CN105899509A - 异丙基三唑并吡啶化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了下式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、使用所述化合物治疗糖尿病的方法和用于制备所述化合物的方法，其中R1选自H、CH3、CN、CH2CN、C(CH3)2CN和F；R2选自H、O(C1‑C3烷基)R5、CH2CN和CN；R3选自H、OCH3、CN、C(CH3)2CN和CH2CN；R4选自H和CH3；R5选自H、CN、C(CH3)2CN、OCH3、S(O)2CH3和C(CH3)2OH；条件是，选自R1、R2、R3和R4中的至少一个是H。

Description

异丙基三唑并吡啶化合物
本发明涉及三唑并吡啶化合物或者它们的药学上可接受的盐，以及化合物在治疗中的用途。本发明的三唑并吡啶化合物是GPR-40的激活剂。
GPR-40也称为游离脂肪酸受体1(FFA1或者FFAR1)，据报道主要在啮齿动物胰腺β细胞、胰岛瘤细胞系和人体胰岛中以高水平表达。胰岛素分泌的葡萄糖调节是激活GPR-40的重要特征。实现GPR-40激活的化合物与刺激患有II型糖尿病(T2D)的患者中的胰岛素分泌相关。作为GPR-40激活剂的化合物期望在GPR-40介导的病况的治疗中使用。
WO2004/041266公开了GPR-40受体功能调节剂，其包括具有芳环和能够释放阳离子的基团的化合物。
本发明提供下式I的化合物，或者其药学上可接受的盐：
I
其中
R1选自H、CH3、CN、CH2CN、C(CH3)2CN和F；
R2选自H、O(C1-C3烷基)R5、CH2CN和CN；
R3选自H、OCH3、CN、C(CH3)2CN和CH2CN；
R4选自H和CH3；并且
R5选自H、CN、C(CH3)2CN、OCH3、S(O)2CH3和C(CH3)2OH；条件是，选自R1、R2、R3和R4中的至少一个是H。
本发明的化合物具有在上述结构中用星号(*)标识的手性碳。优选的化合物具有上述所示的构型，其按惯例被称为S构型。为了免生疑问，本发明包括所有手性碳构型，如由式Ia所示：
Ia。
在一个实施方案中，R1选自H、CH3和F。在一个实施方案中，R1选自H和CH3。
在另一个实施方案中，R2选自H和-O(C1-C3烷基)R5。在一个实施方案中，R2选自H和OCH3。在一个实施方案中，R5选自H、-S(O)2CH3和-C(CH3)2OH。
另一个实施方案是其中R3是H、R1是CH3并且R4是CH3的化合物。在另一个实施方案中，R3是H，R1是CH3，R4是CH3并且R2是-OCH3。
在一个实施方案中，R3选自H和OCH3。在一个实施方案中，R3是H。
在一个实施方案中，R4是CH3。一个实施方案是其中R1是CH3、R2是H或-OCH3、R3是H并且R4是CH3的化合物。在一个实施方案中，R1是CH3并且R4是CH3。
本发明的一个优选的化合物是(S)-3-{4-[2-异丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸，或者其药学上可接受的盐。本发明的一个优选的化合物是(S)-3-{4-[8-(2,6-二甲基-苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸，或者其药学上可接受的盐。
本发明还提供药物组合物，其包含如上所述的式I的化合物或者其药学上可接受的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或者赋形剂。
本发明还提供药物组合物，其包含如上所述的式I的化合物或者其药学上可接受的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或者赋形剂，以及任选的一种或多种治疗剂。附加的治疗剂包括例如二甲双胍和/或捷诺维(Januvia)。
本发明还提供在哺乳动物中治疗糖尿病的方法。所述方法包括对需要治疗的哺乳动物给药有效量的如上式I所述的化合物或者其药学上可接受的盐。更优选地，本发明提供在需要治疗的哺乳动物中治疗II型糖尿病的方法，其包括给药有效量的如上式I所述的化合物或者其药学上可接受的盐。
本发明提供用于治疗的如上所述的根据式I的化合物或者其药学上可接受的盐。
在又一个形式中，本发明提供用于在需要糖尿病治疗的哺乳动物中治疗糖尿病的如上所述的根据式I的化合物、其药学上可接受的盐或者药物组合物。优选所述用途是用于治疗II型糖尿病并且所述哺乳动物是人。
本发明提供根据式I的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗糖尿病的药物中的用途。优选所述药物是用于治疗II型糖尿病。
在又一个形式中，本发明提供式II的中间体化合物或其药学上可接受的盐：
II
其中，R1选自H、CH3、CN、CH2CN、C(CH3)2CN和F；
R2选自H、O(C1-C3烷基)R5、CH2CN和CN；
R3选自H、OCH3、CN、C(CH3)2CN和CH2CN；
R4选自H和CH3；
R5选自H、CN、C(CH3)2CN、OCH3、S(O)2CH3和C(CH3)2OH；条件是，选自R1、R2、R3和R4中的至少一个是H；并且
R选自C1-4 烷基、C1-4 卤代烷基、C3-6 环烷基、C1-4 烷基-C3-6 环烷基、苯基和C1-5 烷基苯基，从而提供式I的化合物或者其药学上可接受的盐。优选的R基团包括C1-2 烷基、C1-2卤代烷基、苯基和C1-2 烷基苯基。特别优选的R基团包括甲基、乙基、苯基和苯甲基。
本发明还提供用于制备上式I所述的化合物的过程或者方法。所述方法包括使根据式II的中间体化合物去保护（de-protect）或者去酯化（de-esterify），从而制备式I的化合物或者其药学上可接受的盐。
本领域技术人员将容易地理解并且能够实现去保护反应而无需过度实验。将被本领域技术人员认识到的是，除了羧酸和被保护的羧酸之外，可以使用其它能容易地转化为羧酸的官能团代替羧酸或者被保护的酸。这样的官能团、制备和这些官能团向羧酸的转化可以在下述文献中找到：Larock. R.C的“Comprehensive Organic Transformations： AGuide to Functional Group Preparations”，Wiley VCH，1999和Smith., M.B.与March,J.的“March's Advanced Organic Chemistry, Reactions, Mechanisms andStructure”，Wiley-Interscience，第六版，2007。
本发明的化合物可以作为药学上可接受的盐提供。“药学上可接受的盐”是指被认为对于临床和/或兽医用途而言可接受的本发明的化合物的盐。药学上可接受的盐和用于制备它们的常规方法是本领域公知的。参见例如：P. Stahl等人，Handbook ofPharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use，(VCHA/Wiley-VCH，2002)；S.M. Berge等人，"Pharmaceutical Salts," Journal of Pharmaceutical Sciences，第66卷，第1期，1977年1月。
个别异构体、对映体或者非对映体可以在式I的化合物的合成中任何方便的点处通过例如手性色谱法的方法进行分离。此外，在下述方案和制备中所述的中间体包含多个氮、羟基和酸保护基团如酯。在每次出现中，取决于特定的反应条件和待实施的特定转换，所述可变的保护基团可以相同或者不同。保护和去保护条件对本领域技术人员是公知的并且被描述于文献中。参见例如，Greene和Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，(T. Greene和P. Wuts编著，第二版，1991)。
在本文中使用的缩写根据Aldrichimica Acta，第17卷，第1期，1984所定义。其它的缩写定义如下：“ADDP”是指1-(偶氮二羰基)二哌啶；“BSA”是指牛血清白蛋白；“n-BuLi”是指正丁基锂；“DIBAL”是指二异丁基氢化铝；“DCM”是指二氯甲烷；“DMEM”是指达尔伯克氏改良伊格尔氏培养基(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)；“DMF”是指二甲基甲酰胺；“DEAD”是指偶氮二甲酸二乙酯；“DMF”是指二甲基甲酰胺；“DMSO”是指二甲基亚砜；“EC50”是指在最大响应的一半时的有效浓度；“EtOAc”是指乙酸乙酯；“EtOH”是指乙基醇或者乙醇；“F12”是指Ham's F12培养基；“FA”是指脂肪酸；“FBS”是指胎牛血清；“HEK”是指人胚肾；“IC50”是指产生对药剂（agent）而言可能的最大抑制响应的50%的该药剂的浓度；“MeOH”是指甲基醇或者甲醇；“MTBE”是指甲基叔丁基醚；“NBS”是指N-溴代丁二酰亚胺；“Pd(amphos)Cl2”是指双(二叔丁基(4-二甲基氨基苯基)膦)二氯钯(II)；“Pd(dppf)Cl2”是指[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)；“Pd(PPh3)2Cl2”是指双(三苯基膦)氯化钯(II)；“PPAR”是指过氧化物酶体增殖物激活受体；“PPRE”是指过氧化物酶体增殖物响应元件；“RFU”是指相对荧光单位；“RPMI”是指洛斯维·帕克纪念研究所(Roswell Park MemorialInstitute)；“TFA”是指三氟乙酸；“THF”是指四氢呋喃；“TK”是指胸苷激酶；并且“TAK875”是指被称为fasiglifam的Takeda化合物。
如在文本中使用的术语烷基是直链烷基，例如乙基或正丙基；或者支链烷基，例如异丙基或叔丁基。术语C1-4 卤代烷基是指具有1、2、3或更多个连接至烷基链的碳的卤素基团的烷基基团。如果存在两个或多个卤素，卤素不必连接至相同的碳。该术语还包括全卤代烷基，其中所述烷基基团的所有氢原子都被卤素替代。
在下述方案中，除非另有说明，所有的取代基都如上文所定义。试剂和起始材料通常对于本领域普通技术人员是容易获得的。其它试剂和起始材料可以通过类似于合成已知结构相似的化合物的有机和杂环化学的标准技术以及下述包括任何新程序的制备和实施例中描述的程序来制造。
方案1
式I的化合物可以根据如方案1所描述的反应来制备。PG是开发用于酸的保护基团，例如酯，参见上文。方案1(步骤1)描述了苯磺酸取代的二氨基吡啶季铵盐（quaternary salt）的形成。可以使单甲基或者三甲基苯基氨基磺酸盐(1)与取代的2-氨基吡啶(2)反应，从而提供二氨基吡啶季铵盐(3)。然后，可以使用极性质子溶剂如MeOH在有机碱如三乙胺中使该季铵盐(3)与2-甲基丙醛(4，步骤2a)反应，从而形成取代的[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶(6)。替代地，可以在碱性有机溶剂如吡啶中使2-甲基丙酰氯(5，步骤2b)与所述季铵盐(3)反应，从而形成取代的[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶(6)。可以在标准条件下使用还原剂如二异丁基氢化铝(DIBAL)在温度如-78℃下在极性非质子溶剂如DCM中，将化合物(6)的酯还原成甲基羟基，从而获得羟基化合物(7，步骤3)。本领域公知的其它还原剂是氢化铝锂或者硼氢化钠。可以将化合物(7)在Mitsunobu条件下烷基化成醚(10，步骤5b)。Mitsunobu条件是本领域公知的，并且涉及使用膦(例如三苯基膦、三丁基膦或者三乙基膦)和偶氮二甲酸酯(例如偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)或偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD))或偶氮二羰基化物(例如ADDP)使醇(7)与亲和试剂如酚(9)反应。替代地，可以将醇(7)转化成卤素(8，步骤4)如溴代物或者氯代物，其使用氯化亚砜从而形成氯代物或者在DCM中使用三溴化磷从而形成溴代物。然后，可以在碱性条件下使用无机碱如碳酸铯或者乙酸钾在极性非质子溶剂如乙腈中，用酚(9)将所述卤代化合物(8)烷基化，从而获得化合物(10，步骤5a)。8-卤素取代的[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶(10)可以在Suzuki-Miyaura交叉偶联条件下用硼酸试剂偶联。本领域技术人员将认识到，存在多种可用于促进这样的交叉偶联反应的条件。因此，合适的钯试剂包括双(三苯基膦)二氯化钯(II)、Pd(amphos)Cl2、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)与三环己基膦、(1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁)氯化钯(II)、四(三苯基膦)钯、或者乙酸钯(II)。合适的碱包括在合适的非极性溶剂如1,4-二氧杂环己烷中的碳酸铯、碳酸钠、碳酸钾、或者磷酸三钾一水合物，从而获得8-取代的[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶(II，步骤6)。可以在本领域公知的标准碱性条件下使II的被保护的酸去保护，从而获得式I的化合物（步骤7）。用于酯的去保护的条件是本领域公知的，其使用在极性质子溶剂如乙醇或者MeOH或者水/THF溶剂混合物中的碱如氢氧化钠或者氢氧化锂。其它替代的去保护条件包括在二氯乙烷或者THF中使用三甲基氢氧化锡或者三甲基硅醇钾（potassium trimethylsilanolate）作为碱从而获得式I的化合物。
方案2
