KR20140119777A - 항-ig-e m1'' 항체 및 그의 사용 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 인간 IgE의 M1' 절편에 결합하는 항-IgE 항체, 및 IgE-매개 장애의 치료 및 예방에 있어서의 그의 용도, 뿐만 아니라 항-IgE 항체를 포함하는 키트를 제공한다.

Description

항-IG-E M1' 항체 및 그의 사용 방법 {ANTI-IG-E M1' ANTIBODIES AND METHODS USING SAME}

<관련 특허 출원에 대한 상호 참조>

본원은 2012년 1월 31일에 출원된 미국 가출원 일련 번호 61/593,282, 2012년 3월 20일에 출원된 미국 가출원 일련 번호 61/613,434, 2012년 4월 6일에 출원된 미국 가출원 일련 번호 61/621,453, 및 2012년 4월 18일에 출원된 미국 가출원 일련 번호 61/635,253을 우선권 주장하며, 이들 모두는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.

<발명의 분야>

본 발명은 인간 IgE의 M1' 절편에 결합하는 항-IgE 항체, 및 IgE-매개 장애의 치료 및 예방에 있어서의 그의 용도에 관한 것이다.

알레르기는 환경 항원에 대한 면역 반응이 조직 염증 및 장기 기능장애를 일으키는 특정 질환을 지칭한다. 각각의 알레르기성 질환의 임상적 양상은 관련된 기관 또는 조직에서 면역학적으로 유도된 염증 반응을 반영한다. 이들 양상은 일반적으로 항원의 화학적 또는 물리적 특성과 독립적이다. 알레르기 반응의 다양성은 각각 독특한 염증 패턴을 생성시키는 상이한 면역학적 이펙터 경로의 관련으로부터 야기된다.

알레르기는 전세계에 걸쳐 보편적이다. 그러나, 특정한 질환에 대한 편향은 상이한 연령군, 성별 및 인종에 따라 달라진다. 특정한 알레르겐에 대한 과민증의 유병률은 유전적 편향에 의해, 및 알레르겐에 대한 노출을 초래하는 지리적 및 문화적 인자 둘 다에 의해 결정된다. 알레르기의 임상적 상태는 각각의 알레르겐에 맞서는 일부 개체에게만 영향을 미친다. 알레르겐에 대한 노출시의 알레르기성 질환의 발병은 선행 "감작" 뿐만 아니라 특정 기관에 대한 반응의 국재화를 결정하는 다른 인자도 또한 필요로 한다.

알레르겐 노출시에 알레르기의 질환에 선행하는 생물학적 과정은 "감작" 또는 감작기로 공지된 면역 반응이다. 감작이 일어나면, 알레르겐에 대한 후속적 노출이 있을 때까지 개체는 증상을 나타내지 않는다. 감작의 효과는 면역 기억으로도 공지되어 있다.

상승된 IgE 수준은 알레르기성 천식을 비롯한 알레르기성 질환과 연관된다. IgE는 비만 세포 및 호염기구의 표면 상에서 알레르겐 수용체로서의 그의 역할로 인해 알레르기에서 중추적인 역할을 수행한다. IgE 항체는 FcεRI로 불리는 고친화도 세포 표면 수용체 대한 분자의 Fc 부분에서 비만 세포 및 호염기구의 표면에 고정된다. 다가 알레르겐 분자가 이들 수용체를 점유하고 있는 항체에 결합하는 경우에 알레르기 반응이 개시된다. 결과적으로 FcεRI의 가교가 일어나며, 이는 다시 세포내에서 신호하여 염증의 매개물: 히스타민, 류코트리엔, 화학주성 인자, 혈소판-활성화 인자 및 프로테이나제의 방출 및 활성화를 야기한다. 이들 활성화된 매개물은 국부적으로 작용하고, 혈관 투과성, 혈관확장, 평활근 수축 및 점액선 분비를 증가시킨다. 이러한 사건은 임상적으로 즉각기 또는 초기라 칭하고, 알레르겐 노출 후 처음 15-30분 이내에 일어난다. 다음의 12시간에 걸쳐, 완전히 충분하게 이해되지 않은 다른 화학적 매개물에 반응하여 호중구로부터 호산구로, 단핵 세포로 진행하는 염증 세포의 점진적인 조직 침윤이 존재한다. 이러한 알레르겐 노출 후 6-12시간의 기간을 후기로 지정하며, 이는 세포 염증의 임상적 징후를 특징으로 한다. 특히 폐에서 후기 반응이 초기 반응의 부재 하에 일어나는 것을 감안할 때, 후기 반응이 반드시 IgE 매개되는지의 여부는 여전히 완전하게 이해되지 않은 상태이다. 상기 메카니즘은 주로 아나필락시스, 두드러기 및 아토피성 질환, 예컨대 알레르기성 비염, 알레르기성 천식, 아토피성 피부염 및 알레르기성 위장병증을 초래한다.

IgE는 막 결합된 형태 및 분비된 형태로 존재한다. 이들 구분되는 형태는 스플라이스 변이체인 것으로 보인다. IgE를 하향 조절함으로써 치료 효과를 달성하기 위한 이전의 접근법은 면역계의 추가의 "아밍"을 예방하거나 이를 해제하도록, 주로 분비된 형태를 표적화하였다 (예를 들어, 졸레어(XOLAIR)® 오말리주맙). 분비된 형태의 IgE는 보다 짧은 형태이고, 본질적으로 Fc 영역은 CH4 도메인에서 종결되는 반면, 보다 긴 형태는 M1/M1' 및 M2로서 공지된 엑손에 의해 코딩되는 펩티드를 포함하는 추가의 C-말단 잔기를 포함한다. 분비된 형태의 IgE에 결합하는 항-IgE 항체를 사용하는 통상의 요법은 분비된 혈청 IgE (졸레어와 복합체를 형성하지 않은 총 IgE)의 감소를 일으킨다. 문헌 [Casale et al., J. Allergy Clin. Immunol. 100 (1): 110-121 (1997)].

M1' 섹션을 포함하는 막 결합된 IgE는 인간 IgE-스위칭된 B 세포, IgE 기억 B 세포 및 IgE 형질모구 내에 존재한다. 미국 특허 번호 8,071,097 (또한 WO2008/116149로 기재되며, 이들 둘 모두의 개시내용은 그 전문이 참조로 포함됨)에는 막 결합된 IgE의 M1' 절편을 표적화하는 항체가 개시되어 있다. 이들 항체는 아폽토시스 및/또는 항체-의존성 세포-매개 세포독성 메카니즘을 통해 M1' 발현 B 세포를 고갈시킬 수 있다.

특허 출원 및 공개를 비롯하여 본원에 인용된 모든 참고문헌은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.

인간 환자에게 인간 IgE의 M1' 절편에 결합하는 항-IgE 항체의 유효량을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 항체의 투여 사이의 간격이 약 1개월 또는 그 초과인, IgE-매개 장애를 치료 또는 예방하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 투여 사이의 간격은 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 약 6개월, 또는 그 초과이다. 일부 실시양태에서, 투여 사이의 간격은 약 3개월이며 제1 투여 4주 후에 추가 투여를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항체는 용량당 약 150 mg 내지 약 450 mg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항체는 용량당 약 150 mg, 용량당 약 300 mg 또는 용량당 약 450 mg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항체는 피하로 또는 정맥내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 인간 환자에서의 혈청 총 IgE가 항체 치료 후에 기준선에 비해 감소된다. 일부 실시양태에서, 인간 환자에서의 알레르겐-특이적 IgE가 항체 치료 후에 기준선에 비해 감소된다. 일부 실시양태에서, 인간 환자에서의 혈청 총 IgE의 알레르겐-유도된 증가가 항체 치료 후에 예방 또는 감소된다. 일부 실시양태에서, 인간 환자에서의 알레르겐-특이적 IgE의 알레르겐-유도된 증가가 항체 치료 후에 예방 또는 감소된다. 일부 실시양태에서, 새로운 IgE의 생산이 항체 치료 후에 예방 또는 감소된다.

또한, 인간 환자에게 인간 IgE의 M1' 절편에 결합하는 항-IgE 항체의 유효량을 용량당 약 150 mg 내지 약 450 mg의 용량으로 투여하는 것을 포함하는, IgE-매개 장애를 치료 또는 예방하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 항체는 용량당 약 150 mg, 용량당 약 300 mg 또는 용량당 약 450 mg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항체는 피하로 또는 정맥내로 투여된다.

또한, 인간 환자에게 인간 IgE의 M1' 절편에 결합하는 항-IgE 항체의 유효량을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 항체의 투여 사이의 간격은 약 1개월 또는 그 초과인, 인간에서 혈청 총 IgE 및/또는 알레르겐-특이적 IgE를 감소시키는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 혈청 총 IgE는 기준선 수준으로부터 적어도 약 20% 감소된다. 일부 실시양태에서, 혈청 총 IgE는 기준선 수준으로부터 적어도 약 25% 감소된다. 일부 실시양태에서, 혈청 총 IgE의 감소는 항체의 최종 투여 후 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 또는 적어도 6개월 동안 지속된다. 또한, 인간 환자에게 인간 IgE의 M1' 절편에 결합하는 항-IgE 항체의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 새로운 IgE의 생산을 예방하는 방법이 본원에 제공된다.

또한, 인간 환자에게 인간 IgE의 M1' 절편에 결합하는 항-IgE 항체의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 혈청 총 IgE 및/또는 알레르겐-특이적 IgE의 알레르겐-유도된 증가를 예방 또는 감소시키는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 항체의 투여 사이의 간격은 약 1개월 또는 그 초과이다. 일부 실시양태에서, 항체의 투여 사이의 간격은 약 2개월이다. 일부 실시양태에서, 항체의 투여 사이의 간격은 약 3개월이다. 일부 실시양태에서, 항체의 투여 사이의 간격은 약 4개월이다. 일부 실시양태에서, 항체의 투여 사이의 간격은 약 5개월이다. 일부 실시양태에서, 항체의 투여 사이의 간격은 약 6개월이다. 일부 실시양태에서, 항체는 용량당 약 150 내지 약 450 mg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 알레르겐-특이적 IgE의 알레르겐-유도된 증가가 예방 또는 감소된다. 일부 실시양태에서, 혈청 총 IgE 및/또는 알레르겐-특이적 IgE의 알레르겐-알레르겐 유도된 증가의 예방 또는 감소는 항체의 최종 투여 후 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월 또는 적어도 6개월 동안 지속된다.

본원에 기재된 방법의 일부 실시양태에서, 항체는 알레르기성 비염, 알레르기성 천식, 비-알레르기성 천식, 아토피성 피부염, 알레르기성 위장병증, 아나필락시스, 두드러기, 식품 알레르기, 알레르기성 기관지폐 아스페르길루스증, 기생충성 질환, 간질성 방광염, 과다-IgE 증후군, 모세혈관확장성 운동실조 비스코트-알드리치 증후군, 무흉선 림프증식증, IgE 골수종, 이식편 대 숙주 반응 및 알레르기성 자반증으로 이루어진 군으로부터 선택된 IgE-매개 장애를 치료하기 위해 투여된다. 일부 실시양태에서, IgE-매개 장애는 알레르기성 비염, 알레르기성 천식 또는 비-알레르기성 천식이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법은 표준 치료, 예를 들어 제2 제어제와 조합된 고-용량 흡입용 또는 경구 코르티코스테로이드에 의해 불충분하게 제어되는 알레르기성 천식을 앓는 인간 환자를 치료하기 위한 것이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법은 중증, 중등도 또는 경도 천식을 앓는 인간 환자를 치료하기 위한 것이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법은 고용량 흡입용 코르티코스테로이드 (ICS) (플루티카손 프로피오네이트 (FP) 또는 등가물의 ≥ 400 μg/일 총 1일 용량) 및 제2 제어제 (예를 들어, 치료한지 적어도 12주 또는 적어도 36주 후)에도 불구하고 불충분하게 제어되는 알레르기성 천식을 앓는 인간 환자를 치료하기 위한 것이다. 일부 실시양태에서, 제2 제어제는 기관지확장제 또는 항류코트리엔제이다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법은 인간 환자에게 항-IgE 항체, 항히스타민제, 기관지확장제, 글루코코르티코이드, NSAID, 충혈제거제, 기침 억제제, 진통제, TNF-길항제, 인테그린 길항제, 면역억제제, IL-4 길항제, IL-13 길항제, 이중 IL-4/IL-13 길항제, DMARD, B-세포 표면 마커에 결합하는 항체, 및 BAFF 길항제로 이루어진 군으로부터 선택된 제2 약물을 IgE-매개 장애를 치료 또는 예방하기 위한 항체와 함께 투여하는 것을 추가로 포함한다. 본원에 기재된 방법의 일부 실시양태에서, 항체는 IgE-매개 장애에 대한 제2 치료 방법과 함께 인간 환자에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 제2 치료 방법은 알레르겐 탈감작의 치료 요법을 포함한다.

본원에 기재된 방법에서, 본원에 기재된 임의의 항-IgE 항체가 인간 환자에게 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-IgE 항체는 키메라, 인간화 또는 인간 항체이다. 일부 실시양태에서, 항체는 도 14에 나타낸 인간 IgE의 M1' 절편 내의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 항-IgE 항체는 47H4, 7A6, 26A11, 47H4v5, 7A6v1 및 26A11v6으로 이루어진 군으로부터 선택된 항체에 의해 결합된 것과 동일한 에피토프에 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 서열 4, 서열 5, 서열 6 및 서열 7로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 펩티드에 상응한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열 1의 잔기 317 내지 352에 의해 규정된 IgE의 M1' 절편 내의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열 1의 잔기 317 내지 352에 의해 규정된 IgE의 M1' 절편 내의 에피토프에 특이적으로 결합하고, 뮤린 항-IgE 항체 47H4의 것과 동등한 스캐차드(Scatchard) 결합 친화도를 갖는다. 일부 실시양태에서, 친화도는 0.30 내지 0.83 nM이다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열 1의 잔기 317 내지 352에 의해 규정된 IgE의 M1' 절편 내의 에피토프에 특이적으로 결합하고, 항-IgE 항체 47H4v5의 것과 동등한 스캐차드 결합 친화도를 갖는다. 일부 실시양태에서, 친화도는 약 1.5 nM이다. 일부 실시양태에서, 항체는 26A11, 26A11 v.1-16, 7A6, 7A6v1, 47H4 및 47H4v1-6으로 이루어진 군으로부터 선택된 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 중쇄 및 경쇄 HVR을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 26A11, 26A11 v.1-16, 7A6, 7A6v1, 47H4, 47H4v1-6으로 이루어진 군으로부터 선택된 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 중쇄 및 경쇄의 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함한다.

일부 실시양태에서, 항-IgE 항체는 서열 29의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 (a) HVR-H1은 서열 29의 잔기 26-35를 포함하고, (b) HVR-H2는 서열 29의 잔기 49-66을 포함하고, (c) HVR-H3은 서열 29의 잔기 97-106을 포함하고, (d) HVR-L1은 서열 19의 잔기 24-39를 포함하고, (e) HVR-L2는 서열 19의 잔기 55-61을 포함하고, (f) HVR-L3은 서열 19의 잔기 94-102를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 인간 컨센서스 프레임워크를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체의 중쇄 가변 영역은 하위군 III 컨센서스 프레임워크를 포함한다. 일부 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 카파 하위군 I 컨센서스 프레임워크를 포함한다. 일부 실시양태에서, 인간 환자에게 투여되는 항-IgE 항체는 서열 39의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 40의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-IgE 항체의 항원-결합 단편은 인간 환자에게 투여되며, 여기서 항-IgE 항체는 서열 39의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 40의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.

일부 실시양태에서, 항-IgE 항체는 ADCC 활성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-IgE 항체는 비-푸코실화된다. 일부 실시양태에서, 항-IgE 항체는 IgE-스위칭된 B-세포를 고갈시킨다. 일부 실시양태에서, 항-IgE 항체는 IgE 기억 B-세포를 고갈시킨다. 일부 실시양태에서, 항-IgE 항체는 IgE 형질모구를 고갈시킨다. 일부 실시양태에서, 항-IgE 항체는 항체 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물 중에 있다.

또한, 인간 IgE의 M1' 절편에 결합하는 항-IgE 항체, 및 항체가 IgE-매개 장애를 치료하기 위해 인간 환자에게 투여되며 여기서 인간 환자에 대한 항체의 투여 사이의 간격이 약 1개월 또는 그 초과임을 나타내는 포장 삽입물을 포함하는 키트가 본원에 제공된다.

또한, 인간 IgE의 M1' 절편에 결합하는 항-IgE 항체, 및 항체가 IgE-매개 장애를 치료하기 위해 용량당 약 150 mg 내지 약 450 mg의 투여량으로 인간 환자에게 투여됨을 나타내는 포장 삽입물을 포함하는 키트가 본원에 제공된다.

일부 실시양태에서, 키트 내의 포장 삽입물은 치료가 인간 환자에서 기준선에 비해 혈청 총 IgE를 감소시키는데 효과적임을 추가로 나타낸다. 일부 실시양태에서, 키트의 포장 삽입물은 치료가 인간 환자에서 기준선에 비해 알레르겐-특이적 IgE를 감소시키는데 효과적임을 추가로 나타낸다. 일부 실시양태에서, 포장 삽입물은 치료가 인간 환자에서 혈청 총 IgE의 알레르겐-유도된 증가를 예방 또는 감소시키는데 효과적임을 추가로 나타낸다. 일부 실시양태에서, 포장 삽입물은 치료가 인간 환자에서 알레르겐-특이적 IgE의 알레르겐-유도된 증가를 예방 또는 감소시키는데 효과적임을 추가로 나타낸다. 일부 실시양태에서, 인간 환자는 중증, 중증도 또는 경도 천식을 앓는다. 일부 실시양태에서, 키트에서의 항체는 바이알 내에 있다. 일부 실시양태에서, 키트에서의 항체는 사전-충전된 시린지 내에 있다. 일부 실시양태에서, 키트는 주사 장치 (예컨대, 자동-주사기)를 추가로 포함한다.

일부 실시양태에서, 키트는 항-IgE 항체, 항히스타민제, 기관지확장제, 글루코코르티코이드, NSAID, 충혈제거제, 기침 억제제, 진통제, TNF-길항제, 인테그린 길항제, 면역억제제, IL-4 길항제, IL-13 길항제, 이중 IL-4/IL-13 길항제, DMARD, B-세포 표면 마커에 결합하는 항체, 및 BAFF 길항제로 이루어진 군으로부터 선택된 제2 약물, 및 항체가 IgE-매개 장애를 치료하기 위한 제2 약물과 함께 매달 또는 매분기 간격으로 인간 환자에게 투여됨을 나타내는 포장 삽입물을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 제2 약물은 항-IgE 항체 rhuMAbE25이다.

일부 실시양태에서, 본 발명은 임의의 상기 기재된 투여 간격, 양 또는 요법에 의해 투여되는, 임의의 상기 기재된 방법에 사용하기 위한 임의의 상기 기재된 항-IgE-M1' 항체를 제공한다.

일부 실시양태에서, 본 발명은 임의의 상기 기재된 투여 간격, 양 또는 요법에 의해 투여되도록 제조되는, 임의의 상기 기재된 방법에 사용하기 위한 임의의 상기 기재된 항-IgE-M1' 항체를 제공한다.

일부 실시양태에서, 본 발명은 임의의 상기 기재된 투여 간격, 양 또는 요법에 의해 투여되는, 임의의 상기 기재된 방법에서의 임의의 상기 기재된 항-IgE-M1' 항체의 용도를 제공한다.

본원에 기재된 다양한 실시양태의 특성 중 하나, 일부 또는 전부가 조합되어 본 발명의 다른 실시양태를 형성할 수 있음을 이해해야 한다. 본 발명의 이들 측면 및 다른 측면은 당업자에게 명백하게 될 것이다.

도 1은 건강한 지원자에서의 1a 상 단일 상승-용량 연구의 다이어그램이다.
도 2는 경도 천식을 앓는 환자에서의 1b 상 다중 상승 용량 연구의 다이어그램이다.
도 3은 1a 상 연구에서의 모든 코호트의 경시적 평균 혈청 농도를 나타내는 그래프이다.
도 4는 1b 상 연구에서의 모든 코호트의 경시적 평균 혈청 농도를 나타내는 그래프이다.
도 5는 MEMP1972A로의 치료 85일 및 168일 후의 혈청 총 IgE를 나타내는 그래프이다. 데이터는 연구 제85일 (a) 및 제168일 (b)에 대해 제시되고, 여기서 연구 제1일은 단일-용량 투여일로서 규정된다. 데이터는 기준선으로부터의 % 변화로 표현되며, 여기서 기준선은 투여전 방문의 평균으로서 규정된다 (평균 ± SD, 0.003, 0.03 및 0.3 mg/kg IV 군에서 n=3-4명의 환자, 1, 3, 5 mg/kg IV 및 3 mg/kg SC 군에서 n = 5, 및 위약군에서 n = 14).
도 6은 MEMP1972A로의 치료 후에 알레르기성 비염을 앓는 환자에서의 혈청 총 IgE를 나타내는 그래프이다. 데이터는 기준선으로부터의 % 변화로 표현되며, 여기서 기준선은 투여전 방문의 평균으로서 규정된다 (평균 ± SD, MEMP1972A 군에서의 n = 8명의 환자, 위약군에서의 n = 12 (IV 및 SC 조합)).
도 7은 경도 천식을 앓는 환자에서의 2a 상 활성 증명 알레르겐 접종 연구의 다이어그램이다.
도 8은 항-M1 프라임 항체 (MEMP1972A)가, 2a 상 연구에서의 알레르겐 흡입 후 경시적 1초 강제 호기량 (FEV₁)에서의 퍼센트 감소에 의한 측정시에 조기 천식성 반응 (EAR) 및 후기 천식성 반응 (LAR)을 둘 다 감소시켰음을 나타내는 그래프이다. a)는 위약 또는 약물 투여 전의 스크리닝시 환자에서의 알레르겐 흡입 후, 기준선 (접종전)과 비교한 경시적 평균 퍼센트 FEV₁을 보여준다. b)는 위약 또는 약물 (MEMP1972A) 치료한 환자에서 제86일에서의 알레르겐 흡입 후, 기준선 (접종전)과 비교한 경시적 평균 퍼센트 FEV₁을 보여준다.
도 9는 항-M1 프라임 항체가 2a 상 연구에서 경도 천식을 앓는 환자에서의 알레르겐-특이적 IgE의 알레르겐-유도된 증가를 예방하고 총 IgE를 감소시켰음을 나타내는 그래프이다. a)는 위약 또는 항-M1 프라임 (MEMP1972A)으로 치료된 환자에서의 (접종 알레르겐에 대한) 알레르겐-특이적 IgE를 보여준다. *p≤0.01; †p≤0.05. b)는 전체 폐 알레르겐 접종되고 위약 또는 항-M1 프라임 (MEMP1972A)으로 치료된 환자에서의 (무관한 알레르겐 (즉, 비-접종 알레르겐)에 대한) 알레르겐-특이적 IgE를 보여준다. c)는 중간 결과에서 위약 또는 항-M1 프라임으로 치료된 환자에서의 총 IgE를 보여준다. d)는 위약 또는 항-M1 프라임으로 치료된 환자에서의 총 IgE를 보여준다. 연구의 시작 전 IgE 수준을 100%의 기준선으로 설정한다 (MEMP1972A). *p≤0.01. 데이터는 평균 ± SEM으로 나타내었다. a)-c)의 경우, 후기 시점에 모든 대상체가 포함되지는 않았다; 제197일에 n = 4-5/치료군.
도 10은 MEMP1972A가 호산구의 알레르겐 접종-유도된 증가를 감소시켰음을 보여주는 그래프이다. a)는 스크리닝시의 객담 호산구 수준을 보여준다. b)는 연구의 제12주에서의 객담 호산구 수준을 보여준다. 데이터는 평균 ± 표준 오차로 제시된다.
도 11은 MEMP1972A로 치료된 환자에서의 말초 혈액 호산구의 감소를 보여주는 그래프이다. a)는 호산구에서의 기준선 (스크리닝)의 백분율 (%)을 보여준다. *p≤0.10; †p≤0.15. b)는 호산구에서의 기준선 (스크리닝)의 백분율 (절대 카운트)을 보여준다. *p≤0.10; †p≤0.15. 데이터는 평균 ± 표준 오차로 제시된다.
도 12는 MEMP1972A가 알레르겐-유도된 CCL17 수준에서의 증가를 차단하는 것을 보여주는 그래프이다. a)는 CCL17 수준을 연구 과정에 걸친 기준선의 백분율로 보여준다. b)는 CCL17 수준을 스크리닝 및 제86일에서의 기준선의 백분율로 보여준다. 데이터는 평균 ± 표준 오차로 제시된다.
도 13은 천식을 앓는 환자에서의 2b 상 연구의 다이어그램이다. 위약군의 환자에게 매달 간격으로 (제0, 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28 및 32주) 총 9회의 위약 용량을 투여한다. 300 mg 항-M1 프라임 항체 아암의 환자에게 매달 간격으로 (제0, 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28 및 32주) 총 9회의 항체의 용량을 투여한다. 150 mg 및 450 mg 항-M1 프라임 항체 아암의 환자에게 분기별 간격으로 (제0, 12 및 24주) 3회 용량 뿐만 아니라 제4주에서의 별도 용량을 포함하여 총 4회의 항체의 활성 용량을 투여하고, 나머지 5회 용량은 위약을 투여한다.
도 14는 인간 (서열 1), 레서스 원숭이 (서열 2) 및 시노몰구스 원숭이 (서열 3)의 IgE의 선택된 불변 쇄 영역의 정렬이다. CH2, CH3, CH4, M1', 막횡단 및 세포내 도메인의 대략의 위치를 보여준다.
도 15a-f는 뮤린 항체 26A11, 7A6 및 47H4 및 그의 다양한 인간화 변이체의 가변 경쇄 및 중쇄 서열을 보여준다. 위치는 카바트(Kabat)에 따라 넘버링하고, 가변 컨센서스 네트워크에 그라프팅된 초가변 영역 (경쇄에 대해 카파 I, 중쇄에 대해 하위군 III)을 박스로 표시하였다. a)는 인간 카파 I 경쇄 (서열 8)와 비교하여, 26A11 (서열 9) 및 인간화 변이체 1,4 (서열 10), 변이체 2,5 (서열 11), 변이체 3,6 (서열 12), 변이체 13,15 (서열 13) 및 변이체 14,16 (서열 14)의 가변 경쇄를 보여준다. b)는 인간 카파 I 경쇄 (서열 8)와 비교하여, 7A6 (서열 15) 및 인간화 변이체 1 (서열 16)의 가변 경쇄를 보여준다. c)는 인간 카파 I 경쇄 (서열 8)와 비교하여, 47H4 (서열 17) 및 인간화 변이체 1,3 (서열 18) 및 변이체 2, 4-6 (서열 19)의 가변 경쇄를 보여준다. d)는 인간 III 중쇄 (서열 20)와 비교하여, 26A11 (서열 21) 및 인간화 변이체 1-3, 13, 14 (서열 22) 및 변이체 4-6, 15, 16 (서열 23)의 가변 중쇄를 보여준다. e)는 인간 중쇄 (서열 20)와 비교하여, 7A6 (서열 24) 및 인간화 변이체 1 (서열 25)의 가변 중쇄를 보여준다. f)는 인간 III 중쇄 (서열 20)와 비교하여, 47H4 (서열 26), 및 인간화 변이체 1,2 (서열 27), 변이체 3-4 (서열 28), 변이체 5 (서열 29) 및 변이체 6 (서열 30)의 가변 중쇄를 보여준다.
도 16은 항-M1 프라임 항체가 2a 상 연구에서 경도 천식을 앓는 환자에서의 접종 및 비-접종 특이적 IgE를 감소시켰음을 나타내는 그래프이다. a)는 위약 또는 항-M1 프라임 (MEMP1972A)으로 치료된 환자에서의 접종 알레르겐에 대한 알레르겐-특이적 IgE를 보여준다. b) 위약 또는 항-M1 프라임 (MEMP1972A)으로 치료된 환자에서의 비-접종 알레르겐에 대한 알레르겐-특이적 IgE를 보여준다. IgE 수준은 기준선의 퍼센트로 나타내었고, 연구 시작 전의 IgE 수준은 기준선 (100%)이다. 데이터는 평균 또는 중앙값으로 나타내었다.

본원은 IgE의 M1' 절편에 결합하는 항-IgE 항체를 사용하여 IgE-매개 장애를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 본 발명자들은 임상 연구에서, 인간화 항-M1' 항체가 건강한 대상체, 및 알레르기성 비염 또는 알레르기성 천식을 앓는 환자에서의 혈청 총 IgE 및 알레르겐 특이적 IgE를 감소시키는데 효과적이었으며 이러한 총 IgE의 감소가 단일 및 다중 용량 연구 둘 모두에서 최종 용량 후 적어도 3개월 동안 지속되었음을 보여주었다. 또한, 별도의 연구에서, 본 발명자들은 혈청 총 IgE 및 알레르겐-특이적 IgE의 알레르겐-유도된 증가가 항-IgE 항체 치료 후에 환자에서 예방 또는 감소되었음을 보여주었다.

I. 일반적 기술

본원에서 기재되거나 언급된 기술 및 절차는 일반적으로 잘 이해되며, 통상의 방법론, 예컨대 예를 들어 문헌 [Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3d edition (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.; Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel, et al. eds., (2003)); the series Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.): PCR 2: A Practical Approach (M.J. MacPherson, B.D. Hames and G.R. Taylor eds. (1995)), Harlow and Lane, eds. (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, and Animal Cell Culture (R.I. Freshney, ed. (1987)); Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R.I. Freshney), ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather and P.E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths, and D.G. Newell, eds., 1993-8) J. Wiley and Sons; Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir and C.C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller and M.P. Calos, eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J.E. Coligan et al., eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999); Immunobiology (C.A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: A Practical Approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal Antibodies: A Practical Approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using Antibodies: A Laboratory Manual (E. Harlow and D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies (M. Zanetti and J. D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995); 및 Cancer: Principles and Practice of Oncology (V.T. DeVita et al., eds., J.B. Lippincott Company, 1993)]에 기재된 널리 활용되는 방법론을 사용하여 당업자에 의해 통상적으로 이용된다.

II. 정의

"알레르겐" 또는 "면역원"은 면역 반응을 유발할 수 있는 임의의 분자이다. 본원에 사용된 바와 같이, 상기 용어는 항원 분자 그 자체, 또는 그의 공급원, 예컨대 화분립, 동물 비듬, 곤충 독 또는 식료품을 포괄한다. 이는 이뮤노글로불린 또는 T-세포 수용체에 의해 특이적으로 인식될 수 있는 분자를 지칭하는 용어 항원과 대조된다. 면역 반응을 유도할 수 있는 임의의 외래 물질은 잠재적인 알레르겐이다. 천연 및 합성 기원 둘 모두의 많은 다양한 화학물질들이 알레르겐인 것으로 공지되어 있다. 복합 천연 유기 화학물질, 특히 단백질은 항체-매개 알레르기를 유발하는 것으로 보이는 한편, 단순 유기 화합물, 무기 화학물질, 및 금속은 T-세포 매개 알레르기를 보다 우세하게 유발한다. 일부 경우에, 동일한 알레르겐이 하나 초과의 유형의 알레르기의 원인이 될 수 있다. 알레르겐에 대한 노출은 흡입, 주사, 주사, 또는 피부 접촉을 통할 수 있다.

용어 "항체"는 모노클로날 항체 (이뮤노글로불린 Fc 영역을 갖는 전장 항체 포함), 폴리에피토프 특이성을 갖는 항체 조성물, 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체, 디아바디, 및 단일-쇄 분자 뿐만 아니라 항체 단편 (예를 들어, Fab, F(ab')₂ 및 Fv)을 포함한다. 용어 "이뮤노글로불린" (Ig)은 본원에서 "항체"와 상호교환가능하게 사용된다.

기본 4-쇄 항체 단위는 2개의 동일한 경쇄 (L) 및 2개의 동일한 중쇄 (H)로 구성된 이종사량체 당단백질이다. IgM 항체는 J 쇄로 불리는 추가의 폴리펩티드와 함께 5개의 기본 이종사량체 단위로 이루어지고 10개의 항원 결합 부위를 함유하는 한편, IgA 항체는 중합되어 J 쇄와 조합된 다가 조립체를 형성할 수 있는 2-5개의 기본 4-쇄 단위를 포함한다. IgG의 경우, 4-쇄 단위는 일반적으로 약 150,000 달톤이다. 각각의 L 쇄는 1개의 공유 디술피드 결합에 의해 H 쇄에 연결되지만, 2개의 H 쇄는 H 쇄 이소형에 따라 1개 이상의 디술피드 결합에 의해 서로 연결된다. 또한, 각각의 H 및 L 쇄는 규칙적으로 이격된 쇄내 디술피드 가교를 갖는다. 각각의 H 쇄는 N-말단에 가변 도메인 (V_H)을 갖고, 이어서 α 및 γ 쇄 각각의 경우에는 3개의 불변 도메인 (C_H), μ 및 ε 이소형의 경우에는 4개의 C_H 도메인을 갖는다. 각각의 L 쇄는 N-말단에서 가변 도메인 (V_L)을 갖고, 이어서 그의 다른 말단에서 불변 도메인을 갖는다. V_L은 V_H와 정렬되고, C_L은 중쇄의 제1 불변 도메인 (C_H1)과 정렬된다. 특정한 아미노산 잔기는 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 사이의 인터페이스를 형성하는 것으로 여겨진다. V_H 및 V_L의 쌍형성은 함께 단일 항원-결합 부위를 형성한다. 상이한 부류의 항체의 구조 및 특성에 대해서는, 예를 들어 문헌 [Basic and Clinical Immunology, 8th Edition, Daniel P. Sties, Abba I. Terr and Tristram G. Parsolw (eds), Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994] (71 페이지 및 제6장)을 참조한다.

임의의 척추동물 종으로부터의 L 쇄는 그의 불변 도메인의 아미노산 서열을 기초로, 카파 및 람다로 불리는 명백히 구분되는 2가지 유형 중 하나에 배정될 수 있다. 이뮤노글로불린은 중쇄의 불변 도메인 (CH)의 아미노산 서열에 따라 상이한 부류 또는 이소형으로 배정될 수 있다. 5가지 부류의 이뮤노글로불린: 각각 α, δ, ε, γ 및 μ로 명명되는 중쇄를 갖는 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM이 존재한다. γ 및 α 부류는 CH 서열 및 기능에 있어서의 상대적으로 작은 차이를 기초로 하위부류로 추가로 분류되며, 예를 들어 인간은 하기 하위부류: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2를 발현한다.

"단리된" 항체는 그의 생산 환경 (예를 들어, 자연적으로 또는 재조합 방식으로)의 성분으로부터 확인, 분리 및/또는 회수된 것이다. 바람직하게는, 단리된 폴리펩티드는 그의 생산 환경으로부터의 다른 모든 성분과 회합되지 않는다. 그의 생산 환경의 오염 성분, 예컨대 재조합 형질감염된 세포로부터 생성되는 것은 전형적으로 항체에 대한 연구, 진단 또는 치료 용도를 방해할 물질이고, 효소, 호르몬 및 다른 단백질성 또는 비-단백질성 용질을 포함할 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 폴리펩티드는: (1) 예를 들어 로우리 방법에 의해 결정시에 항체의 95 중량% 초과, 및 일부 실시양태에서 99 중량% 초과로, (2) 스피닝 컵 서열분석기의 사용에 의해 N-말단 또는 내부 아미노산 서열 중 적어도 15개 잔기를 얻기에 충분한 정도로, 또는 (3) 쿠마시 블루, 또는 바람직하게는 은 염색을 사용하여 비-환원 또는 환원 조건 하에 SDS-PAGE에 의해 균질한 정도로 정제될 것이다. 단리된 항체는 재조합 세포 내의 계내 항체를 포함하며, 이는 항체의 천연 환경의 적어도 하나의 성분이 존재하지 않을 것이기 때문이다. 그러나, 통상적으로, 단리된 폴리펩티드 또는 항체는 적어도 1회의 정제 단계에 의해 제조될 것이다.

항체의 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항체의 중쇄 또는 경쇄의 아미노-말단 도메인을 지칭한다. 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 각각 "VH" 및 "VL"로 지칭될 수 있다. 이들 도메인은 일반적으로 (동일한 부류의 다른 항체에 비해) 항체의 가장 가변성인 부분이고, 항원 결합 부위를 함유한다.

용어 "가변"은 가변 도메인의 특정 절편의 서열이 항체마다 광범위하게 상이하다는 사실을 지칭한다. V 도메인은 항원 결합을 매개하고, 그의 특정한 항원에 대한 특정한 항체의 특이성을 규정한다. 그러나, 가변성은 가변 도메인의 전체 범위에 걸쳐 균등하게 분포되지 않는다. 대신에, 이는 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 둘 다에서 초가변 영역 (HVR)으로 불리는 3개의 절편에 집중되어 있다. 가변 도메인의 보다 고도로 보존된 부분은 프레임워크 영역 (FR)이라 불린다. 천연 중쇄 및 경쇄 각각의 가변 도메인은 주로 베타-시트 배위를 채택하여 3개의 HVR에 의해 연결되어 있는 4개의 FR 영역을 포함하며, 이는 베타-시트 구조를 연결하고 일부 경우에는 상기 베타-시트 구조의 일부를 형성하는 루프를 형성한다. 각각의 쇄 내의 HVR은 FR 영역에 의해 매우 근접하게 함께 유지되고, 다른 쇄로부터의 HVR과 함께 항체의 항원 결합 부위의 형성에 기여한다 (문헌 [Kabat et al., Sequences of Immunological Interest, Fifth Edition, National Institute of Health, Bethesda, MD (1991)] 참조). 불변 도메인은 항체의 항원에 대한 결합에 직접 관여하지 않지만, 다양한 이펙터 기능, 예컨대 항체 의존성 세포 독성에서 항체의 참여를 나타낸다.

본원에 사용된 용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 동종인 항체의 집단으로부터 수득한 항체를 지칭하고, 즉 이러한 집단을 구성하는 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이 및/또는 번역후 변형 (예를 들어, 이성질체화, 아미드화)을 제외하고는 동일하다. 모노클로날 항체는 단일 항원 부위에 대해 지시되며 고도로 특이적이다. 전형적으로 상이한 결정기 (에피토프)에 대해 지시된 상이한 항체를 포함하는 폴리클로날 항체 제제와 대조적으로, 각각의 모노클로날 항체는 항원 상의 단일 결정기에 대해 지시된다. 그의 특이성 이외에도, 모노클로날 항체는 하이브리도마 배양에 의해 합성되고, 다른 이뮤노글로불린에 의해 오염되지 않는다는 점에서 유리하다. 수식어 "모노클로날"은 항체의 특징이 실질적으로 동종의 항체 집단으로부터 수득된 것임을 나타내며, 임의의 특정한 방법에 의한 항체 생산이 필요하다는 것으로 해석되어서는 안된다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용되는 모노클로날 항체는, 예를 들어 하이브리도마 방법 (예를 들어, 문헌 [Kohler and Milstein., Nature, 256:495-97 (1975); Hongo et al., Hybridoma, 14 (3): 253-260 (1995), Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2^nd ed. 1988); Hammerling et al., in: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981)]), 재조합 DNA 방법 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,816,567 참조), 파지-디스플레이 기술 (예를 들어, 문헌 [Clackson et al., Nature, 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004); 및 Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132 (2004)] 참조), 및 인간 이뮤노글로불린 유전자좌, 또는 인간 이뮤노글로불린 서열을 코딩하는 유전자의 일부 또는 전부를 갖는 동물에서 인간 또는 인간-유사 항체를 생산하는 기술 (예를 들어, WO 1998/24893; WO 1996/34096; WO 1996/33735; WO 1991/10741; 문헌 [Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 2551 (1993); Jakobovits et al., Nature 362: 255-258 (1993); Bruggemann et al., Year in Immunol. 7:33 (1993)]; 미국 특허 번호 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 및 5,661,016; 문헌 [Marks et al., Bio/Technology 10: 779-783 (1992); Lonberg et al., Nature 368: 856-859 (1994); Morrison, Nature 368: 812-813 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnol. 14: 845-851 (1996); Neuberger, Nature Biotechnol. 14: 826 (1996); 및 Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93 (1995)] 참조)을 비롯한 다양한 기술에 의해 제조될 수 있다.

용어 "네이키드 항체"는 세포독성 모이어티 또는 방사성표지에 접합되지 않은 항체를 지칭한다.

용어 "전장 항체", "무손상 항체" 및 "전체 항체"는 항체 단편과 대조적으로, 그의 실질적으로 무손상인 형태의 항체를 지칭하기 위해 상호교환가능하게 사용된다. 구체적으로, 전체 항체는 Fc 영역을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 갖는 것들을 포함한다. 불변 도메인은 천연 서열 불변 도메인 (예를 들어, 인간 천연 서열 불변 도메인) 또는 그의 아미노산 서열 변이체일 수 있다. 일부 경우에, 무손상 항체는 하나 이상의 이펙터 기능을 가질 수 있다.

참조 항체와 "동일한 에피토프에 결합하는 항체"는 경쟁 검정에서 참조 항체의 그의 항원에 대한 결합을 50% 이상 차단하고, 반대로 경쟁 검정에서 참조 항체가 항체의 그의 항원에 대한 결합을 50% 이상 차단하는 항체를 지칭한다. 경쟁 검정은 당업계에 공지되어 있다.

예시적인 경쟁 검정에서, IgE의 고정화된 M1' 절편을 M1' 절편에 결합하는 제1 표지된 항체 (예를 들어, 항체 47H4, 47H4 v1, v2, v3, v4, v5 또는 v6), 및 M1' 절편에 대한 결합에 대해 제1 항체와 경쟁하는 그의 능력에 대해 시험되는 제2 비표지된 항체를 포함하는 용액에서 인큐베이션한다. 제2 항체는 하이브리도마 상청액에 존재할 수 있다. 대조군으로서, 고정화된 M1' 절편을 제1 표지된 항체를 포함하나 제2 비표지된 항체는 포함하지 않는 용액에서 인큐베이션한다. M1' 절편에 대한 제1 항체의 결합을 허용하는 조건 하에 인큐베이션한 후에, 잉여 비결합 항체를 제거하고, 고정화된 M1' 절편과 연관된 표지의 양을 측정한다. 고정화된 M1' 절편과 연관된 표지의 양이 대조 샘플에 비해 시험 샘플에서 실질적으로 감소된 경우에, 이는 제2 항체가 M1' 절편에 대한 결합에 대해 제1 항체와 경쟁한다는 것을 나타낸다. 문헌 [Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY)]을 참조한다.

"항체 단편"은 무손상 항체의 일부, 바람직하게는 무손상 항체의 항원 결합 및/또는 가변 영역을 포함한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')₂ 및 Fv 단편; 디아바디; 선형 항체 (미국 특허 번호 5,641,870의 실시예 2; 문헌 [Zapata et al., Protein Eng. 8(10): 1057-1062 [1995]] 참조); 단일-쇄 항체 분자 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함한다.

항체의 파파인 소화는 "Fab" 단편이라 불리는 2개의 동일한 항원-결합 단편, 및 나머지 "Fc" 단편 (이 명칭은 용이하게 결정화되는 능력을 반영함)을 생산한다. Fab 단편은 H 쇄의 가변 영역 도메인 (V_H) 및 1개 중쇄의 제1 불변 도메인 (C_H1)과 함께 전체 L 쇄로 이루어진다. 각각의 Fab 단편은 항원 결합에 대해 1가이고, 즉 단일 항원-결합 부위를 갖는다. 항체의 펩신 처리는 상이한 항원-결합 활성을 갖는 2개의 디술피드 연결된 Fab 단편에 대략 상응하는 단일의 대형 F(ab')₂ 단편을 생성시키고, 여전히 항원에 가교될 수 있다. Fab' 단편은 항체 힌지 영역으로부터의 1개 이상의 시스테인을 포함하는 C_H1 도메인의 카르복시 말단에 몇 개의 추가의 잔기를 갖는다는 점에서 Fab 단편과 상이하다. Fab'-SH는 본원에서 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)가 유리 티올 기를 보유하는 Fab'에 대한 명칭이다. F(ab')₂ 항체 단편은 본래 그들 사이에 힌지 시스테인을 갖는 Fab' 단편의 쌍으로서 생산된다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링이 또한 공지되어 있다.

Fc 단편은 디술피드에 의해 함께 유지되는 H 쇄 둘 다의 카르복시-말단 부분을 포함한다. 항체의 이펙터 기능은 Fc 영역 내의 서열에 의해 결정되고, 이 영역은 또한 특정 유형의 세포 상에서 발견되는 Fc 수용체 (FcR)에 의해 인식된다.

"Fv"는 완전한 항원-인식 및 -결합 부위를 함유하는 최소 항체 단편이다. 이 단편은 1개의 중쇄 및 1개의 경쇄 가변 영역 도메인이 단단하게 비공유 회합된 이량체로 이루어진다. 이들 2개 도메인이 폴딩되어 6개의 초가변 루프 (H 및 L 쇄로부터 각각 3개의 루프)가 형성되는데, 이는 항원 결합을 위한 아미노산 잔기를 제공하고 항체에 항원 결합 특이성을 부여한다. 그러나, 단일 가변 도메인 (또는 항원에 특이적인 3개의 HVR만을 포함하는 Fv의 절반)일지라도 전체 결합 부위보다 친화도가 낮긴 하지만 항원을 인식하고 그에 결합하는 능력을 갖는다.

"단일-쇄 Fv" ("sFv" 또는 "scFv"로도 약칭됨)는 단일 폴리펩티드 쇄 내로 연결된 VH 및 VL 항체 도메인을 포함하는 항체 단편이다. 바람직하게는, sFv 폴리펩티드는 sFv가 항원 결합에 바람직한 구조를 형성할 수 있도록 하는, V_H 및 V_L 도메인 사이의 폴리펩티드 링커를 추가로 포함한다. sFv의 검토를 위해서는 문헌 [Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)]을 참조한다.

본 발명의 항체의 "기능적 단편"은 무손상 항체의 일부, 일반적으로 무손상 항체의 항원 결합 또는 가변 영역, 또는 변형된 FcR 결합 능력을 보유하거나 갖는 항체의 F 영역을 포함한다. 항체 단편의 예는 선형 항체, 단일-쇄 항체 분자 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함한다.

용어 "디아바디"는 V_H 및 V_L 도메인 사이의 짧은 링커 (약 5-10개 잔기)를 갖는 sFv 단편 (상기 단락 참조)을 구축함으로써 V 도메인의 쇄내 쌍 형성이 아닌 쇄간 쌍 형성을 달성하여 2가 단편, 즉 2개의 항원-결합 부위를 갖는 단편을 생성하여 제조된 소형 항체 단편을 지칭한다. 이중특이적 디아바디는 2개 항체의 V_H 및 V_L 도메인이 상이한 폴리펩티드 쇄에 존재하는 2개의 "교차" sFv 단편의 이종이량체이다. 디아바디는 예를 들어 EP 404,097; WO 93/11161; 문헌 [Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)]에 보다 상세하게 기재되어 있다.

