JP7046086B2 - Ｍｐｃ阻害剤を使用する育毛を促進するための組成物及び方法 - Google Patents

Description

関連出願
本出願は、２０１６年８月２６日に出願された米国仮特許出願第６２／３８０，２０５号及び２０１７年２月２４日に出願された米国仮特許出願第６２／４６３，２３２号の優先権の利益を主張し、参照によりその全体が本明細書に援用される。

世界で４億を超える人々が脱毛症に罹患している。男性型脱毛症は５０歳以上の男性人口の約５０％に発症する。利用可能な育毛治療によって短く縮れた毛髪が生えるが、継続的な適用が必要となる。すなわち、一度治療を停止すると、新しい育毛が終わり、脱毛が再開する。

脱毛症の治療のため、Ｆｏｏｄ＆Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ（ＦＤＡ）によって現在承認されている２つの薬は、ＲＯＧＡＩＮＥ（登録商標）（局所ミノキシジル）及びＰＲＯＰＥＣＩＡ（登録商標）（経口フィナステリド）である。ミノキシジルは女性型脱毛症を治療する唯一のＦＤＡ承認薬であるが、頭頂部の脱毛に作用するだけである。フィナステリドは妊婦に対して先天性欠損症を引き起こし得るため、男性のみに使用される。フィナステリドは性の健康にも副作用がある。

より副作用を少なく、育毛を加速、促進または回復する組成物及び方法の改良が必要である。

本開示の一態様は、育毛を加速、促進または回復する方法であって、それを必要とする対象に有効量の式（Ｉ）：

の化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む方法に関する。

いくつかの実施形態では、禿頭症、脱毛、毛髪菲薄化及び脱毛症から選択される症状を治療する方法が本明細書に開示される。

本開示の他の態様は、式（Ｉ）：

の化合物またはその薬学的に許容される塩、ならびに皮膚への局所塗布に適した担体または賦形剤を含む組成物に関する。

いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、本明細書に記載されるような症状の治療用薬剤の製造に使用され得る。

毛包幹細胞ニッチにおいて乳酸脱水素酵素活性が高いことを示す。毛周期のＬｄｈａ発現に対する免疫組織化学（ＩＨＣ）染色によって、毛包幹細胞（ＨＦＳＣ）ニッチ、つまり角括弧で示されたバルジに限定されるＬｄｈａタンパク質が示される。表皮における総Ｌｄｈに対するＩＨＣ染色によって、毛包間表皮、毛漏斗、脂腺及び角括弧内に示された毛包バルジにおいて発現が示される。連続切片上のＳｏｘ９に対するＩＨＣ染色によって、ＨＦＳＣ集団の境界が画定される。スケールバーは２０μｍである。 ＦＡＣＳで単離したＨＦＳＣ集団（α６ｌｏｗ／Ｃｄ３４^＋及びα６ｈｉ／Ｃｄ３４^＋）対表皮全体（Ｅｐｉ）に関する免疫ブロット法によって、幹細胞ニッチにおいてＬｄｈａの発現差異が示される。Ｓｏｘ９はＨＦＳＣのマーカーであり、β－アクチンはローディングコントロールである。 表皮におけるＬｄｈ酵素活性に対する比色アッセイによって、バルジ（角括弧）及び表皮下の筋肉層（角括弧）において最も高い活性が示される。この活性は、毛周期の異なる段階でバルジにおいて高かった。活性は暗色で示され、灰色は核の対比染色である。色素で着色されたマウスの発育過程の毛幹は、ここで観察されるようにメラニンの濃い沈着を示すが、毛幹はＬｄｈ活性を示すいかなる暗色の染色も示さなかった。 ソートした細胞集団におけるＬｄｈ活性は、プレートリーダーに基づくアッセイを使用して測定される。表皮細胞（Ｅｐｉ）及び繊維芽細胞（ＦＢ）と比べて、２つの別々のＨＦＳＣ集団（α６ｌｏｗ／Ｃｄ３４^＋及びα６ｈｉ／Ｃｄ３４^＋）において最も高いＬｄｈ活性を示す。各バーは各細胞型に対する平均シグナルを表し、ここでｎは３つの個別の実験からプールされたマウス９匹である。平均±ｓ．ｅ．ｍとして示される。各細胞型対表皮細胞について、対応のあるｔ検定が行われ、Ｐ＜０．０５が示される。 ＨＦＳＣ及び表皮細胞は、休止期（５０日目）にＦＡＣＳによって単離され、代謝物が抽出され、ＬＣ－ＭＳによって分析された。ヒートマップは、各々の３匹の動物に由来する細胞を使用した個別の実験において、異なるマウスから単離された細胞に由来する解糖及びＴＣＡ回路の代謝物の相対レベルを示す。Ｇ６Ｐ－Ｆ６Ｐはグルコース－６－リン酸及びフルクトース－６－リン酸であり、ＦＢＰはフルクトース－ビスリン酸であり、ＤＨＡＰはジヒドロキシアセトンリン酸であり、３ＰＧは３－ホスホグリセリン酸であり、αＫＧはα－ケトグルタル酸である。アスタリスクは、表皮細胞とＨＦＳＣの間の代謝物レベルの有意差を示す。 ソートした幹細胞集団におけるＬｄｈ活性はプレートリーダーに基づくアッセイを使用して測定される。休止期から成長期への移行（Ｔｅｌ－Ａｎａ）において幹細胞が活性化されると、高いＬｄｈ活性を示す。 休止状態のＨＦＳＣ（５０日目）及び活性化したＨＦＳＣ（７０日目）から抽出された解糖及びＴＣＡ回路の代謝物の相対レベルを示すヒートマップ。アスタリスクは、ＨＦＳＣの代謝物レベル間の有意差を示す。 休止状態のＨＦＳＣ（休止期、５０日目）、活性化したＨＦＳＣ（休止期－成長期、７０日目）及び休止状態に戻ったＨＦＳＣ（成長期、９０日）から抽出された解糖及びＴＣＡ回路の代謝物の相対レベルを示すヒートマップ。Ｐｙｒはピルビン酸であり、Ｌａｃは乳酸である。 ＨＦＳＣ対表皮全体のＲＮＡ－ｓｅｑトランスクリプトームデータの遺伝子セットエンリッチメント解析（ＧＳＥＡ）^１１は、ＨＦＳＣにおける解糖系遺伝子に対するエンリッチメントを示す（正規化されたエンリッチメントスコア（ＮＥＳ）＝１．７２）。 ＨＦＳＣ対表皮全体のマイクロアレイトランスクリプトームデータに関するＧＳＥＡは、ＨＦＳＣにおける解糖系遺伝子に対するエンリッチメントを示す（ＮＥＳ＝１．４５）。 休止期または休止期－成長期移行（Ｔｅｌ－Ａｎａ）時、ソートしたＨＦＳＣ由来のＲＮＡ－ｓｅｑデータから、Ｌｄｈａの誘導が示される。 Ｌｄｈ活性の欠失がＨＦＳＣ活性化を遮断したことを示す。Ｌｄｈａ^＋／＋動物では、剃毛及び５０日目の観察の開始によって測定すると、同調的に約７０日目で毛周期（成長期）に移行した。ミフェプリストンで治療されたＫ１５ＣｒｅＰＲ；Ｌｄｈａ^{ｆｌ／ｆｌ}動物は、成長期への移行において欠失を示した。 Ｋ１５ＣｒｅＰＲ；Ｌｄｈａ^＋／＋動物は毛包及び皮下組織の肥厚の下方成長に代表される通常の成長期に移行したことを示す皮膚症状である。一方、Ｌｄｈａ^{ｆｌ／ｆｌ}動物はどちらでもなく、休止期のままであったことを示す皮膚症状である。 Ｌｄｈ酵素活性アッセイによって、Ｋ１５ＣｒｅＰＲ；Ｌｄｈａ^＋／＋動物のＨＦＳＣにおいて強い活性が示されたが、Ｋ１５ＣｒｅＰＲ；Ｌｄｈａ^{ｆｌ／ｆｌ}動物ではＨＦＳＣにおいてその活性が不足していた（ＨＦＳＣニッチは角括弧で示した）。 Ｋ１５ＣｒｅＰＲ；Ｌｄｈａ^＋／＋マウス対Ｋ１５ＣｒｅＰＲ；Ｌｄｈａ^{ｆｌ／ｆｌ}マウスにおける休止期、休止期－成長期移行及び成長期の毛包のパーセンテージを示すグラフ。 Ｌｄｈａ^＋／＋ＨＦＳＣ及びＬｄｈａ^{ｆｌ／ｆｌ}ＨＦＳＣから抽出され、ＬＣ－ＭＳで測定された解糖及びＴＣＡ回路の代謝物の相対レベルを示すヒートマップ。アスタリスクは、ＨＦＳＣの代謝物レベル間の有意差を示す。 Ｌｄｈａ^{ｆｌ／ｆｌ}ＨＦＳＣにおいて、増殖マーカーであるＫｉ－６７に対する免疫組織化学染色はない。Ｌｄｈａ^{ｆｌ／ｆｌ}ＨＦＳＣにおいて、新規な毛周期の開始時ＨＦＳＣにおけるマーカーであるホスホ－Ｓ６はなかった。Ｌｄｈａに対する染色によって、ＨＦＳＣにおいて特異的な欠失が示された。角括弧はバルジを示す。Ｓｏｘ９に対する染色によって、ＨＦＳＣがまだＬｄｈａ欠失ニッチに存在したことが示される。スケールバーは２０μｍである。 Ｌｇｒ５ＣｒｅＥＲにより制御されると、特異的にＨＦＳＣにおいてＬｄｈａが欠失した動物は、成長期への移行で重大な欠失を示す。右図は、Ｌｇｒ５ＣｒｅＥＲ；Ｌｄｈａ^{ｆｌ／ｆｌ}動物がほとんど休止期のままだったことを示す皮膚症状である。スケールバーは１００μｍを示す。 表皮における酵素活性アッセイによって、Ｌｇｒ５ＣｒｅＥＲ；Ｌｄｈａ^{ｆｌ／ｆｌ}動物がＨＦＳＣにおいてその活性が不足していたことが示される。スケールバーは２０μｍを示す。 表示したマウス由来の代謝物のＬＣ－ＭＳ分析。 毛包幹細胞におけるＭｐｃ１の欠失が新規な毛周期を活性化させたことを示す。Ｍｐｃ１^{ｆｌ／ｆｌ}動物では色素沈着及び育毛を示し、これは９週目の成長期サイクルへの移行と一致した。Ｍｐｃ１^＋／＋動物は、これほど早く色素沈着及び育毛を示さなかった。 Ｍｐｃ１^＋／＋対Ｍｐｃ１^{ｆｌ／ｆｌ}マウスにおけるＨＦＳＣバルジ集団のＦＡＣＳ単離に続くウエスタンブロット法によって、幹細胞ニッチにおいてＭｐｃ１タンパク質の欠失の成功が示された。β－アクチンはローディングコントロールである。 ソートしたＨＦＳＣ集団のＬｄｈ活性に対するプレートリーダーアッセイによって、Ｍｐｃ１^＋／＋ＨＦＳＣに比べてＭｐｃ１^{ｆｌ／ｆｌ}ＨＦＳＣにおいて高い活性が示された。 右の表現型の定量化によって、Ｍｐｃ１^＋／＋マウス対Ｍｐｃ１^{ｆｌ／ｆｌ}マウスの休止期、休止期－成長期移行及び成長期における毛包のパーセンテージを示す。 野生型対Ｍｐｃ１欠失皮膚に関する組織診断によって、Ｍｐｃ１の非存在下での成長期の誘導が示された。スケールバーは１００μｍを示す。 新規な毛周期の開始時、ＨＦＳＣにおいて単に活性である増殖マーカーであるＫｉ－６７に対する免疫組織化学染色によって、８．５週目でＭｐｃ１^{ｆｌ／ｆｌ}のＨＦＳＣにおいてのみ存在することが示され、これは新規な毛周期への移行が加速されたことと一致する。新規な毛周期の開始時、ＨＦＳＣにおいて単に活性である別のマーカーであるホスホ－Ｓ６は、Ｍｐｃ１^{ｆｌ／ｆｌ}のＨＦＳＣにおいてのみ存在した。Ｓｏｘ９に対する染色によって、ＨＦＳＣがＭｐｃ１欠失ニッチに存在したことが示される。 Ｌｇｒ５ＣｒｅＥＲ対立遺伝子を有するマウスのＭｐｃ１の欠失は、毛周期の強い誘導を示す。赤い囲みは新しい育毛の部分を示すことに留意されたい。 ３匹の個別の同腹仔に対する、指示した遺伝子型における色素沈着の定量化。 式（Ｉ）の化合物（２０μＭ）で局所的に治療された動物では、色素沈着及び育毛を示し、これは治療の８日後、成長期に移行したことを示す。治療の１４日後、毛の全面外被によって示される完全な成長期が達成された。ビヒクルコントロールで局所的に治療されたマウスは、治療の１２日後でさえ色素沈着も育毛も示さなかった。右図は、式（Ｉ）の化合物で治療された動物が毛包及び皮下組織の肥厚の下方成長に代表される８週目で成長期の加速に移行したことを示す皮膚症状である。一方、ビヒクルコントロールで治療された動物はどちらでもなく、休止期のままであったことを示す皮膚症状である。 ビヒクル対式（Ｉ）の化合物で治療されたマウスにおける、時間対観察された表現型を示すグラフ。 表皮のＬｄｈ酵素活性アッセイによって、ビヒクルコントロールで治療された動物及び式（Ｉ）の化合物で治療された動物のＨＦＳＣにおいて強い活性が示された。Ｌｄｈ酵素活性はまた、式（Ｉ）の化合物で治療された動物の毛包間表皮に見られた。Ｌｄｈ活性は暗色の染色で示され、灰色はヌクレアファストレッド対比染色である。 ４８時間、式（Ｉ）の化合物で治療された皮膚から単離されたＨＦＳＣの乳酸のメタボローム解析。 バルジから細胞の２つの集団を単離するために使用されるソーティング戦略を示す。この特定のソートは、図１ｄのウエスタンブロット法によって示されるタンパク質試料を単離するために用いた。 Ｌｄｈａを特異的に認識する抗体（上）及び乳酸脱水素酵素（Ｌｄｈ）タンパク質の複数のイソ型を認識する抗体（下）を使用する免疫組織化学（ＩＨＣ）染色を示す。スケールバーは２０μｍである。 Ｋｉ－６７に対する染色によって、毛周期の種々の段階で分裂細胞が標識化される。角括弧はＨＦＳＣニッチを示す。 上図は、比色分析のＬｄｈ酵素活性アッセイの検証を示す。最も高いＬｄｈ酵素活性は、ＨＦＳＣバルジ及び筋肉において観察された。活性は暗色で示され、灰色はヌクレアファストレッド対比染色である。乳酸基質の非存在下で検出可能な活性（暗色）は存在しなかった。下図は、比色分析のＬｄｈ酵素活性アッセイの更なる検証を示す。乳酸基質を有する染色溶液を添加する前に、皮膚を塩酸（ＨＣｌ）で治療することによって酵素活性を抑制した。Ｌｄｈ活性（暗色）は検出されなかった。酵素活性がＨＣｌによって抑制されない皮膚は、ＨＦＳＣバルジ及び筋肉において最も高いＬｄｈ酵素活性を示す。スケールバーは５０μｍである。 休止期－成長期移行におけるＨＦＳＣが実際にこのような移行であったかを検証するためのＲＮＡ－ｓｅｑデータの分析。休止期－成長期移行は、Ｓｈｈ（Ｇｌｉファクターがターゲットである）及びＷｎｔ（Ｌｅｆ１、Ａｘｉｎ、Ｃｃｎｄ１がターゲットである）シグナル伝達によって起こり、増殖の上昇（Ｋｉ６７及びＰｃｎａ）と相関することが知られている。また、Ｓｏｘ４は休止期－成長期移行のレギュレーターとして先に確認された。 休止期（５０日目）時、ミフェプリストンで治療されたＫ１５ＣｒｅＰＲ；Ｌｄｈａ^{ｆｌ／ｆｌ}動物は６ヵ月間発育させることができた。完全に外被が元のように成長したコントロール動物と比べて、毛の再成長が完全であるＫ１５ＣｒｅＰＲ；Ｌｄｈａ^{ｆｌ／ｆｌ}マウスはいなかった。 長期のＫ１５ＣｒｅＰＲ；Ｌｄｈａ^{ｆｌ／ｆｌ}マウスの組織学的検査によって、Ｌｄｈａが存在しないＨＦＳＣが休止期のままだったが、野生型ＨＦＳＣが成長期を経て、休止期に戻ったことが示された。これは、Ｌｄｈａが存在しない毛包に対するＷＴにおける棍毛が増加したことを示す厚い切片（５０ミクロン、右側）から明らかである。スケールバーは１００μｍ（左）及び２０μｍ（真ん中及び右）を示す。 ＨＦＳＣマーカーであるＳｏｘ９に対するＩＨＣによって、ＨＦＳＣからのＬｄｈａの欠失が６ヵ月後でもバルジにおいてＨＦＳＣの存在に影響を及ぼさないことが示された。さらに、ＩＨＣ及びＬｄｈ活性アッセイによって、Ｌｄｈａの欠失が継続されたことが実証される。欠失のモザイク現象のため、Ｋ１５ＣｒｅＰＲ；Ｌｄｈａ^{ｆｌ／ｆｌ}皮膚のいくつかの部分においてＬｄｈａが欠失されなかった。下列には、Ｌｄｈａがまだ発現したＫ１５ＣｒｅＰＲ；Ｌｄｈａ^{ｆｌ／ｆｌ}マウスにおける有毛皮膚由来の組織を示す。これは、Ｋ１５ＣｒｅＰＲ；Ｌｄｈａ^{ｆｌ／ｆｌ}マウスにおける新しい育毛がＣｒｅ再結合を媒介するために使用されるモザイクアプローチによって生じるＬｄｈａの欠失が不足するためであることを示す。スケールバーは２０μｍを示す。 あらかじめ毛周期に関連した種々のシグナル伝達経路がＨＦＳＣにおけるＬｄｈａの損失によってどのように影響を受けるかを決定するために、休止期及び休止期－成長期移行におけるこれらの経路の活性を示すマーカーに対するＩＨＣを実行した。ｐＳｔａｔ５は通常の休止期－成長期移行において抑制されるように見え、これはＬｄｈａが存在しないＨＦＳＣにおいて発生しないようであることに留意されたい。ｐＳｔａｔ１及びｐＳｔａｔ３は、Ｌｄｈａの損失によって影響を受けないようだった。Ｇｌｉ３の発現、つまり、Ｓｈｈシグナル伝達のターゲットは、通常、ＨＦＳＣに由来する活性した毛芽において誘導されるが、Ｌｄｈａが存在しないＨＦＳＣは活性毛芽を作らない。Ｗｎｔ経路の活性化は、β－カテニンの核移行によって示され、Ｌｄｈａが存在しないＨＦＳＣにおいてごくわずかの核β－カテニンが検出された。スケールバーは６μｍを示す。 ＨＦＳＣ（Ｋ１５ＣｒｅＰＲ；Ｍｐｃ１ｆｌ／ｆｌ）におけるＭｐｃ１の欠失の開始から６ヵ月後、Ｍｐｃ１が欠けているマウスでは毛周期（左）、病理学（中央、Ｈ及びＥ）またはＨＦＳＣに対する染色（右、Ｓｏｘ９）によって測定されるように、有害作用が示されない。中央の図のスケールバーは１００μｍで、右図のスケールバーは５０μｍを示す。 Ｍｐｃ１の欠失がＨＦＳＣにおいて特異的な増殖を促進することを実証するために、ｌｏｘ－ｓｔｏｐ－ｌｏｘ－Ｔｏｍａｔｏ対立遺伝子を有するＫ１５ＣｒｅＰＲ；Ｌｄｈａ^{ｆｌ／ｆｌ}マウスを使用して、Ｋ１５＋ＨＦＳＣ及びＭｐｃ１欠失を有する及びＭｐｃ１欠失がない増殖（左）を見つけた。さらに、発明者らはＬｇｒ５ＣｒｅＥＲ対立遺伝子内でｉｒｅｓ－ＧＦＰを利用して、Ｋｉ－６７及びＧＦＰに対して染色し、Ｍｐｃ１欠失との共局在及びＭｐｃ１欠失なしの共局在（右）を探した。白い角括弧はバルジ領域を指す。スケールバーは２０μｍを示す。 Ｌｇｒ６ＣｒｅＥＲ対立遺伝子を有するマウスにおけるＭｐｃ１の欠失は、毛周期の早発性の誘導がないことを示す。 コントロールまたはＬｇｒ６ＣｒｅＥが媒介するＭｐｃ１欠失マウス由来のソートしたＨＦＳＣに関するＬｄｈ活性アッセイによって、Ｍｐｃ１が欠けている細胞の活性の増加が示された。 ＫＥＧＧ経路分析によって、ＨＦＳＣにおいて誘導される（赤）代謝経路に関連した遺伝子対抑制される（緑）ものが示される。 Ｌｄｈａ ＋／＋動物は、剃毛及び５０日目の観察の開始によって測定すると、同調的に約７０日目で毛周期（成長期）に移行した。Ｌｇｒ５ＣｒｅＥＲによって制御されると、特異的にＨＦＳＣにおいてＬｄｈａが欠失したＬｄｈａ ｆｌ／ｆｌ動物では、成長期への移行において重大な欠失が示される。右図は、Ｌｄｈａ ＋／＋動物では毛包及び皮下組織の肥厚の下方成長に代表される通常の成長期に移行したことを示す皮膚症状である。一方、Ｌｄｈａ ｆｌ／ｆｌ動物はどちらでもなく、休止期のままでもあったことを示す皮膚症状である。 表皮におけるＬｄｈ酵素活性アッセイによって、Ｌｄｈａ ＋／＋動物のＨＦＳＣにおいて強い活性が示される。一方、Ｌｄｈａ ｆｌ／ｆｌ動物ではＨＦＳＣにおいてその活性が不足した（ＨＦＳＣニッチは角括弧で示した）。 ＨＦＳＣにおけるＭＰＣ１の損失に関する実験を追試する。２回の単独の実験では、ＨＦＳＣにおけるＭＰＣ１の損失が５０日目にミフェプリストン治療によって開始された。 式（Ｉ）の化合物を使用する治療の４８～７２時間後、乳酸のメタボローム解析の実験を追試する。図３に示されるものと同様に、実験も乳酸レベルの増加を示した。 式（Ｉ）の化合物（２０μＭ）で局所的に治療された動物では、より完全な育毛が示された。ビヒクルコントロールで局所的に治療されたマウスでは、斑状の育毛が示された。

