KR20160095114A

KR20160095114A - 이소프로필 트리아졸로 피리딘 화합물

Info

Publication number: KR20160095114A
Application number: KR1020167018131A
Authority: KR
Inventors: 차피크 햄도치; 프라나브 마이티; 앤 라이펠 밀러
Original assignee: 일라이 릴리 앤드 캄파니
Priority date: 2014-01-10
Filing date: 2015-01-06
Publication date: 2016-08-10
Also published as: AU2015204916B2; EP3092240B1; US20160333005A1; AU2015204916A1; US9809592B2; JP2017507115A; EP3092240A1; BR112016012469A2; CA2931817A1; JP6170255B2; MX2016008909A; WO2015105779A1; EA201691150A1; CN105899509B; ES2705039T3; CN105899509A

Abstract

본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 이러한 화합물을 사용하여 당뇨병을 치료하는 방법 및 이러한 화합물을 제조하는 방법을 제공하며, 여기서 R¹은 H, CH₃, CN, CH₂CN, C(CH₃)₂CN, 및 F로 이루어진 군으로부터 선택되고; R²는 H, O(C₁-C₃알킬)R⁵, CH₂CN, 및 CN으로 이루어진 군으로부터 선택되고; R³은 H, OCH₃, CN, C(CH₃)₂CN, 및 CH₂CN으로 이루어진 군으로부터 선택되고; R⁴는 H 및 CH₃으로 이루어진 군으로부터 선택되고; R⁵는 H, CN, C(CH₃)₂CN, OCH₃, S(O)₂CH₃, 및 C(CH₃)₂OH로 이루어진 군으로부터 선택되며; 단 R¹, R², R³, 및 R⁴로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나는 H이다.
<화학식 I>

Description

이소프로필 트리아졸로 피리딘 화합물 {ISOPROPYL TRIAZOLO PYRIDINE COMPOUNDS}

본 발명은 트리아졸로-피리딘 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 요법에 있어서 화합물의 용도에 관한 것이다. 본 발명의 트리아졸로-피리딘 화합물은 GPR-40의 활성화제이다.

유리 지방산 수용체 1 (FFA1 또는 FFAR1)로도 알려진 GPR-40은 설치류 췌장 베타 세포, 인슐린종 세포주, 및 인간 섬에서 높은 수준으로 우세하게 발현되는 것으로 보고된다. 인슐린 분비의 글루코스 조정은 GPR-40 활성화의 중요한 특색이다. GPR-40 활성화를 유발시키는 화합물은 제II형 당뇨병 (T2D)을 가진 환자에서 인슐린 분비의 자극과 연관된다. GPR-40 활성화제인 화합물은 GPR-40 매개 상태의 치료에 사용하는데 바람직하다.

WO2004/041266은 방향족 고리 및 양이온을 방출할 수 있는 기를 갖는 화합물을 포함하는 GPR-40 수용체 기능 조절제를 개시한다.

본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.

<화학식 I>

상기 식에서

R¹은 H, CH₃, CN, CH₂CN, C(CH₃)₂CN, 및 F로 이루어진 군으로부터 선택되고;

R²는 H, O(C₁-C₃알킬)R⁵, CH₂CN, 및 CN으로 이루어진 군으로부터 선택되고;

R³은 H, OCH₃, CN, C(CH₃)₂CN, 및 CH₂CN으로 이루어진 군으로부터 선택되고;

R⁴는 H 및 CH₃으로 이루어진 군으로부터 선택되고;

R⁵는 H, CN, C(CH₃)₂CN, OCH₃, S(O)₂CH₃, 및 C(CH₃)₂OH로 이루어진 군으로부터 선택되며; 단 R¹, R², R³, 및 R⁴로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나는 H이다.

본 발명의 화합물은 상기 구조에서 별표 (*)로 식별되는 키랄 탄소를 갖는다. 바람직한 화합물은 상기 나타낸 배위를 가지며, 이는 통상적으로 S 배위로서 알려져 있다. 의문을 피하기 위해, 본 발명은 화학식 Ia에 의해 도시된 바와 같이 모든 키랄 탄소 배위를 포함한다.

<화학식 Ia>

한 실시양태에서 R¹은 H, CH₃ 및 F로 이루어진 군으로부터 선택된다. 한 실시양태에서 R¹은 H 및 CH₃으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

또 다른 실시양태에서 R²는 H, 및 -O(C₁-C₃알킬)R⁵로 이루어진 군으로부터 선택된다. 한 실시양태에서 R²는 H 및 OCH₃으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 또 다른 실시양태에서 R⁵는 H, -S(O)₂CH₃, 및 -C(CH₃)₂OH로 이루어진 군으로부터 선택된다.

또 다른 실시양태는 R³은 H이고, R¹은 CH₃이고 R⁴는 CH₃인 화합물이다. 또 다른 실시양태에서 R³은 H이고, R¹은 CH₃이고, R⁴는 CH₃이고, R²는 -OCH₃이다.

한 실시양태에서 R³은 H 및 OCH₃으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 한 실시양태에서 R³은 H이다.

한 실시양태에서 R⁴는 CH₃이다. R¹은 CH₃이고, R²는 H 또는 -OCH₃이고, R³은 H이고, R⁴는 CH₃인 화합물이 한 실시양태이다. 한 실시양태에서 R¹은 CH₃이고, R⁴는 CH₃이다.

본 발명의 한 바람직한 화합물은 (S)-3-{4-[2-이소프로필-8-(4-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시]-페닐}-헥스-4-인산 또는 그의 제약상 허용되는 염이다. 본 발명의 하나의 바람직한 화합물은 (S)-3-{4-[8-(2,6-디메틸-페닐)-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시]-페닐}-헥스-4-인산 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.

본 발명은 또한 상기 기재된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제와 함께 포함하는 제약 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한 상기 기재된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제, 및 임의로 1종 이상의 치료제와 함께 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 추가의 치료제는 예를 들어 메트포르민 및/또는 자누비아를 포함한다.

본 발명은 또한 포유동물에서 당뇨병을 치료하는 방법을 제공한다. 방법은 유효량의 화학식 I에 대해 상기 기재된 바와 같은 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 치료를 필요로 하는 포유동물에게 투여하는 것을 포함한다. 보다 바람직하게는 본 발명은 유효량의 화학식 I에 대해 상기 기재된 바와 같은 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 제2형 당뇨병의 치료를 필요로 하는 포유동물에서 제2형 당뇨병을 치료하는 방법을 제공한다.

본 발명은 요법에 사용하기 위한 상기 기재된 바와 같은 화학식 I에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.

또 다른 형태에서, 본 발명은 당뇨병의 치료를 필요로 하는 포유동물에서 당뇨병을 치료하는데 사용하기 위한 화학식 I에 따른 상기 기재된 바와 같은 화합물, 그의 제약상 허용되는 염, 또는 제약 조성물을 제공한다. 바람직하게는, 이러한 용도는 제2형 당뇨병의 치료를 위한 것이고, 포유동물은 인간이다.

본 발명은 당뇨병의 치료를 위한 의약의 제조에 있어서 화학식 I에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도를 제공한다. 바람직하게는 의약은 제2형 당뇨병의 치료를 위한 것이다.

또 다른 형태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물을 제공하기 위한 하기 화학식 II의 중간체 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.

<화학식 II>

상기 식에서 R¹은 H, CH₃, CN, CH₂CN, C(CH₃)₂CN, 및 F로 이루어진 군으로부터 선택되고;

R⁴는 H 및 CH₃으로 이루어진 군으로부터 선택되고;

R⁵는 H, CN, C(CH₃)₂CN, OCH₃, S(O)₂CH₃, 및 C(CH₃)₂OH로 이루어진 군으로부터 선택되며; 단 R¹, R², R³, 및 R⁴로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나는 H이고;

R은 C_1-4 알킬, C_1-4 할로알킬, C_3-6 시클로알킬, C_1-4 알킬-C_3-6 시클로알킬, 페닐, 및 C_1-5 알킬페닐로 이루어진 군으로부터 선택된다. 바람직한 R 기는 C_1-2 알킬, C_1-2 할로알킬, 페닐, 및 C_1-2 알킬페닐을 포함한다. 특히 바람직한 R 기는 메틸, 에틸, 페닐, 및 벤질; 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함한다.

본 발명은 또한 화학식 I에 대해 상기 기재된 화합물을 제조하는 과정 또는 방법을 제공한다. 방법은 화학식 II에 따른 중간체 화합물을 탈-보호 또는 탈-에스테르화하여, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제조하는 것을 포함한다.

관련 기술분야의 통상의 기술자는 과도한 실험없이 반응물을 탈-보호하는 것을 용이하게 이해하고 구현할 수 있을 것이다. 카르복실산 및 보호된 카르복실산 이외에, 카르복실산으로 용이하게 전환될 수 있는 다른 관능기가 카르복실산 또는 보호된 산 대신에 사용될 수 있음이 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 인지될 것이다. 이러한 관능기, 제조, 및 이들 관능기의 카르복실산으로의 변환은 문헌 ["Comprehensive Organic Transformations: A Guide to Functional Group Preparations" by Larock. R.C, Wiley VCH, 1999 및 "March's Advanced Organic Chemistry, Reactions, Mechanisms and Structure" Smith, M.B., and March, J., Wiley-Interscience, 6th Ed. 2007]에서 찾아볼 수 있다.

본 발명의 화합물은 제약상 허용되는 염으로서 제공될 수 있다. "제약상 허용되는 염"은 임상적 및/또는 수의학적 용도에 허용될 수 있는 것으로 간주되는 본 발명의 화합물의 염을 지칭한다. 제약상 허용되는 염 및 그들을 제조하는 통상의 방법론은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들면, 문헌 [P. Stahl, et al., Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use, (VCHA/Wiley-VCH, 2002); S.M. Berge, et al., "Pharmaceutical Salts," Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol. 66, No. 1, January 1977]을 참조한다.

개별 이성질체, 거울상이성질체, 또는 부분입체이성질체는 방법, 예컨대 키랄 크로마토그래피에 의해 화학식 I의 화합물의 합성 중 임의의 편리한 포인트에서 분리될 수 있다. 추가적으로, 하기 반응식 및 제조예에 기재된 중간체는 다수의 질소, 히드록시, 및 산 보호기, 예컨대 에스테르를 함유한다. 가변 보호기는 각 경우에 특정한 반응 조건 및 수행될 특정한 변환에 따라 동일하거나 상이할 수 있다. 보호 및 탈보호 조건은 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있고, 문헌에 기재되어 있다. 예를 들면, 문헌 [Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, (T. Greene and P. Wuts, eds., 2d ed. 1991)]을 참조한다.