본원에서 모노클로날 항체는 구체적으로 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정한 종으로부터 유래되거나 특정한 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성이고, 쇄(들)의 나머지 부분은 또 다른 종으로부터 유래되거나 또 다른 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성인 "키메라" 항체 (이뮤노글로불린), 뿐만 아니라 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한 이러한 항체의 단편을 포함한다 (미국 특허 번호 4,816,567; 문헌 [Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)]). 본원에서 관심 키메라 항체는 프리마티즈드(PRIMATIZED)® 항체를 포함하고, 여기서 항체의 항원-결합 영역은 예를 들어 마카크 원숭이를 관심 항원으로 면역화시킴으로써 생산된 항체로부터 유래된다. 본원에 사용된 "인간화 항체"는 "키메라 항체"의 하위세트로 사용된다.

비-인간 (예를 들어, 뮤린) 항체의 "인간화" 형태는 비-인간 이뮤노글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 항체이다. 한 실시양태에서, 인간화 항체는 수용자의 HVR로부터의 잔기가 비-인간 종 (공여자 항체), 예컨대 원하는 특이성, 친화도 및/또는 능력을 갖는 마우스, 래트, 토끼 또는 비-인간 영장류의 HVR로부터의 잔기로 대체된 인간 이뮤노글로불린 (수용자 항체)이다. 일부 경우에, 인간 이뮤노글로불린의 FR 잔기를 상응하는 비-인간 잔기로 대체한다. 또한, 인간화 항체는 수용자 항체 또는 공여자 항체에서는 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 변형은 항체 성능, 예를 들어 결합 친화도를 보다 정밀화하기 위해 이루어질 수 있다. 일반적으로, 인간화 항체는 적어도 1개, 전형적으로 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이고, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 초가변 루프는 비-인간 이뮤노글로불린 서열의 것에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역은 인간 이뮤노글로불린 서열의 것이지만, FR 영역은 항체 성능, 예를 들어 결합 친화도, 이성질체화, 면역원성 등을 개선하는 하나 이상의 개별 FR 잔기 치환을 포함할 수 있다. FR 내의 이들 아미노산 치환의 수는 전형적으로 H 쇄에서 6개 이하, L 쇄에서는 3개 이하이다. 또한, 인간화 항체는 임의로 이뮤노글로불린 불변 영역 (Fc) 중 적어도 일부, 전형적으로 인간 이뮤노글로불린의 적어도 일부를 포함할 것이다. 보다 상세한 내용을 위해서는 예를 들어 문헌 [Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); 및 Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)]을 참조한다. 또한, 예를 들어 문헌 [Vaswani and Hamilton, Ann. Allergy, Asthma & Immunol. 1:105-115 (1998); Harris, Biochem. Soc. Transactions 23:1035-1038 (1995); Hurle and Gross, Curr. Op. Biotech. 5:428-433 (1994)]; 및 미국 특허 번호 6,982,321 및 7,087,409를 참조한다.

"인간 항체"는 인간에 의해 생산되고/되거나 본원에 개시된 임의의 인간 항체 제조 기술을 사용하여 제조된 항체의 것에 상응하는 아미노산 서열을 보유하는 것이다. 인간 항체의 이러한 정의에서 비-인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화 항체는 명확하게 배제된다. 인간 항체는 파지-디스플레이 라이브러리를 비롯한 당업계에 공지된 다양한 기술을 사용하여 생산될 수 있다. 문헌 [Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991)]. 또한, 문헌 [Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boerner et al., J. Immunol., 147(1):86-95 (1991)]에 기재된 방법도 인간 모노클로날 항체의 제조에 이용가능하다. 또한, 문헌 [Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol., 5: 368-74 (2001)]을 참조한다. 인간 항체는, 항원 접종에 반응하여 이러한 항체를 생산하도록 변형되었으나 내인성 유전자좌는 무력화시킨 트랜스제닉 동물, 예를 들어 면역화된 제노마우스에게 항원을 투여함으로써 제조될 수 있다 (예를 들어, 제노마우스(XENOMOUSE)™ 기술에 관한 미국 특허 번호 6,075,181 및 6,150,584 참조). 또한, 인간 B-세포 하이브리도마 기술을 통해 생성된 인간 항체에 대해 예를 들어 문헌 [Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)]을 참조한다.

본원에 사용시에 용어 "초가변 영역", "HVR", 또는 "HV"는 서열 내에서 초가변적이고/거나 구조적으로 한정된 루프를 형성하는 항체-가변 도메인의 영역을 지칭한다. 일반적으로, 항체는 6개의 HVR; VH 내에 3개 (H1, H2, H3) 및 VL 내에 3개 (L1, L2, L3)를 포함한다. 천연 항체에서, H3 및 L3은 6개의 HVR 중에서 가장 높은 다양성을 나타내고, 특히 H3은 항체에 정밀한 특이성을 부여하는데 특유의 역할을 수행한다고 여겨진다. 예를 들어, 문헌 [Xu et al., Immunity 13:37-45 (2000)]; [Johnson and Wu in Methods in Molecular Biology 248:1-25 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003)]을 참조한다. 실제로, 중쇄만으로 이루어진 자연 발생 낙타류 항체는 경쇄의 부재 하에 기능적이고 안정하다. 예를 들어, 문헌 [Hamers-Casterman et al., Nature 363:446-448 (1993) 및 Sheriff et al., Nature Struct. Biol. 3:733-736 (1996)]을 참조한다.

다수의 HVR 설명이 사용되고 있고 본원에 포괄된다. 카바트 상보성-결정 영역 (CDR)인 HVR은 서열 변동성에 기초하고, 가장 통상적으로 사용된다 (상기 문헌 [Kabat et al.]). 대신에 코티아(Chothia)는 구조적 루프의 위치를 지칭한다 (문헌 [Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)]). AbM HVR은 카바트 CDR과 코티아 구조적 루프 사이의 절충안을 나타내고, 옥스포드 몰레큘라(Oxford Molecular)의 AbM 항체-모델링 소프트웨어에 의해 사용된다. "접촉" HVR은 이용가능한 복합체 결정 구조의 분석을 기초로 한다. 각각의 이들 HVR로부터의 잔기가 하기 기재된다.

HVR은 다음과 같이 "연장된 HVR"을 포함할 수 있다: VL에서 24-36 또는 24-34 (L1), 46-56 또는 50-56 (L2) 및 89-97 또는 89-96 (L3), 및 VH에서 26-35 (H1), 50-65 또는 47-65 (바람직한 실시양태) (H2) 및 93-102 (H3). 가변-도메인 잔기는 각각의 이들 연장된-HVR 정의에 대해 상기 문헌 [Kabat et al.]에 따라 넘버링된다.

"프레임워크" 또는 "FR" 잔기는 본원에 정의된 HVR 잔기 이외의 가변-도메인 잔기이다.

표현 "카바트에서와 같은 가변-도메인 잔기-넘버링" 또는 "카바트에서와 같은 아미노산-위치 넘버링", 및 그의 변형은 상기 문헌 [Kabat et al.]에서의 항체의 편집의 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄 가변 도메인에 대해 사용된 넘버링 시스템을 지칭한다. 이러한 넘버링 시스템을 사용하여, 실제 선형 아미노산 서열은 가변 도메인의 FR 또는 HVR의 단축 또는 이것으로의 삽입에 상응하는 보다 적은 또는 추가의 아미노산을 함유할 수 있다. 예를 들어, 중쇄 가변 도메인은 H2의 잔기 52 후에 단일 아미노산 삽입 (카바트에 따른 잔기 52a), 및 중쇄 FR 잔기 82 후에 삽입된 잔기 (예를 들어, 카바트에 따른 잔기 82a, 82b 및 82c 등)를 포함할 수 있다. 잔기의 카바트 넘버링은 주어진 항체에 대해, 항체 서열을 "표준" 카바트 넘버링된 서열과 상동성 영역에서 정렬하여 결정할 수 있다.

본원의 목적을 위해 "수용자 인간 프레임워크"는 인간 이뮤노글로불린 프레임워크 또는 인간 컨센서스 프레임워크로부터 유래된 VL 또는 VH 프레임워크의 아미노산 서열을 포함하는 프레임워크이다. 인간 이뮤노글로불린 프레임워크 또는 인간 컨센서스 프레임워크"로부터 유래된" 수용자 인간 프레임워크는 그의 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있거나, 이미 존재하는 아미노산 서열 변화를 함유할 수 있다. 일부 실시양태에서, 이미 존재하는 아미노산 변화의 수는 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하 또는 2개 이하이다.

"인간 컨센서스 프레임워크"는 인간 이뮤노글로불린 VL 또는 VH 프레임워크 서열의 선택시에 가장 통상적으로 발생하는 아미노산 잔기를 나타내는 프레임워크이다. 일반적으로, 인간 이뮤노글로불린 VL 또는 VH 서열의 선택은 가변 도메인 서열의 하위군으로부터 행한다. 일반적으로, 서열의 하위군은 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5^th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)]에서와 같은 하위군이다. 한 실시양태에서, VL의 경우에 하위군은 상기 문헌 [Kabat et al.]에서와 같은 하위군 카파 I이다. 한 실시양태에서, VH의 경우에 하위군은 상기 문헌 [Kabat et al.]에서와 같은 하위군 III이다.

"VH 하위군 III 컨센서스 프레임워크"는 상기 문헌 [Kabat et al.]의 가변 중쇄 하위군 III 내의 아미노산 서열로부터 얻은 컨센서스 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, VH 하위군 III 컨센서스 프레임워크 아미노산 서열은 하기 서열 각각의 적어도 일부 또는 모두를 포함한다:

"VL 하위군 I 컨센서스 프레임워크"는 상기 문헌 [Kabat et al.]의 가변 경쇄 카파 하위군 I 내의 아미노산 서열로부터 수득한 컨센서스 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, VH 하위군 I 컨센서스 프레임워크 아미노산 서열은 하기 서열 각각의 적어도 일부 또는 모두를 포함한다:

예를 들어 Fc 영역의 명시된 위치에서의 "아미노산 변형"은 명시된 잔기의 치환 또는 결실, 또는 명시된 잔기에 인접한 적어도 1개의 아미노산 잔기의 삽입을 지칭한다. 명시된 잔기에 "인접한" 삽입은 그의 1 내지 2개의 잔기 내의 삽입을 의미한다. 삽입은 명시된 잔기에 대해 N-말단 또는 C-말단일 수 있다. 본원에서 바람직한 아미노산 변형은 치환이다.

"친화도-성숙" 항체는 변경(들)을 보유하지 않는 모 항체와 비교하여 항원에 대한 항체의 친화도의 개선을 발생시키는, 그의 하나 이상의 HVR에 하나 이상의 변경을 갖는 항체이다. 한 실시양태에서, 친화도-성숙 항체는 표적 항원에 대해 나노몰 또는 심지어 피코몰의 친화도를 갖는다. 친화도-성숙 항체는 당업계에 공지된 절차에 의해 생산된다. 예를 들어, 문헌 [Marks et al., Bio/Technology 10:779-783 (1992)]은 VH- 및 VL-도메인 셔플링에 의한 친화도 성숙을 기재한다. HVR 및/또는 프레임워크 잔기의 무작위 돌연변이유발은 예를 들어 문헌 [Barbas et al., Proc Nat. Acad. Sci. USA 91:3809-3813 (1994); Schier et al., Gene 169:147-155 (1995); Yelton et al., J. Immunol. 155:1994-2004 (1995); Jackson et al., J. Immunol. 154(7):3310-9 (1995); 및 Hawkins et al., J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992)]에 기재되어 있다.

특정한 폴리펩티드 또는 특정한 폴리펩티드 상의 에피토프에 "특이적으로 결합하는" 또는 "특이적인" 항체는 임의의 다른 폴리펩티드 또는 폴리펩티드 에피토프에 실질적으로 결합하지 않으면서 특정한 폴리펩티드 또는 특정한 폴리펩티드 상의 에피토프에 결합하는 항체이다. 예를 들어, 본 발명의 M1' 특이적 항체는 B-세포 상의 막 IgE 상에서 발견되지만 분비된 IgE 상에는 존재하지 않는 IgE의 M1' 세포외 절편에 특이적이다. 일부 실시양태에서, IgE의 M1' 절편에 결합하는 항체는 ≤ 1 μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM, 또는 ≤ 0.001 nM (예를 들어, 10^-8 M 이하, 예를 들어 10^-8 M 내지 10^-13 M, 예를 들어 10^-9 M 내지 10^-13 M)의 해리 상수 (Kd)를 갖는다.

"아폽토시스를 유도하는" 또는 "아폽토시스성"인 항체는 아넥신 V의 결합, DNA의 단편화, 세포 수축, 세포질 세망의 확장, 세포 단편화 및/또는 막 소포 (아폽토시스체라 불림)의 형성과 같은 표준 아폽토시스 검정에 의해 결정된, 프로그램화된 세포 사멸을 유도하는 것들이다. 예를 들어, 본 발명의 항-IgE 항체의 아폽토시스 활성은 표면 결합된 IgE를 갖는 세포를 아넥신 V로 염색하여 보여줄 수 있다.

용어 "총 혈청 IgE" 또는 "혈청 총 IgE"는 혈청 샘플 내에 존재하는 IgE의 총량을 지칭한다.

용어 "알레르겐-특이적 IgE"는, 알레르기 감작으로 공지된 과정에서 알레르겐에 대한 초기 노출에 의해 발생하는 특정 항원에 대해 특이적이며 비만 세포 및 호염기구의 표면에 결합하고 동일한 알레르겐에 대한 후속 노출시에 비만 세포 및 호염기구의 활성화를 야기할 수 있는 IgE를 지칭한다. 바이러스 (예를 들어, 시토메갈로바이러스 - CMV), 박테리아 (예를 들어, 스타필로코쿠스(Staphylococcus)), 연충 (예를 들어, 아스카리스(Ascaris), 쉬스토소마(Schistosoma)) 및 공기 오염의 보조 인자 (예를 들어, 담배 연기 및 디젤 배기가스)의 몇몇 유사분열촉진 인자는 임의의 알레르겐 특이적 IgE-감작을 개시시키지 않으면서 IgE 분자의 생산을 자극한다. 따라서, IgE 수준이 반드시 숙주가 IgE-매개 장애에 보다 감수성이 되기 쉽게 하지는 않는 방식으로 상승할 수 있기 때문에, 알레르겐-특이적 IgE 수준이 종종 임상 평가에서 사용된다.

본원에 사용된, 인간에서의 "기준선" 수준 (예컨대, 혈청 총 IgE 및 알레르겐-특이적 IgE에 대한 기준선 수준)은 인간에게 본원에 기재된 항-IgE 항체를 투여하기 전의 수준을 지칭한다.

용어 "IgE-M1 프라임 발현 B-세포를 고갈시키는"은 IgE를 특이적으로 분비하는 B-세포 (즉, 혈장 세포)의 집단 또는 유효성을 결과적으로 감소시키지만, 다른 이뮤노글로불린, 예컨대 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA 및 IgM을 분비하는 B-세포의 집단 또는 유효성에는 유의하게 영향을 미치지 않는, IgE-스위칭된 B-세포, IgE 형질모구, 또는 IgE 기억 B 세포 중 하나 이상을 고갈시키는 능력을 의미한다.

용어 "고체 상"은 본 발명의 항체가 부착될 수 있는 비-수성 매트릭스를 기재한다. 본원에 포함되는 고체 상의 예는 부분적으로 또는 전적으로 유리 (예를 들어, 제어된 공극 유리), 폴리사카라이드 (예를 들어, 아가로스), 폴리아크릴아미드, 폴리스티렌, 폴리비닐 알콜 및 실리콘으로 형성된 것들을 포함한다. 특정 실시양태에서, 문맥에 따라 고체 상은 검정 플레이트의 웰을 포함할 수 있으며; 다른 실시양태에서 고체 상은 정제 칼럼 (예를 들어, 친화성 크로마토그래피 칼럼)이다. 상기 용어는 또한 미국 특허 번호 4,275,149에 기재된 것과 같은 별개 입자의 불연속 고체 상을 포함한다.

항체 "이펙터 기능"은 항체의 Fc 영역 (천연 서열 Fc 영역 또는 아미노산 서열 변이체 Fc 영역)에 기인하는 생물학적 활성을 지칭하고, 항체 이소형에 따라 달라진다. 항체 이펙터 기능의 예는 C1q 결합 및 보체 의존성 세포독성; Fc 수용체 결합; 항체-의존성 세포-매개 세포독성 (ADCC); 식세포작용; 세포 표면 수용체 (예컨대, B 세포 수용체)의 하향 조절; 및 B 세포 활성화를 포함한다.

"항체-의존성 세포-매개 세포독성" 또는 ADCC는 특정 세포독성 세포 (예를 들어, 자연 킬러 (NK) 세포, 호중구 및 대식세포)에 존재하는 Fc 수용체 (FcR)에 결합된 분비된 Ig가, 이들 세포독성 이펙터 세포가 항원-보유 표적 세포에 특이적으로 결합한 후, 표적 세포를 세포독소로 사멸시키도록 할 수 있는 세포독성의 형태를 지칭한다. 항체는 세포독성 세포를 "아밍"시키고, 상기 메카니즘으로 표적 세포를 사멸시키는데 필요하다. ADCC를 매개하는 일차 세포인 NK 세포는 FcγRIII만을 발현하는 반면에, 단핵구는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII를 발현한다. 조혈세포 상의 Fc 발현에 대해서는 문헌 [Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-92 (1991)]의 464페이지 표 3에 요약되어 있다. 관심 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위해, 시험관내 ADCC 검정, 예컨대 미국 특허 번호 5,500,362 또는 5,821,337에 기재된 검정을 수행할 수 있다. 이러한 검정에 유용한 이펙터 세포는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 및 자연 킬러 (NK) 세포를 포함한다. 대안적으로, 또는 추가로, 관심 분자의 ADCC 활성은 생체내에서, 예를 들어 문헌 [Clynes et al., PNAS USA 95:652-656 (1998)]에 개시된 것과 같은 동물 모델에서 평가할 수 있다.

본원에서 달리 나타내지 않는 한, 이뮤노글로불린 중쇄 내 잔기의 넘버링은 상기 문헌 [Kabat et al.]에서와 같은 EU 인덱스의 넘버링이다. "카바트에서와 같은 EU 인덱스"는 인간 IgG1 EU 항체의 잔기 넘버링을 지칭한다.

본원의 용어 "Fc 영역"은 천연-서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함하는, 이뮤노글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하는데 사용된다. 이뮤노글로불린 중쇄의 Fc 영역의 경계는 달라질 수 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 통상적으로 위치 Cys226에서의 아미노산 잔기로부터 또는 Pro230으로부터 그의 카르복실-말단까지의 스트레치인 것으로 정의된다. Fc 영역의 C-말단 리신 (EU 넘버링 시스템에 따른 잔기 447)은, 예를 들어 항체의 생산 또는 정제 동안 또는 항체의 중쇄를 코딩하는 핵산의 재조합 조작에 의해 제거될 수 있다. 따라서, 무손상 항체의 조성물은 모든 K447 잔기가 제거된 항체 집단, K447 잔기가 제거되지 않는 항체 집단, 및 K447 잔기가 존재하는 항체와 존재하지 않는 항체들의 혼합물을 갖는 항체 집단을 포함할 수 있다. 본 발명의 항체에 사용하기에 적합한 천연-서열 Fc 영역은 인간 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함한다.

"Fc 수용체" 또는 "FcR"은 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 기재한다. 바람직한 FcR은 천연 서열 인간 FcR이다. 또한, 바람직한 FcR은 IgG 항체 (감마 수용체)에 결합하는 것이고, FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII 하위부류의 수용체 (이들 수용체의 대립유전자 변이체 및 선택적 스플라이싱된 형태 포함)를 포함하며, FcγRII 수용체는 FcγRIIA ("활성화 수용체") 및 FcγRIIB ("억제 수용체")를 포함하고, 이들은 그의 세포질 도메인에서 주로 상이한 유사한 아미노산 서열을 갖는다. 활성화 수용체 FcγRIIA는 그의 세포질 도메인에 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프 (ITAM)를 함유한다. 억제 수용체 FcγRIIB는 그의 세포질 도메인에 면역수용체 티로신-기반 억제 모티프 (ITIM)를 함유한다 (문헌 [M. Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997)] 참조). FcR은 문헌 [Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-92 (1991); Capel et al., Immunomethods 4: 25-34 (1994); 및 de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126: 330-41 (1995)]에서 검토된다. 추후로 확인될 것들을 포함하여 다른 FcR이 본원에서의 용어 "FcR"에 포괄된다.

용어 "Fc 수용체" 또는 "FcR"은 또한 태아로의 모체 IgG의 전달을 담당하는 신생아 수용체, FcRn을 포함한다. 문헌 [Guyer et al., J. Immunol. 117: 587 (1976) 및 Kim et al., J. Immunol. 24: 249 (1994)]. FcRn에 대한 결합을 측정하는 방법은 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Ghetie and Ward, Immunol. Today 18: (12): 592-8 (1997); Ghetie et al., Nature Biotechnology 15 (7): 637-40 (1997); Hinton et al., J. Biol. Chem. 279 (8): 6213-6 (2004)]; WO 2004/92219 (Hinton et al.) 참조).

생체내 FcRn에 대한 결합 및 인간 FcRn 고친화도 결합 폴리펩티드의 혈청 반감기는 예를 들어 인간 FcRn을 발현하는 트랜스제닉 마우스 또는 형질감염된 인간 세포주에서, 또는 변이체 Fc 영역을 갖는 폴리펩티드가 투여된 영장류에서 검정될 수 있다. WO 2004/42072 (Presta)에는 FcR에 대한 결합이 개선 또는 감소된 항체 변이체가 기재되어 있다. 또한, 예를 들어 문헌 [Shields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)]을 참조한다.

"인간 이펙터 세포"는 하나 이상의 FcR을 발현하고 이펙터 기능을 수행하는 백혈구이다. 바람직하게는, 세포는 적어도 FcγRIII를 발현하고, ADCC 이펙터 기능을 수행한다. ADCC를 매개하는 인간 백혈구의 예는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC), 자연 킬러 (NK) 세포, 단핵구, 세포독성 T 세포 및 호중구를 포함하고, PBMC 및 MNK 세포가 바람직하다. 이펙터 세포는 천연 공급원, 예를 들어 혈액으로부터 단리할 수 있다.

"보체 의존성 세포독성" 또는 "CDC"는 보체 존재 하의 표적 세포의 용해를 지칭한다. 고전적 보체 경로의 활성화는 그의 동족 항원에 결합된 항체 (적절한 서브클래스의 항체)에 대한 보체 시스템의 제1 성분 (C1q)의 결합에 의해 개시된다. 보체 활성화를 평가하기 위해, 예를 들어 문헌 [Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202: 163 (1996)]에 기재된 바와 같은 CDC 검정을 수행할 수 있다.

Fc 영역 아미노산 서열이 변경되고 C1q 결합 능력이 증가 또는 감소된 폴리펩티드 변이체가 미국 특허 번호 6,194,551B1 및 WO99/51642에 기재되어 있다. 이들 특허 공개의 내용은 명확하게 본원에 참고로 포함된다. 또한, 문헌 [Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)]을 참조한다.

Fc 영역에 부착된 탄수화물은 변경될 수 있다. 포유동물 세포에 의해 생산된 천연 항체는 전형적으로 Fc 영역의 CH2 도메인의 Asn297에 대한 N-연결에 의해 일반적으로 부착되는 분지형 이중안테나 올리고사카라이드를 포함한다. 예를 들어, 문헌 [Wright et al. (1997) TIBTECH 15:26-32]을 참조한다. 올리고사카라이드는 다양한 탄수화물, 예를 들어 만노스, N-아세틸 글루코사민 (GIcNAc), 갈락토스 및 시알산 뿐만 아니라 이중안테나 올리고사카라이드 구조의 "줄기" 내의 GIcNAc에 부착된 푸코스를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, IgG 내의 올리고사카라이드의 변형이 특정의 추가 개선된 특성을 갖는 IgG를 제조하기 위해 이루어질 수 있다.

예를 들어, Fc 영역에 (직접적으로 또는 간접적으로) 부착된 푸코스가 결여된 탄수화물 구조를 갖는 항체 변형이 제공된다. 이러한 변형체에서는 ADCC 기능이 개선될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 공개 번호 US 2003/0157108 (Presta, L.); US 2004/0093621 (교와 핫코 고교 캄파니, 리미티드(Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd))을 참조한다. "탈푸코실화" 또는 "푸코스-결핍" 항체 변형과 관련된 공개의 예는 US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO2005/053742; WO2002/031140; 문헌 [Okazaki et al. J. MoL. Biol. 336: 1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)]을 포함한다. 탈푸코실화 항체를 생산할 수 있는 세포주의 예는 단백질 푸코실화가 결핍된 Lee 13 CHO 세포 (문헌 [Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)]; 미국 특허 출원 공개 번호 2003/0157108 A1 (Presta, L); 및 WO 2004/056312 A1 (Adams et al., 특히 실시예 11)), 및 녹아웃 세포주, 예컨대 알파-1,6-푸코실트랜스퍼라제 유전자, FUT8, 녹아웃 CHO 세포 (예를 들어, 문헌 [Yamane-Ohnuki et al., Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006)]; 및 WO2003/085107 참조)를 포함한다.

"결합 친화도"는 일반적으로, 분자 (예를 들어, 항체)의 단일 결합 부위와 그의 결합 파트너 (예를 들어, 항원) 사이의 비-공유 상호작용의 총합의 강도를 지칭한다. 달리 나타내지 않는 한, 본원에 사용된 "결합 친화도"는 결합 쌍의 구성원들 (예를 들어, 항체 및 항원) 사이의 1:1 상호작용을 반영하는 내인성 결합 친화도를 지칭한다. 분자 X의 그의 파트너 Y에 대한 친화도는 일반적으로 해리 상수 (Kd)로 표시될 수 있다. 친화도는 본원에 기재된 것들을 비롯하여 당업계에 공지된 통상의 방법에 의해 측정될 수 있다. 저친화도 항체는 일반적으로 항원에 서서히 결합하고 용이하게 해리되는 경향이 있는 반면, 고친화도 항체는 일반적으로 항원에 보다 신속하게 결합하고 보다 길게 결합된 상태를 유지하는 경향이 있다. 결합 친화도를 측정하는 다양한 방법이 당업계에 공지되어 있고, 본 발명의 목적을 위해 이들 중 임의의 방법이 사용될 수 있다. 결합 친화도 측정을 위한 구체적인 설명적 및 예시적 실시양태가 하기 기재된다.

한 실시양태에서, 본 발명에 따른 "Kd" 또는 "Kd 값"은 하기 검정에 기재된 바와 같이 관심 항체의 Fab 버전 및 그의 항원을 사용하여 수행된 방사성표지된 항원-결합 검정 (RIA)에 의해 측정된다. 항원에 대한 Fab의 용액-결합 친화도는 비표지된 항원의 적정 시리즈의 존재 하에 (¹²⁵I)-표지된 항원의 최소 농도로 Fab를 평형화시킨 후, 항-Fab 항체-코팅된 플레이트를 사용하여 결합된 항원을 포획함으로써 측정한다 (예를 들어, 문헌 [Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999)] 참조). 검정 조건을 확립하기 위해, 마이크로타이터 플레이트 (다이넥스 테크놀로지스, 인크.(DYNEX Technologies, Inc.))를 50 mM 탄산나트륨 (pH 9.6) 중 5 μg/ml의 포획 항-Fab 항체 (카펠 랩스(Cappel Labs))로 밤새 코팅한 후에 PBS 중 2% (w/v) 소 혈청 알부민으로 실온 (대략 23℃)에서 2 내지 5시간 동안 차단한다. 비-흡착 플레이트 (눈크(Nunc) #269620)에서, 100 pM 또는 26 pM [¹²⁵I]-항원을 관심 Fab의 연속 희석물과 혼합한다 (예를 들어, 문헌 [Presta et al., Cancer Res. 57:4593-4599 (1997)]의 항-VEGF 항체, Fab-12의 평가와 일치함). 이어서, 관심 Fab를 밤새 인큐베이션하지만; 평형에 도달하는 것을 확실하게 하기 위해 더 오랜 기간 (예를 들어, 약 65시간) 동안 인큐베이션을 계속할 수 있다. 이후에, 혼합물을 포획 플레이트로 옮겨 실온에서 (예를 들어, 1시간 동안) 인큐베이션한다. 이어서, 용액을 제거하고, 플레이트를 PBS 중 0.1% 트윈(TWEEN)-20™ 계면활성제로 8회 세척한다. 플레이트가 건조되면, 150 μl/웰의 섬광제 (마이크로신트(MICROSCINT)-20™; 팩커드(Packard))를 첨가하고, 플레이트를 탑카운트(TOPCOUNT)™ 감마 계수기 (팩커드)에서 10분 동안 계수한다. 최대 결합의 20% 이하를 제공하는 각각의 Fab의 농도를 선택하여 경쟁 결합 검정에 사용한다.

또 다른 실시양태에 따라, Kd는 25℃에서 ~10 반응 단위 (RU)의 고정화된 항원 CM5 칩과 함께 비아코어(BIACORE)®-2000 또는 비아코어®-3000 기기 (비아코어, 인크.(BIAcore, Inc.), 뉴저지주 피스카타웨이)를 사용하는 표면-플라즈몬 공명 검정에 의해 측정한다. 간략하게, 카르복시메틸화 덱스트란 바이오센서 칩 (CM5, 비아코어 인크.)을 공급업체의 지침에 따라 N-에틸-N'-(3-디메틸아미노프로필)-카르보디이미드 히드로클로라이드 (EDC) 및 N-히드록시숙신이미드 (NHS)로 활성화시킨다. 항원을 10 mM 아세트산나트륨 (pH 4.8)을 사용하여 5 μg/ml (~0.2 μM)로 희석한 후에 커플링된 단백질 대략 10 반응 단위 (RU)가 달성되도록 5 μl/분의 유량으로 주입한다. 항원의 주입 후, 1 M 에탄올아민을 주입하여 반응하지 않은 기를 차단한다. 동역학적 측정을 위해, Fab의 2배 연속 희석물 (0.78 nM 내지 500 nM)을 대략 25 μl/분의 유량으로 25℃에서 0.05% 트윈 20™ 계면활성제를 함유하는 PBS (PBST) 중에 주입한다. 간단한 일-대-일 랭뮤어 결합 모델 (비아코어® 평가 소프트웨어 버전 3.2)을 사용하여 회합 및 해리 센서그램을 동시에 피팅시켜 회합률 (k_on) 및 해리율 (k_off)을 계산한다. 평형 해리 상수 (Kd)는 k_off/k_on의 비로 계산한다. 예를 들어, 문헌 [Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999)]을 참조한다. 상기 표면-플라즈몬 공명 검정에 의한 온-레이트(on-rate)가 10⁶ M^-1 s^-1을 초과하는 경우, 온-레이트는 분광측정계, 예컨대 정지-유동-구비 분광광도계 (아비브 인스트루먼츠(Aviv Instruments)) 또는 교반 큐벳을 갖는 8000-시리즈 SLM-아민코(AMINCO)™ 분광광도계 (써모스펙트로닉(ThermoSpectronic))에서 측정되는, 증가하는 농도의 항원의 존재하에 PBS (pH 7.2) 중 20 nM의 항-항원 항체 (Fab 형태)의 25℃에서의 형광 방출 강도 (여기 = 295 nm, 방출 = 340 nm, 16 nm 통과 대역)의 증가 또는 감소를 측정하는 형광 켄칭 기술을 사용하여 결정할 수 있다.

본 발명에 따른 "온-레이트", "회합의 속도", "회합률" 또는 "k_on"은 또한 비아코어®-2000 또는 비아코어®-3000 시스템 (비아코어, 인크., 뉴저지주 피스카타웨이)을 사용하여 상기 기재된 바와 같이 결정할 수 있다.

본원에 사용된 어구 "실질적으로 감소된" 또는 "실질적으로 상이한"은 당업자가 2개의 수치 값 (일반적으로 하나는 분자와 연관되고, 다른 하나는 참조/비교 분자와 연관됨)에 의해 측정된 생물학적 특성의 맥락 내에서 2개의 값 사이의 차이를 통계적 유의성을 갖는 것으로 간주하도록 상기 값 (예를 들어, Kd 값) 사이의 충분히 높은 정도의 차이를 나타낸다. 상기 2개의 값 사이의 차이는 참조/비교 분자에 대한 값의 함수로서 예를 들어 약 10% 초과, 약 20% 초과, 약 30% 초과, 약 40% 초과 및/또는 약 50% 초과이다.

본원에 사용된 용어 "실질적으로 유사한" 또는 "실질적으로 동일한"은 당업자가 2개의 수치 값 (예를 들어, 하나는 본 발명의 항체와 연관되고, 다른 하나는 참조/비교 항체와 연관됨)에 의해 측정된 생물학적 특성의 맥락 내에서 2개의 값 사이의 차이를 생물학적 및/또는 통계적 유의성이 거의 또는 전혀 없는 것으로 간주하도록 상기 값 (예를 들어, Kd 값) 사이의 충분히 높은 정도의 유사성을 나타낸다. 상기 2개의 값 사이의 차이는 참조/비교 값의 함수로서 예를 들어 약 50% 미만, 약 40% 미만, 약 30% 미만, 약 20% 미만 및/또는 약 10% 미만이다.

펩티드, 폴리펩티드 또는 항체 서열에 대한 "퍼센트 (%) 아미노산 서열 동일성" 및 "상동성"은 서열을 정렬시키고 필요한 경우 최대 퍼센트 서열 동일성을 달성하도록 갭을 도입시킨 후의, 특정 펩티드 또는 폴리펩티드 서열 내의 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열 내의 아미노산 잔기의 백분율로 정의되고, 임의의 보존적 치환은 서열 동일성 부분으로 간주하지 않는다. 퍼센트 아미노산 서열 동일성을 결정하기 위한 정렬은 당업계의 기술 내의 다양한 방법, 예를 들어 공개적으로 입수가능한 컴퓨터 소프트웨어, 예컨대 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 MEGALIGN™ (DNASTAR) 소프트웨어를 사용하여 달성할 수 있다. 당업자는 비교될 전장 서열에 대한 최대 정렬을 달성하는데 필요한 임의의 알고리즘을 비롯하여 정렬 측정에 적절한 파라미터를 결정할 수 있다. 그러나, 본원의 목적을 위해, % 아미노산 서열 동일성 값은 제넨테크, 인크.(Genentech, Inc.)가 제작한 서열 비교 컴퓨터 프로그램 ALIGN-2를 사용하여 생성한다. ALIGN-2의 소스 코드는 미국 저작권청 (미국 20559 워싱턴 디.씨.)에 사용자 문서로 제출되어 있고, 미국 저작권 등록 번호 TXU510087로 등록되어 있다. ALIGN-2 프로그램은 제넨테크, 인크. (미국 캘리포니아주 사우스 샌프란시스코)로부터 공개적으로 입수가능하다. ALIGN-2 프로그램은 UNIX 작업 시스템, 바람직하게는 디지털 UNIX V4.0D에서 사용되도록 컴파일링되어야 한다. 모든 서열 비교 파라미터는 ALIGN-2 프로그램에 의해 설정되어 있으며 달라지지 않는다.

ALIGN-2가 아미노산 서열 비교를 위해 사용되는 상황에서, 주어진 아미노산 서열 B에 대한, 그와의, 또는 그에 대항하는 주어진 아미노산 서열 A의 % 아미노산 서열 동일성 (대안적으로, 주어진 아미노산 서열 B에 대한, 그와의, 또는 그에 대항하는 특정 % 아미노산 서열 동일성을 갖거나 또는 이를 포함하는 주어진 아미노산 서열 A라는 어구로 기재될 수 있음)은 하기와 같이 계산된다:

X/Y의 분율 x 100

여기서, X는 서열 정렬 프로그램 ALIGN-2에 의한 A 및 B의 프로그램 정렬시에 상기 프로그램에 의해 동일한 매치로 스코어링된 아미노산 잔기의 수이고, Y는 B의 아미노산 잔기의 전체 수이다. 아미노산 서열 A의 길이가 아미노산 서열 B의 길이와 동일하지 않은 경우에는 B에 대한 A의 % 아미노산 서열 동일성이 A에 대한 B의 % 아미노산 서열 동일성과 동일하지 않을 것임을 인식할 것이다.

달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 % 아미노산 서열 동일성 값은 ALIGN-2 컴퓨터 프로그램을 사용하여 바로 앞 단락에 기재한 바와 같이 수득한다.

본원의 항체를 코딩하는 "단리된" 핵산 분자는 그것이 생산되는 환경에서 그와 통상적으로 회합되는 하나 이상의 오염 핵산 분자로부터 확인 및 분리된 핵산 분자이다. 바람직하게는, 단리된 핵산은 생산 환경과 연관된 모든 성분과 회합되지 않는다. 본원에서 폴리펩티드 및 항체를 코딩하는 단리된 핵산 분자는 자연에서 발견되는 형태 또는 설정 이외의 형태이다. 따라서, 단리된 핵산 분자는 세포에서 자연적으로 존재하는 본원의 폴리펩티드 및 항체를 코딩하는 핵산과 구별된다.

용어 "제어 서열"은 특정한 숙주 유기체 내에서 작동가능하게 연결된 코딩 서열의 발현에 필요한 DNA 서열을 지칭한다. 원핵생물에 적합한 제어 서열은 예를 들어 프로모터, 임의로 오퍼레이터 서열 및 리보솜 결합 부위를 포함한다. 진핵 세포는 프로모터, 폴리아데닐화 신호 및 인핸서를 이용하는 것으로 공지되어 있다.

핵산은 또 다른 핵산 서열과 기능적 관계로 배치될 때 "작동가능하게 연결"된다. 예를 들어, 프리서열 또는 분비 리더에 대한 DNA는, 폴리펩티드의 분비에 관여하는 프리단백질로서 발현되는 경우에 폴리펩티드에 대한 DNA에 작동가능하게 연결되거나; 프로모터 또는 인핸서는 코딩 서열의 전사에 영향을 미치는 경우에 상기 코딩 서열에 작동가능하게 연결되거나; 또는 리보솜 결합 부위는 번역을 용이하게 하도록 위치되는 경우에 코딩 서열에 작동가능하게 연결된다. 일반적으로, "작동가능하게 연결된"은 연결될 DNA 서열들이 인접하여 위치함을 의미하며, 분비 리더의 경우에는 인접하여 위치하고 리딩 상 내에 존재하는 것을 의미한다. 그러나, 인핸서는 인접하여 위치할 필요가 없다. 연결은 편리한 제한 부위에서의 라이게이션에 의해 달성된다. 이러한 부위가 존재하지 않는 경우에는 합성 올리고뉴클레오티드 어댑터 또는 링커를 통상적인 실시에 따라 사용한다.

"안정한" 제제는 보관시 그 안의 단백질이 그의 물리적 및 화학적 안정성, 및 완전성을 본질적으로 유지하는 것이다. 단백질 안정성을 측정하기 위한 다양한 분석 기술들이 당업계에서 이용가능하고, 문헌 [Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, New York, Pubs.(1991) 및 Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10:29-90(1993)]에 검토되어 있다. 안정성은 선택된 기간 동안 선택된 온도에서 측정될 수 있다. 신속한 스크리닝을 위해 제제를 40℃에서 2주 내지 1개월 동안 보관할 수 있고, 상기 시점에 안정성을 측정한다. 제제를 2-8℃에서 보관할 경우에는, 일반적으로 제제는 30℃ 또는 40℃에서 적어도 1개월 동안 안정해야 하고/거나, 2-8℃에서 적어도 2년 동안 안정해야 한다. 제제를 30℃에서 보관할 경우에는, 일반적으로 제제는 30℃에서 적어도 2년 동안 안정해야 하고/거나 40℃에서 적어도 6개월 동안 안정해야 한다. 예를 들어, 보관 동안 응집의 정도는 단백질 안정성의 지표로 사용될 수 있다. 따라서, "안정한" 제제는 약 10% 미만, 바람직하게는 약 5% 미만의 단백질이 제제 내에 응집체로서 존재하는 것일 수 있다. 다른 실시양태에서, 제제의 보관 동안의 응집체 형성의 임의의 증가를 결정할 수 있다.

"재구성된" 제제는 단백질이 전체적으로 분산되도록 동결건조된 단백질 또는 항체 제제를 희석제에 용해시켜 제조된 것이다. 재구성된 제제는 관심 단백질로 치료될 환자에게 투여 (예를 들어, 비경구 투여)하기에 적합하고, 본 발명의 특정 실시양태에서는 피하 투여에 적합한 것일 수 있다.

"등장성" 제제는 인간 혈액과 본질적으로 동일한 삼투압을 갖는 것이다. 등장성 제제는 일반적으로 약 250 내지 350 mOsm의 삼투압을 가질 것이다. 용어 "저장성"은 인간 혈액의 삼투압 미만의 삼투압을 갖는 제제를 기재한다. 이에 상응하게, 용어 "고장성"은 인간 혈액의 삼투압을 초과하는 삼투압을 갖는 제제를 기재하는데 사용된다. 예를 들어, 증기압 또는 빙냉 유형 삼투압계를 사용하여 등장성을 측정할 수 있다. 본 발명의 제제는 염 및/또는 완충제를 첨가한 결과로 고장성이다.

본원에서 사용된 "담체"는 사용되는 투여량 및 농도에서 이에 노출되는 세포 또는 포유동물에 비독성인 제약상 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제를 포함한다. 종종, 생리학상 허용되는 담체는 수성 pH 완충 용액이다. 생리학상 허용되는 담체의 예는 완충제, 예컨대 포스페이트, 시트레이트 및 다른 유기 산; 항산화제, 예컨대 아스코르브산; 저분자량 (약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 이뮤노글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌 또는 리신; 모노사카라이드, 디사카라이드 및 다른 탄수화물, 예컨대 글루코스, 만노스 또는 덱스트린; 킬레이트화제, 예컨대 EDTA; 당 알콜, 예컨대 만니톨 또는 소르비톨; 염-형성 반대이온, 예컨대 나트륨; 및/또는 비이온성 계면활성제, 예컨대 트윈™, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 및 플루로닉스(PLURONICS)™를 포함한다.

용어 "포장 삽입물"은 적응증, 용법, 투여량, 투여에 대한 정보, 금기사항, 포장 제품과 조합되는 다른 의약, 및/또는 상기 의약의 사용에 대한 경고 등을 함유하는, 의약의 상업용 패키지에 통상적으로 포함되는 지침서를 지칭한다.

"제약상 허용되는 산"은 제제화되는 농도 및 방식에서 비 독성인 무기 및 유기 산을 포함한다. 예를 들어, 적합한 무기 산은 염산, 과염소산, 브로민화수소산, 아이오딘화수소산, 질산, 황산, 술폰산, 술핀산, 술파닐산, 인산, 탄산 등을 포함한다. 적합한 유기 산은 직쇄형 및 분지쇄 알킬, 방향족, 시클릭, 시클로지방족, 아릴지방족, 헤테로시클릭, 포화, 불포화, 모노, 디- 및 트리-카르복실산, 예를 들어 포름산, 아세트산, 2-히드록시아세트산, 트리플루오로아세트산, 페닐아세트산, 트리메틸아세트산, t-부틸 아세트산, 안트라닐산, 프로판산, 2-히드록시프로판산, 2-옥소프로판산, 프로판디오산, 시클로펜탄프로피온산, 시클로펜탄 프로피온산, 3-페닐프로피온산, 부탄산, 부탄디오산, 벤조산, 3-(4-히드록시벤조일)벤조산, 2-아세톡시-벤조산, 아스코르브산, 신남산, 라우릴 황산, 스테아르산, 뮤콘산, 만델산, 숙신산, 엠본산, 푸마르산, 말산, 말레산, 히드록시말레산, 말론산, 락트산, 시트르산, 타르타르산, 글리콜산, 글리콘산, 글루콘산, 피루브산, 글리옥살산, 옥살산, 메실산, 숙신산, 살리실산, 프탈산, 팔모산, 팔메산, 티오시안산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 1,2-에탄디술폰산, 2-히드록시에탄술폰산, 벤젠술폰산, 4-클로로벤젠술폰산, 나프탈렌-2-술폰산, p-톨루엔술폰산, 캄포르술폰산, 4-메틸비시클로[2.2.2]-옥트-2-엔-1-카르복실산, 글루코헵톤산, 4,4'-메틸렌비스-3-(히드록시-2-엔-1-카르복실산), 히드록시나프토산을 포함한다.

"제약상 허용되는 염기"는 이들이 제제화되는 농도 및 방식에서 비-독성인 무기 및 유기 염기를 포함한다. 예를 들어, 적합한 염기는 무기 염기 형성 금속, 예컨대 리튬, 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 칼슘, 암모늄, 철, 아연, 구리, 망가니즈, 알루미늄으로부터 형성된 것들, N-메틸글루카민, 모르폴린, 피페리딘, 및 유기 비독성 염기, 예를 들어 1급, 2급 및 3급 아민, 치환된 아민, 시클릭 아민 및 염기성 이온 교환 수지 [예를 들어, N(R')₄ ⁺ (여기서, R'는 독립적으로 H 또는 C_{1 -4} 알킬, 예를 들어 암모늄, 트리스(Tris)임)], 예를 들어 이소프로필아민, 트리메틸아민, 디에틸아민, 트리에틸아민, 트리프로필아민, 에탄올아민, 2-디에틸아미노에탄올, 트리메타민, 디시클로헥실아민, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 카페인, 프로카인, 히드라바민, 콜린, 베타인, 에틸렌디아민, 글루코사민, 메틸글루카민, 테오브로민, 퓨린, 피페라진, 피페리딘, N-에틸피페리딘, 폴리아민 수지 등을 포함한다. 특히 바람직한 유기 비-독성 염기는 이소프로필아민, 디에틸아민, 에탄올아민, 트리메타민, 디시클로헥실아민, 콜린 및 카페인이다.

본 발명에 사용가능한 추가의 제약상 허용되는 산 및 염기는 아미노산, 예를 들어 히스티딘, 글리신, 페닐알라닌, 아스파르트산, 글루탐산, 리신 및 아스파라긴으로부터 유래된 것들을 포함한다.

"제약상 허용되는" 완충제 및 염은 상기 나타낸 산 및 염기의 산 및 염기 부가 염 둘 다로부터 유래된 것들을 포함한다. 구체적인 완충제 및/또는 염은 히스티딘, 숙시네이트 및 아세테이트를 포함한다.

