KR20170103009A - 나이세리아 메닌지티디스 조성물 및 그의 방법 - Google Patents

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라사파 가운더 아루무그햄
존 어윈 파레이
레아 다이앤 플렛처
샤논 해리스
카트린 우테 얀센
토마스 리차드 존스
라크쉬미 칸드케
보운톤 라운
존 란스 페레즈
개리 워렌 로트닉
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Abstract

한 양태에서, 본 발명은 서열번호 1에 나타낸 서열을 갖는 제 1 폴리펩티드 및 서열번호 2에 나타낸 서열을 갖는 제 2 폴리펩티드를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 상기 조성물은 서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 제 1 폴리펩티드 약 120 ㎍/ml, 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 제 2 폴리펩티드 120 ㎍/ml, 제 1 폴리펩티드에 대해 약 2.8 몰비의 폴리솔베이트-80, 제 2 폴리펩티드에 대해 약 2.8 몰비의 폴리솔베이트-80, 약 0.5 mg/ml 알루미늄, 약 10 mM의 히스티딘, 및 약 150 mM의 염화나트륨을 포함한다. 한 실시양태에서, 조성물의 용량은 총부피로 약 0.5 ml이다. 한 실시양태에서, 상기 조성물의 2개-용량은 인간에서 다양한 이종 서브패밀리 A 및 서브패밀리 B 균주들에 대해 살균 역가를 유도한다.

Description

나이세리아 메닌지티디스 조성물 및 그의 방법
본 발명은 나이세리아 메닌지티디스( Neisseria meningitidis) 조성물 및 그의 방법에 관한 것이다.
관련 출원의 교차-참조
본 출원은, 2015년 2월 19일자로 출원된 미국 가출원 제 62/118,457 호 및 2016년 1월 19일자로 출원된 미국 가출원 제 62/280,212 호를 우선권 주장한다. 상기 출원들은 모두 전체로 본원에 참고로 도입된다.
나이세리아 메닌지티디스는 패혈증, 수막염 및 사망을 야기할 수 있는 그람-음성 피낭성(encapsulated) 세균이다. 나이세리아 메닌지티디스는 화학적 및 항원적으로 독특한 폴리사카라이드 캡슐에 근거하여 12개 이상의 혈청군(혈청군 A, B, C, 29E, H, I, K, L, W-135, X, Y 및 Z 포함)으로 분류될 수 있다. 상기 혈청군 중 5개(A, B, C, Y 및 W135)를 갖는 균주가 대부분의 질환에 원인이 된다.
수막구균성 수막염은 항생물질의 유효성에도 불구하고 수시간내에 아동 및 젊은 성인들을 사망시킬 수 있는 치명적인 질환이다. 수막구균 혈청군 A, B, C, Y 및 W135 및/또는 X에 대한 개선된 면역원성 조성물이 요구된다.
현재, 광범위한 MnB 분리균에 대해 효과적인 교차-보호 백신 또는 조성물은 아직 상업적으로 이용가능하지 않다. 예를 들면, 혈청군 B 질환에 대해 보호하기 위한 허가된 다성분 조성물에 관해 지금까지 발표된 결과는, 적어도 청소년들에서, 이종 LP2086 (fHBP) 변이체를 발현하는 다중 균주에 대한 직접적인 살균 면역 반응을 입증하지 못하였다. 기껏해야, 혈청군 B 질환에 대해 보호하기 위한 다성분 조성물에 관해 지금까지 발표된 결과는, 다성분 조성물중 LP2086 (fHBP) 변이체에 이종인 LP2086 (fHBP) 변이체에 대해 면역원성을 나타내는 것으로 보인다. 따라서, 다양하거나 이종인 수막구균 균주들(예를 들면, 상이한 지리적인 구역들을 대표하는)의 일단에 대해 실제적인 백신 적용범위(vaccine coverage)를 결정하는 것과 같이 다양한 MnB 분리균에 대해 효과적인 교차-보호 백신 또는 조성물이 요구된다.
한 양태에서, 본 발명은 서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 제 1 지질화 폴리펩티드 약 120 ㎍/ml, 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 제 2 지질화 폴리펩티드 120 ㎍/ml, 제 1 폴리펩티드에 대해 약 2.8 몰비의 폴리솔베이트-80, 제 2 폴리펩티드에 대해 약 2.8 몰비의 폴리솔베이트-80, 약 0.5 mg/ml 알루미늄, 약 10 mM의 히스티딘, 및 약 150 mM의 염화나트륨을 포함하는 조성물에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 1차 용량은 총부피로 약 0.5 ml이다. 한 실시양태에서, 상기 조성물은 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B에 대한 살균 면역 반응을 유도한다. 한 실시양태에서, 상기 조성물은 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 A, C, 29E, H, I, K, L, W-135, X, Y 또는 Z에 대한 살균 면역 반응을 유도한다. 한 실시양태에서, 상기 조성물은 서열번호 1에 대해 100% 미만의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드를 추가로 포함하지 않는다. 한 실시양태에서, 상기 조성물은 서열번호 2에 대해 100% 미만의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드를 추가로 포함하지 않는다. 한 실시양태에서, 상기 제 1 폴리펩티드는 총 258개의 아미노산을 갖는다. 한 실시양태에서, 제 2 폴리펩티드는 총 261개의 아미노산을 갖는다. 한 실시양태에서, 상기 조성물은, 1차 용량을 투여받은 후의 인간에서, 1차 용량을 투여받기 전 인간에서의 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B에 대한 혈청 면역글로불린의 살균 역가보다 2배 이상 더 높은, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B에 대한 혈청 면역글로불린의 살균 역가를 유도하며, 이때 살균 역가에서의 증가는 인간 보체를 사용한 혈청 살균 분석에서 동일한 조건하에서 측정된다. 한 실시양태에서, 제 1 지질화 폴리펩티드는 서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열들로 이루어진다. 한 실시양태에서, 제 2 지질화 폴리펩티드는 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열들로 이루어진다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 인간에서 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B에 대한 면역 반응을 유도하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 인간에게 효과량의 조성물 1차 용량 및 2차 용량을 투여하는 것을 포함하며, 상기 조성물은 서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 제 1 지질화 폴리펩티드 120 ㎍/ml, 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 제 2 지질화 폴리펩티드 120 ㎍/ml, 제 1 폴리펩티드에 대해 2.8 몰비의 폴리솔베이트-80, 제 2 폴리펩티드에 대해 2.8 몰비의 폴리솔베이트-80, 0.5 mg/ml 알루미늄, 10 mM의 히스티딘, 및 150 mM의 염화나트륨을 포함한다. 한 실시양태에서, 상기 조성물의 용량은 0.5 ml의 총 부피를 갖는다. 한 실시양태에서, 인간은 많아야 2개 용량의 조성물을 투여받는다. 한 실시양태에서, 인간은 추가접종 용량의 조성물을 추가로 투여받지 않는다. 한 실시양태에서, 인간은 3차 용량의 조성물을 투여받는다. 한 실시양태에서, 인간은 3차 용량후에 추가접종 용량의 조성물을 추가로 투여받지 않는다. 한 실시양태에서, 인간은 4차 용량의 조성물을 추가로 투여받지 않는다. 한 실시양태에서, 3차 용량은 1차 용량후 약 6개월의 기간 내에 인간에게 투여된다. 한 실시양태에서, 2차 용량은 1차 용량의 적어도 30일후에 투여된다. 한 실시양태에서, 상기 방법은 3차 용량의 조성물을 투여하는 것을 추가로 포함하며, 이때 상기 3차 용량은 2차 용량의 적어도 90일후에 투여된다. 한 실시양태에서, 상기 조성물은, 인간 보체를 사용한 혈청 살균 분석에서 동일한 조건하에서 측정시, 1차 용량을 투여받은 후의 인간에서, 1차 용량을 투여받기 전 인간에서의 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B에 대한 혈청 면역글로불린의 살균 역가보다 2배 이상 더 높은, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B에 대한 혈청 면역글로불린의 살균 역가를 유도한다. 한 실시양태에서, 상기 면역 반응은 A05를 발현하는 나이세리아 메닌지티디스 균주에 이종인 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주에 대해 살균성이다. 한 실시양태에서, 상기 면역 반응은 B01을 발현하는 나이세리아 메닌지티디스 균주에 이종인 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대해 살균성이다. 한 실시양태에서, 상기 면역 반응은 나이세리아 메닌지티디스 균주 M98250771에 이종인 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주에 대해 살균성이다. 한 실시양태에서, 상기 면역 반응은 나이세리아 메닌지티디스 균주 CDC1127에 이종인 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대해 살균성이다. 바람직한 실시양태에서, 상기 면역 반응은 나이세리아 메닌지티디스 균주 CDC1573에 이종인 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대해 살균성이다. 한 실시양태에서, 제 1 폴리펩티드는 총 258개 아미노산을 갖는다. 한 실시양태에서, 제 2 폴리펩티드는 총 261개 아미노산을 갖는다. 한 실시양태에서, 제 1 지질화 폴리펩티드는 서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열들로 이루어진다. 한 실시양태에서, 제 2 지질화 폴리펩티드는 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열들로 이루어진다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 제 1 지질화 폴리펩티드 60 ㎍, 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 제 2 지질화 폴리펩티드 60 ㎍, 제 1 폴리펩티드에 대해 2.8 몰비의 폴리솔베이트-80, 제 2 폴리펩티드에 대해 2.8 몰비의 폴리솔베이트-80, 0.5 mg/ml 알루미늄, 10 mM의 히스티딘, 및 150 mM의 염화나트륨을 포함하는 조성물에 관한 것으로, 이때 상기 조성물은 약 0.5 ml의 총 부피를 갖는다. 한 실시양태에서, 상기 조성물은 A05를 발현하는 나이세리아 메닌지티디스 균주에 이종인 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주에 대한 살균성 면역 반응을 유도한다. 한 실시양태에서, 상기 조성물은 B01을 발현하는 나이세리아 메닌지티디스 균주에 이종인 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대한 살균성 면역 반응을 유도한다. 한 실시양태에서, 상기 조성물은, 인간 보체를 사용한 혈청 살균 분석에서 동일한 조건하에서 측정시, 1차 용량을 투여받은 후 인간에서, 1차 용량을 투여받기 전 인간에서의 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B에 대한 혈청 면역글로불린의 살균 역가보다 2배 이상 더 높은, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B에 대한 혈청 면역글로불린의 살균 역가를 유도한다. 한 실시양태에서, 상기 조성물은 서열번호 1에 대해 100% 미만의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드를 추가로 포함하지 않는다. 한 실시양태에서, 상기 조성물은 서열번호 2에 대해 100% 미만의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드를 추가로 포함하지 않는다. 한 실시양태에서, 상기 제 1 폴리펩티드는 총 258개의 아미노산을 갖는다. 한 실시양태에서, 제 2 폴리펩티드는 총 261개의 아미노산을 갖는다. 한 실시양태에서, 제 1 지질화 폴리펩티드는 서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열들로 이루어진다. 한 실시양태에서, 제 2 지질화 폴리펩티드는 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열들로 이루어진다.
또 다른 양태에서, 본 발명은, 인간에서 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주 및 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대한 살균 면역 반응을 유도하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은, a) 서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 제 1 지질화 폴리펩티드; 및 b) 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 제 2 지질화 폴리펩티드를 포함하는 나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물 효과량을 인간에게 투여하는 것을 포함하며, 이때, 상기 방법은 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B에 대한 상기 조성물을 투여한지 24 시간 이내에 하기의 면역원성 조성물들 중 1개 이상을 인간에게 투여하는 것을 추가로 포함한다: (i) 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 A 균주, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 C 균주, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 Y 균주 및/또는 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 W135 균주에 대한 면역원성 조성물; (ii) 디프테리아, 파상풍 및 백일해에 대한 면역원성 조성물; (iii) A형 간염 바이러스에 대한 면역원성 조성물; (iv) 인유두종바이러스에 대한 면역원성 조성물; (v) 디프테리아, 파상풍, 백일해 및 소아마비에 대한 면역원성 조성물: 또는 (vi) 이들의 임의의 조합. "면역원성"은 면역 반응을 유도하는 능력을 말한다.
한 양태에서, 본 발명은 , 인간에서 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주 및 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대한 살균 면역 반응을 유도하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은, a) 서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 제 1 지질화 폴리펩티드; 및 b) 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 제 2 지질화 폴리펩티드를 포함하는 나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물의 효과량을 인간에게 투여하는 것을 포함하며, 이때, 상기 방법은 하기의 추가의 면역원성 조성물들 중 1개 이상을 인간에게 병용 투여하는 것을 추가로 포함한다: (i) 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 A 균주, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 C 균주, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 Y 균주 및/또는 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 W135 균주에 대한 면역원성 조성물; (ii) 디프테리아, 파상풍 및 백일해에 대한 면역원성 조성물; (iii) A형 간염 바이러스에 대한 면역원성 조성물; (iv) 인유두종바이러스에 대한 면역원성 조성물; (v) 디프테리아, 파상풍, 백일해 및 소아마비에 대한 면역원성 조성물: 또는 (vi) 이들의 임의의 조합.
또 다른 양태에서, 본 발명은, 인간에서 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주 및 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대한 살균 면역 반응을 유도하기 위한, 효과량의 나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물 및 병용적으로 1개 이상의 추가의 면역원성 조성물의 용도에 관한 것으로, 이때, 상기 나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물은 a) 서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 제 1 지질화 폴리펩티드; 및 b) 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 제 2 지질화 폴리펩티드를 포함하고, 이때, 상기 1개 이상의 추가의 면역원성 조성물은 (i) 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 A 균주, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 C 균주, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 Y 균주 및/또는 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 W135 균주에 대한 면역원성 조성물; (ii) 디프테리아, 파상풍 및 백일해에 대한 면역원성 조성물; (iii) A형 간염 바이러스에 대한 면역원성 조성물; (iv) 인유두종바이러스에 대한 면역원성 조성물; (v) 디프테리아, 파상풍, 백일해 및 소아마비에 대한 면역원성 조성물: 또는 (vi) 이들의 임의의 조합이다.
한 실시양태에서, 상기 나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물은 폴리솔베이트-80을 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 상기 나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물은 알루미늄을 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물은 히스티딘 완충제를 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 상기 나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물은 염화나트륨을 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 상기 나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물은 약 120 ㎍/ml의 제 1 폴리펩티드; 약 120 ㎍/ml의 제 2 폴리펩티드; 약 2.8 몰비의 폴리솔베이트-80; 약 0.5 mg/ml 알루미늄; 약 10 mM의 히스티딘; 및 약 150 mM의 염화나트륨을 포함한다. 한 실시양태에서, 상기 나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물은 약 60 ㎍의 제 1 폴리펩티드; 약 60 ㎍의 제 2 폴리펩티드; 약 18 ㎍의 폴리솔베이트-80; 약 250 ㎍ 알루미늄; 약 780 ㎍ 히스티딘; 및 약 4380 ㎍ 염화나트륨을 포함한다.
한 실시양태에서, 나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물은 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B A22, A56, B24, B44 균주들 중 1개 이상 또는 이들의 임의의 조합에 대한 살균 면역 반응을 유도한다. 한 실시양태에서, 나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물은 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B A22에 대한 살균 면역 반응을 유도한다. 한 실시양태에서, 나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물은 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B B24에 대한 살균 면역 반응을 유도한다. 한 실시양태에서, 나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물은 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B B24, B16, B44, A22, B03, A12, A19, A05, A07, B153 균주들 중 1개 이상 또는 이들의 임의의 조합에 대한 살균 면역 반응을 유도한다.
한 실시양태에서, 상기 방법은, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 A 균주, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 C 균주, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 Y 균주 및/또는 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 W135 균주 중 1개 이상, 또는 이들의 임의의 조합에 대한 면역 반응을 유도하는 것을 추가로 포함한다.
한 실시양태에서, 상기 방법은, 4개의 별개의 별도로 제조된 단백질-캡슐 폴리사카라이드 접합체들의 혼합물을 포함하는 추가의 면역원성 조성물을 인간에게 투여하는 것을 포함하며, 이때, 제 1 접합체는 운반 단백질에 접합된 혈청군 W-135의 정제된 나이세리아 메닌지티디스 캡슐 폴리사카라이드를 포함하고, 제 2 접합체는 운반 단백질에 접합된 혈청군 Y의 정제된 나이세리아 메닌지티디스 캡슐 폴리사카라이드를 포함하고, 제 3 접합체는 정제된 운반 단백질에 접합된 혈청군 A의 정제된 나이세리아 메닌지티디스 캡슐 폴리사카라이드를 포함하고, 제 4 접합체는 운반 단백질에 접합된 혈청군 C의 정제된 나이세리아 메닌지티디스 캡슐 폴리사카라이드를 포함하며, 이때, 상기 운반 단백질은 디프테리아 톡소이드, CRM197 및 파상풍 톡소이드로 이루어진 군에서 선택된다. 한 실시양태에서, 운반 단백질은 디프테리아 톡소이드다.
한 실시양태에서, 면역원성 조성물은 액체 조성물이다.
한 실시양태에서, 면역원성 조성물은 동결건조되지 않는다.
한 실시양태에서, 상기 방법은, 인유두종 바이러스 6, 11, 16 및 18 형 중 1개 이상 또는 이들의 임의의 조합에 대한 면역 반응을 유도하는 것을 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 상기 방법은 디프테리아, 파상풍, 백일해, 소아마비 중 1개 이상, 또는 이들의 임의의 조합에 대한 면역 반응을 유도하는 것을 추가로 포함한다.
한 실시양태에서, 나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물의 효과량은 1개 용량을 포함한다. 한 실시양태에서, 나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물의 효과량은 2개 용량을 포함한다. 한 실시양태에서, 나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물의 효과량은 추가접종 용량을 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물의 효과량은 3개 이하의 용량을 포함한다.
한 실시양태에서, 나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물은 추가 조성물의 투여후 24 시간 이내에 투여된다. 한 실시양태에서, 나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물은 추가 조성물과 동시에 투여된다. 한 실시양태에서, 나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물의 1차 용량은 추가 용량에 병용 투여된다. 한 실시양태에서, 나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물의 1차 용량은 추가 조성물과 동시에 투여된다.
도 1은 ≥LLOQ의 hSBA 역가를 달성한 대상자들의 비율이다. hSBA는 인간 보체를 사용한 혈청 살균성 분석이고; LLOQ는 정량하한이다.
도 2는 rLP2086으로 면역화후 개별적 인간 대상자들의 프린스턴 대학(Princeton University) 발생 균주 및 UCSB 발생 균주에 대한 hSBA 역가에서의 4배 증가를 달성한 대상자들의 백분율이다(연구 B1971012 - 실시예 5, 실시예 6에서 기술됨). 임상 연구 B1971012에서 2가의 rLP2086으로 면역화된 9명의 인간 대상자들로부터의 혈청 샘플을 프린스턴 대학으로부터 및 UCSB로부터 수득된 MnB 발생 균주를 사용하여 탐색적 hSBA에서 평가하였다. 실시예 9 참조.
서열목록
서열번호 1은 재조합 나이세리아 메닌지티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 A05 폴리펩티드 항원에 대한 아미노산 서열을 나타낸다.
서열번호 2는 재조합 나이세리아 메닌지티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 B01 폴리펩티드 항원에 대한 아미노산 서열을 나타낸다.
서열번호 3은 서열번호 1 및 서열번호 2의 위치 1 내지 4에서의 아미노산 잔기를 나타낸다.
서열번호 4는 재조합 나이세리아 서브패밀리 A LP2086 폴리펩티드 (rLP2086) (A05) 폴리펩티드 항원의 N-말단의 아미노산 서열을 나타낸다.
서열번호 5는 나이세리아 서브패밀리 A LP2086 M98250771 폴리펩티드 (A05) 폴리펩티드 항원의 N-말단의 아미노산 서열을 나타낸다.
서열번호 6은 나이세리아 메닌지티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 B153에 대한 아미노산 서열을 나타낸다.
서열번호 7은 나이세리아 메닌지티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 A04에 대한 아미노산 서열을 나타낸다.
서열번호 8은 나이세리아 메닌지티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 A05에 대한 아미노산 서열을 나타낸다.
서열번호 9는 나이세리아 메닌지티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 A12에 대한 아미노산 서열을 나타낸다.
서열번호 10은 나이세리아 메닌지티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 A22에 대한 아미노산 서열을 나타낸다.
서열번호 11은 나이세리아 메닌지티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 B02에 대한 아미노산 서열을 나타낸다.
서열번호 12는 나이세리아 메닌지티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 B03에 대한 아미노산 서열을 나타낸다.
서열번호 13은 나이세리아 메닌지티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 B09에 대한 아미노산 서열을 나타낸다.
서열번호 14는 나이세리아 메닌지티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 B22에 대한 아미노산 서열을 나타낸다.
서열번호 15는 나이세리아 메닌지티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 B24에 대한 아미노산 서열을 나타낸다.
서열번호 16은 나이세리아 메닌지티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 B44에 대한 아미노산 서열을 나타낸다.
서열번호 17은 나이세리아 메닌지티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 B16에 대한 아미노산 서열을 나타낸다.
서열번호 18은 나이세리아 메닌지티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 A07에 대한 아미노산 서열을 나타낸다.
서열번호 19는 나이세리아 메닌지티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 A19에 대한 아미노산 서열을 나타낸다.
서열번호 20은 나이세리아 메닌지티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 A06에 대한 아미노산 서열을 나타낸다.
서열번호 21은 나이세리아 메닌지티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 A15에 대한 아미노산 서열을 나타낸다.
서열번호 22는 나이세리아 메닌지티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 A29에 대한 아미노산 서열을 나타낸다.
서열번호 23은 나이세리아 메닌지티디스, 혈청군 B, 2086 변이체 B15에 대한 아미노산 서열을 나타낸다.
본 발명자들은 놀랍게도 서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 제 1 지질화 폴리펩티드 및 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 제 2 지질화 폴리펩티드를 포함하는 rLP2086 조성물을 찾아내었다. 상기 조성물은 인간에서 허용되는 안전성 프로필을 가지며, 상기 조성물은 놀랍게도 적어도 2가지보다 더 많은 다양한 나이세리아 메닌지티디스 균주에 대해 인간에서 광범위하게 교차-반응성인 살균 면역 반응을 유도한다.
본 발명자들은 또한, rLP2086 조성물 및 하기 면역원성 조성물들 중 1개 이상의 병용 투여후에도 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B에 대한 강한 면역 반응이 야기되었음을 밝혀내었다: (i) 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 A 균주, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 C 균주, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 Y 균주 및/또는 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 W135 균주에 대한 면역원성 조성물; (ii) 디프테리아, 파상풍 및 백일해에 대한 면역원성 조성물; (iii) A형 간염 바이러스에 대한 면역원성 조성물; (iv) 인유두종바이러스에 대한 면역원성 조성물; (v) 디프테리아, 파상풍, 백일해 및 소아마비에 대한 면역원성 조성물: 또는 (vi) 이들의 임의의 조합.
적어도 rLP2086 조성물 및 수막구균 A, C, Y 및 W-135 군 폴리사카라이드 접합체 백신(MCV4)의 병용 투여는 또한 놀랍게도 수막구균 B군 이외에 적어도 수막구균 A, C, Y 및 W-135 군에 대한 면역 반응을 야기하였다. rLP2086 조성물과 MCV4 조성물의 병용 투여후 수막구균 A, C, Y 및 W-135 군에 대한 면역 반응은, rLP2086 조성물의 부재하에서 MCV4 조성물의 투여에 의해 야기된 면역 반응에 비해 열등하지 않았다.
적어도 rLP2086 조성물, 수막구균 A, C, Y 및 W-135 군 폴리사카라이드 접합체 백신(MCV4), 및 파상풍, 디프테리아 및 무세포성 백일해(Tdap) 백신의 병용 투여는 또한 놀랍게도 수막구균 A, C, Y 및 W-135 군 이외에 및 수막구균 B군 이외에 적어도 파상풍, 디프테리아 및 무세포성 백일해에 대한 면역 반응을 야기하였다. rLP2086 조성물, MCV4 조성물 및 Tdap 조성물의 병용 투여후에 Tdap 및 수막구균 A, C, Y 및 W-135 군에 대한 면역 반응은, rLP2086 조성물의 부재하에서 MCV4 조성물 및 Tdap 조성물의 투여에 의해 야기된 면역 반응에 비해 열등하지 않았다.
또한, 본 발명자들은 rLP2086 조성물이 A형 간염 바이러스에 대한 면역원성 조성물과 병용하여 인간에게 안전하게 투여될 수 있음을 밝혀내었다.
본 발명자들은 또한, 2개-용량 투여 스케줄 및 3개-용량 투여 스케줄이 놀랍게도, 높은 비율의 인간 대상자들에서 백신 이종 LP2086(인자 H 결합 단백질(fHBP)) 서브패밀리 A 및 B와 함께, 나이세리아 메닌지디티스 혈청군 B로부터의 시험 균주들에 대해 ≥8의 hSBA 역가를 제공하였음을 밝혀내었다. 3개-용량 투여 스케줄은 2개-용량 투여 스케줄에 비해 다양한 MnB 임상 균주에 대해 인간에서 보다 광범위한 보호를 제공할 수 있다.
본 발명자들은 또한 놀랍게도, rLP2086 조성물 및 인유두종 바이러스(HPV4)에 대한 4가 면역원성 조성물의 병용 투여후에 인유두종 바이러스 및 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B에 대한 강한 면역 반응이 야기되었음을 밝혀내었다. 예를 들면, rLP2086 조성물 및 HPV4 조성물의 병용 투여는, 적어도 rLP2086 조성물중 상기 fHBP에 이종인 fHBP를 발현하는 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 시험 균주에 대해 면역 반응을 야기하였다. 상기 이종 시험 균주로는, 각각 rLP2086 조성물중 fHBP에 이종인 A22 fHBP, A56 fHBP, B24 fHBP 또는 B44 fHBP를 발현하는 야생형 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B가 포함된다. 특히 A22 fHBP, A56 fHBP, B24 fHBP 및 B44 fHBP를 포함하여 변이체 fHBP 단백질을 기술하고 있는 WO/2012/032489 호, WO/2013/132452 호, US 특허 공개 US20120093852 호 및 US 특허 공개 US20130243807 호를 참조하시오. 상기 참조문헌들은 각각 전체로 참고로 도입된다. 병용 투여는 또한 놀랍게도 적어도 HPV 제 6, 11, 16 및/또는 18 형에 대해 면역 반응을 야기하였다. rLP 2086 조성물과 HPV4 조성물의 병용 투여후 상기 HPV 유형들에 대한 면역 반응은, rLP2086 조성물의 부재하에서 HPV4 조성물의 투여에 의해 야기된 면역 반응에 비해 열등하지 않았다.
또한, 본 발명자들은 놀랍게도, rLP2086 조성물, 및 디프테리아, 파상풍, 백일해 및 소아마비에 대한 면역원성 조성물의 병용 투여후에 디프테리아, 파상풍, 백일해 및 소아마비, 및 나이세리아 메닌지디티스 혈청군 B에 대한 강한 면역 반응이 야기되었음을 밝혀내었다. 예를 들면, rLP2086 조성물 및 레페백스(REPEVAX) 조성물의 병용 투여는, 적어도 rLP2086 조성물중 상기 fHBP에 이종인 fHBP를 발현하는 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 시험 균주에 대해 면역 반응을 야기하였다. 병용 투여는 또한 놀랍게도 적어도 레페백스내 9개 항원: 디프테리아, 파상풍, 백일해 톡소이드, 백일해 섬유상 헤마글루티닌, 백일해 퍼탁틴(pertactin), 백일해 핌브리아 응집소 제 2 + 3 형, 제 1 형 소아마비바이러스, 제 2 형 소아마비바이러스, 제 3 형 소아마비바이러스에 대해 면역 반응을 야기하였다. rLP2086 조성물 및 레페백스 조성물의 병용 투여후 레페백스 항원에 대한 면역 반응은, rLP2086 조성물의 부재하에서 레페백스 조성물의 투여에 의해 야기된 면역 반응에 비해 열등하지 않았다.
조성물 및 백신
한 양태에서, 본 발명은 나이세리아 메닌지티디스에 대한 조성물에 관한 것이다. 상기 조성물은 서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 제 1 지질화 폴리펩티드 및 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 제 2 지질화 폴리펩티드를 포함한다.
본 발명자들은 놀랍게도 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B의 다중 균주들에 대해 효과적인 광범위 보호성 면역 반응을 유도하는 단일 나이세리아 메닌지티디스 폴리펩티드 성분을 발견하였다. 따라서, 한 실시양태에서, 상기 조성물은 융합 단백질을 포함하지 않는다. 한 실시양태에서, 상기 조성물은 키메라 단백질을 포함하지 않는다. 한 실시양태에서, 상기 조성물은 하이브리드 단백질을 포함하지 않는다. 한 실시양태에서, 상기 조성물은 펩티드 단편을 추가로 포함하지 않는다. 또 다른 실시양태에서, 상기 조성물은 fHBP가 아닌 나이세리아 폴리펩티드를 추가로 포함하지 않는다. 예를 들면, 한 실시양태에서, 상기 조성물은 PorA 단백질을 포함하지 않는다. 또 다른 실시양태에서, 상기 조성물은 NadA 단백질을 포함하지 않는다. 또 다른 실시양태에서, 상기 조성물은 나이세리아 헤파린 결합 항원(NHBA)을 추가로 포함하지 않는다. 또 다른 실시양태에서, 상기 조성물은 나이세리아 외막 소포체(OMV)를 추가로 포함하지 않는다. 바람직한 실시양태에서, 상기 조성물은 제 1 폴리펩티드 및 제 2 폴리펩티드 이외의 다른 항원을 추가로 포함하지 않는다.
또 다른 양태에서, 본 발명자들은 놀랍게도 최대 2개의 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 균주로부터 유래된 폴리펩티드 항원이 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B의 다중 균주에 대한 면역 반응을 유도함을 밝혀내었다. 따라서, 한 실시양태에서, 상기 조성물은 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 A M98250771 균주 및/또는 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 B CDC1573 균주로부터 유래되지 않은 폴리펩티드를 추가로 포함하지 않는다.
한 실시양태에서, 조성물은 서열번호 1에 대해 100% 미만의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드를 추가로 포함하지 않는다. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 서열번호 2에 대해 100% 미만의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드를 추가로 포함하지 않는다. 예를 들면, 조성물은 서열번호 1 및/또는 서열번호 2의 전장에 대해 100% 미만의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드를 추가로 포함하지 않는다.
한 실시양태에서, 조성물은 또한 폴리솔베이트-80, 알루미늄, 히스티딘 및 염화나트륨을 포함한다. 한 실시양태에서, 조성물은 서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 제 1 지질화 폴리펩티드 약 60 ㎍, 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 제 2 지질화 폴리펩티드 약 60 ㎍, 각 폴리펩티드에 대해 2.8 몰비의 폴리솔베이트-80, 인산알루미늄으로서 알루미늄 0.5 mg/ml, 10 mM의 히스티딘, 및 150 mM의 염화나트륨을 포함하며, 이때 상기 조성물은 바람직하게는 약 0.5 ml의 총 부피를 갖는다.
또 다른 양태에서, 조성물은 서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 제 1 지질화 폴리펩티드 약 120 ㎍/ml, 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 제 2 지질화 폴리펩티드 약 120 ㎍/ml, 각 폴리펩티드에 대해 2.8 몰비의 폴리솔베이트-80, 인산알루미늄으로서 알루미늄 0.5 mg/ml, 10 mM의 히스티딘, 및 150 mM의 염화나트륨을 포함한다.
또 다른 양태에서, 조성물은 a) 서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 제 1 지질화 폴리펩티드 60 ㎍; b) 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 제 2 지질화 폴리펩티드 60 ㎍; c) 18 ㎍ 폴리솔베이트-80; d) 250 ㎍ 알루미늄; e) 780 ㎍ 히스티딘, 및 f) 4380 ㎍ 염화나트륨을 포함한다.
예시적인 실시양태에서, 조성물은 서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 제 1 지질화 폴리펩티드 약 60 ㎍, 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 제 2 지질화 폴리펩티드 약 60 ㎍, 제 1 지질화 폴리펩티드 및 제 2 지질화 폴리펩티드에 대해 2.8 몰비의 폴리솔베이트-80, 0.5 mg/ml 인산알루미늄, 10 mM의 히스티딘, 및 150 mM의 염화나트륨을 포함하며, 이때 상기 조성물은 약 0.5 ml의 총 부피를 갖는다. 예시적인 실시양태에서, 조성물은 멸균 등장성 완충된 액체 현탁액이다. 예시적인 실시양태에서, 조성물은 pH 6.0을 갖는다. 예시적인 실시양태에서, 제 1 폴리펩티드 및 제 2 폴리펩티드는 알루미늄에 흡착된다.
한 실시양태에서, 조성물은 약 0.5 ml의 총 부피를 갖는다. 한 실시양태에서, 조성물의 1차 용량은 약 0.5 ml의 총 부피를 갖는다. "1차 용량"은 제 0 일에 투여되는 조성물의 용량을 말한다. "2차 용량" 또는 "3차 용량"은 1차 용량에 이어서 투여되는 조성물의 용량을 말하며, 1차 용량과 동일한 양일 수 있거나 아닐 수 있다.
조성물은 인간에게 1차 용량의 투여후에 면역원성이다. 한 실시양태에서, 1차 용량은 총 부피로 약 0.5 ml이다.
조성물은, 인간 보체를 사용한 혈청 살균 분석(hSBA)에서 동일한 조건하에서 측정시, 1차 용량을 투여받은 후의 인간에서, 1차 용량을 투여받기 전 인간에서의 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B에 대한 혈청 면역글로불린의 살균 역가보다 적어도 1배보다 더 많이 높거나, 바람직하게는 2배 이상 더 높은, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B에 대한 혈청 면역글로불린의 살균 역가를 유도한다.
바람직한 실시양태에서, 살균 역가 또는 살균 면역 반응은 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주 및 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대한 것이다. 가장 바람직하게, 살균 역가 또는 살균 면역 반응은 적어도 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B, 서브패밀리 B, B01 균주에 대한 것이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 살균 역가 또는 살균 면역 반응은 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B, 서브패밀리 B, B24 균주에 대한 것이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 살균 역가 또는 살균 면역 반응은 적어도 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B, 서브패밀리 A, A22 균주에 대한 것이다.
한 실시양태에서, 상기 조성물은, 인간 보체를 사용한 혈청 살균 분석에서 동일한 조건하에서 측정시, 한 용량의 조성물을 투여받은 후의 인간에서, 상기 용량을 투여받기 전 인간에서의 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B에 대한 혈청 면역글로불린의 살균 역가보다 적어도 1배보다 더 많이 높은, 예를 들면, 적어도 1.01배, 1.1배, 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 11배, 12배, 13배, 14배, 15배 또는 16배 더 높은, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B에 대한 혈청 면역글로불린의 살균 역가를 유도한다.
한 실시양태에서, 조성물은 인간을 위한 면역원성 조성물이다. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 백신이다. "백신"은, 항원에 특이적인 면역 반응을 유도하는 1개 이상의 에피토프를 함유하는, 상기 항원을 포함하는 조성물을 말한다. 백신은 피하, 경구, 구비강 또는 비강내 투여 경로에 의해 대상자에게 직접 투여될 수 있다. 바람직하게, 백신은 근육내 투여된다. 한 실시양태에서, 조성물은 인간을 위한 백신이다. 한 실시양태에서, 조성물은 나이세리아 메닌지티디스에 대한 면역원성 조성물이다.
한 실시양태에서, 조성물은 액체 조성물이다. 바람직한 실시양태에서, 조성물은 액체 현탁액 조성물이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 조성물은 동결건조되지 않는다.
제 1 폴리펩티드
한 실시양태에서, 조성물은 서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 제 1 폴리펩티드를 포함한다. 한 바람직한 실시양태에서, 조성물은 서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 제 1 폴리펩티드를 약 60 ㎍ 포함하며, 이때 상기 조성물은 바람직하게는 0.5 ml의 총 부피를 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 제 1 폴리펩티드를 약 120 ㎍/ml 포함한다. 폴리펩티드는 나이세리아 메닌지티디스 균주 M98250771로부터의 변형된 인자 H 결합 단백질(fHBP)이다. fHBP에 대한 설명은, 각각 전체로 참고로 도입된 WO2012032489 호 및 US 특허 공개 US 2012/0093852 호에 개시되어 있다. 폴리펩티드는, 폴리펩티드의 3개 위치들에서 공유 결합된 3개의 우세한 지방산 C16:0, C16:1 및 C18:1로 N-말단에 지질화된다. 제 1 폴리펩티드는 총 258개의 아미노산을 포함한다.
제 1 폴리펩티드는, 나이세리아 메닌지티디스 균주 M98250771로부터의 상응하는 야생형 서열과 비교하여, 폴리펩티드의 N-말단 영역에 도입된 2개의 변형을 포함한다. 제 2 위치에서의 글리신은 클로닝 부위를 도입한 결과로서 부가된다. 제 2 변형은 4개 아미노산들의 결실을 포함한다. 따라서, 한 실시양태에서, 제 1 폴리펩티드는 N-말단에서 C-G-S-S 서열(서열번호 3)을 포함한다. 서열번호 1, 처음 4개 아미노산 잔기 참조.
