KR20140146133A - 모발 성장을 조절하는 방법 및 조성물 - Google Patents

모발 성장을 조절하는 방법 및 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 모발 성장을 조절하는 조성물 및 방법에 관련된 것이다. 구체적으로 본 발명은 프로스타글란딘 D2(PGD2) 수용체, DP-2(GPR44) 중 하나의 활성을 조절하여 모발 성장을 조절하는 것과 관련이 있다. 모발 성장을 조절하는 조성물 및 방법은 DP-2 효능제 투여에 의해 모발 성장을 저해하는 것 또는 DP-2 길항제 투여에 의해 모발 성장을 촉진하는 것을 포함한다.

Description

모발 성장을 조절하는 방법 및 조성물 {COMPOSITIONS AND METHODS FOR REGULATING HAIR GROWTH}
[관련 출원들의 상호 참조]
본 출원은 2012년 3월 21일에 출원된 미국 특허 가출원 제61/613,829호에 우선권의 이익을 주장한다. 상기 출원 모두는 참조에 의해 전체가 본원에 혼입된다.
[기술분야]
본 발명은 모발 성장을 조절하는 방법과 조성물에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 프로스타글란딘 D2(PGD2) 수용체, DP-2(GPR44)의 활성 조절에 의해서 모발 성장을 조절하는 것에 관한 것이다.
백인 남성의 80%는 70세 이전에 어느 정도의 남성형 탈모(AGA, androgenetic alopecia) 경험을 하게된다. 테스토스테론은 AGA의 진행을 위해서 필요하며, 안드로겐 수용체의 유전적으로 취약한 자리(locus)는 AGA가 있는 소수의 남성에게 존재한다; 그러나, 이 질환에 기여하는 추가의 제제들은 아직 알려지지 않은 채로 남아있다. AGA에 관한 연구들은 양성의 전립성 비대증이나 전립선암과 같은 다른 안드로겐 매개 질병들과 연관이 있을 가능성을 갖고 있다. AGA를 위한 현재 적당한 치료는 피나스테리드(finasteride), 미녹시딜(minoxidil), 및 모발 이식이 있다. 피나스테리드는 테스토스테론을 더 강력한 안드로겐인 디하이드로테스토스테론으로 전환하는 5-a 환원 효소 2 (SRD5A2, 5-a reductase 2)를 저해한다. AGA 치료에서 미녹시딜의 능동표적은 아직 확실하게 밝혀지지 않았다.
AGA에서 두꺼운 모간을 형성하는 큰 ”끝” 모낭은 시간이 지날수록 축소되어 미세하고 무력해진 모발을 생성하는 작은 모낭으로 전환된다. 모낭축소는 모낭성장기(anagen) 기간의 감소와 동반하는데, 상기 모낭 성장기는 일반적으로 1m 보다 긴 모발을 생성하기 위해서는 수년이 지나야하지만, AGA에서 이 기간이 몇 일 또는 몇주로 감소된다. 이 결과로 대머리의 두피에서는 미세한 모발을 함유하는 모낭휴지기(telogen)의 비율이 증가하게 된다.
이러한 모낭의 본질적인 변화 외에도, 잠입한 림프구와 비만세포들이 축소된 모낭 근처, 특히 줄기세포가 풍부한 돌출영역(bulge area) 근처에서 확인되었다. 각 모낭에 부착되어있는 피지선들이 대머리의 두피에서 비대했다. 대머리의 두피에서 모낭 줄기세포의 숫자는 그대로였지만, 더욱 활발하게 증식하는 전구세포의 숫자는 현저하게 감소하였다. 이것은 대머리의 두피가 활성화제가 부족할 뿐만 아니라 모낭 성장의 저해제를 가지고 있는 것을 나타낸다.
따라서, 모낭 성장을 조절하는 물질을 확인하고 특징짓는 것이 필요하다.
일 양태에서, 대상체의 모발 성장을 조절하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 DP-2 효능제(agonist) 또는 길항제(antagonist)의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
다른 양태에서, 대상체의 모발 성장을 촉진하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 DP-2 길항제의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
다른 양태에서, 대상체의 모발 성장을 저해하는 방법이 제공된다.상기 방법은 DP-2 효능제의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
다른 양태에서, 대상체의 모발 성장을 조절하기 위한 유효량의 DP-2 효능제 또는 길항제를 포함하는, 대상체에서 모발 성장을 조절하기 위한 조성물(예; 국소적 제형)이 제공된다.
다른 양태에서, 대상체의 모발 성장을 촉진하기 위한 유효량의 DP-2 길항제를 포함하는, 대상체에서 모발 성장을 촉진하기 위한 조성물(예; 국소적 제형(topical formulation))이 제공된다.
다른 양태에서, 대상체의 모발 성장을 저해하기 위한 유효량의 DP-2 효능제를 포함하는, 대상체에서 모발 성장을 저해하기 위한 조성물(예; 국소적 제형)이 제공된다.
다른 양태에서, 남성형 탈모증 치료용 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 존재 및 프로스타글란딘 D2 존재하에 DP-2 활성을 측정하고, 상기와 동일한 조건하에서, 남성형 탈모증 치료용 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 부재 및 프로스타글란딘 D2 존재하에 DP-2 활성을 측정하는 것을 포함하는 남성형 탈모증 치료용 잠재적 제제인 화합물을 스크리닝하는 방법이 제공되며, 여기서, 상기 화합물의 부재시보다 존재하에서 DP-2 활성이 더 낮은 것은 상기 화합물이 남성형 탈모증 치료에 있어 잠재적인 제제임을 나타낸다. 일부 양태에서, 상기 방법은 남성형 탈모증 치료용 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 존재 및 프로스타글란딘 D2의 존재 하에 DP-1 활성을 측정하고, 상기와 동일한 조건에서, 남성형 탈모증 치료용 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 부재 및 프로스타글란딘 D2의 존재 하에 DP-1 활성을 측정하는 것을 더 포함하며, 여기서, DP-2의 활성이 더 낮고, DP-1 활성은 상기 화합물의 존재 및 부재하에서 거의 동일한 것이 상기 화합물이 남성형 탈모증 치료에 잠재적 제제임을 나타낸다. 일부 양태에서, 복수개의 화합물들이 스크리닝된다.
다른 양태에서, 모발 성장을 촉진하는 잠재적 제제인 화합물을 스크리닝하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 모발 성장을 촉진하는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 존재 및 프로스타글란딘 D2의 존재 하에, DP-2의 활성을 측정하고, 상기와 동일한 조건에서, 모발 성장을 촉진하는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 부재 및 프로스타글란딘 D2의 존재 하에, DP-2의 활성을 측정하는 것을 포함하고,여기서, 상기 화합물의 부재 시 DP-2의 활성보다 상기 화합물의 존재시 DP-2의 활성이 더 낮은 것은 상기 화합물이 모발 성장을 촉진하는 잠재적 제제인 것을 나타낸다. 일부 양태에서, 상기 방법은 모발 성장을 촉진시키는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 존재 및 프로스타글란딘 D2의 존재 하에 DP-1 활성을 측정하고, 상기와 동일한 조건에서, 모발 성장을 촉진시키는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 부재 및 프로스타글란딘 D2의 존재 하에 DP-1 활성을 측정하는 것을 더 포함하며, 여기서, DP-2의 활성이 더 낮고, DP-1 활성은 상기 화합물의 존재 및 부재하에서 거의 동일한 것이 상기 화합물이 모발 성장을 촉진시키는 잠재적 제제임을 나타낸다. 일부 양태에서, 복수개의 화합물들이 스크리닝된다.
다른 양태에서, 모발 성장을 저해하는 잠재적 제제인 화합물을 스크리닝하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 모발 성장을 저해하는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 존재 하에 DP-2의 활성을 측정하고, 상기와 동일한 조건에서, 프로스타글란딘 D2의 존재 하에 DP-2의 활성을 측정하는 것을 포함하고, 여기서, 상기 모발 성장을 저해하는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 존재 시 DP-2의 활성이 프로스타글란틴 D2의 존재 시 DP-2 활성과 같거나 이보다 큰 것이 상기 화합물이 모발 성장을 저해하는 잠재적 제제인 것을 나타낸다. 일부 양태에서, 상기 방법은 모발 성장을 저해시키는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 존재하에 DP-1 활성을 측정하고, 상기와 동일한 조건에서, 프로스타글란딘 D2의 존재 하에 DP-1 활성을 측정하는 것을 더 포함하며, 여기서, 상기 모발 성장을 저해하는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 DP-2의 활성이 프로스타글란틴 D2의 존재 하에 DP-2 활성과 같거나 이보다 더 크고, 상기 모발 성장을 저해하는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 DP-1 활성이 프로스타글란틴 D2의 존재 하에 DP-1 활성과 같거나 이보다 더 작은 것이 모발 성장을 저해시키는 잠재적 제제임을 나타낸다. 일부 양태에서, 복수개의 화합물들이 스크리닝된다.
본 발명의 다른 특징 및 장점은 다음의 상세한 설명의 실시예들 및 도면을 참조하여 더욱 명확히 될 것이다. 그러나, 당업자는 본 발명의 사상과 범위 내에서 상세한 설명에 다양한 변경 및 수정을 할 수 있으므로 본 발명의 상세한 설명 및 구체적인 실시예들은 단지 바람직한 양태들의 예시로 제공되는 것임을 이해해야 한다.
본 특허 출원 파일은 최소한 한개의 컬러 도면을 포함한다. 컬러 도면이 있는 특허 출원 출판의 사본은 사무소의 요청과 필요한 사용료의 지불 하에 제공되어야한다.
도 1은 다섯명의 AGA를 지닌 남성의 모발이 있는 두피와 대머리 두피를 비교한 유전자 발현 프로파일의 요약이다. (A) 모발이 있는 표본 중에서, 모발이 없는 표본 중에서, 또는 각각 개인 내에서 모발이 있거나 모발이 없는 표본들 간의 차이 정도를 비교한 상관계수. 데이터는 평균± SEM(n = 5)을 나타낸다. 모발이 있거나 모발이 없는 표본을 비교한 ***P < 0.001. (B) A부터 E까지 분류된 다섯명의 남성 중에서 두피가 있거나 두피가 없는 250개의 중요한 유전자를 군집화한 알고리즘. (C) 250개의 가장 중요한 유전자들은 모발이 있는 두피에서(H) 더 높게 나타나는 (169; 왼쪽)와 모발이 없는 두피에서(B) 더 높게 나타나는(81; 오른쪽)것으로, 쌍을 이루는 그룹화된 표본은 x축을 따라서 나타나고, y축은 유전자 발현 정도를 나타내는 불연속 그래프. 각 쌍에서, 첫번째 표본(줄의 시작)은 모발이 있는 두피이고, 두번째 표본(줄의 끝)은 모발이 없는 두피이다. (D) 모발이 있는 두피(왼쪽)과 모발이 없는 두피(오른쪽)을 비교한 유전자 온톨로지 카테고리. 고유 유전자 전사의 총 숫자 중에서 각 카테고리에서 전사한 숫자의 백분율이 표시되어 있다. 함수의 각 카테고리의 중요도를 높이기 위해서 P 값은 피셔 이그잭트(Fisher exact) EASE(Expression Analysis Systematic Explorer) 스코어로 변환되었다.(E) 모발이 있는 두피와 비교된 모발이 없는 두피에서 PTGDS 발현의 배수 변화. 데이터는 평균± SEM(n = 5)을 나타낸다. PTGDS 유전자 내에서 뚜렷한 구역을 포함하는 각 프로브 세트에서 모발이 있는 두피와 모발이 없는 두피 사이에서 ***P < 0.0001로 나타났다. (F) PGD2 경로를 도식화하였다.
도 2는 AGA가 있는 남성의 모발이 없는 두피에서 증가된 PGD2 경로 활성 (A) qPCR에 의해 시험된 모발이 없는 두피와 모발이 있는 두피와 비교한 리포칼린형 PTGDS mRNA의 발현. 데이터는 평균 ± SEM(n = 4)을 나타낸다. (B 및 C) 쌍인 대머리에서 PTGDS 단백질의 양. (B) 같은 로딩(B)와 모발이 있는 두피 에서 정규화된 그것의 양(C)의 검증에 이용되는 폰큐(Ponceau) 염색으로 웨스턴 블롯된 결과, 모발이 있는 (H) 두피 (n = 4), 데이터는 평균 ± SEM(n = 4)을 나타낸다.(D) ELISA로 시험된 대머리 두피에서 PGD2 산물. 데이터는 평균 ± SEM(n = 3)을 나타낸다.(E 및 F) 모발이 있는 두피(E)와 비교했을 때 모발이 없는 두피에서 PGD2(n = 17), 15-dPGJ2)(n = 7), 및 PGE2(n = 17)의 발현의 배수 변화. 전체 프로스타글란딘 함량은(F)에서 정량화된다. 데이터는 평균 ± SEM을 나타낸다. *P < 0.05; **P < 0.01. (F)에서, P값은 각 프로스타글란딘에서 모발이 있는 표본과 모발이 없는 표본을 비교한 것이다.