毛包幹細胞（ＨＦＳＣ）は、毛包の細胞ホメオスタシスを維持する役割を果たす休止状態の長寿命細胞である。ＨＦＳＣは通常、休止しているが、新規な毛周期中に分裂するために急速に活性化される。ＨＦＳＣの休止状態は複数の固有及び外因性の機構によって調節されることが知られている。

毛包は静止（休止期）、再生（成長期）及び退化（退行期）の周期的な循環を行うことができる。このサイクルを維持する毛包の能力は毛包幹細胞の存在に依存し、この毛包幹細胞はバルジ（図１ａ）内にある。成長期の開始時、バルジ幹細胞は真皮乳頭から受け取ったシグナルによって活性化され、その段階でこの真皮乳頭はバルジ領域に接する。この幹細胞はバルジを出て、下方に増殖し、外毛根鞘（ＯＲＳ）になる道を作る。バルジ幹細胞は毛包の異なる細胞型すべての元となることができる。休止状態を維持するが、休止状態に戻る前に２日間増殖性になるＨＦＳＣの能力はこの組織に特有である。

ＨＦＳＣは、毛周期中にｉｎ ｖｉｖｏで増殖性と休止状態の間を行き来する能力を示す^１，２。本明細書において、ｉｎ ｖｉｖｏでＨＦＳＣの代謝を調査する新規な方法が提供される。長期間の休止状態後、再活性化を見込むために、これらの細胞が解糖及び乳酸脱水素酵素活性を必要とする根拠が提供される。さらに、これらの所見を用いて、ＨＦＳＣ活性化及び毛周期を促進する新規な薬学的な方法を明らかにした。

使用方法
一態様では、本開示は、育毛を加速、促進または回復する方法であって、それを必要とする対象に有効量の式（Ｉ）：

の化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む方法を提供する。

本明細書で使用される「育毛を回復する」という句は、育毛が向上することを意味する。例えば、この句は毛包幹細胞の増殖または活性化、例えば、静止期から活発な成長期まで毛包が移行することを含む。さらに、対象が禿頭症、脱毛、毛髪菲薄化及び脱毛症などの徴候を示す場合、本明細書で開示される化合物または組成物を使用した治療によってこれらの徴候を治療前よりも低減させる。いくつかの実施形態では、育毛を回復することは、式（Ｉ）の化合物を投与しない場合と比較して測定される。