본원에 사용된 약어는 문헌 [Aldrichimica Acta, Vol. 17, No. 1, 1984]에 따라 정의된다. 다른 약어는 하기와 같이 정의된다: "ADDP"는 1-(아조디카르보닐)디피페리딘을 지칭하고; "BSA"는 소 혈청 알부민을 지칭하고; "n-BuLi"는 n-부틸 리튬을 지칭하고; "DIBAL"은 디이소부틸알루미늄 히드라이드를 지칭하고;; "DCM"은 디클로로메탄을 지칭하고; "DMEM"은 둘베코 변형 이글 배지를 지칭하고; "DMF"은 디메틸포름아미드를 지칭하고; "DEAD"는 디에틸 아조디카르복실레이트를 지칭하고; "DMF"는 디메틸포름아미드를 지칭하고; "DMSO"는 디메틸술폭시드를 지칭하고; "EC₅₀"은 반수 최대 반응에서의 유효 농도를 지칭하고; "EtOAc"는 에틸 아세테이트를 지칭하고; "EtOH"는 에틸 알콜 또는 에탄올을 지칭하고; "F12"는 햄 F12 배지를 지칭하고; "FA"는 지방산을 지칭하고; "FBS"는 소 태아 혈청을 지칭하고; "HEK"는 인간 배아 신장을 지칭하고; "IC₅₀"은 그 작용제에 대한 가능한 최대 억제 반응의 50%를 생성하는 작용제의 농도를 지칭하고; "MeOH"는 메틸 알콜 또는 메탄올을 지칭하고; "MTBE"는 메틸 t-부틸 에테르를 지칭하고; "NBS"는 N-브로모숙신이미드를 지칭하고; "Pd(amphos)Cl₂"는 비스(디-tert-부틸(4-디메틸아미노페닐)포스핀)디클로로팔라듐(II)을 지칭하고; "Pd(dppf)Cl₂"는 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센-팔라듐(II) 디클로라이드를 지칭하고; "Pd(PPh₃)₂Cl₂"는 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 클로라이드를 지칭하고; "PPAR"은 퍼옥시솜 증식자-활성화된 수용체를 지칭하고; "PPRE"는 퍼옥시솜 증식자 반응 요소를 지칭하고; "RFU"는 상대 형광 단위를 지칭하고; "RPMI"는 로스웰 파크 메모리얼 인스티튜트(Roswell Park Memorial Institute)를 지칭하고; "TFA"는 트리플루오로아세트산을 지칭하고; "THF"는 테트라히드로푸란을 지칭하고; "TK"는 티미딘 키나제를 지칭하고; "TAK875"는 파시글리팜으로 공지된 다케다(Takeda) 화합물을 지칭한다.

본원에 사용된 용어 알킬은 직쇄 알킬, 예컨대 에틸 또는 n-프로필, 또는 분지쇄 알킬, 예컨대 이소프로필 또는 tert-부틸이다. 용어 C_1-4 알킬은 알킬 쇄의 탄소에 부착된 1개, 2개, 3개, 또는 보다 많은 할로 기를 갖는 알킬 기를 지칭한다. 2개 이상의 할로겐이 있다면, 할로겐이 동일한 탄소에 부착될 필요는 없다. 이 용어는 또한 알킬 기의 모든 수소 원자가 할로겐으로 대체된 퍼할로 알킬을 포함한다.

하기 반응식에서, 달리 나타내지 않는 한, 모든 치환기는 이전에 정의된 바와 같다. 시약 및 출발 물질은 일반적으로 관련 기술분야의 통상의 기술자에 용이하게 입수가능하다. 다른 것들은 공지되어 있는 구조적으로-유사한 화합물의 합성과 유사한 유기 및 헤테로시클릭 화학의 표준 기술, 및 임의의 신규 절차를 비롯한 하기 제조예 및 실시예에 기재된 절차에 의해 제조될 수 있다.

<반응식 1>

화학식 I의 화합물은 반응식 1에 도시된 바와 같은 반응에 따라 제조될 수 있다. PG는 산을 위해 개발된 보호기, 예컨대 에스테르이다 (상기 참조). 반응식 1 (단계 1)은 페닐 술폰산 치환된 디아미노 피리딘 4급 염의 형성을 도시한다. 모노 메틸 또는 트리메틸 페닐 아미노술포네이트 (1)는 치환된 2-아미노 피리딘 (2)과 반응하여, 디아미노 피리딘 4급 염 (3)을 제공할 수 있다. 4급 염 (3)은 이어서 극성 양성자성 용매, 예컨대 MeOH를 사용하여 유기 염기, 예컨대 트리에틸아민 중에서 2-메틸프로판알 (4, 단계 2a)과 반응하여, 치환된 [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘 (6)을 형성할 수 있다. 대안적으로 2-메틸프로파노일 클로라이드 (5, 단계 2b)는 염기성 유기 용매, 예컨대 피리딘 중에서 4급 염 (3)과 반응하여, 치환된 [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘 (6)을 형성할 수 있다. 화합물 (6)의 에스테르는 극성 비양성자성 용매, 예컨대 DCM 중에서 -78℃와 같은 온도에서 환원제, 예컨대 디이소부틸 알루미늄 히드라이드 (DIBAL)를 사용하여 표준 조건 하에 메틸 히드록시로 환원되어, 히드록시 화합물 (7, 단계 3)을 제공할 수 있다. 관련 기술 분야에 널리 공지되어 있는 다른 환원 시약은 수소화알루미늄리튬 또는 수소화붕소나트륨이다. 화합물 (7)은 미츠노부(Mitsunobu) 조건 하에 에테르 (10, 5b 단계)로 알킬화될 수 있다. 미츠노부 조건은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 포스핀, 예컨대 트리페닐 포스핀, 트리부틸 포스핀, 또는 트리에틸포스핀 및 아조디카르복실레이트, 예컨대 디에틸 아조디카르복실레이트 (DEAD) 또는 디이소프로필 아조디카르복실레이트 (DIAD) 또는 아조디카르보닐, 예컨대 ADDP를 사용하여 알콜 (7)을 친핵체, 예컨대 페놀 (9)과 반응시키는 것을 수반한다. 대안적으로 알콜 (7)은 할로겐 (8, 4 단계), 예컨대 브로마이드 또는 클로라이드로 전환되는데 티오닐 클로라이드를 사용하여 클로라이드를 형성하거나 또는 DCM 중 삼브로민화인을 사용하여 브로마이드를 형성할 수 있다. 할로겐화 화합물 (8)은 이어서, 극성 비양성자성 용매, 예컨대 아세토니트릴 중에서 무기 염기, 예컨대 탄산세슘 또는 아세트산칼륨을 사용하여 염기성 조건 하에 페놀 (9)로 알킬화되어, 화합물 (10, 단계 5a)을 제공할 수 있다. 8-할로겐 치환된 [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘 (10)은 보론산 시약을 사용하여 스즈키-미야우라(Suzuki-Miyaura) 교차 커플링 조건 하에 커플링될 수 있다. 통상의 기술자는 이러한 교차 커플링 반응을 용이하게 하기에 유용한 다양한 조건이 있음을 인지할 것이다. 따라서, 적합한 팔라듐 시약은 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 디클로라이드, Pd(amphos)Cl₂, 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐 (0)과 트리시클로헥실포스핀, (1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센)팔라듐 (II) 클로라이드, 팔라듐 테트라키스트리페닐포스핀, 또는 팔라듐(II) 아세테이트를 포함한다. 8-치환된 [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘 (II, 6 단계)을 제공하기에 적합한 염기는 적합한 비-극성 용매, 예컨대 1,4-디옥산 중 탄산세슘, 탄산나트륨, 탄산칼륨, 또는 삼염기성 인산칼륨 1수화물을 포함한다. 화학식 II의 보호된 산은 관련 기술분야의 널리 공지된 표준 염기성 조건 하에 탈보호되어, 화학식 I의 화합물 (단계 7)을 제공할 수 있다. 극성 양성자성 용매, 예컨대 에탄올 또는 MeOH 또는 물/THF 용매 혼합물 중 염기, 예컨대 수산화나트륨 또는 수산화리튬을 사용하는 에스테르의 탈보호를 위한 조건은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 화학식 I의 화합물을 제공하기 위한 다른 대안적인 탈보호 조건은 디클로로에탄 또는 THF 중에서 트리메틸주석 히드록시드 또는 칼륨 트리메틸실란올레이트를 염기로서 사용하는 것을 포함한다.

<반응식 2>

반응식 2에서 보여지는 또 다른 변형에서, 8-브로모 치환된 [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘 (7, 단계 1)은 보론산 시약을 사용하여 스즈키-미야우라 교차 커플링 조건 하에 커플링되어, 반응식 1, 단계 6에 기재된 바와 같이 화합물 (12)을 제공할 수 있다. 이 알콜 (12)은 이어서 반응식 1, 5b 단계에 기재된 바와 같이 미츠노부 조건 하에 페놀 (9)과 반응하여, 단계 2a의 화합물 II를 제공할 수 있다. 대안적으로, 화합물 12의 알콜은 할로겐화되어, 반응식 1, 단계 4에 기재된 바와 같이 화합물 13을 제공할 수 있다. 할로겐화 화합물 (13)은 이어서 반응식 1, 단계 5b에 기재된 바와 같이 염기성 조건 하에 알킬화되어, 화합물 II (단계 2b)를 제공할 수 있다. 화학식 II의 화합물은 이어서 반응식 1, 단계 7에 기재된 바와 같이 탈보호되어, 화학식 I의 화합물을 제공할 수 있다.

제조예 및 실시예

하기 제조예 및 실시예는 본 발명을 추가로 설명하고, 화학식 I의 화합물의 전형적인 합성을 보여준다. 달리 나타내지 않는 한, 본원에 설명된 화합물은 엑셀리스 드로우(Accelrys Draw) 4.0, IUPACNAME ACDLABS 또는 MDL ISIS, 버전 2.5 SP2를 사용하여 명명되고 넘버링된다.

제조예 1

6-아미노-니코틴산 메틸 에스테르

MeOH (200 mL) 중 6-아미노-니코틴산 (25 g, 181.1 mmol)의 교반된 용액에, 진한 H₂SO₄ (7 mL)를 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 밤새 80℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 포화 NaHCO₃ 용액 (100 mL)을 사용하여 중화시켰다. 침전된 고체를 여과하고, 진공 하에 건조시켜 표제 화합물을 황색 고체 (22 g, 81.5%)로서 수득하였다. LCMS m/z 153 (M+H)⁺.

제조예 2

에틸 6-아미노니코티네이트

에탄올 (30 L) 중 6-아미노니코틴산 (3 Kg, 21.61 mol)의 교반된 용액에, 진한 H₂SO₄ (3 L)를 첨가하고, 반응 혼합물을 16시간 동안 78℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 증발시켰다. 잔류물을 포화 NaHCO₃ 용액을 사용하여 pH ~7.5로 중화시키고, EtOAc (3x5 L)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 물 (2x5 L), 염수 용액 (5 L)으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시켜, 표제 화합물을 회백색 고체 (3.4 Kg, 93.87%)로서 수득하였다. LCMS m/z 167 (M+H)⁺.

하기 화합물을 본질적으로 제조예 2의 방법에 의해 제조하였다.

<표 1>

제조예 4

6-아미노-5-브로모-니코틴산 메틸 에스테르

THF (500 mL) 중 메틸 6-아미노 니코티네이트 (22 g, 143.7 mmol)의 교반된 용액에 0℃에, NBS (27.9 g, 158.1 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 염화암모늄 (100 mL)을 반응 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 EtOAc (2x100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 용액 (100 mL)으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켰다. 조 물질을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬)에 의해 정제하고, 35% EtOAc/헥산으로 용리하여, 표제 화합물을 연갈색 고체 (28 g, 84.8%)로서 수득하였다. LCMS m/z (⁷⁹Br/⁸¹Br) 231/233 (M+H)⁺.

하기 화합물을 본질적으로 제조예 4의 방법에 의해 제조하였다.

<표 2>

제조예 6

(E)-에틸 N-(p-톨루엔 술포닐)옥시아세트이미데이트

DMF (300 mL) 중 (E)-에틸 N-히드록시아세트이미데이트 (47.2 g, 458.7 mmol)의 교반된 용액에, 트리에틸아민 (128 mL, 917.4 mmol)을 실온에서 첨가하고, 혼합물을 20분 동안 교반하였다. p-톨루엔술포닐 클로라이드 (100 g, 458.7 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (200 mL)로 희석하고, EtOAc (3x150 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜, 표제 화합물을 백색 고체 (94 g, 80.3%)로서 수득하였다. LCMS m/z 258 (M+H)⁺.

