JP7337107B2 - 髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）組成物およびその方法 - Google Patents

髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）組成物およびその方法 Download PDF

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    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１５年２月１９日出願の米国仮特許出願第６２／１１８，４５７号、および２０１６年１月１９日出願の米国仮特許出願第６２／２８０，２１２号の利益を主張する。前述の出願はすべて、その全体が参照により本明細書に援用される。
本発明は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）組成物およびその方法に関する。
髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）は、敗血症、髄膜炎、および死を引き起こしうるグラム陰性被包性細菌である。髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）は、化学的におよび抗原に関して特徴的な多糖莢膜に基づき、少なくとも１２の血清型（血清型Ａ、Ｂ、Ｃ、２９Ｅ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｗ－１３５、Ｘ、ＹおよびＺが含まれる）に分類することができる。その血清型のうちの５つ（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｙ、Ｗ１３５）である菌株が、疾患の大部分の原因である。
髄膜炎菌性髄膜炎は、抗生物質が利用可能であるにもかかわらず、小児および若年成人を数時間で死に至らしめることのある破壊的な疾患である。髄膜炎菌の血清型Ａ、Ｂ、Ｃ、ＹおよびＷ１３５および／またはＸに対する、改良された免疫原性組成物が求められている。
現在のところ、広範なＭｎＢ分離株に対して有効な交差防御ワクチンまたは組成物は、まだ市販されていない。たとえば、Ｂ血清型疾患に対する防御について認可されている多成分組成物に関するこれまでの公表結果では、非相同のＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）変異体を発現する複数菌株に対する直接の殺菌性免疫応答は、少なくとも青年では実証されていない。Ｂ血清型疾患に対する防御用の多成分組成物に関するこれまでの公表結果は、せいぜい、多成分組成物中のＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）変異体と相同であるＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）変異体に対する免疫原性を示しているにすぎないと思われる。
米国仮特許出願第６２／１１８，４５７号 米国仮特許出願第６２／２８０，２１２号 ＷＯ／２０１２／０３２４８９ ＷＯ／２０１３／１３２４５２ 米国特許公開第ＵＳ２０１２００９３８５２号 米国特許公開第ＵＳ２０１３０２４３８０７号 米国特許公開ＵＳ２０１２／００９３８５２ ＷＯ２０１２０２５８７３ 米国特許公開ＵＳ２０１３／０１７１１９４ 米国特許公開ＵＳ２００９／００１６９４６ 米国特許第７４７９２８３号 ＷＯ１９９０／０１３３１３ ＥＰ１６６６０５７Ｂ１ 米国特許第５，８２０，８７０号
ＵＫ Ｍａｒｋｅｔｉｎｇ Ａｕｔｈｏｒｉｓａｔｉｏｎ ＰＬ０ ６７４５／０１２１
したがって、多様なＭｎＢ分離株に対して有効な交差防御ワクチンまたは組成物が求められており、同様に（たとえば、異なる地理的領域を代表する）多様なまたは異種の髄膜炎菌株の一団に対する現実世界でのワクチン有効範囲を明らかにする必要もある。
一態様において、本発明は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む約１２０μｇ／ｍｌの第一の脂質付加ポリペプチド、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む１２０μｇ／ｍｌの第二の脂質付加ポリペプチド、第一のポリペプチドに対して約２．８のモル比のポリソルベート８０、第二のポリペプチドに対して約２．８のモル比のポリソルベート８０、約０．５ｍｇ／ｍｌのアルミニウム、約１０ｍＭのヒスチジン、および約１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む組成物に関する。一実施形態では、初回用量は、合計体積で約０．５ｍｌである。一実施形態では、組成物は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する殺菌免疫応答を誘発する。一実施形態では、組成物は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ａ、Ｃ、２９Ｅ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｗ－１３５、Ｘ、Ｙ、またはＺに対する殺菌免疫応答を誘発する。一実施形態では、組成物は、配列番号１との配列同一性が１００％未満であるポリペプチドをさらに含まない。一実施形態では、組成物は、配列番号２との配列同一性が１００％未満であるポリペプチドをさらに含まない。一実施形態では、第一のポリペプチドは、合計で２５８アミノ酸を有する。一実施形態では、第二のポリペプチドは、合計で２６１アミノ酸を有する。一実施形態では、組成物は、初回用量を投与された後のヒトにおいて、初回用量を投与される前のヒトにおける血清免疫グロブリンの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する殺菌力価の少なくとも２倍の強さである、血清免疫グロブリンの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する殺菌力価を誘導し、殺菌力価の増大は、ヒト補体を使用する血清殺菌検定において同一条件下で測定される。一実施形態では、第一の脂質付加ポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる。一実施形態では、第二の脂質付加ポリペプチドは、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる。
別の態様において、本発明は、ヒトにおいて髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する免疫応答を誘発する方法に関する。方法は、ヒトに有効量の組成物の初回用量および二回目用量を投与することを含み、前記組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む１２０μｇ／ｍｌの第一の脂質付加ポリペプチド、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む１２０μｇ／ｍｌの第二の脂質付加ポリペプチド、第一のポリペプチドに対して２．８のモル比のポリソルベート８０、第二のポリペプチドに対して２．８のモル比のポリソルベート８０、０．５ｍｇ／ｍｌのアルミニウム、１０ｍＭのヒスチジン、および１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む。一実施形態では、組成物の用量は、合計体積０．５ｍｌである。一実施形態では、ヒトに多くとも２用量の組成物を投与する。一実施形態では、ヒトに組成物の追加免疫用量をさらに投与しない。一実施形態では、ヒトに組成物の三回目用量を投与する。一実施形態では、三回目用量の後、ヒトに組成物の追加免疫用量をさらに投与しない。一実施形態では、ヒトに組成物の四回目用量をさらに投与しない。一実施形態では、三回目用量は、初回用量の後約６カ月の期間内にヒトに投与する。一実施形態では、二回目用量は、初回用量から少なくとも３０日後に投与する。一実施形態では、方法は、組成物の三回目用量を投与することをさらに含み、三回目用量は、二回目用量から少なくとも９０日後に投与する。一実施形態では、組成物は、ヒト補体を使用する血清殺菌検定において同一条件下で測定したとき、初回用量を投与された後のヒトにおいて、初回用量を投与される前のヒトにおける血清免疫グロブリンの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する殺菌力価の少なくとも２倍の強さである、血清免疫グロブリンの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する殺菌力価を誘導する。一実施形態では、免疫応答は、、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ｂ２４、Ｂ１６、Ｂ４４、Ａ２２、Ｂ０３、Ｂ０９、Ａ１２、Ａ１９、Ａ０５、Ａ０７、Ｂ１５３株の少なくとも１種、またはこれらのいずれかの組合せに対する殺菌免疫応答を誘発するる。一実施形態では、免疫応答は、Ｂ０１を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株と異種である髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株Ｍ９８２５０７７１と異種である髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株ＣＤＣ１１２７と異種である髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。好ましい実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株ＣＤＣ１５７３と異種である髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。一実施形態では、第一のポリペプチドは、合計で２５８アミノ酸を有する。一実施形態では、第二のポリペプチドは、合計で２６１アミノ酸を有する。一実施形態では、第一の脂質付加ポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる。一実施形態では、第二の脂質付加ポリペプチドは、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる。
別の態様において、本発明は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む６０μｇの第一の脂質付加ポリペプチド、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む６０μｇの第二の脂質付加ポリペプチド、第一のポリペプチドに対して２．８のモル比のポリソルベート８０、第二のポリペプチドに対して２．８のモル比のポリソルベート８０、０．５ｍｇ／ｍｌのアルミニウム、１０ｍＭのヒスチジン、および１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含み、合計体積が約０．５ｍｌである組成物に関する。一実施形態では、組成物は、Ａ０５を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株と異種である髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対する殺菌免疫応答を誘発する。一実施形態では、組成物は、Ｂ０１を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株と異種である髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対する殺菌免疫応答を誘発する。一実施形態では、組成物は、ヒト補体を使用する血清殺菌検定において同一条件下で測定したとき、初回用量を投与された後のヒトにおいて、初回用量を投与される前のヒトにおける血清免疫グロブリンの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する殺菌力価の少なくとも２倍の強さである、血清免疫グロブリンの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する殺菌力価を誘導する。一実施形態では、組成物は、配列番号１との配列同一性が１００％未満であるポリペプチドをさらに含まない。一実施形態では、組成物は、配列番号２との配列同一性が１００％未満であるポリペプチドをさらに含まない。一実施形態では、第一のポリペプチドは、合計で２５８アミノ酸を有する。一実施形態では、第二のポリペプチドは、合計で２６１アミノ酸を有する。一実施形態では、第一の脂質付加ポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる。一実施形態では、第二の脂質付加ポリペプチドは、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる。
別の態様において、本発明は、ヒトにおいて、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対して、また髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して、殺菌免疫応答を誘発する方法に関する。本方法は、ヒトに、有効量の髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物を投与することを含み、前記組成物は、ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第一の脂質付加ポリペプチドと、ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第二の脂質付加ポリペプチドとを含み、本方法は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する前記組成物の投与から２４時間以内に、次の免疫原性組成物：（ｉ）髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ａ株、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｃ株、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｙ株、および／もしくは髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｗ１３５株に対する免疫原性組成物、（ｉｉ）ジフテリア、破傷風、および百日咳に対する免疫原性組成物、（ｉｉｉ）Ａ型肝炎ウイルスに対する免疫原性組成物、（ｉｖ）ヒトパピローマウイルスに対する免疫原性組成物、（ｖ）ジフテリア、破傷風、百日咳、および灰白髄炎に対する免疫原性組成物、または（ｖｉ）これらのいずれかの組合せのうちの少なくとも１つをそのヒトに投与することをさらに含む。「免疫原性」とは、免疫応答を誘発しうる能力を指す。
一態様において、本発明は、ヒトにおいて、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対して、また髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して、殺菌免疫応答を誘発する方法に関する。本方法は、ヒトに、有効量の髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物を投与することを含み、前記組成物は、ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第一の脂質付加ポリペプチドと、ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第二の脂質付加ポリペプチドとを含み、本方法は、次の付加的免疫原性組成物：（ｉ）髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ａ株、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｃ株、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｙ株、および／もしくは髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｗ１３５株に対する免疫原性組成物、（ｉｉ）ジフテリア、破傷風、および百日咳に対する免疫原性組成物、（ｉｉｉ）Ａ型肝炎ウイルスに対する免疫原性組成物、（ｉｖ）ヒトパピローマウイルスに対する免疫原性組成物、（ｖ）ジフテリア、破傷風、百日咳、および灰白髄炎に対する免疫原性組成物、または（ｖｉ）これらのいずれかの組合せのうちの少なくとも１つを並行してそのヒトに投与することをさらに含む。
別の態様において、本発明は、ヒトにおいて、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対して、また髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌免疫応答を誘発するために、有効量の髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物と、少なくとも１種の付加的免疫原性組成物を並行して使用することに関し、前記髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物は、ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第一の脂質付加ポリペプチドと、ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第二の脂質付加ポリペプチドとを含み、少なくとも１種の付加的免疫原性組成物は、（ｉ）髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ａ株、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｃ株、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｙ株、および／もしくは髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｗ１３５株に対する免疫原性組成物、（ｉｉ）ジフテリア、破傷風、および百日咳に対する免疫原性組成物、（ｉｉｉ）Ａ型肝炎ウイルスに対する免疫原性組成物、（ｉｖ）ヒトパピローマウイルスに対する免疫原性組成物、（ｖ）ジフテリア、破傷風、百日咳、および灰白髄炎に対する免疫原性組成物、または（ｖｉ）これらのいずれかの組合せである。
一実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物は、ポリソルベート８０をさらに含む。一実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物は、アルミニウムをさらに含む。一実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物は、ヒスチジン緩衝剤をさらに含む。一実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物は、塩化ナトリウムをさらに含む。一実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物は、約１２０μｇ／ｍｌの第一のポリペプチド、約１２０μｇ／ｍｌの第二のポリペプチド、約２．８のモル比のポリソルベート８０、約０．５ｍｇ／ｍｌのアルミニウム、約１０ｍＭのヒスチジン、および約１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む。一実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物は、約６０μｇの第一のポリペプチド、約６０μｇの第二のポリペプチド、約１８μｇのポリソルベート８０、約２５０μｇのアルミニウム、約７８０μｇのヒスチジン、および約４３８０μｇの塩化ナトリウムを含む。
一実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ａ２２、Ａ５６、Ｂ２４、Ｂ４４株の少なくとも１つ、またはこれらのいずれかの組合せに対して殺菌免疫応答を誘発する。一実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ａ２２に対して殺菌免疫応答を誘発する。一実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ｂ２４に対して殺菌免疫応答を誘発する。一実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ｂ２４、Ｂ１６、Ｂ４４、Ａ２２、Ｂ０３、Ｂ０９、Ａ１２、Ａ１９、Ａ０５、Ａ０７、Ｂ１５３株の少なくとも１つ、またはこれらのいずれかの組合せに対して殺菌免疫応答を誘発する。
一実施形態では、方法は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ａ株、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｃ株、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｙ株、および／もしくは髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｗ１３５株の少なくとも１つ、またはこれらのいずれかの組合せに対して免疫応答を誘発することをさらに含む。
一実施形態では、方法は、別個で個別に作製された４種のタンパク質－莢膜多糖コンジュゲートの混合物を含む付加的免疫原性組成物をヒトに投与することを含み、第一のコンジュゲートは、担体タンパク質にコンジュゲートした血清型Ｗ－１３５の精製髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜多糖を含み、第二のコンジュゲートは、担体タンパク質にコンジュゲートした血清型Ｙの精製髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜多糖を含み、第三のコンジュゲートは、精製担体タンパク質にコンジュゲートした血清型Ａの精製髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜多糖を含み、第四のコンジュゲートは、担体タンパク質にコンジュゲートした血清型Ｃの精製髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜多糖を含み、担体タンパク質は、ジフテリアトキソイド、ＣＲＭ１９７、および破傷風トキソイドからなる群から選択される。一実施形態では、担体タンパク質は、ジフテリアトキソイドである。
一実施形態では、免疫原性組成物は、液体組成物である。
一実施形態では、免疫原性組成物は、凍結乾燥されていない。
一実施形態では、方法は、ヒトパピローマウイルス６、１１、１６、１８型の少なくとも１つ、またはこれらのいずれかの組合せに対して免疫応答を誘発することをさらに含む。一実施形態では、方法は、ヒトにおいて、ジフテリア、破傷風、百日咳、灰白髄炎の少なくとも１つ、またはこれらのいずれかの組合せに対して免疫応答を誘発することをさらに含む。
一実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物の有効量は、１用量を含む。一実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物の有効量は、２用量を含む。一実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物の有効量は、追加免疫用量をさらに含む。一実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物の有効量は、多くとも３用量を含む。
一実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物は、付加的組成物の投与から２４時間以内に投与される。一実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物は、付加的組成物と同時に投与される。一実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物の初回用量が、付加的組成物と並行して投与される。一実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物の初回用量は、付加的組成物と同時に投与される。
ｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ以上に達する対象の割合を示すグラフである。ｈＳ ＢＡ＝ヒト補体を使用する血清殺菌検定、ＬＬＯＱ＝定量下限。 ｒＬＰ２０８６で免疫処置後の個々のヒト対象のうち、プリンストン大学アウトブレイク株およびＵＣＳＢアウトブレイク株に対するｈＳＢＡ力価の上昇が４倍に達する対象の百分率を示すグラフである（Ｂ１９７１０１２試験－実施例５、実施例６に記載）。臨床試験Ｂ１９７１０１２において２価ｒＬＰ２０８６で免疫処置した９人のヒト対象からの血清サンプルを、プリンストン大学およびＵＣＳＢからのＭｎＢアウトブレイク株を使用する試験的ｈＳＢＡにおいて評価した。実施例９を参照されたい。
本発明者らは、意外にも、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第一の脂質付加ポリペプチドと、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第二の脂質付加ポリペプチドとを含むｒＬＰ２０８６組成物を発見した。組成物は、ヒトにおいて、許容される安全性プロファイルを有し、組成物は、驚いたことに、ヒトにおいて、少なくとも２種類を超える多様な髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株に対して、広く交差反応性の殺菌免疫応答を惹起する。
本発明者らは、ｒＬＰ２０８６組成物と、次の免疫原性組成物：（ｉ）髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ａ株、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｃ株、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｙ株、および／もしくは髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｗ１３５株に対する免疫原性組成物、（ｉｉ）ジフテリア、破傷風、および百日咳に対する免疫原性組成物、（ｉｉｉ）Ａ型肝炎ウイルスに対する免疫原性組成物、（ｉｖ）ヒトパピローマウイルスに対する免疫原性組成物、（ｖ）ジフテリア、破傷風、百日咳、および灰白髄炎に対する免疫原性組成物、または（ｖｉ）これらのいずれかの組合せのうちの少なくとも１つとを並行して投与した後になお、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する活発な免疫応答が生じたことも発見した。
少なくともｒＬＰ２０８６組成物と髄膜炎菌Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ－１３５型多糖コンジュゲートワクチン（ＭＣＶ４）の並行投与は、意外にも、髄膜炎菌Ｂ型に加えて、少なくとも、髄膜炎菌Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ－１３５型に対する免疫応答も生じさせた。ｒＬＰ２０８６組成物とＭＣＶ４組成物の並行投与後の、髄膜炎菌Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ－１３５型に対する免疫応答は、ｒＬＰ２０８６組成物なしでのＭＣＶ４組成物の投与によって生じた免疫応答と比べて劣っていなかった。
少なくとも、ｒＬＰ２０８６組成物と、髄膜炎菌Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ－１３５型多糖コンジュゲートワクチン（ＭＣＶ４）と、破傷風、ジフテリア、および無細胞百日咳（Ｔｄａｐ）ワクチンの並行投与は、意外にも、髄膜炎菌Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ－１３５型ならびに髄膜炎菌Ｂ型に加えて、少なくとも、破傷風、ジフテリア、および無細胞百日咳に対する免疫応答も生じさせた。ｒＬＰ２０８６組成物とＭＣＶ４組成物とＴｄａｐ組成物の並行投与後の、Ｔｄａｐならびに髄膜炎菌Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ－１３５型に対する免疫応答は、ｒＬＰ２０８６組成物なしでのＭＣＶ４組成物およびＴｄａｐ組成物の投与によって生じた免疫応答と比べて劣っていなかった。
さらに、本発明者らは、ｒＬＰ２０８６組成物を、Ａ型肝炎ウイルスに対する免疫原性組成物と並行して、安全にヒトに投与できることも発見した。
本発明者らは、意外にも、２用量投与スケジュールおよび３用量投与スケジュールによって、高い割合のヒト対象において、ワクチンと非相同のＬＰ２０８６（Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ））を有する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡおよびＢからの試験株に対して、８以上のｈＳＢＡ力価が得られたことをさらに発見した。３用量投与スケジュールでは、２用量投与スケジュールと比較したとき、ヒトにおいて、多様なＭｎＢ臨床菌株に対するより広い防御を得ることができる。
本発明者らは、意外にも、ｒＬＰ２０８６組成物と、ヒトパピローマウイルスに対する四価の免疫原性組成物（ＨＰＶ４）を同時に投与した後、ヒトパピローマウイルスおよび髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する活発な免疫応答が生じたことも発見した。たとえば、ｒＬＰ２０８６組成物とＨＰＶ４組成物の同時投与によって、少なくとも、ｒＬＰ２０８６組成物中のｆＨＢＰと非相同であるｆＨＢＰを発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ試験株に対する免疫応答が生じた。このような異種試験株としては、それぞれがｒＬＰ２０８６組成物中のｆＨＢＰと非相同であるＡ２２ ｆＨＢＰ、Ａ５６ ｆＨＢＰ、Ｂ２４ ｆＨＢＰ、またはＢ４４ ｆＨＢＰを発現する野生型髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ株が挙げられる。数ある中でもＡ２２ ｆＨＢＰ、Ａ５６ ｆＨＢＰ、Ｂ２４ ｆＨＢＰ、およびＢ４４ ｆＨＢＰを始めとする変異体ｆＨＢＰタンパク質について記載している、ＷＯ／２０１２／０３２４８９、ＷＯ／２０１３／１３２４５２、米国特許公開第ＵＳ２０１２００９３８５２号、および米国特許公開第ＵＳ２０１３０２４３８０７号を参照されたい。これら参考文献は、その全体がそれぞれ参照により本明細書に援用される。意外にも、同時投与によって、少なくともＨＰＶ型６、１１、１６、および／または１８に対する免疫応答も生じた。ｒＬＰ２０８６組成物とＨＰＶ４組成物の同時投与後のＨＰＶ型に対する免疫応答は、ｒＬＰ２０８６組成物不在でＨＰＶ４組成物を投与して生じた免疫応答と比べても劣っていなかった。
加えて、本発明者らは、意外にも、ｒＬＰ２０８６組成物と、ジフテリア、破傷風、百日咳、および灰白髄炎に対する免疫原性組成物を同時に投与した後、ジフテリア、破傷風、百日咳、および灰白髄炎と、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する活発な免疫応答が生じたことを発見した。たとえば、ｒＬＰ２０８６組成物とＲＥＰＥＶＡＸ組成物の同時投与によって、少なくとも、ｒＬＰ２０８６組成物中のｆＨＢＰと非相同であるｆＨＢＰを発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ試験株に対する免疫応答が生じた。同時投与によって、意外にも、少なくともＲＥＰＥＶＡＸの９種類の抗原：ジフテリア、破傷風、百日咳トキソイド、百日咳線維状赤血球凝集素、百日咳パータクチン、百日咳線毛凝集原２＋３型、ポリオウイルス１型、ポリオウイルス２型、ポリオウイルス３型に対する免疫応答も生じた。ｒＬＰ２０８６組成物とＲＥＰＥＶＡＸ組成物の同時投与後のＲＥＰＥＶＡＸ抗原に対する免疫応答は、ｒＬＰ２０８６組成物不在でＲＥＰＥＶＡＸ組成物を投与して生じた免疫応答と比べても劣っていなかった。
組成物およびワクチン
一態様において、本発明は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する組成物に関する。組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する第一の脂質付加ポリペプチドと、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する第二の脂質付加ポリペプチドとを含む。
本発明者らは、意外にも、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂの複数菌株に対して有効な広域防御免疫応答を誘発する単一の髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ポリペプチド成分を発見した。したがって、一実施形態では、組成物は、融合タンパク質を含まない。一実施形態では、組成物は、キメラタンパク質を含まない。一実施形態では、組成物は、ハイブリッドタンパク質を含まない。一実施形態では、組成物は、ペプチド断片をさらに含まない。別の実施形態では、組成物は、ｆＨＢＰでないナイセリアポリペプチドをさらに含まない。たとえば、一実施形態では、組成物は、ＰｏｒＡタンパク質を含まない。別の実施形態では、組成物は、ＮａｄＡタンパク質を含まない。別の実施形態では、組成物は、ナイセリアヘパリン結合抗原（ＮＨＢＡ）をさらに含まない。別の実施形態では、組成物は、ナイセリア外膜小胞（ＯＭＶ）をさらに含まない。好ましい実施形態では、組成物は、第一のポリペプチドおよび第二のポリペプチド以外の抗原をさらに含まない。
別の態様において、本発明者らは、意外にも、多くとも２種類の髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ株由来のポリペプチド抗原が、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂの複数菌株に対して免疫応答を誘発することを発見した。したがって、一実施形態では、組成物は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ Ｍ９８２５０７７１株および／または髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ ＣＤＣ１５７３株由来のものでないポリペプチドをさらに含まない。
一実施形態では、組成物は、配列番号１との配列同一性が１００％未満であるポリペプチドをさらに含まない。別の実施形態では、組成物は、配列番号２との配列同一性が１００％未満であるポリペプチドをさらに含まない。たとえば、組成物は、配列番号１および／または配列番号２の全長との配列同一性が１００％未満であるポリペプチドをさらに含まない。
一実施形態では、組成物は、ポリソルベート８０、アルミニウム、ヒスチジン、および塩化ナトリウムをさらに含む。一実施形態では、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む約６０μｇの第一の脂質付加ポリペプチド、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む約６０μｇの第二の脂質付加ポリペプチド、各ポリペプチドに対して２．８のモル比のポリソルベート８０、リン酸アルミニウムとしての０．５ｍｇ／ｍｌのアルミニウム、１０ｍＭのヒスチジン、および１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含み、組成物は、合計体積が約０．５ｍｌであることが好ましい。
別の態様において、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む約１２０μｇ／ｍｌの第一の脂質付加ポリペプチド、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む約１２０μｇ／ｍｌの第二の脂質付加ポリペプチド、各ポリペプチドに対して２．８のモル比のポリソルベート８０、リン酸アルミニウムとしての０．５ｍｇ／ｍｌのアルミニウム、１０ｍＭのヒスチジン、および１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む。
別の態様において、組成物は、ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む６０μｇの第一の脂質付加ポリペプチド、ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む６０μｇの第二の脂質付加ポリペプチド、ｃ）１８μｇのポリソルベート８０、ｄ）２５０μｇのアルミニウム、ｅ）７８０μｇのヒスチジン、およびｆ）４３８０μｇの塩化ナトリウムを含む。
例示的一実施形態では、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる約６０μｇの第一の脂質付加ポリペプチド、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる約６０μｇの第二の脂質付加ポリペプチド、第一の脂質付加ポリペプチドに対して、また第二の脂質付加ポリペプチドに対して２．８のモル比のポリソルベート８０、０．５ｍｇ／ｍｌのリン酸アルミニウム、１０ｍＭのヒスチジン、および１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含み、組成物は、合計体積が約０．５ｍｌである。この例示的実施形態において、組成物は、緩衝剤処理された等張性滅菌液体懸濁液である。この例示的実施形態において、組成物は、ｐＨが６．０である。この例示的実施形態において、第一のポリペプチドおよび第二のポリペプチドは、アルミニウムに吸着されている。
一実施形態では、組成物は、合計体積が約０．５ｍｌである。一実施形態では、組成物の初回用量は、合計体積が約０．５ｍｌである。「初回用量」とは、０日目に投与される組成物の用量を指す。「二回目用量」または「三回目用量」とは、初回用量に引き続いて投与される組成物の用量を指し、初回用量と同じ量でも、そうでなくてもよい。
