO 00/15265 및 미국특허 제 5,856,438 호 및 미국특허 제 5,138,045 호에 기재되어 있다.
추가의 예로서, 상기 접합체 모이어티는 성장 인자, 예를 들어 트랜스페린 또는 폴레이트일 수 있다. 트랜스페린-폴리리신-올리고뉴클레오타이드 복합체 또는 폴레이트-폴리리신-올리고뉴클레오타이드 복합체를 높은 수준의 트랜스페린 또는 폴레이트 수용체를 발현하는 세포에 의한 흡수를 위해 제조할 수 있다. 세포내로 올리고뉴클레오타이드 흡수를 촉진하는 담체 성분으로서 트랜스페린 복합체의 제조가 문헌[Wagner et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, 3410-3414 (1990)]에 기재되어 있다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 전달을 포함하여, 폴레이트 수용체 엔도사이토시스를 통한 폴레이트-거대분자 접합체의 세포 전달이 로우(Low) 등의 미국특허 제 5,108,921 호에 기재되어 있다. 또한 문헌[Leamon et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 88, 5572 (1991)]을 참조하시오.
표적 핵산/표적 서열
바람직한 태양에서, 본 명세서에 사용되는 바와 같은 "표적 핵산" 및 "표적 서열"이란 용어는 HBx 또는 HBsAg 폴리펩타이드를 암호화하는 DNA 또는 RNA, 예를 들어 서열번호 1 및 서열번호 2 중 어느 하나에 함유된 서열을 지칭한다. 따라서 "표적 핵산" 및 "표적 서열"이란 용어는 HBx- 또는 HBsAg-암호화 핵산 또는 그의 천연 변이체, 및 상기로부터의 RNA 핵산, 바람직하게는 mRNA, 예를 들어 전-mRNA를 포함하지만, 바람직하게는 성숙한 mRNA를 포함한다. 일부 실시태양에서, 예를 들어 상기 "표적 핵산" 또는 "표적 서열"은 연구 또는 진단에 사용될 때 cDNA 또는 상기 DNA 또는 RNA 핵산 표적으로부터 유래된 합성 올리고뉴클레오타이드일 수 있다. 본 발명에 따른 올리고머는 바람직하게는 표적 핵산에 하이브리드화할 수 있다.
일치성/상동성
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "동종의" 및 "상동성"이란 용어는 "일치성" 및 "일치하는"이란 용어와 호환가능하다.
에 상응하는/에 상응하다
"에 상응하는" 및 "에 상응하다"란 용어는 상기 올리고머의 뉴클레오타이드 서열(즉 핵염기 또는 염기 서열) 또는 그의 연속적인 뉴클레오타이드 서열 및 i) 상기 핵산 표적, 예를 들어 표적 서열 단백질을 암호화하는 mRNA의 역 보체의 하위-서열, 예를 들어 서열번호 1 또는 서열번호 2 또는 서열번호 3내의 임의의 서열 및/또는 ii) 본 명세서에 제공된 특정한 뉴클레오타이드 서열 중 어느 하나의 서열 또는 그의 하위-서열로부터 선택된 추가의 서열의 등가의 연속적인 뉴클레오타이드 서열간의 비교를 지칭한다. 뉴클레오타이드 유사체들을 그들의 등가의 또는 상응하는 뉴클레오타이드에 직접 비교한다. i) 또는 ii)하의 추가의 서열에 상응하는 서열은 전형적으로 제 1 서열(예를 들어 상기 연속적인 뉴클레오타이드 서열)의 길이에 걸쳐 상기 서열과 일치하거나, 본 명세서에 기재된 바와 같이, 일부 실시태양에서 상응하는 서열에 적어도 80% 상동성, 예를 들어 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96% 상동성, 예를 들어 100% 상동성(일치성)이다. 상기 서열 일치성 백분율은 상기 2개의 서열간에 일치하는 정렬된 염기의 수를 카운트하고, 상기 올리고머 중의 전체 단위 수로 나누고, 100을 곱하여 계산할 수 있다.
"상응하는 뉴클레오타이드 유사체" 및 "상응하는 뉴클레오타이드"란 용어는 상기 뉴클레오타이드 유사체 중의 뉴클레오타이드 및 천연 뉴클레오타이드가 일치함을 가리키고자 한다. 예를 들어, 상기 뉴클레오타이드의 2-데옥시리보스 단위가 아데닌에 결합하는 경우, "상응하는 뉴클레오타이드 유사체"는 아데닌에 결합된 펜토스 단위(2-데옥시리보스와 상이한)를 함유한다.
상보성
"상보성"이란 용어는 하나의 서열이 역-평행한 의미로 다른 서열에 결합할 수 있을 때 상기 두 서열은 상보성임을 의미하며, 이때 각 서열의 3'-단부는 다른 서열의 5'-단부에 결합하고 이어서 하나의 서열의 각각의 A, T(U), G 및 C는 다른 서열의 T(U), A, C 및 G에 각각 정렬된다. 통상적으로, 상기 올리고뉴클레오타이드의 상보성 서열은 정의된 서열에 대해 적어도 90%, 바람직하게는 95%, 가장 바람직하게는 100% 상보성을 갖는다.
본 발명의 올리고머(또는 그의 영역)와 표적 서열, 예를 들어 HBx 또는 HBsAg 표적 서열간의 "상보성" 정도를 측정함에 있어서, "상보성"(또한 "상동성" 또는 "일치성")의 정도를 상기 올리고머(또는 그의 영역)의 서열과, 가장 잘 정렬하는 표적 영역(또는 상기 표적 영역의 역 보체)의 서열간의 일치성 백분율(또는 상동성 백분율)로서 표현한다. 상기 백분율은 상기 2개의 서열간에 일치하는 정렬된 염기의 수를 카운트하고, 상기 올리고머 중의 단위의 총수로 나누고, 100을 곱하여 계산한다. 상기와 같은 비교에서, 끊김이 존재하는 경우, 상기와 같은 끊김이, 상기 끊김내 단위의 수가 본 발명의 올리고머와 상기 표적 영역간에 상이한 경우의 영역이라기보다는 단순한 미스매치인 것이 바람직하다.
특히, "상보성"이란 용어는 제 1 핵산과 제 2 핵산의 핵염기들간에 짝을 이루는 능력을 의미한다. 하나의 서열이 역-평행한 의미로 다른 서열에 결합할 수 있을 때 2개의 서열은 상보성이며, 이때 각 서열의 3'-단부는 다른 서열의 5'-단부에 결합하고 이어서 하나의 서열의 각각의 핵염기 A, T(U), G 및 C는 다른 서열의 T(U), A, C 및 G에 각각 정렬된다. 본 발명의 올리고머(또는 그의 영역)와 표적 서열, 예를 들어 HBx 또는 HBsAg 표적 서열간의 상보성의 정도를 측정함에 있어서, 상보성의 정도를 상기 올리고머(또는 그의 영역)의 서열과, 가장 잘 정렬하는 표적 영역의 서열간의 상보성 백분율로서 표현한다. 상기 백분율은 상기 2개의 서열간에 짝을 형성하는 정렬된 염기의 수를 카운트하고, 상기 올리고머 중의 연속하는 단위의 총수로 나누고, 100을 곱하여 계산한다. 상기와 같은 비교에서, 정렬되지 않는 핵염기/뉴클레오타이드를 미스매치라 칭한다. 통상적으로, 본 발명의 올리고뉴클레오타이드의 상보성 서열은 정의된 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95%, 가장 바람직하게는 100% 상보성을 갖는다.
폴리뉴클레오타이드 서열을 언급할 때 "상보성 서열"이란 용어는 염기-짝짓기 규칙에 의한 또 다른 핵산 분자 중의 염기 서열에 관한 것이다. 보다 특히, 상기 용어 또는 유사한 용어는 뉴클레오타이드 또는 핵산 사이의, 예를 들어 이중 가닥 DNA 분자의 2개 가닥 사이의, 또는 올리고뉴클레오타이드 프라이머와 서열분석되거나 증폭되는 단일 가닥 핵산상의 프라이머 결합 부위 사이의 하이브리드화 또는 염기 짝짓기를 지칭한다. 상보성 뉴클레오타이드는 일반적으로 A와 T(또는 A와 U), 또는 C와 G이다. 2개의 단일 가닥 RNA 또는 DNA 분자를, 최적으로 정렬 및 비교되고 적합한 뉴클레오타이드 삽입 또는 결실을 갖는 하나의 가닥의 뉴클레오타이드가 다른 가닥의 뉴클레오타이드와 적어도 약 95%, 대개는 적어도 약 98% 및 보다 바람직하게는 약 99 내지 약 100% 짝을 이룰 때 실질적으로 상보성이라고 한다. 상보성 폴리뉴클레오타이드 서열을 주지된 컴퓨터 연산 및 소프트웨어, 예를 들어 BLAST 프로그램의 사용을 포함한 다양한 접근법에 의해 확인할 수 있다.
역 보체/역 상보/역 상보성
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "역 보체", "역 상보" 및 "역 상보성"이란 용어들은 "보체", "상보" 및 "상보성"이란 용어와 호환가능하다.
미스매치
"미스매치"(때때로 비-상보성 핵염기로서 지칭된다)란 용어는 제 1 핵산을 제 2 핵산과 정렬시킬 때 상기 제 2 핵산 중의 상응하는 핵염기 또는 뉴클레오타이드와 와트슨-크리크 염기 쌍을 이루지 않는 상기 제 1 핵산 중의 주어진 위치의 핵염기 또는 뉴클레오타이드를 지칭한다. 상기 제 1 핵산은 예를 들어 본 발명에 따른 올리고머 또는 올리고머 접합체일 수 있고 상기 제 2 핵산은 예를 들어 표적 서열일 수 있다. 다수의 미스매치를 함유하는 올리고머 또는 올리고머 접합체에서, 상기 미스매치는 서로 인접하거나 산재될 수 있다.
그의 천연 변이체
"그의 천연 변이체"란 용어는 정의된 분류학적 군내에 자연적으로 존재하는 표적 서열의 변이체, 예를 들어 HBV 유전자형 A-H를 지칭한다. 전형적으로, 폴리뉴클레오타이드의 "천연 변이체"를 언급하는 경우, 상기 용어는 또한 염색체 전좌 또는 중복에 의해 발견되는 게놈 DNA, 및 RNA, 예를 들어 상기로부터 유래되는 mRNA를 암호화하는 표적 서열의 임의의 대립유전자 변이체를 포함할 수 있다. "천연 변이체"는 또한 상기 표적 서열 mRNA의 선택적 이어맞추기로부터 유래되는 변이체를 포함할 수 있다. 특정한 폴리펩타이드 서열을 참조할 때, 예를 들어 상기 용어는 또한 예를 들어 공-번역 또는 번역-후 변형, 예를 들어 신호 펩타이드 절단, 단백질분해 절단, 글리코실화 등에 의해 가공될 수 있는 상기 단백질의 천연 형태들을 포함한다.
하류
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "하류"란 용어는 뉴클레오타이드 서열을 따르는 방향을 참조하여 사용될 때 5'에서부터 3' 단부로의 방향을 의미한다. 유사하게, "상류"란 용어는 3'에서부터 5' 단부로의 방향을 의미한다.
LNA
"LNA"란 용어는 "잠금 핵산"으로서 공지된 바이사이클릭 뉴클레오사이드 유사체를 지칭한다. 상기 용어는 LNA 단위를 지칭하거나, "LNA 올리고뉴클레오타이드"와 관련하여 사용될 때, 하나 이상의 상기와 같은 바이사이클릭 뉴클레오타이드 유사체를 함유하는 올리고뉴클레오타이드를 지칭한다. LNA 뉴클레오타이드는 리보스 당 고리의 C2'과 C4' 사이의 링커기(예를 들어 가교)(예를 들어 하기에 기재되는 바와 같이 바이라디칼 R4" - R2"로서 나타낸 바와 같은)의 존재를 특징으로 한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "LNA 올리고뉴클레오타이드" 및 "LNA-변형 올리고뉴클레오타이드"란 용어는 LNA 단위에 의해 완전히 또는 부분적으로 변형된 임의의 올리고뉴클레오타이드를 포함한다. 따라서, LNA-변형 올리고뉴클레오타이드는 전적으로 LNA 단위로 구성되거나, LNA-변형된 올리고뉴클레오타이드는 하나의 LNA 단위를 포함할 수 있다.
본 발명의 올리고뉴클레오타이드 화합물, 및 그의 염기성 염 및 산부가염에 사용되는 LNA는 바람직하게는 하기 화학식 I의 구조를 갖는다:
[화학식 I]
Figure pat00001
상기 식에서,
모든 키랄 중심에 대해서, 비대칭 기가 R 또는 S 배향으로 발견될 수 있으며;
X는 -O-, -S-, -N(RN*)-, -C(R6R6*)-, 예를 들어 일부 실시태양에서 -O- 중에서 선택되고;
B는 수소, 임의로 치환된 C1-4-알콕시, 임의로 치환된 C1-4-알킬, 임의로 치환된 C1-4-아실옥시, 천연을 포함한 핵염기 및 핵염기 유사체, DNA 삽입제, 광화학적 활성기, 열화학적 활성기, 킬레이트기, 리포터기, 및 리간드 중에서 선택되고; 바람직하게 B는 핵염기 또는 핵염기 유사체이고;
P는 인접한 단위에 대한 뉴클레오타이드간 결합 또는 5'-말단기를 표시하며, 상기와 같은 뉴클레오타이드간 결합 또는 5'-말단기는 치환체 R5 또는 동등하게 적용할 수 있는 치환체 R5*를 임의로 포함하고;
P*는 인접한 단위에 대한 뉴클레오타이드간 결합 또는 3'-말단기를 표시하며;
R4* 및 R2*는 함께 -C(RaRb)-, -C(Ra)=C(Rb)-, -C(Ra)=N-, -O-, -Si(Ra)2-, -S-, -SO2-, -N(Ra)-, 및 >C=Z 중에서 선택된 1 내지 4개의 기/원자로 이루어진 2가 링커기를 표시하며, 이때 Z는 -O-, -S- 및 -N(Ra)- 중에서 선택되고, Ra 및 Rb는 각각 독립적으로 수소, 임의로 치환된 C1-12-알킬, 임의로 치환된 C2-12-알케닐, 임의로 치환된 C2-12-알키닐, 하이드록시, 임의로 치환된 C1-12-알콕시, C2-12-알콕시알킬, C2-12-알케닐옥시, 카복시, C1-12-알콕시카보닐, C1-12-알킬카보닐, 폼일, 아릴, 아릴옥시-카보닐, 아릴옥시, 아릴카보닐, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시-카보닐, 헤테로아릴옥시, 헤테로아릴카보닐, 아미노, 모노- 및 다이(C1-6-알킬)아미노, 카바모일, 모노- 및 다이(C1-6-알킬)-아미노-카보닐, 아미노-C1-6-알킬-아미노카보닐, 모노- 및 다이(C1-6-알킬)아미노-C1-6-알킬-아미노카보닐, C1-6-알킬-카보닐아미노, 카브아미도, C1-6-알카노일옥시, 설포노, C1-6-알킬설포닐옥시, 나이트로, 아지도, 설파닐, C1-6-알킬티오, 할로겐, DNA 삽입제, 광화학적 활성기, 열화학적 활성기, 킬레이트기, 리포터기, 및 리간드 중에서 선택되고, 이때 아릴 및 헤테로아릴은 임의로 치환될 수 있으며, 2개의 같은 자리 치환체 Ra 및 Rb는 함께 임의로 치환된 메틸렌(=CH2)을 표시할 수 있고, 이때 모든 키랄 중심에 대해 비대칭 기가 R 또는 S 배향으로 발견될 수 있으며;
각각 존재하는 치환체 R1*, R2, R3, R5, R5*, R6 및 R6*는 수소, 임의로 치환된 C1-12-알킬, 임의로 치환된 C2-12-알케닐, 임의로 치환된 C2-12-알키닐, 하이드록시, 치환된 C1-12-알콕시, C2-12-알콕시알킬, C2-12-알케닐옥시, 카복시, C1-12-알콕시카보닐, C1-12-알킬카보닐, 폼일, 아릴, 아릴옥시-카보닐, 아릴옥시, 아릴카보닐, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시-카보닐, 헤테로아릴옥시, 헤테로아릴카보닐, 아미노, 모노- 및 다이(C1-6-알킬)아미노, 카바모일, 모노- 및 다이(C1-6-알킬)-아미노-카보닐, 아미노-C1-6-알킬-아미노카보닐, 모노- 및 다이(C1-6-알킬)아미노-C1-6-알킬-아미노카보닐, C1-6-알킬-카보닐아미노, 카브아미도, C1-6-알카노일옥시, 설포노, C1-6-알킬설포닐옥시, 나이트로, 아지도, 설파닐, C1-6-알킬티오, 할로겐, DNA 삽입제, 광화학적 활성기, 열화학적 활성기, 킬레이트기, 리포터기, 및 리간드 중에서 선택되고, 이때 아릴 및 헤테로아릴은 임의로 치환될 수 있으며, 2개의 같은 자리 치환체들은 함께 옥소, 티옥소, 이미노 또는 임의로 치환된 메틸렌을 표시할 수 있고; 이때 RN은 수소 및 C1-4-알킬 중에서 선택되고, 이때 2개의 인접한(비-같은 자리) 치환체는 이중 결합을 생성시키는 추가적인 결합을 표시할 수 있고; RN*는, 존재하고 바이라디칼 중에 포함되지 않을 때, 수소 및 C1-4-알킬 중에서 선택된다.
모든 키랄 중심에 대해 비대칭 기가 R 또는 S 배향으로 발견될 수 있다.
일부 실시태양에서, R4* 및 R2*는 함께 C(RaRb)-C(RaRb)-, C(RaRb)-O-, C(RaRb)-NRa-, C(RaRb)-S- 및 C(RaRb)-C(RaRb)-O- 중에서 선택된 작용기들로 이루어진 바이라디칼을 표시하며, 이때 각각의 Ra 및 Rb는 임의로 독립적으로 선택된다. 일부 실시태양에서, Ra 및 Rb는 임의로 독립적으로 수소 및 C1-6-알킬, 예를 들어 메틸, 예를 들어 수소로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
일부 실시태양에서, R4* 및 R2*는 함께 R- 또는 S-배열의 바이라디칼 -O-CH(CH2OCH3)-(2'O-메톡시에틸 바이사이클릭 핵산)을 표시한다(문헌[Seth at al., 2010, J. Org. Chem]).
일부 실시태양에서, R4* 및 R2*는 함께 R- 또는 S-배열의 바이라디칼 -O-CH(CH2CH3)-(2'O-에틸 바이사이클릭 핵산)을 표시한다(문헌[Seth at al., 2010, J. Org. Chem]).
일부 실시태양에서, R4* 및 R2*는 함께 R- 또는 S-배열의 바이라디칼 -O-CH(CH3)-를 표시한다. 일부 실시태양에서, R4* 및 R2*는 함께 바이라디칼 -O-CH2-O-CH2-를 표시한다(문헌[Seth at al., 2010, J. Org. Chem]).
일부 실시태양에서, R4* 및 R2*는 함께 바이라디칼 -O-NR-CH3-를 표시한다(문헌[Seth at al., 2010, J. Org. Chem]).
일부 실시태양에서, 상기 LNA 단위는 하기의 군으로부터 선택된 구조를 갖는다:
Figure pat00002
일부 실시태양에서, R1*, R2, R3, R5, R5*는 독립적으로 수소, 할로겐, C1-6알킬, 치환된 C1-6알킬, C2-6알케닐, 치환된 C2-6알케닐, C2-6알키닐 또는 치환된 C2-6알키닐, C1-6알콕시, 치환된 C1-6알콕시, 아실, 치환된 아실, C1-6아미노알킬 또는 치환된 C1-6아미노알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다. 모든 키랄 중심에 대해서, 비대칭 기가 R 또는 S 배향으로 발견될 수 있다.
일부 실시태양에서, R1*, R2, R3, R5, R5*는 수소이다.
일부 실시태양에서, R1*, R2, R3은 독립적으로 수소, 할로겐, C1-6알킬, 치환된 C1-6알킬, C2-6알케닐, 치환된 C2-6알케닐, C2-6알키닐 또는 치환된 C2-6알키닐, C1-6알콕시, 치환된 C1-6알콕시, 아실, 치환된 아실, C1-6아미노알킬 및 치환된 C1-6아미노알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다. 모든 키랄 중심에 대해서, 비대칭 기가 R 또는 S 배향으로 발견될 수 있다.
일부 실시태양에서, R1*, R2, R3은 수소이다.
일부 실시태양에서, R5 및 R5*는 각각 독립적으로 H, -CH3, -CH2-CH3,- CH2-O-CH3, 및 -CH=CH2로 이루어진 군으로부터 선택된다. 적합하게는 일부 실시태양에서, R5 및 R5* 중 어느 하나는 수소인 반면, 다른 기(각각 R5 또는 R5*)는 C1-5알킬, C2-6알케닐, C2-6알키닐, 치환된 C1-6알킬, 치환된 C2-6알케닐, 치환된 C2-6알키닐 및 치환된 아실(-C(=O)-)로 이루어진 군으로부터 선택되고; 이때 각각의 치환기는 할로겐, C1-6알킬, 치환된 C1-6알킬, C2-6알케닐, 치환된 C2-6알케닐, C2-6알키닐, 치환된 C2-6알키닐, OJ1, SJ1, NJ1J2, N3, COOJ1, CN, O-C(=O)NJ1J2, N(H)C(=NH)NJ1J2 및 N(H)C(=X)N(H)J2 중에서 독립적으로 선택된 치환기로 일 또는 다중 치환되고, 이때 X는 O 또는 S이고; 각각의 J1 및 J2는 독립적으로 H, C1-6알킬, 치환된 C1-6알킬, C2-6알케닐, 치환된 C2-6알케닐, C2-6알키닐, 치환된 C2-6알키닐, C1-6아미노알킬, 치환된 C1-6아미노알킬 또는 보호기이다. 일부 실시태양에서, R5 및 R5* 중 어느 하나는 치환된 C1-6알킬이다. 일부 실시태양에서, R5 및 R5* 중 어느 하나는 치환된 메틸이며, 이때 바람직한 치환기는 F, NJ1J2, N3, CN, OJ1, SJ1, O-C(=O)NJ1J2, N(H)C(=NH)NJ, J2 및 N(H)C(O)N(H)J2 중에서 독립적으로 선택된 하나 이상의 기를 포함한다. 일부 실시태양에서, 각각의 J1 및 J2는 독립적으로 H 또는 C1-6알킬이다. 일부 실시태양에서, R5 및 R5* 중 어느 하나는 메틸, 에틸 또는 메톡시메틸이다. 일부 실시태양에서, R5 및 R5* 중 어느 하나는 메틸이다. 추가의 실시태양에서, R5 및 R5* 중 어느 하나는 에틸레닐이다. 일부 실시태양에서 R5 및 R5* 중 어느 하나는 치환된 아실이다. 일부 실시태양에서 R5 및 R5* 중 어느 하나는 C(=O)NJ1J2이다. 모든 키랄 중심에 대해서 비대칭 기가 R 또는 S 배향으로 발견될 수 있다. 상기와 같은 5' 변형 바이사이클릭 뉴클레오타이드는 WO 2007/134181에 개시되어 있으며, 이는 내용 전체가 본 발명에 참고로 인용된다.
일부 실시태양에서 B는 핵염기이며, 핵염기 유사체 및 천연 핵염기, 예를 들어 퓨린 또는 피리미딘, 또는 치환된 퓨린 또는 치환된 피리미딘, 예를 들어 본 명세서에 지칭된 핵염기, 예를 들어 아데닌, 시토신, 티민, 아데닌, 유라실 및/또는 변형되거나 치환된 핵염기, 예를 들어 5-티아졸로-유라실, 2-티오-유라실, 5-프로피닐-유라실, 2'-티오-티민, 5-메틸 시토신, 5-티오졸로-시토신, 5-프로피닐-시토신, 및 2,6-다이아미노퓨린으로 이루어진 군으로부터 선택된 핵염기를 포함한다.
일부 실시태양에서, R4* 및 R2*는 함께 -C(RaRb)-O-, -C(RaRb)-C(RcRd)-O-, -C(RaRb)-C(RcRd)-C(ReRf)-O-, -C(RaRb)-O-C(RcRd)-, -C(RaRb)-O-C(RcRd)-O-, -C(RaRb)-C(RcRd)-, -C(RaRb)-C(RcRd)-C(ReRf)-, -C(Ra)=C(Rb)-C(RcRd)-, -C(RaRb)-N(Rc)-, -C(RaRb)-C(RcRd)- N(Re)-, -C(RaRb)-N(Rc)-O-, -C(RaRb)-S- 및 -C(RaRb)-C(RcRd)-S- 중에서 선택된 바이라디칼을 표시하고, 이때 Ra, Rb, Rc, Rd, Re 및 Rf는 각각 독립적으로 수소, 임의로 치환된 C1-12-알킬, 임의로 치환된 C2-12-알케닐, 임의로 치환된 C2-12-알키닐, 하이드록시, C1-12-알콕시, C2-12-알콕시알킬, C2-12-알케닐옥시, 카복시, C1-12-알콕시카보닐, C1-12-알킬카보닐, 폼일, 아릴, 아릴옥시-카보닐, 아릴옥시, 아릴카보닐, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시-카보닐, 헤테로아릴옥시, 헤테로아릴카보닐, 아미노, 모노- 및 다이(C1-6-알킬)아미노, 카바모일, 모노- 및 다이(C1-6-알킬)-아미노-카보닐, 아미노-C1-6-알킬-아미노카보닐, 모노- 및 다이(C1-6-알킬)아미노-C1-6-알킬-아미노카보닐, C1-6-알킬-카보닐아미노, 카브아미도, C1-6-알카노일옥시, 설포노, C1-6-알킬설포닐옥시, 나이트로, 아지도, 설파닐, C1-6-알킬티오, 할로겐, DNA 삽입제, 광화학적 활성기, 열화학적 활성기, 킬레이트기, 리포터기, 및 리간드 중에서 선택되고, 이때 아릴 및 헤테로아릴은 임의로 치환될 수 있으며, 2개의 같은 자리 치환체 Ra 및 Rb는 함께 임의로 치환된 메틸렌(=CH2)을 표시할 수 있다. 모든 키랄 중심에 대해 비대칭 기가 R 또는 S 배향으로 발견될 수 있다.
추가의 실시태양에서, R4* 및 R2*는 함께 -CH2-O-, -CH2-S-, -CH2-NH-, -CH2-N(CH3)-, -CH2-CH2-O-, -CH2-CH(CH3)-, -CH2-CH2-S-, -CH2-CH2-NH-, -CH2-CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-O-, -CH2-CH2-CH(CH3)-, -CH=CH-CH2-, -CH2-O-CH2-O-, -CH2-NH-O-, -CH2-N(CH3)-O-, -CH2-O-CH2-, -CH(CH3)-O-, 및 -CH(CH2-O-CH3)-O-, 및/또는 -CH2-CH2-, 및 -CH=CH- 중에서 선택된 바이라디칼(2가 기)을 표시한다. 모든 키랄 중심에 대해 비대칭 기가 R 또는 S 배향으로 발견될 수 있다.
추가의 실시태양에서, R4* 및 R2*는 함께 바이라디칼 C(RaRb)-N(Rc)-O-를 표시하고, 이때 Ra 및 Rb는 독립적으로 수소, 할로겐, C1-6알킬, 치환된 C1-6알킬, C2-6알케닐, 치환된 C2-6알케닐, C2-6알키닐 또는 치환된 C2-6알키닐, C1-6알콕시, 치환된 C1-6알콕시, 아실, 치환된 아실, C1-6아미노알킬 및 치환된 C1-6아미노알킬, 예를 들어 수소로 이루어진 군으로부터 선택되고; Rc는 수소, 할로겐, C1-6알킬, 치환된 C1-6알킬, C2-6알케닐, 치환된 C2-6알케닐, C2-6알키닐 또는 치환된 C2-6알키닐, C1-6알콕시, 치환된 C1-6알콕시, 아실, 치환된 아실, C1-6아미노알킬 및 치환된 C1-6아미노알킬, 예를 들어 수소로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시태양에서, R4* 및 R2*는 함께 바이라디칼 C(RaRb)-O-C(RcRd)-O-를 표시하고, 이때 Ra, Rb, Rc 및 Rd는 독립적으로 수소, 할로겐, C1-6알킬, 치환된 C1-6알킬, C2-6알케닐, 치환된 C2-6알케닐, C2-6알키닐 또는 치환된 C2-6알키닐, C1-6알콕시, 치환된 C1-6알콕시, 아실, 치환된 아실, C1-6아미노알킬 및 치환된 C1-6아미노알킬, 예를 들어 수소로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시태양에서, R4* 및 R2*는 바이라디칼 -CH(Z)-O-를 형성하고, 이때 Z는 C1-6알킬, C2-6알케닐, C2-6알키닐, 치환된 C1-6알킬, 치환된 C2-6알케닐, 치환된 C2-6알키닐, 아실, 치환된 아실, 치환된 아미드, 티올 및 치환된 티오로 이루어진 군으로부터 선택되고; 상기 치환된 기는 각각 독립적으로 할로겐, 옥소, 하이드록실, OJ1, NJ1J2, SJ1, N3, OC(=X)J1, OC(=X)NJ1J2, NJ3C(=X)NJ1J2 및 CN 중에서 독립적으로 선택된 임의로 보호된 치환기로 일 또는 다중 치환되고, 이때 각각의 J1, J2 및 J3은 독립적으로 H 또는 C1-6알킬이고, X는 O, S 또는 NJ1이다. 일부 실시태양에서 Z는 C1-6알킬 또는 치환된 C1-6알킬이다. 일부 실시태양에서 Z는 메틸이다. 일부 실시태양에서 Z는 치환된 C1-6알킬이다. 일부 실시태양에서 상기 치환기는 C1-6알콕시이다. 일부 실시태양에서 Z는 CH3OCH2-이다. 모든 키랄 중심에 대해서 비대칭 기가 R 또는 S 배향으로 발견될 수 있다. 상기와 같은 바이사이클릭 뉴클레오타이드는 미국특허 제 7,399,845 호에 개시되어 있으며, 상기 특허는 내용 전체가 본 발명에 참고로 인용된다. 일부 실시태양에서 R1*, R2, R3, R5, R5*는 수소이다. 일부 실시태양에서 R1*, R2, R3*는 수소이고 R5 및 R5* 중 하나 또는 둘 다는 상기 및 WO 2007/134181에 언급된 바와 같이 수소 이외의 것일 수 있다.
일부 실시태양에서 R4* 및 R2*는 함께 바이라디칼 -CH2-N(Rc)-로 이루어지거나 상기로 구성된 바와 같은 가교 중에 치환된 아미노기를 포함하는 바이라디칼을 표시하며, 이때 Rc는 C1-12알킬옥시이다. 일부 실시태양에서 R4* 및 R2*는 함께 바이라디칼 -Cq3q4-NOR-을 표시하고, 이때 q3 및 q4는 독립적으로 수소, 할로겐, C1-6알킬, 치환된 C1-6알킬, C2-6알케닐, 치환된 C2-6알케닐, C2-6알키닐 또는 치환된 C2-6알키닐, C1-6알콕시, 치환된 C1-6알콕시, 아실, 치환된 아실, C1-6아미노알킬 및 치환된 C1-6아미노알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고; 각각의 치환된 기는 독립적으로 할로겐, OJ1, SJ1, NJ1J2, COOJ1, CN, O-C(=O)NJ1J2, N(H)C(=NH)NJ1J2 및 N(H)C(=X=N(H)J2 중에서 독립적으로 선택된 치환기로 일 또는 다중 치환되고; 이때 X는 O 또는 S이고; 각각의 J1 및 J2는 독립적으로 H, C1-6알킬, C2-6알케닐, C2-6알키닐, C1-6아미노알킬 또는 보호기이다. 모든 키랄 중심에 대해서 비대칭 기가 R 또는 S 배향으로 발견될 수 있다. 상기와 같은 바이사이클릭 뉴클레오타이드는 WO 2008/150729에 개시되어 있으며 상기는 내용 전체가 본 발명에 참고로 인용된다. 일부 실시태양에서, R1*, R2, R3, R5, R5*는 독립적으로 수소, 할로겐, C1-6알킬, 치환된 C1-6알킬, C2-6알케닐, 치환된 C2-6알케닐, C2-6알키닐 또는 치환된 C2-6알키닐, C1-6알콕시, 치환된 C1-6알콕시, 아실, 치환된 아실, C1-6아미노알킬 및 치환된 C1-6아미노알킬로 이루어진 군 중에서 선택된다. 일부 실시태양에서 R1*, R2, R3, R5, R5*는 수소이다. 일부 실시태양에서, R1*, R2, R3은 수소이고 R5 및 R5* 중 하나 또는 둘 다는 상기 및 WO 2007/134181에 언급된 바와 같이 수소 이외의 것일 수 있다. 일부 실시태양에서 R4* 및 R2*는 함께 바이라디칼(2가 기) C(RaRb)-O-를 표시하고, 이때 Ra 및 Rb는 각각 독립적으로 할로겐, C1-C12알킬, 치환된 C1-C12알킬, C2-C12알케닐, 치환된 C2-C12알케닐, C2-C12알키닐, 치환된 C2-C12알키닐, C1-C12알콕시, 치환된 C1-C12알콕시, OJ1, SJ1, SOJ1, SO2J1, NJ1J2, N3, CN, C(=O)OJ1, C(=O)NJ1J2, C(=O)J1, O-C(=O)NJ1J2, N(H)C(=NH)NJ1J2, N(H)C(=O)NJ1J2 또는 N(H)C(=S)NJ1J2이거나; Ra 및 Rb는 함께 =C(q3)(q4)이고; q3 및 q4는 각각 독립적으로 H, 할로겐, C1-C12알킬 또는 치환된 C1-C12알킬이고; 각각의 치환된 기는 독립적으로 할로겐, C1-6알킬, 치환된 C1-6알킬, C2-6알케닐, 치환된 C2-6알케닐, C2-6알키닐, 치환된 C2-6알키닐, OJ1, SJ1, NJ1J2, N3, CN, C(=O)OJ1, C(=O)NJ1J2, C(=O)J1, O-C(=O)NJ1J2, N(H)C(=O)NJ1J2 및 N(H)C(=S)NJ1J2 중에서 독립적으로 선택된 치환기로 일 또는 다중 치환되고; 각각의 J1 및 J2는 독립적으로 H, C1-6알킬, 치환된 C1-6알킬, C2-6알케닐, 치환된 C2-6알케닐, C2-6알키닐, 치환된 C2-6알키닐, C1-6아미노알킬, 치환된 C1-6아미노알킬 또는 보호기이다. 상기와 같은 화합물은 WO 2009/006478A에 개시되어 있으며, 상기는 내용 전체가 본 발명에 참고로 인용된다.
일부 실시태양에서, R4* 및 R2*는 바이라디칼 -Q-를 형성하고, 이때 Q는 C(q1)(q2)C(q3)(q4), C(q1)=C(q3), C[=C(q1)(q2)]-C(q3)(q4) 또는 C(q1)(q2)-C[=C(q3)(q4)]이고; q1, q2, q3, q4는 각각 독립적으로 H, 할로겐, C1-12알킬, 치환된 C1-12알킬, C2-12알케닐, 치환된 C1-12알콕시, OJ1, SJ1, SOJ1, SO2J1, NJ1J2, N3, CN, C(=O)OJ1, C(=O)-NJ1J2, C(=O)J1, -C(=O)NJ1J2, N(H)C(=NH)NJ1J2, N(H)C(=O)NJ1J2 또는 N(H)C(=S)NJ1J2이고; 각각의 J1 및 J2는 독립적으로 H, C1-6알킬, C2-6알케닐, C2-6알키닐, C1-6아미노알킬 또는 보호기이고; 임의로 Q가 C(q1)(q2)(q3)(q4)이고 q3 및 q4 중 하나가 CH3일 때 상기 q3 및 q4 중 다른 하나 및 q1 및 q2 중 하나 중 하나 이상은 H 이외의 것이다. 일부 실시태양에서, R1*, R2, R3, R5, R5*는 수소이다. 모든 키랄 중심에 대해서 비대칭 기가 R 또는 S 배향으로 발견될 수 있다. 상기와 같은 바이사이클릭 뉴클레오타이드는 WO 2008/154401에 개시되어 있으며, 상기는 내용 전체가 본 발명에 참고로 인용된다. 일부 실시태양에서 R1*, R2, R3, R5, R5*는 독립적으로 수소, 할로겐, C1-6알킬, 치환된 C1-6알킬, C2-6알케닐, 치환된 C2-6알케닐, C2-6알키닐 또는 치환된 C2-6알키닐, C1-6알콕시, 치환된 C1-6알콕시, 아실, 치환된 아실, C1-6아미노알킬 및 치환된 C1-6아미노알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시태양에서, R1*, R2, R3, R5, R5*는 수소이다. 일부 실시태양에서, R1*, R2, R3은 수소이고 R5 및 R5* 중 하나 또는 둘 다는 상기 및 WO 2007/134181 또는 WO 2009/067647(알파-L-바이사이클릭 핵산 유사체)에 언급된 바와 같이 수소 이외의 것일 수 있다.
추가의 바이사이클릭 뉴클레오사이드 유사체 및 안티센스 올리고뉴클레오타이드에서의 그의 용도는 WO 2011/115818, WO 2011/085102, WO 2011/017521, WO 09/100320, WO 10/036698, WO 09/124295 및 WO 09/006478에 개시되어 있다. 상기와 같은 뉴클레오사이드 유사체는 일부 태양에서 본 발명의 화합물에 유용할 수 있다.
일부 실시태양에서 본 발명의 올리고뉴클레오타이드 화합물에 사용된 LNA는 바람직하게는 하기 화학식 II의 구조를 갖는다:
[화학식 II]
Figure pat00003
상기 식에서,
Y는 -O-, -CH2O-, -S-, -NH-, N(Re) 및/또는 -CH2-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Z 및 Z*는 독립적으로 뉴클레오타이드간 결합, RH, 말단기 및 보호기 중에서 선택되고;
B는 천연 또는 비-천연 뉴클레오타이드 염기 부분(핵염기)을 구성하고, RH는 수소 및 C1-4-알킬 중에서 선택되고;
Ra, Rb, Rc, Rd 및 Re는 임의로 독립적으로 수소, 임의로 치환된 C1-12-알킬, 임의로 치환된 C2-12-알케닐, 임의로 치환된 C2-12-알키닐, 하이드록시, C1-12-알콕시, C2-12-알콕시알킬, C2-12-알케닐옥시, 카복시, C1-12-알콕시카보닐, C1-12-알킬카보닐, 폼일, 아릴, 아릴옥시-카보닐, 아릴옥시, 아릴카보닐, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시-카보닐, 헤테로아릴옥시, 헤테로아릴카보닐, 아미노, 모노- 및 다이(C1-6-알킬)아미노, 카바모일, 모노- 및 다이(C1-6-알킬)-아미노-카보닐, 아미노-C1-6-알킬-아미노카보닐, 모노- 및 다이(C1-6-알킬)아미노-C1-6-알킬-아미노카보닐, C1-6-알킬-카보닐아미노, 카브아미도, C1-6-알카노일옥시, 설포노, C1-6-알킬설포닐옥시, 나이트로, 아지도, 설파닐, C1-6-알킬티오, 할로겐, DNA 삽입제, 광화학적 활성기, 열화학적 활성기, 킬레이트기, 리포터기, 및 리간드로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이때 아릴 및 헤테로아릴은 임의로 치환될 수 있으며, 2개의 같은 자리 치환체 Ra 및 Rb는 함께 임의로 치환된 메틸렌(=CH2)을 표시할 수 있고; RH는 수소 및 C1-4-알킬 중에서 선택된다.
일부 실시태양에서, Ra, Rb, Rc, Rd 및 Re는 임의로 독립적으로 수소 및 C1-6알킬, 예를 들어 메틸로 이루어진 군으로부터 선택된다. 모든 키랄 중심에 대해 비대칭 기가 R 또는 S 배향으로 발견될 수 있으며, 예를 들어 2개의 예시적인 입체화학 이성질체는 베타-D 및 알파-L 동형을 포함하고, 이들을 하기와 같이 예시할 수 있다:
Figure pat00004
구체적인 예시적인 LNA 단위를 하기에 나타낸다:
Figure pat00005
"티오-LNA"란 용어는 상기 화학식에서 Y가 S 및 -CH2-S- 중에서 선택되는 잠금 뉴클레오타이드를 포함한다. 티오-LNA는 베타-D 및 알파-L-배열 모두로 존재할 수 있다.
"아미노-LNA"란 용어는 상기 화학식에서 Y가 -N(H)-, N(R)-, CH2-N(H)- 및 -CH2-N(R)-(이때 R은 수소 및 C1-4-알킬 중에서 선택된다) 중에서 선택되는 잠금 뉴클레오타이드를 포함한다. 아미노-LNA는 베타-D 및 알파-L-배열 모두로 존재할 수 있다.
"옥시-LNA"란 용어는 상기 화학식에서 Y가 -O-를 나타내는 잠금 뉴클레오타이드를 포함한다. 옥시-LNA는 베타-D 및 알파-L-배열 모두로 존재할 수 있다.
"ENA"란 용어는 상기 화학식에서 Y가 -CH2-O-(이때 -CH2-O의 산소 원자는 염기 B에 대해 2'-위치에 부착된다)인 잠금 뉴클레오타이드를 포함한다. Re는 수소 또는 메틸이다.
일부 예시적인 실시태양에서 LNA는 베타-D-옥시-LNA, 알파-L-옥시-LNA, 베타-D-아미노-LNA 및 베타-D-티오-LNA, 특히 베타-D-옥시-LNA 중에서 선택된다.
LNA-변형된 안티센스 올리고뉴클레오타이드들을 함께 사용할 수 있다. 예를 들어 동일한 유전자의 상이한 영역에 대한 다수의 상이한 LNA 변형 올리고뉴클레오타이드들의 칵테일을 동시에 또는 별도로 투여할 수 있다.
헤드머
"헤드머"는 영역 X' 및 상기 영역에 연속적인 영역 Y'를 포함하는 올리고머로서 정의되며, 이때 영역 Y'의 가장 5'-단위가 영역 X'의 가장 3'-단위에 결합된다. 영역 X'는 비-RNase 모집 뉴클레오사이드 유사체의 연속적인 신장부를 포함하고 영역 Y'는 RNase에 의해 인식가능하고 절단가능한 DNA 단위 또는 뉴클레오사이드 유사체 단위의 연속적인 신장부(예를 들어 적어도 7개의 연속적인 단위)를 포함한다.
테일머
"테일머"는 영역 X" 및 상기 영역에 연속적인 영역 Y"를 포함하는 올리고머로서 정의되며, 이때 영역 Y"의 가장 5'-단위가 영역 X"의 가장 3'-단위에 결합된다. 영역 X"는 RNase에 의해 인식가능하고 절단가능한 DNA 단위 또는 뉴클레오사이드 유사체 단위의 연속적인 신장부(예를 들어 적어도 7개의 연속적인 단위)를 포함하고, 영역 X"는 비-RNase 모집 뉴클레오사이드 유사체의 연속적인 신장부를 포함한다.
키메릭 올리고머/믹스머
"믹스머"라 칭하는 "키메릭" 올리고머는 (i) RNase에 의해 인식가능하고 절단가능한 DNA 단위 또는 뉴클레오사이드 유사체 단위, 및 (ii) 비-RNase 모집 뉴클레오사이드 유사체 단위의 교번 조성으로 이루어진다.
광화학적 활성기
본 내용과 관련하여, "광화학적 활성기"란 용어는 빛의 조사시 화학 반응을 겪을 수 있는 화합물을 지칭한다. 본 명세서에서 작용기의 예시적인 예는 퀴논, 특히 6-메틸-1,4-나프토퀴논, 안트라퀴논, 나프토퀴논, 및 1,4-다이메틸-안트라퀴논, 다이아지린, 방향족 아지드, 벤조페논, 소랄렌, 다이아조 화합물, 및 다이아지리노 화합물이다.
기본으로 하는
본 명세서에 사용되는 바와 같은, "기본으로 하는"이란 용어는 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머가 코어 모티프 또는 서열의 뉴클레오타이드의 적어도 80%, 바람직하게는 적어도 85%, 바람직하게는 적어도 90%, 바람직하게는 적어도 95%, 바람직하게는 전부를 차지함을 의미하며, 임의로 상기 뉴클레오타이드 중 하나 이상은 변형 뉴클레오타이드일 수 있다.
따라서, 몇몇 실시태양의 경우, "기본으로 하는"이란 용어는 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머가 코어 모티프 또는 서열의 뉴클레오타이드의 전부를 차지함을 의미하며, 임의로 상기 뉴클레오타이드 중 하나 이상은 변형 뉴클레오타이드일 수 있다.
몇몇 실시태양의 경우, "기본으로 하는"이란 용어는 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머가 코어 모티프 또는 서열의 뉴클레오타이드의 전부를 차지함을 의미하며, 상기 뉴클레오타이드 중 하나 이상은 변형 뉴클레오타이드이다.
몇몇 실시태양의 경우, "기본으로 하는"이란 용어는 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머가 코어 모티프 또는 서열의 뉴클레오타이드의 적어도 80%, 바람직하게는 적어도 85%, 바람직하게는 적어도 90%, 바람직하게는 적어도 95%, 바람직하게는 전부를 차지함을 의미하며, 상기 뉴클레오타이드 중 하나 이상은 변형 뉴클레오타이드일 수 있고; 상기 올리고머는 모티프 X-Y-Z의 갭머이며, 이때 X 및 Z는 각각 독립적으로 하나 이상의 변형 뉴클레오타이드를 포함하는 날개이고 Y는 뉴클레오타이드의 중심 영역이다.
따라서, 몇몇 실시태양의 경우, "기본으로 하는"이란 용어는 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머가 코어 모티프 또는 서열의 뉴클레오타이드의 전부를 차지함을 의미하며, 상기 뉴클레오타이드 중 하나 이상은 변형 뉴클레오타이드일 수 있고; 상기 올리고머는 모티프 X-Y-Z의 갭머이며, 이때 X 및 Z는 각각 독립적으로 하나 이상의 변형 뉴클레오타이드를 포함하는 날개이고 Y는 뉴클레오타이드의 중심 영역이다.
안정성
듀플렉스 또는 트라이플렉스 형성과 관련하여 "안정성"이란 용어는 일반적으로 안티센스 올리고뉴클레오타이드가 그의 의도된 표적 서열에 얼마나 단단히 결합하는지를 표시하며; 보다 특히, "안정성"은 생리학적 조건하에서 상기 듀플렉스 또는 트라이플렉스 형성의 자유 에너지를 표시한다. 표준 세트의 조건하에서, 예를 들어 하기에 개시하는 바와 같은 조건하에서 융점은 듀플렉스 및/또는 트라이플렉스 안정성의 편리한 척도이다. 바람직하게, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA 및 10 mM 포스페이트 완충제 수용액, pH 7.0에서 1.5 μM의 안티센스 올리고뉴클레오타이드 및 표적 핵산 모두의 가닥 농도로 측정시 적어도 45℃의 융점을 갖도록 선택된다. 따라서, 생리학적 조건하에서 사용시 듀플렉스 또는 트라이플렉스 형성은 상기 안티센스 올리고뉴클레오타이드 및 그의 표적이 해리되는 상태에 비해 실질적으로 유리할 것이다. 일부 실시태양에서 안정한 듀플렉스 또는 트라이플렉스는 염기쌍간의 및/또는 트라이플렉스의 경우 염기 트리플릿간의 미스매치를 포함할 수 있다. 바람직하게, 본 발명의 LNA 변형 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 그의 표적 핵산과 완벽하게 매치된 듀플렉스 및/또는 트라이플렉스를 형성한다.
효능 있는 억제제
일부 실시태양에서 상기 올리고머 또는 올리고머 접합체는 특히 HBx 또는 HBsAg의 효능 있는 억제제이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "효능 있는 억제제"란 어구는 리포펙타민 형질감염 분석에 의해 측정 시 5 nM 미만의 IC50을 갖는 올리고머를 지칭한다. 일부 실시태양에서, 상기 IC50은 4 nM 미만, 예를 들어 2 nM 미만이다.
"짐노시스(gymnosis)"(이때 짐노시스는 형질감염제의 사용 없이 상기 올리고머를 배양된 세포로 전달함을 묘사한다)에 의해 측정된 바와 같은 "효능 있는 억제제"는 짐노시스 분석에서 또는 생체내 AAV/HBV 마우스 모델에서 5 ㎛ 미만의 IC50을 지칭한다. 일부 실시태양에서, 상기 IC50은 2 ㎛ 미만, 예를 들어 1 ㎛ 미만이다.
치료하다/치료
"치료하다"/"치료" 등의 용어는 완치, 경감, 예방 또는 검출 중 하나 이상을 포함한다. 몇몇 바람직한 실시태양에서, "치료하다"/"치료" 등의 용어는 완치 또는 경감을 의미한다. "경감하다"란 용어는 바이러스성 질환의 특성이 있거나 상기 질환과 관련된 증상 및/또는 상태를 경감시킴을 포함한다.
따라서, 일부 태양에서, 본 발명은 바이러스성 질환의 치유, 경감, 예방 또는 검출에 적합한 올리고머 또는 올리고머 접합체, 및 그의 용도 및 그의 사용 방법에 관한 것이다.
따라서, 몇몇 태양에서, 본 발명은 바이러스성 질환의 치유 또는 경감에 적합한 올리고머 또는 올리고머 접합체, 및 그의 용도 및 그의 사용 방법에 관한 것이다.
