KR20140134291A - 재조합 인자 viii 단백질 - Google Patents

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Abstract

재조합 인자 VIII 단백질, 예를 들어, 인자 III A 도메인 내에 위치되는 가요성의 허용적 루프 내로 삽입된 이종성 모이어티를 지니는 인간 인자 VIII 단백질이 제공되며, 한편으로 이는 인자 VIII의 응혈촉진 활성을 보유한다.

Description

재조합 인자 VIII 단백질{RECOMBINANT FACTOR VIII PROTEINS}
혈우병은 혈액 응고가 특정 혈장 응고 인자의 결여에 의해 방해되는 출혈 장애이다. A형 혈우병 및 B형 혈우병은 각각 인자 VIII(FVIII) 및 인자 IX에서의 결핍에 의해 야기되는 혈우병의 2가지 상이한 유형이다.
A형 혈우병은 자발적 출혈 및 외상 후 과도한 출혈을 특징으로 한다. 시간에 거쳐서, 종종 유아기에 시작되는 근육 및 관절 내로 반복된 출혈은 혈우병성 관절증 및 비가역적 관절 손상을 초래한다. 이 손상은 진행성이며, 관절의 심하게 제한된 이동, 근위축 및 만성 통증을 야기할 수 있다(본 명세서에 참조로서 포함된 문헌[Rodriguez-Merchan, E.C., Semin.Thromb. Hemost. 29:87-96 (2003)]).
B형 혈우병(또한 크리스마스병으로서 알려짐)은 세계에서 가장 흔한 유전성 출혈 장애이다. 이는 감소된 생체내 및 시험관내 혈액 응고 활성을 초래하며, 병에 걸린 개체의 생애 전반적으로 광범위한 의학적 모니터링을 필요로 한다. 개입이 없을 때, 병에 걸린 개체는 중증의 통증 및 허약성 부동을 만드는 관절에서의 자발적 출혈로 고통받을 것이며; 근육 내로의 출혈은 해당 조직에서 혈액의 축적을 초래하고; 목구멍 및 목에서의 자발적 출혈은 즉시 치료되지 않는다면 질식을 야기할 수 있으며; 수술, 경미한 사고의 손상 또는 발치 후 중증의 출혈이 또한 만연한다.
혈우병의 치료는 FVIII 및 인자 IX 활성의 복원을 표적화하는 대체 요법에 의한다. A형 혈우병의 치료는 정상 수준의 1 내지 5%로 FVIII 활성의 회복을 표적화하는 대체 요법에 의해 자발적 출혈을 방지한다(본 명세서에 그것의 전문이 참조로서 포함된 문헌[Mannucci, P.M., et al ., N. Engl . J. Med . 344:1773-1779 (2001)]). 요구에 따라 출혈 에피소드를 치료하고 예방적으로 치료함으로써 출혈 에피소드가 일어나는 것을 방지하는데 이용가능한 혈장 유래 및 재조합 FVIII 산물이 있다. 이들 산물의 반감기에 기반하여, 치료 요법은 빈번한 정맥내 투여를 필요로 한다. 이러한 빈번한 투여는 통증이 있으며, 불편하다.
본 개시내용은 식 I: (A1)-a1-(A2)-a2-[B]를 포함하는 제1 폴리펩타이드; 및 식 II: a3-(A3)-(C1)을 포함하는 제2 폴리펩타이드를 포함하는 재조합 FVIII 단백질을 제공하며; 여기서 제1 폴리펩타이드 및 제2 폴리펩타이드는 헤테로다이머로서 융합되거나 또는 존재하고; 여기서, a) A1는 FVIII의 A1 도메인이며; b) A2는 FVIII의 A2 도메인이고; c) [B]는 FVIII의 B 도메인, 이의 단편이거나, 또는 결실되거나 또는 선택적으로 존재하지 않으며; d) A3은 FVIII의 A3 도메인이고; e) C1은 FVIII의 C1 도메인이며; f) a1, a2 및 a3은 산성 스페이서 영역이고; A1 도메인은 허용적 루프(permissive loop)-1(A1-1) 영역 및 허용적 루프-2(A1-2) 영역을 포함하며; A2 도메인은 허용적 루프-1(A2-1) 영역 및 허용적 루프-2(A2-2) 영역을 포함하고; A3 도메인은 허용적 루프-1(A3-1) 영역 및 허용적 루프-2(A3-2) 영역을 포함하며; 영역 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 중 적어도 하나는 이종성 모이어티(heterologous moiety)를 포함하고; 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 나타낸다.
본 개시내용은 식 I: (A1)-a1-(A2)-a2-[B]를 포함하는 제1 폴리펩타이드; 및 식 II: a3-(A3)-(C1)을 포함하는 제2 폴리펩타이드를 포함하는 재조합 FVIII 단백질을 추가로 제공하며; 여기서 제1 폴리펩타이드 및 제2 폴리펩타이드는 헤테로다이머로서 융합되거나 또는 존재하고; a) A1은 FVIII의 A1 도메인이며; b) A2는 FVIII의 A2 도메인이고; c) [B]는 FVIII의 B 도메인, 이의 단편이거나, 또는 결실되거나 또는 선택적으로 존재하지 않으며; d) A3은 FVIII의 A3 도메인이고; e) C1은 FVIII의 C1 도메인이며; f) a1, a2 및 a3은 산성 스페이서 영역이고; a3은 이종성 모이어티를 포함하며; 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 나타낸다.
제1 폴리펩타이드 및 제2 폴리펩타이드가 식 (A1)-a1-(A2)-a2-[B]-[a3]-(A3)-(C1)을 포함하는 단일 폴리펩타이드 쇄를 형성하는 본 발명의 재조합 FVIII 단백질이 추가로 제공된다. 제2 폴리펩타이드가 식 [a3]-(A3)-(C1)-(C2)를 포함하는 본 발명의 재조합 FVIII 단백질이 추가로 제공되며, 여기서 (C2)는 FVIII의 C2 도메인이다).
특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질의 허용적 루프는 표면-노출된, 가요성 루프 구조 내에 함유된다. 예를 들어, DSSP 데이터베이스의 등록번호 2R7E로서 저장된 성숙 FVIII의 2차 구조에 따라, A1-1은 베타 가닥 1과 베타 가닥 2 사이에 위치되며, A1-2는 베타 가닥 11과 베타 가닥 12 사이에 위치되고, A2-1은 베타 가닥 22와 베타 가닥 23 사이에 위치되며, A2-2는 베타 가닥 32와 베타 가닥 33 사이에 위치되고, A3-1은 베타 가닥 38과 베타 가닥 39 사이에 위치되며, A3-2는 베타 가닥 45와 베타 가닥 46 사이에 위치된다. 특정 양태에서, A1-1을 포함하는 표면-노출된, 가요성 루프 구조는 서열번호 1의 약 아미노산 15 내지 약 아미노산 45, 예를 들어, 서열번호 1의 약 아미노산 18 내지 약 아미노산 41의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응된다. 특정 양태에서, A1-2를 포함하는 표면-노출된, 가요성 루프 구조는 서열번호 1의 약 아미노산 201 내지 약 아미노산 232, 예를 들어, 서열번호 1의 약 아미노산 218 내지 약 아미노산 229의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응된다. 특정 양태에서 A2-1을 포함하는 표면-노출된, 가요성 루프 구조는 서열번호 1의 약 아미노산 395 내지 약 아미노산 421, 예를 들어, 서열번호 1의 약 아미노산 397 내지 약 아미노산 418의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응된다. 특정 양태에서, A2-2를 포함하는 표면-노출된, 가요성 루프 구조는 서열번호 1의 약 아미노산 577 내지 약 아미노산 635, 예를 들어, 서열번호 1의 약 아미노산 595 내지 약 아미노산 607의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응된다. 특정 양태에서, A3-1을 포함하는 표면-노출된, 가요성 루프 구조는 서열번호 1의 약 아미노산 1705 내지 약 아미노산 1732, 예를 들어, 서열번호 1의 약 아미노산 1711 내지 약 아미노산 1725의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응된다. 특정 양태에서, A3-2를 포함하는 표면-노출된, 가요성 루프 구조는 서열번호 1의 약 아미노산 1884 내지 약 아미노산 1917, 예를 들어, 서열번호 1의 약 아미노산 1899 내지 약 아미노산 1911의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응된다. 일부 실시형태에서, a3은 서열번호 1의 약 아미노산 1649 내지 아미노산 1689의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응된다.
특정 양태에서, 영역 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 중 적어도 2은 이종성 모이어티를 포함한다.
특정 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 서열번호 1의 아미노산 18, 서열번호 1의 아미노산 22, 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 40, 서열번호 1의 아미노산 216, 서열번호 1의 아미노산 220, 서열번호 1의 아미노산 224, 서열번호 1의 아미노산 399, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 409, 서열번호 1의 아미노산 599, 서열번호 1의 아미노산 603, 서열번호 1의 아미노산 1711, 서열번호 1의 아미노산 1720, 서열번호 1의 아미노산 1725, 서열번호 1의 아미노산 1900, 서열번호 1의 아미노산 1905, 서열번호 1의 아미노산 1910 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 성숙 천연 인간 FVIII에서의 아미노산에 대응되는 삽입 부위에서 이종성 모이어티를 포함한다.
특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질(이때 적어도 하나의 허용적 루프는 이종성 모이어티를 포함함)은 a3에서 추가적인 이종성 모이어티를 추가로 포함한다. 예를 들어, a3 영역은 서열번호 1의 약 아미노산 1649 내지 약 아미노산 1689이다. 특정 양태에서, 재조합 FVIII 단백질의 a3은 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 삽입 부위에서 추가적인 이종성 모이어티를 포함한다.
특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질(a3은 이종성 모이어티를 포함함) 상기 기재한 바와 같은 영역 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 중 적어도 하나에서 추가적인 이종성 모이어티를 추가로 포함한다. 특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 a3에서 이종성 모이어티, 및 상기 기재한 바와 같은 영역 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 중 적어도 하나에서 2개의 추가적인 이종성 모이어티를 포함한다. 특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 a3에서 이종성 모이어티, 및 상기 기재한 바와 같은 영역 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 중 적어도 하나에서 3개의 추가적인 이종성 모이어티를 포함한다.
특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 하나 이상의 아미노산의 서열을 포함하는 적어도 하나의 이종성 모이어티를 포함한다.
특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 단백질의 반감기, 예를 들어 생체내 반감기를 증가시키는 적어도 하나의 이종성 모이어티를 포함한다. 특정 양태에서, 재조합 FVIII 단백질의 반감기를 증가시키는 이종성 모이어티는 알부민, 알부민-결합 폴리펩타이드(ABP), XTEN, Fc, PAS, 인간 융모성 생식선 자극호르몬의 β 서브유닛의 C-말단 펩타이드(CTP), 폴리에틸렌 글라이콜(PEG), 하이드록시에틸 전분(HES), 알부민-결합 소분자, 또는 이들의 조합을 포함한다. 특정 양태에서, 재조합 FVIII 단백질의 반감기를 증가시키는 이종성 모이어티는 클리어런스 수용기(clearance receptor), 또는 이의 단편을 포함하되, 클리어런스 수용기는 FVIII 클리어런스 수용기에 대한 재조합 FVIII 단백질의 결합을 차단한다. 특정 양태에서, 클리어런스 수용기는 저밀도 리포단백질 수용기 관련 단백질 1(LRP1) 또는 이의 FVIII-결합 단편이다.
특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 재조합 FVIII 단백질의 시각화 또는 국소화(visualization or localization)를 가능하게 하는 펩타이드 또는 폴리펩타이드를 포함하는 적어도 하나의 이종성 모이어티를 포함한다. 시각화 또는 국소화는 시험관내, 생체내, 생체밖 또는 이들의 임의의 조합으로 가능하게 될 수 있다. 특정 양태에서, 시각화 또는 국소화를 가능하게 하는 펩타이드 또는 폴리펩타이드는 바이오틴 수용체(acceptor) 펩타이드, 리포산 수용체 펩타이드, 형광 단백질, 2비소 염료의 결찰을 위한 또는 준안정(metastable) 테크네튬을 컨쥬게이트하기 위한 시스테인-함유 펩타이드, 형광 공명 에너지 전이(fluorescence resonance energy transfer: FRET)-기반 근접 분석을 위한 유로퓸 클라스레이트를 컨쥬게이팅하기 위한 펩타이드, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 특정 양태에서, 형광 단백질은 GFP, RFP, YFP, EGFP 또는 EYFP이다. 특정 양태에서, 2비소 염료는 4',5'-비스(1,3,2-다이티오아솔란-2-일)플루오레세인(FlAsH)이다. 특정 양태에서, 바이오틴 수용체 펩타이드는 아비딘- 및 스트렙타비딘-계 시약의 컨쥬게이션을 가능하게 한다. 특정 양태에서, 리포산 수용체 펩타이드는 리포산에 대한 티올-반응성 프로브의 컨쥬게이션 또는 형광 리포산 유사체의 직접 결찰을 가능하게 한다.
특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 단백질의 안정성을 증가시키는 적어도 하나의 이종성 모이어티를 포함한다.
특정 양태에서 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 천연 FVIII의 응혈촉진 활성의 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100%를 가진다. 응혈촉진 활성은, 예를 들어 색원체 기질 분석, 1 단계 응고 분석 또는 둘 다에 의해 측정될 수 있다.
본 발명의 재조합 FVIII 단백질을 암호화하는 서열을 포함하는 단리된 핵산, 또는 단리된 핵산 분자를 포함하는 벡터, 예를 들어, 발현 벡터, 또는 숙주 세포가 추가로 제공된다. 특정 양태에서, 숙주 세포는 본 발명의 재조합 FVIII 단백질을 발현시키며, 여기서 발현은 생체내 또는 시험관내일 수 있다. 재조합 FVIII 단백질이 발현되는 조건 하에서 본 발명의 숙주 세포를 배양시키는 단계를 포함하는, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질을 생산하는 방법이 추가로 제공된다.
본 발명은 추가로 본 발명의 재조합 FVIII 단백질, 본 발명의 단리된 핵산, 본 발명의 발현 벡터, 또는 본 발명의 숙주 세포, 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 조성물을 제공한다.
본 발명의 조성물의 유효량을 투여함으로써 치료가 필요한 환자에서 응고 질환 또는 병태를 예방하거나, 치료하거나, 개선시키거나 또는 관리하는 방법이 추가로 제공된다. 본 발명의 조성물로 환자에서 응고 질환 또는 병태를 진단하거나 또는 영상화하는 방법이 추가로 제공된다.
확인된 허용적 위치에서 이종성 모이어티를 삽입하는 단계를 포함하는 본 발명의 재조합 FVIII 폴리펩타이드의 제조방법이 추가적으로 제공되되, 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 나타낸다. 특정 양태에서, 확인된 허용적 위치는 허용적 루프, 예를 들어 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2이다. 특정 양태에서, 방법은 영역 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 중 적어도 2종에 이종성 모이어티를 삽입하는 단계를 포함한다. 특정 양태에서, 방법은 서열번호 1의 아미노산 18, 서열번호 1의 아미노산 22, 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 40, 서열번호 1의 아미노산 216, 서열번호 1의 아미노산 220, 서열번호 1의 아미노산 224, 서열번호 1의 아미노산 399, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 409, 서열번호 1의 아미노산 599, 서열번호 1의 아미노산 603, 서열번호 1의 아미노산 1711, 서열번호 1의 아미노산 1720, 서열번호 1의 아미노산 1725, 서열번호 1의 아미노산 1900, 서열번호 1의 아미노산 1905, 서열번호 1의 아미노산 1910 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 성숙 천연 인간 FVIII에서의 아미노산에 대응되는 아미노산의 바로 하류에 이종성 모이어티를 삽입하는 단계를 포함한다. 특정 양태에서, 방법은 서열번호 1의 아미노산 188, 서열번호 1의 아미노산 221, 서열번호 1의 아미노산 333, 서열번호 1의 아미노산 336, 서열번호 1의 아미노산 339, 서열번호 1의 아미노산 416, 서열번호 1의 아미노산 442, 서열번호 1의 아미노산 490, 서열번호 1의 아미노산 713, 서열번호 1의 아미노산 1796, 서열번호 1의 아미노산 1802, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 성숙 천연 인간 FVIII에서의 아미노산에 대응되는 아미노산의 바로 하류에 이종성 모이어티를 삽입하는 단계를 포함한다. 특정 양태에서, 방법은 a3 내로, 예를 들어 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 아미노산의 바로 하류에 추가적인 이종성 모이어티를 삽입하는 단계를 포함한다.
특정 양태에서, 방법은 FVIII 서열 내로 삽입된 하나 이상의 아미노산의 서열을 포함하는 이종성 모이어티를 삽입하는 단계를 포함한다. 특정 양태에서, 방법은 단백질의 반감기, 예를 들어 생체내 반감기를 증가시키는 이종성 모이어티를 삽입하는 단계를 포함한다. 특정 양태에서, 방법은 재조합 FVIII 단백질의 시각화 또는 국소화를 가능하게 하는 펩타이드 또는 폴리펩타이드를 포함하는 이종성 모이어티를 삽입하는 단계를 포함한다.
다른 양태에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 바와 같은 재조합 FVIII 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 설계하는 단계를 포함하는 재조합 FVIII 단백질을 구성하는 방법을 포함한다.
본 개시내용은 또한 재조합 FVIII 단백질의 a3 산성 스페이서 영역 내로 적어도 하나의 이종성 모이어티를 삽입하는 단계를 포함하는 재조합 FVIII 단백질의 발현을 증가시키는 방법을 제공하되, a3 영역 내로 적어도 하나의 이종성 모이어티의 삽입은 a3 영역 내로 삽입된 적어도 하나의 이종성 모이어티가 없는 대응되는 재조합 FVIII 단백질의 발현에 비해 재조합 FVIII 단백질의 증가된 발현을 초래한다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 허용적 루프, 예를 들어 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 중 하나 내로 삽입된 하나의 추가적인 이종성 모이어티를 추가로 포함하되, a3 영역 내로 적어도 하나의 이종성 모이어티의 삽입은 a3 영역 내로 삽입된 적어도 하나의 이종성 모이어티가 없는 대응되는 재조합 FVIII 단백질의 발현에 비해 재조합 FVIII 단백질의 증가된 발현을 초래한다. 다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 하나 이상의 허용적 루프, 예를 들어 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 내로 삽입된 2개의 추가적인 이종성 모이어티를 추가로 포함하되, a3 영역 내로 적어도 하나의 이종성 모이어티의 삽입은 a3 영역 내에 삽입된 적어도 하나의 이종성 모이어티가 없는 대응되는 재조합 FVIII 단백질의 발현에 비해 재조합 FVIII 단백질의 증가된 발현을 초래한다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질 하나 이상의 허용적 루프, 예를 들어 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 내로 삽입된 3개의 추가적인 이종성 모이어티를 추가로 포함하되, a3 영역 내로 적어도 하나의 이종성 모이어티의 삽입은 a3 영역 내에 삽입된 적어도 하나의 이종성 모이어티가 없는 대응되는 재조합 FVIII 단백질의 발현에 비해 재조합 FVIII 단백질의 증가된 발현을 초래한다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 하나 이상의 허용적 루프, 예를 들어 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 내로 삽입된 4개의 추가적인 이종성 모이어티를 추가로 포함하되, a3 영역 내로 적어도 하나의 추가적인 이종성 모이어티의 삽입은 a3 영역 내에 삽입된 적어도 하나의 이종성 모이어티가 없는 대응되는 재조합 FVIII 단백질의 발현에 비해 재조합 FVIII 단백질의 증가된 발현을 초래한다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 하나 이상의 허용적 루프, 예를 들어, A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 내로 삽입된 5개의 추가적인 이종성 모이어티를 추가로 포함하되, a3 영역 내로 적어도 하나의 추가적인 이종성 모이어티의 삽입은 a3 영역 내에 삽입된 적어도 하나의 이종성 모이어티가 없는 대응되는 재조합 FVIII 단백질의 발현에 비해 재조합 FVIII 단백질의 증가된 발현을 초래한다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 하나 이상의 허용적 루프, 예를 들어, A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 내로 삽입된 6개의 추가적인 이종성 모이어티를 추가로 포함하되, a3 영역 내로 적어도 하나의 추가적인 이종성 모이어티의 삽입은 a3 영역 내에 삽입된 적어도 하나의 이종성 모이어티가 없는 대응되는 재조합 FVIII 단백질의 발현에 비해 재조합 FVIII 단백질의 증가된 발현을 초래한다.
도 1(패널 1a 내지 1g)는 서열번호 2로서 제시되는 성숙 B-도메인 검출된 (BDD) 인간 FVIII 작제물의 주요 서열 및 도메인 구조를 도시한 도면. 도입된 NheI 및 ClaI 제한 부위의 위치를 나타낸다. 아미노산 넘버링은 성숙 FVIII의 주요 서열(서열번호 1)에서의 아미노산 위치에 대응된다는 것을 주목한다. 개개의 도메인은 회색 텍스트에서의 도메인 식별로 회색선/박스에 결합된다. 산성 영역(a1, a2, a3)은 파선 박스로 표시된다. 채워진 웨지/삼각형은 FVIII의 FVIIIa로 활성화에서 트롬빈 절단 부위를 나타낸다. 채워지지 않은 웨지/삼각형은 FVIII의 2쇄 형태에 대한 세포내 단백질분해 처리 부위를 나타낸다. 육각형은 N-연결된 글라이코실화 부위를 나타낸다. 원은 Tyr 황산화 부위를 나타낸다. XTEN 삽입/재조합을 가능하게 하기 위해 cDNA 내로 도입된 독특한 비천연 제한 부위(NheI, gctagc; ClaI, atcgat)는 이중 밑줄과 함께 회색으로 강조된다.
도 2는 도 1에 기재된 FVIII 작제물의 그래프 표면을 제공하며, 천연 및 비천연 제한 부위의 도메인 조직화 및 위치를 나타내는 도면.
도 3은 구조적 데이터 세트 2R7E, 3CDZ, 및 PM0076106에 대한 그래프 ASAView 결과를 도시한 도면. 도메인 A1, A2, A3, C1 및 C2에서 아미노산에 대한 용매 접근 표면적(Accessible Surface Area: ASA)을 나타낸다.
도 4는 XTEN AE42 삽입 부위 위치의 구조적 표현을 도시한 도면. FVIII(PDB: 2R7E)의 결정 구조에 대응되는 중심의 도면은 도메인 A1, A2, A3, C1 및 C2의 상세한 도면에 의해 둘러싸인다. 베타 가닥 및 알파 헬릭스는 리본 표현으로서 나타낸다. 루프는 알파 탄소 파이프로서 나타낸다. 삽입 부위에서 아미노산은 CPK 구체 표현으로서 나타낸다. 각 그래프에서의 숫자는 도 1에서의 넘버링에 따라 삽입 부위의 위치를 나타낸다.
도 5는 도 4에서 나타낸 삽입 부위 위치의 구조적 표현을 나타내되, 얻어진 재조합 FVIII 단백질은 FVIII 활성을 나타내는 것을 도시한 도면.
도 6은 XTEN 144 삽입 부위 위치의 구조적 표현을 도시한 도면.
도 7은 도 6에 나타낸 삽입 부위 위치의 구조적 표현을 나타내되, 얻어진 재조합 FVIII 단백질은 FVIII 활성을 나타내는 것을 도시한 도면.
도 8은 XTEN AE42 삽입위치가 FVIII 활성을 나타내거나(검정색 박스, 흰색 박스) 또는 FVIII 활성을 나타내지 않는(회색 박스, 볼드체 텍스트) 재조합 FVIII 단백질을 초래한다는 것을 나타내는 FVIII의 도메인 A1, A2, A3, C1 및 C2의 ClustalW 다중 서열 정렬을 도시한 도면.
도 9(패널 9a 및 9b)는 단백질 정보 은행(Protein Data Bank)에서 식별자 2R7E 하에 기탁된 천연 활성 인간 FVIII 결정 구조에서의 2개의 폴리펩타이드쇄의 2차 구조의 DSSP 그래프 표현을 도시한 도면. 아미노산 서열 넘버링은 도 1 및 서열번호 1에서의 단백질 서열과 동일하다. 베타 시트 영역은 속이 찬 화살표로 나타내며 1 내지 66을 지정한다. 허용적 루프의 위치는 그물모양의 박스에 의해 정한다. 도메인 A1 허용적 루프는 루프 A1-1 및 루프 A1-2를 지정한다. 도메인 A2 허용적 루프는 루프 A2-1 및 루프 A2-2를 지정한다. 도메인 A3 허용적 루프는 루프 A3-1 및 루프 A3-2을 지정한다.
도 10은 XTEN 144 삽입위치가 FVIII 활성을 나타내거나(검정색 박스, 흰색 텍스트) 또는 FVIII 활성을 나타내지 않는(회색 박스, 볼드체 텍스트) 재조합 FVIII 단백질을 초래한다는 것을 나타내는 FVIII의 도메인 A1, A2, A3, C1 및 C2의 ClustalW 다중 서열 정렬을 도시한 도면. 허용적 루프의 위치는 파선 직사각형에 의해 나타낸다.
도 11A는 도메인 A1, A2, A3, C1 및 C2의 위치(파선에서의 원) 및 CPK 구체 표현으로서 강조한 허용적 루프 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 및 A3-2의 위치를 나타내는 인간 FVIII(PDB:2R7E)의 정면도 구조적 표현을 도시한 도면.
도 11B는 도메인 A1, A2, A3, C1 및 C2의 위치(파선에서의 원) 및 CPK 구체 표현으로서 강조한 허용적 루프 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 및 A3-2의 위치를 나타내는 인간 FVIII(PDB:2R7E)의 측면도 구조적 표현을 도시한 도면.
도 12A, 12C 및 12E는 CPK 구체 표현으로서 강조한 허용적 루프의 위치를 나타내는 단리된 인간 FVIII(PDB:2R7E) A 도메인의 상면도 구조적 표현을 도시한 도면.도 12B, 12D 및 12F는 CPK 구체 표현으로서 강조한 허용적 루프의 위치를 나타내는 단리된 인간 FVIII(PDB:2R7E) A 도메인의 측면도 구조적 표현을 도시한 도면.
도 13은 HemA 마우스(도 13, 패널 A) 및 FVIII/vWF 이중 녹아웃(double knock out: DKO) 마우스(도 13, 패널 B)에서 세포 배양물 PK 분석을 사용하는 B도메인-결실(BDD)-FVIII에 비교한 내부 도메인 삽입(pSD0050 및 pSD0062, 표 III 참조)을 지니는 2개의 FVIII 변이체의 PK 프로파일을 도시한 도면. 5분 회복 및 반감기(t1 /2)를 나타낸다.
도 14는 단일 XTEN 삽입을 지니는 다양한 FVIII 변이체의 색원체 및 aPTT 분석 활성 데이터의 막대 그래프를 도시한 도면. 제시한 데이터는 허용적 루프 A1-1(서열번호 1에 대응되는 아미노산 18, 26 또는 40), 허용적 루프 A2-1(서열번호 1에 대응되는 아미노산 403 또는 399), a3 영역(서열번호 1에 대응되는 아미노산 1656), 허용적 루프 A3-1(서열번호 1에 대응되는 아미노산 1720 또는 1725), 허용적 루프 A3-2(서열번호 1에 대응되는 아미노산 1900, 1905 또는 1910), 또는 카복시 말단(CT; 서열번호 1에 대응되는 아미노산 2332)에서 XTEN, 예를 들어, AE144, AG144 또는 AE288의 단일 삽입에 대응된다. 또한 BDD-FVII 대조군에 대한 aPTT 및 색원체 활성 분석 활성 데이터를 도시한다. 또한 색원체 분석에 의해 결정한 바와 같은 활성과 aPTT 분석에 의해 검출한 바와 같은 활성 사이의 비(색원체/aPTT 비)로서 또는 비의 범위로서(예를 들어, a3에 대해 1.1 또는 A1-1 삽입에 대해 1.4 내지 1.6 범위) 도면에서 나타낸다.
도 15는 2개의 XTEN 삽입을 지니는 다양한 FVIII 변이체의 색원체 및 aPTT 분석 활성의 막대 그래프를 도시한 도면. 제시된 데이터는 각각 허용적 루프 A1-1 및 a3 영역, 허용적 루프 A2-1 및 a3 영역, 허용적 루프 A3-1 및 a3 영역, 허용적 루프 A3-2 및 a3 영역, 허용적 루프 A1-1 및 A2-1, 허용적 루프 A1-1 및 A3-1, 허용적 루프 A1-1 및 A3-2, 및 허용적 루프 A2-1 및 A3-2에서 XTEN의 이중 삽입에 대응된다.
도 16a 및 16b는 2 또는 3개의 XTEN 삽입을 지니는 다양한 FVIII 변이체의 색원체 및 aPTT 분석 활성 데이터의 막대 그래프를 도시한 도면. 도 16a는 허용적 루프 A1-1(서열번호 1에 대응되는 아미노산 18 또는 26), 허용적 루프 A2-1(서열번호 1에 대응되는 아미노산 403), a3 영역(서열번호 1에 대응되는 아미노산 1656), 허용적 루프 A3-1(서열번호 1에 대응되는 아미노산 1720), 허용적 루프 A3-2(서열번호 1에 대응되는 아미노산 1900), 또는 카복시 말단(CT; 서열번호 1에 대응되는 아미노산 2332)에서 XTEN의 이중 또는 삼중 삽입에 대응되는 데이터를 도시한 도면. 그래프는 또한 위치 1900에서 삽입된 XTEN, B 도메인, 및 CT를 지니는 작제물에 대응되는 데이터를 도시한 도면. 또한 색원체 분석에 의해 결정되는 바와 같은 활성과 aPTT 분석에 의해 검출되는 활성 사이의 비(색원체/aPTT 비)로서 또는 비의 범위로서(예를 들어, 3가지 XTEN 삽입 대해 3.2 내지 4.2) 도면에서 나타낸다.
도 16b는 허용적 루프에서 XTEN의 삼중 삽입에 대응되는 데이터를 도시한 도면. 좌측 패널 그래프에 나타낸 작제물(왼쪽에서 오른쪽은)은 각각 서열번호 1에 대응되는 아미노산 26, 403, 및 1656; 26, 1656, 및 1720; 26, 1656, 및 1900; 403, 1656, 및 1720; 403, 1656, 및 1900; 및, 1656, 1720 및 1900에서의 삽입에 대응된다. 우측 패널 그래프에 나타낸 작제물은 허용적 루프 A1-1, 허용적 루프 A2-1, 허용적 루프 A3-1, 또는 허용적 루프 A3-2에서 삽입된 하나의 XTEN, 및 2개의 XTEN 비허용적 루프 삽입, 즉 B 도메인에서의 제2 XTEN 삽입, 및 카복시 말단(CT)에서의 제3 XTEN 삽입을 지니는 3개의 XTEN 삽입에 대응된다. 또한 BDD-FVII 대조군에 대한 aPTT 및 색원체 활성 분석을 나타낸다.
도 17은 BDD-FVIII 대조군과 비교한 단일 XTEN 삽입을 지니는 다양한 투여된 FVIII 변이체의 DKO 마우스에서 혈장 수준을 도시한 도면. XTEN은 서열번호 1에 대응되는 아미노산 26, 403, 1565, 1720, 1900 또는 카복시 말단(CT)에서 삽입된다.
도 18은 BDD-FVIII 대조군(rFVIII)에 비교하여 하나의 삽입(B 도메인에서 XTEN144), 2개의 삽입(서열번호 1에 대응되는 아미노산 1900에서 A3-2 허용적 루프에서의 XTEN144 및 카복시 말단에서 XTEN288; 또는 B 도메인에서 XTEN144 및 카복시 말단에서 XTEN288) 및 3개의 XTEN 삽입(B 도메인에서 XTEN144, 카복시 말단에서 XTEN288 및 서열번호 1에 대응되는 아미노산 1900에서 A3-2 허용적 루프에서의 XTEN144)을 지니는 다양한 투여된 FVIII 변이체의 DKO 마우스에서의 혈장 수준을 도시한 도면.
도 19는 단일 CTP1 삽입을 지니는 다양한 FVIII 변이체의 색원체 활성 데이터의 막대 그래프를 도시한 도면. 제시된 데이터는 FVIII에서의 상이한 위치에서 인간 융모성 생식선 자극호르몬의 카복시 말단으로부터 유래된 29개 아미노산 길이 펩타이드를 포함하는 45개 아미노산 길이 펩타이드(CTP1, 서열번호 81)의 단일 삽입에 대응된다. x축에서 나타낸 작제물 지정에서 수치는 펩타이드가 삽입된 바로 다음의 아미노산 위치에 대응된다. 삽입의 허용적 루프(및 a3 영역) 위치는 막대 위에 표시된다. 또한 FVIII 대조군에 대한 색원체 활성 분석 데이터를 나타낸다.
도 20은 단일 CTP1 삽입을 지니는 다양한 FVIII 변이체의 색원체 활성 데이터의 막대 그래프를 도시한 도면. 제시한 데이터는 FVIII의 상이한 위치에서 인간 융모성 생식선 자극호르몬의 카복시 말단으로부터 유래된 29개 아미노산 길이 펩타이드를 포함하는 45개 아미노산 길이 펩타이드(CTP1, 서열번호 81)의 단일 삽입에 대응된다. x축에서 나타낸 작제물 지정에서 수치는 펩타이드가 삽입된 바로 다음의 아미노산 위치에 대응된다. 삽입의 허용적 루프(및 a3 영역) 위치는 막대 위에 표시된다. 또한 FVIII 대조군에 대한 색원체 활성 분석 데이터를 나타낸다.
도 21은 단일 알부민-결합 펩타이드(ABP1, 서열번호 83) 삽입을 지니는 다양한 FVIII 변이체의 색원체 활성 데이터의 막대 그래프를 도시한 도면. 제시한 데이터는 18 아미노산 길이 ABP1를 포함하는 44 아미노산 길이 펩타이드인 FVIII 내 상이한 위치에서 서열번호 83의 단일 삽입에 대응된다. x축에서 나타낸 작제물 지정에서의 수치는 펩타이드가 삽입된 다음의 아미노산 위치에 대응된다. 삽입의 허용적 루프(및 a3 영역) 위치는 막대 위에 나타낸다. 또한 FVIII 대조군에 대한 색원체 활성 분석을 나타낸다.
도 22는 단일 Gly-Ser 반복체(HAP1, 서열번호 85) 삽입을 지니는 다양한 FVIII 변이체의 색원체 활성 데이터의 막대 그래프를 도시한 도면. 제시한 데이터는 FVIII 내 상이한 위치에서 35 아미노산 HAP1을 포함하는 41 아미노산 길이 펩타이드의 단일 삽입에 대응된다. x축에서 나타낸 작제물 지정에서의 수치는 펩타이드가 삽입된 후 아미노산 위치에 대응된다. 삽입의 허용적 루프(및 a3 영역) 위치는 막대 위에 나타낸다. 또한 FVIII 대조군에 대한 색원체 활성 분석을 나타낸다.
도 23은 단일 향상 녹색 형광 단백질(EGFP1, 서열번호 87) 삽입을 지니는 다양한 FVIII 변이체의 색원체 활성 데이터의 막대 그래프를 도시한 도면. 제시된 데이터는 FVIII 내 상이한 위치에서 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열번호 191)의 2개의 종열중복(tandem repeat)에 측접하는 EGFP1의 239 아미노산 잔기 서열을 포함하는 265 아미노산 길이 폴리펩타이드의 단일 삽입에 대응된다. x축에서 나타낸 작제물 지정에서의 수치는 펩타이드가 삽입된 후 아미노산 위치에 대응된다. 삽입의 허용적 루프(및 a3 영역) 위치는 막대 위에 나타낸다. 또한 FVIII 대조군에 대한 색원체 활성 분석을 나타낸다.
도 24는 화학적 페길화(PEGylation) 전 및 후, 트롬빈 처리와 함께 및 트롬빈 처리 없이 정제된 FVIII 변이체 FVIII-0026-CCP1의 SDS-PAGE 겔의 단백질-특이적(좌측 패널) 및 PEG-특이적 염색(우측 패널)을 도시한 도면. FVIII-0026-CCP1은 시스테인-함유 펩타이드(CCP1; 서열번호 90)가 잔기 26 바로 다음의 변이체이다.
도 25는 214㎚에서 UV 모니터링과 함께 Tosoh G3000 SWxl 칼럼 상에서 크기-배제 크로마토그래피에 의해 분해한 FVIII-0026-CCP1(실선 검정색 자국) 및 페길화된 FVIII-0026-CCP1(파선 검정색 자국)의 겹쳐진 크로마토그램을 도시한 도면. 분자량의 용리 프로파일(회색 자국)은 킬로달톤 단위(kDa)로 나타낸 성분의 분자량과 겹쳐진다.
단수 용어의 독립체는 해당 독립체의 하나 이상을 지칭하며; 예를 들어, "뉴클레오타이드 서열"은 하나 이상의 뉴클레오타이드 서열을 나타내는 것으로 이해되는 것으로 주목하여야 한다. 이와 같이, 단수의 용어, "하나 이상의," 및 "적어도 하나"는 본 명세서에서 상호호환적으로 사용될 수 있다.
본 발명은 FVIII의 응혈촉진 활성을 가지며 숙주 세포에서 발현될 수 있는, 개선된 특성, 예를 들어 개선된 반감기 또는 개선된 안정성을 지니는 특정 재조합 FVIII 단백질에 관한 것이다. 이러한 재조합 FVIII 단백질은, 예를 들어 혈우병에 대한 치료적 처치로서 사용될 수 있다.
용어 "폴리뉴클레오타이드" 또는 "뉴클레오타이드"는 단수 핵산뿐만 아니라 복수 핵산을 포함하는 것으로 의도되며, 단리된 핵산 분자 또는 작제물, 예를 들어 메신저 RNA(mRNA) 또는 플라스미드 DNA(pDNA)를 지칭한다. 특정 실시형태에서, 폴리뉴클레오타이드는 통상적인 포스포다이에스터 결합 또는 비통상적인 결합(예를 들어, 펩타이드 핵산(PNA)에서 발견되는 것과 같은 아마이드 결합)을 포함한다.
용어 "핵산"은 폴리뉴클레오타이드에 존재하는 어떤 하나 이상의 핵산 세그먼트, 예를 들어, DNA 또는 RNA 단편을 지칭한다. "단리된" 핵산 또는 폴리뉴클레오타이드는 천연 환경으로부터 제거된 핵산 분자, DNA 또는 RNA로 의도된다. 예를 들어, 본 발명의 목적을 위해 단리된 벡터에 함유된 FVIII 폴리펩타이드를 암호화하는 재조합 폴리뉴클레오타이드가 고려된다. 단리된 폴리뉴클레오타이드의 추가적인 예는 이종성 숙주 세포에서 유지되거나 또는 용액 중의 다른 폴리뉴클레오타이드로부터 정제된(부분적으로 또는 실질적으로) 재조합 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 단리된 RNA 분자는 본 발명의 폴리뉴클레오타이드의 생체내 또는 시험관내 RNA 전사체를 포함한다. 본 발명에 따른 단리된 폴리뉴클레오타이드 또는 핵산은 합성적으로 생성된 이러한 분자를 추가로 포함한다. 추가로, 폴리뉴클레오타이드 또는 핵산은 조절 구성요소, 예컨대 프로모터, 인핸서, 리보솜 결합 부위, 또는 전사 종결 신호를 포함할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은, "암호 영역" 또는 "암호 서열"은 아미노산으로 번역될 수 있는 코돈으로 이루어진 폴리뉴클레오타이드의 일부이다. "정지 코돈"(tag, tga, 또는 taa)은 전형적으로 아미노산으로 번역되지 않음에도 불구하고, 이는 암호 영역의 부분이 되는 것으로 고려될 수 있지만, 어떤 측접 서열, 예를 들어 프로모터, 리보솜 결합 부위, 전사 종결자, 인트론 등은 암호 영역의 부분이 아니다. 암호 영역의 경계는 얻어진 폴리펩타이드의 아미노 말단을 암호화하는 5' 말단에서 시작 코돈에 의해, 그리고 얻어진 폴리펩타이드의 카복실 말단을 암호화하는 3' 말단에서 번역 정지 코돈에 의해 결정된다. 본 발명의 2 이상의 암호 영역은 단일 폴리뉴클레오타이드 작제물, 예를 들어, 단일 벡터 상에서, 또는 별개의 폴리뉴클레오타이드 작제물에서, 예를 들어, 별개의(상이한) 벡터 상에서 존재할 수 있다. 그 다음에 이는 단일 벡터가 단지 단일 암호 영역을 함유할 수 있거나, 또는 2 이상의 암호 영역을 포함할 수 있다는 것, 예를 들어, 단일 벡터가 이하에 기재되는 바와 같은 결합 도메인-A 및 결합 도메인-B를 별개로 암호화할 수 있다는 것을 따른다. 추가로, 본 발명의 벡터, 폴리뉴클레오타이드 또는 핵산은 본 발명의 결합 도메인을 암호화하는 핵산에 융합되거나 또는 비융합된 이종성 암호 영역을 암호화할 수 있다. 이종성 암호 영역은 분비 신호 펩타이드 또는 이종성 기능성 도메인과 같은 전문화된 구성요소 또는 모티프를 제한 없이 포함한다.
일단 조면 소포체에 걸쳐 성장하는 단백질 쇄의 유출이 개시된다면, 포유류 세포에 의해 분비되는 특정 단백질은 성숙 단백질로부터 절단된 분비 신호 펩타이드와 관련된다. 당업자는 신호 펩타이드가 폴리펩타이드의 N-말단에 대체로 융합되고, 완전한 또는 "전장" 폴리펩타이드로부터 절단되어 폴리펩타이드의 분비된 또는 "성숙" 형태를 생성한다는 것을 인식한다. 특정 실시형태에서, 천연 신호 펩타이드, 예를 들어, 면역글로뷸린 중쇄 또는 경쇄 신호 펩타이드가 사용되거나, 또는 조작가능하게 연결된 폴리펩타이드의 분비를 지시하는 능력을 보유하는 해당 서열의 기능성 유도체가 사용된다. 대안적으로, 이종성 포유류 신호 펩타이드, 예를 들어 인간 조직 플라스미노겐 활성화인자(TPA) 또는 마우스 β-글루쿠로니다제 신호 펩타이드, 또는 이의 기능성 유도체가 사용될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "폴리펩타이드"는 단수 "폴리펩타이드"뿐만 아니라 복수 "폴리펩타이드"를 포함하는 것으로 의도되며, 아마이드 결합(또한 펩타이드 결합으로서 알려짐)에 의해 선형으로 연결된 단량체(아미노산)으로 구성된 분자를 지칭한다. 용어 "폴리펩타이드"는 2 이상의 아미노산의 어떤 쇄 또는 쇄들을 지칭하고, 산물의 구체적 길이를 지칭하지 않는다. 따라서, 펩타이드, 다이펩타이드, 트라이펩타이드, 올리고펩타이드, "아미노산 쇄" 또는 2 이상의 아미노산의 쇄 또는 쇄들을 지칭하기 위해 사용된 임의의 다른 용어는 "폴리펩타이드"의 정의 내에 포함되고, 용어 "폴리펩타이드"는 이들 용어 중 어떤 것 대신 또는 상호호환적으로 사용될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "단백질"은 일부 예에서 아마이드 결합 이외의 결합에 의해 연결될 수 있는 하나 이상의 폴리펩타이드를 포함하는 분자를 포함하는 것으로 의도된다. 예를 들어, 헤테로다이머, 예컨대 천연 활성 FVIII 단백질은 이황화 결합에 의해 결합된 중쇄 폴리펩타이드 및 경쇄 폴리펩타이드의 헤테로다이머이다. 다른 한편으로, 단백질은 또한 단일 폴리펩타이드 쇄일 수 있다. 이런 후자의 예에서, 단일 폴리펩타이드 쇄는 함께 융합된 2 이상의 폴리펩타이드 서브유닛을 포함하여 단백질을 형성할 수 있다. 용어 "폴리펩타이드" 및 "단백질"은 또한 글라이코실화, 아세틸화, 인산화, 아마이드화, 공지된 보호기/차단기에 의한 유도체화, 보호적 절단, 또는 비자연적으로 생기는 아미노산에 의한 변형을 제한 없이 포함하는 발현후 변형의 산물을 지칭하는 것으로 의도된다. 폴리펩타이드 또는 단백질은 천연 생물학적 공급원으로부터 유래될 수 있거나 또는 재조합 기법에 의해 생산될 수 있지만, 지정된 핵산 서열로부터 필수적으로 번역되지는 않는다. 이는 화학적 합성에 의하는 것을 포함하는 임의의 방식으로 만들어질 수 있다.
"단리된" 폴리펩타이드, 단백질, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체는 그것의 천연 환경에 있지 않은 폴리펩타이드 또는 단백질을 지칭한다. 특정 정제 수준이 필요하지는 않다. 예를 들어, 단리된 폴리펩타이드 또는 단백질은 그것의 천연 또는 자연적 환경으로부터 단순히 제거될 수 있다. "재조합" 폴리펩타이드 또는 단백질은 재조합 DNA 기법을 통해 생산된 폴리펩타이드 또는 단백질을 지칭한다. 본 발명의 목적을 위해 단리된 재조합적으로 생산된 폴리펩타이드 및 숙주 세포에서 발현된 단백질이 고려되는데, 분리되거나, 분획화되거나 또는 임의의 적합한 기술에 의해 부분적으로 또는 실질적으로 정제된 천연 또는 재조합 폴리펩타이드가 있기 때문이다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "숙주 세포"는 재조합 핵산을 은닉하거나 또는 은닉할 수 있는 세포 또는 세포의 집단을 지칭한다. 숙주 세포는 원핵세포(예를 들어, 이콜라이(E. coli))일 수 있거나, 또는 대안적으로, 숙주 세포는 진핵세포, 예를 들어, 진균 세포(예를 들어, 효모 세포, 예컨대 사카로마이세스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae), 피키아 파스토리스(Pichia pastoris) 또는 쉬조사카로마이세스 폼베(Schizosaccharomyces pombe)), 및 다양한 동물 세포, 예컨대 곤충 세포(예를 들어, Sf-9) 또는 포유류 세포(예를 들어, HEK293F, CHO, COS-7, NIH-3T3)일 수 있다.
또한 단편, 변이체, 또는 폴리펩타이드의 유도체, 및 이들의 임의의 조합이 본 발명에 포함된다. 용어 "단편" 또는 "변이체"는 본 발명의 폴리펩타이드 및 단백질을 지칭할 때, 기준 폴리펩타이드 또는 단백질의 특성(예를 들어, 응혈촉진 활성) 중 적어도 일부를 보유하는 임의의 폴리펩타이드 또는 단백질을 포함한다. 폴리펩타이드의 단편은 단백질분해 단편뿐만 아니라 결실 단편을 포함한다. 본 발명의 폴리펩타이드 또는 단백질의 변이체는 상기 기재된 바와 같은 단편을 포함하며, 또한 아미노산 치환, 결실 또는 삽입에 기인하여 변성된 아미노산 서열을 지니는 폴리펩타이드 또는 단백질을 포함한다. 변이체는 자연적으로 또는 비자연적으로 생길 수 있다. 비자연적으로 생기는 변이체는 당업계에 공지된 돌연변이유발 기법을 사용하여 생성될 수 있다. 변이체 폴리펩타이드는 보존적 또는 비보존적 아미노산 치환, 결실 또는 첨가를 포함할 수 있다. 본 발명의 폴리펩타이드 또는 단백질의 "유도체"는 천연 폴리펩타이드 또는 단백질 상에서 발견되지 않은 추가적인 특징을 나타내기 위해서 변성되고, 응혈촉진 활성을 가지는 폴리펩타이드 또는 단백질이다. "유도체"의 예는 Fc 융합 단백질이다.
"상보적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체되는 것이다. 염기성 측쇄(예를 들어, 리신, 알기닌, 히스티딘), 산성 측쇄(예를 들어, 아스팔트산, 글루탐산), 비하전 극성 측쇄(예를 들어, 글라이신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인), 비극성 측쇄(예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 아이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지 측쇄(예를 들어, 트레오닌, 발린, 아이소류신) 및 방향족 측쇄(예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)을 포함하는, 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리가 정의되었다. 따라서, 폴리펩타이드 내 아미노산이 동일한 측쇄 패밀리로부터의 다른 아미노산으로 대체된다면, 치환은 보존적이 되는 것으로 고려된다. 다른 실시형태에서, 아미노산의 스트링은 측쇄 패밀리 구성원의 순서 및/또는 조성과 상이한 구조적으로 유사한 스트링으로 보존적으로 대체될 수 있다.
두 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드 서열 사이의 용어 "서열 동일성 백분율"은 두 서열의 최적의 정렬을 위해 도입되어야 하는 첨가 또는 결실(즉, 갭)을 고려하여, 비교창에 걸쳐 서열에 의해 공유되는 동일한 매칭 위치의 수를 지칭한다. 매칭된 위치는 동일한 뉴클레오타이드 또는 아미노산이 표적과 기준 서열 둘 다에서 제공되는 어떤 위치이다. 표적 서열에 제공된 갭은 카운트하지 않는데, 갭은 뉴클레오타이드 또는 아미노산이 아니기 때문이다. 마찬가지로, 기준 서열에 존재하는 갭은 카운트하지 않는데, 기준 서열로부터의 뉴클레오타이드 또는 아미노산이 아닌 표적 서열 뉴클레오타이드 또는 아미노산은 카운트하지 않기 때문이다.
서열 동일성의 백분율은 매칭된 위치의 수를 얻기 위해 동일한 아미노산 잔기 또는 핵산 염기가 서열 둘 다에서 일어나는 위치의 수를 결정하고, 매칭된 위치의 수를 비교창에서 전체수로 나누며, 그 결과에 100을 곱함으로써 계산하여, 서열 동일성의 백분율을 얻는다. 서열의 비교 및 두 서열 간의 서열 동일성 백분율의 결정은 온라인 사용을 위해 그리고 다운로드를 위해 용이하게 입수가능한 소프트웨어를 사용하여 수행될 수 있다. 적합한 소프트웨어 프로그램은 단백질과 뉴클레오타이드 서열 둘 다의 정렬을 위해 다양한 공급원으로부터 입수가능하다. 서열 동일성 백분율을 결정하기 위한 하나의 적합한 프로그램은 bl2seq, 미국 정부의 생명공학 정보를 위한 국립센터(National Center for Biotechnology Information) BLAST 웹 사이트(blast.ncbi.nlm.nih.gov)로부터 이용가능한 프로그램의 BLAST 세트의 부분이다. Bl2seq는 BLASTN 또는 BLASTP 알고리즘 중 하나를 사용하여 두 서열 간의 비교를 수행한다. BLASTN은 핵산 서열을 비교하기 위해 사용하는 한편, BLASTP는 아미노산 서열을 비교하기 위해 사용된다. 다른 적합한 프로그램은, 예를 들어 Needle, Stretcher, Water 또는 Matche, 생물정보학 프로그램의 EMBOSS 세트의 부분이며, 또한 www.ebi.ac.uk/Tools/psa에서 유럽 생물 정보학 연구소(European Bioinformatics Institute: EBI)로부터 입수가능하다.
폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드 기준서열에 맞추어 조정된 단일 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드 표적 서열 내의 상이한 영역은 각각 그 자체의 서열 동일성 백분율을 가질 수 있다. 서열 동일성 백분율 값은 소수점 첫째 자리까지 반올림된다. 예를 들어, 80.11, 80.12, 80.13 및 80.14는 80.1로 반올림되는 반면, 80.15, 80.16, 80.17, 80.18 및 80.19는 80.2까지 반올림된다. 또한 길이 값이 항상 정수라는 것을 주목한다.
당업자는 백분율 서열 동일성의 계산을 위한 서열 정렬의 생성이 주요 서열 데이터에 의해 배타적으로 구동되는 2진수 서열-서열 비교로 제한되지 않는다는 것을 인식할 것이다. 서열 정렬은 다중 서열 정렬로부터 유도될 수 있다. 다중 서열 정렬을 만들기 위한 하나의 적합한 프로그램은 www.clustal.org로부터 이용가능한 ClustalW2이다. 다른 적합한 프로그램은 www.drive5.com/muscle/로부터 이용가능한 MUSCLE이다. ClustalW2 및 MUSCLE는 대안적으로, 예를 들어 EBI로부터 이용가능하다.
또한 서열 정렬은 이종성 공급원으로부터의 데이터, 예컨대 구조적 데이터(예를 들어, 결정학적 단백질 구조), 기능적 데이터(예를 들어, 돌연변이의 위치), 또는 계통발생적 데이터와 서열 데이터를 통합함으로써 만들어질 수 있다는 것이 인식될 것이다. 다중 서열 정렬을 만들기 위해 이종성 데이터를 통합하는 적합한 프로그램은 www.tcoffee.org에서 이용가능한 T-Coffee, 및, 대안적으로 이용가능한, 예를 들어 EBI이다. 또한 백분율 서열 동일성을 계산하기 위해 사용된 최종 정렬은 자동적으로 또는 수동으로 보조될 수 있다는 것이 인식될 것이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은, "성숙 천연 인간 FVIII에서의 아미노산에 대응되는 아미노산"은 임의의 FVIII 단편, 변이체, 또는 유도체에서의 아미노산인데; 이는 천연 인간 FVIII에서의 대응되는 아미노산과 동일한 위치에 속한다. 예를 들어, 키메라 또는 혼성 FVIII 단백질 또는 이의 단편, 예컨대 국제특허출원 WO 2011/069164 A2호, WO 2012/006623 A2호, WO 2012/006635 A2호 또는 WO 2012/006633 A2호에 개시된 것은 성숙 천연 인간 FVIII(서열번호 1)에 맞추어 조정될 수 있으며, 서열번호 1의 영역에 맞추어 조정되는 키메라 또는 혼성 단백질의 영역 내 아미노산은 서열번호 1에 맞추어 조정되는 아미노산 수에 "대응된다". 유사하게, FVIII의 임의의 단편, 예를 들어, FVIII 헤테로다이머(예를 들어, A3, C1 및 C2 도메인)의 경쇄는 서열번호 1에 맞추어 조정되어 서열번호 1의 대응되는 영역을 결정할 수 있고, 성숙 천연 인간 FVIII에서 아미노산에 대응되는 단편 내 아미노산은 그것들이 서열번호 1에 맞추어 조정되는 아미노산을 기준으로 넘버링된다. 영역 간 유사성이 당업자에 의해 용이하게 확인될 수 있다면, 정렬된 FVIII 영역은 서열번호 1의 대응되는 영역과 100% 동일할 필요는 없다. 따라서, FVIII 단편, 변이체, 유도체 또는 유사체에서 정렬된 영역은 서열번호 1에서의 대응되는 영역과 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일할 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "삽입 부위"는 이종성 모이어티가 삽입될 수 있는 위치의 바로 상류의 FVIII 폴리펩타이드, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체에서의 위치를 지칭한다. "삽입 부위"는 숫자로서 구체화되며, 숫자는 삽입 위치에 대해 바로 N-말단인 삽입 부위가 대응되는 성숙 천연 FVIII(서열번호 1)에서의 아미노산 수이다. 예를 들어, 어구 "a3은 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 삽입 부위에서 이종성 모이어티를 포함한다"는 이종성 모이어티가 서열번호 1의 아미노산 1656 및 아미노산 1657에 대응되는 두 아미노산 사이에 위치된다는 것을 나타낸다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 어구 "아미노산의 바로 하류의"는 아미노산의 말단 카복실기 다음의 오른쪽 위치를 지칭힌다. 유사하게, 어구 "아미노산의 바로 상류의"는 아미노산의 말단 아민기 다음의 오른쪽 위치를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "삽입된", "삽입된다", "내로 삽입된" 또는 문법적으로 관련된 용어는 천연 성숙 인간 FVIII 내 유사한 위치에 대해 재조합 FVIII 폴리펩타이드 내 이종성 모이어티의 위치를 지칭한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어는 천연 성숙 인간 FVIII에 대한 재조합 FVIII 폴리펩타이드의 특징을 지칭하며, 재조합 FIII 폴리펩타이드가 만들어지는 어떤 방법 또는 과정을 나타내거나, 의미하거나 또는 암시하지는 않는다. 예를 들어, 본 명세서에 제공된 재조합 FVIII 폴리펩타이드와 관련하여, 어구 "이종성 모이어티가 A1-2 내로 삽입된다"는, 예를 들어 천연 성숙 인간 FVIII의 아미노산 218 및 219, 아미노산 219 및 220, 아미노산 220 및 221, 아미노산 221 및 222, 아미노산 222 및 223, 아미노산 223 및 224, 아미노산 224 및 225, 아미노산 225 및 226, 아미노산 226 및 227, 아미노산 227 및 228, 또는 아미노산 228 및 229에 대응되는 아미노산에 의해 결합되는 재조합 FVIII 폴리펩타이드가 천연 성숙 인간 FVIII 내 A1-2 영역(천연 성숙 인간 FVIII의 약 아미노산 218 내지 약 아미노산 229)에 대응되는 영역에서 이종성 모이어티를 포함한다는 것을 의미한다.
"융합" 단백질은, 예를 들어 제2 폴리펩타이드가 사실상 제1 폴리펩타이드에 자연적으로 연결되지 않은 경우, 제2 폴리펩타이드에 대한 아마이드 결합을 통해 연결된 제1 폴리펩타이드를 포함한다. 별개의 단백질에 정상적으로 존재하는 폴리펩타이드는 융합 폴리펩타이드에서 함께 초래될 수 있거나, 또는 동일한 단백질에 정상적으로 존재하는 폴리펩타이드는 융합 폴리펩타이드, 예를 들어, 면역글로뷸린 Fc 도메인과 본 발명의FVIII 도메인의 융합 또는 B 도메인의 결실을 통해 FVIII의 A3 영역에 대해 직접적으로 FVIII의 A1 및 A2 영역의 융합에서 새로운 정렬에 위치될 수 있다. 융합 단백질은, 예를 들어 화학적 합성에 의해, 또는 폴리뉴클레오타이드를 만들고 번역함으로써 만들어지며, 이때 펩타이드 영역은 원하는 관계로 암호화된다.
용어 "이종성" 및 "이종성 모이어티"는 폴리뉴클레오타이드, 폴리펩타이드 또는 다른 모이어티는 그것이 비교되는 독립체와 별개의 독립체로부터 유래된다는 것을 의미한다. 예를 들어, 이종성 폴리펩타이드는 합성일 수 있거나, 또는 개체의 상이한 종, 상이한 세포 유형 또는 별개의 개체의 세포의 동일 또는 상이한 유형으로부터 유래될 수 있다. 일 양태에서, 이종성 모이어티는 융합 폴리펩타이드 또는 단백질을 생성하기 위해 다른 폴리펩타이드에 융합된 폴리펩타이드일 수 있다. 다른 양태에서, 이종성 모이어티는 폴리펩타이드 또는 단백질에 컨쥬게이트된 PEG와 같은 비폴리펩타이드일 수 있다.
폴리펩타이드에 존재할 수 있는 링커는 본 명세서에서 폴리펩타이드에서 자연적으로 생기지 않는 하나 이상의 이종성 프로테아제-절단 부위(예를 들어, 인자 XIa 또는 트롬빈 절단 부위)를 포함하고, N 말단 또는 C 말단 중 하나에 또는 절단 부위의 양측 둘 다에서 추가적인 링커를 포함할 수 있는 "절단가능한 링커"로서 지칭된다. 이러한 부위에 대한 예시적인 위치는 수반되는 도면에서 나타내며, 예를 들어 FVIII의 중쇄와 FVIII의 경쇄 사이의 위치를 포함한다.
1. 인자 VIII
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "인자 VIII 단백질" 또는 "FVIII 단백질"은 달리 구체화되지 않는다면 응고에서 그것의 정상 규칙에서의 기능성 인자 VIII 단백질을 의미한다. 따라서, 용어 FVIII은 기능성인 변이체 단백질을 포함한다. 일 실시형태에서, FVIII 단백질은 인간, 돼지, 개, 래트 또는 뮤린 FVIII 단백질이다. 기능성 FVIII 단백질은 융합 단백질, 예컨대 이하로 제한되는 것은 아니지만 완전히 또는 부분적으로 B도메인-결실된, 면역글로뷸린 불변 영역의 적어도 일부, 예를 들어, Fc 도메인, 또는 둘 다를 포함하는 융합 단백질일 수 있다. 무수한 기능성 FVIII 변이체가 구성되었고, 본 명세서에 기재된 바와 같은 재조합 FVIII 단백질로서 사용될 수 있다. 국제특허출원 WO 2011/069164 A2호, WO 2012/006623 A2호, WO 2012/006635 A2호 또는 WO 2012/006633 A2호를 참조하며, 이들 모두는 그것의 전문이 본 명세서에 참조로서 포함된다.
매우 다수의 기능성 FVIII 변이체가 공지되어 있다. 추가로, FVIII에서 수백가지의 비기능성 돌연변이가 혈우병 환자에서 확인되었다. 예를 들어, 문헌[Cutler et al ., Hum . Mutat . 19:274-8 (2002)]을 참조하며, 이는 본 명세서에 그것의 전문이 참조로서 포함된다. 추가로, 인간과 다른 종 사이의 FVIII의 비교는 기능을 위해 필요할 가능성이 있는 보존된 잔기를 확인하였다. 예를 들어, 문헌[Cameron et al ., Thromb. Haemost . 79:317-22 (1998)] 및 미국특허 제6,251,632호를 참조하며, 본 명세서에 그것의 전문이 참조로서 포함된다.
인간 FVIII 아미노산 서열은 본 명세서에 전문이 참조로서 포함된 미국특허 제4,965,199호에 나타낸 바와 같은 cDNA로부터 추론되었다. cDNA 서열로부터 유래된 천연 성숙 인간 FVIII(즉, 분비 신호 펩타이드가 없지만, 다른 번역 후 처리 전)은 서열번호 1로서 제시된다. 부분적으로 또는 완전히 B도메인-결실된 FVIII은 기능성이며, 상업적 FVIII 치료에서 사용되었다. 예를 들어, 본 명세서에 전문이 참조로서 포함되는 EP506757B2호를 참조한다.