도 3은 Ptgds 발현이 증가한 후에, 퇴화기 동안 쥐의 모낭에서 PGD2 수치가 높아진다.(A 및 B) PN18 내지 PN53에서, Ptgds (n = 4), Ptgfr (n = 4), 및 Fgf5 (n = 4) mRNA (A 및 B) 및 PGD2 지질 (n = 3). (B) 모낭 주기에서 다른 단계마다 측정했다. 알파벳 대문자는 모발 주기의 단계를 포함한다. A, 성장기; C, 퇴화기; T, 휴지기. 데이터는 평균 ± SEM을 나타낸다. (A)에서, 후기 성장기와 첫번째 휴지기를 비교할 때, Ptgds 와 Fgf5에서, 및 첫번째 휴지기와 두번째 휴지기를 비교할 때, Ptgfr에서 **P < 0.01가 나타난다. (B)에서, 퇴화기와 초기 성장기를 비교할 때, PGD2에서 *P < 0.05가 나타난다. (C) 탈모를 유도하는 모낭 주기 동안 쥐의 피부에서 PGD2(n = 3)의 생산 및 Ptgds(n = 3)의 발현. 데이터는 평균 ± SEM을 나타낸다. 17일과 0일을 비교할 때, Ptgds에서 *P < 0.05가 나타난다; 19.5일과 37일을 비교할 때, PGD2에서 **P < 0.01가 나타난다. (D) 탈모 후 17일 째 Ptgds (갈색)으로 염색된 줄기 세포가 풍부한 돌출 부위 밑에 쥐의 외모근소 케라티노사이트. 점선은 가득찬 모낭을 묘사한다. 스케일 바는100 mm이다.(E 내지 G) 탈모 후, 0일 (성장기) (E), 17 일(늦은 성장기)(F), 및 19일(퇴화기) (G) 에 모낭의 영구적 및 비영구 격실에서 Krt15(빨간색) 및 Ptgds(초록색). 스케일 바는 100 mm이다.
도 4는 모발이 있는 두피에서 인간의 모낭을 고른 비영구적인 부분에서 PTGDS의 발현되고, 모발이 없는 두피에서 더 다양하다.(A 내지 C) 일반 인간 모낭 (A 및 B) 및 대머리 두피모낭(C)에서 파란색 핵 대비염색을 한 PTGDS 면역 염색 (갈색). (A) 협부보다 열등한 PTGDS를 염색한 모발이 있는 두피에서 단일 모낭. (B) 모발이 있는 두피의 가장 성장기에 있는 모낭은 조금 염색된 PTGDS를 가진다. (C) 세보사이트와 모낭 케라티노사이트에서 PTGDS로 염색된 축소된 모낭. 스케일 바는100 mm이다. (D 내지 F) PTGDS(초록색), 핵(파란색), 및 KRT15(빨간색) (D) 또는 트립타제(빨간색) 로 염색한 면역 형광 검사. (E 및 F) 대머리 두피 부근에 있는 피지선과 모낭. 비만세포 마커인 트립타제 (E)를 발현하는 몇몇 PTGDS 양성 세포와 퇴화기 모낭. 모낭 주위 세포는 과발현된 PTGDS-와 트립타제 양성 세포의 뚜렷한 군집을 보인다(F). 스케일 바는 100 mm이다.
도 5는 탈모증, 피지선 과대증, 및 피부에서 증가된 PGD2 수치와 함께 K14-Ptgs2 형질전환된 쥐 피부의 표현형 모사 AGA. (A 및 B) 야생형(WT) 대조군(A)와 비교하면, K14-Ptgs2 동물은 탈모증(B)이 나타난다. (C 및 D) WT (C) 과 K14-Ptgs2 동물(D)에서 헤마톡실린과 에오신-염색된 피부는 피지선(노란색 화살표)과 모낭(검은색 화살표) 형태학에서 보인다. 스케일 바는 100 mm이다. (E) 다른 프로스타글란딘의 양이 WT 쥐(n = 5) 와 K14-Ptgs2 형질 전환된 쥐(n= 3)의 피부 조직에서 보여진다. 데이터는 평균 ± SEM을 나타낸다. WT와 K14-Ptgs2를 비교할 때, **P < 0.01이 나타난다.
도 6은 PGD2는 GPR44을 통해서 쥐와 인간의 모발성장을 저해한다. (A) 탈모 이후 16일 동안 모발 성장한다. 탈모 후에 8일째부터 쥐의 피부에 국소적으로 15-dPGJ2(10 mg) 또는 비히클이 투여된다. 데이터는 평균 ± SEM (처리되는 그룹 마다 n = 3)을 나타낸다. 대조군에 비교한 *P < 0.05. (B) 국소용 PGD2(1 mg; n = 3), 15-dPGJ2(1 mg; n = 3), 또는 비히클(n = 3) 처리 후에 10일 동안 모발 길이 데이터는 평균 ± SEM을 나타낸다. *P < 0.05; **P < 0.01. (C) PGD2에 대응하는 Ptgdr(n = 8), Ptgds(n = 6), 및 Gpr44(n = 11) 녹아웃 (KO) 쥐에서 모발 성장. 데이터는 평균 ± SEM을 나타내고, 쥐마다 세개의 독립적인 실험이 이루어진다. 별표(*P < 0.05)는 비히클과 비교하여 중요한 차이점을 나타낸다. (D) PGD2(n = 3), 15-dPGJ2(n = 3), 또는 비히클(n = 3)과 배양할 때 7일 동안 외식된(explanted) 인간 모낭의 체외 성장. 데이터는 평균 ± SEM을 나타낸다. 비히클과 비교한 ***P < 0.001.
도 7은 PGD2의 유사체는 GPR44의 상대 효능작용에 따라서 인간 모발 성장을 저해한다. 나열된 PGD2 유사체, 프로스타글란딘 I2, 또는 비히클 대조군(처리군 마다 n = 3)과 배양할 때 7일 동안 외식된 인간 모낭의 체외 성장. 스튜던트의 t 테스트(Student’s t test)에 다른게 표시되어있지 않다면, 비히클과 비교한 *P < 0.05..
본 발명은 모발 성장을 조절하는 방법과 조성물에 관한 것이다. 특히, 프로스타글란딘 D2(PGD2) 수용체, DP-2(GPR44)의 활성 조절에 의해서 모발 성장을 조절한다.
본원에서 놀랍고 뜻밖에도 메시지에서 프로스타글란딘 D2 합성효소(PTGDS)의 높아진 수치와 단백질 수치를 AGA가 있는 남성들의 모발이 없는 두피에서 모발이 있는 두피를 비교했을 때 발견했다. 인간의 모낭에서 프로스타글란딘 물질 대사를 고려했을 때, 본원은 쥐(Ptgds) 및 인간(PTGDS)의 합성 효소를 주목한다. PTGDS의 효소적 산물인 프로스타글란딘 D2(PGD2)는 두피가 없는 인간의 두피 조직에서 증가하는 것 또한 발견되었다. 본원은 정상적인 모낭 주기에서 모낭 퇴행시, 쥐에서 Ptgds mRNA 및 PGD2 수치의 상승 사이에 밀접한 시간 연관성을 보여준다. 본원은 PGD2와 그것의 비효소 대사산물인 15-데옥시-D12,14-프로스타글란딘 J2 (15-dPGJ2)가 쥐와 인간의 모낭에서 모발의 성장을 저해한다는 기능적인 데이터를 더 제공한다. 쥐와 인간의 경우, 모발 성장의 PGD2 매개된 저해는 G 단백질(heterotrimeric guanine nucleotide-inding protein) 연결 수용체 44(GPR44 or DP-2)은 필요하지만, 프로스타글란딘 D2 수용체1(Ptgdr 또는 DP-1)은 필요하지 않다. 게다가, 본원은 인간 AGA를 표현모사한 피부에서 상승된 PGD2 수치를 지닌 쥐모델((K14-Ptgs2)을 제시한다. 무엇보다도, 상기 결과는 AGA의 발병 과정에서 탈모 치료를 위한 PGD2 와 DP-2의 역할에 대해서 입증하고 있다.
본원은 대상체의 모발 성장을 조절하기 위한, 유효량의 DP-2 효능제 또는 길항제를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 대상체의 모발 성장을 조절하는 방법이 제공한다.
또한, 본원은 대상체의 모발 성장을 촉진하기 위한 유효량의 DP-2 길항제를 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 대상체의 모발 성장을 촉진하는 방법이 제공한다. 유효량의 DP-2 길항제를 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 대상체의 남성형 탈모증, 또는 대머리, 또는 탈모를 치료하기 위한 방법이 제공한다.
또한, 본원은 대상체의 모발 성장을 저해하거나 예방하기 위한 유효량의 DP-2 길항제를 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 대상체의 탈모를 저해하거나 예방하기 위한 방법 제공한다. 또한, 상기 대상체의 DP-2를 저해하는 것을 포함하는 대상체의 탈모를 예방하는 방법도 제공한다.
남성형 탈모증 치료하기 위한 잠재적 제제인 화합물을 스크리닝 하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 남성형 탈모증 치료하기 위한 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 존재 하 프로스타글란딘 D2 이 있을 때, DP-2 활성을 측정하는 단계를 포함한다. 같은 조건에서, 남성형 탈모증 치료하기 위한 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 부재 및 프로스타글란딘 D2의 존재하에, DP-2 활성을 측정했을 때, 상기 화합물의 부재시 보다 상기 화합물의 존재시, DP-2가 낮은 활성을 보이는 것은 상기 화합물이 남성형 탈모증 치료하기 위한 잠재적 제제인 것을 나타낸다. 일부 양태에서, 상기 방법은 남성형 탈모증 치료하기 위한 잠재적 제제로 추정되는 화합물이 있고, 프로스타글란딘 D2 이 있을 때, DP-1의 활성을 측정하는 것을 포함하는 더 포함한다. 같은 조건에서, 남성형 탈모증 치료하기 위한 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 부재 및 프로스타글란딘 D2의 존재하에, DP-1 활성을 측정했을 때, 낮은DP-2의 활성과 상기 화합물의 부재 및 상기 화합물의 존재하에 같은 DP-1 활성을 보이는 것은 남성형 탈모증 치료하기 위한 잠재적 제제를 나타낼 수 있다. 몇몇 실시예에서는, 다수의 화합물이 스크리닝 되었다.
모발 성장을 촉진하는 잠재적 제제인 화합물을 스크리닝하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 모발 성장을 촉진하는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 존재 및 프로스타글란딘 D2의 존재하에, DP-2 활성을 측정하는 것을 포함한다. 같은 조건에서, 모발 성장을 촉진하는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 부재 및 프로스타글란딘 D2의 존재하에, DP-2 활성을 측정했을 때, 상기 화합물의 부재 시 보다 상기 화합물의 존재하에 DP-2가 낮은 활성을 보이는 것은 모발 성장을 촉진하는 잠재적 제제를 나타낼 수 있다. 일부 양태에서, 상기 방법은 모발 성장을 촉진하는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 존재 및 프로스타글란딘 D2의 존재하에, DP-1 활성을 측정하는 것을 더 포함한다. 같은 조건에서, 모발 성장을 촉진하는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 부재 및 프로스타글란딘 D2의 존재 하에 DP-1 활성을 측정했을 때, 낮은 DP-2의 활성과 상기 화합물의 부재 및 상기 화합물의 존재하에 같은 DP-1 활성을 보이는 것은 모발 성장을 촉진하는 잠재적 제제로 추정되는 화합물을 나타낼 수 있다. 몇몇 실시예에서는, 다수의 화합물이 스크리닝되었다.
모발 성장을 저해하는 잠재적 제제인 화합물을 스크리닝하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 모발 성장을 저해하는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 존재하에 DP-2 활성을 측정하는 것을 포함한다. 같은 조건에서, 프로스타글란딘 D2의 존자하에, DP-2 활성을 측정했을 때, 모발 성장을 저해하는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 DP-2 활성이 프로스타글란딘 D2의 존재하에 DP-2 활성과 같거나 크다는 것은모발 성장을 저해하는 잠재적 제제를 나타낼 수 있다. 일부 양태에서, 상기 방법은 모발 성장을 저해하는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 존재하에, DP-1 활성을 측정하는 것을 더 포함한다. 같은 조건에서, 프로스타글란딘 D2의 존재하에, DP-1 활성을 측정했을 때, 프로스타글란딘 D2의 존재하의 DP-2의 활성보다 모발 성장을 저해하는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 DP-2 활성이 같거나 큰 것과, 프로스타글란딘 D2 가 있을 때의 DP-1의 활성보다 모발 성장을 저해하는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 DP-1 활성이 같거나 작은 것은 모발 성장을 저해하는 잠재적 제제로 추정되는 화합물을 나타낼 수 있다. 몇몇 실시예에서는, 다수의 화합물이 스크리닝 되었다.
본원에서 사용된, “DP-2 효능제”는 세포 내에서 또는 생리적 시스템 내에서 DP-2의 활성 양을 증가시키는 분자이다. 예를 들어, DP-2 효능제는 DP-2 수용체의 생리작용을 끌어내고, 선택적으로 DP-2에 결합할 수 있는 물질이다.
DP-2 효능제는 당업계에서 공지되어있고, 예를 들어 하기 표 1에 나타낸다.
[표 1]
Figure pct00001
몇몇 실시예에서, DP-2 효능제는 높은 선택적인 DP-2 효능제 15(R) PGD2, 15(R)-15-메틸 PGD2 또는 13,14-디하이드로-15-옥소 PGD2 로부터 선택된다.
본원에서 사용된, “DP-2 길항제”는 세포 내에서 또는 생리적 시스템 내에서 DP-2의 활성 양을 감소시키는 분자이다. 예를 들어, DP-2 길항제는 DP-2 수용체의 생리작용을 저해하고, 선택적으로 DP-2에 결합할 수 있는 물질이다.
DP-2 길항제는 당업계에서 공지되어있고, DP-2 길항제의 예는 하기 표 2에 표시되어 있다.