組成物は、初回用量がヒトに投与された後、免疫原性を有する。一実施形態では、初回用量は、合計体積で約０．５ｍｌである。
組成物は、ヒト補体を使用する血清殺菌検定（ｈＳＢＡ）において同一条件下で測定したとき、初回用量を投与された後のヒトにおいて、初回用量を投与される前のヒトにおける血清免疫グロブリンの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する殺菌力価の少なくとも１倍の強さ、好ましくは少なくとも２倍の強さを超える、血清免疫グロブリンの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する殺菌力価を誘導する。
好ましい実施形態では、殺菌力価または殺菌免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株および髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対するものである。殺菌力価または殺菌免疫応答は、少なくとも髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ、サブファミリーＢ、Ｂ０１菌株に対するものであることが最も好ましい。
別の好ましい実施形態では、殺菌力価または殺菌免疫応答は、少なくとも、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ、サブファミリーＢ、Ｂ２４株に対するものである。別の好ましい実施形態では、殺菌力価または殺菌免疫応答は、少なくとも、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ、サブファミリーＡ、Ａ２２株に対するものである。
一実施形態では、組成物は、ヒト補体を使用する血清殺菌検定において同一条件下で測定したとき、組成物の用量を投与された後のヒトにおいて、前記用量を投与される前のヒトにおける血清免疫グロブリンの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する殺菌力価の少なくとも１倍を超える、たとえば、少なくとも１．０１倍、１．１倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、または１６倍の強さである、血清免疫グロブリンの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する殺菌力価を誘導する。
一実施形態では、組成物は、ヒト用の免疫原性組成物である。別の実施形態では、組成物は、ワクチンである。「ワクチン」とは、その抗原に特異的である免疫応答を誘発する少なくとも１つのエピトープを含んでいる抗原を含む組成物を指す。ワクチンは、皮下、経口、口鼻、または鼻腔内の投与経路によって、直接対象に投与することができる。ワクチンは、筋肉内投与することが好ましい。一実施形態では、組成物は、ヒトに対するワクチンである。一実施形態では、組成物は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物である。
一実施形態では、組成物は、液体組成物である。好ましい実施形態では、組成物は、液体懸濁液組成物である。別の好ましい実施形態では、組成物は、凍結乾燥されていない。
第一のポリペプチド
一実施形態では、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する第一のポリペプチドを含む。好ましい一実施形態では、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む約６０μｇの第一のポリペプチドを含み、組成物は、合計体積が０．５ｍｌであることが好ましい。別の実施形態では、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む約１２０μｇ／ｍｌの第一のポリペプチドを含む。ポリペプチドは、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株Ｍ９８２５０７７１からの改変されたＨ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）である。ｆＨＢＰについての記述は、その全体がそれぞれ参照により本明細書に援用される、ＷＯ２０１２０３２４８９および米国特許公開ＵＳ２０１２／００９３８５２で開示されている。ポリペプチドは、ポリペプチドの３箇所の位置において共有結合で連結した主な３種の脂肪酸Ｃ１６：０、Ｃ１６：１、およびＣ１８：１によって、Ｎ末端側が脂質付加されている。第一のポリペプチドは、合計で２５８アミノ酸を含む。
第一のポリペプチドは、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株Ｍ９８２５０７７１からの対応する野生型配列と比べると、ポリペプチドのＮ末端側領域に導入された２つの変更を含む。２番目の位置にあるグリシンは、クローン化部位を導入する結果として付加される。第二の変更は、４つのアミノ酸の欠失を含む。したがって、一実施形態では、第一のポリペプチドは、Ｎ末端にＣ－Ｇ－Ｓ－Ｓ配列（配列番号３）を含む。配列番号１の最初の４つのアミノ酸残基を参照されたい。
第一のポリペプチド配列と野生型ナイセリア配列のＮ末端側の相違点を以下に示す。したがって、一実施形態では、第一のポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列の少なくとも最初の２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、またはそれ以上のアミノ酸残基を含む。第一のポリペプチドは、配列番号１の少なくとも最初の４つ、より好ましくは少なくとも最初の６つ、最も好ましくは少なくとも最初の８つのアミノ酸残基を含むことが好ましい。
組換えとナイセリアサブファミリーＡ ＬＰ２０８６ポリペプチドの予想Ｎ末端側配列の比較
ｒＬＰ２０８６ Ｍ９８２５０７７１ ＣＧＳＳ－－－－－ＧＧＧＧＶＡＡＤ（配列番号４）
ナイセリアＬＰ２０８６ Ｍ９８２５０７７１ Ｃ－ＳＳＧＳ－ＧＳＧＧＧＧＶＡＡＤ（配列番号５）
＞Ａ０５（配列番号１）
ＣＧＳＳＧＧＧＧＶＡＡＤＩＧＴＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩＳＱＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴＦＫＶＧＤＫＤＮＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩＳＲＦＤＦＶＱＫＩＥＶＤＧＱＴＩＴＬＡＳＧＥＦＱＩＹＫＱＤＨＳＡＶＶＡＬＱＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡＦＮＱＬＰＳＧＫＡＥＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶＥＬＡＳＡＥＬＫＡＤＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤＴＲＹＧＳＥＥＫＧＴＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫＩＲＥＫＶＨＥＩＧＩＡＧＫＱ
一実施形態では、第一のポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、第一のポリペプチドは、合計で２５８アミノ酸を有する。一実施形態では、第一のポリペプチドは、配列番号１との配列同一性が１００％未満であるアミノ酸配列を含まない。別の実施形態では、第一のポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる。別の実施形態では、第一のポリペプチドは、アミノ酸配列ＫＤＮを含む。たとえば、配列番号１のアミノ酸残基７３～７５を参照されたい。別の実施形態では、第一のポリペプチドは、ポリペプチドのＮ末端に配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、第一のポリペプチドは、ポリペプチドのＮ末端に配列番号４に記載のアミノ酸配列を含む。
好ましい実施形態では、第一のポリペプチドは、当技術分野で知られている標準技術を使用して、組換え宿主細胞において容易に発現される。別の好ましい実施形態では、第一のポリペプチドは、配列番号１のＮおよび／またはＣドメイン上に殺菌性エピトープを含む。一実施形態では、第一のポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列の少なくとも最初の４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００アミノ酸残基を含む。第一のポリペプチドは、配列番号１の少なくとも最初の２つ、より好ましくは少なくとも最初の４つ、最も好ましくは少なくとも最初の８つのアミノ酸残基を含むことが好ましい。
別の実施形態では、第一のポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列の少なくとも最後の４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００アミノ酸残基を含む。
第二のポリペプチド
一実施形態では、組成物は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する第二のポリペプチドを含む。好ましい一実施形態では、組成物は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む約６０μｇの第二のポリペプチドを含み、組成物は、合計体積が０．５ｍｌであることが好ましい。別の実施形態では、組成物は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む１２０μｇ／ｍｌの第二のポリペプチドを含む。ポリペプチドは、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株ＣＤＣ１５７３からのＨ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）である。ｆＨＢＰについての記述は、その全体がそれぞれ参照により本明細書に援用される、ＷＯ２０１２０３２４８９および米国特許公開ＵＳ２０１２／００９３８５２で開示されている。ポリペプチドは、ポリペプチドの３箇所の位置において共有結合で連結した主な３種の脂肪酸Ｃ１６：０、Ｃ１６：１、およびＣ１８：１によって、Ｎ末端側が脂質付加されている。第二のポリペプチドは、合計で２６１アミノ酸を含む。一実施形態では、第二のポリペプチドは、Ｎ末端にＣ－Ｇ－Ｓ－Ｓ配列（配列番号３）を含む。配列番号２の最初の４つのアミノ酸残基を参照されたい。
＞Ｂ０１（配列番号２）
ＣＧＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＶＴＡＤＩＧＴＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩＳＱＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴＹＧＮＧＤＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＶＳＲＦＤＦＩＲＱＩＥＶＤＧＱＬＩＴＬＥＳＧＥＦＱＶＹＫＱＳＨＳＡＬＴＡＬＱＴＥＱＥＱＤＰＥＨＳＥＫＭＶＡＫＲＲＦＲＩＧＤＩＡＧＥＨＴＳＦＤＫＬＰＫＤＶＭＡＴＹＲＧＴＡＦＧＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬＫＳＰＥＬＮＶＤＬＡＶＡＹＩＫＰＤＥＫＨＨＡＶＩＳＧＳＶＬＹＮＱＤＥＫＧＳＹＳＬＧＩＦＧＥＫＡＱＥＶＡＧＳＡＥＶＥＴＡＮＧＩＨＨＩＧＬＡＡＫＱ
一実施形態では、第二のポリペプチドは、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、第二のポリペプチドは、合計で２６１アミノ酸を有する。一実施形態では、第二のポリペプチドは、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる。別の実施形態では、第二のポリペプチドは、配列番号２との配列同一性が１００％未満であるポリペプチドをさらに含まない。好ましい実施形態では、第一のポリペプチドおよび第二のポリペプチドは、それぞれのポリペプチドのＮ末端にＣ－Ｇ－Ｓ－Ｓ（配列番号３）配列を含む。
好ましい実施形態では、第二のポリペプチドは、当技術分野で知られている標準技術を使用して、組換え宿主細胞において容易に発現される。別の好ましい実施形態では、第二のポリペプチドは、配列番号２のＮおよび／またはＣドメイン上に殺菌性エピトープを含む。一実施形態では、第二のポリペプチドは、配列番号２に記載のアミノ酸配列の少なくとも最初の２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００アミノ酸残基を含む。第二のポリペプチドは、配列番号２の少なくとも最初の２つ、より好ましくは少なくとも最初の４つ、最も好ましくは少なくとも最初の８つのアミノ酸残基を含むことが好ましい。
別の実施形態では、第二のポリペプチドは、配列番号２に記載のアミノ酸配列の少なくとも最後の４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００アミノ酸残基を含む。
ポリソルベート８０
ポリソルベート８０（ＰＳ－８０）は、非イオン性界面活性剤である。モノクローナル抗体に基づくｉｎ ｖｉｔｒｏ効力検定を使用しての安定性加速試験では、最終製剤においてＰＳ－８０のＭｎＢ ｒＬＰ２０８６タンパク質に対するモル比がより大きい場合のサブファミリーＢタンパク質の不安定性が実証された。様々な比率のＰＳ－８０を用いた別の実験では、効力の保持に最適な、ＰＳ－８０のＭｎＢ ｒＬＰ２０８６タンパク質に対するモル比は、およそ２．８±１．４であることが示された。
組成物中のＰＳ－８０の濃度は、ＰＳ－８０のポリペプチドに対するモル比に応じて決まる。一実施形態では、組成物は、第一のポリペプチドに対して、また第二のポリペプチドに対して２．８±１．４のモル比のＰＳ－８０を含む。一実施形態では、組成物は、第一のポリペプチドに対して、また第二のポリペプチドに対して２．８±１．１のモル比のＰＳ－８０を含む。一実施形態では、組成物は、ポリペプチドに対して少なくとも１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、または３．３のモル比のＰＳ－８０を含む。組成物は、ポリペプチドに対して２．８のモル比のＰＳ－８０を含むことが好ましい。
ＰＳ－８０の対ポリペプチドモル比は、どちらの値もモルで示される、ＰＳ－８０の測定濃度および合計ポリペプチド測定濃度から算出することにより求める。たとえば、ＰＳ－８０の対タンパク質モル比は、（たとえば、逆相高圧液体クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）による）ＰＳ－８０の測定濃度を、（たとえば、イオン交換高圧液体クロマトグラフィー（ＩＥＸ－ＨＰＬＣ）による）最終原薬中の合計タンパク質測定濃度に対して算出することにより求められ、どちらの値もモルで示される。
ワクチン製剤中のポリソルベート８０の濃度の定量化には、ＲＰ－ＨＰＬＣを使用する。界面活性剤の濃度は、脂肪酸部分のけん化によって求められ、ポリソルベート８０は、４０℃でのアルカリ加水分解によって遊離オレイン酸に変換される。Ｃ１８カラムを使用するＲＰ－ＨＰＬＣによってサンプルを分離し、ＵＶ検出器を２００ｎｍの波長で使用して定量化する。
第一および第二のポリペプチドは、陰イオン交換ＨＰＬＣによって分割される。ｒＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＡおよびＢタンパク質は、異なる保持時間で溶離し、それぞれのｒＬＰ２０８６タンパク質基準材料に対して生成された検量線を使用して定量化される。
用語「モル比」ならびにｆＨＢＰおよびＰＳ－８０を含む免疫原性組成物についての記述は、その全体がそれぞれ参照により本明細書に援用される、ＷＯ２０１２０２５８７３および米国特許公開ＵＳ２０１３／０１７１１９４でさらに開示されている。
本明細書で使用する用語「モル比」とは、組成物中の２種の異なる要素のモル数の比を指す。一部の実施形態では、モル比は、界面活性剤のモルのポリペプチドのモルに対する比である。一部の実施形態では、モル比は、ＰＳ－８０のモルのタンパク質のモルに対する比である。一実施形態では、モル比は、タンパク質濃度およびポリソルベート８０濃度に基づき、次式を使用して算出することができる。
Figure 0007337107000001
一実施形態では、組成物は、約０．００１５、０．００１７、０．００１９、０．００２１、０．００２３、０．００２５、０．００２７、０．００２９、０．００３１、０．００３３、０．００３５、０．００３７、０．００３９、０．００４１、０．００４３、０．００４５、０．００４７、０．００４９、０．００５１ｍｇ／ｍＬのＰＳ－８０を含む。組成物は、約０．００３５ｍｇ／ｍＬのＰＳ－８０を含むことが好ましい。
別の実施形態では、組成物は、約１０μｇ、１１μｇ、１２μｇ、１３μｇ、１４μｇ、１５μｇ、１６μｇ、１７μｇ、１８μｇ、１９μｇ、２０μｇ、２１μｇ、２２μｇ、２３μｇ、２４μｇ、または２５μｇのＰＳ－８０を含む。好ましい実施形態では、組成物は、約１８μｇのＰＳ－８０を含む。
別の実施形態では、組成物は、０．０００５％～１％の範囲に及ぶＰＳ－８０濃度を含む。たとえば、組成物中のＰＳ－８０濃度は、少なくとも０．０００５％、０．００５％、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、０．１０％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１％、または１．１％のＰＳ－８０でよい。好ましい実施形態では、組成物は、約０．０７％のＰＳ－８０を含む。
任意の最小値を本明細書に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を規定してもよい。
アルミニウム
組成物は、約０．５ｍｇ／ｍｌのリン酸アルミニウムを含むことが好ましい。一実施形態では、組成物は、リン酸アルミニウムとしての約０．５ｍｇのアルミニウム／ｍｌを含む。０．５０ｍｇ／ｍｌのＡｌＰＯ４を安定剤として加えると、製造しやすさおよび安定性が向上する。この濃度により、サブファミリーＡおよびＢタンパク質のアルミニウムへの結合（９０％以上の結合）が維持される。
リン酸アルミニウムの製造方法は、その全体が参照により援用される、米国特許公開Ｕ
Ｓ２００９／００１６９４６に記載されている。
一実施形態では、組成物は、アルミニウム以外に多価カチオンをさらに含まない。一実施形態では、組成物は、Ａｌ（ＯＨ）３またはＡｌ（ＳＯ４）３をさらに含まない。
添加剤
一実施形態では、組成物は、ヒスチジンを含む。一実施形態では、組成物は、塩化ナトリウムを含む。組成物は、約１０ｍＭのヒスチジンおよび約１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含むことが好ましい。一実施形態では、組成物は、１０ｍＭのヒスチジンおよび１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む。
別の実施形態では、組成物は、約６５０μｇ、６６０μｇ、６７０μｇ、６８０μｇ、６９０μｇ、７００μｇ、７１０μｇ、７２０μｇ、７３０μｇ、７４０μｇ、７５０μｇ、７６０μｇ、７７０μｇ、７８０μｇ、７９０μｇ、８００μｇ、８１０μｇ、８２０μｇ、８３０μｇ、８４０μｇ、または８５０μｇのヒスチジンを含む。組成物は、約７８０μｇのヒスチジンを含むことが好ましい。任意の最小値を本明細書に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を規定してもよい。
一実施形態では、組成物は、トリス、リン酸、またはコハク酸緩衝剤を含む。好ましい実施形態では、組成物は、トリス緩衝剤を含まない。好ましい実施形態では、組成物は、リン酸緩衝剤を含まない。好ましい一実施形態では、組成物は、コハク酸緩衝剤を含まない。好ましい実施形態では、組成物は、ヒスチジン緩衝剤を含む。
好ましい実施形態では、組成物のｐＨは、６．０～７．０の間であり、ｐＨ６．０が最も好ましい。一実施形態では、組成物のｐＨは、高くとも６．１である。
殺菌活性
組成物をヒトに投与することによって誘発される免疫応答は、４つの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ（ＭｎＢ）株に対して、ヒト補体を使用する血清殺菌検定（ｈＳＢＡ）を使用して明らかにされる。ｈＳＢＡにおいて使用する４ＭｎＢ株は、菌株プールから選択した。菌株プールは、米国およびヨーロッパから臨床的に関係のある髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ株を体系的に集めた収蔵物であった。ＳＢＡ用の４菌株のうちの２種類は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＡからのものであり、４菌株のうちの別の２種類は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＢからのものである。
すべての試験株、特に、第一のポリペプチドと非相同である配列を有するリポタンパク質２０８６変異体を発現する菌株に高い割合のｈＳＢＡが応答することは、組成物が防御性の広いワクチンであること、および少なくとも髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対して、高い血清防御を付与するのに２用量で十分であることを示唆する。
すべての試験株、特に、第一のポリペプチドおよび第二のポリペプチドの両方と非相同である配列を有するリポタンパク質２０８６変異体を発現する菌株に高い割合のｈＳＢＡが応答することは、組成物が防御性の広いワクチンであること、およびｒＬＰ２０８６（ＦＨＢＰ）サブファミリーＡおよび／またはサブファミリーＢを発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ株に対して高い血清防御を付与するのに、約６カ月の期間内に多くとも３用量で十分であることを示唆する。
一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＡ株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、Ａ０５を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株と異種である、リポタンパク質２０８６変異体を発現するＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＡ株である。たとえば、一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、菌株Ｍ９８２５０７７１と異種である、リポタンパク質２０８６変異体を発現するＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＡ株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ａ２２株である。別の実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ａ５６株である。別の実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ａ２２およびＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ａ５６株である。別の実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６Ａ０４株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６ Ａ０５株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６ Ａ１２株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６ Ａ２２株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６ Ａ１２株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６ Ａ０４株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６ Ａ１９株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６ Ａ０７株である。別の実施形態では、ｈＳＢＡ菌株には、Ａ２２、Ａ１２、Ａ１９、Ａ０５、およびＡ０７、またはこれらのいずれかの組合せが含まれる。一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株には、Ａ０６、Ａ１５、およびＡ２９、またはこれらのいずれかの組合せが含まれる。
一実施形態では、免疫応答は、Ａ０５を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株と異種である髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ａ２２株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ａ５６株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ａ０６株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ａ１５株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ａ２９株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ａ６２株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株Ｍ９８２５０７７１と異種である髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。一実施形態では、免疫応答は、第一のポリペプチドとの同一性が少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％であるアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。別の実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株Ｍ９８２５０７７１が発現するＨ因子結合タンパク質との同一性が少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％であるアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。好ましい実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株Ｍ９８２５０７７１が発現するＨ因子結合タンパク質との同一性が少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８４％であるアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。
別の実施形態では、免疫応答は、第一のポリペプチドとの同一性が多くとも８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％であるアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。別の実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株Ｍ９８２５０７７１が発現するＨ因子結合タンパク質との同一性が多くとも８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％であるアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。好ましい実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株Ｍ９８２５０７７１が発現するＨ因子結合タンパク質との同一性が多くとも９９％、より好ましくは多くとも８５％であるアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。任意の最小値を本明細書に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を規定してもよい。
一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＢ株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、Ｂ０１を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株と異種である、リポタンパク質２０８６変異体を発現するＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＢ株である。たとえば、一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、菌株ＣＤＣ１１２７と異種である、リポタンパク質２０８６変異体を発現するＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＢ株である。好ましい実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、菌株ＣＤＣ１５７３と異種である、リポタンパク質２０８６変異体を発現するＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＢ株である。
一実施形態では、免疫応答は、Ｂ０１を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株と異種である髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ｂ２４株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ｂ４４株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ｂ１６株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ｂ０３株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ｂ０９株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ｂ１５株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ｂ１５３株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株ＣＤＣ１５７３と異種である髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。一実施形態では、免疫応答は、第二のポリペプチドとの同一性が少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％であるアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。別の実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株ＣＤＣ１５７３が発現するＨ因子結合タンパク質との同一性が少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％であるアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。好ましい実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株ＣＤＣ１５７３が発現するＨ因子結合タンパク質との同一性が少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８７％であるアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。別の好ましい実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株ＣＤＣ１５７３が発現するＨ因子結合タンパク質との同一性が１００％であるアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。
別の実施形態では、免疫応答は、第二のポリペプチドとの同一性が多くとも８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％であるアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。別の実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株ＣＤＣ１５７３が発現するＨ因子結合タンパク質との同一性が多くとも８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％であるアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。好ましい実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株ＣＤＣ１５７３が発現するＨ因子結合タンパク質との同一性が多くとも９９％、より好ましくは少なくとも８８％であるアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。任意の最小値を本明細書に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を規定してもよい。
一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ｂ２４株である。別の実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ｂ４４株である。別の実施形態では、ｈＳＢＡ菌株には、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ｂ２４およびＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ｂ４４株が含まれる。一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株には、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ａ２２、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ａ５６、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ｂ２４、およびＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ｂ４４株が含まれる。一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株には、Ｂ１５が含まれる。一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株には、Ｂ１５３が含まれる。別の実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６ Ｂ１６株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６ Ｂ０３株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６ Ｂ０９株である。別の実施形態では、ｈＳＢＡ菌株には、Ｂ２４、Ｂ１６、Ｂ４４、Ｂ０３、およびＢ０９、またはこれらのいずれかの組合せが含まれる。別の実施形態では、ｈＳＢＡ菌株には、Ｂ２４、Ｂ１６、Ｂ４４、Ａ２２、Ｂ０３、Ｂ０９、Ａ１２、Ａ１９、Ａ０５、およびＡ０７、またはこれらのいずれかの組合せが含まれる。たとえば、一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株には、Ａ２２およびＢ２４が含まれる。別の実施形態では、ｈＳＢＡ菌株には、Ａ０６、Ａ０７、Ａ１２、Ａ１５、Ａ１９、Ａ２９、Ｂ０３、Ｂ０９、Ｂ１５、およびＢ１６、またはこれらのいずれかの組合せが含まれる。
一実施形態では、方法は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対して、また髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して免疫応答を誘発する。免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対して、また髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性であることが好ましい。
一実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対する免疫応答が、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対する免疫応答より強い。たとえば、一実施形態では、免疫原性組成物は、同一条件下で試験したとき、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対して、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対してよりも高い殺菌力価を誘発する。一実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対する、より高い殺菌力価は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物の二回目用量の後３０日以内に生じる。一実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対する、より高い殺菌力価は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物の三回目用量なしで生じる。