育毛を加速、促進または回復することと相関した育毛の向上の非限定的な例は、以下から選択することができる。
（ａ）毛根鞘の厚みの向上
（ｂ）毛の固定部の向上
（ｃ）脱毛の低減
（ｄ）毛の破損の低減
（ｅ）毛の強さの増大
（ｆ）育毛速度の向上
（ｇ）つやの向上
（ｈ）目に見える毛束の数の向上
（ｉ）毛の長さの向上
（ｊ）毛束の量の向上
（ｋ）休止期から成長期への移行
（ｌ）新規な毛周期への移行
（ｍ）成長期における毛包の増大
（ｎ）毛包幹細胞（ＨＦＳＣ）活性化の増大
（ｏ）休止状態のＨＦＳＣを活性化する
（ｐ）ＨＦＳＣにおける解糖を増加する
（ｑ）ＨＦＳＣにおける乳酸脱水素酵素を活性化する

いくつかの実施形態では、投与は該化合物を含む組成物を患部に局所的に塗布することを含む。

いくつかの実施形態では、対象は禿頭症、脱毛、毛髪菲薄化及び脱毛症から選択される徴候を示す。いくつかの実施形態では、対象は脱毛、毛髪菲薄化及び脱毛症から選択される徴候を示す。

いくつかの実施形態では、対象は脱毛症を示す。いくつかの実施形態では、脱毛症は男性型脱毛症または女性型脱毛症である。

いくつかの実施形態では、対象は脱毛及び毛髪菲薄化から選択される徴候を示す。いくつかの実施形態では、脱毛及び毛髪菲薄化は成長期脱毛または休止期脱毛によって生じる。

いくつかの実施形態では、成長期脱毛は化学療法（例えば、細胞増殖阻害剤）及び毒性製品（例えば、殺鼠剤）の経口摂取により誘因される。

いくつかの実施形態では、休止期脱毛はストレス（例えば、ワクチン接種、身体的外傷（自動車事故、手術及び所与の出産を含む）、慢性疾患及び抗うつ剤を含む特定の薬剤）及び食事（例えば、鉄の欠乏、過剰な鉄、亜鉛の欠乏、Ｌ－リジンの欠乏、ビタミンＢ６の欠乏、ビタミンＢ１２の欠乏及び過剰なビタミンＡ）により誘因される。

いくつかの実施形態では、脱毛または毛髪菲薄化は自己免疫障害によって生じる。

いくつかの実施形態では、禿頭症は若年性脱毛症、早発性脱毛症、老人性脱毛症、円形脱毛症、アンドロゲン性脱毛症、機械的脱毛症、産後の脱毛症及び症候性脱毛症から選択される。

いくつかの実施形態では、該化合物が毛包に塗布される。

いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物が、本明細書に開示されるように任意の徴候または症状の治療用薬剤の製造において使用される。

いくつかの実施形態では、該症状は育毛の減速または停止である。いくつかの実施形態では、育毛が減速または停止する症状は、禿頭症、脱毛、毛髪菲薄化及び脱毛症から選択される。いくつかの実施形態では、該症状は禿頭症、脱毛、毛髪菲薄化及び脱毛症から選択される。

本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態では、該方法は休止状態のＨＦＳＣを活性化させることを含む。いくつかの実施形態では、休止状態のＨＦＳＣは対象内にある。いくつかの実施形態では、休止状態のＨＦＳＣはヒト対象内にある。

本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態では、該方法はＨＦＳＣにおける解糖を増加させることを含む。いくつかの実施形態では、解糖代謝物のレベルは式（Ｉ）の化合物を投与しない場合に比べ増加する。いくつかの実施形態では、解糖代謝物はグルコース、グルコース－６－リン酸（Ｇ６Ｐ）、フルクトース－６－リン酸（Ｆ６Ｐ）、フルクトース－ビスリン酸（ＦＢＰ）、ジヒドロキシアセトンリン酸（ＤＨＡＰ）、３－ホスホグリセリン酸（３ＰＧ）、３－ホスホ乳酸（３ＰＬ）及びα－ケトグルタル酸（αＫＧ）から選択される。いくつかの実施形態では、解糖代謝物はグルコース、Ｇ６Ｐ、Ｆ６Ｐ、ＦＢＰ、ＤＨＡＰ、３ＰＧ及び３ＰＬから選択される。

本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態では、該方法はＨＦＳＣにおける乳酸脱水素酵素を活性化させることを含む。

本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態では、ＨＦＳＣはヒトＨＦＳＣである。いくつかの実施形態では、ＨＦＳＣはヒト対象内にある。

組成物
別の態様において、本開示は任意に薬学的に許容される担体または希釈液と混合された式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物を提供する。

本開示の組成物及び方法を、治療を必要とする個体を治療するために利用してもよい。ある実施形態では、個体はヒトなどのほ乳類またはヒト以外のほ乳類である。ヒトなどの動物に投与された場合、該組成物または該化合物は、例えば、本開示の式（Ｉ）の化合物及び薬学的に許容される担体を含む医薬品組成物として投与されることが好ましい。薬学的に許容される担体は公知技術であり、例えば、水もしくは緩衝生理食塩水などの水溶液、またはグリコール、グリセロール、オリーブ油などの油もしくは注射可能な有機エステル類などの他の溶媒もしくはビヒクルを含む。賦形剤は、例えば、薬剤の放出遅延を遂行するためにまたは１つ以上の細胞、組織または器官を選択的に標的にするために選択することができる。該医薬品組成物は、錠剤、カプセル（スプリンクルカプセル及びゼラチンカプセルを含む）、顆粒、再構成用凍結乾燥化合物、粉剤、溶液、シロップ、クリーム、ローション剤などの単位剤形であることができる。該組成物は、経皮送達系、例えば、スキンパッチ中に含むこともできる。該組成物は、局所投与に適した溶液または組成物中に含むこともできる。

いくつかの実施形態では、本開示は、式（Ｉ）：

の化合物またはその薬学的に許容される塩、及び皮膚への局所適用に適した担体または賦形剤を含む組成物を提供する。

いくつかの実施形態では、担体または賦形剤は、皮膚に塗布する場合、特に毛髪または頭皮に塗布するために一般的に安全であり、刺激がない。

薬学的に許容される担体は、例えば、溶解性を安定化し、向上させるためにまたは本開示の式（Ｉ）の化合物などの化合物の吸収を増加させるために、作用する生理的に許容される薬剤を含むことができる。このような生理的に許容される薬剤としては、グルコース、スクロースもしくはデキストランなどの糖類、アスコルビン酸もしくはグルタチオンなどの抗酸化剤、キレート剤、低分子タンパク質または他の安定化剤もしくは賦形剤が挙げられる。生理的に許容される薬剤を含む薬学的に許容される担体の選択は、例えば、該組成物の投与経路に依存する。組成物の調製物は自己乳化剤送達系または自己マイクロ乳化剤送達系であり得る。該組成物（調製物）はリポソームまたは他のポリマーマトリックスでもあり得、その中には該組成物、例えば、本開示の式（Ｉ）の化合物を組み込み得る。例えば、リン脂質または他の脂質を含むリポソームは、製造及び投与が比較的簡単である無毒性の生理的に許容されるかつ代謝可能な担体である。

「薬学的に許容される」という句は本明細書で使用され、妥当なベネフィットリスク比に釣り合う、過剰な毒性、刺激、アレルギー応答または他の問題もしくは合併症を起こすことなく、正常な医学判断の範囲内でヒト及び動物の組織との接触用途に適した化合物、材料、組成物及び／または剤形を指す。

本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」という句は、液体もしくは固体充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒または封入材料などの薬学的に許容される材料、組成物またはビヒクルを意味する。各担体は製剤の他の成分と相溶性があり、患者に有害でないという意味において「許容されなければならない」。薬学的に許容される担体として機能することができる材料の一部の例としては、（１）ラクトース、グルコース及びスクロースなどの糖類、（２）コーンスターチ及びジャガイモデンプンなどのデンプン類、（３）カルボキシルメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース及び酢酸セルロースなどのセルロース及びその誘導体、（４）トラガカント粉末、（５）モルト、（６）ゼラチン、（７）タルク、（８）カカオバター及び座薬ワックスなどの賦形剤、（９）ラッカセイ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、ダイズ油（例えば、グリシンダイズ油）、亜麻仁油（例えば、アマ種子油）及びユーカリ油（例えば、ユーカリ葉油）などの油、（１０）プロピレングリコールなどのグリコール類、（１１）グリセリン、ソルビトール、マンニトール及びポリエチレングリコールなどのポリオール類、（１２）オレイン酸エチル及びラウリン酸エチルなどのエステル類、（１３）寒天、（１４）水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウムなどの緩衝剤、（１５）アルギン酸、（１６）発熱物質を含まない水、（１７）等張食塩水、（１８）リンゲル液、（１９）エチルアルコール、（２０）リン酸緩衝液及び（２１）医薬製剤に使用される他の無毒性相溶性物質が挙げられる。

いくつかの実施形態では、担体はポリオール類（例えば、プロピレングリコール、ブチレングリコール、ペンチレングリコール、ヘキシレングリコール、カプリリルグリコール及びグリセリン）、カルビトール、グリコールエーテル類（例えば、エチレングリコールモノブチルエーテル、プロピレングリコールモノメチルエーテル、プロピレングリコールモノブチルエーテル、ジプロピレングリコール及びジエチレングリコール）、アルキルエーテル類（例えば、ジエチレングリコールモノエチルエーテル（エトキシジグリコール）及びジエチレングリコールモノブチルエーテル）、発熱物質を含まない水、アルコール（例えば、エチルアルコール、イソプロパノール、プロパノール、ブタノール、ベンジルアルコール及びフェニルエチルアルコール）から選択される。

いくつかの実施形態では、該組成物はエマルジョンである。エマルジョンは水中油型、水中シリコーン型、油中水型、シリコーン中水型などを含む。エマルジョンとして配合される場合、乳化剤が典型的に含まれる。

いくつかの実施形態では、該組成物は界面活性剤、増粘剤、芳香剤、ＵＶ遮断剤、ワックス、シリコーン、防腐剤、油、ビタミン、プロビタミン、乳白剤、抗酸化剤、乳化剤、賦形剤、溶媒及びバッファーから選択される成分を更に含む。前述の薬剤の例はＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｓｍｅｔｉｃ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ａｎｄ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｔｗｅｌｆｔｈ Ｅｄ．，２００８またはオンライン（参照によりその全体が本明細書に援用される）に見ることができる。

界面活性剤としては、オレス－５、オレイン酸、ドデシル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム及びポロキサマー４０７が挙げられるが、これらに限定されない。

増粘剤としては、脂肪アルコール類（例えば、セチルアルコール及びオレイルアルコール）、エトキシ化フェノール類（例えば、オクトキシノール－１、ノノキシノール－４及びノノキシノール－９）及びポリマー類（例えば、ヒドロキシエチルセルロース及びヒドロキシプロピルメチルセルロース）が挙げられるが、これらに限定されない。

ＵＶ遮断剤としては、アボベンゾン、ベンゾフェノン－４、オキシベンゾン、オクチノキセート、二酸化チタン及び酸化亜鉛が挙げられるが、これらに限定されない。

ワックスとしては、蜜蝋、カンデリラワックス、カルナウバワックス及びカスターワックスが挙げられるが、これらに限定されない。

防腐剤としては、イソチアゾリノン類、パラベン類、フェノキシエタノール、安息香酸、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸及びソルビン酸カリウムが挙げられるが、これらに限定されない。

油としては、アボカド油、ヤシ油、亜麻仁油、ラッカセイ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油及びダイズ油が挙げられるが、これらに限定されない。

ビタミンとしては、ビタミンＥ、ビタミンＣ、ビタミンＢが挙げられるが、これらに限定されない。

薬学的に許容される抗酸化剤としては、（１）アスコルビン酸、エリソルビン酸、イソアスコルビン酸、システイン塩酸塩、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなどの水溶性抗酸化剤、（２）パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、α－トコフェロールなどの油溶性抗酸化剤、ならびに（３）クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などの金属キレート剤が挙げられるが、これらに限定されない。