제조예 7

(E)-에틸 N-(메시틸술포닐)옥시아세트이미데이트

DMF (100 mL) 중 N-히드록시-아세트이미드산 에틸 에스테르 (42g, 183 mmol)의 교반된 용액에, 트리에틸아민 (49.2 mL, 366 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 실온에서 교반하고, 0℃로 다시 냉각시켰다. 2,4,6-트리메틸-벤젠술포닐 클로라이드 (40 g, 183 mmol)를 나누어 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (100 mL)로 희석하고, 빙수 (2x500 mL), 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜, 표제 화합물을 연황색 고체 (40 g, 조 물질)로서 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다. LC-MS m/z 286.1 [M+H]⁺.

제조예 8

tert-부틸 (메시틸술포닐)옥시카르바메이트

MTBE (55 L) 중 2,4,6-트리메틸벤젠-1-술포닐 클로라이드 (5.5 Kg, 25.14 mol)의 교반된 용액에, tert-부틸 히드록시카르바메이트 (4 Kg, 30.17 mol)를 첨가하고, 0℃로 냉각시켰다. 트리에틸아민 (3.05 Kg, 30.17 mol)을 1시간의 기간에 걸쳐 반응 혼합물에 첨가하고, 반응 혼합물을 2시간 동안 0℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, MTBE (2x5 L)로 세척하였다. 여과물을 12 L의 부피로 농축시키고, n-헥산 (6 L)을 첨가하고, 혼합물을 최대 12 L의 부피로 재증류시켰다. 조 화합물에 n-헥산 중 MTBE의 5% 용액 (60 L)을 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하여, 제1 수확물을 회백색 고체 화합물 (6.13 Kg)로서 수득하였다. 여과물을 농축 건조시키고, n-헥산 중 MTBE의 5% 용액 (10 L)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 교반하고, 여과하여, 표제 화합물의 제2 수확물 (0.86 Kg)을 수득하였으며, 이를 제1 수확물과 합하여 표제 화합물 (6.99 g, 88%)을 수득하였다.

제조예 9

O-(p-톨루엔 술포닐) 히드록실아민

1,4 디옥산 (40 mL) 중 (E)-에틸 N-(p-톨루엔 술포닐) 옥시아세트이미데이트 (10 g, 38.9 mmol)의 교반된 용액에, HClO₄ (3.0 mL)를 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, DCM (2x10 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하였다. 용액을 농축하지 않고 직접 사용하였다 (9 g, 100% 조 물질).

제조예 10

O-(메시틸술포닐) 히드록실아민

1,4-디옥산 (200 mL) 중 (E)-에틸 N-(메시틸술포닐) 옥시아세트이미데이트 (16 g, 62.167 mmol)의 교반된 용액에, 과염소산 (8 mL)을 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 1.5시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (30 mL)로 희석하고, DCM (2x20 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 용액 (20 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 농축하지 않고 사용하였다.

대안적 제조예 10

트리플루오로아세트산 (19.74 L)을 함유하는 100 L 반응기에, tert-부틸 (메시틸술포닐)옥시카르바메이트 (6.99 Kg, 22.18 mol)를 45분의 기간에 걸쳐 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 2시간 동안 0℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 분쇄 얼음 (8 L)에 이어서 빙냉수 (16 L)로 켄칭하고, 15분 동안 교반하였다. 추가의 빙냉수 (24 L)를 첨가하고, 혼합물을 15분 동안 교반하였다. 고체 침전물을 여과하고, 물로 세척하고, 건조시켜, 백색 고체 (4.77 Kg, 100%)를 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.

제조예 11

1,2-디아미노-3-브로모-5-메톡시카르보닐-피리디늄 4-메틸벤젠술포네이트

DCM (50 mL) 중 o-(p-톨루엔 술포닐) 히드록실아민 (9 g, 48.1 mmol)의 교반된 용액에, 6-아미노-5-브로모-니코틴산 메틸 에스테르 (11.1 g, 48.1 mmol)를 실온에서 첨가하고, 혼합물을 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 디에틸 에테르를 첨가하였다. 침전된 고체를 여과하고, 진공 하에 건조시켜, 표제 화합물을 회백색 고체 (9 g, 45%)로서 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, d₆-DMSO) δ 9.09 (bs, 2H), 8.69 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.46 (q, J = 8.0 Hz, 1H), 7.06 (s, 3H), 6.71 (s, 2H), 4.31 (q, J = 11.6 Hz, 2H), 2.14 (s, 3H), 1.25-1.32 (m, 4H).

하기 화합물을 본질적으로 제조예 11의 방법에 의해 제조하였다.

<표 3>

a. ¹H NMR (400 MHz, d₆-DMSO) δ 9.09 (bs, 2H), 8.69 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.46 (q, J = 8.0 Hz, 1H), 7.06 (s, 3H), 6.71 (s, 2H), 4.31 (q, J = 11.6 Hz, 2H), 2.14 (s, 3H), 1.25-1.32 (m, 4H).

대안적 제조예 12

습윤 케이크로서 O-(메시틸술포닐) 히드록실아민 (4.77 Kg으로 추정됨, 22.17 mol)을 DCM (25 L) 중에 용해시키고, 수성 층을 분리시키고, 유기 층을 물 (2x10 L) 및 염수 용액 (10 L)으로 세척하였다. 유기 층을 100 L 반응기에 옮기고, 추가의 DCM (45 L)으로 희석하였다. 반응 혼합물을 10℃ - 15℃로 냉각시키고, 6-아미노-5-브로모-니코틴산 에틸 에스테르 (4.24 Kg, 17.29 mol)를 15분의 기간에 걸쳐 나누어 첨가하였다. 반응 혼합물을 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 고체 케이크를 DCM (3x10 L)으로 세척하고 건조시켜, 제1 수확물을 백색 고체 (2.7 Kg)로서 수득하였다. 여과물을 농축시켜, 농후한 덩어리를 수득하였으며, 이를 2시간 동안 DCM (20 L) 중에서 연화처리하였다. 고체를 여과하고, 습윤 케이크를 DCM (2x5 L)으로 세척하고 건조시켜, 제2 수확물을 회백색 고체 (1.1 Kg)로서 수득하였으며, 이를 제1 수확물과 합하여 표제 화합물 (3.8 Kg, 37.25%)을 수득하였다. LCMS m/z (⁷⁹Br/⁸¹Br) 260/262 (M+H)⁺.

제조예 13

3-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-벤조니트릴

아세토니트릴 (30 mL) 중 3-아미노-벤조니트릴 (0.5 g, 4.23 mmol)의 교반된 용액에, tert-부틸니트라이트 (0.7 mL, 6.34 mmol) 및 비스피나콜레이토디보론 (1.29 g, 5.076 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 2시간 동안 80℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 물질을 4% EtOAc/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬)에 의해 정제하여, 표제 화합물 (0.35 g, 99.8%)을 수득하였다. LCMS m/z 294 (M+H)⁺.

하기 화합물을 본질적으로 제조예 13의 방법에 의해 제조하였다.

<표 4>

제조예 15

3,5-디메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-벤조니트릴

DMF (20 mL) 중 4-브로모-3,5-디메틸-벤조니트릴 (0.5 g, 2.38 mmol) 및 비스피나콜레이토디보론 (0.9 g, 3.57 mmol)의 교반된 용액에, CH₃COOK (1.051 g, 10.71 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 아르곤으로 퍼징한 다음, Pd(dppf)₂Cl₂.DCM (0.097 g, 0.119 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 밤새 100℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 규조토를 통해 여과하였다. 여과물을 물 (30 mL)로 희석하고, EtOAc (2x30 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 포화 염수 용액 (20 mL)으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 조 물질을 6% EtOAc/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬)에 의해 정제하여, 표제 화합물을 갈색 액체 (0.4 g, 65%)로서 수득하였다. LCMS m/z 288(M+H)⁺.

제조예 16

2-(4-브로모-페닐)-2-메틸-프로피오니트릴

DMF (10 mL) 중 (4-브로모-페닐)-아세토니트릴 (1 g, 5.10 mmol)의 용액에, 수소화나트륨 (0.408 g, 10.20 mmol, 미네랄 오일 중 60%)을 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 0℃에서 교반한 다음, 메틸 아이오다이드 (0.69 mL, 11.22 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 염화암모늄 용액 (5 mL)으로 켄칭하고, EtOAc (2x20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 물 (20 mL) 및 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 조 물질을 5-10% EtOAc/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬) 상에서 정제하여, 회백색 고체 (0.9 g, 78%)를 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.51 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 1.77 (s, 3H).

하기 화합물을 본질적으로 제조예 16의 방법에 의해 제조하였다.

<표 5>

제조예 18

4-클로로-2,2-디메틸부탄니트릴

건조 THF (20 mL) 중 디이소프로필아민 (2.43 mL, 17.36 mmol)의 교반된 용액에, n-BuLi (14.4 mL, 17.36 mmol)를 -60℃에서 적가하고, 0℃로 서서히 가온되도록 하고, 20분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 -78℃로 냉각시키고, 무수 아세토니트릴 (1.42 mL, 14.47 mmol)을 첨가하고, 반응물을 45분 동안 동일한 온도에서 교반하였다. 1-브로모-4-클로로 부탄 (1.3 mL, 15.91 mmol)을 -78℃에서 첨가하고, 실온으로 가온되도록 하고, 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH₄Cl 용액 (25 mL)으로 켄칭하고, EtOAc (2x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 물 (50 mL) 및 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발 건조시켰다. 조 생성물을 5% EtOAc/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬)에 의해 정제하여, 표제 화합물 (0.5 g, 25.2%)을 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl3); 3.67-3.63 (m, 2H), 2.06-2.02 (m, 2H), 1.45-1.36 (m, 6H).

제조예 19

4-브로모-2-메틸-부탄-2-올

디에틸 에테르 (20 mL) 중 4-브로모-부티르산 메틸 에스테르 (2 g, 12.27 mmol)의 교반된 용액에, 메틸 브로민화마그네슘 (16.4 mL, 49.08 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 1 N HCl으로 켄칭하고, 디에틸 에테르 (2x20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 포화 염수 용액 (20 mL)으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 물질을 20% EtOAc/헥산에서 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬)로 정제하여, 표제 화합물 (1.3 g, 65%)을 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 3.48 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 2.16 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.89 (s, 6H), 1.76 (s, 3H), 1.27 (s, 6H).

제조예 20

8-브로모-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-카르복실산 메틸 에스테르

MeOH (35 mL) 중 1,2-디아미노-3-브로모-5-메톡시카르보닐-피리디늄 4-메틸 벤젠술포네이트 (9 g, 21.4 mmol)의 교반된 용액에, 2-메틸프로판알 (0.98 mL, 10.7 mmol) 및 트리에틸아민 (8.6 mL, 64.2 mmol)을 실온에서 첨가하고, 혼합물을 48시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발 건조시키고, 잔류물을 물 (50 mL) 로 희석하고, EtOAc (2x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발 건조시켰다. 조 물질을 15-20% EtOAc/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬)에 의해 정제하여, 표제 화합물을 연황색 고체 (1.5 g, 12%)로서 수득하였다. LCMS m/z (⁷⁹Br/⁸¹Br) 298/300 (M+H)⁺.

대안적 제조예 20

MeOH (100 mL) 중 2,4,6-트리메틸-벤젠술포네이트1,2-디아미노-3-브로모-5-메톡시 카르보닐-피리디늄 (10 g, 22.3 mmol)의 교반된 용액에, 2-메틸프로판알 (0.8 g, 1 mL, 11.1 mmol) 및 트리에틸아민 (9 mL, 66.9 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 48시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 증발시키고, 물로 희석하고, EtOAc (2x100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 물 (2x50 mL), 포화 염화암모늄 용액 (50 mL), 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발 건조시켰다. 조 물질을 20-40% EtOAc/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬)에 의해 정제하여, 표제 화합물을 회백색 고체 (2.7 g, 43.5%)로서 수득하였다. LC-MS m/z (⁷⁹Br/⁸¹Br) 298/300 [M+H]⁺.