일부 실시태양에서, 본 명세서에 사용되는 바와 같은 "치료"란 용어는 기존 질병(예를 들어 본 명세서에 언급되는 바와 같은 질병 또는 질환)의 치료, 또는 질병의 방지, 즉 예방 모두를 지칭한다. 따라서, 본 명세서에서 지칭되는 바와 같은 치료는 일부 실시태양에서 예방학적일 수 있음을 알 것이다.
피실험자에서 질병 또는 상태를 "치료하는" 또는 질병 또는 상태를 갖는 피실험자를 "치료하는"은 상기 질병 또는 상태의 하나 이상의 증상이 감소되거나 안정화되도록 상기 개인에게 약학적 치료, 예를 들어 약물의 투여를 가함을 지칭한다.
치료가 필요한 환자는 상기 질병 또는 질환을 앓고 있거나 앓을 것 같은 환자이다.
피실험자에서 질병 또는 상태를 "예방학적으로 치료하는"은 상기 질병의 하나 이상의 증상의 출현 전에 상기 질병 또는 상태가 나타날(즉 발병할) 위험성을 감소시키거나 제거하거나 상기 질병 또는 상태의 중증도를 감소시킴을 의미한다.
작용제
"작용제"란 용어는 임의의 화합물, 예를 들어 항체, 또는 치료제, 검출 가능한 표지(예를 들어 마커, 추적자 또는 영상화 화합물)를 의미한다.
치료제
"치료제"란 용어는 생물학적 활성을 갖는 임의의 화합물을 의미한다. 치료제는 상태 또는 질병의 치료에 유용할 수 있다. 본 발명에 따른 구체적인 치료제는 올리고머일 수 있다. 구체적인 치료제는 본 발명에 따른 올리고머 또는 올리고머 접합체일 수 있다.
상기 올리고머를 간으로 전달함
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "상기 올리고머를 간으로 전달함"이란 용어는 올리고머를 간의 세포 또는 조직과 접촉시키거나 가깝게 놓는 과정에 관한 것이다. 이는 상기 올리고머를 상기 간내 또는 상기 간 주변의 혈액 공급에 전달함을 포함한다. 상기 올리고머를 신체의 진입 부위로부터 상기 간 또는 상기 간 주변 조직으로 전달하거나 운반할 수 있다.
상기 올리고머를 간세포로 전달함
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "상기 올리고머를 간세포로 전달함"이란 용어는 올리고머를 간의 간세포와 접촉시키거나 가깝게 놓는 과정에 관한 것이다. 이는 상기 올리고머를 상기 간세포내 또는 상기 간세포 주변의 혈액 공급에 전달함을 포함한다. 상기 올리고머를 신체의 진입 부위로부터 상기 간세포로 전달하거나 운반할 수 있다.
바이러스성 질환
본 발명과 관련하여 "바이러스성 질환"이란 용어는 바이러스 감염과 관련된 임의의 질환 또는 질병을 지칭한다.
약학적 담체/약학적으로 허용가능한 담체
"약학적 담체" 또는 "약학적으로 허용가능한 담체"는 상술한 바와 같은 본 발명의 "담체 성분"과 구분되어야 한다. "약학적 담체" 및 "담체 성분"은 본 발명과 관련하여 상호 배타적인 용어로서 다루어져야 한다.
투여하는/투여
"투여하는" 및 "투여"란 용어는 비제한적으로 동맥내, 비내, 복강내, 정맥내, 근육내, 피하, 경피 등의 전달 방식을 의미하고자 한다. 1일 투여량을 기간 전체를 통해 1, 2회 또는 그 이상으로 투여되는 적합한 형태의 1, 2회 또는 그 이상 용량으로 분할할 수 있다.
발명의 상세한 설명
도입
본 발명은 올리고머(또한 올리고머성 분자라 지칭된다) 및/또는 올리고머 접합체에 관한 것이다.
상기 올리고머 및 올리고머 접합체는 바이러스성 질환의 치료에 유용하다.
특정한 실시태양에서, 본 발명의 올리고머 또는 올리고머 접합체는 HBV HBx 또는 HBsAg 중의 표적 서열을 조절할 수 있다.
본 발명의 올리고머를 담체 성분에 접합시킬 수 있다.
바람직하게, 상기 담체 성분은 상기 올리고머를 치료하려는 피실험자의 간으로 전달할 수 있다.
따라서 본 발명은 HBV HBx 또는 HBsAg를 암호화하는 핵산 분자, 예를 들어 서열번호 1 또는 서열번호 2로서 나타낸 HBV 핵산 분자, 및 HBV HBx 또는 HBV HBsAg를 암호화하는 상기와 같은 핵산 분자의 천연 변이체의 기능을 조절하는데 사용하기 위한 올리고머 또는 올리고머 접합체를 사용한다.
올리고머 특징
상기 올리고머 또는 올리고머 접합체의 올리고머는 8 내지 50, 8 내지 30, 8 내지 25, 8 내지 20, 8 내지 18, 8 내지 17, 8 내지 16, 8 내지 15, 8 내지 14, 8 내지 13, 또는 8 내지 12 뉴클레오타이드 길이, 바람직하게는 8 내지 16 뉴클레오타이드 길이, 보다 바람직하게는 10 내지 20 뉴클레오타이드 길이의 연속적인 뉴클레오타이드 서열로 이루어지거나 상기 서열을 포함할 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 올리고머 또는 올리고머 접합체의 올리고머는 10 내지 50, 예를 들어 10 내지 30, 10 내지 20, 10 내지 18, 10 내지 17, 10 내지 16, 10 내지 15, 10 내지 14, 10 내지 13, 또는 10 내지 12 뉴클레오타이드 길이, 바람직하게는 10 내지 20 뉴클레오타이드 길이, 보다 바람직하게는 10 내지 18 뉴클레오타이드 길이, 가장 바람직하게는 10 내지 16 뉴클레오타이드 길이의 연속적인 뉴클레오타이드 서열로 이루어지거나 상기 서열을 포함할 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 올리고머 또는 올리고머 접합체의 올리고머는 12 내지 50, 예를 들어 12 내지 30, 12 내지 20, 12 내지 18, 12 내지 17, 12 내지 16, 12 내지 15, 12 내지 14, 또는 12 또는 13 뉴클레오타이드 길이, 바람직하게는 12 내지 16 뉴클레오타이드 길이의 연속적인 뉴클레오타이드 서열로 이루어지거나 상기 서열을 포함할 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 올리고머 또는 올리고머 접합체의 올리고머는 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20 뉴클레오타이드 길이의 연속적인 뉴클레오타이드 서열로 이루어지거나 상기 서열을 포함할 수 있다.
일부 실시태양에서, 본 발명의 올리고머 또는 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 총 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30의 연속적인 뉴클레오타이드 길이의 연속적인 뉴클레오타이드 서열로 이루어지거나 상기 서열을 포함할 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 올리고머 또는 올리고머 접합체의 올리고머는 총 8 내지 22, 예를 들어 8 내지 20, 예를 들어 8 내지 18, 예를 들어 8 내지 17 또는 8 내지 16의 연속적인 뉴클레오타이드 길이의 연속적인 뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 상기 서열로 이루어진다.
일부 실시태양에서, 상기 올리고머 또는 올리고머 접합체의 올리고머는 총 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16의 연속적인 뉴클레오타이드 길이의 연속적인 뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 상기 서열로 이루어진다.
일부 실시태양에서, 상기 올리고머 또는 올리고머 접합체의 올리고머는 총 15 또는 16의 연속적인 뉴클레오타이드 길이의 연속적인 뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 상기 서열로 이루어진다.
일부 실시태양에서, 본 발명에 따른 올리고머 또는 올리고머 접합체의 올리고머는 22 뉴클레오타이드 이하, 예를 들어 20 뉴클레오타이드 이하, 예를 들어 18 뉴클레오타이드 이하, 예를 들어 15, 16 또는 17 뉴클레오타이드로 이루어진다.
일부 실시태양에서, 바람직하게 본 발명의 올리고머 또는 올리고머 접합체의 올리고머는 20 뉴클레오타이드 미만을 포함한다.
올리고머, 또는 연속적인 뉴클레오타이드 서열 길이에 대해 일련의 범위가 주어질 때, 상기 범위는 상기 범위 중에 제공된 하한 및 상한 길이를 포함함은 물론이다. 예를 들어 10 내지 30(또는 그 사이)은 10과 30을 포함한다.
상기 올리고뉴클레오타이드 부분의 길이는 다수의 참고문헌들, 예를 들어 로젠버그(Rosenberg) 등의 국제특허출원 PCT/US92/05305; 또는 문헌[Szostak et al., Meth. Enzymol, 68:419-429(1979)]에 설명된 바와 같이, 목적하는 표적 폴리뉴클레오타이드에서만 특이적인 결합이 발생하고 다른 예기치 않은 부위에서는 발생하지 않을 만큼 충분히 크다. 상기 길이의 상부 범위는 다수의 인자들, 예를 들어 약 30 내지 40 뉴클레오타이드 길이 초과의 올리고머의 합성 및 정제에 대한 불편함 및 비용, 보다 짧은 올리고뉴클레오타이드보다 긴 올리고뉴클레오타이드의 보다 큰 미스매치 허용도, 결합 또는 특이성을 증대시키기 위한 변형의 존재 여부, 듀플렉스 또는 트라이플렉스 결합의 필요 여부 등에 의해 결정된다.
상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머는 천연 뉴클레오타이드, 바람직하게는 2'-데옥시뉴클레오타이드(이때 일반적으로 "DNA"라 지칭된다), 또한 가능하게는 리보뉴클레오타이드(이때 일반적으로 "RNA"라 지칭된다), 또는 상기와 같은 천연 뉴클레오타이드와 하나 이상의 비-천연 뉴클레오타이드, 즉 뉴클레오타이드 유사체의 조합의 단순 서열을 포함하거나 상기 서열로 이루어질 수 있다. 상기와 같은 뉴클레오타이드 유사체는 표적 서열에 대한 상기 올리고머의 친화성을 적합하게 증대시킬 수 있다.
적합하고 바람직한 뉴클레오타이드 유사체의 예는 WO 2007/031091에 의해 제공되거나 상기 중에 참고로 인용되어 있다.
뉴클레오타이드 유사체의 예는 변형된 뉴클레오타이드를 포함한다. 상기와 같은 변형의 예는 2'-치환기를 제공하거나 결합 친화성을 증대시키고 또한 증가된 뉴클레아제 내성을 제공할 수 있는 가교된(잠금 핵산) 구조를 생성시키도록 당 부분을 변형시킴을 포함한다. 따라서 이러한 변형 뉴클레오타이드 유사체는 친화성-증대 뉴클레오타이드 유사체일 수 있다.
상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머에 친화성-증대 뉴클레오타이드 유사체, 예를 들어 LNA 또는 2'-치환된 당의 통합은 상기 특이적으로 결합하는 올리고머의 크기를 감소시킬 수 있으며, 또한 비-특이적 또는 이상 결합이 발생하기 전에 상기 올리고머의 크기에 대한 상한을 감소시킬 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머는 하나 이상의 뉴클레오타이드 유사체를 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머는 적어도 2개의 뉴클레오타이드 유사체를 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머는 2 내지 8개의 뉴클레오타이드 유사체, 예를 들어 6 또는 7개의 뉴클레오타이드 유사체를 포함한다. 훨씬 가장 바람직한 실시태양에서, 상기 뉴클레오타이드 유사체 중 하나 이상은 잠금 핵산(LNA)이며; 예를 들어 상기 뉴클레오타이드 유사체의 적어도 2, 3 또는 적어도 4, 또는 적어도 5, 또는 적어도 6, 또는 적어도 7, 또는 8개는 LNA일 수 있다. 일부 실시태양에서 상기 뉴클레오타이드 유사체는 모두 LNA일 수 있다.
오직 뉴클레오타이드만으로 이루어진 바람직한 뉴클레오타이드 서열 모티프 또는 뉴클레오타이드 서열을 언급할 때, 상기 서열에 의해 한정되는 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머는 상기 서열 중에 존재하는 뉴클레오타이드 중 하나 이상 대신에 상응하는 뉴클레오타이드 유사체, 예를 들어 LNA 단위 또는 상기 올리고머/표적 듀플렉스의 듀플렉스 안정성/Tm을 상승시키는 다른 뉴클레오타이드 유사체(즉 친화성 증대 뉴클레오타이드 유사체)를 포함할 수도 있다.
바람직한 뉴클레오타이드 유사체는 LNA, 예를 들어 옥시-LNA(예를 들어 베타-D-옥시-LNA, 및 알파-L-옥시-LNA), 및/또는 아미노-LNA(예를 들어 베타-D-아미노-LNA 및 알파-L-아미노-LNA) 및/또는 티오-LNA(예를 들어 베타-D-티오-LNA 및 알파-L-티오-LNA) 및/또는 ENA(예를 들어 베타-D-ENA 및 알파-L-ENA)이다. 베타-D-옥시-LNA가 가장 바람직하다.
일부 실시태양에서, 본 발명의 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머내에(예를 들어 본 발명에서 언급된 바와 같이 갭머에 대한 영역 W 및 영역 Y 중에) 존재하는 뉴클레오타이드 유사체는 독립적으로 예를 들어 2'-O-알킬-RNA 단위, 2'-아미노-DNA 단위, 2'-플루오로-DNA 단위, LNA 단위, 아라비노 핵산(ANA) 단위, 2'-플루오로-ANA 단위, HNA 단위, INA(삽입 핵산 - 문헌[Christensen, 2002. Nucl. Acids. Res. 2002 30:4918-4925](본 발명에 참고로 인용된다)) 단위 및 2'-MOE 단위 중에서 선택된다. 일부 실시태양에서 본 발명의 올리고머 중에 존재하는 상기 유형의 뉴클레오타이드 또는 그의 연속적인 뉴클레오타이드 서열 중 단지 하나만이 존재한다.
일부 실시태양에서, 상기 뉴클레오타이드 유사체는 2'-O-메톡시에틸-RNA(2'-MOE), 2'-플루오로-DNA 단위 또는 LNA 뉴클레오타이드 유사체이며, 이와 같이 본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 이들 3가지 유형의 유사체 중에서 독립적으로 선택된 뉴클레오타이드 유사체를 포함하거나, 상기 3가지 유형 중에서 선택된 단지 한가지 유형의 유사체만을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서 상기 뉴클레오타이드 유사체 중 하나 이상은 2'-MOE-RNA, 예를 들어 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 2'-MOE-RNA 뉴클레오타이드 단위이다. 일부 실시태양에서 상기 뉴클레오타이드 유사체 중 하나 이상은 2'-플루오로 DNA, 예를 들어 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 2'-플루오로-DNA 뉴클레오타이드 단위이다.
일부 실시태양에서, 본 발명에 따른 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머는 하나 이상의 잠금 핵산(LNA) 단위, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 LNA 단위, 예를 들어 3 내지 7 또는 4 내지 8개의 LNA 단위, 또는 3, 4, 5, 6 또는 7개의 LNA 단위를 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 뉴클레오타이드 유사체는 모두 LNA이다.
일부 실시태양에서, 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머는 베타-D-옥시-LNA, 및 하기의 LNA 단위, 즉 티오-LNA, 아미노-LNA, 옥시-LNA 및/또는 ENA 중 하나 이상을 모두 베타-D 또는 알파-L-배열 또는 이들의 조합으로 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서 모든 LNA 시토신 단위는 5'메틸-시토신이다.
본 발명의 일부 실시태양에서, 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머는 LNA 및 DNA 단위를 모두 포함할 수 있다. 바람직하게 LNA 및 DNA 단위를 합한 총수는 10 내지 25, 예를 들어 10 내지 24, 바람직하게는 10 내지 20, 예를 들어 10 내지 18, 훨씬 더 바람직하게는 12 내지 16이다. 본 발명의 일부 실시태양에서, 상기 올리고머의 뉴클레오타이드 서열, 예를 들어 연속적인 뉴클레오타이드 서열은 하나 이상의 LNA로 이루어지고 나머지 뉴클레오타이드 단위는 DNA 단위이다.
일부 실시태양에서 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머는 단지 LNA 뉴클레오타이드 유사체 및 천연 뉴클레오타이드(예를 들어 RNA 또는 DNA, 가장 바람직하게는 DNA 뉴클레오타이드)를 임의로 변형 뉴클레오타이드간 결합, 예를 들어 포스포로티오에이트와 함께 포함한다.
일부 실시태양에서, 상기 올리고머의 뉴클레오타이드 서열과 표적 서열간의 임의의 미스매치는 바람직하게는 친화성 증대 뉴클레오타이드 유사체 밖의 영역에서 발견된다. 갭머 중의 친화성 증대 뉴클레오타이드 유사체 밖의 상기와 같은 영역의 예는 본 명세서에서 지칭되는 바와 같은 영역 X 및/또는 본 명세서에서 지칭되는 바와 같은 영역 V 및/또는 본 명세서에서 지칭되는 바와 같은 영역 Z, 및/또는 상기 올리고뉴클레오타이드 중의 변형되지 않은 뉴클레오타이드의 부위 및/또는 상기 연속적인 뉴클레오타이드 서열에 대해 5' 또는 3'인 영역을 포함한다.
일부 실시태양에서, 본 발명의 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머는 RNA(단위)를 포함하지 않는다. 본 발명에 따른 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머는 선형 분자이거나 선형 분자로서 합성되는 것이 바람직하다. 바람직하게, 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머는 단일 가닥 분자이며, 바람직하게는 예를 들어 적어도 3, 4 또는 5개의 연속적인 뉴클레오타이드(동일한 올리고머 내에서 동등한 영역들에 상보성이다)(즉 듀플렉스)의 짧은 영역들을 포함하지 않는다. 이에 관하여, 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머는 (필수적으로) 이중 가닥이 아니다. 일부 실시태양에서, 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머는 필수적으로 단일 가닥이다. 다양한 실시태양에서, 본 발명의 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머는 전적으로 상기 연속적인 뉴클레오타이드 영역으로 이루어질 수 있다. 따라서, 바람직하게, 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머는 실질적으로 자기-상보성이 아니다.
따라서, 몇몇 태양에서, 본 발명은 전체적으로 적어도 5개, 예를 들어 적어도 8개 뉴클레오타이드의 연속적인 뉴클레오타이드 서열(제 1 영역)을 포함하는 5 내지 50, 예를 들어 5 내지 30, 또는 예를 들어 5 내지 20, 예를 들어 8 내지 30, 예를 들어 8 내지 20, 예를 들어 8 내지 18, 예를 들어 8 내지 16, 예를 들어 10 내지 16, 예를 들어 10 내지 15, 예를 들어 12 내지 16, 예를 들어 12 내지 15 뉴클레오타이드 길이의 올리고머 성분을 갖는 올리고머 또는 올리고머 접합체를 제공하며, 이때 상기 연속적인 뉴클레오타이드 서열(제 1 영역)은 HBV HBx 또는 HBsAg 유전자 또는 mRNA의 역 보체에 상응하는 영역, 서열번호 1, 서열번호 2 및 서열번호 3 중 어느 하나 내의 상기와 같은 임의의 서열, 또는 그의 천연 변이체에 적어도 80%(예를 들어 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%) 상동성이다. 따라서, 예를 들어 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 서열번호 1, 서열번호 2 및 서열번호 3, 바람직하게는 서열번호 1 및 서열번호 2 중 임의의 서열 내의 일부의 서열을 갖는 단일 가닥 핵산 분자에 하이브리드화한다. 상기 올리고머 또는 올리고머 성분은 서열번호 3의 200 내지 1900번 위치에 나타낸 일부 서열의 서열을 갖는 단일 가닥 핵산 분자에 하이브리드화할 수 있다. 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 서열번호 3의 1264 내지 1598번 또는 691 내지 706번 위치로서 나타낸 서열을 갖는 단일 가닥 핵산 분자에 하이브리드화할 수 있다. 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 서열번호 3 중의 1 내지 1944번, 157 내지 1840번, 1196 내지 1941번, 1376 내지 1840번 및 3158 내지 3182번 위치로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 갖는 단일 가닥 핵산 분자에 하이브리드화할 수 있다. 바람직하게, 상기 올리고머 접합체는 서열번호 3의 1530 내지 1598번 위치, 보다 바람직하게는 서열번호 3의 1577 내지 1598번 위치, 및 가장 바람직하게는 서열번호 3의 1530 내지 1543번 위치내의 선택된 서열을 갖는 단일 가닥 핵산 분자에 하이브리드화한다. 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 서열번호 3의 1264 내지 1278번; 1265 내지 1277번; 1530 내지 1543번; 1530 내지 1544번; 1531 내지 1543번; 1551 내지 1565번; 1551 내지 1566번; 1577 내지 1589번; 1577 내지 1591번; 1577 내지 1592번; 1578 내지 1590번; 1578 내지 1592번; 1583 내지 1598번; 1584 내지 1598번; 및 1585 내지 1598번; 및 670 내지 706번, 691 내지 705번; 691 내지 706번; 692 내지 706번; 693 내지 706번; 및 694 내지 706번 위치로 이루어진 군으로부터 선택된 단일 가닥 핵산 분자에 하이브리드화할 수 있다. 바람직하게, 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 서열번호 3의 1530 내지 1598번 위치; 보다 바람직하게는 서열번호 3의 1530 내지 1543번 위치 또는 1577 내지 1598번 위치내의 단일 가닥 핵산 분자에 하이브리드화할 수 있다.
몇몇 실시태양의 경우, 본 발명은 바이러스성 질환을 치료하기 위해 HBV의 HBx 또는 HBsAg 중의 표적 서열을 조절할 수 있는 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택된 코어 모티프를 기본으로 하는 올리고머 또는 상기 올리고머를 갖는 올리고머 접합체를 제공한다:
GCGTAAAGAGAGG (서열번호 13);
GCGTAAAGAGAGGT (서열번호 11);
AGCGAAGTGCACACG (서열번호 20);
AGGTGAAGCGAAGTG (서열번호 26);
AGCGAAGTGCACACGG (서열번호 18);
CGAACCACTGAACA (서열번호 7);
GAACCACTGAACAAA (서열번호 4);
CGAACCACTGAACAAA (서열번호 5);
CGAACCACTGAACAA (서열번호 6);
CGAACCACTGAAC (서열번호 8);
CCGCAGTATGGATCG (서열번호 9);
CGCAGTATGGATC (서열번호 10);
CGCGTAAAGAGAGGT (서열번호 12);
AGAAGGCACAGACGG (서열번호 14);
GAGAAGGCACAGACGG (서열번호 15);
GAAGTGCACACGG (서열번호 16);
GCGAAGTGCACACGG (서열번호 17);
CGAAGTGCACACG (서열번호 19);
AGGTGAAGCGAAGT (서열번호 27); 및
TAGTAAACTGAGCCA (서열번호 834).
상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 기본으로 할 수 있으며:
GCGtaaagagaGG (서열번호 303);
GCGtaaagagaGGT (서열번호 301);
GCGtaaagagAGG (서열번호 618);
AGCgaagtgcacACG (서열번호 310);
AGgtgaagcgaAGTG (서열번호 668);
AGCgaagtgcacaCGG (서열번호 308);
CGAaccactgaACA (서열번호 297);
CGCagtatggaTC (서열번호 300);
AGGtgaagcgaagTGC (서열번호 315);
AGGtgaagcgaaGTG (서열번호 316);
GAAccactgaacAAA (서열번호 294);
CGAaccactgaacAAA (서열번호 295);
CGAaccactgaaCAA(서열번호 296);
CGAaccactgaAC (서열번호 298);
CCGcagtatggaTCG (서열번호 299);
CGCgtaaagagaGGT (서열번호 302);
AGAaggcacagaCGG (서열번호 304);
GAGaaggcacagaCGG (서열번호 305);
GAAgtgcacacGG (서열번호 306);
GCGaagtgcacaCGG (서열번호 307);
CGAagtgcacaCG (서열번호 309);
GAAccactgaaCAAA (서열번호 585);
CGAAccactgaacAAA (서열번호 588);
GAAgtgcacaCGG (서열번호 628);
TAGtaaactgagCCA (서열번호 678);
CGAaccactgAAC (서열번호 600);
AGGtgaagcgaAGT (서열번호 317); 및
CGAaccactgAACA (서열번호 597),
이때, 대문자는 LNA 단위를 나타내고, 소문자는 DNA 단위를 나타낸다.
몇몇 실시태양에서, 상기 올리고머, 또는 추가적인 올리고머, 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머 성분, 또는 상기 추가적인 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 하기의 목록 중에서 선택된 서열을 기본으로 하는 서열을 포함할 수 있다:
GCGTAAAGAGAGG (서열번호 13);
GCGTAAAGAGAGGT (서열번호 11);
CGCGTAAAGAGAGGT (서열번호 12);
AGAAGGCACAGACGG (서열번호 14);
GAGAAGGCACAGACGG (서열번호 15);
AGCGAAGTGCACACGG (서열번호 18);
GAAGTGCACACGG (서열번호 16);
GCGAAGTGCACACGG (서열번호 17);
AGCGAAGTGCACACG (서열번호 20);
CGAAGTGCACACG (서열번호 19);
AGGTGAAGCGAAGTG (서열번호 26); 및
AGGTGAAGCGAAGT (서열번호 27).
또 다른 실시태양에서, 상기 모티프 서열은 하기 중에서 선택된다:
GCGTAAAGAGAGG (서열번호 13);
GCGTAAAGAGAGGT (서열번호 11);
AGCGAAGTGCACACG (서열번호 20);
AGGTGAAGCGAAGTG (서열번호 26); 및
AGCGAAGTGCACACGG (서열번호 18).
또 다른 실시태양에서 상기 모티프 서열은 GCGTAAAGAGAGG (서열번호 13) GCGTAAAGAGAGGT (서열번호 11) 및 CGCGTAAAGAGAGGT (서열번호 12) 중에서 선택된다.
또 다른 실시태양에서 상기 모티프 서열은 AGCGAAGTGCACACG (서열번호 20); AGGTGAAGCGAAGTG (서열번호 26); AGCGAAGTGCACACGG (서열번호 18); GAAGTGCACACGG (서열번호 16); GCGAAGTGCACACGG (서열번호 17); CGAAGTGCACACG (서열번호 19) 및 AGGTGAAGCGAAGT (서열번호 27) 중에서 선택된다.
또 다른 실시태양에서 상기 모티프 서열은 CGAACCACTGAACA (서열번호 7); GAACCACTGAACAAA (서열번호 4); CGAACCACTGAACAAA (서열번호 5); CGAACCACTGAACAA (서열번호 6); CGAACCACTGAAC (서열번호 8); 및 TAGTAAACTGAGCCA (서열번호 834) 중에서 선택된다.
또 다른 실시태양에서 상기 모티프 서열은 CCGCAGTATGGATCG (서열번호 9); 및 CGCAGTATGGATC (서열번호 10) 중에서 선택된다.
또 다른 실시태양에서 상기 모티프 서열은 AGAAGGCACAGACGG (서열번호 14) 및 GAGAAGGCACAGACGG (서열번호 15) 중에서 선택된다.
몇몇 실시태양에서, 상기 올리고머, 또는 추가적인 올리고머, 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머 성분, 또는 상기 추가적인 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 하기에 제공된 군으로부터 선택된 서열을 포함하거나 상기 서열로 이루어질 수 있으며:
GCGtaaagagaGG (서열번호 303);
GCGtaaagagaGGT (서열번호 301);
GCGtaaagagAGG (서열번호 618);
AGCgaagtgcacACG (서열번호 310);
AGgtgaagcgaAGTG (서열번호 668);
AGCgaagtgcacaCGG (서열번호 308);
CGAaccactgaACA (서열번호 297);
CGCagtatggaTC (서열번호 300);
AGGtgaagcgaagTGC (서열번호 315);
AGGtgaagcgaaGTG (서열번호 316);
GAAccactgaacAAA (서열번호 294);
CGAaccactgaacAAA (서열번호 295);
CGAaccactgaaCAA(서열번호 296);
CGAaccactgaAC (서열번호 298);
CCGcagtatggaTCG (서열번호 299);
CGCgtaaagagaGGT (서열번호 302);
AGAaggcacagaCGG (서열번호 304);
GAGaaggcacagaCGG (서열번호 305);
GAAgtgcacacGG (서열번호 306);
GCGaagtgcacaCGG (서열번호 307);
CGAagtgcacaCG (서열번호 309);
GAAccactgaaCAAA (서열번호 585);
CGAAccactgaacAAA (서열번호 588);
GAAgtgcacaCGG (서열번호 628);
TAGtaaactgagCCA (서열번호 678);
CGAaccactgAAC (서열번호 600);
AGGtgaagcgaAGT (서열번호 317); 및
CGAaccactgAACA (서열번호 597),
이때, 대문자는 친화성 증대 뉴클레오타이드 유사체를 나타내고, 소문자는 DNA 단위를 나타낸다.
또 다른 실시태양에서 상기 서열은 하기 중에서 선택된다:
GCGtaaagagaGG (서열번호 303);
GCGtaaagagaGGT (서열번호 301);
GCGtaaagagAGG (서열번호 618);
CGCgtaaagagaGGT (서열번호 302);
AGAaggcacagaCGG (서열번호 304);
GAGaaggcacagaCGG (서열번호 305);
GAAgtgcacacGG (서열번호 306);
GCGaagtgcacaCGG (서열번호 307);
GAAgtgcacaCGG (서열번호 628);
AGCgaagtgcacaCGG (서열번호 308);
CGAagtgcacaCG (서열번호 309);
AGCgaagtgcacACG (서열번호 310);
AGGtgaagcgaagTGC (서열번호 315);
AGGtgaagcgaaGTG (서열번호 316);
AGGtgaagcgaAGT (서열번호 317); 및
AGgtgaagcgaAGTG (서열번호 668).
하나의 실시태양에서 상기 서열은 하기 중에서 선택된다:
GCGtaaagagaGG (서열번호 303);
GCGtaaagagaGGT (서열번호 301);
GCGtaaagagAGG (서열번호 618);
AGCgaagtgcacACG (서열번호 310);
AGgtgaagcgaAGTG (서열번호 668); 및
AGCgaagtgcacaCGG (서열번호 308).
하나의 실시태양에서 상기 서열은 GCGtaaagagaGG (서열번호 303); GCGtaaagagaGGT (서열번호 301); GCGtaaagagAGG (서열번호 618); 및 CGCgtaaagagaGGT (서열번호 302) 중에서 선택된다.
또 다른 실시태양에서 상기 서열은 AGCgaagtgcacACG (서열번호 310); AGGtgaagcgaagTGC (서열번호 315); AGGtgaagcgaaGTG (서열번호 316); GAAgtgcacaCGG (서열번호 628); AGgtgaagcgaAGTG (서열번호 668); AGCgaagtgcacaCGG (서열번호 308); GAAgtgcacacGG (서열번호 306); GCGaagtgcacaCGG (서열번호 307); CGAagtgcacaCG (서열번호 309); 및 AGGtgaagcgaAGT (서열번호 317) 중에서 선택된다.
또 다른 실시태양에서 상기 서열은 CGAaccactgaACA (서열번호 297); GAAccactgaacAAA (서열번호 294); CGAaccactgaacAAA (서열번호 295); CGAaccactgaaCAA (서열번호 296); CGAaccactgaAC (서열번호 298); CGAaccactgAACA (서열번호 597) 및 TAGtaaactgagCCA (서열번호 678) 중에서 선택된다.
또 다른 실시태양에서 상기 서열은 CCGcagtatggaTCG (서열번호 299) 및 CGCagtatggaTC (서열번호 300) 중에서 선택된다.
또 다른 실시태양에서 상기 서열은 AGAaggcacagaCGG (서열번호 304) 및 GAGaaggcacagaCGG (서열번호 305) 중에서 선택된다.
상기 올리고머 접합체는 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 기본으로 할 수 있다:
Figure pat00006
이때, 대문자는 베타-D-옥시-LNA 단위를 나타내고; 소문자는 DNA 단위를 나타내고; 아래첨자 "s"는 포스포로티오에이트 결합을 나타내고; 위첨자 m은 5-메틸시토신 염기를 함유하는 DNA 또는 베타-D-옥시-LNA 단위를 나타내고; GN2-C6은 C6 링커를 갖는 GalNAc2 담체 성분을 나타낸다.
또 다른 실시태양에서 상기 올리고머 접합체는 하기 중에서 선택된다:
Figure pat00007
또 다른 실시태양에서 상기 올리고머 접합체는 하기 중에서 선택된다:
Figure pat00008
또 다른 실시태양에서 상기 올리고머 접합체는 하기 중에서 선택된다:
Figure pat00009
또 다른 실시태양에서 상기 올리고머 접합체는 하기 중에서 선택된다:
Figure pat00010
또 다른 실시태양에서 상기 올리고머 접합체는 하기 중에서 선택된다:
Figure pat00011
또 다른 실시태양에서 상기 올리고머 접합체는 하기 중에서 선택된다:
Figure pat00012
또 다른 실시태양에서 상기 올리고머 접합체는 하기 중에서 선택된다:
Figure pat00013
일부 실시태양에서 본 발명에 따른 올리고머 또는 올리고머 접합체는 서열 모티프 GCGTAAAGAGAGG (서열번호 13), 또는 그의 하위-서열로 이루어지거나 상기 서열을 포함하거나 상기 서열을 기본으로 한다.
일부 실시태양에서 본 발명에 따른 올리고머 또는 올리고머 접합체는 서열 모티프 AGCGAAGTGCACACG (서열번호 20), 또는 그의 하위-서열로 이루어지거나 상기 서열을 포함하거나 상기 서열을 기본으로 한다.
일부 실시태양에서 본 발명에 따른 올리고머 또는 올리고머 접합체는 서열 모티프 GCGTAAAGAGAGGT (서열번호 11), 또는 그의 하위-서열로 이루어지거나 상기 서열을 포함하거나 상기 서열을 기본으로 한다.
일부 실시태양에서 본 발명에 따른 올리고머 또는 올리고머 접합체는 서열 모티프 AGGTGAAGCGAAGTG (서열번호 26), 또는 그의 하위-서열로 이루어지거나 상기 서열을 포함하거나 상기 서열을 기본으로 한다.
일부 실시태양에서 본 발명에 따른 올리고머 또는 올리고머 접합체는 서열 모티프 AGCGAAGTGCACACGG (서열번호 18), 또는 그의 하위-서열로 이루어지거나 상기 서열을 포함하거나 상기 서열을 기본으로 한다.
일부 실시태양에서 본 발명에 따른 올리고머 또는 올리고머 접합체는 서열 모티프 CGAACCACTGAACA (서열번호 7), 또는 그의 하위-서열로 이루어지거나 상기 서열을 포함하거나 상기 서열을 기본으로 한다.
일부 실시태양에서 본 발명에 따른 올리고머 또는 올리고머 접합체는 서열 모티프 CCGCAGTATGGATCG (서열번호 9) 또는 그의 하위-서열로 이루어지거나 상기 서열을 포함하거나 상기 서열을 기본으로 한다.
일부 실시태양에서 본 발명에 따른 올리고머 또는 올리고머 접합체는 GCGtaaagagaGG (서열번호 303)로 이루어지거나 상기 서열을 포함하거나 상기 서열을 기본으로 한다.
일부 실시태양에서 본 발명에 따른 올리고머 또는 올리고머 접합체는 GCGtaaagagaGGT (서열번호 301)로 이루어지거나 상기 서열을 포함하거나 상기 서열을 기본으로 한다.
일부 실시태양에서 본 발명에 따른 올리고머 또는 올리고머 접합체는 GCGtaaagagAGG (서열번호 618)로 이루어지거나 상기 서열을 포함하거나 상기 서열을 기본으로 한다.
일부 실시태양에서 본 발명에 따른 올리고머 또는 올리고머 접합체는 AGCgaagtgcacACG (서열번호 310)로 이루어지거나 상기 서열을 포함하거나 상기 서열을 기본으로 한다.
일부 실시태양에서 본 발명에 따른 올리고머 또는 올리고머 접합체는 AGgtgaagcgaAGTG (서열번호 668)로 이루어지거나 상기 서열을 포함하거나 상기 서열을 기본으로 한다.
일부 실시태양에서 본 발명에 따른 올리고머 또는 올리고머 접합체는 AGCgaagtgcacaCGG (서열번호 308)로 이루어지거나 상기 서열을 포함하거나 상기 서열을 기본으로 한다.
일부 실시태양에서 본 발명에 따른 올리고머 또는 올리고머 접합체는 CGAaccactgaACA (서열번호 297)로 이루어지거나 상기 서열을 포함하거나 상기 서열을 기본으로 한다.
일부 실시태양에서 본 발명에 따른 올리고머 또는 올리고머 접합체는 CCGcagtatggaTCG (서열번호 299)로 이루어지거나 상기 서열을 포함하거나 상기 서열을 기본으로 한다.
일부 실시태양에서 본 발명에 따른 올리고머 접합체는 5'-GN2-C6 caG s m C s G s tsasasasgsasgsas G s G-3' (서열번호 815)로 이루어지거나 상기를 포함한다.
일부 실시태양에서 본 발명에 따른 올리고머 접합체는 5'-GN2-C6 caG s m C s G s tsasasasgsasgsas G s G s T-3' (서열번호 814)로 이루어지거나 상기를 포함한다.
일부 실시태양에서 본 발명에 따른 올리고머 접합체는 5'-GN2-C6 caG s m C s G stsasasasgsasgs A s G s G-3' (서열번호 825)로 이루어지거나 상기를 포함한다.
일부 실시태양에서 본 발명에 따른 올리고머 접합체는 5'-GN2-C6 caA s G s m C s gsasasgstsgscsascs A s m C s G-3' (서열번호 808)로 이루어지거나 상기를 포함한다.
일부 실시태양에서 본 발명에 따른 올리고머 접합체는 5'-GN2-C6 caA s G sgstsgsasasgs mcsgsas A s G s T s G-3' (서열번호 826)로 이루어지거나 상기를 포함한다.
일부 실시태양에서 본 발명에 따른 올리고머 접합체는 5'-GN2-C6 caA s G s m C s gsasasgstsgscsascsas m C s G s G-3' (서열번호 807)로 이루어지거나 상기를 포함한다.
일부 실시태양에서 본 발명에 따른 올리고머 접합체는 5'-GN2-C6 ca m C s G s A s ascscsascstsgsas A s m C s A-3' (서열번호 811)로 이루어지거나 상기를 포함한다.
일부 실시태양에서 본 발명에 따른 올리고머 접합체는 5'-GN2-C6 ca m C s m C s G s csasgstsastsgsgsas T s m C s G-3' (서열번호 802)로 이루어지거나 상기를 포함한다.
갭머
바람직하게, 본 발명의 올리고머 또는 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 갭머(때때로 갭머 올리고머라 칭한다)이다. 바람직하게, 상기 올리고머 영역은 날개에 의해 양쪽의 측면에 인접한 2'-데옥시리보뉴클레오타이드 갭 영역을 포함하며, 이때 각각의 날개는 독립적으로 하나 이상의 LNA 단위를 포함한다.
전형적으로, 본 발명의 갭머 올리고머 또는 본 발명의 올리고머 접합체의 갭머 올리고머 성분을 하기의 식들 중 어느 하나로 나타낼 수 있다:
W - X - Y;
V - W - X - Y;
W - X - Y - Z;
V - W - X - Y - Z;
상기 식에서,
W는 하나 이상의 친화성 증대 뉴클레오타이드 유사체의 영역(영역 W)을 나타내고;
X는 RNAse를 모집할 수 있는 뉴클레오타이드의 신장부를 포함하는 영역(영역 X)을 나타내고;
Y는 하나 이상의 친화성 증대 뉴클레오타이드 유사체의 영역(영역 Y)을 나타내고;
V는 하나 이상의 뉴클레오타이드 단위의 영역(영역 V)을 나타내고;
Z는 하나 이상의 뉴클레오타이드 단위의 영역(영역 Z)을 나타낸다.
영역 V, W, X, Y 및 Z 중 어느 하나는 추가적인 뉴클레오타이드 또는 친화성 증대 뉴클레오타이드 유사체를 함유할 수 있다.
따라서, 전형적으로, 갭머 올리고머는 RNAse, 예를 들어 RNAseH를 모집할 수 있는 뉴클레오타이드의 연속적인 신장부, 예를 들어 영역 X인 적어도 6 또는 7개의 DNA 뉴클레오타이드의 영역을 포함하는 올리고머이며; 이때 영역 X는 RNAse를 모집할 수 있는 뉴클레오타이드의 연속적인 신장부에 대해 5' 및 3'인 친화성 증대 뉴클레오타이드 유사체, 예를 들어 1 내지 6개의 뉴클레오타이드 유사체의 영역에 의해 5' 및 3' 모두에 측면인접하며, 이들 영역은 각각 영역 W 및 영역 Y이다.
일부 실시태양에서, RNAse를 모집할 수 있는 단위는 DNA 단위, 알파-L-LNA 단위, C4' 알킬화된 DNA 단위(PCT/EP2009/050349 및 문헌[Vester et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 18(2008) 2296-2300](본 발명에 참고로 인용된다)을 참조하시오), 및 UNA(결합되지 않은 핵산) 뉴클레오타이드(본 발명에 참고로 인용된 문헌[Fluiter et al., Mol. Biosyst., 2009, 10, 1039]을 참조하시오)로 이루어진 군으로부터 선택된다. UNA는 열린 핵산이며, 전형적으로 이때 리보스의 C2 - C3 C-C 결합이 제거되어 열린 "당" 잔기를 형성한다. 바람직하게, 상기 갭머는 식 (5'에서 3') W-X-Y, 또는 임의로 W-X-Y-Z 또는 V-W-X-Y의 (폴리)뉴클레오타이드 서열을 포함하며, 이때 영역 W(W)(5' 영역)는 하나 이상의 뉴클레오타이드 유사체, 예를 들어 하나 이상의 LNA 단위, 예를 들어 1 내지 6개의 뉴클레오타이드 유사체, 예를 들어 LNA 단위로 이루어지거나 상기를 포함하며; 영역 X(X)는 RNAse를 모집할 수 있는 적어도 5개의 연속적인 뉴클레오타이드(상보성 RNA 분자, 예를 들어 mRNA 표적과 듀플렉스로 형성될 때), 예를 들어 DNA 뉴클레오타이드로 이루어지거나 상기를 포함하고; 영역 Y(Y)(3' 영역)는 하나 이상의 뉴클레오타이드 유사체, 예를 들어 하나 이상의 LNA 단위, 예를 들어 1 내지 6개의 뉴클레오타이드 유사체, 예를 들어 LNA 단위로 이루어지거나 상기를 포함하고; 영역 V(V) 및/또는 영역 Z(Z)(존재하는 경우)는 1, 2 또는 3개의 뉴클레오타이드 단위, 예를 들어 DNA 뉴클레오타이드로 이루어지거나 상기를 포함한다.
일부 실시태양에서, 영역 W는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6 뉴클레오타이드 유사체, 예를 들어 LNA 단위, 예를 들어 2 내지 5 뉴클레오타이드 유사체, 예를 들어 2 내지 5 LNA 단위, 예를 들어 3 또는 4 뉴클레오타이드 유사체, 예를 들어 2, 3 또는 4 LNA 단위로 이루어진다.
일부 실시태양에서, 영역 Y는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6 뉴클레오타이드 유사체, 예를 들어 LNA 단위, 예를 들어 2 내지 5 뉴클레오타이드 유사체, 예를 들어 2 내지 5 LNA 단위, 예를 들어 2, 3 또는 4 뉴클레오타이드 유사체, 예를 들어 3 또는 4 LNA 단위로 이루어진다.
일부 실시태양에서, 영역 X는 RNAse를 모집할 수 있는 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12의 연속적인 뉴클레오타이드, 또는 RNAse를 모집할 수 있는 6 내지 10, 또는 7 내지 9, 예를 들어 8의 연속적인 뉴클레오타이드로 이루어지거나 상기를 포함한다.
일부 실시태양에서 영역 X는 하나 이상의 DNA 뉴클레오타이드 단위, 예를 들어 1 내지 12 DNA 단위, 바람직하게 4 내지 12 DNA 단위, 보다 바람직하게 6 내지 10 DNA 단위, 예를 들어 7 내지 10 DNA 단위, 가장 바람직하게 8, 9 또는 10 DNA 단위로 이루어지거나 상기를 포함한다.
일부 실시태양에서, 영역 W는 2, 3 또는 4 뉴클레오타이드 유사체, 예를 들어 LNA로 이루어지고, 영역 X는 7, 8, 9 또는 10 DNA 단위로 이루어지고, 영역 Y는 2, 3 또는 4 뉴클레오타이드 유사체, 예를 들어 LNA로 이루어진다. 상기와 같은 설계는 (W-X-Y) 3-10-3, 3-10-4, 4-10-3, 3-9-3, 3-9-4, 4-9-3, 3-8-3, 3-8-4, 4-8-3, 3-7-3, 3-7-4, 4-7-3, 3-10-2, 3-9-2, 3-8-2, 3-7-2, 4-10-2, 4-9-2, 4-8-2, 4-7-2를 포함하고; 1, 2 또는 3 뉴클레오타이드 단위, 예를 들어 DNA 단위를 가질 수 있는 영역 V 및/또는 1, 2 또는 3 뉴클레오타이드 단위, 예를 들어 DNA 단위를 가질 수 있는 영역 Z를 추가로 포함할 수 있다.
추가의 갭머 설계는 본 발명에 참고로 인용된 WO 2004/046160에 개시되어 있다. WO 2008/113832(본 발명에 참고로 인용된 미국 가출원 제 60/977,409 호를 우선권 주장한다)는 "쇼트머" 갭머 올리고머를 언급한다. 일부 실시태양에서, 본 명세서에 제공된 올리고머는 상기와 같은 쇼트머 갭머일 수 있다.
일부 실시태양에서 상기 올리고머는 총 10, 11, 12, 13 또는 14 뉴클레오타이드 단위의 연속적인 뉴클레오타이드 서열로 이루어지며, 이때 상기 연속적인 뉴클레오타이드 서열은 식 (5'-3'), W-X-Y, 또는 임의로 W-X-Y-Z 또는 V-W-X-Y를 가지며, 이때 W는 1, 2 또는 3 뉴클레오타이드 유사체 단위, 예를 들어 LNA 단위로 이루어지고; X는 상보성 RNA 분자(예를 들어 mRNA 표적)와 듀플렉스로 형성될 때 RNAse를 모집할 수 있는 7, 8 또는 9 연속적인 뉴클레오타이드 단위로 이루어지고; Y는 1, 2 또는 3 뉴클레오타이드 유사체 단위, 예를 들어 LNA 단위로 이루어진다. 존재하는 경우, V는 1 또는 2 DNA 단위로 이루어진다. 존재하는 경우, Z는 1 또는 2 DNA 단위로 이루어진다.
일부 실시태양에서 W는 1 LNA 단위로 이루어진다. 일부 실시태양에서 W는 2 LNA 단위로 이루어진다. 일부 실시태양에서 W는 3 LNA 단위로 이루어진다.
일부 실시태양에서 Y는 1 LNA 단위로 이루어진다. 일부 실시태양에서 Y는 2 LNA 단위로 이루어진다. 일부 실시태양에서 Y는 3 LNA 단위로 이루어진다.
일부 실시태양에서 X는 7 뉴클레오타이드 단위로 이루어진다. 일부 실시태양에서 X는 8 뉴클레오타이드 단위로 이루어진다. 일부 실시태양에서 X는 9 뉴클레오타이드 단위로 이루어진다. 몇몇 실시태양에서 영역 X는 10 뉴클레오타이드 단위로 이루어진다. 몇몇 실시태양에서, 영역 X는 1 내지 10 DNA 단위를 포함한다. 일부 실시태양에서 X는 1 내지 9 DNA 단위, 예를 들어 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9 DNA 단위를 포함한다. 일부 실시태양에서 X는 DNA 단위들로 이루어진다. 일부 실시태양에서 X는 알파-L 배열로 존재하는 하나 이상의 LNA 단위, 예를 들어 알파-L-배열의 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9 LNA 단위를 포함한다. 일부 실시태양에서 X는 하나 이상의 알파-L-옥시 LNA 단위를 포함하거나, 알파-L-배열의 모든 LNA 단위는 알파-L-옥시 LNA 단위이다.
일부 실시태양에서 W-X-Y 중에 존재하는 뉴클레오타이드의 수는 1-8-1, 1-8-2, 2-8-1, 2-8-2, 3-8-3, 2-8-3, 3-8-2, 4-8-1, 4-8-2, 1-8-4, 2-8-4, 또는 1-9-1, 1-9-2, 2-9-1, 2-9-2, 2-9-3, 3-9-2, 1-9-3, 3-9-1, 4-9-1, 1-9-4, 또는 1-10-1, 1-10-2, 2-10-1, 2-10-2, 1-10-3, 3-10-1, 3-10-2, 2-10-3, 3-10-3으로 이루어진 군(뉴클레오타이드 유사체 단위 - 영역 X - 뉴클레오타이드 유사체 단위)으로부터 선택된다.
일부 실시태양에서, W-X-Y 중의 뉴클레오타이드의 수는 2-7-1, 1-7-2, 2-7-2, 3-7-3, 2-7-3, 3-7-2, 3-7-4, 및 4-7-3으로 이루어진 군으로부터 선택되고; 일부 실시태양에서 바람직한 모티프는 3-10-3, 3-9-3, 3-8-3, 3-8-2이다.