乳化剤としては、セテアレス－２０、セテアレス－２５、セテアリルアルコール、レシチン、ステアリン酸グリセリル、ステアリン酸ソルビタン、オレイン酸グリセリル、ポリオレイン酸グリセリル、オレイン酸ソルビタン、パルミチン酸イソプロピル、ポリソルベート２０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０、ステアリン酸及びリン酸セチルが挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、該組成物はシャンプー、ヘアリンス、ヘアコンディショナー、ポマード、ヘアジェル、ムース、水アルコール性トニック、クリーム、スプレー、エマルジョン及び液体から選択される形態で塗布される。

いくつかの実施形態では、該組成物は水及びステアリン酸を含むエマルジョンである。いくつかの実施形態では、該組成物は薬学的に許容される担体、乳化剤、油及び芳香剤を含むエマルジョンである。いくつかの実施形態では、該組成物は水、プロピレングリコール、ゼラチン、ステアリン酸、亜麻仁油、ダイズ油、ユーカリ油及び芳香剤を含むエマルジョンである。

いくつかの実施形態では、該組成物はプルロニックレシチンオルガノゲルを含むエマルジョンである。いくつかの実施形態では、該組成物は水、ポロキサマー（例えば、ポロキサマー４０７）及びレシチンを含むエマルジョンである。いくつかの実施形態では、該組成物は水、ポロキサマー（例えば、ポロキサマー４０７）、レシチン及びエトキシジグリコールを含むエマルジョンである。いくつかの実施形態では、該組成物は水、ポロキサマー４０７、ソルビン酸カリウム、レシチン、パルミチン酸イソプロピル及びソルビン酸を含むエマルジョンである。いくつかの実施形態では、該組成物は水、ポロキサマー４０７、ソルビン酸カリウム、レシチン、パルミチン酸イソプロピル、ソルビン酸及びエトキシジグリコールを含むエマルジョンである。いくつかの実施形態では、該組成物はＰＬＯゲルまたはＰＬＯ Ｕｌｔｒａｍａｘゲルを含むエマルジョンである。

組成物（調製物）は、例えば、経口的に（例えば、水性または非水性溶液または懸濁液などの水薬、錠剤、カプセル（スプリンクルカプセル及びゼラチンカプセルを含む）、ボーラス、粉剤、顆粒、舌に塗布するペースト剤）、口腔粘膜を介して（例えば、舌下的に）吸収、経皮的に（例えば、皮膚に塗布されるパッチ）及び局所的に（例えば、皮膚にされる塗布クリーム、軟膏もしくはスプレーまたは毛髪に塗布される製品として）を含む、多数の投与経路のうちのいずれかにより対象に投与され得る。ある実施形態では、化合物は滅菌水に単に溶解または懸濁させ得る。適切な投与経路及びそれに適した組成物の詳細は、例えば、米国特許第６，１１０，９７３号、５，７６３，４９３号、５，７３１，０００号、５，５４１，２３１号、５，４２７，７９８号、５，３５８，９７０号及び４，１７２，８９６号、ならびにそれらの引用特許において見ることができる。

製剤は単位剤形で簡便に提示することができ、薬学の分野において公知の任意の方法によって調製することができる。単一剤形を製造するために担体材料と組み合わせることができる有効成分の量は、治療されるホスト、特定の投与様式に応じて変える。単一剤形を製造するために担体材料と組み合わせることができる有効成分の量は、一般に治療効果が生じる化合物の量である。通常、この量は１００パーセントのうちの約０．００１パーセントから約９９パーセントの有効成分の範囲である。いくつかの実施形態では、この量は約５パーセントから約７０パーセントの範囲である。いくつかの実施形態では、この量は約１０パーセントから約３０パーセントの範囲である。いくつかの実施形態では、この量は該組成物の重量で約０．００１パーセントから約１０パーセントの範囲である。

これらの製剤または組成物を調製する方法は、本開示の式（Ｉ）の化合物などの有効な化合物を担体と任意に１つ以上の補助成分と会合させる工程を含む。一般に、該製剤は本開示の化合物を液体担体もしくは微粉化した固体担体またはその両方と均一にかつ密接に会合させ、必要に応じて、生成物を成形することによって調製される。

経口投与に適した本開示の製剤は、カプセル（スプリンクルカプセル及びゼラチンカプセルを含む）、カシェ剤、丸剤、錠剤、トローチ剤（風味をつけた基剤、通常スクロース及びアカシアまたはトラガカントを使用する）、凍結乾燥化合物、粉剤、顆粒の形態または水性もしくは非水性液体の溶液もしくは懸濁液として、水中油型もしくは油中水型液体エマルジョンとして、エリキシル剤もしくはシロップ剤として、香錠（ゼラチン及びグリセリンなどの不活性基剤またはスクロース及びアカシアを使用する）として及び／またはマウスウォッシュとしてであってもよい。これらはそれぞれ有効成分として本開示の化合物を所定量含む。組成物または化合物はボーラス、舐剤またはペーストとして投与されてもよい。

経口投与用固体剤形（カプセル（スプリンクルカプセル及びゼラチンカプセルを含む）、錠剤、丸剤、糖衣錠、粉剤、顆粒など）を調製するために、有効成分は、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウムなどの、１つ以上の薬学的に許容される担体及び／または以下のいずれかと混合される：（１）充填剤またはデンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール及び／またはケイ酸などの増量剤、（２）カルボキシメチルセルロース、アルギン酸、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース及び／またはアカシアなどの結合剤、（３）グリセロールなどの保湿剤、（４）寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカデンプン、アルギン酸、特定のケイ酸及び炭酸ナトリウムなどの崩壊剤、（５）パラフィンなどの溶解遅延剤、（６）四級アンモニウム化合物などの吸収促進剤、（７）セチルアルコール及びモノステアリン酸グリセロールなどの湿潤剤、（８）カオリン及びベントナイトクレイなどの吸収剤、（９）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム及びその混合物などの潤滑剤、（１０）変性及び未変性シクロデキストリンなどの錯化剤、ならびに（１１）着色剤。カプセル（スプリンクルカプセル及びゼラチンカプセルを含む）、錠剤及び丸剤の場合、該組成物は緩衝剤も含んでいてもよい。類似のタイプの固形組成物はラクトースまたは乳糖などの賦形剤及び高分子量ポリエチレングリコールなどを用いたソフト及びハード充填ゼラチンカプセルの充填剤としても使用され得る。

錠剤は任意に１つ以上の補助成分とともに圧縮または成形することによって製造され得る。圧縮錠は、結合剤（例えば、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、潤滑油、不活性希釈剤、防腐剤、崩壊剤（例えば、グリコール酸ナトリウムデンプンまたは架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、表面活性剤または分散剤を使用して、調製され得る。湿製錠剤は、不活性希釈液で湿らせた粉末状化合物の混合物を適切な機械で成形することによって作成され得る。

錠剤、ならびに糖衣錠、カプセル（スプリンクルカプセル及びゼラチンカプセルを含む）、丸剤及び顆粒などの、該組成物の他の固体剤形は、任意に刻み目を入れるか、または腸溶コーティング及び医薬製剤分野で周知の他のコーティングなどコーティング及びシェルを用いて調製され得る。錠剤及び他の固定剤形は、その中の有効成分の徐放または制御放出を提供するように、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを様々な割合で用いて、他のポリマーマトリックス、リポソーム及び／または微粒子を用いて、処方され、所望の放出性を提供することもできる。例えば、細菌保持フィルターを介したろ過または滅菌水に溶解することができる無菌の固形組成物の形態のもしくは使用直前に他の注射可能な無菌媒体の形態の滅菌剤を組み込むことによって殺菌され得る。これらの組成物は不透明剤を任意に含みまたは胃腸管のある部分のみに、または優先的に任意に遅延するように有効成分（複数可）を放出する組成物であってもよい。使用することができる包埋組成物としては、重合体の物質及びワックスが挙げられる。有効成分は、適切な場合、上記賦形剤の一つ以上とともにマイクロカプセル化の形態とすることもできる。

経口投与に有用な液体剤形は、薬学的に許容されるエマルジョン、再構成用凍結乾燥化合物、ミクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ剤及びエリキシル剤を含む。有効成分に加え、液体剤形は、例えば、水または他の溶媒などの、当該技術分野に一般に使用される不活性希釈剤、シクロデキストリン及びその誘導体、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール、油（特に、綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油及びゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール及びソルビタンの脂肪酸エステルなどの可溶化剤及び乳化剤、ならびにそれらの混合物を含んでいてもよい。

不活性希釈剤の他に、経口組成物は、湿潤剤、乳化剤、懸濁剤、甘味料、フレーバー、染料、芳香剤及び防腐剤などの補助剤を含んでいてもよい。

有効な化合物に加え、懸濁液は、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステルなどの懸濁剤、微晶質セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天及びトラガカント、ならびにそれらの混合物を含んでいてもよい。

局所または経皮投与用剤形は、粉剤、スプレー、軟膏、ペースト、クリーム、ローション剤、ゲル、溶液及びパッチを含む。有効な化合物は、薬学的に許容される担体と、必要とされ得る任意の防腐剤、バッファーまたは溶媒と無菌条件下で混合されてもよい。

軟膏、ペースト、クリーム及びゲルは、有効な化合物に加えて、動物性及び植物性脂肪、油、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルク及び酸化亜鉛などの賦形剤またはそれらの混合物を含んでいてもよい。

粉剤及びスプレーは、有効な化合物に加えて、ラクトース、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウム及びポリアミド粉末などの賦形剤またはこれらの物質の混合物を含んでいてもよい。さらに、スプレーはクロロフルオロ炭化水素などの一般的な噴霧剤、ならびにブタン及びプロパンなどの揮発性非置換炭化水素を含んでいてもよい。

経皮パッチは、本開示の化合物の体への制御した送達を提供する追加の効果を有する。このような剤形は、適切な媒体に有効な化合物を溶解または分散させることによって形成することができる。吸収強化剤を用いて、皮膚を横切って該化合物の流動を増加させることもできる。このような流動の速度は、速度制御膜を提供することまたはポリマーマトリックスもしくはゲルに化合物を分散させることによって制御することができる。

本開示の組成物において使用され得る好適な水性及び非水性担体の例としては、水、エタノール、ポリオール類（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）及びそれらの好適な混合物、オリーブ油などの植物油、ならびにオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステル類が挙げられる。例えば、レシチンなどのコーティング材料を使用することにより、分散の場合は必要な粒度の維持により、及び界面活性剤の使用により適切な流動度を維持することできる。

これらの組成物は防腐剤、湿潤剤、乳化剤及び分散剤などの補助剤を含んでいてもよい。微生物の作用からの保護は、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などの包含によって確保され得る。該組成物に糖、塩化ナトリウムなどの等張剤を含有させることが望ましい。さらに、注射可能な医薬形態の長期にわたる吸収は、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンなどの吸収を遅延させる薬剤の包含によって実行され得る。

医薬組成物は更に持続放出及び／または快適さを提供する成分を含み得る。このような成分は高分子量、アニオン性の粘液模倣性ポリマー、ゲル化多糖類及び微細に分割された薬物担体基質を含む。これらの成分は、米国特許第４，９１１，９２０号、５，４０３，８４１号、５，２１２，１６２号及び４，８６１，７６０号により詳細に開示される。これらの特許の全内容は、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書に援用される。

本開示の方法に使用するため、有効な化合物はそれ自体としてまたは、例えば、薬学的に許容される担体と組み合わせて０．００１～９９．５％（より好ましくは、０．００１～１０％）の有効成分を含む組成物として与えることができる。

当該組成物の有効成分の実際の投与量は、特定の患者、組成及び投与様式への所望の治療応答を、患者に毒性を与えることなく達成するのに有効な量の有効成分を得るように変えることができる。

選択された投与量は、特定の化合物の活性、使用される化合物、そのエステル、塩もしくはアミドの組合せ、投与経路、投与時間、使用される特定の化合物（複数可）の排出速度、治療の継続期間、使用される特定の化合物（複数可）と組み合わせて使用される他の薬、化合物及び／または材料、治療中の患者の年齢、性別、体重、症状、一般的な健康状態及び先の病歴、医学分野において既知である同様の要素を含む様々な要因に依存する。