제조예 21

8-브로모-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-카르복실산 에틸 에스테르

피리딘 (6.6 L) 중 1,2-디아미노-3-브로모-5-(에톡시카르보닐)피리딘-1-윰 2,4,6-트리메틸 벤젠술포네이트 (2.2 Kg, 4.78 mol)의 교반된 용액에, 2-메틸프로파노일 클로라이드 (2.55 Kg, 23.90 mol)를 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 5시간 동안 100℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 증발 건조시키고, 잔류물을 물 (20 L)로 희석하고, 1시간 동안 교반하였다. 침전된 고체를 여과하고, 물 (3x5 L)로 세척하고 건조시켰다. 조 생성물을 헥산:EtOAc (8.0:2.0)으로 용리하는 실리카 겔 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여, 표제 화합물을 회백색 고체 (800 g, 53.7%)로서 수득하였다. LC-MS m/z (⁷⁹Br/⁸¹Br) 312/314 [M+H]⁺.

제조예 22

(8-브로모-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일)-메탄올

DCM (30 mL) 중 8-브로모-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-카르복실산 메틸 에스테르 (1.4 g, 4.70 mmol)의 용액에, 디이소부틸 알루미늄 히드라이드 (9.5 mL, 9 mmol, 헥산 중 1 M)를 -78℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃로 가온하고, 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 MeOH (20 mL)로 켄칭하고, 규조토를 통해 여과하고, EtOAc (30 mL)로 세척하고, 감압 하에 증발시켜, 표제 생성물 (1.8 g, 100% 조 물질)을 수득하였다. LCMS m/z (⁷⁹Br/⁸¹Br) 270/272 (M+H)⁺.

하기 화합물을 본질적으로 적절한 카르복실산 에스테르를 사용하여 제조예 22의 방법에 의해 제조하였다.

<표 6>

제조예 29

8-브로모-6-클로로메틸-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘

혼합물 (8-브로모-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일)-메탄올 (1.8 g, 0.57 mmol) 및 티오닐 클로라이드 (10 mL)를 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 중탄산나트륨 용액 (20 mL)으로 켄칭하고, EtOAc (3x20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 증발시켜, 표제 화합물 (1.1 g, 67%)을 수득하였다. LCMS m/z (⁷⁹Br/⁸¹Br) 288/290 [M+H]⁺.

하기 화합물을 본질적으로 제조예 29의 방법에 의해 제조하였다.

<표 7>

제조예 32

1-브로모-3-브로모메틸-2-메틸-벤젠

DCM (25 mL) 중 (3-브로모-2-메틸-페닐)-메탄올 (2 g, 9.9 mmol)의 용액에, 인 트리브로마이드 (1.76 mL, 14.9 mmol)를 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM (20 mL)으로 희석하고, 수성 NaHCO₃ 용액으로 켄칭하고, DCM (3x50 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 물 (10 mL) 및 염수 (10 mL)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발 건조시켜, 표제 화합물 (2 g, 77%)을 수득하였다. LC-MS m/z 264 [M+H]⁺.

하기 화합물을 본질적으로 제조예 32의 방법에 의해 제조하였다.

<표 8>

제조예 36

(3-브로모-2-메틸-페닐)-아세토니트릴

DMF (15 mL) 중 브로모-3-브로모메틸-2-메틸-벤젠 (0.2 g, 7.6 mmol)의 용액에, 시안화나트륨 (0.55 g, 11.4 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 12시간 동안 100℃에서 가열하고, 과망가니즈산칼륨 용액으로 켄칭하고, 여과하고, 여과물을 물로 희석하고, EtOAc (2x20 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 조 물질을 EtOAc 10-25%/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬) 상에서 정제하여, 표제 화합물 (0.8 g, 28.2%)을 수득하였다. LC-MS m/z 211 [M+H]⁺.

제조예 37

2-이소프로필-8-(4-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-카르복실산 메틸 에스테르

톨루엔 (12 mL) 및 EtOH (3 mL) 중 8-브로모-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-카르복실산 메틸 에스테르 (0.8 g, 2.6 mmol) 및 4-메톡시 2,6-디메틸 페닐 보론산 (0.522 g, 2.9 mmol)의 교반된 용액에, 2 M K₂CO₃ 용액 (3.9 mL, 7.8 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 아르곤으로 퍼징하고, Pd(PPh₃)₂Cl₂ (0.182 g, 0.26 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 16시간 동안 100℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 규조토를 통해 여과하고, 여과물을 물 (20 mL)로 희석하고, EtOAc (2x20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 포화 염수 용액 (10 mL)으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 물질을 15-20% EtOAc/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬)에 의해 정제하여, 표제 화합물을 황색 액체 (0.26 g, 27.4%)로서 수득하였다. LCMS m/z 354 (M+H)⁺.

대안적 제조예 37

톨루엔 (16 mL) 중 8-브로모-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-카르복실산 메틸 에스테르 (2.5 g, 8.8 mmol) 및 4-메톡시 2,6-디메틸 페닐 보론산 (1.4 g, 8.83 mmol)의 교반된 용액에, 삼염기성 인산칼륨 (5.3 g, 12.4 mmol)을 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 20분 동안 질소로 퍼징한 다음, Pd(amphos)Cl₂ (0.57 g, 0.802 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 70℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 규조토를 통해 여과하고, EtOAc (2x20 mL)로 세척하고, 여과물을 증발시켰다. 조 물질을 30% EtOAc/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬)에 의해 정제하여, 표제 화합물을 갈색 고체 (1.5 g, 65.54%)로서 수득하였다. LC-MS m/z 354 [M+H]⁺.

대안적 제조예 37

1,4-디옥산 (20 mL) 중 8-브로모-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-카르복실산 메틸 에스테르 (1.05 g, 3.52 mmol) 및 4-메톡시 2,6-디메틸 페닐 보론산 (0.63 g, 3.52 mmol)의 교반된 용액에, 2 M K₂CO₃ 용액 (1.4 mL, 2.9 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 아르곤으로 퍼징한 다음, Pd(PPh₃)₂Cl₂ (0.041 g, 0.059 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 16시간 동안 100℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 규조토를 통해 여과하고, 여과물을 물 (20 mL)로 희석하고, EtOAc (2x20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (10 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 물질을 14% EtOAc/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬)에 의해 정제하여, 표제 화합물 (0.13 g, 16%)을 수득하였다. LCMS m/z 354 (M+H)⁺.

제조예 38

2-이소프로필-8-(4-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-카르복실산 에틸 에스테르

톨루엔 (8 L) 중 8-브로모-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-카르복실산 에틸 에스테르 (400 g, 1.28 mol) 및 4-메톡시 2,6-디메틸페닐 보론산 (276.8 g, 1.54 mol)의 교반된 용액에, 물 (3.84 L) 중 K₃PO₄ (816 g, 3.84 mol)의 용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 1시간 동안 질소로 퍼징한 다음, Pd(amphos)Cl₂ ( 45.36 g, 0.064 mol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 20분 동안 질소로 퍼징하였다. 반응 혼합물을 16시간 동안 75℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 규조토를 통해 여과하고, EtOAc (3x1 L)로 세척하였다. 여과물을 물 (5 L)로 희석하고, EtOAc (2x1.5 L)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 물 (2.5 L), 염수 (2.5 L)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시켰다. 조 생성물 (600 g)을 또 다른 조 로트 (400 g)와 합하고, 15-20% EtOAc/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 상에서 정제하여, 표제 화합물을 담황색 고체 (901 g, 95.68%)로서 수득하였다.

제조예 39

8-(2-플루오로-5-메톡시-페닐)-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-카르복실산 에틸 에스테르

1,4-디옥산 (6 mL) 중 8-브로모-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-카르복실산 에틸 에스테르 (0.45 g, 1.509 mmol) 및 2-플루오로 4-메톡시 페닐 보론산 (0.512 g, 3.018 mmol)의 교반된 용액에, 2 M K₂CO₃ (0.624 g, 4.527 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 아르곤으로 퍼징하고, Pd(PPh₃)₄ (0.087 g, 0.075 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 마이크로웨이브에서 1시간 동안 100℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 규조토를 통해 여과하였다. 여과물을 물 (20 mL)로 희석하고, EtOAc (2x10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (10 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 물질을 15-20% EtOAc/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬)에 의해 정제하여, 표제 화합물 (0.17 g, 33%)을 수득하였다. LCMS m/z 344 (M+H)⁺.

제조예 40

6-클로로메틸-2-이소프로필-8-(4-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘

DCM (10 mL) 중 [2-이소프로필-8-(4-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일]-메탄올 (0.21 g, 0.64 mmol)의 용액에, SOCl₂ (0.12 mL, 1.61 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 1시간에 걸쳐 실온으로 가온되도록 하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 포화 중탄산나트륨 용액 (20 mL)으로 켄칭하고, DCM (3x20 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발 건조시켜, 표제 화합물을 갈색 고체 (0.06 g, 29%)로서 수득하였다. LCMS m/z; 344 (M+H)⁺.

제조예 41

2-[2-(6-히드록시메틸-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-8-일)-페닐]-2-메틸-프로피오니트릴

THF (10 mL) 중 2-{2-[6-(tert-부틸-디메틸-실라닐옥시메틸)-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-8-일]-페닐}-2-메틸-프로피오니트릴 (0.6 g, 1.33 mmol)의 교반된 용액에, 테트라-n-부틸 암모늄 플루오라이드 (0.52 g, 2 mmol)를 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (10 mL)로 희석하고, EtOAc (2x20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 물 (10 mL) 및 염수 (10 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발 건조시켰다. 조 물질을 40% EtOAc/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬)에 의해 정제하여, 표제 화합물을 백색 고체 (0.4 mg, 50%)로서 수득하였다. LC-MS m/z 335 [M+H]⁺.

제조예 42

8-브로모-6-(tert-부틸-디메틸-실라닐옥시메틸)-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘

DMF (5 mL) 중 8-브로모-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일)-메탄올 (0.25 g, 0.92 mmol)의 교반된 용액에 0℃에서 이미다졸 (0.209 g, 1.38 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 5분 동안 실온에서 교반하고, 0℃로 냉각시키고, tert-부틸클로로디메틸실란 (0.209 g, 1.38 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 12시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (2x25 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (20 mL)로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발 건조시켰다. 조 생성물을 10-30% EtOAc/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬)에 의해 정제하여, 표제 화합물 (0.32 g, 90%)을 수득하였다. LCMS m/z 384/386 [M+H]⁺.

제조예 43

{2-[6-(tert-부틸-디메틸-실라닐옥시메틸)-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-8-일]-페닐}-아세토니트릴

디옥산 (10 mL) 중 8-브로모-6-(tert-부틸-디메틸-실라닐옥시메틸)-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘 (1.3 g, 3.38 mmol) 및 [2-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-페닐]-아세토니트릴 (0.82 g, 3.38 mmol)의 교반된 용액에, 아세트산칼륨 (0.93 g, 6.76 mmol)을 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 20분 동안 질소로 퍼징하였다. Pd(PPh₃)₄ (0.195 g, 0.16 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 밀봉된 튜브에서 12시간 동안 100℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 규조토를 통해 여과하고, 여과물을 증발 건조시켰다. 조 생성물을 10-30% EtOAc/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬)에 의해 정제하여, 표제 화합물 (0.6 g, 42%)을 수득하였다. LCMS m/z 421 [M+H]⁺.