몇몇 실시태양에서, 영역 W 및 Y는 각각 2 또는 3 LNA 단위로 이루어지고, 영역 X는 8 또는 9 또는 10 뉴클레오타이드 단위, 바람직하게는 DNA 단위로 이루어진다.
일부 실시태양에서, 영역 W 및 Y는 각각 2 또는 3 LNA 단위로 이루어지고, X는 8 또는 9 뉴클레오타이드 단위, 바람직하게는 DNA 단위로 이루어진다.
다양한 실시태양에서, 다른 갭머 설계는 영역 W 및/또는 Y가 3, 4, 5 또는 6 뉴클레오사이드 유사체, 예를 들어 2'-O-메톡시에틸-리보스 당(2'-MOE)을 함유하는 단위 또는 2'-플루오로-데옥시리보스 당을 함유하는 단위로 이루어지고, 영역 X는 8, 9, 10, 11 또는 12 뉴클레오사이드, 예를 들어 DNA 단위로 이루어지며, 이때 영역 W-X-Y는 3-9-3, 3-10-3, 5-10-5 또는 4-12-4 단위를 갖는 것들을 포함한다.
추가의 갭머 설계가 본 발명에 참고로 인용된 WO 2007/146511A2에 개시되어 있다.
따라서, 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 상기 서열의 5' 단부에 적어도 1, 적어도 2 또는 적어도 3개의 변형 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 예를 들어 상기 변형 뉴클레오타이드의 하나 이상, 바람직하게는 전부가 LNA 단위일 수 있다.
상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 상기 서열의 3' 단부에 적어도 1, 적어도 2 또는 적어도 3개의 변형 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 예를 들어 상기 변형 뉴클레오타이드의 하나 이상, 바람직하게는 전부가 LNA 단위일 수 있다.
상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 본 명세서에 개시된 서열의 5' 및/또는 3' 단부에 적어도 1, 적어도 2 또는 적어도 3개의 변형 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 예를 들어 상기 변형 뉴클레오타이드의 하나 이상, 바람직하게는 전부가 LNA 단위일 수 있다.
몇몇 실시태양의 경우, 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 본 명세서에 개시된 서열의 5' 및/또는 3' 단부에 적어도 2 또는 적어도 3개의 변형 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 예를 들어 상기 뉴클레오타이드의 2개 이상, 바람직하게는 전부가 LNA 단위일 수 있다.
몇몇 실시태양의 경우, 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 본 명세서에 개시된 서열의 5' 및/또는 3' 단부에 적어도 3개의 변형 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 예를 들어 상기 변형 뉴클레오타이드의 3개 이상, 바람직하게는 전부가 LNA 단위일 수 있다.
몇몇 실시태양의 경우, 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 본 명세서에 개시된 서열의 5' 및/또는 3' 단부에 3개의 변형 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 예를 들어 상기 변형 뉴클레오타이드는 LNA 단위일 수 있다.
몇몇 실시태양의 경우, 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 본 명세서에 개시된 서열의 5' 및 3' 단부에 3개의 변형 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 예를 들어 상기 변형 뉴클레오타이드의 하나 이상, 바람직하게는 전부가 LNA 단위일 수 있다.
일부 실시태양의 경우, 상기 올리고머는 추가적인 CA 다이뉴클레오타이드 모티프를 포함할 수 있다.
몇몇 태양에서, 바람직하게, 상기 올리고머는 GAGGCATAGCAGCAGG (서열번호 102)가 아니다.
본 발명의 몇몇 실시태양의 경우, 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 모티프 2-8-2, 3-8-3, 2-8-3, 3-8-2, 2-9-2, 3-9-3, 2-9-3, 3-9-2, 2-10-2, 3-10-3, 3-10-2, 2-10-3 중 어느 하나를 포함하며, 이때 첫 번째 숫자는 LNA 날개 영역 중의 LNA 단위의 수이고, 두 번째 숫자는 갭 영역 중의 뉴클레오타이드의 수이고, 세 번째 숫자는 LNA 날개 영역 중의 LNA 단위의 수이다.
본 발명의 몇몇 실시태양의 경우, 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 모티프 3-8-3, 3-8-2, 3-9-3, 3-9-2, 3-10-3, 3-10-2 중 어느 하나를 포함하며, 이때 첫 번째 숫자는 LNA 날개 영역 중의 LNA 단위의 수이고, 두 번째 숫자는 갭 영역 중의 뉴클레오타이드의 수이고, 세 번째 숫자는 LNA 날개 영역 중의 LNA 단위의 수이다.
몇몇 실시태양에서, 본 발명은 본 명세서에 정의된 올리고머 또는 올리고머 접합체를 제공하며, 이때 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 갭머이고, 상기 전체 서열은 HBV HBx 유전자의 부분, 예를 들어 서열번호 1의 부분, 또는 HBsAg 유전자의 부분, 예를 들어 서열번호 2의 부분, 또는 HBV HBx 또는 HBV HBsAg를 암호화하는 핵산의 표적 영역의 역 보체에 상응하는 영역에 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 일치하는 적어도 6, 바람직하게는 적어도 7, 바람직하게는 적어도 8, 바람직하게는 적어도 9, 바람직하게는 적어도 10, 바람직하게는 적어도 11, 바람직하게는 적어도 12 단위를 포함한다.
몇몇 실시태양에서, 본 발명은 본 명세서에 정의된 올리고머 또는 올리고머 접합체를 제공하며, 이때 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 갭머이고, 상기 중심 영역의 서열은 HBV HBx 유전자의 부분, 예를 들어 서열번호 1의 부분, 또는 HBsAg 유전자의 부분, 예를 들어 서열번호 2의 부분, 또는 HBV HBx 또는 HBV HBsAg를 암호화하는 핵산의 표적 영역의 역 보체에 상응하는 영역에 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 일치하는 적어도 6, 바람직하게는 적어도 7, 바람직하게는 적어도 8, 바람직하게는 적어도 9, 바람직하게는 적어도 10 단위를 포함한다.
본 발명의 몇몇 실시태양의 경우, 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 기본으로 할 수 있다:
GCGTAAAGAGAGG (서열번호 13);
GCGTAAAGAGAGGT (서열번호 11);
AGCGAAGTGCACACG (서열번호 20);
AGGTGAAGCGAAGTG (서열번호 26);
AGCGAAGTGCACACGG (서열번호 18);
CGAACCACTGAACA (서열번호 7);
GAACCACTGAACAAA (서열번호 4);
CGAACCACTGAACAAA (서열번호 5);
CGAACCACTGAACAA (서열번호 6);
CGAACCACTGAAC (서열번호 8);
CCGCAGTATGGATCG (서열번호 9);
CGCAGTATGGATC (서열번호 10);
CGCGTAAAGAGAGGT (서열번호 12);
AGAAGGCACAGACGG (서열번호 14);
GAGAAGGCACAGACGG (서열번호 15);
GAAGTGCACACGG (서열번호 16);
GCGAAGTGCACACGG (서열번호 17);
CGAAGTGCACACG (서열번호 19);
AGGTGAAGCGAAGT (서열번호 27); 및
TAGTAAACTGAGCCA (서열번호 834),
이때, 상기 3 또는 4개의 5' 말단 뉴클레오타이드 중 1, 2, 3 또는 4개는 변형 뉴클레오타이드, 예를 들어 LNA 단위이고; 상기 3 또는 4개의 3' 말단 뉴클레오타이드 중 1, 2, 3 또는 4개는 변형 뉴클레오타이드, 예를 들어 LNA 단위이다.
본 발명의 몇몇 실시태양의 경우, 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 기본으로 할 수 있다:
GCGTAAAGAGAGG (서열번호 13);
AGCGAAGTGCACACG (서열번호 20);
GCGTAAAGAGAGGT (서열번호 11);
AGGTGAAGCGAAGTG (서열번호 26);
AGCGAAGTGCACACGG (서열번호 18);
CGAACCACTGAACA (서열번호 7);
GAACCACTGAACAAA (서열번호 4);
CGAACCACTGAACAAA (서열번호 5);
CGAACCACTGAACAA (서열번호 6);
CGAACCACTGAAC (서열번호 8);
CCGCAGTATGGATCG (서열번호 9);
CGCAGTATGGATC (서열번호 10);
CGCGTAAAGAGAGGT (서열번호 12);
AGAAGGCACAGACGG (서열번호 14);
GAGAAGGCACAGACGG (서열번호 15);
GAAGTGCACACGG (서열번호 16);
GCGAAGTGCACACGG (서열번호 17);
CGAAGTGCACACG (서열번호 19);
AGGTGAAGCGAAGT (서열번호 27); 및
TAGTAAACTGAGCCA (서열번호 834),
이때, 상기 3개의 5' 말단 뉴클레오타이드 중 2 또는 3개는 변형 뉴클레오타이드, 예를 들어 LNA 단위이고;
상기 3개의 3' 말단 뉴클레오타이드 중 2 또는 3개는 변형 뉴클레오타이드, 예를 들어 LNA 단위이다.
본 발명의 몇몇 실시태양의 경우, 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 기본으로 할 수 있다:
GCGTAAAGAGAGG (서열번호 13);
GCGTAAAGAGAGGT (서열번호 11);
AGCGAAGTGCACACG (서열번호 20);
AGGTGAAGCGAAGTG (서열번호 26);
AGCGAAGTGCACACGG (서열번호 18);
CGAACCACTGAACA (서열번호 7);
GAACCACTGAACAAA (서열번호 4);
CGAACCACTGAACAAA (서열번호 5);
CGAACCACTGAACAA (서열번호 6);
CGAACCACTGAAC (서열번호 8);
CCGCAGTATGGATCG (서열번호 9);
CGCAGTATGGATC (서열번호 10);
CGCGTAAAGAGAGGT (서열번호 12);
AGAAGGCACAGACGG (서열번호 14);
GAGAAGGCACAGACGG (서열번호 15);
GAAGTGCACACGG (서열번호 16);
GCGAAGTGCACACGG (서열번호 17);
CGAAGTGCACACG (서열번호 19);
AGGTGAAGCGAAGT (서열번호 27); 및
TAGTAAACTGAGCCA (서열번호 834),
이때, 상기 3개의 5' 말단 뉴클레오타이드는 변형 뉴클레오타이드, 예를 들어 LNA 단위이고; 상기 3개의 3' 말단 뉴클레오타이드 중 2 또는 3개는 변형 뉴클레오타이드, 예를 들어 LNA 단위이다.
본 발명의 몇몇 실시태양의 경우, 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 기본으로 할 수 있다:
GCGtaaagagaGG (서열번호 303);
GCGtaaagagaGGT (서열번호 301);
GCGtaaagagAGG (서열번호 618);
AGCgaagtgcacACG (서열번호 310);
AGgtgaagcgaAGTG (서열번호 668);
AGCgaagtgcacaCGG (서열번호 308);
CGAaccactgaACA (서열번호 297);
CGCagtatggaTC (서열번호 300);
AGGtgaagcgaagTGC (서열번호 315);
AGGtgaagcgaaGTG (서열번호 316);
GAAccactgaacAAA (서열번호 294);
CGAaccactgaacAAA (서열번호 295);
CGAaccactgaaCAA(서열번호 296);
CGAaccactgaAC (서열번호 298);
CCGcagtatggaTCG (서열번호 299);
CGCgtaaagagaGGT (서열번호 302);
AGAaggcacagaCGG (서열번호 304);
GAGaaggcacagaCGG (서열번호 305);
GAAgtgcacacGG (서열번호 306);
GCGaagtgcacaCGG (서열번호 307);
CGAagtgcacaCG (서열번호 309);
GAAccactgaaCAAA (서열번호 585);
CGAAccactgaacAAA (서열번호 588);
GAAgtgcacaCGG (서열번호 628);
TAGtaaactgagCCA (서열번호 678);
CGAaccactgAAC (서열번호 600);
AGGtgaagcgaAGT (서열번호 317); 및
CGAaccactgAACA (서열번호 597),
이때, 대문자는 변형 뉴클레오타이드, 예를 들어 LNA 단위일 수 있는 뉴클레오타이드를 나타낸다.
본 발명의 몇몇 실시태양의 경우, 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 기본으로 할 수 있다:
Figure pat00014
이때, 대문자는 베타-D-옥시-LNA 단위를 나타내고; 소문자는 DNA 단위를 나타내고; 아래첨자 "s"는 포스포로티오에이트 결합을 나타내고; 위첨자 m은 5-메틸시토신 염기를 함유하는 DNA 또는 베타-D-옥시-LNA 단위를 나타내고; AM-C6은 아미노-C6 링커이고; 이때 5' 말단기 "AM-C6 ca"는 선택적이다. AM-C6은 아미노-C6 링커: 포스포다이에스터 또는 포스포르티오에이트를 통해 결합된 올리고뉴클레오타이드의 5'-단부 중의 C-아미노헥산올이다.
따라서, 본 발명의 몇몇 실시태양의 경우, 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 기본으로 할 수 있다:
GmCGtaaagagaGG (서열번호 303);
GmCGtaaagagaGGT (서열번호 301);
GmCGtaaagagAGG (서열번호 618);
AGmCgaagtgcacAmCG (서열번호 310);
AGgtgaagmcgaAGTG (서열번호 668);
AGmCgaagtgcacamCGG (서열번호 308);
mCGAaccactgaAmCA (서열번호 297);
mCGmCagtatggaTmC (서열번호 300);
AGGtgaagcgaagTGC (서열번호 315);
AGGtgaagmcgaaGTG (서열번호 316);
GAAccactgaacAAA (서열번호 294);
mCGAaccactgaacAAA (서열번호 295);
mCGAaccactgaamCAA(서열번호 296);
mCGAaccactgaAmC (서열번호 298);
mCmCGcagtatggaTmCG (서열번호 299);
mCGmCgtaaagagaGGT (서열번호 302);
AGAaggcacagamCGG (서열번호 304);
GAGaaggcacagamCGG (서열번호 305);
GAAgtgcacamcGG (서열번호 306);
GmCGaagtgcacamCGG (서열번호 307);
mCGAagtgcacamCG (서열번호 309);
GAAccactgaamCAAA (서열번호 585);
mCGAAccactgaacAAA (서열번호 588);
GAAgtgcacamCGG (서열번호 628);
TAGtaaactgagmCmCA (서열번호 678);
mCGAaccactgAAmC (서열번호 600);
AGGtgaagmcgaAGT (서열번호 317); 및
mCGAaccactgAAmCA (서열번호 597),
이때, 대문자는 베타-D-옥시-LNA 단위를 나타내고; 소문자는 DNA 단위를 나타내고; 모든 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 결합을 나타내고; 위첨자 m은 5-메틸시토신 염기를 함유하는 DNA 또는 베타-D-옥시-LNA 단위를 나타낸다.
몇몇 바람직한 태양에서, 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 모티프 3-10-3, 3-10-2, 3-9-3, 3-9-2, 3-8-3, 3-8-2 중 어느 하나를 포함하며, 이때 첫 번째 숫자는 날개 영역 중의 변형 뉴클레오타이드의 수이고, 바람직하게는 하나 이상은 LNA 단위이며, 바람직하게는 전부 LNA 단위이고, 두 번째 숫자는 갭 영역 중의 뉴클레오타이드의 수이고, 세 번째 숫자는 날개 영역 중의 변형 뉴클레오타이드의 수이며, 바람직하게는 하나 이상은 LNA 단위이고, 바람직하게는 전부 LNA 단위이다.
나타낸 바와 같이, 본 발명의 올리고머는 갭머를 포함하거나 갭머일 수 있다. 달리 나타내는 경우, 갭머 올리고머는 RNAse, 예를 들어 RNAseH를 모집할 수 있는 뉴클레오타이드의 연속적인 신장부, 예를 들어 적어도 6 또는 7 DNA 뉴클레오타이드(본 명세서에서 영역 GH(GH)로서 지칭되며, 이때 영역 GH는 RNAse를 모집할 수 있는 뉴클레오타이드의 연속적인 신장부에 대해 5' 및 3'인 친화성 증대 뉴클레오타이드 유사체, 예를 들어 1 내지 6개의 뉴클레오타이드 유사체의 영역에 의해 5' 및 3' 모두에 측면인접하고, 이들 영역은 영역 GX'(GX') 및 GZ'(GZ')로서 지칭된다)의 영역을 포함하는 올리고머이다. 영역 GX, GH 및 GZ는 각각 영역 W, X 및 Y에 상응한다.
일부 실시태양에서, RNAse를 모집할 수 있는 단위는 DNA 단위, 알파-L-LNA 단위, C4' 알킬화된 DNA 단위(PCT/EP2009/050349 및 문헌[Vester et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 18(2008) 2296-2300](본 발명에 참고로 인용된다)을 참조하시오), 및 UNA(결합되지 않은 핵산) 뉴클레오타이드(본 발명에 참고로 인용된 문헌[Fluiter et al., Mol. Biosyst., 2009, 10, 1039]을 참조하시오)로 이루어진 군으로부터 선택된다. UNA는 열린 핵산이며, 전형적으로 이때 리보스의 C2 - C3 C-C 결합이 제거되어 열린 "당" 잔기를 형성한다. 바람직하게, 상기 갭머는 식 (5'에서 3') GX'-GH-GZ'의 (폴리)뉴클레오타이드 서열을 포함하며, 이때 영역 GX'(GX')(5' 영역)는 하나 이상의 뉴클레오타이드 유사체, 예를 들어 하나 이상의 BNA(예를 들어 LNA) 단위, 예를 들어 1 내지 6개의 뉴클레오타이드 유사체, 예를 들어 BNA(예를 들어 LNA) 단위로 이루어지거나 상기를 포함하며; 영역 GH(H)는 RNAse를 모집할 수 있는 적어도 5개의 연속적인 뉴클레오타이드(상보성 RNA 분자, 예를 들어 mRNA 표적과 듀플렉스로 형성될 때), 예를 들어 DNA 뉴클레오타이드로 이루어지거나 상기를 포함하고; 영역 GZ'(GZ')(3' 영역)는 하나 이상의 뉴클레오타이드 유사체, 예를 들어 하나 이상의 BNA(예를 들어 LNA 단위), 예를 들어 1 내지 6개의 뉴클레오타이드 유사체, 예를 들어 BNA(예를 들어 LNA) 단위로 이루어지거나 상기를 포함한다.
일부 실시태양에서, 영역 GX'는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6 뉴클레오타이드 유사체, 예를 들어 BNA(예를 들어 LNA) 단위, 예를 들어 2 내지 5 뉴클레오타이드 유사체, 예를 들어 2 내지 5 LNA 단위, 예를 들어 3 또는 4 뉴클레오타이드 유사체, 예를 들어 3 또는 4 LNA 단위로 이루어지고/이루어지거나; 영역 GZ'는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6 뉴클레오타이드 유사체, 예를 들어 BNA(예를 들어 LNA) 단위, 예를 들어 2 내지 5 뉴클레오타이드 유사체, 예를 들어 2 내지 5 BNA(예를 들어 LNA 단위), 예를 들어 3 또는 4 뉴클레오타이드 유사체, 예를 들어 3 또는 4 BNA(예를 들어 LNA) 단위로 이루어진다.
일부 실시태양에서, GH는 RNAse를 모집할 수 있는 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12의 연속적인 뉴클레오타이드, 또는 RNAse를 모집할 수 있는 6 내지 10, 또는 7 내지 9, 예를 들어 8의 연속적인 뉴클레오타이드로 이루어지거나 상기를 포함한다. 일부 실시태양에서 영역 GH는 하나 이상의 DNA 뉴클레오타이드 단위, 예를 들어 1 내지 12 DNA 단위, 바람직하게 4 내지 12 DNA 단위, 보다 바람직하게 6 내지 10 DNA 단위, 예를 들어 7 내지 10 DNA 단위, 가장 바람직하게 8, 9 또는 10 DNA 단위로 이루어지거나 상기를 포함한다.
일부 실시태양에서, 영역 GX'는 3 또는 4 뉴클레오타이드 유사체, 예를 들어 BNA(예를 들어 LNA)로 이루어지고, 영역 X'는 7, 8, 9 또는 10 DNA 단위로 이루어지고, 영역 Z'는 3 또는 4 뉴클레오타이드 유사체, 예를 들어 BNA(예를 들어 LNA)로 이루어진다. 상기와 같은 설계는 (GX'-GH-GZ') 3-10-3, 3-10-4, 4-10-3, 3-9-3, 3-9-4, 4-9-3, 3-8-3, 3-8-4, 4-8-3, 3-7-3, 3-7-4, 4-7-3을 포함한다.
일부 실시태양에서 상기 올리고머, 예를 들어 영역 GX'는 총 10, 11, 12, 13 또는 14 뉴클레오타이드 단위의 연속적인 뉴클레오타이드 서열로 이루어지며, 이때 상기 연속적인 뉴클레오타이드 서열은 식 (5'-3') GX'-GH-GZ'를 포함하거나 가지며, 이때 GX'는 1, 2 또는 3 뉴클레오타이드 유사체 단위, 예를 들어 BNA(예를 들어 LNA) 단위로 이루어지고; GH는 상보성 RNA 분자(예를 들어 mRNA 표적)와 듀플렉스로 형성될 때 RNAse를 모집할 수 있는 7, 8 또는 9 연속적인 뉴클레오타이드 단위로 이루어지고; GZ'는 1, 2 또는 3 뉴클레오타이드 유사체 단위, 예를 들어 BNA(예를 들어 LNA) 단위로 이루어진다.
일부 실시태양에서 GX'는 1 BNA(예를 들어 LNA) 단위로 이루어진다. 일부 실시태양에서 GX'는 2 BNA(예를 들어 LNA) 단위로 이루어진다. 일부 실시태양에서 GX'는 3 BNA(예를 들어 LNA) 단위로 이루어진다. 일부 실시태양에서 GZ'는 1 BNA(예를 들어 LNA) 단위로 이루어진다. 일부 실시태양에서 GZ'는 2 BNA(예를 들어 LNA) 단위로 이루어진다. 일부 실시태양에서 GZ'는 3 BNA(예를 들어 LNA) 단위로 이루어진다. 일부 실시태양에서 GH는 7 뉴클레오타이드 단위로 이루어진다. 일부 실시태양에서 GH는 8 뉴클레오타이드 단위로 이루어진다. 일부 실시태양에서 GH는 9 뉴클레오타이드 단위로 이루어진다. 몇몇 실시태양에서 영역 GH는 10 뉴클레오타이드 단위로 이루어진다. 몇몇 실시태양에서, 영역 GH는 1 내지 10 DNA 단위로 이루어지거나 포함한다. 일부 실시태양에서 GH는 1 내지 9 DNA 단위, 예를 들어 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9 DNA 단위를 포함한다. 일부 실시태양에서 GH는 DNA 단위들로 이루어진다. 일부 실시태양에서 GH는 알파-L 배열로 존재하는 하나 이상의 BNA 단위, 예를 들어 알파-L-배열의 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9 LNA 단위를 포함한다. 일부 실시태양에서 GH는 하나 이상의 알파-L-옥시 BNA/LNA 단위를 포함하거나, 알파-L-배열의 모든 LNA 단위는 알파-L-옥시 LNA 단위이다. 일부 실시태양에서 GX'-GH-GZ' 중에 존재하는 뉴클레오타이드의 수는 1-8-1, 1-8-2, 2-8-1, 2-8-2, 3-8-3, 2-8-3, 3-8-2, 4-8-1, 4-8-2, 1-8-4, 2-8-4, 또는 1-9-1, 1-9-2, 2-9-1, 2-9-2, 2-9-3, 3-9-2, 1-9-3, 3-9-1, 4-9-1, 1-9-4, 또는 1-10-1, 1-10-2, 2-10-1, 2-10-2, 1-10-3, 3-10-1로 이루어진 군(뉴클레오타이드 유사체 단위 - 영역 GH - 뉴클레오타이드 유사체 단위) 중에서 선택된다. 일부 실시태양에서, GX'-GH-GZ' 중의 뉴클레오타이드의 수는 2-7-1, 1-7-2, 2-7-2, 3-7-3, 2-7-3, 3-7-2, 3-7-4, 및 4-7-3으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시태양에서, 영역 GX' 및 GH는 각각 3 BNA(예를 들어 LNA) 단위로 이루어지고, 영역 GH는 8 또는 9 또는 10 뉴클레오사이드 단위, 바람직하게는 DNA 단위로 이루어진다. 일부 실시태양에서, 영역 GX' 및 GZ'는 모두 각각 2 BNA(예를 들어 LNA) 단위로 이루어지고, GH는 8 또는 9 뉴클레오타이드 단위, 바람직하게는 DNA 단위로 이루어진다. 다양한 실시태양에서, 다른 갭머 설계는 영역 GX' 및/또는 GZ'가 3, 4, 5 또는 6 뉴클레오사이드 유사체, 예를 들어 2'-O-메톡시에틸-리보스 당(2'-MOE)을 함유하는 단위 또는 2'-플루오로-데옥시리보스 당을 함유하는 단위로 이루어지고, 영역 H는 8, 9, 10, 11 또는 12 뉴클레오사이드, 예를 들어 DNA 단위로 이루어지며, 이때 영역 GX'-GH-GZ'는 3-9-3, 3-10-3, 5-10-5 또는 4-12-4 단위를 갖는 것들을 포함한다.
BNA 및 LNA 갭머: BNA 및 LNA라는 용어는 호환가능하게 사용된다. BNA 갭머는 하나 이상의 BNA 뉴클레오타이드를 포함하는 갭머 올리고머(영역 GA)이다. LNA 갭머는 하나 이상의 LNA 뉴클레오타이드를 포함하는 갭머 올리고머(영역 GA)이다.
뉴클레오타이드간 결합
본 명세서에 기재된 올리고머 및 올리고머 접합체의 단위를 결합기를 통해 함께 결합시킨다. 적합하게는 각각의 단위를 결합기를 통해 3' 인접 단위에 결합시킨다.
당해 분야의 통상적인 숙련가는 본 발명과 관련하여 상기 5' 단위는 올리고머의 단부에서 5' 결합기를 포함하지 않지만, 상기 단위는 5' 말단기를 포함하거나 포함하지 않을 수도 있음을 알 것이다.
본 발명의 올리고머의 뉴클레오타이드 또는 그의 연속적인 뉴클레오타이드 서열을 결합기를 통해 함께 커플링시킨다. 적합하게는 각각의 뉴클레오타이드를 결합기를 통해 3' 인접한 뉴클레오타이드에 결합시킨다.
임의로, 본 발명의 올리고뉴클레오타이드 또는 본 발명의 올리고뉴클레오타이드 접합체는 하나 이상의 결합기 및/또는 하나 이상의 분지제 영역을 포함할 수 있다. 다양한 실시태양에서, 상기 링커기는 뉴클레오사이드간 또는 뉴클레오타이드간 결합이다.
적합한 뉴클레오타이드간 결합은 WO 2007/031091내에 나열된 것들, 예를 들어 WO 2007/031091(본 발명에 참고로 인용된다)의 34페이지 첫 번째 단락에 나열된 뉴클레오타이드간 결합을 포함한다.
일부 실시태양의 경우, 상기 뉴클레오타이드간 결합을 그의 통상적인 포스포다이에스터로부터 뉴클레아제 공격에 보다 내성인 것, 예를 들어 포스포로티오에이트 또는 보라노포스페이트(이들 둘은 RNAseH에 의해 절단성이며, 표적 유전자의 발현을 감소시키는 안티센스 억제 경로를 또한 허용한다)로 변형시키는 것이 바람직하다.
본 명세서에 제공된 바와 같은 적합한 황(S) 함유 뉴클레오타이드간 결합이 바람직할 수 있다. 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드간 결합이 특히 갭머의 갭 영역(X)에 또한 바람직하다. 포스포로티오에이트 결합을 또한 인접 영역(W 및 Y, 및 W 또는 Y의 V 또는 Z에의 결합의 경우, 적합한 대로 영역 V 또는 영역 Z 내)에 사용할 수 있다.
그러나, 영역 W, X 및 Y는 포스포로티오에이트 이외의 뉴클레오타이드간 결합, 예를 들어, 특히 뉴클레오타이드 유사체의 사용이 영역 W 및 Y 내의 뉴클레오타이드간 결합을 엔도뉴클레아제 분해로부터 보호하는 경우, 예를 들어 영역 W 및 Y가 LNA 뉴클레오타이드를 포함하는 경우, 포스포다이에스터 결합을 포함할 수 있다.
상기 올리고머 중 뉴클레오타이드간 결합은 표적화된 RNA의 RNaseH 절단을 허용하도록 포스포다이에스터, 포스포로티오에이트 또는 보라노포스페이트일 수 있다. 포스포로티오에이트가 개선된 뉴클레아제 내성 및 다른 이유, 예를 들어 제조의 용이성 때문에 바람직하다.
본 발명의 올리고머의 하나의 태양에서, 뉴클레오타이드 및/또는 뉴클레오타이드 유사체를 포스포로티오에이트기에 의해 서로 결합시킨다.
포스포다이에스터 결합, 예를 들어 하나 또는 2개의 결합의 다른 포스포로티오에이트 올리고머내에, 특히 뉴클레오타이드 유사체 단위 사이에 또는 이에 인접하여(전형적으로 영역 W 및/또는 Y 내) 포함시키는 것이 올리고머의 생체이용률 및/또는 생체분포를 변형시킬 수 있음이 인정되고 있다(본 발명에 참고로 인용된 WO 2008/113832를 참조하시오).
일부 실시태양에서, 상기에 언급된 실시태양들과 같이, 적합한 경우 및 구체적으로 지시되지 않은 경우, 모든 나머지 결합기는 포스포다이에스터 또는 포스포로티오에이트, 또는 이들의 혼합물이다.
일부 실시태양에서 모든 뉴클레오타이드간 결합기는 포스포로티오에이트이다.
특정한 갭머 올리고뉴클레오타이드 서열, 예를 들어 본 명세서에 제공된 특정한 서열 중 어느 하나를 언급하는 경우, 다양한 실시태양에서, 상기 결합이 포스포로티오에이트 결합일 때, 선택적 결합, 예를 들어 본 명세서에 개시된 결합을 사용할 수 있다. 예를 들어 포스페이트(포스포다이에스터) 결합을, 특히 뉴클레오타이드 유사체, 예를 들어 LNA 단위 사이의 결합에 사용할 수 있음을 알 것이다. 마찬가지로, 특정한 갭머 올리고뉴클레오타이드 서열, 예를 들어 본 명서세에 제공된 특정한 서열 중 어느 하나를 언급하는 경우, C 잔기가 5'메틸 변형된 시토신으로서 주석이 달릴 때, 다양한 실시태양에서 상기 올리고머 중에 존재하는 C 중 하나 이상은 변형되지 않은 C 잔기일 수 있다.
WO 09/124238은 중성 뉴클레오사이드간 결합에 의해 3' 또는 5' 말단에 부착된 하나 이상의 바이사이클릭 뉴클레오사이드를 갖는 올리고머성 화합물에 관한 것이다. 따라서 본 발명의 올리고머는 중성 뉴클레오타이드간 결합, 예를 들어 하나 이상의 포스포트라이에스터, 메틸포스포네이트, MMI, 아미드-3, 폼아세탈 또는 티오폼아세탈에 의해 3' 또는 5' 말단에 부착된 하나 이상의 바이사이클릭 뉴클레오사이드를 가질 수 있다. 나머지 결합은 포스포로티오에이트일 수 있다.
담체
일부 실시태양에서, 본 발명의 올리고머를 동일하거나 상이할 수 있는 하나 이상의 담체 성분에 결합시킨다.
일부 실시태양에서, 상기 올리고머 접합체는 하기의 구조를 갖거나 포함한다:
담체 성분 - L - 제 1 올리고머 영역
이때 L은 임의의 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이다. 바람직하게 L은 생리학적으로 불안정한 링커(영역 PL) 또는 선택적인 링커(영역 E) 및 이 둘의 조합 중에서 선택된다.
상기 제 1 올리고머 영역을 하기와 같이 예시된 5'-단부를 통해 링커 또는 담체에 결합시킬 수 있다:
담체 성분 - L1 - 제 1 올리고머 영역
이때, L1은 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이거나;
한편으로 상기 제 1 올리고머 영역을 하기와 같이 예시된 3'-단부를 통해 링커 또는 담체에 결합시킬 수 있다:
제 1 올리고머 영역 - L2 - 담체 성분
이때, L2는 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이다.
몇몇 실시태양의 경우, 바람직하게는 상기 올리고머 접합체는 하기의 구조를 갖거나 포함한다:
담체 성분 - L1 - 제 1 올리고머 영역
이때, L1은 선택적인 링커이다.
몇몇 실시태양의 경우, 바람직하게는 링커 1이 존재한다.
몇몇 실시태양의 경우, 바람직하게, 상기 담체 성분은 상기 제 1 올리고머 영역에 결합되거나, 바람직하게는 접합된다.
몇몇 실시태양의 경우, 바람직하게, 상기 담체 성분은 상기 올리고머의 5' 단부에 결합되거나, 바람직하게는 접합된다.
몇몇 실시태양의 경우, 바람직하게, 상기 담체 성분은 링커기 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티에 의해 상기 올리고머의 5' 단부에 결합되거나, 바람직하게는 접합된다.
몇몇 실시태양의 경우, 바람직하게, 상기 링커기 또는 분지제 영역은 생리학적으로 불안정한 링커기 또는 생리학적으로 불안정한 분지제 영역 또는 생리학적으로 불안정한 구속 분자 또는 생리학적으로 불안정한 가교 모이어티이다.
몇몇 실시태양의 경우, 바람직하게, 상기 생리학적으로 불안정한 링커기는 뉴클레아제 민감성 링커, 바람직하게는 포스포다이에스터 링커이다.
몇몇 실시태양의 경우 상기 바람직한 L1 링커는 생리학적으로 불안정한 링커 및 C2 내지 C36 아미노 알킬기, 예를 들어 C6 내지 C12 아미노 알킬기로 구성된다. 바람직한 실시태양에서 상기 L1 링커는 PO 링커 및 C6 아미노 링커로 구성된다.
일부 실시태양에서, 상기 담체 성분은 탄수화물 접합체 및 친지성 접합체 중에서 선택되거나, 상기 담체 성분은 탄수화물 및 친지성 접합체 모두를 포함한다.
상기 탄수화물 접합체 모이어티는 예를 들어 갈락토스, 갈락토스아민, N-폼일-갈락토스아민, N-아세틸-갈락토스아민, N-프로피오닐-갈락토스아민, N-n-부타노일-갈락토스아민, 및 N-아이소부타노일-갈락토스아민으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 바람직하게, 상기 탄수화물 접합체 모이어티는 아시알로당단백질 수용체 표적화 접합체 모이어티이다. 상기 친지성 접합체는 소수성기, 예를 들어 C16-20 소수성기, 스테롤, 콜레스테롤일 수 있다. 사용될 수 있는 다른 탄수화물 및 친지성기는 예를 들어 본 명세서에 개시되어 있다.
일부 실시태양의 경우, 상기 올리고머는 추가적인 CA 다이뉴클레오타이드 모티프를 포함할 수 있다. 바람직하게, 상기 올리고머 접합체와 관련하여, CA 모티프가 상기 담체 성분과 상기 올리고머 사이에 위치한다. 상기 CA 모티프는 바람직하게는 포스피다이에스터 결합을 포함하며 상기 올리고머와 상기 담체 성분 사이의 PO 링커로서 작용한다.
B형 간염 바이러스(HBV)
본 명세서에 기재된 바와 같은 모든 올리고머 및 올리고머 접합체는 바이러스성 질환, 특히 HBV와 관련된 질환의 치료에 사용하고자 하는 것이다. 상기와 같은 용도는 본 발명의 부분을 형성한다.
본 명세서에 기재된 바와 같은 모든 올리고머 및 올리고머 접합체는 바이러스성 질환, 특히 HBV와 관련된 질환을 치료하기 위한 약제의 제조에 사용하고자 하는 것이다. 상기와 같은 용도는 본 발명의 부분을 형성한다.
본 명세서에 기재된 바와 같은 모든 올리고머 및 올리고머 접합체는 바이러스성 질환, 특히 HBV와 관련된 질환을 경감시키거나 치유하거나 치료하기 위한 방법의 부분으로서 피실험자에게 투여하고자 하는 것이다. 상기와 같은 방법은 본 발명의 부분을 형성한다.
본 명세서에 기재된 바와 같은 모든 올리고머 및 올리고머 접합체는 바이러스성 질환, 특히 HBV와 관련된 질환을 치료하기 위한 약학 조성물의 부분을 포함하고자 하는 것이다. 상기와 같은 조성물은 본 발명의 부분을 형성한다.
B형 간염 바이러스(HBV)는 헤파드나비리다에(Hepadnaviridae) 과의 일부인 오쏘헤파드나바이러스(Orthohepadnavirus) 속의 종이다. 상기 바이러스는 B형 간염 질병을 유발한다. 간염을 유발하는 외에, HBV에 의한 감염은 간경변증 및 간세포 암종을 유도할 수 있다. 상기 바이러스는 또한 췌장암의 위험을 증가시킬 수도 있는 것으로 시사되었다.
상기 바이러스는 그의 외막 단백질상에 존재하는 항원성 에피토프를 기준으로 4개의 주요 혈청형(adr, adw, ayr, ayw)으로 분류되며, 게놈의 전체 뉴클레오타이드 서열 변이에 따라 8개의 유전자형(A 내지 H)으로 분류된다. 상기 유전자형은 별개의 지리적 분포를 가지며 유전자형들간의 차이는 질병 증증도, 과정 및 합병증의 가능성에 영향을 미치고 치료 및 가능하게는 백신화에 반응한다. 상기 유전자형은 적어도 8%까지 상이하다. 다른 게놈으로부터 14%까지 벗어나는 F형이 가장 벗어난 유형으로 공지되어 있다. A형은 유럽, 아프리카 및 필리핀을 포함한 서남아시아에서 유행한다. B 및 C형은 아시아에서 우세하며; D형은 지중해 영역, 중동 및 인도에서 흔하고; E형은 사하라사막 이남의 아프리카에 집중되며; F(또는 H)형은 중앙 및 남아메리카로 국한된다. G형은 프랑스와 독일에서 발견된 적이 있다. 유전자형 A, D 및 F는 브라질에서 우세하고, 미국에서는 모든 유전자형이 민족에 따른 빈도로 발생한다.
HBV는 환상 DNA 게놈이나, 상기 DNA는 완전길이의 한쪽 단부가 바이러스 DNA 폴리머라제에 결합되어 있기 때문에 완전한 이중 가닥은 아니다. 상기 게놈은 3020 내지 3320 뉴클레오타이드 길이(완전길이 가닥의 경우) 및 1700 내지 2800 뉴클레오타이드 길이(짧은 길이 가닥의 경우)이다.
HBV 게놈에 의해 암호화되는 4개의 공지된 유전자(C, P, S 및 X)가 존재한다. 코어 단백질은 유전자 C(HBcAg)에 의해 암호화되고 그의 개시 코돈은 상류 인-프레임 AUG 개시 코돈(이로부터 전-코어 단백질이 생성된다)이 선행한다. HBeAg는 상기 전-코어 단백질의 단백질분해 가공에 의해 생성된다. 상기 DNA 폴리머라제는 유전자 P에 의해 암호화된다.
HBx
HBx 폴리펩타이드는 숙주에서 전사, 신호전달, 세포주기 진행, 단백질 분해, 세포사멸 및 염색체 안정성을 방해하는 154 잔기 단백질이다. 상기 폴리펩타이드는 그의 세포 표적 단백질(HBX 상호작용 단백질: HBXIP)과 이종이량체성 복합체를 형성하며, 상기 상호작용은 중심체 동역학 및 유사분열 방추체 형성을 이상조절한다. 상기 폴리펩타이드는 DDB1(손상된 DNA 결합 단백질 1)과 상호작용하여, DNA 복제 및 수복, 전사 및 신호전달의 세포내 조절에 긴밀히 관련된 CUL4-DDB1 E3 복합체의 유비퀴틴 리가제 활성을 재지시한다.
상기 폴리펩타이드는 임의의 공지된 척추동물 단백질과 서열 일치성이 그다지 없지만, DNA 글리코실라제로부터 진화되는 듯하다. 간에서 X 단백질을 발현하는 유전자이식 마우스는 야생형보다 간세포 암종을 더 발생시키는 듯하다. 이는 상기 X 단백질이 종양 억제 단백질 p53에 결합하여 그의 역할을 수행하는 것을 억제하면서 세포주기 진행을 촉진하기 때문이다. 실험적 관찰은 또한 HBx 단백질이 TERT 및 텔로머라제 활성을 증가시켜, 간세포의 수명을 연장시키고 악성 형질전환에 기여함을 암시한다.
HBV로 감염된 암성 간세포의 정제 연구에서, 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 1(PRMT1)의 발현 수준은 PRMT1의 메틸트랜스퍼라제 기능으로 인한 전사 변화와 관련되는 것으로 밝혀졌다. 과발현은 전사되는 HBV 유전자 수의 감소를 유발하는 한편, 감소된 발현은 증가를 야기한다. PRMT1은 또한 복제 과정 동안 HBV DNA에 의해 모집되어 상기 전사 과정을 조절하는 것으로 밝혀졌다. 차례로 증가된 HBx 발현은 PRMT1-매개된 단백질 메틸화의 억제를 유도하여, 바이러스 복제에 이롭다.
상기 HBx 표적 서열은 1196번 위치의 첫 번째 보고된 전사 개시 부위에서 출발하여 1941번 위치의 폴리아데닐화 부위까지의 서열을 포함한다. 상기 U95551 서열의 1196번에서부터 1941번까지의 서열을 서열번호 1로서 나타낸다. 상기 U95551 서열은 서열번호 3으로서 나타낸다.
HBsAg
HBsAg(또한 주 표면 항원, HBV 주 표면 항원, HBV 표면 항원 및 "S"로서 공지됨)은 HBV의 표면 항원이다.
유전자 S는 상기 표면 항원(HBsAg)을 암호화하는 유전자이다. 상기 HBsAg 유전자는 하나의 긴 개방 판독 프레임이나, 상기 유전자를 3개의 섹션, 전-S1, 전-S2 및 S로 분할하는 3개의 인프레임 "개시"(ATG) 코돈을 함유한다. 상기 다수의 개시 코돈으로 인해, 큰, 중간 및 작은(전-S1+전-S2+S, 전-S2+S, 또는 S)이라 칭하는 3개의 상이한 크기의 폴리펩타이드가 생성된다.
상기 HBsAg는 동일한 유전자에 의해 암호화되는 3개의 당단백질로 구성된다. 상기 단백질은 동일한 판독 프레임 중에서 번역되나, 상이한 AUG 개시 코돈에서 개시하며; 따라서 모두가 동일한 C-말단을 갖는다. 가장 큰 단백질은 L 단백질(42 kd)이며 상기 내에 M 당단백질이 함유된다. 상기 S 당단백질(27 kDa)은 상기 M 단백질 내에 함유된다. 상기 HBsAg 단백질은 또한 환자의 혈청내로 분비되며, 구형(대개 자기-결합된 S 단백질) 또는 섬유상(또한 대개 S 단백질이나 일부 L 및 M을 갖는다) 입자로서 보일 수 있다. 상기 구형 입자는 진짜 바이러스보다 더 작지만 상기 필라멘트는 매우 클 수 있다(수백 나노미터).
S-HBsAg는 226 아미노산 잔기의 길이이다. 상기 항원은 잔기 4와 24 사이에서 아미노-말단 막관통 도메인(TMD-I)을 통해 ER 지질 2층에 고정되는 내재막 당단백질이다. 상기 항원은 잔기 24와 80 사이에 하류 시토솔 고리(CYL-l), 잔기 80과 100 사이에 제 2 막관통 도메인(TMD-II), 및 ER 내강(또는 세포외 입자의 표면)과 면하고 있는 잔기 101 내지 164를 포함하는 항원성 고리(AGL)를 포함한다. 카복실 말단(잔기 165 내지 226)은 2개의 TMD(TMD-III 및 -IV)를 함유하는 것으로 예측되며, 각각 173 내지 193번 및 202 내지 222번 위치에 위치하며, 짧은 서열(잔기 194 내지 201)(이때 상기는 ER 막의 시토솔쪽에 존재하는 것으로 예측되기 때문에 시토솔 고리 II(CYL-II)로서 지칭된다)에 의해 분리된다. 상기 M-HBsAg 단백질 서열은 그의 아미노 말단에서 S-HBsAg보다 55 잔기(전-S2 도메인)까지 더 길고; 상기는 바이러스 외막에서 후자와 함께 조립되나 형태형성 및 시험관내 감염성 모두에 없어도 좋다. L-HBsAg는 상기 HBV 유전자형에 따라 108 내지 119 잔기의 추가적인 아미노-말단 연장부(전-S1)와 함께 전체 M 폴리펩타이드를 포함한다. 2가지 위상이 개시되었다. 즉 아미노-말단 전-S 도메인(전-S1 + 전-S2)은 ER 막(분비된 비리온상의 내부) 또는 내강(상기 비리온 표면에 노출된)에서 시토솔성이다. 상기 내부 입체구조는 비리온 조립을 위해 상기 뉴클레오캡시드를 모집하는데 관련되는 반면, 상기 외부 위치는 바이러스 입구에서 수용체-결합 기능에 상응한다.
3개의 외막 단백질은 모두 소포체(ER) 막에서 합성되며, 이때 이들 단백질은 단백질-단백질 상호작용을 통해 응집되어 주로 빈 S-HBsAg-코팅된 서브바이러스 입자(SVP)의 분비를 유도한다. 상기는 L-HBsAg가 상기 외막 단백질에 존재할 때만, 상기 HBV 뉴클레오캡시드가 출아 복합체에 모집될 수 있고 성숙한 비리온으로서 방출될 수 있도록 상기 ER 막에서 응집된다. L-HBsAg의 경우에 비해, 자가-조립을 위한 S-HBsAg의 압도적인 활성으로 인해, HBV 비리온 형성은 단지 드물게 발생한다.
상기 HBsAg 표적 서열은 3158번에서 3182번까지의 전사 개시 부위로부터 1번 위치에서 1941번 위치의 폴리아데닐화 부위까지의 환상화된 U95551 서열의 서열 개시를 포함한다. 따라서, 상기 HBsAg 표적 서열은 상기 환상화된 U95551 서열의 3158 내지 3182번까지 및 1번 위치에서 1944번 위치까지 합한 서열의 서열들을 포함한다. 상기 표적 서열은 서열번호 2로서 나타낸다. 상기 U95551 서열은 서열번호 3으로서 나타낸다.
표적
바람직한 태양에서, 적합하게 본 발명의 올리고머 또는 올리고머 접합체는 B형 간염 바이러스(HBV)의 HBx 또는 HBsAg 중의 표적 서열을 조절할 수 있다. 이에 관하여, 본 발명의 올리고머는 전형적으로는 포유동물 세포, 예를 들어 인간 세포, 예를 들어 간 세포 중의 표적 서열의 억제에 영향을 미칠 수 있다.
일부 실시태양에서, 본 발명의 올리고머 또는 올리고머 접합체는 표적 핵산에 결합하여 발현을 통상적인 발현 수준에 비해 적어도 10% 또는 20%까지, 보다 바람직하게는 통상적인 발현 수준(예를 들어 상기 올리고머(들) 또는 올리고머 접합체(들) 부재하의 발현 수준)에 비해 적어도 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%까지 조절한다.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 올리고머 또는 올리고머 접합체는 상기 HBx 또는 HBsAg 유전자의 발현을 하향조절(예를 들어 억제, 감소 또는 제거)할 수 있다. 이에 관하여, 본 발명의 올리고머는 HBx 또는 HBsAg의 억제에 영향을 미칠 수 있다. 상기와 같은 억제는 전형적으로 포유동물 세포, 예를 들어 인간 세포, 예를 들어 간세포에서 발생할 수 있다. 일부 실시태양에서, 본 발명의 올리고머는 상기 표적 핵산에 결합하여 발현을 통상적인 발현 수준에 비해 적어도 10% 또는 20%까지, 보다 바람직하게는 통상적인 발현 수준(예를 들어 상기 올리고머(들) 또는 올리고머 접합체(들) 부재하의 발현 수준)에 비해 적어도 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%까지 조절한다.
일부 실시태양에서, 상기와 같은 조절은 0.04 내지 25 nM, 예를 들어 0.8 내지 20 nM 농도의 본 발명의 화합물이 사용될 때 관찰된다. 동일하거나 상이한 실시태양에서, 상기 발현의 조절은 100% 미만, 예를 들어 98% 미만, 95% 미만, 90% 미만, 80% 미만, 70% 미만이다. 발현 수준의 조절은 단백질 수준을, 예를 들어 SDS-PAGE와 같은 방법에 이어서 표적 단백질에 대해 발생된 적합한 항체를 사용하는 웨스턴 블럿팅에 의해 측정함으로써 측정할 수 있다. 한편으로, 발현 수준의 조절을, 예를 들어 노던 블럿팅 또는 정량적인 RT-PCR에 의해 RNA의 수준을 측정함으로써 측정할 수 있다. mRNA 수준을 통해 측정시, 적합한 투여량, 예를 들어 0.04 내지 25 nM, 예를 들어 0.8 내지 20 nM 농도를 사용하는 경우의 하향 조절 수준은 일부 실시태양에서 전형적으로 본 발명의 화합물, 접합체 또는 조성물 부재하의 통상적인 수준의 10 내지 20%의 수준까지이다.