在方案2中显示的另一个变体中，如方案1, 步骤6中所述的，8-溴取代的[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶(7，步骤1)可以在Suzuki-Miyaura交叉偶联条件下使用硼酸试剂偶联，从而获得化合物(12)。然后，如在上述方案1, 步骤5b中所述的，可以在Mitsunobu条件下使该醇(12)与酚(9)反应，从而在步骤2a中获得化合物II。替代地，如方案1, 步骤4中所述的，可以将化合物12的醇卤代从而获得化合物13。然后，可以在如方案1, 步骤5b中所述的碱性条件下将卤代的化合物(13)烷基化，从而获得化合物II（步骤2b）。然后，如方案1, 步骤7中所述的，使式II的化合物去保护，从而获得式I的化合物。
制备和实施例
下述制备和实施例进一步举例说明了本发明并代表了式(I)的化合物的典型合成。除非相反地说明，本文中所述的化合物是使用Accelrys Draw 4.0，IUPACNAME ACDLABS或者MDL ISIS，版本2.5 SP2进行命名和编号。
制备1
6-氨基-烟酸甲酯
在0℃下，向搅拌的6-氨基-烟酸(25 g，181.1 mmol)在MeOH (200 mL)中的溶液中添加浓H2SO4 (7 mL)，并且将反应混合物在80℃下加热过夜。将反应混合物冷却至室温并用饱和的NaHCO3溶液(100 mL)中和。将沉淀的固体过滤并在真空下干燥，从而获得作为黄色固体的标题化合物(22 g，81.5%)。LCMS m/z 153 (M+H)+。
制备2
6-氨基烟酸乙酯
向搅拌的6-氨基烟酸(3 Kg，21.61 mol)在乙醇(30 L)中的溶液中添加浓H2SO4 (3L)，并且将反应混合物在78℃下加热16小时。将反应混合物冷却至室温并在减压下蒸发。使用饱和的NaHCO3溶液将残留物中和至pH ~7.5，并且将其用EtOAc (3×5 L)萃取。将合并的有机萃取物用水(2×5 L)、盐水溶液（brine solution）(5 L)洗涤，经硫酸钠干燥，并将其蒸发，从而获得作为近白色固体的标题化合物(3.4 Kg，93.87%)。LCMS m/z 167 (M+H)+。
基本上通过制备2的方法来制备下述化合物。
表1
制备号 化学名称 结构 ES/MS (m/z)　(M+1)
3 3-溴-2-甲基-苯甲酸乙酯 243/245
制备4
6-氨基-5-溴-烟酸甲酯
在0℃下，向搅拌的6-氨基烟酸甲酯(22 g，143.7 mmol)在THF (500 mL)中的溶液中添加NBS (27.9 g，158.1 mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌过夜。将氯化铵(100 mL)添加至反应混合物，并用EtOAc (2×100 mL)萃取混合物。将合并的有机萃取物用盐水溶液(100 mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下蒸发。将粗材料通过硅胶柱色谱法(combiflash)纯化，并将其用己烷中的35% EtOAc洗脱从而获得作为浅棕色固体的标题化合物(28 g，84.8%)。LCMS m/z (79Br/81Br) 231/233 (M+H)+。
基本上通过制备4的方法来制备下述化合物。
表2
制备号 化学名称 结构 ES/MS (m/z)　(M+1)
5 6-氨基-5-溴烟酸乙酯 245/247
制备6
(E)-N-(对甲苯磺酰基)氧基乙亚胺酸乙酯（(E)-Ethyl N- (p-toluene sulfonyl)oxyacetimidate）
在室温下，向搅拌的(E)-N-羟基乙亚胺酸乙酯(47.2 g，458.7 mmol)在DMF (300 mL)中的溶液中添加三乙胺(128 ml，917.4 mmol)，并且将混合物搅拌20分钟。添加对甲苯磺酰氯(100 g，458.7 mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用水(200mL)稀释，并用EtOAc (3×150 mL)萃取。将合并的有机萃取物经硫酸钠干燥、过滤并蒸发，从而获得作为白色固体的标题化合物 (94 g，80.3%)。LCMS m/z 258 (M+H)+。
制备7
(E)-N-(2,4,6-三甲基苯磺酰基)氧基乙亚胺酸乙酯
在0℃下，向搅拌的N-羟基乙亚胺酸乙酯(42 g，183 mmol)在DMF (100 mL)中的溶液中添加三乙胺(49.2 ml，366 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌10分钟，并再次冷却至0℃。分批添加2,4,6-三甲基-苯磺酰氯(40 g，183 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用EtOAc (100 mL)稀释，用冰水(2×500 mL)、盐水溶液(50 mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发，从而获得不需要进一步纯化即可使用的作为浅黄色固体的标题化合物(40 g，粗品)。LC-MS m/z 286.1 [M+H]+。
制备8
(2,4,6-三甲基苯磺酰基)氧基氨基甲酸叔丁酯
向搅拌的2,4,6-三甲基苯-1-磺酰氯(5.5 Kg，25.14 mol)在MTBE (55 L)中的溶液中添加羟基氨基甲酸叔丁酯(4 Kg，30.17 mol)，并将其冷却至0℃。经1小时的时间将三乙胺(3.05 Kg，30.17 mol)添加至反应混合物，并且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。将反应混合物过滤并用MTBE (2x5 L)洗涤。将滤液浓缩至12 L的体积并添加正己烷(6 L)，并且将混合物再蒸馏至高至12 L的体积。向粗化合物中添加MTBE在正己烷中的5%溶液(60 L)，并且将混合物搅拌2小时。过滤反应混合物，从而获得作为近白色固体化合物的第一产物(6.13Kg)。将滤液浓缩至干燥并添加MTBE在正己烷中的5%溶液(10 L)。将反应混合物搅拌30分钟并过滤，从而获得标题化合物的第二产物(0.86 Kg)，将其与第一产物合并从而获得标题化合物(6.99 g，88%)。
制备9
O-(对甲苯磺酰基)羟胺
在0℃下，向搅拌的(E)-N-(对甲苯磺酰基)氧基乙亚胺酸乙酯(10 g，38.9 mmol)在1,4-二氧杂环己烷(40 mL)中的溶液中添加HClO4(3.0 mL)，并且将反应混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物用水稀释，并用DCM (2×10 mL)萃取。将合并的有机萃取物经硫酸钠干燥并过滤。不需要浓缩即可直接使用溶液 (9 g，100% 粗品)。
制备10
O-(2,4,6-三甲基苯磺酰基)羟胺
在0℃下，向搅拌的(E)-N-(2,4,6-三甲基苯磺酰基)氧基乙亚胺酸乙酯(16 g，62.167mmol)在1,4-二氧杂环己烷(200 mL)中的溶液中添加高氯酸(8 mL)，并且将反应混合物在室温下搅拌1.5小时。将反应混合物用水(30 mL)稀释，并用DCM (2×20 mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(20 mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并且不需要浓缩即可使用滤液。
替代制备10
在0℃下，经45分钟的时间向包含三氟乙酸(19.74 L)的100 L反应器中添加(2,4,6-三甲基苯磺酰基)氧基氨基甲酸叔丁酯(6.99 Kg，22.18 mol)，并且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。将反应混合物用碎冰(8 L)然后用冰水(16 L)淬灭，并且将其搅拌15分钟。添加额外的冰水(24 L)，并将混合物搅拌15分钟。将固体沉淀过滤、用水洗涤并干燥，从而获得不需要进一步纯化即可使用的白色固体(4.77 Kg，100%)。
制备11
1,2-二氨基-3-溴-5-甲氧基羰基-吡啶鎓 4-甲基苯磺酸盐
在室温下，向搅拌的O-(对甲基苯磺酰基)羟胺(9 g，48.1 mmol)在DCM (50 mL)中的溶液中添加6-氨基-5-溴-烟酸甲酯(11.1 g，48.1 mmol)，并将混合物搅拌16小时。将反应混合物冷却至0℃，并添加二乙基醚。将沉淀的固体过滤并在真空下干燥，从而获得作为近白色固体的标题化合物(9 g，45%)。1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 9.09 (bs, 2H), 8.69(d,J = 1.6 Hz, 1H), 8.46 (q,J = 8.0 Hz, 1H), 7.06 (s, 3H), 6.71 (s, 2H),4.31 (q,J = 11.6 Hz, 2H), 2.14 (s, 3H), 1.25-1.32 (m, 4H)。
基本上通过制备11的方法来制备下述化合物。
表3
制备号 化学名称 结构 NMR
12 2,4,6-三甲基-苯磺酸 1,2-二氨基-3-溴-5-乙氧基羰基-吡啶鎓盐 a
a. 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 9.09 (bs, 2H), 8.69 (d,J = 1.6 Hz, 1H),8.46 (q,J = 8.0 Hz, 1H), 7.06 (s, 3H), 6.71 (s, 2H), 4.31 (q,J = 11.6 Hz,2H), 2.14 (s, 3H), 1.25-1.32 (m, 4H)。
替代制备12
将作为湿滤饼的O-(2,4,6-三甲基苯磺酰基)羟胺 (假定4.77 Kg，22.17 mol)溶解于DCM (25 L)中，并分离出水层，将有机层用水(2×10 L)和盐水溶液(10 L)洗涤。将有机层转移至100 L反应器中并用额外的DCM (45 L)稀释。将反应混合物冷却至10℃-15℃，并经15分钟的时间分批添加6-氨基-5-溴-烟酸乙酯(4.24 Kg，17.29 mol)。将反应混合物在室温下搅拌16小时。过滤反应混合物，并且将固体滤饼用DCM (3×10 L)洗涤并干燥，从而获得作为白色固体的第一产物(2.7 Kg)。浓缩滤液，从而获得厚的团块，将其在DCM(20 L)中磨碎2小时。过滤固体，并且将湿滤饼用DCM (2×5 L)洗涤并干燥，从而获得作为近白色固体的第二产物(1.1 Kg)，将其与第一产物合并从而获得标题化合物(3.8 Kg，37.25%)。LCMSm/z (79Br/81Br) 260/262 (M+H)+。
制备13
3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苯甲腈
在0℃下，向搅拌的3-氨基-苯甲腈(0.5 g，4.23 mmol)在乙腈(30 mL)中的溶液中添加亚硝酸叔丁酯和双(频哪醇合)二硼（bispinacolatodiboron）(1.29 g，5.076 mmol)。将混合物在80℃下加热2小时。将反应混合物冷却至室温并在减压下浓缩。将粗材料通过硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用4% EtOAc/己烷洗脱从而获得标题化合物(0.35 g，99.8%)。LCMS m/z 294 (M+H)+。
基本上通过制备13的方法来制备下述化合物。
表4
制备号 化学名称 结构 ES/MS (m/z)　(M+1)
14 2-甲基-2-[2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苯基]-丙腈 286
制备15
3,5-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苯甲腈
向搅拌的4-溴-3,5-二甲基-苯甲腈(0.5 g，2.38 mmol)和双(频哪醇合)二硼(0.9 g，3.57 mmol)在DMF (20 mL)中的溶液中添加CH3COOK (1.051 g，10.71 mmol)。将混合物用氩气吹扫30分钟，然后添加Pd(dppf)2Cl2·DCM (0.097 g，0.119 mmol)并将混合物在100℃下加热过夜。将反应混合物冷却至室温并通过硅藻土过滤。将滤液用水(30 mL)稀释，并用EtOAc (2×30 mL)萃取。将合并的有机萃取物用饱和盐水溶液(20 mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗材料通过硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用6% EtOAc/己烷洗脱从而获得作为褐色液体的标题化合物(0.4 g，65%)。LCMS m/z 288(M+H)+。
制备16
2-(4-溴-苯基)-2-甲基-丙腈
在0℃下，向(4-溴-苯基)-乙腈(1 g，5.10 mmol)在DMF (10 mL)中的溶液中添加氢化钠(0.408 g，10.20 mmol，矿物油中60%)。将反应混合物在0℃下搅拌15分钟，然后在0℃下添加碘甲烷(0.69 ml，11.22 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用氯化铵水溶液(5 mL)淬灭，并用EtOAc (2×20 mL)萃取。将合并的有机萃取物用水(20 mL)和盐水(20 mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并蒸发。将粗材料通过硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用己烷中的5-10%EtOAc洗脱从而获得近白色固体(0.9 g，78%)。1HNMR (400 MHz、CDCl3) δ 7.51 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.34 (d,J = 8.4 Hz, 1H),1.77 (s, 3H)。
基本上通过制备16的方法来制备下述化合物。
表5
制备号 化学名称 结构 ES/MS (m/z)　(M+1)
17 2-(3-溴-苯基)-2-甲基-丙腈 224/226
制备18
4-氯-2,2-二甲基丁腈