"제약상 허용되는 당"은 관심 단백질과 조합되는 경우에 보관시에 단백질의 화학적 및/또는 물리적 불안정성을 유의하게 방지하거나 감소시키는 분자이다. 제제가 동결건조 후에 재구성되도록 의도되는 경우에, "제약상 허용되는 당"은 또한 "동결건조보호제"로 공지될 수 있다. 예시적인 당 및 그의 상응하는 당 알콜은 아미노산, 예컨대 모노소듐 글루타메이트 또는 히스티딘; 메틸아민, 예컨대 베타인; 이액성 염, 예컨대 황산마그네슘; 폴리올, 예컨대 3가 또는 보다 높은 분자량의 당 알콜, 예를 들어 글리세린, 덱스트란, 에리트리톨, 글리세롤, 아라비톨, 크실리톨, 소르비톨 및 만니톨; 프로필렌 글리콜; 폴리에틸렌 글리콜; 플루로닉스®; 및 그의 조합을 포함한다. 추가의 예시적 동결건조보호제는 글리세린 및 젤라틴, 및 당 멜리비오스, 멜레지토스, 라피노스, 만노트리오스 및 스타키오스를 포함한다. 환원당의 예는 글루코스, 말토스, 락토스, 말툴로스, 이소-말툴로스 및 락툴로스를 포함한다. 비-환원당의 예는 당 알콜 및 다른 직쇄 폴리알콜로부터 선택된 폴리히드록시 화합물의 비-환원 글리코시드를 포함한다. 바람직한 당 알콜은 모노글리코시드, 특히 디사카라이드, 예컨대 락토스, 말토스, 락툴로스 및 말툴로스의 환원에 의해 수득된 화합물이다. 글리코시드 측기는 글루코시드 또는 갈락토시드일 수 있다. 당 알콜의 추가의 예는 글루시톨, 말티톨, 락티톨 및 이소-말툴로스이다. 바람직한 제약상 허용되는 당은 비-환원당 트레할로스 또는 수크로스이다. 제약상 허용되는 당은, 단백질이 보관 동안 (예를 들어, 재구성 및 보관 후) 그의 물리적 및 화학적 안정성 및 완전성을 본질적으로 유지하는 것을 의미하는 "보호량"으로 (예를 들어, 동결건조 전에) 제제에 첨가된다.

본원에서 관심 "희석제"는 제약상 허용되고 (인간에 대한 투여에 안전하고 비-독성임), 액체 제제, 예컨대 동결건조 후에 재구성된 제제의 제조에 유용한 것이다. 예시적인 희석제는 멸균수, 주사용 정균수 (BWFI), pH 완충 용액 (예를 들어, 포스페이트-완충 염수), 멸균 염수 용액, 링거액 또는 덱스트로스 용액을 포함한다. 대안적 실시양태에서, 희석제는 염 및/또는 완충제의 수용액을 포함할 수 있다.

"보존제"는 박테리아 활성을 감소시키기 위해 본원에서 제제에 첨가될 수 있는 화합물이다. 보존제의 첨가는, 예를 들어 다중-용도 (다중-용량) 제제의 생산을 용이하게 할 수 있다. 가능한 보존제의 예는 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드, 헥사메토늄 클로라이드, 벤즈알코늄 클로라이드 (알킬 기가 장쇄 화합물인 알킬벤질디메틸암모늄 클로라이드의 혼합물) 및 벤제토늄 클로라이드를 포함한다. 다른 유형의 보존제는 방향족 알콜, 예컨대 페놀, 부틸 및 벤질 알콜, 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤, 카테콜, 레조르시놀, 시클로헥산올, 3-펜탄올 및 m-크레졸을 포함한다. 본원에서 가장 바람직한 보존제는 벤질 알콜이다.

본원에 사용된 용어 "치료"는 임상 병리상태의 과정 동안 치료될 개체 또는 세포의 자연 과정을 변경하도록 설계된 임상적 개입을 지칭한다. 치료의 바람직한 효과는 질환 진행 속도의 감소, 질환 상태의 호전 또는 완화, 및 경감 또는 개선된 예후를 포함한다. 일부 실시양태에서, 치료는 천식 제어를 개선하고/거나 천식 악화를 감소시키고/거나 폐 기능을 개선하고/거나 환자 보고된 증상을 개선한다. 예를 들어, IgE-매개 장애와 연관된 하나 이상의 증상이 완화 또는 제거된 경우에, 개체는 성공적으로 "치료된" 것이다.

본원에 사용된 "와 함께"는 한 치료 양식에 더하여 또 다른 치료 양식의 투여를 지칭한다. 이와 같이, "와 함께"는 한 치료 양식을 개체에게 다른 치료 양식을 투여 전에, 그 동안 또는 그 후에 투여하는 것을 지칭한다.

본원에 사용된 용어 "예방"은 개체에서 질환의 발생 또는 재발과 관련하여 방지를 제공하는 것을 포함한다. 개체는 IgE-매개 장애에 걸리기 쉽거나, 그에 감수성이거나 또는 IgE-매개 장애의 발병 위험에 있을 수 있으나, 아직 상기 장애를 앓는 것으로 진단되지는 않았다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-IgE 항체는 IgE-매개 장애의 발병을 지연시키기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-IgE 항체는 천식 악화 및/또는 폐 기능의 저하 또는 천식 상태를 예방한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-IgE 항체는 IgE-매개 면역 반응을 예방한다.

본원에 사용된, IgE-매개 장애의 발병 "위험에 있는" 개체는 검출가능한 질환 또는 질환의 증상을 갖거나 갖지 않을 수 있고, 본원에 기재된 치료 방법 이전에 검출가능한 질환 또는 질환의 증상을 나타내거나 나타내지 않았을 수 있다. "위험에 있는"은 개체가 당업계에 공지된 바와 같은 IgE-매개 장애의 발병과 상호관련된 측정가능한 파라미터인 하나 이상의 위험 인자를 갖는다는 것을 나타낸다. 이들 위험 인자 중 하나 이상을 갖는 개체는 이들 위험 인자 중 하나 이상이 없는 개체보다 장애 발병의 보다 높은 확률을 갖는다.

"유효량"은 적어도 필요한 투여량에서 필요한 기간 동안 치료 또는 예방 결과를 비롯한 목적 효과 또는 지시된 효과를 달성하는데 효과적인 양을 지칭한다. 유효량은 1회 이상의 투여로 제공될 수 있다.

"치료 유효량"은 적어도 특정한 장애의 측정가능한 개선에 요구되는 최소 농도이다. 치료 유효량은 본원에서 환자의 질환 상태, 연령, 성별 및 체중, 및 개체에서 목적하는 반응을 유도하는 항체의 능력과 같은 요인에 따라 달라질 수 있다. 또한, 치료 유효량은 항체의 임의의 독성 또는 유해한 효과를 치료상 유용한 효과가 능가하는 양이다. "예방 유효량"은 목적하는 예방 결과를 달성하는데 필요한 투여량에서 및 이러한 기간 동안 유효한 양을 지칭한다. 반드시는 아니지만 전형적으로, 예방 용량은 질환의 보다 초기 단계 전에 또는 보다 초기 단계에서 대상체에서 사용되기 때문에, 예방 유효량은 치료 유효량보다 적을 수 있다.

"만성" 투여는 초기 치료 효과 (활성)가 장기간 동안 유지되도록, 급성 방식과 대조적으로 연속적으로 의약(들)을 투여하는 것을 지칭한다. "간헐적" 투여는 중단 없이 연속적으로 수행되지는 않지만, 오히려 성질상 주기적인 치료이다.

본원에 사용된 "개체" 또는 "대상체"는 포유동물이다. 치료를 위한 "포유동물"은 인간, 가축 및 농장 동물, 및 동물원, 스포츠, 또는 애완 동물, 예컨대 개, 말, 토끼, 소, 돼지, 햄스터, 저빌, 마우스, 페릿, 래트, 고양이 등을 포함하는, 포유동물로 분류된 임의의 동물을 지칭한다. 바람직하게는, 포유동물은 인간이다.

용어 "제약 제제"는, 활성 성분의 생물학적 활성이 효과적이 되도록 허용하는 형태이며 제제가 투여되는 대상체에게 허용되지 않는 독성을 보이는 추가의 성분을 함유하지 않는 제제를 지칭한다. 이러한 제제는 멸균된다.

"멸균" 제제는 무균성이거나 모든 살아있는 유기체 및 그의 포자가 없다.

본원에 사용된 "항히스타민제"는 히스타민의 생리학적 효과를 길항하는 작용제이다. 히스타민이 그의 수용체인 H₁ 및 H₂에 결합하면 특징적인 알레르기성 증상 및 효과 또는 가려움증, 발적, 부종 등을 일으킨다. 다수의 항히스타민제는 히스타민이 그의 수용체인 H₁, H₂에 결합하는 것을 차단함으로써 작용하지만; 다른 것은 히스타민 방출을 억제함으로써 작동하는 것으로 여겨진다. 항히스타민제의 예는 클로르페니라민, 디펜히드라민, 프로메타진, 크로몰린 소듐, 아스테미졸, 아자타딘 말레에이트, 브로페니라민 말레에이트, 카르비녹사민 말레에이트, 세티리진 히드로클로라이드, 클레마스틴 푸마레이트, 시프로헵타딘 히드로클로라이드, 덱스브롬페니라민 말레에이트, 덱스클로르페니라민 말레에이트, 디멘히드리네이트, 디펜히드라민 히드로클로라이드, 독실아민 숙시네이트, 펙소펜다딘 히드로클로라이드, 테르페나딘 히드로클로라이드, 히드록시진 히드로클로라이드, 로라티딘, 메클리진 히드로클로라이드, 트리펠란아민 시트레이트, 트리펠렌아민 히드로클로라이드, 트리프롤리딘 히드로클로라이드이다.

본원에 사용된 "기관지확장제"는 전형적으로 폐 용량의 감소 및 숨가쁨을 야기하는 초기 천식 반응에서 발생하는 생리학적 사건인 기관지수축을 길항 또는 역전시키는 작용제를 기재한다. 기관지확장제의 예는 에피네프린, 광범위하게 작용하는 알파 및 베타-아드레날린성, 및 베타-아드레날린제, 알부테롤, 피르부테롤, 메타프로테레놀, 살메테롤, 및 이소에타린을 포함한다. 기관지확장은 또한 아미노필린 및 테오필린을 비롯한 크산틴의 투여를 통해 달성될 수 있다.

본원에 사용된 "비-스테로이드성 항염증 약물" 또는 "NSAID"는 스테로이드성 기재가 아닌, 항염증 활성을 갖는 작용제를 기재한다. NSAID의 예는 아세마타신, 아세트아미노펜, 아스피린, 아자프로파존, 베노릴레이트, 브롬페낙 소듐, 시클로옥시게나제 (COX)-2 억제제, 예컨대 GR 253035, MK966, 셀레콕시브 (셀레브렉스(CELEBREX)®; 4-(5-(4-메틸페닐)-3-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-1-일) 벤젠-술폰아미드) 및 발데콕시브 (벡스트라(BEXTRA)®), 디클로페낙, 디클로페낙 서방제, 디클로페낙 소듐, 디플루니살, 에토돌락, 펜부펜, 페노프로펜 칼슘, 플루르비프로펜, 이부프로펜, 이부프로펜 서방제, 인도메타신, 케토프로펜, 메클로페나메이트 소듐, 메페남산, 멜록시캄 (모빅(MOBIC)®), 나부메톤, 나프록센, 나프록센 소듐, 옥시펜부타존, 페닐부타존, 피록시캄, 술린닥, 테녹시캄, 티아프로펜산, 톨메틴, 톨메틴 소듐, 및 그의 염 및 유도체 등을 포함한다.

용어 "IgE-매개 장애"는 체내에서의 IgE의 국부 및/또는 전신성 수준으로 인해 비정형 증상이 나타날 수 있는, 과도한 IgE 수준 또는 활성과 연관된 장애이다. 이러한 장애는 천식, 아토피성 피부염, 알레르기성 비염, 섬유증 (예를 들어, 폐 섬유증, 예컨대 IPF)을 포함한다. IgE 매개 장애는 많은 통상적인 자연 발생 흡입 및 섭취 항원에 대해 면역학적으로 반응하는 일반적인 유전적 성향 및 IgE 항체의 지속적인 생산을 특징으로 하는 아토피성 장애를 포함한다. 구체적 아토피성 장애는 알레르기성 천식, 알레르기성 비염 (결막염), 아토피성 피부염, 식품 알레르기, 아나필락시스, 접촉성 피부염, 알레르기성 위장병증, 알레르기성 기관지폐 아스페르길루스증 및 알레르기성 자반증 (헤노흐-쉔라인)을 포함한다. 아토피성 환자는 종종 다수의 알레르기를 갖고, 이는 상기 환자가 계절성, 통년성 및 직업성 알레르겐을 비롯한 많은 환경 알레르겐에 대한 IgE 항체 및 이들에 의한 증상을 갖는다는 것을 의미한다. 계절성 알레르겐의 예는 화분 (예를 들어, 목초, 나무, 호밀, 티모시, 돼지풀)를 포함하는 한편, 통년성 알레르겐의 예는 진균 (예를 들어, 곰팡이, 곰팡이 포자), 깃털, 동물 (예를 들어, 애완동물 또는 다른 동물 비듬) 및 곤충 (예를 들어, 먼지 응애) 잔해를 포함한다. 직업성 알레르겐의 예는 또한 동물 (예를 들어, 마우스) 및 식물 항원 뿐만 아니라 약물, 세제, 금속 및 면역증강제, 예를 들어 이소시아네이트를 포함한다. IgE-매개 반응을 유발할 수 있는 비-항원 특이적 자극물은 감염, 자극원, 예를 들어 연기, 연소 증기, 디젤 배기가스 입자 및 이산화황, 운동, 감기 및 정서적 스트레스를 포함한다. 특정 유전적 배경을 갖는 아토피성 및 비아토피성 개체에서의 특이적 과민 반응은 식품 내의 단백질 (예를 들어, 콩과식물, 땅콩), 독 (예를 들어, 곤충, 뱀), 백신, 호르몬, 항혈청, 효소, 라텍스, 항생제, 근육 이완제, 비타민, 세포독소, 오피에이트, 및 폴리사카라이드, 예컨대 덱스트린, 철 덱스트란 및 폴리겔린에 대한 노출에 의해 발생할 수 있다.

IgE-매개인 것으로 보이며 본 발명의 제제로 치료가능한, 상승된 IgE 수준과 연관된 다른 장애는 모세혈관확장성 운동실조, 처그-스트라우스 증후군, 습진, 장염, 위장병증, 이식편-대-숙주 반응, 과다-IgE (잡) 증후군, 과민증 (예를 들어, 아나필락시스성 과민증, 칸디다증, 혈관염), IgE 골수종, 염증성 장 질환 (예를 들어, 크론병, 궤양성 결장염, 불확정 결장염 및 감염성 결장염), 점막염 (예를 들어, 경구 점막염, 위장 점막염, 비내 점막염 및 직장염), 괴사성 소장결장염 및 식도염, 기생충성 질환 (예를 들어, 트리파노소마증), 과민성 혈관염, 두드러기 및 비스코트-알드리치 증후군을 포함한다.

추가로, 장애 자체가 상승된 IgE와 연관되는지의 여부와 무관하게 IgE 수준을 낮춤으로써 치료가능할 수 있는, 따라서 "IgE-매개 장애"의 범주 내에 있는 것으로 간주되어야 하는 장애는 애디슨병 (만성 부신피질 기능부전), 탈모증, 유전성 혈관부종, 혈관부종 (바니스터병, 혈관신경성 부종), 강직성 척추염, 재생불량성 빈혈, 동맥염, 아밀로이드증, 면역 장애, 예컨대 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역 난소염, 자가면역 고환염, 자가면역 다발내분비 부전, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역혈구감소증, 자가면역 사구체신염, 베체트병, 기관지염, 버거병, 수포성 유천포창, 카플란 증후군 (류마티스 진폐증), 심장염, 복강 스프루, 체디악-히가시 증후군, 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 코간-리스 증후군 (홍채각막 내피 증후군), 크레스트 증후군, 포진성 피부염 (두링병), 당뇨병, 호산구성 근막염, 호산구성 신염, 상공막염, 외인성 알레르기성 폐포염, 가족성 발작성 다발장막염, 펠티 증후군, 섬유화 폐포염, 사구체신염, 굿패스쳐 증후군, 과립구감소증, 육아종, 육아종증, 육아종 근육염, 그레이브스병, 길랑-바레 증후군 (다발신경염), 하시모토 갑상선염 (림프종성 갑상선종), 혈색소증, 조직구증, 과다호산구 증후군, 과민성 장 증후군, 소아 관절염, 각막염, 나병, 홍반성 루푸스, 라이엘병, 라임병, 혼합 결합조직 질환, 단일신경염, 다발성 단일신경염, 머클-웰스 증후군, 점막피부 림프성 증후군 (가와사키병), 다중심성 망상조직구증, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 균상 식육종, 지방층염, 유천포창, 천포창, 심막염, 다발신경염, 결절성 다발동맥염, 건선, 건선성 관절염, 폐 관절염, 폐 선종증, 폐 섬유증, 재발성 다발연골염, 류마티스성 열, 류마티스 관절염, 비부비동염 (부비동염), 사르코이드증, 공막염, 경화성 담관염, 혈청병, 세자리 증후군, 쇼그렌 증후군, 스트븐스-존슨 증후군, 전신 비만세포증, 이식 거부, 혈소판감소성 자반증, 흉선 림프조직무형성, 포도막염, 백반증, 베게너 육아종증을 포함한다.

용어 "천식"은 가변성 및 재발성 증상, 가역성 기류 폐쇄 (예를 들어, 기관지확장제에 의함) 및 기저 염증과 연관될 수 있거나 연관되지 않을 수 있는 기관지 과민반응을 특징으로 하는 복합 장애를 지칭한다. 천식의 예는 아스피린 민감성/악화된 천식, 아토피성 천식, 중증 천식, 경도 천식, 중등도 내지 중증 천식, 코르티코스테로이드 미경험 천식, 만성 천식, 코르티코스테로이드 내성 천식, 코르티코스테로이드 불응성 천식, 새로 진단된 치료받지 않은 천식, 흡연으로 인한 천식, 코르티코스테로이드로 제어되지 않는 천식, 및 문헌 [J Allergy Clin Immunol (2010) 126(5):926-938]에 언급된 바와 같은 다른 천식을 포함한다.

천식-유사 증상은 숨가쁨, 기침 (객담 생산 및/또는 객담 특질 및/또는 기침 빈도에서의 변화), 천명, 흉부 압박, 기관지수축, 및 상기 증상 중 하나에 기인한 야간 각성으로 이루어진 군으로부터 선택된 증상 또는 이들 증상의 조합을 포함한다 (문헌 [Juniper et al. (2000) Am. J. Respir. Crit. Care Med., 162(4), 1330-1334.]).

용어 "경도 천식"은 일반적으로 주 2회 미만의 증상 또는 악화, 월 2회 미만의 야간 증상을 경험하는 환자를 지칭하며, 악화 사이에 무증상이다. 필요한 경우에, 경도, 간헐성 천식은 종종 하기: 흡입용 기관지확장제 (단기-작용 흡입용 베타2-효능제); 공지된 유발인자의 회피; 연간 인플루엔자 백신접종; 6 내지 10년마다의 폐렴구균 백신접종, 및 일부 경우에, 흡입용 베타2-효능제, 크로몰린, 또는 확인된 유발인자에 대한 노출 전의 네도크로밀로 치료된다. 환자가 단기-작용 베타2-효능제에 대한 증가하는 필요를 갖는 경우에 (예를 들어, 급성 악화에 대해 1일에 3 내지 4회 초과의 단기-작용 베타2-효능제를 사용하거나, 또는 증상에 대해 월 1개 초과의 캐니스터를 사용함), 환자는 요법에서의 증강을 필요로 할 수 있다.

용어 "중등도 천식"은 일반적으로 환자가 주 2회 초과의 악화를 경험하고, 악화가 수면 및 활동에 영향을 미치고; 환자가 한달에 2회 초과의 천식으로 인한 야간 각성을 갖고; 환자가 매일 또는 격일의 단기-작용 흡입용 베타2-효능제를 필요로 하는 만성 천식 증상을 가지며; 환자의 치료전 예측된 기준선 PEF 또는 FEV1이 60 내지 80 퍼센트이고, PEF 가변성이 20 내지 30 퍼센트인 천식을 지칭한다.

용어 "중증 천식"은 일반적으로 환자가 거의 계속적인 증상, 빈번한 악화, 천식으로 인한 빈번한 야간 각성, 제한된 활동, 예측된 60 퍼센트 미만의 PEF 또는 FEV1 기준선, 및 20 내지 30 퍼센트의 PEF 가변성을 갖는 것인 천식을 지칭한다.

용어 "코르티코스테로이드"는 글루코코르티코이드 및 미네랄로코르티코이드를 포함한다. 예를 들어, 코르티코스테로이드는 플루티카손 (플루티카손 프로피오네이트 (FP) 포함), 베클로메타손, 부데소니드, 시클레소니드, 모메타손, 플루니솔리드, 베타메타손, 히드로코르티손, 프레드니손, 프레드니솔론, 메틸프레드니솔론 및 트리암시놀론을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. "흡입가능한 코르티코스테로이드"는 흡입에 의한 전달에 적합한 코르티코스테로이드를 의미한다. 예시적인 흡입가능한 코르티코스테로이드는 플루티카손, 베클로메타손 디프로피오네이트, 부데노시드, 모메타손 푸로에이트, 시클레소니드, 플루니솔리드, 트리암시놀론 아세토니드 및 현재 이용가능하거나 미래에 이용가능하게 될 임의의 다른 코르티코스테로이드이다. 흡입될 수 있고 장기-작용 베타2-효능제와 조합되는 코르티코스테로이드의 예는 부데소니드/포르모테롤 및 플루티카손/살메테롤을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.

본원에 사용된 "글루코코르티코이드"는 항염증 활성을 갖는 스테로이드계 작용제를 기재한다. 글루코코르티코이드는 통상적으로 후기 천식성 반응을 감쇠시키고 천식 악화를 치료하기 위해 사용된다. 예시적인 글루코코르티코이드는 프레드니손, 베클로메타손 디프로피오네이트, 트리암시놀론 아세토나이드, 플루니솔리드, 베타메타손, 부데소니드, 덱사메타손, 데사메하손 트람시놀론, 플루드로코르티손 아세테이트, 플루니솔리드, 플루티카손 프로피오네이트, 히드로코르티손, 프레드니솔론 [메틸프레드니솔론 (예를 들어, 솔루-메드롤(SOLU-MEDROL)® 메틸프레드니솔론 소듐 숙시네이트)] 및 트리암시놀론을 포함한다.

용어 "FEV1"은 강제 호기의 처음 1초에 내쉰 공기의 부피를 지칭한다. 이는 기도 폐쇄의 척도이다. FEV1에서의 20% 감소를 유도하는데 필요한 메타콜린의 유발 농도 (PC20)는 기도 과민반응의 척도이다. FEV1은 다른 유사한 방식, 예를 들어 FEV₁로 기재될 수 있으며, 모든 이러한 유사한 변형이 동일한 의미를 갖는다는 것을 이해해야 한다.

용어 "FEV1에서의 상대적 변화" = (치료 제12주에서의 FEV1 - 치료 시작 전의 FEV1) / FEV1이다.

본원의 "자가면역 장애"는 개체 자신의 조직 또는 기관 또는 그의 공동-분리물 또는 발현물로부터 유발되고 자신의 조직이나 그의 공동-분리물 또는 발현물로부터 및 그에 대항하여 발생하는 질환 또는 장애, 또는 그로부터 비롯되는 상태이다. 많은 이들 자가면역 및 염증성 장애에서, 고감마글로불린혈증, 높은 수준의 자가항체, 조직 내의 항원-항체 복합체 침착물, 코르티코스테로이드 또는 면역억제 치료로부터의 이익 , 및 이환된 조직 내의 림프성 세포 응집체를 포함하나 이에 제한되지 않는 수많은 임상 및 실험 마커가 존재할 수 있다. B-세포 매개 자가면역 장애에 대해 임의의 한 이론에 제한하지 않으면서, B 세포는 자가항체 생산, 면역 복합체 형성, 수지상 및 T-세포 활성화, 시토카인 합성, 직접 케모카인 방출 및 이소성 신-림프생성을 위한 병소의 제공을 포함하여, 많은 기계적인 경로를 통한 인간 자가면역 질환에서 병원성 효과를 나타내는 것으로 여겨진다. 각각의 이들 경로는 자가면역 질환의 병리상태에 다양한 정도로 관여할 수 있다.

"자가면역 질환"은 기관-특이적 질환 (즉, 면역 반응은 내분비계, 조혈계, 피부, 심폐계, 위장계 및 간계, 신장계, 갑상선, 귀, 신경근육계, 중추 신경계 등과 같은 기관계에 대해 특이적으로 지시됨) 또는 다수의 기관계에 영향을 미칠 수 있는 전신 질환 (예를 들어, 전신 홍반성 루푸스 (SLE), 류마티스 관절염 (RA), 다발근염 등)일 수 있다. 바람직한 이러한 질환은 자가면역 류마티스 장애 (예컨대, 예를 들어, RA, 쇼그렌 증후군, 경피증, 루푸스, 예컨대 SLE 및 루푸스 신염, 다발근염/피부근염, 한랭글로불린혈증, 항-인지질 항체 증후군 및 건선성 관절염), 자가면역 위장 및 간 장애 (예컨대, 예를 들어, 염증성 장 질환 (예를 들어, 궤양성 결장염 및 크론병), 자가면역 위염 및 악성 빈혈, 자가면역 간염, 원발성 담즙성 간경변증, 원발성 경화성 담관염 및 복강 질환), 혈관염 (예컨대, 예를 들어, ANCA-음성 혈관염 및 ANCA-연관 혈관염, 예를 들어 처크-스트라우스 혈관염, 베게너 육아종증 및 현미경적 다발혈관염), 자가면역 신경계 장애 (예컨대, 예를 들어, 다발성 경화증, 안진전 근간대성경련 증후군, 중증 근무력증, 시신경척수염, 파킨슨병, 알츠하이머병 및 자가면역 다발신경병증), 신장 장애 (예컨대, 예를 들어, 사구체신염, 굿패스쳐 증후군 및 베르게르병), 자가면역 피부 장애 (예컨대, 예를 들어, 건선, 두드러기, 담마진, 심상성 천포창, 수포성 유천포창 및 피부 홍반성 루푸스), 혈액 장애 (예컨대, 예를 들어, 혈소판감소성 자반증, 혈전성 혈소판감소성 자반증, 수혈후 자반증 및 자가면역 용혈성 빈혈), 아테롬성동맥경화증, 포도막염, 자가면역 청각 질환 (예컨대, 예를 들어, 내이 질환 및 청각 상실), 베체트병, 레이노 증후군, 기관 이식, 및 자가면역 내분비 장애 (예컨대, 예를 들어, 당뇨병성-관련 자가면역 질환, 예컨대 인슐린-의존적 당뇨병 (IDDM), 애디슨병 및 자가면역 갑상선 질환 (예를 들어, 그레이브스병 및 갑상선염))를 포함한다. 보다 바람직한 이러한 질환은 예를 들어 RA, 궤양 결장염, ANCA-연관 혈관염, 루푸스, 다발성 경화증, 쇼그렌 증후군, 그레이브스병, IDDM, 악성 빈혈, 갑상선염, 및 사구체신염을 포함한다.

본원에 사용된 용어 "세포독성제"는 세포의 기능을 억제 또는 방지하고/거나 세포의 파괴를 유발하는 물질을 지칭한다. 상기 용어는 방사성 동위원소 (예를 들어, At²¹¹, I¹³¹, I¹²⁵, Y⁹⁰, Re¹⁸⁶, Re¹⁸⁸, Sm¹⁵³, Bi²¹², P³² 및 Lu의 방사성 동위원소), 및 독소, 예컨대 소분자 독소 또는 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 기원의 효소 활성 독소, 또는 그의 단편을 포함한다.

용어 "시토카인"은 또 다른 세포 상에서 세포간 매개자로서 작용하는 하나의 세포 집단에 의해 방출되는 단백질에 대한 일반적 용어이다. 이러한 시토카인의 예는 림포카인, 모노카인; 인터류킨 (IL), 예컨대 IL-1, IL-1α, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, 예를 들어 프로류킨(PROLEUKIN)® rIL-2; 종양-괴사 인자, 예컨대 TNF-α 또는 TNF-β; 및 다른 폴리펩티드 인자, 예를 들어 LIF 및 kit 리간드 (KL)이다. 본원에 사용된 용어 시토카인은 천연 공급원 또는 재조합 세포 배양물로부터의 단백질 및 천연-서열 시토카인의 생물학적 활성 등가물 (합성에 의해 생산된 소분자 물질 및 그의 제약상 허용되는 유도체 및 염 포함)을 포함한다.

용어 "호르몬"은 폴리펩티드 호르몬을 지칭하고, 이는 일반적으로 관이 있는 선상 기관에 의해 분비된다. 호르몬 중에서, 예를 들어, 성장 호르몬 예컨대 인간 성장 호르몬, N-메티오닐 인간 성장 호르몬, 및 소 성장 호르몬; 부갑상선 호르몬; 티록신; 인슐린; 프로인슐린; 렐락신; 에스트라디올; 호르몬-대체 요법; 안드로겐 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄 또는 테스토락톤; 프로렐락신; 당단백질 호르몬, 예컨대 여포 자극 호르몬 (FSH), 갑상선 자극 호르몬 (TSH) 및 황체화 호르몬 (LH); 프로락틴, 태반 락토젠, 마우스 고나도트로핀-연관 펩티드, 고나도트로핀-방출 호르몬; 인히빈; 액티빈; 뮐러관-억제 물질; 및 트롬보포이에틴이 포함된다. 본원에 사용된 용어 호르몬은 천연 공급원으로부터 또는 재조합 세포 배양물로부터의 단백질 및 천연-서열 호르몬의 생물학적 활성 등가물 (합성에 의해 생산된 소분자 물질 및 그의 제약상 허용되는 유도체 및 염 포함)을 포함한다.

용어 "성장 인자"는 성장을 촉진하는 단백질을 지칭하고, 예를 들어 간 성장 인자; 섬유모세포 성장 인자; 혈관 내피 성장 인자; 신경 성장 인자, 예컨대 NGF-β; 혈소판-유래 성장 인자; 형질전환 성장 인자 (TGF), 예컨대 TGF-α 및 TGF-β; 인슐린-유사 성장 인자-I 및 -II; 에리트로포이에틴 (EPO); 골유도 인자; 인터페론, 예컨대 인터페론-α, -β, 및 -γ; 및 콜로니-자극 인자 (CSF), 예컨대 대식세포-CSF (M-CSF), 과립구-대식세포-CSF (GM-CSF); 및 과립구-CSF (G-CSF)를 포함한다. 본원에서 사용된 용어 성장 인자는 천연 공급원으로부터 또는 재조합 세포 배양물로부터의 단백질 및 천연-서열 성장 인자의 생물학적 활성 등가물 (합성에 의해 생산된 소분자 물질 및 그의 제약상 허용되는 유도체 및 염 포함)을 포함한다.

용어 "인테그린"은 세포의 세포외 매트릭스에 대한 결합 및 그에 대한 반응 둘 다를 가능하게 하고, 다양한 세포 기능, 예컨대 상처 치유, 세포 분화, 종양 세포의 귀소 및 아폽토시스에 수반되는 수용체 단백질을 지칭한다. 이들은 세포-세포외 매트릭스 및 세포-세포 상호작용에서 수반되는 세포 부착 수용체의 거대 패밀리의 일부이다. 기능적 인테그린은 비-공유 결합된, 알파 및 베타로 불리는 2개의 막횡단 당단백질 서브유닛으로 구성된다. 알파 서브유닛 모두는 서로 약간의 상동성을 공유하고, 베타 서브유닛도 마찬가지이다. 수용체는 항상 1개의 알파 쇄 및 1개의 베타 쇄를 함유한다. 예는 알파6베타1, 알파3베타1, 알파7베타1, LFA-1 등을 포함한다. 본원에 사용된 용어 "인테그린"은 천연 공급원으로부터 또는 재조합 세포 배양물로부터의 단백질 및 천연-서열 인테그린의 생물학적으로 활성인 등가물 (합성에 의해 생산된 소분자 물질 및 그의 제약상 허용되는 유도체 및 염 포함)을 포함한다.

"TNF 길항제"는 시험관 내에서, 계내에서, 및/또는 바람직하게는 생체 내에서 TNFα 활성을 감소, 차단, 억제, 무효화 또는 방해하는 분자로서 본원에 정의된다. 적합한 TNF 길항제는 또한 TNF RNA, DNA 또는 단백질 합성, TNFα 방출, TNFα 수용체 신호전달, 막 TNFα 절단, TNFα 활성, TNFα 생산 및/또는 합성을 감소, 차단, 무효화, 방해, 방지 및/또는 억제할 수 있다. 이러한 TNF 길항제는 항-TNFα 항체, 그의 항원 결합 단편, TNFα에 특이적으로 결합하는 그의 명시된 돌연변이체 또는 도메인 (TNFα에 대한 결합시, 포유동물 내의 TNFα를 발현하는 세포를 파괴 또는 고갈시키고/거나 이들 세포의 하나 이상의 기능을 방해함), 가용성 TNF 수용체 (예를 들어, p55, p70 또는 p85) 또는 그의 단편, 융합 폴리펩티드, 소분자 TNF 길항제, 예를 들어, TNF 결합 단백질 I 또는 II (TBP-I 또는 TBP-II), 네렐리몬맙, CDP-571, 인플릭시맙, 엔테라셉트 (엔브렐(ENBREL)™), 아달리무랍 (휴미라(HUMIRA)™), CDP-571, CDP-870, 아펠리모맙, 레네르셉트 등), 그의 항원 결합 단편, 및 TNFα에 특이적으로 결합하는 수용체 분자; TNFα 합성, TNFα 방출, 또는 표적 세포에 대한 그의 작용을 방지 및/또는 억제하는 화합물, 예컨대 탈리도미드, 테니답, 포스포디에스테라제 억제제 (예를 들어, 펜톡시필린 및 롤리프람), A2b 아데노신 수용체 효능제, 및 A2b 아데노신 수용체 증진제; TNFα 수용체 신호전달을 방지 및/또는 억제하는 화합물, 예컨대 미토겐-활성화 단백질 (MAP) 키나제 억제제; 막 TNFα 절단을 차단 및/또는 억제하는 화합물, 예컨대 메탈로프로테이나제 억제제; TNFα 활성을 차단 및/또는 억제하는 화합물, 예컨대 안지오텐신 전환 효소 (ACE) 억제제 (예를 들어, 캅토프릴); 및 TNFα 생산 및/또는 합성을 차단 및/또는 억제하는 화합물, 예컨대 MAP 키나제 억제제를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 바람직한 길항제는 항체를 포함한다.

"종양 괴사 인자-알파", "TNF-알파" 또는 "TNFα"는 문헌 [Pennica et al., Nature, 312:721 (1984) 또는 Aggarwal et al., JBC, 260:2345 (1985)]의 아미노산 서열을 포함하는 인간 TNFα 분자를 지칭한다. 본원에서 "TNFα 억제제"는 일반적으로 TNFα에 결합하여 그의 활성을 중화함으로써 TNFα의 생물학적 기능을 어느 정도 억제시키는 작용제이다. 본원에서 TNFα 억제제의 예는 에타네르셉트 (엔브렐®), 인플릭시맙 (레미케이드(REMICADE)®) 및 아달리무맙 (휴미라™)을 포함한다.

본원에서 "인테그린 길항제 또는 항체"의 예는 LFA-1 항체, 예컨대 제넨테크로부터 상업적으로 입수가능한 에팔리주맙 (랍티바(RAPTIVA)®), 또는 알파 4 인테그린 항체, 예컨대 바이오젠(Biogen)으로부터 입수가능한 나탈리주맙 (안테그렌(ANTEGREN)®), 또는 디아자시클릭 페닐알라닌 유도체 (WO 2003/89410), 페닐알라닌 유도체 (WO 2003/70709, WO 2002/28830, WO 2002/16329 및 WO 2003/53926), 페닐프로피온산 유도체 (WO 2003/10135), 엔아민 유도체 (WO 2001/79173), 프로판산 유도체 (WO 2000/37444), 알칸산 유도체 (WO 2000/32575), 치환된 페닐 유도체 (미국 특허 번호 6,677,339 및 6,348,463), 방향족 아민 유도체 (미국 특허 번호 6,369,229), ADAM 디스인테그린 도메인 폴리펩티드 (미국 2002/0042368), 알파v베타3 인테그린에 대한 항체 (EP 633945), 아자-가교 비시클릭 아미노산 유도체 (WO 2002/02556) 등을 포함한다.

용어 "면역억제제"는 본원에서 치료될 대상체의 면역계를 억제하거나 차폐하는 작용을 하는 물질을 지칭한다. 이는 시토카인 생산을 억제하거나 자기-항원 발현을 하향-조절 또는 억제하거나 MHC 항원을 차폐시키는 물질을 포함한다. 이러한 면역억제제의 예는 2-아미노-6-아릴-5-치환된 피리미딘 (U.S. 4,665,077 참조); 비-스테로이드성 항염증 약물 (NSAID); 간시클로비르; 타크로리무스; 글루코코르티코이드, 예컨대 코르티솔 또는 알도스테론, 항염증제, 예컨대 시클로옥시게나제 억제제, 5-리폭시게나제 억제제; 또는 류코트리엔 수용체 길항제; 퓨린 길항제, 예컨대 아자티오프린 또는 미코페놀레이트 모페틸 (MMF); 트로케이드 (Ro32-355); 말초 시그마 수용체 길항제, 예컨대 ISR-31747; 알킬화제, 예컨대 시클로포스파미드; 브로모크립틴; 다나졸; 답손; 글루타르알데히드 (U.S. 4,120,649에 기재된 바와 같이 MHC 항원을 차폐함); MHC 항원 및 MHC 단편에 대한 항-이디오타입 항체; 시클로스포린 A; 스테로이드, 예컨대 코르티코스테로이드 또는 글루코코르티코스테로이드 또는 글루코코르티코이드 유사체, 예를 들어 프레드니손, 메틸프레드니솔론, 예를 들어 솔루-메드롤® 메틸프레드니솔론 소듐 숙시네이트, 리멕솔론, 및 덱사메타손; 디히드로폴레이트 리덕타제 억제제, 예컨대 메토트렉세이트 (경구 또는 피하); 항말라리아제, 예컨대 클로로퀸 및 히드록시클로로퀸; 술파살라진; 레플루노미드; 시토카인 방출 억제제, 예컨대 SB-210396 및 SB-217969 모노클로날 항체 및 MHC II 길항제, 예컨대 ZD2315; PG1 수용체 길항제, 예컨대 ZD4953; VLA4 부착 차단제, 예컨대 ZD7349; 항-시토카인 또는 항-시토카인 수용체 항체, 예를 들어 항-인터페론-알파, -베타 또는 -감마 항체, 항-TNF-α 항체 (인플릭시맙 (레미케이드®) 또는 아달리무맙), 항-TNF-α 이뮤노어드헤신 (에타네르셉트), 항-TNF-베타 항체, 인터류킨-1 (IL-1) 차단제, 예컨대 재조합 HuIL-1Ra 및 IL-1B 억제제, 항-인터류킨-2 (IL-2) 항체 및 항-IL-2 수용체 항체; IL-2 융합 독소; 항-L3T4 항체; 레플루노미드; 이종 항림프구 글로불린; OPC-14597; NISV (면역 반응 조절제); 필수 지방산, 예컨대 감마리놀렌산 또는 에이코사펜타엔산; CD-4 차단제 및 범(pan)-T 항체, 바람직하게는 항-CD3 또는 항-CD4/CD4a 항체; 공동-자극 조절제 (예를 들어, 아바타셉트(ABATACEPT)™으로도 공지된 CTLA4-Fc 융합체); 항-인터류킨-6 (IL-6) 수용체 항체 및 길항제; 항-LFA-1 항체, 예를 들어 항-CD11a 및 항-CD18 항체; LFA-3 결합 도메인을 함유하는 가용성 펩티드 (WO 1990/08187); 스트렙토키나제; IL-10; 항-IL-4 길항제, 항-IL-13 길항제 및 이중특이적 항-IL-4/IL-13 길항제 항체, 형질전환 성장 인자-베타 (TGF-베타); 스트렙토도르나제; 숙주로부터의 RNA 또는 DNA; FK506; RS-61443; 엔리모맙; CDP-855; PNP 억제제; CH-3298; GW353430; 4162W94, 클로람부실; 데옥시스페르구알린; 라파마이신; T-세포 수용체 (US 5,114,721); T-세포 수용체 단편 (문헌 [Offner et al., Science, 251:430-432 (1991)]; WO 1990/11294; 문헌 [Janeway, Nature, 341:482 (1989)]; 및 WO 91/01133); BAFF 길항제, 예컨대 BAFF 항체 및 BR3 항체; zTNF4 길항제 (문헌 [Mackay and Mackay, Trends Immunol., 23:113-5 (2002)]); T 세포 헬퍼 신호를 방해하는 생물학적 작용제, 예컨대 항-CD40 수용체 또는 항-CD40 리간드 (CD154), 예를 들어 CD40-CD40 리간드에 대한 차단 항체 (예를 들어, 문헌 [Durie et al., Science, 261:1328-30 (1993); Mohan et al., J. Immunol., 154:1470-80 (1995)]) 및 CTLA4-Ig (문헌 [Finck et al., Science, 265: 1225-7 (1994)]); 및 T 세포 수용체 항체 (EP 340,109), 예컨대 T10B9를 포함한다. 본원에서 바람직한 몇몇 면역억제제는 시클로포스파미드, 클로람부실, 아자티오프린, 레플루노미드, MMF, 또는 메토트렉세이트 (MTX)를 포함한다.

"질환-조절 항류마티스 약물" 또는 "DMARD"는 클로로퀸, 히드록시클로로퀸, 미오크리신, 아우라노핀, 술파살라진, 메토트렉세이트, 레플루노미드, 에타네르셉트, 인플릭시맙 (및 경구 및 피하 MTX), 아자티오프린, D-페니실라민, 금 염 (경구), 금 염 (근육내), 미노시클린, 시클로스포린, 예를 들어 시클로스포린 A 및 국소 시클로스포린, 스타필로코쿠스 단백질 A (문헌 [Goodyear and Silverman, J. Exp. Med., 197:1125-39 (2003)]) (이들의 염 및 유도체 포함) 등을 포함한다.

"B 세포"는 골수에서 성숙하는 림프구이며, 미감작 B 세포, 기억 B 세포, 또는 이펙터 B 세포 (형질 세포)를 포함한다. 본원에서 B 세포는 정상 또는 비-악성일 수 있다.

본원에서 "B-세포 표면 마커" 또는 "B-세포 표면 항원"은 그에 대해 결합하는 길항제로 표적화될 수 있는 B 세포의 표면 상에 발현되는 항원이다. 예시적인 B-세포 표면 마커는 CD10, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD37, CD40, CD53, CD72, CD73, CD74, CDw75, CDw76, CD77, CDw78, CD79a, CD79b, CD80, CD81, CD82, CD83, CDw84, CD85 및 CD86 백혈구 표면 마커를 포함한다 (이에 대한 설명은 문헌 [The Leukocyte Antigen Facts Book, 2^nd Edition. 1997, ed. Barclay et al. Academic Press, Harcourt Brace & Co., New York] 참조). 다른 B-세포 표면 마커는 RP105, FcRH2, B-세포 CR2, CCR6, P2X5, HLA-DOB, CXCR5, FCER2, BR3, Btig, NAG14, SLGC16270, FcRH1, IRTA2, ATWD578, FcRH3, IRTA1, FcRH6, BCMA, 및 239287을 포함한다. 바람직한 B-세포 표면 마커는 포유동물의 다른 비-B-세포 조직에 비해 B 세포 상에 우선적으로 발현되고, 전구체 및 성숙 B 세포 둘 모두 상에서 발현될 수 있다. 가장 바람직한 상기 마커는 CD20 및 CD22이다.

"CD20" 항원, 또는 "CD20"은 말초 혈액 또는 림프성 기관으로부터의 B 세포 중 90% 초과의 표면 상에서 발견되는 약 35-kDa의 비-글리코실화 인단백질이다. CD20은 정상 B 세포 뿐만 아니라, 악성 B 세포, 둘 모두 상에 존재하지만, 줄기 세포 상에서는 발현되지 않는다. 문헌에서 CD20에 대한 다른 명칭으로는 "B-림프구-제한 항원" 및 "Bp35"를 포함한다. CD20 항원은, 예를 들어 문헌 [Clark et al., Proc. Natl. Acad. Sci (USA) 82:1766 (1985)]에 기재되어 있다.

BL-CAM 또는 Lyb8로 공지된 "CD22" 항원 또는 "CD22"는 분자량이 약 130 (환원형) 내지 140kD (비환원형)인 제1형 통합 막 당단백질이다. 이는 B-림프구의 세포질 및 세포막 둘 다에서 발현된다. CD22 항원은 CD19 항원과 거의 동일한 단계에서 B-세포 림프구 분화의 초기에 나타난다. 다른 B-세포 마커와 달리, CD22 막 발현은 성숙 B 세포 (CD22+)와 형질 세포 (CD22-) 사이에 포함되는 후기 분화 단계에 한정된다. CD22 항원은, 예를 들어 문헌 [Wilson et al., J. Exp. Med. 173:137 (1991) 및 Wilson et al., J. Immunol. 150:5013 (1993)]에 기재되어 있다.

"B-세포 표면 마커에 결합하는 항체"는 B-세포 표면 마커에 대한 결합 시에, 예를 들어 B 세포에 의해 유발되는 체액 반응을 감소시키거나 방지함으로써, 포유동물 내의 B 세포를 파괴 또는 고갈시키고/거나 하나 이상의 B-세포 기능을 방해하는 분자이다. 바람직하게는 항체는 이것으로 치료된 포유동물에서 B 세포를 고갈시킬 수 있다 (즉, 순환 B-세포 수준을 감소시킬 수 있다). 이러한 고갈은 다양한 메카니즘, 예컨대 항체-의존성 세포-매개 세포독성 (ADCC) 및/또는 보체-의존성 세포독성 (CDC), B-세포 증식 억제, 및/또는 B-세포 사멸의 유도 (예를 들어, 아폽토시스를 통해)를 통해 달성될 수 있다.