"천연 성숙 FVIII"은 응혈촉진 활성에 필요할 수도 있고, 필요하지 않을 수도 있는 기능성 도메인을 포함한다. 천연 성숙 인간 FVIII의 서열은 서열번호 1로서 제시된다. 천연 FVIII 단백질은 다음의 식 A1-a1-A2-a2-B-a3-A3-C1-C2을 가지며, 여기서 A1, A2 및 A3은 구조적으로 관련된 "A 도메인"이고, B는 "B 도메인"이며, C1 및 C2는 구조적으로 관련된 "C 도메인"이고, a1, a2 및 a3은 산성 스페이서 영역이다. 서열번호 1에서의 주요 아미노산 서열에 대해, 인간 FVIII의 A1 도메인은 Ala1로부터 약 Arg336으로 연장되고, a1 스페이서 영역은 약 Met337로부터 약 Arg372로 연장되며, A2 도메인은 약 Ser373으로부터 약Tyr719로 연장되고, a2 스페이서 영역은 약 Glu720으로부터 약 Arg740으로 연장되며, B 도메인은 약 Ser741로부터 약 Arg 1648로 연장되고, a3 스페이서 영역은 약 Glu1649로부터 약 Arg1689로 연장되며, A3 도메인은 약 Ser1690으로부터 약 Asn2019로 연장되고, C1 도메인은 약 Lys2020으로부터 약 Asn2172로 연장되며, C2 도메인은 약 Ser2173으로부터 Tyr2332로 연장된다(Saenko et al ., J. Thromb. Hemostasis 1:922-930 (2005)). 구체적 단백질분해 절단 부위 이외에, 도메인과 FVIII의 영역 사이의 경계 위치의 지정은 상이한 참고문헌에서 다를 수 있다. 따라서 본 명세서에서 주목된 경계는 용어 "약"의 사용에 근사한 것으로 지정된다.
a3, A3, C1 및 C2 도메인을 포함하는 폴리펩타이드, 즉, 약 Ser1690 내지 Tyr2332는 중쇄 및 경쇄를 초래하는 정상 FVIII 과정 동안 A1, a1, A2, a2 및 B 도메인을 포함하는 폴리펩타이드로부터 절단된다. B 도메인은 응혈촉진 활성에 필요하지 않으며, 특정 양태에서, 상업적으로 입수가능한 치료적 조성물을 포함하여, FVIII의 B 도메인의 일부 또는 모두는 결실된다("B 도메인-결실인자 VIII" 또는 "BDD FVIII"). BDD FVIII의 예는 리팍토(REFACTO)(등록상표) 또는 진타(XYNTHA)(등록상표)(재조합 BDD FVIII)인데, 이들은 서열번호 1의 아미노산 1638 내지 2332에 대응되는 제2 폴리펩타이드에 융합된 서열번호 1의 아미노산 1 내지 743에 대응되는 제1 폴리펩타이드를 포함한다. 본 발명의 재조합 단백질을 생산하기 위해 사용될 수 있는 예시적인 BDD FVIII 작제물은 성숙 인간 FVIII(서열번호 1)의 아미노산 747 내지 1638에 대응되는 아미노산의 결실을 지니는 FVIII(본 명세서에 전문이 참조로서 포함되는 문헌[Hoeben R.C., et al . J. Biol . Chem . 265 (13): 7318-7323 (1990)]), 및 성숙 인간 FVIII(서열번호 1)의 아미노산 771 내지 1666 또는 아미노산 868 내지 1562에 대응되는 아미노산의 결실을 지니는 FVIII(본 명세서에 전문이 참조로서 포함되는 문헌[Meulien P., et al . Protein Eng . 2(4): 301-6 (1988)])을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
특정 양태에서, 단백질이 제1 폴리펩타이드, 즉, 식 I: (A1)-a1-(A2)-a2-[B]를 포함하는 아미노산 쇄, 및 제2 폴리펩타이드, 즉, 식 II: a3-(A3)-(C1)을 포함하는 아미노산 쇄를 포함하는, 재조합 FVIII 단백질이 제공된다. 제1 폴리펩타이드 및 제2 폴리펩타이드는 단일 아미노산 쇄로서 존재할 수 있고, 즉, 아마이드 결합을 통해 융합될 수 있거나, 또는 헤테로다이머로서 존재할 수 있다. 일 실시형태에서, 재조합 FVIII 단백질은 단일 쇄 폴리펩타이드 내 FVIII 중쇄 및 FVIII 경쇄를 포함한다. 단일 쇄 폴리펩타이드는 FVIII 중쇄와 FVIII 경쇄 사이의 절단 부위에서 하나 이상의 치환, 결실, 또는 돌연변이를 함유할 수 있다. 예를 들어, 단일 쇄 FVIII 폴리펩타이드는 잔기 1645, 잔기 1648, 또는 성숙 전장 FVIII 단백질의 잔기 둘 다에 대응되는 알기닌 잔기에서 하나 이상의 치환, 결실, 또는 돌연변이를 함유할 수 있되, 치환, 결실, 또는 돌연변이는 FVIII 중쇄 및 FVIII 경쇄의 헤테로다이머로 절단을 방지한다. 치환 또는 돌연변이는 임의의 공지된 아미노산, 예를 들어, 알라닌일 수 있다. 다른 실시형태에서, 재조합 FVIII 단백질은 단일 쇄 폴리펩타이드에서 FVIII 중쇄 및 FVIII 경쇄를 포함하되, FVIII 중쇄 및 FVIII 경쇄는 처리되지 않는다(본 명세서에서 "미처리됨" 또는 "비처리됨"으로서 지칭됨). 예를 들어, 재조합 FVIII 단백질 내 단일 쇄 폴리펩타이드는 잔기 1645, 1648, 또는 성숙 전장 FVIII 단백질의 잔기 둘 다에 대응되는 알기닌 잔기를 여전히 보유할 수 있지만, 재조합 FVIII 단백질 내 단일 쇄 폴리펩타이드는 FVIII 중쇄 및 FVIII 경쇄로 절단되지 않는다. 다른 실시형태에서, 재조합 FVIII 단백질 조성물은 헤테로다이머 FVIII 및 미처리 FVIII의 혼합물을 포함한다. 다른 실시형태에서, 재조합 FVIII 단백질 조성물은 단일 쇄 FVIII, 미처리 FVIII, 및 헤테로다이머 FVIII의 혼합물을 포함한다.
본 양태에 따라, A1은 본 명세서에 기재된 바와 같은 FVIII의 A1 도메인이며, A2는 본 명세서에 기재된 바와 같은 FVIII의 A2 도메인이고, [B]는 FVIII의 선택적 B 도메인 또는 이의 단편이며(즉, B 도메인은 단백질 부분일 수도 있거나 또는 단백질의 부분이 아닐 수도 있고, 단지 부분적으로 존재할 수도 있음), A3은 본 명세서에 기재된 바와 같은 FVIII의 A3 도메인이고, C1은 본 명세서에 기재된 바와 같은 FVIII의 C1 도메인이며, a1, a2 및 a3은 산성 스페이서 영역이다. 특정 양태에서, 제2 폴리펩타이드는 (C1)에 대해 C-말단에 위치된 (C2)를 추가로 포함하며, 여기서 C2는 FVIII의 C2 도메인이다. 본 발명의 재조합 폴리펩타이드의 다양한 FVIII 도메인은 천연 성숙 FVIII, 예를 들어, 천연 성숙 인간 FVIII의 대응되는 영역과 주요 서열 유사성을 공유하지만, 재조합 폴리펩타이드가 응혈촉진 활성을 가진다는 조건하에서 해당 영역은 동일할 필요는 없다.
본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 적어도 하나의 허용적 루프 내로, 또는 a3 영역 내로, 또는 둘 다에 삽입된 적어도 하나의 이종성 모이어티를 포함하며, 응혈촉진 활성을 가지고, 숙주 세포에서 발현될 수 있다. "이종성 모이어티"는 이종성 폴리펩타이드 또는 비폴리펩타이드 독립체, 예컨대 폴리에틸렌 글라이콜(PEG) 또는 둘 다일 수 있다. 예시적인 이종성 모이어티는 이하에 기재된다. 특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 적어도 하나의 허용적 루프 내로, 또는 a3 영역 내로, 또는 둘 다에 삽입된 적어도 하나의 이종성 모이어티를 포함하되, 이종성 모이어티는 XTEN 서열이 아니다. 다른 양태에서 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 적어도 하나의 허용적 루프 내로, 또는 a3 영역 내로, 또는 둘 다에 삽입된 적어도 하나의 이종성 모이어티를 포함하되, 이종성 모이어티는 단백질의 반감기, 예를 들어, 생체내 반감기를 증가시키고, 이종성 모이어티는 XTEN 서열이 아니다. 이종성 모이어티(예를 들어, 단백질의 반감기를 증가시키는 이종성 모이어티)를 포함하는 작제물은 실시예에서 기재한다. 허용적 루프에 적용되는 용어 "삽입하다" 또는 "내로 삽입하다"는 FVIII 폴리펩타이드 쇄 내에 그것을 통합하는 것에 의한 FVIII 폴리펩타이드에 대한 이종성 모이어티의 공유적 또는 비공유적 부착을 지칭하며, 그것을 천연 아미노산 또는 이종성 천연 또는 비천연 아미노산(예를 들어, 시스테인 또는 분자 생물학 방법을 사용하여 FVIII 서열에 도입된 유도체가능화된 측쇄를 지니는 다른 아미노산)의 측쇄에, 또는 FVIII 폴리펩타이드에 공유적으로 또는 비공유적으로 링커 또는 다른 분자에 부착한다. 폴리펩타이드 서열와 관련하여 사용될 때 용어 "삽입"은 FVIII 폴리펩타이드의 아미노산 서열 내 2개의 인접한 아미노산 간의 이종성 서열(예를 들어, 폴리펩타이드 또는 유도체화가능한 아미노산, 예컨대 시스테인)의 도입, 또는 FVIII 폴리펩타이드에 대한 이종성 모이어티의 융합, 컨쥬게이션 또는 화학적 부착을 지칭한다.
특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 키메라이다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "키메라 단백질" 또는 "키메라 폴리펩타이드"는 상이한 공급원, 예를 들어 이종성 폴리펩타이드를 포함하는 FVIII 단백질로부터 아미노산의 적어도 2개의 신장 내에서, 예를 들어 이하에 더욱 상세하게 기재되는 바와 같은 FVIII의 a3 영역 내에서 포함되는 단백질 또는 폴리펩타이드를 의미한다. 키메라 단백질 또는 키메라 폴리펩타이드는 상이한 공급원, 예컨대 상이한 유전자, 상이한 cDNA 또는 상이한 종으로부터의 2, 3, 4, 5, 6, 7 이상의 아미노산 쇄를 포함할 수 있다. 본 발명의 재조합 폴리펩타이드에서 사용을 위한 예시적인 이종성 폴리펩타이드는 FVIII 반감기 또는 안정성, 예를 들어, 면역글로뷸린 Fc 영역을 증가시키는 폴리펩타이드를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 본 발명의 재조합 폴리펩타이드에 포함될 수 있는 구체적 이종성 폴리펩타이드는 본 명세서의 다른 곳에 기재되어 있다.
키메라 단백질 또는 키메라 폴리펩타이드는 상이한 하위서열과 결합되는 하나 이상의 링커를 포함할 수 있다. 따라서, 하위 서열은 단일 키메라 단백질 또는 키메라 폴리펩타이드 내에서 직접적으로 또는 링커를 통해 간접적으로, 또는 둘 다로 결합될 수 있다. 본 명세서에 기재된 키메라 단백질 또는 키메라 폴리펩타이드는 신호 서열과 같은 추가적인 폴리펩타이드 및 단백질 정제 또는 결실에 도움을 주는 6His 및 FLAG와 같은 서열을 포함할 수 있다. 추가로, 키메라 폴리펩타이드는 N- 및/또는 C-말단에 추가로 아미노산 또는 펩타이드를 가질 수 있다.
특정 실시형태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은, 예를 들어 비폴리펩타이드 이종성 모이어티를 포함하기 위해 컨쥬게이트된다. 컨쥬게이션은 수용체 아미노산(예를 들어, 시스테인), 펩타이드 또는 폴리펩타이드의 허용적 루프 내로, 또는 a3 영역 내로의 삽입, 또는 둘 다를 통할 수 있다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은, 컨쥬게이트는 소수성 상호작용, 공유적 상호작용, 수소 결합 상호작용, 이온 상호작용 또는 이들의 임의의 조합을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 임의의 생화학적 수단에 의해 서로에 대해 결합된 임의의 2 이상의 독립체를 지칭한다. 따라서, 특정 양태에서, 컨쥬게이트된 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 갖는 공유적 또는 비공유적 상호작용에 의해 그것에 결합된 하나 이상의 독립체를 지니는 재조합 FVIII 단백질을 지칭한다.
"응혈촉진 활성"은 천연 FVIII를 대신해서 혈액 내 응고 캐스케이드에 참여하는 본 발명의 재조합 FVIII 단백질의 능력을 의미한다. 예를 들어, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은, 예를 들어 색원체 분석에서 시험되는 바와 같이 그것이 인자 X(FX)를 활성화된 인자 X(FXa)로 전환시키는 보조인자로서 FIX를 활성화시킬 수 있을 때, 응혈촉진 활성을 가진다.
본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 천연 성숙 인간 FVIII의 응혈촉진 활성을 100% 나타낼 필요는 없다. 사실, 특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질 내로 삽입된 이종성 모이어티는 더 낮은 활성이 완벽하게 허용가능하도록 유의하게 단백질의 반감기 또는 안정성을 증가시킬 수 있다. 따라서, 특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 천연 FVIII의 응혈촉진 활성의 적어도 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90% 또는 약 100%를 가진다.
응혈촉진 활성은 임의의 적합한 시험관내 또는 생체내 분석에 의해 측정될 수 있다. FVIII의 활성은 응고물(응고 분석)의 생성을 모니터링함으로써 응혈 캐스케이드의 하류에서 또는 FVIII-FIX 복합체(색원체 분석)에 의한 활성화 후 FX의 효소적 활성을 직접적으로 측정함으로써 상류에서 측정될 수 있다(예를 들어, 문헌[Barrowcliffe et al., Semin. Thromb. Haemost. 28: 247-56 (2002); Lee et al ., Thromb. Haemost. 82: 1644-47 (1999); Lippi et al ., Clin. Chem. Lab. Med. 45: 2-12 (2007); Matsumoto et al ., J. Thromb. Haemost. 4: 377-84 (2006)] 참조). 따라서, 응혈촉진 활성은 색원체 기질 분석, 응고 분석 (예를 들어, 1 단계 또는 2 단계 응고 분석), 또는 둘 다를 사용하여 측정될 수 있다. 색원체 분석 메커니즘은 혈액 응고 캐스케이드의 원칙에 기반하며, 여기서 활성화된 FVIII은 활성화된 FIX, 인지질 및 칼슘 이온의 존재에서 FX의 FXa로 전환을 가속화시킨다. FXa 활성은 FXa에 특이적인 p-나이트로아닐라이드(pNA) 기질의 가수분해에 의해 평가된다. 405 nM에서 측정된 p-나이트로아닐린의 초기 방출속도는 FXa 활성에 직접적으로 비례하고, 따라서 샘플 내 FVIII 활성에 직접 비례한다. 색원체 분석은 혈전증 및 지혈에 대한 국제 협회(International Society on Thrombosis and Hemostasis: ISTH)의 과학적 및 표준화 위원회(Scientific and Standardization Committee: SSC)의 인자 VIII 및 인자 IX 소위원회에 의해 권고된다. 1994년 이래로, 색원체 분석은 또한 FVIII 농축물 효능의 연구를 위한 유럽약전의 참조방법이었다(Rosen et al ., Thromb. Haemost. 54, 818-823 (1985); Lethagen et al ., Scand. J. Haematol. 37, 448-453 (1986)).
응고촉진성 활성을 결정하는데 유용한 다른 적합한 분석은, 예를 들어 Scheiflinger 및 Dockal에 대한 미국특허 출원 공개 제2010/0022445호에 기재된 것을 포함하며, 이는 본 명세서에 그것의 전문이 참조로서 포함되어 있다.
특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질의 응혈촉진 활성은 천연 성숙 FVIII과 비교되며, 특정 양태에서 이는 국제 표준과 비교된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "동일한 양"은 당해 폴리펩타이드의 분자량과 독립적인 국제 단위로 표현되는 바와 같은 FVIII 활성의 동일한 양을 의미한다. FVIII 활성의 일 국제 단위(International Unit: IU)는 정상 인간 혈장의 1 밀리리터 중의 FVIII 의 양에 거의 대응된다. 상기 기재한 바와 같이, 유럽 약전 색원체 기질 분석 및 일 단계 응고 분석을 포함하는 몇몇 분석은 FVIII 활성을 측정하는데 이용가능하다.
2. 인자 VIII 허용적 루프
본 명세서의 다른 곳에서 상세하게 기재되는 바와 같이, 본 발명자들은 각각의 FVIII "A" 도메인이 재조합 단백질의 응혈촉진 활성, 또는 재조합 단백질이 숙주 세포에서 생체내 또는 시험관내 발현되는 능력을 제거하는 일 없이 이종성 모이어티가 삽입될 수 있는 적어도 2개의 "허용적 루프"를 포함하는 것을 인식하였다. 본 발명자들은 속성 중에서, 고표면적 또는 용매 노출 및 높은 입체형태적 가요성을 지니는 영역으로서 허용적 루프를 확인하였다. "허용적 부위"는 허용적 루프에서 클러스터링되는 경향이 있지만, 본 발명자들은 또한 재조합 단백질의 응혈촉진 활성, 또는 재조합 단백질이 숙주 세포에서 생체내 또는 시험관내 발현되는 능력을 제거하는 일 없이 이종성 모이어티가 삽입될 수 있는 확인된 허용적 루프 바깥의 다른 허용적 부위를 확인하였다. 용어 "허용적 위치"는 허용적 루프와 허용적 부위를 둘 다 지칭한다. A1 도메인은 허용적 루프-1(A1-1) 영역 및 허용적 루프-2(A1-2) 영역을 포함하며, A2 도메인은 허용적 루프-1(A2-1) 영역 및 허용적 루프-2(A2-2) 영역을 포함하고, A3 도메인은 허용적 루프-1(A3-1) 영역 및 허용적 루프-2(A3-2) 영역을 포함한다.
특정 양태에서 상기 기재한 바와 같은 재조합 FVIII 단백질은 허용적 루프 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 중 적어도 하나 내로 삽입된 적어도 하나의 이종성 모이어티를 포함하되, 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 가지고, 숙주 세포에서 생체내 또는 시험관내에서 발현될 수 있다. 특정 양태에서 상기 기재한 바와 같은 재조합 FVIII 단백질은 FVIII 단백질 내로 삽입된 적어도 2개의 이종성 모이어티를 포함하되, 2개의 이종성 모이어티 중 적어도 하나는 허용적 루프 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 중 적어도 하나에서 또는 a3 영역에서 삽입되고, 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 가지며, 숙주 세포에서 생체내 또는 시험관내에서 발현될 수 있다. 특정 양태에서 상기 기재한 바와 같은 재조합 FVIII 단백질은 FVIII 단백질 내로 삽입된 적어도 3개의 이종성 모이어티를 포함하되, 3개의 이종성 모이어티 중 적어도 하나는 허용적 루프 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 중 적어도 하나에서 또는 a3 영역에서 삽입되고, 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 가지며, 숙주 세포에서 생체내 또는 시험관내에서 발현될 수 있다. 특정 양태에서 상기 기재한 바와 같은 재조합 FVIII 단백질은 FVIII 단백질 내로 삽입된 적어도 4개의 이종성 모이어티를 포함하되, 4개의 이종성 모이어티 중 적어도 하나는 허용적 루프 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 중 적어도 하나에서 또는 a3 영역에서 삽입되고, 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 가지며, 숙주 세포에서 생체내 또는 시험관내에서 발현될 수 있다. 특정 양태에서 상기 기재한 바와 같은 재조합 FVIII 단백질은 FVIII 단백질 내로 삽입된 적어도 5개의 이종성 모이어티를 포함하되, 5개의 이종성 모이어티 중 적어도 하나는 허용적 루프 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 중 적어도 하나에서 또는 a3 영역에서 삽입되고, 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 가지며, 숙주 세포에서 생체내 또는 시험관내에서 발현될 수 있다. 특정 양태에서 상기 기재한 바와 같은 재조합 FVIII 단백질은 FVIII 단백질 내로 삽입된 적어도 6개의 이종성 모이어티를 포함하되, 6개의 이종성 모이어티 중 적어도 하나는 허용적 루프 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 중 적어도 하나에서 또는 a3 영역에서 삽입되고, 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 가지며, 숙주 세포에서 생체내 또는 시험관내에서 발현될 수 있다.
특정 양태에서 상기 기재한 바와 같은 재조합 FVIII 단백질은 FVIII 내로, 예를 들어 2개의 상이한 허용적 루프 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 내로 삽입된 적어도 2개의 이종성 모이어티를 포함하되, 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 가지며, 숙주 세포에서 생체내 또는 시험관내에서 발현될 수 있다. 대안적으로, 상기 기재한 바와 같은 재조합 FVIII 단백질은 다른 허용적 루프 내로 삽입된 이종성 모이어티와 함께 또는 이종성 모이어티 없이 단일의 허용적 루프 내로 삽입된 2 이상의 이종성 모이어티를 포함할 수 있되, 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 가지며, 숙주 세포에서 생체내 또는 시험관내에서 발현될 수 있다. 특정 양태에서 상기 기재한 바와 같은 재조합 FVIII 단백질은 상기 기재한 바와 같은 허용적 루프 중 적어도 하나 내로 삽입된 적어도 하나의 이종성 모이어티를 포함할 수 있으며, a3 내로 삽입된 하나 이상의 이종성 모이어티를 추가로 포함할 수 있되, 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 가지며, 숙주 세포에서 생체내 또는 시험관내에서 발현될 수 있다. 특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 하나 이상의 허용적 루프 내로 또는 a3 내로 삽입된 3, 4, 5, 6 이상의 이종성 모이어티를 포함할 수 있되, 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 가지며, 숙주 세포에서 생체내 또는 시험관내에서 발현될 수 있다.
특정 양태에서 상기 기재한 바와 같은 재조합 FVIII 단백질은 a3 내로 삽입된 적어도 하나의 이종성 모이어티를 포함하되, 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 가지며, 숙주 세포에서 생체내 또는 시험관내에서 발현될 수 있다. 특정 양태에서 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 a3 내로 삽입된 적어도 하나의 이종성 모이어티를 포함하고, 상기 기재한 바와 같은 하나 이상의 허용적 루프 내로 삽입된 하나 이상의 이종성 모이어티를 추가로 포함하되, 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 가지며, 숙주 세포에서 생체내 또는 시험관내에서 발현될 수 있다.
본 발명자들은 본 발명의 재조합 FVIII 단백질이 이종성 모이어티를 삽입시키는 한편 응혈촉진 활성을 가지고, 또한 숙주 세포에 의해 생체내 또는 시험관내 발현되는 것을 가능하게 하는 FVIII A 도메인 영역의 각각에서 적어도 2개의 허용적 루프를 포함한다는 것을 인식하였다. 다양한 해상도의 FVIII의 다양한 결정 구조가 결정되었다. X레이 결정학 및 분자 동적 시뮬레이션에 의해 결정된 이들 FVIII 및 FVIIIa의 구조를 사용하여 FVIII에 대해 접근가능한 표면적 및 입체형태적 가요성의 모델을 만들었다. 예를 들어, 인간 FVIII의 결정 구조는 문헌[Shen et al. Blood 111: 1240-1247 (2008) 및 Ngo et al . Structure 16: 597-606 (2008)]에 의해 결정되었다. 이들 구조에 대한 데이터는 각각 등록번호 2R7E 및 3CDZ 하에서 단백질 정보 은행(pdb.org)으로부터 입수가능하다.
Shen 등의 결정 구조에 따른 인간 FVIII의 중쇄 및 경쇄의 예측된 2차 구조는 도 9a 및 도 9b에서 재생성된다. Shen 등의 결정 구조로부터 예측된 다양한 베타 가닥은 도 9a 및 도 9b에서 연속적으로 넘버링된다. 특정 실시형태에서, 허용적 루프 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 및 A3-2는 FVIII의 A 도메인의 표면-노출된, 가요성 루프 구조 내에 함유된다. PDB 데이터베이스의 등록번호 2R7E(PDB:2R7E)로서 저장되고, 도 9a 및 도 9b에 나타낸 바와 같은 성숙 FVIII의 2차 구조에 따라, A1-1은 베타 가닥 1과 베타 가닥 2 사이에 위치되며, A1-2는 베타 가닥 11과 베타 가닥 12 사이에 위치되고, A2-1은 베타 가닥 22와 베타 가닥 23 사이에 위치되며, A2-2는 베타 가닥 32와 베타 가닥 33 사이에 위치되고, A3-1은 베타 가닥 38과 베타 가닥 39 사이에 위치되며, A3-2은 베타 가닥 45와 베타 가닥 46 사이에 위치된다. 도 9a 및 도 9b에 나타낸 바와 같은 PDB 등록번호 2R7E의 2차 구조는 DSSP 프로그램에 따른 표준화된 2차 구조 배치에 대응된다(Kabsch and Sander, Biopolymers, 22:2577-2637 (1983)). PDB 등록번호 2R7E로서 저장된 성숙 FVIII의 DSSP 2차 구조는 DSSP 데이터베이스에서 접근될 수 있으며, swift.cmbi.ru.nl/gv/dssp/(Joosten et al., 39(Suppl. 1): D411-D419 (2010))에서 이용가능하다.
특정 양태에서, A1-1을 포함하는 표면-노출된, 가요성 루프 구조는 서열번호 1의 약 아미노산 15 내지 약 아미노산 45의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응된다. 특정 양태에서, A1-1은 서열번호 1의 약 아미노산 18 내지 약 아미노산 41의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응된다. 특정 양태에서, A1-2를 포함하는 표면-노출된, 가요성 루프 구조는 서열번호 1의 약 아미노산 201 내지 약 아미노산 232의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응된다. 특정 양태에서, A1-2는 서열번호 1의 약 아미노산 218 내지 약 아미노산 229의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응된다. 특정 양태에서, A2-1을 포함하는 표면-노출된, 가요성 루프 구조는 서열번호 1의 약 아미노산 395 내지 약 아미노산 421의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응된다. 특정 양태에서, A2-1은 서열번호 1의 약 아미노산 397 내지 약 아미노산 418의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응된다. 특정 양태에서, 표면-노출된, A2-2를 포함하는 가요성 루프 구조는 서열번호 1의 약 아미노산 577 내지 약 아미노산 635의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응된다. 특정 양태에서, A2-2는 서열번호 1의 약 아미노산 595 내지 약 아미노산 607의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응된다. 특정 양태에서, A3-1을 포함하는 표면-노출된, 가요성 루프 구조는 서열번호 1의 약 아미노산 1705 내지 약 아미노산 1732의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응된다. 특정 양태에서, A3-1은 서열번호 1의 약 아미노산 1711 내지 약 아미노산 1725의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응된다. 특정 양태에서, A3-2를 포함하는 표면-노출된, 가요성 루프 구조는 서열번호 1의 약 아미노산 1884 내지 약 아미노산 1917의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응된다. 특정 양태에서, A3-2는 서열번호 1의 약 아미노산 1899 내지 약 아미노산 1911의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응된다.
특정 양태에서 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 FVIII의 하나 이상의 허용적 루프 내로, 또는 a3 영역 내로, 또는 둘 다에 삽입된 하나 이상의 이종성 모이어티를 포함하되, 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 가지며, 숙주 세포에서 생체내 또는 시험관내 발현될 수 있다. 삽입되는 이종성 모이어티는 (i) FVIII의 반감기 또는 생체내 또는 시험관내 안정성을 증가시키는 것, (ii) 클리어런스 수용기, 또는 (iii) 재조합 FVIII 단백질의 시각화 또는 국소화에 도움을 주는 모이어티를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 이종성 모이어티는 이하에 더욱 상세하게 논의된다.
특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 서열번호 1의 아미노산 18, 서열번호 1의 아미노산 22, 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 40, 서열번호 1의 아미노산 216, 서열번호 1의 아미노산 220, 서열번호 1의 아미노산 224, 서열번호 1의 아미노산 399, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 409, 서열번호 1의 아미노산 599, 서열번호 1의 아미노산 603, 서열번호 1의 아미노산 1711, 서열번호 1의 아미노산 1720, 서열번호 1의 아미노산 1725, 서열번호 1의 아미노산 1900, 서열번호 1의 아미노산 1905, 서열번호 1의 아미노산 1910, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 성숙 천연 인간 FVIII에서의 하나 이상의 아미노산에 대응되는 하나 이상의 아미노산의 바로 하류에 삽입된 이종성 모이어티를 포함한다. 특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 서열번호 1의 아미노산 188, 서열번호 1의 아미노산 221, 서열번호 1의 아미노산 333, 서열번호 1의 아미노산 336, 서열번호 1의 아미노산 339, 서열번호 1의 아미노산 416, 서열번호 1의 아미노산 442, 서열번호 1의 아미노산 490, 서열번호 1의 아미노산 713, 서열번호 1의 아미노산 1796, 서열번호 1의 아미노산 1802, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 성숙 천연 인간 FVIII에서의 하나 이상의 아미노산에 대응되는 하나 이상의 아미노산의 바로 하류에 삽입된 이종성 모이어티를 포함한다.
특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 FVIII의 a3 영역 내로 삽입된 적어도 하나의 이종성 모이어티를 포함하며, 단독으로 또는 A 도메인의 허용적 루프(예를 들어, 상기 기재된 바와 같은 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2) 내로 삽입되는 하나 이상의 이종성 모이어티와 조합으로, 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 가지며, 숙주 세포에서 생체내 또는 시험관내에서 발현될 수 있다. 특정 양태에서, 적어도 하나의 이종성 모이어티는 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 아미노산의 바로 하류의 a3 영역 내로 삽입된다. 일부 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 기재된 바와 같이 a3 영역 내로(예를 들어, 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 아미노산의 바로 하류) 삽입된 이종성 모이어티를 포함하고, A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 내로 삽입된 하나 이상의 이종성 모이어티를 추가로 포함한다. 특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 기재된 바와 같이 a3 영역 내로(예를 들어, 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 아미노산의 바로 하류) 삽입된 이종성 모이어티를 포함하며, 서열번호 1의 아미노산 18, 서열번호 1의 아미노산 22, 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 40, 서열번호 1의 아미노산 216, 서열번호 1의 아미노산 220, 서열번호 1의 아미노산 224, 서열번호 1의 아미노산 399, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 409, 서열번호 1의 아미노산 599, 서열번호 1의 아미노산 603, 서열번호 1의 아미노산 1711, 서열번호 1의 아미노산 1720, 서열번호 1의 아미노산 1725, 서열번호 1의 아미노산 1900, 서열번호 1의 아미노산 1905, 서열번호 1의 아미노산 1910, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 성숙 천연 인간 FVIII에서의 하나 이상의 아미노산에 대응되는 하나 이상의 아미노산의 바로 하류에 삽입된 하나 이상의 이종성 모이어티를 추가로 포함한다. 특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 기재된 바와 같이 a3 영역 내로 삽입된 이종성 모이어티를 포함하고, 서열번호 1의 아미노산 188, 서열번호 1의 아미노산 221, 서열번호 1의 아미노산 333, 서열번호 1의 아미노산 336, 서열번호 1의 아미노산 339, 서열번호 1의 아미노산 416, 서열번호 1의 아미노산 442, 서열번호 1의 아미노산 490, 서열번호 1의 아미노산 713, 서열번호 1의 아미노산 1796, 서열번호 1의 아미노산 1802, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 성숙 천연 인간 FVIII에서의 하나 이상의 아미노산에 대응되는 하나 이상의 아미노산의 바로 하류에 삽입된 하나 이상의 이종성 모이어티를 추가로 포함한다.
다른 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 내로 삽입된 제1 이종성 모이어티 및 B 도메인 내로 삽입된 제2 이종성 모이어티를 포함한다. 일 실시형태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 성숙 FVIII 서열(서열번호 1)에 대응되는 아미노산 18, 서열번호 1에 대응되는 아미노산 22, 서열번호 1에 대응되는 아미노산 26, 서열번호 1에 대응되는 아미노산 40, 서열번호 1의 아미노산 216, 서열번호 1의 아미노산 220, 서열번호 1의 아미노산 224, 서열번호 1의 아미노산 399, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 409, 서열번호 1의 아미노산 599, 서열번호 1의 아미노산 603, 서열번호 1의 아미노산 1711, 서열번호 1의 아미노산 1720, 서열번호 1의 아미노산 1725, 서열번호 1의 아미노산 1900, 서열번호 1의 아미노산 1905, 서열번호 1의 아미노산 1910의 바로 하류에 삽입된 제1 이종성 모이어티, 및 B 도메인, 예를 들어 서열번호 1에 대응되는 아미노산 745의 바로 하류 내로 삽입된 제2 이종성 모이어티를 포함한다.
일부 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 서열번호 1의 아미노산 403의 바로 하류에 삽입된 제1 이종성 모이어티 및 서열번호 1의 아미노산 745의 바로 하류에 삽입된 제2 이종성 모이어티를 포함한다. 다른 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 성숙 FVIII 서열(즉, 서열번호 1)에 대응되는 아미노산 1900의 바로 하류에 삽입된 제1 이종성 모이어티 및 서열번호 1에 대응되는 아미노산 745의 바로 하류에 삽입된 제2 이종성 모이어티를 포함한다. 또 다른 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 서열번호 1에 대응되는 아미노산 18의 바로 하류에 삽입된 제1 이종성 모이어티 및 서열번호 1에 대응되는 아미노산 745의 바로 하류에 삽입된 제2 이종성 모이어티를 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 서열번호 1에 대응되는 아미노산 1656의 바로 하류에 삽입된 제1 이종성 모이어티 및 서열번호 1에 대응되는 아미노산 1900의 바로 하류에 삽입된 제2 이종성 모이어티를 포함한다. 특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 서열번호 1에 대응되는 아미노산 26의 바로 하류에 삽입된 제1 이종성 모이어티 및 서열번호 1에 대응되는 아미노산 1656의 바로 하류에 삽입된 제2 이종성 모이어티, 및 서열번호 1에 대응되는 아미노산 1900의 바로 하류에 삽입된 제3 이종성 모이어티를 포함한다. 일부 양태에서, 제1 및 제2 이종성 모이어티는 동일하다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 상이하다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 FVIII 단백질은 FVIII 중쇄(HC) 및 FVIII 경쇄를 포함하는 이중 쇄 FVIII 또는 단일 쇄 FVIII일 수 있다.
일부 양태에서, 도메인의 허용적 루프(예를 들어, 상기 기재된 바와 같은 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2) 내로 삽입된 적어도 하나의 이종성 모이어티를 포함하는 본 발명의 재조합 FVIII 단백질의 a3 영역 내로 적어도 하나의 추가적인 이종성 모이어티의 삽입은 a3 영역에서 삽입된 적어도 하나의 추가적인 이종성 모이어티 없이 재조합 FVIII 단백질의 발현 수준과 비교할 때 발현 수준의 증가를 초래한다. 일부 양태에서, 추가적인 이종성 모이어티는 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 아미노산의 바로 하류의 a3 영역 내로 삽입된다. 일부 양태에서, 발현 수준에서의 증가는 활성 분석에 의해 결정된다. 특정 양태에서, 활성 분석은 색원체 분석 또는 aPTT 분석이다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질(적어도 하나의 추가적인 이종성 모이어티는 a3 영역 내로 삽입됨)은 A 도메인의 허용적 루프(예를 들어, 상기 기재된 바와 같은 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2) 중 하나 이상에 삽입된 하나의 이종성 모이어티를 포함한다.
일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질(적어도 하나의 추가적인 이종성 모이어티는 a3 영역 내로 삽입됨)은 A 도메인의 허용적 루프(예를 들어, 상기 기재된 바와 같은 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2) 중 하나 이상에 삽입된 2개의 이종성 모이어티를 포함한다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질(적어도 하나의 추가적인 이종성 모이어티는 a3 영역 내로 삽입됨)은 A 도메인의 허용적 루프(예를 들어, 상기 기재된 바와 같은 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2) 중 하나 이상에 삽입된 3개의 이종성 모이어티를 포함한다. 다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질(적어도 하나의 추가적인 이종성 모이어티는 a3 영역 내로 삽입됨)은 A 도메인의 허용적 루프(예를 들어, 상기 기재된 바와 같은 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2) 중 하나 이상에 삽입된 3개 초과의 이종성 모이어티를 포함한다. 특정 실시형태에서, 재조합 FVIII 단백질은 서열번호 1에 대응되는 아미노산 1656의 바로 하류의 이종성 모이어티를 포함하되, 서열번호 1에 대응되는 아미노산 745 내지 아미노산 1656은 결실된다.
일부 양태에서, 도메인의 허용적 루프(예를 들어, 상기 기재된 바와 같은 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2) 내로 삽입된 적어도 하나의 이종성 모이어티를 포함하는 본 발명의 재조합 FVIII 단백질의 a3 영역 내로 적어도 하나의 추가적인 이종성 모이어티의 삽입에 의해 야기된 발현 수준에서의 증가는 a3 영역에서 삽입된 적어도 하나의 추가적인 이종성 모이어티 없이 재조합 FVIII 단백질의 발현 수준에 비교할 때, 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 100%의 증가이다. 일부 양태에서, 도메인의 허용적 루프(예를 들어, 상기 기재된 바와 같은 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2) 내로 삽입된 적어도 하나의 이종성 모이어티를 포함하는 본 발명의 재조합 FVIII 단백질의 a3 영역 내로 적어도 하나의 추가적인 이종성 모이어티의 삽입에 의해 야기된 발현 수준에서의 증가는 a3 영역에서 삽입된 적어도 하나의 추가적인 이종성 모이어티 없이 재조합 FVIII 단백질의 발현 수준에 비교할 때, 적어도 약 2배, 적어도 약 3배, 적어도 약 4배, 적어도 약 5배, 적어도 약 6배, 적어도 약 7배, 적어도 약 8배, 적어도 약 9배, 또는 적어도 약 10배의 증가이다.
본 발명은 또한 재조합 FVIII 단백질의 a3 영역 내로 적어도 하나의 이종성 모이어티를 삽입하는 단계를 포함하는 본 발명의 재조합 FVIII 단백질 발현을 증가시키는 방법을 제공하되, a3 영역 내로 삽입된 적어도 하나의 추가적인 이종성 모이어티를 지니는 재조합 FVIII 단백질은 a3 영역에 삽입된 적어도 하나의 추가적인 이종성 모이어티 없이 재조합 FVIII 단백질의 발현에 비해 증가된 발현을 나타낸다.
일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 재조합 FVIII 단백질의 a3 산성 스페이서 영역 내로 삽입된 적어도 하나의 이종성 모이어티를 포함한다. 일 예에서, a3 영역 내로 적어도 하나의 이종성 모이어티의 삽입은 a3 영역에서 삽입된 적어도 하나의 이종성 모이어티 없이 대응되는 재조합 FVIII 단백질의 발현에 비해 재조합 FVIII 단백질의 증가된 발현을 초래한다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 허용적 루프, 예를 들어 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 내로 삽입된 하나의 추가적인 이종성 모이어티를 추가로 포함한다. 다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 하나 이상의 허용적 루프, 예를 들어 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 내로 삽입된 2개의 추가적인 이종성 모이어티를 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 하나 이상의 허용적 루프, 예를 들어 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 내로 삽입된 3개의 추가적인 이종성 모이어티를 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 FVIII 단백질, 예를 들어 하나 이상의 허용적 루프, 예를 들어 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 내로 삽입된 4개의 추가적인 이종성 모이어티를 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 FVIII 단백질, 예를 들어, 하나 이상의 허용적 루프, 예를 들어, A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 내로 삽입된 5개의 추가적인 이종성 모이어티를 추가로 포함한다.
일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 다수의 이종성 삽입, 예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개 초과의 삽입을 포함하되, 삽입 부위는 표 X 내지 XVIII에 열거된 부위 또는 이들의 임의의 조합을 포함하지만, 이들로 제한되지 않으며, 삽입 부위의 적어도 하나는 허용적 루프에서, 예를 들어, A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2, 또는 a3 영역에서 위치된다.
일 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 2개의 이종성 모이어티를 포함하되, 2개의 이종성 모이어티 중 적어도 하나는 허용적 루프 내이거나 또는 a3 영역에서 또는 2개의 이종성 모이어티 둘 다에 삽입된다. 제1 및 제2 이종성 모이어티은 동일 또는 상이할 수 있다. 2개의 이종성 모이어티를 포함하는 재조합 FVIII 단백질의 비제한적 예는 표 XI에 열거된다. 일 예에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A1-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 루프 A2-1에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A1-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 허용적 루프 A2-2에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-2에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A1-1에서 삽입되며, 제2 이종성 모이어티는 a3 영역에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A2-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 a3 영역에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A2-2에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 a3 영역에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 a3 영역에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A1-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-2에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A2-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-2에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-2에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 a3 영역에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A1-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-1에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A2-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-1에서 삽입된다. 다른 실시형태에서, 재조합 FVIII 단백질은 2개의 이종성 모이어티, 즉, 서열번호 1에 대응되는 아미노산 1656의 바로 하류에 삽입된 제1 이종성 모이어티 및 서열번호 1의 아미노산 2332의 바로 하류(CT)에 삽입된 제2 이종성 모이어티를 포함하되, 서열번호 1에 대응되는 아미노산 745 내지 아미노산 1656은 결실된다. 일부 실시형태에서, 2개의 이종성 모이어티를 포함하는 FVIII 단백질은 서열번호 1에 대응되는 아미노산 745 내지 아미노산 1685 또는 서열번호 1에 대응되는 아미노산 745 내지 아미노산 1656의 결실 또는 아미노산 1648(예를 들어, R1648A), 1680(Y1680F), 또는 둘 다에서 돌연변이 또는 치환을 함유한다.
다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 3개의 이종성 모이어티를 포함하되, 3개의 이종성 모이어티 중 적어도 하나는 허용적 루프에서 또는 a3 영역에서 삽입되고, 3개의 이종성 모이어티 중 적어도 2개는 a3 영역에서 2개의 허용적 루프, 또는 이것의 임의의 조합에 삽입되거나, 또는 3개의 이종성 모이어티는 3개의 허용적 루프에서, a3 영역에서, 또는 이들의 임의의 조합에서 삽입된다. 제1, 제2 또는 제3 이종성 모이어티는 서로 동일하거나 또는 상이할 수 있다. 제1, 제2 및 제3 이종성 모이어티는 동일 또는 상이하다. 3개의 이종성 모이어티를 포함하는 재조합 FVIII 단백질의 비제한적 예는 표 XII 또는 XIII에 있다. 일 예에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A1-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 허용적 루프 A2-1에서 삽입되며, 제3 이종성 모이어티는 a3 영역에서 삽입된다. 다른 예에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A1-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 허용적 루프 A2-1에서 삽입되며, 제3 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-1에서 삽입된다. 다른 예에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A1-1에서 삽입되며, 제2 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-1에서 삽입되고, 제3 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-2에서 삽입된다. 다른 예에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A2-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 a3 영역에서 삽입되며, 제3 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-1에서 삽입된다. 다른 예에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A2-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 a3 영역에서 삽입되며, 제3 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-2에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 a3 영역에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-1에서 삽입되며, 제3 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-2에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A1-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 B 도메인에서 삽입되며, 제3 이종성 모이어티는 카복시 말단 위치(CT)에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A2-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 B 도메인에서 삽입되며, 제3 이종성 모이어티는 CT에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 B 도메인에서 삽입되며, 제3 이종성 모이어티는 CT에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-2에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 B 도메인에서 삽입되며, 제3 이종성 모이어티는 CT에서 삽입된다. 일부 실시형태에서, 3개의 이종성 모이어티를 포함하는 FVIII 단백질은 서열번호 1에 대응되는 아미노산 745 내지 아미노산 1685 또는 서열번호 1에 대응되는 아미노산 745 내지 아미노산 1656의 결실 또는 아미노산 1648(예를 들어, R1648A), 1680(Y1680F), 또는 둘 다에서의 돌연변이 또는 치환을 함유한다.
다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 4개의 이종성 모이어티를 포함하되, 4개의 이종성 모이어티 중 적어도 하나는 허용적 루프 내에 또는 a3 영역에 삽입되거나, 4개의 이종성 모이어티 중 적어도 2개는 2개의 허용적 루프 내, a3 영역 내, 또는 이들의 임의의 조합에 삽입되거나, 4개의 이종성 모이어티 중 적어도 3개는 3개의 허용적 루프 내, a3 영역 내, 또는 이들의 임의의 조합에 삽입되거나, 4개의 이종성 모이어티 모두는 4개의 허용적 루프 내, a3 영역 내, 또는 이들의 임의의 조합에 삽입된다. 4개의 이종성 모이어티를 포함하는 재조합 FVIII 단백질의 비제한적 예는 표 XIV 또는 XV에 열거된다. 제1, 제2, 제3 또는 제4의 이종성 모이어티는 동일 또는 상이하다. 일 예에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A1-1에서 삽입되며, 제2 이종성 모이어티는 허용적 루프 A2-1에서 삽입되고, 제3 이종성 모이어티는 a3 영역에서 삽입되며, 제4 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-1에서 삽입된다. 다른 예에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A1-1에서 삽입되며, 제2 이종성 모이어티는 허용적 루프 A2-1에서 삽입되고, 제3 이종성 모이어티는 a3 영역에서 삽입되고, 제4 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-2에서 삽입된다. 다른 예에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A1-1에서 삽입되며, 제2 이종성 모이어티는 허용적 루프 A2-1에서 삽입되고, 제3 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-1에서 삽입되며, 제4 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-2에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A1-1에서 삽입되며, 제2 이종성 모이어티는 a3 영역에서 삽입되고, 제3 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-1에서 삽입되며, 제4 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-2에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A2-1에서 삽입되며, 제2 이종성 모이어티는 a3 영역에서 삽입되고, 제3 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-1에서 삽입되며, 제4 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-2에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A1-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 허용적 루프 A2-1에서 삽입되고, 제3 이종성 모이어티는 B 도메인에서 삽입되며, 제4 이종성 모이어티는 CT에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A1-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-1에서 삽입되며, 제3 이종성 모이어티는 B 도메인에서 삽입되고, 제4 이종성 모이어티는 CT에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A1-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-2에서 삽입되며, 제3 이종성 모이어티는 B 도메인에서 삽입되고, 제4 이종성 모이어티는 CT에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A1-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-2에서 삽입되며, 제3 이종성 모이어티는 B 도메인에서 삽입되고, 제4 이종성 모이어티는 CT에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A2-1에서 삽입되고, 상기 제2 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-1에서 삽입되며, 제3 이종성 모이어티는 B 도메인에서 삽입되고, 제4 이종성 모이어티는 CT에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A2-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-2에서 삽입되며, 제3 이종성 모이어티는 B 도메인에서 삽입되고, 제4 이종성 모이어티는 CT에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-1에서 삽입되며, 제2 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-2에서 삽입되고, 제3 이종성 모이어티는 B 도메인에서 삽입되고, 제4 이종성 모이어티는 CT에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A2-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 a3 영역에서 삽입되고, 제3 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-1에서 삽입되며, 제4 이종성 모이어티는 CT에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A2-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 a3 영역에서 삽입되고, 제3 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-2에서 삽입되며, 제4 이종성 모이어티는 CT에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 a3 영역에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-1에서 삽입되며, 제3 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-2에서 삽입되고, 제4 이종성 모이어티는 CT에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A1-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 허용적 루프 A2-1에서 삽입되며, 제3 이종성 모이어티는 a3 영역에서 삽입되고, 제4 이종성 모이어티는 CT에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A1-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 허용적 루프 A2-1에서 삽입되며, 제3 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-1에서 삽입되며, 제4 이종성 모이어티는 CT에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A1-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 허용적 루프 A2-1에서 삽입되며, 제3 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-2에서 삽입되고, 제4 이종성 모이어티는 CT에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A1-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 a3 영역에서 삽입되며, 제3 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-1에서 삽입되고, 제4 이종성 모이어티는 CT에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A1-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 a3 영역에서 삽입되며, 제3 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-2에서 삽입되고, 제4 이종성 모이어티는 CT에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A1-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-1에서 삽입되며, 제3 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-2에서 삽입되고, 제4 이종성 모이어티는 CT에서 삽입된다. 일부 실시형태에서, 4개의 이종성 모이어티를 포함하는 FVIII 단백질은 서열번호 1에 대응되는 아미노산 745 내지 아미노산 1685 또는 서열번호 1에 대응되는 아미노산 745 내지 아미노산 1656의 결실 또는 아미노산 1648(예를 들어, R1648A), 1680 (Y1680F), 또는 둘 다에서의 돌연변이 또는 치환을 함유한다.
다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 5개의 이종성 모이어티를 포함하되, 5개의 이종성 모이어티 중 적어도 하나는 허용적 루프 내이거나 또는 a3 영역 내에 삽입되고, 5개의 이종성 모이어티 중 적어도 2개는 2개의 허용적 루프 내이거나, a3 영역 내이거나 또는 이들의 임의의 조합에 삽입되며, 5개의 이종성 모이어티 중 적어도 3개는 3개의 허용적 루프 내이거나, a3 영역 내에거나 또는 이들의 임의의 조합에 삽입되고, 5개의 이종성 모이어티 중 적어도 4개는 4개의 허용적 루프 내이거나, a3 영역 내에거나 또는 이들의 임의의 조합에 삽입되거나, 또는 5개의 이종성 모이어티 모두는 5개의 허용적 루프 내이거나, a3 영역 내이거나, 또는 이들의 임의의 조합에 삽입된다. 제1, 제2, 제3, 제4 및 제5 이종성 모이어티는 동일 또는 상이하다. 5개의 이종성 모이어티를 포함하는 재조합 FVIII 단백질의 비제한적 예는 표 XVI에 있다. 일 예에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A2-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 a3 영역에서 삽입되고, 제3 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-1에 삽입되며, 제4 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-2에서 삽입되고, 제5 이종성 모이어티는 CT에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A1-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 허용적 루프 A2-1에서 삽입되며, 제3 이종성 모이어티는 a3 영역에서 삽입되고, 제4 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-1에서 삽입되며, 제5 이종성 모이어티는 CT에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A1-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 허용적 루프 A2-1에서 삽입되며, 제3 이종성 모이어티는 a3 영역에서 삽입되고, 제4 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-2에서 삽입되며, 제5 이종성 모이어티는 CT에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A1-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 허용적 루프 A2-1에서 삽입되며, 제3 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-1에서 삽입되고, 제4 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-2에서 삽입되며, 제5 이종성 모이어티는 CT에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A1-1에서 삽입되며, 제2 이종성 모이어티는 a3 영역에서 삽입되고, 제3 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-1에 삽입되며, 제4 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-2에서 삽입되고, 제5 이종성 모이어티는 CT에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A1-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 허용적 루프 A2-1에서 삽입되며, 제3 이종성 모이어티는 B 도메인에서 삽입되고, 제4 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-1에서 삽입되며, 제5 이종성 모이어티는 CT에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A1-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 허용적 루프 A2-1에서 삽입되며, 제3 이종성 모이어티는 B 도메인에서 삽입되고, 제4 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-2에서 삽입되며, 제5 이종성 모이어티는 CT에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A1-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 B 도메인에서 삽입되며, 제3 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-1에서 삽입되고, 제4 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-2에서 삽입되며, 제5 이종성 모이어티는 CT에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A2-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 B 도메인에서 삽입되며, 제3 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-2에서 삽입되고, 제4 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-2에서 삽입되며, 제5 이종성 모이어티는 CT에서 삽입된다. 일부 실시형태에서, 5개의 이종성 모이어티를 포함하는 FVIII 단백질은 서열번호 1에 대응되는 아미노산 745 내지 아미노산 1685 또는 서열번호 1에 대응되는 아미노산 745 내지 아미노산 1656의 결실 또는 아미노산 1648(예를 들어, R1648A), 1680(Y1680F), 또는 둘 다에서 돌연변이 또는 치환을 함유한다.
다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 6개의 이종성 모이어티를 포함하되, 6개의 이종성 모이어티 중 적어도 하나는 허용적 루프 내이거나 또는 a3 영역 내에 삽입되고, 6개의 이종성 모이어티 중 적어도 2개는 2개의 허용적 루프 내이거나 또는 a3 영역 내에, 또는 이들의 임의의 조합에 삽입되거나, 6개의 이종성 모이어티 중 적어도 3개는 3개의 허용적 루프 내이거나 또는 a3 영역 내에, 또는 이들의 임의의 조합에 삽입되거나, 6개의 이종성 모이어티 중 적어도 4개는 4개의 허용적 루프 내이거나 또는 a3 영역 내에, 또는 이들의 임의의 조합에 삽입되거나, 6개의 이종성 모이어티 중 적어도 5개는 5개의 허용적 루프 내이거나 또는 a3 영역 내에, 또는 이들의 임의의 조합에 삽입되거나, 6개의 이종성 모이어티 모두는 6개의 허용적 루프 내이거나 또는 a3 영역 내에, 또는 이들의 임의의 조합에 삽입된다. 제1, 제2, 제3, 제4, 제5 및 제6 이종성 모이어티는 동일 또는 상이하다. 6개의 이종성 모이어티를 포함하는 재조합 FVIII 단백질의 예는 표 XVII을 포함하지만, 이것으로 제한되지 않는다. 일 예에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A1-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 허용적 루프 A2-1에서 삽입되며, 제3 이종성 모이어티는 a3 영역에서 삽입되고, 제4 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-1에서 삽입되며, 제5 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-2에서 삽입되고, 제6 이종성 모이어티는 CT에서 삽입된다. 다른 양태에서, 제1 이종성 모이어티는 허용적 루프 A1-1에서 삽입되고, 제2 이종성 모이어티는 허용적 루프 A2-1에서 삽입되며, 제3 이종성 모이어티는 B 도메인에서 삽입되고, 제4 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-1에서 삽입되며, 제5 이종성 모이어티는 허용적 루프 A3-2에서 삽입되고, 제6 이종성 모이어티는 CT에서 삽입된다. 일부 실시형태에서, 6개의 이종성 모이어티를 포함하는 FVIII 단백질은 서열번호 1에 대응되는 아미노산 745 내지 아미노산 1685 또는 서열번호 1에 대응되는 아미노산 745 내지 아미노산 1656의 결실 또는 아미노산 1648(예를 들어, R1648A), 1680(Y1680F), 또는 둘 다에서 돌연변이 또는 치환을 함유한다.
특정 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산의 바로 하류에 삽입된 하나의 이종성 모이어티를 포함한다. 다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 2개의 아미노산의 바로 하류에 삽입된 2개의 이종성 모이어티를 포함하며, 각각의 2개의 아미노산은 표 X에서의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, 2개의 이종성 모이어티는 표 XI에서의 삽입 부위로 이루어진 군으로부터 선택된 2개의 삽입 부위에서 삽입된다. 또 다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 3개의 아미노산의 바로 하류에 삽입된 3개의 이종성 모이어티를 포함하며, 각각의 3개의 아미노산은 표 X에서의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 구체적 실시형태에서, 3개의 이종성 모이어티는 표 XII 및 XIII에서의 삽입 부위로 이루어진 군으로부터 선택된 3개의 삽입 부위에서 삽입된다. 또 다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 4개의 아미노산의 바로 하류에 삽입된 4개의 이종성 모이어티를 포함하며, 각각의 4개의 아미노산은 표 X에서의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, 4개의 이종성 모이어티는 표 XIV 및 XV에서의 삽입 부위로 이루어진 군으로부터 선택된 4개의 삽입 부위에서 삽입된다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 5개의 아미노산의 바로 하류에 삽입된 5개의 이종성 모이어티를 포함하며, 각각의 5개의 아미노산은 표 X에서의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, 5개의 이종성 모이어티는 표 XVI에서의 삽입 부위로 이루어진 군으로부터 선택된 5개의 삽입 부위에서 삽입된다. 특정 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 6개의 아미노산의 바로 하류에 삽입된 6개의 이종성 모이어티를 포함하며, 각각의 6개의 아미노산은 표 X에서의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, 6개의 이종성 모이어티는 표 XVII에서의 삽입 부위로 이루어진 군으로부터 선택된 6개의 삽입 부위에서 삽입된다.
일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 성숙 천연 인간 FVIII에서 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 1720, 또는 서열번호 1의 아미노산 1900에 대응되는 아미노산 위치의 바로 하류에 삽입된 하나의 이종성 모이어티를 포함하고, 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 아미노산의 바로 하류에 삽입된 추가적인 이종성 모이어티를 포함한다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 성숙 천연 인간 FVIII에서 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 1720, 또는 서열번호 1의 아미노산 1900에 대응되는 2개의 아미노산 위치의 바로 하류에 삽입된 2개의 이종성 모이어티를 포함하고, 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 아미노산의 바로 하류에 삽입된 추가적인 이종성 모이어티를 포함한다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 성숙 천연 인간 FVIII에서 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 1720, 또는 서열번호 1의 아미노산 1900에 대응되는 3개의 아미노산 위치의 바로 하류에 삽입된 3개의 이종성 모이어티를 포함하고, 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 아미노산의 바로 하류에 삽입된 추가적인 이종성 모이어티를 포함한다.
3. 이종성 모이어티
본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 하나 이상의 허용적 루프 내로 또는 a3 영역 내로, 또는 둘 다에 삽입된 적어도 하나의 이종성 모이어티를 포함하되, 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 가지며 숙주 세포에서 생체내 또는 시험관내에서 발현될 수 있다. "이종성 모이어티"는 이종성 폴리펩타이드, 또는 비폴리펩타이드 모이어티, 또는 둘 다를 포함할 수 있다. 특정 양태에서 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 하나 이상의 허용적 루프 내로 또는 a3 영역 내로, 또는 둘 다에 삽입된 적어도 하나의 이종성 모이어티를 포함하되, 이종성 모이어티는 XTEN 서열이 아니다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 하나 이상의 허용적 루프 내로 또는 a3 영역 내로, 또는 둘 다에 삽입된 적어도 하나의 이종성 모이어티를 포함하되, 이종성 모이어티는 반감기 연장 모이어티(예를 들어, 생체내 반감기 연장 모이어티)이지만, XTEN 서열은 아니다.
삽입 부위의 발견은(FVIII은 그것의 응혈촉진 활성의 적어도 일부를 보유함) 또한 해당 동일 부위 중 하나 이상에서 FVIII 단백질에 융합될 때 반감기의 연장과 관련된 구조화되지 않거나 또는 구조화된 특징을 지니는 다른 펩타이드 및 폴리펩타이드의 삽입을 허용하는 것으로 믿어진다. 이종성 모이어티(예를 들어, 반감기 연장 모이어티)의 비제한적 예는 알부민, 알부민 단편, 면역글로뷸린의 Fc 단편, 인간 융모성 생식선 자극호르몬의 β 서브유닛의 C-말단 펩타이드(CTP), HAP 서열, 트랜스페린, 미국특허 출원 제20100292130호의 PAS 폴리펩타이드, 폴리글라이신 링커, 폴리세린 링커, 펩타이드 및 글라이신(G), 알라닌(A), 세린(S), 트레오닌(T), 글루타메이트(E) 및 프롤린(P)으로부터 선택된 2가지 유형의 6개 내지 40개 아미노산의 짧은 폴리펩타이드를 포함하며, 특히 50% 미만으로부터 50% 초과로 2차 구조의 정도를 변화시키는 것은 FVIII의 확인된 활성 삽입 부위에서의 삽입에 적합하다.
특정 양태에서, 이종성 모이어티는 재조합 FVIII 단백질의 생체내 또는 시험관내 반감기를 증가시킨다. 다른 양태에서, 이종성 모이어티는 재조합 FVIII 단백질의 시각화 또는 국소화를 가능하게 한다. 재조합 FVIII 단백질의 시각화 및/또는 국호화는 생체내, 시험관내, 생체밖, 또는 이들의 조합일 수 있다. 다른 양태에서, 이종성 모이어티는 재조합 FVIII 단백질의 안정성을 증가시킨다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "안정성"은 환경적 조건(예를 들어, 상승되거나 또는 저하된 온도)에 반응한 재조합 FVIII 단백질의 하나 이상의 물리적 특성의 유지의 업계에 인식된 측정을 지칭한다. 특정 양태에서, 물리적 특성은 재조합 FVIII 단백질의 공유 구조의 유지일 수 있다(예를 들어, 단백질분해 절단, 원치 않는 산화 또는 탈아마이드화의 부재). 다른 양태에서, 물리적 특성은 또한 적절하게 폴딩된 상태에서의 재조합 FVIII 단백질의 존재일 수 있다(예를 들어, 가용성 또는 불용성 응집물 또는 침전물의 부재). 일 양태에서, 재조합 FVIII 단백질의 안정성은 재조합 FVIII 단백질의 생물물리적 특성, 예를 들어 열적 안정성, pH 미폴딩 프로파일, 글라이칸의 안정한 제거, 용해도, 행화학적 기능(예를 들어 다른 단백질에 결합되는 능력) 등 및/또는 이들의 조합을 분석함으로써 측정된다. 다른 양태에서, 생화학적 기능은 상호작용의 결합 능력에 의해 입증된다. 일 양태에서, 단백질 안정성의 측정은 열적 안정성, 즉 열 자극에 대한 저항성이다. 안정성은 HPLC(high performance liquid chromatography:고성능 액체 크로마토그래피), SEC(size exclusion chromatography: 크기 배제 크로마토그래피), DLS(dynamic light scattering: 동적 광 산란) 등과 같은 당업계에 공지된 방법을 사용하여 측정될 수 있다. 열 안정성을 측정하는 방법은 시차주사 열량측정법(differential scanning calorimetry: DSC), 시차주사 형광측정법(differential scanning fluorometry: DSF), 원이색법(circular dichroism: CD), 및 열 시험 분석(thermal challenge 분석)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
구체적 양태에서, 재조합 FVIII 단백질에서 하나 이상의 허용적 루프, a3 영역, 또는 둘 다에 삽입된 이종성 모이어티는 재조합 FVIII 단백질의 생화학적 활성을 보유한다. 일 실시형태에서, 생화학적 활성은 색원체 분석에 의해 측정될 수 있는 FVIII 활성이다.
일부 실시형태에서, 이종성 모이어티는 이종성 모이어티의 N-말단, C-말단, 또는 N-말단과 C-말단 둘 다에 위치된 링커를 통해 삽입 부위에서 간접적으로 삽입될 수 있다. 이종성 모이어티의 N-말단 및 C-말단에서 링커는 동일 또는 상이할 수 있다. 일부 실시형태에서, 몇몇 링커는 종열인 이종성 모이어티의 말단 중 하나 또는 둘 다에 측접할 수 있다. 일부 실시형태에서, 링커는 "Gly-Ser 펩타이드 링커"이다. 용어 "Gly-Ser 펩타이드 링커"는 글라이신 및 세린 잔기로 이루어진 펩타이드를 지칭한다.
예시적인 Gly/Ser 펩타이드 링커는 아미노산 서열(Gly4Ser)n(서열번호 60)을 포함하되, n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 46, 50, 55, 60, 70, 80, 90 또는 100 이상인 정수이다. 일 실시형태에서, n=1이며, 즉, 링커는 (Gly4Ser)(서열번호 191)이다. 일 실시형태에서, n=2, 즉, 링커는 (Gly4Ser)2(서열번호 192)이다. 다른 실시형태에서, n=3, 즉, 링커는 (Gly4Ser)3(서열번호 193)이다. 다른 실시형태에서, n=4, 즉, 링커는 (Gly4Ser)4(서열번호 194)이다. 다른 실시형태에서, n=5, 즉, 링커는 (Gly4Ser)5(서열번호 195)이다. 또 다른 실시형태에서, n=6, 즉, 링커는 (Gly4Ser)6(서열번호 196)이다. 다른 실시형태에서, n=7, 즉, 링커는 (Gly4Ser)7(서열번호 197)이다. 또 다른 실시형태에서, n=8, 즉, 링커는 (Gly4Ser)8(서열번호 198)이다. 다른 실시형태에서, n=9, 즉, 링커는 (Gly4Ser)9(서열번호 199)이다. 또 다른 실시형태에서, n=10, 즉, 링커는 (Gly4Ser)10(서열번호 200)이다.