제 1 폴리펩티드 서열과 야생형 나이세리아 서열 사이의 N-말단 차이는 하기에 나타나 있다. 따라서, 한 실시양태에서, 제 1 폴리펩티드는 서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열의 적어도 처음 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13개 이상의 아미노산 잔기를 포함한다. 바람직하게, 제 1 폴리펩티드는 서열번호 1의, 적어도 처음 4개, 보다 바람직하게는 적어도 처음 6개, 및 가장 바람직하게는 적어도 처음 8개 아미노산 잔기를 포함한다.
재조합 및 나이세리아 서브패밀리 A LP2086 폴리펩티드의 예측 N-말단 서열의 비교
rLP2086 M98250771 CGSS-----GGGGVAAD (서열번호 4)
나이세리아 LP2086 M98250771 C-SSGS-GSGGGGVAAD (서열번호 5)
>A05 (서열번호 1)
CGSSGGGGVAADIGTGLADALTAPLDHKDKGLKSLTLEDSISQNGTLTLSAQGAEKTFKVGDKDNSLNTGKLKNDKISRFDFVQKIEVDGQTITLASGEFQIYKQDHSAVVALQIEKINNPDKIDSLINQRSFLVSGLGGEHTAFNQLPSGKAEYHGKAFSSDDAGGKLTYTIDFAAKQGHGKIEHLKTPEQNVELASAELKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIREKVHEIGIAGKQ
한 실시양태에서, 제 1 폴리펩티드는 서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 폴리펩티드는 총 258개의 아미노산을 갖는다. 한 실시양태에서, 제 1 폴리펩티드는 서열번호 1에 대해 100% 미만의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하지 않는다. 또 다른 실시양태에서, 제 1 폴리펩티드는 서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 제 1 폴리펩티드는 아미노산 서열 KDN을 포함한다. 예를 들면, 서열번호 1의 아미노산 잔기 73 내지 75를 참고하시오. 또 다른 실시양태에서, 제 1 폴리펩티드는 폴리펩티드의 N-말단에서 서열번호 3에 나타낸 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 제 1 폴리펩티드는 폴리펩티드의 N-말단에서 서열번호 4에 나타낸 아미노산 서열을 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 제 1 폴리펩티드는 당해 분야에 공지된 표준 기술을 이용하여 재조합 숙주 세포에서 용이하게 발현된다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 제 1 폴리펩티드는 서열번호 1의 N- 및/또는 C-도메인 상에 살균 에피토프를 포함한다. 한 실시양태에서, 제 1 폴리펩티드는 서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열의, 적어도 처음 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100개 아미노산을 포함한다. 바람직하게, 제 1 폴리펩티드는 서열번호 1의, 적어도 처음 2개, 보다 바람직하게는 적어도 처음 4개 및 가장 바람직하게는 적어도 처음 8개 아미노산 잔기를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 제 1 폴리펩티드는 서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열의, 적어도 마지막 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100개 아미노산 잔기를 포함한다.
제 2 폴리펩티드
한 실시양태에서, 조성물은 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 제 2 폴리펩티드를 포함한다. 한 바람직한 실시양태에서, 조성물은 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 제 2 폴리펩티드를 약 60 ㎍ 포함하며, 이때 상기 조성물은 바람직하게는 0.5 ml의 총 부피를 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 제 2 폴리펩티드를 약 120 ㎍/ml 포함한다. 폴리펩티드는 나이세리아 메닌지티디스 균주 CDC1573으로부터의 인자 H 결합 단백질(fHBP)이다. fHBP에 대한 설명은, 각각 전체로 참고로 도입된 WO2012032489 호 및 US 특허 공개 US 2012/0093852 호에 개시되어 있다. 폴리펩티드는, 폴리펩티드의 3개 위치들에서 공유 결합된 3개의 우세한 지방산 C16:0, C16:1 및 C18:1로 N-말단에 지질화된다. 제 2 폴리펩티드는 총 261개의 아미노산을 포함한다. 한 실시양태에서, 제 2 폴리펩티드는 N-말단에서 C-G-S-S 서열(서열번호 3)을 포함한다. 서열번호 2의 처음 4개 아미노산 잔기 참조.
>B01 (서열번호 2)
CGSSGGGGSGGGGVTADIGTGLADALTAPLDHKDKGLKSLTLEDSISQNGTLTLSAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQSHSALTALQTEQEQDPEHSEKMVAKRRFRIGDIAGEHTSFDKLPKDVMATYRGTAFGSDDAGGKLTYTIDFAAKQGHGKIEHLKSPELNVDLAVAYIKPDEKHHAVISGSVLYNQDEKGSYSLGIFGEKAQEVAGSAEVETANGIHHIGLAAKQ
한 실시양태에서, 제 2 폴리펩티드는 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 제 2 폴리펩티드는 총 261개의 아미노산을 갖는다. 한 실시양태에서, 제 2 폴리펩티드는 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 제 2 폴리펩티드는 서열번호 2에 대해 100% 미만의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드를 추가로 포함하지 않는다. 바람직한 실시양태에서, 제 1 폴리펩티드 및 제 2 폴리펩티드는 각각의 폴리펩티드의 N-말단에서 C-G-S-S(서열번호 3) 서열을 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 제 2 폴리펩티드는 당해 분야에 공지된 표준 기술을 이용하여 재조합 숙주 세포에서 용이하게 발현된다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 제 2 폴리펩티드는 서열번호 2의 N- 및/또는 C-도메인 상에 살균 에피토프를 포함한다. 한 실시양태에서, 제 2 폴리펩티드는 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열의, 적어도 처음 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100개 아미노산 잔기를 포함한다. 바람직하게, 제 2 폴리펩티드는 서열번호 2의, 적어도 처음 2개, 보다 바람직하게는 적어도 처음 4개 및 가장 바람직하게는 적어도 처음 8개 아미노산 잔기를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 제 1 폴리펩티드는 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열의, 적어도 마지막 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100개 아미노산 잔기를 포함한다.
폴리솔베이트-80
폴리솔베이트 80(PS-80)은 비-이온성 계면활성제이다. 시험관내 단일클론 항체 기반 효능 분석을 이용한 가속 안정성 연구는, 최종 제형에서 PS-80 대 MnB rLP2086 단백질의 보다 높은 몰비에서의 서브패밀리 B 단백질의 불안정성을 입증하였다. 다양한 비의 PS-80을 사용한 또 다른 실험들은 효능을 유지하기 위한 PS-80 대 MnB rLP2086 단백질의 최적 몰비가 대략 2.8 ± 1.4임을 입증하였다.
조성물중 PS-80의 농도는 PS-80 대 폴리펩티드의 몰비에 따라 달라진다. 한 실시양태에서, 조성물은 제 1 폴리펩티드 및 제 2 폴리펩티드에 대해 2.8 ± 1.1 몰비의 PS-80을 포함한다. 한 실시양태에서, 조성물은 폴리펩티드에 대해 적어도 1.9, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3.0, 3.1, 3.2 또는 3.3 몰비의 PS-80을 포함한다. 바람직하게, 조성물은 폴리펩티드에 대해 2.8 몰비의 PS-80을 포함한다.
PS-80 대 폴리펩티드 몰비는 PS-80의 측정된 농도 및 측정된 총 폴리펩티드 농도로부터 산출하여 결정되며, 이때 상기 두 값은 모두 몰로 나타낸다. 예를 들면, PS-80 대 단백질 몰비는 최종 약물 물질중 PS-80의 측정된 농도(예를 들면, 역상 고압 액체 크로마토그래피(RP-HPLC)에 의해) 대 측정된 총 단백질 농도(예를 들면, 이온 교환-고압 액체 크로마토그래피(IEX-HPLC)에 의해)를 산출하여 결정되며, 이때 상기 두 값 모두 몰로 나타낸다.
RP-HPLC를 사용하여 백신 제형중 폴리솔베이트 80의 농도를 정량화한다. 세제 농도는 지방산 잔기의 비누화에 의해 결정된다: 폴리솔베이트 80은 40℃에서 알칼리성 가수분해에 의해 유리 올레산으로 전환된다. 샘플은 C18 컬럼을 사용하여 RP-HPLC에 의해 분리하고, 200 nm의 파장에서 UV 검출기를 사용하여 정량화한다.
제 1 및 제 2 폴리펩티드는 음이온-교환 HPLC에 의해 분해된다. rLP2086 (fHBP) 서브패밀리 A 및 B 단백질은 별개의 체류 시간에서 용출되며, 각각의 rLP2086 단백질 기준 물질에 대해 작성된 표준 곡선을 이용하여 정량화된다.
용어 "몰비" 및 fHBP 및 PS-80을 포함하는 면역원성 조성물에 대한 설명은, 각각 그 전체로 참고로 도입된 WO2012025873 호 및 US 특허 공개 US 2013/0171194 호에 더 개시되어 있다.
본원에서 사용된 바와 같은 용어 "몰비"는 조성물중 2개의 상이한 요소들의 몰 수의 비를 말한다. 일부 실시양태에서, 몰비는 세제의 몰 대 폴리펩티드의 몰의 비이다. 일부 실시양태에서, 몰비는 PS-80의 몰 대 단백질의 몰의 비이다. 한 실시양태에서, 단백질 및 폴리솔베이트 80 농도를 기준으로, 몰비는 하기 식을 사용하여 산출할 수 있다:
몰비 = (%PS-80)/mg/ml 단백질 x 216
한 실시양태에서, 조성물은 약 0.0015, 0.0017, 0.0019, 0.0021, 0.0023, 0.0025, 0.0027, 0.0029, 0.0031, 0.0033, 0.0035, 0.0037, 0.0039, 0.0041, 0.0043, 0.0045, 0.0047, 0.0049, 0.0051 mg/mL PS-80을 포함한다. 바람직하게, 조성물은 약 0.0035 mg/mL PS-80을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 조성물은 약 10 ㎍, 11 ㎍, 12 ㎍, 13 ㎍, 14 ㎍, 15 ㎍, 16 ㎍, 17 ㎍, 18 ㎍, 19 ㎍, 20 ㎍, 21 ㎍, 22 ㎍, 23 ㎍, 24 ㎍ 또는 25 ㎍ PS-80을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 조성물은 18 ㎍ PS-80을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 조성물은 0.0005% 내지 1% 범위의 PS-80 농도를 포함한다. 예를 들면, 조성물중 PS-80 농도는 적어도 0.0005%, 0.005%, 0.01%, 0.02%, 0.03%, 0.04%, 0.05%, 0.06%, 0.07%, 0.08%, 0.09%, 0.10%, 0.2%, 0.3%, 0.4%, 0.5%, 0.6%, 0.7%, 0.8%, 0.9%, 1% 또는 1.1% PS-80일 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 조성물은 약 0.07% PS-80을 포함한다.
범위를 정의하기 위해 임의의 최소값이 본원에 기술된 임의의 최대값과 조합될 수 있다.
알루미늄
조성물은 바람직하게는 약 0.5 mg/ml 인산알루미늄을 포함한다. 한 실시양태에서, 조성물은 인산알루미늄으로서 약 0.5 mg 알루미늄/ml를 포함한다. 0.50 mg/ml의 AlPO4가 증대된 제조성 및 안정성을 제공하기 위해 안정화제로 첨가된다. 상기 농도는 알루미늄에 대한 서브패밀리 A 및 B 단백질의 결합(90% 이상의 결합)을 유지한다.
인산알루미늄을 제조하기 위한 방법은 전체로 참고로 도입된 미국 특허 공개 US 2009/0016946 호에 기술되어 있다.
한 실시양태에서, 조성물은 알루미늄 이외의 다른 다가 양이온을 추가로 포함하지 않는다. 한 실시양태에서, 조성물은 Al(OH)3 또는 Al(SO4)3을 추가로 포함하지 않는다.
부형제
한 실시양태에서, 조성물은 히스티딘을 포함한다. 한 실시양태에서, 조성물은 염화나트륨을 포함한다. 조성물은 바람직하게는 약 10 mM의 히스티딘 및 약 150 mM의 염화나트륨을 포함한다. 한 실시양태에서, 조성물은 10 mM의 히스티딘 및 150 mM의 염화나트륨을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 조성물은 약 650 ㎍, 660 ㎍, 670 ㎍, 680 ㎍, 690 ㎍, 700 ㎍, 710 ㎍, 720 ㎍, 730 ㎍, 740 ㎍, 750 ㎍, 760 ㎍, 770 ㎍, 780 ㎍, 790 ㎍, 800 ㎍, 810 ㎍, 820 ㎍, 830 ㎍, 840 ㎍ 또는 850 ㎍의 히스티딘을 포함한다. 바람직하게, 조성물은 약 780 ㎍ 히스티딘을 포함한다. 범위를 정의하기 위해 임의의 최소값이 본원에 기술된 임의의 최대값과 조합될 수 있다.
한 실시양태에서, 조성물은 트리스, 포스페이트 또는 숙시네이트 완충제를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 조성물은 트리스 완충제를 포함하지 않는다. 바람직한 실시양태에서, 조성물은 포스페이트 완충제를 포함하지 않는다. 한 바람직한 실시양태에서, 조성물은 숙시네이트 완충제를 포함하지 않는다. 바람직한 실시양태에서, 조성물은 히스티딘 완충제를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 조성물의 pH는 6.0 내지 7,0, 가장 바람직하게는 pH 6.0이다. 한 실시양태에서, 조성물의 pH는 최대 6.1이다.
살균 활성
조성물을 인간에게 투여하여 유도된 면역 반응은 4개의 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B(MnB) 균주에 대한 인간 보체를 사용한 혈청 살균 분석(hSBA)을 이용하여 측정된다. hSBA에 사용된 4개의 MnB 균주는 균주 풀로부터 선택하였다. 균주 풀은 미국 및 유럽으로부터 체계적으로 수집된 임상적으로 관련된 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 균주들의 컬렉션에 해당하였다. SBA에 대한 4개 균주들 중 2개는 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B LP2086 (fHBP) 서브패밀리 A로부터 유래된 것이고, 4개 균주들 중 또 다른 2개는 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B LP2086 (fHBP) 서브패밀리 B로부터 유래된 것이다.
모든 시험 균주들, 특히 제 1 폴리펩티드에 이종인 서열을 갖는 지단백질 2086 변이체를 발현하는 균주들에 대한 hSBA 반응의 높은 비율은, 조성물이 광범위한 보호 백신이며 2개 용량이 적어도 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주들에 대해 높은 혈청보호(seroprotection)를 제공하기에 충분함을 시시한다.
모든 시험 균주들, 특히 제 1 폴리펩티드 및 제 2 폴리펩티드 둘 다에 이종인 서열을 갖는 지단백질 2086 변이체를 발현하는 균주들에 대한 hSBA 반응의 높은 비율은, 조성물이 광범위한 보호 백신이며, 약 6개월 기간 이내에 3개 이하의 용량이 rLP2086 (fHBP) 서브패밀리 A 및/또는 서브패밀리 B를 발현하는 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 균주들에 대해 높은 혈청보호를 제공하기에 충분함을 시시한다.
한 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 (fHBP) 서브패밀리 A 균주이다. 한 실시양태에서, hSBA 균주는 A05를 발현하는 나이세리아 메닌지티디스 균주에 이종인 지단백질 2086 변이체를 발현하는 LP2086 (fHBP) 서브패밀리 A 균주이다. 예를 들면, 한 실시양태에서, hSBA 균주는 균주 M98250771에 이종인 지단백질 2086 변이체를 발현하는 LP2086 (fHBP) 서브패밀리 A 균주이다. 한 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 (fHBP) A22 균주이다. 또 다른 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 (fHBP) A56 균주이다. 또 다른 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 (fHBP) A22 및 LP2086 (fHBP) A56 균주이다. 또 다른 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 A04 균주이다. 한 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 A05 균주이다. 한 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 A12 균주이다. 한 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 A22 균주이다. 한 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 A12 균주이다. 한 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 A04 균주이다. 한 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 A19 균주이다. 한 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 A07 균주이다. 또 다른 실시양태에서, hSBA 균주는 A22, A12, A19, A05 및 A07, 또는 그의 임의의 조합을 포함한다. 한 실시양태에서, hSBA 균주는 A06, A15 및 A29, 또는 그의 임의의 조합을 포함한다.
한 실시양태에서, 면역 반응은 A05를 발현하는 나이세리아 메닌지티디스 균주에 이종인 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주에 대해 살균성이다. 한 실시양태에서, 면역 반응은 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B A22 균주에 대한 것이다. 한 실시양태에서, 면역 반응은 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B A56 균주에 대한 것이다. 한 실시양태에서, 면역 반응은 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B A06 균주에 대한 것이다. 한 실시양태에서, 면역 반응은 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B A15 균주에 대한 것이다. 한 실시양태에서, 면역 반응은 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B A29 균주에 대한 것이다. 한 실시양태에서, 면역 반응은 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B A62 균주에 대한 것이다. 한 실시양태에서, 면역 반응은 나이세리아 메닌지티디스 균주 M98250771에 이종인 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주에 대해 살균성이다. 한 실시양태에서, 면역 반응은 제 1 폴리펩티드에 대해 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 인자 H 결합 단백질을 발현하는 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주에 대해 살균성이다. 또 다른 실시양태에서, 면역 반응은 나이세리아 메닌지티디스 균주 M98250771에 의해 발현된 인자 H 결합 단백질에 대해 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 인자 H 결합 단백질을 발현하는 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주에 대해 살균성이다. 바람직한 실시양태에서, 면역 반응은, 나이세리아 메닌지티디스 균주 M98250771에 의해 발현된 인자 H 결합 단백질에 대해 적어도 80%, 보다 바람직하게는 적어도 84% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 인자 H 결합 단백질을 발현하는 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주에 대해 살균성이다.
또 다른 실시양태에서, 면역 반응은 제 1 폴리펩티드에 대해 최대 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 인자 H 결합 단백질을 발현하는 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주에 대해 살균성이다. 또 다른 실시양태에서, 면역 반응은 나이세리아 메닌지티디스 균주 M98250771에 의해 발현된 인자 H 결합 단백질에 대해 최대 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 인자 H 결합 단백질을 발현하는 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주에 대해 살균성이다. 바람직한 실시양태에서, 면역 반응은, 나이세리아 메닌지티디스 균주 M98250771에 의해 발현된 인자 H 결합 단백질에 대해 최대 99%, 보다 바람직하게는 최대 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 인자 H 결합 단백질을 발현하는 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주에 대해 살균성이다. 범위를 정의하기 위해 임의의 최소값이 본원에 기술된 임의의 최대값과 조합될 수 있다.
한 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 (fHBP) 서브패밀리 B 균주이다. 한 실시양태에서, hSBA 균주는 B01을 발현하는 나이세리아 메닌지티디스 균주에 이종인 지단백질 2086 변이체를 발현하는 LP2086 (fHBP) 서브패밀리 B 균주이다. 예를 들면, 한 실시양태에서, hSBA 균주는 균주 CDC1127에 이종인 지단백질 2086 변이체를 발현하는 LP2086 (fHBP) 서브패밀리 B 균주이다. 바람직한 실시양태에서, hSBA 균주는 균주 CDC1573에 이종인 지단백질 2086 변이체를 발현하는 LP2086 (fHBP) 서브패밀리 B 균주이다.
한 실시양태에서, 면역 반응은 B01을 발현하는 나이세리아 메닌지티디스 균주에 이종인 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대해 살균성이다. 한 실시양태에서, 면역 반응은 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B B24 균주에 대한 것이다. 한 실시양태에서, 면역 반응은 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B B44 균주에 대한 것이다. 한 실시양태에서, 면역 반응은 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B B16 균주에 대한 것이다. 한 실시양태에서, 면역 반응은 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B B03 균주에 대한 것이다. 한 실시양태에서, 면역 반응은 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B B09 균주에 대한 것이다. 한 실시양태에서, 면역 반응은 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B B15 균주에 대한 것이다. 한 실시양태에서, 면역 반응은 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B B153 균주에 대한 것이다. 한 실시양태에서, 면역 반응은 나이세리아 메닌지티디스 균주 CDC1573에 이종인 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대해 살균성이다. 한 실시양태에서, 면역 반응은 제 2 폴리펩티드에 대해 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 인자 H 결합 단백질을 발현하는 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대해 살균성이다. 또 다른 실시양태에서, 면역 반응은 나이세리아 메닌지티디스 균주 CDC1573에 의해 발현된 인자 H 결합 단백질에 대해 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 인자 H 결합 단백질을 발현하는 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대해 살균성이다. 바람직한 실시양태에서, 면역 반응은, 나이세리아 메닌지티디스 균주 CDC1573에 의해 발현된 인자 H 결합 단백질에 대해 적어도 80% 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 87% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 인자 H 결합 단백질을 발현하는 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대해 살균성이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 면역 반응은 나이세리아 메닌지티디스 균주 CDC1573에 의해 발현된 인자 H 결합 단백질에 대해 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 인자 H 결합 단백질을 발현하는 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대해 살균성이다.
또 다른 실시양태에서, 면역 반응은 제 2 폴리펩티드에 대해 최대 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 인자 H 결합 단백질을 발현하는 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대해 살균성이다. 또 다른 실시양태에서, 면역 반응은 나이세리아 메닌지티디스 균주 CDC1573에 의해 발현된 인자 H 결합 단백질에 대해 최대 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 인자 H 결합 단백질을 발현하는 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대해 살균성이다. 바람직한 실시양태에서, 면역 반응은, 나이세리아 메닌지티디스 균주 CDC1573에 의해 발현된 인자 H 결합 단백질에 대해 최대 99% 동일성, 보다 바람직하게는 최대 88% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 인자 H 결합 단백질을 발현하는 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대해 살균성이다. 범위를 정의하기 위해 임의의 최소값이 본원에 기술된 임의의 최대값과 조합될 수 있다.
한 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 (fHBP) B24 균주이다. 또 다른 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 (fHBP) B44 균주이다. 다른 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 (fHBP) B24 및 LP2086 (fHBP) B44 균주이다. 한 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 (fHBP) A22, LP2086 (fHBP) A56, LP2086 (fHBP) B24 및 LP2086 (fHBP) B44 균주를 포함한다. 한 실시양태에서, hSBA 균주는 B15를 포함한다. 한 실시양태에서, hSBA 균주는 B153을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 B16 균주이다. 한 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 B03 균주이다. 한 실시양태에서, hSBA 균주는 LP2086 B09 균주이다. 또 다른 실시양태에서, hSBA 균주는 B24, B16, B44, B03 및 B09, 또는 그의 임의의 조합을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, hSBA 균주는 B24, B16, B44, A22, B03, B09, A12, A19, A05 및 A07, 또는 그의 임의의 조합을 포함한다. 예를 들면, 한 실시양태에서, hSBA 균주는 A22 및 B24를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, hSBA 균주는 A06, A07, A12, A15, A19, A29, B03, B09, B15 및 B16, 또는 그의 임의의 조합을 포함한다.
한 실시양태에서, 상기 방법은 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주 및 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대한 면역 반응을 유도한다. 바람직하게, 상기 면역 반응은 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주 및 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대해 살균성이다.
한 실시양태에서, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주에 대한 면역 반응은 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대한 면역 반응보다 크다. 예를 들면, 한 실시양태에서, 면역원성 조성물은, 동일한 조건하에서 시험시, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대해서보다 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주에 대해 더 높은 살균 역가를 유도한다. 한 실시양태에서, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주에 대해 더 높은 살균 역가는 나이세리아 메닌지티디스에 대한 면역원성 조성물의 2차 용량후 30일 이내에 야기된다. 한 실시양태에서, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주에 대해 더 높은 살균 역가는 나이세리아 메닌지티디스에 대한 면역원성 조성물의 3차 용량의 부재하에서 야기된다.
또 다른 실시양태에서, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대한 면역 반응은 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주에 대한 면역 반응보다 더 크다. 예를 들면, 한 실시양태에서, 면역원성 조성물은, 동일한 조건하에서 시험시, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주에 대해서보다 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대해 더 높은 살균 역가를 유도한다. 한 실시양태에서, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대해 더 높은 살균 역가는 나이세리아 메닌지티디스에 대한 면역원성 조성물의 2차 용량후 30일 이내에 야기된다. 한 실시양태에서, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대해 더 높은 살균 역가는 나이세리아 메닌지티디스에 대한 면역원성 조성물의 3차 용량의 부재하에서 야기된다.
역가
한 실시양태에서, 상기 조성물은, 동일한 조건하에서, 예를 들면, hSBA에서 측정시, 한 용량의 조성물 투여 전에 인간에서의 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B에 대한 살균 역가와 비교하여, 인간에서 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B에 대한 살균 역가의 증가를 유도한다. 한 실시양태에서, 동일한 조건하에서, 예를 들면, hSBA에서 측정시, 조성물의 1차 용량 투여 전 인간에서의 살균 역가와 비교하여, 살균 역가의 증가는 조성물의 1차 용량의 투여전 인간에서의 살균 역가와 비교된다. 한 실시양태에서, 동일한 조건하에서, 예를 들면, hSBA에서 측정시, 조성물의 2차 용량 투여 전 인간에서의 살균 역가와 비교하여, 역가의 증가가 조성물의 2차 용량 후에 관찰된다. 또 다른 실시양태에서, 동일한 조건하에서, 예를 들면, hSBA에서 측정시, 조성물의 3차 용량 투여 전 인간에서의 살균 역가와 비교하여, 살균 역가의 증가가 조성물의 3차 용량 후에 관찰된다.
한 실시양태에서, 조성물은 용량 투여후 인간에서 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B에 대한 살균 역가를 유도하며, 이때 상기 살균 역가는, 동일한 조건하에서, 예를 들면, hSBA에서 측정시, 용량 투여 전 인간에서 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B에 대한 살균 역가보다 적어도 1배보다 더 많이 높다. 예를 들면, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B에 대한 살균 역가는, 동일한 조건하에서, 예를 들면, hSBA에서 측정시, 용량 투여 전 인간에서의 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B에 대한 살균 역가에 비해, 조성물 용량을 투여받은 후 인간에서 적어도 1.01배, 1.1배, 1.5배, 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 11배, 12배, 13배, 14배, 15배 또는 16배 더 높을 수 있다.
한 실시양태에서, 상기 조성물은, 인유두종바이러스에 대한 추가의 면역원성 조성물과 함께 사용될 때, 동일한 조건하에서 측정시, 한 용량의 조성물 투여 전에 인간에서의 인유두종바이러스에 대한 살바이러스 역가와 비교하여, 인간에서 인유두종바이러스에 대한 살바이러스 역가의 증가를 유도한다. 한 실시양태에서, 동일한 조건하에서 측정시, 조성물의 1차 용량 투여 전 인간에서의 살바이러스 역가와 비교하여, 살바이러스 역가의 증가는 조성물의 1차 용량의 투여전 인간에서의 살바이러스 역가와 비교된다. 한 실시양태에서, 동일한 조건하에서 측정시, 조성물의 2차 용량 투여 전 인간에서의 살바이러스 역가와 비교하여, 역가의 증가가 조성물의 2차 용량 후에 관찰된다. 또 다른 실시양태에서, 동일한 조건하에서 측정시, 조성물의 3차 용량 투여 전 인간에서의 살바이러스 역가와 비교하여, 살바이러스 역가의 증가가 조성물의 3차 용량 후에 관찰된다.
한 실시양태에서, 상기 조성물은, 인유두종바이러스에 대한 추가의 면역원성 조성물과 함께 사용될 때, 용량 투여후 인간에서 살바이러스 역가를 유도하며, 이때 인유두종바이러스에 대한 상기 살바이러스 역가는, 동일한 조건하에서 측정시, 용량 투여 전 인간에서 인유두종바이러스에 대한 살바이러스 역가보다 적어도 1배보다 더 많이 높다. 예를 들면, 인유두종바이러스에 대한 살균 역가는, 동일한 조건하에서 측정시, 용량 투여 전 인간에서의 인유두종바이러스에 대한 살바이러스 역가와 비교하여, 한 용량의 조성물을 투여받은 후 인간에서 적어도 1.01배, 1.1배, 1.5배, 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 11배, 12배, 13배, 14배, 15배 또는 16배 더 높을 수 있다.
한 실시양태에서, "반응자"는 인간을 말하며, 이때 조성물은 용량 투여후 인간에서 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B에 대한 살균 역가를 유도하며, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B에 대한 상기 살균 역가는 용량 투여전 인간에서의 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B에 대한 살균 역가보다 적어도 1배보다 더 많이 높다. 바람직한 실시양태에서, 반응자는, 용량 투여전 인간에서의 살균 역가에 비해, hSBA 역가에서 적어도 ≥4배 증가를 달성한다. 상기 반응자는 보호 역가를 갖는 것으로 말할 수 있다.
한 실시양태에서, hSBA 역가는 측정가능한 효과를 제공하는 혈청 샘플의 최고 희석률의 역수이다. 예를 들면, 한 실시양태에서, hSBA 역가는 T30 CFU 값(즉, 시험 혈청을 제외하고 모든 분석 성분들을 함유하는 분석 웰에서 배양후 생존하는 세균의 수; 100% 세균 생존율)에 비해 MnB 세균의 적어도 50% 감소(50% 세균 생존율)를 야기하는 시험 혈청의 최고 2배 희석률의 역수이다.
한 실시양태에서, 조성물은, hSBA에서 동일한 조건하에서 측정시, 1차 용량을 투여받기 전 인간에서의 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B에 대한 살균 역가보다 적어도 2배 더 높은(예를 들면, 1차 용량의 부재하 인간에서의 살균 역가보다 높은), 1차 용량을 투여받은 후 인간에서의 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B에 대한 살균 역가를 유도한다. 한 실시양태에서, 조성물은 인간 보체를 사용한 인간 혈청 살균 분석(hSBA)에서 동일한 조건하에서 측정시, 1차 용량을 투여받기 전 인간에서의 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B에 대한 살균 역가보다 적어도 4배 더 높은, 인간에서의 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B에 대한 살균 역가를 유도한다. 한 실시양태에서, 조성물은 인간 보체를 사용한 인간 혈청 살균 분석(hSBA)에서 동일한 조건하에서 측정시, 1차 용량을 투여받기 전 인간에서의 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B에 대한 살균 역가보다 적어도 8배 더 높은, 인간에서의 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B에 대한 살균 역가를 유도한다.
바람직한 실시양태에서, 인간 혈청 보체는 해당 SBA 시험 균주에 대해 낮은 고유 살균 활성을 갖는 인간으로부터 수득된다. 낮은 고유 살균 활성은, 예를 들면, 해당 SBA 시험 균주에 대해 적어도 1:4의 희석률보다 낮은 살균 역가를 말한다. 한 실시양태에서, 인간 보체는 해당 SBA 시험 균주에 대해, 적어도 1:4 미만, 예를 들면, 1:2 희석률인 hSBA 역가를 갖는 인간으로부터 수득되며, 이때 상기 조성물은 인간에게 투여되지 않았다.
인간은 조성물, 예를 들면, 2가 rLP2086 조성물의 투여전에 1:4 미만의 hSBA 역가를 나타낼 수 있거나, 또는 인간은 조성물의 투여전에 ≥1:4의 hSBA 역가를 나타낼 수 있다. 따라서, 바람직한 실시양태 및 실시예에서, 인간에게 적어도 1개 용량의 조성물의 투여는, 예를 들면, ≥1:8의 hSBA 역가, ≥1:16의 hSBA 역가, 및 ≥1:32의 hSBA 역가와 같은, 적어도 1:4보다 큰 hSBA 역가를 제공한다. 본원에 기술된 각각의 실시예는 ≥1:8 및/또는 ≥1:16의 hSBA 역가를 갖는 인간 대상자의 비율의 평가를 포함하며, 이때 2가 rLP2086 조성물이 인간에게 투여되었다. 1:4보다 큰 hSBA 역가의 상기 바람직한 평가는, 보호, 즉 인간에서 유도된 살균 면역 반응이 조성물과 연관됨을 보여준다.
한 실시양태에서, 인간은 조성물 1차 용량 투여후 hSBA의 정량하한(LLOQ)과 같거나 그보다 큰 hSBA 역가를 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 인간은 조성물 2차 용량 투여후 hSBA의 LLOQ와 같거나 그보다 큰 hSBA 역가를 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 인간은 조성물 3차 용량 투여후 hSBA의 LLOQ와 같거나 그보다 큰 hSBA 역가를 갖는다.
추가의 면역원성 조성물
한 양태에서, 본 발명은, 다음중 임의의 1개 이상에 대한 면역 반응을 유도하는 것 외에, 인간에서 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주 및 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대한 살균 면역 반응을 유도하는 방법에 관한 것이다: 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 A 균주, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 C 균주, 나이세리아 메닌지티디스 Y 균주 및/또는 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 W135 균주; 디프테리아, 파상풍 및/또는 백일해; A형 간염 바이러스; 인유두종바이러스; 디프테리아, 파상풍, 백일해 및/또는 소아마비; 또는 이들의 임의의 조합.
상기 방법은, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B에 대한 면역원성 조성물 효과량을 인간에게 투여하고, 병용적으로 하기의 면역원성 조성물들 중 1개 이상을 인간에게 투여하는 것을 포함한다: (i) 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 A 균주, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 C 균주, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 Y 균주 및/또는 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 W135 균주에 대한 면역원성 조성물; (ii) 디프테리아, 파상풍 및 백일해에 대한 면역원성 조성물; (iii) A형 간염 바이러스에 대한 면역원성 조성물; (iv) 인유두종바이러스에 대한 면역원성 조성물; (v) 디프테리아, 파상풍, 백일해 및 소아마비에 대한 면역원성 조성물: 또는 (vi) 이들의 임의의 조합.
한 실시양태에서, 상기 방법은 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B에 대한 면역원성 조성물 효과량을 인간에게 투여하고, 병용적으로 하기의 면역원성 조성물들 중 1개 이상을 인간에게 투여하는 것을 포함한다: (i) 메낙트라(MENACTRA), 멘비오(MENVEO), 또는 니멘릭스(NIMENRIX); (ii) 아다셀(ADACEL); (iii) 하브릭스(HAVRIX); (iv) 가다실(GARDASIL); (v) 레페백스(REPEVAX); 또는 이들의 임의의 조합.
예를 들면, 예시적인 실시양태에서, 상기 방법은 하기 조성물들의 조합 중 1개 이상을 인간에게 병용적으로 투여하는 것을 포함한다:
Figure pct00001
Figure pct00002
본원에서 사용되는 바와 같이 "병용" 및 "병용적으로" 및 "동시투여되는" 및 "동시투여"는 2개 이상의 조성물을 인간에게 동시에 또는 1차 투여된 조성물의 효과가 인간에서 여전히 효과적인 기간 이내에 투여하는 것을 말한다. 1차 조성물이, 예를 들면, rLP2086 조성물이고 2차 조성물이 MCV4 조성물인 경우, 2차 조성물의 병용 투여는 1차 조성물의 투여후 1 내지 7일 이내에, 바람직하게는 48 시간 이내에, 보다 바람직하게는 24 시간 이내에 일어날 수 있다. 한 실시양태에서, 병용 투여는 1차 조성물의 투여후 최대 1 시간, 2 시간, 3 시간, 4 시간, 5 시간, 6 시간, 7 시간, 8 시간, 9 시간, 10 시간, 11 시간, 12 시간, 24 시간, 또는 48 시간 이내에 일어난다. 또 다른 실시양태에서, 병용 투여는 1차 조성물의 투여와 동시에 일어난다.
병용 투여에서, 1차 조성물은 특정 시간 이내에 추가의 조성물(들) 전에, 후에 또는 동시에 투여될 수 있다. 예를 들면, 한 실시양태에서, 1차 조성물, 예를 들면, rLP2086 조성물이 먼저 인간에게 투여되고, 2차 조성물, 예를 들면, MCV4 조성물이 rLP2086 조성물 투여후 24 시간 이내에 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 1차 조성물, 예를 들면, MCV4 조성물이 인간에게 먼저 투여되고, 2차 조성물, 예를 들면, rLP2086 조성물이 MCV4 조성물 투여후 24 시간 이내에 인간에게 투여된다.
한 실시양태에서, 추가의 조성물(들)은 특정 시간 이내에 rLP2086 조성물의 1차 용량 전에, 후에 또는 동시에 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 추가의 조성물(들)은 특정 시간 이내에 rLP2086 조성물의 2차 용량 전에, 후에 또는 동시에 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 추가의 조성물(들)은 특정 시간 이내에 rLP2086 조성물의 3차 용량 전에, 후에 또는 동시에 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 추가의 조성물(들)은 특정 시간 이내에 rLP2086 조성물의 추가접종 용량 전에, 후에 또는 동시에 투여된다.
본 발명자들은 놀랍게도, rLP2086 조성물이 나이세리아 메닌지티디스에 대한 면역 반응에 불리하게 영향을 미치지 않으면서 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 또는 14개의 추가의 항원들과 함께 투여될 수 있음을 밝혀내었다. 예를 들면, 실시예 11은 나이세리아 메닌지티디스 균주 및 적어도 10개의 MCV4 및 Tdap 항원들 각각에 대한 실질적인 hSBA 반응이 관찰되었음을 보여준다. 실시예 13은 rLP2086 조성물이, 살균 및/또는 살바이러스 면역 반응을 포함할 수 있는 효과적인 면역 반응을 유도하면서 HPV4, MCV4 및 Tdap 백신들 중에 포함된 14개 항원들과 동시투여될 수 있음을 보여준다.