CD20 항체의 예는 다음을 포함한다: 현재 "리툭시맙" ("리툭산(RITUXAN)®)으로 칭해지는 "C2B8" (미국 특허 번호 5,736,137); 아이덱 파마슈티칼스, 인크.(IDEC Pharmaceuticals, Inc.)로부터 상업적으로 입수가능한 "Y2B8" 또는 "이브리투모맙 티욱세탄" (제발린(ZEVALIN)®)으로 명명된 이트륨-[90]-표지된 2B8 뮤린 항체 (미국 특허 번호 5,736,137; 2B8은 1993년 6월 22일에 ATCC에 기탁 번호 HB11388 하에 기탁됨); "토시투모맙"으로도 칭해지는 뮤린 IgG2a "B1" (임의로 ¹³¹I로 표지되어, 코릭사(Corixa)로부터 상업적으로 입수가능한 "131I-B1" 또는 "아이오딘 I131 토시투모맙" 항체 (벡사르(BEXXAR)™)가 생성됨) (또한 미국 특허 번호 5,595,721 참조); 뮤린 모노클로날 항체 "1F5" (문헌 [Press et al. Blood 69(2):584-591 (1987)]) 및 "프레임워크 패치드" 또는 인간화 1F5를 포함하는 그의 변이체 (WO 2003/002607 (Leung, S.); ATCC 기탁물 HB-96450); 뮤린 2H7 및 키메라 2H7 항체 (미국 특허 번호 5,677,180); 인간화 2H7 (WO 2004/056312 (Lowman et al.) 및 하기 기재된 것); B-세포의 세포 막 내의 CD20 분자에서 표적화된, 완전 인간 고친화도 항체인 휴맥스(HUMAX)-CD20™ (젠맙(Genmab, 덴마크); 예를 들어, 문헌 [Glennie and van de Winkel, Drug Discovery Today 8:503-510 (2003) 및 Cragg et al., Blood 101: 1045-1052 (2003)] 참조); WO 2004/035607 (Teeling et al.)에 기재된 인간 모노클로날 항체; AME-133™ 항체 (어플라이드 몰레큘라 에볼루션(Applied Molecular Evolution)); A20 항체 또는 그의 변이체, 예컨대 키메라 또는 인간화 A20 항체 (각각 cA20, hA20) (US 2003/0219433, 이뮤노메딕스 (Immunomedics)); 및 인터내셔널 류코사이트 타이핑 워크샵(International Leukocyte Typing Workshop)으로부터 입수가능한 모노클로날 항체 L27, G28-2, 93-1B3, B-C1 또는 NU-B2 (문헌 [Valentine et al., In: Leukocyte Typing III (McMichael, Ed., p. 440, Oxford University Press (1987)]). 본원에서 바람직한 CD20 항체는 키메라, 인간화, 또는 인간 CD20 항체, 보다 바람직하게는 리툭시맙, 인간화 2H7, 키메라 또는 인간화 A20 항체 (이뮤노메딕스), 및 휴맥스-CD20™ 인간 CD20 항체 (젠맙)이다.

본원에서 용어 "리툭시맙" 또는 "리툭산®"은 일반적으로, CD20 항원에 대항하여 지시되고 미국 특허 번호 5,736,137에서 "C2B8"로 명명된, 유전자 조작된 키메라 뮤린/인간 모노클로날 항체 및 CD20에 결합하는 능력을 보유하는 그의 단편을 지칭한다.

순수하게 본원에서의 목적을 위해, 및 달리 나타내지 않는 한, "인간화 2H7"은 인간화 CD20 항체, 또는 그의 항원-결합 단편을 지칭하고, 여기서 항체는 생체 내에서 영장류 B 세포를 고갈시키는데 효과적이다. 상기 항체는 US 2006/0062787 및 그의 도면에 기재된 것들을 포함하고, US 2006/0188495에 서열이 제시된 버전 114가 포함된다. 또한 US 2006/0034835 및 US 2006/0024300을 참조한다. 본 발명의 다양한 바람직한 실시양태의 요약에서, US 2006/0062787에 개시된 바와 같은 2H7 버전 16을 기초로 하는 변이체의 V 영역은 하기 표에 나타낸 아미노산 치환의 위치를 제외하고는 v16의 아미노산 서열을 가질 것이다. 달리 나타내지 않는 한, 2H7 변이체는 v16과 동일한 L 쇄를 가질 것이다.

한 바람직한 인간화 2H7은 버전 16의 서열을 갖는 무손상 항체 또는 항체 단편이다. 또 다른 바람직한 인간화 2H7은 버전 114의 서열을 갖는다.

"BAFF 길항제"는 BAFF 또는 BR3의 활성을 차단하는 임의의 분자이다. 이들은 BAFF에 결합하는 BR3, TACI 또는 BCMA의 일부를 포함하는 이뮤노어드헤신, 또는 BAFF에 결합하는 그의 변이체를 포함한다. 또 다른 측면에서, BAFF 길항제는 BAFF 항체이다. "BAFF 항체"는 BAFF에 결합하는, 바람직하게는 인간 BAFF의 잔기 162-275를 포함하는 인간 BAFF의 영역 내에서 BAFF에 결합하는 항체이다. 또 다른 측면에서, BAFF 길항제는 BR3 항체이다. "BR3 항체"는 BR3에 결합하는, 바람직하게는 인간 BR3 서열의 잔기 23-38을 포함하는 인간 BR3의 영역 내에서 BR3에 결합하는 항체이다. 인간 BAFF 및 인간 BR3의 서열은 예를 들어 US 2006/0062787에서 확인된다. BAFF-결합 폴리펩티드 또는 BAFF 항체의 다른 예는 예를 들어 WO 2002/092620, WO 2003/014294, 문헌 [Gordon et al., Biochemistry 42(20):5977-5983 (2003), Kelley et al., J. Biol. Chem. 279:16727-16735 (2004)], WO 1998/18921, WO 2001/12812, WO 2000/68378 및 WO 2000/40716에서 확인할 수 있다.

"항-IgE 항체"는 IgE가 비만 세포 및 호염기구 상의 고친화도 수용체에 결합될 때 가교를 유발하지 않는 방식으로 IgE에 특이적으로 결합하는 임의의 항체를 포함한다. 예시적인 항체는 본 발명의 항체 뿐만 아니라 rhuMabE25 (E25, 졸레어®), E26, E27, 뿐만 아니라 CGP-5101 (Hu-901) 및 HA 항체를 포함한다. 인간화 항-IgE 항체 E25, E26 및 E27의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 아미노산 서열은 예를 들어 U.S.P. 6,172,213 및 WO99/01556에 개시되어 있다. CGP-5101 (Hu-901) 항체는 문헌 [Corne et al., (1997) J. Clin. Invest. 99(5): 879-887], WO 92/17207 및 ATCC 기탁 번호 BRL-10706, BRL-11130, BRL-11131, BRL-11132 및 BRL-11133에 기재되어 있다. HA 항체는 USSN 60/444,229, WO2004/070011 및 WO2004/070010에 기재되어 있다.

본원에 사용된 용어 "약"은 이러한 기술 분야의 당업자에게 용이하게 공지된 각각의 값에 대한 통상의 오차 범위를 지칭한다. 본원에서 "약" 값 또는 파라미터에 대한 언급은 그 값 또는 파라미터 자체에 대한 실시양태를 포함(하고 이를 기재)한다.

본원 및 첨부된 특허청구범위에 사용된 단수 형태는 문맥상 달리 명백하게 나타내지 않는 한 복수의 언급을 포함한다. 예를 들어, "항체"에 대한 언급은 하나 내지 다수의 항체 (예컨대, 몰 양)에 대한 언급이고, 당업자에게 공지된 그의 등가물 등을 포함한다.

본원에 기재된 본 발명의 측면 및 실시양태는 측면 및 실시양태를 "포함하는 것", 이들로 "이루어진 것" 및 이들로 "본질적으로 이루어진 것"을 포함하는 것으로 이해된다.

III. 본 발명의 조성물 및 방법

IgE의 M1' 절편에 결합하는 항-IgE 항체, 및 IgE-매개 장애를 치료 또는 예방하기 위해 항-IgE 항체를 사용하는 방법이 본원에 제공된다.

본원에 기재된 모든 방법과 관련하여, 항-IgE/M' 항체에 대한 언급은 또한 하나 이상의 이들 작용제를 포함하는 조성물을 포함한다. 이러한 조성물은 적합한 부형제, 예컨대 제약상 허용되는 부형제 (담체), 예를 들어 완충제, 산, 염기, 당, 희석제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있으며, 이들은 당업계에 널리 공지되어 있고, 본원에 기재되어 있다. 본 발명의 방법은 단독으로 또는 다른 통상의 치료 방법과 조합하여 사용될 수 있다.

A. 항-IgE 항체

본원에 기재된 방법에 사용될 수 있는 항체는 IgE의 M1' 절편에 결합하는 항-IgE 항체를 포함한다. 본원에 기재된 항-IgE 항체는 하기 특성 중 하나 이상을 갖는다: (a) IgE (예컨대, 인간 IgE)의 M1' 절편에 특이적으로 결합하고; (b) 시험관내 및/또는 생체내에서 IgE-발현 B 세포의 아폽토시스를 유도하고; (c) 시험관내에서 아폽토시스 및/또는 항체-의존성 세포-매개 세포독성을 통해 IgE-M1' 발현 세포 (예컨대, IgE-스위칭된 B 세포, IgE 형질모구, 및 IgE 기억 B 세포)를 고갈시키고; (d) 포유동물에서 IgE-M1' 발현 세포를 고갈시키고; (e) 포유동물에서 혈청 총 IgE를 감소시키고; (f) 포유동물에서 알레르겐-특이적 IgE를 감소시키고; (g) 포유동물에서 혈청 총 IgE 또는 알레르겐-특이적 IgE의 알레르겐-유도된 증가를 예방 또는 감소시키고; (h) 시험관내 및/또는 생체내에서 IgE-발현 B 세포의 칼슘 플럭스를 유도하고; (i) IgE-매개 장애 (예를 들어, 알레르기성 비염, 및 알레르기성 천식)를 치료 및/또는 예방한다.

IgE-M1' 발현 세포 (예컨대, IgE-스위칭된 B 세포, IgE 형질모구, 및 IgE 기억 B 세포)의 고갈을 측정하기 위한 방법은 당업계에 공지되어 있고, 미국 특허 번호 8,071,097에 기재되어 있다. M1' 발현 B 세포는 인간 말초 혈액에서 정량적 PCR에 의해 검출될 수 있다. 간략하게, RNA는 팍스젠(PaxGene) 수집 튜브에 수집된 전혈로부터 추출된다. RNA는 cDNA로 전환되고, 역방향 (GTGGCAGAGCACCCTATCC) (서열 41) 및 정방향 (CAGCGAGCGGTGTCTGT) (서열 42) 프라이머, 및 형광 프로브 (CCAGCCCGGGATTT) (서열 43)가 M1' 택맨(TaqMan)에 의해 M1' mRNA를 증폭시키기 위해 사용된다. M1' 발현 B 세포는 또한 인간 말초 혈액에서 유동 세포측정법에 의해 검출될 수 있다. 간략하게, B 세포는 로제트셉(RossetteSep) 키트를 사용하여 대략 40-50 ml의 전혈로부터 풍부화된다. 풍부화 B 세포는 후속으로 기억 B 세포 및 M1'의 표면 마커에 대해 염색된다.

당업계에 공지되어 있는 방법 (예컨대, ELISA)이 혈청 총 IgE 및 알레르겐-특이적 IgE의 수준을 측정하는데 사용될 수 있다. 총 IgE 및 알레르겐 특이적 IgE에 대한 표준 임상적 검정은 지멘스 이뮬라이트(Siemens Immulite) 2000 검정 (지멘스 메디칼 솔루션즈 다이아그노스틱스(Siemens Medical Solutions Diagnostics), 캘리포니아주 로스앤젤레스) 및 파디아 이뮤노캡(Phadia ImmunoCAP) 검정 (파디아 인크.(Phadia Inc.))이다. 문헌 [Li, et al., Ann Clin Lab Sci., 34(1):67-74 (2004) 및 Libeer, et al., Clin Chem Lab Med., 45(3):413-415]을 참조한다.

항-IgE 항체에 의해 유도된 IgE-발현 B 세포에서 칼슘 플럭스를 측정하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 8,071,097, 실시예 7을 참조한다.

일부 실시양태에서, 항-IgE 항체는 도 14에 나타낸 인간 IgE, 레서스 IgE 및/또는 시노 IgE의 M1' 절편 내의 임의의 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항체는 47H4, 7A6, 26A11, 47H4v1, 47H4v2, 47H4v3, 47H4v4, 47H4v5, 47H4v6, 7A6v1, 및 26A11v6으로 이루어진 군으로부터 선택된 항체에 의해 결합된 것과 동일한 에피토프에 특이적으로 결합된다. 이들 항체는 미국 특허 번호 8,071,097에 기재되어 있다. 이들 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 아미노산 서열은 도 15a-15f에 나타내었다. 일부 실시양태에서, 항체는 SAQSQRAPDRVLCHS (서열 4), RAPDRVLCHSGQQQG (서열 5), GQQQGLPRAAGGSVP (서열 6) 또는 PRAAGGSVPHPRCH (서열 7)로 이루어진 군으로부터 선택된 펩티드에 상응하는 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항체는 항원-결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 항체는 인간화 항체, 인간 항체 또는 키메라 항체이다. 일부 실시양태에서, 항체는 비-푸코실화 항체이다.

일부 실시양태에서, 항-IgE 항체는 도 15a-15f에 나타낸 항체의 중쇄 및 경쇄 HVR (예컨대, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 HVR)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-IgE 항체는 도 15a-15c에 나타낸 항체의 경쇄의 HVR1, HVR2 및 HVR3 (예컨대, 3개의 카바트 CDR, 코티아 CDR, 또는 접촉 CDR)을 포함하는 경쇄 및/또는 도 15d-15f에 나타낸 항체의 중쇄의 HVR1, HVR2 및 HVR3 (예컨대, 3개의 카바트 CDR, 코티아 CDR, 또는 접촉 CDR)을 포함하는 중쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 도 15a-15f에 나타낸 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 항체 47H4v5의 중쇄 및 경쇄 HVR을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 항체 47H4v5의 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 26A11 v1-16, 7A6v1 및 47H4v1-6으로 이루어진 군으로부터 선택된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항체는 비-푸코실화 항체이다.

일부 실시양태에서, 항체는 항체 47H4v5 또는 그의 항원-결합 단편이다. 항체 47H4v5 (MEMP1972A)는 서열 39의 중쇄 아미노산 서열 및 서열 40의 경쇄 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항체는 비-푸코실화 항체이다.

47H4v5 중쇄

47H4v5 경쇄

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-IgE 항체는 뮤린 항-IgE 항체 47H4 또는 그의 인간화 변이체 (예컨대, 47H4v1-6)의 것과 동등한 인간 IgE에 대한 스캐차드 결합 친화도를 갖는 인간 IgE의 M1' 절편에 결합한다. 스캐차드 결합 친화도는 미국 특허 번호 8,071,097의 실시예 2A에 기재된 바와 같이 측정된다. 일부 실시양태에서, 친화도는 47H4의 결합 친화도와 동등하다. 일부 실시양태에서, 친화도는 0.30 내지 0.83 nM이다. 또 다른 특정 측면에서, 친화도는 47H4v5의 결합 친화도와 동등하다. 추가의 특정 측면에서, 친화도는 약 1.5 nM이다.

B. 항체 제조

본 발명에 유용한 항체는 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 항체 단편 (예를 들어, Fab, Fab'-SH, Fv, scFv, 및 F(ab')₂), 키메라 항체, 이중특이적 항체, 다가 항체, 이종접합체 항체, 항체 일부를 포함하는 융합 단백질, 인간화 항체, 및 필요한 특이성의 항원 인식 부위를 포함하는 임의의 다른 변형된 형태의 이뮤노글로불린 분자 (항체의 글리코실화 변이체, 항체의 아미노산 서열 변이체, 및 공유 변형된 항체 포함)를 포괄할 수 있다. 항체는 뮤린, 래트, 인간, 또는 임의의 다른 기원일 수 있다 (키메라 또는 인간화 항체 포함).

1) 폴리클로날 항체

폴리클로날 항체는 일반적으로 관련 항원 및 아주반트의 다수의 피하 (sc) 또는 복강내 (ip) 주사에 의해 동물에서 생성된다. 이기능성 작용제 또는 유도체화제, 예를 들어 말레이미도벤조일 술포숙신이미드 에스테르 (시스테인 잔기를 통한 접합), N-히드록시숙신이미드 (리신 잔기를 통한), 글루타르알데히드, 숙신산 무수물, SOCl₂, 또는 R¹N=C=NR (여기서, R 및 R¹은 독립적으로 저급 알킬기임)을 사용하여, 면역화되는 종에 면역원성인 단백질, 예를 들어 키홀 림펫 헤모시아닌 (KLH), 혈청 알부민, 소 티로글로불린 또는 대두 트립신 억제제에 관련 항원을 접합시키는 것이 유용할 수 있다. 사용될 수 있는 아주반트의 예는 프로인트 완전 아주반트 및 MPL-TDM 아주반트 (모노포스포릴 지질 A, 합성 트레할로스 디코리노미콜레이트)를 포함한다. 면역화 프로토콜은 과도한 실험 없이 당업자에 의해 선택될 수 있다.

동물은, 예를 들어 100 μg 또는 5 μg의 단백질 또는 접합체 (각각 토끼 또는 마우스에 대해)를 3 부피의 프로인트 완전 아주반트와 합하고 용액을 다중 부위에 피내로 주사함으로써 항원, 면역원성 접합체, 또는 유도체에 대해 면역화된다. 1개월 후, 프로인트 완전 아주반트 내의 펩티드 또는 접합체의 최초 양의 1/5 내지 1/10을 다중 부위에 피하 주사함으로써 상기 동물을 부스팅한다. 7 내지 14일 후, 동물에서 채혈하여 혈청을 항체 역가에 대해 검정한다. 역가가 정체기에 도달할 때까지 동물을 부스팅한다. 접합체는 또한 재조합 세포 배양에서 단백질 융합체로서 제조될 수 있다. 또한, 응집제, 예컨대 명반이 면역 반응을 증진시키는데 적합하다.

2) 모노클로날 항체

모노클로날 항체는 실질적으로 동종 항체 집단으로부터 수득하며, 즉 상기 집단을 구성하는 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는, 가능한 자연 발생 돌연변이 및/또는 번역후 변형 (예를 들어, 이성질체화, 아미드화)을 제외하고는 동일하다. 따라서, 수식어 "모노클로날"은 개별 항체의 혼합물이 아닌 것으로서의 항체의 특징을 나타낸다.

예를 들어, 모노클로날 항체는 문헌 [Kohler et al., Nature, 256:495 (1975)]에 처음 기재된 하이브리도마 방법을 사용하여 제조할 수 있거나, 또는 재조합 DNA 방법 (미국 특허 번호 4,816,567)에 의해 제조할 수 있다.

하이브리도마 방법에서, 마우스 또는 다른 적절한 숙주 동물, 예를 들어 햄스터는 면역화에 사용된 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 생산하거나 생산할 수 있는 림프구를 유발하기 위해 상기 기재된 바와 같이 면역화된다. 대안적으로, 림프구를 시험관내에서 면역화시킬 수 있다. 이어서, 림프구는 하이브리도마 세포를 형성하기 위해 적합한 융제, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜을 사용하여 골수종 세포와 융합된다 (문헌 [Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp.59-103 (Academic Press, 1986)]).

면역화제는 전형적으로 항원성 단백질 또는 그의 융합체 변이체를 포함할 것이다. 일반적으로, 인간 기원의 세포가 요망될 경우 말초 혈액 림프구 ("PBL")가 사용되거나, 또는 비-인간 포유동물원이 요망될 경우 비장 세포 또는 림프절 세포가 사용된다. 이어서, 림프구는 적합한 융제, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜을 사용하여 불멸화 세포주와 융합되어 하이브리도마 세포를 형성한다. 문헌 [Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press (1986), pp. 59-103].

불멸화 세포주는 통상적으로 형질전환된 포유동물 세포, 특히 설치류, 소 및 인간 기원의 골수종 세포이다. 통상적으로, 래트 또는 마우스 골수종 세포주가 사용된다. 이와 같이 제조된 하이브리도마 세포를, 바람직하게는 융합되지 않은 모 골수종 세포의 성장 또는 생존을 억제하는 하나 이상의 물질을 함유하는 적합한 배양 배지에 시딩하여 성장시킨다. 예를 들어, 모 골수종 세포에 효소 히포크산틴 구아닌 포스포리보실 트랜스퍼라제 (HGPRT 또는 HPRT)가 결핍된 경우, 하이브리도마에 대한 배양 배지는 전형적으로 HGPRT-결핍 세포의 성장을 방지하는 물질인 히포크산틴, 아미노프테린 및 티미딘 (HAT 배지)을 포함할 것이다.

바람직한 불멸화 골수종 세포는, 효율적으로 융합하고 선택된 항체-생산 세포에 의한 항체의 안정한 고수준 생산을 지지하고 배지, 예컨대 HAT 배지에 민감한 세포이다. 이들 중, 뮤린 골수종 세포주, 예컨대 솔크 인스티튜트 셀 디스트리뷰션 센터(Salk Institute Cell Distribution Center, 미국 캘리포니아주 샌디에고)로부터 입수가능한 MOPC-21 및 MPC-11 마우스 종양으로부터 유래된 것들, 및 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection, 미국 버지니아주 마나사스)으로부터 입수가능한 SP-2 세포 (및 그의 유도체, 예를 들어 X63-Ag8-653)가 바람직하다. 인간 골수종 및 마우스-인간 이종골수종 세포주는 또한 인간 모노클로날 항체의 생산에 대해 기재된 바 있다 (문헌 [Kozbor, J. Immunol., 133:3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)]).

하이브리도마 세포가 성장하는 배양 배지를 항원에 대해 지시된 모노클로날 항체의 생산에 대해 검정한다. 바람직하게는, 하이브리도마 세포에 의해 생산된 모노클로날 항체의 결합 특이성을 면역침전에 의해 또는 시험관내 결합 검정, 예컨대 방사성면역검정 (RIA) 또는 효소-연결된 면역흡착 검정 (ELISA)에 의해 결정한다.

하이브리도마 세포가 배양되는 배양 배지는 목적 항원에 대해 지시된 모노클로날 항체의 존재에 대해 검정될 수 있다. 바람직하게는, 모노클로날 항체의 결합 친화도 및 특이성은 면역침전 또는 시험관내 결합 검정, 예컨대 방사성면역검정 (RIA) 또는 효소-연결된 면역흡착 검정 (ELISA)에 의해 결정될 수 있다. 상기 기술 및 검정은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 결합 친화도는 문헌 [Munson et al., Anal. Biochem., 107:220 (1980)]의 스캐차드 분석에 의해 결정될 수 있다.

목적 특이성, 친화도 및/또는 활성의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포가 확인된 후에, 클론을 한계 희석 절차에 의해 서브클로닝하고 표준 방법 (상기 문헌 [Goding])에 의해 성장시킬 수 있다. 이러한 목적에 적합한 배양 배지는 예를 들어 D-MEM 또는 RPMI-1640 배지를 포함한다. 또한, 하이브리도마 세포를 포유동물에서 종양으로서 생체 내에서 성장시킬 수 있다.

서브클론에 의해 분비된 모노클로날 항체는 통상적인 이뮤노글로불린 정제 절차, 예컨대 예를 들어, 단백질 A-세파로스, 히드록실아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석, 또는 친화성 크로마토그래피에 의해 배양 배지, 복수액 또는 혈청으로부터 적합하게 분리된다.

모노클로날 항체는 또한 재조합 DNA 방법, 예컨대 미국 특허 번호 4,816,567에 기재된 방법, 및 상기 기재된 것과 같은 방법에 의해 제조될 수 있다. 모노클로날 항체를 코딩하는 DNA는 통상의 절차 (예를 들어, 뮤린 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브 사용)를 사용하여 용이하게 단리 및 서열분석된다. 하이브리도마 세포는 이러한 DNA의 바람직한 공급원으로 제공된다. 단리되고 나면 DNA는 발현 벡터 내로 위치되고, 이어서 이는 재조합 숙주 세포에서 모노클로날 항체를 합성하기 위해, 달리 이뮤노글로불린 단백질을 생산하지 않는 숙주 세포, 예컨대 이. 콜라이(E. coli) 세포, 원숭이 COS 세포, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포 또는 골수종 세포 내로 형질감염된다. 항체를 코딩하는 DNA의 박테리아에서의 재조합 발현에 대한 종설 논문은 문헌 [Skerra et al., Curr. Opinion in Immunol., 5:256-262 (1993) 및 Plueckthun, Immunol. Revs. 130:151-188 (1992)]을 포함한다.

추가의 실시양태에서, 항체는 문헌 [McCafferty et al., Nature, 348:552-554 (1990)]에 기재된 기술을 사용하여 생성된 항체 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 문헌 [Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991) 및 Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991)]에는 파지 라이브러리를 사용하여 뮤린 및 인간 항체를 각각 단리하는 것이 기재되어 있다. 후속 간행물들에는 쇄 셔플링에 의한 고친화도 (nM 범위) 인간 항체의 생산 (문헌 [Marks et al., Bio/Technology, 10:779-783 (1992)]), 뿐만 아니라 매우 큰 파지 라이브러리를 구축하기 위한 전략으로서의 조합 감염 및 생체내 재조합 (문헌 [Waterhouse et al., Nucl. Acids　Res., 21:2265-2266 (1993)])이 기재되어 있다. 따라서, 이러한 기술은 모노클로날 항체의 단리를 위한 전통적인 모노클로날 항체 하이브리도마 기술에 대한 실행가능한 대안이다.

DNA는 또한, 예를 들어 상동성 뮤린 서열 대신에 인간 중쇄 및 경쇄 불변 도메인에 대한 코딩 서열을 치환시키거나 (미국 특허 번호 4,816,567; 문헌 [Morrison, et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 81:6851 (1984)]), 이뮤노글로불린 코딩 서열을 비-이뮤노글로불린 폴리펩티드에 대한 코딩 서열의 전부 또는 일부와 공유 연결함으로써 변형될 수 있다. 전형적으로, 이러한 비-이뮤노글로불린 폴리펩티드는 항체의 불변 도메인에 대해 치환되거나, 또는 이들은 항체의 하나의 항원-결합 부위의 가변 도메인에 대해 치환되어, 항원에 대한 특이성을 갖는 하나의 항원-결합 부위 및 상이한 항원에 대한 특이성을 갖는 또 다른 항원-결합 부위를 포함하는 키메라 2가 항체를 생성한다.

본원에 기재된 모노클로날 항체는 1가 항체일 수 있고, 그의 제조는 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 한 방법은 이뮤노글로불린 경쇄 및 변형된 중쇄의 재조합 발현을 수반한다. 중쇄는 중쇄 가교를 방지하도록 일반적으로 Fc 영역 내의 임의의 지점에서 말단절단된다. 대안적으로, 관련 시스테인 잔기는 또 다른 아미노산 잔기로 치환될 수 있거나, 또는 결실되어 가교를 방지한다. 시험관내 방법이 또한 1가 항체를 제조하는데 적합하다. 그의 단편, 특히 Fab 단편을 생산하기 위한 항체의 소화는 당업계에 공지된 상용 기술을 사용하여 달성될 수 있다.

또한, 키메라 또는 하이브리드 항체는 가교제의 사용을 수반하는 합성 단백질 화학에 공지된 방법을 사용하여 시험관내에서 제조될 수 있다. 예를 들어, 면역독소는 디술피드-교환 반응을 사용하여 또는 티오에테르 결합을 형성하여 구축될 수 있다. 상기 목적에 적합한 시약의 예는 이미노티올레이트 및 메틸-4-메르캅토부티르이미데이트를 포함한다.

3) 인간화 항체.

본 발명의 항체는 인간화 또는 인간 항체를 추가로 포함할 수 있다. 비-인간 (예를 들어, 뮤린) 항체의 인간화 형태는 비-인간 이뮤노글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 이뮤노글로불린, 이뮤노글로불린 쇄 또는 그의 단편 (예컨대, Fv, Fab, Fab', F(ab')₂ 또는 항체의 다른 항원-결합 하위서열)이다. 인간화 항체는 수용자의 상보성 결정 영역 (CDR)으로부터의 잔기들이 목적 특이성, 친화도 및 능력을 갖는 비-인간 종 (공여자 항체) 예컨대 마우스, 래트 또는 토끼의 CDR로부터의 잔기들에 의해 대체된 인간 이뮤노글로불린 (수용자 항체)을 포함한다. 일부 경우에, 인간 이뮤노글로불린의 Fv 프레임워크 잔기는 상응하는 비-인간 잔기에 의해 대체된다. 또한, 인간화 항체는 수용자 항체 또는 유입된 CDR 또는 프레임워크 서열 어느 것에서도 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 일반적으로, 인간화 항체는 적어도 1개, 전형적으로 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이고, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 영역은 비-인간 이뮤노글로불린의 것들에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역은 인간 이뮤노글로불린 컨센서스 서열의 것들에 상응한다. 또한, 인간화 항체는 이뮤노글로불린 불변 영역 (Fc)의 적어도 일부, 전형적으로 인간 이뮤노글로불린의 것을 최적으로 포함할 것이다. 문헌 [Jones et al., Nature 321: 522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332: 323-329 (1988) 및 Presta, Curr. Opin. Struct. Biol. 2: 593-596 (1992)].

비-인간 항체를 인간화하는 방법은 당업계에 널리 공지되어 있다. 일반적으로, 인간화 항체는 비-인간 공급원으로부터 도입된 1개 이상의 아미노산 잔기를 갖는다. 이들 비-인간 아미노산 잔기는 종종 "유입" 잔기라 지칭되고, 전형적으로 "유입" 가변 도메인으로부터의 것이다. 인간화는 본질적으로 윈터(Winter) 및 동료들의 방법 (문헌 [Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science 239:1534-1536 (1988)])을 따라 또는 인간 항체의 상응하는 서열을 설치류 CDR 또는 CDR 서열로 치환함으로써 수행될 수 있다. 따라서, 이러한 "인간화" 항체는 무손상 인간 가변 도메인보다 실질적으로 더 적은 서열이 비-인간 종으로부터의 상응하는 서열에 의해 치환된 키메라 항체 (미국 특허 번호 4,816,567)이다. 실제로, 인간화 항체는 전형적으로 일부 CDR 잔기 및 가능하게는 일부 FR 잔기가 설치류 항체의 유사한 부위로부터의 잔기에 의해 치환된 인간 항체이다.

인간화 항체의 제조에 사용될 인간 가변 도메인 경쇄 및 중쇄 둘 다의 선택은 항원성 감소에 매우 중요하다. 이른바 "최적-적합" 방법에 따라, 설치류 항체의 가변 도메인 서열을 공지된 인간 가변-도메인 서열의 전체 라이브러리에 대해 스크리닝한다. 설치류의 것과 가장 근접한 인간 서열은 이어서 인간화 항체에 대한 인간 프레임워크 (FR)로서 허용된다. 문헌 [Sims et al., J. Immunol., 151:2296 (1993); Chothia et al., J. Mol. Biol., 196:901 (1987)]. 또 다른 방법은 경쇄 또는 중쇄의 특정한 하위군의 모든 인간 항체의 컨센서스 서열로부터 유래된 특정한 프레임워크를 사용한다. 동일한 프레임워크가 여러 상이한 인간화 항체에 대해 사용될 수 있다. 문헌 [Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); Presta et al., J. Immunol., 151: 2623 (1993)].

또한, 항체가 항원에 대한 높은 친화도 및 다른 유리한 생물학적 특성을 보유하도록 인간화하는 것이 중요하다. 이러한 목적을 달성하기 위해, 바람직한 방법에 따라, 인간화 항체는 모 서열 및 인간화 서열의 3차원 모델을 사용하는 모 서열 및 다양한 개념적 인간화 생성물의 분석 과정에 의해 제조된다. 3차원 이뮤노글로불린 모델은 통상적으로 이용가능하고, 당업자에게 익숙하다. 선택된 후보 이뮤노글로불린 서열의 가능한 3차원 입체형태적 구조를 예시하고 디스플레이하는 컴퓨터 프로그램이 이용가능하다. 이들 디스플레이를 조사하면 후보 이뮤노글로불린 서열의 기능에 있어서 잔기의 가능한 역할의 분석, 즉 후보 이뮤노글로불린이 그의 항원에 결합하는 능력에 영향을 미치는 잔기의 분석이 가능하다. 이러한 방식으로, FR 잔기는 수용자 서열 및 유입 서열로부터 선택 및 조합되어 모적 항체 특성, 예컨대 표적 항원(들)에 대한 친화도 증가를 달성할 수 있다. 일반적으로, CDR 잔기가 항원 결합에 영향을 미치는데 직접적으로, 및 가장 실질적으로 관련된다.

인간화 항체의 다양한 형태가 고려된다. 예를 들어, 인간화 항체는 면역접합체를 생성시키기 위해서 하나 이상의 세포독성제(들)와 임의로 접합된 항체 단편, 예컨대 Fab일 수 있다. 대안적으로, 인간화 항체는 무손상 항체, 예컨대 무손상 IgG1 항체일 수 있다.

4) 인간 항체

인간화에 대한 대안으로서 인간 항체를 생성할 수 있다. 예를 들어, 면역화시, 내인성 이뮤노글로불린 생산의 부재 하에 인간 항체의 전체 레퍼토리를 생산할 수 있는 트랜스제닉 동물 (예를 들어, 마우스)을 생산하는 것이 현재 가능하다. 예를 들어, 키메라 및 배선 돌연변이체 마우스에서 항체 중쇄 연결 영역 (J_H) 유전자를 동형접합 결실시키면 내인성 항체 생산이 완전히 억제된다는 것이 기재된 바 있다. 인간 배선 이뮤노글로불린 유전자 어레이를 이러한 배선 돌연변이체 마우스에게 전달하면, 항원 접종시에 인간 항체가 생산될 것이다. 예를 들어, 문헌 [Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:2551 (1993); Jakobovits et al., Nature, 362:255-258 (1993); Bruggermann et al., Year in Immuno., 7:33 (1993)]; 미국 특허 번호 5,591,669 및 WO 97/17852를 참조한다.

대안적으로, 파지 디스플레이 기술을 사용하여 면역화되지 않은 공여자로부터의 이뮤노글로불린 가변 (V) 도메인 유전자 레퍼토리로부터 인간 항체 및 항체 단편을 시험관내 생산할 수 있다. 문헌 [McCafferty et al., Nature 348:552-553 (1990); Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol. 227: 381 (1991)]. 상기 기술에 따라, 항체 V 도메인 유전자를 필라멘트형 박테리오파지, 예컨대 M13 또는 fd의 주요 또는 소수의 코트 단백질 유전자 내로 인-프레임으로 클로닝하고, 파지 입자의 표면 상에 기능적 항체 단편으로서 디스플레이한다. 필라멘트형 입자는 파지 게놈의 단일-가닥 DNA 카피를 함유하기 때문에, 항체의 기능적 특성을 기초로 한 선택은 또한 이들 특성을 나타내는 항체를 코딩하는 유전자의 선택을 일으킨다. 따라서, 파지는 B-세포의 특성의 일부를 모방한다. 파지 디스플레이는 예를 들어 문헌 [Johnson, Kevin S. and Chiswell, David J., Curr. Opin Struct. Biol. 3:564-571 (1993)]에서 검토된 다양한 포맷으로 수행될 수 있다. V-유전자 절편의 여러 공급원이 파지 디스플레이에 사용될 수 있다. 문헌 [Clackson et al., Nature 352:624-628 (1991)]에서는 면역화된 마우스의 비장으로부터 유래된 V 유전자의 소형 무작위 조합 라이브러리로부터 항-옥사졸론 항체의 다양한 어레이가 단리되었다. 본질적으로 문헌 [Marks et al., J. Mol. Biol. 222:581-597 (1991), 또는 Griffith et al., EMBO J. 12:725-734 (1993)]에 기재된 기술에 따라, 면역화되지 않은 인간 공여자로부터의 V 유전자의 레퍼토리가 구축될 수 있고, 다양한 어레이의 항원 (자기-항원 포함)에 대한 항체가 단리될 수 있다. 또한 미국 특허 번호 5,565,332 및 5,573,905를 참조한다.

콜(Cole) 등 및 뵈르너(Boerner) 등의 기술이 또한 인간 모노클로날 항체의 제조에 이용가능하다 (문헌 [Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985) 및 Boerner et al., J. Immunol. 147(1):86 (1991)]). 유사하게, 인간 항체는 트랜스제닉 동물, 예를 들어 내인성 이뮤노글로불린 유전자가 부분적으로 또는 완전히 불활성화된 마우스에 인간 이뮤노글로불린 유전자좌를 도입하여 제조할 수 있다. 접종시에, 인간 항체 생산이 관찰되고, 이는 유전자 재배열, 어셈블리 및 항체 레퍼토리를 포함하여 모든 면에서 인간에서 관찰되는 것과 매우 유사하다. 이러한 접근법은, 예를 들어 미국 특허 번호 5,545,807; 5,545,806, 5,569,825, 5,625,126, 5,633,425, 5,661,016 및 하기 과학 간행물: 문헌 [Marks et al., Bio/Technology 10: 779-783 (1992); Lonberg et al., Nature 368: 856-859 (1994); Morrison, Nature 368: 812-13 (1994), Fishwild et al., Nature Biotechnology 14: 845-51 (1996), Neuberger, Nature Biotechnology 14: 826 (1996) 및 Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93 (1995)]에 기재되어 있다.

최종적으로, 인간 항체는 또한 시험관 내에서 활성화된 B 세포에 의해 생성될 수 있다 (미국 특허 번호 5,567,610 및 5,229,275 참조).

5) 항체 단편

특정 상황에서는, 전체 항체보다 항체 단편을 사용하는 것이 유리하다. 보다 작은 단편 크기는 신속한 클리어런스를 가능하게 하고, 고형 종양에 대한 접근성을 개선시킬 수 있다.

항체 단편 생산을 위한 다양한 기술이 개발되었다. 전통적으로, 이들 단편은 무손상 항체의 단백질분해적 소화를 통해 유도되었다 (예를 들어, 문헌 [Morimoto et al., J Biochem Biophys. Method. 24:107-117 (1992); 및 Brennan et al., Science, 229:81 (1985)] 참조). 그러나, 현재 이러한 단편이 재조합 숙주 세포에 의해 직접 생산될 수 있다. Fab, Fv 및 scFv 항체 단편은 모두가 이. 콜라이에서 발현되어 분비될 수 있고, 따라서 다량의 이들 단편을 용이하게 생산할 수 있다. 항체 단편은 상기 논의된 항체 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 대안적으로, Fab'-SH 단편은 이. 콜라이로부터 직접 회수되고 화학적으로 커플링되어 F(ab')₂ 단편을 형성할 수 있다 (문헌 [Carter et al., Bio/Technology 10:163-167 (1992)]). 또 다른 접근법에 따라, F(ab')₂ 단편은 재조합 숙주 세포 배양물로부터 직접 단리될 수 있다. 생체내 반감기가 증가된 Fab 및 F(ab')₂는 미국 특허 번호 5,869,046에 기재되어 있다. 다른 실시양태에서, 선택된 항체는 단일 쇄 Fv 단편 (scFv)이다. WO 93/16185; 미국 특허 번호 5,571,894 및 미국 특허 번호 5,587,458을 참조한다. 항체 단편은 또한 예를 들어 미국 특허 번호 5,641,870에 기재된 바와 같은 "선형 항체"일 수 있다. 이러한 선형 항체 단편은 단일특이적 또는 이중특이적일 수 있다.

6) 항체 의존성 효소-매개 전구약물 요법 (ADEPT)

본 발명의 항체는 또한 전구약물 (예를 들어, 펩티딜 화학요법제, WO 81/01145 참조)을 활성 항암 약물로 전환시키는 전구약물-활성화 효소에 항체를 접합시켜서 ADEPT에서 사용될 수 있다. 예를 들어, WO 88/07378 및 미국 특허 번호 4,975,278을 참조한다.

ADEPT에 유용한 면역접합체의 효소 성분은 전구약물을 그의 보다 활성인 세포독성 형태로 전환시키는 방식으로 전구약물에 작용할 수 있는 임의의 효소를 포함한다.

본 발명의 방법에 유용한 효소는 글리코시다제, 글루코스 옥시다제, 인간 리소자임, 인간 글루쿠로니다제, 포스페이트-함유 전구약물을 유리 약물로 전환시키는데 유용한 알칼리성 포스파타제; 술페이트-함유 전구약물을 유리 약물로 전환시키는데 유용한 아릴술파타제; 비독성 5-플루오로시토신을 항암 약물인 5-플루오로우라실로 전환시키는데 유용한 시토신 데아미나제; 펩티드-함유 전구약물을 유리 약물로 전환시키는데 유용한 프로테아제, 예컨대 세라티아 프로테아제, 테르몰리신, 섭틸리신, 카르복시펩티다제 (예를 들어, 카르복시펩티다제 G2 및 카르복시펩티다제 A) 및 카텝신 (예를 들어, 카텝신 B 및 L); D-아미노산 치환기를 함유하는 전구약물을 전환시키는데 유용한 D-알라닐카르복시펩티다제; 글리코실화된 전구약물을 유리 약물로 전환시키는데 유용한 탄수화물-절단 효소, 예컨대 β-갈락토시다제 및 뉴라미니다제; β-락탐으로 유도체화된 약물을 유리 약물로 전환시키는데 유용한 β-락타마제; 및 아민 질소에서 각각 페녹시아세틸 기 또는 페닐아세틸 기로 유도체화된 약물을 유리 약물로 전환시키는데 유용한 페니실린 아미다제, 예컨대 페니실린 V 아미다제 또는 페니실린 G 아미다제를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 대안적으로, 효소 활성을 갖는 항체 (당업계에 "아브자임"으로도 공지됨)가 본 발명의 전구약물을 유리 활성 약물로 전환시키기 위해 사용될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Massey, Nature 328: 457-458 (1987)] 참조). 항체-아브자임 접합체는 종양 세포 집단에 아브자임을 전달하기 위해 본원에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다.

상기 효소는 당업계에 널리 공지된 기술에 의해, 예컨대 상기 논의된 이종이관능성 가교제를 사용하여 본원에 기재된 폴리펩티드 또는 항체에 공유 결합될 수 있다. 대안적으로, 적어도 본 발명의 효소의 기능적 활성 부분에 연결된 본 발명의 항체의 항원 결합 영역을 적어도 포함하는 융합 단백질은 당업계에 널리 공지된 재조합 DNA 기술을 사용하여 구축할 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Neuberger et al., Nature 312: 604-608 (1984)] 참조).

7) 이중특이적 및 다중특이적 항체

이중특이적 항체 (BsAb)는 동일한 또는 또 다른 단백질 상의 에피토프를 포함하여 적어도 2개의 상이한 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 항체이다. 대안적으로, 한 아암은 표적 항원에 결합하도록 아밍될 수 있고, 또 다른 아암은 세포 방어 메카니즘이 표적 항원-발현 세포에 집중되고 국재화되도록 백혈구 상의 유발 분자, 예컨대 T-세포 수용체 분자 (예를 들어, CD3), 또는 IgG에 대한 Fc 수용체 (FcγR), 예컨대 FcγRI (CD64), FcγRII (CD32) 및 FcγRIII (CD16)에 결합하는 아암과 조합될 수 있다. 상기 항체는 전장 항체 또는 항체 단편 (예를 들어, F(ab')₂ 이중특이적 항체)으로부터 유래될 수 있다.

이중특이적 항체는 또한 세포독성제를 표적 항원을 발현하는 세포에 국재화시키기 위해 사용될 수 있다. 이러한 항체는 목적 항원에 결합하는 하나의 아암 및 세포독성제 (예를 들어, 사포린, 항-인터페론-a, 빈카 알칼로이드, 리신 A 쇄, 메토트렉세이트 또는 방사성 동위원소 합텐)에 결합하는 또 다른 아암을 보유한다. 공지된 이중특이적 항체의 예는 항-ErbB2/항-FcgRIII (WO 96/16673), 항-ErbB2/항-FcgRI (U.S.P. 5,837,234), 항-ErbB2/항-CD3 (U.S.P. 5,821,337)을 포함한다.

이중특이적 항체의 제조 방법은 당업계에 공지되어 있다. 전장 이중특이적 항체의 전통적인 제조는 2개의 이뮤노글로불린 중쇄/경쇄 쌍의 공발현에 기초하고, 여기서 2개의 쇄는 상이한 특이성을 갖는다. 문헌 [Millstein et al., Nature, 305:537-539 (1983)]. 이뮤노글로불린 중쇄 및 경쇄의 무작위 분류로 인해, 이들 하이브리도마 (쿼드로마)는 10가지 상이한 항체 분자들의 잠재적 혼합물을 생산하며, 이 중에서 오직 하나만이 정확한 이중특이적 구조를 갖는다. 통상적으로 친화성 크로마토그래피 단계에 의해 이루어지는 정확한 분자의 정제는 다소 번거롭고, 생성물 수율이 낮다. 유사한 절차가 WO93/08829 및 문헌 [Traunecker et al., EMBO J., 10:3655-3659 (1991)]에 개시되어 있다.

다른 접근법에 따르면, 목적 결합 특이성 (항체-항원 결합 부위)을 갖는 항체 가변 도메인이 이뮤노글로불린 불변 도메인 서열에 융합된다. 바람직하게는, 융합은 힌지의 적어도 일부, CH2 및 CH3 영역을 포함하는 이뮤노글로불린 중쇄 불변 도메인에 의한다. 융합체 중 적어도 하나에 존재하는, 경쇄 결합에 필요한 부위를 함유하는 제1 중쇄 불변 영역 (CH1)을 갖는 것이 바람직하다. 이뮤노글로불린 중쇄 융합체 및 원하는 경우에 이뮤노글로불린 경쇄를 코딩하는 DNA를 개별 발현 벡터 내로 삽입하고, 적합한 숙주 유기체 내로 공동-형질감염시킨다. 이는 구축에 사용된 3종의 폴리펩티드 쇄의 동일하지 않은 비가 최적의 수율을 제공하는 실시양태에서 상기 3종의 폴리펩티드 단편의 상호 비율을 조정하는데 있어서 큰 유연성을 제공한다. 그러나, 동일한 비의 적어도 2종의 폴리펩티드 쇄의 발현으로 높은 수율이 수득되는 경우에, 또는 비가 특정한 유의성을 갖지 않는 경우에, 2종 또는 모든 3종의 폴리펩티드 쇄에 대한 코딩 서열을 1개의 발현 벡터에 삽입할 수 있다.

이러한 접근법의 바람직한 실시양태에서, 이중특이적 항체는 한 아암의 제1 결합 특이성을 갖는 하이브리드 이뮤노글로불린 중쇄, 및 다른 아암의 하이브리드 이뮤노글로불린 중쇄-경쇄 쌍 (제2 결합 특이성을 제공함)으로 구성된다. 이중특이적 분자의 한쪽 절반에만 이뮤노글로불린 경쇄가 존재하는 것이 용이한 분리 방법을 제공하므로, 상기 비대칭 구조는 원치 않는 이뮤노글로불린 쇄 조합물로부터의 목적 이중특이적 화합물의 분리를 용이하게 하는 것으로 밝혀졌다. 이러한 접근법은 WO 94/04690에 개시되어 있다. 이중특이적 항체를 생성하는 것에 관한 추가의 상세한 내용을 위해, 예를 들어 문헌 [Suresh et al., Methods in Enzymology 121:210 (1986)]을 참조한다.