다른 예시적인 Gly/Ser 펩타이드 링커는 아미노산 서열 Ser(Gly4Ser)n(서열번호 201)을 포함하되, n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 46, 50, 55, 60, 70, 80, 90 또는 100 이상인 정수이다. 일 실시형태에서, n=1, 즉, 링커는 Ser(Gly4Ser)(서열번호 202)이다. 일 실시형태에서, n=2, 즉, 링커는 Ser(Gly4Ser)2(서열번호 203)이다. 다른 실시형태에서, n=3, 즉, 링커는 Ser(Gly4Ser)3(서열번호 204)이다. 다른 실시형태에서, n=4, 즉, 링커는 Ser(Gly4Ser)4(서열번호 205)이다. 다른 실시형태에서, n=5, 즉, 링커는 Ser(Gly4Ser)5(서열번호 206)이다. 또 다른 실시형태에서, n=6, 즉, 링커는 Ser(Gly4Ser)6(서열번호 207)이다. 또 다른 실시형태에서, n=7, 즉, 링커는 Ser(Gly4Ser)7(서열번호 208)이다. 또 다른 실시형태에서, n=8, 즉, 링커는 Ser(Gly4Ser)8(서열번호 209)이다. 또 다른 실시형태에서, n=9, 즉, 링커는 Ser(Gly4Ser)9(서열번호 210)이다. 또 다른 실시형태에서, n=10, 즉, 링커는 Ser(Gly4Ser)10(서열번호 211)이다.
3.1 반감기 연장
특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 단백질의 반감기, 예를 들어 단백질의 생체내 반감기를 증가시키는 적어도 하나의 이종성 모이어티를 포함한다. 재조합 FVIII 단백질의 반감기는 당업자에게 공지된 어떤 방법, 예를 들어, 혈장 FVIII 활성 수준을 검출하긴 위한 FVIII 활성 분석(색원체 분석 또는 1 단계 응고 aPTT 분석) 또는 혈장 FVIII 항원 수준을 검출하기 위한 FVIII ELISA에 의해 결정될 수 있다. 특정 실시형태에서, 재조합 FVIII 단백질의 응고 활성의 반감기는 1 단계 응고 분석에 의해 결정된다. 더 특별한 실시형태에서, 재조합 FVIII 단백질의 응고활성의 반감기는 마우스, 즉, HemA 마우스 또는 FVIII 및 폰빌레브란트 인자(von Willebrand Factor) 이중 녹아웃(double knockout: DKO) 마우스에서 결정된다.
특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질의 반감기를 증가시키는 이종성 모이어티는 이종성 폴리펩타이드, 예컨대 알부민, 면역글로뷸린 Fc 영역, XTEN 서열, 인간 융모성 생식선 자극호르몬의 β 서브유닛의 C-말단 펩타이드(CTP), PAS 서열, HAP 서열, 트랜스페린, 알부민-결합 모이어티, 또는 이들 폴리펩타이드의 임의의 단편, 유도체, 변이체 또는 조합을 제한 없이 포함할 수 있다. 특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 반감기를 증가시키는 이종성 폴리펩타이드를 포함하되, 이종성 폴리펩타이드는 XTEN 서열이 아니다. 다른 관련된 양태에서, 이종성 모이어티는 폴리에틸렌 글라이콜(PEG), 하이드록시에틸 전분(HES), 폴리시알산, 또는 이들 모이어티의 임의의 유도체, 변이체, 또는 조합과 같은 비폴리펩타이드 모이어티에 대한 부착 부위를 포함할 수 있다.
다른 실시형태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 하나 이상의 중합체에 컨쥬게이트된다. 중합체는 수용성 또는 불수용성일 수 있다. 중합체는 FVIII에 또는 FVIII에 컨쥬게이트된 다른 모이어티에 공유적으로 또는 비공유적으로 부착될 수 있다. 중합체의 비제한적예는 폴리(알킬렌 옥사이드), 폴리(비닐 피롤리돈), 폴리(비닐 알코올), 폴리옥사졸린, 또는 폴리(아크릴로몰폴린)일 수 있다. 중합체-컨쥬게이트된 FVIII의 추가적인 유형은 본 명세서에 전문이 참조로서 포함되는 미국특허 제7,199,223호에 개시되어 있다.
특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 1, 2, 3 이상의 이종성 모이어티를 포함할 수 있는데, 이는 각각 동일 또는 상이한 분자일 수 있다.
3.1.1. Fc 영역
특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 허용적 루프 내로, 또는 a3 영역 내로, 또는 둘 다에 삽입된 적어도 하나의 Fc 영역을 포함하되, 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 가지며 숙주 세포에서 생체내 또는 시험관내에서 발현될 수 있다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 "Fc" 또는 "Fc 영역"은 달리 특정되지 않는다면, Fc 도메인, 변이체, 또는 이의 단편을 포함하는 기능성 신생아 Fc 수용기(FcRn) 결합 상대를 의미한다. FcRn 결합 상대는 FcRn 결합 상대의 FcRn 수용기에 의한 결과적인 활성 수송과 함께 FcRn 수용기에 의해 특이적으로 결합될 수 있는 임의의 분자이다. 따라서, 용어 Fc는 기능성인 IgG Fc의 어떤 변이체를 포함한다. FcRn 수용기에 결합되는 IgG의 Fc 부분의 영역은 X레이 결정학에 기반하여 기재되었다(본 명세서에 전문이 참조로서 포함된 문헌[Burmeister et al ., Nature 372:379 (1994)]). FcRn과 Fc의 주된 접촉 영역은 CH2와 CH3 도메인의 접합점에 근접한다. Fc-FcRn 접촉은 모두 단일 Ig 중쇄 내에 있다. FcRn 결합 상대는 전체 IgG, IgG의 Fc 단편 및 FcRn의 완전한 결합 영역을 포함하는 IgG의 다른 단편을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. Fc는 면역글로뷸린의 힌지 영역이 있거나 또는 없는 면역글로뷸린의 CH2 및 CH3 도메인을 포함할 수 있다. 또한 키메라 단백질에서 Fc 영역의 바람직한 특성, 예를 들어, 반감기, 예를 들어, 생체내 반감기에서의 증가를 유지하는 Fc 단편, 변이체, 또는 유도체가 포함된다. 무수한 돌연변이체, 단편, 변이체, 및 유도체는, 예를 들어 국제특허출원 공개 WO 2011/069164 A2호, WO 2012/006623 A2호, WO 2012/006635 A2호 또는 WO 2012/006633 A2호에 기재되어 있으며, 이들 모두는 본 명세서에 전문이 참조로서 포함된다.
3.1.2 알부민
특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 허용적 루프 내로 또는 a3 영역 내로, 또는 둘 다에 삽입된 적어도 하나의 알부민 폴리펩타이드 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체를 포함하되, 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 가지며 숙주 세포에서 생체내 또는 시험관내에서 발현될 수 있다. 인간 혈청 알부민(HSA 또는 HA), 그것의 전장 형태에서 609 아미노산의 단백질은 상당한 비율의 혈청의 삼투압을 초래하며, 또한 내인성 및 외인성 리간드의 담체로서 작용한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "알부민"은 전장 알부민 또는 이의 기능성 단편, 변이체, 유도체, 또는 유사체를 포함한다. 알부민 또는 이의 단편 또는 변이체의 예는 미국특허 공개 제2008/0194481A1호, 제2008/0004206 A1호, 제2008/0161243 A1호, 제2008/0261877 A1호 혹은 제2008/0153751 A1호, 또는 국제특허출원 공개 제2008/033413 A2호, 제2009/058322 A1호 혹은 제2007/021494 A2호에 개시되어 있으며, 이는 본 명세서에 그것의 전문이 참조로서 포함된다.
알부민-결합 폴리펩타이드(ABP)는 알부민에 결합될 수 있는 박테리아 알부민-결합 도메인, 알부민-결합 펩타이드, 또는 알부민-결합 항체 단편을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 문헌[Kraulis et al ., FEBS Lett. 378:190-194 (1996) 및 Linhult et al ., Protein Sci. 11:206-213 (2002)]에 의해 개시되는 바와 같은 스트렙토코커스 단백질 G로부터의 도메인 3은 박테리아 알부민-결합 도메인의 예이다. 알부민-결합 펩타이드의 예는 코어 서열 DICLPRWGCLW(서열번호 45)을 갖는 일련의 펩타이드를 포함한다. 예를 들어, 문헌[Dennis et al ., J. Biol. Chem. 2002, 277: 35035-35043 (2002)] 참조. 알부민-결합 항체 단편의 예는 문헌[Muller and Kontermann, Curr. Opin. Mol. Ther. 9:319-326 (2007); Roovers et al ., Cancer Immunol. Immunother. 56:303-317 (2007), 및 Holt et al ., Prot. Eng. Design Sci., 21:283-288 (2008)]에 개시되어 있으며, 이는 본 명세서에 전문이 참조로서 포함되어 있다.
특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 폴리펩타이드는 허용적 루프 내로 또는 a3 영역 내로, 또는 둘 다에 삽입된 알부민에 결합될 수 있는 비폴리펩타이드 소분자, 변이체, 또는 유도체에 대한 적어도 하나의 부착 부위를 포함하되, 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 가지며 숙주 세포에서 생체내 또는 시험관내에서 발현될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 하나 이상의 허용적 루프에서 또는 a3 영역에서 부착된 하나 이상의 유기 알부민-결합 모이어티을 포함할 수 있되, 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 가지며 숙주 세포에서 생체내 또는 시험관내에서 발현될 수 있다. 이러한 알부민-결합 모이어티의 예는 문헌[Trussel et al ., Bioconjugate Chem. 20:2286-2292 (2009)]에 개시된 바와 같은 2-(3-말레이미도프로판아미도)-6-(4-(4-요오도페닐)뷰탄아미도)헥사노에이트("Albu" 태그)이다.
일부 실시형태에서, 알부민-결합 폴리펩타이드 서열은 C-말단, N-말단, 또는 말단 둘 다에서, Gly-Ser 펩타이드는 링커 서열에 의해 측접된다. 일부 실시형태에서, Gly-Ser 펩타이드 링커는 Gly4Ser(서열번호 191)이다. 다른 실시형태에서, Gly-Ser 펩타이드 링커는 (Gly4Ser)2(서열번호 192)이다.
3.1.3 XTEN
특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 허용적 루프 내로 또는 a3 영역 내로, 또는 둘 다에 삽입된 적어도 하나의 XTEN 폴리펩타이드 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체를 포함하되, 재조합 단백질은 응혈촉진 활성을 가지며, 숙주 세포에서 생체내 또는 시험관내에서 발현될 수 있다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 "XTEN 서열"은 주로 적은 친수성 아미노산으로 구성된 비자연적으로 생기는 실질적으로 비반복성인 서열을 지니고, 생리적 조건 하에서 낮은 정도로 갖는 또는 2차 또는 3차 구조가 없는 서열을 지니는 연장된 길이 폴리펩타이드를 지칭한다. 키메라 단백질 상대로서, XTEN은 담체로서 작용할 수 있으며, 예를 들어 본 발명의 재조합 FVIII 단백질의 허용적 루프 또는 a3 영역 내로 삽입될 때, 특정 바람직한 약동학적 물리화학적 및 약제학적 특성을 부여한다. 이러한 바람직한 특성은 향상된 약동학적 파라미터 및 용해도 특징을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
본 발명의 재조합 FVIII 단백질 내로 삽입된 XTEN 서열은 다음의 유리한 특성 중 하나 이상을 재조합 단백질에 부여할 수 있다: 입체형태적 가요성, 향상된 수용해도, 높은 정도의 프로테아제 저항성, 낮은 면역원성, 포유류 수용기에 대한 낮은 결합, 또는 증가된 유체역학적(또는 스토크스(Stokes)) 반경. 특정 양태에서, XTEN 서열은 더 긴 반감기(예를 들어, 생체내 반감기) 또는 증가된 곡선하 면적(AUC)과 같은 약동학적 특성을 증가시킬 수 있고, 따라서 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 천연 FVIII에 비해 증가된 시간 기간 동안 응혈촉진 활성을 가지며 생체내에서 머무른다.
본 발명의 재조합 FVIII 단백질 내로 삽입될 수 있는 XTEN 서열의 예는, 예를 들어 미국특허 공개 제2010/0239554 A1호, 2010/0323956 A1호, 제2011/0046060 A1호, 제2011/0046061 A1호, 제2011/0077199 A1호, 또는 제2011/0172146 A1호, 또는 국제특허출원 공개 제WO 2010091122 A1호, 제WO 2010144502 A2호, 제WO 2010144508 A1호, 제WO 2011028228 A1호, 제WO 2011028229 A1호, 또는 제WO 2011028344 A2호에 개시되어 있으며, 이들 각각은 본 명세서에 그것의 전문이 참조로서 포함된다.
본 발명의 재조합 FVIII 단백질 내로 삽입될 수 있는 예시적인 XTEN 서열은 XTEN AE42-4(서열번호 13), XTEN 144-2A(서열번호 15), XTEN A144-3B(서열번호 17), XTEN AE144-4A(서열번호 19), XTEN AE144-5A(서열번호 21), XTEN AE144-6B(서열번호 23), XTEN AG144-1(서열번호 25), XTEN AG144-A(서열번호 27), XTEN AG144-B(서열번호 29), XTEN AG144-C (서열번호 31), 및 XTEN AG144-F(서열번호 33)를 포함한다.
특정 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 단독으로 또는 A 도메인의 허용적 루프(예를 들어, 상기 기재한 바와 같은 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2) 내로 삽입된 하나 이상의 이종성 모이어티와 조합으로 FVIII(예를 들어, 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 삽입 부위)의 a3 영역 내로 삽입된 적어도 하나의 이종성 모이어티를 포함하되, 이종성 모이어티 중 적어도 하나는 XTEN 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 2개는 XTEN 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 3개는 XTEN 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 4개는 XTEN 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 5개는 XTEN 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 6개 이상은 XTEN 서열이다.
일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 허용적 루프, 예를 들어, A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1, A3-2, a3 또는 이들의 임의의 조합 내에서의 삽입 부위에서 하나 이상의 XTEN 서열을 포함한다. 일 실시형태에서, 하나 이상의 XTEN 서열이 A1-1 내에 삽입된다. 다른 실시형태에서, 하나 이상의 XTEN 서열이 A1-2 내에 삽입된다. 다른 실시형태에서, 하나 이상의 XTEN 서열이 A2-1 내에 삽입된다. 또 다른 실시형태에서, 하나 이상의 XTEN 서열이 A2-2 내에 삽입된다. 또 다른 실시형태에서, 하나 이상의 XTEN 서열이 A3-1 내에 삽입된다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 XTEN 서열이 A3-2 내에 삽입된다. 특정 실시형태에서, 하나 이상의 XTEN 서열이 a3 영역 내에 삽입된다.
특정 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에 열거된 삽입 부위에서 삽입된 1개의 XTEN 서열을 포함한다. 다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에 열거된 2개의 삽입 부위에서 삽입된 2개의 XTEN 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 2개의 XTEN 서열은 표 XI에 열거된 2개의 삽입 부위에서 삽입된다. 또 다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에 열거된 3개의 삽입 부위에서 삽입된 3개의 XTEN 서열을 포함한다. 구체적 양태에서, 3개의 XTEN 서열은 표 XII, 표 XIII 또는 표 둘 다에 열거된 3개의 삽입 부위에서 삽입된다. 또 다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에 열거된 4개의 삽입 부위에서 삽입된 4개의 XTEN 서열을 포함한다. 특정 양태에서, 4개의 XTEN 서열은 표 XIV, 표 XV, 또는 둘 다에서 열거된 4개의 삽입 부위에서 삽입된다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에 열거된 5개의 삽입 부위에서 삽입된 5개의 XTEN 서열을 포함한다. 특정 양태에서, 5개 XTEN 서열은 표 XVI에 열거된 5개 삽입 부위에서 삽입된다. 특정 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에 열거된 6개 삽입 부위에서 삽입된 6개 XTEN 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 6개 XTEN 서열은 표 XVII에 열거된 6개 삽입부위에서 삽입된다. 일부 양태에서, 삽입된 XTEN 서열 모두는 동일하다. 다른 양태에서, XTEN 서열 중 적어도 하나는 삽입된 XTEN 서열의 나머지와 상이하다.
일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 성숙 천연 인간 FVIII에서 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 1720, 또는 서열번호 1의 아미노산 1900에 대응되는 아미노산 위치의 바로 하류에 삽입된 하나의 XTEN 서열, 및 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 아미노산의 바로 하류에 삽입된 추가적인 XTEN 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 성숙 천연 인간 FVIII에서 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 1720, 또는 서열번호 1의 아미노산 1900에 대응되는 2개의 아미노산 위치의 바로 하류에 삽입된 2개의 XTEN 서열, 및 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 아미노산의 바로 하류에 삽입된 추가적인 XTEN 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 성숙 천연 인간 FVIII에서 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 1720, 또는 서열번호 1의 아미노산 1900에 대응되는 3개의 아미노산 위치의 바로 하류에 삽입된 3개의 XTEN 서열, 및 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 아미노산의 바로 하류에 삽입된 추가적인 XTEN 서열을 포함한다.
3.1.4 CTP
특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 허용적 루프 내로 또는 a3 영역 내로, 또는 둘 다에 삽입된 인간 융모성 생식선 자극호르몬의 β 서브유닛의 적어도 하나의 C-말단 펩타이드(CTP) 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체를 포함하되, 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 가지며 숙주 세포에서 생체내 또는 시험관내에서 발현될 수 있다. 재조합 단백질 내로 삽입된 하나 이상의 CTP 펩타이드는 해당 단백질의 반감기를 증가시키는 것으로 알려져 있다. 예를 들어, 본 명세서에 전문이 참조로서 포함된 미국특허 제5,712,122호 참조. 예시적인 CTP 펩타이드는 DPRFQDSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPIL(서열번호 35) 또는 SSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ(서열번호 36)를 포함한다. 예를 들어, 참조로서 포함된 미국특허출원 공개 제2009/0087411 A1호 참조. 일부 실시형태에서, CTP 서열은 C-말단, N-말단, 또는 말단 둘 다에서 Gly-Ser 펩타이드 링커 서열에 의해 측접된다. 일부 실시형태에서, Gly-Ser 펩타이드 링커는 Gly4Ser(서열번호 191)이다. 다른 실시형태에서, Gly-Ser 펩타이드 링커는 (Gly4Ser)2(서열번호 192)이다.
특정 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 FVIII의 a3 영역 내로(예를 들어, 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 삽입 부위) 삽입된 적어도 하나의 이종성 모이어티를 단독으로 또는 A 도메인의 허용적 루프(예를 들어, 상기 기재한 바와 같은 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2) 내로 삽입된 하나 이상의 이종성 모이어티와 조합으로 포함하되, 이종성 모이어티 중 적어도 하나는 CTP 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 2개는 CTP 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 3개는 CTP 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 4개는 CTP 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 5개는 CTP 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 6개 이상은 CTP 서열이다.
일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 허용적 루프, 예를 들어, A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1, A3-2, a3 또는 이들의 임의의 조합 내에서 삽입 부위에서 하나 이상의 CTP 서열을 포함한다. 일 실시형태에서, 하나 이상의 CTP 서열은 A1-1 내에 삽입된다. 다른 실시형태에서, 하나 이상의 CTP 서열은 A1-2 내에 삽입된다. 다른 실시형태에서, 하나 이상의 CTP 서열은 A2-1 내에 삽입된다. 또 다른 실시형태에서, 하나 이상의 CTP 서열은 A2-2 내에 삽입된다. 또 다른 실시형태에서, 하나 이상의 CTP 서열은 A3-1 내에 삽입된다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 CTP 서열은 A3-2 내에 삽입된다. 특정 실시형태에서, 하나 이상의 CTP 서열은 a3 영역 내에 삽입된다.
특정 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에 열거된 삽입 부위에서 삽입된 하나의 CTP 서열을 포함한다. 다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 2개의 삽입 부위에서 삽입된 2개의 CTP 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 2개의 CTP 서열은 표 XI에 열거된 2개의 삽입 부위에서 삽입된다. 또 다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에 열거된 3개의 삽입 부위에서 삽입된 3개의 CTP 서열을 포함한다. 구체적 양태에서, 3개의 CTP 서열은 표 XII, 표 XIII 또는 표 둘 다에 열걸된 3개의 삽입 부위에서 삽입된다. 또 다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 4개의 삽입 부위에서 삽입된 4개의 CTP 서열을 포함한다. 특정 양태에서, 4개의 CTP 서열은 표 XIV, 표 XV, 또는 둘 다에 열거된 4개의 삽입 부위에서 삽입된다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 5개의 삽입 부위에서 5개의 CTP 서열을 포함한다. 특정 양태에서, 5개의 CTP 서열은 표 XVI에서 열거된 5개의 삽입 부위에서 삽입된다. 특정 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 6개의 삽입 부위에서 삽입된 6개의 CTP 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 6개의 CTP 서열은 표 XVII에 열거된 6개의 삽입 부위에서 삽입된다. 일부 양태에서, 모든 삽입된 CTP 서열은 동일하다. 다른 양태에서, 삽입된 CTP 서열 중 적어도 하나는 삽입된 CTP 서열의 나머지와 상이하다.
일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 성숙 천연 인간 FVIII에서 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 1720 또는 서열번호 1의 아미노산 1900에 대응되는 아미노산 위치의 바로 하류에 삽입된 하나의 CTP 서열, 및 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 아미노산의 바로 하류에 삽입된 추가적인 CTP 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 성숙 천연 인간 FVIII에서 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 1720 또는 서열번호 1의 아미노산 1900에 대응되는 2개의 아미노산 위치의 바로 하류에 삽입된 2개의 CTP 서열 및 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 아미노산의 바로 하류에 삽입된 추가적인 CTP 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 성숙 천연 인간 FVIII에서 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 1720 또는 서열번호 1의 아미노산 1900에 대응되는 3개의 아미노산 위치의 바로 하류에 삽입된 3개의 CTP 서열 및 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 아미노산의 바로 하류에 삽입된 추가적인 CTP 서열을 포함한다.
3.1.5 PAS
특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 허용적 루프 내로 또는 a3 영역 내로, 또는 둘 다에 삽입된 적어도 하나의 PAS 펩타이드 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체를 포함하되, 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 가지며 숙주 세포에서 생체내 또는 시험관내에서 발현될 수 있다. 본 명세서에 기재된 바와 같은 PAS 펩타이드 또는 PAS 서열은 알라닌 및 세린 잔기를 주로 포함하거나 또는 알라닌, 세린, 및 프롤린 잔기를 주로 포함하는 아미노산 서열, 생리학적 조건 하에서 무작위 코일 입체형태를 형성하는 아미노산 서열을 의미한다. 따라서, PAS 서열은 키메라 단백질에서 이종성 모이어티의 부분으로서 사용될 수 있는 알라닌, 세린, 및 프롤린을 포함하거나, 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진 빌딩 블록, 아미노산 중합체, 또는 서열 카세트이다. 아미노산 중합체는 또한 알라닌, 세린, 및 프롤린 이외의 잔기가 PAS 서열에서 부수적 구성성분으로서 첨가될 때 무작위 코일 입체형태를 형성할 수 있다. "부수적 구성요소"는 알라닌, 세린, 및 프롤린 이외의 아미노산이 특정 정도로, 예를 들어 약 12%까지, 즉, PAS 서열의 100개 아미노산 중 약 12개, 아미노산의 약 10%까지, 9%까지, 약 8%, 약 6%, 약 5%, 약 4%, 약 3%, 즉, 약 2%, 또는 약 1%으로 PAS 서열에서 첨가될 수 있다는 것을 의미한다. 알라닌, 세린 및 프롤린과 상이한 아미노산은 Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Thr, Trp, Tyr, 및 Val으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 생리적 조건 하에서, PAS 펩타이드는 무작위 코일 입체형태를 형성하고, 이에 의해 본 발명의 재조합 단백질에 대해 증가된 생체내 및/또는 시험관내 안정성을 매개할 수 있으며, 응혈촉진 활성을 가진다.
PAS 펩타이드의 비제한적 예는 ASPAAPAPASPAAPAPSAPA(서열번호 37), AAPASPAPAAPSAPAPAAPS(서열번호 38), APSSPSPSAPSSPSPASPSS (서열번호 39), APSSPSPSAPSSPSPASPS(서열번호 40), SSPSAPSPSSPASPSPSSPA(서열번호 41), AASPAAPSAPPAAASPAAPSAPPA(서열번호 42), ASAAAPAAASAAASAPSAAA(서열번호 43) 또는 임의의 변이체, 유도체, 단편, 또는 이들의 조합을 포함한다. PAS 서열의 추가적인 예는, 예를 들어, 미국특허 공개 제2010/0292130 A1호 및 국제특허출원 공개 제WO 2008/155134 A1호, 유럽 등록 특허 제EP2173890호로부터 공지되어 있다.
일부 실시형태에서, PAS 서열은 C-말단, N-말단, 또는 말단 둘 다에서, Gly-Ser 펩타이드 링커 서열에 의해 측접된다. 일부 실시형태에서, Gly-Ser 펩타이드 링커는 Gly4Ser(서열번호 191)이다. 다른 실시형태에서, Gly-Ser 펩타이드 링커는 (Gly4Ser)2(서열번호 192)이다.
특정 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 단독으로 또는 A 도메인의 허용적 루프(예를 들어, 상기 기재한 바와 같은 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2) 내로 삽입된 하나 이상의 이종성 모이어티와 조합으로 FVIII의 a3 영역(예를 들어, 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 삽입 부위) 내로 삽입된 적어도 하나의 이종성 모이어티를 포함하되, 이종성 모이어티 중 적어도 하나는 PAS 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 2개는 PAS 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 3개는 PAS 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 4개는 PAS 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 5개는 PAS 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 6개 이상은 PAS 서열이다.
일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 허용적 루프 내의 삽입 부위에서, 예를 들어, A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1, A3-2, a3, 또는 이들의 임의의 조합에서 하나 이상의 PAS 서열을 포함한다. 일 실시형태에서, 하나 이상의 PAS 서열은 A1-1 내에서 삽입된다. 다른 실시형태에서, 하나 이상의 PAS 서열은 A1-2 내에서 삽입된다. 다른 실시형태에서, 하나 이상의 PAS 서열은 A2-1 내에서 삽입된다. 또 다른 실시형태에서, 하나 이상의 PAS 서열은 A2-2 내에서 삽입된다. 또 다른 실시형태에서, 하나 이상의 PAS 서열은 A3-1 내에서 삽입된다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 PAS 서열은 A3-2 내에서 삽입된다. 특정 실시형태에서, 하나 이상의 PAS 서열은 a3 영역 내에서 삽입된다.
특정 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 삽입 부위에서 삽입된 하나의 PAS 서열을 포함한다. 다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 2개의 삽입 부위에서 삽입된 2개의 PAS 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 2개의 PAS 서열은 표 XI에 열거된 2개의 삽입 부위에서 삽입된다. 또 다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 3개의 삽입 부위에서 삽입된 3개의 PAS 서열을 포함한다. 구체적 양태에서, 3개의 PAS 서열은 표 XII, 표 XIII 또는 표 둘 다에서 열거된 3개의 삽입 부위에서 삽입된다. 또 다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 4개의 삽입 부위에서 삽입된 4개의 PAS 서열을 포함한다. 특정 양태에서, 4개의 PAS 서열은 표 XIV, 표 XV, 또는 둘 다에 열거된 4개의 삽입 부위에서 삽입된다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 5개의 삽입 부위에서 삽입된 5개의 PAS 서열을 포함한다. 특정 양태에서, 5개의 PAS 서열은 표 XVI에서 열거된 5개의 삽입 부위에서 삽입된다. 특정 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 6개의 삽입 부위에서 삽입된 6개의 PAS 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 6개의 PAS 서열은 표 XVII에서 열거된 6개의 삽입 부위에서 삽입된다. 일부 양태에서, 삽입된 PAS 서열 모두는 동일하다. 다른 양태에서, 삽입된 PAS 서열 중 적어도 하나는 삽입된 PAS 서열의 나머지와 상이하다.
일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 성숙 천연 인간 FVIII에서 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 1720, 또는 서열번호 1의 아미노산 1900에 대응되는 아미노산 위치의 바로 하류에 삽입된 하나의 PAS 서열, 및 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 아미노산의 바로 하류에 삽입된 추가적인 PAS 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 성숙 천연 인간 FVIII에서 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 1720, 또는 서열번호 1의 아미노산 1900에 대응되는 아미노산 위치의 바로 하류에 삽입된 2개의 PAS 서열, 및 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 2개 아미노산의 바로 하류에 삽입된 추가적인 PAS 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 성숙 천연 인간 FVIII에서 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 1720, 또는 서열번호 1의 아미노산 1900에 대응되는 3개 아미노산 위치의 바로 하류에 삽입된 3개의 PAS 서열, 및 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 아미노산의 바로 하류에 삽입된 추가적인 PAS 서열을 포함한다.
3.1.6 HAP
특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 허용적 루프 내로 또는 a3 영역 내로, 또는 둘 다에 삽입된 적어도 하나의 호모-아미노산 중합체는(HAP) 펩타이드 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체를 포함하되, 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 가지며 숙주 세포에서 생체내 또는 시험관내에서 발현될 수 있다. HAP 펩타이드는 글라이신의 반복 서열을 포함할 수 있으며, 이는 길이로 적어도 50 아미노산, 적어도 100 아미노산, 120 아미노산, 140 아미노산, 160 아미노산, 180 아미노산, 200 아미노산, 250 아미노산, 300 아미노산, 350 아미노산, 400 아미노산, 450 아미노산, 또는 500 아미노산을 가진다. HAP 서열은 HAP 서열에 융합되거나 또는 연결된 모이어티의 반감기를 연장시킬 수 있다. HAP 서열의 비제한적 예는 (Gly)n, (Gly4Ser)n 또는 S(Gly4Ser)n을 포함하지만, 이들로 제한되지 않으며, n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20이다. 일 실시형태에서, n은 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 26, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 또는 40이다. 다른 실시형태에서, n은 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190 또는 200이다. 예를 들어, 문헌[Schlapschy M et al ., Protein Eng. Design Selection, 20: 273-284 (2007)] 참조.
특정 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 단독으로 또는 A 도메인의 허용적 루프(예를 들어, 상기 기재한 바와 같은 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2) 내로 삽입된 하나 이상의 이종성 모이어티와 조합으로 FVIII(예를 들어, 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 삽입 부위)의 a3 영역 내로 삽입된 적어도 하나의 이종성 모이어티를 포함하되, 이종성 모이어티 중 적어도 하나는 HAP 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 2개는 HAP 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 3개는 HAP 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 4개는 HAP 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 5개는 HAP 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 6개 이상은 HAP 서열이다.
일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 허용적 루프, 예를 들어, A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1, A3-2, a3, 또는 이들의 임의의 조합 내에서의 삽입 부위에서 하나 이상의 HAP 서열을 포함한다. 일 실시형태에서, 하나 이상의 HAP 서열은 A1-1 내에 삽입된다. 다른 실시형태에서, 하나 이상의 HAP 서열은 A1-2 내에 삽입된다. 다른 실시형태에서, 하나 이상의 HAP 서열은 A2-1 내에 삽입된다. 또 다른 실시형태에서, 하나 이상의 HAP 서열은 A2-2 내에 삽입된다. 또 다른 실시형태에서, 하나 이상의 HAP 서열은 A3-1 내에 삽입된다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 HAP 서열은 A3-2 내에 삽입된다. 특정 실시형태에서, 하나 이상의 HAP 서열은 a3 영역 내에 삽입된다.
특정 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 삽입 부위에서 삽입된 하나의 HAP 서열을 포함한다. 다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 2개의 삽입 부위에서 삽입된 2개의 HAP 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 2개의 HAP 서열은 표 XI에 열거된 2개의 삽입 부위에서 삽입된다. 또 다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 3개의 삽입 부위에서 삽입된 3개의 HAP 서열을 포함한다. 구체적 양태에서, 3개의 HAP 서열은 표 XII, 표 XIII 또는 표 둘 다에 삽입된 3개의 삽입 부위에서 삽입된다. 또 다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 4개의 삽입 부위에서 삽입된 4개의 HPA 서열을 포함한다. 특정 양태에서, 4개의 HAP 서열은 표 XIV, 표 XV, 또는 둘 다에 열거된 4개의 삽입 부위에서 삽입된다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 5개의 삽입 부위에서 삽입된 5개의 HPA 서열을 포함한다. 특정 양태에서, 5개의 HAP 서열은 표 XVI에서 열거된 5개의 삽입 부위에서 삽입된다. 특정 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 6개의 삽입 부위에서 삽입된 6개의 HAP 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 6개의 HAP 서열은 표 XVII에서 열거된 6개의 삽입 부위에서 삽입된다. 일부 양태에서, 삽입된 HAP 서열 모두는 동일하다. 다른 양태에서, 삽입된 HAP 서열 중 적어도 하나는 삽입된 HAP 서열의 나머지와 상이하다.
일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 성숙 천연 인간 FVIII에서 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 1720, 또는 서열번호 1의 아미노산 1900의 바로 하류에 삽입된 하나의 HAP 서열 및 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 아미노산의 바로 하류에 삽입된 추가적인 HAP 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 성숙 천연 인간 FVIII에서 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 1720, 또는 서열번호 1의 아미노산 1900의 바로 하류에 삽입된 2개의 HAP 서열 및 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 2개 아미노산의 바로 하류에 삽입된 추가적인 HAP 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 성숙 천연 인간 FVIII에서 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 1720, 또는 서열번호 1의 아미노산 1900의 바로 하류에 삽입된 3개의 HAP 서열 및 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 3개 아미노산의 바로 하류에 삽입된 추가적인 HAP 서열을 포함한다.
3.1.7 트랜스페린
특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 허용적 루프 내로 또는 a3 영역 내로, 또는 둘 다에 삽입된 적어도 하나의 트랜스페린 펩타이드 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체를 포함하되, 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 가지며 숙주 세포에서 생체내 또는 시험관내에서 발현될 수 있다. 임의의 트랜스페린은 본 발명의 재조합 FVIII 단백질 내에 있을 수 있다. 예로서, 야생형 인간 Tf(Tf)는 2개의 주요 도메인, 즉, N(약 330 아미노산) 및 C(약 340 아미노산)을 지니는 대략 75 kDa(글라이코실화를 설명하지 않음)의 679 아미노산 단백질이며, 이는 유전자 중복으로부터 유래되는 것으로 나타난다. 젠뱅크(GenBank) 등록번호 NM001063, XM002793, M12530, XM039845, XM 039847 및 S95936(www.ncbi.nlm.nih.gov)을 참조하며, 이들 모두는 본 명세서에 그것의 전문이 참조로서 포함되어 있다.
트랜스페린은 트랜스페린 수용기(TfR)-매개 내포작용(endocytosis)을 통해 철을 수송한다. 철이 엔도솜 구획 내로 방출되고, Tf-TfR 복합체가 세포 표면으로 재순환된 후, Tf는 다음 주기의 철 수송을 위해 세포밖 공간 뒤로 방출된다. Tf는 14 내지 17일을 초과하는 긴 반감기를 가진다(Li et al ., Trends Pharmacol. Sci. 23:206-209 (2002)). 트랜스페린 융합 단백질은 반감기 연장, 암 치료를 위한 표적화된 전달, 경구 전달 및 프로인슐린의 지속 활성화에 대해 연구되었다(Brandsma et al ., Biotechnol. Adv., 29: 230-238 (2011); Bai et al ., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102:7292-7296 (2005); Kim et al ., J. Pharmacol. Exp. Ther., 334:682-692 (2010); Wang et al ., J. Controlled Release 155:386-392 (2011)).
일부 실시형태에서, 트랜스페린 서열은 C-말단, N-말단, 또는 말단 둘 다에, Gly-Ser 펩타이드 링커 서열에 의해 측접된다. 일부 실시형태에서, Gly-Ser 펩타이드 링커는 Gly4Ser(서열번호 191)이다. 다른 실시형태에서, Gly-Ser 펩타이드 링커는 (Gly4Ser)2(서열번호 192)이다.
특정 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 단독으로 또는 A 도메인의 허용적 루프(예를 들어, 상기 기재한 바와 같은 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2) 내로 삽입되는 하나 이상의 이종성 모이어티와 조합으로 FVIII의 a3 영역(예를 들어, 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 삽입 부위) 내로 삽입된 적어도 하나의 이종성 모이어티를 포함하되, 이종성 모이어티 중 적어도 하나는 트랜스페린 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 2개는 트랜스페린 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 3개는 트랜스페린 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 4개는 트랜스페린 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 5개는 트랜스페린 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 6개 이상은 트랜스페린 서열이다.
일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 허용적 루프 내의 삽입 부위에서, 예를 들어, A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1, A3-2, a3, 또는 이들의 임의의 조합에서 하나 이상의 트랜스페린 서열을 포함한다. 일 실시형태에서, 하나 이상의 트랜스페린 서열은 A1-1 내에 삽입된다. 다른 실시형태에서, 하나 이상의 트랜스페린 서열은 A1-2 내에 삽입된다. 다른 실시형태에서, 하나 이상의 트랜스페린 서열은 A2-1 내에 삽입된다. 또 다른 실시형태에서, 하나 이상의 트랜스페린 서열은 A2-2 내에 삽입된다. 또 다른 실시형태에서, 하나 이상의 트랜스페린 서열은 A3-1 내에 삽입된다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 트랜스페린 서열은 A3-2 내에 삽입된다. 특정 실시형태에서, 하나 이상의 트랜스페린 서열은 a3 영역 내에 삽입된다.
특정 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 삽입 부위에서 삽입된 하나의 트랜스페린 서열을 포함한다. 다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 2개의 삽입 부위에서 2개의 트랜스페린 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 2개의 트랜스페린 서열은 표 XI에 열거된 2개의 삽입 부위에서 삽입된다. 또 다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에 열거된 3개의 삽입 부위에서 3개의 트랜스페린 서열을 포함한다. 구체적 양태에서, 3개의 트랜스페린 서열은 표 XII, 표 XIII 또는 표 둘 다에 열거된 3개의 삽입 부위에서 삽입된다. 또 다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 4개의 삽입 부위에서 삽입된 4개의 트랜스페린 서열을 포함한다. 특정 양태에서, 4개의 트랜스페린 서열은 표 XIV, 표 XV, 또는 둘 다에 열거된 4개의 삽입 부위에서 삽입된다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 5개의 삽입 부위에서 5개의 트랜스페린 서열을 포함한다. 특정 양태에서, 5개 트랜스페린 서열은 표 XVI에 열거된 5개 삽입 부위에서 삽입된다. 특정 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에 열거된 6개 삽입 부위에서 삽입된 6개 트랜스페린 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 6개 트랜스페린 서열은 표 XVII에서 열거된 6개 삽입 부위에서 삽입된다. 일부 양태에서, 삽입된 트랜스페린 서열 모두는 동일하다. 다른 양태에서, 삽입된 트랜스페린 서열 중 적어도 하나는 삽입된 트랜스페린 서열의 나머지와 상이하다.
일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 성숙 천연 인간 FVIII에서 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 1720, 또는 서열번호 1의 아미노산 1900의 바로 하류에 삽입된 하나의 트랜스페린 서열 및 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 아미노산의 바로 하류에 삽입된 추가적인 트랜스페린 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 성숙 천연 인간 FVIII에서 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 1720, 또는 서열번호 1의 아미노산 1900의 바로 하류에 삽입된 2개의 트랜스페린 서열 및 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 2개의 아미노산의 바로 하류에 삽입된 추가적인 트랜스페린 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 성숙 천연 인간 FVIII에서 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 1720, 또는 서열번호 1의 아미노산 1900의 바로 하류에 삽입된 3개의 트랜스페린 서열 및 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 3개의 아미노산의 바로 하류에 삽입된 추가적인 트랜스페린 서열을 포함한다.
3.1.8 PEG
특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 허용적 루프 내로 또는 a3 영역 내로, 또는 둘 다에 삽입된 비폴리펩타이드 이종성 모이어티 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체에 대한 적어도 하나의 부착 부위를 포함하되, 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 가지며 숙주 세포에서 생체내 또는 시험관내에서 발현될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 하나 이상의 허용적 루프에서 또는 a3 영역에서 부착된 하나 이상의 폴리에틸렌 글라이콜 (PEG) 모이어티를 포함할 수 있되, 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 가지며 숙주 세포에서 생체내 또는 시험관내에서 발현될 수 있다.
페길화된 FVIII은 FVIII과 적어도 하나의 폴리에틸렌 글라이콜(PEG) 분자 사이에 형성된 컨쥬게이트를 지칭한다. PEG는 매우 다양한 분자량 및 평균 분자량 범위에서 상업적으로 입수가능하다. PEG 평균 분자량의 전형적인 예는 약 200, 약 300, 약 400, 약 600, 약 1000, 약 1300 내지 1600, 약 1450, 약 2000, 약 3000, 약 3000 내지 3750, 약 3350, 약 3000 내지 7000, 약 3500 내지 4500, 약 5000 내지 7000, 약 7000 내지 9000, 약 8000, 약 10000, 약 8500 내지 11500, 약 16000 내지 24000, 약 35000, 약 40000, 약 60000, 및 약 80000 달톤을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 이들 평균 분자량은 단지 예로서 제공되며, 어떤 방법으로 제한되는 것을 의미하지 않는다.
본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 모노- 또는 폴리-(예를 들어, 2-4) PEG 모이어티를 포함하도록 페길화될 수 있다. 페길화는 당업계에 공지된 페길화 반응 중 어떤 것에 의해 수행될 수 있다. 페길화된 단백질 산물을 제조하기 위한 방법은 대체로 (i) 본 발명의 펩타이드가 하나 이상의 PEG 기에 부착되는 조건 하에서 폴리펩타이드를 폴리에틸렌 글라이콜(예컨대 PEG의 반응성 에스터 또는 알데하이드 유도체)와 반응시키는 단계; 및 (ii) 반응 생성물(들)을 얻는 단계를 포함할 것이다. 일반적으로, 반응을 위한 최적의 반응 조건은 알려진 파라미터 및 원하는 결과를 기반으로 경우에 따라 결정될 것이다.
당업자에게 이용가능한 다수의 PEG 부착 방법이 있으며, 예를 들어 문헌[Malik F et al ., Exp . Hematol. 20:1028-35 (1992); Francis, Focus on Growth Factors 3(2):4-10 (1992)]; 유럽특허 공개 제EP0401384호, 제EP0154316호, 및 제EP0401384호; 및 국제특허출원 공개 제WO92/16221호 및 WO95/34326. 비제한적 예로서, FVIII 변이체는 본 명세서에 기재된 바와 같은 하나 이상의 허용적 루프에서 시스테인 치환을 함유할 수 있으며, 시스테인은 PEG 중합체에 추가로 컨쥬게이트될 수 있다. 문헌[Mei et al ., Blood 116:270-279 (2010)] 및 미국 특허 제7,632,921호를 참조하며, 이는 본 명세서에 그것의 전문이 참조로서 포함된다.
특정 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 단독으로 또는 A 도메인의 허용적 루프(예를 들어, 상기 기재한 바와 같은 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2) 내로 삽입된 하나 이상의 이종성 모이어티와 조합으로 FVIII의 a3 영역 내로(예를 들어, 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 삽입부위) 삽입된 적어도 하나의 이종성 모이어티를 포함하되, 이종성 모이어티 중 적어도 하나는 PEG 분자이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 2개는 PEG 분자이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 3개는 PEG 분자이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 4개는 PEG 분자이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 5개는 PEG 분자이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 6개 이상은 PEG 분자이다.
일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 허용적 루프 내의 삽입 부위에서, 예를 들어, A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1, A3-2, a3, 또는 이들의 임의의 조합에서 하나 이상의 PEG를 포함한다. 일 실시형태에서, 하나 이상의 PEG는 A1-1 내에 삽입된다. 다른 실시형태에서, 하나 이상의 PEG는 A1-2 내에 삽입된다. 다른 실시형태에서, 하나 이상의 PEG는 A2-1 내에 삽입된다. 또 다른 실시형태에서, 하나 이상의 PEG는 A2-2 내에 삽입된다. 또 다른 실시형태에서, 하나 이상의 PEG는 A3-1에 삽입된다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 PEG는 A3-2 내에 삽입된다. 특정 실시형태에서, 하나 이상의 PEG는 a3 영역 내에 삽입된다.
특정 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 삽입 부위에서 삽입된 하나의 PEG를 포함한다. 다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 2개의 삽입 부위에서 2개의 PEG를 포함한다. 특정 실시형태에서, 2개의 PEG는 표 XI에 열거된 2개의 삽입 부위에서 삽입된다. 또 다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에 열거된 3개의 삽입 부위에서 삽입된 3개의 PEG를 포함한다. 구체적 양태에서, 3개의 PEG는 표 XII, 표 XIII 또는 표 둘 다에 열거된 3개의 삽입 부위에서 삽입된다. 또 다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 4개의 삽입 부위에서 삽입된 4개의 PEG를 포함한다. 특정 양태에서, 4개의 PEG는 표 XIV, 표 XV, 또는 둘 다에서 열거된 4개의 삽입 부위에서 삽입된다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 5개의 삽입 부위에서 삽입된 5개의 PEG를 포함한다. 특정 양태에서, 5개의 PEG는 표 XVI에서 열거된 5개의 삽입 부위에서 삽입된다. 특정 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 6개의 삽입 부위에서 삽입된 6개의 PEG를 포함한다. 특정 실시형태에서, 6개의 PEG는 표 XVII에서 열거된 6개의 삽입 부위에서 삽입된다. 일부 양태에서, 삽입된 PEG 모두는 동일하다. 다른 양태에서, 삽입된 PEG 중 적어도 하나는 삽입된 PEG의 나머지와 상이하다.
일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 성숙 천연 인간 FVIII에서 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 1720, 또는 서열번호 1의 아미노산 1900의 바로 하류에 삽입된 하나의 PEG 서열 및 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 아미노산의 바로 하류에 삽입된 추가적인 PEG 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 성숙 천연 인간 FVIII에서 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 1720, 또는 서열번호 1의 아미노산 1900의 바로 하류에 삽입된 2개의 PEG 서열 및 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 2개의 아미노산의 바로 하류에 삽입된 추가적인 PEG 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 성숙 천연 인간 FVIII에서 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 1720, 또는 서열번호 1의 아미노산 1900의 바로 하류에 삽입된 3개의 PEG 서열 및 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 3개의 아미노산의 바로 하류에 삽입된 추가적인 PEG 서열을 포함한다.
3.1.9 HES
특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 하나 이상의 허용적 루프에서 또는 a3 영역에서 컨쥬게이트된 적어도 하나의 하이드록시에틸 전분(HES) 중합체를 포함하되, 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 가지며 숙주 세포에서 생체내 또는 시험관내에서 발현될 수 있다. HES는 자연적으로 생기는 아밀로펙틴의 유도체이며, 신체 내에서 알파-아밀라제에 의해 분해된다. HES는 유리한 생물학적 특성을 나타내며, 혈액 용적 대체제로서 그리고 병원에서의 혈액희석요법에서 사용된다. 예를 들어, 문헌[Sommermeyer et al ., Krankenhauspharmazie 8:271-278 (1987); 및 Weidler et al ., Arzneim .- Forschung / Drug Res. 41: 494-498 (1991)] 참조.
HES는 주로 분자량 분포 및 치환 정도를 특징으로 한다. HES는 1 내지 300 kD, 2 내지 200kD, 3 내지 100 kD, 또는 4 내지 70kD의 평균 분자량(중량 평균)을 가진다. 하이드록시에틸 전분은 추가로 0.1 내지 3, 0.1 내지 2, 0.1 내지 0.9, 또는 0.1 내지 0.8의 몰 치환도, 및 하이드록시에틸기에 대해 2 내지 20의 범위에서 C2:C6 치환비를 나타낼 수 있다. 약 130 kD의 평균 분자량을 지니는 HES는 프레제니우스(Fresenius)제의 볼루벤(Voluven)(등록상표)이다. 볼루벤(등록상표)은 인공 콜로이드이며, 예를 들어 저혈량증의 치료 및 예방을 위한 치료적 적응증에서 사용되는 용량 대체를 위해 사용된다. 당업자에게 이용가능한 다수의 HES 부착 방법, 예를 들어 상기 기재한 동일한 PEG 부착 방법이 있다.
특정 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 단독으로 또는 A 도메인의 허용적 루프(예를 들어, 상기 기재한 바와 같은 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2) 내로 삽입된 하나 이상의 이종성 모이어티와 조합으로 FVIII의 a3 영역 내로(예를 들어, 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 삽입 부위) 삽입된 적어도 하나의 이종성 모이어티를 포함하되, 이종성 모이어티 중 적어도 하나는 HES 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 2개는 HES 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 3개는 HES 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 4개는 HES 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 5개는 HES 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 6개 이상은 HES 서열이다.
일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 허용적 루프 내의 삽입 부위, 예를 들어, A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1, A3-2, a3, 또는 이들의 임의의 조합에서 하나 이상의 HES 서열을 포함한다. 일 실시형태에서, 하나 이상의 HES 서열은 A1-1 내에 삽입된다. 다른 실시형태에서, 하나 이상의 HES 서열은 A1-2 내에 삽입된다. 다른 실시형태에서, 하나 이상의 HES 서열은 A2-1 내에 삽입된다. 또 다른 실시형태에서, 하나 이상의 HES 서열은 A2-2 내에 삽입된다. 또 다른 실시형태에서, 하나 이상의 HES 서열은 A3-1 내에 삽입된다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 HES 서열은 A3-2 내에 삽입된다. 특정 실시형태에서, 하나 이상의 HES 서열은 a3 영역 내에 삽입된다.
특정 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 삽입 부위에서 삽입된 하나의 HES 서열을 포함한다. 다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 2개의 삽입 부위에서 삽입된 2개의 HES 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 2개의 HES 서열은 표 XI에 열거된 2개의 삽입 부위에서 삽입된다. 또 다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 3개의 삽입 부위에서 3개의 HES 서열을 포함한다. 구체적 양태에서, 3개의 HES 서열은 표 XII, 표 XIII 또는 표 둘 다에서 열거된 3개의 삽입 부위에서 삽입된다. 또 다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 4개의 삽입 부위에서 삽입된 4개의 HES 서열을 포함한다. 특정 양태에서, 4개의 HES 서열은 표 XIV, 표 XV, 또는 둘 다에 열거된 4개의 삽입 부위에서 삽입된다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 5개의 삽입 부위에서 삽입된 5개의 HES 서열을 포함한다. 특정 양태에서, 5개의 HES 서열은 표 XVI에서 열거된 5개의 삽입 부위에서 삽입된다. 특정 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 6개의 삽입 부위에서 삽입된 6개의 HES 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 6개의 HES 서열은 표 XVII에서 열거된 6개의 삽입 부위에서 삽입된다. 일부 양태에서, 삽입된 HES 서열 모두는 동일하다. 다른 양태에서, 삽입된 HES 서열 중 적어도 하나는 삽입된 HES 서열의 나머지와 상이하다.
일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 성숙 천연 인간 FVIII에서 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 1720, 또는 서열번호 1의 아미노산 1900에 대응되는 아미노산 위치의 바로 하류에 삽입된 하나의 HES 서열 및 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 아미노산의 바로 하류에 삽입된 추가적인 HES 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 성숙 천연 인간 FVIII에서 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 1720, 또는 서열번호 1의 아미노산 1900의 바로 하류에 삽입된 2개의 HES 서열, 및 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 2개 아미노산의 바로 하류에 삽입된 추가적인 HES 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 성숙 천연 인간 FVIII에서 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 1720, 또는 서열번호 1의 아미노산 1900의 바로 하류에 삽입된 3개의 HES 서열, 및 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 3개 아미노산의 바로 하류에 삽입된 추가적인 HES 서열을 포함한다.
3.1.10 PSA
특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질은 하나 이상의 허용적 루프에서 또는 a3 영역에서 컨쥬게이트된 적어도 하나의 폴리시알산(PSA) 중합체를 포함하되, 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 가지며 숙주 세포에서 생체내 또는 시험관내에서 발현될 수 있다. PSA는 특정 박테리아 균주에 의해 그리고 포유류에서 특정 세포에서 생산된 시알산의 자연적으로 생기는 미분지 중합체이다. 예를 들어, 문헌[Roth J. et al . (1993) Polysialic Acid : From Microbes to Man, eds. Roth J.,　Rutishauser　U., Troy F. A. (
Figure pct00001
), pp. 335-348] 참조. PSA는 제한된 산 가수분해에 의해 또는 뉴라미니다제에 의해 또는 천연, 박테리아 유래된 형태의 중합체의 분획에 의해 n=약 80 이상의 시알산 잔기로부터 n=2에 이르는 다양한 중합 정도에서 생성될 수 있다. 당업자에게 입수가능한 다수의 PSA 부착 방법, 예를 들어 상기 기재한 동일한 PEG 부착 방법이 있다. 특정 양태에서, 활성화된 PSA가 또한 FVIII 상의 시스테인 아미노산 잔기에 부착될 수 있다. 예를 들어 미국특허 제5846951호 참조.
특정 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 단독으로 또는 A 도메인의 허용적 루프(예를 들어, 상기 기재한 바와 같은 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2) 내로 삽입된 하나 이상의 이종성 모이어티와 조합으로 FVIII의 a3 영역(예를 들어, 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 삽입 부위) 내로 삽입된 적어도 하나의 이종성 모이어티를 포함하되, 이종성 모이어티 중 적어도 하나는 PSA 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 2개는 PSA 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 3개는 PSA 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 4개는 PSA 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 5개는 PSA 서열이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 6개 이상은 PSA 서열이다.
일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 허용적 루프 내의 삽입 부위에서, 예를 들어, A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1, A3-2, a3, 또는 이들의 임의의 조합에서 하나 이상의 PSA 서열을 포함한다. 일 실시형태에서, 하나 이상의 PSA 서열은 A1-1 내에 삽입된다. 다른 실시형태에서, 하나 이상의 PSA 서열은 A1-2 내에 삽입된다. 다른 실시형태에서, 하나 이상의 PSA 서열은 A2-1 내에 삽입된다. 또 다른 실시형태에서, 하나 이상의 PSA 서열은 A2-2 내에 삽입된다. 또 다른 실시형태에서, 하나 이상의 PSA 서열은 A3-1 내에 삽입된다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 PSA 서열은 A3-2 내에 삽입된다. 특정 실시형태에서, 하나 이상의 PSA 서열은 a3 내에 삽입된다.
특정 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 삽입 부위에서 삽입된 하나의 PSA 서열을 포함한다. 다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 2개의 삽입 부위에서 삽입된 2개의 PSA 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 2개의 PSA 서열은 표 XI에 열거된 2개의 삽입 부위에서 삽입된다. 또 다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 3개의 삽입 부위에서 삽입된 3개의 PSA 서열을 포함한다. 구체적 양태에서, 3개의 PSA 서열은 표 XII, 표 XIII 또는 표 둘 다에 열거된 3개의 삽입 부위에서 삽입된다. 또 다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 4개의 삽입 부위에서 삽입된 4개의 PSA 서열을 포함한다. 특정 양태에서, 4개의 PSA 서열은 표 XIV, 표 XV, 또는 둘 다에서 열거된 4개의 삽입 부위에서 삽입된다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 5개의 삽입 부위에서 삽입된 5개의 PSA 서열을 포함한다. 특정 양태에서, 5개의 PSA 서열은 표 XVI에 열거된 5개의 삽입 부위에서 삽입된다. 특정 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 6개의 삽입 부위에서 삽입된 6개의 PSA 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 6개의 PSA 서열은 표 XVII에서 열거된 6개의 삽입 부위에서 삽입된다. 일부 양태에서, 삽입된 PSA 서열 모두는 동일하다. 다른 양태에서, 삽입된 PSA 서열 중 적어도 하나는 삽입된 PSA 서열의 나머지와 상이하다.
일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 성숙 천연 인간 FVIII에서 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 1720, 또는 서열번호 1의 아미노산 1900의 바로 하류에 삽입된 하나의 PSA 서열 및 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 아미노산의 바로 하류에 삽입된 추가적인 PSA 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 성숙 천연 인간 FVIII에서 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 1720, 또는 서열번호 1의 아미노산 1900의 바로 하류에 삽입된 2개의 PSA 서열 및 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 2개 아미노산의 바로 하류에 삽입된 추가적인 PSA 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 성숙 천연 인간 FVIII에서 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 1720, 또는 서열번호 1의 아미노산 1900의 바로 하류에 삽입된 3개의 PSA 서열 및 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 3개 아미노산의 바로 하류에 삽입된 추가적인 PSA 서열을 포함한다.
3.1.11 클리어런스 수용기
특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질의 반감기는 연장될 수 있으며, 여기서 재조합 FVIII 단백질은 허용적 루프 내로 또는 a3 영역 내로, 또는 둘 다에 삽입된 FVIII 클리어런스 수용기 또는 FVIII-결합 이의 단편, 변이체, 또는 유도체의 적어도 하나의 단편을 포함하되, 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 가지며 숙주 세포에서 생체내 또는 시험관내에서 발현될 수 있다. 클리어런스 수용기, 예컨대 저밀도 리포단백질-관련 단백질 수용기 LRP1의 가용성 형태 또는 이의 단편의 삽입은 클리어런스 수용기에 대한 FVIII의 결합을 차단할 수 있으며, 이에 의해 그것의 반감기, 예를 들어 생체내 반감기는 연장된다. LRP1은 FVIII을 포함하는 다양한 단백질의 수용기-매개 클리어런스에 연루된 600 kDa 내재 막 단백질이다. 예를 들어, 문헌[Lenting et al., Haemophilia 16:6-16 (2010)] 참조. 다른 적합한 FVIII 클리어런스 수용기는, 예를 들어 LDLR(저밀도 리포단백질 수용기), VLDLR(매우 저밀도 리포단백질 수용기), 및 메갈린(LRP-2) 또는 이의 단편이다. 예를 들어, 문헌[Bovenschen et al ., Blood 106:906-912 (2005); Bovenschen, Blood 116:5439-5440 (2010); Martinelli et al ., Blood 116:5688-5697 (2010)] 참조.
일부 실시형태에서, 클리어런스 수용기 서열은 C-말단, N-말단, 또는 말단 둘 다에서, Gly-Ser 펩타이드 링커 서열에 의해 측접된다. 일부 실시형태에서, Gly-Ser 펩타이드 링커는 Gly4Ser(서열번호 191)이다. 다른 실시형태에서, Gly-Ser 펩타이드 링커는 (Gly4Ser)2(서열번호 192)이다.
특정 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 단독으로 또는 A 도메인의 허용적 루프(예를 들어, 상기 기재한 바와 같은 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2) 내로 삽입된 하나 이상의 이종성 모이어티와 조합으로 FVIII의 a3 영역(예를 들어, 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 삽입 부위) 내로 삽입된 적어도 하나의 이종성 모이어티를 포함하되, 이종성 모이어티 중 적어도 하나는 FVIII 클리어런스 수용기 또는 FVIII-결합 이의 단편, 변이체, 또는 유도체의 단편이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 2개는 FVIII 클리어런스 수용기 또는 이의 FVIII-결합 단편, 변이체, 또는 유도체의 단편이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 3개는 FVIII 클리어런스 수용기 또는 이의 FVIII-결합 단편, 변이체, 또는 유도체의 단편이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 4개는 FVIII 클리어런스 수용기 또는 이의 FVIII-결합 단편, 변이체, 또는 유도체의 단편이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 5개는 FVIII 클리어런스 수용기 또는 이의 FVIII-결합 단편, 변이체, 또는 유도체의 단편이다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티 중 6개 이상은 FVIII 클리어런스 수용기 또는 이의 FVIII-결합 단편, 변이체, 또는 유도체의 단편이다.
일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 허용적 루프 내의 삽입 부위에서, 예를 들어, A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1, A3-2, a3, 또는 이들의 임의의 조합에서 FVIII 클리어런스 수용기 또는 이의 FVIII-결합 단편, 변이체, 또는 유도체의 하나 이상의 단편을 포함한다. 일 실시형태에서, FVIII 클리어런스 수용기 또는 이의 FVIII-결합 단편, 변이체, 또는 유도체의 하나 이상의 단편은 A1-1 내에 삽입된다. 다른 실시형태에서, FVIII 클리어런스 수용기 또는 이의 FVIII-결합 단편, 변이체, 또는 유도체의 하나 이상의 단편은 A1-2 내에 삽입된다. 다른 실시형태에서, FVIII 클리어런스 수용기 또는 이의 FVIII-결합 단편, 변이체, 또는 유도체의 하나 이상의 단편은 A2-1 내에 삽입된다. 또 다른 실시형태에서, FVIII 클리어런스 수용기 또는 이의 FVIII-결합 단편, 변이체, 또는 유도체의 하나 이상의 단편은 A2-2 내에 삽입된다. 또 다른 실시형태에서, FVIII 클리어런스 수용기 또는 이의 FVIII-결합 단편, 변이체, 또는 유도체의 하나 이상의 단편은 A3-1 내에 삽입된다. 일부 실시형태에서, FVIII 클리어런스 수용기 또는 이의 FVIII-결합 단편, 변이체, 또는 유도체의 하나 이상의 단편은 A3-2 내에 삽입된다. 특정 실시형태에서, FVIII 클리어런스 수용기 또는 이의 FVIII-결합 단편, 변이체, 또는 유도체의 하나 이상의 단편은 a3 영역 내에 삽입된다.
특정 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 FVIII 클리어런스 수용기 또는 FVIII-결합 이의 단편, 변이체, 또는 유도체는 표 X에서 열거된 삽입 부위에서 삽입된 하나의 단편을 포함한다. 다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 2개의 삽입 부위에서 삽입된 FVIII 클리어런스 수용기 또는 이의 FVIII-결합 단편, 변이체, 또는 유도체의 2개의 단편을 포함한다. 특정 실시형태에서, FVIII 클리어런스 수용기 또는 이의 FVIII-결합 단편, 변이체, 또는 유도체의 2개의 단편은 표 XI에 열거된 2개의 삽입 부위에서 삽입된다. 또 다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에 열거된 3개의 삽입 부위에서 삽입된 FVIII 클리어런스 수용기 또는 이의 FVIII-결합 단편, 변이체, 또는 유도체의 3개의 단편을 포함한다. 구체적 양태에서, FVIII 클리어런스 수용기 또는 이의 FVIII-결합 단편, 변이체, 또는 유도체의 3개의 단편은 표 XII, 표 XIII 또는 표 둘 다에 열거된 3개의 삽입 부위에서 삽입된다. 또 다른 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 4개의 삽입 부위에서 삽입된 FVIII 클리어런스 수용기 또는 FVIII-결합 단편, 변이체, 또는 유도체의 4개의 단편을 포함한다. 특정 양태에서, FVIII 클리어런스 수용기 또는 이의 FVIII-결합 단편, 변이체, 또는 유도체의 4개의 단편은 표 XIV, 표 XV, 또는 둘 다에 열거된 4개의 삽입 부위에서 삽입된다. 일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 5개의 삽입 부위에서 삽입된 FVIII 클리어런스 수용기 또는 이의 FVIII-결합 단편, 변이체, 또는 유도체의 5개 단편을 포함한다. 특정 양태에서, FVIII 클리어런스 수용기 또는 이의 FVIII-결합 단편, 변이체, 또는 유도체의 5개 단편은 표 XVI에 열거된 5개의 삽입 부위에서 삽입된다. 특정 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 표 X에서 열거된 6개의 삽입 부위에서 삽입된 FVIII 클리어런스 수용기 또는 이의 FVIII-결합 단편, 변이체, 또는 유도체의 6개 단편을 포함한다. 특정 실시형태에서, FVIII 클리어런스 수용기 또는 이의 FVIII-결합 단편, 변이체, 또는 유도체의 6개 단편은 표 XVII에서 열거된 6개 삽입 부위에서 삽입된다. 일부 양태에서, FVIII 클리어런스 수용기 또는 이의 FVIII-결합 단편, 변이체, 또는 유도체의 삽입된 단편 모두는 동일하다. 다른 양태에서, FVIII 클리어런스 수용기 또는 이의 FVIII-결합 단편, 변이체, 또는 유도체의 삽입된 단편 중 적어도 하나는 FVIII 클리어런스 수용기 또는 이의 FVIII-결합 단편, 변이체, 또는 유도체의 삽입된 단편의 나머지와 상이하다.