따라서, 한 양태에서, 본 발명은 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 A 균주, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 C 균주, 나이세리아 메닌지티디스 Y 균주, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 W135 균주, 및 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 균주에 대한 면역 반응을 유도하는 방법에 관한 것이다. 바람직한 실시양태에서, 면역 반응은 살균 면역 반응을 포함한다. 상기 방법은, a) 서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 제 1 지질화 폴리펩티드; 및 b) 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 제 2 지질화 폴리펩티드를 포함하는 나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물, 및 4개의 별개의 별도로 제조된 단백질-캡슐 폴리사카라이드 접합체들의 혼합물을 포함하는 추가의 조성물 효과량을 인간에게 투여하는 것을 포함하며, 이때, 제 1 접합체는 운반 단백질에 접합된 혈청군 W-135의 정제된 나이세리아 메닌지티디스 캡슐 폴리사카라이드를 포함하고, 제 2 접합체는 운반 단백질에 접합된 혈청군 Y의 정제된 나이세리아 메닌지티디스 캡슐 폴리사카라이드를 포함하고, 제 3 접합체는 정제된 운반 단백질에 접합된 혈청군 A의 정제된 나이세리아 메닌지티디스 캡슐 폴리사카라이드를 포함하고, 제 4의 접합체는 운반 단백질에 접합된 혈청군 C의 정제된 나이세리아 메닌지티디스 캡슐 폴리사카라이드를 포함하며, 이때, 상기 운반 단백질은 디프테리아 톡소이드, CRM197 및 파상풍 톡소이드로 이루어진 군에서 선택된다.
한 바람직한 실시양태에서, 상기 방법은 MCV4 조성물을 투여하는 것을 포함하며, 이때 운반 단백질은 디프테리아 톡소이드다. 한 실시양태에서, 상기 방법은 메낙트라 백신을 투여하는 것을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 상기 방법은 운반 단백질이 CRM197인 MCV4 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 한 실시양태에서, 상기 방법은 멘비오 백신을 투여하는 것을 포함한다. 멘비오[수막구균(A, C, Y 및 W-135 군) 올리고사카라이드 디프테리아 CRM197 접합체 백신]는 코리네박테리움 디프테리아( Corynebacterium diphtheriae) CRM197 단백질에 개별적으로 접합된 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 A, C, Y 및 W-135 올리고사카라이드를 함유하는 근육내 주사에 의해 투여된 멸균 액체 백신이다.
또 다른 실시양태에서, 상기 방법은 운반 단백질이 파상풍 톡소이드인 MCV4 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 한 실시양태에서, 상기 방법은 니멘릭스 백신을 투여하는 것을 포함한다. 니멘릭스®(수막구균 폴리사카라이드 A, C, W-135 및 Y 군 접합체 백신)는 운반 단백질로서 파상풍 톡소이드에 각각 커플링된 나이세리아 메닌지티디스 캡슐 폴리사카라이드 A, C, W-135 및 Y를 포함하는 4가 수막구균 폴리사카라이드 접합 백신이다. 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 A 및 C 폴리사카라이드는 아디프산 다이하이드라지드(AH) 스페이서와 접합되고 간접적으로 파상풍 톡소이드에 접합되는 반면, W-135 및 Y 폴리사카라이드는 파상풍 톡소이드에 직접 접합된다.
한 실시양태에서, 상기 방법은, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 A, C, W-135 및/또는 Y에 대한 역가를, 면역원성 조성물의 투여전 인간에서의 역가와 비교하여, 적어도 1배보다 더 많이, 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배 이상 증가시킨다. 또 다른 실시양태에서, 상기 방법은, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 A, C, W-135 및 Y에 대한 역가를, 면역원성 조성물의 투여전 인간에서의 역가와 비교하여, 적어도 1배보다 더 많이, 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배 이상 증가시킨다. 또 다른 실시양태에서, 상기 방법은, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 A, C, W-135 및 Y 및 혈청군 B에 대한 역가를, 면역원성 조성물의 투여전 인간에서의 역가와 비교하여, 적어도 1배보다 더 많이, 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배 이상 증가시킨다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 인간에서 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 균주, 및 파상풍, 디프테리아 및 백일해에 대한 면역 반응을 유도하는 방법에 관한 것이다. 바람직한 실시양태에서, 상기 면역 반응은 살균 면역 반응을 포함한다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 면역 반응은 살바이러스 면역 반응을 포함한다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 면역 반응은 살균 및 살바이러스 면역 반응을 포함한다. 상기 방법은, a) 서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 제 1 지질화 폴리펩티드; 및 b) 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 제 2 지질화 폴리펩티드를 포함하는 나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물; 및 바람직하게는 인산알루미늄 상에 흡착된, 파상풍 및 디프테리아 톡소이드 및 백일해 항원을 포함하는 추가의 조성물 효과량을 인간에게 투여하는 것을 포함한다. 한 실시양태에서, 상기 방법은 아다셀 백신을 투여하는 것을 포함한다.
한 실시양태에서, 상기 방법은, 파상풍, 디프테리아 및/또는 백일해에 대한 역가를, 면역원성 조성물의 투여전 인간에서의 역가와 비교하여, 적어도 1배보다 더 많이, 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배 이상 증가시킨다. 또 다른 실시양태에서, 상기 방법은, 파상풍, 디프테리아 및 백일해에 대한 역가를, 면역원성 조성물의 투여전 인간에서의 역가와 비교하여, 적어도 1배보다 더 많이, 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배 이상 증가시킨다. 또 다른 실시양태에서, 상기 방법은, 파상풍, 디프테리아 및 백일해, 및 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 A, C, W-135 및 Y 및 혈청군 B에 대한 역가를, 면역원성 조성물의 투여전 인간에서의 역가와 비교하여, 적어도 1배보다 더 많이, 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배 이상 증가시킨다.
한 양태에서, 본 발명은 인간에서 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 균주, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 A, C, Y 및 W135 균주, 및 파상풍, 디프테리아 및 백일해에 대한 면역 반응을 유도하는 방법에 관한 것이다. 바람직한 실시양태에서, 상기 면역 반응은 살균 면역 반응을 포함한다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 면역 반응은 살바이러스 면역 반응을 포함한다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 면역 반응은 살균 및 살바이러스 면역 반응을 포함한다. 한 실시양태에서, 상기 방법은 rLP2086 조성물, 메낙트라 및 아다셀 백신을 병용 투여하는 것을 포함한다.
한 양태에서, 본 발명은 인간에서 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 균주, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 A, C, Y 및 W135 균주, 및 파상풍, 디프테리아 및 백일해, 및 또한 인유두종바이러스에 대한 면역 반응을 유도하는 방법에 관한 것이다. 바람직한 실시양태에서, 상기 면역 반응은 살균 면역 반응을 포함한다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 면역 반응은 살바이러스 면역 반응을 포함한다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 면역 반응은 살균 및 살바이러스 면역 반응을 포함한다. 한 실시양태에서, 상기 방법은 rLP2086 조성물, 메낙트라 및 아다셀 백신을 병용 투여하는 것을 포함한다. 한 실시양태에서, 상기 방법은 rLP2086 조성물, 메낙트라, 아다셀 및 가다실 백신을 병용 투여하는 것을 포함한다.
본 발명자들은 놀랍게도, 나이세리아 메닌지티디스에 대한 면역원성 조성물이 나이세리아 메닌지티디스에 대한 살균 반응에 불리하게 영향을 미치지 않으면서 인유두종바이러스(HPV)에 대한 면역원성 조성물과 함께 투여될 수 있음을 밝혀내었다. 실시예 7 및 실시예 8에서 설명되어 있는 바와 같이, 나이세리아 메닌지티디스 시험 균주에 대한 실질적인 hSBA 반응이 나이세리아 메닌지티디스에 대한 면역원성 조성물 및 가다실을 투여받은 인간에서 및 나이세리아 메닌지티디스에 대한 면역원성 조성물 및 식염수를 투여받은 인간에서 관찰되었다. 나이세리아 메닌지티디스에 대한 면역원성 조성물의 3차 용량의 약 1개월후에 hSBA 반응에서 추가의 증가가 관찰되었다.
또한, 본 발명자들은 놀랍게도, 조성물의 투여전 인간에서의 면역 반응에 비해, 나이세리아 메닌지티디스 및 HPV 둘 다에 대한 강한 면역 반응이 나이세리아 메닌지티디스에 대한 면역원성 조성물 및 HPV에 대한 면역원성 조성물 둘 다를 투여한 후 인간에서 야기되었음을 밝혀내었다. 실시예 7 및 실시예 8에서 설명되어 있는 바와 같이, 면역원성 조성물의 투여전 인간에서의 역가에 비해, 나이세리아 메닌지티디스에 대한 면역원성 조성물 및 가다실의 투여후 인간에서 HPV에 대한 역가가 증가하였다. HPV에 대한 역가의 증가는 적어도 1배보다 크거나, 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배 이상이었다.
따라서, 한 실시양태에서, 본 발명의 방법은 인간에서 나이세리아 메닌지티디스에 대한 면역 반응을 유도하는 것을 포함하며, 이때 상기 방법은 인유두종바이러스에 대한 면역원성 조성물을 인간에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 바람직하게, 상기 면역 반응은 나이세리아 메닌지티디스에 대해 살균성이다. 바람직한 실시양태에서, 상기 방법은 인유두종바이러스 제 6, 11, 16 및 18 형 중 적어도 하나, 또는 그의 임의의 조합에 대한 면역 반응을 유도하는 것을 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, HPV에 대한 면역원성 조성물은 나이세리아 메닌지티디스에 대한 상기 조성물을 투여한지 24 시간 이내에 인간에게 투여된다.
한 실시양태에서, 상기 방법은 인간에서 나이세리아 메닌지티디스에 대한 면역 반응을 유도하는 것을 포함하며, 이때 상기 방법은 HPV에 대한 면역원성 조성물을 인간에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 바람직하게, 상기 면역 반응은 나이세리아 메닌지티디스에 대해 살균성이다. 한 실시양태에서, 상기 방법은 HPV에 대한 면역 반응을 유도하는 것을 추가로 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 상기 방법은 인유두종바이러스 제 6, 11, 16 및 18 형 중 적어도 하나, 또는 그의 임의의 조합에 대한 면역 반응을 유도하는 것을 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 인유두종바이러스에 대한 면역원성 조성물은 나이세리아 메닌지티디스에 대한 상기 조성물을 투여한지 24 시간 이내에 인간에게 투여된다.
또 다른 양태에서, 본 발명자들은 놀랍게도, 나이세리아 메닌지티디스에 대한 면역원성 조성물이 나이세리아 메닌지티디스에 대한 살균 반응에 불리하게 영향을 미치지 않으면서 디프테리아, 파상풍, 무세포성 백일해 및 불활성화 소아마비 바이러스(dTaP)에 대한 면역원성 조성물과 함께 투여될 수 있음을 밝혀내었다. 실시예 4에서 설명된 바와 같이, 나이세리아 메닌지티디스 시험 균주에 대한 실질적인 hSBA 반응이 나이세리아 메닌지티디스에 대한 면역원성 조성물 및 레페백스를 투여받은 인간에서 관찰되었다. 나이세리아 메닌지티디스에 대한 면역원성 조성물의 3차 용량 투여후 약 1개월후에 hSBA에 추가의 증가가 관찰되었다.
또한, 본 발명자들은 놀랍게도, 조성물의 투여전 인간에서의 면역 반응과 비교하여, 나이세리아 메닌지티디스에 대한 면역원성 조성물 및 dTaP에 대한 면역원성 조성물 둘 다의 투여후 인간에서 나이세리아 메닌지티디스 및 dTaP 둘 다에 대한 강한 면역 반응이 야기되었음을 밝혀내었다. 실시예 4에서 설명된 바와 같이, 면역원성 조성물의 투여전 인간에서의 역가와 비교하여, 나이세리아 메닌지티디스에 대한 면역원성 조성물 및 레페백스의 투여후 인간에서 dTaP에 대한 역가가 증가하였다. dTaP에 대한 역가의 증가는 적어도 1배보다 크거나, 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배 이상이었다.
방법 및 투여
한 양태에서, 본 발명은 인간에서 면역 반응을 유도하는 방법에 관한 것이다. 바람직한 실시양태에서, 면역 반응은 살균 면역 반응을 포함한다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 면역 반응은 살바이러스 면역 반응을 포함한다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 면역 반응은 살균 및 살바이러스 면역 반응을 포함한다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 면역 반응은 세균 및/또는 바이러스를 불활성화시키는 것을 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 인간을 백신접종하는 방법에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 상기 방법은 전술한 조성물의 적어도 1개 용량을 인간에게 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 상기 방법은 전술한 조성물의 적어도 1차 용량 및 2차 용량을 인간에게 투여하는 것을 포함한다.
놀랍게도, 본 발명자들은 rLP2086 조성물의 2개-용량 스케줄이 인간에서 다양한 이종 서브패밀리 A 및 다양한 이종 서브패밀리 B 균주들에 대해 살균 역가를 유도하였음을 밝혀내었다. 예를 들면, ≥1:8의 hSBA 역가를 갖는 인간의 비율은 전술한 조성물의 2개-용량 스케줄후 LP2086(fHBP) A22 또는 LP2086(fHBP) A56을 발현하는 SBA 시험 균주에 대해 90% 이상이었다(실시예 1 참조).
한 실시양태에서, 2차 용량은 1차 용량후 적어도 20, 30, 50, 60, 100, 120, 160, 170 또는 180일 후에, 및 1차 용량후 최대 250, 210, 200 또는 190일 후에 투여된다. 범위를 정의하기 위해 임의의 최소값이 본원에 기술된 임의의 최대값과 조합될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 2차 용량은 1차 용량의 약 30 일후에 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 2차 용량은, 예를 들면, 0, 2 개월 면역화 스케줄에서와 같이, 1차 용량의 약 60 일후에 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 2차 용량은, 예를 들면, 0, 6 개월 면역화 스케줄에서와 같이, 1차 용량의 약 180 일후에 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 2차 용량은, 예를 들면, 2, 6개월 면역화 스케줄에서와 같이, 1차 용량의 약 120 일후에 투여된다.
한 실시양태에서, 상기 방법은 인간에게 조성물의 2개 용량 및 최대 2개 용량을 투여하는 것을 포함한다. 한 실시양태에서, 2개 용량은 1차 용량후 약 6 개월의 기간 이내에 투여된다. 한 실시양태에서, 상기 방법은 인간에게 추가접종의 투여를 추가로 포함하지 않는다. 본원에서 사용된 바와 같은 "추가접종(booster)"은 인간에게 조성물의 추가 투여를 말한다. 조성물의 최대 2개 용량을 인간에게 투여하는 것이 유리할 수 있다. 상기 이점으로는, 예를 들면, 인간이 완전 투여 스케줄에 순응하는 것을 촉진하는 것 및 스케줄의 비용-효과를 촉진하는 것이 포함된다.
한 실시양태에서, 1차 용량 및 2차 용량은 1차 용량 후, 약 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190 또는 200 일, 및 최대 400, 390, 380, 370, 365, 350, 340, 330, 320, 310, 300, 290, 280, 270, 260, 250, 240, 230, 220, 210 또는 200 일의 기간에 걸쳐 인간에게 투여된다. 범위를 정의하기 위해 임의의 최소값이 본원에 기술된 임의의 최대값과 조합될 수 있다.
한 실시양태에서, 1차 용량 및 2차 용량은 약 30 일의 기간에 걸쳐 인간에게 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 1차 용량 및 2차 용량은 약 60 일의 기간에 걸쳐 인간에게 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 1차 용량 및 2차 용량은 약 180 일의 기간에 걸쳐 인간에게 투여된다.
3개 용량
본 발명자들은 또한 놀랍게도, rLP2086 조성물의 3개-용량 스케줄이 2개-용량 스케줄보다 더 많은 비율의 인간에서 이종 LP2086 (fHBP) 서브패밀리 B 균주를 발현하는 균주에 대해 더 광범위한 살균 역가를 유도하였음을 밝혀내었다. 예를 들면, ≥1:8의 hSBA 역가를 갖는 인간의 비율은 전술한 조성물의 2개-용량 스케줄 후에 SBA 시험 균주 LP20869 (fHBP) B24 및 LP2086 (fHBP) B44에 대해 65% 이상이었다. ≥1:8의 hSBA 역가를 갖는 인간의 비율은 전술한 조성물의 3개-용량 스케줄 후에 SBA 시험 균주 B24 및 B44에 대해 86% 이상이었다(실시예 1 참조).
따라서, 한 실시양태에서, 조성물의 3개-용량 스케줄은 2개-용량 스케줄보다 더 많은 비율의 인간에서 제 1 및/또는 제 2 폴리펩티드에 이종인 LP2086 (fHBP)을 발현하는 다중 균주에 대해 살균 역가를 유도한다.
한 실시양태에서, 상기 방법은 인간에게 3개 용량의 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 상기 방법은 3개 이하의 용량의 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 한 실시양태에서, 3개 용량은 1차 용량후 약 6 개월의 기간 이내에 투여된다. 한 실시양태에서, 상기 방법은 3차 용량후에 인간에게 추가접종 용량의 투여를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 상기 방법은 3차 용량후 인간에게 추가접종 용량의 투여를 포함하지 않는다. 또 다른 실시양태에서, 상기 방법은 인간에게 4차 또는 추가접종 용량의 조성물을 투여하는 것을 추가로 포함하지 않는다. 또 다른 실시양태에서, 약 6 개월의 기간내에 3개 이하의 용량이 인간에게 투여된다.
예시적인 실시양태에서, 예를 들면, 0, 1, 6 개월 면역화 스케줄에서와 같이, 2차 용량은 1차 용량 약 30 일후에 투여되고, 3차 용량은 2차 용량의 약 150 일후에 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 예를 들면, 0, 2, 6 개월 면역화 스케줄에서와 같이, 2차 용량은 1차 용량의 약 60 일후에 투여되고, 3차 용량은 2차 용량의 약 120 일후에 투여된다.
한 실시양태에서, 1차 용량, 2차 용량 및 3차 용량은 약 150, 160, 170 또는 180 일, 및 최대 240, 210, 200 또는 190 일의 기간에 걸쳐 인간에게 투여된다. 범위를 정의하기 위해 임의의 최소값이 본원에 기술된 임의의 최대값과 조합될 수 있다. 바람직하게, 1차 용량, 2차 용량 및 3차 용량은 약 180 일 또는 6 개월의 기간에 걸쳐 인간에게 투여된다. 예를 들면, 2차 용량은 1차 용량 약 60 일후에 인간에게 투여될 수 있고, 3차 용량은 2차 용량 약 120 일후에 인간에게 투여될 수 있다. 따라서, 예시적인 투여 스케줄은 약 0, 2 및 6 개월에 인간에게 용량을 투여하는 것을 포함한다.
전술한 바와 같이, 다중 용량의 면역원성 조성물이 인간에게 투여될 수 있으며, 각 용량 사이의 일수는 달라질 수 있다. 상기 방법의 이점으로는, 예를 들면, 인간이 투여 스케줄에 순응하는 순응성이 포함된다.
실시예
하기 실시예는 본 발명의 실시양태들을 예시한다. 본원에서 달리 언급되지 않는 한, 하기 실시예들에서는, 0.5 mL 용량당 서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 제 1 지질화 폴리펩티드 60 ㎍, 0.5 mL 용량당 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 제 2 지질화 폴리펩티드 60 ㎍, 제 1 폴리펩티드에 대해 2.8 몰비의 폴리솔베이트-80, 제 2 폴리펩티드에 대해 2.8 몰비의 폴리솔베이트-80, 0.5 mg Al3 +/조성물 ml, 10 mM의 히스티딘, 및 150 mM의 염화나트륨을 포함하는 조성물의 바람직한 예시적인 실시양태인 연구용 2가 재조합 백신(rLP2086)이 언급된다. 보다 특히, 상기 연구용 2가 재조합 rLP2086 백신은 (a) 서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 제 1 지질화 폴리펩티드 60 ㎍; (b) 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 제 2 지질화 폴리펩티드 60 ㎍; (c) 18 ㎍ 폴리솔베이트-80; (d) 250 ㎍ 알루미늄; (e) 780 ㎍ 히스티딘, 및 (f) 4380 ㎍ 염화나트륨을 포함한다. 각각의 용량은 0.5 mL이었다.
실시예 1: 11 내지 18세의 건강한 대상자에서 2개 또는 3개 용량의 요법으로 투여시 건강한 청소년에서 연구용 수막구균 혈청군 B 2가 ( MnB ) rLP2086 백신의 안전성, 내약성 및 면역원성
배경: 연구용 2가 재조합 백신(rLP2086)의 안전성, 내약성 및 면역원성을, 2 또는 3회 예방접종을 포함하는 5개 용량 요법을 이용하여 11 내지 18세의 건강한 청소년에서 연구하였다.
백신은 60 ㎍의 각각의 정제된 서브패밀리 A 및 정제된 서브패밀리 B rLP2086 단백질, 2.8 몰비의 폴리솔베이트-80 및 AlPO4로서 Al3 + 0.25 mg, 10 mM의 히스티딘-완충된 식염수(pH 6.0)를 함유하도록 배합된 0.5 ml-용량이다.
활성 대조군으로 사용될 수 있는, MnB에 대한 알려진 입증된 안전하고 면역원성이며 효과적인 백신이 없기 때문에 식염수를 위약으로 사용하였다. 표준 식염수 용액은 0.5 ml 용량에 0.9% 염화나트륨을 포함한다.
방법: 2상, 무작위, 위약-통제, 단일-맹검 연구 수반 백신접종에서 모든 대상자들은 제 0, 1, 2 및 6 개월에 방문한다. 맹검시험을 위해, 백신이 일정이 잡히지 않았을 때 식염수 대조군을 제공하였다. LP2086 (fHBP) fHBP 변이체 A22, A56, B24 및 B44를 발현하는 4개 MnB 시험 균주(즉, 1차 평가변수(primary endpoint) 분석에서 4개의 "주 hSBA 시험 균주")를 사용하여 인간 보체를 사용한 혈청 살균 분석(hSBA)을 수행하였으며, 상기 균주들은 모두 백신내의 변이체들과 상이하였다. 원하지 않는 부작용(AE), 요구된 국소 및 전신 반응, 및 해열 용도를 평가하였다.
양측 95% 신뢰 구간(CI) 하에 각각의 채혈 시점에서 각각의 주요 균주에 대해 기하 평균 hSBA 역가를 산출하였다. 기하 평균 배수 증가는 95% CI 하에 산출하였다.
반응자는 hSBA 분석의 정량하한(LLOQ)과 같거나 그보다 높은 hSBA 역가를 갖는 대상자로 정의되었다. 1차 평가변수 분석에서 4개의 hSBA 시험 균주 각각에 대한 LLOQ는 1:8과 동등한 hSBA 역가이었다. 각 주요 시험 균주에 대한 검출 한계(LOD)는 1:4와 동등한 역가(수막구균 질환에 대한 보호와 상관되는 것으로 일반적으로 간주됨)이었다.
결과: 마지막 백신 용량 1개월 후에, 대상자의 86 내지 99%(3개 용량 후; P<0.001) 및 대상자의 69 내지 100%(2개 용량 후)가 각각의 MnB 시험 균주에 대해 ≥8의 hSBA 역가를 나타내었다. 연구 용량 1 후에, rLP2086 수용자의 19 내지 27%(1.1 내지 4.3% 심각) 및 23 내지 27%(0.0 내지 1.0% 심각)가 각각, 군별로, 발적 및 종창을 경험하였다. 주사 부위 통증이 연구 용량 1 후에 가장 공통적인 국소 반응이었다(7.6 내지 13.1% 심각). 2가 rLP2086 백신의 1차 연구 용량후 ≥38 ℃의 발열이, 식염수 수용자의 2.1%와 비교하여 군 당 3.3 내지 6.5%에서 경험되었다. 국소 및 전신 반응은 일반적으로 후속 용량 이후보다 용량 1 이후에 더 빈번하였다. 1712명 대상자중 43명(2.5%)이 51가지의 심한 AE를 보고하였으며; 두 사례가 관련된 것으로 간주되었다(어지러움, 오한 및 두통의 1개 사례 및 발열 및 구토의 1개 사례). 사망은 보고되지 않았다.
[표 1]
2가 rLP2086의 마지막 용량 1개월후 각각의 주요 균주 1에 대해 ≥8*의 hSBA 역가를 달성한 평가가능한 연구 대상자들의 비율에 대한 통계 분석 - 평가가능한 면역원성 모집단
Figure pct00003
* 모든 균주에 대한 정량하한 = 8.
† ≥8의 hSBA 역가를 갖는 대상자 수.
‡ 유효한 hSBA 역가를 갖는 대상자 수.
§ 2항 분포에 기초한 단측 정확 검정을 이용한 P<0.001; P<0.125의 값이 유의적인 것으로 간주됨.
¶ 관찰된 대상자 비율에 근거한 정확성 양측 신뢰 구간(클로퍼(Clopper) 및 피어선(Pearson)).
결론: 2가 rLP2086은 허용되는 안전성 프로필을 나타내었다. 5개 용량 요법 모두 높은 비율의 대상자들에서 4개 시험 균주 모두에 대해 ≥8의 hSBA 역가를 제공하였다. 2개 용량에 비해 3개 용량 후 일부 시험 균주에 대한 더 높은 비율은, 3개 용량이 다양한 MnB 임상 균주에 대해 가장 광범위한 보호를 제공할 수 있음을 시사한다. 세계적인 3상 임상 시험이 2가 rLP2086 백신을 사용하여 진행중이다.
본 연구의 목표 중 하나는, LP2086 서브패밀리 A 및 B 단백질을 발현하는 MnB 균주를 사용하여 수행된 hSBA에 의해 측정시, 1 군 대상자들(무작위배정된 대로 0-, 1- 및 6-개월 스케줄) 중에서 및 2 군 대상자들(무작위배정된 대로 0-, 2- 및 6-개월 스케줄) 중에서, 2가 rLP2086으로 3차 백신접종한지 1개월 후에, 면역 반응을 평가하는 것이었다. 면역원성 분석을 위한 평가변수는 4개 주요 MnB 시험 균주(A22, A56, B24 및 B44) 각각에 대해 7개월에(또는 2가 rLP2086의 3차 용량 1개월 후에) ≥LLOQ의 hSBA를 달성한 1 군 및 2 군 중의 대상자들의 비율이었다. LLOQ는 4개 주요 MnB 시험 균주에 대해 1:8이었다.
평가가능한 면역원성 모집단의 경우, 2가 rLP2086의 3개 용량후 ≥1:8의 hSBA 역가를 달성한 1 군 중의 대상자 비율은 A22에 대해 91.7%, A56에 대해 99.4%, B24에 대해 89% 및 B44에 대해 88.5%이었다(상기 표 1 참조). 97.5% CI의 하한치는 모든 균주에 대해 >50%이었으므로(균주 A22, A56, B24 및 B44에 대해, 각각 87.8%, p<0.001; 97.8%, p<0.001; 84.7%, p<0.001; 및 84.1%, p<0.001), 연구 목표는 1 군의 대상자들에 대해 충족되었다.
2 군의 경우, 2가 rLP2086의 3개 용량후 ≥1:8의 hSBA 역가를 달성한 대상자들의 비율은 A22에 대해 95.0%, A56에 대해 98.9%, B24에 대해 88.4% 및 B44에 대해 86.1%이었다(상기 표 1 참조). 97.5% CI의 하한치는 모든 균주에 대해 >50%이었으므로(균주 A22, A56, B24 및 B44에 대해, 각각 91.7%, p<0.001; 96.9%, p<0.001; 84.1%, p<0.001; 및 81.4%, p<0.001), 연구 목표는 2 군의 대상자들에 대해 충족되었다.
2차적인 목표는, LP2086 서브패밀리 A 및 B 단백질 1을 발현하는 MnB 균주를 사용하여 수행된 hSBA에 의해 측정시, 3 군의 대상자들(무작위배정된 대로 0- 및 6-개월 스케줄) 중에서, 2가 rLP2086의 2차 용량 1개월 후에 면역 반응을 평가하는 것이었다. 상기 2차적인 목표는 4개 주요 MnB 시험 균주 각각에 대해 7개월에(또는 2가 rLP2086의 2차 용량 1개월 후에) ≥LLOQ(1:8)의 hSBA를 달성한 3 군 중의 대상자들의 비율이었다.
2가 rLP2086의 2개 용량후 ≥1:8의 hSBA 역가를 달성한 3 군 중의 대상자들의 비율이 모든 균주에 대해 >50%의 97.5% CI의 하한치(균주 A22, A56, B24 및 B44에 대해, 각각 90.0%, p<0.001; 96.2%, p<0.001; 76.0%, p<0.001; 및 72.2%, p<0.001) 하에, 주요 MnB 시험 균주들에 대해 93.5%, 98.4%, 81.1% 및 77.5%이었으므로, 상기 2차적인 목표도 또한 충족되었다(상기 표 1 참조).
또 다른 2차적인 목표는 1 군 내지 5 군 중의 대상자들에 대해 각 채혈 시점에서 4개의 주요 MnB 시험 균주들 각각에 대해 ≥LLOQ의 hSBA를 갖는 대상자들의 비율이었다. 4개 주요 hSBA 시험 균주들 각각에 대한 LLOQ는 1:8의 역가이었다. 평가가능한 면역원성 모집단에서 연구 시간별 ≥1:8의 hSBA를 갖는 대상자들의 비율은 상기 표 1에 나타내었다.
2가 rLP2086의 1개 용량 후 ≥1:8의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율(주사 3의 1개월 후 5 군[2- 및 6-개월 스케줄])은 A22에 대해 55.9%, A56에 대해 67.6%, B24에 대해 56.9% 및 B44에 대해 23.8%이었다.
2가 rLP2086의 2개 용량 1개월 후 ≥1:8의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율은 서브패밀리 A 균주의 경우 74.6 내지 100% 범위였고, 서브패밀리 B 균주의 경우 54.0 내지 81.1%의 범위였다. 3개 용량후, 상기 비율은 증가되었으며, 서브패밀리 A 및 B 균주에 대해 각각 91.7 내지 99.4% 및 86.1 내지 89.0%의 범위였다.
실시예 2: 인간 보체를 사용한 혈청 살균 분석( hSBA )
인간 혈류로부터 MnB 제거는 주로 보체-매개 용균에 의해 달성되고, 온전한(intact) 보체 시스템은 MnB에 의해 야기된 감염에 대한 내성에 중요하다. MnB의 생체내 보체-매개 용균은, 기능 혈청학적 분석인, 인간 보체를 사용한 혈청 살균 분석(hSBA)에 의해 시험관내에서 모방되어, 수막구균 질환에 대한 보호를 대신하는 것으로 밝혀졌다. 즉, 인간 보체를 사용한 혈청 살균 분석(hSBA)에서 세균 사멸에 대한 설명은 수막구균 질환에 대한 보호와 관련된다. 백신에 의해 유도된 면역은 4개 MnB 균주(fHBP 변이체 A22, A56, B24 및 B44)에 대한 hSBA를 이용하여 측정된다.
4개의 주요 MnB 시험 균주를, 평가변수 측정을 위해 실시예들에서 기술된 hSBA에 사용하였다. 즉, hSBA 면역원성 평가변수를 이용하여 백신 효능을 평가하기 위해 상기 균주들을 사용하였다. 상기 시험 균주들은 미국 및 유럽에서 퍼지고 있는 질환 분리균의 >90%를 차지하는 6개 fHBP 계통발생 혈청군 중 4개에 해당한다.
2014년 10월 29일자로, 트루멘바(TRUMENBA)®(2가 재조합 지단백질 2086[rLP2086])가 10 내지 25세 연령의 개체들에서 MnB에 의해 야기된 침습성 수막구균 질환을 예방하기 위해 미국에서 승인되었다. 트루멘바®의 승인은, 미국 및 유럽에서 IMD 균주들에 해당하는 4개의 혈청군 B 균주에 대한 혈청 살균 활성에 의해 측정되는 바와 같은 면역 반응의 입증에 근거하였다.
Figure pct00004
침습성 질환 분리균으로부터 4개의 주요 MnB 시험 균주를 선별하기 위해, 시험관내 LP2086 표면 발현의 모집단 분포를 고려한 접근방법을 이용하였다. 또한, hSBA 시험 균주는, 수막구균 질환에 대한 위험이 있는 집단이 대부분의 균주에 대한 존재하지 않거나 낮은 기준선 살균 활성을 특징으로 하기 때문에, 낮은 기준선 hSBA 양성을 나타내어야 했다. 또한, 4개 주요 MnB 시험 균주들 각각은 백신내 LP2086 변이체와 상이한 LP2086 변이체를 발현하므로, 그 집단에서 퍼지고 있는 침습성 수막구균 질환(IMD) 균주에 대한 기능적 면역원성 및 효능의 객관적 평가를 가능하게 한다.
hSBA는 보체-매개 살균 활성을 개시할 수 있는 혈청내 항-수막구균 혈청군 B(MnB) 항체의 양을 측정한다. 간략하게, 시험 혈청은 2배 단계로 연속-희석되어 96-웰 분석 플레이트에 첨가되었다. MnB SBA 시험 균주 및 인간 혈청 보체를 첨가하여, 살균 반응을 개시하였다. 37 ℃에서 30 내지 60 분동안(SBA 시험 균주에 따라 다름; T30으로 지칭됨) 분석 플레이트를 배양한 후에, 상기 배양에서 생존하는 세균을 함유하는 반응 혼합물을 희석시키고 마이크로필터 플레이트로 옮겼다. 밤새 배양한 후에, 콜로니-형성 단위(CFU)로 나타낸 생존 세균을 이뮤노스팟 어낼라이저(Immunospot Analyzer)를 사용하여 증폭시켰다. 미가공(raw) CFU 데이터는 전자공학적으로 기록되고 hSBA 역가를 산출하는 데이터 분석 응용프로그램으로 전달된다. hSBA 역가는 T30 CFU 값(즉, 시험 혈청을 제외하고 모든 분석 성분들을 함유하는 분석 웰에서 배양후 생존하는 세균의 수; 100% 세균 생존율)에 비해 MnB 세균의 적어도 50% 감소(50% 세균 생존율)를 야기하는 시험 혈청의 최고 2배 희석률의 역수이다. 역가는 단계 역가로서, 즉 1:4, 1:8, 1:16 등으로 기록될 수 있다. 혈청 샘플들은 동일 분석법으로 2개의 개별적인 반복 측정에 의해 시험하였다. 반복 측정치가 동일하지 않은 샘플들에 대해 기록된 최종 역가는, 시스템 적합성 및 샘플 적합성 기준(예를 들면, 반복 역가가 하나의 2배 희석률내에서 일치해야 한다)이 충족될 때 2개의 반복 측정치 중 더 낮은 값이다.
hSBA 분석은 둘베코(Dulbecco)의 포스페이트-완충 식염수에 시험 혈청을 연속 희석한 후에 수행하였다. 세균(통상적으로 2000 콜로니-형성 단위) 및 인간 혈청 보체(20 중량% 최종 농도)를 96-웰 플레이트내 연속 희석된 혈청에 첨가하고, 소형-반경 회전 교반기에서 700 rpm으로 37 ℃에서 30 내지 40 분동안(hSBA 시험 혈청에 따라) 배양하였다. 배양 후에, 반응 혼합물 일부를 마이크로필터 플레이트로 옮겼다. 밤새 배양한 후, 생존 세균을 이뮤노스팟 어낼라이저(셀룰러 테크놀로지 리미티드(Cellular Technology Limited); 셰이커하이츠, OH, USA)로 계수하고, hSBA 역가를 SAS(버전 9.2)로 분석하였다. hSBA 역가는 시험 혈청에 적용되지 않은 대조군에 비해 세균(즉, hSBA 반응 종료시 생존하는 세균)의 50% 감소를 야기한 보간 시험 혈청 희석률의 역수로서 산출되었다. 프로토콜에 따라 hSBA는, 실시예 1의 표 1에 열거된 균주들을 사용한 분석들의 정량화시 확립된 바와 같은 hSBA 분석의 정량하한 이상인 hSBA 역가를 기준으로 수행하였다.
인간 혈청은 SBA에 대한 보체 공급원이다. 그러나, hSBA 역가는 사용되는 인간 보체 몫에 따라 달라질 수 있다. 따라서, 인간 보체는 바람직하게는 hSBA에서 일관된 성능을 보장하도록 철저한 검사 및 정성분석을 통해 제어된다. hSBA를 위해, 인간 혈청 보체는 다수의 정상적인 건강한 성인 인간으로부터 수집되거나 또는 개개 공여자로부터 이용될 수 있다(즉, 수집되지 않음).
실시예 3: 폴리솔베이트-80
약물 제품 배합을 위해 3개 파라미터를 최적화하였다: pH, 알루미늄 농도 및 폴리솔베이트 80(PS-80) 대 단백질 몰비. 0.5 ml의 총 부피를 갖는 조성물의 용량에서, 알루미늄에 대한 최적 단백질 결합은 약 6.0의 pH 및 인산알루미늄(AlPO4)으로서 알루미늄의 0.5 mg/ml 농도(용량당 0.25 mg 알루미늄과 등가임)에서 달성되었다. PS-80 대 단백질 몰비는 시험관내 효능과 관련하여 배합물을 안정화시키기 위해 2.8 ± 2.4로 유지시켰다. 폴리솔베이트 80(PS-80)은 2.8의 목표 PS-80 대 단백질 몰비를 달성하도록 약물 물질에 첨가되었다. 그러므로, PS-80은 바람직하게는 약물 생성물 배합 시에는 첨가되지 않는다.