WO 96/27011 또는 U.S.P. 5,731,168에 기재된 또 다른 방법에 따르면, 한 쌍의 항체 분자들 사이의 계면은 재조합 세포 배양물로부터 회수되는 이종이량체의 백분율을 최대화하도록 조작될 수 있다. 바람직한 계면은 항체 불변 도메인의 CH3 영역의 적어도 일부를 포함한다. 이러한 방법에서, 제1 항체 분자의 계면으로부터의 1개 이상의 소형 아미노산 측쇄가 보다 대형의 측쇄 (예를 들어, 티로신 또는 트립토판)로 대체된다. 대형 아미노산 측쇄를 보다 소형의 것 (예를 들어, 알라닌 또는 트레오닌)으로 대체함으로써 대형 측쇄(들)에 대한 동일하거나 유사한 크기의 보상 "캐비티"가 제2 항체 분자의 계면 상에 생성된다. 이는 동종이량체와 같은 다른 원치 않는 최종-생성물에 비해 이종이량체의 수율을 증가시키는 메카니즘을 제공한다.

항체 단편으로부터 이중특이적 항체를 생성하는 기술은 문헌에 기재되어 있다. 예를 들어, 화학적 연결을 사용하여 이중특이적 항체를 제조할 수 있다. 문헌 [Brennan et al., Science 229: 81 (1985)]에는 무손상 항체를 단백질분해적으로 절단하여 F(ab')₂ 단편을 생성하는 절차가 기재되어 있다. 이들 단편을 디티올 착물화제인 아비산나트륨의 존재 하에 환원시켜, 이웃자리 디티올을 안정화시키고 분자간 디술피드 형성을 방지한다. 이어서 생성된 Fab' 단편을 티오니트로벤조에이트 (TNB) 유도체로 전환시킨다. 이어서 Fab'-TNB 유도체 중 하나는 Fab'-TNB 유도체로 재전환되어 이중특이적 항체를 형성한다. 생산된 이중특이적 항체를 효소의 선택적 고정화를 위한 작용제로서 사용할 수 있다.

Fab' 단편을 이. 콜라이로부터 직접 회수하고, 화학적으로 커플링시켜 이중특이적 항체를 형성할 수 있다. 문헌 [Shalaby et al., J. Exp. Med. 175: 217-225 (1992)]에는 완전히 인간화된 이중특이적 항체 F(ab')₂ 분자의 생산이 기재되어 있다. 각각의 Fab' 단편을 이. 콜라이로부터 개별적으로 분비시키고, 이중특이적 항체를 형성하도록 시험관 내에서 지시된 화학적 커플링 반응에 적용한다. 이와 같이 형성된 이중특이적 항체는 ErbB2 수용체를 과다발현하는 세포 및 정상 인간 T 세포에 결합할 수 있을 뿐만 아니라, 인간 유방 종양 표적에 대한 인간 세포독성 림프구의 용해 활성을 유발할 수 있었다.

2가 항체 단편을 재조합 세포 배양물로부터 직접 제조하고 단리하기 위한 다양한 기술이 또한 기재된 바 있다. 예를 들어, 2가 이종이량체가 류신 지퍼를 사용하여 생산되었다. 문헌 [Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992)]. Fos 및 Jun 단백질로부터의 류신 지퍼 펩티드가 2개의 상이한 항체의 Fab' 부분에 유전자 융합체에 의해 연결되었다. 항체 동종이량체는 힌지 영역에서 환원되어 단량체를 형성하고, 이어서 재산화되어 항체 이종이량체가 형성된다. 문헌 [Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 6444-6448 (1993)]에 기재된 "디아바디" 기술은 이중특이적/2가 항체 단편 제조를 위한 대안적 메카니즘을 제공하였다. 상기 단편은 동일 쇄 상의 2개의 도메인 사이의 쌍 형성을 허용하기에는 너무 짧은 링커에 의해 경쇄 가변 도메인 (V_L)에 연결된 중쇄 가변 도메인 (V_H)을 포함한다. 따라서, 한 단편의 V_H 및 V_L 도메인이 또 다른 단편의 상보적 V_L 및 V_H 도메인과 쌍을 형성하여, 2개의 항원-결합 부위가 형성된다. 단일-쇄 Fv (sFv) 이량체를 사용한 이중특이적/2가 항체 단편의 또 다른 제조 전략이 또한 보고된 바 있다. 문헌 [Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)]을 참조한다.

2가 초과의 원자가를 갖는 항체가 고려된다. 예를 들어, 삼중특이적 항체를 제조할 수 있다. 문헌 [Tutt et al., J. Immunol. 147: 60 (1991)].

예시적인 이중특이적 항체는 제시된 분자 상의 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있다. 대안적으로, 항-단백질 아암은 세포 방어 메카니즘이 특정한 단백질을 발현하는 세포에 집중되도록 백혈구 상의 유발 분자, 예컨대 T 세포 수용체 분자 (예를 들어, CD2, CD3, CD28 또는 B7), 또는 IgG에 대한 Fc 수용체 (FcγR), 예컨대 FcγRI (CD64), FcγRII (CD32) 및 FcγRIII (CD16)에 결합하는 아암과 조합될 수 있다. 이중특이적 항체는 또한 세포독성제를 표적 항원을 발현하는 세포에 국재화시키기 위해 사용될 수 있다. 이러한 항체는 단백질-결합 아암 및 세포독성제 또는 방사성핵종 킬레이트화제, 예컨대 EOTUBE, DPTA, DOTA 또는 TETA에 결합하는 아암을 보유한다. 또 다른 관심 이중특이적 항체가 관심 단백질에 결합하고, 조직 인자 (TF)에 추가로 결합한다.

8) 다가 항체

다가 항체는 항체가 결합하는 항원을 발현하는 세포에 의해 2가 항체보다 신속하게 내재화 (및/또는 이화)될 수 있다. 본 발명의 항체는 3개 이상의 항원 결합 부위를 갖는 (예를 들어, 4가 항체) 다가 항체 (IgM 클래스 이외의 것)일 수 있고, 이는 항체의 폴리펩티드 쇄를 코딩하는 핵산의 재조합 발현에 의해 용이하게 생성될 수 있다. 다가 항체는 이량체화 도메인 및 3개 이상의 항원 결합 부위를 포함할 수 있다. 바람직한 이량체화 도메인은 Fc 영역 또는 힌지 영역을 포함한다 (또는 이것으로 이루어진다). 이러한 시나리오에서, 항체는 Fc 영역, 및 Fc 영역에 대한 아미노 말단의 3개 이상의 항원 결합 부위를 포함할 것이다. 본원에서 바람직한 다가 항체는 3 내지 약 8개, 바람직하게는 4개의 항원 결합 부위를 포함한다 (또는 이것으로 이루어진다). 다가 항체는 1개 이상의 폴리펩티드 쇄 (바람직하게는 2개의 폴리펩티드 쇄)를 포함하고, 여기서 상기 폴리펩티드 쇄(들)는 2개 이상의 가변 도메인을 포함한다. 예를 들어 폴리펩티드 쇄(들)는 VD1-(X1)_n-VD2-(X2)_n-Fc (여기서, VD1은 제1 가변 도메인이고, VD2는 제2 가변 도메인이고, Fc는 Fc 영역의 1개의 폴리펩티드 쇄이고, X1 및 X2는 아미노산 또는 폴리펩티드를 나타내고, n은 0 또는 1임)를 포함할 수 있다. 예를 들어, 폴리펩티드 쇄(들)는 VH-CH1-가요성 링커-VH-CH1-Fc 영역 쇄; 또는 VH-CH1-VH-CH1-Fc 영역 쇄를 포함할 수 있다. 본원에서 다가 항체는 바람직하게는 적어도 2개 (바람직하게는 4개)의 경쇄 가변 도메인 폴리펩티드를 추가로 포함한다. 본원에서 다가 항체는 예를 들어 약 2 내지 약 8개의 경쇄 가변 도메인 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 본원에서 고려되는 경쇄 가변 도메인 폴리펩티드는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 임의로 CL 도메인을 추가로 포함한다.

9) 이종접합체 항체

이종접합체 항체가 또한 본 발명의 범주 내에 있다. 이종접합체 항체는 2개의 공유 연결된 항체로 구성된다. 예를 들어, 이종접합체 내의 항체 중 하나는 아비딘에 커플링되고, 다른 하나는 비오틴에 커플링될 수 있다. 이러한 항체는, 예를 들어 면역계 세포를 원치 않는 세포에 표적화시키기 위해 (U.S.P. 4,676,980), 및 HIV 감염의 치료를 위해 제안되었다. WO 91/00360, WO 92/200373 및 EP 0308936. 항체는 가교제를 사용하는 것을 포함하는, 합성 단백질 화학에 공지된 방법을 사용하여 시험관 내에서 제조될 수 있는 것으로 고려된다. 예를 들어, 디술피드 교환 반응을 사용하거나 티오에테르 결합을 형성하여 면역독소를 구축할 수 있다. 이러한 목적에 적합한 시약의 예는 이미노티올레이트 및 메틸-4-메르캅토부티르이미데이트, 및 예를 들어 미국 특허 번호 4,676,980에 개시된 것들을 포함한다. 이종접합체 항체는 임의의 편리한 가교 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 다수의 가교 기술과 함께, 적합한 가교제가 당업계에 널리 공지되어 있고, 미국 특허 번호 4,676,980에 개시되어 있다.

10) 이펙터 기능 조작

본 발명의 항체를 예를 들어 항체의 항원-의존성 세포-매개 세포독성 (ADCC) 및/또는 보체 의존성 세포독성 (CDC)이 증진되도록 이펙터 기능에 관하여 변형시키는 것이 바람직할 수 있다. 이는 항체의 Fc 영역에 하나 이상의 아미노산 치환을 도입함으로써 달성될 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 시스테인 잔기(들)를 Fc 영역 내에 도입하여, 이 영역 내에서의 쇄간 디술피드 결합 형성을 가능하게 할 수 있다. 이와 같이 생성된 동종이량체 항체는 개선된 내재화 능력 및/또는 증가된 보체-매개 세포 사멸 및 항체-의존성 세포 세포독성 (ADCC)을 가질 수 있다. 문헌 [Caron et al., J. Exp Med. 176:1191-1195 (1992) 및 Shopes, B. J. Immunol. 148:2918-2922 (1992)]을 참조한다. 항종양 활성이 증진된 동종이량체 항체는 문헌 [Wolff et al., Cancer Research 53:2560-2565 (1993)]에 기재된 바와 같이 이종이관능성 가교제를 사용하여 제조될 수 있다. 대안적으로, 이중 Fc 영역을 갖는 항체를 조작할 수 있고, 이에 의해 보체 용해 및 ADCC 능력이 증진될 수 있다. 문헌 [Stevenson et al., Anti-Cancer Drug Design 3:219-230 (1989)]을 참조한다.

항체의 혈청 반감기를 증가시키기 위해, 예를 들어 미국 특허 5,739,277에 기재된 바와 같이 샐비지 수용체 결합 에피토프를 항체 (특히, 항체 단편)에 혼입시킬 수 있다. 본원에서 사용된 용어 "샐비지 수용체 결합 에피토프"는 IgG 분자 (예를 들어, IgG₁, IgG₂, IgG₃, 또는 IgG₄)의 생체내 혈청 반감기 증가를 담당하는 상기 IgG 분자의 Fc 영역의 에피토프를 지칭한다.

11) 면역접합체

본 발명은 또한 세포독성제, 예컨대 화학치료제, 독소 (예를 들어, 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 기원의 효소적 활성 독소, 또는 그의 단편), 또는 방사성 동위원소 (즉, 방사성접합체)에 접합된 항체를 포함하는 면역접합체 또는 항체-약물 접합체 (ADC)에 관한 것이다. 이러한 ADC는 허용되는 안전성 프로파일을 보여야 한다.

암의 치료에서 세포독성제 또는 세포증식억제제, 예를 들어 종양 세포를 사멸시키거나 억제하는 약물의 국부 전달을 위한 ADC의 사용 (문헌 [Syrigos and Epenetos, Anticancer Research 19: 605-614 (1999); Niculeascu-Duvaz and Springer, Adv. Drg Del. Rev. 26: 151-72 (1997)]; US 4,975,278)은 이론적으로 종양으로의 약물 모이어티의 표적화된 전달, 및 여기서의 세포내 축적을 가능하게 하고, 여기서 이들 비접합된 약물 작용제의 전신 투여는 제거하고자 하는 종양 세포 뿐만 아니라 정상 세포에 허용되지 않는 수준의 독성을 일으킬 수 있다 (문헌 [Baldwin et al., Lancet, 603-05 (1986); Thorpe, (1985) Antibody Carriers Of Cytotoxics Agents In Cancer Therapy: A Review, in Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications, A. Pinchera et al. (eds), pp. 475-506]). 이로써 최소 독성을 갖는 최대 효능이 추구된다. 폴리클로날 항체 및 모노클로날 항체 둘 모두가 이들 전략에 유용한 것으로 보고되었다 (문헌 [Rowland et al., Cancer Immunol. Immunother., 21:183-187 (1986)]). 이들 방법에 사용된 약물은 다우노마이신, 독소루비신, 메토트렉세이트, 및 빈데신을 포함한다. 항체-독소 접합체에서 사용되는 독소는 박테리아 독소, 예컨대 디프테리아 독소, 식물 독소, 예를 들어 리신, 소분자 독소, 예컨대 겔다나마이신 (문헌 [Mandler et al., J. Nat. Cancer Inst. 92(19):1573-81 (2000); Mandler et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters 10:1025-28 (2000); Mandler et al., Bioconjugate Chem. 13: 786-91 (2002)]), 메이탄시노이드 (EP 1391213; 문헌 [Liu et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93: 8618-8623 (1996)]), 및 칼리케아미신 (문헌 [Lode et al., Cancer Res. 58:2928 (1998); 및 Hinman et al., Cancer Res. 53:3336-42 (1993)])을 포함한다. 독소는 튜불린 결합, DNA 결합, 또는 토포이소머라제 억제를 비롯한 메카니즘에 의해 그의 세포독성 및 세포증식억제 효과를 발휘할 수 있다. 일부 세포독성 약물은 대형 항체 또는 단백질 수용체 리간드에 접합되는 경우에 불활성이 되거나 보다 낮은 활성을 갖는 경향이 있다.

이러한 면역접합체의 생성에 유용한 화학요법제는 상기 기재되었고, BCNU, 스트렙토조신, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 아드리아마이신 및 5-플루오로우라실을 포함한다.

사용될 수 있는 효소 활성 독소 및 그의 단편은 디프테리아 A 쇄, 디프테리아 독소의 비결합 활성 단편, 외독소 A 쇄 (슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa)로부터 유래됨), 리신 A 쇄, 아브린 A 쇄, 모데신 A 쇄, 알파-사르신, 알레우리테스 포르디이(Aleurites fordii) 단백질, 디안틴 단백질, 피토라카 아메리카나(Phytolaca americana) 단백질 (PAPI, PAPII 및 PAP-S), 모모르디카 카란티아(momordica charantia) 억제제, 쿠르신, 크로틴, 사파오나리아 오피시날리스(sapaonaria officinalis) 억제제, 겔로닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신 및 트리코테센을 포함한다. 방사성접합된 항체의 생산을 위한 다양한 방사성핵종이 이용가능하다. 그 예는 ²¹²Bi, ¹³¹I, ¹³¹In, ⁹⁰Y, 및 ¹⁸⁶Re를 포함한다. 항체 및 세포독성제의 접합체는 다양한 이관능성 단백질-커플링제, 예컨대 N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티올) 프로피오네이트 (SPDP), 이미노티올란 (IT), 이미도에스테르의 이관능성 유도체 (예컨대, 디메틸 아디피미데이트 HCl), 활성 에스테르 (예컨대, 디숙신이미딜 수베레이트), 알데히드 (예컨대, 글루타르알데히드), 비스-아지도 화합물 (예컨대, 비스 (p-아지도벤조일) 헥산디아민), 비스-디아조늄 유도체 (예컨대, 비스-(p-디아조늄벤조일)-에틸렌디아민), 디이소시아네이트 (예컨대, 톨루엔 2,6-디이소시아네이트), 및 비스-활성 플루오린 화합물 (예컨대, 1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠)을 사용하여 제조한다. 예를 들어, 리신 면역독소는 문헌 [Vitetta et al., Science, 238: 1098 (1987)]에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 탄소-14 표지된 1-이소티오시아나토벤질-3-메틸디에틸렌 트리아민-펜타아세트산 (MX-DTPA)이 항체에 대한 방사성뉴클레오티드의 접합을 위한 예시적인 킬레이트화제이다. 예를 들어, WO 1994/11026을 참조한다.

항체 및 세포독성제의 접합체는 다양한 이관능성 단백질-커플링제, 예컨대 N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티올) 프로피오네이트 (SPDP), 이미노티올란 (IT), 이미도에스테르의 이관능성 유도체 (예컨대, 디메틸 아디피미데이트 HCL), 활성 에스테르 (예컨대, 디숙신이미딜 수베레이트), 알데히드 (예컨대, 글루타르알데히드), 비스-아지도 화합물 (예컨대, 비스 (p-아지도벤조일) 헥산디아민), 비스-디아조늄 유도체 (예컨대, 비스-(p-디아조늄벤조일)-에틸렌디아민), 디이소시아네이트 (예컨대, 톨리엔 2,6-디이소시아네이트) 및 비스-활성 플루오린 화합물 (예컨대, 1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠)을 사용하여 제조된다. 예를 들어, 리신 면역독소는 문헌 [Vitetta et al., Science, 238: 1098 (1987)]에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 탄소-14-표지된 1-이소티오시아네이토벤질-3-메틸디에틸렌 트리아민펜타아세트산 (MX-DTPA)은 항체에 방사성뉴클레오티드를 접합시키기 위한 예시적인 킬레이트화제이다. WO94/11026을 참조한다. 링커는 세포 내에서 세포독성 약물의 방출을 용이하게 하는 "절단가능한 링커"일 수 있다. 예를 들어, 산-불안정성 링커, 펩티다제-감수성 링커, 디메틸 링커 또는 디술피드-함유 링커 (문헌 [Chari et al., Cancer Res. 52:127-131 (1992)])가 사용될 수 있다.

추가로, 소분자 독소, 예컨대 칼리케아미신, 메이탄신 (U.S.P. 5,208,020), 트리코텐 및 CC1065가 또한 본 발명의 제제에서 사용하기 위한 접합가능 독소로서 고려된다. 한 실시양태에서, 전장 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 하나 이상의 메이탄시노이드 분자 (예를 들어, 항체 분자당 약 1 내지 약 10개의 메이탄시노이드 분자)에 접합될 수 있다. 메이탄시노이드는 튜불린 중합을 억제함으로써 작용하는 유사분열 억제제이다. 천연 공급원으로부터 단리되거나 합성 제조된 메이탄시노이드, 예를 들어 메이탄신, 메이탄시날 및 그의 유도체 및 유사체가 기재된 바 있으며, 예를 들어 미국 특허 번호 5,208,020 및 여기에 인용된 참고문헌 (칼럼 2의 라인 53 내지 칼럼 3의 라인 10 참조) 및 미국 특허 3,896,111 및 4,151,042를 참조한다. 항체-메이탄시노이드 접합체의 제조 방법은 또한 미국 특허 번호 5,208,020에 기재되어 있다. 바람직한 실시양태에서, 메이탄시노이드는 디술피드 또는 다른 황-함유 링커 기를 통해 항체에 연결된다. 예를 들어, 메이탄신은 May-SS-Me로 전환될 수 있고, 이는 May-SH3으로 환원되고 변형된 항체와 반응하여 메이탄시노이드-항체 면역접합체를 생성할 수 있다. 문헌 [Chari et al., Cancer Res. 52: 127-131 (1992)]. 항체는 공지된 방법에 의해 변형될 수 있고, 이어서, 유리 또는 보호된 티올 기를 함유하는 항체는 디술피드 함유 메이탄시노이드와 반응하여 접합체를 생산한다. 항체-메이탄시노이드 접합체의 세포독성은 공지된 방법에 의해 시험관 내에서 및 생체 내에서 측정될 수 있고, IC₅₀이 결정될 수 있다.

칼리케아미신은 또 다른 관심 면역접합체이다. 칼리케아미신 패밀리의 항생제는 피코몰 미만의 농도에서 이중-가닥 DNA 절단부를 생산할 수 있다. 사용될 수 있는 칼리케아미신의 구조 유사체는 γ₁ ¹, α₂ ¹, α₃ ¹, N-아세틸-γ₁ ¹, PSAG 및 θ¹ ₁을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다 (문헌 [Hinman et al., Cancer Res. 53:3336-3342 (1993) 및 Lode et al., Cancer Res. 58:2925-2928 (1998)]). 항체가 접합될 수 있는 다른 항종양 약물은 항폴레이트제인 QFA를 포함한다. 칼리케아미신 및 QFA는 둘 다 세포내 작용 부위를 갖고, 형질 막을 용이하게 통과하지 않는다. 따라서, 항체 매개 내재화를 통한 이들 작용제의 세포 흡수는 이들의 세포독성 효과를 크게 증진시킨다.

항체 및 핵산분해 활성을 갖는 화합물 (예를 들어, 리보뉴클레아제 또는 DNA 엔도뉴클레아제, 예컨대 데옥시리보뉴클레아제, DNase) 사이에 형성된 면역접합체가 또한 고려된다.

본 발명의 ADC에서, 항체 (Ab)는 링커 (L)를 통해 하나 이상의 약물 모이어티 (D), 예를 들어 항체당 약 1 내지 약 20개의 약물 모이어티에 접합된다. 화학식 I의 ADC는 다음을 비롯하여, 당업자에게 공지된 유기 화학 반응, 조건 및 시약을 사용하여 몇몇 경로에 의해 제조할 수 있다: (1) 항체의 친핵성 기를 2가 링커 시약과 반응시켜, 공유 결합을 통해 Ab-L을 형성한 후, 이를 약물 모이어티 D와 반응시키는 것; 및 (2) 약물 모이어티의 친핵성 기를 2가 링커 시약과 반응시켜, 공유 결합을 통해 D-L을 형성한 후, 이를 항체의 친핵성 기와 반응시키는 것.

<화학식 I>

Ab-(L-D)_p

항체 상의 친핵기는 (i) N-말단 아민 기; (ii) 측쇄 아민 기, 예를 들어 리신; (iii) 측쇄 티올 기, 예를 들어 시스테인; 및 (iv) 당 히드록실 또는 아미노 기 (여기서, 항체는 글리코실화됨)를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 아민, 티올 및 히드록실 기는 친핵성이고, 링커 모이어티 및 링커 시약 상의 친전자성 기, 예를 들어 (i) 활성 에스테르, 예컨대 NHS 에스테르, HOBt 에스테르, 할로포르메이트 및 산 할라이드; (ii) 알킬 및 벤질 할라이드, 예컨대 할로아세트아미드; 및 (iii) 알데히드, 케톤, 카르복실 및 말레이미드 기와 반응하여 공유 결합을 형성할 수 있다. 특정 항체는 환원가능한 쇄간 디술피드, 즉 시스테인 가교를 갖는다. 환원제, 예컨대 DTT (디티오트레이톨)로의 처리에 의해 항체를 링커 시약과의 접합에 반응성이 되도록 할 수 있다. 따라서, 각각의 시스테인 가교는 이론적으로 2개의 반응성 티올 친핵체를 형성할 것이다. 리신을 2-이미노티올란 (트라우트 시약)과 반응시켜 아민을 티올로 전환시킴으로써 추가의 친핵성 기를 항체 내로 도입할 수 있다.

본 발명의 ADC는 또한 링커 시약 또는 약물 상의 친핵성 치환기와 반응할 수 있는 친전자성 모이어티를 도입하기 위한 항체의 변형에 의해 생산될 수 있다. 글리코실화된 항체의 당을 예를 들어 퍼아이오데이트 산화 시약으로 산화시켜, 링커 시약 또는 약물 모이어티의 아민 기와 반응할 수 있는 알데히드 또는 케톤 기를 형성할 수 있다. 생성된 이민 쉬프 염기 기는 안정한 연결을 형성할 수 있거나, 또는 예를 들어 보로히드라이드 시약에 의해 환원되어 안정한 아민 연결을 형성할 수 있다. 한 실시양태에서, 글리코실화된 항체의 탄수화물 부분과 갈락토스 옥시다제 또는 소듐 메타-퍼아이오데이트의 반응으로 약물 상의 적절한 기와 반응할 수 있는 단백질 내의 카르보닐 (알데히드 및 케톤) 기가 수득될 수 있다 (문헌 [Domen et al., J. Chromatog., 510: 293-302 (1990)]). 또 다른 실시양태에서, N-말단 세린 또는 트레오닌 잔기를 함유하는 단백질을 소듐 메타-퍼아이오데이트와 반응시키면, 제1 아미노산 대신에 알데히드가 생산될 수 있다 (문헌 [Geoghegan and Stroh, Bioconjugate Chem. 3:138-46 (1992)]; US 5,362,852). 이러한 알데히드는 약물 모이어티 또는 링커 친핵체와 반응할 수 있다.

마찬가지로, 약물 모이어티 상의 친핵성 기는 (i) 활성 에스테르 예컨대 NHS 에스테르, HOBt 에스테르, 할로포르메이트, 및 산 할라이드; (ii) 알킬 및 벤질 할라이드 예컨대 할로아세트아미드; 및 (iii) 알데히드, 케톤, 카르복실 및 말레이미드 기를 비롯한 링커 모이어티 및 링커 시약 상의 친전자성 기와 공유 결합을 형성하도록 반응할 수 있는 아민, 티올, 히드록실, 히드라지드, 옥심, 히드라진, 티오세미카르바존, 히드라진 카르복실레이트, 및 아릴히드라지드 기를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.

대안적으로, 항체 및 세포독성제를 포함하는 융합 단백질은 예를 들어 재조합 기술 또는 펩티드 합성에 의해 제조될 수 있다. DNA의 길이는 서로 인접한 또는 접합체의 목적 성질을 파괴하지 않는 링커 펩티드를 코딩하는 영역에 의해 분리된 접합체의 두 부분을 코딩하는 각각의 영역을 포함할 수 있다.

또 다른 실시양태에서, 항체를 종양 예비표적화에 활용하기 위해 "수용체" (예컨대, 스트렙타비딘)에 접합시킬 수 있고, 여기서 항체-수용체 접합체를 환자에게 투여한 다음, 소실제를 사용하여 순환으로부터 결합되지 않은 접합체를 제거한 후, 세포독성제 (예를 들어, 방사성뉴클레오티드)에 접합된 "리간드" (예를 들어, 아비딘)를 투여한다.

본원에서 ADC는 임의로 하기 가교제 시약을 사용하여 제조된다: BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, 술포-EMCS, 술포-GMBS, 술포-KMUS, 술포-MBS, 술포-SIAB, 술포-SMCC, 및 술포-SMPB, 및 SVSB (숙신이미딜-(4-비닐술폰)벤조에이트) (이들은 예를 들어 피어스 바이오테크놀로지, 인크.(Pierce Biotechnology, Inc., 미국 일리노이주 록포드)로부터 상업적으로 입수가능함).

항체는 또한 고도의 방사성 원자에 접합될 수 있다. 방사성접합된 항체의 생산을 위한 다양한 방사성핵종이 이용가능하다. 그 예는 At²¹¹, Bi²¹², I¹³¹, In¹³¹, Y⁹⁰, Re¹⁸⁶, Re¹⁸⁸, Sm¹⁵³, P³² 및 Pb²¹² 및 Lu의 방사성 동위원소를 포함한다. 접합체가 진단을 위해 사용되는 경우, 접합체는 신티그래피 연구를 위한 방사성 원자, 예를 들어 Tc⁹⁹ 또는 I¹²³, 또는 핵자기 공명 (nmr) 영상화 (자기 공명 영상화, mri로도 공지됨)를 위한 스핀 표지, 예컨대 아이오딘-123, 아이오딘-131, 인듐-111, 플루오린-19, 탄소-13, 질소-15, 산소-17, 가돌리늄, 망가니즈 또는 철을 포함할 수 있다.

방사성- 또는 다른 표지는 공지된 방법으로 접합체에 혼입될 수 있다. 예를 들어, 펩티드는 생합성될 수 있거나, 또는 예를 들어 수소 대신에 플루오린-19를 포함하는 적합한 아미노산 전구체를 사용한 화학적 아미노산 합성에 의해 합성될 수 있다. Tc⁹⁹ 또는 I¹²³, Re¹⁸⁶, Re¹⁸⁸ 및 In¹¹¹과 같은 표지를 펩티드 내의 시스테인 잔기를 통해 부착시킬 수 있다. 이트륨-90은 리신 잔기를 통해 부착될 수 있다. 아이오도겐(IODOGEN)® 방법을 사용하여 아이오딘-123을 혼입시킬 수 있다 (문헌 [Fraker et al., Biohem. Biophys. Res. Commun. 80:49-57 (1978)]). 방사성핵종을 접합시키는 다른 방법은 문헌 ["Monoclonal Antibodies in Immunoscintigraphy," (Chatal, CRC Press 1989)]에 기재되어 있다.

대안적으로, 항체 및 세포독성제를 포함하는 융합 단백질은 재조합 기술 또는 펩티드 합성에 의해 제조할 수 있다. DNA의 길이는 서로 인접한 또는 접합체의 목적 성질을 파괴하지 않는 링커 펩티드를 코딩하는 영역에 의해 분리된 접합체의 두 부분을 코딩하는 각각의 영역을 포함할 수 있다.

또 다른 실시양태에서, 항체를 종양 예비표적화에 활용하기 위해 "수용체" (예컨대, 스트렙타비딘)에 접합시킬 수 있고, 여기서 항체-수용체 접합체를 환자에게 투여한 다음, 소실제를 사용하여 순환으로부터 결합되지 않은 접합체를 제거한 후, 세포독성제 (예를 들어, 방사성뉴클레오티드)에 접합된 "리간드" (예를 들어, 아비딘)를 투여한다.

12) 기타 아미노산 서열 변형

본원에 기재된 항체의 아미노산 서열 변형(들)이 고려된다. 예를 들어, 항체의 결합 친화도 및/또는 다른 생물학적 특성을 개선하는 것이 바람직할 수 있다. 항체의 아미노산 서열 변이체들은 적절한 뉴클레오티드 변화를 항체 핵산 내에 도입함으로써, 또는 펩티드 합성에 의해 제조된다. 이러한 변형은 예를 들어 항체의 아미노산 서열 내 잔기의 결실 및/또는 삽입 및/또는 치환을 포함한다. 최종 구축물이 목적 특성을 보유한다는 조건 하에 결실, 삽입 및 치환의 임의의 조합이 이루어져 최종 구축물에 도달된다. 아미노산 변화는 또한 항체의 번역후 프로세싱을 변경시킬 수 있으며, 예컨대 글리코실화 부위의 수 또는 위치를 변화시킬 수 있다.

돌연변이유발의 바람직한 위치인 항체의 특정 잔기 또는 영역의 확인에 유용한 방법은 문헌 [Cunningham and Wells in Science, 244:1081-1085 (1989)]에 기재된 바와 같은 "알라닌 스캐닝 돌연변이유발"이다. 여기서, 표적 잔기 또는 잔기의 군이 확인되고 (예를 들어, 하전된 잔기, 예를 들어 arg, asp, his, lys, 및 glu), 아미노산과 항원의 상호작용에 영향을 주기 위해 중성 또는 음으로 하전된 아미노산 (가장 바람직하게는 알라닌 또는 폴리알라닌)에 의해 대체된다. 이어서, 치환에 대해 기능적 감수성을 나타내는 아미노산 위치가, 치환 부위에 또는 치환 부위에 대해 추가의 또는 다른 변이체를 도입함으로써 정밀화된다. 따라서, 아미노산 서열 변이를 도입하기 위한 부위는 미리 결정되며, 돌연변이 그 자체의 성질을 미리 결정할 필요는 없다. 예를 들어, 주어진 부위에서의 돌연변이의 성능을 분석하기 위해, ala 스캐닝 또는 무작위 돌연변이유발을 표적 코돈 또는 영역에서 수행하고, 발현된 항체 변이체를 목적 활성에 대해 스크리닝한다.

아미노산 서열 삽입은 길이 범위가 1개의 잔기 내지 100개 이상의 잔기를 함유하는 폴리펩티드에 이르는 아미노- 및/또는 카르복실-말단 융합, 뿐만 아니라 단일 또는 다수 아미노산 잔기의 서열내 삽입을 포함한다. 말단 삽입의 예는 N-말단 메티오닐 잔기를 갖는 항체 또는 세포독성 폴리펩티드에 융합된 항체를 포함한다. 항체 분자의 다른 삽입 변이체는 효소 (예를 들어, ADEPT의 경우) 또는 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 폴리펩티드가 상기 항체의 N- 또는 C-말단에 융합된 것을 포함한다.

또 다른 유형의 변이체는 아미노산 치환 변이체이다. 이들 변이체에서는 항체 분자 내의 1개 이상의 아미노산 잔기가 상이한 잔기에 의해 대체된다. 치환 돌연변이유발에 대한 최대 관심 부위는 초가변 영역을 포함하지만, FR 변경 또한 고려된다. 보존적 치환은 "바람직한 치환"의 표제 하에 하기 표 A에 나타낸다. 이러한 치환으로 생물학적 활성이 변하게 되면, 표 A에서 "예시적인 치환"으로 명명된 또는 아미노산 부류와 관련하여 하기에 추가로 기재되는 바와 같은 보다 실질적인 변화가 도입될 수 있고, 생성물을 스크리닝하게 된다.

<표 A>

항체의 생물학적 특성에 있어서의 실질적인 변형은 (a) 예를 들어 시트 또는 나선형 입체형태로서, 치환 영역 내의 폴리펩티드 백본의 구조, (b) 표적 부위에서의 분자의 전하 또는 소수성, 또는 (c) 측쇄의 벌크를 유지하는 것에 대한 효과가 유의하게 상이한 치환을 선택함으로써 달성된다. 자연 발생 잔기는 공통적인 측쇄 특성을 기초로 하기 군으로 분류될 수 있다:

(1) 소수성: 노르류신, met, ala, val, leu, ile;

(2) 중성 친수성: cys, ser, thr;

(3) 산성: asp, glu;

(4) 염기성: asn, gln, his, lys, arg,

(5) 쇄 배향에 영향을 미치는 잔기: gly, pro; 및

(6) 방향족: trp, tyr, phe.

비-보존적 치환은 이들 부류 중의 하나의 구성원을 또 다른 부류로 교환하는 것을 수반할 것이다.

또한, 항체의 적절한 입체형태 유지에 관여하지 않는 임의의 시스테인 잔기가 일반적으로 세린으로 치환되어 분자의 산화 안정성을 개선시키고 비정상적인 가교를 방지할 수 있다. 반대로, 시스테인 결합(들)이 항체에 부가되어 그의 안정성을 개선할 수 있다 (특히, 항체가 Fv 단편과 같은 항체 단편인 경우).

특히 바람직한 유형의 치환 변이체는 모 항체 (예를 들어, 인간화 또는 인간 항체)의 1개 이상의 초가변 영역 잔기를 치환하는 것을 수반한다. 일반적으로, 추가의 개발용으로 선택된 생성된 변이체(들)는 이들이 생성되는 모 항체에 비해 생물학적 특성이 개선될 것이다. 이러한 치환 변이체를 생성하는 편리한 방법은 파지 디스플레이를 사용하는 친화도 성숙을 포함한다. 간략하게, 여러 초가변 영역 부위 (예를 들어, 6-7개 부위)를 각각의 부위에서 모든 가능한 아미노 치환이 생성되도록 돌연변이시킨다. 이와 같이 생성된 항체 변이체를 필라멘트형 파지 입자로부터 각각의 입자 내에 패키지된 M13의 유전자 III 생성물에 대한 융합체로서 1가 방식으로 디스플레이시킨다. 이어서, 파지-디스플레이된 변이체를 본원에 개시된 바와 같이 이들의 생물학적 활성 (예를 들어, 결합 친화도)에 대해 스크리닝한다. 변형을 위한 후보 초가변 영역 부위를 확인하기 위해, 알라닌 스캐닝 돌연변이유발을 수행하여 항원 결합에 유의하게 기여하는 초가변 영역 잔기를 확인할 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 항체와 IgE 사이의 접촉점을 확인하기 위해 항원-항체 복합체의 결정 구조를 분석하는 것이 유익할 수 있다. 이러한 접촉 잔기 및 인접 잔기는 본원에서 상술된 기술에 따른 치환을 위한 후보이다. 이러한 변이체가 생성되면, 변이체의 패널을 본원에 기재된 바와 같이 스크리닝하고, 하나 이상의 관련 검정에서 우수한 특성을 갖는 항체를 추가의 개발을 위해 선택할 수 있다.

항체의 아미노산 변이체의 또 다른 유형은 항체의 원래의 글리코실화 패턴을 변경시킨다. 변경은 항체에서 발견되는 1개 이상의 탄수화물 모이어티를 결실시키는 것 및/또는 항체에 존재하지 않는 1개 이상의 글리코실화 부위를 부가하는 것을 의미한다.

항체의 글리코실화는 전형적으로 N-연결 또는 O-연결된다. N-연결은 탄수화물 모이어티가 아스파라긴 잔기의 측쇄에 부착된 것을 지칭한다. 트리펩티드 서열 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌 (여기서, X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산임)이 아스파라긴 측쇄로 탄수화물 모이어티를 효소적으로 부착시키기 위한 인식 서열이다. 따라서, 이들 트리펩티드 서열 중 어느 하나가 폴리펩티드에 존재함으로써 잠재적인 글리코실화 부위가 생성된다. O-연결된 글리코실화는 당 N-아세틸갈락토사민, 갈락토스 또는 크실로스 중의 하나가 히드록시아미노산, 가장 통상적으로는 세린 또는 트레오닌에 부착되는 것을 지칭하지만, 5-히드록시프롤린 또는 5-히드록시리신 또한 사용될 수 있다.

항체에 글리코실화 부위를 부가하는 것은 1개 이상의 상기 기재된 트리펩티드 서열을 함유하도록 아미노산 서열을 변경시킴으로써 편리하게 달성된다 (N-연결된 글리코실화 부위의 경우). 변경은 또한 원래의 항체의 서열에 대한 1개 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기의 부가 또는 치환에 의해 이루어질 수 있다 (O-연결된 글리코실화 부위의 경우).

항-IgE 항체의 아미노산 서열 변이체를 코딩하는 핵산 분자는 당업계에 공지된 다양한 방법에 의해 제조된다. 이들 방법은 천연 공급원으로부터의 단리 (자연 발생 아미노산 서열 변이체의 경우), 또는 항-IgE 항체의 초기 제조된 변이체 또는 비-변이체 버전의 올리고뉴클레오티드-매개 (또는 부위-지정) 돌연변이유발, PCR 돌연변이유발, 및 카세트 돌연변이유발에 의한 제조를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.

13) 기타 항체 변형

본 발명의 항체는 당업계에 공지되고 용이하게 입수가능한 추가의 비단백질성 모이어티를 함유하도록 추가로 변형될 수 있다. 바람직하게는, 항체의 유도체화에 적합한 모이어티는 수용성 중합체이다. 수용성 중합체의 비제한적 예는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜의 공중합체, 카르복시메틸셀룰로스, 덱스트란, 폴리비닐 알콜, 폴리비닐 피롤리돈, 폴리-1,3-디옥솔란, 폴리-1,3,6-트리옥산, 에틸렌/말레산 무수물 공중합체, 폴리아미노산 (단독중합체 또는 랜덤 공중합체), 및 덱스트란 또는 폴리(n-비닐 피롤리돈)폴리에틸렌 글리콜, 프로프로필렌 글리콜 단독중합체, 폴리프로필렌 옥시드/에틸렌 옥시드 공중합체, 폴리옥시에틸화 폴리올 (예를 들어, 글리세롤), 폴리비닐 알콜 및 그의 혼합물을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데히드가 물에서의 안정성으로 인해 제조에 이점을 가질 수 있다. 중합체는 임의의 분자량을 가질 수 있고, 분지형 또는 비분지형일 수 있다. 항체에 부착되어 있는 중합체의 수는 달라질 수 있고, 하나 초과의 중합체가 부착되어 있는 경우에, 이들은 동일하거나 상이한 분자일 수 있다. 일반적으로, 유도체화에 사용되는 중합체의 수 및/또는 유형은 개선될 항체의 특정한 특성 또는 기능, 항체 유도체가 규정된 조건 하에 요법에서 사용될 것인지의 여부 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는 고려사항을 기초로 결정될 수 있다. 상기 기술 및 다른 적합한 제제는 문헌 [Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Ed., Alfonso Gennaro, Ed., Philadelphia College of Pharmacy and Science (2000)]에 개시되어 있다.

C. 항-IgE 항체의 재조합 제조

본 발명은 또한 아폽토시스성 항-IgE 항체를 코딩하는 단리된 핵산, 상기 핵산을 포함하는 벡터 및 숙주 세포, 및 항체의 생산을 위한 재조합 기술을 제공한다.

항체의 재조합 생산을 위해, 이를 코딩하는 핵산을 단리하여 추가의 클로닝 (DNA의 증폭) 또는 발현을 위해 복제가능한 벡터에 삽입한다. 모노클로날 항체를 코딩하는 DNA는 용이하게 단리되고, 통상적인 절차 (예를 들어, 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브 사용)에 의해 서열분석된다. 다수의 벡터가 이용가능하다. 벡터 성분은 일반적으로 신호 서열, 복제 기점, 하나 이상의 마커 유전자, 인핸서 성분, 프로모터 및 전사 종결 서열 중의 하나 이상을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.

(1) 신호 서열 성분

본 발명의 항-IgE 항체는 직접적으로, 뿐만 아니라 바람직하게는 신호 서열, 또는 성숙 단백질 또는 폴리펩티드의 N-말단에 특이적 절단 부위를 갖는 다른 폴리펩티드인 이종 폴리펩티드와의 융합 폴리펩티드로서 재조합에 의해 생산될 수 있다. 바람직하게는, 선택된 이종 신호 서열은 숙주 세포에 의해 인식 및 프로세싱 (즉, 신호 펩티다제에 의해 절단)되는 것이다. 천연 포유동물 신호 서열을 인식하고 프로세싱하지 않는 원핵 숙주 세포의 경우에, 신호 서열은 예를 들어 알칼린 포스파타제, 페니실리나제, lpp, 또는 열-안정성 장독소 II 리더의 군으로부터 선택되는 원핵 신호 서열에 의해 치환된다. 효모 분비의 경우에, 천연 신호 서열은 예를 들어 효모 인버타제 리더, 인자 리더 (사카로미세스(Saccharomyces) 및 클루이베로미세스(Kluyveromyces)-인자 리더 포함), 또는 산 포스파타제 리더, 씨. 알비칸스(C. albicans) 글루코아밀라제 리더, 또는 WO 90/13646에 기재된 신호에 의해 치환될 수 있다. 포유동물 세포 발현에서, 포유동물 신호 서열 뿐만 아니라 바이러스성 분비 리더, 예를 들어 단순 헤르페스 gD 신호가 이용가능하다.

상기 전구체 영역에 대한 DNA는 IgE 결합 항체를 코딩하는 DNA에 리딩 프레임으로 라이게이션된다.

(2) 복제 기점

발현 벡터 및 클로닝 벡터는 둘 다 벡터가 하나 이상의 선택된 숙주 세포 내에서 복제될 수 있게 하는 핵산 서열을 함유한다. 일반적으로, 클로닝 벡터에서 상기 서열은 숙주 염색체 DNA와 독립적으로 벡터를 복제할 수 있는 것이고, 복제 기점 또는 자율 복제 서열을 포함한다. 이러한 서열은 다양한 박테리아, 효모 및 바이러스에 대해 널리 공지되어 있다. 플라스미드 pBR322로부터의 복제 기점은 대부분의 그람-음성 박테리아에 적합하고, 2μ 플라스미드 기점은 효모에 적합하며, 다양한 바이러스 기점 (SV40, 폴리오마, 아데노바이러스, VSV 또는 BPV)은 포유동물 세포에서의 클로닝 벡터에 유용하다. 일반적으로, 복제 기점 성분은 포유동물 발현 벡터에서는 필요하지 않다 (전형적으로, SV40 기점은 단지 초기 프로모터를 함유하기 때문에 사용될 수 있음).

(3) 선택 유전자 성분

발현 및 클로닝 벡터는 선택 마커라고도 불리는 선택 유전자를 함유할 수 있다. 전형적인 선택 유전자는 (a) 항생제 또는 다른 독소, 예를 들어 암피실린, 네오마이신, 메토트렉세이트 또는 테트라시클린에 대한 내성을 부여하거나, (b) 영양요구성 결핍을 보완하거나, 또는 (c) 복합 배지로부터 이용할 수 없는 중요 영양분을 공급하는 단백질을 코딩하고, 예를 들어 바실루스의 경우에 유전자는 D-알라닌 라세마제를 코딩한다.

선택 계획의 한 예는 숙주 세포의 성장을 정지시키는 약물을 이용한다. 이종 유전자로 성공적으로 형질전환된 세포는 약물 내성을 부여하는 단백질을 생산하고, 따라서 선택 요법에서 생존한다. 이러한 우성 선택의 예는 약물 네오마이신, 미코페놀산 및 히그로마이신을 사용한다.

포유동물 세포에 적합한 선택 마커의 또 다른 예는 IgE 결합 항체 핵산을 섭취하는 세포 성분의 확인을 가능하게 하는 것들, 예컨대 DHFR, 티미딘 키나제, 메탈로티오네인-I 및 -II, 바람직하게는 영장류 메탈로티오네인 유전자, 아데노신 데아미나제, 오르니틴 데카르복실라제 등이다.

예를 들어, DHFR 선택 유전자로 형질전환된 세포는 우선 DHFR의 경쟁적 길항제인 메토트렉세이트 (Mtx)를 함유하는 배양 배지에서 모든 형질전환체를 배양함으로써 확인한다. 야생형 DHFR을 사용할 경우에 적절한 숙주 세포는 DHFR 활성이 결핍된 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포주 (예를 들어, ATCC CRL-9096)이다.

대안적으로, IgE 결합 항체, 야생형 DHFR 단백질 및 또 다른 선택 마커, 예컨대 아미노글리코시드 3'-포스포트랜스퍼라제 (APH)를 코딩하는 DNA 서열로 형질전환된 또는 공동-형질전환된 숙주 세포 (특히 내인성 DHFR을 함유하는 야생형 숙주)는 선택 마커에 대한 선택제, 예컨대 아미노글리코시드계 항생제, 예를 들어 카나마이신, 네오마이신, 또는 G418을 함유하는 배지에서의 세포의 성장에 의해 선택될 수 있다. 미국 특허 번호 4,965,199를 참조한다.

효모에 사용하기 적합한 선택 유전자는 효모 플라스미드 YRp7에 존재하는 trp1 유전자이다 (문헌 [Stinchcomb et al., Nature, 282:39 (1979)]). trp1 유전자는 트립토판에서 성장하는 능력이 결여된 효모의 돌연변이체 균주, 예를 들어 ATCC 번호 44076 또는 PEP4-1에 대한 선택 마커를 제공한다. 문헌 [Jones, Genetics, 85:12 (1977)]. 이어서, 효모 숙주 세포 게놈 내의 trp1 병변의 존재는 트립토판의 부재 하의 성장에 의해 형질전환을 검출하는데 효과적인 환경을 제공한다. 유사하게, Leu2-결핍 효모 균주 (ATCC 20,622 또는 38,626)는 Leu2 유전자를 보유하는 공지된 플라스미드에 의해 보완된다.