在-60℃下，向搅拌的二异丙胺(2.43 ml，17.36 mmol)在干燥的THF (20 mL)中的溶液中逐滴添加n-BuLi (14.4 ml，17.36 mmol)，并逐渐使其加温至0℃，并搅拌20分钟。将反应混合物冷却至-78℃，并添加无水乙腈(1.42 ml，14.47 mmol)，并且将反应在相同的温度下搅拌45分钟。在-78℃下添加1-溴-4-氯丁烷 (1.3 ml，15.91 mmol)，使其加温至室温并搅拌3小时。将反应混合物用饱和的NH4Cl溶液(25 mL)淬灭，用EtOAc (2×50 mL)萃取。将合并的有机萃取物用水(50 mL)和盐水(50 mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并蒸发至干燥。将粗产物通过硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用己烷中的5% EtOAc洗脱从而获得标题化合物(0.5 g，25.2%)。1H NMR (400 MHz、CDCl3)；3.67-3.63 (m, 2H), 2.06-2.02 (m, 2H),1.45-1.36 (m, 6H)。
制备19
4-溴-2-甲基-丁-2-醇
在0℃下，向搅拌的4-溴-丁酸甲酯(2 g，12.27 mmol)在二乙基醚(20 mL)中的溶液中添加甲基溴化镁(16.4 ml，49.08 mmol)，并且将混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物用1 N HCl淬灭，并用二乙基醚(2×20 mL)萃取。将合并的有机萃取物用饱和盐水溶液(20mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗材料通过硅胶柱色谱法(combiflash)纯化，用20% EtOAc/己烷洗脱从而获得标题化合物(1.3 g，65%)。1H NMR (400 MHz、CDCl3)： δ 3.48(t,J = 8.0 Hz, 2H), 2.16 (t,J = 7.4 Hz, 2H), 1.89 (s, 6H), 1.76 (s, 3H),1.27 (s, 6H)。
制备20
8-溴-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸甲酯
在室温下，向搅拌的1,2-二氨基-3-溴-5-甲氧基羰基-吡啶鎓 4-甲基苯磺酸盐(9 g，21.4 mmol)在MeOH (35 mL)中的溶液中添加2-甲基丙醛(0.98 ml，10.7 mmol)和三乙胺(8.6 ml，64.2 mmol)，并将混合物搅拌48小时。将反应混合物蒸发至干燥，将残留物用水(50 mL)稀释并用EtOAc (2×50 mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水溶液(50 mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发至干燥。将粗材料通过硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用己烷中的15-20%EtOAc洗脱从而获得作为浅黄色固体的标题化合物(1.5 g，12%)。LCMS m/z(79Br/81Br) 298/300 (M+H)+。
替代制备20
在0℃下，向搅拌的2,4,6-三甲基-苯磺酸1,2-二氨基-3-溴-5-甲氧基羰基-吡啶鎓盐(10 g，22.3 mmol)在MeOH (100 mL)中的溶液中添加2-甲基丙醛 (0.8 g，1 ml，11.1mmol)和三乙胺 (9 ml，66.9 mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌48小时。将反应混合物蒸发，用水稀释，并用EtOAc (2×100 mL)萃取。将合并的有机萃取物用水(2×50 mL)、饱和的氯化铵溶液(50 mL)、盐水(50 mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发至干燥。将粗材料通过硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用己烷中的20-40%EtOAc洗脱从而获得作为近白色固体的标题化合物(2.7 g，43.5%)。LC-MS m/z (79Br/81Br) 298/300 [M+H]+。
制备21
8-溴-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸乙酯
在室温下，向搅拌的1,2-二氨基-3-溴-5-(乙氧基羰基)吡啶-1-鎓 2,4,6-三甲基苯磺酸盐(2.2 Kg，4.78 mol)在吡啶 (6.6 L)中的溶液中添加2-甲基丙酰氯(2.55 Kg，23.90mol)，并将反应混合物在100℃下加热5小时。将反应混合物蒸发至干燥，将残留物用水(20L)稀释并搅拌1小时。将沉淀的固体过滤，用水(3×5 L)洗涤并干燥。将粗产物通过硅胶快速色谱法来纯化，用己烷:EtOAc(8.0:2.0)洗脱从而获得作为近白色固体的标题化合物(800 g，53.7%)。LC-MS m/z (79Br/81Br) 312/314 [M+H]+。
制备22
(8-溴-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-甲醇
在-78℃下，向8-溴-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸甲酯(1.4 g，4.70mmol)在DCM (30 mL)中的溶液中添加二异丁基氢化铝(9.5 ml，9 mmol，己烷中1 M)。将反应混合物加温至0℃并搅拌3小时。将反应混合物用MeOH (20 mL)淬灭，并通过硅藻土过滤，用EtOAc (30 mL)洗涤，并在减压下蒸发，从而获得标题产物(1.8 g，100% 粗品)。LCMS m/z(79Br/81Br) 270/272 (M+H)+。
基本上通过制备22的方法使用适当的羧酸酯来制备下述化合物。
表6
制备号 化学名称 结构 ES/MS (m/z)　(M+1)
23 (3-溴-2-甲基-苯基)-甲醇 201/203
24 [2-异丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基]-甲醇 326
25 {8-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷基（silanyl）氧基)-2,6-二甲基-苯基]-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基}-甲醇 426
26 [8-(2-氟-5-甲氧基-苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基]-甲醇 316
27 (8-(2,6-二甲基-4-(3-(甲基磺酰基)丙氧基)苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)甲醇 432
28 [2-异丙基-8-(2-甲氧基-乙氧基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基]-甲醇 266
制备29
8-溴-6-氯甲基-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶
将(8-溴-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-甲醇(1.8 g，0.57 mmol)和氯化亚砜(10 mL)的混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物用饱和的碳酸氢钠溶液(20mL)淬灭，并用EtOAc (3×20 mL)萃取。将合并的有机萃取物经硫酸钠干燥、过滤并在真空下蒸发，从而获得标题化合物(1.1 g，67%)。LCMS m/z (79Br/81Br) 288/290 [M+H]+。
基本上通过制备29的方法来制备下述化合物。
表7
制备号 化学名称 结构 ES/MS (m/z)　(M+1)
30 6-氯甲基-8-(2-氟-5-甲氧基-苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶 334
31 6-(氯甲基)-8-(2,6-二甲基-4-(3-(甲基磺酰基)丙氧基)苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶 450
制备32
1-溴-3-溴甲基-2-甲基-苯
在0℃下，向(3-溴-2-甲基-苯基)-甲醇(2 g，9.9 mmol)在DCM (25 mL)中的溶液中添加三溴化磷(1.76 ml，14.9 mmol)，并使反应混合物加温至室温并将其搅拌1小时。将反应混合物用DCM (20 mL)稀释，用NaHCO3水溶液淬灭，并用DCM (3×50 mL)萃取。将合并的有机萃取物用水(10 mL)和盐水(10 mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥，从而获得标题化合物(2 g，77%)。LC-MS m/z 264 [M+H]+。
基本上通过制备32的方法来制备下述化合物。
表8
制备号 化学名称 结构 ES/MS (m/z)　(M+1)
33 6-溴甲基-2-异丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶 388/390
34 2-[2-(6-溴甲基-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)-苯基]-2-甲基-丙腈 397/399
35 6-溴甲基-2-异丙基-8-[4-(2-甲氧基-乙氧基)-2,6-二甲基-苯基]-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶 432/434
制备36
(3-溴-2-甲基-苯基)-乙腈
在室温下，向溴-3-溴甲基-2-甲基-苯(0.2 g，7.6 mmol)在DMF (15 mL)中的溶液中添加氰化钠(0.55 g，11.4 mmol)。将反应混合物在100℃下加热12小时，并用高锰酸钾溶液淬灭，过滤，并且将滤液用水稀释并用EtOAc (2×20 mL)萃取。将有机萃取物经Na2SO4干燥，过滤并蒸发。将粗材料通过硅胶柱色谱法(combiflash)纯化，用己烷中的10-25% EtOAc洗脱从而获得标题化合物(0.8 g，28.2%)。LC-MS m/z 211 [M+H]+。
制备37
2-异丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸甲酯
向搅拌的8-溴-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸甲酯 (0.8 g，2.6mmol)和4-甲氧基 2,6-二甲基苯基硼酸(0.522 g，2.9 mmol)在甲苯(12 mL)和EtOH (3mL)中的溶液中添加2 M K2CO3溶液(3.9 ml，7.8 mmol)。将混合物用氩气吹扫30分钟，添加Pd(PPh3)2Cl2 (0.182 g，0.26 mmol)并将反应混合物在100℃下加热16小时。将反应混合物冷却至室温，通过硅藻土过滤，将滤液用水(20 mL)稀释并用EtOAc (2×20 mL)萃取。将合并的有机萃取物用饱和盐水溶液(10 mL)洗涤，经硫酸钠干燥、过滤并浓缩。将粗材料通过硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用己烷中的15-20%EtOAc洗脱从而获得作为黄色液体的标题化合物(0.26 g，27.4%)。LCMS m/z 354 (M+H)+。
替代制备37
在室温下，向搅拌的8-溴-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸甲酯 (2.5g，8.8 mmol)和4-甲氧基 2,6-二甲基苯基硼酸 (1.4 g，8.83 mmol)在甲苯(16 mL)中的溶液中添加磷酸三钾 (5.3 g，12.4 mmol)，并将反应混合物用氮气吹扫20分钟，然后添加Pd(amphos)Cl2 (0.57 g，0.802 mmol)。将反应混合物在70℃下加热过夜。将反应混合物通过硅藻土过滤，用EtOAc (2×20 mL)洗涤并将滤液蒸发。将粗材料通过硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用己烷中的30%EtOAc洗脱从而获得作为褐色固体的标题化合物(1.5g，65.54%)。LC-MS m/z 354 [M+H]⁺。
替代制备37
向搅拌的8-溴-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸甲酯 (1.05 g，3.52mmol)和4-甲氧基 2,6-二甲基苯基硼酸(0.63 g，3.52 mmol)在1,4-二氧杂环己烷(20 mL)中的溶液中添加2 M K2CO3溶液(1.4 ml，2.9 mmol)。将混合物用氩气吹扫30分钟，然后添加Pd(PPh3)2Cl2 (0.041 g，0.059 mmol)并将反应混合物加热至100℃进行16小时。将反应混合物冷却至室温，通过硅藻土过滤，将滤液用水(20 mL)稀释并用EtOAc (2×20 mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(10 mL)洗涤，经硫酸钠干燥、过滤并浓缩。将粗材料通过硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用己烷中的14% EtOAc洗脱从而获得标题化合物(0.13 g，16%)。LCMS m/z 354 (M+H)+。
制备38