본 명세서에 예시되는 바와 같이 상기 세포는 시험관내 형질감염된 세포일 수 있다. 상기 사용되는 올리고머 또는 올리고머 접합체의 농도는 일부 실시태양에서 5 nM일 수 있다. 상기 사용되는 올리고머 농도는 일부 실시태양에서 25 nM일 수 있다. 상기 사용되는 올리고머 또는 올리고머 접합체의 농도는 일부 실시태양에서 1 nM일 수 있다. 세포의 치료에 사용되는 올리고머 농도는 전형적으로 실시예에 예시되는 바와 같이, 형질감염(리포펙션)을 사용하는 시험관내 세포 분석에서 수행됨에 유의해야 한다. 형질감염제의 부재하에서, 상기 표적의 하향조절을 획득하는데 필요한 올리고머 또는 올리고머 접합체의 농도는 전형적으로 1 내지 25 μM, 예를 들어 5 μM이다.
따라서 본 발명은 HBx 또는 HBsAg 단백질 및/또는 mRNA를 발현하는 세포에서 HBx 또는 HBsAg 단백질 및/또는 mRNA의 발현을 하향조절하거나 억제하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명에 따른 올리고머 또는 접합체를 상기 세포에 투여하여 상기 세포에서 HBx 또는 HBsAg 단백질 및/또는 mRNA의 발현을 하향조절하거나 억제함을 포함한다. 적합하게 상기 세포는 포유동물 세포, 예를 들어 인간 세포이다. 상기 투여는 일부 실시태양에서 시험관내에서 발생할 수 있다. 상기 투여는 일부 실시태양에서 생체내에서 발생할 수 있다.
몇몇 실시태양의 경우, HBx를 표적화하는 올리고머 또는 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 또한 HBsAg에 결합한다.
표적 서열
상기 올리고머 또는 올리고머 접합체는 표적 서열 중에 존재하는 뉴클레오타이드 서열의 역 보체에 상응하는 연속적인 뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 상기 서열로 이루어진다.
상기 표적 서열은 유전자 또는 mRNA, 예를 들어 유전자 또는 mRNA의 암호화 또는 비-암호화 영역일 수 있다. 예를 들어, 상기 표적 서열은 암호화 또는 비-암호화 엑손일 수 있다. 상기 표적 서열은 엑손의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 상기 표적 서열은 엑손의 부분, 예를 들어 엑손의 내부일 수 있다.
본 발명의 실시에서, 상기 표적 서열은 단일 가닥 또는 이중 가닥 DNA 또는 RNA일 수 있으나; 단일 가닥 DNA 또는 RNA 표적이 바람직하다. 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오타이드가 향하는 표적 서열은 상기 표적화된 유전자의 대립유전자 형태 및 이어맞추기 변이체를 포함하는 상응하는 mRNA를 포함하는 것으로 생각된다. 표적 폴리뉴클레오타이드의 서열에 대한 지식을 제공하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드에 대한 특정 서열의 선택에 대해서 상당한 문헌 지침이 존재한다(예를 들어 문헌[Cook S.T. Antisense Drug Technology, Principles, Strategies, and Applications, Marcel Dekker, Inc, 2001]; 문헌[Peyman and Ulmann, Chemical Reviews, 90:543-584, 1990]; 및 문헌[Crooke, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol., 32:329-376 (1992)]). mRNA 표적은 5' 캡 부위, tRNA 프라이머 결합 부위, 개시 코돈 부위, mRNA 공여체 이어맞추기 부위, 및 mRNA 수용체 이어맞추기 부위를 포함할 수 있다.
상기 표적 폴리뉴클레오타이드 서열이 mRNA 전사물을 포함하는 경우, 서열 상보성 올리고뉴클레오타이드는 상기 전사물의 임의의 목적하는 부분에 하이브리드화할 수 있다. 상기와 같은 올리고뉴클레오타이드는 원칙적으로 번역의 억제에 유효하며, 본 명세서에 개시된 효과를 유도할 수 있다. 번역은 상기 개시 코돈 부위 또는 그 부근에서 상기 mRNA를 차단함으로써 가장 유효하게 억제되는 것으로 가정된다. 따라서, 올리고뉴클레오타이드는 mRNA 전사물의 5'-영역에 상보성일 수 있다. 올리고뉴클레오타이드는 상기 개시 코돈(상기 전사물의 번역된 부분의 5' 단부의 첫 번째 코돈), 또는 상기 개시 코돈에 인접한 코돈을 포함하여, 상기 mRNA에 상보성일 수 있다.
하나의 실시태양에서, 상기 표적 서열은 HBV 유전자형 A 내지 H간에 일치성을 가질 수 있다(하기에 상세히 개시됨).
하나의 실시태양에서, 상기 표적 서열은 HBV 유전자형 A 내지 H 중 임의의 하나 이상과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 일치성을 가질 수 있다. 예를 들어, 상기 표적 서열은 HBV 유전자형 A와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 일치성을 가질 수 있다. 예를 들어, 상기 표적 서열은 HBV 유전자형 B와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 일치성을 가질 수 있다. 예를 들어, 상기 표적 서열은 HBV 유전자형 C와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 일치성을 가질 수 있다. 예를 들어, 상기 표적 서열은 HBV 유전자형 D와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 일치성을 가질 수 있다. 예를 들어, 상기 표적 서열은 HBV 유전자형 E와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 일치성을 가질 수 있다. 예를 들어, 상기 표적 서열은 HBV 유전자형 F와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 일치성을 가질 수 있다. 예를 들어, 상기 표적 서열은 HBV 유전자형 G와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 일치성을 가질 수 있다. 예를 들어, 상기 표적 서열은 HBV 유전자형 H와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 일치성을 가질 수 있다.
하나의 실시태양에서, 상기 표적 서열은 HBV 유전자형 A 내지 H 중 2개 이상간에 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 일치성을 가질 수 있다.
하나의 실시태양에서, 상기 표적 서열은 HBV 유전자형 A, B, C 및 D 중 2개 이상간에 일치성을 가질 수 있다. 상기 표적 서열은 HBV 유전자형 A와 B 간에 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%를 가질 수 있다.
하나의 실시태양에서, 상기 표적 서열은 HBV 유전자형 A, B, C 및 D 중 2개 이상간에 일치성을 가질 수 있다. 상기 표적 서열은 HBV 유전자형 A와 C 간에 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%를 가질 수 있다.
하나의 실시태양에서, 상기 표적 서열은 HBV 유전자형 A, B, C 및 D 중 3개 이상간에 일치성을 가질 수 있다. 상기 표적 서열은 HBV 유전자형 A, B, C 및 D 간에 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 일치성을 가질 수 있다.
하나의 실시태양에서, 상기 표적 서열은 HBV 유전자형 A, B, C 및 D 중 3개 이상간에 일치성을 가질 수 있다. 상기 표적 서열은 HBV 유전자형 A, B 및 C 간에 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 일치성을 가질 수 있다.
하나의 실시태양에서, 상기 표적 서열은 HBV 유전자형 A, B, C 및 D 중 3개 이상간에 일치성을 가질 수 있다. 상기 표적 서열은 HBV 유전자형 A, B 및 D 간에 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 일치성을 가질 수 있다.
하나의 실시태양에서, 상기 표적 서열은 HBV 유전자형 A, B, C 및 D 모두 간에 일치성을 가질 수 있다. 상기 표적 서열은 HBV 유전자형 A, B, C 및 D 간에 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 일치성을 가질 수 있다.
다양한 실시태양에서, 상기 표적 서열은 서열번호 3으로서 나타낸 서열 내에 있다.
하나의 실시태양에서, 상기 표적 서열은 적어도 HBx 또는 HBsAg 또는 그의 천연 변이체를 암호화하는 유전자 또는 mRNA의 부분을 포함한다.
다양한 실시태양에서, 상기 표적 서열은 HBx 또는 HBs Ag 또는 그의 천연 변이체이다.
다양한 실시태양에서, 상기 표적 서열은 서열번호 1로서 나타낸 서열내에 있다.
다양한 실시태양에서, 상기 표적 서열은 서열번호 2로서 나타낸 서열내에 있다.
다양한 실시태양에서, 상기 표적 서열은 서열번호 3의 하기 위치들 중 하나 이상 중에서 선택된다: 1 내지 1944번 위치, 157 내지 1840번 위치, 1196 내지 1941번 위치, 1376 내지 1840번 위치 및 3158 내지 3182번 위치. 바람직하게, 상기 표적 서열은 서열번호 3의 1530 내지 1598번 위치, 보다 바람직하게는 서열번호 3의 1577 내지 1598번 위치, 및 가장 바람직하게는 서열번호 3의 1530 내지 1543번 위치 중에서 선택된다.
다양한 실시태양에서, 상기 표적 서열은 하기의 위치들 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다:
서열번호 3의
1264 내지 1278번;
1265 내지 1277번;
1530 내지 1543번;
1530 내지 1544번;
1531 내지 1543번;
1551 내지 1565번;
1551 내지 1566번;
1577 내지 1589번;
1577 내지 1591번;
1577 내지 1592번;
1577 내지 1598번;
1578 내지 1590번;
1578 내지 1592번;
1583 내지 1598번;
1584 내지 1598번;
1585 내지 1598번;
670 내지 706번;
670 내지 684번;
691 내지 705번;
691 내지 706번;
692 내지 706번;
693 내지 706번;
694 내지 706번.
하나의 태양에서, 본 발명의 올리고머 또는 올리고머 접합체는 서열번호 3의 1200 내지 1900번 위치, 바람직하게는 1530 내지 1598번 위치, 보다 바람직하게는 1577 내지 1598번 위치, 가장 바람직하게는 1530 내지 1543번 위치로서 나타낸 서열내의 8 내지 30, 8 내지 20, 8 내지 18, 8 내지 16, 8 내지 14, 8 내지 12 또는 8 내지 10 연속적인 뉴클레오타이드를 표적화할 수 있으며; 바람직하게는 상기 올리고머 또는 올리고머 접합체는 상기 연속적인 뉴클레오타이드에 상보성이다.
하나의 태양에서, 본 발명의 올리고머 또는 올리고머 접합체는 서열번호 3의 1200 내지 1900번 위치, 바람직하게는 1530 내지 1598번 위치, 보다 바람직하게는 1577 내지 1598번 위치, 가장 바람직하게는 1530 내지 1543번 위치로서 나타낸 서열내의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 또는 29 연속적인 뉴클레오타이드를 표적화할 수 있으며; 바람직하게는 상기 올리고머 또는 올리고머 접합체는 상기 연속적인 뉴클레오타이드에 상보성이다.
하나의 태양에서, 본 발명의 올리고머 또는 올리고머 접합체는 서열번호 3의 1200 내지 1900번 위치, 바람직하게는 1530 내지 1598번 위치, 보다 바람직하게는 1577 내지 1598번 위치, 가장 바람직하게는 1530 내지 1543번 위치로서 나타낸 서열내의 적어도 8 연속적인 뉴클레오타이드를 표적화할 수 있으며; 바람직하게는 상기 올리고머 또는 올리고머 접합체는 상기 연속적인 뉴클레오타이드에 상보성이다.
하나의 태양에서, 본 발명의 올리고머 또는 올리고머 접합체는 서열번호 3의 1200 내지 1900번 위치, 바람직하게는 1530 내지 1598번 위치, 보다 바람직하게는 1577 내지 1598번 위치, 가장 바람직하게는 1530 내지 1543번 위치로서 나타낸 서열내의 적어도 9 연속적인 뉴클레오타이드를 표적화할 수 있으며; 바람직하게는 상기 올리고머 또는 올리고머 접합체는 상기 연속적인 뉴클레오타이드에 상보성이다.
하나의 태양에서, 본 발명의 올리고머 또는 올리고머 접합체는 서열번호 3의 1200 내지 1900번 위치, 바람직하게는 1530 내지 1598번 위치, 보다 바람직하게는 1577 내지 1598번 위치, 가장 바람직하게는 1530 내지 1543번 위치로서 나타낸 서열내의 적어도 10 연속적인 뉴클레오타이드를 표적화할 수 있으며; 바람직하게는 상기 올리고머 또는 올리고머 접합체는 상기 연속적인 뉴클레오타이드에 상보성이다.
하나의 태양에서, 본 발명의 올리고머 또는 올리고머 접합체는 서열번호 3의 1200 내지 1900번 위치, 바람직하게는 1530 내지 1598번 위치, 보다 바람직하게는 1577 내지 1598번 위치, 가장 바람직하게는 1530 내지 1543번 위치로서 나타낸 서열내의 적어도 11 연속적인 뉴클레오타이드를 표적화할 수 있으며; 바람직하게는 상기 올리고머 또는 올리고머 접합체는 상기 연속적인 뉴클레오타이드에 상보성이다.
하나의 태양에서, 본 발명의 올리고머 또는 올리고머 접합체는 서열번호 3의 1200 내지 1900번 위치, 바람직하게는 1530 내지 1598번 위치, 보다 바람직하게는 1577 내지 1598번 위치, 가장 바람직하게는 1530 내지 1543번 위치로서 나타낸 서열내의 적어도 12 연속적인 뉴클레오타이드를 표적화할 수 있으며; 바람직하게는 상기 올리고머 또는 올리고머 접합체는 상기 연속적인 뉴클레오타이드에 상보성이다.
하나의 태양에서, 본 발명의 올리고머 또는 올리고머 접합체는 서열번호 3의 1200 내지 1900번 위치, 바람직하게는 1530 내지 1598번 위치, 보다 바람직하게는 1577 내지 1598번 위치, 가장 바람직하게는 1530 내지 1543번 위치로서 나타낸 서열내의 적어도 13 연속적인 뉴클레오타이드를 표적화할 수 있으며; 바람직하게는 상기 올리고머 또는 올리고머 접합체는 상기 연속적인 뉴클레오타이드에 상보성이다.
하나의 태양에서, 본 발명의 올리고머 또는 올리고머 접합체는 서열번호 3의 1200 내지 1900번 위치, 바람직하게는 1530 내지 1598번 위치, 보다 바람직하게는 1577 내지 1598번 위치, 가장 바람직하게는 1530 내지 1543번 위치로서 나타낸 서열내의 적어도 14 연속적인 뉴클레오타이드를 표적화할 수 있으며; 바람직하게는 상기 올리고머 또는 올리고머 접합체는 상기 연속적인 뉴클레오타이드에 상보성이다.
하나의 태양에서, 본 발명의 올리고머 또는 올리고머 접합체는 서열번호 3의 1200 내지 1900번 위치, 바람직하게는 1530 내지 1598번 위치, 보다 바람직하게는 1577 내지 1598번 위치, 가장 바람직하게는 1530 내지 1543번 위치로서 나타낸 서열내의 적어도 15 연속적인 뉴클레오타이드를 표적화할 수 있으며; 바람직하게는 상기 올리고머 또는 올리고머 접합체는 상기 연속적인 뉴클레오타이드에 상보성이다.
하나의 태양에서, 본 발명의 올리고머 또는 올리고머 접합체는 서열번호 3의 1200 내지 1900번 위치, 바람직하게는 1530 내지 1598번 위치, 보다 바람직하게는 1577 내지 1598번 위치, 가장 바람직하게는 1530 내지 1543번 위치로서 나타낸 서열내의 적어도 16 연속적인 뉴클레오타이드를 표적화할 수 있으며; 바람직하게는 상기 올리고머 또는 올리고머 접합체는 상기 연속적인 뉴클레오타이드에 상보성이다.
하나의 실시태양에서, 상기 표적 서열은 서열번호 1 또는 서열번호 2 또는 서열번호 3에 제시된 서열내의 서열 또는 상기 서열에 대해 적어도 80% 일치성을 갖는 서열을 포함한다. 따라서, 상기 올리고머 또는 올리고머 접합체는 본 명세서에 나타낸 군으로부터 선택된 코어 모티프를 포함하거나 상기 모티프로 이루어질 수 있으며, 이때 상기 올리고머 또는 올리고머 접합체(또는 그의 연속적인 뉴클레오타이드 부분)는 임의로 상기 선택된 모티프 서열에 대해 임의로 1, 2 또는 3개의 미스매치를 가질 수 있다:
GCGTAAAGAGAGG (서열번호 13);
AGCGAAGTGCACACG (서열번호 20);
GCGTAAAGAGAGGT (서열번호 11);
AGGTGAAGCGAAGTG (서열번호 26);
AGCGAAGTGCACACGG (서열번호 18);
CGAACCACTGAACA (서열번호 7);
GAACCACTGAACAAA (서열번호 4);
CGAACCACTGAACAAA (서열번호 5);
CGAACCACTGAACAA (서열번호 6);
CGAACCACTGAAC (서열번호 8);
CCGCAGTATGGATCG (서열번호 9);
CGCAGTATGGATC (서열번호 10);
CGCGTAAAGAGAGGT (서열번호 12);
AGAAGGCACAGACGG (서열번호 14);
GAGAAGGCACAGACGG (서열번호 15);
GAAGTGCACACGG (서열번호 16);
GCGAAGTGCACACGG (서열번호 17);
CGAAGTGCACACG (서열번호 19);
AGGTGAAGCGAAGT (서열번호 27); 및
TAGTAAACTGAGCCA (서열번호 834).
하나의 실시태양에서, 상기 표적 서열은 하기에 제시된 서열 또는 상기 서열에 대해 적어도 80% 일치성을 갖는 서열을 포함한다. 따라서, 상기 올리고머 또는 올리고머 접합체는 하기에 나타낸 군으로부터 선택된 표적 서열에 하이브리드화하는 서열을 포함하거나 상기 서열로 이루어질 수 있으며, 이때 상기 올리고머 또는 올리고머 접합체(또는 그의 연속적인 뉴클레오타이드 부분)는 임의로 상기 선택된 표적 서열에 대해 임의로 1, 2 또는 3개의 미스매치를 가질 수 있다.
Figure pat00015
일부 실시태양에서, 상기 올리고머 또는 올리고머 접합체는 상기 표적 서열에 하이브리드화할 때 1, 2, 3 또는 4(또는 그 이상) 미스매치를 허용할 수 있으며, 상기 표적에 여전히 충분히 결합하여 목적하는 효과, 즉 상기 표적의 하향조절을 나타낼 수 있다. 매스매치는 예를 들어 상기 올리고머 뉴클레오타이드 서열의 증가된 길이 및/또는 상기 뉴클레오타이드 서열내에 존재하는 뉴클레오타이드 유사체, 예를 들어 LNA의 증가된 수에 의해 보상될 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 연속적인 뉴클레오타이드 서열은 상기 표적 서열에, 예를 들어 HBx 또는 HBsAg를 암호화하는 핵산의 상응하는 영역에 하이브리드화할 때 3 이하, 예를 들어 2 이하의 미스매치를 포함한다.
일부 실시태양에서, 상기 연속적인 뉴클레오타이드 서열은 표적 서열, 예를 들어 HBx 또는 HBsAg를 암호화하는 핵산의 상응하는 영역에 하이브리드화할 때 하나 이하의 미스매치를 포함한다.
상기 표적이 HBx인 경우, 본 발명의 올리고머 또는 올리고머 접합체의 뉴클레오타이드 또는 연속적인 뉴클레오타이드 서열은 바람직하게는 본 명세서에 제공된 뉴클레오타이드 서열로부터 선택된 상응하는 서열에 적어도 80% 일치성(때때로 상동성 또는 상응으로서 지칭된다)을 갖고, 예를 들어 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96% 상응, 적어도 97% 상응, 적어도 98% 상응, 적어도 99% 상응, 예를 들어 100% 상응한다(일치한다).
상기 표적이 HBx인 경우, 본 발명의 올리고머 또는 올리고머 접합체의 뉴클레오타이드 서열 또는 연속적인 뉴클레오타이드 서열은 바람직하게는 서열번호 1로서 제공된 서열내의 상응하는 서열의 역 보체에 적어도 80% 일치성(때때로 상동성 또는 상응으로서 지칭된다)을 갖고, 예를 들어 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96% 상응, 적어도 97% 상응, 적어도 98% 상응, 적어도 99% 상응, 예를 들어 100% 상응한다(일치한다).
상기 표적이 HBx인 경우, 본 발명의 올리고머 또는 올리고머 접합체의 뉴클레오타이드 서열 또는 연속적인 뉴클레오타이드 서열은 바람직하게는 서열번호 1로서 제공된 서열내에 존재하는 하위-서열에 적어도 80% 상보성, 예를 들어 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96% 상보성, 적어도 97% 상보성, 적어도 98% 상보성, 적어도 99% 상보성, 예를 들어 100% 상보성(완벽하게 상보성)이다.
일부 실시태양에서 상기 표적이 HBx인 경우, 상기 올리고머 또는 올리고머 접합체(또는 그의 연속적인 뉴클레오타이드 부분)는 본 명세서에 제공된 서열들 중 하나, 또는 그의 적어도 10개의 연속적인 뉴클레오타이드의 하위-서열로부터 선택되거나 상기 서열을 포함하며, 이때 상기 올리고머 또는 올리고머 접합체(또는 그의 연속적인 뉴클레오타이드 부분)는 상기 서열과 비교시 1, 2 또는 3개의 미스매치를 임의로 포함할 수 있다.
상기 표적이 HBsAg인 경우, 본 발명의 올리고머 또는 올리고머 접합체의 뉴클레오타이드 서열 또는 연속적인 뉴클레오타이드 서열은 바람직하게는 본 명세서에 제공된 군으로부터 선택된 상응하는 서열에 적어도 80% 일치성(때때로 상동성 또는 상응으로서 지칭된다)을 갖고, 예를 들어 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96% 상응, 적어도 97% 상응, 적어도 98% 상응, 적어도 99% 상응, 예를 들어 100% 상응한다(일치한다).
상기 표적이 HBsAg인 경우, 본 발명의 올리고머 또는 올리고머 접합체의 뉴클레오타이드 서열 또는 연속적인 뉴클레오타이드 서열은 바람직하게는 서열번호 2로서 제공된 서열내의 상응하는 서열의 역 보체에 적어도 80% 일치성(때때로 상동성 또는 상응으로서 지칭된다)을 갖고, 예를 들어 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96% 상응, 적어도 97% 상응, 적어도 98% 상응, 적어도 99% 상응, 예를 들어 100% 상응한다(일치한다).
상기 표적이 HBsAg인 경우, 본 발명의 올리고머 또는 올리고머 접합체의 뉴클레오타이드 서열 또는 연속적인 뉴클레오타이드 서열은 바람직하게는 서열번호 2로서 제공된 서열내에 존재하는 하위-서열에 적어도 80% 상보성, 예를 들어 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96% 상보성, 적어도 97% 상보성, 적어도 98% 상보성, 적어도 99% 상보성, 예를 들어 100% 상보성(완벽하게 상보성)이다.
일부 실시태양에서 상기 표적이 HBsAg인 경우, 상기 올리고머 또는 올리고머 접합체(또는 그의 연속적인 뉴클레오타이드 부분)는 본 명세서에 제공된 군으로부터 선택된 서열들 중 하나, 또는 그의 적어도 10개의 연속적인 뉴클레오타이드의 하위-서열로부터 선택되거나 상기 서열을 포함하며, 이때 상기 올리고머 또는 올리고머 접합체(또는 그의 연속적인 뉴클레오타이드 부분)는 상기 서열과 비교시 1, 2 또는 3개의 미스매치를 임의로 포함할 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 하위-서열은 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28 또는 29 연속적인 뉴클레오타이드, 예를 들어 12 내지 22, 예를 들어 12 내지 18, 예를 들어 12 내지 16 뉴클레오타이드로 이루어질 수 있다. 적합하게, 일부 실시태양에서, 상기 하위-서열은 본 발명의 올리고머의 연속적인 뉴클레오타이드 서열과 동일한 길이를 갖는다.
그러나, 일부 실시태양에서 상기 올리고머 또는 올리고머 접합체의 뉴클레오타이드 서열은 표적 서열에 비-상보성인 추가적인 5' 또는 3' 뉴클레오타이드, 예를 들어 독립적으로 1, 2, 3, 4 또는 5개의 추가적인 5' 및/또는 3' 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 이에 관하여, 본 발명의 올리고머는 일부 실시태양에서 추가적인 뉴클레오타이드에 의해 5' 및 또는 3' 인접한 연속적인 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 실시태양에서 상기 추가적인 5' 또는 3' 뉴클레오타이드는 천연 뉴클레오타이드, 예를 들어 DNA 또는 RNA이다. 일부 실시태양에서, 상기 추가적인 5' 또는 3' 뉴클레오타이드는 본 명세서의 갭머 올리고머 또는 올리고머 접합체에 관하여 언급된 바와 같은 영역 D를 나타낼 수 있다.
RNAse 모집
올리고머성 분자는 표적 mRNA의 비 RNase 매개된 분해를 통해, 예를 들어 번역의 입체 장애, 또는 다른 방법에 의해 기능할 수 있다.
일부 실시태양의 경우, 본 발명의 올리고머 또는 올리고머 접합체는 엔도리보뉴클레아제(RNase), 예를 들어 RNaseH를 모집할 수 있다.
본 발명의 올리고머 또는 올리고머 접합체는, 상보성 표적 RNA와 듀플렉스로 형성될 때 RNase를 모집할 수 있는 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16 연속적인 뉴클레오타이드를 포함하여, 적어도 6, 예를 들어 적어도 7 연속적인 뉴클레오타이드 단위, 예를 들어 적어도 8 또는 적어도 9 연속적인 뉴클레오타이드 단위(잔기)의 영역을 포함한다. 상기 RNAse를 모집할 수 있는 연속적인 서열은 본 명세서에 기재된 바와 같은 갭머와 관련하여 언급된 바와 같은 영역 X일 수 있다. 일부 실시태양에서 RNAse를 모집할 수 있는 연속적인 서열, 예를 들어 영역 X의 크기는 더 클 수 있고, 예를 들어 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20 뉴클레오타이드 단위일 수 있다.
EP 1 222 309는 RNaseH를 모집하는 능력을 측정하는데 사용될 수 있는 시험관내 RNaseH 활성 측정 방법을 제공한다. 올리고머는, 상보성 RNA 표적과 함께 제공될 때, EP 1 222 309의 실시예 91 내지 95에 의해 제공된 방법을 사용하여 pmol/l/분으로 측정시, 동일한 염기 서열을 갖지만 단지 DNA 단위만을 함유하고, 2' 치환이 없으며 올리고뉴클레오타이드 중의 모든 단위들간에 포스포로티오에이트 결합기를 갖는, DNA만의 올리고뉴클레오타이드를 사용하여 측정된 초기 속도의 적어도 1%, 예를 들어 적어도 5%, 예를 들어 적어도 10% 또는 20% 초과의 초기 속도를 갖는 경우 RNaseH를 모집할 수 있는 것으로 간주된다.
일부 실시태양에서, 올리고머는, 상보성 RNA 표적, 및 RNaseH와 함께 제공될 때, EP 1 222 309의 실시예 91 내지 95에 의해 제공된 방법을 사용하여 pmol/l/분으로 측정시, 상기 RNaseH 초기 속도가, 2' 치환이 없으며 올리고뉴클레오타이드 중의 모든 뉴클레오타이드들간에 포스포로티오에이트 결합기를 갖는, 동등한 DNA만의 올리고뉴클레오타이드를 사용하여 측정된 초기 속도의 1% 미만, 예를 들어 5% 미만, 예를 들어 10% 미만 또는 20% 미만인 경우 RNaseH를 필수적으로 모집할 수 없는 것으로 간주된다.
일부 실시태양에서, 올리고머는, 상보성 RNA 표적, 및 RNaseH와 함께 제공될 때, EP 1 222 309의 실시예 91 내지 95에 의해 제공된 방법을 사용하여 pmol/l/분으로 측정시, 상기 RNaseH 초기 속도가, 2' 치환이 없으며 올리고뉴클레오타이드 중의 모든 뉴클레오타이드들간에 포스포로티오에이트 결합기를 갖는, 동등한 DNA만의 올리고뉴클레오타이드를 사용하여 측정된 초기 속도의 적어도 20%, 예를 들어 적어도 40%, 예를 들어 적어도 60%, 예를 들어 적어도 80%인 경우 RNaseH를 모집할 수 있는 것으로 간주된다.
전형적으로 상보성 표적 RNA와 듀플렉스 형성시 RNase를 모집할 수 있는 연속적인 뉴클레오타이드 단위를 형성하는 본 발명의 올리고머 또는 올리고머 접합체의 영역은, 상기 RNA 표적과 DNA/RNA같은 듀플렉스를 형성하고 알파-L 배열로 존재하는(알파-L-옥시 LNA가 특히 바람직하다) DNA 단위 및 LNA 단위를 모두 포함하는 뉴클레오타이드 단위로 이루어진다.
본 발명의 올리고머 또는 올리고머 접합체는 뉴클레오타이드 및 뉴클레오타이드 유사체 모두를 포함하는 뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있고, 갭머, 헤드머 또는 믹스머의 형태로 존재할 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 올리고머의 상기 표적 영역에 대한 친화성을 증대시키는 것 외에, 일부 뉴클레오사이드 유사체는 또한 RNase(예를 들어 RNaseH) 결합 및 절단을 매개한다. α-L-LNA 단위는 RNaseH 활성을 일정한 정도로 모집하기 때문에, 일부 실시태양에서 α-L-LNA 단위를 함유하는 올리고머의 갭 영역(예를 들어 본 명세서에서 언급되는 바와 같은 영역 X)은 상기 RNaseH에 의해 인식가능하고 절단가능한 보다 적은 단위로 이루어지며, 보다 융통성있게 상기 믹스머 구조 중에 도입된다.
합성
본 발명은 하나 이상의 올리고머를 담체 성분에 접합시킴을 포함하는 올리고머 접합체의 제조 방법을 제공하며, 이때 상기 올리고머 접합체는 바이러스성 질환의 치료에 적합하다.
본 발명은 또한 하나 이상의 올리고머를 링커기(E 또는 L) 또는 대칭적인 분지제 영역 F에 부착시키고, 이어서 본 명세서에 기재된 바와 같이 담체 성분에 부착시킴을 포함하는, 본 명세서에 기재된 바와 같은 폴리올리고머 접합체의 제조 방법을 제공하며, 이때 상기 올리고머 접합체는 바이러스성 질환의 치료에 적합하다.
일부 실시태양에서 상기 대칭적인 분지제 영역은 1,3-펜틸아미도프로필(1,3-비스-[5-(4,4'-다이메톡시트리틸옥시)펜틸아미도]프로필-2-[(2-시아노에틸)-(N,N-다이아이소프로필)]-포스포아미다이트로부터), 트리스-2,2,2-(프로필옥시메틸)에틸(트리스-2,2,2-[3-(4,4'-다이메톡시트리틸옥시)프로필옥시메틸]에틸-[(2-시아노에틸)-(N,N-다이아이소프로필)]-포스포아미다이트로부터) 또는 트리스-2,2,2-(프로필옥시메틸)메틸렌옥시프로필(트리스-2,2,2-[3-(4,4'-다이메톡시트리틸옥시)프로필옥시메틸]메틸렌옥시프로필-[(2-시아노에틸)-(N,N-다이아이소프로필)]-포스포아미다이트로부터)이다. 일부 실시태양에서 비대칭적인 분지제 영역은 1,3-펜틸아미도프로필(1-[5-(4,4'-다이메톡시트리틸옥시)펜틸아미도]-3-[5-플루오레노메톡시카보닐옥시펜틸아미도]-프로필-2-[(2-시아노에틸)-(N,N-다이아이소프로필)]-포스포아미다이트로부터)이다. 글렌 리써치 USA는 상기와 같은 적합한 분지제들을 제공한다(예를 들어 카탈로그 0-1920, 10-1922 및 10-1925).
본 명세서에 기재된 링커기 및 분지제 영역은 절단가능하거나 절단가능하지 않을 수도 있다.
추가의 태양에서 본 발명의 올리고머 접합체를 약학적으로 허용가능한 희석제, 용매, 담체, 염 및/또는 보조제와 혼합함을 포함하는 본 발명 조성물의 제조 방법을 제공한다.
활성화된 올리고머
본 발명에 사용되는 바와 같은 "활성화된 올리고머"란 용어는 상기 올리고머의 하나 이상의 접합된 모이어티(즉 자신이 핵산 또는 단위가 아닌 모이어티)로의 공유 결합을 허용하여 본 명세서에 기재된 접합체를 형성하는 하나 이상의 작용성 모이어티에 공유 결합되는(즉 작용화되는) 본 발명의 올리고머를 지칭한다. 전형적으로, 작용성 모이어티는 예를 들어 아데닌 염기의 3'-하이드록실기 또는 환외 NH2기, 바람직하게는 친수성인 이격자 및 접합된 부분에 결합할 수 있는 말단기(예를 들어 아미노, 설프하이드릴 또는 하이드록실기)를 통해 상기 올리고머에 공유 결합할 수 있는 화학적 기를 포함할 것이다. 일부 실시태양에서, 상기 말단기는 보호되지 않고, 예를 들어 NH2기이다. 다른 실시태양에서, 상기 말단기는 예를 들어 임의의 적합한 보호기, 예를 들어 문헌["Protective Groups in Organic Synthesis" by Theodora W Greene and Peter G M Wuts, 3rd edition (John Wiley & Sons, 1999)]에 개시된 것들에 의해 보호된다. 적합한 하이드록실 보호기의 예는 에스터, 예를 들어 아세테이트 에스터, 아르알킬기, 예를 들어 벤질, 다이페닐메틸, 또는 트라이페닐메틸, 및 테트라하이드로피라닐을 포함한다. 적합한 아미노 보호기의 예는 벤질, 알파-메틸벤질, 다이페닐메틸, 트라이페닐메틸, 벤질옥시카보닐, 3급-부톡시카보닐, 및 아실기, 예를 들어 트라이클로로아세틸 또는 트라이플루오로아세틸을 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 작용성 모이어티는 자기-절단성이다. 다른 실시태양에서, 상기 작용성 모이어티는 생분해성이다. 예를 들어 미국특허 제 7,087,229 호(내용 전체가 본 발명에 참고로 인용된다)를 참조하시오.
일부 실시태양에서, 본 발명의 올리고머는 상기 접합된 부분의 상기 올리고머의 5' 단부에의 공유 부착을 허용하기 위해서 상기 5' 단부에서 작용화된다. 다른 실시태양에서, 본 발명의 올리고머는 3' 단부에서 작용화될 수 있다. 더욱 다른 실시태양에서, 본 발명의 올리고머는 주쇄를 따라 또는 헤테로사이클릭 염기 부분상에서 작용화될 수 있다. 더욱 다른 실시태양에서, 본 발명의 올리고머는 상기 5' 단부, 3' 단부, 주쇄 및 염기 중에서 독립적으로 선택되는 하나 초과의 위치에서 작용화될 수 있다.
일부 실시태양에서, 본 발명의 활성화된 올리고머를, 상기 합성 동안 작용성 모이어티에 공유 부착된 하나 이상의 단위를 통합시킴으로써 합성한다. 다른 실시태양에서, 본 발명의 활성화된 올리고머를 작용화되지 않은 단위로 합성하며, 상기 올리고머를 합성의 완료시 작용화시킨다. 일부 실시태양에서, 상기 올리고머를 아미노알킬 링커를 함유하는 장애 에스터로 작용화시키며, 이때 상기 알킬 부분은 화학식 (CH2)w(이때, w는 1 내지 10 범위의 정수, 바람직하게는 약 6이다)를 갖고, 상기 알킬아미노기의 알킬 부분은 직쇄 또는 분지쇄일 수 있고, 상기 작용기는 에스터기(-O-C(O)-(CH2)wNH)를 통해 상기 올리고머에 부착된다.
다른 실시태양에서, 상기 올리고머는 (CH2)w-설프하이드릴(SH) 링커(이때, w는 1 내지 10 범위의 정수, 바람직하게는 약 6이다)를 함유하는 장애 에스터로 작용화되며, 이때 상기 알킬아미노기의 알킬 부분은 직쇄 또는 분지쇄일 수 있고, 상기 작용기는 에스터기(-O-C(O)-(CH2)wSH)를 통해 상기 올리고머에 부착된다. 일부 실시태양에서, 설프하이드릴-활성화된 올리고뉴클레오타이드를 폴리에틸렌 글리콜 또는 펩타이드와 같은 중합체 부분과 (다이설파이드 결합의 형성을 통해) 접합시킨다.
상술한 바와 같은 장애 에스터를 함유하는 활성화된 올리고머를 당해 분야에 공지된 임의의 방법에 의해, 특히 국제 PCT 공보 WO 2008/034122 및 상기 공보 중의 실시예(이들은 내용 전체가 본 발명에 참고로 인용된다)에 개시된 방법에 의해 합성할 수 있다.
더욱 다른 실시태양에서, 본 발명의 올리고머를 실질적으로 미국특허 제 4,962,029 호 및 미국특허 제 4,914,210 호에 기재된 바와 같은 작용화 시약, 즉 보호되거나 보호되지 않은 설프하이드릴, 아미노 또는 하이드록실기를 포함하는 반대 단부에 친수성 이격자 쇄를 통해 결합된, 한쪽 단부에 포스포아미다이트를 갖는 실질적으로 선형인 시약에 의해 상기 올리고머에 설프하이드릴, 아미노 또는 하이드록실기를 도입시킴으로써 작용화시킨다. 상기와 같은 시약은 주로 상기 올리고머의 하이드록실기와 반응한다. 일부 실시태양에서, 상기와 같은 활성화된 올리고머는 상기 올리고머의 5'-하이드록실기에 커플링된 작용화 시약을 갖는다. 다른 실시태양에서, 상기 활성화된 올리고머는 3'-하이드록실기에 커플링된 작용화 시약을 갖는다. 더욱 다른 실시태양에서, 본 발명의 활성화된 올리고머는 상기 올리고머의 주쇄상의 하이드록실기에 커플링된 작용화 시약을 갖는다. 더욱 추가의 실시태양에서, 본 발명의 올리고머를 미국특허 제 4,962,029 호 및 미국특허 제 4,914,210 호(이들은 내용 전체가 본 발명에 참고로 인용된다)에 기재된 바와 같은 작용화 시약 중 하나 초과의 시약으로 작용화시킨다. 상기와 같은 작용화 시약의 합성 및 상기 시약의 단위 또는 올리고머내로의 통합 방법은 미국특허 제 4,962,029 호 및 미국특허 제 4,914,210 호에 개시되어 있다.
일부 실시태양에서, 고상 결합된 올리고머의 5'-말단을 다이에닐 포스포아미다이트 유도체로 작용화시킨 다음, 탈보호된 올리고머를 예를 들어 딜스-알더 가환 반응을 통해 아미노산 또는 펩타이드와 접합시킨다.
다양한 실시태양에서, 2'-당 변형을 함유하는 단위, 예를 들어 2'-카바메이트 치환된 당 또는 2'-(O-펜틸-N-프탈이미도)-데옥시리보스 당을 상기 올리고머에 통합시키는 것은 상기 올리고머의 당에 대한 접합된 부분의 공유 부착을 촉진한다. 다른 실시태양에서, 하나 이상의 단위의 2'-위치에 아미노-함유 링커를 갖는 올리고머를 예를 들어 5'-다이메톡시트리틸-2'-O-(e-프탈이미딜아미노펜틸)-2'-데옥시아데노신-3'-N,N-다이아이소프로필-시아노에톡시 포스포아미다이트와 같은 시약을 사용하여 제조한다(예를 들어 문헌[Manoharan, et al., Tetrahedron Letters, 1991, 34, 7171]을 참조하시오).
더욱 추가의 실시태양에서, 본 발명의 올리고머는 핵염기상에, 예를 들어 N6 퓨린 아미노기상에, 구아닌의 환외 N2상에, 또는 시토신의 N4 또는 5번 위치상에 아민-함유 작용성 모이어티를 가질 수 있다. 다양한 실시태양에서, 상기와 같은 작용화를, 상기 올리고머 합성에서 이미 작용화된 상업적인 시약을 사용하여 성취할 수 있다.
일부 작용성 모이어티를 상업적으로 입수할 수 있다. 예를 들어 이종이작용성 및 동종이작용성 결합 부분을 피어스 캄파니(Pierce Co.)(미국 일리노이주 록빌 소재)로부터 입수할 수 있다. 다른 상업적으로 입수할 수 있는 결합기는 5'-아미노-변형제 C6 및 3'-아미노-변형제 시약(둘 다 글렌 리써치 코포레이션(미국 버니지아주 스털링 소재)으로부터 입수할 수 있다)이다. 5'-아미노-변형제 C6을 또한 아미노링크-2로서 ABI(어플라이드 바이오시스템스 인코포레이티드(Applied Biosystems Inc.), 미국 캘리포니아주 포스터 시티 소재)로부터 입수할 수 있으며, 3'-아미노-변형제를 또한 클론테크 레보라토리즈 인코포레이티드(Clontech Laboratories Inc.)(미국 캘리포니아주 팔로알토 소재)로부터 입수할 수 있다.
폴리올리고머
상기에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 일부 실시태양에서, 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 2개의 표적화 서열을 갖는 분자를 포함하거나 상기 분자의 부분일 수 있다. 일부의 경우에, 이들 분자를 폴리올리고머라 칭한다.
일부 실시태양에서, 상기 올리고머 접합체는 하기의 구조를 갖거나 포함하거나:
담체 성분 - L1 - 제 1 올리고머 영역 - L2 - 제 2 올리고머 영역
[이때,
L1은 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이고;
L2는 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이고;
L1 및 L2는 동일하거나 상이할 수 있다];
상기 올리고머 접합체는 하기의 구조를 갖거나 포함하거나:
제 1 올리고머 영역 - L2 - 제 2 올리고머 영역 - L3 - 담체 성분
[이때,
L2는 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이고;
L3은 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이고;
L2 및 L3은 동일하거나 상이할 수 있다];
상기 올리고머 접합체는 하기의 구조를 갖거나 포함하거나:
담체 성분 1 - L1 - 제 1 올리고머 영역 - L2 - 제 2 올리고머 영역 - L3 - 담체 성분 2
[이때,
L1은 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이고;
L2는 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이고;
L3은 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이고;
L1, L2 및 L3은 동일하거나 상이할 수 있고;
담체 성분 1 및 담체 성분 2는 동일하거나 상이할 수 있다];
상기 올리고머 접합체는 하기의 구조를 갖거나 포함하거나:
제 1 올리고머 영역 - L1 - 담체 성분 1 - L2 - 제 2 올리고머 영역
[이때,
L1은 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이고;
L2는 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이고;
L1 및 L2 및 L3은 동일하거나 상이할 수 있다];
상기 올리고머 접합체는 하기의 구조를 갖거나 포함하거나:
제 1 올리고머 영역 - L1 - 담체 성분 1 - L2 - 제 2 올리고머 영역 - L3 - 담체 성분 2
[이때,
L1은 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이고;
L2는 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이고;
L3은 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이고;
L1 및 L2는 동일하거나 상이할 수 있고;
담체 성분 1 및 담체 성분 2는 동일하거나 상이할 수 있다];
상기 올리고머 접합체는 하기의 구조를 갖거나 포함하거나:
담체 성분 1 - L1 - 제 1 올리고머 영역 - L2 - 담체 성분 2 - L3 - 제 2 올리고머 영역 - L4 - 담체 성분 3
[이때,
L1은 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이고;
L2는 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이고;
L3은 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이고;
L1, L2 및 L3은 동일하거나 상이할 수 있고;
담체 성분 1, 담체 성분 2 및 담체 성분 3은 동일하거나 상이할 수 있다].
일부 실시태양에서, 바람직하게 본 발명에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서 상기 올리고머 접합체는 하기의 구조를 갖거나 포함한다:
담체 성분 - L1 - 제 1 올리고머 영역 - L2 - 제 2 올리고머 영역
이때,
L1은 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이고;
L2는 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이고;
L1 및 L2는 동일하거나 상이할 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 링커 1이 존재한다.
일부 실시태양에서, 상기 링커 2가 존재한다.
일부 실시태양에서, 상기 링커 3이 존재한다.
일부 실시태양에서, 상기 담체 성분은 상기 제 1 올리고머 영역에 결합된다, 바람직하게는 접합된다.
일부 실시태양에서, 상기 담체 성분은 상기 올리고머의 5' 단부에 결합된다, 바람직하게는 접합된다.
일부 실시태양에서, 상기 제 1 올리고머 영역 및 제 2 올리고머 영역은 각각 링커 또는 분지제 영역에 의해 결합되고, 바람직하게는 접합된다.
일부 실시태양에서, 상기 제 1 올리고머 영역 및 제 2 올리고머 영역은 각각 생리학적으로 불안정한 링커기 또는 생리학적으로 불안정한 분지제 영역에 의해 결합되고, 바람직하게는 접합된다.
일부 실시태양에서, 본 발명은 제 1 영역(영역 PA), 제 2 영역(영역 PB) 및 제 3 영역(영역 PC)을 포함할 수 있는 다중-올리고머성 화합물을 제공하며, 이때 상기 제 1 영역은 하나 이상의 추가의 올리고머성 화합물(영역 PA')에 공유 결합하고, 상기 제 1 영역(영역 PA) 및 영역 PA'는 생절단성 링커(영역 PB')를 통해 공유 결합되며, 상기 링커는 예로서 본 명세서에 개시된 바와 같은 제 2 영역에 상응하게, 예를 들어 하나 이상의 포스포다이에스터 결합된 DNA 또는 RNA(예를 들어 DNA)의 영역, 예를 들어 2, 3, 4 또는 5 포스포다이에스터 결합된 DNA 또는 RNA 뉴클레오사이드(예를 들어 DNA 뉴클레오사이드)일 수 있다. 영역 PB 및 영역 PB'는 일부 실시태양에서 동일한 구조, 예를 들어 동일한 수의 DNA/RNA 뉴클레오사이드 및 포스포다이에스터 결합 및/또는 동일한 핵염기 서열을 가질 수 있다. 다른 실시태양에서 영역 PB 및 PB'는 상이할 수 있다. 예로서 상기와 같은 폴리 올리고머성 화합물은 (5'-3' 또는 3'-5') 접합체/담체 화합물-PO-ON-PO'-ON'와 같은 구조를 가질 수 있으며, 이때 접합체/담체 화합물은 영역 PC이고, PO는 영역 PB이며, PO'는 영역 PB'이고, ON은 영역 PA이며, ON'는 영역 PA'이다.
영역 PA'는 일부 실시태양에서 생절단성 링커를 통해 연속해서(또는 평행하게) 결합된 다수의 추가적인 올리고머성 화합물(예를 들어 추가의 2 또는 3 올리고머성 화합물), 예를 들어 접합체/담체 화합물-PO-ON-PO-ON'-PO"-ON" 또는 접합체/담체 화합물-PO-ON-[PO-ON']n(이때 n은 예를 들어 1, 2 또는 3일 수 있고 각각의 ON'는 동일하거나 상이할 수 있으며, 상이한 경우 동일하거나 상이한 표적을 가질 수 있다)을 포함할 수 있음은 물론이다.
하나의 태양에서, 본 발명은 세포에서 표적 핵산, 예를 들어 HBV HBx 또는 HBsAg를 억제함과 같은 조절에 사용하기 위해 폴리-올리고머성 화합물(또한 본 명세서에서 올리고머 화합물이라 칭한다)을 사용한다. 상기 올리고머 화합물은 적어도 2개의 올리고머 영역, 예를 들어 (PA 및 PA')를 포함하고 추가의 올리고머 영역(예를 들어 PA")을 포함할 수 있다. 하나 이상의 올리고머 영역은 HBV의 HBx 또는 HBsAg 중의 표적 서열을 조절할 수 있는 올리고머, 예를 들어 본 발명에 의해 제공된 바와 같은 올리고머이다. 몇몇 실시태양에서, PA, PA'(및 존재하는 경우 PA")는 각각 HBV의 HBx 또는 HBsAg 중의 표적 서열을 조절할 수 있는 올리고머, 예를 들어 본 발명에 제공된 바와 같은 올리고머일 수 있다. PA 및 PA'는 상기 표적 서열에서 상이한 위치들에 대한 보체일 수 있다.
일부 실시태양에서, PA는 HBx 중의 표적 서열을 조절할 수 있는 올리고머일 수 있고 PA'(및/또는 존재하는 경우 PA")는 상이한 표적 서열을 조절할 수 있는 올리고머일 수 있다. 몇몇 실시태양에서, PA'(및/또는 존재하는 경우 PA")는 HBV의 HBsAg 중의 표적 서열을 조절할 수 있다. 예를 들어 PA'(및/또는 존재하는 경우 PA")는 본 명세서에 기재된 바와 같이, HBV의 HBsAg 중의 표적 서열을 조절할 수 있는 올리고머일 수 있다.
일부 실시태양에서, PA'는 HBx 중의 표적 서열을 조절할 수 있는 올리고머일 수 있고 PA(및/또는 존재하는 경우 PA")는 HBV와 상이한 표적 서열을 조절할 수 있는 올리고머일 수 있다. 몇몇 실시태양에서, PA(및/또는 존재하는 경우 PA")는 HBV의 HBsAg 중의 표적 서열을 조절할 수 있다. 예를 들어 PA(및/또는 존재하는 경우 PA")는 본 명세서에 기재된 바와 같이, HBV의 HBsAg 중의 표적 서열을 조절할 수 있는 올리고머일 수 있다.
각각의 올리고머 영역은 생절단성 영역(영역 PB)(예를 들어 하나 이상의 포스포다이에스터 결합을 포함하는, 1 내지 10 연속적인 뉴클레오타이드의 추가의 영역(영역 PB)일 수 있다)이 측면에 인접할 수 있다. 다른 생리학적으로 불안정한 뉴클레오사이드 영역을 사용할 수도 있다.
일부 실시태양에서, 본 발명의 올리고머 화합물을, 임의로, 예를 들어 1 내지 10의 포스포다이에스터 결합된 DNA 또는 RNA 뉴클레오사이드(들)를 포함하는 짧은 영역을 통해, 접합체 기, 표적화 기, 반응성 기, 활성화 기, 또는 차단 기에 공유 결합시킨다. 상기와 같은 기의 예는 본 명세서에 언급된 담체 성분 및 접합체 성분이다.