当該技術分野において通常の技術を有する医師または獣医師は、必要な組成物の治療上の有効量を直ちに決定し、処方することができる。例えば、医師または獣医師は、当該組成物または化合物の用量を、所望の治療効果を達成するために必要とされるより少ない量で始め、所望の治療効果を達成するまで段階的に投与量を増加させることができるであろう。「治療上の有効量」とは、所望の治療効果を引き出すのに十分な化合物の濃度を意味する。有効量の化合物は、対象の体重、性別、年齢及び病歴に応じて変わることが通常、理解される。有効量に影響する他の要素は、患者の症状の重症度、治療中の障害、化合物の安定性、必要に応じて、本開示の式（Ｉ）の化合物とともに投与される他の種類の治療薬を含んでいてもよいが、これらに限定されるものではない。より多い全用量が薬剤の複数の投与によって送達され得る。有効性及び投与量を決定する方法は当業者に知られている（Ｉｓｓｅｌｂａｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １３ ｅｄ．，１８１４－１８８２、参照により本明細書に援用される）。

一般に、本開示の組成物及び方法において使用される有効な化合物の適切な１日量は、化合物の量が治療効果を得るのに有効である最も低い用量となる。このような有効量は、通常上記の要素に依存する。

必要に応じて、有効な１日量の有効な化合物は、任意に単位剤形で一日をかけて適当な間隔で別々に投与される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ以上のサブ用量で投与され得る。本開示のいくつかの実施形態では、有効な化合物は毎日２回または３回投与され得る。いくつかの実施形態では、有効な化合物は１日１回投与される。

この治療を受けている患者は、霊長類、特にヒト、ならびにウマ、ウシ、ブタ及びヒツジなどの他のほ乳類、一般的な家禽及びペットを含む、それが必要な任意の動物である。

本発明は一般的に記載されているが、本発明のある種の態様及び実施形態の説明のために単に含まれ、発明を制限することを意図しない、以下の実施例を参照することによって本発明はより容易に理解される。

略語
ＡＣＮ アセトニトリル
ＡＥＣ ３－アミノ－９－エチルカルバゾール
ＢＣＡ ビシンコニン酸アッセイ
ＢＣＳ 仔ウシ血清
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＦＡＣＳ 蛍光活性化セルソーティング
ＨＦＳＣ 毛包幹細胞
Ｈｋ ヘキソキナーゼ
Ｌｄｈ 乳酸脱水素酵素
Ｌｄｈａ 乳酸脱水素酵素Ａ
Ｌｄｈａ 乳酸脱水素酵素Ｂ
ＮＡＤ β－ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド
ＮＡＤＨ 還元型β－ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド
ＯＣＴ 最適切断温度媒体
ＰＢＳ リン酸緩衝生理食塩水
ＰＬＯ プルロニックレシチンオルガノゲル
ｐ－Ｓ６ ホスホ－Ｓ６リボソームタンパク質
ｐ－Ｓｔａｔ３ 転写３のホスホシグナルトランスデューサー兼アクティベーター
ＲＩＰＡ 放射性免疫沈降アッセイ
ＴＣＡ回路 トリカルボン酸回路
ＸＴＴ ２，３－ビス（２－メトキシ－４－ニトロ－５－スルホフェニル）－２Ｈ－テトラゾリウム－５－カルボキシアニリド

材料及び方法
マウス
動物は、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ（Ｋ１５－ＣｒｅＰＲ、Ｌｇｒ５－ＣｒｅＥＲ及びＬｇｒ６－ＣｒｅＥＲ）、Ｒｕｔｔｅｒ Ｌａｂ（Ｍｐｃ^{ｆｌ／ｆｌ}）及びＳｅｔｈ Ｌａｂ（Ｌｄｈａ^{ｆｌ／ｆｌ}）（Ｘｉｅ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｍｅｔａｂ．，１９，７９５－８０９（２０１４））から取得し、ＩＵＣＵＣ及びＡＲＣにより規定された条件下で維持した。毛周期の休止期段階の分析を含む実験のため、生後５０日目に動物を集め、休止期－成長期移行の分析を含む実験のため、生後７０日目に動物を集め、成長期の分析を含む実験のため、生後９０日目に動物を集めた。トランスジェニック動物の分析を含む実験のため、Ｋ１５－ＣｒｅＰＲ動物を剃毛し、ミフェプリストンの腹腔内投与で治療し、Ｌｇｒ５－ＣｒｅＥＲ及びＬｇｒ６－ＣｒｅＥＲ動物を剃毛し、休止期間（生後５０日目）にタモキシフェン（ヒマワリ種子油に溶解した１０ｍｇ／ｍｌ、１日当たり２ｍｇを３日間）で治療し、剃毛後の毛の再成長についてモニタリングした。治療された動物から示される表現型がミフェプリストン投与後３～４週間で生じた。図３について、野生型Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ動物を生後５０日目に剃毛し、指定期間、Ｔｒａｎｓｄｅｒｍａ ＰＬＯゲル（プレミアムレシチンオルガノゲル）、ＰＬＯゲルＵｌｔｒａｍａｘ Ｂａｓｅ（ＴＲ２２０）（ビヒクル）または式（Ｉ）の化合物（化合物（Ｉ））（２０μＭ）（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ 製品ＰＺ０１６０）で局所的に治療した。この研究において、性別間に表現型の見かけの違いがない、ほぼ等しい数の雄及び雌の動物を使用した。記載された表現型はすべて各実験の説明に示されるようにｎが最小値３対の同腹仔の代表である。図において代表されるように結果が基本的に陽性または陰性であることから、事前にサンプルの大きさを決定するために統計的な測定を使用せず、効果を測定するために統計も使用しなかった。記載された結果は、治療された動物すべてのデータを含む。実験データの収集時、研究者らは割付けに対し盲検化されず、実験はランダム化しなかった。示された結果は別々に治療された動物の少なくとも３匹の代表画像であった。確認のため、遺伝子型同定が動物の治療の前後に実行された。

組織学、免疫染色及び免疫ブロット法
示された遺伝子型から組織を単離し、凍結組織標本用最適切断温度（ＯＣＴ）化合物に新たに埋め込むか、または終夜４％ホルマリンで固定し、パラフィンに埋め込んだ。凍結組織について、Ｌｅｉｃａ３２００クリオスタットで薄切法を実行し、５分間４％パラホルムアルデヒドで固定した。パラフィン包埋組織を切断し、脱パラフィンし、組織学のために調製した。染色のために調製した切片すべてを適切なコントロールＩｇＧ（ヤギ、ウサギなど）を含む染色バッファーで遮断した。クエン酸塩を用いてホルマリン固定パラフィン包埋組織に免疫組織化学が実行され、または以下の抗体を用いてトリスバッファー抗原賦活化が行われた：Ｋｉ６７（Ａｂｃａｍ ａｂ１６６６７、１：５０）、ｐ－Ｓ６（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ＣＳＴ２２１５、１：５０）、Ｓｏｘ９（Ａｂｃａｍ ａｂ１８５２３０、１：１０００）、Ｌｄｈａ（Ａｂｃａｍ ａｂ４７０１０、１：１００）、Ｌｄｈ（Ａｂｃａｍ ａｂ１２５６８３、１：１００）、ｐ－Ｓｔａｔ３（Ａｂｃａｍ ａｂ６８１５３、１：２００）、ｐ－Ｓｔａｔ１（Ａｂｃａｍ ａｂ１０９４６１、１：２００）、ｐ－Ｓｔａｔ５（Ａｂｃａｍ ａｂ３２３６４；１：５０）、Ｇｌｉ３（Ａｂｃａｍ ａｂ６０５０；１：１００）、β－カテイン（Ａｂｃａｍ ａｂ３２５７２；１：５００）。ＤＡＫＯ ＥｎＶｉｓｉｏｎ＋ ＨＲＰペルオキシダーゼ系（Ｄａｋｏ Ｋ４００９１１－２）及びＤａｋｏ ＡＥＣ基質クロモゲン（Ｄａｋｏ Ｋ３４６４３０－２）を検出に使用した。Ｏｌｙｍｐｕｓ ＢＸ４３正立顕微鏡及びＺｅｉｓｓ Ｍｏｄｅｌ Ａｘｉｏ Ｉｍａｇｅｒ Ｍ１正立蛍光顕微鏡で画像を収集した。Ｈａｌｔプロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤（Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ）を有するＲＩＰＡ溶解バッファー（Ｐｉｅｒｃｅ）中でＦＡＣＳでソートした表皮集団からウエスタンブロット法及び酵素アッセイ用タンパク質試料を抽出し、濃縮のためアセトンに沈殿させた。以下の抗体を用いた：β－アクチン（Ａｂｃａｍ ａｂ８２２７；１：１０００）、β－アクチン（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ ｓｃ－４７７７８；１：１０００）、Ｃ－Ｍｙｃ（Ａｂｃａｍ ａｂ３２０７２；１：１０００）、Ｎ－Ｍｙｃ（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ ｓｃ－５３９９３；１：２００）、Ｈ３Ｋ２７Ａｃ（Ａｂｃａｍ ａｂ１７７１７８；１：２００）、Ｍｐｃ１（Ｓｉｇｍａ ＨＰＡ０４５１１９）。

細胞単離及びＦＡＣＳ
マウスの背部及び腹部全体の皮膚を切除し、３７℃で１時間または４℃で終夜トリプシン（０．２５％）に浮遊させた。真皮から表皮をこすって分離し、表皮細胞をピペットで機械的に分離した。７０μＭセルストレイナーを用いて表皮細胞を２０％仔ウシ血清（ＢＣＳ）にろ過して、３００ｇを回収し、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で２回洗浄した。次に、４０μＭセルストレイナーで細胞をろ過し、ＣＤ３４モノクロナール抗体（ＲＡＭ３４）、ＦＩＴＣ、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（商標）（カタログ番号：１１－０３４１－８２）及びＣＤ４９ｄ（Ｉｎｔｅｇｒｉｎ ａｌｐｈａ ４）モノクロナール抗体（Ｒ１－２）、ＰＥ、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（商標）（カタログ番号：１２－０４９２－８１）を用いた蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）処理のために染色した。図４ａにゲーティング戦略を示す。ＢＤ ＦＡＣＳＡｒｉａ高速セルソーターを使用して、細胞をソートした。単一陽性集団及び二重陽性集団をそれぞれ酵素アッセイ、ウエスタンブロット法または質量分析用の２０％ＢＣＳ、ＲＩＰＡ溶解バッファー（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｐｉｅｒｃｅ）または８０％メタノールに回収した。

プレートリーダーＬｄｈアッセイ
Ｓｙｎｅｒｇｙ－ＭＸプレートリーダー（Ｂｉｏｔｅｋ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を用いて４７５ｎｍ、３７℃でのＮＡＤＨの経時的な産生に直接関係する可溶性２，３－ビス（２－メトキシ－４－ニトロ－５－スルホフェニル）－２Ｈ－テトラゾリウム－５－カルボキシアニリド（ＸＴＴ）ホルマザンの形成を測定することによって、細胞可溶化物中でＬｄｈ活性を決定した。可溶化液は、放射性免疫沈降法アッセイ（ＲＩＰＡ）バッファー（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｉｅｒｃｅ）で調製された。ビシンコニン酸アッセイ（ＢＣＡ）タンパク質アッセイキット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｉｅｒｃｅ）を使用して、タンパク質含有量を決定した。１ウェル当たり１０μｇのタンパク質を使用した。染色溶液は、ｐＨ７．４の５０ｍＭのトリスバッファー、１５０μＭのＸＴＴ（Ｓｉｇｍａ）、７５０μＭのβ－ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）（Ｓｉｇｍａ）、８０μＭのメト硫酸フェナジン（Ｓｉｇｍａ）及び１０ｍＭの乳酸基質（Ｓｉｇｍａ）を含んだ。Ｓｙｎｅｒｇｙ－ＭＸプレートリーダー（Ｂｉｏｔｅｋ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を用いて経時的に３４０ｎｍ、２５℃でのこれらの一般的な基質または生成物、還元型β－ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）の吸光度の変化を測定することによって、細胞可溶化物中でＬｄｈ活性を決定した。

Ｉｎ ｓｉｔｕ Ｌｄｈアッセイ
マウスの皮膚のクリオスタット切片を短時間で固定し（４％ホルマリン、５分間）、ｐＨ７．４のＰＢＳで洗浄し、ＬＤＨ活性について適切な溶液でインキュベートした。染色媒体は、ｐＨ７．４の５０ｍＭのトリス、７５０μＭのＮＡＤ（Ｓｉｇｍａ）、８０μＭのメト硫酸フェナジン（Ｓｉｇｍａ）、６００μＭの塩化ニトロブルーテトラゾリウム（Ｓｉｇｍａ）、１０ｍＭのＭｇＣｌ_２（Ｓｉｇｍａ）及び１０ｍＭの乳酸基質（Ｓｉｇｍａ）を含んだ。スライドを所望の強度になるまで、３７℃で染色媒体を用いてインキュベートし、ヌクレアファストレッド（Ｖｅｃｔｏｒ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）を用いて対比染色し、ＶｅｃｔａＭｏｕｎｔ（Ｖｅｃｔｏｒ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）を用いて固定した。基質混合物またはＮＡＤを含まないインキュベーション培地を使用して、コントロール反応を実行した。