또한, 1.6 μm 원형 플라스미드 pKD1로부터 유래된 벡터는 클루이베로미세스 효모의 형질전환에 사용될 수 있다. 대안적으로, 재조합 송아지 키모신의 대규모 생산을 위한 발현 시스템이 케이. 락티스(K. lactis)에 대해 보고되었다. 문헌 [Van den Berg, Bio/Technology, 8:135 (1990)]. 클루이베로미세스의 산업적 균주에 의한 성숙 재조합 인간 혈청 알부민의 분비를 위한 안정한 다중-카피 발현 벡터가 또한 개시된 바 있다. 문헌 [Fleer et al., Bio/Technology, 9:968-975 (1991)].

(4) 프로모터 성분

발현 및 클로닝 벡터는 통상적으로 숙주 유기체에 의해 인식되고 IgE 결합 항체를 코딩하는 핵산에 작동가능하게 연결된 프로모터를 함유한다. 원핵 숙주에 사용하기 적합한 프로모터는 phoA 프로모터, -락타마제 및 락토스 프로모터 시스템, 알칼린 포스파타제 프로모터, 트립토판 (trp) 프로모터 시스템, 및 하이브리드 프로모터, 예컨대 tac 프로모터를 포함한다. 그러나, 다른 공지된 박테리아 프로모터도 적합하다. 박테리아 시스템에 사용하기 위한 프로모터가 또한 IgE 결합 항체를 코딩하는 DNA에 작동가능하게 연결된 샤인-달가노 (S.D.) 서열을 함유할 것이다.

진핵생물에 대한 프로모터 서열은 공지되어 있다. 실질적으로 모든 진핵 유전자는 전사가 개시되는 부위로부터 대략 25 내지 30개 염기 상류에 위치한 AT-풍부 영역을 갖는다. 다수의 유전자의 전사 출발점으로부터 70 내지 80개 염기 상류에서 발견되는 또 다른 서열은 CNCAAT 영역 (여기서, N은 임의의 뉴클레오티드일 수 있음)이다. 코딩 서열의 3' 말단에 폴리 A 꼬리의 부가를 위한 신호일 수 있는 AATAAA 서열이 대부분의 진핵 유전자의 3' 말단에 존재한다. 모든 이들 서열은 진핵 발현 벡터 내로 적합하게 삽입된다.

효모 숙주에 사용하기에 적합한 프로모터 서열의 예는 3-포스포글리세레이트 키나제 또는 다른 당분해 효소, 예컨대 에놀라제, 글리세르알데히드-3-포스페이트 데히드로게나제, 헥소키나제, 피루베이트 데카르복실라제, 포스포-프럭토키나제, 글루코스-6-포스페이트 이소머라제, 3-포스포글리세레이트 뮤타제, 피루베이트 키나제, 트리오스포스페이트 이소머라제, 포스포글루코스 이소머라제 및 글루코키나제에 대한 프로모터를 포함한다.

성장 조건에 의해 제어되는 전사의 추가의 이점을 갖는 유도성 프로모터인 다른 효모 프로모터는 알콜 데히드로게나제 2, 이소시토크롬 C, 산 포스파타제, 질소 대사와 연관된 분해 효소, 메탈로티오네인, 글리세르알데히드-3-포스페이트 데히드로게나제, 및 말토스 및 갈락토스 이용을 담당하는 효소에 대한 프로모터 영역이다. 효모 발현에 사용하기에 적합한 벡터 및 프로모터는 EP 73,657에 추가로 기재되어 있다. 또한, 효모 인핸서는 효모 프로모터와 함께 유리하게 사용된다.

포유동물 숙주 세포 내의 벡터로부터의 IgE 결합 항체의 전사는 프로모터가 숙주 세포 시스템과 상용성인 경우에, 바이러스, 예컨대 폴리오마 바이러스, 계두 바이러스, 아데노바이러스 (예컨대, 아데노바이러스 2), 소 유두종 바이러스, 조류 육종 바이러스, 시토메갈로바이러스, 레트로바이러스, B형 간염 바이러스, 가장 바람직하게는 원숭이 바이러스 40 (SV40)의 게놈으로부터, 이종 포유동물 프로모터, 예를 들어 액틴 프로모터 또는 이뮤노글로불린 프로모터로부터, 열-충격 프로모터로부터 얻은 프로모터에 의해 제어된다.

SV40 바이러스의 초기 및 후기 프로모터는 SV40 바이러스성 복제 기점을 또한 함유하는 SV40 제한 단편으로서 편리하게 수득된다. 인간 시토메갈로바이러스의 극초기 프로모터가 HindIII E 제한 단편으로 편리하게 수득된다. 소 유두종 바이러스를 벡터로 사용하여 포유동물 숙주에서 DNA를 발현하기 위한 시스템이 미국 특허 번호 4,419,446에 개시되어 있다. 이러한 시스템의 변형이 미국 특허 번호 4,601,978에 기재되어 있다. 또한, 단순 포진 바이러스로부터 티미딘 키나제 프로모터의 조절 하에 마우스 세포에서 인간 -인터페론 cDNA를 발현시키는 것에 대해서는 또한 문헌 [Reyes et al., Nature 297:598-601 (1982)]을 참조한다. 대안적으로, 라우스 육종 바이러스의 긴 말단 반복부를 프로모터로 사용할 수 있다.

(5) 인핸서 요소 성분

고등 진핵생물에 의한 본 발명의 IgE 결합 항체를 코딩하는 DNA의 전사는 종종 인핸서 서열을 벡터 내로 삽입함으로써 증가된다. 많은 인핸서 서열이 현재 포유동물 유전자 (글로빈, 엘라스타제, 알부민, -페토단백질 및 인슐린)로부터 공지되어 있다. 그러나, 전형적으로는 진핵 세포 바이러스로부터의 인핸서를 사용할 것이다. 그 예는 복제 기점의 후측 (bp 100-270) 상의 SV40 인핸서, 시토메갈로바이러스 초기 프로모터 인핸서, 복제 기점 후측 상의 폴리오마 인핸서 및 아데노바이러스 인핸서를 포함한다. 또한, 진핵 프로모터의 활성화를 위한 인핸서 요소에 대해 문헌 [Yaniv, Nature 297:17-18 (1982)]을 참조한다. 인핸서는 위치 5' 또는 3'에서 IgE 결합 항체-코딩 서열로 벡터 내로 스플라이싱될 수 있지만, 바람직하게는 프로모터로부터의 부위 5'에 위치한다.

(6) 전사 종결 성분

진핵 숙주 세포 (효모, 진균, 곤충, 식물, 동물, 인간, 또는 다른 다세포 유기체로부터의 유핵 세포)에 사용되는 발현 벡터는 또한 전사의 종결 및 mRNA의 안정화에 필요한 서열을 함유할 것이다. 이러한 서열은 진핵 또는 바이러스 DNA 또는 cDNA의 5' 및 때때로 3' 비번역 영역으로부터 통상적으로 이용가능하다. 이들 영역은 IgE 결합 항체를 코딩하는 mRNA의 비번역 부분 내의 폴리아데닐화 단편으로서 전사되는 뉴클레오티드 절편을 함유한다. 하나의 유용한 전사 종결 성분은 소 성장 호르몬 폴리아데닐화 영역이다. WO94/11026 및 여기에 개시된 발현 벡터를 참조한다.

(7) 숙주 세포의 선택 및 형질전환

본원에서 벡터에 DNA를 클로닝하거나 발현시키기에 적합한 숙주 세포는 상기 기재된 원핵생물, 효모 또는 고등 진핵생물 세포이다. 이러한 목적에 적합한 원핵생물은 유박테리움, 예컨대 그람-음성 또는 그람-양성 유기체, 예를 들어 엔테로박테리아세아에(Enterobacteriaceae), 예컨대 에스케리키아(Escherichia), 예를 들어 이. 콜라이, 엔테로박터(Enterobacter), 에르위니아(Erwinia), 클레브시엘라(Klebsiella), 프로테우스(Proteus), 살모넬라(Salmonella), 예를 들어 살모넬라 티피뮤리움(Salmonella typhimurium), 세라티아(Serratia), 예를 들어 세라티아 마르세스칸스(Serratia marcescans) 및 시겔라(Shigella) 뿐만 아니라 바실루스(Bacilli), 예컨대 비. 서브틸리스(B. subtilis) 및 비. 리케니포르미스(B. licheniformis) (예를 들어, 1989년 4월 12일에 공개된 DD 266,710에 개시된 비. 리케니포르미스 41P), 슈도모나스(Pseudomonas), 예컨대 피. 아에루기노사(P. aeruginosa) 및 스트렙토미세스(Streptomyces)를 포함한다. 한 바람직한 이. 콜라이 클로닝 숙주는 이. 콜라이 294 (ATCC 31,446)이지만, 다른 균주 예컨대 이. 콜라이 B, 이. 콜라이 X1776 (ATCC 31,537), 및 이. 콜라이 W3110 (ATCC 27,325)도 적합하다. 이들 예는 제한적이기보다는 예시적이다.

전장 항체, 항체 단편 및 항체 융합 단백질은 특히 글리코실화 및 Fc 이펙터 기능이 필요하지 않는 경우, 예컨대 치료 항체가 세포독성제 (예를 들어, 독소)에 접합되고 면역접합체 자체가 종양 세포 파괴에 효과를 나타내는 경우에 박테리아에서 생산될 수 있다. 전장 항체는 보다 긴 순환 반감기를 갖는다. 이. 콜라이에서의 생산은 보다 신속하고 보다 비용 효율적이다. 박테리아에서의 항체 단편 및 폴리펩티드의 발현에 대해, 예를 들어 U.S. 5,648,237 (Carter et al.), U.S. 5,789,199 (Joly et al.), 및 U.S. 5,840,523 (Simmons et al.) (발현 및 분비 최적화를 위한 번역 개시 영역 (TIR) 및 신호 서열을 기재함)을 참조한다. 발현 후에, 항체를 가용성 분획물 중의 이. 콜라이 세포 페이스트로부터 단리하고, 예를 들어 이소형에 따라 단백질 A 또는 G 칼럼을 통해 정제할 수 있다. 최종 정제는 예를 들어 CHO 세포 내에서 발현된 항체를 정제하는 방법과 유사하게 수행될 수 있다.

원핵생물 이외에도, 진핵 미생물, 예를 들어 사상 진균 또는 효모가 IgE 결합 항체-코딩 벡터에 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이다. 사카로미세스 세레비지아에(Saccharomyces cerevisiae) 또는 통상적인 제빵 효모는 하등 진핵 숙주 미생물 중에서 가장 통상적으로 사용된다. 그러나, 다수의 다른 속, 종 및 균주, 예컨대 쉬조사카로미세스 폼베(Schizosaccharomyces pombe); 클루이베로미세스 숙주, 예컨대 예를 들어 케이. 락티스(K. lactis), 케이. 프라길리스(K. fragilis) (ATCC 12,424), 케이. 불가리쿠스(K. bulgaricus) (ATCC 16,045), 케이. 위케라미이(K. wickeramii) (ATCC 24,178), 케이. 왈티이(K. waltii) (ATCC 56,500), 케이. 드로소필라룸(K. drosophilarum) (ATCC 36,906), 케이. 써모톨레란스(K. thermotolerans) 및 케이. 마르시아누스(K. marxianus); 야로위아(yarrowia) (EP 402,226); 피키아 파스토리스(Pichia pastoris) (EP 183,070); 칸디다(Candida); 트리코더마 레에시아(Trichoderma reesia) (EP 244,234); 뉴로스포라 크라사(Neurospora crassa); 슈와니오미세스(Schwanniomyces), 예컨대 슈와니오미세스 옥시덴탈리스(Schwanniomyces occidentalis); 및 사상 진균, 예컨대 예를 들어 뉴로스포라, 페니실리움(Penicillium), 톨리포클라디움(Tolypocladium) 및 아스페르길루스(Aspergillus) 숙주, 예컨대 에이. 니둘란스(A. nidulans) 및 에이. 니거(A. niger)가 통상적으로 이용가능하고 본원에서 유용하다.

글리코실화 IgE 결합 항체 발현에 적합한 숙주 세포는 다세포 유기체로부터 유래한다. 무척추동물 세포의 예는 식물 및 곤충 세포를 포함한다. 스포도프테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda) (모충), 아에데스 아에깁티(Aedes aegypti) (모기), 아에데스 알보픽투스(Aedes albopictus) (모기), 드로소필라 멜라노가스터(Drosophila melanogaster) (과실파리) 및 봄빅스 모리(Bombyx mori)와 같은 숙주로부터의 다수의 바큘로바이러스 균주 및 변이체, 및 상응하는 허용 곤충 숙주 세포가 확인되어 있다. 다양한 형질감염용 바이러스 균주, 예를 들어 아우토그라파 칼리포르니카(Autographa californica) NPV의 L-1 변이체 및 봄빅스 모리 NPV의 Bm-5 균주가 공개적으로 이용가능하고, 이러한 바이러스들은, 특히 스포도프테라 프루기페르다 세포의 형질감염을 위해, 본 발명에 따라 본원에서 바이러스로 사용될 수 있다.

목화, 옥수수, 감자, 대두, 페튜니아, 토마토 및 담배의 식물 세포 배양물이 또한 숙주로서 사용될 수 있다.

그러나, 척추동물 세포가 가장 관심 대상이 되며, 배양물 (조직 배양물)에서의 척추동물 세포의 증식은 상용 절차가 되어 있다. 유용한 포유동물 숙주 세포주의 예는 SV40에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 세포주 (COS-7, ATCC CRL 1651); 인간 배아 신장 세포주 (293 또는 현탁 배양하에 성장하도록 서브클로닝된 293 세포, 문헌 [Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)]); 새끼 햄스터 신장 세포 (BHK, ATCC CCL 10); 차이니즈 햄스터 난소 세포/-DHFR (CHO, 문헌 [Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)]); 마우스 세르톨리 세포 (TM4, 문헌 [Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)]); 원숭이 신장 세포 (CV1 ATCC CCL 70); 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포 (VERO-76, ATCC CRL-1587); 인간 자궁경부 암종 세포 (HELA, ATCC CCL 2); 개 신장 세포 (MDCK, ATCC CCL 34); 버팔로 래트 간 세포 (BRL 3A, ATCC CRL 1442); 인간 폐 세포 (W138, ATCC CCL 75); 인간 간 세포 (Hep G2, HB 8065); 마우스 유방 종양 (MMT 060562, ATCC CCL51); TRI 세포 (문헌 [Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)]); MRC 5 세포; FS4 세포; 및 인간 간세포암 세포주 (Hep G2)이다.

숙주 세포는 IgE 결합 항체 생산을 위한 상기 기재된 발현 또는 클로닝 벡터로 형질전환되고, 프로모터를 유도하거나, 형질전환체를 선택하거나 또는 목적 서열을 코딩하는 유전자를 증폭시키기 위해 적절하게 변형된 통상의 영양 배지에서 배양된다.

(8) 숙주 세포의 배양

본 발명의 IgE 결합 항체를 생산하기 위해 사용된 숙주 세포는 다양한 배지에서 배양할 수 있다. 상업적으로 입수가능한 배지, 예컨대 햄 F10 (시그마(Sigma)), 최소 필수 배지 ((MEM), (시그마)), RPMI-1640 (시그마) 및 둘베코 변형 이글 배지 ((DMEM), 시그마)가 숙주 세포의 배양에 적합하다. 또한, 문헌 [Ham et al., Meth. Enz. 58:44 (1979), Barnes et al., Anal. Biochem. 102:255 (1980)], 미국 특허 번호 4,767,704; 4,657,866; 4,927,762; 4,560,655; 또는 5,122,469; WO 90/03430; WO 87/00195; 또는 미국 특허 재허여 30,985에 기재된 배지들 중 임의의 배지를 숙주 세포를 위한 배양 배지로 사용할 수 있다. 임의의 이들 배지는 필요에 따라 호르몬 및/또는 다른 성장 인자 (예컨대, 인슐린, 트랜스페린 또는 표피 성장 인자), 염 (예컨대, 염화나트륨, 칼슘, 마그네슘 및 포스페이트), 완충제 (예컨대, HEPES), 뉴클레오시드 (예컨대, 아데노신 및 티미딘), 항생제 (예컨대, 겐타마이신(GENTAMYCIN)™ 약물), 미량 원소 (통상적으로 마이크로몰 범위의 최종 농도로 존재하는 무기 화합물로서 정의됨) 및 글루코스 또는 등가의 에너지원으로 보충될 수 있다. 또한, 임의의 다른 필요한 보충물을 당업자에게 공지된 적절한 농도로 포함시킬 수 있다. 배양 조건, 예컨대 온도, pH 등은 발현을 위해 선택된 숙주 세포와 함께 이전에 사용된 것이고, 당업자에게 명백할 것이다.

(9) 항체의 정제

재조합 기술을 사용하는 경우에, 항체는 세포내에서 생산되거나, 주변세포질 공간 내에서 생산되거나, 또는 배지 내로 직접 분비될 수 있다. 항체가 세포 내에서 생산되는 경우, 제1 단계로서 입자형 잔해물인 숙주 세포 또는 용해된 단편을 예를 들어 원심분리 또는 한외여과에 의해 제거한다. 문헌 [Carter et al., Bio/Technology 10:163-167 (1992)]에는 이. 콜라이의 주변세포질 공간에 분비되는 항체를 단리하는 절차가 기재되어 있다. 간략하게, 세포 페이스트를 아세트산나트륨 (pH 3.5), EDTA 및 페닐메틸술포닐플루오라이드 (PMSF)의 존재 하에 약 30분에 걸쳐 해동시킨다. 세포 잔해물은 원심분리에 의해 제거할 수 있다. 항체가 배지 내로 분비되는 경우에, 일반적으로 이러한 발현 시스템으로부터의 상청액을 상업적으로 입수가능한 단백질 농축 필터, 예를 들어 아미콘(Amicon) 또는 밀리포어 펠리콘(Millipore Pellicon) 한외여과 장치를 사용하여 먼저 농축시킨다. 단백질분해를 억제하기 위해 프로테아제 억제제, 예컨대 PMSF를 임의의 이전 단계에 포함시킬 수 있고, 우발적인 오염물의 성장을 방지하기 위해 항생제를 포함시킬 수 있다.

세포로부터 제조된 항체 조성물은, 예를 들어 히드록실아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석, 및 친화성 크로마토그래피를 사용하여 정제할 수 있으며, 친화성 크로마토그래피가 바람직한 정제 기술이다. 친화성 리간드로서의 단백질 A의 적합성은 항체 내에 존재하는 임의의 이뮤노글로불린 Fc 도메인의 종 및 이소형에 따라 달라진다. 단백질 A가 인간 γ1, γ2 또는 γ4 중쇄를 기초로 한 항체를 정제하기 위해 사용될 수 있다 (문헌 [Lindmark et al., J. Immunol. Meth. 62:1-13 (1983)]). 단백질 G는 모든 마우스 이소형 및 인간 3에 대해 권장된다 (문헌 [Guss et al., EMBO J. 5:15671575 (1986)]). 친화성 리간드가 부착되는 매트릭스는 가장 흔하게는 아가로스이지만, 다른 매트릭스도 이용가능하다. 기계적으로 안정한 매트릭스, 예컨대 제어된 기공 유리 또는 폴리(스티렌-디비닐)벤젠이 아가로스를 사용하여 달성될 수 있는 것보다 더 빠른 유동 속도 및 더 짧은 가공 시간을 가능하게 한다. 항체가 C_H3 도메인을 포함하는 경우에, 베이커본드(Bakerbond) ABX™ 수지 (제이. 티. 베이커(J. T. Baker), 뉴저지주 필립스버그)가 정제에 유용하다. 회수할 항체에 따라, 단백질 정제를 위한 다른 기술, 예컨대 이온-교환 칼럼 상의 분획화, 에탄올 침전, 역상 HPLC, 실리카 상의 크로마토그래피, 헤파린 세파로스(SEPHAROSE)™ 상의 크로마토그래피, 음이온 또는 양이온 교환 수지 (예컨대, 폴리아스파르트산 칼럼) 상의 크로마토그래피, 크로마토포커싱, SDS-PAGE 및 황산암모늄 침전이 또한 이용가능하다.

임의의 예비 정제 단계(들) 후에, 관심 항체 및 오염물을 포함하는 혼합물을, pH 약 2.5-4.5의 용리 완충제를 사용하는, 바람직하게는 낮은 염 농도 (예를 들어, 약 0-0.25M 염으로부터)에서 수행되는 저 pH 소수성 상호작용 크로마토그래피에 적용할 수 있다.

D. 제약 제제

치료 제제는 목적하는 정도의 순도를 갖는 활성 성분을 임의적인 제약상 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제 (문헌 [Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Ed., Lippincott Williams & Wiklins, Pub., Gennaro Ed., Philadelphia, PA 2000])와 혼합함으로써 보관을 위해 제조된다. 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제는 사용된 투여량 및 농도에서 수용자에게 비독성이고, 완충제, 항산화제, 예를 들어 아스코르브산, 메티오닌, 비타민 E, 메타중아황산나트륨; 보존제, 등장화제, 안정화제, 금속 착물 (예를 들어, Zn-단백질 착물); 킬레이트화제, 예컨대 EDTA 및/또는 비-이온성 계면활성제를 포함한다.

치료제가 항체 단편인 경우, 표적 단백질의 결합 도메인에 특이적으로 결합하는 최소 억제 단편이 바람직하다. 예를 들어, 항체의 가변 영역 서열을 기초로, 표적 단백질 서열에 결합하는 능력을 보유하는 항체 단편 또는 심지어 펩티드 분자를 설계할 수 있다. 이러한 펩티드는 화학적으로 합성될 수 있고/거나 재조합 DNA 기술에 의해 생산할 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Marasco et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 7889-7893 [1993]] 참조).

완충제를 사용하여, 특히 안정성이 pH 의존성인 경우에, 치료 유효성을 최적화하는 범위로 pH를 제어한다. 완충제는 바람직하게는 약 50 mM 내지 약 250 mM 범위의 농도로 존재한다. 본 발명에 사용하기에 적합한 완충제는 유기 산 및 무기 산 둘 다 및 그의 염을 포함한다. 예를 들어, 시트레이트, 포스페이트, 숙시네이트, 타르트레이트, 푸마레이트, 글루코네이트, 옥살레이트, 락테이트, 아세테이트가 있다. 추가로, 완충제는 히스티딘 및 트리메틸아민 염, 예컨대 트리스로 구성될 수 있다.

보존제는 미생물 성장을 지연시키기 위하여 첨가되고, 전형적으로 0.2% - 1.0% (w/v) 범위로 존재한다. 본 발명에 사용하기에 적합한 보존제는 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 할라이드 (예를 들어, 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드), 벤제토늄 클로라이드; 티메로살, 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥산올, 3-펜탄올 및 m-크레졸을 포함한다.

때때로 "안정화제"로 공지되는 등장화제는 조성물 중 액체의 등장성을 조정하거나 유지하기 위해 존재한다. 대형 하전된 생체분자, 예컨대 단백질 및 항체를 사용하는 경우에, 이들은 아미노산 측쇄의 하전된 기와 상호작용하여 분자간 및 분자내 상호작용의 가능성을 줄일 수 있기 때문에 종종 "안정화제"로 칭해진다. 등장화제는 다른 성분의 상대량을 고려하여, 중량을 기준으로 0.1% 내지 25%, 바람직하게는 1 내지 5%의 양으로 존재할 수 있다. 바람직한 등장화제는 다가 당 알콜, 바람직하게는 3가 이상의 당 알콜, 예컨대 글리세린, 에리트리톨, 아라비톨, 크실리톨, 소르비톨 및 만니톨을 포함한다.

추가의 부형제는 다음 중 하나 이상의 역할을 할 수 있는 작용제를 포함한다: (1) 벌킹제, (2) 용해도 증진제, (3) 안정화제 및 (4) 및 변성 또는 용기 벽으로의 부착을 방지하는 작용제. 이러한 부형제는 다음을 포함한다: 다가 당 알콜 (상기 열거됨); 아미노산, 예컨대 알라닌, 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 리신, 오르니틴, 류신, 2-페닐알라닌, 글루탐산, 트레오닌 등; 유기 당 또는 당 알콜, 예컨대 수크로스, 락토스, 락티톨, 트레할로스, 스타키오스, 만노스, 소르보스, 크실로스, 리보스, 리비톨, 미오이니시토스, 미오이니시톨, 갈락토스, 갈락티톨, 글리세롤, 시클리톨 (예를 들어, 이노시톨), 폴리에틸렌 글리콜; 황 함유 환원제, 예컨대 우레아, 글루타티온, 티옥트산, 나트륨 티오글리콜레이트, 티오글리세롤, α-모노티오글리세롤 및 나트륨 티오 술페이트; 저분자량 단백질, 예컨대 인간 혈청 알부민, 소 혈청 알부민, 젤라틴 또는 다른 이뮤노글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 모노사카라이드 (예를 들어, 크실로스, 만노스, 프룩토스, 글루코스; 디사카라이드 (예를 들어, 락토스, 말토스, 수크로스); 트리사카라이드, 예컨대 라피노스; 및 폴리사카라이드, 예컨대 덱스트린 또는 덱스트란.

비-이온성 계면활성제 또는 세제 ("습윤제"로도 공지됨)는 치료제의 가용화를 돕기 위해, 뿐만 아니라 치료 단백질을 교반-유도된 응집에 대해 보호하기 위해 존재하며, 이는 또한 활성 치료 단백질 또는 항체의 변성을 유발하지 않으면서 제제가 전단 표면 응력에 노출되는 것을 허용한다. 비이온성 계면활성제는 약 0.05 mg/ml 내지 약 1.0 mg/ml, 바람직하게는 약 0.07 mg/ml 내지 약 0.2 mg/ml의 범위로 존재한다.

적합한 비-이온성 계면활성제는 폴리소르베이트 (20, 40, 60, 65, 80 등), 폴리옥사머 (184, 188 등), 플루로닉® 폴리올, 트리톤(TRITON)®, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노에테르 (트윈®-20, 트윈®-80 등), 라우로마크로골 400, 폴리옥실 40 스테아레이트, 폴리옥시에틸렌 수소화 피마자 오일 10, 50 및 60, 글리세롤 모노스테아레이트, 수크로스 지방산 에스테르, 메틸 셀룰로스 및 카르복시메틸 셀룰로스를 포함한다. 사용될 수 있는 음이온성 세제는 소듐 라우릴 술페이트, 디옥틸 소듐 술포숙시네이트 및 디옥틸 소듐 술포네이트를 포함한다. 양이온성 세제는 벤즈알코늄 클로라이드 또는 벤제토늄 클로라이드를 포함한다.

제제를 생체내 투여용으로 사용하기 위해, 제제는 멸균되어야 한다. 제제는 멸균 여과 막을 통한 여과에 의해 멸균될 수 있다. 본원에서 치료 조성물은 일반적으로 멸균 접근 포트를 갖는 용기, 예를 들어 피하 주사 바늘에 의해 뚫을 수 있는 마개를 갖는 정맥내 용액 백 또는 바이알에 넣는다.

투여 경로는 공지되고 허용되는 방법에 따르며, 예컨대 단일 또는 다중 볼루스 또는 장기간에 걸친 주입에 의하고, 적합한 방식, 예를 들어 피하, 정맥내, 복강내, 근육내, 동맥내, 병변내 또는 관절내 경로에 의한 주사 또는 주입, 국소 투여, 흡입 또는 지속 방출 또는 연장-방출 방식이다.

본원의 제제는 또한 치료할 특정한 적응증에 필요한, 바람직하게는 서로 유해 효과를 내지 않는 보완적 활성을 갖는, 하나 초과의 활성 화합물을 함유할 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 조성물은 세포독성제, 시토카인 또는 성장 억제제를 포함할 수 있다. 이러한 분자는 의도된 목적에 유효한 양으로 조합물 내에 적합하게 존재한다.

또한, 활성 성분은 예를 들어 코아세르베이션 기술 또는 계면 중합에 의해 제조된 마이크로캡슐, 예를 들어 각각 히드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐에, 콜로이드성 약물 전달 시스템 (예를 들어, 리포솜, 알부민 마이크로구체, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐)에, 또는 마크로에멀젼 중에 봉입될 수 있다. 이러한 기술은 상기 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences 18th edition]에 개시되어 있다.

본원에 기재된 단백질 및 항체의 안정성은 비-독성 "수용성 다가 금속 염"의 사용을 통해 증진될 수 있다. 그 예는 Ca^{2 +}, Mg^{2 +}, Zn^{2 +}, Fe^{2 +}, Fe^{3 +}, Cu^{2 +}, Sn^{2 +}, Sn⁴⁺, Al^{2 +} 및 Al^{3 +}를 포함한다. 상기 다가 금속 양이온과 수용성 염을 형성할 수 있는 음이온의 예는 무기 산 및/또는 유기 산으로부터 형성된 것들을 포함한다. 상기 수용성 염은 물 (20℃) 중에서 적어도 약 20 mg/ml, 대안적으로 적어도 약 100 mg/ml, 대안적으로 적어도 약 200 mg/ml의 용해도를 갖는다.

"수용성 다가 금속 염"을 형성하는데 사용될 수 있는 적합한 무기 산은 염산, 아세트산, 황산, 질산, 티오시안산 및 인산을 포함한다. 사용될 수 있는 적합한 유기 산은 지방족 카르복실산 및 방향족 산을 포함한다. 이러한 정의 내의 지방족 산은 포화 또는 불포화 C_{2 -9} 카르복실산 (예를 들어, 지방족 모노-, 디- 및 트리-카르복실산)으로 정의될 수 있다. 예를 들어, 이러한 정의 내의 예시적인 모노카르복실산은 포화 C_{2 -9} 모노카르복실산 아세트산, 프로프리온산, 부티르산, 발레르산, 카프로산, 에난트산, 카프릴산, 펠라르곤산 및 카프리온산, 및 불포화 C_{2 -9} 모노카르복실산 아크릴산, 프로프리올산, 메타크릴산, 크로톤산 및 이소크로톤산을 포함한다. 예시적인 디카르복실산은 포화 C_{2 -9} 디카르복실산 말론산, 숙신산, 글루타르산, 아디프산 및 피멜산을 포함하는 한편, 불포화 C_{2 -9} 디카르복실산은 말레산, 푸마르산, 시트라콘산 및 메사콘산을 포함한다. 예시적인 트리카르복실산은 포화 C_2-9 트리카르복실산 트리카르발릴산 및 1,2,3-부탄트리카르복실산을 포함한다. 추가로, 이러한 정의의 카르복실산은 또한 1 또는 2개의 히드록실 기를 함유하여 히드록시 카르복실산을 형성할 수 있다. 예시적인 히드록시 카르복실산은 글리콜산, 락트산, 글리세르산, 타르트론산, 말산, 타르타르산 및 시트르산을 포함한다. 이러한 정의 내의 방향족 산은 벤조산 및 살리실산을 포함한다.

본 발명의 캡슐화된 폴리펩티드를 안정화하는 것을 돕기 위해 사용될 수 있는, 통상적으로 사용되는 수용성 다가 금속 염은 예를 들어 다음을 포함한다: (1) 할라이드 (예를 들어, 아연 클로라이드, 칼슘 클로라이드), 술페이트, 니트레이트, 포스페이트 및 티오시아네이트의 무기 산 금속 염; (2) 지방족 카르복실산 금속 염 (예를 들어, 칼슘 아세테이트, 아연 아세테이트, 칼슘 프로프리오네이트, 아연 글리콜레이트, 칼슘 락테이트, 아연 락테이트 및 아연 타르트레이트); 및 (3) 벤조에이트 (예를 들어, 아연 벤조에이트) 및 살리실레이트의 방향족 카르복실산 금속 염.

일부 실시양태에서, 항-IgE 항체는 100 mg/mL 항체, 30 mM 히스티딘/히스티딘 히드로클로라이드, 140 mM 아르기닌 히드로클로라이드, 0.04% (w/v) 폴리소르베이트 20, pH 5.5를 포함하는 제제 중에 있다.

E. 치료 방법

인간 환자에게 IgE (예컨대, 인간 IgE)의 M1' 절편에 결합하는 항-IgE 항체의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, IgE-매개 장애를 치료 또는 예방하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 인간 환자는 IgE-매개 장애로 진단되었거나, IgE-매개 장애의 발병 위험에 있다.

인간 환자에게 IgE (예컨대, 인간 IgE)의 M1' 절편에 결합하는 항-IgE 항체의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 기준선에 비해 혈청 총 IgE 및/또는 알레르겐-특이적 IgE를 감소시키는 방법이 본원에 제공된다. 혈청 총 IgE는 혈청 샘플 내에 존재하는 IgE의 총량을 지칭한다. 혈청 총 IgE는 모든 알레르겐-특이적 IgE를 포함하고, 유리 또는 비결합, 뿐만 아니라 결합 파트너 (예를 들어, 항-IgE 항체, IgE-보유 B 세포)와 복합체를 형성한 IgE를 포함한다.

인간 환자에게 IgE (예컨대, 인간 IgE)의 M1' 절편에 결합하는 항-IgE 항체의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 총 혈청 IgE 및/또는 알레르겐-특이적 IgE의 알레르겐-유도된 증가를 예방 또는 감소시키는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 알레르겐-유도된 증가의 예방 또는 감소는 항체 치료 후의 알레르겐-유도된 증가를 항체 치료 전의 알레르겐-유도된 증가와 비교함으로써 측정된다. 일부 실시양태에서, 알레르겐-유도된 증가의 예방 또는 감소는 항체 치료 후의 알레르겐-유도된 증가를 또 다른 환자에서의 알레르겐-유도된 증가 또는 항체 치료하지 않은 인간 환자에서의 평균 증가와 비교함으로써 측정된다. 일부 실시양태에서, 새로운 IgE의 생산이 예방된다.

인간 환자에게 IgE (예컨대, 인간 IgE)의 M1' 절편에 결합하는 항-IgE 항체의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 새로운 IgE의 생산을 예방하는 방법이 본원에 제공된다.

본원에 기재된 방법의 일부 실시양태에서, 항체의 투여 사이의 간격은 약 1개월 또는 그 초과이다. 일부 실시양태에서, 투여 사이의 간격은 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 약 6개월 또는 그 초과이다. 본원에 사용된 바와 같이, 투여 사이의 간격은 항체의 1회 투여 및 항체의 다음 투여 사이의 기간을 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같이, 약 1개월의 간격은 4주를 포함한다. 따라서, 일부 실시양태에서, 투여 사이의 간격은 약 4주, 약 8주, 약 12주, 약 16주, 약 20주, 약 24주 또는 그 초과이다. 일부 실시양태에서, 치료는 항체의 다중 투여를 포함하며, 여기서 투여 사이의 간격은 달라질 수 있다. 예를 들어, 제1 투여 및 제2 투여 사이의 간격은 약 1개월이고, 후속 투여 사이의 간격은 약 3개월이다. 일부 실시양태에서, 제1 투여 및 제2 투여 사이의 간격은 약 1개월이고, 제2 투여 및 제3 투여 사이의 간격은 약 2개월이고, 후속 투여 사이의 간격은 약 3개월이다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-IgE 항체는 균일 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-IgE 항체는 용량당 약 150 내지 약 450 mg의 투여량으로 인간 환자에 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-IgE 항체는 용량당 약 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 350 mg, 400 mg 및 450 mg 중 임의의 투여량으로 인간 환자에게 투여된다. 상기 기재된 임의의 투여 빈도가 사용될 수 있다.

일부 실시양태에서, 인간 환자에 대한 항체의 투여는 인간 환자에서 혈청 총 IgE 및/또는 알레르겐-특이적 IgE를 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 혈청 총 IgE는 기준선으로부터 적어도 약 20% 감소된다. 일부 실시양태에서, 혈청 총 IgE는 기준선으로부터 적어도 약 25% 감소된다. 일부 실시양태에서, 혈청 총 IgE의 감소는 항체의 최종 투여 후 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 또는 그 초과 동안 지속된다. 일부 실시양태에서, 알레르겐-특이적 IgE는 기준선으로부터 감소된다. 일부 실시양태에서, 인간 환자에 대한 항체의 투여는 혈청 총 IgE 및/또는 알레르겐-특이적 IgE의 알레르겐-유도된 증가를 예방 또는 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 혈청 총 IgE 및/또는 알레르겐-특이적 IgE의 알레르겐-유도된 증가의 예방 또는 감소는 항체의 최종 투여 후 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월 또는 그 초과 동안 지속된다. 당업계에 공지된 방법 및 본원에 기재된 방법이 혈청 총 IgE 및 알레르겐-특이적 IgE를 측정하는데 사용될 수 있다.

일부 실시양태에서, 항체의 투여는 하기 효과 중 적어도 하나를 갖는다: 1) 위약과 비교하여 악화 속도 ≥ 50% 감소, 및 다음 중 적어도 하나: FEV1 ≥ 5% 개선, 제1 용량 12주 이내 및 활성 투여 36주 후에 위약과 비교하여 증상 빈도 또는 중증도 감소, 및 활성 투여 24-36주에 걸쳐 위약과 비교하여 잘 제어된 주 증가; 2) 위약과 비교하여 악화 속도 ≥ 50% 감소, FEV1 < 5% 개선, 제1 용량 12주 이내 및 활성 투여 36주 후에 위약과 비교하여 증상 빈도 또는 중증도 감소 없음, 및 활성 투여 24-36주에 걸쳐 위약과 비교하여 잘 제어된 주에서 변화 없음; 3) 위약과 비교하여 악화 속도 40-49% 감소, FEV1 < 5% 개선, 및 다음 중 적어도 하나: 제1 용량 12주 이내 및 활성 투여 36주 후에 위약과 비교하여 증상 빈도 또는 중증도 감소, 및 활성 투여 24-36주에 걸쳐 위약과 비교하여 잘 제어된 주 증가; 4) 위약과 비교하여 악화 속도 40-49% 감소, 및 다음 중 적어도 하나: FEV1 ≥ 5% 개선, 제1 용량 12주 이내 및 활성 투여 36주 후에 위약과 비교하여 증상 빈도 또는 중증도 감소, 및 활성 투여 24-36주에 걸쳐 위약과 비교하여 잘 제어된 주 증가; 및 5) 위약과 비교하여 악화 속도 <40% 감소, 및 다음 중 적어도 둘: FEV1 ≥ 5% 개선, 제1 용량 12주 이내 및 활성 투여 36주 후에 위약과 비교하여 증상 빈도 또는 중증도 감소, 및 활성 투여 24-36주에 걸쳐 위약과 비교하여 잘 제어된 주 증가.

본원에 사용된 바와 같이, 인간에서의 기준선 수준 (예컨대, 혈청 총 IgE 및 알레르겐-특이적 IgE에 대한 기준선 수준)은 인간에 대한 본원에 기재된 항-IgE 항체의 투여 전의 수준을 지칭한다.

질환의 예방 또는 치료를 위해, 활성 물질의 적절한 투여량은 상기 정의한 바와 같은 치료할 질환의 유형, 질환의 중증도 및 경과, 작용제가 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지의 여부, 선행 요법, 환자의 임상 병력 및 작용제에 대한 반응, 및 담당의의 판단에 따라 달라질 것이다. 상기 작용제는 적합하게는 환자에게 1회 또는 일련의 치료에 걸쳐 투여된다.

바람직한 치료 방법은 IgE-매개 장애의 치료이다. IgE 매개 장애는 많은 통상적인 자연 발생 흡입 및 섭취 항원에 대해 면역학적으로 반응하는 유전적 성향 및 IgE 항체의 지속적인 생산을 특징으로 하는 아토피성 장애를 포함한다. 구체적 아토피성 장애는 알레르기성 천식, 알레르기성 비염 아토피성 피부염 및 알레르기성 위장병증을 포함한다. 아토피성 환자는 종종 다수의 알레르기를 갖고, 이는 이들이 화분, 진균 (예를 들어, 곰팡이), 동물 및 곤충 잔해 및 특정 식품을 비롯한 많은 환경 알레르겐에 대한 IgE 항체 및 이들에 의한 증상을 갖는다는 것을 의미한다.

그러나, 상승된 IgE 수준과 연관된 장애는 유전적 (아토피성) 병인을 갖는 것에 제한되지 않는다. IgE-매개된 것으로 나타나고 본 발명의 제제로 치료가능한, 상승된 IgE 수준과 연관된 다른 장애는 과민증 (예를 들어, 아나필락시스 과민증), 습진, 두드러기, 알레르기성 기관지폐 아스페르길루스증, 기생충성 질환, 과다-IgE 증후군, 모세혈관확장성 운동실조, 비스코트-알드리치 증후군, 흉선 림프조직무형성, IgE 골수종 및 이색편-대-숙주 반응을 포함한다.

알레르기성 비염 (알레르기성 비결막염 또는 고초열로도 공지됨)은 흡입 알레르겐에 대한 아토피 반응의 가장 통상적인 징후이고, 그의 중증도 및 지속기간은 종종 알레르겐에 대한 노출 강도 및 길이와 관련된다. 이는 임의의 연령에서 처음으로 나타날 수 있는 만성 질환이지만, 보통 소아기 또는 청소년기에 발생한다. 통상적인 발병은 과도한 맑은 콧물, 발작성 재채기, 비폐쇄, 및 코 및 구개의 가려움증으로 이루어진다. 후비 점액 배액은 또한 인후통, 헛기침 및 기침을 야기한다. 또한, 결막 및 안검의 강한 가려움증, 발적, 눈물 및 눈부심을 수반하는 알레르기성 안검결막염의 증상이 있을 수 있다. 심각한 발병은 종종 전신적 권태감, 쇠약, 피로, 및 때때로 강한 재채기 기간 후 근육 통종을 수반한다.

천식 (가역성 폐쇄성 기도 질환으로도 공지됨)은 자발적으로 또는 치료에 의해 가역적인 천명, 호흡곤란, 흉부 압박 및 기침의 발병을 일으키는, 호흡기 자극원 및 기관지수축 화학물질에 대한 기관기관지계의 과민반응을 특징으로 한다. 이는 전체 기도가 관련되는 만성 질환이지만, 간헐성 경도 일과성 에피소드부터 중증, 만성, 생명을 위협하는 기관지 폐쇄까지 중증도가 다양하다. 천식 및 아토피는 공존할 수 있으며, 천식의 약 절반만이 또한 아토피성이고, 심지어 보다 적은 백분율의 아토피성 환자가 또한 천식을 갖는다. 그러나, 천식은 비아토피성 개체 중에서보다는 아토피성 개체 중에서 보다 빈번하게 (특히 소아기에) 발생한다는 점에서 아토피 및 천식이 완전히 독립적이지는 않다. 천식은 병력적으로 외인성 천식 및 내인성 천식의 2개의 하위군으로 추가 분류된다.

외인성 천식 (알레르기성, 아토피성 또는 면역성 천식으로도 공지됨)은 일반적으로 생의 초기, 통상적으로 유아기 또는 소아기에 천식이 발생하는 환자를 설명하는 것이다. 습진 또는 알레르기성 비염을 비롯한 아토피의 다른 징후가 종종 공존한다. 천식 발병은 화분 계절 동안에, 동물의 존재 하에, 또는 집 먼지, 베개 깃털 또는 다른 알레르겐에 대한 노출시 발생할 수 있다. 피부 시험은 원인 알레르겐에 대해 양성 팽진-및-발적 반응을 나타낸다. 흥미롭게도, 혈청 총 IgE 농도가 빈번하게 증가되나, 때로는 정상이다.

내인성 천식 (비알레르기성 또는 특발성 천식으로도 공지됨)은 전형적으로 외견적 호흡기 감염 후에 성인기에 처음으로 발생한다. 증상은 화분 계절 또는 다른 알레르겐에 대한 노출과 관련없는 만성 또는 재발성 기관지 폐쇄를 포함한다. 피부 시험은 통상적 아토피성 알레르겐에 대해 음성이고, 혈청 IgE 농도는 정상이다. 추가 증상은 객담 혈액 및 호산구증가증을 포함한다. 천식을 아스피린-민감성, 운동-유발성, 감염성 및 심리성과 같은 하위군으로 분류하기 위한 다른 방식은 단지 다른 사람들보다 특정 환자에 대해 더 영향을 미치는 외부 유발 인자를 정의한다.

최종적으로, 일부 분류는 병력적으로 IgE 의존성을 갖는 알레르기성 천식과만 연관되어 있지만, 현재 IgE와 천식 (알레르기성 천식 및 비알레르기성 천식 둘 다) 사이의 상관관계를 보여주는 강한 통계적으로 유의한 데이터가 있다는 것에 주목하는 것이 중요하다. 문헌 [Chapter 27, "The Atopic Disease", A.I. Terr in Medical Immunology, 9th Ed., Simon and Schuster, Stites et al., Ed. (1997)]. 결과적으로, 본 특허 출원의 목적을 위한 용어 "IgE-매개 장애"는 알레르기성 및 비알레르기성 천식 둘 다를 포함한다.

천식 발병의 물리적 징후는 빈호흡, 가청 천명 및 호흡의 보조 근육의 사용을 포함한다. 빠른 맥박 및 혈압 상승이 또한 전형적으로 존재하고, 말초 혈액 및 비즙 중 호산구의 수준이 상승된다. 폐 기능은 유량 및 1초 강제 호기량 (FEV₁)의 감소를 나타낸다. 총 폐 용량 및 기능적 잔류 용량은 전형적으로 정상이거나 약간 증가하지만, 극심한 기관지연축으로 감소할 수 있다.

천식의 병리상태는 조기 및 후기 반응으로 구별될 수 있다. 조기는 평활근 수축, 부종 및 과다분비를 특징으로 하는 반면, 후기 반응은 세포 염증을 특징으로 한다. 천식은 감염 (예를 들어, 바이러스 호흡기 감염), 생리적 인자 (예를 들어, 운동, 과다호흡, 깊은 호흡, 정신적 인자), 대기 인자 (예를 들어, 이산화황, 암모니아, 차가운 공기, 오존, 증류수 수증기), 섭취물 (예를 들어, 프로프라놀롤, 아스피린, 비스테로이드성 항염증 약물), 실험실 흡입제 (예를 들어, 고장성 용액, 시트르산, 히스타민, 메타콜린, 프로스타글란딘 F_2α) 및 직업적 흡입물 (예를 들어, 이소시아네이트)를 비롯한 다양한 비-특이적 유발인자에 의해 유도될 수 있다. 알레르기성 천식을 일으키는 다른 추가의 직업적 또는 환경적 알레르겐은 동물 생성물, 곤충 분진, 해양 생물, 식물 생성물, 과일, 종자, 잎 및 화분, 유기 염료 및 잉크, 미생물제, 효소, 치료제, 멸균제, 및 무기 및 유기 화학물질을 포함할 수 있다.