일부 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 RNA(단위)를 포함하지 않는다. 일부 실시태양에서, 본 발명에 따른 화합물은, 임의로 작용기, 예를 들어 접합체 기에 결합된 단일의 연속적인 서열을 형성하거나, 상기와 같은 선형 분자이거나, 선형 분자로서 합성된다. 따라서 상기 올리고머성 화합물은 단일 가닥 분자일 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 올리고머는 동일한 올리고머성 화합물(즉 듀플렉스)내의 등가의 영역에 상보성인, 예를 들어 적어도 3, 4 또는 5 연속적인 뉴클레오타이드의 짧은 영역을 포함하지 않는다. 상기 올리고머는 일부 실시태양에서 (필수적으로) 이중 가닥이 아닐 수도 있다. 일부 실시태양에서, 상기 올리고머는 필수적으로 이중 가닥은 아니며, 예를 들어 siRNA가 아니다.
올리고머 영역 PA, PA' 및 존재하는 경우 PA"는 포스포로티오에이트 올리고머이다. 즉 각각의 올리고머 영역 PA, PA' 및 존재하는 경우 PA"내의 뉴클레오사이드간 결합의 적어도 70%는 포스포로티오에이트 결합이고, 예를 들어 존재하는 올리고머 영역 PA, PA' 및 PA"(존재하는 경우)의 뉴클레오사이드간 결합의 적어도 80% 또는 적어도 90% 또는 전부가 포스포로티오에이트이다.
일부 실시태양에서, 올리고머 영역 PA, PA' 및 존재하는 경우 PA"는 단일의 연속적인 올리고뉴클레오타이드 서열을 형성할 수 있다. 영역 PA, PA' 및 PA"는 영역 PB, 예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5 포스포다이에스터 결합된 DNA 뉴클레오사이드에 의해 이격된다.
영역 PB가 단지 하나의 뉴클레오사이드만을 포함하는 경우, 영역 PB 뉴클레오사이드(예를 들어 DNA 뉴클레오사이드)간의 뉴클레오사이드간 결합 중 하나 이상 또는 둘 모두 포스포다이에스터 결합일 수 있다. 영역 PB가 단지 2개 또는 그 이상의 뉴클레오사이드를 포함하는 경우, 상기 영역 PB 뉴클레오사이드(예를 들어 DNA 뉴클레오사이드)간의 뉴클레오사이드간 결합은 포스포다이에스터 결합이고/이거나 또 다른 뉴클레오사이드간 결합, 예를 들어 포스포로티오에이트 결합일 수 있다.
본 발명의 올리고머, 예를 들어 PA, PA' 및 존재하는 경우 PA"는 siRNA 복합체의 부분을 형성하지 않는다. 본 발명의 올리고머, 예를 들어 PA, PA' 및 존재하는 경우 PA"는 비-상보성이다, 예를 들어 이들은 서로 하이브리드화하여 8 초과 또는 일부 실시태양에서 6 초과의 연속적인 염기쌍의 영역을 형성하지 않는다. 일부 실시태양에서, 영역 PA 및 PA"는 서로 하이브리드화하여 4 초과의 연속적인 염기쌍의 영역을 형성하지 않는다. 예시적인 염기쌍은 A-T, G-C 또는 A-U일 수 있다. 3개의 올리고머 영역 PA, PA' 및 PA"가 존재하는 경우, PA와 PA', 및 PA'와 PA"뿐만 아니라 PA와 PA" 사이는 비-상보성이다.
상기 올리고머 영역 PA, PA' 및 존재하는 경우 PA"는 (실질적으로) 상보성인 올리고뉴클레오타이드와 듀플렉스를 형성하지 않고, 예를 들어 siRNA가 아니다.
일부 실시태양에서, 올리고머 영역 PA, PA' 및 PA"는 동일한 연속적인 뉴클레오타이드 서열을 공유한다. 일부 실시태양에서, 올리고머 영역 PA 및 PA'는 동일한 연속적인 뉴클레오타이드 서열을 공유한다. 이에 관하여 본 발명은 올리고머의 다수의 사본(즉 동일한 연속적인 핵염기 서열 및 임의로 동일한 화학적 변형을 갖는)을 표적 조직으로 전달하는데 사용될 수 있는 단일 화합물을 제공한다.
상기 올리고머 영역(PA, PA' 및 존재하는 경우 PA")을 본 명세서에서 영역 PB라 칭하는 하나 이상의 생절단성 영역(및 하나 초과의 영역 PB가 존재하는 경우, 영역 PB' 및 영역 PB")을 통해 결합시킨다. 일부 실시태양에서, 영역 PB는 올리고머 영역 사이 또는 하나의(또는 각각의) 올리고머 영역과 결합기 사이에 생리학적으로 불안정한 영역을 형성하는 1 내지 10 뉴클레오사이드를 포함한다. DNA 포스포다이에스터 뉴클레오사이드의 영역들을 사용할 수 있으나, 다른 뉴클레오타이드 영역들을 이들이 적합하게 생리학적으로 불안정한 경우 사용할 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 올리고머 영역(PA, PA' 또는 존재하는 경우 PA") 및 (각각의) 제 2 영역 PB 사이에 뉴클레오사이드간 결합은 제 1(또는 유일한) DNA에 결합된 포스포다이에스터이거나 영역 PB의 RNA 뉴클레오사이드는 하나 이상의 포스포다이에스터 결합된 DNA 또는 RNA 뉴클레오사이드를 포함한다.
영역 PB는 일부 실시태양에서 포스포다이에스터 결합될 수 있는 추가의 DNA 또는 RNA 뉴클레오사이드를 포함한다.
본 명세서에 설명된 바와 같이, 영역 PB를 또한, 작용기를, 임의로 추가의 결합기(PY)를 통해 올리고머성 영역(들)에 결합시키기 위해 사용할 수 있다. 작용기를 올리고머에 결합시키기 위한 절단성 링커로서 영역 PB의 용도는 PCT/EP2013/073858(본 발명에 참고로 인용된다)에 기재되어 있다.
일부 실시태양에서 영역 PB를 제 3 영역에 추가로 공유 결합시키며, 상기 제 3 영역은 예를 들어 접합체, 표적 기, 반응성 기 및/또는 차단 기(PC)일 수 있다. 기(PC)는 본 명세서에 기재된 바와 같은 담체 성분일 수 있다.
일부 실시태양에서, 본 발명은 상기 제 1 영역, 예를 들어 안티센스 올리고뉴클레오타이드 및 접합체 또는 작용기, 예를 들어 담체 성분을 결합시키는 생리학적으로 불안정한 영역인 제 2 영역의 제공을 기본으로 한다. 상기 생리학적으로 불안정한 영역은 하나 이상의 포스포다이에스터 결합된 뉴클레오사이드, 예를 들어 DNA 또는 RNA 뉴클레오사이드, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 포스포다이에스터 결합된 뉴클레오사이드, 예를 들어 DNA 또는 RNA를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 올리고머성 화합물은 절단성(생리학적으로 불안정한) 링커를 포함한다. 이에 관하여 상기 절단성 링커는 바람직하게는 영역 PB(또는 일부 실시태양에서 영역 PA와 PB 사이) 중에 존재한다.
일부 실시태양에서, 하나(또는 그 이상 또는 전부)의 영역 PB는 포스포다이에스터 결합을 통해 상기 제 1 영역에 결합된 하나 이상의 DNA 또는 RNA 뉴클레오사이드를 포함하거나 상기로 이루어질 수 있다. 일부 태양에서, 올리고머 영역과 제 2 영역간의 뉴클레오사이드간 결합을 영역 PB의 부분으로서 간주한다.
일부 실시태양에서, 하나(또는 그 이상 또는 각각)의 영역 PB는 1 내지 10 결합된 뉴클레오사이드, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 결합된 DNA 또는 RNA 뉴클레오타이드를 포함하거나 이들로 이루어진다. DNA/RNA 포스포다이에스터의 영역이 절단성 링커의 제공에 중요한 것으로 간주되지만, 영역 PB는 또한 당-변형 뉴클레오사이드 유사체, 예를 들어 상기 제 1 영역 하에서 지칭된 것들을 포함하는 것도 가능하다. 그러나, 일부 실시태양에서, 영역 PB의 뉴클레오사이드는 (임의로 독립적으로) DNA 및 RNA로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시태양에서, 상기 영역 PB의 뉴클레오사이드는 (임의로 독립적으로) DNA이다. 상기 영역 PB의 뉴클레오사이드는 천연 또는 비-천연 핵염기를 포함할 수 있음을 알 것이다. 전형적으로, 영역 PB는 하나 이상의 포스포다이에스터 결합된 DNA 또는 RNA 뉴클레오사이드(일부 실시태양에서 올리고머에 인접한 제 1 뉴클레오사이드일 수 있다)를 포함한다. 영역 PB가 다른 뉴클레오사이드를 포함하는 경우, 영역 PB는 또한 포스포다이에스터 이외의 다른 뉴클레오사이드 결합, 예를 들어 (임의로 독립적으로) 포스포로티오에이트, 포스포다이티오에이트, 보라노포스페이트 또는 메틸 포스포네이트를 포함할 수 있다. 그러나, 다른 예시된 실시태양에서, 영역 PB 중의 모든 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트이다. 일부 실시태양에서, 영역 PB의 모든 뉴클레오사이드는 (임의로 독립적으로) 2'-OH 리보스 당(RNA) 또는 2'-H 당, 즉 RNA 또는 DNA를 포함한다. 1 내지 5, 또는 1 내지 4, 예를 들어 2, 3, 4 포스페이트(포스포다이에스터) 결합된 DNA 뉴클레오사이드가 본 발명의 화합물에 특히 유용한 것으로 나타났다.
일부 실시태양에서, 상기 제 2 영역은 적어도 1 내지 10(예를 들어 포스포다이에스터) 결합된 DNA 또는 RNA 뉴클레오사이드, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10(예를 들어 포스포다이에스터) 결합된 DNA 또는 RNA 뉴클레오타이드를 포함하거나 상기로 이루어진다.
일부 실시태양에서, 영역 PB는 3 이하 또는 4 이하의 연속적인 DNA 또는 RNA 뉴클레오사이드(예를 들어 DNA 뉴클레오사이드)를 포함한다. 그 자체로서 영역 PB는 너무 짧아 RNAseH를 모집하지 못할 수도 있으며, 상기 태양은 영역 PB가 표적에 상보성인 단일의 연속적인 핵염기 서열의 일부를 형성하지 않는 경우의 실시태양에서 중요할 수 있다. 보다 짧은, 예를 들어 1 내지 4 nt 길이의 영역 PB가 또한 일부 실시태양에서, 서열 특이적인 제한 효소의 표적이 아닌 듯하기 때문에, 바람직할 수 있다. 이와 같이 엔도뉴클레아제 절단에 대한 상기 영역 PB의 민감성을 변화시키고 이에 의해 생체내 또는 심지어 세포내에서 상기 활성 올리고머의 활성화 속도를 미세조정하는 것이 가능하다. 적합하게, 매우 빠른 활성화가 필요한 경우, 보다 긴 영역 PB 및/또는 (예를 들어 세포 또는 조직 특이적인 또는 차별적으로 발현된) 제한 효소의 인식 부위를 포함하는 영역 B를 사용할 수 있다.
일부 실시태양에서, 영역 PB를 작용기(PC), 예를 들어 접합체, 표적화 반응성 기, 활성화 기, 또는 차단 기에, 임의로 링커기(본 명세서에 제공된 바와 같은 PY)를 통해 접합시킬 수 있다. 작용기를 또한 올리고머 영역, 또는 본 발명의 화합물에, 다른 수단을 통해, 예를 들어 포스페이트 뉴클레오사이드 결합(예를 들어 포스포다이에스터, 포스포로티오에이트, 포스포다이티오에이트, 보라노포스페이트 또는 메틸포스포네이트) 또는 트라이아졸기를 통해 결합시킬 수 있다. 일부 태양에서, 상기 결합기는 상기 올리고머 영역 중 적어도 2개 사이의 영역 PB와 동일하며, 그 자체가 포스포다이에스터 결합일 수 있다.
일부 실시태양에서 하나(또는 그 이상 또는 각각)의 영역 PB의 DNA 또는 RNA 뉴클레오타이드를 DNA 및 RNA 뉴클레오타이드 중에서 독립적으로 선택한다. 일부 실시태양에서, 하나(또는 그 이상 또는 각각)의 영역 PB의 DNA 또는 RNA 뉴클레오타이드는 DNA 뉴클레오타이드이다. 일부 실시태양에서, 하나(또는 그 이상 또는 각각)의 영역 PB의 DNA 또는 RNA 뉴클레오타이드는 RNA 뉴클레오타이드이다.
상기 제 2 영역과 관련하여, DNA 및 RNA 뉴클레오사이드란 용어는 천연 또는 비-천연 염기(또한 염기 유사체 또는 변형 염기라 칭한다)를 포함할 수 있다.
일부 실시태양에서, 하나(또는 그 이상 또는 각각)의 영역 PB는 다른 뉴클레오타이드 또는 뉴클레오타이드 유사체를 추가로 포함할 수 있음을 알 것이다. 일부 실시태양에서, 하나(또는 그 이상 또는 각각)의 영역 PB는 단지 DNA 또는 RNA 뉴클레오사이드만을 포함한다. 일부 실시태양에서, 하나(또는 그 이상 또는 각각)의 영역 PB는 하나 초과의 뉴클레오사이드를 포함하고, 하나의 또는 각각의 영역 PB 중의 뉴클레오사이드간 결합은 포스포다이에스터 결합을 포함한다. 일부 실시태양에서, 하나(또는 그 이상 또는 각각)의 영역 PB는 하나 초과의 뉴클레오사이드를 포함하고, 상기 제 2 영역 중의 모든 뉴클레오사이드간 결합은 포스포다이에스터 결합을 포함한다.
일부 실시태양에서, 하나(또는 그 이상 또는 각각)의 영역 PB의 적어도 2개의 연속적인 뉴클레오사이드는 DNA 뉴클레오사이드(예를 들어 적어도 3 또는 4 또는 5의 연속적인 DNA 뉴클레오타이드)이다. 일부 실시태양에서, 하나(또는 그 이상 또는 각각)의 영역 PB의 적어도 2개의 연속적인 뉴클레오사이드는 RNA 뉴클레오사이드(예를 들어 적어도 3 또는 4 또는 5의 연속적인 RNA 뉴클레오타이드)이다. 일부 실시태양에서, 상기 하나(또는 그 이상 또는 각각)의 영역 PB의 적어도 2개의 연속적인 뉴클레오사이드는 하나 이상의 DNA 및 하나 이상의 RNA 뉴클레오사이드이다. 영역 PA와 영역 PB간의 뉴클레오사이드간 결합은 포스포다이에스터 결합일 수 있다. 일부 실시태양에서, 영역 PB가 하나 초과의 뉴클레오사이드를 포함하는 경우, 하나 이상의 추가적인 뉴클레오사이드간 결합은 포스포다이에스터, 예를 들어 영역 PA에 인접한 2(또는 3 또는 4 또는 5)의 뉴클레오사이드간의 결합기(들)이다.
영역 PB는 상기 제 1 영역, 예를 들어 안티센스 올리고뉴클레오타이드에 의해 적어도 한쪽(5' 또는 3')에 인접하고, 다른 한쪽(각각 3' 또는 5')에, 추가의 올리고머 영역(PA') 또는 접합체 모이어티 또는 유사한 기(예를 들어 차단 모이어티/기, 표적화 모이어티/기 또는 치료학적 소분자 부분)을 통해, 임의로 링커기를 통해(즉 제 2 영역과 접합체/차단 기 등의 부분 사이에) 인접할 수 있다.
일부 실시태양에서, 영역 PB는 상기 올리고머 영역(예를 들어 PA, PA' 및/또는 PA") 및 PB가 상보성 표적 서열에 정렬될 때 상보성 서열을 형성하지 않는다.
일부 실시태양에서, 영역 PB는 상기 올리고머 영역(예를 들어 PA, PA' 및/또는 PA") 및 PB가 상보성 표적 서열에 정렬될 때 상보성 서열을 형성한다. 이에 관하여 영역 PA 및 PB는 함께 상기 표적 서열에 상보성인 단일의 연속적인 서열을 형성할 수 있다.
일부 실시태양에서, 영역 PB 중의 염기의 서열은 표적 조직 또는 세포 또는 세포이하 구획 중에 존재하는 우세한 엔도뉴클레아제 절단 효소를 근거로, 최적의 엔도뉴클레아제 절단 부위를 제공하도록 선택된다. 이에 관하여, 표적 조직 및 비-표적 조직으로부터 세포 추출물을 단리함으로써, 영역 PB에 사용하기 위한 엔도뉴클레아제 절단 서열을 비-표적 세포(예를 들어 신장)에 비해 목적하는 표적 세포(예를 들어 간/간세포)에서 바람직한 절단 활성을 근거로 선택할 수 있다. 이에 관하여, 표적 하향조절을 위한 상기 화합물의 효능을 목적하는 조직/세포에 대해 최적화할 수 있다.
일부 실시태양에서 영역 PB는 서열 AA, AT, AC, AG, TA, TT, TC, TG, CA, CT, CC, CG, GA, GT, GC, 또는 GG의 다이뉴클레오타이드를 포함하며, 이때 C는 5-메틸시토신일 수 있고/있거나 T는 U로 치환될 수 있다.
일부 실시태양에서 영역 PB는 서열 AAA, AAT, AAC, AAG, ATA, ATT, ATC, ATG, ACA, ACT, ACC, ACG, AGA, AGT, AGC, AGG, TAA, TAT, TAC, TAG, TTA, TTT, TTC, TAG, TCA, TCT, TCC, TCG, TGA, TGT, TGC, TGG, CAA, CAT, CAC, CAG, CTA, CTG, CTC, CTT, CCA, CCT, CCC, CCG, CGA, CGT, CGC, CGG, GAA, GAT, GAC, CAG, GTA, GTT, GTC, GTG, GCA, GCT, GCC, GCG, GGA, GGT, GGC, 및 GGG의 트라이뉴클레오타이드를 포함하며, 이때 C는 5-메틸시토신일 수 있고/있거나 T는 U로 치환될 수 있다.
일부 실시태양에서 영역 PB는 서열 AAAX, AATX, AACX, AAGX, ATAX, ATTX, ATCX, ATGX, ACAX, ACTX, ACCX, ACGX, AGAX, AGTX, AGCX, AGGX, TAAX, TATX, TACX, TAGX, TTAX, TTTX, TTCX, TAGX, TCAX, TCTX, TCCX, TCGX, TGAX, TGTX, TGCX, TGGX, CAAX, CATX, CACX, CAGX, CTAX, CTGX, CTCX, CTTX, CCAX, CCTX, CCCX, CCGX, CGAX, CGTX, CGCX, CGGX, GAAX, GATX, GACX, CAGX, GTAX, GTTX, GTCX, GTGX, GCAX, GCTX, GCCX, GCGX, GGAX, GGTX, GGCX, 및 GGGX의 트라이뉴클레오타이드를 포함하고, 이때 X는 A, T, U, G, C 및 이들의 유사체로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이때 C는 5-메틸시토신일 수 있고/있거나 T는 U로 치환될 수 있다. (천연) 핵염기 A, T, U, G, C를 언급할 때 이들을 등가의 천연 핵염기(예를 들어 상보성 뉴클레오사이드와의 염기쌍)로서 기능하는 핵염기 유사체로 치환시킬 수 있다.
일부 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 하나 초과의 접합체 기(또는 하나 초과의 작용기 PX - 예를 들어 접합체, 표적화, 차단 또는 활성화된 기 또는 반응성 또는 활성화 기), 예를 들어 2 또는 3개의 상기와 같은 기을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 영역 PB를 임의로 [예를 들어 비-뉴클레오타이드]링커기를 통해 하나 이상의 작용기, 예를 들어 2 또는 3개의 작용기에 공유 결합시킨다. 일부 실시태양에서, 제 1 영역(PA)을 (예를 들어 뉴클레오사이드간 결합, 예를 들어 포스포다이에스터 결합을 통해) 2개 영역 PB에, 예를 들어 하나의 5' 및 하나의 3'를 상기 제 1 영역 PA에 공유 결합시킬 수 있으며, 이때 각각의 영역 PB는 본 명세서에 기재된 영역 PB 중에서 (임의로 독립적으로) 선택될 수 있다.
조성물
본 발명의 올리고머 및 본 발명의 올리고머 접합체를 약학 제형 및 조성물에 사용할 수 있다. 적합하게, 상기와 같은 조성물은 약학적으로 허용가능한 희석제, 담체, 염 또는 보조제를 포함한다. WO 2007/03109(본 발명에 참고로 인용된다)는 적합하고 바람직한 약학적으로 허용가능한 희석제, 담체 및 보조제를 제공한다. 적합한 투여량, 제형, 투여 경로, 조성, 투여형, 다른 치료제와의 조합, 전구약물 제형이 또한 WO 2007/03109(또한 본 발명에 참고로 인용된다)에 제공되어 있다.
본 발명의 약학 조성물은 다양한 기능, 예를 들어 약물 농도의 조절, 용해도의 조절, 화학적 안정화, 점도의 조절, 흡수 증대, pH의 조절 등을 제공하는 다양한 성분들을 함유할 수 있는 약학적으로 허용가능한 담체를 포함할 수 있다.
상기 약학 담체는 적합한 액체 비히클 또는 부형제 및 임의의 보조 첨가제 또는 첨가제들을 포함할 수 있다. 상기 액체 비히클 및 부형제는 통상적이며 상업적으로 입수할 수 있다. 그의 예시는 증류수, 생리식염수, 덱스트로스의 수용액 등이다. 수용성 제형의 경우, 상기 약학 조성물은 바람직하게는 완충제, 예를 들어 포스페이트 완충제, 또는 바람직하게는 6.5 내지 8 범위의 pH의 다른 유기산염을 포함한다. 약하게 용해성인 안티센스 화합물을 함유하는 제형의 경우에, 미세유화액을, 용해도를 증가시키기 위해서 예를 들어 비이온성 계면활성제, 예를 들어 폴리솔베이트 80을 0.04 내지 0.05%(w/v)의 양으로 사용함으로써 사용할 수 있다. 다른 성분은 산화방지제, 예를 들어 아스코르브산, 친수성 중합체, 예를 들어 모노사카라이드, 다이사카라이드, 및 다른 탄수화물, 예를 들어 셀룰로스 또는 그의 유도체, 덱스트린, 킬레이트제, 예를 들어 EDTA, 및 의약과학 분야의 숙련가들에게 주지된(예를 들어 문헌[Remington's Pharmaceutical Science, latest edition (Mack Publishing Company, Easton, Pa.)]) 유사 성분들을 포함할 수 있다.
본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 예를 들어 알칼리토염, 예를 들어 나트륨 또는 마그네슘, 암모늄 또는 NX4 +(이때 X는 C1-C4 알킬이다)의 염들을 포함한다. 다른 약학적으로 허용가능한 염은 유기 카복실산, 예를 들어 폼산, 아세트산, 락트산, 타타르산, 말산, 이세티온산, 락토비온산 및 숙신산; 유기 설폰산, 예를 들어 메탄설폰산, 에탄설폰산, 톨루엔설폰산 및 벤젠설폰산; 및 무기산, 예를 들어 염산, 황산, 인산 및 설팜산을 포함한다. 하이드록실기를 갖는 화합물의 약학적으로 허용가능한 염은 적합한 양이온, 예를 들어 Na+, NH4 + 등을 갖는 상기와 같은 화합물의 음이온을 포함한다.
환자는 유효하지만 안전한 세포내 농도의 복합 올리고뉴클레오타이드를 성취하기에 충분한 1일 투여량의 올리고뉴클레오타이드를 수용해야 한다. 당해 분야의 숙련가들은 특정한 환경 및 상기 환자의 필요에 맞도록 적합한 투여량 및 투여 스케줄을 쉽게 이끌어낼 수 있어야 한다.
상기 치료의 유효성을, 경감이 발생했는지의 여부를 측정하는데 사용되는 통상적인 방법에 의해 평가할 수 있다. 상기와 같은 방법은 일반적으로 형태학, 세포화학, 세포유전학, 면역학 및 분자 분석에 따라 변한다. 또한, 경감을 하나 이상의 관련 유전자의 발현 수준을 탐침 조사함으로써 유전학적으로 평가할 수 있다. 역전사효소 폴리머라제 쇄 반응(RT-PCR) 방법을 사용하여 매우 낮은 수라도 mRNA 전사물을 검출할 수 있다.
올리고뉴클레오타이드 전달 기법
본 발명의 올리고뉴클레오타이드 및 접합체를 바람직하게는 피실험자에게 경구로 또는 국소적으로 투여할 수 있지만 주사에 의해 정맥내 투여할 수도 있다. 비히클은 상응하게 설계된다. 한편으로, 상기 올리고뉴클레오타이드를 조절된 방출 투여형 또는 통상적인 정맥주사 제형을 통해 피하로 투여할 수 있다. 올리고뉴클레오타이드의 바람직한 투여 방법은 적합한 대로 국소, 전신 또는 국소 관류를 포함한다. 국소 관류 방법에 따라, 병변을 함유하는 사지로 공급되는 수입혈관 및 수출혈관을 단리하고 산소발생기 및 열교환기와 연속되게 저-유동 관류 펌프에 연결한다. 장골 혈관은 하지의 관류에 사용될 수 있다. 상지 병변의 경우 액와 중의 액와 혈관에 높게 캐뉼러를 꽂는다. 올리고뉴클레오타이드를 상기 관류 회로에 가하고, 적합한 시간, 예를 들어 1시간 동안 관류를 계속한다. 하지 병변의 경우 약 100 내지 약 150 ㎖/분의 관류 속도를 사용할 수 있는 반면, 하지 병변의 경우는 절반 속도를 사용해야 한다. 전신 헤파린요법을 상기 관류 전체를 통해 사용할 수 있으며, 상기 관류의 완료 후에는 반대로 할 수 있다. 상기 단리 관류 기법은, 동맥 또는 정맥 전신 순환내로의 주입시 달리 허용될 수 있는 경우보다 더 높은 용량의 화학요법제의 투여를 허용한다.
특정한 실시태양에서, 본 발명의 올리고머 및 접합체를 전신적으로 투여하거나 전신 투여용으로 제형화한다.
전신 주입의 경우, 상기 올리고뉴클레오타이드를 바람직하게는, 적합한 연속적인 주입 장치에 연결된 중심 정맥 카테터를 통해 전달한다. 내재형 카테터는 연장된 기간에 걸친 약물의 빈번한 투여를 위해 정맥내 순환에 장기적인 접근을 제공한다. 상기 카테터를 일반적으로는 수술에 의해 외부 요골피정맥 또는 내부 경정맥내에 일반 또는 국소 마취하에서 삽입한다. 쇄골하 정맥이 카테터요법에 또 다른 통상적인 부위이다. 상기 주입 펌프는 외부적이거나, 전체 이식성 중심정맥 시스템, 예를 들어 인퓨세드 코포레이션(Infusaid Corp.)(미국 매사추세츠주 노르우드 소재)으로부터 입수할 수 있는 INFUSAPORT 시스템 및 파마시아 레보라토리즈(Pharmacia Laboratories)(미국 뉴저지주 피스카타웨이 소재)로부터 입수할 수 있는 PORT-A-CATH 시스템의 부분을 형성할 수 있다. 이들 장치를 국소 마취하에 피하 공간내에 이식한다. 상기 펌프 주입구에 연결된 카테터는 쇄골하정맥을 통해 상대정맥으로 빠져나간다. 상기 이식물은 필요한 경우 저장소 중의 자가-밀봉 격막을 통해 피하 주사로부터 추가적인 약물의 주사에 의해 새로 보충될 수 있는 상기 저장소 중의 올리고뉴클레오타이드의 공급을 함유한다. 전체 이식성 주입기가 바람직한데, 그 이유는 상기 주입기가 상기와 같은 장치의 편의성, 유지의 용이성 및 미용상 이점 때문에 환자들에게 잘 허용되기 때문이다.
본 발명의 올리고뉴클레오타이드 및 접합체를 본 발명에 참고로 인용된 미국특허 제 4,740,463 호에 기재된 방법들 중 임의의 방법에 의해 도입시킬 수 있다. 한 가지 기법은 다수의 상이한 방법들에 의해 수행될 수 있는 시험관내 형질감염이다. 형질감염의 한 가지 방법은 DEAE-덱스트란을 가하여 수용 세포에 의한 네이키드 DNA 분자의 흡수를 증가시킴을 포함한다. 문헌[McCutchin, J. H. and Pagano, J. S., J. Natl. Cancer Inst. 41, 351-7 (1968)]을 참조하시오. 또 다른 형질감염 방법은 포스페이트-함유 DNA 용액에 Ca2+의 첨가에 따른 칼슘 포스페이트 침전 기법이다. 상기 생성되는 침전물은 겉보기에 칼슘 포스페이트 결정과 함께 DNA를 포함한다. 이들 결정은 세포 단층상에 침전되며; 생성되는 결정 및 세포 표면 부착이 DNA의 흡수를 유도하는 듯하다. 흡수된 DNA의 작은 부분은 형질감염체뿐만 아니라 그의 클론 자손에서 발현되게 된다. 문헌[Graham, F. L. and van der Eb, A. J., Virology 52, 456-467 (1973)] 및 문헌[Virology 54, 536-539 (1973)]을 참조하시오.
형질감염을 또한 양이온성 인지질-매개된 전달에 의해 수행할 수 있다. 특히, 다중양이온성 리포솜을 N-[1-(2,3-다이-올레일옥시)프로필]-N,N,N-트라이메틸암모늄 클로라이드(DOT-MA)로부터 형성시킬 수 있다. 문헌[Felgner et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 84, 7413-7417 (1987)](DNA-형질감염); 문헌[Malone et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 86, 6077-6081 (1989)](RNA-형질감염)을 참조하시오.
전신 또는 국소 생체내 투여의 경우, 올리고뉴클레오타이드의 양은 질병의 성질 및 정도, 사용되는 특정한 올리고뉴클레오타이드, 및 다른 인자들에 따라 변할 수 있다. 실제 투여되는 투여량은 환자의 크기 및 체중, 치료의 성질이 예방학적인지 치료학적인지의 여부, 환자의 연령, 건강 및 성별, 투여 경로, 치료가 국소적인지 전신적인지의 여부, 및 다른 인자들을 고려할 수 있다.
통상적인 약학 담체와의 투여 외에, 상기 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 다양한 특수 올리고뉴클레오타이드 전달 기법에 의해 투여할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물과 함께 사용하기에 적합한 서방성 시스템은 폴리락타이드; L-글루탐산 및 감마-에틸-L-글루타메이트의 공중합체, 폴리(2-하이드록시에틸 메트아크릴레이트) 및 유사 물질을 포함하는 필름, 미세캡슐 등의 형태의 반-투과성 중합체 기질을 포함한다(예를 들어 로젠버그(Rosenberg) 등의 국제특허출원 PCT/US92/05305를 참조하시오).
상기 올리고뉴클레오타이드 및 접합체를 예를 들어 문헌[Liposome Technology, Vol. II, Incorporation of Drugs, Proteins, and Genetic Material, CRC Press]에 개시된 바와 같이, 치료학적 전달을 위해 리포솜 중에 캡슐화할 수 있다. 상기 올리고뉴클레오타이드는 그의 용해도에 따라, 수성층 및 지질층 모두에, 또는 일반적으로 리포솜 현탁액이라 칭하는 것 중에 존재할 수 있다. 소수성 층(일반적으로, 그러나 독점적으로는 아닌)은 인지질, 예를 들어 레시틴 및 스핑고마이엘린, 스테로이드, 예를 들어 콜레스테롤, 이온성 계면활성제, 예를 들어 다이아세틸포스페이트, 스테아릴아민, 또는 포스파티드산, 및/또는 소수성 성질의 다른 물질을 포함한다. 또한 문헌[DeLong et al, Nucl. Acid. Res., 1999, 27(16), 3334-3341]에 개시된 "분자 우산"이라 칭하는 신규의 양이온성 양친성 화합물이 포함된다.
본 발명의 실시태양을 미립자 시스템 및/또는 중합체에 의해 전달할 수도 있다. 폴리뉴클레오타이드의 시험관내 및 생체내 전달을 위한 미립자 시스템 및 중합체는 문헌[Felgner, Advanced Drug Delivery Reviews 5, 163-187 (1990)]에 광범위하게 재고찰되어 있다. 직접 전달을 위한 기법이 또한 문헌[Cook S.T. Antisense Drug Technology, Principles, Strategies, and Applications, Marcel Dekker, Inc, 2001]에 기재되어 있다.
전구-약물
상기 올리고뉴클레오타이드를 상기 올리고에 대한 뉴클레아제 내성을 부여하고 세포 흡수를 개선시키며 세포에 진입 후 선택적으로 탈보호시키는 친지성 기, 예를 들어 메틸-SATE(S-아세틸티오에틸) 또는 t-Bu-SATE(S-피발로일티오에틸) 보호기를 운반하는 전구-약물로서 합성할 수 있다(문헌[Vives et al. Nucl. Acids Res. 1999, Vol. 27, 4071-4076]에 기재됨).
환상 분자
상기 올리고뉴클레오타이드를, 상기 올리고뉴클레오타이드의 5' 및 3' 단부가 상기 5' 단부에 공유 부착된 하나의 구성원과 상기 3' 단부에 공유 부착된 다른 구성원의 친화성 쌍에 의해 함께 유지되거나 공유 결합되는 환상 분자로서 합성할 수 있다. 상기와 같은 환화는 상기 올리고뉴클레오타이드를 엑소뉴클레아제에 의한 분해에 대해 보호하고 또한 세포 흡수 및 분배를 개선시킬 수 있다. 본 발명의 하나의 태양에서 환상 올리고뉴클레오타이드의 5' 및 3' 단부를 결합시키는 부분은 임의의 유형의 인간 또는 척추동물 세포내로 진입시 자동적으로 절단되며 이에 의해 상기 올리고뉴클레오타이드는 선형화되고 그의 표적 서열에 효율적으로 하이브리드화할 수 있게 된다. 또 다른 태양에서, 상기 올리고뉴클레오타이드의 5' 및 3' 단부를 결합시키는 부분을, 절단이 바람직하게는 안티센스 올리고뉴클레오타이드에 대한 표적인 mRNA를 발현하는 특정 유형의 세포에서만 발생하도록 설계한다. 예를 들어, 바이러스성 질환에 관련된 유전자에 대한 환상 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 문제의 유전자, 예를 들어 HBV HBx 또는 HBsAg를 발현하는 세포의 부분집합에서만 선형화에 의해 작용하게 될 수 있다.
추가적인 약학적 존재
본 발명의 올리고머 및 올리고머 접합체를 질병 상태의 치료를 위한 1차 치료제로서 사용하거나, 비-올리고뉴클레오타이드 약물과 함께 사용할 수 있다.
따라서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 바와 같은 약학 조성물 및 추가적인 약학적 존재를 포함하는 약학 시스템을 제공한다. 상기 추가적인 약학적 존재는 당해 분야에 공지된 임의의 치료제일 수 있다. 예를 들어, 상기 추가적인 약학적 존재는 항체, 소분자 치료제, 폴리뉴클레오타이드 또는 유전자 요법 벡터(예를 들어 치료학적 폴리펩타이드 또는 RNAi 작용제를 발현할 수 있는 벡터)일 수 있다.
따라서, 본 발명의 올리고머 또는 올리고머 접합체를 다른 활성제, 예를 들어 다른 항바이러스 활성제와 함께 사용할 수 있다.
예로서, 본 발명의 올리고머 또는 올리고머 접합체를 안티센스(다른 LNA 올리고머 포함), siRNA(예를 들어 ARC520), 앱타머, 모폴리노 또는 임의의 다른 항바이러스제, 뉴클레오타이드 서열-의존성 작용 방식을 통해 작용하는 다른 활성제, 예를 들어 올리고뉴클레오타이드-기재 항바이러스제, 예를 들어 서열 특이성 올리고뉴클레오타이드-기재 항바이러스제와 함께 사용할 수 있다.
추가의 예로서, 본 발명의 올리고머 또는 올리고머 접합체를 다른 활성제, 예를 들어 면역 자극 항바이러스 화합물, 예를 들어 인터페론(예를 들어 peg화된 인터페론 알파), LTR7 작용물질(예를 들어 GS-9620) 또는 치료 백신과 함께 사용할 수 있다.
추가의 예로서, 본 발명의 올리고머 또는 올리고머 접합체를 항바이러스 활성을 갖는 다른 활성제, 예를 들어 소분자와 함께 사용할 수 있다. 이들 다른 활성제는 예를 들어 뉴클레오사이드/뉴클레오타이드 억제제(예를 들어 엔테카비어 또는 테노포비어 다이소프록실 퓨마레이트), 캡시드화 억제제, 진입 억제제(예를 들어 미르클루덱스(Myrcludex) B)와 함께 사용할 수 있다.
몇몇 실시태양에서, 상기 추가적인 치료제는 HBV제, C형 간염 바이러스(HCV)제, 화학요법제, 항생제, 진통제, 비스테로이드성 소염(NSAID)제, 항진균제, 항기생충제, 항구토제, 항설사제, 또는 면역억제제일 수 있다.
특정한 관련 실시태양에서, 상기 추가적인 HBV제는 인터페론 알파-2b, 인터페론 알파-2a, 및 인터페론 알파콘-1(peg화된 및 peg화되지 않은), 리바비린; HBV RNA 복제 억제제; 제 2 안티센스 올리고머; HBV 치료 백신; HBV 예방 백신; 라미뷰딘(3TC); 엔테카비어(ETV); 테노포비어 다이아이소프록실 퓨마레이트(TDF); 텔비뷰딘(LdT); 아데포비어; 또는 HBV 항체 요법(단클론성 또는 다클론성)일 수 있다.
다른 특정한 관련 실시태양에서, 상기 추가적인 HCV제는 인터페론 알파-2b, 인터페론 알파-2a, 및 인터페론 알파콘-1(peg화된 및 peg화되지 않은); 리바비린; HCV RNA 복제 억제제(예를 들어 바이로파마스(ViroPharma's) VP50406 시리즈); HCV 안티센스제; HCV 치료 백신; HCV 프로테아제 억제제; HCV 헬리카제 억제제; 또는 HCV 단클론성 또는 다클론성 항체 요법일 수 있다.
상기 추가적인 약학적 존재는 본 명세서에 정의된 올리고머 또는 올리고머 접합체일 수 있다.
몇몇 실시태양에서 상기 약학적 시스템은 하나 이상, 적어도 둘, 적어도 셋 내지 다수의 본 발명에 의해 제공된 올리고머 또는 올리고머 접합체를 포함할 수 있다.
몇몇 실시태양에서 상기 추가적인 약학적 존재는 HBV 중의 표적 서열을 조절할 수 있는 올리고머 또는 올리고머 접합체일 수 있다. 상기 올리고머 또는 접합체는 각각 HBV HBx 또는 HBsAg 중의 표적 서열을 조절할 수 있다. 상기 올리고머 또는 접합체는 HBx 또는 HBsAg내에 있지 않은 HBV 중의 표적 서열을 조절할 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 올리고머 또는 접합체는 HBcAg, HBeAg 또는 DNA 폴리머라제에 대한 HBV 유전자 또는 mRNA내의 표적 서열을 조절할 수 있다.
몇몇 실시태양에서, 상기 올리고머, 또는 추가적인 올리고머, 또는 접합체, 또는 추가적인 접합체는 HBsAg에 대한 HBV 유전자 또는 mRNA 중의 표적 서열을 조절할 수 있다.
상이한 표적 서열을 표적화하는 올리고뉴클레오타이드들의 조합을 사용하는 경우, 상이한 유형의 올리고뉴클레오타이드들의 양의 비는 광범위하게 변할 수 있다. 본 발명의 하나의 바람직한 실시태양에 따라, 모든 유형의 올리고뉴클레오타이드가 몰농도에 의해 적합하게 동량으로 존재한다.
투여 및 투여량
본 발명은 또한 치료 유효량의 본 발명의 접합체를 함유하는 약학 조성물에 관한 것이다. 상기 조성물을 다양한 약물 전달 시스템에 사용하기 위해 제형화할 수 있다. 하나 이상의 생리학적으로 허용가능한 부형제 또는 담체를 또한 적합한 제형을 위해 조성물 중에 포함시킬 수 있다. 본 발명에 사용하기에 적합한 제형들이 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, Pa., 17th ed., 1985]에서 발견된다. 약물 전달 방법에 대한 간략한 리뷰에 대해서, 예를 들어 문헌[Langer (Science 249:1527-1533, 1990)]을 참조하시오.
본 발명의 약학 조성물은 예방학적 및/또는 치료학적 치료를 위한, 예를 들어 경피 수단에 의한 비경구, 비내, 국소, 경구 또는 국부 투여용이다. 상기 약학 조성물을 비경구에 의해(예를 들어 정맥내, 근육내, 또는 피하 주사에 의해), 또는 경구 섭취에 의해, 또는 국소 적용 또는 관절내 주사에 의해 투여할 수 있다. 추가적인 투여 경로는 소낭내, 동맥내, 종양내, 복강내, 심실내, 경막내뿐만 아니라 코, 눈, 공막내, 안와내, 직장, 국소, 또는 에어로졸 흡입 투여를 포함한다. 또한 데포 주사 또는 미란성 이식물 또는 성분과 같은 수단에 의한 서방성 투여가 또한 본 발명에 특별히 포함된다. 따라서, 본 발명은 허용가능한 담체, 바람직하게는 수성 담체, 예를 들어 물, 완충된 물, 염수, PBS 등에 용해되거나 현탁된 상기 언급한 작용제를 포함하는 비경구 투여용 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 생리학적 조건에 가깝게 하는데 필요한 바와 같은 약학적으로 허용가능한 보조 물질, 예를 들어 pH 조절 및 완충제, 긴장성 조절제, 습윤제, 세제 등을 함유할 수 있다. 본 발명은 또한 정제, 캡슐 등의 제형을 위한 결합제 또는 충전제와 같은 불활성 성분을 함유할 수 있는 경구 전달용 조성물을 제공한다. 더욱 또한, 본 발명은 크림, 연고 등의 제형을 위한 용매 또는 유화제와 같은 불활성 성분을 함유할 수 있는 국소 투여용 조성물을 제공한다.
특정한 실시태양에서, 본 발명의 올리고머 및 접합체를 피하로 투여하거나 피하 투여용으로 제형화한다.
이들 조성물을 통상적인 멸균 기법에 의해 멸균시키거나, 멸균 여과할 수 있다. 생성되는 수용액을 그 자체로 사용하기 위해 패키징하거나, 동결건조시킬 수 있으며, 상기 동결건조된 제제를 투여 전에 멸균 수성 담체와 합한다. 상기 제제의 pH는 전형적으로 3 내지 11, 보다 바람직하게는 5 내지 9 또는 6 내지 8, 및 가장 바람직하게는 7 내지 8, 예를 들어 7 내지 7.5일 것이다. 고체 형태의 상기 생성되는 조성물을 다수의 단일 용량 단위로 패키징할 수 있으며, 각각의 단위는 고정량의 상기 언급된 작용제 또는 작용제들을 정제 또는 캡슐의 밀봉된 패키지 중에 함유한다. 고체 형태의 상기 조성물을 유연한 양을 위한 용기 중에, 예를 들어 국소 적용 가능한 크림 또는 연고용으로 설계된 압착성 튜브 중에 패키징할 수 있다.
유효량을 함유하는 조성물을 예방학적 또는 치료학적 치료를 위해 투여할 수 있다. 예방학적 용도에서, 조성물을 종양 또는 암, 퇴행성 질병, 또는 리소솜 질환의 발생에 대해 임상적으로 측정된 소인 또는 증가된 민감성을 갖는 피실험자에게 투여할 수 있다. 본 발명의 조성물을 환자(예를 들어 인간)에게 임상적 질병 또는 종양발생의 개시를 지연시키거나, 감소시키거나 바람직하게는 예방하기에 충분한 양으로 투여할 수 있다. 치료학적 용도에서, 조성물을 질병(예를 들어 암, 퇴행성 질병 또는 리소솜 저장 장애)을 이미 앓고 있는 피실험자(예를 들어 인간)에게 상기 상태의 증상 및 그의 합병증을 완치시키거나 적어도 부분적으로 저지하기에 충분한 양으로 투여한다. 상기 목적을 수행하기에 적합한 양을 질병 또는 의학적 상태와 관련된 일부 증상을 실질적으로 개선시키기에 충분한 화합물의 양인 "치료 유효 용량"으로서 정의한다. 예를 들어, 암, 퇴행성 질병, 또는 리소솜 저장 질병의 치료에서, 상기 질병 또는 상태의 임의의 증상을 감소시키거나, 예방하거나, 지연시키거나, 억제하거나, 저지하는 작용제 또는 화합물이 치료학적으로 유효할 수 있다. 작용제 또는 화합물의 치료 유효량은 질병 또는 상태를 완치시키는데 필요한 것이 아니라 상기 질병 또는 상태의 개시가 개인에게서 지연되거나, 방해되거나 예방되거나, 상기 질병 또는 상태 증상이 개선되거나, 상기 질병 또는 상태의 기간이 변화되거나, 예를 들어 덜 심하거나, 회복이 가속화되도록 상기 질병 또는 상태에 대한 치료를 제공할 것이다. 상기 용도에 유효한 양은 상기 질병 또는 상태의 중증도 및 상기 환자의 체중 및 일반적인 상태에 따라 변할 수 있지만, 일반적으로는 환자당 용량당 약 0.5 ㎎ 내지 약 3,000 ㎎의 상기 작용제 또는 작용제들의 범위일 수 있다. 초기 투여 및 추가 투여에 적합한 섭생은 초기 투여에 이은 1회 이상의 매시, 매일, 매주 또는 매월 간격의 후속 투여에 의한 반복 용량에 의해 전형화된다. 본 발명의 조성물 중에 존재하는 작용제의 총 유효량을 포유동물에게 단일 용량으로서, 일시주사 또는 비교적 짧은 기간에 걸친 주입에 의해 투여하거나, 세분된 치료 프로토콜을 사용하여 투여할 수 있으며 이때 수회 용량을 보다 연장된 기간에 걸쳐 투여한다(예를 들어 매 4 내지 6, 8 내지 12, 14 내지 16 또는 18 내지 24시간마다, 또는 매 2 내지 4일, 1 내지 2주마다, 1개월에 1회의 용량). 한편으로, 치료학적으로 유효한 혈중 농도를 유지시키기에 충분한 연속적인 정맥내 주입이 고려된다.
본 발명의 조성물내에 존재하고 포유동물(예를 들어 인간)에게 적용되는 본 발명의 방법에 사용되는 하나 이상의 작용제의 치료 유효량을 상기 포유동물의 나이, 체중 및 상태에 있어서 개별적인 차이를 고려하여 통상적인 숙련가가 결정할 수 있다. 본 발명의 작용제를 피실험자(예를 들어 포유동물, 예를 들어 인간)에게, 치료된 개인에서 바람직한 결과(예를 들어 암 또는 퇴행성 질환의 지연 또는 경감)를 생성시키는 양인 유효량으로 투여한다. 치료 유효량은 당해 분야의 숙련가에 의해 경험상 결정될 수 있다.
상기 환자는 또한 주당 1회 이상(예를 들어 주당 2, 3, 4, 5, 6 또는 7회 이상) 약 0.1 내지 3,000 ㎎/용량, 0.1 내지 2,500(예를 들어 2,000, 1,500, 1,000, 500, 100, 10, 1, 0.5 또는 0.1) ㎎ 용량/주의 범위로 작용제를 수용할 수 있다. 환자는 또한 상기 조성의 작용제를 매 2주 또는 3주마다 1회 0.1 내지 3,000 ㎎/용량의 범위로 수용할 수 있다. 유효량을 포함하는 본 발명의 조성물의 단일 또는 수회 투여를 치료 의사에 의해 선택되는 용량 수준 및 패턴으로 수행할 수 있다. 상기 용량 및 투여 스케줄을 환자의 질병 또는 상태의 중증도를 기준으로 측정하고 조절할 수 있으며, 이를 임상의에 의해 통상적으로 실행되는 방법 또는 본 명세서에 기재된 방법들에 따라 치료 과정 전체를 통해 모니터링할 수 있다.
본 발명의 담체 및 접합체를 통상적인 치료 방법 또는 요법과 함께 사용하거나 통상적인 치료 방법 또는 요법과 별도로 사용할 수 있다.
본 발명의 접합체를 다른 작용제와의 복합 요법에 사용하는 경우, 이들을 개인에게 연속적으로 또는 동시에 투여할 수 있다. 한편으로, 본 발명에 따른 약학 조성물은 본 발명의 담체-작용제 접합체의 조합과 본 명세서에 기재된 바와 같은 약학적으로 허용가능한 부형제, 및 당해 분야에 공지된 또 다른 치료제 또는 예방제와 함께 구성될 수 있다.
추가의 용도
본 발명의 올리고머를 예를 들어 진단학, 치료학 및 예방학을 위한 탐구 시약으로서 사용할 수 있다.
탐구시, 상기와 같은 올리고머를 세포 및 실험 동물에서 표적 서열의 발현 생성물의 합성을 특이적으로 억제(전형적으로 mRNA를 분해하거나 억제시킴으로써, 이에 의해 단백질 형성이 방지된다)하는데 사용하여 상기 표적의 기능적 분석 또는 치료 중재를 위한 표적으로서 그의 유용성의 평가를 용이하게 할 수 있다.