別の実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対する免疫応答が、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対する免疫応答より強い。たとえば、一実施形態では、免疫原性組成物は、同一条件下で試験したとき、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対してよりも高い殺菌力価を誘発する。一実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対する、より高い殺菌力価は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物の二回目用量の後３０日以内に生じる。一実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対する、より高い殺菌力価は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物の三回目用量なしで生じる。
力価
一実施形態では、組成物は、たとえばｈＳＢＡにおいて同一条件下で測定したとき、組成物の用量が投与される前のヒトにおける髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する殺菌力価と比べて、ヒトにおける髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する殺菌力価を増大させる。一実施形態では、殺菌力価の増大は、たとえばｈＳＢＡにおいて同一条件下で測定したとき、組成物の初回用量が投与される前のヒトにおける殺菌力価と比べて、初回用量が投与される前のヒトにおける殺菌力価と比較される。一実施形態では、力価の増大は、たとえばｈＳＢＡにおいて同一条件下で測定したとき、組成物の二回目用量が投与される前のヒトにおける殺菌力価と比べて、組成物の二回目用量の後に認められる。別の実施形態では、殺菌力価の増大は、たとえばｈＳＢＡにおいて同一条件下で測定したとき、組成物の三回目用量が投与される前のヒトにおける殺菌力価と比べて、組成物の三回目用量の後に認められる。
一実施形態では、組成物は、用量が投与された後のヒトにおいて髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する殺菌力価を誘導し、殺菌力価は、たとえばｈＳＢＡにおいて同一条件下で測定したとき、用量が投与される前のヒトにおける髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する殺菌力価の少なくとも１倍の強さを超える。たとえば、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する殺菌力価は、たとえばｈＳＢＡにおいて同一条件下で測定したとき、組成物の用量を投与された後のヒトにおいて、用量が投与される前のヒトにおける髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する殺菌力価と比べて、少なくとも１．０１倍、１．１倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、または１６倍の高さでよい。
一実施形態では、組成物は、ヒトパピローマウイルスに対する付加的免疫原性組成物と組み合わせて使用した場合、同一条件下で測定したときの、組成物の用量を投与される前のヒトにおけるヒトパピローマウイルスに対する殺ウイルス力価と比べて、ヒトにおけるヒトパピローマウイルスに対する殺ウイルス力価の増大を誘発する。一実施形態では、殺ウイルス力価の増大は、同一条件下で測定したときの、組成物の初回用量を投与される前のヒトにおける殺ウイルス力価と比べて、組成物の初回用量の投与前のヒトにおける殺ウイルス力価と比較される。一実施形態では、力価の増大は、組成物の二回目用量の後に、同一条件下で測定したときの、組成物の二回目用量を投与される前のヒトにおける殺ウイルス力価と比べて観察される。別の実施形態では、殺ウイルス力価の増大は、組成物の三回目用量の後に、同一条件下で測定したときの組成物の三回目用量を投与される前のヒトにおける殺ウイルス力価と比べて観察される。
一実施形態では、組成物は、ヒトパピローマウイルスに対する付加的免疫原性組成物と組み合わせて使用した場合、用量投与後のヒトにおいて殺ウイルス力価を生じさせ、ヒトパピローマウイルスに対する殺ウイルス力価は、同一条件下で測定したとき、用量を投与される前のヒトにおけるヒトパピローマウイルスに対する殺ウイルス力価の少なくとも１倍を超える高さである。たとえば、ヒトパピローマウイルスに対する殺ウイルス力価は、組成物の用量を投与された後のヒトにおいて、同一条件下で測定したときの、用量を投与される前のヒトにおけるヒトパピローマウイルスに対する殺ウイルス力価と比べて、少なくとも１．０１倍、１．１倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、または１６倍の高さでよい。
一実施形態では、「応答者」とは、ヒトを指し、その場合、組成物は、用量が投与された後のヒトにおいて髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する殺菌力価を誘導し、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する殺菌力価は、用量が投与される前のヒトにおける髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する殺菌力価の少なくとも１倍の強さを超える。好ましい実施形態では、応答者は、用量が投与される前のヒトにおける殺菌力価と比べて、ｈＳＢＡ力価の上昇が少なくとも４倍以上に達する。このような応答者は、防御性力価を有すると呼ぶことができる。
一実施形態では、ｈＳＢＡ力価は、測定可能な効果を生じる血清サンプルの最高希釈度の逆数である。たとえば、一実施形態では、ｈＳＢＡ力価は、Ｔ３０ＣＦＵ値（すなわち、試験血清を除くすべての検定成分を含有する検定ウェルにおいてインキュベートした後に生存する細菌の数、１００％細菌生存）と比べてＭｎＢ細菌を少なくとも５０％減少させる（５０％細菌生存）、試験血清の最も高い２倍希釈度の逆数である。
一実施形態では、組成物は、ｈＳＢＡにおいて同一条件下で測定したとき、初回用量を投与された後のヒトにおいて、初回用量を投与される前のヒトにおける髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する殺菌力価（たとえば、初回用量なしでのヒトにおける殺菌力価）の少なくとも２倍の強さである、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する殺菌力価を誘導する。一実施形態では、組成物は、ヒト補体を利用するヒト血清殺菌検定（ｈＳＢＡ）において同一条件下で測定したとき、ヒトにおいて、初回用量を投与される前のヒトにおける髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する殺菌力価の少なくとも４倍の強さである、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する殺菌力価を誘導する。一実施形態では、組成物は、ヒト補体を利用するヒト血清殺菌検定（ｈＳＢＡ）において同一条件下で測定したとき、ヒトにおいて、初回用量を投与される前のヒトにおける髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する殺菌力価の少なくとも８倍の強さである、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する殺菌力価を誘導する。
好ましい実施形態では、ヒト血清補体は、所与のＳＢＡ試験株について固有の殺菌活性が弱いヒトから得たものである。固有の殺菌活性が弱いとは、たとえば、所与のＳＢＡ試験株に対して少なくとも１：４希釈度未満である殺菌力価をいう。一実施形態では、ヒト補体は、所与のＳＢＡ試験株に対して少なくとも１：４未満、たとえば１：２希釈度であるｈＳＢＡ力価を有し、組成物が投与されなかったヒトから得たものである。
ヒトは、二価ｒＬＰ２０８６組成物などの組成物が投与される前に１：４未満のｈＳＢＡ力価を示すこともあり、または組成物が投与される前に１：４以上のｈＳＢＡ力価を示すこともある。したがって、好ましい実施形態および実施例において、組成物の少なくとも１用量をヒトに投与すると、ｈＳＢＡ力価は、少なくとも１：４を超える、たとえば、１：８以上のｈＳＢＡ力価、１：１６以上のｈＳＢＡ力価、１：３２以上のｈＳＢＡ力価となる。本明細書に記載のそれぞれの実施例は、ｈＳＢＡ力価が１：８以上および／または１：１６以上であるヒト対象の割合の評価を含み、二価ｒＬＰ２０８６組成物をヒトに投与した。ｈＳＢＡ力価が１：４を超えるという好ましい評価は、ヒトにおいて誘発された防御、すなわち、殺菌免疫応答が、組成物と関連付けられることを示す。
一実施形態では、ヒトは、組成物の初回用量が投与された後、ｈＳＢＡの定量下限（ＬＬＯＱ）以上のｈＳＢＡ力価を有する。別の実施形態では、ヒトは、組成物の二回目用量が投与された後、ｈＳＢＡのＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を有する。別の実施形態では、ヒトは、組成物の三回目用量が投与された後、ｈＳＢＡのＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を有する。
付加的免疫原性組成物
一態様において、本発明は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ａ株、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｃ株、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｙ株、および／もしくは髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｗ１３５株；ジフテリア、破傷風、および／もしくは百日咳；Ａ型肝炎ウイルス；ヒトパピローマウイルス；ジフテリア、破傷風、百日咳、および／もしくは灰白髄炎のいずれかの少なくとも１つ；またはこれらのいずれかの組合せに対する免疫応答に加えて、ヒトにおいて、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対して、また髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して、殺菌免疫応答を誘発する方法に関する。
本方法は、ヒトに、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する有効量の免疫原性組成物を投与することと、次の免疫原性組成物：（ｉ）髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ａ株、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｃ株、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｙ株、および／もしくは髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｗ１３５株に対する免疫原性組成物、（ｉｉ）ジフテリア、破傷風、および百日咳に対する免疫原性組成物、（ｉｉｉ）Ａ型肝炎ウイルスに対する免疫原性組成物、（ｉｖ）ヒトパピローマウイルスに対する免疫原性組成物、（ｖ）ジフテリア、破傷風、百日咳、および灰白髄炎に対する免疫原性組成物、または（ｖｉ）これらのいずれかの組合せのうちの少なくとも１つを並行してそのヒトに投与すること、とを含む。
一実施形態では、方法は、ヒトに、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する有効量の免疫原性組成物を投与することと、次の免疫原性組成物：（ｉ）ＭＥＮＡＣＴＲＡ、ＭＥＮＶＥＯ、もしくはＮＩＭＥＮＲＩＸ、（ｉｉ）ＡＤＡＣＥＬ、（ｉｉｉ）ＨＡＶＲＩＸ、（ｉｖ）ＧＡＲＤＡＳＩＬ、（ｖ）ＲＥＰＥＶＡＸ、または（ｖｉ）これらのいずれかの組合せのうちの少なくとも１つを並行してそのヒトに投与することとを含む。
たとえば、例示的な実施形態において、方法は、組成物の次の組合せのうちの少なくとも１つを並行してヒトに投与することを含む。
Figure 0007337107000002
Figure 0007337107000003
本明細書で使用する「並行」、「並行して」、「共投与される」、および「共投与」とは、ヒトに、少なくとも２種の組成物を、同時に、または最初に投与された組成物の効果がそのヒトにおいてまだ有効である期間内に投与することを指す。第一の組成物が、たとえば、ｒＬＰ２０８６組成物であり、第二の組成物がＭＣＶ４組成物である場合、第二の組成物の並行投与は、第一の組成物の投与から１～７日以内、好ましくは４８時間、より好ましくは２４時間以内に行うことができる。一実施形態では、並行投与は、第一の組成物の投与から、長くとも１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、２４時間、または４８時間以内に行われる。別の実施形態では、並行投与は、第一の組成物の投与と同時に行われる。
並行投与では、第一の組成物は、指定の期間内で、付加的組成物の前後またはそれと同時に投与してよい。たとえば、一実施形態では、第一の組成物、たとえば、ｒＬＰ２０８６組成物が最初にヒトに投与され、第二の組成物、たとえばＭＣＶ４組成物が、ｒＬＰ２０８６組成物の後から２４時間時間以内に投与される。別の実施形態では、第一の組成物、たとえば、ＭＣＶ４組成物が最初にヒトに投与され、第二の組成物、たとえばｒＬＰ２０８６組成物が、ＭＣＶ４組成物の後から２４時間以内にそのヒトに投与される。
一実施形態では、付加的組成物は、指定の期間内で、ｒＬＰ２０８６組成物の初回用量の前後またはそれと同時に投与される。別の実施形態では、一実施形態では、付加的組成物は、指定の期間内で、ｒＬＰ２０８６組成物の二回目用量の前後またはそれと同時に投与される。別の実施形態では、付加的組成物は、指定の期間内で、ｒＬＰ２０８６組成物の三回目用量の前後またはそれと同時に投与される。さらに別の実施形態では、付加的組成物は、指定の期間内で、ｒＬＰ２０８６組成物の追加免疫用量の前後またはそれと同時に投与される。
本発明者らは、意外にも、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫応答に悪影響を及ぼすことなく、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、または１４種の付加的な抗原と一緒にｒＬＰ２０８６組成物を投与できることを発見した。たとえば、実施例１１は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株ならびに少なくとも１０種のＭＣＶ４およびＴｄａｐ抗原それぞれに対する実質的なｈＳＢＡ応答が認められたことを示している。実施例１３は、ｒＬＰ２０８６組成物が、ＨＰＶ４、ＭＣＶ４、およびＴｄａｐワクチンの中に含まれる１４種の抗原と共投与でき、その際も、殺菌および／または殺ウイルス免疫応答を包含しうる有効な免疫応答を誘発することを示している。
したがって、一態様において、本発明は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ａ株、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｃ株、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｙ株、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｗ１３５株、および髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ株に対して免疫応答を誘発する方法に関する。好ましい実施形態では、免疫応答は、殺菌免疫応答を含む。方法は、ヒトに、ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する第一の脂質付加ポリペプチドと、ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する第二の脂質付加ポリペプチドとを含む、有効量の髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物と、別個で個別に作製された４種のタンパク質－莢膜多糖コンジュゲートの混合物を含む別の組成物とを投与することを含み、第一のコンジュゲートは、担体タンパク質にコンジュゲートした血清型Ｗ－１３５の精製髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜多糖を含み、第二のコンジュゲートは、担体タンパク質にコンジュゲートした血清型Ｙの精製髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜多糖を含み、第三のコンジュゲートは、精製担体タンパク質にコンジュゲートした血清型Ａの精製髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜多糖を含み、第四のコンジュゲートは、担体タンパク質にコンジュゲートした血清型Ｃの精製髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜多糖を含み、担体タンパク質は、ジフテリアトキソイド、ＣＲＭ１９７、および破傷風トキソイドからなる群から選択される。
好ましい一実施形態では、方法は、ＭＣＶ４組成物の投与を含み、担体タンパク質は、ジフテリアトキソイドである。一実施形態では、方法は、ＭＥＮＡＣＴＲＡワクチンの投与を含む。
別の実施形態では、方法は、ＭＣＶ４組成物の投与を含み、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。一実施形態では、方法は、ＭＥＮＶＥＯワクチンの投与を含む。ＭＥＮＶＥＯ［髄膜炎菌（Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ－１３５型）オリゴ糖ジフテリアＣＲＭ１９７コンジュゲートワクチン］は、ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）ＣＲＭ１９７タンパク質に個々にコンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ－１３５オリゴ糖を含有する、筋肉内注射によって投与される滅菌液体ワクチンである。
さらに別の実施形態では、方法は、ＭＣＶ４組成物の投与を含み、担体タンパク質は、破傷風トキソイドである。一実施形態では、方法は、ＮＩＭＥＮＲＩＸワクチンの投与を含む。ＮＩＭＥＮＲＩＸ（登録商標）（髄膜炎菌多糖Ａ、Ｃ、Ｗ－１３５、およびＹ型コンジュゲートワクチン）は、担体タンパク質としての破傷風トキソイドにそれぞれ連結された髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜多糖Ａ、Ｃ、Ｗ－１３５、およびＹを含む、四価の髄膜炎菌多糖コンジュゲート型ワクチンである。髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＡおよびＣ多糖は、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＨ）スペーサーを用いてコンジュゲートし、破傷風トキソイドに間接的にコンジュゲートしており、Ｗ－１３５およびＹ多糖は、破傷風トキソイドに直接コンジュゲートしている。
一実施形態では、方法は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ａ、Ｃ、Ｗ－１３５、および／またはＹに対する力価を、免疫原性組成物を投与される前のヒトにおける力価と比べて、少なくとも１倍超、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、またはそれ以上に増大させる。別の実施形態では、方法は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ａ、Ｃ、Ｗ－１３５、およびＹに対する力価を、免疫原性組成物を投与される前のヒトにおける力価と比べて、少なくとも１倍超、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、またはそれ以上に増大させる。別の実施形態では、方法は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ａ、Ｃ、Ｗ－１３５、およびＹ、ならびに血清型Ｂに対する力価を、免疫原性組成物を投与される前のヒトにおける力価と比べて、少なくとも１倍超、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、またはそれ以上に増大させる。
別の態様において、本発明は、ヒトにおいて、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ株に対して、また破傷風、ジフテリア、および百日咳に対して、免疫応答を誘発する方法に関する。好ましい実施形態では、免疫応答は、殺菌免疫応答を含む。別の好ましい実施形態では、免疫応答は、殺ウイルス免疫応答を含む。別の好ましい実施形態では、免疫応答は、殺菌および殺ウイルス免疫応答を含む。本方法は、ヒトに、ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する第一の脂質付加ポリペプチドと、ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する第二の脂質付加ポリペプチドとを含む、有効量の髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物と、好ましくはリン酸アルミニウムに吸着させた、破傷風およびジフテリアトキソイドと百日咳抗原とを含む、別の組成物とを投与することを含む。一実施形態では、方法は、ＡＤＡＣＥＬワクチンの投与を含む。
一実施形態では、方法は、破傷風、ジフテリア、および／または百日咳に対する力価を、免疫原性組成物を投与される前のヒトにおける力価と比べて、少なくとも１倍超、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、またはそれ以上に増大させる。別の実施形態では、方法は、破傷風、ジフテリア、および百日咳に対する力価を、免疫原性組成物を投与される前のヒトにおける力価と比べて、少なくとも１倍超、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、またはそれ以上に増大させる。別の実施形態では、方法は、破傷風、ジフテリア、および百日咳、ならびに髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ａ、Ｃ、Ｗ－１３５およびＹ、および血清型Ｂに対する力価を、免疫原性組成物を投与される前のヒトにおける力価と比べて、少なくとも１倍超、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、またはそれ以上に増大させる。
一態様において、本発明は、ヒトにおいて、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ株に対して、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ１３５株に対して、また破傷風、ジフテリア、および百日咳に対して免疫応答を誘発する方法に関する。好ましい実施形態では、免疫応答は、殺菌免疫応答を含む。別の好ましい実施形態では、免疫応答は、殺ウイルス免疫応答を含む。別の好ましい実施形態では、免疫応答は、殺菌および殺ウイルス免疫応答を含む。一実施形態では、本方法は、ｒＬＰ２０８６組成物、ＭＥＮＡＣＴＲＡ、およびＡＤＡＣＥＬワクチンを並行して投与することを含む。
一態様において、本発明は、ヒトにおいて、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ株に対して、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ１３５株に対して、また破傷風、ジフテリア、および百日咳に対して、またさらにヒトパピローマウイルスに対して免疫応答を誘発する方法に関する。好ましい実施形態では、免疫応答は、殺菌免疫応答を含む。別の好ましい実施形態では、免疫応答は、殺ウイルス免疫応答を含む。別の好ましい実施形態では、免疫応答は、殺菌および殺ウイルス免疫応答を含む。一実施形態では、本方法は、ｒＬＰ２０８６組成物、ＭＥＮＡＣＴＲＡ、およびＡＤＡＣＥＬワクチンを並行して投与することを含む。一実施形態では、本方法は、ｒＬＰ２０８６組成物、ＭＥＮＡＣＴＲＡ、ＡＤＡＣＥＬ、およびＧＡＲＤＡＳＩＬワクチンを並行して投与することを含む。
本発明者らは、意外にも、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する殺菌応答に悪影響を及ぼすことなく、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）に対する免疫原性組成物と共に投与できることを発見した。実施例７および実施例８で説明するとおり、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）試験株への実質的なｈＳＢＡ応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物およびＧＡＲＤＡＳＩＬが投与されたヒトの中で、また髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）対する免疫原性組成物および食塩水が投与されたヒトにおいて認められた。髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物の三回目用量から約１カ月後に、ｈＳＢＡ応答の付加的な増大が認められた。
さらに、本発明者らは、意外にも、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物およびＨＰＶに対する免疫原性組成物の両方が投与された後のヒトにおいて、組成物が投与される前のヒトにおける免疫応答と比べて、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）およびＨＰＶ両方に対する活発な免疫応答が生じたことを発見した。実施例７および実施例８で説明するとおり、ＨＰＶに対する力価は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物およびＧＡＲＤＡＳＩＬが投与された後のヒトにおいて、免疫原性組成物が投与される前のヒトにおける力価と比べて増大した。ＨＰＶに対する力価の増大は、少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍を超える、またはそれ以上であった。
したがって、一実施形態では、方法は、ヒトにおいて、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫応答を誘発することを含み、ヒトパピローマウイルスに対する免疫原性組成物をそのヒトに投与することをさらに含む。免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対して殺菌性であることが好ましい。一実施形態では、方法は、ＨＰＶに対する免疫応答を誘発することをさらに含む。好ましい実施形態では、方法は、ヒトパピローマウイルス６、１１、１６、および１８型の少なくとも１種、またはこれらのいずれかの組合せに対する免疫応答を誘発することをさらに含む。一実施形態では、ＨＰＶに対する免疫原性組成物は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する前記組成物の投与から２４時間以内にそのヒトに投与する。
一実施形態では、方法は、ヒトにおいて、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫応答を誘発することを含み、ＨＰＶに対する免疫原性組成物をそのヒトに投与することをさらに含む。免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対して殺菌性であることが好ましい。一実施形態では、方法は、ＨＰＶに対する免疫応答を誘発することをさらに含む。好ましい実施形態では、方法は、ヒトパピローマウイルス６、１１、１６、および１８型の少なくとも１種、またはこれらのいずれかの組合せに対する免疫応答を誘発することをさらに含む。一実施形態では、ヒトパピローマウイルスに対する免疫原性組成物は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する前記組成物の投与から２４時間以内にそのヒトに投与する。
別の態様において、本発明者らは、意外にも、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する殺菌応答に悪影響を及ぼすことなく、ジフテリア、破傷風、無細胞百日咳、および不活化灰白髄炎ウイルス（ｄＴａＰ）に対する免疫原性組成物と共に投与できることを発見した。実施例４で説明するとおり、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）試験株への実質的なｈＳＢＡ応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物およびＲＥＰＥＶＡＸが投与されたヒトの中で認められた。髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物の三回目用量から約１カ月後に、ｈＳＢＡ応答の付加的な増大が認められた。
さらに、本発明者らは、意外にも、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物およびｄＴａＰに対する免疫原性組成物の両方が投与された後のヒトにおいて、組成物が投与される前のヒトにおける免疫応答と比べて、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）およびｄＴａＰ両方に対する活発な免疫応答が生じたことを発見した。実施例４で説明するとおり、ｄＴａＰに対する力価は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物およびＲＥＰＥＶＡＸが投与された後のヒトにおいて、免疫原性組成物が投与される前のヒトにおける力価と比べて増大した。ｄＴａＰに対する力価の増大は、少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍を超える、またはそれ以上であった。
方法および投与
一態様において、本発明は、ヒトにおいて免疫応答を誘発する方法に関する。好ましい実施形態では、免疫応答は、殺菌免疫応答を含む。別の好ましい実施形態では、免疫応答は、殺ウイルス免疫応答を含む。別の好ましい実施形態では、免疫応答は、殺菌および殺ウイルス免疫応答を含む。別の好ましい実施形態では、免疫応答は、細菌および／またはウイルスを不活化することを含む。
別の態様において、本発明は、ヒトにワクチン接種する方法に関する。一実施形態では、方法は、上述の組成物の少なくとも１用量をヒトに投与することを含む。別の実施形態では、方法は、上述の組成物の少なくとも初回用量および二回目用量をヒトに投与することを含む。
意外にも、本発明者らは、ｒＬＰ２０８６組成物の２用量スケジュールにより、ヒトにおいて、多様な異種サブファミリーＡ株に対して、また多様な異種サブファミリーＢ株に対して殺菌力価が誘導されることを発見した。たとえば、上述の組成物の２用量スケジュールに従って、ｈＳＢＡ力価が１：８以上であるヒトの百分率は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ａ２２またはＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ａ５６を発現するＳＢＡ試験株で９０％以上であった。実施例１を参照されたい。
一実施形態では、二回目用量は、初回用量から少なくとも２０、３０、５０、６０、１００、１２０、１６０、１７０、または１８０日後、かつ初回用量から多くとも２５０、２１０、２００、または１９０日後に投与する。任意の最小値を本明細書に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を規定してもよい。
別の実施形態では、二回目用量は、初回用量から約３０日後に投与する。別の実施形態では、二回目用量は、初回用量から約６０日後、たとえば、０、２カ月免疫処置スケジュールで投与する。別の実施形態では、二回目用量は、初回用量から約１８０日後、たとえば、０、６カ月免疫処置スケジュールで投与する。さらに別の実施形態では、二回目用量は、初回用量から約１２０日後、たとえば、２、６カ月免疫処置スケジュールで投与する。
一実施形態では、方法は、ヒトに組成物を２用量、多くとも２用量投与することを含む。一実施形態では、２用量は、初回用量の後約６カ月の期間内に投与する。一実施形態では、方法は、ヒトへの追加免疫のさらなる投与を含まない。本明細書で使用する「追加免疫」とは、組成物をヒトに追加投与することを指す。多くとも２用量の組成物をヒトに投与することが有利となりうる。その利点として、たとえば、ヒトが完全な投与スケジュールを遵守するのを容易にすること、およびスケジュールの費用効果を促進することが挙げられる。
一実施形態では、初回用量および二回目用量は、初回用量後約２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、または２００日の期間、また多くとも４００、３９０、３８０、３７０、３６５、３５０、３４０、３３０、３２０、３１０、３００、２９０、２８０、２７０、２６０、２５０、２４０、２３０、２２０、２１０、または２００日の期間にわたりヒトに投与する。任意の最小値を本明細書に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を規定してもよい。
一実施形態では、初回用量および二回目用量は、約３０日の期間にわたりヒトに投与する。別の実施形態では、初回用量および二回目用量は、約６０日の期間にわたりヒトに投与する。別の実施形態では、初回用量および二回目用量は、約１８０日の期間にわたりヒトに投与する。
３用量
本発明者らはさらに、意外にも、ｒＬＰ２０８６組成物の３用量スケジュールによって、２用量スケジュールより高い百分率のヒトにおいて、非相同のＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）を発現する菌株に対するより広い殺菌力価が誘導されたことを発見した。たとえば、上述の組成物の２用量スケジュールに従って、ｈＳＢＡ力価が１：８以上であるヒトの百分率は、ＳＢＡ試験株ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ｂ２４およびＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ｂ４４について６５％以上であった。上述の組成物の３用量スケジュールに従って、ｈＳＢＡ力価が１：８以上であるヒトの百分率は、ＳＢＡ試験株Ｂ２４およびＢ４４について８６％以上であった。実施例１を参照されたい。
したがって、一実施形態では、組成物の３用量スケジュールによって、２用量スケジュールより高い百分率のヒトにおいて、第一および／または第二のポリペプチドと非相同であるＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）を発現する複数菌株に対する殺菌力価が誘導される。
一実施形態では、方法は、ヒトに組成物を３用量投与することを含む。別の実施形態では、方法は、多くとも３用量の組成物を投与することを含む。一実施形態では、３用量は、初回用量の後約６カ月の期間内に投与する。一実施形態では、方法は、三回目用量の後に追加免疫用量をヒトに投与することを含む。別の実施形態では、方法は、三回目用量の後にヒトに追加免疫用量を投与することを含まない。別の実施形態では、方法は、ヒトに組成物の４回目用量または追加免疫用量を投与することをさらに含まない。別の実施形態では、約６カ月の期間内に多くとも３用量をヒトに投与する。
例示的実施形態では、二回目用量は、初回用量から約３０日後に投与し、三回目用量は、二回目用量から約１５０日後、たとえば、０、１、６カ月免疫処置スケジュールで投与する。別の例示的実施形態では、二回目用量は、初回用量から約６０日後に投与し、三回目用量は、二回目用量から約１２０日後、たとえば、０、２、６カ月免疫処置スケジュールで投与する。
一実施形態では、初回用量、二回目用量、および三回目用量は、約１５０、１６０、１７０、または１８０日の期間、また多くとも２４０、２１０、２００、または１９０日の期間にわたりヒトに投与する。任意の最小値を本明細書に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を規定してもよい。初回用量、二回目用量、および三回目用量は、約１８０日または６カ月の期間にわたりヒトに投与することが好ましい。たとえば、二回目用量は、初回用量から約６０日後にヒトに投与することができ、三回目用量は、二回目用量から約１２０日後にヒトに投与することができる。したがって、例示的な投与スケジュールは、約０、２、および６カ月の時点でヒトに用量を投与することを含む。
上述のとおり、複数の用量の免疫原性組成物をヒトに投与することができ、各用量の間の日数は、様々となりうる。この方法の利点としては、たとえば、ヒトが柔軟に投与スケジュールを遵守できることが挙げられる。
非限定的に、本発明は以下の態様を含む。
［態様１］
ヒトにおいて、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対して、また髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌免疫応答を誘発するための、
有効量の髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物と、
少なくとも１種の付加的免疫原性組成物の並行した使用であって、
前記髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物は、
ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第一の脂質付加ポリペプチドと、
ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第二の脂質付加ポリペプチドとを含み、
少なくとも１種の付加的免疫原性組成物は、