실시예 4
건강한 청소년에서 2가 rLP2086 백신과 병용 투여된 레페백스 ®의 면역원성 및 안정성에 대한 무작위, 위약-통제 2상 연구
배경/목적: 청소년에서 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B(MnB) 질환을 예방하기 위해 개발되고 있는, 연구용 2가 rLP2086 백신을, 상기 집단에서 현재 사용되는 dTaP-불활성화 소아마비 백신(미국 특허 제 7479283 호, WO1990/013313 호, 및 EP1666057 B1 호, 및 영국 마케팅 허가증 PL06745/0121)인 레페백스®의 병용 투여에 의해 평가하였다.
방법: 레페백스 + rLP2086 또는 레페백스 + 식염수에 1:1로 무작위배정된 청소년들을 제 0, 2 및 6 개월에 백신접종하였다. 초기 백신접종 30 일후에 9개의 레페백스 항원들에 대해 사전지정된 항체 수준을 달성한 대상자들의 비율을 측정하였다. 4개의 MnB 시험 균주에 대한 면역 반응(hSBA)을 백신접종2 및 3의 30 일후에 측정하였다. 부작용(AE) 및 국소/전신 반응을 평가하였다.
레페백스(사노피 파스쳐(Sanofi Pasteur) MSD 리미티드)는, 0.5 ml 용량 당 인산알루미늄(1.5 mg(0.33 mg 알루미늄)) 상에 흡착된, 디프테리아 톡소이드(2 IU 이상), 파상풍 톡소이드(20 IU 이상), 백일해 항원(백일해 톡소이드(2.5 ㎍)), 섬유상 헤마글루티닌(5 ㎍), 퍼탁틴(3 ㎍), 및 핌브리아 제 2 및 3 형(5 ㎍), 제 1 형 소아마비바이러스(불활성화)(40 D 항원 단위), 제 2 형 소아마비바이러스(불활성화)(8 D 항원 단위), 제 3 형 소아마비바이러스(불활성화)(32 D 항원 단위)를 함유하는 복합 저-용량 디프테리아, 파상풍, 무세포성 백일해 및 불활성화 소아마비 바이러스 백신이다.
레페백스의 디프테리아, 파상풍 및 백일해 성분들(디프테리아 톡소이드, 파상풍 톡소이드, 백일해 톡소이드, 퍼탁틴, 핌브리아 제 2 및 3 형 및 섬유상 헤마글루티닌)에 대한 면역 반응은 다중 루미넥스(LUMINEX) 분석법을 사용하여 평가하였다. 제 1, 2 및 3 형 소아마비바이러스에 대한 면역 반응은 바이러스 중화 분석법으로 측정하였다. 2개 군 모두에서 모든 대상자들로부터 수득된 혈청을 상기 분석법에 사용하였다.
2가 rLP2086에 대한 면역 반응의 평가를 위해, 기능성 항체들을 기술된 4개의 주요 MnB 시험 균주를 사용한 hSBA에서 분석하였다. 4개의 주요 MnB hSBA 시험 균주(A22, A56, B44 및 B24), 즉 LP2086 서브패밀리 A를 발현하는 2개, 및 LP2086 서브패밀리 B 변이체를 발현하는 다른 2개를 선택하였다. 이들 4개의 주요 hSBA 시험 균주(6개 fHBP 계통발생적 혈청군들 중 4개로부터, 및 미국 및 유럽에서 퍼지고 있는 질환 분리균의 >90%에 해당)를 상기 연구에서 1차 면역원성 평가변수의 측정을 위해 사용하였다. 또한, A22, B24 및 B44 변이체는 유럽에서 유행병학적으로 관련되는 변이체들인 반면, 미국에서는 A22 및 B24가 질환 야기 MnB 균주들에서 발현된 가장 우세하게 발견되는 변이체들이다. MnB hSBA는 1차 및 2차 분석에 사용된 샘플들의 시험 전에 승인되었다.
2개 군 모두에서 무작위로 선택된 대상자들의 50%로부터의 혈청 샘플은 A22 및B24를 사용하여 hSBA가 수행되었고, 나머지 50%는 A56 및 B44를 사용하여 시험되었다. 상기 시험들은 백신접종1 전에, 백신접종2 후에, 및 백신접종3 후에 수집된 혈액 샘플들에 수행되었다.
레페백스의 면역원성은, 레페백스에 대한 인가의 근간을 이룬 청소년에서의 주요 3상 임상 시험에서 정의된 각 항원에 대한 사전지정된 기준을 이용하여 평가된다. 레페백스 병용 항원들은 디프테리아, 파상풍, 백일해 톡소이드, 백일해 섬유상 헤마글루티닌, 백일해 퍼탁틴, 백일해 핌브리아 응집소 제 2 + 3 형, 제 1 형 소아마비바이러스, 제 2 형 소아마비바이러스, 제 3 형 소아마비바이러스를 포함한다. 레페백스의 인가에 사용된 분석에서 ≥5 EU/ml의 역가를 한정한 백일해 핌브리아 응집소(FIM) 제 2 + 3 형은 예외이다. 상기 연구에서, 백일해 FIM 제 2 + 3 형 분석의 정량하한(LLOQ)은 ≥10.6 EU/ml이었으며, 이것은 레페백스의 인가 기준보다 더 높으므로 더 엄격하다.
병용 항원들에 대한 LLOQ는 디프테리아 톡소이드에 대해 0.037 IU/ml; 파상풍 톡소이드에 대해 0.05 IU/ml; 백일해 톡소이드에 대해 0.9 EU/ml; 백일해 섬유상 헤마글루티닌에 대해 2.9 EU/ml; 백일해 퍼탁틴에 대해 3.0 EU/ml; 백일해 핌브리아 응집소 제 2 + 3 형에 대해 10.6 EU/ml; 제 1 형 소아마비바이러스, 제 2 형 소아마비바이러스, 제 3 형 소아마비바이러스에 대해 1:8이었다.
1차적 목표에 대한 또 다른 서술적 평가변수들은 백신접종1(방문 2) 이후에 기하 평균 역가(GMT) 또는 기하 평균 농도(GMC)로서 측정된 항체 대 병용 백신 항원이었다.
또 다른 평가변수는 4개 주요 MnB 시험 균주 각각에 대해 백신접종3(방문 6) 이후 ≥LLOQ의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율이었다.
병용 백신 항원. 디프테리아, 파상풍 및 무세포성 백일해(dTaP)-IPV(레페백스)의 백신접종 1개월후 병용 백신 항원들에 대한 사전지정된 기준을 달성하는 대상자들의 비율은, 1 군 및 2 군에 대해 양측 95% 정확(또는 클로퍼-피어선 신뢰 한계) 검정을 이용하여 산출하였다. 비율의 차이(2가 rLP2086/dTaP-IPV - dTaP-IPV, 또는 1 군 - 2 군)도 또한 차이에 대한 양측 95% 정확 검정 CI 하에 산출하였다. 차이에 대한 양측 95% CI의 하한치가 dTaP-IPV 백신내 9개 항원들 모두에 대해 -0.10(-10%)보다 큰 경우에 비열등성을 선언하였다.
주요 시험 균주를 사용한 hSBA. 각각의 주요 MnB hSBA 시험 균주들에 대해, 각 채혈 시점에서 ≥LLOQ, ≥1:4, ≥1:8, ≥1:16 및 ≥1:128의 hSBA 역가를 달성한 대상자들의 수 및 비율을, 상기 비율에 대한 정확성 양측 95% CI(또는 클로퍼-피어선 신뢰 구간) 하에 서술적으로 요약하였다.
결과: 무작위배정된 749 명의 대상자들 중에서 685명(91.5%)이 평가가능한 면역원성 모집단을 포함하였다. 레페백스 + rLP2086 또는 레페백스 + 식염수 투여후 면역 반응은 모든 9개 레페백스 항원들에 대해 열등하지 않았다. 2가 rLP2086 백신에 대한 면역 반응은 2개 용량 후에 실질적이었으며, 3개 용량 후에 더 증대되었다(표 2). 약함-내지-중간정도 주사 부위 통증이 가장 공통적인 국소 반응이었으며; 두통 및 피로가 가장 공통적인 전신 반응이었다. 백신접종후 30일 이내에 AE를 보고한 대상자들의 비율은 유사하였다(레페백스 + rLP2086 및 레페백스 + 식염수에 대해 각각 8.8% 및 11.4%).
병용 백신 평가가능한 면역원성 모집단의 경우, 레페백스 용량투여 1개월후 병용 백신 항원에 대한 항체의 사전지정된 수준(반응에 대한 임계치)을 달성하는 대상자들의 비율은 병용 백신 항원들에 대해 2가 rLP2086 + 레페백스 군과 레페백스 단독 군 사이에서 유사하였다: 디프테리아 톡소이드(각 군에서 99.4%), 파상풍 톡소이드(각 군에서 100%), 백일해 톡소이드(각각 94.7% 및 96.0%), 백일해 섬유상 헤마글루티닌(각 군에서 100%), 백일해 퍼탁틴(각 군에서 100%), 백일해 핌브리아 응집소 제 2 + 3 형(각각 97.6% 및 98.9%), 제 1 형 소아마비바이러스(각 군에서 100%), 제 2 형 소아마비바이러스(각 군에서 100%), 제 3 형 소아마비바이러스(각 군에서 100%).
레페백스 용량투여 1개월후 2가 rLP2086 + 레페백스 군(1 군)과 레페백스 단독 군(2 군) 사이에서 반응자들의 비율의 차이에 대한 양측 95% CI의 하한계가 레페백스내 9개 항원들에 대해 -0.10(-10%)보다 컸기 때문에(즉, 비율 차이에 대한 95% CI의 최저 하한계는 -4.7%이었다(백일해 톡소이드)) 비열등성이 달성되었다. 따라서, 2가 rLP2086과 함께 제공된 레페백스에 의해 유도된 면역 반응은 레페백스 단독에 의해 유도된 면역 반응보다 열등하지 않았다.
백신접종3 이후 평가가능한 면역원성 모집단에서 4개 주요 MnB 시험 균주 각각에 대해 ≥LLOQ의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율을 평가하였다. A22에 대한 LLOQ는 1:16과 동등한 hSBA 역가인 반면, 나머지 MnB 시험 균주 모두에 대한 LLOQ는 1:8과 동등한 hSBA 역가였다.
1 군의 경우, 기준선(백신접종1 이전)에서 ≥LLOQ의 hSBA 역가를 갖는 대상자 비율은 주요 MnB 균주 A22에 대해 14.4%, A56에 대해 18.2%, B24에 대해 12.7%, 및 B44에 대해 6.2%이었다. 2 군의 경우, 기준선(백신접종1 이전)에서 ≥LLOQ의 hSBA 역가를 갖는 대상자 비율은 주요 MnB 균주 A22에 대해 23.0%, A56에 대해 21.8%, B24에 대해 12.9%, 및 B44에 대해 6.3%이었다.
실질적인 hSBA 반응은, 백신접종3 1개월후 3개 용량후에 관찰된 추가 증가와 함께, 2가 rLP2086의 용량 2 후에 1 군 대상자들 중에서 관찰되었다. 1 군(2가 rLP2086 + 레페백스)의 경우, 백신접종2 1개월후 및 백신접종3 1개월후에 ≥LLOQ의 hSBA를 달성하는 대상자 비율은 A22에 대해 81.1% 및 95.6%, A56에 대해 97.3% 및 100%, B24에 대해 81.0% 및 96.8%, 및 B44에 대해 55.5% 및 81.5%이었다. 실질적인 hSBA 반응은 2개의 2가 rLP2086 용량 후에만 달성되었지만, 3개 용량(백신접종3 1개월 후)에 비해 2개 용량후(백신접종2 1개월후)에 ≥LLOQ의 hSBA를 갖는 대상자 비율의 증가는 3개 용량후 면역 반응의 증대를 예시한다. 대조군(2 군)에서, 백신접종2 1개월후 및 백신접종3 1개월후에 4개 주요 MnB 시험 균주 각각에 대해 ≥LLOQ의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율은 각 MnB 시험 균주에 대한 기준선 hSBA 결과(백신접종1 이전)와 유사하였다.
4개 주요 MnB 시험 균주들의 경우, 정의된 hSBA 역가를 나타내는 1 군 중 대상자들의 비율은 2개 용량후보다 3개 용량후에 더 컸다. ≥1:16의 hSBA 역가를 달성한 대상자들을 기술하였는데, 그 이유는 상기 역가가 1:4 역가로부터 4배 증가이기 때문이다(≥1:4의 역가는 IMD에 대한 보호와 상관되는 것으로 일반적으로 인식된다). 1 군의 경우, 백신접종2 1개월후 1:16의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율은 A22에 대해 81.8%, A56에 대해 97.3%, B24에 대해 68.0% 및 B44에 대해 53.4%이었다. 백신접종3 1개월후, 1:16의 hSBA 역가를 갖는 대상자의 비율은 A22에 대해 95.6%, A56에 대해 100%, B24에 대해 87.3% 및 B44에 대해 79.5%이었다.
대조군(2 군)에서는, 백신접종2 1개월후 및 백신접종3 1개월후에 4개 주요 MnB 시험 균주 각각에 대해 정의된 hSBA 역가를 나타내는 대상자들의 비율이 기준선(백신접종1 이전)에서 정의된 hSBA 역가를 갖는 대상자의 비율과 유사하였다.
1 군의 경우, 2가 rLP2086의 3개 용량후 1:16의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율은, 상기 백신이 2가 rLP2086의 3개 용량을 투여했을 때 강한 면역 반응을 유도함을 입증하였다.
hSBA 기하 평균 역가(GMT). 일반적으로, 기준선에서의 GMT는 2개 군 모두의 경우에 hSBA LLOQ 미만이었다. 1 군의 경우, 백신접종2 1개월후 hSBA GMT는 A22에 대해 35.5, A56에 대해 91.1, B24에 대해 15.9 및 B44에 대해 14.6이었다. 백신접종3 1개월후 hSBA GMT는 A22에 대해 63.4, A56에 대해 151.5, B24에 대해 28.3 및 B44에 대해 36.5이었다.
1 군의 경우, 서브패밀리 A 균주에 대한 2개 용량후 뿐 아니라 서브패밀리 B 균주에 대한 3개 용량후 관찰된 GMT는 강한 면역 반응을 나타내었다.
A22, A56, B24 및 B44에 대한 hSBA 역가의 분포를 보여주는 역 누적 분포 곡선(RCDC)을 평가하였다. 1 군에서의 RCDC로부터의 결과는, 실질적인 면역 반응이 2가 rLP2086의 백신접종2 후 1 군 대상자들 중에서 관찰되었음을 보여주었으나; 도면들은 또한 더 많은 비율의 대상자들이 4개 MnB 시험 균주에 대해 더 높은 역가를 달성하였기 때문에 2가 rLP2086의 3차 용량의 이점을 나타내었다. 상기 효과는 균주 B44의 경우에서 가장 현저하였다.
결론: 2가 rLP2086과 병용 투여될 때, 레페백스는 레페백스 단독에 의해 유도된 면역 반응보다 열등하지 않은 면역 반응을 유도하였다. 2가 rLP2086 백신은 4개의 다양한 MnB 시험 균주에 대해, 특히 서브패밀리 B에 해당하는 균주들에 대해 강한 살균 반응을 유도하였으며, 상기 반응은 2개 용량보다 3개 용량후에 더 높았다. 병용 투여는 일반적으로 안전하고 잘 허용되었다.
[표 2]
2가 rLP2086의 2 및 3개 용량후 4개의 이종 MnB 시험 균주에 대한 면역 반응
Figure pct00005
실시예 5
건강한 청소년에서 연구용 수막구균 혈청군 B 2가 rLP2086 백신의 면역원성
배경 및 목적: 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B(MnB)는 유아, 청소년 및 성인에서 침습성 질환을 야기한다. 보존된, 표면-노출된 지단백질인 LP2086(인자 H 결합 단백질[fHBP])은 유망한 MnB 백신 표적이다. 연구용 2가, 재조합 백신(rLP2086)의 안전성 및 면역원성을 건강한 청소년들(11 내지 18세)에서 연구하였다.
방법: 본 위약-통제, 단일-맹검 연구에서의 대상자들을 2개의 3개-용량 스케줄 및 3개의 2개-용량 스케줄에 무작위배정하였다. 각각의 120 ㎍ 용량은 2개의 rLP2086 항원, 곧 LP2086 서브패밀리 (A 및 B)로부터 각각 1개씩을 함유하였다. 백신이 일정이 잡히지 않았을 때 식염수를 제공하였다. 인간 보체를 사용한 혈청 살균 분석(hSBA)은 4개 MnB 시험 균주(백신 fHBP에 이종)를 사용하여 수행하였다.
결과: 1713명의 대상자들(평균 연령 14.4세)을 무작위배정하였다. 백신의 3개 용량 1개월후, 서브패밀리 A 및 B 균주에 대해 ≥8의 hSBA 역가가 대상자들의 95 내지 99% 및 86 내지 89%에서 각각 관찰되었으며; 2개 용량후에, 상기 숫자는 각각 91 내지 100% 및 69 내지 77%의 범위였다. 2개-용량 스케줄에서, 0 및 6 개월 스케줄이 최고 항체 반응을 유도하였다(실시예 5의 표 1). 2개 용량후 hSBA GMT는 6.2 내지 125.6의 범위였고 3개 용량후에는 4개 MnB 이종 시험 균주 전체에 걸쳐 25.6 내지 155.6의 범위였다. 약함-내지-중간정도 주사 부위 통증이 가장 공통적인 국소 반응이었다. 용량 1 후에, rLP2086 및 식염수 수용자의 각각 3.3 내지 6.5% 및 2.1%에서 ≥38 ℃의 발열을 겪었다.
[표 1]
2가 rLP2086의 마지막 용량 1개월후 각 균주에 대해 ≥8*의 hSBA 역가를 달성한 대상자 비율
Figure pct00006
hSBA = 인간 보체를 사용한 혈청 살균 분석.
* 모든 균주에 대한 정량하한 = 8.
† 관찰된 대상자 비율에 기초한 정확성 양측 신뢰 구간(클로퍼 및 피어선).
‡ P<0.001; <0.0125의 값이 유효한 것으로 간주됨. P는 1, 2 및 3 군에만 적용됨.
[표 2]
2가 rLP2086의 마지막 용량 1개월후 각 균주에 대한 hSBA GMT
Figure pct00007
GMT = 기하 평균 역가; hSBA = 인간 보체를 사용한 혈청 살균 분석.
* GMT는 해당 시점에서 유효하고 확실한 hSBA 역가를 갖는 모든 대상자를 이용하여 산출하였음.
† hSBA 역가의 평균 대수에 대한 스튜던트 t 분포에 기초한 신뢰 구간의 역변환임.
결론: rLP2086은 잘 허용되었다. 모든 투약 요법들은 3개 용량후에 가장 현저한 강한 살균 반응을 제공하였다.
실시예 5의 표 1은 전술한 실시예 1의 표 1과 동일하다. 표 2는 평가가능한 면역원성 모집단에서 연구 시간별 hSBA GMT 및 상응하는 CI를 요약한 것이다. GMT는 기준선(주사 1 이전)으로부터 증가하여 2가 rLP2086의 각 후속 용량에 따라 계속 증가하였다.
4개 주요 MnB 균주에 대해, GMT는 2개 용량(3, 4 및 5 군)후보다 2가 rLP2086의 3개 용량(1 및 2 군)후에 더 컸다. GMT는 2개의 3개-용량 군들 사이에서 유사하였으며, 이들은 3개의 2개-용량 군들 중에서 유사하였다.
주사 1 전에(기준선), 1, 2, 3, 4 및 5 군에 대한 hSBA GMT는 다음과 같았다: A22에 대해 각각 7.1, 6.3, 6.4, 6.4 및 6.8; A56에 대해 각각 6.8, 6.1, 6.7, 6.3 및 6.2; B24에 대해 각각 5.3, 5.1, 5.0, 4.9 및 5.1; 및, B44에 대해 각각 4.4, 4.5, 4.5, 4.6 및 4.4.
1 군(0-, 1- 및 6-개월)의 경우, 4개의 주요 MnB 균주 모두에 대해 용량 2의 1개월 후에 주목된 GMT의 실질적인 증가가 있었다(A22, A56, B24 및 B44에 대해 각각 24.4, 77.3, 13.8 및 13.1). GMT는 4개의 주요 MnB 시험 균주에 대해 1 군 대상자들에서 2가 rLP2086의 3개 용량 후에 더 증가하였다: 55.1(A22); 152.96(A56); 29.1(B24); 및 40.3(B44).
2 군의 경우, 2가 rLP2086의 2개 및 3개 용량 후에 GMT에 유사한 증가가 주목되었다. 2가 rLP2086의 2개 용량후 2 군 대상자들에서 GMT는 A22에 대해 32.9; A56에 대해 94.6; B24에 대해 14.9; 및 B44에 대해 15.5였다. 3개 용량 후에, GMT는 A22에 대해 56.3; A56에 대해 155.6; B24에 대해 25.6; 및 B44에 대해 35.0으로 증가하였다.
1 군 및 2 군의 경우, 서브패밀리 A 균주에 대해 2개 용량 후, 및 서브패밀리 B 균주에 대해 3개 용량 후 관찰된 GMT는 강한 면역 반응을 시사한다.
3 군의 경우, 2가 rLP2086의 1개 용량 후 GMT에 다음과 같이 약간의 증가가 주목되었다: A22에 대해 12.0; A56에 대해 18.5; B24에 대해 9.2; 및 B44에 대해 5.7. 2개 용량 후에 GMT는 A22에 대해 48.4; A56에 대해 125.6; B24에 대해 20.6; 및 B44에 대해 22.5로 증가하였다.
4 군의 경우, GMT는 2가 rLP2086의 1개 용량 후에 A22에 대해 13.3; A56에 대해 17.7; B24에 대해 9.8; 및 B44에 대해 5.9이었다. 2가 rLP2086의 2개 용량 후에, GMT는 A22에 대해 37.1; A56에 대해 104.9; B24에 대해 17.7; 및 B44에 대해 19.1이었다.
5 군의 경우, 2가 rLP2086의 1개 용량 후에 GMT는 A22에 대해 16.0; A56에 대해 26.8; B24에 대해 12.6; 및 B44에 대해 6.8이었다. 2가 rLP2086의 2개 용량 후에, GMT는 A22에 대해 39.6; A56에 대해 111.8; B24에 대해 14.7; 및 B44에 대해 17.8로 증가하였다.
총괄하여, 3, 4 및 5 군의 경우, 관찰된 GMT는 2가 rLP2086의 2개 용량 후에 서브패밀리 A 및 B 균주에 대한 면역 반응을 나타낸다.
요약하면, 2가 rLP2086의 3개 용량은 4개 주요 MnB 시험 균주들에 대해 hSBA 역가에 근거하여 강하고 가장 광범위한 면역 반응을 제공하였다. 2개 용량과 비교하여, 3개 용량의 2가 rLP2086을 투여받은 대상자들의 더 높은 비율이 4개 주요 MnB 시험 균주에 대해 ≥1:8의 hSBA 역가를 달성하였다.
0-, 1- 및 6-개월 투약 스케줄(1 군) 후의 결과는 0-, 2- 및 6-개월 투약 스케줄(2 군) 후의 결과와 유사하였다. 1 군 및 2 군의 경우, 용량 3-후 달성된 GMT 값은 용량 2-후 GMT 값보다 더 높았다. 1 군 및 2 군의 경우, 용량 2-후 GMT 값은 서브패밀리 A 균주의 경우 24.4 내지 94.6, 및 서브패밀리 B 균주의 경우 13.1 내지 15.5의 범위였다. 용량 3-후 GMT 값은 서브패밀리 A 균주의 경우 55.1 내지 155.6, 및 서브패밀리 B 균주의 경우 25.6 내지 40.3의 범위였다. 1 군 및 2 군의 경우, 2가 rLP2086의 2개 용량 후 4개 주요 MnB 시험 균주에 대해 ≥1:8의 hSBA 역가를 달성한 대상자 비율과 비교시, 보다 높은 비율의 대상자가 2가 rLP2086의 3개 용량 후에 4개 주요 MnB 시험 균주에 대해 ≥1:8의 hSBA 역가를 달성하였다.
≥1:16의 hSBA 역가를 달성한 대상자도 또한 평가하였다. 1 군의 경우, 2가 rLP2086의 2개 용량 1개월후 ≥1:16의 hSBA 역가를 달성한 대상자들의 비율은 A22에 대해 73.5%; A56에 대해 96.3; B24에 대해 57.6; 및 B44에 대해 47.2%이었다. 2가 rLP2086의 3개 용량 후에, ≥1:16의 hSBA 역가를 달성한 1 군 대상자들의 비율은 A22에 대해 91.4%; A56에 대해 99.2%; B24에 대해 82.8%; 및 B44에 대해 84.8%이었다.
2 군의 경우, 2가 rLP2086의 2개 용량 1개월후 ≥1:16의 hSBA 역가를 달성한 대상자의 비율은 A22에 대해 88.1%; A56에 대해 97.9%; B24에 대해 63.5%; 및 B44에 대해 58.6%이었다. 2가 rLP2086의 3개 용량 후에, ≥1:16의 hSBA 역가를 달성한 2 군 대상자들의 비율은 A22에 대해 95.0%; A56에 대해 98.9%; B24에 대해 83.6%; 및 B44에 대해 83.8%이었다.
1 군 및 2 군의 경우, 2가 rLP2086의 3개 용량 후에 ≥1:16의 hSBA 역가를 달성한 대상자들의 비율은 백신이 강한 면역 반응을 유도함을 입증하였다.
3 군의 경우, 2가 rLP2086의 2개 용량 후 ≥1:16의 hSBA 역가를 달성한 대상자들의 비율은 A22에 대해 93.2%; A56에 대해 98.4%; B24에 대해 73.8%; 및 B44에 대해 70.8%이었다.
4 군의 경우, 2가 rLP2086의 2개 용량 1개월후 ≥1:16의 hSBA 역가를 달성한 대상자들의 비율은 A22에 대해 90.8%; A56에 대해 99.2%; B24에 대해 67.1%; 및 B44에 대해 64.5%이었다.
5 군의 경우, 2가 rLP2086의 2개 용량 후 ≥1:16의 hSBA 역가를 달성한 대상자들의 비율은 A22에 대해 91.0%; A56에 대해 99.1%; B24에 대해 64.5%; 및 B44에 대해 66.7%이었다.
3, 4 및 5 군의 경우, ≥1:16의 hSBA 역가를 달성한 대상자들의 비율은, 백신이 2개 용량 후에만 서브패밀리 A 균주에 대한 강한 면역 반응을 유도함을 입증하였다. 그러나, 3개 용량은 서브패밀리 B 균주에 대한 반응의 견고성을 증가시킨다.
2가 rLP2086의 3개 용량 후 ≥1:16의 hSBA 역가를 달성한 대상자들의 비율은, 백신이 백신 성분들과 상이한 LP2086 변이체를 발현하는 MnB 균주에 대해 강하고 광범위한 면역 반응을 유도함을 보여준다.
군 별로 각 균주에 대한 평가가능한 면역원성 모집단에 대해 연구 시간별 hSBA 역가의 분포를 보여주는 역 누적 분포 곡선(RCDC)도 또한 평가하였다. RCDC는 2가 rLP2086 서브패밀리 A 균주의 2개 용량 후 강한 면역 반응을 나타낸다. 2가 rLP2086의 3차 용량 후, 반응 곡선하 면적은 4개 MnB 시험 균주 모두에 대해 증가함으로써, 2가 rLP2086의 3개 용량후 면역 반응의 증대를 입증한다.
1차 및 2차 면역원성 평가변수 분석으로부터 수득된 결과는, 백신이 MnB의 이종 서브패밀리 A 및 서브패밀리 B 변이체들에 대한 유의적 hSBA 활성을 갖는 항체들을 생성할 수 있음을 보여준다. ≥1:8의 hSBA 역가를 달성한 대상자들의 비율은 2가 rLP2086의 2 또는 3개 용량 후에 더 높았지만, 더 많은 비율의 대상자들이 2가 rLP2086의 1개 용량 1개월 후에 ≥1:8의 hSBA를 달성하였다(예를 들면, 5 군 참조).
4개 주요 MnB 시험 균주들에 대해, GMT는 2개 용량(3, 4 및 5 군) 후보다 2가 rLP2086의 3개 용량(1 및 2 군) 후에 더 컸다. GMT는 2개의 3개-용량 군들에서 유사하였다. GMT는 또한 3개의 2개-용량 군들중에서 유사하였다. 이들 데이터는 또한 ≥1:16의 hSBA를 달성한 대상자 비율에 근거하여 2가 rLP2086의 3개 용량 후에 강한 hSBA 반응을 보여준다.
이들 데이터는 2가 rLP2086의 최종 제형이 강한 면역 반응을 야기하고 2개 또는 3개 용량으로 제공시 안전하고 잘 허용됨을 입증한다. 심지어 2가 rLP2086의 1개 용량은 기준선보다 높은 실질적인 면역 반응을 제공하며 또한 안전하고 잘 허용된다. 전체적으로, 2가 rLP2086의 2개 또는 3개 용량 후 안전성 프로필에 임상적으로 의미있는 차이가 없었다.
실시예 6
3개의 2상 무작위 통제 연구에서 11 내지 18세 연령의 건강한 청소년에서 수막구균 혈청군 B 2가 rLP2086의 안전성, 내약성 및 면역원성
배경: 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B(MnB)는 청소년에서 침습성 수막구균성 질환의 주 원인이다. 보존된, 표면-노출된 지단백질인 LP2086(인자 H 결합 단백질[fHBP])은 MnB에 의해 야기된 침습성 질환으로부터 보호하기 위한 유망한 MnB 백신 표적이다. 연구용 2가 재조합 MnB 백신(서열번호 1 및 서열번호 2, 2.8 몰비 폴리솔베이트-80, 0.5 mg/ml 알루미늄, 10 mM의 히스티딘 및 150 mM의 염화나트륨 포함, 본원에서 실시예 전체에 걸쳐 "2가 rLP2086"으로 지칭됨)의 안전성, 내약성 및 면역원성을 11 내지 18세 연령의 건강한 청소년에서 3개의 2상 무작위 통제 연구에서 시험하였다.
방법: 연구 1012는 2가 rLP2086의 5개 백신 요법을 시험한 반면, 연구 1010 및 1011은 각각 TdaP-IPV 및 HPC-백신과 병용 투여된 2가 rLP2086 백신의 3개-용량 스케줄을 평가하였다. 2가 rLP2086의 각 용량은 60 ㎍의 rLP2086 서브패밀리 A 변이체 A05 및 60 ㎍의 rLP2086 서브패밀리 B 변이체 B01을 함유하였다. 3개 연구 각각에서 2가 rLP2086의 면역원성을 시험하기 위해, 인간 보체를 사용한 혈청 살균 분석(hSBA)을 이종 fHBP 변이체 A22, A56, B24 및 B44를 발현하는 4개의 MnB 시험 균주를 사용하여 수행하였으며, 상기 균주들은 fHBP 가변성의 관련된 다양성을 나타내기 위해서뿐 아니라, 유행병학적으로 우세한 fHBP 변이체를 발현하는 균주에 대한 백신-유도된 면역 반응의 범위에 대한 조망을 제공하기 위해 선택되었다. 부작용 및 요구된 국소 및 전신 반응을 평가하였다.
결과: 3개 연구 모두에서 대상자들의 82 내지 100%가 3개 용량 1개월후 4개 MnB 시험 균주 각각에 대해 정량하한(LLOQ)보다 높은 hSBA를 달성하였다(표). 3개 연구 전체에 걸쳐, 전신 반응 및 국소 반응의 대부분이 중증도에서 약함 내지 중간정도였으며; 부작용은 일반적으로 심각하지 않았거나 연구 백신과 관련되지 않았다.
결론: 1:4보다 높은 혈청 살균 항체 역가는 침습성 수막구균성 질환에 대해 보호한다. 상기 청소년 2상 연구 각각에서 각각 백신 항원에 이종인 4개 MnB 시험 균주들에 대한 ≥LLOQ의 hSBA 역가의 입증은, 2가 rLP2086 백신이 다양한 MnB 질환-관련 균주들에 대해 광범위하게 활성일 수 있는 기능성 항체 반응을 제공하였음을 시사한다. 2가 rLP2086의 백신접종은 일반적으로 잘 허용되었다.
2가 rLP2086 백신의 마지막 용량 1개월후 각각의 시험 균주에 의해 발현된 각각의 fHBP 변이체에 대해 ≥LLOQ의 hSBA 역가를 달성한 대상자 비율
Figure pct00008
LLOQ = 정량하한; fHBP = 인자 H 결합 단백질; hSBA = 인간 보체를 사용한 혈청 살균 분석; TdaP-IPV 백신 = 파상풍, 디프테리아, 백일해, 소아마비 백신
LLOQ = 정량적으로 측정될 수 있는 샘플내 분석물의 최저량. ≤≥1:4의 hSBA 역가는 침습성 수막구균성 질환에 대한 보호와 상관되는 것임. ≥LLOQ의 hSBA 역가는 최소 상관성보다 높음. LLOQ는 A22에 대해 1:16; 및 A56, B24 및 B44에 대해 1:8이었음.
실시예 7
인유두종바이러스 백신과 병용 투여시 11 내지 18세의 건강한 청소년에서 수막구균 혈청군 B 2가 rLP2086 백신의 면역원성
배경: 본 2상 무작위, 관찰자-맹검, 통제 연구는, ≥11 내지 <18세 연령의 건강한 청소년에서, 인유두종바이러스(HPV4)에 대한 4가 백신인 가다실®(미국 특허 제 5,820,870 호에도 기술되어 있음)과 동시투여되거나 동시투여되지 않은 2가 rLP2086의 면역원성을 평가하였다. 가다실은 제 6, 11, 16 및 18 형 HPV(즉, HPV-6, HPV-11, HPV-16 및 HPV-18) L1 단백질의 재조합 항원들을 함유한다. 평가변수는 각각의 적용가능한 채혈 시점에서 4개의 주요 MnB 시험 균주들 각각에 대한 hSBA GMT이었다.
방법: 대상자들은 0, 2 및 6 개월에 2가 rLP2086(서열번호 1 및 서열번호 2, 2.8 몰비의 폴리솔베이트-80, 0.5 mg/ml 알루미늄, 10 mM의 히스티딘 및 150 mM의 염화나트륨 포함) + HPV4(1 군), 2가 rLP2086 + 식염수(2 군), 또는 HPV4 + 식염수(3 군)를 투여받았다. 백신접종1 이전, 및 백신접종2 및 3의 1개월후에, 1 군 및 2 군의 대상자들로부터의 혈청을 4개 MnB 시험 균주를 사용하여 인간 보체를 이용한 혈청 살균 분석(hSBA)에 의해 검사하였으며, 이때 상기 균주들은 각각, 백신 성분에 이종이며 fHBP 다양성의 광범위함 및 유행병학적으로 우세함을 나타내는 fHBP(A22, A56, B24 및 B44)를 발현한다. 평가된 평가변수는 ≥정량하한(LLOQ; 1:16[A22] 또는 1:8[A56, B44, B24])의 hSBA 역가 및 hSBA 기하 평균 역가(GMT)를 갖는 대상자들의 비율을 포함하였다.
가다실 단독에 비해 가다실 + 2가 rLP2086을 투여하는 것의 비열등성을 입증하기 위해, 2가지 hSBA, 곧 서브패밀리 A 변이체(A22)에 해당하는 1개의 주요 시험 균주 및 서브패밀리 B 변이체(B24)에 해당하는 1개의 주요 시험 균주를 사용하여 면역원성 평가를 수행하였다. 그러나, 추가의 2가 rLP2086 면역원성/효능 탐색적 평가변수의 측정을 위해서는 4개의 주요 MnB 시험 균주 모두를 사용하였다.
2가 rLP2086에 대한 면역 반응의 평가를 위해, 실시예 2에서 기술된 바와 같이, 화이자(Pfizer)의 대표적인 MnB SBA 균주 풀로부터 무작위로 선택된 수막구균 혈청군 B 균주를 사용하여 hSBA에서 기능성 항체들을 분석하였다. hSBA는, 보체-의존성 방식으로 표적 수막구균 균주를 사멸시키는, 인간 혈청내 기능성 항체를 측정하였다.
결과: 814명 및 812명의 대상자들은 각각 1 군 및 2 군의 평가가능한 면역원성 모집단을 포함하였다. 백신접종1 이전과 비교해, 4개 시험 균주 모두에 대해 ≥LLOQ의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율은 백신접종2(55 내지 99%) 및 3(83 내지 99%; 도 1) 후에 더 높았다. 실시예 7의 표 A는 4개의 주요 MnB 균주 각각에 대한 hSBA GMT 및 평가가능한 면역원성 모집단에 대한 채혈 시점별 상응하는 CI를 나타낸 것이다. 기준선에서의 GMT는 2개 군 모두에 대해 hSBA LLOQ 미만이었다. GMT는 1 군 및 2 군에서 각각, 백신접종1 후에 11.1 내지 70.6 및 11.9 내지 76.3, 및 백신접종2 후에 25.8 내지 117.2 및 28.0 내지 128.2였다(하기 표 A).