진단시, 상기 올리고머를 사용하여 노던 블럿팅, 제자리 하이브리드화 또는 유사한 기법에 의해 세포 및 조직 중 표적 서열의 발현 생성물의 발현을 검출 및 정량분석할 수 있다.
치료학의 경우, 표적 서열의 발현을 조절함으로써 치료될 수 있는 질병 또는 질환이 있는 것으로 의심이 가는 동물 또는 인간을, 올리고머성 화합물을 본 발명에 따라 투여함으로써 치료한다. 치료학적 또는 예방학적 유효량의 본 발명의 올리고머 또는 조성물 중 하나 이상을 투여함으로써, 표적 서열의 발현과 관련된 질병 또는 상태가 있는 것으로 의심이 가거나 상기 질병 또는 상태에 걸리기 쉬운 포유동물을 치료하는, 예를 들어 인간을 치료하는 방법을 추가로 제공한다. 본 발명에 따른 올리고머, 접합체 또는 약학 조성물을 전형적으로는 유효량으로 투여한다.
본 발명은 또한 본 명세서에 언급된 바와 같은 질환의 치료를 위한 약제의 제조, 또는 본 명세서에 언급된 바와 같은 질환의 치료 방법을 위한 기재된 바와 같은 본 발명의 화합물 또는 접합체의 용도를 제공한다.
본 발명은 또한 본 명세서에 기재된 바와 같은 본 발명에 따른 화합물 및/또는 본 발명에 따른 접합체, 및/또는 본 발명에 따른 약학 조성물을 상기가 필요한 환자에게 투여함을 포함하는, 본 명세서에 언급된 바와 같은 질환의 치료 방법을 제공한다.
바이러스성 질환
본 발명에 따른 올리고머, 올리고머 접합체 및 다른 조성물을 표적 서열과 관련된 상태, 예를 들어 상기 표적 서열의 돌연변이된 버전의 과발현 또는 발현의 치료에 사용할 수 있다.
본 발명은 또한 본 명세서에 언급된 바와 같은 질병, 질환 또는 상태의 치료를 위한 약제의 제조에서 본 발명의 화합물의 용도를 제공한다.
본 발명과 관련하여, 상기 질병, 질환 또는 상태는 바이러스성 질환일 수 있다.
하나의 실시태양에서, 상기 바이러스성 질환은 HBx 또는 HBsAg의 발현 또는 과발현과 관련된다. 상기 바이러스성 질환은 HBV와 관련된 질환일 수 있다. 상기와 같은 바이러스성 질환의 예는 비제한적으로 B형 간염, 간경변증, 간암(예를 들어 간세포 암종), 담관암을 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 바이러스성 질환은 B형 간염이다. 통상적인 숙련가가 인지하는 바와 같이, 본 발명과 관련하여 "B형 간염"이란 용어는 HBV에 의해 야기되는 간의 감염성 질환을 지칭한다. B형 간염은 급성 또는 만성일 수 있다. 급성 질병은 간 염증, 구토, 황달 및 때때로 사망을 유발한다. 만성 B형 간염은 간경변증 및 간암을 유발할 수 있다.
하나의 실시태양에서, 상기 바이러스성 질환은 간경변증이다. 통상적인 숙련가가 인지하는 바와 같이, 본 발명과 관련하여 "간경변증"이란 용어는 간에서의 섬유증 및 재생성 결절의 존재를 특징으로 하는 진행된 간 질병을 지칭한다. 이러한 변화는 간기능의 상실을 유도할 수 있다.
하나의 실시태양에서, 상기 바이러스성 질환은 간암이다. 통상적인 숙련가가 인지하는 바와 같이, 본 발명과 관련하여 "간암"은 간에서 기원하는 암을 지칭한다.
하나의 실시태양에서, 상기 바이러스성 질환은 간세포 암종(HCC)이다. 통상적인 숙련가가 인지하는 바와 같이, 본 발명과 관련하여 "HCC"란 용어는 바이러스성 간염 감염, 예를 들어 B형 간염에 부차적으로 통상적으로 발생하는 간암의 한 유형을 지칭한다. 거시적으로, HCC는 결절성 또는 침윤성 종양으로서 나타난다. 상기 결절 유형은 단독성(큰 덩어리)이거나 다발성(간경변증의 합병증으로서 나타날 때)일 수 있다. 종양 결절은 원형 내지 타원형의 회색 또는 녹색(종양이 담즙을 생산할 때)으로, 경계는 확실하나 캡슐화되지는 않는다. 확산형은 경계가 불량하며 간문맥 또는 간정맥(드물게)을 침윤한다. 미시적으로는, HCC의 4개의 구조적 및 세포학적 유형(패턴)이 존재한다: 섬유층판형, 가선형(아데노이드), 다형성(거대세포) 및 투명세포. 충분히 분화된 형태에서, 종양 세포는 간세포를 닮아, 기둥, 끈 및 둥우리를 형성하며, 세포질 중 담즙 색소를 함유할 수 있다. 불충분하게 분화된 형태에서, 악성 상피세포는 응집성, 다형성, 미분화성이고 거대하다. 상기 종양은 불충분한 맥관화로 인해 빈약한 간질 및 중심 괴사를 갖는다.
하나의 실시태양에서, 상기 바이러스성 질환은 담관암이다. 통상적인 숙련가가 인지하는 바와 같이, 본 발명과 관련하여 "담관암"은 담즙을 간에서부터 소장으로 배출하는 담관에서 기원하는 돌연변이된 상피세포(또는 상피분화의 특징을 나타내는 세포)로 구성되는 암의 한 형태를 지칭한다.
본 명세서에 개시된 다양한 실시태양들이 HBV 감염과 관련된 바이러스성 질환과 관련되지만, 본 발명은 이들 예시적인 실시태양에 의해 제한되지 않는다. 오히려 본 발명은 바이러스성 감염과 관련된 임의의 질환에 적용될 수 있다.
일반적으로 서술하자면, 본 발명의 하나의 태양은 포유동물에게 치료 유효량의 표적 서열에 표적화된 올리고머를 투여함을 포함하는, 비정상적인 수준의 상기 표적 서열의 발현 생성물과 관련된 상태를 앓고 있거나 상기 상태에 민감한 상기 포유동물의 치료 방법에 관한 것이다. 본 발명의 올리고머는 하나 이상의 LNA 단위를 포함할 수 있다. 본 발명에 따른 올리고머, 접합체 또는 약학 조성물을 전형적으로는 유효량으로 투여한다.
본 발명의 흥미로운 태양은 본 명세서에 언급된 바와 같은 질병, 질환 또는 상태의 치료를 위한 약제의 제조를 위한 본 명세서에 정의된 올리고머(화합물) 또는 본 명세서에 정의된 올리고머 접합체의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 방법을 바람직하게는 비정상적인 수준의 HBx 또는 HBsAg에 의해 유발된 질병에 대한 치료 또는 예방에 사용한다.
달리 서술하자면, 일부 실시태양에서, 본 발명은 더욱 또한 본 발명의 올리고머 또는 본 발명의 접합체 또는 본 발명의 약학 조성물을 상기가 필요한 환자에게 투여함을 포함하는, 비정상적인 수준의 HBx 또는 HBsAg를 치료하는 방법에 관한 것이다.
본 발명은 또한 약제로서 사용하기 위한 본 명세서에 정의된 올리고머, 조성물 또는 올리고머 접합체에 관한 것이다.
본 발명은 또한 비정상적인 수준의 HBx 또는 HBsAg 또는 HBx 또는 HBsAg의 돌연변이 형태(예를 들어 대립유전자 변이체, 예를 들어 본 명세서에 언급된 질병들 중 하나와 관련된 것들)의 발현의 치료를 위한 약제의 제조를 위한 본 명세서에 정의된 화합물, 조성물 또는 접합체의 용도에 관한 것이다.
더욱이, 본 발명은 본 명세서에 언급된 바와 같은 질병 또는 상태를 앓고 있는 피실험자의 치료 방법에 관한 것이다.
치료가 필요한 환자는 상기 질병 또는 질환을 앓고 있거나 앓을 것 같은 환자이다.
예시적인 올리고머
본 발명에 사용하기 위한 올리고머의 예를 하기 표에 나타낸다.
표 1은 LNA 변형 올리고머를 설계하는데 사용되는 올리고뉴클레오타이드 서열 모티프들을 나타낸다. 상기 표는 유전자형 A, B, C 및 D(진뱅크(GenBank))의 모든 공개된 완전길이 유전자형 서열내의 보존 분획을 가리키며, 이는 주어진 올리고머 모티프가 유전자형내 주어진 표적 서열 분획에 100% 상보성일 것임을 의미한다. 모든 올리고머 모티프는 상기 모티프가 유전자형 A, B, C 및 D 내의 거의 모든 서열을 필수적으로 표적화하고, 이에 의해 이들 4개 유전자형 중 어느 하나에 의해 감염된 개인을 치료하도록 선택되었다.
[표 1]
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[표 2]
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[표 3]
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이때, 대문자는 베타-D-옥시 LNA를 나타내고, C LNA는 5-메틸 C LNA를 나타내고, 소문자는 DNA를 나타내고, mc는 5-메틸시토신 DNA를 나타내고, 모든 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티에이트 뉴클레오사이드간 결합이다.
표 4는 C6 아미노 링커 및 절단성 ca 포스포다이에스터 결합을 통해 올리고머에 결합된 GalNAc2 접합체 모이어티를 갖는 LNA 올리고머를 나타낸다. 상기 GalNAc2 접합체 모이어티는 또한 다른 GalNAc 접합체 모이어티 또는 스테롤 부분으로 치환될 수 있다. 이들 올리고머에 기본이 되는 올리고머 서열 모티프는 표 2 및 3으로부터의 부분집합이다. 대문자는 베타-D-옥시 LNA를 나타내고, 소문자는 DNA를 나타내고, mc/mC는 5-메틸시토신 DNA/LNA를 나타내고, s는 포스포로티에이트 뉴클레오사이드간 결합을 나타낸다. 아무것도 명시되지 않은 경우, 그 결합은 포스포다이에스터 뉴클레오사이드간 결합이다.
[표 4]
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표 2의 LNA 올리고머들을 GalNAc와의 접합에 앞서, AM-C6 ca-올리고머로서 나타내며, 이때 AM-C6은 접합 준비가 된 아미노 링커를 나타내고, ca는 절단성 포스포다이에스터 결합이다. 이들 올리고머는 우선권 출원 GB 1408623.5의 표 4로부터 참고로 인용된다.
실시태양
번호를 매긴 단락으로서 나타낸 본 발명의 하기 실시태양들을 본 명세서에 기재된 다른 실시태양들과 함께 사용할 수 있다:
1. 바이러스성 질환의 치료에 사용하기 위한 올리고머 접합체로서, 이때 상기 올리고머 접합체는
a) 상기 바이러스성 질환을 치료하기 위해 B형 간염 바이러스(HBV), 바람직하게는 HBV의 HBx 또는 HBsAg의 표적 서열을 조절할 수 있는 하나 이상의 제 1 올리고머 영역; 및
b) 상기 제 1 올리고머를 간에 전달하기 위한 담체 성분
을 포함한다.
2. 1 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 담체 성분은 상기 올리고머를 상기 올리고머 접합체의 투여에 의해 치료하려는 피실험자의 간으로 전달할 수 있다.
3. 1 항 또는 2 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 담체 성분은 상기 올리고머를 상기 올리고머 접합체의 투여에 의해 치료하려는 피실험자의 간세포로 전달할 수 있다.
4. 1 항 내지 3 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 담체 성분은 탄수화물 접합체 모이어티이다.
5. 1 항 내지 4 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 담체 성분은 아시알로당단백질 수용체(ASGP-R) 표적화 모이어티이다.
6. 4 항 또는 5 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 탄수화물 접합체 모이어티 또는 ASGP-R 표적화 모이어티는 갈락토스, 갈락토스아민, N-폼일-갈락토스아민, N-아세틸-갈락토스아민(GalNAc), N-프로피오닐-갈락토스아민, N-n-부타노일-갈락토스아민, N-아이소부타노일-갈락토스아민 및 이들 중 임의의 하나 이상의 클러스터로 이루어진 군으로부터 선택된다.
7. 1 항 내지 6 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 담체 성분은 2 내지 4개의 말단 갈락토스 유도체를 포함하는 GalNAc 클러스터이고, 친수성 이격자가 각각의 갈락토스 유도체를 분지점 기에 결합시킨다.
8. 7 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 갈락토스 유도체는 GalNAc이고, 상기 이격자는 PEG 이격자이며, 상기 분지점 기는 2개 이상의 아미노기를 갖는 펩타이드, 예를 들어 다이-리신 또는 트라이-리신을 포함한다.
9. 1 항 내지 8 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 담체 성분은 GalNAc2이다.
10. 1 항 내지 9 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 제 1 올리고머 영역은 표적 서열에 대해 80% 이상 상보성을 갖는다.
11. 1 항 내지 10 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 제 1 올리고머 영역은 하나 이상의 LNA 단위를 포함한다.
12. 1 항 내지 11 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 제 1 올리고머 영역은 갭머이다.
13. 1 항 내지 12 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 제 1 올리고머 영역은 양측에 날개가 배치된 2'-데옥시리보뉴클레오타이드 갭 영역을 포함하고, 이때 각각의 날개는 독립적으로 하나 이상의 LNA 단위를 포함한다.
14. 1 항 내지 13 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 제 1 올리고머 영역은 모티프 2-8-2, 3-8-3, 2-8-3, 3-8-2, 2-9-2, 3-9-3, 2-9-3, 3-9-2, 2-10-2, 3-10-3, 3-10-2, 2-10-3 중 어느 하나를 포함하며, 이때 첫 번째 숫자는 5'LNA 날개 영역 중의 LNA 단위의 수이고, 두 번째 숫자는 갭 영역 중의 뉴클레오타이드의 수이고, 세 번째 숫자는 3'LNA 날개 영역 중의 LNA 단위의 수이다.
15. 1 항 내지 14 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 제 1 올리고머 영역은 8 내지 30 뉴클레오타이드 길이이다.
16. 1 항 내지 15 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 제 1 올리고머 영역은 10 내지 20 뉴클레오타이드 길이이다.
17. 1 항 내지 16 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 제 1 올리고머 영역은 10 내지 16 뉴클레오타이드 길이이다.
18. 1 항 내지 17 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 제 1 올리고머 영역은 10 내지 14 뉴클레오타이드 길이이다.
19. 1 항 내지 18 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 제 1 올리고머 영역은 표적 서열에 결합한다.
20. 1 항 내지 19 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 제 1 올리고머 영역은 표적 서열의 발현, 복제 및 번역 중 임의의 하나 이상을 억제할 수 있다.
21. 1 항 내지 20 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 제 1 올리고머 영역은 표적 서열의 발현을 억제할 수 있다.
22. 1 항 내지 21 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 표적 서열은 유전자 또는 mRNA이다.
23. 1 항 내지 22 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 표적 서열은 HBx 또는 HBsAg를 암호화하는 유전자 또는 mRNA 또는 그의 천연 변이체의 적어도 일부를 포함한다.
24. 1 항 내지 23 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 표적 서열은 HBx 또는 HBsAg를 암호화하는 유전자 또는 mRNA 또는 그의 천연 변이체이다.
25. 1 항 내지 24 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 표적 서열은 서열번호 1 및/또는 서열번호 2로서 나타낸 서열, 또는 상기 서열에 80% 이상 일치성, 바람직하게, 상기 서열에 85% 이상 일치성, 바람직하게, 상기 서열에 90% 이상 일치성, 바람직하게, 상기 서열에 95% 이상 일치성을 갖는 서열내에 있다.
26. 1 항 내지 24 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 표적 서열은 서열번호 1 및 서열번호 2로서 나타낸 서열내에 있다.
27. 1 항 내지 26 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 표적 서열은 HBV 유전자형 A 내지 H 중 임의의 하나 이상과 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상 일치성을 갖는다.
28. 1 항 내지 27 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 표적 서열은 하기의 위치들 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택된다:
서열번호 3의
1264 내지 1278번;
1530 내지 1544번;
1551 내지 1566번;
1577 내지 1598번;
691 내지 706번;
670 내지 684번.
29. 1 항 내지 28 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 제 1 올리고머 영역은 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택된 코어 모티프를 기본으로 한다:
GCGTAAAGAGAGG (서열번호 13);
GCGTAAAGAGAGGT (서열번호 11);
AGCGAAGTGCACACG (서열번호 20);
AGGTGAAGCGAAGTG (서열번호 26);
AGCGAAGTGCACACGG (서열번호 18);
CGAACCACTGAACA (서열번호 7);
GAACCACTGAACAAA (서열번호 4);
CGAACCACTGAACAAA (서열번호 5);
CGAACCACTGAACAA (서열번호 6);
CGAACCACTGAAC (서열번호 8);
CCGCAGTATGGATCG (서열번호 9);
CGCAGTATGGATC (서열번호 10);
CGCGTAAAGAGAGGT (서열번호 12);
AGAAGGCACAGACGG (서열번호 14);
GAGAAGGCACAGACGG (서열번호 15);
GAAGTGCACACGG (서열번호 16);
GCGAAGTGCACACGG (서열번호 17);
CGAAGTGCACACG (서열번호 19);
AGGTGAAGCGAAGT (서열번호 27); 및
TAGTAAACTGAGCCA (서열번호 834).
30. 1 항 내지 29 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 제 1 올리고머 영역은 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 기본으로 한다:
GCGtaaagagaGG (서열번호 303);
GCGtaaagagaGGT (서열번호 301);
GCGtaaagagAGG (서열번호 618);
AGCgaagtgcacACG (서열번호 310);
AGgtgaagcgaAGTG (서열번호 668);
AGCgaagtgcacaCGG (서열번호 308);
CGAaccactgaACA (서열번호 297);
CGCagtatggaTC (서열번호 300);
AGGtgaagcgaagTGC (서열번호 315);
AGGtgaagcgaaGTG (서열번호 316);
GAAccactgaacAAA (서열번호 294);
CGAaccactgaacAAA (서열번호 295);
CGAaccactgaaCAA(서열번호 296);
CGAaccactgaAC (서열번호 298);
CCGcagtatggaTCG (서열번호 299);
CGCgtaaagagaGGT (서열번호 302);
AGAaggcacagaCGG (서열번호 304);
GAGaaggcacagaCGG (서열번호 305);
GAAgtgcacacGG (서열번호 306);
GCGaagtgcacaCGG (서열번호 307);
CGAagtgcacaCG (서열번호 309);
GAAccactgaaCAAA (서열번호 585);
CGAAccactgaacAAA (서열번호 588);
GAAgtgcacaCGG (서열번호 628);
TAGtaaactgagCCA (서열번호 678);
CGAaccactgAAC (서열번호 600);
AGGtgaagcgaAGT (서열번호 317); 및
CGAaccactgAACA (서열번호 597),
이때, 대문자는 LNA 단위를 나타내고, 소문자는 DNA 단위를 나타낸다.
31. 1 항 내지 30 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 올리고머 접합체는 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pat00039
이때, 대문자는 베타-D-옥시-LNA 단위를 나타내고; 소문자는 DNA 단위를 나타내고; 아래첨자 "s"는 포스포로티오에이트 결합을 나타내고; 위첨자 m은 5-메틸시토신 염기를 함유하는 DNA 또는 베타-D-옥시-LNA 단위를 나타내고; GN2-C6은 C6 링커를 갖는 GalNAc2 담체 성분을 나타낸다.
32. 1 항 내지 29 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 제 1 올리고머 영역은 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택된 코어 모티프를 기본으로 한다:
GCGTAAAGAGAGG (서열번호 13);
GCGTAAAGAGAGGT (서열번호 11); 및
CGCGTAAAGAGAGGT (서열번호 12).
33. 1 항 내지 29 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 제 1 올리고머 영역은 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택된 코어 모티프를 기본으로 한다:
AGCGAAGTGCACACG (서열번호 20);
AGGTGAAGCGAAGTG (서열번호 26);
AGCGAAGTGCACACGG (서열번호 18);
GAAGTGCACACGG (서열번호 16);
GCGAAGTGCACACGG (서열번호 17);
CGAAGTGCACACG (서열번호 19); 및
AGGTGAAGCGAAGT (서열번호 27).
34. 1 항 내지 33 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 올리고머 접합체는 하기의 구조를 갖거나 포함하거나:
담체 성분 - L1 - 제 1 올리고머 영역
[이때, L1은 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이다];
상기 제 1 올리고머 접합체는 하기의 구조를 갖거나 포함한다:
제 1 올리고머 영역 - L2 - 담체 성분
[이때, L2는 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이다].
35. 1 항 내지 34 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 올리고머 접합체는 하기의 구조를 갖거나 포함한다:
담체 성분 - L1 - 제 1 올리고머 영역
이때, L1은 선택적인 링커이다.
36. 34 항 또는 35 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 링커 1이 존재한다.
37. 1 항 내지 36 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 담체 성분은 상기 올리고머의 5' 단부에 결합되거나, 바람직하게는 접합된다.
38. 34 항 내지 37 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 링커기 또는 분지제 영역은 생리학적으로 불안정한 링커기 또는 생리학적으로 불안정한 분지제 영역 또는 생리학적으로 불안정한 구속 분자 또는 생리학적으로 불안정한 가교 모이어티이다.
39. 38 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 생리학적으로 불안정한 링커기는 뉴클레아제 민감성 링커이다.
40. 38 항 또는 39 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 생리학적으로 불안정한 링커는 추가로 C6 내지 C12 아미노 알킬기와 접합된다.
41. 표적 서열을 조절할 수 있는 제 2 올리고머 영역을 추가로 포함하는 1 항 내지 40 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체.
42. 41 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 제 1 올리고머 영역 및 상기 제 2 올리고머 영역은 각각 HBV의 HBx 또는 HBsAg 중의 표적 서열을 조절할 수 있다.
43. 31 항 또는 42 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 제 1 올리고머 영역 및 상기 제 2 올리고머 영역은 각각 HBV의 HBx 또는 HBsAg 중의 표적 서열을 조절할 수 있고; 이때 상기 표적 서열은 상이하다.
44. 41 항 내지 43 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 올리고머 접합체는 하기의 구조를 갖거나 포함하거나:
담체 성분 - L1 - 제 1 올리고머 영역 - L2 - 제 2 올리고머 영역
[이때,
L1은 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이고;
L2는 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이고;
L1 및 L2는 동일하거나 상이할 수 있다];
상기 올리고머 접합체는 하기의 구조를 갖거나 포함하거나:
제 1 올리고머 영역 - L2 - 제 2 올리고머 영역 - L3 - 담체 성분
[이때,
L2는 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이고;
L3은 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이고;
L2 및 L3은 동일하거나 상이할 수 있다];
상기 올리고머 접합체는 하기의 구조를 갖거나 포함하거나:
담체 성분 1 - L1 - 제 1 올리고머 영역 - L2 - 제 2 올리고머 영역 - L3 - 담체 성분 2
[이때,
L1은 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이고;
L2는 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이고;
L3은 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이고;
L1, L2 및 L3은 동일하거나 상이할 수 있고;
담체 성분 1 및 담체 성분 2는 동일하거나 상이할 수 있다];
상기 올리고머 접합체는 하기의 구조를 갖거나 포함하거나:
제 1 올리고머 영역 - L1 - 담체 성분 1 - L2 - 제 2 올리고머 영역
[이때,
L1은 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이고;
L2는 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이고;
L1 및 L2 및 L3은 동일하거나 상이할 수 있다];
상기 올리고머 접합체는 하기의 구조를 갖거나 포함하거나:
제 1 올리고머 영역 - L1 - 담체 성분 1 - L2 - 제 2 올리고머 영역 - L3 - 담체 성분 2
[이때,
L1은 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이고;
L2는 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이고;
L3은 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이고;
L1 및 L2는 동일하거나 상이할 수 있고;
담체 성분 1 및 담체 성분 2는 동일하거나 상이할 수 있다];
상기 올리고머 접합체는 하기의 구조를 갖거나 포함하거나:
담체 성분 1 - L1 - 제 1 올리고머 영역 - L2 - 담체 성분 2 - L3 - 제 2 올리고머 영역 - L4 - 담체 성분 3
[이때,
L1은 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이고;
L2는 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이고;
L3은 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이고;
L1, L2 및 L3은 동일하거나 상이할 수 있고;
담체 성분 1, 담체 성분 2 및 담체 성분 3은 동일하거나 상이할 수 있다].
45. 39 항 내지 43 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 올리고머 접합체는 하기의 구조를 갖거나 포함한다:
담체 성분 - L1 - 제 1 올리고머 영역 - L2 - 제 2 올리고머 영역
이때,
L1은 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이고;
L2는 선택적인 링커 또는 분지제 영역 또는 구속 분자 또는 가교 모이어티이고;
L1 및 L2는 동일하거나 상이할 수 있다.
46. 45 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 링커 1이 존재한다.
47. 45 항 또는 46 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 링커 2가 존재한다.
48. 41 항 내지 46 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 담체 성분은 상기 올리고머의 5' 단부에 결합되고, 바람직하게는 접합된다.
49. 41 항 내지 48 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 제 1 올리고머 영역 및 제 2 올리고머 영역은 각각 링커 또는 분지제 영역에 의해 결합되고, 바람직하게는 접합된다.
50. 41 항 내지 49 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 제 1 올리고머 영역 및 제 2 올리고머 영역은 각각 생리학적으로 불안정한 링커기 또는 생리학적으로 불안정한 분지제 영역에 의해 결합되고, 바람직하게는 접합된다.
51. 1 항 내지 50 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 바이러스성 질환은 B형 간염 또는 HBV와 관련된 질환이다.
52. 1 항 내지 51 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 바이러스성 질환은 HBx 또는 HBsAg의 발현 또는 과발현과 관련된다.
53. 1 항 내지 52 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 올리고머 접합체에서, 상기 올리고머 접합체는 피하로 투여된다.
54. 바이러스성 질환의 치료에 사용하기 위한 조성물에서, 상기 조성물은 1 항 내지 53 항 중 어느 한 항에 따른 올리고머 접합체 및 하나 이상의 추가적인 상이한 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.
55. 54 항에 따라 사용하기 위한 조성물에서, 상기 추가적인 상이한 올리고뉴클레오타이드 중 하나 이상은 올리고머 접합체이다.
56. 54 항 또는 55 항에 따라 사용하기 위한 조성물에서, 상기 추가적인 상이한 올리고뉴클레오타이드는 각각 올리고머 접합체이다.
57. 54 항 내지 56 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 조성물에서, 상기 추가적인 상이한 올리고뉴클레오타이드는 각각 HBV 중의 표적 서열을 조절할 수 있다.
58. 54 항 내지 57 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 조성물에서, 상기 추가적인 상이한 올리고뉴클레오타이드 중 하나 이상은 HBV의 HBx 또는 HBsAg 중의 표적 서열을 조절할 수 있다.
59. 54 항 내지 58 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 조성물에서, 상기 추가적인 상이한 올리고뉴클레오타이드 중 하나 이상은 HBV의 HBx 또는 HBsAg 중의 표적 서열을 조절할 수 있고; 상기 추가적인 상이한 올리고뉴클레오타이드의 상기 하나 이상은 1 항 내지 53 항 중 어느 한 항에 따른 올리고머 접합체에 의해 표적화되는 것과 상이한 HBV의 HBx 또는 HBsAg 중의 표적 서열을 조절할 수 있다.
60. 54 항 내지 59 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 조성물에서, 상기 추가적인 상이한 올리고뉴클레오타이드는 각각 HBV의 HBx 또는 HBsAg 중의 표적 서열을 조절할 수 있다.
61. 54 항 내지 60 항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 조성물에서, 상기 추가적인 상이한 올리고뉴클레오타이드는 각각 HBV의 HBx 또는 HBsAg 중의 표적 서열을 조절할 수 있고; 상기 추가적인 상이한 올리고뉴클레오타이드는 각각 1 항 내지 53 항 중 어느 한 항에 따른 올리고머 접합체에 의해 표적화되는 것과 상이한 HBV의 HBx 또는 HBsAg 중의 표적 서열을 조절할 수 있다.
62. 바이러스성 질환의 치료에 적합한 올리고머 접합체로서, 이때 상기 올리고머 접합체는
a) 상기 바이러스성 질환을 치료하기 위해 B형 간염 바이러스(HBV), 바람직하게는 HBV의 HBx 또는 HBsAg의 표적 서열을 조절할 수 있는 하나 이상의 제 1 올리고머 영역; 및
b) 상기 제 1 올리고머를 상기 간에 전달하기 위한 담체 성분
을 포함한다.
63. 62 항에 따른 올리고머 접합체에서, 상기 올리고머는 1 항 내지 53 항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같다.
64. 바이러스성 질환의 치료에 적합한 조성물로, 이때 상기 조성물은 올리고머 접합체 및 하나 이상의 추가적인 상이한 올리고뉴클레오타이드를 포함하고; 상기 올리고머 접합체는
a) 상기 바이러스성 질환을 치료하기 위해 B형 간염 바이러스(HBV), 바람직하게는 HBV의 HBx 또는 HBsAg의 표적 서열을 조절할 수 있는 하나 이상의 제 1 올리고머 영역; 및
b) 상기 제 1 올리고머를 상기 간에 전달하기 위한 담체 성분
을 포함한다.
65. 64 항에 따른 조성물에서, 상기 올리고머 접합체는 1 항 내지 53 항 중 어느 한 항 또는 62 항 또는 63 항에 따른 올리고머 접합체이다.
66. 64 항 또는 65 항에 따른 조성물에서, 상기 추가적인 상이한 올리고뉴클레오타이드는 62 항 또는 63 항에 정의된 추가적인 상이한 올리고뉴클레오타이드이다.
67. 바이러스성 질환을 치료하기 위해 HBV의 HBx 또는 HBsAg 중의 표적 서열을 조절할 수 있는 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택된 코어 모티프를 기본으로 하는 올리고머:
GCGTAAAGAGAGG (서열번호 13);
GCGTAAAGAGAGGT (서열번호 11);
AGCGAAGTGCACACG (서열번호 20);
AGGTGAAGCGAAGTG (서열번호 26);
CGAACCACTGAACA (서열번호 7);
GAACCACTGAACAAA (서열번호 4);
CGAACCACTGAACAAA (서열번호 5);
CGAACCACTGAACAA (서열번호 6);
CGAACCACTGAAC (서열번호 8);
CCGCAGTATGGATCG (서열번호 9);
CGCAGTATGGATC (서열번호 10);
CGCGTAAAGAGAGGT (서열번호 12);
AGAAGGCACAGACGG (서열번호 14);
GAGAAGGCACAGACGG (서열번호 15);
GAAGTGCACACGG (서열번호 16);
GCGAAGTGCACACGG (서열번호 17);
CGAAGTGCACACG (서열번호 19);
AGGTGAAGCGAAGT (서열번호 27); 및
TAGTAAACTGAGCCA (서열번호 834).
68. 67 항에 따른 올리고머에서, 상기 올리고머 영역은 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택된 코어 모티프를 기본으로 한다:
GCGTAAAGAGAGG (서열번호 13);
GCGTAAAGAGAGGT (서열번호 11); 및
CGCGTAAAGAGAGGT (서열번호 12).
69. 67 항에 따른 올리고머에서, 상기 올리고머 영역은 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택된 코어 모티프를 기본으로 한다:
AGCGAAGTGCACACG (서열번호 20);
AGGTGAAGCGAAGTG (서열번호 26);
AGCGAAGTGCACACGG (서열번호 18);
GAAGTGCACACGG (서열번호 16);
GCGAAGTGCACACGG (서열번호 17);
CGAAGTGCACACG (서열번호 19); 및
AGGTGAAGCGAAGT (서열번호 27).
70. 67 항 내지 69 항 중 어느 한 항에 따른 올리고머에서, 상기 올리고머는 하나 이상의 LNA 단위를 포함한다.
71. 67 항 내지 70 항 중 어느 한 항에 따른 올리고머에서, 상기 올리고머는 갭머이다.
72. 67 항 내지 71 항 중 어느 한 항에 따른 올리고머에서, 상기 올리고머는 양측에 날개가 배치된 2'-데옥시리보뉴클레오타이드 갭 영역을 포함하고, 이때 각각의 날개는 독립적으로 하나 이상의 LNA 단위를 포함한다.
73. 67 항 내지 72 항 중 어느 한 항에 따른 올리고머에서, 상기 올리고머는 모티프 2-8-2, 3-8-3, 2-8-3, 3-8-2, 2-9-2, 3-9-3, 2-9-3, 3-9-2, 2-10-2, 3-10-3, 3-10-2, 2-10-3 중 어느 하나를 포함하며, 이때 첫 번째 숫자는 LNA 날개 영역 중의 LNA 단위의 수이고, 두 번째 숫자는 갭 영역 중의 뉴클레오타이드의 수이고, 세 번째 숫자는 LNA 날개 영역 중의 LNA 단위의 수이다.
74. 67 항 내지 73 항 중 어느 한 항에 따른 올리고머에서, 상기 제 1 올리고머 영역은 10 내지 18 뉴클레오타이드 길이이다.
75. 67 항 내지 74 항 중 어느 한 항에 따른 올리고머에서, 상기 제 1 올리고머 영역은 10 내지 16 뉴클레오타이드 길이이다.
76. 67 항 내지 75 항 중 어느 한 항에 따른 올리고머에서, 상기 제 1 올리고머 영역은 10 내지 14 뉴클레오타이드 길이이다.
77. 67 항 내지 76 항 중 어느 한 항에 따른 올리고머로서, 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 기본으로 하는 올리고머:
GCGtaaagagaGG (서열번호 303);
GCGtaaagagaGGT (서열번호 301);
GCGtaaagagAGG (서열번호 618);
AGCgaagtgcacACG (서열번호 310);
AGgtgaagcgaAGTG (서열번호 668);
AGCgaagtgcacaCGG (서열번호 308);
CGAaccactgaACA (서열번호 297);
CGCagtatggaTC (서열번호 300);
AGGtgaagcgaagTGC (서열번호 315);
AGGtgaagcgaaGTG (서열번호 316);
GAAccactgaacAAA (서열번호 294);
CGAaccactgaacAAA (서열번호 295);
CGAaccactgaaCAA(서열번호 296);
CGAaccactgaAC (서열번호 298);
CCGcagtatggaTCG (서열번호 299);
CGCgtaaagagaGGT (서열번호 302);
AGAaggcacagaCGG (서열번호 304);
GAGaaggcacagaCGG (서열번호 305);
GAAgtgcacacGG (서열번호 306);
GCGaagtgcacaCGG (서열번호 307);
CGAagtgcacaCG (서열번호 309);
GAAccactgaaCAAA (서열번호 585);
CGAAccactgaacAAA (서열번호 588);
GAAgtgcacaCGG (서열번호 628);
TAGtaaactgagCCA (서열번호 678);
CGAaccactgAAC (서열번호 600);
AGGtgaagcgaAGT (서열번호 317); 및
CGAaccactgAACA (서열번호 597),
이때, 대문자는 친화성 증대 뉴클레오타이드 유사체를 나타내고, 소문자는 DNA 단위를 나타낸다.
78. 67 항 내지 77 항 중 어느 한 항에 따른 올리고머로서, 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열로부터 선택되는 올리고머:
Figure pat00040
이때, 대문자는 베타-D-옥시-LNA 단위를 나타내고; 소문자는 DNA 단위를 나타내고; 아래첨자 "s"는 포스포로티오에이트 결합을 나타내고; 위첨자 m은 5-메틸시토신 염기를 함유하는 DNA 또는 베타-D-옥시-LNA 단위를 나타내고; AM-C6은 아미노-C6 링커이고; 5' 말단기 "AM-C6 ca"는 선택적이다.
79. 의학적 치료에 사용하기 위한, 67 항 내지 78 항 중 어느 한 항에 따른 올리고머.
80. 바이러스성 질환의 치료에 사용하기 위한, 67 항 내지 79 항 중 어느 한 항에 따른 올리고머.
81. 79 항 또는 80 항에 따른 올리고머에서, 상기 올리고머는 1 항 내지 53 항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같다.
82. 79 항 또는 81 항에 따른 올리고머에서, 상기 올리고머는 1 항 내지 53 항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같다.
83. 바이러스성 질환의 치료에 적합한 조성물에서, 상기 조성물은 올리고머 및 하나 이상의 추가적인 상이한 올리고뉴클레오타이드를 포함하고; 상기 올리고머는 바이러스성 질환을 치료하기 위해 B형 간염 바이러스(HBV), 바람직하게는 HBV의 HBx 또는 HBsAg의 표적 서열을 조절할 수 있는 하나 이상의 제 1 올리고머 영역을 포함한다.
84. 83 항에 따른 조성물에서, 상기 올리고머는 67 항 내지 82 항 중 어느 한 항에 따른 올리고머이다.
85. 83 항 또는 84 항에 따른 조성물에서, 상기 하나 이상의 추가적인 상이한 올리고뉴클레오타이드는 54 항 내지 61 항 중 어느 한 항에 정의된 추가적인 상이한 올리고뉴클레오타이드이다.
86. 바이러스성 질환의 치료 방법으로서, 상기 방법은 상기 치료가 필요한 피실험자에게 유효량의 62 항 또는 63 항에 따른 올리고머 접합체 또는 1 항 내지 52 항 중 어느 한 항에 따른 올리고머 접합체를 투여함을 포함한다.
87. 바이러스성 질환의 치료 방법으로서, 상기 방법은 상기 치료가 필요한 피실험자에게 유효량의 64 항 내지 66 항 중 어느 한 항에 따른 조성물 또는 54 항 내지 61 항 중 어느 한 항에 따른 조성물 또는 83 항 내지 85 항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 투여함을 포함한다.
88. 바이러스성 질환의 치료 방법으로서, 상기 방법은 상기 치료가 필요한 피실험자에게 유효량의 67 항 내지 82 항 중 어느 한 항에 따른 올리고머를 투여함을 포함한다.
89. 62 항 또는 63 항에 따른 올리고머 접합체 또는 1 항 내지 53 항 중 어느 한 항에 따른 올리고머 접합체; 및 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 희석제, 담체, 염 또는 보조제를 포함하는 약학 조성물.
90. 64 항 내지 66 항 중 어느 한 항에 따른 조성물 또는 54 항 내지 61 항 중 어느 한 항에 따른 조성물 또는 83 항 내지 85 항 중 어느 한 항에 따른 조성물; 및 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 희석제, 담체, 염 또는 보조제를 포함하는 약학 조성물.
91. 67 항 내지 82 항 중 어느 한 항에 따른 올리고머; 및 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 희석제, 담체, 염 또는 보조제를 포함하는 약학 조성물.
89 항 내지 91 항 중 어느 한 항에 따른 약학 조성물 및 추가적인 약학적 존재를 포함하는 약학적 시스템.
92. 1 항 내지 53 항 중 어느 한 항에 따른 하나 이상의 올리고머를 1 항 내지 53 항 중 어느 한 항에 정의된 담체 성분과 접합시키는 단계를 포함하는, 1 항 내지 52 항 중 어느 한 항에 따른 올리고머 접합체의 제조 방법.
93. 1 항 내지 53 항 중 어느 한 항에 따른 올리고머 접합체를 약학적으로 허용가능한 희석제, 담체, 염 또는 보조제와 혼합하는 단계를 포함하는, 64 항 내지 66 항 중 어느 한 항에 따른 조성물의 제조 방법.
94. 67 항 내지 82 항 중 어느 한 항에 따른 올리고머를 약학적으로 허용가능한 희석제, 담체, 염 또는 보조제와 혼합하는 단계를 포함하는, 91 항에 따른 조성물의 제조 방법.
95. 1 항 내지 94 항 중 어느 한 항에 따른 발명에서, 상기 올리고머 또는 상기 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 모티프 3-10-3, 3-10-2, 3-9-3, 3-9-2, 3-8-3, 3-8-2 중 어느 하나를 포함하며, 이때 첫 번째 숫자는 날개 영역 중의 변형 뉴클레오타이드의 수이고, 바람직하게는 하나 이상은 LNA 단위이며, 바람직하게는 전부 LNA 단위이고, 두 번째 숫자는 갭 영역 중의 뉴클레오타이드의 수이고, 세 번째 숫자는 날개 영역 중의 변형 뉴클레오타이드의 수이며, 바람직하게는 하나 이상은 LNA 단위이고, 바람직하게는 전부 LNA 단위이다.
96. 실시예를 참조하여 실질적으로 본 명세서에 기재된 바와 같은 올리고머 접합체.
97. 실시예를 참조하여 실질적으로 본 명세서에 기재된 바와 같은 조성물.
98. 실시예를 참조하여 실질적으로 본 명세서에 기재된 바와 같은 올리고머.
99. 실시예를 참조하여 실질적으로 본 명세서에 기재된 바와 같은 방법.
특정 실시태양
본 발명은 바이러스성 질환의 치료에 사용하기 위한 올리고머 접합체에 관한 것이다. 상기 올리고머 접합체는 a) 상기 바이러스성 질환을 치료하기 위해 B형 간염 바이러스(HBV)의 HBx 또는 HBsAg의 표적 서열을 조절할 수 있는 올리고머; 및 b) 상기 올리고머에 접합된 담체 성분을 포함한다. 바람직하게, 상기 담체 성분은 상기 제 1 올리고머를 상기 간에 전달하기 위한 것이다.
이제 본 발명의 몇몇 실시태양에 바람직한 태양들을 제공한다.
하나의 태양에서, 본 발명은 바이러스성 질환의 치료에 사용하기 위한 올리고머 접합체를 제공하며, 이때 상기 올리고머 접합체는
a) 상기 바이러스성 질환을 치료하기 위해 B형 간염 바이러스(HBV), 바람직하게는 HBV의 HBx 또는 HBsAg의 표적 서열을 조절할 수 있는 하나 이상의 제 1 올리고머 영역; 및
b) 담체 성분
을 포함하고;
상기 제 1 올리고머 영역은 8 내지 16 뉴클레오타이드 길이이고;
상기 제 1 올리고머 영역은 갭머이며, 바람직하게, 상기 제 1 올리고머 영역은 양측에 날개가 배치된 2'-데옥시리보뉴클레오타이드 갭 영역을 포함하고, 바람직하게 각각의 날개는 독립적으로 하나 이상의 LNA 단위를 포함하며;
상기 담체 성분은 탄수화물 접합체 모이어티이며, 바람직하게, 상기 담체 성분은 갈락토스, 갈락토스아민, N-폼일-갈락토스아민, N-아세틸-갈락토스아민(GalNAc), N-프로피오닐-갈락토스아민, N-n-부타노일-갈락토스아민, N-아이소부타노일-갈락토스아민 및 이들 중 임의의 하나 이상의 클러스터로 이루어진 군으로부터 선택되고; 바람직하게, 상기 담체 성분은 GalNAc 또는 GalNAc 클러스터를 포함하며; 바람직하게, 상기 담체 성분은 GalNAc2이고;
상기 표적 서열은 HBx 또는 HBsAg를 암호화하는 유전자 또는 mRNA 또는 그의 천연 변이체의 적어도 일부를 포함한다.
하나의 태양에서, 본 발명은 바이러스성 질환의 치료에 적합한 올리고머 접합체를 제공하며, 이때 상기 올리고머 접합체는
a) 상기 바이러스성 질환을 치료하기 위해 B형 간염 바이러스(HBV), 바람직하게는 HBV의 HBx 또는 HBsAg의 표적 서열을 조절할 수 있는 하나 이상의 제 1 올리고머 영역; 및
b) 담체 성분
을 포함하고;
상기 제 1 올리고머 영역은 8 내지 16 뉴클레오타이드 길이이고;
상기 제 1 올리고머 영역은 갭머이며, 바람직하게, 상기 제 1 올리고머 영역은 양측에 날개가 배치된 2'-데옥시리보뉴클레오타이드 갭 영역을 포함하고, 바람직하게 각각의 날개는 독립적으로 하나 이상의 LNA 단위를 포함하며;
상기 담체 성분은 탄수화물 접합체 모이어티이며, 바람직하게, 상기 담체 성분은 갈락토스, 갈락토스아민, N-폼일-갈락토스아민, N-아세틸-갈락토스아민(GalNAc), N-프로피오닐-갈락토스아민, N-n-부타노일-갈락토스아민, N-아이소부타노일-갈락토스아민 및 이들 중 임의의 하나 이상의 클러스터로 이루어진 군으로부터 선택되고; 바람직하게, 상기 담체 성분은 GalNAc 또는 GalNAc 클러스터를 포함하며; 바람직하게, 상기 담체 성분은 GalNAc2이고;
상기 표적 서열은 HBx 또는 HBsAg를 암호화하는 유전자 또는 mRNA 또는 그의 천연 변이체의 적어도 일부를 포함한다.
하나의 태양에서, 본 발명은 바이러스성 질환의 치료에 적합한 조성물을 제공하며, 이때 상기 조성물은 올리고머 접합체 및 하나 이상의 추가적인 상이한 올리고뉴클레오타이드를 포함하고; 상기 올리고머 접합체는
a) 상기 바이러스성 질환을 치료하기 위해 B형 간염 바이러스(HBV), 바람직하게는 HBV의 HBx 또는 HBsAg의 표적 서열을 조절할 수 있는 하나 이상의 제 1 올리고머 영역; 및
b) 담체 성분
을 포함하고;
상기 제 1 올리고머 영역은 8 내지 16 뉴클레오타이드 길이이고;
상기 제 1 올리고머 영역은 갭머이며, 바람직하게, 상기 제 1 올리고머 영역은 양측에 날개가 배치된 2'-데옥시리보뉴클레오타이드 갭 영역을 포함하고, 바람직하게 각각의 날개는 독립적으로 하나 이상의 LNA 단위를 포함하며;
상기 담체 성분은 탄수화물 접합체 모이어티이며, 바람직하게, 상기 담체 성분은 갈락토스, 갈락토스아민, N-폼일-갈락토스아민, N-아세틸-갈락토스아민(GalNAc), N-프로피오닐-갈락토스아민, N-n-부타노일-갈락토스아민, N-아이소부타노일-갈락토스아민 및 이들 중 임의의 하나 이상의 클러스터로 이루어진 군으로부터 선택되고; 바람직하게, 상기 담체 성분은 GalNAc 또는 GalNAc 클러스터를 포함하며; 바람직하게, 상기 담체 성분은 GalNAc2이고;
상기 표적 서열은 HBx 또는 HBsAg를 암호화하는 유전자 또는 mRNA 또는 그의 천연 변이체의 적어도 일부를 포함한다.
하나의 태양에서, 본 발명은 바이러스성 질환의 치료에 사용하기 위한 올리고머 접합체를 제공하며, 이때 상기 올리고머 접합체는
a) 상기 바이러스성 질환을 치료하기 위해 B형 간염 바이러스(HBV), 바람직하게는 HBV의 HBx 또는 HBsAg의 표적 서열을 조절할 수 있는 하나 이상의 제 1 올리고머 영역; 및
b) 담체 성분
을 포함하고;
상기 제 1 올리고머 영역은 8 내지 16 뉴클레오타이드 길이이고;
상기 제 1 올리고머 영역은 갭머이며, 바람직하게, 상기 제 1 올리고머 영역은 양측에 날개가 배치된 2'-데옥시리보뉴클레오타이드 갭 영역을 포함하고, 바람직하게 각각의 날개는 독립적으로 하나 이상의 LNA 단위를 포함하며;
상기 담체 성분은 탄수화물 접합체 모이어티이며, 바람직하게, 상기 담체 성분은 갈락토스, 갈락토스아민, N-폼일-갈락토스아민, N-아세틸-갈락토스아민(GalNAc), N-프로피오닐-갈락토스아민, N-n-부타노일-갈락토스아민, N-아이소부타노일-갈락토스아민 및 이들 중 임의의 하나 이상의 클러스터로 이루어진 군으로부터 선택되고; 바람직하게, 상기 담체 성분은 GalNAc 또는 GalNAc 클러스터를 포함하며; 바람직하게, 상기 담체 성분은 GalNAc2이고;
상기 표적 서열은 HBx 또는 HBsAg를 암호화하는 유전자 또는 mRNA 또는 그의 천연 변이체의 적어도 일부를 포함하고;
상기 제 1 올리고머 영역은 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택된 코어 모티프를 기본으로 한다:
GCGTAAAGAGAGG (서열번호 13);
GCGTAAAGAGAGGT (서열번호 11);
AGCGAAGTGCACACG (서열번호 20);
AGGTGAAGCGAAGTG (서열번호 26);
AGCGAAGTGCACACGG (서열번호 18);
CGAACCACTGAACA (서열번호 7);
GAACCACTGAACAAA (서열번호 4);
CGAACCACTGAACAAA (서열번호 5);
CGAACCACTGAACAA (서열번호 6);
CGAACCACTGAAC (서열번호 8);
CCGCAGTATGGATCG (서열번호 9);
CGCAGTATGGATC (서열번호 10);
CGCGTAAAGAGAGGT (서열번호 12);
AGAAGGCACAGACGG (서열번호 14);
GAGAAGGCACAGACGG (서열번호 15);
GAAGTGCACACGG (서열번호 16);
GCGAAGTGCACACGG (서열번호 17);
CGAAGTGCACACG (서열번호 19);
AGGTGAAGCGAAGT (서열번호 27); 및
TAGTAAACTGAGCCA (서열번호 834).