（ｉ）髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ａ株、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｃ株、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｙ株、および／もしくは髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｗ１３５株に対する免疫原性組成物、
（ｉｉ）ジフテリア、破傷風、および百日咳に対する免疫原性組成物、
（ｉｉｉ）Ａ型肝炎ウイルスに対する免疫原性組成物、
（ｉｖ）ヒトパピローマウイルスに対する免疫原性組成物、
（ｖ）ジフテリア、破傷風、百日咳、および灰白髄炎に対する免疫原性組成物、または
（ｖｉ）これらのいずれかの組合せを含む、
使用。
［態様２］
髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物が、ポリソルベート８０をさらに含む、態様１に記載の使用。
［態様３］
髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物が、アルミニウムをさらに含む、態様１または２に記載の使用。
［態様４］
髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物が、ヒスチジン緩衝剤をさらに含む、態様１から３のいずれか一項に記載の使用。
［態様５］
髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物が、塩化ナトリウムをさらに含む、態様１から４のいずれか一項に記載の使用。
［態様６］
髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物が、約１２０μｇ／ｍｌの第一のポリペプチド、約１２０μｇ／ｍｌの第二のポリペプチド、約２．８のモル比のポリソルベート８０、約０．５ｍｇ／ｍｌのアルミニウム、約１０ｍＭのヒスチジン、および約１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む、態様１から５のいずれか一項に記載の使用。
［態様７］
髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物が、約６０μｇの第一のポリペプチド、約６０μｇの第二のポリペプチド、約１８μｇのポリソルベート８０、約２５０μｇのアルミニウム、約７８０μｇのヒスチジン、および約４３８０μｇの塩化ナトリウムを含む、態様１から６のいずれか一項に記載の使用。
［態様８］
髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物が、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ａ２２、Ａ５６、Ｂ２４、Ｂ４４株の少なくとも１種、またはこれらのいずれかの組合せに対する殺菌免疫応答を誘発する、態様１から７のいずれか一項に記載の使用。
［態様９］
髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物が、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ａ２２に対して殺菌免疫応答を誘発する、態様１から８のいずれか一項に記載の使用。
［態様１０］
髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物が、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ｂ２４に対して殺菌免疫応答を誘発する、態様１から８のいずれか一項に記載の使用。
［態様１１］
髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物が、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ｂ２４、Ｂ１６、Ｂ４４、Ａ２２、Ｂ０３、Ｂ０９、Ａ１２、Ａ１９、Ａ０５、Ａ０７、Ｂ１５３株の少なくとも１種、またはこれらのいずれかの組合せに対する殺菌免疫応答を誘発する、態様１から１０のいずれか一項に記載の使用。
［態様１２］
少なくとも１種の付加的免疫原性組成物が、別個で個別に作製された４種のタンパク質－莢膜多糖コンジュゲートの混合物を含み、第一のコンジュゲートは、担体タンパク質にコンジュゲートした血清型Ｗ－１３５の髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜多糖を含み、第二のコンジュゲートは、担体タンパク質にコンジュゲートした血清型Ｙの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜多糖を含み、第三のコンジュゲートは、担体タンパク質にコンジュゲートした血清型Ａの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜多糖を含み、第四のコンジュゲートは、担体タンパク質にコンジュゲートした血清型Ｃの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜多糖を含み、担体タンパク質は、ジフテリアトキソイド、ＣＲＭ１９７、および破傷風トキソイドからなる群から選択さ
れる、態様１から１１のいずれか一項に記載の使用。
［態様１３］
担体タンパク質がジフテリアトキソイドである、態様１２に記載の使用。
［態様１４］
少なくとも１種の付加的免疫原性組成物が液体組成物である、態様１２に記載の使用。
［態様１５］
少なくとも１種の付加的免疫原性組成物が、凍結乾燥されていない、態様１２に記載の使用。
［態様１６］
髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ａ株、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｃ株、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｙ株、および／もしくは髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｗ１３５株の少なくとも１つ、またはこれらのいずれかの組合せに対して免疫応答を誘発する、態様１２から１５のいずれか一項に記載の使用。
［態様１７］
少なくとも１種の付加的免疫原性組成物が、ヒトパピローマウイルスに対する免疫原性組成物を含む、態様１から１１のいずれか一項に記載の使用。
［態様１８］
ヒトパピローマウイルス６、１１、１６、１８型の少なくとも１つ、またはこれらのいずれかの組合せに対して免疫応答を誘発する、態様１７に記載の使用。
［態様１９］
少なくとも１種の付加的免疫原性組成物が、ジフテリア、破傷風、百日咳、および灰白髄炎に対する免疫原性組成物を含む、態様１から１１のいずれか一項に記載の使用。
［態様２０］
ヒトにおいて、ジフテリア、破傷風、百日咳、灰白髄炎の少なくとも１つ、またはこれらのいずれかの組合せに対して免疫応答を誘発する、態様１９に記載の使用。
［態様２１］
少なくとも１種の付加的免疫原性組成物が、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ａ株、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｃ株、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｙ株、および／もしくは髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｗ１３５株に対する免疫原性組成物と、ジフテリア、破傷風、および百日咳に対する免疫原性組成物の組合せを含む、態様１から１１のいずれか一項に記載の使用。
［態様２２］
髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ａ株、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｃ株、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｙ株、および／もしくは髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｗ１３５株の少なくとも１つ、またはこれらのいずれかの組合せに対する免疫応答と、ジフテリア、破傷風、および百日咳に対する免疫応答とを誘発する、態様２１に記載の使用。
［態様２３］
髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物の有効量が１用量を含む、態様１から２２のいずれか一項に記載の使用。
［態様２４］
髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物の有効量が２用量を含む、態様１から２３のいずれか一項に記載の使用。
［態様２５］
髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物の有効量が、追加免疫用量をさらに含む、態様２４に記載の使用。
［態様２６］
髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物の有効量が、多くとも３用量を含む、態様１から２５のいずれか一項に記載の使用。
［態様２７］
髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物が、少なくとも１種の付加的免疫原性組成物の使用から２４時間以内に使用される、態様１から２６のいずれか一項に記載の使用。
［態様２８］
髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物が、少なくとも１種の付加的免疫原性組成物と同時に使用される、態様１から２７のいずれか一項に記載の使用。
［態様２９］
髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物の初回用量が、少なくとも１種の付加的免疫原性組成物と並行して使用される、態様１から２７のいずれか一項に記載の使用。
［態様３０］
髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物の初回用量が、少なくとも１種の付加的免疫原性組成物と同時に使用される、態様２９に記載の使用。
以下の実施例により、本発明の実施形態を例示する。本明細書において別段指摘しない限り、以下の実施例では、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む、０．５ｍＬ用量あたり６０μｇの第一の脂質付加ポリペプチド、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む、０．５ｍＬ用量あたり６０μｇの第二の脂質付加ポリペプチド、第一のポリペプチドに対して２．８のモル比のポリソルベート８０、第二のポリペプチドに対して２．８のモル比のポリソルベート８０、組成物に対して０．５ｍｇ／ｍｌのＡｌ３＋、１０ｍＭのヒスチジン、および１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む組成物の好ましい例示的実施形態である、治験用二価組換えワクチン（ｒＬＰ２０８６）に言及する。より詳細には、治験用二価組換えｒＬＰ２０８６ワクチンは、（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む６０μｇの第一の脂質付加ポリペプチド、（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む６０μｇの第二の脂質付加ポリペプチド、（ｃ）１８μｇのポリソルベート８０、（ｄ）２５０μｇのアルミニウム、（ｅ）７８０μｇのヒスチジン、および（ｆ）４３８０μｇの塩化ナトリウムを含む。各用量は、０．５ｍＬとした。
（実施例１）
１１才～１８才の健康な対象において２または３用量のレジメンで投与したときの、治験用髄膜炎菌血清型Ｂ二価（ＭｎＢ）ｒＬＰ２０８６ワクチンの、健康な青年における安全性、忍容性、および免疫原性
背景：１１～１８才の健康な青年において、２または３回のワクチン処置を含む５種類の用量レジメン（表１）を使用して、治験用二価組換えワクチン（ｒＬＰ２０８６）の安全性、忍容性、および免疫原性を試験した。
ワクチンは、それぞれ６０μｇの精製サブファミリーＡおよび精製サブファミリーＢ ｒＬＰ２０８６タンパク質、２．８のモル比のポリソルベート８０、およびＡｌＰＯ４としての０．２５ｍｇのＡｌ３＋、１０ｍＭのヒスチジンで緩衝剤処理したｐＨ６．０の食塩水を含有するように、０．５ｍｌ用量で製剤する。
活性対照として役立てることのできる、安全性、免疫原性、および有効性が実証済みの対ＭｎＢワクチンは知られていないため、食塩水を偽薬として使用する。標準食塩水は、０．５ｍｌ用量中に０．９％の塩化ナトリウムを含む。
方法：この第二相無作為化偽薬対照単盲検試験におけるすべての対象が、０、１、２および６カ月の時点でワクチン処置訪問に参加した。盲検化のために、ワクチンの予定がなかったときは、食塩水対照を与えた。すべてワクチン中の変異体とは異なる、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）ｆＨＢＰ変異体Ａ２２、Ａ５６、Ｂ２４およびＢ４４を発現する４種のＭｎＢ試験株（すなわち、主要評価項目分析における４種の「主要ｈＳＢＡ試験株」）を用い、ヒト補体を使用する血清殺菌検定（ｈＳＢＡ）を実施した。不要な有害事象（ＡＥ）、必要な局所および全身応答、ならびに解熱剤の使用について評価した。
ｈＳＢＡ力価幾何平均値を、両側９５％信頼区間（ＣＩ）と共に、各血液採取の時点で、各主要菌株について計算した。幾何平均上昇倍率を、９５％ＣＩと共に計算した。
応答者とは、ｈＳＢＡ力価がｈＳＢＡ検定の定量下限（ＬＬＯＱ）以上である対象であると定義した。主要評価項目分析における４種のｈＳＢＡ試験株それぞれのＬＬＯＱは、１：８に相当するｈＳＢＡ力価であった。各主要試験株の検出限界（ＬＯＤ）は、１：４に相当する力価であった（髄膜炎菌疾患に対する防御の相関現象であると広くみなされる）。
結果：最後のワクチン用量から１カ月後、８６～９９％の対象（３用量後、Ｐ＜０．００１）および６９～１００％の対象（２用量後）は、各ＭｎＢ試験株に対してｈＳＢＡ力価が８以上であった。試験用量１の後、まとめて、ｒＬＰ２０８６受容者の１９～２７％（重度１．１～４．３％）および２３～２７％（重度０．０～１．０％）が、それぞれ発赤および腫脹を経験した。注射部位疼痛は、試験用量１の後、最もよくある局所反応であった（重度７．６～１３．１％）。二価ｒＬＰ２０８６ワクチンの初回試験用量後の３８℃以上の発熱は、食塩水受容者における２．１％と比べて、まとめて３．３～６．５％が経験した。局所および全身反応は、一般に、後続の用量の後よりも、用量１の後に頻繁に起こった。１７１２人のうち４３人の対象（２．５％）が、５１例の重篤なＡＥを報告し、２症例が、関連ありとみなされた（めまい、悪寒、および頭痛の１症例と発熱および嘔吐の１症例）。死亡は報告されなかった。
Figure 0007337107000004
結論：二価ｒＬＰ２０８６は、許容される安全性プロファイルを示した。５種類すべての投与レジメンによって、高い割合の対象において、４種類すべての試験株に対して８以上のｈＳＢＡ力価が得られた。一部の試験株に対して、３用量の後の割合が、２用量と比べて高いことは、３用量によって、多様なＭｎＢ臨床株に対して最も広い防御がもたらされうることを示唆している。世界的な第３相臨床試験が、二価ｒＬＰ２０８６ワクチンで進行中である。
この研究の目的の一つは、１群対象（無作為化される０、１、および６カ月スケジュール）および２群対象（無作為化される０、２、および６カ月スケジュール）において、二価ｒＬＰ２０８６での３回目のワクチン処置から１カ月後、ＬＰ２０８６サブファミリーＡおよびＢタンパク質を発現するＭｎＢ株で実施するｈＳＢＡによって測定される免疫応答を評価することであった。免疫原性分析の評価項目は、４種の主要ＭｎＢ試験株（Ａ２２、Ａ５６、Ｂ２４、およびＢ４４）それぞれについて、７カ月目（または二価ｒＬＰ２０８６の３回目用量から１カ月後）にｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ以上に達している、１群および２群の対象の割合であった。ＬＬＯＱは、４種の主要ＭｎＢ試験株について１：８であった。
評価可能な免疫原性集団について、３用量の二価ｒＬＰ２０８６の後、ｈＳＢＡ力価が１：８以上に達する１群の対象の割合は、Ａ２２では９１．７％、Ａ５６では９９．４％、Ｂ２４では８９％、Ｂ４４では８８．５％であった（上の表１を参照されたい）。９７．５％ＣＩの下限がすべての菌株について５０％を超えていたので（菌株Ａ２２、Ａ５６、Ｂ２４、およびＢ４４について、それぞれ、８７．８％、ｐ＜０．００１；９７．８％、ｐ＜０．００１；８４．７％、ｐ＜０．００１；および８４．１％、ｐ＜０．００１）、１群の対象について、研究の目的は果たされた。
２群について、３用量の二価ｒＬＰ２０８６の後、ｈＳＢＡ力価が１：８以上に達する対象の割合は、Ａ２２では９５．０％、Ａ５６では９８．９％、Ｂ２４では８８．４％、Ｂ４４では８６．１％であった（上の表１を参照されたい）。１群でわかったのと同様に、９７．５％ＣＩの下限は、すべての菌株について５０％を超えており（菌株Ａ２２、Ａ５６、Ｂ２４、およびＢ４４について、それぞれ、９１．７％、ｐ＜０．００１；９６．９％、ｐ＜０．００１；８４．１％、ｐ＜０．００１；および８１．４％、ｐ＜０．００１）、２群の対象についても目的が果たされたことが示された。
第二の目的は、３群対象（無作為化される０および６カ月スケジュール）において、二価ｒＬＰ２０８６の二回目用量から１カ月後、ＬＰ２０８６サブファミリーＡおよびＢタンパク質を発現するＭｎＢ株で実施したｈＳＢＡによって測定される免疫応答を評価することであった。この第二の目的は、４種の主要ＭｎＢ試験株それぞれについて、７カ月目（または二価ｒＬＰ２０８６の二回目用量から１カ月後）にｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ（１：８）以上に達している３群の対象の割合であった。
２用量の二価ｒＬＰ２０８６の後にｈＳＢＡ力価が１：８以上に達する３群の対象の割合は、主要ＭｎＢ試験株について９３．５％、９８．４％、８１．１％、および７７．５％であり、９７．５％ＣＩの下限がすべての菌株で５０％を超えていたので（菌株Ａ２２、Ａ５６、Ｂ２４、およびＢ４４について、それぞれ、９０．０％、ｐ＜０．００１；９６．２％、ｐ＜０．００１；７６．０％、ｐ＜０．００１；および７２．２％、ｐ＜０．００１。上の表１を参照されたい）、この第二の目的も果たされた。
別の第二の目的は、１群～５群の対象について、各血液採取の時点で、４種の主要ＭｎＢ試験株それぞれについてのｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ以上である対象の割合であった。４種の主要ｈＳＢＡ試験株それぞれについてのＬＬＯＱは、１：８の力価であった。評価可能な免疫原性集団について、試験時までにｈＳＢＡ力価が１：８以上である対象の割合を上の表１に示す。
１用量の二価ｒＬＰ２０８６の後にｈＳＢＡ力価が１：８以上であった対象の割合（注射３から１カ月後の５群［２および６カ月スケジュール］）は、Ａ２２では５５．９％、Ａ５６では６７．６％、Ｂ２４では５６．９％、Ｂ４４では２３．８％であった。
２用量の二価ｒＬＰ２０８６から１カ月後にｈＳＢＡ力価が１：８以上であった対象の割合は、サブファミリーＡ株では７４．６％～１００％、サブファミリーＢ株では５４．０％～８１．１％の範囲であった。３用量の後、割合は増加し、サブファミリーＡ株およびＢ株について、それぞれ、９１．７％～９９．４％および８６．１％～８９．０％の範囲となった。
（実施例２）
ヒト補体を使用する血清殺菌検定（ＨＳＢＡ）
ヒト血流からのＭｎＢクリアランスは、補体が媒介する溶菌によって主に実現され、無傷の補体系は、ＭｎＢが引き起こす感染に対する抵抗力にとって重要である。補体が媒介するＭｎＢのｉｎ ｖｉｖｏでの溶菌は、髄膜炎菌疾患の防御の代用であることが示されている機能血清検定である、ヒト補体を使用する血清殺菌検定（ｈＳＢＡ）によってｉｎ ｖｉｔｒｏで模倣される。すなわち、ヒト補体を使用する血清殺菌検定（ｈＳＢＡ）において細菌死滅が実証されることは、髄膜炎菌疾患に対する防御と相互に関係がある。ワクチンによって惹起される免疫を、４種のＭｎＢ株（ｆＨＢＰ変異体Ａ２２、Ａ５６、Ｂ２４、およびＢ４４）に対するｈＳＢＡを使用して明らかにする。
実施例に記載のｈＳＢＡでは、評価項目の判定に４種の主要ＭｎＢ試験株を使用した。すなわち、これらの菌株を使用して、ｈＳＢＡ免疫原性評価項目を用いるワクチン有効性の推定を行った。これら試験株は、米国およびヨーロッパを循環する疾患分離株の９０％超を占める６種の系統発生的ｆＨＢＰ亜群のうちの４種である。
１０～２５才の個体においてＭｎＢが引き起こす侵襲性髄膜炎菌疾患を予防するために、２０１４年１０月２９日に、ＴＲＵＭＥＮＢＡ（登録商標）（二価の組換えリポタンパク質２０８６［ｒＬＰ２０８６］）が米国で認可された。ＴＲＵＭＥＮＢＡ（登録商標）の認可は、欧米においてＩＭＤ株を代表する４種の血清型Ｂ株に対する血清殺菌活性によって測定される、免疫応答の証明を根拠とした。
Figure 0007337107000005
侵襲性疾患分離株から４種の主要ＭｎＢ試験株を選択する際、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＬＰ２０８６表面発現の集団分布を考慮に入れた手法を使用した。さらに、髄膜炎菌疾患のリスクのある集団は、大部分の菌株に対してベースライン殺菌活性が存在しないまたは低いことを特徴とするため、ｈＳＢＡ試験株は、低いベースラインｈＳＢＡ陽性度を示す必要があった。加えて、４種の主要ＭｎＢ試験株はそれぞれ、ワクチン中のＬＰ２０８６変異体とは異なるＬＰ２０８６変異体を発現し、したがって、集団の中を循環する侵襲性髄膜炎菌疾患（ＩＭＤ）菌株に対する機能免疫原性および有効性に関する目的の評価が可能になる。
ｈＳＢＡでは、補体が媒介する殺菌活性を始動することのできる、血清中の抗髄膜炎菌血清型Ｂ（ＭｎＢ）抗体の量が測定される。簡潔に述べると、試験血清は、２倍ずつ段階希釈し、９６ウェル検定プレートに加える。ＭｎＢ ＳＢＡ試験株およびヒト血清補体を加えて、殺菌反応を開始する。検定プレートを３７℃で３０～６０分間（ＳＢＡ試験株次第、Ｔ３０と呼ぶ）インキュベートした後、このインキュベートを経ても生存する細菌を含有する反応混合物を希釈し、マイクロフィルタープレートに移す。終夜インキュベートした後、コロニー形成単位（ＣＦＵ）として示される生存細菌を、Ｉｍｍｕｎｏｓｐｏｔ分析装置を使用して数え上げる。生ＣＦＵデータを電子的に記録し、ｈＳＢＡ力価を算出するデータ解析アプリケーションに移す。ｈＳＢＡ力価は、Ｔ３０ＣＦＵ値（すなわち、試験血清を除くすべての検定成分を含有する検定ウェルにおいてインキュベートした後に生存する細菌の数、１００％細菌生存）と比べて、ＭｎＢ細菌を少なくとも５０％減少させる（５０％細菌生存）、試験血清の最も高い２倍希釈度の逆数である。力価は、段階力価、すなわち、１：４、１：８、１：１６などとして報告することができる。血清サンプルは、２個体で試験し、同じ検定で判定を繰り返す。反復測定値が同一でないサンプルについて報告する最終力価は、システム適性およびサンプル適性判断基準（たとえば、反復力価は、１段階の２倍希釈度内で一致しなければならない）を満たすとき、２つの反復測定値の低い方である。
ｈＳＢＡ検定は、試験血清をダルベッコリン酸緩衝食塩水で段階希釈した後に行った。９６ウェルプレート中の連続希釈された血清に、細菌（おおよそ２０００コロニー形成単位）およびヒト血清補体（最終濃度２０重量％）を加え、小半径オービタルシェーカーにおいて、３７℃、７００ｒｐｍで（ｈＳＢＡ試験株に応じて）３０～４０分間インキュベートした。インキュベートした後、反応混合物の一部分をマイクロフィルタープレートに移した。終夜インキュベートした後、生存細菌をＩｍｍｕｎｏｓｐｏｔ分析装置（Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｌｉｍｉｔｅｄ、米国オハイオ州シェーカーハイツ）で計数し、ｈＳＢＡ力価をＳＡＳ（バージョン９．２）で分析した。ｈＳＢＡ力価は、試験血清にさらされていない対照（すなわち、ｈＳＢＡ反応終盤の生存細菌）と比べて細菌を５０％減少させる、内挿された試験血清希釈度の逆数として算出した。実施例１の表１で列挙する菌株を用いた検定の資格付与の際に確立された、ｈＳＢＡ検定の定量下限以上であったｈＳＢＡ力価に基づき、パープロトコールｈＳＢＡを実施した。
ヒト血清は、ＳＢＡ用の補体供給源である。しかし、ｈＳＢＡ力価は、使用するヒト補体ロットに応じて様々となりうる。したがって、ヒト補体は、厳密なスクリーニングおよび資格付与によって管理して、ｈＳＢＡにおいて一貫した性能を確保することが好ましい。ｈＳＢＡについては、ヒト血清補体を何人もの健常な成人からプールしてもよいし、または個々のドナーから使用（すなわち、プールしない）してもよい。
（実施例３）
ポリソルベート８０
３つのパラメータ、すなわち、ｐＨ、アルミニウム濃度、およびポリソルベート８０（ＰＳ－８０）の対タンパク質モル比は、薬品の製剤向けに最適化されている。合計体積が０．５ｍｌである用量の組成物では、タンパク質のアルミニウムへの最適な結合は、ｐＨ約６．０、かつリン酸アルミニウム（ＡｌＰＯ４）としてのアルミニウム濃度０．５ｍｇ／ｍｌ（１用量あたり０．２５ｍｇのアルミニウムと等価である）で実現される。ｉｎ ｖｉｔｒｏでの効力について製剤を安定化するためには、ＰＳ－８０の対タンパク質モル比を２．８±１．４に保つ。ポリソルベート８０（ＰＳ－８０）を原薬に加えて、目標ＰＳ－８０対タンパク質モル比２．８を実現する。したがって、ＰＳ－８０は、薬品の製剤化の間に加えないことが好ましい。
（実施例４）
健康な青年において二価ｒＬＰ２０８６ワクチンと同時投与されたＲＥＰＥＶＡＸ（登録商標）の免疫原性および安全性についての無作為化偽薬対照第二相試験
背景／意図：青年において髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ（ＭｎＢ）疾患を予防するために開発中である治験用二価ｒＬＰ２０８６ワクチンを、この集団において現在使用されているｄＴａＰ不活化ポリオワクチンであるＲＥＰＥＶＡＸ（登録商標）（米国特許第７４７９２８３号、ＷＯ１９９０／０１３３１３、およびＥＰ１６６６０５７Ｂ１、ならびにＵＫ Ｍａｒｋｅｔｉｎｇ Ａｕｔｈｏｒｉｓａｔｉｏｎ ＰＬ０６７４５／０１２１に記載のものでよい）を同時投与しながら評価した。
方法：ＲＥＰＥＶＡＸ＋ｒＬＰ２０８６またはＲＥＰＥＶＡＸ＋食塩水（１：１）に無作為化された青年を、０、２、および６カ月の時点でワクチン処置した。最初のワクチン処置から３０日後に、９種のＲＥＰＥＶＡＸ抗原に対して、所定の抗体レベルを実現する対象の集団を明らかにした。ワクチン処置２および３から３０日後に、４種のＭｎＢ試験株に対する免疫応答（ｈＳＢＡ）を測定した。有害事象（ＡＥ）および局所／全身応答を評価した。
ＲＥＰＥＶＡＸ（Ｓａｎｏｆｉ Ｐａｓｔｅｕｒ ＭＳＤ ｌｉｍｉｔｅｄ）は、０．５ｍＬ用量あたり、リン酸アルミニウム（１．５ｍｇ（アルミニウム０．３３ｍｇ））に吸着された、ジフテリアトキソイド（２ＩＵ以上）、破傷風トキソイド（２０ＩＵ以上）、百日咳抗原（百日咳トキソイド（２．５マイクログラム）、線維状赤血球凝集素（５マイクログラム）、パータクチン（３マイクログラム）、および線毛２および３型（５マイクログラム）、ポリオウイルス（不活化）１型（４０Ｄ抗原単位）、ポリオウイルス（不活化）２型（８Ｄ抗原単位）、ポリオウイルス（不活化）３型（３２Ｄ抗原単位）を含有する、ジフテリア、破傷風、無細胞百日咳、および不活化灰白髄炎ウイルスの混合低用量ワクチンである。
ＲＥＰＥＶＡＸのジフテリア、破傷風、および百日咳成分（ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、百日咳トキソイド、パータクチン、線毛２および３型、ならびに線維状赤血球凝集素）に対する免疫応答は、多重ＬＵＭＩＮＥＸ検定を使用して評価した。ポリオウイルス１、２、および３型に対する免疫応答は、ウイルス中和検定において測定した。両方の群のすべての対象から得た血清を、これらの検定で使用した。
二価ｒＬＰ２０８６に対する免疫応答を評価するために、記載する４種の主要ＭｎＢ試験株を用いたｈＳＢＡにおいて、機能抗体を分析した。２種がＬＰ２０８６サブファミリーＡ変異体を発現し、他の２種がＬＰ２０８６サブファミリーＢ変異体を発現する、４種の主要ＭｎＢ ｈＳＢＡ試験株（Ａ２２、Ａ５６、Ｂ４４、およびＢ２４）を選択した。これら４種の主要ｈＳＢＡ試験株（６種のｆＨＢＰ系統発生的亜群のうちの４種からのものであり、米国およびヨーロッパを循環する疾患分離株の９０％超に相当する）を、この研究における免疫原性主要評価項目の判定に使用した。加えて、Ａ２２、Ｂ２４、およびＢ４４変異体は、ヨーロッパにおいて疫学的に関係のある変異体であり、米国では、Ａ２２およびＢ２４が、疾患を引き起こすＭｎＢ株上での発現が見出された最も流行型の変異体である。ＭｎＢ ｈＳＢＡは、一次および二次分析に使用するサンプルの試験前に有効性を確認した。
両方の群における無作為に選択した５０％の対象からの血清サンプルを、Ａ２２およびＢ２４で実施したｈＳＢＡにかけ、他の５０％をＡ５６およびＢ４４で試験した。これらの試験を、ワクチン処置１の前、ワクチン処置２の後、およびワクチン処置３の後に採取した血液サンプルで行った。
ＲＥＰＥＶＡＸの免疫原性は、ＲＥＰＥＶＡＸの許認可の根拠となった、青年における中心的な第三相臨床試験において定められた、各抗原についての所定の判断基準を使用することにより評価する。ＲＥＰＥＶＡＸ併存抗原には、ジフテリア、破傷風、百日咳トキソイド、百日咳線維状赤血球凝集素、百日咳パータクチン、百日咳線毛凝集原２＋３型、ポリオウイルス１型、ポリオウイルス２型、ポリオウイルス３型が含まれる。ＲＥＰＥＶＡＸの許認可に使用された検定では５ＥＵ／ｍＬ以上の力価が定められた、百日咳線毛凝集原（ＦＩＭ）２＋３型については例外である。この研究では、百日咳ＦＩＭ２＋３型検定の定量下限（ＬＬＯＱ）は、１０．６ＥＵ／ｍＬ以上としたが、これは、ＲＥＰＥＶＡＸの許認可判断基準より高く、したがってより厳しい。
併存抗原のＬＬＯＱは、ジフテリアトキソイドについては０．０３７ＩＵ／ｍＬ、破傷風トキソイドについては０．０５ＩＵ／ｍｌ、百日咳トキソイドについては０．９ＥＵ／ｍＬ、百日咳線維状赤血球凝集素については２．９ＥＵ／ｍＬ、百日咳パータクチンについては３．０ＥＵ／ｍＬ、百日咳線毛凝集原２＋３型については１０．６ＥＵ／ｍＬ、ポリオウイルス１型、ポリオウイルス２型、ポリオウイルス３型については１：８とした。
主要目的のための追加の記述的評価項目は、ワクチン処置１の後に（訪問２で）力価幾何平均値（ＧＭＴ）または濃度幾何平均値（ＧＭＣ）として測定した、併存ワクチン抗原に対する抗体とした。
別の評価項目は、４種の主要ＭｎＢ試験株それぞれについて、ワクチン処置３の後に（訪問６で）ｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ以上である対象の割合とした。
併存ワクチン抗原。ジフテリア、破傷風、および無細胞百日咳（ｄＴａＰ）－ＩＰＶ（ＲＥＰＥＶＡＸ）によるワクチン処置から１カ月後に、併存ワクチン抗原の所定の判断基準に達する対象の割合を、１群および２群について、両側９５％正確（またはＣｌｏｐｐｅｒ－Ｐｅａｒｓｏｎ）信頼限界）で算出した。割合の差（二価ｒＬＰ２０８６／ｄＴａＰ－ＩＰＶ－ｄＴａＰ－ＩＰＶ、または１群－２群）も、差についての両側９５％正確ＣＩと共に計算した。差についての両側９５％ＣＩの下限が、ｄＴａＰ－ＩＰＶワクチン中の９種の抗原すべてについて－０．１０（－１０％）より高かった場合、非劣性を言明した。
主要試験株でのｈＳＢＡ。各主要ＭｎＢ ｈＳＢＡ試験株について、各血液採取の時点で、ｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ以上、１：４以上、１：８以上、１：１６以上、および１：１２８以上に達する対象の数および割合を、割合についての正確両側９５％ＣＩ（またはＣｌｏｐｐｅｒ－Ｐｅａｒｓｏｎ信頼限界）と共に、記述的にまとめた。
結果：無作為化された７４９人の対象のうち、６８５人（９１．５％）を評価可能な免疫原性集団に含めた。ＲＥＰＥＶＡＸ＋ｒＬＰ２０８６またはＲＥＰＥＶＡＸ＋食塩水の後の免疫応答は、９種類すべてのＲＥＰＥＶＡＸ抗原について非劣性であった。二価ｒＬＰ２０８６ワクチンに対する免疫応答は、２用量の後に実体のあるものとなり、３用量の後にさらに増強された（表２）。軽度から中等度の注射部位疼痛が、最も一般的な局所反応であり、頭痛および倦怠が、最も一般的な全身事象であった。ワクチン処置後３０日以内にＡＥを報告している対象の割合は、似通っていた（ＲＥＰＥＶＡＸ＋ｒＬＰ２０８６およびＲＥＰＥＶＡＸ＋食塩水について、それぞれ、８．８％および１１．４％）。
評価可能な併存ワクチン免疫原性集団について、ＲＥＰＥＶＡＸ用量から１カ月後に、併存ワクチン抗原に対する抗体が所定のレベル（応答の閾値）に達する対象の割合は、併存ワクチン抗原について、二価ｒＬＰ２０８６＋ＲＥＰＥＶＡＸ群とＲＥＰＥＶＡＸ単独群とで似通っていた。ジフテリアトキソイド（各群で９９．４％）、破傷風トキソイド（各群で１００％）、百日咳トキソイド（それぞれ９４．７％および９６．０％）、百日咳線維状赤血球凝集素（各群で１００％）、百日咳パータクチン（各群で１００％）、百日咳線毛凝集原２＋３型（それぞれ９７．６％および９８．９％）、ポリオウイルス１型（各群で１００％）、ポリオウイルス２型（各群で１００％）、ポリオウイルス３型（各群で１００％）。
ＲＥＰＥＶＡＸ用量から１カ月後の二価ｒＬＰ２０８６＋ＲＥＰＥＶＡＸ群（１群）とＲＥＰＥＶＡＸ単独群（２群）間の応答者の割合の差についての両側９５％ＣＩの下限が、ＲＥＰＥＶＡＸ中の９種類の抗原について－０．１０（－１０％）より高かった（すなわち、割合の差に関する９５％ＣＩの最低の下限が、－４．７％（百日咳トキソイド）であった）ため、非劣性が実現された。したがって、二価ｒＬＰ２０８６と共に与えられたＲＥＰＥＶＡＸによって誘発された免疫応答は、ＲＥＰＥＶＡＸのみによって誘発された免疫応答に劣っていなかった。
ワクチン処置３の後の評価可能な免疫原性集団に関して、４種の主要ＭｎＢ試験株それぞれについてｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ以上である対象の割合を評価した。Ａ２２のＬＬＯＱは、１：１６に相当するｈＳＢＡ力価であり、他のすべてのＭｎＢ試験株のＬＬＯＱは、１：８に相当するｈＳＢＡ力価であった。
１群については、ベースライン（ワクチン処置１の前）においてｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ以上である対象の割合は、主要ＭｎＢ株Ａ２２で１４．４％、Ａ５６で１８．２％、Ｂ２４で１２．７％、Ｂ４４で６．２％であった。２群については、ベースライン（ワクチン処置１の前）においてｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ以上である対象の割合は、主要ＭｎＢ株Ａ２２で２３．０％、Ａ５６で２１．８％、Ｂ２４で１２．９％、Ｂ４４で６．３％であった。
二価ｒＬＰ２０８６の用量２の後に、１群対象の中で、実質的なｈＳＢＡ応答が認められ、３用量の後（ワクチン処置３から１カ月後）に、追加の増大が認められた。１群（二価ｒＬＰ２０８６＋ＲＥＰＥＶＡＸ）については、ワクチン処置２から１カ月後およびワクチン処置３から１カ月後にｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ以上に達する対象の割合は、Ａ２２で８１．１％および９５．６％、Ａ５６で９７．３％および１００％、Ｂ２４で８１．０％および９６．８％、Ｂ４４で５５．５％および８１．５％であった。実質的なｈＳＢＡ応答は、２用量だけの二価ｒＬＰ２０８６の後にも実現されたが、３用量の後（ワクチン処置３から１カ月後）に、ｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ以上である対象の割合が、２用量の後（ワクチン処置２から１カ月後）と比べて増加したことは、３用量の後に免疫応答が増強されたよい例となる。対照群（２群）では、ワクチン処置２から１カ月後およびワクチン処置３から１カ月後に、４種の主要ＭｎＢ試験株それぞれについてのｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ以上である対象の割合は、各ＭｎＢ試験株についてのベースラインｈＳＢＡの結果（ワクチン処置１の前）と似通っていた。
４種の主要ＭｎＢ試験株について、定められたｈＳＢＡ力価を示す１群の対象の割合は、３用量の後で２用量の後より大きかった。その力価が１：４の力価の４倍の増大であることから（１：４以上の力価は、ＩＭＤに対する防御の相関事項として広く認められている）、ｈＳＢＡ力価が１：１６以上に達した対象を記載する。１群については、ワクチン処置２から１カ月後にｈＳＢＡ力価が１：１６である対象の割合は、Ａ２２で８１．８％、Ａ５６で９７．３％、Ｂ２４で６８．０％、Ｂ４４で５３．４％であった。ワクチン処置３から１カ月後、ｈＳＢＡ力価が１：１６である対象の割合は、Ａ２２で９５．６％、Ａ５６で１００％、Ｂ２４で８７．３％、Ｂ４４で７９．５％であった。
対照群（２群）では、ワクチン処置２から１カ月後およびワクチン処置３から１カ月後に、４種の主要ＭｎＢ試験株それぞれについて、定められたｈＳＢＡ力価を示す対象の割合は、ベースラインで（ワクチン処置１の前に）定められたｈＳＢＡ力価を有する対象の割合と似通っていた。
１群については、３用量の二価ｒＬＰ２０８６の後にｈＳＢＡ力価が１：１６である対象の割合から、３用量の二価ｒＬＰ２０８６が投与されたとき、ワクチンが活発な免疫応答を惹起することが実証された。
ｈＳＢＡ力価幾何平均値（ＧＭＴ）。一般に、ベースラインでのＧＭＴは、両方の群についてｈＳＢＡ ＬＬＯＱを下回った。１群について、ワクチン処置２から１カ月後のｈＳＢＡ ＧＭＴは、Ａ２２で３５．５、Ａ５６で９１．１、Ｂ２４で１５．９、Ｂ４４で１４．６であった。ワクチン処置３から１カ月後のｈＳＢＡ ＧＭＴは、Ａ２２で６３．４、Ａ５６で１５１．５、Ｂ２４で２８．３、Ｂ４４で３６．５であった。
１群では、サブファミリーＡ株については２用量の後に認められたＧＭＴが、サブファミリーＢ株については３用量の後に認められたＧＭＴが、活発な免疫応答を示していた。
Ａ２２、Ａ５６、Ｂ２４、およびＢ４４についてのｈＳＢＡ力価の分布を示す逆累積分布曲線（ＲＣＤＣ）を評価した。１群におけるＲＣＤＣからの結果は、二価ｒＬＰ２０８６のワクチン処置２の後に１群対象の中で実質的な免疫応答が認められたことを示したが、しかし、図面には、より高い割合の対象が４種のＭｎＢ試験株に対してより高い力価を実現したという、二価ｒＬＰ２０８６の３回目用量の利益も示された。効果は、株Ｂ４４について最も顕著であった。