일부 양태에서, 재조합 FVIII 단백질은 성숙 천연 인간 FVIII에서 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 1720, 또는 서열번호 1의 아미노산 1900의 바로 하류에 삽입된 FVIII 클리어런스 수용기 또는 FVIII-결합 이의 단편, 변이체, 또는 유도체의 하나의 단편 및 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 아미노산의 바로 하류에 삽입된 FVIII 클리어런스 수용기 또는 FVIII-결합 이의 단편, 변이체, 또는 유도체의 추가적인 단편을 포함한다. 일부 양태에서, 성숙 천연 인간 FVIII에서 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 1720, 또는 서열번호 1의 아미노산 1900의 바로 하류에 삽입된 FVIII 클리어런스 수용기 또는 FVIII-결합 이의 단편, 변이체, 또는 유도체의 2개의 단편 및 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 2개 아미노산의 바로 하류에 삽입된 FVIII 클리어런스 수용기 또는 FVIII-결합 이의 단편, 변이체, 또는 유도체의 추가적인 단편을 포함한다. 일부 양태에서, 성숙 천연 인간 FVIII에서 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 1720, 또는 서열번호 1의 아미노산 1900의 바로 하류에 삽입된 FVIII 클리어런스 수용기 또는 FVIII-결합 이의 단편, 변이체, 또는 유도체의 3개의 단편 및 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 3개 아미노산의 바로 하류에 삽입된 FVIII 클리어런스 수용기 또는 FVIII-결합 이의 단편, 변이체, 또는 유도체의 추가적인 단편을 포함한다.
3.2 시각화 및 국소화
특정 양태에서, 이종성 모이어티는 본 발명의 재조합 FVIII 단백질의 시각화 또는 국소화를 가능하게 한다. 시각화 또는 국소화를 가능하게 하는 재조합 단백질 내로 삽입 또는 컨쥬게이션을 위한 무수한 펩타이드 및 다른 모이어티는 당업계에 공지되어 있다. 이러한 모이어티는 시각화 또는 국소화 시험관내, 생체내, 생체밖 또는 이들의 임의의 조합을 가능하게 하기 위해 사용될 수 있다.
시각화 또는 국소화를 가능하게 하는 펩타이드 또는 폴리펩타이드의 비제한적 예는 아비딘- 및 스트렙타비딘-계 시약의 컨쥬게이션을 가능하게 할 수 있는 바이오틴 수용체 펩타이드, 결합된 리포산에 대한 티올-반응성 프로브의 컨쥬게이션을 가능하게 할 수 있는 리포산 수용체 펩타이드 또는 형광 리포산 유사체의 직접 결찰, 형광 단백질, 예를 들어, 녹색 형광 단백질(GFP) 및 이의 변이체(예를 들어, EGFP, YFP 예컨대 EYFP, mVenus, YPet 또는 시트린(Citrine), 또는 CFP, 예컨대 세룰린(Cerulean) 또는 ECFP) 또는 적색 형광 단백질(RFP), 2비소 염료, 예컨대 4',5'비스(1,3,2-다이티오아솔란-2-일)플루오레세인(FlAsH)의 결찰을 위한, 또는 준안정 테크네튬을 컨쥬게이션하기 위한 시스테인-함유 펩타이드, 형광 공명 에너지 전이 (FRET)-기반 근접 분석을 위한 유로퓸 클라스레이트를 컨쥬게이팅하기 위한 펩타이드, 이의 어떤 변이체, 및 이들의 임의의 조합을 포함한다.
일부 실시형태에서, 시각화(예를 들어, GFP 예컨대 EGFP)를 가능하게 하는 펩타이드 또는 폴리펩타이드는 C-말단, N-말단, 또는 말단 둘 다에서, Gly-Ser 펩타이드 링커 서열에 의해 측접된다. 일부 실시형태에서, Gly-Ser 펩타이드 링커는 Gly4Ser(서열번호 191)이다. 다른 실시형태에서, Gly-Ser 펩타이드 링커는 (Gly4Ser)2(서열번호 192)이다.
이들 기술에 의해 표지된 재조합 FVIII 단백질은, 예를 들어 병리학적 혈전 형성 및 용해의 3-D 영상화, 응혈촉진 악성종양에서의 종양 영상화, 혈액 및 혈액에서 응혈촉진 마이크로입자의 유세포분석 정량화 및 특성규명, 생활기간 내 현미경에 의한 혈전 형성의 모니터링을 위해 사용될 수 있다.
4. 약제학적 조성물 및 치료방법
본 발명은 본 발명의 재조합 FVIII 단백질을 포함하는 약제학적 조성물을 사용하여 인간 피험체에서 출혈 질환을 치료하기 위한 방법을 추가로 제공한다. 예시적인 방법은 본 발명의 재조합 FVIII 단백질을 포함하는 약제학적 조성물/제형의 치료적 유효량을 치료가 필요한 피험체에 투여하는 단계를 포함한다. 다른 양태에서, 본 발명의 재조합 단백질을 암호화하는 DNA를 포함하는 조성물은 치료가 필요한 피험체에 투여될 수 있다. 본 발명의 특정 양태에서, 본 발명의 재조합 FVIII 단백질을 발현시키는 세포는 치료가 필요한 피험체에게 투여될 수 있다. 본 발명의 특정 양태에서, 약제학적 조성물은 (i) 재조합 FVIII 단백질, (ii) 재조합 FVIII 단백질을 암호화하는 단리된 핵산, (iii) 암호화하는 핵산을 포함하는 벡터, (iv) 재조합 FVIII 단백질을 암호화하는 단리된 핵산을 포함하는 세포 및/또는 재조합 FVIII 단백질을 암호화하는 핵산을 포함하는 벡터, 또는 (v) 이들의 조합을 포함하며, 약제학적 조성물은 허용가능한 부형제 또는 담체를 추가로 포함한다.
출혈 질환은 혈액 응고 장애에 의해 야기될 수 있다. 혈액 응고 장애는 또한 응혈이상으로서 지칭될 수 있다. 일 예에서, 기존의 약제학적 조성물로 치료될 수 있는 혈액 응고 장애는 혈우병 또는 폰빌레브란트병(vWD)이다. 다른 예에서, 본 개시내용의 약제학적 조성물로 치료될 수 있는 혈액 응고 장애는 A형 혈우병이다.
일부 실시형태에서, 출혈 질환과 관련된 출혈의 유형은 관절혈종, 근육 출혈, 경구 출혈, 출혈, 근육 내로의 출혈, 경구 출혈, 외상, 외상 백선, 위장 출혈, 두개내 출혈, 복강내 출혈, 흉강내 출혈, 뼈 골절, 중추신경계 출혈, 인두후강 내 출혈, 복막후극 내 출혈, 및 장요근 집에서의 출혈로부터 선택된다.
다른 실시형태에서, 출혈 질환으로 고통받는 피험체는, 예를 들어 수술적 예방 또는 수술전후 관리를 포함하는, 수술에 대한 처치가 필요하다. 일 예에서, 수술은 부수적 수술 및 주요 수술로부터 선택된다. 예시적인 수술 절차는 발치, 편도선 절제술, 탈장 절제술, 활막절제술, 개두술, 가관절 수술, 외상 수술, 두개내 수술, 복강내 수술, 흉강내 수술, 관절 치환술(예를 들어, 슬관절 전치환술, 전고관절 대치술 등), 심장 수술, 및 제왕절개술을 포함한다.
다른 예에서, 피험체는 부수적으로 인자 IX로 처리된다. 본 발명의 화합물은 FIXa를 활성화할 수 있기 때문에, 그들은 피험체에 FIXa의 투여 전 FIXa 폴리펩타이드를 사전 활성화시키는데 사용될 수 있다.
본 발명의 방법은 예방적 처치 또는 요구되는 처치가 필요한 피험체에서 실행될 수 있다.
본 발명의 재조합 FVIII 단백질을 포함하는 약제학적 조성물은, 예를 들어, 국소(예를 들어, 경피 또는 눈), 경구, 구강, 비강, 질, 직장 또는 비경구 투여를 포함하는 어떤 적절한 투여 방식을 위해 제형화될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 비경구는 피하, 피내, 혈관내(예를 들어, 정맥내), 근육내, 척추, 두개내, 수강내, 안구내, 눈주위, 눈확아래, 활액내 및 복막내 주사뿐만 아니라 임의의 유의한 주사 또는 주입 기술을 포함한다. 조성물은 또한, 예를 들어 현탁액, 에멀전, 지속 방출 제형, 크림, 겔 또는 분말일 수 있다. 조성물은 좌약으로서, 전통적인 결합제 및 담체, 예컨대 트라이글라이세라이드와 함께 제형화될 수 있다.
일 예에서, 약제학적 제형은 액체 제형, 예를 들어, 완충, 등장성, 수용액이다. 다른 예에서, 약제학적 조성물은 생리적 또는 생리적에 가까운 pH를 가진다. 다른 예에서, 수성 제형은 생리적 또는 생리적에 가까운 오스몰 농도 및 염분을 가진다. 이는 염화나트륨 및/또는 아세트산나트륨을 함유할 수 있다. 일부 예에서, 본 발명의 조성물은 동결건조된다.
5. 폴리뉴클레오타이드 , 벡터, 숙주 세포, 및 제조방법
본 발명은 본 명세서에 기재된 재조합 FVIII 단백질을 암호화하는 단리된 핵산, 핵산을 포함하는 발현 벡터, 핵산 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포 또는 재조합 FVIII 단백질의 제조방법을 추가로 제공한다.
일 실시형태에서, 본 발명은 확인된 허용적 위치, a3 영역, 또는 본 명세서에 기재된 바와 같은 둘 다에서 이종성 모이어티를 삽입하는 단계를 포함하는 재조합 FVIII 단백질의 제조방법을 포함하되, 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 나타낸다.
다른 실시형태에서, 본 발명은 FVIII 단백질의 응혈촉진 활성을 제거하거나 또는 감소시키는 일 없이 확인된 허용적 위치, a3 영역, 또는 본 명세서에 기재된 바와 같은 둘 다에서 이종성 모이어티를 삽입하는 단계를 포함하는, FVIII 단백질의 반감기를 증가시키는 방법을 포함하되, 재조합 FVIII 단백질은 이종성 모이어티가 없는 FVIII 단백질에 비해 증가된 반감기 및 응혈촉진 활성을 나타낸다.
다른 실시형태에서, 본 발명은 허용적 위치, a3 영역, 또는 본 명세서에 기재된 바와 같은 둘 다에서 적어도 하나의 이종성 모이어티를 포함하는 재조합 FVIII 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 설계하는 단계를 포함하는, 재조합 FVIII 단백질을 구성하는 방법을 제공한다.
특정 실시형태에서, 본 발명은 확인된 허용적 위치, a3 영역, 또는 본 명세서에 기재된 바와 같은 둘 다에서 이종성 모이어티를 삽입하는 단계를 포함하는, 재조합 FVIII 단백질의 발현을 증가시키는 방법을 포함하되, 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 나타낸다.
또 다른 실시형태에서, 본 발명은 확인된 허용적 위치, a3 영역, 또는 본 명세서에 기재된 바와 같은 둘 다에서 이종성 모이어티를 삽입하는 단계를 포함하는, 재조합 FVIII 단백질의 응혈촉진 활성을 보유하는 방법을 제공하되, 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 나타낸다.
일부 실시형태에서, 핵산, 벡터, 또는 숙주 세포는 단백질 전환효소를 암호화하는 추가적인 뉴클레오타이드를 추가로 포함한다. 단백질 전환효소는 프로단백질 전환효소 서브틸리신/켁신(subtilisin/kexin) 5형(PCSK5 또는 PC5), 프로단백질 전환효소 서브틸리신/켁신 7형(PCSK7 또는 PC5), 효모 Kex 2, 프로단백질 전환효소 서브틸리신/켁신 3형(PACE 또는 PCSK3), 및 이들의 2 이상의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 일부 실시형태에서, 단백질 전환효소는 PACE, PC5, 또는 PC7이다. 구체적 실시형태에서, 단백질 전환효소는 PC5 또는 PC7이다. 본 명세서에 참조로서 포함되는 국제특허출원 공개 제WO 2012/006623호 참조. 다른 실시형태에서, 단백질 전환효소는 PACE/퓨린(Furin)이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 발현 벡터는 삽입된 암호 서열의 전사 및 번역을 위해 또는 필요한 구성요소, 또는 RNA 바이러스 벡터의 경우에, 적절한 숙주 세포 내로 도입될 때 복제 및 번역을 위해 필요한 구성요소를 함유하는 어떤 핵산 작제물을 지칭한다. 발현 벡터는 플라스미드, 파지미드, 바이러스, 및 이의 유도체를 포함할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 유전자 발현 제어 서열은 어떤 조절 뉴클레오타이드 서열, 예컨대 그것이 작동가능하게 연결된 암호 핵산의 효율적인 전사 및 번역을 가능하게 하는 프로모터 서열 또는 프로모터-인핸서 조합이다. 유전자 발현 제어 서열은, 예를 들어 구성적 또는 유도성 프로모터와 같은 포유류 또는 바이러스 프로모터일 수 있다. 구성적 포유류 프로모터는 다음의 유전자에 대한 프로모터를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다: 하이포잔틴 포스포리보실 트랜스퍼라제(HPRT), 아데노신 데아미나제, 파이루베이트 키나제, 베타-액틴 프로모터, 및 다른 구성적 프로모터. 진핵세포에서 구성적으로 작용하는 예시적인 바이러스 프로모터는, 예를 들어, 거대세포바이러스(CMV), 시미안 바이러스(예를 들어, SV40), 유두종 파이러스, 아데노바이러스, 인간 면역결핍증 바이러스(HIV), 라우스 육종 바이러스, 거대세포바이러스, 몰로니 백혈병 바이러스의 긴말단 반복순서(long terminal repeat: LTR), 및 다른 레트로바이러스로부터의 프로모터, 및 단순포진 바이러스의 티미딘 키나제 프로모터를 포함한다. 다른 구성적 프로모터는 당업자에게 공지되어 있다. 본 발명의 유전자 발현 서열로서 유용한 프로모터는 또한 유도성 프로모터를 포함한다. 유도성 프로모터는 유도성 작용제의 존재에서 발현된다. 예를 들어, 메탈로티오네인 프로모터는 특정 금속 이온의 존재에서 전사 및 번역을 촉진하기 위해 유도된다. 다른 유도성 프로모터는 당업자에게 공지되어 있다.
바이러스 벡터의 예는 다음의 바이러스로부터의 핵산 서열을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다: 레트로바이러스, 예컨대 몰로니 뮤린 백혈병 바이러스, 하비 뮤린 육종 바이러스, 뮤린 유방 종양 바이러스, 및 라우스 육종 바이러스; 아데노바이러스, 아데노 관련 바이러스; SV40-형 바이러스; 폴리오마 바이러스; 엡스타인-바르 바이러스; 유두종 바이러스; 헤르페스 바이러스; 백시니아 바이러스; 소아마비 바이러스; 및 RNA 바이러스, 예컨대 레트로바이러스. 당업계에 잘 공지된 다른 벡터를 용이하게 사용할 수 있다. 특정 바이러스 벡터는 비필수 유전자가 관심 대상의 유전자로 대체된 비세포병변 진핵세포 바이러스에 기반한다. 비세포병변 바이러스는 레트로바이러스를 포함하며, 이것의 라이프 사이클은 숙주 세포 DNA 내로 후속적인 프로바이러스 통합에 의해 게놈 바이러스 RNA를 DNA로 역전사시키는 것에 연루된다. 복제 결핍인(즉, 원하는 단백질의 합성을 지시할 수 있지만 감염성 입자를 제조할 수 없음) 레트로바이러스가 가장 유용하다. 이러한 유전적으로 변성된 레트로바이러스 발현 벡터는 생체내 유전자의 고효율 형질도입을 위한 일반적 이용성을 가진다. 복제-결핍 레트로바이러스를 생산하기 위한 표준 프로토콜(외인성 유전적 물질을 플라스미드 내로 도입하는 단계, 패키징 세포주를 플라스미드로 형질감염시키는 단계, 패키징 세포주에 의해 재조합 레트로바이러스를 생산하는 단계 및 표적 세포를 바이러스 입자로 감염시키는 단계를 포함함)은 문헌[Kriegler, M., Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, W.H. Freeman Co., New York (1990) 및 Murry, E. J., Methods in Molecular Biology, Vol. 7, Humana Press, Inc., Cliffton, N.J. (1991)]에서 제공된다.
발현 벡터 또는 벡터는 그 다음에 폴리펩타이드를 발현시킬 적합한 표적 세포 내로 형질감염되거나 또는 공동형질감염된다. 당업계에 공지된 형질감염은, 인산칼슘 침전(Wigler et al . (1978) Cell 14:725), 전기천공법(Neumann et al . (1982) EMBO J 1:841), 및 리포좀계 시약을 포함하지만, 이것으로 제한되지 않는다. 다양한 숙주-발현 벡터 시스템은 원핵세포와 진핵세포 둘 다를 포함하는 본 명세서에 기재된 단백질을 발현시키기 위해 이용될 수 있다. 이들은 적절한 암호 서열을 함유하는 재조합 박테리오파지 DNA 또는 플라스미드 DNA 발현 벡터로 형질전환된 미생물유기체, 예컨대 박테리아(예를 들어, 이콜라이); 적절한 암호 서열을 함유하는 재조합 효모 또는 진균 발현 벡터에 의해 형질전환된 효모 또는 사상균; 적절한 암호 서열을 함유하는 재조합 바이러스 발현 벡터(예를 들어, 바큘로바이러스)로 감염된 곤충 세포 시스템; 재조합 바이러스 발현 벡터(예를 들어, 꽃양배추 모자이크 바이러스 또는 담배 모자이크 바이러스)로 감염되거나 또는 적절한 암호 서열을 함유하는 재조합 플라스미드 발현 벡터(예를 들어, Ti 플라스미드)로 형질감염된 식물 세포 시스템; 또는 포유류 세포(예를 들어, HEK 293, CHO, Cos, HeLa, HKB11, 및 BHK 세포)를 포함하는 동물 세포 시스템을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
일 실시형태에서, 숙주 세포는 진핵세포이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 진핵세포는 고유핵을 갖는 임의의 동물 또는 식물 세포를 지칭한다. 동물의 진핵세포는 척추동물, 예를 들어 포유류의 세포, 및 무척추동물, 예를 들어, 곤충의 세포를 포함한다. 식물의 진핵세포는 구체적으로 효모 세포를 포함할 수 있지만, 이것으로 제한되지 않는다. 진핵세포는 원핵세포, 예를 들어 박테리아와 별개이다.
특정 실시형태에서, 진핵세포는 포유류 세포이다. 포유류 세포는 포유류로부터 유래된 어떤 세포이다. 포유류 세포는 구체적으로는 포유류 세포주를 포함하지만, 이것으로 제한되지 않는다. 일 실시형태에서, 포유류 세포는 인간 세포이다. 다른 실시형태에서, 포유류 세포는 인간 배아 신장 세포주인 HEK 293 세포이다. HEK 293 세포는 버지니아주 매너서스에 소재한 미국미생물균주배양센터(American Type Culture Collection)로부터의 CRL-1533으로서, 그리고 인비트로젠(Invitrogen)(캘리포니아주 칼스베드에 소재)제의 293-H 세포, 카탈로그 번호 11631-017 또는 293-F 세포, 카탈로그 번호 11625-019로서 입수가능하다. 일부 실시형태에서, 포유류 세포는 망막으로부터 유래된 인간 세포주인 PER.C6(등록상표) 세포이다. PER.C6(등록상표) 세포는 크루셀(Crucell)(네덜란드 라이덴에 소재)로부터 입수가능하다. 다른 실시형태에서, 포유류 세포는 중국 햄스터 난소(Chinese hamster ovary: CHO) 세포이다. CHO 세포는 버지니아주 매너서스에 소재한 미국미생물균주배양센터로부터 입수가능하다(예를 들어, CHO-K1; CCL-61). 또 다른 실시형태에서, 포유류 세포는 새끼 햄스터 신장(baby hamster kidney: BHK) 세포이다. BHK 세포는 버지니아주 매너서스에 소재한 미국미생물균주배양센터로부터 입수가능하다(예를 들어, CRL-1632). 일부 실시형태에서, 포유류 세포는 HEK293 세포 및 인간 B 세포주의 혼성 세포주인 HKB11 세포이다. 문헌[Mei et al ., Mol. Biotechnol. 34(2): 165-78 (2006)].
또 다른 실시형태에서, 형질감염된 세포는 안정하게 형질감염된다. 이들 세포는 당업자에게 공지된 통상적인 기법을 사용하여 안정한 세포주로서 선택되고 유지될 수 있다.
단백질의 DNA 작제물을 함유하는 숙주 세포는 적절한 성자 배지에서 성장된다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "적절한 성장 배지"는 세포의 성장을 위해 필요한 영양분을 함유하는 배지를 의미한다. 세포 성장에 필요한 영양분은 탄소 공급원, 질소 공급원, 필수 아미노산, 비타민, 무기질 및 성장 인자를 포함할 수 있다. 선택적으로, 배지는 하나 이상의 선택 인자를 함유할 수 있다. 선택적으로 배지는 우아혈청(bovine calf serum) 또는 우 태아 혈청(fetal calf serum: FCS)을 함유할 수 있다. 일 실시형태에서, 배지는 IgG를 실질적으로 함유하지 않는다. 성장 배지는 일반적으로, 예를 들어 DNA 작제물 상에서 선택가능한 마커에 의해 보충되거나 또는 DNA 작제물과 공동형질감염된 필수 영양분에서 약물 선택 또는 결핍에 의해 DNA 작제물을 함유하는 세포 선택할 것이다. 배양된 포유류 세포는 대체로 상업적으로 입수가능한 혈청-함유 또는 무혈청 배지(예를 들어, MEM, DMEM, DMEM/F12)에서 성장된다. 일 실시형태에서, 배지는 CD293(캘리포니아주 칼스베드에 소재한 인비트로젠)이다. 다른 실시형태에서, 배지는 CD17(캘리포니아주 칼스베드에 소재한 인비트로젠)이다. 사용된 특정 세포주에 대한 적절한 배지의 선택은 당업자의 수준 내에 있다.
특정 양태에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 방법에 의해 생산된 재조합 FVIII 단백질에 관한 것이다.
시험관내 생성은 본 발명의 원하는 변성된 폴리펩타이드의 다량을 제공하도록 정률증가된다. 조직 배양 조건 하에서 포유류 세포 배양에 대한 기술은 당업계에 공지되어 있으며, 균질한 현탁 배양물, 예를 들어 기포탑형 반응기에서 또는 연속적 교반 반응기에서, 또는 고정화된 또는 갇힌 세포 배양물, 예를 들어 중공 섬유, 마이크로캡슐에서, 아가로스 마이크로비드 또는 세라믹 카트리지 상에서 포함한다. 필요하고/하거나 원한다면, 폴리펩타이드의 용액은 관례적인 크로마토그래피 방법, 예를 들어 겔 여과, 이온교환 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC, DEAE-셀룰로스에 걸친 크로마토그래피 또는 친화도 크로마토그래피에 의해 정제될 수 있다.
본 발명의 실행은 달리 표시되지 않는다면, 당업계의 기술 내에 있는 세포 생물학, 세포 배양학, 분자 생물학, 유전자이식 생물학, 미생물학, 재조합 DNA 및 면역학의 통상적인 기법을 사용할 것이다. 이러한 기법은 문헌에서 완전하게 설명된다. 예를 들어, 문헌[Molecular Cloning A Laboratory Manual, 2nd Ed., Sambrook et al ., ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press: (1989); Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Sambrook et al., ed., Cold Springs Harbor Laboratory, New York (1992), DNA Cloning, D. N. Glover ed., Volumes I and II (1985); Oligonucleotide Synthesis, M. J. Gait ed., (1984); Mullis et al. U.S. Pat. No: 4,683,195; Nucleic Acid Hybridization, B. D. Hames & S. J. Higgins eds. (1984); Transcription And Translation, B. D. Hames & S. J. Higgins eds. (1984); Culture Of Animal Cells, R. I. Freshney, Alan R. Liss, Inc., (1987); Immobilized Cells And Enzymes, IRL Press, (1986); B. Perbal, A Practical Guide To Molecular Cloning (1984); the treatise, Methods In Enzymology, Academic Press, Inc., N.Y.; Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells, J. H. Miller and M. P. Calos eds., Cold Spring Harbor Laboratory (1987); Methods In Enzymology, Vols. 154 and 155 (Wu et al . eds.); Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology, Mayer and Walker, eds., Academic Press, London (1987); Handbook Of Experimental Immunology, Volumes I-IV, D. M. Weir and C. C. Blackwell, eds., (1986); Manipulating the Mouse Embryo, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., (1986); 및 Ausubel et al ., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Baltimore, Maryland (1989)] 참조.
면역학의 일반적 원칙을 제시하는 표준 기준 작업은 문헌[Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, New York; Klein, J., Immunology: The Science of Self-Nonself Discrimination, John Wiley & Sons, New York (1982); Roitt, I., Brostoff, J. and Male D., Immunology, 6th ed. London: Mosby (2001); Abbas A., Abul, A. and Lichtman, A., Cellular and Molecular Immunology, Ed. 5, Elsevier Health Sciences Division (2005); 및 Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press (1988)]을 포함한다.
이제 본 발명을 상세하게 설명하면, 이는 단지 예시의 목적을 위해 본 명세서에 포함되고, 본 발명을 제한하는 것으로 의도되지 않는 다음의 실시예를 참조로 하여 더욱 명확하게 이해될 것이다. 본 명세서에서 언급되는 모든 특허 및 간행물은 그것의 전문이 참조로서 명확하게 포함된다.
실시예
실시예 1: 인자 VIII 염기 벡터, 클로닝 , 형질감염 및 발현의 구성 및 조작
일반적으로, 본 발명의 실행은, 달리 표시되지 않는다면, 화학, 생물물리학, 분자 생물학, 재조합 DNA 기법 및 전기영동법에서의 표준 기법의 통상적인 기법을 사용한다. 예를 들어, 문헌[Sambrook, Fritsch and Maniatis, Molecular Cloning: Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)] 참조. 인간 인자 VIII의 암호 서열(젠뱅크 등록 번호 NM_000132)(그것의 천연 신호 서열을 포함함)은 인간 간 폴리A RNA로부터 역전사-중합효소 연쇄 반응(RT-PCR)에 의해 얻어진다. FVIII의 거대한 크기 때문에, 암호 서열을 별개의 RT-PCR 반응으로부터의 몇몇 부문에서 얻었으며, 글루타민 1638(Q1638)에 대한 세린 743(S743)의 융합을 지니는 B 도메인 결실(B 도메인 deleted: BDD) FVIII 암호 영역을 함유하면서 전장 FVIII(서열번호 3)의 B 도메인으로부터 2682 bp를 제거하는 중간체 클로닝 벡터 내로 일련의 PCR 반응, 제한 분해 및 결찰을 통해 조립하였다. BDD FVIII 폴리펩타이드 암호 서열을 시작 Met 잔기를 암호화하는 ATG 코돈에 대해 바로 5'에 코작(Kozak) 번역 개시 서열(GCCGCCACC)의 도입 후 HindIII과 XhoI 사이의 발현 벡터 pcDNA4/myc-His C(캘리포니아주 칼스베드에 소재한 인비트로젠) 내로 결찰시켰다. 염기 벡터 내로 폴리펩타이드 암호화 서열의 삽입을 가능하게 하기 위해, 2개의 독특한 제한 부위(NheI 및 ClaI)를 BDD-FVIII의 얻어진 단백질 서열이 변화되지 않은 채로 남아있도록 표준 PCR 기반 돌연변이유발 방법에 의해 도입하였다. NheI 부위(Ala-Ser을 암호화함)를 뉴클레오타이드 위치 850-855에서 도입하였고, ClaI 부위(Ile-Asp을 암호화함)를 뉴클레오타이드 위치 4984-4989에서 도입하였다. 도 1(패널 a 내지 g)은 인자 VIII 작제물의 도메인 구조 및 도입된 NheI 및 ClaI 부위(단백질 서열, 서열번호 2; DNA 서열, 서열번호 3)의 위치를 나타낸다.
얻어진 플라스미드는 pBC0102를 지정하였다. 플라스미드 pBC102는 후속적으로 변형되어 인자 VIII 서열의 C-말단과 Myc 에피토프 태그(-Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu-) 사이의 그리고 Myc 에피토프 태그와 C-말단의 헥사-히스티딘 태그 사이의 Ala, Glu, Gly, Pro, Ser, 및 Thr 잔기를 포함하는 링커 펩타이드를 암호화하는 서열을 도입함으로써 플라스미드 pBC0114를 만들었다. 도 2는 염기 벡터 pBC0114의 위상(topology)을 나타낸다.
HEK293F 세포(캘리포니아주 칼스베드에 소재한 인비트로젠)를 폴리에틸렌이민(PEI, 펜실베니아주 워링턴에 소재한 폴리사이언스 인코포레이티드(Polysciences Inc)) 또는 LIPOFECTAMINE(등록상표) 형질감염 시약(캘리포니아주 칼스베드에 소재한 인비트로젠)을 사용하여 플라스미드 pBC0114로 형질감염시켰다. 일시적으로 형질감염된 세포를 293 프리 스타일(Free Style) 배지 또는 293 프리스타일과 CD OPTICHO(등록상표) 배지의 혼합물(캘리포니아주 칼스베드에 소재한 인비트로젠) 중에서 성장시켰다.
세포 배양 배지를 형질감염 후 3 내지 5일에 채취하였고 색원체 FVIII 활성 분석 및 FVIII ELISA에 의한 FVIII 발현에 대해 분석하였다. 재조합 FVIII을 함유하는 농축된 조건화된 배지를 초기 약동학적 연구를 위해 사용하였다.
실시예 2A: 잠재적 허용적 루프 부위 선택 - 방법 1
생체연산(biocomputational) 방법을 사용하여 인자 VIII에서 특이적 부위의 위치를 예측하였고, 이종성 모이어티의 삽입은 응혈촉진 활성의 상실을 야기하지 않았다. 구조적 분석을 바이오정보학을 위한 공동 연구소(Research Collaboratory for Structural Bioinformatics: RCSB; www.rcsb.org/pdb)에 의해 유지한 단백질 정보 은행에서 기탁된 X 레이 결정학적 좌표 3CDZ(Ngo et al ., Structure 16: 597-606 (2008)) 및 2R7E(Shen et al ., Blood 111:1240-1247 (2008))뿐만 아니라 Consorzio Interuniversitario per le Applicazioni di Supercalcolo per
Figure pct00002
e Riserca(CASPUR) 및 로마 유니버시티의 생화학 과학부(Department of Biochemical Sciences of the University of Rome)에 의해 유지된 단백질 모델 데이터 베이스(mi . caspur . it / PMDB / main . php)에 기탁된 분자의 동적 시뮬레이션 연구(Venkateswarlu, BMC Struct . Biol . 10:7 (2010))로부터 유래된 예측된 정교한 FVIII 구조에 대한 원자 좌표 PM0076106 상에서 수행하였다.
각 개개의 아미노산 잔기에 대한 접근가능한 표면적(accessible surface area: ASA)을 2R7E, 3CDZ, 및 PM0076106 데이터세트에 대한 ASAView 알고리즘(Ahmad S et al., BMC Bioinformatics 5: 51 (2004))을 사용함으로써 그리고 또한 2R7E 및 3CDZ 데이터세트에 대한 GETAREA 알고리즘(Fraczkiewicz R. & Braun W.,J. Comp . Chem., 19, 319-333 (1998))을 사용함으로써 계산하였다. 구조적 데이터 세트 2R7E, 3CDZ, 및 PM0076106에 대한 그래프 ASAView 결과를 도 3에 도시한다.
동일한 구조적 데이터 세트에 대해, GETAREA 알고리즘은 실질적으로 동일한 결과를 만들었다. 보통 내지 높게 예측된 ASA(0.5-1)의 영역을 문헌[Venkateswarlu et al .]에서 제시된 원자 위치 변동(atomic positional fluctuation: APF) 데이터와 비교함으로써 추가로 평가하였다. 0.5 이상의 ASA 값 및 40Å2의 APF 값을 지니는 것과 대응되는 서열 위치를 추가 분석을 위해 고려하였다.
이 얻어진 서브세트를 포함하는 잔기의 표면 노출을 그 다음에 PYMOL(등록상표) 분자적 시각화 소프트웨어(슈뢰딩거(
Figure pct00003
))를 사용함으로써 2R7E, 3CDZ, 및 PM0076106의 3-D 구조적 도시의 수동 관찰에 의해 평가하였다. 표면 노출되고 정해진 2차 구조적 구성요소, 예컨대 -시트 또는 -나선에 위치되지 않은 잔기를 추가 평가를 위해 고려하였다.
잔기의 얻어진 서브세트를 잔기(이것의 돌연변이는 A형 혈우병에 대한 원인이 되는 것으로 알려져 있음)에 대한 선형 아미노산 서열에서의 근접도를 기반으로 추가로 평가하였다(HAMSTeRS 데이터베이스; hadb.org.uk). 공지된 A형 혈우병 돌연변이 부위의 5개 잔기 내의 부위를 추가 고려사항으로부터 제거하였다.
이 분석에 기반하여, 이종성 모이어티의 삽입을 위해 부위를 선택하였고, 부위의 이런 그룹을 배취(Batch) 1로 지정하였다.
실시예 2B: 잠재적인 허용적 루프 부위 선택 - 방법 2
컴퓨터적 방법을 사용하여 인자 VIII에서의 특이적 부위의 위치를 예측하였고, 이종성 모이어티의 삽입은 응혈촉진 활성의 상실을 야기하지 않았다. 첫째로, 상이한 종에 걸친 인자 VIII의 서열 분석을 유전자위치정보검색(Basic Local Alignment Search Tool: BLAST; blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)을 사용하여 수행하였다. 10가지의 상이한 척추동물 종으로부터 전체 18개의 FVIII 폴리펩타이드 서열을 변이 분석을 위해 선택하였다. 사용한 종은 인간(Homo sapiens )(gi:31499, emb:CAA25619.1, 서열번호 63; gi:182803, gb:AAA52484.1, 서열번호 64; gi:182383, gb:AAA52420.1, 서열번호 65; gi:119593053, gb:EAW72647.1, 서열번호 78), 침팬지(판 트로글로디테스(Pan troglodytes))(gi:332862036, ref:XP_003317837.1, 서열번호 65), 긴팔원숭이(노마스커스 류코게니스(Nomascus leucogenys))(gi:332260614, ref:XP_003279379.1, 서열번호 66), 토끼(오릭토라구스 쿠니쿨루스(Oryctolagus cuniculus))(gi:284005234, ref:NP_001164742.1, 서열번호 69), 개(카니스 루퍼스 과(Canis lupus familiaris))(gi:50978978, ref:NP_001003212.1, 서열번호 70), 소(보스 타우루스(Bos taurus))(gi:296471126, gb:DAA13241.1, 서열번호 71; gi:224458398, ref:NP_001138980.1, 서열번호 72), 양(오비스 아리에스(Ovis aries))(gi:289191358, ref:NP_001166021.1, 서열번호 75), 마우스(무스 무스쿨루스(Mus musculus))(gi:238624182, ref:NP_001154845.1, 서열번호 73; gi:238624180, ref:NP_032003.2, 서열번호 74; gi:238624184, ref:NP_001154846.1, 서열번호 76), 돼지(서스 스크로파(Sus scrofa))(gi:47523422, ref:NP_999332.1, 서열번호 77), 래트(래투스 노르베기쿠스(Rattus norvegicus))(gi:34328534, ref:NP_899160.1, 서열번호 78; gi:316995315, gb:ADU79113.1, 서열번호 79; gi:316995313, gb:ADU79112.1, 서열번호 80)였다. 3 초과의(≥4) 상이한 아미노산을 지니는 부위를 과변이로 고려하였다.
분자 동역학(Molecular Dynamics: MD) 분석을 바이오정보학을 위한 공동 연구소(Research Collaboratory for Structural Bioinformatics: RCSB; www.rcsb.org/pdb)에 의해 유지된 단백질 정보 은행에 기탁된 X 레이 결정학적 구조 2R7E(Shen et al ., Blood 111: 1240-1247(2008))를 사용하여 수행하였다. NAMD(www.ks.uiuc.edu/Research/namd/)를 사용하여 43717개의 명백한 물 분자의 존재에서 MD 시뮬레이션을 수행하였고, 1나노초 시뮬레이션 동안 1000장의 순간촬영사진을 수집하였다. 각 잔기의 C의 평균 제곱근 거리(Root Mean Square Distance: RMSD)를 VMD(www.ks.uiuc.edu/Research/vmd/)에서 수집한 순간촬영사진을 사용하여 계산하여 잔기 가요성을 추정하였고, 4Å 초과의 RMSD 값을 지니는 잔기를 고도로 가요성인 것으로 지정하였다.
이들 두 방법을 조합함으로써, 과변이와 고도로 가요성 둘 다로서 지정된 표면 부위를 추가 평가를 위해 고려하였다. 이들 잠재적인 부위 중에서, 방법 1(상기 실시예 2A)에 의해 확인한 부위의 선형 폴리펩타이드 서열 내 5개 잔기 내에 있는 것을 추가 평가로부터 제외하였다. 잔기의 얻어진 서브세트를 잔기(이것의 돌연변이는 A형 혈우병에 대한 원인이 되는 것으로 알려져 있음)에 대한 선형 아미노산 서열에서의 근접도를 기반으로 추가로 평가하였다(HAMSTeRS 데이터베이스; hadb.org.uk). 공지된 A형 혈우병 돌연변이 부위의 5개 잔기 내의 부위를 추가 고려사항으로부터 제거하였다.
이 분석에 기반하여, 이종성 모이어티의 삽입을 위해 부위를 선택하였고, 부위의 이런 그룹을 배취 2로 지정하였다.
실시예 3: XTEN AE42 -4 삽입
FVIII이 보조인자 기능의 손실 없이 개개의 구조적 도메인 내에서 가변 길이의 펩타이드 및 조성물의 삽입을 용인할 수 있다는 것을 입증하기 위해, 우선 42 아미노산 길이의 XTEN 펩타이드(XTEN AE42-4, 서열번호 13)를 표준 재조합 DNA 기법에 의해 삽입하였다. XTEN AE42-4 DNA 서열(서열번호 14)은 아미노산 Gly(G), Ala(A), Pro(P), Ser(S), Thr(T), 및 Glu(E)를 암호화하며, 5' AscI 제한 부위(ggcgcgcc) 및 3'XhoI 부위(ctcgag)에 측접하고, 이 중 어떤 것도 염기 벡터 pBC0114의 서열 내에 존재하지 않는다.
XTEN AE42-4 DNA 서열을 화학적으로 합성하였고, 얻어진 DNA 작제물이 FVIII 융합 단백질을 암호화하도록 삽입하였으며, 이때 XTEN AE42-4 단백질 서열은 부위 선택에서 표시된 잔기 바로 뒤에 삽입된다.
따라서, 잔기 X가 삽입 부위를 지정하고, 잔기 Z가 천연 FVIII 폴리펩타이드 서열에서 다음 잔기를 지정하는 경우, XTEN AE42의 삽입으로부터 초래되는 폴리펩타이드는 하기 서열을 함유한다:
X-GAPGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGSEPATSGSETPASS-Z
X-(서열번호 13)-Z
추가로, 이 위치에서 대응되는 DNA서열의 삽입은 또한 염기 벡터에서 독특하고 후속적으로 개재 서열을 절단하며 더 긴 XTEN 서열, 상이한 조성 및 서열의 XTEN 서열 및 관련없는 이종성 서열을 도입하기 위해 사용될 수 있는 XTEN 암호화 서열에 측접하는 AscI 및 XhoI 제한 부위를 도입한다.
FVIII 서열에서 전체 16개의 상이한 부위를 실시예 2A에서 상기 기재한 방법에 기반하여 XTEN AE42 삽입을 위해 선택하였고, 이들을 배취 1로 지정하였다. 추가적인 21개 부위를 실시예 2B에서 상기 기재한 방법에 기반하여 XTEN AE42 삽입을 위해 선택하였고, 이들을 배취 2로 지정하였다. 이들 배취 1 및 배취 2의 위치를 표 I에서 요약한다.
종합적으로, 배취 1 및 배취 2 부위는 A1 도메인에서 12개 부위, A2 도메인에서 7개 부위, A3 도메인에서 10개 부위, C1 도메인에서 4개 부위, 및 C2 도메인에서 3개 부위에서 나타난다. FVIII의 3-D 구조에서 배취 1 및 2 부위의 위치를 도 4에서 도시한다.
(표 I)
Figure pct00004
Figure pct00005
FVIII - XTEN 변이체의 발현
AE42-4 XTEN 삽입을 지니는 FVIII 변이체를 폴리에틸렌이민(PEI, 펜실베니아주 워링턴에 소재한 폴리사이언스 인코포레이티드) 또는 리포펙타민(LIPOFECTAMINE)(등록상표) 형질감염 시약(캘리포니아주 칼스베드에 소재한 인비트로젠)을 사용하여 HEK293F 세포(캘리포니아주 칼스베드에 소재한 인비트로젠) 내로 형질감염시켰다. 일시적으로 형질감염된 세포를 293 프리 스타일 배지 또는 293 프리스타일과 CD OPTICHO(등록상표) 배지(캘리포니아주 칼스베드에 소재한 인비트로젠)의 혼합물에서 성장시켰고, 재조합 인자 VIII 단백질을 FVIII 발현을 위한 FVIII 활성 및 ELISA(효소 결합 면역흡착 분석)을 위해 색원체 분석에 의해 분석하였다.
시험관내 분석
XTEN AE42-4 삽입에 대한 FVIII 용인성을 평가하기 위해, FVIII-XTEN 세포 배양물로부터의 배양 배지 샘플 내 FVIII 활성을 FVIII 색원체 분석을 사용하여 분석하였다. 항원 발현 수준을 FVIII-HC(FVIII 중쇄) 및 FVIII-LC(FVIII 경쇄) ELISA에 의해 분석하였다.
색원체 분석에 의한 FVIII 활성 측정
FVIII 활성을 다이아파마(DiaPharma)(로트# N089019)로부터의 코아테스트(COATEST)(등록상표) SP FVIII를 사용하여 측정하였고, 모든 인큐베이션을 진탕하면서 37℃ 플레이트 히터 상에서 수행하였다. 6개 웰 플레이트로부터의 FVIII-XTEN AE42-4 변이체의 일시적 형질감염 배지로부터 채취한 세포 배양물을 1x FVIII 코아테스트(등록상표) 완충제를 사용하여 원하는 FVIII 활성 범위로 희석시켰다. FVIII 표준을 시험 샘플로서 배양물 배지 농도를 매칭시키면서 모의 형질감염 배지를 함유하는 1x FVIII 코아테스트(등록상표) 완충제 중에서 제조하였다. 재조합 인자 VIII(rFVIII) 표준의 범위는 100 mIU/㎖ 내지 0.78 mIU/㎖였다. 표준, 희석시킨 세포 배양물 샘플 및 풀링한 정상 인간 혈장 분석 대조군을 이뮤론(IMMULON)(등록상표) 2HB 96-웰 플레이트에 2회 첨가하였다(25㎕/웰).
갓 제조한 IXa/FX/인지질 믹스(50㎕), 25㎕의 25mM CaCl2 및 50㎕의 FXa 기질을 각 웰에 순차적으로 첨가하였고, 각 첨가 사이에 5분 인큐베이션시켰다. 기질과 함께 인큐베이션시킨 후, 25㎕의 20% 아세트산을 첨가하여 색 반응을 종결시켰고, 405 ㎚에서의 흡광도를 스펙트라맥스(SPECTRAMAX)(등록상표) 플러스(몰레큘러 디바이스(Molecular Devices))기기로 측정하였다.
소프트맥스(SoftMax)(등록상표) 프로 소프트웨어(버전 5.2)를 사용하여 데이터 분석을 수행하였다. 최저 정량화 수준(Lowest Level of Quantification: LLOQ)은 39 mIU/㎖였다.
FVIII - HC 및 FVIII - LC ELISA 에 의한 발현 측정
변이체의 발현을 ELISA를 사용하여 정량화하였다. FVIII의 A1 및 A2 도메인에서 XTEN 삽입에 대응되는 DNA작제물의 FVIII 항원 발현 수준을 FVIII-LC ELISA에 의해 분석하였다. FVIII의 A3, C1 및 C2 도메인에서 XTEN 삽입에 대응되는 DNA 작제물의 FVIII 항원 발현 수준을 FVIII-HC ELISA에 의해 분석하였다.
채취 후 세포 배양 배지 내 FVIII-XTEN 항원을 FVIII-LC ELISA에 대해 GMA011 항체(그린 마운틴 안티바디즈(Green Mountain Antibodies))에 의해 또는 FVIII-HC ELISA에 대해 GMA016 항체(그린 마운틴 안티바디즈)에 의해 포획하였다. 이뮤론(IMMULON)(등록상표) 2HB 96-웰 플레이트를 밤새 4℃에서 인큐베이션에 의해 항-FVIII 항체(2 g/㎖)의 100 l/웰로 코팅하였다. 그 다음에 플레이트를 TWEEN-20(등록상표)(PBST)과 함께 인산염 완충 식염수로 4회 세척하였고, 실온에서 1시간 동안 차단 완충제(10% 열 불활성화된 말 혈청을 지니는 PBST)로 차단시켰다.
6-웰 플레이트로부터의 FVIII-XTEN 변이체의 일시적 형질감염 배지로부터의 세포 배양물 채취를 1x 차단 완충제를 사용하여 원하는 FVIII 항원 범위로 희석시켰다. 시험 샘플로서 배지 농도를 매칭시키면서 모의 형질감염 배지를 함유하는 1x FVIII 차단 완충제 중에서 FVIII 표준을 제조하였다. rFVIII 표준의 범위는 50 ng/㎖ 내지 0.39 ng/㎖였다.
표준, 희석시킨 세포 배양물 샘플 및 풀링한 정상 인간 혈장 분석 대조군을 이뮤론(IMMULON)(등록상표) 2HB 96-웰 플레이트에 2회 첨가하였고(100㎕/웰), 37℃에서 2시간 동안 인큐베이션시켰다. PBST로 4회 세척한 후, 100 l의 HRP-양 항-hFVIII 항체(어피니티 바이오로지컬스(Affinity Biologicals), F8C-EIC-D)를 각 웰에 첨가하였고, 플레이트를 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션시켰다. PBST로 다른 4회 세척 후, 100 l의 TMB 초민감 기질(Super Sensitive Substrate)(BioFX)을 각 웰에 첨가한 다음, 5 내지 10분 발색 현상이 나타났다. 색 반응을 종결시키기 위해, 50㎕의 H2SO4를 각 웰에 첨가하였고, 450 ㎚에서의 흡광도를 스펙트라맥스(등록상표) 플러스(몰레큘러 디바이스) 기기로 측정하였다.
소프트맥스(등록상표) 프로 소프트웨어(버전 5.4)를 사용하여 데이터 분석을 수행하였다. 최저 정량화 수준(LLOQ)은 0.0039 g/㎖였다. 결과를 표 II에 나타낸다.
(표 II)
Figure pct00006
Figure pct00007
재조합 단백질의 응혈촉진 활성, 또는 숙주 세포에서 발현되는 재조합 단백질의 능력을 제거하는 일 없이 이종성 모이어티가 삽입된 허용적 부위를 FVIII의 각각 3개의 A 도메인에서의 루프 내에서 클러스터링하였다. 도 8은 도메인 A1, A2 및 A3 상에서 FVIII 활성을 나타낸 재조합 FVIII 단백질에서 삽입 부위의 위치를 나타낸다. 도 5는 FVIII 활성을 나타낸 재조합 FVIII 단백질에서 삽입 부위의 위치를 도시하는 구조적 표현을 나타낸다.
허용적 부위는 용매 노출된, 고도로 가요성인 표면 루프(허용적 루프)에서 클러스터링된다. A1 도메인 루프를 성숙 인간 FVIII(서열번호 1)의 서열에서의 대략 아미노산 위치 15 내지 45, 및 201 내지 232에 각각 대응되는 영역에서 위치시켰다. A2 도메인 루프를 성숙 인간 FVIII(서열번호 1)의 서열에서의 대략 아미노산 위치 395 내지 421, 및 577 내지 635에 각각 대응되는 영역에서 위치시켰다. A3 도메인 루프를 성숙 인간 FVIII(서열번호 1)의 서열에서의 대략 아미노산 위치 1705 내지 1732, 및 1884 내지 1917에 각각 대응되는 영역에서 위치시켰다. 도 9a 및 도 9b는 FVIII의 3차원 구조에서 2차 구조 구성요소에 대한 허용적 루프의 위치를 나타낸다.
실시예 4: XTEN 144 삽입
상기 제시한 예비 데이터의 분석(실시예 3B)은 이종성 폴리펩타이드 서열의 삽입을 수용할 수 있는 FVIII A 도메인의 선형 폴리펩타이드 서열 및 3-D 구조 내에서 정해진 영역의 존재를 시사하였다. 이 가설을 시험하고 추가로 정의하기 위해, FVIII 활성의 상실 없이 이종성 폴리펩타이드의 삽입을 수용할 수 있는 추정적 영역의 경계, 배취 1 또는 2 중 하나에 존재하지 않는 23개의 추가적인 삽입 부위를 선택하였고, 배취 3으로 지정하였다.
배취 3 작제물을 아미노산 잔기 Gly(G), Ala(A), Pro(P), Ser(S), Thr(T), 및 Glu(E)를 포함하는 144 잔기 XTEN AE 폴리펩타이드, 아미노산 잔기 Gly(G), Ala (A), Pro(P), Ser(S), 및 Thr(T)을 포함하는 144 잔기 XTEN AG 폴리펩타이드의 삽입에 의해 만들었다. 144 잔기 AE 폴리펩타이드의 5개 상이한 버전을 만들었고, XTEN-AE144-2A(서열번호 15), XTEN-AE144-3B(서열번호 17), XTEN-AE144-4A(서열번호 19), XTEN-AE144-5A(서열번호 21), XTEN-AE144-6B(서열번호 23)으로 지정하였다. 144 잔기 폴리펩타이드의 5개 상이한 버전을 만들었고, XTEN-AG144-1(서열번호 25), XTEN-AG144-A(서열번호 27), XTEN-AG144-B(서열번호 29), XTEN-AG144-C(서열번호 31), 및 XTEN-AG144-F(서열번호 33)을 지정하였다.
DNA 서열을 암호화하는 144 잔기 XTEN을 삽입 부위의 측면 중 하나 상의 염기 벡터 내에서 가장 가까운 독특한 제한 부위로 확장되는 DNA 세그먼트(GENEART(등록상표) 유전자 합성, 캘리포니아주 칼스베드에 소재한 인비트로젠)의 화학적 합성에 의해 도입하였다.
XTEN 144 펩타이드에 대응되는 DNA 서열을 얻어진 DNA 작제물이 FVIII 융합 단백질을 암호화하도록 삽입하였고, 이때 XTEN 144 단백질 서열은 부위 선택에서 표시된 잔기 바로 뒤에 삽입되며, AscI 및 XhoI 부위에 측접된다.
이들 부위에 추가로, XTEN AE42 폴리펩타이드의 삽입이 FVIII 응혈촉진 활성을 없애지 않은 배취 1 및 2로부터의 해당 부위를 제한 효소 AscI 및 XhoI를 이용하는 AE42 폴리펩타이드 암호화 DNA 세그먼트의 절단, 및 동일 부위에서 XTEN AE144 및 XTEN AG144 암호 서열의 도입에 의해 변형시켰다. 이들 배취 1, 배취 2 및 배취 삽입 부위의 위치를 표 III에 요약한다. 도 6은 XTEN 144 삽입 부위의 위치를 나타내는 FVIII의 구조적 표현을 제공한다.
(표 III)
Figure pct00008
Figure pct00009
FVIII - XTEN 144 변이체의 발현
XTEN 144 삽입을 지니는 FVIII 변이체를 폴리에틸렌이민(PEI, 펜실베니아주 워링턴에 소재한 폴리사이언스 인코포레이티드(Polysciences Inc.)) 또는 리포펙타민(등록상표) 형질감염 시약(캘리포니아주 칼스베드에 소재한 인비트로젠)을 사용하여 HEK293F 세포(캘리포니아주 칼스베드에 소재한 인비트로젠) 내로 형질감염시켰다. 일시적으로 형질감염된 세포를 293 프리 스타일 배지 또는 293 프리 스타일과 CD OPTICHO(등록상표) 배지의 혼합물(캘리포니아주 칼스베드에 소재한 인비트로젠)에서 성장시켰다. 세포 배양 배지를 형질감염 후 3 내지 5일에 채취하였고, 실시예 3에서 논의한 바와 같이 색원체 FVIII 활성 분석 및 FVIII ELISA에 의해 FVIII 발현에 대해 분석하였다.
일시적 형질감염으로부터의 세포 배양 배지를 센트리콘(CENTRICON)(등록상표) 스핀 칼럼(30kDa MW 컷 오프)에서 10배 농축시켰다. 그 다음에 농축시킨 재료를 급속 냉동시켰고, 장래의 시험관내 분석 및 생체내 PK 연구를 위해 -80℃에서 저장하였다.
시험관내 분석
삽입에 대한 FVIII 용인성을 평가하기 위해, 세포 배양물로부터의 배양 배지 샘플 내 FVIII 활성을 FVIII 색원체 분석을 사용하여 분석하였다. 항원 발현 수준을 FVIII-HC(FVIII 중쇄) 및 FVIII-LC(FVIII 경쇄) ELISA에 의해 분석하였다(실시예 3 참조).
색원체 분석에 의한 FVIII 활성 측정 및 FVIII - HC 및 FVIII - LC ELISA 에 의한 발현 측정
실시예 3에 기재한 바와 같이 색원체 및 ELISA 분석을 수행하였다. 얻어진 결과를 표 IV에 요약한다.
(표 IV)
Figure pct00010
Figure pct00011
재조합 단백질의 응혈촉진 활성, 또는 숙주 세포에서 발현되는 재조합 단백질의 능력을 제거하는 일 없이 이종성 모이어티가 삽입된 허용적 부위를 FVIII의 각각 3개의 A 도메인에서의 루프 내에서 클러스터링하였다. 삽입된 더 짧은 이종성 모이어티를 용인하는 동일한 허용적 루프 영역은 더 긴 이종성 서열의 삽입을 용인하는 것을 발견하였다. 도 10은 얻어진 재조합 FVIII 단백질에서 FVIII 활성을 나타낸 도메인 A1, A2 및 A3 내의 XTEN 144 삽입 부위의 위치를 나타낸다. 도 7은 FVIII 활성을 나타낸 재조합 FVIII 단백질에서 삽입 부위의 위치를 도시하는 구조적 표현을 나타낸다.
이들 관찰은 FVIII의 각각의 A 도메인 내에서 2개의 영역이 FVIII 보조인자 활성의 상실 없이 이종성 폴리펩타이드의 삽입을 수용할 수 있다는 것을 나타낸다. 이들 소위 허용적 루프의 구조적 도시(도 11 및 도 12)는 그것들이 A 도메인의 각각에서 구조적으로 유사한 위치를 점유하고 FVIII 분자의 일 면으로부터 돌출된다는 것을 입증한다. 확인된 허용적 루프는 도 9a 및 도 9b에서 나타낸 바와 같이 A1, A2 및 A3 도메인의 3-차원 구조에서 베타 가닥 사이에 위치된 고도로 가요성인 루프에 대응된다.
FVIII 반감기 연장에 대한 XTEN 144 삽입의 생체내 평가
HemA 마우스에서 세포 배양 배지 PK
HemA 마우스(8 내지 12주령)에 100 내지 300 IU/㎏(n=3/그룹)에서 세포 배양 농축물을 투약하였다. 동일한 세트의 마우스로부터의 안와 뒤 혈액 수집에 의해 투약 후 5분, 24시간 및 48시간에 혈장 샘플을 수집하였다. 혈장 샘플 및 세포 배양 농축물의 FVIII 활성을 앞서 기재한 바와 같은 FVIII 색원체 분석에 의해 분석하였다. FVIII XTEN 144 변이체의 PK 프로파일을 윈논린(WINNONLIN)(등록상표)(캘리포니아주 마운틴 뷰에 소재한 파르사이트 코포레이션(Pharsight Corp.))을 사용하여 분석하였다.
XTEN 144 도메인 내 삽입에 의한 2개의 FVIII 변이체의 PK 프로파일(pSD0050 및 pSD0062, 표 III 참조)을 HemA 마우스(도 13, 패널 A; 및 표 V 참조)에서 세포 배양 PK에 의한 B 도메인-결실(BBB)-FVIII과 비교하였다. 3회 시험한 FVIII 분자에 대해 비교가능한 초기 회복을 도 13, 패널 A에서 나타낸 바와 같이 관찰하였다. FVIII XTEN 144 변이체는 둘 다 야생형 BDD-FVIII과 비교할 때 2배 더 긴 반감기를 나타내었다.
FVIII - VWF DKO 마우스에서 세포 배양 배지 PK
8 내지 12주령의 수컷 FVIII/VWF 이중 녹아웃(DKO) 마우스를 100 내지 300 IU/㎏(n=3/그룹)에서 재조합 BDD-FVIII, pSD0050 또는 pSD062 중 하나를 함유하는 세포 배양 농축물의 단일 정맥내 투여로 처리하였다. 주입 후 5분, 8시간 및 16시간에, 동일한 세트의 마우스로부터의 안와 뒤 출혈을 통해 혈액 샘플을 수집하였다. 혈장 샘플 및 세포 배양 농축물의 FVIII 활성을 FVIII 색원체 분석에 의해 분석하였고, rBDD FVIII 및 FVIII XTEN 144 변이체의 PK 프로파일을 윈논린(등록상표) 프로그램을 사용하여 분석하였다.
2개의 FVIII XTEN 144 도메인내 삽입 변이체 pSD0050 및 pSD0062 FVIII/VWF DKO 마우스에서의 rBDD-FVIII의 PK 프로파일을 도 13, 패널 B 및 표 V에서 나타낸다. VWF 보호의 상실 때문에, rBDD-FVIII은 단지 15분의 혈장 반감기를 가졌다. 그러나 2개의 XTEN 삽입 변이체의 경우에, 반감기는 각각 3.15시간 및 3.83시간으로 연장되었다. 실험 조건 하에서, 연구 결과는 이들 허용적 루프에서 144 아미노산 잔기를 지니는 XTEN의 도메인내 삽입이 FVIII 활성을 보존할 뿐만 아니라 FVIII 반감기의 연장을 제공한다는 것을 입증한다.
(표 V)
Figure pct00012
실시예 5: 다중 XTEN 삽입
FVIII이 보조인자 기능의 손실 없이 허용적 부위에서 42 및 144 아미노산 길이 XTEN 서열의 삽입을 용인할 수 있다는 것을 입증한 후, 2개의 XTEN 펩타이드를 함유하는 변이체를 설계하였다. 이들 FVIII 변이체는 2개의 XTEN 144 삽입, 2개의 XTEN 288 삽입, 또는 하나의 XTEN 144 및 하나의 XTEN 288 삽입을 함유하였다. FVIII 내 다수 위치에서 삽입을 위해 10개의 144 아미노산 잔기-길이 XTEN 서열을 선택하였다: XTEN-AE144-2A(서열번호 15), XTEN-AE144-3B(서열번호 17), XTEN-AE144-4A(서열번호 19), XTEN-AE144-5A(서열번호 21), XTEN-AE144-6B(서열번호 23), XTEN-AG144-1(서열번호 25), XTEN-AG144-A(서열번호 27), XTEN-AG144-B(서열번호 29), XTEN-AG144-C(서열번호 31), 및 XTEN-AG144-F(서열번호 33). FVIII 내 다수 위치에서 삽입을 위해 3개의 상이한 288 아미노산 잔기-길이 XTEN 서열을 선택하였다: XTEN-AE288_1(서열번호 45), XTEN-AG228-2(서열번호 46), 및 XTEN-AG228-1(서열번호 47). 상기 실시예 2A 및 3B에서 기재한 바와 같이 삽입 부위를 선택하였다. 삽입 부위의 위치, 삽입된 XTEN 및 FVIII 변이체에서 도입된 추가적인 돌연변이를 표 IV에 요약한다.
XTEN 144 및 288 펩타이드에 대응되는 DNA 서열을 얻어진 DNA 작제물이 FVIII 융합 단백질을 암호화하도록 삽입하였고, 이때 XTEN 144 단백질 서열은 부위 선택에서 표시된 잔기 바로 뒤에 삽입된다.
FVIII - XTEN 이중 변이체의 발현
XTEN 144 및 XTEN 288 삽입을 지니는 FVIII 변이체를 폴리에틸렌이민(PEI, 펜실베니아주 워링턴에 소재한 폴리사이언스 인코포레이티드) 또는 리포펙타민(등록상표) 형질감염 시약(캘리포니아주 칼스베드에 소재한 인비트로젠)을 사용하여 HEK293F 세포(캘리포니아주 칼스베드에 소재한 인비트로젠) 내로 형질감염시켰다. 일시적으로 형질감염된 세포를 293 프리 스타일 배지 또는 293 프리 스타일과 CD OPTICHO(등록상표) 배지의 혼합물(캘리포니아주 칼스베드에 소재한 인비트로젠)에서 성장시켰다. 형질감염 후 3 내지 5일에 세포 배양 배지를 채취하였고, 색원체 FVIII 활성 분석 및 FVIII ELISA에 의해 FVIII 발현에 대해 분석하였다.
일시적 형질감염으로부터의 FVIII-XTEN 이중 변이체 세포 배양 배지를 센트리콘(등록상표) 스핀 컬럼(30 kDa MW 컷오프)에서 10배 농축시켰다. 그 다음에 농축시킨 물질을 급속 냉동시켰고, 장래의 시험관내 분석 및 생체내 PK 연구를 위해 -80℃에서 저장하였다.
시험관내 분석
XTEN 144 삽입에 대한 FVIII 용인성을 평가하기 위해, FVIII-XTEN 세포 배양물로부터의 배양 배지 샘플 내 FVIII 활성을 앞서 기재한 바와 같은 FVIII 색원체 분석을 사용하여 분석하였다. 항원 발현 수준을 FVIII-HC (FVIII 중쇄) 및 FVIII-LC (FVIII 경쇄) ELISA에 의해 분석할 것이다.
색원체 분석에 의한 FVIII - XTEN 변이체 활성 측정
색원체 분석을 실시예 3에 기재한 바와 같이 수행하였다. 얻은 결과를 표 VI에서 요약한다.
(표 VI)
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
"XTEN 삽입 1" 및 "XTEN 삽입 2" 열은 삽입 위치 및 유형을 나타내며, 예를 들어, "1910_AG144_C"는 성숙 인간 FVIII의 아미노산 위치 1910에서 XTEN AG144-C의 삽입에 대응된다. "추가적인 변형" 열은 추가적인 돌연변이의 위치 및 유형을 나타내며, 예를 들어, "R1648A"는 성숙 인간 FVIII의 아미노산 위치 1648에서 아르기닌의 알라닌으로 돌연변이를 나타내었다.
FVIII - HC 및 FVIII - LC ELISA 에 의한 FVIII - XTEN 변이체 발현 측정
ELISA 분석을 실시예 3에 기재한 바와 같이 수행한다.