[표 2]
Figure pct00002
DP-2 길항제는 많은 종류로 나눠질 수 있다. 한 종류는 라마트로반과 그의 유사체인데, 이들의 예는 표 2 및 표 3에 표시되 어있다. (TM30642 - 3-{3-[(4-플루오로-벤젠술포닐)-메틸-아미노]-1,2,3,4-테트라하이드로-카르바졸-9-일}-프로피온산; TM30643 - [3-(4-플루오로-벤젠술포닐-아미노)-1,2,3,4-테트라하이드로-카르바졸-9-일]-아세트산;TM30089 - {3-[(4-플루오로-벤젠술포닐)-메틸-아미노]-1,2,3,4-테트라하이드로-카르바졸-9-일}-아세트산.
[표 3]
Figure pct00003
DP-2 길항제의 다른 종류는 인돌 아세트산 유도체다. 상기 종류의 예는 표2의 화합물 6 내지 9이다.
DP-2 길항제의 다른 종류는 페닐 아세트산 유도체다. 상기 종류의 예는, 표 2의 화합물 11인 펜클로페낙에 근거한다.
DP-2 길항제의 다른 종류는 테트라하이드로퀴놀린 유도체다. 화합물의 종류의 예는 표 2의 화합물 12, K117 및 K-104이다.
본원에서 제공되는 방법 중 사용을 위해 특히 선호되는 DP-2 길항제는 최소한 한번의 임상 실험의 대상이었다. 최소한 한번의 임상 실험의 대상이었던 길항제의 예는, DP-2 길항제를 포함할 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다. DP-2 길항제들은 하기 표 4에 나타내었다.
임상 단계 DP-2 길항제
회사 화합물 ID 상태 참조a
악텔리온(Actelion) ACT-129968
(Setipiprant)		 IIb 단계 NCT01225315
악티미스(Actimis) AP768 I 단계
아미라(Amira) AM211 I 단계
아미라(Amira) AM461 I 단계
아미라(Amira) AMG853 II 단계(2011)이후 중단 NCT01018550
어레이 바이오파마(Array BioPharma) ARRY-502 I 단계 NCT01349725
아스트라제네카(AstraZeneca) AZD1981 II 단계 NCT01197794
아스트라제네카(AstraZeneca) AZD8075 I 단계(2010)이후 중단 NCT00787072
아스트라제네카(AstraZeneca) AZD5985 I 단계(2010)이후 중단 NCT00967356
머크(Merck) MK-7246 I 단계
노바티스(Novart)is QAV680 II 단계 완료 NCT00814216
옥사겐(Oxagen) OC000459 IIb 단계 NCT01057927
옥사겐(Oxagen) OC002417 Back-up 후보
풀마겐(Pulmagen) ADC3680B I 단계 NCT01173770
시오노기(Shiono)gi S-555739 IIb 단계 (일본)
aNCT 번호는 웹사이트에서 찾을 수 있다: www.clinicaltrials.gov
본원에서 제공되는 방법에서 사용되는 DP-2 길항제는 DP-2 길항제 라마트로반이다. 상기 길항제의 구조는 하기에 제공된다:
Figure pct00004
본원에서 제공되는 방법에서 사용되는 DP-2 길항제는 DP-2 길항제이고, 상기 길항제의 구조는 하기에 제공된다:
Figure pct00005
본원에서 제공되는 방법에서 사용되는 DP-2 길항제는 DP-2 길항제 세티핍란트(Setipiprant)이고, 상기 길항제의 구조는 하기에 제공된다:
Figure pct00006
본원에서 제공되는 방법에서 사용되는 DP-2 길항제는 DP-2 길항제이고, 상기 길항제의 구조는 하기에 제공된다:
Figure pct00007
본원에서 제공되는 방법에서 사용되는 DP-2 길항제는 DP-2 길항제AZD1981이고, 상기 길항제의 구조는 하기에 제공된다:
Figure pct00008
본원에서 제공되는 방법에서 사용되는 DP-2 길항제는 DP-2 길항제이고, 상기 길항제의 구조는 하기에 제공된다:
Figure pct00009
본원에서 제공되는 방법에서 사용되는 DP-2 길항제는 DP-2 길항제이고, 상기 길항제의 구조는 하기에 제공된다:
Figure pct00010
본원에서 제공되는 방법에서 사용되는 DP-2 길항제는 DP-2 길항제AMG853이고, 상기 길항제의 구조는 하기에 제공된다:
Figure pct00011
추가적인 DP-2 길항제는 아래의 공보들에서 찾을 수 있다: EP1,170,594, EP1,435,356 WO2003/066046, WO2003/066047, WO2003/097042, WO2003/101961, WO2003/101981, WO2004/007451, WO2004/032848, WO2004/035543, WO2004/106302, WO2005/019171, WO2005/054232, WO2005/018529, WO2005/040112, GB2,407,318, WO2005/040114, WO2005/044260, WO2005/095397, WO2005/100321, WO2005/102338, WO2006/095183, WO2007/107772, US7,405,215, 각각은 참조에 의해 전체가 본원에 혼입된다.
본 발명의 다른 양태는 DP-2 효능제 또는 길항제를 포함하는 조성물을 포함한다. 예를 들어, 대상체의 모발 성장을 조절하는 조성물은 상기 대상체의 모발 성장을 조절하는 유효량의 DP-2 효능제 또는 길항제를 포함한다.
다른 예에서, 대상체의 모발 성장을 촉진하는 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 상기 대상체의 모발 성장을 향상시키는 유효량의 DP-2 길항제를 포함한다. 다른 예에서, 대상체의 남성형 탈모증, 또는 대머리, 또는 탈모 치료용 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 상기 대상체의 남성형 탈모증, 또는 대머리, 또는 탈모 치료하는 유효량의 DP-2 길항제를 포함한다.
다른 양태에서는, 대상체의 모발 성장을 저해하는 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 상기 대상체의 모발 성장을 저해하는 유효량의 DP-2 효능제를 포함한다.
다른 실시예에서는, DP-2 효능제 또는 DP-2 길항제 및 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제 또는 비히클(담체)을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
저분자, 항체, 핵산, 펩타이드, 벡터, 숙주세포 또는 본 발명의 다른 제제들, 및 하나 또는 그 이상의 약제학적으로 허용되는 비히클를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.“약제학적으로 허용되는 비히클” 이용되는 투여량과 농도로 부형제에 노출되는 세포 또는 대상체에게 독성이 없는 부형제를 포함한다. 상기 약제학적 조성물은 하나 또는 추가적인 치료 제제를 포함할 수도 있다.
약제학적으로 허용되는 비히클은용제, 분산매질, 완충제, 코팅제, 향균 및 향곰팡이 제제, 습윤제제, 보존료, 버거(buggers), 킬레이트 제제, 항산화제, 등장 제제, 및 흡수를 지연시키는 제제를 포함한다. 약제학적으로 허용되는 비히클은 물; 식염수; 인산완충식염수; 덱스트로오스; 글리세롤; 에탄올 및 이소프로판올과 같은 알콜; 인산; 구연산 및 다른 유기산; 아스코르브산; 저분자 (10 잔기보다 적은) 폴리펩티드; 단백질, (예를 들어 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역 글로불린 항체); 친수성 중합체, (예를 들어 폴리비닐피롤리돈); 아미노산, (예를 들어 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌, 또는 리신); 글루코스, 만노스, 또는 덱스트린을 포함하는 단당류, 이당류, 또는 다른 탄수화물; EDTA; 염을 형성하는 카운터이온, (예를 들어 나트륨); 및/ 또는 비이온계 계면 활성제, (예를 들어 TWEEN, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 및 플루로닉스(PLURONICS)); 등장제제, 예를 들어 당, 폴리알콜, (예를 들어 만니톨 및 소르비톨), 및 염화 나트륨; 및 이들의 혼합물을 포함한다. 향균 및 향곰팡이 제제는 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 아스코르브산, 및 티메로살을 포함한다.
본 발명의 약제학적 조성물은 예를 들어 고체, 반고체, (예; 크림, 연고, 젤), 액체 제형 (예를 들어, 용액 (예; 국소용 로션 또는 스프레이)), 분산액 또는 현탁액, 정제, 알약, 파우더, 리포솜, 및 좌약을 포함하는 다양한 방법으로 생성될 수도 있다. 일부 양태에서는, 상기 조성물은 주사 가능한 또는 주입할 수 있는 용약의 형태이다. 상기 조성물은 경로, 정맥, 동맥, 근육, 피하, 비경구, 피부, 또는 국소 투여에 적합한 형태이다. 특히, 상기 조성물은 국소 투여를 위해서 생성한다. 상기 조성물은 즉시, 조절, 연장 또는 지연 방출되는 조성물로써 생성될 수도 있다.
더 상세하게, 사용하기 적합한 약제학적 조성물은 멸균 수용액 (수용성) 또는 확산 및 멸균 용액 또는 확산의 임기 표본을 위한 멸균 분말을 포함한다. 그것은 제조와 저장의 조건에서 안정되어야 하고, 박테리아와 균류 같은 미생물의 오염으로부터 보호되어야한다.
상기 비히클은예를 들어 물, 에탄올, 폴리올(예; 글리세롤, 프로필렌글리콜, 및 폴리에틸렌 글리콜 용액, 등)을 포함하는 용제 또는 분산매질, 및 적절한 혼합물이 될 수 있다. 상기 적절한 유체를, 예를 들어 레시틴 같은 코팅으로 사용하기 위해서, 분산되는 경우에 필요한 입자 크기의 유지를 위해서, 및 계면활성제로 이용하기 위해서 유지한다. 여기서 개시된 치료 방법의 용도로 적절한 제형제는 Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., 16th　ed. (1980) 에서 서술되었다.
일부 양태에서, 상기 조성물은 등장제제를, 예를 들어 당, 폴리알코올, (예를 들어 마니톨, 소르비톨), 또는 염화나트륨을 포함한다. 예를 들어 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴 같은 성분의 흡수를 지연시키는 물질을 포함해서 주입가능한 조성물의 흡수가 연장될 수 있다.
멸균 용액은 그대로 또는 다른 활성제가 혼합된 필요한 양의 분자를 적절한 용액에 하나의 성분 또는 열거된 성분들의 혼합물과 필요한만큼 혼합하여 여과 살균 직후에 준비된다. 일반적으로, 분산제는 활성제를 기본적인 분산매질 및 상기 열거된 다른 필요한 성분들을 포함한 멸균돤 매개체로 첨가하여 준비한다.
멸균된 주입가능한 용약을 준비하기 위한 멸균 파우더인 경우에, 한가지 준비방법으로 진공 건조와 냉동건조가 있는데, 이것은 이전에 여과살균된 용액으로부터 다른 원하는 성분을 첨가하는 활성성분의 파우더를 생성한다. 앰플, 봉지, 병, 주사기, 또는 유리병같은 용기를 채우고, 당업계에서 공지된 방법에 따라서 무균상태에서 밀폐하는, 주입을 위한 준비를 진행한다. 게다가, 상기 준비는 미국 특허 출원 번호 2002/0102208 A1에서 기술된 키트의 형태로 포장되고 판매되며, 상기 출원 모두는 참조에 의해 전체가 본원에 혼입된다. 이렇게 제조된 물품들은 자가면역이나 종양 질환을 겪고 있거나 그러한 성향이 있는 대상체의 치료에 유용한 조성물에 대한 라벨이 있거나 포장에 삽입되는 설명서가 있다.
다른 상기에 기술된 질병과 조건을 치료하기 위한 본 발명의 조성물의 유효한 복용량은 투여 수단, 목표 위치, 환자의 생리학적 상태, 환자가 사람인지 동물인지 여부, 다른 투여된 약물, 및 처치가 치료용인지 예방용인지 여부를 포함하는 많은 여러가지 제제에 따라서 다르다. 보통, 상기 환자는 인간이지만, 이식 유전자를 지닌 포유동물을 포함하는 인간이 아닌 포유류도 역시 치료할 수 있다. 효과 및 안정성을 최적화하는 당업계에서 공지된 기존 방법을 이용하여 치료 투여량을 적정한다. 상기 발명의 약제학적 조성물은 “치료학적 유효량”을 포함할 수도 있다. “치료학적 유효량”은 정량과 기간동안 원하는 치료 결과를 얻기에 유효량을 나타낸다. 분자의 치료학적 유효량은 질병상태, 나이, 성별, 및 개인의 무게 같은 제제와 개인의 원하는 반응을 이끌어내는 상기 분자의 능력에 따라서 달라질 수 있다. 또한 치료학적 유효량은 치료에 유익한 효과보다 중요하지는 않은 상기 분자의 유독하거나 해로운 효과가 있다.
본 발명은 DP-2 효능제 또는 길항제의 치료학적 유효량을 포함하는 키트를 더 제공한다.
본 발명은 DP-2 효능제 또는 길항제의 치료학적 유효량을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 질병이나 질환을 치료하는 방법을 더 제공한다.
본원에서 사용된, 저해나 촉진에 관하여 용어 "선택적인" 은 두번째 활성과 관련된 첫번째 활성의 우선적 저해나 촉진을 각각 의미한다(예; 한가지 경로에 대한 다른 경로의 우선적 저해; 다른 수용체에 대한 우선적 저해; 또는 야생형에 대한 돌연변이체의 우선적 저해 또는 그 반대의 경우). 일부 양태에서, 원하는 분자 타겟 또는 경로와 원하지 않는 타겟 또는 경로의 비교를 위해 선택하는 저해제는 5배 더 선택적인, 10배 더 선택적인, 50배 더 선택적인, 100 더 선택적인, 또는 1000 배 더 선택적이다. 일부 양태에서, 길항제 또는 효능제는 같은 조건에서 상기 분자 타겟 또는 경로의 첫번째 활성을 두번째 활성보다 2배, 5배, 10배, 20배, 50배, 100배로 각각 저해하거나 촉진한다. 몇몇 실시예 덕분에, DP-2 길항제 또는 효능제는 앞서 언급된 양의 DP-1에 관하여 선택적이다. 분자 타겟의 활성이나 경로는 재생가능한 수단에 의해서 측정될 수 있다. 분자 타겟의 활성이나 경로는 체외에서 또는 체내에서 측정될 수 있다.