하나의 태양에서, 본 발명은 바이러스성 질환의 치료에 적합한 올리고머 접합체를 제공하며, 이때 상기 올리고머 접합체는
a) 상기 바이러스성 질환을 치료하기 위해 B형 간염 바이러스(HBV), 바람직하게는 HBV의 HBx 또는 HBsAg의 표적 서열을 조절할 수 있는 하나 이상의 제 1 올리고머 영역; 및
b) 담체 성분
을 포함하고;
상기 제 1 올리고머 영역은 8 내지 16 뉴클레오타이드 길이이고;
상기 제 1 올리고머 영역은 갭머이며, 바람직하게, 상기 제 1 올리고머 영역은 양측에 날개가 배치된 2'-데옥시리보뉴클레오타이드 갭 영역을 포함하고, 바람직하게 각각의 날개는 독립적으로 하나 이상의 LNA 단위를 포함하며;
상기 담체 성분은 탄수화물 접합체 모이어티이며, 바람직하게, 상기 담체 성분은 갈락토스, 갈락토스아민, N-폼일-갈락토스아민, N-아세틸-갈락토스아민(GalNAc), N-프로피오닐-갈락토스아민, N-n-부타노일-갈락토스아민, N-아이소부타노일-갈락토스아민 및 이들 중 임의의 하나 이상의 클러스터로 이루어진 군으로부터 선택되고; 바람직하게, 상기 담체 성분은 GalNAc 또는 GalNAc 클러스터를 포함하며; 바람직하게, 상기 담체 성분은 GalNAc2이고;
상기 표적 서열은 HBx 또는 HBsAg를 암호화하는 유전자 또는 mRNA 또는 그의 천연 변이체의 적어도 일부를 포함하고;
상기 제 1 올리고머 영역은 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택된 코어 모티프를 기본으로 한다:
GCGTAAAGAGAGG (서열번호 13);
AGCGAAGTGCACACG (서열번호 20);
GCGTAAAGAGAGGT (서열번호 11);
AGGTGAAGCGAAGTG (서열번호 26);
AGCGAAGTGCACACGG (서열번호 18);
CGAACCACTGAACA (서열번호 7);
GAACCACTGAACAAA (서열번호 4);
CGAACCACTGAACAAA (서열번호 5);
CGAACCACTGAACAA (서열번호 6);
CGAACCACTGAAC (서열번호 8);
CCGCAGTATGGATCG (서열번호 9);
CGCAGTATGGATC (서열번호 10);
CGCGTAAAGAGAGGT (서열번호 12);
AGAAGGCACAGACGG (서열번호 14);
GAGAAGGCACAGACGG (서열번호 15);
GAAGTGCACACGG (서열번호 16);
GCGAAGTGCACACGG (서열번호 17);
CGAAGTGCACACG (서열번호 19);
AGGTGAAGCGAAGT (서열번호 27); 및
TAGTAAACTGAGCCA (서열번호 834).
하나의 태양에서, 본 발명은 바이러스성 질환의 치료에 적합한 조성물을 제공하며, 이때 상기 조성물은 올리고머 접합체 및 하나 이상의 추가적인 상이한 올리고뉴클레오타이드를 포함하고; 상기 올리고머 접합체는
a) 상기 바이러스성 질환을 치료하기 위해 B형 간염 바이러스(HBV), 바람직하게는 HBV의 HBx 또는 HBsAg의 표적 서열을 조절할 수 있는 하나 이상의 제 1 올리고머 영역; 및
b) 담체 성분
을 포함하고;
상기 제 1 올리고머 영역은 8 내지 16 뉴클레오타이드 길이이고;
상기 제 1 올리고머 영역은 갭머이며, 바람직하게, 상기 제 1 올리고머 영역은 양측에 날개가 배치된 2'-데옥시리보뉴클레오타이드 갭 영역을 포함하고, 바람직하게 각각의 날개는 독립적으로 하나 이상의 LNA 단위를 포함하며;
상기 담체 성분은 탄수화물 접합체 모이어티이며, 바람직하게, 상기 담체 성분은 갈락토스, 갈락토스아민, N-폼일-갈락토스아민, N-아세틸-갈락토스아민(GalNAc), N-프로피오닐-갈락토스아민, N-n-부타노일-갈락토스아민, N-아이소부타노일-갈락토스아민 및 이들 중 임의의 하나 이상의 클러스터로 이루어진 군으로부터 선택되고; 바람직하게, 상기 담체 성분은 GalNAc 또는 GalNAc 클러스터를 포함하며; 바람직하게, 상기 담체 성분은 GalNAc2이고;
상기 표적 서열은 HBx 또는 HBsAg를 암호화하는 유전자 또는 mRNA 또는 그의 천연 변이체의 적어도 일부를 포함하고;
상기 제 1 올리고머 영역은 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택된 코어 모티프를 기본으로 한다:
GCGTAAAGAGAGG (서열번호 13);
GCGTAAAGAGAGGT (서열번호 11);
AGCGAAGTGCACACG (서열번호 20);
AGGTGAAGCGAAGTG (서열번호 26);
AGCGAAGTGCACACGG (서열번호 18);
CGAACCACTGAACA (서열번호 7);
GAACCACTGAACAAA (서열번호 4);
CGAACCACTGAACAAA (서열번호 5);
CGAACCACTGAACAA (서열번호 6);
CGAACCACTGAAC (서열번호 8);
CCGCAGTATGGATCG (서열번호 9);
CGCAGTATGGATC (서열번호 10);
CGCGTAAAGAGAGGT (서열번호 12);
AGAAGGCACAGACGG (서열번호 14);
GAGAAGGCACAGACGG (서열번호 15);
GAAGTGCACACGG (서열번호 16);
GCGAAGTGCACACGG (서열번호 17);
CGAAGTGCACACG (서열번호 19);
AGGTGAAGCGAAGT (서열번호 27); 및
TAGTAAACTGAGCCA (서열번호 834).
하나의 태양에서, 본 발명은 바이러스성 질환의 치료에 사용하기 위한 올리고머 접합체를 제공하며, 이때 상기 올리고머 접합체는
a) 상기 바이러스성 질환을 치료하기 위해 B형 간염 바이러스(HBV), 바람직하게는 HBV의 HBx 또는 HBsAg의 표적 서열을 조절할 수 있는 하나 이상의 제 1 올리고머 영역; 및
b) 담체 성분
을 포함하고;
상기 제 1 올리고머 영역은 12 내지 16 뉴클레오타이드 길이이고;
상기 제 1 올리고머 영역은 갭머이며, 바람직하게, 상기 제 1 올리고머 영역은 양측에 날개가 배치된 2'-데옥시리보뉴클레오타이드 갭 영역을 포함하고, 바람직하게 각각의 날개는 독립적으로 하나 이상의 LNA 단위를 포함하며;
상기 담체 성분은 탄수화물 접합체 모이어티이며, 바람직하게, 상기 담체 성분은 갈락토스, 갈락토스아민, N-폼일-갈락토스아민, N-아세틸-갈락토스아민(GalNAc), N-프로피오닐-갈락토스아민, N-n-부타노일-갈락토스아민, N-아이소부타노일-갈락토스아민 및 이들 중 임의의 하나 이상의 클러스터로 이루어진 군으로부터 선택되고; 바람직하게, 상기 담체 성분은 GalNAc 또는 GalNAc 클러스터를 포함하며; 바람직하게, 상기 담체 성분은 GalNAc2이고;
상기 표적 서열은 HBx 또는 HBsAg를 암호화하는 유전자 또는 mRNA 또는 그의 천연 변이체의 적어도 일부를 포함하고;
상기 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 모티프 3-10-3, 3-10-2, 3-9-3, 3-9-2, 3-8-3, 3-8-2 중 어느 하나를 포함하며, 이때 첫 번째 숫자는 날개 영역 중의 LNA 단위의 수이고, 두 번째 숫자는 갭 영역 중의 뉴클레오타이드의 수이고, 세 번째 숫자는 날개 영역 중의 LNA 단위의 수이다.
하나의 태양에서, 본 발명은 바이러스성 질환의 치료에 적합한 올리고머 접합체를 제공하며, 이때 상기 올리고머 접합체는
a) 상기 바이러스성 질환을 치료하기 위해 B형 간염 바이러스(HBV), 바람직하게는 HBV의 HBx 또는 HBsAg의 표적 서열을 조절할 수 있는 하나 이상의 제 1 올리고머 영역; 및
b) 담체 성분
을 포함하고;
상기 제 1 올리고머 영역은 12 내지 16 뉴클레오타이드 길이이고;
상기 제 1 올리고머 영역은 갭머이며, 바람직하게, 상기 제 1 올리고머 영역은 양측에 날개가 배치된 2'-데옥시리보뉴클레오타이드 갭 영역을 포함하고, 바람직하게 각각의 날개는 독립적으로 하나 이상의 LNA 단위를 포함하며;
상기 담체 성분은 탄수화물 접합체 모이어티이며, 바람직하게, 상기 담체 성분은 갈락토스, 갈락토스아민, N-폼일-갈락토스아민, N-아세틸-갈락토스아민(GalNAc), N-프로피오닐-갈락토스아민, N-n-부타노일-갈락토스아민, N-아이소부타노일-갈락토스아민 및 이들 중 임의의 하나 이상의 클러스터로 이루어진 군으로부터 선택되고; 바람직하게, 상기 담체 성분은 GalNAc 또는 GalNAc 클러스터를 포함하며; 바람직하게, 상기 담체 성분은 GalNAc2이고;
상기 표적 서열은 HBx 또는 HBsAg를 암호화하는 유전자 또는 mRNA 또는 그의 천연 변이체의 적어도 일부를 포함하고;
상기 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 모티프 3-10-3, 3-10-2, 3-9-3, 3-9-2, 3-8-3, 3-8-2 중 어느 하나를 포함하며, 이때 첫 번째 숫자는 날개 영역 중의 LNA 단위의 수이고, 두 번째 숫자는 갭 영역 중의 뉴클레오타이드의 수이고, 세 번째 숫자는 날개 영역 중의 LNA 단위의 수이다.
하나의 태양에서, 본 발명은 바이러스성 질환의 치료에 적합한 조성물을 제공하며, 이때 상기 조성물은 올리고머 접합체 및 하나 이상의 추가적인 상이한 올리고뉴클레오타이드를 포함하고; 상기 올리고머 접합체는
a) 상기 바이러스성 질환을 치료하기 위해 B형 간염 바이러스(HBV), 바람직하게는 HBV의 HBx 또는 HBsAg의 표적 서열을 조절할 수 있는 하나 이상의 제 1 올리고머 영역; 및
b) 담체 성분
을 포함하고;
상기 제 1 올리고머 영역은 12 내지 16 뉴클레오타이드 길이이고;
상기 제 1 올리고머 영역은 갭머이며, 바람직하게, 상기 제 1 올리고머 영역은 양측에 날개가 배치된 2'-데옥시리보뉴클레오타이드 갭 영역을 포함하고, 바람직하게 각각의 날개는 독립적으로 하나 이상의 LNA 단위를 포함하며;
상기 담체 성분은 탄수화물 접합체 모이어티이며, 바람직하게, 상기 담체 성분은 갈락토스, 갈락토스아민, N-폼일-갈락토스아민, N-아세틸-갈락토스아민(GalNAc), N-프로피오닐-갈락토스아민, N-n-부타노일-갈락토스아민, N-아이소부타노일-갈락토스아민 및 이들 중 임의의 하나 이상의 클러스터로 이루어진 군으로부터 선택되고; 바람직하게, 상기 담체 성분은 GalNAc 또는 GalNAc 클러스터를 포함하며; 바람직하게, 상기 담체 성분은 GalNAc2이고;
상기 표적 서열은 HBx 또는 HBsAg를 암호화하는 유전자 또는 mRNA 또는 그의 천연 변이체의 적어도 일부를 포함하고;
상기 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 모티프 3-10-3, 3-10-2, 3-9-3, 3-9-2, 3-8-3, 3-8-2 중 어느 하나를 포함하며, 이때 첫 번째 숫자는 날개 영역 중의 LNA 단위의 수이고, 두 번째 숫자는 갭 영역 중의 뉴클레오타이드의 수이고, 세 번째 숫자는 날개 영역 중의 LNA 단위의 수이다.
하나의 태양에서, 본 발명은 바이러스성 질환의 치료에 사용하기 위한 올리고머 접합체를 제공하며, 이때 상기 올리고머 접합체는
a) 상기 바이러스성 질환을 치료하기 위해 B형 간염 바이러스(HBV), 바람직하게는 HBV의 HBx 또는 HBsAg의 표적 서열을 조절할 수 있는 하나 이상의 제 1 올리고머 영역; 및
b) 담체 성분
을 포함하고;
상기 제 1 올리고머 영역은 12 내지 16 뉴클레오타이드 길이이고;
상기 제 1 올리고머 영역은 갭머이며, 바람직하게, 상기 제 1 올리고머 영역은 양측에 날개가 배치된 2'-데옥시리보뉴클레오타이드 갭 영역을 포함하고, 바람직하게 각각의 날개는 독립적으로 하나 이상의 LNA 단위를 포함하며;
상기 담체 성분은 탄수화물 접합체 모이어티이며, 바람직하게, 상기 담체 성분은 갈락토스, 갈락토스아민, N-폼일-갈락토스아민, N-아세틸-갈락토스아민(GalNAc), N-프로피오닐-갈락토스아민, N-n-부타노일-갈락토스아민, N-아이소부타노일-갈락토스아민 및 이들 중 임의의 하나 이상의 클러스터로 이루어진 군으로부터 선택되고; 바람직하게, 상기 담체 성분은 GalNAc 또는 GalNAc 클러스터를 포함하며; 바람직하게, 상기 담체 성분은 GalNAc2이고;
상기 표적 서열은 HBx 또는 HBsAg를 암호화하는 유전자 또는 mRNA 또는 그의 천연 변이체의 적어도 일부를 포함하고;
상기 제 1 올리고머 영역은 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택된 코어 모티프를 기본으로 하고:
GCGTAAAGAGAGG (서열번호 13);
GCGTAAAGAGAGGT (서열번호 11);
AGCGAAGTGCACACG (서열번호 20);
AGGTGAAGCGAAGTG (서열번호 26);
AGCGAAGTGCACACGG (서열번호 18);
CGAACCACTGAACA (서열번호 7);
GAACCACTGAACAAA (서열번호 4);
CGAACCACTGAACAAA (서열번호 5);
CGAACCACTGAACAA (서열번호 6);
CGAACCACTGAAC (서열번호 8);
CCGCAGTATGGATCG (서열번호 9);
CGCAGTATGGATC (서열번호 10);
CGCGTAAAGAGAGGT (서열번호 12);
AGAAGGCACAGACGG (서열번호 14);
GAGAAGGCACAGACGG (서열번호 15);
GAAGTGCACACGG (서열번호 16);
GCGAAGTGCACACGG (서열번호 17);
CGAAGTGCACACG (서열번호 19);
AGGTGAAGCGAAGT (서열번호 27); 및
TAGTAAACTGAGCCA (서열번호 834);
상기 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 모티프 3-10-3, 3-10-2, 3-9-3, 3-9-2, 3-8-3, 3-8-2 중 어느 하나를 포함하며, 이때 첫 번째 숫자는 날개 영역 중의 LNA 단위의 수이고, 두 번째 숫자는 갭 영역 중의 뉴클레오타이드의 수이고, 세 번째 숫자는 날개 영역 중의 LNA 단위의 수이다.
하나의 태양에서, 본 발명은 바이러스성 질환의 치료에 적합한 올리고머 접합체를 제공하며, 이때 상기 올리고머 접합체는
a) 상기 바이러스성 질환을 치료하기 위해 B형 간염 바이러스(HBV), 바람직하게는 HBV의 HBx 또는 HBsAg의 표적 서열을 조절할 수 있는 하나 이상의 제 1 올리고머 영역; 및
b) 담체 성분
을 포함하고;
상기 제 1 올리고머 영역은 12 내지 16 뉴클레오타이드 길이이고;
상기 제 1 올리고머 영역은 갭머이며, 바람직하게, 상기 제 1 올리고머 영역은 양측에 날개가 배치된 2'-데옥시리보뉴클레오타이드 갭 영역을 포함하고, 바람직하게 각각의 날개는 독립적으로 하나 이상의 LNA 단위를 포함하며;
상기 담체 성분은 탄수화물 접합체 모이어티이며, 바람직하게, 상기 담체 성분은 갈락토스, 갈락토스아민, N-폼일-갈락토스아민, N-아세틸-갈락토스아민(GalNAc), N-프로피오닐-갈락토스아민, N-n-부타노일-갈락토스아민, N-아이소부타노일-갈락토스아민 및 이들 중 임의의 하나 이상의 클러스터로 이루어진 군으로부터 선택되고; 바람직하게, 상기 담체 성분은 GalNAc 또는 GalNAc 클러스터를 포함하며; 바람직하게, 상기 담체 성분은 GalNAc2이고;
상기 표적 서열은 HBx 또는 HBsAg를 암호화하는 유전자 또는 mRNA 또는 그의 천연 변이체의 적어도 일부를 포함하고;
상기 제 1 올리고머 영역은 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택된 코어 모티프를 기본으로 하고:
GCGTAAAGAGAGG (서열번호 13);
GCGTAAAGAGAGGT (서열번호 11);
AGCGAAGTGCACACG (서열번호 20);
AGGTGAAGCGAAGTG (서열번호 26);
AGCGAAGTGCACACGG (서열번호 18);
CGAACCACTGAACA (서열번호 7);
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CGAACCACTGAAC (서열번호 8);
CCGCAGTATGGATCG (서열번호 9);
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AGAAGGCACAGACGG (서열번호 14);
GAGAAGGCACAGACGG (서열번호 15);
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CGAAGTGCACACG (서열번호 19);
AGGTGAAGCGAAGT (서열번호 27); 및
TAGTAAACTGAGCCA (서열번호 834);
상기 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 모티프 3-10-3, 3-10-2, 3-9-3, 3-9-2, 3-8-3, 3-8-2 중 어느 하나를 포함하며, 이때 첫 번째 숫자는 날개 영역 중의 LNA 단위의 수이고, 두 번째 숫자는 갭 영역 중의 뉴클레오타이드의 수이고, 세 번째 숫자는 날개 영역 중의 LNA 단위의 수이다.
하나의 태양에서, 본 발명은 바이러스성 질환의 치료에 적합한 조성물을 제공하며, 이때 상기 조성물은 올리고머 접합체 및 하나 이상의 추가적인 상이한 올리고뉴클레오타이드를 포함하고; 상기 올리고머 접합체는
a) 상기 바이러스성 질환을 치료하기 위해 B형 간염 바이러스(HBV), 바람직하게는 HBV의 HBx 또는 HBsAg의 표적 서열을 조절할 수 있는 하나 이상의 제 1 올리고머 영역; 및
b) 담체 성분
을 포함하고;
상기 제 1 올리고머 영역은 12 내지 16 뉴클레오타이드 길이이고;
상기 제 1 올리고머 영역은 갭머이며, 바람직하게, 상기 제 1 올리고머 영역은 양측에 날개가 배치된 2'-데옥시리보뉴클레오타이드 갭 영역을 포함하고, 바람직하게 각각의 날개는 독립적으로 하나 이상의 LNA 단위를 포함하며;
상기 담체 성분은 탄수화물 접합체 모이어티이며, 바람직하게, 상기 담체 성분은 갈락토스, 갈락토스아민, N-폼일-갈락토스아민, N-아세틸-갈락토스아민(GalNAc), N-프로피오닐-갈락토스아민, N-n-부타노일-갈락토스아민, N-아이소부타노일-갈락토스아민 및 이들 중 임의의 하나 이상의 클러스터로 이루어진 군으로부터 선택되고; 바람직하게, 상기 담체 성분은 GalNAc 또는 GalNAc 클러스터를 포함하며; 바람직하게, 상기 담체 성분은 GalNAc2이고;
상기 표적 서열은 HBx 또는 HBsAg를 암호화하는 유전자 또는 mRNA 또는 그의 천연 변이체의 적어도 일부를 포함하고;
상기 제 1 올리고머 영역은 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택된 코어 모티프를 기본으로 하고:
GCGTAAAGAGAGG (서열번호 13);
GCGTAAAGAGAGGT (서열번호 11);
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CGCGTAAAGAGAGGT (서열번호 12);
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GCGAAGTGCACACGG (서열번호 17);
CGAAGTGCACACG (서열번호 19);
AGGTGAAGCGAAGT (서열번호 27); 및
TAGTAAACTGAGCCA (서열번호 834);
상기 올리고머 접합체의 올리고머 성분은 모티프 3-10-3, 3-10-2, 3-9-3, 3-9-2, 3-8-3, 3-8-2 중 어느 하나를 포함하며, 이때 첫 번째 숫자는 날개 영역 중의 LNA 단위의 수이고, 두 번째 숫자는 갭 영역 중의 뉴클레오타이드의 수이고, 세 번째 숫자는 날개 영역 중의 LNA 단위의 수이다.
하나의 태양에서, 본 발명은 바이러스성 질환의 치료를 위한 올리고머를 제공하며, 이때 상기 올리고머는 상기 바이러스성 질환을 치료하기 위해 B형 간염 바이러스(HBV), 바람직하게는 HBV의 HBx 또는 HBsAg의 표적 서열을 조절할 수 있는 하나 이상의 제 1 올리고머 영역을 포함하고; 상기 제 1 올리고머 영역은 12 내지 16 뉴클레오타이드 길이이고;
상기 제 1 올리고머 영역은 갭머이며, 바람직하게, 상기 제 1 올리고머 영역은 양측에 날개가 배치된 2'-데옥시리보뉴클레오타이드 갭 영역을 포함하고, 바람직하게 각각의 날개는 독립적으로 하나 이상의 LNA 단위를 포함하며;
상기 제 1 올리고머 영역은 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택된 코어 모티프를 기본으로 하고:
GCGTAAAGAGAGG (서열번호 13);
GCGTAAAGAGAGGT (서열번호 11);
AGCGAAGTGCACACG (서열번호 20);
AGGTGAAGCGAAGTG (서열번호 26);
AGCGAAGTGCACACGG (서열번호 18);
CGAACCACTGAACA (서열번호 7);
GAACCACTGAACAAA (서열번호 4);
CGAACCACTGAACAAA (서열번호 5);
CGAACCACTGAACAA (서열번호 6);
CGAACCACTGAAC (서열번호 8);
CCGCAGTATGGATCG (서열번호 9);
CGCAGTATGGATC (서열번호 10);
CGCGTAAAGAGAGGT (서열번호 12);
AGAAGGCACAGACGG (서열번호 14);
GAGAAGGCACAGACGG (서열번호 15);
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GCGAAGTGCACACGG (서열번호 17);
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AGGTGAAGCGAAGT (서열번호 27); 및
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상기 올리고머는 모티프 3-10-3, 3-10-2, 3-9-3, 3-9-2, 3-8-3, 3-8-2 중 어느 하나를 포함하며, 이때 첫 번째 숫자는 날개 영역 중의 LNA 단위의 수이고, 두 번째 숫자는 갭 영역 중의 뉴클레오타이드의 수이고, 세 번째 숫자는 날개 영역 중의 LNA 단위의 수이다.
하나의 태양에서, 본 발명은 바이러스성 질환의 치료에 적합한 올리고머를 제공하며, 이때 상기 올리고머는 상기 바이러스성 질환을 치료하기 위해 B형 간염 바이러스(HBV), 바람직하게는 HBV의 HBx 또는 HBsAg의 표적 서열을 조절할 수 있는 하나 이상의 제 1 올리고머 영역을 포함하고; 상기 제 1 올리고머 영역은 12 내지 16 뉴클레오타이드 길이이고;
상기 제 1 올리고머 영역은 갭머이며, 바람직하게, 상기 제 1 올리고머 영역은 양측에 날개가 배치된 2'-데옥시리보뉴클레오타이드 갭 영역을 포함하고, 바람직하게 각각의 날개는 독립적으로 하나 이상의 LNA 단위를 포함하며;
상기 제 1 올리고머 영역은 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택된 코어 모티프를 기본으로 하고:
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상기 올리고머는 모티프 3-10-3, 3-10-2, 3-9-3, 3-9-2, 3-8-3, 3-8-2 중 어느 하나를 포함하며, 이때 첫 번째 숫자는 날개 영역 중의 LNA 단위의 수이고, 두 번째 숫자는 갭 영역 중의 뉴클레오타이드의 수이고, 세 번째 숫자는 날개 영역 중의 LNA 단위의 수이다.
실시예
물질 및 방법
HBsAg 및 HBeAg 검출
혈청 HBsAg 및 HBeAg 수준을 HBsAg 화학발광 면역분석(CLIA) 및 HBeAg CLIA 키트(오토바이오 다이아그노스틱스 캄파니 리미티드(Autobio diagnostics Co. Ltd.), 중국 정저우 소재, 각각 카탈로그 번호 CL0310-2 및 CL0312-2)를 사용하여 감염된 AAV-HBV 마우스의 혈청에서 제조사의 프로토콜에 따라 측정하였다. 간단히, 50 ㎕의 혈청을 각각의 항체 코팅된 미세적정 플레이트로 옮기고 50 ㎕의 효소 접합체 시약을 가하였다. 상기 플레이트를 실온에서 진탕기상에서 60분 동안 배양한 후에 모든 웰을 자동 세척기를 사용하여 세척 완충제로 6회 세척하였다. 25 ㎕의 기질 A 및 이어서 25 ㎕의 기질 B를 각 웰에 가하였다. 상기 플레이트를 RT에서 10분 동안 배양한 후에 엔비젼(Envision) 발광 판독기를 사용하여 발광을 측정하였다. HBsAg를 단위 IU/㎖로 제공하며; 이때 1 ng HBsAg = 1.14 IU. HBeAg는 단위 NCU/㎖ 혈청으로 제공한다.
HBV DNA 추출 및 qPCR
처음에 마우스 혈청을 포스페이트 완충 염수(PBS)로 10의 인자로 희석하였다(1:10). DNA를 MagNA 퓨어(Pure) 96(로슈) 로봇을 사용하여 추출하였다. 50 ㎕의 희석된 혈청을 200 ㎕ MagNA 퓨어 96 외부 용해 완충제(로슈, 카탈로그 번호 06374913001)로 가공 카트리지에서 혼합하고 10분 동안 배양하였다. 이어서 DNA를 "MagNA 퓨어 96 DNA 및 바이러스 핵산 소분량 키트"(로슈, 카탈로그 번호 06543588001) 및 "바이러스 NA 혈장 SV 외부 용해 2.0" 프로토콜을 사용하여 추출하였다. DNA 용출 부피는 50 ㎕이었다.
추출된 HBV DNA의 정량분석을 Taqman qPCR 기계(ViiA7, 라이프 테크놀로지스(Life technologies))를 사용하여 수행하였다. 각각의 DNA 샘플을 상기 PCR에서 중복 시험하였다. 5 ㎕의 DNA 샘플을 384 웰 플레이트 중의 10 ㎕ TaqMan 유전자 발현 마스터 믹스(어플라이드 바이오시스템스(Applied Biosystems), 카탈로그 번호 4369016), 0.5 ㎕ 프라임 타임 XL qPCR 프라이머/탐침(IDT) 및 4.5 ㎕ 증류수를 함유하는 15 ㎕의 PCR 마스터믹스에 가하고 상기 PCR을 하기의 설정을 사용하여 수행하였다: UDG 배양(2분, 50℃), 효소 활성화(10분, 95℃) 및 PCR(변성을 위한 15초, 95℃ 및 어닐링 및 연장을 위한 1분, 60℃의 40주기). DNA 사본수를 ViiA7 소프트웨어에 의한 HBV 플라스미드 DNA 표준 곡선에 근거한 Ct 값으로부터 계산하였다.
TaqMan 프라이머 및 탐침(IDT)에 대한 서열:
순방향 프라이머(F3_코어): CTG TGC CTT GGG TGG CTT T
역방향 프라이머(R3_코어): AAG GAA AGA AGT CAG AAG GCA AAA
Taqman 탐침(P3_코어): 56-FAM/AGC TCC AAA /ZEN/TTC TTT ATA AGG GTC GAT GTC CAT G/3IABkFQ
조직 특이적인 시험관내 링커 절단 분석
시험하고자 하는 생리학적으로 불안정한 링커(예를 들어 DNA 포스포다이에스터 링커(PO 링커))를 갖는 FAM-표지된 올리고머에, 관련된 조직(예를 들어 간 또는 신장) 및 혈청의 균질물을 사용하는 시험관내 절단을 가한다.
상기 조직 및 혈청 샘플을 적합한 동물(예를 들어 마우스, 원숭이, 돼지 또는 래트)로부터 수집하고 균질화 완충제(0.5% 이게팔(Igepal) CA-630, 25 mM 트리스 pH 8.0, 100 mM NaCl, pH 8.0(1N NaOH로 조절됨)) 중에서 균질화한다. 상기 조직 균질물 및 혈청을 올리고머로 200 ㎍/g 조직의 농도로 스파이크한다. 상기 샘플을 37℃에서 24시간 동안 배양하고 그 후에 상기 샘플을 페놀-클로로폼으로 추출한다. 상기 용액에 다이오넥스(Dionex) DNApac p-100 컬럼 및 pH 7.5에서 10 mM 내지 1 M 나트륨 퍼클로레이트 범위의 구배를 사용하여 다이오넥스 얼티메이트 3000상에서 AIE HPLC 분석을 가한다. 절단 및 비-절단 올리고머의 함량을 615 ㎚에서 형광 검출기 및 260 ㎚에서 UV 검출기 모두를 사용하여 표준에 대해 측정한다.
S1 뉴클레아제 절단 분석
S1 뉴클레아제 민감성 링커(예를 들어 DNA 포스포다이에스터 링커(PO 링커))를 갖는 FAM-표지된 올리고머에, S1 뉴클레아제 추출물 또는 혈청에서의 시험관내 절단을 가한다.
100 μM의 상기 올리고머에 20 및 120분 동안 뉴클레아제 완충제(60 U pr. 100 ㎕) 중의 S1 뉴클레아제에 의한 시험관내 절단을 가한다. 상기 효소 활성을 상기 완충제 용액에 EDTA를 가하여 정지시킨다. 상기 용액에 다이오넥스 DNApac p-100 컬럼 및 pH 7.5에서 10 mM 내지 1 M 나트륨 퍼클로레이트 범위의 구배를 사용하여 다이오넥스 얼티메이트 3000상에서 AIE HPLC 분석을 가한다. 절단 및 비-절단 올리고머의 함량을 615 ㎚에서 형광 검출기 및 260 ㎚에서 UV 검출기 모두를 사용하여 표준에 대해 측정한다.
실시예 1
접합체의 제작
올리고뉴클레오타이드를 MerMade12 또는 올리고메이커(OligoMaker) DNA/RNA 합성기상에서 4 μmol 규모로 포스포아미다이트 접근법을 사용하여 키노베이트(Kinovate)로부터 유니링커(UnyLinker) 지지체 또는 유리딘 일반 지지체상에서 합성하였다. 상기 합성의 끝에서, 상기 올리고뉴클레오타이드를 실온에서 1 내지 2시간 동안 수성 암모니아를 사용하여 고체 지지체로부터 절단하고, 65℃에서 16시간 동안 추가로 탈보호시켰다. 상기 올리고뉴클레오타이드를 역상 HPLC(RP-HPLC)에 의해 정제하고 UPLC에 의해 특성화하고, 분자 질량을 ESI-MS에 의해 추가로 확인하였다. 보다 상세한 내용에 대해서 하기를 참조하시오.
올리고뉴클레오타이드의 연장
β-시아노에틸-포스포아미다이트(DNA-A(Bz), DNA-G(ibu), DNA-C(Bz), DNA-T, LNA-5-메틸-C(Bz), LNA-A(Bz), LNA-G(dmf), LNA-T 또는 아미노-C6 링커)의 커플링을 활성제로서 아세토나이트릴 중의 0.1 M의 5'-O-DMT-보호된 포스포아미다이트 및 아세토나이트릴(0.25 M) 중의 DCI(4,5-다이시아노이미다졸)의 용액을 사용하여 수행하였다. 포스포르티오에이트 결합의 도입을 위한 티올화를 잔탄 하이드라이드(아세토나이트릴/피리딘 9:1 중의 0.01 M)를 사용하여 수행하였다. 포스포다이에스터 결합을 THF/피리딘/수 7:2:1 중의 0.02 M 요오드를 사용하여 도입시켰다. 상기 시약의 나머지는 올리고뉴클레오타이드 합성에 전형적으로 사용되는 것들이었다. 고상 합성 후 접합을 위해서 상업적으로 입수할 수 있는 C6 아미노링커 포스포아미다이트를 상기 고상 합성의 최종 주기에 사용하였으며 탈보호 및 상기 고체 지지체로부터 절단 후에 상기 아미노결합된 탈보호된 올리고뉴클레오타이드를 단리하였다. 상기 접합체를 상기 카복실산의 활성화, 및 표준 합성 방법을 사용하여 상기 올리고뉴클레오타이드의 5'-단부상의 아민과의 후속 반응을 통해 도입시켰다.
RP-HPLC에 의한 정제:
상기 조 화합물을 페노메넥스 주피터(Phenomenex Jupiter) C18 10 μ 150x10 ㎜ 컬럼상에서 예비 RP-HPLC에 의해 정제시켰다. 0.1 M 암모늄 아세테이트 pH 8 및 아세토나이트릴을 5 ㎖/분의 유량으로 완충제로서 사용하였다. 상기 수집된 분획들을 동결건조시켜 전형적으로 백색 고체로서 정제된 화합물을 제공하였다.
약어:
DCI: 4,5-다이시아노이미다졸
DCM: 다이클로로메탄
DMF: 다이메틸폼아미드
DMT: 4,4'-다이메톡시트리틸
THF: 테트라하이드로퓨란
Bz: 벤조일
Ibu: 아이소부티릴
RP-HPLC: 역상 고성능 액체 크로마토그래피
실시예 2
시험관내 효능 시험
도입
하기의 연구들에 사용되는 HbsAg 분석은 표준 방법이다. 상기 분석은 생성되는 바이러스의 양을 측정한다. 따라서 상기 분석은 HBx 또는 HBsAg를 표적화하는 올리고머 또는 올리고머 접합체로 인한 바이러스의 감소를 측정한다. 또한, HBx 전사물을 표적화하는 올리고머 또는 올리고머 접합체는 또한 HbsAg 전사물을 표적화할 것이다(또한 결과 표에서 컬럼 3 및 4를 참조하시오).
세포주
HepG2.2.15 세포를 200 ㎎/ℓ의 최종 농도로 10% 소 태아 혈청(인비트로젠(Invitrogen)) 및 G418(인비트로젠)이 보충된 DMEM+글루타맥스-I 배지(인비트로젠, 미국 캘리포니아주 칼스바드 소재)에서 배양하고 37℃에서 5% CO2 중에서 유지시켰다.
HBsAg 분석
HepG2.2.15 세포(구성적으로 HBV-발현 세포주)를 백색 96-웰 플레이트에 1.5 x 104 세포/웰로 중복 시딩하였다. 상기 세포를 단일 농도의 올리고머 또는 DMSO 중의 상기 화합물들의 3배 연속 희석물로 처리하였다. 모든 웰 중의 최종 DMSO 농도를 대조군으로서 사용하였다.
상기 HBsAg 화학발광 면역분석(CLIA) 키트(오토바이오 다이아그노스틱스 캄파니, 중국 정저우 소재)를 사용하여, 분비된 HBV 항원의 수준을 반정량적으로 측정하였다. 검출을 위해서 50 ㎕/웰 배양 상등액을 사용하고 제조사의 설명서에 의해 지시된 바와 같은 과정을 수행하였다. 세포독성을 셀티터-글로(CellTiter-Glo)(프로메가(Promega), 미국 위스콘신주 매디슨 소재, Cat#G7571)를 사용하여 측정하였다. 이-워크북 스위트(E-WorkBook Suite)(ID 비지니스 솔류션즈 리미티드(Business Solutions Ltd.), 영국 길드포드 소재)를 사용하여 용량-반응 곡선을 생성시키고 IC50 및 CC50 값을 외삽하였다. 상기 IC50 및 CC50은 각각 HBsAg 분비(IC50) 및 세포독성(CC50)이 대조군에 비해 50%까지 감소되는 화합물 농도(또는 순화배지 로그 희석)로서 정의된다. 데이터를, 일련의 농도에서 시험하는 경우 올리고머에 대한 EC50 값으로서, 또는 단일 농도로 시험하는 경우 약물 없는 대조군 샘플 중의 HBsAg 수준의 퍼센트로서 상등액 중의 HBsAg의 절대 수준으로서 나타낼 수 있다.
단일 농도 처리로부터의 결과
접합체 없는 총 290개 올리고머를 단일 용량의 25 μM 올리고머를 사용하여 시험관내 효능 분석에서 선별하였다. HBV 항원(HBsAg) 분비를 13일 후에 측정하였다. 하기 표 5는 상기 선별의 결과를 나타낸다. 서열번호 294 내지 서열번호 318의 올리고머는 모두 상기 HBsAg 활성을 대조군의 40% 미만까지 감소시켰다. 서열번호 584의 올리고머는 미국특허 제 8,598,334 호에서 서열번호 16으로서 개시된 올리고머에 상응한다.
추가로 213개 올리고머를 단일 용량의 25 μM 올리고머를 사용하여 시험관내 효능 분석에서 선별하였다. 결과를 도 5a에 나타낸다.
[표 5]
Figure pat00041
Figure pat00042
Figure pat00043
Figure pat00044
Figure pat00045
Figure pat00046
Figure pat00047
Figure pat00048
Figure pat00049
Figure pat00050
Figure pat00051
[표 5a]
Figure pat00052
Figure pat00053
Figure pat00054
Figure pat00055
Figure pat00056
Figure pat00057
수회 농도 처리로부터의 결과
표 5로부터의 올리고머의 선택을 상기 올리고머들에 대한 IC50 및 CC50 값의 평가를 위해서 시험관내 효능 분석에서 3배 연속 희석물(25.000, 8.3333, 2.7778, 0.9259, 0.0343, 0.0114, 0.0038, 0.0013 μM 올리고머)을 사용하여 시험하였다. HBV 항원(HBsAg) 분비를 13일 후에 측정하였다. 하기 표 6은 상기 분석의 결과를 나타낸다. 서열번호 585의 올리고머는 미국특허 제 8,598,334 호에서 서열번호 16으로서 개시된 올리고머에 상응한다.
[표 6]
Figure pat00058
실시예 3
생체내 AAV/HBV 마우스 모델:
항-HBV LNA를 AAV/HBV 마우스 모델에서 평가할 수 있다. 본 모델에서, HBV 게놈을 운반하는 재조합 아데노-관련된 바이러스(AAV)(AAV/HBV)로 감염된 마우스는 30주 넘게 안정한 바이러스혈증 및 항원혈증을 유지한다(문헌[Dan Yang, et al. 2014 Cellular & Molecular Immunology 11, 71-78]).
특정 병원체가 없는 수컷 C57BL/6 마우스(4 내지 6주 된 것)를 SLAC(중국 과학 아카데미의 상하이 실험 동물 센터)로부터 구입하고 동물 보호 설비에서 개별적으로 환기되는 우리에 수용한다. 동물의 보호 및 사용에 대한 지침은 우시(WuXi) IACUC(연구 동물 보호 및 사용 위원회, WUXI IACUC 프로토콜 번호 R20131126-마우스)에 의해 지시된 바에 따른다. 마우스를 3일 동안 새로운 환경에 순응하게 하고 실험 설계에 따라 분류한다.
재조합 AAV-HBV를 주사당 PBS, 200 ㎕ 중에 희석하였다. 상기 재조합 바이러스는 1.3 사본의 HBV 게놈(유전자형 D, 혈청형 ayw)을 운반한다.
0일째에, 모든 마우스를 꼬리 정맥을 통해 200 ㎕의 AAV-HBV로 주사한다. AAV 주사 후 6, 13 및 20일째에 모든 마우스를 혈청 수집을 위해 턱밑에서 채혈한다(0.1 ㎖ 혈액/마우스). 주사후 22일째에, 안정한 바이러스혈증을 갖는 마우스를 비히클 또는 항-HBV LNA 5 ㎎/㎏의 정맥내 투여로 처리한다. 상기 LNA 올리고머는 접합되지 않거나 GalNAc 접합될 수 있다.
마우스에게 2주 동안 격주로 투여한다. 처음 LNA 투여후 3, 7, 10 및 14일째에, 혈청 수집을 위해 모든 마우스를 턱밑에서 채혈하여(0.1 ㎖ 혈액/마우스) 혈청 중 HBV 표면 항원(HBsAg), HBV e 항원(HBeAg), 및 HBV 게놈 DNA를 모니터링한다.
실시예 4
단일 용량으로 격주 주사의 생체내 연구
실시예 3에서 제조된 바와 같은 AAV/HBV 마우스 모델을 본 연구에 사용하였다. 10개의 GalNAc 접합된 항-HBV LNA 올리고머를 안정한 바이러스혈증을 갖는 C57BL/6 마우스에서 대조군으로서 염수로 시험하였다. 상기 올리고머 중 일부를 매일 경구 용량으로서 0.03 ㎎/㎏로 처방된 바와 같이 투여된 관심 뉴클레오사이드 유사체의 표준, 엔테카비어(ETV)와 비교하였다.
마우스에게 주사당 2 ㎎/㎏의 용량으로 0, 3, 7 및 10 또는 0, 3, 6 및 9일째에 2주동안 매주 2회 피하 투여하였다. 혈청 중 HBV 표면 항원(HBsAg), HBV e 항원(HBeAg) 및 HBV 게놈 DNA를 상기 "물질 및 방법" 섹션에 기재된 방법을 사용하여 지시된 일수로 측정하였다. 마우스를 23 내지 24일동안 추적하였다.
결과를 하기 표들에 나타낸다.
[표 7A 내지 7C]
2 ㎎/㎏의 매주-2회 투여량에 따른 HBsAg의 혈청 수준(log10(IU/㎖))
데이터는 3개의 독립적인 실험으로부터의 것이다
Figure pat00059
상기 데이터로부터, 생체내 모든 GalNAc 접합된 항-HBV 안티센스 올리고머가 HBV s 항원(HBsAg)의 혈청 수준을 염수 및 관심 표준보다 낮은 수준으로 감소시킬 수 있다는 결론을 내릴 수 있다. 특히 서열번호 807, 서열번호 808, 서열번호 814, 서열번호 815, 서열번호 825, 서열번호 826은 HBsAg의 혈청 수준을 크게 감소시키는 것으로 입증될 수 있다.
[표 8A 내지 8C]
2 ㎎/㎏의 매주-2회 투여량에 따른 HBeAg의 혈청 수준(log10(NCU/㎖))
Figure pat00060
Figure pat00061
상기 데이터로부터, 생체내 모든 GalNAc 접합된 항-HBV 안티센스 올리고머가 HBeAg의 혈청 수준을 염수 및 관심 표준보다 낮은 수준으로 감소시킬 수 있다는 결론을 내릴 수 있다. 특히 서열번호 807, 서열번호 808, 서열번호 814, 서열번호 815, 서열번호 825, 서열번호 826은 HBeAg의 혈청 수준을 크게 감소시키는 것으로 입증될 수 있다.
[표 9A 내지 9C]
2 ㎎/㎏의 격주 투여량에 따른 HBV DNA의 혈청 수준(log10 사본수에 의해)
Figure pat00062
Figure pat00063
LLOQ = 정량분석의 보다 낮은 수준보다 낮다
상기 데이터로부터, 모든 GalNAc 접합된 항-HBV 안티센스 올리고머가 HBV 게놈 DNA의 혈청 수준을 염수보다 낮고/낮거나 ETV(관심 임상 표준)와 동등한 수준으로 감소시킬 수 있다는 결론을 내릴 수 있다. 특히 서열번호 807, 서열번호 808, 서열번호 814, 서열번호 815, 서열번호 825, 서열번호 826은 HBV 게놈 DNA의 혈청 수준을 크게 감소시키는 것으로 입증될 수 있다.
상기 데이터로부터의 종합적인 결론은 생체내에서 GalNAc-접합된, HBV-표적화 LNA는 ETV(관심 임상 표준)보다 더 양호하게 HBsAg 및 HBeAg의 발현을 표적화하고 감소시킬 수 있고 HBV 혈청 DNA는 ETV에 비해 동등하거나 양호한 효능을 갖는다는 것이다. 상기 데이터는 뉴클레오사이드 유사체 ETV보다 바이러스 전사 프로그램에 대해 더 넓은 효과를 제공하는 경우, 임상에서 GalNAc 접합된 HBV-표적화 LNA의 사용이 만성적으로 감염된 HBV 환자에 대한 완치율의 현저한 증가를 포함하여, 훨씬 개선된 결과를 유도하는 듯함을 암시한다. 특히 면역 억제제 HBsAg의 감소는 HBV-지시된 숙주 면역 반응의 회복을 유도할 것이다.
실시예 5
수회 용량의 격주 주사의 생체내 연구
실시예 3에서 제조된 바와 같은 AAV/HBV 마우스 모델을 본 연구에 사용하였다. 7개의 GalNAc 접합된 항-HBV LNA 올리고머를 안정한 바이러스혈증을 갖는 C57BL/6 마우스에서 상이한 용량으로 대조군으로서 염수를 사용하여 시험하였다.
마우스에게 하기 표에 지시된 주사당 ㎎/㎏(mpk)의 용량으로 0, 3, 7 및 10 또는 0, 3, 6 및 9일째에 2주동안 매주 2회 피하 투여하였다. 혈청 중 HBV 표면 항원(HBsAg), HBV e 항원(HBeAg) 및 HBV 게놈 DNA를 상기 "물질 및 방법" 섹션에 기재된 방법을 사용하여 지시된 일수로 측정하였다. 마우스를 23 내지 24일동안 추적하였다.
결과를 하기 표들에 나타낸다.
[표 10A 내지 10G]
지시된 농도의 격주 투여량에 따른 HBsAg의 혈청 수준(log10(IU/㎖))
Figure pat00064
Figure pat00065
Figure pat00066
상기 데이터를 또한 도 11에 나타낸다.
[표 11A 내지 11G]
지시된 농도의 격주 투여량에 따른 HBeAg의 혈청 수준(log10(NCU/㎖))
Figure pat00067
Figure pat00068
Figure pat00069
상기 데이터를 또한 도 12에 나타낸다.
[표 12A 내지 12G]
지시된 농도의 격주 투여량에 따른 log10(HBV DNA)의 혈청 수준(사본수에 의해)
Figure pat00070
LLOQ = 정량분석의 보다 낮은 수준보다 낮다
Figure pat00071
Figure pat00072
상기 데이터를 또한 도 13에 나타낸다.
상기 데이터로부터, 모든 GalNAc 접합된 항-HBV 안티센스 올리고머가 HBsAG, HBeAG 및 HBV 게놈 DNA의 혈청 수준을 염수보다 낮은 수준으로 감소시킬 수 있다는 결론을 내릴 수 있다. 특히 서열번호 807, 814, 815 및 825는 중간 용량에서조차 매우 효율적인 HBsAg 감소를 나타낸다. 가장 높은 용량에서, 상기 항원 감소는 서열번호 807 및 815로 처리를 끝낸 후 적어도 11일째에 유지된다. 서열번호 814, 815 및 825는 바이러스 혈청 DNA의 가장 효능 있는 녹-다운을 입증하며, 이는 바이러스 폴리머라제-발현 전사물에 대해 특히 효능 있는 효과를 입증한다.
실시예 6
상이한 투여 경로에 의한 바이러스 억제 효능의 비교
실시예 3에서 제조된 바와 같은 AAV/HBV 마우스 모델을 본 연구에 사용하였다. GalNAc 접합된 항-HBV LNA 올리고머를 안정한 바이러스혈증을 갖는 C57BL/6 마우스에서 대조군으로서 염수로 피하(SC) 또는 정맥내(IV) 투여 경로를 사용하여 상이한 용량으로 시험하였다.
마우스에게 하기 표에서 지시된 주사당 ㎎/㎏(mpk)의 용량으로 0, 3, 6 및 9일째에 2주동안 매주 2회 피하 또는 정맥내 투여하였다. 혈청 중 HBV 표면 항원(HBsAg), HBV e 항원(HBeAg) 및 HBV 게놈 DNA를 상기 "물질 및 방법" 섹션에 기재된 방법을 사용하여 지시된 일수로 측정하였다. 마우스를 최초 투여 후 23일동안 추적하였다.
결과를 하기 표들에 나타낸다.
[표 13A]
지시된 농도의 격주 SC 투여량에 따른 HBsAg의 혈청 수준(log10(IU/㎖))
Figure pat00073
[표 13B]
지시된 농도의 격주 IV 투여량에 따른 HBsAg의 혈청 수준(log10(IU/㎖))
Figure pat00074
[표 14A]
지시된 농도의 격주 SC 투여량에 따른 HBeAg의 혈청 수준(log10(IU/㎖))
Figure pat00075
LLOQ = 정량분석의 보다 낮은 수준보다 낮다
[표 14B]
지시된 농도의 격주 IV 투여량에 따른 HBeAg의 혈청 수준(log10(IU/㎖))
Figure pat00076
[표 15A]
지시된 농도의 격주 SC 투여량에 따른 HBV DNA의 혈청 수준(log10(사본수)에 의해)
Figure pat00077
LLOQ = 정량분석의 보다 낮은 수준보다 낮다
[표 15B]
지시된 농도의 격주 IV 투여량에 따른 HBV DNA의 혈청 수준(log10(사본수)에 의해)
Figure pat00078
LLOQ = 정량분석의 보다 낮은 수준보다 낮다
상기 데이터를 또한 도 14에 나타낸다.