結論：二価ｒＬＰ２０８６と同時に与えられたとき、ＲＥＰＥＶＡＸは、ＲＥＰＥＶＡＸのみによって惹起される免疫応答に劣らない免疫応答を誘発した。二価ｒＬＰ２０８６ワクチンは、４種の多様なＭｎＢ試験株、特に、サブファミリーＢを代表する試験株に対して、２用量の後より３用量の後により強まった、活発な殺菌応答を誘発した。同時投与は、一般に安全であり、十分に忍容された。
Figure 0007337107000006
（実施例５）
健康な青年における治験用髄膜炎菌血清型Ｂ二価ｒＬＰ２０８６ワクチンの免疫原性
背景および意図：髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ（ＭｎＢ）は、小児、青年、および成人において侵襲性疾患を引き起こす。保存された表面露出リポタンパク質であるＬＰ２０８６（Ｈ因子結合タンパク質［ｆＨＢＰ］）は、見込みのあるＭｎＢワクチンターゲットである。治験用二価組換えワクチン（ｒＬＰ２０８６）の安全性および免疫原性を健康な青年（１１～１８才）において調査した。
方法：この偽薬対照単盲検試験における対象を、２組の３用量スケジュールおよび３組の２用量スケジュールに無作為化した。各１２０μｇ用量は、各ＬＰ２０８６サブファミリー（ＡおよびＢ）から１種ずつの２種のｒＬＰ２０８６抗原を含有した。ワクチンの予定がなかったときは、食塩水を与えた。ヒト補体を使用する血清殺菌検定（ｈＳＢＡ）を、４種のＭｎＢ試験株（ワクチンｆＨＢＰと異種）で実施した。
結果：１７１３人の対象（平均年齢１４．４才）を無作為化した。３用量のワクチンから１カ月後、サブファミリーＡ株およびＢ株に対する８以上のｈＳＢＡ力価は、それぞれ、対象の９５～９９％および８６～８９％において認められ、２用量の後に、これらの数は、それぞれ、対象の９１～１００％および６９～７７％の範囲になった。２用量スケジュールのうち、０および６カ月が、最も高い抗体応答（実施例５の表１）を誘発した。２用量の後のｈＳＢＡ ＧＭＴは、４種のＭｎＢ異種試験株全体で、６．２～１２５．６の範囲となり、３用量の後では２５．６～１５５．６の範囲となった。軽度から中等度の注射部位疼痛が、最も一般的な局所反応であった。ｒＬＰ２０８６受容者および食塩水受容者のそれぞれ３．３～６．５％および２．１％において、用量１の後に、３８℃以上の発熱が経験された。
Figure 0007337107000007
結論：ｒＬＰ２０８６は、十分に認容された。すべての投与レジメンによって、３用量の後に最も顕著となった活発な殺菌応答が得られた。
実施例５の表１は、上述の実施例１の表１と同じである。表２に、評価可能な免疫原性集団についての調査時間によるｈＳＢＡ ＧＭＴおよび対応するＣＩをまとめて示す。ＧＭＴは、ベースライン（注射１の前）から増大し、二価ｒＬＰ２０８６の後続の各用量と共に増大し続けた。
４種の主要ＭｎＢ株について、ＧＭＴは、３用量の二価ｒＬＰ２０８６（１群および２群）の後では、２用量（３、４および５群）の後より高かった。ＧＭＴは、２組の３用量群間で似通っており、３組の２用量群の間でも似通っていた。
注射１の前（ベースライン）の、１、２、３、４および５群についてのｈＳＢＡ ＧＭＴは、次のとおりである。Ａ２２については、それぞれ、７．１、６．３、６．４、６．４、および６．８、Ａ５６については、それぞれ、６．８、６．１、６．７、６．３、および６．２、Ｂ２４については、それぞれ、５．３、５．１、５．０、４．９、および５．１、Ｂ４４については、それぞれ、４．４、４．５、４．５、４．６、および４．４。
１群（０、１、および６カ月）については、４種すべての主要ＭｎＢ株について、用量２から１カ月後に、ＧＭＴの実質的な増大が認められた（Ａ２２、Ａ５６、Ｂ２４、およびＢ４４について、それぞれ、２４．４、７７．３、１３．８、および１３．１）。ＧＭＴは、１群対象では、４種の主要ＭｎＢ試験株について、３用量の二価ｒＬＰ２０８６の後に、さらに増大した。５５．１（Ａ２２）、１５２．９６（Ａ５６）、２９．１（Ｂ２４）、および４０．３（Ｂ４４）。
２群については、二価ｒＬＰ２０８６の２用量および３用量の後に、ＧＭＴの同様の増大が認められた。２用量の二価ｒＬＰ２０８６の後の２群対象のＧＭＴは、Ａ２２で３２．９、Ａ５６で９４．６、Ｂ２４で１４．９、Ｂ４４で１５．５であった。３用量の後、ＧＭＴは、Ａ２２では５６．３、Ａ５６では１５５．６、Ｂ２４では２５．６、Ｂ４４では３５．０に増大した。
１群および２群について、サブファミリーＡ株については２用量の後に認められたＧＭＴが、サブファミリーＢ株については３用量の後に認められたＧＭＴが、活発な免疫応答を示している。
３群については、１用量の二価ｒＬＰ２０８６の後に、次のような、ＧＭＴのわずかな増大が認められた。すなわち、Ａ２２では１２．０、Ａ５６では１８．５、Ｂ２４では９．２、Ｂ４４では５．７。２用量の後、ＧＭＴは、Ａ２２で４８．４、Ａ５６で１２５．６、Ｂ２４で２０．６、Ｂ４４で２２．５に増大した。
４群について、ＧＭＴは、１用量の二価ｒＬＰ２０８６の後、Ａ２２では１３．３、Ａ５６では１７．７、Ｂ２４では９．８、Ｂ４４では５．９であった。２用量の二価ｒＬＰ２０８６の後、ＧＭＴは、Ａ２２では３７．１、Ａ５６では１０４．９、Ｂ２４では１７．７、Ｂ４４では１９．１であった。
５群について、１用量の二価ｒＬＰ２０８６の後のＧＭＴは、Ａ２２では１６．０、Ａ５６では２６．８、Ｂ２４では１２．６、Ｂ４４では６．８であった。２用量の二価ｒＬＰ２０８６の後、ＧＭＴは、Ａ２２で３９．６、Ａ５６で１１１．８、Ｂ２４で１４．７、Ｂ４４で１７．８に増大した。
まとめると、３、４および５群について、観察されたＧＭＴは、２用量の二価ｒＬＰ２０８６の後、サブファミリーＡ株およびＢ株について、免疫応答を示している。
要約すると、３用量の二価ｒＬＰ２０８６によって、ｈＳＢＡ力価に基づく免疫応答は、４種の主要ＭｎＢ試験株について、活発で、最も広くなった。２用量と比べると、３用量の二価ｒＬＰ２０８６を投与されている対象は、より高い割合で、４種の主要ＭｎＢ試験株に対して、ｈＳＢＡ力価が１：８以上に達した。
０、１、および６カ月の用量スケジュール（１群）の後の結果は、０、２、および６カ月の用量スケジュール（２群）の後の結果と似通っていた。１群および２群について、実現された用量３の後のＧＭＴ値は、用量２の後のＧＭＴ値より高かった。１群および２群について、用量２の後のＧＭＴ値は、サブファミリーＡ株では２４．４～９４．６、サブファミリーＢ株では１３．１～１５．５の範囲であった。用量３の後のＧＭＴ値は、サブファミリーＡ株では５５．１～１５５．６、サブファミリーＢ株では２５．６～４０．３の範囲であった。１群および２群について、２用量の二価ｒＬＰ２０８６の後に４種の主要ＭｎＢ試験株に対してｈＳＢＡ力価が１：８以上に達する対象の割合と比べて、３用量の二価ｒＬＰ２０８６の後、より高い割合の対象が、４種の主要ＭｎＢ試験株に対して、１：８以上のｈＳＢＡ力価に達した。
ｈＳＢＡ力価が１：１６以上に達した対象も評価した。１群について、２用量の二価ｒＬＰ２０８６から１カ月後に、ｈＳＢＡ力価が１：１６以上に達した対象の百分率は、Ａ２２で７３．５％、Ａ５６で９６．３、Ｂ２４で５７．６、Ｂ４４で４７．２％であった。３用量の二価ｒＬＰ２０８６の後、ｈＳＢＡ力価が１：１６以上に達した１群の対象の百分率は、Ａ２２で９１．４％、Ａ５６で９９．２％、Ｂ２４で８２．８％、Ｂ４４で８４．８％であった。
２群について、２用量の二価ｒＬＰ２０８６から１カ月後に、ｈＳＢＡ力価が１：１６以上に達した対象の百分率は、Ａ２２で８８．１％、Ａ５６で９７．９％、Ｂ２４で６３．５％、Ｂ４４で５８．６％であった。３用量の二価ｒＬＰ２０８６の後、ｈＳＢＡ力価が１：１６以上に達した２群の対象の百分率は、Ａ２２で９５．０％、Ａ５６で９８．９％、Ｂ２４で８３．６％、Ｂ４４で８３．８％であった。
１群および２群について、３用量の二価ｒＬＰ２０８６の後にｈＳＢＡ力価が１：１６以上に達する対象の百分率から、ワクチンが活発な免疫応答を惹起することが実証された
。
３群について、２用量の二価ｒＬＰ２０８６の後、ｈＳＢＡ力価が１：１６以上に達した対象の百分率は、Ａ２２で９３．２％、Ａ５６で９８．４％、Ｂ２４で７３．８％、Ｂ４４で７０．８％であった。
４群について、２用量の二価ｒＬＰ２０８６から１カ月後に、ｈＳＢＡ力価が１：１６以上に達した対象の百分率は、Ａ２２で９０．８％、Ａ５６で９９．２％、Ｂ２４で６７．１％、Ｂ４４で６４．５％であった。
５群について、２用量の二価ｒＬＰ２０８６の後にｈＳＢＡ力価が１：１６以上に達した対象の百分率は、Ａ２２で９１．０％、Ａ５６で９９．１％、Ｂ２４で６４．５％、Ｂ４４で６６．７％であった。
３、４および５群について、ｈＳＢＡ力価が１：１６以上に達する対象の百分率から、ワクチンが、２用量だけの後でも、サブファミリーＡ株に対して活発な免疫応答を惹起することが実証された。しかし、３用量によって、サブファミリーＢ株に対する応答の活発さは増す。
３用量の二価ｒＬＰ２０８６の後にｈＳＢＡ力価が１：１６以上に達する対象の百分率は、ワクチンが、ワクチン成分とは異なるＬＰ２０８６変異体を発現するＭｎＢ株に対して活発で広い免疫応答を惹起することを示している。
各菌株の評価可能な免疫原性集団について、調査時間によるｈＳＢＡ力価の分布を示す逆累積分布曲線（ＲＣＤＣ）も、まとめて評価した。ＲＣＤＣは、２用量の二価ｒＬＰ２０８６サブファミリーＡ株の後に、活発な免疫応答を示す。二価ｒＬＰ２０８６の３回目用量の後、反応曲線下面積は、４種すべての主要ＭｎＢ試験株について増加し、それにより、３用量の二価ｒＬＰ２０８６の後、免疫応答が増強されたことが実証される。
一次および二次の免疫原性評価項目分析の結果は、ワクチンが、ＭｎＢの非相同のサブファミリーＡおよびサブファミリーＢ変異体に対して有意なｈＳＢＡ活性を有する抗体を発生させうることを示している。ｈＳＢＡ力価が１：８以上に達する対象の割合は、２または３用量の二価ｒＬＰ２０８６の後により高くなったが、対象の大部分は、１用量の二価ｒＬＰ２０８６から１カ月後に１：８以上のｈＳＢＡ力価に達した。たとえば、５群を参照されたい。
４種の主要ＭｎＢ試験株について、ＧＭＴは、３用量の二価ｒＬＰ２０８６（１群および２群）で、２用量（３、４および５群）より高かった。ＧＭＴは、２組の３用量群において似通っていた。ＧＭＴは、３組の２用量群間でも似通っていた。これらのデータは、ｈＳＢＡ力価が１：１６以上に達する対象の百分率に基づく、３用量の二価ｒＬＰ２０８６の後の活発なｈＳＢＡ応答も示している。
これらのデータは、二価ｒＬＰ２０８６の最終製剤が、２または３用量で与えられたとき、活発な免疫応答を生じ、安全であり、十分に忍容されることを示している。１用量の二価ｒＬＰ２０８６でさえも、ベースラインを上回る実質的な免疫応答をもたらし、同様に安全で、十分に忍容される。全体として、２用量または３用量の二価ｒＬＰ２０８６の後の安全性プロファイルに臨床上意味のある差は見られなかった。
（実施例６）
３種類の第二相無作為化対照試験における、１１才～１８才の健康な青年における髄膜炎菌血清型Ｂ二価ｒＬＰ２０８６ワクチンの安全性、忍容性、および免疫原性
背景：髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ（ＭｎＢ）は、青年における侵襲性髄膜炎菌疾患の主原因である。保存された表面露出リポタンパク質であるＬＰ２０８６（Ｈ因子結合タンパク質［ｆＨＢＰ］）は、ＭｎＢによって引き起こされる侵襲性疾患に対する防御の見込みのあるワクチンターゲットである。治験用二価組換えＭｎＢワクチン（配列番号１および配列番号２、２．８のモル比のポリソルベート８０、０．５ｍｇ／ｍｌのアルミニウム、１０ｍＭのヒスチジン、および１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含み、本明細書では、実施例全体を通して「二価ｒＬＰ２０８６」と呼ぶ）の安全性、忍容性、および免疫原性を、１１才～１８才の健康な青年における３種類の第二相無作為化対照試験において調べた。
方法：試験１０１２では、二価ｒＬＰ２０８６の５通りのワクチンレジメンを調べ、試験１０１０および１０１１では、ＴｄａＰ－ＩＰＶワクチンおよびＨＰＶワクチンそれぞれと同時に与える二価ｒＬＰ２０８６ワクチンの３用量スケジュールを評価した。二価ｒＬＰ２０８６の各用量は、６０μｇのｒＬＰ２０８６サブファミリーＡ変異体Ａ０５および６０μｇのｒＬＰ２０８６サブファミリーＢ変異体Ｂ０１を含有した。３種類の試験それぞれにおいて、二価ｒＬＰ２０８６の免疫原性を調べるために、ｆＨＢＰの変異性の妥当な多様性を表すように、また疫学的に優勢なｆＨＢＰ変異体を発現する菌株に対してワクチンが惹起する免疫応答の幅に関して見通しが得られるように選択された、非相同ｆＨＢＰ変異体Ａ２２、Ａ５６、Ｂ２４、およびＢ４４を発現する４種のＭｎＢ試験株を用いて、ヒト補体を使用する血清殺菌検定（ｈＳＢＡ）を実施した。有害事象ならびに求められる局所および全身応答を評価した。
結果：３種類すべての試験における８２～１００％の対象が、用量３から１カ月後に、４種のＭｎＢ試験株それぞれについて、定量下限（ＬＬＯＱ）を上回るｈＳＢＡ力価に達した（表）。３種の試験すべてにわたって、全身事象および局所反応の大半は、重症度が軽度から中等度であり、有害事象は、一般に、重篤でない、または試験ワクチンと関係がなかった。
結論：１：４を上回る血清殺菌抗体力価は、侵襲性髄膜炎菌疾患に対する防御となる。こうした青年第二相試験それぞれにおいて、それぞれワクチン抗原とは異種である４種のＭｎＢ試験株に対してＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価が示されたことは、二価ｒＬＰ２０８６ワクチンによって、ＭｎＢ疾患と関連する多様な菌株に対して幅広く活発となりうる機能抗体応答が得られたことを示唆する。二価ｒＬＰ２０８６でのワクチン処置は、一般に十分に忍容された。
Figure 0007337107000008
（実施例７）
ヒトパピローマウイルスワクチンと同時投与したときの、１１才～１８才の健康な青年における髄膜炎菌血清型Ｂ二価ｒＬＰ２０８６ワクチンの免疫原性
この第二相無作為化観察者盲検対照試験では、（米国特許第５，８２０，８７０号にも記載のとおりの）ヒトパピローマウイルスに対する四価ワクチン（ＨＰＶ４）であるＧＡＲＤＡＳＩＬ（登録商標）の同時投与を伴うまたは伴わない二価ｒＬＰ２０８６の免疫原性を、１１才以上１８才未満の健康な青年において評価した。ＧＡＲＤＡＳＩＬは、ＨＰＶ６、１１、１６および１８型（すなわち、ＨＰＶ－６、ＨＰＶ－１１、ＨＰＶ－１６、およびＨＰＶ－１８）Ｌ１タンパク質の組換え抗原を含有する。評価項目は、適用できる各血液採取時点における、４種の主要ＭｎＢ試験株それぞれについてのｈＳＢＡ ＧＭＴとした。
方法：対象に、０、２および６カ月の時点で、二価ｒＬＰ２０８６（配列番号１および配列番号２、２．８のモル比のポリソルベート８０、０．５ｍｇ／ｍｌのアルミニウム、１０ｍＭのヒスチジン、および１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む）＋ＨＰＶ４（１群）、二価ｒＬＰ２０８６＋食塩水（２群）、またはＨＰＶ４＋食塩水（３群）を与えた。ワクチン成分と非相同であり、ｆＨＢＰの多様性の幅に加えて疫学的優性を表すｆＨＢＰ（Ａ２２、Ａ５６、Ｂ４４、およびＢ２４）をそれぞれが発現する４種のＭｎＢ試験株を使用して、ワクチン処置１の前ならびにワクチン処置２および３から１カ月後の１群および２群の対象からの血清を、ヒト補体を使用する血清殺菌検定（ｈＳＢＡ）によって試験した。評価する評価項目には、ｈＳＢＡ力価が定量下限（ＬＬＯＱ、１：１６［Ａ２２］または１：８［Ａ５６、Ｂ４４、Ｂ２４］）以上である対象の割合およびｈＳＢＡ力価幾何平均値（ＧＭＴ）を含めた。
ＧＡＲＤＡＳＩＬに二価ｒＬＰ２０８６を加えた投与が、ＧＡＲＤＡＳＩＬ単独と比べて非劣性であることを実証するために、サブファミリーＡ変異体を代表する１種の主要試験株（Ａ２２）と、サブファミリーＢ変異体を代表する１種の主要試験株（Ｂ２４）を使用する２種のｈＳＢＡで、免疫原性評価を実施した。しかし、付加的な二価ｒＬＰ２０８６免疫原性／有効性調査評価項目の判定には、４種すべての主要ＭｎＢ試験株を使用した。
二価ｒＬＰ２０８６に対する免疫応答を評価するために、Ｐｆｉｚｅｒの代表的なＭｎＢ ＳＢＡ菌株プールから、実施例２に記載のとおりに無作為に選択した髄膜炎菌血清型Ｂ株を用いたｈＳＢＡにおいて、機能抗体を分析した。このｈＳＢＡでは、目標髄膜炎菌株を補体依存的に死滅させる、ヒト血清中の機能抗体を測定した。
結果：８１４人および８１２人の対象を、それぞれ１群および２群の評価可能な免疫原性集団に含めた。４種すべての試験株に対してｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ以上である対象の割合は、ワクチン処置１の前と比べて、ワクチン処置２（５５％～９９％）および３（８３％～９９％、図１）の後ではより高かった。実施例７の表Ａに、評価可能な免疫原性集団について、サンプル採取の時点による、４種の主要ＭｎＢ株それぞれについてのｈＳＢＡ ＧＭＴ、および対応するＣＩを示す。ベースラインのＧＭＴは、両方の群について、ｈＳＢＡ ＬＬＯＱを下回っていた。ＧＭＴは、１群および２群において、ワクチン処置１の後で、それぞれ１１．１～７０．６および１１．９～７６．３、ワクチン処置２の後で２５．８～１１７．２および２８．０～１２８．２の範囲となった（以下の表Ａ）。
評価可能な免疫原性集団について、ワクチン処置３二価ｒＬＰ２０８６用量から１カ月後の、１群および２群についての２種の主要ＭｎＢ株に対するｈＳＢＡ ＧＭＴは、次のとおりであった。すなわち、Ａ２２ではそれぞれ５３．３および５７．８、Ｂ２４ではそれぞれ２５．８および２８．０。
２群（二価ｒＬＰ２０８６＋食塩水）について、ワクチン処置２から１カ月後のｈＳＢＡ ＧＭＴは、Ａ２２で３３．７、Ａ５６で７６．３、Ｂ２４で１６．３、Ｂ４４で１１．９であった。ワクチン処置３から１カ月後のｈＳＢＡ ＧＭＴは、Ａ２２で５７．８、Ａ５６で１２８．２、Ｂ２４で２８．０、Ｂ４４で３１．９であった。
１群（二価ｒＬＰ２０８６＋ＧＡＲＤＡＳＩＬ）について、ワクチン処置２から１カ月後のｈＳＢＡ ＧＭＴは、Ａ２２で３１．９、Ａ５６で７０．６、Ｂ２４で１５．０、Ｂ４４で１１．１であった。ワクチン処置３から１カ月後のｈＳＢＡ ＧＭＴは、Ａ２２で５３．３、Ａ５６で１１７．２、Ｂ２４で２５．８、Ｂ４４で２７．２であった。
評価可能な免疫原性集団に関して、Ａ２２、Ａ５６、Ｂ２４、およびＢ４４についてのｈＳＢＡ力価の分布を示す逆累積分布曲線（ＲＣＤＣ）を、すべてのサンプル採取時点において、１群および２群について評価した。ＲＣＤＣは、対象の大半が、ワクチン処置２の後に応答し、ワクチン処置３の後、４種の主要ＭｎＢ試験株についての力価がさらに増大していたことを示した。抗原に対する免疫応答は、１群と２群で似通っていた。
結論：二価ｒＬＰ２０８６は、ｈＳＢＡ血清応答またはＧＭＴによって評価される殺菌応答に影響を及ぼすことなく、ＨＰＶ４と共に投与することができる。１：４以上のｈＳＢＡ力価は、髄膜炎菌疾患に対する防御と相互に関係があるため、これらのデータは、ＨＰＶワクチンを同時投与する状況において、二価ｒＬＰ２０８６を投与した後、幅広い範囲のＭｎＢ株に対して青年の防御になる可能性を示唆している。
Figure 0007337107000009
（実施例８）
健康な青年における、二価ｒＬＰ２０８６ワクチンと同時投与されたヒトパピローマワクチンの髄膜炎菌血清型Ｂに対する免疫原性
背景：この第二相無作為化試験では、１１才以上１８才未満の健康な青年において、ヒトパピローマウイルスに対する四価ワクチン（ＨＰＶ４）と、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ（ＭｎＢ）が引き起こす侵襲性疾患に対する治験用ワクチンである二価ｒＬＰ２０８６との共投与を評価した。
方法：対象に、０、２、および６カ月の時点で、ＨＰＶ４＋二価ｒＬＰ２０８６（１群）、二価ｒＬＰ２０８６＋食塩水（２群）、または食塩水＋ＨＰＶ４（３群）を与えた。血清は、すべての群において、ベースライン時ならびに用量２および３の後に採取した。ＨＰＶ４抗原（ＨＰＶ－６、１１、１６、および１８）に対する免疫応答を、競合ＬＵＭＩＮＥＸ免疫検定（ｃＬＩＡ）によって明らかにした。二価ｒＬＰ２０８６免疫原性は、ワクチンと非相同のｆＨＢＰ変異体（Ａ２２およびＢ２４）を発現する２種のＭｎＢ試験株を用いた、ヒト補体を使用する血清殺菌検定（ｈＳＢＡ）によって測定した。すべて用量３の後の免疫原性評価項目として、１群および３群におけるＨＰＶ抗原に対する力価幾何平均値（ＧＭＴ）、１群および２群における変異体Ａ２２およびＢ２４を発現する菌株についてのｈＳＢＡ ＧＭＴ、ならびに１群および３群におけるベースライン血清陰性対象のＨＰＶ抗原についての抗体陽転率を含めた。二価ｒＬＰ２０８６の安全性も、ＨＰＶ４または食塩水の同時投与後に評価した。
ＧＡＲＤＡＳＩＬ（ＨＰＶ６、１１、１６、および１８型Ｌ１タンパク質）に対する免疫応答の評価は、蛍光標識されたマイクロスフェアを主体とするプラットフォームに基づくｃＬＩＡ（ＬＵＭＩＮＥＸ）を使用して実施した。ＧＡＲＤＡＳＩＬでの最初のワクチン処置の前（訪問１）およびＧＡＲＤＡＳＩＬでの３回目のワクチン処置から１カ月後（訪問５）に、１群および３群のすべての対象から得た血清を、これらの検定において使用した。
１群および３群についての４種のＨＰＶ抗原に対するＧＭＴの比較を、その対応する、１群の３群に対するＧＭＴ比（ＧＭＲ）およびその比の両側９５％ＣＩを添えて、この実施例の後の表Ａに示す。非劣性限界の判断基準は、ＧＭＲの両側９５％ＣＩの下限についての０．６７の値に相当する、１．５倍とした。０．６７である１．５倍の判断基準は、下限９５％信頼区間（ＣＩ）が０．６２であったＨＰＶ－１８を除いて、すべてのＭｎＢ試験株およびＨＰＶ抗原について満たされた。別の分析において、食塩水＋ＨＰＶ４およびｒＬＰ２０８６＋ＨＰＶ４の両方の群において、対象の９９％以上が、４種すべてのＨＰＶ抗原に対して抗体陽転した。
この試験の別の目的は、両方の群において、ＧＡＲＤＡＳＩＬのワクチン処置３用量の後（訪問５）、ＨＰＶ免疫原性検定における抗体陽転によって測定される、二価ｒＬＰ２０８６＋ＧＡＲＤＡＳＩＬ（１群）および食塩水＋ＧＡＲＤＡＳＩＬ（３群）によって誘発された免疫応答について記載することであった。
１群および３群でベースライン時にＨＰＶ血清陰性であった対象について、ＧＡＲＤＡＳＩＬの最後の用量から１カ月後の、４種のＨＰＶ抗原それぞれについての抗体陽転率を、抗ＨＰＶ血清ｃＬＩＡレベルが、ＨＰＶ－６では２０ｍＭＵ／ｍｌ以上、ＨＰＶ－１１では１６ｍＭＵ／ｍｌ以上、ＨＰＶ－１６では２０ｍＭＵ／ｍｌ以上、ＨＰＶ－１８では２４ｍＭＵ／ｍｌ以上である対象の割合として算出した。
評価可能なベースラインＨＰＶ血清陰性免疫原性集団について、４種のＨＰＶ抗原について所定の抗体陽転の判断基準に達する、ベースラインＨＰＶ血清陰性対象の数および割合を、各群における対応する９５％ＣＩ、割合のパーセントの差（１群－３群）、およびその差の９５％ＣＩと共に、実施例８の表Ｂに示す。
結果：１．５倍（ＧＭＲの９５％ＣＩの下限０．６７）に設定した所定の非劣性判断基準は、４種のＨＰＶ抗原のうちの（ＨＰＶ－１８でない）３種および両方のＭｎＢ試験株について満たされた（表Ａ）。１群および３群の抗体陽転率は、すべてのＨＰＶ抗原について９９％以上であった（表Ｂ）。ｒＬＰ２０８６の後では、食塩水と比べて、より大きな局所反応原性（ｒｅａｃｔｏｇｅｎｉｃｉｔｙ）が生じたが、後の用量と共に増大はせず、注射部位疼痛が、最もよくある局所反応であった。３つの群すべてにおける全身事象は、一般に、重症度が軽度および中等度であった。
評価可能な免疫原性集団について、ワクチン処置３のＧＡＲＤＡＳＩＬ用量から１カ月後の、１群および３群についての、４種のＨＰＶ抗原に対する抗体のＧＭＴは、次のとおりであった。すなわち、それぞれ４５１．８および５５０．３（ＨＰＶ－６）、それぞれ８９２．９および１０８４．３（ＨＰＶ－１１）、それぞれ３６９５．４および４７６３．４（ＨＰＶ－１６）、それぞれ７４４．０および１０４７．４（ＨＰＶ－１８）。ワクチン処置３のＧＡＲＤＡＳＩＬ用量から１カ月後の、１群の３群に対するＧＭＲは、ＨＰＶ－６では０．８２（９５％ＣＩ：０．７２、０．９４）、ＨＰＶ－１１では０．８２（９５％ＣＩ：０．７４、０．９１）、ＨＰＶ－１６では０．７８（９５％ＣＩ：０．６８、０．８８）、ＨＰＶ－１８では０．７１（９５％ＣＩ：０．６２、０．８１）であった。したがって、１群の３群に対する抗ＨＰＶ ＧＭＲの両側９５％ＣＩの下限は、ＨＰＶ－６では０．７２、ＨＰＶ－１１では０．７４、ＨＰＶ－１６では０．６８、ＨＰＶ－１８では０．６２であった。０．６７（ＧＭＲの両側９５％ＣＩの下限）である１．５倍の判断基準は、９５％ＣＩの下限が０．６２であったＨＰＶ－１８を除いて、すべてのＨＰＶ抗原について満たされた。
ワクチン処置３の二価ｒＬＰ２０８６用量から１カ月後の、二価ｒＬＰ２０８６＋ＧＡＲＤＡＳＩＬ群の二価ｒＬＰ２０８６＋食塩水群に対するＧＭＲは、Ａ２２で０．９２（９５％ＣＩ：０．８５、１．００）、Ｂ２４で０．９２（９５％ＣＩ：０．８４、１．０１）であった。１群の２群に対するｈＳＢＡ ＧＭＲの両側９５％ＣＩの下限は、Ａ２２で０．８５、Ｂ２４で０．８４であり、両方とも０．６７より大きく、したがって、１．５倍の非劣性限界を満たした。
ワクチン処置３から１カ月後の２種の主要ＭｎＢ株（Ａ２２およびＢ２４）についてのｈＳＢＡ力価４倍応答率を分析することにより、二価ｒＬＰ２０８６＋ＧＡＲＤＡＳＩＬ（１群）投与からのデータを、二価ｒＬＰ２０８６＋食塩水（２群）投与からのデータと比較した。ベースラインからワクチン処置３の１カ月後までに、２種の主要ＭｎＢ株について、ｈＳＢＡ力価の上昇が４倍以上に達する対象の割合を、二価ｒＬＰ２０８６＋ＧＡＲＤＡＳＩＬを与えた１群対象、および二価ｒＬＰ２０８６＋食塩水を与えた２群対象の両方について測定した。１群の対象のうち、８５．３％が、Ｂ２４に対してｈＳＢＡ力価の４倍以上の上昇を示した。２群の対象のうち、８６．４％が、Ａ２２に対してｈＳＢＡ力価の４倍以上の上昇を示し、８４．８％が、Ｂ２４に対してｈＳＢＡ力価の４倍以上の上昇を示した。
ワクチン処置３から１カ月後の１群と２群の応答者の割合の差は、Ａ２２では－１．１％（９５％ＣＩ：－４．６、２．３）およびＢ２４では－１．４％（９５％ＣＩ：－５．１、２．３）であった。４倍応答率の差は、すべてほぼ１％の値であり、割合の差の９５％ＣＩの下限は、Ａ２２で－４．６％、Ｂ２４で－５．１％であった。
二価ｒＬＰ２０８６＋ＧＡＲＤＡＳＩＬを食塩水＋ＧＡＲＤＡＳＩＬまたは二価ｒＬＰ２０８６＋食塩水と比較する非劣性判断基準では、ワクチン処置３から１カ月後の、４種すべてのＨＰＶ抗原（ＨＰＶ－６、ＨＰＶ－１１、ＨＰＶ－１６、およびＨＰＶ－１８）についてのＨＰＶに対する抗体のＧＭＲ、および２種の主要ＭｎＢ試験株（Ａ２２およびＢ２４）を使用してのｈＳＢＡ力価に関して、両側９５％ＣＩの下限が、０．６７を超えることが必要であった。この所定の判断基準は、両方のＭｎＢ試験株、および４種のうち少なくとも３種のＨＰＶ抗原について満たされた。ＨＰＶ－１８については、ＧＭＲの両側ＣＩの下限が０．６２で、所定の閾値である０．６７をわずかに下回った。
２種の主要ＭｎＢ試験株（Ａ２２およびＢ２４）に対する４倍上昇応答は、二価ｒＬＰ２０８６＋ＧＡＲＤＡＳＩＬを与えた群と二価ｒＬＰ２０８６＋食塩水を与えた群とで似通っていた（８３．４％～８６．４％の範囲であった）。
ワクチン処置前（すなわち、ワクチン処置１の前の）ｈＳＢＡ力価が１：４以上である、１群および２群の対象の割合は、菌株Ａ２２ではそれぞれ１５．２％および１８．８％、菌株Ａ５６ではそれぞれ１０．４％および１０．５％、菌株Ｂ２４ではそれぞれ６．１％および８．４％、菌株Ｂ４４ではそれぞれ１．７％および３．２％であった。加えて、ワクチン処置前ｈＳＢＡ力価が１：１６以上である１群および２群の対象の割合は、菌株Ａ２２ではそれぞれ１３．７％および１６．４％、菌株Ａ５６ではそれぞれ９．０％および９．１％、菌株Ｂ２４ではそれぞれ４．１％および５．４％、菌株Ｂ４４ではそれぞれ１．２％および２．１％であった。
２群（二価ｒＬＰ２０８６＋食塩水）において、ワクチン処置２から１カ月後、ｈＳＢＡ力価が１：４以上である対象の割合は、Ａ２２で８６．３％、Ａ５６で９８．７％、Ｂ２４で７７．１％、Ｂ４４で６０．１％であった。ワクチン処置３から１カ月後、ｈＳＢＡ力価が１：４以上である対象の割合は、Ａ２２で９６．４％、Ａ５６で９９．４％、Ｂ２４で９２．８％、Ｂ４４で８６．５％であった。１群（二価ｒＬＰ２０８６＋ＧＡＲＤＡＳＩＬ）では、ワクチン処置２から１カ月後の、ｈＳＢＡ力価が１：４以上である対象の割合は、Ａ２２で８３．８％、Ａ５６で９７．８％、Ｂ２４で７１．９％、Ｂ４４で５７．７％であった。ワクチン処置３から１カ月後、ｈＳＢＡ力価が１：４以上である対象の割合は、Ａ２２で９４．３％、Ａ５６で９９．１％、Ｂ２４で９１．１％、Ｂ４４で８４．４％であった。
２群（二価ｒＬＰ２０８６＋食塩水）において、ワクチン処置２から１カ月後、ｈＳＢＡ力価が１：１６以上である対象の割合は、Ａ２２で８５．８％、Ａ５６で９８．４％、Ｂ２４で６８．８％、Ｂ４４で４９．９％であった。ワクチン処置３から１カ月後、ｈＳＢＡ力価が１：１６以上である対象の割合は、Ａ２２で９６．３％、Ａ５６で９９．４％、Ｂ２４で８９．２％、Ｂ４４で８２．４％であった。１群（二価ｒＬＰ２０８６＋ＧＡＲＤＡＳＩＬ）では、ワクチン処置２から１カ月後の、ｈＳＢＡ力価が１：１６以上である対象の割合は、Ａ２２で８３．０％、Ａ５６で９７．２％、Ｂ２４で６５．２％、Ｂ４４で４６．４％であった。ワクチン処置３から１カ月後、ｈＳＢＡ力価が１：１６以上である対象の割合は、Ａ２２で９４．０％、Ａ５６で９８．９％、Ｂ２４で８６．３％、Ｂ４４で７８．０％であった。
１群および２群両方について、２または３用量の二価ｒＬＰ２０８６の後、高い割合の対象が、１：１６以上またはそれを超えるｈＳＢＡ力価に達したが、対象の大部分は、ワクチン処置前訪問１の時点では、主要ＭｎＢ試験株のいずれに対しても、測定可能なｈＳＢＡ力価を伴わなかった。
評価可能なベースラインＨＰＶ血清陰性免疫原性集団に関して、ワクチン処置３のＧＡＲＤＡＳＩＬ用量から１カ月後に、ＨＰＶ抗原について、ＨＰＶ抗体陽転の所定の判断基準に達する対象の割合は、二価ｒＬＰ２０８６＋ＧＡＲＤＡＳＩＬ群（１群）および食塩水＋ＧＡＲＤＡＳＩＬ群（３群）について、次のとおりであった。ＨＰＶ－６（それぞれ９９．４％および９９．３％）、ＨＰＶ－１１（それぞれ９９．６％および９９．５％）、ＨＰＶ－１６（それぞれ９９．６％および９９．５％）、ＨＰＶ－１８（それぞれ９９．５％および９９．０％）。
ＧＡＲＤＡＳＩＬ用量から１カ月後の、二価ｒＬＰ２０８６＋ＧＡＲＤＡＳＩＬ群（１群）と食塩水＋ＧＡＲＤＡＳＩＬ群（３群）の応答者の割合の差は、ＨＰＶ－６では０．１％（９５％ＣＩ：－０．９、１．５）、ＨＰＶ－１１では０．１％（９５％ＣＩ：－０．７、１．３）、ＨＰＶ－１６では０．１％（９５％ＣＩ：－０．７、１．３）、ＨＰＶ－１８では０．５％（９５％ＣＩ：－０．６、１．９）であった。
二価ｒＬＰ２０８６＋ＧＡＲＤＡＳＩＬ群（１群）と食塩水＋ＧＡＲＤＡＳＩＬ群（３群）について、抗体陽転率の差は、４種すべてのＨＰＶ抗原にわたって０．１％および０．５％以内であり、群を越えて、抗体陽転率は非常に似通っており、９９％を超える対象が、４種すべてのＨＰＶ抗原について抗体陽転していた。
付加的な評価として、ワクチン処置３から１カ月後の２種の主要ＭｎＢ株（Ａ２２およびＢ２４）についてのｈＳＢＡ力価４倍応答率を分析することにより、二価ｒＬＰ２０８６＋ＧＡＲＤＡＳＩＬ（１群）を二価ｒＬＰ２０８６＋食塩水（２群）と比較した。ベースラインからワクチン処置３の１カ月後までに、２種の主要ＭｎＢ株について、ｈＳＢＡ力価の上昇が４倍以上に達する対象の割合は、次のとおりである。すなわち、１群の対象のうち、８５．３％が、試験株Ａ２２に対して４倍以上のｈＳＢＡ力価の上昇を示し、８３．４％が、試験株Ｂ２４に対して４倍以上のｈＳＢＡ力価の上昇を示した。２群の対象のうち、８６．４％が、試験株Ａ２２に対して４倍以上のｈＳＢＡ力価の上昇を示し、８４．８％が、試験株Ｂ２４に対して４倍以上のｈＳＢＡ力価の上昇を示した。
ワクチン処置３から１カ月後の１群と２群の応答者の割合の差は、Ａ２２では－１．１％（９５％ＣＩ：－４．６、２．３）、Ｂ２４では－１．４％（９５％ＣＩ：－５．１、２．３）であった。４倍応答率の差は、すべてほぼ１％の値であり、割合の差の９５％ＣＩの下限は、－４．６％（Ａ２２）および－５．１％（Ｂ２４）であった。
二価ｒＬＰ２０８６に対する免疫応答。この試験の別の目的は、２種がＬＰ２０８６サブファミリーＡタンパク質（Ａ２２およびＡ５６）を発現し、２種がＬＰ２０８６サブファミリーＢタンパク質（Ｂ２４およびＢ４４）を発現する４種の主要ＭｎＢ試験株で実施したｈＳＢＡによって測定される、２回目の訪問から１カ月後（訪問３）および二価ｒＬＰ２０８６での３回目のワクチン処置から１カ月後（訪問５）に測定した免疫応答について記載することであった。
この目的のための評価項目の一つは、ワクチン処置２から１カ月後（訪問３）およびワクチン処置３から１カ月後（訪問５）に、４種の主要ＭｎＢ試験株それぞれについて、ｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ以上である対象の割合とした。評価可能な免疫原性集団に関して、４種の主要ＭｎＢ試験株それぞれについて、ｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ以上である対象の割合を評価した。Ａ２２についてのＬＬＯＱは、１：１６に相当するｈＳＢＡ力価であり、他のすべてのＭｎＢ試験株についてのＬＬＯＱは、１：８に相当するｈＳＢＡ力価であった。
２群（二価ｒＬＰ２０８６＋食塩水）について、ベースライン時（ワクチン処置１の前）にｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ以上である対象の割合は、Ａ２２では１６．４％、Ａ５６では９．３％、Ｂ２４では６．９％、Ｂ４４では２．５％であった。２群について、ワクチン処置２から１カ月後およびワクチン処置３から１カ月後に、ｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ以上に達する対象の割合は、Ａ２２ではそれぞれ８５．８％および９６．３％、Ａ５６ではそれぞれ９８．５％および９９．４％、Ｂ２４ではそれぞれ７４．２％および９２．６％、Ｂ４４ではそれぞれ５７．１％および８５．７％であった。
１群（二価ｒＬＰ２０８６＋ＧＡＲＤＡＳＩＬ）について、ベースライン時（ワクチン処置１の前）にｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ以上である対象の割合は、Ａ２２では１３．７％、Ａ５６では９．２％、Ｂ２４では５．１％、Ｂ４４では１．４％であった。１群について、ワクチン処置２から１カ月後およびワクチン処置３から１カ月後に、ｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ以上に達する対象の割合は、Ａ２２ではそれぞれ８３．０％および９４．０％、Ａ５６ではそれぞれ９７．５％および９８．９％、Ｂ２４ではそれぞれ７０．６％および９０．５％、Ｂ４４ではそれぞれ５４．５％および８２．７％であった。
ワクチン処置２から１カ月後に、１群および２群両方の対象の間で、４種の主要ＭｎＢ試験株に対して実質的なｈＳＢＡ応答が認められ、ワクチン処置３から１カ月後に追加の増大が認められた。
評価可能な免疫原性集団に関して、４種の主要ＭｎＢ試験株それぞれについてｈＳＢＡ力価の上昇が４倍以上に達する対象の割合、および複合応答を実現する対象の割合を評価した。ベースライン時（ワクチン処置１の前）に混合した４種すべてのＭｎＢ株について、ＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価が認められた対象の割合は、１群（０．３％）と２群（０．７％）とで似通っていた。
２群（二価ｒＬＰ２０８６＋食塩水）について、ベースラインからワクチン処置３の１カ月後までに、ｈＳＢＡ力価の上昇が４倍以上に達する対象の割合は、Ａ２２では８６．４％、Ａ５６では９５．３％、Ｂ２４では８４．８％、Ｂ４４では８０．７％であり、８３．９％の対象が、複合ｈＳＢＡ応答を実現した（混合した４種すべての主要菌株についてｈＳＢＡがＬＬＯＱ以上）。ワクチン処置２から１カ月後、ベースラインからのｈＳＢＡ力価の上昇が４倍以上に達する対象の割合は、Ａ２２では７４．２％、Ａ５６では９２．６％、Ｂ２４では６３．４％、Ｂ４４では４７．４％であり、５１．９％の対象が、複合ｈＳＢＡ応答を実現した。
１群（二価ｒＬＰ２０８６＋食塩水）について、ベースラインからワクチン処置３の１カ月後までに、ｈＳＢＡ力価の上昇が４倍以上に達する対象の割合は、Ａ２２で８６．４％、Ａ５６で９５．３％、Ｂ２４で８４．８％、Ｂ４４で８０．７％であり、８３．９％の対象が、複合ｈＳＢＡ応答を実現した（混合した４種すべての主要菌株についてｈＳＢＡがＬＬＯＱ以上）。ワクチン処置２から１カ月後、ベースラインからのｈＳＢＡ力価の上昇が４倍以上に達する対象の割合は、Ａ２２では７４．２％、Ａ５６では９２．６％、Ｂ２４では６３．４％、Ｂ４４では４７．４％であり、５１．９％の対象が、複合ｈＳＢＡ応答を実現した。
追加のｈＳＢＡ応答倍率。他の評価項目は、ベースラインから各ワクチン処置後血液採取訪問までに、４種の主要ＭｎＢ株それぞれについて、ｈＳＢＡ力価の増大が少なくとも２倍および３倍に達する対象の割合とした。Ａ２２についてのＬＬＯＱは、１：１６に相当するｈＳＢＡ力価であり、他のすべてのＭｎＢ試験株についてのＬＬＯＱは、１：８に相当するｈＳＢＡ力価であったことを留意されたい。
１群および２群について、ベースラインからワクチン処置２の１カ月後までに、ＭｎＢ株についてのｈＳＢＡ力価の上昇が２倍以上に達する対象の割合は、Ａ２２ではそれぞれ７７．３％および８１．１％、Ａ５６ではそれぞれ９４．４％および９５．３％、Ｂ２４ではそれぞれ６３．０％および６６．０％、Ｂ４４ではそれぞれ４６．１％および４８．６％であった。１群および２群について、ベースラインからワクチン処置３の１カ月後までに、ＭｎＢ株についてのｈＳＢＡ力価の上昇が２倍以上に達する対象の割合は、Ａ２２ではそれぞれ９０．２％および９２．８％、Ａ５６ではそれぞれ９７．２％および９７．９％、Ｂ２４ではそれぞれ８４．６％および８７．２％、Ｂ４４ではそれぞれ７７．７％および８１．７％であった。
１群および２群について、ベースラインからワクチン処置２の１カ月後までに、ＭｎＢ株についてのｈＳＢＡ力価の上昇が３倍以上に達する対象の割合は、Ａ２２ではそれぞれ７３．１％および７４．２％、Ａ５６ではそれぞれ９２．５％および９２．６％、Ｂ２４ではそれぞれ６１．３％および６３．４％、Ｂ４４ではそれぞれ４５．７％および４７．４％であった。１群および２群について、ベースラインからワクチン処置３の１カ月後までに、ＭｎＢ株についてのｈＳＢＡ力価の上昇が３倍以上に達する対象の割合は、Ａ２２ではそれぞれ８５．３％および８６．４％、Ａ５６ではそれぞれ９５．０％および９５．３％、Ｂ２４ではそれぞれ８３．４％および８４．８％、Ｂ４４ではそれぞれ７７．０％および８０．７％であった。