아토피성 피부염 (습진, 신경피부염, 아토피성 습진 또는 베스니에 양진으로도 공지됨)은 아토피의 가족성 및 면역학적 양상을 갖는 환자의 하위세트에 특이적인 통상적인 만성 피부 장애이다. 주요 양상은 특정 부위에 편향된, 특징적인 대칭적으로 분포된 피부 발진을 유도하는, 소양성 피부 염증 반응이다. 또한, 형질 세포에 의한 빈번한 IgE의 과다생산이 있다. 아토피성 피부염이 알레르기성 비염 및 천식 및 높은 IgE 수준과 연관되기 때문에 이는 아토피의 피부 형태로 분류되나, 피부염의 중증도는 피부 시험 상의 알레르겐에 대한 노출과 항상 상호관련되지는 않으며, (다른 알레르기성 질환과 달리) 탈감작은 효과적인 치료가 아니다. 높은 혈청 IgE가 알레르기성 천식 진단을 확증하지만, 정상 수준이 이를 배제하지는 않는다. 질환의 발병은 임의의 연령에서 일어날 수 있으며, 병변은 급성으로 홍반성 부종성 구진 또는 비늘성 플라크를 수반하기 시작한다. 가려움증은 삼출 및 가피, 이어서 만성 태선화에 이른다. 세포 수준에서, 급성 병변은 부종성이고, 진피는 단핵세포, CD4 림프구로 침윤된다. 호중구, 호산구, 형질 세포 및 호염기구는 드물지만, 탈과립화 비만 세포가 존재한다. 만성 병변은 표피 증식증, 과다각화증 및 부전각화증을 특징으로 하고, 진피는 단핵 세포, 랑게르한스 세포 및 비만 세포로 침윤된다. 작은 신경의 신경다발막의 관여를 비롯한 초점성 영역의 섬유증이 또한 존재할 수 있다.

알레르기성 위장병증 (호산구성 위장병증으로도 공지됨)은 다수의 IgE 식품 감수성이 국부 위장관 점막 반응과 연관된 비통상적 아토피성 징후이다. 이는 성인에는 드물지만, 유아에서는 보다 통상적이나, 일시적이다. 섭취된 식품 알레르겐이 공장 점막에서 국부 IgE 항체와 반응하는 경우에 상태 결과는 비만세포 매개물을 유리시키고, 식사 직후 위장 증상을 일으킨다. 계속된 노출은 만성 염증을 일으켜, 위장 단백질 손실 및 저단백혈증 부종을 일으킨다. 염증을 일으킨 소장 점막을 통한 혈액 손실은 철 결핍성 빈혈을 일으키기에 충분히 유의할 수 있다. 알레르기 반응은 알레르겐 노출 후에 상부 위장 점막에서 국부적으로 일어나지만, 알레르겐 회피로 해결된다.

아나필락시스 및 두드러기는 명백하게 IgE-매개되지만, 이들은 유전적 결정기가 결여되어 있고, 아토피성 개체에게 편향되지 않는다. 아나필락시스는 여러 기관계, 통상적으로 심혈관, 호흡기, 피하 및 위장이 동시에 관여하는 급성 전신 알레르기 반응이다. 반응은 면역학적으로 매개되고, 대상체가 이전에 감작된 알레르겐에 노출됨에 따라 발생한다. 두드러기 및 혈관부종은 표재성 피부 혈관 내의 히스타민 자극 수용체로부터 일어나는 물리적 종창, 홍반 및 가려움증을 지칭하고, 전신 아나필락시스의 특징적 피부 특성이다. 전신 아나필락시스는 약물, 곤충 독 또는 식품으로부터 일어나는, 다수의 기관에서의 동시적인 IgE-매개 반응의 발생이다. 이는 알레르겐 유도된, 비만 세포 로딩 IgE에 의해 급작스럽게 일어나고, 다양한 중요 기관의 기능에 깊고 생명을 위협하는 변경을 일으킨다. 항상 동일한 정도는 아닐지라도, 혈관 허탈, 급성 기도 폐쇄, 피부 혈관확장 및 부종, 및 위장 및 비뇨생식기 근육 연축이 거의 동시에 발생한다.

아나필락시스의 병리상태는 혈관부종 및 과다팽창된 폐와 함께 기도의 점막 막힘 및 초점성 무기폐를 포함한다. 세포 수준에서, 폐는 급성 천식 발병 동안의 것과 유사하게 보이고, 기관지 점막하선의 과다분비, 점막 및 점막하 부종, 기관지주위 혈관 울혈 및 기관지 벽의 호산구증가증을 갖는다. 폐 부종 및 출혈이 존재할 수 있다. 기관지 근육 연축, 과다침윤, 및 심지어 폐포의 파열이 또한 존재할 수 있다. 인간 아나필락시스의 중요한 양상은 부종, 혈관 울혈, 및 후두, 기관, 후두개 및 하인두의 고유판에서의 호산구증가증이다.

알레르겐에 대한 노출은 섭취, 주사, 흡입, 또는 피부 또는 점막과의 접촉을 통할 수 있다. 반응은 알레르겐에 대한 노출 후 수초 내지 수분 이내에 시작된다. 초기의 두려움, 또는 위험에 임박해 있는 감각, 및 이어서 급속한 심혈관, 호흡기, 피부 및 위장 중 하나 이상의 표적 기관계에서의 증상이 있을 수 있다.

아나필락시스의 원인이 되는 알레르겐은 아토피와 통상적으로 연관된 것과 상이하다. 식품, 약물, 곤충 독 또는 라텍스가 통상적인 원천이다. 식품 알레르겐은 갑각류, 연체동물 (예를 들어, 랍스터, 새우, 게), 어류, 콩과식물 (예를 들어, 땅콩, 완두콩, 콩, 감초), 종자 (예를 들어, 참깨, 면실, 캐러웨이, 겨자, 아마인, 해바리기), 견과류, 장과류, 난백, 메밀 및 우유에서 발견되는 것들을 포함한다. 약물 알레르겐은 이종 단백질 및 폴리펩티드, 폴리사카라이드 및 합텐성 약물에서 발견되는 것들을 포함한다. 곤충 알레르겐은 꿀벌, 말벌, 호박벌, 나나니벌 및 불개미를 비롯한 막시류 곤충을 포함한다.

에피네프린이 아나필락시스에 대한 전형적인 치료이나, 항히스타민제 또는 다른 히스타민 차단제가 덜 심각한 두드러기 또는 혈관부종 반응에 전형적으로 처방된다.

F. 조합 요법

본 발명의 방법은 IgE-매개 장애에 대한 공지된 치료 방법과 조합하여 또는 추가의 치료 단계로서 또는 추가의 치료 제제의 성분으로서 조합될 수 있다.

예를 들어, 항히스타민제, 특히 비-진정 항히스타민제가 본 발명의 항-IgE 항체 전에, 선행하여 또는 동반하여 투여될 수 있다. 적합한 항히스타민제는 알킬아민 (예를 들어, 클로르페니라민), 에탄올아민 (예를 들어, 디페닐히드라민) 및 페노티아진 (예를 들어, 프로메타진)의 것들을 포함한다. 많은 항히스타제가 이펙터 세포 상의 그의 수용체 부위를 차단함으로써 히스타민의 약리학적 효과를 길항하나, 다른 통상적 항히스타민 약물은, 감작되고 알레르겐-특이적 IgE로 아밍된 비만 세포로부터의 히스타민 방출을 차단함으로써 작동한다 (예를 들어, 크로몰린 소듐). 항히스타민제의 예는 아스테미졸, 아자타딘 말레에이트, 브로페니라민 말레에이트, 카르비녹사민 말레에이트, 세티리진 히드로크롤라이드, 클레마스틴 푸마레이트, 시프로헵타딘 히드로크롤라이드, 덱스브롬페니라민 말레에이트, 덱스클로르페니라민 말레에이트, 디멘히드리네이트, 디펜히드라민 히드로크롤라이드, 독실아민 숙시네이트, 펙소펜다딘 히드로크롤라이드, 테르페나딘 히드로크롤라이드, 히드록시진 히드로크롤라이드, 로라티딘, 메클리진 히드로크롤라이드, 트리펠란아민 시트레이트, 트리펠렌아민 히드로크롤라이드, 트리프롤리딘 히드로크롤라이드를 포함한다.

IgE-매개 장애의 특정한 증상 (예를 들어, 초기 반응)은 교감신경흥분제 또는 기관지확장 효과를 갖는 약물을 사용하여 호전될 수 있다. 에피네프린은 종종 0.2 - 0.5 mL의 1:100 수용액의 용량으로 피하 투여되는 광범위 작용 알파 및 베타-아드레날린제이다. 1:200 현탁액 중의 보다 장기 작용 형태의 에피네프린 (즉, 테르부탈린)이 또한 보다 장기 지속기간 효과가 요망되는 경우에 사용된다. 적합한 추가의 베타-아드레날린제는 비강내로 (예를 들어, 휴대용 네뷸라이저, 간헐적 양압 호흡 장치 또는 계량-용량 압축 흡입기) 또는 경구로 투여하기 위한 알부테롤, 피르부테롤, 메타프로테레놀, 살메테롤, 이소에타린 및 포르메테롤을 포함한다.

기관지확장은 또한, 특히 상기 교감신경흥분성 약물과 조합되어 투여되는 경우에, 크산틴의 투여를 통해 달성될 수 있다. 예시적인 크산틴은 아미노필린 (iv. 250-500 mg) 및 테오필린 (경구, 10-20 μg/ml 혈청 농도)을 포함한다.

다양한 IgE-매개 장애로부터의 다른 증상 (예를 들어, 후기 반응)은 글루코코르티코이드 또는 항염증 효과를 갖는 다른 약물로의 치료에 의해 감쇠될 수 있다. 프레드니손 (1일 30-60 mg)은 심각한 발병에 대해 전신적으로 투여되는 한편, 베클로메타손 디프로피오네이트, 트리암시놀론 아세토니드 및 플루니솔리드는 장기간 유지 요법으로서 에어로졸화된 형태로 투여된다. 항염증 효과를 갖는 추가의 코르티코스테로이드는 베타메타손, 부데소니드, 덱사메타손, 플루드로코르티손 아세테이트, 플루니솔리드, 플루티카손 프로피오네이트, 히드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론, 프레드니손, 트리암시놀론을 포함한다.

또한, 본 발명의 치료 방법과 조합하여 사용될 수 있는 비스테로이드성 항염증 약물은 아세트아미노펜, 아스피린, 브롬페낙 소듐, 디클로페낙 소듐, 디플루니살, 에토돌락, 페노프로펜 칼슘, 플루르비프로펜, 이부프로펜, 인도메타신, 케토프로펜, 메클로페나메이트 소듐, 메페남산, 나부메톤, 나프록센, 나프록센 소듐, 옥시펜부타존, 페닐부타존, 피록시캄, 술린닥, 톨메틴 소듐을 포함한다.

추가로, 최대 치료 이익은 또한 충혈제거제 (예를 들어, 페닐에프린, 페닐프로판올아민, 슈도에파드린), 기침 억제제 (예를 들어, 덱스트로메토르판, 코데인, 또는 히드로코돈) 또는 진통제 (예를 들어, 아세트아미노펜, 아스피린)의 투여로 달성될 수 있다.

알레르겐 탈감작은 알레르겐이 알레르기 반응을 감소 또는 제거하기 위한 목적으로 환자에게 주사되는 치료 형태이다. 이는 또한 알레르겐 면역요법, 저감작 또는 알레르기 주사 요법으로 공지되어 있다. 이는 종종 다른 알레르기 치료와 조합되어 사용되지만, 1차 치료로는 흔히 사용되지 않는다. 이는 알레르겐 회피가 불가능한 경우에 성공적으로 이용되어 왔다. 전형적인 알레르겐 탈감작 치료는 주사 부위에서 일시적으로 작은 국부 영역의 염증을 생성시키는 용량에 이를 때까지 주 1회 또는 2회 용량을 증가시키면서 멸균 알레르겐을 피하 주사하는 것을 포함한다. 이어서, 상기 용량이 2-4주마다 1회의 유지 스케줄로 제공된다. 알레르기 탈감작은 알레르기성 천식 및 알레르기성 비염의 치료에 가장 자주 사용되지만, 이는 아나필락시스의 치료에도 성공을 거두어 왔다. 탈감작은 또한 미네랄 오일 중의 수성 항원의 에멀젼인 불완전 프로인트 아주반트와 같은 아주반트의 사용을 통해 효과적으로 사용되어 왔다. 생리적 효과는 알레르겐의 액적이 점진적으로 방출되는 불용성 액체 데포를 생성한다. 또 다른 형태의 알레르겐 탈감작은 단량체 알레르겐을 글루타르알데히드와 중합하여 상대적으로 낮은 알레르기항원성 (즉, 알레르기 반응을 일으키는 것)을 갖지만, 효과적인 정도의 면역원성을 유지하는 분자를 생성하는 것이다.

G. 제약 투여량 및 투여

본 발명의 제약 조성물의 투여량 및 바람직한 약물 농도는 고려되는 특정한 용도에 따라 달라질 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-IgE 항체에 대한 투여량은 인간 환자에 대해 용량당 약 150 mg 내지 약 450 mg이다. 일부 실시양태에서, 투여량은 인간 환자에 대해 용량당 약 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 350 mg, 400 mg, 또는 450 mg 중 임의의 것이다. 일부 실시양태에서, 항체는 피하로 또는 정맥내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항체는 매달 간격 또는 매달 초과의 간격으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항체는 매분기 간격으로 투여된다. 요법의 진행은 통상의 기술 및 검정에 의해, 예컨대 혈청 총 IgE 수준, 알레르겐-특이적 IgE 수준, 혈청 총 IgE 및 알레르겐-특이적 IgE의 알레르겐-유도된 증가의 측정 등에 의해 치료 동안 모니터링될 수 있다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-IgE 항체는 포유동물에게 피하 (즉, 피부 아래) 투여에 의해 투여된다. 이러한 목적을 위해, 제제는 시린지를 사용하여 주사될 수 있다. 그러나, 주사 장치 (예를 들어, 인젝트-이즈(INJECT-EASE)™ 및 젠젝트(GENJECT)™ 장치); 주사기 펜 (예컨대, 젠펜(GENPEN)™); 자동-주사기 장치, 무바늘 장치 (예를 들어, 메디젝터(MEDIJECTOR)™ 및 바이오젝터(BIOJECTOR)™) 및 피하 패치 전달 시스템과 같은 상기 제제의 투여를 위한 다른 장치가 이용가능하다.

H. 제조품 및 키트

또 다른 측면에서, 본원에 기재된 항-IgE 항체를 포함하는 제조품 또는 키트가 제공된다. 제조품 또는 키트는 본 발명의 방법에서의 항체의 사용 지침서를 추가로 포함할 수 있다. 따라서, 특정 실시양태에서, 제조품 또는 키트는, 개체에게 항-IgE 항체의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 IgE-매개 장애를 치료 또는 예방하는 방법에서 항-IgE 항체를 사용하는 것에 대한 지침서를 포함한다. 특정 실시양태에서, 개체는 인간이다. 일부 실시양태에서, 개체는 중증, 중등도 또는 경도 천식을 갖는다.

제조품 또는 키트는 추가로 용기를 포함할 수 있다. 적합한 용기는 예를 들어 병, 바이알 (예를 들어, 이중 챔버 바이알), 시린지 (예컨대, 단일 또는 이중 챔버 시린지) 및 시험 튜브를 포함한다. 용기는 다양한 물질, 예컨대 유리 또는 플라스틱으로 형성될 수 있다. 용기는 제제를 보유한다. 제조품 또는 키트는 라벨 또는 포장 삽입물을 추가로 포함할 수 있으며, 이는 용기 상에 있어나 이와 연관되고, 재구성을 위한 안내 및/또는 제제의 용도를 나타낼 수 있다. 라벨 또는 포장 삽입물은 제제가 개체에서 IgE-매개 장애를 치료 또는 예방하기 위한 피하, 정맥내 또는 다른 방식의 투여에 유용하거나 이를 위해 의도된다는 것을 추가로 나타낼 수 있다. 제제를 보유하는 용기는 단일-사용 바이알 또는 재구성 제제의 반복 투여 (예를 들어, 2-6회 투여)를 가능하게 하는 다중-사용 바이알일 수 있다. 제조품 또는 키트는 적합한 희석제 (예를 들어, BWFI)를 포함하는 제2 용기를 추가로 포함할 수 있다. 희석제 및 동결건조된 제제의 혼합시에, 재구성된 제제에서의 최종 단백질, 폴리펩티드 또는 소분자 농도는 일반적으로 적어도 50 mg/ml일 것이다. 제조품 또는 키트는 상업적, 치료적 및 사용자 입장에서 바람직한 다른 물질, 예를 들어 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘, 시린지, 및 사용 지침서가 있는 포장 삽입물을 추가로 포함할 수 있다.

구체적 실시양태에서, 본 발명은 단일 용량-투여 단위에 대한 키트를 제공한다. 이러한 키트는 단일 또는 다중-챔버의 예비-충전된 시린지를 포함하는, 치료 단백질 또는 항체의 수성 제제의 용기를 포함한다. 예시적인 예비-충전된 시린지는 베터 게엠베하(Vetter GmbH, 독일 라벤스부르크)로부터 입수가능하다.

본원의 제조품 또는 키트는 임의로, 제2 의약을 포함하는 용기를 추가로 포함하고, 여기서 항-IgE 항체가 제1 의약이며, 상기 제조품 또는 키트는 대상체를 유효량의 제2 의약으로 치료하는 것에 대한 라벨 또는포장 삽입물 상의 지침서를 추가로 포함한다. 제2 의약은 상기 기재된 것들 중 임의의 것일 수 있으며, 예시적인 제2 의약은 항-IgE 항체, 항히스타민제, 기관지확장제, 글루코코르티코이드, NSAID, 충혈제거제, 기침 억제제, 진통제, TNF-길항제, 인테그린 길항제, 면역억제제, IL-4 길항제, IL-13 길항제, 이중 IL-4/IL-13 길항제, DMARD, B-세포 표면 마커에 결합하는 항체, 및 BAFF 길항제이다.

또 다른 실시양태에서, 자동-주사기 장치로 투여하기 위한 본원에 기재된 제제를 포함하는 제조품 또는 키트가 본원에 제공된다. 자동-주사기는 활성화시에 환자 또는 투여자로부터 추가로 필요한 작용없이 그의 내용물을 전달하는 주사 장치로 설명될 수 있다. 이들은 특히, 전달 속도가 일정하여야 하고 전달 시간이 수 분 초과인 경우에 치료 제제의 자가-투약에 적합하다.

본 발명은 하기 실시예를 참조로 보다 충분히 이해될 것이다. 그러나 이들 실시예가 본 발명의 범주를 제한하는 것으로 해석되지 않아야 한다. 본 개시내용 전반에 걸쳐 모든 인용문헌은 명백하게 본원에 참고로 포함된다.

실시예

실시예 1: 1a/b 상 연구에서 건강한 지원자 및 알레르기성 비염을 앓는 대상체의 혈청 IgE를 감소시킨 항-M1 프라임 모노클로날 항체, MEMP1972A, 치료

상승된 IgE 수준은 알레르기성 천식을 비롯한 알레르기성 질환과 연관된다. 막 IgE는 인간 IgE-스위칭된 B-세포, IgE 기억 B-세포 및 IgE 형질모구에 존재하는, 'M1 프라임'으로 칭해지는 서열을 포함한다. MEMP1972A는 M1 프라임을 표적화하는 인간화 모노클로날 항체이며, 이는 시험관내에서 아폽토시스 및/또는 항체-의존성 세포-매개 세포독성 메카니즘을 통해 M1-프라임 발현 세포를 고갈시키고, 따라서 다른 이뮤노글로불린 이소형에 영향을 미치지 않으면서 IgE 수준을 감소시킨다. 알레르기성 천식의 치료를 위한 MEMP1972A의 개발을 건강한 지원자 및 알레르기성 대상체에서 안전성을 시험하기 위해 1 상 시험으로 개시하였다.

방법

2가지 1 상, 무작위, 맹검, 위약-제어된 연구로 (1) 건강한 성인 지원자 (n=31 MEMP1972A, n=14 위약) 및 (2) 알레르기성 비염을 앓는 성인 대상체 (n=24 MEMP1972A, n=12 위약 [NCT01160861])에서 MEMP1972A의 안전성, 내약성, 약동학 및 약력학을 조사하였다.

1A 상 연구. 총 45명의 건강한 지원자를 각각 7명의 대상체의 7가지 사전규정된 단일 상승-용량 코호트 (코호트 A-G)로 등록시켰다 (표 1). 치료 제1일 전 35일 이내에 대상체를 스크리닝하여 연구에 참가하기 위한 그의 적격성을 평가하였고, 적격 대상체는 치료 전날 (제-1일)에 클리닉에서 체크받도록 요구하였다. 각각의 적격 대상체를 단일 상승 용량 증량 스키마에 따라 MEMP1972A 또는 상응하는 위약의 단일 정맥내 (IV) 또는 피하 (SC) 용량을 투여받도록 무작위로 배정하였다 (도 1).

<표 1> 1A 상 연구에 대한한 연구 코호트

차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포를 사용하여 MEMP1972A를 생산하고, 정제하고, 주사용수를 사용하여 30 mM 히스티딘/히스티딘 히드로클로라이드, 140 mM 아르기닌 히드로클로라이드, 및 0.04% (w/v) 폴리소르베이트 20 (pH 5.5) 중 100 mg/ml MEMP1972A로서 제제화하였다. MEMP1972A 약물 제품은, 13-mm 플루오로-수지 적층된 마개로 막고 플립-오프 플라스틱 밀봉부를 갖는 알루미늄 캡으로 캡핑된 단일-사용, 2-mL 투명 유리 바이알 내의 IV 및 SC 투여용 멸균 보존제-무함유 액체 용액으로서 공급되었다. 각각의 바이알은 활성 제약 성분 (API) 150 mg을 함유하였다. 희석제 및 MEMP1972A에 상응하는 위약은 API 없이 약물 제품과 동일한 부형제를 함유하였다. 위약은 약물 제품과 동일한 바이알 구성으로 공급되었다. 희석제는, 희석제 25 mL를 함유하는, 20-mm 플루오로-수지 적층된 마개로 막고 플립-오프 플라스틱 밀봉부를 갖는 알루미늄 캡으로 캡핑된 50-mL 투명 유리 바이알로 공급되었다. MEMP1972A를 제1일에 0.003 내지 5 mg/kg IV 또는 3 mg/kg SC 범위의 단일 용량으로 투여하였다. MEMP1972A, 위약 및 희석제 바이알을 사용시까지 2℃-8℃에서 냉장시켰다. 희석제를 사용하여 비어있는 멸균 바이알 내로 MEMP1972A 또는 위약을 희석함으로써 코호트 A-D의 IV 주입을 위한 용량을 제조하였다. 희석제를 사용하여 희석하면, MEMP1972A 또는 위약 용액을 사용 전에 8시간 이하 동안 2℃-25℃의 냉장 온도 또는 실온에서 보관하였다. IV 코호트 E, F 및 SC 코호트 G에 대해서는 희석을 요구하지 않았다. IV 용량을 투여받는 대상체에 대해, MEMP1972A 또는 위약을 1시간의 지속시간 동안 미세내경 연장 세트를 갖는 시린지 펌프를 사용하여 전달하였다. SC 용량을 투여받는 대상체에 대해, MEMP1972A 또는 위약을 시린지 (BD 인슐린 시린지)를 사용하여 SC 주사에 의해 투여하였다. 3 mg/kg 용량의 투여에 대해 (코호트 G), 5/8 인치 길이의 25 또는 27 게이지 바늘을 갖는 1.0 cc 시린지를 사용하여 주사 부위당 1.0 mL 이하를 SC 전달하였다. SC 주사는 복부로 투여하였다.

제1일에 연구를 시작한 후, 제1 추적 평가를 위해 제5일에 대상체에게 다시 클리닉으로 가도록 요구하였다. 7가지 코호트 (A-G)에 대해, 물리적 평가 및 약동학 (PK) 샘플을 제1일, 투여전 30분, 연구 약물 투여 후 0-60분, 및 연구 약물 투여 후 24시간에 수득하였다. 추가의 평가 및 PK 샘플을 제5, 14, 29, 85 및 168일에 수득하였다. 혈청 샘플을, 정량적 면역검정에 의해 MEMP1972A의 총 혈청 수준에 대해, 브리지 ELISA를 사용하여 항-치료 항체 (ATA)의 존재에 대해 평가하고, 표준 임상 검정, 이뮬라이트 2000 (지멘스 메디칼 솔루션즈 다이아그노틱스, 캘리포니아주 로스앤젤레스)을 사용하여 총 IgE 및 알레르겐-특이적 IgE를 측정하였다. 문헌 [Li, et al., Ann Clin Lab Sci., 34(1):67-74 (2004)]을 참조한다.

당업계에 공지된 방법을 사용하여 혈청 샘플 내의 항-치료 항체의 존재를 검출할 수 있다. 예를 들어, 인간 혈청 내의 MEMP1972A에 대한 항체의 검출을 위해, 혈청 샘플을 1/50 희석하고 가교 ELISA에 적용하였다. 희석된 혈청 70 μL 샘플을, 2.0 μg/mL 비오티닐화 MEMP1972A 및 2.0 μg/mL 디곡시게닌-접합 MEMP1972A를 함유하는 마스터 믹스 70 μL와 함께 96-웰 폴리프로필렌 마이크로플레이트 (코닝 인크.(Corning Inc.), 매사추세츠주 로웰)의 웰당 로딩하여 MEMP1972A에 대항하여 지시된 항체를 포획하였다. 마이크로플레이트를 교반하면서 실온에서 16 내지 24시간 동안 밤새 인큐베이션하였다. 이어서, 폴리프로필렌 마이크로플레이트로부터의 샘플을 스트렙타비딘-코팅된 96-웰 리액티-바인드 하이 바인드(Reacti-Bind High Bind) 마이크로플레이트 (피어스(Pierce), 일리노이주 록포드)로 옮기고, 교반하면서 실온에서 2시간 동안 인큐베이션하여 가교된 복합체를 포획하였다. 웰을 세척한 후, 양고추냉이 퍼옥시다제 (HRP)와 접합된 마우스 항-디곡신 항체를 첨가하고, 샘플을 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 후속으로, 퍼옥시다제 기질, 테트라메틸 벤지딘을 첨가하여 색상을 발색시키고, 1M 인산을 첨가하여 반응을 중지시켰다. 플레이트를 Elx800 판독기 (바이오텍(BioTEK), 버몬트주 위누스키)를 사용하여 검출 흡광도에 대해 450 nm에서, 참조 흡광도에 대해 630 nm에서 판독하였다. 항체 역가를 로그 역가 데이터 축소 프로그램, 왓슨(Watson) LIMS 버전 7.2.0.04 (써모 일렉트론 코포레이션(Thermo Electron Corp.), 콜로라도주 루이빌)에 의해 결정하였다.

혈액 RNA 샘플을 사용하여 정량적 폴리머라제 연쇄 반응 (qPCR)에 의해 M1 프라임 mRNA 발현을 측정하였다. 간략하게, RNA를 팍스젠 혈액 RNA 키트 (퀴아젠 인크.)를 사용하여 환자로부터 수집한 전혈 샘플로부터 정제하였다. 정제 후, 총 RNA 250 ng을 바이오라드(BioRad) C1000 열 순환기 (바이오라드, 캘리포니아주 허큘레스) 상에서 제조업체의 지침에 따라, 슈퍼스크립트 빌로(SuperScript VILO) cDNA 합성 키트 (11754-050, 인비트로젠(Invitrogen))를 사용하여 cDNA로 역전사시켰다. qPCR의 경우, 정방향 프라이머 (5'-CAGCGAGCGGTGTCTGT- 3') (서열 42), 역방향 프라이머 (5'- GTGGCAGAGCACCCTATCC - 3') (서열 41) 및 6 FAM-MGB 프로브 (5'- CCAGCCCGGGATTT - 3') (서열 43)를 사용하여 SDS2.3 소프트웨어 (퀴아젠 인크.(Qiagen Inc.))를 사용하는 ABI7900HT 고속 실시간 PCR 기계 (퀴아젠 인크.) 상에서 cDNA를 증폭시켰다.

적격 대상체에 대한 포함 기준은 다음과 같았다: 18-55세 연령; 체질량 지수 (BMI) 18 내지 32 kg/m²; 체중 40-120 kg; 병력, 12-유도 ECG, 및 35-37.5℃의 경구 체온, 90-140 mm Hg의 수축기 혈압 및 50-90 mm Hg의 확장기 혈압을 비롯한 활력 징후에서 임상적으로 유의한 발견이 없는 것으로 결정된 우수한 건강; 스크리닝 및 제-1일 방문시 호중구 카운트 > 1,600개 세포/μL; 스크리닝 및 제-1일 방문시 혈소판 카운트 > 140,000개 세포/μL; 남성, 또는 수술적으로 불임되거나, 지난 해 동안 폐경후에 있거나 또는 연구 약물의 용량 후에 적어도 6개월 (> MEMP1972A의 5 예상 반감기) 동안 임신에 대해 2가지 허용되는 피임 방법을 사용한 여성; 비흡연자, 뿐만 아니라 실험실 스크리닝 통과가 가능하고 지정된 제한 기간에 흡연 자제가 가능한 경미한 또는 간헐적 흡연자; 및 추적 기간을 포함하여, 연구의 필요조건을 충족할 수 있는 것으로 간주됨. 배제 기준은 다음을 포함하였다: 증상의 최근 병력 및/또는 이전 5년 이내의 치료의 증거를 갖는 천식 또는 알레르기의 활성 진단; 아나필락시스, 및 과민증 또는 약물 알레르기의 병력. 추가의 배제 기준은 clinicaltrials.gov 월드 와이드 웹에서 식별자 NCT01160861을 사용하여 찾아볼 수 있다.

1B 상 연구. 계절성 또는 통년성 알레르기성 비염 (SAR 또는 PAR)을 앓는 총 36명의 대상체를 3가지의 계획된 다중 상승 용량 코호트 (X, Y, Z)에 대략 2:1 MEMP1972A:위약의 치료 배정을 기초로 하여 코호트당 12명 (8명 활성 및 4명 위약)의 대상체로 무작위로 분류하였다 (표 2). 치료 제1일 전 35일 이내에 대상체를 스크리닝하여 연구에 참가하기 위한 대상체의 적격성을 평가하였다. 각각의 적격 대상체를 용량 개시 및 증량 스키마에 따라 MEMP1972A 또는 상응하는 위약의 단일 정맥내 (IV) 또는 피하 (SC) 용량을 투여받도록 무작위로 배정하였다 (도 2). 용량 수준은 제1 코호트 (X)에서 1.5 mg/kg IV, 다음으로 제2 코호트 (Y)에서 5 mg/kg IV, 이어서 제3 코호트 (Z)에서 3 mg/kg SC 투여였다. 각각의 대상체에게 4주마다 투여되는 3회 용량을 투여하였다. 제1 코호트 (코호트 X: 1.5 mg/kg IV)에서의 투여는 1A 상 연구에서의 A-E 코호트로부터의 임상적 및 실험실 데이터 검토를 기초로 하였다. 제2 코호트 (코호트 Y: 5 mg/kg IV)에 대한 투여의 개시는 1A 상 연구의 F 코호트로부터의 데이터 및 1.5 mg/kg 다중-용량 IV 코호트 (X)로부터의 투여후 14일의 추적 데이터 검토를 기초로 하였다. 제3 코호트 (코호트 Z: 3 mg/kg SC)에 대한 투여의 개시는 1A 상 연구에서의 3 mg/kg 단일-용량 SC 코호트 (G)로부터의 투여후 14일의 추적 데이터, 뿐만 아니라 1.5 mg/kg 다중-용량 IV 코호트 (X)의 모든 대상체로부터의 제1 용량후 14일의 추적 검토를 기초로 하였다.

<표 2> 1B 상 연구에 대한 연구 코호트

MEMP1972A를 제1일, 제29일 및 제57일에 코호트 연구에 따라 1.5 mg/kg IV, 5.0 mg/kg IV 또는 3.0 mg/kg SC의 용량으로 투여하였다. 희석제를 사용하여 비어있는 멸균 바이알 내로 MEMP1972A 또는 위약을 희석함으로써 코호트 X (1.5 mg/kg IV)의 IV 주입을 위한 용량을 제조하였다. 코호트 Y (5.0 mg/kg IV) 및 코호트 Z (3.0 mg/kg SC)에 대해서는 희석을 요구하지 않았다. IV 용량을 투여받는 대상체에 대해, MEMP1972A 또는 위약을 처음 2회분 용량 (제1일 및 제29일)의 경우 1시간의 지속시간 동안, 제3 용량 (제57일)의 경우 30분의 지속시간 동안 미세내경 연장 세트를 갖는 시린지 펌프를 사용하여 전달하였다. SC 용량을 투여받는 대상체에 대해, MEMP1972A 또는 위약을 시린지 (BD 인슐린 시린지)를 사용하여 SC 주사에 의해 투여하였다. 3 mg/kg 용량의 투여에 대해 (코호트 Z), 5/8 인치 길이의 25 또는 27 게이지 바늘을 갖는 1.0 cc 시린지를 사용하여 주사 부위당 1.0 mL 이하를 SC 전달하였다. SC 주사는 복부로 투여하였다.

코호트 X 및 Y에 대해, 물리적 평가 및 약동학 (PK) 샘플을 제1일의 마지막 연구 약물 주입 0-60분 후, 뿐만 아니라 투여 24시간 후에 수득하였다. 제2 용량 (제29일)에 대해, PK 샘플을 투여 전 및 마지막 주입 0-60분 후에 수득하였다. 제3 및 최종 용량 (제57일)에 대해, 샘플을 투여 전, 뿐만 아니라 마지막 주입 0-60분 후에 수득하였다. 추가의 PK 샘플을 제8, 15, 85, 140 및 224일에 수득하였다. 코호트 Z에 대해, PK 샘플을 제1일의 연구 약물 주입 0-60분 후, 뿐만 아니라 투여 24시간 후에 수득하였다. 제2 및 제3 용량 (제29 및 57일)에 대해, PK 샘플을 투여전에만 수득하였다. 추가의 PK 샘플을 제8, 15, 36, 64, 85, 140 및 224일에 수득하였다. 혈청 샘플을, 정량적 면역검정에 의해 MEMP1972A의 총 혈청 수준에 대해, 브리지 ELISA를 사용하여 항-치료 항체 (ATA)의 존재에 대해 평가하고 (1A 상 연구에 기재된 검정 참조), 표준 임상 검정, 이뮬라이트 2000 (지멘스 메디칼 솔루션즈 다이아그노틱스, 캘리포니아주 로스앤젤레스)을 사용하여 총 IgE 및 알레르겐-특이적 IgE를 측정하였다. 문헌 [Li, et al., Ann Clin Lab Sci., 34(1):67-74 (2004)]을 참조한다.

혈액 RNA 샘플을 사용하여 정량적 폴리머라제 연쇄 반응 (qPCR)에 의해 M1 프라임 mRNA 발현을 측정하였다. 간략하게, RNA를 팍스젠 혈액 RNA 키트 (퀴아젠 인크.)를 사용하여 환자로부터 수집한 전혈 샘플로부터 정제하였다. 정제 후, 총 RNA 250 ng을 바이오라드 C1000 열 순환기 (바이오라드, 캘리포니아주 허큘레스) 상에서 제조업체의 지침에 따라, 슈퍼스크립트 빌로 cDNA 합성 키트 (11754-050, 인비트로젠)를 사용하여 cDNA로 역전사시켰다. qPCR의 경우, 정방향 프라이머 (5'-CAGCGAGCGGTGTCTGT- 3') (서열 42), 역방향 프라이머 (5'- GTGGCAGAGCACCCTATCC - 3') (서열 41) 및 6 FAM-MGB 프로브 (5'- CCAGCCCGGGATTT - 3') (서열 43)를 사용하여 SDS2.3 소프트웨어 (퀴아젠 인크.)를 사용하는 ABI7900HT 고속 실시간 PCR 기계 (퀴아젠 인크.) 상에서 cDNA를 증폭시켰다.

적격 대상체에 대한 포함 기준은 다음과 같았다: 18-55세 연령; 계절성 또는 통년성 알레르기성 비염의 진단; 체질량 지수 (BMI) 18 내지 32 kg/m²; 체중 40-120 kg; 총 IgE 혈청 수준 >10 IU/ml 또는 ≥10 IU/ml 및 적어도 하나의 알레르겐-특이적 IgE >0.1 kIU/L; 병력, 12-유도 ECG, 및 35-37.5℃의 경구 체온, 90-140 mm Hg의 수축기 혈압 및 50-90 mm Hg의 확장기 혈압을 비롯한 활력 징후에서 임상적으로 유의한 발견이 없는 것으로 결정된 우수한 건강; 남성, 또는 수술적으로 불임되거나, 지난 해 동안 폐경후에 있거나 또는 연구 약물의 용량 후에 적어도 6개월 (MEMP1972A의 > 5 예상 반감기) 동안 임신에 대해 2가지 허용되는 피임 방법을 사용한 여성; 및 추적 기간을 포함하여, 연구의 필요조건을 충족할 수 있는 것으로 간주됨. 배제 기준은 다음을 포함하였다: 아나필락시스, 과민증 또는 약물 알레르기의 병력; 이전 3년 이내에 1일 제어제 의약의 사용 또는 단기-작용 기관지확장제의 구급 사용을 필요로 하는 천식 진단의 병력; 및 스크리닝시 예측된 1초 강제 호기량 (FEV₁) < 80%. 추가의 배제 기준은 clinicaltrials.gov 월드 와이드 웹에서 식별자 NCT01160861을 사용하여 찾아볼 수 있다.

결과

MEMP1972A는 1a/b 상 연구 둘 다에서 내약성이 우수하였다. 단일 또는 다중 IV 투여 후의 약동학적 특성의 평가는 용량-비례적 노출을 나타내었다. 비-구획 분석을 기초로, 평균 말단 반감기는 20-21일의 범위였고, 평균 클리어런스는 2가지 연구에 걸쳐 2.2-2.7 mL/일/kg이었다.

1a 상 연구에서, IV 투여 후에, MEMP1972A는 IgG1 모노클로날 항체에 대한 데이터와 일치하게 느린 평균 클리어런스 (2.31-2.74 mL/일/kg) 및 긴 말단 반감기 (~21일)를 가졌다. 분포의 부피는 66.6 내지 81.6 ml/kg 범위였다. 평균 혈청 농도는 용량 비례적이었다 (도 3). 총 노출 (AUC_{0 - inf}) 및 C_max는 0.3 내지 5.0 mg/kg의 IV 코호트에 걸쳐 용량 수준이 증가함에 따라 용량 비례적 증가를 보여주었다 (표 3). 상대적 SC 생체이용률은 동일한 용량 수준의 IV 및 SC 코호트에 대한 평균 AUC_{0 - inf}의 비로 추정된 66.4%였다. 1b 상 연구에서, MEMP1972A 약동학 농도는 1.5 또는 5.0 mg/kg의 반복된 IV 투여 후에 용량 비례적이었다 (표 4; 도 4). 상대적 SC 생체이용률은 SC 용량에 대한 용량-정규화된 AUC_{0 - inf} 대 IV 코호트의 것의 비로 추정하였다. 평균 상대적 SC 생체이용률은 대략 55.1%였다.

MEMP1972A의 2가지 I 상 연구의 집단 PK 분석은 IV 투여 후에 19.6일의 평균 말단 반감기, 216 mL/일의 클리어런스 (CL) 및 3.5 L (V_c)의 분포의 중심 부피, 및 SC 투여 후에 68.8%의 생체이용률을 나타내었다. 체중은 CL 및 V_c에 대한한 유의한 공변량인 것으로 밝혀졌다.

MEMP1972A로의 치료는 혈청 총 IgE의 용량-의존성 감소를 일으켰다. 건강한 지원자에서, 3 및 5 mg/kg IV의 MEMP1972A의 단일 용량은 제85일에 기준선에 비해 각각 28% 및 23%의 혈청 총 IgE 감소를 일으킨 반면, 위약, 보다 낮은 IV 및 3 mg/kg SC 코호트에서는 감소가 관찰되지 않았다 (도 5a). 알레르기성 비염을 앓는 대상체에서, 5 mg/kg IV 및 3 mg/kg SC의 MEMP1972A의 3개월마다의 용량은 제85일에 기준선에 비해 각각 24% 및 26%의 평균 혈청 총 IgE 감소를 일으킨 반면, 위약 및 1.5 mg/kg IV 코호트에서는 유의한 감소가 관찰되지 않았다 (도 6). 혈청 총 IgE 감소는 두 연구 모두에서 투여 후 6개월 지속되었다 (도 5b 및 도 6). 제224일에, 알레르겐-특이적 IgE가 3 mg/kg SC 코호트에서 기준선으로부터 40% 유의하게 감소된 반면, 기준선으로부터 9%, 14% 및 33% 감소가 각각 위약, 1.5 mg/kg IV 및 5 mg/kg IV 환자에서 관찰되었다. M1 프라임-발현 B 세포/형질모구, IgE-생산 형질 세포 및 혈청 IgE 수준의 역학을 설명하는 PK-PD 모델에 의해 특성화시, I 상 연구 둘 다의 IgE 반응은 B 세포 고갈에 대한 MEMP1972A의 효과에 대해 2.7 μg/mL의 IC50 및 대략 130일의 IgE-생산 형질 세포의 반감기를 나타내었다. 이와 함께, 이들 데이터는 MEMP1972A를 사용하여 M1 프라임-발현 B 세포를 표적화하는 것이 알레르기성 질환을 앓거나 앓지 않는 인간 대상체에서 혈청 총 IgE의 감소를 일으킨다는 것을 나타낸다. 또한, MEMP1972A로의 치료는 혈청 총 IgE 수준의 용량-의존성 감소를 일으켰고, IgE의 감소는 최종 용량 후 6개월 동안 지속되었다. 1 상 연구 둘 다에서, 유해 사례 (AE) 프로파일은 MEMP1972A 및 위약 치료군 사이에서 유사하였고, 대부분의 사례는 경도 또는 중등도였다. 1a 상 단일 상승 용량 연구에서, 통상적으로 보고된 AE는 두통, 피로, 혈관 천자 부위 혈종 및 비인두염을 포함하였다. ≥ 1 치료-발현성 AE (TEAE)를 갖는 대상체의 비율은 위약-치료군 (11/14; 78.6%) 및 MEMP1972A 군 (21/31; 67.7%)에서 유사하였다. 대부분의 AE는 연구 약물과 관련되지 않은 것으로 간주되었다. 두통은 가장 빈번하게 보고된 연구 약물-관련 AE였다 (MEMP1972A-치료된 대상체에서 n = 5 [16.1%], 및 IV 위약-치료군에서 n = 1 [8.3%]). 1b 상 다중 상승 용량 연구에서, 가장 통상적인 AE는 두통, 비강 울혈, 요통, 어지럼증 및 피로였다. TEAE는 MEMP1972A-치료된 대상체의 83% (20/24) 및 위약-치료된 대상체의 75% (9/12)가 경험하였으며, 이들 대부분은 경도였다. 단일 중증 TEAE가 연구 동안 위약을 투여받은 대상체에 의해 보고되었다. MEMP1972A를 투여받은 대상체에서 가장 빈번하게 보고된 TEAE는 상기도 감염 (MEMP1972A-치료된 대상체에서 n = 7 [29.2%], IV 위약-치료군에서 n = 2 [25%]) 및 두통 (n = 6 [25.0%], 각각의 위약군에서 n = 1 IV 및 n = 1 SC [12.5%])이었다. 심각한 유해 사례는 어느 연구에서도 보고되지 않았다. 항-치료 항체 수준은 2가지 I 상 연구 전반에 걸쳐 MEMP1972A를 투여받은 모든 대상체에 대해 음성으로 유지되었다.

<표 3> 건강한 지원자에서의 MEMP1972A의 약동학 파라미터.

AUC_{0 - inf} = 0에서 무한대까지의 시간의 농도-시간 곡선하 면적; C_max = 관찰된 최대 농도; t_½ = 제거 반감기; CL = IV 코호트 (C - F)에 대한 총 혈청 클리어런스; CL/F = SC 투여 (코호트 G) 후의 겉보기 총 혈청 클리어런스; V_z = IV 코호트 (C - F)에 대한 분포 부피; V_z/F = SC 투여 (코호트 G) 후의 겉보기 분포 부피. 코호트 A (0.003 mg/kg IV) 및 B (0.03) mg/kg으로부터는 PK 파라미터를 추정하기에 불충분한 농도 데이터가 수득되었다.

<표 4> 알레르기성 비염을 앓는 환자에서의 MEMP1972A의 약동학 파라미터.

AUC_{0 - inf} = 0에서 무한대까지의 시간의 농도-시간 곡선하 면적; C_{max , last} = 제57일에서의 최종 용량 후 관찰된 최대 농도; t_½ = 제거 반감기; CL = IV 코호트 (X 및 Y)에 대한 총 혈청 클리어런스; CL/F = SC 투여 (코호트 Z) 후의 겉보기 총 혈청 클리어런스; V_z = IV 코호트 (X 및 Y)에 대한 분포 부피; V_z/F = SC 투여 (코호트 Z) 후의 겉보기 분포 부피.

결론

I 상 연구 둘 다에서, MEMP1972A는 5 mg/kg 이하의 IV 및 3 mg/kg의 SC에서 건강한 지원자 및 알레르기성 비염을 앓는 환자에서 내약성이 우수하였다. AE 프로파일은 MEMP1972A 및 위약 치료군 사이에서 유사했고, 대부분의 사례는 경도 또는 중등도였다. MEMP1972A로의 치료는 3 mg/kg SC 및 5 mg/kg IV 코호트에서, 건강한 지원자 및 알레르기성 비염을 앓는 환자에서 혈청 총 IgE의 감소를 일으켰고, 이는 최종 용량 후 대략 6개월 지속되었다.

실시예 2: 2a 상 활성-증명 알레르겐 접종 연구에서, 경도 천식을 앓는 대상체에서의 항-M1 프라임 모노클로날 항체, MEMP1972A의 효과

MEMP1972A를 2a 상 연구 (NCT01196039)에서 평가하여 알레르겐 흡입 접종 (AIC) 후 활성-증명을 시험하였다.