평가가능한 면역원성 모집단에 있어서, 1 군 및 2 군에서 2가 rLP2086 용량의 백신접종3 1개월후에 2개 주요 MnB 균주들에 대한 hSBA GMT는 다음과 같았다: A22에 대해 각각 53.3 및 57.8, 및 B24에 대해 각각 25.8 및 28.0.
2 군(2가 rLP2086 + 식염수)의 경우, 백신접종2 1개월후 hSBA GMT는 A22에 대해 33.7, A56에 대해 76.3, B24에 대해 16.3, 및 B44에 대해 11.9였다. 백신접종3 1개월후에 hSBA GMT는 A22에 대해 57.8, A56에 대해 128.2, B24에 대해 28.0 및 B44에 대해 31.9였다.
1 군(2가 rLP2086 + 가다실)의 경우, 백신접종2 1개월후 hSBA GMT는 A22에 대해 31.9, A56에 대해 70.6, B24에 대해 15.0, 및 B44에 대해 11.1이었다. 백신접종3 1개월후에 hSBA GMT는 A22에 대해 53.3, A56에 대해 117.2, B24에 대해 25.8 및 B44에 대해 27.2였다.
평가가능한 면역원성 모집단을 위해 모든 채혈 시점에서 1 군 및 2 군에 대해, A22, A56, B24 및 B44에 대한 hSBA 역가의 분포를 나타내는 역 누적 분포 곡선(RCDC)을 평가하였다. RCDC는, 대상자들의 대부분이 백신접종2 후에 반응하였으며 백신접종3 후에 4개의 주요 MnB 시험 균주들에 대한 역가에 추가의 증가를 나타내었음을 보여주었다. 항원들에 대한 면역 반응은 1 군 및 2 군에 대해 유사하였다.
결론: 2가 rLP2086은 hSBA 혈청반응 또는 GMT에 의해 평가된 살균 반응에 영향을 미치지 않으면서 HPV4와 함께 투여될 수 있다. ≥1:4의 hSBA 역가는 수막구균성 질환에 대한 보호와 상관되기 때문에, 상기 데이터는 HPV 백신의 병용 투여 환경에서 2가 rLP2086의 투여후에 광범위한 MnB 균주들로부터 청소년들을 보호할 가능성을 시사한다.
[표 A]
hSBA GMT - 평가가능한 면역원성 모집단
Figure pct00009
GMT = 기하 평균 역가; HPV4 = 4가 인유두종바이러스 백신; hSBA = 인간 보체를 사용한 혈청 살균 분석.
an = 해당 균주에 대해 유효하고 확실한 hSBA 역가를 갖는 대상자 수.
b기하 평균 역가는 해당 시점에서 유효하고 확실한 hSBA 역가를 갖는 모든 대상자를 이용하여 산출하였음.
c신뢰 구간은 hSBA 역가의 평균 대수에 대한 스튜던트 t 분포에 기초한 신뢰 구간의 역 변환임.
실시예 8
건강한 청소년에서 수막구균 혈청군 B에 대한 2가 rLP2086 백신과 동시투여 된 인유두종 백신의 면역원성
배경: 본 2상 무작위 연구는, ≥11 내지 <18세 연령의 건강한 청소년에서, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B(MnB)에 의해 야기된 침습성 질환에 대한 연구용 백신인 2가 rLP2086과 함께, 인유두종바이러스(HPV4)에 대한 4가 백신의 동시투여를 평가하였다.
방법: 대상자들은 제 0, 2 및 6 개월에 HPV4 + 2가 rLP2086(1 군), 2가 rLP2086 + 식염수(2 군), 또는 식염수 + HPV4(3 군)를 투여받았다. 혈청은 모든 군에서 기준선에서 및 용량 2 및 3 후에 수집하였다. HPV4 항원(HPV-6, 11, 16 및 18)에 대한 면역 반응은 경쟁적 루미넥스 면역분석법(cLIA)에 의해 측정하였다. 2가 rLP2086 면역원성은 이종 fHBP 변이체(A22 및 B24)를 발현하는 2개의 MnB 시험 균주를 사용하여 인간 보체를 이용한 혈청 살균 분석(hSBA)에 의해 측정하였다. 면역원성 평가변수는 모두 용량 3 후에 다음을 포함하였다: 1 군 및 3 군에서 HPV 항원에 대한 기하 평균 역가(GMT); 1 군 및 2 군에서 변이체 A22 및 B24를 발현하는 균주들에 대한 hSBA GMT; 및 1 군 및 3 군에서 기준선 혈청음성 대상자들에서 HPV 항원에 대한 혈청전환율. HPV4 또는 식염수와의 병용 투여 후에 2가 rLP2086의 안전성도 또한 평가하였다.
가다실(제 6, 11, 16 및 18 형 HPV L1 단백질)에 대한 면역 반응의 평가는 형광으로 표지된 미소구-기반 플랫폼(루미넥스)을 기반으로 한 cLIA를 이용하여 수행하였다. 가다실에 의한 1차 백신접종(방문 1) 전에 및 가다실에 의한 3차 백신접종(방문 5) 1개월후에 1 군 및 3 군의 모든 대상자들로부터 수득된 혈청을 상기 분석들에 사용하였다.
1 군 및 3 군에서 4개 HPV 항원들에 대한 GMT와, 1 군 대 3 군의 그의 상응하는 GMT 비(GMR)의 비교, 및 상기 비의 양측 95% CI를 본 실시예의 하기 표 A에 나타내었다. 비열등성 한계에 대한 기준은, GMR의 양측 95% CI의 하한치에 대한 0.67의 값에 상응하는 1.5배였다. 0.67의 1.5배 기준은 모든 MnB 시험 균주, 및 0.62의 하한계 95% 신뢰 구간(CI)을 나타낸 HPV-18을 제외한 HPV 항원들에 대해 충족되었다. 별도의 분석에서, 대상자들의 ≥99%가 식염수 + HPV4 및 rLP2086 + HPV4 군 둘 다에서 4개 HPV 항원들 모두로 혈청전환되었다.
상기 연구의 또 다른 목표는, 2개 군 모두에서 가다실의 백신접종3 용량후에(방문 5) HPV 면역원성 분석에서 혈청전환에 의해 측정시, 2가 rLP2086 + 가다실(1 군) 및 식염수 + 가다실(3 군)에 의해 유도된 면역 반응을 설명하는 것이었다.
1 군 및 3 군에서 기준선에서 HPV-혈청음성이었던 대상자들의 경우 가다실의 마지막 용량 1개월 후에 4개 HPV 항원 각각에 대한 혈청전환율은, HPV-6에 대해 ≥20 mMU/ml, HPV-11에 대해 ≥16 mMU/ml, HPV-16에 대해 ≥20 mMU/ml, 및 HPV-18에 대해 ≥24 mMU/ml의 항-HPV 혈청 cLIA 수준을 갖는 대상자들의 비율로서 산출되었다.
각 군에서 상응하는 95% CI 하에 4개 HPV 항원에 대해 혈청전환에 대한 사전지정된 기준을 달성한 기준선 HPV-혈청음성 대상자들의 수 및 비율, 상기 비율에서의 퍼센트 차이(1 군 - 3 군), 및 상기 차이의 95% CI를 기준선 HPC-혈청음성 평가가능한 면역원성 모집단에 대해 실시예 8의 표 B에 나타내었다.
결과: 1.5배(GMR에 대해 95% CI의 0.67 하한치)로 정해진 사전지정된 비열등성 기준은 4개 HPV 항원들 중 3개(HPV-18 제외) 및 2개의 MnB 시험 균주 모두에 대해 충족되었다(표 A). 1 군 및 3 군에서의 혈청전환율은 모든 HPV 항원들에 대해 ≥99%이었다(표 B). 그러나 식염수와 비교하여 rLP2086 후에 야기된 보다 큰 국소 반응원성은 후속 용량들에 따라 증가하지 않았으며; 주사 부위 통증이 가장 공통적인 국소 반응이었다. 3개 군 모두에서의 전신 반응은 일반적으로 중증도에 있어서 약함 및 중간정도였다.
평가가능한 면역원성 모집단의 경우, 1 군 및 3 군에 대해 백신접종3에서 가다실 용량 1개월후에 4개 HPV 항원들에 대한 항체의 GMT는 다음과 같았다: 각각 451.8 및 550.3(HPV-6); 각각 892.9 및 1084.3(HPV-11); 각각 3695.4 및 4763.4(HPV-16); 및, 각각 744.0 및 1047.4(HPV-18). 백신접종3에서 가다실 용량 1개월후에 1 군 대 3 군의 GMR은 HPV-6에 대해 0.82(95% CI: 0.72, 0.94), HPV-11에 대해 0.82(95% CI: 0.74, 0.91), HPV-16에 대해 0.78(95% CI: 0.68, 0.88), 및 HPV-18에 대해 0.71(95% CI: 0.62, 0.81)이었다. 그러므로, 3 군과 비교하여 1 군에 대한 항-HPV GMR에 대한 양측 95% CI의 하한치는 HPV-6에 대해 0.72, HPV-11에 대해 0.74, HPV-16에 대해 0.68, 및 HPV-18에 대해 0.62였다. 0.67(GMR의 양측 95% CI의 하한치)의 1.5배 기준은 0.62의 95% CI의 하한계를 나타낸 HPV-18을 제외하고 모든 HPV 항원에 대해 충족되었다.
백신접종3 2가 rLP2086 용량 1개월 후에 2가 rLP2086 + 가다실 군 대 2가 rLP2086 + 식염수 군의 GMR은 A22에 대해 0.92(95% CI: 0.85, 1.00), 및 B24에 대해 0.92(95% CI: 0.84, 1.01)이었다. 2 군과 비교하여 1 군에 대한 hSBA GMR에 대해 양측 95% CI의 하한치는 A22에 대해 0.85 및 B24에 대해 0.84였으며, 이것은 둘 다 0.67보다 더 컸으므로 1.5배의 비열등성 한계를 충족시켰다.
백신접종3 1개월 후에 2개의 주요 MnB 균주(A22 및 B24)에 대한 hSBA 역가 4배 반응률을 분석함으로써, 2가 rLP2086 + 가다실(1 군) 투여로부터 얻은 데이터를 2가 rLP2086 + 식염수(2 군) 투여로부터 얻은 데이터와 비교하였다. 2개 주요 MnB 균주에 대해 백신접종3 1개월 후에 기준선으로부터 hSBA 역가에서 ≥4배 증가를 달성한 대상자들의 비율을, 2가 rLP2086 + 가다실을 투여받은 1 군 대상자 및 2가 rLP2086 + 식염수를 투여받은 2 군 대상자 둘 다에 대해 측정하였다. 1 군의 대상자들 중에서, 85.3%가 B24에 대한 hSBA 역가에서 ≥4배 증가를 나타내었다. 2 군의 대상자들 중에서, 86.4%가 A22에 대한 hSBA 역가에서 ≥4배 증가를 나타내었으며, 84.8%가 B24에 대한 hSBA 역가에서 ≥4배 증가를 나타내었다.
백신접종3 1개월 후에 1 군과 2 군 사이에 반응자 비율의 차이는 A22에 대해 -1.1%(95% CI: -4.6, 2.3) 및 B24에 대해 -1.4%(95% CI: -5.1, 2.3)이었다. 4배 반응률의 차이는 모두 1% 값 부근이었으며, 이때 비율 차이의 95% CI의 하한계는 A22에 대해 -4.6% 및 B24에 대해 -5.1%이었다.
식염수 + 가다실에 비해, 또는 2가 rLP2086 + 식염수에 비해 2가 rLP2086 + 가다실의 비열등성 기준은, 4개 HPV 항원(HPV-6, HPV-11, HPV-16 및 HPV-18) 모두에서 항체 대 HPV에 대한 GMR에 대해서 및 백신접종3 1개월후 2개의 주요 MnB 시험 균주(A22 및 B24)를 사용한 hSBA 역가에 대해서 양측 95% CI의 하한치가 0.67보다 커야할 것을 요구하였다. 상기 사전지정된 기준은 2개 MnB 시험 균주 둘 다 및 4개 HPV 항원들중 적어도 3개에 대해 충족되었다. HPV-18의 경우, GMR에 대한 양측 CI의 하한치는 0.62로, 0.67의 사전지정된 임계치보다 약간 낮았다.
2개 주요 MnB 시험 균주(A22 및 B24)에 대한 4배 증가 반응은 2가 rLP2086 + 가다실을 투여받은 군과 2가 rLP2086 + 식염수를 투여받은 군 사이에서 유사하였다(83.4 내지 86.4%의 범위).
≥1:4의 백신접종전 (즉, 백신접종1 이전) hSBA 역가를 갖는 1 군 및 2 군내 대상자들의 비율은 균주 A22에 대해 각각 15.2% 및 18.8%; 균주 A56에 대해 각각 10.4% 및 10.5%; 균주 B24에 대해 각각 6.1% 및 8.4%; 및 균주 B44에 대해 각각 1.7% 및 3.2%이었다. 또한, ≥1:16의 백신접종전 hSBA 역가를 갖는 2 군 및 1 군내 대상자들의 비율은 균주 A22에 대해 각각 13.7% 및 16.4%; 균주 A56에 대해 각각 9.0% 및 9.1%; 균주 B24에 대해 각각 4.1% 및 5.4%; 및 균주 B44에 대해 각각 1.2% 및 2.1%이었다.
2 군(2가 rLP2086 + 식염수)에서, 백신접종2 1개월후에 ≥1:4의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율은 A22에 대해 86.3%, A56에 대해 98.7%, B24에 대해 77.1% 및 B44에 대해 60.1%이었다. 백신접종3 1개월후에, ≥1:4의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율은 A22에 대해 96.4%, A56에 대해 99.4%, B24에 대해 92.8% 및 B44에 대해 86.5%이었다. 1 군(2가 rLP2086 + 가다실)에서, 백신접종2 1개월후 ≥1:4의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율은 A22에 대해 83.8%, A56에 대해 97.8%, B24에 대해 71.9% 및 B44에 대해 57.7%이었다. 백신접종3 1개월 후, ≥1:4의 hSBA 역가를 갖는 대상자 비율은 A22에 대해 94.3%, A56에 대해 99.1%, B24에 대해 91.1% 및 B44에 대해 84.4%이었다.
2 군(2가 rLP2086 + 식염수)에서, 백신접종2 1개월후 ≥1:16의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율은 A22에 대해 85.8%, A56에 대해 98.4%, B24에 대해 68.8% 및 B44에 대해 49.9%이었다. 백신접종3 1개월 후, ≥1:16의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율은 A22에 대해 96.3%, A56에 대해 99.4%, B24에 대해 89.2% 및 B44에 대해 82.4%이었다. 1 군(2가 rLP2086 + 가다실)에서, 백신접종2 1개월후 ≥1:16의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율은 A22에 대해 83.0%, A56에 대해 97.2%, B24에 대해 65.2% 및 B44에 대해 46.4%이었다. 백신접종3 1개월후, ≥1:16의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율은 A22에 대해 94.0%, A56에 대해 98.9%, B24에 대해 86.3% 및 B44에 대해 78.0%이었다.
1 군 및 2 군 둘 다에 있어서, 높은 비율의 대상자들이 2가 rLP2086의 2개 또는 3개 용량 후에 ≥1:16 이상의 hSBA 역가를 달성한 반면, 대상자들의 대부분이 백신접종전 방문 1에서 임의의 주요 MnB 시험 균주에 대해 측정가능한 hSBA 역가를 나타내지 않았다.
기준선 HPV-혈청음성 평가가능한 면역원성 모집단에 있어서, 2가 rLP2086 + 가다실 군(1 군) 및 식염수 + 가다실 군(3 군)의 경우 백신접종3에서 가다실 용량투여 1개월후에 HPV 항원들에 대해 HPV 혈청전환에 대한 사전지정된 기준을 달성한 대상자들의 비율은 다음과 같았다: HPV-6(각각 99.4% 및 99.3%), HPV-11(각각 99.6% 및 99.5%), HPV-16(각각 99.6% 및 99.5%), 및 HPV-18(각각 99.5% 및 99.0%).
가다실 용량 1개월 후에 2가 rLP2086 + 가다실 군(1 군) 및 식염수 + 가다실 군(3 군) 사이의 반응자들 비율의 차이는 HPV-6에 대해 0.1%(95% CI; -0.9, 1.5), HPV-11에 대해 0.1%(95% CI: -0.7, 1.3), HPV-16에 대해 0.1%(95% CI; -0.7, 1.3), 및 HPV-18에 대해 0.5%(95% CI; -0.6, 1.9)이었다.
2가 rLP2086 + 가다실 군(1 군) 및 식염수 + 가다실 군(3 군)의 경우, 혈청전환율 차이는 4개 HPV 항원 모두에 걸쳐 0.1% 및 0.5% 이내였으며, 상기 혈청전환율은, 99%보다 많은 대상자들이 4개 HPV 항원 모두에 대해 혈청전환되면서, 군 전체에 걸쳐 매우 유사하였다.
추가의 평가로서, 백신접종3 1개월 후에 2개의 주요 MnB 균주(A22 및 B24)에 대한 hSBA 역가 4배 반응률을 분석함으로써, 2가 rLP2086 + 가다실 군(1 군)을 2가 rLP2086 + 식염수 군(2 군)과 비교하였다. 2개 주요 MnB 균주들에 대해 백신접종3 1개월 후에 기준선으로부터 ≥4의 hSBA 역가 배수 증가를 달성한 대상자들의 비율은 다음과 같았다: 1 군의 대상자들 중에서 85.3%가 시험 균주 A22에 대한 hSBA 역가에 ≥4배 증가를 나타내었고, 83.4%가 시험 균주 B24에 대한 hSBA 역가에 ≥4배 증가를 나타내었다. 2 군의 대상자들 중에서 86.4%가 시험 균주 A22에 대한 hSBA 역가에 ≥4배 증가를 나타내었고, 84.8%가 시험 균주 B24에 대한 hSBA 역가에 ≥4배 증가를 나타내었다.
백신접종3 1개월 후에 1 군과 2 군 사이의 반응자들 비율의 차이는 A22에 대해 -1.1%(95% CI:-4.6, 2.3) 및 B24에 대해 -1.4%(95% CI: -5.1, 2.3)이었다. 4배 반응률의 차이는 모두 1% 값 부근이었으며, 이때 비율 차이의 95% CI의 하한계는 -4.6%(A22) 및 -5.1%(B24)이었다.
2가 rLP2086에 대한 면역 반응. 본 연구의 또 다른 목표는, 2차 방문(방문 3) 및 2가 rLP2086에 의한 3차(방문 5) 백신접종 1개월 후에 측정된, 4개의 주요 MnB 시험 균주, 곧 LP2086 서브패밀리 A 단백질을 발현하는 2개(A22 및 A56) 및 LP2086 서브패밀리 B 단백질을 발현하는 2개(B24 및 B44)를 사용하여 수행된 hSBA에 의해 측정된 바와 같은 면역 반응을 설명하는 것이었다.
상기 목표를 위한 평가변수 중 하나는, 4개 주요 MnB 시험 균주 각각에 대해 백신접종2(방문 3) 1개월후 및 백신접종3(방문 5) 1개월후 ≥LLOQ의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율이었다. 평가가능한 면역원성 모집단에서 4개 주요 MnB 시험 균주 각각에 대해 ≥LLOQ의 hSBA 역가를 갖는 대상자의 비율을 평가하였다. A22에 대한 LLOQ는 1:16과 동등한 hSBA 역가였던 반면, 나머지 MnB 시험 균주들 모두에 대한 LLOQ는 1:8과 동등한 hSBA 역가였다.
2 군(2가 rLP2086 + 식염수)의 경우, 기준선(백신접종1 이전)에서 ≥LLOQ의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율은 A22에 대해 16.4%, A56에 대해 9.3%, B24에 대해 6.9% 및 B44에 대해 2.5%이었다. 2 군의 경우, 백신접종2 1개월후 및 백신접종3 1개월후에 ≥LLOQ의 hSBA 역가를 달성한 대상자들의 비율은 A22에 대해 각각 85.8% 및 96.3%; A56에 대해 각각 98.5% 및 99.4%; B24에 대해 각각 74.2% 및 92.6%; 및 B44에 대해 각각 57.1% 및 85.7%이었다.
1 군(2가 rLP2086 + 가다실)의 경우, 기준선(백신접종1 이전)에서 ≥LLOQ의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율은 A22에 대해 13.7%, A56에 대해 9.2%, B24에 대해 5.1% 및 B44에 대해 1.4%이었다. 1 군의 경우, 백신접종2 1개월후 및 백신접종3 1개월후 ≥LLOQ의 hSBA 역가를 달성한 대상자들의 비율은 A22에 대해 각각 83.0% 및 94.0%; A56에 대해 각각 97.5% 및 98.9%; B24에 대해 각각 70.6% 및 90.5%; 및 B44에 대해 각각 54.5% 및 82.7%이었다.
4개 주요 MnB 시험 균주에 대한 실질적인 hSBA 반응은 백신접종2 1개월 후에 1 군 및 2 군 대상자 둘 다에서 관찰되었으며, 백신접종3 1개월 후에 추가의 증가가 관찰되었다.
4개 주요 MnB 시험 균주 각각에 대해 ≥4의 hSBA 역가 배수 증가를 달성한 대상자들의 비율 및 평가가능한 면역원성 모집단에서 복합 반응을 달성한 대상자들의 비율을 평가하였다. 기준선(백신접종1 이전)에서 조합된 4개 MnB 균주 모두에 대해 ≥LLOQ의 관찰 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율은 1 군(0.3%)과 2 군(0.7%) 사이에서 유사하였다.
2 군(2가 rLP2086 + 식염수)의 경우, 기준선으로부터 백신접종3 1개월후까지 ≥4의 hSBA 역가 배수 증가를 달성한 대상자들의 비율은 A22에 대해 86.4%, A56에 대해 95.3%, B24에 대해 84.8% 및 B44에 대해 80.7%이었으며, 대상자들의 83.9%가 복합 hSBA 반응(조합된 4개 주요 균주 모두에 대해 ≥LLOQ의 hSBA)을 달성하였다. 백신접종2 1개월 후에, 기준선으로부터 ≥4의 hSBA 역가 배수 증가를 달성한 대상자들의 비율은 A22에 대해 74.2%, A56에 대해 92.6%, B24에 대해 63.4% 및 B44에 대해 47.4%이었고, 대상자들의 51.9%가 복합 hSBA 반응을 달성하였다.
1 군(2가 rLP2086 + 식염수)의 경우, 기준선으로부터 백신접종3 1개월 후까지 ≥4의 hSBA 역가 배수 증가를 달성한 대상자들의 비율은 A22에 대해 86.4%, A56에 대해 95.3%, B24에 대해 84.8% 및 B44에 대해 80.7%이었으며, 대상자들의 83.9%가 복합 hSBA 반응(조합된 4개 주요 균주 모두에 대해 ≥LLOQ의 hSBA)을 달성하였다. 백신접종2 1개월 후에, 기준선으로부터 ≥4의 hSBA 역가 배수 증가를 달성한 대상자들의 비율은 A22에 대해 74.2%, A56에 대해 92.6%, B24에 대해 63.4% 및 B44에 대해 47.4%이었고, 대상자들의 51.9%가 복합 hSBA 반응을 달성하였다.
추가의 hSBA 배수 반응. 다른 평가변수는 4개 주요 MnB 균주 각각에 대해 기준선으로부터 각각의 백신접종후 채혈 방문까지 적어도 2배 및 3배 hSBA 역가 증가를 달성한 대상자들의 비율이었다. A22에 대한 LLOQ는 1:16과 동등한 hSBA 역가인 반면, 나머지 MnB 시험 균주 모두에 대한 LLOQ는 1:8과 동등한 hSBA 역가였음을 유의한다.
MnB 균주에 대해 1 군 및 2 군에 있어서 기준선으로부터 백신접종2 1개월후까지 hSBA 역가에 ≥2배 증가를 달성한 대상자들의 비율은 A22에 대해 각각 77.3% 및 81.1%; A56에 대해 각각 94.4% 및 95.3%; B24에 대해 각각 63.0% 및 66.0%; 및 B44에 대해 각각 46.1% 및 48.6%이었다. MnB 균주에 대해 1 군 및 2 군에 있어서 기준선으로부터 백신접종3 1개월후까지 ≥2의 hSBA 역가 배수 증가를 달성한 대상자들의 비율은 A22에 대해 각각 90.2% 및 92.8%; A56에 대해 각각 97.2% 및 97.9%; B24에 대해 각각 84.6% 및 87.2%; 및 B44에 대해 각각 77.7% 및 81.7%이었다.
MnB 균주에 대해 1 군 및 2 군에 있어서 기준선으로부터 백신접종2 1개월 후까지 ≥3의 hSBA 역가 배수 증가를 달성한 대상자들의 비율은 A22에 대해 각각 73.1% 및 74.2%; A56에 대해 각각 92.5% 및 92.6%; B24에 대해 각각 61.3% 및 63.4%; 및 B44에 대해 각각 45.7% 및 47.4%이었다. MnB 균주에 대해 1 군 및 2 군에 있어서 기준선으로부터 백신접종3 1개월 후까지 ≥3의 hSBA 역가 배수 증가를 달성한 대상자들의 비율은 A22에 대해 각각 85.3% 및 86.4%; A56에 대해 각각 95.0% 및 95.3%; B24에 대해 각각 83.4% 및 84.8%; 및 B44에 대해 각각 77.0% 및 80.7%이었다.
상기 목표 하에서의 서술적 평가변수들을 요약하면, 대상자들의 대부분이 4개 주요 MnB 시험 균주 모두에 대해 1 군(2가 rLP2086 + 가다실) 및 2 군(2가 rLP2086 + 식염수) 둘 다에 있어서 ≥LLOQ의 hSBA 역가를 달성한 반면, 매우 적은 비율의 대상자만이 기준선에서(백신접종전 방문 1) ≥LLOQ의 측정가능한 hSBA 역가를 달성하였다. 4개 MnB 균주들에 의한 실질적인 면역 반응은 백신접종2 1개월 후에 관찰되었으며, 1 군 및 2 군 대상자들 둘 다에서 백신접종3 1개월 후에 추가의 증가가 관찰되었다. 이러한 결론은, 3개 용량후 ≥1:16의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율, 2개 군 모두에서 2개 용량후 및 3개 용량후 달성된 관찰 GMT, 및 4개 주요 MnB 시험 균주에 대한 RCDC에 의해 확인되었다.
1 군 및 2 군 둘 다에서, 높은 비율의 대상자들이 주요 MnB 시험 균주 각각에 대해 ≥4의 hSBA 역가 배수 증가 및 3차 연구 백신접종후 4개 주요 MnB 시험 균주들에 대해 ≥LLOQ의 복합 hSBA 반응을 달성하였다.
또한, 대상자들의 대부분이 1 군(2가 rLP2086 + 가다실) 및 2 군(2가 rLP2086 + 식염수) 둘 다에서 모든 채혈 시점에서 4개 주요 MnB 균주에 대해 ≥3의 hSBA 역가 배수 증가 및 ≥2의 hSBA 역가 배수 증가를 달성하였다. 상기 기준을 충족시키는 결과를 갖는 대상자들의 비율은 2회 백신접종과 비교하여 3회 백신접종후에 더 높았다.
상기 결과들은, HPV 백신인 가다실과 동시투여시 2가 rLP2086에 대한 면역 반응이 2가 rLP2086 + 식염수에 대한 면역 반응에 필적하는 강한 면역 반응을 제공한다는 증거를 뒷받침한다.
HPV GMT. 실시예 8의 표 B는 평가가능한 면역원성 모집단에 있어서 1 군(2가 rLP2086 + 가다실) 및 3 군(식염수 + 가다실)에서 백신접종3 1개월 후에 4개 HPV 항원 각각에 대한 GMT 및 상응하는 CI를 나타낸 것이다.
3 군의 경우, 기준선(백신접종1 이전)에서 및 백신접종3 1개월후에 HPV GMT는 HPV-6에 대해 각각 6.0 및 550.3; HPV-11에 대해 각각 4.3 및 1084.3; HPV-16에 대해 각각 6.1 및 4763.4; 및 HPV-18에 대해 각각 5.3 및 1047.4였다. 1 군(2가 rLP2086 + 가다실)의 경우, 기준선(백신접종1 이전)에서 및 백신접종3 1개월후에 HPV GMT는 HPV-6에 대해 각각 5.8 및 451.8; HPV-11에 대해 각각 4.2 및 892.9; HPV-16에 대해 각각 5.8 및 3695.4; 및 HPV-18에 대해 각각 5.2 및 744.0이었다. 전체적으로, GMT는 수치적으로 1 군과 비교하여 3 군에 대해 더 높았다. HPV-6, HPV-11, HPV-16 및 HPV-18에 대한 역가 분포를 보여주는 역 누적 분포 곡선(RCDC)을 평가가능한 면역원성 모집단에 대해 모든 채혈 시점에서 1 군(2가 rLP2086 + 가다실) 및 3 군(식염수 + 가다실)에서 평가하였다. RCDC는 1 군 및 3 군 둘 다에서 백신접종3 후의 대상자들중에서 강한 면역 반응을 나타내었다.
가다실에 대한 면역 반응의 요약. HPV 항원들에 대한 GMT는 수치적으로 1 군(2가 rLP2086 + 가다실)에 비해 3 군(식염수 + 가다실)에서 더 높았으며, 백신접종3 후에 관찰된 HPV GMT는 2개 군 모두에서 강한 면역 반응을 나타내었다. RCDC도 또한 1 군 및 3 군 둘 다에서 백신접종3 후의 강한 면역 반응을 뒷받침하였다. 이것은 2개 군 모두에서 백신접종3 1개월 후에 >99%였던, 4개 HPV 항원에 대해 혈청양성 상태를 갖는 대상자들의 비율에 의해 또한 뒷받침되었다. 더 어린 연령의 하위군은 더 높은 연령 하위군보다 3 군(식염수 + 가다실)에서 더 높은 HPV GMT를 나타내었다. 상기 차이는 가다실이 2가 rLP2086과 병용 투여될 때 유지되었다.
면역원성 결론. 식염수 + 가다실에 비해 또는 2가 rLP2086 + 식염수에 비해 2가 rLP2086 + 가다실의 비열등성 기준은, 4개 HPV 항원(HPV-6, HPV-11, HPV-16 및 HPV-18) 모두에 대해 HPV에 대한 항체들에 대한 기하 평균 역가 비(GMR)에 대해서 및 백신접종3 1개월 후에 2개의 주요 MnB 시험 균주(A22 및 B24)를 이용한 hSBA 역가에 대해 양측 95% CI의 하한치가 0.67보다 커야할 것을 요구하였다. 상기 사전지정된 임계치는 2개 MnB 균주 모두 및 4개 HPV 항원들중 3개에 대해 충족되었다. HPV-18의 경우, GMR에 대한 양측 95% CI의 하한치는, 0.62로, 0.67의 사전지정된 임계치보다 약간 낮았다.
4개 HPV 항원 모두에 대한 혈청전환은 2가 rLP2086과 또는 식염수와 병용적으로 가다실을 투여받은 군에서 99% 이상의 대상자들에 의해 달성되었다. 4개 HPV 항원 모두에 대한 RCDC는 대상자들의 대부분이 백신접종3 1개월 후에 혈청전환 임계치보다 높은 반응을 달성하였음을 보여준다. 기준선에 비해 강한 GMT는 가다실을 투여받은 2개 군 모두에서 관찰되었다.
2개의 주요 MnB 시험 균주(A22 및 B24)에 대한 4배 증가 반응은 rLP2086 + 가다실을 투여받은 군(각각 85.3% 및 83.4%) 및 2가 rLP2086 + 식염수를 투여받은 군(각각 86.4% 및 84.8%) 사이에서 유사하였다(83.4 내지 86.4%의 범위).
2가 rLP2086에 대한 반응의 추가의 서술적 분석을 4개의 주요 MnB 시험 균주(A22, A56, B24 및 B44)를 사용하여 수행하였다. 높은 비율의 대상자들이, 백신접종 2 또는 3의 1개월 후에, 가다실(2가 rLP2086 + 가다실)과 병용되든지 또는 식염수(2가 rLP2086 + 식염수)와 병용되든지, 2가 rLP2086을 투여받은 2개 군 모두에서 평가가능한 면역원성 모집단에 대해 ≥4의 hSBA 역가 배수 증가 및 복합 반응(3상 임상 프로그램에서 사용된 바와 같은 모든 4개의 주요 MnB 시험 균주 및 동일한 면역원성/효능 평가변수 정의)을 달성하였다. 상기 반응들은 혈청군 B 질환을 포함한 수막구균 질환에 대한 보호와 상관되는 것으로 입증된 ≥1:4의 hSBA 역가보다 실질적으로 더 높았다. 상기 결과들은 또한 식염수와 함께 투여되든 또는 가다실과 병용투여되든 2가 rLP2086에 대한 강한 면역 반응의 증거를 시사하고 뒷받침한다.
결론: 데이터는 2개 백신 모두에 대한 강한 면역 반응이 rLP2086 + HPV4의 병용 투여후에 야기되었음을 시사한다. 사전지정된 비열등성 기준은 6개 항원들중 5개에 대해 충족되었다. HPV-18에 대한 GMR은 비열등성 기준에 아슬아슬하게 미치지 못했지만, 반응자들의 높은 비율(≥99%)은 임상 효과가 병용 투여후에도 유지될 것으로 예상됨을 시사한다. 2가 rLP2086은 잘 허용되었으며 백신내 균주와 이종인 fHBP를 발현하는 시험 균주에 대해 강한 면역 반응을 유도하였다.
[표 A]
백신접종3 1개월후에 기하 평균 역가의 비교(평가가능한 면역원성 모집단)
Figure pct00010
[표 B]
백신접종3 1개월후 HPV 혈청전환을 달성한 대상자들의 비교 - 기준선 HPV 혈청음성 평가가능한 면역원성 모집단
Figure pct00011
실시예 9: 2가 rLP2086 백신 효능
침습성 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B(MnB) 균주에 대한 혈청 살균 항체 반응의 효능 및 입증의 대용물로서 hSBA 반응을 이용하여 2가 rLP2086의 효능을 추정하였다.
침습성 수막구균 질환(IMD) 야기 균주를 대표하는 4개의 MnB 균주를 평가에 사용하였다. 각각의 MnB 시험 균주는 백신 성분(A05 및 B01)과 이종인(상이한) fHBP 단백질 변이체(A22, A56, B24 또는 B44)를 발현한다.
2가 rLP2086의 효능은 미국 및 유럽에서 11 내지 18세 연령의 4,459명 청소년에서 수행된 3가지 무작위 통제 2상 연구에서 평가하였다(실시예 6도 참조). 0-, 2- 및 6-개월 백신접종 스케줄을 이용하여 총 2,293 명이 적어도 1개 용량의 2가 rLP2086 120 ㎍을 투여받았다. 2가 rLP2086으로 백신접종된 대상자들에서 hSBA 면역 반응을 평가함으로써 효능을 평가하였다.
효능은 5가지 공동-1차(co-primary) 면역원성 평가변수를 이용하여 추정하였다. 5가지 공동-1차 평가변수들중 4가지에 있어서, 사전지정된 비율의 대상자들은 2가 rLP2086 3개 용량 후에 4개 MnB 시험 균주 각각에 대한 hSBA 역가에 4배 증가를 달성해야 했다. 5번째 공동-1차 평가변수는, 사전지정된 높은 비율의 대상자들이 각각 2가 rLP2086의 3개 용량 후에 주요 MnB 시험 균주를 사용한 4개 hSBA 모두에서 반응할 것을 요구하는 복합 평가변수였다. 면역 반응은 또한 백신의 3차 용량 1개월 후에 ≥정량하한(LLOQ)의 hSBA 역가를 달성한 대상자들의 비율에 근거하여 평가하였다. LLOQ는 측정될 수 있는 샘플중 항체의 최저량으로 정의된다.
연구 1(실시예 7 및 실시예 8에서 기술됨)은 2 상, 무작위 능동-통제, 관찰자-맹검, 다기관 시험으로, 여기에서는 11 내지 17세 연령의 2,499명의 미국 대상자들이 3개 군 중 1개 군에 무작위로 배정되었다(2:2:1 비): 1 군은 2가 rLP2086 + HPV4를 투여받고, 2 군은 2가 rLP2086 + 식염수를 투여받고, 3 군은 식염수 + HPV4를 투여받았다. 모든 백신접종은 0-, 2- 및 6-개월 스케줄로 투여되었다.
연구 2(실시예 4에서 기술됨)는 2상, 무작위 위약-통제, 단일-맹검 시험으로 여기에서는 11 내지 18세 연령의 753명의 유럽 대상자들이 다음 2개 군에 1:1 비로 무작위 배정되었다: 1 군은 0-, 2- 및 6-개월에 2가 rLP2086, 및 0-개월에 dTaP-IPV(디프테리아, 파상풍, 무세포성 백일해-불활성화 소아마비 바이러스)를 투여받았다. 2 군은 0-, 2- 및 6-개월에 식염수, 및 0-개월에 dTaP-IPV를 투여받았다.