제조예 44

2-(3-브로모-2-메틸-페닐)-2-메틸-프로피오니트릴

THF 중 NaH (0.22 g, 5.6 mmol, 파라핀 오일 중 60%)의 용액에 0℃에서 THF (4 mL) 중 (3-브로모-2-메틸-페닐)-아세토니트릴 (0.6 g, 2.8 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 실온에서 교반한 다음, 메틸 아이오다이드 (0.43 mL, 7 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 12시간 동안 실온에서 교반하고, 포화 수성 NH₄Cl 용액으로 켄칭하고, EtOAc (2x25 mL) 중에서 추출하였다. 유기 층을 염수 (10 mL)로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 또 다른 로트의 조 물질 (1 g)을 이 로트와 합하고, 10-30% EtOAc/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬) 상에서 정제하여, 표제 화합물 (1.2 g, 75.9%)을 수득하였다. LC-MS m/z 239 [M+H]⁺.

하기 화합물을 본질적으로 제조예 44의 방법에 의해 제조하였다.

<표 9>

제조예 47

대안적 제조예 47

톨루엔 (16 mL) 중 8-브로모-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-카르복실산 메틸 에스테르 (2.5 g, 8.8 mmol) 및 4-메톡시 2,6-디메틸 페닐 보론산 (1.4 g, 8.83 mmol)의 교반된 용액에, 삼염기성 인산칼륨 (5.3 g, 12.4 mmol)을 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 20분 동안 질소로 퍼징한 다음, Pd(amphos)Cl₂ (0.57 g, 0.802 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 70℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 규조토를 통해 여과하고, EtOAc (2x20 mL)로 세척하고, 여과물을 증발시켰다. 조 물질을 30% EtOAc/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬)에 의해 정제하여, 표제 화합물을 갈색 고체 (1.5 g, 65.54%)로서 수득하였다. LCMS m/z 354 [M+H]⁺.

대안적 제조예 47

1,4-디옥산 (20 mL) 중 8-브로모-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-카르복실산 메틸 에스테르 (1.05 g, 3.52 mmol) 및 4-메톡시 2,6-디메틸 페닐 보론산 (0.63 g, 3.52 mmol)의 교반된 용액에, 2 M K₂CO₃ 용액 (1.4 mL, 2.9 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 아르곤으로 퍼징한 다음, Pd(PPh₃)₂Cl₂ (0.041 g, 0.059 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 16시간 동안 100℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 규조토를 통해 여과하고, 여과물을 물 (20 mL)로 희석하고, EtOAc (2x20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (10 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 물질을 14% EtOAc/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬)에 의해 정제하여, 표제 화합물 (0.13 g, 16%)을 수득하였다. LCMS m/z 354 (M+H)⁺.

제조예 48

톨루엔 (8 L) 중 8-브로모-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-카르복실산 에틸 에스테르 (400 g, 1.281 mol) 및 4-메톡시 2,6-디메틸페닐 보론산 (276.8 g, 1.538 mol)의 교반된 용액에, 물 (3.84 L) 중 K₃PO₄ (816 g, 3.844 mol)의 용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 1시간 동안 질소로 퍼징한 다음, Pd(amphos)Cl₂ (45.36 g, 0.064 mol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 20분 동안 질소로 퍼징하였다. 반응 혼합물을 16시간 동안 75℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 규조토를 통해 여과하고, EtOAc (3x1 L)로 세척하였다. 여과물을 물 (5 L)로 희석하고, EtOAc (2x1.5 L)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 물 (2.5 L), 염수 (2.5 L)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시켰다. 조 생성물 (600 g)을 또 다른 조 로트 (400 g)와 합하고, 15-20% EtOAc/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 상에서 정제하여, 표제 화합물을 담황색 고체 (901 g, 95.68%)로서 수득하였다.

제조예 49

MeOH (35 mL) 중 1,2-디아미노-3-브로모-5-메톡시카르보닐-피리디늄 4-메틸 벤젠술포네이트 (9 g, 21.4 mmol)의 교반된 용액에, 이소부티르알데히드 (0.98 mL, 10.7 mmol) 및 트리에틸아민 (8.6 mL, 64.2 mmol)을 실온에서 첨가하고, 혼합물을 48시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발 건조시키고, 잔류물을 물 (50 mL)로 희석하고, EtOAc (2x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발 건조시켰다. 조 물질을 15-20% EtOAc/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬)에 의해 정제하여, 표제 화합물을 연황색 고체 (1.5 g, 12%)로서 수득하였다. LCMS m/z (⁷⁹Br/⁸¹Br) 298/300 (M+H)⁺.

대안적 제조예 49

MeOH (100 mL) 중 2,4,6-트리메틸-벤젠술포네이트1,2-디아미노-3-브로모-5-메톡시 카르보닐-피리디늄 (10 g, 22.3 mmol)의 교반된 용액에, 2-메틸-프로피온알데히드 (0.8 g, 1 mL, 11.1 mmol) 및 트리에틸아민 (9 mL, 66.9 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 48시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 증발시키고, 물로 희석하고, EtOAc (2x100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 물 (2x50 mL), 포화 염화암모늄 용액 (50 mL), 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발 건조시켰다. 조 물질을 20-40% EtOAc/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬)에 의해 정제하여, 표제 화합물을 회백색 고체 (2.7 g, 43.5%)로서 수득하였다. LC-MS m/z (⁷⁹Br/⁸¹Br) 298/300 [M+H]⁺.

제조예 50

피리딘 (6.6 L) 중 1,2-디아미노-3-브로모-5-(에톡시카르보닐)피리딘-1-윰 2,4,6-트리메틸 벤젠술포네이트 (2.2 Kg, 4.779 mol)의 교반된 용액에, 이소부티릴 클로라이드 (2.546 Kg, 23.895 mol)를 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 5시간 동안 100℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 증발 건조시키고, 잔류물을 물 (20 L)로 희석하고, 1시간 동안 교반하였다. 침전된 고체를 여과하고, 물 (3x5 L)로 세척하고, 건조시켰다. 조 생성물을 헥산:EtOAc (8.0:2.0)으로 용리하는 실리카 겔 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여, 표제 화합물을 회백색 고체 (800 g, 53.7%)로서 수득하였다. LC-MS m/z (⁷⁹Br/⁸¹Br) 312/314 [M+H]⁺.

제조예 51

(8-브로모-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1, 5-a]피리딘-6-일)-메탄올

하기 화합물을 본질적으로 제조예 51의 방법에 의해 제조하였다.

<표 10>

제조예 58

하기 화합물을 본질적으로 제조예 58의 방법에 의해 제조하였다.

<표 11>

제조예 61

(S)-3-[4-(8-브로모-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시)-페닐]-헥스-4-인산 에틸 에스테르

아세토니트릴 (20 mL) 중 (S)-3-(4-히드록시-페닐)-헥스-4-인산 에틸 에스테르 (1.1g, 3.8 mmol) 및 8-브로모-6-클로로메틸-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘의 교반된 용액에, 탄산세슘 (2.48 g, 7.62 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 규조토를 통해 여과하고, EtOAc (20 mL)로 세척하고, 증발 건조시켰다. 잔류물을 EtOAc (30 mL) 중에 용해시키고, 물 (2x30 mL) 및 염수 용액 (20 mL)으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 증발시켰다. 조 물질을 35-40% EtOAc/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬)에 의해 정제하여, 표제 화합물 (1.0 g, 53.4%)을 수득하였다. LCMS m/z (⁷⁹Br/⁸¹Br) 484/486 (M+H)⁺.

하기 화합물을 본질적으로 제조예 61의 방법에 의해 제조하였다.

<표 12>

제조예 67

(S)-3-{4-[8-(4-시아노-페닐)-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시]-페닐}-헥스-4-인산 에틸 에스테르

1,4 디옥산 (10 mL) 중 (S)-3-[4-(8-브로모-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시)-페닐]-헥스-4-인산 에틸 에스테르 (1.0 g, 2.07 mmol) 및 4-시아노페닐보론산 (0.602 g, 9.6 mmol)의 교반된 용액에, 2 M 탄산칼륨의 용액 (0.542 g, 6.18 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 질소 분위기 하에 20분 동안 퍼징하고, Pd(PPh₃)₄ (0.117 g, 0.103 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 마이크로웨이브에서 4시간 동안 100℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (30 mL)로 희석하고, 물 (2x30 mL) 및 염수 용액 (30 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켰다. 잔류물을 30-40% EtOAc/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬)에 의해 정제하여, 표제 화합물을 무색 액체 (0.500 g, 47.8%)로서 수득하였다. LCMS m/z 507 (M-H)⁺.

하기 화합물을 본질적으로 제조예 67의 방법에 의해 제조하였다.

<표 13>

제조예 72

(S)-3-(4-{8-[4-(시아노-디메틸-메틸)-페닐]-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시}-페닐)-헥스-4-인산 에틸 에스테르

1,4-디옥산 (10 mL) 중 2-메틸-2-[4-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-페닐]-프로피오니트릴 (0.184 g, 0.680 mmol) 및 (S)-3-[4-(8-브로모-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a] 피리딘-6-일메톡시)-페닐]-헥스-4-인산 에틸 에스테르 (0.3 g, 0.619 mmol)의 교반된 용액에, 2 M 탄산칼륨 (0.619 mL, 1.238 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 20분 동안 질소 분위기 하에 퍼징하고, Pd(PPh₃)₂Cl₂ (0.021 g, 0.0309 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 16시간 동안 100℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 규조토를 통해 여과하고, EtOAc (2x20 mL)로 세척하였다. 여과물을 냉수 (2x10 mL), 염수 용액 (10 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발 건조시켰다. 조 물질을 30-50% EtOAc/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬) 상에서 정제하여, 표제 화합물을 무색 액체 (0.13 g, 38%)로서 수득하였다. LC-MS m/z 547 [M+H]⁺.

하기 화합물을 본질적으로 제조예 72의 방법에 의해 제조하였다.

<표 14>

제조예 74

(S)-3-{4-[8-(2-시아노-페닐)-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시]-페닐}-헥스-4-인산 에틸 에스테르

1,4 디옥산 (9 mL) 중 (S)-3-[4-[8-(8-브로모-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시]-페닐}-헥스-4-인산 에틸 에스테르 (0.200 g, 1.64 mmol) 및 2-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-벤조니트릴 (0.110 g, 1.96 mmol)의 교반된 용액에, 고체 탄산칼륨 (0.172 g, 4.92 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 20분 동안 질소 분위기 하에 퍼징하고, Pd(PPh₃)₄ (0.024 g, 0.800 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 100℃에서 가열하고, 규조토를 통해 여과하고, EtOAc로 세척하고, 감압 하에 증발 건조시켰다. 잔류물을 29-32% EtOAc/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬)에 의해 정제하여, 표제 화합물 (0.140 g, 66%)을 수득하였다. LCMS m/z 507 (M+H)⁺.

제조예 75

(S)-3-(4-{8-[3-(시아노-디메틸-메틸)-페닐]-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시}-페닐)-헥스-4-인산 에틸 에스테르.

1,4-디옥산 (40 mL) 중 (S)-3-[4-(8-브로모-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시)-페닐]-헥스-4-인산 에틸 에스테르 (0.4 g, 0.82 mmol) 및 2-메틸-2-[3-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-페닐]-프로피오니트릴 (0.23 g, 0.9 mmol)의 교반된 용액에, K₂CO₃ (0.33 g, 2.4 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 질소로 퍼징하였다. 이어서, Pd(dppf)₂Cl₂.DCM (0.066 g, 0.08 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 12시간 동안 100℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 규조토를 통해 여과하였다. 여과물을 EtOAc (2x30 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 물질을 15-20% EtOAc/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬) 상에서 정제하여, 표제 화합물 (0.1 g, 22.22%)을 수득하였다. LCMS m/z 549.5 (M+H)⁺.

제조예 76

8-(4-히드록시-2,6-디메틸-페닐)-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-카르복실산 메틸 에스테르

DCM (30 mL) 중 2-이소프로필-8-(4-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-카르복실산 메틸 에스테르 (1.25 g, 3.5 mmol)의 용액에, 보론트리브로마이드 (0.51 mL, 5.3 mmol)를 -40℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 중탄산나트륨 용액 (5 mL)으로 켄칭하고, EtOAc (2x20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 물 (10 mL) 및 염수 용액 (10 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜, 표제 화합물 (0.9 g, 76%)을 수득하였다. LC-MS m/z 340 [M+H]⁺.