본원에서 사용된, "조절하는"은 분자 타겟의 활성 또는 경로를 "촉진하는" 또는 "저해하는" 것을 의미한다. 예를 들어, 같은 조건이지만 조성물의 존재만 결여됐을 때 분자 타겟의 활성 또는 경로와 관하여, 상기 조성물이 분자 타겟의 활성 또는 경로를 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 98%, 또는 약 99% 이상으로 촉진하거나 저해한다면, 상기 조성물이 분자 타겟의 활성 또는 경로를 조절한다. 다른 예에서, 같은 조건이지만 조성물의 존재만 결여됐을 때 분자 타겟의 활성 또는 경로와 관하여, 상기 조성물이 분자 타겟의 활성 또는 경로를 적어도 2-배, 적어도 5 -배, 적어도 10-배, 적어도 20-배, 적어도 50-배, 적어도 100-배로 촉진하거나 저해한다면, 상기 조성물이 분자 타겟의 활성 또는 경로를 조절한다. 분자 타겟의 활성 또는 경로는 어느 재생가능한 수단으로 측정할 수 있다. 분자 타겟의 활성이나 경로는 체외에서 또는 체내에서 측정될 수 있다. 예를 들어, 분자 타겟의 활성이나 경로는 활성을 측정하는 당업계에서 공지된 적절한 분석로 체외에서 또는 체내에서 측정될 수 있다. 대조 표본은 (상기 조성물로 처리되지 않은) 100%의 상대 활성 값으로 부여된다. 상기 조성물에 의해 활성에 변화는 상기 분석에서 측정할 수 있다.
본원에서 기술된 많은 길항제들은 그 타겟들의 강력한 저해제이다.
예를 들어, 길항제는 1000 μM 이하, 1000 nM 이하, 100 nM 이하, 10 nM 이하, 또는 특히 1 nM 이하의 원하는 분자 타겟(즉, DP-2)의 결합 저해 활성(IC50 값)을 가진다. 다른 예에서, 상기 저해제는 1000 μM와 1 nM 사이의, 1000 μM와 10 nM 사이의, 1000 μM 와 100 nM 사이의, 1000 μM와 1000 nM 사이의, 1000 nM 와 1 nM 사이의, 1000 nM와 10 nM 사이의, 1000 nM와 100 nM 사이의, 100 nM와 10 nM 사이의, 100 nM와 1 nM 사이의, 또는 10 nM와 1 nM 사이의 원하는 분자 타겟의 결합 저해 활성(IC50 값)을 가진다.
일부 양태에서, 본원에서 개시된 상기 길항제는 분자 타겟이나 경로를 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 98%, 또는 약 99% 이상으로 저해한다.
본원에서 기술된 많은 효능제들은 그 타겟들의 강력한 자극제이다.
예를 들어, 효능제는 1000 μM이하, 1000 nM 이하, 100 nM 이하, 10 nM 이하, 또는 특히 1 nM 이하의 원하는 분자 타겟(즉, DP-2)의 반 최대 효과적인 농도(EC50 값)을 갖는다. 다른 예에서, 효능제는 1000 μM 와 1 nM 사이의, 1000 μM와 10 nM 사이의, 1000 μM와 100 nM 사이의, 1000 μM와 1000 nM 사이의, 1000 nM와 1 nM 사이의, 1000 nM와 10 nM 사이의, 1000 nM와 100 nM 사이의, 100 nM와 10 nM 사이의, 100 nM와 1 nM 사이의, 또는 10 nM와 1 nM 사이의 원하는 분자 타겟(즉, DP-2)의 반 최대 효과적인 농도(EC50 값)을 갖는다.
몇몇 실시예에서, 본원에서 개시된 효능제는 분자 타겟 또는 경로를 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 98%, 또는 99% 이상으로 촉진한다.
본원에서 사용된, 용어 "치료하다" 및 "치료"는 질병 또는 질환과 연관된 원하지 않던 생리학적 변화를 예방하거나 늦추거나(완화하는) 것이 목적인 예방을 위한 방법을 포함하는 치료법을 의미한다. 유익하거나 원하는 임상적 결과는 증상의 완화, 질병 또는 질환 정도의 축소, 질병 또는 질환의 안정 (즉, 질병 또는 질환이 더 악화되지 않는다), 질병 또는 질환의 진행을 늦추거나 지연, 질병 또는 질환의 개선 또는 일시적 완화, 및 질병 또는 질환의 차도 (부분적이나 전체적이거나), 그것이 검출되는지 검출되지 않는지의 여부를 포함하지만, 이것에 제한되는 것은 아니다. 또한 "치료"는 만약 치료를 받지 않았을 때 기대했던 생존과 비교하여 연장된 생존을 의미한다. 이미 질병 또는 질환을 가지고 있거나, 또는 질병 또는 질환을 가질 가능성이 있거나, 또는 질병 또는 질환을 예방해야하는 사람들은 치료를 필요로 하는 사람들에 포함한다.
또한 대상체의 DP-2를 저해하는 것을 포함하는 상기 대상체의 탈모를 치료하는 방법이 제공된다. 저해는 당업계에서 공지된 조직 이식 방법을 통해 세포나 조직에 의해서 시행되고, 이러한 세포나 조직은 모발 성장을 필요로 하는 피부 부위에 이식된다.
일 실시예에서, 탈모 치료는 탈모를 포함하는 질병 또는 장애를 치료하는 것을 의미한다. 다른 실시예에서, 탈모 치료는 남성형 탈모증 (AGA) 치료를 의미한다. 다른 실시예에서, 탈모 치료는 남성형 대머리인 질병 또는 장애를 치료하는 것을 의미한다.다른 실시예에서, 탈모 치료는 여성형 대머리인 질병 또는 장애를 치료하는 것을 의미한다.일 예에서, 탈모 치료는 두피와 눈썹을 포함하지만 제한되지는 않는, 신체의 어느 부위의 어느 종류의 탈모를 치료 또는 예방하는 것을 의미한다.
다른 실시예에서, 탈모 치료는 탈모와 연관된 질병 또는 장애를 치료하는 것을 의미한다. 다른 실시예에서, 탈모 치료는 원판상 루푸스와 연관된 질병 또는 장애를 치료하는 것을 의미한다.다른 실시예에서, 탈모 치료는 선천성 소모증과 연관된 질병 또는 장애를 치료하는 것을 의미한다.다른 실시예에서, 탈모 치료는 모공성 편평태선과 연관된 질병 또는 장애를 치료하는 것을 의미한다. 다른 실시예에서, 탈모 치료는 탈모증 고통을 치료하는 것을 의미한다.
본원에서 사용된, "모발 성장을 저해하는"은 모발 성장을 예방, 모발 성장의 속도를 저해, 모발 성장 시작의 지연, 모발 주기의 늘리기, 휴지기를 늘리기, 최대 모발 길이 또는 최대 머리 지름을 최소화하는 것을 의미한다.
상기 DP-2 효능제 또는 길항제는 단독으로 투여되거나, 치료에 효과적인 제제 또는 치료제 중 적어도 한 개 이상 조합되어 투여된다. 일 실시예에서, 상기 DP-2 길항제는 단독으로 투여되거나, 치료에 효과적인 모발 촉진하는 제제(예; 피나스테리드, 미녹시딜, 또는 그 혼합물) 또는 치료제 중 적어도 한개 이상 조합되어 투여된다. 다른 실시예에서, 상기 DP-2 효능제는 단독으로 투여되거나, 치료에 효과적인 모발 제거하는 제제 또는 치료제 중 적어도 한개 이상 조합되어 투여된다. 다른 치료적 유효 성분은 DP-2 효능제 또는 길항제에 결합될 수 있고, DP-2 효능제 또는 길항제 같은 조성물에 결합되거나, 또는 별개의 조성물로 투여될 수도 있다. DP-2 효능제 또는 길항제의 투여 전에, 동안, 및/또는 후에, 다른 치료적 유효 성분 또는 치료제가 투여될 수 있다.
일 실시예에서, DP-2 길항제는 모발을 촉진하는 제제 (예; 피나스테리드, 미녹시딜, 또는 그 혼합물) 하나 또는 그 이상과 함께 투여된다(co-administrated). 다른 실시예에서, DP-2 길항제는 모발을 촉진하는 제제의 투여와 독립적으로 투여된다. 일 실시예에서, DP-2 길항제가 첫번째로 투여되고, 그 다음에 모발을 촉진하는 제제가 투여된다. 다른 실시예에서, 모발을 촉진하는 제제가 첫번째로 투여되고, 그 다음에 DP-2 길항제가 투여된다.
일 실시예에서, DP-2 효능제는 모발을 제거하는 제제 하나 또는 그 이상과 함께 투여된다. 다른 실시예에서, DP-2 효능제는 모발을 제거하는 제제의 투여와 독립적으로 투여된다. 일 실시예에서, DP-2 효능제가 첫번째로 투여되고, 그 다음에 모발을 제거하는 제제가 투여된다. 다른 실시예에서, 모발을 제거하는 제제가 첫번째로 투여되고, 그 다음에 DP-2 효능제가 투여된다.
모발 성장을 촉진하는 병용 용법을 위한 치료에 효과적인 다른 제제/ 치료제는 예를 들어, 이식수술, 및 진피 또는 표피를 제거하는 것을 포함하지만, 이것으로 한정되지는 않는다. 모발 성장을 저해하는 병용 용법을 위한 치료에 효과적인 다른 제제/ 치료제는 예를 들어, 당업자에게 알려진 물리적인 또는 화학적인 방법으로 피부에 모발을 제거하는 것을 포함하지만, 이것으로 한정되지는 않는다.
다른 제제 및/또는 치료제와 함께 DP-2 효능제 또는 길항제를 투여하는 것은 함께 또는 별도로, 같거나 또는 다른 방법을 통해서, 동시에 또는 다른 시간에 일어날 수 있다. 최적화된 원하는 반응(예; 치료상의 또는 예방상의 반응)을 제공하기 위해 복용량 양생법이 적용될수 있다. 일 예에서, 일회분이 투여될 수 있다. 다른 예에서, 여러 분량이 여러번이 걸쳐서 투여될 수 있다. 다른 예에서, 치료하는 상황의 긴급 사태에 따라서 복용량이 비례하여 줄거나 늘어날 수 있다. 본원에서 사용된 투여 단위 제형은 포유류의 대상체를 치료하기 위해 단일화된 용량에 적합한 물리적으로 별개의 단위를 의미한다. 각 단위는 원하는 치료 효과를 낼 수 있게 계산된 활성화된 화합물의 미리 정해진 양을 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 본 발명의 상기 투여 단위 제형은 활성화된 화합물의 독특한 특성이나 얻어야할 특정한 치료적인 또는 예방적인 효과에 따르거나 직접적으로 의존한다
본 발명의 상기 조성물은 한번 투여될 수 있거나, 여러번에 걸쳐서 투여될 수 있다. 여러번 복용하는 경우, 상기 조성물은 예를 들어, 하루에 세번, 하루에 두번, 이틀에 한번, 일주일에 두번, 매주마다, 이주마다 한번, 또는 한달마다 투여될 수 있다.
본원에서 사용된, 같은 조건이지만 화합물만 결여된 상황에서, 만일 상기 화합물이 원하는 활성을 적어도 약 10% 저해한다면, 상기 화합물은 활성을 "저해한다". 상기 활성은 재생가능한 수단에 의해서 측정할 수 있다. 상기 활성은 체외에서 또는 체내에서 측정할 수 있다. 일부 실시예에서, 본원에서 개시한 방법에 사용되는 화합물은 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 정도, 적어도 약 98% 정도, 또는 약 99% 이상으로 최소한의 활성을 저해한다.
완화되어야할 질환의 종류와 강도에 따라서 투여값이 달라진다. 개인의 요구, 상기 조성물의 투여를 감시하거나 투여하는 사람의 전문적인 판단에 따라서 특정한 대상체에게 특정한 복용량 투여법(regimens)이 시간이 가면서 적용되어야 하고, 여기 외에서 정해진 상기 용량의 범위는 모범적이고, 제시된 조성물의 실행 또는 범위를 제한하지 않기 위해 고안한다.
대상체에게 "투여"는 특정한 전달 시스템에 제한되지 않고, 제한 없이 국소, 경피, 경구(예; 캡슐, 현탁액 또는 정제), 비경구, (피하, 정맥 내, 골수 내, 관절 내, 근육 내, 또는 복강 내 주사를 포함하는), 또는 직장 투여를 포함할 수 있다. 대상체에게 투여는 일회 또는 여러번의 투여로 이루어질 수 있고, 및 다양하게 생리학적으로 허용되는 염의 형태로, 및/또는 약제학적으로 허용되는 비히클로, 및/ 또는 약제학적 첨가제의 일부인 첨가제(앞서 언급되었다) 로 이루어질 수 있다. 다시, 생리학적으로 허용되는 염의 형태 및 표준적인 약학적 제형제 기술은 당업계에서 알려진 사람에게 잘 알려져 있다 (예를 들어, Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co.).