FVIII 반감기 연장에 대한 다수 XTEN 삽입의 생체내 평가
HemA 마우스에서 세포 배양 배지 PK
HemA 마우스(8 내지 12주령)에 100 내지 300 IU/㎏(n=3/그룹)에서 세포 배양 농축물로 투약하였다. 투약 후 5분, 24시간 및 48시간에, 동일한 세트의 마우스로부터의 안와 뒤 혈액 수집에 의해 혈액 샘플을 수집하였다. 혈장 샘플 및 세포 배양 농축물의 FVIII 활성을 앞서 기재한 바와 같은 FVIII 색원체 분석에 의해 분석하였다. 2개의 XTEN 삽입을 지니는 FVIII 변이체의 PK 프로파일을 윈논린(등록상표)(캘리포니아주 마운틴뷰에 소재한 파르사이트 코포레이션)을 사용하여 분석하였다.
2개의 XTEN 도메인 내 삽입을 지니는 FVIII의 PK 프로파일을 HemA 마우스에서 세포 배양 PK에 의한 B 도메인-결실(BBB)-FVIII과 비교한다.
FVIII - VWF DKO 마우스에서의 세포 배양 배지 PK
FVIII-VWF DKO 마우스(8 내지 12주령)에 ~100 IU/㎏(n=3/그룹)에서 세포 배양 농축물로 투약한다. 투약 후 5분에 혈액 샘플을 수집하여 초기 회복을 평가하였고, 반감기 평가를 위해 동일한 세트의 마우스로부터의 다른 2회 혈액 수집을 수행한다(투약 후 96시간까지). 혈장 샘플 및 세포 배양 농축물의 FVIII 활성을 앞서 기재한 바와 같이 FVIII 색원체 분석에 의해 분석한다. 2개의 XTEN 삽입을 지니는 FVIII 변이체의 PK 프로파일을 윈논린(등록상표)(캘리포니아주 마운틴뷰에 소재한 파르사이트 코포레이션)을 사용하여 분석한다. 2개의 XTEN 도메인 내 삽입을 지니는 FVIII의 PK 프로파일을 FVIII-VWF DKO 마우스에서 세포 배양 PK에 의한 B 도메인-결실(BBB)-FVIII과 비교한다.
실시예 6: GFP 삽입
녹색 형광 단백질(GFP)은 고유한 형광 특성 및 빽빽한 3-D 구조를 지니는 ~30 kDa 단백질이며, 이때 N- 및 C-말단은 근접해 있다(Shimomura et al ., J. Cell Comp. Physiol. 59:223-39 (1962); Ormo et al ., Science 273:1392-95 (1996); GFP의 결정 구조는 단백질 정보 은행에서 식별자 PDB ID:1EMA 하에서 입수가능함). 별개의 스펙트럼 특성 및 안정성 프로파일을 나타내는 GFP(예를 들어, 서열번호 48 참조) 또는 이의 변이체(Davidson and Campbell, Nat. Methods 6:713-717 (2009); Rizzo et al . (2010). Fluorescent protein tracking and detection. In Live Cell Imaging: A Laboratory Manual (ed. Goldman, R. D., Spector, D. L. and Swedlow, J. R.), pp. 3-34. Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor Laboratory Press)를 5' AscI 제한 부위, GFP 또는 이의 변이체의 암호 서열, 및 삽입을 가능하게 하는 3' XhoI 제한 부위를 포함하는 DNA 세그먼트를 사용하는 표준 분자 생물학 기법에 의해 FVIII 분자의 a3 세그먼트 및 허용적 루프 내에 도입한다. 얻어진 재조합 FVIII 단백질을 응혈촉진 활성을 위해 시험하고, 당업계에 공지된 방법에 의해 재조합 FVIII 단백질의 위치를 시각화하기 위해 사용할 수 있다.
GFP는 표 I 또는 III에 개시된 위치 중 적어도 하나, 허용적 루프 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 중 적어도 하나에서의 다른 적합한 삽입 부위 내로, 또는 a3 영역 내로, 또는 둘 다에 삽입된다. GFP 삽입을 지니는 FVIII 변이체를 상기 기재한 바와 같이 형질감염시키고 HEK293F 세포 내로 일시적으로 발현시킨다. 일시적 형질감염으로부터의 세포배양 배지를 센트리콘(등록상표) 스핀 칼럼(30 kDa MW 컷오프)에서 10배 농축시킨다. 그 다음에 농축시킨 물질을 급속 냉동시켰고, 장래의 시험관내 분석 및 생체내 PK 연구를 위해 -80℃에서 저장하였다. GFP를 포함하는 FVIII 변이체를 발현시키는 세포 배양물로부터 배양 배지 샘플에서 FVIII 활성을 FVIII 색원체 분석을 사용하여 분석한다. 항원 발현 수준을 FVIII-HC(FVIII 중쇄) 및 FVIII-LC(FVIII 경쇄) ELISA에 의해 분석한다. GFP를 포함하는 FVIII 변이체의 PK를 상기 기재한 바와 같은 HemA 마우스 및 FVIII-VWF DKO에서 분석한다.
얻어진 재조합 FVIII 단백질을 또한 그것의 형광 특성을 특성규명하기 위해 시험하였고, 당업계에 공지된 방법, 예를 들어 유세포 분석 또는 현미경, 예컨대 공초점 현미경을 사용하여 재조합 FVIII 단백질의 위치를 시각화하기 위해 사용하였다.
실시예 7: 반감기를 증가시키는 이종성 모이어티의 삽입
실시예 7.1 - IgG 의 Fc 영역의 삽입
Fc 영역이 단백질 중 하나의 C-말단에 융합될 때, IgG의 Fc 영역의 융합은 응고 인자 IX과 VIII 둘 다에 대해 순환 반감기에서의 증가를 부여한다(Dumont et al ., Blood (2012), 인쇄 전 온라인 공개됨, doi: 10.1182/blood-2011-08-367813; Peters et al., Blood 115:2056-64 (2010); Shapiro et al ., Blood 119:666-72 (2012)). 대안의 접근으로서, 가요성 글라이신- 및 세린-함유 링커에 의해 분리된 동일한 Fc 폴리펩타이드 서열을 포함하는 단쇄 Fc(scFc) 영역(예를 들어, 서열번호 49)을 표준 분자 생물학 기법에 의해 FVIII 분자의 허용저거 루프 내에 도입한다. 이 scFc 영역은 FVIII 분의 구조적 뒤틀림 없이 허용적 루프 내로 삽입을 가능하게 하는 말단의 가요성 링커 서열을 추가적으로 포함할 수 있다. 삽입되는 DNA 세그먼트는 5'AscI 제한 부위, scFc의 암호 서열, 및 허용적 루프 부위 내로 수월한 삽입을 가능하게 하는 3'XhoI 제한 부위를 포함한다. 얻어진 재조합 FVIII 단백질을 응혈촉진 활성에 대해 그리고 연장된 반감기에 대해 시험한다.
Fc 서열을 표 I 또는 III에서 개시된 위치 중 적어도 하나, 허용적 루프 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 중 적어도 하나 내의 다른 적합한 삽입 부위 내로, 또는 a3 영역 내로, 또는 둘 다에 삽입한다. Fc 삽입을 지니는 FVIII 변이체를 상기 기재한 바와 같이 형질감염시키고 HEK293F 세포로 일시적으로 발현시킨다. 일시적 형질감염으로부터의 세포배양 배지를 센트리콘(등록상표) 스핀 칼럼(30 kDa MW 컷오프)에서 10배 농축시킨다. 그 다음에 농축시킨 물질을 급속 냉동시켰고, 장래의 시험관내 분석 및 생체내 PK 연구를 위해 -80℃에서 저장하였다. Fc 이종성 모이어티를 포함하는 FVIII 변이체를 발현시키는 세포 배양물로부터 배양 배지 샘플에서 FVIII 활성을 FVIII 색원체 분석을 사용하여 분석한다. 항원 발현 수준을 FVIII-HC(FVIII 중쇄) 및 FVIII-LC(FVIII 경쇄) ELISA에 의해 분석한다. Fc 이종성 모이어티를 포함하는 FVIII 변이체의 PK를 상기 기재한 바와 같은 HemA 마우스 및 FVIII-VWF DKO에서 분석한다.
실시예 7.2 - 알부민 또는 알부민-결합 모이어티의 삽입
실시예 7.2.1 - 알부민 삽입
재조합 응고 인자의 순환 반감기를 단백질 말단에 알부민 폴리펩타이드의 재조합 융합에 의해 연장시킬 수 있다. 문헌[Schulte, Thromb. Res. 128(Suppl. 1):29-S12 (2011)] 참조. 본 접근에 대한 대안으로서, 알부민 폴리펩타이드를 그것의 말단에 현수된 가요성 링커 세그먼트가 있도록 또는 없이, 표준 분자 생물학 기법에 의해 FVIII 분자의 허용적 루프 및 a3 세그먼트 내에 도입할 수 있다. 삽입되는 DNA 세그먼트는 5'AscI 제한 부위, 알부민(서열번호 50)의 단백질 암호 서열, 알부민 변이체 또는 알부민 단편, 및 허용적 루프 부위 내로 삽입될 수 있는 3'XhoI 제한 부위를 포함한다. 얻어진 재조합 FVIII 단백질을 응혈촉진 활성 및 연장된 반감기에 대해 시험한다.
알부민 서열을 표 I 또는 III에서 개시된 위치 중 적어도 하나, 허용적 루프 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 중 적어도 하나 내의 다른 적합한 삽입 부위 내로, 또는 a3 영역 내로, 또는 둘 다에 삽입한다. 알부민 삽입을 지니는 FVIII 변이체를 상기 기재한 바와 같이 형질감염시키고 HEK293F 세포로 일시적으로 발현시킨다. 일시적 형질감염으로부터의 세포배양 배지를 센트리콘(등록상표) 스핀 칼럼(30 kDa MW 컷오프)에서 10배 농축시킨다. 그 다음에 농축시킨 물질을 급속 냉동시켰고, 장래의 시험관내 분석 및 생체내 PK 연구를 위해 -80℃에서 저장하였다. 알부민 이종성 모이어티를 포함하는 FVIII 변이체를 발현시키는 세포 배양물로부터 배양 배지 샘플에서 FVIII 활성을 FVIII 색원체 분석을 사용하여 분석한다. 항원 발현 수준을 FVIII-HC(FVIII 중쇄) 및 FVIII-LC(FVIII 경쇄) ELISA에 의해 분석한다. 알부민 이종성 모이어티를 포함하는 FVIII 변이체의 PK를 상기 기재한 바와 같은 HemA 마우스 및 FVIII-VWF DKO에서 분석한다.
실시예 7.2.2: 펩타이드 알부민-결합 모이어티의 삽입
하나 이상의 폴리펩타이드 알부민-결합 모이어티, 예컨대 RLIEDICLPRWGCLWEDD(서열번호 52), QRLMEDICLPRWGCLWEDDF(서열번호 53), QGLIGDICLPRWGCLWGDSVK(서열번호 54) 또는 GEWWEDICLPRWGCLWEEED(서열번호 55)를 표준 분자 생물학 기법에 의해 허용적 루프 내로 또는 FVIII의 a3 영역 내로, 또는 둘 다에 삽입한다. 일 접근은 알부민-결합 펩타이드의 축퇴 뉴클레오타이드 서열을 합성하고, 적절한 제한 엔도뉴클레아제 부위를 만든 다음, 제한 효소 분해 및 플라스미드 DNA 결찰에 의해 알부민-결합 모이어티를 삽입하는 것이다. 링커 서열, (GGGS)n, (Denise et al . J. Biol. Chem. 277:35035-35043 (2002))(여기서 n은 0, 1, 2, 3, 4 이상일 수 있음)(서열번호 51)은 그것이 FVIII에 삽입되기 전 알부민-결합 펩타이드의 N-말단 및/또는 C-말단에서 첨가될 수 있다. 얻어진 재조합 FVIII 단백질을 응혈촉진 활성 및 연장된 반감기에 대해 시험한다.
폴리펩타이드 알부민-결합 모이어티의 서열을 표 I 또는 III에서 개시된 위치 중 적어도 하나, 허용적 루프 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 중 적어도 하나 내의 다른 적합한 삽입 부위 내로, 또는 a3 영역 내로, 또는 둘 다에 삽입한다. 삽입된 펩타이드 알부민-결합 모이어티를 지니는 FVIII 변이체를 상기 기재한 바와 같이 형질감염시키고 HEK293F 세포로 일시적으로 발현시킨다. 일시적 형질감염으로부터의 세포배양 배지를 센트리콘(등록상표) 스핀 칼럼(100 kDa MW 컷오프)에서 10배 농축시킨다. 그 다음에 농축시킨 물질을 급속 냉동시켰고, 장래의 시험관내 분석 및 생체내 PK 연구를 위해 -80℃에서 저장하였다. 삽입된 펩타이드 알부민-결합 모이어티를 지니는 FVIII 변이체를 발현시키는 세포 배양물로부터 배양 배지 샘플에서 FVIII 활성을 FVIII 색원체 분석을 사용하여 분석한다. 항원 발현 수준을 FVIII-HC(FVIII 중쇄) 및 FVIII-LC(FVIII 경쇄) ELISA에 의해 분석한다. 삽입된 펩타이드 알부민-결합 모이어티를 지니는 FVIII 변이체의 PK를 상기 기재한 바와 같은 HemA 마우스 및 FVIII-VWF DKO에서 분석한다.
실시예 7.2.3 - 소분자 알부민-결합 모이어티의 삽입
펩타이드 알부민-결합 모이어티에 추가로, 알부민-결합 능력을 소유하는 하나 이상의 소분자는 또한 하나 이상의 허용적 루프 또는 FVIII의 a3 영역 내에 부착될 수 있다. FVIII는 결정 구조에 기반한 그것의 표면에서 유리 시스테인을 가지지 않기 때문에(PDB:2R7E, Shen et al ., Blood 111:1240 (2008); PDB:3CDZ, Ngo, Structure, 16:597-606 (2008)), 일 접근은 FVIII의 허용적 루프 또는 a3 영역 내로 시스테인 함유 펩타이드(예를 들어, GGGSGCGGGS)(서열번호 56)를 삽입하는 것이다. 알부민-결합 2-(3-말레이미데오프로판안미도)-6-(4-(4-요오도페닐)뷰탄아미도)헥사노에이트를 그 다음에 FVIII 상에 도입된 시스테인에 특이적으로 컨쥬게이션시킬 수 있다. 간략하게, Cys 삽입을 합유하는 FVIII을 표준 분자 기법에 의해 구성할 수 있고, 포유류 발현 시스템(예를 들어, HEK293, CHO, BHK21, PER.C6, CAP 세포)에서 발현된 FVIII를 친화도 및 이온 교환 크로마토그래피를 통해 정제할 수 있다.
정제된 재조합 FVIII 단백질을 트리스(2-카복시에틸)포스핀(TCEP)에 의해 환원시켜 도입된 시스테인의 티올기에 노출시킨 다음, 2-(3-말레이미데오프로판안미도)-6-(4-(4-요오도페닐)뷰탄아미도)헥사노에이트와 반응시켰다. 컨쥬게이션되지 않은 재조합 FVIII 단백질을 HSA 친화도 크로마토그래피에 의해 제거할 수 있는데, 컨쥬게이션된 재조합 FVIII 단백질이 HAS 친화도 수지에 결합될 것이기 때문이다. 얻어진 재조합 FVIII 단백질을 응혈촉진 활성 및 연장된 반감기에 대해 시험한다.
소분자 알부민-결합 모이어티 서열을 표 I 또는 III에서 개시된 위치 중 적어도 하나, 허용적 루프 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 중 적어도 하나 내의 다른 적합한 삽입 부위 내로, 또는 a3 영역 내로, 또는 둘 다에 부착한다. 소분자 알부민-결합 모이어티를 지니는 FVIII의 FVIII 활성을 FVIII 색원체 분석을 사용하여 분석한다. 소분자 알부민 결합 모이어티를 지니는 FVIII 변이체의 PK를 상기 기재한 바와 같이 HemA 마우스 및 FVIII-VWF DKO 마우스에서 분석한다.
실시예 7.3 페길화
하나 이상의 폴리에틸렌 글라이콜(PEG) 분자를 FVIII의 허용적 루프 또는 a3 영역 중 하나 이상 내에 부착할 수 있다. FVIII는 그것의 결정 구조에 기반하여 그것의 표면에서 유리 시스테인을 가지지 않기 때문에(PDB:2R7E, Shen et al ., Blood 111:1240 (2008); PDB:3CDZ, Ngo, Structure, 16:597-606 (2008)), 일 접근은 FVIII의 허용적 루프 또는 a3 영역 내로 시스테인 함유 펩타이드(예를 들어, GGGSGCGGGS)(서열번호 56)를 삽입하는 것이다. 말레이미드를 함유하는 PEG 분자는 그 다음에 재조합 FVIII 단백질 상에 도입된 시스테인에 특이적으로 컨쥬게이션될 수 있다. 간략하게, Cys 삽입을 함유하는 재조합 FVIII 단백질은 표준 분자 기법에 의해 구성될 수 있고, 포유류 발현 시스템(예를 들어, HEK293, CHO, BHK21, PER.C6, CAP 세포)에서 발현된 재조합 FVIII 단백질은 친화도 및 이온 교환 크로마토그래피를 통해 정제될 수 있다. 정제된 재조합 FVIII 단백질은 트리스(2-카복시에틸)포스핀(TCEP)에 의해 환원되어 도입된 시스테인의 티올 기에 노출된 다음, 말레이미드 PEG와 반응된다. 얻어진 재조합 FVIII 단백질을 응혈촉진 활성 및 연장된 반감기에 대해 시험한다.
PEG를 표 I 또는 III에서 개시된 위치 중 적어도 하나, 허용적 루프 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 중 적어도 하나 내의 다른 적합한 삽입 부위 내로, 또는 a3 영역 내로, 또는 둘 다에 부착한다. 페길화된 재조합 FVIII 단백질의 FVIII 활성을 FVIII 색원체 분석을 사용하여 분석한다. 페길화된 재조합 FVIII 단백질의 PK를 상기 기재한 바와 같은 HemA 마우스 및 FVIII-VWF DKO 마우스에서 분석한다.
실시예 7.4 - 인간 융모성 생식선 자극 호르몬-서브유닛(CTP)의 카복실-말단 펩타이드의 삽입
인간 융모성 생식선 자극호르몬 베타서브유닛의 29 잔기 C-말단 펩타이드의 융합은 재조합 단백질의 약동학적 특성을 향상시키는 것으로 입증되었다(Fares et al ., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:4304-7 (1992)). CTP(DSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ)(서열번호 62), 또는 이의 농축된 형태를 표준 분자 생물학 기법에 의해 FVIII 분자의 허용적 루프 또는 a3 세그먼트 내로 도입할 수 있다. 삽입되는 DNA 세그먼트는 5'AscI 제한 부위, 단백질 암호 서열 CTP, 및 허용적 루프 부위 내로 삽입을 가능하게 하는 3'XhoI 제한 부위를 포함한다. 얻어진 재조합 FVIII 단백질을 응혈촉진 활성 및 연장된 반감기에 대해 시험한다.
CTP 서열을 표 I 또는 III에서 개시된 위치 중 적어도 하나, 허용적 루프 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 중 적어도 하나 내의 다른 적합한 삽입 부위 내로, 또는 a3 영역 내로, 또는 둘 다에 삽입한다. CTP 삽입을 지니는 FVIII를 상기 기재한 바와 같이 형질감염시키고 HEK293F 세포로 일시적으로 발현시킨다. 일시적 형질감염으로부터의 세포배양 배지를 센트리콘(등록상표) 스핀 칼럼(30 kDa MW 컷오프)에서 10배 농축시킨다. 그 다음에 농축시킨 물질을 급속 냉동시켰고, 장래의 시험관내 분석 및 생체내 PK 연구를 위해 -80℃에서 저장하였다. CTP 이종성 모이어티를 포함하는 재조합 FVIII 단백질을 발현시키는 세포 배양물로부터 배양 배지 샘플에서 FVIII 활성을 FVIII 색원체 분석을 사용하여 분석한다. 항원 발현 수준을 FVIII-HC(FVIII 중쇄) 및 FVIII-LC(FVIII 경쇄) ELISA에 의해 분석한다. CTP 이종성 모이어티를 포함하는 재조합 FVIII 변이체의 PK를 상기 기재한 바와 같은 HemA 마우스 및 FVIII-VWF DKO에서 분석한다.
실시예 7.5 - 클리어런스 수용기 LRP1에 대한 융합
리포단백질 수용기-관련 단백질-1(LRP1)은 FVIII을 포함하는 다양한 단백질의 수용기-매개 클리어런스에 연루된 600 kDa 내재 막 단백질이다(Lentinget al ., Haemophilia 16:6-15 (2010)). 서열번호 57(신호 펩타이드를 포함하는 인간 LRP1 서열) 참조.
FVIII에 대한 LRP1의 융합은 FVIII의 분자내 차폐를 초래할 수 있고, 이에 의해 FVIII를 LRP1에 의한 정상 클리어런스로부터 보호하며, 그것의 순환 반감기를 증가시킨다. LRP1의 4404 아미노산 세포밖 영역 또는 이의 도메인 또는 별개의 단편은 표준 분자 생물학 기법에 의해 FVIII 분자의 허용적 루프 또는 a3 세그먼트 내로 도입될 수 있다. 삽입된 DNA 세그먼트는 5'AscI 제한 부위, LRP1(또는 별개의 도메인 또는 이의 단편)의 단백질 암호 서열, 및 허용적 루프 부위 내로 삽입을 가능하게 하는 3'XhoI 제한 부위를 포함한다. 얻어진 재조합 FVIII 단백질을 응혈촉진 활성 및 연장된 반감기에 대해 시험한다.
LRP1 서열(또는 별개의 도메인 또는 이의 단편)을 표 I 또는 III에서 개시된 위치 중 적어도 하나, 허용적 루프 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 중 적어도 하나 내의 다른 적합한 삽입 부위 내로, 또는 a3 영역 내로, 또는 둘 다에 삽입한다. LRP1 삽입을 지니는 FVIII를 상기 기재한 바와 같이 형질감염시키고 HEK293F 세포로 일시적으로 발현시킨다. 일시적 형질감염으로부터의 세포배양 배지를 센트리콘(등록상표) 스핀 칼럼(30 kDa MW 컷오프)에서 10배 농축시킨다. 그 다음에 농축시킨 물질을 급속 냉동시켰고, 장래의 시험관내 분석 및 생체내 PK 연구를 위해 -80℃에서 저장하였다. LRP1 이종성 모이어티를 포함하는 재조합 FVIII 단백질을 발현시키는 세포 배양물로부터 배양 배지 샘플에서 FVIII 활성을 FVIII 색원체 분석을 사용하여 분석한다. 항원 발현 수준을 FVIII-HC(FVIII 중쇄) 및 FVIII-LC(FVIII 경쇄) ELISA에 의해 분석한다. LRP1 이종성 모이어티를 포함하는 재조합 FVIII 변이체의 PK를 상기 기재한 바와 같은 HemA 마우스 및 FVIII-VWF DKO에서 분석한다.
실시예 7.6 - 파실화( PASylation)
FVIII 파실화는 3가지 아미노산, 즉 알라닌, 세린 및 프롤린으로 주로 구성된 하나 이상의 폴리펩타이드와 FVIII의 재조합 융합을 지칭한다(유럽특허 공개 제EP2173890호 참조).
예시적인 PAS 폴리펩타이드는 서열 ASPAAPAPASPAAPAPSAPA(서열번호 37), AAPASPAPAAPSAPAPAAPS(서열번호 38), APSSPSPSAPSSPSPASPSS(서열번호 39), APSSPSPSAPSSPSPASPS(서열번호 40), SSPSAPSPSSPASPSPSSPA(서열번호 41), AASPAAPSAPPAAASPAAPSAPPA(서열번호 42), 또는 ASAAAPAAASAAASAPSAAA(서열번호 43)의 하나 또는 다수의 반복체를 함유할 수 있다. 하나 이상의 PAS 폴리펩타이드는 표준 분자 생물학 기법에 의해 FVIII 분자의 허용적 루프 또는 a3 세그먼트 내로 도입될 수 있다. 일 접근은 PAS 폴리펩타이드의 축퇴 뉴클레오타이드 서열을 합성하고, 적절한 제한 엔도뉴클레아제 부위를 만든 다음, 제한 효소 분해 및 플라스미드 DNA 결찰에 의해 PAS 폴리펩타이드를 삽입하는 것이다. 링커 서열, 예컨대 (GGGS)n(여기서 n은 0, 1, 2, 3, 4 이상일 수 있음)은 그것이 FVIII에 삽입되기 전 PAS 펩타이드의 N-말단 및/또는 C-말단에서 첨가될 수 있다. 얻어진 재조합 FVIII 단백질을 응혈촉진 활성 및 연장된 반감기에 대해 시험한다.
PAS 서열을 표 I 또는 III에서 개시된 위치 중 적어도 하나, 허용적 루프 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 중 적어도 하나 내의 다른 적합한 삽입 부위 내로, 또는 a3 영역 내로, 또는 둘 다에 삽입한다. PAS 폴리펩타이드 삽입을 지니는 FVIII를 상기 기재한 바와 같이 형질감염시키고 HEK293F 세포로 일시적으로 발현시킨다. 일시적 형질감염으로부터의 세포배양 배지를 센트리콘(등록상표) 스핀 칼럼(30 kDa MW 컷오프)에서 10배 농축시킨다. 그 다음에 농축시킨 물질을 급속 냉동시켰고, 장래의 시험관내 분석 및 생체내 PK 연구를 위해 -80℃에서 저장하였다. PAS 폴리펩타이드 이종성 모이어티를 포함하는 재조합 FVIII 단백질을 발현시키는 세포 배양물로부터 배양 배지 샘플에서 FVIII 활성을 FVIII 색원체 분석을 사용하여 분석한다. 항원 발현 수준을 FVIII-HC(FVIII 중쇄) 및 FVIII-LC(FVIII 경쇄) ELISA에 의해 분석한다. PAS 폴리펩타이드 이종성 모이어티를 포함하는 재조합 FVIII 변이체의 PK를 상기 기재한 바와 같은 HemA 마우스 및 FVIII-VWF DKO에서 분석한다.
실시예 7.7 - 해필화( HAPylation)
FVIII 해필화는 글라이신 풍부 호모-아미노산 중합체(HAP)로 주로 구성된 하나 이상의 폴리펩타이드의 FVIII에 대한 재조합 융합을 지칭한다. HAP 폴리펩타이드의 예는 하나의 (Gly4Ser)n 모듈(여기서 n은 1, 2, 및 400까지일 수 있음)(서열번호 60)을 함유할 수 있다. 하나 이상의 HAP 폴리펩타이드는 표준 분자 생물학 기법에 의해 FVIII 분자의 허용적 루프 또는 a3 세그먼트 내로 삽입할 수 있다. 일 접근은 HAP 폴리펩타이드의 축퇴 뉴클레오타이드 서열을 합성하고, 적절한 제한 엔도뉴클레아제 부위를 만든 다음, 제한 효소 분해 및 플라스미드 DNA 결찰에 의해 HAP 폴리펩타이드를 삽입하는 것이다. 얻어진 재조합 FVIII 단백질을 응혈촉진 활성 및 연장된 반감기에 대해 시험한다.
HAP 서열을 표 I 또는 III에서 개시된 위치 중 적어도 하나, 허용적 루프 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 중 적어도 하나 내의 다른 적합한 삽입 부위 내로, 또는 a3 영역 내로, 또는 둘 다에 삽입한다. HAP 폴리펩타이드 삽입을 지니는 FVIII를 상기 기재한 바와 같이 형질감염시키고 HEK293F 세포로 일시적으로 발현시킨다. 일시적 형질감염으로부터의 세포배양 배지를 센트리콘(등록상표) 스핀 칼럼(30 kDa MW 컷오프)에서 10배 농축시킨다. 그 다음에 농축시킨 물질을 급속 냉동시켰고, 장래의 시험관내 분석 및 생체내 PK 연구를 위해 -80℃에서 저장하였다. HAP 폴리펩타이드 이종성 모이어티를 포함하는 재조합 FVIII 단백질을 발현시키는 세포 배양물로부터 배양 배지 샘플에서 FVIII 활성을 FVIII 색원체 분석을 사용하여 분석한다. 항원 발현 수준을 FVIII-HC(FVIII 중쇄) 및 FVIII-LC(FVIII 경쇄) ELISA에 의해 분석한다. HAP 폴리펩타이드 이종성 모이어티를 포함하는 FVIII 변이체의 PK를 상기 기재한 바와 같은 HemA 마우스 및 FVIII-VWF DKO에서 분석한다.
실시예 7.8 - 헤실화( HESylation)
하나 이상의 하이드록시에틸 전분(HES) 분자는 FVIII의 허용적 루프 또는 a3 영역 중 하나 이상 내에 부착할 수 있다. FVIII는 그것의 결정 구조에 기반하여 그것의 표면에서 유리 시스테인을 가지지 않기 때문에(PDB:2R7E, Shen et al., Blood 111:1240 (2008); PDB:3CDZ, Ngo, Structure, 16:597-606 (2008)), 일 접근은 FVIII의 허용적 루프 또는 a3 영역 내로 시스테인 함유 펩타이드(예를 들어, GGGSGCGGGS)(서열번호 56)를 삽입하는 것이다. 간략하게, Cys 삽입을 함유하는 재조합 FVIII 단백질은 표준 분자 기법에 의해 구성될 수 있고, 재조합 FVIII 단백질은 포유류 발현 시스템(예를 들어, HEK293, CHO, BHK21, PER.C6, CAP 세포)에서 발현된 다음, 친화도 및 이온 교환 크로마토그래피를 통해 정제될 수 있다. 정제된 재조합 FVIII 단백질은 트리스(2-카복시에틸)포스핀(TCEP)에 의해 환원되어 도입된 시스테인의 티올 기에 노출된 다음, 말레이미드 HES와 반응된다. 얻어진 재조합 FVIII 단백질을 응혈촉진 활성 및 연장된 반감기에 대해 시험한다.
HES 분자를 표 I 또는 III에서 개시된 위치 중 적어도 하나, 허용적 루프 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 중 적어도 하나 내의 다른 적합한 삽입 부위 내로, 또는 a3 영역 내로, 또는 둘 다에 부착한다. HES 이종성 모이어티를 포함하는 재조합 FVIII 단백질의 FVIII 활성을 FVIII 색원체 분석을 사용하여 분석한다. HES 이종성 모이어티를 포함하는 재조합 FVIII 변이체의 FVIII 활성을 FVIII 색원체 분석을 사용하여 분석한다. HES 이종성 모이어티를 포함하는 재조합 FVIII 단백질의 PK를 상기 기재한 바와 같은 HemA 마우스 및 FVIII-VWF DKO에서 분석한다.
실시예 7.9 - 트랜스페린 융합
하나 이상의 트랜스페린 분자 또는 이의 단편 또는 변이체를 표준 분자 생물학 기법에 의해 FVIII의 허용적 루프내로 또는 a3 영역 내로 삽입할 수 있다. 일 접근은 트랜스페린-펩타이드의 축퇴 뉴클레오타이드 서열을 합성하고, 적절한 제한 엔도뉴클레아제 부위를 만든 다음, 제한 효소 분해 및 플라스미드 DNA 결찰에 의해 트랜스페린을 삽입하는 것이다. 링커 서열, 예컨대 (GGGS)n(서열번호 51)(여기서 n은 0, 1, 2, 3, 4 이상일 수 있음)은 그것이 FVIII에 삽입되기 전 트랜스페린 펩타이드의 N-말단 및/또는 C-말단에서 첨가될 수 있다. 얻어진 재조합 FVIII 단백질을 응혈촉진 활성 및 연장된 반감기에 대해 시험한다. 대안의 링커, 예컨대 PEAPTDPEAPTD(서열번호 61)를 또한 GGGS 링커 대신 사용할 수 있다(Kim et al ., J. Pharmacol. Exp. Ther., 2010, 334, 682-692). 얻어진 재조합 FVIII 단백질을 응혈촉진 활성 및 연장된 반감기에 대해 시험한다.
트랜스페린 서열을 표 I 또는 III에서 개시된 위치 중 적어도 하나, 허용적 루프 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 중 적어도 하나 내의 다른 적합한 삽입 부위 내로, 또는 a3 영역 내로, 또는 둘 다에 삽입한다. 트랜스페린 삽입을 지니는 FVIII를 상기 기재한 바와 같이 형질감염시키고 HEK293F 세포로 일시적으로 발현시킨다. 일시적 형질감염으로부터의 세포배양 배지를 센트리콘(등록상표) 스핀 칼럼(30 kDa MW 컷오프)에서 10배 농축시킨다. 그 다음에 농축시킨 물질을 급속 냉동시켰고, 장래의 시험관내 분석 및 생체내 PK 연구를 위해 -80℃에서 저장하였다. 트랜스페린 이종성 모이어티를 포함하는 재조합 FVIII 단백질을 발현시키는 세포 배양물로부터 배양 배지 샘플에서 FVIII 활성을 FVIII 색원체 분석을 사용하여 분석한다. 항원 발현 수준을 FVIII-HC(FVIII 중쇄) 및 FVIII-LC(FVIII 경쇄) ELISA에 의해 분석한다. 트랜스페린 이종성 모이어티를 포함하는 재조합 FVIII 변이체의 PK를 상기 기재한 바와 같은 HemA 마우스 및 FVIII-VWF DKO에서 분석한다.
실시예 8: 시각화을 위한 이종성 모이어티의 삽입
실시예 8.1 - 바이오틴 수용체 펩타이드( Biotin Acceptor Peptide : BAP )
바이오틴 수용체 펩타이드(BAP)는 이콜라이 바이오틴 리가제에 대한 기질로서 작용하는 무작위 펩타이드 디스플레이 방법에 의해 확인되는 13-잔기 펩타이드(LNDIFEAQKIEWH)(서열번호 58)이다. 이콜라이 바이오틴 리가제는 펩타이드 내에서 단일 리신 잔기의 아미노기에 바이오틴의 공유적 결합을 촉매한다(Schatz, Biotechnology 11:1138-43 (1993)). 이런 방식에서, BAP가 현수된 융합 단백질을 바이오틴으로 공유적으로 표지할 수 있고, 이에 의해 정제, 2차적 표지 및 (스트렙트)아비딘계 시약에 의한 면역화를 용이하게 한다. 추가로, 포유류 세포-기반 발현 시스템을 BAP를 보유하는 재조합 표적 단백질의 부위 특이적 효소 바이오틴화를 가능하게 하기 위해 개발하였다(Mize et al ., Protein Expr. Purif. 576:280-89 (2008); Kulman et al ., Protein Expr. Purif. 52:320-28 (2007). 얻어진 재조합 FVIII 단백질을 시각화 또는 국소화를 위해 사용할 수 있다.
5'AscI 제한 부위 및 3'XhoI 제한 부위에 측접하는 BAP 암호화 서열을 허용적 루프 삽입 부위 또는 a3 영역에서 표준 분자 생물학 기법에 의해 FVIII 분자의 허용적 루프 또는 a3 영역 내에 도입한다.
BAP 서열을 표 I 또는 III에서 개시된 위치 중 적어도 하나, 허용적 루프 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 중 적어도 하나 내의 다른 적합한 삽입 부위 내로, 또는 a3 영역 내로, 또는 둘 다에 삽입한다. BAP 삽입을 지니는 FVIII를 상기 기재한 바와 같이 형질감염시키고 HEK293F 세포로 일시적으로 발현시킨다. 일시적 형질감염으로부터의 세포배양 배지를 센트리콘(등록상표) 스핀 칼럼(30 kDa MW 컷오프)에서 10배 농축시킨다. 그 다음에 농축시킨 물질을 급속 냉동시켰고, 장래의 시험관내 분석 및 생체내 PK 연구를 위해 -80℃에서 저장하였다. BAP 이종성 모이어티를 포함하는 재조합 FVIII 단백질을 발현시키는 세포 배양물로부터 배양 배지 샘플에서 FVIII 활성을 FVIII 색원체 분석을 사용하여 분석한다. 항원 발현 수준을 FVIII-HC(FVIII 중쇄) 및 FVIII-LC(FVIII 경쇄) ELISA에 의해 분석한다. BAP 이종성 모이어티를 포함하는 FVIII 변이체의 PK를 상기 기재한 바와 같은 HemA 마우스 및 FVIII-VWF DKO에서 분석한다.
실시예 8.2 - 리포에이트 수용체 펩타이드(L ipoate Acceptor Peptide: LAP )
13 잔기 리포에이트 수용체 펩타이드 2(LAP2; GFEIDKVWYDLDA)(서열번호 59)는 이콜라이 리포산 리가제에 대한 기질로서 작용할 수 있는 효모 펩타이드 디스플레이 방법에 의해 확인된 펩티딜 기질 분류 중 하나이다(Puthenveetil et al ., J. Am. Chem. Soc. 131:16430-38 (2009)). 트립토판 37이 알라닌으로 대체된 LplA의 변이체(W37ALplA)는 그것이 시험관내 또는 살아있는 세포 내에서 LAP2에 대한 형광 7-하이드록시쿠마린 유도체의 공유적 컨쥬게이션을 촉매하지만, 리포산은 그렇지 않도록 특이적으로 변성된 기질을 소유한다(Uttamapinant et al ., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 107:10914-19 (2010)).
5'AscI 제한 부위 및 3'XhoI 제한 부위에 측접하는 LAP2 서열을 허용적 루프에 위치된 부위에서 표준 분자 생물학 기법에 의해 FVIII 분자의 허용적 루프 및 a3 세그먼트 내에 도입하고, 이에 의해 재조합 FVIII 단백질의 직접적 및 공유적 부위 특이적 형광 표지를 가능하게 한다. 얻어진 재조합 FVIII 단백질을 시각화를 위해 사용할 수 있다.
LAP 서열을 표 I 또는 III에서 개시된 위치 중 적어도 하나, 허용적 루프 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 중 적어도 하나 내의 다른 적합한 삽입 부위 내로, 또는 a3 영역 내로, 또는 둘 다에 삽입한다. LAP 삽입을 지니는 FVIII를 상기 기재한 바와 같이 형질감염시키고 HEK293F 세포로 일시적으로 발현시킨다. 일시적 형질감염으로부터의 세포배양 배지를 센트리콘(등록상표) 스핀 칼럼(30 kDa MW 컷오프)에서 10배 농축시킨다. 그 다음에 농축시킨 물질을 급속 냉동시켰고, 장래의 시험관내 분석 및 생체내 PK 연구를 위해 -80℃에서 저장하였다. LAP 이종성 모이어티를 포함하는 재조합 FVIII 단백질을 발현시키는 세포 배양물로부터 배양 배지 샘플에서 FVIII 활성을 FVIII 색원체 분석을 사용하여 분석한다. 항원 발현 수준을 FVIII-HC(FVIII 중쇄) 및 FVIII-LC(FVIII 경쇄) ELISA에 의해 분석한다. LAP 이종성 모이어티를 포함하는 FVIII 변이체의 PK를 상기 기재한 바와 같은 HemA 마우스 및 FVIII-VWF DKO에서 분석한다.
실시예 9: FVIII의 a3 산성 펩타이드 영 역 내에서 XTEN 서열의 삽입에 의한 FVIII 발현의 구조 또는 향상
부착된 HEK293 세포를 FVIII-XTEN DNA 작제물에 의해 실시예 5에 기재된 바와 같이 형질감염시켰으며, 이때 B도메인 결실된 FVIII의 암호 서열은 각각 144 아미노산 잔기의 2 내지 4개의 XTEN 삽입을 함유하였다. 작제물 및 삽입 위치의 조성을 이하의 표 VII에 나타낸다. 형질감염 후 제5일에, 세포 배양물 상청액을 실시예 3에 기재한 바와 같은 색원체 분석에 의해 FVIII 활성에 대해 분석하였다. 결과를 표 VII에서 나타낸다.
(표 VII)
Figure pct00017
비교 목적을 위해, 모든 FVIII-XTEN 작제물은 A3 도메인 내에서 성숙 천연 FVIII에 대해 넘버링된 위치 1720에서 AG144 XTEN 삽입을 가졌다. 발현 수준을 색원체 분석에 의해 결정하였고 mIU/㎖의 단위로 표현하였다. A1 도메인에서의 위치 26(LSD0040.002) 또는 A2 도메인에서의 위치 403(LSD0041.008)에서 단일의 추가적인 XTEN 삽입을 지니는 작제물은 각각 175 및 279 mIU/㎖의 발현 수준을 수득하였다. 대조적으로, a3 산성 펩타이드 내의 위치 1656에서 단일의 추가적인 XTEN 삽입을 지니는 작제물은 2598 mIU/㎖의 발현 수준을 수득하였는데, 이는 A1 및 A2 삽입 작제물에 대해 a3 XTEN 삽입 작제물에 대한 발현 수준의 향상을 입증한다.
추가로, A1 도메인에서의 위치 26에서 및 A3 도메인에서의 1720에서 XTEN 삽입을 지니는 FVIII-XTEN 작제물(LSD0040.002)에 비해, a3 산성 펩타이드 영역 내의 위치 1656에서 추가적인 XTEN 삽입을 지니는 작제물(pSD080.002)은 유의하게 더 높은 발현을 수득하였다(각각 175 및 1081 mIU/㎖). 이들 발견점과 일치되게, A2 도메인에서의 위치 403 및 A3 도메인에서의 1720에서 XTEN 삽입을 지니는 작제물(LSD0041.008)은 279 mIU/㎖의 발현 수준을 수득한 반면, a3 산성 펩타이드 영역 내의 위치 1656에서 추가적인 XTEN 삽입(PSD083.001)은 789 mIU/㎖에 대한 발현 수준의 증가를 초래하였다.
마지막으로, A1 도메인 내의 위치 26에서 XTEN 삽입 및 A3 도메인 내의 위치 1720 및 1900에서 2개의 XTEN 삽입을 지니는 FVIII-XTEN(PSD082.001)은 정량화의 하한을 초과하는 활성을 수득하지 않았다. 그러나, a3 산성 펩타이드 영역(PSD090.003) 내의 추가적인 XTEN 삽입을 지니는 FVIII-XTEN 작제물은 검출가능한 활성을 초래하였는데, 이는 a3 영역 내의 XTEN 서열의 포함이 정량화의 하한(LLOQ) 미만의 수준에서 달리 발현된 FVIII-XTEN 작제물에서 발현의 회복(활성에 의해 측정한 바와 같음)을 초래할 수 있다는 것을 입증한다. 실험 조건 하에서, 결과는 a3 영역 내의 1656 위치에서 XTEN의 삽입 및 연장에 의해 응혈촉진 FVIII-XTEN 조성물의 향상된 발현을 초래한다는 결과를 뒷받침한다.
실시예 10: aPTT 에 의해 측정한 FVIII 활성에 대한 XTEN 삽입의 효과
일 단계 활성화된 부분적 프로트롬빈(activated partial prothrombin: aPTT) 응고 분석을 색원체 분석(실시예 3에서 기재한 바와 같음)을 추가로 사용하여 다양한 FVIII-XTEN 융합 단백질의 FVIII 활성을 결정하였다.
방법: 시스멕스(SYSMEX)(등록상표) CA-1500 기기(뉴욕주 태리타운에 소재한 지멘스 헬스케어 다이아그노스틱스 인코포레이티드(Siemens Healthcare Diagnostics Inc.))를 사용하여 FVIII-XTEN aPTT 활성을 측정하였다. 분석을 위한 표준 곡선을 만들기 위해, WHO 인자 VIII 표준을 100 mU/㎖로 2% 모의 형질감염 배지로 희석시켰고, 그 다음에 2배 단계 희석을 수행하여, 최종 표준은 0.78 mU/㎖이 되었다. FVIII-XTEN 세포 배양 샘플을 aPTT 분석 완충제로 1:50에서 우선 희석시켰고, 추가 희석을 필요할 때 2% 모의 형질감염 배지를 이용하여 만들었다.
희석 후, 다음과 같은 시스멕스(SYSMEX)(등록상표) 기기를 사용하여 aPTT 분석을 수행하였다: 50㎕의 희석 표준 및 샘플을 50㎕ 인간 FVIII 결핍 혈장과 혼합한 다음, 50㎕의 aPTT 시약과 혼합하였다. 혼합물을 37℃에서 4분 동안 인큐베이션시켰고, 인큐베이션 후, 50㎕의 CaCl2를 혼합물에 첨가하였으며, 응고 시간을 즉시 측정하였다.
시험 샘플 FVIII 활성을 결정하기 위해, 표준의 응고 시간을 준로그(semi-log) 스케일을 사용하여 플롯팅하여(응고시간: 선형; 표준 농도: 로그) 응고 시간과 FVIII 활성 사이의 식을 추론하였고, 그 다음에 FVIII-XTEN 활성을 표준 곡선에 대해 계산하였다. 분석 민감도는 40 mU/㎖ 인자 VIII였다.
결과: 결과를 도 14 내지 도 16에서 요약한다. 단일 XTEN 144 또는 288 아미노산 길이를 FVIII에 삽입하였을 때, 색원체 분석에서 활성을 나타내는 모든 FVIII-XTEN 융합 단백질은 또한 aPTT 분석에서 활성이었다. aPTT 활성은 색원체 분석에서 관찰된 경향을 따랐고, 예를 들어, 색원체 분석에서 낮은 FVIII 활성을 나타낸 해당 분자는 낮은 aPTT 값을 가졌다.
대체로, 융합 단백질에 대한 aPTT 결과는 단일 XTEN 삽입에 대해 도 14에 도시한 바와 같은 1.1 내지 2.2의 색원체 대 aPTT 비로 색원체 분석에 의해 얻어진 것보다 더 낮았다. 다수의 XTEN 삽입을 지니는 FVIII-XTEN 융합 단백질은 색원체 분석을 통해 관찰한 활성에 비해 aPTT 활성에서 추가적인 감소를 나타내었다. 2개의 XTEN 삽입을 지니는 FVIII-XTEN의 분석은 모든 작제물에 의한 활성을 나타내었지만, 일부 예에서 색원체/aPTT 비는 4에 근접한다(도 15). 3개의 XTEN 삽입을 지니는 FVIII-XTEN의 분석은 또한 분석 둘 다에서의 활성을 나타내는데, 일부 예에서 색원체/aPTT 비는 5에 근접하는 반면(도 16), BDDFVIII 대조군에 대한 비는 더 비교할만 하였다(도 16의 우측).
추가적으로, XTEN 삽입 부위는 aPTT와 색원체 활성 사이에 보이는 차이에 기인하는 것으로 나타났다. 예를 들어, 2개의 XTEN 삽입을 지니는 일부 분자는 색원체 값보다 4배까지 더 낮은 aPTT 활성을 초래하였지만, 2개 XTEN 삽입을 지니는 다른 FVIII 분자에 대한 aPTT 활성 값은 색원체 활성과 상당히 비슷하였다(도 15). 3개의 XTEN 삽입을 지니는 일부 분자는 색원체 값보다 5배까지 더 낮은 aPTT 활성을 초래한 반면, 3개의 XTEN 삽입을 지니는 다른 FVIII 분자에 대한 aPTT 활성 값은 대응되는 색원체 활성보다 2배 더 낮았다(도 15).
실험 조건 하에서, 결과는 FVIII-XTEN 융합 단백질 작제물이 응혈촉진 활성을 보유하지만, 색원체 분석은 대체로 본 연구에서 사용한 aPTT 분석 시스템에서 관찰한 것보다 더 높은 활성 수준을 제공한다는 결과를 뒷받침한다.
실시예 11: FVIII 반감기 연장에 대한 XTEN 삽입 부위 효과의 평가
방법: 정해진 위치에서 단일 XTEN AG-144 삽입을 지니는 6개의 FVIII-XTEN 융합 단백질을 FVIII/VWF DKO 마우스(실시예4에서 일반적으로 기재한 바와 같음)에서 시험하여 FVIII 반감기 상의 XTEN 삽입 부위의 효과를 평가하였다. A1-1, A2-1, a3, A3-1, A3-2 내의 또는 C-말단의 XTEN 삽입을 지니는 표 IV에서 열거한 6가지의 대표적인 FVIII 변이체(위치 2332, 즉, 카복시-말단에서 단일 AG-144 삽입을 포함하는 pSD-0050, pSD-0003, pSD-0039, pSD-0010, 및 pSD-0063; 및 pSD-0014)를 이 연구를 위해 선택하였다.
FVIII/VWF DKO 마우스를 100-200 IU/㎏에서 6가지의 FVIII-XTEN 작제물(또는 양성 대조군 배지)로부터의 일시적 형질감염 세포 배양 배지 농축물의 단일 정맥내 투여로 처리하였고, 혈장 샘플을 후속적으로 투약 후 5분, 7시간 및 16시간에 수집하였다. 혈장 FVIII 활성을 FVIII 색원체 분석을 사용하여 시험하였고, 윈논린(등록상표) 프로그램을 사용하여 FVIII-XTEN 반감기를 추정하였다. 연구 데이터를 표 VIII 및 도 17에 요약한다.
결과: 유의하게 더 긴 반감기를 BDD-FVIII 대조군과 비교하는 시험한 모든 FVIII-XTEN 변이체에 대해 관찰하였지만, 반감기 정도는 다르게 증가되었고, 403 삽입 부위에서 XTEN을 지니는 변이체는 10배에서(대조군에 비해) 최소 반감기 연장을 부여하는 한편, 1900 삽입 변이체는 18배에서 최대 반감기 연장을 부여하였다. FVIII 반감기 연장에 대한 XTEN 삽입 부위의 차이는 생체내 FVIII 클리어런스 내 상이한 FVIII 도메인의 규칙을 반영할 수 있다.
(표 VIII)
Figure pct00018
실시예 12: FVIII 반감기 연장에 대한 XTEN 삽입의 추가적인 효과의 평가
방법: FVIII-XTEN 융합 단백질의 반감기에 대한 다수개의 XTEN 삽입의 효과를 평가하기 위해, 1 내지 3개의 XTEN 삽입을 지니는 FVIII-XTEN 변이체의 반감기를 5개 작제물로부터의 세포 배양물을 사용하여 FVIII-XTEN DKO 마우스에서 결정하였다(실시예 4에서 일반적으로 기재한 바와 같음). 5개 FVIII-XTEN 변이체를 연구에서 시험하였다: 위치 1900에서 AE144 삽입을 지니는 pSD-0062(전장 인자 VIII에 대해 넘버링); FVIII B 도메인에서의 AE144를 지니는 pSD-0005(B도메인 아미노산 위치 745); FVIII C-말단(CT)에서 AE288을 지니는 pSD-0019; B도메인에서 삽입된 AE144를 지니는 LSD-0003.006 및 C-말단에서 삽입된 AE288, 및 B 도메인 내에서 및 C-말단에서 위치 1900에서 삽입된 AE144, AE144 및 AE288 의 3개의 XTEN을 지니는 LSD-0055.021. 윈논린(등록상표) 프로그램을 사용하여 FVIII-XTEN 반감기 값을 추정하였다.
결과: 연구 결과를 표 IX에서 요약하고, PK 곡선을 도 18에서 나타낸다. 연구 결과는 FVIII 반감기 연장에 대한 다수개의 XTEN 삽입의 추가적인 효과를 입증하였다. 단일 XTEN 삽입에 의해, FVIII의 반감기를 0.25 시간으로부터 3.2 내지 4.0 시간으로 연장하였고, 즉, 13배 내지 16배로 증가시켰다. B 및 CT XTEN 삽입을 함께 조합하였을 때, FVIII 반감기를 10.6시간, 즉, 42배 연장으로 추가로 연장시켰다. 최종적으로, B/CT 작제물에 대해 위치 1900에서 제3 XTEN 삽입의 경우에, 반감기는 FVIII-VWF DKO 마우스에서 16시간에 도달되었고, 즉, 64배 증가되었다.
(표 IX)
Figure pct00019
실시예 13: XTEN 삽입을 함유하는 추가적인 FVIII 변이체
표 X 내지 XVIII에서 제시한 데이터는 1 내지 6개의 XTEN 삽입을 함유한 추가적인 FVIII 변이체 발현 작제물에 대응된다. 작제물을 만들기 위해 사용한 방법, ELISA를 사용하여 발현 수준을 결정하는 방법, 및 색원체 분석을 사용하여 응혈촉진 활성을 결정하는 방법을 상기에 상세하게 기재한다.
본 명세서에 기재된 기준에 근거하여 선택한 단일 부위에서 삽입된 XTEN을 지니는 FVIII 변이체를 사용하여 표 X에 제시한 결과를 얻었다. pBC00114 FVIII 양성 대조군은 양호한 발현 및 FVIII 활성을 나타내었다.
(표 X)
Figure pct00020
Figure pct00021
Figure pct00022
단일 삽입 부위 데이터의 결과는 2개의 XTEN 삽입을 지니는 FVIII-XTEN 변이체를 만들게 했고, 이것의 결과를 표 XI에 제시한다.
(표 XI)
Figure pct00023
Figure pct00024
Figure pct00025
앞서 언급한 데이터의 결과는 3개의 XTEN 삽입을 지니는 FVIII-XTEN 변이체 작제물을 만들게 했고, 이것의 결과를 표 XII에 제시한다. 3개의 XTEN 삽입을 포함하는 추가적인 FVIII 변이체를 표 XIII에 나타낸다.
(표 XII)
Figure pct00026
Figure pct00027
(표 XIII)
Figure pct00028
Figure pct00029
4개의 XTEN 삽입을 지니는 다수의 작제물을 만들고 분석하였으며, 대부분의 분자는 FVIII 활성을 나타내었는데(표 XIV 및 표 XV), 이는 다수 XTEN의 삽입을 지니는 FVIII가 여전히 FVIII 활성을 보유할 수 있다는 것을 시사한다.
(표 XIV)
Figure pct00030
(표 XV)
Figure pct00031
Figure pct00032
Figure pct00033
A1, A2, B, A3 도메인 및 C-말단에서 삽입된 4개 XTEN을 지니는 제한된 수의 FVIII 변이체 작제물을 만들었고, 분석하였으며, 9개의 분자 중 6개는 FVIII 활성을 나타내었다(표 XVI). 그 동안, 6개의 XTEN 삽입을 각각 지니는 2개의 FVIII 변이체를 또한 만들었고, 그것들은 이 색원체 분석에서 FVIII 활성을 나타내지 않았는데(표 XVII), 이는 XTEN 삽입의 수 및 부위가 FVIII 활성을 보유하는데 중요하다는 것을 시사한다.
(표 XVI)
Figure pct00034
(표 XVII)
Figure pct00035
결과는 실험 조건 하에서, FVIII의 선택된 부위 내로 하나 이상의 XTEN의 삽입이 결과 XTEN 분자의 응혈촉진 활성의 보유를 초래하지 않을 가능성이 더 많다는 점, 및 3개의 XTEN의 삽입이 단일 또는 이중 XTEN 삽입 작제물에 비해 더 높은 수준의 FVIII 응혈촉진 활성을 보유하는 융합 단백질의 더 큰 비율을 초래하는 것으로 나타난 점에서, XTEN 삽입부위를 선택하기 위해 사용한 기준은 유효하다는 관념을 뒷받침하였다.
실시예 14: 허용적 루프 내의 대표적인 부위에서 CTP1 의 삽입
FVIII이 보조인자 기능의 상실 없이 개개의 구조적 도메인 내에서 가변 길이 및 조성의 펩타이드의 삽입을 용인할 수 있다는 것을 입증하기 위해, 인간 융모성 생식선 자극호르몬(CTP1, 서열번호 81)의 카복시 말단으로부터 유래된 29개 아미노산 길이 펩타이드를 포함하는 45개 아미노산 길이 펩타이드를 표준 재조합 DNA 기법에 의해 삽입하였다. CTP-1 DNA 서열(서열번호 82)은 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열번호 191)에 측접되고, 5'AscI 제한 부위(ggcgcgcc) 및 3'XhoI 부위(ctcgag)(이들 둘 다 염기 벡터 pBC0114의 서열 내에 존재하지 않음)에 의해 말단에 측접된 인간 융모성 생식선 자극호르몬-유래 펩타이드(서열번호 62)를 포함하는 폴리펩타이드를 암호화한다.
CTP-1 DNA 서열을 화학적으로 합성하였고, AscI 및 XhoI로 분해하였으며, 적절한 FVIII 발현 플라스미드 내로 삽입하였는데, 얻어진 DNA 작제물은 FVIII 융합 단백질을 암호화하였고, 이때 CTP1 단백질 서열을 부위 선택에서 표시한 잔기 바로 뒤에 삽입되도록, 독특한 AscI 및 XhoI 부위를 지정된 삽입 부위의 바로 하류에 삽입한다.
따라서, 잔기 X가 삽입 부위를 지정하고, 잔기 Z는 천연 FVIII 폴리펩타이드 서열에서 다음 잔기를 지정하며, 폴리펩타이드는 서열을 함유하는 CTP1의 삽입으로부터 초래된다:
X-GAPGGGGSDSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQGGGGSASS-Z
X-(서열번호 81)-Z
추가로, 이 위치에서 대응되는 DNA서열의 삽입은 염기 벡터에서 독특한 서열을 암호화하는 CTP1에 측접하는 AscI 및 XhoI 제한 부위를 보유하였고, 후속적으로 개재 CTP1 서열을 절단하고 조성, 길이 및 주요 서열이 다른 서열을 도입하기 위해 사용할 수 있다.
FVIII 서열 내의 전체 12개의 상이한 삽입 부위를 CTP1 삽입을 위해 선택하였다. 각각에 대해 FVIII 일 부위를 허용적 루프의 각각에서(즉, 루프 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 및 A3-2에서)뿐만 아니라 a3 산성 펩타이드 영역 내의 일 부위에서 선택하였다. CTP1 삽입 부위의 위치를 표 XVIII에서 요약한다(또한 표 XXIV 참조).
(표 XVIII)
Figure pct00036
CTP1 삽입을 지니는 FVIII 변이체를 폴리에틸렌이민(PEI, 펜실베니아주 워링턴에 소재한 폴리사이언스 인코포레이티드)을 사용하는 HEK293F 세포(캘리포니아주 칼스베드에 소재한 라이프 테크놀로지즈(Life Technologies))를 형질감염시키기 위해 사용하였다. 일시적으로 형질감염된 세포를 프리스타일(FREESTYLE)(등록상표) F17 배지 및 CD OPTICHO(등록상표) 배지(라이프 테크놀로지즈)의 혼합물 중에서 성장시켰다. 형질감염 후 5일에, 배양 배지 중의 재조합 FVIII-CTP1 변이체의 활성을 색원체 FVIII 분석에 의해 분석하여 이들 부위에서 CTP1 삽입에 대한 FVIII의 용인성을 평가하였다.
FVIII 활성을 다이아파마(DiaPharma)제의 코아테스트(등록상표) SP FVIII 키트를 사용하여 측정하였고, 모든 인큐베이션을 진탕하면서 37℃ 플레이트 히터 상에서 수행하였다. FVIII-CTP1 변이체의 일시적 형질감염으로부터의 채취 세포 배양 배지를 1x FVIII 코아테스트(등록상표) 완충제를 사용하여 원하는 FVIII 활성 범위로 희석시켰다. FVIII 표준을 시험 샘플의 농도와 매칭되는 농도로 모의 형질감염 세포로부터의 배지를 함유하는 1x FVIII 코아테스트(등록상표) 완충제 중에서 제조하였다. 재조합 인자 VIII(rFVIII) 표준의 범위는 100 mIU/㎖ 내지 0.78 mIU/㎖였다. 표준, 희석 세포 배양 샘플 및 풀링한 정상 인간 혈장 대조군을 25㎕/웰로 2회 이뮤론(IMMULON)(등록상표) 2HB 96-웰 플레이트에 첨가하였다. 갓 제조한 IXa/FX/인지질 혼합물(50㎕), 25㎕의 25mM CaCl2 및 50㎕의 FXa 기질을 각 웰에 순차적으로 첨가하였고, 각 첨가 사이에 5분 인큐베이션시켰다. 기질과 함께 인큐베이션시킨 후, 25㎕의 20% 아세트산을 첨가하여 색 발생을 종결시켰고, 405 ㎚에서 흡광도를 스펙트라맥스(등록상표) 플러스(몰레큘러 디바이스) 기기로 측정하였다. 소프트맥스(등록상표) 프로 소프트웨어(버전 5.2)를 사용하여 데이터 분석을 수행하였다. 최저 정량화 수준(LLOQ)는 39 mIU/㎖였다. 색원체 FVIII 분석 결과를 도 19에 나타낸다.
도 19에 도시한 결과는 FVIII이 FVIII의 보조인자 활성을 없애지 않고, 허용적 루프 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 및 A3-2 내에서뿐만 아니라 a3 영역 내의 대표적인 부위에서 CTP1 펩타이드의 삽입을 수용할 수 있다는 것을 나타낸다. A2 도메인에서의 위치 518, A3 도메인에서의 1861, C1 도메인에서의 2111, 및 C2 도메인에서의 2188에서 CTP1의 삽입은 정량화 제한 미만(BLOQ)인 FVIII 활성 수준을 초래하였다. A1 도메인에서의 위치 116에서 CTP1 펩타이드의 삽입은 허용적 루프 내의 또는 a3 영역 내의 대표적인 부위에서 CTP1 삽입에 대해 관찰된 것에 대해 낮지만 검출가능한 FVIII 활성을 수득하였다. 이들 결과는 이들 허용적 부위에서 펩티딜 삽입에 대한 FVIII의 용인성이 삽입된 구성요소의 조성물에 엄격하게 의존하지 않는 FVIII의 고유한 특성이라는 결과를 뒷받침한다.
실시예 15: 허용적 루프 내의 추가적인 부위에서 CTP1 의 삽입
FVIII이 보조인자 기능의 상실 없이 허용적 루프 내의 다양한 부위에서 외인성 펩티딜 구성요소의 개개의 삽입을 용인할 수 있다는 것을 입증하기 위해, 인간 융모성 생식선 자극호르몬(CTP1, 서열번호 81)의 카복시 말단으로부터 유래된 29 아미노산 길이 펩타이드를 포함하는 45 아미노산 길이 펩타이드를 표준 재조합 DNA 기법에 의해 삽입하였다. CTP1 DNA 서열(서열번호 82)은 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열번호 191)에 측접되고, 5'AscI 제한 부위(ggcgcgcc) 및 3'XhoI 부위(ctcgag)(이들 둘 다 염기 벡터 pBC0114의 서열 내에 존재하지 않음)에 의해 말단에 측접된 인간 융모성 생식선 자극호르몬-유래 펩타이드(서열번호 62)를 포함하는 폴리펩타이드를 암호화한다.
CTP1 DNA 서열을 화학적으로 합성하였고, AscI 및 XhoI로 분해하였으며, 적절한 FVIII 발현 플라스미드 내로 삽입하였는데, 얻어진 DNA 작제물은 FVIII 융합 단백질을 암호화하였고, 이때 CTP1 단백질 서열을 부위 선택에서 표시한 잔기 바로 뒤에 삽입되도록, 독특한 AscI 및 XhoI 부위를 지정된 삽입 부위의 바로 하류에 삽입한다.
따라서, 잔기 X가 삽입 부위를 지정하고, 잔기 Z는 천연 FVIII 폴리펩타이드 서열에서 다음 잔기를 지정하며, 폴리펩타이드는 서열을 함유하는 CTP1의 삽입으로부터 초래된다:
X-GAPGGGGSDSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQGGGGSASS-Z
X-(서열번호 81)-Z
추가로, 이 위치에서 대응되는 DNA서열의 삽입은 염기 벡터에서 독특한 서열을 암호화하는 CTP1에 측접하는 AscI 및 XhoI 제한 부위를 보유하였고, 후속적으로 개재 CTP1 서열을 절단하고 조성, 길이 및 주요 서열이 다른 서열을 도입하기 위해 사용할 수 있다.