2-异丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸乙酯
向搅拌的8-溴-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸乙酯 (400 g，1.28mol)和4-甲氧基 2,6-二甲基苯基硼酸(276.8 g，1.54 mol)在甲苯(8 L)中的溶液中添加K3PO4 (816 g，3.84 mol)在水(3.84 L)中的溶液，并且将反应混合物用氮气吹扫1小时，然后添加Pd(amphos)Cl2 (45.36 g，0.064 mol)，并且将反应混合物用氮气吹扫20分钟。将反应混合物在75℃下加热16小时。将反应混合物冷却至室温，通过硅藻土过滤，并用EtOAc(3×1 L)洗涤。将滤液用水(5 L)稀释，并用EtOAc (2×1.5 L)萃取。将合并的有机萃取物用水(2.5 L)和盐水(2.5 L)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干燥。将粗产物(600 g)与另一粗品批次(400 g)合并，并通过硅胶柱色谱法纯化，用己烷中的15-20% EtOAc洗脱从而获得作为淡黄色固体的标题化合物(901 g，95.68%)。
制备39
8-(2-氟-5-甲氧基-苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸乙酯
向搅拌的8-溴-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸乙酯 (0.45 g，1.509mmol)和2-氟 4-甲氧基苯基硼酸(0.512 g，3.018 mmol)在1,4-二氧杂环己烷 (6 mL)中的溶液中添加2 M K2CO3 (0.624 g，4.527 mmol)。将混合物用氩气吹扫30分钟，添加Pd(PPh3)4 (0.087 g，0.075 mmol)，并且在微波中将混合物在100℃下加热1小时。将反应混合物冷却至室温并通过硅藻土过滤。将滤液用水(20 mL)稀释，并用EtOAc (2×10 mL)萃取。将合并的有机层用盐水(10 mL)洗涤，经硫酸钠干燥、过滤并浓缩。将粗材料通过硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用己烷中的15-20% EtOAc洗脱从而获得标题化合物(0.17 g，33%)。LCMS m/z 344 (M+H)+。
制备40
6-氯甲基-2-异丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶
在0℃下，向[2-异丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基]-甲醇(0.21 g，0.64 mmol)在DCM (10 mL)中的溶液中添加SOCl2 (0.12 ml，1.61mmol)。然后使混合物经1小时加温至室温。将反应混合物冷却至0℃，用饱和的碳酸氢钠溶液(20 mL)淬灭，并用DCM (3×20 mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥、过滤并蒸发至干燥，从而获得作为褐色固体的标题化合物 (0.06 g，29%)。LCMS m/z；344 (M+H)+。
制备41
2-[2-(6-羟基甲基-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)-苯基]-2-甲基-丙腈
在0℃下，向搅拌的2-{2-[6-(叔丁基二甲基-硅烷基氧基甲基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基]-苯基}-2-甲基-丙腈 (0.6 g，1.33 mmol)在THF (10 mL)中的溶液中添加四正丁基氟化铵(0.52 g，2 mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物用水(10 mL)稀释，并用EtOAc (2×20 mL)萃取。将合并的有机萃取物用水(10 mL)和盐水(10 mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发至干燥。将粗材料通过硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用己烷中的40%EtOAc洗脱从而获得作为白色固体的标题化合物(0.4mg，50%)。LC-MS m/z 335 [M+H]+。
制备42
8-溴-6-(叔丁基二甲基-硅烷基氧基甲基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶
在0℃下，向搅拌的8-溴-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-甲醇(0.25 g，0.92 mmol)在DMF (5 mL)中的溶液中添加咪唑(0.209 g，1.38 mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌5分钟，冷却至0℃并添加叔丁基氯二甲基硅烷(0.209 g，1.38 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌12小时。将反应混合物用水稀释，并用EtOAc (2×25 mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(20 mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥。将粗产物通过硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用己烷中的10-30% EtOAc洗脱从而获得标题化合物(0.32 g，90%)。LCMS m/z 384/386 [M+H]+。
制备43
{2-[6-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基甲基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基]-苯基}-乙腈
在室温下，向搅拌的8-溴-6-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基甲基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶 (1.3 g，3.38 mmol)和[2-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苯基]-乙腈 (0.82 g，3.38 mmol)在二氧杂环己烷 (10 mL)的溶液中添加乙酸钾 (0.93 g，6.76 mmol)，并且将反应混合物用氮气吹扫20分钟。添加Pd(PPh3)4 (0.195 g，0.16 mmol)，然后在密封管中将反应混合物在100℃下加热12小时。将反应混合物冷却，并通过硅藻土过滤，并将滤液蒸发至干燥。将粗产物通过硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用己烷中的10-30% EtOAc洗脱从而获得标题化合物(0.6 g，42%)。LCMS m/z 421 [M+H]+。
制备44
2-(3-溴-2-甲基-苯基)-2-甲基-丙腈
在0℃下，向NaH (0.22 g，5.6 mmol，石蜡油中60%)在THF中的溶液中添加(3-溴-2-甲基-苯基)-乙腈(0.6 g，2.8 mmol)在THF (4 mL)中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌30分钟，然后添加碘甲烷(0.43 ml，7 mmol)。将反应混合物室温下搅拌12小时，用饱和的NH4Cl水溶液淬灭，并在EtOAc (2×25 mL)中萃取。将有机层用盐水(10 mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并蒸发。将另一批次的粗品与该批次合并，并通过硅胶柱色谱法(combiflash)纯化，用己烷中的10-30% EtOAc洗脱从而获得标题化合物(1.2 g，75.9%)。LC-MS m/z 239 [M+H]+。
基本上通过制备44的方法来制备下述化合物。
表9
制备号 化学名称 结构 LC/MS (m/z)　(M+1)
45 2-{2-[6-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基甲基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基]-苯基}-丙腈 435
46 2-{2-[6-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基甲基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基]-苯基}-2-甲基-丙腈 449
制备47
2-异丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸甲酯
向搅拌的8-溴-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸甲酯 (0.8 g，2.6mmol)和4-甲氧基 2,6-二甲基苯基硼酸(0.522 g，2.9 mmol)在甲苯(12 mL)和EtOH (3mL)中的溶液中添加2 M K2CO3溶液(3.9 ml，7.8 mmol)。将混合物用氩气吹扫30分钟，添加Pd(PPh3)2Cl2 (0.182 g，0.26 mmol)并将反应混合物在100℃下加热16小时。将反应混合物冷却至室温，通过硅藻土过滤，将滤液用水(20 mL)稀释并用EtOAc (2×20 mL)萃取。将合并的有机萃取物用饱和盐水溶液(10 mL)洗涤，经硫酸钠干燥、过滤并浓缩。将粗材料通过硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用己烷中的15-20%EtOAc洗脱从而获得作为黄色液体的标题化合物(0.26 g，27.4%)。LCMS m/z 354 (M+H)+。
替代制备47
在室温下，向搅拌的8-溴-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸甲酯 (2.5g，8.8 mmol)和4-甲氧基 2,6-二甲基苯基硼酸 (1.4 g，8.83 mmol)在甲苯(16 mL)中的溶液中添加磷酸三钾 (5.3 g，12.4 mmol)，并且将反应混合物用氮气吹扫20分钟，然后添加Pd(amphos)Cl2 (0.57 g，0.802 mmol)。将反应混合物在70℃下加热过夜。将反应混合物通过硅藻土过滤，用EtOAc (2×20 mL)洗涤并将滤液蒸发。将粗材料通过硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用己烷中的30%EtOAc洗脱从而获得作为褐色固体的标题化合物(1.5g，65.54%)。LC-MS m/z 354 [M+H]⁺。
替代制备47
向搅拌的8-溴-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸甲酯 (1.05 g，3.52mmol)和4-甲氧基 2,6-二甲基苯基硼酸(0.63 g，3.52 mmol)在1,4-二氧杂环己烷(20 mL)中的溶液中添加2 M K2CO3溶液(1.4 ml，2.9 mmol)。将混合物用氩气吹扫30分钟，然后添加Pd(PPh3)2Cl2 (0.041 g，0.059 mmol)并将反应混合物在100℃下加热16小时。将反应混合物冷却至室温，通过硅藻土过滤，将滤液用水(20 mL)稀释并用EtOAc (2×20 mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(10 mL)洗涤，经硫酸钠干燥、过滤并浓缩。将粗材料通过硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用己烷中的14% EtOAc洗脱从而获得标题化合物(0.13 g，16%)。LCMS m/z 354 (M+H)+。
制备48
2-异丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸乙酯
向搅拌的8-溴-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸乙酯 (400 g，1.281mol)和4-甲氧基 2,6-二甲基苯基硼酸(276.8 g，1.538 mol)在甲苯(8 L)中的溶液中添加K3PO4 (816 g，3.844 mol)在水(3.84 L)中的溶液，并且将反应混合物用氮气吹扫1小时，然后添加Pd(amphos)Cl2 (45.36 g，0.064 mol)，并且将反应混合物用氮气吹扫20分钟。将反应混合物在75℃下加热16小时。将反应混合物冷却至室温，通过硅藻土过滤，并用EtOAc(3×1 L)洗涤。将滤液用水(5 L)稀释，并用EtOAc (2×1.5 L)萃取。将合并的有机萃取物用水(2.5 L)和盐水(2.5 L)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干燥。将粗产物(600 g)与另一粗品批次(400 g)合并，并通过硅胶柱色谱法纯化，用己烷中的15-20% EtOAc洗脱从而获得作为淡黄色固体的标题化合物(901 g，95.68%)。
制备49
8-溴-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸甲酯