目的に沿った記述的な評価項目の概要において、対象の大半は、１群（二価ｒＬＰ２０８６＋ＧＡＲＤＡＳＩＬ）および２群（二価ｒＬＰ２０８６＋食塩水）の両方について、４種すべての主要ＭｎＢ試験株についてのｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ以上に達し、ベースライン（ワクチン処置前訪問１）の時点では、非常に少ない割合の対象しか、測定可能なＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を伴わなかった。１群および２群両方の対象について、ワクチン処置２から１カ月後に、４種のＭｎＢ株で実質的な免疫応答が認められ、ワクチン処置３から１カ月後に、追加の増大が認められた。この結論は、３用量の後にｈＳＢＡ力価が１：１６以上である対象の割合、両方の群において２用量の後および３用量の後に得られたＧＭＴ実測値、ならびに４種の主要ＭｎＢ試験株についてのＲＣＤＣによって確認された。
１群および２群両方について、高い割合の対象が、３回目の試験ワクチン処置の後、主要ＭｎＢ試験株それぞれについては４倍以上のｈＳＢＡ力価の上昇、および４種すべての主要ＭｎＢ株についてはＬＬＯＱ以上の複合ｈＳＢＡ応答を実現した。
加えて、１群（二価ｒＬＰ２０８６＋ＧＡＲＤＡＳＩＬ）および２群（二価ｒＬＰ２０８６＋食塩水）の両方について、対象の大半が、すべてのサンプル採取時点で、４種の主要ＭｎＢ株について、３倍以上のｈＳＢＡ力価の上昇および２倍以上のｈＳＢＡ力価の上昇を実現した。こうした判断基準を満たす結果となった対象の割合は、３回のワクチン処置の後の方が、２回のワクチン処置と比べて高かった。
これらの結果は、ＨＰＶワクチンであるＧＡＲＤＡＳＩＬと共投与したときの二価ｒＬＰ２０８６に対する免疫応答が、二価ｒＬＰ２０８６＋食塩水に対する免疫応答に匹敵する活発な免疫応答になるという証拠の裏付けとなる。
ＨＰＶ ＧＭＴ。実施例８の表Ｂに、評価可能な免疫原性集団の１群（二価ｒＬＰ２０８６＋ＧＡＲＤＡＳＩＬ）および３群（食塩水＋ＧＡＲＤＡＳＩＬ）について、ワクチン処置３から１カ月後の、４種のＨＰＶ抗原それぞれについてのＧＭＴおよび対応するＣＩを示す。
３群について、ベースライン時（ワクチン処置１の前）およびワクチン処置３から１カ月後のＨＰＶ ＧＭＴは、ＨＰＶ－６ではそれぞれ６．０および５５０．３、ＨＰＶ－１１ではそれぞれ４．３および１０８４．３、ＨＰＶ－１６ではそれぞれ６．１および４７６３．４、ＨＰＶ－１８ではそれぞれ５．３および１０４７．４であった。１群（二価ｒＬＰ２０８６＋ＧＡＲＤＡＳＩＬ）について、ベースライン時（ワクチン処置１の前）およびワクチン処置３から１カ月後のＨＰＶ ＧＭＴは、ＨＰＶ－６についてはそれぞれ５．８および４５１．８、ＨＰＶ－１１についてはそれぞれ４．２および８９２．９、ＨＰＶ－１６についてはそれぞれ５．８および３６９５．４、ＨＰＶ－１８についてはそれぞれ５．２および７４４．０であった。全体として、ＧＭＴは、３群の方が１群と比べて数値が高かった。ＨＰＶ－６、ＨＰＶ－１１、ＨＰＶ－１６、およびＨＰＶ－１８についての力価の分布を示す逆累積分布曲線（ＲＣＤＣ）を、評価可能な免疫原性集団に関して、すべてのサンプル採取時点において、１群（二価ｒＬＰ２０８６＋ＧＡＲＤＡＳＩＬ）および３群（食塩水＋ＧＡＲＤＡＳＩＬ）について評価した。ＲＣＤＣは、１群および３群両方について、ワクチン処置３の後の対象の間で、活発な免疫応答を示した。
ＧＡＲＤＡＳＩＬに対する免疫応答の概要。ＨＰＶ抗原に対するＧＭＴは、３群（食塩水＋ＧＡＲＤＡＳＩＬ）の方が１群（二価ｒＬＰ２０８６＋ＧＡＲＤＡＳＩＬ）と比べて数値が高く、ワクチン処置３の後に認められたＨＰＶ ＧＭＴは、両方の群について活発な免疫応答を示すものであった。ＲＣＤＣでも、１群および３群両方について、ワクチン処置３の後の活発な免疫応答が裏付けられた。このことは、４種のＨＰＶ抗原について血清陽性状態である対象の割合が、ワクチン処置３から１カ月後、両方に群について、９９％を超えていたことによっても裏付けられた。より年少の亜群は、３群（食塩水＋ＧＡＲＤＡＳＩＬ）において、より年長の亜群よりＨＰＶ ＧＭＴが高かった。この差は、ＧＡＲＤＡＳＩＬを二価ｒＬＰ２０８６と同時に与えたときも維持された。
免疫原性の結論。二価ｒＬＰ２０８６＿ＧＡＲＤＡＳＩＬを食塩水＋ＧＡＲＤＡＳＩＬまたは二価ｒＬＰ２０８６＋食塩水と比較する非劣性判断基準では、ワクチン処置３から１カ月後の、４種すべてのＨＰＶ抗原（ＨＰＶ－６、ＨＰＶ－１１、ＨＰＶ－１６、およびＨＰＶ－１８）についてのＨＰＶに対する抗体の力価幾何平均値比（ＧＭＲ）、および２種の主要ＭｎＢ試験株（Ａ２２およびＢ２４）を使用してのｈＳＢＡ力価に関して、両側９５％ＣＩの下限が、０．６７を超えることが必要であった。この所定の閾値は、両方のＭｎＢ株および４種のうち３種のＨＰＶ抗原について満たされた。ＨＰＶ－１８については、ＧＭＲについての両側９５％ＣＩの下限が０．６２で、所定の閾値である０．６７をわずかに下回った。
ＧＡＲＤＡＳＩＬを二価ｒＬＰ２０８６または食塩水と同時に与えた群の対象の９９％以上が、４種すべてのＨＰＶ抗原についての抗体陽転を実現した。４種すべてのＨＰＶ抗原についてのＲＣＤＣは、対象の大半が、ワクチン処置３から１カ月後に、抗体陽転閾値を上回る応答を実現したことを示している。ＧＡＲＤＡＳＩＬを与えた両方の群について、ベースラインより強いＧＭＴが認められた。
２種の主要ＭｎＢ試験株（Ａ２２およびＢ２４）に対する４倍上昇応答は、二価ｒＬＰ２０８６＋ＧＡＲＤＡＳＩＬを与えた群（それぞれ８５．３％および８３．４％）と二価ｒＬＰ２０８６＋食塩水を与えた群（それぞれ８６．４％および８４．８％）とで似通っていた（８３．４％～８６．４％の範囲であった）。
４種の主要ＭｎＢ試験株（Ａ２２、Ａ５６、Ｂ２４、およびＢ４４）を使用して、二価ｒＬＰ２０８６に対する応答の別の記述的分析を実施した。評価可能な免疫原性集団に関して、ＧＡＲＤＡＳＩＬ（二価ｒＬＰ２０８６＋ＧＡＲＤＡＳＩＬ）または食塩水（二価ｒＬＰ２０８６＋食塩水）のいずれかと同時に二価ｒＬＰ２０８６を与えた両方の群について、ワクチン処置２または３から１カ月後、高い割合の対象が、ｈＳＢＡ力価の４倍以上の上昇および複合応答（４種すべての主要ＭｎＢ試験株、および第三相臨床プログラムで使用されるのと同じ免疫原性／有効性評価項目規定）を実現した。こうした応答は、Ｂ血清型疾患を始めとする髄膜炎菌疾患に対する防御との相互関係が実証されている、１：４以上のｈＳＢＡ力価より実質的に高い。これらの結果からも、食塩水と一緒に投与されようと、ＧＡＲＤＡＳＩＬと同時投与されようと、二価ｒＬＰ２０８６に対する活発な免疫応答の証拠が示唆され、裏付けられる。
結論：データは、ｒＬＰ２０８６＋ＨＰＶ４の同時投与の後、両方のワクチンに対する活発な免疫応答が生じたことを示している。所定の非劣性判断基準は、６種のうち５種の抗原について満たされた。ＨＰＶ－１８に対するＧＭＲは、非劣性判断基準に僅差で届き損ねたが、応答者の割合が高い（９９％以上）ことは、同時投与の後、臨床的有効度の維持が予想されることを示唆している。二価ｒＬＰ２０８６は、十分に忍容され、ワクチン中のｆＨＢＰと非相同のｆＨＢＰを発現する試験株に対して活発な免疫応答を惹起した。
Figure 0007337107000010
Figure 0007337107000011
（実施例９）
二価ＲＬＰ２０８６ワクチンの有効性
侵襲性の髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ（ＭｎＢ）株に対する血清殺菌抗体応答の有効性および実証の代理としてｈＳＢＡ応答を使用して、二価ｒＬＰ２０８６の有効性を推測した。
侵襲性髄膜炎菌疾患（ＩＭＤ）を引き起こす菌株を代表する４種のＭｎＢ株を、評価において使用した。各ＭｎＢ試験株は、ワクチン成分（Ａ０５およびＢ０１）と非相同である（異なる）ｆＨＢＰタンパク質変異体（Ａ２２、Ａ５６、Ｂ２４、またはＢ４４）を発現する。
米国およびヨーロッパにおける１１才から１８才の４４５９人の青年で行った３種類の無作為化対照第ＩＩ相試験において、二価ｒＬＰ２０８６の有効性を評価した。実施例６も参照されたい。合計２２９３人に、０、２、および６カ月のワクチン処置スケジュールを使用して、１２０μｇの二価ｒＬＰ２０８６を少なくとも１用量与えた。二価ｒＬＰ２０８６でワクチン処置した対象においてｈＳＢＡ免疫応答を評価することにより、有効性を評価した。
５つの副主要免疫原性評価項目を使用して、有効性を推測した。５つのうち４つの副主要評価項目では、所定の割合の対象が、３用量の二価ｒＬＰ２０８６の後、４種のＭｎＢ試験株それぞれに対して、ｈＳＢＡ力価の４倍の上昇に達する必要があった。５つ目の副主要評価項目は、３用量の二価ｒＬＰ２０８６の後、所定の高い割合の対象が、主要ＭｎＢ試験株を用いた４種類すべてのｈＳＢＡにおいてそれぞれ応答することが求められる、複合評価項目であった。ワクチンの３回目用量から１カ月後、ｈＳＢＡ力価が定量下限（ＬＬＯＱ）以上に達した対象の割合に基づく免疫応答も評価した。ＬＬＯＱは、測定することのできる、サンプル中の抗体の最低量であると定める。
試験１（実施例７および実施例８に記載）は、１１才から１７才の２４９９人の米国人対象を、３つの群、すなわち、二価ｒＬＰ２０８６＋ＨＰＶ４が与えられる１群、二価ｒＬＰ２０８６＋食塩水が与えられる２群、および食塩水＋ＨＰＶ４が与えられる３群のうちの１つに（２：２：１の比で）無作為に割り当てた、第ＩＩ相無作為化実薬対照観察者盲検多施設試験であった。ワクチン処置はすべて、０、２、および６カ月スケジュールで投与した。
試験２（実施例４に記載）は、１１才から１８才の７５３人のヨーロッパ人対象を、２つの群、すなわち、０、２、および６カ月の時点で二価ｒＬＰ２０８６、０カ月の時点でｄＴａＰ－ＩＰＶ（ジフテリア、破傷風、無細胞百日咳－不活化ポリオウイルス）が与えられる１群と、０、２、および６カ月の時点で食塩水、０カ月の時点でｄＴａＰ－ＩＰＶが与えられる２群とに、１：１の比で無作為に割り当てた、第ＩＩ相無作為化偽薬対照単盲検試験であった。
試験３（実施例５に記載）は、１１才から１８才の１７１３人のヨーロッパ人対象を、３：３：３：２：１の比で５つの群に無作為に割り当てた、第ＩＩ相無作為化偽薬対照単盲検多施設試験であった。対象には、０、１、および６カ月スケジュール（１群）、０、２、および６カ月スケジュール（２群）、０および６カ月スケジュール（３群）、０および２カ月スケジュール（４群）、または０および４カ月スケジュール（５群）で投与される２または３用量の二価ｒＬＰ２０８６を与えた。各群において食塩水注射（群に応じて１または２用量）を投与して、盲検化を維持した。
０、２、および６カ月の時点で一連の３用量の二価ｒＬＰ２０８６を与えた対象の間での試験１、２および３の結果は、それぞれの実施例４～８において上述している。４倍および複合応答率の評価を、すべての試験の調査評価項目とした。４倍応答率は、４つすべての評価項目の９５％信頼区間（ＣＩ）の下限が、３つの試験間で似通っており、一貫して第ＩＩＩ相評価項目の限界値に達したことを示した。ｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ以上に達する対象の割合は、３つの試験すべてにわたって似通っていた。
１または２カ月空けて与えた２回のワクチン投与の後に得たｈＳＢＡデータによると、こうした間隔で投与された２用量のワクチンは、髄膜炎菌Ｂ血清型疾患の事例に触れる潜在的可能性があるために、リスクが高まっている個体の防御となりうる。１または２カ月空けて送達された２回のワクチン投与の後に認められた応答は、一定割合の対象が、４種の主要試験株それぞれについてＬＬＯＱ値以上のｈＳＢＡレベルを示したことを示すものであった（１群および２群についての試験１の結果、１群についての試験２の結果、２群についての試験３の結果を参照されたい）。６カ月の時点で投与される３回目用量のワクチンによって、ワクチンを介した防御を実現することができる。
同時ワクチン投与。試験１（実施例７および実施例８に記載）では、米国人青年において二価ｒＬＰ２０８６とＨＰＶ４の同時使用を評価した。試験評価項目には、４種のＨＰＶ４抗原（力価幾何平均値［ＧＭＴ］に基づく）、および二価ｒＬＰ２０８６（２種のＭｎＢ試験株［変異体Ａ２２およびＢ２４］を使用するｈＳＢＡに基づく）についての、３回目のワクチン処置から１カ月後の免疫応答の非劣性評価を含めた。ＨＰＶ４免疫応答は、４種のＨＰＶ抗原それぞれについての抗体陽転によっても評価した。
試験１では、ＨＰＶ抗原に対する抗体の力価幾何平均値（ＧＭＴ）の、１群（二価ｒＬＰ２０８６＋ＨＰＶ４）と３群（食塩水＋ＨＰＶ４）についての比較を、その対応する１群と３群のＧＭＴ比（ＧＭＲ）、およびその比の両側９５％ＣＩと共に示す。試験１では、２種の主要ＭｎＢ試験株に対するｈＳＢＡ ＧＭＴの、１群と２群についての比較も、その対応する１群と２群のＧＭＲ、およびその比の両側９５％ＣＩと共に示す。非劣性限界の判断基準は、ＧＭＲの両側９５％ＣＩの下限では０．６７の値に相当する、１．５倍とした。０．６７である１．５倍判断基準は、９５％信頼区間（ＣＩ）の下限が０．６２であったＨＰＶ－１８を除いて、すべてのＭｎＢ試験株およびＨＰＶ抗原について満たされた。ＨＰＶ－１８に対する応答は、所定の非劣性判断基準に届かなかったが、差はほんのわずかであった。別の分析では、食塩水＋ＨＰＶ４および二価ｒＬＰ２０８６＋ＨＰＶ４の両方の群で、９９％以上の対象が、４種すべてのＨＰＶ抗原に対して抗体陽転した。
（実施例１０）
二価ｒＬＰ２０８６によって、流行型でアウトブレイクと関連するｆＨＢＰ変異体を発現するＭｎＢ株を広範にカバーする抗体が、個体において惹起される。
ヒト補体を使用する血清殺菌検定（ｈＳＢＡ）において測定される殺菌性抗体は、髄膜炎菌疾患の防御と互いに関連付けられており、ｈＳＢＡ応答は、ワクチン有効性の代用として、日常的に使用されている。ｆＨＢＰ多様性の世界規模での疫学調査により、髄膜炎菌疾患の約８０％が、１０種の流行型ｆＨＢＰ変異体のうちの１種を発現する菌株によって引き起こされることが明らかになった。
方法：米国およびヨーロッパにおいて最も流行型の１０種のｆＨＢＰ変異体（Ｂ２４、Ｂ１６、Ｂ４４、Ａ２２、Ｂ０３、Ｂ０９、Ａ１２、Ａ１９、Ａ０５、およびＡ０７）を発現する髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ（ＭｎＢ）株に対するｈＳＢＡ応答を、二価ｒＬＰ２０８６で免疫処置した個々のヒト対象において評価した。こうした最も流行型の１０種の変異体を発現するＭｎＢ株は、ｆＨＢＰ多様性の幅を表すものであり、ＭｎＢ ＳＢＡ菌株プールおよびＭｎＢ ＳＢＡ菌株プールの米国亜集団のそれぞれ９８％および９７％を超える菌株（亜群別）を代表するものである、６種の主要なｆＨＢＰ亜群のうちの５種を含む。２３種のＭｎＢ試験株は、２０００年～２００６年の間に米国およびヨーロッパから系統的に収集した菌株の典型である、ＰｆｉｚｅｒのＭｎＢ ＳＢＡ菌株プール（Ｎ＝１２６３）から入手した。加えて、最近のＭｎＢ疾患アウトブレイクからの分離株を分析に含めた。対応させたワクチン処置前とワクチン処置後血清（用量２の後および用量３の後）を、臨床試験Ｂ１９７１００５、Ｂ１９７１０１２、またはＢ１９７１００３に登録された青年および若年成人対象から無作為に取得した。
二価ｒＬＰ２０８６でのワクチン処置によってもたらされる潜在的なカバー範囲を裏付ける追加情報を得るために、アウトブレイク株、および二価ｒＬＰ２０８６で免疫処置した９人の対象からの血清サンプルを用いて、ｈＳＢＡを実施した（実施例５および実施例６に記載の臨床試験Ｂ１９７１０１２）。対象（１１才～１９才未満）には、０、２、および６カ月の時点で３用量の二価ｒＬＰ２０８６を与えておいた。保存的なｈＳＢＡ評価を確保するために、９人の対象は、主要ＭｎＢ試験株に対してベースラインｈＳＢＡ活性を伴わない組の対象から偏りなく選択した。プリンストン大学クローンアウトブレイク株の２種（ＰＭＢ５０２１およびＰＭＢ５０２５）およびＵＣＳＢアウトブレイク株の２種（２つの遺伝子クラスターのそれぞれから１種、ＰＭＢ４４７８およびＰＭＢ４４７９）を試験した。
プリンストン大学クローンＭｎＢアウトブレイク株の遺伝子特性決定は、次のとおりである。データから、プリンストン大学アウトブレイク株がクローンであることが示唆される。菌株はそれぞれ、ＣＣ４１／４４（ＳＴ４０９）と分類され、ｆＨＢＰ変異体Ｂ１５３（配列番号６）を発現した。菌株は、ＮＨＢＡ（２）、ｐｏｒＡ（サブタイプＰ１．５－１，２－２）、およびｐｏｒＢ（３－８２）についてアレルの割当てが同一であり、すべてがｎａｄＡを欠損しており、すべてが同じパルスフィールドゲル電気泳動（ＰＦＧＥ）プロファイルを有していた（４２９）。
２０１３カリフォルニア大学Ｓａｎｔａ Ｂａｒｂａｒａアウトブレイク株の遺伝子特性決定は、次のとおりである。ＵＣＳＢ株は、ＣＣ３２（ＥＴ５、ＳＴ３２）と分類され、ｆＨＢＰ変異体Ｂ２４を発現し、１９９３年以来、非常に地域流行性のＢ血清型疾患と関連付けられているオレゴンクローンと同類である。プリンストンアウトブレイク群の菌株とは異なり、ＵＣＳＢ株は、そのＰＦＧＥプロファイル（４６８または４６７）およびｐｏｒＢ型（３－４６１または３－２４）によって区別された２つの別個のクラスターに遺伝的に分けられる。菌株は、ＮａｄＡ（１）、ＮＨＢＡ（５）、ｐｏｒＡ（サブタイプＰ１．７，１６－２０）についてアレルの割当てが同一であった。
すべての対象およびすべてのアウトブレイク株について、ベースラインのｈＳＢＡ力価は、４未満であり、対象が、二価ｒＬＰ２０８６での免疫処置前に、アウトブレイク株のいずれに対する防御抗体も有していなかったことが示された。
結果：２３種すべてのＭｎＢ株が、二価ｒＬＰ２０８６で免疫処置した個々の対象からの血清を用いたｈＳＢＡにおいて感受性を有した。全１０の流行型ｆＨＢＰ変異体を表す菌株に加えて、追加の菌株も、ｈＳＢＡによってすべて死滅した。ベースラインｈＳＢＡ血清防御率（ｈＳＢＡ力価が１：４以上に達する対象の割合）は、一般に低かった。二価ｒＬＰ２０８６での免疫処置前の対象において、より低い血清防御率が認められたことは、ワクチン処置を受けていない青年または若年成人集団のＭｎＢ疾患に対する脆弱性を典型的に示している。しかし、ワクチン処置後血清を有する青年および若年成人では、活況な血清防御率が認められた。すなわち、試験したＭｎＢ株および集団に応じて、こうした菌株の８３％について、７０％を超える血清防御率が認められた。最も流行型のサブファミリーＡおよびＢ ｆＨＢＰ変異体であるＢ２４およびＡ２２を発現する菌株についてのワクチン処置後血清防御率は、８１．０％～１００％の範囲であり、ｆＨＢＰ変異体Ｂ２４およびＢ１５３を発現する最近のアウトブレイク株については、７７．８％～１００％の範囲であった。さらに、こうした対象において、すべてのアウトブレイク株に対する（ベースラインと比べて）活発な用量２後応答が、ｈＳＢＡで使用したアウトブレイク株に応じて５６～８９％の範囲で認められた。対照的に、ワクチン処置前の血清防御率は、最近の米国アウトブレイク株について、低い、または検出不可能であった。プリンストン大学およびＵＣＳＢアウトブレイク株に対するｈＳＢＡ応答を図２に示す。
結論：二価ｒＬＰ２０８６は、個体において、米国およびヨーロッパにおける流行型ｆＨＢＰ、ならびに新たに出現する変異体（Ｂ１５３）（配列番号６）を発現する多様な侵襲性ＭｎＢ株に対して活発な血清防御ｈＳＢＡ応答を惹起する。二価ｒＬＰ２０８６での免疫処置後に血清防御応答を示した対象の割合は、ベースライン時に血清防御があった対象の割合を大きく上回った。データは、二価ｒＬＰ２０８６が、最近のアウトブレイクからの疾患を含めた、侵襲性髄膜炎菌Ｂ血清型疾患から、青年および若年成人を幅広く防御する潜在的可能性を有することを裏付けている。
＞Ｂ１５３（配列番号６）
ＣＳＳＧＧＧＧＶＡＡＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＱＳＬＴＬＤＱＳＶＲＫＮＥＫＬＫＬＡＡＱＧＡＥＫＴＹＧＮＧＤＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＶＳＲＦＤＦＩＲＱＩＥＶＤＧＱＬＩＴＬＥＳＧＥＦＱＶＹＫＱＳＨＳＡＬＴＡＬＱＴＥＱＶＱＤＳＥＤＳＧＫＭＶＡＫＲＱＦＲＩＧＤＩＡＧＥＨＴＳＦＤＫＬＰＫＧＧＳＡＴＹＲＧＴＡＦＧＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬＫＳＰＥＬＮＶＤＬＡＡＡＹＩＫＰＤＥＫＨＨＡＶＩＳＧＳＶＬＹＮＱＤＥＫＧＳＹＳＬＧＩＦＧＧＫＡＥＥＶＡＧＳＡＥＶＫＴＶＮＧＩＲＨＩＧＬＡＡＫＱ
（実施例１１）
米国人青年における、ＴｄａｐおよびＭＣＶ４と共投与された、髄膜炎菌血清型Ｂワクチンである二価ｒＬＰ２０８６の免疫原性および安全性
１０才以上１３才未満の健康な対象において、ＭＣＶ４、Ｔｄａｐワクチン、および二価ｒＬＰ２０８６ワクチンの、並行して投与されたときの安全性、忍容性、および免疫原性を評価するための、第二相無作為化実薬対照観察者盲検試験
背景：二価ｒＬＰ２０８６を、米国で推奨されているワクチンと並行投与することで、ワクチンスケジュールの遵守を改善することができる。
目的：ＭＥＮＡＣＴＲＡ（登録商標）［髄膜炎菌Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ－１３５多糖コンジュゲートワクチン（ＭＣＶ４）］およびＡＤＡＣＥＬ（登録商標）［破傷風トキソイド、弱毒化ジフテリアトキソイド、無細胞百日咳ワクチン（Ｔｄａｐ）］のＴＲＵＭＥＮＢＡ（登録商標）［米国で認可された髄膜炎菌Ｂ（ＭｎＢ）ワクチン（二価ｒＬＰ２０８６）］との共投与によって誘発された免疫応答が、ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐまたは二価ｒＬＰ２０８６単独に劣らなかったかどうかを明らかにすること。
計画／方法：１０才以上１３才未満の健康な青年に、ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６、ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ、または二価ｒＬＰ２０８６を与えた。ワクチンと非相同のｆＨＢＰ変異体を発現する２種のＭｎＢ試験株を用いた、ヒト補体を使用する血清殺菌検定（ｈＳＢＡ）によって、二価ｒＬＰ２０８６免疫原性を評価し、多重ＬＵＭＩＮＥＸ検定および／またはウサギＳＢＡによって、ＭＣＶ４／Ｔｄａｐ抗原の免疫原性を評価した。安全性を評価した。
結果：２６４８人の対象に、ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６、ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ、または二価ｒＬＰ２０８６を与えた。並行して与えられたＭＣＶ４、Ｔｄａｐ、および二価ｒＬＰ２０８６に対する免疫応答は、ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐまたは二価ｒＬＰ２０８６単独に対する免疫応答に劣らなかった。ワクチン処置２および３の後、ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６受容者のそれぞれ６２．３～６８．０％および８７．５～９０％が、２種のＭｎＢ試験株に対して所定の血清防御ｈＳＢＡ力価を有し、二価ｒＬＰ２０８６単独でも、同様の応答が誘発された。並行投与によって、局所反応または全身事象は、二価ｒＬＰ２０８６単独に比べて実質的に増加しなかった。
ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐと並行して与えられた二価ｒＬＰ２０８６は、すべての非劣性免疫原性判断基準を満たし、臨床上有意な反応原性の増加もなかった。並行投与と関連する便利さによって、推奨されたスケジュールの遵守が改善される場合もある。
この研究（Ｂ１９７１０１５）では、四価髄膜炎菌多糖コンジュゲート（ＭＣＶ４）ワクチン；破傷風、ジフテリア、および無細胞百日咳（Ｔｄａｐ）ワクチン；および二価ｒＬＰ２０８６の、並行して投与したときの免疫原性を評価した。米国の１０才以上１３才未満の健康な対象における二価ｒＬＰ２０８６の安全性、忍容性、および免疫原性も評価した。認可されたワクチンと共にまたはそれなしで与えたときの二価ｒＬＰ２０８６に対する免疫応答の非劣性を評価するためにｈＳＢＡで使用した２種のＭｎＢ試験株は、米国において最も流行性の高い２種のｆＨＢＰ、すなわちＡ２２およびＢ２４を発現する。
実薬対照として役立てることのできる、安全性、免疫原性、および有効性が実証済みの対ＭｎＢワクチンが存在しなかったため、食塩水を偽薬として使用して、試験を盲検にしておいた。加えて、治験用製品の忍容性プロファイルを説明する安全性の目的に、別のワクチンより食塩水が合致したため、添加剤（アルミニウムなど）を用いた対照ワクチンに対向するものとして、食塩水を不活性対照として選択した。
およそ２６２５人の対象が、米国のおよそ８８箇所でこの研究に参加した（各箇所におよそ３０人の対象）。対象は、３つの群の１つに１：１：１（１群：２群：３群）の比で無作為に割り当てた（表Ａ）。対象には、ワクチン処置訪問（訪問１、３、および５）それぞれの際に治験用製品を与えた。
次のいずれかを訴える対象は、研究に含めないようにした。すなわち、いずれかの髄膜炎菌血清型Ｂワクチンによる、以前のワクチン処置；いずれかのジフテリア、破傷風、または百日咳ワクチンによる、初回試験ワクチン処置から５年以内のワクチン処置；いずれかのＭＣＶ４ワクチンによる、以前のワクチン処置。
Figure 0007337107000012
試験の間、１群および３群の対象には、およそ０、２、および６カ月（それぞれ、訪問１、３、および５）の時点で、左腕に二価ｒＬＰ２０８６を与えた。２群の対象については、およそ０、２、および６カ月（それぞれ、訪問１、３、および５）の時点で、左腕に筋肉内（ＩＭ）注射（０．５ｍＬ）によって食塩水を投与した。３群の対象は、０カ月の時点で、右腕に２回のＩＭ食塩水注射を受けた。ＭＣＶ４およびＴｄａｐワクチンは、０カ月の時点（１群および２群）で、ＩＭ注射によって１回だけ右腕に投与した。訪問６の時点での最後の採血（ワクチン処置３後の採血）に続いて、３群の対象に、ＭＣＶ４およびＴｄａｐワクチンを与えた。
ＭＣＶ４およびＴｄａｐワクチンは、０カ月の時点（１および２群）で、右腕の上腕三角筋に、ＩＭ注射によって１回だけ投与した。ワクチンは、少なくとも５ｃｍ離して投与した。３群の対象には、訪問６の時点で、最後の採血に続いて、ＭＣＶ４およびＴｄａｐワクチンを与えた。
血液サンプル（各およそ２０ｍｌ）は、免疫原性分析のために、ワクチン処置１の直前、ワクチン処置１から２８～４１日後、ワクチン処置２から２８～４２日後、およびワクチン処置３から２８～４２日後に採取した。
使用した二価ｒＬＰ２０８６ワクチンは、ｐＨ６．０の１０ｍＭヒスチジン緩衝食塩水中に、各６０μｇの精製サブファミリーＡ ｒＬＰ２０８６タンパク質（変異体Ａ０５、配列番号１）と精製サブファミリーＢ ｒＬＰ２０８６タンパク質（変異体Ｂ０１、配列番号２）、０．１５Ｍの塩化ナトリウム、２．８のモル比のポリソルベート８０、および安定剤として、リン酸アルミニウム（ＡｌＰＯ４）としての０．２５ｍｇのＡｌ３＋を含有するように製剤された０．５ｍＬの用量とした。
ＭＣＶ４ワクチンは、市販品として入手可能なワクチンである、ＭＥＮＡＣＴＲＡ（登録商標）［髄膜炎菌（Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ－１３５型）多糖ジフテリアトキソイドコンジュゲートワクチン（ＭＣＶ４）］とした。ＭＥＮＡＣＴＲＡは、ＩＭ注射用に０．５ｍＬ用量として供給されている溶液である。このワクチンは、ジフテリアトキソイドタンパク質に個々にコンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ－１３５莢膜多糖抗原を含有する。個々の血清型に特有の複合多糖として存在する４種の髄膜炎菌成分が、最終製剤化ワクチンを構成する。保存剤またはアジュバントは、製造の際に加えられない。各０．５ｍＬ用量は、計算によると２．６６μｇ（０．０００５３２％）未満の残留量のホルムアルデヒドを含有する可能性もある。ＭＥＮＡＣＴＲＡは、透明からわずかに濁った滅菌液体として製造される。各０．５ｍＬ用量のワクチンは、リン酸ナトリウム緩衝等張性塩化ナトリウム溶液中に、およそ４８μｇのジフテリアトキソイドタンパク質担体にコンジュゲートした各４μｇの髄膜炎菌Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ－１３５多糖を含有するように製剤される。
Ｔｄａｐワクチンは、市販品として入手可能なワクチンである、ＡＤＡＣＥＬ（登録商標）（破傷風トキソイド、弱毒化ジフテリアトキソイド、無細胞百日咳ワクチンを吸着させたもの［Ｔｄａｐ］）とした。ＡＤＡＣＥＬは、ＩＭ注射用に０．５ｍＬ用量として供給される。このワクチンは、リン酸アルミニウムに吸着させた破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド、および百日咳抗原の滅菌等張性懸濁液である。各０．５ｍＬ用量は、５Ｌｆの破傷風トキソイド、２Ｌｆのジフテリアトキソイド、および無細胞百日咳抗原（２．５μｇの無毒化百日咳毒素、５μｇの線維状赤血球凝集素、３μｇのパータクチン［ＰＲＮ］、５μｇの線毛２および３型）を含有する。０．５ｍＬ用量あたりの他の成分には、アジュバントとしての１．５ｍｇのリン酸アルミニウム（０．３３ｍｇのアルミニウム）、５μｇ以下の残留ホルムアルデヒド、５０ｎｇ未満の残留グルタルアルデヒド、および（保存剤としてでない）３．３ｍｇ（０．６％ｖ／ｖ）の２－フェノキシエタノールが含まれる。ＡＤＡＣＥＬは、保存剤を含有しない。
注射用滅菌標準食塩水（０．９％塩化ナトリウム）は、０．５ｍＬ用量とした。
二価ｒＬＰ２０８６血清殺菌検定。二価ｒＬＰ２０８６に対する免疫応答を評価するために、検証されたｈＳＢＡで、機能抗体を分析した。このｈＳＢＡでは、補体の媒介によるターゲットＭｎＢ株の死滅をもたらす、ヒト血清中の抗体が測定される。二価ｒＬＰ２０８６での最初のワクチン処置の前、二価ｒＬＰ２０８６での２回目のワクチン処置（訪問３）からおよそ１カ月後、および二価ｒＬＰ２０８６での３回目のワクチン処置（訪問５）からおよそ１カ月後に、１群および３群のすべての対象から得た血清を、菌株ＰＭＢ８０［Ａ２２］およびＰＭＢ２９４８［Ｂ２４］を用いたｈＳＢＡで試験した。
ＭＣＶ４併存ワクチンＳＢＡ。ＭＣＶ４ワクチンに対する免疫応答を評価するために、血清型Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ－１３５を代表する髄膜炎菌株を用いた、ウサギ補体を使用する血清殺菌検定（ｒＳＢＡ）において、機能抗体を分析した。ＭＣＶ４での最初のワクチン処置の前（訪問１）およびＭＣＶ４でのワクチン処置から１カ月後（訪問２）に、１群および２群のすべての対象から得た血清を、これらの検定において使用した。
ＭＣＶ４および他の併存ワクチンについての抗原検出検定。ジフテリア、破傷風、および百日咳抗体応答の評価は、検証および多重化がなされたＬＵＭＩＮＥＸ多重検定（ＭＣＶ４ＬＸＡ）を使用して行った。ＭＣＶ４およびＴｄａｐでの最初のワクチン処置の前（訪問１）およびＭＣＶ４およびＴｄａｐでのワクチン処置から１カ月後（訪問２）に、１群および２群のすべての対象から得た血清を、この検定において使用した。髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ－１３５応答の付加的な評価は、検証済みの多重化ＬＸＡ（Ａ，Ｃ，Ｙ，Ｗ ＬＸＡ）を使用して行った。ＭＣＶ４およびＴｄａｐでの最初のワクチン処置の前（訪問１）およびＭＣＶ４およびＴｄａｐでのワクチン処置から１カ月後（訪問２）に、１群および２群のすべての対象から得た血清を、これらの検定において使用した。
サンプルサイズ。市販のワクチン中の１０種の抗原および２種のＭｎＢ株に対する抗体応答は、独立したものであると仮定した。非劣性限界の判断基準は、１．５倍とした。
分析方法。ＰＭＢ８０（Ａ２２）のＬＬＯＱは、１：１６とし、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）のＬＬＯＱは、１：８とした。Ｔｄａｐ／ＭＣＶ４検定についてのＬＬＯＱは、表Ｂに列挙する。
Figure 0007337107000013
副主要目的（非劣性目的）の分析
ＧＭＴおよびＧＭＣ。ＭｎＢ株であるＰＭＢ８０（Ａ２２）およびＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）については、各血液採取時点（訪問１、４、および６）で測定したｈＳＢＡ力価を、分析用に対数的に変換し、各血液採取時点で、各主要菌株について、また各群について、両側９５％信頼区間（ＣＩ）と共にＧＭＴを算出した。ＣＩは、スチューデントｔ分布に基づき、対数的に変換された検定データの平均について算出された信頼限界の逆変換によって構築した。４種のＭＣＶ４抗原それぞれに対するｒＳＢＡで求められたＧＭＴ、および４種のＭＣＶ４抗原それぞれに対するＬＸＡｓｒで求められたＧＭＣは、訪問１および訪問２の時点で、同様に集計した。Ｔｄａｐワクチンの６種の抗原それぞれに対するＬＸＡによって求められたＧＭＣは、訪問１および訪問２の時点で集計した。
幾何平均比。非劣性仮説を試す目的で、該当する各訪問における対応する群間の幾何平均比（ＧＭＲ）（訪問６におけるｈＳＢＡ力価についての１群／３群、および訪問２におけるＭＣＶ４／Ｔｄａｐ抗原についての１群／２群）を、９５％ＣＩと共に使用した。対数的に変換した結果の差平均値は、対数尺度での比の平均値と同値であった：ｌｏｇ（１群／２群）＝ｌｏｇ（１群）－ｌｏｇ（２群）。適正な指数変換を使用してＧＭＲを計算した。同様に、比についての両側９５％ＣＩは、スチューデントｔ分布を使用して算出された、対数的に変換した検定結果の差平均値についてのＣＩの逆変換によって構築した。統計的推論は、ＧＭＲのＣＩ（すなわち、９５％ＣＩの下限が０．６７を超えた）を根拠とした。
市販ワクチンについての非劣性（ＭＣＶ４／Ｔｄａｐについての副主要事項）。第一の副主要目的については、ワクチン処置から１カ月後（訪問２）に測定された、市販ワクチン中の１０種の抗原それぞれに対する抗体力価または濃度を、分析用に対数的に変換し、１群および２群についてＧＭを算出した。ＧＭの比（［二価ｒＬＰ２０８６＋ＭＣＶ４／Ｔｄａｐ］／［ＭＣＶ４／Ｔｄａｐ］）の両側９５％ＣＩを、１０種の抗原それぞれについて示した。
ｒＬＰ２０８６ワクチンについての非劣性（二価ｒＬＰ２０８６についての副主要事項）。第二の副主要目的については、訪問６の時点で測定された、２種の主要菌株それぞれに対するｈＳＢＡ力価を、分析用に対数的に変換し、１群および３群についてＧＭＴを算出した。ＧＭＲ（［二価ｒＬＰ２０８６＋ＭＣＶ４／Ｔｄａｐ］／二価ｒＬＰ２０８６）の両側９５％ＣＩを、２種の主要菌株それぞれについて示した。市販ワクチン（ＭＣＶ４／Ｔｄａｐ）と治験用製品（二価ｒＬＰ２０８６）双方の非劣性に関する研究副主要目的は、（［二価ｒＬＰ２０８６＋ＭＣＶ４／Ｔｄａｐ］／［ＭＣＶ４／Ｔｄａｐ］については訪問２の時点で、また［二価ｒＬＰ２０８６＋ＭＣＶ４／Ｔｄａｐ］／二価ｒＬＰ２０８６）については訪問６の時点で、ＧＭＲの両側９５％ＣＩの下限が、全１０種のＭＣＶ４／Ｔｄａｐ抗原、および２種の主要菌株それぞれについて、０．６７より大きかったときに達成された。ＧＭＲ（１群／２群）は、訪問２の時点でのＭＣＶ４の４種の抗原それぞれに対するＩｇＧ濃度について、両側９５％ＣＩと共に記述的にまとめた。
ｈＳＢＡデータの分析。各血液採取の時点で、ｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ以上、１：４以上、１：８以上、１：１６以上、１：３２以上、１：６４以上、および１：１２８以上に達した対象の数および割合を、１群および３群に関して、主要ＭｎＢ試験株であるＰＭＢ８０（Ａ２２）およびＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）について、割合の正確両側９５％ＣＩ（またはＣｌｏｐｐｅｒ－Ｐｅａｒｓｏｎ信頼限界）と共に、記述的にまとめた。割合についての正確ＣＩは、Ｆ分布を使用して算出した。二価ｒＬＰ２０８６の非劣性についての付加的な分析として、Ａ２２変異体（ＰＭＢ８０）およびＢ２４変異体（ＰＭＢ２９４８）についてのｈＳＢＡ ４倍応答率を、１群と３群で比較した。この率の差（二価ｒＬＰ２０８６／ＭＣＶ４／Ｔｄａｐ－二価ｒＬＰ２０８６または１群－３群）および差の正確両側９５％ＣＩを示した。正確ＣＩは、標準化された検定統計値およびγ＝０．０００００１を使用して算出した。これは、記述的分析とみなした。
ＭＣＶ４／Ｔｄａｐ免疫原性の分析。各ＭＣＶ４／Ｔｄａｐ抗原に対して血清応答を実現した対象の割合、ならびに破傷風およびジフテリアトキソイドについて抗体レベルが１．０ＩＵ／ｍＬ以上に達した対象の割合を、１群および２群について、正確両側９５％ＣＩと共にまとめた。各ＭＣＶ４／Ｔｄａｐ抗原に対する血清応答率、ならびに破傷風およびジフテリアトキソイドについて抗体レベルが１．０ＩＵ／ｍＬ以上に達する対象の割合に関する非劣性（１群－２群）を分析した。
並行して投与した際の二価ｒＬＰ２０８６およびＭＣＶ４／Ｔｄａｐ抗原に対する免疫応答。ＴｄａｐおよびＭＣＶ４抗原に対する幾何平均濃度および幾何平均力価の非劣性分析。この研究の第一の副主要目的は、両方の群において最初のワクチン処置（訪問２）から１カ月後に測定したとき、二価ｒＬＰ２０８６と共に与えられたＭＣＶ４およびＴｄａｐワクチン（１群）によって誘発された、ＧＭＴ（または該当する場合ではＧＭＣ）に基づく免疫応答が、ＭＣＶ４およびＴｄａｐワクチン単独（２群）によって誘発された免疫応答に劣らないことを実証することであった。第一の副主要目的の主要評価項目は、１群および２群の対象における、最初のワクチン処置から１カ月後（訪問２）の時点での、市販ワクチンの１０種の抗原それぞれに対するＧＭＴまたはＧＭＣとした。
１群および２群についての１０種のＭＣＶ４およびＴｄａｐ抗原に対するＧＭＴ（または該当する場合ではＧＭＣ）の比較を、その対応する、１群の２群に対するＧＭＴ（または該当する場合ではＧＭＣ）比（ＧＭＲ）およびその比の両側９５％ＣＩを添えて、表Ｃに示す。非劣性限界の判断基準は、ＧＭＲの両側９５％ＣＩの下限についての０．６７の値に相当する、１．５倍とした。
評価可能免疫原性集団について、Ｔｄａｐ抗原についてのワクチン処置１から１カ月後の１群の２群に対するＧＭＲは、ジフテリアトキソイドで０．９４（９５％ＣＩ：０．８６、１．０３）、破傷風トキソイドで０．９２（９５％ＣＩ：０．８５、０．９９）、百日咳トキソイドで０．９３（９５％ＣＩ：０．８５、１．０２）、百日咳線維状赤血球凝集素で０．９１（９５％ＣＩ：０．８４、０．９８）、百日咳パータクチンで０．８８（９５％ＣＩ：０．８０、０．９８）、百日咳線毛凝集原２＋３型で０．９０（９５％ＣＩ：０．７４、１．０８）であり、ＭＣＶ４抗原についてのＧＭＲは、血清型Ａで０．９１（９５％ＣＩ：０．８２、１．０１）、血清型Ｃで１．０２（９５％ＣＩ：０．９０、１．１５）、血清型Ｙで０．９９（９５％ＣＩ：０．８９、１．０９）、血清型Ｗ－１３５で０．９３（９５％ＣＩ：０．８３、１．０４）であった。したがって、１群の２群に対するＭＣＶ４およびＴｄａｐ抗原ＧＭＲについての両側９５％ＣＩの下限は、ジフテリアトキソイドで０．８６、破傷風トキソイドで０．８５、百日咳トキソイドで０．８５、百日咳線維状赤血球凝集素で０．８４、百日咳パータクチンで０．８０、百日咳線毛凝集原２＋３型で０．７４、血清型Ａで０．８２、血清型Ｃで０．９０、血清型Ｙで０．８９、血清型Ｗ－１３５で０．８３であった。０．６７（ＧＭＲの両側９５％ＣＩの下限）という１．５倍の判断基準は、すべてのＭＣＶ４およびＴｄａｐ抗原で満たされた。したがって、第一の副主要目的が適った。