FVIII 서열 내의 전체 14개의 상이한 삽입 부위를 CTP1 삽입을 위해 선택하였다. 각각에 대해 FVIII 일 부위를 허용적 루프의 각각에서(즉, 루프 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 및 A3-2에서)뿐만 아니라 a3 산성 펩타이드 영역 내의 일 부위에서 선택하였다. CTP1 삽입 부위의 위치를 표 XIX에서 요약한다(또한 표 XXIV 참조).
(표 XIX)
Figure pct00037
CTP1 삽입을 지니는 FVIII 변이체를 폴리에틸렌이민(PEI, 펜실베니아주 워링턴에 소재한 폴리사이언스 인코포레이티드)을 사용하는 HEK293F 세포(캘리포니아주 칼스베드에 소재한 라이프 테크놀로지즈(Life Technologies))를 형질감염시키기 위해 사용하였다. 일시적으로 형질감염된 세포를 프리스타일(등록상표) F17 배지 및 CD OPTICHO(등록상표) 배지(라이프 테크놀로지즈)의 혼합물 중에서 성장시켰다. 형질감염 후 5일에, 배양 배지 중의 재조합 FVIII-CTP1 변이체의 활성을 색원체 FVIII 분석에 의해 분석하여 이들 부위에서 CTP1 삽입에 대한 FVIII의 용인성을 평가하였다.
FVIII 활성을 다이아파마제의 코아테스트(등록상표) SP FVIII 키트를 사용하여 측정하였고, 모든 인큐베이션을 진탕하면서 37℃ 플레이트 히터 상에서 수행하였다. FVIII-CTP1 변이체의 일시적 형질감염으로부터의 채취 세포 배양 배지를 1x FVIII 코아테스트(등록상표) 완충제를 사용하여 원하는 FVIII 활성 범위로 희석시켰다. FVIII 표준을 시험 샘플의 농도와 매칭되는 농도로 모의 형질감염 세포로부터의 배지를 함유하는 1x FVIII 코아테스트(등록상표) 완충제 중에서 제조하였다. 재조합 인자 VIII(rFVIII) 표준의 범위는 100 mIU/㎖ 내지 0.78 mIU/㎖였다. 표준, 희석 세포 배양 샘플 및 풀링한 정상 인간 혈장 대조군을 25㎕/웰로 2회 이뮤론(IMMULON)(등록상표) 2HB 96-웰 플레이트에 첨가하였다. 갓 제조한 IXa/FX/인지질 혼합물(50㎕), 25㎕의 25mM CaCl2 및 50㎕의 FXa 기질을 각 웰에 순차적으로 첨가하였고, 각 첨가 사이에 5분 인큐베이션시켰다. 기질과 함께 인큐베이션시킨 후, 25㎕의 20% 아세트산을 첨가하여 색 발생을 종결시켰고, 405 ㎚에서 흡광도를 스펙트라맥스(등록상표) 플러스(몰레큘러 디바이스) 기기로 측정하였다. 소프트맥스(등록상표) 프로 소프트웨어(버전 5.2)를 사용하여 데이터 분석을 수행하였다. 최저 정량화 수준(LLOQ)은 39 mIU/㎖였다. 색원체 FVIII 분석 결과를 도 20에 나타낸다.
도 20에 도시한 결과는 FVIII이 FVIII의 보조인자 활성을 없애지 않고, 도 19에서 도시한 각각의 허용적 루프 내 단일의 대표적인 부위에 추가로 허용적 루프 A1-1, A2-1, A3-1 및 A3-2 내의 다른 부위에서 CTP1 펩타이드의 삽입을 수용할 수 있다는 것을 나타낸다. 이들 결과는 펩티딜 삽입에 대한 FVIII의 용인성이 각각의 허용적 루프의 일반적 특성이며, 표면 루프 내의 구체적 위치로 제한되지 않는다는 결과를 뒷받침한다.
실시예 16: 허용적 루프 내의 대표적인 부위에서 알부민-결합 펩타이드 ABP1 의 삽입
FVIII가 보조인자 기능의 상실 없이 허용적 루프 내의 다양한 부위에서 외인성 펩티딜 구성요소의 개개의 삽입을 용인할 수 있다는 것을 입증하기 위해, 18 아미노산 길이 알부민-결합 펩타이드(ABP1, 서열번호 83)를 포함하는 44 아미노산 길이 펩타이드를 표준 재조합 DNA 기법에 의해 삽입하였다. ABP1 DNA 서열(서열번호 84)은 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열번호 191)의 두 반복체에 측접되고, 5'AscI 제한 부위(ggcgcgcc) 및 3'XhoI 부위(ctcgag)(이들 둘 다 염기 벡터 pBC0114의 서열 내에 존재하지 않음)에 의해 말단에 측접된 알부민-결합 펩타이드 (서열번호 52)를 포함하는 폴리펩타이드를 암호화한다.
ABP1 DNA 서열을 화학적으로 합성하였고, AscI 및 XhoI로 분해하였으며, 적절한 FVIII 발현 플라스미드 내로 삽입하였는데, 얻어진 DNA 작제물은 FVIII 융합 단백질을 암호화하였고, 이때 ABP1 단백질 서열을 부위 선택에서 표시한 잔기 바로 뒤에 삽입되도록, 독특한 AscI 및 XhoI 부위를 지정된 삽입 부위의 바로 하류에 삽입한다.
따라서, 잔기 X가 삽입 부위를 지정하고, 잔기 Z는 천연 FVIII 폴리펩타이드 서열에서 다음 잔기를 지정하며, 폴리펩타이드는 서열을 함유하는 ABP1의 삽입으로부터 초래된다:
X-GAPGGGGSGGGGSRLIEDICLPRWGCLWEDDGGGGSGGGGSASS-Z
X-(서열번호 83)-Z
추가로, 이 위치에서 대응되는 DNA서열의 삽입은 염기 벡터에서 독특한 서열을 암호화하는 ABP1에 측접하는 AscI 및 XhoI 제한 부위를 보유하였고, 후속적으로 개재 ABP1 서열을 절단하고 조성, 길이 및 주요 서열이 다른 서열을 도입하기 위해 사용할 수 있다.
FVIII의 각각의 A 도메인에 대해, 하나의 ABP1 삽입 부위를 허용적 루프의 각각에서(즉, 루프 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 및 A3-2에서) 뿐만 아니라 a3 산성 펩타이드 영역 내의 일 부위에서 선택하였다. ABP1 삽입 부위의 위치를 표 XX에서 요약한다(또한 표 XXIV 참조).
(표 XX)
Figure pct00038
ABP1 삽입을 지니는 FVIII 변이체를 폴리에틸렌이민(PEI, 펜실베니아주 워링턴에 소재한 폴리사이언스 인코포레이티드)을 사용하는 HEK293F 세포(캘리포니아주 칼스베드에 소재한 라이프 테크놀로지즈(Life Technologies))를 형질감염시키기 위해 사용하였다. 일시적으로 형질감염된 세포를 프리스타일(등록상표) F17 배지 및 CD OPTICHO(등록상표) 배지(라이프 테크놀로지즈)의 혼합물 중에서 성장시켰다. 형질감염 후 5일에, 배양 배지 중의 재조합 FVIII-CTP1 변이체의 활성을 색원체 FVIII 분석에 의해 분석하여 이들 부위에서 ABP1 삽입에 대한 FVIII의 용인성을 평가하였다.
FVIII 활성을 다이아파마제의 코아테스트(등록상표) SP FVIII 키트를 사용하여 측정하였고, 모든 인큐베이션을 진탕하면서 37℃ 플레이트 히터 상에서 수행하였다. FVIII-CTP1 변이체의 일시적 형질감염으로부터의 채취 세포 배양 배지를 1x FVIII 코아테스트(등록상표) 완충제를 사용하여 원하는 FVIII 활성 범위로 희석시켰다. FVIII 표준을 시험 샘플의 농도와 매칭되는 농도로 모의 형질감염 세포로부터의 배지를 함유하는 1x FVIII 코아테스트(등록상표) 완충제 중에서 제조하였다. 재조합 인자 VIII(rFVIII) 표준의 범위는 100 mIU/㎖ 내지 0.78 mIU/㎖였다. 표준, 희석 세포 배양 샘플 및 풀링한 정상 인간 혈장 대조군을 25㎕/웰로 2회 이뮤론(IMMULON)(등록상표) 2HB 96-웰 플레이트에 첨가하였다. 갓 제조한 IXa/FX/인지질 혼합물(50㎕), 25㎕의 25mM CaCl2 및 50㎕의 FXa 기질을 각 웰에 순차적으로 첨가하였고, 각 첨가 사이에 5분 인큐베이션시켰다. 기질과 함께 인큐베이션시킨 후, 25㎕의 20% 아세트산을 첨가하여 색 발생을 종결시켰고, 405 ㎚에서 흡광도를 스펙트라맥스(등록상표) 플러스(몰레큘러 디바이스) 기기로 측정하였다. 소프트맥스(등록상표) 프로 소프트웨어(버전 5.2)를 사용하여 데이터 분석을 수행하였다. 최저 정량화 수준(LLOQ)은 39 mIU/㎖였다. 색원체 FVIII 분석 결과를 도 21에 나타낸다.
도 21에 도시한 결과는 FVIII이 FVIII의 보조인자 활성을 없애지 않고, 허용적 루프 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 및 A3-2 내에서뿐만 아니라 a3 영역 내의 대표적인 부위에서 ABP1 펩타이드의 삽입을 수용할 수 있다는 것을 나타낸다. A1 도메인에서의 위치 116에서, A2 도메인에서의 위치 518, A3 도메인에서의 1861, C1 도메인에서의 2111, 및 C2 도메인에서의 2188에서 ABP1의 삽입은 정량화 제한 미만(BLOQ)인 FVIII 활성 수준을 초래하였다. 일반적으로, 개개의 APB1 삽입은 대응되는 CTP1 삽입보다 더 낮은 FVIII 활성을 수득하였는데, 이는 삽입된 펩티딜 구성요소의 조성이 얻어진 작제물의 활성을 조절할 수 있다는 것을 나타낼 수 있다. 그러나, 이들 결과는 이들 허용적 부위에서 펩티딜 삽입에 대한 FVIII의 전반적인 용인성이 삽입된 구성요소의 조성물에 엄격하게 의존적이 아닌 FVIII의 본질적 특성이라는 결과를 뒷받침한다.
실시예 17: 허용적 루프 내의 대표적인 부위에서 Gly - Ser 반복체의 삽입
FVIII가 보조인자 기능의 상실 없이 허용적 루프 내의 다양한 부위에서 외인성 펩티딜 구성요소의 개개의 삽입을 용인할 수 있다는 것을 입증하기 위해, 41 아미노산 길이 알부민-결합 펩타이드(ABP1, 서열번호 85)를 포함하는 35 아미노산 길이 펩타이드를 표준 재조합 DNA 기법에 의해 삽입하였다. HAP1 DNA 서열(서열번호 86)은 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열번호 191)의 7개 종열 반복체를 포함하는 폴리펩타이드를 암호화하며, 5'AscI 제한 부위(ggcgcgcc) 및 3'XhoI 부위(ctcgag)(이들 둘 다 염기 벡터 pBC0114의 서열 내에 존재하지 않음)에 의해 말단에 측접된다.
HAP1 DNA 서열을 화학적으로 합성하였고, AscI 및 XhoI로 분해하였으며, 적절한 FVIII 발현 플라스미드 내로 삽입하였는데, 얻어진 DNA 작제물은 FVIII 융합 단백질을 암호화하였고, 이때 HAP1 단백질 서열을 부위 선택에서 표시한 잔기 바로 뒤에 삽입되도록, 독특한 AscI 및 XhoI 부위를 지정된 삽입 부위의 바로 하류에 삽입한다.
따라서, 잔기 X가 삽입 부위를 지정하고, 잔기 Z가 천연 FVIII 폴리펩타이드 서열에서 다음의 잔기를 지정하는 경우, HAP1의 삽입으로부터 초래되는 폴리펩타이드는 다음의 서열을 함유하였다:
X- GAP GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS ASS -Z
X-(서열번호 85)-Z
추가로, 이 위치에서 대응되는 DNA서열의 삽입은 염기 벡터에서 독특한 서열을 암호화하는 AHAP1에 측접하는 AscI 및 XhoI 제한 부위를 보유하였고, 후속적으로 개재 HAP1 서열을 절단하고 조성, 길이 및 주요 서열이 다른 서열을 도입하기 위해 사용할 수 있다.
FVIII의 각각의 A 도메인에 대해, 하나의 HAP1 삽입 부위를 허용적 루프의 각각에서(즉, 루프 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 및 A3-2에서)뿐만 아니라 a3 산성 펩타이드 영역 내의 일 부위에서 선택하였다. 이들 ABP1 삽입 부위의 위치를 표 XXI에서 요약한다(또한 표 XXIV 참조).
(표 XXI)
Figure pct00039
HAP1 삽입을 지니는 FVIII 변이체를 폴리에틸렌이민(PEI, 펜실베니아주 워링턴에 소재한 폴리사이언스 인코포레이티드)을 사용하는 HEK293F 세포(캘리포니아주 칼스베드에 소재한 라이프 테크놀로지즈(Life Technologies))를 형질감염시키기 위해 사용하였다. 일시적으로 형질감염된 세포를 프리스타일(등록상표) F17 배지 및 CD OPTICHO(등록상표) 배지(라이프 테크놀로지즈)의 혼합물 중에서 성장시켰다. 형질감염 후 5일에, 배양 배지 중의 재조합 FVIII-CTP1 변이체의 활성을 색원체 FVIII 분석에 의해 분석하여 이들 부위에서 HAP1 삽입에 대한 FVIII의 용인성을 평가하였다.
FVIII 활성을 다이아파마제의 코아테스트(등록상표) SP FVIII 키트를 사용하여 측정하였고, 모든 인큐베이션을 진탕하면서 37℃ 플레이트 히터 상에서 수행하였다. FVIII-CTP1 변이체의 일시적 형질감염으로부터의 채취 세포 배양 배지를 1x FVIII 코아테스트(등록상표) 완충제를 사용하여 원하는 FVIII 활성 범위로 희석시켰다. FVIII 표준을 시험 샘플의 농도와 매칭되는 농도로 모의 형질감염 세포로부터의 배지를 함유하는 1x FVIII 코아테스트(등록상표) 완충제 중에서 제조하였다. 재조합 인자 VIII(rFVIII) 표준의 범위는 100 mIU/㎖ 내지 0.78 mIU/㎖였다. 표준, 희석 세포 배양 샘플 및 풀링한 정상 인간 혈장 대조군을 25㎕/웰로 2회 이뮤론(IMMULON)(등록상표) 2HB 96-웰 플레이트에 첨가하였다. 갓 제조한 IXa/FX/인지질 혼합물(50㎕), 25㎕의 25mM CaCl2 및 50㎕의 FXa 기질을 각 웰에 순차적으로 첨가하였고, 각 첨가 사이에 5분 인큐베이션시켰다. 기질과 함께 인큐베이션시킨 후, 25㎕의 20% 아세트산을 첨가하여 색 발생을 종결시켰고, 405 ㎚에서 흡광도를 스펙트라맥스(등록상표) 플러스(몰레큘러 디바이스) 기기로 측정하였다. 소프트맥스(등록상표) 프로 소프트웨어(버전 5.2)를 사용하여 데이터 분석을 수행하였다. 최저 정량화 수준(LLOQ)은 39 mIU/㎖였다. 색원체 FVIII 분석 결과를 도 22에 나타낸다.
도 22에 도시한 결과는 FVIII이 FVIII의 보조인자 활성을 없애지 않고, 허용적 루프 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 및 A3-2 내에서뿐만 아니라 a3 영역 내의 대표적인 부위에서 HAP1 펩타이드의 삽입을 수용할 수 있다는 것을 나타낸다. A2 도메인에서의 위치 518, C1 도메인에서의 2111, 및 C2 도메인에서의 2188에서 HAP1의 삽입은 정량화 제한 미만(BLOQ)인 FVIII 활성 수준을 초래하였다. A1 도메인에서의 위치 116 및 A3 도메인에서의 위치 1861에서 HAP1 펩타이드의 삽입은 허용적 루프 내의 또는 a3 영역 내의 대표적인 부위에서 HAP1 삽입에 대해 관찰한 것에 대해 낮지만 검출가능한 FVIII 활성을 수득하였다. 이들 결과는 이들 허용적 부위에서 펩티딜 삽입에 대한 FVIII의 전반적인 용인성이 삽입된 구성요소의 조성물에 엄격하게 의존적이 아닌 FVIII의 본질적 특성이라는 결과를 뒷받침한다.
실시예 18: 선택된 허용적 루프 내의 대표적인 부위에서 녹색 형광 단백질의 삽입
FVIII가 보조인자 기능의 상실 없이 허용적 루프 내에서 정해진 3-차원 구조를 채택하는 것으로 알려진 단백질의 삽입을 용인할 수 있다는 것을 입증하기 위해, 향상된 녹색 형광 단백질의 239 아미노산 잔기 서열(EGFP1, 서열번호 87)을 포함하는 265 아미노산 길이 폴리펩타이드를 표준 재조합 DNA 기법에 의해 삽입하였다. EGFP1 DNA 서열(서열번호 89)은 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열번호 191)의 2개 종열 반복체에 측접하는 EGFP 폴리펩타이드(서열번호 88)를 암호화하며, 5'AscI 제한 부위(ggcgcgcc) 및 3'XhoI 부위(ctcgag)(이들 둘 다 염기 벡터 pBC0114의 서열 내에 존재하지 않음)에 의해 말단에 측접된다.
EGFP1 DNA 서열을 화학적으로 합성하였고, AscI 및 XhoI로 분해하였으며, 적절한 FVIII 발현 플라스미드 내로 삽입하였는데, 얻어진 DNA 작제물은 FVIII 융합 단백질을 암호화하였고, 이때 EGFP1 단백질 서열을 부위 선택에서 표시한 잔기 바로 뒤에 삽입되도록, 독특한 AscI 및 XhoI 부위를 지정된 삽입 부위의 바로 하류에 삽입한다.
따라서, 잔기 X가 삽입 부위를 지정하고, 잔기 Z가 천연 FVIII 폴리펩타이드 서열에서 다음 잔기를 지정하는 경우, EGFP1의 삽입으로부터 초래되는 폴리펩타이드는 서열을 함유하였다:
X-GAPGGGGSGGGGSMVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGD
ATYGKLTLKFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMP
EGYVQERTIFFKDDGNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLE
YNYNSHNVYIMADKQKNGIKVNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVL
LPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLLEFVTAAGITLGMDELYKGGGGSGGG
GSASS-Z
X-(서열번호 87)-Z
추가로, 이 위치에서 대응되는 DNA서열의 삽입은 염기 벡터에서 독특한 서열을 암호화하는 EGFP1에 측접하는 AscI 및 XhoI 제한 부위를 보유하였고, 후속적으로 개재 HAP1 서열을 절단하고 조성, 길이 및 주요 서열이 다른 서열을 도입하기 위해 사용할 수 있다.
EGFP1 삽입 부위 삽입 부위를 각각의 허용적 루프 A1-1, A2-1, A3-1 및 A3-2뿐만 아니라 a3 산성 펩타이드 영역 내에서 선택하였다. 이들 EGFP1 삽입 부위의 위치를 표 XXII에서 요약한다(또한 표 XXIV 참조).
(표 XXII)
Figure pct00040
EGFP1 삽입을 지니는 FVIII 변이체를 폴리에틸렌이민(PEI, 펜실베니아주 워링턴에 소재한 폴리사이언스 인코포레이티드)을 사용하는 HEK293F 세포(캘리포니아주 칼스베드에 소재한 라이프 테크놀로지즈(Life Technologies))를 형질감염시키기 위해 사용하였다. 일시적으로 형질감염된 세포를 프리스타일(등록상표) F17 배지 및 CD OPTICHO(등록상표) 배지(라이프 테크놀로지즈)의 혼합물 중에서 성장시켰다. 형질감염 후 5일에, 배양 배지 중의 재조합 FVIII-CTP1 변이체의 활성을 색원체 FVIII 분석에 의해 분석하여 이들 부위에서 HAP1 삽입에 대한 FVIII의 용인성을 평가하였다.
FVIII 활성을 다이아파마제의 코아테스트(등록상표) SP FVIII 키트를 사용하여 측정하였고, 모든 인큐베이션을 진탕하면서 37℃ 플레이트 히터 상에서 수행하였다. FVIII-CTP1 변이체의 일시적 형질감염으로부터의 채취 세포 배양 배지를 1x FVIII 코아테스트(등록상표) 완충제를 사용하여 원하는 FVIII 활성 범위로 희석시켰다. FVIII 표준을 시험 샘플의 농도와 매칭되는 농도로 모의 형질감염 세포로부터의 배지를 함유하는 1x FVIII 코아테스트(등록상표) 완충제 중에서 제조하였다. 재조합 인자 VIII(rFVIII) 표준의 범위는 100 mIU/㎖ 내지 0.78 mIU/㎖였다. 표준, 희석 세포 배양 샘플 및 풀링한 정상 인간 혈장 대조군을 25㎕/웰로 2회 이뮤론(IMMULON)(등록상표) 2HB 96-웰 플레이트에 첨가하였다. 갓 제조한 IXa/FX/인지질 혼합물(50㎕), 25㎕의 25mM CaCl2 및 50㎕의 FXa 기질을 각 웰에 순차적으로 첨가하였고, 각 첨가 사이에 5분 인큐베이션시켰다. 기질과 함께 인큐베이션시킨 후, 25㎕의 20% 아세트산을 첨가하여 색 발생을 종결시켰고, 405㎚에서 흡광도를 스펙트라맥스(등록상표) 플러스(몰레큘러 디바이스) 기기로 측정하였다. 소프트맥스(등록상표) 프로 소프트웨어(버전 5.2)를 사용하여 데이터 분석을 수행하였다. 최저 정량화 수준(LLOQ)은 39 mIU/㎖였다. 색원체 FVIII 분석 결과를 도 23에 나타낸다.
도 23에 도시한 결과는 FVIII이 FVIII의 보조인자 활성을 없애지 않고, 허용적 루프 A1-1, A2-1, A3-1 및 A3-2 내에서뿐만 아니라 a3 영역 내의 대표적인 부위에서 HAP1 펩타이드의 삽입을 수용할 수 있다는 것을 나타낸다. 이들 부위의 각각에서 EGFP1 삽입은 검출가능한 FVIII 활성을 수득하였지만, 관찰된 활성 정도는 삽입 부위에 의존하였으며, a3 영역 내의 EGFP1 삽입은 미변형 염기 벡터로부터의 활성화 비슷한 활성을 수득하였고, 허용적 루프 A2-1 및 A3-1 내의 EGFP1 삽입은 보통의 FVIII 활성을 수득하였으며, 허용적 루프 A1-1 및 A3-2 내의 EGFP1 삽입은 낮은 FVIII 활성을 수득하였다. 따라서, FVIII은 삽입 부위의 기능으로서 한정된 3-차원 구조를 채택하는 것으로 알려진 단백질인 EGFP의 삽입에 대한 그것의 용인성의 정도에서 유의한 가변성을 나타낸다.
실시예 19: Cys 함유 펩타이드의 삽입 및 화학적 PEG 변형
FVIII이 허용적 루프 내에서 외인성 펩티딜 구성요소의 삽입 및 FVIII가 보조인자 기능의 상실 없이 해당 구성요소 내에 함유된 시스테인 잔기에 대한 후속적인 공유적 컨쥬게이션을 용인할 수 있다는 것을 입증하기 위해, 단일 Cys 잔기를 함유하는 35 잔기 Gly-Ser 반복체 서열(CCP1, 서열번호 90)을 포함하는 41 아미노산 길이 펩타이드를 표준 재조합 DNA 기법에 의해 삽입하였다. CCP1 DNA 서열(서열번호 91)은 위치 21에서 치환된 Cys 잔기와 함께 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열번호 191)의 7개 종열 반복체를 포함하는 폴리펩타이드를 암호화하며, 5'AscI 제한 부위(ggcgcgcc) 및 3'XhoI 부위(ctcgag)(이들 둘 다 염기 벡터 pBC0114의 서열 내에 존재하지 않음)에 의해 말단에 측접된다.
CCP1 DNA 서열을 화학적으로 합성하였고, AscI 및 XhoI로 분해하였으며, 플라스미드 pBC0184의 AscI와 XhoI 부위 사이에 삽입하므로, 얻어진 DNA 작제물인 FVIII-0026-CCP1는 FVIII 융합 단백질을 암호화하였고, 이때 CCP1 단백질 서열을 잔기 26 바로 뒤에 삽입한다.
X-GAPGGGGSGGGGSGGGGSGGCGSGGGGSGGGGSGGGGSASS-Z
X-(서열번호 90)-Z
추가로, 이 위치에서 대응되는 DNA서열의 삽입은 염기 벡터에서 독특한 서열을 암호화하는 CCPP1에 측접하는 AscI 및 XhoI 제한 부위를 보유하였고, 후속적으로 개재 CCP1 서열을 절단하고 조성, 길이 및 주요 서열이 다른 서열을 도입하기 위해 사용할 수 있다.
플라스미드 FVIII-0026-CCP1를 폴리에틸렌이민(PEI, 펜실베니아주 워링턴에 소재한 폴리사이언스 인코포레이티드)을 사용하는 HEK293F 세포(캘리포니아주 칼스베드에 소재한 라이프 테크놀로지즈(Life Technologies))를 형질감염시키기 위해 사용하였다. 일시적으로 형질감염된 세포를 프리스타일(등록상표) F17 배지 및 CD OPTICHO(등록상표) 배지(라이프 테크놀로지즈)의 혼합물 중에서 성장시켰다.
형질감염 후 5일에, 조건화된 세포 배양 배지를 채취하였고, FVIII-0026-CCP1 단백질을 순차적 면역친화도 크로마토그래피 및 이온 교환 크로마토그래피 단계에 의해 높은 정도로 정제하였다.
FVIII-0026-CCP1에 대한 PEG의 공유적 컨쥬게이션을 트리스(2-카복시에틸)포스핀(TCEP)에 의한 FVIII-0026-CCP1의 약한 환원, 이온 교환 크로마토그래피에 의한 환원된 산물의 정제, 및 60 kDa PEG-말레이미드에 의한 정제 환원된 FVIII-0026-CCP1의 인큐베이션에 의해 달성하였다. 페길화된 및 비페길화된 FVIII-0026-CCP1을 이온 교환 크로마토그래피에 의해 분해하였다.
PEG 컨쥬게이션이 FVIII-0026-CCP1의 A1 도메인 상에서 특이적으로 일어난다는 것을 확인하게 위해, 페길화된 종과 비페길화된 종을 둘 다 트롬빈으로 분해하였고, 그것의 비트롬빈 처리된 상대와 마찬가지로 비환원 SDS-PAGE에 의해 분석하였다. FVIII의 트롬빈 분해는 A1 도메인, A2 도메인, 및 산물이 SDS-PAGE에 의해 분해될 때 명확하게 구별가능한 잔여 FVIII 경쇄의 대응되는 밴드를 만드는 것에서 잘 공지되어 있다. 따라서 미처리되거나 또는 화학적 페길화가 실시된 FVIII-0026-CCP1 샘플에 대한 이 방법의 적용은 PEG 모이어티가 A1 도메인에 현수되는 것의 확인을 가능하게 한다.
FVIII-0026-CCP1이 정량적으로 페길화되었다는 것을 확인하기 위해, 미변형 FVIII-0026-CCP1 및 페길화된 FVIII-0026-CCP1을 Tosoh G3000 SWxl 칼럼 상의 크기 배제 크로마토그래피(SEC)에 의해 분석하였고, 용리액의 흡광도를 시간의 함수로서 214㎚에서 모니터링하였다. 얻어진 크로마토그램을 17, 44, 158 및 670 kDa의 단백질 분자량 표준에 의해 만들어진 기준 크로마토그램과 겹쳐서 미변형 및 페길화된 FVIII-0026-CCP1의 명확한 분자량의 결정 및 페길화된 반응의 효율 평가를 가능하게 하였다.
미변형 FVIII-0026-CCP1 및 페길화된 FVIII-0026-CCP1의 FVIII 활성을 다이아파마제의 코아테스트(등록상표) SP FVIII 키트를 사용하여 측정하였고, 모든 인큐베이션을 진탕하면서 37℃ 플레이트 히터 상에서 수행하였다. 정제된 FVIII-0026-CCP1 및 모노-페길화된 FVIII-0026-CCP1의 샘플을 1x FVIII 코아테스트(등록상표) 완충제를 사용하여 원하는 FVIII 활성 범위로 희석시켰다. FVIII 표준을 시험 샘플의 농도와 매칭되는 농도로 모의 형질감염 세포로부터의 배지를 함유하는 1x FVIII 코아테스트(등록상표) 완충제 중에서 제조하였다. 재조합 인자 VIII(rFVIII) 표준의 범위는 100 mIU/㎖ 내지 0.78 mIU/㎖였다. 표준, 희석 세포 배양 샘플 및 풀링한 정상 인간 혈장 대조군을 25㎕/웰로 2회 이뮤론(IMMULON)(등록상표) 2HB 96-웰 플레이트에 첨가하였다. 갓 제조한 IXa/FX/인지질 혼합물(50㎕), 25㎕의 25mM CaCl2 및 50㎕의 FXa 기질을 각 웰에 순차적으로 첨가하였고, 각 첨가 사이에 5분 인큐베이션시켰다. 기질과 함께 인큐베이션시킨 후, 25㎕의 20% 아세트산을 첨가하여 색 발생을 종결시켰고, 405 ㎚에서 흡광도를 스펙트라맥스(등록상표) 플러스(몰레큘러 디바이스) 기기로 측정하였다. 소프트맥스(등록상표) 프로 소프트웨어(버전 5.2)를 사용하여 데이터 분석을 수행하였다. 최저 정량화 수준(LLOQ)은 39 mIU/㎖였다. 비페길화 및 페길화된 작제물에 대한 활성 데이터를 표 XXIII에 나타낸다:
(표 XXIII)
Figure pct00041
도 24에 제시한 표는 정제된 FVIII-0026-CCP1 제제는 단일 쇄 종(SC FVIII) 및 중쇄(HC) 및 경쇄(LC)를 포함하는 2쇄 종을 함유하였다는 것을 나타낸다. 미변형 SC FVIII 및 HC(레인 1)에 대응되는 단백질 밴드는 감소된 전기 영동 이동성 때문에 페길화의 결과로서 시프트 업되었다(레인 2). 페길화된 SC FVIII 및 HC에 대응되지만 LC가 아닌 밴드를 PEG 염색에 의해 관찰하였다(레인 7). 미변형 FVIII-0026-CCP1의 트롬빈 처리는 a3-결실 경쇄(LC a3), A1 도메인, 및 A2 도메인(레인 4)에 대응되는 밴드에 의한 절단 산물의 예상된 패턴을 초래하였다. 물론, A1 도메인에 대응되는 밴드만이 페길화시 위쪽으로 이동되어(레인 3) PEG 염색(레인 8)에 의해 검출되는 감소된 전기 영동 이동성을 지니는 단일 밴드가 생기게 하였다. 이들 결과는 FVIII-0026-CCP1이 A1 도메인 상에서 특이적으로 페길화되었다는 것을 입증한다.
도 25에서 도시한 바와 같이, 페길화된 및 비페길화된 FVIII-0026-CCP1을 크기 배제 크로마토그래피(SEC)에 의해 추가로 분석하였다. 주된 피크는 158kDa 분자량 표준과 유사한 체류시간으로 용리시킨 비페길화된 FVIII-0026-CCP1에 대응되는 반면, 부수적 피크는 670kDa 분자량 표준보다 약간 더 적은 체류 시간으로 용리시킨 페길화된 FVIII-0026-CCP1와 대응되는데, 이는 페길화가 FVIII-0026-CCP1의 유체역학적 반경을 유의하게 증가시킨다는 것을 나타낸다. 비페길화되고 페길화된 FVIII-0026-CCP1에 대한 크로마토그램은 단백질 종이 둘 다 >90%로 순수하다는 것을 나타낸다. 결과적으로, 표 XXIII에 제시한 FVIII 활성 데이터가 FVIII의 잔기 26 뒤에 삽입된 시스테인-함유 CCP1 펩타이드에 대한 PEG의 화학적 컨쥬게이션이 미변형 FVIII-0026-CCP1에 대해 얻어진 분자의 특이적 활성을 유의하게 변경시키지 않는다는 결론을 내리는 것으로 이해될 수 있다. 추가로, FVIII-0026-CCP1과 페길화된 FVIII-0026-CCP1 둘 다의 관찰된 특이적 활성은 미변형된 B 도메인-결실(BDD) FVIII에 대해 관찰한 것과 유사하며, 이는 FVIII의 허용적 루프 A1-1 내의 잔기 26에서 CCP1 펩타이드의 삽입이 삽입된 CCP1 펩타이드가 페길화되든 아니든 자연히 FVIII의 특이적 활성의 감소에 기여하지 않는다는 것을 나타낸다.
(표 XXIV)
Figure pct00042
Figure pct00043
실시예 20: FVIII 변이체를 만들기 위한 조합적 라이브러리 접근
XTEN은 다수의 단백질의 순환 반감기를 증가시키는 것으로 나타난 비구조화된 반복체를 포함하는 폴리펩타이드이다. 하중된 분자의 클리어런스 및 기능에 대한 XTEN의 영향을 XTEN 삽입의 위치, 조성, 길이 및 수를 달리함으로써 최적화할 수 있는데, 이들 모두는 재조합 기법에 의해 달성할 수 있다. XTEN의 도메인내 삽입을 수용할 수 있는 FVIII에서의 허용적 루프의 식별에 의해, FVIII의 XTEN변형에 대한 다변수 접근을 탐구하여 기존의 임상적 후보에 의해 관찰한 바와 같이 2배 이상의 반감기 연장을 지니는 FVIII-XTEN 변이체를 발생시켰다. 따라서 FVIII의 활성 및 약동학에 대한 다수의 XTEN 삽입의 효과를 평가하였다.
방법: A 도메인 내, B 도메인 접합에서 및 C-말단에서 허용적 루프 내의 2 내지 6개의 XTEN 삽입을 지니는 400 이상의 BDD-FVIII 변이체를 포함하는 구성하였다. 변이체를 소규모 일시적 발현에 의해 HEK293 세포에서 발현시켰고, 조건화된 배지 내 FVIII 활성을 FVIII 색원체 분석에 의해 측정하였다. 배양 배지 내 ≥0.3 IU/㎖ FVIII 활성을 지니는 변이체의 약동학적(PK) 특성을 시간에 걸쳐 혈장 FVIII 활성을 모니터링함으로써 FVIII 녹아웃(HemA) 및 FVIII/VWF 이중-녹아웃(DKO) 마우스에서 평가하였다. 반감기에 대한 내인성 VWF의 영향을 제거하기 위한 초기 랭킹 목적을 위해 DKO 마우스를 사용하였다. 농축시킨 조건화된 배지 또는 부분적으로 정제된 FVIII-XTEN 제조를 PK 연구에서 사용하여 PK 스크리닝의 처리량을 증가시켰다. 조건화된 배지 또는 정제된 단백질 중 하나를 사용하여 유사한 PK 프로파일을 관찰하였다.
결과: FVIII 변이체는 5개까지의 XTEN 삽입을 지니는 활성을 보유하였다. VWF의 보호적 이점이 없는 DKO 마우스에서, XTEN에 의해 부여된 반감기 개선은 삽입 부위 의존적이었고, 미변형 BDD-FVIII에 대한 0.25 시간에 대해 A3 도메인 내 단일 XTEN 삽입은 4.5 시간까지 반감기를 연장시켰으며, 2.5시간까지 A2 도메인에서 반감기를 연장시켰다. 도메인내 삽입에 대해, 144 잔기의 XTEN 길이는 세포 배양 및 반감기 연장에서의 활성에 대해 최적이었고, 삽입 부위가 상이한 도메인에 있을 때 다수개의 XTEN 삽입의 PK 효과는 부가적이었다. 3개의 XTEN 삽입을 지니는 FVIII는 DKO 마우스에서 16시간의 반감기를 달성하였는데, 이는 BDD FVIII에 대해 64배 증가를 나타내지만, 추가적인 XTEN의 도입은 18시간으로 명목상의 증가만을 초래하였고, 이는 XTEN에 의한 반감기 연장이 부가적이지만 포화성이라는 것을 나타낸다. DKO 마우스에서 3시간 내지 18시간의 반감기를 나타낸 선택된 FVIII-XTEN 변이체는 모두 HemA 마우스에서 유사한 반감기를 가진다(~14 시간).
본 발명은 구체화된 기능 및 이의 관계의 실행을 설명하는 기능성 빌딩 블록의 도움으로 위에 기재하였다. 이들 기능성 빌딩 블록의 경계는 설명의 편리함을 위해 본 명세서에서 임의로 정하였다. 구체화된 기능 및 이의 관계가 적절하게 수행된다면 대안의 경계를 정할 수 있다.
따라서 구체적 실시형태의 앞서 언급한 설명은 당업계의 기술 내의 지식을 적용함으로써, 본 발명의 일반적 개념으로부터 벗어나지 않고 과도한 실험 없이 구체적 실시형태와 같은 다양한 적용을 위해 용이하게 변형하고/하거나 적합하게 할 수 있는 본 발명의 일반적 특성을 완전히 나타낼 것이다. 따라서 이러한 적용 및 변형은 본 명세서에 제시된 교시 및 가이드에 기반하여 개시된 실시형태의 동일한 의미 및 범위 내인 것으로 의도된다. 본 명세서의 어구 또는 용어는 본 명세서의 용어 또는 어구가 교시 및 가이드에 비추어 당업자에 의해 이해되도록, 제한 없이 설명의 목적을 위한 것으로 이해되어야 한다.
본 발명의 범위 및 범주는 상기 설명한 예시적인 실시형태 중 어떤 것에 의해 제한되지 않아야 하지만, 다음의 특허청구범위 및 그것의 동등물에 따라서만 정해져야 한다. 본 발명의 다른 실시형태는 본 명세서의 고려사항 및 본 명세서에 개시된 본 발명의 실행으로부터 당업자에게 명백할 것이다.
SEQUENCE LISTING <110> Biogen Idec MA Inc. <120> Recombinant Factor VIII Proteins <130> WO/2013/123457 <140> PCT/US2013/026521 <141> 2013-02-15 <150> US61/759,785 <151> 2013-02-01 <150> US61/599,305 <151> 2012-02-15 <150> US61/670,553 <151> 2012-07-11 <160> 211 <170> PatentIn version 2.0 <210> 1 <211> 2332 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Ala Thr Arg Arg Tyr Tyr Leu Gly Ala Val Glu Leu Ser Trp Asp Tyr 1 5 10 15 Met Gln Ser Asp Leu Gly Glu Leu Pro Val Asp Ala Arg Phe Pro Pro 20 25 30 Arg Val Pro Lys Ser Phe Pro Phe Asn Thr Ser Val Val Tyr Lys Lys 35 40 45 Thr Leu Phe Val Glu Phe Thr Asp His Leu Phe Asn Ile Ala Lys Pro 50 55 60 Arg Pro Pro Trp Met Gly Leu Leu Gly Pro Thr Ile Gln Ala Glu Val 65 70 75 80 Tyr Asp Thr Val Val Ile Thr Leu Lys Asn Met Ala Ser His Pro Val 85 90 95 Ser Leu His Ala Val Gly Val Ser Tyr Trp Lys Ala Ser Glu Gly Ala 100 105 110 Glu Tyr Asp Asp Gln Thr Ser Gln Arg Glu Lys Glu Asp Asp Lys Val 115 120 125 Phe Pro Gly Gly Ser His Thr Tyr Val Trp Gln Val Leu Lys Glu Asn 130 135 140 Gly Pro Met Ala Ser Asp Pro Leu Cys Leu Thr Tyr Ser Tyr Leu Ser 145 150 155 160 His Val Asp Leu Val Lys Asp Leu Asn Ser Gly Leu Ile Gly Ala Leu 165 170 175 Leu Val Cys Arg Glu Gly Ser Leu Ala Lys Glu Lys Thr Gln Thr Leu 180 185 190 His Lys Phe Ile Leu Leu Phe Ala Val Phe Asp Glu Gly Lys Ser Trp 195 200 205 His Ser Glu Thr Lys Asn Ser Leu Met Gln Asp Arg Asp Ala Ala Ser 210 215 220 Ala Arg Ala Trp Pro Lys Met His Thr Val Asn Gly Tyr Val Asn Arg 225 230 235 240 Ser Leu Pro Gly Leu Ile Gly Cys His Arg Lys Ser Val Tyr Trp His 245 250 255 Val Ile Gly Met Gly Thr Thr Pro Glu Val His Ser Ile Phe Leu Glu 260 265 270 Gly His Thr Phe Leu Val Arg Asn His Arg Gln Ala Ser Leu Glu Ile 275 280 285 Ser Pro Ile Thr Phe Leu Thr Ala Gln Thr Leu Leu Met Asp Leu Gly 290 295 300 Gln Phe Leu Leu Phe Cys His Ile Ser Ser His Gln His Asp Gly Met 305 310 315 320 Glu Ala Tyr Val Lys Val Asp Ser Cys Pro Glu Glu Pro Gln Leu Arg 325 330 335 Met Lys Asn Asn Glu Glu Ala Glu Asp Tyr Asp Asp Asp Leu Thr Asp 340 345 350 Ser Glu Met Asp Val Val Arg Phe Asp Asp Asp Asn Ser Pro Ser Phe 355 360 365 Ile Gln Ile Arg Ser Val Ala Lys Lys His Pro Lys Thr Trp Val His 370 375 380 Tyr Ile Ala Ala Glu Glu Glu Asp Trp Asp Tyr Ala Pro Leu Val Leu 385 390 395 400 Ala Pro Asp Asp Arg Ser Tyr Lys Ser Gln Tyr Leu Asn Asn Gly Pro 405 410 415 Gln Arg Ile Gly Arg Lys Tyr Lys Lys Val Arg Phe Met Ala Tyr Thr 420 425 430 Asp Glu Thr Phe Lys Thr Arg Glu Ala Ile Gln His Glu Ser Gly Ile 435 440 445 Leu Gly Pro Leu Leu Tyr Gly Glu Val Gly Asp Thr Leu Leu Ile Ile 450 455 460 Phe Lys Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr Asn Ile Tyr Pro His Gly Ile 465 470 475 480 Thr Asp Val Arg Pro Leu Tyr Ser Arg Arg Leu Pro Lys Gly Val Lys 485 490 495 His Leu Lys Asp Phe Pro Ile Leu Pro Gly Glu Ile Phe Lys Tyr Lys 500 505 510 Trp Thr Val Thr Val Glu Asp Gly Pro Thr Lys Ser Asp Pro Arg Cys 515 520 525 Leu Thr Arg Tyr Tyr Ser Ser Phe Val Asn Met Glu Arg Asp Leu Ala 530 535 540 Ser Gly Leu Ile Gly Pro Leu Leu Ile Cys Tyr Lys Glu Ser Val Asp 545 550 555 560 Gln Arg Gly Asn Gln Ile Met Ser Asp Lys Arg Asn Val Ile Leu Phe 565 570 575 Ser Val Phe Asp Glu Asn Arg Ser Trp Tyr Leu Thr Glu Asn Ile Gln 580 585 590 Arg Phe Leu Pro Asn Pro Ala Gly Val Gln Leu Glu Asp Pro Glu Phe 595 600 605 Gln Ala Ser Asn Ile Met His Ser Ile Asn Gly Tyr Val Phe Asp Ser 610 615 620 Leu Gln Leu Ser Val Cys Leu His Glu Val Ala Tyr Trp Tyr Ile Leu 625 630 635 640 Ser Ile Gly Ala Gln Thr Asp Phe Leu Ser Val Phe Phe Ser Gly Tyr 645 650 655 Thr Phe Lys His Lys Met Val Tyr Glu Asp Thr Leu Thr Leu Phe Pro 660 665 670 Phe Ser Gly Glu Thr Val Phe Met Ser Met Glu Asn Pro Gly Leu Trp 675 680 685 Ile Leu Gly Cys His Asn Ser Asp Phe Arg Asn Arg Gly Met Thr Ala 690 695 700 Leu Leu Lys Val Ser Ser Cys Asp Lys Asn Thr Gly Asp Tyr Tyr Glu 705 710 715 720 Asp Ser Tyr Glu Asp Ile Ser Ala Tyr Leu Leu Ser Lys Asn Asn Ala 725 730 735 Ile Glu Pro Arg Ser Phe Ser Gln Asn Ser Arg His Pro Ser Thr Arg 740 745 750 Gln Lys Gln Phe Asn Ala Thr Thr Ile Pro Glu Asn Asp Ile Glu Lys 755 760 765 Thr Asp Pro Trp Phe Ala His Arg Thr Pro Met Pro Lys Ile Gln Asn 770 775 780 Val Ser Ser Ser Asp Leu Leu Met Leu Leu Arg Gln Ser Pro Thr Pro 785 790 795 800 His Gly Leu Ser Leu Ser Asp Leu Gln Glu Ala Lys Tyr Glu Thr Phe 805 810 815 Ser Asp Asp Pro Ser Pro Gly Ala Ile Asp Ser Asn Asn Ser Leu Ser 820 825 830 Glu Met Thr His Phe Arg Pro Gln Leu His His Ser Gly Asp Met Val 835 840 845 Phe Thr Pro Glu Ser Gly Leu Gln Leu Arg Leu Asn Glu Lys Leu Gly 850 855 860 Thr Thr Ala Ala Thr Glu Leu Lys Lys Leu Asp Phe Lys Val Ser Ser 865 870 875 880 Thr Ser Asn Asn Leu Ile Ser Thr Ile Pro Ser Asp Asn Leu Ala Ala 885 890 895 Gly Thr Asp Asn Thr Ser Ser Leu Gly Pro Pro Ser Met Pro Val His 900 905 910 Tyr Asp Ser Gln Leu Asp Thr Thr Leu Phe Gly Lys Lys Ser Ser Pro 915 920 925 Leu Thr Glu Ser Gly Gly Pro Leu Ser Leu Ser Glu Glu Asn Asn Asp 930 935 940 Ser Lys Leu Leu Glu Ser Gly Leu Met Asn Ser Gln Glu Ser Ser Trp 945 950 955 960 Gly Lys Asn Val Ser Ser Thr Glu Ser Gly Arg Leu Phe Lys Gly Lys 965 970 975 Arg Ala His Gly Pro Ala Leu Leu Thr Lys Asp Asn Ala Leu Phe Lys 980 985 990 Val Ser Ile Ser Leu Leu Lys Thr Asn Lys Thr Ser Asn Asn Ser Ala 995 1000 1005 Thr Asn Arg Lys Thr His Ile Asp Gly Pro Ser Leu Leu Ile Glu 1010 1015 1020 Asn Ser Pro Ser Val Trp Gln Asn Ile Leu Glu Ser Asp Thr Glu 1025 1030 1035 Phe Lys Lys Val Thr Pro Leu Ile His Asp Arg Met Leu Met Asp 1040 1045 1050 Lys Asn Ala Thr Ala Leu Arg Leu Asn His Met Ser Asn Lys Thr 1055 1060 1065 Thr Ser Ser Lys Asn Met Glu Met Val Gln Gln Lys Lys Glu Gly 1070 1075 1080 Pro Ile Pro Pro Asp Ala Gln Asn Pro Asp Met Ser Phe Phe Lys 1085 1090 1095 Met Leu Phe Leu Pro Glu Ser Ala Arg Trp Ile Gln Arg Thr His 1100 1105 1110 Gly Lys Asn Ser Leu Asn Ser Gly Gln Gly Pro Ser Pro Lys Gln 1115 1120 1125 Leu Val Ser Leu Gly Pro Glu Lys Ser Val Glu Gly Gln Asn Phe 1130 1135 1140 Leu Ser Glu Lys Asn Lys Val Val Val Gly Lys Gly Glu Phe Thr 1145 1150 1155 Lys Asp Val Gly Leu Lys Glu Met Val Phe Pro Ser Ser Arg Asn 1160 1165 1170 Leu Phe 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cggcctcatc ctcgcctggg 300 tcctcaacgc cctcgggtgc gactggttcg ccgggaactc ctggctcggg gacggcctcg 360 tcgtcgcctg gggcatcacc ggggacgagc tccacggggt cccctggagc gtcaccgggg 420 acctcctcga caggtagccc ggcctcgagc 450 <210> 29 <211> 144 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> XTEN AG144-B synthetic polypeptide <400> 29 Gly Thr Pro Gly Ser Gly Thr Ala Ser Ser Ser Pro Gly Ser Ser Thr 1 5 10 15 Pro Ser Gly Ala Thr Gly Ser Pro Gly Ala Ser Pro Gly Thr Ser Ser 20 25 30 Thr Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser Gly Thr Ala Ser Ser Ser Pro 35 40 45 Gly Ser Ser Thr Pro Ser Gly Ala Thr Gly Ser Pro Gly Ser Ser Pro 50 55 60 Ser Ala Ser Thr Gly Thr Gly Pro Gly Ser Ser Pro Ser Ala Ser Thr 65 70 75 80 Gly Thr Gly Pro Gly Ser Ser Thr Pro Ser Gly Ala Thr Gly Ser Pro 85 90 95 Gly Ser Ser Thr Pro Ser Gly Ala Thr Gly Ser Pro Gly Ala Ser Pro 100 105 110 Gly Thr Ser Ser Thr Gly Ser Pro Gly Ala Ser Pro Gly Thr Ser Ser 115 120 125 Thr Gly Ser Pro Gly Ala Ser Pro Gly Thr Ser Ser Thr Gly Ser Pro 130 135 140 <210> 30 <211> 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Gly Pro Gly Ser Ser Pro Ser Ala Ser 115 120 125 Thr Gly Thr Gly Pro Gly Ala Ser Pro Gly Thr Ser Ser Thr Gly Ser 130 135 140 Pro Gly Thr Pro Gly Ser Gly Thr Ala Ser Ser Ser Pro Gly Ser Ser 145 150 155 160 Thr Pro Ser Gly Ala Thr Gly Ser Pro Gly Ser Ser Pro Ser Ala Ser 165 170 175 Thr Gly Thr Gly Pro Gly Ser Ser Pro Ser Ala Ser Thr Gly Thr Gly 180 185 190 Pro Gly Ala Ser Pro Gly Thr Ser Ser Thr Gly Ser Pro Gly Ala Ser 195 200 205 Pro Gly Thr Ser Ser Thr Gly Ser Pro Gly Ser Ser Thr Pro Ser Gly 210 215 220 Ala Thr Gly Ser Pro Gly Ser Ser Pro Ser Ala Ser Thr Gly Thr Gly 225 230 235 240 Pro Gly Ala Ser Pro Gly Thr Ser Ser Thr Gly Ser Pro Gly Ser Ser 245 250 255 Pro Ser Ala Ser Thr Gly Thr Gly Pro Gly Thr Pro Gly Ser Gly Thr 260 265 270 Ala Ser Ser Ser Pro Gly Ser Ser Thr Pro Ser Gly Ala Thr Gly Ser 275 280 285 <210> 48 <211> 264 <212> PRT <213> Unknown <220> <223> GFP protein sequence (Genbank ID AAG34521.1) <400> 48 Met Ser Lys Gly Glu Glu Leu Phe Thr Gly Val Val Pro Ile Leu Val 1 5 10 15 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Sequence repeated n times, where n=0 , 1,2 ,3 ,4 or more. <400> 51 Gly Gly Gly Ser 1 <210> 52 <211> 18 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 52 Arg Leu Ile Glu Asp Ile Cys Leu Pro Arg Trp Gly Cys Leu Trp Glu 1 5 10 15 Asp Asp <210> 53 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 53 Gln Arg Leu Met Glu Asp Ile Cys Leu Pro Arg Trp Gly Cys Leu Trp 1 5 10 15 Glu Asp Asp Phe 20 <210> 54 <211> 21 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 54 Gln Gly Leu Ile Gly Asp Ile Cys Leu Pro Arg Trp Gly Cys Leu Trp 1 5 10 15 Gly Asp Ser Val Lys 20 <210> 55 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 55 Gly Glu Trp Trp Glu Asp Ile Cys Leu Pro Arg Trp Gly Cys Leu Trp 1 5 10 15 Glu Glu Glu Asp 20 <210> 56 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide, Cysteine-containing peptide <400> 56 Gly Gly Gly Ser Gly Cys Gly Gly Gly Ser 1 5 10 <210> 57 <211> 4544 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 57 Met Leu Thr Pro Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Ser Ala Leu 1 5 10 15 Val Ala Ala Ala Ile Asp Ala Pro Lys Thr Cys Ser Pro Lys Gln Phe 20 25 30 Ala Cys Arg Asp Gln Ile Thr Cys Ile Ser Lys Gly Trp Arg Cys Asp 35 40 45 Gly Glu Arg Asp Cys Pro Asp Gly Ser Asp Glu Ala Pro Glu Ile Cys 50 55 60 Pro Gln Ser Lys Ala Gln Arg Cys Gln Pro Asn Glu His Asn Cys Leu 65 70 75 80 Gly Thr Glu Leu Cys Val Pro Met Ser Arg Leu Cys Asn Gly Val Gln 85 90 95 Asp Cys Met Asp Gly Ser Asp Glu Gly Pro His Cys Arg Glu Leu Gln 100 105 110 Gly Asn Cys Ser Arg Leu Gly Cys Gln His His Cys Val Pro Thr Leu 115 120 125 Asp Gly Pro Thr Cys Tyr Cys Asn Ser Ser Phe Gln Leu Gln Ala Asp 130 135 140 Gly Lys Thr Cys Lys Asp Phe Asp Glu Cys Ser Val Tyr Gly Thr Cys 145 150 155 160 Ser Gln Leu Cys Thr Asn Thr Asp Gly Ser Phe Ile Cys Gly Cys Val 165 170 175 Glu Gly Tyr Leu Leu Gln Pro Asp Asn Arg Ser Cys Lys Ala Lys Asn 180 185 190 Glu Pro Val Asp Arg Pro Pro Val Leu Leu Ile Ala Asn Ser Gln Asn 195 200 205 Ile Leu Ala Thr Tyr Leu Ser Gly Ala Gln Val Ser Thr Ile Thr Pro 210 215 220 Thr Ser Thr Arg Gln Thr Thr Ala Met Asp Phe Ser Tyr Ala Asn Glu 225 230 235 240 Thr Val Cys Trp Val His Val Gly Asp Ser Ala Ala Gln Thr Gln Leu 245 250 255 Lys Cys Ala Arg Met Pro Gly Leu Lys Gly Phe Val Asp Glu His Thr 260 265 270 Ile Asn Ile Ser Leu Ser Leu His His Val Glu Gln Met Ala Ile Asp 275 280 285 Trp Leu Thr Gly Asn Phe Tyr Phe Val Asp Asp Ile Asp Asp Arg Ile 290 295 300 Phe Val Cys Asn Arg Asn Gly Asp Thr Cys Val Thr Leu Leu Asp Leu 305 310 315 320 Glu Leu Tyr Asn Pro Lys Gly Ile Ala Leu Asp Pro Ala Met Gly Lys 325 330 335 Val Phe Phe Thr Asp Tyr Gly Gln Ile Pro Lys Val Glu Arg Cys Asp 340 345 350 Met Asp Gly Gln Asn Arg Thr Lys Leu Val Asp Ser Lys Ile Val Phe 355 360 365 Pro His Gly Ile Thr Leu Asp Leu Val Ser Arg Leu Val Tyr Trp Ala 370 375 380 Asp Ala Tyr Leu Asp Tyr Ile Glu Val Val Asp Tyr Glu Gly Lys Gly 385 390 395 400 Arg Gln Thr Ile Ile Gln Gly Ile Leu Ile Glu His Leu Tyr Gly Leu 405 410 415 Thr Val Phe Glu Asn Tyr Leu Tyr Ala Thr Asn Ser Asp Asn Ala Asn 420 425 430 Ala Gln Gln Lys Thr Ser Val Ile Arg Val Asn Arg Phe Asn Ser Thr 435 440 445 Glu Tyr Gln Val Val Thr Arg Val Asp Lys Gly Gly Ala Leu His Ile 450 455 460 Tyr His Gln Arg Arg Gln Pro Arg Val Arg Ser His Ala Cys Glu Asn 465 470 475 480 Asp Gln Tyr Gly Lys Pro Gly Gly Cys Ser Asp Ile Cys Leu Leu Ala 485 490 495 Asn Ser His Lys Ala Arg Thr Cys Arg Cys Arg Ser Gly Phe Ser Leu 500 505 510 Gly Ser Asp Gly Lys Ser Cys Lys Lys Pro Glu His Glu Leu Phe Leu 515 520 525 Val Tyr Gly Lys Gly Arg Pro Gly Ile Ile Arg Gly Met Asp Met Gly 530 535 540 Ala Lys Val Pro Asp Glu His Met Ile Pro Ile Glu Asn Leu Met Asn 545 550 555 560 Pro Arg Ala Leu Asp Phe His Ala Glu Thr Gly Phe Ile Tyr Phe Ala 565 570 575 Asp Thr Thr Ser Tyr Leu Ile Gly Arg Gln Lys Ile Asp Gly Thr Glu 580 585 590 Arg Glu Thr Ile Leu Lys Asp Gly Ile His Asn Val Glu Gly Val Ala 595 600 605 Val Asp Trp Met Gly Asp Asn Leu Tyr Trp Thr Asp Asp Gly Pro Lys 610 615 620 Lys Thr Ile Ser Val Ala Arg Leu Glu Lys Ala Ala Gln Thr Arg Lys 625 630 635 640 Thr Leu Ile Glu Gly Lys Met Thr His Pro Arg 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Leu Asp Pro Phe Lys Pro Phe Ile Ile Phe Ser Asn Arg His Glu 1265 1270 1275 Ile Arg Arg Ile Asp Leu His Lys Gly Asp Tyr Ser Val Leu Val 1280 1285 1290 Pro Gly Leu Arg Asn Thr Ile Ala Leu Asp Phe His Leu Ser Gln 1295 1300 1305 Ser Ala Leu Tyr Trp Thr Asp Val Val Glu Asp Lys Ile Tyr Arg 1310 1315 1320 Gly Lys Leu Leu Asp Asn Gly Ala Leu Thr Ser Phe Glu Val Val 1325 1330 1335 Ile Gln Tyr Gly Leu Ala Thr Pro Glu Gly Leu Ala Val Asp Trp 1340 1345 1350 Ile Ala Gly Asn Ile Tyr Trp Val Glu Ser Asn Leu Asp Gln Ile 1355 1360 1365 Glu Val Ala Lys Leu Asp Gly Thr Leu Arg Thr Thr Leu Leu Ala 1370 1375 1380 Gly Asp Ile Glu His Pro Arg Ala Ile Ala Leu Asp Pro Arg Asp 1385 1390 1395 Gly Ile Leu Phe Trp Thr Asp Trp Asp Ala Ser Leu Pro Arg Ile 1400 1405 1410 Glu Ala Ala Ser Met Ser Gly Ala Gly Arg Arg Thr Val His Arg 1415 1420 1425 Glu Thr Gly Ser Gly Gly Trp Pro Asn Gly Leu Thr Val Asp Tyr 1430 1435 1440 Leu Glu Lys Arg Ile Leu Trp Ile Asp Ala Arg Ser Asp Ala Ile 1445 1450 1455 Tyr Ser Ala Arg Tyr Asp Gly Ser Gly His Met Glu Val Leu Arg 1460 1465 1470 Gly His Glu Phe Leu Ser His Pro Phe Ala Val Thr Leu Tyr Gly 1475 1480 1485 Gly Glu Val Tyr Trp Thr Asp Trp Arg Thr Asn Thr Leu Ala Lys 1490 1495 1500 Ala Asn Lys Trp Thr Gly His Asn Val Thr Val Val Gln Arg Thr 1505 1510 1515 Asn Thr Gln Pro Phe Asp Leu Gln Val Tyr His Pro Ser Arg Gln 1520 1525 1530 Pro Met Ala Pro Asn Pro Cys Glu Ala Asn Gly Gly Gln Gly Pro 1535 1540 1545 Cys Ser His Leu Cys Leu Ile Asn Tyr Asn Arg Thr Val Ser Cys 1550 1555 1560 Ala Cys Pro His Leu Met Lys Leu His Lys Asp Asn Thr Thr Cys 1565 1570 1575 Tyr Glu Phe Lys Lys Phe Leu Leu Tyr Ala Arg Gln Met Glu Ile 1580 1585 1590 Arg Gly Val Asp Leu Asp Ala Pro Tyr Tyr Asn Tyr Ile Ile Ser 1595 1600 1605 Phe Thr Val Pro Asp Ile Asp Asn Val Thr Val Leu Asp Tyr Asp 1610 1615 1620 Ala Arg Glu Gln Arg Val Tyr Trp Ser Asp Val Arg Thr Gln Ala 1625 1630 1635 Ile Lys Arg Ala Phe Ile Asn Gly Thr Gly Val Glu Thr Val Val 1640 1645 1650 Ser Ala Asp Leu Pro Asn Ala His Gly Leu Ala Val 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tcatttcagt ggacatgtgt tcactgtacg aaaaaaagag 3360 gagtataaaa tggcactgta caatctctat ccaggtgttt ttgagacagt ggaaatgtta 3420 ccatccaaag ctggaatttg gcgggtggaa tgccttattg gcgagcatct acatgctggg 3480 atgagcacac tttttctggt gtacagcaat aagtgtcaga ctcccctggg aatggcttct 3540 ggacacatta gagattttca gattacagct tcaggacaat atggacagtg ggccccaaag 3600 ctggccagac ttcattattc cggatcaatc aatgcctgga gcaccaagga gcccttttct 3660 tggatcaagg tggatctgtt ggcaccaatg attattcacg gcatcaagac ccagggtgcc 3720 cgtcagaagt tctccagcct ctacatctct cagtttatca tcatgtatag tcttgatggg 3780 aagaagtggc agacttatcg aggaaattcc actggaacct taatggtctt ctttggcaat 3840 gtggattcat ctgggataaa acacaatatt tttaaccctc caattattgc tcgatacatc 3900 cgtttgcacc caactcatta tagcattcgc agcactcttc gcatggagtt gatgggctgt 3960 gatttaaata gttgcagcat gccattggga atggagagta aagcaatatc agatgcacag 4020 attactgctt catcctactt taccaatatg tttgccacct ggtctccttc aaaagctcga 4080 cttcacctcc aagggaggag taatgcctgg agacctcagg tgaataatcc aaaagagtgg 4140 ctgcaagtgg acttccagaa gacaatgaaa gtcacaggag taactactca gggagtaaaa 4200 tctctgctta ccagcatgta tgtgaaggag ttcctcatct ccagcagtca agatggccat 4260 cagtggactc tcttttttca gaatggcaaa gtaaaggttt ttcagggaaa tcaagactcc 4320 ttcacacctg tggtgaactc tctagaccca ccgttactga ctcgctacct tcgaattcac 4380 ccccagagtt gggtgcacca gattgccctg aggatggagg ttctgggctg cgaggcacag 4440 gacctctacg gcgccggatc acctggggcc gaaacggccg aacaaaaact catctcagaa 4500 gaggatctgt cacctgcaac cggtcatcat caccatcacc at 4542 <210> 95 <211> 1514 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> FVIII-0022-CTP1 PROTEIN SEQUENCE <400> 95 Ala Thr Arg Arg Tyr Tyr Leu Gly Ala Val Glu Leu Ser Trp Asp Tyr 1 5 10 15 Met Gln Ser Asp Leu Gly Gly Ala Pro Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ser 20 25 30 Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu 35 40 45 Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Gly Gly Gly Gly Ser 50 55 60 Ala Ser Ser Glu Leu Pro Val Asp Ala Arg Phe Pro Pro Arg Val Pro 65 70 75 80 Lys Ser Phe Pro Phe Asn Thr Ser Val Val Tyr Lys Lys Thr Leu Phe 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tcaaatataa atggacagtg 1680 actgtagaag atgggccaac taaatcagat cctcggtgcc tgacccgcta ttactctagt 1740 ttcgttaata tggagagaga tctagcttca ggactcattg gccctctcct catctgctac 1800 aaagaatctg tagatcaaag aggaaaccag ataatgtcag acaagaggaa tgtcatcctg 1860 ttttctgtat ttgatgagaa ccgaagctgg tacctcacag agaatataca acgctttctc 1920 cccaatccag ctggagtgca gcttgaggat ccagagttcc aagcctccaa catcatgcac 1980 agcatcaatg gctatgtttt tgatagtttg cagttgtcag tttgtttgca tgaggtggca 2040 tactggtaca ttctaagcat tggagcacag actgacttcc tttctgtctt cttctctgga 2100 tataccttca aacacaaaat ggtctatgaa gacacactca ccctattccc attctcagga 2160 gaaactgtct tcatgtcgat ggaaaaccca ggtctatgga ttctggggtg ccacaactca 2220 gactttcgga acagaggcat gaccgcctta ctgaaggttt ctagttgtga caagaacact 2280 ggtgattatt acgaggacag ttatgaagat atttcagcat acttgctgag taaaaacaat 2340 gccattgaac caagaagctt ctctcaaaac ccaccagtct tgaaacgcca tcaacgggaa 2400 ataactcgta ctactcttca gtcagatcaa gaggaaatcg attatgatga taccatatca 2460 gttgaaatga agaaggaaga ttttgacatt tatgatgagg 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gagattttca gattacagct tcaggacaat atggacagtg ggccccaaag 3600 ctggccagac ttcattattc cggatcaatc aatgcctgga gcaccaagga gcccttttct 3660 tggatcaagg tggatctgtt ggcaccaatg attattcacg gcatcaagac ccagggtgcc 3720 cgtcagaagt tctccagcct ctacatctct cagtttatca tcatgtatag tcttgatggg 3780 aagaagtggc agacttatcg aggaaattcc actggaacct taatggtctt ctttggcaat 3840 gtggattcat ctgggataaa acacaatatt tttaaccctc caattattgc tcgatacatc 3900 cgtttgcacc caactcatta tagcattcgc agcactcttc gcatggagtt gatgggctgt 3960 gatttaaata gttgcagcat gccattggga atggagagta aagcaatatc agatgcacag 4020 attactgctt catcctactt taccaatatg tttgccacct ggtctccttc aaaagctcga 4080 cttcacctcc aagggaggag taatgcctgg agacctcagg tgaataatcc aaaagagtgg 4140 ctgcaagtgg acttccagaa gacaatgaaa gtcacaggag taactactca gggagtaaaa 4200 tctctgctta ccagcatgta tgtgaaggag ttcctcatct ccagcagtca agatggccat 4260 cagtggactc tcttttttca gaatggcaaa gtaaaggttt ttcagggaaa tcaagactcc 4320 ttcacacctg tggtgaactc tctagaccca ccgttactga ctcgctacct tcgaattcac 4380 ccccagagtt 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ctggatatac cttcaaacac 1980 aaaatggtct atgaagacac actcacccta ttcccattct caggagaaac tgtcttcatg 2040 tcgatggaaa acccaggtct atggattctg gggtgccaca actcagactt tcggaacaga 2100 ggcatgaccg ccttactgaa ggtttctagt tgtgacaaga acactggtga ttattacgag 2160 gacagttatg aagatatttc agcatacttg ctgagtaaaa acaatgccat tgaaccaaga 2220 agcttctctc aaaacccacc agtcttgaaa cgccatcaac gggaaataac tcgtactact 2280 cttcagtcag atcaagagga aatcgattat gatgatacca tatcagttga aatgaagaag 2340 gaagattttg acatttatga tgaggatgaa aatcagagcc cccgcagctt tcaaaagaaa 2400 acacgacact attttattgc tgcagtggag aggctctggg attatgggat gagtagctcc 2460 ccacatgttc taagaaacag ggctcagggc gcgccgggag gcggaggaag cgactccagc 2520 agcagcaagg cccctccccc tagcctgcct agccctagca ggctgcctgg acctagcgat 2580 acccccattc tgcctcaggg cggcggaggc agcgcctcga gcagggctca gagtggcagt 2640 gtccctcagt tcaagaaagt tgttttccag gaatttactg atggctcctt tactcagccc 2700 ttataccgtg gagaactaaa tgaacatttg ggactcctgg ggccatatat aagagcagaa 2760 gttgaagata atatcatggt aactttcaga aatcaggcct 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aggcagcgcc 3780 tcgagctggc agacttatcg aggaaattcc actggaacct taatggtctt ctttggcaat 3840 gtggattcat ctgggataaa acacaatatt tttaaccctc caattattgc tcgatacatc 3900 cgtttgcacc caactcatta tagcattcgc agcactcttc gcatggagtt gatgggctgt 3960 gatttaaata gttgcagcat gccattggga atggagagta aagcaatatc agatgcacag 4020 attactgctt catcctactt taccaatatg tttgccacct ggtctccttc aaaagctcga 4080 cttcacctcc aagggaggag taatgcctgg agacctcagg tgaataatcc aaaagagtgg 4140 ctgcaagtgg acttccagaa gacaatgaaa gtcacaggag taactactca gggagtaaaa 4200 tctctgctta ccagcatgta tgtgaaggag ttcctcatct ccagcagtca agatggccat 4260 cagtggactc tcttttttca gaatggcaaa gtaaaggttt ttcagggaaa tcaagactcc 4320 ttcacacctg tggtgaactc tctagaccca ccgttactga ctcgctacct tcgaattcac 4380 ccccagagtt gggtgcacca gattgccctg aggatggagg ttctgggctg cgaggcacag 4440 gacctctacg gcgccggatc acctggggcc gaaacggccg aacaaaaact catctcagaa 4500 gaggatctgt cacctgcaac cggtcatcat caccatcacc at 4542 <210> 127 <211> 1514 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 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aaccctccaa ttattgctcg atacatccgt 3900 ttgcacccaa ctcattatag cattcgcagc actcttcgca tggagttgat gggctgtgat 3960 ttaaatagtt gcagcatgcc attgggaatg gagagtaaag caatatcaga tgcacagatt 4020 actgcttcat cctactttac caatatgttt gccacctggt ctccttcaaa agctcgactt 4080 cacctccaag ggaggagtaa tgcctggaga cctcaggtga ataatccaaa agagtggctg 4140 caagtggact tccagaagac aatgaaagtc acaggagtaa ctactcaggg agtaaaatct 4200 ctgcttacca gcatgtatgt gaaggagttc ctcatctcca gcagtcaaga tggccatcag 4260 tggactctct tttttcagaa tggcaaagta aaggtttttc agggaaatca agactccttc 4320 acacctgtgg tgaactctct agacccaccg ttactgactc gctaccttcg aattcacccc 4380 cagagttggg tgcaccagat tgccctgagg atggaggttc tgggctgcga ggcacaggac 4440 ctctacggcg ccggatcacc tggggccgaa acggccgaac aaaaactcat ctcagaagag 4500 gatctgtcac ctgcaaccgg tcatcatcac catcaccat 4539 <210> 133 <211> 1513 