在室温下，向搅拌的1,2-二氨基-3-溴-5-甲氧基羰基-吡啶鎓 4-甲基苯磺酸盐(9 g，21.4 mmol)在MeOH (35 mL)中的溶液中添加异丁醛(0.98 ml，10.7 mmol)和三乙胺(8.6ml，64.2 mmol)，并将混合物搅拌48小时。将反应混合物蒸发至干燥，将残留物用水(50 mL)稀释并用EtOAc (2×50 mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水溶液(50 mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发至干燥。将粗材料通过硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用己烷中的15-20%EtOAc洗脱从而获得作为浅黄色固体的标题化合物(1.5 g，12%)。LCMS m/z (79Br/81Br) 298/300 (M+H)+。
替代制备49
在0℃下，向搅拌的2,4,6-三甲基-苯磺酸1,2-二氨基-3-溴-5-甲氧基羰基-吡啶鎓盐(10 g，22.3 mmol)在MeOH (100 mL)中的溶液中添加2-甲基-丙醛 (0.8 g，1 ml，11.1mmol)和三乙胺 (9 ml，66.9 mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌48小时。将反应混合物蒸发，用水稀释，并用EtOAc (2×100 mL)萃取。将合并的有机萃取物用水(2×50 mL)、饱和的氯化铵溶液(50 mL)、盐水(50 mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥、过滤并蒸发至干燥。将粗材料通过硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用己烷中的20-40%EtOAc洗脱从而获得作为近白色固体的标题化合物(2.7 g，43.5%)。LC-MS m/z (79Br/81Br) 298/300 [M+H]+。
制备50
8-溴-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸乙酯
在室温下，向搅拌的1,2-二氨基-3-溴-5-(乙氧基羰基)吡啶-1-鎓 2,4,6-三甲基苯磺酸盐(2.2 Kg，4.779 mol)在吡啶 (6.6 L)中的溶液中添加异丁酰氯(2.546 Kg，23.895mol)，并将反应混合物在100℃下加热5小时。将反应混合物蒸发至干燥，将残留物用水(20L)稀释并搅拌1小时。将沉淀的固体过滤，用水(3×5 L)洗涤并干燥。将粗产物通过硅胶快速色谱法来纯化，用己烷:EtOAc(8.0:2.0)洗脱从而获得作为近白色固体的标题化合物(800 g，53.7%)。LC-MS m/z (79Br/81Br) 312/314 [M+H]+。
制备51
(8-溴-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-甲醇
在-78℃下，向8-溴-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸甲酯(1.4 g，4.70mmol)在DCM (30 mL)中的溶液中添加二异丁基氢化铝(9.5 ml，9 mmol，己烷中1 M)。将反应混合物加温至0℃并搅拌3小时。将反应混合物用MeOH (20 mL)淬灭，并通过硅藻土过滤，用EtOAc (30 mL)洗涤，并在减压下蒸发，从而获得标题产物(1.8 g，100% 粗品)。LCMS m/z(79Br/81Br) 270/272 (M+H)+。
基本上通过制备51的方法来制备下述化合物。
表10
制备号 化学名称 结构 ES/MS (m/z)　(M+1)
52 (3-溴-2-甲基-苯基)-甲醇 201/203
53 [2-异丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基]-甲醇 326
54 {8-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2,6-二甲基-苯基]-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基}-甲醇 426
55 [8-(2-氟-5-甲氧基-苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基]-甲醇 316
56 (8-(2,6-二甲基-4-(3-(甲基磺酰基)丙氧基)苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)甲醇 432
57 [2-异丙基-8-(2-甲氧基-乙氧基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基]-甲醇 266
制备58
8-溴-6-氯甲基-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶
将(8-溴-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-甲醇(1.8 g，0.57 mmol)和氯化亚砜(10 mL)的混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物用饱和的碳酸氢钠溶液(20mL)淬灭，并用EtOAc (3×20 mL)萃取。将合并的有机萃取物经硫酸钠干燥、过滤并在真空下蒸发，从而获得标题化合物(1.1 g，67%)。LCMS m/z (79Br/81Br) 288/290 [M+H]+。
基本上通过制备58的方法来制备下述化合物。
表11
制备号 化学名称 结构 ES/MS (m/z)　(M+1)
59 6-氯甲基-8-(2-氟-5-甲氧基-苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶 334
60 6-(氯甲基)-8-(2,6-二甲基-4-(3-(甲基磺酰基)丙氧基)苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶 450
制备61
(S)-3-[4-(8-溴-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基)-苯基]-己-4-炔酸乙酯
向搅拌的(S)-3-(4-羟基-苯基)-己-4-炔酸乙酯 (1.1g, 3.8 mmol)和8-溴-6-氯甲基-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶在乙腈(20 mL)中的溶液中添加碳酸铯(2.48 g，7.62 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物通过硅藻土过滤，用EtOAc(20 mL)洗涤并蒸发至干燥。将残留物溶解于EtOAc (30 mL)中，用水(2×30 mL)和盐水溶液(20 mL)洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下蒸发。将粗材料通过硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用己烷中的35-40% EtOAc洗脱从而获得标题化合物(1.0 g，53.4%)。LCMS m/z (79Br/81Br) 484/486 (M+H)+。
基本上通过制备61的方法来制备下述化合物。
表12
制备号 化学名称 结构 ES/MS (m/z)　(M+1)
62 (S)-3-{4-[2-异丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸乙酯 540
63 (S)-3-(4-{8-[2-(氰基-二甲基-甲基)-苯基]-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸乙酯 549
64 (S)-3-{4-[8-(2-氟-5-甲氧基-苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸乙酯 530
65 (S)-3-(4-((8-(2,6-二甲基-4-(3-(甲基磺酰基)丙氧基)苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)甲氧基)苯基)己-4-炔酸乙酯 646
66 (S)-3-(4-{2-异丙基-8-[4-(2-甲氧基-乙氧基)-2,6-二甲基-苯基]-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸乙酯 584
制备67
(S)-3-{4-[8-(4-氰基-苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸乙酯
向搅拌的(S)-3-[4-(8-溴-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基)-苯基]-己-4-炔酸乙酯 (1.0 g，2.07 mmol)和4-氰基苯基硼酸(0.602 g，9.6 mmol)在1,4-二氧杂环己烷 (10 mL)中的溶液中添加2 M 碳酸钾(0.542 g，6.18 mmol)的溶液。将混合物在氮气氛围下吹扫20分钟，并添加 Pd(PPh3)4 (0.117 g，0.103 mmol)。在微波中将反应混合物在100℃下搅拌4小时。将反应混合物用EtOAc (30 mL)稀释，用水(2×30 mL)和盐水溶液(30 mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下蒸发。将残留物通过硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用己烷中的30-40%EtOAc洗脱从而获得作为无色液体的标题化合物(0.500 g，47.8%)。LCMS m/z 507 (M-H)+。
基本上通过制备67的方法来制备下述化合物。
表13
制备号 化学名称 结构 ES/MS (m/z)　(M+1)
68 (S)-3-{4-[8-(2-氰基甲基-苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸乙酯 521
69 (S)-3-{4-[8-(2,6-二甲基-苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸乙酯 510
70 (S)-3-{4-[8-(4-氰基-2,6-二甲基-苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸乙酯 535
71 (S)-3-{4-[8-(3-氰基-苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸乙酯 507
制备72
(S)-3-(4-{8-[4-(氰基-二甲基-甲基)-苯基]-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸乙酯
在室温下，向搅拌的2-甲基-2-[4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苯基]-丙腈 (0.184 g，0.680 mmol)和(S)-3-[4-(8-溴-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基)-苯基]-己-4-炔酸乙酯 (0.3 g，0.619 mmol)在1,4-二氧杂环己烷(10 mL)中的溶液中添加2 M 碳酸钾 (0.619 ml，1.238 mmol)。将反应混合物在氮气氛围下吹扫20分钟，并添加Pd(PPh3)2Cl2 (0.021 g，0.0309 mmol)。将反应混合物在100℃下加热16小时。将反应混合物通过硅藻土过滤，并用EtOAc(2×20 mL)洗涤。将滤液用冷水(2×10 mL)和盐水(10 mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发至干燥。将粗材料通过硅胶柱色谱法(combiflash)纯化，用己烷中的30-50%EtOAc洗脱从而获得作为无色液体的标题化合物(0.13 g，38%)。LC-MS m/z 547 [M+H]+。
基本上通过制备72的方法来制备下述化合物。
表14
制备号 化学名称 结构 ES/MS (m/z)　(M+1)
73 (S)-3-{4-[8-(3-氰基甲基-苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸乙酯 521
制备74
(S)-3-{4-[8-(2-氰基-苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸乙酯
向搅拌的(S)-3-[4-[8-(8-溴-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸乙酯 (0.200 g，1.64 mmol)和2-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苯甲腈(0.110 g，1.96 mmol)在1,4-二氧杂环己烷 (9 mL)中的溶液中添加固体碳酸钾(0.172 g，4.92 mmol)。将混合物在氮气氛围下吹扫20分钟，并添加 Pd(PPh3)4(0.024 g，0.800 mmol)。将反应混合物在100℃下加热过夜，通过硅藻土过滤，用EtOAc洗涤，并在减压下蒸发至干燥。将残留物通过硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用己烷中的29-32% EtOAc洗脱从而获得标题化合物(0.140 g，66%)。LCMS m/z 507 (M+H)+。
制备75
(S)-3-(4-{8-[3-(氰基-二甲基-甲基)-苯基]-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸乙酯.