Ｔｄａｐ＋ＭＣＶ４抗原が二価ｒＬＰ２０８６と並行して与えられたときのこれらのワクチンに対する免疫応答は、これらが単独で与えられたときに得られた免疫応答に劣らなかった。
Figure 0007337107000014
Figure 0007337107000015
二価ｒＬＰ２０８６に対するｈＳＢＡ ＧＭＴについての非劣性分析
この研究の第二の副主要目的は、ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６（１群）によって誘発された主要菌株ＰＭＢ８０（Ａ２２）およびＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）に対する（ＧＭＴに基づく）ｈＳＢＡ応答が、食塩水＋食塩水＋二価ｒＬＰ２０８６（３群）によって誘発された免疫応答に劣らないことを実証することであった。ｈＳＢＡは、両方の群について、二価ｒＬＰ２０８６での３回目のワクチン処置から１カ月後（訪問６）に行った。第二の副主要目的の主要評価項目は、１群（ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６）および３群（食塩水＋食塩水＋二価ｒＬＰ２０８６）の対象に投与された、二価ｒＬＰ２０８６の三回目用量から１カ月後（訪問６）に測定された２種の主要菌株（ＰＭＢ８０［Ａ２２］およびＰＭＢ２９４８［Ｂ２４］）それぞれに対するｈＳＢＡ ＧＭＴの評価とした。
表Ｃは、評価可能免疫原性集団について、１群と３群についての２種の主要ＭｎＢ試験株に対するｈＳＢＡ ＧＭＴの比較を、その対応する、１群の３群に対するＧＭＲ、およびその比の両側９５％ＣＩと共に示している。非劣性限界の判断基準は、ＧＭＲの両側９５％ＣＩの下限についての０．６７の値に相当する、１．５倍とした。
評価可能免疫原性集団について、ワクチン処置３（二価ｒＬＰ２０８６）から１カ月後の、１群および３群についての２種の主要ＭｎＢ株に対するｈＳＢＡ ＧＭＴは、次のとおりであった。すなわち、ＰＭＢ８０（Ａ２２）ではそれぞれ４５．９および４９．７、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）ではそれぞれ２４．８および２７．４。ワクチン処置３（二価ｒＬＰ２０８６）から１カ月後の、ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６群の食塩水＋食塩水＋二価ｒＬＰ２０８６群に対するＧＭＲは、ＰＭＢ８０（Ａ２２）で０．９２（９５％ＣＩ：０．８４、１．０２）、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）で０．９０（９５％ＣＩ：０．８２、１．００）であった。１群の３群に対するｈＳＢＡ ＧＭＲについての両側９５％ＣＩの下限は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）で０．８４、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）で０．８２であり、両方とも、０．６７より大きく、１．５倍の非劣性限界を満たした。したがって、第二の副主要目的が果たされた。
Ｔｄａｐ＋ＭＣＶ４と並行して与えたときの二価ｒＬＰ２０８６ワクチンに対する免疫応答は、ワクチンを単独で与えたときに得られた免疫応答に劣らなかった。
副主要目的についての非劣性分析
ＭＣＶ４およびＴｄａｐワクチンと共に与えられた二価ｒＬＰ２０８６をＭＣＶ４およびＴｄａｐ両方のワクチンだけと比べた非劣性についての第一の副主要目的は、ワクチン処置１後の評価可能免疫原性集団に関して、１０種のＭＣＶ４およびＴｄａｐ抗原それぞれについて、ＧＭＲの両側９５％ＣＩの下限だと０．６７の値に相当する、１．５倍に設定した非劣性限界を調べることにより試験した。この判断基準は、試験したすべてのＭＣＶ４およびＴｄａｐ抗原について満たされた。
ＭＣＶ４およびＴｄａｐワクチンと共に与えられた二価ｒＬＰ２０８６を二価ｒＬＰ２０８６単独と比べた非劣性についての第二の副主要目的は、ワクチン処置３から１カ月後に測定したときのワクチン処置３後の評価可能免疫原性集団において、２種の主要ＭｎＢ株（変異体Ａ２２およびＢ２４）それぞれについて、ＧＭＲの両側９５％ＣＩの下限だと０．６７の値に相当する、１．５倍に設定した非劣性限界を調べることにより試験した。この判断基準は、両方のＭｎＢ試験菌株ＰＭＢ８０（Ａ２２）およびＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）について満たされた。
したがって、両方の副主要目的が、Ｔｄａｐ、ＭＣＶ４、および二価ｒＬＰ２０８６ワクチンのすべての抗原について、１．５倍の非劣性限界で果たされた。
ＭＣＶ４／Ｔｄａｐ血清応答率についての記述。この研究の二次的な目的の一つは、ＭＣＶ４およびＴｄａｐでのワクチン処置から１カ月後（訪問２）に測定したときの、ＭＣＶ４およびＴｄａｐに含まれる抗原に対する血清応答（１群および２群）について述べることであった。
１０種のＴｄａｐおよびＭＶＣ４抗原についての血清応答率を、各群における対応する９５％ＣＩ、パーセントの差（１群－２群）、およびその差の９５％ＣＩと共に、ワクチン処置１後の評価可能免疫原性集団について、表Ｄに示す。
評価可能免疫原性集団について、ワクチン処置１から１カ月後の、１群および２群についての、６種のＴｄａｐ抗原に対する血清応答率は、次のとおりであった。すなわち、それぞれ９８．６％および９８．３％（ジフテリアトキソイド）、それぞれ９７．７％および９７．４％（破傷風トキソイド）、それぞれ６８．１および７２．７％（百日咳トキソイド）、それぞれ８５．３％および８９．２％（百日咳線維状赤血球凝集素）、それぞれ９６．０％および９６．２％（百日咳パータクチン）、それぞれ７９．５％および８１．９％（百日咳線毛凝集原２＋３型）。評価可能免疫原性集団について、ワクチン処置１から１カ月後の、１群および２群についての、４種のＭＣＶ４抗原に対する血清応答率は、次のとおりであった。すなわち、それぞれ８５．４％および８８．６％（血清型Ａ）、それぞれ８９．３％および８８．９％（血清型Ｃ）、それぞれ９０．５％および９３．６％（血清型Ｙ）、それぞれ９７．１％および９７．２％（血清型Ｗ－１３５）。ワクチン処置１から１カ月後の１群から２群への血清応答率の差は、ジフテリアトキソイドで０．２％（９５％ＣＩ：（－１．１、１．６）、破傷風トキソイドで０．２％（９５％ＣＩ：－１．４、１．８）、百日咳トキソイドで－４．６％（９５％ＣＩ：－９．１、－０．１）、百日咳線維状赤血球凝集素で－４．０％（９５％ＣＩ：－７．３、－０．６）、百日咳パータクチンで－０．２％（９５％ＣＩ：－２．１、１．８）、百日咳線毛凝集原２＋３型で－２．５％（９５％ＣＩ：－６．４、１．５）、血清型Ａで－３．２％（９５％ＣＩ：－６．７、０．３）、血清型Ｃで０．３％（９５％ＣＩ：－２．８、３．５）、血清型Ｙで－３．２％（９５％ＣＩ：－６．０、－０．４）、血清型Ｗ－１３５で－０．１％（９５％ＣＩ：－１．９、１．７）であった。
ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６群（１群）とＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋食塩水群（２群）について、推定による血清応答率の差は、６種のＴｄａｐおよび４種のＭＣＶ４抗原で、－４．６％～０．３％の間であり、この率の差の９５％ＣＩの下限は、－９．１％以上であった（すなわち、すべて－１０％より高かった）。
Figure 0007337107000016
ｈＳＢＡ力価の４倍上昇についての記述。ワクチン処置３から１カ月後の２種の主要ＭｎＢ株（ＰＭＢ８０［Ａ２２］およびＰＭＢ２９４８［Ｂ２４］）に対するｈＳＢＡ力価４倍応答率を分析することにより、ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６（１群）を食塩水＋食塩水＋二価ｒＬＰ２０８６（３群）と比較した。２種の主要ＭｎＢ株についての、ベースラインからワクチン処置３の１カ月後までにｈＳＢＡ力価の上昇が４倍以上に達する対象の数および割合を、各群における対応する９５％ＣＩ、割合のパーセントの差（１群－３群）、およびその差の９５％ＣＩと共に、ワクチン処置３後の評価可能免疫原性集団について、表Ｅに示す。
２種の主要ＭｎＢ試験株について、ベースラインからワクチン処置３の１カ月後までにｈＳＢＡ力価の上昇が４倍以上に達する対象の割合を、ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６を与えた１群対象および食塩水＋食塩水＋二価ｒＬＰ２０８６を与えた３群対象の両方について測定した。１群の対象のうち、８４．０％が、試験株ＰＭＢ８０（Ａ２２）に対して４倍以上のｈＳＢＡ力価の上昇を示し、８５．７％が、試験株ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）に対して４倍以上のｈＳＢＡ力価の上昇を示した。３群の対象のうち、８８．７％が、試験株ＰＭＢ８０（Ａ２２）に対して４倍以上のｈＳＢＡ力価の上昇を示し、８７．７％が、試験株ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）に対して４倍以上のｈＳＢＡ力価の上昇を示した。
ワクチン処置３から１カ月後の、１群と３群との、ｈＳＢＡ力価の上昇が４倍以上に達する対象の割合の差は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）で－４．７％（９５％ＣＩ：－８．４、－１．１）、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）で－２．１％（９５％ＣＩ：－５．７、１．６）であった。推定による４倍応答率の差は小さく（５．０％未満）、割合の差の９５％ＣＩの下限は、－８．４％（ＰＭＢ８０［Ａ２２］）および－５．７％（ＰＭＢ２９４８［Ｂ２４］）であった。
Figure 0007337107000017
並行して投与した際の二価ｒＬＰ２０８６とＭＣＶ４およびＴｄａｐ抗原に対する免疫応答の概要。ＭＣＶ４およびＴｄａｐワクチンと共に与えられた二価ｒＬＰ２０８６が、ＭＣＶ４およびＴｄａｐ両方のワクチンだけ、または食塩水＋食塩水＋二価ｒＬＰ２０８６と比較される、非劣性判断基準には、１０種のＭＣＶ４／Ｔｄａｐ抗原それぞれについて（ワクチン処置１から１カ月後）、また２種の主要ＭｎＢ試験株（Ａ２２およびＢ２４）それぞれについて（ワクチン処置３から１カ月後）、ＧＭＲについての両側９５％ＣＩの下限が０．６７より大きくなることが要求された。この所定の閾値は、両方のＭｎＢ試験株ならびに１０種のＴｄａｐおよびＭＣＶ４抗原それぞれについて満たされた。
ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６群（１群）とＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋食塩水群（２群）について、推定による血清応答率の差は、６種のＴｄａｐおよび４種のＭＣＶ４抗原で、－４．６％～０．３％の間であり、この率の差の９５％ＣＩの下限は、９．１％以下であった（すべての差が－１０％より高かった）。２種の主要ＭｎＢ試験株（Ａ２２およびＢ２４）に対する、４倍以上上昇したｈＳＢＡ応答は、ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６が与えられた群と食塩水＋食塩水＋二価ｒＬＰ２０８６が与えられた群とで似通っていた（８４．０％～８８．７％の範囲をとる）。
二価ｒＬＰ２０８６に対する免疫応答。ＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価（記述的評価項目） この研究の二次的な目的の一つは、１種がサブファミリーＡ ＬＰ２０８６（ＰＭＢ８０［Ａ２２］）を発現し、１種がサブファミリーＢ ＬＰ２０８６（ＰＭＢ２９４８［Ｂ２４］）を発現する、２種の主要ＭｎＢ試験株で実施したｈＳＢＡによって測定される、二価ｒＬＰ２０８６での２回目（訪問４）および３回目（訪問６）のワクチン処置から１カ月後に測定した免疫応答について述べることであった。
この二次的な目的のための記述的な二次的評価項目の一つは、ワクチン処置２から１カ月後（訪問４）およびワクチン処置３から１カ月後（訪問６）に、２種の主要ＭｎＢ試験株それぞれに対するｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ以上である対象の割合とした。ワクチン処置３後の評価可能免疫原性集団について、２種の主要ＭｎＢ試験株それぞれに対するｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ以上である対象の割合を、表Ｆに示す。ＰＭＢ８０（Ａ２２）についてのＬＬＯＱが、１：１６に相当するｈＳＢＡ力価であり、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）についてのＬＬＯＱが、１：８に相当するｈＳＢＡ力価であったことを留意されたい。
３群（食塩水＋食塩水＋二価ｒＬＰ２０８６）について、ベースライン時（ワクチン処置１の前）にｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ以上である対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）では５．６％、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）では３．４％であった。３群（食塩水＋食塩水＋二価ｒＬＰ２０８６）について、ワクチン処置２から１カ月後およびワクチン処置３から１カ月後にｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ以上に達する対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）ではそれぞれ６８．０％および９１．４％、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）ではそれぞれ６６．０％および９２．７％であった。
１群（ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６）について、ベースライン時（ワクチン処置１の前）にｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ以上である対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）では４．４％、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）では１．６％であった。１群（ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６）について、ワクチン処置２から１カ月後およびワクチン処置３から１カ月後にｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ以上に達する対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）ではそれぞれ６８．０％および８７．５％、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）ではそれぞれ６２．３％および９０．０％であった。
ワクチン処置１の前に比べて、ワクチン処置２から１カ月後には、１群および３群両方の対象において、２種の主要ＭｎＢ試験株についてｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ以上である対象の割合の実質的な増加が認められ、ワクチン処置３から１カ月後には、さらに増加が認められた。評価可能免疫原性集団の１群および３群におけるｈＳＢＡ応答は、似通っていた。
Figure 0007337107000018
規定のレベルに達するｈＳＢＡ力価
もう一つの二次的評価項目は、各血液採取時点で２種の主要ＭｎＢ試験株に対してｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ以上、１：４以上、１：８以上、１：１６以上、１：３２以上、１：６４以上、１：１２８以上である対象の割合とした。
以下で、１：４以上および１：１６以上のｈＳＢＡ力価に達した対象について述べる。１：４以上というｈＳＢＡ力価は、ＩＭＤに対する防御の相関事項として広く認識されてはいるが、しかし、１：１６以上というより保守的なｈＳＢＡ力価が、ワクチン処置前に血清陰性である対象について、４倍のワクチン効果を表すレベルとみなされている。
ワクチン処置前（すなわち、ワクチン処置１の前）のｈＳＢＡ力価が１：４以上である、１群（ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６）および３群（食塩水＋食塩水＋二価ｒＬＰ２０８６）の対象の割合は、菌株ＰＭＢ８０（Ａ２２）ではそれぞれ６．９％および７．５％、菌株ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）ではそれぞれ２．１％および３．７％であった。加えて、ワクチン処置前のｈＳＢＡ力価が１：１６以上である１群および３群の対象の割合は、菌株ＰＭＢ８０（Ａ２２）ではそれぞれ４．４％および５．６％、菌株ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）ではそれぞれ１．５％および２．１％であった。
３群（食塩水＋食塩水＋二価ｒＬＰ２０８６）において、ワクチン処置２から１カ月後にｈＳＢＡ力価が１：４以上である対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）では６８．６％、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）では６８．２％であった。ワクチン処置３から１カ月後、ｈＳＢＡ力価が１：４以上である対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）では９１．７％、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）では９３．１％であった。１群（ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６）において、ワクチン処置２から１カ月後にｈＳＢＡ力価が１：４以上である対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）では６８．２％、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）では６４．８％であった。ワクチン処置３から１カ月後、ｈＳＢＡ力価が１：４以上である対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）では８７．８％、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）では９０．７％であった。
３群（食塩水＋食塩水＋二価ｒＬＰ２０８６）において、ワクチン処置２から１カ月後にｈＳＢＡ力価が１：１６以上である対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）では６８．０％、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）では６０．３％であった。ワクチン処置３から１カ月後、ｈＳＢＡ力価が１：１６以上である対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）では９１．４％、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）では８８．９％であった。１群（ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６）において、ワクチン処置２から１カ月後にｈＳＢＡ力価が１：１６以上である対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）では６８．０％、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）では５７．６％であった。ワクチン処置３から１カ月後、ｈＳＢＡ力価が１：１６以上である対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）では８７．５％、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）では８６．７％であった。
１群および３群両方について、２または３用量の二価ｒＬＰ２０８６の後、対象の大半が、１：１６以上のｈＳＢＡ力価に達したが、ワクチン処置前の訪問１の時点で、主要ＭｎＢ試験株のいずれかに対して測定可能なｈＳＢＡ力価を伴う対象は、比較的少数だけであった。
ｈＳＢＡ力価幾何平均値。もう一つの二次的評価項目は、該当する各血液採取時点における、２種の主要ＭｎＢ試験株それぞれについてのｈＳＢＡ ＧＭＴとした。表Ｇに、ワクチン処置３後の評価可能免疫原性集団の１群および３群について、サンプル採取時点による、２種の主要ＭｎＢ試験株それぞれについてのｈＳＢＡ ＧＭＴ、および対応するＣＩを示す。ベースラインのＧＭＴは、両方の群について、ｈＳＢＡ ＬＬＯＱを下回った。３群（食塩水＋食塩水＋二価ｒＬＰ２０８６）について、ワクチン処置２から１カ月後のｈＳＢＡ ＧＭＴは、ＰＭＢ８０（Ａ２２）では２３．８、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）では１３．０であった。ワクチン処置３から１カ月後のｈＳＢＡ ＧＭＴは、ＰＭＢ８０（Ａ２２）では４９．７、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）では２７．４であった。１群（ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６）について、ワクチン処置２から１カ月後のｈＳＢＡ ＧＭＴは、ＰＭＢ８０（Ａ２２）で２３．７、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）で１２．０であった。ワクチン処置３から１カ月後のｈＳＢＡ ＧＭＴは、ＰＭＢ８０（Ａ２２）で４５．９、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）で２４．８であった。ＧＭＴによって測定されるｈＳＢＡ応答は、１群と３群で似通っていた。
ｈＳＢＡ力価についての逆累積分布曲線
ＰＭＢ８０（Ａ２２）およびＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）についてのｈＳＢＡ力価の分布を示す逆累積分布曲線（ＲＣＤＣ）を、ワクチン処置３後の評価可能免疫原性集団に関して、すべてのサンプル採取時点で、１群および３群について評価した。ＲＣＤＣは、対象の大半が、ワクチン処置２の後に応答し、ワクチン処置３の後、２種の主要ＭｎＢ試験株についての力価がさらに増大していたことを示した。抗原に対する免疫応答は、１群と３群で似通っていた。
ｈＳＢＡ ４倍以上の応答
この研究の予め指定された調査目的は、１種がＬＰ２０８６サブファミリーＡタンパク質を発現し、１種がＬＰ２０８６サブファミリーＢタンパク質を発現する、２種の主要ＭｎＢ試験株で実施したｈＳＢＡ力価での４倍の応答によって測定される、二価ｒＬＰ２０８６での２回目および３回目のワクチン処置から１カ月後（訪問３および訪問５）に測定した、二価ｒＬＰ２０８６に対する免疫応答について述べることであった。
この調査目的の評価項目は、ベースラインから二価ｒＬＰ２０８６での２回目および３回目のワクチン処置の１カ月後までに、２種のＭｎＢ株のＰＭＢ８０（Ａ２２）およびＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）に対するｈＳＢＡ力価の増大が少なくとも４倍に達する対象の割合とした。ＰＭＢ８０（Ａ２２）についてのＬＬＯＱが、１：１６に相当するｈＳＢＡ力価であり、ＰＭＢ８０（Ａ２２）についてのＬＬＯＱが、１：８に相当するｈＳＢＡ力価であったことを留意されたい。４倍応答は、次のように定義した：ベースラインｈＳＢＡ力価が検出限界（ＬＯＤ）未満である、またはｈＳＢＡ力価が１：４未満である対象について、４倍応答は、１：１６以上のｈＳＢＡ力価と定義した。ベースラインｈＳＢＡ力価がＬＯＤ以上（すなわち、ｈＳＢＡ力価が１：４以上）かつＬＬＯＱ未満である対象について、４倍応答は、ＬＬＯＱの４倍以上のｈＳＢＡ力価であると定義した。ベースラインｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ以上である対象について、４倍応答は、ベースライン力価の４倍以上のｈＳＢＡ力価であると定義した。
ワクチン処置３後の評価可能免疫原性集団について、２種の主要ＭｎＢ試験株それぞれに対して、ｈＳＢＡ力価の上昇が４倍以上に達する対象の割合を、１群（ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６）および３群（食塩水＋食塩水＋二価ｒＬＰ２０８６）について、表Ｈに示す。
３群（食塩水＋食塩水＋二価ｒＬＰ２０８６）について、ベースラインからワクチン処置３の１カ月後までに、ｈＳＢＡ力価の上昇が４倍以上に達する対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）では８８．７％、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）では８７．７％であった。ワクチン処置２から１カ月後に、ベースラインからのｈＳＢＡ力価の上昇が４倍以上に達する対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）では６３．７％、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）では５８．４％であった。
１群（ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６）について、ベースラインからワクチン処置３の１カ月後までに、ｈＳＢＡ力価の上昇が４倍以上に達する対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）では８４．０％、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）では８５．７％であった。ワクチン処置２から１カ月後に、ベースラインからのｈＳＢＡ力価の上昇が４倍以上に達する対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）では６４．３％、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）では５６．３％であった。
４倍力価応答によって測定されるｈＳＢＡ応答は、１群と３群で似通っていた。
Figure 0007337107000019
Figure 0007337107000020
追加のｈＳＢＡ応答倍率
付加的評価項目を、２種の主要ＭｎＢ株それぞれについて、ワクチン処置後血液採取訪問時に、ベースラインからのｈＳＢＡ力価が、少なくとも２倍の増加に達する対象の割合、および少なくとも３倍の増加に達する対象の割合とした。ＰＭＢ８０（Ａ２２）についてのＬＬＯＱが、１：１６に相当するｈＳＢＡ力価であり、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）についてのＬＬＯＱが、１：８に相当するｈＳＢＡ力価であったことを留意されたい。
１群および３群について、ベースラインからワクチン処置２の１カ月後までに、ＭｎＢ株についてのｈＳＢＡ力価の上昇が２倍以上に達する対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）ではそれぞれ６６．２％および６６．１％、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）ではそれぞれ５６．８％および５９．７％であった。１群および３群について、ベースラインからワクチン処置３の１カ月後までに、ＭｎＢ株についてのｈＳＢＡ力価の上昇が２倍以上に達する対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）ではそれぞれ８６．６％および９０．３％、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）ではそれぞれ８６．１％および８８．５％であった。
１群および３群について、ベースラインからワクチン処置２の１カ月後までに、ＭｎＢ株についてのｈＳＢＡ力価の上昇が３倍以上に達する対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）ではそれぞれ６４．３％および６３．７％、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）ではそれぞれ５６．３％および５８．４％であった。１群および３群について、ベースラインからワクチン処置３の１カ月後までに、ＭｎＢ株についてのｈＳＢＡ力価の上昇が３倍以上に達する対象の割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）ではそれぞれ８４．０％および８８．７％、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）ではそれぞれ８５．７％および８７．７％であった。
ワクチン処置３後の評価可能免疫原性集団において、ベースライン力価がＬＯＤ（１：４）未満である対象については、ワクチン処置２から１カ月後に５６．７％～６６．６％、ワクチン処置３から１カ月後に８６．３％～９１．０％の範囲となり、１群および３群の両方において、すべての血液採取時点で、対象の大半が、２倍、３倍、および４倍の応答を実現した。
二価ｒＬＰ２０８６に対する免疫応答の概要
二次的目的に沿った記述的な評価項目を要約すると、対象の大半は、１群（ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６）および３群（食塩水＋食塩水＋二価ｒＬＰ２０８６）の両方について、両方の主要ＭｎＢ試験株についてのｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ以上に達したが、ベースライン（ワクチン処置前訪問１）の時点では、非常に少ない割合の対象しか、測定可能なＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を伴わなかった。１群および３群両方の対象について、ワクチン処置２から１カ月後に、２種のＭｎＢ株で実質的な免疫応答が認められ、ワクチン処置３から１カ月後には、追加の増大が認められた。この結論は、３用量の後にｈＳＢＡ力価が１：１６以上である対象の割合、両方の群においてで２用量の後および３用量の後に得られたＧＭＴ実測値、ならびに２種の主要ＭｎＢ試験株についてのＲＣＤＣによって確認された。
１群（ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６）および３群（食塩水＋食塩水＋二価ｒＬＰ２０８６）両方について、高い割合の対象が、２種の主要ＭｎＢ試験株それぞれに対して４倍以上のｈＳＢＡ力価の上昇を実現した。
加えて、１群（ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６）および３群（食塩水＋食塩水＋二価ｒＬＰ２０８６）両方について、対象の大半が、すべてのサンプル採取時点で、２種の主要ＭｎＢ株に対して、２倍以上のｈＳＢＡ力価の上昇および３倍以上のｈＳＢＡ力価の上昇を実現した。こうした判断基準を満たす結果となった対象の割合は、３回のワクチン処置後の方が、２回のワクチン処置後と比べて高かった。感受性分析でも、両方の群について、３用量によって誘発された活発な免疫応答が裏付けられる。
これらの結果は、ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐワクチンと共投与したときの二価ｒＬＰ２０８６に対する免疫応答が、二価ｒＬＰ２０８６＋食塩水に対する免疫応答に匹敵する活発な免疫応答になるという証拠の裏付けとなる。
ＭＣＶ４およびＴｄａｐに対する免疫応答
Ｔｄａｐ／ＭＣＶ４抗原のＧＭＴおよびＧＭＣ
表Ｉに、ワクチン処置１後の評価可能免疫原性集団の１群（ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６）および２群（ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋食塩水）について、ベースラインおよびワクチン処置１から１カ月後の、ＴｄａｐおよびＭＣＶ４抗原それぞれについてのＧＭＴおよびＧＭＣならびに対応するＣＩを示す。
２群（ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋食塩水）について、ベースライン（ワクチン処置１の前）およびワクチン処置１から１カ月後のＴｄａｐ抗原ＧＭＣは、それぞれ０．２および９．８（ジフテリアトキソイド）、それぞれ０．５および１０．３（破傷風トキソイド）、それぞれ３．９および１４．２（百日咳トキソイド）、それぞれ２１．８および１２２．９（百日咳線維状赤血球凝集素）、それぞれ１６．２および２２８．９（百日咳パータクチン）、それぞれ８．５および１５４．２（百日咳線毛凝集原２＋３型）であり、ベースライン（ワクチン処置１の前）およびワクチン処置１から１カ月後のＭＣＶ４抗原ＧＭＴは、それぞれ４３６．３および５１１３．０（血清型Ａ）、それぞれ８４．３および１６５０．２（血清型Ｃ）、それぞれ１６８．５および２２４４．９（血清型Ｙ）、それぞれ１７７．７および６３６７．９（血清型Ｗ－１３５）であった。１群（ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６）について、ベースライン（ワクチン処置１の前）およびワクチン処置１から１カ月後のＴｄａｐ抗原ＧＭは、それぞれ０．２および９．３（ジフテリアトキソイド）、それぞれ０．５および９．４（破傷風トキソイド）、それぞれ３．９および１３．２（百日咳トキソイド）、それぞれ２１．３および１１２．０（百日咳線維状赤血球凝集素）、それぞれ１５．７および２０２．０（百日咳パータクチン）、それぞれ８．４および１３８．１（百日咳線毛凝集原２＋３型）であり、ベースライン（ワクチン処置１の前）およびワクチン処置１から１カ月後のＭＣＶ４抗原ＧＭは、それぞれ４９０．０および４６４７．３（血清型Ａ）、それぞれ８７．６および１６７９．２（血清型Ｃ）、それぞれ１８３．３および２２１２．６（血清型Ｙ）、それぞれ１７６．７および５９２５．１（血清型Ｗ－１３５）であった。全体として、推定によるＧＭは、１群と２群で似通っていた。
ＩｇＧ ＭＣＶ４のＧＭＣ
この研究の調査目的は、二価ｒＬＰ２０８６と共に、またこれなしで与えたときのＭＣＶ４ワクチンによって誘発された抗ＭＣＶ４ ＩｇＧ ＧＭＣによって測定される、ＩｇＧ免疫応答について述べることであった。この研究の調査免疫原性評価項目は、１群（ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６）および２群（ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋食塩水）からの対象において、４種のＭＣＶ４抗原性成分に適用した。調査評価項目は、血清型Ａ、Ｃ、Ｙ、またはＷ－１３５多糖に対する（ＧＭＣとして測定される）ＩｇＧ応答とした。この検定を検証した後（すなわち、検証後）およびサンプルを試験する前に、ＬＬＯＱは、標準基準曲線からの付加的なデータ分析に基づき、上向きに調整して、血清型Ａについては０．１７９５μｇ／ｍＬ、血清型Ｃについては０．０９４０μｇ／ｍＬ、血清型Ｙについては０．２４８５μｇ／ｍＬ、血清型Ｗ－１３５については０．２５３０μｇ／ｍＬとした。ＬＬＯＱ未満の結果は、分析用に０．５×ＬＬＯＱに設定した。調整した検証後ＬＬＯＱを使用している、ワクチン処置１後の評価可能免疫原性集団の１群および２群についてのＭＣＶ４ ＩｇＧ ＧＭＣを、表Ｊに示す。
１群（ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋ｒＬＰ２０８６）について、ベースライン（ワクチン処置１の前）およびワクチン処置１から１カ月後のＭＣＶ４ ＩｇＧ ＧＭＣは、それぞれ０．１７および１１．４２μｇ／ｍＬ（血清型Ａ）、それぞれ０．１１および５．５９μｇ／ｍＬ（血清型Ｃ）、それぞれ０．１４および２．４９μｇ／ｍＬ（血清型Ｙ）、それぞれ０．１３および１．７９μｇ／ｍＬ（血清型Ｗ－１３５）であった。２群（ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋食塩水）について、ベースライン（ワクチン処置１の前）およびワクチン処置１から１カ月後のＭＣＶ４ ＩｇＧ ＧＭＣは、それぞれ０．１５および１１．３８μｇ／ｍＬ（血清型Ａ）、それぞれ０．１１および５．４７μｇ／ｍＬ（血清型Ｃ）、それぞれ０．１３および２．１４μｇ／ｍＬ（血清型Ｙ）、それぞれ０．１３および１．８４μｇ／ｍＬ（血清型Ｗ－１３５）であった。
全体として、ＭＣＶ４ ＩｇＧ ＧＭＣは、１群と２群で数値的に似通っていた。初めの検定検証データ分析に基づき、ＭＣＶ４ ＩｇＧ検定ＬＬＯＱを、血清型Ａについては０．１０３７μｇ／ｍＬ、血清型Ｃについては０．０２０４μｇ／ｍＬ、血清型Ｙについては０．１１０４μｇ／ｍＬ、血清型Ｗ－１３５については０．１１９８μｇ／ｍＬに設定した。この検証ＬＬＯＱを使用している、ワクチン処置１後の評価可能免疫原性集団の１群および２群についてのＭＣＶ４ ＩｇＧ ＧＭＣでも、ＭＣＶ４ ＩｇＧ ＧＭＣが１群と２群で数値的に似通っていたことが示された。
ジフテリアトキソイド／破傷風抗原に対して所定の抗体レベルに達する対象
この研究の記述的な二次的評価項目は、破傷風トキソイドに対して抗体レベルが１．０ＩＵ／ｍＬ以上に達する対象（１群および２群）の割合、およびジフテリアトキソイドに対して抗体レベルが１．０ＩＵ／ｍＬ以上に達する対象（１群および２群）の割合とした。
ジフテリアトキソイドおよび破傷風トキソイド抗原に対して抗体が所定のレベルに達する対象の割合を、対応する９５％ＣＩと共に、ワクチン処置１後の評価可能免疫原性集団の１群（ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６）および２群（ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋食塩水）について、表Ｋに示す。