본 발명의 다른 양태은 대상체의 남성형 탈모증, 대머리, 또는 탈모의 원인을 치료하기 위해 진단하는 방법이다. 상기 방법은 상기 대상체의 피부에서 프로스타글란딘 D2의 수치를 측정하는 것과 상기 대상체의 상기 피부가 미리 정해진 수치와 관련 있는 프로스타글란딘 D2의 증가된 수치를 가진 것의 여부를 결정하는 것을 포함한다. 여기서 프로스타글란딘 D2의 증가된 수치의 존재는 상기 DP-2를 통해서 매개된 남성형 탈모증, 또는 대머리, 또는 탈모 치료할 수 있는 것을 알린다. 프로스타글란딘 D2의 상기 수치는 당업자에게 알려진 분석나 다른 방법을 통해서 측정한다. 미리 정해진 수치는 대조군에서 프로스타글란딘 D2의 수치를 의미하고, 예를 들어, 정상 피부는 대머리나 모발 손실이 없다.
용어 "대상체"는 포유류를 예; 인간, 반려동물 (예; 개, 고양이, 새, 등), 가축 동물 (예; 소, 양, 돼지, 말, 닭, 등), 및 실험 동물 (예: 쥐, 생쥐, 기지피그, 새, 등)을 포함한다. 일부 양태에서, 상기 대상체는 남성인 인간 또는 여성인 인간이다.
본원에서 사용된, 구절 "약제학적으로 허용가능한"은 건전한 의학적 판단의 범위 내에서, 인간이나 동물의 조직에 접촉할 때 사용에 적합하게, 과도한 독성, 자극, 알레르게 반응, 또는 다른 문제나 합병증 없이, 합리적인 이익/위험 비율에 상응하는, 상기 화합물, 물질, 조성물, 비히클, 및/또는 투약 형태를 의미한다.
"약제학적으로 허용가능한 부형제"는 일반적으로 안전하고, 무해하고, 생물학적이지 않고, 다른 바람직하지 않은 것도 아닌 약제학적 조성물을 준비하는데 유용한 부형제를 의미하고, 인간의 약학적인 사용처럼 수의과용으로도 허용가능한 부형제를 포함한다. 본원에서 사용된 "약제학적으로 허용가능한 부형제"는 하나의 부형제나 하나의 부형제보다 많은 것 모두 포함한다.
또한 본 발명에서 화합물은 예를 들어 약제학적으로 허용가능한 "프로-드러그" 와 "프로드러그"로 준비되기도 한다. 용어 "프로-드러그" 와 "프로드러그"는 교환 가능하게 본원에서 사용되며, 체내에서 활성화된 모약물을 배출하는 화합물을 나타낸다. 프로드러그는 수많은 양질의 제약으로(예; 용해성, 생체 이용성, 제조성, 등) 향상시키기 때문에, 본 발명의 상기 화합물은 프로드러그의 형태로 전달될 수 있다.
용어 "약" 또는 "대략"은 어떻게 값이 측정되거나 결정되는지에 의존하는 당업계에서 공지된 기술 중 하나로 결정되는 특정한 값의 허용가능한 오차 범위 안에 있다는 것을 의미한다.
본원에 인용된 특허, 특허 출원 공개, 또는 과학 출판물은 참조에 의해 전체가 본원에 혼입된다.
다음 예들은 본 발명의 실시예들을 더 상세하게 설명하기 위해서 제시된다. 그러나, 그것은 본 발명의 넓은 범위를 제한하기 위해서라고 간주되어서는 안된다.
실시예들
재료 및 방법들
인간 조직 표본
이 연구는 정상적으로 폐기되고, 익명으로 얻은 인간 두피만을 사용하였고, 면제 프로토콜로 펜의 심사위원회(Penn’s Institutional Review Board office)의 사무실에 의해 승인되었다. 정상적으로 폐기된 인간의 두피는 모발이식 중일 때 얻었다. 피나스테리드 또는 미녹시딜을 섭취하지 않은 40세 내지 65세인 성인 서양 남자들로 부터 조직이 유래되었다. 모든 분석은 다른 실험에 사용되지 않은 유니크한 두피 표본들을 이용했다. 모발이 있는 두피와 모발이 없는 두피 사이의 평균 배수 차이를 계산하기 위해서, 각 환자들의 비를 만들고, 그것을 평균냈다. 마이크로 어레이는 출판된 방법으로 시행하였다. 모발을 기르는 실험을 위해서, 모발의 끝을 포함하는 페이스 리프트에서 버려진 조직을 사용했다.
동물들
모든 동물 프로토콜은 펜실베니아 기관 동물 관리 및 사용 기관의 대학(University of Pennsylvania Institutional Animal Care and Use Committee)으로부터 승인을 받았다. 야생형 C57BL/6J 여성 쥐는 시간적 처리 연구를 위한 동일한 무게와 탄생시기의 쥐에 대한 요청 하에서 잭슨 실험실(Jackson Laboratory)에서 구입했다. K14-Cox2 형질 전환된 쥐와 Ptgdr, Gpr44, 및 Ptgds 유전자 제거 쥐는 원래 출처에서 얻었다. 내인성 테스토스테론의 효과를 줄이기 위해서, 여성 쥐만을 사용했다. 모발 주기와 동기화시킨 탈모는 상기 기술된 것처럼 시행했다. 만일 동물이 생검한 당일에 과도기적 상태로 발견되면, 후기 단계의 표본은 12시간 더 진행되었다고 표지하였다.
실시간( Real - time ) qPCR
쥐의 등쪽 피부를 가위와 겸자로 제거한다. 인간의 조직은 가위로 절단하였다. 조직(25 내지 35 mg)을 300 mL 의 키아겐(Qiagen) RLT 완충제에 용해한다. 인간의 두피와 쥐의 조직은 조직 로터에 의해 균질화시키고, RNA는 수집되어서 섬유상(Fibrous) RNA 추출 키트(Qiagen)와 고용량(High-Capacity) cDNA 키트(Applied Biosystems)인 제조사의 지침에 대하여 상보적 DNA(cDNA)로 전환되었다. cDNA(50 ng)는 패스트 믹스(Fast Mix)와 실시간 qPCRs에 사용된다.
정량적 RT - PCR Master
혼합하고 Step One Plus System(Applied Biosystems)으로 측정하였다. b-액틴과 18S RNA 프로브 표준은 서로 동등한 것으로 밝혀졌고, 동등한 부하량의 표본 사이에서 변동하지 않았다. 배수 변화는 DDCT 방법에 의해서 계산하였다. 사용된 프라이머는 TaqMan 프라이머(생검에 적용된)로 목록을 만들었다: PTGDS(인간), Ptgds(쥐), Fgf5(쥐), Ptgfr(쥐), b-actin(인간), b-actin(쥐), 및 18S(인간 및 쥐).
웨스턴 블롯
인간 두피의 조직은 균일화되었고, 단백질의 양은 BCA 키트(Pierce)에 의해서 수량화되었다. 각 폐기된 조직 용해물(15 내지 35 mg)의 동일한 양이 SDS-폴리 아크릴아미드 겔 전기 영동에 의하여 채워졌다. 폴리비닐리덴 디플루오라이드 블롯은 쥐의 단일클론 항-PTGDS(Cayman Chemical)에 프로브되었고, 뒤이어 HRP(Vector)에 결합된 항-쥐 이차항체가 블롯되었다. 상기 블롯은 모두 제조업체의 지침에 따라 전자화학발광(Amersham)으로 현상되고, 방사선 사진법으로 노출되고, ImageJ(National Institutes of Health)에 의해서 정량화되었다. 검사된 모든 레인 사이에 동일하게 로딩된 것을 입증하기 위해서 블롯은 Ponceau Red(Sigma)에 의해서 연속적으로 염색되었다.
PGD2 효소 결합 면역 흡착 분석법
PGD2의 양을 측정하기 위해서 인간의 두피는 모발 이식으로부터 얻어졌다. 수술 바로 직후에, 표본은 10%의 소태아 혈청(FBS)과 항생물질/항진균제와 함께 둘베코의 변형된 이글스(Dulbecco’s modified Eagle’s) 배지에 4°C에 놓여지고, 즉시 냉동하였다.
조직 표본의 무게는 0.14 내지 0.94 g까지 다양하다. 모든 값은 시작된 조직 무게로 정상화되었다. 1 내지 2일 이내로, 표본들은 액체 질소에서 급속 냉동되고, 최소한 24시간 동안 -70°C에서 저장되었다. 해동 후, 표본은 1 mL의 아세톤에 희석되었고, 균질화되었다. 표본은 10분동안 5000g으로 원심분리 되었고, 상등액이 제거되었고, 및 두번째 추출은 펠렛에서 시행되었다. 상기 모아진 상등액은 SpeedVac 원심 분리기에서 건조되고, Cayman Chemical 프로스타글란딘 D2-MOX ELISA(효소 결합 면역 흡착 분석법) 키트에서 제공된 100 mL의 효소 면역 검정 완충제에 다시 현탁되었다.
제조업체의 지침에 따라서 표준 곡선에 관한 PGD2 농도가 결정된다. 값은 모발이 있는 두피에서 정규화되었다.
초고성능 액체 크로마토그래피
인간 조직은 ELISA로 준비했다. 쥐에서 프로스타글란딘 수율을 최대화하기 위해서, 표본을 스냅 냉동하고 항상 4°C에서 보관했다. K14-Ptgs2 쥐와 프랜드 바이러스 B-형(FVB) 변형-일치 동물 대조군으로부터 조직을 태어나고 24일 될 때 얻는다. 쥐 조직에서, 절개된 표피와 진피는 아세톤에서 스냅 냉동하고, 갈아지고, 2분 이하로 아세톤에서 금속의 끝에 Omni TH 115V로 균질화하였다. 상등액에 저장되어 10분동안 16,000g에서 균질화된 조직을 원심분리하였다. 표본을 1 mL의 5% 아세토니트릴을 물과 다시 녹인 후에, 질소 가스의 잔잔한 흐름에서 아세톤을 건조하고, 20 ml의 포름산으로 산성화하고, 조절된 Strata-X SPE 카트리지(Phenomenex)에 적용한다. SPE 프로토콜은 1 mL의 아세토니트릴 다음에 1 mL의 H2O로 전처리하고, 표본을 적용하고, 15분 동안 하우스 진공에 적용하여 건조하고, 에틸 아세테이트 중 1 mL의 10% 아세토니트릴로 용출하였다. 상기 용출액은 질소 흐름에서 건조하고, H2O에서 200 mL의 30% 아세토니트릴에 재용해하고, 100 mL 가 UHPLC 분석을 위한 기구로 투입되기 전에 0.2-mm 나일론 스핀-X 필터(Corning)를 통해서 여과된다. 상기 UHPLC 악셀라(Accela) 용매-전달 시스템(Thermo)과 Hypersil GOLD C18, 200 mm × 1 mm, 1.9-mm 입자 크기 칼럼(Thermo)으로 구성되어 있다. 이동상은 물(용매 A)와 아세토니트릴/메탄올(95:5, 용매 B)로 구성되어있고, 수산화암모늄을 이용하여 pH 5.7로 조정된 0.005%의 아세트산과 존재하였다. 상기 이동상의 농도는 20% B에서 시작해서, 10분에 35%까지 선으로 증가하고, 20분에는 80% B까지 선으로 증가하고, 3분동안 80% B에서 유지하였다. 유속은 350 ml/분이다.
질량 분석
TSQ 퀀텀 울트라 기기(Quantum Ultra instrument)(Thermo)가 가열된 전자분무이온화(ESI) 소스에 구비되어 있고, 트리플 4중극 분석기가 사용되었다. ESI 소스는 70까지 설정할 수 있고 임의로 5단위로 설정되는 시스용 질소와 보조가스를 사용한다. 질량분석계는 0 kV의 분사전압과 350°C의 모세혈관 온도에서 음이온 모드로 작동한다. 소스의 오프셋은 6 V로 설정했다. 분석기는 선택된 반응 감시 모드로 작동된다. 처음 16분 동안 감시되는 전환은 다음과 같다: 내인성 PGD2 와 PGE2의 질량/전하 비(m/z) 351→271(충돌 에너지, 15 V), 사중수소화된 PGD2 와 PGE2의 m/z 355→275 (15 V), 내인성 PGF2a의 m/z 353→193 (24 V), 및 사중수소화된 PGF2a의 m/z 357→197 (24 V). 마지막 7분동안, 내인성 15-dPGJ2의 m/z 315→271 (15 V)와 사중수소화된 유사체의 m/z 319→275 (15 V)가 관찰되었다. 모든 아이코사노이드는 Cayman Chemical에서 구입했다.
면역 조직학과 면역 형광법
쥐의 등 또는 인간의 두피 피부는 4% 파라포름알데히드에서 고정되고, 파라필름에 삽입되어, 5 내지 10 mm로 절개되었다. 비면역 슬라이드는 헤마톡실린과 에오신(Fisher Scientific)으로 염색하였다. 면역 염색의 경우, 바이오티닐된 항-토끼 또는 항-쥐 다음으로 다클론성 토끼 항-PTGDS(Cayman Chemical) 또는 단일클론 쥐 KRT15(Lab Vision, clone LHKRT15)가 각각 적용되었다. ABC 키트(Vector labs)는 발색을 위해 홀스래디시 페록시다아제(Horseradish peroxidase)와 디아조아미노벤젠과 함께 사용된다. 메틸 녹색(Vector Labs)은 면역 조직 화학용 조직을 대비염색하는 것에 사용한다; 항원염색은 갈색으로 보이고, 대비염색은 청록색으로 보인다. 염색은 기존의 광학현미경(Nikon)으로 확인할 수 었있다. 면역조직화학에서 기술된 것처럼 피부를 같은 일차 항체로 처리한다. 항-토끼 Alexa Fluor 488(Invitrogen) 및 항-쥐rhodamine(Vector Labs)은 이차항체로 사용되었다. 그 뒤에 조직은 4',6-디아미디노-2-페닐인돌(DAPI) 배지(Vector Labs)에 심어진다. 염색은 빨간색, 녹색, 및 파란색 필터 큐브를 가진 기존의 형광 현미경(Leica)으로 확인할 수 있다.