向搅拌的(S)-3-[4-(8-溴-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基)-苯基]-己-4-炔酸乙酯 (0.4 g，0.82 mmol)和2-甲基-2-[3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苯基]-丙腈 (0.23 g，0.9 mmol)在1,4-二氧杂环己烷 (40 mL)中的溶液中添加K2CO3 (0.33 g，2.4 mmol)。将混合物用氮气吹扫10分钟。然后，添加Pd(dppf)2Cl2·DCM (0.066 g，0.08 mmol)，并将混合物在100℃下加热12小时。将反应混合物冷却至室温并通过硅藻土过滤。将滤液用EtOAc(2×30 mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗材料通过硅胶柱色谱法(combiflash)纯化，用己烷中的15-20% EtOAc洗脱从而获得标题化合物(0.1 g，22.22%)。LCMS m/z 549.5 (M+H)+。
制备76
8-(4-羟基-2,6-二甲基-苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸甲酯
在-40℃下，向2-异丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸甲酯 (1.25 g，3.5 mmol)在DCM (30 mL)中的溶液中添加三溴化硼(0.51 ml，5.3 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物用碳酸氢钠水溶液(5 mL)淬灭，并用EtOAc (2×20 mL)萃取。将合并的有机萃取物用水(10 mL)和盐水溶液(10 mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发，从而获得标题化合物(0.9 g，76%)。LC-MS m/z 340 [M+H]+。
制备77
8-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2,6-二甲基-苯基]-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸甲酯
在0℃下，向搅拌的8-(4-羟基-2,6-二甲基-苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸甲酯 (0.9 g，2.65 mmol)在DMF (30 mL)中的溶液中添加咪唑 (0.540 g，7.96 mmol)和叔丁基二甲基氯硅烷(1.2 g，7.96 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用水(30 mL)稀释，并用EtOAc (2×50 mL)萃取。将合并的有机萃取物用水(30 mL)和盐水溶液(30 mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将粗材料通过硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用己烷中的8% EtOAc洗脱从而获得标题化合物(1.1 g，92%)。LC-MS m/z 454 [M+H]+。
制备78
((S)-3-(4-{8-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2,6-二甲基-苯基]-2-异丙基[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸乙酯
向搅拌的{8-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2,6-二甲基-苯基]-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基}-甲醇(0.8 g，1.8 mmol)在DCM (20 mL)中的溶液中添加(S)-3-(4-羟基-苯基)-己-4-炔酸乙酯 (0.655 g，2.8 mmol)、DEAD (0.43 ml，2.8 mmol)和三苯基膦 (0.566 g，2.16 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌90分钟。将反应混合物蒸发，并将粗材料通过硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用己烷中的18% EtOAc洗脱从而获得标题化合物(1 g，91%)。LC-MS m/z 640 [M+H]+。
制备79
(S)-3-{4-[8-(4-羟基-2,6-二甲基-苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸乙酯
在0℃下，向搅拌的(S)-3-(4-{8-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2,6-二甲基-苯基]-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸甲酯 (0.1 g，1.56 mmol)在THF (20 mL)中的溶液中添加四正丁基氟化铵 (0.8 g，3.12mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用水(10 mL)稀释，并用EtOAc (2×20 mL)萃取。将合并的有机萃取物用水(10 mL)和盐水(10 mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发至干燥。将粗材料通过硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用己烷中的40%EtOAc洗脱从而获得作为白色固体的标题化合物(0.4 g，50%)。LC-MS m/z 526 [M+H]+。
制备80
2-异丙基-8-[4-(2-甲氧基-乙氧基)-2,6-二甲基-苯基]-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸甲酯
在室温下，向搅拌的8-(4-羟基-2,6-二甲基-苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸甲酯 (0.40 g，1.185 mmol)和1-溴-2-甲氧基-乙烷 (0.82 ml，9.06 mmol)在乙腈 (15 mL)中的溶液中添加碳酸铯 (0.734 g，2.26 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物通过硅藻土过滤，用EtOAc (20 mL)洗涤并浓缩，从而获得残留物。将残留物溶解于EtOAc (30 mL)中，用水(2×30 mL)、盐水溶液(30 mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下蒸发。将粗化合物通过硅胶柱色谱法(combiflash)纯化，用己烷中的30%EtOAc洗脱从而获得作为白色半固体的标题化合物(0.350 g，87%)。LCMS m/z 397 (M+H)+。
制备81
8-(2,6-二甲基-4-(3-(甲基磺酰基)丙氧基)苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸乙酯
在室温下，向搅拌的8-(4-羟基-2,6-二甲基苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸乙酯 (1.1 g，3.11 mmol)和3-(甲基磺酰基)丙基-4-甲基苯磺酸酯(1.09 g，3.73 mmol)在DMF (15 mL)中的溶液中添加碳酸钾(1.29 g，9.34 mmol)。将反应混合物在80 °C下加热16小时。然后，将混合物用水淬灭，并用EtOAc (2×70 mL)萃取。将有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下蒸发。将粗化合物通过硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用正己烷中的45% EtOAc洗脱从而获得标题化合物(0.8 g，54.27%)。LCMS m/z474.41 (M+H)+。
制备82
((S)-3-(4-{8-[4-(3-羟基-3-甲基-丁氧基)-2,6-二甲基-苯基]-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸乙酯
向搅拌的(S)-3-(4-{8-[4-(3-羟基-3-甲基-丁氧基)-2,6-二甲基-苯基]-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸乙酯(0.09 g，0.17 mmol)在乙腈(10 mL)中的溶液中添加4-溴-2-甲基-丁-2-醇 (0.114 g，0.68 mmol)和碳酸铯(0.168 g，0.51 mmol)。将反应混合物在100℃下搅拌4小时。将反应混合物溶解于水(10mL)中，并用EtOAc (2×20 mL)萃取。将合并的有机萃取物用水(10 mL)和盐水(10 mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将粗材料通过硅胶柱色谱法来纯化，用己烷中的40%EtOAc洗脱从而获得作为褐色固体的标题化合物(0.05 g，50%)。LC-MS m/z 612 [M+H]+。
制备83
(S)-3-(4-{8-[4-(3-氰基-3,3-二甲基-丙氧基)-2,6-二甲基-苯基]-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸乙酯
向搅拌的(S)-3-{4-[8-(4-羟基-2,6-二甲基-苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸乙酯 (0.16 g，0.304 mmol)和4-氯-2,2-二甲基丁腈 (0.047 g，0.364 mmol)在DMF (10 mL)中的溶液中添加碳酸铯(0.29 g，0.912 mmol)，并在90℃下搅拌4小时。将反应混合物通过硅藻土过滤，将滤液用水(30 mL)稀释并用EtOAc(2×30 mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水溶液(2 mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，并蒸发至干燥。将粗化合物通过硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用30% EtOAc/己烷洗脱从而获得标题化合物(0.17 g，94%)。ES/MS m/z 621.4 [M+H]+。
制备84
(S)-3-{4-[8- (4-氰基甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸乙酯
向搅拌的(S)-3-(4-{8-[4-羟基-2,6-二甲基-苯基]-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸甲酯(0.09 g，0.17 mmol)在乙腈(10 mL)中的溶液中添加溴乙腈(0.26 g，0.22 mmol)和碳酸钾(0.046 g,0.34 mmol)。将反应混合物在100℃下搅拌4小时。将反应混合物用水(10 mL)稀释，并用EtOAc (2×20 mL)萃取。将合并的有机萃取物用水(10 mL)、盐水(10 mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发至干燥。将粗材料通过硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用己烷中的35%EtOAc洗脱从而获得作为褐色固体的标题化合物(0.08 g，82.4%)。LC-MS m/z 565 [M+H]+。
实施例1
(S)-3-{4-[2-异丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸
向(S)-3-{4-[2-异丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸乙酯 (0.11 g，0.2 mmol)在EtOH (15 mL)中的溶液中添加5 N NaOH (0.12 ml，0.61 mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物蒸发至干燥，将残留物用正戊烷洗涤，干燥并再溶于水(5 mL)中。将溶液用饱和的柠檬酸溶液酸化至约pH 5。将固体沉淀过滤，用水洗涤，并干燥从而获得作为白色固体的标题化合物(0.068g，65%)。LCMS m/z 512 (M+H)+。1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 12.17 (bs, 1H), 8.95(s, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.26 (t,J = 8.0 Hz, 2H), 6.98 (d,J = 8.4 Hz, 2H),6.73 (s, 2H), 5.20 (s, 2H), 3.92 (s, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.08 (tJ = 8.0 Hz,2H), 2.65 (s, 2H), 1.89 (s, 6H), 1.75 (s, 3H), 1.27 (d,J = 6.4 Hz, 6H)。
基本上通过实施例1的方法来制备下述化合物。
表15
实施例号 化学名称 结构 ES/MS (m/z)　(M+1)
2 (S)-3-(4-{8-[4-(3-羟基-3-甲基-丁氧基)-2,6-二甲基-苯基]-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸 584
3 (S)-3-{4-[8-(2-氟-5-甲氧基-苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸 502
4 (S)-3-(4-{2-异丙基-8-[4-(2-甲氧基-乙氧基)-2,6-二甲基-苯基]-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸 556
5 (S)-3-{4-[8-(2,6-二甲基-苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸 482
替代制备，实施例1
在10-15℃下，向(S)-3-{4-[2-异丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸乙酯 (419 g，0.776 mol)在EtOH (8.38L)和THF (1 L)中的溶液中添加NaOH (62.1 g，1.55 mol)在水(310 mL)中的溶液。将反应混合物加温至25℃并搅拌2小时。添加额外的NaOH (31.05 g，0.78 mol)在水(155 mL)中的溶液，并将反应搅拌另外1.5小时。将反应混合物蒸发至干燥，从而获得粘性材料，将其用水(4.5 L)稀释并用二乙基醚(3×2.5 L)洗涤。将水层冷却至0℃，并用饱和的柠檬酸溶液酸化至pH 4.2，并搅拌30分钟。将所得到的白色乳液用DCM (3×5 L)萃取。将合并的有机萃取物用水(3×4 L)和盐水(4 L)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发至干燥，从而获得粘性油。将该油溶解于DCM (5 L)中并过滤，从而除去可能存在的任何颗粒。将所得到的滤液浓缩成粘性油。添加二乙基醚 (2.5 L)，然后添加正己烷(5 L)，并且将混合物搅拌4小时。从所得到的胶状材料中，在40℃下除去溶剂12小时，从而获得作为标题化合物的淡黄色固体(341.9 g，86%)。LCMS m/z 512 (M+H)+。