연구 3(실시예 5에서 기술됨)은 2 상, 무작위 위약-통제, 단일-맹검, 다기관 시험으로, 여기에서는 11 내지 18세 연령의 1,713명의 유럽 대상자들이 5개 군에 3:3:3:2:1 비로 무작위 배정되었다. 대상자들은 0-, 1- 및 6-개월 스케줄(1 군); 0-, 2- 및 6-개월 스케줄(2 군); 0- 및 6-개월 스케줄(3 군); 0- 및 2-개월 스케줄(4 군); 또는 0- 및 4-개월 스케줄(5 군)로 2가 rLP2086의 2 또는 3개 용량을 투여받았다. 식염수 주사(군에 따라 1 또는 2개 용량)를 맹검을 유지하기 위해 각 군에 투여하였다.
0-, 2- 및 6-개월에 2가 rLP2086의 3개-용량 시리즈를 투여받은 대상자들 중에서 연구 1, 2 및 3의 결과를 각각의 실시예 4 내지 8에서 전술하였다. 4배 및 복합 반응률의 평가는 모든 연구에서 탐색적 평가변수였다. 4배 반응률은, 4개 평가변수 모두에 대한 95% 신뢰 구간(CI)의 하한계가 3개 연구중에서 유사하였으며 3 상 평가변수에 대한 임계치를 일관되게 충족시켰음을 보여주었다. ≥LLOQ의 hSBA 역가를 달성한 대상자들의 비율은 3개 연구 전체에 걸쳐 유사하였다.
1 또는 2 개월 간격으로 제공된 백신의 2회 투여 후에 수득된 hSBA 데이터에 근거하여, 상기 간격들에 걸쳐 투여된 백신 2개 용량은 수막구균 혈청군 B 질환의 경우에 잠재적인 노출로 인해 위험이 증가된 개체에 대한 보호를 제공할 수 있다. 1 또는 2 개월 간격으로 전달된 2회 백신 투여 후 관찰된 반응은, 대상자들의 일부가 4개 주요 시험 균주 각각에 대해 LLOQ 값 이상의 hSBA 수준을 나타내었음을 보여주었다(1 군 및 2 군의 경우 연구 1 결과 참조; 1 군의 경우 연구 2 결과 참조; 2 군의 경우 연구 3 결과 참조). 6 개월에 투여된 백신의 3차 용량은 백신-매개 보호를 달성할 수 있다.
병용 백신 투여. 연구 1(실시예 7 및 8에서 기술됨)은 미국 청소년들에서 2가 rLP2086 및 HPV4의 병용 사용을 평가하였다. 연구 평가변수는 3차 백신접종 1개월후에, 4개 HPV4 항원(기하 평균 역가[GMT]에 근거) 및 2가 rLP2086(2개의 MnB 시험 균주[변이체 A22 및 B24]를 사용한 hSBA에 근거)에 대한 면역 반응의 비열등성 평가를 포함하였다. HPV4 면역 반응은 또한 4개 HPV 항원 각각에 대한 혈청전환에 의해 평가하였다.
연구 1은, 1 군(2가 rLP2086 + HPV4) 및 3 군(식염수 + HPV4)에서 HPV 항원에 대한 항체의 기하 평균 역가(GMT)와, 1 군과 3 군 사이의 그의 상응하는 GMT 비(GMR) 및 상기 비의 양측 95% CI와의 비교를 보여준다. 연구 1은 또한, 1 군 및 2 군에서 2개 주요 MnB 시험 균주에 대한 hSBA GMT와, 1 군과 2 군 사이의 그의 상응하는 GMR 및 상기 비의 양측 95% CI와의 비교를 제공한다. 비열등성 한계에 대한 기준은 1.5배로서, 이것은 GMR의 양측 95% CI의 하한치에 대한 0.67의 값에 상응한다. 0.67의 1.5배 기준은, 모든 MnB 시험 균주, 및 0.62의 95% 신뢰 구간(CI) 하한계를 나타낸 HPV-18을 제외한 HPV 항원들에 대해 충족되었다. HPV-18에 대한 반응이 사전지정된 비열등성 기준을 충족시키진 않았지만, 차이는 미미하였다. 별도의 분석에서, 대상자의 ≥99%가 식염수 + HPV4 및 2가 rLP2086 + HPV4 군 둘 다에서 4개 HPV 항원 모두로 혈청전환되었다.
실시예 10
2가 rLP2086은 우세하고 돌발-연관된 fHBP 변이체를 발현하는 MnB 균주들에 대해 광범위한 적용범위를 제공하는 개체들에서 항체를 유도한다
인간 보체를 사용한 혈청 살균 분석(hSBA)에서 측정된 살균성 항체들은 수막구균성 질환으로부터의 보호와 상관되었으며, hSBA 반응은 통상적으로 백신 효능의 대용물로서 사용되었다. fHBP 다양성에 대한 세계적인 유행병학 연구는 수막구균성 질환의 약 80%가 10개의 우세한 fHBP 변이체들 중 하나를 발현하는 균주들에 의해 야기됨을 밝혔다.
방법: 2가 rLP2086으로 면역화된 개별적인 인간 대상자들에서 미국 및 유럽에서 가장 우세한 10개의 fHBP 변이체들(B24, B16, B44, A22, B03, B09, A12, A19, A05 및 A07)을 발현하는 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B(MnB) 균주들에 대한 hSBA 반응을 평가하였다. 상기 10개의 가장 우세한 변이체들을 발현하는 MnB 균주는, MnB SBA 균주 풀, 및 MnB SBA 균주 풀의 US 부분집합 각각에서 균주들(부분군 별)의 >98% 및 97%에 해당하는 6개 주요 fHBP 부분군들 중 5개를 포함하여, fHBP 다양성의 광범위함을 나타낸다. 2000년과 2006년 사이에 미국 및 유럽에서 체계적으로 수집된 균주를 대표하는 화이자의 MnB SBA 균주 풀(N=1263)로부터 23개 MnB 시험 균주들을 수득하였다. 또한, 최근의 MnB 질환 발생으로부터 수득된 분리균이 분석에 포함되었다. 매칭된 백신접종전 및 백신접종후 혈청(용량 2 이후 및 용량 3 이후)은 임상 연구 B1971005, B1971012 또는 B1971003에 참가한 청소년 및 젊은 성인 대상자들로부터 무작위로 수득하였다.
2가 rLP2086으로 백신접종하여 수득된 잠재적 적용범위를 뒷받침하는 추가의 정보를 제공하기 위해, 실시예 5 및 실시예 6에서 기술된, 2가 rLP2086(임상 연구 B1971012)으로 면역화된 9명의 대상자들로부터의 발생 균주 및 혈청 샘플을 사용하여 hSBA를 수행하였다. 대상자들(11 내지 <19세 연령)은 제 0, 2 및 6 개월에 2가 rLP2086의 3개 용량을 투여받았다. 보존적 hSBA 평가를 보장하기 위해, 주요 MnB 시험 균주들에 대해 기준선 hSBA 활성을 갖지 않는 일군의 대상자들로부터 비-편향 방식으로 9명의 대상자를 선택하였다. 클론성 프린스턴 대학 발생 균주들 중 2개(PMB5021 및 PMB5025) 및 UCSB 발생 균주들 중 2개(2개 유전자 클러스터 각각으로부터 하나씩, PMB4478 및 PMB4479)를 시험하였다.
클론성 프린스턴 대학 MnB 발생 균주들의 유전자 특성화는 다음과 같다: 데이터는 프린스턴 대학 발생 균주들이 클론성임을 시사한다. 균주들 각각은 CC41/44(ST 409)로서 분류되었으며 fHBP 변이체 B153(서열번호 6)을 발현하였다. 상기 균주는 NHBA(2), porA(아형 P1.5-1, 2-2) 및 porB(3-82)에 대해 동일한 대립유전자 배치를 나타내었으며, 모두 nadA가 존재하지 않았고, 모두 동일한 펄스장 겔 전기영동(PFGE) 프로필(429)을 나타내었다.
2013 유니버시티 오브 캘리포니아 산타 바바라(2013 University of California Santa Barbara) 발생 균주의 유전자 특성화는 다음과 같다: UCSB 균주는 CC32(ET5; ST32)로 분류되었고, fHBP 변이체 B24를 발현하였으며, 1993년 이래로 고-유행성(hyperendemic) 혈청군 B 질환과 연관된 오레곤(Oregon) 클론과 관련된다. 프린스턴 발생 균주 군과 달리, UCSB 균주는 그의 PFGE 프로필(468 또는 467) 및 porB 유형(3-461 또는 3-24)에 의해 차별화된 2개의 별개의 클러스터로 유전자적으로 구분되었다. 상기 균주들은 NadA(1), NHBA(5), porA(아형 P1.7, 16-200에 대해 동일한 대립유전자 배치를 가졌다.
모든 대상자 및 모든 발생 균주들에 대해 기준선에서의 hSBA 역가는 <4이어서, 대상자들이 2가 rLP2086으로 면역화 전에 어떤 발생 균주들에 대해서도 보호 항체를 갖지 않았음을 시사하였다.
결과: 23개 MnB 균주 모두 2가 rLP2086으로 면역화된 개개 대상자들로부터의 혈청을 사용한 hSBA에서 민감하였다. 10개의 우세한 fHBP 변이체 모두에 해당하는 균주들 및 추가의 균주들 모두 hSBA에 의해 사멸되었다. 기준선 hSBA 혈청보호율(≥1:4의 hSBA 역가를 달성한 대상자 비율)은 일반적으로 낮았다. 2가 rLP2086으로 면역화되기 전에 대상자에서 관찰된 보다 낮은 혈청보호율은 MnB 질환에 대한 백신접종되지 않은 청소년 또는 젊은 성인 집단의 취약성을 예시한다. 그러나, 백신접종후 혈청을 갖는 청소년 및 젊은 성인들에서는 강한 혈청보호율이 관찰되었다: 시험된 MnB 균주 및 집단에 따라 상기 균주들의 83%에 대해 >70%의 혈청보호율이 관찰되었다. 가장 우세한 서브패밀리 A 및 B fHBP 변이체, B24 및 A22를 발현하는 균주들에 대한 백신접종후 혈청보호율은 81.0 내지 100%의 범위였으며, fHBP 변이체 B24 및 B153을 발현하는 최근의 발생 균주에 대해서는 77.8 내지 100%의 범위였다. 또한, 모든 발생 균주에 대한 용량 2 이후의 강한 반응(기준선 대비)이, hSBA에 사용된 발생 균주에 따라 56 내지 89%의 범위로, 상기 대상자들에서 관찰되었다. 대조적으로, 백신접종후 혈청보호율은 최근 미국 발생 균주의 경우 낮거나 검출가능하지 않았다. 프린스턴 대학 및 UCSB 발생 균주들에 대한 hSBA 반응은 도 2에 나타내었다.
결론: 2가 rLP2086은 미국 및 유럽에서 우세한 fHBP 뿐 아니라 새로 출현하는 변이체(B153)(서열번호 6)를 발현하는 다양한 침습성 MnB 균주에 대해 개체에서 강한 혈청보호 hSBA 반응을 유도한다. 2가 rLP2086으로 면역화후 혈청보호 반응을 나타낸 대상자들의 비율은 기준선에서 혈청보호된 대상자들의 비율을 크게 초과하였다. 상기 데이터는 2가 rLP2086이 최근 발생 질환들로부터의 질환을 포함하여 침습성 수막구균성 혈청군 B 질환으로부터 청소년 및 젊은 성인의 광범위한 보호를 제공할 잠재력을 가짐을 뒷받침한다.
> B153 (서열번호 6)
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실시예 11: 미국 청소년들에서 Tdap 및 MCV4와 동시투여된 , 수막구균 혈청군 B 백신인 2가 rLP2086의 면역원성 및 안전성
≥10 내지 <13세 연령의 건강한 대상자들에서 병용 투여시 MCV4, Tdap 백신 및 2가 rLP2086 백신의 안전성, 내약성 및 면역원성을 평가하기 위한 2상, 무작위 능동-통제, 관찰자 맹검 시험.
배경: 미국에서 권장되는 백신들과 2가 rLP2086의 병행 투여는 백신 스케줄에 대한 준수를 개선할 수 있다.
목표: 미국에서 승인된 트루멘바®[수막구균 B(MnB) 백신](2가 rLP2086)와 메낙트라®[수막구균 A, C, Y 및 W-135 폴리사카라이드 접합 백신(MCV4)] 및 아다셀®[파상풍 톡소이드, 환원 디프테라이 톡소이드, 무세포성 백일해 백신(Tdap)]의 동시투여에 의해 유도된 면역 반응이 MCV4 + Tdap 또는 2가 rLP2086 단독보다 열등하지 않음을 측정하기 위해.
설계/방법: ≥10 내지 <13세 연령의 건강한 청소년들에게 MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086, MCV4 + Tdap, 또는 2가 rLP2086을 투여하였다. 2가 rLP2086 면역원성은, 백신-이종 fHBP 변이체들을 발현하는 2개의 MnB 시험 균주들을 사용하여 인간 보체를 이용한 혈청 살균 분석(hSBA)에 의해 평가하였으며; 다중화 루미넥스 분석 및/또는 토끼 SBA는 MCV4/Tdap 항원들의 면역원성을 평가하였다. 안전성을 평가하였다.
결과: 2648명의 대상자들이 MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086, MCV4 + Tdap, 또는 2가 rLP2086을 투여받았다. 병용 투여된 MCV4, Tdap, 및 2가 rLP2086에 대한 면역 반응은 MCV4 + Tdap 또는 2가 rLP2086 단독에 대한 면역 반응보다 열등하지 않았다. 백신접종 2 및 3 후에 MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086 수용자들의 62.3 내지 68.0% 및 87.5 내지 90%가 각각 2개의 MnB 시험 균주들에 대해 사전지정된 혈청보호 hSBA 역가를 나타내었고; 2가 rLP2086 단독은 유사한 반응을 유도하였다. 병용 투여는 2가 rLP2086 단독에 비해 국소 반응 또는 전신 반응을 별로 증가시키지 않았다.
MCV4 + Tdap와 병용 투여된 2가 rLP2086은 반응원성에 임상적으로 유의적인 증가없이 모든 비열등성 면역원성 기준을 충족시켰다. 병용 투여와 연관된 편의성은 권장 스케줄에 대한 준수를 개선할 수 있다.
본 연구(B1971015)는 4가 수막구균성 폴리사카라이드 접합체(MCV4) 백신; 파상풍, 디프테리아 및 무세포성 백일해(Tdap) 백신; 및 병용 투여시 2가 rLP2086의 면역원성을 평가하였다. 상기 연구는 또한 미국에서 ≥10 내지 <13세 연령의 건강한 대상자들에서 2가 rLP2086의 안전성, 내약성 및 면역원성을 평가하였다. 허가받은 백신들과 함께 또는 백신들없이 투여시 2가 rLP2086에 대한 면역 반응의 비열등성을 평가하기 위해 hSBA에 사용된 2개의 MnB 시험 균주들은 미국에서 가장 우세한 2개의 fHBP, 즉 A22 및 B24를 발현한다.
활성 대조군으로 사용될 수 있는, MnB에 대한 입증된 안전하고 면역원성이며 효과적인 백신이 없기 때문에 식염수를 연구 맹검을 유지하기 위한 위약으로 사용하였다. 또한, 연구용 제품의 내약성 프로필을 서술하기 위한 안전성 목표가 또 다른 백신보다는 식염수를 사용하여 충족되었기 때문에, 부형제(예를 들면, 알루미늄)를 사용한 대조군 백신과 달리 불활성 대조군으로 식염수를 선택하였다.
미국에서 약 88개 사이트에서 본 연구에 약 2625명의 대상자들이 참가하기로 하였다(각 사이트에서 약 30명의 대상자). 대상자들은 3개 군 중 1개 군에 1:1:1 비(1 군: 2 군: 3군)로 무작위 배정되었다(표 A). 대상자들은 백신접종 방문(방문 1, 3 및 5) 각각에서 연구용 제품들을 투여받았다.
다음중 어느 하나가 있는 대상자들은 연구에 포함되지 못했다: 임의의 수막구균 혈청군 B 백신에 의한 이전의 백신접종; 첫번째 연구 백신접종의 5년 이내에 임의의 디프테리아, 파상풍 또는 백일해 백신에 의해 백신접종; 임의의 MCV4 백신에 의한 이전의 백신접종.
[표 A]
연구 설계
Figure pct00012
연구동안, 1 군 및 3 군의 대상자들은 대략적으로 0, 2 및 6 개월(각각 방문 1, 3 및 5)에 왼쪽 팔에 2가 rLP2086을 투여받았다. 2 군의 대상자들의 경우에는, 대략적으로 0, 2 및 6 개월(각각 방문 1, 3 및 5)에 왼쪽 팔에 식염수를 군육내(IM) 주사(0.5 mL)에 의해 투여받았다. 3 군의 대상자들은 0 개월에 오른쪽 팔에 2회의 IM 식염수 주사를 투여받았다. MCV4 및 Tdap 백신은 0 개월에(1 군 및 2 군) 오른쪽 팔에 IM 주사에 의해 1회만 투여받았다. 방문 6에서 마지막 채혈(백신접종3 이후 채혈) 후에, 3 군의 대상자들은 MCV4 및 Tdap 백신을 투여받았다.
MCV4 및 Tdap 백신은 0 개월에(1 군 및 2 군) 오른쪽 팔의 상부 삼각근내에 IM 주사에 의해 1회만 투여되었다. 상기 백신들은 적어도 5 cm 떨어져 투여되었다. 3 군의 대상자들은 그들의 마지막 채혈후 방문 6에서 MCV4 및 Tdap 백신을 투여받았다.
면역원성 분석을 위해 혈액 샘플(각각 약 20 ml)을 백신접종1 직전에, 백신접종1의 28 내지 41일 후에, 백신접종2의 28 내지 42일 후에, 및 백신접종3의 28 내지 42일 후에 수집하였다.
사용된 2가 rLP2086 백신은, pH 6.0에서 10 mM의 히스티딘-완충 식염수 중에 정제된 서브패밀리 A rLP2086 단백질(변이체 A05, 서열번호 1) 및 정제된 서브패밀리 B rLP2086 단백질(변이체 B01, 서열번호 2) 각각 60 ㎍, 0.15 M 염화나트륨, 2.8 몰비 폴리솔베이트 80, 및 안정화제로서 인산알루미늄(AlPO4)으로서 Al3 + 0.25 mg를 함유하도록 0.5 mL 용량으로 제형화되었다.
MCV4 백신은 상업적으로 시판하는 백신인 메낙트라®[수막구균(A, C, Y 및 W-135 군) 폴리사카라이드 디프테리아 톡소이드 접합체 백신(MCV4)]였다. 메낙트라는 IM 주사용의 0.5 ml 용량으로 공급되는 용액이다. 상기 백신은 디프테리아 톡소이드 단백질에 개별적으로 접합된 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 A, C, Y 및 W-135 캡슐 폴리사카라이드 항원들을 함유한다. 개별적인 혈청군-특이적 당접합체로 존재하는 4개의 수막구균 성분들이 최종 제형화된 백신을 구성한다. 제조시 보존제 또는 보조제는 첨가되지 않는다. 각각의 0.5 mL 용량은 계산상 2.66 ㎍(0.000532%) 미만의 포름알데하이드 잔류량을 함유할 수 있다. 메낙트라는 멸균성의 투명 내지는 약간 혼탁한 액체로 제조된다. 백신의 각각의 0.5 mL 용량은 인산나트륨 완충된 등장성 염화나트륨 용액중에 약 48 ㎍의 디프테리아 톡소이드 단백질 운반체에 접합된 수막구균 A, C, Y 및 W-135 폴리사카라이드 각각을 4 ㎍ 함유하도록 제형화된다.
Tdap 백신은 상업적으로 시판하는 백신인 아다셀®(흡착된 파상풍 톡소이드, 환원 디프테리아 톡소이드 및 무세포성 백일해 백신[Tdap])이었다. 아다셀은 IM 주사용의 0.5 mL 용량으로 공급된다. 상기 백신은 인산알루미늄 상에 흡착된 파상풍 및 디프테리아 톡소이드 및 백일해 항원의 멸균 등장성 현탁액이다. 각각의 0.5 mL 용량은 5 Lf 파상풍 톡소이드, 2 Lf 디프테리아 톡소이드 및 무세포성 백일해 항원(2.5 ㎍ 해독된 백일해 독소, 5 ㎍ 섬유상 헤마글루티닌, 3 ㎍ 퍼탁틴[PRN], 5 ㎍ 제 2 및 3 형 핌브리아)을 함유한다. 0.5 mL 용량 당 다른 성분들은 보조제로서 1.5 mg 인산알루미늄(0.33 mg 알루미늄), ≤5 ㎍ 잔류 포름알데하이드, <50 ng 잔류 글루타르알데하이드 및 3.3 mg(0.6% v/v) 2-페녹시에탄올(보존제로서가 아님)을 포함한다. 아다셀은 보존제를 함유하지 않는다.
주사용 멸균 표준 식염수 용액(0.9% 염화나트륨)은 0.5 mL 용량이었다.
2가 rLP2086 혈청 살균 분석. 2가 rLP2086에 대한 면역 반응을 평가하기 위해, 기능성 항체들을 인증된 hSBA에서 분석하였다. hSBA는 표적 MnB 균주의 보체 매개 사멸을 야기하는 인간 혈청내 항체를 측정한다. 2가 rLP2086에 의한 1차 백신접종 전에, 2가 rLP2086에 의한 2차 백신접종(방문 3) 약 1 개월 후에, 및 2가 rLP2086에 의한 3차 백신접종(방문 5) 약 1 개월 후에, 1 군 및 3 군의 모든 대상자들로부터 수득된 혈청을 균주 PMB80[A22] 및 PMB2948[B24]을 사용하여 hSBA에서 검사하였다.
MCV4 병용 백신 SBA. MCV4 백신에 대한 면역 반응을 평가하기 위해, 혈청군 A, C, Y 및 W-135를 대표하는 수막구균 균주를 사용하여 토끼 보체를 이용한 혈청 살균 분석법(rSBA)으로 기능성 항체들을 분석하였다. MCV4에 의한 1차 백신접종(방문 1) 전 및 MCV4에 의한 백신접종(방문 2) 1개월 후에 1 군 및 2 군의 모든 대상자들로부터 수득된 혈청을 상기 분석들에 사용하였다.
MCV4 및 다른 병용 백신들에 대한 항원 검출 분석. 디프테리아, 파상풍 및 백일해 항체 반응의 평가는 인증되고 다중화된 루미넥스 다중 분석법(MCV4 LXA)을 이용하여 수행하였다. MCV4에 의한 1차 백신접종(방문 1) 전 및 MCV4에 의한 백신접종(방문 2) 1개월 후에 1 군 및 2 군의 모든 대상자들로부터 수득된 혈청을 분석들에 사용하였다. 수막구균 혈청군 A, C, Y 및 W-135 반응의 추가 평가는 인증된 다중화 LXA(A, C, Y, W LXA)를 이용하여 수행하였다. MCV4 및 Tdap에 의한 1차 백신접종(방문 1) 전 및 MCV4 및 Tdap에 의한 백신접종(방문 2) 1개월 후에 1 군 및 2 군의 모든 대상자들로부터 수득된 혈청을 상기 분석들에 사용하였다.
샘플 크기. 시판 백신 및 2 MnB 균주들 중 10개 항원에 대한 항체 반응은 무관한 것으로 추정되었다. 비열등성 한계에 대한 기준은 1.5배였다.
분석 방법. PMB80(A22)에 대한 LLOQ는 1:16이었고 PMB2948(B24)에 대한 LLOQ는 1:8이었다. Tdap/MCV4 분석에 대한 LLOQ는 표 B에 열거되어 있다.
[표 B]
시판 백신 항원에 대한 면역 반응을 측정하기 위한 분석에 대한 LLOQ
Figure pct00013
공동-1차 목표( 비열등성 목표)에 대한 분석
GMT 및 GMC. MnB 균주 PMB80(A22) 및 PBM2948(B24)에 대해, 각 채혈 시점(방문 1, 4 및 6)에서 측정된 hSBA 역가를 분석을 위해 대수적으로 변환시켰으며, 양측 95% 신뢰 구간(CI)하에 각 채혈 시점에서 각각의 주요 균주에 대해서 및 각 군에 대해 GMT를 산출하였다. CI는 스튜던트 t 분포에 기초하여 대수적으로 변환된 분석 데이터의 평균에 대해 산출된 신뢰 한계의 역 변환에 의해 구축되었다. 4개의 MCV4 항원들 각각에 대해 rSBA에서 측정된 GMT 및 4개의 MCV4 항원들 각각에 대해 LXAsr에서 측정된 GMC는 방문 1 및 방문 2에서 유사하게 요약되었다. Tdap 백신내 6개 항원들 각각에 대해 LXA에 의해 측정된 GMC는 방문 1 및 방문 2에서 요약되었다.
기하 평균 비. 비열등성 가설의 검정 목적으로, 95% CI 하에, 각각의 적용가능한 방문에서 상응하는 군들(방문 6에서 hSBA 역가에 대해 1 군/3 군, 및 방문 2에서 MCV4/Tdap 항원들에 대해 1 군/2 군) 사이의 기하 평균 비(GMR)를 이용하였다. 대수 변환된 결과들의 평균차는 대수 눈금 상의 비의 평균: log(1 군/2 군) = log(1 군) - log(2 군)과 같았다. 적절한 지수 변환을 이용하여 GMR을 산출하였다. 유사하게, 상기 비들에 대한 양측 95% CI는, 스튜던트 t 분포를 이용하여 산출된 대수 변환된 분석 결과들의 평균차에 대한 CI의 역변환에 의해 구축되었다. 통계적 추론은 GMR의 CI를 기반으로 하였다(즉, 95% CI의 하한계는 >0.67이었다).
시판 백신에 대한 비열등성(MCV4/Tdap에 대한 공동-1차 목표). 첫번째 공동-1차 목표를 위해, 백신접종(방문 2) 1개월 후에 측정된 시판 백신내 10개 항원들 각각에 대한 항체 역가 또는 농도를 분석을 위해 대수적으로 변환시켰으며, 1 군 및 2 군에 대해 GM을 산출하였다. GM의 상기 비([2가 rLP2086 + MCV4/Tdap]/ [MCV4/Tdap])의 양측 95% CI를 10개 항원 각각에 대해 제공하였다.
rLP2086 백신에 대한 비열등성(2가 rLP2086에 대한 공동-1차 목표). 두번째 공동-1차 목표를 위해, 방문 6에서 측정된 2개의 주요 균주들 각각에 대한 hSBA 역가를 분석을 위해 대수적으로 변환시켰으며, 1 군 및 3 군에 대해 GMT를 산출하였다. GMR([2가 rLP2086 + MCV4/Tdap]/2가 rLP2086)의 양측 95% CI를 2개의 주요 균주들 각각에 대해 제공하였다. 시판 백신(MCV4/Tdap) 및 연구용 제품(2가 rLP2086) 둘 다의 비열등성에 대한 연구 공동-1차 목표는, 방문 2에서 ([2가 rLP2086 + MCV4/Tdap]/[MCV4/Tdap])에 대한 GMR 및 방문 6에서 [2가 rLP2086 + MCV4/Tdap]/2가 rLP2086에 대한 GMR에 대한 양측 95% CI의 하한치가 10개 MCV4/Tdap 항원 모두 및 2개 주요 균주 각각에 대해 0.67보다 컸을 때에 달성되었다. GMR(1 군/2 군)은 방문 2에서 MCV4중의 4개 항원들 각각에 대한 IgG 농도에 대해, 양측 95% CI와 함께 서술적으로 요약되었다.
hSBA 데이터의 분석. 각각의 채혈 시점에서 ≥LLOQ, ≥1:4, ≥1:8, ≥1:16, ≥1:32, ≥1:64, 및 ≥1:128의 hSBA를 달성하고, 기준선으로부터 백신접종2 이후 및 백신접종3 이후까지 hSBA 역가에 적어도 2배, 3배 및 4배 증가를 갖는 대상자들의 수 및 비율을, 1 군 및 3 군에서 주요 MnB 시험 균주 PMB80(A22) 및 PMB2948(B24)에 대한 비율의 양측 95% CI(또는 클로퍼-피어선 신뢰 한계)와 함께 서술적으로 요약하였다. 상기 비율에 대한 정확성 CI는 F 분포를 사용하여 산출하였다. 2가 rLP2086의 비열등성에 대한 추가의 분석으로서, A22 변이체(PMB80) 및 B24 변이체(PMB2948)에 대한 hSBA 4배 반응률을 1 군과 3 군 사이에서 비교하였다. 상기 반응률의 차이(2가 rLP2086/MCV4/Tdap - 2가 rLP2086, 또는 1 군 - 3 군) 및 상기 차이에 대한 정확성 양측 95% CI를 제공하였다. 상기 정확성 CI는 표준화 검정 통계량 및 감마=0.000001을 이용하여 산출하였다. 이것은 서술적 분석으로 간주되었다.
MCV4 / Tdap 면역원성의 분석. 각각의 MCV4/Tdap 항원에 대해 혈청반응을 달성한 대상자들의 비율, 및 파상풍 및 디프테리아 톡소이드에 대해 ≥1.0 IU/mL의 항체 수준을 달성한 대상자들의 비율을 1 군 및 2 군에 대해 정확성 양측 95% CI와 함께 요약하였다. 각각의 MCV4/Tdap 항원에 대한 혈청반응률 및 파상풍 및 디프테리아 톡소이드에 대해 ≥1.0 IU/mL의 항체 수준을 달성한 대상자들의 비율(1 군 - 2 군)과 관련하여 비열등성을 분석하였다.
병용 투여시 2가 rLP2086 및 MCV4 / Tdap 항원들에 대한 면역 반응 . Tdap 및 MCV4 항원들에 대한 기하 평균 농도 및 기하 평균 역가의 비열등성 분석. 본 연구의 첫번째 공동-1차 목표는 2가 rLP2086과 함께 제공된 MCV4 및 Tdap 백신에 의해 유도된 GMT(또는 적용가능한 경우 GMC)에 근거한 면역 반응(1 군)이 2개 군 모두에서 1차 백신접종(방문 2) 1개월후 측정시 MCV4 및 Tdap 백신에 의해 유도된 면역 반응(2 군)보다 열등하지 않았음을 입증하는 것이었다. 상기 첫번째 공동-1차 목표에 대한 1차 평가변수는, 1 군 및 2 군의 대상자들 중에서, 1차 백신접종(방문 2) 1개월 후에 시판 백신중의 10개 항원들 각각에 대한 GMT 또는 GMC였다.
1 군 및 2 군에서 10개 MCV4 및 Tdap 항원들에 대한 GMT(또는 적용가능한 경우 GMC)와, 1 군 대 2 군의 그의 상응하는 GMT(또는 적용가능한 경우 GMC) 비(GMR) 및 상기 비들의 양측 95% CI의 비교를 표 C에 나타내었다. 비열등성 한계에 대한 기준은 1.5배였으며, 이 값은 GMR의 양측 95% CI의 하한치에 대한 0.67의 값에 상응한다.
평가가능한 면역원성 모집단의 경우, Tdap 항원들에 대해 백신접종1 1개월 후에 1 군 대 2 군의 GMR은 디프테리아 톡소이드에 대해 0.94(95% CI: 0.86, 1.03), 파상풍 톡소이드에 대해 0.92(95% CI: 0.85, 0.99), 백일해 톡소이드에 대해 0.93(95% CI: 0.85, 1.02), 백일해 섬유상 헤마글루티닌에 대해 0.91(95% CI: 0.84, 0.98), 백일해 퍼탁틴에 대해 0.88(95% CI: 0.80, 0.98), 백일해 핌브리아 응집소 제 2 + 3 형에 대해 0.90(95% CI: 0.74, 1.08)이었으며; MCV4 항원들에 대한 GMR은 혈청군 A에 대해 0.91(95% CI: 0.82, 1.01), 혈청군 C에 대해 1.02(95% CI: 0.90, 1.15), 혈청군 Y에 대해 0.99(95% CI: 0.89, 1.09), 및 혈청군 W-135에 대해 0.93(95% CI: 0.83, 1.04)이었다. 그러므로, 2 군과 비교하여 1 군에서 MCV4 및 Tdap 항원 GMR에 대한 양측 95% CI의 하한치는 디프테리아 톡소이드에 대해 0.86, 파상풍 톡소이드에 대해 0.85, 백일해 톡소이드에 대해 0.85, 백일해 섬유상 헤마글루티닌에 대해 0.84, 백일해 퍼탁틴에 대해 0.80, 백일해 핌브리아 응집소 제 2 + 3 형에 대해 0.74, 혈청군 A에 대해 0.82, 혈청군 C에 대해 0.90, 혈청군 Y에 대해 0.89, 및 혈청군 W-135에 대해 0.83이었다. 0.67의 1.5배 기준(GMR의 양측 95% CI의 하한치)은 MCV4 및 Tdap 항원들 모두에 대해 충족되었다. 그러므로, 첫번째 공동-1차 목표는 충족되었다.
백신들이 2가 rLP2086과 병용적으로 제공되었을 때 Tdap + MCV4 항원들에 대한 면역 반응은 이들이 단독으로 투여되었을 때 수득된 면역 반응보다 열등하지 않았다.
[표 C]
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
2가 rLP2086에 대한 hSBA GMT에 대한 비열등성 분석.
본 연구의 두번째 공동-1차 목표는 MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086(1 군)에 의해 유도된 주요 균주 PMB80(A22) 및 PMB2948(B24)에 대한 hSBA 반응(GMT에 근거하여)이 식염수 + 식염수 + 2가 rLP2086(3 군)에 의해 유도된 면역 반응보다 열등하지 않았음을 입증하는 것이었다. hSBA는 2개 군 모두에서 2가 rLP2086에 의한 3차 백신접종(방문 6) 1 개월후에 수행하였다. 두번째 공동-1차 목표에 대한 1차 평가변수는, 1 군(MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086) 및 3 군(식염수 + 식염수 + 2가 rLP2086)에서 대상자들에게 투여된 2가 rLP2086의 3차 용량(방문 6) 1 개월후에 측정된 2개 주요 균주(PMB80 [A22] 및 PMB2948 [B24]) 각각에 대한 hSBA GMT의 평가였다.
표 C는, 평가가능한 면역원성 모집단에 있어서, 1 군 및 3 군에서 2개 주요 MnB 시험 균주들에 대한 hSBA GMT와 1군 대 3 군의 그의 상응하는 GMR 및 상기 비의 양측 95% CI의 비교를 나타낸다. 비열등성 한계에 대한 기준은 1.5배였으며, 이는 GMR의 양측 95% CI의 하한치에 대한 0.67의 값에 상응한다.
평가가능한 면역원성 모집단의 경우, 1 군 및 3 군에서 백신접종3(2가 rLP2086) 1 개월후에 2개 주요 MnB 균주들에 대한 hSBA GMT는 다음과 같았다: PMB80(A22)에 대해 각각 45.9 및 49.7, 및 PMB2948(B24)에 대해 각각 24.8 및 27.4. 백신접종3(2가 rLP2086) 1 개월후에, MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086 군 대 식염수 + 식염수 + 2가 rLP2086 군의 GMR은, PMB80(A22)에 대해 0.92(95% CI: 0.84, 1.02) 및 PMB2948(B24)에 대해 0.90(95% CI: 0.82, 1.00)이었다. 3 군과 비교하여 1 군에서 hSBA GMR에 대한 양측 95% CI의 하한치는 PMB80(A22)에 대해 0.84 및 PMB2948(B24)에 대해 0.82였으며, 이것은 둘 다 0.67보다 컸으며 1.5배의 비열등성 한계를 충족시켰다. 그러므로, 두번째 공동-1차 목표는 달성되었다.
Tdap + MCV4와 병용적으로 제공되었을 때 2가 rLP2086 백신에 대한 면역 반응은 백신이 단독으로 제공되었을 때 수득된 면역 반응보다 열등하지 않았다.
공동-1차 목표에 대한 비열등성 분석.
MCV4 및 Tdap 백신 둘 다 단독 투여와 비교하여 MCV4 및 Tdap 백신과 함께 제공된 2가 rLP2086의 비열등성에 대한 첫번째 공동-1차 목표는, 백신접종1 이후 평가가능한 면역원성 모집단에서 10개의 MCV4 및 Tdap 항원들 각각에 대한 GMR의 양측 95% CI의 하한치에 대한 0.67의 값에 상응하는 1.5배로 설정된 비열등성 한계를 검사함으로써 시험하였다. 상기 기준은 시험된 모든 MCV4 및 Tdap 항원들에 대해 충족되었다.
2가 rLP2086 단독과 비교하여 MCV4 및 Tdap 백신과 함께 제공된 2가 rLP2086의 비열등성에 대한 두번째 공동-1차 목표는, 백신접종3 1개월후에 측정시 백신접종3 이후 평가가능한 면역원성 모집단에서 2개의 주요 MnB 균주들(변이체 A22 및 B24) 각각에 대한 GMR의 양측 95% CI의 하한치에 대한 0.67의 값에 상응하는 1.5배로 설정된 비열등성 한계를 검사함으로써 시험하였다. 상기 기준은 2개의 MnB 시험 균주 PMB80(A22) 및 PMB2948(B24) 둘 다에 대해 충족되었다.
그러므로, 두가지 공동-1차 목표는 모두 Tdap, MCV4 및 2가 rLP2086 백신내 모든 항원들에 대한 1.5배 비열등성 한계에서 달성되었다.