케라티노사이트 세포 배양
인간의 포피(foreskin) 케라티노사이트는 신생아의 포피에서 분리했다. 같은 밀도의 케라티노사이트는 여섯개의 웰 배양접시에 개시된 후에 2 또는 3개 통로 사이에 배양된다(50,000 세포/cm2). 세포는 2 mL의 에피라이프(EpiLife) 배지(Cascade Biologics)에서 유지되고, 아세톤에 용해된 100 nM PGD2, 1 mM PGE2, 또는 10 mM 15-dPGJ2(Cayman Chemical)에 12 내지 48시간 동안 처리된다. 다른 특정한 규정이 없는한, 세포는 20시간 동안 10 mM 프로스타글란딘으로 처리하였다. 대조군으로는 아세톤 단독으로 사용한다.
유동 세포 분석법
배양하는 동안, 인간의 케라티노사이트는 0.2 mM의 브로모데옥시우리딘(BrdU)에 프로스타글란딘으로 항온처리하는 마지막 3시간 동안 방치하였다. 세포는 트립신처리되어서 세포를 현탁액으로 방출하고, 산출하고, 고정하고, 침투한다(Caltech). 세포는 106 세포마다 20 mL의 항-활성화된 카스파제 3(Becton Dickinson, clone CPP32) 또는 항-BrdU플루오레세인이소티오시안산염(Becton Dickinson, clone B44)으로 염색된다.세포는 LSRII 플로우 사이토미터(Becton Dickinson)를 작동하기 전에 5% FBS 및 DAPI(5 mg/mL)와 함께PBS(phosphate buffered saline)로 재현탁되었다. 서브 G1 세포는 DNA 의 두배 양보다 적게 포함하면서 들어가게 되었다.
쥐의 모발 기르기 연구
비히클, PGD2, 및 15-dPGJ2의 효과를 비교하기 위해 모발 주기에 있는 야생형과 녹아웃쥐 중에서, 200 mL의 아세톤에 있는 1 mg 의 PGD2이나 아세톤 단독으로 탈모 후 8, 10, 12, 14, 16, 및 18일에 등의 중앙에 주입하고, 20일 째 모발 길이를 측정했다. 15-dPGJ2의 모발 길이의 시간 경과를 시험하기 위해서, 상기 PGD2대신에 10 mg을 사용했다. 선술한 바와 같이, 머리 길이를 측정하였고, 송곳 (지그재그가 아닌) 모양의 모발을 선택하여 측정하였다. 돌연변이 쥐 균주를 시험하기 위해서, 상기 실험은 각각 세번 분리해서 시행했다.
인간 모낭 배양
모낭 기관 배양 모델은 기술된 것처럼 시행된다. 간단하게, 성장기에 있는 인간의 모낭은 성형외과 의사에게서 얻은 얼굴과 눈썹 리프트 조직으로부터 분리하였다. 최소한 세명의 다른 인간 기증자 (남자와 여자의 혼합)이 각 화합물 시험에 사용되었다. 모든 대상체응 40에서 60세의 나이 범위에 있다. 피부는 1내지 2 mm의 얇은 조각으로 슬라이스되고, 쉽게 절개할 수 있는 2 내지 3줄의 모낭에 노출된다.
모낭은 L-글루타민(2 mM), 인슐린(10 mg/ml), 히드로코르티손(10 ng/ml), 페니실린(100 U), 스트렙토마이신(0.1 mg/ml), 및 암포테리신 B(0.25 mg/ml) 로 채워져있는 0.5 mL의 윌리엄의 E 배지(Life Technologies)에 위치시킨다. 상기 모낭은 5 % CO2 및 95 % 공기 분위기와 37°C에서 24-웰 플레이트(한개의 웰당 한개의 모낭)에서 인큐베이트된다. PGD2, PGD2 대사산물, 및 PGD2 유사체(Cayman Chemical)는 디메틸 술폭시드(DMSO)에 100×의 저장액으로 용해된다(예; 5 mM 처리를 위한 0.5 mM 및 10 mM 처리를 위한 1 mM). DMSO 비히클 대조군은 1% (v/v)에서 사용한다. 모낭은 오직 대조군인 DMSO로 처리한다. 모낭은 0일에(모낭이 배양에 놓여진 날)과 다시 7일 째 일반적으로 이미지된다. 모발 섬유의 길이는 Vision Builder(National Instruments)에 의해서 측정된다. 상기 모발 섬유의 길이는 7일째 결정된 길이에서 0일째 길이를 빼는 방법으로 계산된다. 각 보고된 측정은 14개 내지 20개 모낭으로부터 나온 결과의 평균이다.
통계학적 분석
모든 P값 계산에서, 쌍을 이루는 스튜던트의 T 테스트(Student’s t test)는 단측 분포(one-tailed distribution)로 계산되었고, P < 0.05인 경우, 효과를 유의한 것으로 생각되었다.
데이터는 평균± SEM을 나타낸다. 분산 분석법(ANOVA) 테스트는 사람, 생검 날짜, 또는 마이크로 어레이의 날짜와 관계없이 우선적으로 차이가 있는 부위(모발과 모발이 없는)에 관하여 마이크로 어레이로부터 유전자들을 랭크하는데 사용되었다.
결과들
실시예 1
대머리의 두피에서 PTGDS 와 PGD2 가 올라갔다
AGA를 지닌 남성의 모발이 없는 두피에서 전체적 유전자 발현 변화를 측정하기 위하여, AGA를 지닌 다섯명의 남성의 모발이 있는 두피와 모발이 없는 두피를 비교하는 유전자 발현 마이크로 어레이를 시행했다. 모발이 있는 두피 중에서 및 모발이 없는 두피 중에서의 상관계수는 1로 접근하는 표본(도 1A) 사이에서 반복검증되었다. 각 개인 내에서 모발이 있는 두피와 모발이 없는 두피를 비교한 상관계수 역시 1에 가까워져가는 것은 내부 통제로 쌍을 이루고 있는 표본의 장점을 나타낸다. 250 전사체는 인간의 모발이 있는 두피와 모발이 없는 두피에서 다르게 발현되는 것을 확인하였다. 상기 전사체의 유효성을 위한 증거로써, 상기 유전자의 발현을 기반으로 클러스터링 알고리즘(clustering algorithm)으로 모발이 있거나 모발이 없는 표본으로 분류했다(도 1B). 예상했던 것처럼, 모발 케라틴은 모발이 있는 두피에서 상위 규제되었다. 불확실한 이유로, 전사체와 관련있는 헤모글로빈은 모발이 없는 두피에서 증가되었다. 발현에서 예상했던 방향처럼, 모발이 있는 두피에서 169개의 유전자가 증가되었고, 모발이 없는 두피에서 81개의 유전자가 증가되었다 (도 1C). 상기 유전자를 위한 풍부한 유전자 온톨로지 기능분류법을 결정했고, 겹쳐지는 카테고리를 확인했다. AGA의 알려진 조직학과 일치하는 것처럼, 두발이 있는 모피에 형태발생 발달 경로의 유전자는 과발현되었으며, 반면에 두발이 없는 모피에서 면역반응유전자는 과발현되었다(도 1D).
모발 성장을 촉진하기 위한 프로스타글란딘 F2a(PGF2a)관련 화합물의 임상적 활용과 프로스타글란딘의 길항 기능을 고려하면, 인간 남성의 모발이 없는 두피에서 가장 높게 발현되는 전사체의 하나인 PTGDS를 찾는 것에 주목했다(도 1, E, F). 마이크로 어레이에서 PTGDS를 포함하는 세개의 프로브 세트가 모발이 없는 두피에서 모두 증가되었다(도 1E).정량적 중합효소 연쇄반응 F2(qPCR) (도 2A)와 웨스턴 블럿팅(도 2, B 및 C)을 이용해서 모발이 없는 인간의 두피와 모발이 있는 인간의 두피를 비교할 때 증가된 PTGDS 발현과 PTGDS 단백질 수치를 더 확인할 수 있었다. 대머리에서 PTGDS의 역할을 잘 이해하기 위해서, 모발이 없는 인간의 두피와 모발이 있는 인간의 두피에서 PTGDS의 합성 산물인 PGD2의 수치를 측정했다. 면역 분석으로 모발이 있는 두피와 비교했을 때 모발이 없는 두피에서 상당한 PGD2의 증가를 발견하였다(도 2D). PGD2의 절대수치는 모발이 없는 두피에서 16.3 ng/g 조직이고, 모발이 있는 두피에서 1.5 ng/g 조직이었다. 면역 분석과 비교하면 프로스타글란딘을 측정할 때 월등한 정확도를 나타내기 때문에 PGD2 수치는 고성능액체크로마토그래피(UHPLC-MS)를 이용해서 측정했다. AGA를 지닌 17명의 남성으로부터 모발이 없는 표본과 모발이 있는 표본의 많은 쌍에서, 모발이 있는 두피와 비교했을 때 모발이 없는 두피에서 PGD2의 증가를 발견하였다(도 2E). 다른 프로스타글란딘은 모낭 성장에 활성을 가지고 있다. 모발이 없는 두피와 모발이 있는 두피에서 추가적인 프로스타글란딘 종의 수치를 측정하였다. 또한, 모발이 있는 두피와 비교했을 때 모발이 없는 두피에서 PGD2, 15-dPGJ2의 비효소 대사 산물이 증가되었다(도 2E). 그러나, 15-dPGJ2(3.8 ng/g모발이 없는 두피, 1.3 ng/g 모발이 있는 두피)의 절대 수치는PGD2(53.5 ng/g 모발이 없는 두피, 25.6 ng/g모발이 있는 두피)보다 낮았다(도 2F). 두 방법 모두 모발이 없는 두피에서 PGD2양의 증가를 입증했지만, 면역분석(53.5 대 16.3 ng/g 조직)보다 UHPLC-MS에서 모발이 없는 두피에서 PGD2의 수치가 높다는 것을 관찰했다. PGD2와 대조적으로, 모발이 없는 두피와 비교했을 때 모발이 있는 두피에서 PTGDS보다 PTGES로 합성되는 프로스타글란딘 E2 (PGE2)의 수치가 더 풍부하다(도 2E), UHPLC-MS로 모발이 없는 두피에서 3.1 ng/g이고, 모발이 있는 두피에서 6.4 ng/g이 관찰되었다(도 2F).
실시예 2
성장기의 말에 변하는 쥐모낭 형성세포 발현 Ptgds
모발 성장에서 Ptgds와 PGD2의 정상적인 생물학적 기능을 잘 이해하기 위해서, 잘 알려지고, 동기화된 쥐의 모발 주기에 대해서 관찰하였다. 동기화된 새로운 모낭 주기를 유도하는 쥐의 모발의 탈모 후, 또는 다른 나이에서 피부를 검사하면, 유전자 발현과 단백질 수치의 변동으로 상기 모낭의 주기의 다른 단계를 추적할 수 있다. 상기 동기화된 쥐의 모발 주기의 특징을 조사하는 과정에서, 쥐의 피부의 생체 검사 표본에서 생후(PN)와 관련된 무발 주기 단계를 확인할 수 있었다. 육안적 소견에서 제안된 것처럼, PN21에서 쥐의 조직학적 특징은 늦은 휴지기, 늦은 성장기의 PN35, 및 퇴화기의 PN46의 특징인 것을 확인했다. qPCR에서 측정된 것 처럼Ptgds mRNA는 성장기의 늦은 단계에서 피크였고, PN20에서 휴지기(telogen)과 비교했을 때 7배나 높았다(도 3A). 이와 같이, Ptgds 발현은 휴지기 동안 가장 낮고, 성장기에 꾸준히 증가하다가, 퇴행 단계인 퇴화기로 전이하는 시기 근처의 늦은 성장기에 피크가 된다. 퇴화기 전이에서 피크로 발현되는 Ptgds의 부근을 더 자세히 관찰하기 위해서, 퇴화기 개시로 알려진 마커인 섬유아세포성장촉진인자 5 (Fgf5)의 발현과 비교했다. 늦은 성장기에 피크인 Fgf5 발현을 휴지기와 비교하였다(도 3A). 동시에, Fgf5와 Ptgds의 피크 발현 수치는 퇴화기 개시 바로 직전의 늦은 성장기 동안 겹친다. 다음으로 Fgf5 와 Ptgds부터 다르게 발현되는 조절 유전자의 확인을 시도하였다. 이른 성장기의 마커로써, 쥐와 인간의 모발 성장을 유도하는 능력으로써 알려진 PGF2a의 수용체의 발현을 측정했다. Ptgds 와 Fgf5의 늦은 피크와 대조했을 때, 이른 성장기 또는 늦은 휴지기에서 피크인프로스타글란딘F 수용체 (Ptgfr) mRNA는 두번째 휴지기(PN52)와 비교했을 때 21배 변화가 나타나고, 첫번째 휴지기(PN20)와 비교했을 때 3배 변화를 나타난다.