質量分析に基づくメタボローム解析
Ｆｏｌｍｅｓ，Ｃ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．Ｓｏｍａｔｉｃ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｂｉｏｅｎｅｒｇｅｔｉｃｓ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎｓ ｉｎｔｏ ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｃｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｇｌｙｃｏｌｙｓｉｓ ｔｏ ｆａｃｉｌｉｔａｔｅ ｎｕｃｌｅａｒ ｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ．Ｃｅｌｌ Ｍｅｔａｂ １４，２６４－２７１に記載されるように、実験を行った。細胞内の代謝物を抽出するために、ＦＡＣＳでソートした細胞を１５０ｍＭの冷酢酸アンモニウム（ｐＨ７．３）で短時間ですすぎ、ドライアイス上で８０％冷メタノール（ＭｅＯＨ）１ｍｌを添加した。細胞懸濁液をエッペンドルフチューブに移し、１０ｎｍｏｌのＤ／Ｌ－ノルバリンを添加した。厳密に混合後、遠心分離（１．３×１０^４ｒｐｍ、４℃）で懸濁液をペレット状にした。上澄みをガラスバイアルに入れ、代謝物を真空下で乾燥し、７０％アセトニトリルに再懸濁した。試料の質量分析に基づく分析のために、Ｌｕｎａ ＮＨ２（１５０ｍｍ×２ｍｍ、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）カラムに５μＬを注入した。Ｑ Ｅｘａｃｔｉｖｅ質量分析計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に連結したＵｌｔｉＭａｔｅ ３０００ＲＳＬＣ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で試料を分析した。Ｑ Ｅｘａｃｔｉｖｅは、ｍ／ｚが６５～９７５の範囲内でフルスキャンモードで極性スイッチング（＋３．５０ｋＶ／－３．５０ｋＶ）によって実行させた。Ａ）５ｍＭの酢酸アンモニウム（ＮＨ_４ＡｃＯ）（ｐＨ９．９）及びＢ）アセトニトリル（ＡＣＮ）を使用して、分離を達成した。勾配はＡ）１８分かけて１５％からＡ）９０％に到達するように開始し、次に９分間、均一濃度の段階を経て、Ａ）７分間、最初の１５％に戻った。正確な質量測定（≦３ｐｐｍ）及び保持時間を使用してＴｒａｃｅＦｉｎｄｅｒ３．３で代謝物を定量化した。

統計
この研究において、性別間で表現型の見かけの違いがない、ほぼ等しい数の雄及び雌両方の動物を使用した。記載された表現型はすべて各実験の説明に示されるように、ｎが最小値３対の同腹仔の代表である。図において代表されるように結果が基本的に陽性または陰性であることから、毛の再成長表現型の分析のために、事前のサンプルの大きさの決定に統計的な測定を使用せず、効果の測定に統計も使用しなかった。記載された結果は、治療された動物すべてのデータを含む。実験データの収集時、研究者らは割付けに対し盲検化されず、実験はランダム化しなかった。示された結果は、別々に治療された動物の少なくとも３匹の代表画像であった。確認のため、遺伝子型同定が動物の治療の前後に実行された。グラフについて、Ｓｔｕｄｅｎｔの両側の対応のないｔ検定によってすべての比較を示し、すべてのグラフ、バーまたはラインは平均を示し、エラーバーは平均の標準誤差（ｓ．ｅ．ｍ）を示す。

実施例１：乳酸脱水素酵素活性は毛包幹細胞ニッチにおいて高い
多数の研究では、ＨＦＳＣ対他の毛包細胞または毛包間表皮の細胞における独自の遺伝子発現の兆候を明らかにしている^３－６。これらの兆候の多くは、ＨＦＳＣホメオスタシスにおいて重要な役割を果たすことを後述した転写因子によって調整される^７。乳酸脱水素酵素は、ほ乳類におけるＬｄｈａ及びＬｄｈｂ遺伝子によって最も一般的にコードされ、そのタンパク質産物はホモまたはヘテロ四量体を形成し、ピルビン酸の乳酸へのＮＡＤＨ依存性還元及び乳酸のピルビン酸へのＮＡＤ^＋依存性酸化を触媒する^９。免疫染色によって、ｉｎ ｓｉｔｕで休止状態のＨＦＳＣ（休止期）においてＬｄｈａは高く見え（図１ａ）、Ｌｄｈａ及びＬｄｈｂを認識する抗体によるＩＨＣでは、ＬｄｈａだけがＨＦＳＣニッチに局在化するように見えることを示した（図４ａ）。

ＨＦＳＣは毛周期（休止期－成長期移行）の開始と相関する短期間の増殖によって中断される休止状態（休止期）の連続した循環を経ることが知られている。ＨＦＳＣの増殖または活性化は、毛周期の前進の必要条件であることがよく知られている。ＩＨＣ分析によって、Ｌｄｈａ発現が毛周期の３段階でＨＦＳＣ（Ｓｏｘ９＋）において高いことも示された（図１ａ）。一様に、ソートした細胞由来の可溶化液の免疫ブロット法では、全表皮に対して基底のＨＦＳＣ（α６ＨｉＣＤ３４＋）におけるＬｄｈａのほぼ排他的な発現、ならびに基底（α６ＨｉＣＤ３４＋）及び基底上層（α６ＬｏＣＤ３４＋）両方のＨＦＳＣ集団におけるＬｄｈｂの有意により高い発現を示した（図１ｂ）^３。ソーティング戦略は図４ｂで概説される。

Ｌｄｈａ発現パターンがＬｄｈ酵素の活性と相関するかどうかを決定するために、比色に基づく酵素アッセイを使用して、ｉｎ ｓｉｔｕでＬｄｈ活性能を評価した。通常、プレートリーダーを用いてタンパク質可溶化液またはアリコートについて行われるが（Ｎｇｕｙｅｎ，Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ，１２７，１７１－１８３（２００６））、Ｌｄｈ活性アッセイを修正して、凍結組織切片についてｉｎ ｓｉｔｕで行った。ｉｎ ｓｉｔｕ及びｉｎ ｖｉｔｒｏの両方でのＬｄｈ活性アッセイでは、過剰な基質（乳酸）の使用を採用するため、アッセイで得られた結果には定常状態の活性ではなく、Ｌｄｈ活性に関する性能が反映されることに留意されたい。

このアッセイを皮膚試料に適用すると、Ｌｄｈａの発現パターンと一貫して、ＨＦＳＣにおいてＬｄｈ活性能が有意に高くなることが実証された（図１ｃ）。さらに、毛周期でＨＦＳＣにおいてＬｄｈ活性は高かった（図１ｃ）。コントロールとして、酵素基質（乳酸）なしでまたは酸で処理した組織について行われたアッセイでは、活性が０であった（図４ｄ）。これらの結果を更に確認するために、表皮集団はソートされ、ソートした細胞の細胞可溶化物が産生され、類似の比色に基づく酵素アッセイがソートした細胞可溶化物について実施された。これもＨＦＳＣにおいてＬｄｈ活性の増加を示した（図１ｄ）。ＨＦＳＣの代謝をより良く特徴づけるために、液体クロマトグラフィ－質量分析（ＬＣ－ＭＳ）によってマウスの皮膚由来のソートした集団についてメタボローム解析を行った（図１ｅ）。３つの個別の実験で、グルコース／フルクトース－６－リン酸、フルクトース－ビスリン酸、リン酸ジヒドロキシアセトン、３－ホスホグリセリン酸及び乳酸を含むいくつかの解糖代謝物は、（異なる日に異なるマウスから単離した）全表皮に対してＨＦＳＣにおいて決まってより高かった。逆に、大部分のＴＣＡ回路代謝物は、表皮とＨＦＳＣの間に一貫して違いがなかった（図１ｅ）。まとめると、これらの結果では表皮の細胞すべてが広範囲にＴＣＡ回路を使用してエネルギーを発生しながら、ＨＦＳＣではＬｄｈａ発現、Ｌｄｈ活性及び解糖代謝が増加したことを示唆する。

したがって、毛周期の代謝の測定によって、活性化または休止状態と相関するＨＦＳＣにおいて起こる任意の動的変化が分かる。休止期または休止期－成長期移行時、単離したＨＦＳＣ由来のＲＮＡ－ｓｅｑデータの分析によって、ＬｄｈａがＨＦＳＣにおいて発現される優勢なＬｄｈイソ型である（図１ｋ）だけでなく、休止期－成長期移行時、Ｌｄｈａが誘導される（図１ｉ及び１ｊ）（ＮＩＨＧＥＯＧＳＥ６７４０４及びＧＳＥ５１６３５）ことも実証された。ＲＮＡ－ｓｅｑで分析される細胞が休止期または休止期から成長期への移行に実際に存在したことを確認するために、Ｓｈｈ及びＷｎｔ経路（Ｇｌｉ１、２、３；Ｌｅｆ１、Ａｘｉｎ１、Ａｘｉｎ２、Ｃｃｎｄ１）ならびに増殖マーカー（Ｋｉ－６７、Ｐｃｎａ及びＳｏｘ４）を含むこの移行の重要なマーカーを評価した（図４ｅ）。

ソートしたＨＦＳＣ由来の可溶化液に関するｉｎ ｖｉｔｒｏでのＬｄｈ活性アッセイでは、休止期から成長期への移行と相関するＬｄｈ活性の中程度の誘導を明らかにした（図１ｆ、右側）。毛周期の分類はＫｉ－６７免疫染色によって確認され、ＨＦＳＣ活性化を決定した（図４ｃ）。さらに、ソートしたＨＦＳＣから抽出された定常状態の代謝物の測定によって、休止期から休止期－成長期移行まで移行すると、ＨＦＳＣにおいて乳酸が増加し、ＨＦＳＣが休止状態に戻ると、成長期に再び減少することが示された（図１ｈ）。

実施例２：Ｌｄｈ活性の欠失はＨＦＳＣ活性化を遮断する
Ｌｄｈ活性が毛周期の開始時に休止状態のままであるか、または活性化するＨＦＳＣの能力に機能的に関連するかどうかを決定するために、ＨＦＳＣにおいて特異的にＬｄｈａを欠失させた。特異的にＨＦＳＣにおいてミフェプリストンによって誘導されることが知られているＫ１５ＣｒｅＰＲ対立遺伝子を有するマウス^５へ、ＬｄｈａのｌｏｘＰが導入された対立遺伝子を有するマウス^１２を利用して、交雑することによって、ＨＦＳＣにおいてこの酵素を欠失させた。休止期（５０日目）時、ミフェプリストンの投与によって、ＨＦＳＣにおいてＬｄｈａの欠失が開始され、背部の皮膚でｌｏｘＰが導入された対立遺伝子の典型的なモザイク状の組換えに至った。少なくとも３３対の同腹仔にはミフェプリストン治療後３～４週間でほとんどの毛包が休止期のままで、ＬｄｈａのＨＦＳＣに特有の欠失を有するマウスは適切な毛周期を経なかった（図２ａ）。

組織学では、ＷＴ毛包が通常７０日目までに休止期から成長期への移行に入ることが示され、これは下部で皮下組織の典型的な膨張を伴っていた（図２ｂ）。しかし、Ｌｄｈａの欠失を有する背部の皮膚において皮下組織は膨張せず、休止期から成長期への移行は著しく抑制された（図２ｂ）。強い表現型浸透度の領域では、Ｌｄｈ活性はＨＦＳＣ区画において著しく抑制された（図２ｃ）。これにより、Ｌｄｈａ対立遺伝子がＨＦＳＣにおいてＬｄｈ活性にとってきわめて重要であり、Ｌｄｈの「ａ」のイソ型が最高レベルで発現するという事実に矛盾がないことが実証された。多数の動物に対する毛周期進行の定量化によって、Ｌｄｈａを欠いているほとんどの毛包が休止期のままであることが示された（図２ｄ）。