Tris盐制备
(S)-3-{4-[8-(2,6-二甲基-苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸的tris盐是通过在80℃下(板温度)以1000 rpm搅拌的同时将(S)-3-{4-[8-(2,6-二甲基-苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸 (492 mg)溶解于乙腈(10 mL)中来制备。添加三羟甲基氨基甲烷（Tromethamine）(tris) (492 mg) (溶解于1 mL的水中)。将样品在80℃/1000 rpm下浆化15分钟。关闭加热和搅拌，并使得板达到室温。在室温下短时间恢复搅拌。在达到室温后，将样品放置在5℃的冰箱中30分钟。通过真空过滤分出白色的固体Tris盐形式，并将其适当地在真空和气流下在滤纸上干燥15分钟。将所得到的亮白色固体(由于片状形态)用70℃真空烘箱干燥。回收所得到的(S)-3-{4-[8-(2,6-二甲基-苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸的tris盐(458 mg, 74%收率)。
实施例6
(S)-3-(4-((8-(2,6-二甲基-4-(3-(甲基磺酰基)丙氧基)苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)甲氧基)苯基)己-4-炔酸
向搅拌的(S)-3-(4-((8-(2,6-二甲基-4-(3-(甲基磺酰基)丙氧基)苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)甲氧基)苯基)己-4-炔酸乙酯 (0.200 g，0.309 mmol)在EtOH (15 mL)中的溶液中添加5 N 氢氧化钠 (0.18 ml，0.93 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物浓缩，并将残留物用二乙基醚(2×10 mL)洗涤，溶于水(25mL)中并用1.0 N HCl 酸化(pH 4-5)。将化合物用DCM (2×25 mL)萃取，并且将有机萃取物经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干燥。将粗材料进一步通过制备型HPLC纯化。制备型HPLC条件：柱：X BRIDGE C18 (19 × 250) mm, 5μ；移动相 (A)：0.1% TFA；移动相 (B)：乙腈；流速：梯度，15 ml/分钟，从而获得作为白色固体的标题化合物(0.070 g，36.64%)。LCMS m/z 318.50 (M+H)+。
实施例7
(S)-3-(4-{8-[4-(3-氰基-3,3-二甲基-丙氧基)-2,6-二甲基-苯基]-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸
向搅拌的(S)-3-(4-{8-[4-(3-氰基-3,3-二甲基-丙氧基)-2,6-二甲基-苯基]-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸乙酯 (0.16 g，0.258mmol)在EtOH (10 mL)中的溶液中添加5 N 氢氧化锂(0.15 ml，0.774 mmol)，并且将混合物在80℃下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩，并且将残留物用乙醚/正戊烷(1:1)磨碎。将该材料溶解于水中，并用柠檬酸溶液酸化至约5的pH。将固体沉淀过滤并冷冻干燥，从而获得作为白色固体的标题化合物(0.145 g，79.7%)。LCMS m/z 593.4[M+H]+。
基本上通过实施例7的方法来制备下述化合物。
表16
实施例号 化学名称 结构 ES/MS (m/z)　(M+1)
8 (S)-3-(4-{8-[4-(氰基-二甲基-甲基)-苯基]-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸 521
实施例9
(S)-3-(4-{8-[2-(氰基-二甲基-甲基)-苯基]-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸
向(S)-3-(4-{8-[2-(氰基-二甲基-甲基)-苯基]-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸乙酯 (0.06 g，0.109 mmol)在THF/水 (6 mL/2 mL)中的溶液中添加2 M LiOH (0.109 ml，0.218 mmol)。将混合物在室温下搅拌12小时。在减压下蒸发THF。将粗材料用饱和的柠檬酸溶液酸化(pH~5)。然后，将固体沉淀过滤并经真空干燥，从而获得作为近白色固体的标题化合物(0.043 g，75.7%)。LC-MS m/z 521 [M+H]+。
基本上通过实施例9的方法来制备下述化合物。
表17
实施例号 化学名称 结构 ES/MS (m/z)　(M+1)
10 (S)-3-{4-[8-(2-氰基-苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸 479
11 (S)-3-{4-[8-(3-氰基-苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸 479
实施例12
((S)-3-{4-[8-(3-氰基甲基-苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-l甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸
向(S)-3-(4-{8-[3-(氰基-二甲基-甲基)-苯基]-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸乙酯 (0.07 g，0.13 mmol)在THF (7 mL)和水 (3 mL)中的溶液中添加LiOH·H2O (0.028 g，0.67 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌48小时。将反应混合物蒸发至干燥，然后用水(10 mL)稀释，用柠檬酸酸化(pH ~5)并用DCM (2×30mL)萃取。将合并的有机萃取物经无水硫酸钠干燥并浓缩。将粗材料通过硅胶柱色谱法(combiflash)纯化，用15-50% EtOAc/己烷洗脱从而获得标题化合物(0.025 g，29.41%)。LCMS m/z 493.3 (M+H)+。
基本上通过实施例12的方法来制备下述化合物。
表18
实施例号 化学名称 结构 ES/MS (m/z)　(M+1)
13 (S)-3-[4-(3-溴-2-苯基-吡唑并[1,5-b]哒嗪-6-基甲氧基)-苯基]-3-异噁唑-3-基-丙酸 493
14 (S)-3-(4-{8-[3-(氰基-二甲基-甲基)-苯基]-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸 521a
15 (S)-3-(4-{8-[3-(氰基-二甲基-甲基)-2-甲基-苯基]-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸 535
a
通过制备型HPLC来纯化，其使用柱：Kinetex C18 (50 mm × 2.1 mm × 1.7 µm)，使用移动相(A)水中的0.01% TFA 和(B)乙腈，具有0.3 mL/分钟的流速。
实施例16
(S)-3-{4-[8-(4-氰基甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸
向搅拌的(S)-3-{4-[8- (4-氰基甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸乙酯 (0.07 g，0.12 mmol)在二氯乙烷(10 mL)中的溶液中添加三甲基氢氧化锡 (0.224 g，1.23 mmol)，并将混合物在80℃下加热96小时。将反应混合物冷却至室温，并用1.5 N HCl溶液 (20 mL)洗涤，并用EtOAc (2×20 mL)萃取。将合并的有机萃取物用饱和盐水溶液(10 mL)洗涤，经硫酸钠干燥、过滤并浓缩。将粗材料通过硅胶柱色谱法(combiflash)纯化，用49% EtOAc/己烷洗脱从而获得作为黄色固体的标题化合物(0.023 g，34.8%)。LCMS m/z 536 (M+H)+。
基本上通过实施例16的方法来制备下述化合物。
表19
实施例号 化学名称 结构 ES/MS (m/z)　(M+1)
17 (S)-3-{4-[8-(4-氰基-苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸 479
18 (S)-3-{4-[8-(4-氰基-2,6-二甲基-苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸 507
GPR40：信息
最近由Nagasumi报道的使用转基因小鼠在胰岛素II启动子的控制下过度表达人体GPR40基因的研究结果进一步支持下述观点：GPR40在体内的GDIS和血浆葡萄糖水平的调节中起到了重要的作用，尤其是在胰岛素抵抗的啮齿动物模型中。Nagasumi K等人,Overexpression of GPR40 in pancreatic β-cells augments glucose-stimulated insulin secretion and improves glucose tolerance in normal and diabetic mice,Diabetes 58： 1067-1076, 2009。还参见Briscoe CP等人,The orphan G protein- coupled receptor GPR40 is activated by medium and long chain fatty acids,Journal Biological Chemistry 278： 11303 – 11311, 2003。这些发现进一步支持了下述观点：可以特别期望开发新的GPR40调节剂化合物以用于T2D的治疗。
试验
钙通量初步试验
基本上如下所述地测试在本文中示例的化合物，并且展现出对于钙通量初步试验而言小于500 nM的EC50值，并展现出>50%的功效。
这些试验用于通过测量细胞内钙水平的提高来筛选化合物，当配体结合并激活GPR40时导致所述细胞内钙水平的提高，由此证明了GPR40激动剂的效能和功效。将过度表达人体GPR40 cDNA的HEK293细胞用于所述研究，所述细胞在37℃和5% CO2下保持在补充有10% FBS和800 μg/ml的遗传霉素的以3:1的比例的达尔伯克氏改良伊格尔氏培养基与F12培养基中。在试验缓冲液(1×HBSS(Hank's平衡盐溶液)和20 mM HEPES(4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙磺酸))中，在存在或不存在0.1%不含脂肪酸的BSA的情况下使用Calcium 4 Dye试验试剂盒(Molecular Devices)进行激动剂试验。使用荧光成像读板仪(FLIPR)作为细胞内钙的提高来测量受体激活。将超出基线的荧光最大改变用于测定激动剂响应。使用ExcelFit软件(第4版；IDBS)通过绘制浓度vs相对荧光单位(RFU)来计算化合物的EC50值。基于与天然配体亚油酸相比化合物所展现出的最大响应来计算百分比功效。当在该试验中检验时，实施例1的受试化合物具有247 nM(±23.9，n=12)的EC50和78.7%的功效(±12.5，n=12)。这些结果进一步证明了该化合物作为GPR40激动剂的所期望的效能和功效。(平均值±SEM；SEM = 该平均值的标准误差)。
选择性试验
过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)α、δ和γ功能试验
由于已知GPR40通过结合至PPARγ的配体而激活，所以在Gal4 PPARα、Gal4 PPARδ和PPARγ报告子(reporter)试验中检验示例化合物以确定示例化合物的选择性。使用Fugene用多种受体和报告子质粒转染源自非洲绿猴的肾组织的CV1细胞。对于Gal4 PPARα和Gal4PPARδ试验，将含有酵母转录蛋白Gal4响应元件的五个串联副本(tandem copies)的报告子质粒(在由腺病毒的主要晚期启动子驱动的萤火虫荧光素酶基因的上游克隆)与SimianVirus 40(SV40)驱动的构成性地表达含有Gal4 DNA结合域(DBD)和PPARα或PPARδ配体结合域的杂交蛋白的质粒一起转染。对于PPARγ试验，将均由巨细胞病毒(CMV)启动子驱动的编码PPARγ和RXRα的质粒与含有由TK启动子驱动的荧光素酶报告子cDNA和受体响应元件(2×PPRE)的质粒一起转染。细胞在T225 cm2细胞培养烧瓶中在带有5%木炭剥离的FBS和用于个别试验的特异性质粒的DMEM培养基中转染。在过夜培养后，将转染的细胞胰蛋白酶化，在含有5%木炭剥离的FBS的DMEM培养基中点板于不透明的96孔盘中(15,000细胞/孔)，培养4小时并暴露于以半对数稀释的0.17 ηM至10 μM的受试化合物或参比化合物。与化合物培养24小时后，使细胞裂解并通过发光测定荧光素酶活性作为受体激活的量度。将数据拟合成四参数拟合的logistics模型以测定EC50值。相对于用10 μM适当的PPAR激动剂参比化合物(2-甲基-2-(4-{2-甲基-3-[2-(苯基羰基)-4-(三氟甲氧基)苯氧基]丙氧基}苯氧基)丙酸)获得的最大刺激来测定最大百分比刺激。<20%的功效被认为是阴性的。在PPAR功能试验中，对于实施例1的化合物的EC50如下所述：PPARα> 10 µM；PPARδ = 4 µM；PPARγ = 2.26 µM。这些数据表明，实施例1的示例化合物具有弱的PPAR活性。因此，这些试验支持了下述观点：在所述的试验中，示例化合物具有如期望的弱的或者阴性的PPAR功效。
对GPR-40的体外结合亲和力
运行使用自制放射性标记(5 nM [3H]-TAK-875)和由过度表达人体GPR40(hGPR40)构造的HEK293细胞制备的膜的快速洗滤的放射性配体竞争结合试验，从而测定受试化合物的平衡解离常数(Ki)。将竞争曲线绘制为特异性抑制百分比vs化合物浓度，并使用具有可变斜率的四参数非线性回归拟合进行分析。使用Cheng-Prusoff方程Ki = IC50/(1+(D/Kd))计算Ki值，其中IC50是导致50%结合抑制的化合物浓度，D是试验中使用的放射性配体的浓度，并且Kd是所述受体和所述放射性配体的平衡解离常数，其由饱和结合分析实验测定([3H]TAK-875的Kd = 6.2)。对于实施例1，Ki=15.8 nM±3.86，n=5/6。参见Cheng, Y.和Prusoff,W.H. (1973) “Relationship between the inhibition constant (Ki) and theconcentration of inhibitor which causes 50 per cent inhibition (IC50) of anenzymatic reaction”, Biochem Pharmacol 22(23):3099-108。(平均值±SEM；SEM = 该平均值的标准误差)。这些数据证明，实施例1的化合物是人体GPR40的高亲和力配体。
竞争结合动力学-测定受体停留时间