제조예 77

8-[4-(tert-부틸-디메틸-실라닐옥시)-2,6-디메틸-페닐]-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-카르복실산 메틸 에스테르

DMF (30 mL) 중 8-(4-히드록시-2,6-디메틸-페닐)-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a] 피리딘-6-카르복실산 메틸 에스테르 (0.9 g, 2.65 mmol)의 교반된 용액에, 이미다졸 (0.540 g, 7.96 mmol) 및 tert-부틸디메틸클로로실란 (1.2 g, 7.96 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (30 mL)로 희석하고, EtOAc (2x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 물 (30 mL) 및 염수 용액 (30 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 조 물질을 8% EtOAc/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬)에 의해 정제하여, 표제 화합물 (1.1 g, 92%)을 수득하였다. LC-MS m/z 454 [M+H]⁺.

제조예 78

((S)-3-(4-{8-[4-(tert-부틸-디메틸-실라닐옥시)-2,6-디메틸-페닐]-2-이소프로필[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시}-페닐)-헥스-4-인산 에틸 에스테르

DCM (20 mL) 중 {8-[4-(tert-부틸-디메틸-실라닐옥시)-2,6-디메틸-페닐]-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일}-메탄올 (0.8 g, 1.8 mmol)의 교반된 용액에, (S)-3-(4-히드록시-페닐)-헥스-4-인산 에틸 에스테르 (0.655 g, 2.8 mmol), DEAD (0.43 mL, 2.8 mmol), 및 트리페닐포스핀 (0.566 g, 2.16 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 90분 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 증발시키고, 조 물질을 18% EtOAc/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬)에 의해 정제하여, 표제 화합물 (1 g, 91%)을 수득하였다. LC-MS m/z 640 [M+H]⁺.

제조예 79

(S)-3-{4-[8-(4-히드록시-2,6-디메틸-페닐)-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시]-페닐}-헥스-4-인산 에틸 에스테르

THF (20 mL) 중 (S)-3-(4-{8-[4-(tert-부틸-디메틸-실라닐옥시)-2,6-디메틸-페닐]-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시}-페닐)-헥스-4-인산 메틸 에스테르 (0.1 g, 1.56 mmol)의 교반된 용액에, 테트라-n-부틸 암모늄 플루오라이드 (0.8 g, 3.12mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 물 (10 mL)로 희석하고, EtOAc (2x20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 물 (10 mL) 및 염수 (10 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발 건조시켰다. 조 물질을 40% EtOAc/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬)에 의해 정제하여, 표제 화합물을 백색 고체 (0.4 g, 50%)로서 수득하였다. LC-MS m/z 526 [M+H]⁺.

제조예 80

2-이소프로필-8-[4-(2-메톡시-에톡시)-2,6-디메틸-페닐]-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-카르복실산 메틸 에스테르

아세토니트릴 (15 mL) 중 8-(4-히드록시-2,6-디메틸-페닐)-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-카르복실산 메틸 에스테르 (0.40 g, 1.185 mmol) 및 1-브로모-2-메톡시-에탄 (0.82 mL, 9.06 mmol)의 교반된 용액에, 탄산세슘 (0.734 g, 2.26 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 혼합물을 규조토를 통해 여과하고, EtOAc (20 mL)로 세척하고, 농축시켜, 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 EtOAc (30 mL) 중에 용해시키고, 물 (2x30 mL), 염수 용액 (30 mL)으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켰다. 조 화합물을 30% EtOAc/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬)에 의해 정제하여, 표제 화합물을 백색 반 고체 (0.350 g, 87%)로서 수득하였다. LCMS m/z 397 (M+H)⁺.

제조예 81

에틸 8-(2,6-디메틸-4-(3-(메틸술포닐)프로폭시)페닐)-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-카르복실레이트

DMF (15 mL) 중 에틸 8-(4-히드록시-2,6-디메틸페닐)-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-카르복실레이트 (1.1 g, 3.11 mmol) 및 3-(메틸술포닐)프로필-4-메틸벤젠술포네이트 (1.09 g, 3.73 mmol)의 교반된 용액에, 탄산칼륨 (1.29 g, 9.34 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 16시간 동안 80℃에서 가열하였다. 혼합물을 이어서 물로 켄칭하고, EtOAc (2x70 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 증발시켰다. 조 화합물을 45% EtOAc/n-헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬)에 의해 정제하여, 표제 화합물 (0.8 g, 54.27%)을 수득하였다. LCMS m/z 474.41 (M+H)⁺.

제조예 82

((S)-3-(4-{8-[4-(3-히드록시-3-메틸-부톡시)-2,6-디메틸-페닐]-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시}-페닐)-헥스-4-인산 에틸 에스테르

아세토니트릴 (10 mL) 중 ((S)-3-(4-{8-[4-(3-히드록시-3-메틸-부톡시)-2,6-디메틸-페닐]-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시}-페닐)-헥스-4-인산에틸에스테르 (0.09 g, 0.17 mmol)의 교반된 용액에, 4-브로모-2-메틸-부탄-2-올 (0.114 g, 0.68 mmol) 및 탄산세슘 (0.168 g, 0.51 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 4시간 동안 100℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (10 mL) 중에 용해시키고, EtOAc (2x20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 물 (10 mL) 및 염수 (10 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 조 물질을 40% EtOAc/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여, 표제 화합물을 갈색 고체 (0.05 g, 50%)로서 수득하였다. LC-MS m/z 612 [M+H]⁺.

제조예 83

(S)-3-(4-{8-[4-(3-시아노-3,3-디메틸-프로폭시)-2,6-디메틸-페닐]-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시}-페닐)-헥스-4-인산 에틸 에스테르

DMF (10 mL) 중 (S)-3-{4-[8-(4-히드록시-2,6-디메틸-페닐)-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시]-페닐}-헥스-4-인산 에틸 에스테르 (0.16 g, 0.304 mmol) 및 4-클로로-2,2-디메틸부탄니트릴 (0.047 g, 0.364 mmol)의 교반된 용액에, 탄산세슘 (0.29 g, 0.912 mmol)을 첨가하고, 4시간 동안 90℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 규조토를 통해 여과하고, 여과물을 물 (30 mL)로 희석하고, EtOAc (2x30 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 용액 (2x30 mL)으로 세척하고, 무수 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 증발 건조시켰다. 조 화합물을 30% EtOAc/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬)에 의해 정제하여, 표제 화합물 (0.17 g, 94%)을 수득하였다. ES/MS m/z 621.4 [M+H]⁺.

제조예 84

(S)-3-{4-[8-(4-시아노메톡시-2,6-디메틸-페닐)-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시]-페닐}-헥스-4-인산 에틸 에스테르

아세토니트릴 (10 mL) 중 (S)-3-(4-{8-[4-히드록시-2,6-디메틸-페닐]-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시}-페닐)-헥스-4-인산 메틸 에스테르 (0.09 g, 0.17 mmol)의 교반된 용액에, 브로모아세토니트릴 (0.26 g, 0.22 mmol) 및 탄산칼륨 (0.046 g,0.34 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 4시간 동안 100℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (10 mL)로 희석하고, EtOAc (2x20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 물 (10 mL), 염수 (10 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발 건조시켰다. 조 물질을 35% EtOAc/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬)에 의해 정제하여, 표제 화합물을 갈색 고체 (0.08 g, 82.4%)로서 수득하였다. LC-MS m/z 565 [M+H]⁺.

실시예 1

(S)-3-{4-[2-이소프로필-8-(4-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시]-페닐}-헥스-4-인산

EtOH (15 mL) 중 (S)-3-{4-[2-이소프로필-8-(4-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시]-페닐}-헥스-4-인산 에틸 에스테르 (0.11 g, 0.2 mmol)의 용액에, 5 N NaOH (0.12 mL, 0.61 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 증발 건조시키고, 잔류물을 n-펜탄으로 세척하고, 건조시키고, 물 (5 mL) 중에 재-용해시켰다. 용액을 포화 시트르산 용액을 사용하여 약 pH 5로 산성화시켰다. 고체 침전물을 여과하고, 물로 세척하고, 건조시켜, 표제 화합물을 백색 고체 (0.068 g, 65%)로서 수득하였다. LCMS m/z 512 (M+H)⁺. 1H NMR (400 MHz, d₆-DMSO) δ 12.17 (bs, 1H), 8.95 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.26 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 6.98 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.73 (s, 2H), 5.20 (s, 2H), 3.92 (s, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.08 (t J = 8.0 Hz, 2H), 2.65 (s, 2H), 1.89 (s, 6H), 1.75 (s, 3H), 1.27 (d, J = 6.4 Hz, 6H).

하기 화합물을 본질적으로 실시예 1의 방법에 의해 제조하였다.

<표 15>

대안적 제조, 실시예 1

EtOH (8.38 L) 및 THF (1 L) 중 (S)-3-{4-[2-이소프로필-8-(4-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시]-페닐}-헥스-4-인산 에틸 에스테르 (419 g, 0.776 mol)의 용액에, 물 (310 mL) 중 NaOH (62.1 g, 1.55 mol)의 용액을 10-15℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃로 가온하고, 2시간 동안 교반하였다. 물 (155 mL) 중 NaOH (31.05 g, 0.78 mol)의 추가의 용액을 첨가하고, 반응물을 또 다른 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발 건조시켜, 점성 물질을 수득하였으며, 이를 물 (4.5 L)로 희석하고, 디에틸 에테르 (3x2.5 L)로 세척하였다. 수성 층을 0℃로 냉각시키고, 포화 시트르산 용액을 사용하여 pH 4.2로 산성화시키고, 30분 동안 교반하였다. 생성된 백색 에멀젼을 DCM (3x5 L)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 물 (3x4 L) 및 염수 (4 L)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발 건조시켜, 점성 오일을 수득하였다. 이 오일을 DCM (5 L) 중에 용해시키고, 여과하여, 존재할 수 있는 임의의 입자를 제거하였다. 생성된 여과물을 점성 오일로 농축시켰다. 디에틸 에테르 (2.5 L)를 첨가한 후, n-헥산 (5 L)을 첨가하고, 혼합물을 4시간 동안 교반하였다. 생성된 점착성 물질로부터, 용매를 12시간 동안 40℃에서 제거하여, 담황색 고체를 표제 화합물 (341.9 g, 86%)로서 수득하였다. LCMS m/z 512 (M+H)⁺.

트리스 염 제조

(S)-3-{4-[8-(2,6-디메틸-페닐)-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시]-페닐}-헥스-4-인산의 트리스 염을, 아세토니트릴 (10 mL) 중에 (S)-3-{4-[8-(2,6-디메틸-페닐)-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시]-페닐}-헥스-4-인산 (492 mg)을 1000 rpm으로 80℃ (플레이트 온도)에서 교반하면서 용해시킴으로써 제조하였다. 트로메타민 (트리스) (492 mg)을 첨가하였다 (1 mL의 물 중에 용해시킴). 샘플을 15분 동안 80℃/1000 rpm에서 슬러리화하였다. 가열 및 교반을 중지하고, 플레이트를 실온에 도달시켰다. 교반을 짧은 시간 동안 실온에서 재개하였다. 샘플이 실온에 도달한 후에, 이를 30분 동안 5℃ 냉장고에 두었다. 백색 고체 트리스 염 형태를 진공 여과에 의해 단리하고, 진공 및 공기 스트림 하에 15분 동안 여과지 상에서 제자리 건조시켰다. 생성된 반짝거리는 백색 고체 (플레이트-유사 형태로 인함)를 70℃ 진공 오븐을 사용하여 건조시켰다. (S)-3-{4-[8-(2,6-디메틸-페닐의)-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시]-페닐}-헥스-4-인산의 생성된 트리스 염을 회수하였다 (458 mg, 74% 수율).