さらに、表現型を確認するために、単独のＨＦＳＣに特有のＣｒｅ戦略によってもＬｄｈａを欠失させた。Ｌｇｒ５－ＣｒｅＥＲは様々な成体の幹細胞モデルにおける分化系列追跡に使用され、ＨＦＳＣを含む高い再生能を有する細胞にマークをつけたことが示された（Ｊａｋｓ，Ｖ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ ４０，１２９１－１２９９（２００８））。同期化した毛周期前の生後５０日目にタモキシフェンで治療されたＬｇｒ５ＣｒｅＥＲ；Ｌｄｈａ^{ｆｌ／ｆｌ}マウスも少なくとも２０対の同腹仔に対して成長期を活性化しなかった（図２ｇ）。ｉｎ ｓｉｔｕでのＬｄｈアッセイ及びメタボローム解析では、これらの動物におけるＬｄｈａの欠失の成功を確認した（図２ｈ及び２ｉ）。

Ｋ１５＋細胞におけるＬｄｈａ活性の損失の効果は、６ヵ月間にわたってモニタリングされ、Ｌｄｈａの欠失が背部の皮膚のいくつかの部分でＨＦＳＣ活性化のモザイク状であり、持続的な遮断を導くことを発見した（図４ｆ）。これらのデータから、Ｌｄｈ活性がＨＦＳＣ活性化に必要であり、単にＨＦＳＣのマーカーでないことが確認される。これらの長期Ｌｄｈａ欠失のより綿密な観察から、Ｌｄｈａが存在しないＨＦＳＣが典型的マーカーの発現を継続するが、Ｌｄｈ活性が欠け、更に新規な毛周期を開始しないことが示された。一方、欠失を回避した毛包は、Ｌｄｈａを発現し、正常に循環し続けたことが示された（図４ｇ及び図４ｈ）。

Ｌｄｈａの欠失を有するまたは持たない動物由来のＨＦＳＣをソートした後、ＬＣ－ＭＳに基づくメタボローム解析によって、他の解糖代謝物のレベルと同様に、乳酸レベルがＬｄｈａの非存在下で強く低下したことが実証された（図２ｅ）。これはターゲッティング戦略が成功したという機能的な証拠であった。乳酸の上流の解糖代謝物が抑制されたという事実は、ＨＦＳＣがそれらの代謝を適応させ、Ｌｄｈ活性の損失を埋めることができることを示唆する。ＨＦＳＣ活性化及び増殖のマーカーに対する免疫染色によって、ＨＦＳＣ活性化の失敗が示された。Ｋｉ６７及びｐＳ６は、毛周期の開始時にＨＦＳＣニッチで豊富であることが明らかに実証され^１３、これらのマーカー両方がＬｄｈａが欠失した背部の皮膚において存在しなかった（図３ｆ）。Ｌｄｈａに対する免疫染色からも、このタンパク質の欠失の成功が確認された。一方、ＨＦＳＣのマーカーであるＳｏｘ９に対する染色によって、これらの細胞がそれらのニッチに残存するが、Ｌｄｈａの非存在下で活性化しないことが示された（図３ｆ）。毛周期の誘導もＳｈｈ、Ｗｎｔ及びＪａｋ－Ｓｔａｔ経路からのシグナル伝達によって調整されると考えられる。これらはそれぞれ正常な毛包またはＬｄｈａが欠失した毛包におけるＩＨＣによって分析され、一般に、これらの経路が、休止期－成長期移行に移らないＬｄｈａが存在しないＨＦＳＣにおいて活性化されないことが分かった（図４ｉ）。

実施例３：毛包幹細胞におけるＭｐｃ１の欠失は新規な毛周期を活性化する
Ｋ１５ＣｒｅＰＲ動物は、ミトコンドリアのピルビン酸担体１（Ｍｐｃ１）についてｌｏｘＰが導入された動物に交雑された（Ｋ１５ＣｒｅＰＲ；Ｍｐｃ１^{ｆｌ／ｆｌ}）。Ｍｐｃ２を有するヘテロ二量体であるＭｐｃ１は、ミトコンドリアのピルビン酸担体ＭＰＣ、つまり、ミトコンドリアへのピルビン酸の侵入に必要とされるミトコンドリア内膜上のトランスポーターを形成する^１５。Ｍｐｃ１の機能の喪失は、Ｌｄｈによるピルビン酸の乳酸への転換の強化によって乳酸の産生を促すことを示した^１６。

ＨＦＳＣにおけるＭｐｃ１の欠失を有する動物において、腹部及び背部の毛周期の強い加速は休止期－成長期移行の典型的特徴すべてについて観察された（図３ａ）（同腹仔１２対；図６ａにおいて示された追加の動物）。ミフェプリストンで治療したＫ１５ＣｒｅＰＲ；Ｍｐｃ１^{ｆｌ／ｆｌ}動物だけが、７０日目までに背部の成長期の任意の兆候を示した。ソートしたＨＦＳＣに関するウエスタンブロット法によって、Ｍｐｃ１タンパク質の損失が確認された（図３ｂ）。重要なことに、Ｍｐｃ１が欠けている精製されたＨＦＳＣは、Ｌｄｈ活性の強い誘導を示した（図３ｃ）。同腹仔３対に対する背部の毛周期の定量化によって、Ｍｐｃ１を欠いている背部の皮膚において成長期の強い誘導が示され（図３ｄ）、組織学から、成長期誘導が典型的な皮下組織の膨張を伴って見かけ上、正常であることが示された（図３ｅ）。免疫染色によって、Ｋｉ－６７及びｐＳ６などの毛周期活性化の種々のマーカーのＭｐｃ１が存在しないＨＦＳＣにおける誘導が実証されたが、Ｓｏｘ９発現では影響を受けなかった（図３ｆ）。Ｓｏｘ９に対する病理学及び染色で判断されるように、Ｍｐｃ１の長期欠失によって、異常な毛包またはＨＦＳＣの染着は発生しなかった（図４ｊ）。さらに、Ｌｇｒ５ＣｒｅＥＲでのＭｐｃ１の欠失はＫ１５ＣｒｅＰＲでの欠失と非常に類似の表現型を示し（図３ｆ及び図３ｇ）、ＨＦＳＣにおけるこのタンパク質の欠失がそれらの活性化を導くという事実を実証した（ｎ＝１２対の同腹仔）。最後に、Ｋｉ－６７と共にＬｇｒ５ＣｒｅＥＲ導入遺伝子のＩｒｅｓ－ＧＦＰに対する蛍光抗体法及びＫ１５ＣｒｅＰＲ；Ｍｐｃ１^{ｆｌ／ｆｌ}；ｌｓｌ－Ｔｏｍａｔｏマウスを使用する分化系列追跡からも、ＨＦＳＣがタモキシフェンまたはミフェプリストンによってＭｐｃ１欠失を誘導した後、実際に増殖することが実証された（図４ｋ）。

一方、毛包（毛漏斗、脂腺前駆細胞）の上部におけるＭｐｃ１の欠失及びＬｇｒ６ＣｒｅＥＲを有する限定数の毛包間細胞^２８は、少なくとも２ヵ月にわたり毛周期（Ｌｇｒ６ＣｒｅＥＲ；Ｍｐｃ１^{ｆｌ／ｆｌ}）（ｎ＝１０対の同腹仔）または一般的な皮膚ホメオスタシスに影響を及ぼすように見えなかった（図４ｌ）。野生型または欠失皮膚からソートされたＬｇｒ６＋細胞に関するＬｄｈ活性アッセイによって、Ｍｐｃ１欠失が有効であることが実証された（図４ｍ）。まとめて、これらの結果からＴＣＡ回路へのピルビン酸の遮断により乳酸の産生が増加すると、活性化されて新規な毛周期を開始するＨＦＳＣの能力への強い効果を有するが、毛包の他の細胞にはそのような効果はないことが分かる。

式（Ｉ）の化合物は、ミトコンドリアのピルビン酸担体の非常に確立した薬学的阻害剤であり、種々の現場で結果として乳酸の産生を促進することが知られている^１７。式（Ｉ）の化合物を使用する休止期（５０日目）の動物の局所治療によって毛周期の堅調な加速、ならびに毛包間表皮の微量の過剰増殖（図３ｉ）が引き起こされた。少なくとも６対の動物（ビヒクル対式（Ｉ）の化合物）に対する毛周期の定量化によって、毛周期の堅調な加速が示され、わずか３～５日で開始された（図３ｊ）。Ｍｐｃ１の遺伝子欠失と同様に、式（Ｉ）の化合物の休止期間における４８時間の局所塗布によるミトコンドリアのピルビン酸担体の薬学的遮断によって、毛包間表皮におけるＬｄｈ活性の増加が促進し、これは乳酸の産生の能力の増加と一致する（図３ｋ）。最後に、メタボローム解析によって、式（Ｉ）の化合物の局所塗布はソートしたＨＦＳＣにおける乳酸の総量を増加させることが実証された（図３ｌ）。

まとめると、これらのデータから、Ｌｄｈａを介する乳酸の産生がＨＦＳＣ活性化にとって重要であり、ＨＦＳＣがＭｙｃの活性を介して少なくとも部分的に解糖代謝にとって高い能力を維持することができることが実証された。乳酸産生の遺伝的または薬学的破壊によって、ＨＦＳＣの活性を調整することができる。

実施例４：高齢マウスの治療では毛周期が加速された
１７ヵ月齢マウスを剃毛し、ＤＭＳＯまたはＰＬＯゲル（プルロニックレシチンオルガノゲル）で希釈した式（Ｉ）の化合物２０ｕＭで１日おきに治療した。剃毛後の指定日に画像を撮り、３０日間それを行った。ＤＭＳＯで治療した高齢マウスでは、背部の外被が斑状模様に伸びた。一方、式（Ｉ）の化合物で治療した場合、より完全に再生された（図７）。