Ptgds의 발현과 PGD2의 생성 사이의 일시적인 관계를 결정하기 위해, mRNA data는 도 3A에서 나타나는 동일한 쥐에서 HPLC-MS 로 PGD2수치를 측정하였다. Ptgds발현 정점 이후에 PGD2생성의 피크가 관찰했다. 퇴화기 단계동안, 이른 성장기의 가장 낮은 7.4 ng/g 조직의 PN24와 비교했을 때 PGD2은 87.6 ng/g 조직의 피크수치에 도달한다(도 3B). 이와 같이, Ptgds mRNA는 늦은 성장기의 피부에서 첫번째로 발현되고, 그 후에, PGD2는 퇴화기 동안 Ptgds 단백질을 거쳐서 생성된다.
비록 각 쥐에서 이른 모낭 주기 단계가 자연히 동기화가 되지만, 같은 나이거나 조금 어린 동물들은 모낭 주기에 관해서는 이질성을 나타낸다. 그러므로, 동물들 내에서와 마찬가지로 동물들 사이에서 모발 주기를 동기화 하기 위해 동시에 털을 뽑아온 쥐를 이용하여 상기 분석을 반복시행했다. 자발적 모발 주기의 결과를 입증했을 때, 털을 뽑은 동물에서 Ptgds mRNA 역시 변동하였다. 퇴화기에서 PGD2의 피크 직후의, 늦은 성장기에서 Ptgds mRNA는 피크였다(도 3C). PGD2 생성은 37일에 27.6 ng/g 조직의 바닥과 비교했을 때, 19.5(퇴화기)일에 199.9 ng/g 조직으로 피크였다. 또한, 탈모 기간 내에서 도 3B의 자발적인 모발 주기에서는 관찰되지 않았던, PGD2 생성의 독특한 피크가 관찰되었다. 비만세포의 탈과립과 일치하는것은 탈모 이후에 미리 관찰 되었다. 털을 뽑힌 모발 주기의 마커의 더 좁은 피크는 탈모 이후의 모낭 주기의 더 고정된 동기화를 반영한다. Ptgds의 발현을 잘 정의하기 위해서, 도 3C에서 시간경과로 사용된 동물의 피부로부터 얻은 조직 부분에서 면역 조직 화학을 시행하였다. 기모근이 있는 줄기세포가 풍부한 팽창된 부분의 아래에 있는 외모근소의 케라티노사이트의 늦은 성장기의 증거는 Ptgds이다(도 3D). 모낭의 상기 부분은 퇴화기 동안 퇴화된다.
면역조직화학에서 보여지는 상기 패턴을 입증하기 위해서, 모낭 줄기 세포 마커인 Ptgds 와 케라틴(keratin) 15(Krt15)를 위한 이중 면역 형광 라벨링을 다음으로 실시했다. 탈모 0일(휴지기) 째, 휴지기를 이어나가는 모낭의 열등하고 영구적인 부분인 팽창된 부분에서Krt15이 존재한다(도 3E). Ptgds를 확인하지 못했는데, 이것은 휴지기 동안 Ptgds의 발현의 결여를 보여주는 qPCR 데이터와 일치한다 (도 3A). 또한, qPCR와 일치하여, 17일(늦은 성장기)에 면역 조직 화학으로 탐지 가능한 Ptgds 패턴이 발견했다(도 3, D, F).더 적은 외모 근소 세포들이 -돌출세포는 아닌- Ptgds를 발현하였다. 게다가, 탈모 이후 19일 째, Krt15- 양성 케라티노사이트의 겹치지 않고, 퇴화기 모낭의 케라티노사이트는 Ptgds를 발현한다(도 3G). 상기 결과는 쥐의 모낭에서 비영구적인 케라티노사이트에서 Ptgds는 풍부하다는 것을 입증한다.
실시예 3
인간의 모낭의 비영구적인 케라티노사이트에서 PTGDS 는 발현된다
정상적인 말단의 인간의 모낭에서, 입모근 아래의 비영구적인 모낭에서 일차적으로 PTGDS의 유사 존재가 있음을 발견했다(도 4A). 그러나 염색은 많은 정상적인 인간의 모낭이 염색을 아예 보이지 않거나 조금 보이도록 가변될 수 있다(도 4B). 이는 모발이 없는 두피와 모발이 있는 두피를 비교할 때, PTGDS mRNA의 낮은 수치와 일치하며, 또한 인간 모낭 주기에서 동시성이 결여되는 것을 반영한다. 모발이 없는 인간 두피의 축소된 모낭에서, 팽창된 부위의 (도 4, C 및 E) 바깥에 있고, 몇몇 경우에 초기저 팽창 부위 (도 4D) 내에 있는 피지선과 모낭의 케라티노사이트는 PTGDS를 발현한다. 또한, 모낭 상피의 바깥의 PTGDS가 관찰 되는 것은 진피에서 PGD2의 잠재적인 요인이 있다는 것을 보여준다(도 4, E 및 F). 퇴화기에 있는 모낭에서, 퇴화된 모낭의 이전 위치인 섬유질 띠 내에 있는 비만세포에 PTGDS가 있다(도 4E). 모낭이 퇴행하기 시작할 때, 모낭의 전이 부분에서 리포칼린 PTGDS와 그것의 산물인 PGD2가 우세하게 발현되는 것을 쥐와 인간의 결과가 입증한다. 이러한 발견은 모낭 성장을 저해하는 PGD2 경로인 가설과 일치한다.
실시예 4
AGA 표현형 모사한 피부에서 형질전환된 쥐는 Ptgs2 를 과발현한다
쥐의 모낭에서 PGD2의 추정했을 때 제한적인 역할과 인간의 모발이 없는 두피에서 PGD2의 높아진 수치와의 상관관계를 고려하면, 피부에서 PGD2의 높아진 수치를 지닌 쥐가 AGA의 특징이 된다고 가정했다. Ptgs2(사이클로옥시게나제 2, 프로스타글란딘G/H 합성효소)는 Ptgds를 상류로 하는 효소기 때문에, Ptgs2를 과발현하는 쥐는 증가된 PGD2 수치를 나타낼 것이라고 더 가정했다. 표피에서 Ptgs2가 과발현된 형질 전환된 쥐는 이전에 발암연구에서 연구되어왔다. K14-Ptgs2 형질 전환된 쥐의 모낭은 퇴화기로 이르게 진입하였고, 상기 쥐들은 탈모증이 생겼고 피지선이 확장되었다고 한다.
K14-Ptgs2 쥐의 모낭과 피부를 더 분석하였다. 상기 쥐는 탈모증이 있는데, 이것은 비교군과 비교했을 때 정상 쥐의 털가죽에서 감소로 확인하였다(도 5, F5 A 및 B). 조직학에 의하여, 또한 모낭 근처에서 군집해 있는 확장된 세보사이트로 알려진 피지선 비대증을 발견하였다(도 5, C 및 D). K14-Ptgs2 쥐의 모낭은 대조군과 비교했을 때 축소되었고(도 5, C 및 D), 이 모낭은 인간의 모발이 없는 두피의 축소된 모낭과 뚜렷한 유사성이 있다. K14-Ptgs2 쥐의 탈모증 피부에 프로스타글란딘 함량을 알아내기 위해서, 모낭 주기의 성장기 단계 동안 HPLC-MS를 이용하여 프로스타글란딘 수치를 측정하였다. 이전에 생체 검사한 쥐의 피부에서 PGE2 와 PGF2a 함량을 측정하는 면역 분석을 사용했을 때 나타난 것처럼, 나이가 일치하는 야생형 대조군과 비교했을 때, K14-Ptgs2 쥐에서 PGE2는 증가하였다. 또한 야생형과 K14-Ptgs2 쥐에서 모두 PGD2는 증가했고, PGE2보다 더 풍부했다. 대조군과 비교했을 때 K14-Ptgs2 쥐에서 15-dPGJ2는 증가했고, 비록 기준값이 낮지만(5.7 ng/g 조직) 가장 큰 배수 증가(~14배)를 보였다. 낮은 수치(18.4 ng/g 조직)의 PGF2a을 발견했고, 정상 피부에서 하는 것이 알려지지 않은 프로스타시클린(6k-PGF1a)와 트롬복산(TxB2) 는 없었다. 함께, 상기 쥐의 대머리 표현형은, 모발 성장의 프로모터로 알려진 PGE2의 존재에도 불구하고, 모낭에서 압도적인 PGD2와 15-dPGJ2 저해 효과의 결과로 보여진다.
실시예 5
쥐와 인간의 모낭에서 모발 성장을 저해하는 15- dPGJ2 와 PGD2
세포 사멸 퇴화기 단계 전에 PGD2의 일시적인 피크와, 다른 세포 형에서 세포 사멸을 유도하는 PGD2의 대사 산물인 15-dPGJ2의 능력을 고려하여, 신생아의 포피로부터 유래한 케라티노사이트의 초기 세포 배양에서 프로스타글란딘의 효과를 시험하였다. 15-dPGJ2가 세포 사멸을 유도하는 것을 원형질 막 기포 형성과 세포 후퇴/ 수축에 의해서 증명하였다. 또한 15-dPGJ2는 세포 밀도, 세포 분열, 및 살아있는 세포의 숫자를 줄인다. 아마도, 케라티노사이트의 기원이 모낭이 아니기 때문에, PGD2는 상기 세포에 어떤 영향도 미치지 않는다. 그러나, 인간의 케라티노사이트에서 15-dPGJ2는 사멸 세포의 죽음의 특징인 보조G1 DNA양과 활성화된 카스파제 3를 증가한다. 그러므로, 적어도 15-dPGJ2, PGD2는 아닐지라도, 생체 내에서 모발 성장을 직접적으로 저해할 수 있다는 가정을 세웠다. 모낭 주기와 동기화 하기위해 털을 뽑힌 C57BL/6 쥐의 등 피부에 국소적으로 15-dPGJ2는 적용된다. 탈모 후에 8일이 시작하고 하루 걸러 이어질 때, 15 dPGJ2 또는 아세톤 비히클10 mg을 적용했다. 탈모 후 4, 12, 14, 및 16일 되었을 때, 머리 길이를 측정했다. 14일부터 16일까지, 처리된 부위는 비히클 처리된 동물 F6보다 길이가 짧았다 (도 6A). 최소한 효과있는 투여량을 결정하기 위해서, 1 mg 의 PGD2 와 15-dPGJ2을 상기와 같이 적용하는 것을 시험해보았고, 탈모 후 20일 째 머리의 길이를 측정하였다. PGD2는 모발 성장을 저해하였지만, 15-dPGJ2보다 적은 범위였다(도 6B).
조직학 검사를 통해서 모낭 주기 큰 변화의 증거를 찾지 못했다. PGD2-매개의 모발 성장 저해제를 증명하고, 다음으로 이 효과에 원인인 수용체를 증명하려고했다. PGD2의 두가지 표준 수용체는 PTGDR(DP-1으로 알려져있다) 및 GPR44(DP-2)이다. 다른 부위들 중에서 모낭에서 외모근소 케라티노사이트로부터 DP-1와 DP-2가 과발현되는 걸로 알려져있다. 그러므로, 대조군으로 Ptgds 결핍 쥐를 사용해서 Ptgdr 결핍 쥐와 Gpr44 결핍 쥐에서 모발 성장을 저해하는 PGD2의 능력을 시험했다. Ptgds 와 Ptgdr 결핍 쥐는 모발이 자라는 것을 저해하는 것에 취약한 반면에, Gpr44 결핍쥐는 PGD2의 저해 효과에 저항력이 있었다(도 6C). 상기 데이터에서 PTGDR보다 GPR44가 PGD2-매개의 모발 성장 저해제의 수용체인 것을 보여주고, 그러므로 AGA의 치료 표적이 될 수 있다.
인간 모발 성장에서 PGD2의 효과를 시험하기 위해서, 7일동안 배지에서 유지된 인간의 모낭을 외식하였다. 점점 늘려가는 양의(0부터 10 mM까지) PGD2, 15-dPGJ2, 또는 비히클를 배지에 추가하였고, 모발의 길이를 측정하였다(도 6D). 5 mM부터 시작해서, PGD2와 15-dPGJ2는 상당히 모발성장을 저해했다. 10 mM에, 비히클보다 PGD2처리한 모발은 ± 5%가 짧았고, 반면에 10 mM 의 15-dPGJ2는 완전히 모든 모발 성장을 저해하였다. 다양한 PGD2 유사체를 시험했고, 모발 성장을 저해하는 능력이 있음을 발견했다. GPR44 작동성은 모발 성장을 저해하는 능력과 연관이 있다(도 7). 예를 들어, 약한 효능제 11-디옥시-11-메틸렌 PGD2는 화합물의 가장 낮은 활성(모발 성장 저해)이 검증되었다. GPR44는 리간즈에 나노몰 친화성을 가지고 있지만, 이 실험에 전형적으로는, 조직 침투성과 화합물 분해를 극복하기 위해서 고농도가 필요하다. 그래서, 쥐와 인간의 경우, PGD2와 15-dPGJ2는 GPR44 수용체를 통해서 모발 성장을 저해한다.
AGA를 지닌 남성들의 모발이 있는 두피와 비교했을때, 모발이 없는 두피에서 프로스타글란딘 D2 합성효소(PTGDS)는 mRNA 와 단백질 수치가 증가하는 것을 확인했다. PTGDS 효소 활동의 산물인, 프로스타글란딘 D2(PGD2)는 대머리의 두피에서 유사하게 증가한다. 쥐의 정상적인 모낭 주기동안, 퇴행 단계 이전에 즉각적으로 Ptgds와 PGD2 수치는 증가하는데, 이것은 모발 성장을 저해하는 효과를 제안한다. 외식된 인간의 모낭에서 및 국소적으로 쥐에게 적용했을 때 PGD2가 모발 성장을 저해하는 것을 확인할 수 있다. 모발 성장 저해를 위해서는 PGD2 수용체 G 단백질(heterotrimeric guanine nucleotide)연결 수용체 44(GPR44)가 필요하지만, PGD2 수용체 1(PTGDR)는 필요하지 않다. 더욱이, 피부에 프로스타글란딘-엔도페록시드 합성효소 2 발현을 목표로 하는 형질전환된 쥐, K14-Ptgs2에서 피부의 PGD2의 증가된 수치를 보여주고, 인간 AGA의 전형적인 특징인 탈모증, 모낭축소, 및 갑상선 비대증이 나타난다.