실시예 6

(S)-3-(4-((8-(2,6-디메틸-4-(3-(메틸술포닐)프로폭시)페닐)-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일)메톡시)페닐)헥스-4-인산

EtOH (15 mL) 중 (S)-에틸 3-(4-((8-(2,6-디메틸-4-(3-(메틸술포닐)프로폭시)페닐)-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일)메톡시)페닐)헥스-4-이노에이트 (0.200 g, 0.309 mmol)의 교반된 용액에, 5 N 수산화나트륨 (0.18 mL, 0.93 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 디에틸 에테르 (2x10 mL)로 세척하고, 물 (25 mL) 중에 용해시키고, 1.0 N HCl을 사용하여 산성화시켰다 (pH 4-5). 화합물을 DCM (2x25 mL)으로 추출하고, 유기 추출물을 무수 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시켰다. 조 물질을 정제용 HPLC에 의해 추가로 정제하여 (정제용 HPLC 조건: 칼럼: X 브리지(BRIDGE) C18 (19 × 250) mm, 5μ; 이동상 (A): 0.1% TFA; 이동상 (B): 아세토니트릴; 유량: 구배, 15 ml/분), 표제 화합물을 백색 고체 (0.070 g, 36.64%)로서 수득하였다. LCMS m/z 318.50 (M+H)⁺.

실시예 7

(S)-3-(4-{8-[4-(3-시아노-3,3-디메틸-프로폭시)-2,6-디메틸-페닐]-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시}-페닐)-헥스-4-인산

EtOH (10 mL) 중 (S)-3-(4-{8-[4-(3-시아노-3,3-디메틸-프로폭시)-2,6-디메틸-페닐]-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시}-페닐)-헥스-4-인산 에틸 에스테르 (0.16 g, 0.258 mmol)의 교반된 용액에, 5 N 수산화리튬 (0.15 mL, 0.774 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 80℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 에테르/n-펜탄 (1:1)으로 연화처리하였다. 이 물질을 물 중에 용해시키고, 시트르산 용액을 사용하여 약 5의 pH로 산성화시켰다. 고체 침전물을 여과하고, 동결 건조시켜, 표제 화합물을 백색 고체 (0.145 g, 79.7%)로서 수득하였다. LCMS m/z 593.4[M+H]⁺.

하기 화합물을 본질적으로 실시예 7의 방법에 의해 제조하였다.

<표 16>

실시예 9

(S)-3-(4-{8-[2-(시아노-디메틸-메틸)-페닐]-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시}-페닐)-헥스-4-인산

THF/물 (6 mL/2 mL) 중 (S)-3-(4-{8-[2-(시아노-디메틸-메틸)-페닐]-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시}-페닐)-헥스-4-인산 에틸 에스테르 (0.06 g, 0.109 mmol)의 용액에, 2 M LiOH (0.109 mL, 0.218 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 12시간 동안 실온에서 교반하였다. THF를 감압 하에 증발시켰다. 조 물질을 포화 시트르산 용액을 사용하여 산성화시켰다 (pH~5). 고체 침전물을 이어서 여과하고, 진공 하에 건조시켜, 표제 화합물을 회백색 고체 (0.043 g, 75.7%)로서 수득하였다. LC-MS m/z 521 [M+H]⁺.

하기 화합물을 본질적으로 실시예 9의 방법에 의해 제조하였다.

<표 17>

실시예 12

((S)-3-{4-[8-(3-시아노메틸-페닐)-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시]-페닐}-헥스-4-인산.

THF (7 mL) 및 물 (3 mL) 중 (S)-3-(4-{8-[3-(시아노-디메틸-메틸)-페닐]-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시}-페닐)-헥스-4-인산 에틸 에스테르 (0.07 g, 0.13 mmol)의 용액에, LiOH.H₂O (0.028 g, 0.67 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 48시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 증발 건조시키고, 이어서 물 (10 mL)로 희석하고, 시트르산을 사용하여 산성화시키고 (pH ~5), DCM (2x30 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고 농축시켰다. 조 물질을 15-50% EtOAc/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬) 상에서 정제하여, 표제 화합물 (0.025 g, 29.41%)을 수득하였다. LCMS m/z 493.3 (M+H)⁺.

하기 화합물을 본질적으로 실시예 12의 방법에 의해 제조하였다.

<표 18>

^a0.3 mL/분의 유량으로 이동상 (A) 0.01% TFA/물 및 (B) 아세토니트릴을 사용하는 칼럼: 키네텍스(Kinetex) C18 (50 mm x 2.1 mm x 1.7 μm)을 사용하여 정제용 HPLC에 의해 정제함.

실시예 16

(S)-3-{4-[8-(4-시아노메톡시-2,6-디메틸-페닐)-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시]-페닐}-헥스-4-인산

디클로로에탄 (10 mL) 중 (S)-3-{4-[8-(4-시아노메톡시-2,6-디메틸-페닐)-2-이소프로필-[1,2,4]티아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시]-페닐}-헥스-4-인산 에틸 에스테르 (0.07 g, 0.12 mmol)의 교반된 용액에, 트리메틸주석 히드록시드 (0.224 g, 1.23 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 96시간 동안 80℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 1.5 N HCl 용액 (20 mL)으로 세척하고, EtOAc (2x20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 포화 염수 용액 (10 mL)으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 물질을 49% EtOAc/헥산으로 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (콤비플래쉬) 상에서 정제하여, 표제 화합물을 황색 고체 (0.023 g, 34.8%)로서 수득하였다. LCMS m/z 536 (M+H)⁺.

하기 화합물을 본질적으로 실시예 16의 방법에 의해 제조하였다.

<표 19>

GPR40: 정보

최근에 나가스미(Nagasumi)에 의해 보고된, 인슐린 II 프로모터의 제어 하에 인간 GPR40 유전자를 과다발현하는 트랜스제닉 마우스를 사용한 연구의 결과는, GPR40이 특히 인슐린 저항성의 설치류 모델에서 생체내 GDIS 및 혈장 글루코스 수준의 조절에 있어 중요한 역할을 한다는 것을 추가로 뒷받침하였다. 문헌 [Nagasumi K, et. al., Overexpression of GPR40 in pancreatic β-cells augments glucose-stimulated insulin secretion and improves glucose tolerance in normal and diabetic mice, Diabetes 58: 1067-1076, 2009]. 또한, 문헌 [Briscoe CP et al., The orphan G protein-coupled receptor GPR40 is activated by medium and long chain fatty acids, Journal Biological Chemistry 278: 11303 - 11311, 2003]을 참조한다. 이들 발견은 신규 GPR40 조절제 화합물의 개발이 특히 T2D의 치료에 사용하기 바람직할 수 있음을 추가로 뒷받침하였다.

검정

칼슘 유동 1차 검정

본원에 예시된 화합물을 본질적으로 하기 기술된 바와 같이 시험하였고, 이는 칼슘 유동 1차 검정에서 500 nM 미만의 EC₅₀ 값을 나타내고, >50%의 효능을 나타내었다.

이들 검정을 사용하여, 리간드가 GPR40에 결합하여 이를 활성화할 때 일어나는 세포내 칼슘 수준의 증가를 측정함으로써 화합물을 스크리닝하고, 이에 따라 GPR40 효능제의 효력 및 효능을 입증하였다. 10% FBS 및 800 μg/ml 제네티신으로 보충된 둘베코 변형 이글 배지 (3:1 비로 F12 배지 함유) 중에 37℃ 및 5% CO₂에서 유지된, 인간 GPR40 cDNA를 과다발현하는 HEK293 세포를 본 연구에 사용하였다. 효능제 검정을 검정 완충제 (1 × HBSS (행크 평형 염 용액(Hank's Balanced Salt Solution)) & 20 mM HEPES (4-(2-히드록시에틸)-1-피페라진에탄술폰산)) 중에서 0.1% 지방산 무함유 BSA의 존재 또는 부재 하에 칼슘 4 염료 검정 키트 (몰레큘라 디바이시스(Molecular Devices))를 사용하여 수행하였다. 수용체 활성화를 형광측정 영상화 플레이트 판독기 (FLIPR)를 사용하여 세포내 칼슘의 증가로서 측정하였다. 기준선에 비해 형광에서의 최대 변화를 사용하여 효능제 반응을 결정하였다. 화합물의 EC₅₀값을 엑셀 피트(Excel Fit) 소프트웨어 (버전 4; IDBS)를 사용하여 농도 대 상대 형광 단위 (RFU)를 플롯팅함으로써 계산하였다. 퍼센트 효능을 천연 리간드인 리놀레산과 비교하여 화합물에 의해 나타나는 최대 반응에 기초하여 계산하였다. 실시예 1의 시험 화합물은 본 검정에서 조사했을 때 247 nM (±23.9, n=12)의 EC₅₀및 78.7% 효능 (±12.5, n=12)을 가졌다. 이들 결과는 GPR40 효능제로서의 이 화합물의 바람직한 효력 및 효능을 추가로 입증하였다. (평균 ± SEM; SEM = 평균의 표준 오차.)

선택성 검정

퍼옥시솜 증식자-활성화 수용체 (PPAR) α, δ, 및 γ 기능적 검정

GPR40이 PPARγ에 대한 리간드에 의해 활성화되는 것으로 알려져 있기 때문에, 예시된 화합물을 Gal4 PPARα, Gal4 PPARδ, 및 PPARγ 리포터 검정에서 조사하여, 예시된 화합물의 선택성을 결정하였다. 아프리카 녹색 원숭이의 신장 조직으로부터 유래되는 CV1 세포를 퓨젠(Fugene)을 사용하여 다양한 수용체 및 리포터 플라스미드로 형질감염시켰다. Gal4 PPARα 및 PPARδ 검정의 경우에, 아데노바이러스의 주요 후기 프로모터에 의해 가동되는 반딧불이 루시페라제 유전자의 상류에 클로닝된, 효모 전사 단백질 Gal4 반응 요소의 5개의 탠덤 카피를 함유하는 리포터 플라스미드를, Gal4 DNA 결합 도메인 (DBD) 및 PPARα 또는 PPARδ 리간드 결합 도메인을 함유하는 하이브리드 단백질을 구성적으로 발현하는 원숭이 바이러스 40 (SV40) 구동 플라스미드와 함께 형질감염시켰다. PPARγ 검정의 경우에, 둘 다 시토메갈로바이러스 (CMV) 프로모터에 의해 구동되는 PPARγ 및 RXRα를 코딩하는 플라스미드를 TK 프로모터에 의해 구동되는 루시페라제 리포터 cDNA 및 수용체 반응 요소 (2 × PPRE)를 함유하는 플라스미드와 함께 형질감염시켰다. 세포를 T225 cm² 세포 배양 플라스크에서 5% 목탄-스트리핑 FBS 및 개별적 검정을 위한 특정한 플라스미드를 포함하는 DMEM 배지 중에서 형질감염시켰다. 밤새 인큐베이션한 후에, 형질감염된 세포를 트립신처리하고, 5% 목탄-스트리핑 FBS를 함유하는 DMEM 배지 중에서 불투명 96 웰 접시에 플레이팅하고 (15,000개 세포/웰), 4시간 동안 인큐베이션하고, 절반 로그 희석한 0.17 ηM 내지 10 μM의 시험 화합물 또는 참조 화합물에 노출시켰다. 화합물과 24시간 인큐베이션한 후에, 세포를 용해시키고, 루피페라제 활성을 발광에 의한 수용체 활성화의 척도로서 결정하였다. 데이터를 4 파라미터-피트 로지스틱스 모델에 핏팅시켜, EC₅₀ 값을 결정하였다. 최대 퍼센트 자극을 10 μM의 적절한 PPAR 효능제 참조 화합물, 2-메틸-2-(4-{2-메틸-3-[2-(페닐카르보닐)-4-(트리플루오로메톡시)페녹시]프로폭시}페녹시)프로판산을 사용하여 수득된 최대 자극과 비교하여 결정하였다. < 20%의 효능을 음성으로 간주하였다. PPAR 기능 검정에서 실시예 1의 화합물에 대한 EC₅₀은 다음과 같다: PPARα > 10 μM; PPARδ = 4 μM; PPARγ = 2.26 μM. 이들 데이터는 실시예 1의 예시된 화합물이 약한 PPAR 활성을 갖는다는 것을 나타낸다. 따라서, 이들 검정은 예시된 화합물이 목적하는 바와 같이, 기재된 검정에서 약한 또는 음성 PPAR 효능을 갖는다는 것을 뒷받침한다.