使用由Motulsky, H. J.和L. C. Mahan (1984),“The kinetics of competitiveradioligand binding predicted by the law of mass action” Mol Pharm 25(1): 1-9描述的方法量化未标记化合物的缔合与解离速率。在不存在或存在1x Ki、3x Ki或10x Ki的未标记化合物的情况下，在多个时间点用6-8 nM [3H] TAK875培养人体GPR40膜。使用快速洗滤进行将结合和游离的放射性配体分离至纤维玻璃过滤器上，并在液体闪烁计数器中计数。通过将数据在GraphPad Prism 6(用于Windows的6.03版, GraphPad Software，LaJolla California USA, www.graphpad.com)中拟合成竞争性结合模型的动力学来计算速率。实施例1的化合物显示出GPR40停留时间(τ)为169分钟(±52.1，n=4)，其表明该GPR40配体具有在受体上足够的停留时间，从而产生体内响应(平均值±SEM；SEM = 平均值的标准误差)。
采用1% FBS的人和小鼠β-抑制蛋白激动剂试验以测定β-抑制蛋白的募集：
人胚肾(hEK293)-hFFAR1细胞购自DiscoveRx。表达mFFAR1的人骨肉瘤(U2OS)细胞由DiscoveRX开发。这些细胞共同表达Prolink (PK)标记的GPR40和Enzyme Acceptor (EA)标记的β-抑制蛋白融合蛋白。如果GPR40的激活刺激β-抑制蛋白的募集，这将迫使β-半乳糖苷酶(B-gal)酶片段互补，形成B-gal酶，所述B-gal酶使用DiscoveRx PathHunter检测试剂盒生成化学发光信号。在含有1% FBS(胎牛血清)的培养基中，将细胞以5,000细胞/孔在384孔板中培养过夜。将在DMSO中连续稀释的化合物(2x 稀释以产生20个浓度)逐步降低地在含有1% FBS(胎牛血清)的培养基中稀释并添加至细胞中，最终的最高浓度由100 µM起始。在添加化合物后，在5% CO2培养箱中在37℃下培养细胞90分钟，并添加DiscoveRX试剂盒检测试剂。在室温下培养1小时后，用Envision读取器确定化学发光信号的测量。将数据拟合成4参数拟合的logistics以测定EC50值，相对于在1 µM下内标GPR40激动剂标准TAK875的最大响应来测量%活性。实施例1具有30.6 nM(±12.3，n=2)的hGPR40 b-抑制蛋白EC50，其中%刺激最大值(FA)为170(±5.95，n=2)，和4.87 nM(±1.48，n=3)的mGPR40 b-抑制蛋白，其中%刺激最大值(FA)为149(±11.8，n=3)。(平均值±SEM；SEM = 该平均值的标准误差)。这些数据表明实施例1是可以通过β-抑制蛋白发出信号的GPR40激动剂。
可以容易地根据本领域已知的公认实践(例如在Remington's “PharmaceuticalSciences”, Gennaro, Ed., Mack Publishing Co. Easton Pa. 1990中找到的)将本发明的示例化合物配制为药物组合物，例如片剂、固体或者凝胶填充的胶囊剂、粉剂、混悬剂或者溶液。该组合物还可以包含一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂和稀释剂。
优选的药物组合物包括被配制为片剂或胶囊剂用于口服给药的那些。片剂或胶囊剂可以治疗糖尿病（特别是II型糖尿病）的有效量包含本发明的化合物。本领域技术人员将理解的是，可以将式I的化合物与一种或多种额外的治疗剂进行给药。可以优选将药物组合物配制成包含式I的化合物和一种或多种额外的治疗剂。
将药物组合物以治疗糖尿病（更特别是II型糖尿病）的有效量给药至患者。可以通过医疗服务提供者确定治疗患者的有效的适当的量或者剂量。

Claims (19)

1.化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物为：
其中，
R1选自H、CH3、CN、CH2CN、C(CH3)2CN和F；
R2选自H、O(C1-C3烷基)R5、CH2CN和CN；
R3选自H、OCH3、CN、C(CH3)2CN和CH2CN；
R4选自H和CH3；并且
R5选自H、CN、C(CH3)2CN、OCH3、S(O)2CH3和C(CH3)2OH；条件是，选自R1、R2、R3和R4中的至少一个是H。
2.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是H。
3.如权利要求1至2中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1选自H和CH3。
4.如权利要求1至3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2选自H和O(C1-C3烷基)R5。
5.如权利要求1至4中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2选自H和OCH3。
6.如权利要求1至5中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4是CH3。
7.如权利要求1至6中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是CH3。
8.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物为(S)-3-{4-[2-异丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸。
9.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物为(S)-3-{4-[8-(2,6-二甲基-苯基)-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸。
10.药物组合物，其包含根据权利要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或者赋形剂。
11.在需要治疗糖尿病的哺乳动物中治疗糖尿病的方法，其包括给药有效量的如权利要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
12.在需要治疗II型糖尿病的哺乳动物中治疗II型糖尿病的方法，其包括给药有效量的如权利要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
13.如权利要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗。
14.如权利要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗II型糖尿病。
15.根据式II的化合物或其药学上可接受的盐，
II
其中，R1选自H、CH3、CN、CH2CN、C(CH3)2CN和F；
R2选自H、O(C1-C3烷基)R5、CH2CN和CN；
R3选自H、OCH3、CN、C(CH3)2CN和CH2CN；
R4选自H和CH3；
R5选自H、CN、C(CH3)2CN、OCH3、S(O)2CH3和C(CH3)2OH；条件是，选自R1、R2、R3和R4中的至少一个是H；并且
R选自C1-4 烷基、C1-4 卤代烷基、C3-6 环烷基、C1-4 烷基-C3-6 环烷基、苯基和C1-5 烷基苯基。
16.权利要求15的化合物，其中R1和R4各自是CH3。
17.权利要求15的化合物，其中R1和R4各自是H。
18.如权利要求15至17中任一项所述的化合物，其中R2选自H和OCH3。
19.用于制备下式I的化合物或其药学上可接受的盐的方法，
I
所述方法包括使式II的化合物去酯化；
II
其中，
R1选自H、CH3、CN、CH2CN、C(CH3)2CN和F；
R2选自H、O(C1-C3烷基)R5、CH2CN和CN；
R3选自H、OCH3、CN、C(CH3)2CN和CH2CN；
R4选自H和CH3；
R5选自H、CN、C(CH3)2CN、OCH3、S(O)2CH3和C(CH3)2OH；条件是，选自R1、R2、R3和R4中的至少一个是H；并且
R选自C1-4 烷基、C1-4 卤代烷基、C3-6 环烷基、C1-4 烷基-C3-6 环烷基、苯基和C1-5 烷基苯基，从而提供式I的化合物或其药学上可接受的盐。
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Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR112016013874A2 (pt) 2014-01-10 2017-08-08 Lilly Co Eli Fenil-triazolo-piridina, seus usos, seus processo de produção e seus intermediários, e composição farmacêutica
WO2019057946A1 (en) 2017-09-25 2019-03-28 F. Hoffmann-La Roche Ag MULTI-CYCLIC AROMATIC COMPOUNDS AS D-FACTOR INHIBITORS
TWI796596B (zh) 2018-02-13 2023-03-21 美商基利科學股份有限公司 Pd‐1/pd‐l1抑制劑
CA3093130C (en) 2018-04-19 2023-10-17 Gilead Sciences, Inc. Pd-1/pd-l1 inhibitors
KR20230159715A (ko) 2018-07-13 2023-11-21 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 Pd-1/pd-l1 억제제
KR102635333B1 (ko) 2018-10-24 2024-02-15 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 Pd-1/pd-l1 억제제
WO2021071837A1 (en) 2019-10-07 2021-04-15 Kallyope, Inc. Gpr119 agonists
CA3178994A1 (en) 2020-05-19 2021-11-25 Iyassu Sebhat Ampk activators
CN116390925A (zh) 2020-06-26 2023-07-04 卡尔优普公司 Ampk活化剂

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007033002A1 (en) * 2005-09-14 2007-03-22 Amgen Inc. Conformationally constrained 3- (4-hydroxy-phenyl) - substituted-propanoic acids useful for treating metabolic disorders
CN1946666A (zh) * 2004-02-27 2007-04-11 埃姆艮股份有限公司 用于治疗代谢性疾病的化合物、药物组合物和方法
WO2009153496A2 (fr) * 2008-05-26 2009-12-23 Genfit Composés agonistes ppar, préparation et utilisations
EP1893582B1 (en) * 2005-05-20 2011-12-14 Amgen, Inc Compounds, their pharmaceutical compositions and their use in treating metabolic disorders
WO2013119040A1 (en) * 2012-02-07 2013-08-15 Kainos Medicine, Inc. Compounds as inhibitors of diacylglycerol o-acyltransferase type 1 enzyme

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2003277576A1 (en) 2002-11-08 2004-06-07 Takeda Pharmaceutical Company Limited Receptor function controlling agent
JP4805552B2 (ja) * 2003-05-30 2011-11-02 武田薬品工業株式会社 縮合環化合物
TW200838526A (en) * 2006-12-01 2008-10-01 Astellas Pharma Inc Carboxylic acid derivatives
JP5512665B2 (ja) * 2008-06-20 2014-06-04 ジェネンテック， インコーポレイテッド トリアゾロピリジンｊａｋ阻害剤化合物と方法
US8530413B2 (en) 2010-06-21 2013-09-10 Sanofi Heterocyclically substituted methoxyphenyl derivatives with an oxo group, processes for preparation thereof and use thereof as medicaments
TWI692469B (zh) * 2012-11-09 2020-05-01 南韓商Ｌｇ化學股份有限公司 Ｇｐｒ４０受體促效劑，製造該促效劑的方法以及含有該促效劑作爲活性劑的醫藥組成物
TW201609722A (zh) 2013-12-13 2016-03-16 美國禮來大藥廠 新穎三唑并吡啶化合物
BR112016013874A2 (pt) 2014-01-10 2017-08-08 Lilly Co Eli Fenil-triazolo-piridina, seus usos, seus processo de produção e seus intermediários, e composição farmacêutica

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1946666A (zh) * 2004-02-27 2007-04-11 埃姆艮股份有限公司 用于治疗代谢性疾病的化合物、药物组合物和方法
EP1893582B1 (en) * 2005-05-20 2011-12-14 Amgen, Inc Compounds, their pharmaceutical compositions and their use in treating metabolic disorders
WO2007033002A1 (en) * 2005-09-14 2007-03-22 Amgen Inc. Conformationally constrained 3- (4-hydroxy-phenyl) - substituted-propanoic acids useful for treating metabolic disorders
WO2009153496A2 (fr) * 2008-05-26 2009-12-23 Genfit Composés agonistes ppar, préparation et utilisations
WO2013119040A1 (en) * 2012-02-07 2013-08-15 Kainos Medicine, Inc. Compounds as inhibitors of diacylglycerol o-acyltransferase type 1 enzyme

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