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５．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｒ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｃａｐｔｕｒｉｎｇ ａｎｄ ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ ａｄｕｌｔ ｈａｉｒ ｆｏｌｌｉｃｌｅ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２２，４１１－４１７（２００４）．
６．Ｔｒｅｍｐｕｓ，Ｃ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ ｆｏｒ ｌｉｖｉｎｇ ｍｕｒｉｎｅ ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｈａｉｒ ｆｏｌｌｉｃｌｅ ｂｕｌｇｅ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｓｕｒｆａｃｅ ｍａｒｋｅｒ ＣＤ３４．Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ １２０，５０１－５１１（２００３）．
７．Ｎｇｕｙｅｎ，Ｈ．，Ｒｅｎｄｌ，Ｍ．＆Ｆｕｃｈｓ，Ｅ．Ｔｃｆ３ ｇｏｖｅｒｎｓ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｆｅａｔｕｒｅｓ ａｎｄ ｒｅｐｒｅｓｓｅｓ ｃｅｌｌ ｆａｔｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｉｎ ｓｋｉｎ．Ｃｅｌｌ １２７，１７１－１８３（２００６）．
８．Ｌｏｗｒｙ，Ｗ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．Ｄｅｆｉｎｉｎｇ ｔｈｅ ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ｂｅｔａ－ｃａｔｅｎｉｎ／Ｔｃｆ ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｎ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ １９，１５９６－１６１１（２００５）．
９．Ｆｒｏｍｍ，Ｈ．Ｊ．Ｔｈｅ ｎａｔｕｒｅ ｏｆ ｐｙｒｕｖａｔｅ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｅｎｚｙｍｉｃ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌ－ｌａｃｔａｔｅ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｂｂｉｔ－ｍｕｓｃｌｅ ｌａｃｔａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ．Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ ９９，５４０－５４２（１９６５）．
１０．Ｐａｕｓ，Ｒ．，Ｍｕｌｌｅｒ－Ｒｏｖｅｒ，Ｓ．＆Ｂｏｔｃｈｋａｒｅｖ，Ｖ．Ａ．Ｃｈｒｏｎｏｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ ｈａｉｒ ｆｏｌｌｉｃｌｅ：ｈｕｎｔｉｎｇ ｔｈｅ“ｈａｉｒ ｃｙｃｌｅ ｃｌｏｃｋ”．Ｊ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ Ｄｅｒｍａｔｏｌ Ｓｙｍｐ Ｐｒｏｃ ４，３３８－３４５（１９９９）．
１１．Ｗａｎｇ，Ｌ．，Ｓｉｅｇｅｎｔｈａｌｅｒ，Ｊ．Ａ．，Ｄｏｗｅｌｌ，Ｒ．Ｄ．＆Ｙｉ，Ｒ．Ｆｏｘｃ１ ｒｅｉｎｆｏｒｃｅｓ ｑｕｉｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗｉｎｇ ｈａｉｒ ｆｏｌｌｉｃｌｅ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ３５１，６１３－６１７，ｄｏｉ：１０．１１２６／ｓｃｉｅｎｃｅ．ａａｄ５４４０（２０１６）．
１２．Ｘｉｅ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｌａｃｔａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ－－ａ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｔｕｍｏｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｉｍｐａｃｔｓ ｔｕｍｏｒ－ｉｎｉｔｉａｔｉｎｇ ｃｅｌｌｓ．Ｃｅｌｌ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ １９，７９５－８０９，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｍｅｔ．２０１４．０３．００３（２０１４）．
１３．Ｋｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒ，Ａ．Ｊ．＆Ｔａｕｃｈｉ，Ｍ．Ｍａｍｍａｌｉａｎ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ｒａｐａｍｙｃｉｎ ｃｏｍｐｌｅｘ １（ｍＴＯＲＣ１）ｍａｙ ｍｏｄｕｌａｔｅ ｔｈｅ ｔｉｍｉｎｇ ｏｆ ａｎａｇｅｎ ｅｎｔｒｙ ｉｎ ｍｏｕｓｅ ｈａｉｒ ｆｏｌｌｉｃｌｅｓ．Ｅｘｐ Ｄｅｒｍａｔｏｌ ２２，７７－８０，ｄｏｉ：１０．１１１１／ｅｘｄ．１２０６２（２０１３）．
１４．Ｊａｋｓ，Ｖ．ｅｔ ａｌ．Ｌｇｒ５ ｍａｒｋｓ ｃｙｃｌｉｎｇ，ｙｅｔ ｌｏｎｇ－ｌｉｖｅｄ，ｈａｉｒ ｆｏｌｌｉｃｌｅ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ ４０，１２９１－１２９９，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｇ．２３９（２００８）．
１５．Ｂｒｉｃｋｅｒ，Ｄ．Ｋ．ｅｔ ａｌ．Ａ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｐｙｒｕｖａｔｅ ｃａｒｒｉｅｒ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｐｙｒｕｖａｔｅ ｕｐｔａｋｅ ｉｎ ｙｅａｓｔ，Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ，ａｎｄ ｈｕｍａｎｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３７，９６－１００，ｄｏｉ：１０．１１２６／ｓｃｉｅｎｃｅ．１２１８０９９（２０１２）．
１６．Ｓｃｈｅｌｌ，Ｊ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．Ａ ｒｏｌｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｐｙｒｕｖａｔｅ ｃａｒｒｉｅｒ ａｓ ａ ｒｅｐｒｅｓｓｏｒ ｏｆ ｔｈｅ Ｗａｒｂｕｒｇ ｅｆｆｅｃｔ ａｎｄ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ．Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ ５６，４００－４１３，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｍｏｌｃｅｌ．２０１４．０９．０２６（２０１４）．
１７．Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ，Ｊ．Ｎ．ｅｔ ａｌ．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｏｆ ｐｙｒｕｖａｔｅ ｉｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｇｌｕｃｏｓｅ－ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ｉｎｓｕｌｉｎ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８９，１３３３５－１３３４６，ｄｏｉ：１０．１０７４／ｊｂｃ．Ｍ１１３．５２１６６６（２０１４）．
１８．Ｈｓｕ，Ｐ．＆Ｑｕ，Ｃ．Ｋ．Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ ａｎｄ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｂｉｏｌｏｇｙ．Ｃｕｒｒｅｎｔ ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ ２０，２８９－２９４，ｄｏｉ：１０．１０９７／ＭＯＨ．０ｂ０１３ｅ３２８３６０ａｂ４ｄ（２０１３）．
１９．Ｈａｒｒｉｓ，Ｊ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ｇｌｕｃｏｓｅ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｉｍｐａｃｔｓ ｔｈｅ ｓｐａｔｉｏｔｅｍｐｏｒａｌ ｏｎｓｅｔ ａｎｄ ｍａｇｎｉｔｕｄｅ ｏｆ ＨＳＣ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｖｉｖｏ．Ｂｌｏｏｄ １２１，２４８３－２４９３，ｄｏｉ：１０．１１８２／ｂｌｏｏｄ－２０１２－１２－４７１２０１（２０１３）．
２０．Ｔａｋｕｂｏ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｌｙｃｏｌｙｓｉｓ ｂｙ Ｐｄｋ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ａｓ ａ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ ｆｏｒ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｑｕｉｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ １２，４９－６１，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍ．２０１２．１０．０１１（２０１３）．
２１．Ｓｉｍｓｅｋ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｐｒｏｆｉｌｅ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｒｅｆｌｅｃｔｓ ｔｈｅｉｒ ｌｏｃａｔｉｏｎ ｉｎ ａ ｈｙｐｏｘｉｃ ｎｉｃｈｅ．Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ ７，３８０－３９０，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍ．２０１０．０７．０１１（２０１０）．
２２．Ｓｈｉｎ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｓｉｎｇｌｅ－Ｃｅｌｌ ＲＮＡ－Ｓｅｑ ｗｉｔｈ Ｗａｔｅｒｆａｌｌ Ｒｅｖｅａｌｓ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｓｃａｄｅｓ ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇ Ａｄｕｌｔ Ｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ １７，３６０－３７２，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍ．２０１５．０７．０１３（２０１５）．
２３．Ｉｔｏ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｈａｉｒ ｆｏｌｌｉｃｌｅ ｂｕｌｇｅ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅ ｔｏ ｗｏｕｎｄ ｒｅｐａｉｒ ｂｕｔ ｎｏｔ ｔｏ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ．Ｎａｔ Ｍｅｄ １１，１３５１－１３５４（２００５）．
２４．Ｓｕｂｒａｍａｎｉａｎ，Ａ．ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎｅ ｓｅｔ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓ：ａ ｋｎｏｗｌｅｄｇｅ－ｂａｓｅｄ ａｐｐｒｏａｃｈ ｆｏｒ ｉｎｔｅｒｐｒｅｔｉｎｇ ｇｅｎｏｍｅ－ｗｉｄｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｏｆｉｌｅｓ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ １０２，１５５４５－１５５５０，ｄｏｉ：１０．１０７３／ｐｎａｓ．０５０６５８０１０２（２００５）．

参照による援用
本明細書に引用されるすべての米国及びＰＣＴ特許出願公報ならびに米国特許は、それぞれ個々の公報または特許が参照により援用されることを明確にかつ個別に示したかのように、それらの全体が参照により本明細書に援用される。不一致がある場合、本明細書における任意の定義を含む本出願が優先される。
以下は、本発明の実施形態の一つである。
（１）育毛を加速、促進または回復する方法であって、それを必要とする対象に有効量の式（Ｉ）：

の化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、前記方法。
（２）投与が患部に前記化合物を含む組成物を局所的に塗布することを含む、（１）に記載の方法。
（３）前記対象が禿頭症、脱毛、毛髪菲薄化及び脱毛症から選択される徴候を示す、（１）または（２）に記載の方法。
（４）前記対象が脱毛、毛髪菲薄化及び脱毛症から選択される徴候を示す、（１）～（３）のいずれかに記載の方法。
（５）前記対象が脱毛症を示す、（１）～（４）のいずれかに記載の方法。
（６）前記脱毛症が男性型脱毛症または女性型脱毛症である、（５）に記載の方法。
（７）前記対象が脱毛及び毛髪菲薄化から選択される徴候を示す、（１）～（４）のいずれかに記載の方法。
（８）前記脱毛または前記毛髪菲薄化が成長期脱毛または休止期脱毛によって生じる、（７）に記載の方法。
（９）前記禿頭症は、若年性脱毛症、早発性脱毛症、老人性脱毛症、円形脱毛症、アンドロゲン性脱毛症、機械的脱毛症及び症候性脱毛症から選択される、（３）に記載の方法。
（１０）前記化合物が毛包に塗布される、（１）～（９）のいずれかに記載の方法。
（１１）前記式（Ｉ）の化合物が毎日投与される、（１）～（１０）のいずれかに記載の方法。
（１２）前記対象がほ乳類である、（１）～（１１）のいずれかに記載の方法。
（１３）前記対象がヒトである、（１）～（１２）のいずれかに記載の方法。
（１４）式（Ｉ）：

の化合物またはその薬学的に許容される塩、及び皮膚への局所塗布に適した担体または賦形剤を含む組成物。
（１５）前記化合物の濃度が前記組成物の約０．００１重量％～約１０重量％である、（１４）に記載の組成物。
（１６）前記組成物がエマルジョンである、（１４）または（１５）に記載の組成物。
（１７）前記組成物が界面活性剤、増粘剤、芳香剤、ＵＶ遮断剤、ワックス、シリコーン、防腐剤、油、ビタミン、プロビタミン、乳白剤、抗酸化剤、乳化剤、賦形剤、溶媒及びバッファーから選択される成分を更に含む、（１４）～（１６）のいずれかに記載の組成物。
（１８）前記組成物が乳化剤を更に含む、（１４）～（１７）のいずれかに記載の組成物。
（１９）前記組成物がシャンプー、ヘアリンス、ヘアコンディショナー、ポマード、ヘアジェル、ムース、水アルコール性トニック、クリーム、スプレー、エマルジョン及び液体から選択される形態で塗布される、（１４）～（１８）のいずれかに記載の組成物。
（２０）育毛を減速または停止する症状の治療用薬物の製造における、（１４）～（１９）のいずれかに記載の組成物の使用。
（２１）育毛を減速または停止する前記症状は、禿頭症、脱毛、毛髪菲薄化及び脱毛症から選択される、（２０）に記載の使用。
（２２）禿頭症、脱毛、毛髪菲薄化及び脱毛症から選択される症状の治療用薬物の製造における、（１４）～（１９）のいずれかに記載の組成物の使用。
（２３）脱毛症の治療のための、（２１）または（２２）に記載の使用。
（２４）前記脱毛症が男性型脱毛症または女性型脱毛症である、（２３）に記載の使用。
（２５）脱毛及び毛髪菲薄化から選択される症状の治療のための、（２１）または（２２）に記載の使用。
（２６）前記脱毛または前記毛髪菲薄化が成長期脱毛または休止期脱毛によって生じる、（２５）に記載の使用。
（２７）前記禿頭症は、若年性脱毛症、早発性脱毛症、老人性脱毛症、円形脱毛症、アンドロゲン性脱毛症、機械的脱毛症及び症候性脱毛症から選択される、（２１）または（２２）に記載の使用。

Claims (16)

1. 育毛を減速または停止する症状の治療用薬物の製造における化合物の使用であって、前記化合物が式（Ｉ）：
   

   

   の化合物またはその薬学的に許容される塩である、使用。
2. 禿頭症、脱毛、毛髪菲薄化及び脱毛症から選択される症状の治療用薬物の製造における化合物の使用であって、前記化合物が式（Ｉ）：
   

   

   の化合物またはその薬学的に許容される塩である、使用。
3. 前記症状が脱毛症である、請求項１または２に記載の使用。
4. 前記脱毛症が男性型脱毛症または女性型脱毛症である、請求項３に記載の使用。
5. 前記症状が脱毛及び毛髪菲薄化から選択される、請求項１または２に記載の使用。
6. 前記症状が成長期脱毛または休止期脱毛によって生じる、請求項５に記載の使用。
7. 前記症状が、若年性脱毛症、早発性脱毛症、老人性脱毛症、円形脱毛症、アンドロゲン性脱毛症、機械的脱毛症及び症候性脱毛症から選択される、請求項１または２に記載の使用。
8. 育毛を減速または停止する症状の治療における使用のための医薬組成物であって、式（Ｉ）：
   

   

   の化合物またはその薬学的に許容される塩、及び皮膚への局所塗布に適した担体または賦形剤を含む、医薬組成物。
9. 前記症状が脱毛症である、請求項８に記載の使用のための医薬組成物。
10. 前記脱毛症が男性型脱毛症または女性型脱毛症である、請求項９に記載の使用のための医薬組成物。
11. 前記症状が脱毛及び毛髪菲薄化から選択される、請求項８に記載の使用のための医薬組成物。
12. 前記症状が禿頭症である、請求項８に記載の使用のための医薬組成物。
13. 前記症状が、若年性脱毛症、早発性脱毛症、老人性脱毛症、円形脱毛症、アンドロゲン性脱毛症、機械的脱毛症及び症候性脱毛症から選択される、請求項８に記載の使用のための医薬組成物。
14. 前記症状が成長期脱毛または休止期脱毛によって生じる、請求項８～１３のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
15. 前記化合物の濃度が前記組成物の０．００１重量％～１０重量％である、請求項８～１３のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
16. 前記組成物がエマルジョンである、請求項８～１３のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。

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