상기 데이터로부터 GalNAc 접합된 항-HBV 안티센스 올리고머의 투여가, 정맥내 투여에 비해 피하 투여에 의해 투여될 때, 염수보다 더 낮은 수준으로 HBsAG, HBeAG 및 HBV 게놈 DNA의 혈청 수준을 보다 효율적으로 감소시킨다는 결론을 내릴 수 있다.
실시예 7
접합된 및 접합되지 않은 올리고뉴클레오타이드의 비교
실시예 3에서 제조된 바와 같은 AAV/HBV 마우스 모델을 본 연구에 사용하였다. 접합되지 않은(서열번호 308 및 303) 및 GalNAc 접합된(서열번호 807 및 815) 항-HBV LNA 올리고머를 안정한 바이러스혈증을 갖는 C57BL/6 마우스에서 대조군으로서 염수를 사용하여 동몰 올리고머 용량으로 시험하였다.
마우스에게 하기 표에 지시된 주사당 ㎎/㎏(mpk)의 용량으로 0, 3, 6 및 9일째에 2주동안 매주 2회 피하 투여하였다. 혈청 중 HBV 표면 항원(HBsAg), HBV e 항원(HBeAg) 및 HBV 게놈 DNA를 상기 "물질 및 방법" 섹션에 기재된 방법을 사용하여 지시된 일수로 측정하였다. 마우스를 23일동안 추적하였다.
결과를 하기 표들에 나타낸다.
[표 16A 및 16B]
동몰 농도의 격주 투여량에 따른 HBsAg의 혈청 수준(log10(IU/㎖))
Figure pat00079
[표 17A 및 17B]
동몰 농도의 격주 투여량에 따른 HBeAg의 혈청 수준(log10(IU/㎖))
Figure pat00080
[표 18A 및 18B]
동몰 농도의 격주 투여량에 따른 HBV DNA의 혈청 수준(log10(사본수)에 의해)
Figure pat00081
LLOQ = 정량분석의 보다 낮은 수준보다 낮다
Figure pat00082
LLOQ = 정량분석의 보다 낮은 수준보다 낮다
상기 데이터를 또한 도 15에 나타낸다.
상기 데이터로부터 GalNAc 접합된 항-HBV 안티센스 올리고머의 투여가, 정맥내 투여에 비해 피하 투여에 의해 투여될 때, 염수보다 더 낮은 수준으로 HBsAG 및 HBeAG의 혈청 수준을 보다 효율적으로 감소시킨다는 결론을 내릴 수 있다. 혈청 HBV DNA는, 상기 분석의 한계가 높은 용량에서 식별을 방해하지만, 2가지 전달 방법에 의해 동등한 효능으로 감소된다.
본 명세서에 인용된 간행물, 특허출원 및 특허를 포함한 모든 참고문헌은 내용 전체, 및 각각의 참고문헌이 참고로 인용되고 본 명세서에 그의 내용 전체가 제시됨을 개별적이고 구체적으로 가리키는 바와 같은 정도(법에 의해 허용되는 최대한도)로 본 발명에 참고로 인용된다. 모든 표제 및 부제는 단지 편의상 본 명세서에 사용되며 본 발명을 어떠한 식으로도 제한하는 것으로서 해석해서는 안 된다. 본 명세서에 제공된 모든 실시예, 또는 예시적인 언어(예를 들어, "예를 들어")의 사용은 단지 본 발명을 보다 양호하게 설명하고자 하는 것이며 달리 청구되지 않는 한 본 발명의 범위에 대한 제한을 나타내지 않는다. 임의의 청구되지 않은 요소들을 본 발명의 실시에 필수적인 것으로 가리키는 것으로서, 명세서의 용어를 해석해서는 안 된다. 본 명세서의 특허 문서의 인용 및 포함은 단지 편의를 위한 것이며 상기와 같은 특허 문서의 효력, 특허권 및/또는 시행가능성의 어떠한 의도도 반영하지 않는다. 본 발명은 적용가능한 법에 의해 허용되는 바와 같이 본 명세서에 첨부된 특허청구범위에 인용된 발명의 요지의 모든 변형 및 균등물을 포함한다.
SEQUENCE LISTING <110> F. HOFFMANN-LA ROCHE AG <120> OLIGOMERS AND OLIGOMER CONJUGATES <130> 32180 <140> PCT/EP2015/060402 <141> 2015-05-12 <150> GB1408623.5 <151> 2014-05-15 <160> 862 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 746 <212> DNA <213> Hepatitis B virus <400> 1 aacccccact ggctggggct tggtcatggg ccatcagcgc gtgcgtggaa ccttttcggc 60 tcctctgccg atccatactg cggaactcct agccgcttgt tttgctcgca gcaggtctgg 120 agcaaacatt atcgggactg ataactctgt tgtcctctcc cgcaaatata catcgtatcc 180 atggctgcta ggctgtgctg ccaactggat cctgcgcggg acgtcctttg tttacgtccc 240 gtcggcgctg aatcctgcgg acgacccttc tcggggtcgc ttgggactct ctcgtcccct 300 tctccgtctg ccgttccgac cgaccacggg gcgcacctct ctttacgcgg actccccgtc 360 tgtgccttct catctgccgg accgtgtgca cttcgcttca cctctgcacg tcgcatggag 420 accaccgtga acgcccaccg aatgttgccc aaggtcttac ataagaggac tcttggactc 480 tctgcaatgt caacgaccga ccttgaggca tacttcaaag actgtttgtt taaagactgg 540 gaggagttgg gggaggagat tagattaaag gtctttgtac taggaggctg taggcataaa 600 ttggtctgcg caccagcacc atgcaacttt ttcacctctg cctaatcatc 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atgggccatc agcgcgtgcg tggaaccttt tcggctcctc 1260 tgccgatcca tactgcggaa ctcctagccg cttgttttgc tcgcagcagg tctggagcaa 1320 acattatcgg gactgataac tctgttgtcc tctcccgcaa atatacatcg tatccatggc 1380 tgctaggctg tgctgccaac tggatcctgc gcgggacgtc ctttgtttac gtcccgtcgg 1440 cgctgaatcc tgcggacgac ccttctcggg gtcgcttggg actctctcgt ccccttctcc 1500 gtctgccgtt ccgaccgacc acggggcgca cctctcttta cgcggactcc ccgtctgtgc 1560 cttctcatct gccggaccgt gtgcacttcg cttcacctct gcacgtcgca tggagaccac 1620 cgtgaacgcc caccgaatgt tgcccaaggt cttacataag aggactcttg gactctctgc 1680 aatgtcaacg accgaccttg aggcatactt caaagactgt ttgtttaaag actgggagga 1740 gttgggggag gagattagat taaaggtctt tgtactagga ggctgtaggc ataaattggt 1800 ctgcgcacca gcaccatgca actttttcac ctctgcctaa tcatctcttg ttcatgtcct 1860 actgttcaag cctccaagct gtgccttggg tggctttggg gcatggacat cgacccttat 1920 aaagaatttg gagctactgt ggagttactc tcgtttttgc cttctgactt ctttccttca 1980 gtacgagatc ttctagatac cgcctcagct ctgtatcggg aagccttaga gtctcctgag 2040 cattgttcac ctcaccatac tgcactcagg caagcaattc tttgctgggg ggaactaatg 2100 actctagcta cctgggtggg tgttaatttg gaagatccag catctagaga cctagtagtc 2160 agttatgtca acactaatat gggcctaaag ttcaggcaac tcttgtggtt tcacatttct 2220 tgtctcactt ttggaagaga aaccgttata gagtatttgg tgtctttcgg agtgtggatt 2280 cgcactcctc cagcttatag accaccaaat gcccctatcc tatcaacact tccggaaact 2340 actgttgtta gacgacgagg caggtcccct agaagaagaa ctccctcgcc tcgcagacga 2400 aggtctcaat cgccgcgtcg cagaagatct caatctcggg aacctcaatg ttagtattcc 2460 ttggactcat aaggtgggga actttactgg tctttattct tctactgtac ctgtctttaa 2520 tcctcattgg aaaacaccat cttttcctaa tatacattta caccaagaca ttatcaaaaa 2580 atgtgaacag tttgtaggcc cacttacagt taatgagaaa agaagattgc aattgattat 2640 gcctgctagg ttttatccaa aggttaccaa atatttacca ttggataagg gtattaaacc 2700 ttattatcca gaacatctag ttaatcatta cttccaaact agacactatt tacacactct 2760 atggaaggcg ggtatattat ataagagaga aacaacacat agcgcctcat tttgtgggtc 2820 accatattct tgggaacaag atctacagca tggggcagaa tctttccacc agcaatcctc 2880 tgggattctt tcccgaccac 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C <222> (3)..(5) <220> <221> phosphorothioate lnternucleoside linkages <222> (4)..(18) <220> <221> LNA nucleosides, LNA C are 5-methyl C <222> (16)..(18) <400> 807 caagcgaagt gcacacgg 18 <210> 808 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antisense oligonucleotide GalNAc conjugate <220> <221> GalNAc2-C6 <222> (1)..(1) <220> <221> phosphodiester lnternucleoside linkages <222> (1)..(3) <220> <221> LNA nucleosides, LNA C are 5-methyl C <222> (3)..(5) <220> <221> phosphorothioate lnternucleoside linkages <222> (4)..(17) <220> <221> LNA nucleosides, LNA C are 5-methyl C <222> (15)..(17) <400> 808 caagcgaagt gcacacg 17 <210> 809 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antisense oligonucleotide GalNAc conjugate <220> <221> GalNAc2-C6 <222> (1)..(1) <220> <221> phosphodiester lnternucleoside linkages <222> (1)..(3) <220> <221> LNA nucleosides <222> (3)..(5) <220> <221> phosphorothioate lnternucleoside linkages <222> (4)..(18) <220> <221> 5-methyl C <222> 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16 <210> 812 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antisense oligonucleotide GalNAc conjugate <220> <221> GalNAc2-C6 <222> (1)..(1) <220> <221> phosphodiester lnternucleoside linkages <222> (1)..(3) <220> <221> LNA nucleosides, LNA C are 5-methyl C <222> (3)..(5) <220> <221> phosphorothioate lnternucleoside linkages <222> (4)..(15) <220> <221> LNA nucleosides, LNA C are 5-methyl C <222> (14)..(15) <400> 812 cacgaaccac tgaac 15 <210> 813 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antisense oligonucleotide GalNAc conjugate <220> <221> GalNAc2-C6 <222> (1)..(1) <220> <221> phosphodiester lnternucleoside linkages <222> (1)..(3) <220> <221> LNA nucleosides, LNA C are 5-methyl C <222> (3)..(5) <220> <221> phosphorothioate lnternucleoside linkages <222> (4)..(15) <220> <221> LNA nucleosides, LNA C are 5-methyl C <222> (14)..(15) <400> 813 cacgcagtat ggatc 15 <210> 814 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antisense oligonucleotide GalNAc conjugate <220> <221> GalNAc2-C6 <222> (1)..(1) <220> <221> phosphodiester lnternucleoside linkages <222> (1)..(3) <220> <221> LNA nucleosides, LNA C are 5-methyl C <222> (3)..(5) <220> <221> phosphorothioate lnternucleoside linkages <222> (4)..(16) <220> <221> LNA nucleosides <222> (14)..(16) <400> 814 cagcgtaaag agaggt 16 <210> 815 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antisense oligonucleotide GalNAc conjugate <220> <221> GalNAc2-C6 <222> (1)..(1) <220> <221> phosphodiester lnternucleoside linkages <222> (1)..(3) <220> <221> LNA nucleosides, LNA C are 5-methyl C <222> (3)..(5) <220> <221> phosphorothioate lnternucleoside linkages <222> (4)..(15) <220> <221> LNA nucleosides <222> (14)..(15) <400> 815 cagcgtaaag agagg 15 <210> 816 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antisense oligonucleotide GalNAc conjugate <220> <221> GalNAc2-C6 <222> (1)..(1) <220> <221> phosphodiester lnternucleoside linkages <222> (1)..(3) <220> <221> LNA nucleosides <222> (3)..(5) <220> <221> phosphorothioate lnternucleoside linkages <222> (4)..(15) <220> <221> 5-methyl C <222> (13)..(13) <220> <221> LNA nucleosides <222> (14)..(15) <400> 816 cagaagtgca cacgg 15 <210> 817 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antisense oligonucleotide GalNAc conjugate <220> <221> GalNAc2-C6 <222> (1)..(1) <220> <221> phosphodiester lnternucleoside linkages <222> (1)..(3) <220> <221> LNA nucleosides, LNA C are 5-methyl C <222> (3)..(5) <220> <221> phosphorothioate lnternucleoside linkages <222> (4)..(15) <220> <221> LNA nucleosides, LNA C are 5-methyl C <222> (14)..(15) <400> 817 cacgaagtgc acacg 15 <210> 818 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antisense oligonucleotide GalNAc conjugate <220> <221> GalNAc2-C6 <222> (1)..(1) <220> <221> phosphodiester lnternucleoside linkages <222> (1)..(3) <220> <221> LNA nucleosides <222> (3)..(5) <220> <221> phosphorothioate lnternucleoside linkages <222> (4)..(16) <220> <221> 5-methyl C <222> (11)..(11) <220> <221> LNA nucleosides <222> (14)..(16) <400> 818 caaggtgaag cgaagt 16 <210> 819 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antisense oligonucleotide GalNAc conjugate <220> <221> GalNAc2-C6 <222> (1)..(1) <220> <221> phosphodiester lnternucleoside linkages <222> (1)..(3) <220> <221> LNA nucleosides <222> (3)..(5) <220> <221> phosphorothioate lnternucleoside linkages <222> (4)..(17) <220> <221> LNA nucleosides, LNA C are 5-methyl C <222> (14)..(17) <400> 819 cagaaccact gaacaaa 17 <210> 820 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antisense oligonucleotide GalNAc conjugate <220> <221> GalNAc2-C6 <222> (1)..(1) <220> <221> phosphodiester lnternucleoside linkages <222> (1)..(3) <220> <221> LNA nucleosides <222> (3)..(6) <220> <221> phosphorothioate lnternucleoside linkages <222> (4)..(18) <220> <221> LNA nucleosides, LNA C are 5-methyl C <222> (16)..(18) <400> 820 cacgaaccac tgaacaaa 18 <210> 821 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antisense oligonucleotide GalNAc conjugate <220> <221> GalNAc2-C6 <222> (1)..(1) <220> <221> phosphodiester lnternucleoside linkages <222> (1)..(3) <220> <221> LNA nucleosides <222> (3)..(5) <220> <221> phosphorothioate lnternucleoside linkages <222> (4)..(15) <220> <221> LNA nucleosides, LNA C are 5-methyl C <222> (13)..(15) <400> 821 cagaagtgca cacgg 15 <210> 822 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antisense oligonucleotide GalNAc conjugate <220> <221> GalNAc2-C6 <222> (1)..(1) <220> <221> phosphodiester lnternucleoside linkages <222> (1)..(3) <220> <221> LNA nucleosides <222> (3)..(5) <220> <221> phosphorothioate lnternucleoside linkages <222> (4)..(17) <220> <221> LNA nucleosides, LNA C are 5-methyl C <222> (15)..(17) <400> 822 catagtaaac tgagcca 17 <210> 823 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antisense oligonucleotide GalNAc conjugate <220> <221> GalNAc2-C6 <222> (1)..(1) <220> <221> phosphodiester lnternucleoside linkages <222> (1)..(3) <220> <221> LNA nucleosides, LNA C are 5-methyl C <222> (3)..(5) <220> <221> phosphorothioate lnternucleoside linkages <222> (4)..(15) <220> <221> LNA nucleosides, LNA C are 5-methyl C <222> (13)..(15) <400> 823 cacgaaccac tgaac 15 <210> 824 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antisense oligonucleotide GalNAc conjugate <220> <221> GalNAc2-C6 <222> (1)..(1) <220> <221> phosphodiester lnternucleoside linkages <222> (1)..(3) <220> <221> LNA nucleosides, LNA C are 5-methyl C <222> (3)..(5) <220> <221> phosphorothioate lnternucleoside linkages <222> (4)..(16) <220> <221> LNA nucleosides, LNA C are 5-methyl C <222> (13)..(16) <400> 824 cacgaaccac tgaaca 16 <210> 825 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antisense oligonucleotide GalNAc conjugate <220> <221> GalNAc2-C6 <222> (1)..(1) <220> <221> phosphodiester lnternucleoside linkages <222> (1)..(3) <220> <221> LNA nucleosides, LNA C are 5-methyl C <222> (3)..(5) <220> <221> phosphorothioate lnternucleoside linkages <222> (4)..(15) <220> <221> LNA nucleosides <222> (13)..(15) <400> 825 cagcgtaaag agagg 15 <210> 826 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antisense oligonucleotide GalNAc conjugate <220> <221> GalNAc2-C6 <222> (1)..(1) <220> <221> phosphodiester lnternucleoside linkages <222> (1)..(3) <220> <221> LNA nucleosides <222> (3)..(4) <220> <221> phosphorothioate lnternucleoside linkages <222> (4)..(17) <220> <221> 5-methyl C <222> (11)..(11) <220> <221> LNA nucleosides <222> (14)..(17) <400> 826 caaggtgaag cgaagtg 17 <210> 827 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide target sequence <400> 827 acggggcgca cctctcttta cgcg 24 <210> 828 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide target sequence <400> 828 cgtgtgcact tcgcttcacc tc 22 <210> 829 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide target sequence <400> 829 ccgtctgtgc cttctc 16 <210> 830 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide target sequence <400> 830 cgatccatac tgcgg 15 <210> 831 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide target sequence <400> 831 tggctcagtt tacta 15 <210> 832 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide sequence motif <400> 832 ccgcagtatg gatcg 15 <210> 833 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide target sequence <400> 833 ctagtgccat ttgtt 15 <210> 834 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide sequence motif <400> 834 tagtaaactg agcca 15 <210> 835 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide sequence motif <400> 835 ctagtaaact gagcca 16 <210> 836 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide sequence motif <400> 836 ctagtaaact gagcc 15 <210> 837 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide sequence motif <400> 837 gcactagtaa actga 15 <210> 838 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide sequence motif <400> 838 ggcactagta aactga 16 <210> 839 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide sequence motif <400> 839 caacggggta aaggt 15 <210> 840 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide sequence motif <400> 840 cagtatggat cggca 15 <210> 841 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide sequence motif <400> 841 ttccgcagta tggatc 16 <210> 842 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide sequence motif <400> 842 ttccgcagta tggat 15 <210> 843 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide sequence motif <400> 843 gttccgcagt atggat 16 <210> 844 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide sequence motif <400> 844 gttccgcagt atgga 15 <210> 845 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide sequence motif <400> 845 agttccgcag tatgga 16 <210> 846 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide sequence motif <400> 846 agttccgcag tatgg 15 <210> 847 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide sequence motif <400> 847 gagttccgca gtatgg 16 <210> 848 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide sequence motif <400> 848 gagttccgca gtatg 15 <210> 849 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide sequence motif <400> 849 ggagttccgc agtatg 16 <210> 850 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide sequence motif <400> 850 taaagagagg tgcgcc 16 <210> 851 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide sequence motif <400> 851 taaagagagg tgcgc 15 <210> 852 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide sequence motif <400> 852 gtaaagagag gtgcgc 16 <210> 853 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide sequence motif <400> 853 gtaaagagag gtgcg 15 <210> 854 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide sequence motif <400> 854 cgtaaagaga ggtgcg 16 <210> 855 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide sequence motif <400> 855 cgtaaagaga ggtgc 15 <210> 856 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide sequence motif <400> 856 gcgtaaagag aggtgc 16 <210> 857 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide sequence motif <400> 857 gcgtaaagag aggtg 15 <210> 858 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide sequence motif <400> 858 cgcgtaaaga gaggtg 16 <210> 859 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide sequence motif <400> 859 tgagaaggca cagacg 16 <210> 860 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide sequence motif <400> 860 gcctcaaggt cggtc 15 <210> 861 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide sequence motif <400> 861 atgcctacag cctcc 15 <210> 862 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> oligonucleotide sequence motif <400> 862 accaatttat gcctac 16

Claims (21)

  1. a) 바이러스성 질환을 치료하기 위해 B형 간염 바이러스(HBV)의 표적 서열을 조절할 수 있는 하나 이상의 제 1 올리고머 영역; 및
    b) 담체 성분
    을 포함하는, 바이러스성 질환의 치료에 사용하기 위한 올리고머 접합체로서,
    상기 제 1 올리고머 영역이 10 내지 20 뉴클레오타이드 길이이고;
    상기 담체 성분이 아시알로당단백질 수용체(ASGP-R) 표적화 모이어티 또는 콜레스테롤 접합체 모이어티이고;
    상기 표적 서열이 적어도 HBx(서열번호 1) 또는 HBsAg(서열번호 2)를 암호화하는 유전자 또는 mRNA 또는 그의 천연 변이체의 부분을 포함하는
    올리고머 접합체.
  2. 제 1 항에 있어서,
    제 1 올리고머 영역이 양측에 날개가 배치된 2'-데옥시리보뉴클레오타이드 갭 영역을 포함하고, 각각의 날개가 독립적으로 하나 이상의 LNA 단위를 포함하는 올리고머 접합체.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    ASGP-R 표적화 모이어티가 갈락토스, 갈락토스아민, N-폼일-갈락토스아민, N-아세틸-갈락토스아민(GalNAc), N-프로피오닐-갈락토스아민, N-n-부타노일-갈락토스아민, N-아이소부타노일-갈락토스아민 및 이들 중 임의의 하나 이상의 클러스터로 이루어진 군으로부터 선택되는
    올리고머 접합체.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
    담체 성분이 2 내지 4개의 말단 GalNAc 모이어티, 각각의 GalNAc 모이어티를 분지점 기에 결합시키는 PEG 이격자를 포함하는 GalNAc 클러스터인 올리고머 접합체.
  5. 제 4 항에 있어서,
    GalNAc 클러스터가 3가 GalNAc, 예를 들어 Conj1, Conj2, Conj1a 또는 Conj2a로서 나타내는 것인 올리고머 접합체.
  6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,
    담체 성분이 GalNAc2인 올리고머 접합체.
  7. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    담체 성분이 생리학적으로 불안정한 링커에 의해 제 1 올리고머에 결합되는 올리고머 접합체.
  8. 제 7 항에 있어서,
    생리학적으로 불안정한 링커가 2, 3, 4 또는 5 포스포다이에스터 결합된 DNA 또는 RNA 뉴클레오사이드를 포함하는 올리고머 접합체.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,
    표적 서열이 서열번호 3의 1530 내지 1598번, 1264 내지 1278번 및 670 내지 706번 위치 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택되는 올리고머 접합체.
  10. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서,
    제 1 올리고머 영역이 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택되는 코어 모티프를 기본으로 하는 올리고머 접합체:
    GCGTAAAGAGAGG (서열번호 13);
    GCGTAAAGAGAGGT (서열번호 11);
    AGCGAAGTGCACACG (서열번호 20);
    AGGTGAAGCGAAGTG (서열번호 26);
    AGCGAAGTGCACACGG (서열번호 18);
    CGAACCACTGAACA (서열번호 7);
    GAACCACTGAACAAA (서열번호 4);
    CGAACCACTGAACAAA (서열번호 5);
    CGAACCACTGAACAA (서열번호 6);
    CGAACCACTGAAC (서열번호 8);
    CCGCAGTATGGATCG (서열번호 9);
    CGCAGTATGGATC (서열번호 10);
    CGCGTAAAGAGAGGT (서열번호 12);
    AGAAGGCACAGACGG (서열번호 14);
    GAGAAGGCACAGACGG (서열번호 15);
    GAAGTGCACACGG (서열번호 16);
    GCGAAGTGCACACGG (서열번호 17);
    CGAAGTGCACACG (서열번호 19);
    AGGTGAAGCGAAGT (서열번호 27); 및
    TAGTAAACTGAGCCA (서열번호 834).
  11. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
    제 1 올리고머 영역이 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 기본으로 하되, 대문자는 LNA 단위를 나타내고 소문자는 DNA 단위를 나타내는, 올리고머 접합체:
    GCGtaaagagaGG (서열번호 303);
    GCGtaaagagaGGT (서열번호 301);
    GCGtaaagagAGG (서열번호 618);
    AGCgaagtgcacACG (서열번호 310);
    AGgtgaagcgaAGTG (서열번호 668);
    AGCgaagtgcacaCGG (서열번호 308);
    CGAaccactgaACA (서열번호 297);
    CGCagtatggaTC (서열번호 300);
    AGGtgaagcgaagTGC (서열번호 315);
    AGGtgaagcgaaGTG (서열번호 316);
    GAAccactgaacAAA (서열번호 294);
    CGAaccactgaacAAA (서열번호 295);
    CGAaccactgaaCAA(서열번호 296);
    CGAaccactgaAC (서열번호 298);
    CCGcagtatggaTCG (서열번호 299);
    CGCgtaaagagaGGT (서열번호 302);
    AGAaggcacagaCGG (서열번호 304);
    GAGaaggcacagaCGG (서열번호 305);
    GAAgtgcacacGG (서열번호 306);
    GCGaagtgcacaCGG (서열번호 307);
    CGAagtgcacaCG (서열번호 309);
    GAAccactgaaCAAA (서열번호 585);
    CGAAccactgaacAAA (서열번호 588);
    GAAgtgcacaCGG (서열번호 628);
    TAGtaaactgagCCA (서열번호 678);
    CGAaccactgAAC (서열번호 600);
    AGGtgaagcgaAGT (서열번호 317); 및
    CGAaccactgAACA (서열번호 597).
  12. 제 11 항에 있어서,
    제 1 올리고머 영역이 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 기본으로 하되, 대문자는 LNA 단위를 나타내고 소문자는 DNA 단위를 나타내는, 올리고머 접합체:
    GCGtaaagagaGG (서열번호 303);
    GCGtaaagagaGGT (서열번호 301);
    GCGtaaagagAGG (서열번호 618); 및
    CGCgtaaagagaGGT (서열번호 302).
  13. 제 11 항에 있어서,
    제 1 올리고머 영역이 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 기본으로 하되, 대문자는 LNA 단위를 나타내고 소문자는 DNA 단위를 나타내는, 올리고머 접합체:
    AGCgaagtgcacACG (서열번호 310);
    AGGtgaagcgaagTGC (서열번호 315);
    AGGtgaagcgaaGTG (서열번호 316);
    GAAgtgcacaCGG (서열번호 628);
    AGgtgaagcgaAGTG (서열번호 668);
    AGCgaagtgcacaCGG (서열번호 308);
    GAAgtgcacacGG (서열번호 306);
    GCGaagtgcacaCGG (서열번호 307);
    CGAagtgcacaCG (서열번호 309); 및
    AGGtgaagcgaAGT (서열번호 317).
  14. 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서,
    제 1 올리고머 영역이 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 기본으로 하는 올리고머 접합체:
    Figure pat00083

    이때, 대문자는 베타-D-옥시-LNA 단위를 나타내고, 소문자는 DNA 단위를 나타내고, 아래첨자 s는 포스포로티오에이트 결합을 나타내고, 위첨자 m은 5-메틸시토신 염기를 함유하는 DNA 또는 베타-D-옥시-LNA 단위를 나타내고, GN2-C6은 C6 링커를 갖는 GalNAc2 담체 성분을 나타낸다.
  15. 하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택되는 코어 모티프를 기본으로 하는 올리고머:
    GCGTAAAGAGAGG (서열번호 13);
    GCGTAAAGAGAGGT (서열번호 11);
    AGCGAAGTGCACACG (서열번호 20);
    AGGTGAAGCGAAGTG (서열번호 26);
    CGAACCACTGAACA (서열번호 7);
    GAACCACTGAACAAA (서열번호 4);
    CGAACCACTGAACAAA (서열번호 5);
    CGAACCACTGAACAA (서열번호 6);
    CGAACCACTGAAC (서열번호 8);
    CCGCAGTATGGATCG (서열번호 9);
    CGCAGTATGGATC (서열번호 10);
    CGCGTAAAGAGAGGT (서열번호 12);
    AGAAGGCACAGACGG (서열번호 14);
    GAGAAGGCACAGACGG (서열번호 15);
    GAAGTGCACACGG (서열번호 16);
    GCGAAGTGCACACGG (서열번호 17);
    CGAAGTGCACACG (서열번호 19);
    AGGTGAAGCGAAGT (서열번호 27); 및
    TAGTAAACTGAGCCA (서열번호 834).
  16. 제 15 항에 있어서,
    하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 기본으로 하되, 대문자는 LNA 단위를 나타내고 소문자는 DNA 단위를 나타내는, 올리고머:
    GCGtaaagagaGG (서열번호 303);
    GCGtaaagagaGGT (서열번호 301);
    GCGtaaagagAGG (서열번호 618);
    AGCgaagtgcacACG (서열번호 310);
    AGgtgaagcgaAGTG (서열번호 668);
    AGCgaagtgcacaCGG (서열번호 308);
    CGAaccactgaACA (서열번호 297);
    CGCagtatggaTC (서열번호 300);
    AGGtgaagcgaagTGC (서열번호 315);
    AGGtgaagcgaaGTG (서열번호 316);
    GAAccactgaacAAA (서열번호 294);
    CGAaccactgaacAAA (서열번호 295);
    CGAaccactgaaCAA(서열번호 296);
    CGAaccactgaAC (서열번호 298);
    CCGcagtatggaTCG (서열번호 299);
    CGCgtaaagagaGGT (서열번호 302);
    AGAaggcacagaCGG (서열번호 304);
    GAGaaggcacagaCGG (서열번호 305);
    GAAgtgcacacGG (서열번호 306);
    GCGaagtgcacaCGG (서열번호 307);
    CGAagtgcacaCG (서열번호 309);
    GAAccactgaaCAAA (서열번호 585);
    CGAAccactgaacAAA (서열번호 588);
    GAAgtgcacaCGG (서열번호 628);
    TAGtaaactgagCCA (서열번호 678);
    CGAaccactgAAC (서열번호 600);
    AGGtgaagcgaAGT (서열번호 317); 및
    CGAaccactgAACA (서열번호 597).
  17. 제 15 항 또는 제 16 항에 있어서,
    하기 중 임의의 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 기본으로 하는 올리고머:
    Figure pat00084

    이때, 대문자는 베타-D-옥시-LNA 단위를 나타내고, 소문자는 DNA 단위를 나타내고, 아래첨자 s는 포스포로티오에이트 결합을 나타내고, 위첨자 m은 5-메틸시토신 염기를 함유하는 DNA 또는 베타-D-옥시-LNA 단위를 나타내고, AM-C6은 아미노-C6 링커이고, 5' 말단기 AM-C6 ca는 선택적이다.
  18. 제 1 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 따른 올리고머 접합체 또는 제 15 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 따른 올리고머, 및 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 희석제, 담체, 염 또는 보조제를 포함하는 약학 조성물.
  19. a) 바이러스성 질환을 치료하기 위해 B형 간염 바이러스(HBV), 바람직하게는 HBV의 HBx 또는 HBsAg의 표적 서열을 조절할 수 있는 하나 이상의 제 1 올리고머 영역; 및
    b) 상기 제 1 올리고머를 간에 전달하기 위한 담체 성분
    을 포함하는, 바이러스성 질환의 치료에 사용하기 위한 올리고머 접합체.
  20. 제 19 항에 있어서,
    제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 따른 올리고머 접합체인 올리고머 접합체.
  21. 제 19 항 또는 제 20 항에 있어서,
    피하로 투여되는 올리고머 접합체.
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Families Citing this family (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EA201290152A1 (ru) 2009-10-16 2012-12-28 Глаксо Груп Лимитед Антисмысловые ингибиторы вируса гепатита в (hbv)
GB201408623D0 (en) 2014-05-15 2014-07-02 Santaris Pharma As Oligomers and oligomer conjugates
AU2016296592B2 (en) 2015-07-17 2021-08-19 Arcturus Therapeutics, Inc. Compositions and agents against Hepatitis B virus and uses thereof
US20170137821A1 (en) 2015-07-17 2017-05-18 Arcturus Therapeutics, Inc. Molecules and agents for treating hepatitis b virus
MA45496A (fr) 2016-06-17 2019-04-24 Hoffmann La Roche Molécules d'acide nucléique pour la réduction de l'arnm de padd5 ou pad7 pour le traitement d'une infection par l'hépatite b
CN110446718A (zh) * 2017-03-29 2019-11-12 罗氏创新中心哥本哈根有限公司 Unylinker快速裂解
WO2018215049A1 (en) * 2017-05-23 2018-11-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Process for galnac oligonucleotide conjugates
AU2018332216B2 (en) * 2017-09-14 2024-05-02 Janssen Biopharma, Inc. Galnac derivatives
US10953034B2 (en) * 2017-10-16 2021-03-23 Hoffmann-La Roche Inc. Nucleic acid molecule for reduction of PAPD5 and PAPD7 mRNA for treating hepatitis B infection
CN111372593B (zh) * 2017-10-20 2024-03-19 戴瑟纳制药公司 治疗乙型肝炎感染的方法
PE20211912A1 (es) 2018-04-05 2021-09-28 Centre Nat Rech Scient Uso de inhibidores de fubp1 para el tratamiento de infeccion de virus de hepatitis b
CR20210179A (es) 2018-07-03 2022-05-23 Hoffmann La Roche OLIGONUCLEÓTIDOS PARA MODULAR LA EXPRESIÓN DE TAU (Divisional 2021-0058)
MX2021000404A (es) 2018-07-13 2021-03-25 Hoffmann La Roche Oligonucleotidos para modular la expresion de rtel1.
BR112021023488A2 (pt) * 2019-05-31 2022-01-18 Aligos Therapeutics Inc Oligonucleotídeos de gapmer modificados e métodos de uso
TW202126304A (zh) 2019-09-20 2021-07-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 使用核心蛋白異位調節劑治療hbv感染之方法
EP4077669A1 (en) 2019-12-19 2022-10-26 F. Hoffmann-La Roche AG Use of sbds inhibitors for treating hepatitis b virus infection
JP2023506540A (ja) 2019-12-19 2023-02-16 エフ． ホフマン－ラ ロシュ エージー． Ｂ型肝炎ウイルス感染を処置するためのｓｃａｍｐ３阻害剤の使用
WO2021122735A1 (en) 2019-12-19 2021-06-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Use of sept9 inhibitors for treating hepatitis b virus infection
JP2023506954A (ja) 2019-12-19 2023-02-20 エフ． ホフマン－ラ ロシュ エージー． Ｂ型肝炎ウイルス感染を処置するためのｓａｒａｆ阻害剤の使用
JP2023506547A (ja) 2019-12-19 2023-02-16 エフ． ホフマン－ラ ロシュ エージー． Ｂ型肝炎ウイルス感染を処置するためのｃｏｐｓ３阻害剤の使用
EP4081639A1 (en) 2019-12-24 2022-11-02 F. Hoffmann-La Roche AG Pharmaceutical combination of a therapeutic oligonucleotide targeting hbv and a tlr7 agonist for treatment of hbv
MX2022007909A (es) 2019-12-24 2022-07-21 Hoffmann La Roche Combinacion farmaceutica de agentes antivirales que actuan sobre hbv y/o un inmunomodulador para el tratamiento de hbv.
KR20220119616A (ko) 2019-12-24 2022-08-30 에프. 호프만-라 로슈 아게 Tlr7 효현제를 이용하여 바이러스 감염을 치료하는 방법
US20210317457A1 (en) * 2020-04-10 2021-10-14 Aligos Therapeutics, Inc. Antisense oligonucleotide (aso) molecules and uses thereof for coronavirus diseases
US20240033278A9 (en) * 2020-06-10 2024-02-01 Medshine Discovery Inc. Conjugate group and conjugate
AR122731A1 (es) 2020-06-26 2022-10-05 Hoffmann La Roche Oligonucleótidos mejorados para modular la expresión de fubp1
WO2022038211A2 (en) 2020-08-21 2022-02-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Use of a1cf inhibitors for treating hepatitis b virus infection
TW202246500A (zh) 2021-02-02 2022-12-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 用於抑制 ｒｔｅｌ１ 表現之增強型寡核苷酸
CA3234478A1 (en) 2021-11-11 2023-05-19 Souphalone LUANGSAY Pharmaceutical combinations for treatment of hbv
WO2023111210A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination of oligonucleotides for modulating rtel1 and fubp1

Family Cites Families (93)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5927900A (ja) 1982-08-09 1984-02-14 Wakunaga Seiyaku Kk 固定化オリゴヌクレオチド
US4948882A (en) 1983-02-22 1990-08-14 Syngene, Inc. Single-stranded labelled oligonucleotides, reactive monomers and methods of synthesis
US4587044A (en) 1983-09-01 1986-05-06 The Johns Hopkins University Linkage of proteins to nucleic acids
US4740463A (en) 1984-04-13 1988-04-26 Massachusetts Institute Of Technology Methods and artificial genes for antagonizing the function of an oncogene
US5430136A (en) 1984-10-16 1995-07-04 Chiron Corporation Oligonucleotides having selectably cleavable and/or abasic sites
US4962029A (en) 1987-10-02 1990-10-09 Cetus Corporation Covalent oligonucleotide-horseradish peroxidase conjugate
US4914210A (en) 1987-10-02 1990-04-03 Cetus Corporation Oligonucleotide functionalizing reagents
US5525465A (en) 1987-10-28 1996-06-11 Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine Oligonucleotide-polyamide conjugates and methods of production and applications of the same
DE3738460A1 (de) 1987-11-12 1989-05-24 Max Planck Gesellschaft Modifizierte oligonukleotide
US5108921A (en) 1989-04-03 1992-04-28 Purdue Research Foundation Method for enhanced transmembrane transport of exogenous molecules
US5391723A (en) 1989-05-31 1995-02-21 Neorx Corporation Oligonucleotide conjugates
US5254469A (en) 1989-09-12 1993-10-19 Eastman Kodak Company Oligonucleotide-enzyme conjugate that can be used as a probe in hybridization assays and polymerase chain reaction procedures
WO1991004753A1 (en) 1989-10-02 1991-04-18 Cetus Corporation Conjugates of antisense oligonucleotides and therapeutic uses thereof
US5486603A (en) 1990-01-08 1996-01-23 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide having enhanced binding affinity
US5138045A (en) 1990-07-27 1992-08-11 Isis Pharmaceuticals Polyamine conjugated oligonucleotides
US5608046A (en) 1990-07-27 1997-03-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated 4'-desmethyl nucleoside analog compounds
US5245022A (en) 1990-08-03 1993-09-14 Sterling Drug, Inc. Exonuclease resistant terminally substituted oligonucleotides
US5512667A (en) 1990-08-28 1996-04-30 Reed; Michael W. Trifunctional intermediates for preparing 3'-tailed oligonucleotides
WO1992008728A1 (en) 1990-11-08 1992-05-29 Hybridon, Inc. Incorporation of multiple reporter groups on synthetic oligonucleotides
WO1993001286A2 (en) 1991-06-28 1993-01-21 Massachusetts Institute Of Technology Localized oligonucleotide therapy
US20040127446A1 (en) 1992-05-14 2004-07-01 Lawrence Blatt Oligonucleotide mediated inhibition of hepatitis B virus and hepatitis C virus replication
US20030206887A1 (en) * 1992-05-14 2003-11-06 David Morrissey RNA interference mediated inhibition of hepatitis B virus (HBV) using short interfering nucleic acid (siNA)
US20040054156A1 (en) * 1992-05-14 2004-03-18 Kenneth Draper Method and reagent for inhibiting hepatitis B viral replication
NL9201440A (nl) 1992-08-11 1994-03-01 Univ Leiden Triantennaire clusterglycosiden, hun bereiding en toepassing.
US5574142A (en) 1992-12-15 1996-11-12 Microprobe Corporation Peptide linkers for improved oligonucleotide delivery
US5652332A (en) 1993-03-12 1997-07-29 Xoma Biologically active peptides from functional domains of bactericidal/permeability-increasing protein and uses thereof
US6413949B1 (en) 1995-06-07 2002-07-02 D-Pharm, Ltd. Prodrugs with enhanced penetration into cells
CA2178811A1 (en) 1993-12-23 1995-06-29 Leslie R. Coney Anti-hepatitis b viral oligonucleotides
US5728518A (en) 1994-01-12 1998-03-17 The Immune Response Corporation Antiviral poly-and oligonucleotides
US5580731A (en) 1994-08-25 1996-12-03 Chiron Corporation N-4 modified pyrimidine deoxynucleotides and oligonucleotide probes synthesized therewith
WO1996011205A1 (en) 1994-10-06 1996-04-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Peptide nucleic acid conjugates
US5856459A (en) 1995-06-06 1999-01-05 Hybridon, Inc. Oligonucleotides specific for hepatitis B virus
US5684142A (en) 1995-06-07 1997-11-04 Oncor, Inc. Modified nucleotides for nucleic acid labeling
WO1996040961A1 (en) 1995-06-07 1996-12-19 Life Technologies, Inc. Peptide-enhanced cationic lipid transfections
US5985662A (en) 1995-07-13 1999-11-16 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense inhibition of hepatitis B virus replication
JP2000501414A (ja) 1995-11-22 2000-02-08 ザ・ジョンズ・ホプキンス・ユニバーシティー 生体分子の細胞取り込みを高めるリガンド
AU3811897A (en) 1996-07-24 1998-02-10 Oglios Therapeutics, Inc. Antisense oligonucleotides as antibacterial agents
WO1998042876A1 (en) 1997-03-26 1998-10-01 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions for using membrane-penetrating proteins to carry materials across cell membranes
US5770716A (en) 1997-04-10 1998-06-23 The Perkin-Elmer Corporation Substituted propargylethoxyamido nucleosides, oligonucleotides and methods for using same
JP2002502376A (ja) 1997-05-21 2002-01-22 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティ 生物学的膜を横切る輸送を増強するための組成物および方法
US6610539B1 (en) 1997-07-10 2003-08-26 Genesense Technologies, Inc. Antisense oligonucleotide sequences as inhibitors of microorganisms
EP2341058A3 (en) 1997-09-12 2011-11-23 Exiqon A/S Oligonucleotide Analogues
US6096875A (en) 1998-05-29 2000-08-01 The Perlein-Elmer Corporation Nucleotide compounds including a rigid linker
AU4281999A (en) 1998-06-10 1999-12-30 Queen's University Of Belfast, The Peptide
US6300319B1 (en) 1998-06-16 2001-10-09 Isis Pharmaceuticals, Inc. Targeted oligonucleotide conjugates
US6335432B1 (en) 1998-08-07 2002-01-01 Bio-Red Laboratories, Inc. Structural analogs of amine bases and nucleosides
US6335437B1 (en) 1998-09-07 2002-01-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for the preparation of conjugated oligomers
AU6258999A (en) 1998-09-16 2000-04-03 Vitagenix, Inc. Compositions and methods of use of uptake mechanisms for diagnostic and therapeutic applications of oligonucleotides targeting bacteria
WO2001016312A2 (en) * 1999-08-31 2001-03-08 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid based modulators of gene expression
US6617442B1 (en) 1999-09-30 2003-09-09 Isis Pharmaceuticals, Inc. Human Rnase H1 and oligonucleotide compositions thereof
EP1383782A1 (en) * 2001-03-26 2004-01-28 Sirna Therpeutics, Inc. Oligonucleotide mediated inhibition of hepatitis b virus and hepatitis c virus replication
US7087229B2 (en) 2003-05-30 2006-08-08 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Releasable polymeric conjugates based on aliphatic biodegradable linkers
DK2284269T3 (en) 2002-11-18 2017-10-23 Roche Innovation Ct Copenhagen As Antisense design
ES2302898T3 (es) 2003-07-11 2008-08-01 Lbr Medbiotech B.V. Transferencia de genes a celulas musculares mediada por el receptor de manosa-6-fosfato.
US7521184B2 (en) * 2003-08-22 2009-04-21 Sirna Therapeutics, Inc. Detection and quantitation of nucleic acid molecules in biological samples
WO2007031091A2 (en) 2005-09-15 2007-03-22 Santaris Pharma A/S Rna antagonist compounds for the modulation of p21 ras expression
JP5342881B2 (ja) 2006-01-27 2013-11-13 アイシス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッド ６−修飾された二環式核酸類似体
CN103554205A (zh) 2006-05-05 2014-02-05 Isis制药公司 调节gccr的表达的化合物和方法
AU2007249349B2 (en) 2006-05-11 2012-03-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5'-Modified bicyclic nucleic acid analogs
MX2009002856A (es) 2006-09-15 2009-03-30 Enzon Pharmaceuticals Inc Conjugados polimericos que contienen porciones cargadas positivamente.
MX2009002859A (es) 2006-09-15 2009-03-30 Enzon Pharmaceuticals Inc Enlazadores biodegradables a base de ester impedido para suministro de oligonucleotidos.
DK2149605T3 (da) 2007-03-22 2013-09-30 Santaris Pharma As Korte RNA antagonist forbindelser til modulering af det ønskede mRNA
US8278425B2 (en) 2007-05-30 2012-10-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-substituted-aminomethylene bridged bicyclic nucleic acid analogs
EP2173760B2 (en) 2007-06-08 2015-11-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic bicyclic nucleic acid analogs
CN101796062B (zh) 2007-07-05 2014-07-30 Isis制药公司 6-双取代双环核酸类似物
WO2009060316A2 (en) * 2007-09-14 2009-05-14 The Governors Of The University Of Alberta Hepatitis b virus-binding polypeptides and methods of use thereof
WO2009067647A1 (en) 2007-11-21 2009-05-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic alpha-l-bicyclic nucleic acid analogs
WO2009090182A1 (en) 2008-01-14 2009-07-23 Santaris Pharma A/S C4'-substituted - dna nucleotide gapmer oligonucleotides
US8530640B2 (en) 2008-02-07 2013-09-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic cyclohexitol nucleic acid analogs
EP2285819B1 (en) 2008-04-04 2013-10-16 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising neutrally linked terminal bicyclic nucleosides
EP2274423A2 (en) 2008-04-04 2011-01-19 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleosides and having reduced toxicity
JP5788312B2 (ja) 2008-04-11 2015-09-30 アルニラム ファーマスーティカルズ インコーポレイテッドＡｌｎｙｌａｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． 標的リガンドをエンドソーム分解性成分と組み合わせることによる核酸の部位特異的送達
DK2356129T3 (da) 2008-09-24 2013-05-13 Isis Pharmaceuticals Inc Substituerede alpha-L-bicykliske nukleosider
AR076053A1 (es) * 2009-04-14 2011-05-18 Schering Corp Derivados de pirazolo[1,5-a]pirimidina como inhibidores de mtor
EP2462153B1 (en) 2009-08-06 2015-07-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic cyclohexose nucleic acid analogs
EA201290152A1 (ru) 2009-10-16 2012-12-28 Глаксо Груп Лимитед Антисмысловые ингибиторы вируса гепатита в (hbv)
WO2011085102A1 (en) 2010-01-11 2011-07-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. Base modified bicyclic nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom
US9193752B2 (en) 2010-03-17 2015-11-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5′-substituted bicyclic nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom
CA2807307C (en) 2010-08-17 2021-02-09 Merck Sharp & Dohme Corp. Rna interference mediated inhibition of hepatitis b virus (hbv) gene expression using short interfering nucleic acid (sina)
BR112013013247A2 (pt) 2010-12-13 2016-09-13 Ericsson Telefon Ab L M troca de parâmetros relativos a períodos de medição
BR112013013434A2 (pt) * 2010-12-17 2016-08-16 Arrowhead Res Corp metade que tem por alvo modulador fármaco cinético em cacho de galactose para sirna
ES2605990T3 (es) 2010-12-29 2017-03-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Conjugados de molécula pequeña para la administración intracelular de ácidos nucleicos
TW201303013A (zh) * 2011-04-21 2013-01-16 Isis Pharmaceuticals Inc Ｂ型肝炎病毒（ｈｂｖ）表現之調節
SG10201604074TA (en) * 2011-04-21 2016-07-28 Isis Pharmaceuticals Inc Modulation of hepatitis b virus (hbv) expression
MX342731B (es) * 2011-06-30 2016-10-11 Arrowhead Res Corp Composiciones y metodos para inhibir la expresion genica del virus de hepatitis b.
DK2756080T3 (da) * 2011-09-14 2019-05-20 Translate Bio Ma Inc Multimeriske oligonukleotidforbindelser
KR20140036498A (ko) * 2012-09-17 2014-03-26 김문섭 와이-클립 이어폰 줄정리기
JP2016503300A (ja) 2012-11-15 2016-02-04 ロシュ・イノベーション・センター・コペンハーゲン・アクティーゼルスカブＲｏｃｈｅ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ Ａ／Ｓ 抗ＡｐｏＢアンチセンス複合体化合物
CN104955952A (zh) * 2013-01-30 2015-09-30 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 Lna寡核苷酸碳水化合物缀合物
EP2992009B1 (en) * 2013-05-01 2020-06-24 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulating apolipoprotein (a) expression
DK3013959T3 (da) 2013-06-27 2020-02-17 Roche Innovation Ct Copenhagen As Antisense-oligomerer og konjugater målrettet pcsk9
GB201408623D0 (en) 2014-05-15 2014-07-02 Santaris Pharma As Oligomers and oligomer conjugates
KR20170068469A (ko) 2014-10-10 2017-06-19 에프. 호프만-라 로슈 아게 ＧａｌＮＡｃ 포스포라미다이트, 그의 핵산 컨쥬게이트 및 그의 용도

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