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> FVIII-0116-ABP1 PROTEIN SEQUENCE <400> 133 Ala Thr Arg Arg Tyr Tyr Leu Gly Ala Val Glu Leu Ser Trp Asp Tyr 1 5 10 15 Met Gln Ser Asp 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tataaatgga cagtgactgt agaagatggg 1560 ccaactaaat cagatcctcg gtgcctgacc cgctattact ctagtttcgt taatatggag 1620 agagatctag cttcaggact cattggccct ctcctcatct gctacaaaga atctgtagat 1680 caaagaggaa accagataat gtcagacaag aggaatgtca tcctgttttc tgtatttgat 1740 gagaaccgaa gctggtacct cacagagaat atacaacgct ttctccccaa tccagctggc 1800 gcgccgggcg gaggaggctc cggaggaggc ggaagcaggc tgatcgagga catctgcctg 1860 cccaggtggg gctgtctgtg ggaagatgac ggaggcggcg gaagcggagg cggaggaagc 1920 gcctcgagcg gagtgcagct tgaggatcca gagttccaag cctccaacat catgcacagc 1980 atcaatggct atgtttttga tagtttgcag ttgtcagttt gtttgcatga ggtggcatac 2040 tggtacattc taagcattgg agcacagact gacttccttt ctgtcttctt ctctggatat 2100 accttcaaac acaaaatggt ctatgaagac acactcaccc tattcccatt ctcaggagaa 2160 actgtcttca tgtcgatgga aaacccaggt ctatggattc tggggtgcca caactcagac 2220 tttcggaaca gaggcatgac cgccttactg aaggtttcta gttgtgacaa gaacactggt 2280 gattattacg aggacagtta tgaagatatt tcagcatact tgctgagtaa aaacaatgcc 2340 attgaaccaa gaagcttctc tcaaaaccca ccagtcttga aacgccatca acgggaaata 2400 actcgtacta ctcttcagtc agatcaagag gaaatcgatt atgatgatac catatcagtt 2460 gaaatgaaga aggaagattt tgacatttat gatgaggatg aaaatcagag cccccgcagc 2520 tttcaaaaga aaacacgaca ctattttatt gctgcagtgg agaggctctg ggattatggg 2580 atgagtagct ccccacatgt tctaagaaac agggctcaga gtggcagtgt ccctcagttc 2640 aagaaagttg ttttccagga atttactgat ggctccttta ctcagccctt ataccgtgga 2700 gaactaaatg aacatttggg actcctgggg ccatatataa gagcagaagt tgaagataat 2760 atcatggtaa ctttcagaaa tcaggcctct cgtccctatt ccttctattc tagccttatt 2820 tcttatgagg aagatcagag gcaaggagca gaacctagaa aaaactttgt caagcctaat 2880 gaaaccaaaa cttacttttg gaaagtgcaa catcatatgg cacccactaa agatgagttt 2940 gactgcaaag cctgggctta tttctctgat gttgacctgg aaaaagatgt gcactcaggc 3000 ctgattggac cccttctggt ctgccacact aacacactga accctgctca tgggagacaa 3060 gtgacagtac aggaatttgc tctgtttttc accatctttg atgagaccaa aagctggtac 3120 ttcactgaaa atatggaaag aaactgcagg gctccctgca atatccagat ggaagatccc 3180 acttttaaag agaattatcg cttccatgca atcaatggct acataatgga tacactacct 3240 ggcttagtaa tggctcagga tcaaaggatt cgatggtatc tgctcagcat gggcagcaat 3300 gaaaacatcc attctattca tttcagtgga catgtgttca ctgtacgaaa aaaagaggag 3360 tataaaatgg cactgtacaa tctctatcca ggtgtttttg agacagtgga aatgttacca 3420 tccaaagctg gaatttggcg ggtggaatgc cttattggcg agcatctaca tgctgggatg 3480 agcacacttt ttctggtgta cagcaataag tgtcagactc ccctgggaat ggcttctgga 3540 cacattagag attttcagat tacagcttca ggacaatatg gacagtgggc cccaaagctg 3600 gccagacttc attattccgg atcaatcaat gcctggagca ccaaggagcc cttttcttgg 3660 atcaaggtgg atctgttggc accaatgatt attcacggca tcaagaccca gggtgcccgt 3720 cagaagttct ccagcctcta catctctcag tttatcatca tgtatagtct tgatgggaag 3780 aagtggcaga cttatcgagg aaattccact ggaaccttaa tggtcttctt tggcaatgtg 3840 gattcatctg ggataaaaca caatattttt aaccctccaa ttattgctcg atacatccgt 3900 ttgcacccaa ctcattatag cattcgcagc actcttcgca tggagttgat gggctgtgat 3960 ttaaatagtt gcagcatgcc attgggaatg gagagtaaag caatatcaga tgcacagatt 4020 actgcttcat cctactttac caatatgttt 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agatcaagag gaaatcgatt atgatgatac catatcagtt 2460 gaaatgaaga aggaagattt tgacatttat gatgaggatg aaaatcagag cccccgcagc 2520 tttcaaaaga aaacacgaca ctattttatt gctgcagtgg agaggctctg ggattatggg 2580 atgagtagct ccccacatgt tctaagaaac agggctcaga gtggcagtgt ccctcagttc 2640 aagaaagttg ttttccagga atttactgat ggctccttta ctcagccctt ataccgtgga 2700 gaactaaatg aacatttggg actcctgggg ccatatataa gagcagaagt tgaagataat 2760 atcatggtaa ctttcagaaa tcaggcctct cgtccctatt ccttctattc tagccttatt 2820 tcttatgagg aagatcagag gcaaggagca gaacctagaa aaaactttgt caagcctaat 2880 gaaaccaaaa cttacttttg gaaagtgcaa catcatatgg cacccactaa agatgagttt 2940 gactgcaaag cctgggctta tttctctgat gttgacctgg aaaaagatgt gcactcaggc 3000 ctgattggac cccttctggt ctgccacact aacacactga accctgctca tgggagacaa 3060 gtgacagtac aggaatttgc tctgtttttc accatctttg atgagaccaa aagctggtac 3120 ttcactgaaa atatggaaag aaactgcagg gctccctgca atatccagat ggaagatccc 3180 acttttaaag agaattatcg cttccatgca atcaatggct acataatgga tacactacct 3240 ggcttagtaa tggctcagga tcaaaggatt cgatggtatc tgctcagcat gggcagcaat 3300 gaaaacatcc attctattca tttcagtgga catgtgttca ctgtacgaaa aaaagaggag 3360 tataaaatgg cactgtacaa tctctatcca ggtgtttttg agacagtgga aatgttacca 3420 tccaaagctg gaatttggcg ggtggaatgc cttattggcg agcatctaca tgctgggatg 3480 agcacacttt ttctggtgta cagcaataag tgtcagactc ccctgggaat ggcttctgga 3540 cacattagag attttcagat tacagcttca ggacaatatg gacagtgggc cccaaagctg 3600 gccagacttc attattccgg atcaatcaat gcctggagca ccaaggagcc cttttcttgg 3660 atcaaggtgg atctgttggc accaatgatt attcacggca tcaagaccca gggtgcccgt 3720 cagaagttct ccagcctcta catctctcag tttatcatca tgtatagtct tgatgggaag 3780 aagtggcaga cttatcgagg aaattccact ggaaccttaa tggtcttctt tggcaatgtg 3840 gattcatctg ggataaaaca caatattttt aaccctccaa ttattgctcg atacatccgt 3900 ttgcacccaa ctcattatag cattcgcagc actcttcgca tggagttgat gggctgtgat 3960 ttaaatagtt gcagcatgcc attgggaatg gagagtaaag caatatcaga tgcacagatt 4020 actgcttcat cctactttac caatatgttt gccacctggt ctccttcaaa agctcgactt 4080 cacctccaag ggaggagtaa 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gctacaaaga atctgtagat 1680 caaagaggaa accagataat gtcagacaag aggaatgtca tcctgttttc tgtatttgat 1740 gagaaccgaa gctggtacct cacagagaat atacaacgct ttctccccaa tccagctgga 1800 gtgcagcttg aggatccaga gttccaagcc tccaacatca tgcacagcat caatggctat 1860 gtttttgata gtttgcagtt gtcagtttgt ttgcatgagg tggcatactg gtacattcta 1920 agcattggag cacagactga cttcctttct gtcttcttct ctggatatac cttcaaacac 1980 aaaatggtct atgaagacac actcacccta ttcccattct caggagaaac tgtcttcatg 2040 tcgatggaaa acccaggtct atggattctg gggtgccaca actcagactt tcggaacaga 2100 ggcatgaccg ccttactgaa ggtttctagt tgtgacaaga acactggtga ttattacgag 2160 gacagttatg aagatatttc agcatacttg ctgagtaaaa acaatgccat tgaaccaaga 2220 agcttctctc aaaacccacc agtcttgaaa cgccatcaac gggaaataac tcgtactact 2280 cttcagtcag atcaagagga aatcgattat gatgatacca tatcagttga aatgaagaag 2340 gaagattttg acatttatga tgaggatgaa aatcagagcc cccgcagctt tcaaaagaaa 2400 acacgacact attttattgc tgcagtggag aggctctggg attatgggat gagtagctcc 2460 ccacatgttc taagaaacag ggctcagagt ggcagtgtcc ctcagttcaa gaaagttgtt 2520 ttccaggaat ttactgatgg ctcctttact cagcccttat accgtggaga actaaatgaa 2580 catttgggac tcctggggcc atatataaga gcagaagttg aagataatat catggtaact 2640 ttcagaaatc aggcctctcg tccctattcc ttctattcta gccttatttc ttatgaggaa 2700 gatcagaggc aaggagcaga acctagaaaa aactttgtca agcctaatga aaccaaaact 2760 tacttttgga aagtgcaaca tcatatggca cccactaaag atgagtttga ctgcaaagcc 2820 tgggcttatt tctctgatgt tgacctggaa aaagatgtgc actcaggcct gattggaccc 2880 cttctggtct gccacactaa cacactgaac cctgctcatg ggagacaagt gacagtacag 2940 gaatttgctc tgtttttcac catctttgat gagaccaaaa gctggtactt cactgaaaat 3000 atggaaagaa actgcagggg cgcgccgggc ggaggaggct ccggaggagg cggaagcagg 3060 ctgatcgagg acatctgcct gcccaggtgg ggctgtctgt gggaagatga cggaggcggc 3120 ggaagcggag gcggaggaag cgcctcgagc gctccctgca atatccagat ggaagatccc 3180 acttttaaag agaattatcg cttccatgca atcaatggct acataatgga tacactacct 3240 ggcttagtaa tggctcagga tcaaaggatt cgatggtatc tgctcagcat gggcagcaat 3300 gaaaacatcc attctattca tttcagtgga catgtgttca ctgtacgaaa aaaagaggag 3360 tataaaatgg cactgtacaa tctctatcca ggtgtttttg agacagtgga aatgttacca 3420 tccaaagctg gaatttggcg ggtggaatgc cttattggcg agcatctaca tgctgggatg 3480 agcacacttt ttctggtgta cagcaataag tgtcagactc ccctgggaat ggcttctgga 3540 cacattagag attttcagat tacagcttca ggacaatatg gacagtgggc cccaaagctg 3600 gccagacttc attattccgg atcaatcaat gcctggagca ccaaggagcc cttttcttgg 3660 atcaaggtgg atctgttggc accaatgatt attcacggca tcaagaccca gggtgcccgt 3720 cagaagttct ccagcctcta catctctcag tttatcatca tgtatagtct tgatgggaag 3780 aagtggcaga cttatcgagg aaattccact ggaaccttaa tggtcttctt tggcaatgtg 3840 gattcatctg ggataaaaca caatattttt aaccctccaa ttattgctcg atacatccgt 3900 ttgcacccaa ctcattatag cattcgcagc actcttcgca tggagttgat gggctgtgat 3960 ttaaatagtt gcagcatgcc attgggaatg gagagtaaag caatatcaga tgcacagatt 4020 actgcttcat cctactttac caatatgttt gccacctggt ctccttcaaa agctcgactt 4080 cacctccaag ggaggagtaa tgcctggaga cctcaggtga ataatccaaa agagtggctg 4140 caagtggact tccagaagac aatgaaagtc acaggagtaa ctactcaggg agtaaaatct 4200 ctgcttacca gcatgtatgt gaaggagttc ctcatctcca gcagtcaaga tggccatcag 4260 tggactctct tttttcagaa tggcaaagta aaggtttttc agggaaatca agactccttc 4320 acacctgtgg tgaactctct agacccaccg ttactgactc gctaccttcg aattcacccc 4380 cagagttggg tgcaccagat tgccctgagg atggaggttc tgggctgcga ggcacaggac 4440 ctctacggcg ccggatcacc tggggccgaa acggccgaac aaaaactcat ctcagaagag 4500 gatctgtcac ctgcaaccgg tcatcatcac catcaccat 4539 <210> 149 <211> 1513 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> FVIII-1900-ABP1 PROTEIN SEQUENCE <400> 149 Ala Thr Arg Arg Tyr Tyr Leu Gly Ala Val Glu Leu Ser Trp Asp Tyr 1 5 10 15 Met Gln Ser Asp Leu Gly Glu Leu Pro Val Asp Ala Arg Phe Pro Pro 20 25 30 Arg Val Pro Lys Ser Phe Pro Phe Asn Thr Ser Val Val Tyr Lys Lys 35 40 45 Thr Leu Phe Val Glu Phe Thr Asp His Leu Phe Asn Ile Ala Lys Pro 50 55 60 Arg Pro Pro Trp Met Gly Leu Leu Gly Pro Thr Ile Gln Ala Glu Val 65 70 75 80 Tyr Asp Thr Val Val Ile Thr Leu Lys Asn Met Ala Ser His Pro Val 85 90 95 Ser Leu His Ala 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gtcagacaag aggaatgtca tcctgttttc tgtatttgat 1740 gagaaccgaa gctggtacct cacagagaat atacaacgct ttctccccaa tccagctgga 1800 gtgcagcttg aggatccaga gttccaagcc tccaacatca tgcacagcat caatggctat 1860 gtttttgata gtttgcagtt gtcagtttgt ttgcatgagg tggcatactg gtacattcta 1920 agcattggag cacagactga cttcctttct gtcttcttct ctggatatac cttcaaacac 1980 aaaatggtct atgaagacac actcacccta ttcccattct caggagaaac tgtcttcatg 2040 tcgatggaaa acccaggtct atggattctg gggtgccaca actcagactt tcggaacaga 2100 ggcatgaccg ccttactgaa ggtttctagt tgtgacaaga acactggtga ttattacgag 2160 gacagttatg aagatatttc agcatacttg ctgagtaaaa acaatgccat tgaaccaaga 2220 agcttctctc aaaacccacc agtcttgaaa cgccatcaac gggaaataac tcgtactact 2280 cttcagtcag atcaagagga aatcgattat gatgatacca tatcagttga aatgaagaag 2340 gaagattttg acatttatga tgaggatgaa aatcagagcc cccgcagctt tcaaaagaaa 2400 acacgacact attttattgc tgcagtggag aggctctggg attatgggat gagtagctcc 2460 ccacatgttc taagaaacag ggctcagagt ggcagtgtcc ctcagttcaa gaaagttgtt 2520 ttccaggaat ttactgatgg ctcctttact cagcccttat accgtggaga actaaatgaa 2580 catttgggac tcctggggcc atatataaga gcagaagttg aagataatat catggtaact 2640 ttcagaaatc aggcctctcg tccctattcc ttctattcta gccttatttc ttatgaggaa 2700 gatcagaggc aaggagcaga acctagaaaa aactttgtca agcctaatga aaccaaaact 2760 tacttttgga aagtgcaaca tcatatggca cccactaaag atgagtttga ctgcaaagcc 2820 tgggcttatt tctctgatgt tgacctggaa aaagatgtgc actcaggcct gattggaccc 2880 cttctggtct gccacactaa cacactgaac cctgctcatg ggagacaagt gacagtacag 2940 gaatttgctc tgtttttcac catctttgat gagaccaaaa gctggtactt cactgaaaat 3000 atggaaagaa actgcagggc tccctgcaat atccagatgg aagatcccac ttttaaagag 3060 aattatcgct tccatgcaat caatggctac ataatggata cactacctgg cttagtaatg 3120 gctcaggatc aaaggattcg atggtatctg ctcagcatgg gcagcaatga aaacatccat 3180 tctattcatt tcagtggaca tgtgttcact gtacgaaaaa aagaggagta taaaatggca 3240 ctgtacaatc tctatccagg tgtttttgag acagtggaaa tgttaccatc caaagctgga 3300 atttggcggg tggaatgcct tattggcgag catctacatg ctgggatgag cacacttttt 3360 ctggtgtaca gcaataagtg tcagactccc ctgggaatgg cttctggaca cattagagat 3420 tttcagatta cagcttcagg acaatatgga cagtgggccc caaagctggc cagacttcat 3480 tattccggat caatcaatgc ctggagcacc aaggagccct tttcttggat caaggtggat 3540 ctgttggcac caatgattat tcacggcatc aagacccagg gtgcccgtca gaagttctcc 3600 agcctctaca tctctcagtt tatcatcatg tatagtcttg atgggaagaa gggcgcgccg 3660 ggcggaggag gctccggagg aggcggaagc aggctgatcg aggacatctg cctgcccagg 3720 tggggctgtc tgtgggaaga tgacggaggc ggcggaagcg gaggcggagg aagcgcctcg 3780 agctggcaga cttatcgagg aaattccact ggaaccttaa tggtcttctt tggcaatgtg 3840 gattcatctg ggataaaaca caatattttt aaccctccaa ttattgctcg atacatccgt 3900 ttgcacccaa ctcattatag cattcgcagc actcttcgca tggagttgat gggctgtgat 3960 ttaaatagtt gcagcatgcc attgggaatg gagagtaaag caatatcaga tgcacagatt 4020 actgcttcat cctactttac caatatgttt gccacctggt ctccttcaaa agctcgactt 4080 cacctccaag ggaggagtaa tgcctggaga cctcaggtga ataatccaaa agagtggctg 4140 caagtggact tccagaagac aatgaaagtc acaggagtaa ctactcaggg agtaaaatct 4200 ctgcttacca gcatgtatgt 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tcgtgtacaa aaagactctg tttgtagaat tcacggatca ccttttcaac 180 atcgctaagc caaggccacc ctggatgggt ctgctaggtc ctaccatcca ggctgaggtt 240 tatgatacag tggtcattac acttaagaac atggcttccc atcctgtcag tcttcatgct 300 gttggtgtat cctactggaa agcttctgag ggagctgaat atgatgatgg cgcgccggga 360 ggaggcggct ccggcggagg aggaagcggc ggaggaggca gcggaggcgg cggctccggc 420 ggcggcggca gcggcggcgg aggcagcgga ggcggcggca gcgcctcgag ccagaccagt 480 caaagggaga aagaagatga taaagtcttc cctggtggaa gccatacata tgtctggcag 540 gtcctgaaag agaatggtcc aatggcctct gacccactgt gccttaccta ctcatatctt 600 tctcatgtgg acctggtaaa agacttgaat tcaggcctca ttggagccct actagtatgt 660 agagaaggga gtctggccaa ggaaaagaca cagaccttgc acaaatttat actacttttt 720 gctgtatttg atgaagggaa aagttggcac tcagaaacaa agaactcctt gatgcaggat 780 agggatgctg catctgctcg ggcctggcct aaaatgcaca cagtcaatgg ttatgtaaac 840 aggtctctgc caggtctgat tggatgccac aggaaatcag tctattggca tgtgattgga 900 atgggcacca ctcctgaagt gcactcaata ttcctcgaag gtcacacatt tcttgtgagg 960 aaccatcgcc aggctagctt 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tggctccttt actcagccct tataccgtgg agaactaaat 2700 gaacatttgg gactcctggg gccatatata agagcagaag ttgaagataa tatcatggta 2760 actttcagaa atcaggcctc tcgtccctat tccttctatt ctagccttat ttcttatgag 2820 gaagatcaga ggcaaggagc agaacctaga aaaaactttg tcaagcctaa tgaaaccaaa 2880 acttactttt ggaaagtgca acatcatatg gcacccacta aagatgagtt tgactgcaaa 2940 gcctgggctt atttctctga tgttgacctg gaaaaagatg tgcactcagg cctgattgga 3000 ccccttctgg tctgccacac taacacactg aaccctgctc atgggagaca agtgacagta 3060 caggaatttg ctctgttttt caccatcttt gatgagacca aaagctggta cttcactgaa 3120 aatatggaaa gaaactgcag ggctccctgc aatatccaga tggaagatcc cacttttaaa 3180 gagaattatc gcttccatgc aatcaatggc tacataatgg atacactacc tggcttagta 3240 atggctcagg atcaaaggat tcgatggtat ctgctcagca tgggcagcaa tgaaaacatc 3300 cattctattc atttcagtgg acatgtgttc actgtacgaa aaaaagagga gtataaaatg 3360 gcactgtaca atctctatcc aggtgttttt gagacagtgg aaatgttacc atccaaagct 3420 ggaatttggc gggtggaatg ccttattggc gagcatctac atgctgggat gagcacactt 3480 tttctggtgt acagcaataa 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gagcacagac tgacttcctt tctgtcttct tctctggata taccttcaaa 2100 cacaaaatgg tctatgaaga cacactcacc ctattcccat tctcaggaga aactgtcttc 2160 atgtcgatgg aaaacccagg tctatggatt ctggggtgcc acaactcaga ctttcggaac 2220 agaggcatga ccgccttact gaaggtttct agttgtgaca agaacactgg tgattattac 2280 gaggacagtt atgaagatat ttcagcatac ttgctgagta aaaacaatgc cattgaacca 2340 agaagcttct ctcaaaaccc accagtcttg aaacgccatc aacgggaaat aactcgtact 2400 actcttcagt cagatcaaga ggaaatcgat tatgatgata ccatatcagt tgaaatgaag 2460 aaggaagatt ttgacattta tgatgaggat gaaaatcaga gcccccgcag ctttcaaaag 2520 aaaacacgac actattttat tgctgcagtg gagaggctct gggattatgg gatgagtagc 2580 tccccacatg ttctaagaaa cagggctcag agtggcagtg tccctcagtt caagaaagtt 2640 gttttccagg aatttactga tggctccttt actcagccct tataccgtgg agaactaaat 2700 gaacatttgg gactcctggg gccatatata agagcagaag ttgaagataa tatcatggta 2760 actttcagaa atcaggcctc tcgtccctat tccttctatt ctagccttat ttcttatgag 2820 gaagatcaga ggcaaggagc agaacctaga aaaaactttg tcaagcctaa tgaaaccaaa 2880 acttactttt ggaaagtgca acatcatatg gcacccacta aagatgagtt tgactgcaaa 2940 gcctgggctt atttctctga tgttgacctg gaaaaagatg tgcactcagg cctgattgga 3000 ccccttctgg tctgccacac taacacactg aaccctgctc atgggagaca agtgacagta 3060 caggaatttg ctctgttttt caccatcttt gatgagacca aaagctggta cttcactgaa 3120 aatatggaaa gaaactgcag ggctccctgc aatatccaga tggaagatcc cacttttaaa 3180 gagaattatc gcttccatgc aatcaatggc tacataatgg atacactacc tggcttagta 3240 atggctcagg atcaaaggat tcgatggtat ctgctcagca tgggcagcaa tgaaaacatc 3300 cattctattc atttcagtgg acatgtgttc actgtacgaa aaaaagagga gtataaaatg 3360 gcactgtaca atctctatcc aggtgttttt gagacagtgg aaatgttacc atccaaagct 3420 ggaatttggc gggtggaatg ccttattggc gagcatctac atgctgggat gagcacactt 3480 tttctggtgt acagcaataa gtgtcagact cccctgggaa tggcttctgg acacattaga 3540 gattttcaga ttacagcttc aggacaatat ggacagtggg ccccaaagct ggccagactt 3600 cattattccg gatcaatcaa tgcctggagc accaaggagc ccttttcttg gatcaaggtg 3660 gatctgttgg caccaatgat tattcacggc atcaagaccc agggtgcccg tcagaagttc 3720 tccagcctct 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tcgtactact 2280 cttcagtcag atcaagagga aatcgattat gatgatacca tatcagttga aatgaagaag 2340 gaagattttg acatttatga tgaggatgaa aatcagagcc cccgcagctt tcaaaagaaa 2400 acacgacact attttattgc tgcagtggag aggctctggg attatgggat gagtagctcc 2460 ccacatgttc taagaaacag ggctcagagt ggcagtgtcc ctcagttcaa gaaagttgtt 2520 ttccaggaat ttactgatgg ctcctttact cagcccttat accgtggaga actaaatgaa 2580 catttgggac tcctggggcc atatataaga gcagaagttg aagataatat catggtaact 2640 ttcagaaatc aggcctctcg tccctattcc ttctattcta gccttatttc ttatgaggaa 2700 gatcagaggc aaggagcaga acctagaaaa aactttgtca agcctaatga aaccaaaact 2760 tacttttgga aagtgcaaca tcatatggca cccactaaag atgagtttga ctgcaaagcc 2820 tgggcttatt tctctgatgt tgacctggaa aaagatgtgc actcaggcct gattggaccc 2880 cttctggtct gccacactaa cacactgaac cctgctcatg ggagacaagt gacagtacag 2940 gaatttgctc tgtttttcac catctttgat gagaccaaaa gctggtactt cactgaaaat 3000 atggaaagaa actgcagggg cgcgccggga ggaggcggct ccggcggagg aggaagcggc 3060 ggaggaggca gcggaggcgg cggctccggc ggcggcggca gcggcggcgg 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Ala Gln Ser Gly Ser Val Pro Gln Phe Lys Lys Val 865 870 875 880 Val Phe Gln Glu Phe Thr Asp Gly Ser Phe Thr Gln Pro Leu Tyr Arg 885 890 895 Gly Glu Leu Asn Glu His Leu Gly Leu Leu Gly Pro Tyr Ile Arg Ala 900 905 910 Glu Val Glu Asp Asn Ile Met Val Thr Phe Arg Asn Gln Ala Ser Arg 915 920 925 Pro Tyr Ser Phe Tyr Ser Ser Leu Ile Ser Tyr Glu Glu Asp Gln Arg 930 935 940 Gln Gly Ala Glu Pro Arg Lys Asn Phe Val Lys Pro Asn Glu Thr Lys 945 950 955 960 Thr Tyr Phe Trp Lys Val Gln His His Met Ala Pro Thr Lys Asp Glu 965 970 975 Phe Asp Cys Lys Ala Trp Ala Tyr Phe Ser Asp Val Asp Leu Glu Lys 980 985 990 Asp Val His Ser Gly Leu Ile Gly Pro Leu Leu Val Cys His Thr Asn 995 1000 1005 Thr Leu Asn Pro Ala His Gly Arg Gln Val Thr Val Gln Glu Phe 1010 1015 1020 Ala Leu Phe Phe Thr Ile Phe Asp Glu Thr Lys Ser Trp Tyr Phe 1025 1030 1035 Thr Glu Asn Met Glu Arg Asn Cys Arg Ala Pro Cys Asn Ile Gln 1040 1045 1050 Met Glu Asp Pro Thr Phe Lys Glu Asn Tyr Arg Phe His Ala Ile 1055 1060 1065 Asn Gly Tyr Ile Met Asp Thr Leu Pro Gly Leu Val Met Ala Gln 1070 1075 1080 Asp Gln Arg Ile Arg Trp Tyr Leu Leu Ser Met Gly Ser Asn Glu 1085 1090 1095 Asn Ile His Ser Ile His Phe Ser Gly His Val Phe Thr Val Arg 1100 1105 1110 Lys Lys Glu Glu Tyr Lys Met Ala Leu Tyr Asn Leu Tyr Pro Gly 1115 1120 1125 Val Phe Glu Thr Val Glu Met Leu Pro Ser Lys Ala Gly Ile Trp 1130 1135 1140 Arg Val Glu Cys Leu Ile Gly Glu His Leu His Ala Gly Met Ser 1145 1150 1155 Thr Leu Phe Leu Val Tyr Ser Asn Lys Cys Gln Thr Pro Leu Gly 1160 1165 1170 Met Ala Ser Gly His Ile Arg Asp Phe Gln Ile Thr Ala Ser Gly 1175 1180 1185 Gln Tyr Gly Gln Trp Ala Pro Lys Leu Ala Arg Leu His Tyr Ser 1190 1195 1200 Gly Ser Ile Asn Ala Trp Ser Thr Lys Glu Pro Phe Ser Trp Ile 1205 1210 1215 Lys Val Asp Leu Leu Ala Pro Met Ile Ile His Gly Ile Lys Thr 1220 1225 1230 Gln Gly Ala Arg Gln Lys Phe Ser Ser Leu Tyr Ile Ser Gln Phe 1235 1240 1245 Ile Ile Met Tyr Ser Leu Asp Gly Lys Lys Trp Gln Thr Tyr Arg 1250 1255 1260 Gly Asn Ser Thr Gly Thr Leu Met Val Phe Phe Gly Asn Val Asp 1265 1270 1275 Ser Ser Gly Ile Lys His Asn Ile Phe Asn Pro Pro Ile Ile Ala 1280 1285 1290 Arg Tyr Ile Arg Leu His Pro Thr His Tyr Ser Ile Arg Ser Thr 1295 1300 1305 Leu Arg Met Glu Leu Met Gly Cys Asp Leu Asn Ser Cys Ser Met 1310 1315 1320 Pro Leu Gly Met Glu Ser Lys Ala Ile Ser Asp Ala Gln Ile Thr 1325 1330 1335 Ala Ser Ser Tyr Phe Thr Asn Met Phe Ala Thr Trp Ser Pro Ser 1340 1345 1350 Lys Ala Arg Leu His Leu Gln Gly Arg Ser Asn Ala Trp Arg Pro 1355 1360 1365 Gln Val Asn Asn Pro Lys Glu Trp Leu Gln Val Asp Phe Gln Lys 1370 1375 1380 Thr Met Lys Val Thr Gly Val Thr Thr Gln Gly Val Lys Ser Leu 1385 1390 1395 Leu Thr Ser Met Tyr Val Lys Glu Phe Leu Ile Ser Ser Ser Gln 1400 1405 1410 Asp Gly His Gln Trp Thr Leu Phe Phe Gln Asn Gly Lys Val Lys 1415 1420 1425 Val Phe Gln Gly Asn Gln Asp Ser Phe Thr Pro Val Val Asn Ser 1430 1435 1440 Leu Asp Pro Pro Leu Leu Thr Arg Tyr Leu Arg Ile His Pro Gln 1445 1450 1455 Ser Trp Val His Gln Ile Ala Leu Arg Met Glu Val Leu Gly Cys 1460 1465 1470 Glu Ala Gln Asp Leu Tyr Gly Ala Gly Ser Pro Gly Ala Glu Thr 1475 1480 1485 Ala Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Ser Pro Ala Thr 1490 1495 1500 Gly His His His His His His 1505 1510 <210> 191 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Gly4Ser linker <400> 191 Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 192 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> (Gly4Ser)n linker, n=2 <400> 192 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 <210> 193 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> (Gly4Ser)n linker, n=3 <400> 193 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 194 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> (Gly4Ser)n linker, n=4 <400> 194 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Ser 20 <210> 195 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> (Gly4Ser)n linker, n=5 <400> 195 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 20 25 <210> 196 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> (Gly4Ser)n linker, n=6 <400> 196 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 20 25 30 <210> 197 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> (Gly4Ser)n linker, n=7 <400> 197 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 20 25 30 Gly Gly Ser 35 <210> 198 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> (Gly4Ser)n linker, n=8 <400> 198 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 20 25 30 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 35 40 <210> 199 <211> 45 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> (Gly4Ser)n linker, n=9 <400> 199 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 20 25 30 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 35 40 45 <210> 200 <211> 50 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> (Gly4Ser)n linker, n=10 <400> 200 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 20 25 30 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 35 40 45 Gly Ser 50 <210> 201 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ser(Gly4Ser)n linker, GGGGS subsequence repeated n times, where n= 1 to 400 <400> 201 Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 202 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ser(Gly4Ser)n linker, n=1 <400> 202 Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 203 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ser(Gly4Ser)n linker, n=2 <400> 203 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 <210> 204 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 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Gly Gly Gly Ser Gly 20 25 30 Gly Gly Gly Ser 35 <210> 209 <211> 41 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ser(Gly4Ser)n linker, n=8 <400> 209 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 20 25 30 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 35 40 <210> 210 <211> 46 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ser(Gly4Ser)n linker, n=9 <400> 210 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 20 25 30 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 35 40 45 <210> 211 <211> 51 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ser(Gly4Ser)n linker, n=10 <400> 211 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 20 25 30 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 35 40 45 Gly Gly Ser 50

Claims (110)

  1. 재조합 FVIII 단백질로서, 식 I: (A1)-a1-(A2)-a2-[B]를 포함하는 제1 폴리펩타이드; 및 식 II: a3-(A3)-(C1)을 포함하는 제2 폴리펩타이드를 포함하되;
    상기 제1 폴리펩타이드 및 상기 제2 폴리펩타이드는 헤테로다이머로서 융합되거나 또는 존재하고;
    a) A1은 FVIII의 A1 도메인이며; b) A2는 FVIII의 A2 도메인이고; c) [B]는 FVIII의 B 도메인, 이의 단편이거나, 또는 결실되어 있으며; d) A3은 FVIII의 A3 도메인이고; e) C1은 FVIII의 C1 도메인이며; f) a1, a2 및 a3은 산성 스페이서 영역이고;
    상기 A1 도메인은 허용적 루프(permissive loop)-1(A1-1) 영역 및 허용적 루프-2(A1-2) 영역을 포함하며;
    상기 A2 도메인은 허용적 루프-1(A2-1) 영역 및 허용적 루프-2(A2-2) 영역을 포함하고;
    상기 A3 도메인은 허용적 루프-1(A3-1) 영역 및 허용적 루프-2(A3-2) 영역을 포함하며;
    상기 영역 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 중 적어도 하나에 이종성 모이어티(heterologous moiety)가 삽입되고;
    상기 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 나타내는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  2. 재조합 FVIII 단백질로서, 식 I: (A1)-a1-(A2)-a2-[B]를 포함하는 제1 폴리펩타이드; 및 식 II: a3-(A3)-(C1)을 포함하는 제2 폴리펩타이드를 포함하되;
    상기 제1 폴리펩타이드 및 상기 제2 폴리펩타이드는 헤테로다이머로서 융합되거나 또는 존재하고;
    a) A1은 FVIII의 A1 도메인이며; b) A2는 FVIII의 A2 도메인이고; c) [B]는 FVIII의 B 도메인, 이의 단편이거나, 또는 결실되거나 또는 선택적으로 존재하지 않으며; d) A3은 FVIII의 A3 도메인이고; e) C1은 FVIII의 C1 도메인이며; f) a1, a2 및 a3은 산성 스페이서 영역이고;
    a3 내로 이종성 모이어티가 삽입되며;
    상기 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 나타내는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 제1 폴리펩타이드 및 상기 제2 폴리펩타이드는 식 (A1)-a1-(A2)-a2-[B] -[a3]-(A3)-(C1)을 포함하는 단일 폴리펩타이드 쇄를 형성하는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 폴리펩타이드는 식 [a3]-(A3)-(C1)-(C2)를 포함하되, (C2)는 FVIII의 C2 도메인인 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  5. 제1항, 제3항 및 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 허용적 루프는 표면-노출된, 가요성 루프 구조 내에 함유되고, DSSP 데이터베이스의 등록번호 2R7E로서 저장된 성숙 인자 FVIII의 2차 구조에 따라서, A1-1은 베타 가닥 1과 베타 가닥 2 사이에 위치되고, A1-2는 베타 가닥 11과 베타 가닥 12 사이에 위치되며, A2-1은 베타 가닥 22와 베타 가닥 23 사이에 위치되고, A2-2는 베타 가닥 32와 베타 가닥 33 사이에 위치되며, A3-1은 베타 가닥 38과 베타 가닥 39 사이에 위치되고, A3-2는 베타 가닥 45와 베타 가닥 46 사이에 위치되는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  6. 제5항에 있어서, A1-1을 포함하는 상기 표면-노출된, 가요성 루프 구조는 서열번호 1의 약 아미노산 15 내지 약 아미노산 45의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응되는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  7. 제6항에 있어서, A1-1은 서열번호 1의 약 아미노산 18 내지 약 아미노산 41의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응되는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  8. 제5항에 있어서, A1-2를 포함하는 상기 표면-노출된, 가요성 루프 구조는 서열번호 1의 약 아미노산 201 내지 약 아미노산 232의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응되는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  9. 제8항에 있어서, A1-2는 서열번호 1의 약 아미노산 218 내지 약 아미노산 229의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응되는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  10. 제5항에 있어서, A2-1을 포함하는 상기 표면-노출된, 가요성 루프 구조는 서열번호 1의 약 아미노산 395 내지 약 아미노산 421의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응되는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  11. 제10항에 있어서, A2-1은 서열번호 1의 약 아미노산 397 내지 약 아미노산 418의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응되는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  12. 제5항에 있어서, A2-2를 포함하는 상기 표면-노출된, 가요성 루프 구조는 서열번호 1의 약 아미노산 577 내지 약 아미노산 635의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응되는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  13. 제12항에 있어서, A2-2는 서열번호 1의 약 아미노산 595 내지 약 아미노산 607의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응되는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  14. 제5항에 있어서, A3-1을 포함하는 상기 표면-노출된, 가요성 루프 구조는 서열번호 1의 약 아미노산 1705 내지 약 아미노산 1732의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응되는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  15. 제14항에 있어서, A3-1은 서열번호 1의 약 아미노산 1711 내지 약 아미노산 1725의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응되는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  16. 제5항에 있어서, A3-2를 포함하는 상기 표면-노출된, 가요성 루프 구조는 서열번호 1의 약 아미노산 1884 내지 약 아미노산 1917의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응되는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  17. 제16항에 있어서, A3-2는 서열번호 1의 약 아미노산 1899 내지 약 아미노산 1911의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응되는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  18. 제1항 및 제3항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 이종성 모이어티가 상기 영역 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 중 적어도 2개에 삽입된 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  19. 제1항 및 제3항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 이종성 모이어티가 서열번호 1의 아미노산 18, 서열번호 1의 아미노산 22, 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 40, 서열번호 1의 아미노산 216, 서열번호 1의 아미노산 220, 서열번호 1의 아미노산 224, 서열번호 1의 아미노산 399, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 409, 서열번호 1의 아미노산 599, 서열번호 1의 아미노산 603, 서열번호 1의 아미노산 1711, 서열번호 1의 아미노산 1720, 서열번호 1의 아미노산 1725, 서열번호 1의 아미노산 1900, 서열번호 1의 아미노산 1905, 서열번호 1의 아미노산 1910, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 성숙 천연 인간 FVIII에서의 아미노산에 대응되는 아미노산의 바로 하류에 삽입된 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  20. 제1항 및 제3항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 추가적인 이종성 모이어티가 a3 내로 삽입된 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  21. 제20항에 있어서, 상기 추가적인 이종성 모이어티는 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 아미노산의 바로 하류의 a3 내로 삽입된 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  22. 제1항 및 제3항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9개의 추가적인 이종성 모이어티를 더 포함하는, 재조합 FVIII 단백질.
  23. 제2항에 있어서,
    상기 A1 도메인은 허용적 루프-1(A1-1) 영역 및 허용적 루프-2(A1-2) 영역을 포함하고;
    상기 A2 도메인은 허용적 루프-1(A2-1) 영역 및 허용적 루프-2(A2-2) 영역을 포함하며;
    상기 A3 도메인은 허용적 루프-1(A3-1) 영역 및 허용적 루프-2(A3-2) 영역을 포함하고;
    추가적인 이종성 모이어티가 상기 영역 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 중 적어도 하나 내로 삽입된 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  24. 제2항 또는 제23항에 있어서, 추가적인 이종성 모이어티가 서열번호 1의 아미노산 18, 서열번호 1의 아미노산 22, 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 40, 서열번호 1의 아미노산 216, 서열번호 1의 아미노산 220, 서열번호 1의 아미노산 224, 서열번호 1의 아미노산 399, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 409, 서열번호 1의 아미노산 599, 서열번호 1의 아미노산 603, 서열번호 1의 아미노산 1711, 서열번호 1의 아미노산 1720, 서열번호 1의 아미노산 1725, 서열번호 1의 아미노산 1900, 서열번호 1의 아미노산 1905, 서열번호 1의 아미노산 1910, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 성숙 천연 인간 FVIII에서의 아미노산에 대응되는 아미노산의 바로 하류에 삽입되는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 이종성 모이어티는 상기 FVIII 서열 내로 삽입된 하나 이상의 아미노산의 서열을 포함하는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 이종성 모이어티는 상기 단백질의 생체내 반감기를 증가시키는 구성요소를 포함하는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  27. 제26항에 있어서, 상기 재조합 FVIII 단백질의 생체내 반감기를 증가시키는 상기 구성요소는 알부민, 알부민-결합 폴리펩타이드, Fc, PAS, 인간 융모성 생식선 자극호르몬의 β 서브유닛의 C-말단 펩타이드(C-terminal peptide: CTP), 폴리에틸렌 글라이콜(PEG), 하이드록시에틸 전분(HES), 알부민-결합 소분자, 또는 이들의 조합을 포함하는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  28. 제26항에 있어서, 상기 재조합 FVIII 단백질의 생체내 반감기를 증가시키는 상기 구성요소는 클리어런스 수용기, 또는 이의 단편을 포함하고, 상기 클리어런스 수용기는 FVIII 클리어런스 수용기에 대한 상기 재조합 FVIII 단백질의 결합을 차단하는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  29. 제28항에 있어서, 상기 클리어런스 수용기는 저밀도 리포단백질 수용기 관련 단백질 1(LRP1) 또는 이의 FVIII-결합 단편인 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 이종성 모이어티가 상기 재조합 FVIII 단백질의 시각화 또는 국소화(visualization or localization)를 가능하게 하는 펩타이드 또는 폴리펩타이드를 포함하는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  31. 제30항에 있어서, 시각화 또는 국소화는 시험관내, 생체내, 생체밖 또는 이들의 임의의 조합에서 가능해지는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  32. 제30항 또는 제31항에 있어서, 시각화 또는 국소화를 가능하게 하는 상기 펩타이드 또는 폴리펩타이드는 바이오틴 수용체(acceptor) 펩타이드, 리포산 수용체 펩타이드, 형광 단백질, 2비소 염료의 결찰을 위한 또는 준안정(metastable) 테크네튬을 컨쥬게이트하기 위한 시스테인-함유 펩타이드, 형광 공명 에너지 전이(fluorescence resonance energy transfer: FRET)-기반 근접 분석을 위한 유로퓸 클라스레이트를 컨쥬게이팅하기 위한 펩타이드, 또는 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  33. 제32항에 있어서, 상기 형광 단백질은 GFP, RFP, YFP, EGFP 또는 EYFP인 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  34. 제32항에 있어서, 상기 2비소 염료는 4',5' 비스(1,3,2-다이티오아솔란-2-일)플루오레세인(FlAsH)인 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  35. 제32항에 있어서, 상기 바이오틴 수용체 펩타이드는 아비딘- 및 스트렙타비딘-계 시약의 컨쥬게이션을 가능하게 하는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  36. 제32항에 있어서, 상기 리포산 수용체 펩타이드는 결합된 리포산에 대한 티올-반응성 프로브의 컨쥬게이션 또는 형광 리포산 유사체의 직접적 결찰을 가능하게 하는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  37. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 이종성 모이어티는 상기 단백질의 상기 안정성을 증가시키는 구성요소를 포함하는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  38. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 단백질은 천연 FVIII의 상기 응혈촉진 활성의 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100%를 갖는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  39. 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 응혈촉진 활성은 색원체 기질 분석, 일 단계 응고 분석 또는 둘 다에 의해 측정되는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  40. 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항의 재조합 FVIII 단백질을 암호화하는 서열을 포함하는 단리된 핵산.
  41. 제40항의 핵산을 포함하는 발현 벡터.
  42. 제40항의 단리된 핵산 또는 제39항의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  43. 제42항에 있어서, 상기 재조합 FVIII 단백질은 생체내에서 발현되는 것인, 숙주 세포.
  44. 제42항에 있어서, 상기 재조합 FVIII 단백질은 시험관내에서 발현되는 것인, 숙주 세포.
  45. 재조합 FVIII 단백질을 생산하는 방법으로서, 상기 재조합 FVIII 단백질이 발현되는 조건 하에서 제42항의 숙주 세포를 배양시키는 단계를 포함하는, 재조합 FVIII 단백질의 생산방법.
  46. 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항의 재조합 FVIII 단백질, 제40항의 단리된 핵산, 제41항의 발현 벡터 또는 제42항 내지 제44항 중 어느 한 항의 숙주 세포 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 조성물.
  47. 제46항의 조성물의 유효량을 투여함으로써 이를 필요로 하는 환자에서 응고 질환 또는 병태를 예방하거나, 치료하거나, 개선시키거나 또는 관리하는 방법.
  48. 제46항의 조성물로 환자에서의 응고 질환 또는 병태를 진단하거나 또는 영상화하는 방법.
  49. 재조합 FVIII 단백질을 제조하는 방법으로서, 확인된 허용적 위치에서 이종성 모이어티를 삽입하는 단계를 포함하되, 상기 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 나타내는 것인 제조방법.
  50. 제49항에 있어서, 상기 확인된 허용적 위치는 허용적 루프인 것인 제조방법.
  51. 제50항에 있어서, 상기 허용적 루프 영역은 영역 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 및 A3-2로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 제조방법.
  52. 제51항에 있어서, 상기 영역 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 중 적어도 2개에 이종성 모이어티가 삽입되는 것인 제조방법.
  53. 제49항 또는 제52항에 있어서, 상기 이종성 모이어티는 서열번호 1의 아미노산 18, 서열번호 1의 아미노산 22, 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 40, 서열번호 1의 아미노산 216, 서열번호 1의 아미노산 220, 서열번호 1의 아미노산 224, 서열번호 1의 아미노산 399, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 409, 서열번호 1의 아미노산 599, 서열번호 1의 아미노산 603, 서열번호 1의 아미노산 1711, 서열번호 1의 아미노산 1720, 서열번호 1의 아미노산 1725, 서열번호 1의 아미노산 1900, 서열번호 1의 아미노산 1905, 서열번호 1의 아미노산 1910, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 성숙 천연 인간 FVIII에서의 아미노산에 대응되는 아미노산의 바로 하류에 삽입되는 것인 제조방법.
  54. 제49항에 있어서, 이종성 모이어티는 서열번호 1의 아미노산 188, 서열번호 1의 아미노산 221, 서열번호 1의 아미노산 333, 서열번호 1의 아미노산 336, 서열번호 1의 아미노산 339, 서열번호 1의 아미노산 416, 서열번호 1의 아미노산 442, 서열번호 1의 아미노산 490, 서열번호 1의 아미노산 713, 서열번호 1의 아미노산 1796, 서열번호 1의 아미노산 1802, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 성숙 천연 인간 FVIII에서의 아미노산에 대응되는 아미노산의 바로 하류에 삽입되는 것인 제조방법.
  55. 제49항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 추가적인 이종성 모이어티가 a3 내로 삽입되는 것인 제조방법.
  56. 제55항에 있어서, 상기 추가적인 이종성 모이어티는 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 아미노산의 바로 하류의 a3 내로 삽입되는 것인 제조방법.
  57. 제49항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 이종성 모이어티는 상기 FVIII 서열 내로 삽입된 하나 이상의 아미노산의 서열을 포함하는 것인 제조방법.
  58. 제49항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 이종성 모이어티는 상기 단백질의 상기 생체내 반감기를 증가시키는 것인 제조방법.
  59. 제49항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 이종성 모이어티는 상기 재조합 FVIII 단백질의 시각화 또는 국소화를 가능하게 하는 펩타이드 또는 폴리펩타이드를 포함하는 것인 제조방법.
  60. 재조합 FVIII 단백질의 발현을 증가시키는 방법으로서, 적어도 하나의 이종성 모이어티를 상기 재조합 FVIII 단백질의 a3 산성 스페이서 영역 내로 삽입하는 단계, 적어도 하나의 이종성 모이어티의 상기 a3 영역 내로의 상기 삽입은 상기 a3 영역에서 삽입된 적어도 하나의 이종성 모이어티가 없는 상기 대응되는 재조합 FVIII 단백질의 상기 발현에 비해 상기 재조합 FVIII 단백질의 증가된 발현을 초래하는 단계를 포함하는, 재조합 FVIII 단백질의 발현을 증가시키는 방법.
  61. 제60항에 있어서, 상기 이종성 모이어티는 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 아미노산의 바로 하류의 a3 내로 삽입되는 것인, 재조합 FVIII 단백질의 발현을 증가시키는 방법.
  62. 제60항에 있어서, 상기 재조합 FVIII 단백질은 허용적 루프 영역 내로 삽입된 적어도 하나의 추가적인 이종성 모이어티를 포함하는 것인, 재조합 FVIII 단백질의 발현을 증가시키는 방법.
  63. 제62항에 있어서, 상기 재조합 FVIII 단백질은 허용적 루프 영역 내로 삽입된 2개의 추가적인 이종성 모이어티를 포함하는 것인, 재조합 FVIII 단백질의 발현을 증가시키는 방법.
  64. 제62항에 있어서, 상기 재조합 FVIII 단백질은 허용적 루프 영역 내로 삽입된 3개의 추가적인 이종성 모이어티를 포함하는 것인, 재조합 FVIII 단백질의 발현을 증가시키는 방법.
  65. 제62항에 있어서, 상기 재조합 FVIII 단백질은 허용적 루프 영역 내로 삽입된 4개의 추가적인 이종성 모이어티를 포함하는 것인, 재조합 FVIII 단백질의 발현을 증가시키는 방법.
  66. 제62항에 있어서, 상기 재조합 FVIII 단백질은 허용적 루프 영역 내로 삽입된 5개의 추가적인 이종성 모이어티를 포함하는 것인, 재조합 FVIII 단백질의 발현을 증가시키는 방법.
  67. 제62항에 있어서, 상기 재조합 FVIII 단백질은 허용적 루프 영역 내로 삽입된 6개의 추가적인 이종성 모이어티를 포함하는 것인, 재조합 FVIII 단백질의 발현을 증가시키는 방법.
  68. 제62항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 허용적 루프 영역은 상기 영역 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 및 A3-2로 이루어진 군으로부터 선택된 것인, 재조합 FVIII 단백질의 발현을 증가시키는 방법.
  69. 제62항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이종성 모이어티는 서열번호 1의 아미노산 18, 서열번호 1의 아미노산 22, 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 40, 서열번호 1의 아미노산 216, 서열번호 1의 아미노산 220, 서열번호 1의 아미노산 224, 서열번호 1의 아미노산 399, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 409, 서열번호 1의 아미노산 599, 서열번호 1의 아미노산 603, 서열번호 1의 아미노산 1711, 서열번호 1의 아미노산 1720, 서열번호 1의 아미노산 1725, 서열번호 1의 아미노산 1900, 서열번호 1의 아미노산 1905, 서열번호 1의 아미노산 1910, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 성숙 천연 인간 FVIII에서의 아미노산에 대응되는 아미노산의 바로 하류에 삽입된 것인, 재조합 FVIII 단백질의 발현을 증가시키는 방법.
  70. 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 재조합 FVIII 단백질, 제40항의 핵산, 제41항의 벡터, 제42항 내지 제44항 중 어느 한 항의 숙주 세포, 또는 제45항 내지 제69항 중 어느 한 항의 방법에 있어서, 상기 제1 폴리펩타이드 및 상기 제2 폴리펩타이드는 서로 융합됨으로써 단일 쇄 폴리펩타이드를 형성하는 것인, 재조합 FVIII 단백질, 핵산, 벡터, 숙주 세포 또는 방법.
  71. 제70항에 있어서, 상기 단일 쇄 폴리펩타이드는 성숙 전장 FVIII 서열에 대응되는 잔기 1645, 잔기 1648 또는 잔기 1645와 잔기 1648 둘 다에서 하나 이상의 치환, 결실, 또는 돌연변이를 함유하는 것인, 재조합 FVIII 단백질, 핵산, 벡터, 숙주 세포, 또는 방법.
  72. 제71항에 있어서, 잔기 1645, 잔기 1648, 또는 잔기 1645와 1648 둘 다에서 상기 아미노산 잔기는 알기닌이 아닌 것인, 재조합 FVIII 단백질, 핵산, 벡터, 숙주 세포 또는 방법.
  73. 제70항에 있어서, 상기 단일 쇄 폴리펩타이드는 미처리인 것인, 재조합 FVIII 단백질, 핵산, 벡터, 숙주 세포 또는 방법.
  74. FVIII 단백질의 응혈촉진 활성을 제거하거나 또는 감소시키지 않고 FVIII 단백질의 반감기를 증가시키는 방법으로서, 확인된 허용적 위치에서 이종성 모이어티를 삽입하는 단계를 포함하되, 상기 재조합 FVIII 단백질은 이종성 모이어티가 없는 상기 FVIII 단백질에 비해 증가된 반감기 및 응혈촉진 활성을 나타내는 것인, FVIII 단백질의 반감기를 증가시키는 방법.
  75. 제49항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 FVIII 단백질은 상기 이종성 모이어티가 없는 FVIII 단백질에 비해 증가된 반감기 및 응혈촉진 활성을 가지는 것인 방법.