광범위한 발명의 영역에서 벗어나지 않고 상기 기술된 실시예에 맞출 수 있는 변화들을 당업자는 인지할 것이다.
그러므로, 본 발명은 개시된 특정한 실시예에 한정되지 않지만, 청구된 특허 범위에 정의된 바와 같이, 본 발명의 사상 및 카테고리 내에 있는 수정이 포함된다.

Claims (43)

  1. DP-2 효능제 또는 길항제의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 대상체의 모발 성장을 조절하는 방법.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 투여하는 것은 국소적으로 시행되는, 방법.
  3. 청구항 1에 있어서, 모발 성장을 조절하는 것은 모발 성장을 저해하는 것이고, 이는 DP-2 효능제를 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  4. 청구항 1에 있어서, 모발 성장을 조절하는 것은 모발 성장을 촉진하는 것이고, 이는 DP-2 길항제를 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  5. DP-2 길항제의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체의 모발 성장을 촉진하는 방법.
  6. 청구항 5에 있어서, 상기 투여하는 것은 국소적으로 시행되는, 방법.
  7. 청구항 5에 있어서, 상기 방법이 상기 대상체에게 모발 성장을 조절하는 다른 성분을 투여하는 것을 추가로 포함하며, 여기서 상기 다른 성분이 피나스테리드 또는 미녹시딜인, 방법.
  8. 청구항 5에 있어서, 상기 방법이 상기 대상체에게 모낭을 이식하는 것을 더 포함하는, 방법.
  9. 청구항 5에 있어서, 상기 방법이 상기 대상체의 피부의 진피 또는 표피를 제거하는 것을 더 포함하는, 방법.
  10. 청구항 5에 있어서, 상기 대상체가 남성형 탈모증을 가진, 방법.
  11. 청구항 5에 있어서, 상기 대상체가 원판상 홍반성 루푸스, 선천성 소모증, 모공성 편평태선, 또는 흉터성 탈모과 연관된 모발 손실을 가진, 방법.
  12. 청구항 5에 있어서, DP-2 길항제는 DP-1과 관련하여 선택적인 DP-2 길항제인, 방법.
  13. 청구항 5에 있어서, 길항제는 100 nM 이하의 DP-2에 대한 IC50를 갖는, 방법.
  14. 청구항 5에 있어서, 상기 DP-2 길항제는 라마트로반 또는 이의 유사체인, 방법.
  15. 청구항 5에 있어서, 상기 DP-2 길항제는 인돌 아세트산 유도체인, 방법.
  16. 청구항 5에 있어서, 상기 DP-2 길항제는 페닐 아세트산 유도체인, 방법.
  17. 청구항 5에 있어서, 상기 DP-2 길항제는 테트라하이드로퀴놀린 유도체인, 방법.
  18. DP-2 효능제의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체의 모발 성장을 저해하는 방법.
  19. 청구항 18에 있어서, 상기 투여하는 것은 국소적으로 시행되는, 방법.
  20. 청구항 18에 있어서, 상기 방법이 상기 대상체의 피부에서 모발을 제거하는 것을 더 포함하는, 방법.
  21. 청구항 18에 있어서, 상기 DP-2 효능제가 DP-1과 관련하여 선택적인 DP-2 효능제인, 방법.
  22. 청구항 18에 있어서, 상기 DP-2 효능제가 15(R)PGD2, 15(R)-15-메틸 PGD2 및, 13,14-디하이드로-15-옥소 PGD2로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  23. 청구항 18에 있어서, 상기 DP-2 효능제가 100 nM 이하의 DP-2에 대한 EC50를 갖는 방법.
  24. 대상체의 모발 성장을 조절하기 위한 유효량의 DP-2 효능제 또는 길항제를 포함하는, 대상체의 모발 성장을 조절하기 위한 조성물.
  25. 청구항 24에 있어서, 상기 조성물은 상기 DP-2 효능제 또는 길항제의 국소적 제형인, 조성물.
  26. 대상체의 모발 성장을 촉진하는 유효량의 DP-2 길항제를 포함하는, 대상체의 모발 성장을 촉진하기 위한 조성물.
  27. 청구항 26에 있어서, 상기 조성물은 DP-2 길항제의 국소적 제형인, 조성물.
  28. 대상체의 남성형 탈모증, 또는 대머리, 또는 탈모 치료를 위한 유효량의 DP-2 길항제를 포함하는, 대상체의 남성형 탈모증, 또는 대머리, 또는 탈모 치료용 조성물.
  29. 청구항 28에 있어서, 상기 조성물은 DP-2 길항제의 국소적 제형인, 조성물.
  30. 대상체의 모발 성장을 저해하는 유효량의 DP-2 효능제를 포함하는, 대상체의 모발 성장을 저해하기 위한 조성물.
  31. 청구항 30에 있어서, 상기 조성물은 상기 DP-2 효능제의 국소적 제형인, 조성물.
  32. 남성형 탈모증 치료용 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 존재 및 프로스타글란딘 D2 존재하에 DP-2 활성을 측정하고, 상기와 동일한 조건하에서, 남성형 탈모증 치료용 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 부재 및 프로스타글란딘 D2 존재하에 DP-2 활성을 측정하는 것을 포함하며, 여기서, 상기 화합물의 부재시보다 존재하에서 DP-2 활성이 더 낮은 것은 상기 화합물이 남성형 탈모증 치료에 있어 잠재적인 제제임을 나타내는, 남성형 탈모 치료에 있어 잠재적 제제로서 화합물을 스크리닝하는 방법.
  33. 청구항 32에 있어서, 상기 방법은 남성형 탈모증 치료용 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 존재 및 프로스타글란딘 D2의 존재 하에 DP-1 활성을 측정하고, 상기와 동일한 조건에서, 남성형 탈모증 치료용 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 부재 및 프로스타글란딘 D2의 존재 하에 DP-1 활성을 측정하는 것을 더 포함하며, 여기서, DP-2의 활성이 더 낮고, DP-1 활성은 상기 화합물의 존재 및 부재하에서 거의 동일한 것이 상기 화합물이 남성형 탈모증 치료에 잠재적 제제임을 나타내는 방법.
  34. 모발 성장을 촉진하는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 존재 및 프로스타글란딘 D2의 존재 하에, DP-2의 활성을 측정하고, 상기와 동일한 조건에서, 모발 성장을 촉진하는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 부재 및 프로스타글란딘 D2의 존재 하에, DP-2의 활성을 측정하는 것을 포함하고, 여기서, 상기 화합물의 부재시 보다 상기 화합물의 존재시 DP-2의 활성이 더 낮은 것은 상기 화합물이 모발 성장을 촉진하는 잠재적 제제인 것을 나타내는, 모발 성장을 촉진하는 잠재적 제제인 화합물을 스크리닝하는 방법.
  35. 청구항 34에 있어서, 상기 방법은 모발 성장을 촉진시키는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 존재 및 프로스타글란딘 D2의 존재 하에 DP-1 활성을 측정하고, 상기와 동일한 조건에서, 모발 성장을 촉진시키는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 부재 및 프로스타글란딘 D2의 존재 하에 DP-1 활성을 측정하는 것을 더 포함하며, 여기서, DP-2의 활성이 더 낮고, DP-1 활성은 상기 화합물의 존재 및 부재하에서 거의 동일한 것이 상기 화합물이 모발 성장을 촉진시키는 잠재적 제제임을 나타내는, 방법.
  36. 모발 성장을 저해하는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 존재 하에 DP-2의 활성을 측정하고, 상기와 동일한 조건에서, 프로스타글란딘 D2의 존재 하에 DP-2의 활성을 측정하는 것을 포함하고, 여기서, 상기 모발 성장을 저해하는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 DP-2의 활성이 프로스타글란틴 D2의 존재 시 DP-2 활성과 같거나 이보다 큰 것이 상기 화합물이 모발 성장을 저해하는 잠재적 제제인 것을 나타내는, 모발 성장을 저해하기 위한 잠재적 제제인 화합물을 스크리닝 하는 방법.
  37. 청구항 36에 있어서, 상기 방법이 모발 성장을 저해시키는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 존재하에 DP-1 활성을 측정하고, 상기와 동일한 조건에서, 프로스타글란딘 D2의 존재 하에 DP-1 활성을 측정하는 것을 더 포함하며, 여기서, 상기 모발 성장을 저해하는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 DP-2의 활성이 프로스타글란틴 D2의 존재 하에 DP-2 활성과 같거나 이보다 더 크고, 상기 모발 성장을 저해하는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 DP-1 활성이 프로스타글란틴 D2의 존재 하에 DP-1 활성과 같거나 이보다 더 작은 것이 모발 성장을 저해시키는 잠재적 제제임을 나타내는, 방법.
  38. 복수개의 화합물들 중 각각의 화합물에 대해, 남성형 탈모증 치료용 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 존재 및 프로스타글란딘 D2 존재하에 DP-2 활성을 측정하고, 상기와 동일한 조건하에서, 남성형 탈모증 치료용 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 부재 및 프로스타글란딘 D2 존재하에 DP-2 활성을 측정하는 것을 포함하며, 여기서, 상기 화합물의 부재시보다 존재하에서 DP-2 활성이 더 낮은 것은 상기 화합물이 남성형 탈모증 치료에 있어 잠재적인 제제임을 나타내는, 남성형 탈모 치료에 있어 잠재적 제제들로서 복수개의 화합물들을 스크리닝하는 방법.
  39. 청구항 38에 있어서, 상기 방법은, 복수개의 화합물들 중 각각의 화합물에 대해, 남성형 탈모증 치료용 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 존재 및 프로스타글란딘 D2의 존재 하에 DP-1 활성을 측정하고, 상기와 동일한 조건에서, 남성형 탈모증 치료용 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 부재 및 프로스타글란딘 D2의 존재 하에 DP-1 활성을 측정하는 것을 더 포함하며, 여기서, DP-2의 활성이 더 낮고, DP-1 활성은 상기 화합물의 존재 및 부재하에서 거의 동일한 것이 상기 화합물이 남성형 탈모증 치료에 잠재적 제제임을 나타내는 방법.
  40. 복수개의 화합물들 중 각각의 화합물에 대해, 모발 성장을 촉진하는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 존재 및 프로스타글란딘 D2의 존재 하에, DP-2의 활성을 측정하고, 상기와 동일한 조건에서, 모발 성장을 촉진하는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 부재 및 프로스타글란딘 D2의 존재 하에, DP-2의 활성을 측정하는 것을 포함하고, 여기서, 상기 화합물의 부재시 보다 상기 화합물의 존재시 DP-2의 활성이 더 낮은 것은 상기 화합물이 모발 성장을 촉진하는 잠재적 제제인 것을 나타내는, 모발 성장을 촉진하는 잠재적 제제들로서 복수개의 화합물들을 스크리닝하는 방법.
  41. 청구항 40에 있어서, 상기 방법은, 복수개의 화합물들 중 각각의 화합물에 대해, 모발 성장을 촉진시키는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 존재 및 프로스타글란딘 D2의 존재 하에 DP-1 활성을 측정하고, 상기와 동일한 조건에서, 모발 성장을 촉진시키는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 부재 및 프로스타글란딘 D2의 존재 하에 DP-1 활성을 측정하는 것을 더 포함하며, 여기서, DP-2의 활성이 더 낮고, DP-1 활성은 상기 화합물의 존재 및 부재하에서 거의 동일한 것이 상기 화합물이 모발 성장을 촉진시키는 잠재적 제제임을 나타내는, 방법.
  42. 복수개의 화합물들 중 각각의 화합물에 대해, 모발 성장을 저해하는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 존재 하에 DP-2의 활성을 측정하고, 상기와 동일한 조건에서, 프로스타글란딘 D2의 존재 하에 상기 DP-2의 활성을 측정하는 것을 포함하고, 여기서, 상기 모발 성장을 저해하는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 존재 시 상기 DP-2의 활성이 프로스타글란틴 D2의 존재 시의 상기 DP-2 활성과 같거나 이보다 큰 것이 상기 화합물이 모발 성장을 저해하는 잠재적 제제인 것을 나타내는, 모발 성장을 저해하기 위한 잠재적 제제들로서 복수개의 화합물들을 스크리닝하는 방법.
  43. 청구항 42에 있어서, 상기 방법이 복수개의 화합물들 중 각각의 화합물에 대해, 모발 성장을 저해시키는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 존재하에 DP-1 활성을 측정하고, 상기와 동일한 조건에서, 프로스타글란딘 D2의 존재 하에 DP-1 활성을 측정하는 것을 더 포함하며, 여기서, 상기 모발 성장을 저해하는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 DP-2의 활성이 프로스타글란틴 D2의 존재 하에 DP-2 활성과 같거나 이보다 더 크고, 상기 모발 성장을 저해하는 잠재적 제제로 추정되는 화합물의 DP-1 활성이 프로스타글란틴 D2의 존재 하에 DP-1 활성과 같거나 이보다 더 작은 것이 모발 성장을 저해시키는 잠재적 제제임을 나타내는, 방법.
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