MCV4 / Tdap 혈청반응률의 설명. 본 연구의 2차적 목표들 중 하나는 MCV4 및 Tdap에 의한 백신접종(방문 2) 1개월후에 측정시 MCV4 및 Tdap에 함유된 항원들에 대한 혈청반응(1 군 및 2 군)을 설명하는 것이었다.
각각의 군에서 상응하는 95% CI하에 10개의 Tdap 및 MCV4 항원들에 대한 혈청반응률, 및 퍼센트 차이(1 군 - 2 군) 및 상기 차이의 95% CI를 백신접종1 이후 평가가능한 면역원성 모집단에 대해서 표 D에 나타내었다.
평가가능한 면역원성 모집단에 있어서, 1 군 및 2 군에서 백신접종1 1개월 후 6개의 Tdap 항원들에 대한 혈청반응률은 다음과 같았다: 각각 98.6% 및 98.3%(디프테리아 톡소이드); 각각 97.7% 및 97.4%(파상풍 톡소이드); 각각 68.1 및 72.7%(백일해 톡소이드); 각각 85.3% 및 89.2%(백일해 섬유상 헤마글루티닌); 각각 96.0% 및 96.2%(백일해 퍼탁틴); 및, 각각 79.5% 및 81.9%(백일해 핌브리아 응집소 제 2 + 3 형). 평가가능한 면역원성 모집단에 있어서, 1 군 및 2 군에서 백신접종1 1개월후 4개의 MCV4 항원들에 대한 혈청반응률은 다음과 같았다: 각각 85.4% 및 88.6%(혈청군 A); 각각 89.3% 및 88.9%(혈청군 C); 각각 90.5% 및 93.6%(혈청군 Y); 및 각각 97.1% 및 97.2%(혈청군 W-135). 백신접종1 1개월 후에 1 군 대 2 군의 혈청반응률의 차이는, 디프테리아 톡소이드에 대해 0.2%(95% CI: (-1.1, 1.6), 파상풍 톡소이드에 대해 0.2%(95% CI: -1.4, 1.8), 백일해 톡소이드에 대해 -4.6%(95% CI: -9.1, -0.1), 백일해 섬유상 헤마글루티닌에 대해 -4.0%(95% CI: -7.3, -0.6), 백일해 퍼탁틴에 대해 -0.2%(95% CI: -2.1, 1.8), 백일해 핌브리아 응집소 제 2 + 3 형에 대해 -2.5%(95% CI: -6.4, 1.5), 혈청군 A에 대해 -3.2%(95%　CI: -6.7, 0.3), 혈청군 C에 대해 0.3%(95% CI: -2.8, 3.5), 혈청군 Y에 대해 -3.2%(95%　CI: -6.0, -0.4), 및 혈청군 W-135에 대해 -0.1%(95% CI: -1.9, 1.7)이었다.
MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086 군(1 군) 및 MCV4 + Tdap + 식염수 군(2 군)에 있어서, 평가된 혈청반응률 차이는 6개의 Tdap 및 4개의 MCV4 항원들에 대해 -4.6% 내지 0.3%이었으며, 이때 상기 반응률 차이의 95% CI의 하한치는 -9.1% 이상이었다(즉, 모두 -10%보다 컸다).
[표 D]
백신접종1 1개월후 Tdap/MCV4 항원들에 대한 혈청반응률의 비교 - 백신접종1 이후 평가가능한 면역원성 모집단
Figure pct00017
Figure pct00018
hSBA 역가 4배 증가에 대한 설명. 백신접종3 1개월 후에 2개의 주요 MnB 균주(PMB80[A22] 및 PMB2948[B24])에 대한 hSBA 역가 4배 반응률을 분석함으로써, MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086(1 군)을 식염수 + 식염수 + 2가 rLP2086(3 군)과 비교하였다. 각 군에서 상응하는 95% CI 하에 2개의 주요 MnB 균주들에 대해 기준선으로부터 백신접종3 1개월 후까지 ≥4의 hSBA 역가 배수 증가를 달성한 대상자들의 수 및 비율, 상기 비율의 퍼센트 차이(1 군 - 3 군), 및 상기 차이의 95% CI를 백신접종3 이후 평가가능한 면역원성 모집단에 대해 표 E에 나타내었다.
2개의 주요 MnB 시험 균주들에 대해 기준선으로부터 백신접종3 1개월 후까지 hSBA 역가에 ≥4배 증가를 달성한 대상자들의 비율을, MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086을 투여받은 1 군 대상자들 및 식염수 + 식염수 + 2가 rLP2086을 투여받은 3 군 대상자들 둘 다에 대해 측정하였다. 1 군의 대상자들 중에서, 84.0%가 시험 균주 PMB80(A22)에 대한 hSBA 역가에 ≥4배 증가를 나타내었고, 85.7%가 시험 균주 PMB2948(B24)에 대한 hSBA 역가에 ≥4배 증가를 나타내었다. 3 군의 대상자들 중에서, 88.7%가 시험 균주 PMB80(A22)에 대한 hSBA 역가에 ≥4배 증가를 나타내었고, 87.7%가 시험 균주 PMB2948(B24)에 대한 hSBA 역가에 ≥4배 증가를 나타내었다.
백신접종3 1개월 후에 1 군과 3 군 사이에서 hSBA 역가에 ≥4배 증가를 달성한 대상자들의 비율의 차이는 PMB80(A22)에 대해 -4.7%(95% CI: -8.4, -1.1) 및 PMB2948(B24)에 대해 -2.1%(95% CI: -5.7, 1.6)이었다. 평가된 4배 반응률의 차이는 작았으며(<5.0%), 이때 상기 비율 차이의 95% CI의 하한계는 -8.4%(PMB80[A22]) 및 -5.7%(PMB2948[B24])이었다.
[표 E]
기준선으로부터 백신접종3 1개월후까지 ≥4의 hSBA 역가 배수 증가를 달성한 대상자들의 비교 - 백신접종3 이후 평가가능한 면역원성 모집단
Figure pct00019
병용 투여시 2가 rLP2086 및 MCV4 및 Tdap 항원들에 대한 면역 반응의 요약. MCV4 및 Tdap 백신 둘 다 단독 투여와 비교하여 또는 식염수 + 식염수 + 2가 rLP2086과 비교하여, MCV4 및 Tdap 백신과 함께 제공된 2가 rLP2086에 대한 비열등성 기준은, GMR에 대한 양측 95% CI의 하한치가 10개의 MCV4/Tdap 항원들 각각에 대해서(백신접종1 1개월후) 및 2개의 주요 MnB 시험 균주(A22 및 B24)의 각각에 대해서(백신접종3 1개월후) 0.67보다 클 것을 요구하였다. 상기 사전지정된 임계치는 MnB 시험 균주들 둘 다 및 10개의 Tdap 및 MCV4 항원들 각각에 대해 충족되었다.
MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086 군(1 군) 및 MCV4 + Tdap + 식염수 군(2 군)에 있어서, 평가된 혈청반응률 차이는 6개의 Tdap 및 4개의 MCV4 항원들에 대해 -4.6% 내지 0.3%이었으며, 이때 상기 반응률 차이의 95% CI의 하한계는 -9.1% 이하이었다(즉, 모든 차이는 -10%보다 컸다). 2개의 주요 MnB 시험 균주들(A22 및 B24)에 대한 ≥4배 증가 hSBA 반응들은 MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086을 투여받은 군과 식염수 + 식염수 + 2가 rLP2086을 투여받은 군 사이에서 유사하였다(84.0% 내지 88.7%의 범위).
2가 rLP2086에 대한 면역 반응. ≥ LLOQ의 hSBA 역가 (서술적 평가변수).
본 연구의 2차적 목표 중 하나는, 2가 rLP2086에 의한 2차(방문 4) 및 3차(방문 6) 백신접종 1 개월후에 측정된, 2개의 주요 MnB 시험 균주, 곧 서브패밀리 A LP2086을 발현하는 1개(PMB80[A22]) 및 서브패밀리 B LP2086을 발현하는 1개(PMB2948[B24])를 사용하여 수행된 hSBA에 의해 측정된 바와 같은 면역 반응을 설명하는 것이었다.
상기 2차적 목표에 대한 서술적 2차 평가변수들 중 하나는, 백신접종2(방문 4) 1개월후 및 백신접종3(방문 6) 1개월후에, 2개의 주요 MnB 시험 균주들 각각에 대해 ≥LLOQ의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율이었다. 백신접종3 이후 평가가능한 면역원성 모집단에 있어서 2개의 주요 MnB 시험 균주들 각각에 대해 ≥LLOQ의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율을 표 F에 나타내었다. PMB80(A22)에 대한 LLOQ는 1:16과 동등한 hSBA 역가인 반면, PMB2948(B24)에 대한 LLOQ는 1:8과 동등한 hSBA 역가였음을 유의한다.
3 군(식염수 + 식염수 + 2가 rLP2086)의 경우, 기준선(백신접종1 이전)에서 ≥LLOQ의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율은 PMB80(A22)에 대해 5.6% 및 PMB2948(B24)에 대해 3.4%이었다. 3 군(식염수 + 식염수 + 2가 rLP2086)의 경우, 백신접종2 1개월후 및 백신접종3 1개월후에 ≥LLOQ의 hSBA 역가를 달성한 대상자들의 비율은 PMB80(A22)에 대해 각각 68.0% 및 91.4%, 및 PMB2948(B24)에 대해 각각 66.0% 및 92.7%이었다.
1 군(MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086)의 경우, 기준선(백신접종1 이전)에서 ≥LLOQ의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율은 PMB80(A22)에 대해 4.4% 및 PMB2948(B24)에 대해 1.6%이었다. 1 군(MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086)의 경우, 백신접종2 1개월후 및 백신접종3 1개월후에 ≥LLOQ의 hSBA 역가를 달성한 대상자들의 비율은 PMB80(A22)에 대해 각각 68.0% 및 87.5%, 및 PMB2948(B24)에 대해 각각 62.3% 및 90.0%이었다.
백신접종1 이전과 비교하여, 2개의 주요 MnB 시험 균주들에 대해 ≥LLOQ의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율에 실질적인 증가가 백신접종2 1개월 후에 1 군 및 3 군 대상자들 둘 다 중에서 관찰되었으며, 이때 백신접종3 1개월 후에 추가에 증가가 관찰되었다. 평가가능한 면역원성 모집단의 1 군 및 3 군에서 hSBA 반응은 유사하였다.
[표 F]
≥LLOQ의 hSBA 역가를 갖는 대상자들 - 백신접종3 이후 평가가능한 면역원성 모집단
Figure pct00020
정의된 수준을 달성한 hSBA 역가
또 다른 2차 평가변수는 각 채혈 시점에서 2개의 주요 MnB 시험 균주들 각각에 대해 ≥LLOQ, ≥1:4, ≥1:8, ≥1:16, ≥1:32, ≥1:64, 및 ≥1:128의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율이었다.
≥1:4 및 ≥1:16의 hSBA 역가를 달성한 대상자들을 하기에 기술하였다. ≥1:4의 hSBA 역가는 IMD에 대한 보호와 상관되는 것으로 일반적으로 인식되지만, ≥1:16의 더 보존적인 hSBA 역가가 백신접종전 혈청음성인 대상자들에 대해 4배 백신 효과를 나타내는 수준으로 간주되어 왔다.
≥1:4의 백신접종전(즉, 백신접종1 이전) hSBA 역가를 갖는 1 군(MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086) 및 3 군(식염수 + 식염수 + 2가 rLP2086) 내 대상자들의 비율은 균주 PMB80(A22)에 대해 각각 6.9% 및 7.5%; 및 균주 PMB2948(B24)에 대해 각각 2.1% 및 3.7%이었다. 또한, ≥1:16의 백신접종전 hSBA 역가를 갖는 1 군 및 3 군내 대상자들의 비율은 균주 PMB80(A22)에 대해 각각 4.4% 및 5.6%; 및 균주 PMB2948(B24)에 대해 각각 1.5% 및 2.1%이었다.
3 군(식염수 + 식염수 + 2가 rLP2086)에서, 백신접종2 1개월 후에 ≥1:4의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율은 PMB80(A22)에 대해 68.6% 및 PMB2948(B24)에 대해 68.2%이었다. 백신접종3 1개월 후에 ≥1:4의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율은 PMB80(A22)에 대해 91.7% 및 PMB2948(B24)에 대해 93.1%이었다. 1 군(MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086)에서, 백신접종2 1개월 후에 ≥1:4의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율은 PMB80(A22)에 대해 68.2% 및 PMB2948(B24)에 대해 64.8%이었다. 백신접종3 1개월 후에 ≥1:4의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율은 PMB80(A22)에 대해 87.8% 및 PMB2948(B24)에 대해 90.7%이었다.
3 군(식염수 + 식염수 + 2가 rLP2086)에서, 백신접종2 1개월 후에 ≥1:16의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율은 PMB80(A22)에 대해 68.0% 및 PMB2948(B24)에 대해 60.3%이었다. 백신접종3 1개월 후에 ≥1:16의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율은 PMB80(A22)에 대해 91.4% 및 PMB2948(B24)에 대해 88.9%이었다. 1 군(MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086)에서, 백신접종2 1개월 후에 ≥1:16의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율은 PMB80(A22)에 대해 68.0% 및 PMB2948(B24)에 대해 57.6%이었다. 백신접종3 1개월 후에 ≥1:16의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율은 PMB80(A22)에 대해 87.5% 및 PMB2948(B24)에 대해 86.7%이었다.
1 군 및 3 군 둘 다에서, 대상자들의 대부분이 2가 rLP2086의 2 또는 3개 용량 후에 1:16 이상의 hSBA 역가를 달성하였지만, 비교적 소수의 대상자들은 백신접종전 방문 1에서 임의의 주요 MnB 시험 균주들에 대해 측정가능한 hSBA 역가를 나타내었다.
hSBA 기하 평균 역가. 또 다른 2차 평가변수는 각각의 적용가능한 채혈 시점에서 2개의 주요 MnB 시험 균주들 각각에 대한 hSBA GMT였다. 표 G는 백신접종3 이후 평가가능한 면역원성 모집단에 있어서 1 군 및 3 군에서 채혈 시점까지 2개 MnB 시험 균주들 각각에 대한 hSBA GMT 및 상응하는 CI를 나타낸다. 기준선에서의 GMT는 2개 군 모두에서 hSBA LLOQ 미만이었다. 3 군(식염수 + 식염수 + 2가 rLP2086)에서, 백신접종2 1개월 후에 hSBA GMT는 PMB80(A22)에 대해 23.8 및 PMB2948(B24)에 대해 13.0이었다. 백신접종3 1개월 후에 hSBA GMT는 PMB80(A22)에 대해 49.7 및 PMB2948(B24)에 대해 27.4였다. 1 군(MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086)에서, 백신접종2 1개월 후에 hSBA GMT는 PMB80(A22)에 대해 23.7 및 PMB2948(B24)에 대해 12.0이었다. 백신접종3 1개월 후에 hSBA GMT는 PMB80(A22)에 대해 45.9 및 PMB2948(B24)에 대해 24.8이었다. GMT로 측정된 바와 같은 hSBA 반응은 1 군과 3 군 사이에서 유사하였다.
hSBA 역가에 대한 역 누적 분포 곡선
PMB80(A22) 및 PMB2948(B24)에 대한 hSBA 역가의 분포를 보여주는 역 누적 분포 곡선(RDCD)을, 백신접종3 이후 평가가능한 면역원성 모집단에서 매 채혈 시점에서 1 군 및 3 군에 대해 평가하였다. RCDC는, 대상자들의 대부분이 백신접종2 이후에 반응하였으며 백신접종3 이후에 2개의 주요 MnB 시험 균주들에 대한 역가에 추가의 증가를 나타내었음을 보여주었다.
hSBA ≥4배 반응
본 연구의 사전지정된 탐색적 목표는, 2가 rLP2086에 의한 2차 및 3차 백신접종(방문 3 및 방문 5) 1개월 후에 측정된, 2개의 주요 MnB 시험 균주, 곧 LP2086 서브패밀리 A 단백질을 발현하는 1개 및 LP2086 서브패밀리 B 단백질을 발현하는 1개 균주를 사용하여 수행된 hSBA 역가에서의 4배 반응에 의해 측정되는 바와 같은, 2가 rLP2086에 대한 면역 반응을 설명하는 것이었다.
상기 탐색적 목표에 대한 평가변수는, 기준선으로부터 2가 rLP2086에 의한 2차 및 3차 백신접종 1개월후까지 2개 MnB 균주, PMB80(A22) 및 PMB2948(B24)에 대한 hSBA 역가에서 적어도 4배 증가를 달성한 대상자들의 비율이었다. PMB80(A22)에 대한 LLOQ는 1:16과 동등한 hSBA 역가인 반면, PMB80(A22)에 대한 LLOQ는 1:8과 동등한 hSBA 역가였음을 유의한다. 4배 반응은 다음과 같이 정의되었다: 검출 한계(LOD) 미만의 기준선 hSBA 역가 또는 <1:4의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 경우, 4배 반응은 ≥1:16의 hSBA 역가로서 정의되었다. ≥LOD(즉, ≥1:4의 hSBA 역가) 및 <LLOQ의 기준선 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 경우, 4배 반응은 ≥4xLLOQ의 hSBA 역가로서 정의되었다. ≥LLOQ의 기준선 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 경우, 4배 반응은 ≥4x기준선 역가의 hSBA 역가로서 정의되었다.
백신접종3 이후 평가가능한 면역원성 모집단에 있어서, 2개의 주요 MnB 시험 균주 각각에 대해 ≥4의 hSBA 역가 배수 증가를 달성한 대상자들의 비율을 표 H에 1 군(MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086) 및 3 군(식염수 + 식염수 + 2가 rLP2086)에 대해 나타내었다.
3 군(식염수 + 식염수 + 2가 rLP2086)에서, 기준선으로부터 백신접종3 1개월후까지 ≥4의 hSBA 역가 배수 증가를 달성한 대상자들의 비율은 PMB80(A22)에 대해 88.7% 및 PMB2948(B24)에 대해 87.8%이었다. 백신접종2 1개월 후에, 기준선으로부터 ≥4의 hSBA 역가 배수 증가를 달성한 대상자들의 비율은 PMB80(A22)에 대해 63.7% 및 PMB2948(B24)에 대해 58.4%이었다.
1 군(MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086)에서, 기준선으로부터 백신접종3 1개월후까지 ≥4의 hSBA 역가 배수 증가를 달성한 대상자들의 비율은 PMB80(A22)에 대해 84.0% 및 PMB2948(B24)에 대해 85.7%이었다. 백신접종2 1개월 후에, 기준선으로부터 ≥4의 hSBA 역가 배수 증가를 달성한 대상자들의 비율은 PMB80(A22)에 대해 64.3% 및 PMB2948(B24)에 대해 56.3%이었다.
4배 역가 반응으로 측정된 바와 같은 hSBA 반응은 1 군과 3 군 사이에서 유사하였다.
[표 G]
hSBA 기하 평균 역가 - 백신접종3 이후 평가가능한 면역원성 모집단
Figure pct00021
[표 H]
hSBA 역가에서 ≥4배 증가를 달성한 대상자들 - 백신접종3 이후 평가가능한 면역원성 모집단
Figure pct00022
추가의 hSBA 배수 반응
추가의 평가변수는, 각각의 백신접종후 채혈 방문에서 기준선으로부터 2개 주요 MnB 균주 각각에 대한 hSBA 역가에서 적어도 2배 증가를 달성한 대상자들의 비율 및 적어도 3배 증가를 달성한 대상자들의 비율이었다. PMB80(A22)에 대한 LLOQ는 1:16과 동등한 hSBA 역가인 반면, PMB2948(B24)에 대한 LLOQ는 1:8과 동등한 hSBA 역가였음을 유의한다.
1 군 및 3 군에서 MnB 균주에 대해 기준선으로부터 백신접종2 1개월후까지 hSBA 역가에 있어서 ≥2배 증가를 달성한 대상자들의 비율은 PMB80(A22)에 대해 각각 66.2% 및 66.1%; 및 PMB2948(B24)에 대해 각각 56.8% 및 59.7%이었다. 1 군 및 3 군에서 MnB 균주에 대해 기준선으로부터 백신접종3 1개월후까지 ≥2의 hSBA 역가 배수 증가를 달성한 대상자들의 비율은 PMB80(A22)에 대해 각각 86.6% 및 90.3%; 및 PMB2948(B24)에 대해 각각 86.1% 및 88.5%이었다.
1 군 및 3 군에서 MnB 균주에 대해 기준선으로부터 백신접종2 1개월후까지 hSBA 역가에 있어서 ≥3배 증가를 달성한 대상자들의 비율은 PMB80(A22)에 대해 각각 64.3% 및 63.7%; 및 PMB2948(B24)에 대해 각각 56.3% 및 58.4%이었다. 1 군 및 3 군에서 MnB 균주에 대해 기준선으로부터 백신접종3 1개월후까지 hSBA 역가에 있어서 ≥3배 증가를 달성한 대상자들의 비율은 PMB80(A22)에 대해 각각 84.0% 및 88.7%; 및 PMB2948(B24)에 대해 각각 85.7% 및 87.7%이었다.
백신접종3 이후 평가가능한 면역원성 모집단에서 LOD(1:4) 미만의 기준선 역가를 갖는 대상자들의 경우, 1 군 및 3 군 둘 다에서 모든 채혈 시점에서 대상자들의 대부분이, 백신접종2 1개월후 56.7 내지 66.6%, 및 백신접종3 1개월후 86.3 내지 91.0% 범위의, 2배, 3배 및 4배 반응을 달성하였다.
2가 rLP2086에 대한 면역 반응의 요약
2차적 목표하의 서술적 평가변수들을 요약하면, 대상자들의 대부분이 1 군(MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086) 및 3 군(식염수 + 식염수 + 2가 rLP2086) 둘 다에서 주요 MnB 시험 균주 둘 다에 대해 ≥LLO1의 hSBA 역가를 달성한 반면, 매우 적은 비율의 대상자들만이 기준선(백신접종전 방문 1)에서 ≥LLOQ의 측정가능한 hSBA 역가를 나타내었다. 2개 MnB 균주들에 의한 실질적인 면역 반응은 백신접종2 1개월 후에 관찰되었으며, 1 군 및 3 군 대상자들 둘 다에서 백신접종3 1개월 후에 추가의 증가가 관찰되었다. 이러한 결론은, 3개 용량 후에 ≥1:16의 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율, 2개군 모두에서 2개 용량후 및 3개 용량후에 달성된 관찰 GMT, 및 2개 주요 MnB 시험 균주들에 대한 RCDC에 의해 확인되었다.
1 군(MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086) 및 3 군(식염수 + 식염수 + 2가 rLP2086) 둘 다에서, 높은 비율의 대상자들이 2개 주요 MnB 시험 균주들 각각에 대해 ≥4의 hSBA 역가 배수 증가를 달성하였다.
또한, 대상자들의 대부분은, 1 군(MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086) 및 3 군(식염수 + 식염수 + 2가 rLP2086) 둘 다에서 모든 채혈 시점에서 2개의 주요 MnB 시험 균주에 대해 ≥2의 hSBA 역가 배수 증가 및 ≥3의 hSBA 역가 배수 증가를 달성하였다. 상기 기준을 충족시키는 결과를 갖는 대상자들의 비율은 2회 백신접종에 비해 3회 백신접종 후에 더 높았다. 민감도 분석도 또한 2개 군 모두에서 3개 용량에 의해 유도된 강한 면역 반응을 뒷받침한다.
상기 결과들은, MCV4 + Tdap 백신과 동시투여시 2가 rLP2086에 대한 면역 반응이 2가 rLP2086 + 식염수에 대한 면역 반응에 필적하는 강한 면역 반응을 제공한다는 증거를 뒷받침한다.
MCV 4 및 Tdap에 대한 면역 반응
Tdap / MCV4 항원 GMT 및 GMC
표 I는, 백신접종1 이후 평가가능한 면역원성 모집단에 있어서 1 군(MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086) 및 2 군(MCV4 + Tdap + 식염수)에서 기준선 및 백신접종1 1개월후에 Tdap 및 MCV4 항원들 각각에 대한 GMT 및 GMC 및 상응하는 GI를 나타낸다.
2 군(MCV4 + Tdap + 식염수)에서, 기준선(백신접종1 이전)에서 및 백신접종1 1개월후에 Tdap 항원 GMC는 각각 0.2 및 9.8(디프테리아 톡소이드); 각각 0.5 및 10.3(파상풍 톡소이드); 각각 3.9 및 14.2(백일해 톡소이드); 각각 21.8 및 122.9(백일해 섬유상 헤마글루티닌); 각각 16.2 및 228.9(백일해 퍼탁틴); 각각 8.5 및 154.2(백일해 핌브리아 응집소 제 2 + 3 형)였고; 기준선(백신접종1 이전)에서 및 백신접종1 1개월후에 MCV4 항원 GMT는 각각 436.3 및 5113.0(혈청군 A); 각각 84.3 및 1650.2(혈청군 C); 각각 168.5 및 2244.9(혈청군 Y); 및 각각 177.7 및 6367.9(혈청군 W-135)였다. 1 군(MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086)에서, 기준선(백신접종1 이전)에서 및 백신접종1 1개월후에 Tdap 항원 GM은 각각 0.2 및 9.3(디프테리아 톡소이드); 각각 0.5 및 9.4(파상풍 톡소이드); 각각 3.9 및 13.2(백일해 톡소이드); 각각 21.3 및 112.0(백일해 섬유상 헤마글루티닌); 각각 15.7 및 202.0(백일해 퍼탁틴); 각각 8.4 및 138.1(백일해 핌브리아 응집소 제 2 + 3 형)이었고; 기준선(백신접종1 이전)에서 및 백신접종1 1개월후에 MCV4 항원 GM은 각각 490.0 및 4647.3(혈청군 A); 각각 87.6 및 1679.2(혈청군 C); 각각 183.3 및 2212.6(혈청군 Y); 및 각각 176.7 및 5925.1(혈청군 W-135)이었다. 전체적으로, 평가된 GM은 1 군과 2 군 사이에서 유사하였다.
IgG MCV4 GMC
본 연구의 탐색적 목표는 2가 rLP2086의 존재 및 부재하에서 제공될 때 MCV4 백신에 의해 유도된 항-MCV4 IgG GMC로 측정되는 바와 같은 IgG 면역 반응을 설명하는 것이었다. 본 연구에 대한 탐색적 면역원성 평가변수는 1 군(MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086) 및 2 군(MCV4 + Tdap + 식염수)의 대상자들 중의 4개의 MCV4 항원 성분들에 적용되었다. 탐색적 평가변수는 혈청군 A, C, Y 또는 W-135 폴리사카라이드에 대한 IgG 반응(GMC로 측정된)이었다. 상기 분석의 인증 후에(즉, 인증후) 및 샘플 검사 전에, LLOQ는 표준 기준 곡선들로부터의 추가의 데이터 분석에 근거하여 다음으로 상향 조정되었다: 혈청군 A에 대해 0.1795 ㎍/mL, 혈청군 C에 대해 0.0940 ㎍/mL, 혈청군 Y에 대해 0.2485 ㎍/mL 및 혈청군 W-135에 대해 0.2530 ㎍/mL. LLOQ 미만의 결과는 분석을 위해 0.5 x LLOQ로 설정하였다. 조정된 인증후 LLOQ를 이용하여 백신접종1 이후 평가가능한 면역원성 모집단에서 1 군 및 2 군에 대한 MCV4 IgG GMC는 표 J에 나타내었다.
1 군(MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086)에서, 기준선(백신접종1 이전)에서 및 백신접종1 1개월 후에 MCV4 IgG GMC는 다음과 같았다: 각각 0.17 및 11.42 ㎍/mL(혈청군 A); 각각 0.11 및 5.59 ㎍/mL(혈청군 C); 각각 0.14 및 2.49 ㎍/mL(혈청군 Y); 및 각각 0.13 및 1.79 ㎍/mL(혈청군 W-135). 2 군(MCV4 + Tdap + 식염수)에서, 기준선(백신접종1 이전)에서 및 백신접종1 1개월 후에 MCV4 IgG GMC는 다음과 같았다: 각각 0.15 및 11.38 ㎍/mL(혈청군 A); 각각 0.11 및 5.47 ㎍/mL(혈청군 C); 각각 0.13 및 2.14 ㎍/mL(혈청군 Y); 및 각각 0.13 및 1.84 ㎍/mL(혈청군 W-135).
전체적으로, MCV4 IgG GMC는 1 군 및 2 군에 대해 수치적으로 유사하였다. 초기 분석 인증 데이터 분석들에 근거하여, MCV4 IgG 분석 LLOQ는 혈청군 A에 대해 0.1037 ㎍/mL, 혈청군 C에 대해 0.0204 ㎍/mL, 혈청군 Y에 대해 0.1104 ㎍/mL 및 혈청군 W-135에 대해 0.1198 ㎍/mL에서 설정되었다. 인증 LLOQ를 사용하여 백신접종1 이후 평가가능한 면역원성 모집단에서 1 군 및 2 군에 대한 MCV4 IgG GMC는 1 군 및 2 군에 대해 수치적으로 유사하였다.
디프테리아 톡소이드 /파상풍 항원에 대해 사전지정된 항체 수준을 달성한 대상자들
본 연구의 서술적 2차 평가변수는 파상풍 톡소이드에 대해 ≥1.0 IU/mL의 항체 수준을 달성한 대상자들(1 군 및 2 군)의 비율 및 디프테리아 톡소이드에 대해 ≥1.0 IU/mL의 항체 수준을 달성한 대상자들(1 군 및 2 군)의 비율이었다.
상응하는 95% CI하에, 디프테리아 톡소이드 및 파상풍 톡소이드 항원들에 대한 항체의 사전지정된 수준을 달성한 대상자들의 비율은 표 K에 백신접종1 이후 평가가능한 면역원성 모집단에서 1 군(MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086) 및 2 군(MCV4 + Tdap + 식염수)에 대해 나타내었다.
1 군(MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086)에서, 백신접종1 1개월 후에 디프테리아 톡소이드 및 파상풍 톡소이드 항원에 대한 항체들의 사전지정된 수준을 달성한 대상자들의 비율은 각각 98.1%(95% CI: 96.8, 98.9) 및 99.1%(95% CI: 98.2, 99.6)이었다.
2 군(MCV4 + Tdap + 식염수)에서, 백신접종1 1개월 후에 디프테리아 톡소이드 및 파상풍 톡소이드 항원에 대한 항체들의 사전지정된 수준을 달성한 대상자들의 비율은 각각 99.0%(95% CI: 98.0, 99.6) 및 99.0%(95% CI: 98.0, 99.6)이었다.
[표 I]
Tdap/MCV4 항원 기하 평균 - 백신접종1 이후 평가가능한 면역원성 모집단
Figure pct00023
Figure pct00024
약칭: ELISA = 효소-결합 면역흡착 분석; EU = ELISA 단위; GM = 기하 평균; LLOQ = 정량하한; MCV4 = 4가 수막구균 폴리사카라이드 접합체(백신); rSBA = 토끼 보체를 사용한 혈청 살균 분석; Tdap = 파상풍, 디프테리아 및 무세포성 백일해(백신).
주: LLOQ = 디프테리아에 대해 0.037 IU/mL; 파상풍에 대해 0.05 IU/mL; 파상풍 톡소이드에 대해 0.9 EU/mL; 백일해 섬유상 헤마글루티닌에 대해 2.9 EU/mL; 백일해 퍼탁틴에 대해 3.0 EU/mL; 백일해 핌브리아 응집소 제 2 + 3 형에 대해 10.6 EU/mL. rSBA 혈청군 A에 대해 1:32, 혈청군 C에 대해 1:64, 혈청군 Y에 대해 1:128, 및 혈청군 W-135에 대해 1:64. LLOQ 미만의 결과들은 분석을 위해 0.5 x LLOQ로 설정함.
a.　　 N = 해당 항원 및 균주들에 대해 유효하고 확실한 분석 결과를 갖는 대상자들의 수.
b.　　 GM은 유효하고 확실한 분석 결과를 갖는 모든 대상자들을 이용하여 산출됨.
c. 신뢰 구간(CI)은 분석 결과들의 평균 대수에 대한 스튜던트 t 분포에 기초한 신뢰 수준의 역 변환임.
[표 J]
IgG MCV4 기하 평균 농도(인증후 LLOQ) - 백신접종1 이후 평가가능한 면역원성 모집단
Figure pct00025
[표 K]
디프테리아 톡소이드/파상풍 항원에 대한 사전지정된 항체 수준을 달성한 대상자 - 백신접종1 이후 평가가능한 면역원성 모집단
Figure pct00026
MCV4 및 Tdap 항원들에 대한 RCDC
백신접종1 이후 평가가능한 면역원성 모집단에서, 백신접종1 이전 및 1개월 후에, 1 군(MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086) 및 2 군(MCV4 + Tdap + 식염수)에서 MCV4 혈청군 A, C, Y 및 W-135에 대한 rSBA 역가의 분포를 보여주는 RCDC는 2개군 모두에서 백신접종1 이후에 대상자들 중에서 강한 면역 반응을 나타내었고, 상기 곡선들은 rSBA 역가의 범위 전체에 걸쳐 유사하였다.
백신접종1 이후 평가가능한 면역원성 모집단에서, 백신접종1 이전 및 1개월 후에, 1 군(MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086) 및 2 군(MCV4 + Tdap + 식염수)에서 인증후 LLOQ를 이용한 MCV4 혈청군 A, C, Y 및 W-135 폴리사카라이드에 대한 IgG 역가의 분포를 보여주는 RCDC; 및 백신접종1 이후 평가가능한 면역원성 모집단에서, 백신접종1 이전 및 1개월 후에, 1 군(MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086) 및 2 군(MCV4 + Tdap + 식염수)에서 인증 LLOQ를 이용한 MCV4 혈청군 A, C, Y 및 W-135에 대한 IgG 역가의 분포를 보여주는 RCDC는, 인증 및 인증후 LLOQ 둘 다를 이용하여 2개군 모두에서 백신접종1 이후 대상자들 중에서 강한 면역 반응을 나타내었다.
백신접종1 이후 평가가능한 면역원성 모집단에서, 백신접종1 이전 및 1개월 후에, 1 군(MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086) 및 2 군(MCV4 + Tdap + 식염수)에서 디프테리아, 파상풍, 백일해 톡소이드, 백일해 섬유상 헤마글루티닌, 백일해 퍼탁틴 및 백일해 핌브리아 응집소 제 2 + 3 형에 대한 Tdap 역가의 분포를 보여주는 RCDC는 2개군 모두에서 백신접종1 이후에 대상자들 중에서 강한 면역 반응을 나타내었다
MCV4 및 Tdap에 대한 면역 반응
Tdap/MCV4 항원들에 대한 항체들의 GM은 2 군(MCV4 + Tdap + 식염수)과 1 군(MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086) 사이에 유사하였으며, 백신접종1 이후 관찰된 Tdap/MCV4 항원 GM은 2개군 모두에 대해 강한 면역 반응을 시사하였다. RCDC도 또한 1 군 및 2 군 둘 다에서 백신접종1 이후에 강한 면역 반응을 뒷받침하였다.
2가 rLP2086 + 식염수 + 식염수 및 MCV4 + Tdap + 식염수와 비교하여 MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086에 대한 비열등성 기준은, GMR에 대한 양측 95% CI의 하한치가 10개의 MCV4/Tdap 항원들 각각에 대해서(백신접종1 1개월후) 및 2개의 주요 MnB 시험 균주(PMB80[A22] 및 PMB2948[B24])를 이용한 hSBA 역가의 각각에 대해서(백신접종3 1개월후) 0.67보다 클 것을 요구하였다. 상기 사전지정된 임계치는 MnB 시험 균주들 둘 다 및 10개의 Tdap 및 MCV4 항원들 각각에 대해 충족되었다. 상기 연구의 공동-1차 면역원성 목표들은 이들이 사전지정된 비열등성 기준을 만족시켰으므로 충족되었다.
2가 rLP2086과 병용 투여된 MCV4 백신 및 Tdap 백신에 의해 유도된 면역 반응은 2개 군 모두에서 1차 백신접종 1개월 후에 측정했을 때 MCV4 및 Tdap 백신에 의해 유도된 면역 반응보다 열등하지 않았다. MCV4 및 Tdap 백신의 모든 항원 성분들에 대한 면역 반응을 평가하였다.
2개의 MnB 시험 균주들을 사용하여 수행된 hSBA에 의해 측정된 바와 같은, MCV4 및 Tdap 백신과 병용 투여된 2가 rLP2086에 의해 유도된 면역 반응은, 2개 군 모두에서 2가 rLP2086에 의한 3차 백신접종 1개월후에 측정시, 2가 rLP2086 단독에 의해 유도된 면역 반응보다 열등하지 않았다.
MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086 군(1 군) 및 MCV4 + Tdap + 식염수 군(2 군)에서, 평가된 혈청반응률의 차이는, 9.1% 이하와 동등한 반응률 차이의 95% CI의 하한계 하에, 6개 Tdap 및 4개　MCV4 항원들에 대해 -4.6% 내지 0.3%이었다. 상기 차이의 CI는 모두 -10%보다 컸으므로; 상기 차이는 임상적으로 중요하지 않았다. RCDC는 2개 군 모두의 대상자들에 있어서 백신접종1 이후에 강한 면역 반응을 나타내었다. 기준선에 비해 강한 GMT는 MCV4 + Tdap를 투여받은 2개 군 모두에서 관찰되었다.