  76. 재조합 FVIII 단백질로서, 식 I: (A1)-a1-(A2)-a2-[B]를 포함하는 제1 폴리펩타이드; 및 식 II: a3-(A3)-(C1)을 포함하는 제2 폴리펩타이드를 포함하되;
    상기 제1 폴리펩타이드 및 상기 제2 폴리펩타이드는 헤테로다이머로서 융합되거나 또는 존재하고;
    a) A1은 FVIII의 A1 도메인이며; b) A2는 FVIII의 A2 도메인이고; c) [B]는 FVIII의 B 도메인이거나, 또는 결실되어 있으며; d) A3은 FVIII의 A3 도메인이고; e) C1은 FVIII의 C1 도메인이며; f) a1, a2 및 a3은 산성 스페이서 영역이고;
    상기 A1 도메인은 허용적 루프-1(A1-1) 영역 및 허용적 루프-2(A1-2) 영역을 포함하며;
    상기 A2 도메인은 허용적 루프-1(A2-1) 영역 및 허용적 루프-2(A2-2) 영역을 포함하고;
    상기 A3 도메인은 허용적 루프-1(A3-1) 영역 및 허용적 루프-2(A3-2) 영역을 포함하며;
    상기 영역 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1, A3-2, 또는 a3 중 적어도 하나는 이종성 모이어티를 포함하고;
    상기 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 나타내는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  77. 제1항, 제3항, 제4항 및 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 허용적 루프는 표면-노출된, 가요성 루프 구조 내에 함유되고, DSSP 데이터베이스의 등록번호 2R7E로서 저장된 성숙 인자 FVIII의 2차 구조에 따라서, A1-1은 베타 가닥 1과 베타 가닥 2 사이에 위치되고, A1-2는 베타 가닥 11과 베타 가닥 12 사이에 위치되며, A2-1은 베타 가닥 22와 베타 가닥 23 사이에 위치되고, A2-2는 베타 가닥 32와 베타 가닥 33 사이에 위치되며, A3-1은 베타 가닥 38과 베타 가닥 39 사이에 위치되고, A3-2는 베타 가닥 45와 베타 가닥 46 사이에 위치되는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  78. 제5항 또는 제77항에 있어서, A1-1을 포함하는 상기 표면-노출된, 가요성 루프 구조는 서열번호 1의 약 아미노산 15 내지 약 아미노산 45의 천연 성숙 인간 FVIII 내의 영역에 대응되는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  79. 제78항에 있어서, A1-1은 서열번호 1의 약 아미노산 18 내지 약 아미노산 41의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응되는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  80. 제5항 내지 제8항 및 제77항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, A1-2를 포함하는 상기 표면-노출된, 가요성 루프 구조는 서열번호 1의 약 아미노산 201 내지 약 아미노산 232의 천연 성숙 인간 FVIII 내의 영역에 대응되는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  81. 제80항에 있어서, A1-2는 서열번호 1의 약 아미노산 218 내지 약 아미노산 229의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응되는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  82. 제5항 내지 제9항 및 제77항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, A2-1을 포함하는 상기 표면-노출된, 가요성 루프 구조는 서열번호 1의 약 아미노산 395 내지 약 아미노산 421의 천연 성숙 인간 FVIII 내의 영역에 대응되는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  83. 제82항에 있어서, A2-1은 서열번호 1의 약 아미노산 397 내지 약 아미노산 418의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응되는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  84. 제5항 내지 제11항 및 제77항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서, A2-2를 포함하는 상기 표면-노출된, 가요성 루프 구조는 서열번호 1의 약 아미노산 577 내지 약 아미노산 635의 천연 성숙 인간 FVIII 내의 영역에 대응되는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  85. 제84항에 있어서, A2-2는 서열번호 1의 약 아미노산 595 내지 약 아미노산 607의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응되는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  86. 제5항 내지 제13항 및 제77항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, A3-1을 포함하는 상기 표면-노출된, 가요성 루프 구조는 서열번호 1의 약 아미노산 1705 내지 약 아미노산 1732의 천연 성숙 인간 FVIII 내의 영역에 대응되는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  87. 제86항에 있어서, A3-1은 서열번호 1의 약 아미노산 1711 내지 약 아미노산 1725의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응되는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  88. 제5항 내지 제15항 및 제77항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서, A3-2를 포함하는 상기 표면-노출된, 가요성 루프 구조는 서열번호 1의 약 아미노산 1884 내지 약 아미노산 1917의 천연 성숙 인간 FVIII 내의 영역에 대응되는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  89. 제88항에 있어서, A3-2는 서열번호 1의 약 아미노산 1899 내지 약 아미노산 1911의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응되는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  90. 제1항 내지 제17항 및 제76항 내지 제89항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 영역 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1, A3-2 또는 a3 중 적어도 2개의 각각은 이종성 모이어티를 포함하는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  91. 제1항, 제3항 내지 제18항 및 제76항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 FVIII 단백질은 서열번호 1의 아미노산 18, 서열번호 1의 아미노산 22, 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 40, 서열번호 1의 아미노산 216, 서열번호 1의 아미노산 220, 서열번호 1의 아미노산 224, 서열번호 1의 아미노산 399, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 409, 서열번호 1의 아미노산 599, 서열번호 1의 아미노산 603, 서열번호 1의 아미노산 1711, 서열번호 1의 아미노산 1720, 서열번호 1의 아미노산 1725, 서열번호 1의 아미노산 1900, 서열번호 1의 아미노산 1905, 서열번호 1의 아미노산 1910, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 성숙 천연 인간 FVIII에서의 아미노산에 대응되는 삽입 부위에서 이종성 모이어티를 포함하는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  92. 제1항, 제3항 내지 제19항 및 제76항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서, a3은 추가적인 이종성 모이어티를 포함하는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  93. 제92항에 있어서, a3은 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 삽입 부위에서 상기 추가적인 이종성 모이어티를 포함하는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  94. 제2항에 있어서,
    상기 A1 도메인은 허용적 루프-1(A1-1) 영역 및 허용적 루프-2(A1-2) 영역을 포함하고;
    상기 A2 도메인은 허용적 루프-1(A2-1) 영역 및 허용적 루프-2(A2-2) 영역을 포함하며;
    상기 A3 도메인은 허용적 루프-1(A3-1) 영역 및 허용적 루프-2(A3-2) 영역을 포함하고;
    상기 영역 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 중 적어도 하나는 추가적인 이종성 모이어티를 포함하는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  95. 제94항에 있어서, A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2는 제5항 내지 제17항 중 어느 한 항으로서 정의되는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  96. 제2항, 제23항, 제93항 및 제94항에 있어서, 상기 재조합 FVIII 단백질은 서열번호 1의 아미노산 18, 서열번호 1의 아미노산 22, 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 40, 서열번호 1의 아미노산 216, 서열번호 1의 아미노산 220, 서열번호 1의 아미노산 224, 서열번호 1의 아미노산 399, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 409, 서열번호 1의 아미노산 599, 서열번호 1의 아미노산 603, 서열번호 1의 아미노산 1711, 서열번호 1의 아미노산 1720, 서열번호 1의 아미노산 1725, 서열번호 1의 아미노산 1900, 서열번호 1의 아미노산 1905, 서열번호 1의 아미노산 1910, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 성숙 천연 인간 FVIII에서의 아미노산에 대응되는 삽입 부위에서 추가적인 이종성 모이어티를 포함하는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  97. 제1항 내지 제25항 및 제76항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이종성 모이어티 중 적어도 하나는 상기 단백질의 반감기를 증가시키는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  98. 제1항 내지 제36항 및 제76항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이종성 모이어티 중 적어도 하나는 상기 단백질의 안정성을 증가시키는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  99. 제2항 내지 제4항, 제20항, 제21항, 제23항, 24항 내지 제39항, 제70항 내지 제73항 및 제76항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, a3은 서열번호 1의 약 아미노산 1649 내지 약 아미노산 1689의 천연 성숙 인간 FVIII에서의 영역에 대응되는 것인, 재조합 FVIII 단백질.
  100. 제45항에 있어서, 상기 재조합 FVIII 단백질은 시험관내 또는 생체내에서 발현되는 것인 방법.
  101. 제47항 또는 제48항에 있어서, 상기 응고 질환 또는 병태는 혈우병인 것인 방법.
  102. 제51항에 있어서, A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2는 제5항 내지 제17항 중 어느 한 항에서 정의되는 것인 방법.
  103. 제50항, 제101항 및 제102항에 있어서, 상기 영역 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1 또는 A3-2 중 적어도 2개의 각각은 이종성 모이어티를 포함하는 것인 방법.
  104. 제49항 내지 제52항, 제102항 및 제103항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 FVIII 단백질은 서열번호 1의 아미노산 18, 서열번호 1의 아미노산 22, 서열번호 1의 아미노산 26, 서열번호 1의 아미노산 40, 서열번호 1의 아미노산 216, 서열번호 1의 아미노산 220, 서열번호 1의 아미노산 224, 서열번호 1의 아미노산 399, 서열번호 1의 아미노산 403, 서열번호 1의 아미노산 409, 서열번호 1의 아미노산 599, 서열번호 1의 아미노산 603, 서열번호 1의 아미노산 1711, 서열번호 1의 아미노산 1720, 서열번호 1의 아미노산 1725, 서열번호 1의 아미노산 1900, 서열번호 1의 아미노산 1905, 서열번호 1의 아미노산 1910, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 성숙 천연 인간 FVIII에서의 아미노산에 대응되는 삽입 부위에서 상기 이종성 모이어티를 포함하는 것인 방법.
  105. 제49항 내지 제52항, 제102항 및 제103항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 FVIII 단백질은 서열번호 1의 아미노산 188, 서열번호 1의 아미노산 221, 서열번호 1의 아미노산 333, 서열번호 1의 아미노산 336, 서열번호 1의 아미노산 339, 서열번호 1의 아미노산 416, 서열번호 1의 아미노산 442, 서열번호 1의 아미노산 490, 서열번호 1의 아미노산 713, 서열번호 1의 아미노산 1796, 서열번호 1의 아미노산 1802 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 성숙 천연 인간 FVIII에서의 아미노산에 대응되는 삽입 부위에서 상기 이종성 모이어티를 포함하는 것인 방법.
  106. 제49항 내지 제54항 및 제102항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서, a3은 추가적인 이종성 모이어티를 포함하는 것인 방법.
  107. 제55항 또는 제106항에 있어서, a3은 서열번호 1의 아미노산 1656에 대응되는 삽입 부위에서 상기 추가적인 이종성 모이어티를 포함하는 것인 방법.
  108. 재조합 FVIII 단백질을 구성하는 방법으로서, 상기 재조합 FVIII 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 설계하는 단계를 포함하되,
    상기 재조합 FVIII 단백질은 식 I: (A1)-a1-(A2)-a2-[B]를 포함하는 제1 폴리펩타이드; 및 식 II: a3-(A3)-(C1)을 포함하는 제2 폴리펩타이드를 포함하고;
    상기 제1 폴리펩타이드 및 상기 제2 폴리펩타이드는 헤테로다이머로서 융합되거나 또는 존재하며;
    a) A1은 FVIII의 A1 도메인이며; b) A2는 FVIII의 A2 도메인이고; c) [B]는 FVIII의 B 도메인, 이의 단편이거나 또는 결실되어 있으며; d) A3은 FVIII의 A3 도메인이고; e) C1은 FVIII의 C1 도메인이며; f) a1, a2 및 a3은 산성 스페이서 영역이고;
    상기 A1 도메인은 허용적 루프-1(A1-1) 영역 및 허용적 루프-2(A1-2) 영역을 포함하며;
    상기 A2 도메인은 허용적 루프-1(A2-1) 영역 및 허용적 루프-2(A2-2) 영역을 포함하고;
    상기 A3 도메인은 허용적 루프-1(A3-1) 영역 및 허용적 루프-2(A3-2) 영역을 포함하며;
    영역 A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1, A3-2, 또는 a3 중 적어도 하나는 이종성 모이어티를 포함하고;
    상기 재조합 FVIII 단백질은 응혈촉진 활성을 나타내는 것인, 재조합 FVIII 단백질을 구성하는 방법.
  109. 제108항에 있어서, 상기 재조합 FVIII 단백질은 제3항 내지 제39항, 제70항 내지 제73항 및 제77항 내지 제98항 중 어느 한 항으로서 정의되는 것인 방법.
  110. 제108항에 있어서, A1-1, A1-2, A2-1, A2-2, A3-1, A3-2 또는 a3은 제5항 내지 제17항 및 제21항 중 어느 한 항으로서 정의되는 것인 방법.
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Families Citing this family (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102741422B (zh) 2009-08-24 2016-06-08 阿穆尼克斯运营公司 凝血因子ⅶ组合物及其制备和使用方法
BR112014017165B1 (pt) 2012-01-12 2023-05-02 Bioverativ Therapeutics Inc Proteína quimérica compreendendo uma proteína de fator viii, composição farmacêutica, e seus usos
JP6256882B2 (ja) 2012-02-15 2018-01-10 アムニクス オペレーティング インコーポレイテッド 第ｖｉｉｉ因子組成物、ならびに組成物の作製方法および用途
JP6383666B2 (ja) 2012-02-15 2018-08-29 バイオベラティブ セラピューティクス インコーポレイテッド 組換え第ｖｉｉｉ因子タンパク質
AU2013270683A1 (en) 2012-06-08 2014-12-11 Biogen Ma Inc. Chimeric clotting factors
JP2015521589A (ja) 2012-06-08 2015-07-30 バイオジェン・エムエイ・インコーポレイテッドＢｉｏｇｅｎ ＭＡ Ｉｎｃ． プロコアグラント化合物
SG10201913893XA (en) 2012-07-11 2020-03-30 Bioverativ Therapeutics Inc Factor viii complex with xten and von willebrand factor protein, and uses thereof
EP3889173B1 (en) 2013-02-15 2023-07-05 Bioverativ Therapeutics Inc. Optimized factor viii gene
PT3024498T (pt) 2013-07-22 2020-03-06 Childrens Hospital Philadelphia Variante aav e composições, métodos e usos para transferência genética em células, órgãos e tecidos
US10548953B2 (en) 2013-08-14 2020-02-04 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor VIII-XTEN fusions and uses thereof
EP4108254A1 (en) * 2013-08-14 2022-12-28 Bioverativ Therapeutics Inc. Recombinant factor viii proteins
EP3048899B1 (en) 2013-09-25 2021-09-08 Bioverativ Therapeutics Inc. On-column viral inactivation methods
RS63583B1 (sr) 2014-01-10 2022-10-31 Bioverativ Therapeutics Inc Himerni proteini faktora viii i njihova upotreba
GB201420139D0 (en) 2014-11-12 2014-12-24 Ucl Business Plc Factor IX gene therapy
US10654910B2 (en) 2015-01-30 2020-05-19 Emory University Factor VIII proteins having ancestral sequences, expression vectors, and uses related thereto
CA2990193A1 (en) 2015-06-23 2016-12-29 The Children's Hospital Of Philadelphia Modified factor ix, and compositions, methods and uses for gene transfer to cells, organs and tissues
US10287338B2 (en) 2015-07-10 2019-05-14 Miran NERSISSIAN Factor VIII protein compositions and methods of treating of hemophilia A
BR112018002150A2 (pt) 2015-08-03 2018-09-18 Bioverativ Therapeutics Inc proteínas de fusão do fator ix e métodos de fabricação e uso das mesmas
PE20231949A1 (es) * 2015-10-30 2023-12-05 Spark Therapeutics Inc VARIANTES DEL FACTOR VIII REDUCIDO CON CpG, COMPOSICIONES Y METODOS Y USOS PARA EL TRATAMIENTO DE TRASTORNOS DE LA HEMOSTASIA
DK3411478T3 (da) 2016-02-01 2022-09-12 Bioverativ Therapeutics Inc Optimerede faktor viii-gener
CN109790529A (zh) * 2016-06-24 2019-05-21 财团法人牧岩生命科学研究所 包含FVIII和vWF因子的嵌合蛋白及其用途
CN106279437B (zh) * 2016-08-19 2017-10-31 安源医药科技（上海）有限公司 高糖基化人凝血因子viii融合蛋白及其制备方法与用途
CN111247251A (zh) 2017-08-09 2020-06-05 比奥维拉迪维治疗股份有限公司 核酸分子及其用途
BR112020015228A2 (pt) 2018-02-01 2020-12-29 Bioverativ Therapeutics Inc. Uso de vetores lentivirais que expressam fator viii
EP3833766A1 (en) 2018-08-09 2021-06-16 Bioverativ Therapeutics Inc. Nucleic acid molecules and uses thereof for non-viral gene therapy
WO2020124032A1 (en) * 2018-12-14 2020-06-18 Fred Hutchinson Cancer Research Center Transferrin receptor targeting peptides
US20210113634A1 (en) 2019-09-30 2021-04-22 Bioverativ Therapeutics Inc. Lentiviral vector formulations
EP4171657A1 (en) 2020-06-24 2023-05-03 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods for the removal of free factor viii from preparations of lentiviral vectors modified to express said protein
AU2022334711A1 (en) 2021-08-23 2024-04-04 Bioverativ Therapeutics Inc. Baculovirus expression system
CA3229323A1 (en) 2021-08-23 2023-03-02 Ajay MAGHODIA Optimized factor viii genes
CA3232988A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Bioverativ Therapeutics Inc. Nucleic acids encoding factor viii polypeptides with reduced immunogenicity
WO2023092864A1 (en) * 2021-11-25 2023-06-01 Sichuan Real&Best Biotech Co., Ltd. Engineered human fviii with enhanced secretion ability and clotting activity

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20130017997A1 (en) * 2010-08-19 2013-01-17 Amunix Operating Inc. Factor VIII Compositions and Methods of Making and Using Same

Family Cites Families (363)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US3992518A (en) 1974-10-24 1976-11-16 G. D. Searle & Co. Method for making a microsealed delivery device
GB1478759A (en) 1974-11-18 1977-07-06 Alza Corp Process for forming outlet passageways in pills using a laser
US4284444A (en) 1977-08-01 1981-08-18 Herculite Protective Fabrics Corporation Activated polymer materials and process for making same
US4200098A (en) 1978-10-23 1980-04-29 Alza Corporation Osmotic system with distribution zone for dispensing beneficial agent
US4200984A (en) 1979-03-12 1980-05-06 Fink Ray D Detachable tool combining bracket and method
US4342832A (en) 1979-07-05 1982-08-03 Genentech, Inc. Method of constructing a replicable cloning vehicle having quasi-synthetic genes
US4215051A (en) 1979-08-29 1980-07-29 Standard Oil Company (Indiana) Formation, purification and recovery of phthalic anhydride
ZA811368B (en) 1980-03-24 1982-04-28 Genentech Inc Bacterial polypedtide expression employing tryptophan promoter-operator
US4398908A (en) 1980-11-28 1983-08-16 Siposs George G Insulin delivery system
US4456591A (en) 1981-06-25 1984-06-26 Baxter Travenol Laboratories, Inc. Therapeutic method for activating factor VII
US4435173A (en) 1982-03-05 1984-03-06 Delta Medical Industries Variable rate syringe pump for insulin delivery
US4542025A (en) 1982-07-29 1985-09-17 The Stolle Research And Development Corporation Injectable, long-acting microparticle formulation for the delivery of anti-inflammatory agents
US4599311A (en) 1982-08-13 1986-07-08 Kawasaki Glenn H Glycolytic promotersfor regulated protein expression: protease inhibitor
US4713339A (en) 1983-01-19 1987-12-15 Genentech, Inc. Polycistronic expression vector construction
US4870008A (en) 1983-08-12 1989-09-26 Chiron Corporation Secretory expression in eukaryotes
US4757006A (en) 1983-10-28 1988-07-12 Genetics Institute, Inc. Human factor VIII:C gene and recombinant methods for production
US5004804A (en) 1984-01-12 1991-04-02 Nordisk Gentofte Method and composition for preparation of factor VIIIC
US7138505B1 (en) 1984-01-12 2006-11-21 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Factor VIII:C nucleic acid molecules
EP0154316B1 (en) 1984-03-06 1989-09-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified lymphokine and production thereof
US5916588A (en) 1984-04-12 1999-06-29 The Liposome Company, Inc. Peptide-containing liposomes, immunogenic liposomes and methods of preparation and use
US5231112A (en) 1984-04-12 1993-07-27 The Liposome Company, Inc. Compositions containing tris salt of cholesterol hemisuccinate and antifungal
US4965199A (en) 1984-04-20 1990-10-23 Genentech, Inc. Preparation of functional human factor VIII in mammalian cells using methotrexate based selection
US4931373A (en) 1984-05-25 1990-06-05 Zymogenetics, Inc. Stable DNA constructs for expression of α-1 antitrypsin
AU576889B2 (en) 1984-07-24 1988-09-08 Key Pharmaceuticals, Inc. Adhesive transdermal dosage layer
US4766073A (en) 1985-02-25 1988-08-23 Zymogenetics Inc. Expression of biologically active PDGF analogs in eucaryotic cells
US4885249A (en) 1984-12-05 1989-12-05 Allelix, Inc. Aspergillus niger transformation system
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US4965188A (en) 1986-08-22 1990-10-23 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences using a thermostable enzyme
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US5981216A (en) 1985-04-01 1999-11-09 Alusuisse Holdings A.G. Transformed myeloma cell-line and a process for the expression of a gene coding for a eukaryotic polypeptide employing same
DE3683980D1 (de) 1985-04-12 1992-04-02 Genetics Inst Neue prokoagulierungsproteine.
GR860984B (en) 1985-04-17 1986-08-18 Zymogenetics Inc Expression of factor vii and ix activities in mammalian cells
AU5864086A (en) 1985-04-22 1986-11-18 Genetics Institute Inc. High yield production of active factor ix
US4684479A (en) 1985-08-14 1987-08-04 Arrigo Joseph S D Surfactant mixtures, stable gas-in-liquid emulsions, and methods for the production of such emulsions from said mixtures
KR910006424B1 (ko) 1985-08-21 1991-08-24 인코텍스 비.브이 편성브리프(brief) 제조방법
US4882279A (en) 1985-10-25 1989-11-21 Phillips Petroleum Company Site selective genomic modification of yeast of the genus pichia
US5250421A (en) 1986-01-03 1993-10-05 Genetics Institute, Inc. Method for producing factor VIII:C-type proteins
EP0253870B1 (en) 1986-01-03 1993-03-31 Genetics Institute, Inc. Method for producing factor viii:c-type proteins
US5198349A (en) 1986-01-03 1993-03-30 Genetics Institute, Inc. Method for producing factor VIII:C and analogs
US4935349A (en) 1986-01-17 1990-06-19 Zymogenetics, Inc. Expression of higher eucaryotic genes in aspergillus
US5595886A (en) 1986-01-27 1997-01-21 Chiron Corporation Protein complexes having Factor VIII:C activity and production thereof
US4800159A (en) 1986-02-07 1989-01-24 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences
DK122686D0 (da) 1986-03-17 1986-03-17 Novo Industri As Fremstilling af proteiner
GB8610600D0 (en) 1986-04-30 1986-06-04 Novo Industri As Transformation of trichoderma
US6759057B1 (en) 1986-06-12 2004-07-06 The Liposome Company, Inc. Methods and compositions using liposome-encapsulated non-steroidal anti-inflammatory drugs
US5543502A (en) 1986-06-24 1996-08-06 Novo Nordisk A/S Process for producing a coagulation active complex of factor VIII fragments
IE60901B1 (en) 1986-08-21 1994-08-24 Vestar Inc Improved treatment of systemic fungal infections with phospholipid particles encapsulating polyene antifungal antibiotics
US4933185A (en) 1986-09-24 1990-06-12 Massachusetts Institute Of Technology System for controlled release of biologically active compounds
US5811128A (en) 1986-10-24 1998-09-22 Southern Research Institute Method for oral or rectal delivery of microencapsulated vaccines and compositions therefor
US4912040A (en) 1986-11-14 1990-03-27 Genetics Institute, Inc. Eucaryotic expression system
US6406713B1 (en) 1987-03-05 2002-06-18 The Liposome Company, Inc. Methods of preparing low-toxicity drug-lipid complexes
US4775207A (en) 1987-03-17 1988-10-04 Bell Communications Research, Inc. Electro-optical switch
EP0307434B2 (en) 1987-03-18 1998-07-29 Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. Altered antibodies
CA1331157C (en) 1987-04-06 1994-08-02 Randal J. Kaufman Method for producing factor viii:c-type proteins
US6060447A (en) 1987-05-19 2000-05-09 Chiron Corporation Protein complexes having Factor VIII:C activity and production thereof
US5171844A (en) 1987-06-12 1992-12-15 Gist-Brocades N.W. Proteins with factor viii activity: process for their preparation using genetically-engineered cells and pharmaceutical compositions containing them
US6346513B1 (en) 1987-06-12 2002-02-12 Baxter Trading Gmbh Proteins with factor VIII activity: process for their preparation using genetically-engineered cells and pharmaceutical compositions containing them
DE3720246A1 (de) 1987-06-19 1988-12-29 Behringwerke Ag Faktor viii:c-aehnliches molekuel mit koagulationsaktivitaet
US4897268A (en) 1987-08-03 1990-01-30 Southern Research Institute Drug delivery system and method of making the same
US4976696A (en) 1987-08-10 1990-12-11 Becton, Dickinson And Company Syringe pump and the like for delivering medication
FR2619314B1 (fr) 1987-08-11 1990-06-15 Transgene Sa Analogue du facteur viii, procede de preparation et composition pharmaceutique le contenant
US4861800A (en) 1987-08-18 1989-08-29 Buyske Donald A Method for administering the drug deprenyl so as to minimize the danger of side effects
US4994371A (en) 1987-08-28 1991-02-19 Davie Earl W DNA preparation of Christmas factor and use of DNA sequences
AU598958B2 (en) 1987-11-12 1990-07-05 Vestar, Inc. Improved amphotericin b liposome preparation
US5270176A (en) 1987-11-20 1993-12-14 Hoechst Aktiengesellschaft Method for the selective cleavage of fusion proteins with lysostaphin
GB8807504D0 (en) 1988-03-29 1988-05-05 Sandoz Ltd Improvements in/relating to organic compounds
US5037743A (en) 1988-08-05 1991-08-06 Zymogenetics, Inc. BAR1 secretion signal
JP2717808B2 (ja) 1988-08-10 1998-02-25 テルモ株式会社 シリンジポンプ
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
US6780613B1 (en) 1988-10-28 2004-08-24 Genentech, Inc. Growth hormone variants
US5534617A (en) 1988-10-28 1996-07-09 Genentech, Inc. Human growth hormone variants having greater affinity for human growth hormone receptor at site 1
US5004803A (en) 1988-11-14 1991-04-02 Genetics Institute, Inc. Production of procoagulant proteins
DE68925966T2 (de) 1988-12-22 1996-08-29 Kirin Amgen Inc Chemisch modifizierte granulocytenkolonie erregender faktor
WO1990009800A1 (en) 1989-02-21 1990-09-07 Washington University Modified forms of reproductive hormones
US5017378A (en) 1989-05-01 1991-05-21 The University Of Virginia Alumni Patents Foundation Intraorgan injection of biologically active compounds contained in slow-release microcapsules or microspheres
EP0471036B2 (en) 1989-05-04 2004-06-23 Southern Research Institute Encapsulation process
US5599907A (en) 1989-05-10 1997-02-04 Somatogen, Inc. Production and use of multimeric hemoglobins
US5298022A (en) 1989-05-29 1994-03-29 Amplifon Spa Wearable artificial pancreas
FR2647677B1 (fr) 1989-05-31 1991-09-27 Roussel Uclaf Nouvelles micro-proteines, procede de preparation et application a titre de medicaments de ces nouvelles micro-proteines
US7413537B2 (en) 1989-09-01 2008-08-19 Dyax Corp. Directed evolution of disulfide-bonded micro-proteins
SE465222C5 (sv) 1989-12-15 1998-02-10 Pharmacia & Upjohn Ab Ett rekombinant, humant faktor VIII-derivat och förfarande för dess framställning
US5492534A (en) 1990-04-02 1996-02-20 Pharmetrix Corporation Controlled release portable pump
US5318540A (en) 1990-04-02 1994-06-07 Pharmetrix Corporation Controlled release infusion device
US6552170B1 (en) 1990-04-06 2003-04-22 Amgen Inc. PEGylation reagents and compounds formed therewith
US5176502A (en) 1990-04-25 1993-01-05 Becton, Dickinson And Company Syringe pump and the like for delivering medication
US6517859B1 (en) 1990-05-16 2003-02-11 Southern Research Institute Microcapsules for administration of neuroactive agents
US5215680A (en) 1990-07-10 1993-06-01 Cavitation-Control Technology, Inc. Method for the production of medical-grade lipid-coated microbubbles, paramagnetic labeling of such microbubbles and therapeutic uses of microbubbles
US5583107A (en) 1990-09-04 1996-12-10 Cor Therapeutics, Inc. Agents affecting thrombosis and hemostasis
JPH06503473A (ja) 1990-12-13 1994-04-21 ジ・アップジョン・カンパニー 融合ポリペプチド
US5206161A (en) 1991-02-01 1993-04-27 Genentech, Inc. Human plasma carboxypeptidase B
US20060122376A1 (en) 1991-02-07 2006-06-08 Chiron Corporation Protein complexes having factor VIII:C activity and production thereof
US5833982A (en) 1991-02-28 1998-11-10 Zymogenetics, Inc. Modified factor VII
SG47099A1 (en) 1991-03-15 1998-03-20 Amgen Boulder Inc Pegylation of polypeptides
US5846951A (en) 1991-06-06 1998-12-08 The School Of Pharmacy, University Of London Pharmaceutical compositions
IE922437A1 (en) 1991-07-25 1993-01-27 Idec Pharma Corp Recombinant antibodies for human therapy
US6376463B1 (en) 1992-04-07 2002-04-23 Emory University Modified factor VIII
US5859204A (en) 1992-04-07 1999-01-12 Emory University Modified factor VIII
US5364771A (en) 1992-04-07 1994-11-15 Emory University Hybrid human/porcine factor VIII
US6037452A (en) 1992-04-10 2000-03-14 Alpha Therapeutic Corporation Poly(alkylene oxide)-Factor VIII or Factor IX conjugate
WO1994007510A1 (en) 1992-10-02 1994-04-14 Kabi Pharmacia Ab Composition comprising coagulation factor viii formulation, process for its preparation and use of a surfactant as stabilizer
US5563045A (en) 1992-11-13 1996-10-08 Genetics Institute, Inc. Chimeric procoagulant proteins
US5573776A (en) 1992-12-02 1996-11-12 Alza Corporation Oral osmotic device with hydrogel driving member
US5554730A (en) 1993-03-09 1996-09-10 Middlesex Sciences, Inc. Method and kit for making a polysaccharide-protein conjugate
US6090925A (en) 1993-03-09 2000-07-18 Epic Therapeutics, Inc. Macromolecular microparticles and methods of production and use
US5981719A (en) 1993-03-09 1999-11-09 Epic Therapeutics, Inc. Macromolecular microparticles and methods of production and use
ATE258685T1 (de) 1993-03-09 2004-02-15 Baxter Int Makromolekulare mikropartikel und verfahren zur ihrer herstellung
SE504074C2 (sv) 1993-07-05 1996-11-04 Pharmacia Ab Proteinberedning för subkutan, intramuskulär eller intradermal administrering
US5576291A (en) 1993-09-13 1996-11-19 Baxter International Inc. Activated factor VIII as a therapeutic agent and method of treating factor VIII deficiency
US5643575A (en) 1993-10-27 1997-07-01 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US20020042079A1 (en) 1994-02-01 2002-04-11 Sanford M. Simon Methods and agents for measuring and controlling multidrug resistance
US5660848A (en) 1994-11-02 1997-08-26 The Population Council, Center For Biomedical Research Subdermally implantable device
GB9422383D0 (en) 1994-11-05 1995-01-04 Wellcome Found Antibodies
SE503424C2 (sv) 1994-11-14 1996-06-10 Pharmacia Ab Process för rening av rekombinant koagulationsfaktor VIII
US6818439B1 (en) 1994-12-30 2004-11-16 Chiron Corporation Methods for administration of recombinant gene delivery vehicles for treatment of hemophilia and other disorders
US6086875A (en) 1995-01-17 2000-07-11 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor specific transepithelial transport of immunogens
US6485726B1 (en) 1995-01-17 2002-11-26 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor specific transepithelial transport of therapeutics
US6030613A (en) 1995-01-17 2000-02-29 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor specific transepithelial transport of therapeutics
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6096871A (en) 1995-04-14 2000-08-01 Genentech, Inc. Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life
US5739277A (en) 1995-04-14 1998-04-14 Genentech Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6121022A (en) 1995-04-14 2000-09-19 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US7846455B2 (en) 1996-07-15 2010-12-07 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Attenuated chimeric respiratory syncytial virus
SE9503380D0 (sv) 1995-09-29 1995-09-29 Pharmacia Ab Protein derivatives
GB9526733D0 (en) 1995-12-30 1996-02-28 Delta Biotechnology Ltd Fusion proteins
NZ332234A (en) 1996-03-12 2000-06-23 Pg Txl Company Lp Water soluble paclitaxel prodrugs formed by conjugating paclitaxel or docetaxel with a polyglutamic acid polymer and use for treating cancer
US6441025B2 (en) 1996-03-12 2002-08-27 Pg-Txl Company, L.P. Water soluble paclitaxel derivatives
US8183344B2 (en) * 1996-04-24 2012-05-22 University Of Michigan Inactivation resistant factor VIII
US6458563B1 (en) 1996-06-26 2002-10-01 Emory University Modified factor VIII
US7560107B2 (en) 1996-06-26 2009-07-14 Emory University Modified factor VIII
AU3968897A (en) 1996-08-02 1998-02-25 Bristol-Myers Squibb Company A method for inhibiting immunoglobulin-induced toxicity resulting from the use of immunoglobulins in therapy and in vivo diagnosis
ES2208946T3 (es) 1996-08-23 2004-06-16 Sequus Pharmaceuticals, Inc. Liposomas que contienen un compuesto de cisplatino.
US6056973A (en) 1996-10-11 2000-05-02 Sequus Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic liposome composition and method of preparation
EP0932390A1 (en) 1996-10-11 1999-08-04 Sequus Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic liposome composition and method
AU725257B2 (en) 1996-10-15 2000-10-12 Transave, Inc. N-acyl phosphatidylethanolamine-mediated liposomal drug delivery
US6361796B1 (en) 1996-10-25 2002-03-26 Shire Laboratories, Inc. Soluble form osmotic dose delivery system
US6110498A (en) 1996-10-25 2000-08-29 Shire Laboratories, Inc. Osmotic drug delivery system
AU5065198A (en) 1996-11-15 1998-06-10 Maria Grazia Masucci Fusion proteins having increased half-lives
EP0842657A1 (en) 1996-11-19 1998-05-20 OctoPlus B.V. Microspheres for controlled release and processes to prepare these microspheres
US6395302B1 (en) 1996-11-19 2002-05-28 Octoplus B.V. Method for the preparation of microspheres which contain colloidal systems
WO1998023289A1 (en) 1996-11-27 1998-06-04 The General Hospital Corporation MODULATION OF IgG BINDING TO FcRn
US6294170B1 (en) 1997-08-08 2001-09-25 Amgen Inc. Composition and method for treating inflammatory diseases
AT405516B (de) 1997-02-27 1999-09-27 Immuno Ag Faktor x-analoge mit modifizierter proteasespaltstelle
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
CA2225189C (en) 1997-03-06 2010-05-25 Queen's University At Kingston Canine factor viii gene, protein and methods of use
EP1724282B1 (en) 1997-05-21 2013-05-15 Merck Patent GmbH Method for the production of non-immunogenic proteins
US7786070B2 (en) 1997-09-10 2010-08-31 Novo Nordisk Healthcare A/G Subcutaneous administration of coagulation factor VII
US6310183B1 (en) 1997-09-10 2001-10-30 Novo Nordisk A/S Coagulation factor VIIa composition
DE19747261A1 (de) 1997-10-25 1999-04-29 Bayer Ag Osmotisches Arzneimittelfreisetzungssystem
GB9722131D0 (en) 1997-10-20 1997-12-17 Medical Res Council Method
US6309370B1 (en) 1998-02-05 2001-10-30 Biosense, Inc. Intracardiac drug delivery
JP2002507393A (ja) 1998-02-11 2002-03-12 マキシジェン， インコーポレイテッド 抗原ライブラリー免疫
US20050260605A1 (en) 1998-02-11 2005-11-24 Maxygen, Inc. Targeting of genetic vaccine vectors
US6528624B1 (en) 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
ATE375365T1 (de) 1998-04-02 2007-10-15 Genentech Inc Antikörper varianten und fragmente davon
US6242195B1 (en) 1998-04-02 2001-06-05 Genentech, Inc. Methods for determining binding of an analyte to a receptor
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6406632B1 (en) 1998-04-03 2002-06-18 Symyx Technologies, Inc. Rapid characterization of polymers
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
US7090976B2 (en) 1999-11-10 2006-08-15 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions comprising Renilla GFP
GB9815157D0 (en) 1998-07-13 1998-09-09 Metron Designs Ltd High resolution pulse width setting from relatively low frequency clocks
EP1105427A2 (en) 1998-08-17 2001-06-13 Abgenix, Inc. Generation of modified molecules with increased serum half-lives
US20030190740A1 (en) 1998-10-13 2003-10-09 The University Of Georgia Research Foundation, Inc Stabilized bioactive peptides and methods of identification, synthesis, and use
PT1129186E (pt) 1998-11-10 2007-12-07 Sanquin Bloedvoorziening Um polipéptido factor viii com actividade de factor viii-c
EP1006183A1 (en) 1998-12-03 2000-06-07 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Recombinant soluble Fc receptors
US6329186B1 (en) 1998-12-07 2001-12-11 Novozymes A/S Glucoamylases with N-terminal extensions
US6358703B1 (en) 1998-12-10 2002-03-19 Bayer Corporation Expression system for factor VIII
US6713086B2 (en) 1998-12-18 2004-03-30 Abbott Laboratories Controlled release formulation of divalproex sodium
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
HUP0104865A3 (en) 1999-01-15 2004-07-28 Genentech Inc Polypeptide variants with altered effector function
JP4543553B2 (ja) 1999-03-03 2010-09-15 オプティノーズ アズ 鼻用の送り込み装置
US6183770B1 (en) 1999-04-15 2001-02-06 Acutek International Carrier patch for the delivery of agents to the skin
US7666400B2 (en) 2005-04-06 2010-02-23 Ibc Pharmaceuticals, Inc. PEGylation by the dock and lock (DNL) technique
US6743211B1 (en) 1999-11-23 2004-06-01 Georgia Tech Research Corporation Devices and methods for enhanced microneedle penetration of biological barriers
US7829085B2 (en) 1999-07-14 2010-11-09 Life Sciences Research Partners Vzw Methods of treating hemostasis disorders using antibodies binding the C1 domain of factor VIII
EP1203014B1 (en) 1999-08-06 2004-10-13 Genentech, Inc. Peptide antagonists of factor viia
US6458387B1 (en) 1999-10-18 2002-10-01 Epic Therapeutics, Inc. Sustained release microspheres
US20030109428A1 (en) 1999-12-01 2003-06-12 John Bertin Novel molecules of the card-related protein family and uses thereof
US20050287153A1 (en) 2002-06-28 2005-12-29 Genentech, Inc. Serum albumin binding peptides for tumor targeting
US6352721B1 (en) 2000-01-14 2002-03-05 Osmotica Corp. Combined diffusion/osmotic pumping drug delivery system
DE60138364D1 (de) 2000-02-11 2009-05-28 Bayer Healthcare Llc Gerinnungsfaktor vii oder viia konjugate
ES2269366T3 (es) 2000-02-11 2007-04-01 Merck Patent Gmbh Mejoramiento de la vida media en circulacion de proteinas de fusion basadas en anticuerpos.
EP1276849A4 (en) 2000-04-12 2004-06-09 Human Genome Sciences Inc ALBUMIN FUSION PROTEINS
WO2001087922A2 (en) 2000-05-16 2001-11-22 Lipoxen Technologies Limited Derivatisation of proteins in aqueous solution
WO2002013786A2 (en) 2000-08-15 2002-02-21 Board Of Trustees Of The University Of Illinois Method of forming microparticles
RU2326126C2 (ru) 2000-09-13 2008-06-10 Ново Нордиск Хелт Кэр Аг Полипептид фактора vii свертывания крови, его получение и применение
PL206105B1 (pl) 2000-09-19 2010-07-30 Emory Universityemory University Zmodyfikowany ludzki czynnik VIII oraz sposób modyfikacji ludzkiego czynnika VIII ze zmniejszeniem reaktywności na przeciwciało hamujące i zachowaniem aktywności prokoagulacyjnej
DE10053224A1 (de) 2000-10-26 2002-05-08 Univ Goettingen Georg August Verfahren zur Exposition von Peptiden und Polypeptiden auf der Zelloberfläche von Bakterien
US20030228309A1 (en) 2000-11-08 2003-12-11 Theodora Salcedo Antibodies that immunospecifically bind to TRAIL receptors
AU2002226028A1 (en) 2000-11-14 2002-05-27 Board Of Regents, Unversity Of Texas Systems Mutant human factor ix with an increased resistance to inhibition by heparin
GB0029407D0 (en) 2000-12-01 2001-01-17 Affitech As Product
EP2341060B1 (en) 2000-12-12 2019-02-20 MedImmune, LLC Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof
US20030049689A1 (en) 2000-12-14 2003-03-13 Cynthia Edwards Multifunctional polypeptides
US20030104591A1 (en) * 2000-12-14 2003-06-05 Murray Christopher J. Methods and compositions for grafting functional loops into a protein
JP2005500815A (ja) 2000-12-29 2005-01-13 キュラジェン コーポレイション タンパク質およびそれをコードする核酸
WO2002060951A2 (en) 2001-01-12 2002-08-08 The American National Red Cross Methods and compositions for reducing heparan sulfate proteoglycan-mediated clearance of factor viii
IN190699B (ko) 2001-02-02 2003-08-16 Sun Pharmaceutical Ind Ltd
EP1359936B1 (en) 2001-02-05 2008-02-20 Novo Nordisk Health Care AG Combined use of factor vii polypeptides and factor viii polypeptides
US6888319B2 (en) 2001-03-01 2005-05-03 Palomar Medical Technologies, Inc. Flashlamp drive circuit
CA2440582A1 (en) 2001-03-09 2002-10-03 Dyax Corp. Serum albumin binding moieties
US20020169125A1 (en) 2001-03-21 2002-11-14 Cell Therapeutics, Inc. Recombinant production of polyanionic polymers and uses thereof
US6992174B2 (en) 2001-03-30 2006-01-31 Emd Lexigen Research Center Corp. Reducing the immunogenicity of fusion proteins
US20040106794A1 (en) 2001-04-16 2004-06-03 Schering Corporation 3,4-Di-substituted cyclobutene-1,2-diones as CXC-chemokine receptor ligands
US20050048512A1 (en) 2001-04-26 2005-03-03 Avidia Research Institute Combinatorial libraries of monomer domains
JP2004528345A (ja) 2001-04-30 2004-09-16 シャイア ラボラトリーズ，インコーポレイテッド Ａｃｅ／ｎｅｐインヒビターおよびバイオアベイラビリティーエンハンサーを含む薬学的組成物
US6838093B2 (en) 2001-06-01 2005-01-04 Shire Laboratories, Inc. System for osmotic delivery of pharmaceutically active agents
US20040192599A1 (en) 2001-06-15 2004-09-30 Schuh Andre C Gene therapy for hemophilia a
KR100407467B1 (ko) 2001-07-12 2003-11-28 최수봉 리모컨 방식의 인슐린 자동주사기
AU2002322394A1 (en) 2001-07-30 2003-02-17 Eli Lilly And Company Method for treating diabetes and obesity
NZ532027A (en) 2001-10-10 2008-09-26 Neose Technologies Inc Remodeling and glycoconjugation of peptides
US7125843B2 (en) 2001-10-19 2006-10-24 Neose Technologies, Inc. Glycoconjugates including more than one peptide
US6960657B2 (en) 2001-11-02 2005-11-01 Novo Nordisk Healthcare A/G Human coagulation factor VII polypeptides
EP1451297A4 (en) 2001-12-07 2006-06-28 Toolgen Inc PHENOTYPIC SCANNING OF CHIMERIC PROTEINS
US20080167238A1 (en) 2001-12-21 2008-07-10 Human Genome Sciences, Inc. Albumin Fusion Proteins
US20080194481A1 (en) 2001-12-21 2008-08-14 Human Genome Sciences, Inc. Albumin Fusion Proteins
EP2277889B1 (en) 2001-12-21 2014-07-09 Human Genome Sciences, Inc. Fusion proteins of albumin and interferon beta
KR101271635B1 (ko) 2001-12-21 2013-06-12 휴먼 게놈 사이언시즈, 인코포레이티드 알부민 융합 단백질
US20040126856A1 (en) 2002-01-23 2004-07-01 Bajaj Paul S. Factor ixa: factor Vllla interaction and methods therefor
US20040002587A1 (en) 2002-02-20 2004-01-01 Watkins Jeffry D. Fc region variants
US20040018557A1 (en) 2002-03-01 2004-01-29 Immunomedics, Inc. Bispecific antibody point mutations for enhancing rate of clearance
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
AU2002316574B2 (en) 2002-03-15 2008-05-01 Brandeis University Central airway administration for systemic delivery of therapeutics
NZ536340A (en) 2002-04-30 2006-09-29 Maxygen Holdings Ltd Factor VII or VIIa polypeptide variants with N-glycosylation
US6945952B2 (en) 2002-06-25 2005-09-20 Theraject, Inc. Solid solution perforator for drug delivery and other applications
US7294513B2 (en) 2002-07-24 2007-11-13 Wyatt Technology Corporation Method and apparatus for characterizing solutions of small particles
EP1534335B9 (en) 2002-08-14 2016-01-13 Macrogenics, Inc. Fcgammariib-specific antibodies and methods of use thereof
US7198867B2 (en) 2002-09-17 2007-04-03 Diffusion Science, Inc. Electrochemical generation, storage and reaction of hydrogen and oxygen
US6911323B2 (en) 2002-09-25 2005-06-28 Novo Nordisk Healthcare A/G Human coagulation factor VII polypeptides
BRPI0314814C1 (pt) 2002-09-27 2021-07-27 Xencor Inc anticorpo compreendendo uma variante de fc
PT1562972E (pt) 2002-10-15 2010-11-10 Facet Biotech Corp Alteração de afinidades de ligação ao fcrn ou semi-vidas séricas de anticorpos por mutagénese
GB2395337B (en) 2002-11-14 2005-12-28 Gary Michael Wilson Warning Unit
EP2368578A1 (en) 2003-01-09 2011-09-28 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
US7041635B2 (en) 2003-01-28 2006-05-09 In2Gen Co., Ltd. Factor VIII polypeptide
SI1596887T1 (sl) 2003-02-26 2022-05-31 Nektar Therapeutics Konjugati polimer-del faktorja VIII
WO2004076522A1 (ja) 2003-02-28 2004-09-10 Kuraray Co., Ltd. 硬化性樹脂組成物
US20090010920A1 (en) 2003-03-03 2009-01-08 Xencor, Inc. Fc Variants Having Decreased Affinity for FcyRIIb
US8388955B2 (en) 2003-03-03 2013-03-05 Xencor, Inc. Fc variants
US20050176108A1 (en) 2003-03-13 2005-08-11 Young-Min Kim Physiologically active polypeptide conjugate having prolonged in vivo half-life
TWI353991B (en) 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
US7348004B2 (en) 2003-05-06 2008-03-25 Syntonix Pharmaceuticals, Inc. Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
SI2298347T1 (sl) 2003-05-06 2016-03-31 Biogen Hemophilia Inc. Himerni proteini s faktorjem strjevanja krvi za zdravljenje hemostatske motnje
US7132398B2 (en) 2003-05-06 2006-11-07 Dendreon Corporation Method of treatment of hemorrhagic disease using a factor VIIa/tissue factor inhibitor
US20070161087A1 (en) 2003-05-29 2007-07-12 Wolfgang Glaesner Glp-1 fusion proteins
JP4644663B2 (ja) 2003-06-03 2011-03-02 セル ジェネシス インコーポレイテッド ペプチド開裂部位を用いた単一ベクターからの組換えポリペプチドの高められた発現のための構成と方法
WO2005016974A1 (en) 2003-08-12 2005-02-24 Lipoxen Technologies Limited Sialic acid derivatives for protein derivatisation and conjugation
US7785594B2 (en) 2003-08-14 2010-08-31 Life Sciences Research Partners Vzw Factor VIII inhibitory antibodies with reduced glycosylation
US20050152979A1 (en) 2003-09-05 2005-07-14 Cell Therapeutics, Inc. Hydrophobic drug compositions containing reconstitution enhancer
CN101870729A (zh) 2003-09-09 2010-10-27 诺和诺德医疗保健公司 凝固因子ⅶ多肽
EP2932981B1 (en) 2003-09-19 2021-06-16 Novo Nordisk A/S Albumin-binding derivatives of GLP-1
GB0324368D0 (en) 2003-10-17 2003-11-19 Univ Cambridge Tech Polypeptides including modified constant regions
US20050123997A1 (en) 2003-10-30 2005-06-09 Lollar John S. Modified fVIII having reduced immunogenicity through mutagenesis of A2 and C2 epitopes
US7211559B2 (en) 2003-10-31 2007-05-01 University Of Maryland, Baltimore Factor VIII compositions and methods
CA2545603A1 (en) 2003-11-12 2005-05-26 Biogen Idec Ma Inc. Neonatal fc receptor (fcrn)-binding polypeptide variants, dimeric fc binding proteins and methods related thereto
JP2007511604A (ja) 2003-11-18 2007-05-10 アイコニック セラピューティクス インコーポレイティッド キメラタンパク質の均質製剤
US20060040856A1 (en) 2003-12-03 2006-02-23 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated factor IX
WO2005077981A2 (en) 2003-12-22 2005-08-25 Xencor, Inc. Fc POLYPEPTIDES WITH NOVEL Fc LIGAND BINDING SITES
DE602005015542D1 (de) 2004-01-12 2009-09-03 Applied Molecular Evolution Varianten der fc-region
WO2005069845A2 (en) 2004-01-14 2005-08-04 Ohio University Methods of producing peptides/proteins in plants and peptides/proteins produced thereby
BRPI0507026A (pt) 2004-02-09 2007-04-17 Human Genome Sciences Inc proteìnas de fusão de albumina
US8076288B2 (en) 2004-02-11 2011-12-13 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Hybrid polypeptides having glucose lowering activity
EP2053062A1 (en) 2004-03-24 2009-04-29 Xencor, Inc. Immunoglobin variants outside the Fc region
WO2005123780A2 (en) 2004-04-09 2005-12-29 Protein Design Labs, Inc. Alteration of fcrn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
US20080233100A1 (en) 2004-06-30 2008-09-25 Yiyou Chen Targeted enzymes
WO2006085967A2 (en) 2004-07-09 2006-08-17 Xencor, Inc. OPTIMIZED ANTI-CD20 MONOCONAL ANTIBODIES HAVING Fc VARIANTS
EP1919950A1 (en) 2004-07-15 2008-05-14 Xencor, Inc. Optimized fc variants
US7566701B2 (en) 2004-09-07 2009-07-28 Archemix Corp. Aptamers to von Willebrand Factor and their use as thrombotic disease therapeutics
US7442778B2 (en) 2004-09-24 2008-10-28 Amgen Inc. Modified Fc molecules
WO2006047350A2 (en) 2004-10-21 2006-05-04 Xencor, Inc. IgG IMMUNOGLOBULIN VARIANTS WITH OPTIMIZED EFFECTOR FUNCTION
PL1824988T3 (pl) * 2004-11-12 2018-01-31 Bayer Healthcare Llc Ukierunkowana na miejsce modyfikacja czynnika VIII
MX2007007877A (es) 2004-12-27 2007-08-21 Baxter Int Conjugados de polimero-factor de von willebrand.
CA2595695A1 (en) 2005-01-25 2006-08-03 Cell Therapeutics, Inc. Biologically active protein conjugates comprising (nn[s/t]) peptide repeats and having increased plasma half-life
US8263545B2 (en) 2005-02-11 2012-09-11 Amylin Pharmaceuticals, Inc. GIP analog and hybrid polypeptides with selectable properties
EP1871801A2 (en) 2005-04-01 2008-01-02 Novo Nordisk Health Care AG Blood coagulation fviii analogues
CA2604299A1 (en) * 2005-04-14 2006-10-19 Csl Behring Gmbh Modified coagulation factor viii with enhanced stability and its derivates
KR20080071119A (ko) 2005-08-12 2008-08-01 휴먼 게놈 사이언시즈, 인코포레이티드 알부민 융합 단백질
WO2007039475A1 (en) 2005-09-21 2007-04-12 Novo Nordisk Health Care Ag Human coagulation factor vii polypeptides
AU2006294644A1 (en) 2005-09-27 2007-04-05 Amunix, Inc. Proteinaceous pharmaceuticals and uses thereof
US7855279B2 (en) 2005-09-27 2010-12-21 Amunix Operating, Inc. Unstructured recombinant polymers and uses thereof
US20090099031A1 (en) 2005-09-27 2009-04-16 Stemmer Willem P Genetic package and uses thereof
US7846445B2 (en) 2005-09-27 2010-12-07 Amunix Operating, Inc. Methods for production of unstructured recombinant polymers and uses thereof
US20130172274A1 (en) 2005-12-20 2013-07-04 Duke University Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties
WO2007073486A2 (en) 2005-12-20 2007-06-28 Duke University Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties
US8048848B2 (en) 2006-02-03 2011-11-01 Prolor Biotech Ltd. Long-acting interferons and derivatives thereof and methods thereof
EP1816201A1 (en) 2006-02-06 2007-08-08 CSL Behring GmbH Modified coagulation factor VIIa with extended half-life
FR2897868B1 (fr) 2006-02-24 2012-08-31 Lab Francais Du Fractionnement Anticorps anti-idiotypiques neutralisant l'activite inhibitrice d'un anticorps inhibiteur dirige contre le domaine c1 du facteur viii.
CA2644712C (en) 2006-03-06 2016-09-13 Amunix, Inc. Unstructured recombinant polymers and uses thereof
WO2007104146A1 (en) 2006-03-13 2007-09-20 Tir Technology Lp Adaptive control apparatus and method for a solid-state lighting system
KR20080108147A (ko) 2006-03-31 2008-12-11 백스터 인터내셔널 인코포레이티드 페질화된 인자 ｖｉｉｉ
US7645860B2 (en) 2006-03-31 2010-01-12 Baxter Healthcare S.A. Factor VIII polymer conjugates
WO2007130535A2 (en) 2006-05-04 2007-11-15 Molecular Innovations Novel protein fusion/tag technology
EP3896090B1 (en) 2006-06-14 2022-01-12 CSL Behring GmbH Proteolytically cleavable fusion protein comprising a blood coagulation factor
US7939632B2 (en) 2006-06-14 2011-05-10 Csl Behring Gmbh Proteolytically cleavable fusion proteins with high molar specific activity
EP1867660A1 (en) 2006-06-14 2007-12-19 CSL Behring GmbH Proteolytically cleavable fusion protein comprising a blood coagulation factor
US9187532B2 (en) 2006-07-21 2015-11-17 Novo Nordisk A/S Glycosylation of peptides via O-linked glycosylation sequences
JP5290177B2 (ja) 2006-08-31 2013-09-18 セントカー・インコーポレーテツド Ｇｌｐ−２ミメティボディ、ポリペプチド、組成物、方法および用途
EP2068905A4 (en) 2006-09-14 2009-12-30 Human Genome Sciences Inc ALBUM INFUSION PROTEINS
US7985783B2 (en) * 2006-09-21 2011-07-26 The Regents Of The University Of California Aldehyde tags, uses thereof in site-specific protein modification
EP2054521A4 (en) 2006-10-03 2012-12-19 Novo Nordisk As METHODS OF PURIFYING CONJUGATES OF POLYPEPTIDES
JP5457185B2 (ja) 2006-10-04 2014-04-02 ノヴォ ノルディスク アー／エス グリセロール連結のｐｅｇ化された糖および糖ペプチド
WO2008049711A1 (en) 2006-10-27 2008-05-02 Novo Nordisk A/S Peptide extended insulins
CN101190945A (zh) 2006-11-29 2008-06-04 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所 特异性抗凝血物质的制备及其应用
EP3231440A1 (en) * 2006-12-22 2017-10-18 CSL Behring GmbH Modified coagulation factors with prolonged in vivo half-life
EP1935430A1 (en) 2006-12-22 2008-06-25 CSL Behring GmbH Modified coagulation factors with prolonged in vivo half-life
NZ577728A (en) 2006-12-27 2012-01-12 Baxter Int Von willebrand factor- and factor viii-polymer conjugates having a releasable linkage
EP2099475B1 (en) 2007-01-03 2016-08-24 Novo Nordisk Health Care AG Subcutaneous administration of coagulation factor viia-related polypeptides
US7700734B2 (en) 2007-01-09 2010-04-20 Shu-Wha Lin Recombinant human factor IX and use thereof
AU2008209985A1 (en) 2007-02-01 2008-08-07 Baxter Healthcare S.A. Improved fix-mutant proteins for hemophilia B treatment
CA2683423C (en) 2007-04-26 2020-10-27 Inspiration Biopharmaceuticals, Inc. Recombinant vitamin k dependent proteins with high sialic acid content and methods of preparing same
ATE502114T1 (de) 2007-06-21 2011-04-15 Univ Muenchen Tech Biologisch aktive proteine mit erhöhter in-vivo- und/oder in-vitro-stabilität
KR20100058541A (ko) 2007-08-15 2010-06-03 아뮤닉스 인코포레이티드 생물학적 활성 폴리펩티드의 특성을 변경하기 위한 조성물 및 방법
WO2009058446A1 (en) 2007-11-01 2009-05-07 University Of Rochester Recombinant factor viii having increased stability
US8173597B2 (en) 2007-11-09 2012-05-08 Baxter International Inc. Modified recombinant factor VIII and von Willebrand factor and methods of use
NZ586383A (en) 2007-12-28 2012-11-30 Baxter Int Recombinant vwf formulations
JP5444629B2 (ja) 2008-04-03 2014-03-19 富士通株式会社 照度センサ用光案内機構及び携帯電話機
TWI573806B (zh) 2008-04-17 2017-03-11 巴克斯歐塔公司 生物活性胜肽
US20110286988A1 (en) 2008-06-04 2011-11-24 Bayer Healthcare Llc FVIII Muteins for Treatment of Von Willebrand Disease
ES2531464T3 (es) * 2008-06-24 2015-03-16 Csl Behring Gmbh Factor VIII, factor de von Willebrand o sus complejos con semivida in vivo prolongada
CA2732423A1 (en) * 2008-08-21 2010-02-25 Octapharma Ag Recombinantly produced human factor viii and ix
CA2740793A1 (en) 2008-11-03 2010-06-03 Haiyan Jiang Method for the treatment of hemophilia
WO2010060081A1 (en) 2008-11-24 2010-05-27 Bayer Healthcare Llc Method of determining pegylated blood coagulation factor activity in a silica-based activated partial thromboplastin time assay
US8680050B2 (en) 2009-02-03 2014-03-25 Amunix Operating Inc. Growth hormone polypeptides fused to extended recombinant polypeptides and methods of making and using same
CN116925238A (zh) 2009-02-03 2023-10-24 阿穆尼克斯制药公司 延伸重组多肽和包含该延伸重组多肽的组合物
US8703717B2 (en) 2009-02-03 2014-04-22 Amunix Operating Inc. Growth hormone polypeptides and methods of making and using same
WO2010111414A1 (en) 2009-03-24 2010-09-30 Bayer Healthcare Llc Factor viii variants and methods of use
US20120121706A1 (en) 2009-04-10 2012-05-17 Tufts Medical Center, Inc. PAR-1 Activation by Metalloproteinase-1 (MMP-1)
EP3278813A1 (en) 2009-06-08 2018-02-07 Amunix Operating Inc. Growth hormone polypeptides and methods of making and using same
CA2764108A1 (en) 2009-06-08 2010-12-16 Amunix Operating Inc. Glucose-regulating polypeptides and methods of making and using same
ES2597954T3 (es) * 2009-07-27 2017-01-24 Baxalta GmbH Conjugados de proteína de la coagulación sanguínea
US20120148557A1 (en) 2009-08-20 2012-06-14 Ulrich Kronthaler Albumin fused coagulation factors for non-intravenous administration in the therapy and prophylactic treatment of bleeding disorders
CN102741422B (zh) 2009-08-24 2016-06-08 阿穆尼克斯运营公司 凝血因子ⅶ组合物及其制备和使用方法
WO2011028344A2 (en) 2009-08-25 2011-03-10 Amunix Operating Inc. Interleukin-1 receptor antagonist compositions and methods of making and using same
NZ600278A (en) 2009-11-13 2014-04-30 Grifols Therapeutics Inc Von willebrand factor (vwf)-containing preparations, and methods, kits, and uses related thereto
CN102791285A (zh) 2009-12-06 2012-11-21 比奥根艾迪克依蒙菲利亚公司 因子VIII-Fc嵌合多肽和杂交多肽及其使用方法
US20110312881A1 (en) 2009-12-21 2011-12-22 Amunix, Inc. Bifunctional polypeptide compositions and methods for treatment of metabolic and cardiovascular diseases
WO2011101242A1 (en) 2010-02-16 2011-08-25 Novo Nordisk A/S Factor viii molecules with reduced vwf binding
US9493543B2 (en) * 2010-02-16 2016-11-15 Novo Nordisk A/S Factor VIII fusion protein
US8557961B2 (en) 2010-04-02 2013-10-15 Amunix Operating Inc. Alpha 1-antitrypsin compositions and methods of making and using same
WO2011123813A2 (en) 2010-04-02 2011-10-06 Amunix Operating Inc. Binding fusion proteins, binding fusion protein-drug conjugates, xten-drug conjugates and methods of making and using same
WO2011131774A1 (en) 2010-04-21 2011-10-27 Erik Berntorp Genetic factors associated with inhibitor development in hemophilia a
JP6148979B2 (ja) 2010-05-20 2017-06-14 アラーガン、インコーポレイテッドＡｌｌｅｒｇａｎ，Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ 分解性クロストリジウム毒素
MX2013000301A (es) 2010-07-09 2013-05-09 Biogen Idec Hemophilia Inc Factores quimericos de coagulacion.
WO2012006623A1 (en) 2010-07-09 2012-01-12 Biogen Idec Hemophilia Inc. Systems for factor viii processing and methods thereof
CN103140237A (zh) 2010-07-09 2013-06-05 比奥根艾迪克依蒙菲利亚公司 因子ix多肽及其使用方法
EP2593130A2 (en) 2010-07-15 2013-05-22 Novo Nordisk A/S Stabilized factor viii variants
AT510236B1 (de) * 2010-07-26 2015-12-15 MAN Truck & Bus Österreich AG Verfahren zur motorbremsung
WO2012170969A2 (en) 2011-06-10 2012-12-13 Biogen Idec Ma Inc. Pro-coagulant compounds and methods of use thereof
EP2794409A4 (en) 2011-12-21 2016-04-27 Advanced Tech Materials DISCHARGE SYSTEMS WITH A FEED
BR112014017165B1 (pt) 2012-01-12 2023-05-02 Bioverativ Therapeutics Inc Proteína quimérica compreendendo uma proteína de fator viii, composição farmacêutica, e seus usos
JP6383666B2 (ja) 2012-02-15 2018-08-29 バイオベラティブ セラピューティクス インコーポレイテッド 組換え第ｖｉｉｉ因子タンパク質
JP6256882B2 (ja) 2012-02-15 2018-01-10 アムニクス オペレーティング インコーポレイテッド 第ｖｉｉｉ因子組成物、ならびに組成物の作製方法および用途
EP2841451A1 (en) 2012-04-24 2015-03-04 Novo Nordisk A/S Compounds suitable for treatment of haemophilia
US20150045303A1 (en) 2012-04-24 2015-02-12 Novo Nordisk A/S Pharmaceutical Composition Suitable for Treatment of Haemophilia
SG10201913893XA (en) 2012-07-11 2020-03-30 Bioverativ Therapeutics Inc Factor viii complex with xten and von willebrand factor protein, and uses thereof
WO2014015132A1 (en) 2012-07-18 2014-01-23 Dow Global Technologies Llc Forming ethylene
WO2014100913A1 (en) 2012-12-24 2014-07-03 Beijing Anxinhuaide Biotech. Co., Ltd Improving the half life of a therapeutic polypeptide by fusing with a trimeric scaffold protein via a spacer
EP2796145B1 (en) 2013-04-22 2017-11-01 CSL Ltd. A covalent complex of von willebrand factor and faktor viii linked by a disulphide bridge
TW201536811A (zh) 2013-05-31 2015-10-01 Biogen Idec Inc 嵌合ｆｖｉｉ－ｘｔｅｎ分子及其用途
WO2014198699A2 (en) 2013-06-12 2014-12-18 Novo Nordisk A/S Compounds suitable for treatment of haemophilia
AU2014302100B2 (en) 2013-06-28 2020-02-13 Bioverativ Therapeutics Inc. Thrombin cleavable linker with XTEN and its uses thereof
EP3013359A4 (en) 2013-06-28 2017-01-25 Biogen MA Inc. Thrombin cleavable linker
US10548953B2 (en) * 2013-08-14 2020-02-04 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor VIII-XTEN fusions and uses thereof
RS63583B1 (sr) 2014-01-10 2022-10-31 Bioverativ Therapeutics Inc Himerni proteini faktora viii i njihova upotreba

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20130017997A1 (en) * 2010-08-19 2013-01-17 Amunix Operating Inc. Factor VIII Compositions and Methods of Making and Using Same

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