방법

본 무작위, 이중-맹검, 위약-제어된, 다기관 연구는 AIC 후 경도 천식을 앓는 대상체에서 MEMP1972A의 활성, 안전성 및 내약성을 평가하였다. 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포를 사용하여 MEMP1972A를 생산하고, 정제하고, 주사용수를 사용하여 30 mM 히스티딘/히스티딘 히드로클로라이드, 140 mM 아르기닌 히드로클로라이드, 및 0.04% (w/v) 폴리소르베이트 20 (pH 5.5) 중 100 mg/mL MEMP1972A로서 제제화하였다. MEMP1972A 약물 제품은, 13-mm 플루오로-수지 적층된 마개로 막고 플립-오프 플라스틱 밀봉부를 갖는 알루미늄 캡으로 캡핑된 단일-사용, 2-mL 투명 유리 바이알 내의 IV 및 SC 투여용 멸균 보존제-무함유 액체 용액으로서 공급되었다. 각각의 바이알은 활성 제약 성분 (API) 150 mg을 함유하였다. MEMP1972A에 상응하는 위약은 API 없이 약물 제품과 동일한 부형제를 함유하였다. 위약은 약물 제품과 동일한 바이알 구성으로 공급되었다. 안정한 경도 알레르기성 천식을 앓는 환자를 스크리닝하여 (제-35 내지 1일), 흡입된 증분적 접종에 대해 EAR (조기 천식성 반응) 및 LAR (후기 천식성 반응)을 보고한 환자의 코호트를 수득하였다. 29명의 성인 대상체를 위약 또는 MEMP1972A를 투여받도록 무작위로 배정하였고 (1:1), 이들에게 총 12주 동안 4주마다 (즉, 제1, 29 및 57일) 5 mg/kg을 정맥내로 투여한 후, 5개월 (즉, 제57-197일)의 안전성 추적을 수행하였다 (도 7). 기준선 및 인구통계 특성은 치료군 사이에서 유사하였다 (표 5). 스크리닝 및 혈액 샘플을 치료전 대상체로부터 수득하였다. 알레르겐 접종을 제-1일에 치료전 제공하였고, 치료후 알레르겐 접종을 제86일 (± 3일), 제3 및 최종 주입 용량 약 29일 후에 제공하였다. 알레르겐 접종에 대해, 10가지 상이한 특이적 IgE를 모든 환자에서 측정하였고 (고양이-털, 고양이-비듬, 말, HDMf, HDMp, 왕포아풀, 돼지풀, 레드 톱, 향기풀, 티모시), 모든 환자에게 그의 피부 반응성에 따라 이들 10가지 알레르겐 중 하나를 접종하였다. 이러한 관련 접종 알레르겐은 각각의 환자에 대해 상이하였다. 대상체에게 접종하지 않은 알레르겐으로 인한 검출가능한 알레르겐-특이적 IgE는 무관한 또는 비-접종 특이적 IgE 수준으로서 획득하였다. 관련 접종 알레르겐과 고도로 관련이 있는 무관한 또는 비-접종 알레르겐 (예를 들어, 고양이 비듬 vs 고양이 털)은 무관한 또는 비-접종 특이적 IgE 평가에서 제외시켰다. 메타콜린 접종을 알레르겐 접종 24시간 전 및 24시간 후에 수행하였다. 메타콜린 클로라이드 원액 (흡입용 메타콜린 클로라이드 분말)을 0.9% 염화나트륨 (생리 염수) 중에서 128 mg/ml의 농도로 제조하였다. 메타콜린을 생리 염수 중에 추가로 희석하여 0.031 mg/mL 내지 128 mg/mL의 작업 농도를 달성하였다. 메타콜린 흡입을 콕크로프트(Cockcroft)의 방법을 사용하여 수행하엿다 (문헌 [Cockcroft et al. 1987]). 간략하게, 대상체는 0.13 mL/분의 출력을 갖는 라이트(Wright) 네뷸라이저에 연결된 한스 루돌프(Hans Rudolf) 밸브로부터 메타콜린을 흡입하였다. 대상체에게 노즈 클립을 끼고 2-분 흡입 기간 동안 마우스피스로부터 정상적으로 호흡하도록 지시하였다. 대상체는 생리 염수에 이어서 2분 동안 배가 농도의 메타콜린을 흡입하였다. FEV₁을 각각의 흡입 30 및 90초 후에 측정하였다. 대상체의 기준선 값의 FEV₁에서 20% 감소가 일어나면 시험을 종료하고, 메타콜린 PC₂₀을 계산하였다. 알레르겐 접종 24시간 전, 및 각각의 알레르겐 접종 7시간 및 24시간 후에 객담 유도 절차를 문헌 [Pizzichini et al. 1996 (Eur. Respir. J. 9:1174-1180)]에 기재된 방법에 따라 수행하였다. 총 IgE 및 M1 프라임의 분석을 위해 객담 샘플을 단백질 수준 및 mRNA 발현에 대해 측정할 수 있었다. 메타콜린 접종은 객담 유도에 선행된다. 객담 및 혈액에서의 호산구를 또한 예비 바이오마커로서 측정하였다. 말초 혈액에서의 호산구의 수준을 표준 전혈구 카운트 (CBC) 검정을 사용하여 측정하였다. 객담에서의 호산구를 세포 형태 및 염색을 기초로 확인하고, 후속으로 호산구 수준의 결정을 위해 현미경 하에 카운팅하였다. 연구 동안 MEMP1972A 용량 수준의 변형은 허용되지 않았다. 일차 결과 측정은 제1 용량 12주 후 (제86일)의 알레르겐 접종 후 3 내지 7시간 사이의 알레르겐-유도된 후기 천식성 반응 (LAR)의 곡선하 면적 (AUC)이었다. 이차 결과 측정은 경시적 FEV₁의 퍼센트 감소의 면적을 수득하기 위한 알레르겐 접종 치료후 0 내지 3시간 또는 0 내지 2시간 사이의 조기 천식성 반응 (EAR) AUC를 포함하였고, 제85일에 계산된 알레르겐 접종전 PC₂₀에 비한 제87일 (알레르겐 접종 투여후 24시간)에서의 메타콜린 접종 PC₂₀의 변화를 포함하였다. 표준 임상적 검정, 파디아 이뮤노캡 (파디아 인크.)을 사용하여 혈청 총 IgE 및 알레르겐-특이적 IgE를 평가하여 MEMP1972A의 기계적 활성을 입증하였다. 혈청에서의 CCL17의 수준을 인간 CCL17/TARC 퀀티킨(Quantikine) ELISA 키트 (알앤디 시스템즈(R&D Systems), 미네소타주 미네아폴리스; 카탈로그 번호 DDN100)를 사용하여 측정하였다.

<표 5> 기준선 및 인구통계 특성

FEV₁ = 1초 강제 호기량; LAR = 후기 천식성 반응; AUC = 곡선하 면적; SD= 표준 편차

적격 대상체에 대한 포함 기준은 다음과 같았다: 18 내지 65세 연령; 50 내지 125 kg 체중; 경도의 안정한 알레르기성 천식; 간헐성 천명 및 숨가쁨의 병력; 기준선에서의 FEV₁ ≥ 70%의 예측값; 남성, 또는 수술적으로 불임되거나, 지난 해 동안 폐경후에 있거나 또는 연구 약물의 최종 투여 후에 적어도 5개월에 걸쳐 임신에 대해 2가지 허용되는 피임 방법을 사용한 여성; 스크리닝시 출발 알레르겐 농도의 예측을 위해 보고된 PC₂₀ 값; 통상적인 표준 공기 알레르겐 추출물에 대한 피부 단자 시험 양성; 및 알레르겐-유도된 조기 및 후기 기도 반응 양성. 알레르겐-유도된 조기 기도 반응 양성은 알레르겐 접종 후 0-2시간 또는 0-3시간에 측정시 FEV₁이 알레르겐전 최고 값으로부터 ≥20% 감소한 것으로 규정하였다. 후기 기도 반응은 알레르겐 접종 후 3-7시간에 측정시 FEV₁이 알레르겐전 최고 값으로부터 ≥15% 감소한 것으로 규정하였다. 배제 기준은 다음을 포함하였다: 방문 1 이전 6주 이내의 천식의 악화; 방문 2 이전 6주 이내의 급성 호흡기 감염 또는 임의의 진행중인 만성 감염; 성인으로서의 재발성 박테리아 감염의 병력 또는 임의의 만성 감염성 상태의 병력 또는 존재; 경도 알레르기성 천식 이외의 폐 질환; 단기-작용 β2-효능제 또는 이프라트로피움 브로마이드 이외의 알레르기성 폐 질환의 치료를 위한 임의의 다른 의약의 만성 사용; 크로모글리케이트, 네도크로밀, 류코트리엔 수용체 길항제, 및 5-리폭시게나제 억제제의 사용이 방문 2 이전 4주 이내에 허용되지 않음; 연구 치료 이전 6개월 이내에 알레르겐 또는 펩티드 면역요법; 및 방문 2의 시점에, 오말리주맙을 포함하여, 이전 5개월 이내에 모노클로날 항체 또는 키메라 생체분자로의 치료. 추가의 배제 기준은 clinicaltrials.gov 월드 와이드 웹에서 식별자 NCT01196039를 사용하여 찾아볼 수 있다.

결과

총 28명의 대상체가 일차 종점 분석 (n=15 MEMP1972A, n=13 위약)에 포함되었고; 위약군으로부터의 1명의 대상체가 증가된 천식 증상으로 인해 연구에서 배제되었다. 스크리닝시, 2가지 치료군은 1초 강제 호기량 (FEV₁) 평가에서 유사한 백분율 감소를 가졌다. 제2 방문시, 연구 약물의 제3 용량 1개월 후에 EAR 및 LAR 둘 다에서 위약과 비교하여 개선이 관찰되었다. MEMP1972A 치료는 경도 천식을 앓는 대상체에서 12주 후에 내약성이 우수하였다. 제12주에, MEMP1972A-치료된 대상체에서의 LAR의 AUC는 위약에 비해 평균 36% 감소되었다 (90% CI: -14, 69%, p=0.21) (도 8a 및 b). 또한, EAR의 AUC는 위약에 비해 평균 26% 유의하게 감소된 반면 (90% CI: 6, 43%, p=0.046), 메타콜린에 대한 기도 과민반응에는 어떠한 효과도 없었다. EAR의 AUC를 제12주에서의 알레르겐 접종 0 내지 2시간 후에 계산하였다. 최대 LAR FEV₁ 감소는 위약에 비해 13% (90% CI: -33%, 44; p=0.58)였다 (도 8). 최대 EAR FEV₁ 감소는 위약에 비해 11% (90% CI: -7%, 26; p=0.27)였다 (도 8). 하위군 분석은 접종전 LAR FEV₁에서 ≥2 연속 ≥15% 하락 (하위군 A) 또는 ≥3 연속 10% 하락을 보인 대상체 (하위군 B)가 MEMP1972A 치료에 대해 보다 큰 반응을 나타내었음을 입증하며, 각각 위약과 비교하여 43% (90% CI: -5%, 77%) 및 62% (90% CI: 29%, 88%)의 LAR AUC 감소를 보였다 (표 6). 또한 스크리닝시 LAR AUC ≥10%/시간을 나타낸 대상체 (하위군 C)가 개선된 반응을 나타내었으며, 54% (90% CI 10%, 84%)의 LAR AUC 감소를 보였다 (표 6).

기준선 혈청 총 IgE 수준은 낮았지만 (7-254 IU/ml 범위), 위약- (48.5 IU/ml) 및 MEMP1972A- (57 IU/ml) 치료된 환자 사이에 균형을 맞추었다. 위약군에서, 전체-폐 알레르겐 접종은 총 IgE 및 알레르겐-특이적 IgE 둘 다에서 증가를 유도하였다 (도 9a 및 c). 제29일에, 스크리닝 동안 투여된 알레르겐 접종은 기준선 총 IgE 및 알레르겐-특이적 IgE를 각각 117% 및 188% 증가시켰다. 제113일에, 제86일에 투여된 제2 알레르겐 접종은 각각 141% 및 308%의 기준선 총 IgE 및 알레르겐 특이적 IgE의 추가 증가를 일으켰다. MEMP1972A 치료는 혈청 총 IgE 및 알레르겐-특이적 IgE의 이러한 알레르겐-유도된 증가를 완전히 예방하였다. 치료군에서 스크리닝 및 제12주에서의 알레르겐 흡입 접종은 혈청 알레르겐-특이적 IgE에서 대략 2-배 증가를 유도하였고, 이는 MEMP1972A 치료에 의해 완전히 차단되었다 (p<0.01 vs. 위약) (도 9a). 알레르겐-특이적 IgE의 증가는 MEMP1972A-치료된 환자에서 어느 시점에서도 관찰되지 않았다. 추가로, 무관한 또는 비-접종 특정 IgE 평가는, 위약 및 MEMP1972A-치료된 환자에서 접종 후에 무관한 또는 비-접종 알레르겐-특이적 IgE 수준의 증가가 없었음을 입증하였다 (도 9b). 제85일 (접종전)에, IgE 수준의 중앙 퍼센트 감소는 MEMP1972A 치료된 대상체에서 총 IgE 및 특이적 (접종 관련 알레르겐 또는 비-접종 알레르겐) IgE 수준의 경우 둘 다 기준선으로부터 대략 20% 였다 (도 16a 및 b). 제197일에, IgE 수준의 중앙 퍼센트 감소는 MEMP1972A 치료된 대상체에서 총 IgE 및 특이적 접종 관련 IgE 수준의 경우 둘 다 기준선으로부터 대략 20%, 및 총 IgE 및 특이적 비-접종 IgE 수준의 경우 둘 다 기준선으로부터 20% 초과였다 (도 16a 및 b). 혈청 알레르겐-특이적 IgE의 증가와 유사하게, 스크리닝 및 제12주에서의 AIC는 제12주에서의 MEMP1972A 치료에 의해 감소된 객담 호산구에서 대략 10-배 초과의 증가를 유도하였다 (도 10). 제86일에, 알레르겐 접종 7시간 후, 위약 치료된 환자에서의 객담 호산구는 16% ± 4.5% (평균 ± 표준 오차)였다. MEMP1972A-치료된 환자에서, 제86일에서의 알레르겐 접종 7시간 후 객담 호산구 수준은 8.0% ± 2.2%였다. 추가로, MEMP1972A 치료는 치료 개시 8주 후에 혈청 총 IgE를 기준선으로부터 대략 20% 감소시켰고 (p<0.01 vs. 위약) (도 9a 및 c), 제28주에 혈액 호산구를 대략 45% 감소시켰다 (도 11). 추가의 환자로부터의 데이터를 사용한 추가의 분석은 MEMP1972A 치료가 제197일에 혈청 총 IgE를 기준선으로부터 25%까지 감소시켰음을 보여주었다 (도 9d). 혈액 호산구는 MEMP1972A로 치료한 환자에서 경시적으로 감소하였고, 각각 제20주 및 제38주에 기준선 수준의 20% 및 28%의 절대 카운트에서의 평균 감소를 보여주었다. 대조적으로, 위약-치료된 환자에서의 혈액 호산구 수준은 기준선에 비해 증가하였고, 연구의 지속기간 동안 기준선 위로 유지되었다. 알레르겐 접종 후에, T_h2 화학유인물질, CCL17의 혈청 수준은 위약-치료된 환자에서 유의하게 증가하였으나 MEMP1972A-치료된 환자에서는 그렇지 않았다 (도 12). 위약-치료된 환자에서, 알레르겐 접종은 제85일 (알레르겐 접종 24시간 전)에서 제87일 (알레르겐 접종 24시간 후)까지 혈청 CCL17 수준의 116 pg/ml 증가를 유발하였다. MEMP1972A로 치료된 환자에서, 혈청 CCL17 수준은 제85일에서 제87일까지 알레르겐 접종 후에 26 pg/ml 증가하였다. AIC 후의 알레르겐-유도된 EAR, LAR, 혈청 IgE, 혈청 CCL17 뿐만 아니라 객담 및 혈액 호산구의 감쇠는 MEMP1972A의 작용 메카니즘과 일치하였다. 이 연구로부터의 결과는 M1 프라임-발현 B-세포 계열의 고갈이 알레르기성 천식의 치료를 위한 효과적 치료 전략임을 시사한다. 위약군과 비교하여 치료군에서 유해 사례 또는 심각한 유해 사례의 유의한 증가는 없었다. MEMP1972A는 활성군에서의 치료-발현성 유해 사례 (AE), 임의의 장기계에 대해 보여지는 독성 효과를 나타내는 AE의 클러스터, 및 심각한 AE, 중증 AE 또는 연구 약물의 중단을 유발하는 AE 없이 내약성이 우수하였다. 바람직한 용어 가장 빈번한 AE는 5명의 환자에서 발생한 두통이었다; 위약 아암에서 3명 및 MEMP1972A 아암에서 2명. 어느 한 아암에서 적어도 2명의 환자에서 보고된 다른 AE는 각각 비인두염 (MEMP1972A 군에서 보다 빈번함), 흉부 불쾌감 (MEMP1972A 군에서 2명의 환자), 어지럼증 및 구인두 통증 (각각 2명의 위약 환자)이었다 (표 B).

<표 B> 군당 ≥ 2 환자에서 발생한 통상적인 유해 사례

* All은 경도, 등급 1 사례였다

<표 6> 접종전 LAR FEV₁ 하위군 분석

AUC = 곡선하 면적; CI = 신뢰 구간; EAR = 조기 천식성 반응; FEV₁ = 1초 강제 호기량; LAR = 후기 천식성 반응

결론

3개월마다의 용량의 투여 후에, MEMP1972A 치료는 위약과 비교하여 천식성 반응의 전체적 수준을 감소시켰다. 알레르겐-특이적 IgE의 증가는 MEMP1972A-치료된 대상체에서 어느 시점에도 관찰되지 않았으며, 이는 치료후 효과의 지속을 입증한다. MEMP1972A 치료 후에 관찰된 총 IgE의 감소는 건강한 지원자 및 알레르기성 비염을 앓는 대상체에서의 I 상 연구로부터의 데이터와 일치하였다. MEMP197A는 치료군 사이에서 관찰된 AE에서의 유의차 없이 내약성이 우수하였다. 이들 데이터는 천식에 대한 치료로서의 MEMP1972A의 계속된 조사를 뒷받침하며, ICS 및 LABA 치료에도 불구하고 불량하게 제어된 천식을 앓는 대상체에서의 MEMP1972A의 상 IIb 연구가 계획되었다.

실시예 3: 천식을 앓는 대상체에서의 분기별 투여 요법에 대한 2b 상 개념-증명 연구에서의 항-M1 프라임 모노클로날 항체, MEMP1972A의 효과

MEMP1972A를 흡입용 스테로이드 및 제2 제어제로 불충분하게 제어된 알레르기성 천식을 앓는 환자에서 2b 상 개념-증명 연구로 평가하였다. 본 무작위, 이중-맹검, 위약-제어된, 36-주 연구를 수행하여, 고용량 흡입용 코르티코스테로이드 및 제2 제어제 의약을 사용한 장기적 요법으로 불충분하게 제어된 채 남아있는 알레르기성 천식을 앓는 대상체에서의 MEMP1972A 투여 요법의 효능, 안전성 및 내약성을 평가하였다. 18 내지 75세 연령 표적 집단으로부터 약 560명의 대상체를 위약 또는 MEMP1972A를 투여받는 4가지 코호트 (A-D)로 무작위로 배정하였다 (1:1:1:1) (도 13). 코호트 A의 140명의 대상체에게 36주의 과정에 걸쳐 4주마다 (제0, 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28 및 32주) 연구 약물의 피하 (SC) 용량 300 mg을 제공하였다. 코호트 B의 140명의 대상체에게 분기별 간격의 활성 용량 뿐만 아니라 제4주에서의 별도 용량을 포함하는 총 4회의 450 mg SC 용량의 연구 약물을 제공하였다 (제0, 4, 12 및 24주). 코호트 C의 140명의 대상체에게 분기별 간격의 활성 용량 뿐만 아니라 제4주에서의 별도 용량을 포함하는 총 4회의 150 mg SC 용량의 연구 약물을 제공하였다 (제0, 4, 12 및 24주). 코호트 D의 140명의 대상체에게 36주 연구의 과정에 걸쳐 4주마다 (제0, 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28 및 32주) 위약 용량을 제공하였다. 연구 치료에 대한 예상 시간은 36주였고, 48-주 추적을 가졌다.

분기별 투여 요법에 대한 일차 종점은 36주에 걸친, 전신 스테로이드의 사용을 유도하는 프로토콜-정의된 천식 악화의 속도이다. 상기 속도는 치료 기간에 걸쳐 군에서 관찰된 프로토콜-정의된 천식 악화의 총 횟수를 상기 군에 대해 위험에 있는 총 환자-주로 나누어 추정하였다. 각각의 개별 환자에 대해, 위험에 있는 주는 치료 완료 또는 치료 기간 중단 날짜, 및 제1 연구 약물 투여 날짜 사이의 일수를 7일로 나누어 계산하였다. 과대 산포를 갖는 포아송(Poisson) 회귀를 분석에 사용하여 프로토콜-정의된 천식 악화의 속도에 대한 치료 효과를 평가하였다. 모델을 혈청 페리오스틴 수준 (< 50 ng/mL, ≥ 50 ng/mL), 이전 18개월 내에 전신 코르티코스테로이드의 사용을 필요로 하는 악화의 횟수 (1, >1), IgE 수준 (≤ 75 IU/mL, 75-200 IU/mL, > 200 IU/mL) 및 국가에 대해 조정하였다.

이차 종점은 기관지확장제전 FEV₁에서 기준선으로부터 제12주 및 제36주까지의 상대적 변화, 천식 증상 스코어에서 기준선으로부터 제12주 및 제36주까지의 변화, 및 천식이 잘 제어된 제24주에서 제36주까지의 주의 백분율이었다. 환자 다이어리에 보고된 바와 같이, "잘-제어된"은, 천식 증상으로 인한 야간 각성이 없고 주당 단기 작용 베타 효능제 (SABA)의 사용이 ≤ 2일임을 의미한다.

예비 종점은 제36주를 넘어서의 악화의 속도, 제36주 및 제84주에서의 반응, 천식 제어에서 폐 기능의 FEV₁ 및 다른 폐활량 척도 변화, 천식 증상 점수에서의 변화, 및 예비 바이오마커를 포함한다. 모든 결과 측정에 대한 예비 분석은 진단 하위세트 (페리오스틴 및 다른 사전-지정된 바이오마커 후보) 내에서 수행하였다.

안전성 결과 측정은 제48주에서의 유해 사례의 발생률 및 제84주에서의 항-치료 항체 (ATA)의 발생률을 포함하였다. 약동학 결과 측정은 제0, 4, 12, 24 및 36주에서의 MEMP1972의 투여전 및 투여후에 측정된 농도-시간 곡선하 면적 (AUC)을 포함하였다.

2b 상 연구에서 분기별 투여 요법의 임상 효능을 입증하기 위한 일차 종점은 위약과 비교시 ≥ 55% 악화 비율 감소였다. 이차 종점은 FEV₁에서의 ≥ 5% 개선, 제1 용량 12주 이내 및 활성 투여 36주 후에 위약과 비교시 천식 증상 빈도 또는 중증도에서의 감소, 또는 단기 작용 베타 효능제 (SABA) 사용 및 야간 각성이 측정된 제어와 ≥1 잘-제어된 주의 차이에 의해 입증되는, 활성 투여의 제24주 내지 제36주에 걸쳐 위약과 비교하여 잘 제어된 주의 퍼센트 증가. 분기별 투여 요법의 임상 효능 결정을 상기 기재된 범위 밖의 일차 및 이차 종점을 나타내는 대상체에서 추가로 평가하였다 (표 7 참조).

<표 7> 분기별 투여 요법에 대한 임상 효능 기준.

이 연구에 대해, 일차 종점을 평가하는데 사용된 천식 악화 사례는 입원 또는 전신 코르티코스테로이드로의 치료를 유발하는 새로운 또는 증가된 천식 증상으로서 정의된다. 새로운 또는 증가된 천식 증상은 하기 새로운 또는 증가된 (이미 존재하는 경우) 증상 중 하나 이상을 포함한다: 천명, 기침 (객담 생산 또는 특질 뿐만 아니라 기침 빈도에서의 변화 포함), 흉부 압박, 숨가쁨, 또는 상기 증상 중 하나에 기인한 야간 각성. 임의의 이들 천식 증상의 결과로서, 다음 중 하나가 보고되어야 한다: 천식 치료를 위한 입원 또는 전신 코르티코스테로이드로의 치료. 전신 코르티코스테로이드로의 치료는 다음으로서 정의된다: 3일 이상 동안의 경구, 정맥내 (IV) 또는 근육내 (IM) 코르티코스테로이드로의 치료, 또는 IV 또는 IM 코르티코스테로이드의 1회 이상의 용량을 사용한 응급부 방문. 천식 악화의 발생 또는 개시는 입원 날짜 또는 전신 스테로이드 (경구, IM 또는 IV)로의 치료 시작 날짜 어느 것이든 먼저 일어난 것으로서 정의된다. 악화의 종료는 전신 스테로이드의 중단으로 정의된다. 이전의 프로토콜-정의된 악화에 대한 전신 코르티코스테로이드 (경구, IM, IV) 치료의 최종 용량의 7일 이내에 발생한 임의의 프로토콜-정의된 천식 악화 에피소드는 이전 악화의 연속으로 간주한다.

임상적 안전 기준은 다음과 같다: 1) 항-M1 프라임과 관련된 심각한 아나필락시스성 반응을 갖는 대상체가 2명 이하로 나타나는, 허용되는 아나필락시스성 반응; 2) 등급 4 주사 부위 반응을 갖는 항-M1 프라임 대상체 없음; 3) 항-M1 프라임 대상체에서 등급 4 (<500개 세포/mcl) 호중구감소증 또는 혈소판감소증 (<20,000개 세포/mcl)의 지속 없음; 및 4) 감염을 갖는 위약에 비해 15% 이하의 항-M1 프라임 대상체, 및 등급 4 감염을 갖는 위약에 비해 6% 미만의 항-M1 프라임 대상체로 나타나는, 감염 속도에서의 최소 증가

적격 대상체에 대한 포함 기준은 다음과 같았다: 18 내지 75세 연령; ≥ 40 kg 체중; 적어도 12개월 동안 천식 진단; 4모금 이하의 알부테롤을 사용하여 (스크리닝시 또는 최근 2년 내에) 12% 이상의 β-효능제 가역성, 또는 PC₂₀ FEV₁ 메타콜린 (FEV₁에서 20% 하락을 일으키는 메타콜린의 유발 농도) 8 mg/ml 이하 (최근 2 년 내에)로 정의되는, 보고된 기관지확장제 가역성의 증거; 방문 1에서 예측된, 기관지확장제전 FEV₁ ≥ 40% 및 ≤ 80%; 방문 1 이전 최소 연속 3개월 동안 ICS (≥ 400 μg/일 총 1일 용량의 플루티카손 프로피오네이트 (FP) 또는 등가물 (하기 표 8 참조)) 및 제2 제어제의 매일 사용 필요; 방문 1 이전 18개월 내에 3일 이상 (또는 ≥ 72시간의 치료 용량을 제공하는 제제로 투여) 및 30일 이하 동안 전신 코르티코스테로이드 치료를 필요로 하는 천식 악화의 1회 이상의 병력; 각각의 방문에서 천식 제어 설문지 점수 (ACQ) 점수 ≥ 1.50로 보고된, 방문 1 및 2에서의 불충분하게-제어된 천식; 무작위화 전 14일 중 적어도 10일 동안 완전한 일지 데이터 입력을 갖는 것으로 정의된 런-인 기간 동안 1일 일지에 보고된, 천식 제어제 요법 준수에도 불구하고 불충분하게 제어된 천식, ≥ 1 야간 각성/주 및 구급 의약 사용 (적어도 1 "모금"의 단기 작용 베타 효능제 [SABA] 또는 적어도 2일/주 SABA 분무); 적어도 1종의 "임상적으로 관련된" 공기 알레르겐에 대해 혈청 IgE "양성" 또는 적어도 75 IU/mL의 혈청 총 IgE; 스크리닝시 정상 한도 내의 ECG.

<표 8> ICS의 동등한 용량: 플루티카손 프로피오네이트 400 μg/일 용량과 비교

주: 용량 등가물은 효력에 대한한 조정 없이 작동당 스테로이드의 마이크로그램의 수를 기초로 도출하였다. CFC = 클로로플루오로카본; DPI = 건조 분말 흡입기; FP = 플루티카손 프로피오네이트, HFA = 히드로플루오로알칸; ICS = 흡입용 코르티코스테로이드; MDI = 계량 용량 흡입; d = 일.

하기 기준을 갖는 대상체는 연구 참가에서 배제하였다: 방문 1 이전 30일 내에 또는 방문 1 및 방문 2 사이에 전신 스테로이드를 필요로 하는 천식 악화; 방문 1 및 방문 2 사이의 FEV1의 > 20% 상대적 변화; 본 연구 동안 1회 초과 스크리닝 실패 (스크린 실패에 대한 이유가 일시적인 경우에는 환자를 1회 재스크리닝할 수 있음); 천식 이외의 기존의 활성 폐 질환을 가짐; 만성 또는 잠재성 감염을 비롯한 임의의 감염, 또는 스크리닝 동안 치료를 필요로 하는 감염, 이는 기도 감염 (동성 질환 및 기관지염을 포함하나, 이에 제한되지는 않음)을 포함함; 치료에도 불구하고 비제어되거나, 연구 동안 요법의 변화를 필요로 할 가능성이 있거나, 또는 치료 상태와 관계없이 원인불명 병인 (예를 들어, 만성 간 질환), 예를 들어 악화될 수 있는 만성 질환 (예를 들어, 염증성 장 질환 또는 류마티스 관절염), 공지된 악성종양 (새롭게 진단되거나 불충분하게 치료됨) 또는 잠재적 악성 종양에 대한 현재의 평가, 공지된 면역결핍, 예를 들어 비제한적으로 HIV 감염을 갖는 임상적으로 유의한 의학 질환; 알레르기 이외의 원인에 대해 상승된 IgE 수준 (기생충 감염, 고이뮤노글로불린 E 증후군, 기관지폐 아스페르길루스증 및 비스코트-알드리치 증후군을 포함하나, 이에 제한되지는 않음); 임상시험용 약물의 사용이 금지되거나, 또는 과거 또는 현재의 물질 남용, 순응도 부족, 진행중인 또는 최근의 또 다른 임상시험 시험에의 참여 (어느 쪽이 보다 길더라도, 방문 1 이전 30일 또는 임상시험용 약물의 5 반감기 이내)를 비롯하여 결과의 해석 및 환자의 참여 능력에 영향을 미칠 수 있는 임의의 상태; 수인성 기생충에 대한 유의한 노출의 병력 (방문 1 이전 6주 이내) 및/또는 최근의 불확정 병인의 설사병 (방문 1 이전 3개월 이내), 대변 시험을 수행하여 결과가 음성으로 보고된 경우는 예외로 함; >10 매년 하루 1갑의 흡연력의 이전 흡연자 또는 현재 흡연자 (이전 흡연자는 방문 1 이전 12개월 초과 동안 금연해야 함); 아나필락시스 (임의의 유발로부터)의 병력 또는 모노클로날 항체의 사용 (또는 맹검 연구인 경우에 가능한 사용) 동안의 알레르기 반응; 임의의 배제된 병용 요법의 사용 (표 9 참조); 적어도 60주의 연구 동안 고도로 효과적인 피임 방법의 사용을 받아들이지 않는 남성 및 여성; 방문 1의 시점에 임신 또는 수유 중이 아닌 여성; 및 스크리닝 동안 절대 호중구 카운트 < 1.5 x 10⁹/L.

<표 9> 병용 의약 및 윈도우

ICS=흡입용 코르티코스테로이드; IM=근육내; IV=정맥내; QOD=격일마다

주: 임의의 연장 방출 (데포 주사) 스테로이드, 면역조절제 또는 임상시험용 약물을 투여받은 환자는 연구 약물을 중단해야하지만, 계속된 관찰 및 평가를 위해 연구에 남아있어야 한다. 경구, IV 또는 IM (비데포 제제) 스테로이드, 테르부탈린 또는 이프라트로피움은 환자가 연구 약물을 계속해서 투여받는 동안 천식 악화의 치료를 위해 사용될 수 있으나, 치료의 지속기간은 30일 미만이어야 하거나, 또는 연구 약물을 중단해야만 한다. 천식 이외의 적응증을 치료하기 위해 사용되는 스테로이드는 금지된다. 또 다른 적응증의 치료가 필요한 경우, 치료의 지속기간은 30일 미만으로 유지되어야 하거나, 또는 연구 약물을 중단해야만 한다. ICS, 알레르겐 면역요법 및 류코트리엔 조절제의 용량은 연구 전반에 걸쳐 안정하게 유지되어야 한다. 그러나, 이들 의약의 용량이 치료 기간 중에 짧은 기간 (30일 미만) 동안 변화하는 경우, 환자에게 계속하여 연구 약물을 허용할 수 있다. 용량이 30일 이상으로 지속되는 기간 동안 변화하는 경우, 연구 약물을 중단해야만 한다. 환자는 계속된 관찰 및 평가를 위해 연구에 남아있어야 한다. 병용 의약 이외에도 계속되는 연구 약물과 연관된 안전성 위험이 없음을 보장하기 위해 의료용 모니터를 참고해야 한다.

^a 천식 악화의 치료를 위한 경구 또는 정맥내 스테로이드제의 표준 단기 코스 (3 내지 30일)는 방문 1 이전 및 방문 2 이후 ≥ 30일의 적절하고 허용되는 임의시점이다. 방문 1 및 2 사이의 경구 또는 IV 또는 IM 스테로이드 사용 또는 ICS 용량의 변화는 환자를 부적격으로 만든다.

^b 비맹검이 아닌 임상시험용 모노클로날 항체의 시험에 참여하는 환자는 활성제를 투여받은 것으로 가정해야 한다.

^c 백신접종은 연구 이전 또는 연구 동안에 허용된다. 주사 (연구 약물 또는 백신)에 이어서 일어난 임의의 반응을 보다 명백히 해석하기 위해, 백신접종을 연구 약물 투여와 동일한 날에 수행하지 않도록 권장한다. 둘 모두를 동일한 날에 투여해야 하는 경우, 백신접종을 위한 주사 부위는 연구 약물 투여 부위(들)로부터 멀어야 한다 (상이한 사지).

SEQUENCE LISTING <110> GENENTECH, INC. et al. <120> ANTI-IGE ANTIBODIES AND METHODS USING SAME <130> P4867R1-WO <141> 2013-01-30 <150> US 61/593,282 <151> 2012-01-31 <150> US 61/613,434 <151> 2012-03-20 <150> US 61/621,453 <151> 2012-04-06 <150> US 61/635,253 <151> 2012-04-18 <160> 43 <210> 1 <211> 431 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Ile Leu Gln Ser Ser Cys Asp Gly Gly Gly His Phe Pro Pro Thr 1 5 10 15 Ile Gln Leu Leu Cys Leu Val Ser Gly Tyr Thr Pro Gly Thr Ile 20 25 30 Asn Ile Thr Trp Leu Glu Asp Gly Gln Val Met Asp Val Asp Leu 35 40 45 Ser Thr Ala Ser Thr Thr Gln Glu Gly Glu Leu Ala Ser Thr Gln 50 55 60 Ser Glu Leu Thr Leu Ser Gln Lys His Trp Leu Ser Asp Arg Thr 65 70 75 Tyr Thr Cys Gln Val Thr Tyr Gln Gly His Thr Phe Glu Asp Ser 80 85 90 Thr Lys Lys Cys Ala Asp Ser Asn Pro Arg Gly Val Ser Ala Tyr 95 100 105 Leu Ser Arg Pro Ser Pro Phe Asp Leu Phe Ile Arg Lys Ser Pro 110 115 120 Thr Ile Thr Cys Leu Val Val Asp Leu Ala Pro Ser Lys Gly Thr 125 130 135 Val Asn Leu Thr Trp Ser Arg 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14

Claims (70)

1. 인간 환자에게 인간 IgE의 M1' 절편에 결합하는 항-IgE 항체의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 항체의 투여 사이의 간격은 약 1개월 또는 그 초과인, IgE-매개 장애를 치료 또는 예방하는 방법.
2. 제1항에 있어서, 투여 사이의 간격이 약 2개월인 방법.
3. 제1항에 있어서, 투여 사이의 간격이 약 3개월인 방법.
4. 제1항에 있어서, 투여 사이의 간격이 약 4개월인 방법.
5. 제1항에 있어서, 투여 사이의 간격이 약 5개월인 방법.
6. 제1항에 있어서, 투여 사이의 간격이 약 6개월인 방법.
7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항체를 용량당 약 150 mg 내지 약 450 mg의 투여량으로 투여하는 것인 방법.
8. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항체를 용량당 약 150 mg, 약 300 mg 또는 약 450 mg의 투여량으로 투여하는 것인 방법.
9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 항체를 피하로 또는 정맥내로 투여하는 것인 방법.
10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 투여 사이의 간격이 약 3개월이며 제1 투여 4주 후에 추가 투여를 갖는 것인 방법.
11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 환자에서의 혈청 총 IgE가 항체 치료 후에 기준선에 비해 감소되는 것인 방법.
12. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 환자에서의 알레르겐-특이적 IgE가 항체 치료 후에 기준선에 비해 감소되는 것인 방법.
13. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 환자에서의 혈청 총 IgE의 알레르겐-유도된 증가가 항체 치료 후에 예방 또는 감소되는 것인 방법.
14. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 환자에서의 알레르겐-특이적 IgE의 알레르겐-유도된 증가가 항체 치료 후에 예방 또는 감소되는 것인 방법.
15. 인간 환자에게 인간 IgE의 M1' 절편에 결합하는 항-IgE 항체의 유효량을 용량당 약 150 내지 약 450 mg의 용량으로 투여하는 것을 포함하는, IgE-매개 장애를 치료 또는 예방하는 방법.
16. 제15항에 있어서, 항체를 용량당 약 150 mg, 약 300 mg 또는 약 450 mg의 투여량으로 투여하는 것인 방법.
17. 제15항 또는 제16항에 있어서, 항체를 피하로 또는 정맥내로 투여하는 것인 방법.
18. 인간 환자에게 인간 IgE의 M1' 절편에 결합하는 항-IgE 항체의 유효량을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 항체의 투여 사이의 간격은 약 1개월 또는 그 초과인, 기준선에 비해 인간에서의 혈청 총 IgE를 감소시키는 방법.
19. 제18항에 있어서, 혈청 총 IgE가 기준선 수준으로부터 적어도 약 20% 감소되는 것인 방법.
20. 제18항에 있어서, 혈청 총 IgE가 기준선 수준으로부터 적어도 약 25% 감소되는 것인 방법.
21. 제18항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 혈청 총 IgE의 감소가 항체의 최종 투여 후 적어도 1개월 동안 지속되는 것인 방법.
22. 제18항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 혈청 총 IgE의 감소가 항체의 최종 투여 후 적어도 2개월 동안 지속되는 것인 방법.
23. 제18항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 혈청 총 IgE의 감소가 항체의 최종 투여 후 적어도 3개월 동안 지속되는 것인 방법.
24. 제18항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 혈청 총 IgE의 감소가 항체의 최종 투여 후 적어도 4개월, 적어도 5개월 또는 적어도 6개월 동안 지속되는 것인 방법.
25. 인간 환자에게 인간 IgE의 M1' 절편에 결합하는 항-IgE 항체의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 인간 환자에서 총 혈청 IgE의 알레르겐-유도된 증가를 예방 또는 감소시키는 방법.
26. 제25항에 있어서, 항체의 투여 사이의 간격이 약 1개월 또는 그 초과인 방법.
27. 제25항에 있어서, 항체의 투여 사이의 간격이 약 3개월인 방법.
28. 제25항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 항체를 용량당 약 150 내지 약 450 mg의 용량으로 투여하는 것인 방법.
29. 제25항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 알레르겐-특이적 IgE의 알레르겐-유도된 증가가 예방 또는 감소되는 것인 방법.
30. 제29항에 있어서, 알레르겐-특이적 IgE의 예방 또는 감소가 항체의 최종 투여 후 적어도 1개월 동안 지속되는 것인 방법.
31. 제29항에 있어서, 알레르겐-특이적 IgE의 예방 또는 감소가 항체의 최종 투여 후 적어도 2개월 동안 지속되는 것인 방법.
32. 제29항에 있어서, 알레르겐-특이적 IgE의 예방 또는 감소가 항체의 최종 투여 후 적어도 3개월 동안 지속되는 것인 방법.
33. 제29항에 있어서, 알레르겐-특이적 IgE의 감소가 항체의 최종 투여 후 적어도 6개월 동안 지속되는 것인 방법.
34. 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, IgE-매개 장애가 알레르기성 비염, 알레르기성 천식 또는 비-알레르기성 천식인 방법.
35. 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 환자가 제2 제어제와 조합된 고-용량 흡입용 또는 경구 코르티코스테로이드에 의해 불충분하게 제어되는 알레르기성 천식을 앓는 것인 방법.
36. 제35항에 있어서, 제2 제어제가 기관지확장제 또는 항류코트리엔제인 방법.
37. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 환자에게 항-IgE 항체, 항히스타민제, 기관지확장제, 글루코코르티코이드, NSAID, 충혈제거제, 기침 억제제, 진통제, TNF-길항제, 인테그린 길항제, 면역억제제, IL-4 길항제, IL-13 길항제, 이중 IL-4/IL-13 길항제, DMARD, B-세포 표면 마커에 결합하는 항체, 및 BAFF 길항제로 이루어진 군으로부터 선택된 제2 약물을 IgE-매개 장애를 치료 또는 예방하기 위한 항체와 함께 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
38. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 항체를 IgE-매개 장애에 대한 제2 치료 방법과 함께 인간 환자에게 투여하는 것인 방법.
39. 제38항에 있어서, 제2 치료 방법이 알레르겐 탈감작의 치료 요법을 포함하는 것인 방법.
40. 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 키메라, 인간화 또는 인간 항체인 방법.
41. 제40항에 있어서, 항체가 47H4, 7A6, 26A11, 47H4v5, 7A6v1 및 26A11v6으로 이루어진 군으로부터 선택된 항체에 의해 결합된 것과 동일한 에피토프에 특이적으로 결합하는 것인 방법.
42. 제41항에 있어서, 에피토프가 서열 4, 서열 5, 서열 6 및 서열 7로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 펩티드에 상응하는 것인 방법.
43. 제40항에 있어서, 항체가 서열 1의 잔기 317 내지 352에 의해 규정된 IgE의 M1' 절편 내의 에피토프에 특이적으로 결합하는 것인 방법.
44. 제40항에 있어서, 항체가 서열 1의 잔기 317 내지 352에 의해 규정된 IgE의 M1' 절편 내의 에피토프에 특이적으로 결합하고, 뮤린 항-IgE 항체 47H4의 것과 동등한 스캐차드(Scatchard) 결합 친화도를 갖는 것인 방법.
45. 제44항에 있어서, 친화도가 0.30 내지 0.83 nM인 방법.
46. 제41항에 있어서, 항체가 서열 1의 잔기 317 내지 352에 의해 규정된 IgE의 M1' 절편 내의 에피토프에 특이적으로 결합하고, 뮤린 항-IgE 항체 47H4v5의 것과 동등한 스캐차드 결합 친화도를 갖는 것인 방법.
47. 제46항에 있어서, 친화도가 약 1.5 nM인 방법.
48. 제40항에 있어서, 항체가 26A11, 26A11 v.1-16, 7A6, 7A6v1, 47H4 및 47H4v1-6으로 이루어진 군으로부터 선택된 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 중쇄 및 경쇄 HVR을 포함하는 것인 방법.
49. 제40항에 있어서, 항체가 26A11, 26A11 v.1-16, 7A6, 7A6v1, 47H4, 47H4v1-6으로 이루어진 군으로부터 선택된 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 중쇄 및 경쇄의 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 방법.
50. 제40항에 있어서, 항체가 서열 29의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 방법.
51. 제40항에 있어서, 항체가 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 (a) HVR-H1이 서열 29의 잔기 26-35를 포함하고, (b) HVR-H2가 서열 29의 잔기 49-66을 포함하고, (c) HVR-H3이 서열 29의 잔기 97-106을 포함하고, (d) HVR-L1이 서열 19의 잔기 24-39를 포함하고, (e) HVR-L2가 서열 19의 잔기 55-61을 포함하고, (f) HVR-L3이 서열 19의 잔기 94-102를 포함하는 것인 방법.
52. 제51항에 있어서, 항체가 인간 컨센서스 프레임워크를 추가로 포함하는 것인 방법.
53. 제52항에 있어서, 항체의 중쇄 가변 영역이 하위군 III 컨센서스 프레임워크를 포함하는 것인 방법.
54. 제52항에 있어서, 경쇄 가변 영역이 카파 하위군 I 컨센서스 프레임워크를 포함하는 것인 방법.
55. 제1항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 ADCC 활성을 갖는 것인 방법.
56. 제1항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 비-푸코실화 항체인 방법.
57. 제1항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 IgE-스위칭된 B 세포를 특이적으로 고갈시키는 것인 방법.
58. 제1항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 항체 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물 중에 있는 것인 방법.
59. 인간 IgE의 M1' 절편에 결합하는 항-IgE 항체, 및 항체가 IgE-매개 장애를 치료 또는 예방하기 위해 인간 환자에게 투여되며 여기서 인간 환자에 대한 항체의 투여 사이의 간격이 약 1개월 또는 그 초과임을 나타내는 포장 삽입물을 포함하는 키트.
60. 인간 IgE의 M1' 절편에 결합하는 항-IgE 항체, 및 항체가 IgE-매개 장애를 치료 또는 예방하기 위해 용량당 약 150 mg 내지 약 450 mg의 투여량으로 인간 환자에게 투여됨을 나타내는 포장 삽입물을 포함하는 키트.
61. 제59항 또는 제60항에 있어서, 포장 삽입물이, 치료가 인간 환자에서 기준선에 비해 혈청 총 IgE를 감소시키는데 효과적임을 추가로 나타내는 것인 키트.
62. 제59항 또는 제60항에 있어서, 포장 삽입물이, 치료가 인간 환자에서 기준선에 비해 알레르겐-특이적 IgE를 감소시키는데 효과적임을 추가로 나타내는 것인 키트.
63. 제59항 또는 제60항에 있어서, 포장 삽입물이, 치료가 인간 환자에서 혈청 총 IgE의 알레르겐-유도된 증가를 예방 또는 감소시키는데 효과적임을 추가로 나타내는 것인 키트.
64. 제59항 또는 제60항에 있어서, 포장 삽입물이, 치료가 인간 환자에서 알레르겐-특이적 IgE의 알레르겐-유도된 증가를 예방 또는 감소시키는데 효과적임을 추가로 나타내는 것인 키트.
65. 제59항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 바이알 내에 있는 것인 키트.
66. 제59항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 사전-충전된 시린지 내에 있는 것인 키트.
67. 제59항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 주사 장치를 추가로 포함하는 키트.
68. 제67항에 있어서, 주사 장치가 자동-주사기인 키트.
69. 제59항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 항-IgE 항체, 항히스타민제, 기관지확장제, 글루코코르티코이드, NSAID, 충혈제거제, 기침 억제제, 진통제, TNF-길항제, 인테그린 길항제, 면역억제제, IL-4 길항제, IL-13 길항제, 이중 IL-4/IL-13 길항제, DMARD, B-세포 표면 마커에 결합하는 항체, 및 BAFF 길항제로 이루어진 군으로부터 선택된 제2 약물, 및 항체가 IgE-매개 장애를 치료하기 위한 제2 약물과 함께 매달 또는 매분기 간격으로 인간 환자에게 투여됨을 나타내는 포장 삽입물을 추가로 포함하는 키트.
70. 제69항에 있어서, 제2 약물이 항-IgE 항체 rhuMAbE25인 키트.

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