기준선으로부터 백신접종3 1개월후까지 2개의 주요 MnB 시험 균주 PMB80(A22) 및 PMB2958(B24)에 대한 4배 증가 반응은 MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086을 투여받은 군(각각 84.0% 및 85.7%)과 2가 rLP2086 + 식염수 + 식염수를 투여받은 군(각각 88.7% 및 87.7%) 사이에서 유사하였다.
면역원성 논의
2가 rLP2086 + 식염수 + 식염수 및 MCV4 + Tdap + 식염수와 비교하여 MCV4 + Tdap + 2가 rLP2086에 대한 비열등성 기준은, GMR에 대한 양측 95% CI의 하한치가 10개의 MCV4/Tdap 항원들 각각에 대해서(백신접종1 1개월후) 및 2개의 주요 MnB 시험 균주(A22 및 B24)를 사용한 hSBA 역가 각각에 대해서(백신접종3 1개월후) 0.67(즉, 1.5 비열등성 한계)보다 클 것을 요구하였다. 상기 사전지정된 임계치는 MnB 시험 균주들 둘 다 및 10개의 Tdap 및 MCV4 항원들에 대해 충족되었다. 따라서, 2개의 공동-1차 면역원성 목표가 둘 다 충족되었다. 구체적으로, 상기 데이터들은 적어도 다음을 뒷받침한다: 1) rLP2086과 함께 제공된 MCV4 및 Tdap 백신에 의해 유도된 면역 반응(GM에 근거)은, 2개 군 모두에서 1차 백신접종 1개월후에 측정시, MCV4 및 Tdap 백신 단독에 의해 유도된 면역 반응보다 열등하지 않았다. MCV4 및 Tdap 백신의 모든 성분들에 대한 면역 반응을 평가하였다. 2) MCV4 및 Tdap 백신과 함께 제공된, 2개 MnB 시험 균주들을 사용하여 수행된 hSBA에 의해 측정되는 바와 같은, 2가 rLP2086에 의해 유도된 면역 반응(GMT에 근거)은, 2개 군 모두에서 2가 rLP2086에 의한 3차 백신접종 1개월 후에 측정시, 2가 rLP2086 단독에 의해 유도된 면역 반응보다 열등하지 않았다.
≥10 내지 <13세 연령의 대상자들에서의 상기 무작위, 관찰자-맹검, 능동-통제된 다기관 시험에서, 2가 rLP2086 및 MCV4 + Tdap 백신 둘다에 대한 면역원성은, 백신들이 병용 투여되었을 때 강하게 유지되었다.
전체적으로, 상기 데이터들은, Tdap, MCV4, MenACWY-CRM, 및 HPV 백신들이 임상적으로 병용 투여될 수 있음을 시사하였으며, 상기 백신들은 단일 방문에서 제공되도록 권장된다. 상기 현행 연구(B1971015)에서 수득된 데이터는 상기 결론을 뒷받침하며, 또한 2가 rLP2086이 Tdap 및 MCV4와 함께 제공될 수 있음을 뒷받침한다. 상기 연구는 적어도 2개 용량의 2가 rLP2086이 2개 주요 MnB 시험 균주들 둘 다에 대해 강한 면역 반응을 유도하였음을 보여주었다. 상기 연구는 또한 3개 용량의 2가 rLP2086이 2개의 주요 MnB 시험 균주들(A22 및 B24) 둘 다에 대해 강한 면역 반응을 유도하였음을 보여주었다. 상기 시험 균주들 상에서 발현된 fHBP는 rLP2086 백신 항원들에 이종이며, 미국에서 침습성 수막구균성 질환 분리균 중에서 확인된 가장 우세한 서브패밀리 A 및 서브패밀리 B 변이체들을 대표한다. 상기 2개 변이체들은 또한 다른 지리적 구역에서의 질환 분리균들 중에서도 두드러진다. 연구 B1971015에 대한 면역원성 평가는 hSBA 역가에서의 4배 증가의 정의를 이용하였다.
2개의 주요 MnB 시험 균주들 각각에 대한 LOD는 1:4(보호와 상관되는 것으로 인식됨)와 동등한 역가였으며, 상기 2개의 주요 MnB 시험 균주들에 대한 인증 LLOQ는 PMB2948(B24)에 대해 1:8 및 PMB80(A22)에 대해 1:16과 동등한 hSBA 역가였다. 2가 rLP2086을 투여받기 전에, 낮은 비율의 연구 대상자들이 ≥1:4의 hSBA 역가를 나타내어, 상기 모집단에서 대부분의 대상자들이 MnB 질환에 대해 보호되지 않는 것으로 간주될 수 있음을 시사하였다. 2차 연구 백신접종 후에, 높은 비율의 대상자들이 hSBA 역가에 4배 증가를 달성하였으며 ≥1:4 및 ≥LLOQ의 면역화후 역가를 나타내었다. 상기 반응률들은, 2개 MnB 균주 둘 다에 대해, 2가 rLP2086와 MCV4 + Tdap를 동시투여받은 대상자들과 2가 rLP2086와 식염수를 투여받은 대상자들 사이에서 유사하였다. RCDC는 또한 대상자들의 대부분이, 2가 rLP20896이 MCV4 + Tdap와 동시투여되었는지에 무관하게, 2개의 주요 MnB 균주들에 대해 반응을 유도하였음을 보여주었다.
현행 연구(B1971015)에서, 1 군과 2 군을 합쳤을 때, PMB80(A22)에 대한 2가 rLP2086의 2차 및 3차 용량 후 4배 반응률(95% CI)은 64.0%(61.3, 66.5) 및 86.3%(84.4, 88.1)이었다. B24에 대해서도 유사하게, 합친 1 군과 2 군에서 2가 rLP2086의 2차 및 3차 용량후 4배 반응률(95% CI)은 57.4%(54.6, 60.1) 및 86.7%(84.8, 88.5)이었다.
중요하게, 연구 B1971015에서 rLP2086의 2차 용량후 면역 반응은, 기준선으로부터의 hSBA 역가의 4배 증가 및 ≥LLOQ(A22에 대해 1:16 및 B24에 대해 1:8)의 백신접종후 hSBA 역가를 갖는 대상자들의 비율 둘 다에 의해 평가시, 강하였다. A22의 경우, 합친 1 군 및 2 군에서 2차 용량후 ≥LLOQ(1:16)의 hSBA 역가를 달성한 대상자들의 백분율(95% CI)은 68.0%(65.4, 70.5)이었다. B24의 경우, 64.2%(61.5, 66.8)의 대상자들이 2차 연구 용량후 ≥LLOQ(1:8)의 hSBA 역가를 달성하였다. 상기 데이터들은 2개 용량의 2가 rLP2086에 대한 실질적인 hSBA 반응을 나타낸다.
전체적으로, 상기 결과들은, 2가 rLP2086과 MCV4 + Tdap가 병용 투여될 때 MCV4 + Tdap에 대한 면역 반응 및 2가 rLP2086에 대한 면역 반응이 강하게 유지되고 공동-1차 연구 목표를 충족시켰음을 시사한다.
≥10 내지 <13세 연령의 대상자들에서 상기 데이터들은 공동-1차 연구 목표를 충족시켜, 2가 rLP2086이 MCV4 + Tdap와 병용 투여될 수 있다는 논제를 뒷받침하였다. 또한, 높은 비율의 대상자들이 2 또는 3개 용량의 2가 rLP2086으로 백신접종한 후 hSBA 4배 반응 및 ≥LLOQ의 hSBA 역가를 달성하였으며, 상기 강한 반응은 MCV4 + Tdap의 병용 사용에 의해 영향을 받지 않았다. 면역원성과 안전성 데이터를 함께 고려할 때, 이익-위험 프로필은 2가 rLP2086의 단독 투여 또는 MCV4 + Tdap와의 병용 투여를 뒷받침한다.
실시예 12: ≥10 내지 26세 연령의 건강한 대상자들에서 제공된 수막구균 혈청군 B 2가 재조합 지단백질 ( rLP2086 ) 백신의 안전성 및 내약성을 평가하기 위한 3상, 무작위, 능동 통제된, 관찰자 맹검 시험
본 시험은 ≥10 내지 26세 연령의 건강한 대상자들에서 2가 rLP2086의 안전성 및 내약성을 평가하기 위해 설계된 3상, 무작위, 능동 통제된, 관찰자 맹검, 다기관 시험이었다. 대략 5,700 명의 대상자들이 2개 군 중 1개 군에 2:1 비로 무작위로 배정되었다. 1 군은 제 0 개월(제 1 일)에 2가 rLP2086을 투여받은 후 제 2 및 6 개월에 후속 백신접종이 이어졌다. 2 군은 제 0 개월 및 제 6 개월에 A형 간염 바이러스(HAV) 및 제 2 개월에 식염수 주사를 받았다.
2가 rLP2086 백신은, pH 6.0에서 10 mM의 히스티딘-완충 식염수 중에. 정제된 서브패밀리 A rLP2086 단백질(변이체 A05, 서열번호 1) 및 정제된 서브패밀리 B rLP2086 단백질(변이체 B01, 서열번호 2) 각각 60 ㎍, 0.15 M 염화나트륨, 2.8 몰비 폴리솔베이트 80, 및 인산알루미늄(AlPO4)으로서 Al3 + 0.25 mg를 함유하도록 0.5 mL 용량으로 제형화되었다.
HAV 백신(하브릭스(HAVRIX), 0.5-mL 용량 또는 1.0-mL 용량)은 720 ELISA 단위(EL.U.) 또는 1440 EL.U.의 바이러스 항원을 함유하였다. 특히, 하브릭스(A형 간염 백신)는 근육내 투여를 위한 불활성화 바이러스의 멸균 현탁액이다. 바이러스(균주 HM175)는 MRC-5 인간 2배체 세포에서 증식된다. HAV 백신(하브릭스)의 연령-특이적 용량을 국가별 지침에 따라 공급하였다. 백신의 각각의 1-mL 성인 용량은 수산화알루미늄으로서 0.5 mg의 알루미늄 상에 흡착된, 1440 EL.U.의 바이러스 항원을 함유한다. 백신의 각각의 0.5-mL 소아 용량은 수산화알루미늄으로서 0.25 mg의 알루미늄 상에 흡착된, 720 EL.U.의 바이러스 항원을 함유한다. 하브릭스는 다음의 부형제들을 함유한다: 포스페이트-완충 식염수 용액중의 아미노산 보충제(0.3% w/v) 및 폴리솔베이트 20(0.05 mg/mL). 제조 과정으로부터, 하브릭스는 또한 잔류 MRC-5 세포성 단백질(5 mcg/mL 이하), 포르말린(0.1 mg/mL 이하), 및 네오마이신 설페이트(40 ng/mL 이하), 세포 성장 배지에 포함된 아미노글리코시드 항생물질을 함유한다. 하브릭스는 보존제 없이 제형화된다.
주사용 멸균 표준 식염수 용액(0.9% 염화나트륨)은 0.5-mL 용량으로 공급되었다.
[표 A]
연구 설계
Figure pct00027
약칭: approx = 대략적; Vax = 백신접종.
본 연구는 0-, 2- 및 6-개월 스케줄을 이용하여 ≥10 내지 <26세 연령의 건강한 대상자에서 투여된 120-㎍ 용량 수준에서 2가 rLP2086의 안전성 및 내약성을 평가하였으며, 2가 rLP2086에 대한 안전성 데이터베이스의 중요한 요소를 제공하였다.
제 0 및 6 개월에 투여된 HAV 백신이 본 연구에서 대조군으로 선택되었는데, 그 이유는 활성 대조군으로 사용될 수 있는 MnB에 대한 입증된 안전하고 면역원성이며 효과적인 백신이 없기 때문이다. 상기 연령군에 대해 다른 권장 백신들과 비교하여, HAV 백신은 잘 확립된 내약성 프로필을 갖는다. 또한, HAV 백신은 미래의 여행 또는 다른 노출에서 A형 간염 바이러스 감염에 대한 위험이 증가될 수 있는 대상자들에게 이익을 제공하였다. 연구를 맹검으로 유지하기 위해 대조군에서 제 2 개월에 식염수를 투여하였다. 대상자들이 다음을 포함한 임의의 배제 기준을 충족시킨 경우, 대상자들은 참가할 자격이 없었다: 임의의 수막구균 혈청군 B 백신에 의한 이전의 백신접종; 선행 HAV 백신접종을 받았던 대상자; 임의의 HAV 백신에 의한 백신접종에 대한 사용금지사유. 대상자들은 표 A에 따른 백신접종 방문(방문 1, 3 및 7) 각각에서 1개 용량의 120 ㎍의 2가 rLP2086 또는 HAV 백신/식염수/HAV 백신을 투여받았다.
대상자들은 0-, 2-, 6-개월 스케줄을 이용하여 백신접종을 받았다. 1 군은 제 0 개월(제 1 일)에 2가 rLP2086을 투여받은 후 제 2 및 6 개월에 후속 백신접종이 이어졌다. 2 군은 제 0 개월 및 제 6 개월에 HAV 백신을 투여받고, 연구를 맹검으로 유지하기 위해 제 2 개월에 식염수 주사를 투여받았다. HAV 백신의 연령-특이적 용량을 국가별 지침에 따라서 공급하였다.
안전성 모집단에 대한 1차 평가변수는, 1차 연구 백신접종으로부터 마지막 연구 백신접종 6개월 후까지의 기간동안 발생한 적어도 1개의 심각한 부작용(SAE)을 갖는 대상자들의 백분율 및 각각의 백신접종후 30일 이내의 기간동안 발생한 적어도 1개의 의학적으로 주의되는 부작용(AE)을 갖는 대상자들의 백분율이었다.
전체적으로, 각 백신접종 30일 이내에 적어도 1개의 SAE를 보고한 대상자들의 비율은 2개 군 모두에서 ≤3.0%였고 2가 rLP2086 및 HAV 백신/식염수 대조군 사이에서 유사하였다. 연구 전체에 걸쳐, 2 군(HAV 백신/식염수)의 대상자들에서 1 군(2가 rLP2086)보다 수치적으로 더 큰 비율의 SAE가 보고되었다(각각 2.52% 및 1.55%). SAE는 또한 백신접종 및 후속 단계들 동안 1 군에 비해 2 군에서 수치적으로 더 많은 비율의 대상자들에 의해 보고되었다. 전체적으로, 백신접종 단계동안 보고된 AE의 백분율은 2 군에 비해 1 군에서 더 높았다. 1 군의 대상자들은 백신접종 단계동안 2 군의 대상자들보다 더 큰 반응원성 AE를 보고하였다. 반응원성 AE는 백신접종후 7일 이내에 개시되는 임의의 AE로 정의되었으며, 사전정의된 바람직한 기간 목록과 매치되었다. 본 연구에서는 2가 rLP2086을 투여받은 군에서 새로운 안전성 관련문제가 확인되지 않았다. 본 연구로부터의 데이터는 2가 rLP2086이 ≥10 내지 <26세 연령의 대상자들에서 안전하고 잘 허용됨을 보여준다.
실시예 13: 건강한 청소년에서 다른 허가받은 백신과 병용 투여된 수막구균 혈청군 B 2가 rLP2086 백신의 면역원성
배경: 2가 rLP2086(트루멘바®) 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B(MnB) 인자 H 결합 단백질(fHBP) 백신은 미국에서 10 내지 25세 대상자들에서 침습성 MnB 질환의 예방을 위해 승인되었다. 상기 집단에서 권장 백신의 병용 투여는 순응성을 개선하고 공중 보건에 미치는 영향을 최대화시킨다.
목적: 트루멘바와 병용 투여시 가다실®(HPV4) 또는 메낙트라®(수막구균 A, C, Y 및 W-135 군, MCV4) 및 아다셀®(Tdap)에 의해 유도된 면역 반응(기하 평균(GM) 역가에 근거)의 비열등성을 입증하기 위함.
설계/방법: 연구 1: 대상자들(11 내지 <18세)은 제 0, 2 및 6 개월에 트루멘바 + HPV4, 트루멘바, 또는 HPV4를 투여받았다. 트루멘바 또는 HPV4 만을 투여받은 대상자들은 맹검을 유지하기 위해 식염수 주사를 투여받았다. 연구 2: 대상자들(10 내지 <13세)은 MCV4 + Tdap + 트루멘바, MCV4 + Tdap, 또는 트루멘바를 투여받았다. 트루멘바는 제 0, 2 및 6 개월에 투여되었다. MCV4 및 Tdap는 제 0 개월에 제공되었다. MCV4 및 Tdap, 또는 트루멘바 만 투여받은 군들은 맹검을 유지하기 위해 제 0, 2 및 6 개월에 식염수 주사를 투여받았다. 최종 백신 투여 후에 면역 반응을 평가하였다. 두 연구 모두에서, 비열등성은, 군들 사이의 GM 비의 95% CI의 하한계가 >0.67(1.5배 비열등성 한계)인 경우에 달성되었다.
결과: 비열등성 기준은, HPV18(하한 95% CI = 0.62)을 제외한 모든 HPV 항원에 대해서 및 모든 Tdap 및 MCV4에 대해서, 이들 백신이 트루멘바와 동시투여되었을 때, 충족되었다. 모든 HPV 항원들에 대한 혈청전환율은, HPV4가 단독으로 또는 트루멘바와 함께 제공되었을 때 ≥99%이었다. 비열등성 기준은 트루멘바가 허가받은 백신들과(표) 동시투여되었을 때 MnB hSBA 반응에 대해 충족되었다.
데이터는 트루멘바와 미국 청소년들에 대해 권장된 HPV4, MCV4 및 Tdap 백신들과의 동시투여를 뒷받침한다.
Figure pct00028
CI = 신뢰 구간; GMT = 기하 평균 역가; HPV = 인유두종바이러스; HPV4 = 인유두종바이러스 4가 백신; MCV4 = 수막구균(A, C, Y 및 W-135 군) 폴리사카라이드 디프테리아 톡소이드 접합체 백신; MnB = 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B; NA = 적용할 수 없음; Tdap = 흡착된 파상풍 톡소이드, 환원 디프테리아 톡소이드 및 무세포성 백일해 백신.
a해당 항원 또는 균주에 대해 유효하고 확실한 분석 결과를 갖는 대상자들의 수.
b기하 평균은 백신접종3 1개월 후에 유효하고 확실한 분석 결과를 갖는 모든 대상자들을 이용하여 산출됨.
cGM의 비.
d상기 비에 대한 신뢰 구간(CI)은 측정치들의 대수의 평균차에 대한 스튜던트 t 분포에 기초한 신뢰 구간의 역 변환임(HPV 역가의 경우 1 군 - 3 군; Tdap/MCV4 항원들의 경우 1 군 - 2 군).
eHPV 항원들에 대한 면역 반응은 3차 가다실® 백신접종 1개월 후에 경쟁적 루미넥스 면역분석에서 평가됨.
fMnB 항원들에 대한 면역 반응은 3차 2가 rLP2086 백신접종 1개월 후에 인간 보체를 사용한 혈청 살균 분석에서 평가됨.
g디프테리아, 파상풍 및 백일해 항원들에 대한 면역 반응은 단일 아다셀® 백신접종 1개월 후에 루미넥스 분석에서 평가됨.
hMCV4 항원들에 대한 면역 반응은 단일 메낙트라® 백신접종 1개월 후에 토끼 보체를 사용한 혈청 살균 분석에서 평가됨.
실시예 14: 청소년에서 수막구균 혈청군 B 백신인 2가 rLP2086의 면역원성에 대한 3상 시험: 항원적으로 다양한 균주들의 일단에 대한 살균 활성
배경:
인자 H 결합 단백질(fHBP)을 표적으로 하는 2가 rLP2086은 미국에서 10 내지 25세 대상자들에서 수막구균 혈청군 B(MnB) 질환을 예방하기 위해 승인되었다. 2가 rLP2086을 사용한 광범위한 보호는, 백신 항원들과 상이한 서열을 갖는 fHBP를 발현하는 4개의 다양한 침습성 MnB 균주들을 사용하여 hSBA에서 초기에 입증되었다. 본 주요 3상 시험에서, MnB 질환에 대한 광범위한 적용범위는 퍼지고 있는 침습성 MnB 균주들의 다양성을 나타내는 10개의 추가 MnB 시험 균주들을 사용한 hSBA 데이터에 의해 더욱 뒷받침된다(ClinicalTrials.gov.:NCT01830855).
방법:
10 내지 <19세 연령의 건강한 대상자들을, 제 0, 2 및 6 개월에 2가 rLP2086, 또는 제 0 및 6 개월에 A형 간염 바이러스 백신, 및 제 2 개월에 식염수를 투여받도록 무작위배정하였다. 4개의 주요 MnB 시험 균주들을 사용하여 hSBA에서(1차 평가변수; N=1210-1266) 및 10개의 2차 MnB 시험 균주들을 사용한 모집단 부분집합에서(2차 평가변수; N=266-281) 면역 반응을 평가하였다. 모든 균주들은 백신-이종 fHBP를 발현하였다.
결과:
≥LLOQ의 hSBA 역가에 의해 측정된, 4개 주요 MnB 시험 균주들에 대한, 2가 rLP2086 수용자들중에서 용량 2 및 3 1개월 후의 hSBA 반응은 각각 64.0% 내지 99.1% 및 87.1% 내지 99.5%이었다(표). 10개의 2차 MnB 시험 균주들에 대한 hSBA 반응은 용량 2 및 3 1개월 후에 각각 61.1% 내지 100.0% 및 75.1% 내지 98.6%이었다. 각각의 2차 시험 균주들에 대한 hSBA GMT는 기준선에서 4.5 내지 11.4로부터 용량 3 후에 22.1 내지 93.5로 증가되었다.
2차 MnB 시험 균주들에 대한 2가 rLP2086의 면역원성
Figure pct00029
결론:
2가 rLP2086 백신접종은 2 및 3개 용량 후에 백신 항원들에 이종인 다양한 MnB 균주들에 대해 강한 면역 반응을 야기하였다. 높은 비율의 개체들이 10개의 추가 MnB 시험 균주들에 대해 보호 상관성(≥1:4의 hSBA 역가)보다 큰 보호적 hSBA 역가를 나타내었다. 총괄하여, 상기 3상 면역원성 데이터들은 청소년에서 MnB 질환에 대한 2가 rLP2086에 의해 제공된 광범위한 보호를 뒷받침한다.
실시예 15: 젊은 성인들에서 수막구균 혈청군 B 백신인 2가 rLP2086의 면역원성에 대한 3상 시험: 항원적으로 다양한 균주들의 일단에 대한 살균 활성
배경:
인자 H 결합 단백질(fHBP)을 표적으로 하는 2가 rLP2086은 미국에서 10 내지 25세 대상자들에서 수막구균 혈청군 B(MnB) 질환을 예방하기 위해 승인되었다. 2가 rLP2086을 사용한 광범위한 보호는, 백신 항원들과 상이한 서열을 갖는 fHBP를 발현하는 4개의 다양한 침습성 MnB 균주들을 사용하여 hSBA에서 초기에 입증되었다. 본 주요 3상 시험에서, MnB 질환에 대한 광범위한 적용범위는 퍼지고 있는 침습성 MnB 균주들의 다양성을 나타내는 10개의 추가 MnB 시험 균주들을 사용한 hSBA 데이터에 의해 더욱 뒷받침된다(ClinicalTrials.gov.:NCT01352845).
방법:
18 내지 <26세 연령의 건강한 대상자들을 제 0, 2 및 6 개월에 2가 rLP2086 또는 식염수를 투여받도록 무작위배정하였다. 4개의 주요 MnB 시험 균주들을 사용하여 hSBA에서(1차 평가변수; N=1702-1714) 및 10개의 2차 MnB 시험 균주들을 사용한(2차 평가변수; N=273-284) 모집단 부분집합에서(N=273-284) 면역 반응을 평가하였다. 모든 균주들은 백신-이종 fHBP를 발현하였다.
결과:
≥LLOQ의 hSBA 역가에 의해 측정된 바와 같은, 4개 주요 MnB 시험 균주들에 대한, 2가 rLP2086 수용자들중에서 용량 2 및 3 1개월 후의 hSBA 반응은 각각 68.3% 내지 97.4% 및 87.4% 내지 99.4%이었다(표). 10개의 2차 MnB 시험 균주들에 대한 hSBA 반응은 용량 2 및 3 1개월 후에 각각 51.6% 내지 97.9% 및 71.3% 내지 99.3%이었다. 각각의 2차 균주들에 대한 hSBA GMT는 기준선에서 5.1 내지 13.9로부터 용량 3 후에 20.6 내지 96.3으로 증가되었다.
2차 MnB 시험 균주들에 대한 2가 rLP2086의 면역원성
Figure pct00030
결론:
2가 rLP2086 백신접종은 2 및 3개 용량 후에 백신 항원들에 이종인 fHBP 변이체들을 발현하는 다양한 MnB 균주들에 대해 강한 면역 반응을 유도하였다. 높은 비율의 개체들이 10개의 추가 MnB 시험 균주들에 대해 보호 상관성(≥1:4의 hSBA 역가)보다 큰 보호적 hSBA 역가를 나타내었다. 총괄하여, 상기 3상 면역원성 데이터들은 젊은 성인들에서 MnB 질환에 대한 2가 rLP2086에 의해 제공된 광범위한 보호를 뒷받침한다.
SEQUENCE LISTING <110> Pfizer Inc. <120> NEISSERIA MENINGITIDIS COMPOSITIONS AND METHODS THEREOF <130> PC072198 <140> PCT/IB2016/050829 <141> 2016-02-16 <150> 62/118,457 <151> 2015-02-19 <150> 62/280,212 <151> 2016-01-19 <160> 23 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 258 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic amino acid sequence <400> 1 Cys Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Thr Gly 1 5 10 15 Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu 20 25 30 Lys Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Ser Gln Asn Gly Thr Leu Thr 35 40 45 Leu Ser Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Phe Lys Val Gly Asp Lys Asp 50 55 60 Asn Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Ile Ser Arg Phe 65 70 75 80 Asp Phe Val Gln Lys Ile Glu Val Asp Gly Gln Thr Ile Thr Leu Ala 85 90 95 Ser Gly Glu Phe Gln Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala Val Val Ala 100 105 110 Leu Gln Ile Glu Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile 115 120 125 Asn Gln Arg Ser Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly 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<212> PRT <213> Neisseria meningitidis (group B) <400> 8 Cys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile 1 5 10 15 Gly Thr Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp 20 25 30 Lys Gly Leu Lys Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Ser Gln Asn Gly 35 40 45 Thr Leu Thr Leu Ser Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Phe Lys Val Gly 50 55 60 Asp Lys Asp Asn Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Phe Asp Phe Val Gln Lys Ile Glu Val Asp Gly Gln Thr Ile 85 90 95 Thr Leu Ala Ser Gly Glu Phe Gln Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala 100 105 110 Val Val Ala Leu Gln Ile Glu Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp 115 120 125 Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu 130 135 140 His Thr Ala Phe Asn Gln Leu Pro Ser Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly 145 150 155 160 Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile 165 170 175 Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr 180 185 190 Pro Glu Gln Asn Val Glu Leu Ala Ser Ala 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Gln Asn His Ser Ala Val Val Ala Leu 100 105 110 Gln Ile Glu Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile Asn 115 120 125 Gln Arg Ser Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala Phe 130 135 140 Asn Gln Leu Pro Gly Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe Ser 145 150 155 160 Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala 165 170 175 Lys Gln Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln Asn 180 185 190 Val Glu Leu Ala Ala Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His Ala 195 200 205 Val Ile Leu Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Ser Glu Glu Lys Gly Thr Tyr 210 215 220 His Leu Ala Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala 225 230 235 240 Thr Val Lys Ile Gly Glu Lys Val His Glu Ile Ser Ile Ala Gly Lys 245 250 255 Gln <210> 21 <211> 254 <212> PRT <213> Neisseria meningitidis (group B) <400> 21 Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu 1 5 10 15 Ala Asp Ala Leu Thr Thr Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln 20 25 30 Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val 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Gly Lys Gln 245 250 <210> 22 <211> 262 <212> PRT <213> Neisseria meningitidis (group B) <400> 22 Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp 1 5 10 15 Ile Gly Thr Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys 20 25 30 Asp Lys Gly Leu Lys Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Pro Gln Asn 35 40 45 Gly Thr Leu Thr Leu Ser Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Phe Lys Ala 50 55 60 Gly Asp Lys Asp Asn Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys 65 70 75 80 Ile Ser Arg Phe Asp Phe Val Gln Lys Ile Glu Val Asp Gly Gln Thr 85 90 95 Ile Thr Leu Ala Ser Gly Glu Phe Gln Ile Tyr Lys Gln Asn His Ser 100 105 110 Ala Val Val Ala Leu Gln Ile Glu Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile 115 120 125 Asp Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly 130 135 140 Glu His Thr Ala Phe Asn Gln Leu Pro Gly Asp Lys Ala Glu Tyr His 145 150 155 160 Gly Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp Pro Asn Gly Arg Leu His Tyr Thr 165 170 175 Ile Asp Phe Thr Asn Lys Gln Gly Tyr Gly Arg Ile Glu His Leu Lys 180 185 190 Thr Pro Glu Leu Asn Val Asp Leu Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp 195 200 205 Glu Lys Ser His Ala Val Ile Leu Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Ser Glu 210 215 220 Glu Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu 225 230 235 240 Ile Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys Ile Gly Glu Lys Val His Glu Ile 245 250 255 Gly Ile Ala Gly Lys Gln 260 <210> 23 <211> 255 <212> PRT <213> Neisseria meningitidis (group B) <400> 23 Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu 1 5 10 15 Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Gln 20 25 30 Ser Leu Ile Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu 35 40 45 Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn 50 55 60 Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg 65 70 75 80 Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe 85 90 95 Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Leu Gln Thr Glu 100 105 110 Gln Val Gln Asp Ser Glu His Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln 115 120 125 Phe Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu 130 135 140 Pro Glu Gly Gly Arg Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Ser Ser Asp 145 150 155 160 Asp Ala Gly Gly Lys Leu Ile Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln 165 170 175 Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Asp 180 185 190 Leu Ala Ala Ala Asp Ile Lys Pro Asp Glu Lys His His Ala Val Ile 195 200 205 Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Ala Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu 210 215 220 Gly Ile Phe Gly Gly Lys Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val 225 230 235 240 Lys Thr Val Asn Gly Ile Arg His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln 245 250 255

Claims (30)

  1. 인간에서 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 A 균주 및 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B 서브패밀리 B 균주에 대한 살균 면역 반응을 유도하기 위한, 효과량의 나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물 및 병용적으로 1개 이상의 추가의 면역원성 조성물의 용도로서, 상기 나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물이 a) 서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 제 1 지질화 폴리펩티드; 및 b) 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 제 2 지질화 폴리펩티드를 포함하고, 상기 1개 이상의 추가의 면역원성 조성물이 (i) 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 A 균주, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 C 균주, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 Y 균주 및/또는 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 W135 균주에 대한 면역원성 조성물; (ii) 디프테리아, 파상풍 및 백일해에 대한 면역원성 조성물; (iii) A형 간염 바이러스에 대한 면역원성 조성물; (iv) 인유두종바이러스에 대한 면역원성 조성물; (v) 디프테리아, 파상풍, 백일해 및 소아마비에 대한 면역원성 조성물: 또는 (vi) 이들의 조합을 포함하는, 용도.
  2. 제 1 항에 있어서,
    나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물이 폴리솔베이트-80을 추가로 포함하는, 용도.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물이 알루미늄을 추가로 포함하는, 용도.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
    나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물이 히스티딘 완충제를 추가로 포함하는, 용도.
  5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
    나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물이 염화나트륨을 추가로 포함하는, 용도.
  6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,
    나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물이 약 120 ㎍/ml의 제 1 폴리펩티드; 약 120 ㎍/ml의 제 2 폴리펩티드; 약 2.8 몰비의 폴리솔베이트-80; 약 0.5 mg/ml의 알루미늄; 약 10 mM의 히스티딘; 및 약 150 mM의 염화나트륨을 포함하는, 용도.
  7. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물이 약 60 ㎍의 제 1 폴리펩티드; 약 60 ㎍의 제 2 폴리펩티드; 약 18 ㎍의 폴리솔베이트-80; 약 250 ㎍의 알루미늄; 약 780 ㎍의 히스티딘; 및 약 4380 ㎍의 염화나트륨을 포함하는, 용도.
  8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,
    나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물이 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B A22, A56, B24 및 B44 균주 중 1개 이상 또는 이들의 조합에 대한 살균 면역 반응을 유도하는, 용도.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,
    나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물이 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B A22에 대한 살균 면역 반응을 유도하는, 용도.
  10. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,
    나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물이 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B B24에 대한 살균 면역 반응을 유도하는, 용도.
  11. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
    나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물이 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 B B24, B16, B44, A22, B03, B09, A12, A19, A05, A07 및 B153 균주 중 1개 이상 또는 이들의 조합에 대한 살균 면역 반응을 유도하는, 용도.
  12. 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서,
    1개 이상의 추가의 면역원성 조성물이 4개의 별개의 별도로 제조된 단백질-캡슐 폴리사카라이드 접합체의 혼합물을 포함하고, 이때 제 1 접합체가 운반 단백질에 접합된 혈청군 W-135의 나이세리아 메닌지티디스 캡슐 폴리사카라이드를 포함하고, 제 2 접합체가 운반 단백질에 접합된 혈청군 Y의 나이세리아 메닌지티디스 캡슐 폴리사카라이드를 포함하고, 제 3 접합체가 운반 단백질에 접합된 혈청군 A의 나이세리아 메닌지티디스 캡슐 폴리사카라이드를 포함하고, 제 4 접합체가 운반 단백질에 접합된 혈청군 C의 나이세리아 메닌지티디스 캡슐 폴리사카라이드를 포함하고, 상기 운반 단백질이 디프테리아 톡소이드, CRM197 및 파상풍 톡소이드로 이루어진 군에서 선택되는, 용도.
  13. 제 12 항에 있어서,
    운반 단백질이 디프테리아 톡소이드인, 용도.
  14. 제 12 항에 있어서,
    1개 이상의 추가의 면역원성 조성물이 액체 조성물인, 용도.
  15. 제 12 항에 있어서,
    1개 이상의 추가의 면역원성 조성물이 동결건조되지 않는, 용도.
  16. 제 12 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서,
    나이세리아 메닌지티디스 혈청군 A 균주, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 C 균주, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 Y 균주 및/또는 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 W135 균주 중 1개 이상 또는 이들의 조합에 대한 면역 반응을 유도하는 용도.
  17. 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서,
    1개 이상의 추가의 면역원성 조성물이 인유두종바이러스에 대한 면역원성 조성물을 포함하는, 용도.
  18. 제 17 항에 있어서,
    인유두종바이러스 6, 11, 16 및 18 형 중 1개 이상 또는 이들의 조합에 대한 면역 반응을 유도하는 용도.
  19. 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서,
    1개 이상의 추가의 면역원성 조성물이 디프테리아, 파상풍, 백일해 및 소아마비에 대한 면역원성 조성물을 포함하는, 용도.
  20. 제 19 항에 있어서,
    인간에서 디프테리아, 파상풍, 백일해 및 소아마비 중 1개 이상 또는 이들의 조합에 대한 면역 반응을 유도하는 용도.
  21. 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서,
    1개 이상의 추가의 면역원성 조성물이 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 A 균주, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 C 균주, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 Y 균주 및/또는 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 W135 균주에 대한 면역원성 조성물, 및 디프테리아, 파상풍 및 백일해에 대한 면역원성 조성물의 혼합물을 포함하는, 용도.
  22. 제 21 항에 있어서,
    나이세리아 메닌지티디스 혈청군 A 균주, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 C 균주, 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 Y 균주 및/또는 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 W135 균주 중 1개 이상 또는 이들의 조합에 대한 면역 반응, 및 디프테리아, 파상풍 및 백일해에 대한 면역 반응을 유도하는 용도.
  23. 제 1 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 있어서,
    나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물의 효과량이 1개 용량을 포함하는, 용도.
  24. 제 1 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 있어서,
    나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물의 효과량이 2개 용량을 포함하는, 용도.
  25. 제 24 항에 있어서,
    나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물의 효과량이 추가접종 용량을 추가로 포함하는, 용도.
  26. 제 1 항 내지 제 25 항 중 어느 한 항에 있어서,
    나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물의 효과량이 3개 이하의 용량을 포함하는, 용도.
  27. 제 1 항 내지 제 26 항 중 어느 한 항에 있어서,
    나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물이 1개 이상의 추가의 면역원성 조성물의 사용후 24 시간 이내에 사용되는, 용도.
  28. 제 1 항 내지 제 27 항 중 어느 한 항에 있어서,
    나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물이 1개 이상의 추가의 면역원성 조성물과 동시에 사용되는, 용도.
  29. 제 1 항 내지 제 27 항 중 어느 한 항에 있어서,
    나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물의 1차 용량이 1개 이상의 추가의 면역원성 조성물과 병용적으로 사용되는, 용도.
  30. 제 29 항에 있어서,
    나이세리아 메닌지티디스 rLP2086 조성물의 1차 용량이 1개 이상의 추가의 면역원성 조성물과 동시에 사용되는, 용도.
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