１群（ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６）について、ワクチン処置１から１カ月後、ジフテリアトキソイドおよび破傷風トキソイド抗原に対して抗体が所定のレベルに達する対象の割合は、それぞれ、９８．１％（９５％ＣＩ：９６．８、９８．９）および９９．１％（９５％ＣＩ：９８．２、９９．６）であった。
２群（ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋食塩水）について、ワクチン処置１から１カ月後、ジフテリアトキソイドおよび破傷風抗原に対して抗体が所定のレベルに達する対象の割合は、それぞれ、９９．０％（９５％ＣＩ：９８．０、９９．６）および９９．０％（９５％ＣＩ：９８．０、９９．６）であった。
Figure 0007337107000021
Figure 0007337107000022
Figure 0007337107000023
Figure 0007337107000024
ＭＣＶ４およびＴｄａｐ抗原についてのＲＣＤＣ
ワクチン処置１後の評価可能免疫原性集団に関して、ワクチン処置１の前およびワクチン処置１から１カ月後の、１群（ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６）および２群（ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋食塩水）について、ＭＣＶ４血清型Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ－１３５に対するｒＳＢＡ力価の分布を示すＲＣＤＣは、ワクチン処置１の後の対象において、両方の群について活発な免疫応答を示し、曲線は、ｒＳＢＡ力価の範囲全域で似通っていた。
ワクチン処置１後の評価可能免疫原性集団に関して、ワクチン処置１の前およびワクチン処置１から１カ月後の、１群（ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６）および２群（ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋食塩水）について、検証後ＬＬＯＱを使用している、ＭＣＶ４血清型Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ－１３５多糖に対するＩｇＧ力価の分布を示すＲＣＤＣ、ならびにワクチン処置１後の評価可能免疫原性集団に関して、ワクチン処置１の前およびワクチン処置１から１カ月後の、１群（ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６）および２群（ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋食塩水）について、検証ＬＬＯＱを使用している、ＭＣＶ４血清型Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ－１３５に対するＩｇＧ力価の分布を示すＲＣＤＣは、検証および検証後どちらのＬＬＯＱを使用しても、ワクチン処置１の後の対象において、両方の群について活発な免疫応答を示した。
ワクチン処置１後の評価可能免疫原性集団に関して、ワクチン処置１の前およびワクチン処置１から１カ月後の、１群（ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６）および２群（ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋食塩水）について、ジフテリア、破傷風、百日咳トキソイド、百日咳線維状赤血球凝集素、百日咳パータクチン、および百日咳線毛凝集原２＋３型に対するＴｄａｐ力価の分布を示すＲＣＤＣは、ワクチン処置１後の対象において、両方の群について活発な免疫応答を示した。
ＭＣＶ４およびＴｄａｐに対する免疫応答
Ｔｄａｐ／ＭＣＶ４抗原に対する抗体のＧＭは、２群（ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋食塩水）と１群（ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６）で似通っており、観察された、ワクチン処置１後のＴｄａｐ／ＭＣＶ４ 抗原ＧＭは、両方の群について活発な免疫応答を示すものであった。ＲＣＤＣでも、１群および２群両方についてのワクチン処置１後の活発な免疫応答が裏付けられた。
ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６が二価ｒＬＰ２０８６＋食塩水＋食塩水およびＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋食塩水と比較される非劣性判断基準には、１０種のＭＣＶ４／Ｔｄａｐ抗原それぞれについて（ワクチン処置１から１カ月後）、また２種の主要ＭｎＢ試験株（ＰＭＢ８０［Ａ２２］およびＰＭＢ２９４８［Ｂ２４］）を使用してのｈＳＢＡ力価それぞれについて（ワクチン処置３から１カ月後）、ＧＭＲについての両側９５％ＣＩの下限が０．６７より大きくなることが要求された。この所定の閾値は、両方のＭｎＢ試験株ならびに１０種すべてのＴｄａｐおよびＭＣＶ４抗原について満たされた。所定の非劣性判断基準が満たされたので、この研究の副主要免疫原性目的は果たされた。
二価ｒＬＰ２０８６と並行して与えたＭＣＶ４ワクチンおよびＴｄａｐワクチンによって誘発された免疫応答は、両方の群において、最初のワクチン処置から１カ月後に測定したとき、ＭＣＶ４およびＴｄａｐワクチンだけによって誘発された免疫応答に劣らなかった。ＭＣＶ４およびＴｄａｐワクチンのすべての抗原成分に対する免疫応答を評価した。
２種のＭｎＢ試験株で実施されるｈＳＢＡによって測定される、ＭＣＶ４およびＴｄａｐワクチンと並行して与えた二価ｒＬＰ２０８６によって誘発された免疫応答は、両方の群において、二価ｒＬＰ２０８６での３回目のワクチン処置から１カ月後に測定したとき、二価ｒＬＰ２０８６だけによって誘発された免疫応答に劣らなかった。
ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６群（１群）およびＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋食塩水群（２群）について、推定による血清応答率の差は、６種のＴｄａｐおよび４種のＭＣＶ４抗原で、－４．６％～０．３％の間であり、この率の差の９５％ＣＩの下限は、９．１％以下であった。差のＣＩがすべて－１０％より高かったので、これらの差は、臨床上有意でなかった。ＲＣＤＣは、両方の群の対象について、ワクチン処置１の後の活発な免疫応答を示した。ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐが与えられた両方の群について、ベースラインより強いＧＭＴが認められた。
２種の主要ＭｎＢ試験株ＰＭＢ８０（Ａ２２）およびＰＭＢ２９５８（Ｂ２４）に対する、ベースラインからワクチン処置３の１カ月後までの４倍上昇応答は、ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６が与えられた群（それぞれ８４．０％および８５．７％）と二価ｒＬＰ２０８６＋食塩水＋食塩水が与えられた群（それぞれ８８．７％および８７．７％）とで似通っていた。
免疫原性の考察
ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋二価ｒＬＰ２０８６が二価ｒＬＰ２０８６＋食塩水＋食塩水およびＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋食塩水と比較される非劣性判断基準には、１０種のＭＣＶ４／Ｔｄａｐ抗原それぞれについて（ワクチン処置１から１カ月後）、また２種の主要ＭｎＢ試験株（Ａ２２およびＢ２４）を使用してのｈＳＢＡ力価それぞれについて（ワクチン処置３から１カ月後）、ＧＭＲについての両側９５％ＣＩの下限が０．６７より大きくなる（すなわち、非劣性限界が１．５になる）ことが要求された。この所定の閾値は、両方のＭｎＢ試験株ならびに１０種のＴｄａｐおよびＭＣＶ４抗原について満たされた。したがって、両方の副主要免疫原性目的が果たされた。詳細には、これらのデータによって、少なくとも次のことが裏付けられる。すなわち、１）二価ｒＬＰ２０８６と共に与えたＭＣＶ４およびＴｄａｐワクチンによって誘発された（ＧＭに基づく）免疫応答は、両方の群において、最初のワクチン処置から１カ月後に測定したとき、ＭＣＶ４およびＴｄａｐワクチンだけによって誘発された免疫応答に劣らなかった。ＭＣＶ４およびＴｄａｐワクチンのすべての成分に対する免疫応答が評価された。２）２種のＭｎＢ試験株で実施されるｈＳＢＡによって測定される、ＭＣＶ４およびＴｄａｐワクチンと共に与えた二価ｒＬＰ２０８６によって誘発された（ＧＭＴに基づく）免疫応答は、両方の群において、二価ｒＬＰ２０８６での３回目のワクチン処置から１カ月後に測定したとき、二価ｒＬＰ２０８６だけによって誘発された免疫応答に劣らなかった。
１０才以上１３才未満の対象におけるこの無作為化観察者盲検実薬対照多施設試験では、二価ｒＬＰ２０８６とＭＣＶ４＋Ｔｄａｐのどちらのワクチンに対する免疫原性も、ワクチンを並行して投与したとき、活発なままであった。
全体として、これらのデータは、Ｔｄａｐ、ＭＣＶ４、ＭｅｎＡＣＷＹ－ＣＲＭ、およびＨＰＶワクチンを、臨床的に並行して与えてもよいこと、ならびにこれらのワクチンを１回の訪問時に与えることが推奨されることを示唆している。この現在の研究（Ｂ１９７１０１５）からのデータによって、その結論が裏付けられ、また二価ｒＬＰ２０８６をＴｄａｐおよびＭＣＶ４と共に与えてよいことも裏付けられる。この研究では、少なくとも２用量の二価ｒＬＰ２０８６によって、両方の主要ＭｎＢ試験株に対して活発な免疫応答が惹起されたことが示された。この研究では、３用量の二価ｒＬＰ２０８６によって、両方の主要ＭｎＢ試験株（Ａ２２およびＢ２４）に対して活発な免疫応答が惹起されたことも示された。これらの試験株に発現されるｆＨＢＰは、ｒＬＰ２０８６ワクチン抗原と非相同であり、米国において侵襲性髄膜炎菌疾患分離株の中から同定された最も流行性の高いサブファミリーＡおよびサブファミリーＢ変異体に相当する。これら２種の変異体は、他の地理的領域における疾患分離株の中でも顕著である。Ｂ１９７１０１５研究のための免疫原性評価では、ｈＳＢＡ力価の４倍増加という定義を用いた。
２種の主要ＭｎＢ試験株それぞれについてのＬＯＤは、（防御の相関事項として認識されている）１：４に相当する力価とし、これら２種の主要ＭｎＢ試験株についての検証ＬＬＯＱは、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）では１：８、ＰＭＢ８０（Ａ２２）では１：１６に相当するｈＳＢＡ力価とした。二価ｒＬＰ２０８６が与えられる前に、ｈＳＢＡ力価が１：４以上である試験対象の割合は少なく、この集団の大部分の対象は、ＭｎＢ疾患に対して無防備とみなしてよいことが示された。２回目の試験ワクチン処置の後、高い割合の対象が、ｈＳＢＡ力価の４倍の増加を実現し、１：４以上かつＬＬＯＱ以上の免疫処置後力価を示した。こうした応答率は、両方のＭｎＢ株について、二価ｒＬＰ２０８６のＭＣＶ４＋Ｔｄａｐとの共投与を受けている対象と、二価ｒＬＰ２０８６を食塩水と共に与えられている対象とで似通っていた。ＲＣＤＣでも、二価ｒＬＰ２０８６がＭＣＶ４＋Ｔｄａｐと共投与されたかに関わりなく、対象の大半が、２種の主要ＭｎＢ株に対して応答を惹起したことが示された。
現研究（Ｂ１９７１０１５）において、ＰＭＢ８０（Ａ２２）についての、二価ｒＬＰ２０８６の二回目および三回目用量の後の４倍応答率（９５％ＣＩ）は、１群と２群を合わせたとき、６４．０％（６１．３、６６．５）および８６．３％（８４．４、８８．１）であった。同様にＢ２４について、二価ｒＬＰ２０８６の二回目および三回目用量の後の４倍応答率（９５％ＣＩ）は、１群と２群を合わせて、５７．４％（５４．６、６０．１）および８６．７％（８４．８、８８．５）であった。
特に、ベースラインからのｈＳＢＡ力価の４倍増加、およびワクチン処置後ｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ（２２では１：１６、Ｂ２４では１：８）以上である対象の割合の両方によって評価されたとおり、研究Ｂ１９７１０１５におけるｒＬＰ２０８６の二回目用量後の免疫応答は、活発であった。Ａ２２について、二回目用量後にｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ（１：１６）以上に達した、１群と２群を合わせた対象の百分率（９５％ＣＩ）は、６８．０％（６５．４、７０．５）であった。Ｂ２４については、対象の６４．２％（６１．５、６６．８）が、２回目試験用量後にＬＬＯＱ（１：８）以上のｈＳＢＡ力価を実現した。これらのデータは、２用量の二価ｒＬＰ２０８６に対する実質的なｈＳＢＡ応答を示している。
全体として、これらの結果は、ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐに対する免疫応答および二価ｒＬＰ２０８６に対する免疫応答が、二価ｒＬＰ２０８６とＭＣＶ４＋Ｔｄａｐを並行して投与したとき、活発なままであり、副主要研究目的に適合したことを示している。
１０才以上１３才未満の対象におけるこれらのデータは、副主要研究目的に適合し、二価ｒＬＰ２０８６をＭＣＶ４＋Ｔｄａｐと並行して与えることができるという仮説が裏付けられた。さらに、高い割合の対象が、２または３用量の二価ｒＬＰ２０８６でのワクチン処置の後、ｈＳＢＡ ４倍応答およびＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を実現し、こうした活発な応答は、ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐを並行して使用しても影響を受けなかった。免疫原性データと安全性データを考え合わせたとき、利益－リスクプロファイルは、二価ｒＬＰ２０８６の単独またはＭＣＶ４＋Ｔｄａｐと一緒の投与を支持するものである。
（実施例１２）
１０才以上２６才未満の健康な対象において与えられた髄膜炎菌血清型Ｂ二価組換えリポタンパク質（ｒＬＰ２０８６）ワクチンの安全性および忍容性を評価するための、第三相無作為化実薬対照観察者盲検試験
本試験は、１０才以上２６才未満の健康な対象における二価ｒＬＰ２０８６の安全性および忍容性を評価するように設計された、第三相無作為化実薬対照観察者盲検多施設試験とした。およそ５，７００人の対象を、２群のうちの１つに、２：１の比で無作為に割り当てた。１群には、０カ月目（１日目）に二価ｒＬＰ２０８６を与えた後、引き続いて、２カ月および６カ月目にワクチン処置を受けさせた。２群は、０カ月および６カ月目にＡ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）ワクチン、２カ月目に食塩水注射を受けた。
二価ｒＬＰ２０８６ワクチンは、１０ｍＭのｐＨ６．０のヒスチジン緩衝食塩水中に、各６０μｇの精製サブファミリーＡ ｒＬＰ２０８６タンパク質（変異体Ａ０５、配列番号１）および精製サブファミリーＢ ｒＬＰ２０８６タンパク質（変異体Ｂ０１、配列番号２）、０．１５Ｍの塩化ナトリウム、２．８のモル比のポリソルベート８０、およびリン酸アルミニウム（ＡｌＰＯ４）としての０．２５ｍｇのＡｌ３＋を含有するように製剤された０．５ｍＬ用量とした。
ＨＡＶワクチン（ＨＡＶＲＩＸ、０．５ｍＬ用量または１．０ｍＬ用量）は、７２０ＥＬＩＳＡ単位（ＥＬ．Ｕ．）または１４４０ＥＬ．Ｕ．のウイルス抗原を含有した。詳細には、ＨＡＶＲＩＸ（Ａ型肝炎ワクチン）は、筋肉内注射用の、不活化ウイルスの滅菌懸濁液である。ウイルス（ＨＭ１７５菌株）は、ＭＲＣ－５ヒト二倍体細胞中で増殖される。ＨＡＶワクチン（ＨＡＶＲＩＸ）の年齢別用量は、各国ごとの指針に従って供給した。ワクチンの各１ｍＬの成人用量は、水酸化アルミニウムとしての０．５ｍｇのアルミニウムに吸着させた１４４０ＥＬ．Ｕ．のウイルス抗原を含有する。ワクチンの各０．５ｍＬの小児用量は、水酸化アルミニウムとしての０．２５ｍｇのアルミニウムに吸着させた７２０ＥＬ．Ｕ．のウイルス抗原を含有する。ＨＡＶＲＩＸは、次の添加剤、すなわち、リン酸緩衝食塩水中のアミノ酸補給剤（０．３％ｗ／ｖ）、およびポリソルベート２０（０．０５ｍｇ／ｍＬ）を含有する。ＨＡＶＲＩＸは、製造工程から、残留ＭＲＣ－５細胞タンパク質（５ｍｃｇ／ｍＬ以下）、ホルマリン（０．１ｍｇ／ｍＬ以下）、および細胞成長培地に含まれるアミノグリコシド抗生物質であるネオマイシン硫酸塩（４０ｎｇ／ｍＬ以下）も含有する。ＨＡＶＲＩＸは、保存剤なしで製剤される。
注射用の滅菌標準食塩水（０．９％塩化ナトリウム）は、０．５ｍＬ用量として供給した。
Figure 0007337107000025
この研究は、１０才以上２６才未満の健康な対象において、０、２、および６カ月のスケジュールを使用して投与した１２０μｇの用量レベルでの二価ｒＬＰ２０８６の安全性および忍容性を評価し、二価ｒＬＰ２０８６についての安全性データベースの重要な構成要素を提供するものであった。
実薬対照として役立てることのできる、安全性、免疫原性、および有効性が実証済みの対ＭｎＢワクチンが存在しなかったため、０カ月および６カ月目に投与されたＨＡＶワクチンを、この研究における対照として選択した。この年齢群のための推奨される他のワクチンに比べて、ＨＡＶワクチンは、十分に確立された忍容性プロファイルを有する。加えて、ＨＡＶワクチンは、将来の旅行または他の暴露の際にＡ型肝炎ウイルス感染のリスクが増していく恐れのある対象にとって利益にもなった。対照群において２カ月目に食塩水を投与して、試験を盲検にしておいた。対象は、いずれかの髄膜炎菌血清型Ｂワクチンによる以前のワクチン処置、事前のＨＡＶワクチン処置を受けていた対象、いずれかのＨＡＶワクチンでのワクチン処置に対する禁忌を含めて、除外判断基準のいずれかに適合する場合、参加不適格とした。対象に、表Ａに従うワクチン処置訪問（訪問１、３、および７）それぞれの時点で、１２０μｇの１用量の二価ｒＬＰ２０８６またはＨＡＶワクチン／食塩水／ＨＡＶワクチンを与えた。
対象には、０、２、および６カ月のスケジュールを使用して、ワクチン処置を受けさせた。１群には、０カ月目（１日目）に二価ｒＬＰ２０８６を与えた後、引き続いて、２カ月および６カ月目にワクチン処置を受けさせた。２群には、０カ月および６カ月目にＨＡＶワクチン、２カ月目に食塩水注射を受けさせて、試験を盲検にしておいた。ＨＡＶワクチンの年齢別用量は、各国ごとの指針に従って供給した。
安全性集団についての主要評価項目は、最初の試験ワクチン処置から最後の試験ワクチン処置の６カ月後までの期間の間に、少なくとも１件の重度有害事象（ＳＡＥ）が生じた対象の百分率、および各ワクチン処置後３０日以内の期間の間に、医療手当を受けた有害事象（ＡＥ）が少なくとも１件生じた対象の百分率とした。
全体として、各ワクチン処置から３０日以内に少なくとも１件のＳＡＥを報告する対象の割合は、両方の群について３．０％以下であり、二価ｒＬＰ２０８６とＨＡＶワクチン／食塩水対照とで似通っていた。研究全体を通して、２群（ＨＡＶワクチン／食塩水）の対象は、１群（二価ｒＬＰ２０８６）より数値的に高い割合のＳＡＥを報告した（それぞれ、２．５２％および１．５５％）。ワクチン処置および追跡段階の間も、２群において１群より数値的に高い割合の対象がＳＡＥを報告した。全般に、ワクチン処置段階の間に報告されたＡＥの百分率は、２群より１群において高かった。１群の対象は、ワクチン処置段階の間、２群の対象より多くの反応原性ＡＥを報告した。反応原性ＡＥとは、ワクチン処置後７日以内に発生した任意のＡＥであると定義され、所定の好ましい用語リストに対応させた。二価ｒＬＰ２０８６が与えられた群について、新たな安全性の懸念はこの研究において確認されなかった。この研究からのデータによって、二価ｒＬＰ２０８６が、１０才以上２６才未満の対象において安全であり、十分に認容されることが示される。
（実施例１３）
他の認可ワクチンと並行して与えられた健康な青年における髄膜炎菌血清型Ｂ二価ｒＬＰ２０８６ワクチンの免疫原性
背景：髄膜炎菌（Ｎ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ（ＭｎＢ）Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）ワクチンである、二価ｒＬＰ２０８６（ＴＲＵＭＥＮＢＡ（登録商標））は、１０～２５才における侵襲性ＭｎＢ疾患の予防のために、米国で認可されている。この集団において推奨されたワクチンを並行投与することで、コンプライアンスが高まり、公衆衛生への影響は最大限大きくなる。
目的：ＴＲＵＭＥＮＢＡと並行して投与したときの、ＧＡＲＤＡＳＩＬ（登録商標）（ＨＰＶ４）、またはＭＥＮＡＣＴＲＡ（登録商標）（髄膜炎菌Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ－１３５型、ＭＣＶ４）およびＡＤＡＣＥＬ（登録商標）（Ｔｄａｐ）によって誘発された力価幾何平均値［ＧＭ］に基づく）免疫応答の非劣性を実証すること。
計画／方法：試験１：０、２、および６カ月目に、対象（１１才～１８才未満）にＴＲＵＭＥＮＢＡ＋ＨＰＶ４、ＴＲＵＭＥＮＢＡ、またはＨＰＶ４を与えた。ＴＲＵＭＥＮＢＡまたはＨＰＶ４だけを与えられている対象には、食塩水注射を受けさせて、隠したままにした。試験２：対象（１０才～１３才未満）に、ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ＋ＴＲＵＭＥＮＢＡ、ＭＣＶ４＋Ｔｄａｐ、またはＴＲＵＭＥＮＢＡを与えた。ＴＲＵＭＥＮＢＡは、０、２、および６カ月目に投与した。ＭＣＶ４およびＴｄａｐは、０カ月目に与えた。ＭＣＶ４およびＴｄａｐ、またはＴＲＵＭＥＮＢＡだけを与えられている群には、０、２、および６カ月目に食塩水注射を受けさせて、隠したままにした。最終ワクチン投与後に免疫応答を評価した。両方の試験において、群間のＧＭ比の９５％ＣＩの下限が０．６７（１．５倍非劣性限界）を超えていた場合、非劣性が実現された。
結果：非劣性判断基準は、これらのワクチンをＴＲＵＭＥＮＢＡと共投与したとき、ＨＰＶ１８（より低い、９５％ＣＩ＝０．６２）を除くすべてのＨＰＶ抗原について、またすべてのＴｄａｐおよびＭＣＶ４抗原について満たされた。ＨＰＶ４を単独またはＴＲＵＭＥＮＢＡと共に与えたとき、すべてのＨＰＶ抗原についての抗体陽転率が９９％以上となった。ＴＲＵＭＥＮＢＡを認可ワクチンと共投与したとき、非劣性判断基準は、ＭｎＢ ｈＳＢＡ応答について満たされた（表）。
データは、ＴＲＵＭＥＮＢＡの、米国人青年に推奨されているＨＰＶ４、ＭＣＶ４、およびＴｄａｐワクチンとの共投与を支持するものである。
Figure 0007337107000026
Figure 0007337107000027
（実施例１４）
青年における、髄膜炎菌血清型Ｂワクチンである二価ｒＬＰ２０８６の免疫原性の第三相試験：抗原性の多様な菌株パネルに対する殺菌活性
背景：
Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）をターゲットとする二価ｒＬＰ２０８６は、１０～２５才において髄膜炎菌血清型Ｂ（ＭｎＢ）疾患を予防するために、米国で認可されている。二価ｒＬＰ２０８６による広い防御は、ワクチン抗原と異なる配列を有するｆＨＢＰを発現する４種の多様な侵襲性ＭｎＢ株を用いたｈＳＢＡにおいて、最初に実証された。この中心的な第三相試験では、循環する侵襲性ＭｎＢ株の多様性を表す１０種の付加的ＭｎＢ試験株でのｈＳＢＡデータによって、ＭｎＢ疾患に対する広いカバー範囲が、さらに裏付けられる。
方法：
１０才～１９才未満の健康な対象を無作為化して、０、２、および６カ月の時点で二価
ｒＬＰ２０８６を与え、または０および６カ月の時点でＡ型肝炎ウイルスワクチン、２カ
月の時点で食塩水を与えた。免疫応答は、４種の主要ＭｎＢ試験株でのｈＳＢＡ（主要評
価項目、Ｎ＝１２１０～１２６６）、および１０種の二次的ＭｎＢ試験株を使用する亜集
団（二次的評価項目、Ｎ＝２６６～２８１）において評価した。すべての菌株が、ワクチ
ンと非相同のｆＨＢＰを発現した。
結果： ＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価によって測定された、用量２および３から１カ月後の、二価ｒＬＰ２０８６受容者における、４種の主要ＭｎＢ試験株に対するｈＳＢＡ応答は、それぞれ、６４．０％～９９．１％および８７．１％～９９．５％であった（表）。１０種の二次的ＭｎＢ試験株に対するｈＳＢＡ応答は、用量２および３から１カ月後、それぞれ、６１．１％～１００．０％および７５．１％～９８．６％であった。各二次的試験株についてのｈＳＢＡ ＧＭＴは、ベースラインの４．５～１１．４から用量３後の２２．１～９３．５に増大した。
Figure 0007337107000028
結論：
二価ｒＬＰ２０８６ワクチン処置の結果として、２および３用量の後、ワクチン抗原と非相同の多様なＭｎＢ株に対して、活発な免疫応答が生じた。高い割合の個体が、１０種の付加的ＭｎＢ試験株に対して、防御の相関事項より大きい防御ｈＳＢＡ力価（１：４以上のｈＳＢＡ力価）を生じた。一括して、これらの第三相免疫原性データは、二価ｒＬＰ２０８６が、青年において、ＭｎＢ疾患に対する広い防御をもたらしたことを裏付けるものである。
（実施例１５）
若年成人における、髄膜炎菌血清型Ｂワクチンである二価ｒＬＰ２０８６の免疫原性の第三相試験：抗原性の多様な菌株パネルに対する殺菌活性
背景：
Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）をターゲットとする二価ｒＬＰ２０８６は、１０～２５才において髄膜炎菌血清型Ｂ（ＭｎＢ）疾患を予防するために、米国で認可されている。二価ｒＬＰ２０８６による広い防御は、ワクチン抗原と異なる配列を有するｆＨＢＰを発現する４種の多様な侵襲性ＭｎＢ株を用いたｈＳＢＡにおいて、最初に実証された。この中心的な第三相試験では、循環する侵襲性ＭｎＢ株の多様性を表す１０種の付加的ＭｎＢ試験株でのｈＳＢＡデータによって、ＭｎＢ疾患に対する広いカバー範囲が、さらに裏付けられる（ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ：ＮＣＴ０１３５２８４５）。
方法：
１８才～２６才未満の健康な対象を無作為化して、０、２、および６カ月の時点で、二価ｒＬＰ２０８６または食塩水を与えた。免疫応答は、４種の主要ＭｎＢ試験株でのｈＳＢＡ（主要評価項目、Ｎ＝１７０２～１７１４）、および１０種の二次的ＭｎＢ試験株を使用する亜集団（Ｎ＝２７３～２８４）（二次的評価項目、Ｎ＝２７３～２８４）において評価した。すべての菌株が、ワクチンと非相同のｆＨＢＰを発現した。
結果：
ＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価によって測定される、用量２および３から１カ月後の、二価ｒＬＰ２０８６受容者における、４種の主要ＭｎＢ試験株に対するｈＳＢＡ応答は、それぞれ、６８．３％～９７．４％および８７．４％～９９．４％であった（表）。１０種の二次的ＭｎＢ試験株に対するｈＳＢＡ応答は、用量２および３から１カ月後、それぞれ、５１．６％～９７．９％および７１．３％～９９．３％であった。各二次的菌株についてのｈＳＢＡ ＧＭＴは、ベースラインの５．１～１３．９から用量３後の２０．６～９６．３に増大した。
Figure 0007337107000029
結論：
二価ｒＬＰ２０８６ワクチン処置によって、２および３用量の後、ワクチン抗原と非相同のｆＨＢＰ変異体を発現する多様なＭｎＢ株に対して、活発な免疫応答が惹起された。高い割合の個体が、１０種の付加的ＭｎＢ試験株に対して、防御の相関事項より大きい防御ｈＳＢＡ力価（１：４以上のｈＳＢＡ力価）を生じた。一括して、これらの第三相免疫原性データは、二価ｒＬＰ２０８６が、若年成人において、ＭｎＢ疾患に対する広い防御をもたらしたことを裏付けるものである。
配列表フリーテキスト配列表
配列番号１は、組換え髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ０５ポリペプチド抗原のアミノ酸配列を示す。
配列番号２は、組換え髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ０１ポリペプチド抗原のアミノ酸配列を示す。
配列番号３は、配列番号１および配列番号２の１～４位のアミノ酸残基を示す。
配列番号４は、組換えナイセリアサブファミリーＡ ＬＰ２０８６ポリペプチド（ｒＬＰ２０８６）（Ａ０５）ポリペプチド抗原のＮ末端のアミノ酸配列を示す。
配列番号５は、ナイセリアサブファミリーＡ ＬＰ２０８６ Ｍ９８２５０７７１ポリペプチド（Ａ０５）ポリペプチド抗原のＮ末端のアミノ酸配列を示す。
配列番号６は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ１５３のアミノ酸配列を示す。
配列番号７は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ０４のアミノ酸配列を示す。
配列番号８は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ０５のアミノ酸配列を示す。
配列番号９は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ１２のアミノ酸配列を示す。
配列番号１０は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ２２のアミノ酸配列を示す。
配列番号１１は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ０２のアミノ酸配列を示す。
配列番号１２は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ０３のアミノ酸配列を示す。
配列番号１３は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ０９のアミノ酸配列を示す。
配列番号１４は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ２２のアミノ酸配列を示す。
配列番号１５は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ２４のアミノ酸配列を示す。
配列番号１６は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ４４のアミノ酸配列を示す。
配列番号１７は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ１６のアミノ酸配列を示す。
配列番号１８は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ０７のアミノ酸配列を示す。
配列番号１９は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ１９のアミノ酸配列を示す。
配列番号２０は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ０６のアミノ酸配列を示す。
配列番号２１は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ１５のアミノ酸配列を示す。
配列番号２２は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ２９のアミノ酸配列を示す。
配列番号２３は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ１５のアミノ酸配列を示す。

Claims (20)

  1. ヒトにおいて、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対して、ならびに、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して、殺菌免疫応答を誘発するための方法において、組み合わせて使用される、有効量の髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物及び有効量の少なくとも１種の付加的免疫原性組成物であって、
    ここにおいて、前記髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物は、ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第一の脂質付加ポリペプチドと、ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第二の脂質付加ポリペプチドとを含み、
    少なくとも１種の付加的免疫原性組成物は、
    （ｉ）ＭＣＶ４、及び、
    （ｉｉ）Ｔｄａｐワクチン
    を含み、
    ここにおいて、免疫応答は、ｉ）髄膜炎菌Ａ０５株と異種である髄膜炎菌血清型ＢサブファミリーＡ株に対する殺菌免疫応答であり、そして、ｉｉ）髄膜炎菌Ｂ０１株と異種である髄膜炎菌血清型ＢサブファミリーＢ株に対する殺菌免疫応答である、
    前記髄膜炎菌ｒＬＰ２０８６組成物及び前記付加的免疫原性組成物。
  2. 免疫応答が、髄膜炎菌Ｍ９８２５０７７１株と異種である髄膜炎菌血清型ＢサブファミリーＡ株に対する殺菌免疫応答である、請求項１に記載の髄膜炎菌ｒＬＰ２０８６組成物及び付加的免疫原性組成物。
  3. 免疫応答が、髄膜炎菌ＣＤＣ１１２７株と異種である髄膜炎菌血清型ＢサブファミリーＢ株に対する殺菌免疫応答である、請求項１に記載の髄膜炎菌ｒＬＰ２０８６組成物及び付加的免疫原性組成物。
  4. 免疫応答が、髄膜炎菌ＣＤＣ１５７３株と異種である髄膜炎菌血清型ＢサブファミリーＢ株に対する殺菌免疫応答である、請求項１に記載の髄膜炎菌ｒＬＰ２０８６組成物及び付加的免疫原性組成物。
  5. 髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物が、ポリソルベート８０をさらに含む、請求項１－４のいずれか１項に記載の髄膜炎菌ｒＬＰ２０８６組成物及び付加的免疫原性組成物。
  6. 髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物が、アルミニウムをさらに含む、請求項１－５のいずれか１項に記載の髄膜炎菌ｒＬＰ２０８６組成物及び付加的免疫原性組成物。
  7. 髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物が、ヒスチジン緩衝剤をさらに含む、請求項１－６のいずれか一項に記載の髄膜炎菌ｒＬＰ２０８６組成物及び付加的免疫原性組成物。
  8. 髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物が、塩化ナトリウムをさらに含む、請求項１－７のいずれか一項に記載の髄膜炎菌ｒＬＰ２０８６組成物及び付加的免疫原性組成物。
  9. 髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物が、約１２０μｇ／ｍｌの第一のポリペプチド、約１２０μｇ／ｍｌの第二のポリペプチド、約２．８のモル比のポリソルベート８０、約０．５ｍｇ／ｍｌのアルミニウム、約１０ｍＭのヒスチジン、および約１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む、請求項１－８のいずれか一項に記載の髄膜炎菌ｒＬＰ２０８６組成物及び付加的免疫原性組成物。
  10. 髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物が、約６０μｇの第一のポリペプチド、約６０μｇの第二のポリペプチド、約１８μｇのポリソルベート８０、約２５０μｇのアルミニウム、約７８０μｇのヒスチジン、および約４３８０μｇの塩化ナトリウムを含む、請求項１－８のいずれか一項に記載の髄膜炎菌ｒＬＰ２０８６組成物及び付加的免疫原性組成物。
  11. 髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物が、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ａ２２、Ａ５６、Ｂ２４、Ｂ４４株の少なくとも１種、またはこれらのいずれかの組合せに対する殺菌免疫応答を誘発する、請求項１－１０のいずれか一項に記載の髄膜炎菌ｒＬＰ２０８６組成物及び付加的免疫原性組成物。
  12. 髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物が、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ｂ２４、Ｂ１６、Ｂ４４、Ａ２２、Ｂ０３、Ｂ０９、Ａ１２、Ａ１９、Ａ０７、Ｂ１５３株の少なくとも１種、またはこれらのいずれかの組合せに対する殺菌免疫応答を誘発する、請求項１－１０のいずれか一項に記載の髄膜炎菌ｒＬＰ２０８６組成物及び付加的免疫原性組成物。
  13. 少なくとも１種の付加的免疫原性組成物が液体組成物である、請求項１に記載の髄膜炎菌ｒＬＰ２０８６組成物及び付加的免疫原性組成物。
  14. 少なくとも１種の付加的免疫原性組成物が、凍結乾燥されていない、請求項１に記載の髄膜炎菌ｒＬＰ２０８６組成物及び付加的免疫原性組成物。
  15. 髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物の有効量が１用量を含む、請求項１－１４のいずれか一項に記載の髄膜炎菌ｒＬＰ２０８６組成物及び付加的免疫原性組成物。
  16. 髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物の有効量が２用量を含む、請求項１－１４のいずれか一項に記載の髄膜炎菌ｒＬＰ２０８６組成物及び付加的免疫原性組成物。
  17. 髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物の有効量が、追加免疫用量をさらに含む、請求項１５又は１６に記載の髄膜炎菌ｒＬＰ２０８６組成物及び付加的免疫原性組成物。
  18. 髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物の有効量が、多くとも３用量を含む、請求項１－１４のいずれか一項に記載の髄膜炎菌ｒＬＰ２０８６組成物及び付加的免疫原性組成物。
  19. 髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物が、少なくとも１種の付加的免疫原性組成物の使用から２４時間以内に使用される、請求項１－１８のいずれか一項に記載の髄膜炎菌ｒＬＰ２０８６組成物及び付加的免疫原性組成物。
  20. 髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ｒＬＰ２０８６組成物が、少なくとも１種の付加的免疫原性組成物と同時に使用される、請求項１－１８のいずれか一項に記載の髄膜炎菌ｒＬＰ２０８６組成物及び付加的免疫原性組成物。
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