GPR40에 대한 시험관내 결합 친화도

주문 제조된 방사성표지 (5 nM [³H]- TAK-875) 및 인간 GPR40 (hGPR40) 구축물을 과다발현하는 HEK293 세포로부터 제조된 막을 사용하는 신속-세척 여과를 사용하는 방사성리간드 경쟁 결합 검정을 실행하여 시험 화합물에 대한 평형 해리 상수 (K_i)를 결정하였다. 경쟁 곡선을 퍼센트 특이적 억제 대 화합물의 농도로서 플롯하고, 가변 기울기를 갖는 4 파라미터 비선형 회귀 피트를 사용하여 분석하였다. K_i 값을 쳉-프루소프(Cheng-Prusoff) 식 K_i = IC₅₀/(1+(D/K_d))를 사용하여 계산하였으며, 여기서 IC₅₀은 결합의 50% 억제를 발생시키는 화합물의 농도이고, D는 검정에 사용되는 방사성리간드의 농도이고, K_d는 포화 결합 분석 실험으로부터 결정된 수용체 및 방사성리간드에 대한 평형 해리 상수이다 ([³H] TAK-875에 대한 K_d = 6.2). 실시예 1의 경우에, K_i = 15.8 nM ± 3.86, n=5/6이었다. 문헌 [Cheng, Y. and Prusoff, W.H. (1973) "Relationship between the inhibition constant (K_i) and the concentration of inhibitor which causes 50 per cent inhibition (IC₅₀) of an enzymatic reaction," Biochem Pharmacol 22(23):3099-108]을 참조한다. (평균 ± SEM; SEM = 평균의 표준 오차.) 이들 데이터는 실시예 1 화합물이 인간 GPR40에 대해 고친화도 리간드임을 입증한다.

경쟁 결합 동역학 - 수용체 체류 시간의 결정

비표지된 화합물의 회합률 및 해리율을 문헌 [Motulsky, H. J. and L. C. Mahan (1984), "The kinetics of competitive radioligand binding predicted by the law of mass action" Mol Pharm 25(1): 1-9]에 의해 기재된 방법을 사용하여 정량화하였다. 인간 GPR40 막을 1x K_i, 3x K_i, 또는 10x K_i 비표지된 화합물의 부재 및 존재 중에서 6-8 nM [³H] TAK875와 함께 다양한 시점에서 인큐베이션하였다. 결합 및 유리 방사성리간드의 분리를 유리 섬유 필터 상에서 신속-세척 여과를 사용하여 수행하고, 액체 섬광 카운터로 계수하였다. 데이터를 윈도우즈(Windows)용 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism) 6, 버전 6.03 (그래프패드 소프트웨어(GraphPad Software), 미국 캘리포니아 라 졸라, www.graphpad.com)에서 경쟁적 결합 모델의 동역학에 핏팅시킴으로써 속도를 계산하였다. 실시예 1의 화합물은 GPR40 체류 시간, τ가 169분 (± 52.1, n=4)임을 보여주었으며, 이는 이 GPR40 리간드가 생체내 반응을 생산하기에 수용체 상에서 충분한 체류 시간을 갖는다는 것을 시사한다 (평균 ± SEM; SEM = 평균의 표준 오차)

베타-아레스틴 동원을 결정하기 위한 1% FBS를 사용하는 인간 및 마우스 베타-아레스틴 효능제 검정:

인간 배아 신장 (hEK293)-hFFAR1 세포를 디스커버엑스(DiscoveRx)로부터 구입하였다. mFFAR1을 발현하는 인간 골육종 (U2OS) 세포는 디스커버엑스에 의해 개발되었다. 이들 세포는 프로링크(Prolink) (PK)-태그부착된 GPR40 및 효소 수용자 (EA)-태그부착된 베타-아레스틴 융합 단백질을 공동-발현한다. GPR40의 활성화가 베타-아레스틴 동원을 자극하면, 디스커버엑스 패스헌터(PathHunter) 검출 키트를 사용하여 베타 갈락토시다제 (B-gal) 효소 단편의 상보성을 강제하여 화학발광 신호를 생성하는 B-gal 효소를 형성할 수 있다. 세포를 1% FBS (소 태아 혈청)를 함유하는 배양 배지 중에서 384 웰 플레이트에 5,000개 세포/웰로 밤새 인큐베이션하였다. DMSO 중 일련 희석된 화합물 (20가지 농도 생성까지 2x 희석)을 1% FBS (소 태아 혈청)를 함유하는 배양 배지 중에서 스텝 다운 희석하고, 100 μM로 출발하는 최종 최고 농도로 세포에 첨가하였다. 화합물의 첨가 후에, 세포를 5% CO₂ 인큐베이터에서 90분 동안 37℃에서 인큐베이션하고, 디스커버엑스 키트 검출 시약을 첨가하였다. 화학발광 신호의 측정을 실온에서의 1-시간 인큐베이션 후에, 엔비전(Envision) 판독기로 확인하였다. 데이터를 4 파라미터-피트 로지스틱스에 핏팅시켜, EC₅₀ 값을 결정하였고, % 활성을 1 μM에서의 내부 표준 GPR40 효능제 표준인 TAK875에 대한 최대 반응과 비교하여 측정하였다. 실시예 1에 대해, hGPR40 b-아레스틴은 30.6 nM (± 12.3, n=2)의 EC₅₀과 170 (± 5.95, n=2)의 % 자극 최대 (FA)를 갖고, mGPR40 b-아레스틴은 4.87 nM (± 1.48, n=3)과 149 (± 11.8, n=3)의 % 자극 최대 (FA)를 가졌다. (평균 ± SEM; SEM = 평균의 표준 오차) 이들 데이터는 실시예 1이 베타 아레스틴을 통해 신호전달할 수 있는 GPR40 효능제임을 나타낸다.

본 발명의 예시된 화합물은 관련 기술분야에 공지된, 예컨대 문헌 [Remington's "Pharmaceutical Sciences", Gennaro, Ed., Mack Publishing Co. Easton Pa. 1990]에서 찾아볼 수 있는 허용되는 실시에 따라 제약 조성물, 예컨대 정제, 고체 또는 겔 충전 캡슐, 분말, 현탁액, 또는 용액으로 용이하게 제제화될 수 있다. 조성물은 또한 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 부형제, 및 희석제를 포함할 수 있다.

바람직한 제약 조성물은 경구 투여를 위해 정제 또는 캡슐로서 제제화되는 것들을 포함한다. 정제 또는 캡슐은 본 발명의 화합물을 당뇨병, 특히 제2형 당뇨병을 치료하는데 효과적인 양으로 포함할 수 있다. 통상의 기술자는 화학식 I의 화합물이 1종 이상의 추가의 치료제와 함께 투여될 수 있음을 인지할 것이다. 제약 조성물이 화학식 I의 화합물 및 1종 이상의 추가의 치료제를 포함하도록 제제화되는 것이 바람직할 수 있다.

제약 조성물은 당뇨병, 보다 특히 제2형 당뇨병을 치료하는데 효과적인 양으로 환자에게 투여된다. 환자의 치료에 효과적인 적절한 양 또는 용량은 건강 관리 제공자에 의해 결정될 수 있다.

Claims

하기 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.

상기 식에서
R¹은 H, CH₃, CN, CH₂CN, C(CH₃)₂CN, 및 F로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R²는 H, O(C₁-C₃알킬)R⁵, CH₂CN, 및 CN으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R³은 H, OCH₃, CN, C(CH₃)₂CN, 및 CH₂CN으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R⁴는 H 및 CH₃으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R⁵는 H, CN, C(CH₃)₂CN, OCH₃, S(O)₂CH₃, 및 C(CH₃)₂OH로 이루어진 군으로부터 선택되며; 단 R¹, R², R³, 및 R⁴로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나는 H이다.
제1항에 있어서, R³이 H인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제1항 또는 제2항에 있어서, R¹이 H 및 CH₃으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, R²가 H 및 O(C₁-C₃알킬)R⁵로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, R²가 H 및 OCH₃으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, R⁴가 CH₃인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, R¹이 CH₃인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제1항에 있어서, (S)-3-{4-[2-이소프로필-8-(4-메톡시-2,6-디메틸-페닐)-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시]-페닐}-헥스-4-인산인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제1항에 있어서, (S)-3-{4-[8-(2,6-디메틸-페닐)-2-이소프로필-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일메톡시]-페닐}-헥스-4-인산인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 제약상 허용되는 담체, 희석제, 또는 부형제 중 적어도 1종을 포함하는 제약 조성물.
유효량의 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 당뇨병의 치료를 필요로 하는 포유동물에서 당뇨병을 치료하는 방법.
유효량의 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 제2형 당뇨병의 치료를 필요로 하는 포유동물에서 제2형 당뇨병을 치료하는 방법.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 요법에 사용하기 위한 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 제2형 당뇨병의 치료에 사용하기 위한 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
화학식 II에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
<화학식 II>

상기 식에서
R¹은 H, CH₃, CN, CH₂CN, C(CH₃)₂CN, 및 F로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R²는 H, O(C₁-C₃알킬)R⁵, CH₂CN, 및 CN으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R³은 H, OCH₃, CN, C(CH₃)₂CN, 및 CH₂CN으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R⁴는 H 및 CH₃으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R⁵는 H, CN, C(CH₃)₂CN, OCH₃, S(O)₂CH₃, 및 C(CH₃)₂OH로 이루어진 군으로부터 선택되며; R¹, R², R³, 및 R⁴로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나는 H이고;
R은 C_1-4 알킬, C_1-4 할로알킬, C_3-6 시클로알킬, C_1-4 알킬-C_3-6 시클로알킬, 페닐, 및 C_1-5 알킬페닐로 이루어진 군으로부터 선택된다.
제15항에 있어서, R¹ 및 R⁴가 각각 CH₃인 화합물.
제15항에 있어서, R¹ 및 R⁴가 각각 H인 화합물.
제15항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, R²가 H 및 OCH₃으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화합물.
화학식 II의 화합물을 탈-에스테르화하여 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공하는 것을 포함하는, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제조하는 방법.
<화학식 I>

<화학식 II>

상기 식에서
R¹은 H, CH₃, CN, CH₂CN, C(CH₃)₂CN, 및 F로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R²는 H, O(C₁-C₃알킬)R⁵, CH₂CN, 및 CN으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R³은 H, OCH₃, CN, C(CH₃)₂CN, 및 CH₂CN으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R⁴는 H 및 CH₃으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R⁵는 H, CN, C(CH₃)₂CN, OCH₃, S(O)₂CH₃, 및 C(CH₃)₂OH로 이루어진 군으로부터 선택되며; 단 R¹, R², R³, 및 R⁴로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나는 H이고;
R은 C_1-4 알킬, C_1-4 할로알킬, C_3-6 시클로알킬, C_1-4 알킬-C_3-6 시클로알킬, 페닐, 및 C_1-5 알킬페닐로 이루어진 군으로부터 선택된다.